主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

総合序論

な位置づけにある．

現在，国内の植物に発生する病害は，農業生物資源ジー

リンドウ（Gentiana trifloral ）は，リンドウ科リンドウ属の植物

ンバンクの日本植物病名データベースによれば 10,298 件あである．日本では古くから薬草として利用されてきた以外に，り，そのうち菌類（糸状菌）による病害が最も多く 7,797 件で，観賞用として切り花や鉢植えとして品種改良しつつ栽培され全病害の 3/4 以上を占め（佐藤，2013），各種病原の中でも特てきた．リンドウの主要産地には岩手県，秋田県，山形県，福に重要な存在である．

島県，長野県などが知られている．近年，栃木県ではリンドウ

糸状菌による病害は，その伝染方法の違いによって土壌（エゾ系）の品種開発に取り組み，「るりおとめ（商標）」や品種

伝染性病害と空気伝染性病害の 2 種類に大きく分けられる．

「栃木 r2 号（愛称：るりおとめ 月あかり）」などを開発し，全国

土壌伝染性病害（土壌病害）は「植物病害の中で，土壌中にで最も早出し出荷の産地となっている．また，リンドウは花き栽

生存する病原が植物の土壌と接する部分から侵入して起こる

培農家における栽培品目の一つであるだけでなく，水稲栽培

病気」（「新版土壌病害の手引」編集委員会編，1984）とされ，農家の複合品目としても農業経営上，有用な品目となってお空気伝染性病害は「地上部の感染植物体から病原体が風にり，栃木県でのリンドウの栽培面積は漸増傾向で産地化の形

よって運ばれる病気」（久能ら，1999）とそれぞれ定義されて成も進みつつある．

いる．土壌病害は，土壌中の病原が植物の根や地際部から本研究では，栃木県におけるトマト，イチゴ，リンドウという侵入するため，地上部の黄化や萎凋，枯死などの症状が発

主要な園芸作物で発生した各種糸状菌病について，効果的生して初めて病気を疑うことも多く，発生後の防除対応は困な防除対策の構築に資するため，原因菌の分離，同定なら難であり，いわゆる難防除病害と呼ばれるものが多い．また，びに，その発生生態などを解明することを目的とした．

空気伝染性病害は，風雨等により病原菌の胞子が飛散し宿第 1 章のトマトフザリウム株腐病については，2004 年に栃主への侵入，感染を経て病徴発現に至る．このように糸状菌

木県のトマト圃場で発生した立枯症状の病徴，発生状況，病病は，伝染方法が大きく異なる病原菌を含み，農作物の重要原菌の所属を明らかにした．また，トマト花器，果実および茎病害となっていることが多い．また，その効果的な防除対策のに対する病原性を検討し，本菌の土壌伝染以外の伝染経路構築に当たっては，病原菌の分離，同定やその発生生態をの存否を検討するとともに，薬剤感受性，嫌気的発酵処理に究明することが極めて重要である．

よる不活化についても検討した．さらに，本菌のトマトに対す

さて，栃木県の平成 28 年農業産出額は，2,863 億円で全る病原性を実験室内の素寒天培地上で簡便かつ短期間のう

国第 9 位である（農林水産省，2018）．その農業産出額を，米ちに検定する方法や，ジャガイモマイクロチューバーを用いて

麦，園芸，畜産，その他と大きく分けると，特に園芸，畜産の本菌を土壌から簡易に検出する方法の開発を試みた．

産出額がそれぞれ 1,000 億円を超えており，野菜，果樹，花第 2 章のトマト綿腐病については，2006 年に栃木県の土など園芸生産が着実に伸びている．品目別にみると，1 位は耕栽培トマトの育苗中に根腐症状を伴う生育不良が発生した

米の 608 億円，2 位は生乳の 349 億円，3 位にイチゴの 285

ため，その根部罹病組織から病原菌を分離し，トマトへの接億円，8 位にトマトの 114 億円と続いている．

種による病徴の再現性の確認，その形態的な特徴，種特異

トマト（Solanum lycopersicum）は，南アメリカのアンデス山脈

的なプライマーによる PCR 検定等により病原菌を同定した．

高原地帯を原産とするナス科ナス属の植物で，野菜では世第 3 章のイチゴピシウム根腐病については，2007 年に栃木

界で最も栽培されている品目である．日本での生産量は約

県のイチゴ圃場で主に下葉の葉柄が小豆色に変色し，生育74 万ｔで，栃木県の作付面積は 378ha，収穫量は 36,400ｔで，の停滞や萎凋，枯死を呈する病害が発生したため，その根部

全国第６位で（農林水産省，2017），栃木県ではイチゴに次ぐ罹病組織から病原菌を分離し，イチゴへの接種による病徴の野菜品目として重要な位置を占めている．

再現性の確認，その形態的な特徴，rDNA ITS 領域の塩基配また，イチゴの栽培種（Fragaria × ananassa）は，北米原産の Fragaria virginiana と南米原産の F. chiloensis が交雑

列解析，種特異的なプライマーによる PCR 検定等により病原菌を同定した．

されたもので，江戸時代にオランダから日本に入ってきたとさ

第 4 章のリンドウ炭疽病については，2001 年および 2002

れる．栃木県では戦後からしだいに栽培が活発となり，栃木

年に栃木県のリンドウ圃場で茎葉に斑点を生じ，病勢が進展

県農業試験場による品種「女峰」，「とちおとめ」などの開発や，すると激しい株枯症状を呈する病害が発生したため，その病

その栽培技術の確立，普及により，イチゴ生産は大きく発展し斑部から病原菌を分離し，リンドウへの接種による病徴の再た．栃木県のイチゴ生産は，作付面積 586ha，収穫量 25,100

現性の確認，その形態的な特徴，種特異的なプライマーによｔで（農林水産省，2017），産出額の 285 億円も含めて，それる PCR 検定等により病原菌を同定した．

ぞれ日本一であり，栃木県の園芸品目の中でも極めて重要

以上のように，本論文では栃木県の主要園芸作物で発生
1

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

した糸状菌病のうち，トマトに発生したフザリウム株腐病，綿腐に関する知見をとりまとめ，日本の植物病名目録の充実を図

病，イチゴに発生したピシウム根腐病およびリンドウに発生しった．

た炭疽病について，病原菌の同定ならびにその発生生態等

2

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

第１章

トマトフザリウム株腐病の発生（新称）

簡易に検出する方法を検討した．
また，植物病害の防除対策上，罹病残渣の適切な処理は2004 年 5～6 月，栃木県宇都宮市および真岡市の施設栽

病原菌の伝染環を断ち切る有効な手段の一つである．その培トマト（土耕栽培，促成長期どり栽培）で，主根が激しく褐変事例として，罹病残渣の嫌気的発酵によってダイコン萎黄病

腐敗し，病勢が進展すると立枯症状を呈する病害が発生した．

菌（F. oxysporum f. sp. raphani）が不活化されるとの報告があ

茎または主根の病斑部からは Fusarium 属菌が高率に分離さる（萩原・竹内，1982；萩原・竹内，1983）．石川ら（1990）は，れた．分離菌株はその形態的特徴から F. solani に属すと考嫌気的発酵処理がイチゴ炭疽病菌（Glomerella cingulata）のえられた．そこで，本病の病徴，病原菌の所属，宿主範囲等

罹病残渣処理に有効であることを明らかにしている．そこで，について検討した．

これら事例をもとに，本菌の不活化についても検討した．

本病では，摘葉に伴う茎の傷口から感染し発病に至ったと

１

発生状況，病徴

考えられる病斑がまれにみられる．さらに，この病斑部から組2004 年 5～6 月，宇都宮市および真岡市の施設栽培トマト

織分離により F. solani 種複合体に属す菌株が分離される．ま（穂木品種「ハウス桃太郎」，台木品種「がんばる根 3 号」また

た，トマトの主要な土壌病原菌の一種であるトマト根腐萎凋病

は「がんばる根 11 号」）で立枯症状が発生した．

菌（F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici：駒田ら，1989）は，ト

１）自然発生圃場での発生状況

マト果実腐敗症の原因菌であることが報告されている（冨川，

材料および方法

1987）．一方，本菌についてはトマト花器および果実への病

2006 年 2 月 17 日から 5 月 26 日まで，宇都宮市の自然発原性に関する知見はない．そこで，本菌の土壌伝染以外の生圃場（促成長期どり栽培，土耕栽培；穂木品種「マイロッ

伝染経路の存否を明らかにするため，トマト茎，花器および果

ク」，台木品種「ブロック」，2005 年 7 月 21 日播種，9 月 1 日

実に対する病原性を検討した．

定植）において，本病の発生状況を経時的に調査した．

また，今後の防除対策に役立てるため，トマトに農薬登録

なお，発病調査は以下により行った．

のある主要薬剤を供試し本菌の薬剤感受性を検討した．
Sanchez et al. (1975) に準じ，本菌のトマトに対する病原性

発病指数；0：病徴なし，1：地際部付近に褐色病斑，
2：褐色病斑が上位に進展，3：萎凋，4：枯死を実験室内の素寒天培地上で簡便かつ短期間に検定する
方法についても検討した．
トマト作付前に栽培圃場が本菌に汚染されているかどうか

発病度=［Σ（発病程度別株数×指数）/（4×調査株数）］

判定する技術の開発は，本病の防除対策を構築するうえで×100

極めて有用性が高い．これまでに，各種病原菌で土壌からの簡易な検出技術開発への取組が行われている．鐙谷ら（1963）

また，2006 年 10 月 16 日から 2007 年 6 月 7 日まで，宇都はヤナギ等の枝を圃場に一定期間挿すことで紫紋羽病菌

宮市の自然発生圃場（促成長期どり栽培，土耕栽培；穂木品（Helicobasidium monpa）を，糸井ら（1964）は同様にクワの枝

種「マイロック」，台木品種「ブロック」，2006 年 7 月 10 日播種，で白紋羽病菌（Rosellinia necatrix）を，Eguchi et al.（2009）は

8 月 3 日定植）において，前記と同様に発病状況を経時的にクワ枝でナシおよびリンゴの白紋羽病菌を，原ら（2010），森

調査した．

田ら（2013）および森田ら（2014）はイチジクの枝でイチジク株

結果

枯病菌（Ceratocystis fimbriata）を，圃場からそれぞれ検出し2006 年調査では，2 月 17 日に発病株率 1.0％，発病度ている．また，Merz（1993）は，トマト苗がジャガイモ粉状そうか

0.5，4 月以降になると発病株率が徐々に高まり，最終調査の病菌（Spongospora subterranea）の土壌からの検出に有効で

5 月 26 日に発病株率 11.8％，発病度 4.1 に達した（図 1-1，あることを明らかにしている．Nakayama et al.（2007）および中

図 1-2）．

山・眞岡（2008）は，トマト苗を利用したジャガイモ粉状そうか

2006～2007 年調査では，10 月下旬から発生が始まり，翌病菌の検出技術を確立している．今回，栃木県のトマトから得春の 4 月下旬以降，発病株率が急激に高まり，6 月上旬に地られた分離菌株は，トマトのみでなくジャガイモにも病原性を上部の発病株率が 41.7％となった（図 1-3）．なお，圃場内の有し，その茎基部に褐色で腐敗した病斑を生じた（中山・青全株を抜き取り，地下部の発病状況を調査したところ，発病

木，2010）．また，ジャガイモのマイクロチューバーは，ジャガ

株率は 68.0％に達した．

イモの組織培養苗から培養器内で生産された病原体フリー

２）病徴の塊茎であり大量生産が可能となっている．そこで，本研究

本病はトマトの根および茎に病徴を示した．根では，はじめ

ではジャガイモマイクロチューバーを用いて本菌を土壌から

主根の表面に淡褐色で不整形の病斑が形成され，しだいに3栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

4

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

a

b

C

図１－４ トマトフザリウム株腐病（Fusarium solani f. sp. eumartii）の病徴
a：葉の黄化，萎れ，b：地際部の褐変腐敗，c：根部の褐変腐敗（品種；穂木「マイロック」，台木「ブロック」）

5

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

拡大しながら褐変腐敗した大型病斑となった．また，主根の－6.5（菌株ごとの平均値の範囲：42.6－45.2×4.8－4.9）㎛で病斑部から伸びている側根の付け根付近に褐変腐敗が認めあった．厚壁胞子は球形，間生または頂生で，単生もしくはられたが，大部分の側根には病徴は認められなかった．主根

連鎖，表面平滑または粗で，SNA 上では大きさは 7.5－15×の病斑はしだいに上下へ拡大伸展し，地際部付近の茎の褐7.5－8.8（平均値 10.1×8.6）㎛であった（表 1-2）．

変腐敗となって現れた．まれに，地際部から 50～100cm 上位

分離菌株は，小分生子を擬頭状に形成し，小分生子柄がまで病斑が進展し，茎の表面が褐色条斑を呈する病斑を形長く，まばらに分枝し，その形態数値は Gerlach and Nirenberg

成した．葉は下葉から黄化し，しだいに萎凋，枯死した．根お(1982) の記載による Fusarium solani (Mart.) Sacc. とほぼ一よび地際部の褐変腐敗が激しい場合，株が立枯症状を呈し致した．また，Nirenberg and Brielmaier-Liebetanz (1996) およた（図 1-4）．

び Rossman et al. (1999) による Fusarium striatum Sherb. (完全 世 代 名 ： Haematonectria ipomoeae (Halst.) Samuels et２

Nirenberg) の記載と比較したところ，本菌の 5 隔壁大分生子

病原菌

１）形態

は明らかに短く，形態的に一致しなかった（表 1-2）．

（１）病原菌の分離

２）病原性

地際部付近の茎を水道水で十分に水洗した後，罹病部組
織を約 5mm 角に切り取り，この切片を 70％エタノールに約 30（１）トマトに対する病原性＜試験Ⅰ＞

秒間浸漬して表面殺菌し，殺菌蒸留水で洗浄し殺菌濾紙で材料および方法

水滴を取った後，ブドウ糖加用ジャガイモ煎汁寒天（Potatoア）供試菌株

Dextrose Agar; PDA）培地に置床した．25℃，暗条件で培養

分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した．

した後，単分生子分離を行って供試菌株とした．分離菌株イ）供試トマト品種

04T-1，04T-2 および 04T-3 は，農業生物資源ジーンバンク

台木品種「がんばる根 3 号」を供試した．

（農研機構遺伝資源センター）にそれぞれ MAFF240345，

ウ）接種

MAFF240346，MAFF240347 として寄託登録した．

分離菌株を SNA 培地，25℃，暗条件で 7 日間培養し，分生子を殺菌蒸留水に懸濁し，10５個/ml の胞子懸濁液を作製（２）病原菌の形態材料および方法

した．これを接種源として，「がんばる根 3 号」苗（第 6 葉期）

ア）供試菌株に浸根接種（Wellman, 1939）し，1/5000a ワグネルポット中の分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した

殺菌土壌に移植した．

（表 1-1）．

エ）調査
接種 78 日後に株を抜き取り根部の発病状況を調査した．

イ）形態計測分離菌株を合成低栄養寒天（Synthetic Low Nutrient Agar；

また，接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行った．

SNA）培地（Nirenberg and O’Donnell, 1998）で 25℃，暗条件

結果

で 14 日培養後に形成された分生子の形，隔壁数，厚壁胞子分離菌株の浸根接種により，トマト台木品種「がんばる根 3の有無，分生子形成細胞の形態およびその分生子形成様式

