220

プロパニル

220.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
221

プロパルギット

221.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
222

プロピコナゾール

222.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
222.2

トリアゾール系農薬のガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 6 による。
223

プロファム

223.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
224

プロフェノホス224.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
224.2

アジンホスメチル及びプロフェノホスのガスクロマトグラフによる同時分析

法
第 3 節 10 による。
225

プロペタンホス225.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
226

プロポキスル226.1

カーバメート系農薬の液体クロマトグラフによる同時分析法（その 1）

第 3 節 2 による。
226.2

カーバメート系農薬のガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 4 による。
226.3

アゾキシストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 12 による。
279

227

プロメトリン

227.1

アメトリン、シアナジン及びプロメトリンの液体クロマトグラフ質量分析計

による同時分析法
第 3 節 14 による。
228

ブロモキシニル

228.1

ガスクロマトグラフ法
A

ブロモキシニル標準液

試薬の調製

ブロモキシニル〔C7 H3 Br 2 NO〕25 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、50 mL の全量フラスコに入れ、アセトンを加えて溶かし、更に標線までアセトンを加えてブロモキシニル標準原液を調製する（この液 1 mL は、ブロモキシニルとして 0.5 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をアセトンで正確に希釈し、1 mL 中にブロモ
キシニルとして 1.0 µg を含有するブロモキシニル標準液を調製する。
B
抽

出

定

量

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、200 mL の共栓三角フラスコに入れ、水 20 mL 及び塩酸（1 mol/L）5 mL を加えて潤し、30分間静置後、更にアセトン 100 mL を加え、60 分間振り混ぜて抽出する。200mLの全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。更に全量フラスコの標線までアセトンを加えた後、この液 20 mL を正確に 200 mL のなす形フラスコに入れ、40 °C 以下の水浴で約 5 mL まで減圧濃縮
し、加水分解に供する試料溶液とする。
加水分解

試料溶液にメタノール 50 mL 及びアンモニア水 10 mL を加え、ときどき軽く振り混ぜながら室温で 60 分間静置する。この液を 40 °C 以下の水浴で約 10 mL まで減圧濃縮し、ジエチルエーテル洗浄及び転溶に供する試料溶液とする。
ジエチルエーテル洗浄及び転溶

試料溶液を 300 mL の分液漏斗 A に入れ、炭酸

水素ナトリウム溶液（4 w/v%）100 mL 及びジエチルエーテル 50 mL を分液漏斗
A に加え、5 分間振り混ぜた後静置する。水層（下層）を 300 mL の分液漏斗 Bに入れ、分液漏斗 B にジエチルエーテル 50 mL を加え、5 分間振り混ぜた後静置する。
水層を 500 mL の分液漏斗 C に入れ、塩酸（6 mol/L）15 mL を少量ずつ加えて
pH を 2 以下に調整した後、発泡が収まるまで 20 分程度静置する。分液漏斗 C にジエチルエーテル 50 mL を加え、5 分間振り混ぜた後静置し、水層を 500 mL の分液漏斗 D に入れ、ジエチルエーテル層（上層）を 300 mL の三角フラスコに入れる。分液漏斗 D にジエチルエーテル 50 mL を加え、5 分間振り混ぜた後静置し、水層を捨て、ジエチルエーテル層を先の三角フラスコに合わせる。ジエチル
エーテル層を適量の硫酸ナトリウム（無水）で脱水し、200 mL のなす形フラス
コにろ紙（5 種 B）でろ過した後、先の三角フラスコを少量のジエチルエーテル
280

で洗浄し、洗液を先のろ紙を通してろ液を合わせる。
ろ液を 40 °C 以下の水浴で約 1 mL まで減圧濃縮し、窒素ガスを送って乾固した後、アセトン 2 mL を加えて残留物を溶かし、メチル化に供する試料溶液とする。
メチル化

試料溶液にメタノール 1 mL 及びトリメチルシリルジアゾメタン液 0.5mL を加え、ときどき軽く振り混ぜながら室温で 30 分間静置し、ブロモキシニルをメチル化する。この液にアセトン－ジエチレングリコール（49+1）50 µL を加え、窒素ガスを送って乾固する。ヘキサン 5 mL を加えて残留物を溶かし、カラ
ム処理に供する試料溶液とする。
同時に、ブロモキシニル標準液 2 mL を 50 mL のなし形フラスコに正確に入れ、以下同様にメチル化の操作を行った後、ヘキサン 10 mL を正確に加えて残留物を溶かす。この液の一部をヘキサンで正確に希釈し、1 mL 中にブロモキシニルとして 2~200 ng 相当量を含有する数点の標準液を調製する。
合成ケイ酸マグネシウムミニカラム（910 mg） 注 1 をヘキサン 10 mL

カラム処理で洗浄する。

試料溶液をミニカラムに入れ、液面が充てん剤の上端に達するまで流下で流出させる。試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン 5 mL ずつで 2 回洗浄し、洗液を順次ミニカラムに加え、同様に流出させる。50 mL のなし形フラスコをミニカラムの下に置き、ヘキサン－アセトン（99+1）20 mL をミニカラムに加えてブロモキシニルのメチル化物を溶出させる。溶出液にアセトン－ジエチレン
グリコール（49+1）50 µL を加え、40 °C 以下の水浴で約 1 mL まで減圧濃縮した
後、窒素ガスを送って乾固する。
ヘキサン 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし、ガスクロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
ガスクロマトグラフィー

試料溶液及び各標準液各 1 µL をガスクロマトグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：電子捕獲検出器

カラ

ム：溶融石英製キャピラリーカラム（6 %シアノプロピルフ
ェニル－94 %ジメチルポリシロキサンコーティング、
内径 0.32 mm、長さ 30 m、膜厚 1.8 µm） 注 2

キ ャ リ ヤ ー ガ ス：He（5 mL/min）
メイクアップガス：N2 （60 mL/min）
試 料 導 入 法：スプリットレス（60 s）
試 料 導 入 部 温 度：250 °C
カ ラ ム 槽 温 度：80 °C（2 min 保持）→昇温 10 °C/min→260 °C（10 min
保持）
検 出 器 温 度：300 °C
計

