茨城県自然博物館研究報告
アオゾメキイロキツネガサ
Bull. Ibaraki Nat. Mus.,
Leucoagaricus（18）: 33-38（2015）
viridiflavus の日本における新産地

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アオゾメキイロキツネガサ Leucoagaricus viridiflavus の日本における新産地
糟谷大河＊ , ＊＊・三上愛＊＊＊ , ＊＊＊＊・保坂健太郎＊＊ , ＊＊＊＊＊（2015 年 6 月 11 日受理）

A New Locality of Leucoagaricus viridiflavus in JapanTaiga Kasuya ＊ , ＊＊ , Megu Mikami ＊＊＊ , ＊＊＊＊ and Kentaro Hosaka ＊＊ , ＊＊＊＊＊（Accepted June 11, 2015）

Abstract
Leucoagaricus viridiflavus, an agaric fungus newly recorded in Ibaraki Prefecture, was collected fromthe ground in the coastal pine forest of Hasaki, Kamisu-shi. This is the second report of L. viridiflavus inJapan. This paper contains a description of the fungus and the illustrations of its morphological characteristics.
By maximum parsimony analyses of the nuclear rDNA ITS region and LSU, L. viridiflavus samples collectedfrom Japan（Ibaraki and Hyogo）and India were placed within the same well-supported clade.
Key words: Ibaraki Prefecture, Leucoagaricus viridiflavus, molecular phylogeny, new locality, taxonomy.

はじめにされた（名部ほか，2014）．
2014 年 7 月，筆者らは茨城県神栖市の海岸砂地の担子菌門ハラタケ科シロカラカサタケ属の一種，クロマツ林内において，アオゾメキイロキツネガサのLeucoagaricus viridiflavus（Petch）T.K. Kumar & Manim.

子実体を発見した．本種は茨城県新産種であり，茨城はスリランカで新種記載され（Petch，1917），インド

県は日本における本種の新産地となる．そこで，筆者

で 再 発 見 さ れ た（Kumar and Manimohan，2009）． 日らは今回得られた標本に基づく形態的特徴の記載と図本では兵庫県南あわじ市の海岸のクロマツ林内の砂地を添えてここに報告する．なお，筆者らは今回得られで発見され，アオゾメキイロキツネガサの和名が命名た標本を用いて分子系統解析を試みたので，その系統* 千葉科学大学危機管理学部環境危機管理学科 〒 288-0025 千葉県銚子市潮見町 3（Department of Environmental Riskand Crisis Management, Faculty of Risk and Crisis Management, Chiba Institute of Science, 3 Shiomi-cho, Choshi, Chiba 2880025, Japan）．
** 茨城県自然博物館総合調査調査員．
*** 千葉科学大学危機管理学部動物・環境システム学科 〒 288-0025 千葉県銚子市潮見町 3（Department of Animal andEnvironmental System Science, Faculty of Risk and Crisis Management, Chiba Institute of Science, 3 Shiomi-cho, Choshi, Chiba,288-0025, Japan）．
**** 現所属 : 佐倉草ぶえの丘 〒 285-0003 千葉県佐倉市飯野 820（Sakura Kusabue-no-Oka, 820 Iino, Sakura, Chiba 2850003, Japan）．
*****国立科学博物館植物研究部 〒 305-0005 茨城県つくば市天久保 4-1-1（National Museum of Nature and Science, 4-1-1Amakubo, Tsukuba, Ibaraki 305-0005, Japan）．

糟谷大河・三上34的位置についても考察する．

愛・保坂健太郎

DNA を吸着させ，エタノール / バッファー溶液で洗浄した．抽出した DNA は 100μl の TE バッファー中材料および方法
1．標本作製で保存した．
以上により得られた DNA を鋳型とし，PCR により
核 rDNA 遺伝子の転写領域内部スペーサー（ITS）領

野外で採集した子実体は写真撮影した後，肉眼的特域および核 rDNA 遺伝子の大サブユニット（LSU）を徴を記録した．その後，食品用乾燥機（Snackmaster増幅した．ITS 領域の増幅には ITS5 と ITS4（White etExpress FD-60，Nesco/American Harvest，WI，USA）

al.，1990）の，LSU の増幅には LR0R と LR5（Vilgalysを用いて子実体を 46℃で 36 時間熱乾燥させ，乾燥標and Hester，1990）のプライマーセットをそれぞれ用い本を作製した．乾燥標本に加えて，糟谷ほか（2013），た．PCR は，反応液を 20μl［1μl の精製 DNA，1μl

