NBRP	  Zebraﬁsh	  	  News	  Le0er	  	  	  March	  2016	
平素は格別のご高配を賜り、厚く御礼申し上げます。	
ナショナルバイオリソースプロジェクト（NBRP）・ゼブラフィッシュの活動にご協力いただき、有り難うございます。代表機関である理化学研究所・脳科学総合研究センターからニュースレターを配信いたします。ご活用いただければ嬉しく存じます。	
NBRPゼブラフィッシュ第3期に突入してから4年が経過しようとしています。着実に規模を広げ、リソースとして国内外からの寄託・分譲依頼件数もますます増加しております。	
今後ともご協力のほど宜しくお願い申し上げます。	
利用者の声	
新たに研究室を立ち上げられました平田普三先生と小林功先生に、ゼブラフィッシュ研究にまつわるお話とNBRPゼブラフィッシュに関するお声をいただきました。	
平田 普三 先生	
青山学院大学理工学部化学・生命科学科	
hihirata@chem.aoyama.ac.jp	
http://researchmap.jp/hihirata/ 	
青山学院大学と聞けば、おしゃれ、都会的、アナウンサーを輩出するなど、スタイリッシュなイメージをお持ちの方が多いかもしれません。実際に大学キャンパスは景観にすぐれ、学食は美味、学生はさわやかで社交性が高く、また駅伝チームは注目を集めるなど、華やか	なイメージはおおむね正しいと言えるでしょう。	
青山学院大学は明治時代初期に米国人宣教師が設立したミッションスクールを源流とし、1949年に開学し 研究室の創立メンバー	た私立大学です。キリスト教信仰に基づく教育を校是 左から６人目が筆者。一番左は荻野一豊助教。	  とし、キャンパス内のチャペルでは毎日礼拝が行われ 筆者の右隣は共同研究者で招聘研究員のショーン・ロー博士 	ているそうです。青山という名の通り、東京都渋谷区	の青山地区にメインキャンパスがあり、ここに文系学部が居を構え、華やかな大学イメージを形成しています。私も着任する1年前まで、青山学院大学は文系の大学だと思っていましたが、実は理工学部があり、私の研究室は神奈川県相模原市の理系キャンパスにあります。理工学部には物理•数理、化学•生命科学、電気電子工学、機械創造工学、経営システム工学、情報テクノロジーの6学科があり、私が所属する化学•生命科学科には13の研究室があり、化学と生命科学を融合した研究・教育を行っています。本学科の学部生は1学年百余名で、6割が学部卒で就職する一方、3割が大学院に内部進学し、1割が外部の大学院に進学します。蛇足ですが、研究者を志望して外部の大学院への進学を検討する学生は少なからずいるものの、情報不足やちょっとした行き違いで実現につながらないケースもあるようです。このニュースレターを学内の人に読まれると干されること確実ですが、外部から大学院生を受け入れたい大学•研究所の説明会や体験入学の情報があれば、積極的に教えていただけれ	ばと思います。	
大学の紹介はここまでにして、研究について話しましょう。生物を動物と植物に分類したのは古代ギリシアの哲学者アリストテレス（BC384-322）で、感覚と運動能をもつ、すなわち外部からの刺激に応答して動くものを動物、動かないものを植物と定義しました。現代では細菌を含めて生物は真正細菌、	古細菌、真核生物（動物も植物もここに含まれる）に分類されますが、動物、植物という概念は今も変わっていません。アリストテレスの時代から2,000年以上にわたり、動物の動きは子供から大人まで多くの人を魅了してきました。私もその例にもれず、子供の頃から生き物が好きで、虫を捕まえてはその動きを飽きることなく見ていました。昆虫少年の興味は色あせることなく、むしろ高じて、動物はどのように運動能力を形成し、また状況に応じて変化させるのかをどうしても知りたいと思うようになりました。	
