1-3. 細胞材料開発室
Cell Engineering Division室長

中村幸夫

Yukio Nakamura

当開発室は、我が国の産・官・学におけるライフサイエンス研究分野の発展を促進することを目的として、ヒト及び動物由来の細胞材料の収集・検査・解析・標準化・保存・提供等のバンク業務を遂行している。1987 年 6 月の開設以来、細胞材料のバンク業務のみならず、新しい細胞材料やその付随情報等に関する開発研究、それらの利用技術の普及にも努力してきた。
また、2003 年度からはヒト由来の正常細胞（幹細胞等）に関してもバンク業務を拡張し、発生学・移植学・再生医学等の関連分野の研究に資することを目指している。最近の開発業務としては、従来の開発業務に加えて、胚性幹細胞株・高次機能維持細胞株・ヒト由来栄養細胞などの取得・樹立・維持培養・保存等に関わる技術開発にも取り組んでいる。なお、当開発室は、2002 年度より文部科学省ナショナルバイオリソースプロジェクト「細胞（動物培養細胞、がん細胞等）」分野の、また、2003 年度からは「ヒト細胞」分野の中核的拠点機関としても選定され、我が国の細胞材料整備における重要な役割を果たしている。

事業内容

1. 細胞材料の収集・検査・保存・品質管理・提供業務
2. 細胞材料のバンキング技術の改良
3. ヒト細胞材料取扱いに関する倫理的問題への対応
4. 研究用ヒト幹細胞バンキング（臍帯血（血液幹細胞）、間葉系幹細胞等）
5. 日本人由来不死化細胞株バンキング（EB ウイルス形質転換 B 細胞株）
6. 霊長類胚性幹細胞（ES 細胞）の培養・保存技術開発
7. 高次機能維持細胞株（幹細胞株、MAPC 等）の樹立を目指した技術開発
8. ヒト由来栄養細胞の樹立を目指した技術開発

職員とメンバー構成室長

中村幸夫（平成 15 年 4 月〜）

大野忠夫（平成 13 年 4 月〜平成 15 年 3 月）

研究員

寛山隆（平成 15 年 7 月〜）

先任技師

永吉

満利子（平成 13 年 4 月〜）

協力研究員

須藤和寛（平成 16 年 2 月〜）

BRC 研究協力員

飯村

BRC 業務委託56

西條薫（平成 13 年 4 月〜）

恵美（平成 16 年 1 月〜）

栗田香苗（平成 14 年 12 月〜）

戸塚早英里（平成 13 年 4 月〜）

青木尚子（平成 13 年 4 月〜）

福沢彩絵（平成 15 年 11 月〜）

高井則子（平成 13 年 4 月〜）

堀切寛子（平成 13 年 4 月〜平成 16 年 3 月）

細胞材料開発室

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2003~2004

BRC 非常勤職員

共同研究員

Cell Engineering Division

湯原直美（平成 15 年 10 月〜）

吉野佳織（平成 16 年 4 月〜）

松村尚和（平成 16 年 4 月〜）

菅野恵（平成 16 年 4 月〜）

関山佐知子（平成 16 年 4 月〜）

楠美美知子（平成 13 年 4 月〜）

小平洋子（平成 13 年 4 月〜）

内山幸子（平成 13 年 4 月〜）

江原多賀子（平成 15 年 1 月〜）

中村真理子（平成 15 年 5 月〜）

青木ひろみ（平成 16 年 9 月〜）

轟

研究生・研修生

健（平成 13 年 4 月〜）

沖明典（平成 13 年 4 月〜）

松井裕史（平成 13 年 4 月〜）

河合弘二（平成 13 年 4 月〜）

青木康展（平成 15 年 10 月〜）

服部一紀（平成 16 年 10 月〜）

宇土潤平（平成 15 年 8 月〜）

三原田賢一（平成 15 年 4 月〜）

前田るい（平成 15 年 4 月〜）

中村由美子（平成 13 年 4 月〜）

下川治（平成 15 年 7 月〜）

金子剛（平成 16 年 4 月〜）

ミラ・ゴーシュ（平成 13 年 4 月〜）

及川剛宏（平成 13 年 4 月〜）

奥村志乃（平成 16 年 10 月〜）

後列左から 宇土、楠美、吉野、前田、青木（尚）、関山、松村
三原田、江原、菅野、戸塚、飯村、奥村、内山高井、湯原、福澤、栗田、中村、小平
須藤、青木（ひ）、西條、中村室長、永吉、寛山

