Gebrauchsanweisung

Gebrauchsanweisung auf unserer Website: https://www.eiken.co.jp/en/ifu*380263-C

Negativkontrolle Mal (NC Mal)·························· 3 x 0,5 mL
30 µL Tropfer··········································· 5 x 12 Tropfer

975000Deutsch

SSP verfügbar in EUDAMED*a: Die aus geo Bacillus stearothermophilus stammende Bst DNAPolymerase ist eine strangversetzende DNA-Polymerase ohne
5′→3′-Exonukleaseaktivität.
*b: Primer für die mitochondriale DNA von Pv, gereinigt aus
synthetisierten Oligonukleotiden durch HPLC.
*c: Die PC PV enthält ein Produkt, das aus der In-vitro-Amplifikationeines künstlichen Gens aus der mitochondrialen DNA von Pv
stammt (GenBank-Nr. AF055587).

Loopamp MALARIA Pv
Detection Kit
ZWECKBESTIMMUNG

Das Loopamp MALARIA Pv Detection Kit ist ein qualitativesIn-vitroDiagnostikum zum Nachweis der Plasmodium vivax DNA, die aus
Humanblutproben von Patienten mit Verdacht auf eine Malaria-Infektion
gewonnen wird. Das Kit hilft bei der Diagnose einer Plasmodium vivaxInfektion und ist für die Verwendung in professionellen Labors und
Krankenhäusern durch entsprechend geschultes Personal vorgesehen.
Das Ergebnis kann entweder mit einem automatischen Turbidimeteroder optisch unter UV-Bestrahlung interpretiert werden.

Die Abkürzungen der folgenden Reagenzien, ihre Chargennummer
und der Hersteller (EKN) sind wie folgt auf den Behältern aufgedruckt:
Reagenzien
Positivkontrolle Mal Pv
Negativkontrolle MalTESTPRINZIP

Beschriftungam
PC PV
Lot No., EKN
NC MalLot No., EKN

Deckelcode
PC
PV
NC
Mal

*Informationen zur Metrologischen Rückverfolgbarkeit

Dieses Produkt basiert auf dem von der Eiken Chemical Co., Ltd.
entwickelten Nukleinsäure-Amplifikationsverfahren „Loop-mediatedisothermal amplification“ (LAMP).
Die LAMP-Methode zeichnet sich durch folgende Merkmale aus: (1) Es
wird nur ein Enzym benötigt und die Amplifikationsreaktion läuft unter
isothermen Bedingungen ab.1),2) (2) Sie hat eine extrem hohe Spezifität
aufgrund der Verwendung von vier Primern, die sechs verschiedene
Regionen auf der Ziel-DNA erkennen. (3) Sie hat eine hohe
Amplifikationseffizienz und kann in kurzer Zeit eine hohe Konzentration
an Amplifikat erzeugen, was einen optischen oder automatischen
Nachweis ermöglicht.3),4)
Die P. vivax (Pv)-spezifischen Primer sind für den Nachweis der
mitochondrialen DNA von Pv konzipiert. Die Alignment-Analyse hat
bestätigt, dass die anvisierten DNA-Sequenzen spezifisch für die PvSequenz sind.
Die aus den Blutproben extrahierte Test-DNA-Lösung wird in ein
Reaktionsgefäß gegeben. Die strangversetzende DNA-Polymerase,
Desoxyribonukleosidtriphosphate (dATP, dCTP, dGTP und dTTP),
Calcein, Reaktionspuffer und Malaria Pv-spezifische Primer werden ingetrockneter Form in der Verschlusskappe des Reaktionsgefäßes
aufbewahrt. Dieses getrocknete LAMP-Reagenz (Malaria Pv
Nachweisreagenz (dMAL Pv)) löst sich auf, wenn die DNA-Lösung
hinzugefügt wird. Das Reaktionsgefäß wird dann bei 65,0 °C inkubiert
und die DNA wird durch die strangversetzende DNA-Polymerase in der
LAMP-Reaktion amplifiziert.
Der Nachweis von amplifizierten Produkten basiert auf der Trübung
von Magnesiumpyrophosphat (einem weißen Präzipitat, das als
Nebenprodukt der DNA-Amplifikation entsteht).3) Alternativ kann auchein visueller Nachweis unter UV-Licht verwendet werden. Vor der DNAAmplifikation befindet sich das Calcein im Reagenz im gequenchten
Zustand, da es an Mangan-Ionen gebunden ist. Zu Beginn der DNAAmplifikation konkurrieren die erzeugten Pyrophosphat-Ionen mit den
Mangan-Ionen um die Bindungsstellen, wodurch das Calcein
fluoreszierend wird.4)

