2024年版
ヒストファイン
免疫組織化学染色試薬

検出系試薬 / 補助試薬のご紹介
ヒストファイン ユニバーサル試薬
ヒト組織用
マウス組織用
ラット組織用ヒストファイン 構成試薬
ヒストファイン 補助試薬

製品の選び方シンプルステイン（酵素標識ポリマー試薬）〈製品の選び方〉
使用する
組織の種類

発色させる
酵素の種類

組み合わせる
第一抗体の種類

組み合わせる第一抗体によって適切な製品をお選び下さい。

免疫組織化学染色ヒト組織

ペルオキシダーゼ

マウス組織

アルカリフォスファターゼ

ラット組織

ペルオキシダーゼ

マウス・ウサギ第一抗体両用 マウス・ウサギ第一抗体両用
マウス第一抗体
ウサギ第一抗体

マウス第一抗体
ウサギ第一抗体

ペルオキシダーゼ

マウス・ウサギ第一抗体両用

マウス第一抗体

マウス第一抗体

ウサギ第一抗体

ウサギ第一抗体

ヤギ第一抗体ヤギ第一抗体ヤギ第一抗体ラット第一抗体

製品

シンプルステイン
マウスMAX-PO（Rat）
シンプルステイン
マウスMAX-PO（G）

シンプルステイン
MAX-PO（G）
シンプルステイン
MAX-PO（R）
シンプルステイン
MAX-PO（M）
シンプルステイン
MAX-PO（MULTI）

シンプルステイン
AP（R）
シンプルステイン
AP（M）

シンプルステイン
マウスMAX-PO（R）

マウスステインキット

シンプルステイン
ラットMAX-PO（G）
シンプルステイン
ラットMAX-PO（R）
シンプルステイン
ラットMAX-PO（M）
シンプルステイン
ラットMAX-PO（MULTI）

シンプルステイン
AP（MULTI）

SAB-POキット（ストレプトアビジンービオチンシステム）〈製品の選び方〉
使用する
組織の種類

ヒト組織

発色させる
酵素の種類

ペルオキシダーゼ組み合わせる
第一抗体の
種類
製

1

免疫組織化学染色マウス第一抗体

ウサギ第一抗体

SAB-PO（M）

SAB-PO（R）

ヤギ第一抗体組み合わせる第一抗体によって適切な製品をお選び下さい。

マウス・ウサギ第一抗体両用品
SAB-PO（Goat）

SAB-PO（MULTI）

調製済試薬がドロッピングボトルに入っているので操作が簡単！

操作手順
SAB-POキット
シンプルステイン（ストレプトアビジンー マウスステインキット（酵素標識ポリマー試薬）
ビオチンシステム）
脱パラフィン

脱パラフィン

脱パラフィン

内因性ペルオキシダーゼ処理

内因性ペルオキシダーゼ処理

内因性ペルオキシダーゼ処理(MAX-POの場合)

第一抗体（常温または4℃）

洗プロテインブロッキング

ブロッキング試薬A（常温、10分間）（常温、60分間）

浄洗

シンプルステインMAX - PO
シンプルステインマウスMAX - PO
シンプルステインラットMAX - PO
シンプルステインAP

浄

第一抗体

第一抗体

（常温または4℃）（常温または4℃）（常温、30分間）

洗

洗

浄

調製済
もしくは
基質溶液

洗

第二抗体

ブロッキング試薬B（常温、10分間）

調製
洗

浄

洗

浄

（常温、5-20分間）

酵素試薬

シンプルステイン
マウスMAX - PO（M）（常温、5分間）

洗

浄（常温、10分間）

基質溶液（常温、5-20分間）

浄

浄（常温、10分間）

洗

浄

洗

浄

対比染色、封入

調製済
染色終了

調製

もしくは

基質溶液

基質溶液

（常温、5-20分間）

洗（常温、5-20分間）

浄

対比染色、封入

染色終了

調製済
もしくは

基質溶液

基質溶液

（常温、5-20分間）

洗（常温、5-20分間）

浄

対比染色、封入

染色終了

より詳 細な操作手順や使用説明書/電子添文は弊社WEBサイトに掲載しております。
裏 表 紙にW E Bサイトへのアクセス方法の説明がございます。
2ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ヒト組織用
シンプルステイン
ペルオキシダーゼ染色

貯法

品名

ヒストファイン製造販売承認番号

コード

包装

2−8℃
価格（円）

シンプルステイン MAX-PO（M）

Histof ine Simple Stain MAX-PO（M）

424131 170ﾃｽﾄ
424132 500ﾃｽﾄ
医薬品 21300AMZ00405000 424134 1500ﾃｽﾄ

40,00060,00017mL×9本 128,000

医薬品

21300AMZ00405000

17mL×1本医薬品

21300AMZ00405000

17mL×3本（動物種：ヤギ）［マウス第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
構成試薬：酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗マウスIgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

ヒストファインシンプルステイン MAX-PO（R）

Histof ine Simple Stain MAX-PO（R）

424141 170ﾃｽﾄ
医薬品 21300AMZ00406000 424142 500ﾃｽﾄ
医薬品 21300AMZ00406000 424144 1500ﾃｽﾄ
医薬品

21300AMZ00406000

40,00060,00017mL×9本 128,000
17mL×1本
17mL×3本［ウサギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
構成試薬：酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗ウサギIgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

ヒストファインシンプルステイン MAX-PO（G）

Histof ine Simple Stain MAX-PO（G）

414161414162

170ﾃｽﾄ500ﾃｽﾄ

17mL×1本
17mL×3本

40,00060,000（動物種：ウサギ）［ヤギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ヤギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗ヤギIgG（動物種：ウサギ）を結合させた標識ポリマー

ヒストファインシンプルステイン MAX-PO（MULTI）

Histof ine Simple Stain MAX-PO（MULTI）

424151 170ﾃｽﾄ
424152 500ﾃｽﾄ
医薬品 21300AMZ00321000 424154 1500ﾃｽﾄ
医薬品

21300AMZ00321000

17mL×1本医薬品

21300AMZ00321000

17mL×3本
17mL×9本

48,00065,000130,000（動物種：ヤギ）［マウス・ウサギ第一抗体両用］ペルオキシダーゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
ペルオキシダーゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
構成試薬：酵素標識第二抗体

アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗マウスIgG（動物種：ヤギ）
および抗ウサギIgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

シンプルステインについて
ヒストファイン ユニバーサル試薬であるシンプルステイン各試薬は、アミノ酸ポリマーに酵素とFabʼにした第二抗体を結合させた標識ポリマーです。組織切片上の抗原に第一抗体を反応させ、次にシンプルステイン試薬を反応させると、抗原・第一抗体・ポリマー・酵素の複合体を形成することができます。
この複合体の酵素活性を利用し基質を発色させ、抗原部位を染色します。
第二抗体をFabʼに断片化しているため、細胞表面上にFcレセプターを有する細胞（マクロファージ、B細胞など）との非特異反応を低減する効果が期待されます。

3

ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ヒト組織用
シンプルステイン
染色原理: ペルオキシダーゼ（酵素）: Fabʼにした第二抗体: アミノ酸ポリマー

第一抗体
抗 原

ヒト組織切片: シンプルステイン MAX-PO

特長● 第一抗体に反応させた後は発色させるだけです。
ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法で行う正常血清によるブロッキング操作、第二抗体および酵素試薬の反応の3ステップを１ステップに省略できます。
●ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法と比べて高感度・低バックグラウンド、強い染色結果が得られます。
● 調製済みのため、そのまま使用可能（１ボトルタイプ）
です。
●アビジン・ビオチン系を利用しないため、内因性ビオチンの影響を受けません。

シンプルステインMAX-POを用いた染色例胃シンプルステインMAX-PO（MULTI）
抗アクチン（平滑筋）モノクローナル抗体（動物種：マウス）

扁桃

シンプルステインMAX-PO（M）
CD3モノクローナル抗体（PS1）（動物種：マウス）＊pH9 AC処理（＋）

扁桃

シンプルステインMAX-PO（R）
CD23ウサギモノクローナル抗体（SP23）（動物種：ウサギ）＊pH9 AC処理（＋）＊抗原賦活化液pH94

ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ヒト組織用
シンプルステイン
アルカリフォスファターゼ染色

貯法

品名

ヒストファインコード

シンプルステイン AP（M）

414241

包装

170ﾃｽﾄ2−8℃
価格（円）17mL×1本

54,000

Histof ine Simple Stain AP（M）［マウス第一抗体用］アルカリフォスファターゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにアルカリフォスファターゼと Fabʼ にした抗マウス IgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

ヒストファインシンプルステイン AP（R）

414251

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

54,000

Histof ine Simple Stain AP（R）［ウサギ第一抗体用］アルカリフォスファターゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにアルカリフォスファターゼと Fabʼ にした抗ウサギ IgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

ヒストファインシンプルステイン AP（MULTI）

414261

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

58,000

Histof ine Simple Stain AP（MULTI）［マウス・ウサギ第一抗体両用］アルカリフォスファターゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
アルカリフォスファターゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体
アミノ酸ポリマーにアルカリフォスファターゼと Fabʼ にした抗マウス IgG（動物種：ヤギ）および抗ウサギ IgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

