2012 SEPTEMBER
No. 576

2012 年（平成 24 年）9 月号

第 58 巻 第 5 号（通巻 576 号）

挨拶・巻頭言昨年の出来事：「限界に挑む」........................................笹 川 千 尋（ 2 ）獣医病理学研修会
第 51 回 No. 1027 ウシの空腸......... 動衛研つくば・広島県西部家保（ 3 ）第 51 回 No. 1040 イヌの内股部腫瘤.................................... 東京農工大学（ 4 ）第 51 回 No.1045 イヌの卵巣部腫瘤........................................... 摂南大学（ 5 ）論文紹介
豚流行性下痢ウイルスの培養細胞における馴化および弱毒化に伴うスパイク遺伝子の変異 ..............................佐 藤 哲 朗（ 6 ）学会参加記
22nd International Pig Veterinary
Society Congress（IPVS 2012 in
Korea）
場所：大韓民国・済州島
期間：2012 年 6 月 10 日〜 14 日 ......（11）

一般財団法人 日本生物科学研究所
http://nibs.lin.gr.jp/

2（66）

日生研たより昨年の出来事：「限界に挑む」
笹川千尋
4 月から日生研で勤務させていただいている。無我夢中で半年があっという間に過ぎたが，毎日新
たな経験があり充実した時間を過ごしている。今回本稿を書く機会に今迄のことを色々と思い巡らしてみた。やはり昨年の事を思い出す。震災にも遭遇して，また大学教員として最後の年でもあり，多忙を極める一年だった。3 月 11 日の東日本大震災により東北を中心に日本は甚大な被害を被ったが，一方で人々のあいだに強い絆が芽生え，また家族，友人，社会に対して新たな価値観も生まれ，復興の支えになった。さて私のことで恐縮だが，震災に加えて幾つかの出来事があった。震災直前の 2 月
は，文科省の大型研究費のヒアリングの準備に追われていたが，震災で 4 月中旬に延期された。大型研究費（五カ年）では限られた採択枠に新規申請者が入ることは，まさに「限界に挑む」ことであり，厳しい審査結果を覚悟していた。5 月中旬に採択通知を受け取った時は，定年後の計画も進行中であり，晴天の霹靂であった。6 月から研究はスタートしたが，医科研では定年後も研究を継続させた前例はなく，清野所長と教授会はその取り扱いに苦慮した。10 月まで議論を重ね，私の研究事業の受け皿とし，11 月に入って「社会連携講座：細菌感染生物学」の設置案が提案された。東大の規則では社会連携の設立条件として，研究パートナーとして民間研究財団や企業との連携を求めている。4
月の設立までには残された時間も僅かであり，研究を断念することも覚悟した。しかし清野所長の熱意に押され，また上田理事長，田中ヤクルト中央研究所元所長からも社会連携の主旨にご理解をいた
だき，日生研とヤクルトへ連携講座をお願いすることにした。年の瀬も押し迫った 12 月のことで，
まさに「限界に挑む」心境であった。このように多くの方々に助けられ，4 月 1 日から，何とか社会連携講座をスタートすることができた。また同時に，日生研と医科研そしてヤクルトとの間に太いパイプが築かれた。ここに今あらためて，お世話になった上田進理事長および田中隆一郎ヤクルト中央
研究所元所長には心より謝意を表したい。
ところで昨年は，ヒアリング直前のある忘れられない出来事がある。2 年ほど前から家族に誘われ近くのスポーツジムに通い始めた。最初にスタジオレッスンに参加したが，若い頃の瞬発力はすっかり失われていた。そこで週一度ジムでベンチプレスを始めた。開始後 10 ヶ月してやっと 37.5 kg が挙がり喜んだ。しかし早速 40 kg の壁が現れた。因みに現在は 60 kg の直前まできている。一般にベンチプレスでは，40 kg を連続 10 回挙げられる筋力があれば 50 kg を一回挙げることができる。即ち，
我々は最大負荷筋力の約 20% 減の力しか通常では発揮していないことになる。実はこの 20% 増が「限界の壁」と感じる。これはスポーツにかぎらず仕事にも言えることかもしれない。さて私が 40 kgのバーベルで苦しんでいるのを前に，ある女性のインストラクター（80 kg 以上を挙げられる怪力の持ち主）が言い放った。
「限界を意識して失敗を恐れたら，笹川さん絶対に挙りませんから！」。久しぶりに体育系の厳しい一言に打ちのめされた。あの研究費のヒアリング直前の出来事である。翌週は心をいれかえそのインストラクターのかけ声で 40 kg のバーベルに挑戦した。不思議なことに挙げる
時に何故か，「もしここで 40 kg が挙れば，来週のヒアリングも突破できる」と自問した。次の瞬間，
これまで不可能であった 40 kg のバーベルがついに挙がった。インストラクターも周囲の仲間も思わず拍手してくれた。とても嬉しかった。ジムの帰り路にヒアリングに僅かな希望を感じた。
さて私の大学在職中の研究でも「限界に挑む」ことを何度か経験した。研究成果を最終的に論文にしていろいろな国際誌へ投稿するが，特に「三大誌」と言われる国際誌に掲載されるまでの道のりは長く，まさに「限界に挑む」ことであった。私の研究の軌跡を，論文が掲載されるジャーナルのイン
パクトファクター（IF）で，論文業績リストを俯瞰すると，興味深いことに，IF4 – 6, 10 – 15, 20 – 30の三つの段階（壁）を経て研究が進展してきたことがわかる。最初は IF4 – 6 あたりの微生物学専門
誌にコンスタントに発表する時期があり，それを過ぎてやっと IF10 – 15 程度の一般生物・医学雑誌へ発表できる段階が到来した。次に毎回苦労の連続だったが，IF10 – 15 程度の雑誌に論文がコンスタントに出せるようになり，やっと IF20 – 30 の三大誌に挑戦できるようになった。このことは上述のベンチプレスの経験則と一脈通ずるところがあるように思える。もちろん「beginnerʼs luck」の番狂わせもあったが，若い時は周到に準備した論文でもその時々の壁に行き詰まり苦悩した。今思うと，
一つ一つ壁を克服できたのは，研究室の若いメンバーと一丸となり，「限界重量のバーベルに挑む」
時のような心境で，勇気とパワーを瞬間的に爆発させたからではないだろうか。
「限界に挑む」と題して，私の拙い経験を披露させていただいた。誰にでも「限界に挑む」必要に迫られた経験は一度や二度はあるに違いない。そしてまたこれからも幾度となくあるだろう。限界への挑み方は壁（課題）に応じて様々であって良いと思う。しかし最初から挑戦を諦めたら，いかなるブレークスルーも生まれない。昨年はこのことをあらためて実感させられた。私自身，仕事であれ，日常生活であれ，「限界に挑む」ことをこれからも経験できればこのうえない幸せである。
（理事）

