Notice d'utilisation

Notice disponible sur notre site web https://www.eiken.co.jp/en/ifu*380270-C

Contrôle positif Mal (PC Mal)*c : ···························· 1 x 1,0 mL
Contrôle négatif Mal (NC Mal) ····························· 3 x 0,5 mL
Compte-gouttes 30 µL ······················· 5 x 12 compte-gouttes

977000Français

SSP disponible dans EUDAMED MALARIA Pan
Loopamp*a : La Bst DNA polymerase dérivée de Bacillus stearothermophilus
est un ADN polymérase à déplacement de brin qui manqued'activité exonucléase 5′→3′.
*b : Amorces conçues pour l'ADN mitochondrial des parasites
Plasmodium, purifiées à partir des oligonucléotides synthétiséspar HPLC.
*c : Le PC Mal contient un produit résultant de l'amplification in vitro
d'un gène artificiel conçu à partir de l'ADN mitochondrial de
Plasmodium falciparum (GenBank no M76611).
Les abréviations des réactifs suivants, leur numéro de lot ainsi que lefabricant (EKN) sont imprimés sur les récipients comme indiqué cidessous :Detection Kit
DESTINATION

Le Loopamp MALARIA Pan Detection Kit est un test de diagnostic
qualitatif in vitro permettant de détecter l'ADN de Plasmodium extraitd'échantillons de sang humain chez les patients suspectés d’être
infectés par le paludisme. Le kit aide au diagnostic de l'infection par lepaludisme et est destiné à être utilisé dans les laboratoires
professionnels et les hôpitaux par un personnel dûment formé. Le
résultat peut être interprété soit par un turbidimètre automatisé, soit
visuellement sous irradiation UV.

Réactifs
Contrôle positif Mal

PRINCIPE DU TESTCe produit est basé sur la méthode d'amplification des acides
nucléiques, LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification),développée par Eiken Chemical Co., Ltd.
Les caractéristiques de la méthode LAMP sont les suivantes : (1) une
seule enzyme est nécessaire et la réaction d'amplification se dérouledans des conditions isothermes ;1),2) (2) elle présente une spécificitéextrêmement élevée en raison de l'utilisation de quatre amorces
reconnaissant six régions distinctes sur la cible ; (3) elle présente une
efficacité d'amplification élevée et peut produire une concentrationélevée de produit amplifié en peu de temps, ce qui rend possible une
détection visuelle ou automatisée.3),4)
Les amorces spécifiques au genre Plasmodium Pan fournies avec ce
produit sont conçues pour détecter l'ADN mitochondrial des cinq
espèces de Plasmodium les plus répandues à l'origine du paludisme(P. falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae et P. knowlesi). L'analysede l'alignement a confirmé que les séquences d'ADN ciblées ont uneséquence de bases bien conservée dans toutes ces espèces dePlasmodium.
La solution d'ADN de test extraite des échantillons sanguins est verséedans un tube de réaction. L'ADN polymérase à déplacement de brin, lesdésoxynucléotides triphosphates (dATP, dCTP, dGTP et dTTP), lacalcéine, les tampons de réaction et les amorces spécifiques au genre
Plasmodium Pan sont ensuite conservés sous forme séchée dans lebouchon du tube de réaction. Ce réactif LAMP séché (Réactif dedétection du Malaria Pan (dMAL Pan)) est dissout lorsque la solution
d'ADN est ajoutée. Ensuite, le tube de réaction est incubé à 65,0 °C et
l'ADN est amplifié par l'ADN polymérase à déplacement de brin selon laréaction LAMP.
La détection des produits amplifiés est basée sur la turbidité dupyrophosphate de magnésium (un précipité blanc produit comme sousproduit de l'amplification de l'ADN).3) Il est également possible d’utiliser
la détection visuelle sous lumière UV. Avant l'amplification de l'ADN, lacalcéine contenue dans le réactif est à l'état éteint, car elle est liée aux
ions manganèse. Au début de l'amplification de l'ADN, les ionspyrophosphate générés rivalisent avec les ions manganèse pour lessites de liaison, rendant ainsi la calcéine fluorescente.4)

