1(57)【特許請求の範囲】【請求項１】落花生薄皮の抽出物を活性成分として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤。
【請求項２】該活性成分が落花生薄皮を熱水で抽出した抽出成分であることを特徴とする抗ＨＩＶ剤。
【請求項３】該活性成分が落花生薄皮を９０〜９５℃の熱水で抽出した抽出成分であることを特徴とする抗ＨＩＶ剤。
【請求項４】該活性成分が、スチレン１０〜８０モル％とジビニルベンゼン９０〜２０モル％との共重合物の含 10水物（含水率は３０〜７０重量％）に吸着することを特徴とする請求項１〜３のいずれかの抗ＨＩＶ剤。
【請求項５】該活性成分が水およびエタノールに可溶性であることを特徴とする請求項４の抗ＨＩＶ剤。
【請求項６】該活性成分が、落花生薄皮を熱水抽出し、2得られた抽出液をスチレン１０〜８０モル％とジビニルベンゼン９０〜２０モル％との共重合物の含水物（含水率は３０〜７０重量％）に吸着させた後アセトンで溶出し、さらに水およびエタノールに可溶性の成分を分取することによって調製しうることを特徴とする抗ＨＩＶ剤。
【請求項７】錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤、注射剤および貼付剤からなる群より選択される形態を有する請求項１〜６のいずれかの抗ＨＩＶ剤。
【請求項８】食品または飲料の形態を有する請求項１〜６のいずれかの抗ＨＩＶ剤。
【発明の詳細な説明】【０００１】【発明の属する技術分野】本発明は、落花生薄皮に由来

(2)3する活性成分を含有する抗ＨＩＶ剤に関する。また、本発明は落花生薄皮に由来する活性成分を含有する機能性食品および機能性飲料に関する。
【０００２】【従来の技術】近年、後天性免疫不全症候群（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＩＤＳ）が急速に広まり、その予防法や治療法の確立が世界的に必要とされている。ＡＩＤＳはレトロウィルスの一種であるヒト免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ，ＨＩＶ）によって引き起こされることから、ＨＩＶの増殖を抑制する薬剤の開発研究が活発に行われている。
【０００３】その結果、これまでに、アジドチミジン、ジダノシン、インターフェロン、リコンビナントＣＤ４、プロテアーゼ阻害剤、デキストラン硫酸、カードラン硫酸およびレンチナン硫酸などの化学的修飾多糖などに抗ＨＩＶ活性があることが報告されている。その中の幾つかは、現在ＡＩＤＳ治療のために臨床で用いられている。抗ＨＩＶ活性を有する物質として報告されているもののうち、例えばアジドチミジンやジダノシンはｉｎｖｉｔｒｏで優れた抗ＨＩＶ作用を有し、ＡＩＤＳ患者に対する延命効果があることが認められている。しかしながら、これらの薬剤は造血機能の抑制や膵炎を起こすといった副作用が強いうえ、耐性株ＨＩＶが出現するという問題を抱えている。
【０００４】また、化学的修飾多糖の１種であるデキス
トラン硫酸は、α−グルカンであるデキストランの硫酸エステル化物であるが、生体内における安定性が極めて悪いという欠点がある。そのうえ、血液凝固阻害作用が強いという問題もある。さらに、別の化学的修飾多糖であるカードラン硫酸は、β−１，３グリコシド結合のみからなるカードランやその低分子体から誘導されるものであるが、生体内における半減期が短いために効果が持続しないという欠点がある。このように、今日までに開発された抗ＨＩＶ物質は、抗ＨＩＶ活性が高いと副作用も大きいというジレンマを抱えている。このため、より低毒性でかつ有効性の高い抗ＨＩＶ物質を開発することが急務とされている。
【０００５】一方、古来より我国や中国では、疾病の治療や予防に生薬や漢方薬を使用している。これらの生薬や漢方薬は、安全性が十分に確認されており、安心して服用することができるものが多い。中には、ウイルスの増殖を阻害する抗ウイルス効果をもつものもあり、注目を集めている。しかしながら、生薬や漢方薬のＨＩＶに対する作用を本格的に検討した結果は、カンゾウに含まれるグリチルリチンの検討例を除けばほとんど報告されていない。このため、多種多様な生薬や漢方薬に由来する物質のいずれに抗ＨＩＶ活性があるのかを示唆する報告は皆無に近い。

