BRAF 変異高悪性þ神経膠腫~薬剤耐性機構獲得機序~解明
横浜^立大学大学院医学研究ù脳神経外ù学講ÿ 博士後期課程 3 
大島 聡人
ÿ研究目的Ā
神経膠腫最頻þ~高い原発性脳腫瘍~rxtwあº1遺伝子異常²標的xw新z治療法~開発|近²³wい»~~1現時点w治療r績~UP{tz|»画期的z
治療法~確立{ósvいzい2一部~高悪性þ神経膠腫 (high-grade glioma, HGG) {BRAFV600E変異|高率{存在y»sx|知¹¼vい»2BRAFV600E変異²伴うHGG10-20
ï~ç{多く発生w1通常~膠芽腫ÿglioblastoma, GBMĀx比較wv非常{高率{髄液播種²}w1~予後6ヶo未満x極vO良wあ»zy1V子生物学的z病態解明x治療法~開発|急務wあ»2BRAFV600E変異HGG{対wvBRAFや}~Q流~MEK²標的xw
V子標的薬{¸»治療|報告u¼vい»|1薬剤耐性化~問題|指摘u¼vzº1~
耐性化~原因{tいv未O明z点|多い2
最近~研究{¸º本腫瘍epithelioid-likexGBM-like~組織|混在wøöýz腫瘍
wあ»xu¼1最新~WHO 2021脳腫瘍Ā準wV類{¹外¼»zy診断P~混²
¹wvい»2s々1BRAFV600E変異HGG|治療抵抗性²示y原因xwv1s~腫瘍ÕO均一性{着目w2予備ß験~結果{¹1腫瘍ÕO均一性~背o{組織可塑性~高ux1}¼²誘^y»腫瘍微_環境|存在wvい»x仮説²立v2本研究w1世界{先駆qv樹立wBRAFV600E変異HGGúアĂ÷û²通xv1V子標的治療後~腫瘍微_環境x
腫瘍細胞~可塑性²通x薬剤耐性機構獲得機序~解明²目指wvい»2
ÿ研究方法Ā
当施設{vBRAFV600E変異HGG症例²2例経験w21例 (YMG62)V子標的治療{O応1う1例 (YMG89)V子標的治療{当初著効数回~治療後{耐性²}w2手術時{
ã×w腫瘍検体(primary, P)及s再発時髄液中¸ºã×w播種性病変(recurrence, R){¹細胞株~樹立²÷º1いz¼安定株|得¹¼2~s¼¹~細胞株{¹PDXĂ÷û
²樹立w2s¼¹~Ă÷û1d患者腫瘍\様{1髄膜播種²主体xw腫瘍形r²呈
y»表現型~再現1eBRAFV600E²始xw遺伝子異常²py»遺伝型~再現1fin
vitro, in vivow~V子標的治療反応性Ā抵抗性~再現zy²確認wvzº1é床像²忠
ß{再現y»Ă÷ûwあ» (Sasame J et al. 2022)2
s~ß験過程{zいv1BRAFV600E変異HGG~表現型|容易{変化y»興味深い現象²観察w2脳Õ{播種w患者v来BRAFV600E変異HGG細胞塊ÿepithelial phenotypeĀ²
mouse~ú腔Õ{移植y»x1mesenchymal phenotype{表現型|変化w2更{1s~ú
腔Õ腫瘍²脳Õ{再移植y»xepithelial phenotype²呈y»sx|病理組織学的{観察u¼2yzわ1P皮間葉転換ÿEMT; epithelial-mesenchymal transitionĀz¸s間葉P皮転換ÿMET; mesenchymal-epithelial transitionĀ|誘^u¼結果x考え¹¼－105－

»2Ý要zsx{1s¼~w世界p数~PDXĂ÷û²作rwv}当研究室~ß績{¹1周ö組織{¸sv組織像|変化y»現象一般的zGBMw観察u¼zいsx²確認wvい»2s~結果{¹1BRAFV600E変異HGG~組織可塑性~高u1髄液播種~病態やV子標的薬{対y»耐性機構獲得{寄Pwvい»可能性|あº1腫瘍微_環境{¸sv腫瘍細胞~
遺伝子発現|変化y»sxw誘^u¼vい»x仮説²立v2

本研究期間Õ{ñQ~ß験²ß施w2
ß験1. YMG89P~ÿ養細胞w浮遊細胞x接着細胞|混在y»sx{¹1s~現象|EMT²
反映wvい»x仮説²立v2浮遊細胞x接着細胞²Vöwv1Western blot(WB)法{¸ºP皮系þü»üû間葉系þü»ü~発現²評価y»sxw1仮説²検証w2ß験2. YMG89~初発û再発~腫瘍細胞{tいv1EMT関連蛋白質~発現~評価²WB法w行s2~1初発û再発~T々{対wvBRAF阻害薬ÿdabrafenibĀ治療²24時間行い1WB法
wEMT関連蛋白質~発現~変化²評価w2ß験3. YMG89P~ÿ養細胞{dabrafenib²7ヶo間{わsv長期治療²施w細胞²樹立
wÿYMG89P-Dab7moĀ2ÿzz1s~細胞株wMEK, BRAF治療抵抗性{変化wvzº1
YMG89R²模sw細胞wあ»sx|ç報w示u¼vい»2Ās¼¹~細胞株{発現wvい»EMT関連蛋白質²WB法w評価w2ß験4. BRAF阻害薬naïve~患者検体株ÿYMG89PĀ{¹PDX mouse²作rw1s~PDX mouse{vehicle治療xBRAF阻害薬ÿdabrafenibĀ治療²ýþ的{行s後1安楽死u{2両群~病理組織像²HE染色z¸s免疫染色w評価w1u¹{}¼~¼~組織{発現wvい»EMT
関連~蛋白質²WB法w評価w2ÿ結 果Ā
結果1. 浮遊細胞P皮系1接着細胞間葉系þü»ü~発現|P昇wvzº1仮説|裏付
q¹¼ÿFigure 1AĀ2
結果2. YMG89w1初発時{epithelial type1再発時{mesenchymal type²示yþü»ü~ð²|認¹¼1再発時{EMT|生xvい»sx|示Wu¼ÿFigure 1BĀ2一方w1YMG89P, 89R細胞²dabrafenibw24時間治療w細胞w1明¹{zEMT~誘^生
xvいz{sÿFigure 1CĀ2s~結果{¹1dabrafenib~治療{¸sv短期的{EMT－106－誘^u¼zい可能性|示u¼2
結果3. YMG89P-Dab7mo細胞w1P皮系þü»ü|減弱w1間葉系þü»ü|ð²wvい»sx{¹1YMG89R\様{EMT²生xvい»x考え¹¼»結果²得ÿFigure 1DĀ2ß験1~結果x\わ{»x1dabrafenib治療{¸sv短時間wEMT誘^u¼zい|1長期間~暴露{¸sv再発時\様~phenotype²示y¸う{z»sx|示Wu¼2

