08-06

DNA Fragment Purification Kit®

MagExtractor-PCR & Gel Clean up(Code No. : NPK – 600，NPK-601)

使用说明书

科研用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department
OSAKA JAPAN目 录[1] 前言........................................................................................................................... 1[2] 纯化流程................................................................................................................... 2[3] 试剂盒中所包含的物品........................................................................................... 2[4] 试剂盒以外所需要的其他物品............................................................................... 3[5] 回收DNA溶液 .......................................................................................................... 3[6] 回收琼脂糖凝胶....................................................................................................... 5[7] 疑难解答................................................................................................................... 8【 注意 】
本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，注意安全。由于本试剂盒内含有对人体有害的试剂，所以请务必严格遵守各试剂的相关使用说明书，按要求使用保护罩等防护措施。

[1] 前言
MagExtractor - PCR & Gel Clean up-利用在Chaotropic（盐）试剂存在的情况下，核酸能吸附在硅胶上的特性1），用于手动法对DNA片段进行纯化。本试剂盒采用磁硅胶粒子，若使用磁性台架，则能最大限度地减少复杂的离心操作，能够快速地的纯化DNA片段。
1)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76(2) 615-619(1979)
特征·从 DNA 溶液（约 100μl），以及 TAE·TBE 琼脂糖凝胶（约 0.3g）中，能够以平均回收率 60～70％比例回收 DNA 片段（约 100bp～50kbp）。
·能够在 5 分钟之内从 DNA 溶液中，或者在 15 分钟之内从琼脂糖凝胶
中回收 DNA 片段。
·由于在室温下琼脂糖凝胶可以被融解，因此无需进行加热反应。
* 要彻底去除混杂在回收液中的乙醇时则需要进行加热处理（55℃）。

试剂盒的用途·脱盐，去除 dNTPs。
·去除引物。
·去除酶（碱性磷酸酶等）。
·从电泳后的琼脂糖凝胶块中回收 DNA。
回收的 DNA 的用途·RI.Non-RI 测序反应·限制酶反应
·标记反应
·杂交反应
·连接反应
·转化反应·扩增反应1

http://www.bio-toyobo.cn东洋纺（上海）生物科技有限公司[2] 纯化流程下图显示为使用 MagExtractor-PCR &Gel Clean up-时的纯化流程。

电泳后的凝胶凝胶块
吸附液

Melt

磁珠

BindWash
磁石
磁性或离心分离洗净液

溶出液

75％乙醇Elute纯化 DNA 片段[3] 试剂盒中所包含的物品
本试剂盒中包含以下试剂。（50 次份）

试剂量

保存条件

吸附液*22ml

避光室温保存

洗净液*

33ml

室温保存

磁珠

1.8ml

室温保存

垂询电话：021-58794900

2

*吸附液，洗净液在低温情况下会析出结晶。请一边用手捂暖，一边将其倒转混合让结晶溶解后使用。另外，吸附液及洗净液内含有蛋白变性剂。在使用时务必注意，万一沾到身体，请立刻用清水冲洗。

[4] 试剂盒以外所需要的其他物品
1．试剂
·灭菌蒸馏水<溶出液>·75％乙醇<洗净用>
2．器具，器材·1.5ml 小型试管用磁性台架·简易台式离心机
·漩涡混合器·Heat Block 55℃（用于在需要去除混于回收液中的乙醇的场合）*可使用本公司的磁性台架 Magical Trapper（Code No.：MGS-101）等产品。

[5] 回收 DNA 溶液
1．前言·本操作程序用于从 DNA 溶液（约 100μl）中回收 DNA 片段。
·能够回收的 DNA 大小约为 100bp～50kb。另外，40bp 以下的核酸几乎能够被加以除去。
· 磁珠的最大吸附量为每 30μl 磁珠大约吸附 5μg。使用时请以 2.5μg 左右为参考量。
·能够从 PCR 反应液，限制酶反应溶液，碱性磷酸酶反应液等各种反应液中回收 DNA。
·回收后的 DNA，能够用于限制酶处理、测序、连接、标记、杂交等多种反应。

