08-05

Nucleic Acid Purification Kit®

MagExtractor－Genome－（Code No :NPK-100, NPK-101）

使用说明书

科研用

TOYOBO CO., LTD. Life Science Department
OSAKA JAPAN目

录

[1] 前言........................................................................................................................... 1[2] 使用前须知............................................................................................................... 1[3] 试剂盒中所包含的物品........................................................................................... 1[4] 操作程序................................................................................................................... 2
1．试剂盒以外所需要的其他物品 ............................................................................ 2
2．样品的前处理方法 ................................................................................................ 3
3．抽提流程 ................................................................................................................ 5
4．手动法抽提Genomic DNA.................................................................................... 5
5．用MFX-2000 抽提Genomic DNA....................................................................... 11
6．抽提后分析 .......................................................................................................... 16[5] 疑难解答................................................................................................................. 17[6] 参考文献................................................................................................................. 19【 注意 】
本试剂盒中所包含的都是科研用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使
用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，并注意安全。

z对于 PCR 法，Hoffmann-La Roche 公司保留专利。

z

MagExtractor®是东洋纺织株式会社的登录商标。

z

FALCON®是BECTON DICKINSON公司的登录商标。

[1] 前言
MagExtractor®-Genome-利用Chaotropic（盐）存在的情况下，DNA能吸附在硅胶上的特性1），2），用于Genomic DNA的纯化。本试剂盒通过使用自动核酸抽提
装置MFX-2000，能够方便地从全血、培养细胞等生物样品中抽提出高纯度的
Genomic DNA。另外，本试剂盒也可以作为手动抽提用试剂盒使用。

特征·由于无需乙醇沉淀操作、离心分离操作等，可在短时间完成抽提。
·不含苯酚及氯仿等危险物质。
·从全血中直接抽提 DNA，无需进行复杂的血细胞分离操作。
·抽提出的 DNA 回收于灭菌水中，能够直接用于 PCR 等实验。

[2] 使用前须知
MagExtractor®-Genome-主要用于从以下样品中抽提DNA。
对应样品
血液
培养细胞
组织
鼠尾

获取量
2μg / 100μl 全血
3μg /5×105cell（HeLa）
5μl / 5mg 组织（猪的精巢）
3μl / 2mm 尾巴纯度（A260/A280比例）用途

1.8±0.1

PCR·在用于组织和鼠尾的情况下，需要进行前处理（匀浆和溶解）。详细请参照 4～5 页。
·获取量会因样品的种类以及状态而有所变动。上表中数据仅作参考。
·此外，只需通过适当的前处理，也能够从石蜡包埋组织切片，酵母，乳酸菌等中抽提 DNA（详细情况请打本公司的技术服务热线）。
·请在室温（20～30℃）下使用本试剂盒。如果使用时温度过低或过高，将无法完全发挥本
试剂盒的性能。

[3] 试剂盒中所包含的物品
MagExtractor®-Genome-中含有 50 次份（Code No：NPK-100）和 100 次份（Code
No：NPK-101）的 2 种。

1http://www.bio-toyobo.cn

东洋纺（上海）生物科技有限公司

NPK-100（50 次份）
50ml . 溶解·吸附液（含蛋白质变性剂）
100ml ........... 洗净液（含蛋白质变性剂）
3ml ....................................................... 磁珠

4℃下保存
4℃下保存
4℃下保存

NPK-101（100 次份）
100ml 溶解·吸附液（含蛋白质变性剂）
200ml ........... 洗净液（含蛋白质变性剂）
6ml ....................................................... 磁珠

4℃下保存
4℃下保存
4℃下保存

·所有试剂都在 4℃下保存，使用前请先回复到室温。如果是在短时间内（1 个月内）使用，也可以在室温下（25℃）保存。
·溶解·吸附液和洗净液中含有高浓度的蛋白质变性剂，使用时请格外小心，并请戴上手套做好防护措施。万一试剂沾在手或者皮肤上，请用清水充分清洗。如若碰到眼睛，请
立刻用清水清洗，然后去医院就诊。
·使用本公司的自动核酸抽提装置 MFX-2000 时，请在指定的试管内注入相应的剂量后放置在规定位置。