染色原理: アルカリフォスファターゼ（酵素）: アミノ酸ポリマー: Fabʼにした第二抗体

第一抗体
抗 原

ヒト組織切片: シンプルステインAP

特長●スメア標本、サイトスピン標本の染色に最適です。
● 第一抗体に反応させた後は発色させるだけです。ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法で行う正常血清によるブロッキング操作、第二抗体および酵素試薬の反応の3ステップを１ステップに省略できます。
●ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法と比べて高感度・低バックグラウンド、強い染色結果が得られます。
● 調製済みのため、そのまま使用可能（１ボトルタイプ）です。
●アビジン・ビオチン系を利用しないため、内因性ビオチンの影響を受けません。

シンプルステインAPを用いた染色例

急性リンパ性白血病（T-ALL）

シンプルステインAP（M）
CD7（T55）モノクローナル抗体（動物種：マウス）

5

正常ヒト末梢血シンプルステインAP（MULTI）
CD41（TP80）モノクローナル抗体（動物種：マウス）

胃シンプルステインAP（R）
シンプルステインAP（M）
抗アクチン（平滑筋）モノクローナル抗体（HHF35） 抗S-100ポリクローナル抗体（動物種：マウス）（動物種：ウサギ）

結腸ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ヒト組織用
ストレプト アビジン-ビオチン（SAB）
ペルオキシダーゼ染色

貯法

品名

ヒストファイン製造販売承認番号

SAB-PO（M）キット

Histof ine SAB-PO（M）Kit［マウス第一抗体用］
構成試薬：ブロッキング試薬Ⅱ
第二抗体
酵素試薬

ヒストファイン

03AM0769

医薬品

03AM0769

SAB-PO（R）キット［ウサギ第一抗体用］
構成試薬：ブロッキング試薬Ⅱ
第二抗体
酵素試薬

医薬品

03AM0770

医薬品

03AM07706mL×各1本
17mL×各3本価格（円）38,00054,000424031 50ﾃｽﾄ
424032 500ﾃｽﾄ

6mL×各1本
17mL×各3本

35,00054,000

10％ヤギ正常血清
ビオチン標識抗ウサギ IgG 抗体（動物種：ヤギ）
ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン

414011 50ﾃｽﾄ
414012 500ﾃｽﾄ

SAB-PO（Goat）キット

Histof ine SAB-PO（Goat）Kit［ヤギ第一抗体用］
ブロッキング試薬Ⅱ
第二抗体
酵素試薬

ヒストファイン

424021 50ﾃｽﾄ
424022 500ﾃｽﾄ

包装

10％ウサギ正常血清
ビオチン標識抗マウス IgG＋IgA＋IgM 抗体（動物種：ウサギ）
ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン

Histof ine SAB-PO（R）Kit

ヒストファイン

医薬品

コード

2−8℃

6mL×各1本
17mL×各3本

35,00054,00010％ウサギ正常血清
ビオチン標識抗ヤギ IgG 抗体（動物種：ウサギ）
ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン

SAB-PO（MULTI）キット

Histof ine SAB-PO（MULTI）Kit［マウス・ウサギ第一抗体両用］
構成試薬：ブロッキング試薬Ⅱ
第二抗体
酵素試薬

医薬品

06AM1002

医薬品

06AM1002

424041 170ﾃｽﾄ 17mL×各1本 48,000
424043 1000ﾃｽﾄ 100mL×各1本 98,000

10％ヤギ正常血清
ビオチン標識抗マウス IgG＋ウサギ IgG 抗体（動物種：ヤギ）
ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン

染色原理: 酵素標識ストレプトアビジン: ビオチン
ビオチン標識第二抗体: 酵素（ペルオキシダーゼ）

第一抗体
抗 原

特

長

組織切片

● アビジン類似物質であるストレプトアビジンの使用により、バックグラウンド染色をおさえ、特異性の高い
鮮明な染色像が得られます。
● 酵素を直接ストレプトアビジンに結合させているため、試薬の安定性が高くなっています。
● キットの構成試薬は全て調製済みのため、そのまま使用可能です。

各 構 成 試 薬 は 単 品 販 売 もご ざ い ま す ⇒ P 1 4
6

ヒストファイン

ユニバーサル試薬

マウス組織用シンプルステインマウス
ペルオキシダーゼ染色

貯法

品名

ヒストファインコード

マウスステインキット

414321414322

Histof ine Mouse Stain Kit［マウス組織用 マウス第一抗体用］①ブロッキング試薬 A②ブロッキング試薬 B③シンプルステインマウス MAX-PO
（M）

包装

50ﾃｽﾄ
500ﾃｽﾄ2−8℃
価格（円）6mL×各1本
17mL×各3本

46,00090,000アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼと Fabʼ にした抗マウス IgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー

染色原理: ペルオキシダーゼ（酵素）: Fabʼにした第二抗体: アミノ酸ポリマー
ブロッキング試薬A
内因性
マウスIg
マウス
組織切片

第一抗体

抗 原

: シンプルステインマウス MAX-PO（M）

ブロッキング試薬B

特長● マウス組織専用試薬です。
● ブロッキング操作をしているため、内因性マウス免疫グロブリン（Ig）と反応しません。
● 調製済みのため、そのまま使用可能（１ボトルタイプ）です。
● アビジン・ビオチン系を利用しないため、内因性ビオチンの影響を受けません。

マウス正常腸マウス正常腸マウスステインキットを用いた染色例

マウスステインキット
シンプルステインDAB溶液
PC10（動物種：マウス）
抗増殖細胞抗原（PCNA）
モノクローナル抗体

7

マウスステインキット
シンプルステインDAB溶液
抗アクチンモノクローナル抗体（動物種：マウス）

ヒストファイン

ユニバーサル試薬

マウス組織用シンプルステインマウス
ペルオキシダーゼ染色

貯法

品名

コード

ヒストファイン シンプルステインマウスMAX-PO（R）

414341

包装

170ﾃｽﾄ2−8℃
価格（円）17mL×1本

48,000

Histof ine Simple Stain Mouse MAX-PO（R）［マウス組織用 ウサギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼと Fabʼ にした抗ウサギ IgG（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

ヒストファイン シンプルステインマウスMAX-PO（G）

414351

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

48,000

Histof ine Simple Stain Mouse MAX-PO（G）（動物種：ウサギ）［マウス組織用 ヤギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ヤギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗ヤギIgG（動物種：ウサギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

ヒストファイン シンプルステインマウスMAX-PO（Rat） 414311

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

48,000

Histof ine Simple Stain Mouse MAX-PO（Rat）（動物種：ヤギ）［マウス組織用 ラット第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ラット IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗ラットIgG（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

染色原理: ペルオキシダーゼ（酵素）: Fabʼにした第二抗体: アミノ酸ポリマー

第一抗体
抗 原

マウス組織切片: シンプルステインマウス MAX-PO

特長● マウス組織専用試薬です。
● 吸収処理をしているため、内因性マウス免疫グロブリン（Ig）と反応しません。
● 第一抗体に反応させた後は発色させるだけです。ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法で行う正常血清によるブロッキング操作、第二抗体および酵素試薬の反応の3ステップを１ステップに省略できます。
●ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法と比べて高感度・低バックグラウンド、強い染色結果が得られます。
● 調製済みのため、そのまま使用可能（１ボトルタイプ）です。
● アビジン・ビオチン系を利用しないため、内因性ビオチンの影響を受けません。

シンプルステインマウスMAX-POを用いた染色例
マウス正常皮膚シンプルステインマウスMAX-PO（R）
シンプルステインDAB溶液
抗ケラチン／サイトケラチンポリクローナル抗体（動物種：ウサギ）

マウス正常リンパ節

シンプルステインマウスMAX-PO（G）
シンプルステインDAB溶液
CD3-ε（M-20）（動物種：ヤギ）

マウス正常脾臓

シンプルステインマウスMAX-PO（Rat）
シンプルステインDAB溶液
マウスCD45R／B220（動物種：ラット）

8

ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ラット組織用シンプルステインラット
ペルオキシダーゼ染色

貯法

品名

コード

ヒストファイン シンプルステインラットMAX-PO（M） 414171

包装

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

2−8℃
価格（円）

45,000

Histof ine Simple Stain Rat MAX-PO（M）［ラット組織用 マウス第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗マウスIgG（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

ヒストファイン シンプルステインラットMAX-PO（R）

414181

170ﾃｽﾄ

17mL×1本

45,000

Histof ine Simple Stain Rat MAX-PO（R）［ラット組織用 ウサギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFabʼにした抗ウサギIgG（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

ヒストファイン シンプルステインラットMAX-PO（G）

414331 170ﾃｽﾄ

17mL×1本

45,000

Histof ine Simple Stain Rat MAX-PO（G）（動物種：ウサギ）［ラット組織用 ヤギ第一抗体用］ペルオキシダーゼ標識抗ヤギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼと Fabʼ にした抗ヤギ IgG（動物種：ウサギ）
酵素標識第二抗体を結合させた標識ポリマー