結果4.
病理組織像ÿFigure 2AĀ：Vehicle治療群ÿ対照群Ā~組織像epithelial type1
dabrafenib治療群ÿ治療群Ā~組織像mesenchymal typewあs2}¼~¼~組織²P
皮系þü»ü1間葉系þü»ü~免疫組織染色w評価w2組織像~表現系²裏付q»¸う{1対照群wE-cadherin|細胞膜{集積wvい»一方1治療群wN-cadherin,
vimentin|}¼~¼細胞膜x細胞質{集積wvい»sx|確認u¼2u¹{1βcatenin1対照群w細胞膜Q{強い染色²示wvい|1治療群w細胞質や核Õ{集積wvい2s~sx{¹1治療群wβ-catenin |細胞膜{¹遊öw1細胞質z¸s核
Õ{局在wvいsx1EMT÷ýÀùĀ²ø»遺伝子~発現|誘^u¼vい»sx|示W
u¼2

蛋白発現ÿFigure 2BĀ：WB法~結果1E-cadherin, N-cadherin免疫組織化学染色x\ôy»結果wあº1dabrafenib治療{¸svEMT|誘^u¼可能性|示Wu¼2β－107－

catenin{tいv1IHCw細胞Õ局在~変化捉え¹¼|1蛋白発現~総ß変化wv
いzい結果wあs2EMT誘^{関わ»転写因子xwv1ZEB-1~発現|増àwvい»sx{¹1s~転写因子|本ß験系~EMT²誘^y»key moleculewあ»可能性|示Wu¼
2一方w1snail両群w変化|zく1~slug治療群発現|PQwvい»zy1}~
他~転写因子{tいv一貫w結果得¹¼z{s2ÿr果û考察Ā
申請者|所属y»研究Àûü÷1患者腫瘍検体{¹樹立wòøv来脳腫瘍þウÉĂ
÷û(PDX Ă÷û)²活用wøùンÉüüÇョúû研究²通xv1BRAFV600E変異HGG~V
子標的治療剤{対y»薬剤抵抗性機序²解明y»xx{1耐性化²克服y»標的V子
ÿHSP90Ā²見出wÿSasame J, et al. Clin Cancer Res. 2022Ā2w{wz|¹1本腫
瘍|高率{髄液播種²来y病態機序や1見出w治療候補薬剤HSP90阻害剤|髄液播種後~病態²y~¸う{制御y»{zy1本腫瘍~制御{zいvÝ要z未解決課題|残u¼vい»2
今回~研究r果{¸sv新{解明u¼Õ容ñQ{集約u¼»2
û YMG89細胞P皮系²示y浮遊細胞x間葉系²示y接着細胞|混在y»腫瘍wあº1
BRAF阻害薬~長期間~治療{¸svEMT|誘^u¼»sx|1in vitro, in vivoß験~
結果{¹示u¼2s~sx1YMG89細胞|再発時{髄液播種²伴い制御困÷xzs現象²反映wvい»可能性|あ»2
û EMT²誘^y»因子xwv数多く~~|知¹¼vい»|1今回~ß験w調査w限ºw1ZEB-1|候補因子~一tx考え¹¼2
s¼¹~結果1BRAF変異高悪性þ神経膠腫~薬剤耐性機序xwv組織可塑性|関わsvい»xいう仮説²支持y»~wあ»2今後1s~研究結果²Ā盤xwv1ZEB-1²抑制y»sx{¸svEMT~制御x髄液播種や薬剤耐性化~抑制{tz|»{~検証1z¹s{s々|見出wHSP90阻害剤|腫瘍細胞~可塑性²制御w得»{²検証wvいく2
ÿ倫理的配慮Ā
本研究横浜^立大学{zq»人²対象xy»生}ù学û医学系研究倫理委員会: ¿イø
û; 脳腫瘍~ðイºþü»ü~ä索x標的治療開発{Uq遺伝子解析及sòøv来脳腫
瘍細胞株²用い前é床研究, B220203057, 更新認åð和42o3å1¿イøû; 脳脊髄腫瘍{対y»病態解明1治療法~検証1及s予後因子~解明{関y»後½U}前U}研究(IRB no. B190700012, 認åð和元7o18å)1 及s横浜^立大学動物ß験委員会認(IRB no. FA21-025, 認åð和35o17å)1 遺伝子組換え生物等~第Ð種使用等拡散防k措置 (no. F-D-21-30, 認åð和33o31å) {Āuいvß施w2－108－

