Bacillus subtilis を有効成分とした新規微生物殺菌剤“アグロケア水和剤”について
前田 光紀
Mitsunori Maeda

はじめに

アグロケア水和剤の開発経緯

わが国の微生物農薬は1954年のトリコデルマ生菌のアグロケア水和剤の有効成分であるBacillus subtilis

登録に始まり、1980年代にはBT剤が登録され始めた。

HAI-0404株は、弊社研究所がある静岡県牧之原市のその後、環境保全型農業が重要視され始めた1990年頃茶葉から分離・採取された。2009年２月に新規農薬登から新規剤の開発が盛んになり、環境保全型農業を担録を申請し、同年11月18日付で農薬登録（農林水産省

う中核的資材として期待されてきている。

登録：第22516号）を取得し、翌年２月より販売を開

微生物農薬は、効力が不安定で保存性が劣り、使用始した。

方法が難しく気象条件に影響を受け易いなど多くの欠アグロケア水和剤の登録内容点が挙げられ、農家が積極的に使用するに躊躇する面がある。しかし、ポジティブリスト規制対象外となる性状

他に農薬使用回数にカウントされず、減農薬に結びつ

登録番号：農林水産省登録

き、化学農薬耐性菌や抵抗性害虫にも有効であり、耐有効成分：バチルス ズブチリス

１）

HAI-0404株の生芽胞性菌率を低下させたという報告もある（川根、2000）など多くの利点も併せ持っている。

第22516号
5×10９cfu/g

性状：類白色水和性粉末

アグロケア水和剤については、本年度５月29日に北剤型：水和剤

海道大学で開催された日本農薬学会第35回大会にて有効年数：４年（常温）“新規微生物農薬殺菌剤アグロケア水和剤の開発”と適用病害虫名および使用方法：表１に示す題して発表した。本報ではその内容について改めて紹介する。

図１

HAI-0404株

図２

―

29―

アグロケア水和剤

農薬時代

第192号 （2010）

表１

アグロケア水和剤の適用作物，病害および使用方法

作物名

適用病害虫名

希釈倍数

使用液量

使用時期

本剤の使使用

用回数

方法－

散布

バチルス ズブチ
リスを含む農薬の総使用回数

野菜類（トマト、ミニトマト、食用ゆりを除く）

灰色かび病

1,000～

うどんこ病

2,000倍葉かび病

1,000倍100～300

灰色かび病

1,000～

L/10a

うどんこ病

2,000倍

トマト
ミニトマト
食用ゆり

収穫前日
まで

－

葉枯病
ガーベラ
ペチュニア

うどんこ病

1,000倍

かんきつ

灰色かび病

1,000～

200～700

なし

黒星病

2,000倍L/10a
2010年5月26日現在

室内選抜試験
弊社研究所内の試験圃場茶園の茶葉から微生物を分灰色かび病防除活性を有しており、開発候補菌株とし離し、灰色かび病を対象に病害防除活性を有する菌株て選抜した。

を選抜した。その中で、HAI-0404株が先行剤に優る
表２

室内選抜試験結果（インゲン灰色かび病）
供試菌株
HAI-0404株
バチルスA剤
無処理

図３

供試微生物数（cfu/ml）

病斑直径(mm)

防除価

８0.0

100.0

７0.0100.0

８0.0100.0

1.0×10７1.086.0－21.5

1.0×10
1.0×10
1.0×10

HAI-0404株のインゲン灰色かび病防除試験結果

図４―

30―

無処理

もしくはB. licheniformis に相同性が高いことが明らか

HAI-0404株の同定となった。そこで、両菌種間の異なる性質（Peterら）
２）

16SrDNA解析結果を元に系統樹を作成した（図５）。

（プロピオン酸の利用の有無、55℃での生育の可否、その結果、HAI-0404株は、B. subtilis やB. licheniformis

嫌気条件での生育の可否）について検討した結果、等の種に系統的に近いことがあきらかとなった。次にHAI-0404株は全てネガティブでB. subtilis と同じであ種の特定のため、API50CH等を用いて種々の生化学ることが明らかとなった。これらの結果を総合し、的性状検討を実施した。HAI-0404株は、グラム陽性

