Instrucciones de uso

Prospecto en nuestra página web https://www.eiken.co.jp/en/ifu*380273-C
Español

SSP disponible en EUDAMED

Control negativo de Mal (NC Mal)··························3 × 0,5 mL
Cuentagotas de 30 µL ··························· 5 × 12 cuentagotas

978000Loopamp MALARIA Pf*a: La ADN polimerasa de Bst obtenida a partir de Bacillus
stearothermophilus es una ADN polimerasa con actividad dedesplazamiento de la hebra que carece de actividad exonucleasa
en sentido 5′→3′.
*b: Cebadores diseñados para el ADN mitocondrial de Pf, purificadospor HPLC a partir de oligonucleótidos sintéticos.
*c: El PC Mal contiene un producto resultante de la amplificación invitro de un gen artificial diseñado a partir del ADN mitocondrial dePf (núm. de GenBank M76611).
Las abreviaturas de los siguientes reactivos, su número de lote y elfabricante (EKN), están impresos en los envases, como se muestra acontinuación:

Detection Kit
USO PREVISTOEl Loopamp MALARIA Pf Detection Kit es una prueba de diagnósticocualitativo in vitro para detectar el ADN de Plasmodium falciparum
extraído de muestras de sangre humana en pacientes con sospecha deinfección por malaria. El kit sirve de ayuda en el diagnóstico de la
infección por Plasmodium falciparum y está destinado a ser utilizado enlaboratorios profesionales y hospitales por personal debidamente
cualificado. El resultado puede interpretarse mediante un turbidímetro
automático o visualmente bajo irradiación UV.

Reactivos
Control positivo de Mal
Control negativo de Mal

PRINCIPIOS DE LA PRUEBA

Este producto se basa en la amplificación isotérmica mediada por
bucle (LAMP), un método de amplificación de ácidos nucleicosdesarrollado por Eiken Chemical Co., Ltd.
Las características del método de LAMP son las siguientes: (1) Solonecesita una enzima y la reacción de amplificación se produce encondiciones isotérmicas;1),2) (2) tiene una especificidad extremadamente
alta gracias al uso de cuatro cebadores que reconocen seis regiones
distintas en la región de interés; (3) tiene una alta eficiencia deamplificación y puede producir una alta concentración de producto
amplificado en poco tiempo, lo que hace posible la detección visual oautomatizada. 3),4)
Los cebadores específicos para P. falciparum (Pf) están diseñados
para detectar el ADN mitocondrial de Pf. El análisis de la alineación haconfirmado que las secuencias de ADN seleccionadas son específicas
para la secuencia de Pf.
La solución problema de ADN extraído de las muestras de sangre se
dispensa en un tubo de reacción. A continuación, la ADN polimerasa
con actividad de desplazamiento de la hebra, los desoxinucleótidos
trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP), la calceína, los tampones dereacción y los cebadores específicos para Pf de la malaria se conservan
en forma seca en la tapa del tubo de reacción. Este reactivo seco de
LAMP (reactivo de detección de Pf de la malaria (dMAL Pf)) está
disuelto cuando se añade la solución de ADN. A continuación, el tubo
de reacción se incuba a 65,0 °C y el ADN es amplificado por la ADN
polimerasa con actividad de desplazamiento de la hebra en la reacciónde LAMP.
La detección de los productos amplificados se basa en la turbidez delpirofosfato de magnesio (un precipitado de color blanco producido como
subproducto de la amplificación del ADN).3) Como otra posibilidad, sepuede recurrir a la detección visual con luz UV. Antes de la amplificacióndel ADN, la calceína en el reactivo se encuentra inactiva, ya que estáunida a iones manganeso. Al inicio de la amplificación del ADN, losiones pirofosfato generados desplazan a los iones manganeso de lossitios de unión, lo que hace que la calceína se vuelva fluorescente. 4)