周術期患者~喉~o}{対y»看護師~認識xÁア~ß態
横浜^立大学大学院 周麻酔期看護学VÞ

博士前期課程花城

真理子

a.研究目的
周術期患者~ 75.0%～89.6%(Pierotti et al, 2018 ; Aroni et al, 2012)|術後 24 時間ñÕ{喉~o}²¼え»xu¼1}~割\術後~痛や嘔気û嘔Tx\様{1周術期患者~¼えxwv
高い頻þwあ»2術後~喉~o}~要因1齢1性別1ûûĂンV泌~変化1O安1麻酔や術中使用薬剤zy様々wあ»(Conchon et al,2015)2}~1喉~o}単{補液{¸»循環血液ß~補lqw改善y»sx|÷wい現象x言え»2周術期患者痛やè痛{¸º喉~o}²医療者{¼えu¹い(Silva et al, 2016)2¸sv周術期患者~喉~o}²早期{改善y»{1周術期Áア{関わ»看護師|患者~喉~o}²認識y»sx1z¸s周術期~ýþw観察やÁア|必要xz»2}~{1外ù系病棟看護師x手術室看護師~Áア~視点や}~共p1連携|必要x考え»2w{w1s¼~w外ù系病棟看護師x手術室看護師|周術期患者~喉~o}²y~¸う{認識w1Áア²行い1互い{情報共pwvい»{明¹{xzsvいzい2¸sv本研究周術期{
関わ»看護師²対象xwv周術期患者~喉~o}{対y»認識xÁア~ß態²明¹{{y»sx²目的xw2b. 研究方法
1ÿ研究÷Æイン1研究対象者z¸s研究期間
ë記式質問紙²用い横断的調査研究wあº1A 学附属病院 2 施設~集中治療領域²含外ù
系病棟看護師x手術室看護師²研究対象者xwÿñQ¸º対象者wあ»看護師 Ns x示y2
~1外ù系病棟 Ns ~う1集中治療系病棟 Ns ²除く病棟看護師²一般病棟 Ns xy»2
Ā2ÿ調査Õ容z¸sV析方法
先行研究²参考{q記]ë記式質問紙²作rw2調査項目11)対象者~背o12)周術期~
観察項目13)周術期患者~喉~o}²認識y»¿イÿンÀ14)喉~o}{関y»看護師~情報共p15)喉~o}~評価16)Áア~ß態(種類x頻þ)xw2V析単純集計w記述統計ß²算出
w2zz本研究w患者~主観wあ»喉~o}²看護師|第O者xwvû観的{認識y»sx²調査Õ容xw2
3ÿ倫理的配慮
本研究1横浜^立大学 人²対象xy»生}ù学û医学系研究倫理委員会~認(認番÷：F220900001)²得2
c. 結果
1. 対象者~背o研究協力~得¹¼対象者 741 ]{アンÁüø²配_w1p効回答~得¹¼ 432 ]²V析
対象xw(p効回答率 58.3%Ā
2V析対象者数~Õ»1外ù系病棟 Ns 389 ](一般病棟 Ns 298－109－

]1集中治療系病棟 Ns 91 ])1手術室 Ns 43 ]wあs2
2. 周術期患者~喉~o}{対y»看護師~認識
1) 看護師|n段{¹観察wvい»術後観察項目 (÷表zw)
いz¼~所属~ Ns <術後~痛=
1<出血=
1<嘔気û嘔T=1<O穏û{³妄=<いt観察y»=| 80%ñPwあs2一方1喉~o}²<いt観察y»=頻þP{s22) 看護師|周術期患者~喉~o}²認識y»¿イÿンÀ (÷ 1)
いz¼~所属~ Ns <患者{¹~¼え|あs時={患者~喉~o}²認識wvい2集中治療系病棟 Ns ~認識 (÷ 1c)yyv~項目{zいv 65%²超えvい23) 患者~喉~o}{関y»看護師~情報共p (÷ 2)
患者~喉~o}{関y»情報共p術前¸º術後{行わ¼vい2術後1手術室 Ns 病棟
Ns {対wv情報共pwx回答w割\|高{s|1病棟 Ns 手術室 Ns x情報共pwv
いzいx回答w割\|高{s24) 患者~喉~o}~評価 (÷表zw)
患者~喉~o}²<尺þやÉÁüû²使sv評価wsx|あ»=者いz{s2
3. 周術期患者~喉~o}{対y»Áア~ß態
1) 術前~患者~喉~o}{対y»Áア~ß態 (表 1)
術前~Áア²行s群~病棟 Ns  38.3%wあs2行sÁア<水w~含嗽²行sv¹s=|最多s2手術室 Ns  11.6%wあº1行sÁア<濡¹w¼üÌ²口{当v=|最多s2両者xÁア選択~理v<患者~意U|あs{¹=|最多s2Áア²行
zわz{s群~病棟 Ns  56.7%1手術室 Ns  81.4%wあº1理v<飲水禁k~指示|あ»{¹=|多{s22) 術後~患者~喉~o}{対y»Áア~ß態 (表 2)
術後~Áア²行s群~病棟 Ns  70.9%wあº1Áア<水w含嗽²行sv¹s=
1理v<患者~意U|あs{¹=|多{s2手術室 Ns  18.6%wあº1Áア<濡¹w¼
üÌ²口{当v=1理v<効果|あ»x思う{¹=|多{s2集中治療系病棟 Ns  96.6%
wあº1<濡¹wÉýンÈöùÇw~口腔Õo拭²行s=
1理v<患者~意U|あs{¹=|最多s2Áア²行わz{s群~病棟 Ns  29.1%1手術室 Ns  81.4%wあº1理v
<飲水禁k~指示|あ»{¹=|最多{s2集中治療系病棟 Ns  3.4%wあº1理v}~他~ëv記載w<患者{¹¼え|z{s=wあs2
d. r果û考察
1. 看護師|認識y»周術期患者~喉~o}1) 看護師|術後観察wvい»項目x喉~o}
看護師術後<術後~痛=
1<出血=1<O穏û{³妄=1<嘔気û嘔T=²主{観察wvzº1<喉~o}=他~観察項目¸º観察頻þ|Pいsx|明¹{xzs2s~結果1Pavani ¹(2016)|1看護師患者~喉~o}²過_評価wvい»x述y結果x\様wあs2
<術後~
痛=1
<O穏û{³妄=1<嘔気û嘔T(PONV)=近予防や治療法|確立u¼v}vい»1
観察wvい»頻þ|高{sx考え¹¼2w{w<喉~o}=~Áア{関y»エó÷ンÉ整－110－