58（5）
，2012

3（67）

ウシの空腸
動衛研つくば・広島県西部家保第 51 回獣医病理学研修会 No. 1027

動物：ウシ，ホルスタイン，雌，8 歳。

診断：ホルスタイン種雌牛における好銀性グラム陽性分

臨床事項：妊娠 3 ヶ月時に，突然，食欲不振，皮膚温度

節性フィラメント状細菌が関連した多病巣性肉芽腫性空の低下，第一胃運動の停止，沈鬱，重度の脱水，腹部膨腸炎

満が認められた。

考察：この好銀性グラム陽性分節性フィラメント状細菌

肉眼所見：右膁部切開開腹手術時に，長さ約 50 cm のがこの牛の多病巣性肉芽腫性空腸炎を引き起こしたと考空腸重積が認められた。重積起始部粘膜には，腫瘤（直えられた。さらにこの肉芽腫性腫瘤より二次的に腸重積

径 25 および 10 mm）（図 1）が認められた。腫瘤と腸重が誘発されたと推察された。

積部分は外科的に摘出された。この病変は境界明瞭で，参考文献：

その割面には，さらに小さい腫瘤（直径 8 mm）ととも

1. Ibaraki, Y., Shibahara, T., Kobayashi, H., Ito, N.,に，多発性の白黄色病巣が確認された。

Shinozuka, Y., Kasuya, K., Murakoshi, N., Chikuba, T.

組織所見：空腸の粘膜固有層に多発性の肉芽腫（図 2）

and Kubo, M. 2011. Multifocal granulomatous jejunitis

が み ら れ，類 上 皮 細 胞，多 核 巨 細 胞（図 3），マ ク ロ

associated with an argyrophilic gram – positive segmented

ファージ，リンパ球，好中球の著しい浸潤と細胞崩壊産ﬁlamentous bacterium in a Holstein cow. J. Comp. Pathol.

物が認められた。この病変には，多数の好銀性フィラメ

145 : 118 – 121.

