栃木農試研報No．47：37−46（1998）
Bull

Tochigi

Agr．Exp．stn

No．47：37−46（1998）

弱毒ウイルスを用いたユウガオモザイク病の防除
大野義文・中山喜一＊

摘要：ユウガオモザイク病防除のため，本病の病原ウイルスのひとつであるキュウリ緑斑モザイクウイルス（CGMMV）の弱毒株NQ24を作出した．本弱毒ウイルスは，ユウガオに対して顕著なモザイク症状を示さず，強毒株の二次感染に対して高い緩衝効果を示した．本弱毒ウイルスをカボチャモザイクウイルス（WMV2）弱毒株W

I−9と共にユウガオ苗に混合接種することで本病の防除が可能であった．

キーワード：ユウガオモザイク病，弱毒株，キュウリ緑斑モザイクウイルス，カボチャモザイク混合接種

ContorolSummary：In

order

toMotUe

Mosalcgourd

without

inducing

CGMMV

strain．ln

mosaicDiseaseOHNo，Kiichi

diseasebottleremarkableofNo24．Thissymptoms，but

examination，simultaneous

Melon

MosaicVirus

mosaicdisease．

Words：mosaicdisease

Waterof

Water

Melonof

Mosaic＊：現栃木県農務部普及教育課

BottleYoshibumi

Virus（CGMMV）strain
anyof

field

controlKey

Mosaiccontrol

Greenofof

presented

bottlebyGourdprotect

gourd，attenuatedvirusesanstrainthemfrom

attenuatedisabletoof

Cucumbermultiply㎞bottle
withvirulent

No24andWl−9（attenuatedisolateAgriculture

ResearchCenter）wasisolate，Cucumber

later

isolatewithinoculation

Virus，simultaneous

selected

attenuated

National

Attenuated

NAKAYAMA＊

gourd，wetobyinfecti（）nGreenMottle

effective

MosaicforVirus，inoculation（1998：6．30受理）
37栃木県農業試験場研究報告第47号

ウイルス感染葉をリン酸緩衝液で磨砕して二重ガーゼ

1

緒言

濾液を低速遠心分離し，その上清を供試した．4M亜硝

栃木県におけるユウガオ栽培の歴史は古く，正徳2年（1712）に壬生町で栽培されたのが発端とされている1）．

酸ナトリウム液を加えて22℃で30分または60分処理した．
その後の処理は熱処理に準じた．

現在では本県が国内生産量のほとんどを占め，栃木県の2．C代表的な地域特産物となっている．

び主要ウリ科作物におよぼす影響

しかし，ユウガオでは従来からモザイク病の発生が多C

G

MMV弱毒株及びWMV2弱毒株がユウガオ及GMMV弱毒株としてNQ12及びNQ24を，WMVく，生産上の阻害要因となっている．手塚らの調査によ

2弱毒株としてWH−5及びWり，本病の病原はキュウリ緑斑モザイクウイルス（C研究センターより分譲）をそれぞれ供試した．

GMMV）であることが明らかにされた2）．さらに，中山らの調査により本病の病原がC

GMMVのみではなく，I−9（両菌株とも農業対象作物として，ユウガオでは「しもつけしろ」，カボチャでは，「そうめん」，「えびす」，「みやこ」及キュウリモザイクウイルス（CMV），カボチャモザイ

び「つるなしやっこ」，キュウリでは「シャープワン」，クウイルス（WMV2）及びズッキー二黄斑モザイクウ「北宝1号」，イルス（ZYMV）も関与していることが示され，中で知地這」，スイカでは「金山」，もCだま」をそれぞれ供試した．

GMMV及びWMV2の感染が多く，それぞれの単独感染よりも2種の複合感染により症状が著しく激しくなることが明らかにされた3〉．

作物のウイルス病は農薬による防除が困難なため，耕「南極1号」，「南極2号」及び「霜不「こだま」及び「紅こ接種源は，それぞれのウイルス感染ユウガオ葉をlO倍容のリン酸緩衝液中で摩砕して調整し，接種はカーボランダムを用いた汁液接種で行った．

