電気泳動の進化系

高分子解析に適した電気泳動システム

電気泳動解析の可能性ひろがる
HMW ＆ Native PAGE シリーズ

u-PAGEL H

高分子用プレキャストゲル

EzProteoLysis Native

Native PAGE 用タンパク質抽出用キット

EzApply Native

Native PAGE 用サンプル調製バッファー

EzStandard Native

Native PAGE 用分子量スタンダート

EzRun ClearNative

HR-CN-PAGE 用泳動バッファー

EzRun BlueNative

BN-PAGE 用泳動バッファー

高分子タンパク質の電気泳動に最適な究極のプレキャストゲル

u-PAGEL H
u・パジェル

まず分離に適したゲルを選びましょう
20 ～ 1,500kDa まで対応

H

U-PAGEL H (3-14%)

ポリアクリルアミドゲル は、アクリルアミドと架橋剤である N,N'- メチレンビ
スアクリルアミド（Bis）がラジカル重合により結合した重合体です。アクリル
アミドだけでは直鎖状につながっていくだけですが、架橋剤を加えることにより、架橋の役割を果たして網目（三次元）構造を持った重合体（ゲル）ができます。
従来の架橋剤（Bis）は、水への溶解度が低いため Bis 同士が集まる部分ができ、不均一なゲルとなります。不均一なゲルは機械的強度が下がるため、もろく破れやすいために取り扱いが難しいことが課題でした。

770

245

75

u-PAGEL H は、Bis よりも親水性が高く、結合の手が長い新規架橋剤を用いています（右図）。そのため、低濃度であっても均一なゲルになり、機械的強度に優れ、破れにくいゲルになりました。またポアサイズが大きくなることで、泳動試料がゲルの網目に目詰まりすることなくスムーズに入り、さらに高い分離能を示します。

45
20
kDa

SDS PAGE

u-PAGEL H で高分子バンドがこんなにシャープに！
UH-T5

UH-T310

UH-T314SDS PAGE
他社 Tris-Acetate
3-8% ゲル

UH-T4205% ゲル

3-10% ゲル

3-14% ゲル

4-20% ゲル75 ～ 1,000kDa まで対応

35 ～ 1,500kDa まで対応

20 ～ 1,500kDa まで対応

5 ～ 600kDa まで対応

SDS PAGE

u-PAGEL H

Collagen（コラーゲン）の泳動

UH-T5

右 図 は、 各 種 u-PAGEL H と 他 社 の ゲ ル に よ り SDSPAGE により泳動した結果を示しています。上図のゲル内の橙色枠で囲まれた Collagen（コラーゲン）のレーンを拡大しています。
u-PAGEL H は、他社ゲルに比べて、バンドがスメアにならず、高分子のバンドもシャープに分離されることが確認できます。特にβ 11 と β 12 がシャープに分離されて
γ
おり、γ のバンドも明瞭に確認できるうえ、さらに高分子領域のバンドもはっきりと視認できます。
さらに u-PAGEL H は、他社ゲルの約半分の時間で高速泳 β 11
動が終了するうえに、低分子から高分子に至るまで、バ β 12ンドがシャープに分離できることがわかります。

ゲル

泳動条件

時間

u-PAGEL H

300V c.v.

30~45 分他社ゲル 3-8%
Tris-Acetate gel

150V c.v.

61 分（1x EzRun）

1

UH-T310

5% ゲル

α1
α2

UH-T314

3-10% ゲルUH-T420

3-14% ゲル

4-20% ゲル

他社製

Tris-Acetate
3-8% ゲル

γ
β 11
β 12
γ
γ
β 11
β 12

α1
α2

β 11
β 12

α1
α2

α1
α2

γ
β 11
β 12

α1
α2

高い分離能と物理的強度を兼ね備えた究極のポリアクリルアミドゲル
従来の架橋剤 (Bis) を用いたゲルの架橋イメージ

ぎゅ

新規架橋剤を用いたゲルの架橋イメージ

アクリルアミド

スッキリ！

うぎ

ゅう

従来の架橋剤
Bis

スッキリ！

う
うぎゅ
ぎゅぎゅうぎゅう

新規架橋剤

こんなに引っ張ってもやぶれない！
新規架橋剤を用いたゲルは、Bis を用いたゲルに比べて、引張破断ひずみが約 1.7 倍高く、やぶれにくいことが特長です。
染脱色操作やブロッティング操作において、ゲルが格段に取り扱
いやすくなりました。

u-PAGEL H で高分子を効率的に検出しよう！

高分子量用ゲルu-PAGEL H

セミドライ式で１MDa が転写できる⁉
大腸 が ん 細 胞由 来 の 細 胞 抽 出液を
u-PAGEL で 分 離 し、 ウ ェ ス タ ン ブ
ロ ッ テ ィ ン グ で CA19-9、CD66、Transferrin、SMAD2 の発現を検出した結果を示しています。CA19-9と CD66 は Colo205 細 胞 の み で、Transferrin は HepG2 細胞で検出されました。このように u-PAGEL H
は 500kDa 以上の高分子タンパク質を良好に分離し、ウェスタンブロッ
ティングで高効率に転写して良好にバンドを検出できます。
サンプル： 分子量マーカー
左からColo205, HCT116,
SW620, HeLa, HepG2 細胞抽出液
泳動条件： 300V、35 分（1x EzRun）
転写条件： EzFastBlot HMW、24V、30 分
ブロッキング： EzBlock CAS 30 分
1 次抗体： CA19-9, CD66, Transferrin,
SMAD2
2 次抗体： HRP 標識抗 IgG 抗体
検出：
EzWestLumiOne
撮影：
LuminoGraph III

UH-R5

UH-R420約 800kDa

CA19-9200-400kDa

CD66 (CEA)
180-200kDa

Transferrin
80kDa

SMAD2
60kDa

※ EzProtein Ladder のバンド移動度です

SDS PAGE

u-PAGEL H (5%)
u- パジェル H(5%)

ゲル濃度

UH-R310（u・パジェル H）

5% 均一

u-PAGEL H (3-10%)
u- パジェル H(3-10%)

3-10% グラディエント

SDS PAGE

u-PAGEL H (3-14%)
u- パジェル H(3-14%)

3-14% グラディエント

u-PAGEL H (4-20%)
u- パジェル H(4-20%)

4-20% グラディエント

製品名

UH-T5

UH-R5

UH-T310

UH-R310

UH-T314

UH-R314

UH-T420

UH-R420

コード No.

