山口県立大学学術情報

第６号〔看護栄養学部紀要通巻第６号〕 2013年３月

ブレンド健康茶およびその原料茶葉における抗酸化活性および糖質分解酵素阻害活性の評価
Evaluation of anti-oxidant and carbohydrate-hydrolyzing enzyme inhibitory activities
of a blended health tea and constituent its tea leaves.
三上奈々，藤野加奈子，繁田真弓，加藤元士，人見英里＊

Nana Mikami, Kanako Fujino, Mayumi Shigeta, Motoshi Kato and Eri Hitomi＊
In this study, we evaluated the anti-oxidant activity of a blended health tea and its 8 constituent tea leaves including rooibos tea(Aspalathus linearis), black soybean tea, brown rice tea, Salacia reticulata, Pu-erh tea, Tu-chung tea (Eucommia ulmoides, Oliv), dandelion
tea and Snow-tea (Thamnolia vermicularis Ach.) by measuring ORAC and DPPH radical scavenging assay and total polyphenol content.
Pu-erh tea showed the highest anti-oxidant activity among all of the tea leaves in all three evaluation methods. Dandelion tea, Tuchung tea, rooibos tea and the blended health tea also showed anti-oxidant activities.
We also measured the inhibition activities of the carbohydrate-hydrolyzing enzymes, α-amylase and α-glucosidase (maltase andsucrase) demonstrated by the blended health tea and its 8 constituent tea leaves in vitro. Pu-erh tea, Salacia reticulata and the blended
health tea tended to inhibit maltase. On the other hand, no tea leaves inhibited α-amylase or sucrase.

キーワード：健康茶、抗酸化活性、糖質分解酵素阻害活性
Keywords: health tea, anti-oxidant activity, carbohydrate-hydrolyzing enzyme inhibitory activity

諸言

ン系の色素を含む。正月の煮豆に用いられるもので近年、我が国では様々な生活習慣病の増加が問題ある。となっており、その予防や改善のために生体調節に玄米は、一般的には緑茶と炒った玄米を混ぜて玄資する機能性成分を含む食品に注目が集まっている。

米茶として飲用されているが、本研究の原料は、玄その中でも、古くからの飲用歴がある健康茶の人気米のみを用いている。

は高く、数多くの健康茶が市販されている。本研究サラシア・レティキュラータ（Salacia reticulata）

で用いたブレンド茶（商品名Hygieia tea）はルイ

は、インドやスリランカに生育するニシキギ科の樹

ボス茶をベースとし、黒豆、玄米、サラシア・レティ

木でアーユルヴェーダの天然薬用植物として伝統的キュラータ、プーアル茶、杜仲茶、タンポポ茶、雪に糖尿病の薬として使用されてきた。強いα-グル茶の８種の茶葉からなるブレンド茶である。原料とコシダーゼ阻害作用を有することが報告されていして用いられている茶は以下のような特徴を持つ。