種的防除，ベクターとなる害虫の防除及び弱毒ウイルス

3．Cを用いた防除が一般的な防除方法なっている．ユウガオ

オ及び他のウリ科作物に対する病原性においても，種子消毒，土壌・資材消毒等が普及してきたが，十分な効果が発揮されていない現状である．

そこで本病を弱毒ウイルスを用いて防除する目的で，CGMMV弱毒株の作出に取り組んだ．その結果，ユウC

GMMV及びWMV2弱毒株の混合接種がユウガ

GMMV弱毒株としてNQ12及びNα24を，WMV2弱毒株としてWH−5及びWI−9（両菌株とも農業研究センターより分譲）をそれぞれ供試した．

対象作物として，ユウガオでは「しもつけしろ」，カガオ及び他のウリ科作物に対して病原性が低く，ユウガ

ボチャでは，「そうめん」，「えびす」，

オにおいて強毒株の二次接種に対して高い干渉効果を発び「つるなしやっこ」，キュウリでは「シャープワン」，揮する最優良弱毒株NQ24の作出に成功した．また，本弱「北宝1号」，毒株をWMV2弱毒株W知地這」，スイカでは「金山」，I−94）と混合利用することで，ユウガオモザイク病による減収を回避することがで「南極2号」及び「霜不「こだま」及び「紅こだま」をそれぞれ供試した．

接種源は，それぞれのウイルス感染ユウガオ葉（Cきた．

皿
1．C「南極1号」，「みやこ」及

GMM

材料及び方法

V弱毒株の作出

1）熱処理
ウイルス感染葉の磨砕液（リン酸緩衝液）をユウガオGMMV及びWMV2）を同時に10倍容のリン酸緩衝液中で摩砕して調整し，接種はカーボランダムを用いた汁液接種で行った。

それぞれのウイルス感染ユウガオ葉を10倍容のリン酸緩衝液中で摩砕して調整し，接種はカーボランダムを用い葉に接種し，25℃で2日経過した後，35℃で22日処理した汁液接種で行った．

た感染葉の磨砕液をカーボランダム法でChenopodium

4．弱毒ウイルスの効率的な接種方法amaranticolorに接種した．形成された局部病斑1病斑を1）接種源調整法の検討

切り取り，ユウガオに戻し接種して病徴を調査した．

リン酸緩衝液または滅菌水を用いて弱毒株感染ユウガ

2）紫外線処理

オ葉を磨砕した．磨砕液をユウガオ第一本葉にカーボラ

ウイルス感染葉をリン酸緩衝液で磨砕してガーゼ濾過

ンダム法で接種した．ユウガオヘの感染率はELISしたあと，低速及び高速遠心分離で部分純化し，それに法により調査した。

紫外線（ランプ：15W，30cm）を60〜300秒照射するこ

2）接種方法及び接種濃度の検討とによって行った．その後の処理は熱処理に準じた．

リン酸緩衝液で弱毒株感染ユウガオ葉を磨砕し，ユウ3）亜硝酸ナトリウム処理

ガオ苗の第一葉にカーボランダム法による汁液接種，ま38A

弱毒ウイルスを用いたユウガオモザイク病の防除

たはハンドスプレーを用いた噴霧接種を行った．リン酸皿

緩衝液での希釈倍率は300，600，1000倍とした．なお，噴霧接種ではカーボランダムを3％となるように磨砕液に加えた．ユウガオヘの感染率はEL

I

1．C

SA法により調結果

GMMV弱毒株の作出

親株L85−1に熱処理4回，紫外線処理5回及び亜硝酸処理1回行いNQ24を作出した（第1図）．

査した．

3）混合弱毒ウイルスの接種濃度がユウガオ体内ウイル

2．C

ス濃度におよぼす影響

CGMMV及びWMV−2両弱毒ウイルスの接種濃度

G

MMV弱毒株及びWMV2弱毒株がユウガオ及び他のウリ科作物におよぼす影響

Cを変えてユウガオ体内のウイルス濃度の推移を調査した．

GMMVについては，NQl2株，及びNα24株を供試し

接種はカーボランダム法を用いて，ユウガオ苗の第一本た．これらの株は強毒株と比較してユウガオや他のウリ葉に汁液接種で行った．接種後にユウガオの第3，4，科作物に対して病原性がきわめて低かった（第2表〉．

