2012 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡二級技士技術認定試験問題
問１．リボソームを内在する細胞小器官はどれか．

Ｂ．四酸化オスミウム固定は１～２％で２時間以内にする

Ａ．葉緑体

Ｃ．灌流固定では 4°C に冷却した固定液を用いる

Ｂ．ライソソーム

Ｄ．免疫電顕法には２％以上のグルタルアルデヒドを用いる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．ミトコンドリア

問 10．固定について正しいのはどれか．

Ｄ．ペルオキシソーム
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．微小管の固定は 4°C で行う

問２．細胞骨格について正しいのはどれか．

Ｂ．微生物は小さいので固定は動物細胞よりも短時間でよい

Ａ．微小管，中間径線維およびアクチンフィラメントに大別される

Ｃ．植物組織の固定では脱気することがある

Ｂ．微小管は直径 24 nm の細管構造をなす

Ｄ．硬組織の透過電顕観察は固定後に脱灰処理する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．中間径線維は直径 7 nm の細糸である

問 11．脱水剤について正しいのはどれか．

Ｄ．アクチンフィラメントは有糸分裂に関与する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．分子量が小さいほど脱水が速く，試料の収縮が小さい

問３．正しいのはどれか．

2．分子量が小さいほど脱水が速く，試料の収縮が大きい

Ａ．細菌の細胞壁はセルロースを主成分とする

3．分子量が大きいほど脱水が速く，試料の収縮が小さい

Ｂ．細胞膜の厚さは約 10 nm で３層構造を示す

4．分子量が大きいほど脱水が速く，試料の収縮が大きい

Ｃ．ウイルスには細胞壁がない

5．分子量は脱水速度に影響を与えるが，試料収縮には影響を与えない

Ｄ．植物の細胞壁はペプチドグリカンで構成される

問 12．脱水について正しいのはどれか．

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ問４．小胞体について正しいのはどれか．

Ａ．アセトンで脱水した試料は置換剤を用いなくてもエポキシ系樹脂に包埋できる

Ａ．動物細胞に特有な構造体である

Ｂ．100％エタノールを得るためにモレキュラーシーブスを用いた

Ｂ．粗面小胞体は表面にリボソームが付着している

Ｃ．プロピレンオキサイドには脱水作用がある

Ｃ．核膜とつながっている

Ｄ．エタノールで脱水すると細胞成分は流失しない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．滑面小胞体はタンパク質合成に関与する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 13．包埋樹脂について正しいのはどれか．

問５．ミトコンドリアについて正しいのはどれか．

Ａ．アクリル系樹脂は低温下で紫外線重合することができる

Ａ．二重の膜構造で囲まれている

Ｂ．エポキシ系樹脂は酸素の存在下で重合が阻害される

Ｂ．植物細胞に特有な構造体である

Ｃ．メタクリレート系樹脂は重合時の収縮が大きい

Ｃ．クリステは膜の積み重ね構造でグラナとも呼ばれる

Ｄ．ポリエステル系樹脂は重合時の収縮が大きい
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．マトリックスにはクエン酸回路の酵素群が存在する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 14．エポキシ樹脂包埋（Luft 法）で硬さの調節に使用するのはどれか．

問６．正しいのはどれか．

Ａ．Epon 812

Ａ．グルタルアルデヒドはアルデヒド基を一つ持つ

Ｂ．MNA

Ｂ．パラホルムアルデヒドは塩酸を入れて溶解する

Ｃ．DMP-30

Ｃ．四酸化オスミウムはリン脂質などをよく固定する

Ｄ．DDSA
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．タンニン酸は媒染効果がある
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 15．超薄切片の作製について正しいのはどれか．

問７．グルタルアルデヒドと直接混合して用いることができる溶液はどれ

Ａ．ガラスナイフは右端側を使用する

か．

Ｂ．ダイヤモンドナイフの逃げ角は６度程度にする

Ａ．四酸化オスミウム

Ｃ．薄切時にはナイフボートの水は盛り上げるように入れる

Ｂ．タンニン酸

Ｄ．超薄切片の厚さはボート水面に浮かんだ切片の干渉色で判断する
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．過マンガン酸カリウム

問 16．樹脂切片の厚さを干渉色で見たとき，厚い方から順に並んでいる

Ｄ．ホルムアルデヒド
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤのはどれか．

問８．ホルムアルデヒドについて正しいのはどれか．

1．青

紫

金

銀

灰

Ａ．パラホルムアルデヒドは白色の粉末あるいは顆粒状である

2．灰

青

銀

金

紫

Ｂ．グルタルアルデヒドに比べて架橋が安定している

3．紫

青

金

灰

銀

Ｃ．調製した固定液は長期保存できる

4．青

金

紫

銀

灰

Ｄ．グルタルアルデヒドに比べて速やかに組織内へ浸透する

5．金

紫

青

銀

灰

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 17．超薄切片作製時にチャターが起こりやすい原因はどれか．