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特許３０１０２５８4【０００６】【発明が解決しようとする課題】このような状況を踏まえて、本発明は、従来技術がかかえる上記の問題点を解決することを課題とした。すなわち、本発明は、強力な抗ＨＩＶ活性を有していながら、細胞毒性が極めて低いという特徴を有する、安全で高活性な抗ＨＩＶ剤を提供することを課題とした。また、本発明は、このような特徴を有する抗ＨＩＶ機能性食品および飲料を提供することも課題とした。さらに、本発明は、従来焼却廃棄されていた自然界の産物を有効に利用することも課題とした。
【０００７】【課題を解決するための手段】これらの課題を解決するために鋭意研究を進めた結果、本発明者らは、落花生薄皮の抽出物中に高い抗ＨＩＶ活性を示す成分があることを見出し、本発明を提供するに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、落花生薄皮の抽出物を活性成分として含有することを特徴とする抗ＨＩＶ剤を提供するものである。本発明の好ましい実施態様では、落花生薄皮の熱水抽出物を活性成分として使用する。また、本発明の別の好ましい実施態様では、落花生薄皮を９０〜９５℃の熱水で抽出した抽出成分を活性成分として使用する。本発明の好ましい活性成分は、スチ
レン１０〜８０モル％とジビニルベンゼン９０〜２０モル％との共重合物の含水物（含水率は３０〜７０重量％）（以下「ダイアイオンＨＰ２０」（登録商標）という）に吸着し、水およびエタノールに可溶性である。
【０００９】本発明の活性成分の調製法として、落花生薄皮を熱水抽出し、得られた抽出液をダイアイオンＨＰ２０に吸着させた後アセトンで溶出し、さらに水およびエタノールに可溶性の成分を分取する方法を挙げることができる。本発明の抗ＨＩＶ剤は、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤、注射剤および貼付剤からなる群より選択される形態にすることができる。また、本発明の抗ＨＩＶ剤は、食品または飲料の形態にすることもできる。
【００１０】【発明の実施の形態】以下において、本発明の抗ＨＩＶ剤の実施形態を説明する。本発明の抗ＨＩＶ剤は、落花生薄皮の抽出物を活性成分とする点に特徴がある。本発
明で使用する落花生は、ラッカセイ属に属する植物であればその種類は問わない。特に好ましいのは、ラッカセイ属に属するラッカセイ（Ａ．ｈｙｐｏｇａｅａ）である。本発明で使用する落花生の生育地、収穫期および種類などは特に制限されない。また、実の大きさ、果皮中に入っている種子の数、果皮や薄皮の色なども特に制限されない。
【００１１】落花生から薄皮を取得する方法は、特に制限されない。このため、厚い皮質を帯びた果皮を除去して薄皮付きの種子を取得してから、種子と薄皮を分離す