Contrôle négatif Mal

Code sur leÉtiquetage sur le tube bouchon
PC MalPC
No de lot, EKNMalNC MalNC
No de lot, EKN
Mal*Informations sur la traçabilité métrologique

Le contrôle positif est préparé à partir de Plasmodium Falciparum
Honduras-1 (GenBank no M76611), car il n'existe pas de norme
internationale pour l'ADN de Plasmodium. L'ADN plasmidiquecomprenant la région ciblée de l'ADN génomique de Plasmodium
Falciparum Honduras-1 a été utilisé comme modèle pour amplifier lefragment d'ADN PC MAL. Le fragment est quantifié à l'aide de laspectrophotométrie et la concentration d'ADN du PC Mal est ajustée à2000 copies/μl.

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS(1) Utilisation pour le diagnostic in vitro seulement.
(2) Ce produit est uniquement conçu pour détecter l'ADN des parasites
P. falciparum, P. vivax, P. malariae, P. ovale et P. knowlesi dans leséchantillons de sang humain. Ne pas l'utiliser à d'autres fins.
(3) Lors de l'utilisation de ce produit, toujours suivre cette notice.
(4) Ne pas congeler les réactifs.
(5) Ne pas utiliser de réactif périmé.
(6) Ne pas mélanger des réactifs provenant de lots différents.
(7) Ne pas réapprovisionner les réactifs.
(8) Les performances du Loopamp MALARIA Pan Detection Kit
dépendent de la compétence de l'opérateur et du respect desinstructions de procédure. Les tests doivent être effectués par dupersonnel formé en conséquence en suivant strictement les
instructions fournies.
(9) L'exposition à la chaleur, à l'humidité et à la lumière peut détériorer
le dMAL Pan. Ainsi, ne retirer que le nombre requis de tubes deréaction (somme des échantillons et des contrôles) et refermer
immédiatement la pochette en aluminium.
(10) Ne pas retirer le dessiccateur de la pochette en aluminium. Un tauxd'humidité élevé peut détériorer le réactif LAMP séché dans lestubes de réaction.
(11) Lire le manuel d'instructions et s'assurer que l'équipement requis(turbidimètre ou incubateur) est disponible avant de commencer laprocédure.
(12) Les échantillons sanguins présentent un risque d'infection. Ainsi,
respecter les précautions universelles pour minimiser les risquesbiologiques.5)(13) Le PC Mal et le NC Mal contiennent une petite quantité d'azide desodium comme conservateur. L'azide de sodium étant classé
comme toxique, éviter tout contact avec les yeux, la bouche ou lapeau.
(14) En cas de contact accidentel d'un réactif avec les yeux, la bouche
ou la peau, rincer immédiatement la région concernée à l'eau
courante et consulter un médecin.
(15) Ne pas diluer ou ajouter le PC Mal aux échantillons. N'utiliser le PC
Mal que de la manière décrite dans cette notice pour éviter toutecontamination de l'ADN.

CONTENU DU KIT

Les réactifs sont stables jusqu'à la date indiquée sur l'étiquette tant quele récipient n'est pas ouvert et est stocké à une température de stockagede 2−30 °C. Les réactifs sont également confirmés stables après
ouverture du récipient si ces instructions de procédure sont respectées.
Réactif de détection du Malaria Pan (dMAL Pan) 2 x 48 tubes
Les réactifs suivants, sous forme séchée, sont contenus danschaque tube de réaction :Bst DNA polymerase*a :Désoxynucléotide triphosphates
Sulfate de magnésium
Calcéine
Chlorure de manganèse
Amorces*b :5

