タバココナジラミが媒介するウリ類退緑黄化ウイルスに対する数種薬剤の媒介抑制効果

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タバココナジラミが媒介するウリ類退緑黄化ウイルスに対する数種薬剤の媒介抑制効果
森田茂樹＊・石井貴明・柳田裕紹・國丸謙二
タバココナジラミが媒介するウリ類退緑黄化ウイルス（CCYV）に対する数種薬剤の媒介抑制効果について検討した。数種殺虫剤を散布したキュウリにCCYVを保毒したタバココナジラミ個体群を曝露したところ，ジノテフラン水溶剤とニテンピラム水溶剤は高い媒介抑制効果を示した。殺虫効果の高いピリフルキナゾン水和剤とピリダベン水和剤は，ジノテフラン水溶剤やニテンピラム水溶剤と比べると劣るが，一定の媒介抑制効果が認められた。また，ジノテフラン粒剤とニテンピラム粒剤を処理したキュウリにCCYVを保毒したタバココナジラミを接種したところ，CCYV媒介抑制効果が認められ，定植 1～ 3日前の処理が有効であると考えられた。栽培初期からこれらのCCYV媒介抑制効果のある薬剤を定期的に処理することで，減収の原因となるCCYVの感染被害を防ぐことができると考えられる。
［キーワード：ウリ類退緑黄化ウイルス，タバココナジラミ，キュウリ，殺虫剤］
Efficacy of several pesticides for suppressing CCYV transmission by the sweetpotato whitefly. MORITA Shigeki, Takaaki ISHII,Hirotsugu YANAGITA and Kenji KUNIMARU(Fukuoka Agricultural Research Center, Chikushino, Fukuoka 818-8549, Japan) Bull.
Fukuoka Agric. Res. Cent. 32:29-32 (2013)
The efficacy of granule treatment and foliage spray of different pesticides for suppressing CCYV transmitted by Bemisia tabaci
was evaluated in laboratory experiments. First, eight cucumber seedlings were separately splayed with one of nine pesticides, andthen all seedlings were simultaneously exposed to CCYV-infected adult whitefly. While dinotefuran and nitenpyram were highlyeffective against CCYV transmission, pyrifluquinazon and pyridaben were estimated to be moderately effective. Second, cucumber
seedlings treated with dinotefuran or nitenpyram granules in a nursery pot were exposed to the virus as described above. These
granule insecticides were highly effective against CCYV transmission and it was considered that treatment on 1～ 3 days before
planting in the greenhouse was effective. Consequently, the use of these chemicals in rotation can effectively reduce the damage
caused by CCYV.
[Key words: Cucurbit chlorotic yellows virus, Bemisia tabaci, cucumber, insecticide ]緒 言
キュウリおよびメロン退緑黄化病（以下，退緑黄化病）
は , タ バ コ コ ナ ジ ラ ミ バ イ オ タ イ プ QBemisia tabaci
Q-biotype お よ び タ バ コ コ ナ ジ ラ ミ バ イ オ タ イ プ BB.
tabaci B-biotype が 媒 介 す る ウ リ 類 退 緑 黄 化 ウ イ ル ス
Cucurbit chlorotic yellows virus（以下,CCYV）によって引き起こされる（行徳ら 2009）。本ウイルスはキュウリ属をはじめとする複数種の植物に感染することが明らかとなっており（Okuda et al. 2010）,感染したキュウリやメロンでは葉に退緑小斑点が生じたのち,病徴が進展すると葉脈間の黄化や下側への葉巻などの症状が現れ,減収や果実糖度の低下を引き起こす（行徳 2008，彌冨・小野 2011）。
退緑黄化病は,2004 年に熊本県のメロンで初めて確認され,その後，九州全県や中四国,関東へと発生地域が拡大している（樋口・行徳 2010）。福岡県においても,2008 年にキュウリとメロンで発生が確認されて以降,施設キュウリにおいて毎年発生しており，防除対策の確立が求められている。
退緑黄化病を防除するためには,ウイルスの媒介虫であるタバココナジラミに対する防除対策を講じる必要があり,防除法の一つとして化学農薬の利用が挙げられる。退緑黄化病と同様にタバココナジラミが媒介するトマト黄化葉巻病においては,ネオニコチノイド系薬剤をトマトに処理することでウイルスの媒介を抑制できることが確認されており（内川・小川 2005），化学農薬を処理すること＊連絡責任者（病害虫部:s-morita@farc.pref.fukuoka.jp）

