ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪ࡟ྵࡲࢀࡿ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡢᶵ⬟ᛶホ౯౯㸰ᖺ㸱⤌ ୕ዲ ྍ┾ 㸰ᖺ㸲⤌ బࠎᮌ⨾⥴㸰ᖺ㸲⤌ Ꮿぢ 㐶  㸰ᖺ㸲⤌ ⸨ᒸ ᕼ⩚ᣦᑟ⪅ ❑ᆅ ⫱ဢ㸯 ㄢ㢟タᐃࡢ⌮⏤⏤Ᏹ࿴ᓥᕷࡣࠊࡳ࠿ࢇࡢ⏘ᆅ࡛᭷ྡ࡛࠶ࡿࠋࡑࡢ୰࡛ࡶ⚾ࡓࡕࡣ⏕⏘㔞ࡀ᪥ᮏ୍࡜࡞ࡗ࡚࠸ࡿࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪ࡟↔Ⅼࢆᙜ࡚ࡓࠋࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡣ㉥㯮࠸ᯝ⫗ࢆᣢࡘࡇ࡜࡛▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋࡑࡢṇయࡣ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽ࡛ࣥ࠶ࡿࠋ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥ࡜ࡣࠊᯝᐇࡸⰼ࡟ぢࡽࢀࡿࠊ᳜≀⏺
࡟࠾࠸࡚ᗈࡃᏑᅾࡍࡿⰍ⣲࡛࠶ࡾࠊᅗ㸯࡟♧ࡍᅗ㸯 ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࣥࡢᇶᮏ㦵᱁ᇶᮏ㦵᱁ࢆᣢࡕࠊR1㹼R7 ࡟Ỉ⣲ࡸỈ㓟ᇶࡀධࡾࠊࡑࡢ✀㢮ࡣᩘⓒ࡟ࡢࡰࡿࠋὠ⏣㸦2003㸧ࡣࠊ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡣࠊᙉ㓟ᛶ࡛ࡣࠊࣇࣛࣅ࣒ࣜ࢘ᆺ࡜࠸ࢃࢀࡿᵓ㐀ࢆ࡜ࡾࠊ㉥Ⰽࢆ࿊ࡋࠊẚ㍑ⓗᏳᐃ࡛ࡣ࠶ࡿࡀࠊᙅ㓟ᛶࠊ୰ᛶ㡿ᇦ࡛ࡣࠊỈศᏊ࡜཯ᛂࡋ࡚↓Ⰽࡢࣉࢯ࢖ࢻሷᇶ࡟ኚ᥮ࡋࠊ୙Ᏻᐃ࡛࠶ࡿࡇ࡜ࢆሗ࿌ࡋ࡚࠸ࡿ㸦ᅗ㸰㸧ࠋྜྷ⏣
㸦2012㸧࡟ࡼࡿ࡜ࠊ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡣࠊ㔠ᒓ࢖࢜ࣥ࡜㘒యࢆᙧᡂࡋ࡚Ᏻᐃ໬ࡉࢀ࡚࠸ࡿࡇ࡜
ࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋఀ⸨ࡽ㸦2013㸧ࡣࠊࣈࣛࢵ
ᅗ㸰 S+ ࡟ࡼࡿᵓ㐀ኚ໬ࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡣࠊᅗ㸯࡟࠾ࡅࡿ
R4 ࡟ࢢࣝࢥ࣮ࢫࡀ⨨᥮ࡉࢀࡓࢩ࢔ࢽࢪࣥ㸱ࢢࣝࢥࢩࢻࡀከࡃྵࡲࢀࡿࡇ࡜ࠊࡲࡓࢩ࢔ࢽࢪࣥ 3ࢢࣝࢥࢩࢻ࡟ᢠ㓟໬άᛶࡀ࠶ࡿࡇ࡜ࢆሗ࿌ࡋ࡚࠸ࡿࠋ୍᪉ࠊ୍ᲄ࡯࠿㸦2005㸧ࡣࠊάᛶ㓟⣲ࡀ⑓ཎయឤᰁ࡟ࡼࡗ࡚㉳ࡇࡿ⅖⑕ࡸ࢔ࣞࣝࢠ࣮཯ᛂࢆಁ㐍ࡍࡿస⏝ࢆᣢࡘࡇ࡜ࢆ✺ࡁṆࡵࡓࠋᾘ㈝⪅ᗇ࡟ࡼࡿ࡜ࠊᖹᡂ㸯㸵ᖺࡣ㸱ே࡟㸯ேࡀ࢔ࣞࣝࢠ࣮⑌ᝈ࡟⨯ᝈࡋ࡚࠸ࡓࡢ࡟ᑐࡋࠊᖹᡂ㸰㸱ᖺ࡟ࡣ㸰ே࡟㸯ே࡜࡞ࡗ࡚࠾ࡾࠊ࢔ࣞࣝࢠ࣮⑌ᝈ࡟ࡼࡾ་⒪ᶵ㛵ࢆཷデࡍࡿᝈ⪅ᩘࡣࠊቑຍഴྥ࡛࠶ࡿ࡜ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋ⚾ࡓࡕࡣࠊࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡢᢠ㓟໬άᛶ࡟ὀ┠ࡋࠊ࢔ࣞࣝࢠ࣮ᢚไຠᯝࡀ࠶ࡿࡢ࡛ࡣ࡞࠸࠿࡜⪃࠼ࠊᮏ◊✲ࢆ⾜ࡗࡓࠋࡲࡓࠊ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࢆᏳᐃ໬ࡉࡏࡿࡓࡵ࡟ pH ࡜㔠ᒓ࢖࢜ࣥ࡜ࡢ㛵ಀ࡟ࡶὀ┠ࡋࡓࠋ㸰 ௬ㄝㄝ(1) ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪ࡟ྵࡲࢀࡿ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥ࡟ࡣ࢔ࣞࣝࢠ࣮ᢚไຠᯝࡀ࠶ࡿࠋ(2) ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪ࡟ྵࡲࢀࡿࢩ࢔ࢽࢪࣥ㸱ࢢࣝࢥࢩࢻࡣ㔠ᒓ࢖࢜ࣥࡢ✀㢮࡟ࡼࡗ࡚ࠊᏳᐃࡢ௙᪉ࡀ␗࡞ࡿࠋ㸱 ◊✲ࡢ᪉ἲ    (1) ௬ㄝ(1)ࡢ᳨ドӐIgE ⏘⏕ᢚไຠᯝࡢᐇ㦂ӑ࠙ヨ⸆ࠚࢥ࣮ࢸ࢕ࣥࢢ⦆⾪ᾮ㸸50mmol/L Ⅳ㓟⦆⾪ᾮ㸦ph9.6㸧㸪ࣈࣟࢵ࢟ࣥࢢ๣㸸5㸣ࢫ࣒࣑࢟ࣝࢡ-ࣜࣥ㓟⦆⾪⏕⌮㣗ሷỈ㸪Ὑί๣㸸0.05㸣Tween20-PBS㸦T-PBS㸧㸪ⓎⰍᇶ㉁㸸2,2’-࢔ࢪࣀࣅࢫ㸦3࢚ࢳࣝ࣋ࣥࢰࢳ࢔ࢰࣜࣥ—6—ࢫࣝ࣍ࣥ㓟㸧㸪
㸦ABTS㸧, H₂O₂㸪㓟⣲཯ᛂ⦆⾪ᾮ:50mmol/L ࢡ࢚― 59 ―ࣥ㓟⦆⾪ᾮ㸦ph4.0㸧㸪㓟⣲཯ᛂ೵Ṇᾮ㸸1.5㸣ࢩࣗ࢘㓟Ỉ⁐ᾮ㸪ᢠࣄࢺ IgE ᢠయ㸪ࣄࢺ IgE㸸᳨㔞⥺⏝ᶆ‽ᾮ 100ng/mL㸪ࣅ࢜ࢳࣥᶆ‽ᢠࣄࢺ IgE ᢠయ㸪HRP ᶆ㆑ࢫࢺࣞࣉࢺ࢔ࣅࢪࣥ」ྜ
య⁐ᾮ࠙ᐇ㦂᧯సࠚձ ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢⰍ⣲ᾮ࡜࣓ࢱࣀ࣮ࣝࢆ 1:1 ࡛ᢳฟࡋࡓ⁐ᾮࢆసࡿࠋղ ࣄࢺ⬨㧊✀⣽⬊ᰴࡢ U266 ⣽⬊ᰴࢆቑṪࡋ㸪ࡇࡢ⣽⬊࡟ձ࡛ᢳฟࡋࡓ⁐ᾮࢆ⁲ᐃࡍࡿࠋճ 㓝⣲ᢠయἲࢆ⏝࠸ࡿࠋࢥ࣮ࢸ࢕ࣥࢢ - IgE ࡔࡅ࡟⤖ྜࡍࡿ 1 ḟᢠయࢆ᳜࠼㸪4℃࡛ 24 ᫬㛫௨ୖ㟼⨨ࡍࡿࠋࣈࣟࢵ࢟ࣥࢢ ‐ ࢱࣥࣃࢡ㉁ࡀ⤖ྜࡋࡸࡍ࠸ࡼ࠺࡟ࢫ࣒࣑࢟ࣝࢡ࡛‶ࡓࡋ㸪4℃࡛ 12 ᫬㛫㟼⨨ࡍࡿࠋᇵ㣴ୖΎࡢ཯ᛂ ‐ ࣄࢺ IgE ᶆ‽ᾮࢆྵࡴࢧࣥࣉࣝࢆ୍ḟᢠయ࡟⤖ྜࡉࡏ㸪37℃࡛ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡍࡿࠋ஧ḟᢠయ ‐ ࣅ࢜ࢳࣥࡀ௜╔ࡋ࡚࠸ࡿ஧ḟᢠయ࡜୍ḟᢠయ࡛ࢧࣥࣉࣝࢆࡣࡉࡳ㸪37℃࡛ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡍࡿࠋ࢔ࣅࢪࣥฎ⌮ ‐ ࣅ࢜ࢳࣥ࡟ᙉࡃ཯ᛂࡍࡿࢱࣥࣃࢡ㉁ࡀྵࡲࢀࡿ HRP ᶆ㆑ࢫࢺࣞࣉࢺ࢔ࣅ  ࢪࣥ」ྜయࢆຍ࠼ࡿࠋ37℃࡛ 1 ᫬㛫㟼⨨ࡍࡿࠋ