PRÉPARATION DE LA SOLUTION D'ÉCHANTILLON
D'ADN(16) Conserver le PC Mal et tout échantillon sanguin positif séparément
des autres réactifs du kit.
(17) Le bouchon de chaque tube de réaction contient le dMAL Pan sous
forme séchée. Ne pas toucher l'intérieur du bouchon.
(18) Avant d'utiliser les tubes de réaction, vérifier soigneusement qu'ils
ne présentent pas de fissures ou de rayures. Des tubes
endommagés peuvent donner de faux résultats et entraîner une
contamination de l'incubateur et de la zone de travail par l'ADN.
(19) Ne pas exposer les tubes de réaction à la lumière UV avant la finde la réaction LAMP. Une exposition prolongée à la lumière UV peut
endommager les tubes et entraîner de faux résultats.
(20) Lorsque la lumière UV est utilisée pour évaluer visuellement lafluorescence, ne pas la fixer directement. La lumière UV étant
nocive pour les yeux, la regarder même pendant une courte période
peut irriter les yeux et provoquer des symptômes similaires à ceuxde la conjonctivite. Utiliser plutôt un écran en verre ou porter deslunettes de protection ou un masque oculaire anti-UV lorsque vous
regardez directement la lumière UV.
(21) Se référer au manuel de l'incubateur. Lorsque le HumaLoop M ou
le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A est utilisé, retirer
soigneusement les tubes de réaction de l'incubateur pour éviter lesbrûlures.
(22) Ne pas utiliser le PC Mal comme contrôle positif pour le Loopamp
MALARIA Pf Detection Kit et le Loopamp MALARIA Pv Detection
Kit. Ne pas utiliser le contrôle positif d'autres kits comme contrôle
positif pour ce kit.

Pour extraire l'ADN des échantillons de sang, la méthode PURE et laméthode Boil & Spin sont recommandées. Pour plus d'informations, seréférer à la dernière version du « Manual of Standard Operating
Procedures for malaria LAMP » (SOP).
Faire attention aux points critiques suivants pour la méthode PURE :・ Échantillons ： sang total ou tâche de sang séchée nonanticoagulé/hépariné・ Volume de l'échantillon ：30 µL (sang total) ou poinçon pourtâche de sang de 6 mm (tâche de sang séchée)・Additif ：ajouter 30 µL de solution de NaCl 334 mM (non inclusedans le LoopampTM PURE DNA Extraction Kit)
au tube chauffant avant de chauffer
・Chauffage ：pendant 5 minutes à 75 °C

PRÉPARATION DES RÉACTIFS(1) Réactif de détection du Malaria Pan
Retirer le nombre requis de tubes de la pochette en aluminium etles placer sur le portoir (somme des échantillons et des contrôles).

Remarque : après avoir retiré les tubes nécessaires, refermer
immédiatement la pochette en aluminium avec les tubes nonutilisés.

(2) Contrôle négatif Mal（（NC Mal））
Agiter (ou centrifuger) le tube pour recueillir le contenu au fonddu tube. Pipetter 30 µL du NC Mal dans le tube chauffant fourni
dans le Loopamp PURE DNA Extraction Kit. Suivre la SOP pourtraiter le NC Mal (ci-après le NC Mal extrait est appelé « solution decontrôle négatif »).

ÉLIMINATION DES DÉCHETS(1) Ne pas ouvrir les tubes après amplification de l'ADN. Laisser lebouchon fermé et éliminer les tubes usagés comme des déchets
médicaux par incinération ou après double ensachage avec dessacs plastiques scellables.
(2) Ne jamais autoclaver ou réutiliser les tubes de réaction, car les
produits amplifiés se disperseront et provoqueront une
contamination.
(3) Le matériau principal des tubes de réaction et des tubes de réactif
est le PP ; pour le plateau des tubes de réaction, le PET ; pour lapochette en aluminium, l’aluminium et pour l’emballage du kit, lepapier.
(4) Éliminer tout autre réactif, récipient ou matériel de laboratoire
conformément aux réglementations locales.

Remarque : une solution de contrôle négatif doit être utilisée
pour chaque série d'analyse.

(3) Contrôle positif Mal （PC Mal））
Agiter (ou centrifuger) le tube pour recueillir le contenu au fonddu tube.

Remarque : le PC Mal doit être utilisé pour chaque séried'analyse.