Die Positivkontrolle wird aus Plasmodium vivax Salvador I (GenBankNr. AF055587) hergestellt, da es keinen internationalen Standard fürPlasmodium-DNA gibt. Die Plasmid-DNA, die die Zielregion der
genomischen DNA von Plasmodium vivax Salvador I enthält, wurde als
Vorlage für die Amplifikation des PC PV-DNA-Fragments verwendet.
Das Fragment wird mit der photospektrometrischen Analyse quantifiziert,
und die DNA-Konzentration von PC PV wird auf 2000 Kopien/μl
eingestellt.

WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN(1) Nur zum Gebrauch in der In-Vitro-Diagnostik.
(2) Dieses Produkt ist nur für den Nachweis der DNA von Pv-Parasiten
in Humanblutproben bestimmt. Nicht für andere Zwecke verwenden.
(3) Bei Verwendung dieses Produkts immer diese Serviceanleitung
beachten.
(4) Reagenzien nicht einfrieren.
(5) Keine abgelaufenen Reagenzien verwenden.
(6) Reagenzien unterschiedlicher Chargen nicht mischen.
(7) Reagenzien nicht nachfüllen.
(8) Die Leistung des Loopamp MALARIA Pv Detection Kit hängt vonder Kompetenz des Anwenders und der Einhaltung der
Verfahrensanweisungen ab. Die Tests sollten von entsprechendgeschultem Personal unter strikter Einhaltung der mitgelieferten
Anweisungen durchgeführt werden.
(9) Hitze, Feuchtigkeit und Licht können das dMal Pv zersetzen. Daher
nur die erforderliche Anzahl Reaktionsgefäße (Anzahl Proben +Anzahl Kontrollen) entnehmen und den Aluminiumbeutel sofort
wieder verschließen.
(10) Trockenmittel im Aluminiumbeutel belassen. Hohe Feuchtigkeit
kann das getrocknete LAMP-Reagenz in den Reaktionsgefäßen
zersetzen.
(11) Benutzerhandbuch lesen und vor Beginn des Verfahrens
vergewissern, dass die erforderliche Ausrüstung (Turbidimeter oder
Inkubator) verfügbar ist.
(12) Blutproben stellen ein potenzielles Infektionsrisiko dar. Allgemeine
Vorsichtsmaßnahmen anwenden, um die biologische Gefährdungzu minimieren.5)(13) Die PC PV und die NC Mal enthalten geringe Mengen an
Natriumazid als Konservierungsmittel. Da Natriumazid als giftig
eingestuft ist, jeglichen Kontakt mit Augen, Mund oder Hautvermeiden.
(14) Bei versehentlichem Kontakt von Reagenzien mit Augen, Mundoder Haut die betroffene Stelle sofort mit reichlich Wasser abspülen
und, falls notwendig, einen Arzt konsultieren.
(15) PC PV nicht diluieren oder den Proben beifügen. Stattdessen PC
PV nur wie in dieser Packungsbeilage beschrieben verwenden, um
eine DNA-Kontamination zu vermeiden.
(16) Die PC PV und alle positiven Blutproben getrennt von den anderen
Kit-Reagenzien aufbewahren.

TESTBESTANDTEILE

Die Reagenzien sind bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Datum
haltbar, vorausgesetzt, der Behälter bleibt ungeöffnet bei einer
Lagertemperatur
von2−30 °C.
Bei
Beachtungdieser
Verfahrensanweisungen sind die Reagenzien auch nach dem Öffnen
des Behälters stabil.
Malaria Pv Nachweisreagenz (dMAL Pv)·····2 x 48 Röhrchen
Die folgenden Reagenzien in getrockneter Form sind in jedem
Reaktionsgefäß enthalten:
Bst DNA-Polymerase*a:
Desoxyribonukleosidtriphosphate
Magnesiumsulfat
Calcein
Manganchlorid
Primer*b:
Positivkontrolle Mal Pv (PC PV)*c: ····················· 1 x 1,0 mL

