LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－

7-2

75

液体クロマトグラフタンデム質量分析（LC-MS/MS）法による堆肥等中のクロピラリドの測定－微量試験法の共同試験成績－

伊藤浩平 1，小塚健志 2，秋元里乃 3，坂井田里子 2，大島舞弓 2，中村信仁 2，白井裕治 2
キーワード

クロピラリド，堆肥，汚泥発酵肥料，液体クロマトグラフタンデム型質量分析計,微量試験法, 共同試験

1. はじめにクロピラリドはカルボキシル基を有するピリジン系の農薬であり（Fig. 1），クロピラリドに汚染された堆肥等を利用した場合，植物種により生育障害等が発現することが知られている１）．平成 28 年度に行われた調査によると，国内で生産されている牛ふん堆肥中にもクロピラリドが含まれることが確認されている２）．また，牛ふん堆肥及び汚泥発酵肥料中のクロピラリドの分析法としては，平成 21 年度から平成 28 年度において八木，顯谷，小塚らにより液体クロマトグラフタンデム型質量分析（LC-MS/MS）法が開発および妥当性の確認がなされ３～５），定量下限が 10 µg/kg の試験方法として肥料等試験法に収載されている６）．しかしながら，土壌中のクロピラリド濃度が 1μg/kg 程度の低濃度においても作物によっては生育障害を引き起こす場合があることから７）より低含有量のクロピラリドを測定可能な分析法が必要とされ，平成 29 年度に国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機
構において定量下限 2 μg/kg 以下の「牛ふん堆肥中クロピラリドの高感度分析法」（参考法）が開発された８）．また，独立行政法人農林水産消費安全技術センター（FAMIC）では，この試験法について，牛ふん以外の畜ふん由来堆肥等への適用範囲拡大を検討し，単一試験室の妥当性確認のための試験を実施した９）．
更に，この方法の性能評価（試験室間の再現精度）のため，共通試料を用いて複数試験室による妥当性確認を実施したので，その概要を報告する．
2． 材料及び方法
1） 共同試験用試料
流通されている堆肥を 4 種類（牛ふん堆肥 2 種類，豚ぷん堆肥及び鶏ふん堆肥各 1 種類）及び汚泥発酵肥料 1 種類を 40 °C で一昼夜風乾した後，目開き 500 µm のスクリーンを通過するまで粉砕し，よく混合して共同試験用試料とした．このうち豚ぷん堆肥と 2 種類の牛ふん堆肥はクロピラリドの含有が認められ，その他の試料は対象成分の含有が認められない試料であった．そのため，共同試験参加試験室において含有しない対象成分を添加して共同試験を実施することとした．
共同試験用試料は約 9 g をポリエチレン袋に入れ密封して，それぞれ 40 袋を調製した．一対のブラインド試
1

独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部（現）農薬検査部

2

独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部

3

独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部（現）農林水産省 関東農政局< 81 >

76

肥料研究報告 Vol. 11 （2018）

料を提供するため，それぞれの共同試験用試料の袋にはランダムな番号を付し，参加試験室に配付した．

Clopyralid

CAS No: 1702-17-6
Fig. 1 Chemical structure of clopyralid
2． 材料及び方法
2） 添加用標準液
市販されているクロピラリドをアセトニトリルに溶解した各標準液のそれぞれ一定量を混合し，アセトニトリルで希釈して 2 種類の濃度の添加用標準液を用意した．
添加用標準液は約 1.5 mL をガラスバイアルに入れ，一対のブラインド試料を提供するため，1）の 2 種類の共同試験用試料と共通した番号をバイアルに付し，参加試験室に配付した．
3） 装置及び器具各試験室に設置している LC-MS/MS，振とう機，遠心分離機，高速遠心分離機，ロータリーエバポレーター，マニホールド，試験管ミキサーを使用した．
4） クロピラリドの測定
（1） 抽