算得られたクロマトグラムからピーク高さを求めて検量線を作成し、試料中のブロモキシニル量を算出する。
281

注1

Sep-Pak Plus Florisil Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

2DB-624（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
試料の種類
成鶏飼育用配合飼料
肉用牛肥育用配合飼料
とうもろこしアルファルファ添加濃度（mg/kg）
0.02
0.2
0.02
0.2
0.02
0.2
0.01
0.1

繰返し
3
3
3
3
3
3
3
3

添加回収率 繰返し精度（%）
RSDr（%）
106.8
2.6
104.0
3.2
98.8
11.8
95.7
8.1
98.7
7.5
96.5
7.0
97.6
9.1
79.8
4.8

・共同試験
試料の種類

有効試
験室数

棄却試
験室数

とうもろこし
チモシー

7
7

0
0

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.2
90.7
3.1
7.3
0.1
95.4
4.9
12

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中0.005 mg/kg

・検出下限（単一試験室による確認）

試料中0.002 mg/kg（参考）クロマトグラム例

添加試料（アルファルファにブロモキシニルとして0.1 mg/kg 相当量添加）のクロマトグラム
229

ブロモブチド229.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
230 ブロモブチド脱臭素体
230.1 農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法
第 3 節 1 による。
231

ブロモプロピレート

231.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。

282

HorRat
0.35
0.56

232

ブロモホス

232.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
233

ヘキサクロロベンゼン

233.1

有機塩素系及び酸アミド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 3 による。
234

ヘキサコナゾール

234.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
235

ベノキサコール

235.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
236

ベノミル（カルベンダジム、チオファネートメチル及びベノミル）

236.1

チオファネートその他の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 35 による。
236.2

液体クロマトグラフ質量分析計法 注 1

63.2 による。
注 1

ベノミルは、カルベンダジムとしての量に換算され、カルベンダジム、カルベンダジムに換算したチオファネートメチル及びカルベンダジムに換算したベノミルの総和として定量される。

236.3

液体クロマトグラフ法
A

カルベンダジム標準液

試薬の調製

カルベンダジム〔C9 H9 N3 O2〕20 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、100 mL の全量フラスコに入れ、ジクロロメタン－メ
タノール（193+7）を加えて溶かし、更に標線までジクロロメタン－メタノール（193+7）を加えてカルベンダジム標準原液とする（この液 1 mL は、カルベン
ダジムとして 0.2 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をジクロロメタン－メタノール（193+7）で正確に希釈し、1 mL 中にカルベンダジムとして 0.25~2 µg を含有する数点のカルベ
ンダジム標準液を調製する。
B
抽

出

定

量

分析試料 10~20 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、300 mLの分液漏斗に入れ、メタノール－水（1+1）100 mL を加え、30 分間振り混ぜて283

抽出する（ベノミルは抽出液中にカルベンダジムとして存在する。） 注 1 。200mL の全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の分液漏斗及び残さを順次メタノール－水（1+1）25 mL で 2 回洗浄し、同様に吸引ろ過する。更にメタノールを全量フラスコの標線まで加えた後、この液 50~100 mL を正確に 300 mL のなす形フラスコに入れ、50 °C 以下の
水浴で約 10 mL まで減圧濃縮し、カラム処理に供する試料溶液とする。
試料溶液を多孔性ケイソウ土カラム（20 mL 保持用） 注 2 に入れ、試

カラム処理

料溶液の入っていたなす形フラスコを少量の水で洗浄し、洗液をカラムに加え、5 分間静置する。
300 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き、ジクロロメタン－ヘキサン（1+1）100 mL をカラムに加えてカルベンダジムを溶出させる。溶出液を 40 °C
以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮し、窒素ガスを送って乾固し、得られた残留物を精製に供する。
精製

残留物をジクロロメタン 50 mL で 100 mL の分液漏斗 A に移し、更に、残留物の入っていたなす形フラスコを塩酸（0.1 mol/L）25 mL で洗浄し、洗液を分液漏斗 A に合わせる。分液漏斗 A を 5 分間振り混ぜた後静置し、ジクロロメタン層（下層）を 100 mL の分液漏斗 B に入れ、塩酸層（上層）を 100 mLのトールビーカーに入れる。分液漏斗 A を少量の塩酸（0.1 mol/L）で洗浄し、洗液をトールビーカーに合わせる。分液漏斗 B に塩酸（0.1 mol/L）25 mL を加えて 5 分間振り混ぜた後静置し、ジクロロメタン層を捨て塩酸層を先のトールビー
カーに合わせる。
塩酸層の pH を水酸化ナトリウム溶液（1 mol/L）で 6.5 に調整した後、塩酸層を 300 mL の分液漏斗 C に入れる。先のトールビーカーをジクロロメタン 50 mL
で洗浄し、洗液を分液漏斗 C に加え、5 分間振り混ぜた後静置し、ジクロロメタン層（下層）を三角フラスコに入れる。分液漏斗 C にジクロロメタン 50 mL を加え、同様に操作し、ジクロロメタン層を先の三角フラスコに合わせる。ジクロ
ロメタン層を適量の硫酸ナトリウム（無水）で脱水し、300 mL のなす形フラス
コに分液ろ紙でろ過した後、先の三角フラスコ及びろ紙を順次少量のジクロロメ
タンで洗浄し、洗液を先のろ紙を通してろ液を合わせる。ろ液を 40 °C 以下の水
浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
ジクロロメタン－メタノール（193+7）2 mL を正確に加えて残留物を溶かし、メンブランフィルター（孔径 0.5 µm 以下）でろ過し、液体クロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
液体クロマトグラフィー

試料溶液及び各カルベンダジム標準液各 20 µL を液体

クロマトグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：蛍光検出器（励起波長：285 nm、蛍光波長：315 nm）

カラ

ム：オクタデシルシリル化シリカゲルカラム（内径 4.6 mm、長さ 250 mm、粒径 5 µm） 注 3

溶
284

離

液：ジクロロメタン－メタノール（193+7）

流

速：1.0 mL/min

カラム槽温度：40 °C
計

算得られたクロマトグラムからピーク高さ又は面積を求めて検量線を作成し、次式により試料中のベノミル〔C 14 H18 N4 O3〕量を算出する。
試料中のベノミル量（µg/kg）=A×1.52×20
A ：検量線から求めたカルベンダジムの質量（ng）
注 1