ント状細菌（図 4：グロコットメセナミン銀染色）が認

2. Ogawa, K., Shibahara, T., Kobayashi, H., Kanazaki, M.,

められ，グラム陽性，PAS 陽性，非抗酸性，長さ 2 〜Morishita, M., Kamikawa, M. and Kubo, M. 2010. Jejunal

28 μm，直径 0.2 〜 0.35 μm でまれに分岐し，分節を有granuloma associated with an argyrophilic gram – negative

していた。このフィラメント状細菌（accession number

non – segmented ﬁlamentous bacterium in a Holstein cow.

AB539875）と既知の細菌との塩基配列の相同性は非常

J. Comp. Pathol. 143 : 52 – 56.

に低かった（640 bp 比較，高いものでも 89.2 ％）。

（芝原友幸）

4（68）

日生研たよりイヌの内股部腫瘤
東京農工大学第 51 回獣医病理学研修会 No. 1040

動物：イヌ，ブラッドハウンド，雌，11 歳。

浸潤している。免疫染色では腫瘍細胞は vimentin，α –

臨床事項：2009 年 3 月上旬に左内股部皮下腫瘤に気づsmooth muscle actin（図 4）お よ び calponin（図 5）にく。その 3 日後に食欲低下，若干の元気消失の主訴で某陽性を示した。

動物病院に来院。来院 5 日後に腫瘍を摘出し，退院。そ診 断：高 グ レ ード 筋 線 維 芽 細 胞 肉 腫（High – gradeの後良好に経過するも，術後 2 ヶ月目に急死。飼い主のmyoﬁbroblastic sarcoma）

希望により剖検は行わなかった。摘出した腫瘍がホルマ

考察：ヒトでは筋線維芽細胞腫瘍は 4 つのサブタイプにリン固定後，当研究室に送付された。

区分され，その 1 つである高グレード筋線維芽細胞肉腫

肉眼所見：腫瘍は 6 × 8 × 1 cm と 4 × 3 × 1 cm の 2 つは豊富な膠原線維産生を伴う細長い紡錘形腫瘍細胞の花の腫瘤から構成され，腫瘍を被う皮膚の一部は浅く潰瘍

筵状増殖ならびに多数の分裂像と壊死巣形成を特徴とす化していた（4 cm 径）。6 × 8 × 1 cm の腫瘤は割面でる。これらの組織学的特徴は本症例のものと合致する所

灰白色の結合組織様弾性組織に淡褐色巣が不規則に混在見であり，免疫染色結果もヒトの筋線維芽細胞肉腫の場しており，4 × 3 × 1 cm の腫瘤は一様に灰白色の結合合とほぼ合致していた。これらのことから，現在の動物

組織様弾性組織で構成されていた。

の腫瘍分類では筋線維芽細胞腫瘍はないが，ヒトでの診組織所見：皮下組織において，大小不同，紡錘形〜多角

断区分に基づいて本症例の診断を高グレード筋線維芽細形の細胞が束状あるいは不整な花筵状に増殖している

胞肉腫とした。

（図 1）。増殖細胞の核は淡明，核小体明瞭で異型性は高

参考文献：

く，分裂像も多い（22 個 /10 HPF ; 図 2）
。トリクロー

1. Mentzel, T. 2001. Myofibroblastic sarcomas: a brief

ム染色で青染する膠原線維の産生も豊富である（図 3）。

review of sarcomas showing a myofibroblastic line of

周囲組織との境界は不明瞭で，広範囲に壊死巣がみら

differentiation and discussion of the differential diagnosis.

れ（図 1），その周囲にはリンパ球，マクロファージがCurr. Diag. Pathol. 7 : 17 – 24.