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2．操作程序DNA溶液（100μl）1）↓← 400μl 吸附液↓← 30μl磁珠2)↓不时用漩涡混合器搅拌，并放置约 1～2min（室温）B/F（固/液）分离3）↓←（600μl洗净液）4）↓漩涡混合器搅拌 10sec，B/F分离。3）↓←1ml75％乙醇4）↓漩涡混合器搅拌 10sec，B/F分离。3）
瞬时高速离心，彻底去除上清部分。
（打开小型试管的盖子，55℃下放置 5min，干燥）4）↓←25～100μl 蒸馏水↓漩涡混合器搅拌 10sec，（在无法充分将粒子分离的情况下，请用 pipetting 来分离粒子。
）↓放置 2min
B/F分离，回收上清液。5）1）请尽量不要含矿物油。
2）使用磁珠前，请彻底悬浊混合后再使用。
3）将试管放置在磁性台架上，让磁珠靠近磁石，用微量移液器持续去除上清部分。通过乙醇清洗时，可以通过将上清液倒入其他容器进行去除。
B/F 分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m 程度，5sec.的离心进行分离。g 会根据离心机的转子口径而发生变化，所以请
调整转数，使得能更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。
4）请参照 3.的表。
5）回收液中少量混入的磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附度等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

垂询电话：021-58794900

43．关于工序的省略，纯化规模·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）
洗净
用途
洗净液

干燥

75％乙醇
溶液

测序，限制酶反应，连接反应等的前处－1次－－2次－1次

55 ℃ ，（2 次）

5min理盐的混入会产生影
响的场合乙醇的混入会产生
影响的场合要去除混入的酶的场合－

1次

1次－（2 次）要通过吸光度来准确定量核酸浓度的

1次备注2次－场合标准操作程序。回收的核酸能用于Low Buffer 系列的限制酶切断。
吸附液和洗净液含有高浓度的盐分。
用于易受乙醇影响的前处理。

用于去除碱性磷酸酶等。

吸附液内含有能吸收紫外线的物质。

·根据 DNA 溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净液和磁珠的使用量。
此时，无需减少 75％乙醇溶液的使用量。

[6] 回收琼脂糖凝胶
1．前言·本操作程序适用于从 TAE 或者 TBE 琼脂糖凝胶（约 0.3g）中回收 DNA 片段。
本操作程序是以琼脂糖浓度 2％以下的凝胶为对象。要使用 2％以上的凝胶时，推荐所使用凝胶的量少于 0.3g。另外，本操作程序不需要使用特殊的低融点琼
脂糖凝胶。
·能够回收的 DNA 大小约为 100bp～50kbp。
·回收后的 DNA 主要用于连接反应、标记、测序等反应。

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2．操作程序琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色。
↓在 UV 照射下（Long wave），为了使得目标条带尽可能地变小，使用切割刀或手术刀等进行切开。
↓把切开的琼脂糖切细，放到 1.5ml 小型试管中。（此时称得重量，如果大于 0.3g则分几次进行。）1）↓←400μl 吸附液
在凝胶完全溶解之前，将其放置在室温中，并不时进行搅拌。2）↓←30μl磁珠3）↓经常用漩涡混合器搅拌，并放置 2min（室温），B/F分离。4）↓←600μl 洗净液↓漩涡混合器搅拌 10sec，B/F分离。4）↓←1ml75％乙醇溶液5）↓漩涡混合器搅拌 10sec，B/F分离。4）瞬时高速离心，彻底去除上清部分。
（打开微型试管的盖子，55℃下放置 5min，干燥）5）↓←25～100μl 蒸馏水↓漩涡混合器搅拌 10sec（在无法充分分开粒子的情况下，请用 pipetting 来分散粒子。）↓放置 2min
B/F分离，回收上清液6）1） 将琼脂糖凝胶制成切片，以利于溶解。
2） 如果想要快速溶解琼脂糖凝胶或凝胶难以溶解时，请加温至 55℃5min。
3） 使用磁珠前，请彻底混合后再使用。