る2）。

ルイボス（Aspalathus linearis）茶は南アフリカのプーアル茶は、緑茶をコウジカビで発酵させて作

セダルバーグ山脈の高地に生育するマメ科植物からられる中国茶の一種であり、黒茶に分類されている。

作られた発酵茶であり、浸出液が美しい赤色を呈す

古くから中国の西北辺境の遊牧民にとっては不可欠るのが特徴である。南アフリカでは、一般的な茶とな茶として飲用されてきた3）。

して日常的に飲用されている1）。

杜仲茶は、中国四川省原産の落葉喬木トチュウ

黒豆は、黒大豆とも呼ばれ、種皮にアントシアニ（Eucommia ulmoides, Oliv）の葉を焙煎して作られた

山口県立大学 看護栄養学部 栄養学科
Yamaguchi Prefectural University, Department of Human Nutrition＊
連絡先 hitomi@yamaguchi-pu.ac.jp＊
Corresponding Author : hitomi@yamaguchi-pu.ac.jp―5―ブレンド健康茶およびその原料茶葉における抗酸化活性および糖質分解酵素阻害活性の評価茶であり、含まれるゲニポシド酸により血圧降下作
4）salt溶液200 µLを加え10秒間振とう撹拌後、37℃で15分加温した。次いで、31.1 mM AAPH溶液75 µL用があることが知られている 。
タンポポ茶は、タンポポの根を焙煎して作られるを加えて10秒間振とう撹拌し、蛍光マイクロプレートリーダー（SYNERGY Mx、Bio Tek社）にてEx茶である。コーヒーの代用品として用いられる。
雪 茶（Thamnolia vermicularis（Ach）．
Asahina） と485 nm、Em 520 nmの蛍光強度を２分間隔で90分は雲南省や四川省の高地に自生するムシゴケ科の地間測定した。ORAC値は、Trolox標準液の蛍光強度衣植物を乾燥させたもので、中国では古くから茶との曲線下面積（AUC:Area Under the Curve）と非して飲用されるほか、中国の伝統療法として高血圧存在下におけるBlankの曲線下面積の差（net AUC）

5）等の治療薬としても使用されてきたものである 。
以上の原料には、ポリフェノールを中心としたに対する抗酸化物質存在下でのnet AUCの相対値を求め、Trolox当量（µmol TE/100g）として算出した。

様々な機能性成分を含むことが予想されるが、さまざまな成分を含むブレンド茶の機能性の評価はこれ

３．DPPHラジカル消去活性
DPPHラジカル消去活性は、Matsuoら8）の方法にまで行われていない。
そこで本研究では、ブレンド茶およびその原料茶て行った。蒸留水で適宜希釈した試料溶液または検葉における抗酸化活性および糖類分解酵素阻害活性

量線用の０（蒸留水）～ 1.0 mM Trolox標準液0.3を調べ、これらの健康機能性を探索することを目的

mLに、0.1M 酢酸緩衝液（pH 5.5）0.3 mL、0.2 mMとして研究を実施した。

DPPH（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）-エタノール溶液0.3 mLを加えて攪拌し、60分間遮光して室温で実験方法反応させ、517 nmの吸光度（紫外可視分光光度計

１．試料および試料液

UV-1800、島津製作所）を測定した。

ブレンド健康茶として（株）Owl&Owls社より供与

DPPHラジカル消去活性は、ブランクの吸光度とされたHygieia teaおよびその原料であるルイボス各濃度の試料液添加時の吸光度の差から試料溶液１茶、杜仲茶、黒豆茶、玄米茶、プーアル茶、雪茶、mLあたりの517nmにおける吸光度の減少値を求め、タンポポ茶、サラシア・レティキュラータの計９種

Trolox当量（µmol TE/100g）として算出した。

類を茶試料とした。試料液は、蒸留水１Lに茶試料３gを加えて10分間沸騰後、室温まで冷却し、総量４．総ポリフェノール量の定量が１Lになるよう水分蒸発量を蒸留水で補正した。

総ポリフェノール量はFolin-Denis法にて定量し、なお、上記の浸出濃度は、Hygieia teaの調製方法没食子酸相当量（mg GAE/100g）として算出した。

を参考として、通常飲用に供することを想定した濃蒸留水で適宜希釈した試料溶液または検量線用の０度として決定した。雪茶とタンポポ茶は浮遊物が生（蒸留水）～ 50μg/ml没食子酸標準液0.5 mLに、２じたため、0.45 µmメンブレンフィルターでろ過し倍希釈したFolin試薬0.5 mLを加えて攪拌し、３分た。調製した試料液は、分析に用いるまで－30℃で間放置した。10%（w/w）炭酸ナトリウム溶液0.5保存し、抗酸化活性の測定に用いた。また、この試

mLを加えて攪拌し、室温で１時間反応後760 nmの料液の濃度を３mg/mLとして、２倍希釈したもの

吸光度（紫外可視分光光度計UV-1800、島津製作所）（1.5 mg/mL）とともに酵素阻害活性の測定に用いた。

を測定した。

２．ORAC法による抗酸化活性の測定

５．糖類分解酵素阻害活性の測定
6）

ORAC法による抗酸化活性の測定は、沖ら およ（１）粗酵素液の抽出

7）

びAntioxidant Unit研究会 の方法を一部改変してラット腸管アセトン粉末１gを量りとり、0.1Mリ

行 っ た。96 wellマ イ ク ロ プ レ ー ト に 検 量 線 用ン酸緩衝液（pH6.0）20 mLを加え、10分間、氷中Trolox標準液（6.25 ～ 100 µm）または試料液を20で超音波装置処理した。その後、12,000 rpm、20分、µLずつ分注した。Trolox溶液および試料液の希釈