出

分析試料 5.00 g を量ってねじ口遠心沈殿管 100 mL に入れ，水酸化ナトリウム溶液（40 g/L）－メタノール〔1 +99〕を 50 mL 加え，振とう機で 30 分間振り混ぜた．その後，遠心力約 1700×g で 5 分間遠心分離し，上澄み液を三角フラスコ 100 mL に移した．残留物に水酸化ナトリウム溶液（40 g/L）－メタノール〔1 + 99〕を 40 mL 加え，振とう機で 30 分間振り混ぜた後，遠心力約 1700×g で 5 分間遠心分離した．太首全量フラスコ 100 mL を受器として上記上澄み液をガラス繊維ろ紙をのせた桐山ロートで吸引ろ過し，続いて容器及び残留物を少量の水酸化ナトリウム溶液（40 g/L）－メタノール〔1 + 99〕で数回洗浄した洗液を同様に吸引ろ過した．標線まで水酸化ナトリウム溶液（40 g/L）－メタノール〔1 + 99〕を加えて抽出液とした．
（2） 精 製 1
カートリッジカラムを予めメタノール 5 mL 及び水 5 mL で速やかに洗浄した．なす形フラスコ 100 mL をカートリッジカラムの下に置き，抽出液 10 mL をカートリッジカラムに正確に加え，速やかに液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．さらに水酸化ナトリウム溶液（0.4 g/L）－メタノール〔1+1〕5 mL を 2 回カートリッジカラムに加え，同様に流出させた．

< 82 >

LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－

77（3） 精 製 2
新たなカートリッジカラムを予めアセトニトリル 5 mL 及び塩酸（1+120）5 mL で速やかに洗浄した．流出液を40 °C 以下の水浴で 5 mL 以下まで減圧濃縮した後，塩酸（1+11）3 mL を加えた．その後，濃縮した流出液をカートリッジカラムに負荷させ，速やかに液面が充てん剤の上端に達するまで流出させた．なす形フラスコ 100 mLを塩酸（1+120）5 mL で 2 回洗浄し，洗液を順次カートリッジに加え，次に塩酸（1+120）－アセトニトリル〔9+1〕5mL 及び水 5 mL を順次カートリッジに加えて速やかに流出させた．ねじ口円錐型遠心沈殿管 10 mL をカートリッジカラムの下に置き，アンモニア溶液（0.0025 w/v%）－アセトニトリル（9+1）4 mL をカートリッジカラムに正確に加え，クロピラリドを速やかに溶出させた．
（4） 精 製 3
溶出液に水酸化ナトリウム（40 g/L）0.1 mL を加え，試験管ミキサーで混合した．その後，ジクロロメタン 2 mLを加え，試験管ミキサーで 30 秒間混合し，遠心力 740×g で約 3 分間遠心分離し，下層（ジクロロメタン層）をパスツールピペットで除去する操作を 2 回繰り返した．残った水層に硫酸（1+2）0.15 mL を加え，試験管ミキサーで混合した．その後，ジクロロメタン 2 mL を加え，試験管ミキサーで 30 秒間混合し，遠心力 740×g で 3 分間遠心分離し，下層（ジクロロメタン層）をパスツールピペットでなす形フラスコ 50 mL に入れる操作を 3 回繰り返した．
繰り返しの操作において，下層は同じなす形フラスコ 50 mL に加えた．これにアセトン 5 mL を加え，40 °C 以下の水浴上でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後，窒素ガスを送って乾固させた．これにぎ酸（1+1000）を 1 mL加え，超音波洗浄機を用いて超音波処理により溶解した後，共栓遠心沈殿管 1.5 mL に移して遠心力 8100×gで 5 分間遠心分離した．上澄み溶液を LC-MS/MS の測定バイアルに移し試料溶液とした．
（5） 液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による測定試料溶液及び検量線作成用混合標準液を LC-MS/MS に注入し，選択反応検出（SRM）クロマトグラムを得た．
得られた SRM クロマトグラムから各成分のピーク面積又は高さを求めて検量線を作成し，試料溶液中の各成分量を求め，分析試料中のクロピラリドの量を算出した．なお，測定にあたっては，肥料等試験法（2017）8.2,a 項を参照して各試験室の LC-MS/MS 操作方法に従った．
なお，定量法の概要を Scheme 1-1 及び Scheme 1-2 に示した．
.