Etiquetado en el tubo
PC MalN.º de lote, EKN
NC MalN.º de lote, EKN

Código en la tapa
PC
Mal
NC
Mal

*Información de trazabilidad metrológica

El control positivo se prepara a partir de Plasmodium Falciparum
Honduras-1 (GenBank n.º M76611), ya que no existe un patrón
internacional para el ADN de Plasmodium. El ADN plasmídico que
incluye la región diana del ADN genómico de Plasmodium Falciparum
Honduras-1 se utilizó como plantilla para amplificar el fragmento de ADN
PC MAL. El fragmento se cuantifica con el análisis fotoespectrométrico,y la concentración de ADN de PC Mal se ajusta a 2000 copias/μL.

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES(1) Únicamente para uso diagnóstico in vitro.
(2) Este producto está diseñado únicamente para detectar el ADN delos parásitos del género Pf en muestras de sangre humana. No
utilizar para otros fines.
(3) Siga siempre estas instrucciones de uso al utilizar este producto.
(4) No congele los reactivos.
(5) No utilice reactivos que hayan caducado.
(6) No mezcle reactivos de diferentes lotes.
(7) No reponga ningún reactivo.
(8) La calidad de los resultados obtenidos con el Loopamp MALARIA
Pf Detection Kit depende de la destreza del operador y delcumplimiento de las instrucciones de uso. Las pruebas deben serrealizadas por personal debidamente cualificado y siguiendoestrictamente las instrucciones facilitadas.
(9) La exposición al calor, la humedad y la luz podría deteriorar el dMAL
Pf. Por lo tanto, retire sólo el número necesario de tubos dereacción (total de muestras y controles) y vuelva a sellar la bolsa
de aluminio inmediatamente.
(10) No retire el desecante de la bolsa de aluminio. Un exceso de
humedad podría deteriorar el reactivo seco de LAMP en los tubos
de reacción.
(11) Lea el manual de instrucciones y asegúrese de que los equipos
necesarios (turbidímetro o incubadora) están disponibles antes decomenzar el procedimiento.
(12) Las muestras de sangre representan un riesgo de infección. Por lotanto, adopte las precauciones universales para minimizar el riesgo
biológico.5)(13) El PC Mal y el NC Mal contienen una pequeña cantidad de azida
sódica como conservante. Puesto que la azida sódica está
clasificada como tóxica, evite todo contacto con los ojos, la boca ola piel.
(14) En caso de contacto accidental de cualquiera de los reactivos con
los ojos, la boca o la piel, enjuague inmediatamente la zona
afectada con agua abundante y, si es necesario, acuda al médico.
(15) No diluya el PC Mal ni lo añada a las muestras. Utilice el PC Mal
sólo según se detalla en este manual para evitar la contaminación
con ADN.
(16) Conserve el PC Mal y todas las muestras de sangre positivas por
separado de los demás reactivos del kit.

CONTENIDO DEL KIT

Los reactivos son estables hasta la fecha que figura en la etiqueta,
suponiendo que el envase permanezca sin abrir a una temperatura deconservación de 2−30 °C. Los reactivos también son estables despuésde abrir el envase si se siguen estas instrucciones de uso.
Reactivo de detección de Pf de la malaria (dMAL Pf) 2 × 48 tubos
Cada uno de los tubos de reacción contiene los siguientes
reactivos en forma seca:
ADN polimerasa de Bst *a:
Desoxinucleótidos trifosfato
Sulfato de magnesio
Calceína
Cloruro de manganeso
Cebadores*b:Control positivo de Mal (PC Mal)*c: ························ 1 × 1,0 mL