４℃で遠心分離し、得られた上清を粗酵素液としておよびBlankには75 mMリン酸緩衝液（pH 7.0）をマルターゼ・スクラーゼ阻害活性測定に用いた。

用 い た。 各 ウ ェ ル に94.4 nM Fluorescein sodium―6―

山口県立大学学術情報第６号〔看護栄養学部紀要通巻第６号〕 2013年３月（４）スクラーゼ阻害活性（２）α-アミラーゼ阻害活性9）

測定は齋藤ら の方法を改変して行った。すなわ

測定は出口ら10） の方法を改変して行った。すなち、基質として 0.5%（w/w）デンプン-0.1 Mリン

わち、基質として２%スクロース溶液 150 µL、阻酸ナトリウム緩衝液（pH 6.7）625µL、0.1Mリン酸

害 剤 と し て 各 抽 出 液 150 µLを1.5 mLマ イ ク ロ

緩衝液（pH 6.7）50 µL、1%（w/v）塩化ナトリウチューブに入れ、混合した。37℃で５分間プレインム水溶液 125 µLを1.5 mLマイクロチューブに入れ、キュベートした後、上記の粗酵素液を２倍希釈した

これに阻害剤として各抽出液 50 µLを加えて混合しものを150µL加え、混合した。37℃で60分間反応さた。

せた後、95℃で５分間煮沸し、反応を停止させた。

37℃で10分間加温した後、30 µg/mL α-アミラー

5,000 rpm、室温で５分間遠心分離した上清５ µLをゼ水溶液 50 µLを加えて混合し、37℃で20分間反応

1.5 mLマイクロチューブに分注し、グルコースCⅡ-させた。その後、２mol/L水酸化ナトリウム水溶液

テストワコー（和光純薬株式会社）発色試液を200

125 µLを加えて反応を停止させ、１%（w/v）3,5-µL加え、37℃で5分間反応させた。発色した試液をジニトロサリチル酸水溶液 125 µLを加えて混合し、190 µLずつマイクロプレートに分注し、マイクロ沸騰水中で10分間加熱した。反応した溶液を190

プレートリーダーを用いて505 nmの吸光度を測定µLずつマイクロプレートに分注し、マイクロプレーした。また、個々の反応ごとにブランク（粗酵素液

トリーダーを用いて540 nmの吸光値から還元糖（D-の代わりに、粗酵素液を95℃で５分間加熱処理したグルコース相当量）を測定した。また、個々の反応

加熱失活粗酵素液を添加）を置いた。

ごとにブランク（粗酵素液の代わりに、粗酵素液を95℃で５分間加熱処理した加熱失活粗酵素液を添

阻害率に関しては、α-アミラーゼの方法と同様に算出した。

加）を置いた。
阻害率に関しては、検体（抽出液を含まない）のグルコース相当値からブランクのグルコース相当値

結果及び考察１．各種茶試料液のORAC値を減じた値をもとに、以下の式により阻害活性を算出した。

各種茶試料液のORAC値の測定結果を図１に示した。また、参考値としてUSDA（アメリカ合衆国農務 省：United States Department of Agriculture）が公表している緑茶のORAC値11） を図１に併記し（３）マルターゼ阻害活性測定は出口ら10） の方法を改変して行った。すな

た。今回試料に用いた茶試料中では、プーアル茶のわち、基質として２%マルトース溶液 150 µL、阻ORAC値が最も高く、次いでルイボス茶、杜仲茶、害 剤 と し て 各 抽 出 液150 µLを1.5 mLマ イ ク ロ

Hygieia teaのORAC値 が 175μmol TE/100 g程 度チューブに入れ、混合した。37℃で５分間プレインの類似の値を示した。サラシア・レティキュラータ、キュベートした後、上記の粗酵素液を５倍希釈した

