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沼津工業高等専門学校研究報告
第 52 号，2018 年 1 月

高脂肪高果糖飼料飼育マウスにおける雲南百薬（Anredera cordifolia）
エキスの肝障害改善効果
芳野恭士 *1・嘉島康二 *2・丸山浩司 *3
Anredera cordifolia Extracts Effectively Ameliorate Hepatic Disorders
in High Fat and High Fructose Diet-Fed Mouse Model
Kyoji YOSHINO *1, Koji KAJIMA *2, Koji MARUYAMA *3
Abstract: We investigated the preventive effects of the extracts of the leaves of Madeira vine
(Anredera cordifolia) on hepatic disorders in mice fed high fat and high fructose diet. Aqueoussolutions of water extract, ethanol extract, and methanol extract prepared from the leaves of A.
cordifolia were administered to nine-week-old male C57BL/6J mice as a drinking water for 42days. Plasma PAI-1 and TNF- levels in high fat and high fructose diet-fed mice were higher
than those of normal diet-fed mice, then high fat and high fructose diet-fed mice would beobese. Liver total cholesterol and triglyceride levels in high fat and high fructose diet-fed mice
were higher than those of normal diet-fed mice. Fatty liver was observed in high fat and highfructose diet-fed mice. Plasma TBARS, 8-OHdG, uric acid, and IFN- levels, markers foroxidative stress and inflammation, were also elevated in high fat and high fructose diet-fed
mice. These changes were suppressed by simultaneous administration of the extracts of A.
cordifolia. The active components for the preventive effects of A. cordifolia on metabolic
syndrome and liver disorders in mice would be some polyphenols and triterpenoid saponins.
Key Words: Madeira vine, Anredera cordifolia, Hepatic disorder, Mouse

１．はじめに抑制作用と脂質低下作用[1]、葉エキスのラットにおける血糖低下作用[8]、葉、茎、球茎エキスの薬物誘発でのラット

アカザカズラ（Anredera cordifolia）は、南米原産のツ肝炎に対する抑制作用[9]が報告されてきた。同属のルムラサキ科のつる性多年草であり、日本では「雲南百薬」

Anredera diffusa エキスには、傷治癒作用が認められていあるいは「オカワカメ」とも呼ばれている。その葉や球茎る[10]。我々も、これまでに高脂肪高果糖飼料飼育マウスが食用とされており、民間薬としても中国で糖尿病、炎症を用いて、雲南百薬の葉エキスの代謝症候群改善作用や酸あるいは肝臓病等に使用されてきた[1]。雲南百薬には、こ化ストレス抑制作用について報告してきた[11-13]。

れまでに根のエキスの抗菌作用[2]や全草エキスの抗ウイ

厚生労働省の「平成 25 年度国民健康・栄養調査」によ

ルス作用[3]、食用部位エキスの抗変異原作用[4]、葉エキると、日本人の男性の 28.6%、女性の 20.3%が肥満である

スの皮膚繊維芽細胞によるコラーゲン合成促進作用[5]、葉と報告されている。その原因としては、食生活における過や茎エキスの出産後の体調調節作用[6]、葉エキスのラット剰な脂質と糖の摂取が挙げられる[14]。肥満は、糖尿病や胃底部筋肉に対する弛緩作用[7]といった多様な効果が知高脂血症、高血圧といった生活習慣病の発症と関係があるられている。また、葉エキスの肥満ラットに対する肥満と考えられており、これらはさらに重篤な動脈硬化等の循環器障害を引き起こす可能性が高い[15]。そのため、内臓*1 物質工学科
Department of Chemistry and Biochemistry*2 応用薬理研究会
The Japanese Society of Pharmacometrics

脂肪型肥満に高血糖、高脂血症あるいは高血圧のうちの 2つを併発した状態を代謝症候群と呼ぶようになった[16]。
また、肥満そのものも、変形性関節症[17]や非アルコール性肝炎（NASH）[18]などの疾病と関連があるとされてい*3 ㈱三協ホールディングス

る。多量の脂質が肝臓に蓄積されると脂肪肝となり、Sankyo Holdings Co., Ltd.