2331300

2331310

2331302

23313122331306

2331316

2331304

2331314

検体数

14

18

14

18

14

18

14

18

分画範囲

75 ～ 1,000 kDa

35 ～ 1,500 kDa

35 ～ 1,500 kDa

アプライ量

14 検体

ゲルサイズ

90mm (W) x 83mm (H) x 1.0mm (D)

価格（税別）

最大 24uL 18 検体
25,800 円

5 ～ 600 kDa

最大 18uL

10 枚

本誌記載の価格 ( 税抜き ) および製品仕様は予告なく変更する場合がありますので、ご了承ください。最新の情報などに関しましては当社ホームページでご確認ください。

2

Native PAGE

高分子といえばやっぱりネイティブです

Native PAGE はドデシル硫酸ナトリウム（SDS）や還元剤（DTT など）を使用せずに、タンパク質をポリアクリルアミドゲルで電気泳動により分離する手法です。SDS イオン由来の負電荷を帯びず、タンパク質固有の電荷と分子量に依存して分離されます。タンパク質の変性が抑えられるため、タンパク質間の高次構造や生理活性などが保持されやすく、タンパク質の相互作用やコンプレックス、酵素活性などの解析に用いられます。Native PAGE には従来の Native PAGE 法のほかに、タンパク質の高次構造を壊さずに、負電荷を帯びた色素であるクーマジー
ブリリアントブルー（CBB）を利用した Blue-Native PAGE（BN-PAGE) や、弱い陰イオン性界面活性剤を利用した High-Resolution-Clear
Native PAGE（HR-CN-PAGE）があります。

+
陽イオン
H
+

C

H3N

COOH

H

+

R
pH が低い
酸性

+

H

両性イオン

陰イオン

H

H

H3N

C

COO

-

H

+

R

+

H2N
H

中性

C

COO

等電点よりも低い pH
溶液内ではタンパク質は + になる← pH が低い-

pH が高いアルカリ性

pH が高い→等 電 点 よ り も 高 い pH
溶液内ではタンパク質
は－になる

R

+

タンパク質
の等電点

-

タンパク質を構成するアミノ酸は両性イオンであり、pH が低い溶液内（酸性）では陽イオンに、pH が高い溶液内（アルカリ性）では陰イオンとして挙動します（左図）。一方、タンパク質は等電点よりも pH が低い溶液内ではプラス（+）に、等電点よりも pH が高い溶液内ではマイナス（－）に帯電します。プラス（+）になるかマイナス（－）になるかは、アミノ酸は解離定数（pK) に、タンパク質は等電点に依存します。
そのため Native PAGE では、等電点が大きいタンパク質は泳動されにくくなり、泳動途中で止まったり、逆行するため良好に分離することが困難な場合があります。さらに変性されていないタンパク質は複雑な高次構造をとるため、Native PAGE では立体構造の影響により分子量がそのまま分子サイズを反映しないことがあります。また等電点の影響もうけるため、相対移動度が分子量を反映しない現象がしばしば起きます。

それぞれの泳動方法の原理に関して、模式図を使用して簡単に説明します。

HR-CN-PAGE

BN-PAGE

Native PAGESDS PAGE

消失

－

Det.

Det.

－

－

Det.

Det.

－

－

Det.

Det.

－

－

Det.

Det.

－

+

解離
－

Det.

Det.

－

CBB

－

－

CBB

－

CBB

CBB

－

－

－

－

凝集

+

－

－
－

－

－

－
－

CBB

－

－

CBB

－

－
－

－

タンパク質コンプレックスの周りが陰性界面活性剤で覆われて泳動されるため、分子量に応じて分離されます。弱く結合したコンプレックスは解離する場合があります。酵素活性やタンパク質の機能は保持されます。

3タンパク質コンプレックスの周りが負に帯電した CBB により覆われて泳動されます。コンプレックスが解離
し な い CBB 濃 度 な の で、 安 定 し た
形状で分子量に応じて分離されます。
CBB の結合により酵素活性やタンパ
ク質の機能は損なわれることがあります。

タンパク質をそのまま泳動するため、タンパク質の等電点が分子量よりも影響が大きくなります。ゲルの㏗よりも等電点が大きいタンパク質は、陰極側に移動して消失することがあります。またタンパク質コンプレッ
クスは壊れませんが、凝集が生じる
ことがあります。

タンパク質コンプレックスは、SDSと還元剤の処理により解離して１本鎖のポリペプチドに変性します。
SDS が均等に付加されて負の電荷を帯びるため、各ポリペプチドは分子量の大きさに従って分離されます。
酵素活性などは損なわれることが多くなります。

Native PAGE Reagents
SDS を含まない Tris-Glycine 系ゲルに使用可能です

WSE-7056

EzRun ClearNative

UH-T310150V cv,95min

HR-CN

✓

High-Resolution-Clear-Native PAGE（HR-CN-PAGE）用泳動バッファー✓

5 ×濃度の陰極用と陽極用の泳動バッファーのセット✓

蒸留水で 5 倍希釈するだけ✓

酵素活性やタンパク質の活性を阻害しない✓

SDS を含まない Tris-Glycine 系ゲルに使用可能

P.9

HR-CN-PAGE 中の様子

WSE-7057

EzRun BlueNative

UH-T310150V cv, 85min

BN✓Blue-Native PAGE（BN-PAGE）用泳動バッファー✓

10x 濃度の泳動バッファーと 100x 濃度の陰極バッファー用添加溶液のセット✓

陰極 / 陽極用泳動バッファーは蒸留水で 10 倍希釈するだけ✓

サンプルアプライ後、陰極バッファーに添加溶液を加えて泳動開始✓タンパク質のコンプレックスやオリゴマーの解離を生じない✓

SDS を含まない Tris-Glycine 系ゲルに使用可能

P.11

BN-PAGE 中の様子

WSE-7055

EzRun TG

UH-T310150V cv, 90min✓

Native PAGE 用泳動バッファー✓

10 ×濃度の泳動バッファー✓

蒸留水で 10 倍希釈するだけ

EzProteoLysis Native

P.7

EzApply Native		

P.8

分子量マーカー EzStandard Native		

P.8

サンプル調製Native4Native PAGE で解析しよう
コンプレックス解析
HR-CN

BN

Native

SDS

1,236
1,048
720
480
350
146

酵素活性染色による検出
様 々 な Native PAGE 法 お
よ び SDS-PAGE で 葉 緑 体
抽出液を泳動分離したゲルを EzStain AQua で染色し、Printgraph Classic で カラー撮影したイメージです。
同じサンプルでも泳動法に
より泳動パターンが異なり、コンプレックスの解離等の解析に利用できます。

