ISSN 1347-4804

April 2005
Vol.73 No.2

〔総説〕

｢スーパーオキシドアニオン検出用発光プローブ
Green Chemiluminescent CD の開発｣
寺西克倫 ……… 2｢ビス（p-ニトロフェニル）
リン酸アジド（p-NO2DPPA）｣
塩入孝之 ……… 6〈テクニカルレポート〉「アルデヒド類捕集及び誘導体化用カートリッジのブランク値測定
方法について（2）ガラス器具の影響」
久保田守 ………10〈Talking of LAL〉
「第59話 SLP試薬の応用（その2）」 土谷正和 ………14〈生薬のはなし〉｢シコンと紫雲膏｣

守安正恭 ………12〔化学大家〕「エミール･フィッシャー」

島尾永康 ………23〔製品紹介〕
有機合成
p-NO2DPPA
Fluorous社 フルオラス化学関連試薬
三次元パラジウム錯体

9
17
18

環境・分析
プレセップR-C DNPHシリーズ
11
生薬試験用標準品
13
NMR溶媒
16
イオンクロマトグラフ用標準液
18
悪臭物質測定用 アンモニア標準液Ⅱ
19
日本薬局方適合 生薬有効成分（標品） 19
マイコトキシン試験用 パツリン
20

生化学
グリーンケミルミネッセント CD
Dojindo Molecular Technologies社
ラベリングキット

21

細胞生物
アゾキシメタン
リポポリサッカリド

20
20

5

遺伝子
RNAスタビライザーを用いて精製した
Total RNAのRT-PCR増幅例
アポトーシス in situ 検出キット ワコー

22
28

その他
医薬品原薬 Add-Spec Series

15〔お知らせ〕｢遺伝子工学用試薬カタログ・マニュアル｣発行のご案内……22
1

R

esearchスーパーオキシドアニオン検出用発光プローブ
Green Chemiluminescent CD の開発
三重大学生物資源学部

m

OH

R1

1 はじめにOH

地球の誕生から現在の歴史におけ

O

O
OH

HO

O
OH

HN

HOOC

OH
HN

O
N

る酸素の蓄積は、30億年以前の水の太陽光紫外線の光分解による酸素の

NH
OH

N
H

H3CO

1: m = 0 - 6, R 1 = Fluoresceinyl-5-thioureido group, R 2 = OHm = 0, R 1 = OH, R2 = Fluoresceinyl-5-thioureido group

生成、および、その後の光合成生物である藍 藻 類による酸 素の急 激な生

O

S

O

N

O

O

γ-CD
g-CD

OH

NH
O

成が基盤となり、現在の酸素濃度が

HN

多様化し酸素を電子受容体とする酸
酸素 3O 2は三重項基底状態であり反応 性は低く、 生 物は酵 素 等によって

NH

H3CO

S
Fluoresceinyl-5-thioureido
group

素の利用能力を獲得してきた。

素には、スーパーオキシドアニオン（O2−）、

NH

図1．

ピラジノン環を有 する化 合 物（ 各 々−2

スーパーオキシドアニオン（O ）2の発光法による測定

過酸化水素（H 2O 2 ）、ヒドロキシラジカ

Renilla Luciferin 5）、 Oplophorus
Luciferin 6 ）と命名されている）であり、さらに、この基質は発光クラゲが持つル（・OH ）、一重項酸素（ 1 O 2 ）などが発 光による分 析は、１）サンプルをあり、これらは活性酸素と呼ばれ、生破 壊しない、２）ラジオアイソトープに質前駆体coelenterazineでもある。

体において能動的には酵素反応、受匹敵、あるいはそれ以上の高感度でこれらのイミダゾピラジノン系化合物は、

動的には自動酸化反応、光による反ある、３）
ラジオアイソトープのように有酵素あるいは発光タンパク質が存在し発光タンパク質aequorin 7,8 ）の発光基

応など様々な化学反応によりつくり出さ害でない、４）測定装置は安価である、ない水溶液中でも酸化反応により発光れている。活性酸素は、生物の特定

５）吸光度法、蛍光法のように光源を（ 化学発光 ）をするが、その強度は著器官や細胞器官において能動的に生必要としない、などの利点を兼ね備えしく低い。これは、酸素との反応が遅産され生体防御などの生体制御に使ている。スーパーオキシドアニオンのく、さらに 酸 化 反 応によって 生 成し

われるが、 生 体自身への攻 撃による発光法による測定では、ルミノールやた 励 起 体 の 蛍 光 収 率 および 一 重 項

酸素障害も引き起こされる。このため、ルシゲニンなどの発光プローブが用い

励 起 収 率がさらに低いためである。

生体は、生体制御および酸素障害とられてきたが、1980年代において後後 藤らは、 Cypridina luciferin、

いう活性酸素の機能を調節するため

藤らによりイミダゾピラジノン系化合物

coelenterazineの構造改変を行ない

2）

3）に活 性 酸 素 濃 度を制 御している。このCLA およびMCLA が報告され、化 学 発 光 効 率を高めることに成 功し、のような活性酸素の機能を理解するた

現在これらの発光プローブを用いた測スーパーオキシドアニオンとの反応におめには、活性酸素の測定が必要となり、定が多く報告されている。

いても三重項酸素と同様の化学発光測定には活性酸素の種類に適した方法、
例えば吸光度法、ESR法、発光法な

これらのイミダゾピラジノン系化合物は、が生じることを見出したのである。

ウミホタルや発光クラゲなどの発光効率が高い生物の発光現象（生物発光）

どが用いられている。

3

シクロデキストリン結合型
イミダゾピラジノン化合物

著者は、活性酸素を発光法で測定をもとに開発されたものである。ウミホするための発光剤（ 発光プローブ）のタルは、発光基質 Cypridina luciferin、

開発を手掛けており、その中でスーパー

酵素 Cypridina luciferaseおよび三後藤らが開発したMCLAの水溶液

オキシドアニオン検出用発光プローブ

重 項 酸 素との化 学 反 応により酸 化 反中での発 光 効 率をさらに高める研 究Green Chemiluminescent CD応が生じ、励起分子種が生成しこのが行なわれた9-16）。その中で、著者は分子が基底状態に緩和する際に発光グルコースのα- 1 , 4 結 合からなる環 状

1）（図1. 化合物1）を開発した 。本総説
では、 Green Chemiluminescent CD

2

N

1

活 性の高い酸 素に変 換し、それを利用して進 化してきた。 活 性の高い酸

O
N

HOOC

作り上げられてきた。その間に生物は

克倫

O

O
HO

寺西

6-m

OH
O

O
HO

R2

O

O

生物圏生命科学科

4）が生じる 。ウミホタルと同様にluciferin-

糖シクロデキストリンにMCLAを共有

および 他の発 光プローブの開 発につluciferase反 応で発 光 する発 光ウミシ

結合させることにより、三重項酸素おて記載したい。

イタケやヒオドシエビの 発 光 基 質 はよびスーパーオキシドアニオンに対する

Cypridina Luciferinと同じイミダゾ

化学発光効率の向上に成功した。

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

試みた1）。
OO

Cyclodextrin
α-, β-, γ-,δ-CD
NH
O

H3CO

N

にMCLAを、さらに1級水酸基面ある

N
H

いは2級水酸基面に緑色蛍光分子でα-, β-, γ-,δ-CDO
N

γ-シクロデキストリンの2級水酸基面
NH

N

H3CO

あるフルオレセインを共有結合させ（ 次

N

MCLA

頁 図３. 化合物1,2）、MCLAの酸化N
H反応から生ずるエネルギーをフルオレ
セインにエネルギー 移 動させる方 法

図2.

（Chemiluminescence Resonance

量的に実用できるシクロデキストリンのような機構で発光効率に影響していEnergy Transfer: CRET）
を採用しには、グルコース数が6（α-CDと呼ぶ）、るのであろうか。これに対する答えは、た。これらの化学合成した化合物の7（β-CD ）、8個（γ-CD ）のものがある。

発光スペクトル、誘起円二色スペクト

水溶液中（ 1×10−6 mol/L ）でのキサン

シクロデキストリンの分 子 形 状は底のルから推測できた。いずれのシクロデ

チン-キサンチンオキシダーゼ系スーパー

抜けたバケツ状であり、 分 子 内 部にキストリン結 合 型 M C L A 分 子では、オキシドアニオンに対する化学発光のは疎水的な空洞が存在し分子外部はMCLA部分は疎水的な性質でないた

発光効率を調べた。その結果、1級

親水的となっている。グルコース数がめ酸素との反応時はシクロデキストリン

水酸基面にフルオレセインを結合させ多くなると分子内部の空洞は大きくなり、の 空 洞より離れて存 在 する。 酸 素とたGreen Chemiluminescent CD（1）

空 洞の大きさに適した分 子 形 状の疎反応しペルオキシド分子およびそれがは、 2 級 水 酸 基 面にフルオレセインを

水的分子をゲスト分子として取り込む（包

分裂して形成される励起アミド分子は結 合させた化 合 物 2よりも約 8 倍 発 光接という）ことができる。

疎水的性質を持つためシクロデキスト

効率が高く、後藤らにより開発された

著者は、各種シクロデキストリンのリン空洞に近づき包接される。この包緑色発光を示すFCLA 21）よりも約26倍

空洞口の広い2級水酸基面に位置す

接は、ゲスト部分の大きさとシクロデキ

発光効率が高いことが見出された（ 次る2位水酸基の簡便な選択的スルホニ

ストリンの空洞径がフィットするγ-シクロ

頁 図４）。Green Chemiluminescent

ル化を見出し17-19）、この化学反応を用

デキストリンの2 級 水 酸 基 側が良 好とCD（ 1 ）の発 光は、 発 光 極 大 波 長がいることにより2 級 水 酸 基 面に発 光 分なる。MCLAの化学発光においては、

約520nmであり、γ-シクロデキストリン

子となるMCLAを結合させることに成その発光場が疎水的である方が一重を介しても良好にCRETが生ずること功した（ 図２）。また、空洞口の狭い1項励起効率が高まることが示されておが見出された。

20）

級水酸基面にもMCLAを結合させ、シ

り 、シクロデキストリン空洞への包接Green Chemiluminescent CD（1）クロデキストリンの種類（α-, β-, γ-, δ-は、一重項励起効率の向上に寄与しは、1×10−6mol/L付近の濃度において、CD ）、空洞口の種類（ 1級水酸基面、たものと考えられる。なお、MCLAの

これまで多用されてきたMCLAの約42級水酸基面 ）およびシクロデキストリ

化学発光においては、その発光場の倍の発光効率を示し緑色発光でスーンとMCLAを結合させる鎖の鎖長など

疎水性は励起体の蛍光効率にあまりパーオキシドアニオンを検出できる。測の分子構造と水溶液中での酸素に対影響を及ぼさない20）。

定の操作はMCLAの場合と同じであり、する発光の発光効率との相関を検討

簡単にGreen Chemiluminescent CDした。その結果、γ-シクロデキストリンの 2 級 水 酸 基 面 に 結 合した 場 合 にMCLAの40倍以上の発光効率の向4Green Chemiluminescent CDを使用することができる。

の開発

5

Green Chemiluminescent CD

上を見出した。α-シクロデキストリンにC L AおよびM C L Aの極 大 発 光 波

結 合した場 合には、ほとんど発 光 効

長はそれぞれ約380nm、460nmであ率の向上はみられなく、β-シクロデキ

り、光の透過性を向上させるためにさ図３の化 合 物 4に示 すように2 級 水ストリンあるいはδ-シクロデキストリンにらに長波長発光を目指した。MCLA

酸基面にフルオレセインを結合させた

結合した場合は約10倍の向上となった。

分子をγ-シクロデキストリンの2級水酸

場合には、MCLAから生成する励起

このようにシクロデキストリンの種類、の発光機構

基面に共有結合させる方法は、水溶体とフルオレセインとの距離は近くエネ

空洞口の種類およびシクロデキストリン

液中での発光効率の向上に有効であ

ルギー移動効率は良好であるが、励とMCLAを結合させる鎖の鎖長は、ることが見出されたので、次にこの方起体のシクロデキストリン空洞への包発 光 効 率に大きく影 響を及ぼ すがど

法を用い緑色の化学発光系の開発を接がフルオレセインに妨 害されるため、

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

3

O

O
14000

Green Light

HN

HOOC

O

HN

S

S

Light intensity (count/min)

HOOC

O

Energy
NH

NH
OH

OH

Superoxide anions

γ-CD

γ-CD
NH

O

O
N*
N
N
H

H3CO

O
N

N

12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
0.001

0.01

0.1

1

10

100

10

100

Probe concentration (mM)

O
350

H3CO

3

1

γ-CD

γ-CD
NH

HN
O

HN

O
N

O

Superoxide anions

S

N
HO

O

O

HN

200
150
100
50
0
0.001

0.1

1

図 4. ヒ ポ キ サ ン チ ン - キ サ ン チ ン オ キ シ ダ ー ゼ 系 に お け る

HO

O

O

Green Light
2

0.01

S

EnergyH3CO

250

Probe concentration (mM)

HOOC

HOOC

H3CO

300

NH

NH

O
N* NH

N

N
H

Light intensity (count/min)N
H

4

Green Chemiluminescent CDおよび FCLA の発光強度（上図：Green Chemiluminescent CD、下図：FCLA、実線：スーパーオキシドアニオン誘起発光、破線：バックグラウンド発光）

O
O

HOOC
HN

したことを示し、スーパーオキシドアニ

HOOC

O

S

HN

NH

O

オンとMCLAとの反応における発光に

S
NH

OH

到達するまでの時間は、包接現象にOH

Superoxide anions

必要な時間よりも短いと推測された。

α-CD
α-CD

Green Chemiluminescent CD（1）

NH
O

O
N

N

O

EnergyOのγ-シクロデキストリンは、MCLAから

NH生成する励起体の励起効率を高める

*

N

H3CO

N
H

Blue LightNとともに励起体とフルオレセインとの距
離を短くしている役割をもち、高い発

H3CO

5

6

光効率をかもしだしていると考えられた。

図3.