理u¼vz¹z(Nascimento et al, 2020)1明確z改善方法|示u¼vいzい2¸sv術後観察y»頻þ|Pく1評価y»項目xwv考え¹¼vいzい~wzい{x推察u¼22) 看護師|患者~喉~o}²認識y»¿イÿンÀx所属tx~特徴 (÷ 1)
いz¼~所属~看護師1X~o}や舌~o}1口|吸~様子や皮膚状態zy~身体所見¸º1患者~¼え{¸sv喉~o}²認識wvい»割\|最高{s2先行研究w1麻酔ù医や病棟 Ns |患者~喉~o}²1患者{¹直接¼え¹¼»~w認識wzい(Pavani et al, 2016;
Silva et al, 2016)sx|示u¼vzº1本研究結果\様wあs2¸sv患者~喉~o}~改善~{1患者|¼えやyい¸う意÷的{聞く必要|あ»x考え¹¼2
看護師|周術期患者~喉~o}²認識y»¿イÿンÀ{関wv1集中治療系病棟 Ns |いz¼~項目 65%ñPx他~所属~看護師¸º割\|高{s2t~ºs~結果1集中治療系病
棟w1患者~Áア頻þ|高く1看護師~アËÉāンø頻þ高いsx²示Wwvい»2¸sv
アËÉāンø頻þ|喉~o}²認識y»割\{影響wvい»可能性|考え¹¼23) 喉~o}{関y»情報共p (÷ 2)病棟間~情報共p{tいv手術室看護師²対象xw先行研究w<手術室x病棟wúÉ¿
認識~違い|あº共pw}vいzいsx|Èüンþ=(乾¹, 2020)x示u¼vい»2喉~o}{対wv尺þやôüû²使sv評価wvいz{sxいう本研究~結果{¹1情報共p~{喉~o}²共通認識w}vいzい可能性|考え¹¼2<術後1病棟Õ=w喉~o}{関y»情報²共pwvい»割\|1病棟 Ns1集中治療系病棟
Ns 共{高{s2術後病棟Õwýþwv患者²看»必要|あ»1患者{¹~¼えや行svい»Áア²病棟Õw共pwvÁア²行svい»可能性|考え¹¼2
2. 看護師|行う周術期患者~喉~o}{対y»Áア~ß態 (表 11表 2)
術前1病棟 Ns x手術室 Ns 共{1Áア²行s看護師¸ºÁア²行わz{s看護師~割\|高く1}~理v<飲水禁k~指示|あ»{¹=wあs2s~結果{¹1本研究対象者
医師{¹<飲水禁k~指示={従い喉~o}{対y»Áア²行svいz{ssx|考え¹¼2w{w}~一方w1術前患者~喉~o}{対wv1飲水ñ外~方法w喉~o}²改善y»Áア²
行svい»看護師|い»sx|1本研究w初v明¹{xzs2s~結果{¹周術期患者~喉~o}術前{¹生xvい»sx1患者看護師{対wvÁア²求vい»sx|示Wu¼2
術後1病棟 Ns ~ 70.9%1集中治療系 Ns ~ 96.6%1手術室 Ns ~ 18.6%|患者~喉~o}{対wvÁア²行svい2~Áア選択理v1いz¼~所属~看護師<患者~意U=
1<効果|あ»x思う{¹=|多{s2Pavani ¹(2016)1看護師経験的{喉~o}{対y»Áア²
行svいx示wvい»2本研究対象者均 12.1±10.4 ~看護師経験|あº1先行研究w効
果|あ»x示u¼vい»<üĂン水噴霧=や<生食噴霧=¸º1経験{ĀuいÁア²行sv
い2¸sv1本研究対象者看護師xwv働く経験~中wÁア方法²見出w1先輩{¹教わ»zy1患者{xsv~効果²考えvÁア²行svい»sx|推測u¼2e. 研究~限界x今後~課題
本研究大学病院w行s~wあº1一般化{限界|あ»2今回~結果²x{今後¸º
広い範öw調査²行い1ÿÕ~喉~o}{対y»Áア~ß態²明¹{{wvいく必要|あ»2－111－

患者さ³{¹の訴え|無くても1)
患者さ³{¹の訴え|あsた時2)
患者さ³の唇の渇}²見た時1)
患者さ³の舌の渇}²見た時1)
患者さ³|口呼吸²してい»時1)
患者さ³|酸素投与²してい»時2)
患者さ³の皮膚の状態²見て1)
0.0

50.0

ÿ)

100.0
%

2)

ÿ． 一般病棟看護師 ( n=296

0.0

50.0

0.0

100.0

Ā． 手術室看護師 (n=43)

n=295)

50.0

100.0
%

%
ā．集中治療系病棟看護師(n=91)図 ÿ 看護師|周術期患者の喉の渇}²認識す»タイミン°%

術前、病棟➡手術室

術前、病棟内術後、手術室➡病棟

術後、手術室➡病棟

術前、病棟➡
手術室

術後、病棟内ÿ 一般病棟看護師 (n=296)
治療系看護師 (n=91)

術後、手術室➡病棟

術後、病棟内Ā 手術室看護師 (n=43)
4: いtも共有す»

図 Ā 患者の喉の渇}{関す»看護師の情報共有

c. 集中

3: x}y}共有す» 2: あまº共有しzい 1: 全く共有しzい※棒°ラフの上部{ÿ情報共有す»群ÿ、ÿ情報共有しzい群ÿの%²表記．

表ÿ 術前の患者の喉の渇}{す»±アの実態

表Ā 術後の患者の喉の渇}{対す»±アの実態

ａ．術前の±ア²行sた群

ÿ．術後の±ア²行sた群

ÿケアの有無ÿ病棟 N=298, 手術室 N=43, n(%)
病棟

ケア²行っ

ÿケアの種類ÿ114 ( 38.3 )5

病棟 N=298, 手術室 N=43, 集中治療系病棟 N=91, n(%)
病棟

ÿケアの有無ÿ ケア²行っ

手術室( 11.6 )