HR-CN

Cox Ⅰ Cox Ⅱ Cox Ⅳ Cox Ⅴ

1,236
1,048

720
480
350

146

66
45
20

66

kDa

kDa

UH-T314 ゲル (3~14%)

カラー撮影に最適なPrintgraph Classic「WSE-5400 Printgraph
Classic」 は カ ラ ー CMOS カ
メラを搭載、高速起動～撮影～プリントのスタイルを持ちながら、画質にもこだわった
ゲル撮影装置です。

UH-T310 ゲル (3~10%)

EzProteoLysis Native で抽出したニワトリ肝ミト
コンドリアタンパク質をHR-CN-PAGE で 泳 動 分 離し、NADH デヒドロゲナー
ゼ（ Ⅰ ）、 コ ハ ク 酸 デ ヒ ド
ロ ゲ ナ ー ゼ（ Ⅱ ）、 チ ト ク
ロム C オキシダーゼ（Ⅳ）、ATP 合成酵素（Ⅴ）をゲル
内での酵素活性染色により検出した結果を示しています。Printgraph Classic でカラー撮影したイメージです。

プロテアソーム活性の検出
HCT116 Colo205

Native
1,236
1,048
720

26S
20S

480
350
146

EzProteoLysis Native で 抽 出 し た 大 腸
が ん 細 胞 HCT116 お よ び Colo205 抽 出
タ ン パ ク 質 を Native PAGE で 泳 動 分 離し、Suc-LLVY-AMC を 使 用 し て キ モ ト
リプシン様プロテアソーム活性を In Gel
Proteasome Activity assay で 検 出 した 結 果 を 示 し て い ま す。UV で 励 起 し、BPF530 フィルターと UV カットフィル
ターを使用して LuminoGraph Ⅱ EM で
5 秒露光により撮影したイメージです。

66
45
20

kDa

UH-T314 ゲル (3~14%)

HR-CN-PAGE
泳動バッファー／ゲル

透明

泳動中の着色バンドの分離能バンドのシャープさなど

酵素活性の検出
In-gel catalytic activity assay

蛍光タンパク質の検出
In-gel fluorescence assay

コンプレックスの構造
解離による影響など

アトーの関連製品

5◎
BN-PAGE よりもバンドの分離能が高いといわれています。泳動バッファーに含まれる陰イオン性界面活性剤のミセルがタンパク質に結合することで、溶解度が上がり、コンプレックス全体が負に帯電し、等電点に関係なく分子量に従った泳動分離ができます。

◎
タンパク質の変性が最小限に抑えられているため、酵素活性が保持されます。Ingel catalytic activity assay に適しており、OXPHOS、ATP 合成酵素、NADPH、
HRP、その他さまざまな活性測定に利用されています。

◎
タンパク質の変性が最小限に抑えられているため、蛍光反応が阻害されず、透明なため蛍光の吸収も生じません。In-gel fluorescence assay に適しており、CyDye 標識タンパク質、GFP、YFP などの解析に利用されています。

△
陰イオン性界面活性剤が少量とはいえ含まれるため、泳動中に、不安定な結合のサ
ブユニットが解離することがあります。そのためコンプレックスを完全な大きさで分離できないことがあります。

EzProteoLysis Native, EzApply Native, EzStandard Native,
EzRun ClearNativeタンパク質の機能が保たれているので様々な解析ができます
蛍光タンパク質の検出
HR-CN

BN

蛍光や発光撮影に最適な

LuminoGraph Ⅱ EM

Native
酵母細胞で発現した EGFP 結合タンパク質を
EzBactYeast Crusher に よ り 抽 出 し、 様 々な Native PAGE 法で分離しました。ゲル内のEGFP の蛍光を、Blue LED で励起し、BPF525
フィルターを使用して LuminoGraph Ⅱ EM を使用して 10 秒露光により撮影した結果を示しています。BN-PAGE で分離した場合、ゲルが青く染色されるため、EGFP の蛍光が吸収され、EGFP の蛍光は検出できません。

720
480
350
146
66
45

アトーが持つ撮影装置開発の技術、ノウハウを全て集約。
超 高 感 度 EM-CCD カ メ ラ、
歪 み の 少 な い「F0.8」 高 感度レンズを搭載、最適な光源とフィルターの組み合わせにより、微弱な発光や蛍光の検出に最適なハイエンドモデル
ケミルミ撮影装置です。

20
kDa

UH-T420 ゲル (4~20%)抗体の標識蛍光色素および標識酵素の検出
Alexa 647 標識抗体
HR-CN

BN

Alexa 800 標識抗体

NativeHR-CNBN

HRP 標識抗体

NativeHR-CN

BNNative
市販の蛍光色素および酵素標識抗体を様 々 な Native PAGE 法 で 泳 動 分 離 し、LuminoGraph Ⅱ EM で検出した結果を示し て い ま す。Alexa 647 は Red LED で 励
起 し て BPF690 フ ィ ル タ ー で 10 秒 露 光、Alexa 800 は近赤外光で励起して LPF810
フィルターで 30 秒露光により撮影したイメージです。また HRP は発光基質である
EzWestLumiOne と反応させて、ゲル内の発光を LuminoGraph Ⅱ EM で５秒露光により撮影したイメージです。