本法では、試料中にカルベンダジムが含まれている場合には、カルベンダ
ジムがベノミルと同様に抽出され、試料中のベノミル量に含まれる可能性がある。

2

Chem Elut（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの

3

Nucleosil 50-5（Macherey-Nagel 製）又はこれと同等のもの（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
試料の種類
ブロイラー肥育後期用配合飼料

とうもろこしスーダングラス

添加濃度（mg/kg）
0.2
0.5
1
0.2
0.5
1
0.2
0.5
1

繰返し
3
3
3
3
3
3
3
3
3

添加回収率 繰返し精度（%）
RSDr（%）
92.0
8.0
96.7
2.4
96.1
8.8
98.8
0.8
101
1.1
99.7
7.8
104
5.7
97.9
1.9
90.1
11

・共同試験
試料の種類

有効試
験室数

棄却試
験室数

6

0

ブロイラー後期用配合飼料

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.2
97.8
4.6
6.6

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中

HorRat0.32

0.02 mg/kg（参考）クロマトグラム例

添加試料（配合飼料にベノミルとして 0.5 mg/kg 相当量添加）のクロマトグラム237

ヘプタクロル（ヘプタクロル及びヘプタクロルエポキシド）

237.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
237.2

有機塩素系及び酸アミド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 3 による。
285

237.3

有機塩素系農薬のガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 7 による。
238

ヘプタクロルエポキシド

238.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
238.2

有機塩素系及び酸アミド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 3 による。
238.3

有機塩素系農薬のガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 7 による。
239

ペルメトリン（cis-ペルメトリン及び trans-ペルメトリン）

239.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
239.2

ピレスロイド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 2 による。
239.3

フェンバレレート及びペルメトリンのガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 32 による。
240

ペンコナゾール

240.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
241

ペンシクロン

241.1

オリサストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計

による同時分析法
第 3 節 21 による。
242

ベンスルタップ（カルタップ、チオシクラム及びベンスルタップ）

242.1

液体クロマトグラフ質量分析計法 注 1

59.1 による。
注 1

ベンスルタップは、カルタップとしての量に換算され、カルタップ、カル
タップに換算したチオシクラム及びカルタップに換算したベンスルタップの総和として定量される。

286

243

ベンスルフロンメチル

243.1

ベンスルフロンメチルその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 33 による。
244

ベンゾフェナップ

244.1

オリサストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計

による同時分析法
第 3 節 21 による。
245

ベンダイオカルブ

245.1

カーバメート系農薬の液体クロマトグラフによる同時分析法（その 1）

第 3 節 2 による。
245.2

カーバメート系農薬の液体クロマトグラフによる同時分析法（その 2）

第 3 節 3 による。
246

ベンタゾン

246.1

ガスクロマトグラフ法
A

ベンタゾン標準原液

試薬の調製

ベンタゾン〔C10 H12 N2 O3 S〕25 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、50 mL の褐色全量フラスコに入れ、アセトンを加えて溶かし、更に標線までアセトンを加えてベンタゾン標準原液を調製する（この液 1
mL は、ベンタゾンとして 0.5 mg を含有する。）。
B
抽

出

定

量注 1

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、200 mL の

褐色共栓三角フラスコに入れ、水 15 mL を加えて潤し、30 分間静置後、更にメ
タノール 100 mL を加え、60 分間振り混ぜて抽出する。200 mL の全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の三角フラスコ及び残さを順次メタノール 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。更に全量フラスコの標線までメタノールを加え、この液 80 mL を 200 mL のなす形
フラスコに入れ、40 °C 以下の水浴で約 5 mL まで減圧濃縮し、精製に供する試料溶液とする。
精製

試料溶液を 300 mL の分液漏斗 A に入れ、塩化ナトリウム溶液（5w/v%）50 mL、水酸化ナトリウム溶液（1 mol/L）4 mL 及びヘキサン－酢酸エチ
ル（1+1）50 mL を分液漏斗 A に加え、穏やかに振り混ぜた後静置する。水層（下層）を 300 mL の分液漏斗 B に入れ、ヘキサン－酢酸エチル（1+1）50 mL を加え、同様に振り混ぜた後静置する。水層を分液漏斗 C に入れ、塩酸（6 mol/L）
2 mL 及びヘキサン－酢酸エチル（1+1）100 mL を加え、5 分間激しく振り混ぜた
後静置する。水層を 300 mL の分液漏斗 D に入れ、ヘキサン－酢酸エチル（1+1）
287層（上層）を 300 mL の褐色三角フラスコに入れる。分液漏斗 D にヘキサン－酢酸エチル（1+1）50 mL を加え、5 分間激しく振り混ぜた後静置し、ヘキサン－
酢酸エチル（1+1）層を先の褐色三角フラスコに合わせる。ヘキサン－酢酸エチ
ル層を適量の硫酸ナトリウム（無水）で脱水し、300 mL のなす形フラスコにろ紙（5 種 B）でろ過する。先の三角フラスコ及びろ紙を順次少量のヘキサン－酢酸エチル（1+1）で洗浄し、洗液を先のろ紙を通してろ液を合わせる。ろ液を
40 °C 以下の水浴で約 1 mL まで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
メタノール 1 mL を加えて残留物を溶かし、誘導体化に供する試料溶液とする。
誘導体化

試料溶液にトリメチルシリルジアゾメタン液 0.5 mL を加えた後、試料溶液の入っているなす形フラスコを密栓して室温で 30 分間静置し、窒素ガスを送って乾固する。ヘキサン 5 mL を加えて残留物を溶かし、カラム処理に供する試料溶液とする。
標準原液の誘導体化

ベンタゾン標準原液 1 mL を 100 mL のなす形フラスコに正確に入れ、窒素ガスを送って乾固した後、メタノール 1 mL を加えて残留物を溶かし、トリメチルシリルジアゾメタン液 0.5 mL を加える。先のなす形フラス
コを密栓し、室温で 30 分間静置し、窒素ガスを送って乾固する。アセトン 2 mLを正確に加えて残留物を溶かし、更にアセトンで正確に希釈し、1 mL 中にベンタゾンとして 0.02~1.2 µg 相当量を含有する数点の標準液を調製する。
シリカゲルミニカラム（690 mg） 注 2 をヘキサン 5 mL で洗浄する。