10

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN PROBLEMA DE ADN(17) La tapa de cada uno de los tubos de reacción contiene dMAL Pf en
forma seca. No toque el interior de la tapa.
(18) Antes de utilizar los tubos de reacción, compruebe detenidamente
si presentan grietas o arañazos. Los tubos dañados podrían dar
resultados falsos y provocar la contaminación con ADN de la
incubadora y de la zona de trabajo.
(19) No exponga los tubos de reacción a la luz UV antes de la
finalización de la reacción de LAMP. La exposición prolongada a laluz UV podría dañar los tubos y dar resultados falsos.
(20) No mire directamente la luz UV cuando esta se utilice para lavaloración de la fluorescencia a simple vista. Dado que la luz UV
es perjudicial para la vista, incluso si se observa durante un breve
periodo de tiempo, esta puede producir irritación ocular y síntomas
similares a los de la conjuntivitis. Por lo tanto, utilice una pantalla
de cristal, gafas de seguridad o una máscara ocular con protección
UV siempre que mire directamente a la luz UV.
(21) Consulte el manual de la incubadora. Cuando se utilice el
HumaLoop M o el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A,
tenga cuidado al sacar los tubos de reacción de la incubadora paraevitar quemaduras.
(22) No utilice el PC Mal como control positivo para el Loopamp
MALARIA Pan Detection Kit ni el Loopamp MALARIA Pv
Detection Kit. No utilice los PC de otros kits como control positivo
para este kit.

Para extraer el ADN de las muestras de sangre, se recomienda elmétodo PURE y el método Boil & Spin. Para más información, consultela última versión del "Manual of Standard Operating Procedures formalaria LAMP" (SOP).
Preste atención a los siguientes puntos críticos para el método PURE.

・ Muestras ： sangre entera no anticoagulada/heparinizada omancha de sangre seca
・Volumen de muestra：30 µL (sangre entera) o punción de 6 mmpara obtener una mancha de sangre (mancha desangre seca)
・ Aditivo: añadir 30 µL de solución de NaCl 334 mM (no está
incluida en el Loopamp PURE DNA Extraction Kit) al
tubo de calentamiento antes de calentar
・Calentamiento：durante 5 minutos a 75 °C

PREPARACIÓN DE REACTIVOS(1) Reactivo de detección de Pf de la malaria
Retire el número necesario de tubos de la bolsa de aluminio ycolóquelos en la gradilla. (total de muestras y controles).

Nota: Una vez haya retirado los tubos necesarios, vuelva asellar la bolsa de aluminio inmediatamente con los tubos que
no haya utilizado.

(2) Control negativo de Mal（NC Mal）
Sacuda el tubo de arriba a abajo (o centrifúguelo) para recoger elcontenido al fondo del tubo. Pipetee 30 µL de NC Mal en el tubo decalentamiento suministrado en el Loopamp PURE DNA
Extraction Kit. Haga el tratamiento del NC Mal (en adelante, el NC
Mal extraído se denominará "solución de control negativo")
siguiendo el SOP.

ELIMINACIÓN DE DESECHOS(1) No abra los tubos después de la amplificación del ADN. Deje la tapa
cerrada y deseche los tubos usados con los residuos biológicospara su incineración o deséchelos mediante embolsado doble conbolsas de plástico sellables.
(2) Nunca esterilice en el autoclave los tubos de reacción ni los reutilice,
de lo contrario, los productos amplificados se dispersaránproduciendo contaminación.
(3) El material principal para los tubos de reacción y los tubos dereactivos es el PP; para la bandeja de los tubos de reacción, el PET;
para la bolsa de aluminio, el aluminio; y para el estuche del kit, elpapel.
(4) Deseche todos los demás reactivos, el envase o el material delaboratorio de acuerdo con la normativa local.

Nota: En cada serie analítica se debe utilizar una solución decontrol negativo.

(3) Control positivo de Mal（PC Mal）
Sacuda el tubo de arriba a abajo (o centrifúguelo) para recoger elcontenido al fondo del tubo.

Nota: El PC Mal se debe usar en cada serie analítica.