< 83 >

78

肥料研究報告 Vol. 11 （2018）

Sample 5.00 g

Centrifuge tube with screw cap 100 mL← Sodium hydroxide (40 g/L)－Methanol 〔1+99〕 50 mL
Shaking
Centrifugal separation

30 min1700× g , 5 min

Supernatant solution［Receiver, Erlenmeyer flask 100 mL］(Supernatant solution)（Residue）← Sodium hydroxide (40 g/L)－Methanol 〔1+99〕 40 mL
Shaking

30 minCentrifugal separation

1700× g , 5 min

Filtration under reducedpressure

Glass fiber filter paper［Receiver, Short-neck volumetric flask 100 mL］← Washing centrifuge tube and recidue、Sodium hydroxide (40 g/L)－Methanol 〔1+99〕← Sodium hydroxide (40 g/L)－Methanol 〔1+99〕 40 mL (up to the marked line)
Extracted solution

Purification (1)Oasis HLB column (1)(Wash with about 5 mL of methanol, then 5 mL of water in advance）［Reciever, Eggplant-shaped flask 100 mL］← Apply 10 mL of extract← Wash 2 times with sodium hydroxide (0.4 g/L)-methanol 〔1+1〕 5 mL
← About 5 mL of methanol
Evaporation

40 °C, removed methaol← Hydrochloric acid (1+11) 3 mL
Purification (2)Oasis HLB column (2)（Wash with about 5 mL of acetonitrile,then 5 mL of hydrochloric acid (1+120) in advance）← Wash 2 times with hydrochloric acid （1+120） 5 mL with washed the flask beforehand← Wash with hydrochloric acid （1+120) - acetonitrile 〔9+1〕 5 mL
← Wash with water 5 mL
［Reciever, Centrifuge tube (screw cap) 10 mL］← Eluate with ammonia solution (0.0028 w/v%) - acetonitrile 〔1+1〕 4 mL
EluateScheme 1-1

Analytical procedure for clopyralid in fertilizer< 84 >

LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－79Eluate
Purification (3)← Sodium hydroxide (40 g/L) 0.1 mL
MixingVortex← Dichloromethane 2 mL
MixingCentrifugal separation
Clear underlayer

Vortex, 30 sec
740× g (2000 rpm, 165 mm), 3 min
Pasteur pipette

Repeat 1 time
← Sulfic acid (1+2) 0.15 mL
MixingVortex← Dichloromethane 2 mL
MixingVortex, 30 sec

Centrifugal separation

740× g (2000 rpm, 165 mm), 3 min

Sampling of underlayer

Pasteur pipette［Reciever, Eggplant-shaped flask 50 mL］

Repeat 2 times←Acetone 5 mL
Evaporation
Dry up

40 °C
Nitrogen gas← Formic acid(1+1000） 1 mL（Volumetric pippet）
Transfer
Centrifugal separation

Centrifuge tube 1.5 mL
8100×g （10000 rpm, 72.5 mm）, 5 min

Supernatant solution
Measurement

LC-MS/MS

Scheme 1-2

Analytical procedure for clopyralid in fertilizer5） 共同試験用試料の均質性試験
IUPAC/ISO/AOAC の技能試験プロトコル１０）の均質性試験に従い，クロピラリドの含有が認められた共同試験用試料（牛ふん堆肥 1，牛ふん堆肥 2 及び豚ぷん堆肥）から 10 試料を抜き取り，各試料につき 2 点併行で 4）に従って分析した．なお，ねじ口遠心沈殿管に計り入れる分析試料は牛ふん堆肥 1 は 4.00 g，その他は 4.50 gとした．
6） 共同試験
試験に参加した 10 試験室と使用した LC-MS/MS は以下の通りであり，それぞれの試験室において送付した10 試料について 4）に従って分析した．

< 85 >

80

肥料研究報告 Vol. 11 （2018）

なお，各試験室で使用した LC-MS/MS の機種等を Table 1 に示した．
・ 一般財団法人材料科学技術振興財団分析評価部 KB
・ 一般社団法人日本海事検定協会食品衛生分析センター
・ 一般財団法人日本食品検査関西事業所
・ 一般財団法人日本食品分析センター多摩研究所
・ 株式会社食環境衛生研究所
・ 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構農業環境変動研究センター
有害化学物質研究領域
・ ジーエルサイエンス株式会社総合技術本部カスタマーサポートセンター
・ 独立行政法人農林水産消費安全技術センター肥飼料安全検査部肥料鑑定課
・ 日本環境科学株式会社事業部分析グループ
・ 三浦工業株式会社環境事業本部科学分析センター（50 音順）

