シンポジウムⅡ 微生物 『感染性胃腸炎の検査法-下痢原性大腸菌・ノロウイルスを中心に-』
下痢原性大腸菌およびノロウイルス感染症の発生動向
吉野修司
宮崎県衛生環境研究所 微生物部
現在、下痢原性大腸菌は腸管出血性大腸菌（EHEC）、常の診療では遺伝子型別は不要であるが、行政処分

腸管毒素原性大腸菌（ETEC）、腸管侵入性大腸菌が伴う食中毒発生時などでは遺伝子型別まで求めら（EIEC）、腸管病原性大腸菌（EPEC）、腸管凝集付着れる場合がある。2010 年～2013 年の各シーズンで報性大腸菌（EAggEC）などに分類されている。このう

告された NoV の遺伝子型別は GⅡ.4 が最も多いが、ち EHEC 感染症は全数把握の三類感染症として医師シーズン毎に変動する場合があり（IASR Vol.35の届出が義務付けられている。また、EHEC は菌の分No.7）、さらに新たに GⅡ.17 変異型も報告されてい離に特化した培地の使用やイムノクロマト法によるることから、今後の流行状況に注意する必要がある。

Stx（行政用語では VT）の検出により、医療機関でなお、これまで地方衛生研究所等で実施していたも検査は可能であり、毎年全国で 4000 件前後の届出

遺伝子型別は Capsid N/S 領域を標的にしたものであがなされている。

ったが、2015/16 シーズンより RdRp/VP1 領域を標的

一方、他の下痢原性大腸菌は PCR 法等による遺伝子にすることが推奨されており、それに伴い遺伝子型検査で病原因子を調べないかぎり非病原性大腸菌との表記も変更されている。の区別が困難で、下痢症の起因菌であるかどうかは判断できない。地方衛生研究所では食中毒や集団感染が発生した際、行政検査として起因菌および病原因子の特定を行うが、通常の医療機関等で病原因子の検出まで行える施設は限られており、EHEC を除く下痢原性大腸菌の発生動向は掴めていないのが現状である。また、最近では非典型的な大腸菌との鑑別が難しい Escherichia albertii も下痢症起因菌として認知されている。これまで分離された E.albertii
は eae を保有し、菌株によっては stx の存在も認められていることから、別菌種である E.albertii を下痢原性大腸菌の範疇に含めるのか、行政的な位置づけをどうするかなどが曖昧で、下痢原性大腸菌の発生動向を把握するのはより困難な状況になっている。
ノロウイルス（NoV）は感染性胃腸炎の起因ウイルスの一つであり、現在まで培養細胞を用いた invitro での完全な増殖は報告されていない。このため NoV は遺伝子群（Genogroup：GⅠ～GⅤ）で分類されており、ヒトに感染する NoV が主に GⅠと GⅡであることから、現在のところ GⅠを 9、GⅡを 22 の遺伝子型（genotype：GⅠ.1～9 および GⅡ.1～22）に細分類している。なお、多くの種類の遺伝子型はその抗原性も多様であることが示唆されており、簡易キットにおける偽陰性の一因となっている。また、通シンポジウムⅡ 微生物 『感染性胃腸炎の検査法-下痢原性大腸菌・ノロウイルスを中心に-』市中病院の下痢原性大腸菌検査
古谷 明子
国家公務員共済組合連合会 佐世保共済病院
大腸菌はヒトの腸管内における常在菌のひとつでためには、便から直接もしくは選択培地上のコロニあるが、一部腸管内感染を引き起こすものがあり下ーから DNA を抽出し、PCR 法による病原因子を検痢原性大腸菌と総称される。2012 年 1 月に国立感出する方法が最も優れているが、多くの検査室では染症研究所および衛生微生物協議会により下痢原性

未だに釣菌と病原大腸菌免疫血清型に依存した検査大腸菌の病原因子や発症機序の違いからカテゴリー法で行っているのが現状である。の見直しが行われ、腸管病原性大腸菌

不十分な検査方法とわかっていても変更できない、毒素（enteropathogenic Escherichia coli, EPEC）

要因のひとつに保険点数がある。平成 28 年度診療

原 性 大 腸 菌 （ enterotoxigenic Escherichia coli,

報酬改定により、便培養検査は 180 点となった。20ETEC ）、 腸 管 侵 入 性 大 腸 菌 （ enteroinvasive

点増加したとはいえそれでも採算が取れない。しかEscherichia coli, EIEC ）、 腸 管 出 血 性 大 腸 菌し、病原大腸菌免疫血清型検査は「大腸菌血清型別（enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC）、腸検査」として 180 点保険収載されており、「大腸菌管 凝 集 付 着 性 大 腸 菌 （ enteroaggregative

ベロトキシン定性」194 点と併せて唯一算定できる

Escherichia coli, EAggEC）の 5 つに分類されてい検査である。また、その他の要因としてマンパワーる。

やハード面なども関係していると思われる。

下痢原性大腸菌の検査は、1944 年に Kauffman

今回、下痢原性大腸菌の検査方法について県内によって血清型による病原大腸菌の分類が提唱されの細菌検査室を有する市中病院を対象にアンケて以来長年に渡り、培地上に形成された大腸菌様コートによる調査を行った。本シンポジウムではそロニーを数個釣菌し、市販の病原大腸菌免疫血清にの結果も含めて、検査方法の現状とそれぞれの検凝集するか否かで病原性を推定するという手法が用査室が抱える問題点について考えてみたい。