[4] 操作程序
1．试剂盒以外所需要的其他物品（1）试剂
·灭菌水（双蒸水或者 milliQ 水经高温高压湿热灭菌后所得）·乙醇溶液（使用 MFX-2000 进行自动抽提时使用 99.5％以上的特级品，使用
手动抽提时使用 70％乙醇溶液）（2）器具·器材·微量移液器·微量移液器用 Tip·匀浆器（微型试管用/组织处理用）·台式离心机（能够达到 3,000～10,000rpm 左右的旋转速度）
使用 MFX-2000 时·抽提专用试管（Code No：MFX-301）
垂询电话：021-58794900

2

·带滤芯 Tip 头（Code No：MFX-401）·离心管（50ml用，15ml用，2ml用）1）
使用手动法时
·1.5ml 离心管·1.5ml 离心管用磁性台架（市场上有售，也可用离心法代替）·涡旋振荡器（精工公司制造的 MT-360 等）*1设置试剂用离心管请使用以下产品。50ml离心管：FALCON® 2170，15ml离心管：FALCON®

2196 （都是BECTON DICKINSON公司生产），2ml离心管：Assist试管No 72.694（Assist公司生产）。

2．样品的前处理方法本试剂盒可用于于全血和培养细胞等生物样品。不同种类的样品，准备步骤
也会有所不同。另外，请严格控制样品量。如果样品量超过规定标准，抽提效果会有很大影响；另外，也有可能会使机器产生故障。
(1) 全血将 100μl均匀混合的血液加入离心管1）内。
·除了新鲜血液外，也可以使用EDTA或肝素进行过抗凝固处理后的血液，以及冻结保
存后解冻出来的血液等2 ，但肝素处理后的血液DNA会严重影响PCR效果。
）·血液量不足 100μl 时，请添加溶解·吸附液以调整到 100μl。

(2) 培养细胞将PBS（Phosphate-Buffered Saline）下回收的培养细胞 1×105～1×106cell左右注入到Assist试管（No 72.692）或者 1.5ml离心管内，离心分离（6,000rpm，5分钟）后，去除上清液。
·细胞密度为 1×105～1×106cell / 100μl 时，也可直接取其中 100μl 用于抽提，但最好先用 PBS 洗涤一遍。

(3) 组织，鼠尾请从如下方法中选取一种进行样品的溶解处理。对于肝脏组织等多种组织样品，不管使用哪种方法，Genomic DNA的抽提效率和纯度差别不大3）。

3

http://www.bio-toyobo.cn

东洋纺（上海）生物科技有限公司① 在溶解·吸附液中溶解样品组织块（10mg以下）或者鼠尾（大约 2～5mm）|←850μl 溶解·吸附液| 匀浆（使用微型匀浆器）| 离心分离（10,000rpm.，5 分钟）
上清液（约 850μl）·将全部上清液加入离心管内。
·上清液不足 850μl 时，请添加溶解·吸附液以调整到 850μl。

*1

除了MFX-2000 专用离心管（Code No：MFX-301）以外，还可以使用Assist离心管（No 72.692）

或者 1.5ml离心管等。
*2使用长期存放的血液时，请务必确认是否已经凝固。凝固则会造成Tip堵塞。

*3

根据组织的种类以及状态，使用前处理②可能会使抽提效率提高。

通过 Proteinase K 消化来溶解样品组织块（10mg 以下）或者鼠尾（大约 2～5mm）|←90μl Proteinase K buffer（100mM NaCl，10mM Tris-HCl（pH8.0），25mM EDTA）|←5μl 10mg/ml Proteinase K（30U/mg）|←5μl 10％ SDS| 55℃，6～18hr.加温（途中倒转混合 2，3 次，进行充分消化）| 离心分离（10,000rpm.，5 分钟）
上清液（约 100μl）·将全部上清液加入离心管内。
·上清液不足 100μl 时，请添加溶解·吸附液以调整到 100μl。

