esSeri

No.

2 蛍光顕微鏡データの誤った解釈
水島 昇・鈴木邦律

る．蛍光顕微鏡画像の取得と解釈については注意点やコツ

はじめにが無限にあるはずだが，今回は，普通の蛍光顕微鏡（共焦光学顕微鏡による観察は，電子顕微鏡のような高度な訓点顕微鏡を含む）で普通に観察をした場合にだれもが注意す

練を必要としないこともあり，生命科学領域において頻用べき，きわめて日常的なことに話をとどめることにする．

されている研究手法のひとつである．近年の光学系やCCDカメラなど検出装置の改良によって，顕微鏡画像を高分解間接蛍光抗体法により得られた画像の評価能かつ高感度で得ることが可能になってきた．また，解析アルゴリズムや解析ソフトウェアの使い勝手の改善によっウェスタンブロット法と間接蛍光抗体法による細胞（またて，得られた画像を見た目にも美しく処理することも容易は，組織）の染色は，どちらも抗体を用いて染色するというになってきた．さらに，抗体染色法や各種の蛍光プローブ

点では同じであるが，得られる情報は大きく異なっている．の開発により，目的に応じてさまざまな染色法を選択する

1 次元ウェスタンブロット法では，細胞レベルでの空間情報ことができるようにもなった．とくに，蛍光顕微鏡法は標が得られない代わりに分子量の情報が得られる．一方，顕的蛋白質の局在を電子顕微鏡に近い解像度で解析すること微鏡観察法では，分子量の情報が得られない代わりに空間ができるので，多くの研究者に親しまれる方法となってい情報が得られる．抗体染色に成功して思いどおりの蛍光画る．したがって，この蛍光顕微鏡法によって得られた画像像を取得できたらまずは一安心であるが，いつまでも喜んデータの解釈に関する注意点も広く知られるべきであろう．

でばかりもいられない．お茶でも飲んで心を鎮めたあとに

デジタルデータ画像の処理については，本シリーズ第 1 回は，得られた画像が妥当なものであるかどうかを冷静に判「Photoshop によるゲル画像の調整」（2008 年 12 月号掲載）

断しなければならないのだ（とくに，使用実績の少ない抗体にてくわしく解説されていることがそのままあてはまるのを使用した場合や，実験手法に習熟していない場合）．

で，ここでは，画像が取得されるまでの過程を中心に述べ一般に ウェスタンブロット法に適した抗体 といえば，最低でも 予想される分子量付近にバンドが得られる抗体であろう．ウェスタンブロット法により検出される種々の

1

Noboru Mizushima , Kuninori Suzuki

21

東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 細胞生理学分野
2
基礎生物学研究所 分子細胞生物学研究部門
E-mail ： nmizu.phy2@tmd.ac.jp
kuninori@nibb.ac.jp
URL：http://www.tmd.ac.jp/med/phy2/phy2-J.html
http://www.nibb.ac.jp/ ˜ enehen/

蛋白質は，最初から 1 次元の電気泳動で分子量を基準に分離されているので，標的とする蛋白質以外の場所にいくら強い ノンスペ＊ のシグナルがあったとしても，データの解釈に不都合は生じない．しかしながら，間接蛍光抗体法により得られた画像を解釈する際の判断基準は，ウェスタ
ンブロット法の場合とは異なるので注意が必要である．ウ蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）185

緑色蛍光用フィルター

赤色蛍光用フィルター

重ね合わせ像20μm

図 1 いわゆる 蛍光漏れ により誤って共局在と解釈されるケース
mit-GFP（ミトコンドリア局在化シグナルを付加した GFP）のみを発現する HeLa 細胞を観察したもの．露光時間は，緑色蛍光用フィルターの場合が 5 ミリ秒，赤色蛍光用フィルターの場合が 2000 ミリ秒．それぞれ，適度にコントラストを調整してある．また，ここでは，説明するうえでわかりやすいよう単染色の画像に緑色と赤色とをつけているが，これはのちに述べるように，本来は必要ないものである．

ェスタンブロットにはよい抗体が細胞染色にはまったく使くお目にかかる．

えないこともよくあり，その逆もある． 使えない だけな

まずは，ひとつの例を提示したい． 図 1 では，緑色の蛍らまだしも，まったく関係のない抗原を染めてしまうこと光像と赤色の蛍光像とが非常によく一致している．しかし，すらある．ウェスタンブロットによって強い ノンスペ の