5，7及び9葉をそれぞれ完全展開時に採取してELIWMV2についても既述の方法で弱毒株の作出を行った

Sが，有望な株の作出には至らなか・）た．そこで，農業研A法でウイルス濃度を調査した．

究センターよりWH−5株及びWI−9株の分譲を受けて試5．混合弱毒株の混合強毒株に対する干渉効果

C

GMMV弱毒株としてNQ12，NQ24を，WMV2弱毒株、としてWI−9を供試した．試験は農試場内ガラスハウスの鉢試験，場内圃場及び現地農家圃場で行った．弱験を行った．その結果，両菌株ともユウガオやその他のウリ科作物に対して病原性が低いことが確認された（第2表）．

毒株の接種は，供試株感染葉をリン酸緩衝液中で摩砕し，ユウガオ第一本葉にカーボランダム法で行った．混合弱毒株及び混合強毒株とも一次接種は10倍液，混合強毒株の二次接種は1000倍液を用いた．品種は「しもつけしろ」を用いた．

試験区の構成は第1表に示す．

第1表

試験区の構成二次ウイルス

●一●

○○●

IH皿NV

区No．一次ウイルス○：混合弱毒ウイルス●：混合強毒ウイルス
ー：無接種

元株

熱処理×2

GA30

熱処理

GA30−31

亜硝酸処理

GA30−31N

紫外線処理

紫外線処理

GA12

GA46

Lesion選抜

Lesion選抜

第1図

GA15

GA3

紫外線処理

GA24

紫外線処理

熱処理

L85−1

No．12

紫タ玉線処理圓

CGMMV弱毒株No．24の作出過程

39栃木県農業試験場研究報告47号

第2表

CGMMV及びWMV2弱毒株の接種によるウリ科作物の発病程度

ウイルス名

CGMMV

WMV2

病

発供給菌株

度

無接 種

①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫
000000000000No．12480＊0019028060012＊0＊133116＊10（20）WII−5320005＊00＊＊＊＊230050＊00＊＊＊＊

WI−900No．24

O：1997年の圃場試験（No．24単独接種）による⑦⑧⑨⑩⑪⑫①②③④⑤⑥注）①一⑫はウリ科作物
ユウガオ（しもつけしろ）
カボチャ（アラジン）
カボチャ（えびす）

カボチャ（そうめん）
カボチャ（みやこ）

キュウリ（南極1号）

キュウリ（南極2号）

キュウリ（北宝1号）
スイカ（金山）スイカ（紅こだま）
スイカ（こだま）キュウリ（シャープワン）

発病度；Σ（程度別発病指数×同子づる数）／（4×調査子づる数）×100
3ニモザイク
発病指数；0：無病徴
4：奇形をともなう激しいモザイク
1：葉脈透過，退緑斑点
2：軽いモザイク

3．C

GMMV弱毒株及びWMV2弱毒株の混合接種がユウガオ及び他のウリ科作物におよぼす影響た場合は，両弱毒ウイルス共に高率に感染した（第5表）．

ハンドスプレーを用いた混合接種では，WMV2弱毒GMMV弱毒株N（！12とWMV2弱毒株Wn−5の混株のユウガオヘの感染率が極端に低下した（第6表）．

合接種は，両ウイルスの強毒株の混合接種と比較してユ以上より，二種の弱毒ウイルスを高率にユウガオに感Cウガオの生育抑制程度も低く（第3表），病徴も著しく染させるためには，10倍容のリン酸緩衝液でウイルス感低かった．しかし，無接種と比較すると若干の生育抑制