で殺虫効果のみならず，ウイルス媒介抑制効果が期待される。タバココナジラミに対する化学農薬の殺虫効果については多くの知見がある（樋口 2006，松浦 2006，小林 2007，
德丸・林田 2010）が，化学農薬の CCYV に対する媒介抑制効果については，樋口・行徳（2010）がジノテフラン粒剤について検討しているのみで，他の化学農薬の CCYV 媒介抑制効果は明らかとなっていない。CCYV 媒介抑制効果の高い薬剤を明らかにすることができれば，これらの薬剤を基幹とした退緑黄化病に対する薬剤防除体系を構築することができる。そこで，数種粒剤と茎葉散布剤を供試し，キュウリにおける CCYV 媒介抑制効果と抑制期間について検討した。また，粒剤については，処理時期により CCYV 媒介抑制効果に違いがあることが指摘されているため（樋口・行徳 2010），有効な処理時期についても併せて検討した。
なお，本研究は，新たな農林水産政策を推進する実用技術開発事業「タバココナジラミにより媒介される新規ウリ科野菜ウイルス病の統合型防除技術体系の開発」の中で実施したものである。

材料および方法
１

供試虫および供試ウイルス
試験には，独立行政法人九州沖縄農業研究センターより分譲いただいたタバココナジラミバイオタイプQ（以下，タバココナジラミ）およびCCYVを，福岡県農業総合試験場
受付 2012 年 8 月 1 日；受理 2012 年 11 月 19 日

30

福岡県農業総合試験場研究報告 32（2013）（以下，農総試）内の恒温室（25℃，全明条件）において，キュウリ「四葉」を寄主植物として累代飼育したものを用いた。
２

ウイルス感染調査
試験に供したキュウリの未展開葉から 1 株につき直径1cm のリーフディスクを 2 枚切り取り，RNeasy Plant Mini
Kit（QIAGEN（株）製）を用いて RNA を抽出した。RNA は30μL の蒸留水に溶解したのち，PrimeScript® One StepRT-PCR Kit Ver.2（タカラバイオ（株）製）と CCYV 特異プライマー（行徳ら 2009）を用いて RT-PCR を行った。反応条件は，50℃ 30 分の逆転写反応と 94℃ 2 分の変成反応の後，94℃ 30 秒，60℃ 30 秒，72℃ 30 秒を 1 サイクルとする反応を 40 サイクル行った。増幅産物は 1.5%アガロースゲルで電気泳動を行い，CCYV に特異的な約 450bpの DNA 増幅を確認した。
また，各試験開始前に累代飼育しているタバココナジラミ個体群からランダムに 10 頭ずつサンプリングし，CCYVの保毒の有無を調査した。コナジラミ 1 頭ずつを磨り潰したのち，キュウリ葉と同様の手法で調査したところ，供試した全個体が CCYV を保毒していた。
３

茎葉散布剤のCCYV媒介抑制効果試験には，キュウリに発生するコナジラミ類に対して適用のある薬剤およびタバココナジラミに対して殺虫活性の高いエマメクチン安息香酸塩乳剤およびスピノサド水和剤（浦・嶽本 2008）を供した（第 1表）。農総試内のガラス温室において，直径 9cmのポリビニルポットで育成した本葉3葉期のキュウリ「グリーンラックス 2」の苗にハンドスプレーを用いて常用濃度に希釈した各薬液をキュウリ苗全体に散布した。散布24時間後に，各薬剤につき8株を白色トレイにそれぞれ並べ，これをタバココナジラ
ミ成虫 800頭（株あたり10頭）が寄生したCCYV感染株から同心円上に配置した。試験は，25℃，全明条件の恒温室内で行った。24時間後に殺虫活性の高いジノテフラン水溶剤とピリダベン水和剤を散布してタバココナジラミを除去し，ガラス温室内にて14日間育成した。その後，キュウリの未展開葉をサンプリングし，RT-PCR法によりウイルス感染の有無を調査した。試験は 3反復行い，照明の当たり方が均一になるように調整した。