年次計画と成果Ⅰ . 細胞提供業務ならびに細胞材料のバンキング技術の改良
１）細胞材料提供業務
1987 年の開設以来、提供細胞数は増加の一途を辿っており、2003 年度の提供実数は約 3000株に達している。提供先は国内が中心であるが、海外への提供も全体の約 10％近くを占めるに至っている。また、国内においては大学等の公的研究機関への提供が中心ではあるが、企業等の民間研究機関への提供も全体の約 15％を占めている。

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細胞材料開発室

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2003~2004

Cell Engineering Division２）細胞材料のバンキング技術の改良
2003 年度より、幹細胞を中心としたヒト細胞材料のバンク業務を大々的に拡張した。これに併せて、2002 年度には GMP (Good Manufacturing Practice) 準拠培養施設を整備しており、当該施設を利用しての本格的なヒト幹細胞材料の提供業務を実施している。GMP 施設は、製薬会社等において医薬品や医療機器を製造する際に適用されている施設であり、基本的にこうした施設で製造された医薬品・医療機器でないと販売は許可されない。GMP 施設の３原則は、（１）
クリーンな室内環境、（２）SOP (System Operating Procedure) に則った作業、（３）Validation（第三者による認証）である。こうした原則を守ることで、人為的な誤り等を極力削減し、製品の品質管理を徹底することが求められている。細胞材料は通常の培養細胞株であっても、その性質は容易に変異することが知られている。プライマリーの幹細胞等の培養においては、培養細胞株以上にその性質は変異を起こしやすく、そうした意味で通常の培養細胞株よりもより徹底した良好な培養環境が必要である。殊にヒト由来のプライマリー細胞は、提供者の尊い意思によって提供されたものであり、品質の低下によって細胞材料としての価値が損なわれることが決してないように最大限の努力をすることが必須であると考えている。
３）ヒト細胞材料取扱いに関する倫理的問題への対応
ヒト細胞材料の取扱いに関しては、理化学研究所
筑波研究所研究倫理委員会に諮り、「ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針（平成 13 年 4 月 1 日、文部科学省、厚生労働省、経済産業省）」及び「疫学研究に関する倫理指針（平成 14 年 7 月 1 日、文部科学省、厚生労働省）」等を踏まえた審査を受け、当該委員会の承認を得られたヒト細胞材料のみをバンク業務の対象として取扱っている。ヒト細胞材料の当室への寄託（または譲渡）に当たっては、ヒト細胞材料採取機関及びヒト細胞材料寄託（または譲渡）機関におFigure 1.

細胞材料の年度別提供実数。年間約３０００件の提供を実施するに至っている。 いても、当該機関の倫理審査委員会において、上記の指針等を踏まえた上での承認を受けていることを確認している。当室からヒト細胞材料を提供するに当たっては、必要に応じて、ヒト細胞材料使用機関における倫理審査委員会による承認書の写しの提出を受けた上で、提供手続きを実施している。
４）研究用ヒト幹細胞バンキング（臍帯血（血液幹細胞）、間葉系幹細胞等）
2003 年度より、広島大学大学院医歯薬学総合研究科と連携して、研究用ヒト間葉系幹細胞の収集・保存・提供業務を開始した。また、文部科学省リーディングプロジェクト「再生医療の実現化プロジェクト・研究用幹細胞バンク整備領域」との連携により、研究用ヒト臍帯血幹細胞のバンク業務も開始した。
５）日本人由来不死化細胞株バンキング（EB ウイルス形質転換 B 細胞株）
2003 年度より、独立行政法人放射線医学総合研究所フロンティア研究センターと連携して、日本人由来不死化細胞株の収集・保存・提供業務を開始した。現在のところは、健常人由来の58