(3)5ることによって取得してもよいし、果皮と薄皮を同時に種子から分離した後に、果皮と薄皮を分離することによって取得してもよい。薄皮付きの種子から薄皮のみを取得する方法には様々なものがあり、例えば空気流を当てて薄皮を飛ばして収集する方法、種々の条件下で薄皮を溶かす方法、人手によって剥く方法などがある。また、水流を当てることによって水とともに薄皮を洗い流す方法や、９０〜９５℃の熱水中に５〜１０分間浸した後に剥離機で剥く方法もある。これら方法によれば薄皮の除去と水または熱水抽出を同時に行うことができるため効率的である。特に種子を水で湿らせたうえで使用する場合には、この方法は有効である。本発明の薄皮はこれらのいずれの方法によって取得したものであってもよい。
【００１２】こうして分離した薄皮は一般に人の食用に供しないため、一部が家畜の飼料として利用されていはいるものの、大部分は焼却または廃棄されている。本発明によれば、このような廃材同然であった落花生の薄皮を有効に利用することができる。このため、本発明は安価な原料費で大きな成果を上げることが可能であり、産業上の利用性が極めて高い。
【００１３】落花生薄皮の抽出方法は特に制限されず、当業者に周知の方法にしたがって行うことができる。抽出溶媒としては、水または温水、アルコール系溶媒、およびアセトンなどのその他の有機溶媒を用いることができる。アルコール系溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノールなどを例示することができる。これらの溶媒は単独で使用してもよいし、組み合わせて使用してもよい。
【００１４】好ましい抽出溶媒は水または温水であり、特に好ましいのは熱水である。熱水の温度は４０〜１００℃、より好ましくは６０〜１００℃、さらに好ましくは８０〜１００℃、もっとも好ましくは９０〜９５℃である。抽出は、常温で行っても還流下で行ってもよい。
また、ソックスレー抽出器などの抽出装置を使用してもよい。
【００１５】抽出溶媒によって抽出した抽出液は、そのまま抗ＨＩＶ剤として使用することができる。しかしながら、通常はさらに活性効率を高めるために濃縮や精製を行う。濃縮を行う場合、濃縮の程度は抗ＨＩＶ剤の使用環境によって異なる。例えば、濃度１０％程度になるまで濃縮して液剤として使用してもよいし、粉末状になるまで溶媒を除去してもよい。また、凍結乾燥してもよい。
【００１６】さらに精製を行う場合は、当業者に既知の手段を組み合わせて行うことができる。例えば、合成吸着樹脂、活性炭、イオン交換樹脂、セファデックス、バイオゲルなどのゲル濾過剤、カラムクロマトグラフィー、再結晶などを適宜組み合わせることによって、さらに活性成分の精製効率や純度を上げることができる。そ1020304050

特許３０１０２５８6の際に、活性成分の化学的性質を利用して精製するのが好ましい。すなわち、本発明の好ましい活性成分は、ダイアイオンＨＰ２０に吸着し、水およびエタノールに溶解する性質を有するため、これらの性質を利用してさらに精製を進めることができる。
【００１７】例えば、熱水抽出物をダイアイオンＨＰ２０が充填されたカラムにチャージし、吸着された成分を溶出することによって精製を行うことができる。吸着された成分は、アセトンやエタノールなどの活性成分を溶解し得る溶媒を用いて溶出させることができる。また、熱水抽出物を先にアセトンやエタノールなどの活性成分を溶解し得る溶媒に溶解し、デンプン質などの不溶性成分を濾過した後に、ダイアイオンＨＰ２０に吸着させて精製することもできる。これらの精製方法の具体的手順については、後述の製造例を参考にすることができる。
【００１８】本発明で使用する活性成分は、強力な抗ＨＩＶ活性を有するとともに、細胞毒性が低いという極めて望ましい特徴を有する。例えば、熱水抽出後にダイアイオンＨＰ２０に吸着精製し、さらに水およびエタノールに可溶性の成分を分取することによって得た成分は、抗ＨＩＶ剤の活性成分として使用されているデキストラン硫酸と同等な抗ＨＩＶ活性を有する。その一方で、細胞毒性はアジドチミジンの１／１２５程度であり、安全性は極めて高い。このように、本発明の活性成分は、抗ＨＩＶ活性が強力であれば細胞毒性も高いという従来のジレンマを解消した極めて有用な物質である。
【００１９】したがって、本発明の抗ＨＩＶ剤は、医薬品、食品および飲料として安全かつ有効に使用することができる。本発明の抗ＨＩＶ剤には、１種類の活性成分を単独で使用してもよいし、２種以上のものを組み合わせて使用してもよい。
【００２０】本発明の抗ＨＩＶ剤は、ＨＩＶへの感染や発症を予防し、治療する際に有用である。本発明の抗ＨＩＶ剤の医薬としての投与形態は特に制限されず、経口的または非経口的に投与することが可能である。例えば、直腸投与、鼻内投与、頬側投与、舌下投与、膣内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与を行なうことが可能である。中でも、本発明の抗ＨＩＶ剤は、経口投与、皮下投与または経皮投与するのが好ましい。
【００２１】また、本発明の抗ＨＩＶ剤の剤型も特に制限されず、投与経路等に応じて適宜選択することができる。例えば、経口投与に適した製剤として、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤などを挙げることができ、非経口投与に適した製剤として、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤などを挙げることができる。注射剤は、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、点滴などのいずれに用いるものであってもよい。本発明の医薬は、特に経口用製剤、注射剤、貼付剤のいずれかであるのが好ましい。
【００２２】本発明の抗ＨＩＶ剤には、必要に応じて薬(4)