４ 茎葉散布剤が CCYV の媒介を抑制できる期間
上記試験でCCYV媒介抑制効果が高かったジノテフラン
水溶剤とニテンピラム水溶剤およびこれらと比べると劣るものの一定の媒介抑制効果が認められたピリフルキナ
ゾン水和剤とピリダベン水和剤について，媒介を抑制できる期間を調査した。試験には，上記試験と同様の方法で育成した本葉3葉期のキュウリ「四葉」の苗を用いた。ハンドスプレーを用いて常用濃度に希釈した各薬液をキュウ
リ苗全体に散布した後，薬液が付着していない新葉が展開しないように生長点を除去した。薬剤散布 1， 7，14日後に，各処理につき 5株ずつを白色トレイに並べ，これをタバココナジラミ成虫 150頭（株あたり 3頭）が寄生したCCYV感染株から同心円上に配置した。試験は，25℃，全明条件の恒温室内で行った。タバココナジラミへの曝露から24時間後にジノテフラン水溶剤とピリダベン水和剤を散布してタバココナジラミを除去し，ガラス温室内にて14日間生育させた後，キュウリの未展開葉をサンプリングし，
RT-PCR法によりウイルス感染の有無を調査した。試験は 2反復行った。

５ 粒剤の CCYV 媒介抑制効果試験には，茎葉散布剤の試験において CCYV 媒介抑制効果が高かったジノテフラン粒剤およびニテンピラム粒剤を供した。農総試内のガラス温室において，直径 9cm のポリビニルポットでキュウリ「グリーンラックス 2」を育成し，本葉 2～ 3 葉期に各薬剤を株あたり 1g ずつポット内に散粒した。薬剤処理 5 時間， 1， 3， 7 日後のキュウ
リ苗を試験に供した。
浦・嶽本（2008）を参考にして，プラスチックシャーレ（直径 30mm，高さ 10mm）の底を切り抜き，ゴースを張ったものを試験容器とした。薬剤を処理したキュウリの展開
葉を容器で挟み，その中に吸虫管を用いてタバココナジラミ成虫を 10 頭ずつ入れた。試験容器は，キュウリ苗ごと陽光型定温機（25℃，自然日長）内に置いた。接種 2 日後に容器内のコナジラミを除去したのち，試験に供したキュウリはガラス温室内で 14 日間育成した。その後，キュウリの未展開葉をサンプリングし，RT-PCR 法によりウイルス感染の有無を調査した。試験は，各処理について 5 株ずつ行った。

第１表 試験に供した薬剤
一般名
粒剤
ジノテフラン粒剤
ニテンピラム粒剤

商品名
アルバリン／スタークル粒剤
ベストガード粒剤

茎葉散布剤
ジノテフラン水溶剤
ニテンピラム水溶剤
ピリフルキナゾン水和剤
ピリダベン水和剤
トルフェンピラド乳剤
エマメクチン安息香酸塩乳剤
スピノサド水和剤
アセタミプリド水溶剤
フロニカミド水和剤

アルバリン／スタークル顆粒水溶剤
ベストガード水溶剤
コルト顆粒水和剤
サンマイトフロアブル
ハチハチ乳剤
アファーム乳剤
スピノエース顆粒水和剤
モスピラン水溶剤
ウララDF

処理量／希釈濃度
株あたり 1g
株あたり 1g
2,000倍
1,000倍
4,000倍
1,000倍
1,000倍2,000倍
5,000倍2,000倍2,000倍31