この細胞はミトコンドリア局在化シグナルを付加した GFP

バンドがみられる場合は，とくにその可能性が高い．した（mit-GFP）のみを発現させたものである．赤色で見える蛍がって，抗体などプローブの特異性を顕微鏡データのみか光は，赤色蛍光用フィルターの検出域に漏れ込んできた微ら判断することは非常に困難である．自作の抗体によって弱な GFP の蛍光を，強引に増幅して表示したものなので染色される構造が目的の蛋白質の局在を示していると結論ある．

するには，多くの対照実験が必要である．厳密なことをい蛍光物質から発せられる蛍光の波長はある程度の広がりえば，ノックアウトやノックダウンなどによって消えるシグをもつので，その蛍光物質用のフィルター以外の蛍光用フナルが，本来，調べるべき対象である．いくらウェスタン

ィルターを使った場合でも，蛍光が検出されてしまう場合

ブロットでシングルバンドであっても油断できない．このこがある．たとえば，強い緑色と弱い赤色の二重染色像を観とは，つねに気にとめておく必要がある．

察する場合，GFP などによる緑色蛍光には緑色蛍光用のフィルターを，赤色蛍光には赤色蛍光用のフィルターを用い蛍光の漏れに注意る．緑色蛍光用フィルターによる観察でも赤色蛍光の漏れ込みは生じるが，もともと弱い赤色蛍光が少々漏れ込んだ

さて，使用した抗体や蛍光プローブが確かに目的の構造

ところで緑色蛍光の像にはほとんど影響しない．しかし，を染色していることが確認されたとする．つぎに頻繁にト

赤色蛍光用フィルターを用いた観察にあたって弱い赤色蛍ラブルが発生する可能性のある実験は，多重蛍光標識法（2

光を検出するため露光時間を延ばすなどして感度を上げる

種類の異なるプローブを用いて同時にそれらの関係を解析と，強い緑色蛍光の漏れ込みを検出し，あたかも赤色蛍光する方法）による共局在の検出であろう．ギリギリの勝負をであるかのようにとらえてしまう可能性がある．図 1 では，するような高度な実験は意外に単染色のデータが多く，反緑色蛍光用フィルターでの露光時間は 5 ミリ秒であるのに対に，この多重標識は比較的初心者の行なう実験などでよ対して，赤色蛍光用フィルターでの露光時間は2000 ミリ秒＊ ノンスペ：このよび方は，多くの場合，不適切に使用されている． ノンスペ とよばれているもののほとんどは， 自分の期待するものとは異なる，別の抗原に対する特異的反応 をさす．

186蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）緑色蛍光用フィルター

赤色蛍光用フィルター

重ね合わせ像10μm

図 2 NIH-3T3 細胞の自家蛍光固定した NIH-3T3 細胞を，何も染色せずに緑色蛍光用フィルターと赤色蛍光用フィルターで画像取得したもの．検出された蛍光はすべて，細胞のもっている自家蛍光である．

である．このような極端な画像取得は通常は行なわないとの，緑色のシグナルと赤色のシグナルの大部分が共局在し思うかもしれないが，後述する 自動露光自動コントラているように見える．しかし，実はこれらは，なんの染色スト を行なう設定にしておくと，このような極端な処理がもしていないただのNIH-3T3 細胞を緑色蛍光用のフィルタ知らないうちに行なわれてしまうことがある．ふだん，顕ーと赤色蛍光用のフィルターとで画像取得したもの，つま微鏡をあまり使い慣れていない人が共通機器室の顕微鏡でり，陰性対照である．あえてコントラストを強くしてシグ画像を取得して ばっちり共局在していました！ と言ったナルを浮き出させるとこのようになる（後述の，「自動コンら，顕微鏡の設定を確認してみる必要があるかもしれない．

トラスト設定に注意しよう」の項を参照）．皮肉にも，染色これを防ぐには，観察する 2 種類の蛍光が同じ程度の強を完全に失敗するとこのような見事な結果がでることにも度になるよう染色を工夫することと，なによりも，単染色なる．これらの写真では，細胞のもっているなんらかの自のみの対照試料を用意することがもっとも重要である．ま

家蛍光物質（リポフスチンなど）が検出されているものと考た，離れた波長をもつ蛍光色素の組合せ（FITC とCy5 の組えられる．自家蛍光物質は通常，広範囲の波長の蛍光を発合せのように，漏れ込みがまず起らないもの）を用いることする（つまり，異なるフィルターでもほぼ同じ像が検出されや，使用する蛍光フィルターを再検討することも有効である）ので，判別は可能である．