（北条友理・鈴木和彦）

58（5）
，2012

5（69）

イヌの卵巣部腫瘤
摂南大学

第 51 回獣医病理学研修会 No.1045

動物：イヌ，雑種，雄，17 歳。
臨床事項：腎不全の治療のため本学を来院。その際，右後肢の浮腫が認められた。初診から 7 ヶ月後，元気消失
および起立不能となり，超音波検査にて左腎に腫瘤が認められた。状態悪化のため，安楽殺が施され，当教室にて剖検が行われた。
剖検所見：右膝関節の大腿脛関節および大腿膝蓋関節の関節面に，直径 7 mm に至る多結節性灰白色軟性腫瘤が認められた（図 1）。腫瘤は大腿脛関節から連続して，近位下腿部の筋間まで伸展していた。同様の腫瘤が大腿部筋間にも認められた。筋間腫瘤の一部は嚢胞状を呈し，その内部に透明なゼリー状物質が貯留していた（図 2）。
参考所見：左腎に 3 × 3 × 4 cm の白色硬性腫瘤がみられ，病理組織学的に腎細胞癌と診断されたが，他臓器への転移は認められなかった。
組織所見：筋間腫瘤は，少数の紡錘形ないし星状の間葉系細胞（図 3；挿入図）と粘液基質（図 4；アルシアン青染色）からなる多結節性病変であり，嚢胞内腔面ではA 型滑膜細胞様細胞の内張りが認められた（図 5）。同様の病変が，膝関節の関節包および大腿骨・脛骨の関節面でみられたが，骨浸潤は認められなかった（図 6）。
免疫染色では，結節内の間葉系細胞および嚢胞の内張り
細胞はビメンチンに強陽性で，その一部はマクロファー
ジマーカー（MSR – A）と PCNA に陽性を示した。サイトケラチンと S – 100 には陰性を示した。
診断：滑膜粘液腫 Synovial myxoma
考察：上記の病理学的所見は，既報のイヌの滑膜粘液腫と一致しており，膝関節原発の滑膜粘液腫と診断した。
本症例では，大腿部および下腿 部の筋間に広く浸潤がみられたものの，明らかな臨床症状（運動障害）を示さず，骨浸潤も認められないことから良性腫瘍と考えた。
滑膜粘液腫の由来細胞については未だ不明であるが，本症例では膝関節から離れた下腿部筋間においても，間葉系細胞（B 型滑膜細胞様）に加えて，嚢胞を内張りする細胞（A 型滑膜細胞様）の増殖が認められ，滑膜粘液腫の病理組織学的特徴の一つと考えられた。
（井澤 武史）
参考文献：
1. Craig, L. E., Krimer, P. M. and Cooley, A. J. 2010. Canine
synovial myxoma: 39 cases. Vet. Pathol. 47 : 931 – 6.
2. Craig, L.E., Julian, M.E. and Ferracone, J.D. 2002. The
diagnosis and prognosis of synovial tumors in dogs: 35
cases. Vet. Pathol. 39 : 66 – 73.
3. Pool, R. R. and Thompson, K. G. 2002. Tumors of joints.
pp. 199 – 243. In : Tumors in Domestic Animals, 4th ed.
(Meuten, D. J. ed.), Iowa State Press, Ames, Iowa.

6（70）

日生研たより

論文紹介

豚流行性下痢ウイルスの培養細胞における馴化
および弱毒化に伴うスパイク遺伝子の変異
佐藤哲朗

背景

材料および方法

豚流行性下痢ウイルス（PEDV）は，下痢および子豚の小腸から分離した PEDV 83P – 5 株の親株，

脱水症状を主徴とし，幼齢豚において致死率の高い

34 継代株，61 継代株および 100 継代株の培養上清コロナウイルス属のウイルスである [1, 2]。PEDV

か ら，ウ イ ル ス RNA を 抽 出 し た。各 継 代 株 のは一本のプラス鎖 RNA ゲノム全長 28 kb に，それcDNA を 合 成 し た 後，PCR に よ っ て 全 長 の S，M

ぞれ 4 つの構造蛋白質（スパイク [S]，エンベロー

および N 遺伝子をそれぞれ増幅した。各 PCR 産物

プ，メンブレン [M] およびヌクレオカプシド [N]）は，pCR®4 – TOPO ベクター（インビトロジェン）

および非構造蛋白質（1a，1b，3a および 3b）をコーにクローニングした後，塩基配列を解析した。

ドした遺伝子を有している。このうちの S 蛋白質

継 代 し た 83P – 5 株 の 病 原 性 を 確 認 す る た め，

は，ウイルスの宿主レセプターへの結合や細胞膜とPEDV 抗体陰性の 3 ヶ月齢豚に，各継代株を経口投の融合の役割を果たすだけでなく，ウイルスの中和

与し，各個体の臨床症状を観察した。また，糞便中反応や病原性とも深く関わっている [7 – 10]。M 蛋のウイルス排泄を RT – PCR を用いて確認した。

白質は，最も豊富なウイルス蛋白質で，ウイルス粒子の会合に関与している [14 – 19]。N 蛋白質は，ウ
イルスゲノムを内包する役割を果たしている [20,21]。