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2003~2004

Cell Engineering Division細胞株を取り扱っている。

Ⅱ . 開発研究計画
１）霊長類胚性幹細胞（ES 細胞）の培養・保存技術開発
マーモセット ES 細胞の維持培養技術を修得し、試験管内分化誘導技術開発にも取り組んでいる。また、2003 年度からはカニクイサル ES 細胞の維持培養技術・分化誘導技術の開発にも取り組んでいる。
２）高次機能維持細胞株（幹細胞株）の樹立を目指した技術開発
血液幹細胞を始めとして、各種幹細胞を分離・同定し、当該細胞を用いて高次機能維持細胞株（幹細胞株）を樹立するための技術開発を行っている。現在は主に、骨髄に存在し ES 細胞と同様な多分化能を有すると報告されている MAPC (multipotent adultprogenitor cells) の取得培養技術の開発に取り組ん
Figure 2.

でいる。

研究用ヒト臍帯血バンク事業の開始。文部科学省リーディングプロジェクト「再生医療の実現化プロジェクト・研究用幹細胞バンク整備領域」の一環として、研究用ヒト臍帯血バンク事業を平成 15 年度から開始した。

３）ヒト由来栄養細胞の樹立を目指した技術開発
ヒト ES 細胞を臨床に応用することを考えた場合には、マウス栄養細胞ではなく、ヒト由来栄養細胞を用いることが必須である。そこで、将来のこうした需要に応えるべく、ヒト由来栄養細胞の樹立を目指した技術開発に取り組んでいる。材料としては、ヒト胎盤、ヒト臍帯及びヒト臍帯血中に存在する当該細胞を増殖することを計画している。こうした栄養細胞は、単にヒト ES 細胞の培養のみならず、ヒト由来体性幹細胞（組織幹細胞）の維持培養や分化誘導にも大変有用な細胞となる可能性がきわめて高い。

Figure 3.
研究用ヒト間葉系幹細胞バンク事業の開始。文部科学省ナショナルバイオリソースプロジェクト「中核的拠点整備プログラム・ヒト細胞」の一環として、研究用ヒト間葉系幹細胞バンク事業を平成 15 年度から開始した。

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2003~2004

Cell Engineering Division

研究発表（誌上発表）（原著論文）* 印は査読制度のある論文誌
1. Tadao Ohno: Autologous cancer vaccine: A novel formulation. Microbiol. Immunol. 47: 255-263(2003) *2. Kaoru Saijo, Mayako Kato, Takashi Oomori, Isao Yoshimura, Tadao Ohno: The Validation study
which leads organizers "cry": So many points you must follow. AATEX 9: 54 (2003) *3. Fabian Emura, Hiroshi Kamma, Mila Ghosh, Naoto Koike, Toru Kawamoto, Kaoru Saijo, TadaoOhno, Nobuhiro Ohkouchi, and Takeshi Todoroki: Establishment and characterization of novel
xenograft models of human biliary tract carcinomas. Int. J. Oncol. 23: 1293-1300 (2003) *4. Lan Huang, Tadao Ohno: Protective anti-tumor immunity induced by fixed tumor cells in combination
with adjuvant in a murine hepatoma model. Cancer Letters 202: 153-159 (2003) *5. Oikawa T., Kawai K., Ishikawa I., Ohno T., and Akaza H.: Induction of potent anti-tumor
natural-killer cells from peripheral blood of patients with advanced prostate cancer. Scientific
Discovery 92: 1009-1015 (2003) *6. Fujiki, Y., Fukawa, K., Kameyama, K., Kudo, O., Onodera, M., Nakamura, Y., Yagami, K-i., Shiina,Y., Hamada, H., Shibuya, A., and Nakauchi, H.: “Successful xenotransplantation of humanhematopoietic progenitor cells into pig”, Transplantation 75: 916-922 (2003)*
7. Eiichi Ishikawa, Koji Tsuboi, Shingo Takano, Eiji Uchimura, Tadao Nose and Tadao Ohno:
Intratumoral injection of IL-2-activated NK cells enhances the antitumor effect of intradermallyinjected paraformaldehyde-fixed tumor vaccine in an rat intracranial brain tumor model. Cancer
Sci. 95: 98-103 (2004) *8. Ming Kuang, Bao Peng, Ming D. Lu, Li J. Liang, Jie F. Huang, Qiang He, Yun P. Hua, Saeri
Totsuka, Shu Q. Liu, Kam W. Leong, and Tadao Ohno: Phase II Randomized Trial of Autologous
Formalin-Fixed Tumor Vaccine for Post-surgical Recurrence of Hepatocellular Carcinoma.
Clinical Cancer Research 10: 1574-1579 (2004) *9. Hideki Harada, Satoru Watanabe, Kaoru Saijo, Isamu Ishiwata, and Tadao Ohno: A Wilms tumor cellline, HFWAT, can greatly stimulate proliferation of CD56+ human natural killer cells and theirnovel precursors in blood mononuclear cells. Experimental Hematology 32: 614-621 (2004) *10. Mila Ghosh, Naoto Koike, Go Yanagimoto, Shin-ichi Tsunoda, Sumil Kaul, Takashi Hirano,
Fabian Emura, Hironobu Kashiwagi, Toru Kawamoto, Nobihiro Ohkohchi, Kaoru Saijo, Tadao
Ohno: Establishment and characterization of unique human gallbladder cancer cell lines.
INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 24: 1189-1196 (2004) *60

