Living up to Life

STELLARIS 5 WLL
LAS X
Basic
20211124_JP

Confidential - Company Proprietary

I. STELLARIS

1

II. Start up

2

III. Acquire Image

5

1. The Beam Path Setting

6

2. 対物レンズ選択

63. Beam Path 設定

7

1. Dye Assistant を使用して励起・蛍光取得領域を新規作成する場合 7
2. Drag and Drop を使用して励起・蛍光取得領域を新規作成する場合 9
3. 使用する検出器を手動設定で新規作成する場合

9

4. 使用するレーザーを手動設定で新規作成する場合

10

5. 設定を削除する方法

10

6. 励起波長の調整

107. 蛍光検出領域の調整

118. 設定の Save と Load11

9. Pseudo color look up table の変更

12

10. 画像取得時のスキャン方法： Line Sequence、Frame Sequence、Stack Sequence13
11. 取得画像データを用いた取得条件の設定
4. 画像取得パラメータ設定と画像取得方法

14
15

1. Live Scan と Fast Live Scan (Preview scan)15

2. Control Panel

16

3. 画像のサチュレーションチェック

16

4. Acquire image or image series

17

5. 画像取得条件の設定

18

1. Format、スキャンスピード、Zoom の設定

18

2. ナイキストのサンプリング定理と Pixel Size

22

3. Smooth Rendering

22

4. HyD S、HyD X と HyD R の違いについて

23

5. HyD (Hybrid Detector)について

24

6. Z stack (XYZ)画像撮影手順

26

7. z 駆動方法(z-Galvo と z-Wide)27

8. タイムラプス撮影(XYT, XYZt etc.)28

9. 透過像(BF: Bright Field)、微分干渉(DIC: Differential Interference Contrast)、位相差像(PH:Phase Difference)撮影

29

Confidential - Company Proprietary

IV. TauSense

31

1. TauContrast

32

2. TauGating

33

3. TauScan

34

4. TauSeparation

35

V. Viewer

371.取得した画像の Pseudo color や表示スケールを変更する方法

37

2. 右クリックメニュー

38

3. Viewer ボタン機能

38

4. Maximum Projection 画像の作成方法

41

VI. Quantify

42VII. Data Handling43

1. Tool Bar

43

2. Save data

43

3. Export image

44

4. Projects でのデータの取扱い

45

5. Free viewer software LAS X Small (For Win10)

46

VIII. Online Help46

IX. Shut down

47

X. 倒立顕微鏡 DMi8 の使用方法

49

Confidential - Company Proprietary

I. STELLARIS description and technical specifications
STELLARIS はポイントスキャン方式の共焦点顕微鏡で、超解像 LIGHTNING を標準搭載しています。

スキャン方式・FOV (Field Of View) Scanner
FOV スキャナーは広視野を歪みなく撮影することができます。またガルバノミラーを使用することでスキャンスピードやスキャンする位置を自由に設定することができます。最大フォーマットサイズは8192 x 8192 pixels です。
・Resonant Scanner ＊Optional
Resonant スキャナーは高速イメージングを可能にしたスキャン方式です。ライブイメージングなどの高速イメージングに適しており、褪色がしにくいという特徴があります。スキャンスピードは固定(8000 Hz または 12000 Hz、仕様によって異なります)で変更することはできません。
＊FOV と Resonant スキャナーはソフトウェア LAS X 上で切替えることができます。

蛍光検出方式 -プリズム分光下図のように励起された蛍光はプリズムにより分光され、超高感度検出器 HyD により検出されます。
取得できる蛍光波長は検出器の前にあるスリット位置の調整により 1 nm 単位で設定することができます。スリットの表面はミラーになっているため、取得しなかった波長は反射され、他の検出器で検出可能です。このように光は遮られることなく、最大 5 つの蛍光波長を同時取得可能です。

1

Confidential - Company ProprietaryII. Start up

5.

左脇

ON OFF
2.
1.

3.
4.

＊装置外観は仕様によって異なります
1. PC の電源を入れる＊自動的に “LAS X User”にログインします
2. 主電源を入れる
3. レーザーの電源を入れる
4. キースイッチを時計回りに 90 度回す
5.目視観察用水銀光源を使用する場合、電源を入れる＊目視観察用、画像取得には用いません＊LED 光源の場合、電源が自動で入るので次のステップへ

Power switch＊水銀光源の電源を落とした後、再度電源を入れる場合は水銀光源が冷えるまで
15-20 分時間を置く。
＊Shutter Switch は“Remote”にする(デフォルト)

Shutter Swich2

Confidential - Company Proprietary6. “LAS X”を起動する
7. 下図の設定を確認する
Configuration に“machine.xlhw”が、Microscope に“DMi8”が選択されていることを確認し、OK をク
リックします。
(“Simulator.xlhw”は解析のみを行う場合に使用、画像取得はできません)
前回使用時設定が表示されます。

DMi8

3

Confidential - Company Proprietary9. レーザーの起動“Configuration”メニューを開き、“Laser Config”を選択する。

使用するレーザーを ON にする

WLL(White Light Laser)のWLL(White Light Laser)の%は変えない
パワーは変更しない＊WLL(White Light Laser)の%は変えない＊OPSL は単波長 CW レーザーです＊WLL は波長可変パルスレーザーです＊表示されるレーザーは仕様によって変わります
レーザー波長(nm)405
WLL: 485-685

Fluorescent dye/protein
Blue Ex. (DAPI, Hoechst etc.)
Green -Infrared Ex.
Green Ex. FITC, Alexa488, Cy2, GFP etc.
Yellow Ex. YFP etc.
Red Ex. TRITC, Alexa555, Cy3, RFP, DsRed, mCherry etc.
Infrared Ex. Alexa633, Cy5 etc.

OPSL

448

Cyan Ex. CFP, Lucifer Yellow etc.

488

Green Ex. FITC, Alexa488, Cy2, GFP etc.

514

Yellow Ex. YFP etc.

561

Red Ex. TRITC, Alexa555, Cy3, RFP, DsRed, mCherry etc.

638

Infrared Ex. Alexa633, Cy5 etc.

4

Confidential - Company Proprietary

III. Acquire image

ハードやソフトの設

画像取得設定画面

画像処理画面

画像解析画面

画像定量画面(Optional)

定画面

The Beam Path settings：(次ページ参照)
レーザーや検出器、対物レンズ、AOBS(filter

Viewer (37 ページ参照)

cube)の設定

取得画像表示と調整

Buttons for Image Acquisition
Acquisition/Open Projects 表示を切替えて使用

：Preview スキャン (16 ページ参照)＊画像は保存できません

Acquisition：設定された条件で現在のステージ位置だけ

Format やスキャンスピード、Z-Stackなど画像撮影設定の画像取得時を行います。撮影された画像は Project に一時

Project

保存されます。

画像取得を行ったデータ名の一覧表示
保存や削除、データの呼び出しなど：Z-stack やタイムラプス、タイルスキャンを含め設定された条件通りに画像取得を行います。画像は Projectに一時保存されます。Start を押すと、Stop に表示が切り替
わり、途中で撮影を止めることができます。
撮影された画像は Project に一時保存されます。

5

Confidential - Company ProprietaryIII-1. The Beam Path Setting
蛍光色素やレーザー、検出器の設定などができます
Control Panel 設定
対物レンズ選択画面

AOBS (Filter cube) 設定
Notch Filter 設定

透過光撮影方法選択
Fluorescent Dye 検察用入力場所

Fluorescent Dye 選択画面

蛍光検出領域(nm)＊Notch Filter Lines (Optional)：レーザーの反射を抑えます＊透過光撮影方法：29 ページ参照＊Control Panel (Optional)：16 ページ参照
検出器の Gain、レーザーパワー、Zoom 倍率、Pinhole サイズ、Z 位置を調整できます(18 ページ参照).