成績および考察83P – 5 各継代株の S 遺伝子をシークエンスした

現在，野外で利用されている豚流行性下痢のワク

結果，親株，34 継代株および 61 継代株の S 遺伝子

チンは，培養細胞を用いて連続継代された弱毒生ワ

は，4,152 塩基で 1,383 アミノ酸をコードしていた。

クチンである [22, 23]。これまでにもコロナウイル

一方，100 継代株は 455 から 457 番目の 3 塩基が欠

スでは，培養細胞における連続継代によって，本来損していた。この欠損によって，Tyr152 が欠損した。

の宿主に対する病原性が減弱することは報告されて各継代株の S 遺伝子を比較したところ，親株に比べ，いるが，ウイルスの培養細胞への馴化と弱毒化のメ

34 継代株で 6，61 継代株で 10 および 100 継代株でカニズムに関する分子生物学的知見は乏しい。以前， 18 塩基の変異が認められた。これらの変異は，34
我々は PEDV 83P – 5 株を子豚の小腸から Vero 細胞

継代株で 5，61 継代株で 9 および 100 継代株で 13を用いて分離した [24]。分離した 83P – 5 株は，始のアミノ酸置換を伴っていた。非同義置換と同義置

めは Vero 細胞のみで増殖したが，22 継代目以降の換の比を求めたところ，34 継代で 5.00，61 継代でウイルスは，MA104 細胞，MPK 細胞および CPK

9.00 および 100 継代で 5.00 といずれも高く，83P – 5

細 胞 に お い て も 増 殖 が 確 認 さ れ た。こ の よ う に

株の S 遺伝子が，Vero 細胞における連続継代を通じVero 細胞において連続継代した 83P – 5 株は，次第て，選択圧を受けていたことが示された。

に様々な培養細胞に馴化した。そこで今回，PEDV

検出した変異の S 蛋白質における局在を確認しの培養細胞への馴化とウイルス弱毒化のメカニズムたところ，S 遺伝子の変異は，S 蛋白質のシグナル配の一端を明らかにするため，83P – 5 株を Vero 細胞列および S1・S2 外部ドメインに存在し，膜貫通領にて 100 代まで連続継代し，構造蛋白質である S，域および細胞質領域には存在していなかった（図 1）。

M および N 遺伝子の変異を解析した。さらに，34，

このことは，Vero 細胞における継代によって，S

61 および 100 継代目の 83P – 5 株を豚に感染させ，蛋白質の外部ドメインに優先的に選択圧が働いたこ

その病原性を確認した。

とを示している。また，34 継代株と 61 継代株で発58（5），2012

7（71）

図 1 各継代株の S 蛋白質のアミノ酸置換の位置
シグナルペプチド（SP），膜貫通領域（TM），中和エピトープ（SS2，SS6，2C10）を灰色で示した。アミノ酸番号は 83P 5 親株を基準にした。ダッシュは欠損を示す。

生したアミノ酸置換は，Arg1087Gly のアミノ酸置換

83P – 5 および DR13 両弱毒株の遺伝的類縁関係をを除き，100 継代株へと引き継がれており，100 代

解 明 す る た め，PEDV 野 外 株 の S 遺 伝 子 配 列 をに及ぶ連続継代によって，S 遺伝子に変異が蓄積さ

GenBank より引用し，分子系統樹を作成した（図れていったことが明らかとなった。S1 ドメインの2）。分子系統樹解析の結果，PEDV の S 遺伝子は 5

Asn112とSer114，Tyr152 の欠損と Leu153，Lys378とSer379

つのグループに分類された。83P – 5 親株はグルーおよび S2 ドメインの Leu963，Thr965 と His973 は，互プ III に属したが，DR13 親株はグループ IV であっいに隣接して存在しており，他の散在するアミノ酸

た。また，83P – 5 株は親株から順に 34 代，61 代，

置換に比べ，S 蛋白質の構造や機能に影響している

100 代と継代回数の順番にグループ III 内に配置し可能性が推測された。一方，S 蛋白質には中和エピた。一 方，DR13 弱 毒 株 は，グ ル ープ III に 属 し，トープとして SS2，SS6 および 2C10 が報告されて83P – 5 の 100 継代株と最も近縁であった。

いるが [7, 10]，これらの中和エピトープ内には変異はみられなかった。

83P – 5 各継代株の M および N 遺伝子配列も S 遺伝子と同様に解析したところ，M 遺伝子では，61

S 蛋白質は高度にグリコシル化された糖蛋白質で， および 100 継代株において，A499G の非同義置換に
83P – 5 親株では 30 箇所の N – 型糖鎖結合部位が予よる Asn167Asp のアミノ酸置換がみられた。N 遺伝

