イヌジステンパーウイルスおよび日本脳炎の抗体保有状況と課題
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兵庫ワイルドライフモノグラフ
18838219前田,健
兵庫県森林動物研究センター
1号
p. 55-65
2009年3月

農林水産省 農林水産技術会議事務局筑波産学連携支援センター
Tsukuba Business-Academia Cooperation Support Center, Agriculture, Forestry and Fisheries Research Council
Secretariat

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第6 章

イヌジステンパーウイルスおよび日本脳炎の抗体保有状況と課題
要点•兵庫県におけるアライグマのイヌジステンパーウイルスおよび日本脳炎ウイルスの感染歴を明らかにするため、抗体保有状況を調べた。

1.イヌジステンパーウイルス・アライグマ 56頭中 19頭 (33.9%) がイヌジステンパーウイルスに過去に感染していた。
・イヌジステンパーウイルス感染率に地域差が認められることから、イヌジステンパーウイルスがアライグマ間で拡大している可能性が示唆された。
・ジステンパーウイルスはアライグマ以外のタヌキやイタチなどの兵庫県内の野生動物にも感染している可能性があるため、野生動物の衰弱などを発見した際には、他の動物に感染を広げないように検査・隔離することが重要である。

2. 日本脳炎ウイルス• 兵庫県のアライグマの 40.7%が日本脳炎ウイルスに対して抗体を保有していた。
•都道府県別、地域別の日本脳炎ウイルス抗体保有率に違いが認められた。

・アライグマの性別や体重別の日本脳炎ウイルス抗体陽性率に大きな違いはなかった。
• 日本脳炎ウイルス抗体保有率における地域差は、日本脳炎ウイルスの拡大に必要な要因（蚊、ブタなど）に大きく影響を受けていると考えられる。
・ヒトやウマはワクチン接種を行うとともに、蚊に刺されないよう長袖•長ズボンの着用、防虫剤の使用を推奨する。

6‑
1. イヌジステンパーウイルス6‑
1‑1. はじめにイヌジステンパーウイルス (Caninedistempervirus; 以下 CDVと略す）は風邪に類似する呼吸器症状、下痢などの消化器症状、脳炎などの神経症状、時には感染しても発症しない（不顕性感染）など多様な症状を引き起こす。感染する動物はイヌなどの食肉目やアザラシなどの海棲哺乳類などであるが、それ以外にサルなど幅広い動物種への感染も報告されている。動物種によって CDVに対する感受性が大きく異なっており、フ‑ 55‑

ェレットなどは高感受性で死ぬ確率が高いといわれている。

CDVはパラミクソウイルス科のモルビリウイルス属に属する RNAウイルスで、ヒトにはしかを引き起こす麻疹ウイルスに非常によく似ている。これらのウイルスは核酸として RNAを持っているため変異が激しく、表面にエンベロープと呼ばれる膜を有していることから様々な消毒薬で簡単にその感染性が失われる。ウイルスを含む飛沫を吸入することにより呼吸器感染するといわれている。
家庭で飼育されている犬の多くが CDVに対する予防接種を受けているため、発生数が減っているといわれているが、予防接種を受けていない野生動物では CDVの流行により、壊滅的な被害を受けることがある。 1993年から 1994年の CDVの流行によりア000頭中 1000頭が死亡し、 1999年にはカフリカのセレンゲティ国立公園のライオン 3
リフォルニア州の島に生息するシマハイイロギツネが 1340頭から 150頭にまで激減している。
本研究では国内の野生動物における CDVの感染状況を調査することを目的として、兵庫県で捕獲されたアライグマの CDVに対する中和抗体保有状況を調べた。