タバココナジラミが媒介するウリ類退緑黄化ウイルスに対する数種薬剤の媒介抑制効果

結 果

３１

茎葉散布剤の CCYV 媒介抑制効果
茎葉散布剤を処理したキュウリに CCYV を保毒したタバ
ココナジラミ個体群を曝露した場合の CCYV 感染株率を第2 表に示した。ジノテフラン水溶剤とニテンピラム水溶剤を処理したキュウリでは CCYV の感染が認められず，感染株率は無処理との間に 1％水準で有意な差が認められた。
また，ピリフルキナゾン水和剤およびピリダベン水和剤を処理したキュウリでは無処理との間に有意な差は認められなかったが，感染株率は 12.5％以下であった。その他の薬剤では，感染株率が 25％以上で CCYV 媒介抑制効果が不安定であった。
第２表
供試

薬

濃度

CCYV感染株率

第３表薬

茎葉散布剤処理後のCCYV感染株率剤

粒剤のCCYV媒介抑制効果
粒剤の処理期間が異なるキュウリにCCYVを保毒したタ
バココナジラミを 2日間接種した場合のCCYV感染株率を第 3表に示した。CCYV感染株率は，無処理では全ての処理期間において 100％であったのに対して，ニテンピラム粒剤では，全ての処理期間において20％であった。また，ジノテフラン粒剤では処理期間が 1および 3日間の場合は20％であったが，処理期間が 5時間では60％， 7日間では40％であった。
薬剤処理期間別のCCYV感染株率剤p 値1)

ジノテフラン粒剤
ニテンピラム粒剤

5時間

CCYV感染株率(%)
1日間
3日間

6020207日間
4020202020

100

100

100100ジノテフラン水溶剤

2000倍

0.0%

<0.01

ニテンピラム水溶剤

1000倍

0.0%

<0.01

ピリフルキナゾン水和剤

4000倍

8.3%

0.08

ピリダベン水和剤

1000倍

12.5%

0.13

考 察

トルフェンピラド乳剤

1000倍

25.0%

0.42

エマメクチン安息香酸塩乳剤

2000倍

29.2%

0.81

スピノサド水和剤

5000倍

29.2%

0.81

アセタミプリド水溶剤

2000倍

33.3%

0.94

フロニカミド水和剤

2000倍

37.5%

0.98

－50.0%

1.00

本試験では，数種薬剤の CCYV 媒介抑制効果について検討した。試験に供した茎葉散布剤のうち，CCYV 媒介抑制効
果が高かった薬剤はジノテフラン水溶剤およびニテンピラム水溶剤であり（第 2 表）
，これらの薬剤は散布後 7 日間は CCYV 媒介抑制効果を示した（第 1 図）
。また，ピリフルキナゾン水和剤とピリダベン水和剤は，ジノテフラン水溶剤やニテンピラム水溶剤と比べると劣るものの一定のCCYV 媒介抑制効果が認められたこと，およびタバココナジラミ成虫に対する殺虫効果が高い（浦・嶽本 2008，山口2010）ことから，タバココナジラミや退緑黄化病の基幹防除剤として使用できると考えられる。粒剤の CCYV 媒介抑制効果については，ニテンピラム粒剤では 5 時間から 7日間の全ての処理期間，ジノテフラン粒剤では 1 日から 3日間の処理期間において認められた（第 3 表）。ジノテフ
ラン粒剤を接種 5 時間前に処理した場合においては感染株率が 60％であり，CCYV 媒介抑制効果は不十分であった。
これは，ジノテフラン（40ｇ/Ｌ）と比べてニテンピラム（>590ｇ/Ｌ）の水溶解度が高いため（日本植物防疫協会
2005），ニテンピラム粒剤の方が薬剤成分の植物への移行が速かったものと考えられる。また，樋口・行徳（2010）
は，施設メロンにおいてジノテフラン粒剤を異なる時期に処理した場合の CCYV 媒介抑制効果を検討しており，定植 2日前に育苗ポット内に処理した場合は定植時に植穴処理した場合と比べて退緑黄化病の発病株率を低減できると報告している。これらのことから，粒剤では，植物体内の薬剤成分濃度が上昇し，殺虫および CCYV 媒介抑制効果が現れるまで一定の時間を要するため，薬剤処理を定植前に行う必要があると考えられる。 メロンやキュウリでは発病時期が早いほど被害が大きくなる（行徳 2008，彌冨・小野 2011）ため，定植 1～ 3 日前のジノテフラン粒剤あるいはニテンピラム粒剤施用に加えて，栽培初期に 7 日間隔で CCYV 媒介抑制効果の高い茎葉散布剤を処理すれば，CCYV による収量への被害を低減できると考えられる。
薬剤処理による CCYV 媒介抑制のメカニズムは明らかにされていないが，ジノテフランやニテンピラムなどのネオ無処理1) 逆正弦変換後、Dunnett検定２