III-2. 対物レンズ選択
対物レンズが表示されている場所をクリックすると、現在搭載されている対物レンズの一覧のプルダウ
ンメニューが表示されます。対物レンズを選択すると、プルダウンメニューが閉じ、選択された対物レンズに自動的に切り替わります。
＊表示される対物レンズは仕様によって異なります6

Confidential - Company ProprietaryIII-3. Beam Path 設定
III-3-1. Dye Assistant を使用して励起・蛍光取得領域を新規作成する場合
Dye Assistant を使用して励起・蛍光取得領域を新規作成する手順は以下の通りです。
1.下図○
a “Dye Assistant”ボタンをクリックします

下図が表示されます。

2. 上図○b “...”ボタンをクリックするとプルダウンメニューで蛍光色素名が表示されます。
3. プルダウンメニューから色素名を選択すると、右図のように左側に選択した色素名が表示されます。
2 つの色素を選択した場合、右図のようになり、下段に撮影方法が提案されます。表示されているカーブはそれぞれの蛍光波長曲線を示しています。また蛍光色素の蛍光
波長をすべて取得したときの割合を 100 としたき、設定されている蛍光取得領域における割合を“Yield”で、蛍光がほかの検出器へ漏れ込む割合を“Crosstalk”で示しています。“Yield”が高く、“Crosstalk”が低いほうがいいです。
4. 同様にしてサンプルに応じて色素名を選択していきます。
5. 検出器の種類が複数ある場合、色素に応じて使用する検出器を指定することができます。右図のようにプルダウ
ンメニューから任意の検出器を選択します。

使用する検出器を指定する場合、検出器の組み合わせおよび仕様によって設定できるスキャン方法が制限されます(13 ページ参照)。

7

Confidential - Company Proprietary6. Pseudo Color は自動設定されますが、右図赤矢印部分をクリックするとプルダウンメニューが表示され任意の色を設定することができます。

7. 色素、検出器、Pseudo color の設定ができたら検出方法を選択し Apply をクリックします。Dye
Assistant 画面が閉じ、それらすべての設定が反映されます。
8. Edit をクリックすることで新規ウインドウが表示され、励起波長や蛍光検出領域を調整できます。

9. 励起波長は縦の線○
c で、蛍光取得領域は○d で示され、励起波長曲線が薄い色で表示されます。WLLの場合、○c をドラッグすることで励起波長を調整することができます。○
d の両端をドラッグすることで蛍光取得領域を狭めたり、広げたりすることができます。
励起波長や蛍光波長の調整は設定の適用後でも可能です。
10. Apply を押し、設定を適用します8

Confidential - Company ProprietaryIII-3-2. Drag and Drop を使用して励起・蛍光取得領域を新規作成する場合
検索窓で色素名を入力すると、該当する蛍光色素が表示されます。これらを下図○
a のようにドラッグす
ると、励起波長○c および蛍光取得領域○
b が自動設定されます。下図は Alexa と入力した場合の例。

ドラッグ中に表示される検出器名に合わせてドラッグすると、使用する検出器を指定することができます。○
b の枠など何もないところにドラッグすると色素に応じて自動選択されます。
蛍光取得領域は色素が追加されると再度自動調整されます。
表示されているカーブはそれぞれの蛍光波長曲線を示しています。また蛍光色素の蛍光波長をすべて取得したときの割合を最大としたき、設定されている蛍光取得領域における割合を“Yield”で、蛍光がほかの検出器へ漏れ込む割合を“Crosstalk”で示しています。“Yield”が高く、“Crosstalk”が低いほうがいいです。

III-3-3. 使用する検出器を手動設定で新規作成する場合
1. 上図“Setting”内の使用する検出器をクリックします(○c の下側矢印部分)
2. “Dye”の下をクリックすると表示されるプルダウンメニューから使用する色素名を選択すると、励起波長および蛍光取得領域が自動設定されます。

9

Confidential - Company ProprietaryIII-3-4. 使用するレーザーを手動設定で新規作成する場合
1.下図のようにを Setting 内にドラッグすると最寄りのレーザーが自動選択されます。

2.使用する検出器を設定します(次ページ、蛍光検出領域の調整を参照)。

III-3-5. 設定を削除する方法
削除したい設定の上図○b で表示されている蛍光波長曲線部分をクリックし、・Delete キーを押す
・上図右上に表示されているゴミ箱マークをクリックする
削除することができます。
また、削除したい設定の上図○b で表示されている蛍光波長曲線部分“Setting の外にドラッグすると削除することができます。

III-3-6. 励起波長の調整
1. ○g で表示される励起波長の縦線部分をクリックすると、白に変わります。また“Setting”の数がレーザー調整用に切替ります。Shutter はデフォルトで ON になっています。

2. 下記方法でレーザーの出力を調整できます。
・○h のスライダーバーを動かす・スライダーバー上でマウスのホイールを回す
・上図矢印で表示されているレーザー出力表示ウインドウから直接数値入力する・Control Panel の“Smart Channel Intensity”を使用する(Viewer 画面上で選択されている画像のレー
ザー出力を変更)

10

Confidential - Company ProprietaryIII-3-7. 蛍光検出領域の調整
1. 調整する検出器の○i をクリック
すると、検出器の名前部分と辺縁部が白に変わり、Setting 下部が検出器設定用画面に切り替わります。デ
フォルトで ON になっています。
2. 必要に応じて検出器の蛍光検出領域の調整を行います。↔で表示されている部分をドラッグすることで蛍光検出領域を広げたり、狭めたりできます。検出領域をダブルクリックすることで現在の検出領域波長をポップアップで数値表示し、数値を直接入力することで変更することもできます。
3. 下記の方法で検出器の Gain(感度)を調整します。デフォルトは 100%です。
・○j のスライダーバーを動かす・スライダーバー上でマウスのホイールを回す
・上図矢印で表示されている Gain 表示ウインドウから直接数値入力する・Control Panel の“Smart Gain”を使用する(Viewer 画面上で選択されている画像のレーザー出力を変更)III-3-8. 設定の Save と Load

Save：設定の保存
作成した画像取得設定を保存することで、次回同じ設定で画像取得を行えます。
1.

ボタンをクリックするとファイルブラウザが開きます。

2. ファイル名と保存先を指定し、“Save”をクリックします。
Load setting：設定の呼び出し
1.

