バイオ実験キット

Dr.ジーンシリーズ

取扱説明書

株式会社ニッポンジーン
富士フイルム和光純薬株式会社

第 13 版

目次

ページ
1．本キットについて······································································· 32．キット内容の確認········································································ ·· 4

キット構成·························································· ·· 5

キット以外に必要な物
3．使用上の注意·········································································· ·· 6

4．実験準備氷の準備··········································································· ·· 7

37℃の水浴の準備······························································· ·· 7

アガロースゲル電気泳動用試薬の準備
1×TAE の調製···························································· ·· 8

アガロースゲルの作製··················································· ·· 9

Stains-All 溶解液の調製················································· 12

5．各班の試薬等のチェック··························································· 13

6．実験プロトコル
実験の流れ········································································ 14

実験操作··········································································· 15

7．データ解析
質問例·············································································· 24

解答例·············································································· 27

8．廃棄物の処理·········································································· 31

21． 本キットについて
制限酵素は、DNA 中の特定の配列を正確に認識して DNA 鎖を切断する酵素です。この酵素を使って DNA 中の遺伝子を取り出し、別の DNA に結合させることで組換え体を作ることができます。この技術は遺伝子組換え実験の最も基本となる操作であり、制限酵素は遺伝子組換え実験においてなくてはならないものです。
本キットはラムダ DNA を 2 種類の制限酵素、HindIII、PvuII で切断した後、アガロースゲル電気泳動を行い、DNA を染色することにより DNA の切断パターンを確認するキットです。
この実験によって、アガロースゲル電気泳動を行うことにより、制限酵素が実際に DNA を切断するということを学生自身の目で確認し、遺伝子操作の基本となる技術を学習します。

3

2． キット内容の確認
本キットは、制限酵素反応、電気泳動、染色、脱色までを班ごとに行い、電気泳動は市販のミューピ
ッド電気泳動槽で行っていただくことを想定したキット構成にしてあります。使う泳動槽によっては試薬が不足することがありますので、その際には別途、試薬を購入していただく必要があります。

1） キ ッ ト 構 成 （ 6 班 分 ）
容量

数量

保存

チェック

ラムダ DNA

300μl

6 本（緑色チューブ）

－20℃

□

HindIII 酵素液

30μl

6 本（黄色チューブ）

－20℃

□

PvuII 酵素液30μl

6 本（水色チューブ）

－20℃

□

コントロール用バッファー

30μl

6 本（透明チューブ）

－20℃

□

ローディングバッファー

80μl

6 本（透明チューブ）

－20℃

□

分子量マーカー30μl

6 本（透明チューブ）

－20℃

□

50×TAE

100 ml1 本（125 ml ボトル）

室温□

Stains-All（粉末）

10 mg

6 本（50 ml チューブ）

室温

(遮光)

□

ホルムアミド120 ml1 本（125 ml ボトル）

室温

(遮光)

□

イソプロパノール

300 ml1 本（500 ml ボトル）

室温

□

1本

室温

□

1.5 ml チューブ

各 12 本（黄、水色、透明）

室温□

チューブ立て

12 個

室温

□

フロート

6個

室温

□

アガロース S

5g

キット構成

4

2）キット以外に必要な物
マイクロピペット（～20μl 用、～200μl 用）
マイクロピペット用チップ（できればオートクレーブで滅菌してあるものが望ましい）
アガロースゲル電気泳動装置（パワーサプライ含む）
ゲル作製用トレー（通常、電気泳動装置に付属）
染色液用溶解液を混合する容器（1.5 L ほどが入る容器）
染色用容器（アガロースゲルの大きさよりやや大きめのタッパーなど）
200 ml
1L

メスシリンダーメスシリンダー

1×TAE を混合する容器（5 リットル入れることのできる容器）
500 ml三角フラスコ

氷、および氷を入れる容器
37℃ エアーインキュベーター、または 37℃の水浴（水浴の場合、本キット輸送用の発泡スチロ
ール箱を利用すると便利です）
滅菌用エタノール（70％程度のもの）
電子レンジ
電子天秤
タイマー（時計）
温度計
油性ペン
ラップ
アルミホイル
廃棄チップ入れ（空き箱やペットボトルを切ったもの、あるいはビーカーなどでもかまいません）

