誘導体化 GC/MS 法を用いた生体試料中の OHOH-PCBs 分析○羽賀雄紀1，鈴木元治2，奥野俊博1，矢本善也3，鶴川正寛1，松村千里1，英保次郎1，井上嘉則4，中野武5（1（財）ひょうご環境創造協会 兵庫県環境研究センター, 2 神戸大学, 3 関西大学,4 日本フィルコン, 5 大阪大学）

Analysis of OH-PCBs in Biological Sample by Derivatized GC/MS Method, by Yuki HAGA1, Motoharu SUZUKI2, Toshihiro
OKUNO1, Yoshinari YAMOTO3, Masahiro TSURUKAWA1, Chisato MATSUMURA1, Jiro EIHO1, Yoshinori INOUE4,Takeshi NAKANO5 (1Hyogo Pref. Inst. of Env. Sci. , 2Kobe Univ. , 3Kansai Univ. , 4Nippon Filcon, 5Osaka Univ.)urine sample

dilution
Hexane extraction
add surrogate
clean up
RP-WAX(SEP-PAK Plus Florisil)

0.1% NH4/MeOH
extraction

concentration
HRGC/HRMS

concentration
GN-ASEz
incubation
DCM extraction

図１

Analytic flow of OH-PCBs in urine

0.5
concentration (μg/g Cre)h u m an u r i n e （ 2 0 1 1 . 1 . 2 2 )h u m an u r i n e （ 2 0 1 1 . 3 . 1 4 )blan k

0.4
0.3
0.2
0.1

図２

OH-HpCBs

OH-HxCBs

OH-PeCBs

OH-TeCBs

OH-TrCBs

0.0
OH-MoCBs

2.実験方法尿中の OH-PCBs の分析フローを図１に示す。試料として 60 才代男性の尿（2011 年 1 月 22 日と 2011 年3 月 14 日に採取）を 150～200ml 用いた。Filter paper
5A(Advantec 社)で濾過後，0.02M リン酸緩衝液（pH4）
で尿を 2 倍に希釈し，10%蟻酸/水で pH を 4 に調整した。OH-PCBs のサロゲートを 2ng 添加し，RP-WAX（日本フィルコン（株））に通水した。0.1%アンモニ
ア/メタノールで RP-WAX から溶出した後，窒素気流下で 0.5～1ml に濃縮した。
0.02M リン酸緩衝液（pH7）で 5ml に希釈し，グルクロン酸及び硫酸抱合体を分解さ せ る た め に β -glucuronidase/arylsulfatase（GN/ASEz）溶液(Merck 社)を 20μl 加え，37℃で 1.5時間反応させた。
次に，ジクロロメタン（DCM）抽出し，2600rpm

derivatization(methylation)

filtration

OH-DiCBs

1.はじめに絶縁油や熱媒体として使用されたポリ塩化ビフェニル（PCBs）は，1972 年に製造が禁止されたが，難分解性や高蓄積性をもつため，現在も環境や生体中から検出されている。
生体内にとりこまれた PCBs は，薬物代謝酵素シト
クロム P450 による酸化をうけ，水酸化ポリ塩化ビフ
ェニル（OH-PCBs）へと代謝される。その一部異性体は体内に残留し，甲状腺ホルモン等の作用に影響を及ぼすことが疑われている 1)。甲状腺ホルモンは，熱産生，心拍出量や心拍数の増大，糖新生や脂肪分解等の多彩な作用を有し，また，胎児期においては，脳や筋肉の発達に重要な役割を担っている内分泌系の中でも重要なホルモンである。
OH-PCBs の環境汚染については，これまでに環境水，大気，底質及び生物などを対象に調査されており，それら全てから OH-PCBs が検出されている。ヒト試料では，主に血液中の OH-PCBs が測定されており，特定の異性体が検出されている。本研究では，ヒト尿試料を対象とした測定方法の検討を行い，一般男性におけるヒト尿中の OH-PCBs レベルを測定したので，その結果を報告する。