Table 1 Instruments used in the collaborative study
LC column
LC-MS/MS(i.d.×length, particle size)
LC: 1200series, Agilent Technologies
L-column2 ODS, CERI
MS/MS: QTRAP 4500, AB SCIEX(2.1 mm×150 mm, 3.0 µm)
LC: Prominence, Shimadzu
InertSustain C18, GL Sciences
MS/MS: LCMS-8060, Shimadzu(2.1 mm×150 mm, 3.0 µm)
LC: ACQUITY UPLC, Waters
ACQUITY UPLC HSS T3, Waters
MS/MS: MICROMASS Quattro micro API, Waters(2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
LC: Prominence, Shimadzu
Eclipse XDB-C18, Agilent Technologies
MS/MS: LCMS-8050, Shimadzu(2.1 mm×100 mm, 1.8 µm)
LC: Agilent 1200 Infinity Series
ZORBAX Eclipse Plus C18
MS/MS: Agilent 6460 Triple Quad LC/MS(2.1 mm×100 mm, 1.8 µm)
LC: Prominence UFLC, Shimadzu
L-column2 ODS, CERI
MS/MS: QTRAP 4500, AB SCIEX(2.1 mm×150 mm, 5.0 µm)
LC: Nexera, Shimadzu
InertSustain AQ-C18, GL Science
MS/MS: API 4000 QTRAP, AB SCIEX(2.1 mm×100 mm, 1.9 µm)
LC: ACQUITY UPLC, Waters
ACQUITY UPLC HSS C18, Waters
MS/MS: Quatro Premier XE, Waters(2.1 mm×100 mm, 1.8 µm)
LC: Nexera XR, Shimadzu
InertSustain C18, GL Sciences
MS/MS: QTRAP 4500, AB SCIEX(3.0 mm×50 mm, 2.0 µm)
LC: ACQUITY UPLC, Waters
InertSustain C18, GL Sciences
MS/MS: Xevo TQ, Waters(2.1 mm×100 mm, 2.0 µm)
3． 結果及び考察
1） 共同試験用試料の均質性確認
均質性試験の試験成績について，Cochran 検定による外れ値を除外し，一元配置分散分析から得られた統計量を Table 2 に示した．いずれの試料においても，併行相対標準偏差（RSDr）は肥料等試験法 6）の妥当性確< 86 >

LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－

81

認の手順に示している各濃度のレベルにおける併行精度の目安（CRSDr）以内であり，F 値が F 境界値を下回ったことから，有意水準 5 %において試料間に有意な差は認められなかった．これらのことから，各試料は共同試験に用いることができる均質性を有していることを確認した．

Table 2 Homogeneity test result of clopyralidb)c)

sampleMeansr(µg/kg) (µg/kg)

Cattle manure compost 110(0)180.31

11.88

6.6

Cattle manure compost 210(0)

2.70

0.28

Pig manure compost

9(1)

31.92

1.50

SampleNo. ofa)d)

fg

11

2.02

12.05

6.7

1.06

10.4

110

0.28

10.4

0.43

4.7

11

1.58

2.18

6.8

3.23

RSD r(%)

ehCRSD r ） s bb ）s b+r ） RSD b+r ）F valuei）j）(%)(μg/kg) (μg/kg)(%)a) Number of the samples used for analysis; (): Number of outliersb) Grand mean value (n =20=10×number of repetiton (2))c) Standard deviation of repeatabilityd) Relative standard deviation of repeatabilitye) Rough standard of relative standard deviation of repeatability in Testing Methods for Fertilizersf) Standard deviation of sample-to-sampleg) Standard deviation of sample-to-sample including repeatability‫ݏ‬ୠା୰ ൌ ‫ݏ‬ୠୠଶ ൅ ‫ݏ‬୰ଶh) Relative standard deviation of sample-to-sample including repeatabilityi) F value calculated based on analysis of variance (ANOVA)j) F critical value: F (9,10:0.05)=3.022） 共同試験成績及び外れ値検定
各試験室から報告された共同試験成績を Table 3 に示した．各系列の分析試料の結果を IUPAC の共同試験プロトコル１１）に従って統計処理した．外れ値を検出するために Cochran の検定及び Grubbs の検定を実施した．
その結果，10 試験室の試験成績のうち，3 種類の試料で各 1 試験室が外れ値として判定された．
3） 併行精度及び室間再現精度
外れ値を除外した試験成績より算出した平均値，併行標準偏差（sr），併行相対標準偏差（RSDr）値及び肥料等試験法６）における併行相対標準偏差（CRSDr）の目安並びに室間再現標準偏差（sR），室間再現相対標準偏差（RSDR）及び肥料等試験法１１）における室間再現相対標準偏差（CRSDR）の目安を Table 4 に示した．
クロピラリドの平均値は 1.20 µg/kg～128 µg/kg であり， その併行標準偏差は.0.06 µg/kg～10.1 µg/kg，併行相対標準偏差は 2.5 %～15.3 %，室間再現標準偏差は 0.14 µg/kg～14.6 µg/kg，室間再現相対標準偏差は11.4 %～17.6 %であった．
いずれの併行相対標準偏差（RSDr）及び室間再現相対標準偏差（RSDR）も肥料等試験法６）の妥当性確認の手順に示している各濃度のレベルにおける精度の目安の 2 倍以内であったことから，本法の精度は同試験法の性能評価規準の要求事項に適合していることを確認した．

