栃木農研報

No39153〜56（1992）

シクラメンの組織培養による大量増殖

第2報

つぼみ内組織からの増殖

大橋一夫・峯岸長利・米内貞夫％次亜塩素酸ナトリウム溶液で15分殺菌，滅菌

Ⅰ緒 言

水で3回洗浄後，花柱を摘出し第1表の5種のシクラメンの組織培養では，シクラメンの内培地（基本組成は1／3MS無機塩，MSビタミン，生菌が培養の大きな妨げになっている．筆者ら

ショ糖3％，ゲルライト0．3％，pH5．6，以下のは内生菌回避のために無菌実生苗からの増殖法

試験は植物生長調節物質を除いて基本組成は全を開発し前報で報告した．シクラメンの組織培て同じ）で培養した．培養は25℃の暗黒下で行養の研究は当初，培養部位として塊茎組織が主い置床53日後に肥大程度，出芽組織片数，出芽に利用されていた．これは塊茎組織が高い器官数を調査した．第1培地を用いた培養で出芽し分化能を持っているためである．開花株の塊茎た芽の葉柄部分を約3mmに切断し，NAAO。02，組織は内生菌が多く，株の高温処理，抗生物質BAO，2mg/lの培地に置床した．第2回継代培養等を培地に入れる等工夫がなされたが培養は困

からは，芽を付けたまま2〜3分割し，同じ培難であった．1978年Geier2）は繭を培養し，器地に置床しこれを7代培養まで繰り返した．ま

官分化を確認している．その後，三浦ら3）も弱た4回目及び5回目培養時に出芽した葉柄を約の基部を培養して肥大カルスを得，葉および胚5mmの長さに切断し，同じ培地に置床した．培様体の形成を確認している．一方，安藤ら1）は

養はすべて20℃の暗黒下で行い，培養期間は第20℃の暗黒で葉柄部を伸ばした黄化葉柄を培養

2表のとおり21〜34日である．

し，馴化苗を得ている．また大越ら6）は花弁を2．その他のつぼみ内組織の培養培養し根の分化に成功したが，芽の分化は見ら花柱の培養が可能なので，その他のつぼみ内組織の培養を検討した．品種リスト，シューベれなかった。

Geierおよび三浦らの繭の培養，大越らの花ルト，ショパン，ヒュールバークの開花株を用弁の培養の結果を見ると開花株のつぼみ内組織

い長さ8〜15mmのつぼみを花柱培養と同じく殺は無菌であることが明らかである．筆者らはこ菌，滅菌水で洗浄後，花柱，子房，子房壁，繭基れらの組織を含めて他のつぼみ内組織での培養を検討し，多くのつぼみ内組織（花柱，子房壁，繭基部，花弁）から出芽させ，出た芽の葉柄部を続けて培養し塊茎組織を誘導後，塊茎分割で増殖できることを明らかにしたので報告する．

Ⅱ

1．

試験方法

花柱の培養

品種ショパンの開花株を用い，長さ8〜15mmのつぼみを70％エタノールで20秒，有効塩素1

一53一

第1図

つぼみ内組織の培養部位

栃木県農業試験研究報告第39号

第1表
培地

花柱の培養

植調物質濃度（mg／4）

肥大程度
置床数BAadenin

3〜2．9mm

織片数以上

4．9mm

以下

（％）

3（16）

3（17）

0（0）
0（0）

平均

出芽−Qゾ600

第2表

出芽本数4（22）

1部，花弁，がくを摘出し（第1図参照）NAAO．1，

Qゾ3︻﹂0￡U

8Q4QO5Qゾ
ー−11110乙4

一〇〇〇〇〇〇一314615

NAA0000 U
11112
11111
ααα00

番号

出芽組

5mm

本数
0．60．50．300

葉柄肥大部の分割培養での出芽BA1．Omg／4の培地に置床した．置床47日目に同じ培地に継代移植した。培養は25℃の暗黒下で培養回数行い，移植41日後（置床88日後）に出芽組織片数，出芽数を調査した．