The concentrations of each OH-PCBs
homologue in human urine

で 10 分間遠心分離した。DCM 相は硫酸ジメチルと３Ｎ水酸化カリウム/エタノール（10%含水）を用いてメチル誘導体化とアルカリ分解を行い，ヘキサンに転溶した後に SEP-PAK Plus Florisil Cartridge（Waters社）によりクリーンアップした。溶出液を 100μL に濃縮してシリンジスパイクを添加後，HT-8PCB カラムを接続した HRGC/HRMS（HP6890/JMS-800D）により OH-PCBs を分析した。異性体の同定は既報に準じて行った 2)。

(%)

10050OHHpCBs

OHHxCBs

OHP eCBs

OHTeCBs

OHMoCBs

OH-DiCBs

OH-TrCBs

0OH- PC Bs r at i o in h um an ur in e （ 20 1 1 .1 . 2 2 )

(%)

10050

図３

OH-PCBs ratio in human urine
Chromatograms of OH-PeCBs

OH-5Cl / Average▼1▼ ８(2011.3.14)
4

▼

80000

５

▼

７

▼

40000

６2

▼

▼ 3
▼

９▼

020

22

24

26

28
30
32
Retention Time (min)2)

M. Suzuki et al ： Organohalogen Compounds, 71,1866-1870(2009)3)

Sakiyama T. et al：Organohalogen Compounds, 69,1380-1383(2007)

4)

M. Suzuki et al：Organohalogen Compounds(2011 掲載予定)

36383Intensity▼(2011.3.14)80000

4▼40000

21▼▼0

参考文献
Kitamura S. et al.：Toxicology, 208, 377-387 (2005)

34

Chromatograms of OH-HxCBs

221)

OHHpCBs

OH-PCBs r at io in h u m an u r in e （ 2 0 1 1 .3 .1 4 )OH-6Cl / Average

4.謝辞
本研究は，文部科学省の平成 22 年度科学研究費補助金（基盤研究 B）課題番号 21310027 の支援により実施されました。

OHHxCBs

OHPeCBs

OHTeCBs

OHTrCBs

OHDiCBs

OHMoCBs

0Intensity

3.結果と考察
クレアチニンで補正した尿中の OH-PCBs 濃度を図２に示す。濃度に約 10 倍の差があったため，食事等からの暴露も検討する必要がある。
次に，尿中の OH-PCBs の同族体比を図３に示す。
尿中からは 5 塩素体と 6 塩素体の OH-PCBs が多く排出されることが認められた。これまでに当センターや先山らが報告した環境試料では、大気と古紙再生工場周辺では 1,2 塩素体が 2) ，底質では 3～5 塩素体のOH-PCBs が多く含まれ 3)，環境中と生体中では同族体組成が違うことがわかった。
尿中の 5 塩素体と 6 塩素体の OH-PCBs のクロマトグラムを図４に示す。5 塩素体は 4’OH-93CB と 3OH-110CB が，6 塩素体は 4 OH-146CB/3 OH-153CBと 3’ OH-138CB が主に検出されたが，同定できていない異性体も残っており，さらなる検討を行う必要がある。
同サンプル提供者の尿・血液の結果について別途報告する予定であるが 4)，尿と血液中の OH-PCBs 濃度の相関関係を調査することで，より詳細に生体内の挙動が明らかになることが期待できる。

No.
12345678924262830
Retention Time (min)OH-PeCB
Isomer4’OH-93CB
2 OH-109CB
3 OH-119CB
3 OH-84CB
3 OH-113CB
4’OH-86CB
4’OH-107CB
3 OH-110CB
4 OH-97CB

3234

OH-HxCB
Isomer4 OH-134CB
4’OH-165CB
4 OH-146CB/
33 OH-153CB
43’OH-138CB

No.
12

図４ The chromatograms
ofthe
OH-PeCBs▼：Identified
peak (RT matched tostandard) andOH-HxCBs in human urine

36