qEV 細胞外小胞抽出キット
AFC qEVオートフラクションコレクター
製品カタログ

⽇本で唯⼀！ISO規格取得のEV抽出キット

インタクトな細胞外⼩胞(EV)を抽出

2023年 4月 現在

夾雑物なく、インタクトな細※ qEV, AFCは基礎的研究⽬的で使⽤願います。臨床、医療⾏為には使⽤できません。

⽇本で唯⼀！ISO規格取得のEV抽出キット

インタクトな細胞外⼩胞(EV)を抽出
医療機器の品質マネジメント国際標準規格ISO13485を取得
カラム内部

細胞外⼩胞を15分で分離・精製
カラム内部にはアガロース樹脂のメッシュがあり、そのメッシュの表⾯には無数の⼩さな⽳が開いています。適正抽出サイズより⼤きな粒⼦はメッシュで遮られるため通過が遅れます。また、適正抽出サイズより⼩さな粒⼦はメッシュ表⾯の⽳に⼊るため、通過が遅AFC (qEVオートフラクションコレクター)れます。マニュアル通りのタイミングで回収することで、15分の抽出時間で誰でも簡単に細胞外⼩胞の抽出が⾏えます。

細胞外⼩胞の研究を加速させるqEV抽出
qEV カラムは、2015 年から 2021 年にかけて 650 以上の出版物で使⽤されています。qEV分離によって可能になった研究の最新情報を⼊⼿す
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qEVの⽂献数推移https://meiwanet.co.jp/lettter-form

2014 年〜2021年までに公 開された⽂献数をまとめたグラフです。

細胞外⼩胞抽出なら「qEV」
qEV 細胞外⼩胞抽出キット／ AFC (qEVオートフラクションコレクター)

夾雑物を取り除き細胞外⼩胞本来のカップ型形状を損なうことなく抽出⾼回収率で不要なタンパク質は除去抽出したサンプルのサイズ分布はいずれも、細胞外⼩胞のサイズ範囲

粒⼦／蛋⽩質割合によると、qEVを使⽤した結果が良好です。

内の粒⼦を検出しています。ポリマー沈殿法と密度勾配沈殿法の⼿他の⼿法では、汚染タンパク質も共同分離を⾏っていることがわかります。

法では、粒⼦が多く存在していますが電⼦顕微鏡で画像を確認すると、細胞外⼩胞以外の不純物が多く含まれていることがわかります。

TRPS 測定

TEM画像

Ａ⼿法

Ｂ⼿法

qEV
⾼い程純度が⾼い

Ａ⼿法（ポリマー沈殿法製品）

Ｂ⼿法（分離カラム製品）
Isolation method

正確に細胞外⼩胞の粒⼦のみを回収
qEV

50μgの蛋⽩質の「Western blot」解析によると、3つのメソッドにおいても「Calnexin」の存在は⾒られませんでした。しかし、細胞外⼩胞の存在を⽰す、「Flotillin-1」については、qEVの結果でのみ検出されました。
他の⼿法の結果では⾮細胞外⼩胞含有蛋⽩質の存在は、⼤量の「Albumin」の存在によって判明しましたが、「Albumin」は、qEVサンプルではほとんど⾒られませんでした。

細胞 Ａ Ｂ
溶解液 手法 手法

qEV【 qEVと他手法との細胞外小胞抽出比較参考文献 】
Richard J. Lobb; Melanie Becker; Shu Wen Wen; Christina S. F. Wong; Adrian P.
Wiegmans; Antoine Leimgruber; and Andreas MÖller.
Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.
Journal of Extracellular Vesicles. 2015, 4: 27031

