NBRP Zebrafish
News Letter March 2021
平素より、ナショナルバイオリソースプロジェクト（NBRP）・ゼブラフィッシュの活動にご協力いただき、ありがとうございます。代表機関である理化学研究所・脳神経科学研究センターからニュースレターを配信いたします。NBRPゼブラフィッシュ第4期4年目が終わろうとしております。今年度も多くのリソースを寄託・分譲依頼いただき、嬉しく思っております。
来年度も、ご協力のほど宜しくお願い申し上げます。

書籍紹介
平 田 普三先生に 、 ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ 実 験 ガ イ ド を ご 紹 介 い た だ き ま す 。

ゼブラフィッシュ実験ガイド
平田普三「編著」
2020年，B5，148ページ，定価3,300円（本体3,000円＋税）
ISBN: 9784254171730
平田 普三
青山学学院大学理工学部化学・生命科学科
hihirata@chem.aoyama.ac.jp

ゼブラフィッシュを用いた実験をする際の参考書籍としては、オレゴン大学神経科学研究所のウェスターフィールド教授が1993年に出版されたThe Zebrafish Bookが初出です(1)。同書は2007年に改訂第5版が刊行され、Zebrafish International Resource Center (ZIRC)から入手できます。
他にも英語で書かれた実験書はいくつも出版されています。一方で、日本語で書かれたゼブラフィッシュの書籍は、モデル生物を紹介する本の中の１つの章として (2, 3) 、あるいは発生や行動といった特定分野の知見を集めた本としてはあるものの(4~6) 、ゼブラフィッシュの基礎から実践までを指南する入門書あるいはThe Zebrafish Bookを補完するような実験書はありませんでした。ここで紹介する「ゼブラフィッシュ実験ガイド」はゼブラフィッシュを用いた研究に必要な知識を体系的にまとめた、はじめての日本語の成書です。
世界の第一線で活躍される日本のゼブラフィッシュ研究者20名が筆を取り、写真やイラストをふんだんに入れ、それぞれの分野の流儀やコツを解説しています。内容は飼育システムのスペック、水質管理、交配採卵といった飼育基礎からCRISPR/Cas9による遺伝子破壊や遺伝子ノックイン、トランスジェニック作製、ライブイメージングといった実験技術、さらには行動解析、化合物スクリーニング、データベース検索などの解析手法まで多岐にわたります。飼育や実験に必要な市販のエサや交配タンクの入手先など実用的な情報が数多く提供されています。発生の章では解剖の手技を詳しく説明した動画を用意しており、QRコードから無料で視聴できます。実験をはじめる前に必要な動物実験や遺伝子組換え実験の手続きについても詳しく記載されています。ナショナルバイオリソースプロジェクト(NBRP)の章もあり、事業の内容や展望が紹介されています。
ここで本書から、ゼブラフィッシュの専門家にもあまり知られていない豆知識を2つ紹介しましょう。理化学研究所で樹立されたゼブラフィッシュの野生型系統RIKEN WT (RW)はNBRPから入手できますが、これがどのように維持されているか、みなさまご存知でしょうか。本書の「系統」の章によりますと、RWは理化学研究所で多対多の交配を多数行い、得られた胚集団に発生異常が出ないことを確認し、健康な胚を産んでくれる魚のみから次世代の個体を得て、さらに成魚の時点でも状態の良いものを選別して維持するそうです。ずいぶんと手間のかかる方法で維持されていますが、それによって世界のゼブラフィッシュ研究が支えられているわけですから、本当にありがたいことです。RWはNBRPで一番リクエストの多いゼブラフィッシュ系統でもあるそうです。

みなさまは胚と成魚の間の時期の魚をどうよびますか。仔魚？稚魚？幼魚？どうでしょう。英語ではembryo (0~3dpf) → larva (3~30 dpf) → juvenile (30~90 dpf) → adult (90~ dpf) と定義されていますが(7, 8)、日本語での呼称は研究者によって違いがあります。「発生」の章末コラムで以下の表を示して呼称問題を解説した上で、本書では、胚 → 仔
魚 → 稚魚 → 成魚に統一して記載しています。日々使う用語のターミノロジーをきちんと把握することは重要で、これはみなさまに是非知っていただきたいと思いました。