ボタンをクリックするとファイルブラウザが開きます。

2. ファイルを選択し、“OK”をクリックすると、画像取得設定が呼び出されます。

11

Confidential - Company ProprietaryIII-3-9. Pseudo color look up table の変更
各検出器の左に表示されている“Pseudo color of look up table”で指定されている色が取得画像のPseudo color として表示されます。“Pseudo color of look up table”をクリックするとリストが表示され、変えたい色をダブルクリックすると Pseudo color を変更することができます。

Pseudo color of look-up table

12

Confidential - Company ProprietaryIII-3-10. 画像取得時のスキャン方法： Line Sequence、Frame Sequence、Stack
Sequence

Line Sequence

Stack Sequence
Frame Sequence
Line Sequence

撮影対象が動くライブイメージングに適した撮影方法です

ラインごとに設定を切替え、ライ＊この撮影方法では Sequence 間で以下の設定を変更でき

ンを積み重ねることで画像取得をます。レーザーの設定、Gain、検出器の ON/OFF

おこないます。

＊検出器が OFF の状態でも光は検出器に入るため、他の＊ラインは高速に切替えているた

Sequence のレーザー波長と重ならないようにしてくださ

め、同時取得に近い撮影方法ですい。

Frame Sequence＊この撮影方法では Sequence 間で以下の設定を変更でき

画像を 1 枚撮影するごとに設定をます。レーザーの設定、Gain、検出器の ON/OFF、

切替えながら画像取得をおこない

Frame Accumulation、Line/Frame Average、Pinhole、ます。

motCorr、検出器の設定(検出波長領域、Tau Mode、＊励起波長や蛍光波長を変えながOperation Mode)

ら、1 つの検出器だけを使用して複数の Channel の画像取得ができます。
Stack Sequence＊この撮影方法では Sequence 間で以下の設定を変更でき

1 つの Channel の Z-Stack を撮ます。レーザーの設定、Gain、検出器の ON/OFF、

影するごとに設定を切替えながら

Frame Accumulation、Line/Frame Average、Pinhole、

画像取得をおこないます

motCorr、検出器の設定(検出波長領域、Tau Mode、＊励起波長や蛍光波長を変えながOperation Mode)

ら、1 つの検出器だけを使用して複数の Channel の画像取得がで
きます。

13

Confidential - Company ProprietaryIII-3-11. 取得画像データを用いた取得条件の設定
画像取得を行ったデータを用いて取得条件を設定できます。
呼び出したい設定で撮影した画像データを選択後、下図”Apply image settings”を押すと設定が呼び出されます(下記参照)。

Apply image settings

Open the dialog
すべての撮影条件が呼び出されるわけではありません。
レーザーや検出器の設定、Line/Frame Average/Accumulation、Pinhole の設定が呼び出されますが、他は適用されません。下記の方法で設定を確認の上、手動で設定します。
設定を確認したい画像データを選択後、右クリックし、表示される左下画像から Properties を選択す
ると、右下図のように新規ウインドウが表示されます。そこにすべての撮影条件が記載されています。

14

Confidential - Company ProprietaryIII-4. 画像取得パラメータ設定と画像取得方法
III-4-1. Live Scan と Fast Live Scan (Preview scan)Preview 画像取得方法には Live と Fast Live の 2 つがあります。
Fast Live mode：下記設定で Preview 画像を取得します。主に XY 位置や Z 位置の確認などに使用
Live mode：画像撮影時と同じ設定で Preview 画像を作成します。画像撮影時のパラメータ設定の確認などに使用Fast Live の右側にカーソルを合わせると表示がのように変わり、歯車部分をクリッ

クすると下図の Fast Live 設定ウインドウが表示されます。
Fast Live の FOV 使用時と Resonant 使用時、それぞれ設定することができます。
＊Active Sequence Only(Between Lines Mode)： ON になっていると、Fast Live で画像取得を行うと、現在選択されている Setting だけが画像取得されます。Line Sequence の時のみ有効な機能で、デフォルトは ON です。

15

Confidential - Company ProprietaryIII-4-2. Control Panel“Control Panel configuration”ボタン

をクリックすると、詳細な機能設定ができます

デフォルト設定は下記です。

①

②

③

④

⑤

⑥

①Smart Gain：Viewer 画面上で選択されている Channel の検出器の Gain を調整できます②Smart Intensity：Viewer 画面上で選択されている Channel のレーザー出力を調整できます③Smart Wavelength：Viewer 画面上で選択されている Channel のレーザー波長を調整できます④Pinhole：選択されている Sequence の Pinhole size を調整できます⑤ Zoom：Zoom 倍率を調整できます⑥Z position：Z 位置を調整できます
z-Galvo: super Z ステージ (Galvano ステージ)の Z 位置を調整します
z-Wide: 倒立顕微鏡の場合、レボルバーの Z 位置を調整します
正立顕微鏡の場合、サンプルステージの Z 位置を調整します
z-Galvo と z-Wide については 27 ページ参照

III-4-3. 画像のサチュレーションチェック
Quick Look-up table

ボタンをクリックすると、画像の表示色を変更することができます。

Pseudo Color (デフォルト) → Grow Over/Under → Gray → Pseudo Color →Grow Over/Under：下図のように輝度が 0（設定した値以下)の Pixel を緑で、サチュレーションしている(設定した値以上の)Pixel を青で表示し、その間を黒、茶、白で表示します。
255

4095

青(サチュレーションまたは設定値以上の値)

・

・

白

・

・

茶

・

・

黒

0

0

緑(輝度が 0 または設定値以下の値)

8 Bit

12 Bit

青：サチュレーションまたは設定値以上の値
緑：輝度値が 0 または設定値以下の値

16

Confidential - Company ProprietaryIII-4-4. Acquire image or image series
画像撮影ボタン：Preview スキャン用ボタン(15 ページ参照)＊取得画像は保存できません：設定された条件で現在のステージ位置だけの画像取得時を行います。撮影された画
像は Project に一時保存されます。

：Z-stack やタイムラプス、タイルスキャンを含め設定された条件通りに画像取得を行います。画像は Project に一時保存されます。Start を押すと、Stop に表示が切り替わり、途中で撮影を止めることができます。撮影された画像は Project に一時保存されます。

17

Confidential - Company ProprietaryIII-5. 画像取得条件の設定
III-5-1. Format、スキャンスピード、Zoom の設定
1 Format：画像の Pixel 数を設定します。
○

デフォルトは 512 x 512 Pixels です。数値部分をクリ

①
2
○
3
○
④

ックするとプルダウンメニューで表示される組み合わ+ ボタンをクリックすると任意
せに、また右側にある○の数値を入力でき、その値に変更できます。
2 Speed：スキャンスピード(Hz)を設定します。
○

デフォルトは 400 Hz です。数値部分をクリックするとプルダウンメニューで表示される組み合わせに、ま+ ボタンをクリックすると任意の数値をた右側にある○5○

入力でき、その値に変更できます。
＊601 Hz 以上にすると数値に応じてズームが掛かります。
＊スキャンスピードを遅くすると S/N は上がりますが、退色しやすくなります。

⑥＊Resonant スキャナーのスキャンスピードは固定値(8000 Hz または 12000 Hz)で変更できません。
3 Bidirectional X：画像取得速度を最大で 2 倍速くす○ることができます。(Phase を調整する必要があります)
ガルバノミラーは左から右、右から左の往復運動をしていますが、デフォルトの設定では下左図のように左から右への移動時のみレーザーの照射および画像取得を行っています。Bidirectional X を ON にすると下中央図のように左から右だけでなく右から左の移動時にもレーザー照射および画像取得を行うことで、画像取得速度を速くします。しかし、左から右と右から左の位相を合わせる“Phase”(Bidirectional X を ON にすると表示されます)の調整が必要です。位相がずれていると下図のようなります。
Unidirectional Scan

Bidirectional Scan

18

Confidential - Company Proprietary

4 Zoom：光学 Zoom を設定します。
○

下記の方法で Zoom 倍率を変更できます。
・スライダーバーを動かす。Zoom In を ON にして、Viwer 画像上で ROI を指定する。Control Panel
上の Zoom を操作(16 ページ参照)＊601 Hz 以上にするとその値に応じて自動的に Zoom が掛かります。
5 Line/Frame Average/Accumulation○