細胞外⼩胞存在

⾮細胞外⼩胞含有蛋⽩質

純粋な細胞外⼩胞を抽出
qEVカラムは、EV含有サンプルからの可溶性タンパク質の除去に⾮常に効果的です。このことは、EV以外のコンポーネントの共分離がダウンストリーム分析の精度に影響を与え、その後、結果をゆがめる可能性があるため、特に重要です。
qEVは、幅広いカラムサイズで可溶性タンパク質からのEVの分離を最⼤化するように最適化されています。Gen2 qEVカラムは、この⾼分解能分離を可能にする独⾃の⾼性能樹脂で構築されています。
10mLのヒト⾎漿をロードした、qEV 10 / 35 nm (Gen 2)と qEV 10 / 70nm (Gen 2 )カラム間の総タンパク質溶出レベルと細胞外⼩胞および同様のサイズの粒⼦>60nmの濃度の⽐較です。EV濃度は、ビシンコニン酸（BCA）アッセイによるExoidおよびタンパク質レベルを使⽤して測定されました。
※注意
qEV10/35nm Gen 2 (23.2mL)カラムと、qEV10 / 70nm Gen 2 (22.9mL)カラムでは、デフォルトのバッファー量の値が異なります。
**容量はそのサンプルの最⼤容量としてラベル付けされています。
ラベル「5」はバッファー容量後の0.0〜5.0mLの容量を指し、ラベル「10」はバッファー容量後の5.0〜10.0mLの容量を指します 。

再現性
最適化および標準化されたカラムであるqEVカラムは、研究内および研究間で同じ分離アプローチを使⽤することで、再現性を向上させます。対照的に、多くのEV分離アプローチは、⼿動の⽅法(例えば、超遠⼼分離(UC)、密度勾配遠⼼分離、および⾃家製のSECカラム)に広く依存しており、これらの⽅法の再現性の低さは広く⽂書化されています。
例えば、EV収量の量的な違いは、UC の機器とオペレーターに依存する、技術的変動の両⽅ に よ る も の と 考 え ら れ て い ま す 。 密 度 ベ ー ス の 分 離 ⽅ 法 は U C ⾃ 体 に 依 存 し て い る た
め 、 同じ変動源を共有しています。
⼀⽅、カラム作成の「DIY」ルートは、⾼度な最適化(およびその後の時間)、リソース、およびスキルを必要とする効率的で標準化されたカラムの作成で、不必要なエラーの可能性をもたらします。

ダウンストリーム分析に合わせたサンプル精製

精製された抽出液量（PCV）の純度が⾼まることには、もう⼀つの⼤きなメリットがあります。分離が改善されたことで、より多くのフラクションからEVのみを抽出することができ、新しいレベルのコントロールが可能になりました。また、抽出後の分析⽬的に合わせて、異なるPCVを選択することができます。

3

新登場Gen2カラムでムで真の細胞外真の細胞外⼩胞評価を価をさらに多くの夾雑タンパク質を除去
Gen2カラムに使⽤されている独⾃の樹脂は、左図に⽰すように、ロードされたサンプルからより多くのタンパク質を除去することができます。左図は、AFCオートフラクションコレク
ターを使⽤して分離したヒト⾎漿サンプル（2mL）に含まれるタンパク質を、アプライされたタンパク質全体に対する割合を⽰しています。
タンパク質はビシンコニン酸アッセイ（BCA）で測定しました。70nmシリーズおよび35nmシリーズのqEVoriginalLegacyカラムおよびGen2qEVoriginalカラムのデータを⽰しています。（0.5mLのローディングボリューム）

細胞外⼩胞の真のタンパク評価
Tunabl Resistive Pulse Sensing（TRPS法）とビシンコニン酸アッセイ（BCA）でそれぞれ測定したタンパク質1μgあたりの細胞外⼩胞(EV)の数を⽰しています。
右 図 は 、 I Z O N の A F C（ オ ー ト フ ラ ク シ ョ ン コ レ ク タ ー ）と 、7 0 n m お よ び 3 5 n m シ リ ー ズ のqEV original カラム（ロードボリューム0.5mL）を⽤いて、分離したヒト⾎漿サンプルについて⽰しています。Gen2カラムでは分離が強化されているため、より精製されたEV含有サンプルを得ることができます。

マイルド抽出でインタクトEV抽出
超遠⼼機による分離はEVを強い重⼒にさらすため、EVは分解、凝集、融合しやすくなりますが、qEVカラムは穏やかなアプローチを提供します。SECベースのqEVカラムは、無傷で機能的なEVの分離を可能にします。
【関連⽂献】
Higher functionality of extracellular vesicles isolated using size-exclusion chromatography compared to ultracentrifugation.
Mol EA, Goumans MJ, Doevendans PA, Sluijter JPG, Vader P.
Nanomedicine:Nanotechnology,Biology and Medicine.
2017;13(6):2061-2065.doi:10. 1016/j.nano.2017.03.011
High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles.
Linares R, Tan S, Gounou C, Arraud N, Brisson AR.
Journal of Extracellular Vesicles.
2015;4(1):29509.doi:10.3402/jev.v4.29509