カラム処理

試料溶液をミニカラムに入れ、液面が充てん剤の上端に達するまで流出させる。
試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン 5 mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次ミニカラムに加え、同様に流出させる。更にヘキサン－ジエチルエーテル（49+1）10 mL をミニカラムに加え、同様に流出させる。
50 mL のなす形フラスコをミニカラムの下に置き、ヘキサン－ジエチルエーテ
ル（19+1）20 mL をミニカラムに加えてベンタゾン誘導体化物を溶出させる。溶出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
アセトン 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし、ガスクロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
ガスクロマトグラフィー

試料溶液及び各標準液各 2 µL をガスクロマトグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：窒素リン検出器

カラ

ム：溶融石英製キャピラリーカラム（5 %ジフェニル－95 %ジメチルポリシロキサンコーティング、内径 0.25 mm、長さ 30 m、膜厚 0.25 µm） 注 3

キ ャ リ ヤ ー ガ ス：He（2.5 mL/min）
メイクアップガス：He（2 mL/min）

288

燃

料

ガ

ス：H2 （3 mL/min）

助

燃

ガ

ス：乾燥空気（60 mL/min）

試 料 導 入 法：スプリットレス（60 s）
試 料 導 入 部 温 度：250 °C
カ ラ ム 槽 温 度：70 °C（1 min 保持）→昇温 20 °C/min→280 °C（4 min保持）
検 出 器 温 度：280 °C計

算得られたクロマトグラムからピーク高さ又は面積を求めて検量線を作成し、試料中のベンタゾン量を算出する。
注12

定量操作は遮光した状態で行う。
Sep-Pak Plus Silica Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

3

DB-5（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
試料の種類
幼すう育成用配合飼料
ほ乳期子牛育成用配合飼料

チモシー
ライグラス

添加濃度
添加回収率 繰返し精度繰返し（mg/kg）（%）
RSDr（%）
0.05
3
91.8
6.8
0.5
3
89.4
7.8
0.05
3
91.6
7.5
0.5
3
95.4
1.4
0.05
3
86.4
3.7
0.5
3
83.5
2.7
0.05
3
88.1
7.7
0.5
3
85.3
5.9

・共同試験
試料の種類
ブロイラー肥育後期用配合飼料

ライグラス

有効試
験室数

棄却試
験室数

7
7

0
0

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.5
96.0
12
13
0.5
90.3
5.4
11

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中0.01 mg/kg

・検出下限（単一試験室による確認）

試料中0.003 mg/kg（参考）クロマトグラム例
A

HorRat
0.74
0.60

B

標準液及び添加試料のクロマトグラム
A：標準液（ベンタゾンとして 0.4 µg 注入）
B：添加試料（幼すう育成用配合飼料にベンタゾンとして 0.5 mg/kg 相当量添加）

289

247

ペンディメタリン

247.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
248

ベンフルラリン248.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
249

ベンフレセート

249.1

シハロホップブチル及びベンフレセートの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法（適用範囲：稲発酵粗飼料）
第 3 節 29 による。
249.2

シハロホップブチル及びベンフレセートのガスクロマトグラフ質量分析計による同時分析法
（適用範囲：稲わら及び籾米）第 3 節 30 による。
250

ホキシム

250.1

液体クロマトグラフ法
A

1)

ホキシム標準液

試薬の調製

ホキシム〔C12 H15 N2 O3 PS〕25 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、50 mL の全量フラスコに入れ、アセトンを加えて溶かし、更に標線までアセトンを加えてホキシム標準原液を調製する（この液 1 mL は、ホキシムとして 0.5 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をメタノールで正確に希釈し、1 mL 中にホキ
シムとして 0.05~5 µg を含有する数点のホキシム標準液を調製する。
2)

ケイ酸マグネシウム
メッシュ））

注1

合成ケイ酸マグネシウム（粒径 149~250 µm（100~60をアセトンで洗浄した後、風乾し、130 °C で 16 時間乾燥する。
B

抽

出

定

量

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、200 mL の共栓三角フラスコに入れ、水 15 mL を加えて潤した後 15 分間静置し、アセトン
80 mL（乾牧草は 120 mL）を加え、30 分間振り混ぜて抽出する。300 mL のなす
形フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した
後、先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。ろ液を 40 °C 以下の水浴で約 15 mL まで減圧濃縮し、塩化ナトリウム 5 g（4.5~5.4 g）を加えてカラム処理 I に供する試料溶液とする。
カラム処理 I

試料溶液を多孔性ケイソウ土カラム（20 mL 保持用）注 2 に入れ、5 分間静置する。300 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き、試料溶液の入っ290

ていたなす形フラスコをヘキサン 10 mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次カラムに加える。液面が充てん剤の上端に達するまで流下してホキシムを溶出させる。更
にヘキサン 70 mL をカラムに加えて同様に溶出させる。
溶出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。シクロヘキサン－アセトン（4+1）10 mL を正確に加えて残留物を溶かし、メンブランフィルター（孔径 0.5 µm）でろ過してカラム処理 IIに供する試料溶液とする。
カラム処理 II

試料溶液 5.0 mL をゲル浸透クロマトグラフに注入し、ホキシムが溶出する画分を 100 mL のなす形フラスコに分取し、40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
ヘキサン－ジエチルエーテル（9+1）5 mL を加えて残留物を溶かし、カラム処
理 III に供する試料溶液とする。
ゲル浸透クロマトグラフ条件
カラ