問９．固定について正しいのはどれか．

Ａ．ナイフの逃げ角が大きすぎる

Ａ．微細形態に大きく影響を与えるのは固定剤を除いた浸透圧である

Ｂ．切削のスピードが遅すぎる（ 1 ）Ｃ．切削面が小さすぎる

問 27．電顕酵素組織化学について正しいのはどれか．

Ｄ．樹脂の重合が不完全である

Ａ．強い酵素活性を得るためには固定を長時間行う

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．ホスファターゼの反応液にはリン酸緩衝液を用いる

問 18．連続切片を一枚のグリッドに多く載物する際，切削面形状で適切

Ｃ．ホスファターゼの反応産物は金属塩を用いて捕捉するなのはどれか．

Ｄ．酵素活性の検出には反応基質液の pH，浸透圧に留意をする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．

2．

3．

4．

5．

問 28．免疫電顕法について正しいのはどれか．

問 19．薄切時に厚い切片と薄い切片が交互に現れる原因はどれか．

Ａ．ホルムアルデヒドによる架橋は可逆的である

Ａ．試料ブロックの締め付けが悪い

Ｂ．LR White 樹脂包埋切片が包埋後免疫染色法に用いられることが多い

Ｂ．照明の角度が悪い

Ｃ．ペルオキシダーゼ標識抗体は通常包埋後免疫染色法に用いる

Ｃ．ナイフが鋭利でない

Ｄ．2.5％グルタルアルデヒドは免疫反応性を高める
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．薄切面がナイフと平行になっていない
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 29．免疫電顕法の包埋前染色法の一次抗体反応はどの手順の後に行う

問 20．飽和酢酸ウラニル水溶液を切片染色に使用する際，正しいのはどのが適当か．

れか．

1．固定

Ａ．溶解度（飽和度）は室温で 20％である

2．ブロッキング

Ｂ．一年前に作製したものは染色性が低下する

3．ペルオキシダーゼ標識二次抗体反応

Ｃ．使用済み染色液は，回収して何度でも使用できる

4．超薄切

Ｄ．シリンジフィルターでろ過すると，試料汚染を防ぐのに有効である

5．電子染色1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 30．免疫電顕法の包埋後染色法の手順について正しいのはどれか．

問 21．鉛染色液について正しいのはどれか．

Ａ．固定

Ａ．クエン酸鉛法で使用される試薬は炭酸鉛とクエン酸ナトリウムである

Ｂ．超薄切片作製

Ｂ．染色時間は通常１～５分程度で行われる

Ｃ．LR White 樹脂包埋

Ｃ．染色時に二酸化炭素と反応して生じた沈殿物は試料汚染の原因になる

Ｄ．免疫反応Ｄ．長期保存には常温が適している

Ｅ．電顕観察1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡＢＣＤＥ

2．ＡＢＤＣＥ

3．ＡＣＢＤＥ問 22．トルイジンブルー染色で試料の中心部分が周辺より薄く染色され4．ＡＣＤＢＥ

5．ＡＤＢＣＥ

6．ＡＤＣＢＥ

た．正しいのはどれか．

問 31．組織の凍結置換固定について正しいのはどれか．

Ａ．周辺部分は固定が良好である

Ａ．氷晶が形成されても膜構造は保存される

Ｂ．脱水が不十分である

Ｂ．凍結置換剤にはアセトンがよく用いられる

Ｃ．エポキシ樹脂の重合が不十分である

Ｃ．凍結置換は１時間程度で十分である

Ｄ．組織片が大きすぎる

Ｄ．凍結置換を行う温度は通常 −80°C である

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 23．準超薄切片を光顕観察する方法について正しいのはどれか．

問 32．フリーズフラクチャー法について正しいのはどれか．

Ａ．切片の厚さは 0.5 μm 程度にする

Ａ．グリセリン処理により生体膜は良く保存される

Ｂ．切片をスライドグラスに圧着する

Ｂ．生体膜の親水基のところで割断される

Ｃ．切片の上にトルイジンブルー染色液を滴下して温める

Ｃ．試料を回転しながら蒸着することがある

Ｄ．染色液を洗い流さずに数秒～数十秒後に観察する

Ｄ．膜の内部構造の観察に適している

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 24．電子線照射による生物試料の損傷を軽減するのに有効な方法はど

問 33．オートラジオグラフィーについて正しいのはどれか．

れか．

Ａ．ラジオアイソトープ（RI）の放射能は時間とともに減少してゼロとな

Ａ．スポットサイズを大きくする

る

Ｂ．加速電圧を上げる

Ｂ．分解能は RI 局在部位と銀粒子との距離をいう

Ｃ．試料に薄くカーボンを蒸着する

Ｃ．3H の半減期は約 60 日である

Ｄ．対物絞りの孔径を大きくする

Ｄ．乳剤の潜像は放射線のイオン化力で形成される

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 25．電顕写真に 0.5 μm を表す長さ 10 mm のスケールバーが入ってい問 34．走査電顕試料の乾燥法について正しいのはどれか．