手術室

200 ( 70.9 )8( 18.6 )ÿケアの種類ÿ ※複数選択可項目

病棟0n=205

手術室0n=8

集中治療系
86( 96.6 )集中治療系0n=89

病棟0n=132

手術室0n=5

湿¹せガー¼²ó{当v

湿¹せガー¼²ó{当v80( 39.0 )7( 87.5 )36( 40.4 )20( 15.2 )4( 80.0 )51( 24.9 )0( 0.0 )

84

( 94.4 )ï¹し¹ポン¸öù·w~ó腔内清拭²行っ

ï¹し¹ポン¸öù·w~ó腔内清拭²行っ

14( 10.6 )0( 0.0 )

水w~含嗽²行っvも¹っ

189 ( 92.2 )0( 0.0 )

82

( 92.1 )水w~含嗽²行っvも¹っ

116 ( 87.9 )0( 0.0 )

洗ó液w~含嗽²行っvも¹っ

9( 4.4 )

0

( 0.0 )

3

( 3.4 )

洗ó液w~含嗽²行っvも¹っ8( 6.1 )

0

( 0.0 )

ó腔用湿潤¹÷üー²使用し3( 1.5 )

0

( 0.0 )

10

( 11.2 )ó腔用湿潤¹÷üー²使用し3( 2.3 )

0

( 0.0 )

ó唇{保ÿ剤ÿワ»úンzyĀ²塗っ

25( 12.2 )2( 25.0 )35( 39.3 )ó唇{保ÿ剤ÿワ»úンzyĀ²塗っ

16( 12.1 )1( 20.0 )ó腔内{生食²噴霧し2( 1.0 )

0

( 0.0 )

0

( 0.0 )

そ~他

6

( 4.5 )

1

( 20.0 )ó腔内{üモン水²噴霧し0( 0.0 )

0

( 0.0 )

0

( 0.0 )

医師{飲水w}る{確し39( 19.0 )2( 25.0 )33( 37.1 )そ~他

6( 2.9 )

1

( 12.5 )7( 7.9 )

※複数選択可項目

病棟0n=132

手術室0n=5

患者さ³~意U|あっ{¹81( 61.4 )2( 40.0 )学生~時{学校w教わっ{¹1( 0.8 )

0

( 0.0 )

先輩{¹教わっ{¹29( 22.0 )1( 20.0 )病棟~ûーû{¹6( 4.5 )

0

( 0.0 )

文献zyw見こx|ある{¹3( 2.3 )

0

効果|あるx}う{¹69( 52.3 )

z³xzく

6

そ~他

3

ÿケア選択の理由ÿ

※複数選択可項目

ÿケア選択の理由ÿ ※複数選択可項目

病棟0n=213

患者さ³~意U|あっ{¹165 ( 77.5 )1)79( 88.8 )学生~時{学校w教わっ{¹3( 1.4 )

1

( 14.3 )2( 2.2 )

先輩{¹教わっ{¹55( 25.8 )2( 28.6 )28( 31.5 )( 0.0 )

病棟~ûーû{¹5( 2.3 )

2

( 28.6 )3( 3.4 )

3

( 60.0 )文献zyw見こx|ある{¹4( 1.9 )

1

( 14.3 )2( 2.2 )

( 4.5 )

0

( 0.0 )

効果|あるx}う{¹97( 45.5 )3( 42.9 )51( 57.3 )( 2.3 )

1

( 20.0 )

z³xzく

10

( 4.7 )

1

( 14.3 )3( 3.4 )

そ~他

4

( 1.9 )

2

( 28.6 )5( 5.6 )

Ā．術前の±ア²行わz{sた群
病棟 N=298, 手術室 N=43, n(%)
ÿケアの有無ÿ病棟

ケア²行わz{っ

手術室

169 ( 56.7 )35

病棟0n=165

手術室0n=26

飲水禁止~g示|ある{¹54( 32.7 )10( 38.5 )病棟~ûーû{¹0( 0.0 )

0

( 0.0 )

ケア²しvいけzいx教わっ{¹0( 0.0 )

0

( 0.0 )

z³xzく6

( 3.6 )

2

( 7.7 )y~¸う{行えいい{1わ{¹zい{¹13( 7.9 )

6

必要zいx}う{¹7( 4.2 )

®嚥~可能性|ある{¹5

行っvも効果|zいx}う{¹

ÿケアを行わなかった理由ÿ

※複数選択可項目

手術室0n=7
ー

集中治療系0n=89

Ā．術後の±ア²行zわz{sた群
病棟 N=298, 手術室 N=43, 集中治療系病棟 N=91, n(%)
ÿケアの有無ÿ病棟

ケア²行わz{っ( 81.4 )82
ÿケアを行わなかった理由ÿ

※複数選択可項目( 29.1 )病棟0n=94

手術室
35( 81.4 )手術室0n=36

集中治療系
3( 3.4 )

集中治療系0n=3

飲水禁止~g示|ある{¹39( 41.5 )10( 27.8 )0( 0.0 )

病棟~ûーû{¹1( 1.1 )

0

( 0.0 )

0

( 0.0 )

ケア²しvいけzいx教わっ{¹0( 0.0 )

0

( 0.0 )

0

( 0.0 )

z³xzく3

( 3.2 )

2

( 5.6 )

0

( 0.0 )y~¸う{行えいい{1わ{¹zい{¹7( 7.4 )

5

( 13.9 )0( 0.0 )

( 23.1 )必要zいx}う{¹4( 4.3 )

2

( 5.6 )

0

( 0.0 )

2

( 7.7 )

®嚥~可能性|ある{¹20( 21.3 )6( 16.7 )0( 0.0 )