15

・ Proben ： Nicht-antikoaguliertes/heparinisiertes Vollblut odergetrockneter Blutfleck
・ Probenvolumen ： 30 µL (Vollblut) oder 6-mm-Blutfleckstanze(getrockneter Blutfleck)・ Zusatzstoff ： 30 µL einer 334-mM-NaCl-Lösung (nicht im
Lieferumfang des Loopamp PURE DNA Extraction Kit)
vor dem Erhitzen in das Heizgefäß zugeben
・Erwärmen：Für 5 Minuten bei 75 °C(17) Die Verschlusskappe jedes Reaktionsgefäßes enthält das dMAL Pv
in getrockneter Form. Verschlussinnenseite nicht berühren.
(18) Reaktionsgefäße vor Verwendung sorgfältig auf Risse oder Kratzer
prüfen. Beschädigte Gefäße können falsche Ergebnisse liefern undzu DNA-Kontamination von Inkubator und Arbeitsbereich führen.
(19) Reaktionsgefäße vor Ende der LAMP-Reaktion keinem UV-Licht
aussetzen. Längere UV-Lichtbestrahlung kann die Gefäße
beschädigen und zu falschen Ergebnissen führen.
(20) Bei
Verwendung
von
UV-Lichtfürdieoptische
Fluoreszenzbeurteilung nicht direkt in die UV-Lichtquelle schauen.
Schon ein kurzer Blick in das UV-Licht kann die Augen reizen und
konjunktivitisähnliche Symptome hervorrufen. Bei direktem
Blickkontakt mit dem UV-Licht sollte eine Glasscheibe verwendet
oder eine Schutzbrille bzw. Augenmaske getragen werden.
(21) Im Benutzerhandbuch des Inkubators nachschlagen. Bei
Verwendung von HumaLoop M oder Real-Time Turbidimeter
HumaTurb C+A die Reaktionsgefäße vorsichtig aus dem Inkubator
entnehmen, um Verbrennungen zu vermeiden.
(22) Die PC PV nicht als Positivkontrolle für das Loopamp MALARIAPan Detection Kit und das Loopamp MALARIA Pf Detection Kit
verwenden. Keine PC aus anderen Kits als Positivkontrolle fürdieses Kit verwenden.

REAGENZVORBEREITUNG(1) Malaria Pv Nachweisreagenz
Die erforderliche Anzahl von Röhrchen aus dem Aluminiumbeutel
entnehmen und in das Rack stellen (Summe der Proben undKontrollen).

Hinweis: Nach Entnahme der benötigten Röhrchen den
Aluminiumbeutel mit den unbenutzten Röhrchen sofort wieder
verschließen.

(2) Negativkontrolle Mal（NC Mal）
Röhrchen anschnippen (oder abzentrifugieren), um den Inhalt auf
dem Boden des Röhrchens zu sammeln. 30 µL der NC Mal in das
Heizgefäß pipettieren, das im Loopamp PURE DNA Extraction Kit
enthalten ist. Zur Verarbeitung der NC Mal die SOP beachten (imFolgenden
wird
extrahierte
NC
Mal
als
„Negativkontrolllösung“ bezeichnet).

ABFALLENTSORGUNG

Hinweis: Bei jedem Lauf sollte eine Negativkontrolllösung
verwendet werden.

(1) Röhrchen
nicht
nach
der
DNA-Amplifikationöffnen.
Verschlusskappe geschlossen halten und benutzte Röhrchen als
medizinische Abfälle mittels Verbrennung oder doppelt verpackt inverschließbaren Plastikbeuteln entsorgen.
(2) Reaktionsgefäße niemals autoklavieren oder wiederverwenden, daanderenfalls Amplifikate dispergieren und zu Kontamination führen
würden.
(3) Das Hauptmaterial der Reaktionsgefäße und Reagenzröhrchen ist
PP, des Reaktionsgefäßhalters PET, des Aluminiumbeutels
Aluminium und des Kit-Koffers Papier.
(4) Andere Reagenzien, Behälter oder Laborutensilien gemäß lokalen
Vorschriften entsorgen.

(3) Positivkontrolle Mal Pv （PC PV）
Röhrchen anschnippen (oder abzentrifugieren), um den Inhalt auf
dem Boden des Röhrchens zu sammeln.

Hinweis: Die PC PV sollte bei jedem Lauf verwendet werden.