る．プリント時に２倍に拡大したとすると，撮影時のネガの倍率は何倍

Ａ．臨界点乾燥には液化二酸化炭素の代わりにドライアイスを用いてもよか．

い問 26．酵素と細胞構造の組合せについて正しいのはどれか．

Ｂ．臨界点乾燥法では試料の収縮は起こらない

1．Na+・K+-ATPase

細胞膜

Ｃ．酢酸イソアミルは臨界点乾燥の前処理に用いられる

2．グルコース-6-ホスファターゼ

ゴルジ装置

Ｄ．t-ブチルアルコール乾燥法では脱水操作は不要である

3．チアミンピロホスファターゼ

葉緑体

4．カタラーゼミトコンドリア問 35．走査電子顕微鏡で加速電圧を下げたときに正しいのはどれか．

5．酸性ホスファターゼ

ペルオキシソーム

Ａ．エッジ効果が増加する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ（ 2 ）Ｂ．試料ダメージが軽減する

Ａ．銅グリッドは蒸留水中で保存する

Ｃ．焦点深度が深くなる

Ｂ．メッシュの数字が大きいほど網目が大きい

Ｄ．試料表面の情報が多くなる

Ｃ．切片との接着性を高めるにはグリッドに親水化処理をする

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．支持膜や切片を積極的にグリッド面に接着させるには粘着処理を行う
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 36．正しいのはどれか．
Ａ．電子は磁界の向きと同じ向きの力を受ける

問 45．透過電顕観察での試料汚染防止について正しいのはどれか．

Ｂ．電子は電界の向きと反対向きの力を受ける

Ａ．真空ポンプの油は長期間交換しない

Ｃ．一様な磁界の中に垂直入射した電子は円軌道を描く

Ｂ．電子線を集束して明るくする

Ｄ．一様な電界の中に平行入射した電子は偏向される

Ｃ．試料周辺を冷却する

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．鏡筒内の真空を良くする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

問 37．磁界レンズについて正しいのはどれか．
Ａ．コイル励磁電流を逆転すれば凹レンズが得られる

問 46．倍率１万倍で撮影したフルサイズ（8.2 × 11.8 cm）のネガを３倍Ｂ．狭い領域に強い磁界を形成するためにポールピースを用いるに引き伸ばして焼いた電顕写真について正しいのはどれか．

Ｃ．コイル励磁電流の変動は球面収差の原因となるＡ．試料上で 1 μm の距離は写真上では 3 cm になる

Ｄ．拡大像は軸を中心とする回転を伴っている

Ｂ．コントラストは変化しない

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．面積は３倍になる

問 38．色収差について正しいのはどれか．

Ｄ．ネガ全体を引き伸ばすためには焦点距離 135 mm 以上のレンズを使用

Ａ．厚い試料で像がボケる原因となるする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．低加速電圧の方が影響が少ない
Ｃ．像の回転を発生させる

問 47．デジタル画像について正しいのはどれか．

Ｄ．試料中における電子エネルギー損失が一因となる

Ａ．デジタル画像の最小単位を画素（pixel）という1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｂ．1 cm の中に含まれる画素の数を dpi という

問 39．透過電子顕微鏡の収差について正しいのはどれか．

Ｃ．０と１の２進法で表示されるデジタル信号量の最小単位をビットといＡ．湾曲収差はスティグマトールで補正できる

う

Ｂ．回折収差の影響を防ぐには可能な限り大きな対物絞りを使用する

Ｄ．画像解像度を確認するためのグラフをヒストグラムという

Ｃ．高倍率観察時は歪像収差の影響が大きくなる

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｄ．対物レンズの球面収差は分解能に影響する

問 48．走査電子顕微鏡で対物絞りの孔径を小さくした際の効果について

1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

正しいのはどれか．

問 40．生物切片の透過電顕観察時の操作について正しいのはどれか．

Ａ．分解能が高くなる

Ａ．コントラストを高めるために対物絞りを小さくした

Ｂ．電子線の開き角が小さくなる

Ｂ．電子ビーム照射に伴う試料の損傷を軽減するために加速電圧を下げた

Ｃ．焦点深度が浅くなる

Ｃ．最適なコントラストを得るために対物レンズ電流をジャストフォーカ

Ｄ．レンズ収差が大きくなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤスから少し減少させた

問 49．走査電子顕微鏡の像検出について正しいのはどれか．

Ｄ．試料汚染を防ぐために制限視野絞りを挿入した
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．組成コントラストを得るため二次電子を検出した