5

3． 使用上の注意


本品は試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。また、試薬についての基本的な知識を十分に理解した上で使用してください。



本品の取り扱いは、マニュアルの記載通りに行ってください。マニュアルの記載内容と異なった取り扱いによるトラブル、事故につきましては、弊社では責任を負いかねます。



本品の仕様は、ご使用になったお客様のご意見等を参考にして予告なく変更されることがあります。ご了承ください。

6

4． 実験準備
以下の操作はあらかじめ実験を指導する方が行ってください。時間に余裕があるのであれば学生が行ってもかまいません。

1）氷の準備可能であれば各班の分を準備します。氷が大きい場合は氷中にチューブを差し込むことができる
サイズに砕いてください。氷が少量しか用意できない場合には、水を入れて、フロートでチューブを浮かべて使用してください

氷を入れた発泡スチロール箱

2）37℃の水浴の準備
37℃のエアインキュベーター、または水槽のインキュベーター（ウォーターバス）を利用します。
エアインキュベーター、または水槽のインキュベーターが無い場合、本キットの輸送用発泡スチロ
ールに、37℃の水を作ります。
実験前に作ると実際に使用するときには冷めてしまいます。各班反応をかける準備ができてから作った方が良いでしょう。

37℃のお湯を入れた発泡ス
チロール箱

7

3）アガロースゲル電気泳動用試薬の準備
以下の試薬の調製には水を使用します。できればイオン交換水、または蒸留水を使用します。
もし無い場合には水道水を使用してください。

① 1×TAE の調製
1×TAE は以降の操作（アガロースゲルの作製、電気泳動、ゲルの染色液調製）で必要なため、まとめて作ります。キットの 50×TAE 100 ml を 5 リットル入れることのできる容器に入れます。
次に水を 4,900 ml 加えます。スターラーなどで撹拌してバッファーをよく混合します。
作ったバッファーは電気泳動用に各班分 400 ml ずつ、試薬瓶かビーカーなどに分けます。
残りのバッファーはアガロースゲル用、染色液調製用に使います。

50×TAE を水で希釈する

ポリバケツなどで混合する

必要な 1×TAE の量は電気泳動槽の大きさ、数などによって変わります。
本キットにはミューピッド電気泳動槽を各班で一台ずつ使用することを想定した量の試薬が含まれています。泳動槽の数が少なければ 1×TAE 量はもっと少なくてすみますが、ミューピッド泳動槽よりも大きな泳動槽を各班で使用する場合には、作製する 1×TAE 量は多くしなければなりません。
TAE が不足する場合には別途 50×TAE を購入していただく必要があります。

8

② アガロースゲルの作製
ここではミューピッドゲルに付属しているゲル作製用トレーを使ったアガロースゲル作製方法を示します。異なる泳動槽を使用する場合は、その泳動槽のゲル作製方法に従ってください。
アガロースゲルは、一実験あたり小さなゲル（5.9 cm×5.1 cm）一枚使用します。したがって、一班（4 人、2 実験）につき小さなゲル 2 枚、あるいは大きなゲル（5.9 cm×10.2 cm）一枚を使用することになります。
6 班分（12 実験）ですと、小さなゲル 12 枚で足りることになりますが、失敗したときのために少し余分に作っておくとよいでしょう。
以下はゲル作製用トレーひとつ分（小さなゲル 4 枚、大きなゲル 2 枚）の作製方法です。

アガロースゲルは、分離したい目的の DNA の予想される大きさに応じて種類やアガロース濃度を変えます。今回は一般的に使われている 1％（W/V）濃度のアガロースゲルを作製します。

