第38回動物⽣殖⼯学研究会
SARB : SOCIETY OF ANIMAL REPRODUCTIVE BIOTECHNOLOGY

令和元年１１⽉２３⽇（祝）北⾥⼤学⽩⾦キャンパス
プラチナタワー １２階 会議室

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バイオバブルクリーンルームは、米国空軍とNASAの素材を採用し、耐久性に優れ、軽量・容易にメンテナンスやクリーニングを行うことができ、設置スペース
や環境に最適なクリーンルームを実現できる画期的な装置です。
自立設置できるフリースタンディングタイプと既存の建物を利用するリノベー
ションタイプの２種類を御提供いたしておりますので、お気軽にご相談下さい。

販売元
日本クレア株式会社
東京器材部 TEL:03-5704-7600
大阪器材部 TEL:06-4861-7105

輸入元株式会社 野村事務所〒105-003 東京都港区西新宿1-2-9

Stage 14 Chick Embryo
Original drawing by Hayashi & Tajima

cited in J. Poultry Scinece 50:1-8,2013
ウシ７⽇⽬体外受精卵（国研）農業・⾷品産業技術総合研究機構

イヌ

胚盤胞

帯広畜産⼤学

ウシ体外受精卵
北⾥⼤学

的場 理⼦

鈴⽊ 宏志

８細胞胚

桃沢 健⼆

ミーアキャット
近畿⼤学

マウス未受精卵
熊本⼤学

中潟 直⺒
1

GV-1

安齋 政幸

プログラム１２：３０〜１２：５５
１３：００

総会

開会挨拶

１３：０５〜１３：５５

会⻑：横⼭峯介
特別講演 １座⻑：⻑⾕川孝徳

我が国の無菌動物の歴史と SPF 動物への利⽤
⽇置恭司 先⽣（公財・実験動物中央研究所・嘱託研究員)
１４：００〜１４：５０

特別講演 ２座⻑：的場理⼦

⽜体外受精と⼈⼯繁殖技術の野⽣動物への応⽤に関する研究
永野昌志 先⽣（北⾥⼤学獣医学部動物資源科学科動物⽣殖学研究室・教授）
１４：５０〜１５：００

休憩

１５：００〜１６：５５（発表１０分 質疑応答５分）
⼀般講演

座⻑：安齋政幸

１. イヌ凍結融解精⼦の運動性に及ぼす DMSO 及び Quercetin の効果（15:00-15:15）○川崎雄⼤、吉原達也、海鉾聖恵、吉⽥まどか、鈴⽊宏志（帯広畜産⼤学原⾍病研究センター）
２. イヌ精⼦の凍結保存における平衡時間の短縮（15:15-15:30）○阿部靖之 1、浅野智由 2、若狭⼀紅 2、久⽶愛⼦ 2、横澤幸美 2、⽩藤（梅宮）梨可 2、鈴⽊宏志 2（1 県⽴広島⼤学・⽣命環境学部、2 帯広畜産⼤学・原⾍病研究センター）
３. ヒト肝臓置換マウスを⽤いた⾎液製剤の安全性の検証（15:30-15:45）○星友⼆（⽇本⾚⼗字社中央⾎液研究所）
４. ⽣殖⼯学技術を⽤いたヒト化マウスの計画的⽣産（15:45-16:00）○松⽥正史、近藤隆、⽯倉知征、⼿塚知栄⼦、飯塚裕介、⾠⺒宏美、川元由⾥⾐、
⼭本貴⼦、新野夏⼦、⻑⾕川孝徳、古関明彦(国⽴研究開発法⼈理化学研究所⽣命医科学研究センター 免疫器官形成研究チーム)
１６：００〜１６：１０ 休憩

2

⼀般講演

座⻑：宮地 均５. 実験動物中央研究所におけるマウス胚移植による個体⽣産の現状（16:10-16:25）○⾹川貴洋（公益財団法⼈ 実験動物中央研究所動物資源技術センター

資源開発室）

６. 受精卵移植後のレシピエントラットへの持続性⻩体ホルモン投与（16:25-16:40）○中務

胞 1、中潟 直⼰ 2

（1 新潟⼤学脳研究所モデル動物開発分野、
2 熊本⼤学⽣命資源研究・⽀援センター(CARD)資源開発分野）
７. 熊本⼤学 CARD におけるラット有償バンクシステム（16:40-16:55）○中潟直⼰、⽵尾 透（熊本⼤学⽣命資源研究・⽀援センター（CARD）資源開発分野）
１６：５５〜１７：０５