Average および Accumulation により S/N が向上します
一般的に検出器の Gain を低くすると、必要な Average 数は減ります。
左にあるチェックボックスを ON にすると、設定した値がすべての Sequence に適用されます。
⑥Rotation：画像の回転(Optional)
プリズムを回すことで画像を+/- 100°まで自由に回転させることができます。Control Panel からでも操作できます(16 ページ参照)
画像の Pseudo color は下図、Viewer 画面左の白点線内をダブルクリックすると表示されるウインドウ
で色を選択すると、その色に変更できます。
表示スケールは下図の白点線部分の上端または下端をドラッグすると変更できます。また上端または下端に表示されているウインドウに数値を直接入力することでも変更できます。
画像の表示スケールについて撮影した画像の輝度に合わせて Viewer 画面左にあるスライダー位置を調整します。
Auto Scale ボタン
すべての画像において輝度値/Pixel のヒスト
グラムの最高値と最低値に表示スケール上端と下端を自動的に合わせます。これによりダ

上記 Auto Scale で調整さイナミックレンジを広く見せることができまれた値が、赤枠の上端と下す。

端に表示されます。ウイン

Z-Stack 画像やタイムラプス画像の場合、各ドウに数値を直接入力できStack、各時間の画像に自動調整されます。

ます。

もう一度クリックすると、その時の値で固定されます。

Counting Mode を使用した場合、表示できる Photon/Pixel 数は Bit スケールによって変わります。

19

Confidential - Company Proprietary1 XY format optimization
○

①

2
○

選択されている対物レンズの NA と設定されている
ピンホールサイズを考慮し、得られる最大の分解能を表現できる Pixel サイズになるように画像の Pixel
数が自動設定されます(23 ページ参照)。
2 FOV Scanner と Resonant Scanner の切替えボ○タン
グレー：FOV Scanner

3○

赤：Resonant Scanner＊Resonant スキャナーのスキャンスピードは固定値(8000 Hz または 12000 Hz)で変更できません。
＊Resonant scanner 選択時は HyD S の Analog
mode は使用できません。
⑤Dynamic Signal Enhancement(DSE)：DSE は指数
加重移動平均化処理により画像取得速度を損なうことなく、タイムラプス画像の S/N を向上させる機能④

です(次ページ参照)。

⑤＊Raw データと処理画像両方作成されます。
＊Process/Lightning/Dynamic Signal Enhancementから再処理することも可能です。
Enable：DSE 機能の ON/OFF をします。
Frames：指数加重移動平均処理の対象となる画像の枚数(Z-Stack の場合は Stack 数)を設定します(最大 65)。現在画像とその前後の画像に対して処理を行うため、設定値は必ず奇数です。
Weight：指数加重移動平均処理を行う際の加重を設定します(0 - 2)。数値が大きくなるほど加重(貢献度)が大きくなります。
＊Counting Mode で DSE を使用する場合、輝度値は平均化ではなく積算されます。
サチュレーションに注意してください。

20

Confidential - Company ProprietaryDSE は指数加重移動平均処理により画像取得速度を損なうことなく、タイムラプス画像の S/N を向上させる機能です。
左図は 14 枚の画像を取得した場合の模式図です。青で示された 7 枚目の画像を DSE の Frame 数 7 で処理すると、7 枚目(青)を中心に赤枠で示された+/-3 枚ずつ計 7 枚(4-10 枚目)が処理対象となります。
＊8 枚目や 9 枚目を処理する場合は、赤枠ごと移動して処理をしていきます。

DSE 処理には対象画像に加え前後の画像が必要ですが、最初と最後付近の画像にはそれぞれ前と後の画像が無いまたは不足しているため、処理対象枚数が少なくな
り、S/N が低下します。
そのため、前後に余裕を持たせた撮影を行ってください。そのあと、Process/Edit/Crop で必要な枚数を切り抜きます。

左図は Frame 数 7 に設定したときの Live 撮影時の処理対象画像を示しています。Start 撮影時は前後の画像を処理対象(Frame 数 7 の場合、*/3 枚)としますが、Live 撮影時には-6 までを処理対象とします。そのため、Live と Start では設定数が同じでも画像が変わる場合があります。

21

Confidential - Company ProprietaryIII-5-2. ナイキストのサンプリング定理と Pixel Size
Nyquist-Shannon サンプリング定理ではどのようなアナログ波形であっても 2 倍以上のサンプル情報量があればデジタル波形から戻すことができるというものです。
Pixel Size を表現したい分解能の 1/2 から 1/3 の値にする必要があるということになります。
Pixel Size と表現したい分解能が同じ場合左下図のように、分解能を表現できない場合があります。

Sampling space is equal

Sampling space is one half

Intensity

analog signal
was restored

Analog signal
was not

60

restorednm

Display in pixel

III-5-3. Smooth Rendering
Viewer 画面上 Smooth Rendering を OFF にしてください。起動時は ON です。
Smooth Rendering を OFF にした画像が Raw データとなります。

22

Confidential - Company ProprietaryIII-5-4. HyD S、HyD X と HyD R の違いについて (Ref: Volker Schweikhard et al., Nature
Method 2020)
各検出器の波長と PDE(Photon Detection Efficiency)の関係を示した下表を参考に HyD S、HyD X、
HyD R から使用する検出器を選択してください。

-

HyD S

HyD S は受光素子にシリコンを用いた Multi-Pixel Photon Counter (MPCC)検出器です。
*HyD S は TauSense や-STED に使用できますが、FLIM や FCS には使用できません。
HyD S には 3 つの Operation mode があります： Analog、Counting、Reflection(次ページ参照)-

HyD X、HyD R (搭載できません)

HyD X は FLIM や FCS 測定に特化した検出器です。
HyD R は近赤外検出に特化した検出器です。
HyD X と HyD R はどちらも冷却により、低ノイズを実現しています。
HyD X と HyD R には 2 つの Operation mode があります：Digital、Counting(次ページ参照)

23

Confidential - Company ProprietaryIII-5-5. HyD (Hybrid Detector)について
Operation mode
検出器により使える Mode が異なります。
-Counting：Counting mode はすべての検出器で使用できます。Counting mode を使用すると、検出した Photon 数を輝度値として表示するため、定量性の高い解析が可能となります。ある Pixel で 15個の Photon が検出されると、その Pixel の輝度値は 15 となります。
＊FRET などの Ratio イメージングに有効です＊Gain は変更できません＊輝度値が 8 Bit スケール(255)を超える場合、12 Bit(4095)や 16B it(65535)に変更してください(次ページ参照)。
＊画像の輝度値を ASCII ファイルへ出力できます(44 ページ参照)。
-Analog：この Mode は通常の輝度画像取得に使用します。サンプルの明るさに合わせて Gain を調整します。
-Reflection：この Mode は反射や非常に明るいサンプルを撮影する場合にのみ使用します。

Counting mode を使用した画像取得方法
1. Analog mode(Gain 50 - 100)でレーザー出力の調整を行う
2. Counting mode に変更
3. スキャンスピードや Accumulation の調整を行う(レーザー出力や Average ではなく)＊スキャンスピードを遅くすると、Pixel Dwell time が長くなり、得られる Photon 数が増えます＊Resonant scanner はスキャンスピードを変更できません。
＊Counting mode では、検出した Photon 数を輝度値として表示するため、Accumulation を行うとより明るく表示できるようになります。
＊Accumulation 設定時には 8 Bit スケール(255)を超えないようにするため１スキャン当たりの明るさを Auto Scale で確認します(19 ページ参照)。または 12 Bit や 16 Bit に変更してください(次ページ参照)。

24

Confidential - Company Proprietary

Bit スケール変更方法“Configuration”を選択し、“Hardware を開きます。”

下図“Hardware Settings”が表示されます。白枠内の“Resolution”にある“Bit Depth”のプルダウンメニ
ューから 12 Bit または 16 Bit へ変更します。デフォルトは 8 Bit です。