私は2003年に米国ミシガン大学のジョン・クワダ教授の研究室に留学して、ゼブラフィッシュを用いた遺伝学的アプローチで神経系と筋で構成される運動システムの研究をはじめました。留学後は名古屋大学理学部の小田洋一教授の下で助手・助教として5年間、運動システム形成の分子基盤解明を進め、運動システムは胚期に遺伝的プログラムにより形成された後、生後の訓練や環境の変化により変化しうることを見出しました。国立遺伝学研究所で准教授の職を得て、グリシン作動性シナプスを後天的に操作する研究を行い、動物の動きを改変する実験にも成功しました。2015年4月に青山学院大学に着任してからも、遺伝的プログラムと後天的変化、つまり運動システムの「氏」と「育ち」の解明を続け、また老化にともなう運動システムの衰退も研究し、運動の生命科学というべき新たな生物学の地平を拓きたいと考えています。私たちの研究は運動に関する基礎研究ですが、脊髄性筋萎縮症や乳児てんかんなどヒトの運動障害の原因遺伝子解明に発展したプロジェクトもあり、臨床研究への貢献を通してゼブラフィッシュがヒトの疾患モデルとして有用であることを再認識することになりまし	た。	
ゼブラフィッシュを実験材料とする研究では、ゼブラフィッシュを飼育し、卵を産ませ、稚魚を育てます。また、国立遺伝学研究所の川上浩一さんが開発したTol2トランスポゾンを用いて外来遺伝子を組み込んだトランスジェニック個体を作製したり、CRISPR/Cas9法によるゲノム編集で変異体を作製したりと、新しい系統の作製が欠かせません。ゼブラフィッシュの飼育においては水質が重要で、もちろん塩素を除き、pHや電気伝導度（ミネラル量）等を確認した良質の水で飼育するのですが、実際には地域による水の良し悪しや季節による水の変化にも左右されます。水質検査値からは良質と思われる水でも、卵を産まなくなったり、稚魚が育たなくなったりする原因不明のトラブルもあります。私は異動で研究機関を移るたびに、新しい飼育室を作り、50系統のゼブラフィッシュを引越しさせてきました。
引越しで懸念されるのは水のトラブルにともなう自作系統の喪失であり、大事な系統が絶えると研究が一からやり直しになったり、過去の実験を再現できなくなったりすることも起こりえます。このトラブルを回避するにはゼブラフィッシュの系統保存センターが必要で、ありがたいことにNBRP Zebrafishがこれを行ってくれています。私は異動のたびにNBRP Zebrafishに自作のゼブラフィッシュ系統を寄託して精子を凍結保存してもらい、今に至るまで確実に系統を維持することができています。この場を借りて御礼を申し上げるとともに、今後も有用な系統の収集と提供を継続してもらえるようお願いした	いです。	
小林 功 先生	
金沢大学 理工研究域 自然システム学系	
幹細胞発生学研究室 	
ikobayashi@se.kanazawa-u.ac.jp	
多分化能と自己複製能を併せ持つ幹細胞は再生医療への応用が期待され、近年世界中で盛んに研究が進められています。幹細胞の中でも最も古くか
ら研究されてきたのが血液細胞の源である造血幹細胞です。全ての種類の血液細胞を生涯にわたって供給し続けられるという特徴から、造血幹細胞は骨髄移植という形で既に臨床の現場でも応用されており、白血病や再生不良性貧血といった様々な難治性血液疾患に対する治療に用いられてきました。しかしながら、骨髄移植におけるドナー不足や	移植後の免疫拒絶は依然として深刻な問題として残っています。2007年にヒトで人工多能性幹細胞（iPS細胞）が樹立されて以来、患者さんの細胞から作製したiPS細胞を用いる “自家移植”という	新たな移植医療への期待が高まっています。細胞の初期化（リプログラム）によって作製されたiPS細胞は、全ての細胞へ分化可能な受精卵のような特徴を持っており、iPS細胞から造血幹細胞を作出するには胚発生期における造血幹細胞の発生過程を生体外で忠実に再現する必要があると考えられています。そのため、現在多くの研究者が造血幹細胞の発生機構を分子レベルで解明する研究に取り組んでいます。また、作製した造血幹細胞を生体外で維持・増殖させるには、生体内の造血環境を生体外で再現し、それをコントロールする必要があります。こうした背景を基に、私たちの研究室
ではゼブラフィッシュを実験モデルとして、造血幹細胞の発生および維持機構の解明に取り組んでい	ます。 	
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ゼブラフィッシュはヒトと高い保存性を有する脊椎動物でありながら、体外発生を行い、胚が透%!