休憩

１７：０５〜１７：３５（発表１０分 質疑応答５分）
企業セッション

座⻑：宮地均

Ａ.個別換気ケージシステム、無菌・ノトバイオート向け個別換気ケージシステムのご紹介
⼭下

真由（テクニプラスト・ジャパン株式会社） （17:05-17:20）

Ｂ. 無菌マウス関連サービスのご紹介（株式会社オリエンタルバイオサービス） （17:20-17:35）
１７：３５

閉会挨拶

１８：００〜２０：００

副会⻑：浜野晴三
懇親会

北⾥⼤学⽩⾦キャンパス内「レストラン⽩⾦」
参加費：会員・⾮会員 4,000 円、学⽣ 1,000 円。
―次回のお知らせー
第３９回動物⽣殖⼯学研究会（和歌⼭地⽅会）
２０２０年１０⽉３⽇（⼟）―４⽇（⽇）予定
場所：南紀⽩浜アドベンチャーワールド
第４０回動物⽣殖⼯学研究会
２０２０年１１⽉２８⽇（⼟）予定
場所：北⾥⼤学⽩⾦キャンパス

3

特別講演

１
我が国の無菌動物の歴史と SPF 動物への利⽤
⽇置恭司(公益財団法⼈実験動物中央研究所)

無菌動物の研究は、1886 年 Pasteur（フランス）が脊椎動物の無菌飼育実験を着想したことが切っ掛けで始まり、1896 年に Berlin ⼤学の Nuttall と Thierfelder がモルモットの無菌化に最初に成功した。我が国の無菌動物の研究は、1936 年に内藤良⼀ら(京⼤医)によってニワ
トリの無菌環境下での飼育が試みられ、19 ⽇間の飼育に成功した報告から始まった。これらの研究は第⼆次世界⼤戦で中断したが、戦後まもなく再開され、1957 年に宮川正澄ら(名⼤医)が無菌モルモットの 300 ⽇を超える⻑期飼育に成功し、さらに 1965 年には無菌ラットの育成と繁殖に成功した。同時期に⽥波潤⼀郎ら(千葉⼤医)は、ニワトリ、ラット、モルモッ
トの無菌飼育を⾏い、これらを使⽤して⽣体防御機構の研究を⾏っている。また、実中研の斎藤宗雄らも 1967 年に帝王切開で摘出した胎⼦を⼈⼯哺育し、無菌ラットの育成に成功している。しかし、国内の⼈⼯哺育による無菌マウスの育成は、各種⼿技に不馴れで、周辺器材も不⼗分だったため、⻑期の無菌動物の維持は困難であった。当時の無菌動物繁殖の成功例
は 1958 年の Pleasants（Notre Dame ⼤学）の⼀例のみで、世界のすべての無菌マウスがこれに由来するものであった。1965 年に佐々⽊正五(慶応⼤医)は、アメリカの Charles River
Breed. Labs.からこの無菌マウスを輸⼊し、その維持・繁殖を実中研に委託した。実中研はそれを基に無菌マウスの⽣産を⾏い、2 年後の 1967 年に研究⽤に、1972 年には⼀般向けにも無菌マウスの分与が⾏われるようになった。佐々⽊正五の主導によって東海⼤のグループは、無菌マウスに既知の腸内細菌種を⽣着させたノートバイオロジー動物で腸内細菌の研究を⾏い、実中研では、無菌動物技術を⽤いて、既知の細菌群を定着させた SPF 動物の確⽴へと向かった。⼀⽅で、1978 年に宿⽥幸男ら(武⽥薬品)が世界で⼆例⽬と思われる無菌マウスの作
製と育成に成功し、繁殖集団が確⽴されたことが報告されている。
我が国では、⾼品質な実験動物として微⽣物統御された SPF 動物の開発研究は、1961 年に⽇本実験動物研究会の会員が中⼼となって発⾜した「SPF 動物研究委員会」を中⼼に精⼒的に⾏われた。同年に実中研は、東京⽬⿊に SPF 動物の研究施設を建設し、この施設と委員
会を中⼼として、具体的な検討が⾏われた。最初の SPF 動物は上述の Charles River Breed.
Labs.から導⼊されたもので、1963 年に川崎市野川の SPF 動物⽣産施設において、⽇本初のSPF マウスの量産・供給体制が整備された。その後、実中研で確⽴した無菌動物の作製と維持の基盤技術を駆使することによって、⽇本独⾃の腸内細菌叢を持つ SPF 動物が作製された。
この SPF 動物のビニールアイソレータ飼育による遺伝・微⽣物的に統御する量産基盤技術を基に、実中研は免疫不全ヌードマウスの⽣産、WHO のポリオ撲滅プログラムに使⽤されているポリオ⽣ワクチンの神経毒⼒試験⽤ TgPVR マウス、世界中で短期がん原性試験に⽤いられている TgrasH2 マウスや複合免疫不全 NOG マウスの開発を進めていった。
講演では、これら無菌動物開発の歴史とともに、1980 年代前半から開始してきた⽣殖⼯学
技術(胚採取、凍結保存、個体復元)と無菌動物を応⽤した SPF マウスの⽣産についても合わ
せて紹介したい。

