実験動物ニュース

6Vol. 63

No. 1

実験動物感染症の現状

サルレトロウイルス，その後
岡本宗裕
京都大学霊長類研究所人類進化モデル研究センター

要約

京都大学霊長類研究所で発生したニホンザル血小板減少症は，サルレトロウイルス 4 型（SRV-4）と深い関連があると考えられたため，発症ニホンザルより分離した SRV-4 を 4 頭のニホンザルに投与した。その結果，感染後 1 月ほどで全ての個体において血小板の急激な減少が認められ，歯茎からの出血等が確認された。これらの症状は，血小板減少症を発症したニホンザルと同様であり，さらに 4 頭全ての PBMC，リンパ節等から SRV-4 が分離できた。このことから，ニホンザル血小板減少症の病原体は SRV-4 であることが確認された。この SRV-4 は，1990 年代の始めに導入されたカニクイザルと共に霊長類研究所に持ち込まれたと推定された。カニクイザル，ニホンザルともに，ウイルス血症となっても発症しない個体がいることが明らかとなり，ウイルスの伝播にはこれらの無症候性キャリアが深く関与したと考えられた。霊長類研究所におけるニホンザル血小板減少症は，SRV-4 感染をコントロールすることにより撲滅できたと考えられるが，発症機序，持続感染機序，自然宿主等不明な点が多く，引き続き研究が必要である。

1．これまでの経緯
本疾病が初めて観察されたのは，2001 年のことで，その年に 2 頭，翌 2002 年に 5 頭が発症し，うち 6 頭が死亡した。その後 6 年間発生は見られなかったが，2008 年 3 月に再び発症個体が発見され，2011 年 2 月までの間に 44 頭が発症し，43 頭が死亡した（予後不良と判断して安楽殺した個体を含む）。発症した個体は，顔面蒼白，鼻粘膜・歯茎・皮下の出血，褐色の粘血便等を呈し，一旦発症すると致死率は極めて高い。血小板数の激減，それに続く赤血球並びに白血球数の低下が発症個体共通にみられ，死亡時にはほとんどの場合血小板数はゼロになる。
国内の複数の研究機関の協力のもと，さまざまな方法で原因の究明にあたった結果，霊長類研究所で発生したニホンザルの病気は，SRV-4（サルレトロウイルス 4 型）と深い関連があるという証拠が得られた。徹底した SRV-4 の検査と罹患個体の隔離，ウイルス血症個体の淘汰を行った結果，2011 年 2 月の隔離個体の発症以降，発症した個体はいない。
SRV-4 をコントロールすることで疾病の発症を抑えられたことから，SRV-4 が本症の原因病原体と考えられたが，SRV-4 がコッホの原則を全て満たす病原体かどうかを確かめるためには感染実験が不可欠であった。
2．感染実験
京都大学ウイルス研究所の協力のもと，同研究所の P3 施設において，SRV-4 のニホンザルへの感染実験を行った。発症個体から分離した SRV-4 を invitro 培養し，4 頭のニホンザルの静脈および腹腔内に投与した。投与後，血中の血小板数，ウイルス量を経時的に調べると共に一般性状，出血の有無等を確認した。その結果，SRV-4 ウイルス RNA は投与後４日目から血漿中に確認され，11 日目以降は全ての個体で高いレベルのまま維持された。血小板数は，25 日目まではほぼ正常値を維持していたが，それ以降急激に減少し，いずれの個体でも 1 万以下となった。1 個体は死亡，その他の個体は予後不良と判断し，投与後 37 日目までに安楽殺した。剖検時の肉眼所見
では，歯茎からの出血，腸管からの出血が見られたが，その他には特別な病変は認められなかった。また，病理学的検査においても骨髄以外，特に異常は認められなかった。これらの所見は，霊長類研究所で発生した血小板減少症の典型的な病態と同様であり，

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これら 4 頭のニホンザルは SRV-4 の投与により血小板減少症を発症したと考えられた。また，これら 4頭の PBMC，脾臓，リンパ節等から SRV-4 を分離することができた。以上の結果は，コッホの原則を全て満たすものであり，我々は霊長類研究所で発生したニホンザル血小板減少症の原因病原体は SRV-4 であると結論づけた。
3．霊長類研究所への侵入経路
前回のニュースで書いたとおり，SRV-4 についての論文報告は今回の例を含めても過去に 4 度しかなく，霊長類研究所のものを除き，いずれもカニクイザルから発見されている。また，野生ニホンザルからは，これまでいずれのセロタイプの外来性 SRV も検出されたことはない。このことから，霊長研で血小板減少症を引き起こした SRV-4 は過去に霊長類研究所に導入されたいずれかのマカク類が持ち込んだものと考えられた。霊長類研究所では，入荷時に全ての個体に対して入荷検疫を実施しており，そのときの血漿は超低温フリーザーに保存してある。そこで，過去にさかのぼって保存血漿中の SRV-4 を検査した。その結果，1991 年にある企業から導入したカニクイザル 1 頭の血漿中に SRV-4 のウイルス RNAを確認した。つまり，導入したこの 1 頭は SRV-4 のウイルス血症であったことになる。現在このウイルス RNA の遺伝子型を血小板減少症の原因となったウイルスと比較しているが，もしこれらが一致した場合（もちろん，時間を経ているため多少の変異は予想される），罹患ザルを導入後，約 10 年の歳月を経て最初の発症が起こったことになる。