ABTS ῧຍ‐ⓎⰍᇶ㉁ࡢ ABTS ࢆῧຍࡍࡿࠋᐊ ࡛ 30 ศ⨨ࡃࠋ㓝⣲཯ᛂࡢ೵Ṇ ‐ 37℃࡛ 1 ᫬㛫⨨ࡃࠋ྾ගᗘ ᐃ ‐ ⏘ฟࡉࢀࡓ IgE 㔞ࢆᐃ㔞ࡍࡿࠋ  (2) ௬ㄝ(2)ࡢ᳨ドӐ྾཰ࢫ࣌ࢡࢺࣝࡢ ᐃӑձ pH3ࠊ5ࠊ7ࠊ9ࠊ11 ࡢ⁐ᾮࢆሷ㓟࡜࢔ࣥࣔࢽ࢔Ỉࢆ⏝࠸࡚ㄪᩚࡍࡿࠋղ ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢⰍ⣲ᾮ࡜ձ࡛సᡂࡋࡓ⁐ᾮ࡜┠ⓗࡢ㔠ᒓ࢖࢜ࣥࡢ◪㓟⁐ᾮࢆࠊ    1㸸1㸸1 ࡛ΰࡐࡿࠋճ ࣮࣋ࢫࣛ࢖ࣥࢆ㸦࣓ࢱࣀ࣮ࣝ㸸⵨␃Ỉ㸧㸻㸦㸱㸸㸯㸧࡛ᘬࡃࠋ         մ 㔠ᒓ࢖࢜ࣥࢆྵࡲ࡞࠸ᇶ‽⥺ࢆ㸦࣓ࢱࣀ࣮ࣝ㸸Ⰽ⣲ᾮ㸧㸻㸦㸯㸸㸯㸧࡛ᘬࡃࠋյᐃࡍࡿΰྜᾮࢆ▼ⱥࢭࣝ࡟ධࢀࠊタ⨨ࡍࡿࠋն ྾ගᗘィࢆ౑ࡗ࡚ղ࡛సᡂࡋࡓ⁐ᾮࡢ྾ගᗘࢆ ࡿࠋ   㸲 ⤖ᯝ࡜⪃ᐹ(1) ӐIgE ⏘⏕ᢚไຠᯝࡢᐇ㦂ӑᅗ㸱 I㹥E ⏘⏕ᢚไຠᯝᅗ㸲― 60 ―⣽⬊ẘᛶ 㓝⣲ᢠయἲࡢ⤖ᯝࢆᅗ㸱࠾ࡼࡧᅗ㸲࡟♧ࡍࠋᅗ㸱ࡼࡾࠊࢃࡎ࠿࡟ IgE ⏘⏕㔞ࡢῶᑡࡀࡳࡽࢀࡿࡶࡢࡢࠊᅗ㸲ࡼࡾࠊU266 ⣽⬊ࡢ⏕Ꮡ⋡ࡶῶᑡࡋ࡚࠾ࡾࠊIgE ⏘⏕ຠᯝࡀୗࡀࡗ࡚࠸ࡿࡢ
ࡣࠊࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡀാ࠸ࡓࡢ࡛ࡣ࡞ࡃ㸪IgE ࢆ⏘⏕ࡍࡿ⣽⬊ࡢᩘࡀṚ⁛ࡋ࡚࠸ࡓࡓࡵ࡜᥎ᐹࡋࡓࠋ࢔ࣞࣝࢠ࣮ᢚไຠᯝࡣㄆࡵࡽࢀ࡞࠸࡜࠸࠺⤖ᯝ࡜࡞ࡗࡓࠋ(2) Ӑ྾཰ࢫ࣌ࢡࢺࣝࡢ ᐃӑ
pH3 ࡢࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪᯝỒᢳฟᾮ࡟ྛ࢖࢜ࣥࢆῧຍࡋࡓ㝿ࡢ྾཰ࢫ࣌ࢡࢺࣝࢆᅗ㸳࡟ࠊpH3㸪5㸪7㸪9㸪11 ࡢࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪᯝỒ࡟ྛ࢖࢜ࣥࢆῧຍࡋࡓ⁐ᾮ࡟ࡘ࠸࡚ࡢ 515nm ࡟࠾ࡅࡿ྾ගᗘࢆᅗ㸴࡟♧ࡍࠋ‫ن‬$EV@‫ن‬$EV@۟+ટᅑभा
সരॖड़থ૮ख
&DPRO/&DPRO/&DPRO/.PRO/.PRO/.PRO/