6‑1‑2. 調査期間と方法
検査血清： 2005年 2月から 2006年 6月にかけて兵庫県で捕獲されたアライグマ 56頭から血清を回収し、それを検査試料とした。捕獲個体の詳細は表 1に示した。対象として2006年 6月から 2007年 2月に大阪府で捕獲されたアライグマ 50頭の血清を用いた。
血清は 56℃ 30分で非働化し、使用まで ‑20℃で保存した。
ウイルス：ワクチン株として広く用いられている Onderstepoort株、遺伝子型 AsiaH/1に属する KDK‑1株を用いた。
細胞： KDK‑1株の増殖には我々の作製した A72/cSLAM細胞、ウイルス中和試験にはnderstepoort株の増殖・中和試験には我々の作製した CRFK/cSLAM細胞を用いた。 O
Vero細胞を用いた。
ウイルス中和試験：
一次スクリーニング： 100個 (PFU) の KDK‑1を含む 100μ1のウイルス溶液と 1:5に2希釈した血清 100μ1を混合し（血清最終希釈倍率 1:10)、37℃で 1時間反応後、細胞に接種した。 37℃で 60分間ウイルスを吸着後、アガロースを重層した。 3‑
4 日後に緩衝ホルマリンで細胞を固定後、生細胞を染色し、プラークを計測した。血清を含まないコントロール群と比べて 75%以上プラークが減少しているものを CDV抗体陽性と判‑ 56‑定した。
二次スクリーニング：一次スクリーニングで CDV抗体陽性の検体について更に血清を10倍から 2倍階段希釈し、一次スクリーニングと同様の実験を行い、 75%プラークが減少している最大希釈倍率を中和抗体価とした。
有意差検定：得られたデータの解析には x2検定を実施し、 p(0.05のものを有意差ありとした。

6‑1‑
3. 結果と考察(1) 兵庫県のアライグマの CDV中和抗体保有率

9頭 (33.9%)が CDVに対する中和抗体を保兵庫県で捕獲されたアライグマ 56頭中 1有していることが示された（表 1)。雌雄差や体重別の有意差は認められなかった。大5頭 (30.0%)が CDV抗体陽性であり、大阪府と兵庫県の阪府のアライグマは 50頭中 1

アライグマの中和抗体保有率に有意差は認められなかった。
表 1 アライグマの CDV中和抗体保有状況
地域ABCDE

兵庫県全体，陽性個体数陰性個体数陽性率（％）

゜
゜
6190.0・2゜
゜231410193720.728.633.9(2) 地域別の中和抗体保有率の比較
0頭中 9頭 (90.0%)が陽性であったのに対地域別に比較すると、地域 Aのアライグマ 120.7%)、地域 Eでは 14頭中 4頭 (28.6%)しか陽性が認めらして地域 Cでは 29頭中 6頭 ()。特に地域 Cの陽性個体のほとんど (6頭中 5頭）が 2006年 6月以降れなかった（表 1の捕獲であったことは、この時期の直前にイヌジステンパーウイルスの流行があったと考えている（図 1)。地域 Aではほとんどのアライグマが陽性であったことから、調査)。
期間 (2005年 2月）以前にイヌジステンパーの流行があったと考えている（図 1‑ 57‑

一040200201 0 0 0860842631＜垣社垣忌廿ぺ 1(}む0地 域A●地域Cーcol¥g

U¥g

Ll¥v

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図 1 地域 Aと Cで捕獲されたアライグマの C
DV中和抗体価の比較(3) 感染ウイルスの推定

KDK‑1に対する中和抗体を保有している個体 (19頭）について、 ワクチン株であるOnderstepoort株に対する中和抗体価を調べた（図 2)。 その結果、兵庫県のアライグ
nderstepoort株に対する中和抗体価よりも KDK‑1株に対する高い中和抗マの多くが O体価を持っていた。 このことは兵庫県のアライグマが KDK‑1株によく似たウイルス、すなわち近年日本国内のイヌから分離されるウイルスによく似たウイルスに感染していたことを示している 。一方、大阪府のアライグマにはこのような傾 向が認められなかった。

図 2C
DV各株に対する中和抗体価の比較
アライグマはイヌジステンパ ーウイル スに感染しても比較的耐性であるといわれている 。一方 、タヌキやイタチなどはイヌジステンパーウイルスに高感受性である 。和歌山県田辺市で 2007年 3月からタヌキの集団死が確認されており、我々の調査では周辺地域で捕獲される野生動物のほぼすべてがイヌジステンパ ーウイルスに感染している‑ 58‑ことが証明されている（参考資料）。和歌山県田辺市での流行は天神崎という特殊な地域での発生であったことから流行を確認することができたが、本来野生動物の病死等を確認することは非常に困難である。イヌジステンパーウイルスは人知れず野生動物で広がっている可能性がある。
和歌山県や高知県での調査では、イヌジステンパーウイルスのかなりの変異が確認されている。今後とも調査の継続が必要であると考えられた。

