NBRP	  Zebraﬁsh	  	  News	  Le0er	  	  	  March	  2017	
平素より、ナショナルバイオリソースプロジェクト（NBRP）・ゼブラフィッシュの活動にご協力いただき、ありがとうございます。代表機関である理化学研究所・脳科学総合研究センターからニュースレターを配信いたします。	
NBRPゼブラフィッシュ第3期が終わろうとしております。昨今のゼブラフィッシュ系統作製技術の進歩はめざましく、私どもへのリソース寄託・分譲依頼件数もますます増加しております。	
4月からは第4期が始動いたします。今後ともご協力のほど宜しくお願い申し上げます。	
分担機関 研究室の紹介	
分担機関である自然科学研究機構より、ゼブラフィッシュ研究にまつわるお話と研究室の紹介をさせていただきます。	
東島 眞一	
自然科学研究機構岡崎統合バイオサイエンスセンター	  基礎生物学研究所 神経行動学研究部門
shigashi@nibb.ac.jp	
岡崎地区には、国立の３つの大学共同利用研究所が存在しています。分子科学研究所、基礎生物学研究所、生理学研究所です。それぞれは概ね、理学部物理・化学科、理学部生物学科、医学部基礎系、に対応する研究を行うとともに、大学と積極
nefma:Gal4;	  UAS:GFPトランスジェニックフィッシュ。中脳、後脳の網的に共同研究を進めています。16年前の2000年に、 様体脊髄路ニューロンでGFPが発現している（図1）。 	
これら３つの研究所の共通施設として、新たなバイ	オサイエンス分野を開拓するという趣旨のもと、岡崎統合バイオサイエンスセンターが設立されました。各教員は、３つの研究所のいずれかを併任しており、それぞれの研究所との協力関係のもと、分野横断型の研究を目指して日々研究を進めているところです。私は、2004年から2016年3月まで、生理学研究所の併任教員として当センターで研究を進めてきました。そして、2016年4月より、併任先が基礎生物学研究所へと異動することとなりました。この経緯を活かし、生理学研究と基礎生物	学研究の橋渡しとなるような研究を進めて行けたら、と考えているところです。	
もともと私は理学畑の出身です。中学・高校時代は、物理学に興味を抱いており、数式のもつ物理的な意味が腑に落ちた瞬間に大きな快感を感じていました。それで、｢将来は研究者になりたい、自分で自然法則を見いだしてより強い快感を感じたい｣ということを漠然と考えるようになりました。しかし、学ぶことがハイレベルになっていくと、当然のことながらだんだんと本当の意味での快感を感じることが難しくなっていきます。ですが、研究業界に進みたいという気持ちは変わることなく、｢何か自分レベルでも快感を感じられるものを｣と考えて行き着いた先がショウジョウバエの遺伝学の世界でした。これはとても面白い世界で、大学院時代には夢中になって研究を進めました。とりわけ興味を抱いたのが、｢中枢神経系には膨大な種類の神経細胞が存在しており、それぞれは遺伝子発現の違いによって規定されている｣という事実でした。これは、当時（1980年代後半から90年代前半）、目の前で現在進行形で明かされつつある出来事であり、非常に強いインプットを受けました。｢三つ子の	魂百まで｣といいますが、私の場合はまさにそうで、それ以来の自身の研究テーマはずっと、｢多種多様の神経細胞が存在する中枢内神経系回路を、遺伝子発現を用いたトランスジェニック手法を用いて紐解いていく｣というものとなっています。1994年に基礎生物学研究所に助手として赴任し（堀田凱樹教授、岡本仁助教授客員研究室）、ショウジョウバエからゼブラフィッシュに実験対象を変えました。この変更には、遺伝学は好きでしたが、虫は子供の時から大嫌いだったことが大きく影響しています。基
生研では、まずトランスジェニックフィッシュ作製の系を確立し、ついで、脳幹運動神経細胞特異的なトランスジェニックの作製とその解剖学的解析を行いました。ショウジョウバエでの研究は、レポーター遺伝子としてlacZを用いていましたが、ゼブラフィッシュでは、当時ちょうど出たてのGFPを用いて行いました。GFPを発現するトランスジェニックフィッシュは実にきれいで美しく、｢この生物材料を選んでよかっ	た！｣とうれしく思ったことを思い出します。	  
その後、生理学的素養を身につけるべく米国ニューヨーク州立大学Joseph	   R.	   Fetcho研究室へ1998年に留学し、以来、脊髄を研究対象と定めました。帰国後（2004年）も、研究対象は変わっていませんが、自分なりの味付けとして、トランスジェニックフィッシュを自由自在に駆使した研究を進めるよう心がけています。脊髄内神経回路は、脊椎動物の運動パターン（哺乳類においては歩行運動）を直接形作るものでありますが、数十年にわたる研究にも関わらず、回路の詳細については哺乳類においては多くの点が不明です。この10年間、ゼブラフィッシュを用いて、運動系神経回路の動作機構のエッセンスに迫る研究を進めるよう目指してきました。回路の動作様式がある適度理解できるたびに、そこそこの快感を味わうことができ、自分に向いているテーマだと思っています。今後ともこの路線を継続するとともに、	脊髄より上位の神経回路情報処理機構にも迫っていけたら、と思います。 	  
我々の研究室は、バイオリソース分担機関を担っています。研究室で作製するトランスジェニック系統をいち早く国内外の研究者に提供するということを主な使命としています。これまでの研究経歴において、多数のトランスジェニックゼブラフィッシュ系統を作製し、それらを多くの研究者に提供して参りました。手法的には最新のものを取り入れる（あるいは自力開発する）ことを心がけています。現在は、当研究室で確立に成功したCRISPR/Cas9によるノックイン法を中心手法として用いています。
エンハンサー・ジーントラップなどのランダムな挿入手法を除けば、おそらく世界でもっとも多くのトランスジェ研究室の集合写真（2016年春）	
ニック系統を作製してきたのではな
いかと思います。その過程で、さま	ざまなノウハウを蓄積していますので、トランスジェニックフィッシュ作製に関して疑問点をお持ちの方は気軽に相談していただけたらと思います。また、現在も、中枢神経系でレポーター遺伝子を発現する様々なトランスジェニック系統の作製を継続して続けています。たとえば、vachta遺伝子（アセチルコリン作動性ニューロンで発現）、vglut1遺伝子（脳に存在するグルタミン酸作動性ニューロンのうちの一部で発現）、nefma遺伝子（網様体脊髄路ニューロンで発現；図１）、prdm12遺伝子,	   shox2遺伝子,	   lhx1遺伝子,	  sox14遺伝子,	  nr5a2遺伝子,	  mafaa遺伝子,	  nkx1.2lb遺伝子,	  foxp2遺伝子,	  maVa遺伝子（これらはすべて、特定のクラスの神経細胞で発現する転写因子）に関するトランスジェニックを、この1年間で作製しました。作製している系統の安定供給が可能となり、ウェブサイトに掲載されるまでにはまだ時間がかかりますが、皆様が興味をもつ系統がすでに存在している、あるいは作製途上にある可能性もあります。ですので、神経系で発現する遺伝子が研究対象の方は、｢xxx系統は作っています	か？｣というような質問を気軽にしていただけたらと思います。 	