< 87 >

82

肥料研究報告 Vol. 11 （2018）a)

Lab IDABCDEFGH
IJa)

Lab ID

Table 3 Individual result of clopyralid (μg/kg)
Cattle manure
Cattle manure
Pig manure compost
compost 1
compost 291.6
129
113
166
115

91.2
128
146
157
121

1.34
2.52
2.45
2.18
3.38

1.14
2.50
1.88
2.45
2.14138161100
85.0
129
134
153
155
127
121
Poultry manurecompostb)

b)

2.63
2.89
1.48
2.00
2.45
2.69
2.16
2.17
2.72
2.44
Composted sludge
fertilizerb)

b)

0.896
1.07
1.05
0.992
1.29

0.856
0.971
1.00
0.967
1.36

35.9
53.5

34.2
54.8

35.4
56.733c)53.0
55.0
35.0b)

61.1
33.4
42.5
56.8
59.3

ABCDEF

1.49GHIJ

0.413
1.12
1.23
1.65b)

1.52b)

c)

0.765
1.13
1.141.84c)

62.7
35.2
42.0
54.3
60.9a) Laboratory identificationb) Calculated value using m/z 110 for quantificationc) Outlier of Cochran test

< 88 >c)

b)

16.6
26.6

14.4
27.8

10.1
26.022.3c)

26.5
33.219.5b)

28.9
12.0
22.8
23.8
19.5

30.0
15.6
23.1
20.5
21.7c)b)

LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－

83

Table 4 Statistical analysis of collaborative study results for clopyralida)

SampleCattle manurecompost 1
Cattle manurecompost 2
Pig manure compostb)

c)

Labsp (q )Mean(μg/kg)

sr(μg/kg)

RSD r(%)

10(0)

128

10.1

10(0)

2.289(1)22.5d)e)f)g)

CRSD r(%)

sR(μg/kg)

RSD R(%)

CRSD R(%)

7.9

1114.611.4

220.3515.3

110.40

17.6

22

2.31

10.3

113.4315.322h)

Poultry manure
9(1)
1.20
0.06
5.0
110.1412.0
22compostComposted sludge
9(1)
48.1
1.21
2.5
115.6011.6
22
fertilizera) Number of laboratories, where p =number of laboratories retained after outlier removed and(q )=number of outlierb) Grand mean value of the results of duplicate sample which were reported from laboratories retained
after outlier removed (n =p ×number of samples (2))c) Standard deviation of repeatabilityd) Relative standard deviation of repeatabilitye) Rough standard of relative standard deviation of repeatability in Testing Methods for Fertilizersf) Standard deviation of reproducibilityg) Relative standard deviation of reproducibilityh) Rough standard of relative standard deviation of reproducibility in Testing Methods for Fertilizers

4． まとめ10 試験室において 5 種類（10 点）の堆肥及び汚泥発酵肥料を用いて共同試験を実施し，LC-MS/MS 法による堆肥及び汚泥発酵肥料中のクロピラリドの測定について室間再現性の評価を行った．その結果，クロピラリドの平均値 1.20 µg/kg～128 µg/kg において，室間再現相対標準偏差は 11.4 %～17.6 %であった．いずれの室間再現相対標準偏差（RSDR）も肥料等試験法６）の妥当性確認の手順に示している各濃度のレベルにおける精度の目安の範囲内であることから，本法の精度は同試験法の性能評価規準の要求事項に適合していることが確認された．
謝 辞
共同試験にご協力頂きました一般財団法人材料科学技術振興財団分析評価部 KB，一般社団法人日本海事検定協会食品衛生分析センター，一般財団法人日本食品検査関西事業所，一般財団法人日本食品分析センター多摩研究所，株式会社食環境衛生研究所，国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構農業環境変動研究センター有害化学物質研究領域，ジーエルサイエンス株式会社総合技術本部カスタマーサポー
トセンター，日本環境科学株式会社事業部分析グループ及び三浦工業株式会社環境事業本部科学分析セン
ターの各位に謝意を表します．