HAI-0404 株はバイオセーフティーレベル１であるの桿菌でカタラーゼ反応は陽性、酸化的に酸を生成し、B. subtilis と判断し、H17年2月に産業技術総合研究所バチルス型の内生胞子を形成することが明らかとなっ特許微生物寄託センターに国際寄託した。

た。また、API50CHの結果を元にAPIWebのデータベースで相同性検索した結果、HAI-0404株はB. subtilis

図５

HAI-0404株の系統樹

―

31―

図６

HAI-0404株のグラム染色結果

図７

HAI-0404株の胞子染色結果

農薬時代

第192号 （2010）

表３

HAI-0404株の生化学的性状試験結果
試験項目

試験結果

試験項目

試験結果

グラム染色陽性（図６）

Amygdalin＋カタラーゼ反応陽性

Arbutin＋

O-Fテストoxidation

Esculin＋

胞子形成

バチルス型内生胞子形成（図７）Salicin＋Glycerol＋

Cellobiose＋

Erythritol－Maltose＋

D arabinose－

Lactose＋L arabinose＋

Melibiose＋

Ribose＋Sucrose＋D xylose＋Trehalose＋

L xylose－

Inulin－Adonitol－Melezitose－

β methyl-D xyloside－

Raffinose＋

Galactose－

Starch＋Glucose＋

Glycogen＋

Fructose＋

Xylitol－

Mannose＋

Gentiobiose＋

Sorbose－D turanose－

Rhamnose－

D lyxose－

Dulcitol－D tagatose－

Inositol＋D fucose－

Mannitol＋

L fucose－

Sorbitol＋D arabitol－

α-methyl-D mannoside－

L arabitol－

α-methyl-D＋

Gluconate－2-keto-gluconate－

5-keto-gluconate－

glucoseide
N-acetylglucosamine－＋：資化性あり－：資化性なし

安全性試験
HAI-0404株は人畜および環境生物に対して、毒性は認められず、通常の使用において所定の注意事項をや病原性等の影響は認められなかった。製剤で軽度の守れば、人の健康に影響を及ぼすことはないと判断さ

刺激性や感作性が認められたが、何れも毒性や病原性れた。

―

32―

表４

安全性試験結果

人畜毒性
環境毒性

試験の種類

供試生物

検体

結

果

単回経口投与ラット

原体

感作性，病原性，体内生残性，毒性なし

単回経皮投与ウサギ

水和剤

軽度の刺激性あり。経皮毒性なし

単回経気道投与

ラット

原体

感染性，病原性，体内生残性，毒性なし

単回静脈内投与

ラット

原体

感染性，病原性，体内生残性，毒性なし

眼一次刺激性ウサギ

水和剤

中程度～強度の刺激性あり（但し洗浄効果あり）

皮膚感作性

モルモット

水和剤

皮膚感作性あり

淡水魚

コイ

原体

影響なし

淡水無脊椎動物

オオミジンコ

原体

影響なし

鳥類

ウズラ

原体

影響なし

植物

標的外10種

原体

影響なし

昆虫

標的外５種

原体

影響なし

土壌微生物

真菌，細菌，放線菌

原体

影響なし
実施機関：三菱化学安全科学研究所

アグロケア水和剤の特徴
１）
菌株の特徴
菌株の性質検討の一環として、培養温度と生育量にこの特徴が病害防除効果に対して有効に働くか検討しついて検討した。HAI-0404株は他の先行微生物剤のたところ、インゲン花器を用いた灰色かび病防除試験菌株と比較して、低温域での生育に優れるということの結果、低温でも高い防除価を示すことが明らかとがわかった（図８）。

なった（図５、６）。

図８

培養温度と菌体生育量

―

33―

農薬時代

第192号 （2010）

表５20℃でのインゲン灰色かび病防除試験結果
供試薬剤名

試験温度

希釈倍数病斑径(mm)

防除価

1,000倍0.199.7

1,000倍

0.498.8500倍

0.2

99.4－34.4

アグロケア水和剤
バチルスA剤
バチルスB剤20℃

無処理
表６16℃でのインゲン灰色かび病防除試験結果果
供試薬剤名

試験温度

希釈倍数

病斑径(mm)