720

1,236
1,048

1,236
1,048

720

720

480
350

480
350

146

146

45

66
45
20

66
45
20

20

kDa

kDa

480
350

UH-T314 ゲル (3~14%)

146
66

kDa

UH-T314 ゲル (3~14%)

UH-T420 ゲル (4~20%)

BN-PAGE

Native PAGECBB 由来の濃青色

透明

◎

△

負に帯電した CBB が大量にタンパク質に結合することで、溶解度が上がり、コンプレックス全体が負に帯電し、等電点に関係なく泳動分離ができます。CBB が結合した疎水性タンパク質は凝集を生じず、界面活性剤による解離も生じないため安定です。逆に CBB が結合しない塩基性の水溶性タンパク質は分離できません。

タンパク質の電荷および等電点に強く依存します。負に帯電したタンパク質（pI がゲル内の環境より低い、酸性タンパク質）は陽極側に移動し、正に帯電したタンパ
ク質（pI がゲル内の環境より高い、塩基性タンパク質）は陰極側に移動し、消失する場合があります。泳動途中で析出することもあり、スメアなパターンになります。

△〇

CBB の結合により酵素活性が阻害されることがあり、ゲルやタンパク質の着色によっても酵素活性の検出が妨げられることがあります。

タンパク質の変性が生じないため酵素活性が保持されてます。In-gel catalytic
activity assay に適しております。ただし泳動中に析出や逆走することがあり、バンドとして分離できないことがあります。

△〇

CBB がタンパク質に結合するため蛍光検出が阻害されることがあります。ゲルやタンパク質が濃青色に着色されるため、吸収により蛍光検出が妨げられます。9095％クエンチングされるといわれています。

タンパク質の変性が最小限に抑えられているため、蛍光反応が阻害されず、透明なため蛍光の吸収も生じません。ただし泳動中に析出や逆走することがあり、バンドとして分離できないことがあります。

◎△

泳動中にコンプレックスの解離が生じないため、少量で簡便にコンプレックスが分離できます。クロマトグラフィーとの相関性が 90％以上と高く、OXPHOS、ATP
合成酵素、GPCR、膜タンパク質、その他コンプレックスに利用されています。

泳動中にコンプレックスの解離が生じないが、泳動中に析出や逆走することがあり、バンドとして分離できないことがあります。

EzProteoLysis Native, EzApply Native, EzStandard Native,

EzProteoLysis Native, EzApply Native, EzStandard Native,

EzRun BlueNative

EzRun TG

6

Native PAGE に最適なサンプル調製用試薬

WSE-7424

イージープロテオライシス

ネイティブ

EzProteoLysis Native
動植物細胞や組織に添加するだけで、活性を損なうことなく簡単にタンパク質が抽出できます。
Protease inhibitor と Phosphatase inhibitor が付属しています。

培養細胞

葉緑体

動物組織
14,000 × g で ５ ～10 分間遠心します

EzProteoLysis Native に Proteaseinhibitor と Phosphatase inhibitorを添加して混合します

EzProteoLysis Native を添加してピペッ
ティングし氷上で 5 ～ 10 分間静置します

15,000rpm

遠心上清を回収します※動物組織はホモジェナイズします

葉 緑 体（Chloroplast） は 0.5
mg、 大 腸 菌（E.Coli） は 10 mLの培養液、HeLa 細胞はコンフル
エントの 10 cm ディッシュ 1 枚
から 1 mL の溶出液を使用して抽出した結果を示しています。

※ DDM: n-dodecyl- β -D-maltoside

Chlorophile
(mg)

1:1
1:2
1:4
1:1
1:2
1:4
1:8

:

Lysis buffer(mL)

EzProteoLysis
1% DDM
Native葉 緑 体 1mg に １ ％ DDM 溶 出 液 あ る い は EzProteoLysis Native を 1、2、4、 ８mL 添 加
してタンパク質を抽出しました。それぞれの抽出液に EzApply Native を 1/10 量添加し、u-PAGEL H (3~10%) を使用して Blue Native PAGE により泳動分離しました。電気泳動バッ
ファーには EzRun BlueNative を使用しています。EzProteoLysis Native は 1％ DDM と同等の抽出効率および泳動パターンを示しています。

EzProteoLysis Native

イージープロテオライシス ネイティブ
型式
コード
キット内容

UH-T310 ゲル (3~10%)

7

BN

WSE-7424
2332319① EzProteoLysis Native
30 mL② Protease inhibitor (100x)
0.3 mL③ Phosphatase inhibitor (100x) 0.3 mL
保存① 4℃ / ②③ -20℃
（製造より 1 年保存可能）価格（税別） 20,800 円

広範囲の分子量域をカバーする Native PAGE 用分子量スタンダード

WSE-7016

イージースタンダード

ネイティブ

EzStandard Native▶ Native PAGE 用分子量スタンダード▶ 20 ～ 1,236kDa の 9 本のバンド

HR-CN

BN

Native▶ Ready to Use▶ 5µL/ レーンで約 100 回分

1,236
1,048

720
480
350
20 ～ 1,236kDa の 広
範囲の分子量域をカバーする Native PAGE
用の分子量スタンダー
ドです。

HR-CN: High-ResolutionClear-Native-PAGE
BN: Blue-Native PAGE

146

Native: Native PAGE

66
45
20
kDa

EzStandard Native の相対移動度模式図

UH-T314 ゲル(3~14%)

従来の Native PAGE 法、Blue-Native 法、界面活性剤を使用する HR-CN-PAGE 法に対応します。泳動パターン、移動度に相関性があり、再現性の良いデータを採取できます。
分子量範囲が広いので、様々な濃度のゲルで使用可能な Native PAGE 用の分子量スタンダー
ドです。

EzStandard Native

イージースタンダード ネイティブ
型式
コード
バンドサイズ
主成分
容量
保存
使用期限
価格（税別）

WSE-7016
2332344
20, 45, 66, 146, 350, 480,
720, 1,048, 1,236 kDa
緩衝液、グリセリン
100 µL × 5 本-20℃
製造より 1 年
37,800 円
SDS-PAGE には使用できません

