19南太平洋海域調査研究報告
OCCASIONAL PAPERS

No.57（2016 年 3 月）
No.57（March 2016）

奄美群島在来シィクワーサー（Citrus depressa）における葉緑体 DNA の多型
山本雅史

Polymorphisms of Chloroplast DNA in Shiikuwasha(Citrus depressa) Grown on the Amami Islands
YAMAMOTO Masashi
鹿児島大学農学部
Faculty of Agriculture, Kagoshima University
要旨
奄美群島の在来シィクワーサーを供試し、CAPS（Cleaved Amplified Polymorphic Sequence）法によって葉緑体 DNA 分析を実施した。その結果、供試した 13 系統のうち奄美大島および与論島のシィクワーサー
各 1 系統の葉緑体 DNA が他の 11 系統と区別できた。以上のことから、奄美群島在来シィクワーサーにおける葉緑体 DNA の多型の存在を明らかにすることができた。

はじめに
有史以前に我が国に自生していたカンキツはタチバナ（Citrus tachibana）およびシィクワーサー（C. depressa）のみであり、後者は南西諸島に広く分布している。特にシィクワーサーは果実に健康増進・維持に有効な機能性成分が含まれており（十一 2005）需要が多い。
シィクワーサーは系統間における果実特性等の多様性が高く、利用の面からも各系統の特性を明らかにする必要がある。そのため、DNA 分析による系統識別・同定、多様性の解明は極めて重要であり、著者はこれらに関する研究を進めてきた（山本ら 1998, YAMAMOTO et al.
2011, 2013）。しかし、これらの研究においては主に沖縄のシィクワーサーを供試しており、奄美群島在来シィクワーサーについては供試点数が十分でなかった。本研究においては、奄美群島に分布する 5 島の在来シィクワーサーを供試して、結果の信頼性が高い CAPS
（Cleaved Amplified Polymorphic Sequence）法によって葉緑体 DNA 分析を実施し、その多様性について検討した。

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YAMAMOTO Masashi方法
奄美群島在来シィクワーサー13 系統を供試した。対照として、沖縄在来シィクワーサー
3 系統およびシィクワーサー以外のマンダリン 6 系統も供試した（表 1）。
DNA は葉から抽出し、葉緑体 DNA の trnL-trnF 領域を PCR を用いて増幅した。増幅したDNA を制限酵素の Sau3AI を用いて切断してアガロースゲル電気泳動を実施した。ゲルはGelRed で染色し、紫外線照射下で出現バンドを確認した。

表 1 供試した奄美群島の在来シィクワーサーおよび対照系統系 統

葉緑体 DNA

学 名

分 布

シィクワーサー#14

Citrus depressa Hayata

奄美大島

1シィクワーサー#15

C. depressa Hayata

奄美大島

2シィクワーサー#11

C. depressa Hayata

加計呂麻島

2シークニン（甘）C. depressa Hayata

徳之島

2シークニン（辛）C. depressa Hayata

徳之島

2シークリブ（上城）C. depressa Hayata

沖永良部島

2シークリブ（余多）C. depressa Hayata

沖永良部島

2シークリブ（屋子母）C. depressa Hayata

沖永良部島

2キンカン#4

C. depressa Hayata

与論島

2キンカン#7

C. depressa Hayata

与論島

2キンカン#13

C. depressa Hayata

与論島

1キンカン#15

C. depressa Hayata

与論島

2キンカン#17

C. depressa Hayata

与論島

2のタイプ

奄美群島在来シィクワーサー

対照系統：沖縄在来シィクワーサー
大宜味クガニー

C. depressa Hayata

沖縄

1

伊豆見クガニー

C. depressa Hayata

沖縄

1

イシクニブ

C. depressa Hayata

沖縄

2タチバナ

C. tachibana (Makino) Tanaka

日本

1スンキ

C. sunki (Hayata) hort. ex Tanaka

中国

2クレオパトラ

C. reshni hort. ex Tanaka

インド

2キシュウミカン

C. kinokuni hort. ex Tanaka

中国

3ウンシュウミカン

C. unshiu Marccow.

日本

3ポンカン

C. reticulata Blanco

インド

3対照系統：その他マンダリン21
Polymorphisms of Chloroplast DNA in Shiikuwasha (Citrus depressa) Grown on the Amami Islands

結果と考察
CAPS 分析の結果、供試系統は 3 タイプに区別できた（表 1）。このうちタイプ 3 は対照のシィクワーサー以外のマンダリンで確認されたのみであり、奄美群島在来シィクワーサー
ではタイプ 1 および 2 が確認できた。沖縄在来シィクワーサーでもタイプ 1 および 2 が出現した。シィクワーサー以外ではタチバナがタイプ 1、スンキとクレオパトラがタイプ 2 であった。
、沖縄在来シィクワーサーではタイプ 1 およ
既報においては（YAMAMOTO et al. 2011, 2013）
び 2 の存在を確認したが、奄美群島在来シィクワーサーではタイプ 2 しか認めることができなかった。このため、奄美群島在来シィクワーサーの多様性が沖縄在来シィクワーサーよりも低い可能性を推察した。しかし、本研究の結果、奄美大島および与論島の各 1 系統はタイプ 1 であり、奄美群島在来シィクワーサーにおいても沖縄在来シィクワーサーと同様の葉緑体 DNA の多型の存在を確認することができた。今後は、核 DNA についても同様の研究を進め、奄美群島在来シィクワーサーの識別・同定および多様性の解明を実施する必要がある。

引用文献
十一元晴 2005．カンキツ類の化学成分とがん予防物質に関する研究．
薬学雑誌，125：231-254．
YAMAMOTO, M., KOUNO, R., NAKAGAWA, T., USUI, T., KUBO, T. and TOMINAGA, S. 2011. Isozyme
and DNA Analyses of Local Citrus Germplasm on Amami Islands, Japan. Journal of the JapaneseSociety for Horticultural Science, 80: 268-273.
山本雅史・松尾洋一・國賀 武・松本亮司・山田彬雄 1998．シイクワシャー類のアイソザ
イム及び RAPD 分析．果樹試験場報告，30／31：339-351．
YAMAMOTO, M., TSUCHIMOCHI, Y., NINOMIYA, T., KOGA, T., KITAJIMA, A., YAMASAKI, A.,INAFUKU-TERAMOTO, S., YANG, X. H., YANG, X. L., ZHONG, G. Y., NASIR, N., KUBO, T. andTOMINAGA, S. 2013. Diversity of Chloroplast DNA in Various Mandarins (Citrus spp.) and OtherCitrus Demonstrated by CAPS Analysis. Journal of the Japanese Society for Horticultural Science,
82: 106-113.