新着系統	
リソースとして新たに公開されました系統の一部をご紹介いたします。ウェブサイト（http://shigen.nig.ac.jp/zebra/index.html）から系統をオーダー可能ですので、ぜひお立ち寄りください。 	
系統名	
mib2/chi1	 

寄託者	

寄託機関	

伊藤素行	

千葉大学	

Tg[gfap:LckGCaMP6f]	 

小田洋一	

名古屋大学	

wnt8a/ORF1-1	 

日比 正彦	

名古屋大学	

望月直樹	

国立循環器病研究センター	

mib2/chi3	 Tg(myl7:Gal4db-Tcfwt-2A-mCherry)	 
仁科博史	
伊藤素行	

東京医科歯科大学	
千葉大学	

Tg(osterix:gal4-vp16-2A-mCherry)	 

reln/del7	 

hey1/ha8	 

菊池裕	

広島大学	

日比 正彦	

名古屋大学	

川原敦雄	

山梨大学	

日比 正彦	

名古屋大学	

SP2/uy201	 
Tg(hs-epdr1:eGFP)/uy230	 

hey1/ha7	 

筑波大学	

esrp1/uy200	 Tg(runx2enhancer:	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 gal4-vp16-2A-mCherry)	 
岡田由紀	
東京大学	
埼玉大学	

小林麻己人	

trim36/ex2-5	 

SP2/uy202	 

弥益恭	

北里大学	

prdm8b/ex3-5	 

Tg(UAS:EB1-mCherry)/chi6	 Tg(otx2:DsRed)	 

寄託機関	

txnl1/it301b	 
trim36/ex7-10	 

Tg(EF1a:Smac-GFP11)	 
Tg(UAS:Lifeact-mCherry)/chi4	 

和田浩則	
Tg(Krt4:Gal4)/zf422;	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 	 Tg(UAS:ctnnb1-RFP)/zf425	 
txnl1/it301a	 

Tg(vmhc:mCherry-zCdt1)	 
Tg(EF1a:GFP1-10)	 

寄託者	

Tg(UAS:dkk1a-RFP)/zf423	 
Tg(UAS:dkk2-RFP)/zf424	 Tg(kdrl:mCherry-Cdt1)/ncv4Tg	 
Tg(fli1a:YFP-DEVD-CFP)	 

系統名	

Tg(hs-pax2a:eGFP)/uy231	 
cbln12/ex2-13	 
skor2/ex2-8	 
uncx4.1/ex1-10	 

順不同	

寄託募集	
-あなたも寄託をしませんか ‒	
理化学研究所脳科学総合研究センターは、ゼブラフィッシュ系統保存の代表機関であり、20万尾収容できる施設を設けております。外部研究機関からの系統の寄託受け入れを進んで行なっております
ので、遠慮をせずにぜひ寄託をしてください。寄託する際、寄託者の知的財産権は保護されます。 	
-凍結精子保存が可能です ‒ 	
凍結精子保存は系統のバックアップに最適です。魚をお送り頂けましたら、こちらで速やかに処理しサンプルを保存致します。処理する魚の条件は、若く健康な雄魚5匹を目安としております。5匹から人工授精45回分のサンプルが確保できる計算です。	
凍結精子サンプルは理化学研究所脳科学総合研究センターと基礎生物学研究所で相互バックアップ保存することにより災害対策をしており、「預けて安心!」です。	
臨機応変に対応させていただきますので、お気軽にご相談ください。お待ちしております。	
実施機関	
NBRPゼブラフィッシュは下記の3機関で実施しております。	
- 代表機関 -	
国立研究開発法人 理化学研究所・脳科学総合研究センター	
代表者 岡本 仁	
ニュースレターに関する連絡先：	
- 分担機関 -	
理化学研究所・脳科学総合研究センター	
大学共同利用機関法人 情報・システム研究機構	
代表者 川上 浩一	
発生遺伝子制御チーム	
岡本仁 (hitoshi@brain.riken.jp)	
- 分担機関 -	
大学共同利用機関法人 自然科学研究機構	
〒351-0198 埼玉県和光市広沢2-1	
Phone:048-467-9712 Fax:048-467-9714	
代表者 東島 眞一