まず、キットのアガロース S を 2 g 量り、500 ml 程度の三角フラスコにいれ、1×TAE を 200 ml
加えます。三角フラスコにラップで軽く蓋をして何カ所か穴を開け、フラスコを攪拌します。

穴を開けないでラップで密閉してしまうと、電子レンジで溶かす際にフラスコ内の空気が膨張してラップが破裂します。

9アガロースの計量

1×TAE に懸濁する

三角フラスコを電子レンジに入れ、
約 5 分にセットします。
しばらくするとアガロースが沸騰し始め、細かい気泡が出てきます。その時点で一度電子レンジからフラスコを取り出し、よく振り混ぜアガロー
スを撹拌してください。そのままにしておくと沸騰したアガロースがフラスコから吹き出すおそれがあります。
撹拌後、泡が吹き出さないようにフラスコをよく見ながらさらに 1～2 分程度電子レンジで溶解しま
す。ときどき取り出してアガロースの様子を確認して、透明な粒状のものがなくなり、溶液が均一な状態になるまで溶かします。

電子レンジでアガロースを溶解する

10電子レンジから出した後は、50～60℃（手でフラスコを持てる程度）になるまで室温に置いておきます。

水や氷につけて冷やさないようにしてください。ゲルが部分的に固まってしまう恐れがあります。均一でないゲルを使用するときれいな電気泳動像が得られません。

電子レンジから出した直後のアガロースをゲル作製用トレーへ流し込まないでください。
熱によってトレーが変形することがあります。

この間にアガロース作製用トレーを組み立てておきます。大きなゲル（5.9×10.2 cm）でウェル（電気泳動の際、サンプルを入れるところ）が 12 穴作れる大きさのコームを使用するときれいな泳動像が得られます。

ゲル作製用トレーを組み立てる

溶解したアガロースが 50～60℃になったら、組み立てておいたゲル作製用トレーにアガロースを注ぎます。ゲルが固まるまで室温に放置し、固まったらコームをゆっくりと抜きます。ゲルはラップなどをして乾燥しないようにし、使用時まで冷蔵庫で保管します。

室温に置いておくうちにゲルが固まってしまったときは、もう一度電子レンジで溶かして使用してください。

コームは慎重に抜いてください。乱雑に扱うとアガロースゲルのウェルが壊れることがあ
ります。

11

ゲルをトレーへ流し込む

ゲルが固まったらコームを抜く③ Stains-All 溶解液の調製
Stains-All を溶かすための溶液を作製します。一班につき 200 ml
使用しますので、6 班分では 1200 ml を作製します。
1200 ml 入れることのできる容器に、付属のホルムアミド全量（120 ml）、イソプロパノール全量 （300 ml）、そしてあらかじめ作っておいた 1×TAE を 780 ml 加えよく混合します。
作った溶解液は各班用に 200 ml ずつ試薬瓶等の容器に分け、容器の周りをアルミホイルなどで包んで遮光しておきます。

この溶解液は実験直前に調製してください。

12

5． 各班の試薬等のチェック
本キットは一班 2～6 人で各班 2 実験分、6 班分の試薬が入っています。一つのチューブに 2 実験分の試薬が入っていますので、実験者は、必要量の試薬をそれぞれの実験台に置かれた試薬チューブから
マイクロピペットで取り実験を行います。