垂询电话：021-58794900

4

3．抽提流程
以下是使用MagExtractor®-Genome-的抽提流程。
样品|←溶解·吸附液..................................... [样品的溶解]|←磁珠 .................................. [Genomic DNA 的吸附]| B/F 分离（固液分离）|←洗净液............................. [非特异性吸附物的去除]| B/F 分离（固液分离）|←70％乙醇溶液..................... [蛋白质变性剂的去除]| B/F 分离（固液分离）|←溶出液（灭菌水）...... [DNA 从磁珠上溶解分离]| B/F 分离（固液分离）回收上清液（100μl）

4．手动法抽提 Genomic DNA
本试剂盒也能用于手动法抽提DNA1）。根据样品的种类，请按照以下步骤进
行抽提操作。
·不同种类的样品，准备步骤也会有所不同。详细事项请参照“样品前处理方法”（p4～5）。

*1

如果样品量略有增减，试剂量也应相应按比例增减。
·对于磁珠分离，推荐使用市场上销售的 1.5ml 微型试管用磁性台架，也可以通过台式
离心机进行 3,000rpm 30 秒左右的离心来分离。
·除了本试剂盒，还需要 70％乙醇溶液和灭菌水。请将无水乙醇和灭菌水按 7：3 的体
积比混合均匀，制备成 70％乙醇溶液（每个样品需要 1.8ml）。
·抽提操作请全部在室温下进行。

5

http://www.bio-toyobo.cn

东洋纺（上海）生物科技有限公司（1）全血①在 1.5ml 微型试管中注入 100μl 血液。
②添加 750μl 溶解·吸附液和 40μl 磁珠后，使用试管混合器剧烈混合 10 分钟。
·加入磁珠前，请务必将磁珠溶液充分混合后再使用。
·请调节搅拌速度，尽量剧烈，使得样品和磁珠充分混合。

③将离心管置于磁性台架上，放置 30 秒左右使磁珠聚集，然后去除上清液。
·如果离心管盖内侧粘有磁珠，可倾斜离心管数次，使磁珠完全聚集。
·置离心管于磁性台架上，用微量移液器去除上清液。
·尽可能完全地去除上清液，但尽量不要吸除磁珠。

④离心管中添加 900μl 洗净液后，使用涡旋振荡器剧烈混合 5 秒钟。
·请混合至磁珠均匀分散为止。

⑤将离心管置于磁性台架上，放置 30 秒左右使磁珠聚集，然后去除上清液。
·同③。

⑥重复步骤④～⑤。
⑦添加 900μl

70％乙醇溶液后，使用漩涡混合器剧烈混合 5 秒钟。

·请混合至磁珠均匀分散为止。

⑧将离心管置于磁性台架上，放置 30 秒左右使磁珠聚集，然后去除上清液。
·同③。

⑨重复步骤⑦～⑧。
⑩添加 100μl 灭菌水后，使用试管混合器混合 10 分钟，使 Genomic DNA 溶出。
·加入水时尽量不要碰到试管壁，直接加到离心管底部。
·和②一样，请调节搅拌速度，使得样品和磁珠充分混合，注意不要让液体碰到离心管盖内侧。

○
11将试管置于磁性台架上，通过放置 30 秒左右使磁珠聚集，然后将含有 Genomic
DNA 的上清液回收至新的 1.5ml 离心管内。

垂询电话：021-58794900

6

【操作流程】100μl 全血|← 750μl 溶解·吸附液|← 40μl 磁珠（充分振荡后的均匀混合物）| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）|← 900μl 洗净液| 剧烈振荡 5sec
| B/F 分离（固液分离）进行 2 次进行 2 次|← 900μl 70％乙醇溶液| 剧烈振荡 5sec
| B/F 分离（固液分离）|← 100μl 灭菌水| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）
上清液

7

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东洋纺（上海）生物科技有限公司（2）培养细胞
① 将PBS（Phosphate-Buffered Saline）下回收的培养细胞 1×105～1×106cell左右加入到 1.5ml离心管中，离心分离（6,000rpm 5 分钟）后，去除上清液。
② 添加 850μl 溶解·吸附液以及 40μl 磁珠后，使用试管混合器剧烈混合 10分钟。
·加入磁珠前，请务必将磁珠溶液充分混合后再使用。
·请调节搅拌速度，尽量剧烈，使得样品和磁珠充分混合。