4

特別講演

２
⽜体外受精と⼈⼯繁殖技術の野⽣動物への応⽤に関する研究永野 昌志
北⾥⼤学獣医学部動物資源科学科動物⽣殖学研究室

⽜の体外胚⽣産技術は、と体卵巣あるいは超⾳波ガイド下で経腟的に⼩卵胞から採取された卵⼦を体外で成熟培養し、体外受精を⾏って、移植可能な胚盤胞まで発育させる技術であり、世界中で商業的に⾏われるほど⼀般的なものとなっている。しかし、移植可能胚作出効
率は 30〜50%であり、体内成熟卵⼦より低いことが知られている。⽜は１回の発情周期中に 1 個の卵⼦を排卵する動物であることから、体外胚⽣産に利⽤される卵⼦の⼤部分は退⾏する運命にあり、卵⼦固有の発⽣能は退⾏の程度によって様々であると考えられる。そこで、体内で発育した卵⼦の特性を調べるとともに、より⼩さな卵⼦を体外で発育させる技術を開発することは、卵⼦の発⽣能獲得に係わる要因についての検討を可能とするとともに、
⾼い発⽣能を有する卵⼦の体外⽣産に繋がると考えられる。
発育途上にある⽜卵⼦の利⽤を⽬的に、初期胞状卵胞（直径 0.5〜1 mm）から直径 95 µm程度の卵⼦を採取して実験を⾏った。採取した卵⼦を体外で 10〜14 ⽇間発育させ、成熟培養を⾏った場合の卵⼦核成熟率は 30〜50%であったが、ホスホジエステラーゼ阻害剤である IBMX を添加した培地での前培養（pre-IVM）後に成熟培養に供することにより、核成熟
率は体内発育卵⼦と同等の約 90%まで向上した。また、卵⼦ミトコンドリア活性は、preIVM 10 時間後に最も⾼くなり、この卵⼦を体外受精に供することで、約 40%の体外発育卵
⼦が胚盤胞へ発⽣した。さらに、この⽅法によって作出した胚由来の産⼦を得ることにも成功した。しかし、培養 8 ⽇⽬以降に顆粒層細胞によるエストラジオール産⽣の低下とプロジェステロン産⽣の増加が確認され、この培養系は体内で退⾏過程にある卵胞を再現していると考えられることから、現在、改善を進めている。
家畜において⼈⼯授精や体外受精などの⼈⼯繁殖技術は広く応⽤され、家畜増産に寄与している。⼀⽅で、動物園で飼育されている野⽣動物種においては、家畜同様にヒトに⾷料と⽣殖をコントロールされる環境下にありながら多くの動物種で個体数減少が問題となっている。そこで動物園で飼育されている野⽣動物に⼈⼯授精技術を応⽤するため、各種動物から精液を採取する⽅法について検討を⾏っている。また、妊娠を成⽴させるには採取した精液を授精適期に雌⽣殖道に注⼊する必要があるが、雌の発情周期に関する情報がほとんど分かっていない動物種も多い。ホッキョクグマは絶滅が危惧される動物であるが、その近縁種のヒグマは北海道において害獣として問題となっている。そこで、エゾヒグマを⽤いて雄からの効率的な精液採取法を開発するとともに、雌における卵胞発育周期の検討および排卵誘起を含めた⼈⼯授精⽅法の開発を⾏っており、今年 1 頭に⼈⼯授精を実施した。現在までに様々な動物種において⼈⼯授精を実施しているものの妊娠を確認できておらず、さらに研究を進める必要がある。