MCLAから生成する励起体の励起効狭いためMCLAから生じる励起体は、率が低下するため発光効率が低いとシクロデキストリンの空洞に包接されず

推 測された。それに対し、 1 級 水 酸

フルオレセイン部位から離れてしまうた

発光で測定する際には、色素が混

基 面にフルオレセインを結 合させ ためエネルギー移動が起こりにくいもの

在する検体がある。この場合、発光Green Chemiluminescent CD（1）と推測された。興味深いことに、発光

プローブから発 生した光は色 素に吸では、図３の化合物3に示すように、後の化合物6を別途化学合成し、スー収され 光 透 過 性が 低くなり検 出が 不MCLAから生成する励起体のシクロ

パーオキシドアニオンによる発光反応と可能なことも有る。このような問題を解デキストリン空洞への包接が良好に起同じ条件下で330nmの励起光を照射

決 するために、より長 波 長 域の発 光

こるため励起効率が高く、さらに、シし蛍光を観測すると、MCLAから励が望まれる。しかし、これまで開発さ

クロデキストリンを介してのフルオレセイ

起体として生成するアミドピラジン部分

れてきた発 光プローブでは、 緑 色 発

ンへのエネルギー移動も良好に行なわからの青色の蛍光は観測されず、フ光が発光波長の最長であった。著者は、れるものと推測された。

ルオレセイン部分からの緑色蛍光のみ

中性の水溶液においてCRETを適用

が観 測された。この現 象はFluores-

せず赤色の自己発光を示すイミダゾピ

せた化 合 物 5（ 図３）においては、 発

cence Resonance Energy Transfer

ラジノン系化合物あるいは他の発光系

光はMCLAから生成する励起体から（FRET）であり、スーパーオキシドアの開 発 研 究を現 在 行なっているが、また、α-シクロデキストリンを結合さ46 赤色発光を示す発光プローブの青色発光が主でフルオレセインからニオンによる発光後には、アミドピラジ

未だ見出すことに成功していない。よっの緑 色 発 光は僅かであった。この現ン部分は、α-シクロデキストリンの空洞て、赤色を示す自己発光化合物の開象は、α-シクロデキストリンの空 洞はに包接されフルオレセイン部位に接近発までの中継ぎプローブとしてCRET

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

発光クラゲの発光機構に関する研究
NOおよびイミダゾピラジノン系化合物の化N
O

学発光に関する研究の延長線上に有

N

N
H

H
N

N
H

CH3
N

SO3
O2S

Haneda, Y.: Biochemistry, 17, 994-998（1978）.
７）Shimomura, O., Johnson, F. H., Saiga, Y.: J.
Cell. Comp. Physiol., 59, 223-240（ 1962）.
８）Head, J. F., Inouye, S., Teranishi, K., Shimomura,O.: Nature, 405, 372-376（ 2000）.
９）Toya, Y., Kayano, T., Sato, K., Goto, T.:
Bull. Chem. Soc. Jpn., 65, 2475-2479（ 1992）.
１０）Teranishi, K., Shimomura, O.: Anal. Biochem.,
249, 37-43（1997）.
１１）Shimomura, O., Wu, C., Murai, A., Nakamura,
H.: Anal. Biochem., 258, 230-235（ 1998）.
１２）Teranishi, K., Tanabe, S., Hisamatsu, M.,
Yamada, T.: Luminescence, 14, 303-314（1999）.
１３）Teranishi, K.: ITE Letters on Batteries, New
Technologies & Medicine, 2, 530-536（2001）.
１４）Teranishi, K.: Luminescence, 16, 367-374（2001）.
１５）Teranishi, K., Nishiguchi, T., Ueda, H.:
Carbohydr. Res., 228, 987-993（ 2003）.
１６）Teranishi, K.: ITE Letters on Batteries, New
Technologies & Medicine, 4, C16-C20（2003）.
１７）Teranishi, K., Watanabe, K., Hisamatsu,
M., Yamada, T.: J. Carbohydr. Chem., 17,489-494（ 1998）.
１８）Teranishi, K., Tanabe, S., Hisamatsu, M.,
Yamada, T.: Biosci. Biotech. Biochem., 62,1249-1252（ 1998）.
１９）Teranishi, K., Nishiguchi, T., Ueda, H.: ITE

OO

7

り、さらには、シクロデキストリン化学との融合により成り立ったものである。
ここで取り上げた化学発光のスーパー
オキシドアニオン分析においては、発光

図 5.

プローブのスーパーオキシドアニオンにを適用したイミダゾピラジノン系のスーパー

対する発光選択性、すなわち三重項

オキシドアニオン検出用発光プローブ

酸素による非特異的発光の抑制、発の開発を試みることとした。その結果、

光 感 度の増 強 、 水 溶 性 、 溶 液 状 態

著者は、赤色（最大発光波長約610nm）での保存などが望まれているが、これの発光を示すスーパーオキシドアニオ

らすべてを満たしている化合物は未だ

ン検出用発光プローブ7（ 図５）の開発開発されていない。今後 、
これらの目

に成功した

22 ）

。この発光プローブは、

MCLAやGreen Chemiluminescent
CDと同様な測定操作でスーパーオキ
シドアニオンを検出することができる。

標を達成するために研究に励みたいと考えている。
〔参考文献〕

7 おわりに以上、著者が行なってきたスーパー
オキシドアニオン検出用発光プローブの開発について紹介した。この研究は、

１）Teranishi, K., Nishiguchi, T.: Anal. Biochem.,
325, 185-195（2004）.
２）Goto, T., Takagi, T.: Bull. Chem. Soc. Jpn.,
53, 833-834（ 1980）.
３）Nishida, A., Kimura, H., Nakano, M., Goto,
T.: Clin. Chim. Acta, 179, 177-182（ 1989）.
（1968）.
４）Goto, T.: Pure Appl. Chem., 17, 421-441
５）Hori, K., Nakano, Y. and Cormier, M. J.:
Biochim. Biophys. Acta, 256, 638-644（1972）.
６）Shimomura, O., Masugi, T., Johnson, F. H.,

Letters on Batteries, New Technologies& Medicine, 3, 26-29（ 2002）.
２０）Teranishi, K., Hisamatsu, M., Yamada, T.:
Luminescence, 14, 297-302（ 1999）.
２１）Suzuki, N., Suetsuna, K., Mashiko, S., Yoda,
B., Nomoto, T., Toya, Y., Inaba, H., Goto, T.:
Agric. Biol. Chem., 55, 157-160（1991）.
２２）日本特許：出願番号2004-338145.

P roducts
スーパーオキシドアニオンの分析に有効な新規発光試薬！
グリーンケミルミネッセント CD

O

O

OH

HOOC

スーパーオキシドアニオンは、活性酸素の一種で、生体での解毒活性などの生NH

HN

理活性を有しています。しかし、過剰なスーパーオキシドアニオンは正常な部位をS破壊するため、がん化や老化を招きます。そのため、スーパーオキシドアニオンのN

本品は、一つのシクロデキストリン分子内に、スーパーオキシドと反応する分子と、
O

O

NH OH

O
HO

OH

N

（１）

N
H

H3CO

そこで生じたエネルギーを受け取って発光する分子の両分子を含む構造をしており、

O
O

O
O

生体での分析は重要です。

7

OH
O

OH

スーパーオキシドアニオンを良好に分析できます。従来の発光試薬と比較して高い
HOOC

発光強度を有し、また、発光波長が長波長領域であるため、他の生体成分の影HN響を受けにくいなどの特長があります。

特

NH
S

HO

OH

●高い発光強度

O

OH

O
HN

O
N

●長波長領域の発光波長（530nm）
本品は、右記（1）及び（2）の混合物です。
コードNo.

OH

O
O

HO

H3CO

品

名

規

Green Chemiluminescent CD

格

細胞生物学用和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

N
H

6-n

OH

O
O

長

075-05111

n

OH
O

OH

O
HO

OH

O
N

（２）

容

量

1mg

ｎは0〜6の整数

希望納入価格（円）
9,800

5

R

esearchビス（ p-ニトロフェニル）リン酸アジド（ p-NO2DPPA）
塩入

名城大学大学院総合学術研究科

1 はじめに孝之

J=9Hzで観察される。DPPAが高沸のためラセミ化フリーのペプチド同 士

点（ bp134-136℃/0.2mmHg）の液体のカップリングを目指して極めて多数ので あ る の に 対し p - N O 2 D P P A は縮合剤が開発されている。

ビス（ p -ニトロフェニル ）リン酸アジ

mp110℃前後の結晶性化合物である

このペプチド縮合におけるラセミ化

ド（ p -NO 2DPPA、Di- p -Nitrophenyl

ため取り扱いが容 易である。 一 般にをはかるモデルとして種々の系が開発

phosphorazidate、（p-NO2-C6H4O）
2P（O）

アジド化合物は爆発の危険性があるが、され ているが 、 我 々は D P P A 、 p -N3 ）はChemical

D P P Aのようなリン酸アジドは非 爆 発

NO 2 DPPA、その他縮合剤の縮合能

AbstractsのIndex

NameではPhosphorazidic acid, bis

性 で あることが 知られ て いる 。 p -をは か るた め に 、まず 古 典 的 な（ 4-nitrophenyl ）ester（ RegistryNO 2 DPPAについて念のため示差走

Youngテストを行った（Scheme 3）。

Number: 51250-91-0 ）と呼ばれ、す

査熱量計（ Differential

Youngテストというのはベンゾイル-L-

でに多目的有機合成反応剤として市Calorimeter、DSC ）を用いて熱分

ロイシン
（４）
にグリシンエチルエステル（５）

販され様々な反応に使用されているジフェ析を行い、その爆発の危険性を確めを縮合し、その際のロイシン部のキラニルリン酸アジド（ DPPA、Diphenyl

た 3 ）。その結果発熱量が705J/gと自ル中心のラセミ化を見るものである。

1）

phosphorazidate、（PhO）2P（O）N3 ）己反応性物質の指標である1,000J/g

D P P A 、 p - N O 2D P P Aを用いたの p -ニトロ類縁体である（Figure 1）。

を下回っていた。また分解開始温度もYoungテストの結果の一部を2 ）、これ317℃と高く、これから200℃以下でのまた我々が開発したジエチルリン酸シp-NO2DPPAは今から約30年以上前、Scanning

DPPAとほぼ同時期に、DPPAのニト取り扱いには大きな問題のないことがロ化により我々が始めて合成に成功し

わかる。

R1

2）

た化 合 物であるが 、 D P P Aに比 べて大きな利点が当時見つからなかった

H 2N

ウレタン型アミノ酸を用いるペプチド合成

通常のペプチド合成では、アミノ酸R1のアミノ基をtert -ブトキシカルボニル基

R2OCOHN

ることがわかって来た。 本 稿では p -（ Boc ）、9-フルオレニルメトキシカルボ

R3

NO 2 DPPAの合成的有用性を述べ読ニル基（ Fmoc ）、ベンジルオキシカル者の御批判をあおぎたい。

ボニル基（ Cbz ）などウレタン型保護基して発煙硝酸で処理することによってほぼ定量的に得られる結晶性化合物
である（Scheme 1）。IRスペクトルで−1

R1
Carboxyl
CO2H Activation R2OCOHN

等かの縮合剤で活性化して、C末端からN 末 端 へアミノ酸を伸 長して行くR1型で保護したキラルアミノ酸（１）は、極端ないい方をすれば如何なる縮合

R2OCOHN縮合の際のラセミ化の心配はないといっ

H N M Rスペクトルではベンゼン核のてよい。 現 在 汎 用されている固 相 法

プロトンがABタイプで7.4、8.3ppmにによるペプチド合成は、このウレタン型

R1
R2COHNP

p-NO2-C6H4O

N

+
N

ｰ
N

O

p-NO2DPPA

PhO
P
PhO

N

+
N

ｰ
N

シル型アミノ酸（２）のカルボキシル基

R1

Carboxyl
R2COHN* CO2H Activation

* COX

2
R1
-

R1
O

N
R2

R1
O

N

O

O

N

O

R2

3a

R2

3b

O
3c

R3
H2N

CONHR4R1

アミノ酸を用いて行われている。しかしジペプチド、トリペプチドといったアCONHR4CONH

アシル型アミノ酸を用いるペプチド合成剤でカルボキシル基を活性化しても、

1

R3

CONHR4

H2N（Scheme 2）。このアミノ基をウレタン

は2200cm 付近にアジドの吸収を示し、

p-NO2-C6H4O

COX

1で保護しておき、カルボキシル基を何

p -NO 2 DPPAはDPPAを0℃に冷却

Rn
NH
CO2H
C末端

CO

ペプチド鎖伸長DPPAに比較して幾つかの利点のあ

2 p-NO2DPPAの合成と物性

R3
CONH

3 ペプチド合成

ことから、今日迄あまり利用されないで来 た 。し かし 以 下 に の べ るように

R2

CONH
N末端

R2COHN*R3
CONHR4

CONH

Scheme 2.

の活性化は、そのカルボキシル基のαO
DPPA

Figure 1.

位（＊印 ）のキラル中心がオキサゾロン（３）経由でラセミ化（正確にはエピメリ

PhCOHN

4

CO2H

+

H2N

5

CO2Et

化 ）する恐れがあり、これも極端ない(PhO)2P N3O

f. HNO3
0℃, 30 min
96%

Scheme 1.

6(p-NO2-C6H4O)2P N3
O

い方をすれば、現在知られているどん
な方法、縮合剤を使用しても全くラセミ化フリーというわけにはいかない。そ和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

Coupling Reagent
DMF, Et3N
0℃, 0.5 h
PhCOHN
20℃, 4 h

Scheme 3.

CONH

CO2Et

Table 1.

Table 2.

Coupling Reagent

Yield (%) L-Isomer (%)(PhO)2P(O)N381

92(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3

92
86

41

(EtO)2P(O)CN

96

ないが、エピメリ化の危険のあるペプ

Coupling Reagent

Temp(°C)

Yield(%)

D-Isomer(%)

チド同士の縮合の際、エピメリ化には(PhO)2P(O)N30

3.2

DPPA、DEPC以上に充分注意する(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3

-20
0

75.4
71.6

2.5
6.2
5.0

必要がある。

82.1
80.7
76.7

-20
0
-20

(EtO)2P(O)CN

3.0
2.0

71.4

4 エナミンとの反応

アニド（ DEPC、diethyl phosphoro-

ル中心がフェニルアラニン部とバリン部

一般にアジドは、エナミンと1,3-双極

cyanidate、（ EtO ）2 P（ O ）CN ）4 ）を用の二つあり、そのうちバリン部のキラル子付加反応をすることが知られている。

いた場合と一緒にTable １に示す。

センターが動く可能性があるのでエピメ

我々はDPPAを用いてアルキルアリー

５）

当時（ 1 9 7 0 年 初 頭 ）はまだ高 速 液リ化を検討した（Scheme 4） 。生成しルケトンのエナミン（ 10 ）から、1,3-双体クロマトグラフィー（HPLC）など普及たトリペプチドエステル（８）をトリフル

極 子 付 加 - 脱 窒 素 - 転 位 反 応により生していなかったので、Table １に示す

オロ酢酸で脱保護して９としHPLC分成したホスホリルアミジン（ 11 ）を加水

収率は単離収率であり、生成物の光析した。バリン部がエピメリ化したもの

分解することにより、非ステロイド系抗学純度（L-異性体）
は旋光度測定によっ（D-Isomer）はジアステレオアイソマー

炎症薬の骨格である2-アリールアルカて決 定したものであるが 、 旋 光 度 測になるので、HPLC上分離定量できる。

ン酸（ 12 ）を合成するルートを開発し 6 ）、

定は正確さという点ではHPLCに劣る

結果の一部をTable 2に示す。この系

また環状ケトン（ 13 ）由来のエナミンかものがある。この表からわかることはでもp -NO 2 DPPAは収率は優れている

らは縮環を伴って対応するカルボン酸

p -NO 2 DPPAは収率的には優れていが、ラセミ化の度合が若干大きいこと（ 14 ）を合成する一般法を開発した 7 ）るが、かなりラセミ化を伴っている。ペ

がわかる（Table 2）。

（Scheme 5）。

プチド合成におけるカルボキシル基活以上のことからp -NO 2DPPAは通常

更にベンジル2-ピリジルケトンのピロ性化は微妙で、活性化が強いと収率のアミド結合を形成する場合には問題

リジンエナミン（ 1 5 ）とD P P A 及び p N O 2 D P P Aの反 応を検 討した 8 ）。 反は良好であるが、ラセミ化の危険が増
大し、活性化が弱いとラセミ化はそう

R1

Ar

おきないが、 収 率が低 下してしまう。

R2

O

N
H

R1

Ar

応は三フッ化ホウ素の存在下行ったが、R2

N

共に1,3-双極子付加-脱窒素-転位反10

その後約10年たって、1980年代に入るとHPLCが普及して来たので、今度はジペプチドであるベンジルオキシカル

R1(PhO)2P(O)N3Ar

R2ボニル-L-フェニルアラニル-L-バリン（Cbz-

5 アルコールの一行程アジド化
Ar

N

R2

N P(O)(OPh)2

R1

CO2H

+

6

N
H

Coupling DMF, Et3N
Reagent 24 h
Ph

CbzHN

CO2But7

P(O)(OPh)2-N2時におけるラセミ化、正確にいうとキラ

CONHた（Scheme 6）。

NN

ルエステル（H-L-Pro-OBut, ７）の縮合CbzHN応で生 成したアミジン（ 1 7 ）が 副 生しNN

L-Phe-L-Val-OH, ６）とL-プロリンt-ブチ

Ph応の 成 績 体ホスホリルアミジン（ 1 6 ）が 主 生 成 物で、 1 , 3 - 双 極 子 脱 離 反

11

KOH

Ar
R1

CO2H

R2

O 1) pyrrolidine, BF3・Et2O2) (PhO)2P(O)N312一般にアルコールをアジドに変換する反応は、アジドが還元により容易にアミンへ 変 換できることから、 有 機 合

CO2H3) KOH1413

成上有用な反応である。通常この反応はアルコールを一旦ハロゲン化ある

Scheme 5.