③ 执行⑴全血的步骤③～○11（p6～7），最后将含有 Genomic DNA 的上清液回收
至新的 1.5ml 离心管内。

【操作流程】PBS下回收的培养细胞 1×105～1×106cell| 离心分离（6,000rpm，5min）| 去除上清液（收集细胞）|← 850μl 溶解·吸附液|← 40μl 磁珠（充分振荡后的均匀混合物）| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）|← 900μl 洗净液| 剧烈振荡 5sec
| B/F 分离（固液分离）进行 2 次进行 2 次|← 900μl 70％乙醇溶液| 剧烈振荡 5sec
| B/F 分离（固液分离）|← 100μl 灭菌水| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）上清液

垂询电话：021-58794900

8

（3）组织，鼠尾（在溶解·吸附液中溶解样品的方法）① 在 1.5ml 离心管中放入组织片（10mg 以下）或者鼠尾（2～5mm 左右），然后加入 850μl 溶解·吸附液，再使用匀浆器充分匀浆。
② 离心分离（10,000rpm. 5 分钟）后，将上清液放入新的 1.5ml 离心管内。
③ 加入 40μl 磁珠，然后使用涡旋振荡器剧烈混合 10 分钟。
·加入磁珠前，请务必将磁珠溶液充分混合后再使用。
·请调节搅拌速度，尽量剧烈，使得样品和磁珠充分混合。

④ 执行⑴全血的步骤③～○11（p6～7），最后将含有 Genomic DNA 的上清液回收
至新的 1.5ml 离心管内。

【操作流程】
组织片（10mg 以下）或者鼠尾（2～5mm 左右）|← 850μl 溶解·吸附液| 充分匀浆
| 离心分离（10,000rpm，5min）| 将上清液注入 1.5ml 离心管内|← 40μl 磁珠（充分振荡后的均匀混合物）| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）|← 900μl 洗净液| 剧烈振荡 5sec

进行 2 次| B/F 分离（固液分离）|← 900μl 70％乙醇溶液| 剧烈振荡 5sec

进行 2 次| B/F 分离（固液分离）|← 100μl 灭菌水| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）
上清液

9

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东洋纺（上海）生物科技有限公司（4）组织，鼠尾（通过 Proteinase K 溶解样品的方法）① 在 1.5ml 离心管中放入组织片（10mg 以下）或者鼠尾（2～5mm 左右），然后依次加入 90μl Proteinase K buffer（100mM NaCl，10mM Tris-HCl（pH8.0），25mM EDTA），5μl 10mg/ml Proteinase K（30U/mg），5μl 10％SDS，充分
混合后在 55℃下加温 6～18 小时。
·中途请再倒转混合 2，3 次，使其充分消化。

② 离心分离（10,000rpm，5 分钟）后，将上清液放入新的 1.5ml 微型试管内。
③ 加入 750μl 溶解·吸附液和 40μl 磁珠，然后使用试管混合器剧烈混合 10分钟。
·加入磁珠前，请务必将磁珠溶液充分混合后再使用。
·请调节搅拌速度，尽量剧烈，使得样品和磁珠充分混合。

④ 执行⑴全血的步骤③～○11（p6～7），最后将含有 Genomic DNA 的上清液回收
至新的 1.5ml 微型试管内。

【操作流程】
组织片（10mg 以下）或者鼠尾（2～5mm 左右）|← 90μl Proteinase K buffer|← 5μl 10mg/ml Proteinase K（30U/mg）|← 5μl 10％SDS| 55℃下加温 6～18 小时| 离心分离（10,000rpm，5min）| 将上清液注入 1.5ml 离心管内|← 750μl 溶解·吸附液|← 40μl 磁珠（充分振荡后的均匀混合物）| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）|← 900μl 洗净液| 剧烈振荡 5sec
垂询电话：021-58794900

