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実験動物ニュース

Vol. 61 No. 1

実験動物感染症の現状

リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス12

要髙木利一 1, 2，大沢一貴 1
長崎大学先導生命科学研究支援センター・比較動物医学分野

日本エスエルシー（株）バイオテクニカルセンター・品質管理部

約
リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（Lymphocytic choriomeningitis virus, LCMV）は，1934 年に初めてアメリカで分離された人獣共通感染性のウイルスである。LCMV は，現在も免疫学研究の進展に貢献している一方，実験動物分野においては，排除されるべき病原体と考えられている。国内の実験動物における感染報告例は少ないものの，近年でも，輸入後に交配維持されていた野生由来近交系マウスで汚染が確認された事例がある（2005 年）。垂直感染したマウス個体は，免疫寛容に陥り抗体検出が困難とされること，帝王切開を実施してもウイルスを排除できないリスクを伴うこと，ヒトもウイルス感受性動物であることなどを考慮すると，動物実験施設において適切なモニタリングを行い，マウスコロニー内に絶対に持ち込ませないため，監視の不可欠な病原体のひとつといえよう。

1．ウイルスと自然宿主
リ ン パ 球 性 脈 絡 髄 膜 炎 ウ イ ル ス（Lymphocyticchoriomeningitis virus, LCMV）は，アレナウイルス科に属する人獣共通感染性のウイルスである。アレナウイルス科には旧世界アレナウイルスとして LCMVやラッサウイルスなど，ならびに新世界アレナウイルスとしていわゆる南米出血熱ウイルスが含まれており，概ね各ウイルスは固有のげっ歯類を自然宿主としている。一方，感受性動物として，マウスやヒトのほか，ハムスター，モルモット，イヌ，ブタ，サル類など多くの動物種が知られている。
ウイルスの形状は，球形または不定形（直径 50–300 nm）でエンベロープを有している。ウイルスゲ
ノムは 1 本鎖のアンビセンス RNA で，約 3.4 kb からなる S-RNA と 7.2 kb からなる L-RNA の 2 分節から構成され，各分節には各 2 つの ORF が存在する。すなわち，S-RNA にはヌクレオカプシドタンパク質と糖タンパク質，L-RNA には RNA 依存性 RNA ポリメラーゼと zinc フィンガータンパク質がコードされている。
LCMV は，1934 年に Armstrong らによってセントルイス脳炎の患者から最初に分離され，マウスからは 1935 年に Traub により分離された [2, 13]。日本でも 1937 年に笠原らによりウイルスが分離されている[5]。これまでに，北米やヨーロッパ，中国大陸など複数の地域で抗体保有動物の存在が確認されており，近年では，LCMV 抗体保有率は，イタリア（’02–06 年）で 8.3％，スペイン（’03–06 年）で 3.8％との報告がある [6, 11]。
国内でも，森田らにより 1990 年に横浜港，1991 年に大阪港に生息する野生ハツカネズミの抗体調査が行われ（7.0–25.9 ％），1998 〜 2001 年には吉川らにより名古屋港（6.1 ％）や神戸港（30.0 ％）でも行われている [7, 8]。これらは海外と直接交流のある限られた港湾地区での調査であり，国内全般の抗体保有野生ハツカネズミの分布状況は不明である。
2．実験動物とウイルス
実験動物分野における LCMV 感染状況について
は，1986 年に佐藤らにより抗体検査が行われ，マウス（SPF を含む）やシリアンハムスターなどで 2 〜 6％の抗体保有率であることが確認されている [10]。また最近の話題として，2005 年に理化学研究所がフランスのパスツール研究所より導入した野生由来近交系マウスから，このウイルス感染が検出されたことがあげられる [4, 14]。帝王切開を経てこれらマウスを導入したものの，垂直感染した LCMV をコロニーから排除できなかったという。免疫機能の不完全な新生仔期に LCMV が感染した場合，免疫寛容状態を実験動物ニュースVol. 61 No. 1