5

⼀般講演 １
イヌ凍結融解精⼦の運動性に及ぼす DMSO 及び Quercetin の効果○川崎雄⼤、吉原達也、海鉾聖恵、吉⽥まどか、鈴⽊宏志
帯広畜産⼤学 原⾍病研究センター
現在、⽇本における慢性的な盲導⽝不⾜を解消ため、海外から優秀な繁殖⽝の凍結精⼦を輸⼊し、⼈⼯授精させるなどの試みがなされている。しかしながら、凍結精⼦を使⽤した⼈
⼯授精では、⾃然交配と⽐較し受精率が悪いことが報告されているため、⼈⼯授精の繁殖成績を改善することを⽬的とし、凍結融解精⼦の⽣存性の向上に取り組んだ。DMSO とQuercetin の抗酸化作⽤により低温下でのマウス精巣上体尾部精⼦の⽣存期間延⻑、運動性・受精能の維持効果があると報告されていることから、これらをイヌ精⼦希釈液に添加することで、イヌ精⼦の凍結・融解後の⽣存性に及ぼす効果を検討した。
雄ラブラドール・レトリバー5 頭(1 歳〜9 歳)から⽤⼿法にて採取した精液第⼆分画を 24℃、500G、5 分間の条件で遠⼼分離し、上清を除去後、室温にて⼀次希釈液(30mg/ml スキムミ
ルク+0.3M グルコース)で 2.0×10^8/ml になるように希釈後、4℃条件下で 3 時間平衡した。
次いで、精⼦懸濁液と等量の 0.5% DMSO、1% DMSO、5% DMSO、10% DMSO、0.5%
DMSO+5µg/ml quercetin、1% DMSO+10µg/ml quercetin、5% DMSO+50µg/ml quercetin、
10% DMSO+100µg/ml quercetin 添加あるいはコントロール群として無添加の⼆次希釈液(14% グリセロール添加⼀次希釈液)を加え混和し、再び平衡した。15 分後、ストローに精⼦
懸濁液を 0.2ml ずつ封⼊し、液体窒素液⾯ 6cm 上で 15 分冷却させた。冷却後、液体窒素へ投⼊し凍結させた。凍結精⼦は、37℃の温湯に１分間浸漬し融解後、500G で 5 分間遠⼼分離を⾏い、希釈液を除去し、TCM199 を 0.2ml 加え混和した。37℃ウォーターバスで保温しながら 30 分毎に融解直後から 3 時間経過時まで精⼦運動解析装置(CASA)による運動性の測定を⾏った。測定項⽬は、運動性、前進運動性、VAP(平均通路速度)、VSL(平均直線速度)、
VCL(曲線速度)、ALH(頭部振幅)、BCF(頭部振動数)を測定した。
従来の⼆次希釈液と⽐較して、0.5% DMSO 添加群の 1 時間半経過時において BCF が、
1% DMSO 添加群の 1 時間経過時において運動性が有意に⾼いという結果が得られたが、精⼦の卵管到達にかかる 2〜3 時間の間では有意差がみられなかった。さらに、1% DMSO 添
加群の 30 分経過時において ALH、BCF がコントロールと⽐較して有意に低く、0.5% DMSO
添加群の融解直後に VAP、VSL、VCL が、30 分経過時において ALH が有意に低いという結果が得られた。⼀⽅、0.5% DMSO+5µg/ml quercetin 及び 1% DMSO+10µg/ml quercetin 添
加群の融解後 2 時間経過時の運動性がそれぞれ、34.6%及び 39.7%と、コントロールの 22.3%と⽐較して、有意に⾼い成績が得られた。特に 1% DMSO+10µg/ml quercetin 添加群では、0.5% DMSO+5µg/ml quercetin 添加群より多数の測定項⽬で有意差がみられ、精⼦の卵管到達にかかる 2〜3 時間の間に関しても運動性、前進運動性、VAP、VSL、VCL、ALH、BCF が有意に⾼かった。以上より DMSO 単体の添加では凍結融解精⼦の活⼒の向上がみられなか
ったが、DMSO 及び Quercetin の添加では凍結融解精⼦の活⼒が向上すると考えられる。
今後、⼈⼯授精を実施して、効果の検証を図る予定である。