る．2 種類の抗体を使用した場合には，それぞれの抗体にでは，図 3 に示す例はどうであろうか？ 2 つの細胞に多ついて染色パターン（局在と蛍光強度）に微妙な違いが生じくのドット様の構造体が観察されるが，左側の細胞では共るのがつねであり，共染色像のパターンが画像の細かな部局在率が低く，右側の細胞では共局在率が高いように見え分まで一致することはごくまれである．そう考えると，図 1

る．これはどのように解釈すべきであろうか？ 2 種類のドの中央の細胞のように，重ね合わせた際に完全な共局在がット様構造体が共局在する細胞としない細胞があるという示されるような像に関しては疑いの眼差しをむけるべきでように判断するかもしれない．実は，これはあるGFP 融合あろう．強拡大により細かな局在をよくよく観察すること蛋白質のみを一過性発現させた（単色対照の）細胞を，GFPによって，これが蛍光の漏れであるかどうかをある程度ま用フィルターと Cy5 用フィルターとでそれぞれ画像取得しで推定することもできる．

たものである．左側の細胞ではトランスフェクションに成功しているためGFP に特異的なシグナルが検出されており，自家蛍光にも注意

右側の細胞ではトランスフェクションに失敗している．右側の細胞で見えているものは自家蛍光である．もちろん，図 2 は，また別の例である．ここでは完全ではないもの

左側の細胞にも自家蛍光はあるのだが，発現させたGFP 融

蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）187

合蛋白質の蛍光が自家蛍光に比べ十分に強いので，一見，在パターンを反映していることがよくあるので，蛍光の明わかりにくくなっているだけである．多重蛍光標識の際にるい細胞だけにとらわれず，蛍光の暗い細胞での局在様式は，誤った解釈を防止するためにも，このような単色対照も観察して比較検討してみるのがよい．また，間接蛍光抗は必須である．

体法を併用して，両者の局在パターンが一致するようなら，より信頼性が向上するだろう．
GFP 融合蛋白質を高発現させることによる凝集体の形成凝集していないか？

は顕微鏡観察をするうえでもっとも注意すべき問題のひと
これまで述べた例は顕微鏡の検出系に関連したものであつであることを述べた．さらに，2 つのマーカー蛋白質が共ったが，つぎに，観察試料を作製する際に注意すべきこと凝集することによって生物学的に誤った解釈が生じる可能を議論しよう．GFP の発見とその生物学への応用に対し性をあげたい．図 4 は，オートファゴソームマーカーである

2008 年ノーベル化学賞が授与されたことに象徴されるようGFP-LC3 融合蛋白質と，凝集体を形成することで知られてに，ある蛋白質の細胞内局在を知りたい場合，GFP との融いるポリグルタミン蛋白質との共局在を観察した実験であ合蛋白質を作製して蛍光顕微鏡により観察することは，現る．両者は見事に重なっており，一見，ポリグルタミン蛋在では日常的に行なわれている作業である．融合蛋白質を白質の凝集体がオートファゴソームに取り囲まれたものの発現するプラスミドをつくって細胞にトランスフェクションように見える．しかし，事実はそうではない．なぜなら，すれば簡単に局在を観察できる，はずである．しかしながこの細胞はオートファゴソームをつくることのできないら，しばしば，細胞内に ボテッ あるいは グチャッ と凝Atg5 ノックアウトマウスに由来する線維芽細胞だからであ集しているGFP 融合蛋白質の写真を見ることがある．特定る 1）．両者は単に 共凝集 していたにすぎないのである．の蛋白質を高発現させると細胞内で凝集してしまうことがこのような例は，ポリグルタミン蛋白質のような有名な易しばしばあるのである．GFP 融合蛋白質などのように非生凝集性蛋白質にかぎらず，さまざまなコンストラクトで観理的な蛋白質であればなおさらである．また，分泌蛋白質察される．実は，GFP-LC3 融合蛋白質は単独でも凝集体をを高発現させると小胞体にとどまってしまうなど，GFP を形成しうる．そのような凝集体がほかの蛋白質を巻き込ん融合させた蛋白質が本来とは違う局在を示すこともある．