一班分 2 実験
容量数量

ラムダ DNA

300μl

1 本（緑色チューブ） □HindIII 酵素液

30μl

1 本（黄色チューブ） □PvuII 酵素液30μl

1 本（水色チューブ） □コントロール用バッファー

30μl

1 本（透明チューブ） □ローディングバッファー

80μl

1 本（透明チューブ） □分子量マーカー

30μl

1 本（透明チューブ）

1×TAE

400 mlStains-All（粉末）

10 mg

Stains-All 溶解液

200 mlチェック□□

1 本（遮光）□□アガロースゲル小 2 枚（大 1 枚）□

1.5 ml チューブ（黄、水色、透明）

各2本□

チューブ立て2個□

氷□各 1～2 本マイクロピペット（～20μl 用、～200μl 用）
マイクロピペット用チップ

□
□

1個

フロート
37℃の水浴（37℃エアインキュベーターがない場合）□（各班共通でも可）
1組

電気泳動装置

□

□

温度計

□

タイマー（時計）

□

油性ペン

□

滅菌用エタノール

□

廃棄物入れ

□

注意：ラムダ DNA、HindIII 酵素液、PvuII 酵素液、コントロール用バッファーは氷に浸けておいてください。

13

6． 実験プロトコル
実験の流れ
手の洗浄
実験台の消毒

実験準備

↓

10 分

各チューブにサンプル名等を記入する
試薬の溶解↓
DNA をチューブへ分注する↓

酵素反応

酵素溶液を加え、37℃で反応させる

電気泳動準備↓
電気泳動槽にアガロースゲルと TAE バッファーを入れる

20 分

ローディングバッファーを加え反応を停止する↓
アガロースゲルのウェルへサンプルを入れ、電気泳動を開始する

電気泳動↓

染色液の調製染色液を作製する

40 分↓
電気泳動を止める↓

アガロースゲルの染色

アガロースゲルの染色

一晩↓

アガロースゲルの脱色

脱色

～4 時間

↓
ゲルを観察する

データの解析

30 分※実験時間はおおよその目安です。

14

実験操作
実験の前に、実験室の窓および扉は閉めておいてください。
ここでは 1 実験分の操作について説明します。本キットは 6 班で各班 2 実験行うことを想定してあります。試薬によっては一つのチューブに 2 実験分が入っていますので間違わないようにしてください。

1． 石けんで手を洗います。

2． ティッシュペーパーなどに 70％の滅菌用エタノールを含ませ、実験台を拭きます。

3． 実験台に試薬、器具が揃っているか確認します。

4． 黄色のチューブの蓋に油性ペンで HindIII、青いチューブに PvuII、透明なチューブにコントロー
ルと書きます。必要であれば班名も書いておきます。

5． 試薬が溶けていることを確認し、氷上の HindIII 酵素液（黄色チューブ）、PvuII 酵素液（水色チューブ）、コントロール用バッファー（透明チューブ）のチューブからマイクロピペットを用いて 10μlずつ溶液をとり、それぞれ同じ色の 1.5 ml チューブに入れて氷に浸けておきます。
チップはサンプルごとに新しいものと交換してください。

酵素溶液はできるだけチューブの底へ入れてください。まだ凍っている場合は、室温に置いて溶かしてもかまいませんが、完全に溶けたら氷上に移してください。

10μl

10μl

10μl

HindIII 酵素溶液

PvuII 酵素溶液

コントロール15写真 1
各チューブを氷に浸けておく

酵素溶液は DNA 溶液を加えるまで必ず氷の中に浸けておきます。
長時間室温に放置したり、乱暴な扱いをすると酵素の活性が低下することがあります。

6． HindIII、PvuII、コントロールのチューブにそれぞれラムダ DNA（緑色チューブ）を 40μl ずつ
加え、ゆっくりと泡立てないようにピペッティング（マイクロピペットで溶液を数回吸ったり出したりすること）して反応液を混合します（写真 2）。その際、チップはサンプルごとに新しいものに交換してください。
ここからの操作はすべて室温でかまいません。

ラムダ DNA は、酵素溶液に加える前に数回穏やかにピペッティングして溶液全体を均一にしてください。
（ラムダ DNA は約 48 キロ塩基対と非常に長いため、激しいピペッティング
により DNA が切断される可能性があります。
）

40μl

ラムダ DNA16

写真 2 ピペットで各チューブへ DNA を加える

7. 反応液の入ったチューブを 37℃のエアインキュベーターまたは水浴に入れ、15 分間インキュベー
トします（写真 3）。

写真 3 37℃で酵素反応を行う

反応時間が短すぎると酵素反応が不十分になり DNA が完全に切断されないことがありますのでご注意ください。

17

8. あらかじめ作製しておいた 1% アガロースゲルを電気泳動槽に置き、ゲルが完全に浸るまで泳動用
バッファー（1×TAE）を泳動槽に注ぎます。このとき、ゲルはウェル（コームで作った DNA サン
プルを入れるための穴）のある方が－極側になるようにして下さい（写真 4）。

