国際抗老化再生医療学会雑誌

第 2 巻（41−43）201941■ 技術講座細胞培養培地を長持ちさせる方法－酸素補給水を用いて
松本

高明，萩原敏且

1, 2）

要，松本

1, 2）

美弥子

1, 2）

旨

従来の培養液は 4 日おきに液換えをせねばならない．しかしながら，酸素補給水を用いた培地では 1 週間に 1 回の液換えで十分な細胞培養環境がえられる．
Key words 酸素補給水，粉末培地の溶解液，浮遊細胞培養(WAARM Journal, 2019; 2: 41–43)ため長く細胞分裂をする．そこで，今回の試験にははじめに浮遊細胞を用いた．

細胞培養技術は医学・生物学の分野において欠か材料および方法せない技術であり，医薬品の開発および再生医療の研究など多岐にわたり使われている．培養細胞を用

浮遊細胞は CHO DP-12 抗体産生株であるチャイ

いるには細胞をはじめ培地，培養方法など種々の検ニーズハムスター卵巣細胞を用いた ．培地は極東討が必要である．特に，細胞の増殖には培地内の安製薬工業株式会社製の無血清・無タンパク CHO 用定した酸素補給が必要である ．通常，培地は 3 あを用いた．培地の溶解液は酸素補給水群（酸素補給るいは 4 日おきに液換えが必要である．そのため，水）および対照群（精製水 極東製薬製 ミリ Q 水）

これに従事する者は休日も返上しなければならないを用いた．酸素補給水（製品名：WOX）はメディサこととなる．

イエンス・エスポア株式会社製であり，飲用として

1）

接着細胞培養では培養上清の液換えが容易であり

5）

酸素補給に効果があることが報告されている

．

6-10）

酸素補給は簡単である．しかし，浮遊細胞培養ではまた，両群の pH および浸透圧の相違は認められない．

培養上清の液換えには遠心分離機を用いて浮遊細胞それぞれ二群の培養液 25ml と 3×10 cell/ml に調を集めなければならなく，その際に浮遊細胞は損傷整した細胞を混合し 125ml 細胞用バックル付きエを受ける．また，培養上清の液換えをしないならば，ルレンマイヤーフラスコを用いて 37℃，5%CO2 存

無菌空気あるいは無菌酸素の気泡を培養液への吹込在下で振盪撹拌培養を行った．

5

みと撹拌を行わねばならない．そのためには酸素吸入用の酸素補給装置

結果および考察を設置しなければならない．

2, 3）

その上，酸素飽和濃度の調整，酸素吸入時で生じるエアレーションにより細胞損傷など

4）の問題もあ

細胞の増殖
対照群と酸素補給水について培養直後，4，8，11る．これらの問題を解決する一助となればと思い酸

日後の細胞数を血球計算盤を用いて測定した

素補給水を溶解液として培養液を作成し，細胞の増4 日後までは，両群ともに細胞の増殖の差異はみら殖と生存率からその効果を検討した．通常，接着細れない．8 日後では対照群の細胞数の増加は鈍化す

胞は培養皿全面に増殖すると，細胞分裂が停止す

るが，酸素補給水群では 8 日後では明瞭な細胞増加る．しかし，浮遊細胞は細胞同士が結合していないを示した．しかしながら，11 日後では細胞数の増1）
2）

メディサイエンス・エスポア株式会社
特定非営利活動法人 QOL サポート研究会
代表者 松本 高明
連絡先 住所：〒 212-0027 川崎市幸区新塚越 1-2 2-502 電話：044-511-2214．

11, 12）e-mail アドレス：matsumoto@espoir.com

細胞培養培地を長持ちさせる方法

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加はわずかながら鈍化していた．（図）−酸素補給水を用いてであるが，酸素補給水を用いた培地では 1 週間に 1回の液換えで，十分な細胞環境が得られる．時間的細胞の生存率にも実験計画の段階でも培地の 1 週間に 1 回の液換対照群と酸素補給水群による培養直後，4，8，11日後の細胞の生存率の測定にトリパン青染色液を用いて死細胞を検索した．4 日目までは両群ともト12）

リパン青で染色される細胞は見られない．しかしながら 8 日後では対照群では 20％がトリパン青で染色される死細胞が観察される．酸素補給水群ではトリパン青で染色される細胞は見られない（図）．11日後では対照群ではほとんどの培養細胞がトリパン青で染色される．しかしながら，酸素補給水群では15〜18％の培養細胞が生存していた．
これらの結果から，従来用いられている培地の溶解液（対照群）と酸素補給水群では明確な差が認められた．即ち，対照群では培養細胞は 4 日を過ぎると細胞の増加や生存率の減少が見られた．しかし酸素補給水では 8，11 日後でさえも増加していた．また，トリパン青で染色される死細胞は対照群では 8日後では 4 割認められる．しかし酸素補給水群では8 日後でも認められない．これらのことは，従来用いられている培地では細胞の増殖能および生存率より 4 日間は使用することができる．即ち対照群では4 日以降は培養液の液換えを行わなければならないことを示している．
それに対して，酸素補給水を用いた培養液では 8日後も 4 日後と同様に細胞数の増加率や生存率を示しており，培養液は 8 日間使用できることを示した．
最後に，従来の培養液では 4 日おきに液換えが必要

えは革命的なことと信じる．
この酸素補給水が細胞培養の培地の溶液として広く用いられることを期待している．

謝辞

本報告にご協力をいただきました極東製薬工業株
式会社に深謝いたします．
参考文献
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国際抗老化再生医療学会雑誌

第 2 巻（41−43）2019

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4311）北村敬：細胞数の測定と生存細胞数の測定：ウイ
ルス検査のための組織培養技術：近代出版 1976：98-10212）血球計算盤を用いた細胞数のカウント法：http://
www.abcan.co.jp/protocols/ counting-cells-using-ahaemocytometer.