DV感染状況
和歌山県田辺市周辺の野生動物における C動物
検査頭数 抗体陽性率(%)a 死亡例 b

参考資料

食肉目偶蹄目アライグマ

10451.9タヌキ

1921.1アナグマ

250.0

イタチ

1テン1チョウセンイタチ

1キツネ1シカ5イノシシ

41゜
゜

7例

1例

100.
0
100.
040.026.8

a: KDK‑1株に対するウイルス中和試験で 1:10以上のものを陽性と判定
b: ウイルス分離あるいはチェックマン CDVにより CDV感染死と確定された検体

6‑
1‑4. 結論
兵庫県の一部の地域では 2006年以前にアライグマにイヌジステンパーウイルスが拡がっていたことがわかった。更に、 2005年末から 2006年にかけての調査期間中にもイヌジステンパーウイルスが流行した地域があることが示された。

以上のことから、

1. アライグマの陽性率が非常に高いので、北米のようにアライグマが他の動物への感染源となる可能性が強く疑われる。野生動物をイヌジステンパーウイルス感染から守るためにもアライグマの捕獲を強化し、個体数を減少させることが必要である。

2. 衰弱した野生動物を保護する場合、イヌジステンパーウイルス感染の鑑別には「肛」（アドテック株式会
門周囲の汚れ」の確認と外傷がない場合は「チェックマン CDV社・共立製薬）での簡易検査の実施が有効である。そして、他の動物へ感染を拡げないためには、感染動物を隔離することが重要となる。

3. ワクチン接種を行っている家庭犬については、感染の心配はないため、家庭飼育犬‑ 59‑

にはワクチン接種の徹底が重要である。
4. 一般人には、死亡した野生動物に安易に近づかない、触らないことを周知する。
5. 特に動物園には多くのイヌジステンパーウイルス感受性動物が飼育されているため、野生動物の侵入防止を徹底する。

6‑2. 日本脳炎ウイルス
6‑2‑
1. はじめに日本脳炎ウイルス (Japaneseencephalitisvirus; 以下 JEV) は、ヒトやウマに致死的な脳炎症状を引き起こす。国内では 1940‑50年代にかけて猛威をふるい、年度によっ)。てはヒトで 5000名以上の患者、ウマで 3000頭以上の発症が認められている（図 3しかし、ヒトとウマでの発生は、その後、急激に減少し、現在ではヒトでの患者数が年0名以内であり、ウマでの発生は 2003年に 18年ぶりの発生があった以外は全くな間1くなった。

日本脳炎患者数

ウマの日本脳炎発症数1000010000

1000

1000

100

10010

100.
10.
1

2005年ワクチンの積極的勧奨の中止

図 3 日本脳炎患者とウマの日本脳炎の発生状況
一方、国外では東南アジアを中心に年間 50,000名の患者と 10,000以上の死者が発生しており、依然として脅威となっている。

JEVの感染は、蚊、主にコガタアカイエカの体内で増殖したウイルス （蚊のことをベクター（運び屋）という）が、蚊の吸血時に動物の体内に侵入することにより成立する。ブタが JEV感染蚊の吸血により感染すると血液中にウイルスが出現（ウイルス血症）する。この JEV感染ブタを吸血した蚊が、血液とともにウイルスを体内に取り込‑ 60‑むことにより、感染し、ウイルスが蚊の体内で増殖する。このブタ→力→ブタ→力の感)。
染が JEVの感染環の基本となっている（図 5