6

⼀般講演 ２
イヌ精⼦の凍結保存における平衡時間の短縮○阿部靖之 1，浅野智由 2，若狭⼀紅 2，久⽶愛⼦ 2，
横澤幸美 2，⽩藤（梅宮）梨可 2，鈴⽊宏志 2
県⽴広島⼤学・⽣命環境学部 1，帯広畜産⼤学・原⾍病研究センター2【⽬的】精⼦の凍結保存は，効率的な動物⽣産に⼤きく貢献する技術であり，より簡便で汎⽤性の⾼い⽅法が望まれる．ラットやサルなどの実験動物を含む多くの種において，精⼦は凍結前に耐凍剤を含む希釈液内で⻑時間の平衡を必要とする．我々は，イヌ精⼦の凍結保存において，従来の耐凍剤である卵⻩（⿃インフルエンザ流⾏国からの凍結精液輸⼊は制限される）の代替物質としてスキムミルクを⽤いた⽅法を開発し，経⼦宮頸管授精法（TCI）と併⽤することで，盲導⽝の繁殖などに⼀定の成果を挙げてきた（Abe et al., 2008）．ただし，従来の⽅法では⼀次（グリセリン⾮処理）および⼆次平衡（グリセリン処理）として合計 195
分もの時間を要した．そこで，イヌ精⼦の凍結操作にかかる時間短縮を⽬的として，0〜180分間の⼀次平衡後に凍結保存したイヌ精⼦の運動能および受胎能を調べた． 【⽅法】採取したイヌ射出精液を，４℃または室温のスキムミルク-ラフィノース液（SR 液）で希釈（2 ×108 精⼦/ml）した後，４℃に冷却した（⼀次平衡）．0〜180 分間の⼀次平衡を⾏った後，等量の 14%グリセリン添加 SR 液（４℃）でさらに希釈（1 × 108 精⼦/ml）し，４℃，15分間の⼆次平衡を⾏った．次いで，0.25 ml ストローに充填した後，液体窒素蒸気に 15 分間
暴露することで凍結し，液体窒素中で保存した． 【結果】融解精液の運動精⼦率を CASA シ
ステムによって解析した結果，RT-0 区（室温の SR 液で希釈，⼀次平衡を省略し直ちに⼆次
希釈・平衡）では 26.7 ± 3.7%であり，⼀次平衡（30〜180 分）を⾏った区に⽐べ低かった（28.5〜43.7％）．⼀⽅，4C-0 区（４℃の SR 液で希釈，⼀次平衡を省略し直ちに⼆次希釈・平衡）では，38.3 ± 4.8%であり，RT-0 区に⽐べ⾼い傾向があった．精⼦先体を FITC 標識
アグルチニン（ピーナッツ由来）で染⾊・観察した結果，RT-0 区の先体正常率は，4C-0 区
および RT-1 区（室温 SR 液で 60 分間の⼀次平衡），RT-3 区（室温 SR 液で 180 分間の⼀次平衡；従来法）に⽐べ有意に低かった（それぞれ，71.9，78.6 および 88.6，92.7％；P < 0.05）．
また，各区の融解精液をそれぞれ５頭のレシピエントに TCI した結果，妊娠率は RT-0 区で20％と低かったのに対し，4C-0 区では 80％であり，従来法の RT-3 区と同率だった．しかし，リッターサイズは 4C-0 区では 2.5 で，RT-3 区の 6.0 に⽐べ低かった．⼀⽅，RT-1 区の妊娠率およびリッターサイズは，それぞれ 80％および 5.5 であり，RT-3 区と同程度であった．これらの結果から，⼀次平衡を省略する場合，４℃の SR 液で希釈することで⾼率で妊娠させることが可能であるが，耐凍剤の保護効果が低下し，先体の障害，ひいてはリッターサ
イズの低下を引き起こすことが⽰された．⼀⽅で，⼀次平衡時間を従来の 180 分から 60 分へ短縮しても，⾼い妊娠率およびリッターサイズを実現できることを⽰した．

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⼀般講演 ３
ヒト肝臓置換マウスを⽤いた⾎液製剤の安全性の検証○星 友⼆
⽇本⾚⼗字社中央⾎液研究所
HBc 抗体陽性⾎液製剤の製造基準