PROCEDIMIENTO ANALÍTICO

Mezcla de reactivos y muestras(1) Encienda el HumaLoop M o el turbidímetro en tiempo real
HumaTurb C+A.
(2) Dispense 30 µL de la solución de ADN extraído en un tubo dereacción utilizando el Loopamp PURE DNA Extraction Kit y cierre
la tapa.
(3) Dispense 30 µL de solución de control negativo en un tubo dereacción utilizando el Loopamp PURE DNA Extraction Kit y cierre
la tapa.
(4) Dispense 30 µL de PC Mal en un tubo de reacción utilizando una
pipeta o el cuentagotas suministrado y cierre la tapa.
(5) Sacuda el tubo de arriba a abajo (o centrifúguelo) para recoger lasolución al fondo de los tubos.

RECOGIDA DE MUESTRAS(1) Las muestras de sangre se deben utilizar inmediatamente despuésde su recogida.
(2) Haga la recogida de muestras de sangre en una sala independientede la sala de amplificación por LAMP. Durante la recogida demuestras de sangre se pueden generar aerosoles que contienen
ADN de Pf, lo que podría provocar contaminación.
(3) NO UTILICE EDTA ni citrato como anticoagulantes para la recogida
de muestras de sangre si el resultado se va a leer por fluorescencia.
En su lugar se recomienda utilizar heparina como anticoagulante.

MATERIALESREQUERIDOS,
SUMINISTRADOS

PERO

Nota: Asegúrese de que el nivel de líquido se encuentra en el
centro de las dos líneas de un tubo de reacción para garantizarque se pipetean 30 µL.

NO・Loopamp PURE DNA Extraction Kit (opcional)
・HumaHeat (opcional)(6) Reconstituya los reactivos secos en la tapa invirtiendo los tubos dereacción y recogiendo la solución de ADN en la tapa. Deje los tubos
boca abajo durante 2 minutos para reconstituir los reactivos secos.
(7) Invierta los tubos de reacción cinco veces para mezclar elcontenido. Asegúrese de que los reactivos secos en la tapa estáncompletamente disueltos.
(8) Sacuda el tubo de arriba a abajo (o centrifúguelo) para recoger lasolución al fondo de los tubos.
Amplificación
Para la detección de fluorescencia a simple vista(Para HumaLoop M)(1) Compruebe que la temperatura en el HumaLoop M es de 65,0 °C.
(2) Coloque los tubos de reacción en el HumaLoop M y pulse el botón
verde para iniciar la reacción de LAMP (40 minutos a 65,0 °C).
Consulte el manual de instrucciones de HumaLoop M para obtener
información sobre el funcionamiento de la incubadora.
(3) Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa(completada automáticamente por el HumaLoop M). Retire todos
los tubos de reacción del HumaLoop M.

Para la detección de fluorescencia a simple vista(Para HumaLoop M)
・HumaLoop M(Para otra incubadora con luz UV)・Incubadora (exactitud de la temperatura: ±0,5 °C; con cubierta
caliente)
・Termobloque・Luz UV o luz LED azul (longitud de onda: 240−260 nm y
350−370 nm)
・Gafas de seguridad o máscara ocular con protección UV(opcional)
Para la detección de la turbidez en tiempo real・HumaTurb C+A
Para la mezcla de reactivos y muestras
・Micropipetas (10−100 µL o 20−200 µL) y puntas de pipeta con filtro・Centrífuga para microtubos (opcional)
・Centrífuga para ocho tubos conectados (opcional)
・HuMax ITA, microcentrífuga (opcional)

11

(Para otra incubadora con luz UV)(1) Fije la temperatura de la incubadora a 65,0 °C (con la temperaturadel capó caliente fijada a 10 °C por encima de la temperatura dereacción o lo más cerca posible de esta cifra; exactitud de latemperatura: ±0,5 °C). Espere hasta que la temperatura mostrada
en la pantalla alcance el valor fijado.
(2) Coloque los tubos de reacción y a continuación inicie la reacción deamplificación (durante 40 minutos a 65,0 °C).
(3) Después de 40 minutos, inactive la polimerasa con el termobloque(durante 5 minutos a 80 °C o durante 2 minutos a 95 °C) para pararla reacción.