进行 2 次10

| B/F 分离（固液分离）进行 2 次|← 900μl 70％乙醇溶液| 剧烈振荡 5sec
| B/F 分离（固液分离）|← 100μl 灭菌水| 剧烈振荡 10min| B/F 分离（固液分离）上清液

5．用 MFX-2000 抽提 Genomic DNA
在使用前，请阅读 MFX-2000 的使用说明书。
(1) 操作程序的选择在MFX-2000 中准备了以下 3 种用于抽提Genomic DNA的操作程序。请根据
需要选择其一1），在液晶画面上输入操作程序的号码。
操作程序名
血液用

输入号码
11

液晶画面显示内容
Genome：Blood

培养细胞用
组织用

12
13

Genome：Cell
Genome：Tissue样品量血液，Proteinase K 消化物等
液体（100μl）
培养细胞等细胞块
组织等溶解物（850μl）·每次运转只能选择一个操作程序·各个样品的前处理方法请参照 4～5 页。
·在PBS下回收的培养细胞的细胞密度为 1×105～1×106cell / 100μl时，请取其
中的 100μl进行血液用操作程序（输入号码：11）。
·对组织或者鼠尾等进行了方法①（在溶解·吸附液中溶解）的前处理时，请选择组织用操作程序（输入号码：13），进行了方法②（通过 Proteinase K 溶解）
的前处理时，请选择血液用操作程序（输入号码：11）。
·抽提必要时间为每个样品 11 分钟左右。样品数的不同，抽提时间也会有所不同。

11

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东洋纺（上海）生物科技有限公司(2) 加温 block，回收 block 的温度设定
冷却 block 设定为以下温度。
设定温度

加温 blockOFF

冷却 block10℃·因为不使用加温 block，请将电源设为 OFF。
·使用简易保冷 block 时，请事先将保冷 block 在冷藏室或者低温室中进行
冷却。简易保冷 block 能够对回收液进行短时间的保冷。

*1

3 种Genomic DNA抽提用操作程序根据各自使用的样品量（液体量）以及前处理方法，已

使“样品的溶解”工序的参数条件达到最优化。因此，即使是从同一个样品中进行抽提，也请选择与液体量和前处理方法相适应的操作程序。

（3）附带专用过滤器的 Tip 的安装
安装附带专用过滤器的 Tip 于 Tip 架中。安装个数请参照下表。
·请使用附带专用过滤器的 Tip（Code No：MFX-401）·Tip 已经过电子射线照射灭菌。请戴好手套将专用 Tip 放置于 Tip 架中。
·安装的 Tip 若多于下表所记的数量不会有影响。
·关于 Tip 的安装位置请阅读 MFX-2000 的使用说明书。

垂询电话：021-58794900

12

操作程序号码
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
样品数

样品数

操作程序号码
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

必要 Tip 数
11
12
13
7
7
6
9
9
8
11
11
10
13
13
12
18
18
17
20
20
19
22
22
21
24
24
23
29
29
28
31
31
30
33
33
32
35
35
34

必要 Tip 数
11 12
13
40 40
39
42 42
41
44 44
43
46 46
45
51 51
50
53 53
52
55 55
54
57 57
56
62 62
61
64 64
63
66 66
65
68 68
67

(4) 专用试管的使用
将专用试管（Code No：MFX-301）如数置于抽提架的 A～F 及回收架上。
·抽提架除了安置专用试管外，请不要用于其他用途。否则容易引起故障。
·回收架中也可安装带螺旋帽的 1.5ml试管1）·详细使用方法请阅读 MFX-2000 的使用说明书。
*1

Assist试管（No 72.692）等。

(5) 试剂的使用将试剂分别注入指定的试管，放在试剂架规定的位置。
·根据样品数的不同需要的试剂量也会有所不同。请根据下页的表使用试剂。
·磁珠在使用前充分搅拌，请确认均匀混合后再注入到 2ml 试管内。另外，放入磁珠后，
请马上（10 分钟以内）启动装置。否则可能会引起获取量的参差不齐以及操作上的故障。
·注入磁珠时请使用微量移液器。其他试剂注入时可以以试管刻度为标准。
·抽提后的残留试剂可以再次使用，但是必须注意，如果长时间放置的话，可能会由于
挥发等原因使得液体的组成发生变化。
·本试剂盒内不含灭菌水和乙醇溶液（99.5％以上的特级品），请自己准备。
·如果选择操作程序 13，则无需安装溶解·吸附液。
试剂架内
置放位置