PROCÉDURE DE MESURE

Mélange des réactifs et des échantillons(1) Mettre en marche le HumaLoop M ou le turbidimètre en temps réel
HumaTurb C+A.
(2) Distribuer 30 µL de la solution d'extraction d’ADN dans un tube deréaction à l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction Kit et fermer
le tube avec le bouchon.
(3) Distribuer 30 µL de la solution de contrôle négatif dans un tube deréaction à l'aide du Loopamp PURE DNA Extraction Kit et fermer
le tube avec le bouchon.
(4) Distribuer 30 µL du PC Mal dans un tube de réaction à l'aide d'une
pipette ou du compte-gouttes fourni et fermer le tube avec lebouchon.
(5) Agiter (ou centrifuger) tous les tubes pour recueillir la solution au
fond des tubes.

PRÉLÈVEMENT D'ÉCHANTILLONS(1) Les échantillons de sang doivent être utilisés immédiatement après
leur prélèvement.
(2) Prélever le sang dans une pièce séparée de la salle d'amplification
LAMP. Des aérosols contenant l'ADN de Plasmodium peuvent êtregénérés lors de la collecte de sang et peuvent entraîner une
contamination.
(3) NE PAS UTILISER D'EDTA et de citrate comme anticoagulants
pour le prélèvement sanguin si le résultat doit être lu par
fluorescence. L'utilisation d'héparine comme anticoagulant est
recommandée à la place.

Remarque : veiller à ce que le niveau de liquide se trouve au
milieu des deux lignes sur le tube de réaction afin de garantir
30 µL de pipetage.

MATÉRIELS REQUIS MAIS NON FOURNIS

・Loopamp PURE DNA Extraction Kit (facultatif)
・HumaHeat (facultatif)(6) Reconstituer les réactifs séchés dans le bouchon en retournant les
tubes de réaction et en recueillant la solution d'ADN dans lebouchon. Laisser les tubes debout, tête en bas, pendant 2 minutes
pour reconstituer les réactifs séchés.
(7) Retourner les tubes de réaction cinq fois pour mélanger le contenu.
Faire attention à ce que les réactifs séchés dans le bouchon soiententièrement dissous.
(8) Agiter (ou centrifuger) tous les tubes pour recueillir la solution au
fond des tubes.
Amplification
Pour la détection visuelle de la fluorescence(pour HumaLoop M)(1) Vérifier que la température du HumaLoop M est de 65,0 °C.
(2) Placer les tubes de réaction dans le HumaLoop M et appuyer sur lebouton vert pour démarrer la réaction LAMP (40 minutes à 65,0 °C).
Se reporter au manuel d'instructions du HumaLoop M pour plus dedétails sur le fonctionnement de l'incubateur.
(3) Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase
(automatiquement réalisée par le HumaLoop M). Retirer tous lestubes de réaction du HumaLoop M.

Pour la détection visuelle de la fluorescence(pour HumaLoop M)
・HumaLoop M(pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV)・Incubateur (précision de la température : ± 0,5 °C ; avec capotchauffant)・Bloc chauffant・Lumière UV ou lumière LED bleue (longueur d'onde : 240−260 nm
et 350−370 nm)
・Lunettes de protection ou masque oculaire anti-UV (facultatif)
Pour la détection de la turbidité en temps réel・HumaTurb C+A
Pour le mélange des réactifs et des échantillons
・ Micropipettes (10−100 µL ou 20-200 µL) et embouts de pipetteavec filtre
・Centrifugeuse pour microtubes (facultatif)
・Centrifugeuse pour huit tubes connectés (facultatif)
・HuMax ITA, micro-centrifugeuse (facultatif)6

(pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV)(1) Régler la température de l'incubateur à 65,0 °C (avec latempérature du capot chauffant réglée à 10 °C au-dessus de latempérature de réaction ou aussi près de cette valeur que possible.
Précision de la température : ± 0,5 °C). Attendre que la température
affichée atteigne la valeur réglée.
(2) Placer les tubes de réaction, puis démarrer la réactiond'amplification (pendant 40 minutes à 65,0 °C).
(3) Après 40 minutes, inactiver la polymérase en utilisant le bloc
chauffant (pendant 5 minutes à 80 °C ou 2 minutes à 95 °C) pourterminer la réaction.
Pour la détection de la turbidité en temps réel avec HumaTurb C+A(voir le diagramme de la procédure)(1) Configurer le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A pour ladétection avec ce produit.
(2) Vérifier que la température affichée atteint 65,0 °C (laisser leturbidimètre se réchauffer pendant 20 minutes avant de l'utiliser).
(3) Placer les tubes de réaction et commencer la mesure.
(4) Surveiller l'affichage du turbidimètre et vérifier si une augmentationde la turbidité est observée dans les contrôles positifs et négatifs.
Si la turbidité augmente dans le contrôle positif mais pas dans lecontrôle négatif, la réaction d'amplification se déroule correctement(Fig. 1). Si ce n'est pas le cas, la réaction d'amplification peut se
dérouler dans le mauvais sens. Dans ce cas, retester leséchantillons concernés.
(5) Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase
(automatiquement réalisée par le turbidimètre). Retirer tous lestubes de réaction du turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A et
les jeter sans les ouvrir.

）(pour le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A）
Comme les bulles dans la solution de réaction peuvent interférer
avec la mesure de la turbidité et provoquer un faux résultat, éviter
la formation de bulles lors du mélange du réactif et de la solutiond'échantillon. Si des bulles apparaissent, centrifuger le tube ou luidonner une pichenette pour les libérer.
(9) Le dMAL Pan doit être entièrement dissous. Toute partie non
dissoute peut influencer les performances, par exemple endiminuant la sensibilité. Maintenir en particulier les tubes debouttête à l'envers pendant 2 minutes.
(10) Le PC Mal contient un nombre élevé de copies de l'ADN de contrôle.
Éviter toute contamination d'autres échantillons avec le PC Mal.
Distribuer les échantillons et la solution de contrôle négatif et fermer
tous les tubes de réaction avant de distribuer le PC Mal.
(11) Agiter (ou centrifuger) le tube PC Mal avant de l'ouvrir pour recueillir
le contenu au fond du tube. Fermer le tube immédiatement après
avoir distribué le PC Mal.
(12) Ne jamais ouvrir les tubes de réaction une fois que la réaction LAMP
a commencé ou après son achèvement. Faire particulièrement
attention à ne pas ouvrir les tubes accidentellement lors dudéchargement des tubes de réaction de l'incubateur.
(13) Lorsque le HumaLoop M ou le turbidimètre en temps réel
HumaTurb C+A est utilisé, l'inactivation de la polymérase est
effectuée automatiquement.
(14) Pour les autres incubateurs, lorsque l'évaluation visuelle de lafluorescence est choisie, inactiver la polymérase (pendant
5 minutes à 80 °C ou 2 minutes à 95 °C) avant de la lire, ou lesrésultats seront faussés.
(15) Ne pas réutiliser les produits amplifiés dans les tubes pourl'électrophorèse ou pour d'autres applications.

Graphiques d'amplification par le réactif de détection duMalaria Pan

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Pour la détection visuelle de la fluorescence(pour HumaLoop M)
Placer chaque tube de réaction dans l'unité de détection de lafluorescence, irradier et observer le tube de côté.
(pour les autres incubateurs utilisant la lumière UV)
Irradier le fond de chaque tube de réaction et observer de côté àtravers des lunettes ou un masque oculaire anti-UV.

(Analyseur : turbidimètre en temps réel HumaTurb C+A)

Échantillon négatif
Échantillon positif 1
Échantillon positif 2

0,7

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5
0,4

0,4

0,3

0,3
0,2

0,2

0,1

0,1

0

Pour une exécution valide, les résultats suivants doivent êtreobtenus lorsqu'ils sont lus à l'heure spécifiée :• Contrôle positif : une lumière fluorescente verte est émise.
• Contrôle négatif : aucune lumière fluorescente n'est émise.
Si l'un des contrôles n'est pas valide, tous les échantillons de lasérie doivent être signalés comme non valides et doivent êtreretestés.