(8) (Para HumaLoop M o cualquier otra incubadora con luz UV)
Si hubiera burbujas, sacuda los tubos de arriba a abajo (ocentrifúguelos) para eliminarlas.
(Para el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A)
Puesto que las burbujas en la solución de reacción pueden interferir
con la determinación de la turbidez y generar resultados falsos,
evite la formación de burbujas al mezclar el reactivo y la solución
problema. Si se forman burbujas, sacuda los tubos de arriba aabajo (o centrifúguelos) para eliminarlas.
(9) El dMAL Pf debe estar completamente disuelto. Toda porción nodisuelta podría afectar a la calidad de los resultados, por ejemplo,
causando una disminución de la sensibilidad. En particular,mantenga los tubos en posición invertida durante 2 minutos.
(10) El PC Mal contiene un elevado número de copias de ADN decontrol. Evite la contaminación de otras muestras con el PC Mal.
Dispense la solución problema y la solución de control negativo ycierre todos los tubos de reacción antes de dispensar el PC Mal.
(11) Sacuda el tubo de arriba a abajo (o centrifúguelo) antes de abrirlo,
para recoger el contenido al fondo del tubo. Cierre el tubo
inmediatamente después de dispensar el PC Mal.
(12) Nunca abra los tubos de reacción una vez iniciada la reacción de
LAMP o después de terminada. Tenga especial cuidado al sacar lostubos de reacción de la incubadora, para evitar abrirlos de manera
accidental.
(13) Cuando se utiliza el HumaLoop M o el turbidímetro en tiempo real
HumaTurb C+A, la inactivación de la polimerasa se realiza
automáticamente.
(14) Para otras incubadoras, cuando se seleccione como criterio la
fluorescencia a simple vista, inactive la polimerasa (durante 5
minutos a 80 °C o durante 2 minutos a 95 °C) antes de hacer lalectura, o de lo contrario se generarán resultados falsos.
(15) No reutilice ningún producto amplificado en los tubos paraelectroforesis u otras aplicaciones.

Para la detección de la turbidez en tiempo real con el HumaTurb
C+A (véase el diagrama de flujo del procedimiento)(1) Configure el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A para la
detección con este producto.
(2) Compruebe si la temperatura mostrada en la pantalla alcanza los
65,0 °C (deje que el turbidímetro se caliente durante 20 minutos
antes de utilizarlo).
(3) Coloque los tubos de reacción e inicie el análisis.
(4) Observe la pantalla del turbidímetro para comprobar si los controles
positivo y negativo presentan un aumento de la turbidez. Si laturbidez aumenta en el control positivo, pero no en el control
negativo, la reacción de amplificación está teniendo lugar
correctamente (Fig. 1). De lo contrario, la reacción de amplificación
podría estar teniendo lugar de manera incorrecta. Si este fuera elcaso, vuelva a analizar las muestras afectadas.
(5) Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa(completada automáticamente por el turbidímetro). Retire todos lostubos de reacción del turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A y
deséchelos sin abrirlos.

Gráficas de amplificación por el reactivo de detección de
Pf de la malaria

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS(Analizador： turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A)

Muestra negativa
Muestra positiva 1
Muestra positiva 2

0,7

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5

Turbidez

Turbidez

Control negativo
Control positivo

0,4

0,4

0,3

0,3
0,2

0,2

0,1

0,1

0

0

5 10 15 20 25 30 35 40

Tiempo (min)00

5 10 15 20 25 30 35 40

Tiempo (min)Fig. 1 ： Gráficas de amplificación Fig. 2 ： Gráficas de amplificación
correspondientes a las muestras.
correspondientes a los controles.

NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO(1) La reacción de LAMP es muy sensible, y cualquier contaminante,
incluso con pequeñas cantidades de producto amplificado, podría
dar falsos positivos.
(2) Separe la zona de preparación de muestras de la zona deamplificación.
(3) Antes y después de realizar la prueba, limpie las mesas de trabajo
con una solución de hipoclorito de sodio con una concentración deal menos un 0,5 %.
(4) Adopte todas las medidas necesarias para evitar la contaminación,en particular, cámbiese los guantes después de transferir la sangreo si los guantes entran en contacto con la solución de ADN.
(5) Al manipular este producto, evite la contaminación con microbios ynucleasas. Incluso una pequeña cantidad de contaminantes en eltubo de reacción procedentes del sudor o la saliva podría
descomponer el ADN y generar un resultado falso.
(6) Asimismo, lea el SOP cuando realice la extracción de ADN.
(7) Lo ideal es que la solución de ADN se utilice inmediatamente
después de su preparación; si esto no es posible, la solución de
ADN se puede conservar a temperatura ambiente y utilizar en unplazo de 72 horas.

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Para la detección de fluorescencia a simple vista(Para HumaLoop M)
Coloque cada uno de los tubos de reacción en la unidad dedetección de fluorescencia, y a continuación irradie y observe el tubo
desde un lado.
(Para otra incubadora con luz UV)
Irradie el fondo de cada uno de los tubos de reacción y observe
desde un lado a través de gafas de seguridad o de una máscaraocular con protección UV.
Para que el análisis sea válido, se deben obtener los siguientes
resultados cuando la lectura se hace en el tiempo especificado:• Control positivo: se emite luz fluorescente verde• Control negativo: no se emite luz fluorescente.
Si alguno de los controles es inválido, todas las muestras de esa
serie analítica se deben notificar como inválidas y se han de volver
a analizar.
Una vez se haya confirmado que la serie analítica es válida, evalúe
las muestras de la siguiente manera:• Muestra positiva: se emite luz fluorescente verde.
• Muestra negativa: no se emite luz fluorescente.
Para la detección de la turbidez en tiempo real con el HumaTurb
C+A
Una vez se haya confirmado que la turbidez aumenta en el control
positivo, pero no en el control negativo, evalúe las muestras
atendiendo a los siguientes criterios (Figs. 1 y 2).
• Positivo: se observa un cierto aumento de la turbidez.
• Negativo: no se observa un aumento de la turbidez.
Notas:(1) La sensibilidad mínima de detección del Loopamp MALARIA Pf
Detection Kit es de 12,5 copias por prueba. Si la prueba da negativo,
se debe considerar hacer otra prueba a los pacientes que
presenten síntomas que persistan o empeoren, y también se debe
considerar e investigar otras posibles causas de los síntomas.
Además, el ensayo de LAMP es muy sensible y permite detectar
una parasitemia de bajo grado que no es la causa directa de lossíntomas de presentación. Por lo tanto, a la hora de establecer eldiagnóstico final y determinar el tratamiento, siempre se debe teneren cuenta el estado clínico del paciente.
(2) Aunque los cebadores se han diseñado para hibridarse con una
región que contenga un número relativamente pequeño devariaciones, es posible que el ADN de Plasmodium falciparum
adquiera variaciones adicionales en esta región y se vuelva menos
sensible a este producto. Así pues, que una prueba haya dado
negativo no siempre permite descartar la infección por Pf.
(3) Este producto es un kit para detección cualitativa; no está diseñado
para la determinación cuantitativa. Por lo tanto, la intensidad de laluz fluorescente observada o el tiempo de aumento de la turbidez
determinado por el turbidímetro en tiempo real HumaTurb C+A no
guarda relación con la concentración de ADN molde.