このように感染を拡大させるブタのような動物のことを増幅動物といい、ブタ以外にもトリの関与が示唆されている。一方、ヒトやウマも JEV感染蚊の吸血により感染するが血液中にウイルスが出現しないため、これ以上感染を拡大させることがなく終末宿主といわれている。
ヒトやウマはワクチン接種により日本脳炎発症から防御され、水田で増殖するコガタアカイエカが農業形態の変化により激減し、ブタの飼育場所が都市部から隔離されつつあることから、現在 JEVの発生が激減したと考えられている。しかし、国内での日本脳炎感染の骨威は本当に軽減したのであろうか？我々は、特定外来種として捕獲され、比較的血清が入手しやすいアライグマの日本脳炎感染状況を調査することにより、国内での JEV感染状況を調査した。

（（蚊（コガタアカイエカ）

下ウマ
ヒト

トリブタ

＼ブタ蚊（コガタアカイエカ））

図4 日本脳炎の生活環

6‑2‑2. 調査期間と方法
検査血清：合計 20
4頭のアライグマから血清を回収し、解析に用いた。そのうち 54検005年 5月から 2006年 6月に兵庫県、 62検体は 2006年 6月から 2007年 2月に
体は 28検体は 2007年 6月から 2008年 2月に和歌山県で回収した。 20検体は 2007
大阪府、 6年 5月から 2007年 9月に北海道で回収した。

すべての血清は 56℃で 30分非働化した後ウイルス中和試験に供試した。

/sw/
Chiba/88/2002株（国立感染症研究所高崎智ウイルス： JEVgenotypeIである JEV
彦先生より分与）を用いた。ウイルスの増殖には C6/36細胞を、ウイルスの力価測定および中和試験には Vero9013細胞を用いた。

‑ 61 ‑

ウイルス中和試験：
一次スクリーニング： 5倍希釈した被検血清およびコントロール 100μ1 と lOOPFUのウイルスを含むウイルス希釈液 100μ1を等量混合し、 37℃で 90分間反応させた。その後、 Vero9013細胞に接種した。 37℃で 90分間ウイルスを吸着後、アガロースを重層した。 4 日後に緩衝ホルマリンで細胞を固定後、生細胞を染色し、プラークを計測した。
血清を含まないコントロール群と比べて 80%以上プラークが減少しているものを JEV抗体陽性と判定した。
二次スクリーニング：一次スクリーニングで JEV抗体陽性の検体について更に血清を10倍から 2倍階段希釈し、一次スクリーニングと同様の実験を行い、 80%プラークが減少している最大希釈倍率を中和抗体価とした。
有意差検定：得られたデータの解析には xz検定を実施し、広 0.05のものを有意差ありとした。

6‑2‑3. 結果と考察(1) アライグマの JEV中和抗体保有状況
2005年から 2008年にかけて近畿地方で捕獲されたアライグマ 184頭の JEVに対する中和抗体保有状況を 80%プラーク減少法で調査した結果、 109頭 (59.2%)に 1:10以上)。また、コントロールとして用いた北海道のアライグマ 20の抗体価が存在した（表 2頭には 1:10以上のウイルス中和抗体は存在しなかった。
表 2 アライグマの日本脳炎ウイルス中和抗体陽性率
捕獲場所

陽性率（陽性頭数／検査頭数）

和歌山県

69.1%(47/68)

大阪府

64.5% (40/62)

兵庫県

40.7% (22/54)

北海道0% (0/20)

計

53.4% (109/204)(2) JEV中和抗体保有率の都道府県別の比較

地域別に比較すると兵庫県のアライグマの JEV抗体保有率 (40.7%)は大阪府 (64.5%)や和歌山県 (69.1%)のものよりも有意に低いことが示された (p(O.05)(表 2、図 5)。

‑ 62‑

(3) JEV中和抗体保有率の地域別の比較)。地域 B は 14頭中 10
兵庫県の 地域別 の JEV抗体保有率を地域別で比較した（図 6頭(71.4%)の高い JEV抗体保有率であったのに対して、地域 Aは 40頭中 12頭 (30.0%)の JEV抗体保有率であった。 地域 Aと地域 Bの抗体保有率を 比較すると、地域 Bは有意に JEV抗体保有率が高いことが示された。この 地域差に関しては現在不明であるが、今後蚊の分布やブタの飼養頭数と 比較する必要がある 。

