レトロトランスポゾンによる福岡県育成キク品種「雪姫」，「月姫」，「秋華」，「夏日和」の品種識別

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レトロトランスポゾンによる福岡県育成キク品種「雪姫」，「月姫」，「秋華」，「夏日和」の品種識別
平島敬太＊・佐伯一直
福岡県育成のキク品種「雪姫」等の知的財産権侵害に対する抑止力を高め，適正な表示と流通を確保するために，国内で流通する主要な輪ギク品種に対するDNAマーカーによる品種識別技術の開発を行った。
キクのレトロトランスポゾンCMRE 1 を基に設計･選定したIRAP（Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism）マー
カー 1種およびREMAP（REtrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphism ）マーカー 9種は，輪ギク13品種間で多型を示した。本県育成の 4品種「雪姫」，「月姫」，「秋華」，「夏日和」は，国内で流通する主要な10品種に対して，IRAPマー
カー 1種とREMAPマーカー 2種（CRF151-827，CRF151-816）のマーカーを利用することにより識別できた。
［キーワード：キク，品種識別，DNAマーカー，IRAP，REMAP，レトロトランスポゾン］

Discrimination of Chrysanthemum Cultivars “Yukihime”, ” Tsukihime “, ” Shuka” and “Natsubiyori” bred at the Fukuoka
Agricultural Research Center by Retrotransposon DNA Markers. HIRASHIMA Keita and Kazunao SAEKI (Fukuoka Agricultural
Research Center, Chikushino, Fukuoka 818-8549, Japan) Bull. Fukuoka Agric. Res. Cent. 31: 49-53 (2012)
To protect intellectual property and to ensure correct labeling of chrysanthemum varieties in the marketplace, it is importantto have an accurate and reliable marker system. We developed a system to discriminate varieties of chrysanthemums using
retrotransposon DNA markers. Inter-retrotransposon amplified polymorphism (IRAP) and retrotransposon-microsatellite
amplified polymorphism (REMAP) markers were designed from retrotransposon CMRE1, and showed polymorphisms
among 13 chrysanthemum cultivars. Four varieties that were bred at the Fukuoka Agricultural Research Center (‘Yukihime’,‘Tsukihime’, ‘Shuka’, and ‘Natsubiyori’) were distinguished from 10 domestic varieties using an IRAP marker and twoREMAP (CRF151-827, CRF151-816) markers.
[Key words : Chrysanthemum × morifolium Ramat., variety identification, DNA markers, IRAP, REMAP, Retrotransposon]緒言

福岡県は，輪ギク（Chrysanthemum × morifoliumRamat.）出荷量9,510万本で，愛知県に次ぐ全国第 2位の生産地である（花き生産出荷統計2009年度版）。
その輪ギクのうち約 7割が白輪ギクである。市場に流通する白輪ギクは，海外からの輸入品増加に伴い，県産品を含めて低価格化が進行し（花きをめぐる情勢2011），栽培農家の経営は厳しさが増す一方である。
このため，輸入品や他県産の輪ギクに対抗できる本県オリジナルの品種として，2008年には「雪姫」（登録番号16874），「秋華」（登録番号16979）が，2010年以降には「夏日和」（登録番号18908）,「月姫」（登録番号21096）が品種登録された。これらの中でも「雪姫」
は，透明感のある純白で抱え咲きの大きな花形，水揚げが良い等の優れた特性を持つ品種として高い市場評価を受け，県外への栽培許諾も増加して，市場での占有率拡大が進んでいる。
この様な国内外における激しい産地間競争においては，ブランド品種の適正な表示を担保し，知的財産権（育成者権）の侵害に対する抑止力を高め，適正で公正な市場流通を確保することが重要である。そのためには，正確にオリジナル品種であることを識別する技術が必要である。
農作物の種，属，品種の識別や遺伝的な分類は，本来形態的な特徴の区別性に基づくものであるが，近* 連絡責任者（研究企画部：k-hira@farc.pref.fukuoka.jp）