MESSVERFAHREN

Mischen von Reagenzien und Proben(1) HumaLoop M oder Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A
einschalten.
(2) 30 µL der extrahierten DNA-Lösung unter Verwendung desLoopamp PURE DNA Extraction Kit in ein Reaktionsgefäß geben
und die Verschlusskappe schließen.
(3) 30 µL der Negativkontrolllösung unter Verwendung des Loopamp
PURE DNA Extraction Kit in ein Reaktionsgefäß geben und die
Verschlusskappe schließen.
(4) 30 µL der PC PV mit einer Pipette oder dem mitgelieferten Tropfer
in ein Reaktionsgefäß geben und Verschlusskappe schließen.
(5) Alle Reaktionsgefäße anschnippen (oder abzentrifugieren), um die
Lösung auf dem Boden der Gefäße aufzufangen.

PROBENGEWINNUNG(1) Blutproben sollten sofort nach der Entnahme verwendet werden.
(2) Blut in einem vom LAMP-Amplifikationsraum getrennten Raum
entnehmen. Bei der Blutentnahme können Aerosole entstehen, die
die Pv-DNA enthalten und eine Kontamination verursachen.
(3) EDTA und Citrat NICHT als Antikoagulanzien für die Blutentnahmeverwenden, wenn das Ergebnis mittels Fluoreszenz abgelesen
werden soll. Stattdessen wird die Verwendung von Heparin als
Antikoagulanz empfohlen.

ERFORDERLICHEENTHALTEN

MATERIALIEN,

NICHT

IM

Hinweis: Nur wenn sich der Flüssigkeitsstand mittig der beiden
Linien auf einem Reaktionsgefäß befindet, wurden 30 µL
pipettiert.

KIT(6) Diegetrockneten
Reagenzien
durch
UmdrehenderReaktionsgefäße und Sammeln der DNA-Lösung in der
Verschlusskappe rekonstituieren. Zur Rekonstitution dergetrockneten Reagenzien die Reaktionsgefäße 2 Minuten verkehrt
herum lagern.
(7) Zum Mischen des Inhalts die Reaktionsgefäße fünfmal umdrehen.
Vollständige Auflösung der getrockneten Reagenzien in der
Verschlusskappe prüfen.
(8) Alle Reaktionsgefäße anschnippen (oder abzentrifugieren), um die
Lösung auf dem Boden der Gefäße aufzufangen.
Amplifikation
Für optischen Fluoreszenznachweis(Für HumaLoop M)(1) Überprüfen, ob die Temperatur des HumaLoop M 65,0 °C beträgt.
(2) Reaktionsgefäße in den HumaLoop M einsetzen und die grüne
Taste drücken, um die LAMP-Reaktion zu starten (40 Minuten bei
65,0 °C). Einzelheiten zur Bedienung des HumaLoop M sind im
Benutzerhandbuch des HumaLoop M zu finden.
(3) Fertigstellung der Polymerase-Inaktivierung bestätigen (wird vom
HumaLoop M automatisch abgeschlossen). Alle Reaktionsgefäße
aus dem HumaLoop M entnehmen.
(Für Inkubator mit UV-Licht)(1) Die Temperatur des Inkubators auf 65,0 °C einstellen (wobei die
Temperatur der heißen Haube auf 10 °C über der
Reaktionstemperatur oder so nahe wie möglich an diesem Wert
eingestellt werden sollte – Temperaturgenauigkeit: ±0,5 °C). Warten,bis der eingestellte Temperaturwert angezeigt wird.
(2) Reaktionsgefäße
einsetzenundanschließend
dieAmplifikationsreaktion starten (40 Minuten bei 65,0 °C).

・Loopamp PURE DNA Extraction Kit (optional)
・HumaHeat (optional)

Für optischen Fluoreszenznachweis(Für HumaLoop M)
・HumaLoop M(Für Inkubator mit UV-Licht)
・Inkubator (Temperaturgenauigkeit: ±0,5 °C; mit heißer Haube)
・Thermoblock
・UV-Licht oder blaues LED-Licht (Wellenlänge: 240−260 nm und
350−370 nm)
・Schutzbrille oder eine UV-blockierende Augenmaske (optional)
Für Echtzeit-Trübungsmessung
・HumaTurb C+A
Zum Mischen von Reagenzien und Proben
・Mikropipetten (10−100 µL oder 20−200 µL) und Pipettenspitzen mit
Filter・Zentrifuge für Mikroreaktionsgefäße (optional)
・Zentrifuge für acht verbundene Röhrchen (optional)
・HuMax ITA, Mikrozentrifuge (optional)

HERSTELLUNG DER DNA-PROBENLÖSUNG

Um die DNA aus Blutproben zu extrahieren, werden die PUREMethode und die Boil & Spin-Methode (Erhitzen-und-AbzentrifugierenMethode) empfohlen. Weitere Informationen sind in der neuesten
Version des „Manual of Standard Operating Procedures for malaria
LAMP” (SOP) zu finden.
Bei der PURE-Methode ist auf die folgenden kritischen Punkte zu
achten.