ユウガオ葉を摩砕し，カーボランダムを用いた汁液接種が認められた（第4表）．Cが適していると考えられた．

V2弱毒株W

GMMV弱毒株NQ12とWM

I−9との混合接種は，両強毒株の混合接種と比較して，ユウガオやその他のウリ科作物に対して病徴が著しく軽度で，ユウガオの生育抑制程度も低かっ

混合弱毒ウイルス接種濃度と体内濃度の関係を調査しGMMV弱毒株NQ24とWMV2弱た結果，WMV2弱毒株については，接種濃度が高いほI−9の混合接種はユウガオに対する生育抑制程ど体内濃度が高く推移し，100倍希釈及び1000倍希釈でた（第3，4表）．C毒株W2）混合弱毒ウイルスの接種濃度がユウガオ体内ウイルス度度におよぼす影響度が最も低く（第3表），他のウリ科作物に対する病原は無接種区とほぼ同様なE性も軽度であった（第4表）．

一方，C

4．弱毒ウイルスの効率的な接種方法

低いほど体内濃度も低い値を示したが，上位葉では］LOO

1）接種源の調整法及び接種技術の検討

倍希釈，1000倍希釈接種区においても、10倍希釈接種区

滅菌水を弱毒ウイルス感染葉の摩砕液に用いて混合弱毒ウイルスを接種した場合，CLI

SA値を示した（第2図）．

GMMV弱毒株は第3葉においては接種濃度がと同等の濃度を示した（第3図）．このことから，植物

GMMV弱毒株のユウガ体内の弱毒ウイルス濃度を早い時期から高めるためには，オヘの感染率は高いが，WMV2弱毒株の感染が極端に弱毒ウイルス感染葉の10倍希釈液が適していると考えら低下した（第5表）．一方，リン酸緩衝液を用いて摩砕しれた．

40

弱毒ウイルスを用いたユウガオモザイク病の防除

第3表 混合弱毒ウイルス接種がユウガオの生育及び発病に第5表およぼす影響

親づるの長さ処理区

リン酸緩衝液及び滅菌水を用いた混合弱毒ウイルスのユcm

No．12十WH−5
1992混合強毒株
無接種
1993混合強毒株
無接種

l994混合強毒株
無接種

縦×横12．4（91）232．6（97）108．1（81）ll．8（87）202．1（85）IOO
13。5

50

237．7

12．5（93）306．9（97）148．2（76）ll。5（86）250．6（79）100
13．4

感染ウイルス名

リン酸緩衝液CGMMVのみ
WMV2のみ9．10．0

2種重複

90．9

CGMMVのみ

54．5

48316．0

滅菌水（％）

0WMV2のみ

O．Q

48

2種重複

36．4

190．3（97）18．8（99）316．7（89）170．6（85）18．2（96）284．2（80）100

198．9

18．9356．4

感染率

摩砕液

0123．7（83）！48．2

No．24十WI−g

発病度

ll6．9（87）！33．7

No．12十WI−9

ウガオヘの感染率

最大葉葉数枚注）希釈濃度は10倍0（）：無接種区を100としたときの指数

発病度の算出は第4表にしたがった

第4表

000

＊

05＊

3165

98

100

100100

無接種

0000＊

45100

＊

72

00167293

75

000⑦⑧⑨⑩⑪

注）①〜⑫はウリ科作物① カボチャ（アラジン）② カボチャ（えびす〉③ カボチャ（そうめん）④ カボチャ（みやこ）⑤ カボチャ（落合2号節成）⑥キュウリ（シャープワン）