年は迅速性や客観性に優れるDNAマーカーを利用した解析手法が利用されている。キク科植物においては，RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA
techniqe：Wolffら1995，Chatterjeeら2005，Yangら
2006，吉川ら2008），RFLP（Restriction FragmentLength Polymorphism:Wolffら1995），ISSR（InterSimple Sequence Repeat :Yangら2006），IGSAP（Intergenic Spacer region Amplified Polymorphism:谷口2008），SSR（Simple Sequence Repeat ：江口ら2010）等の適用が報告されている。ただし，輪ギクはガンマ線やイオンビームの照射，さらには栽培ほ場での自然突然変異によっても新品種が派生し，この様なDNAレベルでの変異が極めて少ない突然変異体の識別は，上記の様な多様なDNAマーカー解析手法を利用しても困難と考えられてきた。
しかしながら，イオンビーム照射による突然変異体として得られたキク品種を識別できる手法として，レトロトランスポゾンをマーカーとする手法（阿部ら2007，松山・白尾2009）が報告された。レトロトラン
スポゾンは，環境ストレス等により活性化し，転写した自身の配列を宿主ゲノムの異なる位置に挿入することで転移する遺伝子であり，一度挿入された配列は安定的に遺伝する（Kumar and Bennetzen 1999）。また，全ての真核生物のゲノムに多数のコピーが散在しているため，遺伝的多様性の評価に適する優れた遺伝子マーカーとなることが知られている（Waughら

受付2011年 7月22日；受理2011年11月28日

50

福岡県農業総合試験場研究報告 31（2012）

1997，Flavellら1998，Kumar and Hirochika 2001）。
キクのレトロトランスポゾンは，唯一逆転写酵素に対応する配列CMRE1（Accession No.AB033265 ）が登録されている。阿部ら（2007）や松山・白尾（2009）の報告もCMRE1の散在に由来する多型検出にRBIP（Retrotransposon-Based Insertion Polymorphisms）のSTS（Sequence Tag Site）化やRAPD用プライマーを組み合わせて，特定の品種に特異的なマーカーを開発したものである。
この様にレトロトランスポゾンは，キクの品種識別に対しても極めて有用なマーカーとなり得るが，本県で育成した品種の識別に対する適用例はない。
また，レトロトランスポゾンのゲノムにおける散在性を基本とするマーカー検出手法としては，他にもS-SAP（Sequence-Specific Amplification Polymorphism），
IRAP（Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism），REMAP（REtrotransposon-Microsatellite AmplifiedPolymorphism） が 多 く の 作 物 で 報 告 さ れ て い る（Waugh ら1997，Kalendarら1999，Priceら2003， 大
江 ら2004，Guoら2006，Biswasら2010）。その中でもIRAPとREMAPは，S-SAPに比べて制限酵素処理やアダプター配列の付加操作が不用で，基礎的なPCRと検出操作だけで完結できる等，操作が簡素な点で優れている。
そこで，本県で育成した「雪姫」等の 4品種を市場に流通する主要品種に対して識別するためにIRAPやREMAP に基づくDNAマーカーの開発を試みた。

物の生成を考慮し，5’側および 3’側プライマーを組み合わせて利用した。プライマー濃度を各0.5μMとし，抽出したDNA 10ngを鋳型に，AmpliTaqGold
PCR Master Mix（Applied Biosystems製）
を 6μL，滅菌水を加えて全量12μLとした。サーマルサイ
ク ラ ー のPCR反 応 プ ロ グ ラ ム は，1サ イ ク ル：95 ℃（ 5min），40サイクル：95℃（15sec）, 60℃（30sec）,
72 ℃（ 1min），1サ イ ク ル：72 ℃（ 7min） と し た。
PCR反応産物は，0.9%のSeaKem GTGアガロースゲ
ルにて80Vで電気泳動し，増幅断片の有無やサイズを画像解析装置（Fluorchem8900:Alphainnotech社）で確認した。なお，採取時期の異なる14品種の新葉および硬化葉より個別に抽出したDNAで 3回の解析を行い，各採取時期を通じて再現性の高い増幅バンドを識別マーカーとした。
CRR411, 380, 273