WSE-7011

イージーアプライ

ネイティブ

EzApply Native▶ Native PAGE 用サンプルバッファー▶ 10 ×濃度タンパク質抽出液に 1/10 容量添加します。
様々な Native PAGE に使用可能です。

EzApply Native

イージーアプライ ネイティブ
型式
コード
容量
保存
価格（税別）

WSE-7011
233231740 mL (10x 濃度 )4℃（製造より 1 年保存可能）
9,800 円

本誌記載の価格 ( 税抜き ) および製品仕様は予告なく変更する場合がありますので、ご了承ください。最新の情報などに関しましては当社ホームページでご確認ください。

8HR-Clear-Native PAGE 用泳動バッファー

WSE-7056

イージーラン

クリアネイティブ

EzRun ClearNative
High-Resolution-Clear-Native PAGE（HR-CN-PAGE）は、弱い陰イオン性界面活性剤を利用してタンパク質の酵素活性を保持したまま電気泳動する Native PAGE のひとつです。HR-CN-PAGE は、元々Bis-Tris ゲルがベースとなって開発された泳動法であり、Tris-Glycine 系ゲルには適さない方法でした。
EzRun ClearNative は、Bis-Tris 系ゲルで得られる泳動パターンと相関性を保ちながら、SDS-PAGE でよく利用されている Tris-Glycine 系ポリアクリルアミドゲルで HR-CN-PAGE ができる、画期的な泳動用
バッファーです。
葉緑体

大腸菌

※

で 示 し た バ ン ド は Tris-Gly 系
ゲルでのみ検出できたスーパーコ
ンプレックス

EzRun ClearNative

イージーラン クリアネイティブ

HR-CN-PAGE

Bis-Tris

Tris-Gly

Bis-Tris

電気泳動の方法
Step 1

電気泳動槽にゲルをセットして下部槽（陽極側）に
1 ×の EzRun ClearNative 陽極用を入れます

Tris-Gly

Bis-Tris 系ゲル：
Bis-Tris 系の CN-PAGE
Wittig ら Mol Cell Proteomics (2007)の方法に準拠Tris-Glycine 系ゲル：
EzRun ClearNative で泳動

Step 2

上部槽（陰極側）に 1 ×のEzRun ClearNative 陰極用を入れます

型式
コード
キット内容

WSE-7056
2332313
陽極用泳動バッファー (5x)陰極用泳動バッファー (5x)保存
室温
（製造より 1 年保存可能）価格（税別） 16,800 円※ Bis-Tris 系ゲル、Tris-Tricine 系ゲルには使用できません

Step 3

サンプルをアプライします※泳動槽により入れる泳動バッファーの量が変わります動電気泳 ートスタ

150V 定電圧で 80 ～ 95 分泳動します（ミニサイズゲルの場合）

ゲルの染色方法
脱色染色
電気泳動後のゲルを EzStainAQua で染色します

500 mL
500 mL

EzStainAQua で染色したゲルを蒸留水で脱色します

カラー撮影※ピタットクリア（撮影用フィルム）にゲルを挟むと、気泡が入りにくく、クリアに撮影することができます

Printgraoh Classic で撮影します

ブロッティングの方法※ EzFastBlot HMW を使用したセミドライ式、もしくは一般的なウェット式の転写方法を推奨

ゲルの平衡化

① 0.1% と な る よ う に SDS を 添 加 し た 1 × EzFastBLot
HMW に浸漬、振とうさせ 20 分間平衡化します② ①で平衡化したゲルを 1 × EzFastBLot HMW に浸漬、振とうさせ 10 分間リンスします9

明視野 / 発光 / 蛍光撮影

ブロッティング③ ブロッティング装置の電極板にろ紙、PVDF 膜、ゲルを順番に重ねます④ ブロッティング装置を電源に接続しブロッティングします※ブロッティング後の膜は、通常通り染色やブロッキング～
抗体反応～検出を行います

EzStainAQua MEM で染色した PCDF 膜はPrintgraph Classic で撮影します
抗体反応を行った PVDF 膜は
LuminoGraph Ⅱ EM で検出しますEzRun ClearNative

タンパク質の活性染色
ゲル：UH-T420
泳動条件：150V, 85 分（1 × EzRun ClearNative）
検出：WSE-5400 Printgraph Classic

HR-CN-PAGE

左図は、HR-CN-PAGE 法、従来の Native PAGE 法、SDS-PAGE 法で泳動分離した後に、β -Galactosidase の活性染色を行った結果を示しています。HR-CNPAGE 法は、従来の Native PAGE 法と同様に、酵素活性を阻害することなく検出することが可能です。一方で、SDS-PAGE 法では、SDS が酵素活性に影響を与えるため、バンドが検出できません。このように HR-CN-PAGE 法は、酵素活性の検出に適しています。

Native PAGESDS PAGE

HR-CN-PAGE のブロッティング
葉緑体

①

②

IgM

③

①

②

HR-CN-PAGE

③

1236
1048
kDa

1236kDa の転写効率の比較

積算値

転写後の膜
EzStain AQua MEM①

転写後のゲル
EzStain AQua②

ゲル：UH-T314
泳動条件：150V, 90 分（1 × EzRun ClearNative）
転写条件：EzFastBlot HMW 12V, 60 分
転写前のゲル前処理条件：下表を参照
膜染色：EzStain AQua MEM
ゲル染色：EzStain AQua
膜染色後の撮影：WSE-5400 Printgraph Classic
ブロッキング：EzBlock CAS
1 次抗体：Anti-IgM HRP Conjugated
検出 :EzWestLumi plus
撮影：LuminoGraph Ⅱ EM

左図は IgM の 1236kDa のバンドを、CS Analyzer
で解析して、転写効率を比較しました。

③

転写前のゲル前処理方法① 2 段階平衡1) 0.1% になるように SDS を添加した 1 × EzFastBlot HMW に泳動後のゲルを浸漬、振とうして 20 分間平衡化
2) 1 × EzFastBlot HMW にゲルを浸漬、振とうさせ 10 分間リンス② ブロッティングバッファーで平衡化
1 × EzFastBlot HMW に泳動後のゲルを浸漬、振とうさせ 30 分間平衡化③ ブロッティングバッファーでリンス
泳動後のゲルを 1 × EzFastBlot HMW でリンス

上図は、HR-CN-PAGE 法で泳動分離した後に、泳動後のゲルを上表の条件で前処理し、EzFastBlot HMW（高分子用高速転写バッファー）
で転写を行った結果を示しています。②、③に比べて①は、転写後のゲルにバンドが残っておらず、転写効率が向上しており、特に高分子（▶で示したバンドなど ) は良好に転写できることが確認できます。Native PAGE で分離されたタンパク質固有の電荷しか持たないため、SDS 処理で負電荷を付与することで転写効率が向上すると考えられます。

コードNo.