Kasuya et al.（2014），名部ほか（2014）の方法に従い，の dNTP（4 mM），1μl の各プライマー（8μM），0.5

新鮮な子実体から剃刀の刃を用いてひだの一部を切りunits の Taq ポ リ メ ラ ー ゼ（ タ カ ラ バ イ オ， 大 津 ），取り，100 mM Tris-HCl（pH 8.0）および 0.1 M 亜硫酸

2μl の MgCl2（25 mM），2μl の Bovine Serum Albumin

ナトリウム（Na2SO3）を添加した DMSO バッファー（BSA）］とし，以下の温度プログラムにより行った :（Seutin et al.，1991）中に浸漬し，4℃で保存した．な

前処理，94℃ 3 分を 1 サイクル ; 熱変性，94℃ 35 秒，

お，標本はミュージアムパーク茨城県自然博物館の標

アニーリング，51℃ 30 秒，伸長，72℃ 1 分を 30 サイ本庫（INM）に保管した．

クル ; 後処理，72℃ 10 分を 1 サイクル．

標本 : INM-2-87722，茨城県神栖市波崎，童子女のPCR 産物は 1％アガロースゲルで電気泳動した後，松原公園内，海岸のクロマツ林内砂地上に散生，2014

エチジウムブロマイドにより染色させ，紫外線照射に

年 7 月 9 日，三上より可視化させた．これにより遺伝子の増幅が確認さ愛採集．

れた場合，PCR 産物を illustra ExoStar（GE Healthcare，2．子実体の形態観察UK）を用いて精製し，Big Dye Terminator v3.1 Cycle

子実体の肉眼的特徴を把握するため，新鮮な生の子Sequencing Kit（Applied Biosystems Inc.，Norwalk，実体に基づき観察した．光学顕微鏡観察には，子実体CT，USA）により定法に従ってダイレクトシークエのひだの切片を作成し，それらを水，3％（w/v）KOHンスを行い，塩基配列を決定した．以上により得られ水溶液およびフロキシン B 水溶液を用いて観察した．

た茨城県産アオゾメキイロキツネガサ（INM-2-87722）

担子胞子の大きさは光学顕微鏡の 1,000 倍の倍率下での塩基配列を NCBI GenBank（http://www.ncbi.nlm.nih.

無作為に抽出した 40 個を用いて測定し，アミロイドgov/genbank/）に登録した（ITS 領域 : KR259170; LSU:反応の観察にはメルツァー試薬を用いた．

KR259171）．

3．DNA 抽出，PCR およびシークエンシング

4．系統解析

2014 年 7 月 9 日に採集した子実体からの DNA 抽本研究により新たに得られた塩基配列は ATGC Ver.

出は，DMSO バッファー中に浸漬した試料を用いて6（GENETYX，東京）でアセンブルした．その後，行った．DNA 抽出は，グラスミルクを用いた改変

ITS 領域と LSU についてそれぞれ，GenBank 上に公CTAB 抽 出 法（Hosaka，2009; Hosaka and Castellano，

開されているインドおよび日本（兵庫県）産アオゾメ

2008; Kasuya et al.，2012; 糟谷ほか，2013）によった．

キイロキツネガサを含むハラタケ型きのこ類の塩基配すなわち，試料を乳鉢に入れた後，液体窒素を加えな列を加えて，データセットを作成した．データセット

がら乳棒を用いて攪拌し，CTAB バッファーを加えた．のアライメントは Muscle v.3.6（Edgar，2004a; 2004b）

その後，65℃で 1 時間加温し，たんぱく質を除去するにより行い，さらに BioEdit ver. 7.0.1（Hall，1999）をため，クロロホルムとイソアミルアルコールの 24 : 1用いてその結果を目視で確認し，必要に応じて補正をの混合液を加えた．試料にはさらに，6 M ヨウ化ナト行った．その後，PAUP＊ ver. 4.0b10（Swofford，2002）

リウムバッファー（Hosaka and Castellano，2008）をを用いて最節約法により系統解析を行った．最節約

加えて DNA を抽出した後，グラスミルクを添加して系統樹の探索には MULTREES オプションを用いて発アオゾメキイロキツネガサ Leucoagaricus viridiflavus の日本における新産地見的探索法を，また，初期系統樹の作製には random

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Manim., Mycotaxon, 108: 399, 2009.

addition オプションを用いて 1,000 回反復を行った．

≡Lepiota viridiflava Petch, Ann. Roy. Bot. Gdns.