M1M等の炎症性免疫細胞が産生する活性酸素による酸34

沼津工業高等専門学校研究報告

第 52 号

化ストレスを受けて、肝炎や肝硬変を発症して肝機能が低（TG）のレベルについては、Folch 法[20]で脂質を抽出し下する恐れがある。

た後、和光純薬工業社製コレステロール E-テストワコーお本研究では、高脂肪高果糖飼料飼育マウスにおける肝障

よびトリグリセライド E-テストワコーを用いて測定した。

害に対する、雲南百薬の葉エキスの改善作用について検討

血中過酸化脂質レベルとしてチオバルビツール酸反応した。

性物質（TBARS）レベルを Yagi の方法[21]で測定し、マロンジアルデヒド相当量として算出した。血中 8-ヒドロキ

２．材料および方法
２．１ 雲南百薬の葉エキスの調製

シ-2’-デオキシグアノシン（8-OHdG）のレベルは、日研ザイル社製 New 8-OHdG Check ELISA を用いて測定した。
血中尿酸レベルは、和光純薬工業社製尿酸 C-テストワコー

静岡県富士市で栽培された雲南百薬の乾燥葉を用いて、を用いて測定した。血中インターフェロン-（IFN-）のレ既報の方法[13]で水エキス、エタノール（EtOH）エキス

ベルは R＆D systems 社製 Quantikine ELISA mouseおよびメタノール（MeOH）エキスを調製した。

IFN-γ Immunoassay を用いて測定した。

２．２ 実験動物

２．５ 統計処理

本実験では、マウスは 12 時間間隔で照明が点灯、消灯

動物実験で得られたデータは、平均値±標準誤差で表しする 25℃の部屋で飼育し、実験中は飲料水と飼料を自由にた。各群間の平均値の差の検定には、一元配置分散分析法摂取させた。と Tukey の多重比較法を用い、P < 0.05 を統計学的に有意であるとした。

２．３ 高脂肪高果糖飼料によるマウスの飼育
日本 SLC 社より購入した 9 週齢の雄性 C57BL/6J 系マ

２．６ 糖類およびポリフェノール類の総量の測定

ウスを用い、Sato ら[19]の方法に従って代謝症候群のモデ

雲南百薬の葉の水エキス、EtOH エキスおよび MeOHルを作成した[11]。マウスを 1 群 5 匹として、健常群、高エキスについて、糖類の総量をアントロン硫酸法[22]を用

脂食群、水群、EtOH 群、MeOH 群の 5 群に分けた。飼いて測定した。糖量は、グルコース相当量として算出した。

料は、健常群には通常食として PMI 社製の 5L37 を、そまた、各エキスのポリフェノール類の総量を、フォーリンの他の群には高脂肪高果糖食として同社製の58TQ を与え-チオカルトー法[23]を用いて測定した。ポリフェノール量た。飲料水は、水群、EtOH 群、MeOH 群にはそれぞれ雲は、没食子酸エチル相当量として算出した。同様の実験を

南百薬の葉の水エキス、EtOH エキス、MeOH エキスの水3 回行い、データは平均値±標準偏差で表した。

溶液を与え、その他の群には水道水を与えた。マウスは 42日間飼育し、その後エーテル麻酔下で血液および肝臓を採２．７ DART-TOF-MS によるサポニン類の定性分析取した。動物の取扱いは、文部科学省「研究機関等におけ雲南百薬の葉の水エキス、EtOH エキスおよび MeOHる動物実験等の実施に関する基本指針」に準拠した「沼津エキスについて、リアルタイム直接分析（DART）-飛行時工業高等専門学校における動物実験に関する指針」に従っ

間型質量分析（TOF-MS）法を用いて、含有されるサポニた。

ン類の存在を検討した。質量分析の条件は、装置は JEOL

２．４ マウス試料の分析

LC-TOFMS、イオン化ガスはヘリウム、ガス温度は 350℃、社製 DART イオン源装着 JMS-T100LC AccuTOF™
マウスから採取した血液は、4 ℃、3000 rpm で 10 分間正イオンモードで測定した。