EV抽出は15分以内にqEVカラムの簡便で迅速な性質により、qEV分離は最も⼀般的なEV分離⽅法の1つです。qEVカラムをAFC(オートフラクションコレクター)と⼀緒に使⽤すると、効率、再現性がさらに向上します。AFCは、分離プロセスをガイドし、⾃動容量測定と収集の貴重な要素を導⼊します。AFCを使⽤すると分離が発⽣している間も他の作業を進めることができるため、1⽇の貴重な時間を節約できます。

AFC（qEV オートフラクションコレクター）仕様
タッチスクリーンサイズ

5 インチ(解像度 800 x 480 px)

平均抽出時間10 〜 15 分 (qEV カラムによる)ユーザーに提供されるデータ

カラムタイプ、使⽤可能回数

重量(kg)

1.2

装置⼨法(mm)

W250×D300×H400
4

サンプル容量、回収サンプル、抽出サイズ、抽出後のご用途に応じて選べるカラム

qEV

Gen2カラムがフルラインナップ
qEV / 35nm
35〜350nm
最適な回収範囲

70〜1000nm
最適な回収範囲<110nm
110 nm 未満のEV回収率が⾼い>110nm
110nmを超えるEVの⾼い回収率

エクソソーム領域のEV精製に培養上清に最適

リポタンパク質のオーバーラップが少ない
⾎漿を扱う場合

qEV single

抽出サイズ領域qEV original

qEV 1

qEV2

qEV10

qEV100qEV single35 qEV single70

qEV
orignal35qEV
original70

qEV1 35

qEV1 70

qEV2 35

qEV2 70

qEV10 35

qEV10 70

qEV100 35

qEV100 70

35〜350nm

35〜350nm

70〜1,000nm

35〜350nm

70〜1,000nm

35〜350nm

70〜1,000nm

35〜350nm

70〜1,000nm

35〜350nm

70〜1,000nm

70〜1,000nm

サンプル容量150μL

500μL

1mL

2mL

10mL

100mL

ColumnVolumeフラクション
サイズ

3.0mL

8.5ｍL

13.5 mL

45.1 mL

69.3mL

600mL

0.17 mL

0.4 mL

0.7 mL

2 mL

5 mL

50mL

Gen 2, Legacy

Gen 2, Legacy

使⽤回数

1回

カラム種類

Gen 2, Legacy

AFC使⽤

5qEV/70nm

5回
Gen 2, Legacy

Gen 2
使⽤可能

Gen2, Legacy

使⽤不可qEV濃縮キット
EV含有サンプルを濃縮するためのシンプルで便利なキットです。qEVで抽出したEVの分析によっては、qEVカラムから抽出後に濃縮ステップが必要になる場合があります。qEV濃縮キットを使⽤すると、EVを含むサンプルをダウンストリーム処理に便利な量に濃縮することができます 。

・qEVで抽出したインタクトなEVを濃縮収集ボリュームの範囲を集中します。
EV濃度は、600 µL から20 mL の範囲の精製されたコレクションボリュームで達成できます。

・サンプルをダウンストリーム処理に最適な量に濃縮精製に使⽤する

サンプル量

qEV濃縮キットのqEVカラム(mL)

必要量(µL)

RNA抽出後の分析などに対応

qEV single

0.60〜0.80

50.0・キットには5mLの濃縮⽤粒⼦が含まれています。濃縮するサンプル量によってqEV original

1.5〜3.0

100.0

qEV2

6.0〜8.0

150.0

qEV10

10.0〜20.0

200.0

サンプルをペレットに変換し適切な量に濃縮できます。
・ウェスタンブロッティング、質量分析、またはqEVRNA抽出キットを使⽤した

必要な濃縮⽤粒⼦の量は異なります。

qEV RNA抽出キット
・シンプルで標準化可能な⾼収量のRNA抽出キット
qEV RNA抽出キットを使⽤すると、細胞外⼩胞 (EV) が豊富なサンプルから⾼品質のRNAを抽出できます。