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64） 将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去除上清部分。要洗净乙醇，也可以通过将上清液倒入其他容器来去除。B/F 分离时推荐使用对应于微型试管
的磁性台架，但也可使用简易台式离心机，用大约 6,000r.p.m 程度，5sec.的离心进行分
离。g 会根据离心机的转子口径而发生变化，故请调整旋转数，使得更有效地集合粒子，
并保证凝结不至于过度。
5） 请参照 3.的表。
6） 回收液中混入少量磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附度等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

3．关于工序的省略，纯化规模·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）
洗净用途连接反应, 测序等盐的混入会产生影
响的场合乙醇的混入会产生
影响的场合洗净液75％乙醇

*溶液干燥

1次

1次－

1次

2次－

1次

1 次（2 次）

1次2次

标准操作程序。
吸附液和洗净液中含有高浓度的盐分。

55℃，用于容易受乙醇影响的前处

5min理。

要通过吸光度来准确定量核酸浓度的

备注－场合

吸附液内含有吸收紫外线的物质。

*从琼脂糖凝胶中回收核酸时，必须用洗净液清洗。
·根据 DNA 溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净液和磁珠的使用量。此时，无需减少 75％乙醇溶液的使用量。

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东洋纺（上海）生物科技有限公司[7] 疑难解答
1．回收量低原因
去除乙醇
不彻底
溶出不充分

对策
瞬时高速离心后，请仔细去除 75％乙醇溶液。
通过 10mM Tris-HCI（pH8.0），或者 TE buffer 能够提高溶出的效率。另外，如果加温至 55℃保持 2min 能够更加有效地提高溶出效率。

吸附时间不如果吸附过剩，回收量则会变少。最恰当的吸附时间是，对于 DNA 溶液合适为 1～2min，对于凝胶则为 2min。

溶出时的搅拌不充分琼脂糖凝胶的量大于 0.3g
使用 2％以上
的琼脂糖
没有用洗净
液清洗

溶出时，如果磁珠的混合不充分，回收量会减少。在瞬时高速离心后，磁珠会在底部结块，请仔细将其散开。特别是在从琼脂糖凝胶中进行纯化的时候，结块的磁珠会比较难以重新散开。
请减少琼脂糖凝胶的量。

请减少琼脂糖凝胶的量。

从琼脂糖凝胶中回收 DNA 时，请务必先用洗净液清洗。

2．回收的核酸的吸光度不准确
原因

对策清洗不充分

吸附液中含有吸收紫外线的物质。要对回收的核酸定量，请用洗净液以及75％乙醇溶液来清洗。

混入了

吸附液中含有吸收紫外线的物质。请仔细去除吸附液。用面纸等擦拭试管

吸附液

的盖子上沾有的吸附液，可以有效改善状况。

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83．回收后的核酸不能良好地进行反应原因对策盐阻碍请添加两次 75％乙醇溶液进行清洗的工序。吸附液和洗净液都含有高浓度

了反应

的盐分。

乙醇阻碍了反应请按照操作程序，对乙醇进行干燥处理。

酶未能要去除反应液中的碱性磷酸酶等酶，请用洗净液以及 75％乙醇溶液进行清

完全去除洗。

反应用的从琼脂糖凝胶中回收核酸时，反应用的酶量应比通常要多，这样就能得到酶过少

准确良好的结果。

使用的琼脂糖级别不够请使用高级别的琼脂糖。

从琼脂糖凝胶
中分离条带
时，受到的紫请用 Long wave（365nm 附近）的紫外线来进行切片工作。

外线照射过多9

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