明であるため、特定の細胞を可視化することで、その細胞の動態を追跡しやすいという利点があ% !
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ります。実際、胚発生期において造血幹細胞が出現する様子は、トランスジェニックゼブラフィッ !
シュを用いたライブイメージングによって捉えら% >876?!
れており、背側大動脈の腹側壁から造血幹細胞5:<9374;- >"# ?!
が“出芽”することによって出現することが明らか!
% !になっています（Bertrand et al., Nature. 2010;
Kissa et al., Nature. 2010）。一方、興味深いことに、ゼブラフィッシュを含む硬骨魚類は成体においても骨髄組織を持たず、造血システムは腎臓内で維持されていることが知られています。造血-&$,.)+
幹細胞を取り巻く造血環境からは、造血系細胞
'-% *#/
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021(!
!の増殖や分化に関わる様々な造血因子が産生	されており、近年の研究からゼブラフィッシュにおいても多くの造血因子が保存されていることが分かっています。しかしながら、哺乳類と魚類の造血環境に目を向けてみると、骨髄と腎臓とで造血組織の構造が全く異なることが分かります。魚類は哺乳類の祖先形質を有するため、脊椎動物は進化の過程で、造血組織を腎臓から骨髄へ移動させたと考えられます。つまり、魚類の腎臓造血は哺乳類の骨髄造血の“原型”であると言えます。この原型である腎臓造血を詳細に解析することで、造血機構の本質的な理解につながる可能性があります。このように、私たちの研究室では、ゼブラフィッ
シュの利点や特徴を活かし、①造血幹細胞がどのようなメカニズムで発生し、②腎臓内でどのような制御を受けているのか、という2つの点に焦点を絞り、細胞レベルおよび分子レベルで明らか	にすることを目指しています。	
私は2015年11月より、現職の金沢大学にて新たに研究室の立ち上げを行いました。金沢大学ではゼブラフィッシュなどの魚類を飼育する施設がなかったため、研究室だけでなく、飼育施設の立ち上げも任されていました。私はそれまでカリフォルニア大学サンディエゴ校（UCSD）でポスドクとして働いていたため、金沢大学で研究に使用する多くのゼブラフィッシュ系統（トランスジェニックおよび遺伝子変異体）をアメリカより持ち込む必要がありました。陸上生活のマウスなどとは異なり、熱帯魚であるゼブラフィッシュは常に水温を25−29℃程度に保ち、充分な酸素を供給する必要があるため、成魚として海外から持ち出すことは難しく、温度や環境の変化に強い胚の状態で輸送するのが一般的です。
しかし、せっかく育てた魚を、全て胚の状態にして日本へ送ることは、研究の遅れにもつながってしまいます。そこで今回、ゼブラフィッシュの太平洋横断の引越しに、理化学研究所・脳科学総合研究センターの岡本仁先生と石岡亜季子さんのご協力をいただきました。まず、私がUCSDにいる間に、必要な系統を全て胚の状態で理化学研究所へ送り、研究所内の飼育スペースにて飼育していただきました。その間に、私自身の引越しと、大学内での飼育施設と実験室の立ち上げ、および動物実験や遺伝子組換え実験に関わる手続きを済ませました。その後、胚として送った魚達を理化学研究所から郵送していただいたところ、大きく成長し、繁殖が可能な成魚の状態で届きました。サンディエゴから金沢への引越しであったにも関わらず、研究のブランクはわずかに3ヶ月程度であったことを考えると、理化学研究所のご協力が如何に大きかったことが分かります。岡本先生と石岡さんにはこの場を	借りて厚く御礼申し上げます。	
 "!!