写真 4 電気泳動の準備（泳動槽の右側が－極）9. 反応終了後、ローディングバッファー 10μl を反応液の入ったチューブに直接加え、数回ピペッテ
ィングすることで、反応液を混合します（写真 5）。そのうち 10μl をアガロースゲル電気泳動に用
います。

10μl

ローディングバッファー18

写真 5 ローディングバッファーを酵素反応液へ加える

10. 分子量マーカー、
コントロール、HindIII で処理したラムダ DNA 及び PvuII で処理したラムダ DNAを各 10μl ずつ順番にゆっくりとゲルのウェルに入れます（写真 6）。1 つのサンプルをウェルに入れるごとに、泳動バッファー中で数回ピペッティングをし、チップ内を洗います（写真 7）。チップをサンプルごとに交換する必要はありません。

サンプルはゆっくりウェルに入れます。勢いよく押し出すと泳動バッファー中にサンプルが舞い上がってしまいます。

写真 6 サンプルをアガロースゲルへ

写真 7 チップをバッファーで洗う19

ウェルの奥までチップを入れないようにしてください。奥まで入れすぎるとチップがアガロースゲルを突き破ってしまい、サンプルがアガロースゲルの裏側から漏れて無くなってしまうことがあります。

11. すべてのサンプルをウェルに入れたら、泳動槽に蓋をして電圧をかけ 100V で約 30～40 分、あるいは 50V で 1 時間～1 時間 30 分程泳動します。泳動時間は使用する電気泳動槽によって異なります。低い電圧で流した方がバンドはきれいになります。

電気泳動中は泳動槽のバッファー内に手や指などを入れないでください。感電する恐れがあり危険です。

12．電気泳動の間に染色液を作製します。
50 ml チューブに入った Stains-All（粉末）に、Stains-All 溶解液を 30～40 ml 程度加え（写真 8）、
蓋をしっかりと締めてよく撹拌します。撹拌した溶液は Stains-All 溶解液へ戻し、よく混ぜます（写真 9）。もう一度 20 ml 程度を粉末の入っていたチューブに入れ、よく撹拌してからまた Stains-All
溶解液へ戻します。これをさらに一、二回繰り返して 200 ml の染色液を作ります（写真 10）。最後にアルミホイルなどで染色液の容器を完全に包んでおきます（写真 11）。

20

写真 8 Stains-All に溶解液を加える

写真 9 撹拌して溶解後、溶解液の容器へ戻す

写真 10 できあがった染色液

写真 11 染色液の遮光

この染色液は光により急速に劣化します。しっかりと遮光し、使用直前（数時間前なら可。その場合は冷蔵庫で保存してください）に調製してください。

21

13．泳動が進むと、ローディングバッファーに含まれる 2 種類の色素（XC と BPB）が分離して、BPB（紫色）は先に、XC（青色）はゆっくりと流れます（写真 12）。BPB がゲルの末端（＋極側）か
ら 0.5cm 程度まできたら、泳動を止め、ゲルを染色用容器（タッパーなど）に入れます（写真 13）。
アガロースゲルは壊れやすいので、取り扱いには十分注意してください。

写真 12 電気泳動の様子

写真 13 電気泳動終了後、タッパーへ、アルミホイルなどで14．ゲルの入った容器に Stains-All 染色液をゲルが浸る程度まで加え（写真 14）
完全に容器を遮光して室温で一晩染色します（写真 15）。

写真 14 染色液を加える

写真 15 遮光して一晩置いておく

22

15．翌日、Stains-All 染色液を別の容器に捨て、ゲルの入った容器に水道水を入れ脱色します(写真 16)。
脱色操作は遮光せず室温で行います。脱色が進むにつれ DNA が青いバンドとしてはっきり見えてきます（写真 17）。

写真 16 染色直後のゲル写真 17 脱色後のゲルすぐに観察しないときは水を入れたタッパー中で遮光して保存してください。光に当たると DNAのバンドの青色も徐々に抜けていってしまいます。保存は遮光してあれば冷蔵庫でも室温でもかまいません。遮光したままの状態であれば DNA のバンドは数ヶ月間安定に維持できますが、できればデジタルカメラ等でゲルの写真を残しておくといいでしょう。

23

7.