問 41．透過電顕像のコントラストについて正しいのはどれか．

Ｂ．チャージアップの影響を軽減するため反射電子を検出した

Ａ．加速電圧を高くすると散乱コントラストが低くなる

Ｃ．試料表面の微細な形状を観察するために反射電子を検出した

Ｂ．対物絞りを小さくすると散乱コントラストが高くなる

Ｄ．エッジコントラストを軽減するため反射電子を検出した
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．位相コントラストは焦点はずれ量に依存しない

問 50．光学顕微鏡について正しいのはどれか

Ｄ．電子染色は散乱コントラストを低くする
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ａ．焦点深度は開口数が大きいほど浅くなる

問 42．走査電顕像のコントラストについて正しいのはどれか．

Ｂ．分解能は開口数が大きいほど高くなる

Ａ．試料組成の違いによりコントラストが生じる

Ｃ．倍率が高くなるほど焦点深度は深くなる

Ｂ．加速電圧を高くするとコントラストが高くなる

Ｄ．アクロマートは湾曲収差補正されたレンズである
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ

Ｃ．作動距離を長くするとコントラストが高くなる
Ｄ．表面の凹凸が大きいほどコントラストが高くなる
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 43．真空ポンプについて正しいのはどれか．
Ａ．油拡散ポンプは油の逆流による試料汚染に注意する
Ｂ．スパッタイオンポンプは大気圧から使用できる
Ｃ．ターボ分子ポンプは全ての気体に対してほぼ同じ排気速度を持っている
Ｄ．ダイアフラムポンプの到達圧力は油回転ポンプより低い
1．ＡとＢ 2．ＡとＣ 3．ＡとＤ 4．ＢとＣ 5．ＢとＤ 6．ＣとＤ
問 44．グリッドについて正しいのはどれか．

（ 3 ）2012 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅰ（生物）12 題の問題のうち，問１～問６は全問解答し，問７～問 12 はその中から４問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

この処方に則って A：B = 5：5 の樹脂を 100 ml 調製する場合，Epon【必須問題】

812，DDSA，MNA の容量は各々どのくらいになるか計算しなさい．また，
問１．（）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．（10 点）加えると樹脂ブロックはどのようになるのか説明しなさい．（10 点）

神 経 細 胞 は 興 奮 を 伝 え る 働 き を す る． 神 経 細 胞 の 核 を 持 つ 部 分 を（１ ）とよび，その周りからは２種類の神経突起が出ている．一つは

（

２

問５．（

１

）から一本だけ出ている（

３

）であ

る．
３

）の周りに（髄 神 経 線 維 と，（

４

） を 持 た な い 無 髄 神 経 線 維 が 存 在 す る． こ の４）は末梢神経系では（６

ぎれている部分を（５４）という絶縁体を持つ有）によって作られる．（）とよび，この部分を介して（４７８）とよび，（８側（興奮を伝える側）の神経終末には神経伝達物質を含んだ（

Ｄ．ランヴィエ絞輪
Ｈ．シナプス小胞Ｅ．軸索Ｊ．シュワン細胞

ステン酸，あるいは（胞膜レプリカから界面活性剤である（

）前膜
９

）が

６

）

）で膜外成分を除去して，免９）や（10 ）の分布を検出することができる．

Ｇ．アセチルコリン

Ａ．凍結置換固定法

Ｂ．凍結割断法

Ｄ．凍結超薄切片法

Ｅ．質量分析

Ｈ．トレハロース
Ｌ．オスミウム

Ｋ．跳躍伝導

Ｃ．凍結エッチング法
Ｆ．元素分析

Ｊ．ポリビニルアルコール

Ｑ．電子染色Ｍ．酢酸ウラニル

Ｇ．免疫電顕法

Ｋ．タンニン酸

Ｎ．脱水

Ｐ．重合

Ｓ．トリトン X-100 Ｔ．SDS

Ｒ．包埋

それぞれについて説明しなさい．（10 点）

問６．凍結技法について（

Ｗ．脂質

Ｘ．構造
）の中にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．（10 点））にあてはまる最も適切な語句を語群

冷却速度を速くするためには，極低温の冷媒が必要である．冷媒には液
体（

１

）
，液体（

は，（

３

）と融点の差が小さいと試料冷却時に冷媒が試料で暖められ）と，試料を液体窒素で凍結し形態や構成成分の移動・変形て（４）となる．試料周囲の（２

却速度を低下させる．そこで（

３がよいことになる．液体（）は，この温度差が小さく適さないが，を防ぐ（）がある．また走査電子顕微鏡で生物試料の内部構造を観察する方法として用いられるオスミウム―DMSO―オスミウム法は
）四酸化