新着系統	
リソースとして新たに公開されました系統の一部をご紹介いたします。ウェブサイト（http://shigen.nig.ac.jp/zebra/index.html）から系統をオーダー可能ですので、ぜひお立ち寄りください。 	

寄託募集	

系統名	Allele	
寄託者	
寄託機関	
six7	
ja51	
six7	ja52	
six3b	ja53	
深田吉孝	
東京大学	
six7	ja54	
six3b	ja55	
Tg(-3.2gnat2:EGFP)	
ja23	
Tg(6xNFkBBS-miniP:d2EGFP-F)	 isi10	Tg(6xNFkBBS-miniP:d2EGFP-A)	 isi11	
石谷太	
九州大学	
nlk2 TALEN-A	
isi12	
nlk2 TALEN-B	
isi13	
Tg(gfap:Gal4FF)	
wa32	
大島登志男	 早稲田大学	
Tg (nestin:EGFP)	
Tol-026	
武田洋幸	
東京大学	
Tg(hsp:sema3famt)	
js6	
東海林亙	
東北大学	
Tg(aldoca:gap43-Venus)	
rk22Tg	Tg(aldoca:gap43-mCherry)	
nub5Tg	Tg(aldoca:GFF); Tg(UAS:GFP)	
nub6Tg	
日比正彦	
名古屋大学	
Tg(-0.5zp3b:Mmu.Mapre1-GFP)	 nub1Tg	
Tg(-0.5zp3b:GFP-Has.TUBA1B)	 nub7	
wnt8a	
ORF1ORF2-3/+	Tg(myl7:Kaede)	
ai1Tg	
大石勲	
産業技術総合研究所	
Tg(fli1a:Myr-mCherry)	
ncv1Tg	Tg(fli1a:Myr-GFP)	
ncv2Tg	望月直樹	
国立循環器病研究センター	
Tg(kdrl:mVenus-gmnn)	
ncv3Tg	
順不同	
Tg(kdrl:NLS-mCherry)	
ncv5Tg	-あなたも寄託をしませんか ‒	
理化学研究所脳科学総合研究センターは、ゼブラフィッシュ系統保存の代表機関であり、20万尾収容できる施設を設けております。外部研究機関からの系統の寄託受け入れを進んで行なっております
ので、遠慮をせずにぜひ寄託をしてください。寄託する際、寄託者の知的財産権は保護されます。 	
-凍結精子保存が可能です ‒ 	
凍結精子保存は系統のバックアップに最適です。魚をお送り頂けましたら、こちら速やかに処理しサンプルを保存致します。処理する魚の条件は、若く健康な雄魚5匹を目安としております。5匹から人工授精45回分のサンプルが確保できる計算です。	
凍結精子サンプルは理化学研究所脳科学総合研究センターと基礎生物学研究所で相互バックアップ保存することにより災害対策をしており、「預けて安心!」です。	
臨機応変に対応させていただきますので、お気軽にご相談ください。お待ちしております。	
実施機関	
NBRPゼブラフィッシュは下記の3機関で実施しております。	
- 代表機関 -	
国立研究開発法人 理化学研究所・脳科学総合研究センター	
代表者 岡本 仁	
ニュースレターに関する連絡先：	
- 分担機関 -	
理化学研究所・脳科学総合研究センター	
大学共同利用機関法人 情報・システム研究機構	
代表者 川上 浩一	
発生遺伝子制御チーム	
岡本仁 (hitoshi@brain.riken.jp)	
- 分担機関 -	
大学共同利用機関法人 自然科学研究機構	
〒351-0198 埼玉県和光市広沢2-1	
Phone:048-467-9712 Fax:048-467-9714	
代表者 東島 眞一