5’LTR GAGAP Reverse Transcriptase RNase HIN3’LTR

CRF181, 151, 132

第1図
Ty3-gypsy型レトロトランスポゾンの構造と型レトロトランスポゾンの構造と第１図
Ty3-gypsy
CMRE1に対するIRAPプライマー設計概要
CMRE1に対するIRAP プライマー設計概要
1）

1：3’LTR配列下流への伸長反応用プライマー：5’LTR配列上流への伸長反応用プライマー
LTR ：Long-Terminal Repeats,
GAG：Group-specific AntiGen
AP： Asparatic Proteinase, IN ：Integrase

2REMAPマーカー検出
第3図 下 に 示 し た 3種（MF, RM, MM type）PCR
材料および方法
5
産物の生成を考慮して，IRAPマーカーの増幅を確認
１ 供試品種およびDNA抽出
し た プ ラ イ マ ー 2種（ 第1表 ） に 対 し，UBCプ ラ イ6
識別対象の品種は，本県で育成した「雪姫」，「月マーセット（The University of British Columbia製，7姫」，「秋華」，「夏日和」の 4品種とした。比較品種は， 8 Canada）♯ 9の13種を用いた。IRAP用 2種プライマー
2009年に日本花普及センターがまとめた花き品種別流とUBC13種プライマーを一対とする26組み合わせを9
通動向分析調査結果に含まれる主要な品種，または上プライマーセットとし，IRAP同様の組成で全量12μ10
記 4品種と生態的特徴が似ている10品種（第2表）とLに調整した。PCR反応にはタッチダウンサイクルを11した。
加えた。すなわち，1サイクル：95℃（ 5min），6タッ各品種から，新葉，硬化葉，花弁組織を各50mg 1 2 チダウンサイクル：95℃（15sec）, 65℃ -55℃（ 2℃採取し，直径 5mmのジルコニアボールと共に 2mL 1 3 /サイクルの降温30sec，）,72℃（ 1min），34サイクル：セーフロックチューブに詰めて，液体窒素で凍結し 1 4 95℃（15sec）, 55℃（30sec）,72℃（ 1min），1サイクル：た。続いて，自動破砕装置（MM400 Mixer Mill型； 1 5 72℃（ 7min）とした。PCR反応産物は，アガロース
Retsch GmbH & Co. KG社製）により破砕し，Mag 1 6 電気泳動およびマイクロチップ電気泳動装置MultiNA
Extracter Plant Genome Kit（TOYOBO社 製 ） に よ 1 7 （島津製作所製）により，増幅断片のサイズやパターりゲノムDNAを抽出した。その際に以下の点を添付 1 8 ンを確認した。なお，IRAP同様に個別に 3度採取抽マニュアルより変更した。①溶解液に 1％濃度でβ出したDNA試料，および個別に合成したロットの異メルカプトエタノールを添加した。②抽出操作行程
なるプライマーを用いて再現性を確認し，識別性に優の全ての溶液量を1/2量とした。③DNA溶出液のTE1第１表
IRAP，REMAP 用プライマーを1/10濃度とした。また，抽出したDNAの濃度が50
第１表 IRAP，REMAP用プライマー～ 100ng/μLの 範 囲，UV Ratio（A260/A280,A260/
プライマー
塩基配列(5'-3')
塩基数
Tm値(℃)A230）がそれぞれ1.8, 2.2以上であることを確認して
IRAP
CRF151CGGGAGTGGGTAACGGTTCT
2059.5マーカー検出に供試した。
3３4

CRR411

２

IRAPマーカー検出
キ ク の レ ト ロ ト ラ ン ス ポ ゾ ンCMRE1（ReverseTranscriptase, Accession No.AB033265）の内部配列に対し，5’側および 3’側の外側に向け，それぞれ 3種プライマーを設計した（第1図）。これらプライマーは，第3図上に示した 3種（RF,RR,FF type）PCR産CGCACCAGCTGTGTTCATGG