液体（

オスミウム固定，②緩衝液による洗浄，③ 25％と 50％の DMSO 処理，④

【語群】

３ ）の観察法として知られている．この方法は①（

液体窒素温度で試料を（
７

５

），⑤（

６

４

１

２

）四酸化オスミウムに浸漬

Ａ．凝固点

Ｂ．大きい

Ｆ．小さい

Ｇ．窒素

ムが膜成分の（８）を固定する一方で，蛋白質を（を併せ持つことを利用している．（

５

）後に（

９

Ｍ．固体

）する性質

10 ）等を溶出し，）を残す方法である．

【語群】
Ａ．細胞小器官

Ｂ．浸軟処理Ｆ．0.5％

Ｇ．重合

Ｍ．消化

Ｎ．糖脂質

Ｓ．物理固定Ｃ．凍結割断Ｈ．化学固定Ｐ．細胞間質Ｔ．リン脂質

Ｄ．１％

Ｅ．核

Ｋ．２％

Ｌ．破壊

Ｊ．0.1％

Ｑ．氷包埋

Ｕ．細胞質基質

Ｒ．飽和脂肪酸

Ｗ．結合組織問４．エポキシ樹脂の調製は通常 Luft の処方で行う．エポキシ当量が 150の場合の Luft の処方は以下の通りである．
Ａ液：Epon 812

71 ml

DDSA

100 ml

Ｂ液：Epon 812

100 ml

MNA

78 ml

（ 4 ）

），液体ヘリウムなどがある．浸漬法の場合

２

４）は熱伝導率が極めて悪く，冷）と融点の温度差が（ ５）冷媒）は一般的によく使用される．

），その後，脱水，置換（t-ブチルアルコール等）の通常の手順で走査電子顕微鏡の試料作製を行う．この方法では，四酸化オスミウ

３）で処理して，（【語群】

試料作製法には，細胞・組織を固定剤を用いて構造や形態を安定化す（

８

疫反応を行う．これにより，細胞膜の（Ｕ．タンパク質して（５）処理凍結割断レプリカ法では，白金とカーボン蒸着による細アルデヒド系固定液で浸漬固定する際に注意すべき点を５つあげ，

１

）を含む（

８

より選び，記号で答えなさい．（10 点）

（

４

（

問３．以下の文章は，走査電子顕微鏡を使用して生物試料の内部構造を観る（）などに広く応用されている．

）が行わ

問２．透過電子顕微鏡下での形態観察を目的として，一般的な動物組織を察する方法である．（

３）は，抗体と反応させた後の切片をリンタング）を同時に行う．

Ｃ．細胞体

Ｆ．樹状突起３７【語群】
Ａ．髄鞘（ミエリン鞘） Ｂ．シナプス

２ ）や金コロイドを用いた（

徳安法と呼ばれる（と（10 ）などが知られている．

多数存在する．この神経伝達物質には（）とは，試料を凍結したまま薄切し，電顕観察用の超薄切片）のとれるために，有髄神経線維は無髄神経線維と比べて伝導速度が速い．
神経細胞同士で興奮を伝える部分を（１を作製する方法である．組織内の金属やイオンの分布を明らかにする（

神経線維には（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．（10 点）（）と言われるもので，多極性の神経細胞ではこの突起をたくさん持っている．もう一つは（（DMP-30 は全容量に対して何％加えればよいか，さらに DMP-30 を過剰にＮ．液体

Ｃ．プロパン

Ｄ．融点

Ｊ．酸素

Ｈ．沸点
Ｐ．アセトン

Ｅ．速い

Ｋ．遅い

Ｌ．気体

【選択問題】
問７．走査電子顕微鏡で細胞内部を観察する方法として種々の方法が考案されている．写真は肝細胞の内部構造を観察したものである．各設
問に答えなさい．
（10 点）

１）下図のＡと矢印の名称を記入しなさい．
１）写真を得るための試料作製法名を述べなさい．

２）電顕像からこの組織の特徴や性状を推測し，200 字以内で述べなさい．

２）Ａ，Ｂ，Ｃで示した記号の構造名称と機能を述べなさい．

問 10．電顕観察用に試料を凍結する方法として，植物では金属圧着法よ３）方法の特徴を３つ述べなさい．

りも高圧（加圧）凍結法がよく使用される．これは，植物細胞の構問８．写真は免疫電顕法（包埋前染色法）で，ある組織の細胞の表面抗原

造的な理由から，金属圧着法では動物組織に比べ良好な凍結領域がを観察したものである．切片はクエン酸鉛で単染色してある．矢印は陽性部位を示す．スケールバーは 1 μm である．（10 点）

狭くなっているためと考えられている．（10 点）
１）この凍結に障害となっている植物独特の細胞構造は何か．
２）なぜ，植物組織では，金属圧着法ではうまく凍結されないことが多いのか．その理由を１）の構造と関連して述べなさい．
問 11．写真（ａ）は，グルタルアルデヒドと四酸化オスミウムによる化
学固定，写真（ｂ）は，グルタルアルデヒド固定後に，四酸化オス
ミウム・アセトンによる急速凍結置換固定を行った微生物の超薄切片像である．各設問に答えなさい．（10 点）１）構造１，２がみられた．これらの構造はそれぞれ何か．
２）この免疫電顕法で反応産物の可視化に使われているものはどれか．次のＡ～Ｅより選びなさい．
（J. Electron. Microsc. 60: 283–287, 2011 より）（Ａ．生じたリン酸を鉛イオンで捕捉して不溶性のリン酸鉛を観察している．