ヒストファイン シンプルステインラットMAX-PO（MULTI）414191 170ﾃｽﾄ

17mL×1本

45,000

Histof ine Simple Stain Rat MAX-PO（MULTI）（動物種：ヤギ）マウス・ウサギ第一抗体両用］ペルオキシダーゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）
ペルオキシダーゼ標識抗ウサギ IgG ポリクローナル抗体（Fabʼ）（動物種：ヤギ）
アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼと Fabʼ にした抗マウス IgG（動物種：ヤギ）
酵素標識第二抗体および抗ウサギ IgG（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマー［ラット組織用

染色原理: ペルオキシダーゼ（酵素）: Fabʼにした第二抗体: アミノ酸ポリマー

第一抗体
抗 原

ラット組織切片: シンプルステインラット MAX-PO

特長●ラット組織専用試薬です。
●吸収処理をしているため、内因性ラット免疫グロブリン（Ig）と反応しません。
●第一抗体に反応させた後は発色させるだけです。ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法で行う正常血清によるブロッキング操作、第二抗体および酵素試薬の反応の3ステップを１ステップに省略できます。
●ストレプトアビジン・ビオチン（SAB）法と比べて高感度・低バックグラウンド、強い染色結果が得られます。
●調製済みのため、そのまま使用可能（１ボトルタイプ）です。
●アビジン・ビオチン系を利用しないため、内因性ビオチンの影響を受けません。

9ヒストファイン

ユニバーサル試薬

ラット組織用シンプルステインラット
ラット正常大腸

シンプルステインラット
MAX-POを用いた染色例

シンプルステインラットMAX-PO（MULTI）
抗S-100ポリクローナル抗体（動物種：ウサギ）

ラット正常大腸

シンプルステインラットMAX-PO（M）
抗ビメンチンモノクローナル抗体（動物種：マウス）＊pH6 MW処理（＋）

ラット正常脾臓

＊10mMクエン酸緩衝液pH6

シンプルステイン
マウス組織用シンプルステインラットMAX-PO（R）
抗グルカゴンポリクローナル抗体（動物種：ウサギ）

ラット正常リンパ節

シンプルステインラットMAX-PO（G）
CD3-ε（M-20）（動物種：ヤギ）マウス・ラット組織用
コード

吸収処理一覧

吸収処理

ヒストファインシンプルステインマウス MAX-PO(R)414341抗ウサギ IgG固相化したヒト血清タンパク質、（動物種：ヤギ） マウス IgG とマウス血清タンパク質

ヒストファインシンプルステインマウス MAX-PO(G)414351

抗ヤギ IgG固相化したマウス IgG とマウス血清タンパク質（動物種：ウサギ）

ヒストファインシンプルステインマウス MAX-PO(Rat)

414311抗ラット IgG固相化したマウス IgG とマウス血清タンパク質（動物種：ヤギ）

コード

吸収処理

ラット組織用ヒストファインシンプルステインラット MAX-PO(M)414171抗マウス IgG固相化したラット、ヒト、イヌ、ブタ、ウサギ（動物種：ヤギ） およびウシ血清タンパク質

ヒストファインシンプルステインラット MAX-PO(R)414181抗ウサギ IgG固相化したラット、ヒト、イヌ、ブタ、マウス（動物種：ヤギ） およびウシ血清タンパク質

ヒストファインシンプルステインラット MAX-PO(G)414331

抗ヤギ IgG固相化したラット IgG とラット血清タンパク質（動物種：ウサギ）

ヒストファインシンプルステインラット MAX-PO(MULTI)

414191

固相化したラット、ヒト、イヌ、ブタ、ウサギ
抗マウス IgG（動物種：ヤギ） およびウシ血清タンパク質
抗ウサギ IgG固相化したラット、ヒト、イヌ、ブタ、マウス（動物種：ヤギ） およびウシ血清タンパク質注）ラット組織用(コード : 414171、414181、414191)は、ラットに追加して複数の動物種の血清タンパク質で吸収処理をしていますが、本製品のラット以外の動物組織での使用について弊社は性能を保証いたしかねます。
ご使用の際は、まずはサンプル等で性能をご検討ください。

10

ヒストファイン

補助試薬

基質
ペルオキシダーゼ（HRP）基質

貯法

品名

シンプルステイン DAB溶液
Simple Stain DAB Solution

2−8℃

コード

包装

価格（円）

415171415172415174

170ﾃｽﾄ（調製済）500ﾃｽﾄ（調製済）1500ﾃｽﾄ（調製済）15,00025,00050,000

シンプルステイン DAB溶液
17mL×1本（170テスト）、17mL×3本（500テスト）、17mL×9本（1500テスト）
・調製済みのため、そのまま使用可能（H2O2 含有）。
・発色は茶褐色。非水溶性封入剤で封入することを推奨する。水溶性封入剤で封入することも可能である。
注）ボトルの中に沈殿物が生成する場合がある。沈殿物の微粒子を除去するため、ボトルの先端には、フィルターが内蔵されているが微粒子の一部が漏出する場合がある。ボトルの中の沈殿物は染色の性能には影響しないが漏出した微粒子の一部が組織に付着した場合、鮮明な顕鏡画像を得るには、不向きな場合がある。
医薬品

DAB 基質キット

425011

500ﾃｽﾄ

28,000DAB Substrate Kit
発色基質（試薬 A）3,3ʼ-ジアミノベンジジン・4HCl 3mL×1 本
基質緩衝液（試薬 B）
3mL×1 本発色試薬（試薬 C）0.6vol%過酸化水素水
3mL×1 本・発色は茶褐色。非水溶性封入剤で封入することを推奨する。
水溶性封入剤で封入することも可能である。

試薬A１滴（20μL）と試薬B１滴（20μL）を精製水１mLに加える。
よく混合して、試薬C１滴（40μL）を加え、再び混合する。遮光して冷蔵保存し、1週間以内に使用すること。
注）混合時、溶液表面が泡立った場合は、使用時に泡を取り除くか、泡を避けて使用すること。

415182415184

シンプルステイン AEC溶液
Simple Stain AEC Solution

500ﾃｽﾄ（調製済） 35,000
1500ﾃｽﾄ（調製済） 65,000

シンプルステイン AEC溶液
17mL×3 本（500 テスト）、17mL×9 本（1500 テスト）
・調製済みのため、そのまま使用可能（H2O2 含有）。
・発色は赤色。水溶性封入剤で封入する。

アルカリフォスファターゼ（AP）基質貯法

品名

ニューフクシン基質キット

2−8℃

コード

包装

価格（円）

415161

2000ﾃｽﾄ

80,000New Fuchsin Substrate Kit
ニューフクシン溶液（試薬 A）
活性化剤（試薬 B）
基質緩衝液（試薬 C）
基質溶液（試薬 D）
・発色は赤色。非水溶性封入剤で永久封入する。

6mL×1 本
6mL×1 本
12mL×1 本
6mL×1 本試薬A１滴（50μL）と試薬B１滴（50μL）をよく混合し、そこへ精製水2mLを加える。次に試薬C2滴（100μL）を加え再び混合し、さらに試薬D１滴（50μL）を加えよく混合する。必ず30分以内に使用すること。

415261

ファーストレッドⅡ基質キット

300ﾃｽﾄ60,000

Fast Red Ⅱ Substrate Kit
ファーストレッド溶液（試薬 A）
0.6mL×1 本
基質緩衝液（試薬 B）
40mL×1 本・発色は赤色。乾燥による脱水の後、キシレンに数秒間浸して、非水溶性封入剤で封入する。

試薬A １滴（約50μL）を、試薬B 2.5mLに加え、よく混合する。
30分以内に使用すること。

基質比較表
品

名

ＨＲＰ用
ＡＰ用

呈色

有効期間

調製に要する手間

シンプルステイン DAB溶液

茶製造後6 ヶ月○

DAB 基質キット

茶製造後1年6 ヶ月△

シンプルステイン AEC 溶液

赤製造後1年6 ヶ月○

ニューフクシン基質キット

赤製造後1年6 ヶ月△

ファーストレッドⅡ基質キット

赤製造後1年6 ヶ月△

発色の強さ：シンプルステインDAB溶液 ＜ DAB基質キット
ニューフクシン基質キット ＜ ファーストレッドⅡ基質キット

11

ヒストファイン

補助試薬

抗原賦活化液脱パラフィン・親水化・熱による抗原賦活化処理を同時に処理可能な試薬
品名

コード415281

脱パラ抗原賦活化液 pH6

包装
貯法

価格（円）

50mL×10 本（10 倍濃縮）

65,0002-30℃

Deparaff inization/Antigen Retrieval Solution pH6・10 倍濃縮は、2-30℃保存。ただし、開封後は 2-8℃保存すること。
また、調製後も冷蔵保存し、調製後一ヶ月以内に使用すること。

415291 50mL×各10本（10倍濃縮）

脱パラ抗原賦活化液 pH9
Deparaff inization/Antigen Retrieval Solution pH9
試薬A
試薬B

65,0002-30℃

50mL×10 本（10 倍濃縮）
50mL×10 本（10 倍濃縮）・10倍濃縮は、2-30℃保存。ただし、開封後は 2-8℃保存すること。
また、調製後も冷蔵保存し、調製後一ヶ月以内に使用すること。