025

lOOO倍汁液接種

1混合強毒9300倍600倍

噴霧接種

0り乙40＊＊100077000100M感⑫ゆ＊V染90

W2率4090

りQOO

31＊85

100

源00A︾

934I−950倍倍倍0＊

りO久∪0020000

040＊＊＊

No．24＋W

1003511無接種

1000Q︾00

10050

M感⑫ゆ

I−9030070GV立CM確①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪接種方法

混合強毒
1994

種度
接濃

No．12＋W

るユウガオヘの感染率

ウリ科作物発病数

試験
年度 供試菌株
1993

第6表 混合弱毒株の噴霧接種によ混合弱毒ウイルス接種がウリ科作物におよぼす影響

100．0

40．090．0

40．090．0

50．0

キュウリ（南極2号）
キュウリ（北宝1号〉
スイカ（金山）スイカ（紅こだま）
スイカ（こだま）2

十10倍

一闘一100倍㏄＋10倍−︵EおO寸︶遡米餐

＋100倍 しO︻UE⊂りO寸︶遡訳督→鴎一無接種只︾Lr幽一・1000倍

005

00

第3葉
第3葉

第5葉

第7葉

第9葉

W

I−9のユウガオ体内濃度推移

第7葉

第9葉

調査葉位

調査葉位

第2図

第5葉

第3図

No．24のユウガオ体内濃度推移

41

栃木県農業試験場研究報告47号

第7表

第8表

混合弱毒ウイルスの同時接種がユウガオ体内濃度におよぼす影響（WMV2）

験区

第3葉第5葉第7葉第9葉混合弱毒ウイルスの同時接種がユウガオ体内濃度におよぼす影響（CGMMV）

験第3葉第5葉第7葉第9葉

区

混合弱毒株接種 0．114 0．159 0．485 0．345
混合弱毒株接種 0．164 0．384 0．875 0．532
無接種0．035 0．Ol9 0．028 0．035

混合弱毒株接種 0．975 0．832 0．845 LO23
混合弱毒株接種 0．942 1．035 L213 1．077

注）表内の数値はELISA値（405nm）

注）表内の数値はELISA値（405nm）

無接種

0．032

0．021

0．024

0．028の収量に関しては，19♀5年の農試場内圃場で行った無接C GMMV弱毒株及びWMV2弱毒株をユウガオに同時接種した場合，WMV2弱毒株の体内濃度は，対照と種区に対して71％の増収を得たのを最高に，現地農家圃した強毒株の体内濃度よりも低い濃度で推移した（第7場においても無接種区と同等以上の収量を得た（第11表）．

表）．一方，C農試場内圃場においてこのように高い増収を得た原因とGMMV弱毒株の体内濃度は，対照とした強毒株と比較して第5，7葉で若干低い傾向がみられして，本圃場がユウガオの連作圃場であるため，早い時たが，第9葉ではほとんど同程度の濃度であった（第8期からユウガオがC表）

ことが弱毒株の干渉効果をより顕在化させためであると5．混合弱毒ウイルスの混合強毒株に対する干渉効果考えられる．一方，1996年の上三川町坂上の試験では，

1）鉢試験
C GMMV弱毒株N（！12及びWMV2弱毒株WI−9の混無接種区での発病開始時期が遅れたため，混合弱毒株接種区は無接種区と同等の収量にとどまったものと考えら

合接種区は，無接種区と比較して若干の生育抑制及び軽れる（第5図）．12＋9の収量は農試場内圃場では無処いモザイク症状が見られたものの，混合強毒株を二次接理区よりも9％減収したが，強毒株接種区と比較すると種しても病徴は進展しなかった（第9表）．CGMMV
弱毒株Nα24及びWMV2弱毒株Wl−9株の混合接種も同95％の増収であり，現地農家圃場においても無接種区よ様に，混合強毒株の接種に対して高い干渉効果を示した

して，強毒株に対する干渉効果はやや優ると判断できる．

GMMVに感染し（第4図），このりも増収を得ている．以上より，24＋9は12＋9と比較（第9表）．

さらに，1996年の上三川町梁で行った現地試験及び試2）圃場試験験規模を拡大して行った1996年の石橋町における試験結試験区は第1表にしたがって設置し，各試験の耕種概

果では，混合弱毒ウイルス接種区の収量は収穫前期までは無接種区と同様な推移を示しているが収穫中後期には要は第10表に示した．

I−9の組

無接種区を上回り，最終的にそれぞれ18％，12％の増収み合わせ（以後12＋9）の最終発病度が49〜52であるのを得ている（第6，7図）ことから，弱毒ウイルスの干に対し，NQ24とWI−9の組み合わせ（以後24＋9）は渉効果はユウガオの生育期問を通して持続されているこ