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7らずということになる。SRV-4 の伝搬にはもっと別の個体が関与している可能性が高いと思われた。
我々は，抗 SRV 抗体，プロウイルス DNA，ウイルス RNA を調べることにより SRV-4 の検査を実施している。発症個体では，プロウイルス DNA，ウイルス RNA はともに陽性となるが，抗 SRV 抗体が検出されないのが本症の大きな特徴である。ところが，
プロウイルス DNA，ウイルス RNA が陽性で抗 SRV抗体の産生が見られない個体でも，血小板の減少が起こらない個体が多数いることがわかってきた。我々は，当初，このような個体は発症前の予備軍と考え，発見次第隔離室での飼育に切り替えてきたが，そのほとんど全てが発症することなくその後も生存し続けた。保存血漿を調べた結果，このような例では数年にわたってウイルス血症のまま生存していることも希ではなく，1 期と 2 期で発症後に生き残った 2頭も同様の状況であった。SRV-4 の伝搬にはこのような無症候性キャリアの存在が深く関与していたと考えられ，実際保存血漿を使って感染経路をたどってみると，そのほとんど全てがカニクイザルかニホンザルの無症候性キャリアにたどりつく。1991 年に霊長類研究所に導入されたカニクイザルも検疫を問題なく通過しその後実験に使用されていたことから，無症候性キャリアであったと考えられる。ただし，無症候性とはいってもそれは「血小板減少」についてのことであり，カニクイザルの SRV 感染で報告されている下痢や削痩等の症状を頻発していた個体は何頭か確認されている。その様な個体は入退院等で移動を繰り返しており，さらに病気を広げる一因となったようである。
5．今後の課題

4．無症候性キャリアと伝播経路発症した個体の多くは，発症するまで一般性状にはほとんど変化が見られないため，血液データを含め発症直前のデータはほとんどない。しかし，発症個体と同室で飼育していた数個体についてはモニタリングのため定期的に採血しており，発症数週間前からの血漿が保存されていた。そこで，それらの血漿中のウイルス量を調べたところ，発症 1 ヶ月前ではいずれの個体においてもウイルス RNA は確認できなかった。また，上述のように感染実験でも血漿中1 ヶ月以内に発症している。にウイルスを確認した後，このことから，発症した個体はウイルス血症になってからきわめて短時間の間に発症していることがわかる。この事実から考えると，発症個体が他の個体にウイルスを伝搬する可能性がある期間は 1 ヶ月足

上述のように，霊長類研究所では徹底した SRV-4の検査と陽性個体の隔離，淘汰を実施した結果，新たな発生は見られておらず，ここ 1 年ほどは各検査で陽性となる個体も全くいない。おそらく，SRV-4撲滅に成功したものと考えている。一方で，どのような機序で発症に至るのか，同じウイルス血症になっていても発症する個体と発症しない個体がいるのはなぜなのか等，SRV-4 に由来する血小板減少症の本質については未だ不明な点が多い。調べた限りでは，発症したサルから分離されたウイルスと発症していないウイルス血症のサルから分離されたウイルスのRNA 塩 基 配 列 の 間 に 差 は 見 ら れ な か っ た。 ま た，
TRIM 等のウイルス感染抵抗性因子や MHC と発症との関連も検討しているが，今のところ発症を制御するサル側の因子は見つかっていない。

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感染源についても大きな問題である。これまでカ
ニクイザルからしか SRV-4 が見つかっていないこと，
実際霊長類研究所に導入されたカニクイザルがウイルス血症であったことから，我々はカニクイザルがSRV-4 を持ち込んだと考えている。我が国には年間数千頭のカニクイザルが輸入されているが，輸入検疫の項目に SRV は含まれていない。野生ニホンザルにこの病気が持ち込まれたときの重大性を鑑みれば，今後何らかの対策が必要と考えられる。
霊長類研究所の例を含め SRV-4 についての過去の報告はいずれも実験動物として飼育されていたサルからのものであり，自然界での SRV-4 の宿主についての情報は全くない。確かにカニクイザルは重要なレゼルボアである可能性が高いが，霊長類研究所では，アカゲザル等の他のマカク類においてもウイルス血症の個体が発見されている。SRV-4 の自然宿主がカニクイザルと断定することはできない。また，
国内の他の施設からは，SRV-5 によって同様のニホンザル血小板減少症が起こることが報告されている。
野生ニホンザルには外来性 SRV の感染が全く見られないことから，ニホンザルは SRV 全般に対して感受性が高い可能性が有り，今後他のセロタイプによる血小板減少症の発生も否定できない。我が国固有の霊長類であるニホンザルを守るためにも，野生を含めたマカク類全般の SRV 調査が必要である。

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