熱による抗原賦活化処理用試薬
品名

コード415201

抗原賦活化液 pH9415211

包装
貯法

500mL×2 本（調製済）
2−8℃
50mL×10 本（10 倍濃縮）
常温

価格（円）

25,00045,000

・調製済は、そのまま使用可能。冷蔵（2-8℃）保存。
・10 倍濃縮は、常温（15-25℃）保存。ただし、開封後は冷蔵保存すること。また、調製後も冷蔵保存し、調製後一ヶ月以内に使用
すること。

参考

10mMクエン酸ナトリウム緩衝液（pH6.0）の作り方
A液9mL＋B液41mL＋精製水450mL（用時調製）
A液（0.1Mクエン酸水溶液）：常温で保存可能
クエン酸一水和物（C6H8O7・H2O）2.1g/精製水100mL
B液（0.1Mクエン酸ナトリウム水溶液）：常温で保存可能
クエン酸三ナトリウム二水和物（C6H5O7Na3・2H2O）14.7g/精製水500mL

タンパク質分解酵素処理用溶液
品名

コード

プロテアーゼ溶液

415231

包装
貯法

価格（円）

18mL×1 本（調製済）18,0002−8℃Protease
・調製済みのため、そのまま使用可能。

・プロテアーゼ処理は、ホルマリン固定パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色を行う際、その染色強度を増強する目的で行われる。プロテアーゼはトリプシン、ペプシンより強い処理効果が得られる。プロテアーゼ処理に適する抗体は、ヒストファイ
ン第一抗体の能書を参照すること。
・脱パラフィン処理したパラフィン組織切片に調製したプロテアーゼ溶液を滴下し、湿潤箱に入れ 25℃で5-15 分間インキュベー
トする。プロテアーゼ処理を行った組織切片は染色を開始する前にリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で充分洗浄する。

415101

トリプシン溶液

2−8℃

Trypsin Solution
トリプシン濃縮液（試薬A）
希釈液（試薬B）

28,00015mL×1 本（調製済）
50mL×1 本（調製済）・トリプシン処理は、ホルマリン固定パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色を行う際、その染色強度を増強する目的で行われる。
トリプシンはペプシンより弱い処理効果が得られる。トリプシン処理に適する抗体は、ヒストファイン第一抗体の能書を参照すること。
・脱パラフィン処理したパラフィン組織切片に調製したトリプシン溶液を滴下し、湿潤箱に入れ37℃で10分間あるいは常温30-45分間インキュベートする。トリプシン処理をした組織切片は染色を開始する前にリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で充分洗浄する。

12

ヒストファイン

補助試薬

その他

コード

品名

マイヤーヘマトキシリン溶液

415081

包装
貯法

12mL×1 本（調製済）価格（円）12,0002−8℃

Mayerʼs Hematoxylin Solution
・調製済みのため、そのまま使用可能。
・組織、細胞の核の染色。

・ヘマトキシリン溶液1-2滴を滴下し、常温（15-25℃）で 10 秒 -3 分間対比染色した後、流水でよく洗い落とす。

水溶性永久（長期）封入剤

41513130mL×1 本（調製済）14,000

常温

Aqueous Permanent Mounting Solution
・調製済みのため、そのまま使用可能。

・免疫組織（細胞）化学染色したスライドの封入。ペルオキシダーゼ染色で使用するアミノエチルカルバゾール（AEC）や、アルカ
リフォスファターゼ染色で使用するファーストレッド、BCIP/NBTを長期間保存するための水溶性封入剤である。

内因性アビジン・ビオチンブロッキングキット

415041

Endogenous Avidin/Biotin Blocking Kit
アビジン溶液（試薬 A）
ビオチン溶液（試薬 B）

18,0002−8℃

10mL×1 本（調製済）
10mL×1 本（調製済）

・このキットはアビジンまたはストレプトアビジンとビオチンを用いて反応を増強させる免疫組織（細胞）化学染色（SAB法あるいはABC法）において、内因性のアビジンまたはビオチン類似物質によっておこる問題を解決する。特に肝、腎に使用するとよい結果が得られる。
・ブロッキング操作は、第一抗体の反応前に行う。

PBS
PBS粉末
・用時、9.55ｇを精製水1Lに溶解し、PBS（洗浄用）とする。

13

415223191ｇ（20L用）

2-30℃

35,000ヒストファイン

構成試薬

ストレプト アビジン-ビオチン（SAB）
ヒストファイン ブロッキング試薬

貯法

品名10% ヤギ正常血清

医薬品

10% Normal Goat Serum

医薬品

10% ウサギ正常血清

医薬品

10% Normal Rabbit Serum

医薬品

コード

包装

4260414260426mL
17mL

12,00016,0004260514260526mL
17mL

12,00016,000

ヒストファイン 第二抗体

価格（円）

貯法

品名

2−8℃

2−8℃

コード

包装

4260314260326mL
17mL

16,00022,0004260114260126mL
17mL

16,00022,000

Biotinylated Anti-Goat IgG

4160214160226mL
17mL

16,00022,000ビオチン標識抗マウスIgG +ウサギIgG抗体（動物種：ヤギ） 医薬品

42607217mL

24,000ビオチン標識抗マウスIgG + IgA + IgM抗体（動物種：ウサギ） 医薬品
Biotinylated Anti-Mouse IgG+IgA+IgM

医薬品

ビオチン標識抗ウサギ IgG抗体（動物種：ヤギ）

医薬品

Biotinylated Anti-Rabbit IgG

医薬品

ビオチン標識抗ヤギ IgG抗体（動物種：ウサギ）

価格（円）

Biotinylated Anti-Mouse IgG+Rabbit IgG

ヒストファイン 酵素試薬

貯法

品名

ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン

医薬品

Peroxidase Conjugated Streptavidin

医薬品

コード

包装

426061426062

6mL
17mL

2−8℃
価格（円）

22,00028,00014

技術レポート

マウス、
ラットおよびヒトの各組織専用試薬 比較データ
第一抗体とヒト組織用試薬を用いてマウスあるいはラット組織を免疫組織化学染色した
場合、特異反応とは別にヒト組織用試薬が原因で起こるバックグラウンド染色がみられる場合があります。マウスおよびラット組織専用試薬で免疫組織化学染色した場合、そのようなバックグラウンド染色はみられません。

1．各組織専用試薬を用いてバックグラウンド染色を明確にした例
・マウス、ラット組織を用いて各組織専用試薬による免疫組織化学染色を行った。
第一抗体のかわりには抗体希釈液を用いた。発色には、シンプルステインDAB溶液（茶色）を用いた。

パラフィン包埋切片

マウス組織【マウス組織専用試薬】【マウス組織専用試薬】【ヒト組織用試薬】
シンプルステインマウスMAX-PO（Rat）シンプルステインMAX-PO（M）

マウスステインキット
マウス正常腸マウス正常脾臓

バックグラウンド染色はみられない。 バックグラウンド染色はみられない。 形質細胞にバックグラウンド染色が
みられる。

ラット組織
【ラット組織専用試薬】【ヒト組織用試薬】

シンプルステインラットMAX-PO（Ｍ）シンプルステインMAX-PO（M）
ラット正常腸バックグラウンド染色はみられない。 形質細胞にバックグラウンド染色が
みられる。

15

技術レポート

2．二重染色を用いてバックグラウンド染色を明確にした例
・マウス組織を用いて、1回目の染色には抗マウスCD45R/B220モノクローナル抗体を用いてマウス組織専用試薬にて検出した。発色にはVIP（青紫色）を用いた。2回目の染色には、第一抗体のかわりに抗体希釈液を用いて、ヒト組織用試薬にて検出した。発色にはDAB（茶褐色）を用いた。

ヒト組織用試薬を用いてマウス組織を免疫組織化学染色した場合、特異染色の他に、本来抗原が無いところにバックグラウンド染色を起こしてしまうことになります。

パラフィン包埋切片

マウス組織マウス正常脾臓
第一抗体による特異的な染色が青紫色でみられる。
一方、ヒト組織用試薬による非特異的な染色が茶色でみられる。

《1回目の抗原検出》【VIP発色（青紫色）】
・使用キット：シンプルステインマウスMAX-PO（Rat）
・第一抗体：抗マウスCD45R/B220モノクローナル抗体（動物種：ラット）80倍希釈・抗原賦活化処理：10mMクエン酸緩衝液（pH 6.0）にてMW処理（＋）
《2回目の抗原検出》【発色：DAB発色（茶褐色）】
・使用キット：シンプルステインMAX-PO（MULTI）
・第一抗体：第一抗体のかわりに抗体希釈液を使用