( 3.0 )

3

( 11.5 )行っvも効果|zいx}う{¹0( 0.0 )

2

( 5.6 )

0

( 0.0 )

0

( 0.0 )

1

( 3.8 )

他~業務w忙しい{¹9( 9.6 )

3

( 8.3 )

0

( 0.0 )

他~業務w忙しい{¹7( 4.2 )

3

( 11.5 )そ~他

7( 7.4 )

5

( 13.9 )3( 1.8 )

そ~他

19

( 11.5 )6( 23.1 )－112－

肝外胆管癌Ă÷ûþウÉ~樹立x新規治療法~開発横浜^立大学附属病院 消化器外ù

指^診療医
豊u 純哉

ÿ研究目的Ā
本研究~目的1精密z肝外胆管癌þウÉĂ÷û²構築w1新規治療法²開発y»sxwあ»2
新規治療法~開発{1動物Ă÷û~利用|O可欠wあ»2þウÉ~肝外胆管非常{短くÿ÷1Ā1厳密{肝外胆管{~腫瘍|発生wvい»Ă÷ûs¼~w{報告u¼vいzい2本研究w1本学附属病院û

図1|³ÂþĀ診断ù~à藤真吾先生|開発wImplantation oforganoid-derived Tumor Bud (IoTB) (Oncogenesis. 2021;
10(4))²利用w1厳密{肝外胆管{腫瘍|生x»Ă÷û²構
築y»2更{1網羅的遺伝子発現解析²行い1治療標的xz»Q流ÇÀúû系²明¹{{w1肝外胆管癌{zq»新規治療~開発²目指y2

ÿ研究方法Ā
1). IoTB 法²用い肝外胆管þウÉĂ÷û~構築
本学附属病院û|³ÂþĀ診断ù~à藤真吾先生x共\w樹立w肝外胆管癌ºû¼þイù株²
Þ生型þウÉ~皮Q{移植w1皮Q腫瘍~形r²確認y»2増大w皮Q腫瘍²摘出w1_uく{³腫瘍片²別~Þ生型þウÉ{\所ÿ肝外胆管Ā{移植y»ÿIoTB 法Ā
2s~手法²用いv1
肝外胆管þウÉĂ÷û²構築y»ÿ÷ 2Ā
2移植後~胆管閉塞²予防y»{1÷ùÉÁó¿É
öンø²経頭的{挿入y»2挿入y»Éöンø~形状や性質~検討²行う2
図2

－113－

2). 網羅的遺伝子発現解析{¸»薬剤標的ÇÀúû系~ä索3)w治療標的xw単一免疫細胞²用いv RNA Çü¿エンÉ{¸»網羅的遺伝子発現解析²行
う2Bioinformatics 解析²用いv活性化y»Q流ÇÀúû系²明¹{{w1遺伝子変異や病変部
O~違いw~発現~相違²V析y»2

ÿ結 果Ā
d 肝外胆管癌ºû¼þイù~皮Q腫瘍形r
KrasLSL-G12D²py»þウÉ肝外胆管{¹樹立w肝外胆管癌ºû¼þイù{CRISPR/Cas9²
用いv1p53þó¿アウø²^入w作rw1KrasG12D変異 + p53 þó¿アウø肝外胆管癌ºû¼þイù²Þ生型þウÉ(C57BL/6J){þøúÂûx共{皮Q注射²行い1腫瘍形r能²評価w2
当教室w樹立wKrasG12D変異+ p53þó¿アウø肝外胆管癌ºû¼þイù~3株~いz¼{zいv皮Q注射後6±間w腫瘍形r²認2一方wKrasG12D変異~²py»肝外胆管ºû¼þイù{¹腫瘍形r能²認z{sÿ÷3Ā2
図3

皮Q腫瘍²HE染色y»xû癌²呈wvzº1免疫染色w胆道P皮þü»üwあ»CK19,CK7やKi-67|染色u¼ÿ÷4Ā2
図4

－114－

e 腫瘍片~\種\所移植ÿIoTB法Ā{¸»肝外胆管癌Ă÷ûþウÉ~構築\腫瘍{¹5mm角~腫瘍片ÿTumor budĀ²作製w1Þ生型þウÉ(C57BL/6J)~肝外胆管x\所移植²行sÿIoTB法Ā術後2±間w腫瘍片胆管{浸潤w1粘膜面~wû癌{置換u¼1肝外胆管癌~病理像²呈y»sx²確認wÿ÷5Ā2w{w1腫瘍{¸»閉塞性黄疸
²来w1IoTB後2-3±間w死ïwvw~う1胆道ùüúüÈ|必要wあs2}sw
IoTB施行時{÷ùÉÁó¿Éöンø{¸»胆嚢空ùðイñÉ²作製y»Ï{¸º1生存期間|延長w1動物ß験²施行可能zþウÉ肝外胆管Ă÷û²作ry»sx{rßw2
図5

f 網羅的遺伝子発現解析{¸»薬剤標的ÇÀúû系~ä索þウÉ肝外胆管ºû¼þイùxþウÉ肝外胆管癌ºû¼þイùÿKrasG12D変異 + p53 þó¿アウøĀ²}¼~¼RNAÇü¿エンÉ行い1遺伝子発現²比較w2現在1治療標的xz»可能性~あ»経路²ä索中wあ»2
図6

ÿr果û考察Ā新規治療法~開発{1動物Ă÷û~利用|O可欠wあ»2胆管癌~þウÉĂ÷û遺伝子改変Ă÷û1化学発癌Ă÷ûや|³移植Ă÷û~報告|あ»|1ç報w肝Õ胆管癌~~|多い 12肝外胆管癌þウÉĂ÷û Nakagawa ¹~報告wvい»遺伝子改変þウÉ
Ă÷û~wあ» 22w{w1\Ă÷û Kras1TGFβR21E-cadherin ~ 3 t~遺伝子変異²誘^w遺伝子改変þウÉĂ÷ûwあº1個体数~確保~w~時間ûÃÉø効率|悪く－115－