特許３０１０２５８78
理学的および製剤学的に許容しうる添加物を添加するこ＊ 【実施例】以下に製造例、実施例および試験例を挙げてとができる。例えば、賦形剤、崩壊剤または崩壊補助本発明をさらに具体的に説明する。以下の製造例および剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、実施例に示す材料、試薬、割合、操作等は、本発明の精基剤、溶解剤または溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節神から逸脱しない限り適宜変更することができる。した剤、安定化剤、噴射剤、粘着剤、湿潤剤などを使用するがって、本発明の範囲は以下に示す具体例に制限されることができる。これらの添加剤を適宜組み合わせて使用ものではない。
することによって、本発明の抗ＨＩＶ剤にさまざまな付【００２７】［製造例］本実施例において、落花生から加的機能を持たせることができる。例えば、必要に応じ抗ＨＩＶ活性粉末を取得する方法を説明する。落花生のて抗ＨＩＶ成分が徐放されるように設計することができ薄皮２７９ｋｇに水１０００リットルを加えて９０〜９る。また、体内の必要な個所において抗ＨＩＶ成分が集 10 ５℃で２時間加熱後、濾過することによって抽出液を得中的に放出されるように設計することもできる。このよた。抽出後の落花生に再度水１０００リットルを加えてうな徐放性製剤やドラッグデリバリーシステムは、製剤同様に加熱濾過することによって抽出液を得た。これら業界において周知の方法にしたがって設計のうえ製造すの抽出液を混合して、カラム（容積４００リットル、ダることができる。
イアイオンＨＰ２０充填）にチャージした。水で洗浄し【００２３】また、本発明の抗ＨＩＶ剤には、有機物また後に７０％アセトン１２００リットルで溶出し、得らたは無機物の担体を使用することができる。そのようなれた溶出液を濃縮した。濃縮物にエタノール２０リット担体として、乳糖、でんぷん、植物性および動物性脂肪ルを加えて攪拌し、濾過することによって茶色透明液をや油脂を例示することができる。本発明の抗ＨＩＶ剤に得た。この液体を濃縮して乾燥し、茶色粉末１９０ｇをは、抗ＨＩＶ成分を０．０１〜１００重量％の範囲内で得た。
使用することができる。さらに、本発明の抗ＨＩＶ剤に 20 【００２８】［実施例１］以下の表に示す量の茶色粉は、本発明の抗ＨＩＶ成分以外の抗ＨＩＶ成分を組み合末、塩化ナトリウムおよびベンジルアルコールを蒸留水わせて使用することもできる。に溶解した。この溶液をフィルター（孔径０．２μｍ）【００２４】本発明の抗ＨＩＶ剤の投与量は、治療またを通して濾過することによって、注射剤を製造した。
は予防の目的、患者の性別、体重、年齢、疾患の種類や【表１】程度、剤型、投与経路、投与回数などの種々の条件に応じて適宜決定する。例えば、経口投与する場合には、０．５μｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日で、一日一回から数回に分けて投与することができるが、投与量はこの範囲に限定されるものではない。
【００２５】本発明の活性成分は、各種食品や飲料に混 30合することによってその食品や飲料に抗ＨＩＶ機能を持たせることができる。例えば、紅茶、清涼飲料水、ジュース、あめ、澱粉質食品、各種加工食品等に添加するこ【００２９】［実施例２］以下の表に示す量の乳糖とスとができる。活性成分の添加量は、約０．１〜９９重量
テアリン酸マグネシウムを製造例で調製した茶色粉末と％の範囲内に設定することができる。また、必要に応じ混合して、十分に攪拌した。この混合物をゼラチンカプて、ゲル化剤などの添加剤を加えることもできる。
セルに充填することによってカプセル剤を製造した。
【００２６】＊【表２】【００３０】［実施例３］市販の紅茶葉を粉砕し、これに製造例で調製した茶色粉末を３重量％になるように添加してよく混合し、ティーパックに詰めた。このティーパックを熱湯中に入れることによって、抗ＨＩＶ成分が紅茶に溶出した抗ＨＩＶ機能性紅茶を調製することができた。
50【００３１】〔実施例４〕市販のオレンジジュース１Ｋｇに、製造例で調製した茶色粉末を３重量％になるよう添加してよく混合し、抗ＨＩＶ成分を含むオレンジジュースを製造した。
【００３２】［試験例］本試験例において、製造例で調製した茶色粉末の抗ＨＩＶ活性および細胞毒性を試験し(5)