16

(3) Nach 40 Minuten die Polymerase mittels dem Thermoblock(5 Minuten bei 80 °C oder 2 Minuten bei 95 °C) inaktivieren, um die
Reaktion zu beenden.

(9) Das dMal Pv sollte vollständig aufgelöst sein. Nicht aufgelöste
Bestandteile können die Leistung beeinträchtigen, z. B. in Formeiner verminderten Sensitivität. Die Röhrchen insbesondere
2 Minuten lang auf dem Kopf stehend lagern.
(10) Die PC PV enthält eine hohe Kopienzahl der Kontroll-DNA. Jegliche
Kontamination anderer Proben mit der PC PV vermeiden. Die
Proben und die Negativkontrolllösung dispensieren und vor dem
Dispensieren der PC PV alle Reaktionsgefäße verschließen.
(11) Zum Sammeln der Bestandteile auf dem Boden des Gefäßes das
Gefäß mit PC PV vor dem Öffnen abzentrifugieren oder vorsichtig
anschnippen. Gefäß unmittelbar nach Dispension von PC PV
verschließen.
(12) Reaktionsgefäße nach Beginn oder Abschluss der LAMP-Reaktion
niemals öffnen. Insbesondere ist darauf zu achten, dass die
Reaktionsgefäße beim Entladen aus dem Inkubator nichtversehentlich aufgehen.
(13) Bei Verwendung des HumaLoop M oder des Real-Time
Turbidimeter HumaTurb C+A wird die Polymerase-Inaktivierung
automatisch durchgeführt.
(14) Bei
anderenInkubatoren
ist
bei
einem
optischen
FluoreszenznachweisvorderMesswerterfassung
eine
Polymerase-Inaktivierung (5 Minuten bei 80 °C oder 2 Minuten bei
95 °C) durchzuführen, um falsche Ergebnisse zu vermeiden.
(15) Amplifikate in den Röhrchen nicht zur Elektrophorese oder fürandere Anwendungen wiederverwenden.

Für die Echtzeit-Trübungsmessung mit HumaTurb C+A (siehe
Verfahrensablaufdiagramm)(1) Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A für den Nachweis mit
diesem Produkt konfigurieren.
(2) Prüfen, ob die angezeigte Temperatur 65,0 °C erreicht(Turbidimeter sollte vor Gebrauch 20 Minuten vorgeheizt werden).
(3) Reaktionsgefäße einsetzen und Messung starten.
(4) Turbidimeter-Anzeige auf einen Trübungsanstieg der Positiv- und
Negativkontrollen prüfen. Steigt die Trübung in der Positivkontrollean, in der Negativkontrolle jedoch nicht, läuft die
Amplifikationsreaktion korrekt ab (Abb. 1). Wenn dies nicht der Fallist, verläuft die Amplifikationsreaktion möglicherweise nicht
ordnungsgemäß. In einem solchen Fall sind die betroffenen Proben
erneut zu testen.
(5) Fertigstellung der Polymerase-Inaktivierung bestätigen (wird vom
Turbidimeter automatisch abgeschlossen). Alle Reaktionsgefäße
aus dem Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A entnehmen undungeöffnet entsorgen.

Amplifikationsplots mit Malaria Pv Nachweisreagenz(Analysegerät： Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A)