号」の接種株のすべてで根部に原病徴が再現され，病斑部を光学顕微鏡で観察した．また，分生子の大きさについては，から接種菌が再分離された（表 1-3）．なお，無接種区では病分生子の種類と隔壁数を区別し，菌株ごとにそれぞれ 30 個

徴は認められなかった．

ずつを計測した．

＜試験Ⅱ＞
結果

小分生子は楕円～紡錘形で 0 から 1 隔壁であった．SNA

材料および方法ア）供試菌株

上での 0 隔壁の小分生子は 3.5－18.5×1.5－6（菌株ごとの分離菌株 04T-2 を供試した．

平均値の範囲：8.5－9×2.7－2.8）㎛であった．小分生子柄イ）供試トマト品種

は長く，非分枝あるいは分枝し，モノフィアライドから擬頭状に穂木品種は「麗容」，「マイロック」，「桃太郎はるか」，「ハウ分生子を形成した．大分生子柄は比較的短く，分枝あるいはス桃太郎」の 4 品種，台木品種は「ブロック」，「ジョイント」，

非分枝で，モノフィアライドから分生子を形成した．大分生子「がんばる根 3 号」，「がんばる根 11 号」，「ドクターK」，「サポは鎌形で 1 から 5 隔壁，基部に脚胞を有していた．3 隔壁のート」，「マグネット」，「プロテクト 3」の 8 品種，計 12 品種を供

大分生子は，PDA 上では 27－43.5×3－5.5（菌株ごとの平均

試した．

値の範囲：35－38.8×4.4－4.7）㎛，5 隔壁は 35.5－49.5×3.5
6主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-1 供試菌株（トマト分離菌株）
分離菌株

MAFF №

分離場所

分離年

品種（穂木/台木）

栽培様式

04Ｔ-1

MAFF240345 栃木県宇都宮市

2004

ハウス桃太郎/がんばる根３号

土耕栽培

04Ｔ-2

MAFF240346 栃木県宇都宮市

2004

ハウス桃太郎/がんばる根３号

土耕栽培

04Ｔ-3

MAFF240347 栃木県真岡市

2004

ハウス桃太郎/がんばる根11号

土耕栽培

表1-2 トマト分離菌株04T-2と既知種との形態比較
04T-2

F. solani a)

F. solani b)

F. striatum c, j)

3-5(-7)3-5(-7)36×5.527-50×4.2-6

48×5.734-55×4.2-6 h）

45.8-68×4.8-6 f, i）(41×5.3)(49.2-60.3×5.2-5.9)

F. striatum d, j)

大分生子
隔壁数

1-5
27-43.5×3-5.5 e)

大きさ(3隔壁) (µm)(35.0-38.8×4.4-4.7) k)
大きさ(5隔壁) (µm)

35.5-49.5×3.5-6.5 e)(42.6-45.2×4.8-4.9)k)（36×5.3）
49-64×4.8-5.9

小分生子
隔壁数
大きさ(0隔壁) (µm)

0-1

0-1

0-3(-5)

3.5-18.5×1.5-6 f)

8-13×3.2-4

6.5-15×2-4 f, i）（10×3.5）(7-11.4×2.2-3.4)(8.5-9.0×2.7-2.8)

k)9.8-14.5×4.5-5

小分生子柄≦255×2.5-5.5 f)

大きさ (µm)
厚壁胞子7.5-15×7.5-8.8 f)

大きさ (µm)

6-11(10.1×8.6) k)a)Snyder and Hansen (1941)b)Gerlach and Nirenberg (1982)c)Nirenberg and Brielmaier-Liebetanz (1996)d)Rossman et al. (1999)e)PDA上f)SNA上g)1-4隔壁h）4-5隔壁i）近紫外線照射（暗黒12hr/照射12hr）j）ホモタリックk）各30個/菌株

表1-3 トマト分離菌株のトマトに対する
病原性
分離菌株

発病株数/供試株数a)

04Ｔ-1

5/5

04Ｔ-2

5/5

04Ｔ-3

5/5

無処理

0/5

a)供試品種：がんばる根3号

7栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

ウ）接種は認められなかった．

接種は，分離菌株 04T-2 をマングビーン培地で 25℃，10日間培養し，殺菌蒸留水で胞子様菌体の濃度を 2.8×10

＜試験Ⅲ＞

５

材料および方法

bud cell/ml に調整し接種源とした．接種は，ベロペット（軟質ア）供試菌株PE 製）により 1/5000a ワグネルポット中のトマト各品種の株元

分離菌株 04T-2 を供試した．

に 1 株当たり 30ml ずつかん注接種した．なお，供試株数は，

イ）供試トマト品種

各品種とも接種区が各 10 株，無接種区が各 5 株とした．

穂木品種は「麗容」，「マイロック」，「桃太郎はるか」，「ハウマングビーン液体培地；マングビーン 20g を蒸留水 1000ml

ス桃太郎」の 4 品種，台木品種は「ブロック」，「ジョイント」，

で 20 分間煮沸した後，二重ガーゼでろ過し，その上清をオー「がんばる根 3 号」，「がんばる根 11 号」，「ドクターK」，「サポトクレーブ処理して使用した．

ート」，「マグネット」，「プロテクト 3」の 8 品種，計 12 品種を供

エ）調査

試した．

接種 67 日後に株を抜き取り，発病状況を調査した．また，接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行った．
結果ウ）接種
接種は，分離菌株 04T-2 を土壌ふすま培地（松尾ら，1980）
で 25℃，40 日間培養し，1/5000a ワグネルポット中の殺菌土

分離菌株 04T-2 のトマト各品種に対するかん注接種の結果，壌に重量で 1％の割合で混和し保菌土壌とした後，殺菌土壌「サポート」，「マグネット」を除いた計 10 品種で発病が認めらで育苗したトマト苗（2.0～2.5 葉期）を移植した（土壌接種）．

れた．台木品種の発病株率は 0～70.0％で，特に品種「ジョイなお，供試株数は，各品種とも接種区が各 10 株，無接種区

ント」は 70.0％と高かった（表 1-4）．なお，無接種区では病徴が各 5 株とした．

表1-4 トマト分離菌株04T-2のトマト品種に対する病原性（かん注接種）
処理区
品種名
発病株率(%) a)
発病度b)
麗容
50.0
37.5
マイロック
30.0
7.5
桃太郎はるか10.0
7.5
ハウス桃太郎
20.0
5.0
ブロック
10.0
7.5
ジョイント
70.0
32.5
接種
がんばる根3号
20.0
5.0
がんばる根11号
40.0
15.0
ドクターK
10.0
7.5
サポート
0
0
マグネット
0
0
プロテクト3
10.0
2.5
麗容
0
0
マイロック
0
0
桃太郎はるか00
ハウス桃太郎
0
0
ブロック
0
0
ジョイント
0
0
無接種
がんばる根3号
00
がんばる根11号
0
0
ドクターK
0
0
サポート
0
0
マグネット
0
0
プロテクト300a) (発病株数/調査株数)×100b) 発病度＝［Σ(発病程度別株数×指数）/（4×調査株数）］×100(発病指数 0：病徴なし，1：主根の一部が褐変腐敗，2：主根の大部分が褐変腐敗，3：褐変腐敗が茎に進展，4：枯死）

8

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究エ）調査

品種「ジョイント」を供試した．

移植 84 日後に株を抜き取り，発病状況を調査した．また，接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行った．

ウ）接種
分離菌株を土壌ふすま培地で室温下，54 日間培養し，結果1/5000a ワグネルポット中の殺菌土壌に 1％の割合で混合し分離菌株 04T-2 のトマト各品種に対する土壌接種の結果，保菌土壌とした後，品種「男爵薯」のマイクロチューバーおよ

供試した計 12 品種のすべてで発病が認められ，高度な抵抗びトマト品種「ジョイント」苗（3.5～4.0 葉期）を移植した（土壌性を示す品種は見当たらなかった．台木品種の発病株率は接種）．

40.0～100％，発病度は 20.0～55.0，穂木品種の発病株率はエ）調査

30.0～40.0％，発病度は 10.0～17.5 であり，台木品種の発病

移植 62 日後または 71 日後に株を抜き取り，発病状況を調

株率や発病度が穂木品種のそれに比較して全般に高かった

査した．また，接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行っ（表 1-5）．なお，無接種区では病徴は認められなかった．

た．

（２）ジャガイモに対する病原性
＜試験Ⅰ＞

結果
ジャガイモに対する病原性を調査したところ，分離菌株を材料および方法

接種した品種「男爵薯」の茎の基部が褐変腐敗した（図 1-5）．

ア）供試菌株

塊茎では，その表面の一部が淡褐色に変色し亀裂が入り，し分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した．

だいに亀裂が内部に進展し，内部が褐変腐敗した（図 1-5，イ）供試植物・品種

表 1-6）．病斑部からは接種菌が再分離された．なお，無接種

ジャガイモ（Solanum tuberosum）品種「男爵薯」およびトマト

区では病徴は認められなかった．

表1-5 トマト分離菌株04T-2のトマト品種に対する病原性（土壌接種）
処理区
品種名
発病株率(%) a)
発病度b)
麗容
40.0
10.0
マイロック
30.0
17.5
桃太郎はるか30.0
10.0
ハウス桃太郎
30.0
12.5
ブロック
60.0
25.0
ジョイント
100
55.0
接種
がんばる根3号
40.0
20.0
がんばる根11号
70.0
25.0
ドクターK
70.0
32.5
サポート
80.0
42.5
マグネット
60.0
27.5
プロテクト3
60.0
27.5
麗容
0
0
マイロック
0
0
桃太郎はるか00
ハウス桃太郎
0
0
ブロック
0
0
ジョイント
0
0
無接種
がんばる根3号
00
がんばる根11号
0
0
ドクターK
0
0
サポート
0
0
マグネット
0
0
プロテクト300a) (発病株数/調査株数)×100b) 発病度＝［Σ(発病程度別株数×指数）/（4×調査株数）］×100(発病指数 0：病徴なし，1：主根の一部が褐変腐敗，2：主根の大部分が褐変腐敗，3：褐変腐敗が茎に進展，4：枯死）
9

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

表1-6 トマト分離菌株のジャガイモに対する病原性
分離菌株
ジャガイモa)トマトb)
04T-1
12/20c)
5/5 c)
04T-2
19/20
5/5
04T-3
16/20
4/5
無処理
0/20
0/5
a)品種「男爵薯」．接種71日後に発病調査を行った．
b)品種「ジョイント」．接種62日後に発病調査を行った．
c)発病株数/供試株数ab

図 1-5 トマト分離菌株 04T-2 のジャガイモ品種「男爵薯」での病徴
a：茎基部の褐変腐敗，b：塊茎の褐変腐敗

表1-7 トマト分離菌株04T-2のジャガイモ茎葉に対する病原性
処理区
接種
無接種

接種法

発病株数/供試株数a)

有傷

0/11

無傷

0/12

有傷

0/12

無傷

0/12

a)品種「男爵薯」．接種36日後に発病調査を行った．

10

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

接種したトマトでは，品種「ジョイント」の主根の一部に褐変

ウ）接種

腐敗がみられ，茎に病斑が進展している株も認められた（表接種は，分離菌株 04T-2 をマングビーン液体培地で 25℃，

1-6）．また，その病斑部からは接種菌が再分離された．なお，

11 日間培養し，殺菌蒸留水で胞子様菌体の濃度を 1.7×105

無接種区では病徴は認められなかった．

bud cell/ml に調整し接種源とした．接種は，ベロペットにより＜試験Ⅱ＞

殺菌土壌で育苗した供試植物に 1 株当たり 30ml ずつ株元
材料および方法にかん注接種した．
なお，供試株数は，各品種とも接種区が各 7 株（ただし，トア）供試菌株
分離菌株 04T-2 を供試した．

ウモロコシは 5 株），無接種区が各 5 株（ただし，トウモロコシイ）供試ジャガイモ品種

は 3 株）とした．

品種「男爵薯」を供試した．

エ）調査

ウ）接種

移植 63 日後に株を抜き取り，発病状況を調査した．また，ジャガイモ茎葉への病原性調査は，品種「男爵薯」のマイク

接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行った．

ロチューバーを黒ポリポット（直径 15cm）中の殺菌土壌に植え結果付け，その 19 日後に分離菌株 04T-2 を PDA 平板培地で接種植物では，インゲンマメ品種「初みどり 2 号」およびソラ

25℃，暗条件で 13 日間培養し調整した 7.3×10５個/ml の分

マメ品種「讃岐長莢早生蚕豆」にのみ病原性が認められ，トウ

生子懸濁液をペーパークロマトグラフ用噴霧器で接種した．

モロコシなど 10 種 10 品種には病原性は認められなかった

なお，接種は有傷区および無傷区を設けた．有傷区は，殺菌（表 1-8）．また，発病株の根の病斑部から接種菌が再分離さした針の束（昆虫針 4 号，約 60 本）でジャガイモ茎葉を軽く押れた．なお，無接種区では病徴は認められなかった．

して傷を付けた．

＜試験Ⅱ＞

エ）調査

材料および方法

接種後は 16 時間湿室状態を保ち，接種 36 日後に発病状ア）供試菌株
分離菌株 04T-2 を供試した．

況を調査した．
結果イ）供試植物・品種

分離菌株の分生子懸濁液をジャガイモ茎葉へ接種したとこ

分離菌株の宿主範囲調査には，トウモロコシ品種「ハニーろ，有傷接種および無傷接種とも病徴は認められなかったバンダム」，ダイズ品種「富貴」，インゲンマメ品種「本金時」，（表 1-7）．なお，無接種区では病徴は認められなかった．

「初みどり 2 号」，ササゲ品種「赤種三尺大長」，ソラマメ品種（３）各種植物に対する病原性「讃岐長莢早生蚕豆」，ナス品種「はやぶさ」，キュウリ品種＜試験Ⅰ＞「鈴成四葉」，カボチャ品種「みやこ」，ユウガオ品種「相生
材料および方法

FMT」，ハクサイ品種「金将二号」，シュンギク品種「きわめ中ア）供試菌株葉春菊」，オクラ品種「大和グリーンオクラ」の計 12 種 13 品種

分離菌株 04T-2 を供試した．

を供試した．

イ）供試植物・品種

ウ）接種

分離菌株の宿主範囲調査には，トウモロコシ（Zea mays）品

接種は，分離菌株 04T-2 を土壌ふすま培地で，25℃，27 日

種「ハニーバンダム」，ダイズ（Glycine max）品種「富貴」，イン間培養し，1/5000a ワグネルポット中の殺菌土壌に 1％の割合

ゲンマメ（Phaseolus vulgaris）品種「初みどり 2 号」，ササゲ

で混和し保菌土壌とした後，殺菌土壌で育苗した供試植物を（Vigna sinensis）品種「赤種三尺大長」，ソラマメ（Vicia faba）

移植した（土壌接種）．なお，供試株数は，各品種とも接種区

品種「讃岐長莢早生蚕豆」，ナス（Solanum melongena）品種

が各 7 株，無接種区が各 5 株とした．

「はやぶさ」，キュウリ（Cucumis sativus）品種「鈴成四葉」，カエ）調査

ボ チ ャ （ Cucurbita moschata ） 品 種 「 み や こ 」 ， ユ ウ ガ オ

移植 57 日後に株を抜き取り，発病状況を調査した．また，（Lagenaria siceraria）品種「相生 FMT」，ハクサイ（Brassica

接種植物の病斑部から接種菌の再分離を行った．

campestris）品種「金将二号」，シュンギク（ Chrysanthemum

結果coronarium）品種「きわめ中葉春菊」，オクラ（ Abelmoschus

接種植物では，インゲンマメ品種「初みどり 2 号」およびソラ

esculentus）品種「大和グリーンオクラ」の計 12 種 12 品種を供

マメ品種「讃岐長莢早生蚕豆」にのみ病原性が認められ，トウ試した．

モロコシなど 10 種 10 品種およびインゲンマメ品種「本金時」には病原性は認められなかった（表 1-9）．また，発病株の根11栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