25

Confidential - Company ProprietaryIII-5-6. Z stack (XYZ)画像撮影手順
1. “Acquisition Mode”から XYZ または XYZT を選択します。

①

2. Control Panel や Smart Move を使用して ZStack を撮影する範囲の上端または下端まで移動
2
○

します。
1 “Begin”をクリックします3. ○4. 2.と同様に Control Panel や Smart Move を使用して Z-Stack を撮影する範囲のもう一方の端ま
3○で移動します。
1 “End”をクリックします。
5. ○1 Begin や End の右にある矢印をクリックする
○

4
○

5
○

と、Begin または End の設定位置へ移動します。
2 Begin と End 位置を削除します。
○
3 Begin から End までの距離です。
○
4 Stack Direction (Z)：下から上に撮影するか、○

6○

上から下に撮影するか変更できます⑤ Z 位置の調整方法を変更できます。“z-Galvo”と“z-Wide”の違いなどについては次ページ参照。
6 z-Stack 撮影枚数の設定○

Nr. of Steps：撮影枚数を手動で設定
Z-Step Size：撮影間隔を手動で設定
System Optimized：使用する対物レンズと設定されている Pinhole サイズをもとに Z 方向の分解能を表現できる枚数を自動設定します。
6. 画像取得“Start”をクリックします。

26

Confidential - Company ProprietaryIII-5-7. z 駆動方法(z-Galvo と z-Wide)・z-Galvo(Optional)
ガルバノ駆動で右図のようにステージ自身が動きます。薄いサンプルを高い z 分解能で撮影するのに適しています。最大駆動幅は 500 m(Restrict Range)または 1500 m (Whole Range)です。
＊z-Galvo 選択時に Control Panel からのみ操作できます。
＊z-Galvo 選択時でも Smart Move や顕微鏡本体のノブでレボルバー(倒立顕微鏡の場合)の z 位置を変更することができます。
Control Panel または LAS X 画面上では現在の z 位置を表示します。しかし、どちらにおいても zGalvo の位置のみを認識・表示しており、レボルバー(倒立顕微鏡の場合)の z 位置は認識していません。そのため、ｚ-Stack 設定時 Begin を設定したあとは Smart Move や顕微鏡本体のノブを操作しないでください。設定後 Smart Move や顕微鏡本体のノブを操作すると撮影したい場所とズレます。
・z-Wide
顕微鏡のレボルバー(倒立顕微鏡)が動きます。厚いサンプル撮影に適していますが、z 分解能が低いです。撮影できる厚さは撮影に用いる対物レンズの作動距離に依存します。
＊z-Galvo 選択時でも Smart Move や顕微鏡本体のノブでレボルバー(倒立顕微鏡の場合)の z 位置を変更することができます。
＊z-Wide 選択時に Control Panel からも操作できます。
-Control panel (16 ページ参照)
z-Galvo と z-Wide どちらも Control Panel から操作できます。
同時操作は不可Z position-Smart Move (49 ページ参照)

27

Confidential - Company ProprietaryIII-5-8. タイムラプス撮影(XYT, XYZt etc.)
1. “Acquisition Mode”で XYT や XYZT などを選択する
xyt：XY 画像のタイムラプス
xyzt：XY または XYZ 画像のタイムラプス

下記ウインドウが表示されます。
左：xyt 選択時
右：xyzt 選択時

xyt

xyzt

1
○

1
○

2
○

2
○

3
○

3
○

1 “Time Interval”を設定します。撮影開始から次の撮影開始までの時間です。
2. ○“Minimize”を選択すると、最小間隔で撮影します。
2 、○
3 全撮影時間または撮影回数を設定します。
3. ○Acquire Until Stopped を選択すると、Start したあと Stop するまで撮影し続けます。ファイルは 2 GBごとに分割されます。
4.

“Start”をクリックし、撮影を開始します。

28

Confidential - Company ProprietaryIII-5-9. 透過像(BF: Bright Field)、微分干渉(DIC: Differential Interference
Contrast)、位相差像(PH: Phase Difference)撮影
蛍光画像撮影設定を行ったあとに設定します。“Trans PMT”をクリックすると下図のように Setting 下部の画面が切り替わります。

Transmitted light Detector ON/OFF

Transmitted light Detector Gain

Transmitted light Detector Offset

撮影方法を選択します
Scan-BF：透過像を撮影します。
Scan DIC(Optional)：微分干渉像を撮影します。撮影には Polarizer および Analyzer (Optional)が必要です。

微分干渉像撮影手順
1. “Scan-DIC”または“Scan-DIC-Pol”を選択します
2. 右図のように Prism と Bias が表示され、Prism は自動選択されます。
画像のコントラストを見ながら Bias のスライダーバーを操作し、位置を決めます。
3. 必要に応じてレーザー出力や検出器の Gain を調整します。
透過像または位相差像撮影手順
1. “Scan-BF”または“Scan-PH”を選択
2. 必要に応じてレーザー出力や検出器の Gain を調整します。

29

Confidential - Company Proprietary透過像撮影時の注意点
微分干渉像撮影にはプラスチックディッシュは適していません。プラスチックディッシュを使用する場
合は位相差撮影を選択してください。
画像撮影に用いるレーザー出力や波長は画像自身やその明るさに影響します。
ケーラー照明の調整が必要です。
Scan-DIC と Scan-DIC-POL の違い
Scan-DIC は 1 つの偏光板と 2 つのプリズムの計 3 つの素子を用います。
一方 Scan-DIC-POL は 2 つの偏光板と 2 つのプリズムの計 4 つの素子を用います。
これらの素子が光路中に存在するため、Scan-DIC または Scan-DIC-POL と蛍光像を同時取得すると、蛍光画像が暗くなります。このため、Scan-DIC または Scan-DIC-POL と蛍光像を別の Setting で設定し、Frame Sequence を使用して撮影してください。
＊レーザーはコヒーレントであるため、偏光板は 1 つでも微分干渉像を撮影できます。

30

Confidential - Company Proprietary

IV. TauSense (Ref: M Julia Roberti et al., Nature Research 2020)
TauSense はパルスレーザーで励起されてから、Photon が検出される時間を解析して輝度とは異なる
画像や情報が得られる技術です。
反射など不要なシグナルの除去や蛍光寿命の違いを用いて蛍光を分離することができます。
＊WLL などパルスのレーザーが必要です。
＊TauSense は、レーザー照射量はそのままに輝度画像と同時に画像取得することができます。
検出器をクリックすると、Setting
下部に設定画面が表示されます①②①TauContrast: 次ページ参照②TauMode
プルダウンメニューから TauMode を変更できます。右にあるをクリッ

クすると TauMode に応じた調整画面が表示されます。
None：TauContrast を ON にしたときだけ使用でき、TauContrast 画像のみを取得し、輝度画像を取得しません。
Intensity：輝度画像を取得します。デフォルトで選択されています。
TauGating：33 ページ参照
TauScan：34 ページ参照
TauSeparation：35 ページ参照

31

Confidential - Company ProprietaryIV-1. TauContrast“TauContrast”は Pixel ごとに励起されてから Photon が検出されるまでの時間の平均値を算出し、その平均値に応じた色で表示します。TauContrast(前ページ①)を ON にして撮影すると、下図のように輝度画像と TauContrast 画像の 2 つの画像が表示されます。
Start/Capture で画像取得できます。

Auto Scale ボタン
Histogram 表示・非表示切替
え
TauContrast 画像

輝度画像

Average Photon arrival time

Average Photon arrival time のスケール調整

Average photon arrival time の Histogram
カーソルがある Pixel のAverage Photon Arrival Time