発生ステージ

孵化前

孵化後

基本形態の確立後

性成熟後

ゼブラフィッシュの受精後日齢（生育環境で前後する）

0～3日

3～30日

30～90日

90日以降

英語名称

EmbryoLarva

Juvenile

Adult

英語の直訳（Google翻訳）胚, 胎児

幼虫, 仔虫少年, 幼若成人, 大人

日本語正式名称（魚類学用語）

胚

仔魚

稚魚

成魚

日本語慣用名称（日本の多くのゼブラフィッシュ研究者が用いる）

胚

稚魚

幼魚成魚

このように本書では、基礎的なことから、これまで多くの人が意識してこなかったこと、特定の分野で常識となっている専門知識まで、ゼブラフィッシュ研究に必要な知見を余すことなく取り上げており、初心者からベテランの研究者まで必携の一冊と言えます。ぜひ皆様もお手元にお持ちください。
第1章 実験動物としてのゼブラフィッシュ〔平田普三〕
第2章 系統〔酒井則良〕
第3章 飼育〔飯田敦夫〕
第4章 交配と採卵 〔亀井宏泰〕
第5章 発生〔伊藤素行〕
第6章 仔魚の運動〔平田普三〕
第7章 仔魚の行動〔武藤彩〕
第8章 成魚の行動〔宮坂信彦〕
第9章 トランスジェニックゼブラフィッシュ〔川上浩一〕
第10章 遺伝子の機能阻害〔川原敦雄〕
第11章 遺伝子ノックイン〔東島眞一・木村有希子〕
第12章 ライブイメージング〔浅川和秀〕
第13章 化学物質の毒性評価への応用〔鑪迫典久〕
第14章 創薬への応用〔松田大樹〕
第15章 ゼブラフィッシュのデータベース〔横井勇人〕
第16章 ゼブラフィッシュ・リソース事業〔岡本 仁・川上浩一・東島眞一・石岡亜季子〕
第17章 実験に必要な手続き〔日比正彦・清水貴史・橋本寿史・井原邦夫〕
1. Monte Westerfield. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). University ofOregon Press. 2007年 ISBN: 9789994860579.
2. 鈴木範男(編)身近な動物を使った実験１：ホヤ, メダカ・ゼブラフィッシュ, キンギョ, カエル。2009年 三共出版。
ISBN: 9784782705803.
3. 吉川寛・堀寛(編)。研究をささえるモデル生物：実験室いきものガイド。2009年 化学同人。ISBN: 9784759811780.
4. 久保健雄・奥山輝大・上川内あずさ・竹内秀明（共著）。新・生命科学シリーズ 動物行動の分子生物学。2014年
裳華房。ISBN: 9784785358587.
5. 弥益恭（著）。新・生命科学シリーズ ゼブラフィッシュの発生遺伝学。2015年 裳華房。ISBN: 9784785358648.
6. 大久保範聡・吉崎悟朗・越田澄人(編)。魚類発生学の基礎。2018年 恒星社厚生閣。ISBN: 9784769914853.
7. Charles B. Kimmel et al. Stages of Embryonic Development of the Zebrafish. Dev Dyn 203: 253-310 (1995).
8. David M. Parichy et al., Dev Dyn 238: 2975-3015 (2009).

新着系統
リソースとして新たに寄託・公開された系統をご紹介いたします。
ウェブサイト （ http://shigen.nig.ac.jp/zebra/index.html ） から系統をオーダー可能です。ぜひお立ち寄りください。
Tg(hsp70l:GFP-T2A-GSK-3β) isi28
Tg(hsp70l:GFP-T2A-GSK-3β R96A) isi29
Tg(hsp70l:GAP43GFP) isi30
pax9 kt1109
Tg(fli1a:GFP-rap1b) ncv508Tg
Tg(fli1a:LIFEACT-mCherry) ncv7Tg ; rap1b ncv124
Tg(hsp70l:GFP-T2A-β-catCA) line1 isi26
Tg(hsp70l:GFP-T2A-β-catCA) line2 isi27
skor1b ex1-10
hoxaa cluster sud111
hoxab cluster sud112
hoxaa cluster sud111 ; hoxab cluster sud112 ; hoxda cluster
sud116
Tg(fli1a:EGFP-ARPC4) nf5Tg
TgBAC(wt1a:Gal4FF) nf7Tg
TgBAC(dab2:Gal4FF) nf9Tg

Tg(myl7:GAL4VP16ECR) ncv77Tg
Tg BAC(tbx2b:EGFP) ncv83Tg
z Higd1aTg(14xUAS:NLS-mCherry,zVegfr2-ΔC) ncv33Tg
Touch-unresponsive agu38
Tg(smyhc1:gap43-Venus) agu42
Tg(UAS:CaMKIIWT-2A-mCherry) agu46 ; Tg(glra1:GAL4)
Tg(UAS:CaMKIICA-2A-mCherry) agu47 ; Tg(glra1:GAL4)
Tg(UAS:CaMKIIDN-2A-mCherry) agu48 ; Tg(glra1:GAL4)
Tg(Mbpa;NfsB2A-gap43Venus) agu49
Tg(UAS:hm3Dq-2A-mCherry) agu50 ; Tg(glra1:GAL4)
Tg(actb1:lslGFP; Rho1:mCherry) agu53
Tg (eno2:Cerulean) ; Tg(gfap:mCherry) ; Tg(mbp:mCitrine)
keap1a it302
keap1b it308
順不同

寄託募集
-あ な た も 寄 託 を し ま せ ん か –理化学研究所脳神経科学研究センターは、ゼブラフィッシュ系統保存の代表機関であり、20万尾収容できる施設を設けております。外部研究機関からの系統の寄託受け入れを進んで行なっておりますので、遠慮をせずにぜひ寄託をしてください。寄託する際、寄託者の知的財産権は保護されます。
-凍 結 精 子 保 存 が 可 能 で す –凍結精子保存は系統のバックアップに最適です。魚をお送り頂けましたら、こちらで速やかに処理しサンプルを保存致します。処理する魚の条件は、若く健康な雄魚5匹を目安としております。5匹から人工授精45回分のサンプルが確保できる計算です。
凍結精子サンプルは理化学研究所脳神経科学研究センターと基礎生物学研究所で相互バックアップ保存することにより災害対策をしており、「預けて安心!」です。
臨機応変に対応させていただきますので、お気軽にご相談ください。お待ちしております。

実施機関
NBRPゼブラフィッシュは下記の3機関で実施しております。
- 代表機関 国立研究開発法人 理化学研究所・脳神経科学研究センター
代表者 岡本 仁- 分担機関 大学共同利用機関法人 情報・システム研究機構
代表者 川上 浩一- 分担機関 大学共同利用機関法人 自然科学研究機構
代表者 東島 眞一

ニュースレターに関する連絡先：
理化学研究所・脳神経科学研究センター
意思決定回路動態研究チーム
岡本 仁 (hitoshi.okamoto@riken.jp)〒351-0198 埼玉県和光市広沢2-1
Phone:048-467-9712 Fax:048-467-9714