2059.5

CRF151CGGGAGTGGGTAACGGTTCTCRR411CGCACCAGCTGTGTTCATGGUBC810(GA)8T
UBC816(CA)8T
UBC817(CA)8A
UBC819(GT)8A
UBC821(GT)8T
UBC826(AC)8C
UBC827(AC)8G注)Tm:melting temperature

202017171717171717

59.5
59.5
49.8
49.8
49.8
49.8
49.8
52.2
52.2

REMAP

123456

レトロトランスポゾンによる福岡県育成キク品種「雪姫」，「月姫」，「秋華」，「夏日和」の品種識別れるマーカーを選定した。

結果

IRAP

bp
300020001000-

精雲

岩の白扇

フローラル優香

山陽黄金精興光明

精興の秋秀芳の力

新神神馬

夏日和

秋華

月姫

雪姫

県育成品種

精興の誠

IRAPマーカー
CMRE1の内部配列に対し，外側に向けて設計した 6種プライマーのうち，増幅産物を認めたのは，CRF151とCRR411の組み合わせであった。14品種における増幅産物の電気泳動像を第2図上段に，マーカーの識別パターンを第2表に示した。
「月姫」
「神馬」，
，「新神」
，「秀芳の力」，「山陽黄金」，「岩の白扇」，「精雲」
では約3100bpの増幅産物Aが，「月姫」，「秋華」，「フローラル優香」では約2500bpの増幅産物Bが認められた。しかし，「雪姫」，「夏日和」，「精興の誠」，「精興の秋」「精興光明」では，，両増幅産物は認められなかった。14品種の中で「月姫」は，単独で増幅産物AおよびBを併せ持つことから，CRF151とCRR411を用いたIRAPにより，他の品種に対して識別できることが明
サイズマーカー

１- A:3100- B:25001200-- A:810675-

REMAP 460CRF151-827- B:350
2221200-__ A:1080- B:940

REMAP 675CRF151-816

460-１) IRAPは0.9％アガロースゲルでの分離
2) REMAPはMulti NA DNA2500 ｋit での分離

1

らかとなった。
なお，DNA抽出に用いた新葉，硬化葉，花弁組織の試料および採取時期の異なる新葉，硬化葉からは，いずれも同一のマーカー識別パターンが得られることを確認した。
２

REMAPマーカー
IRAPで品種間多型を示したプライマーのCRF151
およびCRR411に対し，UBCプライマーセット♯ 9の13種を組み合わせた結果，増幅産物を確認できたのは26組み合わせ中20組み合わせであり，識別性の高い品
種間多型が認められたのはそのうち 7種プライマー（第1表）による 9組み合わせ（第2表）であった。14品種における増幅産物の電気泳動像の例を第2図中下段に，プライマーセットとの組み合わせにおけるマーカーの識別パターンを第2表に示した。
こ れ ら14品 種 のREMAPマ ー カ ー パ タ ー ン の 中で， 単 独 で 品 種 特 定 が 可 能 な パ タ ー ン を 示 した のは，CRF151-816に お け る「 夏 日 和 」，「 精 興 の 誠 」，
CRF151-821に お け る「 精 興 の 秋 」，「 山 陽 黄 金 」，
CRF151-810における「精興の誠」，「山陽黄金」であった。その他の品種の識別は，「神馬」と「新神」の識別を除き，3種以上のマーカーを組み合わせることによって相互識別が可能であった。例えば，県育成の 4品種を相互に，かつ他の10品種に対して識別するために は，CRF151-827，CRF151-816，CRR411-819を 併用すれば可能であった。
なお，試料組織および採取時期によりマーカー識別パターンに違いがないことを確認した。

考- C:390

第２図
輪ギクの品種識別に有効なDNAマーカーの電気泳動像第２図
輪ギクの品種識別に有効な
DNA マーカーの電気泳動像

2察

今回のキク14品種の識別性マーカー探索において，IRAPおよびREMAPマーカーは再現性の高い多型を示し，5品種については，単独のマーカーで品種固有

第２表 輪ギクの品種識別に有効な DNA マーカーの多型
第２表
輪ギクの品種識別に有効なDNAマーカーの多型

3REMAP
IRAP
CRF151 CRF151 CRF151 CRF151 CRR411 CRF151 CRR411 CRF151 CRF151 CRR411-R411 -827-816-821-819-810-817-819-826-827