すべてのキャラクターは unordered および equal weight

Peradeniya, 6: 195, 1917, type from Sri Lanka, Peradeniya.とし，枝の位置交換を tree-bisection-reconnection（TBR）

和名 : アオゾメキイロキツネガサ（名部ほか，2014）に設定した．また，総体一致指数（consistency index

肉眼的特徴（図 1A-B）: かさは丸山形から中高の平＝CI），保持指数（retention index＝RI），修正一致指らに開き，ときに明瞭な中丘を備え，径 7-30 mm，幼数（rescale consistency index＝RC）についても求めた．

時は淡帯緑黄色ないし鮮黄色で成熟するにつれて灰褐

さらに，最節約法により得られた系統樹の各枝の支持色，中央部は濃色となり，表面ははじめ全体がほぼ平率には，ブートストラップ解析を 10,000 回反復して滑，のち周辺部から灰褐色のささくれを生じ，縁部は行った．なお，ITS 領域と LSU ともに，外群にはアしばしば細かく裂けてフリル状となり，条線を欠く．

オゾメキイロキツネガサと同様にハラタケ科に属する

湿時，かさを触ると青緑色に変色する．ひだは離生し，Lepiota flammeotincta Kauffman を用いた．

やや密，小ひだを有し，淡帯緑黄色ないし鮮黄色，青緑変性を有するが，乾燥した子実体では変色は顕著で結果および考察
Leucoagaricus viridiflavus（Petch）T.K. Kumar &はない．肉は薄く，淡黄色で青緑変性があり，特別な味やにおいを欠く．柄はかさと同色で繊維状の縦線を有し，12-30 × 1-2 mm，青緑変性があり，上部にかさ

図 1．アオゾメキイロキツネガサの子実体（INM-2-87722）の形態的特徴．A: かさ表面．B: ひだと柄．C: 担子胞子．D:縁シスチジア．
Fig. 1. Morphological characteristics of baisidiomata of Leucoagaricus viridiflavus（INM-2-87722）. A: Pileal surface. B:Lamellae and stipes. C: Basidiospores. D: Cheilocystidia.

糟谷大河・三上36とほぼ同色で膜質，剥落しやすいつばを有する．

愛・保坂健太郎による解析では，249 ステップからなる 2 個の系統樹

顕微鏡的特徴（図 1C-D）: 担子胞子は卵形，ときにが 得 ら れ た（CI＝0.8193，RI＝0.9043，RC＝0.7408）．

側面がくぼみ，6.5-9 × 4-5.5μm，無色，表面は平滑，

この解析の結果，日本（茨城県および兵庫県）とイン

胞子膜は厚く層状，発芽孔は不明瞭，偽アミロイド．

ド産のアオゾメキイロキツネガサは同一のクレードを

担子器はこん棒形，15-25 × 6-9μm，4 胞子性，クラ形成し，単系統群をなすことが明らかとなった（図 2）．

ンプを欠き，しばしば帯緑色の粒状内容物を有する．

また，このクレードの単系統性は最節約法のブートス

縁シスチジアは嚢状ないしは円柱形，紡錘形，フラストラップ値で強く支持された（図 2）．

コ形，便腹形など多様な形状で，ときに頂部が伸長し，さらに，同様に茨城県産アオゾメキイロキツネガサ

15-59 × 6-15μm，薄膜，しばしば内部に帯緑色の粒を含むハラタケ型きのこ菌類の LSU の塩基配列を用状色素を有する．側シスチジアを欠く．

いて，最節約法による解析を行った結果，928 サイト

標本の肉眼的および顕微鏡的特徴は，Petch（1917），から構成される LSU の部分配列のうち 73 サイトに変Kumar and Manimohan（2009）および名部ほか（2014）