表1-8 トマト分離菌株04T-2の各種植物に対する病原性（かん注接種）
品種名

発病株率(%)a)

発病度b)

トウモロコシ(Zea mays )ハニーバンダム

00

ダイズ(Glycine max )

冨貴

0

0

インゲンマメ( Phaseolus vulgaris )初みどり2号

85.7

42.9

ササゲ(Vigna sinensis )赤種三尺大長00

ソラマメ( Vicia faba )讃岐長莢早生蚕豆

42.9

21.4

ナス(Solanum melongena )

はやぶさ

0

0

キュウリ(Cucumis sativus )

鈴成四葉

0

0

カボチャ(Cucurbita moschata )

みやこ

0

0

ユウガオ(Lagenaria siceraria )

相生FMT

0

0

ハクサイ(Brassica campestris )

金将二号

0

0

シュンギク(Chrysanthemum coronarium )きわめ中葉春菊

00

オクラ(Abelmoschus esculentus )大和グリーンオクラ00

トウモロコシハニーバンダム

0

0

ダイズ

冨貴

0

0

インゲンマメ

初みどり2号

00

ササゲ

赤種三尺大長00

ソラマメ

讃岐長莢早生蚕豆

0

0

ナス

はやぶさ

0

0

キュウリ

鈴成四葉

0

0

カボチャ

みやこ

0

0

ユウガオ

相生FMT

0

0

ハクサイ

金将二号

0

0

シュンギク

きわめ中葉春菊

00

オクラ

大和グリーンオクラ

0

0

処理区

接種

無接種

植物名

a) (発病株数/調査株数)×100b) 発病度=[Σ(発病程度別株数X指数）/（4×調査株数）]×100(発病指数 0：病徴なし，1：主根，側根の一部が褐変腐敗，2：主根，側根の大部分が褐変腐敗，3：褐変腐敗が茎に進展，4：枯死）

12

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-9 トマト分離菌株04T-2の各種植物に対する病原性（土壌接種）
処理区

接種

無接種

植物名

品種名

発病株率(%)a)

発病度b)

トウモロコシハニーバンダム

0

0

ダイズ

冨貴

0

0

インゲンマメ本金時

00

インゲンマメ

初みどり2号

85.7

21.4

ササゲ

赤種三尺大長00

ソラマメ

讃岐長莢早生蚕豆

71.4

17.9

ナス

はやぶさ

0

0

キュウリ

鈴成四葉

0

0

カボチャ

みやこ

0

0

ユウガオ

相生FMT

0

0

ハクサイ

金将二号

0

0

シュンギク

きわめ中葉春菊

00

オクラ

大和グリーンオクラ00

トウモロコシハニーバンダム

0

0

ダイズ

冨貴

0

0

インゲンマメ本金時

00

インゲンマメ

初みどり2号

00

ササゲ

赤種三尺大長00

ソラマメ

讃岐長莢早生蚕豆

0

0

ナス

はやぶさ

0

0

キュウリ

鈴成四葉

0

0

カボチャ

みやこ

0

0

ユウガオ

相生FMT

0

0

ハクサイ

金将二号

0

0

シュンギク

きわめ中葉春菊

00

オクラ

大和グリーンオクラ00a) (発病株数/調査株数)×100b) 発病度=[Σ(発病程度別株数X指数）/（4×調査株数）]×100(発病指数 0：病徴なし，1：主根，側根の一部が褐変腐敗，2：主根，側根の大部分が褐変腐敗，3：褐変腐敗が茎に進展，4：枯死）

13

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号の病斑部から接種菌が再分離された．なお，無接種区ではそこで，トマトフザリウム株腐病菌について，トマトに対する病徴は認められなかった．

病原性を実験室内の素寒天培地上で簡便かつ短期間のうち（４）Sanchez 法の改変によるトマトに対する病原性検定に検定する方法を検討した．

農作物病害の原因究明の過程では，病斑部から分離した＜試験Ⅰ＞菌株の分離源植物に対する病原性確認が必要となる．接種

材料および方法

方法には，菌糸片での接種，ふすまや穀粒などで培養し接ア）供試菌株

種する方法，胞子で接種する方法などがあるが（「新版土壌分離菌株 04T-2 を供試した．

病害の手引」編集委員会編，1984），接種から病徴発現に至イ）供試トマト品種

るまで一定期間を必要とし，病原菌かどうかの判定には長期

穂木品種は「麗容」，「マイロック」，「ハウス桃太郎」の 3 品
種，台木品種は「ブロック」，「ジョイント」，「がんばる根 3 号」，

間を要する場合もある．
トマトの土壌病原菌の一種であるトマトフザリウム株腐病菌「マグネット」の 4 品種，計 7 品種を供試した．

では，本菌を土壌ふすま培地（松尾ら，1980）で培養した後，

ウ）接種

保菌土壌を作製し，そこにトマト苗を移植（土壌接種）して病

04T-2 菌株を SNA 培地，20℃，暗条件で培養した菌糸片

原性の有無を確認している（中山・青木，2010）．本菌の場合，（約 3mm 角）を接種源とした．その菌糸片を 1.75％素寒天培

トマトへの土壌接種から地際部に病徴が現れるまで通常 1～

地が入ったペトリ皿（直径 9cm）の中央に置床した．次に，2 か月を要する．

Sanchez et al.（1975）の方法に準じ，トマト各品種の種子を流Sanchez et al. （ 1975 ） は ， 病 原 菌 を 接 種 し た ト マ ト 品 種

水で洗浄，浸種し，次亜塩素酸ナトリウム液（有効成分 1％）「Bonny Best」の種子を素寒天培地上に置床し，発芽した幼で 5 分間表面殺菌した．次に，種子を殺菌蒸留水で洗浄し殺植 物 体 の 病 徴 に よ り ト マ ト 根 腐 萎 凋 病 菌 （ Fusarium

菌濾紙で水滴を取った後，菌糸片の周囲 20～25mm の距離

oxysporum f. sp. radicis-lycopersici）（山本ら，1974；駒田ら，に，ペトリ皿当たり 4～6 粒ずつほぼ等間隔になるように置床

1989）を他の病原菌と識別する方法を開発している．また，黒した．各品種当たりペトリ皿は 2 枚供した．

田ら（1996）は，素寒天培地上で非病原性フザリウム菌のトマエ）調査

ト根腐萎凋病菌に対する発病抑制効果をトマト幼植物胚軸部

接種後，25℃，照明下で培養し，接種 6 日後，10 日後および 14 日後にトマト幼植物体の発病状況を調査した．

の褐変程度により判定している．

表1-10 トマト各品種に対するトマト分離菌株04T-2の病原性（試験Ⅰ） a)
発病数
処理区
品種名
供試数 発芽数
接種6日後 接種10日後 接種14日後
接種

麗容

8

8

0

4

5(62.5) b）

接種

マイロック

9

9

0

3

6(66.7)

接種

ハウス桃太郎

10

10

0

3

8(80.0)

接種

マグネット

11

11

0

3

9(81.8)

接種

ブロック

10

10

0

1

9(90.0)

接種

ジョイント

11

10

0

8

8(80.0)接種

がんばる根３号

12

12

0

4

9(75.0)

無接種

麗容

9

7

0

0

0(0)

無接種

マイロック

7

7

0

0

0(0)

無接種

ハウス桃太郎

9

9

0

0

0(0)

無接種

マグネット

9

9

0

0

0(0)

無接種

ブロック

10

10

0

0

0(0)

無接種

ジョイント

10

10

0

0

0(0)

無接種

がんばる根３号

11

11

0

0

0(0)

a)Sanchez et al. （1975）の方法に準じ，1.75％素寒天培地上に04T-2菌株とトマト各品種の種子を置床し発病状況を調査した．
b) カッコ内は発病率（％）を示す．
発病率＝（発病数/発芽数） ×100
14

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-11 トマト各品種に対するトマト分離菌株04T-2の病原性（試験Ⅱ） a)
接種7日後
接種14日後無接種7日後無接種14日後
品種名
反復
発病率
発病度
発病率
発病度
発病率
発病度
発病率b） 発病度c)
麗容
Ⅰ
100%
52.8
100%
100
0%
0
0%
0
Ⅱ
100
38.9
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
41.2
100
100
0
0
0
0
平均
100d
44.3
100
100
0
0
0
0
マイロック
Ⅰ
100
27.8
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
53.1
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
87.5
23.4
100
100
0
0
0
0
平均
95.8d
34.8
100
100
0
0
0
0
桃太郎はるか
Ⅰ
100
47.1
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
39.7
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
33.3
100
100
0
0
0
0
平均
100d
40.0
100
100
0
0
0
0
ハウス桃太郎
Ⅰ
94.1
48.5
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
53.1
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
48.4
100
100
0
0
0
0
平均
98.0d
50.0
100
100
0
0
0
0
マグネット
Ⅰ
93.8
40.6
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
55.6
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
38.2
100
100
0
0
0
0
平均
97.9d
44.8
100
100
0
0
0
0
ブロック
Ⅰ
94.4
40.3
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
50
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
27.8
100
100
0
0
0
0
平均
98.1d
39.4
100
100
0
0
0
0
ジョイント
Ⅰ
88.2
41.2
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
57.4
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
94.1
25
100
100
0
0
0
0
平均
94.1d
41.2
100
100
0
0
0
0
がんばる根３号
Ⅰ
100
51.5
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
45.6
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
52.9
100
100
0
0
0
0
平均
100d
50.0
100
100
0
0
0
0
がんばる根１１号 Ⅰ
100
48.5
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
69.4
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
45.8
100
100
0
0
0
0
平均
100d
54.6
100
100
0
0
0
0
ドクターＫ
Ⅰ
100
43.8
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
46.9
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
94.1
38.2
100
100
0
0
0
0
平均
98.0d
43.0
100
100
0
0
0
0
サポート
Ⅰ
100
63.3
100
100
0
0
0
0
Ⅱ
100
56.9
100
100
0
0
0
0
Ⅲ
100
47.1
100
100
0
0
0
0
平均
100d
55.8
100
100
0
0
0
0
a) Sanchez et al. （1975）の方法に準じ，1.75％素寒天培地上に04T-2菌株の分生子懸濁液に浸漬したトマト各品種の種子を置床し発病状況を調査した．
b) 発病率（％）＝（発病数/発芽数） ×100c) 発病度＝[Σ（発病程度別株数×指数）/（4×調査株数）]×100
発病程度； 0：発病なし，1：胚軸の基部付近が褐変腐敗，2：胚軸の1/2未満が褐変、腐敗，
3：胚軸の1/2以上が褐変、腐敗，4：萎凋、枯死※ 表中の同一英文字はTukeyの多重比較により危険率1%で有意差がないことを示す．

15

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

結果

結果

04T-2 菌株の菌糸片によりトマト各品種に接種したところ，

04T-2 菌株の分生子懸濁液によりトマト各品種に接種したと接種 6 日後では供試した全品種で発病は認められなかった

ころ，接種 4～5 日後には幼植物体胚軸の基部，特に根とのが，接種 10 日後には全品種の幼植物体胚軸の基部，特に根境界付近に褐変腐敗が認められた．接種 7 日後には全品種との境界付近が褐変腐敗を呈した．接種 14 日後には，発病で発病がみられ，穂木品種の「麗容」，「マイロック」，「桃太郎

率は穂木品種の「麗容」，「マイロック」，「ハウス桃太郎」ではるか」，「ハウス桃太郎」では発病率 95.8～100％，発病度62.5～80.0％，台木品種の「マグネット」，「ブロック」，「ジョイ34.8～50.0 であった．台木品種の「マグネット」，「ブロック」，

ント」，「がんばる根 3 号」で 75.0～90.0％となった（表 1-10）．

「ジョイント」，「がんばる根 3 号」，「がんばる根 11 号」，「ドクタなお，無接種区では各供試品種に病徴は認められなかった．

ーK」，「サポート」では発病率 94.1～100％，発病度 39.4～＜試験Ⅱ＞

55.8 であった．発病率は，全品種間に有意な差は認められなかった．なお，接種 14 日後には全幼植物体が萎凋，枯死し，材料および方法ア）供試菌株各品種とも発病率 100％，発病度 100 となった（表 1-11）．な

分離菌株 04T-2 を供試した．

お，無接種区では各供試品種に病徴は認められなかった．

イ）供試トマト品種

３）培養的性質

穂木品種は「麗容」，「マイロック」，「桃太郎はるか」，「ハウ（１）菌糸生育と温度との関係

ス桃太郎」の 4 品種，台木品種は「ブロック」，「ジョイント」，

材料および方法「がんばる根 3 号」，「がんばる根 11 号」，「ドクターK」，「サポア）供試菌株ート」，「マグネット」の 7 品種，計 11 品種を供試した．

分離菌株 04T-1，04T-2 の 2 菌株を供試した．

ウ）接種

イ）生育温度

トマト各品種の種子を流水で洗浄，浸種し，70％エタノー

菌糸の生育温度は，分離菌株を PDA 平板培地で 25℃，

ルで 30 秒間表面殺菌した．次に，種子を殺菌蒸留水で洗浄

暗条件で前培養した後，コルクボーラー（直径 4mm）で打ちし殺菌濾紙で水滴を取った後，04T-2 菌株の分生子懸濁液

抜いた菌叢片を PDA 平板培地上に置床し，5，10，15，20，

５（10 個/ml）に浸漬した．なお，接種源の分生子は，04T-2 菌

25，28，30，35，37℃の各温度で暗条件，6 日間培養後の菌株を SNA 平板培地で 20℃，暗条件で 8～12 日間培養し形

叢直径を調査した．

成されたものを供試した．

結果

次に，種子から殺菌濾紙で水滴を取り，1.75％素寒天培地

分離菌株の菌糸の生育は 10～37℃で認められ，適温は上にペトリ皿当たり 9 粒ずつ置床した．接種区は各品種当た

28～30℃付近であった（図 1-6）．

りペトリ皿 2 枚ずつ供した．

（２）完全時代形成の検討

エ）調査

材料および方法

接種後，25℃，照明下で培養し，接種 7 日後および 14 日
後にトマト幼植物体の発病状況を調査した．なお，試験は 3ア）供試菌株
分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した．

菌叢直径（mm）

回実施した．

温度（℃）
図 1-6 トマト分離菌株 04T-2 の菌糸生育と温度との関係（PDA 上）

16

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究イ）調査した．本研究で明らかにした DNA 塩基配列は DDBJ に登録

分離菌株を PDA 平板培地へ移植し，室温，散光下で培養し た （ Accession Nos. AB498980-AB498985, AB513841,

し，それぞれの菌株について完全世代形成の有無を調査し

AB513843-AB513849, AB513851, AB513852）．

た．最終調査は培養開始から 95 日後に行った．

結果

結果

供試 3 菌株より得られた rDNA ITS 領域の DNA 塩基配列供試した 3 菌株とも，子のう殻，子のう，子のう胞子の形成を GenBank に登録されている F. solani 種複合体の典型菌株はみられず，完全世代の形成は認められなかった（データのデータおよび日本産典型菌株のデータを併せて解析し，略）．