黒 豆 茶、 玄 米 茶、 雪 茶 のORAC値 は40 μmol

ものを150 µL 加え、混合した。37℃で30分間反応TE/100 g以下であった。また、いずれの茶試料のさせた後、95℃で５分間煮沸し、反応を停止させた。 ORAC値も緑茶より低値であった。
5,000 rpm、室温で５分間遠心分離した上清５ µLを1.5 mLマイクロチューブに分注し、グルコースCⅡテストワコー（和光純薬株式会社）発色試液を200µL加え、37℃で５分間反応させた。発色した試液を190 µLずつマイクロプレートに分注し、マイクロプレートリーダーを用いて505 nmの吸光度を測定した。また、個々の反応ごとにブランク（粗酵素液の代わりに、粗酵素液を95℃で５分間加熱処理した加熱失活粗酵素液を添加）を置いた。
阻害率に関しては、α-アミラーゼの方法と同様に算出した。

図１―7―

各種茶試料液のORAC値

ブレンド健康茶およびその原料茶葉における抗酸化活性および糖質分解酵素阻害活性の評価

２．各種茶試料液のDPPHラジカル消去活性ORAC値やDPPHラジカル消去活性にポリフェノーDPPHラジカル消去活性の測定結果を図２に示しルの含有量が寄与したものと考えられる。

た。プーアル茶の値が最も高く、次いでタンポポ茶、プーアル茶を除くチャノキ以外の植物を原料とす

杜仲茶、ルイボス茶、Hygieia teaの順に高かった。

る茶試料（茶外茶）は、総ポリフェノール量が少な

一方、黒豆茶、玄米茶、雪茶、サラシア・レティキュ

く抗酸化活性が低い傾向がみられたが、ルイボス茶

ラータの値は８μmol TE/100 g以下であった。タはケルセチンなどフラボノイド類1，12）を、杜仲茶はン ポ ポ 茶 を 除 い て は、 図 １ に 示 し たORAC値 とルテオニンやケルセチンなどを含む4）ことが報告さ

DPPHラジカル消去活性能の高さが一致する傾向をれており、これらの成分の存在により他の茶外茶よ示した。

りも比較的高い値を示したと考えられる。
また、ブレンド茶（Hygieia tea）の総ポリフェノー

３．各種茶試料液の総ポリフェノール量

ル量および抗酸化活性がルイボス茶と同程度であっ各種茶試料液の総ポリフェノール量の測定結果を図３に示した。

たのは、ルイボス茶の配合比率が他の茶に比べて高いことによるものと考えられる。

総ポリフェノール量はプーアル茶が最も多く、次これら茶の抗酸化活性は、緑茶には劣るものの、いでHygieia tea、ルイボス茶、杜仲茶、タンポポポリフェノール等の抗酸化物質を摂取する給源とし茶の順に多かった（図３）。サラシア・レティキュラーてルイボス茶、杜仲茶、プーアル茶及びブレンド茶タ、玄米茶、黒豆茶、雪茶試料液中の総ポリフェノー（Hygieia tea）は有効であると考えられた。

ル量は５mg/100g以下と少量だった。
４．各種茶試料液の糖類分解酵素阻害活性以上の結果より、プーアル茶の総ポリフェノール

Hygieia teaおよび8種類の茶葉抽出液のα-アミ量が多かったのは、プーアル茶の原料が緑茶と同じラーゼ、マルターゼ、スクラーゼに対する阻害率のツバキ科のチャノキの葉であることからカテキン類測定結果を図４～６に示した（茶葉の浸出に用いたな ど を 多 く 含 ん で い る た め で あ る と 考 え ら れ、蒸留水（０mg/mL）を阻害率０%として比較した）。
（1）α-アミラーゼ阻害活性
α-アミラーゼに関しては、プーアル茶で３mg/mLの濃度における阻害率が19.1%であった以外、ブレンド茶（Hygieia tea）をはじめとするほとんどの茶葉において阻害が見られなかった。
（2）マルターゼ阻害活性
マ ル タ ー ゼ の 阻 害 率 に 関 し て は、 ブ レ ン ド 茶（Hygieia tea）の1.5 mg/mLの濃度で21.6%、３mg/