Negative Probe
Positive Probe 1
Positive Probe 2

0,7

0,7

0,6

0,6

0,5

0,5

Für optischen Fluoreszenznachweis(Für HumaLoop M)
Jedes Reaktionsgefäß in die Fluoreszenz-Detektionseinheit stellen,
bestrahlen und von der Seite beobachten.
(Für Inkubator mit UV-Licht)
Den Boden jedes Reaktionsgefäßes bestrahlen und von der Seite
durch eine Schutzbrille oder eine UV-blockierende Augenmaske
beobachten.
Für einen gültigen Lauf müssen die folgenden Ergebnisse erzielt
werden, wenn sie zum angegebenen Zeitpunkt abgelesen werden:• Positivkontrolle: Emission von grünem Fluoreszenzlicht• Negativkontrolle: keine Emission von Fluoreszenzlicht
Falls eine der Kontrollen ungültig ist, sollten alle Proben derTestserie als ungültig gemeldet und die Proben erneut gemessen
werden.
Nach erfolgter Bestätigung der Gültigkeit der Testserie sind die
Proben wie folgt zu beurteilen:• Positive Probe: Emission von grünem Fluoreszenzlicht.
• Negative Probe: keine Emission von Fluoreszenzlicht.
Für die Echtzeit-Trübungsmessung mit HumaTurb C+A
Nachdem bestätigt wurde, dass die Trübung in der Positivkontrolle
zunimmt, in der Negativkontrolle jedoch nicht, sind die Proben nachden folgenden Kriterien (Abb. 1 und 2) zu bewerten.
• Positiv: leichter Trübungsanstieg zu beobachten• Negativ: kein Trübungsanstieg zu beobachten
Anmerkungen:(1) Die Minimum-Nachweisempfindlichkeit des Loopamp MALARIA
Pv Detection Kit liegt bei 7,5 Kopien pro Test. Im Falle eines
negativen Testergebnisses sollten Patienten mit anhaltenden odersich verschlimmernden Symptomen für einen erneuten Test in
Betracht gezogen werden, und andere mögliche Ursachen der
Symptome sollten ebenfalls in Betracht gezogen und untersucht
werden. Darüber hinaus ist der LAMP-Test hochempfindlich undkann eine geringe Parasitämie nachweisen, die nicht die
unmittelbare Ursache für die auftretenden Symptome ist. Daher
sollte der klinische Zustand des Patienten immer berücksichtigt
werden, wenn eine endgültige Diagnose gestellt und die
Behandlung festgelegt wird.
(2) Obwohl Primer auf eine bestimmte Genregion mit einer relativ
geringen Anzahl von Variationen ausgerichtet sind, kannPlasmodium vivax möglicherweise weitere Variationen in dieser
Region erwerben und weniger empfindlich auf dieses Produkt
reagieren. Deshalb kann eine Pv-Infektion trotz negativen Tests
nicht immer ausgeschlossen werden.

0,4

0,4

0,3

0,3
0,2

0,2

0,1

0,1

0

INTERPRETATION DER ERGEBNISSE

Trübung

Trübung

Negativkontrolle
Positivkontrolle0

5 10 15 20 25 30 35 40

Zeit (min)Abb. 1：Amplifikationsplots für
Kontrollen.

00

5 10 15 20 25 30 35 40

Zeit (min)Abb. 2：Amplifikationsplots für Proben.

VERFAHRENSHINWEISE(1) Die LAMP-Reaktion ist sehr empfindlich, und jede Kontamination
mit selbst kleinen Mengen des amplifizierten Produkts könnte zu
falsch-positiven Ergebnissen führen.
(2) Die Bereiche für die Probenvorbereitung und für die Amplifikation
trennen.
(3) Arbeitsplätze vor und nach dem Testen mit > 0,5 %Natriumhypochloritlösung reinigen.
(4) Alle notwendigen Maßnahmen zur Kontaminationsvermeidung
treffen,insbesondereHandschuhwechsel
nach
Blutprobenübertragung oder bei Kontakt der Handschuhe mit der
DNA-Lösung.
(5) Beim Umgang mit diesem Produkt mikrobielle Kontamination und
Nuklease-Kontamination vermeiden. Schon eine geringe
Kontamination des Reaktionsgefäßes durch Schweiß oder
Speichel kann die DNA zersetzen und ein falsches Ergebnis
verursachen.
(6) Des Weiteren beim Durchführen der DNA-Extraktion die SOP
durchlesen.
(7) Die DNA-Lösung sollte idealerweise sofort nach der Herstellung
verwendet werden. Wenn dies nicht möglich ist, kann die DNALösung bei Raumtemperatur gelagert und innerhalb von
72 Stunden verwendet werden.
(8) (Für HumaLoop M oder einen anderen Inkubator mit UV-Licht）
Wenn Bläschen vorhanden sind, die Röhrchen anschnippen(oderabzentrifugieren), um die Bläschen zu entfernen.
(Für Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A）
Da Bläschen in der Reaktionslösung die Trübungsmessung
beeinträchtigen und zu einem falschen Ergebnis führen können,
sollte Bläschenbildung beim Mischen von Reagenz undProbenlösung vermieden werden. Wenn Bläschen auftreten, das
Röhrchen umdrehen oder anschnippen, um sie zu lösen.