Plasmodium que se transmiten a través de las picaduras demosquitos infectados. Después de desarrollarse en el hígado
durante algún tiempo, se liberan parásitos en estadio sanguíneo,que se introducen en los glóbulos rojos y los lisan durante su
posterior reproducción, causando síntomas, entre estos la fiebre. El
ensayo de LAMP permite detectar el ADN de parásitos en estadio
sanguíneo.
El ensayo Malaria LAMP se evaluó en muestras de sangre
enviadas para la prueba de la malaria en un laboratorio
especializado. Tras la microscopía estándar, las muestras seanonimizaron, el ADN se extrajo de las muestras de sangre
mediante el método PURE y se analizó mediante el ensayo Malaria
LAMP utilizando cebadores específicos para Pf, con dos métodosde lectura diferentes. Por último, se utilizó la PCR anidada como
método de referencia. Un total de 705 ensayos Malaria LAMP, de loscuales 56 procedían de pacientes que habían dado positivo por
microscopía, se compararon con la PCR anidada (método dereferencia). La sensibilidad y la especificidad de los cebadores
específicos para Pf de la malaria fueron del 98,4 % y del 98,1 %,respectivamente.6)
Malaria LAMP frente a PCR anidada
Sensibilidad diagnóstica
98,4 % (91,4-100,0)
Especificidad diagnóstica
98,1 % (96,8-99,0)
Valor predictivo positivo
83,8 %
Valor predictivo negativo
99,8 %
Coeficiente de probabilidad +51,79(sensibilidad/(1-especificidad))
Coeficiente de probabilidad 0,0163((1-sensibilidad)/especificidad)

SUSTANCIAS INTERFERENTES

En nuestros estudios internos se observó que el análisis turbidimétrico
no se ve afectado por la presencia de heparina-Na (2.600 unidades/dL),
heparina-Li (2.600 unidades/dL), EDTA-2Na (300 mg/dL), EDTA-2K(380 mg/dL), EDTA-3K (340 mg/dL), citrato de sodio (7,6 %), bilirrubina
libre (66,3 mg/dL), bilirrubina conjugada (67,0 mg/dL), quilo (turbidez dela formazina: 5.433) y hemoglobina hemolítica (1.567 mg/dL). El EDTA
puede causar falsos positivos cuando la lectura del resultado se hacepor fluorescencia.
En cuanto a los fármacos, nuestros estudios internos revelaron que la
medición no se vio afectada por la presencia de proguanil (0,6 µg/mL),
cloroquina (1,1 µg/mL), quinina (26,7 µg/mL), clorhidrato de doxiciclina(10,0 µg/mL), mefloquina (4,7 µg/mL), primaquina (0,5 µg/mL),artemisinina (2,6 µg/mL), loxoprofeno sódico (17,7 µg/mL), paracetamol(9,0 µg/mL), isoniazida (23,3 µg/mL), etambutol (5,7 µg/mL), rifampicina(26,6 µg/mL), pirazinamida (116,7 µg/mL), claritromicina (12,4 µg/mL),
estreptomicina (133,3 µg/mL), cefotaxima sódica (333,3 µg/mL) ylevofloxacina (7,5 µg/mL).

PARÁMETROS DE CALIDAD(1) Exactitud
En los análisis de las siguientes muestras:• Muestra negativa (concentración: 0 copia/prueba)• Muestra positiva 1 (100 copias/prueba)• Muestra positiva 2 (1.000 copias/prueba)
La muestra negativa debe dar negativo, mientras que las muestras
positivas 1 y 2 deben dar positivo.
(2) Reproducibilidad intraserial
Si se analizan simultáneamente cinco muestras negativas y cinco
muestras positivas, las muestras negativas deben dar siempre
negativo, mientras que las muestras positivas deben dar siempre
positivo.
(3) Límite de detección
12,5 copias/prueba(4) Reactividad cruzada
El sistema analítico dio positivo para Plasmodium falciparum ynegativo para otros microorganismos patógenos, como se detalla
en la tabla siguiente:

Malaria LAMP frente a microscopía
Sensibilidad diagnóstica
100,0 % (93,2-100,0)
Especificidad diagnóstica
96,6 % (94,9-97,9)
Valor predictivo positivo
70,3 %
Valor predictivo negativo
100,0 %
Coeficiente de probabilidad +29,41(sensibilidad/(1-especificidad))
Coeficiente de probabilidad 0,0000((1-sensibilidad)/especificidad)

INFORMACIÓN PARA PEDIDOS
Código delproducto

Género Plasmodium
Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
Plasmodium ovale
Plasmodium malariae
Plasmodium knowlesi