CONH

CO N
8
ButO2C

CF3CO2H

N
N

CbzHN

CONH

H

CO N
9
HO2C

HPLC分析

Scheme 4.

N

N

Ph

X-N3
BF3・Et2O

N

N

+
H

N

X

N

15

16

17

X = (PhO)2P(O)X = (p-NO2-C6H4O)2P(O)

44 %
26 %

15 %
15 %

X

Scheme 6.

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

7

Mitsunobu Reaction
H
HO
N CO2Et+ (PhO)2P(O)N3 ++ Ph3P
1
N CO2Et
R
R2
H

N3

R1

R2

+ (PhO)2P(O)OH +

BnO
OH
22

HN CO2Et
HN CO2Et+ Ph3P=O
OH(96.5 % ee)

DPPA/DBU Method
HO

H

R1

R2

H

N3

R1

+ (PhO)2P(O)OH・DBU
R2
N
DBU:

OH

+ (PhO)2P(O)N3 + DBU

N

N3
23

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, toluene
50℃, 6 h
90 %N3(96.3 % ee)
N3
S(95.6 % ee)
N3OH

R1 = Ar, CO2R3(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, THF
rt, 2 h82 %N

Scheme 7.
(100 % ee)

いはスルホン酸エステル化した後、アCO2Meジドイオンを反応させてアジドに導く二行程による合成法が一般的である。

50℃, 6 h
71 %OH

そのための方 法としては窒 化 水 素 酸
また は D P P Aを 用 いる光 延 反 応と

CO2Me
N3
(92.7% de)(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU,THF
rt, 2 h82 %導できれば、その方が効 率 的である。

+

O
BnO

7 ）。 光 延 反 応は応 用性の広い反 応

BnO

OH

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, DMF
rt, 2 h
85 %
OBn

N3

(1:1)
N3

O

DPPA/DBU法が知られている（SchemeN(81.3 % ee)(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, THF

OH(97.4 % de)

勿論アルコールを一工程でアジドに誘

BnO
BnO

N3

OBn
OBn

24

OBn

であるが、反応後に生成するヒドラジ

Oノエステルやホスフィンオキシドの除去

BnO

は必ずしも容易ではない。これに対し

BnO

OH

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, DMF
rt, 2 h
75 %
OBn

O
BnO

N3

OBn

BnO
OBn

OBn

DPPA/DBU法は、反応の際に生成

25

Scheme 8.

するジフェニルリン酸がDBUの塩として水洗により容易に除去できるが、一

まず1-及び2-デカノール（18、20）をが 確 認され た 3 , 9 ）。 結 果 の 一 部 を般にベンジルアルコールやα-ヒドロキシ用いてDPPAとp -NO 2 DPPAの反応

Scheme 8に示す。22から23への変エステルのような活 性なアルコールし性を検討した。その結果Table 3に示

換は、海洋に棲息する藍藻から単離さか効率よくアジドに変換できない。後すように、 p -NO 2 DPPAの方がはるかれたカルキトキシン全合成の一工程に者の反応は、アルコールがDPPAのに反応性に富み、対応するアジド（ 19、活用された10）。

リン原子を攻撃し、生じたホスフェート

21 ）を好収率で与えることがわかった。

本法はアミノ糖合成における重要中にアジドイオンが背 面から攻撃して、また塩基としてはDBUが最も好結果を間体であるグリコシルアジド（ 24、25 ）の合成にも適用できる。すなわち上記

立 体 反 転したアジドを与えるものと考与えた。この p -NO 2 DPPA/DBUによえられる。そこでDPPAのフェニル基

るアルコールの一行程アジド化は、かp -NO 2DPPA/DBU法をヘキソピラノーのかわりに、より電子吸収性の高い p -なり一般性があり、種々の一級乃至2スに適用すると、円滑に1,2- trans -グリ

ニトロフェニル基にかえれば、もっと反級アルコールのアジド化に有効で、まコシルアジドが生成することが判った3,9 ）。

応は円滑に進行するものと推測された。

た立 体 反 転の効 率も極めて高いこと

6 その他の反応

Table 3.
(ArO)2P(O)N3 (1.2 eq)
DBU (1.2 eq), toluene

R OH(ArO)2P(O)N3

Alcohol

OH

Temp
(℃)

R N3

Time
(h)

DPPA

25

24

p-NO2DPPA

25

16

上述のp-NO2DPPA/DBU法を1,3-ジ
Azide

N3

18

Yield
(%)

ケトンに適用したところ、1-フェニル-1,3-5ブタンジオン（26）ではイソオキサゾール

76

誘導体（27）が、5,5-ジメチル-1,3-シクロ

19

OH

DPPA

50

6

p-NO2DPPA

50

6

N3

20

8

BnO

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, THF
rt, 3 h91 %S(95.9 % ee)(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, DMF
0℃, 1 h; 65℃, 5 h81 %3ヘキサンジオン（イソフォロン、28）
ではβ-

81

アジドビニルケトン（29）が高収率で生成21

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

することが判明した3）（Scheme 9）。

O

O

O

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, THF
85 %

Ph
26

特に水野正則博士（エーザイ）に感謝

８）Kato, N., Hamada, Y., Shioiri, T.: Chem.

の意を表したい。

Pharm. Bull., 32, 2496-2502（ 1984）.
９）Mizuno, M., Shioiri, T.: Chem. Commun.,Ph

2165-2166（ 1997）.
１０）Yokokawa, F., Asano, T., Okino, T.,

O N

O N

-N2

N3

Ph

(p-NO2-C6H4O)2P(O)N3
DBU, THFO
97 %28

60, 6859-6880（ 2004）.

１）a）
Shioiri, T., Ninomiya, K., Yamada, S.: J.

27
O

O

Gerwick, W. H., Shioiri, T.: Tetrahedron,〔参考文献〕Ph

Am. Chem. Soc., 94, 6203-6205（1972）. b）
Thomas, A. V.: "In Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis", Paquette, L. A., Ed.,

N3
29

Scheme 9.

7 おわりに
以上 p -NO 2 DPPAの今日迄に判明

John Wiley & Sons, Chichester, Vol. 4, p.
2242-2245（1995）.
２）Shioiri, T., Yamada, S.: Chem. Pharm. Bull.,
22, 855-858（1974）.
３）水野正則学位論文（名古屋市立大学大学院
薬学研究科）2000年.
４）a）Yamada, S., Kasai, Y., Shioiri, T.:

Tetrahedron Lett., 1595-1598（ 1973）. b）
Patel, H. H.: "In Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis", Paquette, L. A.,

している合 成 的 有 用性を解 説した。

p -NO 2 DPPAを用いた有機合成反応
は今日迄のところ上記につきる。しかし冒頭で述べたように、液体で取り扱いにくいD P P Aに比 べ 結 晶 性で取り扱い易い p -NO 2 DPPAは、反応性も一般的にDPPAより高く、DPPAを用いた諸反応に適用可能であると考えら
れ 、いわば 第 2 世 代 の D P P Aとして
DPPAに見られない反応性が開拓されることを期待したい。
終りにp -NO 2DPPAを用いる有機合

Ed., John Wiley & Sons, Chichester, Vol. 3,
p. 1851-1854（ 1995）.
５）a）Takuma, S., Hamada, Y., Shioiri, T.:

Peptide Chemistry 1981, 13-18（ 1982）. b）
Takuma, S., Hamada, Y., Shioiri, T.: Chem.
Pharm. Bull., 30, 3147-3153（ 1982）.
６）a）Shioiri, T., Kawai, N.: J. Org. Chem., 43,
2936-2938（ 1978）. b）Kawai, N., Shioiri, T.:
Chem. Pharm. Bull., 31, 2564-2573（ 1983）.
c）Kawai, N., Kato, N., Hamada, Y., Shioiri,T.: Chem. Pharm. Bull., 31, 3139-3148（1983）.
７）a）Yamada, S., Hamada, Y., Ninomiya, K.,
Shioiri, T.: Tetrahedron Lett., 4749-4752（1976）. b）Hamada, Y., Shioiri, T.: Org.

成反応を遂行した共同研究者諸氏、Syntheses., 62, 191-195（ 1984）.

P roducts
p-NO2DPPA
規外

格
観：白色〜わずかにうすい黄色、粉末

含量（ HPLC ）：97.0％以上
コードNo.

023-15281
021-15282

品

名規Bis（p-nitrophenyl）Azidophosphonate【p-NO2DPPA】

格

有機合成用

容

量

希望納入価格（円）

5g

8,500

25g

30,000

関連商品
コードNo.

043-16383
049-16385
320-54342
324-54345

品

名

規

格

1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene【DBU】

和光一級

Diphenylphosphoryl Azide【DPPA】

Wケミカル

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

容量

希望納入価格（円）

25mr

1,570

500mr

15,700

25g

5,000

500g

25,0009

echnical Report
アルデヒド類捕集及び誘導体化用カートリッジのブランク値測定方法について（2）
ガラス器具の影響
和光純薬工業株式会社 試薬研究所

ホルムアルデヒド、アセトアルデヒドは、

久保田守至る過程で使用する器具類及び試薬報告した。今回は、抽出操作に用い大気汚染防止法（ 環境省 ）、室内空からの汚 染を受ける場 合があり、 本るガラス器具の洗浄法及び保管条件

気汚染に係るガイドライン（厚生労働省）誌Vol.73、No.1にてHPLC用試料容がブランク値に与える影響について比により規制され、測定法が定められて器がブランク値を上昇、変動させる原較検討したので報告する。

いる１,２,３,４）。

因になりうることとその予防策について

その手法の一つとして、2,4ｰジニト
ロフェニルヒドラジン（ DNPH ）含浸シ

表1. 使用器具と試薬（ガラス器具）リカゲルが充てんされたカートリッジにガラス製シリンジ（容量30mR）

大気や室内空気を通気させることによ

ガラス製パスツールピペット（容量2mR）りアルデヒドやケトン類を捕集、DNPH

ガラス製メスフラスコ（容量5mR）

HPLC用ガラス製試料容器（容量1.9mR、アルミシート／シリコン製O-リング、と誘導体化後、HPLC法により目的成

ポリプロピレン製スクリューキャップ）分を定量する方法が採用されている。

（その他の器具）

アルデヒドの測 定 値は、 試 料を捕集したカートリッジの実 測 値から成 分
毎にブランク値を差し引いて求める。

される。PresepR-C DNPH、PresepR-

DNPH精製品（試薬特級DNPHを再結晶法により精製した）

高純度Ｎ2ガスボンベ

アセトニトリル（アルデヒド分析用、HPLC用）

ステンレス製スパーテル

りん酸（試薬特級）

ピペッター

このためブランク値はその値が十分低く、かつ安定した値であることが要求（試薬）

グローブボックス

表2. 使用器具の洗浄及び保管方法（第1法）

C DNPH（Short）
はこの目的に適合さ

メタノール洗浄 → アセトニトリル溶液に一晩以上含浸 → メタノール洗浄 → 室内で乾燥及び保管れるように設計、開発されたカートリッ（第2法）

ジであるが 、 抽 出からH P L C 測 定に

アセトニトリル洗浄 → アセトニトリル溶液に一晩以上含浸 → アセトニトリル洗浄 →加熱真空乾燥（60℃×1時間）→ ガラス製デシケーター内で保管

表3. ブランク値の測定方法と定量下限値(10s)１．操作手順2．定量下限値(10s)（１）
Ｎ2ボンベのガス出口にPresepR-C DNPHを1本取り付け

各成分のピーク面積値より、1）ブランク値（μg/5mr）、2）環境省より公示されている有害大た後、グローブボックスに接続してボックス内をＮ2ガスで置

気汚染物質測定マニュアル１）ならびに厚生労働省の室内空気中化学物質の測定方法２,３）に記換させる。

載されている大気中のアルデヒド濃度換算式をもとに、１で調製した試料溶液の10μrをHPLC（２）容量5mrのメスフラスコに再結晶DNPHをスパーテルでに注入して各アルデヒド類のブランク値（ng）を測定し、以下の計算式①より大気濃度（μg/m3 ）2.0mg量り取った後、グローブボックス内に移す。

に換算した。各ブランク成分について、10本（n=10）測定した時の大気濃度の標準偏差（s）（３）上記のメスフラスコにパスツールピペットを用いてりん酸を約から計算式②により定量下限値（10s ：μg/m3 ）を求めた。

100μr入れた後、別のパスツールピペットでアセトニトリル（大気濃度換算式）

を加えて全量を5mrとする（各洗浄法で準備した器具を用

計算式① Ｃ＝（Ａ×Ｅ×１０, ００）／（ｖ×Ｖ×２９３／（２７３＋ｔ）
×Ｐ／１０１３. ）いて10本ずつ、計20本を調製した）。

C：20℃における大気中の各アルデヒド類の濃度（μg/m3）
A：ブランク値(ng)［HPLCへ注入した試料10μRに含まれる各ブランク成分重量(ng)］Ｅ：試験液量(mR［) 抽出液量=5mR］
v：HPLCへの注入量(μR)［v=10μR］
V：ガスメータで測定した捕集量(R［) R=144Rとする］
t ：試料採取時の平均気温(℃)［t=20℃とする］
P：試料採取時の平均大気圧(kPa［) P=101.3とする］（４）DNPHが溶解したらパスツールピペットでHPLC用試料容器に約1.5mr分注後、開口部にアルミシール、シリコン製
O-リングの順に静かにのせて、最後にスクリューキャップできつめに締め付ける。
（５）順次HPLCによりブランク値を測定する。
（HPLC Conditions）