< 89 >

84

肥料研究報告 Vol. 11 （2018）

文 献1） 飼料及び堆肥に残留する除草剤の簡易判別法と被害軽減対策マニュアル，筑波印刷情報サービスセン
ター協同組合2） 農林水産省：輸入飼料中及び堆肥中に含まれるクロピラリドの調査結果について<http://www.maff.go.jp/j/seisan/kankyo/clopyralid/attach/pdf/clopyralid-18.pdf>
3） 八木寿治，関根優子，白井裕治：液体クロマトグラフタンデム型質量分析計（LC-MS/MS）によるたい肥及び汚泥発酵肥料中のクロピラリド測定，肥料研究報告，3，51～59（2010）4） 顯谷久典，八木寿治，橋本良美，白井裕治：液体クロマトグラフタンデム型質量分析計（LC-MS/MS）法による堆肥及び汚泥肥料中のクロピラリド，アミノピラリド及びピクロラムの測定，肥料研究報告，7，1~9 (2014)5） 小塚健志，大島舞弓，橋本良美，田丸直子，白井裕治：液体クロマトグラフタンデム型質量分析計（LC-MS/MS）法による堆肥及び汚泥肥料中のクロピラリド及び関連物質の測定－共同試験成績－，平成28 年度肥料等技術検討会資料
6) 独立行政法人農林水産消費安全技術センター(FAMIC)：肥料等試験法< http://www.famic.go.jp/ffis/fert/sub9.html >7） 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構農業環境変動研究センター：土壌中クロピラリドのト
マト，サヤエンドウ，スイートピーの初期成育に及ぼす影響・データ集< http://www.naro.affrc.go.jp/publicity_report/pub2016_or_later/pamphlet/tech-pamph/078226.html>
8） 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構農業環境変動研究センター：牛ふん堆肥中クロピラリドの高感度分析法(参考法)< http://www.naro.affrc.go.jp/publicity_report/pub2016_or_later/pamphlet/tech-pamph/078229.html>
9） 伊藤浩平，小塚健志，青山恵介，白井裕治：12 LC-MS/MS 法による堆肥等中のクロピラリドの測定－適用範囲拡大－，平成 29 年度肥料等技術検討会資料
10） Thompson, M., L. R. Ellison S., Wood, R.: The International Harmonized Protocol for the Proficiency
Testing of Analytical Chemistry Laboratories, Pure & Appl. Chem., 78（1）, 145~196 （2006）12） Horwitz W. : Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method-Performance Studies, Pure &Appl. Chem., 67（2）, 331~343 （1995）< 90 >

LC-MS/MS法による堆肥等中のクロピラリドの測定 －微量試験法の共同試験成績－85

Microanalysis Determination of Clopyralid in Compost and Composted Sludge Fertilizer by
Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS): A Collaborative Study
Kohei ITO1, Kenji KOZUKA2,Satono AKIMOTO3, Satoko SAKAIDA1, Mayu OSHIMA1,Nobuhito NAKAMURA1 and Yuji SHIRAI1
1

Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department(Now) Food and Agricultural Materials Inspection Center, Agricultural Chemicals Inspection Station

2

Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department

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Food and Agricultural Materials Inspection Center, Fertilizer and Feed Inspection Department(Now) Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, Kanto Regional Agricultural Administration Office
A collaborative study was conducted to evaluate LC-MS/MS for determination of clopyralid, in compost andcomposted sludge fertilizer. Clopyralid was extracted with methanol under alkaline condition. The extract waspurified by retention and elution with a cleanup cartridge and by extraction with dichloromethane These
purification took advantage of characteristics that the behavior of elution varies between acidity and alkaline. The
clopyralid, was analyzed by LC-MS/MS. Five samples, respectively, were sent to 10 collaborators. These samples
were analyzed as blind duplicates. The mean values and the reproducibility relative standard deviation (RSDR) forclopyralid were 1.20 µg/kg ~ 128 µg/kg and 11.4 % ~ 17.6 %, respectively. These results indicated that thismethod has an acceptable precision for determination of clopyralid,
Key words

clopyralid, compost, composted sludge fertilizer, LC-MS/MS, microanalysis method, collaborative

study(Research Report of Fertilizer, 11, 75~85, 2018)< 91 >