⽇本は B 型肝炎ウイルス（HBV）に感染している⼈が多く、感染既往者を全て採⾎不可としてしまうと⾎液の確保に⽀障が出ることから、⽇本⾚⼗字社が製造する⾎液製剤の製造基
準では、HBc 抗体（HBV に過去に感染すると作られる抗体）が陽性であっても HBs 抗体（HBV に感染したり、HB ワクチンを接種すると作られる抗体で、感染を防御する働きがある）が 200 mIU/mL 以上あれば製品試験適合としてきました。しかし、この 200 mIU/mL という値は、経験的に得られたもので、しっかりとした科学的データはありませんでした。
マウスを⽤いた HBs 抗体による HBV 感染阻⽌効果の確認
ヒトの肝細胞に置換したマウス（PXB マウス）を⽤いて検証を⾏いました。
HBV ウイルスに、HBs 抗体を 0, 50, 100, 200 mIU/mL に調製したものを添加し、室温で１時間反応後、PXB マウスに接種し、13 週間にわたって HBV ウイルス量を測定しました。

現⾏製造基準の安全性を科学的に証明

HBs 抗体は 200 mIU/mL の濃度で、HBV の感染を完全に防御しました。
HBV と HBs 抗体を反応させただけで感染阻⽌できたということは、免疫系の働きがなくとも、HBs 抗体⾃体に感染阻⽌効果があるということを⽰しました。
以上のことから、たとえ HBc 抗体が陽性であっても、HBs 抗体が 200 mIU/mL あれば適合としている現⾏の献⾎⾎液の製造基準の安全性が妥当であることを⽰す結果を得ることができました。
今回の研究成果は、2019 年 8 ⽉号第 59 巻の Transufusion 誌に掲載されました。
興味のある⽅は、ぜひご覧ください。
「 Optimal titer of anti-HBs in blood components derived from donors in occult HBV
infection」
Yuji Hoshi, Takashi Hasegawa, Naoji Yamagishi, Masashi Mizokami, Masaya Sugiyama, Keiji
Matsubayashi, Shigeharu Uchida, Tadashi Nagai, Masahiro Satake8

⼀般講演 ４
⽣殖⼯学技術を⽤いたヒト化マウスの計画⽣産○松⽥正史、近藤隆、⽯倉知征、⼿塚知栄⼦、飯塚裕介、
⾠⺒宏美、川元由⾥⾐、⼭本貴⼦、新野夏⼦、⻑⾕川孝徳、古関明彦
国⽴研究開発法⼈理化学研究所⽣命医科学研究センター 免疫器官形成研究チーム
実験動物（マウス）をホストとしてヒト由来材料を⽤いた研究は、古くは Nude マウスを⽤いたヒト腫瘍細胞⽣着実験から、その後 NOD/Scid マウスと IL2 受容体サイトカイン共通
γ鎖 KO マウスから作製された NOG マウス、NSG マウスの誕⽣によってヒト腫瘍細胞の⽣着だけでなく、ヒト造⾎幹細胞の⾼い⽣着率が可能となり、免疫系ヒト化マウスを⽤いた研究へと発展している。
我々は更にヒト化マウス研究を進めるため、新たにヒト遺伝⼦を導⼊した NSG マウス作
製を進めており、効率よく計画的にヒト化マウス研究に使うマウス⽣産を⾏うために⽣殖⼯学技術を⽤いている。
これまで、NSG マウスに直接遺伝⼦導⼊（トランスジェニック (Tg)、ノックインマウス(KI) ）を作製することは難しく、B6 系野⽣型マウスから作製した Tg, KI マウスを NSG マ
ウスに戻し交配し作製した。戻し交配は、顕微授精または若週齢雄を⽤いた I.V.F および、マ
イクロサテライトマーカーによる次世代雄の選別を併⽤（Ogonuki et al. 2008, Mochida et al,2019）することにより、従来の⾃然交配による戻し交配にかかる期間をおよそ半分とすることが可能である。
また、1 つのヒト遺伝⼦だけなく、2 つ以上の遺伝⼦導⼊マウスを⽤いることも必要となるため、それぞれ作製した遺伝⼦組換えマウス同⼠の繁殖には I.V.F、受精卵移植による計画的⽣産を⾏うことで、安定した繁殖計画及び、実験予定に合わせたマウス⽣産を⾏っている。
このような⽣殖⼯学技術を⽤いることでヒト化マウス研究のためのマウス⽣産が安定、計画
的⾏うことができるようになった。
実際に新たに作製したヒト化マウスから得られた知⾒についても紹介したい。

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⼀般講演 ５
実験動物中央研究所におけるマウス胚移植による個体⽣産の現状○⾹川 貴洋公益財団法⼈ 実験動物中央研究所
動物資源技術センター 資源開発室