計算式②

定量下限値＝１０ｓ（μg/m3 ）（大気汚染防止法における基準値及び目標定量下限値１））

Column: Wakosil-Ⅱ 5C18RS, 4.6×250mm
Eluent: CH3CN/H2O=60/40（ v/v）

物

Flow Rate: 1.0mr/min at 40℃

目標定量下限値（μg/m3）（基準値の1/10）

名

ホルムアルデヒド
アセトアルデヒド

Detection: UV 360nm, 0.005AUFS
Injection vol.: 10μr

0.85

（室内空気汚染に係るガイドラインにおける指針値及び目標定量下限値２,３,４））物

質

名

ホルムアルデヒド
アセトアルデヒド

100.08（＊0.8）0.5

基準値（μg/m3）＊印：暫定値（オートサンプラーは、ニードル洗浄液としてHPLC用ア
セトニトリル100%を使用した。）

質

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

目標定量下限値（μg/m3）
指針値（μg/m3）（指針値の1/10）10
4.8100（0.08ppm）
48（0.03ppm）

表4. ブランク値と定量下限値(10s)ホルムアルデヒド

従 来 法
新規洗浄法

アセトアルデヒド

アセトン

平均値

10s

平均値

10s

平均値

10s

0.024
0.020

0.337
0.109

0.004
0.006

0.203
0.203

0.028
0.026

0.161
0.163

平均値：μg/5mR 10s：μg/m3実験に用いたガラス器具、試薬を表

下限値の達成が厳しい物質の場合、止法におけるホルムアルデヒドの目標１に示した。ブランク値はアセトニトリ

暫定値を当面の目標定量下限値と定定量下限値である0.08より高い状況にルをカートリッジに通 液させ 、その抽めている。定量下限値（ 10s ）の値がある。 今 後さらに検 討を継 続し、 定

出液に含まれるアルデヒド類の含有量小さいほどブランク値のばらつきが小さ

量下限値の低減化を達成させるとともに、から求めるが、 今 回カートリッジに代くなる。

より簡便な洗浄、保管方法を見いだし

わりDNPH精製品及び酸触媒としてりたいと考えている。 今 回の事 例が、ん酸を用いた。表２に示した洗浄、乾測定結果を表４に示した。第1法でアルデヒド類の測定に用いる器具の洗燥及び保管条件で処理した器具を各々処 理した器 具を用いた場 合 、ホルム

浄、保管方法の参考になれば幸いで用いて、表３に記載した手順でホルム

アルデヒドの 定 量 下 限 値（ 1 0 s ）はある。

アルデヒド、アセトアルデヒド、アセトン

0.337μg/m で、厚生労働省の目標のブランク値ならびに定量下限値（10s）

定量下限値より低いが、大気汚染防を求めた。公定法ではホルムアルデヒ

止 法の目標 定 量 下 限 値に対して約４

ド、アセトアルデヒドの２成分について、倍 高い値を示した。 一 方 、 第２法で3

〔参考文献〕

定 量 下 限 値や操 作ブランク値などの処理した器具を用いたときのホルムア

許 容 性を判 断 する基 準として目標 定

ルデヒドの定量下限値は0.109μg/m3で、量下限値が導入されている。目標定

第１法の約１/３まで低下した。第２法

量下限値は原則として基準値（環境省）

で取り入れた洗浄、保管方法は、ガまたは指 針 値（ 厚 生 労 働 省 ）の1 / 1 0

ラス器具類からのホルムアルデヒドのの濃 度で、 環 境 省ではブランク値の

汚 染を低 減 する効 果があることが 示低減が極めて困難なために目標定量唆された。しかしながら大 気 汚 染 防

１）有害大気汚染物質測定方法マニュアル、環境庁（現環境省）.
２）室内空気中化学物質の室内濃度指針値及び標準的測定方法について、厚生省（現厚生労働省）、生衛発第1093号通知.
３）シックハウス（室内空気汚染）問題に関する検討会中間報告−第６回〜第７回のまとめについて、
厚生労働省.
４）シックハウス（室内空気汚染）問題に関する検討会中間報告−第８回〜第９回のまとめについて、
厚生労働省.

P roducts
コードNo.
291-43951
290-34251
293-40351
017-17743
011-17741

品

名

容 量
20個
20個
20個
100mr
200mr

希望納入価格（円）カラムタイプデュポン
ウォーターズデュポン
ウォーターズ

記 号
ワＩＤ
ワＩＷ
トＩＤ
トＩＷ

希望納入価格（円）

規 格
HPLC用
HPLC用

容 量
1r
1r

希望納入価格（円）容

希望納入価格（円）アルデヒド分析用

Acetonitrile
品

名カラムサイズ

WakopakR Wakosil DNPH-Ⅱ

4.6φ×150mm

R

4.6φ×250mm

Wakopak Wakosil-Ⅱ 5C18RS
コードNo.
236-02181
233-02191

規 格
試料前処理用
試料前処理用
試料前処理用

PresepR-C DNPH（Short）
PresepR-C DNPH
PresepR-C Ozone Scrubber

品

名

WakosilR DNPH-Ⅱ溶離液A
WakosilR DNPH-Ⅱ溶離液B

24,00029,00013,5002,200
4,000

60,00048,000

6,000
6,000

■各種標準液コードNo.

062-03481
012-17391

品
名ホルムアルデヒド-2,4-ジニトロフェニルヒドラゾン標準液（ホルムアルデヒドとして40μg/mRin acetonitrile）
2種アルデヒドDNPH混合標準液(ホルムアルデヒド-DNPH, アセトアルデヒド-DNPH, 各アルデヒドとして0.1μg/μRin acetonitrile)

規 格
排ガス分析
(HPLC)用
大気汚染物質測定(HPLC)用

量

2mr×5

10,5002mr×512,000上記以外にも各種標準液を取揃えておりますのでお問合せ下さい。

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

11

ー①

シコンと紫雲膏
神戸薬科大学守安

シコンはムラサキ科（Boraginaceae）

が進行し、栽培品も使用されるようにらの皮膚の盛り上がりを助ける）、浮のムラサキ（ Lithospermum erythro-

なった。しかし天然品は二年生であ腫抑制、抗炎症作用、殺菌作用など

rhizome、硬紫根）の根で、その名がるのに対し、栽培品は一年生で小さを有することが知られている。また植示すように根に紫色の色素を含み、く見 劣りし色も悪い。 紫 色の色 素が物からの抽出ではなく、カルスを用い古来、医薬品や染料として用いられ有効成分のため、品質の差が一目瞭てシコニンを製 造 する技 術が 完 成し、てきた。シコンはその使 用法に大 変然のため栽培品は低品質とされ好ま

口紅をはじめとする化粧品に配合す特徴がある生薬で、熱傷時などに内れない。

ることが行われている。きれいな紫色

服用に用いるわずかな処方例以外は、

紫雲膏はシコンとトウキの２つの生の色素であり、抗菌作用を有すること、ほとんどが火傷をはじめとする皮膚疾薬にゴマ油、ミツロウ、豚脂を加えて紫外線を吸収することなど、化粧品

患に、紫雲膏という軟膏として用いら熱抽出した製剤で、製法が簡単なのの材料としても有用な性質をもっていれる。紫雲膏は江戸時代後期の名医で紫雲膏の製造が薬科大学の生薬るから で あ ろう。 シコンを 抽 出し

華岡青州によって発明された製剤での学生実習の題材となったりする。まHPLCで分析してみるとシコニン（ 6 ）ある。華岡青州は古法派の漢方と蘭た種々の生薬製剤メーカーから紫雲のピークは痕跡程度で、ほとんどがア法（オランダ医学）の両方を学び、チョ

膏が市販されているが、製法に各社

セチルシコニン（ 1 ）などのエステル類

ウセンアサガオ抽出物を含む生薬製で特徴（秘伝）がありバリエーションがである。シコニン類は光や熱に対して剤「通仙散」を用いて世界最初の全

大きく各社とも自社のものが最もよく効

かなり不 安 定な化 合 物である。そこ

身麻酔法による乳ガンの摘出手術にくと主 張されている。 通 常は局 方 品

でシコンの成分の研究を行う際エステ成 功したことは有 名であるが、 彼のの硬 紫 根を使 用するが、 同じムラサル類を加水分解して研究したため、発 明した製 剤の中で紫 雲 膏は十 味

キ科で中国産の別の属の植物（Arnebia

シコニンが最初に報告され有名になっ敗毒湯とともに現在も広く用いられる

euchroma、軟紫根）をよしとする人もいたためであろう。

処方である。

る。またヨーロッパではやはりムラサキ華 岡 青 州の時 代 、ムラサキは日本

前述の軟紫根やアルカンナ根にはとそ科のセイヨウムラサキ（Alkanna tinctoria、 シコニンではなくアルカンニン（ 7 ）では全国に自生していたと考えられる

アルカンナ）の根がシコンとよく似た用途のエステル類を含んでいるとされる。

が、現在は激減し、レッドデータブッで用いられる。

シコニンとアルカンニンは光学異性体

クに載り、近い将来野生種の絶滅がシコン（ 硬紫根 ）の薬効成分はシコであり、よく似た植物にd-体とl-体が別々危惧されている。現在シコンはほとん

ニン（6）やその誘導体のアセチルシコに含 有されるのは極めて珍しく興 味

どが中国よりの輸入品で、従来は野ニン（ 1 ）などのナフトキノン類で、 創のあることである。医薬品ではd -体と生品を採集したものが用いられてきた

傷治癒促進や肉芽形成の促進（火傷、 l -体で薬効が異なることはよくあるが、が、中国においても近年資源の枯渇

凍傷、湿疹、水疱などのときに下か果たしてシコニンの場合とアルカンニ

compoundR(1) acetylshikonin
OH

O

O

(2) isobutylshikonin
O
OH

O

OH

O

RO

H
O

(3) β-hydroxyisovalerylshikonin(4) isovalerylshikonin(5) α-methyl-n-butylshikonin

O

H
OH

(6) shikoninO(7) alkanninOH

ムラサキの花

12

正恭

O

HO

H

Structures of shikonin derivatives

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

ー①

ンで何か薬効に差はあるのだろうか？

古いほうがよいのか ？これらの疑 問

またシコニンやアルカンニンおよびそのは硬 紫 根や軟 紫 根のそれぞれの色

エステル類の間に薬効に差があるの

素成分の薬効を詳細に検討し、またであろうか？そしてもし差があるのなら熱や光でシコニン類がどのような化合

紫雲膏のなかで最も有用な成分は何物に変 化し、その分 解 物にどのようであろうか？硬紫根にはシコニン類、な薬効があるかを調べて初めて明ら

軟紫根にはアルカンニン類が含まれてかになるのかもしれない。

いるとされているが 、 光 学 純 度はどの程 度であろうか 。 硬 紫 根にはシコニンが多く含まれているのは正しいであろうが、アルカンニンも混 在していると思われる。さらにシコニンはアセ
チルシコニンなどのエステルが加水分解して生成した可能性があるが、加水分解時に一部ラセミ化する可能性もある。そうだとすると元のアセチル
シコニンをはじめとするエステル類は光学的にピュアなのであろうか。疑問はまだまだつきない。シコニン類は不安定なため製造から年月を経た紫雲膏をHPLCで分析するとシコニン類が１. シコニン２. βｰハイドロキシイソバレリルシコニン
３. アセチルシコニン
４. イソブチルシコニン
５. αｰメチルｰnｰブチルシコニン
イソバレリルシコニン（混合物）

ほとんどなくなっていることがある。しかし紫色はあまり退色していない。つまり何か未知の色素に変わっていることになる。当然 古い紫 雲 膏は効き目

shikoninβ-hydroxyisovalerylshikoninacetylshikonin
isobutylshikonin
α-methyl-n-butylshikonin
isovalerylshikonin

HPLCの条件
カラム：Wakosil-Ⅱ 5C18 HG（6.0mm×15cm）
溶 媒：アセトニトリル：水＝7：3、2.0mL/min.
検 出：515nm

が 悪くなると思われるのだが 、 古い
紫雲膏のほうがよく効くと主張する人もいる。硬紫根がよいのか軟紫根がよいのか？新しい紫雲膏がよいのか

P roducts
生薬試験用標準品
コードNo.

品

名

規

格

容

量

希望納入価格（円）Shikonin Standard

生薬試験用

10mg

30,000198-13581

Shikonin（mixture of optical isomers, about 6:1）

生薬試験用

10mg

14,000198-13601

Shikonin（mixture of optical isomers, about 1:1）

生薬試験用

10mg

22,000013-19901

Alkannin Standard

生薬試験用

10mg

30,000018-19191

Acetylshikonin

生化学用

10mg

24,000083-07891

β-Hydroxyisovalerylshikonin

生化学用

10mg

24,000093-04891

Isobutyrylshikonin

生化学用

10mg

24,000191-13331

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

13

SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

第59話

土谷

正和

SLP試薬の応用（その2）

SLP試薬は、細菌のペプチドグリカ

た腹 膜 透 析 液は生 体 適 合 性もよく、つは、通常問題にされないペプチドグンに反応する試薬です。SLP試薬は、ブドウ糖ベースの腹膜透析液にはない

リカンの汚 染がある病 態を引き起こし

β-1,3-グルカンにも反応するため、使良さを持っています。

たことです。これは、ペプチドグリカン

用時にその特異性を考慮する必要が2002年に欧州でアイコデキストリンの汚染も、ある種の医薬品や医療用ありますが、ペプチドグリカンを簡単にが原因と考えられる無菌性腹膜炎が具では管理する必要があるかもしれな

検出する試薬としては唯一のものです。

多 発しました 。メーカーの 報 告 では

いことを示唆しています。また、ペプ

最近、SLP試薬を用いてペプチドグリ

2001年1月以前の無菌性腹膜炎の発

チドグリカンの引き起こした症状がエンカンを検出する応用例がいくつか報告

生率は1%以下であったとのことですが、ドトキシンに比べて非常にマイルドな症されています。今回はこの中から一つ

2002年の最初の6か月間の発病率は状を示したことは、これまでの研究結

1）の論文 をご紹介したいと思います。

10%以上に達しました。メーカーは、

果通り、ペプチドグリカンの生物活性

腹膜透析は、透析膜を使った血液

この原因を特定ロットの製品へのペプがエンドトキシンに比べて低いことを示

透析と共に、末期腎不全に対する重チドグリカン汚染としています。この無唆しています。汚染アイコデキストリン

要な治療法です。日本では血液透析

菌性腹膜炎の発生率は、メーカーのが原因と思われる無菌性腹膜炎患者

が 主 流ですが 、 腹 膜 透 析の方が 簡汚染ロット回収によって、再び1%以下の中には、アレルギー反応のために、便で安価であるとの理由で、世界各に回復したそうです。

アイコデキストリンの使用を中止せざる

国で腹膜透析が採用されています。

この論文の著者Toureらは、アイコを得なかった例もあったとのことですか

透析療法のうち、メキシコでは90%、デキストリンが原因と思われる無菌性

ら、マイルドであるから安全と考えるこ

英国では50%、カナダでは40%、欧腹 膜 炎 5 例と同 時 期に発 生した細 菌とはできません。このマイルドな症状が州と米国では10%から20%が腹膜透性腹膜炎7例について比較を行っていさらにどのような病態に結びついていく

析を行っているとのことです 。腹膜ます。アイコデキストリンによる無菌腹かは、今後の課題です。

透析の原理は、患者さんの腹腔内に膜 炎は、ペプチドグリカンによる汚 染

今回SLP試薬による測定値が指標

高浸透圧の液を入れ、腹膜を介したによって引き起こされ、細菌性腹膜炎

として有用だったようですが、その要拡散で体内の水分と溶質を除去するに比べて、腹腔内のサイトカイン量が因 の 一 つに 汚 染 源 が 単 一 の 細 菌というものです 。 腹 膜 透 析 用の透 析

高くなること、 活 性 化 好 中 球の腹 腔（ Bacillus acidocaldarius ）であっ

液を高浸透圧にするためにブドウ糖が内への浸潤が少ないこと、腹腔のダメーたことが 挙 げられます 。 すなわち、使われていましたが 、 性 能のよい水ジが少ないことを報告しています。

SLP試薬の反応性は菌種によって異り

1）

溶性ブドウ糖ポリマーとして、デンプン

さて、アイコデキストリンの ペプチを原料としたアイコデキストリンが開発

ドグリカン汚 染は、 S L P 試 薬で測 定する必 要がありますが 、 今 回の例でされました。アイコデキストリンを用いされており、 回 収 が 行われたものでは汚染源がほぼ単一と考えられるため、

3から1 0 n g / mr、 汚 染のないものは定量が可能であったということです。

0 . 6 n g /mr以 下とされています 。 原

SLP試薬は、その特異性や反応性

因菌は Bacillus acidocaldarius で、に注 意 する必 要がありますが、 試 料

ますし、β-グルカンによる反 応も考 慮

原料のデンプン中に認められるとのこの性質を考慮して使用すれば、まだまとです。これらの情報は、アイコデキ

だ有用な使用法があるように思われます。

ストリンのメーカーから得たとのことです。
これまで、ペプチドグリカンによる生物活性や生体への影響は、数多く研究され、報告されてきました。しかし、〔参考文献〕
１）Toure, F. et al.: Kidney International, 65, 654（2004）.