測されている。各継代株の N – 型糖鎖結合部位を子では，100 継代株においてのみ，T102C の同義置

NetNGlyc 1.0 Server（http://www.cbs.dtu.dk/serv-

換が認められた。これら両遺伝子は S 遺伝子に比ices/NetNGlyc/）を用いて予測したところ，100 番

べ，非常に少ない変異数であり，ウイルスの表現型

目の Asn が 112 番目に変化した以外の箇所は，高に与える影響はわずかなものと推測された。

度に保存されていた。このような近接した N – 型糖

83P – 5 各継代株を 3 ヶ月齢豚に経口投与した。34

鎖結合部位の変化およびその他の結合部位の保存は， および 61 継代株を経口投与したすべての豚で，投与
N – 結合型のグリコシル化が，S 蛋白質の構造の保

5 日後までに水様性の下痢または軟便を観察した（表持とその機能にとって，重要であることを示唆して

1）。 一方，100 継代株を投与した豚は，いずれも下いる [25, 26]。

痢症状を示さなかったことから，83P – 5 株は 61 継

以 前，Park ら は Vero 細 胞 に お け る 連 続 継 代 に

代から 100 継代の間で弱毒化したことが明らかと

よって弱毒化した PEDV DR13 株の S 遺伝子の塩基なった。また，直腸スワブから RT – PCR によって，配列を報告した [27]。この DR13 弱毒株と今回解析

ウイルスの排泄を確認したところ，100 継代を投与した 83P – 5 各継代株の S 遺伝子を比較したところ，した 1 頭のみでウイルス排泄を確認できなかったこ

83P – 5 の 100 継代株と最も高い相同性を示した。

とを除き，すべての豚で一過性のウイルス排泄を確

83P – 5 親株と 100 継代株の間では，14 箇所のアミ認した。

ノ酸置換が存在するが，このうち 13 箇所が DR13
弱毒株にも存在した。両者の親株間では，47 個のアミノ酸に相違が認められた。このように，DR13
弱毒株の S 蛋白質は，その親株に比べ，83P – 5 の100 継代株に類似しているようであった。

まとめ
PEDV 83P – 5 株を Vero 細胞において連続継代したところ，ウイルスの細胞への馴化および豚に対す8（72）

日生研たより図 2 S 遺伝子の分子系統樹
分子系統樹の作成には，ClustalX v1.83 プログラムによる近隣接合法を用い，1,000 回のブートストラップ検定を行った。アウトグループには TGEV Miller M6 株（GenBank アクセッション番号 DQ811785）を使用した。

る弱毒化を確認した。83P – 5 株の中間継代で発生えられる。

した S 遺伝子の変異が，100 継代株に存在したこと

本研究において，コロナウイルスの弱毒化にとっは，Vero 細胞内において，一方向性の選択圧が Sて，S 蛋白質がその中心的役割を果たしている可能遺伝子に働き，変異が蓄積されたことを示している。

性が示唆された。しかし，S 遺伝子上のどの変異が，

S 蛋白質は PEDV の細胞への侵入および病原性に関ウイルスの弱毒化に関与しているかは不明である。

与しているとの報告から，連続継代によって S 遺今後，コロナウイルスの弱毒化のメカニズムを理解

伝子に発生した変異の蓄積は，PEDV の表現型に影するためには，今回検出したどの遺伝子変異が，ウ響を与えたことが推測された。

イルスの表現型を決定する要素となっているかを明

83P – 5 の 100 継 代 株 と DR13 弱 毒 株 の S 遺 伝 子らかにする必要がある（本稿は Virus Genes（2011）

は，非常に類似していたことは，コロナウイルスの139（3 – 4）, 347 – 350. に掲載された論文を訳し，一部

弱毒化と遺伝子変異に関するこれまでの報告とは，を省略・改変したものです）。

異なるものである。
鶏伝染性気管支炎ウイルス（IBV）[28 – 31] や豚
伝染性胃腸炎ウイルス（TGEV）[32] 弱毒株のゲノ

引用文献

ム配列が解析されているが，弱毒株共通のアミノ酸

1. Ammayappan, A., Upadhyay, C., Gelb, J. Jr., Va-

置換の報告は僅かである。83P – 5 の 100 継代株とkharia, V.N. 2009. Identiﬁcation of sequence chang-

DR13 弱毒株が非常に近縁であることは，Vero 細胞

es responsible for the attenuation of avian infec-という同じ環境からの強い選択圧を受けていること

tious bronchitis virus strain Arkansas DPI. Arch.

が原因の可能性も示唆される。しかし，マウス肝炎

Virol. 154 : 495 – 499.