3マウスに引き起こすことが知られており，パスツー
4．検査方法ル研究所でも 8 年間に亘り発見されなかったのも抗体産生が微弱であったためと推察される。これらを検査方法には，抗体検査や遺伝子検査のほか，ウ踏まえると，LCMV がマウスコロニーに侵淫した場
イルス培養検査や Mouse/Hamster Antibody Production
合，血清学的に検出することはそれほど容易ではな （MAP/HAP）テストがある。血清中の抗体検査法とい可能性がある。この分離ウイルス株などを用いたして，国内ではおもに間接蛍光抗体法が用いられて感染実験データが，徐々に蓄積されつつある [14,いる。抗体検査については，ICLAS モニタリングセンターに委託することができる。また，バキュロウ
15]。
イルス組換え LCMV 抗原を用いた ELISA 法が確立
このウイルスは，国立感染症研究所病原体等安全管理規程においてはバイオセーフティレベル（BSL） されているが，現在までに検査キットの市販には至っていないようである [12]。
2 に分類され，感染動物実験の場合 ABSL3 とされて抗体産生が微弱な場合，遺伝子検査に頼らざるをいる。米国 CDC/NIH の Biosafety in Microbiological
得ないであろう。複数の機関で解析・設計されたプand Biomedical Laboratories (BMBL)，5th Edition におライマーを用いた RT-PCR 法が報告されているが，いては [16]，原則 BSL2，エアロゾール発生リスクが高い場合や高濃度使用の場合，ヒト以外の霊長類でLCMV 株間の塩基配列の相同性はそれほど高くなく，致死性が明らかな株については BSL3，マウスの脳でどのウイルス株でも検出可能なユニバーサルプライ
マーの設計は極めて困難と考えられる [4, 15]。
継代されたウイルス株を用いたマウス感染実験はウイルス培養検査や MAP/HAP テストは，検査期ABSL2，ハムスターの感染実験は ABSL3 と実験内容間が長く，感度がやや低い欠点はあるものの，陽性に応じて細分化されている。
信頼度が高く優れたウイルス検出方法といえる。脾
臓，腎臓ないし肺の 10％臓器乳剤を培養細胞（Vero
3．感染様式と臨床症状細胞，BHK 細胞，L 細胞）に播種する，あるいはマLCMV の自然宿主はハツカネズミ（Mus musculus）， ウスやハムスターの腹腔に接種し抗体価上昇の有無を検査する。いずれも古典的な方法ではあるが，使すなわちマウスであり，実験的にマウスの脳内にウ用する RT-PCR 検査の LCMV 検出スペクトルの内かイルスを接種した場合に，いわゆるリンパ球性脈絡髄膜炎を惹起し，接種後約 1 週間で立毛，円背，間外か不確実な場合，信頼度の高い方法である。
代性痙攣を起こし死亡する。またマウスの場合，水平感染では抗体産生を認め多くは無症状に推移する
5．今後の展望が，垂直感染の場合は抗体が産生されにくい免疫寛容状態となり，持続感染して唾液や尿中にウイルス
近 年， ス ペ イ ン 産 モ リ ア カ ネ ズ ミ（Apodemussylvaticus）から LCMV が分離され，このウイルスのを排出するといわれている。前述のように，一旦持続感染系が成立すると，例え感染動物を帝王切開法
系統樹解析によれば，既知のウイルス株とは異なるで清浄化しようとしても，ウイルスを排除すること
ク ラ ス タ ー を 形 成 し た [6]。 こ の こ と は， 未 知 のは難しいと考えられる。
LCMV 株 が 多 数 存 在 し て い る こ と， そ し て 将 来
一方，ヒトでの LCMV 感染例では，無症状の場合LCMV の再定義が必要になる可能性を示唆している。
遺伝子組換え動物の授受が頻繁に行われている現も多いが，発症した場合は発熱，頭痛，筋肉痛，倦状を顧みると，ほとんどの研究機関で事故経験のな怠感を伴うインフルエンザ様症状を示す。また，妊い LCMV などのげっ歯類の人獣共通感染性病原体の娠中の感染では，流産や新生児の先天性水頭症，脈絡網膜炎，精神障害を起こすことがある。近年，臓検索は決して疎かにしてはならない。LCMV の場合，器移植ドナーの LCMV 感染に起因するレシピエント持続感染系が一旦成立すると，通常の微生物モニタリングによる抗体検出が困難となり，コロニーからの死亡例が複数報告されているが，臓器移植を除きのウイルス排除が後手に回り被害が甚大となりかねヒト−ヒト感染の報告はない。免疫抑制状態に誘導ない。コロニー内に LCMV を絶対に持ち込まない，する場合は重篤になる傾向にあり，今後わが国でも注意を払うべきであろう [1, 3, 9]。
細心の導入時検疫体制が肝要といえる。

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参考文献
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