II．プリオン蛋白の代謝とプリオン複製

質 疑 応 答

彼らでお互いに議論して，このベクターはうちのほうで使うとか手分けして行っているようです．モンペリエのほうでは，どちらかというとあまり変異のないヒトのプリオン遺伝子を入れています．それは確かに細胞の表面

（座長）

品川

森一にヒトの PrPc がよく出たが，PrPSc と一緒に行っても増えたということはなかったと言っています．チューリヒのグループは，合成ヒ座長（品川） このセッションのトータルのト型遺伝子を使ったほうがよいというので，ディスカッションをいたします．順番は構いプロモーターをつけてみたり，変異を入れてませんが，最初に小野寺先生の演題から，トーみたり，いろいろ行っている最中だそうです．

タルなかたちでディスカッションをお願いしヒトでセルラインができれば，動物を使わなます．金子先生，何かありますでしょうか．

くてもよいということで，かなり精力的に予金子清俊（国立精神・神経セ神経研） 先ほ
ど時間がなくて聞けなかった点を一つおうか算が出ているようです．
座長

金子先生におうかがいしたいのです

がいしたいと思います．ヒト型のセルラインが，いまの考え方は動物の代わりにヒト型のの話で，マウスのノックアウトラインにヒトセルラインを使う．そうすれば，実験動物をの PrP を発現させたらなかなか感染させに培養細胞の系に持っていけばいけるというこくいとおっしゃっておられたと思います．ほとだろうと思います．私たちでもスクレイ

かの先生方のデータもうかがいますと，たと

ピーではいくつかの試みがあって，わかってえばヒューマンのニューロブラストーマのセいることは，同じ培養細胞の系を使っても必ルラインを使って感染させようという試みがずしも感染が成り立つとは限らないというこかなり精力的に行われていて，確か 1995 年とです．ただ，チャンドラー株由来のプリオ

ごろ Lancet に 1 例，イタリアのグループが成ンは感染が比較的うまくいきます．残念なが功したという論文が出ました．しかし，そのら私たちの使っている帯広株は，培養細胞に後そのグループにそれをいただこうとして感染させるとすぐなくなってしまいます．そも，どなたもいただけません．UCSF も含めてういうことを考えた場合，ヒトの診断に培養ほかの施設で同じことをしようとしてもうま細胞を使うとなると，個々のケースが違うわ

くいかないとうかがっています．もしヒューけですから，いろいろなフィールドの株になマンのニューロブラストーマのセルライン，ります．それでうまくいくかなという気がしインフェクシャスなセルラインができれば，ますが，いかがでしょうか．

診断を含めてかなり有効ではないかと思いま

金子先生のおっしゃるとおり，動物の重すが，なぜそれができないのでしょうか．小

要性はどうしてもゆるがせないと思います．

野寺先生，何かありますでしょうか．

ただ，マウスの系の研究の経過を見ましても，節（東 京 大） で き な い と は ま だ

マウスのニューロブラストーマの感染性のセ言っていません．いまヨーロッパのほうはセ小野寺

ルラインができたことで研究が非常に進展しルラインをつくりたいと言っているものです

たことを考えますと，リプレースはできないから，一つはモンペリエに差し上げて，一つけれども，さらに加わることの重要性はあるはスイスのチューリヒに差し上げて，彼らはのではないでしょうか．確かにマウスでも，プリオン病 77ある特定の株をある特定のセルラインに感染ら非常にありがたいのです．どの程度まで精させたときだけ，ある程度維持できるようで製されると，電顕であのように見えるのか，す．また，たとえ感染させても，恒常的では方法論の問題です．

なく数カ月経てば感染力が落ちていったり，

村本

Prusiner のラボでやっている方法でかなりフラクチュエートしたりしますから，すが，正確には答えられないので，精製方法非常にトリッキーではあると思います．ですは私が答えるべきではないと思います．