16

技術レポート

マウス、ラット組織の凍結切片の染色に参考

ヒストファイン製品の各動物組織専用試薬（パラフィン包埋切片用）は、凍結切片を用いた免疫組織化学染色法へもご使用できます。注意事項、操作方法を参考にしてください。

凍結切片を用いて染色を行う場合の注意（マウスステインキットの場合）◆凍結切片作製方法について
組織は、固定組織注）を使用してください。
◆固定液について第一抗体により適する固定液は異なるので、固定液の検討は十分に行ってください。
◆各構成試薬の反応時間について
各構成試薬は、パラフィン包埋切片用に濃度、反応時間を設定していますが、凍結切片でも同様の濃度、反応時間で使用してください。
ただし、凍結切片の作製方法によっては、バックグラウンド染色がみられる場合があります。

染色例
マウス組織を用いて免疫組織化学染色を行った。
第一抗体のかわりに PBS を用いた。発色には、DAB基質キット
（茶色）
を用いた。

これらは
当社の検討結果です。
マウスの系統・組織によりバックグラウンド染色がみられる場合があるので、十分確認の上、使用してください。

【固定組織、固定液：4％PFA 注）（4℃、一晩）】 【未固定組織、固定液：4％PFA（4℃、10分間）】：マウス正常結腸：マウス正常結腸■マウスステインキット
操作方法の変更、追加なくそのままご使用いただけます。
組織は、固定組織を使用してください。
未固定組織 注）を使用すると、良好な結果が得られない場合があります。

■形質細胞にバックグラウンド染色がみられない。

注）固定組織：固定後、凍結・薄切された組織■形質細胞にバックグラウンド染色がみられる。

未固定組織：凍結・薄切後に組織を固定させた組織（新鮮凍結組織）

PFA：パラホルムアルデヒド溶液

マウス組織専用品

組み合わせる第一抗体の動物種

名

コード

50テスト
500テスト包装

マウス

ヒストファインマウスステインキット

414321414322ウサギ

ヒストファインシンプルステインマウスMAX-PO（R）

414341

170テストヤギ

ヒストファインシンプルステインマウスMAX-PO（G）

414351

170テストラット

ヒストファインシンプルステインマウスMAX-PO（Rat）

414311

170テストマウス

ヒストファインシンプルステインラットMAX-PO（M）

414171

170テストウサギ

ヒストファインシンプルステインラットMAX-PO（R）

414181

170テストヤギ

ヒストファインシンプルステインラットMAX-PO（G）

414331

170テストマウス・ウサギ両用

ヒストファインシンプルステインラットMAX-PO（MULTI）

414191

170テスト

掲載ページ

P7

P8

ラット組織専用品

組み合わせる第一抗体の動物種

17

名

コード

包

装

掲載ページ

P9

技術レポート

凍結切片を用いて染色を行う場合の注意（マウスステインキット以外の場合）
通常の染色手順においてバックグラウンド染色が認められる場合、下記のステップにて調整することを推奨します。
通常の
染色手順

バックグラウンド染色がある場合

まだバックグラウンド
染色が解消されない場合

STEP1

・シンプルステイン10−30分の間で反応時間の調整をする

シンプルステイン
30分で凍結切片に使用

STEP2

・0.2％グルタルアルデヒド溶液（10分）との反応を、第一抗体とシンプルステインとの反応の間に追加する
・シンプルステイン10−30分の間で反応時間の調整をする◆凍結切片作製方法について
組織は、固定組織、未固定組織いずれも使用できます。
◆固定液について第一抗体により適する固定液は異なるので、固定液の検討は十分に行ってください。
◆シンプルステインの反応時間について
シンプルステインは、パラフィン包埋切片用に濃度、反応時間（30 分）を設定しています。凍結切片で、シンプルステインを30 分間反応させ、バッ
クグラウンド染色（非特異染色）が認められた場合には、シンプルステインの反応時間を 10−30 分の間で調整してください。マウス、ラットの系統・組織・固定方法により、至適時間が異なるので、十分検討を行ってください。
◆0.2％グルタルアルデヒド溶液の使用について
試薬の反応時間を短縮しても、バックグラウンド染色（非特異染色）が認められる場合、0.2％グルタルアルデヒド溶液でのブロッキングにより、
バックグラウンド染色（非特異染色）が低下する場合があります。0.2％グルタルアルデヒド溶液の作製方法・使用方法については、下記、操作方
法を参照してください。なお、0.2％グルタルアルデヒド溶液を併用する場合、使用する第一抗体の反応を阻害しないかどうかの確認を必ず行ってください。
また、マウス、ラットの系統・組織・固定方法により、効果に差があるので、十分確認の上、使用してください。
※0.2％グルタルアルデヒド溶液：50％グルタルアルデヒド（SIGMA社：コードG7651）をPBSで0.2％となるように250倍希釈

操作方法

STEP1

シンプルステイン（10-30分の間で調整する）

3%H2O2/MeOH（10-15分）

固定組織
または
未固定組織

第一抗体

PBSで洗浄する

PBSで洗浄する

ペルオキシダーゼ
基質溶液（DAB、AEC等）

精製水で
洗浄する

PBSで
洗浄する

染色終了

0.2%グルタルアルデヒド溶液（10分）

PBSで洗浄する

PBSで洗浄する

PBSで洗浄する

STEP2

染色例

マウス、ラット組織を用いて各組織専用試薬による免疫組織化学染色を行った。
第一抗体のかわりに PBS を用いた。発色には、DAB基質キット（茶色）を用いた。

ステップ1の手順で解消された例［シンプルステインの反応時間を短くした例］【使用キット：シンプルステインラット MAX-PO（MULTI）】【固定組織、固定液：4％PFA（4℃、一晩）】
シンプルステインの反応時間：30分

STEP1

シンプルステインの反応時間：10分

ラット正常結腸

これらは当社の検討結果です。
マウス、ラットの系統・組織・
固定方法により、効果に差があるので、十分確認の上、使用してください。
■形質細胞にバックグラウンド染色がみられる。

■形質細胞にバックグラウンド染色がみられない。

ステップ2の手順で解消された例［シンプルステインの反応時間の短縮と0.2％グルタルアルデヒド溶液を使用した例］％グルタルアルデヒド溶液を使用した例］【使用キット：シンプルステインマウス MAX-PO（R）】【未固定組織、固定液：4％PFA（4℃、10分間）】
シンプルステインの反応時間：30分

STEP1

シンプルステインの反応時間：10分

0.2％グルタルアルデヒド溶液の反応時間：10分
シンプルステインの反応時間：10分
STEP2

マウス正常結腸■形質細胞にバックグラウンド染色がみられる。

■形質細胞に対するバックグラウンド染色は軽減したがわずかにみられる。

■形質細胞にバックグラウンド染色がみられない。

18

技術レポート

三重染色法
シンプルステインMAX-PO（M）、
シンプルステインAP（M）
を用いたマウス第一抗体による三重染色法◆目的：3種類の抗原を同一切片上で検出する。
◆材料：20％緩衝ホルマリン固定・パラフィン包埋切片◆技術アドバイス（抗原検出の順番の決定）
・1回目の抗原検出は微少抗原や抗原量の少ないものを選択し、BCIP/NBT発色（青色）。
・2回目の抗原検出は細胞質抗原や多量に存在する抗原を選択し、ニューフクシン発色（赤色）。
・3回目の抗原検出は核内抗原や中等量〜多量に存在する抗原を選択し、DAB発色（茶色）。

◆操作手順＊各ステップでの反応温度、反応時間は厳密に守ること。
＊特に温度指定のない場合は、常温（15〜25℃）で操作すること。
＊染色結果に影響を及ぼす為、必ず下記の操作手順に従って操作を行うこと。

1 ． 脱パラフィン
1-1）キシレンに浸す。常温、3分間、3回。
1-2）エタノールに浸す。100％エタノール：常温、3分間、2回。95％エタノール：常温、3分間、2回。
1-3）PBSで洗浄する。 常温、3分間、1回。

1 回目の抗原検出
2 ． 抗原賦活化処理（1回目の第一抗体の能書に準じ、必要に応じて行う。）
2-1）1回目の第一抗体の能書に準じた抗原賦活化液および時間にて処理を行う。
2-2）常温にて20〜60分間自然冷却し、PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

3 ． ブロッキング試薬による処理
3） 10％正常ヤギ血清（ニチレイコード：426041）を滴下する。常温、10分間。

4 ． 第一抗体の添加・反応（1回目の抗原検出）
4-1）1回目の第一抗体を滴下する。37℃、1時間。
4-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

5 ． シンプルステインの添加・反応5-1）シンプルステイン AP（M）（ニチレイコード：414241）を滴下する。室温、30分間。
5-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。
5-3）TBSに置換する。TBS溶液中でスライドを5回上下させる。

6 ． BCIP/NBT基質溶液※1の添加・反応6-1）BCIP/NBT発色。BCIP/NBT基質液を滴下し、検鏡しながら発色する。
6-2）精製水で洗浄する。

19

技術レポート

2 回目の抗原検出
7 ．1回目の第一抗体と標識酵素の失活 兼 抗原賦活化処理（2回目の第一抗体の能書に準ずる。）
7-1）①または②の処理を行う。
①2回目の第一抗体が熱による抗原賦活化処理を必要としない場合：0.01Mクエン酸ナトリウム緩衝液（pH6.0）を耐熱性バットに入れ95℃で10分間加熱する。
②2回目の第一抗体が熱による抗原賦活化処理を必要とする場合：能書に準じた抗原賦活化液を耐熱性バットに入れ95℃で40分間加熱後、常温にて20分〜60分間自然冷却する。
7-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