で共凝集体を形成することもしばしばあり，それがあたか

これらの意図せぬ局在は，GFP 融合蛋白質を高発現させたも生理的な共局在のように見えてしまう場合がある．困っときの細胞内局在を反映していることはまちがいないわけ

たことに，このような場合は 共免疫沈降 されてしまうこ

だが，もちろん，本来，解析したい目的とは異なっている．とさえあるので，注意しないと研究がどんどん誤った方向

GFP 融合蛋白質の発現量が相対的に低い細胞では本来の局へと進んでしまう．

GFP用フィルター

Cy5用フィルター

重ね合わせ像20μm

図 3 真のシグナルにひそむ自家蛍光
GFP と ULK2 というオートファジー関連蛋白質との融合蛋白質を一過性に発現させた胎仔線維芽細胞を，GFP 用フィルターと Cy5 用フィルターとで画像取得した
もの．左側の細胞はトランスフェクションに成功しているため比較的明るい特異的なシグナルと暗めの自家蛍光シグナルが観察されているが，右側の細胞では自家蛍光シグナルのみが観察されている．

188

蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）

細胞観察ならではの注意点もある．このとき，細胞が 生

少し上級編：動きを忘れてはいないか？

きて動いている ことを忘れてはならない．たとえば，GFP
間接蛍光抗体法では，細胞を薬剤で処理することによりの蛍光像を取得してからつぎにRFP の蛍光像を取得しよう

細胞内で進行中の生理的なプロセスをそのままの状態で保とする場合，蛍光フィルターを交換してから画像を取得す存する，いわゆる，固定処理がほどこされるのが普通であるので，得られた画像には数秒間のタイムラグが生じる．

る．そうした 死んだ細胞 に対し，GFP 融合蛋白質を使

そのあいだに対象が動いてしまい，本来は完全に共局在し用する利点は，細胞を生きたまま観察する，いわゆる 生細ているものが微妙にずれていたり局在していなかったりする

胞観察 が行なえる点にある．細胞固定や染色によるアーテように見えることがある．

ィファクトが入りにくいので安心なようにも思えるが，生GFP用フィルター（GFP-LC3）

このような対象の動きの問題は，GFP 融合蛋白質だけをCy5用フィルター（HA-ポリグルタミン）

重ね合わせ像20μm

図 4 2 つのマーカー蛋白質の共凝集により誤って共局在と解釈されるケース
Atg5 ノックアウトマウス由来の胎仔線維芽細胞に，GFP-LC3 融合蛋白質（オートファゴソームマーカー）と HA 付加ポリグルタミン蛋白質を共トランスフェクションした．固定後，ポリグルタミンを抗 HA 抗体と Cy5 標識 2 次抗体で染色し，GFP 用フィルターと Cy5 用フィルターとで画像取得した．オートファゴソームとポリグルタミン凝集体が共局在しているかのように見えるが，オートファジーに必須の蛋白質である Atg5 をノックアウトした細胞なのでオートファゴソームは形成されない．ここで見えているのは，GFP-LC3 融合蛋白質が単にポリグルタミン凝集体に巻き込まれてしまっているようすである．
［文献 1 より転載］

短時間露光

長時間露光

微分干渉像5μm

図 5 長時間の露光により失われる情報
出芽酵母のオートファジー関連蛋白質に GFP を融合し，GFP 用フィルターを用いて生細胞観察したもの．短時間露光（400 ミリ秒）と長時間露光（5000 ミリ秒）の画像を比較している．短時間露光では細胞内をめまぐるしく移動している多数の輝点がとらえられている．長時間露光ではこのようなすばやい動きがとらえられず，逆に，輝点の数が減少しているように見える．

蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）

189

（a）

（b）
コントラスト未調整

自動コントラスト調整

画像表示範囲蛍光強度

蛍光強度

画像表示範囲頻度

頻度

自動コントラスト調整

蛍光強度

真っ黒にみえる

図6

蛍光シグナルを強調
真っ白にみえる

真っ黒にみえる

真っ白にみえるバックグラウンドをカット

自動コントラスト調整 機能（a）自動コントラスト調整で行なわれていること．横軸に蛍光強度（実際にカメラがデータを取得できる範囲），縦軸にそれぞれの面積（ピクセル数）をとったヒス
トグラムと，得られる画像を示した．一般的には，CCD カメラから得られた生データはダイナミックレンジが広いため，そのまま表示しようとすると，よほど蛍光が強くないかぎり相当にコントラストが低くなる（左）．自動コントラスト調整機能によって画像表示範囲が適度に調整されると，バックグラウンドは真っ暗でシグナルが飽和しない程度に明るく観察される（右）．
（b）自動コントラスト調整を棒グラフで考えたときのイメージ．自動コントラスト調整により得られた画像は，棒グラフの一部分（オレンジ色の点線で囲った部分）を切り取って引き延ばして表示したものに似ている．コントラスト調整した画像を 8 ビットの TIFF 画像などに変換することがあるが，この処理は，棒グラフでいうと上下を切って表示することと同義であり，蛍光強度の情報が保存されていないことに留意してほしい．