例

ム：スチレンジビニルベンゼン共重合体カラム（内径 20 mm、長さ 300 mm、粒径 15 µm）

ガードカラム：スチレンジビニルベンゼン共重合体カラム（内径 20 mm、長さ 100 mm、粒径 15 µm）
溶

離液：シクロヘキサン－アセトン（4+1）

流

速：5 mL/min

分 取 画 分：80~100 mL
カラム処理 III

ケイ酸マグネシウム 5 g（4.5~5.5 g）をヘキサンに懸濁させてカ

ラム管（内径 15 mm）に流し込み、液面が充てん剤の上端から 3 mm の高さに達するまで流出させ、カラムを調製する。
200 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き、試料溶液をカラムに入れ、試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン－ジエチルエーテル（9+1）5 mLずつで 3 回洗浄し、洗液を順次カラムに加える。液面が充てん剤の上端から 3mm の高さに達するまで流下してホキシムを流出させる。更にヘキサン－ジエチ
ルエーテル（9+1）50 mL をカラムに加えて同様に流出させ、流出液を 40 °C 以
下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
メタノール 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし、この溶液をプラスチック製
遠心沈殿管（容量 1.5 mL）に入れ、5,000×g で 5 分間遠心分離し、上澄み液を液
体クロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
液体クロマトグラフィー

試料溶液及び各ホキシム標準液各 20 µL を液体クロマ

トグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：紫外吸光光度検出器（測定波長：284 nm）

カラ

ム：オクタデシルシリル化シリカゲルカラム（内径 4.6 mm、長さ 250 mm、粒径 5 µm） 注 3

溶
流離液：メタノール－水（7+3）
速：1 mL/min
291

カラム槽温度：40 °C
計

算得られたクロマトグラムからピーク高さ又は面積を求めて検量線を作成し、試料中のホキシム量を算出する。
注1

フロリジル（Floridin 製）又はこれと同等のもの

2

Chem Elut（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの

3

Mightysil RP-18 GP（関東化学製）又はこれと同等のもの（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
添加濃度
添加回収率 繰返し精度繰返し（mg/kg）（%）
RSDr（%）
0.1
3
88.8
5.1
0.5
3
88.2
5.4
0.1
3
91.7
4.1
0.5
3
90.5
2.2
0.1
3
90.6
4.4
0.5
3
90.4
2.0
0.1
3
89.7
7.3
0.5
3
91.6
7.3

試料の種類
鶏用配合飼料
豚用配合飼料
とうもろこし
ライグラス

・共同試験
試料の種類

有効試
験室数

棄却試
験室数

7

0

肉用牛肥育用配合飼料

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.2
89.5
5.9
7.7

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中（参考）クロマトグラム例
A

HorRat0.37

0.025 mg/kg

B

標準液及び添加試料のクロマトグラム
A：標準液（ホキシムとして 25 ng 注入）
B：添加試料（成鶏飼育用配合飼料にホキシムとして 0.5 mg/kg 相当量添加）
251

ホサロン

251.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
251.2

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
251.3

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 2）

第 2 節 5 による。
292

252

ホスチアゼート

252.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
253

ホスメット

253.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
253.2

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
254

ホレート

254.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
254.2

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
255

マラチオン

255.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
255.2

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
255.3

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 2）

第 2 節 5 による。
256

マンゼブ（ジネブ及びマンゼブ）

256.1

液体クロマトグラフによる分析法 注 1（適用範囲：配合飼料）
102.1 による。
注 1

本法では、試料中のジネブ及びマンゼブはいずれもエチレンビスメチルジ
チオカーバメートに変換され、ジネブとしての合量又はマンゼブとしての合量として定量される。

257

ミクロブタニル

257.1

シアナジン及びミクロブタニルのガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 27 による。

293

258

メカルバム

258.1

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
259

メタクリホス259.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
260

メタミドホス

260.1

アセフェート及びメタミドホスの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計

による同時分析法
第 3 節 11 による。
261

メタラキシル261.1

アゾキシストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 12 による。
262

メチオカルブ（メチオカルブスルホキシド及びメチオカルブスルホンを含む。）

262.1

カーバメート系農薬の液体クロマトグラフによる同時分析法（その 2）

第 3 節 3 による。
263

メチダチオン263.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
263.2

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
264

メトキシクロール264.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
264.2

有機塩素系及び酸アミド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 3 による。
264.3

アラクロール、アレスリン、クロルプロファム、ジクロラン及びメトキシク

ロールのガスクロマトグラフによる系統的分析法
第 2 節 6 による。

294

265

メトキシフェノジド

265.1

カルバリルその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 23 による。
266

メトプレン

266.1

液体クロマトグラフ法
A

メトプレン標準液

試薬の調製

メトプレン〔C19 H34 O3〕20 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、100 mL の全量フラスコに入れ、アセトニトリルを加えて溶かし、更に標線までアセトニトリルを加えてメトプレン標準原液を調製する（この液 1 mL は、メトプレンとして 0.2 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をアセトニトリルで正確に希釈し、1 mL 中に
メトプレンとして 0.02~0.5 µg を含有する数点のメトプレン標準液を調製する。
B
抽

出

定

量

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、200 mL の共栓三角フラスコに入れ、アセトニトリル－水（3+1）20 mL を加えて潤し、15分間静置後、更にアセトニトリル 100 mL を加え、30 分間振り混ぜて抽出する。
300 mL のなす形フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の三角フラスコ及び残さを順次アセトニトリル 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。ろ液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧
濃縮し、塩化ナトリウム飽和溶液 20 mL を加え、カラム処理 I に供する試料溶液とする。
カラム処理 I

試料溶液を多孔性ケイソウ土カラム（20 mL 保持用）注 1 に入れ、5 分間静置する。300 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き、試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン 20 mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次カラムに加える。液面が充てん剤の上端に達するまで流下してメトプレンを溶出させる。
更にヘキサン 60 mL をカラムに加えて同様に溶出させ、溶出液を 40 °C 以下の水
浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
ヘキサン 10 mL を正確に加えて残留物を溶かし、カラム処理 II に供する試料溶液とする。
カラム処理 II
2

試料溶液 2 mL を多孔性ケイソウ土ミニカラム （3 mL 保持用） 注に正確に入れ、2 分間減圧して溶媒を除去する。あらかじめアセトニトリル 5

mL で洗浄したオクタデシルシリル化シリカゲルミニカラム（360 mg） 注 3 を多孔性ケイソウ土ミニカラムの下に連結する。
100 mL のなす形フラスコをミニカラムの下に置き、ヘキサン飽和アセトニト
リル 20 mL をミニカラムに加えてメトプレンを溶出させ、溶出液を 40 °C 以下の
水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
ヘキサン－ジエチルエーテル（19+1）2 mL を加えて残留物を溶かし、カラム
処理 III に供する試料溶液とする。
295