26〜40であり，発病度を低く抑えた（第ll表）．24＋9とが明らかになった．

農試場内及び現地農家において，NQl2とW

第9表 鉢試験における混合弱毒株の混合強毒株に対する干渉効果及びユウガオの生育におよぼす影響

実施年

19942

CGMMV
N（112Nα12WMV2

試験

親づるの区Nα

長さcm

WI−9＊

WI−9＊

IHmW
IH
V皿WV

！9931

使用弱毒株

149．2
123．7
130．3
113．2
111．5

葉数

発病度

最大葉縦×横

13．4

0．0

316．O

l2．5

48．0

306．9

12．6

49．0

310．4

11．5

100．0

250．6

12．0

73．6

269．4

352．4

37．8

0．0

254．8

336．8

40．8

30．0

220．6

337．8

41．3

30．0

348．0

41．9

100．0

204．4

100．O

l90．7

307．8

38．3227．5注）発病度の算出は第3表にしたがった

L品種は「しもつけしろ」，5月21日播種，一次接種6月7日，二次接種6月17日，調査7月12日
2。品種は「しもつけしろ」，6月16日播種，一次接種7月6日，二次接種7月18日，調査8月18日＊農業研究センターより分譲
42

弱毒ウイルスを用いたユウガオモザイク病の防除

1994

播種日 定植日一次接種二次接種
4月7日 5月11日 4月22日 5月17日
梁 3月19日
4月20日 4月7日
一町町

曲 辰上上実施圃場

試 三三

実施年

坂士3月16日

4月20日

4月7日

4月18日

5月20日

5月10日

3月19日

4月21日 4月7日
4月24日 4月7日

一一

4月4日
農試
3月9日 4月20日
上三川町梁 3月19日 4月18日 4月7日
上三川町坂⊥ 3月9日 4月18日 4月4日
石橋町橋本
4月1日 5月3日 4月20日

6月2日

農試

1995

1996

100

上三川町

梁

上三川町

坂⊥3月16日

一6月1日

一一一区｝0株供試した

一〇一噸区

一』田区
一★一即区

一←v区

7／5

7／21

8／5

調査月日

第4図 場内圃場における発病後の推移（1995年）

CGMMV弱毒株及びWMV2弱毒株の混合接種がユウガオの収量及び発病度におよぼす影響
使用弱毒株

1994

＊

Nα12

W卜91996

Wl−9Wl−9＊閥α24＊：農業研究センターより分譲

上梁坂町町

零閥o．2491

上三川町梁
上三川町坂上

試三三
農上上

1995

WMV2 農試

収量
対無接1 対強毒2
1954126
171304

107
103

農試

138

上三川町梁
上三川町坂上
石橋町橋本

118

100
112261

最終発病度3弱毒接種4り乙09 90ΩりCGMMV

実施圃場

032ρU
433り乙553
433

実施年『一司レー隔1区6／9注）農試圃場は1区5株，石橋圃場は1区80株，その他の圃場は1

第11表

007
0605
04
0302
0100
98
遡膿姻

圃場試験における各試験の耕種概要

第10表

無接種
73
63

100
100
80
100

100
63
61

77

1．ロ区の収量／1区の収量

2，H区の収量／IV区の収量3、第4表にしたがった4。H区の最終発病度

8070

十無瞳種区

60

一｛』一混合舅毒区

50脳o猷

30

20
100

5月31日

6月国日

6月28日

7月12日

7月26日

8月9日

調査月日

第5図 現地圃場における発病度の推移（上三川町坂上1996）43栃木県農業試験場研究報告47号

1800
1600

十混合弱毒区・・■…

1400

無接種区圏贋■・■一1200、■一嬰・・。

月一藷8。。
畷6︒︒

40020007〆257／158、〆48／148／24

一．

9／3

収穫日

第6図 現地圃場における累計収量の推移（1997石橋町）
200180160140

十混合弱毒区
＋無接種区

0ー120

胃100
縮蛛 80

60
40
200

7月9日

7月24日

8月8日

8月23日

収穫日
現地圃場における累計収量の推移
第7図（1997年上三川町梁）V考察
C GMMVの属するTobamovirus属のタイプ種ウイル

は，①対象とする作物に感染したとき，収量及び品質の低下を最低限にとどめること，②生育期間全体を通じて干渉効果を維持すること，③簡易にかつ大量に接種できスのタバコモザイクウイルス（TMV）では，熱処理，ること，④他のウイルスとの重複感染がおきても病徴を紫外線処理及び亜硝酸処理などの方法で多くの弱毒株が激化しないこと，⑤対象作物以外に感染しないか，たと作出されている5〜9）．CGMMVにおいても吉本lo）