・EVからの迅速なRNA抽出RNA の抽出は 15 〜 20 分以内に完了
シンプルなカラムベースのろ過システムにより、サンプルの希釈を最⼩限に抑えた⾼収率なろ過が可能です。

・溶出量
抽出したRNAは、50〜100μL の溶出量で回収できます。
その後のアプリケーションに応じて、サンプル量や濃度を最適化できます。

・様々なアプリケーションとの互換性

サンプルの種類

⽣体液と細胞培養培地（条件有）抽出されたRNAは、qPCR、マイクロアレイ、および次世代シーケンシングのアプリ
ケーションに使⽤して、疾患の進⾏を評価、治療反応を監視、新薬または環境化学物質のリスク評価できます。

精製されたRNAの種類

・⽣体液を含む様々なサンプルに適しています
このキットは、⾎漿や尿などの⽣体液や in vitro 細胞培養上清から得られる単離EV から質と量に優れた RNA を抽出することができます。

フェノールフリー

全てのサイズRNAに対応。他の⽅法よりも多くのmiRNA を分離し、GC含有量による偏りがありません。
RNA 解析に影響を与える危険な化学物質であるフェノールを含まない

qEV RNA抽出キットは、qEV濃縮キットと⼀緒に使⽤することも、必要に応じて個別に使⽤することも可能です。50サンプル分が含まれています。

1 時間未満で精製から解析までトータルにご提案
細胞外⼩胞は⽣物性の流体で、量的な分析を⾏う前に、複雑なバックグラウンドタンパク質を除外する必要があります。qEVを使⽤することで、迅速に浄化することが可能です。
qEVはサイズ排除クロマトグラフィーの⼿法を使⽤し、凝 集 せ ず に 急 速 で ⾼ い 浄 化 を す る
ことによって、容易に費⽤対効果が⾼い作業が⾏えます。
通常EVの分離は数時間〜1⽇以上かかりますが、qEVでは15分の短時間で抽出が完了します。その後、Exoid（ナノ粒⼦マルチアナライザー）、VIDEO DROP（ナノ粒⼦イメージングアナライザー）、NanoFCM（フローナノアナライザー）を使⽤することで、計測までの全体⼿順（精製+解析）は1時間未満で簡単に完了することができます。

6●最適 な qEVカラム選択 ●抽出サンプルは？

qEV 詳細はこちらから培養上清

⾎液抽出のサイズは？

70〜1,000nm
エクソソーム&マイクロベシクルサイズ領域70〜1,000nm

35〜350nm(エクソソームサイズ領域)

エクソソーム&マイクロ
ベシクルサイズ領域

qEV/35

qEV/70qEV/70

培養容量

1ｍL

5ｍL

10ｍL

20ｍL

100ｍL

1L

濃縮

サンプル容量

150μL

500μL

1ｍL

2ｍL

10ｍL

100ｍL

qEV single
qg

qEV original

qEV 1

qEV 2

qEV 10q

qEV 100

メイワフォーシス 株式会社
meiwanet.co.jp

製品、その他お問合せ先
本社 〒160-0022 東京都新宿区新宿1-14-2

大名阪古仙テ

本屋台
ク

ノ営
営

ロ

業
業

ジ

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千日前Mʼsビル9階

所 〒464-0075 愛知県名古屋市千種区内山3-10-18

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ナ ノ 粒 子 計 測 技 術 ラ ボ 〒223-8522 神奈川県横浜市港北区日吉3-14-1

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TEL（06）6212-2500

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TEL（022）218-0560

FAX（022）218-0561

製品開発支援ラボ318

慶應義塾大学矢上キャンパス

理工学部中央試験所

36棟213号室

京都工芸繊維大学-メイワフォーシス 〒606-8585 京都府京都市左京区松ヶ崎橋上町 京都工芸繊維大学松ヶ崎キャンパス オープンファシリティーセンター
表 面 解 析 ユ ニ ッ ト
表面解析ユニット 16 号館 307 号室※テクノロジーラボ、ナノ粒子計測技術ラボ、表面解析ユニットへの連絡は本社までお願いいたします。
※外見・仕様・その他について、予告なしに変更をする場合がございます。