最大節約法で系統樹を作成した（図 1-7）．ギャップ配列は除４）分子系統解析

去して解析を行った．その結果，分離菌株は O’Donnell によ（１）rDNA ITS 領域の解析
材料および方法ア）供試菌株
分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した．

る F. solani 種複合体のクレード 1～3 のうちクレード 3 に属していたが，これまでに知られている F. solani 種複合体の交配群（MPⅠ～Ⅶ）のいずれとも異なる系統学的位置であった．
分離菌株は，Romberg and Davis（2007）がアメリカ，カリフォイ）解析

ルニアで発生したジャガイモの Eumartii wilt およびトマトの分離菌株をそれぞれ SNA 培地上に接種した後に，殺菌濾Foot rot の原因菌とした F. solani f. sp. eumartii 菌株と rDNA

紙片を 5mm 直径の円盤に打ち抜いて 3～5 枚重ねにしたも

ITS 領域の塩基配列（525 塩基対分）が 98.8～99.8％と高いのを SNA 培地上に接着して培養した．菌集落が生育し紙円相同性が認められた．さらに，分離菌株は Romberg and Davis盤を覆ったことを確認後，紙円盤をエッペンドルフ・チューブ（2007）による F. solani f. sp. eumartii と同一のクレードに所属に回収し，PCI（Phenol: Chloroform: Isoamyl alcohol = 25: 24:

した．

1）処理により菌体から全 DNA を抽出し，遠心分離後の上清（２）TEF1-α 遺伝子の解析に 3M 酢酸ナトリウム水溶液 1/10 容量と 100％エタノール 2.5

材料および方法

倍容量を加え，さらに遠心分離し DNA を沈殿させ，乾燥，

ア）供試菌株Tris バッファー （pH8.0）25µl に溶解して，その 1µl を鋳型

分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 の 3 菌株を供試した．

DNA として，rDNA ITS 領域の塩基配列の解析に供した．

イ）解析

PCR 増幅にはプライマーITS5 と NL4（White et al., 1990;

rDNA ITS 領域の解析と同様に分離菌株から全 DNA を抽O’Donnell, 1996）を用いた．それぞれプライマーITS2，ITS5，

出し鋳型 DNA を調整した後，翻訳伸長因子（Translation

NL1，NL3 および NL4（White et al., 1990；O’Donnell,1996）をElongation Factor; TEF）1-α 遺伝子の塩基配列の解析に供用いたダイレクトシークエンスにより塩基配列を決定した．また，した．PCR 増幅にはプライマーEF1 と EF2（O’Donnell et al.,

近 縁 菌 種 の 当 該 遺 伝 子 領 域 の DNA 塩 基 配 列 を

1998）を用いた．それぞれプライマーEF1 と EF2 を用いたダ

DDBJ/EMBL/GenBank のデータベースよりダウンロードするとイレクトシークエンスにより塩基配列を決定した．また，近縁と も に ， 日 本 産 典 型 菌 株 と し て ， F. striatum の 3 菌 株

菌 種 の 当 該 遺 伝 子 領 域 の DNA 塩 基 配 列 を（MAFF237667，MAFF237668，MAFF238974）と F. solani f.

DDBJ/EMBL/GenBank のデータベースよりダウンロードする

sp. radicicola の 1 菌株（MAFF731042），加えて F. striatum のとともに，日本産典型菌株として，F. striatum の 3 菌株

1 菌 株 （ MAFF240020 ） と F. solani f. sp. pisi の 1 菌 株（MAFF237667，MAFF237668，MAFF238974）と F. solani f.

（MAFF840047）について rDNA ITS 領域を塩基配列決定し，

sp. radicicola の 1 菌株（MAFF731042）について TEF1-α 遺そのデータも比較のために用いた．供試菌株より得た DNA

伝子領域を塩基配列決定し，そのデータも比較のために用

塩基配列は比較のための塩基配列データとともに，Clustal X

いた．供試菌株より得た DNA 塩基配列は比較のための塩（Thompson et al., 1997）でアライメントした．配列上のギャップ

基配列データとともに，Clustal X（Thompson et al.，1997）でおよび不明瞭に決定された配列部分はすべて除去し，分子アライメントした．配列上のギャップおよび不明瞭に決定され系統解析した．分子系統解析および分子系統樹の作成はソた配列部分はすべて除去し，分子系統解析した．分子系統

フトウェア PAUP*4.0b10（Swofford，2002）を用いた．一部菌解析および分子系統樹の作成はソフトウェア PAUP*4.0b10

株については，ブドウ糖加用ジャガイモ煎汁液体（ Potato（Swofford，2002）を用いた．本研究で明らかにした DNA 塩

dextrose broth; PDB）培地に移植した分離菌株を室温で 11 日

基配列は DDBJ に登録した（Accession Nos. AB498980-

間振とう培養し，DNeasy Plant Mini Kit（QIAGEN Sciences,

AB498985, AB513841, AB513843-AB513849, AB513851,

Germantown, USA）を用いて抽出した DNA に基づいて解析

AB513852）．
17栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

図 1-7 rDNA ITS 領域の DNA 塩基配列に基づいた最大節約系統樹18主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

図 1-8 TEF-1α遺伝子の DNA 塩基配列に基づいた最大節約系統樹19栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

結果
供試 3 菌株より得られた TEF1-α 遺伝子の DNA 塩基配列

急激に発芽率が高まり，6 時間後に 54.4％，8 時間後に80.2％，12 時間後には 96.1％に達した（図 1-9）．

を GenBank に登録されている F. solani 種複合体の典型菌株のデータおよび日本産典型菌株のデータを併せて解析し，最大節約法で系統樹を作成した（図 1-8）．ギャップ配列は除去して解析を行った．その結果，分離菌株は O’Donnell による F. solani 種複合体のクレード 1～3 のうちクレード 3 に属していたが，これまでに知られている F. solani 種複合体の交配群（MPⅠ～Ⅶ）のいずれとも異なる系統学的位置であった．
分離菌株は，Romberg and Davis（2007）がアメリカ，カリフォル
ニアで発生したジャガイモの Eumartii wilt およびトマトの Footrot の原因菌とした F. solani f. sp. eumartii 菌株とその TEF-1α遺伝子（597 塩基対分）の塩基配列が完全に一致あるいは
99.8％相同であった．分離菌株は Romberg and Davis（2007）
による F. solani f. sp. eumartii と同一のクレードに所属した．
５）小括
トマト立枯症状から分離した菌株は，トマトに対する病原性が認められ，原病徴が再現され，その形態的特徴から F.
solani species-complex に属すと考えられた．さらに，ジャガイ

２）トマト茎に対する病原性モに対する病原性，rDNA ITS 領域や TEF1-α 遺伝子の解析＜試験Ⅰ＞結果から，F. solani f. sp. eumartii と同定した．本菌によるトマ

材料および方法

ト病害の報告は本邦初であり，病名をトマトフザリウム株腐病ア）供試菌株と提案した（中山・青木，2010）．

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．
イ）供試トマト品種

３発生生態

品種「麗容」および「ジョイント」を供試した．

１）分生子の発芽ウ）接種
材料および方法

分離菌株を土壌ふすま培地（松尾ら，1980）で，68 日間室ア）供試菌株

温下で培養し接種源とした．ガラス温室内の 1/2000a ワグネル

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

ポットで栽培した品種「麗容」および「ジョイント」の茎（高さ約イ）分生子の発芽40～70cm）に土壌ふすま培養菌を 1 か所当たり約 20mg ずつ

分離菌株を PDA 平板培地，25℃，暗条件で 22 日間培養

接種し，接種部位をパラフィルム（PARAFILM® M, Pechiney

し，菌叢上に形成された分生子を殺菌蒸留水に懸濁し，4.2

Plastic Packaging Inc. Chicago, Illinois）で被覆した．接種は有６４×10 個/ml または 4.2×10 個/ml の分生子懸濁液とした．こ傷区，無傷区を設けた．有傷区は，トマト茎を殺菌した針の束れを PDA 平板培地に滴下しクリーンベンチ内で 30 分間乾燥で数回軽く押して傷を付けた．なお，無接種区はパラフィルム

させた後，培地をメスで切り取ってスライドグラス上に置床し，で被覆した．供試した品種「麗容」および「ジョイント」は，接種

それをペトリ皿に入れ湿室状態にしてふたを閉じた．

時はそれぞれ播種 68，78 日後で，それぞれ 15，19 葉期であ

その後，25℃，暗条件で処理 3～12 時間後まで 100 個以
上の分生子の発芽状況を経時的に観察した．処理 3～9 時間
６後の観察には 4.2×10 個/ml，10～12 時間後の観察には 4.2
４

った．
エ）調査
接種 14 日後にパラフィルムを取り除き，接種 22 日後に接×10 個/ml の分生子懸濁液をそれぞれ供試した．試験は 3種部位での発病状況を調査し，接種菌の再分離を行った．

反復で行った．なお，分生子の発芽率は，発芽管がわずかで結果も伸長した分生子を発芽分生子として算出した．

分離菌株 04T-2 土壌ふすま培養菌のトマト茎への接種によ

結果り，有傷接種だけでなく無傷接種でも品種「麗容」および「ジョ分生子の発芽は，25℃，暗条件で処理 3 時間後では認め

イント」の茎に褐色で不整形の病斑を形成し原病徴が再現さられなかった．処理 4 時間後に発芽率が 4.0％となり，その後れ（図 1-10），病斑部から接種菌が再分離された．また，両品20主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

種とも茎の無病徴部位からも接種菌が再分離され，接種菌はウ）接種

茎の全接種部位から分離された．

分離菌株 04T-2 を PDA 平板培地，25℃，暗条件で 8 日間

供試品種の比較では，無傷接種，有傷接種とも台木品種

培養し，分生子を殺菌蒸留水に懸濁し 8.0×10５個/ml の分生「ジョイント」の発病率が，穂木品種「麗容」に比較してやや高子懸濁液とした．これを接種源とし，ガラス温室内の 1/2000a

かった（表 1-12）．なお，無接種区では両品種とも茎に病徴はワグネルポットで栽培した品種「麗容」および「ジョイント」の茎認められなかった．

にペーパークロマトグラフ用噴霧器で無傷接種し，接種部位＜試験Ⅱ＞をパラフィルムで 24 時間被覆した．対照としてパラフィルムで材料および方法

被覆しない区を設けた．なお，無接種区は殺菌蒸留水を噴ア）供試菌株霧した．

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

エ）調査イ）供試トマト品種

接種 28 日後に接種部位での発病状況を調査し，接種菌

品種「麗容」および「ジョイント」を供試した．

の再分離を行った．供試した品種「麗容」および「ジョイント」

b
c

b

a

c
図 1-10 トマトフザリウム株腐病菌（Fusarium solani f. sp. eumartii, 04T-2 菌株）によるトマト茎での原病徴再現（a，b：自然発生したトマト茎での褐変症状．a：穂木「マイロック」，台木「ブロック」，
b：穂木「CF 桃太郎はるか」，台木「ブロック」），c：接種したトマト茎での病徴．穂木品種「麗容」）

21

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

表1-12 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）土壌ふすま培養菌のトマト茎に対する病原性
処理区

接 種

無接種

品種名

接種法 接種か所数

発病数a)

無病徴・再分離数a, b)

無感染数a, c)

麗容

有傷

10

5(50)

5(50)

0(0)

麗容

無傷

10

4(40)

6(60)

0(0)

ジョイント

有傷

10

8(80)

2(20)

0(0)

ジョイント

無傷

10

5(50)

5(50)

0(0)

d)

－d)

麗容

有傷

10

0

－

麗容

無傷

10

0

－

－

ジョイント

有傷

10

0

－

－

ジョイント

無傷

10

0

－

－

a)カッコ内の単位は％を表す．
b)無病徴だが接種菌が再分離されたもの．
c)無病徴で接種菌も再分離されないもの．
d)接種菌の再分離は未実施．
表1-13 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）分生子懸濁液のトマト茎に対する病原性（無傷接種）
処理区

接 種

無接種

品種名

被覆

接種か所数

麗容

有

15

発病数a)

無病徴・再分離数a, b)2(13.3)

無感染数a, c)3(20.0)10(66.7)

麗容

無

15

0

0

15(100)

ジョイント

有

15

5(33.3)5(33.3)5(33.3)

ジョイント

無

15

0

1(6.7)

14(93.3)

d)

麗容

有

10

0

－

－d)

ジョイント

有

10

0

－

－

a)カッコ内の単位は％を表す．
b)無病徴だが接種菌が再分離されたもの．
c)無病徴で接種菌も再分離されないもの．
d)接種菌の再分離は未実施．
は，接種時は播種 62 日後で両品種とも 20 葉期であった．
結果
分離菌株 04T-2 分生子懸濁液の茎への無傷接種により，められなかった．
３）トマト花器，果実に対する病原性＜試験Ⅰ＞

品種「麗容」，「ジョイント」の両品種ともパラフィルムで被覆し材料および方法

た区では茎の接種部位に褐色で不整形の病斑がそれぞれ

ア）供試菌株

13.3％，33.3％形成された（表 1-13）．茎の病斑部からは接種

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

菌が再分離された．なお，両品種とも病徴が認められない接イ）供試トマト品種

種部位からも接種菌が再分離された．

品種「麗容」を供試した．

パラフィルムで接種部位を被覆しなかった区では，両品種ウ）接種

とも病斑の形成は認められなかった．ただし，品種「ジョイント」

分離菌株 04T-2 を PDA 平板培地，25℃，暗条件で 10 日

では，1 か所の接種部位から接種菌が再分離された．品種

間培養し，分生子を殺菌蒸留水に懸濁し 7.5×10５個/ml の「ジョイント」は，品種「麗容」に比較して接種部位の発病率，

分生子懸濁液とした．これを接種源にして，殺菌土壌を詰め

無病徴な部位から接種菌が再分離された割合ともやや高かた 1/2000a ワグネルポットで栽培したトマト品種「麗容（穂木品

った（表 1-13）．なお，無接種区では両品種とも茎に病徴は認種）」の花器および果実（直径 20～30mm）にペーパークロマト22

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

グラフ用噴霧器で接種した．

離された．また，無傷接種において，病徴が認められない果

供試した品種「麗容」は，接種時は播種 72 日後で 12～13実の花柱基部付近からも接種菌が再分離され，その割合は葉期のものとした．接種は有傷区および無傷区を設けた．有

供試果実の 50.0%に達した（表 1-14）．なお，対照とした無接傷区は，殺菌した針の束（昆虫針 4 号，約 60 本，以下同じ）

種区の果実では病徴は認められなかった．

で果実の果頂部を数回軽く押して傷を付けた．花器は無傷＜試験Ⅱ＞区のみとした．対照は殺菌蒸留水を花器および果実へ噴霧

材料および方法

した．接種後，花器および果実をポリエチレン袋で 21 時間覆ア）供試菌株い，湿室状態とした．その後，ポリエチレン袋を取り除き，ガラ

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

ス温室内で管理した．

イ）供試トマト品種エ）調査

品種「麗容」を供試した．

接種 13 日後に果実，21 日後に花器での発病状況をそれウ）接種

ぞれ調査し，接種菌の再分離を行った．なお，接種菌の再分分離菌株 04T-2 の 5.5×10５個/ml に調整した分生子懸濁離は果頂部位を約 3mm 角に切り取り，または花器の雌蕊を液を，殺菌土壌を詰めた 1/2000a ワグネルポットで栽培した品