456

A:3100 A:810 A:1080 A:610 A:740 A:640
B:2500 B:350 B:940 B:560 B:300 B:550
C:390 C:180
雪姫
ABA
A
BCA
月姫
AB
秋華
B
BCA
B
夏日和
CA
AB
神馬
A
B
ACA
新神A
B
A
C
A
C
A
A
精興の誠AB
AB
秀芳の力
A
B
A
B
精興の秋
B
A
A C
AB
精興光明
B
3BCB
山陽黄金A
A
フローラル優香 B
AB
A
岩の白扇
A
AB
BCAB
精雲
A
AB
BCA
１）アンダーラインは、単独で品種特定が可能なマーカーパターン
2)神馬と新神は同じマーカーパターンを示すため、識別不可
3)空白は識別マーカーが検出されないことを示す
品種名

78910111213
141
234

51

A:530 A:1100 A:600 A:570
B:450 B:420 B:530 B:350

A

B
B
A

A
A
A
A
A
A
A
A
A

B
B

AB

B

B

AB
AB
AB
B
B
AB

AB
AB
AB

AB
AB
AB

B

A
B
B

52

福岡県農業総合試験場研究報告 31（2012）の識別パターンを示した（第2表）。しかしながら，「雪姫」や「秋華」，他の品種においては，単独マーカーで品種固有のパターンを得ることはできず，複数マーカーのパターン比較による識別が必要であった。
IRAPは，CMRE1の隣接距離の相違に基づいて 3タイプの増幅産物の有無やサイズが決定される多型である（第3図上）。今回キク14品種の識別性を示した増幅産物は，Aが約3100bp，Bが約2500bpであり，PCRによる検出対象としては比較的サイズが大きい。その要因としては，塩基配列情報が明らかな逆転写酵素領域にプライマーを設計したことにより，PCR産物はレトロトランスポゾン配列の中央に近い位置からLTR配列を含んで外側に向かって増幅されたため（第1図）と考えられる。PCR反応の安定性，検出と識別性を考
慮すれば，識別に利用するPCR増幅産物サイズは100～1000bpの範囲が適しているため，
Karendarら（1999）
やPriceら（2003）の様にレトロトランスポゾンの両端に位置するLTR配列にIRAPのプライマーを設計配置することが増幅産物サイズを小さくし，マーカーの出現頻度を高める上で望ましいと考えられる。今後
はLTR配列を含むCMRE1の全塩基配列を取得し，新たなIRAPプライマーをより外側に設計することで，PCR増幅産物サイズが比較的小さいマーカーを追加獲得することが課題である。
REMAPは， 第3図 で 示 す よ う にCMRE1や マ イ ク
ロサテライト（SSR）配列の散在と隣接距離によって，IRAPの1タイプ（FF typeまたはRR type）に加えて 3タイプのPCR増幅産物のサイズやパターンに相違が生じる。今回多型を示したマーカーは，SSRの散在の多様さに由来すると考えられ，レトロトランスポゾンとSSRを組み合わせたREMAPは，相乗的にマーカー出現頻度が高くなることを示している。
RF typeFF type

RR type

PCR products

CMRE1

CMRE1

CMRE1

CMRE1

IRAP: Inter-Retrotransposon Amplified Polymorphism

PCR products
Microsatellite

MF type

CMRE1

RM type

MM(ISSR) type

Microsatellite

Microsatellite

REMAP: REtrotransposon-Microsatellite Amplified Polymorphism

第３図123456789101112IRAP, REMAP におけるプライマーのアニール位

第3図 IRAP,REMAPにおけるプライマーのアニール位置とPCR増幅パターン
置と PCR 増幅パターン
1） ：3’LTR配列下流への伸長反応用プライマー：5’LTR配列上流への伸長反応用プライマー：Micro satellite 3’下流への伸長反応用プライマー
RF：CRR-CRF primer products, RR：CRR-CRR, FF ：CRF-CRF,
MF：Micro satellite-CRF, RM：CRR-Micro satellite,
MM：Micro satellite-Micro satellite,
ISSR：Inter-Simple Sequence Repeat