1
2
4
5
7
9

试剂名
灭菌水
洗净水
溶解·吸附液
乙醇溶液
磁珠
灭菌水

试管容量
50ml
50ml
50ml
50ml
2ml
15ml

13

操作程序
11
12
13
要
要
要
要
要
要
要
要
不要
要
要
要
要
要
要
要
要
要

http://www.bio-toyobo.cn

东洋纺（上海）生物科技有限公司【各试剂的注入量】
试剂名
试管容量
置放位置

灭菌
水
50ml
1

洗净
液
50ml
2

溶解·
吸附液
50ml
4

乙醇
溶液
50ml
5

磁珠
2ml
7

灭菌
水
15ml
9

各试管中注入的试剂量（ml）

样品数

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24

5
5
5
（20）
（20）
5
（20）
10
（20）
10
（20）
（20）
15
（20）
10
15
（20） （20）
20
（20）
10
20
（20）
25
（20）
（35）
15
30
（20）
25
（35）
（35）
35
（35）
20
30
40
15
（20） （35）（20） （45）
45
（45）

35
25
（45）
（35）

0.5
(1.5)

2
(5)

0.8
(1.5)
3
(5)

1
(1.5)

1.3
(1.5)

4
(5)

1.5
(1.5)

·此处记载了根据样品数，各试剂注入量的标准。这里记载的剂量已足够充分，请按照此数值把试剂加入到试管内即可。
·括号内的数值标识了注入到试管中时允许的最大容量。如果超过此数值，会引起喷嘴污染
以及液体溅出等问题。

垂询电话：021-58794900

14

（6）样品的前处理及使用
根据 4～5 页的样品前处理方法来制备样品，并置于抽提架中。
·使用带螺旋帽的 1.5ml 样品试管的情况下，请在打开试管盖的状态下放入指定位置。
·使用普通的 1.5ml 试管时，请先用剪刀如下图进行剪断后再行安置。
←请沿此处剪断

·根据在正面编有的 1～24 等号码的孔内，按顺序置放。

（7）抽提开始
按以下要领开始抽提。
·确认样品，试管，专用试管（抽提 block 和回收 block），专用 Tip 等是否和说明书上的一致。
·确认各试剂盒的使用位置，以及 stage 是否完全收回到内部，并请关闭机器前门。
·确认在液晶画面上显示输入了正确的操作程序号码以及样品数。
·出现“请按下开始键”的画面后，请确认无误后按下“START”键。
·抽提操作开始后会在液晶画面上显示“操作中”。

（8）样品的回收
抽提操作结束后，打开机器前门取出样品。
·抽提结束后，抽提的 DNA 被回收 block 上的试管回收。另外，液晶画面会再次显示“请按下开始键”字样的画面。
·确认装置完全停止运行后，从回收 block 上取出试管，将其在低温（4～10℃）下保存，直至使用为止。
·从磁珠中溶出 DNA 时使用的是 100μl 溶出液（灭菌水），因此回收液量大约会是 100μl。

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6．抽提后分析（1）DNA 的定量
DNA 溶液中的 DNA 量可通过测定 260nm 波长下的吸光度来定量。
·测定吸光度的时候，请对 DNA 溶液进行离心分离（10,000rpm，1 分钟），然后使用
上清液。
·A260nm / A280nm比以及计算DNA浓度的时候，请务必将A320nm值作为背景进行修正。

（2）电泳
取适量 DNA 溶液，加入市售或者自备的电泳用 Loading Dye 后，进行琼脂糖凝胶电泳。
·请适当多加 Loading Dye，可定为正常使用量的 1.5～2 倍。电泳样品如果没有在凝胶内沉淀，则无法正常电泳。