長さ約 3mm に切断し，それを 70%エタノールに約 30 秒間浸種「麗容」の異なる大きさの果実（小：直径 30～45mm，または漬して表面殺菌し，殺菌蒸留水で洗浄し殺菌濾紙で水滴をと

中：50～65mm）にペーパークロマトグラフ用噴霧器でそれぞった後，PDA 培地へ置床した．以後の試験においても接種菌

れ無傷接種した．供試した品種「麗容」は，接種時は播種 99の再分離は同様に行った．

日後で 21～22 葉期のものとした．接種した果実をポリエチレ
ン袋で 18 時間覆い，湿室状態で保持した．

結果
分離菌株 04T-2 の接種により，品種「麗容」の花器では柱その後，ポリエチレン袋を取り除き，ガラス温室内で管理し頭付近から褐変がはじまり，しだいに枯死し落花するものがた．

認められた．接種に供試した花器の 80.8%で発病が認められ，

エ）調査

病斑部から接種菌が再分離された．また，花器では，無病徴接種 7 日後に果実での発病状況を調査し，接種菌の再分であるが接種菌の再分離された個体が供試した花器の 3.8%離を行った．

で確認された（表 1-14）．対照とした無接種区の花器では病結果徴は認められなかった．

試験Ⅰで無傷接種した果実においても病原性が認められ果実については，有傷接種では供試した品種「麗容」の全たことから，それを再確認するために試験Ⅱを実施した．分離

果実で果実腐敗がみられたのに対し，無傷接種では発病率

菌株 04T-2 を品種「麗容」の異なる大きさの果実に無傷接種が 12.5 %であり，有傷接種に比較して発病率は著しく低かっしたところ，供試果実「小（直径 30～45mm）」，「中（直径 50～た．果実での病徴は，はじめ果頂部の花柱基部付近に水浸65mm）」のそれぞれ 9.1%，34.8%に病徴が認められ，病斑部状の褐変した病斑を生じ，しだいに果梗部へ拡大し果実腐敗から接種菌が再分離された（表 1-15）．

を呈した（図 1-11）．発病果実の病斑部からは接種菌が再分接種に供試した果実のうち，病徴が認められない果実から

表1-14 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）のトマトa)花器，果実に対する病原性
処理区
接 種

無接種

接種部位

接種法

供試数

発病数b)

無病徴・再分離数b,c)

花器

無傷

26

21(80.8)1(3.8)

4(15.4)

果実

有傷

26

26(100)

0(0)

0(0)

果実

無傷

24

3(12.5)12(50.0)9(37.5)

花器

無傷

35

0

0

35

果実

有傷

21

0

0

果実

無傷

20

0

－

無感染数b,d)

21
e)

－e)

a)品種「麗容」を供試した．
b)カッコ内の単位は％を表す．
c)無病徴だが接種菌が再分離されたもの．
d)無病徴で接種菌も再分離されないもの．
e)接種菌の再分離は未実施．

23

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

図 1-11 トマトフザリウム株腐病菌（Fusarium solani f. sp. eumartii, 04T-2 菌株）を接種したトマト果実
での病徴（品種「麗容」）

表1-15 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）の異なる大きさのトマト果実（品種「麗容」）に対する病原性（無傷接種）
処理区

果実の大きさa)

供試数

発病数b)

無病徴・再分離数b, c)

無感染数b, d)30-45mm222(9.1)

9(40.9)11(50.0)50-65mm238(34.8)6(26.1)9(39.1)

接 種
無接種

30-45mm260－50-65mm

21

0

－

e)

－e)
－

a)果実の直径．
b)カッコ内の単位は％を表す．
c)無病徴だが接種菌が再分離されたもの．
d)無病徴で接種菌も再分離されないもの．
e)接種菌の再分離は未実施．

表1-16 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）接種後の経過時間とトマト果実a)発病（有傷接種）
処理区

供試数

接 種
無接種

12

24

36

48

72

96hrsc)

20

0

0

0

8(40.0)17(85.0)19(95.0)

20

0

0

0

0

0

0

a)品種「麗容」b)カッコ内の単位は％を表す．
c)接種後の経過時間を表す．

24

発病数b)

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

も接種菌が再分離され，その割合はそれぞれ供試果実の対 策 に 役 立 て るた め， ト マ ト に 農 薬 登 録 の あ る主 要 薬

40.9%，26.1%であった．発病果実および無病徴であるが接剤 を供 試 して本 病 菌 の薬 剤 感 受 性 を検 討 した．

種菌の再分離された果実の合計は，供試果実のうち「小」が１） 最小生育阻止濃度（Minimum Inhibitory Concentration：

50.0%，「中」が 60.9%であった（表 1-15）．なお，無接種区でMIC）

は病徴は認められなかった．

材料および方法＜試験Ⅲ＞ア）供試菌株
材料および方法

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-1，04T-2 および

ア）供試菌株

04T-3 の 3 菌株を供試した．

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．
イ）供試トマト品種イ）供試薬剤
ベノミル水和剤，チオファネートメチル水和剤，イプロジオ

品種「麗容」を供試した．

ン水和剤，トリフルミゾール水和剤，イミノクタジンアルベシルウ）接種

酸塩水和剤，アゾキシストロビン水和剤およびキャプタン水和

ガラス温室内の 1/5000a ワグネルポットで栽培した品種「麗剤の計 7 薬剤を供試した．

容」の果実（直径約 35mm）を採取し，それらに分離菌株 04T-ウ）検定

2 を有傷接種した．有傷接種は，果実の果頂部を殺菌した針分離菌株 04T-1，04T-2 および 04T-3 を PDA 培地で前培６の束で数回軽く押して傷を付け，2.0×10 個/ml に調整した養し，それぞれの菌叢をコルクボーラー（直径 4mm）で打ち抜

分生子懸濁液を果実当たり 40～60µl ずつ果頂部に滴下し行き，薬剤添加培地へ菌叢面を下にして置床し，25℃，暗条件

った．なお，対照区は殺菌蒸留水を果頂部へ滴下した．

で培養した．なお，薬剤添加培地は，供試薬剤の有効成分エ）調査がそれぞれ 1.56，3.13，6.25，12.5，25，50，100，200，400，

接種後，直ちに湿室状態とし，25℃，暗条件下に置き，12，

800，1600µg/ml となるように 2 倍段階希釈により PDA 培地で24，36，48，72 および 96 時間後に発病状況を調査した．
結果採取した品種「麗容」の果実に分離菌株 04T-2 の分生子懸濁液を接種し，25℃，暗条件での発病状況を経時的に調査したところ，接種 12～36 時間後までは発病がみられなかった作製した．対照は供試菌株を薬剤無添加培地（PDA 培地）へ置床した．1 処理当たりペトリ皿は 1 枚供した．
エ）調査
置床 2 日後および 5 日後に供試菌株の菌糸伸長の有無を調査し，最小生育阻止濃度（MIC）を判定した．

が，接種 48 時間後には供試果実の 40.0%に接種部位である

結果

果頂部から果実腐敗が認められ，72 時間後には 85.0%，96

各薬剤添加培地への置床 2 日後，供試した 3 菌株の MIC

時間後には 95.0%となった（表 1-16）．なお，無接種区では病は，ベノミル水和剤，チオファネートメチル水和剤がそれぞれ徴は認められなかった．

25µg/ml，トリフルミゾール水和剤が 400µg/ml であった．イプ

４）トマト市販種子からの分離

ロジオン水和剤，イミノクタジンアルベシル酸塩水和剤，アゾ

材料および方法

キシストロビン水和剤およびキャプタン水和剤は 3 菌株とも

市販種子であるトマト台木品種「がんばる根 3 号」の種子を1600µg/ml で菌糸伸長が認められ，MIC は 1600µg/ml より大種子袋からピンセットで取り出し，それぞれ駒田培地（駒田，きいと判定した．なお，置床 5 日後では，供試した 3 菌株はい

1980）および PDA 平板培地に置床し，25℃，暗条件で培養ずれの供試薬剤とも MIC が 1600µg/ml より大きかった（表 1-

し，置床 14 日後に種子からの Fusarium 属菌の検出状況を17）．

調査した．駒田培地には計 308 粒，PDA 平板培地には計 293

２）チオファネートメチル剤に対する感受性粒を供試した．なお，種子袋にはキャプタン剤処理済との記載があった．

材料および方法ア）供試菌株

結果

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-1，04T-2，04T-3

駒田培地，PDA 平板培地のいずれの培地とも，置床したおよび他の県内分離菌株 13 菌株を用いた．なお，この 13 菌

種子からの Fusarium 属菌の検出は認められなかった．

株についてはトマト主要産地から発病株を採取し，常法により病原菌を分離し単胞子分離した後，菌の形態観察およびトマ

４

薬剤感受性
ト マ ト フ ザ リ ウ ム 株 腐 病 菌 に つ いて は ， こ れ ま で 有 効

な防 除 薬 剤 に関 する知 見 はない．そこで，今 後 の防 除トに対する病原性を確認した．
イ）供試薬剤
チオファネートメチル水和剤を供試した．
25

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号ウ）検定

対照は供試菌株を PDA 平板培地へ置床した．1 処理当たり

供試菌株（計 16 菌株）を PDA 培地で前培養し，それぞれ

ペトリ皿は 5 枚供した．

の菌叢をチオファネートメチル水和剤の有効成分がエ）調査

100µg/ml，400µg/ml になるように添加した PDA 平板培地へ

置床 5 日後にそれぞれの菌叢直径を計測し，次式により菌菌叢面を下にして置床し，25℃，暗条件で培養した．対照は糸伸長抑制率を算出した．

供試菌株を PDA 平板培地へ置床した．1 処理当たりペトリ皿
は 3 枚供した．

菌糸伸長抑制率＝100－［（各処理区の菌叢直径－4mm）エ）調査/（対照区の菌叢直径－4mm）］×100

置床 6 日後に供試菌株の菌糸伸長の有無を調査した．
結果

結果

MIC の置床 5 日後調査では，ベノミル水和剤およびチオフ

分離菌株 04T-2 は，前記の主要薬剤を実用濃度に設定しァネートメチル水和剤とも MIC は 1600µg/ml より大きいと判定

た各薬剤添加培地において菌糸の伸長が認められた．菌糸されたが，置床 2 日後調査ではベノミル水和剤およびチオフ

伸長抑制率は，アゾキシストロビン水和剤で 35.6％と低かったァネートメチル水和剤とも有効成分 25µg/ml で供試菌株の菌が，トリフルミゾール水和剤，キャプタン水和剤はそれぞれ

糸伸長が認められなかった．そのため，ベノミル水和剤およ94.0％，ベノミル水和剤，チオファネートメチル水和剤はそれ

びチオファネートメチル水和剤は供試菌株 04T-1，04T-2 およ

ぞれ 91.8％，86.8％と高かった（表 1-17）．

び 04T-3 以外の菌株に対して実用濃度付近で菌糸伸長を抑

４）分生子の発芽抑制

制する可能性もあると考えられた．そこで，チオファネートメチ

材料および方法

ル水和剤を供試薬剤とし，計 16 菌株を供試して有効成分ア）供試菌株

100µg/ml，400µg/ml における菌糸伸長の有無を調査した．

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

その結果，供試した計 16 菌株は，いずれもチオファネートメ

イ）供試薬剤

チル水和剤の 100µg/ml，400µg/ml で菌糸伸長がみられ，分

ベノミル水和剤，チオファネートメチル水和剤，イプロジオ

離菌株の違いによって感受性に差は認められなかった（表 1-

ン水和剤，トリフルミゾール水和剤，イミノクタジンアルベシル

18）．なお，供試菌株は，両濃度での菌糸伸長は認められた

酸塩水和剤，アゾキシストロビン水和剤，キャプタン水和剤のが，それぞれの菌糸伸長量は強く抑制されていた．

計 7 薬剤を供試した．

３）菌糸伸長抑制率ウ）検定
材料および方法

分離菌株 04T-2 を PDA 培地で前培養し殺菌蒸留水を加ア）供試菌株

えて分生子懸濁液の濃度を 106 個/ml に調整した．これをトマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

0.5µl ずつ実用濃度（３）のウ）に同じ）に設定した各薬剤添加イ）供試薬剤培地へ滴下した．対照は分生子懸濁液を PDA 培地へ滴下しベノミル水和剤，チオファネートメチル水和剤，イプロジオ

た．1 処理当たりペトリ皿は 5 枚供した．

ン水和剤，トリフルミゾール水和剤，イミノクタジンアルベシルエ）調査

酸塩水和剤，アゾキシストロビン水和剤，キャプタン水和剤の25℃，暗条件で 5 日間培養した後，それぞれ 100 個以上

計 7 薬剤を供試した．
ウ）検定の分生子について発芽の有無を調査した．なお，発芽管がわずかでも伸長した分生子を発芽分生子とした．

分離菌株 04T-2 を PDA 培地で前培養し，その菌叢をコル

結果

クボーラー（直径 4mm）で打ち抜き，各薬剤がそれぞれ実用

分離菌株 04T-2 は，キャプタン水和剤を実用濃度に設濃度となるように添加した PDA 平板培地へ菌叢面を下にして定した PDA 培地上では分生子の発芽が認められなかった

置床し，25℃，暗条件で培養した．実用濃度として，ベノミル（表 1-17）．他の薬剤では，調査した分生子のすべてで発水和剤 2000 倍（有効成分 250µg/ml に相当，以下同じ），チ

芽が確認され，供試薬剤の違いによって発芽率に差は認

オファネートメチル水和剤 1500 倍（467µg/ml），イプロジオン

められなかった．

水和剤 3000 倍（167µg/ml），トリフルミゾール水和剤 3000 倍（100µg/ml），イミノクタジンアルベシル酸塩水和剤 2000 倍（200µg/ml），アゾキシストロビン水和剤 2000 倍（100µg/ml），
キャプタン水和剤 800 倍（1000µg/ml）にそれぞれ設定した．
26

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-17

トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii ）の薬剤感受性
最小生育阻止濃度(µg/ml) a)

菌糸伸長抑制率（%） b）c）

分生子発芽 b）d）

1600<

91.8

＋

1600<

86.8

＋

1600<

1600<

65.2

＋

400

1600<

94.0

＋

イミノクタジンアルベシル酸塩水和剤

1600<

1600<

68.5

＋

アゾキシストロビン水和剤

1600<

1600<

35.6

＋

キャプタン水和剤

1600<

1600<

94.0

－

供試薬剤

２日後

５日後

ベノミル水和剤

25

チオファネートメチル水和剤

25

イプロジオン水和剤
トリフルミゾール水和剤

対照＋a)分離菌株04T-1，04T-2，04T-3を供試した．
b)分離菌株04T-2を供試した．
c)各薬剤添加培地への置床５日後に調査した．
d)分生子の発芽が認められたものを＋，認められなかったものを－とした．