症状が報告され、その原因がペプチ
ドグリカンであったことが明らかにされた例はほとんどないのではないでしょう
か 。 今 回ご紹 介した例は、いくつかの教訓を示唆していると思います。一14

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

次回は、第60話「エンドトキシン試
験法への適応」の予定です。

ew Products
新しいコンセプトの医薬品原薬
Add-Spec Series

従来の医薬品製造移管のイメージ
データの整合性

今お使いの医薬品原料を、「試薬」から「局方」に代えませんか？
長年の試薬製造で培った技術でGMPガイドラインに従って原料に関する
データ

試薬に関する
データ

試薬に関する
データ

研究開発
部門

製造部門
移管作業

製造した医薬品「製造専用」原料を発売しました。
研究開発部門から製造部門への移管で原料変更に伴う膨大なデータを取る必要があります。

特長●GMP管理されたクリーンルーム内での製造。
●最終小分け工程直前で異物除去装置を導入。

「Add-Spec Series」●多岐にわたる品質保証。
●医薬品の研究開発用に500ｇ包装品もラインアップ。

データをそのまま使用
原料に関する
データ

研究開発
部門

クラス10,000クリーンルーム内

製造部門
移管作業

小分け前
半製品

異物除去装置半製品

原料に関するデータ「Add-Spec Series」を使用する事で原料のスムーズな移管ができます。
異物
製品

製品
製品

製品
製品

異物除去装置を最終小分け工程直前に導入しました。これにより、今まで混入が懸念されていたさまざまな異物がほぼすべて除去されています。

大入り包装品に加え500g包装品もご用意しました ので、研究開発段階から本生産まで、安定した高品質の局方「製造専用」品のご使用が可能です。

コードNo.
198-13265

194-13267
037-19185
033-19187

受入れ検査のご負担を軽減

194-13245
190-13247

時間節約

030-19175

今まで受入れ検査に取られていた時間の節約が可能です。

036-19177
197-13235
193-13237
204-16055
200-16057

Add-Spec Series

191-13255
197-13257

品質安定

安全性向上

品 質 の ぶ れ が 少 なく、安定した 品質 の 原料をご使用いただけます。

万 全 の 品 質 管 理 で 、安心してご使 用い た だけ
ます。

規

格

亜硫酸水素ナトリウム「製造専用」 日本薬局方
クエン酸「製造専用」

日本薬局方

クエン酸ナトリウム「製造専用」 日本薬局方
グルコン酸カルシウム「製造専用」 日本薬局方
酢酸ナトリウム「製造専用」日本薬局方
酸化チタン「製造専用」

日本薬局方

水酸化ナトリウム「製造専用」 日本薬局方

容量 希望納入価格（円）

500g

2,000

20kg

照

500g

3,000

20kg

照

会
会

500g

3,600

10kg

照

500g

6,000

10kg

照

500g

3,300

20kg

照

500g

3,600

10kg

照

500g

2,400

会
会
会
会

20kg

照

500g

5,000

263-01815 硫酸亜鉛「製造専用」

500g

2,800

207-16045
136-14485

和光純薬時報名133-14495 D-マンニトール「製造専用」 日本薬局方203-16047

多岐にわたる項目について品質保証しており、受入れ試験のご負担を軽減します。
試験項目など詳細は当社営業員までお問合せ下さい。

品132-14487
047-29015
043-29017

日本薬局方

トロメタモール「製造専用」 局外規
リン酸二水素カリウム「製造専用」 局外規
リン酸二カリウム「製造専用」 局外規Vol.73, No.2（2005）

会

500g

6,500

10kg

照

500g

3,000

25kg

照

会
会

500g

3,600

20kg

照

会

15

ew Products
コードNo.

価格改訂しました！
NMR溶媒

コードNo.

048-26843

010-13551 (min.99.95%)

規

格

NMR用

012-11931
017-19862 Acetone-d6,99.9%

NMR用018-11933019-17161 Acetone-d6,99.9%014-18412 containing 0.05v/v%

NMR用

015-17163 TMS
011-17361 Acetone-d6,99.8%

NMR用

容

量 希望納入価格（円）

NMR用

040-26842 Deuterium Oxide,

1mr×5A

18,000042-26841 99.9%

Acetonitrile-d3,100%(min.99.95%)

NMR用

NMR用

Benzene-d6,100%(min.99.95%)024-13511 Benzene-d6,99.8%025-14261
021-15081

Benzene-d6,99.6%

NMR用
NMR用

NMR用

035-19201
039-19221 Chloroform-d,99.8%,035-19223 containing 1v/v%TMS

NMR用

032-19211 Chloroform-d,99.8%,039-18001 containing 0.05v/v%

NMR用

038-19213 TMS

10g

6,800

25g
50g

036-16693 containing TMS

5,000

10g

3,300

1kg

照

8,500

040-18831

10g

3,250

16,000048-18832 Deuterium Oxide,

10g

6,500

045-23411 Min. 99.75%

25g

11,000044-18834

50g

21,000043-29051

8,800

048-27781

1mr×5

8,800

1mr×5

NMR用

会

25g

5,750

100g

16,4001kg

照会

17,8005g

14,000046-27782

25g

42,000046-22961 Dichloromethane-d2,

1mr

4,400

Dichloromethane-d2,
99.9%

21,000049-22711 100%(min. 99.95%)

1mr×5

15,000046-29063

10g

11,0000.8mr×10

NMR用

1g×10
NMR用

NMR用

10mr

17,5000.8mr×10

19,000

1mr×5A

15,7000.6mr×10

3,700

10g

3,800

25g

7,500

25g

7,500

10g

3,200

25g

7,500

50g

13,50010g

3,800

0.6mr×10

8,200

25mr

23,00010g

10,50050g

48,000

NMR用

10g

12,000NMR用

50g

34,000Dimethyl Sulfoxide-d6,
040-29061
NMR用
99.9%
048-29062

0.8mr×10

20,000049-29092 99.9%, containing

1mr×5

12,00050g

23,000048-29084 Dimethyl Sulfoxide-d6,

28,000042-29082 99.9%, containing

50g

3,600

044-29086 0.05v/v%TMS

100g

5,700

047-29071

100g×1035,00050g

3,200

135-14531

100g

4,800

130-10402

50g

3,200

131-14533

100g

5,700

134-13641

100g×1035,000

100g

100g

NMR用

040-26423 Chloride Soln. in D2O, NMR用Methanol-d4,99.8%

TMS
202-15071

Tetrahydrofuran-d8,
100%(min.99.95%)

NMR用

0.8mr×10

72,000Tetrahydrofuran-d8,
99.5%

NMR用

10g

40,000Toluene-d8,99.6%

NMR用

10g

14,50025g

20,000

50g

3,100

100g

5,600

206-16071

50g

13,000200-14271
201-16082

和光純薬時報NMR用Methanol-d4,99.8%

5,600

99.5%

NMR用

Dimethyl Sulfoxide-d6,
NMR用
99.9%(septam)

135-12951 containing 0.05v/v%
NMR用

NMR用

1v/v% TMS

35% Deuterium

16

0.6mr×10046-26844

TMS
030-16691 Chloroform-d,99.7%,

NMR用

5,800

Chloroform-d,99.7%,034-17211 containing 0.05v/v%

13,000Dimethyl Sulfoxide-d6,
NMR用

036-18011
032-18013 Chloroform-d,99.8%

50g

16,500045-27791 Dimethyl Sulfoxide-d6,

012-17313
028-14251

量 希望納入価格（円）25g042-22963 99.75%

010-17314
016-17311 Acetonitrile-d3,99.8%

容

100g

TMS
010-18431

Deuterium Oxide,100%(min. 99.95%)

20,0000.8mr×10

Acetone-d6,99.8%,018-17371 containing 0.05v/v%

格

99.5%
046-29041

013-18421 Acetone-d6,100%

規

20% Deuterium

従来品と同様の品質で、より安価な設定となっております。
名名043-26413 Chloride Soln. in D2O, NMR用

ご好評頂いておりますNMR溶媒の品揃えを充実しました。

品

品

Vol.73, No.2（2005）

ew Products
コードNo. メーカーコード

フルオラス化学を始めませんか
Fluorous社は、アメリカのふっ素誘導製品のメーカーであり、コンビ化学の精製系でユニークな製品が注目されています。一般にフルオロアルキル基でタグ化された有機分子はfluorous solid phase extraction（F-SPE）と呼ばれる手法により容易に他の有機分子から分離することが可能です。固相試薬とは異なりフルオラス試薬は通常の液相反応として取り扱うことができます。そのためクロマトグラフィー
での単離や、各種スペクトル装置での同定が可能な独特の物性を持ってます。
製品は、フルオラス標識合成試薬とカラム精製系に分け
られます。

品

名

容量 希望納入価格（円）583-79751 801-0027S-5 FluoroFlashR SPE Cartridges, 2 grams, 5pack 17,800
20pack 69,000ー
801-0027S 8 cc tube - Flanged
FluoroFlashR SPE Cartridges, 2 grams,
20pack 67,700
586-79741 801-0027FL
8 cc tube - FlangelessFluoroFlashR SPE Cartridges, 2 grams,
20pack 69,000ー
801-00027RL
8 cc tube - Rimless
R
FluoroFlash SPE Cartridges, 5 grams, 2pack 28,600
586-79763
801-0058S
10pack 75,000
10 cc tube
ー587-79771 801-0109S-1 FluoroFlashR SPE Cartridges, 10 grams, 1pack 19,300
5pack 75,000ー
801-0109S 60 cc tube
584-79781 801-0209B FluoroFlashR SPE Cartridges, 20 grams, 2pack 67,700
5pack 120,000
801-0209A 60 cc tube
ーフルオラス保護基（フルオラスタグ）
通常の固相による合成反応では反応速度の低下や、反特長応が完結しないといった問題がありますが、フルオラス保護●対象化合物のフルオラス標識により、通常のシリカゲルカ

基（タグ）を用いる合成反応では、液相反応なので上記のような問題はなく、また簡単に合成反応進行状況を薄相クラムで精製が行える。
●さらにフルオラス化されたシリカゲルカラムにより独特な分

ロマトグラフィーもしくはGC、HPLCなどで確認できます。
加えてF-SPEにより容易な化合物の精製を可能にします。

離条件でフルオラス化化合物を精製できる。
●フルオラス化されたシリカゲルは、繰り返し使用できる。

これらの保護基は通常のふっ素鎖を有しない保護基と同様の方法で保護、脱保護が可能です。

F-SPE（パッケージドカラム）

OO

フルオラス化されたシリカゲルカラムをあらかじめカラムにパッケージしたものです。このパッケージドカラムF-SPEの一般
操作は下記のとおり非常に簡単です。

O

C8F17

O

N

O

Ph
CN

O
O

N

iPr
O
C8F17

C8F17

F17-Boc-ON

F17-Cbz-OSu

iPr
Si

O-SO2-CF3

F17-TIPS-OTf

標識試薬例

１：反応混合物をフルオラスシリカゲルのチューブもしくは
上記製品以外にも、TLC、HPLCカラム、シリカゲルや

カラムクロマトにチャージする。
２：Fluorophobicな溶媒を流すことでノンフルオラスな有
３：Fluorophilicな溶媒を流すことでフルオラス化合物のFluorous Solid Phase Extraction

O

C8F17
Silica O Si

O

じた場合には、それを克服する１つの手法としてフルオラス
性を利用したこれらの製品を是非お試し下さい。フルオラ

フラクションを得る。

O

スカベンジャーなど様々なフルオラス化学関連試薬が提供可能です、合成反応において目的物の分離に問題点が生機化合物のフラクションを得る。

ス化学は精製系をはじめ広範囲な領域での利用が予想さCNれるので、各種修飾基を備えた多くのフルオラス化試薬をPh提供しており、品揃えを充実させています。Fluorous社

N

C8F17

Figure 1. Fluorous Compoundsのwebサイト"http://fluorous.com"には各種製品情報が
1. Reaction mixture containing organic andfluorous components.
2. Elute organic fraction
3. Elute fluorous fraction

豊富に掲載されており最新情報がダウンロードできますので、ご参照下さい。

Figure 2. Fluorous Solid Phase
Extraction（F-SPE）
フルオラスとはこの 簡 単 か つ 有 益 な F - S P E に 関 す る詳 細 な 実 験

フルオラスとは親フルオロカーボン性という意味です。ふっ素

方 法 及 び 使 用 溶 媒 の 情 報 は w e b にて 容 易 に 入 手 可を含む化合物を取り扱う利点は容易な分離精製能にあります。含ふっ能です 。
（ パッケ ー ジドカラム の 動 画 による 説 明 が素化合物は有機溶媒にも水にも混ざりにくいという性質を持って"http://fluorous.com/start.html"でご 覧になれます ）います。ターゲットとなる化合物にこのふっ素のタグを付けてやれば、フルオラス溶媒を用いる抽出操作やフルオラスシリカゲル
カラムクロマトで簡単にタグなしの化合物群と分離することができます。

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）17

ew Products
三次元空孔を持つ
水溶性パラジウム錯体
Pd-ナノケージ
Pd-ナノボール[（en）Pd]（ONO2）2

イオンクロマトグラフ用
標準液
イオンクロマトグラフィーは、イオン類、特に微量の無機イ
オン類やアルカリ金属、アルカリ土類金属などの分析に、三次元的に閉じた構造を持つ化合物は骨格の内部に外界から孤立した特異な空間を有しており、このような空間に取り込まれた分子には、新規な物性や反応性が期待されます。Pd-Nanocage及びPd-Nanobowlは、遷移金属への有効な分析法です。
少量の試料で複数のイオンを同時に測定できることから、
環 境 分 析の分 野ではJIS K 0102工 場 排 水 試 験 法、 水 道
法などの公定法で、分析法のひとつとして採用されています。
当社では、これら環境分析での一斉分析に使用可能な
混合標準液を追加発売しました。

配位結合を駆動力とする自己集合によって、瞬時にかつ定量的に構築されたナノサイズの空孔を持った新しいタイプの三次元錯体です。この三次元錯体空孔では、孤立空間の形状や大きさを利用した特異な反応、有機分子の特異的な抱接、水中での有機合成反応場としての利用などが可能です。ご好評をいただいておりますPd-Nanocageに
Pd-Nanobowlと三次元錯体を構築するためのビスの役割

混合標準液■陰イオン混合標準液
コードNo.