１）写真（ｂ）は，写真（ａ）と比べて，どのような特徴があるか．細胞

Ｂ．コロイド金標識二次抗体を使用して金粒子を観察している．

の形態，膜（OM：外膜，M：膜）の形態，および細胞質（C）の構

Ｃ．使用した抗体タンパク質の電子密度が高いので，これを観察している．

造に留意して答えなさい．
２）グルタルアルデヒド固定後に，急速凍結置換固定を行うのは，どのよ

Ｄ．DABと四酸化オスミウムによるオスミウム・ブラックを観察している．

うな場合に有用であるか．例を二つあげて説明しなさい．
問 12．写真はある細菌の固形培地上のコロニーを走査電顕で観察した際

Ｅ．あらかじめ入れてあるルテニウムレッドを観察している．
３）切片を酢酸ウラニル・クエン酸鉛の二重染色ではなく鉛の単染色にした理由は何か．

に見られたコード形成と呼ばれる特異形態の拡大像である．この菌はバイオセーフティーレベル３領域での取り扱いが義務付けられて

問９．写真はある植物組織の低倍率（上図）と高倍率（下図）の透過電いる慢性呼吸器疾患の原因菌であり，写真はこの細菌の ATCC 標

顕像である．各設問に答えなさい．スケールバーは 50 μm（上図），

準株（全薬剤感受性）を約４週間培養して得られたものである．各1 μm（下図）を示している．（10 点）設問に答えなさい．（10 点）（ 5 ）１）この細菌を下記の語群より選択しなさい．
【語群】
Ａ．アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus（
fumigatus）
Ｂ．クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella（pneumoniae）
Ｃ．結核菌（Mycobacterium（
tuberculosis）
Ｄ．肺炎マイコプラズマ（Mycoplasma（
pneumoniae）
Ｅ．ヘモフィルス-インフルエンザ菌（Haemophilus（
influenzae）
２）このような走査電顕像を得るために用いられる固定から観察までの一
般的なサンプル処理方法を，各段階におけるバイオセーフティーに関する注意点（実験室設備等）を含めて順序立てて箇条書きで具体的に述べなさい．

（ 6 ）2012 年度日本顕微鏡学会電子顕微鏡技術認定試験問題一級技士Ⅱ（鏡体・共通技術）
12 題の問題のうち，問１～問７は全問解答し，問８～問 12 はその中から３問を選んで解答しなさい．なお，選択しなかった問の解答欄には，大きく×印を記入しなさい．

図１は銅薄膜の結晶サイズと分散を観察した例である．このような写真【必須問題】

は一般に（
問１．電子が試料を通過する時，試料構成原子と入射電子との相互作用

１）視野像と呼ばれ（

２

）な（

３

により，試料を構成する元素の種類や状態を知る手掛かりとなる

図２は図１と同一視野のある結晶面を選択的に光らせて撮影した例であ

様々な情報を持つ信号が生じる．それらの信号に関する以下の設問

る．このような写真は一般に（の答えとして最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．

面に対応する（（10 点）

２は（６）コントラストであり，試料で（子を（３）絞りで遮ることにより形成される．

１）電子エネルギー損失分光分析に利用される信号は何か．

５のような写真は一般に（３）固有のエネルギーを持つ電磁波として放出され，元素分析に利用され

４

）を（

３

）視野像と呼ばれ，光らせたい結晶）絞りで選択して結像する．図１と図６），（７ ）した電図３は単結晶 Si を高倍率で観察したものであり格子が写っている．こ

２）試料のごく表面から放出され構成元素の分析に利用される信号は何か．

）絞りを使うことでコントラストが向上する．

子が（

９

８

）像と呼ばれ，試料上で（

７

）した電

10 ）コントラストで形成される．

）して生じた（る信号は何か．
４）エネルギー変化を伴わずに進行方向を変えて放出される信号は何か．
５）蛍光情報に基づく信号は何か．
【語群】
Ａ．透過電子Ｂ．トンネル電流