型式・名称

数量

2332595

WSE-7210

EzFastBlot HMW

１本

高分子用高速ブロッティングバッファー

12800円

2332375

WSE-7160

EzStain AQua MEM

１セット

膜用タンパク質検出CBB染脱色試薬キット

24,800円

2332617

WSE-1477

EzBlock CAS

カゼイン含有ブロッキング試薬

12,800円

2332637

WSE-7120S

EzWestLumi plus

2305405

WSE-5400A-CP

2305427

落射WhiteLEDプレートセット

2110030

CS Analyzer Ver.4 (Windows版)

Printgraph Classic

1本
1セット
１式
１セット
1本

価格（税別）

高感度HRP用発光基質
ゲル撮影用装置

本体・コントローラー

12,800円
1,280,000円

ゲル、PVDF膜撮影用白色落射光源

100,000円

ゲル撮影・イメージング 画像解析ソフトウエア

250,000円

本誌記載の価格 ( 税抜き ) および製品仕様は予告なく変更する場合がありますので、ご了承ください。最新の情報などに関しましては当社ホームページでご確認ください。

10Blue-Native PAGE 用泳動バッファー

WSE-7057

イージーランブルーネイティブ

EzRun BlueNative

Blue-Native PAGE は、タンパク質コンプレックスをそのままの形で電気泳動する Native PAGE のひとつとして、Schägger ら Anal. Biochem.
(1991) によって開発されました。Blue-Native PAGE は Bis-Tris 系ゲルや Imidazole 系ゲルを使用する方法が一般的です。これらの試薬や既製ゲルは高価で、実験費用が非常にかかるため、Blue-Native PAGE はなかなかハードルの高い手法であると思われています。
EzRun BlueNative は、SDS-PAGE でよく利用されている Tris-Glycine 系のポリアクリルアミドゲルで Blue-Native PAGE が出来る、画期的な泳動用バッファーです。実験のコストを抑えながらも従来の Bis-Tris 系ゲル等を使用した方法と遜色のない泳動パターンを得ることができます。

Bis-Tris 系ゲル

Bis-Tris 系 Native PAGE 用
泳動バッファーで泳動

BN-PAGE

Tris-Gly 系ゲル

大腸菌

葉緑体

EzRun BlueNative で泳動

鶏筋肉

実験のコストダウン！
泳動時間の大幅な短縮が可能！

50 ～ 100V 定 電 圧 で 泳 動 時 間 は
180 ～ 360 分

Step 1

EzRun BlueNative を泳動槽に入れます

150V 定電圧で泳動時間は80 ～ 90 分

泳動後のゲルを脱色液 に入れゲルを固定します※脱色液：50％メタノール、12.5% 酢酸溶液

Bis-Tris

上部槽バッファーに添加します

バックグラウンドが透明にな っ た ら 蒸 留 水 に 浸 漬 し、
振とうさせます
固定後のゲル（UH-T314）

BN

Bis-Tris

Tris-Gly

で示したバンドは Tris-Gly 系ゲルでのみ検出できた
スーパーコンプレックス

上部バッファーの 1/100 量を添加します

Step 5

Tris-GlyBlueNative Buffer Additive を

サンプルをアプライします

ファーの量が変わります※※

Tris-Gly

Step 3

Step 2※泳動槽により入れる泳動バッ

Step 4

Bis-Tris

動
電気泳
ト
スター

150V 定 電 圧 で 80 ～ 90 分 泳 動
します（ミニサイズゲルの場合）

Step 6

EzStain AQua（CBB 染色液）に入れゲルを染色します
その後、蒸留水に浸漬して脱色します

撮影

ゲルの

染色後のゲル（UH-T314）

BN

ピタットクリア（撮影用フィルム）にゲルを挟むと、気泡が入りにくく、クリアに撮影することができます11

EzRun BlueNative
Blue-Native PAGE の “Blue” の秘密

2
3

CBB は陰イオン性の色素であり、タンパク質の表面に結合する性質を持っています。
CBB が結合したタンパク質は負の電荷を帯びるため、タンパク質自身が持つ電荷の影響が抑えられ、分子量に応じて陽極へと流れていきます。
CBB が表面に結合することで、タンパク質コンプレックスの安定性を高める働きがあります。
SDS-PAGE で用いられる SDS は強い変性作用をもった界面活性剤であるため、タンパク質コンプレックスが解離してしまいます。
CBB は溶解度が高いため、可溶化したタンパク質コンプレックスに CBB が結合することで、タンパク質の溶解度が上がります。
そのため界面活性剤がなくても安定に保たれ、界面活性剤を含まないゲルと泳動バッファーで電気泳動をすることができます。
CBB はタンパク質に定量的に結合する性質があります。
CBB が結合したタンパク質コンプレックスは、分子の大きさに応じて電気泳動されます。

2 次元電気泳動（B）（A）

タンパク質コンプレックスの解析（C）

1D BN-PAGE

BN

BN

HR-CN

SDS

1236
1048

2D HR-CN-PAGE

245

1D BN-PAGE

720
480
350

146

720
480

146

66
45

45
25

kDa

kDa

BN

75

10

66

20
kDa

1D BN-PAGE

2D SDS-PAGE

1

サンプル：葉緑体抽出液、EzStandard Native（A および B）、EzProteinLadder(C)（A）：UH-T314、EzRun BlueNative で 150V,80 分泳動（B）：(A）のゲルの 1 レーンを切り取り、自作 3-10%（2D 用 ) で 50V,30 分→ 100V,30 分→ 150V,70 分泳動
泳動後に EzStainAQua で染色し、Printgraph Classic で撮影（C）：(A）のゲルの 1 レーンを切り取り、自作 4-20%（2D 用 ) で 300V,30 分泳動
泳動後に EzStainAQua で染色し、Printgraph Classic で撮影