また別に品種ショパンの花弁を用い第6表に培養
日数

置床数343126291431204030示した植調物質濃度の高い3種の培地に置床して，出芽の可否を検討した。培養は25℃の暗黒58

出芽組織片数（％）

平均出芽本数2（14）12（39）
11（55）
30（75）
57（98）

2i120112（93）28280

278（99）

0，4
3．2
4．7
5．8

12．4
12．7
13．1

下で行い，置床89日後に出芽組織片数，出芽数を調査した．

用した培地および培養法は実生の塊茎組織を培

皿

結果及び考察養したときと同じであり，葉柄部分を培養して花柱の培養では第1培地（NAAO．1，BA1．Omg／

一度塊茎組織ができてしまえば塊茎組織の培養4）で出芽が多かった（写真1参照）．Adenin法が適用できることがわかった．続いて4回目を100mg／乏添加することにより肥大は大きくな

培養時および5回目培養時に出芽した葉柄部をるが，出芽は第1培地よりやや劣ったAdenin

培養した場合には出芽組織片数の率は高くともをさらに高濃度に添加すると肥大，出芽ともにに96％であり，平均出芽本数はそれぞれ6．2お劣った．またBA濃度を2．Omg／乏に高めると肥大よび6．1本であった（第3表）。これらのことかはするがまったく出芽しなかった（第1表）．

ら塊茎組織からでた葉柄と花柱から出芽した葉

三浦らは繭基部の培養においてアデニンを100柄には差があり，塊茎組織の分割培養を繰り返mm添加することにより葉の再分化が高くなるこすことにより出芽した芽の葉柄は，培養によるとを確認しているがこの試験ではアデニン添加出芽能力が次第に高まるものと考えられる．観の効果は見られなかった．原因としては品種お察結果でも花柱組織からの芽は伸びが少なく切よび培養組織が違うことが考えられる．

断した時の形が円形でなく偏平であったり角ば出芽した芽の葉柄部分を分割し培養すると，ったものが多く，色はやや黒ずんでいる．一方元の部分が肥大し塊茎に類似した組織となる．

塊茎組織からの芽は伸びが良く，切断面が円形

初代培養では出芽組織片の率は14％と低いが，であり色は淡い桃色であり先端部に近くなるに継代培養を繰り返すことにより出芽組織片数はつれて色が濃くなり紫色となってくる．

多くなり7代培養では99％の組織で出芽し，平花柱組織を培養し，出芽した芽の葉柄部分を均出芽本数も13．1本と多かった（第2表）。

さらに培養することにより，塊茎組織を誘導し

使

一54一

シクラメンの組織培養による増殖

第3表
培養

材

料

置床数

（第2表参照）

1

4回目培養時出芽した葉柄 30
5回目培養時21
出芽した葉柄5499

出芽組織

平均出片数（％）

芽本数

52（96）
95（96）

つぼみ内組織培養での雑菌汚染率

組織部位

供試数

柱 壁 部弁房く房基花子繭花子が培養
日数

回数2

第4表

葉柄の培養

6．2
6．1

雑菌汚染数（％）

295238521
250
10050

29（9．8〉45（18．9）69（13．2）

42（16．8）30（30．0）50（100．0）て増殖できることが明らかになったので，次につぼみ内の他の組織の培養を行った．まず培養時の雑菌汚染率をみると花柱が9．8％と最も低

第6表

花弁の培養

く，次に繭基部（13．2％），花弁（16．8％），子培地

房壁（18．9％），子房（30．0％）の順に汚染率が置床

出芽組織

出芽

平均出（mg／乏）

番号IAANAABA数片数（％）数芽本数高くなる．がくはすべて雑菌に汚染された（第4表）．

植調物質濃度10

がく組織までは内生菌が生息している

0．127

20ものと考えられる。このことからがく組織と子0．5
2．02．01（4〉252（2828）

0．1
48（29〉

640．22。3

房組織との間に内生菌の進入を遮断する機能が存在すると推察される．花柱組織の汚染率が低た．子房壁は35％，0．5本，花柱は26％，0．7本

いのは，内生菌のいるつぼみの基部表面から離であった．品種で比較するとバッハは花柱，繭れており，組織を摘出するとき，これらに触れ基部で出芽が多く，シューベルトは子房壁で多にくいためと思われる．

かった．品種により培養に適した組織が異なることを示している（第5表）．花弁及び子房で花柱組織からの試験で最も出芽組織の多かった培地であるNAAO．1，BA1．Omg／4を用いつぼみはまったく出芽しなかった．

組織（花柱，子房壁，蔚基部，花弁，子房）の花弁組織はNAAO，1，BALOmg／4の培地を用い培養では，繭基部での出芽が多く5品種平均でて出芽しなかったので，さらに第6表の3種培出芽組織片率55％，平均出芽本数1．4本であっ地で培養したが，植調物質としてNAA2．0，BA2．0