合成ケイ酸マグネシウムミニカラム（910 mg） 注 4 をヘキサン 5

カラム処理 IIImL で洗浄する。
試料溶液をミニカラムに入れ、試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン－ジエチルエーテル（19+1）2 mL ずつで 2 回洗浄し、洗液を順次カラムに加え、液面が充てん剤の上端に達するまで流出させる。更にヘキサン－ジエチルエーテル（19+1）20 mL をミニカラムに加え、同様に流出させる。50 mL のなす形
フラスコをミニカラムの下に置き、ヘキサン－ジエチルエーテル（17+3）10 mLをミニカラムに加えてメトプレンを溶出させる。溶出液を 40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
アセトニトリル 2 mL を正確に加えて残留物を溶かし、メンブランフィルター（孔径 0.5 µm 以下）でろ過し、液体クロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
液体クロマトグラフィー

試料溶液及び各標準液各 20 µL を液体クロマトグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：紫外吸光光度検出器（測定波長：267 nm）

カラ

ム：オクタデシルシリル化シリカゲルカラム（内径 4.6 mm、長さ 250 mm、粒径 5 µm） 注 5

溶
流離液：アセトニトリル－水（7+3）
速：1 mL/min

カラム槽温度：40 °C
計

算得られたクロマトグラムからピークの高さ又は面積を求めて検量線を作成し、試料中のメトプレン量を算出する。
注1
2

Chem Elut（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの
Extrelut-3（Merck 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの3

Sep-Pak Plus C18 Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

4

Sep-Pak Plus Florisil Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

5296

HAIsil C18（Higgins Analytical 製）又はこれと同等のもの

（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
添加濃度
添加回収率 繰返し精度繰返し（mg/kg）（%）
RSDr（%）
0.05
3
91.7
8.5
0.25
3
96.7
1.6
0.5
3
99.0
6.1
0.05
3
86.0
7.1
0.25
3
85.7
15
0.5
3
85.7
0.7
0.05
3
95.0
3.2
0.25
3
92.0
3.8
0.5
3
93.0
4.9

試料の種類
鶏用配合飼料肉豚肥育用配合飼料

アルファルファ

・共同試験
試料の種類

有効試
験室数

棄却試
験室数

成鶏飼育用配合飼料

70

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.5
91.2
5.5
7.1

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中

HorRat0.39

0.05 mg/kg（参考）クロマトグラム例

添加試料（配合飼料にメトプレンとして 0.5 mg/kg 相当量添加）のクロマトグラム
267

メトミノストロビン（E 体）267.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
268

メトラクロール

268.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
268.2

有機塩素系及び酸アミド系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法

第 2 節 3 による。
269

メトルカルブ269.1

カーバメート系農薬の液体クロマトグラフによる同時分析法（その 1）

第 3 節 2 による。

297

269.2

カーバメート系農薬のガスクロマトグラフによる同時分析法

第 3 節 4 による。
269.3

アゾキシストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 12 による。
270

メビンホス

270.1

農薬のガスクロマトグラフ質量分析計による一斉分析法

第 3 節 1 による。
271

メプロニル

271.1

オリサストロビンその他の農薬の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計

による同時分析法
第 3 節 21 による。
272

モノクロトホス272.1

有機リン系農薬のガスクロマトグラフによる系統的分析法（その 1）

第 2 節 4 による。
273

モリネート

273.1

ガスクロマトグラフ質量分析計法
A

モリネート標準液

試薬の調製

モリネート〔C9 H17 NOS〕25 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、50 mL の全量フラスコに入れ、アセトンを加えて溶かし、更に標線までアセトンを加えてモリネート標準原液を調製する（この液 1 mL は、モ
リネートとして 0.5 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をヘキサンで正確に希釈し、1 mL 中にモリネー
トとして 0.03~0.5 µg を含有する数点のモリネート標準液を調製する。
B
抽

出

定

量

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、300 mL の共栓三角フラスコに入れ、水 20 mL（稲わら及び稲発酵粗飼料は 30 mL）を加え、
30 分間静置後、更にアセトン 100 mL（稲わら及び稲発酵粗飼料は 120 mL）を加え、30 分間振り混ぜて抽出する。200 mL の全量フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。更に全量フラスコの標線までアセトンを加える。この液 20 mL を正確に 100 mL のなす形フラスコに入れ、40 °C 以下の水浴で約 3 mL まで減圧濃縮し、液液分配に供する試料溶液とする。
液液分配

試料溶液を 300 mL の分液漏斗 A に入れ、塩化ナトリウム溶液（10w/v%）100 mL 及びヘキサン 50 mL を加える。試料溶液の入っていたなす形フラ298

スコをヘキサン 25 mL で 2 回洗浄し、洗液を分液漏斗 A に合わせる。分液漏斗 A
を 5 分間振り混ぜた後静置し、水層（下層）を 300 mL の分液漏斗 B に入れ、ヘキサン層（上層）を 300 mL の三角フラスコに入れる。分液漏斗 B にヘキサン 50
mL を加えて 5 分間振り混ぜた後静置し、水層を捨てヘキサン層を先の三角フラ
スコに合わせる。ヘキサン層を適量の硫酸ナトリウム（無水）で脱水し、 300
mL のなす形フラスコにろ紙（5 種 A）でろ過した後、先の三角フラスコ及びろ紙を順次 10 mL のヘキサンで洗浄し、洗液を先のろ紙を通してろ液を合わせる。
ろ液を 40 °C 以下の水浴で約 3 mL まで減圧濃縮し、カラム処理に供する試料溶液とする。
カラム処理 注 1（500 mg）

エチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲルミニカラム

注2の下に合成ケイ酸マグネシウムミニカラム（910 mg） 注 3 を連結し、ヘキサン 10 mL で洗浄する。50 mL のなす形フラスコをミニカラムの下に置き、試料溶液をミニカラムに入れ、液面が充てん剤の上端に達するまで流下し、モリ
ネートを流出させる。更に試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン 5
mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次ミニカラムに加え、同様に流出させる。
次に、エチレンジアミン-N-プロピルシリル化シリカゲルカラムをはずし、ヘキサン－ジエチルエーテル（9+1）15 mL を合成ケイ酸マグネシウムミニカラムに加えてモリネートを溶出させる。溶出液にアセトン－ジエチレングリコール（100+1）1 mL を加え、40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した
後、窒素ガスを送って乾固する。ヘキサン 1 mL を正確に加えて残留物を溶かし、ガスクロマトグラフ質量分析計による測定に供する試料溶液とする。
ガスクロマトグラフ質量分析計による測定

試料溶液及び各モリネート標準液

各 2 µL をガスクロマトグラフ質量分析計に注入し、選択イオン検出クロマトグ
ラムを得る。
測定条件

例（ガスクロマトグラフ部）
カ

ラ

ム：溶融石英製キャピラリーカラム（5 %ジフェニル－
95 %ジメチルポリシロキサンコーティング、内径0.25 mm、長さ 30 m、膜厚 0.25 µm） 注 4

キ ャ リ ヤ ー ガ ス：He（1.0 mL/min）
試

料

導

入

法：スプリットレス（60 s）

カ ラ ム 槽 温 度：80 °C（1 min 保持）→昇温 20 °C/min→280 °C（10min 保持）→300 °C（10 min 保持）（質量分析計部 注 5 ）
検
イ

出
オ

ン

器：四重極型質量分析計
化

法：電子イオン化（EI）法

インターフェース温度：280 °C
イ オ ン 源 温 度：230 °C
イ オ ン 化 電 圧：70 eV
モニターイオン：定量イオン m/z 187、確認イオン m/z 126
299

計

算

得られた選択イオン検出クロマトグラムからピーク面積又は高さを求めて検量線を作成し、試料中のモリネート量を算出する。
注 1

流速は 1~2 mL/min 程度とする。必要に応じて吸引マニホールドを使用する。

2

Bond Elut PSA（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの

3

Sep-Pak Plus Florisil Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

4

Rtx-5ms（Restek 製）又はこれと同等のもの

5

GCMS-QP2010 Plus（島津製作所製）による条件例（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
添加濃度
添加回収率 繰返し精度繰返し（mg/kg）（%）
RSDr（%）
0.1
3
94.1
2.0
0.3
3
91.9
5.2
0.1
3
95.7
4.1
0.3
3
90.8
1.4
0.03
3
110
2.2
0.05
3
111
7.6
0.1
3
110
3.9
0.3
3
106
3.1
0.05
3
108
4.8
0.1
3
98.5
1.2
0.3
3
104.0
4.2
0.03
3
101
12
0.05
3
95.5
2.4
0.1
3
96.3
2.8
0.3
3
96.3
0.4

試料の種類
鶏用配合飼料
牛用配合飼料稲わら

稲発酵粗飼料

籾米

・共同試験
試料の種類
乳用牛飼育用配合飼料

稲わら
籾米

有効試
験室数

7
7
7

棄却試 添加濃度 添加回収率
験室数 （mg/kg） （%）

2
2
2

0.1
0.3
0.05

107
105
103

室内繰返し精度

室間再現精度RSDr（%）
7.4
5.1
5.6

RSDR（%）

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中0.03 mg/kg

・検出下限（単一試験室による確認）

試料中0.01 mg/kg

12
16
11

（参考）クロマトグラム例

添加試料（稲わらにモリネートとして 0.3 mg/kg 相当量添加）のクロマトグラム300

HorRat
0.54
0.84
0.50

274

リニュロン

274.1

液体クロマトグラフ法
A

リニュロン標準液

試薬の調製

リニュロン〔C9 H10 Cl 2 N2 O2〕20 mg を 0.01 mg の桁まで量り、その数値を記録し、100 mL の全量フラスコに入れ、アセトンを加えて溶かし、更に標線までアセトンを加えてリニュロン標準原液を調製する（この液 1 mL は、
リニュロンとして 0.2 mg を含有する。）。
使用に際して、標準原液の一部をメタノールで正確に希釈し、1 mL 中にリニ
ュロンとして 0.05~5 µg を含有する数点のリニュロン標準液を調製する。
B
抽

出

定

量

分析試料 10 g を 0.01 g の桁まで量り、その数値を記録し、200 mL の共栓三角フラスコにいれ、水 15 mL を加えて潤し、30 分間静置後、更にアセト
ン 100 mL を加え、60 分間振り混ぜて抽出する。300 mL のなす形フラスコをブフナー漏斗の下に置き、抽出液をろ紙（5 種 B）で吸引ろ過した後、先の三角フラスコ及び残さを順次アセトン 50 mL で洗浄し、同様に吸引ろ過する。
ろ液を 40 °C 以下の水浴で約 15 mL まで減圧濃縮し、カラム処理 I に供する試料溶液とする。
カラム処理 I

試料溶液を多孔性ケイソウ土カラム（20 mL 保持用）注 1 に入れ、5 分間静置する。300 mL のなす形フラスコをカラムの下に置き、試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン 10 mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次カラムに加える。液面が充てん剤の上端に達するまで流下してリニュロンを溶出させ、更にヘキサン 70 mL をカラムに加えて同様に溶出させる。溶出液を 40 °C 以下の水
浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
シクロヘキサン－アセトン（4+1）10 mL を正確に加えて残留物を溶かし、メ
ンブランフィルター（孔径 0.5 µm 以下）でろ過し、カラム処理 II に供する試料溶液とする。
カラム処理 II

試料溶液 5.0 mL をゲル浸透クロマトグラフに注入し、リニュロンが溶出する画分を 100 mL のなす形フラスコに分取し、40 °C 以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮した後、窒素ガスを送って乾固する。
ヘキサン－ジエチルエーテル（19+1）10 mL を正確に加えて残留物を溶かし、カラム処理 III に供する試料溶液とする。
ゲル浸透クロマトグラフィー
カラ