から，そういうことで診断してよいかどうか

片峰というのは確かにおっしゃるとおりだと思いすね．

ます．
村本先生，かなり感染セルラインを使っておられましたが，何かございますでしょうか．
村本

環（東北大） 私は失敗した経験しかありません．福岡 1 株と 2 株でやってみましたが，うまくいきませんでした．
小野寺

スターティングは感染マウスの脳で村本そうです．

片峰

そこから精製されて感染分画ですね．
村本

ええ．サルコシル溶液中での不溶性を主に使っている方法だと思います．
片峰

その分画で感染性はあるわけです

スクレイピーの材料では N2a でね．それから，聞き落としたかもしれません

すか，持続性のある系があって，それを使っが，PrP 27-30 といわゆるミニプリオンのあれて in vitro の仕事はかなり進んでいるみ たで引き算されていましたが，ミニプリオンにいです．ある種のプリオンということになっ保存されている領域は，先生のスキームではていますが，お互い相性があるのではないでどのへんに分布しているのでしょうか．

しょうか．だからセルラインをたくさんつく村本

ヘリックスの 2 番目より前の と こればよいのではないかと，私はつい思ってしろが，β ヘリックスになっていると考えられまいます．ていて，それが野生型だと 5 回巻き，PrP 106

座長

確かにそのとおりだと思います．

だと欠けた部分があるので 3 回巻きと想定

フィールドの材料を使って診断に持っていこしているようです．その根拠は，5 回巻きのプ

うとすると，現在ではかなり無理があるかもリオンが PrP 106 を異常化した．したがって，しれませんが，よい持続感染細胞ができるとある程度似た構造をつくっていて鋳型になっいうことは，治療薬のスクリーニングといったはずだから，共通して持っている部分は同た意味からも非常に重要だろうと思います．

じような折りたたみをされているだろうと推

小野寺

特に BSE 株は 1 株だという話も定しているわけです．推定の部分がかなり多あるくらいですから，変異型 CJD もそうかもく，実際起こったことに合わせるようなモデしれませんが，あれにものすごく感受性の高ルをつくったということなので，その範囲でいものが見つかればよいと思います．

お考えいただきたいと思います．

座長

小野寺先生，ありがとうございます．

分子の真ん中あたりに欠損部分があります

次に村本先生のプリオン蛋白の構造と病原性が，そこが β ヘリックスの二巻き分くらい足についてのお話ですが，これは非常におもしりなくなっているけれ ど も，同 じ よ う な βろく，おまけに重要な部分が含まれていたとヘリックスをつくりうるのではないかという思います．片峰先生，いかがですか．

ことだと思います．

片峰茂（長崎大） どういう手法で何を精製して何を電顕で見たかをご説明いただけた
78 第 121 回日本医学会シンポジウム

片峰

いわゆるプロテネース K で切れる

N 末，ランダムコイル構造でという話があります．あそこはどこになるのですか．
村本

村本

プリオンを打たない場合には何も起精製過程でプロテネース K を使いこりません．通常のマウスで発生しているプますので，両方の分子で一番 N 末はなくなっリオンをトランスジェニックマウスに接種すています．

ると，そのとき初めて PrP マウスができま片峰す．ですから，野生型のプリオンが PrP マウ

あれはプロテネース K で処理したあとの話ですか．
村本

そうです．精製過程にはプロテネースにいく，逆はいかないということです．
山内

かつて GSS の 101 番のプロリン，ロス K 処理が入りますので，PrP 106 と野生型イシンの変換で，自然にいったという仕事がで違うのは，分子の中ほどの欠損の部分だけありますね．あれとは違うのですね．

です．N 末は両方ともなくなっています．
座長

いまの続きですが，今日電子顕微鏡で見せていただいた構造は，6 分子集まって村本

違います．野生型の場合と同じようにアイソフォームのコンバージョンです．
座長

関連のあるところで，分泌型のもの穴のあいた六角形のような構造をつくっていをつくられたわけですが，このマウスはどうましたが，高さは 1 分子だけですか．いくつなりましたか．

かの分子が重なり合ってできているということはありませんか．
村本

高さは測定されていませんので，わかりません．
座長

電子顕微鏡の写真をペーパーで見てもフラットなところだけですが，いままでプ

村本

このマウスは何もしないと何も起こりません．アミロイドも貯まりませんし，分泌型蛋白の異常化も起こりません．野生型と同じように，プリオンを接種した場合だけ異常化が起こっています．
座長

これはプリオンの正常な機能はない

リオンロッドといわれたり，scrapie-associ-と考えてよいわけですね．分泌型で膜に asso-

ated fibril と呼ばれたりしているものは，みなciate しているわけでもない，ただ蛋白ができ桿状になっていますね．あの桿状の構造と広ているだけで，おまけにほかのものはないわ