8．
ブロッキング試薬による処理
8） 10％正常ヤギ血清（ニチレイコード：426041）を滴下する。常温、10分間。

9 ．第一抗体の添加・反応（2回目の抗原検出）
9-1）2回目の第一抗体を滴下する。37℃、1時間。
9-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

10 ．
シンプルステインの添加・反応10-1）シンプルステイン AP（M）（ニチレイコード：414241）を滴下する。常温、30分間。
10-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。
10-3）TBSに置換する。TBS溶液中でスライドを5回上下させる。

11 ．ニューフクシン基質溶液※2の添加・反応11-1）ニューフクシン発色。ニューフクシン基質溶液を滴下し、検鏡しながら発色する。
（ニューフクシン基質キット（ニチレイコード：415161）も使用できます。）
11-2）精製水で洗浄する。

3 回目の抗原検出12 ．2回目の第一抗体と標識酵素の失活 兼 抗原賦活化処理（3回目の第一抗体の能書に準ずる。）
12-1）①または②の処理を行う。
①3回目の第一抗体が熱による抗原賦活化処理を必要としない場合：0.01Mクエン酸ナトリウム緩衝液（pH6.0）を耐熱性バットに入れ、95℃で10分間加熱する。
②3回目の第一抗体が熱による抗原賦活化処理を必要とする場合：能書に準じた抗原賦活化液を耐熱性バットに入れ95℃で40分間加熱後、常温にて20分〜60分間自然冷却する。
12-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

13 ．内因性ペルオキシダーゼ除去13-1）3％過酸化水素水に浸す。常温、10分間。
13-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

14 ．
ブロッキング試薬による処理
14） 10％正常ヤギ血清（ニチレイコード：426041）を滴下する。常温、10分間。

15 ．第一抗体の添加・反応（3回目の抗原検出）15-1）3回目の第一抗体を滴下する。37℃、1時間。
15-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

16 ．
シンプルステインの添加・反応16-1）シンプルステイン MAX-PO（M）（ニチレイコード：424131）を滴下する。常温、30分間。
16-2）PBSで洗浄する。 常温、3分間、3回。

17 ．DAB基質溶液※3の添加・反応17-1）DAB発色。DAB基質溶液を滴下し、検鏡しながら発色する。
（シンプルステインDAB溶液（ニチレイコード：
415171）またはDAB基質キット（ニチレイコード：425011）も使用できます。）
17-2）精製水で洗浄する。

18 ．封入18） 水溶性封入剤で封入する。
（水溶性永久（長期）封入剤（ニチレイコード：415131）も使用できます。）

20

技術レポート

三重染色法◆染色例◆目的：3種類の抗原検出により組織内の3種類の細胞分布を観察する。
◆材料：ヒト反応性リンパ節染色例

1CD8：CD8陽性細胞の細胞膜がBCIP/NBT発色で青色に染色されている。
CD4：CD4陽性細胞の細胞膜がニューフクシン発色で赤〜桃色に染色されている。
CD20 cy：主に胚中心に存在するCD20 cy陽性細胞（B細胞）の細胞膜がDAB発色で茶褐色に染色されている。

使用抗体《1回目の抗原検出》 【BCIP/NBT発色（青色）】・CD 8・抗原賦活化処理：1ｍM EDTA緩衝液（pH 8.0）
、95℃、40分《2回目の抗原検出》 【ニューフクシン発色（赤〜桃色）】・CD 4・抗原賦活化処理：1ｍM EDTA緩衝液（pH 8.0）、95℃、40分《3回目の抗原検出》 【DAB発色（茶褐色）】
・CD 20 cy
・抗原賦活化処理：10mMクエン酸緩衝液（pH 6.0）、95℃、40分◆目的：同一細胞内において3種類の抗原分布を観察する。
◆材料：子宮頸部扁平上皮癌

染色例

β-catenin：細胞膜に存在するβ-cateninがBCIP/NBT発色にて青色に染色されている。
Cytokeratin（AE1/AE3）：細胞内の細胞骨格タンパクであるCytokeratinがニューフクシン発色にて赤〜桃色に染色されている。
Ki-67抗原：増殖細胞核内のKi-67抗原がDAB発色にて茶褐色に染色されている。

使用抗体《1回目の抗原検出》 【BCIP/NBT発色（青色）】・β-catenin
・抗原賦活化処理：1ｍM EDTA緩衝液（pH 8.0）、95℃、40分《2回目の抗原検出》 【ニューフクシン発色（赤〜桃色）】・Cytokeratin（AE1/AE3）
・抗原賦活化処理：10mMクエン酸緩衝液（pH 6.0）、95℃、40分《3回目の抗原検出》 【DAB発色（茶褐色）】
・Ki-67抗原
・抗原賦活化処理：10mMクエン酸緩衝液（pH 6.0）、95℃、40分◆参考文献
池田勝秀，鈴木孝夫ほか：高感度間接法を用いた酵素抗体法三重染色，医学検査；52（7）：944-949, 2003

212

技術レポート◆参考●

1 回目の第一抗体の反応時間を4℃、一晩とし、2回目、3回目の第一抗体の反応時間を37℃、1時間とした場合、本操作全てを2日間で行うことができます。

◆試薬※1

BCIP/NBT基質溶液調製法●

使用時に ii）NBT保存液 6.5μL、iii）BCIP保存液 5μLを混合し，i）100mMトリス塩酸緩衝液1.5mLを加え基質溶液とする。
i ）100mMトリス塩酸緩衝液（pH 9.5, 含100mM NaCl, 50mM MgCl2）（冷蔵保存）①1Mトリス塩酸緩衝液（pH 9.5）：Tris（hydroxy-methyl）amino-methane 6.06gを精製水25mLに溶解させ、塩酸にてpHを9.5に調製し、精製水で50mLにメスアップする。
②5M NaCl 水溶液：NaCl 2.93gを精製水10mLに溶解する。
③1M MgCl2 水溶液：MgCl2 3.01gを精製水25mLに溶解する。
④①②③を混合し、精製水で500mLにメスアップする。
ii）NBT（Nitro Blue Tetrazolium）保存液（- 20℃保存）・NBT（SIGMA）75mgを70％ N,N-ジメチルホルムアミド1mLに撹拌溶解する。
iii）BCIP（5-Bromo-4-Chloro-3-Indolylphosphate-p-Toluidine salt）保存液（- 20℃保存）・BCIP（SIGMA）50mgをN,N-ジメチルホルムアミド 1mLに撹拌溶解｡●②ニューフクシン溶液、③4％ 亜硝酸ナトリウム水溶液を100μLずつ等量混合し、1分放置。この液に④ 0.2Mトリス塩酸
緩衝液 40mLを加え、さらに撹拌しながら、① 基質溶液 100μLを溶解する。濾過後すぐに使用する。
（用時調製）
i）基質溶液（用時調製）①naphthol AS-BI phosphoric acid（SIGMA）10mgをN,N-ジメチルホルムアミド100μLに溶解する。
ii）カップラー液②ニューフクシン溶液：New fuchsin powder（MERCK）4.0gを2N塩酸 100mLに溶解し、濾過する。
（冷蔵保存）③4％ 亜硝酸ナトリウム水溶液：亜硝酸ナトリウム 40mgを精製水1mLに溶解する。
（用時調製）
iii）0.2Mトリス塩酸緩衝液（pH8.2〜8.3）（常温保存）④Tris（hydroxy-methyl）amino-methane 12.12gを精製水250mLに溶解し、塩酸にてpHを8.2〜8.3に調製し、精製水で500mLにメスアップする。

●

下記を溶解、混合、撹拌し、基質溶液とする。
（用時調製）i ）3,3'-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride（DOJINDO）10mgii）0.05Mトリス塩酸緩衝液（pH 7.6，含15mM NaN3）50mLiii）5％ 過酸化水素水 50μLiv）イミダゾール 34mg

※2

ニューフクシン基質溶液調製法※3

DAB基質溶液調製法◆参考情報：免疫染色玉手箱
QRコードから参考情報の記事をご覧いただけます。
昭和大学藤が丘病院 病理診断科 池田勝秀 鈴木孝夫
熱湯処理を用いた酵素抗体法多重染色神戸大学医学部附属病院病理部 先端組織染色センター 柳田絵美衣
酵素抗体多重染色法

22

技術レポート

ヒストファイン 第一抗体交差反応の参考表（マウス、ラット組織）
改訂版 vol.6
本データは、あるロットにおいて弊社での使用結果をまとめたものです。ヒストファイン第一抗体は、ヒト組織用であり動物組織での製品検定は行っておりません。
本データはあくまでも参考としてご活用くださいますようご了承ください。 使用検体 マウス ： BALB/cAnNCrj 8週齢
ラット： Crj:CD(SD)IGS 9週齢
Anti1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51