品

混合イオン
種（mg/R）

名

規格

容量

希望納入
価格（円）

Br−：100 Cl−：20−−
イオンクロマト133-11891 Multianion Standard F ：20− NO2 ：100
50mr 6,800
NO3 ：100 PO43−：200 グラフ用
SolutionⅠ

SO42−：100 in H2Oをもつ［（en）Pd］（ONO 2 ）2の２品目を追加しました。

Cl−：200 F−：50

136-11881

Multianion Standard NO2−N：10
SolutionⅡNO3−N：20 in H2O

134-14621

Multianion Standard
NO2−：50 NO3−50
SolutionⅢ
SO42−：100 in H2O

Br−：50 Cl−：10

イオンクロマト
50mr 4,900
グラフ用
イオンクロマト
50mr 4,900
グラフ用■陽イオン混合標準液
コードNo.

品

混合イオン
種（mg/R）

名2+

136-14561

規格

容量

希望納入
価格（円）

2+

Multication Standard Ca+：100 Mg ：100 イオンクロマト
50mr 4,900
Na ：100
グラフ用
SolutionⅠin 0.02mol/RHNO3++

4 ：100 Na ：100
Multication Standard NH+
130-14601
K ：100
SolutionⅡ

Pd-Nanocage

in 0.02mol/R in HNO3

イオンクロマト
50mr 4,900
グラフ用

Li+：5 Na+：20 NH4+：25+
2+
Multication Standard K :50 Mg ：30
イオンクロマト2+
50mr 4,900
137-14611
Ca ：50グラフ用
SolutionⅢ
in 0.02mol/R in HNO3

塩素酸イオン、亜塩素酸イオン
平成16年4月より改正された水道法の水質基準項目の臭素酸イオンに加え、管理目標項目の塩素酸イオン及び亜塩
素酸イオンの測定にご使用いただける標準液も発売しました。

Pd-Nanobowl

コードNo.
コードNo.

18

品

名

規

格

容

品

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）

量 希望納入価格（円）160-20471 Palladium-Nanocage

有機合成用

1g

23,000165-21761
Palladium-Nanobowl
161-21763

有機合成用

200mg
1g

10,00035,000(Ethylenediamine)
200mg
052-07341
dinitratopalladium(Ⅱ) 有機合成用
1g
058-07343【[(en)Pd](ONO2)2】

8,000
30,000

和光純薬時報Bromate Ion Standard Solution イオンクロマト
50mr
グラフ用
(BrO3−：2,000mg/Rin Water)

4,000

Ion Standard Solution イオンクロマト 50mr
037-19401 Chlorate
グラフ用(ClO3−：1,000mg/Rin Water)

4,000

Ion Standard Solution イオンクロマト 50mr
034-19411 Chlorite
グラフ用(ClO2−：1,000mg/R in Water)

4,000

028-15091

Vol.73, No.2（2005）

ew Products
ギンセノシド Rg1

悪臭物質測定用標準液
アンモニア標準液Ⅱ
大気中の有害成分を規制する法律のひとつに、悪臭防止法があります。悪臭防止法施行規則第5条には、アンモ
ニア、アルデヒド類、トルエン、キシレンなどが特定悪臭物
質としてあげられ、その測定方法も定められています。
この度、当社では現行の測定法に対応したアンモニア
標準液を発売しました。
コードNo.

012-20081

品

名

規

格

Ammonia Standard SolutionⅡ 悪臭物質
（100μR/mR Water Solution）
試験用

容

本品はオタネニンジン根に含有される有効成分です。ラット大脳皮質刺激、脳内シナプスの神経伝達物質の分泌促
進作用があります。
起 源 ： Panax ginseng C. A. Meyer（ Panax Schinseng
Nees）（ Araliaceae ）CAS No. : 22427-39-0
R2OOH

量 希望納入価格（円）

5mr

3,200

HO

R1=R2=Glc-

関連商品

コードNo.

下記、既存商品 アンモニア標準液も、引き続き販売します。

076-05021 Ginsenoside Rg1

コードNo.

012-08241

品

名規

Ammonia Standard Solution（0.2μg/μR Water Solution）

格

悪臭物質
試験用

容

品

名

規

5mr

3,200

局方生薬試験用(薄層クロマトグラフ用)

10mg

30,000

本品はチョウセンゴミシ果実に含有される有効成分です。

CAS No. : 7432-28-2
OCH3
H3CO
H3CO
H3CO
OH

C24H32O7=432.51

OCH3

アルブチン
本品はウワウルシ、コケモモの葉に含有される有効成分です。大腸菌増殖阻止作用の抗菌作用、マウスの塩化ピ
クリルによる接触性皮膚炎に対する治療効果増強などの薬理作用があります。
起 源：Arctostaphylos uva-ursi（Linné）
Sprengel（Ericaceae）
化学名：4-Hydroxyphenyl-β-D-glucopyranoside
CAS No. : 497-76-7

コードNo.

品

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用
197-13551 Schizandrin
20mg（薄層クロマトグラフ用）

18,000

サイコサポニン a
本品はミシマサイコの根に含有される有効成分です。モルモットに対する鎮咳作用など中枢抑制の作用があります。
起 源：Bupleurum falcatum Linné（ Umbelliferae ）CAS No. : 20736-09-8

CH2OH
O

O

OH

H

O

・nH2O

OH OH

H

H

OH

H
OH

C12H16O7・nH2O（C12H16O7=272.25）

RO
CH2OH

011-20291 Arbutin

量 希望納入価格（円）

マウス、ラット、ウサギに対し鎮咳作用、肝障害防止作用があります。
起 源：Schisandra chinensis Baillon（ Schisandraceae ）

H3CO

品

容

シザンドリン

第十四改正日本薬局方に収載されている生薬有効成分の試験に使用されます。本品は、日本薬局方一般試験法
試薬・試液の規格「成分含量測定用及び薄層クロマトグラ
フ用」に適合しています。

コードNo.

格

量 希望納入価格（円）

日本薬局方適合生薬有効成分（標品）

H

C42H72O14=801.01

OR1

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用（成分含量20mg
測定用・薄層クロマトグラフ用）

12,000

コードNo.

品

名190-13541 Saikosaponin a

C42H68O13=780.98

R=Glc-3Fuc-

規

格

容

量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用10mg（薄層クロマトグラフ用）

23,000ew Products
マウス・ラットのモデル大腸がん誘発剤
アゾキシメタン【AOM】

関連商品
マイコトキシン試験用試薬

本品はマウスやラットにおける大腸がんを強力に誘発させる物質で、大腸がんモデル作製物質として発がん予防物質の探索やがん発生メカニズムの研究に広く用いられています。今後も結腸がんの増加が危惧される中で、発がんコードNo.

品

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）013-10361 3-Acetyldeoxynivalenol マイコトキシン試験用

10mg

22,000010-17691 Aflatoxin G2

生化学用

10mg

58,000024-07761 Butenolide

マイコトキシン試験用

10mg

15,700ー

033-08011 Citrinin Standard

10mg

27,000048-18631 Deoxynivalenol Standard マイコトキシン試験用

10mg

24,000046-20401 Diacetoxyscirpenol マイコトキシン試験用

10mg

16,000回、約3週間行う事で数週間後には前がん病変（ACF）が060-03563
Fumonisin B1
064-03561

生化学用

1mg
10mg

10,00042,000

認められます。

063-03411 Fumonisin B2

生化学用予防物質の探索がますます盛んに行われるものと考えられ、本品が果たす役割は重要となってきています。本品の平均的な投与量は、ラットで皮下注射15mg／kg（ 体重 ）を週1O
H3CｰN＝NｰCH3

C2H6N2O＝74.08

CAS No：. 25843‐45‐2
含 量（ GC ）： 95.0％以上

10mg

39,900063-01711 Fusarenon-X Standard マイコトキシン試験用

10mg

22,000141-04661 Neosolaniol Standard マイコトキシン試験用

10mg

20,000144-04651 Nivalenol Standard

マイコトキシン試験用

10mg

21,000生化学用

5mg

42,000

マイコトキシン試験用

10mg

14,500150-02111 Ochratoxin A
209-08251 T-2 Toxin Standard〔参考文献〕
田中卓二 他：日本癌学会総会記事, ｐ269（ 1996）.
１） 広瀬善信、
２） Tanaka, T., Sumida, K. and Ogawa, H.： Foods & Food Ingredients
J. Jap., 177, 43（ 1998）.
. J. Exp. Clin. Cancer Res., 22, 41（ 2003）.
３） Orii, S. et al：. Microbiol. Immunol., 47, 951（ 2003）.
４） Nakanishi, S. et al：. J. Gastroenterol., 37, 186（ 2002）.
５） Kishimoto, Y. et al：

コードNo.

品

名011-20171 Azoxymethane

関連商品

規

格

容

量 希望納入価格（円）

細胞生物学用 100mg 50,000

がん誘発物質LPSは、グラム陰性細菌の細胞壁の最外層を構成している成分です。本品は、 E.coliより粗LPSをフェノールｰ水抽出法（ Westphal法 ）にて抽出した製品と（ →フェノール抽
出品 ）、さらに、超遠心法で精製し2回洗浄した製品がコードNo.
品
名
誘発がん 規格 容量 希望納入価格（円）042-02801 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene 乳腺がん 和光特級 1g
29,000049-24891 DMIP
大腸がん 生化学用 20mg 26,000
147-03421 4-Nitroquinoline 1-Oxide 卵巣腫瘍、白血病 和光特級 1g
13,000163-15951 PhIP Hydrochloride 口腔がん（舌がん） 生化学用 100mg 36,000あります（ →超遠心品 ）。各種炎症反応の誘発実験などにご使用下さい。

規格起

源 ： E.coli

マイコトキシン試験用試薬形

状 ： 凍結乾燥品

パツリン

コードNo.

パツリンは、 Penicillium 属や Aspergillus 属などの真菌によって産生されるマイコトキシンで、汚染の可能性の高い主要食品としてリンゴ果汁が良く知られており、公定規格でリンゴジュースや原料用リンゴ果汁中のパツリンは50ppb
以下と定められています。
本品は、リンゴジュースや原料用リンゴ果汁中のパツリン
検査用標準品として使用できます。
含量（ HPLC ）：９８.５％以上
融

点 ：１１０〜１１１℃起

源 ： Penicillium expansum

コードNo.

品

168-21631 Patulin

20

生体防御機能研究
LPS（リポポリサッカリド）

名

規

格

マイコトキシン試験用

容

量 希望納入価格（円）10mg

30,000

和光純薬時報品
名Lipopolysaccharide, from E.coli
120-05131
O26（by phenol extraction）
Lipopolysaccharide, from E.coli
127-05141
O55（by phenol extraction）
Lipopolysaccharide, from E.coli
125-05201
O111（by phenol extraction）
Lipopolysaccharide, from E.coli
124-05151
O127（by phenol extraction）
Lipopolysaccharide, from E.coli
121-05161
O26（by ultracentrifugation）
Lipopolysaccharide, from E.coli
128-05171
O55（by ultracentrifugation）
Lipopolysaccharide, from E.coli
125-05181
O111（by ultracentrifugation）
Lipopolysaccharide, from E.coli
122-05191
O127（by ultracentrifugation）

Vol.73, No.2（2005）

菌株 精製 規格 容量 希望納入価格（円）O26

フェノール 細胞生25mg 10,000
抽出 物学用O55

フェノール 細胞生25mg 10,000
抽出 物学用O111

フェノール 細胞生25mg 近日発売
抽出 物学用O127

フェノール 細胞生25mg 10,000
抽出 物学用O26 超遠心

細胞生
5mg
物学用

12,000O55 超遠心

細胞生
5mg
物学用

12,000O111 超遠心

細胞生
5mg
物学用

12,000O127 超遠心

細胞生
5mg
物学用

12,000ew Products■ ウエスタンブロット

簡単、迅速なラベリングキット
Dojindo ラベリングキット

52kDa

本品は活性化試薬とFiltration Tubeにより抗体などを簡単に標識するキットです。前処理、反応、精製まですべて一つのFiltration Tube上で行う事ができ、3時間以内で標標的タンパク質

21kDa

識する事ができます。

特

33kDa

長

Fig.3. 抗原タンパク質をSDS-PAGE後、ニトロセルロース膜に転
写し、ALPラベリングキットで標識したALP標識抗体を用い●短時間で標識が可能て検出

従来の標識法では標識に2日要していたが、本品を用い■ 免疫組織染色

る事でわずか3時間に短縮できる。
●高分子から低分子まで

肺動脈

分 子 量 5 0 , 0 0 0 以 上の高 分 子の標 識ができる。また、PeroxidaseとAlkaline Phosphataseのラベリングキットに関しては、さらに分子量5,000以下の低分子の標識も可能である。
●豊富なラインアップ
Peroxidase、Alkaline Phosphatase、BiotinはそれぞれSHタイプとNH 2タイプ、また蛍光物質ではFluoresceinのラベリングキットをラインアップしている。各種用途にあわせてご利用下さい。

Fig.4. ビオチン標識Anti-Nitroguanosineモノクロナール抗体を用いて染色した、肺高血圧剤投与ラット肺動脈凍結切片の免
疫組織染色（北里大学医療衛生学部微生物学教室 北里英郎教授提供）
a

各種データ

Fluorescein -labeledb
Macrophage marker■ ELISA
1.4
同仁：PLK-NH2
同仁：PLK-SH
B社（グルタルアルデヒド法）
A社（マレイミド法）

Abs.at 650 nm

1.2
1.0
0.8

c

d

Nuclear staining

0.6
0.4
0.2
0

0

1

2

3

4

5

[Biotinylated-BSA]:ng/mR

Fig.1. プレートに固相化したビオチン標識BSAを、各種方法でHRP標識した抗ビオチン抗体を用いて測定
2.0
1.8

同仁：BLK-NH2
B社
D社
A社

Abs.at 650 nm

1.6
1.4

Fig.5. マウス肺の蛍光染色a）マクロファージに発現するレセプターの抗体をフルオレセイ
ンラベリングキットで標識した抗体で染色b）マクロファージのマーカーで染色
c）核染色d）多重染色（熊本大学医学部細胞病理学講座 寺崎泰弘先生提供）
コードNo. メーカーコード

1.2
1.0

品

名

容

量

希望納入価格（円）348-90821

LK11

Peroxidase Labeling Kit-NH2 3samples

17,0000.6

345-90831

LK09

Peroxidase Labeling Kit-SH 3samples

17,0000.4

343-90871

LK12

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 3samples

21,000346-90861

LK13

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-SH 3samples

21,000347-90891

LK03

Biotin Labeling Kit-NH2 3samples

12,000348-90941

LK10

Biotin Labeling Kit-SH

3samples

12,000347-90911

LK01

Fluorescein Labeling Kit-NH2 3samples

21,000

0.8

0.2
0
0

10

20
30
40
[CAT enzyme]:mU/mR

50

Fig.2. プレートに固相化したCATを、各社ビオチンラベリングキットで標識した抗CAT抗体を用いて測定

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）21

A

pplication Data

シリカ担体によるRNA精製キットとRNAスタビライザーを併用して精製したTotal RNAについて、その性能を検討しました。試料としてマウス肝臓を用い、RNAスタビライザーを添加及び未添加で、その精製したTotal RNAの安定性及び、それぞれのサンプルを鋳型としたRT-PCR増幅について検討しました。結果として、RNAスタビライザーを用いて精製したTotal RNAは、37℃、一晩インキュベートしても分解が認められず、また、RT-PCRで増幅断片を得ることができました。この実験結果より、RNAスタ
ビライザーを添加して精製したRNAは非常に安定で、他の酵素へ影響を与えないことが判明しました。

■RNA精製■RT-PCR

50℃ 20min.
↓
85℃ 1min.
クチン遺伝子（294bp）
をRT-PCR増幅した。 52℃ 1min. ×28cycles
72℃ 1min.