（3）PCRDNA 溶液可作为 PCR 模板。
·DNA 溶液中可能会混入微量的磁珠，但不会影响 PCR 正常进行。
·DNA 溶液中混有 10％左右的乙醇溶液，可能会对 PCR 反应有所阻碍，所以使用量请
不要超过反应液的 1/5（反应液 50μl 时使用不超过 10μl）。

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[5] 疑难解答抽提异常时，请参照以下对策。
（1）回收量低，无法得到 DNA
原因
样品过剩

对策
即使使用规定量以上的样品，也不会使回收量上升，反而会使效率下降。
请调节样品量。
（使用组织，鼠尾时）
可能是样品的前处理（p4～5）不够充分。使用①的前处理（在溶解·吸附液中溶解）时，请花时间（5 分钟以上）充分匀浆，直至看不到组织块。

破碎·溶解不充分

另外，福尔马林固定组织等一部分样品无法通过①的方法溶解。请尝试
使用②的前处理（使用 Proteinase K 溶解）。
（使用革兰氏阳性菌时）
如果是革兰氏阳性菌等本试剂盒内附带的溶解·吸附液无法溶解的样品，
就需要特别的溶解处理。例如，对于酵母，需要通过再次加入 Zymolyase
等溶解酶来溶解细胞壁。

试剂量不足

使用 MFX-2000 进行自动抽提时，请确认试剂是否足够，以及所有试剂
的残存量。如果试剂残存量不多（200μl 以下），则认为液量不足。

·另外，样品的种类以及保存状态的不同也会影响回收量（收率）。
（2）PCR 不能有效进行原因对策回收液中混入的DNA 溶液如果超过反应液的 1/5 就有可能对反应起阻碍作用。此时请减乙醇引起阻碍作

少液体量。

用

另外，将回收液在 75℃下加温 5 分钟左右，情况可以有所改善。
抽提出的 DNA 的平均链长是 40kb 左右（全血 DNA），因此对于一般的目标片段长度过PCR 都没有问题，但是如果目标片段长度大于 5kb，由于 PCR 酶性能的长

原因，使得难以扩增。此时，推荐使用 KOD Dash（Code No：LDP-101）
等 Long Distance PCR 用酶。

·其他关于 PCR 的疑难解答，请参考本公司的各种 PCR 用酶的实例集或者其他PCR 相关说明书。
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东洋纺（上海）生物科技有限公司（3）洗净时磁珠不能完全分散，磁珠堵住了 Tip（使用 MFX-2000 进行自动抽
提时）
原因

对策
样品量如果过剩，磁珠就会容易凝集。另外，即使使用规定量以上的样样品过剩
品，回收量也不会上升，反而会降低效率。请减少样品量。
请确认试剂是否足够，以及所有试剂的残存量。如果剩下不多（200μl
试剂量不足以下），则可以认为液量已经不足了。如果洗净液不足或者搅拌不充分，磁珠就可能会不分散。

（4）磁珠不能很好地注入（使用 MFX-2000 进行自动抽提时）
原因对策能够通过漩涡混合器混合直至均匀后再次用于抽提。在抽提之前，确认是否

磁珠由于沉
已经通过漩涡混合器混合均匀，并请在使用前（10 分钟以内）将磁珠放入淀而固化
2ml 试管内。
由于蒸发使
为了防止以后的错误，请不要再使用 2ml 试管中残留的磁珠。另外，保存或得磁珠混合者短时间放置的情况下，请将瓶子及试管等的盖子盖紧。
液成分浓缩·其他关于机器操作的疑难解答，在 MFX-2000 的使用说明书中有记载，可以加以参考。

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18[6] 参考文献
1）Vogelstein, B., and Gillespie, D., (1979) Preparative and analytical purification of
DNA from agarose. Proc. Natl.Acad.Sci. 76:615-619.
2）Boom, R., Sol, C.J.A., Salirnans, M.M.M., Jansen, C.L., Wertheirm-van Dillen,
P.M.E., and van der Nocrdaa, J. (1990) Rapid and simple method for purificationof nucleic acids. J.Clin. Microbiol. 28:495-503.

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