23

α-Fetoprotein(AFP)
Actin
Actin, Smooth Muscle
bcl-2 gene Product
Calcitonin
Carcinoembryonic Antigen(CEA)
Carcinoembryonic Antigen(CEA)
CD3
CD3
CD4
CD5
CD8
CD20(L26)
CD23
CD23
CD34
CD45RO(UCHL1)
CD79α
CD79α
CD79α
ChromograninA
D2-40
DesminEpithelial Membrane Antigen(EMA)
Factor Ⅷ Related Antigen（ⅧR：Ag)
Factor Ⅷ Related Antigen（ⅧR：Ag)
Glial Fibrillary Acidic Protein(GFAP)
Glial Fibrillary Acidic Protein(GFAP)
GlucagonGranzyme B Antigen
Human Chorionic Gonadotropinβ subunit(HCG-β)Immunoglobulin A (IgA)
Immunoglobulin G (IgG)
Immunoglobulin M (IgM)
Keratin/Cytokeratin
Keratin/Cytokeratin
Keratin/Cytokeratin, AE1,AE3
Keratin/Cytokeratin 20
Leucocyte Common Antigen(LCA)
Lysozyme/Muramidase
Myoglobin
Neurofilament
Neuron Specific Enolase(NSE)
p53 gene product
Prostate Specific Antigen(PSA)
S-100 protein
Somatostatin
Thyroglobulin
Uroplakin Ⅲ
VimentinVimentin

品

名種

抗α-フェトプロテインモノクローナル抗体
M
抗アクチンモノクローナル抗体
M抗アクチン（平滑筋）モノクローナル抗体
M
抗ヒトbcl-2遺伝子産物モノクローナル抗体
M
抗カルシトニンポリクローナル抗体
R
抗癌胎児性抗原ポリクローナル抗体
R
抗癌胎児性抗原モノクローナル抗体
M
CD3ウサギモノクローナル抗体（SP7）R
CD3モノクローナル抗体
M
CD4モノクローナル抗体
M
CD5モノクローナル抗体
M
CD8モノクローナル抗体
M
L26モノクローナル抗体
M
CD23ウサギモノクローナル抗体（SP23）R
CD23モノクローナル抗体
M
CD34モノクローナル抗体
M
UCHL1モノクローナル抗体
M
CD79αウサギモノクローナル抗体（SP18）
R
CD79αモノクローナル抗体
M
CD79αモノクローナル抗体
M
抗クロモグラニンAポリクローナル抗体
R
D2-40モノクローナル抗体
M
抗デスミンモノクローナル抗体
M
抗上皮膜抗原モノクローナル抗体
M
抗第Ⅷ因子関連抗原モノクローナル抗体
M
抗第Ⅷ因子関連抗原ポリクローナル抗体
R
抗グリア線維性酸性プロテインポリクローナル抗体 R
抗グリア線維性酸性プロテインモノクローナル抗体 M
R
抗グルカゴンポリクローナル抗体
M
抗グランザイムBモノクローナル抗体
抗ヒト絨毛性ゴナドトロピンβサブユニットモノクローナル抗体 M
R
抗免疫グロブリンAポリクローナル抗体
M
抗免疫グロブリンGモノクローナル抗体
M
抗免疫グロブリンMモノクローナル抗体
R
抗ケラチン/サイトケラチンポリクローナル抗体
M
抗ケラチン/サイトケラチンモノクローナル抗体
M
抗ケラチン/サイトケラチンモノクローナル抗体
抗ケラチン/サイトケラチン20モノクローナル抗体（Ks20.8） MM
抗白血球共通抗原モノクローナル抗体
R
抗リゾチーム/ムラミダーゼポリクローナル抗体
R
抗ミオグロビンポリクローナル抗体
M
抗ニューロフィラメントモノクローナル抗体
抗ニューロン特異エラノーゼポリクローナル抗体 RM
抗ヒトp53遺伝子産物モノクローナル抗体
M
抗前立腺特異抗原モノクローナル抗体
R
抗S-100タンパクポリクローナル抗体
R
抗ソマトスタチンポリクローナル抗体
R
抗サイログロブリンポリクローナル抗体
M
抗ウロプラキンⅢモノクローナル抗体
抗ビメンチンウサギモノクローナル抗体（SP20） RM
抗ビメンチンモノクローナル抗体

コード
クローン名
希釈済抗体
ZSA06
422221
HHF354120111A4412021124
413141412091412111COL-1
413121SP7413591
PS1413241
1F64131814C7413251
C8/144B
413201
L26422441
SP234136111B12413341NU-4A1413111UCHL1422721SP18413631
HM57
413161
JCB117413311412751D2-40
413451D33422011E29422021
F8/86412191422181422251422261GA5422271413351GrB-7422321
C6405
413581413271
A57H
413291R1/69422061422431
MNF116412811
AE1,AE3413491
Ks20.8422071 PD7/26,2B114224914125214125512F11422081413231
DO-7
422611ER-PR8422091422651422691
413401
AU1413541SP20
422101
V9

前処理

反応時間 マウス ラット

ー
ー
ー
CB、AC
ー
ー
CB、MW
pH9、AC
pH9、AC
pH9、AC
pH9、AC
pH9、ACー
pH9、AC
pH9、AC
ー
ー
CB、AC
CB、AC
CB、AC
ー
CB、MW
ー
ー
Trypsin
Trypsinーーー
CB、AC
Trypsin
pH9、AC
Trypsinーー
Trypsin
CB、AC
Proteaseー
Trypsinーーー
CB、AC
Trypsinーーー
Trypsin
CB、MW
CB、MW

RT、1h
RT、1h
RT、1h
4℃、O/N
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
4℃、O/N
4℃、O/N
RT、1h
RT、1h
4℃、O/N
RT、1h
RT、1h
4℃、O/N
4℃、O/N
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
4℃、O/N
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h
RT、1h

ー
＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

ー
＋＋

ー
ー
＋＋

＋＋

ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー

ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
ー
＋＋

ー
ー
ー

＋＋

＋＋

ー
ー
±

ー
ー
±

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

ー

ー
ー

＋

＋＋

ー
ー

ー
ー

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

ー

ー

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

ー
ー

ー
ー

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋
＋＋

＋＋

＋＋

ー
ー

＋＋

ー

前処理方法

交差反応性情報

組織標本

Trypsin ：トリプシン溶液（ニチレイコード：415101）37℃ 10分
Protease：プロテアーゼ溶液（ニチレイコード：415231）25℃ 10分
CB、MW ：10mMクエン酸ナトリウム緩衝液（pH6.0）マイクロウェーブ処理 5分×3回
CB、AC ：10mMクエン酸ナトリウム緩衝液（pH6.0）オートクレーブ処理 120℃ 20分
pH9、AC：抗原賦活化液pH9（ニチレイコード：415201または415211）オートクレーブ処理＋＋：交差反応性が認められる± ：交差反応性は認められるが弱い− ：交差反応性が認められない
空白：交差反応性の情報がないもの

・ホルマリン固定パラフィン包埋切片：固定液 10％中性緩衝ホルマリン：固定時間 24時間

120℃

20分

R
M
M
R
M
R
R
M
R
M
M
R
M
M
R
M
R
M
M
R
M
R
M
M
R
M
R
R
M
M
M
M
R
M
M
M
M
R
M

α-Fetoprotein(AFP)
Actin
Actin, Smooth Muscle
Arginase-1（EP261）
bcl-6（LN22）
Calcitonin
Calretinin(SP13)
CD3(PS1)
CD3(SP7)
CD20(L26)
CD23(1B12)
CD23(SP23)
CD45RO(UCHL1)
CD79α（HM57）
Chromogranin A
Desmin
DOG-1
Epithelial Membrane Antigen(EMA)
FactorⅧRelated Antigen(ⅧR:Ag)
FactorⅧRelated Antigen(ⅧR:Ag)
Glial Fibrillary Acidic Protein(GFAP)
Glial Fibrillary Acidic Protein(GFAP)
Granzyme B Antigen
Keratin/Cytokeratin
Keratin/Cytokeratin
Keratin/Cytokeratin, AE1,AE3
Lysozyme/Muramidase
Myoglobin
Neurofilament
p53 Gene Product, DO-7
Podoplanin(D2-40)
Prostate Specific Antigen(PSA)
S-100 Protein
TdT(SEN28)
TTF-1
UroplakinⅡ
VimentinVimentin(SP20)
WT1

−
−
−
−
−
−
−
−
−
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−
−
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−
−
−
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−
−
−
−
−
−

413621423301413171−413601422741−413571

−
−
−
−
−
−

未希釈

コード
希釈済
422211412011412021418131418181412091413561413241413591422441413341413611422721413161412751422011418041422021412191422181422261422251413351422431422061412811422491412521412551413231413451422611422091413371413841418121422101413541
413861
＋＋

＋＋

＋＋
＋＋
＋＋

＋＋
＋＋
＋＋

＋＋
＋＋

＋＋

＋＋

＋＋
＋＋

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＋＋
＋＋

ウシ

＋＋

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＋＋
−
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＋＋
＋＋