第5表172（12）シューベルト1741（35）132

74（56）
19（45）
39（76）
25（52）
15（36）

部

リスト

シューベルト

42

バッハ
ショパン

51
48

計315

フユールバーク

42

172（55）

一55一

70

728
1133
149

3

118
2657
27
39267

195
33
98
40
72

438

58Q400︹14118に﹂

計0（0〉

︻﹂

19

1

基

3（16）

ショパン

6GJり乙4

ノギツノ、

1

平均出芽
本
数

440637 LOlOLL
住02︒住住色 0000
00

26（52）
10（59）

853QOO40乙−

50

1∩乙︻﹂

リスト

計

2447つ00

19（26）り乙1

74

壁フユールバーク15
繭

3（25）
1（10）

2mm以下

0213ハ∪￡U

房

6（50）

3〜4mm

40乙0乙︻﹂ハ∪3

子

8（27）
1（10〉

5mm以上

703り乙0241000rD10乙計30IO
121210

出芽本数

出芽組織片数（％）

640乙43Qゾーワ勧

リスト
シューベルトバッハ
ショパン
フユールバーク

置床数

1柱

種600り乙08

花品0021∩︾00

組織部位

つぼみ内組織の培養

栃木県農業試験研究報告第39号

mg超の培地を用いたときに29％の花弁組織で子房壁，繭基部，花弁からは出芽することがわ出芽し，平均出芽本数は2．3本であった（第6かった．

表）．大越らも花弁組織を培養しNAA，BAおよびアデニンを組み合わせて培養しているが、芽の本研究を行うにあたり，農業試験場生物工学分化は見られていない．本試験との違いは品種部，花き部の方々に有益な助言を賜った．ここと基本培地にMSを使用している点である．に記して感謝の意を表する次第である．

以上のことから，開花株のつぼみ内組織であ

引用文献

る花柱，子房壁，繭基部，花弁組織から増殖で1．安藤敏夫ら（1983）千葉大園学報32：1−5

きることが明らかになった．

2．Geler，T．（1978）Z．Pflanzenphysiol．

五1摘要

Bd．

90s：245−256

3．三浦泰昌ら（1986）神奈川農総研生物工

1．花柱組織から出芽させ，出芽した芽の葉

学試験

柄部分を培養して塊茎組織を誘導した．誘導し成績書：473−497

4。大橋一夫ら（1989）栃木農試研報36：93−た塊茎組織を繰り返し分割培養することにより108増殖できることが明らかになった．
2．その他のつぼみ内組織（子房壁，繭基部，5。大橋一夫ら（1990）園学雑59別1：530−531

花弁，子房，がく）を培養し，がく組織は内生

6．大越一一一雄（1985）昭60花き試験成績概要（千葉県）：23−26

菌に汚染されており培養が不可能であること，

lnvitromass

propagation（2）Propagation
Kazuoof（⊇y61α耀

ρ6額6％観MiII

organsflower

from

OoHAsHI，Nagatoshi

MINEGlsHI

inandSa（iaobuds

YoNAI

SummaryThemethods

ofpropagationfromorganswalls，anth（｝rs，petals

an（icalyxes

flowerorgansstyles，ovary

bu〔is、Of

Explants

were

these

cultured

on

shoot

sucrose，0．3％gerhte，0．lmg／乏
47（iays，andtissues

onsubcultured

were26，35，55％in

with

were

in

flowerbu（iswereexamined．Styles，ovaries，ovaryfromflowerbuds

asepticallywalls，anthers

wereefficient

removeddifferentiation

NAA，LOmg／4

thesamestyles，ovary

mediummediumfor41days．

differentiation

mediumcontaining1／3MS

2．Omg／4

NAA，2・Omg／4

BA

atpH5．6andcentage

shoottissues

was29％，formatiQnTheinsalts，MSincubatedinfor

disinfection
tissueofculture．

salts，MSvitamins，3％

the

at25℃

percentages

walls，anthers，respectively．Petalshootofexplants

containing1／3MS

BAatpH5．6，incubated

after

dark
of

shoot

explants

wereforformation
culturedvitamins，3％sucrose，0．3％gerhte，

the

dark

at25℃

for89days．The

per−rBull．T。chigiAgr．Exp．r」Stn．N。．39：53−56（1992）！

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