胚移植を⽤いた個体⽣産は、実験動物中央研究所(実中研)においては凍結胚での授受、微⽣物学的クリーニング、無菌化、計画⽣産、系統育成などを⽬的として⾏われており、所内外の業務を通じて年間約 1,000 匹のレシピエントマウスに胚移植を実施している。
本発表では、産⼦率を指標として系統差、新鮮胚と凍結胚の差、胚凍結法の差、レシピエ
ントの胚移植時期の差、免疫不全の有無による⽣産効率の⽐較を紹介する。
2014 年〜2017 年度の 4 年間での胚移植で使⽤したレシピエント数は 4,070 匹であり、その内訳は、新鮮胚移植が 33.7%、凍結胚移植が 66.3%であった。その産⼦率は新鮮胚で 50.9%、
凍結胚で 47.5%と差はみられなかった。胚凍結法の違いによる産⼦率は緩慢法(SF)が 43.5%、
簡易ガラス化法の DAP213 は 42.6%、EFS は 49.3%、PEPes は 48.5%であり、凍結法による⼤きな差もみなれなかった。背景系統による新鮮胚と凍結胚(PEPes)の⽐較では、凍結胚の加温後の⽣存率はどの系統でも 90%以上を⽰し、産⼦率は B6 系統で新鮮胚(50.7%)、凍結胚(48.5%)、DBA 系統で新鮮胚(42.8%)、凍結胚(39.0%)、BALB 系統で新鮮胚(33.5%)、凍結胚(28.9%)、NOG 系統で新鮮胚(55.0%)、凍結胚(53.7%)であり、すべての系統で凍結胚は新鮮胚と遜⾊ない結果を⽰した。
実中研では、NOG マウスを背景としたヒト遺伝⼦導⼊(Tg-NOG)やマウス遺伝⼦の破壊(KO-NOG)を開発しており、これら遺伝⼦改変 NOG マウスや筋ジストロフィーである mdx
系統のデータの蓄積により、⽣産効率を正確に捉え、合理的な動物実験計画を⽴案・実⾏していっている。

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⼀般講演 ６受精卵移植後のレシピエントラットへの持続性⻩体ホルモン投与○中務 胞 1、中潟 直⼰ 212

新潟⼤学脳研究所モデル動物開発分野

熊本⼤学⽣命資源研究・⽀援センター(CARD)資源開発分野

近年、遺伝⼦編集や導⼊技術の開発により遺伝⼦改変ラットが⽐較的容易に作製できるよ
うになってきた。しかし、樹⽴したラットの凍結精⼦・受精卵等の系統保存⽅法においては、
マウスのように世界的にスタンダードな⽅法は確⽴されていない。特に体外受精由来受精卵を凍結し、融解後移植した産仔獲得成績は安定しておらず、改善が必要である。我々は体外受精由来凍結融解受精卵の移植を⾏う中で、移植胚がレシピエントラットへ着床はするものの、産仔への発⽣率が低いことに気が付いた。そこで、胚移植後のレシピエントラットへ家畜などで受精卵着床障害および習慣性流産の治療のために⽤いられている、持続性⻩体ホルモンを投与することで、妊娠維持率の改善を試み、若⼲の知⾒が得られたので報告する。
体外受精後の前核期卵⼦と 8cell-桑実胚を簡易ガラス化法にて凍結した。前核期卵⼦はプラ
グ確認当⽇(偽妊娠 0.5 ⽇⽬)のレシピエントの卵管に移植し、8cell-桑実胚は偽妊娠 2.5 ⽇⽬のレシピエントの⼦宮に移植して、偽妊娠 3.5 ⽇⽬に 0.25mg/mL の持続性⻩体ホルモンを100μL ずつ左右⼤腿四頭筋に筋⾁内注射した。コントロール区にはセサミ油を投与した。
凍結胚の融解後の前核期卵⼦の⽣存率は 76.9％で、8cell-桑実胚では 93.8％で 8cell-桑実胚の⽣存率が⾼かった。前核期卵⼦の移植結果はコントロール区で胚移植を⾏った 6 匹のレシ
ピエント中 4 匹より産仔が得られたのに対し、試験区では胚移植を⾏った 7 匹すべての個体で産仔が得られた。同様に 8cell-桑実胚を移植したレシピエント 6 匹中 3 匹より産仔が得られたのに対し、試験区では 7 匹すべての個体で産仔を得ることができた。前核期卵⼦のコン
トロール区では 26 匹（4.3±3.8）の産仔が得られ、試験区では 34 匹(4.9±2.7)の産⼦が得られた。8cell-桑実胚のコントロールでは 11 匹(1.8±2.6)の産仔が得られ、試験区では 18 匹(2.6±1.3)の産仔を得ることができた。本研究では前核期卵⼦の産仔獲得率が⾼かった。
各試験区の産仔数については 1 腹あたりの産仔数のばらつきが⼤きく、コントロール区と試験区間に有意な差は認められなかった。しかし、移植後のレシピエントへ持続性⻩体ホルモン投与したすべての個体が妊娠していたことより、少なからず妊娠維持の改善効果があったものと考えられる。