遠心分離し、その上清を血漿として用いた。肝臓について
は、0.04 M リン酸緩衝液（pH7.4）を用いて 5%ホモジネートを調製して用いた。

３．結果および考察

血中プラスミノーゲン活性化抑制因子-1（PAI-1）レベ

マウスの体重、脂肪重量および肝臓重量は、健常群に比ル は Innovative Research 社 製 Mouse PAI-1 Total

較して高脂食群で上昇し、高脂食群のマウスで肥満を発症

Antigen ELISA Kit、血中腫瘍壊死因子-（TNF-）レベしたことが確認されている[13]。これらの値の上昇は、

ルは eBioscience 社製 Mouse TNF alpha ELISA を用いてEtOH 群と MeOH 群で抑制される傾向が見られた[13]。

測定した。

本研究では、肥満のマーカーとしてさらに血中 PAI-1 およ肝臓の総コレステロール（TC）およびトリグリセリド

び TNF-のレベルを測定したが、各レベルともに健常群

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高脂肪高果糖飼料飼育マウスにおける雲南百薬（ Anredera cordifolia ）エキスの肝障害改善効果

P<0.05

P<0.05

P<0.05
P<0.05
P<0.050246810Fig.1 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

Fig.3 Effects of Anredera cordifolia on mouse liver

PAI-1 (pg/mL).

TC (mg/g).

Values are means ± SE, n=5.

Values are means ± SE, n=5.

0102030P<0.05

P<0.050100

2000123Fig.2 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

Fig.4

TNF- (pg/mL).

TG (mg/g).

Values are means ± SE, n=5.

Values are means ± SE, n=5.に比較して高脂食群で上昇した（Fig.1, Fig.2）。このうち、ストレスと炎症がある。肝臓中の TBARS のレベルは、健TNF-のレベルは水群でその上昇が抑制された。

常群に比較して高脂食群で上昇し、雲南百薬の葉エキスのEffects of Anredera cordifolia on mouse liver

肝臓中の TC と TG のレベルは、健常群に比較して高脂投与でその上昇が抑制される傾向が見られている[13]。全食群で上昇する傾向が見られた（Fig.3, Fig.4）。高脂食群

身の酸化ストレスマーカーについても、尿中 8-OHdG のでは高脂血症も見られ[13]、脂質代謝異常症を発症していレベルは、健常群に比較して高脂食群で上昇し、雲南百薬ることが確認された。血中 PAI-1 レベルの上昇と合わせるの葉エキス投与群でその上昇が抑制されることがわかっと血圧の上昇が予想され、本動物モデルは代謝症候群を発ている[13]。本実験では同マーカーとしてさらに、血中症しているものと予想される。実際、本動物モデルで血圧TBARS、8-OHdG さらには尿酸の各レベルを測定したが、の上昇が確認されている[24]。
EtOH 群と MeOH 群では、尿中 8-OHdG レベルと同様の変動が見られた（Fig.5～肝臓中の脂質レベルの上昇を抑制する傾向が見られた。目Fig.7）。また、全身の炎症マーカーとして血中 IFN-のレ視においても、高脂食群の肝臓は白色で肥大しており脂肪ベルを測定し、これについても同様の変動が見られた

肝の形成が認められたが、これは雲南百薬の葉の各エキス（Fig.8）。尿酸は、核酸や核酸代謝のマーカーであるが、の投与で抑制された。

近年、酸化ストレスや代謝症候群のマーカーとしても認識

血中グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼおされつつある[25]。

よびグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼの各レ以上の結果から、雲南百薬の葉の水エキス、EtOH エキ

ベルは、健常群に比較して高脂食群で上昇する傾向が見らスおよび MeOH エキスには、高脂肪高果糖飼料摂取によれ、高脂食群における肝機能障害の発症が確認されている

るマウスの肥満、脂質代謝異常症、酸化ストレス、炎症、[12]。これらの障害は、雲南百薬の葉エキスの投与で抑制さらには肝機能障害等を予防する効果があるものと考えされる傾向が見られ、特に EtOH エキスと MeOH エキスられる。雲南百薬の葉エキス[2]や Anredera diffusa エキで効果が強いことがわかっている。

ス[10]には細胞毒性は認められず、安全な食材と考えられ肝臓の機能障害と関連があると考えられる因子に酸化ることから、その有用性が期待される。

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沼津工業高等専門学校研究報告

第 52 号

P<0.05

P<0.05
P<0.05
P<0.050123020406080

Fig.5 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

Fig.8 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

TBARS (nmol/mL).

IFN- (pg/mL).

Values are means ± SE, n=5.

Values are means ± SE, n=5.

Aqueous ext.
EtOH ext.
MeOH ext.

00.20.4

0.6

051015Fig.6 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

Fig.9 Total saccharide contents of Anredera cordifolia

8-OHdG (pg/mL).

extracts (%, w/w as glucose).