防除価

1,000倍879.6

1,000倍23.2

41500倍

15.7

60.1

－39.3

次に、夜間低温時期の施設内イチゴ圃場での灰色かた（図10）。

アグロケア水和剤
バチルスA剤
バチルスB剤16℃

無処理び病防除試験を実施した。図９に示したように最低気

アグロケア水和剤は先行剤に比較し、低温時にも高温は５℃前後と非常に低い条件である。この様な条件い病害防除効果を発揮することが明らかとなった。

下でアグロケア水和剤は対照剤に優る防除効果を示し

図９

図10

試験期間中の気温変化

イチゴ灰色かび病防除試験結果―34―

２）剤の特徴
本剤は収穫前日まで使用可能という登録用件を最大た。しかし、アグロケア水和剤散布後のナス果実には、限生かそうと、薬液散布後の作物に対する汚れが少な殆ど汚れは確認されなかった。トマトに対しても同様い製剤の開発を目指してきた。

であり、アグロケア水和剤は、散布後の作物に対する先行剤A，B，C，D剤の薬液散布後のナス果実は程汚れは極めて少ないことが確認された。

度の差はあるが薬斑による汚れがはっきりと確認され

図11

アグロケア水和剤

1000倍

図12

バチルスA剤

1000倍

図13

バチルスB剤

500倍

―

35―

農薬時代

第192号 （2010）

図16

図14

バチルスC剤

1000倍

図15

バチルスD剤

2000倍

アグロケア水和剤

図18

1000倍

バチルスB剤500倍

―

36―

図17

バチルスA剤

1000倍

図19

バチルスC剤

1000倍

図20

バチルスD剤

2000倍
アグロケア水和剤の連続散布区は、化学農薬の体系

化学農薬との体系防除防除区と比較し、灰色かび病防除効果は低くなる傾向

微生物農薬は散布回数に制限がなく、散布回数もカにあったが、アグロケア水和剤と化学農薬との体系防ウントされない。化学農薬の耐性菌や抵抗性害虫にも除区は、化学農薬の体系防除区とほぼ同等の灰色かび効果を示すなど幾つかの利点があるが、その反面、効病防除効果を示した。このように、アグロケア水和剤

果が不安定で低いことや適用適期幅が狭いことなど多と化学農薬を体系防除することにより、アグロケア水くの欠点も持ち合わせている。そこで、アグロケア水和剤のみの連続散布より病害防除効果を高め、化学農和剤の有効な使用方法の１例として、ナス灰色かび病

薬の体系防除と殆ど遜色のない病害防除効果が得られに対する化学農薬との体系防除試験を実施した。

ることが明らかとなった。

図21

ナス灰色かび病に対するアグロケア水和剤と化学農薬体系防除試験

―37―

農薬時代

第192号 （2010）

おわりに

参考文献

本報では、アグロケア水和剤の登録内容や特徴、有１）川根太（2000）．微生物殺菌剤「ボトキラー水効な使用方法例について紹介した。登録作物および病和剤」の開発．微生物農薬（山田昌雄編）．

害に対しては、今後、登録農薬の少ない作物の病害にpp.136-146，全農協，東京．

も適用を広げていく予定である。
作用機構に関しては、

２）P eter H. A. Sneath

Section 13 Endospore-

本報ではふれなかったが、本剤を散布すると有効成分

forming Gram-Positive Rods and Cocci Bergey ’であるB. subtilis HAI-0404株が作物の表面を覆って病s Manual of Systematic Bacteriology Vol.2

原菌と競合し、その栄養と生息場所を奪うことにより1104-1139

病害を予防すると考えている。
この様な特徴をご理解頂き、環境保全や多様な防除手段を持つことによる化学農薬の耐性菌発現遅延に貢献できればと願っている。今後も微生物の多様な能力を利用した微生物農薬の製品群の充実に貢献していきたいと考える。

B. subtilis HAI-0404株の同定にあたって、農業環境技術研究所の對馬博士および東京農業大学の篠原博士にご尽力頂いた。末筆ながらこの場をお借りしてお礼申し上げる。
（日本曹達㈱ 研究開発本部
小田原研究所

圃場評価研究部）―

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