農作物の品種識別マーカーは，理想的にはCRF151810における「精興の誠」，「山陽黄金」の様に単一品種に対応した単独マーカーパターンが望まれる。それは，穀物や加工品など主要な農産物の流通形態として複数品種のブレンド商品が存在し，その様な商品に含まれる品種の特定には，複数マーカーの組み合わせパターンでの識別では対応できないためである。しかしながら，キクの流通形態にその様なブレンド商品は存在しない。したがって，本研究で得られた複数マーカーの組み合わせパターン，例えば最低 3マーカー
CRF151-CRR411，CRF151-827，CRF151-816の 併 用で「雪姫」，「月姫」，「秋華」，「夏日和」の相互識別，および他10品種に対する識別パターンによる判定でも実用性に支障はない。
ちなみに，今回選定したIRAPおよびREMAPの全マーカーを用いた場合に，ある持ち込まれた異品種が比較14品種と同一のマーカーパターンを偶然に示す 確 率 は，P= 1（1-Pok）n=0.0069〜0.000017（ た だし，Po=同一アリールの頻度=0.203〜0.467，n=品種数=14，k=ローカスの数=10）であり（DNA品種識別技術検討会2003），本研究の品種識別精度は十分に高いと考えられる。
なお，①試料は新葉，硬化葉，花弁のいずれでも対応可能で，②搬入から識別が完了するまでの所要時間は，使用するマーカーや試料の数により異なるが，24試料を本報告の手法で解析した場合は約 8時間程度であり，③品種識別手法に求められる簡素な操作性や迅速性の点でも実用性が高いものと考える。
これまでに，植物の遺伝的な多様性の解析や品種識
別にはRFLP，RAPD，AFLP，SSR，SNP等のDNAマーカーがキクに限らず多様な作物で利用されてきた。今回利用したIRAPやREMAPは，Kalendarら（1999）に
よってオオムギに多数散在するレトロトランスポゾン
BARE-1およびSSR間の多型検出法として最初に報告された手法であり，その後，アブラヤシ，カキ，イネ，カンキツ等の遺伝的類似性解析（Priceら2003，Guoら2006，Casteloら2007，Biswasら2010） 等 に 利 用 された。
その特長は，緒言で述べたレトロトランスポゾンの特長に加えて，①植物に普遍的に数多く散在するSSRを活用できること，②高度に保存された塩基配列に基づく特異的プライマーを設計できること，これらを応用することにより，③基礎的なPCR操作と検出装置だけで安定したマーカーパターンが得られることなどである。キクにおいても近縁野生種のIRAP解析と品種識別適用への可能性が報告（岸脇ら2008）され，本報告においてはIRAPにREMAPを加えて主要な市場流通品種の識別を実証したものである。この様なレトロトランスポゾンの種，属，品種の識別におけるDNAマーカーとしての有用性は，特に倍数性や異質接合性の高い栄養繁殖性植物において高いとされ（大江ら
2004），他殖性 6倍体のキクにおいても十分に機能したものと推察される。
今後は、単一品種に対応した単独マーカーパターンが得られなかった本県育成品種の「雪姫」や「秋華」に対し，CMRE1に組み合わせるSSRのプライマー種を増やすこと，CMRE1以外のレトロトランスポゾン配列情報を新たに取得して今回同様に新規のマーカーを探索すること，さらには STS化（阿部ら2007）の適用等により，各品種の固有マーカーを開発し，識別精度のさらなる向上を図ることなどが望まれる。