表1-18 栃木県内から分離したトマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium
solani f. sp. eumartii ）のチオファネートメチル剤に対する感受性
チオファネートメチル水和剤ａ）
100µg/ml
400µg/ml
04T-1
＋
＋
＋
04T-2
＋
＋
＋
04T-3
＋
＋
＋
07KT-1＋＋＋07MT-1＋＋＋07MT-2＋＋＋07MT-3＋＋＋07ST-5＋＋＋07ST-6＋＋＋
07UT-1＋＋＋
07UT-2＋＋＋
07UT-3＋＋＋
07UT-4＋＋＋
07UT-5＋＋＋
07UT-6＋＋＋
07UT-7＋＋＋a)菌糸の伸長が認められたものを＋とした．
供試菌株

５

対照a)

ジャガイモ利用による他土壌病原菌との識別

トマトフザリウム株腐病菌は，トマトのみでなくジャガイモにト マ トフ ザリウ ム株 腐 病 は，土壌病害のため発病後の防対しても病原性を有し，その茎基部に褐色で腐敗した病斑を除手段は限られている．そのため，トマト作付前に栽培圃場

生ずる（Romberg and Davis，2007; 中山・青木，2010）．そこが本菌に汚染されているかどうかを判定する技術の開発は，で，ジ ャガイモマ イクロ チ ューバ ーを用 いて本 菌 を土 壌

本病の防除対策を構築するうえで極めて有用性が高いと考から簡 易 に検 出 する方 法 の開 発 に取 り組 んだ．

えられる．

１）ジャガイモ各品種に対する病原性第 1 章の冒頭部分で述べたように，これまで各種病原菌で材料および方法

土壌からの簡易な検出技術開発への取り組みが行われてきア）供試菌株た．しかし，現状ではトマト栽培圃場における本菌の有無を簡

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

易に判定できる有効な手段はない．

イ）供試ジャガイモ品種
品種「男爵薯」，「ニシユタカ」，「農林１号」および「メークイン」の計 4 品種を供試した．
27

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

ウ）接種

２）土壌の保菌程度と発病分離菌株 04T-2 を土壌ふすま培地で 25℃，27 日間培養材料および方法後，殺菌土壌（110℃，70 分，オートクレーブ処理）に重量でア）供試菌株

0.5％の割合で混和し，保菌土壌を作製した．ジャガイモ各品

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

種のマイクロチューバーを，保菌土壌を入れた黒ポリポットイ）供試ジャガイモ品種（直径 15cm，以下同じ）にそれぞれ植え付けた．

品種「男爵薯」を供試した．

供試したマイクロチューバーは，品種「男爵薯」が直径 10ウ）接種～12mm，品種「ニシユタカ」が 12～13mm，品種「農林 1 号」

分離菌株04T-2を土壌ふすま培地で室温，31日間培養後，が 12～13mm，品種「メークイン」が 14～18mm×7～10mm で殺菌土壌にそれぞれ0，0.05，0.1，0.5，1％の割合で混和し，あった．試験はガラス温室内（15～35℃，以下同じ）で行った．

保菌土壌を作製した．品種「男爵薯」のマイクロチューバーをマイクロチューバーは各品種とも 13 個ずつ供試した．対照とそれぞれの保菌土壌を入れた黒ポリポットに植え付けた（土して，本菌を含まない殺菌土壌を用いて各品種 5 個ずつ供壌接種）．試験はガラス温室内で行った．

試した．

エ）調査

エ）調査

接種55日後に株を抜き取り地下部の発病状況を調査した．

接種 35 日後に株を抜き取り地下部の発病状況を調査した．

マイクロチューバーは各区15個ずつ供試した．病斑がみられまた，病斑がみられたすべての接種植物について，病斑部かたすべての接種植物について，病斑部から接種菌の再分離

ら接種菌の再分離を行った．再分離は，病斑部を水道水でを行った．

十分に洗浄した後，約 3mm 角に切り取り，70％エタノールに結果

約 30 秒間浸漬後，殺菌蒸留水で洗浄し，殺菌濾紙で水滴を本菌の殺菌土壌への混和割合が 0.05～1％のいずれにお取り除いてから PDA 培地に置床した．分離菌の形態的な特いても，品種「男爵薯」のマイクロチューバーから萌芽した植徴から接種菌と同一かどうかを判定した．

物体の茎基部と根の境界付近が淡褐色～褐色となり腐敗し結果た．混和割合に応じて発病率が高くなる傾向がみられた（表「男爵薯」，「ニシユタカ」，「農林1号」，「メークイン」のいず

1-20）．また，接種植物の病斑部から接種菌が再分離された．

れの品種とも，マイクロチューバーから萌芽した植物体の茎

３）保菌土壌への植え付け後日数と発病

基部と根の境界付近，または植え付けたマイクロチューバー

材料および方法

が淡褐色～褐色に変色し腐敗した．植え付け35日後におけア）供試菌株る各品種の発病率は，「男爵薯」，「メークイン」が100％，「ニトマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

シユタカ」が92.3％，「農林1号」は23.1％であった（表1-19）．

イ）供試ジャガイモ品種

接種植物の病斑部から接種菌が再分離された．なお，無接品種「男爵薯」を供試した．

種区では，いずれの品種も病徴は認められなかった．

表1-19 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）のジャガイモ各品種に対する病原性
処理区

接種

無接種

品種名

供試数

発病数a)

発病率（%）

男爵薯

13

13

100

ニシユタカ

13

12

92.3

農林1号

13

3

23.1

メークイン

13

13

100

男爵薯

5

0

0

ニシユタカ

5

0

0

農林1号

5

0

0

メークイン

5

0

0

a)ジャガイモの茎基部と根との境界付近，または植え付けたマイクロチューバーに病徴が認められたもの．

28

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-20 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp.
eumartii , 04T-2菌株）の保菌程度とジャガイモ「男爵薯」の発病状況
処理区a)

供試数

発病数b)

発病率(%）

1%

15

12

80.0

0.5%

15

13

86.7

0.1%

15

6

40.0

0.05%

15

4

26.7

0%

15

0

0

a)分離菌株04T-2土壌ふすま培養菌の殺菌土壌への混和割合を表す．
b)ジャガイモの茎基部と根との境界付近，または植え付けたマイクロチューバーに病徴が認められたもの．
表1-21 トマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii ） ａ）
保菌土壌へのジャガイモ植え付け後日数と発病状況
発病数/供試数ｂ)
14日後c）

20日後c）

27日後c）

35日後c）

接種

8/13(61.5)

12/13(92.3)

12/13(92.3)

13/13(100)

無接種

0/5(0)

0/5(0)

0/5(0)

0/5(0)

a)分離菌株04T-2b)品種「男爵薯」のマイクロチューバーを供試した．
c)ジャガイモの茎基部と根との境界付近，または植え付けたマイクロ
チューバーに病徴が認められたもの．カッコ内は％を表す．

表1-22 供試菌（トマト各種土壌病原菌）
病

名

病原菌名

菌株名

MAFF №

採集地

トマトフザリウム株腐病

Fusarium solani f. sp. eumartii

04T-2

240346

栃木県

トマト萎凋病F . oxysporum f. sp. lycopersici

宇都宮103042

栃木県

トマト根腐萎凋病

F . oxysporum f. sp. radicis -lycopersici

RJN1

238905岐阜県

トマト立枯病

Haematonectria ipomoeae （F . striatum ）MTN-4239972

宮崎県

トマト株腐病

Rhizoctonia solani

O1-1241953北海道ウ）接種

況を調査した．病斑がみられたすべての接種植物について，分離菌株 04T-2 を土壌ふすま培地で 25℃，27 日間培養

病斑部から接種菌の再分離を行った．

後，殺菌土壌に 0.5％の割合で混和し，保菌土壌を作製した．

結果

保菌土壌を入れた黒ポリポットに品種「男爵薯」のマイクロチ

マイクロチューバーの保菌土壌への植え付け14日後にューバーを植え付けた（土壌接種）．試験はガラス温室内では，マイクロチューバーの表面に直径1～3mmのほぼ円形行った．マイクロチューバーは各区 13 個ずつ供試した．対照でやや陥没した灰褐色の病斑が形成され，萌芽した植物として，本菌を含まない殺菌土壌を用いた．

体の根部の一部に褐変が認められた．植え付け20日後でエ）調査

は，植え付けたマイクロチューバーでの病徴がさらに進接種 14，20，27，35 日後に株を抜き取り，地下部の発病状

展し軟化腐敗を呈するとともに，萌芽した植物体の茎基

29栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

部に褐変腐敗が認められた．植え付け20日後以降，ほぼす

れぞれ土壌ふすま培地で25℃，70日間培養し，1/5000aワグ

べての株に病徴がみられた（表1-21）．また，接種植物のネルポット中の殺菌土壌にそれぞれ1％の割合で混和し保菌

病斑部から接種菌が再分離された．なお，無接種区では病土壌とした後，品種「男爵薯」のマイクロチューバーを植え付

徴は認められなかった．

けた（土壌接種）．マイクロチューバーは各区12個ずつ供試し

４）各種土壌病原菌のジャガイモに対する病原性

た．

＜試験Ⅰ＞

エ）調査
材料および方法

接種36日後に株を抜き取り地下部の発病状況を調査しア）供試菌

た．病斑がみられたすべての接種植物について，病斑部か

トマトフザリウム株腐病菌，トマト萎凋病菌（F. oxysporum f.

ら接種菌の再分離を行った．

sp. lycopersici ）， ト マ ト根 腐 萎凋 病 菌（ F. oxysporum f. sp.

結果radicis-lycopersici ） ， ト マ ト 立 枯 病 菌 （ Haematonectria

トマトフザリウム株腐病菌，トマト立枯病菌のジャガイモへのipomoeae ： 異 名 F. striatum ） お よ び ト マ ト 株 腐 病 菌

土壌接種の結果，両菌とも品種「男爵薯」の茎基部，特に根（Rhizoctonia solani）を供試した（表 1-22）．

部との境界付近が褐変腐敗を呈し，発病率はそれぞれ

イ）供試ジャガイモ品種

58.3％，33.3％であった（表 1-24）．また，接種植物の病斑部

品種「男爵薯」を供試した．

から接種菌が再分離された．なお，無接種区では病徴は認ウ）接種

められなかった．

各種土壌病原菌を土壌ふすま培地で25℃，25日間培養後，1/5000aワグネルポット中の殺菌土壌にそれぞれ1％の割合で６

嫌気的発酵処理による不活化

混和し，品種「男爵薯」のマイクロチューバーを植え付けた

植 物 病 害 の防 除 対 策 上 ，罹 病 残 渣 の適 切 な処 理

（土壌接種）．試験はガラス温室内で行った．マイクロチューは病 原 菌 の伝 染 環 を断 ち切 る有 効 な手 段 の一 つであ

バーは各区14～16個ずつ供試した．

る．第 1 章 の冒 頭 部 分 で述 べたように，他 の病 害 ではエ）調査

罹 病 残 渣 中 の病 原 菌 の不 活 化 に嫌 気 的 発 酵 処 理 が接種41日後に株を抜き取り地下部の発病状況を調査した．

有 効 であるとの報 告 がある．

病斑がみられたすべての接種植物について，病斑部から接種菌の再分離を行った．

そ こ で，嫌 気 的 発 酵 処 理 によ るト マ ト フ ザ リウ ム株 腐病 菌 の不 活 化 について検 討 した．

結果

１）トマトフザリウム株腐病罹病切片の作製

供試した5種土壌病原菌のうち，トマトフザリウム株腐病菌，

材 料 および方 法

トマト立枯病菌およびトマト株腐病菌は，品種「男爵薯」に対ア）供 試 菌 株する病原性が認められた（表1-23）．トマト立枯病菌は，品種

トマトフザリウム株腐病菌の分 離 菌 株 04T-2 を供 試 した．

「男爵薯」の萌芽した植物体の茎基部，特に根部との境界付イ）供試罹病切片の作製

近にトマトフザリウム株腐病菌による病徴と類似した淡褐色～

トマトへの接種は，分離菌株 04T-2 を土壌ふすま培地で褐色に変色する腐敗を呈し，病徴の違いによる両菌の識別

25℃，59 日間培養し，それを 1/2000a ワグネルポット中の殺は困難であった（図1-12）．トマト株腐病菌は，品種「男爵薯」

菌土壌に重量で 1％の割合になるよう混和し保菌土壌としたの匐枝に褐色で条状の病斑が形成された．また，接種植物後，殺菌土壌で育苗したトマト苗(品種「ジョイント」，約 2.0 葉の病斑部から接種菌が再分離された．なお，無接種区では期)を移植した（土壌接種）．接種 137 日後に株を抜き取り，ト

病徴は認められなかった．

マトの主根に形成された病斑を約 3mm×3mm×1mm に切り＜試験Ⅱ＞出して罹病切片とした．
材料および方法

罹病切片を不織布の袋（ふんわりお茶パック®M，ア）供試菌

9.5×7.0cm；株式会社トキワ工業，四国中央）に 9 切片ずつ詰

トマトフザリウム株腐病菌およびトマト立枯病菌を供試した．

め，それをポリ袋に入れて冷蔵庫（6℃）内で保存し，以後のイ）供試ジャガイモ品種試験に供した．

品種「男爵薯」を供試した．
ウ）接種
トマト立枯病菌の品種「男爵薯」に対する病原性を再確認するため，トマトフザリウム株腐病菌およびトマト立枯病菌をそ
30

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

図 1-12 ジャガイモ品種「男爵薯」の地下部病徴
左：トマトフザリウム株腐病菌（04T-2 菌株）接種，右：トマト立枯病菌（MTN-4 菌株）接種

表1-23 トマト各種土壌病原菌のジャガイモ品種「男爵薯」に対する病原性（土壌接種）
菌株名

供試数

発病数a)

発病率（%）

Fusarium solani f. sp. eumartii

04T-2

16

8

50.0

F . oxysporum f. sp. lycopersici

宇都宮

15

0

0

F . oxysporum f. sp. radicis - lycopersici

RJN1

16

0

0

F . striatum

MTN-4

14

5

35.7

Rhizoctonia solani

O1-1

15

7

46.7

無接種

－

16

0

0

病原菌名

a)ジャガイモの茎基部と根との境界付近に病徴が認められたもの．ただし，Rhizoctonia solani
接種区では匐枝に病徴が認められたものを示す．

表1-24 2種Fusarium 属菌のジャガイモ品種「男爵薯」に対する病原性（土壌接種）
菌株名

供試数

発病数a)

発病率（%）

Fusarium solani f. sp. eumartii

04T-2

12

7

58.3

F . striatum

MTN-4

12

4

33.3

－

12

0

0

病原菌名

無接種

a)ジャガイモの茎基部と根との境界付近に病徴が認められたもの．

31

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

２）嫌気的発酵処理による不活化

＜試験Ⅱ＞

＜試験Ⅰ＞

材料および方法
材料および方法ア）供試菌株ア）供試菌株トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

トマトフザリウム株腐病菌の分離菌株 04T-2 を供試した．

イ）不活化

イ）不活化

本試験では，トマト栽培圃場から採取した葉を試験 1 と同トマト栽培圃場から採取した葉をポリ袋（ポリ規格袋 No. 11，

規格のポリ袋に 300g ずつ詰め，その中心部に罹病切片入り

0.03×200×300mm；株式会社シモジマ，台東区）に 350g ずつの袋を置いた．ポリ袋にはトマト葉の重さの 50％となるよう詰め，その中心部に罹病切片入りの袋を置いた．なお，トマト

150ml の水道水を添加した区と添加しない区を設けた．以後

葉は，嫌気的発酵処理による本菌不活化の実用場面を想定の処理は試験 1 に準じ，嫌気的発酵区と対照区を設けた．まし供試した．ポリ袋にはトマト葉の重さの 50％となるよう 175ml