Ｄ．オージェ電子

Ｅ．特性Ｘ線

Ｈ．カソードルミネッセンス

Ｃ．弾性散乱電子
Ｆ．非弾性散乱電子

Ｊ．二次電子

Ｇ．反射電子

Ｋ．赤外線

問２．電子レンズの収差について各設問に答えなさい．（10 点）

図１

図２

図３

１）ザイデルの５収差を語群より選び，記号で答えなさい．
２）電子顕微鏡の分解能を決める収差三つを語群より選び，記号で答えな
さい．

【語群】
Ａ．明

Ｂ．暗

３）透過電子顕微鏡で色収差を軽減する方法を二つ述べなさい．

Ｇ．制限視野【語群】

Ｍ．位相

Ａ．回折収差Ｅ．色収差

Ｂ．球面収差Ｆ．コマ収差Ｃ．歪像収差Ｄ．わん曲収差問５．（

Ｇ．非点収差

Ｃ．小さ

Ｄ．大き

Ｊ．広視野

Ｈ．高分解能Ｎ．干渉

Ｅ．コンデンサー

Ｐ．回折

Ｋ．散乱

Ｆ．対物

Ｌ．吸収

Ｑ．回折斑点）にあてはまる最も適切な語句を語群から選び，記号で答えなさい．（10 点）

問３．反射電子像は図に示すように，試料の上方に設置した二個の半導体

（

１

）は（

２

）型のポンプであり，（３）の状態から使用で検出器 A，B で反射電子を検出することで得られる．チャート左はき，粗排気用のポンプとして利用される．回転子が毎分千数百回転の回転

組成によって検出される反射電子像のシグナルを，またチャート右を行うことで，気体の吸入，圧縮，排出の工程が繰り返し行われることには試料断面形状の違いによって検出される反射電子像のシグナルを

よって真空室内からガスを排気する．

示している．図に A と B を加算したとき（A + B）と減算したとき（（A − B）のシグナルをチャートの各枠内に書き込み，それぞれど機構によって往復させる圧縮機で，オイルフリーのポンプである．医療のような像が得られるかを述べ，理由を説明しなさい．（10 点）用，分析器用などの補助ポンプとして利用される．

４

（

５

）は（

２

）型のポンプであり，横隔膜や振動板をクランク）は 1 Pa 程度の真空状態から使用される（で，粗排気ポンプと組み合わせて使用される．（

２）型のポンプ

６ ）でポンプ内にある油を加熱して蒸発させ，それを狭いノズルから超音速で噴出させる．吸入口の近くにある気体は，このジェット噴流に巻き込まれて下方に押しやられて排気口から排出される．
（

７）は，高速で回転している動翼の面に衝突した気体分子に，特定の方向の運動量を与えることで，気体分子を（空を作り出す（２３）側に輸送して真）型のポンプである．粗排気ポンプと組み合わせて使用され，到達圧力は形式により 10−6 ～ 10−8 Pa である．すべての気体に対してほぼ同じ排気速度で排気できるという特徴をもつ．
（（
問 ４． 以 下 は 透 過 電 子 顕 微 鏡 の コ ン ト ラ ス ト に 関 す る 説 明 で あ る．
（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答

８ ） は， 化 学 的 活 性 を 持 つ 金 属 の ゲ ッ タ ー 作 用 を 利 用 し た
９）型の真空ポンプである．（

３）からは使用せず，動作圧力は（ 10 ）電子銃やショットキー型電子銃
10−3 から 10−8 Pa 程度である．
を利用した電子顕微鏡に不可欠なポンプである．

えなさい．（10 点）

（ 7 ）

【語群】
Ａ．油回転ポンプ
Ｅ．熱電子型

Ｂ．低圧

Ｃ．ヒーター

Ｆ．スパッタイオンポンプ

Ｊ．油拡散ポンプ

Ｋ．モーターＮ．ターボ分子ポンプ

Ｄ．ダイアフラムポンプ
Ｇ．大気圧

Ｌ．電界放出型

Ｐ．クライオポンプ

Ｈ．開放

Ｍ．非開放

Ｑ．オイル

問６．以下の設問に答えなさい．（10 点）
１）タングステン線に蒸着用金属を巻き付けて，タングステン線に電流を流して加熱することで，金属を蒸着する方法がよく使われる．電流を

図１

図２

図３

流して抵抗加熱する金属としてタングステンが用いられるのはどのような性質によるものか，性質を二つ記しなさい．また，この方法で蒸着できる金属を三つ記しなさい．

Ａ．デバイ―シェラー

２）有機・生物試料の走査電顕観察では，試料への導電性付与のために金

Ｄ．多

Ｅ．結像

Ｊ．制限視野Ｋ．対物

Ｌ．拡大

問９．電子顕微鏡の保守に関する以下の設問の答えを解答欄に記しなさ）に当てはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答
１） か ら 放 出 さ れ た 電 子 を（）で細く絞って得られた電子線を（

４

２

）と

）を用いて二次元的に試料表面を走査する．真空中で電子線を物体（試料）表面に照射すると，電子と試料の（５ ）により，（

陰極線蛍光などが発生する．（
７

い．（10 点）

６

６ ），（

７

），特性 X 線，）は試料表面の微細構造観察に，

２）対物絞りに付着した汚れを除去する方法を簡単に記しなさい．
３）O リングが傷ついた時には装置にどのような影響が出るか．
４）有機溶剤を使用する際の注意点は何か．
５）油回転ポンプのオイルは何を目安にして補充すればよいか．
問 10．透過電顕観察において電子線照射の試料への影響を述べた文であ）は試料の組成コントラストの観察に用いられる．一般的に走査る．（