上図は葉緑体抽出液を Blue-Native PAGE(A) により 3-14％の u-PAGEL H で分離し（1 次元目）、さらにこのゲルを HR-Clear- Native
PAGE(B) および SDS-PAGE(C) で 2 次元展開した結果を示しています。
BN-PAGE はタンパク質コンプレックスが解離することなく電気泳動されますが、HR-CN-PAGE で 2 次元展開すると 1 本だったバンドが2 本以上になっており (B)、ごく弱い界面活性剤でも解離するコンプレックスであることが分かります。一方で、SDS-PAGE は強い界面活性剤と還元剤をともなう加熱処理によりコンプレックスはバラバラに解離します。実際、SDS-PAGE により 2 次元展開したゲル (C) では、
1 次元目の BN-PAGE で 1 本のバンドとして見えていたタンパク質が、SDS-PAGE による 2 次元展開によって、こんなにもたくさんのタンパク質で構成されていることがわかります。さらにこの後に 3 次元、4 次元の電気泳動を行い、目的とするタンパク質をより深く解析することも可能です。
u-PAGEL H はタンパク質コンプレックスのような高分子のタンパク質の解析にも最適な既製ポリアクリルアミドゲルです。

EzRun BlueNative
イージーラン
型式
コード
構成
容量
保存
使用期限
価格（税別）

ブルーネイティブ
WSE-7057
2332315
EzRun BlueNative（電気泳動用バッファー） 1 本
BlueNative Buffer Additive（陰極バッファー用添加溶液） 1 本
EzRun BlueNative：500mL（10 倍希釈）
BlueNative Buffer Additive（陰極バッファー用添加溶液）：25mL（100 倍希釈）
※当社ミニスラブ電気泳動槽使用の場合 → 10 回分
室温
製造より 1 年
12,800 円※ Bis-Tris 系ゲル、Tris-Tricine 系ゲルには使用できません

本誌記載の価格 ( 税抜き ) および製品仕様は予告なく変更する場合がありますので、ご了承ください。最新の情報などに関しましては当社ホームページでご確認ください。

12高分子電気泳動関連製品
試料調製

コードNo.

型式名称

数量

価格（税別）

2332319

WSE-7424 EzProteoLysis Native

1セット

Native PAGE用タンパク質抽出試薬

20,800円

2332339

WSE-7423 EzBactYeastCrusher

1セット

大腸菌・酵母

16,800円

2332336

WSE-7420 EzRIPA Lysis kit

1セット

全タンパク質抽出用RIPA可溶化バッファー

12,800円

2332337

WSE-7421 EzSubcell Extract

1セット

動物細胞（オルガネラ）分離抽出試薬キット

48,800円

2332338

WSE-7422 EzSubcell Fraction

1セット

2332317

WSE-7011 EzApply Native

2332330

AE-1430 EzApply

電気泳動関連試薬

2332380

ヒートブロック、
シェーカー、
遠心機

電気泳動

電気泳動槽

電源装置

タンパク質抽出試薬

動物細胞（核・ミトコンドリア）分画試薬キット

45,800円

1本

Native PAGE用サンプル調製試薬

9,800円

1セット

SDS-PAGE試料調製用バッファー

9,800円WSE-7430 EzPBS(-)

1本

細胞調製用リン酸緩衝生理食塩溶液

7,800円

4002610

WSC-2610 MyMiniBLOCK

1台

小型ブロックインキュベータ

59,800円

4002620

WSC-2620 PowerBLOCK

1台

汎用ブロックインキュベータ

148,000円

4002630

WSC-2630 PowerBLOCK Shaker

1台

振とう式ブロックインキュベータ

288,000円

4002615

WSC-2615 MyMiniBLOCK C&H

1台

小型ブロックインキュベータ

99,800円

4002800

WSC-2800 MyMiniVortex

1台

ボルテックスミキサー

39,800円

4002700

WSC-2700 MyMiniSpin

1式

小型遠心機

48,000円

コードNo.

型式名称

冷却・加熱対応

数量

価格（税別）

2332313

WSE-7056 EzRun ClearNative

1セット

HR-CN-PAGE用電気泳動バッファー

16,800円

2332315

WSE-7057 EzRun BlueNative

1セット

BN-PAGE用電気泳動バッファー

12,800円

2332310

AE-1410 EzRun

1袋

Tris-Glycine-SDS高速泳動バッファー（10L）

6,800円

2332326

WSE-7065 EzRun MOPS

1本

Tris-MOPS-SDS系PAGE用電気泳動バッファー

8,800円

2332323

WSE-7055 EzRun TG

1本

Tris-Glycine系PAGE用電気泳動バッファー

6,800円

2321905

AE-6530P ラピダス・ミニスラブ電気泳動槽（PAGEL仕様）

1台

ミニスラブサイズ ポリアクリルアミドゲル電
気泳動槽

52,800円

2321670

WSE_1150P パジェラン Ace

1台

電源付ミニスラブサイズ ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動槽128,000円

2322197

WSE-1165 ラピダス・ミニスラブ電気泳
動槽

1セット

ミニスラブサイズ ポリアクリルアミドゲル電気泳動槽

88,000円

2311130

WSE-3100 パワーステーション ギブリⅠ

1台

最新型高機能電源装置

248,000円

2311145

WSE-3200 パワーステーションⅢ

1台

電気泳動用高機能電源装置

198,000円

分子量スタンダード
コード No.