図２ 各種茶試料液のDPPHラジカル消去活性mLの濃度で29.3%であった。また、プーアル茶やサラシア・レティキュラータにおいては３mg/mLの濃度でそれぞれ38.5%、45.2%であった。それ以外の茶葉については、３mg/mLにおいても弱い阻害が見られたのみであった。
（3）スクラーゼ阻害活性
ス ク ラ ー ゼ の 阻 害 率 に 関 し て は、 ブ レ ン ド 茶（Hygieia tea）1.5 mg/mLの濃度では見られなかったが、３mg/mLの濃度では12.4%であった。８種の茶葉に関しては、ほとんどの茶葉で阻害が見られな

図３

各種茶試料液の総ポリフェノール量かったのに対し、サラシア・レティキュラータは1.5―8―

山口県立大学学術情報

図４

各種茶試料液のα-アミラーゼ阻害活性

図５

各種茶試料液のマルターゼ阻害活性

図６

各種茶試料液のスクラーゼ阻害活性―9―第６号〔看護栄養学部紀要通巻第６号〕 2013年３月

ブレンド健康茶およびその原料茶葉における抗酸化活性および糖質分解酵素阻害活性の評価

mg/mLでは20.7%、３mg/mLでは32.1%と他の茶葉は日常的な飲料として子供から高齢者までが１日にに比べ高かった。

複数回飲用することも想定され、明らかな糖類分解酵素阻害活性を示さないことは、誰もが安心して飲（4）考察用できることにもつながると考えられる。

ブレンド茶（商品名Hygieia tea）およびそれに含まれる８種の茶葉におけるα-アミラーゼ、マル要約
健康茶として市販されているブレンド茶（商品名

ターゼ、スクラーゼに対する阻害作用について検討

Hygieia tea）およびその原料であるルイボス茶、黒した。
ブレンド茶の阻害効果に関しては、マルターゼに豆、玄米、サラシア・レティキュラータ、プーアル対する作用が３種の酵素の中で最も強いものであっ茶、杜仲茶、タンポポ茶、雪茶を用いて、通常飲用た。また、８種のどの茶葉においても同様の傾向がに供する濃度で浸出を行い抗酸化活性及び糖質分解みられたため、これらの茶葉に含まれる成分はマル酵素阻害活性を評価した。抗酸化活性はORAC法、ターゼに対して阻害活性を示しやすいと推察された。

DPPHラジカル消去法、及び総ポリフェノール量かサラシア・レティキュラータではマルターゼやスら評価した。また、糖質分解酵素阻害活性はラット

クラーゼに対し、他の茶葉と比較すると高い阻害活腸管アセトン粉末から抽出した粗酵素液を用いて、性がみられた。サラシア・レティキュラータ（Salacia

α-アミラーゼ、マルターゼ、スクラーゼ阻害活性reticulata）に関しては、salacinolやkotalanolをはじを評価した。その結果、抗酸化活性では、いずれのめとする様々な成分が小腸でのマルターゼやスク指標においてもプーアル茶の値が最も高く、茶外茶13）ラーゼを阻害することが知られている 。本研究でであるタンポポ茶、杜仲茶、ルイボス茶、ブレンド用いたサラシア・レティキュラータの抽出液は、日茶も抗酸化活性を示した。一方、糖質分解酵素阻害

常的に飲用することを想定した濃度であるために低活性については、マルターゼについてプーアル茶、濃度であるが、少なからず上記のような成分も含まサラシア・レティキュラータ、ブレンド茶が弱い阻れていたため、阻害効果が見られたと考えられる。

害作用を示したが、α-アミラーゼ、スクラーゼに総合的に考えると、ブレンド茶に関しては配合比

ついては、いずれの茶でも、ほとんど阻害作用は認の約８割がルイボス茶である（販売会社からの私信められなかった。

による）ことから、ルイボスとほぼ同等の阻害率を示すことが予想されたが、３mg/mLの抽出液では謝辞

どの酵素においてもブレンド茶の方が高い阻害率を本研究を行うにあたり、Hygieia teaおよびその示した。その理由としては、サラシア・レティキュ

原料茶葉をご提供いただきました（株）Owl&Owls

ラータやプーアル茶など８種類の中でも作用の強社に感謝申し上げます。また、研究の実施のためにかった茶葉が含まれていることや、単独の茶葉ではご協力いただきました山口県立大学看護栄養学部栄