細胞材料開発室

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2003~2004

Cell Engineering Division

11. Kushida, S., B.G.Peng, E. Uchimura, M. Kuang, L. Huang, M. Miwa, T. Ohno: A tumour vaccine of
fixed tumour fragments in a controlled-release vehicle cytokines for therapy of hepatoma in mice.
Digestive and Liver Disease 36: 478-485 (2004) *12. Hideki Harada, Kaoru Saijo, Isamu Ishikawa, and Tadao Ohno: A GFP-Transfected HFWT CellLine, CHINK-1, as a Novel Target for Non-RI Activated Natural Killer Cytotoxicity Assay.
Human Cell 17: 43-48 (2004) *13. Eiichi Ishikawa, Koji Tsuboi, Kaoru Saijo, Hideki Harada, Shingo Takano, Tadao Nose andTadao Ohno: Autologous Natural Killer Cell Therapy for Human Recurrent Malignant Glioma.
Anticancer Research 24: 1861-1872 (2004) *14. Nakamura Y., Hiroyama T., Nagayoshi M., Saijo K., Sudo K., Iimura E., Kurita K., Totsuka S., Aoki
N., and Obata Y. Human and Animal Cell Collection at RIKEN BioResource Center. Proceedingsof the Tenth International Congress for Culture Collections. Chapter 13: 365-367 (2004)
15. Fujioka, T., Yasuchika, K., Nakamura, Y., Nakatsuji, N., and Suemori H. A simple and efficient
cryopreservation method for primate embryonic stem cells. Int. J. Dev. Biol. (in press) *（総説）1. 中村幸夫、今川重彦：「ホルモンの辞典」エリスロポエチン（朝倉書店）、p.397-403 (2004)
2. 寛山隆、中村幸夫：「バイオ高性能機器・新技術利用マニュアル」動物細胞（共立出版）、

p.1546-1550 (2004)
研究発表（学会発表）（国際会議等）
1. Yukio Nakamura, Takashi Hiroyama, Mariko Nagayoshi, Kaoru Saijo, Kazuhiro Sudo, Emi Iimura,Kanae Kurita, Saeri Totsuka, Naoko Aoki, Yuichi Obata: “Human and Animal Cell Collection at
RIKEN BioResource Center” 10th International Congress for Culture Collection (ICCC) (2004)（国内会議）
1. 中村幸夫：「細胞材料開発事業の現状と今後の展望」第 57 回日本泌尿器科学会茨城地方会（2003）
2. 中村幸夫：「「ヒト細胞」および「動物細胞」バンク事業：文部科学省ナショナルバイオリソースプロジェクト中核的拠点整備プログラム」第 26 回日本分子生物学会（2003）
3. 寛山隆、前田豊樹、中崎有恒、栗田良、三原田賢一、前田るい、中村幸夫、中熊秀喜、谷憲三朗：「変異型（Pig-A 欠損）K562 細胞の巨核球系細胞への分化異常と RNA 結合タンパク質・Musashi １による分化能の回復」第 26 回日本分子生物学会（2003）61