17

(6) Klinische Leistung
Malaria wird durch bestimmte Parasiten der Gattung Plasmodium
verursacht, die durch die Stiche infizierter Moskitos übertragenwerden. Nachdem sie sich einige Zeit in der Leber entwickelt haben,
werden Parasiten im Blutstadium freigesetzt, die in die roten
Blutkörperchen eindringen, diese bei der anschließenden
Vermehrung lysieren und Symptome wie Fieber verursachen. Der
LAMP-Test weist die DNA von Parasiten im Blutstadium nach.
Aus 560 Blutproben, die im Rahmen einer Studie in Peru
gesammelt wurden,6) wurde die DNA mit der Boil & Spin-Methode(Erhitzen-und-Abzentrifugieren-Methode) extrahiert und mit dem
Malaria-LAMP mit Pv-spezifischen Primern getestet. Die Sensitivität
und Spezifität der Malaria Pv-spezifischen Primer gegenüber dernested-PCR lagen bei 84,6 % bzw. 92,0 %.

(3) Dies ist ein Kit für den qualitativen Nachweis. Es ist nicht für diequantitative Bestimmung konzipiert. Daher korreliert die Intensität
des beobachteten Fluoreszenzlichts oder die Anstiegszeit der vom
Real-Time Turbidimeter HumaTurb C+A gemessenen Trübung
nicht mit der Menge an Template-DNA.

INTERFERENZEN

Unsere internen Studien ergaben, dass die Trübungsmessung durch
die Anwesenheit von Heparin-Na (2.600 Einheiten/dL), Heparin-Li(2.600 Einheiten/dL), EDTA-2Na (300 mg/dL), EDTA-2K (380 mg/dL),
EDTA-3K (340 mg/dL), Natriumcitrat (7,6 %), freiem Bilirubin(66,3 mg/dL),
konjugiertem
Bilirubin(67,0 mg/dL),
Chylus(Formazintrübung:5.433)
undhämolysiertem
Hämoglobin(1.567 mg/dL) nicht beeinflusst war. EDTA kann zu falsch-positiven
Ergebnissen führen, wenn das Ergebnis mittels Fluoreszenz gemessen
wird.
Was die Medikamente betrifft, so haben unsere internen Studien
gezeigt, dass die Messung nicht durch die Anwesenheit von Proguanil(0,6 µg/mL), Chloroquin (1,1 µg/mL), Chinin (26,7 µg/mL),
Doxycyclinhydrochlorid (10,0 µg/mL), Mefloquin (4,7 µg/mL), Primaquin(0,5 µg/mL), Artemisinin (2,6 µg/mL), Loxoprofen-Natrium (17,7 µg/mL),
Paracetamol (9,0 µg/mL), Isoniazid (23,3 µg/mL), Ethambutol(5,7 µg/mL), Rifampicin (26,6 µg/mL), Pyrazinamid (116,7 µg/mL),
Clarithromycin (12,4 µg/mL), Streptomycin (133,3 µg/mL), CefotaximNatrium (333,3 µg/mL) und Levofloxacin (7,5 µg/mL) beeinflusst wird.

Malaria LAMP vs. nested-PCR
Diagnostische Sensitivität
84,6 % (78,4-89,6)
Diagnostische Spezifität
92,0 % (88,8-94,5)
Positiver prädiktiver Wert
82,7 %
Negativer prädiktiver Wert
92,9 %
Wahrscheinlichkeitsverhältnis +10,575(Sensitivität/(1-Spezifität))
Wahrscheinlichkeitsverhältnis 0,1674((1-Sensitivität)/Spezifität)

BESTELLINFORMATIONENLEISTUNGSDATEN

Produktnu
Produktbezeichnung
mmer(1) Genauigkeit
Beim Testen der folgenden Proben:• Negative Probe (Konzentration: 0 Kopie/Test)• Positive Probe 1 (100 Kopien/Test)• Positive Probe 2 (1.000 Kopien/Test)
Die negative Probe sollte negativ getestet und die positiven
Proben 1 und 2 positiv getestet werden.
(2) Reproduzierbarkeit innerhalb einer Testserie
Beim Testen von fünf negativen und fünf positiven Proben
gleichzeitig sollten die negativen Proben durchgehend negativ
getestet und die positiven Proben durchgehend positiv getestet
werden.
(3) Nachweisgrenze
7,5 Kopien/Test(4) Kreuzreaktivität
Das Messsystem wurde positiv getestet auf Plasmodium vivax und
negativ auf andere Pathogene, wie in der folgenden Tabelle
angegeben:
Positiv
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ

962000

HumaLoop M

1 Haupteinheit
1 FluoreszenzDetektionseinheit

970000Loopamp PUREDNA Extraction Kit

90 Tests

963200

HumaTurb C+A

1 Kontrollgerät
1 Amplifikationsgerät

980000

HuMax ITA

Mikrozentrifuge

964000

HumaHeat Incubator

Thermoblock

LITERATUR

1) Notomi T., et al.: Nucleic Acids Research 28, No. 12, e63 (2000)
2) Nagamine K., et al.: Clin. Chem. 47, No. 9, 1742–1743 (2001)
3) Mori Y., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 289, No. 1, 150–
154 (2001)
4) Tomita N., et al.: Nat. Protoc. 3, No. 5, 877–882 (2008)
5) The guideline for the bio-safety and bio-hazard (by the JapaneseSociety for Bacteriology): Japanese Journal of Bacteriology 54, No.
3, 667–715 (1999)
6) Die Studie wurde in Zusammenarbeit von FIND und der Universität
Peruana Cayetano Heredia (UPCH) durchgeführt.

Negativ
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ
Negativ

AndereHumane genomische DNA

Loopamp MALARIA
96 Tests
Pv Detection Kit

Bitte melden Sie jegliche schwerwiegenden Zwischenfälle, die im
Zusammenhang mit dem Gerät auftreten, dem Hersteller oder derzuständigen Behörde des Mitgliedsstaates, in dem sich der Benutzer
und/oder der Patient aufhält.

Andere Krankheitserreger
Trypanosoma brucei
Trypanosoma cruzi
Leishmania donovani
Leishmania chagasi
Toxoplasma gondii
Entamoeba histolytica
Giardia intestinalis
Theileria parva
Mycobacterium tuberculosis

975000HINWEIS

Gattung Plasmodium
Plasmodium vivax
Plasmodium falciparum
Plasmodium ovale
Plasmodium malariae
Plasmodium knowlesi

Wirksame Bestandteile

Negativ(5) Informationen zu einem Kalibrator
Beim Leistungstest für dieses Produkt wurde die Plasmid-DNA
verwendet, die die mitochondriale DNA von Pv als Kalibrator
verwendet.

18

Ablaufdiagramm
Vorgehensweise für Echtzeit-Trübungsmessung
Vorbereitung der Probenlösung
DNA-Probenlösungen vorbereiten, indem die DNA
aus gewonnenen Blutproben extrahiert wird.

Reagenzvorbereitung

Die erforderliche Anzahl von
Reaktionsgefäßen des dMAL Pv
nehmen.
(Für Proben, Negativ- und
Positivkontrollen)

Mischen von Reagenz und Probenlösung
30 µL der Proben- oder Kontrolllösung in jedes
Reaktionsgefäß geben.
Die Negativkontrolllösung als Negativkontrolle
verwenden.
PC PV als Positivkontrolle verwenden.
(Positivkontrolle zuletzt vorbereiten.)
Reaktionsgefäße umdrehen, um die Lösung in der
Verschlusskappe zu sammeln. Die Röhrchen
2 Minuten lang auf dem Kopf stehend lagern.
Reaktionsgefäße zum Mischen des Inhalts fünf Mal
umdrehen und anschließend abzentrifugieren.
(Bläschenbildung vermeiden.)
Amplifikation
Reaktionsgefäße in den
Turbidimeters einsetzen.

ReaktionsblockdesReaktion
gemäß
GebrauchsanweisungdesTurbidimeters starten und die Trübung messen undbeurteilen (40 Minuten bei 65,0 °C).
Abschluss der Polymerase-Inaktivierung (5 Minuten bei 80 °C oder
2 Minuten bei 95 °C) bestätigen. Alle Reaktionsgefäße aus dem
Turbidimeter entnehmen und ungeöffnet entsorgen. Dabei darauf
achten, die Gefäße nicht zu beschädigen.

TABELLE DER SYMBOLE
Katalognummer

In Serviceanleitung
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Verfallsdatum

Medizinprodukt für
In-vitro-Diagnostik

Hersteller

Temperaturbegrenzung

Chargennummer

Inhalt ausreichendfür <n> Tests

Bevollmächtigter
Vertreter in derEuropäischen
Gemeinschaft

Importeur

HUMAN Gesellschaft für Biochemica
und Diagnostica mbH
Max-Planck-Ring 21, 65205 Wiesbaden, Germany*Datum der Revision: 2023-06-23

19380263-C