使った単染色による観察の際にも生じうる． 図 5 に示して自動コントラスト設定に注意しよう

いるのは，対象となる構造体が短い露光時間ではよく見え，長い露光時間では見えなくなるという，逆説的なことが起さて，話をまた一般的なレベルに戻したいと思う．顕微

こっている例である．これは，対象となっている小さな構

鏡写真は，コントラストを調整しないかぎりはまともな写造体が細胞内で速く動き回っているために起こっている．

真にならない場合がほとんどである．そのため，前述のよ露光時間が短かければそれらの動きを止めて画像取得したうに，画像取得ソフトウェアの 自動コントラスト調整 がことになるが，じっくり見ようとして露光時間を長くするつねにオンになっている場合も多いと考えられる．それ自と露光しているあいだにも対象が動いてしまい画像がぼや体はいけないことではないが，この自動コントラスト調整けてしまう．この現象は，暗い部屋のなかでカメラ撮影をがどのようなことを行なっているかを理解しておかないと，する場合，露光時間が増えることにより，ちょっとした体誤った解釈につながりうる．の動きでぼけた写真になってしまうのに似ている．このよ

よくある 自動コントラスト調整 機能は，見やすくする

うに，生細胞観察では観察時間（露光時間）によっても見えために画像のバックグラウンドを取り除き，蛍光シグナル方がかわってしまう場合がある．

をひき延ばして明るく表示する，という行為を自動的に行なうものである（図 6a）．こうすることでメリハリのある見やすい像となる．これを棒グラフで考えたときのイメージ

190

蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）

を，図 6（b）に示した．
定性的に蛍光シグナルの局在パターンを解析するのであればあまり問題にならないかもしれないが，このような画像まで一致していることを確認する必要がある．

できるだけグレースケールで提示しよう！

を用いて 明るさ を比較する場合には注意が必要となる．

白黒画像がもっともコントラストにすぐれ，かつ，プリたとえばウェスタンブロット法では，別々のメンブレンのあントアウトによるトラブルが少ない．せっかくの投稿論文

いだでバンドの濃さを比較することはあまりないが（というがレフェリーにまわっても，そのレフェリーが高性能のプリより，やるべきではないだろう），顕微鏡観察では別々のプンターをもっているかどうかは保証されない．レフェリーがレパラートのあいだで蛍光強度を比較せざるをえない．そコンピューターのディスプレイでじっくりとみてくれることの場合，自動コントラスト処理した画像を比較してはまっはないと思うべきである．たとえば， 図 1 のように，白黒たく意味がなく，自動コントラスト機能を使用しないで撮カメラで取得したGFP 単色の画像を緑色で示すことに意味影をする必要がある．このことによって，画像間の明るさはなく，グレースケールで十分である．それどころか，とを直接に見た目で比較することができる．こうして得られくに緑色は印刷時のトラブルが多いので，非常に不鮮明なた画像があまりに暗い場合は，手動でコントラストを調整画像になってしまうことがある．これは，顕微鏡で取得さする．通常の画像処理ソフトウェアは，バックグラウンドれた画像が RGB 形式であるのに対し，基本的な印刷はを取り除く程度と蛍光シグナルを明るくする程度を数値でCMYK 方式であるためである．二重染色の場合であって入力できる（もしくは，表示される）ようになっているので，も，単色の画像はグレースケールで示し，重ね合わせ像に比較する画像のコントラストの程度をまったく同じようにのみ赤色と緑色とを用いるようにするとよい（図 2 〜図 4 で調整できる．こうして得られた画像を用いれば， 見た目の示した例を参照されたい）．最近では，色覚バリアフリーの明るさ を比較することが可能である．

観点から，重ね合わせの画像にはマゼンタ色（赤色と青色のただし，バックグランドのシグナルが差し引かれているかぎり，こうして表示された顕微鏡画像データでは 見た目の明るさ は 実際の蛍光強度 と比例しないと思ったほうが混合色）と緑色とが使用される例も増えてきた．