がった形の構造の関係はどうなのかと疑問をけですからね．

持っていましたから，おわかりであればぜひと思いました．
村本

私は先生がご存じ以上のことは知り

村本

正常機能を果たしているかどうかはわかりません．
座長

これはプリオンの正常な機能を知るうえで使えないでしょうか．

ません．
山内一也
（日本生物科学研） TgPrP 106 が村本

私たちのノックアウトマウスも，よくわからなかったのですが，あのマウスがNgsk マウスと同じように Doppel 症候が出ま

感染性のプリオンを産生していると考えてよす．それはコンストラクトデザインからそういのですか．それは正常なマウスに継代をしなります．分泌型を発現したときに，それがた場合に感染がいっているということですか．

中和されるかどうかがおもしろい所見だと思村本

正常なマウスにはいきません．非常に大きなバリアがあります．
山内

います．あまりハイレベルな発現のマウスは持っていませんが，私の見た範囲ではプルキ

そうすると，もともとの TgPrP 106

ンエ細胞のロスは軽くなっているような印象の中で，自然に感染性のものができているだがあります．ですから，もしある種のリガンろう，それを TgPrP 106 に打つと，継代できドが PrP と結合し，それが Doppel 症候と絡たという意味ですか．

んでいるとすれば，分泌型も同じような結合プリオン病 79

能があるかもしれないという示唆を得ていまミューテーションを入れて，SS 結合を破壊しす．

たらどのようになるのでしょう．

佐藤猛（国立精神・神経セ国府台病院・片峰

おもしろいと思いますが，どういう名誉院長） 聞き落としたのかもしれません

つぶし方をするか，すべてのつぶし方をするが，先生の抄録に書かれた PrP 106 の培養細とけっこうな仕事になると思います．それを胞ですが，試験管内で線維状のポリマーを形in vivo でやるのかという話になると，いま成したということでよろしいですか．のところは手が出せないでいますし，どうい

村本ポリマーを形成したのは，あくまでもトランスジェニックマウスの脳から精製された PrP 106 の異常型です．
佐藤

う結果になるかもわかりません．
座長

それでは最後に，八谷先生のおもしろい技術を使った，非常に新しい，これからそうすると，たとえばオリゴマーの進んでいくだろうという分野の仕事ですが，段階でチェックすることはできないわけです

何かありますでしょうか．視覚的にも非常にね．

きれいでした．

村本

オリゴマーになっているかどうかということでしょうか．
佐藤

ちょっと教えていただきたいのですが，先ほどの動画の場合，自発的に発色しているのはい．
ポリマーをつくる前の段階で，ですか，それとも蛍光のようなかたちですか．

PrP 106 の 1 分 子 が 数 分 子 オ リ ゴ マ ー を つ

八谷如美（国立精神・神経セ神経研） エキ

くったときとポリマーをつくったときで，アサイテーションエミッションの励起光を当てミロイドのように毒性に差があるかどうか．て，ライブの状態で観察します．

異常型プリオン蛋白の精製の過程

座長

時間はどのくらい観察できますか．

で，ショ糖密度勾配遠沈を用いて異常蛋白を八谷細胞が生きている限り，ずっと観察高濃度に含む分画を採取するステップがあるできます．と思いますが，そういう過程でオリゴマーに座長励起光を当てるでしょう．

八谷

それは顕微鏡の性能によって，その村本相当するような分画を取って，それを調べると新しい所見が得られるかもしれません．た

瞬間だけ励起光を当てて，長い間生かしていだ，基本的にはポリメライズした異常蛋白にくことができれば，細胞が死ぬまで見られま富む分画を実験に用いていますので，報告さす．私どものシステムでは，細胞にもよりまれている結果はポリマーになったものだけをすが，N2a で 3〜4 時間，A6 を用いたサイト見ていると考えたほうがよいと思います．

スケルトンのデータだとインキュベーターと座長

次は片峰先生の Doppel について，さらなるご質問などはありますでしょうか．
金子先生に関しては PrPLP とお呼びし連動してオーバーナイトでも 2 日でも 3 日
でも大丈夫です．
座長

そのほかどなたかありませんか．なたほうがよろしいかと思いますが，ジスルければ，ここで終わらせていただきたいと思

フィド結合の重要性をご指摘になっていましいます．

た が，あ そ こ の シ ス チ ン を ブ ロ ッ ク し て

80 第 121 回日本医学会シンポジウム