え感染しても実害を与えないこと，⑥突然変異によってらが紫外線照射と亜硝酸ナトリウム処理で作出した弱毒強毒化したり干渉効果が低下したりしないことを挙げて

株SH33bは，メロンモザイク病防除に利用されているいる．今回作出したNQ24について，WMV2弱毒株と混ll・12）．本研究では，中山ら13）によってC

GMMVによるユウガオモザイク病防除を目的に作出されたCGMM

V弱毒株GA30−31に，さらに熱処理（1回），亜合利用した場合にこれらの条件を満足させるかどうかを検討した．

CGMMV及びWMV2によるモザイク病はユウガオ硝酸処理（1回），紫外線処理（4回）及びC．quinoaに栽培圃場に毎年恒常的に発生する病害であるため3），①おけるLesion選抜を行い（第1図），WMV2弱毒株との弱毒ウイルスを接種した場合の品質，収量の低下はユの混合利用が可能な弱毒株の作出を試みた結果，最優良ウガオにおいて両弱毒株を使用する上で間題にならない株NQ24を作出した．と考えられる．

実用的な弱毒ウイルスの持つべき条件として花田14）44②については鉢試験（第9表）及び圃場試験（第ll表）

弱毒ウイルスを用いたユウガオモザイク病の防徐の結果から両強毒株の二次接種に対して高い干渉効果を復活は起こりにくいと考えられる．しかし，ユウガオヘ示している．さらに，収量についても収穫後期に無接種の戻し接種による継代を繰り返し行うと，強毒性の復活区を上回り（図6，7），ユウガオの生育期間全体を通が起こりうる可能性が残される．そのため，本弱毒株をして干渉効果が持続していることが明らかになった．

安全に保存するには，全ゲノムR③の簡易にかつ大量に接種できることをめざし，効率的な接種法及び接種源の調整法について検討した．最もNAをクローニングし，cDNA化することが望ましい．

以上のように，今回作出・選抜されたC

GMMV弱毒GMMV弱毒株の感染株Nα24は，WMV2弱毒株Wl−9と混合利用することで率は高い水準であったのに対し，WMV2弱毒株の感染ユウガオモザイク病の症状を緩和するばかりか，増収を率が極端に低下したため（第6表），本法による2種の得ることが明らかになった．

簡便と考えられる噴霧接種ではC弱毒株を同時に接種することは困難であると考えられた．

弱毒ウイルスを用いたウイルス病の防除は，ウイルス

しかし，ユウガオは10a当たり100株前後の定植数であ病の発生がなければ対象作物の減収をまねくおそれがあるため汁液接種でも十分対応できるものと考えられる．

るため保険的な防除法である．しかし，ウイルス病に対本法は接種するにあたり弱毒ウイルス感染葉の摩砕が必する特効薬が無い現在，弱毒ウイルスを用いたウイルス要であり，必ずしも簡便な方法であるとはいえない．し病防除は媒介昆虫の防除回数を減らすことや，土壌消毒かし近年，キュウリモザイク病に対し防除効果を示すZ剤の使用を削減する意味でも，今後重要な防除法となりYMV弱毒株については，その汁液凍結乾燥品の製剤化うると考えられる．特にCが進み，摩砕することなく接種できる方向で試験が進め

ガオ栽培圃場で毎年発生するウイルスであるため，本弱られている（現在日本植物防疫協会による生物農薬連絡

毒ウイルス利用による防除効果・増収は大きく，広くユ試験中）．C

ウガオ栽培地域に普及することを望む．

GMMV及びWMV2においても本法が適用されれば接種源の調整が容易になるばかりではなく，

謝

GMMV及びWMV2はユウ辞

弱毒ウイルスの保存においても有望であると考えられる．

本研究は，農林水産省の地域バイオテクノロジー実用④については，圃場試験において栽培期間中の弱毒ウ化技術研究開発事業「複数のウイルスに対する高度防除イルス無処理区におけるCMV及びZYMVの感染をE技術の確立」の中で行われた．本研究の推進に当たり終A法を用い調査した．その結果，CMVは希に感始ご指導・ご助言を頂いた農業研究センター病害虫防除