阻害作用がみられない成分であっても茶葉をブレン養学科学生、佐藤あゆみさんと若林舞さんに感謝申ドすることによって複数の成分による相加的あるいし上げます。

は相乗的な作用が発揮された可能性が考えられる。
しかし、ブレンド茶で最も高い阻害率を示したマ

参考文献

ルターゼに対しても、３mg/mLの濃度で29.3%であ１）人見英里、田村聡美、鶴本祐子、津田孝範、中り、通常、糖類分解酵素阻害活性の強さの指標とな

野昌俊：ルイボス茶（Aspalathus linearis）の抗酸るIC50値（50%阻害するために必要な試料の濃度）化性、日本食品科学工学会誌、46（12）、779-785の算出ができなかった。

（1999）．

これらのことより、本研究で用いたブレンド茶は、

２）下田博司、川守秀輔、河原有三：スリランカ有

通常飲用に供する濃度では、特定保健用食品（トク用 植 物 サ ラ シ ア・ レ テ ィ キ ュ ラ ー タ（Salaciaホ）として販売されている糖類分解酵素阻害活性をreticulata）水抽出物のラットおよびヒトの食後10）持つような食品

過血糖に及ぼす作用、日本栄養・食糧学会誌、51と比較すると、その効果は弱いものであることが明らかになった。しかし、健康茶（5）、279-287（1998）．

― 10 ―

山口県立大学学術情報３）郭 雯飛、呂 毅、駱 少君、坂田完三：黒茶－微生物発酵を取り入れた茶、日本食品科学工学会誌、
51（7）、323-331（2004）．
４）角橋明美、神田知子、安藤真美、桑守正範、人見英里：杜仲茶の抗酸化性、山口県立大学大学院論集、第９号、113-119（2008）．
５）川原信夫、安食菜穂子、合田幸広：各種雪茶製品の含有成分並びにHPLCプロファイル分析に関する研究、日本食品化学学会誌、14（2）、63-69（2007）．
６）沖智之、竹林純、山崎光司：食品機能性評価マ
ニュアル集

第Ⅱ集．（社）日本食品科学工学会、pp.79-86（2008）．
７）Antioxidant Unit研究会ホームページ、抗酸化力 の 分 析 法 ORAC（http://www.antioxidantunit.com/analysis/orac/index.htm ）平成23年２月
３日ダウンロード
８）M. Matsuo：Antioxidant Activity ofHydrophilic Compounds of Defatted Soybean
Fermented with Neurospora intermedia（D-Ontjom）．Food Sci. Technol. Res., 8（3），235-238（2002）．
９）齋藤優介、西 繁典、小疇 浩、弘中和憲、小嶋道之：豆類ポリフェノールの抗酸化活性ならびにα-アミラーゼおよびα-グルコシダーゼ阻害活性、
日本食品科学工学会誌、54（12）、563-567（2007）.
10）出口ヨリ子、長田邦子、内田和美、木村広子、芳川雅樹、工藤辰幸、保井久子、綿貫雅章：グア
バ葉熱水抽出物のdb/dbマウスにおける抗糖尿病効果およびヒト飲用試験による食後血糖値上昇抑制効果、
日本農芸化学会誌、72（8）、923-931、（1998）.
11）USDA Database for the Oxygen Radical
Absorbance Capacity （ORAC） of SelectedFoods, Release 2, p.36（2010）．
12）梶本五郎、村上智嘉子：各種市販茶の抗酸化性とそれらの成分、日本栄養・食糧学会誌、52（4）、209-218（1999）．
13）H. Matsuda, M. Yoshikawa., T. Morikawa., G.
Tanabe., and O. Muraoka. Antidiabetogenic
constituents from Salacia species. J. Trad. Med. 22（Suppl.1），145-153（2005）．

― 11 ―

第６号〔看護栄養学部紀要

通巻第６号〕 2013年３月