＊上記 Average photon arrival time のスケールを調整した際、TauContrast 画像が 2 色以上になる場
合、自家蛍光、反射、蛍光色素/タンパク質など複数の蛍光寿命成分が膨れている可能性を示唆しています。

32

Confidential - Company ProprietaryIV-2. TauGating
パルスレーザーで励起されてから Photon が検出される時間を測定し、設定された時間範囲内に検出された Photon のみを用いて画像を作成します。
TauGating を選択した状態で(31 ページ参照)をクリックすると、下図が表示されます。1 つの検出器につき複数の Channel を設定することができ、１つの Channel につき 1 つの画像が取得表示されます。また 1 つの Channel につき最大 3 つの Gate○b を設定できます。複数の Gate を設定した場合、すべての Gate で取得した Photon の総和を輝度画像として表示します。
下図赤枠内横○a のライン 1 つが 1 つの Channel を示しており、その中のグレーで示されているのがGate○
b を示しています。Gate の位置と幅で Photon を取得する時間と時間幅を示しています。

○
d +/-ボタンで Channel 内の Gate 数を増やすことができます(最大 3 つ)。
Gate の時間範囲はマウス操作で移動、拡大・縮小することができます。またダブルクリックするとポップアップウインドウが表示され、時間を直接入力できます。
○
e 横軸は時間(ns)です。
Add Channel：Channel を追加します。
Remove Channel：選択されている Channel を削除します。
Start/Capture で画像取得できます

33

Confidential - Company ProprietaryIV-3. TauScan
スキャンすると下図のようにスキャン範囲中におおよそいくつの Lifetime Component があるのか表示します。これにより異なる蛍光寿命を持つものが含まれているかどうか分かります。
TauScan を選択した状態で(31 ページ参照)をクリックすると、下図が表示されます。スキャン行うと、下図のように Lifetime diversity curve○a が表示され、○c で指定した範囲を○b で指定した数の画像に分割します。取得画像から異なる蛍光寿命を持つものが含まれているか判断することができます。また異なる蛍光寿命を持つものが含まれている場合、必要に応じて TauSeparation で分離することができます(次ページ参照)。

○
a スキャンされた画像に含まれる Lifetime Component から Lifetime diversity curve が作成・表示されます。各ピークがそれぞれの Lifetime Component のピークを示しています。
○
b Lifetime diversity curve をいくつの画像に分割するか設定します。設定した数の画像取得が行われます。
○
c Lifetime diversity curve のどの範囲を分割するか設定します。時間範囲はマウス操作で移動、拡大・縮小することができます。またダブルクリックするとポップアップウインドウが表示され、時間を直接入力できます。
○
d 画像の分画幅を示しています。
Start/Capture で画像取得できます

34

Confidential - Company ProprietaryIV-4. TauSeparation
TauScan(35 ページ参照)などでスキャン画像中に蛍光寿命が異なるものが含まれているのが確認できた場合、Dye Separation 機能のように異なる蛍光寿命のものを分離して画像取得できます。
TauSeparation を選択した状態で(31 ページ参照)をクリックすると、下図が表示されます。スキャ

ンすると、下図のように Lifetime diversity curve○a が表示されます。TauContrast や TauScan、
Lifetime diversity curve○a の結果を参考に○
c の位置と数を決めると、その数に画像を分割表示します。

○
a スキャンされた画像に含まれる Lifetime Component から Lifetime diversity curve が作成・表示されます。各ピークがそれぞれの Lifetime Component のピークを示しています。
○
b 横のライン 1 つが 1 つの Channel を示しています。○
e で追加と削除できます。
○
c Lifetime diversity curve○a を分割する位置を示しています。時間位置はマウス操作で移動できます。
またダブルクリックするとポップアップウインドウが表示され、時間を直接入力できます。
＊時間位置のある特定の時間範囲を表示するわけではありません。設定された○
c の位置や数に応じて変化します。
○
d 画像の Pseudo color を表示します。ダブルクリックすると表示されるウインドウで変更できます。
○
e +/ –で Lifetime diversity curve○a を分割表示する Channel の数の追加と削除できます。
○
f “Find”ボタンをクリックすると、設定した○
c の数 Lifetime diversity curve○a に応じて○c の位置を自動設定します。
Start/Capture で画像取得できます

35

Confidential - Company Proprietary

TauContrast 画像で複数の色になっていても、Lifetime diversity curve 上では１つのピークしか表示されないことがあります。
この場合、TauContrast の Average photon arrival time のスケールの上下端を、画像の一部が青や青になるように調整します。この時の上下端の値を TauSeparation 上で設定します。
TauContrast 画像で 3 色以上の場合はさらにスケールの上下端を調整し、画像中の緑などの箇所が青または赤になるようにし、同様に TauSeparation 上で設定します。

蛍光寿命測定および分離時の注意点
下記の条件を満たすと蛍光寿命の分離がしやすくなります。
・蛍光寿命差が大きい
・取得する蛍光波長範囲において、輝度差が小さい
・蛍光寿命成分の局在が異なる
分離前の輝度画像が 8 Bit スケールでサチュレーションしていなくても、TauSeparation を行うとサチュレーションすることがあります。その場合は Bit スケールを 12 または 16 に変更してください(25 ページ参照)。

36

Confidential - Company Proprietary

V. Viewer
V-1. 取得した画像の Pseudo color や表示スケールを変更する方法
Z-Stack 撮影やタイムラ

画像の Pseudo color は右

プス撮影を行うと、

図、Viewer 画面左の白点

Viewer の右または下に線内をダブルクリックす表示される Z またはタると表示されるウインド

イムスケールバーを操

ウで色を選択すると、そ作することで断面を変の色に変更できます。

えられます。

表示スケールは右図の白点線部分の上端または下
端をドラッグすると変更できます。また上端または下端に表示されているウインドウに数値を直接入力することでも変更できます。

取得した画像の Format サイズ、データ容量などを表示します。
＊“ｍ”と“pixel”の表示切替ボタン

37

Confidential - Company ProprietaryV-2. 右クリックメニュー

ROI

Save：ファイルブラウザを開き、選択されている ROI を保存できます。XY 位置

Reference ROI

を含めて保存する場合は Reference ROI を、ROI の形のみ保存する場合は ROIを選択します。
Load：ファイルブラウザを開き、保存された ROI を呼び出せます。XY 位置を含めて呼び出す場合は Reference ROI を、ROI の形のみ呼び出す場合は ROI を選択します。Load ROI を選択した場合は ROI が画面中央に呼び出されます。

SnapshotSnapshot を撮りたい画像上で行うと、その画像の見えている状態でのSnapshot が作成されます。ROI、スケールバーなども含まれます。

Snapshot All

表示されているすべての Channel で、それらの画像の見えている状態でのSnapshot が作成されます。余白や ROI、スケールバーなども含まれます。

Properties

選択ツールを選んだ状態で、ROI やスケールバー上で右クリックすると表示されます。
General：サイズを数値指定できます
Color：色を変更できます
Font：フォントやサイズを変更できますV-3. Viewer ボタン機能(詳細は Advanced Manual 参照)
画像上に図形や注釈を挿入できます
ROI やスケールバーなどの選択ツール
選択した ROI などを削除します
クリックしたあと画像上で左クリック場所から話した場所までのスケールバーを作成
します(単位はm)。

38

Confidential - Company Proprietary

＊TIFF などに任意のスケールバーを入れた状態で出力する場合、上記“Annotation”
をクリックしてから作成してください。
選択ツールで選択後、右クリック“Properties”で表示される画面でサイズ、角度、色などを変更できます。