＋＋

−

＋＋

＋＋

ネコ

＋＋

＋＋

＋＋
＋＋

＋＋

ニワトリ

＋＋：交差反応性が認められる −：交差反応性が認められない 空白：交差反応性の情報がないもの

動物種

改訂版Vol.17

Anti-

参考

−
＋＋
＋＋
＋＋
＋＋
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＋＋

サル

＋＋
＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

マカク属サル
カニクイザル アカゲザル

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋

＋＋
＋＋
＋＋

ブタ

＋＋

＋＋

＋＋

−

＋＋
＋＋

＋＋

＋＋

−

＋＋

ウサギ ヒツジ

サイ −

フェレット

ラット −

ヒヒ

サイ

ヒヒ

マウス,サル（マーモセット）

コモン

ライオン −

カンガルー

ヒヒ

キヌザル

ライオン −

ラット −

ラット −

マウス −

ヒヒ,キリン

左記以外＋＋

本データは、弊社での使用結果をまとめたものではありません。複数のご施設の使用結果および各抗体に関する文献等の情報をまとめたものです。
ヒストファイン第一抗体は、ヒト組織用であるため動物組織の交差反応性は保証しておりません。
交差性に関しまして染色データのご提供をいただけます場合には、「評価用サンプル」をご用意できる場合がございますので、弊社営業担当者にご相談ください。

＋＋

＋＋

−

＋＋
＋＋

イヌ モルモット ハムスター ウマ

技術レポートヒストファイン 第一抗体交差反応の参考表（その他動物組織）24

技術レポート

トラブルシューティング
免疫組織化学染色法
問題点考えられる原因

その対策○ 染色にムラがある。

① 洗浄液の振り落としが不十分。

① 切片周囲の余分な洗浄液を十分ふき取った後、試薬を反応させる。切片上で試薬を十分混和させなじませる。

○ 陽性対照スライドおよび標本スライドの染色が認められない、あるいは弱い。

① 切片が乾燥している。

① 切片を湿潤させた後は、湿潤箱などを用いて乾燥させない。
② 適当な包埋剤を選択する。また、包埋組織から、パラフィンを完全に除去する。キシレン、エタノール
溶液を取り替える。
③ アジ化ナトリウムを含有しない緩衝液を使用する。
③ 緩衝液を取り替える。

② 包埋剤が不適当あるいはパラフィン包埋組織からのパラフィン除去が不完全である。
③ 緩衝液中の微量のアジ化ナトリウムがペルオキシダーゼを不活性化し、染色を不可能にする。
④ 酵素や抗体反応が不十分。

⑤ 切り置き切片における抗原性の減弱。

○ 陽性対照スライドは染色されるが、 ① 抗原が固定あるいは包埋過程で変性し標本スライドは染色されない。
たり、マスクされている。

② 自己消化により抗原が破壊されている。
③ 組織に存在する抗原が少ない。

④ 古い基質溶液を取り替える。
④ 各ステップでの、水分の拭き取りを完全にする。
④ 抗体との反応を十分にする。特に、第一抗体では添付書のインキュベーション時間を守る。
⑤ 一部の抗原、特に核内抗原では、薄切後時間が経つにつれて熱処理後の抗原性が減弱してしまう。
標本スライド、陽性対象スライドともにパラフィン
ブロックからその都度薄切するようにする。
⑤ 切り置き切片は高温で保存しない。
① 抗原の中には、固定や包埋に敏感なものがあるので、穏やかな固定剤を使用し固定時間を短縮する。
① 場合によっては、染色前に抗原を露出させるため、熱による抗原賦活化処理あるいはトリプシンなどのタンパク分解酵素処理を行う。
② 可能な限り、生検あるいは外科組織を使用する。
③ インキュベーション時間を長くする。

○ 未希釈抗体の染色が認められない、 ① 抗体溶液の凍結融解を繰り返してしまった。
あるいは弱い。

① 抗体は小分けして保存する。頻回の凍結融解により抗体力価が下がる可能性がある。

○ 全ての染色スライドのバックグラウ 〈ペルオキシダーゼ発色法を使用の場合〉ンドが強く染色される。
① 内因性ペルオキシダーゼを不活性化するための処理が不十分。

① ブロッキング試薬（3％過酸化水素加メタノール）による処理を確実に行う。

② 非特異結合成分がある。

② 第一抗体の添加前に10％正常血清による処理を確実にする。
もしくは前述の処理
（常温、
10分間）
を
追加する。
使用キットの種類
SAB-PO（M）

正常血清
の動物種
ウサギ

SAB-PO（R）

ヤギ

SAB-PO（Goat）

ウサギ

SAB-PO（MULTI）

ヤギ（R）（MULTI）
シンプルステイン MAX-PO（M）

ヤギ

シンプルステイン MAX-PO（G）

ウサギ

（Rat）
シンプルステインマウス MAX-PO（R）

ヤギ

シンプルステインマウス MAX-PO（G）

ウサギ

シンプルステインラット MAX-PO（M）（R）（MULTI）

ヤギ

シンプルステインラット MAX-PO（G）

ウサギ③ ブロッキング試薬、洗浄液（PBS等）、③ ウシIgG成分を含まないブロッキング試薬、洗浄液
第一抗体希釈液等に、ウシIgG成分が（PBS等）、第一抗体希釈液等を使用する。
含まれている場合、そのウシIgG成分と、あるいは試薬対照スライドを併用する。
下 記 使 用キットの 交 差 反 応 による非特異反応が生じる。
（ヤギIgGとウシIgG
成分の一部が酷似しているため起こる）
使用キットの種類
シンプルステインMAX-PO（G）
シンプルステインマウスMAX-PO（G）
シンプルステインラットMAX-PO（G）

25

技術レポート

問題点

考えられる原因

その対策〈アルカリフォスファターゼ発色法を使用の場合〉① 内因性アルカリフォスファターゼの活性を不活性化するための処理が行われていない。
② 非特異結合成分がある。

① 基質・色素混合液の中にレバミゾールを添加する。
（精製水の代わりに1mMレバミゾール溶液を使用する。）② 第一抗体の添加前に10％正常血清による処理を確実にする。
もしくは前述の処理（常温、10分間）を追加する。
使用キットの種類
シンプルステイン AP（M）（R）（MULTI）

正常血清
の動物種
ヤギ

〈共通〉

③ 自己消化の結果、組織液に遊離した抗原が過剰に存在する。
④ 不完全なパラフィン除去。
⑤ 不十分な抗体の洗浄。
⑥ 室温が高すぎて、酵素反応が早すぎる。
⑦ その組織に対して第一抗体の濃度が高い。
○ 反応中に組織切片がスライドからはがれてしまう。

③ 可能ならば、新鮮な組織を包埋する。
④ キシレン、エタノール溶液を取り替える。
⑤ 抗体の洗浄を十分に行う。
⑥ 常温（15−25℃）にコントロールする。
⑥ 反応時間を短縮する。
⑦ 抗体希釈液（0.1％BSA、0.1％NaN3を含んだPBS）
を用いて第一抗体を希釈し、至適濃度を検討する。

① 抗原によってはその同定のために、熱による抗原賦活化処理あるいは第一抗体との長時間の反応を必要とする。このような場合には、はがれ易くなる。

① 0.02％poly-L-lysine、シランなどの組織切片用接着剤を使用する。

考えられる原因

その対策

抗原賦活化処理問題点○ 染色結果にムラがある。染まらない。 ① 固定によるもの。

① 固定不良･過固定による偽陰性化。他の陽性組織を用いて再現性がとれるか確認する。

○ タンパク分解酵素処理をしたのに染まらない。

① 至適な酵素処理方法を行っていない。

① 第一抗体の添付書より、適切な処理方法を確認する。至適ではないタンパク分解酵素処理方法は、抗原性が変化し、抗体の特異性が失われることがある。
① 第一抗体の添付書より、処理時間の確認および用いる緩衝液の種類や濃度を確認する。

○ 熱による抗原賦活化処理をしたのに染まらない。

① 至適な熱処理方法で行っていない。

① 第一抗体の添付書より、推奨されている賦活の種
類（AC、MW）の確認、処理時間の確認および用いる緩衝液の確認をする。
② MW処理の場合、緩衝液を処理温度まで十分加温してから切片を浸す。
② 組織切片が緩衝液に十分浸るようにして乾燥に気をつける。
② 熱による賦活化処理後、緩衝液とともに組織切片を十分ゆっくりと冷却する（常温放置、20分間以上）。

② 操作方法によるもの。

AC：オートクレーブ処理、MW：マイクロウェーブ処理

その他
Q： 第一抗体は凍結保存が可能であるか。
A： 未希釈抗体は凍結保存が可能である。頻回の凍結融解により、抗体力価が下がる可能性があるため、小分けして保存する。
Q： 染まらない。
A： 試薬の有効期間、保存方法を確認する。
Q： 第一抗体の希釈液は何を用いるか。
A： 第一抗体の添付書に示された希釈液を用いる。もし、記載がない場合は、0.1％BSA、0.1％NaN3を含んだPBSの使用をすすめる。ただし、希釈後の第一抗体は使用後廃棄する。

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