ÿë前作rw場\1一般的{作r期間{ 1 半程þ1ÃÉø過剰発現þウÉw約 100
万Ö，þó¿アウøþウÉw約 1000 万Ö|目安wあ»Ā1新規治療法~開発{O適当wあ»2~厳密{肝外胆管{~腫瘍|発生wvい»|³移植Ă÷ûs¼~w{報告u¼vいzい2本研究w1研究協力者wあ»横浜^立大学附属病院|³ÂþĀ診断ù~
à藤真吾|開発w腫瘍片\所移植法ÿImplantation of organoid-derived tumor budÿIoTBĀ法Ā3 ²利用w1厳密{肝外胆管{腫瘍|生x»|³移植Ă÷û²構築w2~\Ă÷ûþウÉ肝外胆管癌ºû¼þイù株{¹作rw腫瘍片²用い\種\所移植Ă÷ûwあº1患者v来|³Ă÷ûx異zº1¸º生理的z状況Qw~腫瘍微_環境²V析
y»sx|可能wあ»2今後\Ă÷û²用いv1治療標的xz»経路{対y»薬剤投Pß験や報告|少zい肝外胆管癌~腫瘍微_環境~解析²行う方針wあ»2
1

Loeuillard E, Fischbach SR, Gores GJ et al. Animal models of cholangiocarcinoma.
Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis 2019; 1865 (5): 982-992.

2

Nakagawa H, Suzuki N, Hirata Y et al. Biliary epithelial injury-induced regenerative
response by IL-33 promotes cholangiocarcinogenesis from peribiliary glands. Proc Natl
Acad Sci U S A 2017; 114 (19): E3806-E3815.

3

Kato S, Fushimi K, Yabuki Y et al. Precision modeling of gall bladder cancer patients inmice based on orthotopic implantation of organoid-derived tumor buds. Oncogenesis
2021; 10 (4): 33.

－116－

非線形Àイúÿ¿É解析²用いòøv³{³ýóøワü¿~時系列変容~解明〜定O的頭蓋Õ脳波記録²用い検討〜
横浜^立大学附属病院 脳神経外ù高山裕{郎ÿ研究目的Ā

v³{³<v³{³発作²引}起sy持þ性素因²特徴xy»脳~ 害=x定義u¼»2薬剤抵抗性v³{³{対w外ù治療|p用z選択肢wあ»2v³{³外ù治療w1v³{³w点~l確z\定|Ý要wあº1}~過程{zq»頭蓋Õ脳波記録~p用性|知¹¼vい»2s¼~w~頭蓋Õ脳波記録~p用性x限界²検証y»研究~r果{¸º1発作制御~{発作起始領域qwzく1定O的頭蓋Õ脳波ÿSEEGĀ²用い早期伝播ýóøワü¿~解明|Ý要wあ»sx|示Wu¼2~
1SEEG ~術²Ā盤xwv提唱û開発²²v}ùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法1脳~深部wあsv1脳²W¹z{l確{t安全{治療w}»新wい手術x
wv評価u¼vい»2本治療~安全性xp効性²UPu{»{1早期伝播ýóø
ワü¿²考慮w治療÷ùンûンÀ必須wあº1発作早期~神経伝播Àイúÿ¿É~可視化1将来~v³{³外ù治療{xsvÝ要zé床的課題wあ»2~課題²解
決y»{ýóøワü¿Õ流動性 (Network Flexibility: NF){着目w2ýóøワü¿構造Õ部~ Nord 間~接þ性|流動的{移º変わºþqvい»sx{¸sv
安定化y»xいう考え方|あ»2s~流動性²NFx|ぶ2本研究w NF ²解析y»－117－

sxw1神経伝播~Àイúÿ¿É²可視化w1v³{³ýóøワü¿Õ{zいv発作時早期{伝播y»脳領域ÿ早期伝播領域Ā²定ß化y»sx|目的wあ»2本研究w
試»v³{³発作早期{zq»神経伝播Àイúÿ¿É~可視化1今~w{zい全く新z視点wあº1非常{特色~あ»研究{z»x思わ¼»2ÿúú単Ow変調y»v³{³ýóøワü¿~Àイúÿ¿É²可視化1高い S/N 比²pw1時間û空間
V解能{優¼»頭蓋Õ脳波記録²用いv初v可能xz»2特{1v³{³ýóøワ
ü¿~存在²前提{電極²留置y» SEEG ²利用y»点|本研究~強wあ»2}~
r果²1ùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法~治療計画{応用y»sxw1早期v³{³ýóøワü¿~w²考慮wP侵襲{tp効性~高い画期的z治療法~完r²
目指wvい»2
ÿ研究方法Ā
ÿÿĀv³{³ýóøワü¿~Àイúÿ¿É~定ß化
SEEG{¸sv得¹¼»頭蓋Õ脳波÷ü¿²短い時間÷ü¿{エýó¿化w1}¼~¼~÷ü¿{¹Ā電極間~関係性²算出w1全電極間~関係性²示yýóøワü¿þøú¿É²作ry»2þøú¿É{¹定ß化u¼»NF~経時÷ü¿²算出y»sxw1
脳Õv³{³ýóøワü¿Àイúÿ¿É~情報²得»2具体的{1薬剤抵抗性v³{³患者²対象{SEEG²施行w1得¹¼発作時~頭蓋Õ脳波÷ü¿²解析対象xw
v1Ā電極{zq»脳波~頂点ÿ山x谷Ā~¿イÿンÀ~一ôþÿO相\期þ: PSIĀ²計算y»sxwĀ電極間~関係性|算出y»2s~計算²5000úア程þ繰º返ys
xw1全電極間~ýóøワü¿Õ流動性(NF)|評価y»2s~解析{¸º早期v³{³ýóøワü¿|定ß化u¼1最終的{早期伝播領域~決定{ó»2ÿĀĀùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法~開発
v³{³ýóøワü¿~Àイúÿ¿É~定ß化{àえv1s~解析²ß装y»~
新規治療wあ»ùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法~開発²²»2具体的{}~
標的選択や凝þ体積1侵襲性²抑え»~ý|{tいv後方視的{考察y»sxw
治療手法~最適化²÷»2
ÿ結 果Ā
ÿÿĀv³{³ýóøワü¿~Àイúÿ¿É~定ß化
現時点wPSI²計算y»アûÄúÊĀ|研究r果xwv完rwvzº1SEEG²行sÅン÷û{zいv1アûÄúÊĀ~検証²開始wvい»2Q÷}~一例wあº1記録
開始ÿ1msecĀ{¹700msec~w~PSI²20ch x 20ch~úアw調y~wあ»2Theta
ÿ4−8HzĀ1Alphaÿ8-13HzĀ1HGAÿ61-80HzĀ1rippleÿ81-200HzĀ~}¼~¼~周
波数帯域w経時的z変化²算出w2PSI~強uñワütxwv»ùüþó÷w表示w2全体的{Alpha帯域w~PSI|高いsx|わ{»|1}~他~周波数帯域w電極úア{¸svPSI~高いúアxPいúア|存在y»sx|わ{s2現時点w
preliminaryz解析xwvアûÄúÊĀ|問題zく使用w}»{²調y段階wあ»|1今後s~解析手法²用いv1発作時早期~PSI²全v~Áăンýû間w調yv1ú
－118－