TurbiditéTurbiditéContrôle négatif
Contrôle positif0

5 10 15 20 25 30 35 40

00

5 10 15 20 25 30 35 40

Temps (min)Temps (min)Fig. 1：Graphique d'amplification pour les Fig. 2 ：Graphique d'amplification pourcontrôles.
les échantillons.

Après avoir confirmé que l'exécution est valide, évaluer leséchantillons comme suit :• Échantillon positif : une lumière fluorescente verte est émise.
• Échantillon négatif : aucune lumière fluorescente n'est émise.
Pour la détection de la turbidité en temps réel avec HumaTurb C+A
Après avoir confirmé que la turbidité augmente dans le contrôle
positif mais pas dans le contrôle négatif, évaluer les échantillons
selon les critères suivants (Fig. 1 et 2) :• Positif : une certaine augmentation de la turbidité est observée.
• Négatif : aucune augmentation de la turbidité n'est observée.
Remarques :(1) La sensibilité minimale de détection du Loopamp MALARIA Pan
Detection Kit est de 7,5 copies par test. En cas de résultat négatif,
il convient d'envisager un nouveau test pour les patients dont les
symptômes persistent ou s'aggravent et d'envisager et derechercher d'autres causes possibles de symptômes. En outre, letest LAMP est très sensible et peut détecter une faible parasitémie
qui n'est pas la cause directe des symptômes présentés. Il faut donc
toujours tenir compte de l'état clinique du patient pour poser undiagnostic définitif et déterminer la prise en charge.
(2) Bien que les amorces aient été conçues pour cibler une région
contenant un nombre relativement faible de variations, lePlasmodium peut acquérir d'autres variations dans cette région etdevenir moins sensible à ce produit. Ainsi, un test négatif n'exclut
pas toujours une infection par les espèces de Plasmodium.

NOTES DE PROCÉDURE(1) La réaction LAMP est très sensible et toute contamination, mêmepar de petites quantités du produit amplifié, peut entraîner desrésultats faussement positifs.
(2) Séparer les zones de préparation des échantillons et d'amplification.
(3) Nettoyer les bancs avec plus de 0,5 % d'hypochlorite de sodium
avant et après la réalisation du dosage.
(4) Prendre toutes les mesures nécessaires pour éviter toutecontamination, en particulier, changer de gants après avoir
transféré le sang ou si les gants sont entrés en contact avec lasolution d'ADN.
(5) Lors de la manipulation de ce produit, éviter la contamination
microbienne et la contamination par les nucléases. Même unepetite quantité de contamination du tube de réaction par la sueur ou
la salive peut décomposer l'ADN et provoquer un faux résultat.
(6) En outre, lire la SOP lors de la réalisation d'une extraction d'ADN.
(7) La solution d'ADN doit idéalement être utilisée immédiatement
après sa préparation ; si cela est impossible, la solution d'ADN peutêtre conservée à température ambiante et utilisée dans les
72 heures.
(8) (pour HumaLoop M ou un autre incubateur utilisant la lumière）
UV）
Si des bulles sont présentes, tapoter (ou centrifuger) les tubes pourles libérer.

7

(6) Performances cliniques
Le paludisme est causé par certains parasites du genre
Plasmodium, transmis par la piqûre de moustiques infectés. Aprèss'être développés dans le foie pendant un certain temps, lesparasites au stade sanguin sont libérés. Ils pénètrent dans les
globules rouges, les lysent lors de leur reproduction ultérieure etprovoquent des symptômes, notamment de la fièvre. Le test LAMP
détecte l'ADN des parasites au stade sanguin.
Le Malaria LAMP a été évalué sur des échantillons de sangenvoyés pour le dépistage du paludisme dans un laboratoire
spécialisé. Après une microscopie standard, les échantillons ont étéanonymisés, l'ADN a été extrait des échantillons sanguins à l'aide dela méthode PURE et testé par le Malaria LAMP en utilisant desamorces spécifiques au genre Plasmodium Pan, avec deux
méthodes de lecture différentes. Enfin, la PCR nichée a été utilisée
comme méthode de référence. Un total de 705 tests Malaria LAMP,
dont 56 provenaient de patients déclarés positifs par microscopie,
ont été comparés à la PCR nichée comme méthode de référence.
La sensibilité et la spécificité des amorces spécifiques au genre
Plasmodium Pan étaient respectivement de 97,0 % et 99,2 %.6)