型式名称

分子量範囲、バンド数

容量

価格

2332344

WSE-7016 EzStandard Native ※Native PAGE 用，20 ～ 1,236 kDa, ９本

100 µL × 5 本

37,800 円

2332343

WSE-7035 EzStandard HMW

高分子用，29 ～ 770 kDa, 11 本

100 µL × 4 本

29,800 円

2332348

WSE-7025 EzStandard LMW

低分子用，1 ～ 29 kDa, 6 本

100 µL（20 ×濃度）

20,800 円

2332341

WSE-7015 EzStandard Ⅱ

エコノミー，14.3 ～ 220 kDa, 7 本

500 µL

14,800 円

2332346

WSE-7020 EzProtein Ladder

プレステイン，5 ～ 245 kDa, 13 本

250 µL ×２

25,800 円

2332347

AE-1450 EzStandard PrestainBlue

プレステイン，17.4 ～ 114 kDa, 6 本

300 µL

16,280 円※ EzStandard Native は Native PAGE 用です。EzStandard Native 以外の分子量スタンダードは SDS-PAGE 用です。

EzStandard Native
HR-CN

BN

Native

1,236
1,048

720

EzStandard HMW
770
270
220
170
140
116
97
77
66

SDS

29

66
45
20

13

97.2
66.4
45
29

kDa

UH-T314 ゲル

UH-T420 ゲル

kDa

UH-T420 ゲル

EzProteinLadder

SDS

220

17
14
6.5
3.5
1.0

146

EzStandard Ⅱ

SDS

45

480
350

kDa

EzStandard LMW

29
20.1
14.3
kDa

UH-T420 ゲル

EzStandard
PrestainBlue

SDS

245
180
140
100
75
60
45
35
25
20
15
10
~5
kDa

UH-T420 ゲル

SDS

114
94.7
47.3
31.3
25.7
17.4
kDa

UH-T420 ゲル

染色

ゲルの染色

Application
Note

転写

コードNo.

型式名称

数量

2332370AE-1340 EzStain AQua

1本

2332350

AE-1310 EzStain Reverse

2332360

AE-1360 EzSTain Silver

2312200

WSC-2400 シーソーシェーカーatto

2305405

WSE-5400A-CP Printgraph Classic

2305426

落射WhiteLEDプレートセット

コードNo.

ブロッティング試薬

ブロッティング装置

検出ウエスタンブロッティング
のコツ

撮影装置

12,800円

1セット

タンパク質検出用リバース染色試薬キット

18,800円

1セット

タンパク質・核酸検出用銀染色試薬キット

18,800円

振とう装置

138,000円

1台
1式

ゲル撮影用装置

１セット

型式名称

本体・コントローラ

ゲル、膜撮影用白色透過光源

1,280,000円
100,000円

数量価格（税別）

2332595

WSE-7210 EzFastBlot HMW

1本

高分子用高速ブロッティング用バッファー

12,800円

2332590AE-1465 EzFastBlot

１本

高速ブロッティング用バッファー

12,800円

2332600

AE-1460 EzBlot

ブロッティング用バッファー

15,800円

2322443

WSE-4057 QBlot kit M

トランスファーパック
膜、Wash Buffer付）

19,800円

2332375

WSE-7160 EzStainAQua MEM

1セット

膜用タンパク質検出CBB染脱色試薬キット

24,800円

2322490

WSE-4115 PoweredBlot Ace

1台

電源付セミドライブロッティング装置

148,000円

2322496

WSE-4125 PoweredBLOT 2M

1台

電源付セミドライブロッティング装置

218,000円

2322466

WSE-4025 HorizeBLOT 2M

1台

セミドライ式ブロッティング装置

128,000円

2311130

WSE-3100 パワーステーション ギブリⅠ

1台

新型デジタル電源装置

248,000円

2311124

WSE-3500 パワーステーションHC

1台

ブロッティング用高電流型電源装置

198,000円

コードNo.

Application Note

価格（税別）
タンパク質検出用CBB染色溶液

１セット

型式名称

１箱

（平衡化済PVDF

数量

価格（税別）

2332615

WSE-1475 EzBlock Chemi

1本非タンパク質系ブロッキング試薬

12,800円

2332616

WSE-1476 EzBlock BSA

1本

BSA含有ブロッキング試薬

12,800円

2332617

WSE-1477 EzBlock CAS

1本

カゼイン含有ブロッキング試薬

12,800円

2332625

WSE-7230 EzTBS

1本

ウェスタンブロッティング用洗浄溶液

7,800円

2332626

WSE-7235 EzTween

1本

洗浄用Tween溶液

3,800円

2332456

WSE-7140 EzWestBlue W

1本

HRP発色用TMB基質

15,800円

2332632

WSE-7110 EzWestLumi One

1本

HRP用発光基質

13,800円

2332637

WSE-7120S EzWestLumi plus

1セット

2006270

WSE-6270 LuminoGraphⅡEM

1式

高感度HRP用発光基質

12,800円

最高感度化学発光撮影装置

3,300,000円~

撮影装置のご紹介

Printgraph Classic

LuminoGraph Ⅱ EM

名称

WSE-5400 Printgraph Classic

WSE-6270 LuminoGraph Ⅱ EM

カメラ

高感度カラーCMOSカメラ（３メガピクセル）
カラー/モノクロ切り替え可能

超高感度冷却 EMCCD カメラ

解像度

2048×1536

2460 × 1620

撮影サイズ

25mm×18mm～200mm×150mm

106 × 70 ～ 273 × 180mm

撮影制御

10インチ タッチ式LCDパネルコントローラー

ImageSaver7（Windows 版・標準付属）

フィルター

オレンジフィルター

寸法・質量

キャビネット：340(W)×275(D)×437mm(H)コントローラ：264(W)×150(D)×222mm(H)電源

AC100～240V

価格（税別）

800,000円 ～冷却温度 -40℃（環境温度 30℃以下）

5 ポジション

OS：Windows 10/11（64/32 bit)

2A

手動切替 3 ポジション

50/60Hz・・（ACアダプター）

9.0kg
2.5kg

365 (W) × 330 (D) x 580mm (H)AC100 ～ 240V

50/60 Hz・

21 kg

120 W ( 最大 )3,300,000円 ～本誌記載の価格 ( 税抜き ) および製品仕様は予告なく変更する場合がありますので、ご了承ください。最新の情報などに関しましては当社ホームページでご確認ください。

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ご用命は下記販売店までお願い致します

Bulletin

2201102022 年 10 月