電子顕微鏡は，10−4 ～ 10−5 Pa 程度の高真空で観察することから，水分を８）が開発され製品化されている．本装置を用いると，チャージ

アップが軽減されるメリットがあることから，（

９）観察が可能であ）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．（10 点）
試料に電子線を照射することにより電子線の（含む試料は乾燥が必要である．しかし近年，含水試料をそのまま観察できる（

Ｎ．電子線波長１）対物絞りが汚れた時には拡大像にどのような影響が出るか．

走 査 電 子 顕 微 鏡 は，（
３

Ｍ．縮小

Ｃ．単

Ｈ．結晶面間隔

ティング方法を二つ記しなさい．
えなさい．（10 点）（

Ｂ．フレネルＧ．カメラ長Ｆ．後焦点

属コーティングがよく行われる．使用される金属の種類を三種とコー
問７．（

（

【語群】

に与えられ，試料の（２る．この変化の中には，原子や分子の（る．また，含水試料の観察では，試料温度を下げて水の（ 10 ）を試

高分子の（料室の飽和蒸気圧力に近づけることで，観察中の水の蒸発を抑制できる．

有機・生物系試料のように主として（【語群】

６ ）あるいは（４

Ｂ．二次電子

Ｄ．電子ビーム

Ｅ．蒸気圧

Ｈ．電子銃

Ｃ．コンデンサレンズ

Ｆ．焦点合わせＪ．低真空型走査電子顕微鏡

Ｌ．偏向コイル

Ｍ．対物レンズ（

Ｇ．反射電子）の原因とな５），７ ）が含まれる．このような変化は８）で構成されている試料で９）を弱くしたり，

10 ）を短くしたりするなどの方法がある．

【語群】
Ａ．分解・ガス化

Ｋ．無蒸着

Ｎ．コントラスト３），化学結合の（は受けやすい．この変化を少なくするには（

Ａ．試料前処理１ ）の一部が試料）に変化をもたらし，（Ｐ．相互作用

Ｅ．切断

Ｂ．軽元素

Ｆ．イオン化

Ｋ．電子線損傷

Ｃ．照射強度Ｇ．重元素

Ｌ．照射時間Ｄ．エネルギー

Ｈ．低分子量化

Ｍ．試料汚染Ｊ．構造

Ｎ．再結晶化問 11．分析電子顕微鏡について各設問に答えなさい．（10 点）１）特性 X 線でわかる情報を述べなさい．

【選択問題】

２）特性 X 線で分析する手法を二つ述べなさい．
問８．以下は電子線回折に関する説明である．
（）にあてはまる最図１は（１）リングと呼ばれ（パターンである．図２は（３ある．これらは対物レンズの（でフィルム面上に（
から（

５

２

）結晶試料から得られる回折４

ることにより（７５）率は試料面）を求めることができ，その公式には一般に下式が用いられる．
R ×（

試料で反射され対物レンズを通った光に対して，（

８ ）× L（R, L は図３を参照）

電子線回折を行うには（

９

を（

２

）という．これまでの光学顕微鏡では（しまうのに対して，この方法では試料内の（（x-y 面上）を（）絞りで試料を選択するが，この絞りは対10 ）面に挿入される．

１）が合う位置にピンホールを置いて，それ以外の位置からの光を排除する仕組みのこと１３５）の像も見えて）が合った面内の像しか観察できない．この原理を応用し，明るい（７ ）=（物レンズの（装置の名称を述べなさい．（10 点））面に結像されたものを電子レンズ）したものであり，その（）にあてはまる最も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．またこの文章はどのような装置について述べたものか，）結晶試料から得られる回折パターンで）L だけ離れた面に結像されたものに相当する．間隔 R を測

６３）２）の手法の特徴を簡単に述べなさい．
問 12．（も適切な語句を語群より選び，記号で答えなさい．（10 点）

４）光で試料面上）して一枚の像を得る装置が開発された．この像は観察対象のある深さ位置の（６）像になる．その像を順次（方向に重ね合わせることで，対象物の立体構造が得られる．（

７ ）

８

れた試料の観察に威力を発揮している．
【語群】
Ａ．断層

Ｂ．x

Ｇ．堆積

Ｈ．走査

Ｍ．光源

Ｎ．対物絞り（ 8 ）Ｃ．y

Ｄ．z Ｅ．焦点はずれ

Ｊ．レーザー
Ｐ．鏡面

Ｋ．共焦点

Ｆ．焦点
Ｌ．ギムザ染色Ｑ．蛍光標識）さ