た，処理期間は 0，28，56，84，112，140 日間の 6 段階としの水道水を添加した区と添加しない区を設けた．

た．

嫌気的発酵区では，ポリ袋内の空気を排出し，ひもで口を結果縛って密封した．それを同規格のポリ袋に入れ，空気を排出

対照区では，20℃，25℃のいずれも水添加の有無にかか

し，ひもで口を縛って密封した．対照区は，ポリ袋の口をひもわらず，0，28，56，84，112，140 日経過後， Fo-G2 培地上

で縛らず開放状態とした．これを 20℃または 25℃で，暗条件

で罹病切片からの本菌の菌糸伸長が認められた（表 1-26）．

に設定したインキュベーター内に置いた．

嫌気的発酵区については，20℃では処理 140 日後でも罹処理期間は 0，14，28，42，56 日間の 5 段階とした．処理

病切片から本菌の菌糸伸長が認められた．25℃では，処理後，各ポリ袋から罹病切片を入れた袋を取り出し，罹病切片

112 日後まで本菌の菌糸伸長がみられたが，140 日後には水から殺菌濾紙で水滴を取った後，罹病切片を Fo-G2 培地（西添加の有無にかかわらず，Fo-G2 培地上で罹病切片からの村，2008）に置床した．20℃，暗条件で 14 日間培養し，罹病本菌の菌糸伸長は認められなかった（表 1-26）．

切片からの菌糸伸長や分生子形成の有無を調査し，本菌の生存の有無を判定した．

７

考察

結果

2004 年 5～6 月，栃木県宇都宮市および真岡市の施設栽

対照区では，20℃，25℃とも水添加の有無にかかわらず，

培トマトで茎の基部および主根が激しく褐変腐敗し，病勢が0，14，28，42,56 日経過後も罹病切片から Fo-G2 培地上で進展すると立枯症状を呈する病害が発生した．病斑部からの本菌の菌糸伸長が認められた．同様に，嫌気的発酵区のFusarium 属菌が高率に分離され，分離菌株の土壌接種によいずれの処理区も，罹病切片から本菌の菌糸伸長が認めらりトマトでの原病徴が再現され，接種菌が再分離された．また，れた（表 1-25）．

分離菌株は，土壌接種によりジャガイモ茎の基部や塊茎の表

表1-25 嫌気的発酵処理のトマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）に対する防除効果（試験Ⅰ）
処理区

嫌気的発酵

対 照

処理温度

水添加

（℃）

の有無

処
0日
a)

理

日

数

14日後

28日後

42日後

56日後

25

有

＋

＋

＋

＋

＋

25

無

＋

＋

＋

＋

＋

20

有

＋

＋

＋

＋

＋

20

無

＋

＋

＋

＋

＋

25

有

＋

＋

＋

＋

＋

25

無

＋

＋

＋

＋

＋

20

有

＋

＋

＋

＋

＋

20

無

＋

＋

＋

＋

＋

a)Fo-G2培地（西村，2008）上で罹病切片から菌糸伸長が認められたものを＋とした．

32

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表1-26 嫌気的発酵処理のトマトフザリウム株腐病菌（ Fusarium solani f. sp. eumartii , 04T-2菌株）に対する防除効果（試験Ⅱ）
処理区

嫌気的発酵

対 照

処

理

日

数

処理温度

水添加

（℃）

の有無

0日

28日後

56日後

84日後

112日後

140日後

25

有

＋a）

＋

＋

＋

＋

－b）

25

無

＋

＋

＋

－

＋

－

20

有

＋

＋

＋

＋

－

＋

20

無

＋

＋

＋

＋

＋

＋

25

有

＋

＋

＋

＋

＋

＋

25

無

＋

＋

＋

＋

＋

＋

20

有

＋

＋

＋

＋

＋

＋

20

無

＋

＋

＋

＋

＋

＋

a)Fo-G2培地（西村，2008）上で罹病切片から菌糸伸長が認められたものを＋とした．
b)Fo-G2培地（西村，2008）上で罹病切片から菌糸伸長が認められなかったものを－とした．
面に褐変腐敗を生じさせ，ジャガイモに対する病原性が確認として組み換えられた（Snyder and Hansen, 1941）．Romberg

された．

and Davis（2007）は，トマト，ジャガイモから菌を分離し，それ分離菌株は，小分生子を擬頭状に形成し，小分生子柄がぞれに対する病原性を確認し，F. solani f. sp. eumartii と同定

長く，まばらに分枝することなどから，形態的に F. solani

した．本報告での分離菌株もトマト，ジャガイモへの病原性を（ Gerlach and Nirenberg, 1982 ） に 属 す ると 判 断 さ れ た ． F.

有し，その病徴は Romberg and Davis（2007）の報告とよく一致

solani 種複合体（O'Donnell, 2000）には交配群 I～VII が知らしていた．

れているが，分離菌株は翻訳伸長因子（TEF）1-α 遺伝子およ以上より，栃木県のトマトから分離した菌株は，トマトやジャび rDNA ITS 領域の DNA 塩基配列に基づく分子系統解析

ガイモに対する病原性，形態的な特徴，TEF1-α 遺伝子およを行ったところ，既知の交配群には属していなかった．また，び rDNA ITS 領域に関する分子データの解析結果に基づき

現時点では，分離菌株の完全時代は植物体上および培地上

F. solani f. sp. eumartii と同定した．

とも得られておらず，少なくともホモタリックではないと推察される．

これまで F. solani に関係したトマト病害としては，大嶋・多賀（1991）が水耕栽培のトマトから Nectria haematococca を分

Fusarium 属菌では種分類の有力な情報として，TEF1-α 遺離し，今村ら（2000b）は施設栽培トマト(土耕栽培)から同様

伝子や rDNA ITS 領域等の解析およびその分子系統解析がの菌を分離し立枯病と命名された．後にこれらの菌は分子系行われており，F. solani でも重要な分子データとして活用され

統 学 的 な 解 析 や 核 型 解 析 等 に 基 づ き Haematonectriaている．本分離菌株の TEF1-α 遺伝子は，Romberg and Davis

ipomoeae (異名 F. striatum) と改名された (多賀ら，2006)．

（2007）がアメリカ，カリフォルニアで発生したトマトの Foot rot，

本報告での分離菌株は，Nirenberg and Brielmaier-Liebetanz

ジャガイモの Eumartii wilt から分離した F. solani f. sp. eumartii（1996）および Rossman et al.（1999）による F. striatum の記載と 100％一致あるいは 99.8％の相同と判明し，rDNA ITS 領域と比較したところ，本菌の 5 隔壁大分生子は長さが短く，形態での相同性も 98.8～99.8%と高かった．さらに，分離菌株は両的に一致しないことから別の菌種であると判断した．また，病遺伝子領域とも Romberg and Davis（2007）による F. solani f.

徴については，H. ipomoeae による立枯病は発病株の地際部

sp. eumartii と同一のクレード（単系統群）に所属し，分子系統や露出根部に赤～橙色の子のう殻を表生する場合が多く，学的に良く対応することを示していた（図 1-7，図 1-8）．

台木品種の髄部黒変が認められるが (今村ら，2000b)，本Carpenter (1915) はジャガイモ塊茎の腐敗した部分から病ではいずれも観察されず，病徴が異なっている．さらに，立Fusarium 属菌を分離し，分離菌株を F. eumartii と呼ぶことを枯病はトマト根腐萎凋病のように主根，側根を含めた激しい提案した．Goss（1940）はジャガイモから F. solani を分離して根腐れが認められ (漆原，私信)，この点でも本病の病徴といる．その後，F. eumartii はその病原性に基づいて F. solani

は大きく異なっている．農業生物資源研究所ジーンバンク微の一分化型である f. sp. eumartii に，当初は品種（f. eumartii）

生物部門（MAFF）に保存される大嶋・多賀（1991）によるトマト
33

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号とガーベラ由来の菌株（当初，Nectria haematococca として登能性が考えられた（Sanchez et al., 1975）．一方，試験Ⅱでは，録）を含めた日本産の F. striatum 4 菌株について分子系統

接種７日後には全品種とも 94％以上の発病率となり，接種 14解析を行ったところ，本報告での分離菌株は，rDNA ITS 領

日後には供試した 11 品種の全幼植物体とも萎凋枯死した．

域の解析では F. striatum 菌株と 2 塩基の違いで比較的近い

本菌の土壌ふすま培養菌をトマト各品種に土壌接種したとこ

位置関係にあったが（図 1-7），TEF1-α 遺伝子では互いに高ろ，台木品種の発病株率が穂木品種に比較し全般に高かっいブート・ストラップ確率で支持される異なったクレードへと分たが（中山・青木，2010），試験Ⅱでは接種 7 日後，接種 14

離し（図 1-8），分子系統学的観点からも本分離菌株と F.

日後とも台木品種と穂木品種との間に明瞭な発病の差は認

striatum は別個の種であると判断された．

められなかった．試験Ⅱの接種方法には，本菌のトマトに対本病と類似の病害に Rhizoctonia solani によるトマト株腐病

する病原性確認だけでなく，トマト各品種での耐病性検定へがある．株腐病では，収穫期に株が青枯れる症状が発生し，の有効性を期待したが，今回の試験結果からそれは困難で発病株の地際部は外側から褐変，軟化するが（三澤，2007），あることが示唆された（中山，2013）．以上のことから，トマトフ

褐変は主根からではなく地際部付近から始まる (三澤，私ザリウム株腐病菌の同定を進めていく過程で，分離菌株のト

信)．本病と株腐病の病徴は，地際部の褐変，軟化が類似しマトに対する病原性の有無を検定する方法として，試験Ⅱのているが，株腐病の株が青枯れを呈し褐変は地際部付近か接種方法は実験室内の WA 培地上で検定でき，土壌接種法

ら始まる点で異なっている．また，その病原菌も大きく異なると比較し病徴発現までの日数や接種に係る労力を大幅に削糸状菌である．

減でき，有効性が高いと考えられた．

本報告での分離菌株は，トマト，ジャガイモ以外ではインゲ

Fusarium 属菌によるトマトの果実腐敗については，土壌病

ンマメ，ソラマメに対する病原性も認められた．本邦では，イン原菌の一種であるトマト萎凋病菌レース J3（現在のトマト根腐

ゲ ン マメ の根 腐病 （ Fusarium root-rot） の 病原 菌と し て， F.

萎凋病菌 F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersici：駒田ら，1989）

solani（Matius）f. sp. phaseoli（Burkh.）Snyder et Hansen（日本

によって起こることが報告されている（冨川ら，1985；冨川ら，

植物病理学会編，2000）（= F. cuneirostrum O’Donnell et T.

1986；冨川，1987）．トマト果実腐敗症は主として柱頭とそれにAoki; Aoki et al., 2005）の報告はあるが， F. solani f. sp.

続く果頂部でみられ，原因菌は柱頭から侵入することが多い

eumartii による病害の報告はない．また，ソラマメでは，立枯とされる．この果実腐敗症の原因菌とトマト根腐萎凋病菌の性病（Stem wilt, Root rot）の病原として，F. avenaceum（Fries）

質が一致したことから，冨川（1987）は果実腐敗症をトマト根

Saccardo，F. oxysporum Schlecht. : Fries f. sp. fabae Yu et

腐萎凋病菌による一症状と結論づけている．

Fang が知られており，F. solani（Martius）Saccardo も分離され今村ら（2000a）は，トマト品種「スーパーファースト」で柱頭とる と あ る （ 日 本 植 物 病 理 学 会 編 ， 2000 ） ． 本 研 究 で は ，

果 実 内 部 維 管 束 の 黒 変 を 伴 う 果 実 腐 敗 症 状 か ら F.

GenBank からの F. solani 種複合体の典型菌株の TEF1-α 遺

oxysporum を分離している．分離菌株は，トマト萎凋病菌 F.

伝子および rDNA ITS 領域のデータに併せて，日本産 F.

oxysporum f. sp. lycopersici およびトマト根腐萎凋病菌 F.

solani f. sp. radicicola（MAFF731042）と F. solani f. sp. pisi

oxysporum f. sp. radicis-lycopersici とは病原性が異なるため，（MAFF840047）から決定した塩基配列についても分子系統

F. oxysporum によるトマト黒すじ実腐病として報告された．また，解析を行った．その結果，本報告での分離菌株はこれらの菌

今村ら（2002）は，ピーマンの土壌病原菌である立枯病菌

株のいずれとも異なる分子系統学的位置にあった（図 1-7，1-（Haematonectria ipomoeae = F. striatum：多賀ら，2006）がピ

8）．今後，インゲンマメおよびソラマメについても本菌の発生

ーマン実腐症状の原因菌であり，本症状は柱頭部から腐敗動向に注意を払う必要があると考える．

がはじまり果梗部に広がる場合が多いとしている．これらの知以上のことから，本邦では F. solani f. sp. eumartii によるトマ

見により，Fusarium 属菌はトマト，ピーマンの土壌病原菌としトの病害発生の報告はなく，本病を F. solani f. sp. eumartii にてだけでなく，それら宿主の果実腐敗の原因菌となることが明よるトマトフザリウム株腐病と呼ぶことを提案した．

らかになっている．

なお，F. solani 種複合体については，F. solani (Mart.)

そこで，根茎部の病害であるトマトフザリウム株腐病菌（F.