データ解析

質問例
質問１.

コントロールのラムダ DNA のバンド数はいくつで、ゲルのどの位置にありますか。

質問２.

ラムダ DNA を HindIII で処理した後とコントロールのラムダ DNA とでは電気泳動後のバンドがまったく違います。
何本のバンドが見えますか。なぜ、ゲル上のいろいろな位置にバンドが見られるのでしょう
か。

質問３.

PvuII で処理したラムダ DNA には何本のバンドがありますか。HindIII で処理したときとゲル上での位置が違いますがなぜでしょうか。

質問４.

その他電気泳動の結果で何か気付いたことはありますか。

24

１. 染色後のゲルを観察して、バンドの距離を定規などを用いて測定し、できるだけ正確にスケッチしてください。

２. 各レーンの DNA のウェルからの距離を測定し、下の表の空欄に記入してください。

距離

塩基数

距離

塩基数

HindⅢ処理した
ラムダDNA
距離
塩基数

(mm)

(bp)

(mm)

(bp)

(mm)

コントロール
ラムダDNAマーカー(bp)

PvuⅡ処理した
ラムダDNA
距離
塩基数
(mm)

(bp)

バンド1

23130

21090

バンド2

9417

4421

バンド3

6557

4268

バンド4

4361

4194

バンド5

2322

3916

バンド6

2072

3638

バンド7

563

バンド8

125

25

３. マーカーのバンドのウェルからの距離に対応する位置を、片対数グラフにプロットして下さい。

検量線

塩基数

100000塩基数(bp)

10000
1000
100
10
1
0

10

20
30
距離(mm）

40

50

４. 上のグラフでプロットした点を直線で結び、その直線をもとに前ページにある表中で空欄になっている塩基数を推定してください。

26

解答例
質問１
アガロースゲルの上部で、はっきりとした濃いバンド一本のみ見られる。

※ラムダ DNA は非常に大きな直鎖状（約 48 kbp）DNA ですので、アガロースゲル中の移動度は小さく、濃い一本のバンドとなります。

質問２
DNA のバンドは 6 本（あるいは 7 本）見られる。
HindIII がラムダ DNA 上の特定の配列を認識し、切断したためいろいろな大きさの DNA 断片が生じた。アガロースゲル電気泳動では DNA の大きさによって移動度が異なるためさまざまな位置にバンドがみられる。

※HindIII はラムダ DNA 上の AAGCTT という塩基配列を認識し切断します。ラムダ DNA には
HindIII の認識部位が次ページの表のように 7 カ所あるため、DNA 断片が 8 本さまざまな大きさで生じます。アガロースゲルの網目構造によって、大きな DNA はゲル中の移動が遅く、小さな DNA は移動が早くなるためそれぞれの断片が分離します。

質問３
DNA のバンドは 5 本みられる。
PvuⅡは HindIII とは違う配列を認識するため、ラムダ DNA の切断箇所、それから認識部位の数も異なっている。そのため HindIII の時とは大きさの違う DNA 断片ができ、電気泳動でのパターンも変わってくる。

※観察されるバンドの数は電気泳動、あるいは染色の条件によって変わってきます。
PvuII は CTGCAG という配列を認識し、ラムダ DNA での切断箇所は 16 カ所あります。しかしそれほど多くの断片がアガロースゲル上で見られないのはできてくる断片が比較的小さいものが多く、ゲルの下方へ流れてしまっていて濃く染色されないためです。