(3) Ce produit est un kit pour la détection qualitative ; il n'est pas conçu
pour une mesure quantitative. Par conséquent, l'intensité de lalumière fluorescente observée ou le temps d'augmentation de laturbidité mesurée par le turbidimètre en temps réel HumaTurb C+An'est pas liée à la concentration d'ADN matrice.

SUBSTANCES INTERFÉRENTES

Nos études internes ont révélé que la mesure de la turbidité n'était pas
affectée par la présence d'héparine-Na (2 600 unités/dL), d'héparine-Li(2 600 unités/dL), d'EDTA-2Na (300 mg/dL), d'EDTA-2K (380 mg/dL),
d'EDTA-3K (340 mg/dL), de citrate de sodium (7,6 %), de bilirubine libre(66,3 mg/dL), de bilirubine conjuguée (67,0 mg/dL), de chyle (turbidité
de la formazine : 5 433), et d'hémoglobine hémolytique (1 567 mg/dL).
L'EDTA peut provoquer des résultats faussement positifs lorsque lerésultat est lu par fluorescence.
Concernant les médicaments, nos études internes ont révélé que lamesure n'était pas affectée par la présence de proguanil (0,6 µg/mL), dechloroquine (1,1 µg/mL), de quinine (26,7 µg/mL), de chlorhydrate de
doxycycline (10,0 µg/mL), de méfloquine (4,7 µg/mL), de primaquine(0,5 µg/mL), d’artémisinine (2,6 µg/mL), de sodium de loxoprofène(17,7 µg/mL), d’acétaminophène (9,0 µg/mL), d’isoniazide (23,3 µg/mL),d’éthambutol (5,7 µg/mL), de rifampicine (26,6 µg/mL), de pyrazinamide(116,7 µg/mL), de clarithromycine (12,4 µg/mL), de streptomycine(133,3 µg/mL), de céfotaxime sodique (333,3 µg/mL) et de lévofloxacine(7,5 µg/mL).

Malaria LAMP vs. PCR nichée
Sensibilité diagnostique
97,0 % (89,6-99,6)
Spécificité diagnostique
99,2 % (98,2-99,7)
Valeur prédictive positive
92,9 %
Valeur prédictive négative
99,7 %
Rapport de vraisemblance +121,25(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance 0,0302((1-sensibilité)/spécificité)

PERFORMANCES DU TEST

(1) ExactitudeLors des tests des échantillons suivants :• Échantillon négatif (concentration : 0 copie/test)• Échantillon positif 1 (100 copies/test)• Échantillon positif 2 (1 000 copies/test)
L'échantillon négatif doit être négatif, tandis que les échantillons
positifs 1 et 2 doivent être positifs.
(2) Reproductibilité au sein d'une série
Lors du test simultané de cinq échantillons négatifs et cinqéchantillons positifs, les échantillons négatifs doivent être négatifs
tout au long du test, tandis que les échantillons positifs doivent êtrepositifs tout au long du test.
(3) Limite de détection
7,5 copies/test(4) Réactivité croisée
Le système de mesure a été testé positif pour les espèces dePlasmodium et négatif pour d'autres agents pathogènes, commedétaillé dans le tableau ci-dessous :Malaria LAMP vs. microscopie
Sensibilité diagnostique
100,0 % (93,6-100,0)
Spécificité diagnostique
97,8 % (96,4-98,8)
Valeur prédictive positive
80,0 %
Valeur prédictive négative
100,0 %
Rapport de vraisemblance +45,45(sensibilité/(1-spécificité))Rapport de vraisemblance 0,0000((1-sensibilité)/spécificité)

INFORMATIONS POUR COMMANDER
CodeproduitGenre Plasmodium
Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
Plasmodium ovale
Plasmodium malariae
Plasmodium knowlesi