LIS染が認められたがZYMVの感染は確認されなかった．

部上席研究官本田要八郎博士，WMV2弱毒株の分譲を

このことからユウガオに関してはこれら2種のウイルス頂いた山口大学農学部教授亀谷満朗博士，ユウガオの栽による病徴の激化はC培管理・調査にご尽力下さった病理昆虫部齋藤芳彦主任

GMMV及びWMV2弱毒ウイル

ス利用において考慮すべき問題ではないと考えられた．

技術員に心より感謝の意を表します．

⑤については，主要ウリ科作物に混合弱毒ウイルスを引用文献接種することによってその病原性の程度を調査した．その結果24＋9はキュウリ（南極二号）及びスイカ（紅ひ1）農業技術協会

野菜畑作技術辞典

169−173

だま）に対して若干のモザイク症状を示すが実用上問題

2）手塚徳弥ら（1970）栃木県におけるキュウリ緑斑モにならない程度であった（第4表）．

ザイクウイルスの分布と系統について．関東東山病⑥については，1995年，1996年の圃場試験の結果を見

害虫研究会報17：49

る限り24＋9の強毒ウイルスヘの変異は起きていないと

3）中山喜一ら（1987）栃木県のユウガオに発生する病考えられる．これまで我が国で作出された弱毒ウイルス

原ウイルスの種類とその発生状況．栃木農試研報33

はTMV−L：33−40ll

Aをはじめとして強毒性の復活という報告はない12）．一方，サテライトRNAを含むCMVでは継代接種を繰り返し行うと別の塩基数のサテライトRNAが出現することが報告されており，弱毒CMVで安4）亀谷満朗ら（1992）カボチャモザイクウイルス（WMV2）の弱毒株作出とその干渉効果．日植病報58：491−494

定的にサテライトR：NAを供給するにはサテライトR：N

5）後藤忠則ら（1971）弱毒ウイルスによるウイルス病のAをクローニングし，cDNA化して長期間保存するのが防除一安定弱毒ウイルスの選出と各種植物に対する望ましい15）とされている．本研究で用いたCGMMV影響．北海道農試彙報99：67−76

弱毒株NQ24は，強毒株に対して物理的・化学的な変異誘

6）Gierer

発処理を多数行って作出された株であるため，強毒性のmosaicA．（1958）Productionvirusbychemicalofmutantsalterationofof

tobaccoits

ribonuclec

45栃木県農業試験場研究報告47号
acidinvitro．Nature182：1457−14587）大島信行ら（1978）新弱毒ウイルスLllA237．日植病報44：504−508

8）長井雄治ら（1986）ピーマンにおけるタバコモザイ
クウイルストウガラシ系弱毒ウイルスC−142の特性と利用．千葉農試研報27：153−1689）長井雄治ら（1987）タバコモザイクウイルスートウガ

ラシ系弱毒ウイルス，C−142の作出．日植病報53：
168−174
10）本吉総男ら（1984）キュウリ緑斑モザイクウイルスの弱毒株の作出と干渉効果．日植病報（講要）50：435

11）大沢高志ら（1984）温室メロンのC

GMMVに対する弱毒ウイルスSH33bの効果．日植病報（講要）50：436

12）亀谷満朗（1994）弱毒ウイルスによるウイルス病防除．69：137−143

13）中山ら（1991）ユウガオにおけるCGMMV弱毒株の作出及びその干渉効果．日植病報（講要）51：74
14）花田薫（1990）弱毒ウイルス利用によるキュウリモザ

イクウイルス病の防除．農業及び園芸65：949−955
15）小湊正幸ら（1992）invitroで転写したサテライトRN

Aの弱毒キュウリモザイクウイルスヘの利用．日植

病報（講要）58：625

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