異があり，それらは最節約法による系統解析を行う上による L. viridiflavus の記載とよく一致し，筆者らは得で有用な情報であった．PAUP＊ ver. 4.0b10 を用いたられた標本をアオゾメキイロキツネガサと同定した．

最節約法による解析では，161 ステップからなる 1 個

本報告は日本における本種の 2 例目の記録であり，茨の系統樹が得られた（CI＝0.5155，RI＝0.5593，RC＝城県では初めての記録である．日本において，本種の0.2883）．この解析の結果，日本（茨城県および兵庫県）発生環境（兵庫県南あわじ市，茨城県神栖市）はいず産のアオゾメキイロキツネガサは同一のクレードを形れも海岸のクロマツ林内の砂地上であり，本種は国内成し，単系統群をなした（図 3）．また，このクレーの同様の環境に広く分布している可能性がある．

ドの単系統性は最節約法のブートストラップ値で強く茨城県産アオゾメキイロキツネガサを含むハラタケ支持された（図 3）．

型きのこ類の ITS 領域の塩基配列を用いて，最節約法茨城県産標本の ITS 領域と LSU を用いたこれらのによる系統解析を行った結果，783 サイトから構成さ解析結果（図 2-3）により，名部ほか（2014）によるれる ITS 領域の部分配列のうち 153 サイトに変異があ系統解析の結果が支持され，日本とインドのアオゾメり，それらは最節約法による系統解析を行う上で有用

キイロキツネガサは単系統群であり，遺伝的な分化が＊な情報であった．PAUP ver. 4.0b10 を用いた最節約法進んでいないことが裏付けられた．また，形態的に，

図 2．アオゾメキイロキツネガサの核 rDNA ITS 領域に基づく最節約法による系統樹．各枝上の数値は最節約法のブートストラップ値を示す．
Fig. 2. One of two parsimonious trees of Leucoagaricus viridiflavus derived by the maximum parsimony analysis of the nuclear rDNA
ITS region. The numbers along the branches are the nodal supports（parsimony bootstrap values）.

アオゾメキイロキツネガサ Leucoagaricus viridiflavus の日本における新産地

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図 3．アオゾメキイロキツネガサの核 rDNA の LSU に基づく最節約法による系統樹．各枝上の数値は最節約法のブートストラップ値を示す．
Fig. 3. A parsimonious tree of Leucoagaricus viridiflavus derived by the maximum parsimony analysis of the nuclear rDNA largesubunit. The numbers along the branches are the nodal supports（parsimony bootstrap values）.

日本産標本と本種の原記載（Petch，1917）およびインド産標本の記載（Kumar and Manimohan，2009）の特徴はよく一致し，系統的にも日本とインド産標本の単系統性が強く支持された．これらのことから，アオゾメキイロキツネガサはアジアに広く分布する種であると考えられる．

謝辞

兵庫県神戸市在住の名部みち代氏には，本菌の同定に際して貴重なご助言をいただいた．国立科学博物館
植物研究部の南京沃氏には，分子生物学実験に際し，ご指導いただいた．さらに，ミュージアムパーク
茨城県自然博物館の鵜沢美穂子氏，宮本卓也氏および今村 敬氏には，供試標本の保管に際してご協力いただいたほか，本稿をまとめるにあたり有益なご助言をいただいた．以上の方々に厚く御礼申し上げる．

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旨）糟谷大河・三上愛・保坂健太郎．アオゾメキイロキツネガサ Leucoagaricus viridiflavus の日本における新産地．茨城県自然博物館研究報告第 18 号（2015）pp. 33-38．

茨城県神栖市波崎の海岸のクロマツ林内砂地上において，茨城県新産種となるアオゾメキイ
ロキツネガサ Leucoagaricus viridiflavus が採集された．これは日本における 2 例目の記録である．
本論文では茨城県産標本の記載と図を添えて報告した．核 rDNA 遺伝子の ITS 領域および LSUの塩基配列に基づき，最節約法による分子系統解析を行った結果，日本（茨城県および兵庫県）とインド産のアオゾメキイロキツネガサの標本は同一クレードを形成した．
（キーワード）: 茨城県，アオゾメキイロキツネガサ，分子系統解析，新産地，分類学．