細胞材料開発室BRC Annual Report

2003~2004

Cell Engineering Division

4. 三原田賢一、大澤光次郎、寛山隆、藤岡剛、前田るい、長澤俊郎、中村幸夫：「鉄輸送タンパク質 24p3(lipocalin-2) の血球産生調節機構における生理学的意義の検討」第 26 回日本分子生物学会（2003）
5. 前田るい、三原田賢一、寛山隆、藤岡剛、八神健一、中村幸夫：「血球産生調節機構における D type Cyclin の機能解析」第 26 回日本分子生物学会（2003）
6. 寛山隆、須藤和寛、三原田賢一、前田るい、栗田良、谷憲三朗、中村幸夫：「霊長類胚性幹細胞を用いた造血細胞への分化誘導」第 66 回日本血液学会（2004）
7. 三 原 田 賢 一、 大 澤 光 次 郎、 寛 山隆、 須 藤 和 寛、 前 田 る い、 長 澤 俊 郎、 中 村 幸 夫：

「24p3(lipocalin-2) の血球産生調節機構における生理学的意義の検討」第 66 回日本血液学会（2004）
8. 高田圭、平井雅子、崔硯、中村幸夫、中内啓光、高橋恒夫：「研究用幹細胞リソースバンクにおけるデータシステムの構築」第 27 回日本造血細胞移植学会（2004）
9. 中村幸夫：「『ヒト細胞』供給体制整備の意義と概要」第 27 回日本分子生物学会（2004）
10. 中村幸夫：「『ヒト細胞』および『動物細胞』バンク事業：文部科学省ナショナルバイオリソースプロジェクト中核的拠点整備プログラム」第 27 回日本分子生物学会（2004）
11. 寛山隆、前田るい、青木尚子、須藤和寛、三原田賢一、中村幸夫：「間葉系細胞株 10T 1/2 を用いたカニクイザル胚性幹細胞の造血細胞への分化誘導」第 27 回日本分子生物学会（2004）
12. 須藤和寛、関山佐知子、寛山隆、三原田賢一、中村幸夫：「マウス骨髄由来多能性幹細胞の同定と性状の検討」第 27 回日本分子生物学会（2004）
13. 飯村恵美、吉野佳織、岩瀬秀、西條薫、中村幸夫：「ヒト由来培養細胞株の STR 解析」

第 27 回日本分子生物学会（2004）
14. 戸塚早英里、須藤和寛、西條薫、寛山隆、中村幸夫：「ヒト間葉系幹細胞とヒト繊維芽細胞の比較」第 27 回日本分子生物学会（2004）
15. 青木尚子、寛山隆、前田るい、須藤和寛、三原田賢一、中村幸夫：「ヒト臍帯由来繊維芽細胞を Feeder としたカニクイザル胚性幹細胞の培養」第 27 回日本分子生物学会（2004）
16. 吉野佳織、須藤和寛、西條薫、関山佐知子、寛山系細胞の樹立」第 27 回日本分子生物学会（2004）
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隆、中村幸夫：「ヒト臍帯血由来間葉細胞材料開発室

BRC Annual Report

2003~2004
17. 三原田賢一、寛山

Cell Engineering Division

隆、須藤和寛、宇土潤平、前田るい、長澤俊郎、中村幸夫：「24p3(lipocalin-2)の血球産生調節機構における生理学的意義の検討」第 27 回日本分子生物学会（2004）
18. 宇土潤平、三原田賢一、須藤和寛、寛山隆、前田るい、八神健一、中村幸夫：「血球産生調節機構における D type Cyclin の機能解析」第 27 回日本分子生物学会（2004）
19. 前田るい、寛山隆、須藤和寛、三原田賢一、山海直、小倉淳郎、中村幸夫：「マウス核移植 ES 細胞の造血細胞への分化能」第 27 回日本分子生物学会（2004）

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