Positivo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo

Otros microorganismos patógenos
Trypanosoma brucei
Trypanosoma cruzi
Leishmania donovani
Leishmania chagasi
Toxoplasma gondii
Entamoeba histolytica
Giardia intestinalis
Theileria parva
Mycobacterium tuberculosis

Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo
NegativoÍndice978000Loopamp
MALARIA Pf
Detection Kit

96 pruebas

962000

HumaLoop M

970000Loopamp
PURE DNA
Extraction Kit

963200

HumaTurb C+A

964000

HumaHeat
Incubator

980000

HuMax ITA

1 Unidad principal
1 Unidad de detecciónde fluorescencia
90 pruebas
1 Unidad de control
1 Unidad de amplificación
Termobloque
MicrocentrífugaAVISO

En caso de producirse cualquier incidente grave relacionado con el
producto, notifique al representante autorizado, al fabricante y a laautoridad competente del Estado miembro en el que esté establecido elusuario y/o el paciente.

REFERENCIAS

1) Notomi T., et al.: Nucleic Acids Research 28, No. 12, e63 (2000)
2) Nagamine K., et al.: Clin. Chem. 47, No. 9, 1742–1743 (2001)
3) Mori Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No. 1, 150–
154 (2001)
4) Tomita N., et al.: Nat. Protoc. 3, No. 5, 877–882 (2008)
5) The guideline for the bio-safety and bio-hazard (by the JapaneseSociety for Bacteriology): Japanese Journal of Bacteriology 54, No.
3, 667–715 (1999)
6) Spencer D. Polley., et al. J Infect Dis. 208(4), 637-644 (2013)

Otros
ADN genómico humano

Nombre delNegativo(5) Información sobre un calibrador
En la evaluación de los parámetros de calidad de este producto se
utilizó como calibrador el ADN plasmídico que contiene ADN
mitocondrial de Pf.
(6) Calidad de los resultados clínicos
La malaria está causada por ciertos parásitos del género

13

Diagrama de flujo
Procedimiento para la detección de la turbidez en tiempo
real
Preparación de la solución problema
Prepare las soluciones problema de ADN
mediante extracción del ADN de las muestras desangre recogidas.

Preparación
los reactivosdeRetire el número necesario de tubos
de reacción del dMAL Pf.
(Para las muestras, el control
negativo y el control positivo)

Mezcla del reactivo y la solución
Transfiera 30 µL de solución problema o solución decontrol a cada uno de los tubos de reacción.
Utilice la solución de control negativo como control
negativo.
Utilice el PC Mal como control positivo.
(El control positivo se debe preparar al final.)
Invierta los tubos de reacción para recoger la solución
en la tapa. Mantenga los tubos en posición invertida
durante 2 minutos.
Invierta los tubos de reacción cinco veces para mezclar
el contenido y a continuación centrifúguelos.
(Evite la formación de burbujas.)
Amplificación
Coloque los tubos de reacción en el bloque de reaccióndel turbidímetro.
Como se indica en las instrucciones de uso delturbidímetro, inicie la reacción, y a continuación
determine y evalúe la turbidez (durante 40 minutos a
65,0 °C).
Confirme la finalización de la inactivación de la polimerasa (durante 5
minutos a 80 °C o durante 2 minutos a 95 °C). Retire todos los tubos dereacción del turbidímetro y deséchelos sin abrirlos. Tenga cuidado deno dañar los tubos.

TABLA DE SÍMBOLOS
Número decatálogo

Consulte las
instrucciones de uso

Fecha de caducidad

Diagnóstico in vitro
dispositivo médico

Fabricante

Límite de temperatura

Código del lote

Contenido suficientepara <n> pruebas

Representante
autorizado en la
Comunidad Europea

Importador

HUMAN Gesellschaft für Biochemica
und Diagnostica mbH
Max-Planck-Ring 21, 65205 Wiesbaden, Germany*Fecha de revisión: 2023-06-23

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