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⼀般講演

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熊本⼤学 CARD におけるラット有償バンクシステム○中潟 直⼰、⽵尾 透
熊本⼤学⽣命資源研究・⽀援センター（CARD）資源開発分野

熊本⼤学⽣命資源研究・⽀援センター 動物資源開発研究施設(CARD)ではマウ
スバンクシステムを構築し、現在 3,000 系統を超えるマウスの胚/精⼦を保有しているが、近年、ゲノム編集技術の発展に伴って、遺伝⼦改変ラットの作製も急増している。
そこで CARD では、マウスのみならず、ラット⽣殖⼯学技術の改良開発にも精⼒的に取り組み、基礎的な⽣殖⼯学技術を確⽴、2019 年 11 ⽉より、有償ラット
バンクを⽴ち上げ、ラットに関する研究⽀援サービスを開始した。本発表では、ラット有償バンクについて、その詳細を紹介する。

https://ratbank.weebly.com/

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企業セッションＡ

個別換気ケージシステム、無菌・ノトバイオート向け
個別換気ケージシステムのご紹介○⼭下真由

テクニプラスト・ジャパン株式会社

我々テクニプラストは 70 年の歴史を持ち、常に「より良い器材のご提供」を追求し、⽇々たゆまぬ努⼒を続けております。
近年、⼤変ありがたいことに弊社個別換気ケージシステムを多くのユーザー様に関⼼をお持ちいただくとともに、ご使⽤頂いております。
げっ⻭類の研究において、微⽣物等のコントロールは極めて重要な課題となっており、その取扱いにおいて我々器材メーカーとしての役割はより安全かつ安⼼して扱いやすい製品の提供だと考えます。
ユーザーの皆様にとって貴重な研究資源である動物の感染事故を防ぎ、ケージ内環境をしっかりと制御できる重要性を求められる中で、個別換気ケージシステム
をベースに開発された無菌マウス・ノトバイオートの向け個別換気ケージシステ
ム“ISO-P”についてご紹介させていただければと思います。
今回のセッションを通じて、皆様に弊社製品についてさらなる関⼼をお持ちいただけましたら幸いです。

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企業セッション Ｂ

無菌マウス関連サービスのご紹介
株式会社オリエンタルバイオサービス
⼤⽵聰

弊社は、マウス・ラットの SPF 化や凍結受精卵の作製、体外受精を⽤いたマ
ウス⽣産などの⽣殖⼯学を⽤いた各種サービスから、Toll like receptor family KO
マウス(以下、TLR KO マウス)を始めとして遺伝⼦組換マウス、ラットの有償分
与も⾏っております。この頃、腸内細菌叢研究が盛んになっており、無菌 TLR
KO マウスのお問い合わせが増えたことから、無菌マウス関連サービスの提供を開始致しました。
当該サービスはビニールアイソレータという特殊な飼育器材を⽤い、微⽣物
学的な汚染に細⼼の注意を払いながら、マウスを飼育しております。
（毎⽉の無菌検査はチオグリコレート培地、ポテトデキストロース寒天培地にて実施）。
最近では TLR KO マウスだけでなく、委託者施設で維持されている遺伝⼦組
換マウスの無菌化と、その後の飼育管理までの作業を依頼されるケースもあり、
ビニールアイソレータ飼育技術に⽣殖⼯学技術（体外受精や凍結受精卵からのマウス個体化）を加味しながら、研究者の皆様のニーズにお応えしております。
本⽇はその概要についてご紹介させて頂きます。

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IVC 個別換気ケージシステム

ISO-P

無菌・ノトバイオート向け
完全密閉型陽圧飼育システム

http://www.tecniplastjapan.co.jp/