市販のRNA抽出キットのマニュアルに従って行った。 精製したTotal RNA 0.2μgに対してβ-ア洗浄工程の最初の洗浄液に対し、RNAスタビライザー
を1/10容量入れた後、室温で20分間インキュベー

RT-PCR条件トした。他の操作は、マニュアルに従って行った。
−80℃保存 37℃, 一晩

1

2

3

4
M

28S
18S

1

−
2

+
3

−
4

+
5

Lane 1：RNAスタビライザー未添加（−80℃終夜保存）
Lane 2：RNAスタビライザー添加（−80℃終夜保存）
Lane 3：RNAスタビライザー未添加（37℃終夜インキュベーション）
Lane 4：RNAスタビライザー添加（37℃終夜インキュベーション）←RNAスタビライザー処理←294bp

精製したRNAのアガロース電気泳動写真M：100bpラダ−分子量マーカー
Lane 1：陰性コントロール
Lane 2：RNAスタビライザー未添加（−80℃終夜保存）
Lane 3：RNAスタビライザー添加（−80℃終夜保存）
Lane 4：RNAスタビライザー未添加（37℃終夜インキュベーション）
Lane 5：RNAスタビライザー添加（37℃終夜インキュベーション）

RT-PCR増幅後のRNAのアガロース電気泳動写真

コードNo.

品

180-01891

RNAstabilizer,Irrevesible RNase Inactivation Reagent

名

規

格

遺伝子研究用容量

50回用

希望納入価格（円）12,000遺伝子工学用試薬カタログ・マニュアル 2005 発行！
特記事項●新製品約200品目追加●新 規 無 細 胞タンパク質 合 成キット−
WakoPUREシステムを掲載●カスタム合成や合成キットまでsiRNA関連試薬を新たに掲載●ECOS TM Competent E.coli、
Ligation-Convenience Kit、
Blunting-Convenience Kit、
Bac'n'Roll Beadsなど短時間、高効率クローニング試薬を新たに掲載●土壌DNA抽出キット「ISOIL（アイソイル）シリーズ」を新たに掲載●バッファー類もさらに充実●DNA、RNA抽出からプロテオーム、
さらに学生実習用キットまで幅広く掲載●Evrogen社 蛍光タンパク質発現ベ
クターシリーズを新規追加

22

目

次

siRNA
PCR
PCR
qPCR
BufferCloning and Modification
Restriction Endonuclease
Modifying Enzyme
DNA Substrate and Vector
Other
Gene Transfer
Gene Transfer
amaxa
DNA Sequencing
PrimerElectrophoresis
MarkerAgarosePolyacrylamide and Dye
Apparatus
DNA Array
Hybridization
DNA and RNA Extraction
Library
CapSiteR Technology
RNA and DNA
BioChain, GeBA, Cybrdi, ILSbio
DNA and RNA Synthesis
Cell free protein synthesis

和光純薬時報Apoptosis
Custom Service
Biotechnology Educational Kit
GMO Detection
Trial Series
Molecular Biology Grade ReagentsProteome Analysis
Protein Extraction
Protein Purification
Protein Refolding Reagent
Protein Analysis
Structural Analysis

Vol.73, No.2（2005）

OthersManuals
Appendix
Index and Price List

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化学大家

399

エミール・フィッシャー（1852.10.9〜1919.7.15）
科学史家

島尾

永康

した姿 勢 、 敏 捷な身のこなし、それが行動人フィッシャーの印であり、一ドイツ大学の競争原理

つの目標を目指して脇目もふらず進むのがかれの人生の顕著な特色だった

エミール・フィッシャーはボンの近くの（図3）。

オイスキルヘンで、豊かな商人の8番目の、末っ子として生まれた（ 図1 ）。上の男
児は亡くなっていたので唯一人の男児

生体に関する合成化学だった。5人の姉たちが争って弟を関心の的としたので、エミールはちょっとフィッシャーは、理論や仮説はうつした女 性 嫌 悪 症に陥った。ボン大 学

ろいやすいものとして重視せず、重要でケクレから化学、クラウジウスから物なのはもっぱら事実であり、事実的な理の講 義を聴いたが、これら有 名な

研 究 成 果こそ永 久 不 変なものと見た。

学者からとくに影響は受けなかった。

徹底した経験主義者だったが、原子論や立体化学の概念は疑わなかった。

翌年、普仏戦争後の1872年にドイツ政府が開いたストラスブルグ大学に移り、

図１. エミール・フィッシャー。

オストヴァルトやマッハのように原子論

そこで真の師匠、アドルフ・フォン・バイ

（1882〜1885）
だった31歳のとき、バーを否 定 する大 家もいた時 代である。

ヤーに出会い（ 図2 ）、かれをドクターデン・アニリン・ソーダ社から、大学教最初の研究発表はヒドラジン化合物にファーター（ 博 士 課 程の指 導 教 授 ）と授の年俸の数倍に当たる、年俸10万ついてだった（ 1875 ）。未知の新しいして22歳で博士となり、直ちにその助マルクで研究部長に迎えたいという申化合物グループを発見し、それをヒド手に採用された。1875年、バイヤー出でがあったが、「思考の自由と研究

ラジンと命名した。フェニルヒドラジン

がリービッヒの後継者としてミュンヘンの自由は、いかなる富や権力とも替えがアルデヒドとケトンの試薬として役立大学に移ったときこれに従い、員外教がたい貴 重なものだ。身に沁みついつことを発見した1884年は、実り多い授となり、分析化学を担当した。超一た学者気質は産業には役に立たない年だった。しかしそれが糖 類の合 成流の実験家バイヤーに学んだフィッシャー

と思う」といって辞退した。しかし産業実験で有力な武器となることが分かっ

自身も高度に熟練した実験家となった。

界との関係は保った。その後ウュルツたのは10年ものちのことである。ホフ

小さな大学町エアランゲンの大学教授

ブルグ大学教授となった（1885〜1892）。

マンが作った染料 、
ロザリニンの構造

エアランゲンからウュルツブルクへ移っ

決定の研究に気をとられたからである。

たころからフィッシャーをドクターファーター

エアランゲンにいたころ、メルカプタとしたいという志 願 者 が 急 増した 。

ンの臭いの研究に関連して、フィッシャー

チューリッヒ工科大学からもハイデルベ

は人間の嗅覚はときに分光分析よりもルク大学からも教授職への招きがあった。

鋭敏であることを量的に検証した。嗅ホフマンの後継者としてベルリン大学

覚を重視したフィッシャーは、ある種の教授という招きがあったとき、南ドイツ

化学物質を最も鋭敏に検知するのはの大学ばかりで過ごしたフィッシャーにやはり嗅覚であると1907年にも言明しはプロイセン気質になじめないものを感ている。

じたが、帝国の首都の与えるさまざま

カフェインの研究に引き続いて、尿な利点を考えると、抗し難い魅力であっ酸とその関連物質の研究を始めたのた。こうしてドイツ大学の競争原理がは1881年で、これらはある仮説的物

機能して、40歳のフィッシャーはベル

質の酸化物であることを明らかにし、リン大学化学教授兼化学科長の地位

その物質をプリンと命名した。その研を獲得した（ 1892〜1919 ）。しゃんと
図２. アドルフ・フォン・バイヤー。40年間のミュ
ンヘン大学教授時代、バイヤーを凌駕する有機化学者はなく、門下から多くの優れた有機化学者が輩出した。インディゴの合成はとくに有名。1905年、ノーベル化学賞受賞。

究の 頂 点はプリン自体の 発 見である
（1898）。尿酸の研究はそれを発見したシェーレに始まり（1776）、フルクロワ、
プラウト、リービッヒ、ヴェーラー、ミッ
チェルリッヒ、ジェラール、シュトレッカー、

図３. フィッシャーの署名。

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

バイヤーなど多くの名前が化学史を飾っ23

ているが、その輝かしい星群の中でドを合成した。1907年にはオクタデカ

ひときわ輝かしい光芒を放っているのペプチド（ 18のアミノ酸からなり、分子

手のひらまで湿 疹を生じ、 腸の機 能がフィッシャーである。 1 9 0 0 年までに量1213）を合成した。この年、ベルリに障害がおこり、下痢を伴う腹痛があっ

かれが合成したプリン誘導体は130にン科 学アカデミーからヘルムホルツ賞た。1892年冬はとくにひどく、いかな

なかった。このため1891年には指から達し、この分野の研究の第一人者となっを受 賞した。これは物 理 学と生 物 学

る治 療 法も効かなかった。中毒は薬た。プリンの知識のすべてはフィッシャー

に関する優れた業績に与えられるもの

物の蒸気にもよったが、皮膚からの侵による。プリン研究と平行しておこなっ

で、フィッシャーの化学研究の生物学

入によることが多かった。神経系統もた炭水化物の研究を結び付けて、最へ の 貢 献を評 価され た の である。

悪影響を受けた。ウュルツブルクの換

初のヌクレオチドを合成したのは1914

1916年には、約100のポリペプチドの気の悪い個人実験室で、2年間、塩

年で、尿酸の研究から実に33年間続合成に関する自身の研究をまとめた。

化リンを弄ったときは咽喉の炎症をおいた研究である。メルク社、バイエル社、

フィッシャーの有機化学研究は、生体こした。 実 験 室の換 気の良し悪しはかれの最大関心事だった。

ヘキスト社はフィッシャーのプリン研究中に存在する物質の構造と合成に関にもとづいて、催眠薬ヴェロナール、するものが主であり、糖、酵素、プリ

バルビタール、ドルミナール、ルミナー

ン、タンパクの研究で生化学の基礎をベルリン大学化学教室の新築

ルなどを製造販売した。またベーリンガー築いた。ベルリン時 代の門 下 生から、社、バイエル社はカフェイン、テオフィ

アドルフ・ヴィンダウス
（1928）、ハンス・ミュンヘン大学では新築されたばか

リン、テオブロミンを製造した。「商売フィッシャー（ 1930 ）、オットー・ワール

りの化学教室で、フィッシャーは師のに向かないと父に愛想をつかされた私

ブルク（ 1 9 3 1 ）、オットー・ディールス

バイヤー教授と同じ大きさの個人実験だが、いささかの発明によって、商人（1950）のノーベル賞受賞者が出てい室を与えられた。エアランゲン大学でも、だった父さえ手にすることもできなかっる。（ ）内は受賞年。

化学教室は新しく、設備はかなり良かったような収入を得る身となった。」（『自た。ウュルツブルク大学では設備は悪伝』）。製薬特許権によってかれは当く、 教 室の新 築について文 部当局と時のドイツの学者のうち最も富めるものとなった。

深刻な薬物中毒

数年にわたって粘り強く折衝したが、フィッシャーは暴飲と過度の喫煙で完成したのはフィッシャーが去った後だっ炭水化物の研究は1884年に始めらしばしば体調を崩したが、実験によるた。見事な化学教室が新築されるこれ 、 尿 酸の研 究と平 行しておこなわ薬害も甚大だった。手は薬品で汚れ、とになっていたチューリッヒ工 科 大 学れた。最初の糖の合成は1887年にお一 見して化 学 者と分かった。ひどいからの誘いは魅力的だったが、健康

こなわれた。糖類の研究で、果糖、悪臭に悩まされたこともある。エアラン

上の理由で断った。ハイデルベルクか

ブドウ糖などの異性体を合成し、ファゲン時 代に始めたフェニルヒドラゾン

らブンゼンの後任にという誘いもあった

ント・ホフ、ル・ベルの説を確証した。

からインドール誘導体を作る実験で、が、実験室の老朽ぶりを見て辞退した。

グルコースの光学異性体が16通りある

多量のスカトールを作ったが、そのつ

ベルリン大学からの招聘を受諾したとことを証 明した。 糖 類の発 酵にかかよい悪 臭が衣 服 、 髪 、 皮 膚にくっつきの最大の条件は化学教室の新築だっわる酵 素の研 究をおこない、 酵 素 化

いて、フィッシャーとその共同研究者た。しかしフィッシャーの指図通りの化学の基礎を作った。酵素と糖類の関たちはオペラ劇 場 、レストラン、自宅、学教室が完成したのは赴任後8年の係を錠と鍵に喩えた（ 1894 ）。糖とプ

あるいは旅先のホテルなど、いたると1900年7月であり、「研究手段の多様

リン族の合成に対してノーベル化学賞

ころで苦情を引き起こした。

性と豊 富さにおいて、 世 界のどの化を受けた（ 1 9 0 2 ）。 炭 水 化 物の研 究ミュンヘン時代に酸化水銀とヒドラジ

学教室・研究所にも引けを取らない、」の延長としてタンニンの研究を始めたンの反応を扱ったとき水銀中毒にかかっとフィッシャーが開設時に誇らしげに挨（ 1 9 0 8 ）。マルトースの誘 導 体としてたが、3ヶ月で直った。フェニルヒドラ