0.8
0.6

۟+‫ڱ‬ટᅑभा
সരॖड़থ૮ख
&DPRO/&DPRO/&DPRO/.PRO/.PRO/.PRO/0.8
0.6
0.4

0.4

0.20.2400‫ن‬$EV@500

ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬400

600

۟+

‫ن‬$EV@ટᅑभाসരॖड़থ૮ख
&DPRO/&DPRO/&DPRO/.PRO/.PRO/.PRO/

0.80.6500

ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬

600

۟+
ટᅑभा
সരॖड़থ૮ख
&DPRO/&DPRO/&DPRO/.PRO/.PRO/.PRO/

0.8
0.6
0.40.40.2

0.2400‫ن‬$EV@500

ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬400600

S+‫ن‬$EV@ટᅑभाসരॖड़থभा
&DPRO/&DPRO/&DPRO/.PRO/.PRO/.PRO/

0.8
0.6
0.4500ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬600সരॖड़থ૮ख
S+
S+

0.8S+
S+
S+

0.6

ટᅑभा

0.4

0.20.2400500ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬

ᅗ㸳

600

400

ᢳฟᾮࡢ྾཰ࢫ࣌ࢡࢺࣝ

― 61 ―500ణশ‫نؙ‬QP‫ه‬

600

10.8
0.6
0.40.20357911pH
ῧຍ↓

Ca2+ 2.0ᅗ㸴Ca2+ 0.5

Ca2+ 0.1

K+ 2.0K+ 0.5

K+ 0.1515nm ࡟࠾ࡅࡿ྾ගᗘ515nm ࡟࠾ࡅࡿ྾ගᗘ࡟ࡘ࠸࡚ࡲ࡜ࡵࡓᅗ㸴࡟ࡼࡿ࡜㸪࢖࢜ࣥࢆῧຍࡋ࡞࠸ሙྜࡢ྾ගᗘࡣ㸪pH ࡟ࡼࡽࡎ࡯ࡰ 0.5 ㏆ࡃࡢ್ࢆ♧ࡍࠋ0.1 mol/L㸪0.5 mol/L㸪2.0 mol/L ࣒࢝ࣜ࢘࢖࢜ࣥῧຍ࡟ࡼࡾ྾ගᗘࡀపୗࡋࡓࠋࡲࡓࠊ࣒࢝ࣜ࢘࢖࢜ࣥ⃰ᗘ࡟ࡼࡿ྾ගᗘపୗࡢᕪࡣぢࡽࢀ࡞࠸࡜࠸࠺⤖ᯝ࡜࡞ࡗࡓࠋ࢝ࣝࢩ࣒࢘࢖࢜ࣥࡢሙྜࡣ⃰ᗘ 