ウ イ ル ス [33, 37]，SARS コ ロ ナ ウ イ ル ス [34]，2. Armesto, M., Cavanagh, D., Britton, P. 2009. The

IBV[35]，猫 伝 染 性 腹 膜 炎 ウ イ ル ス [36] お よ びreplicase gene of avian coronavir us infectious

TGEV[38] では，非構造蛋白質やアクセサリー蛋白

bronchitis virus is a determinant of pathogenicity.

質が，コロナウイルスの弱毒化に関与しているとの

PLoS One 4 : e7384.

報告もあるため、コロナウイルスを弱毒化へと導く

3. Cr uz, D.J., Kim, C.J., Shin, H.J. 2008. The

過程は，S 遺伝子の変異以外にも複数存在すると考GPRLQPY motif located at the carboxy – terminal

58（5），2012

9（73）

表1
群

豚番号
11

グループ 131（34 継代株）
34
9グループ 210（61 継代株）
30
22
グループ 3（100 継代株）

83P‑5 各継代株を経口投与した豚の下痢症状およびウイルスの排泄

23
24
25

下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
下痢症状 aウイルス排泄 b
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経口投与後日数6789− − − −
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108.2 TCID の各継代株を経口投与した。
a
糞便の状態を正常便（−），軟便（+），下痢便（++）
で示した。
b
直腸スワブから S 遺伝子を RT‑PCR で増幅した結果，陽性を +，陰性を−で示した。

of the spike protein induces antibodies that neutral-

attenuated coronavirus vaccines through the di-ize porcine epidemic diarrhea virus. Virus Res.

rected deletion of group – specific genes provide

132 : 192 – 196.

protection against feline infectious peritonitis. J.

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for DC – SIGN – and L – SIGN – mediated severe

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kb of the genome after attenuating passage in em-

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318.

9. Haijema, B.J., Volders, H., Rottier, P.J. 2004. Live,

14. Kweon, C.H., Kwon, B.J., Lee, J.G., Kwon, G.O.,

10（74）日生研たよりKang, Y.B. 1999. Derivation of attenuated porcine

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24. Spaan, W., Delius, H., Skinner, M., Armstrong, J.,

58（5），2012

11（75）

学会参加記

22nd International Pig Veterinary Society Congress（IPVS 2012 in Korea）
場所：大韓民国・済州島
期間：2012 年 6 月 10 日〜 14 日
佐藤哲朗，李知恩

6 月 10 日から 14 日まで，第 22 回国際養豚獣医た。実際には，臨床や繁殖などの分野でも感染症に学会（International Pig Veterinary Society Congress;

起因した問題が多く，印象としては感染症に関する

IPVS）が，韓国の済州島で開催され，参加の機会

演題が 8 割を占めていました。当然のことですが，を得ましたので，その概要を報告いたします。学会

養豚現場での最大の関心事は，感染症のコントロー

開場は済州国際空港から車で約 1 時間の国際コンベ

ルにあるといえます。

ンションセンター（ICC JEJU，西帰浦市，写真 1）

口頭およびポスター発表の演題数を病原体別にです。コンベンションセンターの裏手には漢拏山，まとめました（図 1）。豚サーコウイルス（PCV）

前には東シナ海が見渡せる自然豊かなロケーション

が 156 題，豚 繁 殖・呼 吸 障 害 症 候 群 ウ イ ル スの中，世界 60 ヶ国，3,093 名の養豚獣医師，大学等（PRRSV）が 153 題と圧倒的に多く，全体の 46％をの研究者および豚用医薬品メーカー関係者が集まり，占めています。前回大会（IPVS 2010 in Vancouver，

活発な議論が交わされました。本学会はその性格上，2010 年 7 月）では，PCV が約 200 題，PRRSV が約

豚用の医薬品メーカーからの参加者が多く，各メー

120 題であったことを考えると，今大会では，PCV

カーの臨床データを発表する場として，豚用医薬品の演題数が減少し，PRRSV が増加したことがわかの見本市といった側面も兼ねています。次いで，現りました。日本でも 2008 年から PCV のワクチンが場の臨床獣医師および大学などの公的研究機関の研使用され，効果を発揮していますが，国際的な養豚究者が，実際の野外データを討論する場として参加

現場の関心は，サーコウイルス関連疾病から少し離しており，各国の養豚事情を知る上でおおいに役立
つものです。弊所からは李知恩研究員が，Actinobacillus pleuropneumoniae 15 型菌の ELISA を確立し，ポスター発表を行いました（写真 2）。
学会のセクションは，ウイルス性感染症（359 題），
細菌性感染症（239 題），生産・栄養（128 題），臨
床（81 題），新 興 感 染 症（73 題），繁 殖（57 題），
動物愛護・環境（44 題）および公衆衛生（38 題）の 8 分野（演題数合計 1,019 題）にわかれていまし写真 1