画像表示サイズ切替ボタン
最大画面表示(赤) Pixel 等倍表示(グレー)を切替えます
Quick Look-up table ボタンをクリックすると、画像の表示色を変更することができます。
Pseudo Color (デフォルト)→Grow Over/Under →Gray →Pseudo Color → ・・・

Pseudo color (デフォルト)

Grow Over/Under
青(サチュレーションまたは設定値以上の値)

緑(輝度値が 0 または設定値以下の値)

Gray Scale

選択した Channel のみの表示 ↔ すべての Channel 表示切替ボタン
画像のダブルクリックでも同様の切替ができます
重ね合わせ画像の表示/非表示切替ボタン
39

Confidential - Company Proprietary

Maximum projection
XYZ 画像の Z 軸方向において最も高い輝度を採用し、XY 平面に表示します。
Z-Stack 画像撮影時に表示されます。
＊このボタンで作製される画像は Preview 画像のため保存できません。
＊保存する方法は次ページ参照
Orthogonal Sectioning
XYZ 画像から、XY、XZ、YZ 断面画像を表示します。下図のように表示される十字線を動かすことで断面の位置を変えることができ
XY

ます。

YZ

＊このボタンで作製される画像は Preview 画像

XZのため保存できません。
＊保存するには右クリッ
クで表示される
Snapshot を使用してください。
3D Viewer(Optional)を開きます(Advance Manual 参照)。
各 Channel の右下に下図のような撮影情報ウインドウの表示非表示の切替えを行います。Setting 名、使用した検出器名、使用した色素名を表示します。また
TauMode によっては蛍光寿命の値や設定した Gate の時間などを表示します。
例：Setting の番号 I 検出器名 or gate or lifetime I 色素名 I Pseudo color＊Setting の番号表示は“Setting”部分をダブルクリックし、名前を入力すると、その名前で表示します。

40

Confidential - Company ProprietaryV-4. Maximum Projection 画像の作成方法

1. “Process”メニューを選択します。
2. “Open projects”から Maximum Projection を作成する画像を選択します。
3. ProcessTools 内の Edit/Projection を選択します。
4. 画面下にある“Apply”をクリックすると画像が作成されます。
作成された画像は Project 内に一時保存されます。

41

Confidential - Company Proprietary

VI. Quantify

ROI 中の値をグラフで表示する“Graph”と表で表示する“Statistics”があります。
グラフや表の上で右クリックすると表示される画面から画像や Excel を出力できます。
Line Profile：画像上に直線の ROI を作成し、その線上の値を表示します。
Stack Profile：ROI 中の平均値を表示します。ROI を作成しない場合は画像全体の平均値になります。Z-Stack やタイムラプス画像に使用します。
Histogram：ROI の輝度値のヒストグラムを作成します。
Select Channels and ROIs：Graph や Statistics で表示する ROI や
Channels を選択できます。
ROI/Frame：Graph や Statistics 上で設定した ROI の数値データの表
示非表示切替えができます。
Channel：多色画像を撮影した場合、Graph や Statistics 上で数値データを表示する Channel の切替えができます。
Sort charts by Channels and ROIs：計測したデータを Graph や Statistics 上でどのように表示するか選択できます。
Sort Channels：Channel ごとにグラフや表を分けて表示します。
Sort ROIs：ROI ごとにグラフや表を分けて表示します。
All in One：すべてを１つのグラフや表に表示します。
Report：数値データを別のソフトで解析することが出来るように ROI やグラフ、表、さらには画像取得時の設定も合わせて出力されます。

42

Confidential - Company Proprietary

VII. Data HandlingVII-1. Tool Bar
保存したデータを開いたものや撮影した画損の一時保存などすべての画像は“Open Projects”タブにDirectory 構造で表示されます。
1 “Work in Folders”：データの表示
○

1 ○
2 ○
3 ○
4 ○
5 ○
6 ○
7
○

方法を左図のように保存先が分かる
形で表示します。

2 新規 Project を作成します。
○
3 保存した lif ファイルを開きます。
○
4 現在開いているすべての Project を保存します。
○
5 選択した画像データを撮影したときの画像取得条件を呼び出します(14 ページ参照)。
○
6 専用ファイルブラウザが開き、XYZTファイルサイズ、保存場所などの条件で目的の画像を探すこ○とができます。
7 Project 内の画像をサムネイル表示します。
○

VII-2. Save data
保存したデータを開いたものや撮影した画損の一時保存などすべての画像は“Open Projects”タブにDirectory 構造で表示されます。Project データを保存する場合、表示されている状態の Directory 構造で指定された場所に保存されます。
＊ファイル形式は Leica オリジナルフォーマット lif です。
Project：撮影されたすべての画像を含むフォルダのようなもの。Project 名が lif ファイル名になります。
＊Directory 内のすべての画像ファイルが 1 つの Project に保存されます。
Image series：XY などの Capture で撮影したデータ(Image)、XYZT など Start で撮影したデータ(Image Series)Directory 構造上 Project 下になります。
Metadata：データ保存時に lif ファイルとともに作成され、LUT 設定や ROI などの情報が含まれています。
撮影されたすべての画像は Project 内に一時保存されます。
保存されていない Project や保存したデータにおいて輝度調整などの操作を行った Project にはマークが表示されます。必要に応じて保存してください。
右クリックして表示される Save as やをクリックするとファイルブラウザが開き保存先を指定す

るとデータを保存されます。

43

Confidential - Company Proprietary

VII-3. Export image
Export したい画像を選択し、右クリックで表示される画面(左図参照)で“Export image”を選択すると下図が表示されます。
＊XY(Z)T、XYZ など複数の画像を Auto Scale が ON になっている状態で出力すると、画像間の輝度値が異なります。
特に XY(Z)T など動画を出力する場合、画像のちらつきの原因となります
ので、Auto Scale を OFF にしてから出力するのをお勧めします (19 ページ参照)。
① Image：画像として Export、Movie 動画として Export①②Destination Folder：データの保存先を指定します。
③Store in separate folders：複数の画像データを選択し③ている場合にのみ表示され、ON にすると画像毎に保存②

先のフォルダを自動的に分けます。

④⑤

Image：TIFF、ImageJ TIFF、JPEG、ASCII (画像の輝度⑥値の出力)、BMP、PNG
Movie：Avi、QuickTime、MPEG-4、WMV

⑦
⑧
⑨
⑪
⑫

④Select the export format：保存形式の選択⑤Lossless compression/Quality：可逆圧縮(画質が低下しない方法)で行うかの選択
TIFF：可逆圧縮(画質が低下しない方法)で行うかの選択⑩

JPEG/Quicktime：圧縮率を設定できます⑥Export LUT： color look-up table(LUT)を指定した保存先の Metadata フォルダへ出力します。
⑦Select Channels：多色撮影を行った場合、出力する
Channel を選択します。赤：出力する、グレー出力しない。
⑧Export Channels：ON になっていると、上記“Select⑬

Channels”で選択した Channel の単色画像を出力します。

Raw image：LUT で調整した(Viewer で表示されている)明るさではなく、フルスケール(8 Bit の場合
0-255 の範囲)で出力します(TIFF/ImageJ TIFF の場合選択可)。
Scaled Viewer Image：LUT で調整した(Viewer で表示されている)明るさで出力します(TIFF/ImageJ
TIFF の場合選択可)。