レトロトランスポゾンによる福岡県育成キク品種「雪姫」
，「月姫」
，「秋華」
，「夏日和」の品種識別

引用文献
阿部知子・松山知樹・白尾 吏・上野敬一郎（2007）
キク品種識別方法. 特許公開2007-244334A.
Biswas MK, Xu Q, Deng XX（2010）Utility ofRAPD, ISSR, IRAP and REMAP markers for the
genetic analysis of Citrus spp. Scientia Horticulturae124：254-261.
Castelo J. S. Branco, Eduardo A. Vieira, Gaspar
Malone, Mauricio M. Kopp, Emilia Malone,Albina Bernardes, Claudete C. Mistura,Fernando I. F. Carvalho and Costa A. Oliveira（2007）IRAP and REMAP assessments of genetic
similarity in rice. J. Appl. Genet. 48（2）：107-113.
Chatterjee J, Mandal AK, Ranade SA, Datta SK（2005）Estimation of genetic diversity of for
Chrysanthemum mini cultivars using RAPD.
Pakistan J. Biol. Sci. （8 4）：546-549.
DNA品種識別技術検討会 農林水産省生産局種苗課（2003）植物品種識別における品種同定理論.p3.
江口恭三・山川 理・金森裕之・伊川浩司・安藤 露・
濱口祐子・石内美沙紀・百瀬眞幸・大塚雅子（2010）
キクの品種識別方法.特許公開2010-35499A.
Flavell AJ, Knox M, Pearce SR, Ellis THN（1998）
Retrotransposon-based insertion polymorphisms（RBIP）for high throughput marker analysis.
Plant J. 16：643-650.
Guo D, Zhang H, Luo Z（2006）Genetic relationshipof Diospyros kaki Thunb. and related species
revealed by IRAP and REMAP analysis. Plant
Sci. 170：528-533.
Kalendar R, Grob T, Regina M, Suoniemi A,
Schulman A（1999）IRAP and REMAP：Twonew retrotransposon-based DNA fingerprinting
techniques.Theor. Appl. Genet. 98：704-711.
岸脇由季・小田雅行・森源治郎・山崎織知・中塚貴司・西原昌宏・三柴啓一郎（2008）キクにおけるTy3/gypsy型レトロトランスポゾンの解析. 育種
学研究10（別 2）
：325.

53

Kumar A, Bennetzen JL（1999）Plant retrotransposons.
Annu. Rev. Genet. 33：479-532.
Kumar A, Hirochika H（2001）Application ofretrotransposons as genetic tools in plantbiology.Trends Plant Sci. 6：127-134.
松山知樹・白尾 吏（2009）キク品種「新神 2号」の識別方法. 特許公開2009-172468.
農林水産省大臣官房統計部（編）（2011）花き生産出荷統計（2009年度版）.p21.
農林水産省花き産業振興室（編）（2011）花きをめぐる情勢. p17.< http://www.maff.go.jp/j/seisan/kaki/
flower/pdf/meg231.pdf>（2011年 6月24日閲覧）
大 江 夏 子･田 原 誠･山 下 裕 樹･丸 谷 優･蔵 之 内 利 和（2004）レトロトランスポゾンを利用したサツマイ
モ加工品の原料品種判定. 育種学研究 6：169-177.
Price Z, Schulman AH, Mayes S（2003）Developmentof new marker methods an example from oilpalm. Plant. Genet. Resour. 1：103-113.
谷口研至（2008）キク属植物を識別する方法. 特許公開 2008-334885.
Waugh R, McLean K, Flavell AJ, PearceSR, Kumar
A, Thomas BBT, Powell W（1997）
Genetic
distributionof Bare-1-like retrotransposable
elements in the barley genome revealed bysequence-specific amplification polymorphisms（S-SAP）.Mol. Gen. Genet. 253：687-694.
Wolff K, Zietkiewicz E, Hofstra H（1995）Identificationof chrysanthemum cultivars and stability of DNA
fingerprint patterns. Theor. Appl. Genet. 91：439447.
Yang W, Beverley JG, Guang YR, Yang J（2006）
Molecular evidence for multiple polyploidizationand lineage recombination in the Chrysanthemum
indicum polyploid complex（Asteraceae）. New
Phytologist. 171：875-886.
吉 川 友 紀・ 水 上 優 子・ 竹 内 良 彦・ 大 竹 良 知（2008）
DNAマーカーによる愛知県育成キク品種「白粋」の品種識別.愛知農総試研報40：29-33.