27

質問４
PvuII で切断した DNA の上から 2 番目のバンドが非常に濃い。

※次ページの表にあるように PvuII の 2～5 番目の大きさがかなり近く、アガロースゲルでは分離されずに一つの大きなバンドとなってしまっているためです（条件次第では数本に分離することもあります）。これらを分離するためには、もっと大きなゲルで長時間泳動するなどの方法が必要となります。

ゲルの下部のバンドほど色が薄くなっている。

※制限酵素で切断した DNA から生じる断片の分子数は、その大きさにかかわらず同じです。したがって、分子量（DNA サイズ）の大きな DNA ほど染まりやすく、小さな DNA ほど染色
液で染まりにくくなります。
DNA の量を多くすれば下のバンドも濃く染まりますが、上部の大きな DNA の分離は悪くなります。

DNA のバンドの両端、あるいはコントロールのラムダ DNA のバンドが上に引っ張られて糸を引いたようになっている。

※DNA がアガロースの網目を通ってくる際に、大きな DNA ほど網目に引っかかりやすくなるた
め糸を引いたような形になると思われます。高い電圧で速く流すほどこの現象は起こりやすくなります。

〈参考〉ラムダ DNA を制限酵素で切ったときの実際の断片長

酵素

断片の長さ(base pairs)

切断箇所

ラムダ
DNA

48,502

ラムダ
DNA/HindⅢ

7 カ所

23,130

9,417

6,557

4,361

2,322

2,027

563

ラムダ
DNA
/PvuⅡ

15 カ所

21,090
636

4,421
579

4,268
532

4,194
468

3,916
343

3,638
209

2,296
141

28

125

1,708
63

１．

1

2

3

4

1．マーカー
2．コントロールラムダ DNA
3．ラムダ DNA / HindIII
4．ラムダ DNA / PvuII

２．

距離

塩基数

距離

塩基数

HindⅢ処理した
ラムダDNA
距離
塩基数

(mm)

(bp)

(mm)

(bp)

(mm)

コントロール
ラムダDNA

マーカー

バンド1

16

23130

バンド2

19

バンド3

15000

(mm)

(bp)

16

12000

16

21090

9417

19

10000

26

4421

22

6557

22

7000

4268

バンド4

26

4361

26

5000

4194

バンド5

33

2322

33

2500

3916

バンド6

34

2072

34

2000

28

3638

バンド7

48

563

48

500

33

2500

36

1800

バンド8

15

(bp)

PvuⅡ処理した
ラムダDNA距離
塩基数125

上の表はゲルから求めた DNA の移動度と、マーカーをもとにして書いた検量線から推定した DNAの大きさの例です。マーカーと PvuII 断片の一部の数値は参考として正確な DNA 断片の大きさを表しています。
この検量線から求められる DNA のサイズはそれほど正確ではなく、おおよその数字を出すものです。
特に今回作製した 1％のアガロースゲルでは、大きなサイズ（およそ 10 kbp 以上）の DNA ではほとんど移動度に差が出ないためかなり不正確になります。
片対数グラフ上でプロットした点をもとに検量線を引く際には、小さな（1 kbp～10 kbp）点を基準にして引くと比較的正確な数値になります。

29

３．

塩基数（bp）

検量線
100000塩基数（bp）

10000

1000

100

10

1
0

10

20

30
距離（mm）

４．
前ページの表参照。

30

40

50

8.

廃棄物の処理1）実験後のバッファー類の廃棄について
電気泳動バッファー(TAE 廃液)は産業廃棄物として処理してください。
アガロースゲルは可燃物として廃棄してください。

製品についてのお問い合わせ先
富士フイルム和光純薬株式会社
ﾌﾘｰﾀﾞｲﾔﾙ: 0120-052-099
ﾌﾘｰﾌｧｯｸｽ: 0120-052-806

株式会社ニッポンジーン
TEL: 076-451-6548
http://www.nippongene.com/siyaku/《A05110-1704-1804》31