100‑‑‑80 レ

604020゜地域B
71.
4%

図 6 兵庫県における地域別の JEV抗体陽性率(4) JEV抗体価の個体毎の検討

兵庫県では体重 0.95kgと 0.90kgの新生児がともに 1:1280のウイルス中和抗体価を‑ 63‑有していた（衷 3)。和歌山県でも体重 2.05kg と 2.3kg の同時期に捕獲された幼獣で1:2560と 1:s120の高いウイルス中和抗体価が認められている。これら新生児に認められた母親からの母乳を介した移行抗体の可能性が考えられる。
表 3 アライグマの日本脳炎ウイルス中和抗体価
捕獲場所

ウイルス中和抗体価
1:10 1:20 1:
40 1:so 1:
160 1:
3
20 1:
640 1:
1280 1:2
560 1:5120

く1:
10兵庫県

32大阪府

22和歌山県

21北海道

202113゜゜゜゜ ゜ ゜゜゜゜゜゜゜゜゜ ゜ ゜64323113106443

10

134

7331

2(5) 性別・体重別の JEV抗体保有率の比較

8
4頭の性別と体重別の JEV抗体陽性率を比
近畿地方の兵庫県、大阪府、和歌山県の 1)。日本脳炎に対する抗体保有率に性別、体重別の違いは認められなかっ較した（表 4た。
表 4 アライグマ（兵庫、大阪、和歌山）の性別および体重別による日本脳炎抗体保有率の比較kg)
体重 (性別計オス

メス‑3.9 4.0‑

陽性頭数56533475109

検査頭数1038156128184陽性率（％）

54.9 65.4

60.7 58.6 59.2

6‑2‑4. 結論
兵庫県のアライグマの日本脳炎に対する抗体保有率は 40.7%であった。この陽性率は他県と比較して有意に低い。しかし、兵庫県の地域別に比較した場合、地域により陽性率が異なっていることが示され、一部地域では依然として日本脳炎ウイルスが存在していることが確認された。兵庫県での日本脳炎患者や馬での発生は認められていないが、ウイルスはヒトの生活圏に侵入している可能性がある。参考資料は和歌山県で同時期に捕獲されたアライグマとイノシシの日本脳炎抗体保有状況を比較したものであるが、イノシシはアライグマよりも有意に JEV抗体陽性率が高く、ブタと同様に日本脳炎の増幅動物になる可能性が危惧される。今後は、アライグマで調査を継続して状況を監視すると共に、イノシシでの調査を実施する必要がある。

‑ 64‑゜86.7%
80

6040

゜ueoJeds
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ーp<0.05

20

Raccoon
参考資料

Wildboar

同時期に和歌山県で捕獲されたアライグマとイノシシの J
E
V抗体保有率の比較

以上のことから、
1. ヒトやウマヘの日本脳炎ワクチン接種は重要である （現在、 ヒト用の新規ワクチンが開発中である）。
2. 日本脳炎ウイルスは感染蚊によって媒介されることから、蚊への対策が重要である。

夏場でも長袖、長ズボンの着用や防虫剤をつけて屋外に出ることは有効な対策となる。
3. アライグマでの調査は、「ワクチン未接種」、「年間を通じて調査可能（特定外来種）」、「比較的ヒトの生活空間に近い」など、日本脳炎ウイルスの監視に有効なものとなる。
今後も調査の継続と、アライグマ以外のイノシシなどでの調査の実施が必要である。

謝辞
大阪府の検体は宇仁茂彦先生（大阪市立大学医動物学教室）と柴崎高宏先生（大阪府動物愛護畜産課）に提供していただきました。和歌山県のデータは鈴木和男先生（田辺市ふるさと自然公園センター）との共同研究です。北海道の検体は佐鹿万里子先生（帯広畜産大学獣医内科学教室）に提供していただきました。望月雅美先生（共立製薬株式会社）には「チェックマン CDV」および研究用ウイルスを提供していただきました。尚、ジステンバーウイルスについては、山口大学農学部獣医微生物学教室の中野仁志君と亀尾由紀さんとともに日本脳炎については、大野佳君とともに実施しました。また、日本脳炎研究の一部は厚生労働省科学研究費補助金と山口大学 YU‑VIC 実用化研究（シーズ育成）助成プログラムからの助成金で実施しました。

‑ 65‑

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