44

Confidential - Company Proprietary

⑨Export Overlay as scaled Viewer Image：多色画像の場合、上記“Select Channels”で選択した
Channel の重ね合わせ画像を作成するか選択します。
⑩Save Multipage：XYZ や XY(Z)T などの画像を TIFF に出力する場合、マルチページ TIFF で出力するか選択します。例えば XYZ 画像の場合、OFF になっていると、各 Channel の XY 画像が Z 撮影枚数分出力されます。ON になっていると Z 情報が 1 つのファイルにまとめられるため、各 Channel の XY
画像が Channel 数だけ出力されます。ファイルブラウザのページ送り機能などで見ることができます。
⑪Reduce Tilescan Size：ファイルサイズが大きくなりやすい TileScan 画像の場合、圧縮率(%)を指定することでファイルサイズを小さくすることができます。
⑫Burn in to scaled Viewer Image：チェックボックスを ON にした情報を入れた状態で画像出力時を行います。チェックボックスを ON にすると右側にが表示されます。これをクリックすると表示されるウインドウで詳細設定ができます。
＊任意の位置やサイズのスケールバーを挿入する場合は 38、39 ページを参照。
⑬Save：指定した上記条件で出力を行います。

VII-4. Projects でのデータの取扱い
保存したデータを開いたものや撮影した画損の一時保存などすべての画像は“Open Projects”タブにDirectory 構造で表示されます。
Close Project：選択している Project を閉じます。
Save Project：選択している Project を保存します。
Save All：表示されているすべての Project を保存します。
Save as 選択している Project を別名で保存します。
Delete：選択されている Project を完全削除します。ゴミ箱にもありません。
＊非表示ではありません。
Rename：選択している Project や画像ファイルの名前を変えます。
Cut：選択している画像を Cut します。
Copy：選択している画像を Copy します。
Paste：Cut または Copy した画像を Paste します。
Export：選択している画像を Export します(前ページ参照)。
Properties：画像撮影時の設定を表示します(14 ページ参照)
Open in new viewer：選択した画像を新規ウインドウで表示します。
Open file location：ファイルブラウザが開き、選択した画像の保存先を表示します。
Apply image settings：選択した画像の画像取得時の設定を適用します(14 ページ参照)。
Close All：すべての Project を閉じます。

45

Confidential - Company Proprietary

VII-5. Free viewer software LAS X Small (Win10)
LAS X Small では画像表示、画像の Export、スケールバーの挿入、輝度測定などライセンスが必要な機能以外の操作が可能です。
“Leica LAS X Core”と検索し、出てくるライカのページ内の”Download free LAS X Core Offline
version for Life Science”からダウンロードできます。

＊ImageJ、FIJI や Imaris でも lif ファイルを開くことができます。
＊ImageJ の場合、plug-in “Bio-Format”が必要です。

VIII. Online Helpをクリックすると下図のようにブラウザが開き、該当項目の Online Help が表示されます。

46

Confidential - Company Proprietary

IX. Shut down
1. レーザーを OFF にしますConfiguration メニューを開き、Laser Config を選択します。

ON になっているすべてのレーザーを OFF にします。
＊WLL の出力%は変更せずに OFF にします

WLL の％は変更しない

2. LAS X を閉じます3. 目視観察用水銀光源の電源を切る＊水銀光源の場合、目視観察にしか使用しないので、使用しなくなったときに切ります。
＊水銀光源の電源を落とした後、再度電源を入れる場合は水銀光源が冷えるまで 15-20 分時間を置く。
＊LED 光源の場合、電源が自動で切れるのでスキップ

5. キースイッチを反時計回りに 90 度回す
ON OFF
6. レーザーの電源を切る

76

7. 主電源を切る

547

Confidential - Company Proprietary液浸レンズのクリーニング方法
使用後は必ずすぐにクリーニングしてください
キムワイプは使わないでください
オイルレンズの場合
1. クリーニングペーパーや綿棒でオイルを取り除きます
2. 100% Ethanol などのクリーニング液をクリーニングペーパーや綿棒にとり、残っているオイルを取り除きます
3. オイルが完全に取り除けるまで新しいクリーニングペーパーや綿棒を使用して 2 を繰り返します。
水浸レンズの場合
1. クリーニングペーパーや綿棒で水を取り除きます
2. 100% Ethanol などのクリーニング液をクリーニングペーパーや綿棒にとり、残っている水を取り除きます
3. 水が完全に取り除けるまで新しいクリーニングペーパーや綿棒を使用して 2 を繰り返します。
グリセリン浸レンズの場合
1. クリーニングペーパーや綿棒でグリセリンを取り除きます
2. 100% Ethanol や水などのクリーニング液をクリーニングペーパーや綿棒にとり、残っているグリセ
リンを取り除きます
3. グリセリンが完全に取り除けるまで新しいクリーニングペーパーや綿棒を使用して 2 を繰り返します。
チラーの冷却水の水位についてチラーの“LOW FLUID INDICATOR”ランプが ON になっている場合、下記溶液を足してください

48

Confidential - Company Proprietary

X. 倒立顕微鏡 DMi8 の使用方法
X-1. XYZ 方向の操作

Z 方向(対物レボルバー)
内側：微動

外側：粗動

Smart Move

Z 方向(対物レボルバー)(Optional)

時計回り：上昇反時計回り：下降

XY 移動(電動ステージの場合)

微動・粗動切替ボタン

顕微鏡；上側：Y 方向、下側：X 方向

左側：XY 移動

PC 画面上上側：X 方向、下側：Y 方向

右側：Z 方向

手前側：粗動、奥側：微動

49

Confidential - Company ProprietaryX-２.対物レンズ切替①

をタッチすると左図に切り替わります。

使用できるすべての対物レンズが表示されます。液浸レンズはのように数字の左にドロップマークが表示されます。現在選択されている対物レンズは赤く表示されます。
②任意の対物レンズをタッチすると自動的に切り替わります。異なる液浸レンズを指定すると選択した対物レンズが点滅し、再度タッチすると自動的に切り替わります。

X-3. 透過光観察方法①

をタッチすると左図に切り替わります。

②BF(Bright Field)をタッチします。
③“TL-Shutter”をタッチすると透過光のシャッターの開閉を制御できます。
＊シャッターの制御は顕微鏡の左側面からでもできます(下図参照)。
④透過光の光量は顕微鏡の左側面のノブ(下図参照)または FIM(次ページ参照)で行います。

光量の調整

シャッターの制御

TL (Transmitted Light)と FLUO (Fluorescence)でTL (Transmitted Light) と FLUO (Fluorescence)

共通

で共通

50

Confidential - Company Proprietary光量の調整はタッチパネル上でもできます。
をタッチすると左図に切替ります。
赤点線内の FIM から確認・調整できます。
＊光量は 10、17、30、55、100%の 5 段階です

X-4. 蛍光観察方法(目視観察用)①

をタッチすると左図に切り替わります。

②“FLUO”をタッチします③使用できるすべてのフィルターが表示されます④“IL-Shutter” をタッチすると LED または水銀光源のシャッターの開閉を制御できます。

⑤LED または水銀光源の光量調整は透過光と同じく、顕微鏡の左側面のノブ(前ページ参照)または
FIM(上記参照)で行います。
Specification
Filter Name

Fluorescence

Ex. Range

Ex. Filter

Dichroic

Em. Filter

DAPI

DAPI

UV

BP 350/50

400

BP 460/50

FITC

FITC

Blue

BP 480/40

505

BP 527/30

FITC LP

FITC

Blue

BP 470/40

510

LP 515RHOD

RhodamineGreenBP 515-560

580

LP 590*BP: Band-Path, LP: Long-Path

51

Confidential - Company Proprietary52

Confidential - Company Proprietary