ア\士~関係性~時系列変化²算出y»段階x移行y»予定wあ»2
÷ÿ：PSI解析ÿ予備的検討Ā~一例

ÿĀĀùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法~開発
100åñP~経過観察期間|得¹¼ùÈº波v³{³w点温熱凝þ療法²行zs患者{tいv}~発作予後x凝þ体積x~関連性{tいv調査²行zs2手術時齢中央t5歳ÿ2-11歳Ā1術後追跡期間中央t462åÿ188-722åĀwあs2全例w
両側性~強直発作|毎å見¹¼1島弁蓋部{MRI異常z¸s糖ï謝PQÿþ４例1右1
例Ā²認2SEEG~結果{¹発作w点xwv疑わ¼領域²標的xy»RFTC|行わ¼2RFTC直径5mm~球Ă÷ûw計画w1ü¿ËûõüüĀQwß施w2z入軸数
中央t13ÿ6−14Ā1凝þ病変数中央t31(20−48)wあs2標的体積{対y»治療
体積~割\²示y凝þ効率~中央t70.2%ÿ40.8−91.7%Āwあs2術後100å~時
点w全例w発作|消失1最終経過観察時w3例w発作|消失wvい2発作再発例
w糖ï謝P領域|広い症例²含³wzº1凝þ効率Pい傾U|あs2ÿ表ÿĀ
表ÿ

－119－

ÿr果û考察Ā 等
神経伝播~ýóøワü¿解析{1Àùõ理論|¸く用い¹¼»|1s~手法²用いv得¹¼»Ãý¿øüĀþó÷時間~概念²含³wいzい1脳Õýóøワü¿
可視化{zいvÝ要zÿúúüùû~情報|欠落y»2}~ÿúú単Ow変化y»発作時~v³{³ýóøワü¿²扱うsx÷wい2s~課題²克服y»{1時間情報²活{w状態wýóøワü¿Õ~神経伝播Àイúÿ¿É²定ß化y»必要|あ»2今回完rwアûÄúÊĀ²用いv1発作開始期~頭蓋Õ脳波Åン÷û
²用いv周波数帯域tx~PSI²計算y»x特定~電極úア\士w発作時{\期性|高~»結果|示Wu¼2s¼1v³{³発作開始前ýóøワü¿Õ流動性(NF)|
高く1神経ýóøワü¿全体~安定性|保¼vい»|1発作開始x\時{NF|PQ
w1神経ýóøワü¿~安定性|破綻y»{1発作起始領域w生x活動|伝播
wやyい環境|形ru¼»1xy»s々~仮説²裏付q»所見wあ»可能性|あ»2
今後~追à解析²通xv原著論文~発表²目指wvい»2ùÈº波v³{³w点温熱
凝þ療法{tいv現時点w経験症例|~少zい~~1凝þ体積比率ÿ凝þ効
率Ā|高い方|治療r績良い傾U{あº1ýóøワü¿解析~結果x\わ{v最効率|良いP侵襲治療²ß現y»sx²目指y2

本研究課題横浜学術教育振興財団 2022þ~研究助r~支援²Øqv遂行いw~
w2s~場²z借ºwv財団~関係者~皆様{深く感謝申wPr~y2＜参考文献＞
1.

Takayama, Y., Ikegaya, N., Iijima, K., Kimura, Y., Muraoka, N.,

Kaneko, Y., Yamamoto, T., Iwasaki,M. Is intracranial electroencephalography
useful for planning resective surgery in intractable epilepsy with ulegyria?
J Neurosurg. 133, 1576-1581. (2019).
2.

Takayama, Y., Ikegaya, N., Iijima, K., Kimura, Y., Yokosako, S.,

Muraoka, N., Kosugi, K., Kaneko, Y., Yamamoto, T, Iwasaki, M. SingleInstitutional Experience of Chronic Intracranial Electroencephalography Basedon the Combined Usage of Subdural and Depth Electrodes. Brain Sci. 11, 307.
(2021).
3.

Takayama, Y., Kimura, Y., Iijima, K., Yokosako, S., Kosugi, K.,

Yamamoto, K., Shimizu-Motohashi, Y., Kaneko, Y., Yamamoto, T., Iwasaki, M.
Volume-Based Radiofrequency Thermocoagulation for Pediatric Insulo-Opercular
Epilepsy: A Feasibility Study. Oper Neurosurg (Hagerstown), 23, 241-249.
(2022).

－120－