0.1mol/L ࡢࡶࡢࢆຍ࠼ࡓሙྜࡣ྾ගᗘࡢኚ໬ࡀ࡞࠿ࡗࡓࡶࡢࡢ㸪0.5 mol/L㸪2.0 mol/L ࡢ࢝ࣝࢩ࣒࢘࢖࢜ࣥῧຍ࡟ࡼࡾ྾ගᗘࡀ኱ࡁࡃ࡞ࡿ࡜࠸࠺⤖ᯝࡀᚓࡽࢀࡓࠋ࢖࢜ࣥ࡜࢔ࣥࢺࢩ࢔ࣥ࡜ࡢ┦஫స⏝ࡀ☜ㄆ࡛ࡁࡓࠋ㸲 ࡲ࡜ࡵ࡜௒ᚋࡢㄢ㢟㢟ࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪࡢⰍ⣲ᾮ࡟ࡣ ,J( ᢚไຠᯝࡀ࡞࠸࡜࠸࠺ࡇ࡜ࡀ᫂ࡽ࠿࡟࡞ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪࣒࢝ࣜ࢘࢖࢜ࣥ࠾ࡼࡧ࢝ࣝࢩ࣒࢘࢖࢜ࣥῧຍ࡟ࡼࡾ㸪ࢃࡎ࠿࡞ࡀࡽⰍㄪࡢኚ໬ࡀぢࡽࢀ㸪QP ࡟࠾ࡅࡿ྾ගᗘࡢኚ໬࡜ࡋ࡚ࡶ᫂ࡽ࠿ࡉ࡟ࡉࢀࡓࠋ௒ᚋ ᗘ࡟ࡼࡾⰍㄪࡀ࡝࠺ኚ໬ࡍࡿ࠿࡞࡝ࢆㄪ࡭࡚㸪࢔ࣥࢺࢩ࢔ࣥࡢᏳᐃᛶ࡟ࡘ࠸࡚ヲ⣽ࢆ᫂ࡽ࠿࡟ࡋ࡚࠸ࡁࡓ࠸ࠋ㸳 ㅰ㎡㎡  ᮏ◊✲࡟ᚚᣦᑟ࣭ᚚຓゝࢆ࠸ࡓࡔࡁࡲࡋࡓឡ፾኱Ꮫ኱Ꮫ㝔㎰Ꮫ◊✲⛉⏕࿨ᶵ⬟Ꮫᑓᨷຓᩍࡢ ▼⏣ⴌᏊඛ⏕ࠊ㏆␥୰ᅜᅄᅜ㎰ᴗ◊✲༠㆟఍ࡢ▼⏣ྐᮁᵝ࡟ཌࡃᚚ♩ࢆ⏦ࡋୖࡆࡲࡍࠋཧ⪃ᩥ⊩ ࣭ఀ⸨ྐᮁࠊ▼ᕝⱥᶞࠊΎỈ⠜ࠊ⳥ụẎὒࠊẟ฼ᖾ႐ࠊ᳃㔜㝧Ꮚࠊ▼ᕝ♸Ꮚࣈࣛࢵࢻ࢜ࣞࣥࢪ̓ࢱࣟࢵࢥ̓ᯝ⫗୰ࡢ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥ࠾ࡼࡧࣇࣛ࣎ࣀ࢖ࢻྵ㔞ࡀỈ⁐ᛶ㓟⣲ࣛࢪ࢝ࣝ྾཰⬟ +25$& ࡟ཬࡰࡍᙳ㡪㏆␥୰ᅜᅄᅜ㎰ᴗ◊✲㸻.LQNL&KXJRNX6KLNRNXDJULFXOWXUDO  UHVHDUFKYROS࣭ ὠ⏣Ꮥ⠊㧗ᶵ⬟ᛶ㣗ရᅉᏊ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥ㢮ࡢ᪂ࡋ࠸⏕⌮ⓗព⩏࡟㛵ࡍࡿᇶ┙◊✲᪥ᮏᰤ㣴࣭㣗⣊Ꮫ᠜⣬YROQRS࣭ឡ፾┴❧ᯇᒣ༡㧗➼ᏛᰯⰍ⣲⌜⢾࡟ࡼࡿ࢔ࣥࢺࢩ࢔ࢽࣥࡢᏳᐃ໬࡜࢔ࣞࣝࢠ࣮ᢚไຠᯝࡢ◊✲࣭ཌ⏕ປാ┬೺ᗣᒁࡀࢇ࣭⑌⑓ᑐ⟇ㄢ͇࢔ࣞࣝࢠ࣮⑌ᝈࡢ⌧≧➼͇ཌ⏕ປാ┬ ཧ↷  ࣭᪥ᮏศᯒ໬Ꮫᑓ㛛Ꮫᰯ͇ࡍࡄ࡛ࡁࡿ㸟࡞ࡿ࡯࡝‫ۻࢨۻ‬໬Ꮫᐇ㦂ᐊ͇᪥ᮏศᯒ໬Ꮫᐇ㦂ᐊ ཧ↷  ୍࣭ᲄ⚽᠇ࠊబ⸨㞞⿱͇άᛶ㓟⣲ࡀ⅖⑕࣭࢔ࣞࣝࢠ࣮཯ᛂࢆάᛶ໬ࡍࡿ᪂ࡓ࡞௙⤌ࡳࡢⓎぢ࣮ ឤᰁ㜵ᚚ㸦⮬↛ච␿ࢩࢫࢸ࣒㸧࡟࠾ࡅࡿ᪂ࡓ࡞⣽⬊ෆศᏊᶵᵓ࣮͇⛉Ꮫᢏ⾡᣺⯆ᶵᵓ ཧ↷  ― 62 ―