済州コンベンションセンターの外観

写真 2 ポスターセッションにて自身の研究を発表する李研究員（左から 1 人目）12（76）日生研たよりれてきたのかもしれません。しかし，依然としてPRRSV による被害は，各国の養豚現場を悩ませているようです。PRRS のワクチンは，従来からの生または不活化ワクチンが主流であり，残念ながら今大会においても，有効な新規ワクチンの発表はありませんでした。今後も当面の間，PRRS 対策の基本
は，農場のバイオセキュリティーレベルの強化になると思われます。
以下，簡単ですが興味深いトピックを紹介します。
米 国 ア イ オ ワ 州 立 大 の Opriessnig ら は，米 国 のPCV2 ワクチン使用農場における PCV2 ジェノタイ

図 1 病原体別に分類した演題数とその割合（筆者により集計）

プ（PCV2a または 2b）の分布状況を報告しました。
ワクチン接種農場では，PCV2b タイプのウイルスが循環しているとのことでした。現在，市販 PCV2ありました。唾液を用いた診断は，医学分野ではワクチンのジェノタイプは，すべて PCV2a です。

90 年代から利用されています。豚の唾液の採取方

PCV2 のワクチンは，有効性の高いものですが，

法は，豚房にコットンロープを垂らして行います。

PCV2b タイプのウイルスには，完全な感染防御を

豚はロープを噛むので，唾液がロープに染みこみま

示していないことが報告されました。また，PCV2aす。これをジップロック等のビニール袋の中で絞っタイプのウイルスが，ワクチン接種農場から一切分たものを検査材料とします。PRRSV，PCV2，豚イ

離されていなかったことが印象的でした。

ンフルエンザウイルスおよび豚丹毒菌の PCR・抗新 生 豚 に 散 発 す る 先 天 性 振 戦 病（Congental

体検査の報告がありました。唾液サンプルの利用は，tremor ; CT）には，遺伝的な原因のものと感染症

採血の手間を省くことができ，豚群としての管理をが原因で引き起こされるものがあります。これまで考えた場合に有用です。実際に利用する場合は，に CT のタイプ AII は，ウイルスが原因と考えられ個々の検査法ごとに最適化の必要があると思われまながら，その原因ウイルスは特定されていませんですが，今後，各研究・検査機関で普及するかもしれした。スペインの Segales らは，CT タイプ AII とません。

診断された豚から，牛ウイルス性下痢ウイルス 1

このように IPVS は 2 年に一度，養豚に関わる世（BVDV – 1）を検出したことを報告していました。

界中の臨床家と研究者が集合し，各国の最新情報を

BVDV – 1 が CT タイプ AII の原因ウイルスであるの得る絶好の機会です。IPVS は一般的な学会とはそかどうか，今後の研究の進展が待たれます。

の様相を異にし，臨床現場寄りの内容が多いため，豚の唾液を用いた抗体検査および PCR 検査につ臨床獣医師にとっても得るものが多い学会です。次いて，口頭およびポスター発表を合わせて十数題の回の IPVS は，2014 年 6 月にメキシコのカンクンで発表がありました。唾液をサンプルとした検査方法

開催されます。2 年間で世界の養豚現場において，は，以前から米国アイオワ州立大の Zimmerman ら

どのようなイノベーションが起こるのか，非常に注が盛んに提唱している方法ですが，今大会では，オ目されます。私も自身の研究成果を携え，参加した

ランダ，デンマークおよびポーランドからの発表もいと思います。

日生研たより昭和 30 年 9 月 1 日創刊（隔月 1 回発行）

（通巻 576 号） 平成 24 年 8 月 25 日印刷
発行所〒 198 0024

生命の「共生・調和」を理念とし，生命体の豊かな明日と，研究の永続性を願う
気持ちを快いリズムに整え，視覚化したものです。カラーは生命の源，水を表す「青」としています。

東京都青梅市新町 9 丁目 2221 番地の 1

TEL：0428（33）1056（企画学術部） FAX：0428（33）1036
発行人
編集室
印刷所

表紙題字は故中村⒥治博士の揮毫

平成 24 年 9 月 1 日発行（第 58 巻第 5 号）

一般財団法人 日本生物科学研究所

林

志鋒

委

員／堤 信幸（委員長），大嶋 篤，山下 龍

事務／企画学術部

株式会社 精ഛ社（無断転載を禁ず）