特許３０１０２５８910た結果を示す。
＊ （ＣＰＥ）を顕微鏡により観察した。ＣＰＥが認められ（試験方法）ＭＴ−４細胞にＨＩＶ−１（ＬＡＶ−１た場合は、ＨＩＶ増殖抑制効果なしと判定した。この判株）を０．００１ＴＣＩＤ50 ／個の割合で１時間感染さ定基準にしたがって、ＨＩＶ増殖抑制効果が認められるせ、その後、ＲＰＭＩ−１６４０培養液（１０％ウシ胎最小試料濃度を決定した（ＨＩＶに対する最小増殖抑制
児血清、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシ濃度）。また、上記の方法と同様にしてＭＴ−４細胞にン１００μｇ／ｍｌ含有）を用いて１回洗浄した。この対する細胞毒性の有無も検討した。細胞観察の結果、細ＨＩＶ−１感染ＭＴ−４細胞を、抽出物Ａを含むＲＰＭ胞生育障害または細胞死が認められた場合は、ＭＴ−４5
Ｉ−１６４０培養液に１×１０ 個／ｍｌの濃度で浮遊細胞に対する細胞毒性ありと判定した。この判定基準にさせ、５日間培養した。培養は、９６穴の平底培養プレしたがって、細胞毒性が認められる最小試料濃度を決定
ートにて行ない、１ウェルあたり２００μｌの量で培養 10 した（ＭＴ−４細胞に対する最小細胞障害濃度）。比較した。培養液中の抽出物Ａの濃度は、最大値を１０００のために、アジドチミジンとデキストラン硫酸についてμｇ／ｍｌに設定し、１／２ずつ段階希釈したものを用も同じ試験を行なった。
意して検討を行なった。
【００３４】（試験結果）試験結果は、以下の表に示す【００３３】５日間培養した後、ＨＩＶ感染によるバルとおりであった。
ーニングや巨核細胞出現などのＭＴ−４細胞変性効果 ＊【表３】【００３５】茶色粉末は１００℃で３０分間熱処理して※ ため、本発明の抗ＨＩＶ成分は、抗ＨＩＶ剤や抗ＨＩＶも安定であり、この熱処理後も抗ＨＩＶ活性が確認され機能性食品などの活性成分として広く使用することがでた。
きる。また、本発明の抗ＨＩＶ剤は、従来焼却廃棄され【００３６】30 ていた落花生の薄皮を用いて製造し得ることから、資源【発明の効果】本発明の抗ＨＩＶ成分は、優れた抗ＨＩの有効利用を図るうえで極めて有用である。
Ｖを示す一方で低毒性であるという特徴を有する。この※─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き(72)発明者(72)発明者(72)発明者(72)発明者(72)発明者

山崎 幸苗
茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術院生命工学工業技術研究所内
冨塚 登
茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術院生命工学工業技術研究所内井上 真美
茨城県牛久市岡見町960−144
沖田 幸子
茨城県つくば市松代３−23−１−309
藤田 康子
茨城県つくば市千現１−５−５ 片桐ハイツ102(72)発明者(72)発明者(72)発明者(72)発明者

審査官

大竹 徹
奈良県奈良市西大寺野神町１−６−31−
103
川畑 拓也
大阪府堺市百舌鳥夕雲町２−210
内田 勝
千葉県八街市八街に−72−25
佐々木 務
千葉県八日市場市平木3666−８
冨永 保

(6)

7(58)調査した分野(Int.Cl. ，ＤＢ名)
A61K 35/78
A23L 1/30
A23L 2/38
A23L 2/52

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