拶したのはその翌年である。

合成した物質の分子量は、それまでジンの発見は大ヒットだったが、そのベルリン大学にはゲオルク通りにホ

慢性中毒に悩まされた。「私はこの化

フマンが設 計した第 一 化 学 教 室と、学の初 恋の対 象と1 5 年 間も仲良くし

ブンゼン通りにランドルトがいた第二化

アミノ酸とタンパクの関係は、ヘキソー

たが、それは慢性的な、執拗な中毒

学 教 室があった。 1 9 0 0 年にヘッセンの合成物質中最大の4021であった。
1899年、タンパクの研究を開始した。

24

スと多糖類の関係であり、フィッシャー

をもたらして私を不幸にした。それを通りに移 転して新 築されたのは第 一はまずアミノ酸の研究から始めた。ア取り除くのに12年もかかった」と述べ

化 学 教 室である。 後にこれはたんに

ミノ酸の分離法を改良し、ポリペプチているが、実際は終生これより回復し化学教室、第二化学教室は物理化

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

図４. ベルリン大学化学教室の鳥瞰図（フィッシャー、グート共著、『ベルリン大学第一化学教室の新築』、1901）。
手前の左側に学科長邸宅、右側に大講義室がある。

図５. 有機化学大実験室（前掲書）。

図６. 化学科長の個人実験室（前掲書）。

学教室と呼ばれることになる。地階つき3 階 建ての化 学 教 室に、 豪 壮な化
学科長邸宅が隣接していた（ 図4 ）。
各階の高さは一様でなく、高さの順にいえば、2階5.48ｍ、3階5.15ｍ、1階3.73ｍ、地階2.53ｍとなっていた。2階には有機化学の大実験室が2室あり、各室には12の実験台に48の座席がある（ 図 5 ）。 科 長 邸 宅から渡り廊 下で図７. 大講義室（前掲書）。正面の壁には元素記号表と周期表が掲げられている。

化学教室に入るとすぐ科長個人実験

3 階には2 階のと同じ大きさの無 機 化に伝説的だが、カイザー・ヴィルヘルム

室になっている（ 図6 ）。フィッシャーは学の大実験室が2室ある。他に、悪化学研究所が開設されると、放射化

ベルリン大学ではそれまでのどの大学

臭室、電気分解室、座席数110の中学を独立の部門としてハーンをその主よりも多くの雑用に忙殺されたが、な講義室と34の小講義室、天秤室2、任とした。フィッシャーはベルリン大学

おか つ化 学 教 室で最 大の 個 人 実 験

送風機室、分光分析室、ガス・容量にファント・ホッフとヴァルター・ネルンス

室を作らせてタンパクの研究に没頭し分析室、分科長個人実験室などがあトを招聘するのにも尽力した。

たことが見てとれる。科長天秤室と科る。1階には蒸留水室、工場、倉庫3

開校した年の10月、京都帝大の初長面談室も隣接している。他の研究室、木工・精密機械作業室、電気化

代有機化学教授、久原躬弦が早くも者用の天秤室は2室ある。大講義室

学室、変電器室、鍛工室、長時間見学に来ている。その『独逸国大学

は2階と3階にまたがる、高さ9.5ｍ、加熱室、顕微鏡研究室、ガス分析室、巡覧記事』（ 1901 ）に、「実験室ノ清

幅18ｍ、長さ15ｍの大空間に、12段

カロリメトリ室、液体空気製造室、殺潔 名 状シ難シ」とあるが、ドイツ人のの階 段 教 室となっており、 座 席 数は

菌室、生理化学室、熱化学と冶金室、清潔好きに加えて開校早々であるから490である（図7）。ベルリンはしばしば

光化学室3室などがあり、地階には恒清 潔なのは当然であろう。 久 原が旅

霧がかかって部 屋が 暗くなるので、温室と孵化室がある。

の最後に見たロンドン大学のラムゼー

大講義室の窓は普通より大きくしてある。

フィッシャーが、ラムゼーの推 薦 状

この他、図書室、光学室、有機化学・をもってやってきた若いオットー・ハーンと、その共同研究者マイトナー
分科長個人実験室、助手個人実験室、 （1906）
物理化学作業室、燃焼室などがある。

を1階の木工室で研究させたのはすで

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）の「実験室ノ穢キト其ノ設備ノ不充分ナルニハ誠ニ驚クノ外ナシ」と好対照をなしている。フィッシャーの個人助手、「アームストロング氏ノ案内ニテ残ル隈

25

ナク実験室内ヲ一見セリ」、「少シデ科学者だった。4たびドイツ化学会会保障された。建物と装置を民間の個

モ特殊ノコトニハ必ズ一室アリ。タトエ

長を務めたフィッシャーは、学界と産業

人または企業が提供し、維持費を文

バ油バスノ部屋ニハ通常ト攪拌ノ区別

界と政 府を結ぶ重 要な存 在だった。

部省が負担した。管理は政府またはアリ。 光 学 室アリ、 生 理 化 学ノ実 験

1909年、神学者で自然科学にも造詣

民間人の単独ではなく、両者の合同

室アリ。 蒸 留 室ニモ通 常ト真 空ノ区の深いアドルフ・フォン・ハルナック（図8）でおこなわれる点が英米流と異なって別アリ。低温ノ室アリ、液体空気ノ室

は、フィッシャーの助言にもとづいて、いた。化学研究所はエルンスト・ベック

アリ。 天 秤 室ハスベテ五 六 個アリ。

ドイツが基礎科学の研究所設立では英、マンを所長とし、独立の三部門からなっ毒性ガスヲ実験スル室アリ。ソノ他備

米、仏、スウェーデンなどに立ち遅れていた。無機および物理化学（ ベック

レリ、尽クセリ、実ニ筆紙ニ尽クシ難シ」ていること、そこでベルリン大学創立

マンが主任）、有機化学（リヒャルト・ヴィとある。「フィッセル（フィッシャー）氏ノ百年を記念して複数の研究所を設立

ルシュテッターが主任 ）、放射能（オッ

講義ヲ聴聞ス」とも記している。大講することを皇帝ヴィルヘルム2世に進言

トー・ハーンが化学、リーゼ・マイトナー

義室のフィッシャーの講義はつねに満した。翌年、カイザー・ヴィルヘルム科

が物理の主任 ）である
（ 図10 ）。物理員で、 化 学 者 、 医 師 、 薬 剤 師 、 教

学 振 興 協 会が設 立され 、ハルナック

化学研究所は、物理化学がフリッツ・

員志望者のほかに法科や神学科からが会長、フィッシャーが実行委員長とハーバー、毛細管化学がヘルベルト・

聴きにくるものもいた。鈴木梅太郎がなり、1912年10月23日、その最初のフロイントリッヒが主任である。のちにフィッシャーの許に留学したのは1903

二つである、カイザー・ヴィルヘルム化

ポラニとラーデンブルクが加わって四〜1906年であるから新築の化学教室

学研究所とカイザー・ヴィルヘルム物理部門となった。しかし開所後すぐ大戦である。化学教室は1945年、空襲で化学および電気化学研究所が設立さとなったので、基礎研究どころか、毒破 壊され たが 、 戦 後 、 再 建され 、れた（ 図 9 ）。 所員は教 育の義 務なく、ガス研究の拠点となった。したがって1953年に大講義室は「エミール・フィッ

基礎研究に打ち込み、研究の自由が研究所としての最盛期は第一次大戦

シャー講堂」と命名された。

カイザー・ヴィルヘルム協会
19世紀末葉では物理のヘルムホルツがそうだったように、20世紀初頭では化学のフィッシャーがドイツの最高の

図９. カイザー・ヴィルヘルム研究所の開所式に臨む皇帝ヴィルヘルム2世（左）と、ハルナック、
フィッシャー、ハーバー（右）。

図８. アドルフ・フォン・ハルナック。ベルリン大学教授、教会史研究の権威。カイザー・ヴィルヘルム協会の創始者で初代会長。
大戦後にはドイツ科学緊急協同体を創案した。夫人は19世紀の大化学者リービッヒの孫娘。

26

図１０. カイザー・ヴィルヘルム化学研究所の図書室。手前の机の左側にベックマン、右側にヴィルシュテッター、奥の机にハーンとマイトナーが並んでいる。
（フィッシャー、ベックマン共著、『ベルリン・ダーレムのカイザー・ヴィルヘルム化学研究所』、1913）。

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）

図１１. カイザー・ヴィルヘルム化学研究所。左から順に所長邸宅、門衛住宅そして本館である。
（前掲書）。

後の再建からヒットラーの台頭までの称され 、 物 理 化 学 研 究 所は1 9 5 3 年、間である
（図11）。

フリッツ・ハーバー研究所と改称された。

フェニルヒドラジンの慢性中毒のほかに、 絶えず 咳がとれ ず 、しばしばフィッシャーは戦時中、化学に関す

気管支カタルをおこし、消化器の不調

るありとあらゆる問題の行政にかかわった。チリ硝石に代わる合成硝酸、コー

観察記録となっている。

晩年と不眠症に悩まされた。1917年には、

クス炉からのアンモニア増産、ベンゼ

ウュルツブルクでフィッシャーは解剖

胆嚢に異常があり、肺炎とパラチフス

ンとトルエンの増産、ナフタレンからの学教授の娘アグネス・ゲルラッハと結婚

を併 発した。 家 族の不 幸と自身の病

重油の生産、コールタールからフェノー

した。わずか 7 年 後 、 妻は中耳 炎か気と敗戦後のドイツの虚脱状況にフィッ

ルとクレゾールの抽出、石膏とキーゼら脳膜炎を起こして33歳で3児をのこ

シャーは疲れきった。長年にわたって

ル石の含有イオウの利用、油脂の鹸してベルリンで亡くなった（ 1895 ）。妻

腸 障 害に悩まされたが 、しばしば激化の制 限のため他のグリセロール資の早逝後は社交生活を避けて研究室

痛 によって 起 床 できなくなった の は源の調査、食料不足の対策などである。

に引きこもった。 長 男へルマンはケン

1919年7月のことである。医師たちは

カフェインを用いてコーヒーの完 全

ブリッジ大学に留学し、ベルリンで父手術不能の腸ガンと診断した。7月15

な代替品を作る問題に、フィッシャー

の指 導を受けて生 化 学 者となり、 後

日の朝、公証人を呼んで遺言状を作は戦前から特別の関心をもっていた。

年バークレーのカリフォルニア大 学 教成し、その中、75万マルクをフィッシャー

コーヒー豆による純正コーヒーの輸入授となった（ 1948 ）。次男ヴァルターは基金としてドイツの若い化学者に役立にドイツは年 間 2 億マルクの巨 費を費

医 学を修めて軍 医となったが、 強 度

てるようベルリン科学アカデミーに託した。

やしたので、それを節約するという国のうつ病にかかって入院し、平癒した

同日の夜、青酸によって自ら命を絶った。

民経済的な問題にかかわっていたののち大戦に参加したが、上官と衝突である。コーヒーのかおりの性質とそして精 神 病を再 発し、うつの発 作中の合 成の研 究も戦 前から努めてきた。

に自殺した（ 1916 ）。三男アルフレッド

しかし戦時中は軍の衛生局と戦時食も軍医として出征したが、ルーマニア

料管理庁の抵抗を受けて人造コーヒーの野戦病院で発疹チフスに感染して作りは進展しなかった。

23歳で死んだ（1917）。フィッシャーは

カイザー・ヴィルヘルム協 会は第 二

イタリアのロカルノで保養中（1918年春）、次大戦後、1948年2月26日、
オットー・ハー

未完の『自伝』（ 1921 ）を執筆した。

ンを会長としてマックス・プランク協会と両親に始まり、姉、従兄弟、妻、息子、して再建され、現在は60の研究所を

学 校や大 学での師 、 同 僚 、 門 下 生、

運営する、世界最大の、権威ある、内外の各分野の学者など言及された

政 府 支 援の研 究 組 織となっている。

人物の数は300名近くにもなろう。そ化学研究所は1949年にマインツに移り、の一 人 一 人に論 評を加えているから、

1959年からオットー・ハーン研究所と改フィッシャーが生涯に出会った人間の

和光純薬時報Vol.73, No.2（2005）〔参考文献〕
エミール・フィッシャー著、
桑田智訳、『一化学者の想い出』、
平凡社、（1943）.; 島尾永康、「久原躬弦の『独逸国大学巡覧記事』」、『科学史研究』、
36、（ 1997）.;
島尾永康、『人物化学史』、朝倉書店、（ 2002 ）.;M.O.Forster, "Emil Fischer Memorial Lecture,"
J.Chem.Soc., 117,（1920）1157.; F.Herneck, "EmilFischer als Mensch und Forscher," Z.Chem.,
10,（1970）, 41.; G.B.Kauffmann and P.M.Priebe,"Emil Fischer's Role in the Founding of the
Kaiser Wilhelm Society," J. Chem. Edu., 66,（1989）,
394.; Emil Fischer und Max Guth, Der Neubau
des Ersten Chemischen Instituts zu Berlin,
Verlag von August Hirschwald, Berlin,（1901）.;
Emil Fischer und Ernst Beckmann, Das Kaiser−Wilhelm −Institut für Chemie Berlin−
Dahlem, Verlag von Friedr. Vieweg & Sohn,
Braunschweig,（1913）.

27

TUNEL法によるアポトーシス検出キット
アポトーシス in situ 検出キット ワコー
アポトーシスの研究の基本となる形態学の一手段として、TUNEL法が利用されています。DNAの3'-OH末端をターミナルトランス
フェラーゼを用い、フルオレセインｄUTPで標識することによって、組織及び培養細胞中のアポトーシス細胞が検出でき、組織中のどのシスを検出することが可能です。

特

キット内容

長

40回用

●Protein Digestion Enzyme●簡便な操作性

1mr 1本最適化した試薬をプロトコールに従って使用するだけできれいなアポトー●TdT

40μr 1本シス像が得られる。

●TdT Substrate Solution

4.4mr 1本

●100×POD-Conjugated Antibody

44μr 1本

例えばパラフィン包埋組織切片の場合、脱パラフィンから顕鏡までの一●DAB Solution

4.4mr 1本連の操作は、約2時間である。

●DAB Enhancer

200μr 1本

●迅速な検出

対象試料●パラフィン包埋組織切片●DNaseⅠ

4μr 1本

●10×DNaseⅠReaction Buffer

40μr 1本●培養細胞（中性ホルマリン固定）
●凍結切片

染色例

培養細胞CHO-K1：アポトーシス誘導後（クロルプロマジン処理）（×400）
核：メチルグリーン染色

ラット小腸（×400）
核：メチルグリーン染色

ラット精巣：DAB増感染色（×200）

ヒトT cellリンパ腫：HE染色（×200）

ヒトB cellリンパ腫：HE染色（×200）

ヒト胃がん（×200）
核：メチルグリーン染色

コードNo.

品

298-60201

名規格

Apoptosis in situ Detection Kit Wako

アポトーシス研究用

Apoptosis Ladder Detection Kit wako

アポトーシス研究用

Annexin V-Fluorescein Staining Kit
LemosolR
LemosolR A
1×PBS（-）Powder
Methyl Green Solution

アポトーシス研究用
病理研究用
病理研究用
組織洗浄用
アポトーシス研究用

容量

希望納入価格（円）

40回用

60,000

24レーン用96レーン用
50回用
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収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
（本号15頁収載の局方「製造専用・Add-Spec Series」は医薬品原料としてご利用いただけます）
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.73 No.2

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２００５年4月１５日 発行
発行責任者 松田知憲
編集責任者 大西礼子
発 行 所 和光純薬工業株式会社〒５４０-８６０５ 大阪市中央区道修町三丁目１番２号
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印 刷 所 株式会社 林欧文堂

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Vol.73 No.2

部位にどれだけのアポトーシス細胞が存在するかを知ることができます。本キットは、最適化されているため、簡便、迅速にアポトー