例

ム：スチレンジビニルベンゼン共重合体カラム（内径 20 mm、長さ 300 mm、粒径 15 µm）

ガードカラム：スチレンジビニルベンゼン共重合体カラム（内径 20 mm、長さ 100 mm、粒径 15 µm）
溶

離流

液：シクロヘキサン-アセトン（4+1）
速：5 mL/min

分 取 画 分：85~105 mL
カラム処理 III

合成ケイ酸マグネシウムミニカラム（910 mg） 注 2 をヘキサン 5301

mL で洗浄する。
試料溶液をミニカラムに入れ、液面が充てん剤の上端に達するまで流出させる。
試料溶液の入っていたなす形フラスコをヘキサン－ジエチルエーテル（19+1）2
mL ずつで 3 回洗浄し、洗液を順次ミニカラムに加え、同様に流出させる。
50 mL なす形フラスコをミニカラムの下に置き、ヘキサン－ジエチルエーテル（7+3）25 mL をミニカラムに加えてリニュロンを溶出させる。溶出液を 40 °C
以下の水浴でほとんど乾固するまで減圧濃縮をした後、窒素ガスを送って乾固する。
メタノール 1 mL を正確に加えて残留物を溶かし、この液をプラスチック製遠心沈殿管（容量 1.5 mL）に入れ、5,000×g で 5 分間遠心分離し、上澄み液を液体クロマトグラフィーに供する試料溶液とする。
液体クロマトグラフィー

試料溶液及び各リニュロン標準液各 20 µL を液体クロマトグラフに注入し、クロマトグラムを得る。
測定条件

例

検

出

器：紫外吸光光度検出器（測定波長：254 nm）

カラ

ム：オクタデシルシリル化シリカゲルカラム（内径 4.6 mm、長さ 250 mm、粒径 5 µm） 注 3

溶

離

流

液：水－アセトニトリル－メタノール（6+4+1）
速：1 mL/min

カラム槽温度：40 °C
計

算得られたクロマトグラムからピーク高さ又は面積を求めて検量線を作成し、試料中のリニュロン量を算出する。
注1

Chem Elut（Agilent Technologies 製）又はこれと同等のもの

2

Sep-Pak Plus Florisil Cartridge（Waters 製）に適当な容量のリザーバーを連結したもの又はこれと同等のもの

3

Mightysil RP-18 GP（関東化学製）又はこれと同等のもの（参考）分析法バリデーション
・添加回収率及び繰返し精度
添加濃度（mg/kg）
0.1
0.5
0.1
0.5
0.1
0.5
0.1
0.5

試料の種類
成鶏飼育用配合飼料
牛用配合飼料
とうもろこし
チモシー

繰返し
3
3
3
3
3
3
3
3

添加回収率 繰返し精度（%）
RSDr（%）
87.9
1.1
79.3
1.5
79.2
6.4
82.0
7.4
85.7
2.5
80.1
0.1
90.5
2.8
93.4
1.8

・共同試験
試料の種類
中すう用配合飼料

マイロ

302

有効試
験室数

棄却試
験室数

7
7

0
0

添加濃度 添加回収率 室内繰返し精度 室間再現精度（mg/kg） （%）
RSDr（%） RSDR（%）
0.1
85.6
6.8
8.3
0.1
89.7
4.4
7.8

HorRat0.380.35

・定量下限（単一試験室による確認）

試料中（参考）クロマトグラム例
A

0.01 mg/kg

B

標準液及び添加試料のクロマトグラム
A：標準液（リニュロンとして 25 ng 注入）
B：添加試料（ブロイラー肥育後期用配合飼料にリニュロンとして 0.5 mg/kg 相
当量添加）
275

リン化水素

275.1

吸光光度法
A

1)

リン標準液

試薬の調製

リン酸二水素カリウム〔KH2 PO4〕（デシケーター中で 24 時間

以上乾燥したもの）0.439 g を量り、その数値を記録し、1,000 mL の全量フラス
コに入れ、水を加えて溶かし、更に標線まで水を加えてリン標準原液を調製する（この液 1 mL は、リン〔P〕としてリン酸二水素カリウム採取量（g）に 0.2276を乗じた量（mg）を含有する。）。
2)

臭素飽和溶液 注 1

水を冷却しながら、その中に臭素を飽和するまで溶かす。
B

分離、吸収

定

量

分析試料 200 g を 0.1 g の桁まで量り、その数値を記録し、5 L の丸

底フラスコ（セパラブルカバー、三口）に入れ、リン化水素分離吸収酸化装置（リン化水素分離装置に、空のガス吸収管及び臭素飽和溶液それぞれ 100 mL ず
つを入れた 2 本のガス吸収管を気密に連結し、ガス吸収管の外側を氷水で冷却したもの）に気密に連結する。この丸底フラスコに水 2 L を入れ、窒素ガスを流速200 mL/min で 30 分間送った後、マントルヒーターで加熱しながら窒素ガスを同様に 2 時間送ってリン化水素を分離吸収させる。
次に、ガス吸収管内の反応液を少量の水で 500 mL のビーカーに移し、熱板上で約 10 mL まで加熱濃縮して試料溶液とする。
同時に、試料を用いないで同一操作を行い、空試験溶液を調製する。
測定

試料溶液を少量の水で 25 mL の全量フラスコに移し、硫酸（3+7）2.5

mL、モリブデン酸アンモニウム溶液（2.5 w/v%）3 mL 及び硫酸ヒドラジニウム溶液（0.15 w/v%）1.5 mL を全量フラスコに加え、更に標線まで水を加える。この液を沸騰水浴中で 10 分間加熱して発色させた後放冷し、水を対照液として波長 820 nm の吸光度を測定する。

303

空試験溶液について、同様に吸光度を測定し、結果を補正する。
同時に、各リン標準液の各一部について、試料溶液の場合と同一条件で吸光度を測定する。
計算得られた吸光度から検量線を作成し、次式により試料中のリン化水素〔PH3 〕量を算出する。
A
 1.0976
200
A ：検量線から求めたリンの質量（µg）

試料中のリン化水素量（mg/kg） 

注1276

臭素水（2~3 w/v%）（富士フイルム和光純薬製）又はこれと同等のもの

チオファネート

276.1

チオファネートその他の液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時分析法
第 3 節 35 による。

304