茎葉散布剤がCCYVの媒介を抑制できる期間
茎葉散布剤の処理後 1および 7，14日のキュウリにCCYVを保毒したタバココナジラミ個体群を24時間曝露した場
合のCCYV感染株率を第 1図に示した。ジノテフラン水溶剤とニテンピラム水溶剤を処理したキュウリは，散布 7日後においてもCCYVに感染しなかったが，散布14日後の感染株率は40％で，無処理と同等であった。また，ピリダベン水和剤を処理したキュウリでは，散布 7日後の感染株が10％と無処理より低く，散布14日後の感染株率も20％と無処理の 1/2であった。ピリフルキナゾン水和剤処理では散布 7日後の感染株率は10％と無処理より低かったが，散布14日後の感染株率は30％であり無処理と同程度であった。

CC
YV感
染株率

(%60504030

散布 1日後20

散布 7日後10

散布14日後0)

第１図

ジノテ
フラ
ン

ニテン
ピラ
ム

ピリ
ダ
ベン

ピリ
フル
キナ
ゾン

無処
理

茎葉散布剤処理 1， 7，14日後におけるCCYV
感染株率

無 処

理

32

福岡県農業総合試験場研究報告 32（2013）

ニコチノイド系薬剤は摂食・吸汁行動の抑制作用をもつ（日本植物防疫協会 2005）とされているため，これら 2剤ではタバココナジラミの吸汁行動が抑制されたことによって CCYV が媒介されなかったと考えられる。生産現場
では化学農薬によるタバココナジラミの防除が行われているにもかかわらず退緑黄化病が毎年発生する。このことからも，退緑黄化病の防除にはタバココナジラミの密度抑制のみでは不十分であり，吸汁行動の抑制などのウイルス媒介を抑制する作用を持つ化学農薬の処理が有効であると考えられる。
本試験では，CCYV媒介抑制効果の高い薬剤を明らかにしたが，これらの薬剤の多用はタバココナジラミの感受性低下を招く恐れがある。そこで，化学農薬のみに頼らない防除技術も一方で必要であると考えられる。退緑黄化病の発生を抑制するためには，本試験で明らかにしたCCYV媒介抑制効果の高い薬剤の処理に加え，媒介虫であるタバココナジラミの密度を抑制することが必要である。退緑黄化病は野外から侵入するCCYV保毒コナジラミによってもたらされるため，コナジラミの侵入抑制効果が高い0.4mm以下の目合いの防虫ネット（松浦ら 2005）を施設開口部に設置することが必須である。また，捕食性天敵スワルスキーカ
ブリダニAmblyseius swirskii Athias-Henriotは施設キュウ
リにおいてタバココナジラミに対する密度抑制効果が高いことが明らかとなっている（柴尾ら 2009）。本試験で明らかとなったCCYV媒介抑制効果の高いジノテフラン粒剤／水溶剤およびニテンピラム粒剤／水溶剤は，スワルス
キーカブリダニに対する影響が小さい（柏尾 2009，森田・柳田 2011）ため，スワルスキーカブリダニを用いた総合防除体系にも組み込むことができる有効な薬剤であると考えられる。

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