いられている。しかしこの検査方法では非病原性の大腸菌が病原大腸菌として報告されてしまうだけではなく、多くの下痢原性大腸菌感染症が見落とされるなどの問題点が指摘されている。
EHEC は 3 類感染症で、診断した医師は届け出が義務付けられていることもあり、病原因子である毒素の産生性を確認できる選択培地や検査試薬が製品化され、一般の検査室でも検査方法がある程度確立されているが、それでも O157 や O26、O111 以外の血清型においては見落とされている可能性が高い。
病原微生物検出情報によると、地方衛生研究所から報告された 2014 年の EHEC の菌検出数は 2289 であり、全検出数における O 血清群の割合は、O157が 59％、O26 が 22％、O111 は 3.4％とそのほとんどを占めてはいるが、15.6％はそれ以外の型または型別不能のものであった。
下痢原性大腸菌を迅速、正確かつ簡便に検出する

シンポジウムⅡ 微生物 『感染性胃腸炎の検査法-下痢原性大腸菌・ノロウイルスを中心に-』
臨床検査室における下痢原性大腸菌検査の考え方～血清型別試験と病原遺伝子の直接検出を目的とした PCR 検査について～
磯崎将博
天草地域医療センター
大腸菌はヒトの腸管の常在菌のひとつであるが、年 1 月の下痢原性大腸菌分類の見直し以降、EPEC、その中にはヒトや動物に対して下痢症を引き起こすEIEC、EAEC の検出に関しては PCR 法は必須であものが存在し、これらは下痢原性大腸菌と総称される。ただし、PCR 法にも注意を要する点がある。例る。下痢原性大腸菌は保有する病原因子や病原機序

えば、invE（侵入性因子）陽性の場合には EIEC との違いにより、腸管病原性大腸菌（enteropathogenicShigella の可能性があるので血清型や生化学性状試

Escherichia coli、EPEC）、毒素原性大腸菌

験を行い鑑別する必要がある。また、eae（細胞付、腸管侵入性大（enterotoxigenic E. coli、ETEC）着因子）陽性の場合にも E. coli と E. albertii の鑑、腸管出血性腸菌（enteroinvasive E. coli、EIEC）別が必要となる場合がある。さらに PCR 法では既、EAEC大腸菌（enterohemorrhagic E. coli、EHEC）

知の病原因子をターゲットにするため未知の病原因（enteroaggregative E. coli、EAEC）などに分類さ子を検出することが出来ず見落とす可能性があるこれる。とも理解しておく必要がある。

下痢原性大腸菌の検査法には、血清型別を前提とシンポジウムでは当院の取り組みを紹介し、下痢した分類法と PCR 法などを用いた直接病原因子を原性大腸菌検査、特に PCR 検査に対する理解を深検出する方法がある。臨床検査室における下痢原性めていただきたいと考える。シンポジウムに参加の大腸菌検査は、古くから病原大腸菌免疫血清を用い皆さんとこれからの下痢原性大腸菌検査について活た血清型別分類により行われてきた。しかし、血清発な意見交換ができれば幸いである。

型は病原性を表しているわけではないということや、大腸菌の O 抗原は約 180 種類存在しているが国内で検査可能な血清型はこのうちの 50 種類のみであり全てを網羅しているわけではないということ、さらには抗原間で交差反応を示すなど、血清型別を前提とした検査法の問題が指摘されてきた。しかしながら、今現在でも血清型別分類が用いられる理由は、
例えば EHEC には O157 や O26 を含む 7major O
groups など、病原性の種類により特定の血清型が偏って分布していることがわかっているためと考えられる。血清型別試験に対して否定的な意見が多いが、血清型別分類は確かに限界のある検査法ではあるものの、ある程度の精度を有する確立された検査法であることを忘れてはならず、もっと有効に活用されるべきである。
一方、PCR 法を用いた直接病原因子を検出する方法は、血清型に関係なく一度に複数の病原因子を迅速に検出することができるため、血清型別試験と比較しても優れた検査法であると言える。特に 2012

シンポジウムⅡ 微生物 『感染性胃腸炎の検査法-下痢原性大腸菌・ノロウイルスを中心に-』「ノロウイルス抗原検出キット～正しく検査するために～」
加藤大介
デンカ生研株式会社 研究開発センター
ノロウイルス感染症の検査試薬で体外診断用医薬品として上市されている試薬は ELISA 法を原理とした試薬とイムノクロマト法を原理とした試薬の 2 種類が存在します。ELISA 試薬は多検体処理が可能なためスクリーニング目的での使用、イムノクロマト
試薬は外来・ベッドサイド等の迅速性が求められる現場での使用と、状況に応じて使用されています。
近年イムノクロマト試薬は保険収載され，臨床の現場で広く使われるようになりました。
今回はイムノクロマト法を原理としたノロウイル
ス抗原検出キットの開発の経緯や測定原理に加え、キットを用いて検査する上で、より良い検査結果を得るための排泄便や直腸便検体の採取方法及び採取時の注意点、試料調製の際のコツなどを説明します。
判定や試薬性能の限界、さらに使用に関しての注意点や新生児検体や嚥下補助食品による影響などについても解説させて頂きます。
ノロウイルスの流行シーズン前ということで、昨年出現した新しい遺伝子型の GII.P17-GII.17 の情報やこれまでの流行状況なども合わせて解説します。
ノロウイルス抗原検出キットをより深く理解して日常の業務に生かして頂けるように、解説させて頂きます。本発表を参考にして、ノロウイルス抗原検出キットをより有効活用して頂ければ幸いです。