おわりによい．2 倍の蛍光強度のものが2 倍の明るさに見えることは本稿では，取得された蛍光顕微鏡画像の妥当性をどう評ほとんどないのである．もし，定量的な解析を行なうので価するかという問題に対し，さまざまな実例を引き合いにあれば，本シリーズ第 1 回「Photoshop によるゲル画像の調して解説を行なった．とかく人間というものは， 見えた整」で解説したウェスタンブロットの場合と同様に，実際のということで安心してしまう傾向があり，見えたものに対蛍光強度を測定するべきである．さらに，比較の前提条件する検証をおろそかにしがちである．蛍光顕微鏡観察の経として，露光時間など画像取得の条件はすべて同じにする

験を積むことによりそうした評価が直感的にできるように必要があることはいうまでもない．また，観察時間もそろなってくるが，そうした人たちにとっても，微妙な判断をえるべきで，たとえば，肝心の試料は一所懸命に観察する要求されるときはやはりきちんとした対照実験をするべき

一方で対照試料はサッと済ませてしまうと，蛍光の退色のであろう．ましてや，蛍光顕微鏡観察に慣れないうちはな程度に差がでてしまう．

おさら慎重を期すべきである．これまでふれたように，染色された蛍光パターンが染色していない試料では見えない

そのほかの注意
細胞内に広く分布する構造体との共染色こと，そして，染色していない色では見えないことをまず検証することが重要である．また，GFP 融合蛋白質を観察する際には，その発現量に十分に注意すべきである．融合

小胞体，ミトコンドリア，リソソームなど，細胞内に広蛋白質が過剰発現されると，予期せぬ局在を示したり凝集く（または，多数）分布する構造とは，高い確率で偶然に共体を形成したりすることが往々にしてある．免疫染色に使染色されやすい．とくに，解像度の低い不明瞭な画像では用可能な抗体があれば，間接蛍光抗体法によるパターンと共染色が容易に観察される．このような共染色は必ずしもGFP 融合蛋白質の蛍光パターンとを比較検討することによ共局在を表わさない．ほんとうに共局在しているかどうかり，得られた画像が妥当なものかどうかを検証することがを解釈するには，十分な解像度の画像において細かい形態できる．また，GFP 融合蛋白質を発現した細胞を観察する蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）191

際には，融合蛋白質の発現量が多い細胞と少ない細胞（蛍意点をあげた．これらの注意点をあたりまえだと感じる読

光強度で判断できるだろう）をまんべんなく観察し，どの蛍者も多いと思われるが，そのような方も，ぜひ，今後の新光パターンが妥当なものであるかを総合的に判断する必要

人教育の際にご利用いただけたらと思う．

がある．
人間にとって 見える ということはきわめてインパクトのある表現手段であり，顕微鏡が発明されて以来，光学顕本稿を執筆するにあたり，たいへん貴重な画像データ（ふつうは，このような失敗データは保存しておかないので）を提供いただきました石
原直忠博士，原 太一博士，板倉英祐氏に感謝いたします．

微鏡を用いた形態的な観察は生物学の研究にとって欠くことのできない解析手段となってきた．生物試料は光学的に透明であることから，細胞を可視化するために種々の染色法が開発され，現在でも，ヘマトキシリン-エオジン染色法

文献1） Kuma, A., Matsui, M., Mizushima, N.: Autophagy, 3, 323 - 328（2007）などは組織学的な研究には欠くことができない．これらの染色法は生物試料の形態を解析するために有効であるが，細胞内の特定の蛋白質の局在を可視化したいという欲求か

水島 昇ら，蛍光を用いた標識法が開発されてきた．これらの方法把握するのがむずかしい）という欠点があるが，特定の蛋白

略歴： 1996 年 東京医科歯科大学大学院医学研究科 修了，2002
年 基礎生物学研究所 助手，2004 年 東京都臨床医学総合研究所室長を経て，2006 年より東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 教授．

質を可視化できるという利点はその欠点をおぎなってあま鈴木邦律

りある．蛍光顕微鏡観察は，今後とも生物学の研究にとっ

略歴： 1994 年〜 1999 年 浜松ホトニクス．2002 年 総合研究大学院大学生命科学研究科 修了，日本学術振興会 特別研究員を経て，2004 年より基礎生物学研究所 助手（現 助教）．

は，標的とする蛋白質しか見えない（細胞や組織の形態をてきわめて有効な解析手段となっていくだろう．
本稿では，蛍光顕微鏡観察において初歩的と思われる注

192

蛋白質 核酸 酵素 Vol.54 No.2（2009）