Values are means ± SE, n=5.

Values are means ± SD, n=3.

Aqueous ext.
EtOH ext.

P<0.05

MeOH ext.
024

6

80123
Fig.7 Effects of Anredera cordifolia on mouse plasma

Fig.10 Total polyphenol contents of Anredera cordi-uric acid (mg/dL).

folia extracts (%, w/w as ethyl gallate).

Values are means ± SE, n=5.

Values are means ± SD, n=3.

雲南百薬の葉は、肉厚でデンプンを多く含むとともに類のエキスについてポリフェノール類の総量を測定した。

[26]、モロヘイヤ（Corchorus olitorius）の葉などと同様

EtOH エキスと MeOH エキスのポリフェノール含量に差に粘性多糖に富んでいる。そこで、3 種類のエキスについは見られず、いずれも水エキスに比較して高かったて糖類の総量を測定したところ、水エキスの糖含量が最も（Fig.10）。水エキスに比較して EtOH エキスと MeOH エ高く、次に EtOH エキスで高かった（Fig.9）。

キスで高い代謝症候群抑制効果が見られる傾向にあるこ一方、ポリフェノール類は植物に普遍的に含まれる成分とから、雲南百薬の葉に含まれるポリフェノール類は、その一つであり、茶のカテキン類のように、糖や脂質の吸収の作用に関与している可能性があるものと考えられる。

抑制作用[27]、酸化ストレスや炎症の抑制作用[28,29]とい多糖以外の成分として、雲南百薬の葉[8,30]や球茎[31]った保健作用が報告されているものが多い。そこで、3 種中のトリテルペノイドサポニンが知られている。葉エキス

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高脂肪高果糖飼料飼育マウスにおける雲南百薬（ Anredera cordifolia ）エキスの肝障害改善効果

boussingoside A1 [M-glucuronic acid]441

boussingoside A1(MW616)
COOH OOHOHOCOOH

CH3OH

Fig.11 DART - TOF spectrum of MeOH extract of Anredera cordifolia.の糖吸収抑制作用には、特にトリテルペノイドサポニンのToxicol., 39, 1045-1053.

boussingoside A1 が関与していることが報告されている[5] M. Takahashi, K. Takara, et al. (2012): Biosci.

[8]。そこで、雲南百薬の各エキス中の boussingoside A1

Biotechnol. Biochem., 76, 2317-2320.

について、DART-TOF-MS による定性分析を行った。

[6] K. Panyaphu, T. V. On, et al. (2011): J.

boussingoside A1 の分子量は 616 であり、アグリコンの部

Ethnopharmacol., 135, 226-237.

分の分子量は、グルクロン酸 1 つ分少ない 441 である。各

[7] W.-C. Lin, S.-C. Wu, et al. (1996): Phytother. Res., 10,

エキスとも、m/z 616 には分子イオンピークは見られなか625-627.

ったが、m/z 441 に明確なピークが見られたことから、[8] A. Espada, J. Rodriguez, et al. (1990): Can. J. Chem.,boussingoside A1 の存在が推測された。m/z 441 のピーク

68, 2039-2044.

強度を比較すると、EtOH エキスと MeOH エキスはほぼ[9] C.-C. Lin, T.-C. Sung, et al. (1994): Phytother. Res., 8,

同じで、水エキスではそれらより低かった。例として

201-207.

MeOH エキスのスペクトルを Fig.11 に示す。雲南百薬の[10] L. F. Villegas, I. D. Fernandez, et al. (1997): J.

葉エキスが示す代謝症候群抑制効果に、サポニンが関与しEthnopharmacol., 55, 193-200.ている可能性が示唆された。

[11] 丸山浩司, 新井康介, 他 (2014): 応用薬理, 87, 21-24.

アカザカズラの代謝症候群抑制効果に関する作用機序[12] 丸山浩司, 山田瑞恵, 他 (2015): 応用薬理, 88,に関する報告は少なく、葉エキスの肥満抑制作用に脂肪前47-51.

駆細胞での AMP 誘発プロテインキナーゼの活性化が関与[13] 丸山浩司, 芳野恭士, 他 (2016): 応用薬理, 90,することが知られている程度である[32]。今後、雲南百薬

25-30.の保健作用に関与する有効成分とその作用機序について[14] K. Sato, H. Arai, et al. (2008): J. Med. Invest., 55,の検討を行う必要がある。

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