Positif
Positif
Positif
Positif
Positif

Autres agents pathogènes
Trypanosoma brucei
Trypanosoma cruzi
Leishmania donovani
Leishmania chagasi
Toxoplasma gondii
Entamoeba histolytica
Giardia intestinalis
Theileria parva
Mycobacterium tuberculosis

Négatif
Négatif
Négatif
Négatif
Négatif
Négatif
Négatif
Négatif
Négatif

Contenu

977000Loopamp
MALARIA Pan
Detection Kit

96 tests

962000

HumaLoop M

970000Loopamp
PURE DNA
Extraction Kit

963200

HumaTurb C+A

964000

HumaHeat
Incubator

980000

HuMax ITA

1 unité principale
1 unité de détection de lafluorescence
90 tests
1 unité de contrôle
1 unité d'amplification
Bloc chauffant
Micro-centrifugeuse

AVIS

Veuillez signaler tout incident grave survenu avec le dispositif aureprésentant autorisé, au fabricant et à l'autorité compétente de l'État
membre dans lequel l'utilisateur et/ou le patient est établi.

Autre
ADN génomique humain

Nom du produit

BIBLIOGRAPHIE

Négatif

1) Notomi T., et al.: Nucleic Acids Research 28, No. 12, e63 (2000)
2) Nagamine K., et al.: Clin. Chem. 47, No. 9, 1742–1743 (2001)
3) Mori Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No. 1, 150–
154 (2001)
4) Tomita N., et al.: Nat. Protoc. 3, No. 5, 877–882 (2008)
5) The guideline for the bio-safety and bio-hazard (by the JapaneseSociety for Bacteriology): Japanese Journal of Bacteriology 54, No.
3, 667–715 (1999)
6) Spencer D. Polley., et al. J Infect Dis. 208(4), 637-644 (2013)(5) Informations sur le calibrateur
Pour le test de performance de ce produit, l'ADN plasmidiquecontenant l'ADN mitochondrial de Plasmodium falciparum a été
utilisé comme calibrateur.

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Diagramme
Procédure opérationnelle pour la détection de la turbidité
en temps réelPréparation de la solution d'échantillon
Préparer des solutions d'échantillons d'ADN en
extrayant l'ADN des échantillons de sang collectés.

Préparation des réactifs

Prendre le nombre requis de tubesde réaction du dMAL Pan.
(Pour les échantillons et lescontrôles négatif et positif)

Mélange du réactif et de la solution d'échantillon
Transférer 30 µL de solution d'échantillon ou de contrôledans chaque tube de réaction.
Utiliser la solution de contrôle négatif comme contrôle
négatif.
Utiliser le PC Mal comme contrôle positif.
(Le contrôle positif doit être préparé en dernier.)
Retourner les tubes de réaction pour recueillir lasolution dans le bouchon. Laisser les tubes debout, latête en bas, pendant 2 minutes.
Retourner les tubes de réaction cinq fois pour mélanger
le contenu, puis les centrifuger à nouveau.
(Éviter la formation de bulles.)Amplification

Placer les tubes de réaction dans le bloc de réaction duturbidimètre.
Comme indiqué dans la notice d'utilisation duturbidimètre, lancer la réaction, mesurer et évaluer laturbidité (pendant 40 minutes à 65,0 °C).
Confirmer la fin de l'inactivation de la polymérase (pendant 5 minutes
à 80 °C ou 2 minutes à 95 °C). Retirer tous les tubes de réaction duturbidimètre et les jeter sans les ouvrir. Ne pas endommager les tubes.

TABLE DES SYMBOLES
Référence ducatalogue

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Dispositif médical dediagnostic in vitro

FabricantNuméro de lot

Contenu suffisantpour <n> tests

Date d'expiration
Limitation de latempérature
Représentant autorisé
dans la Communauté
européenne

Importateur

HUMAN Gesellschaft für Biochemica
und Diagnostica mbH
Max-Planck-Ring 21, 65205 Wiesbaden, Germany*Date de révision : 2023-06-23

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