Sacc. のタイプがエピタイプとして再指定されるなど，再分類

solani f. sp. eumartii）においても，今後の防除対策を構築すが急速に進められつつある(Schroers et al., 2016)．今後，本る上でトマト花器および果実に対する病原性の有無を明らか

分化型についても独立した種に格上げされる可能性がある．

にする必要があると考え，トマト果実等への接種試験を行った．

Sanchez 法の改変によるトマトに対する病原性検定について

なお，本菌の分生子懸濁液を供試し 25℃，暗条件での分生は，試験Ⅰでは，接種 14 日後でも無病徴の幼植物体が複数子発芽率を検討したところ，処理 12 時間後には分生子の発認められ，接種源とした 04T-2 菌株から発病が回避された可芽率が 96.1%に達した．そのため，接種試験では接種後 1234主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

時間以上，湿室状態を保つことが良いと判断した．果実等へ

がトマトの花器および果実に対する病原性を有することを明らの接種試験の結果，本菌は無傷接種でトマト品種「麗容」のかにするとともに，摘葉など管理作業に伴う茎の傷口から発花器に病原性が認められ，柱頭付近からの褐変や枯死，落病したと考えられる原病徴を再現することができた．これらは花を引き起こしたり，果実果頂部にある花柱基部付近から果本菌の土壌伝染以外の伝染経路として，トマト茎だけでなく

実に水浸状で褐変した病斑を形成した．また，無傷接種では花器，果実など地上部からの自然感染の可能性を示唆して

供試果実の 9.1～34.8%に果実腐敗が認められた．さらに，無いると考えられた．

病徴の果実からも組織分離により接種菌が再分離されること

県内から採集したトマトフザリウム株腐病菌の各分離菌株から，接種菌が果実組織内に侵入，感染している可能性が高は ， ト マ ト 主 要 薬 剤 で の 最 小 生 育 阻 止 濃 度 （ MIC ） が

いと考えられる．果実の大きさの違いとトマト果実腐敗症状と1600µg/ml より大きかった．しかし，供試薬剤の中で，トリフルの関連については，「小（直径 30～45mm）」と「中（直径 50～

ミゾール水和剤，キャプタン水和剤は本菌の菌糸伸長抑制率65mm）」の品種「麗容」の果実で比較したところ，発病率はそがそれぞれ 94.0％，ベノミル水和剤，チオファネートメチル水

れぞれ 9.1%，34.8%，無病徴で接種菌が再分離された果実

和剤はそれぞれ 91.8％，86.8％と高かった．また，キャプタン

はそれぞれ 40.9%，26.1%であり，両者を合わせた割合はそ

水和剤では本菌の分生子発芽が著しく抑制された．以上よ

れぞれ 50.0%，60.9%であった．中型の果実が小型の果実にり，キャプタン水和剤は本菌の菌糸伸長や分生子発芽を著し比較して本菌に対する感受性が高い傾向が見受けられた．

く抑制し，本病の防除薬剤として有効である可能性が高いと採取したトマト果実への有傷接種では，25℃，暗条件で，接考えられた（中山ら，2010b）．

種 48 時間後には果実腐敗が認められ，96 時間後には本菌保菌土壌に植え付けたジャガイモ4品種のマイク

95.0％の発病率となった．これらのことから，本菌は無傷接種

ロチューバーの発病率は，品種「男爵薯」，「メークイン」

条件下でトマト花器および果実に対する病原性を有するととが100％，品種「ニシユタカ」が92.3％，「農林1号」が23.1％

もに，有傷部がある場合，接種 48 時間後には果実腐敗がはであり，本菌に対する感受性には品種間差があると考え

じまると考えられる．

られた．特に，品種「男爵薯」および「メークイン」は本

これまで圃場内で果実腐敗を呈するトマト果実から組織分菌に対する感受性が高く，土壌からの本菌の検出に適し離を試みているが，現在までのところ本菌は分離されていなていると考えられた．品種「男爵薯」マイクロチューバー

い．しかし，地際部付近のトマト茎の病斑上には分生子が多の発病率は，本菌の土壌への混和割合が0.5％以上では数形成されることから，それらが伝染源となりトマト花器や果実

80％以上となったが，0.1％で40.0％，0.05％で26.7％と低が発病に至ることも考えられる．今後，現地栽培圃場での発くなり，菌密度の推定に利用できる可能性が示唆された．

生に注意が必要と考える（中山ら，2010a）．

また，品種「男爵薯」マイクロチューバーの発病率は，本また，本病の病徴には栽培管理の一つである摘葉に伴う茎菌保菌土壌への植え付け後日数に応じて高まり，植え付の傷口から自然感染し発病に至ったと推測される病斑がとき

け14日後には発病率61.5％であったが，20日後には92.3％に観察される．そこで，本菌のトマト茎に対する病原性を検討に達した．本菌保菌土壌からの検出にあたっては，植え付したところ，土壌ふすま培養菌または分生子懸濁液のいずれ

け20日後に地下部での発病状況を調査することが望ましの接種とも，茎の接種部位に褐色，不整形でやや陥没した病

いと考えられた．

斑を形成し原病徴が再現された．本菌の分生子懸濁液の無トマトの主要な土壌病原菌について，ジャガイモマイ

傷接種では，品種「麗容」の接種部位の 13.3%で病斑形成がクロチューバーに対する病原性を調査したところ，トマ

認められるなどトマト茎に対する病原性が確認され，本菌がト立枯病菌が萌芽した植物体の茎基部と根の境界付近に茎から自然感染し発病に至る場合があることが裏付けられた．

トマトフザリウム株腐病菌による病徴と類似した淡褐色

また，土壌ふすま培養菌による接種では，供試した両品種と～褐色の病斑を形成した．両者のジャガイモ病徴での識も有傷接種が無傷接種に比較して発病率が高い傾向が見受別は困難であった．一方，トマト株腐病菌は，匐枝の表面

けられ，栽培管理に伴って生じるトマト茎の傷口から本菌が侵に褐色で条状の病斑を形成するが，萌芽した植物体の茎入しやすいことを示唆していた．発病率は，品種「ジョイント」

基部と根の境界付近に病徴はみられなかった．なお，トマが「麗容」に比較してやや高く，本菌に対する感受性がややト萎凋病菌およびトマト根腐萎凋病菌は，品種「男爵薯」

高いと考えられた（中山ら，2010a）．このことは本菌の土壌接に対する病原性は認められず，トマトフザリウム株腐病

種によるトマト各品種への病原性調査でも「ジョイント」など台菌と識別可能であると考えられた．

木品種が「麗容」など穂木品種に比較し発病株率が全般に高トマトフザリウム株腐病菌は，トマトの地下部に明瞭かった（中山・青木，2010）ことと一致していた．以上より，本菌な病徴を呈するまで通常1か月以上を要する．そのため，
35

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

接種試験は植物体の維持管理の面から1/5000a～1/2000a

では，その菌糸，分生胞子および子のう殻とも，15℃または

ワグネルポットでの試験となる．これに対してジャガイ

25℃の 7～30 日処理で不活化されることが明らかになっていモマイクロチューバーは，直径15cm程度の黒ポリポットる（石川ら，1990）．一 方 ， Ebihara and Uematsu （ 2014 ）で栽培が可能であり，品種「男爵薯」のマイクロチューバ

は ， 嫌 気 条 件 下 で イ チ ゴ 萎 黄 病 菌 （ F. oxysporum f.

ーを利用し本菌を土壌中から簡易に検出できる可能性がsp. fragariae）の生 存 状 況 を検 討 し， 25℃では約 500示唆された（中山ら，2016）．今回の試験は，本菌の土壌

日 前 後 で 本 病 菌 が死 滅 す るこ と を報 告 して いる．我 々ふすま培養菌を殺菌土壌に混和して行った試験であり，の 試 験 で は ， 罹 病 切 片 中 の 本 菌 （ F. solani f. sp.

栽培圃場が本菌に汚染されているかどうか判定する技術

eumartii）は 25℃，140 日 間 の嫌 気 的 発 酵 処 理 によりの確立に向けては，無殺菌土壌に本菌の土壌ふすま培養

不 活 化 し，嫌 気 的 発 酵 処 理 下 での不 活 化 に要 する日菌を混和した保菌土壌を作製し今回と同様の試験を行う

数 は病 原 菌 の種 類 によって異 なると考 えられた（中 山 ・とともに，現地栽培圃場での実用性を検証する必要があ

青 木 ， 2014 ） ． ま た ， イ チ ゴ 萎 黄 病 菌 と ト マ ト フ ザ リ ウ ムる．

株 腐 病 菌 は ， い ず れ も Fusarium 属 菌 の 一 種 で あ る

萩原・竹内（1982）は，ダイコン萎黄病罹病残渣の堆積発

が，嫌 気 条 件 下 と嫌 気 的 発 酵 処 理 下 での不 活 化 に要酵試験を行い，本病菌（Fusarium oxysporum f. sp. raphani）がする日 数 は大 きく異 なった．今 後 ，現 場 レベルでの嫌嫌気的発酵の過程で活性を失ったと推定している．また，10

気 的 発 酵 処 理 による本 菌 の防 除 効 果 や実 用 性 を検

～30℃の範囲内では，本病菌の不活化速度は温度が高いほ討 する必 要 がある．

ど速やかであるとされる（萩原・竹内，1983）．イチゴ炭疽病菌36

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

第２章

トマト綿腐病の発生（病徴追加）

品種「麗夏」および「ブロック」を供試した．
（３）接種

トマトの育苗中に根腐症状を伴う生育不良が発生した．地接種は東條ら（1993）の方法に準じて行った．ベントグラス

上部の主な症状は葉の黄化や生育の停滞であった．また，

種子 3g に蒸留水 12ml を加え，オートクレーブで殺菌して作発病株を圃場に定植しても多くは生育が停滞したままであっ製した培地上で分離菌株を 25℃，暗条件で 10 日間前後培た．発病株の根部罹病組織からは Pythium 属菌が高率に分養した後，500ml の殺菌蒸留水を入れ，ホモジナイザーで 30離された．

秒間粉砕し，約 2ℓの殺菌土と混合して保菌土壌を作製した．

そこで，今後の防除対策の資とするため，病原菌の分離，接種は，殺菌土壌にトマト品種をそれぞれ播種し，育苗し接種による病徴の再現性の確認および病原菌の同定を行った約 2.5 葉期のトマト苗を保菌土壌に移植して行った（土壌接た．

種）．なお，トマト 2 品種に対する分離菌株の接種試験は 2 回

１発生状況，病徴実施した．

2006 年 6 月，那須塩原市のトマト（土耕栽培）の育苗中にまた，トマト品種「麗夏」および「ブロック」の種子を直接，保発病株の発生が認められた．発病株は，接木苗で穂木品種

菌土壌に播種する区も設定した．

は「麗夏」，台木品種は「ブロック」であった．育苗中のトマト苗（４）調査の根部は根腐症状を呈し（図 2-1），地上部の主な症状は葉接種後はガラス温室で管理し，発病の有無を調査した．

の黄化や生育の停滞であった．また，発病株は圃場に定植しても，多くの苗は生育が停滞したままであった．

図 2-1 現地でのトマト発病株の根部病徴（品種；穂木「麗夏」，台木「ブロック」）

２

病原菌の同定１）病原菌の分離
2006 年 6 月，那須塩原市のトマトで葉の黄化や生育の停滞を呈する発病株（ポット苗）を採取し，台木品種「ブロック」の根部罹病組織から常法により WA 平板培地で病原菌を分離した後，単菌糸分離して供試菌株を得た．
２）トマトに対する病原性材料および方法（１）供試菌株
トマト発病株から分離した分離菌株 TO-01 および TO-02 の

図 2-2 トマト分離菌株（Pythium sp.）のトマト接種株での根部病徴（上：穂木品種「麗夏」，下：台木品種「ブロック」）

2 菌株を供試した．
（２）供試トマト品種
37栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

結果

で根腐症状が認められ，原病徴が再現された（表 2-2）．また，トマトからの分離菌株 TO-01，TO-02 は，トマト品種「麗夏」

接種株の根部罹病組織から接種菌が再分離された．なお，

および「ブロック」に萎凋，枯死を引き起こし，トマトに対する病無接種区では両品種とも病徴は認められなかった．

原性が確認された．また，接種株では，地上部が無病徴であ

保菌土壌にトマトの種子を播種したところ，無接種区に比較っても全株に根腐症状が認められ（図 2-2，表 2-1），接種株

して発芽率が大きく低下し，発芽前立ち枯れが確認されたの根部罹病組織から接種菌が再分離された．なお，無接種（表 2-3）．さらに，保菌土壌での発芽苗をポットに移植し，約 1

区では両品種とも病徴は認められなかった．

か月後に掘り上げたところ，根部が淡褐色に変色し，その罹

第 2 回目の接種試験では，接種 45 日後まで地上部は無病組織から接種菌が再分離された．

病徴であったが，株を掘りあげて観察すると，接種株の全株

表2-1 トマト分離菌株（ Pythium sp. ）のトマトに対する病原性-1
供試菌株 供試品種

TO-01
TO-02
無接種

9月6日

9月27日

10月5日

（5日後） （12日後） （19日後） （26日後）（34日後）

9月20日

2/7

2/7

3/7

3/7(7/7) b)

1/7

1/7

1/7

1/7

1/7(7/7)

麗夏

3/7

3/7

3/7

3/7

3/7(7/7)

ブロック

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7(7/7)

麗夏

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7(0/7)

ブロック

0/7

0/7

0/7

0/7

0/7(0/7)

麗夏

2/7

ブロック

a)

9月13日

播種日：2006年8月13日
接種日：2006年9月1日
a)発病株数／供試株数b)根部病徴から判断

表2-2 トマト分離菌株（ Pythium sp. ）のトマトに対する病原性-2
供試菌株 供試品種

TO-01
TO-02
無接種

10月31日

11月7日

（7日後）

（14日後） （20日後） （28日後） （35日後） （42日後） （45日後）

12月8日

0/10

0/10

0/10

0/10

10/10 b)

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

10/10

麗夏

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

10/10

ブロック

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

10/10

麗夏

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

ブロック

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

0/3

0/10

ブロック

播種日：2006年9月1日
接種日：2006年10月24日
a)発病株数／供試株数b)根部病徴から判断

38

12月5日

0/10

麗夏

a)

11月13日 11月21日 11月28日

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表2-3 トマト分離菌株（ Pythium sp. ）のトマトに対する病原性-3
供試菌株 供試品種
TO-01
無接種

発芽率(%)麗夏

25.0（3/12） a)

ブロック

50.0（6/12）

麗夏

66.6（8/12）

ブロック

91.6（11/12）

接種日（播種日）：2006年9月25日
調査日：2006年10月5日a)発芽苗数／播種粒数３）分離菌株の形態
材料および方法

結果（１）供試菌株

分離菌株 TO-01 は，膨状の胞子のうを形成した．有性器官

分離菌株 TO-01 を供試した．

は単一菌株で形成され，造卵器の大きさは 22－28（平均値（２）形態25.7）㎛で，表面は平滑であった．造精器は主に間生で頂生分離菌株を Corn Meal Agar（CMA）平板培地上のシバ葉でも認められ，側着で，同菌糸性または異菌糸性であった．ま培養後，殺菌した雨水にシバ葉を入れて胞子のうおよび有性

た，造卵器柄は造精器に傾いていなかった．卵胞子の大きさ

器官の形態を調査した．

は 18－24（平均値 20.7）㎛で，非充満性であった（表 2-4）．

表2-4 トマト分離菌株（ Pythium sp., TO-01菌株）と Pythium aphanidermatumとの形態比較
ａ)TO-01

P. aphanidermatum

膨状

膨状

単一菌株で形成単一菌株で形成

表面平滑

表面平滑

22－28 (25.7)

22－24 (23.0)

主に間生，頂生も認められる

主に間生，頂生も認められる

側着側着同菌糸性，異菌糸性

同菌糸性，異菌糸性

造卵器柄は蔵精器に傾かない

造卵器柄は造精器に傾かない

非充満性

非充満性

18－24 (20.7)

20－22 (20.2)

胞子のう
形態
有性器官
造卵器
形態
大きさ(μm)
造精器
形態
造卵器への付着

卵胞子
充満性
大きさ(μm)ａ）van der Plaats-Niterink(1981)39栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

４）菌糸の生育温度

３
材料および方法考察
土耕栽培トマトの育苗中に根腐症状を伴う生育不良が発生し，その根部罹病組織から Pythium 属菌が高率に分離され（１）供試菌株
分離菌株 TO-01 を供試した．

たため，病原菌の分離，接種による病徴の再現性の確認および病原菌の同定を行った．分離菌株 TO-01 は，トマト品種（２）生育温度
分離菌株を CMA 平板培地で 25℃，暗条件で前培養した「麗夏」および「ブロック」に萎凋，枯死を引き起こし，罹病組

後，コルクボーラー（直径 5mm）で打ち抜いた菌叢片を CMA

織から接種菌が再分離された．

平板培地上に置床し，5，10，15，20，25，30，35，38，40，42，

分離菌株は，膨状の胞子のうを形成し，有性器官は単一

45℃の各温度で，暗条件，24 時間培養後の菌叢直径を調査

菌株で形成され，造卵器の大きさは平均 25.7 ㎛で，表面はした．1 処理当たりペトリ皿は 3 枚供試した．

平滑であった．造精器は主に間生で頂生も認められ，側着で，結果

同菌糸性または異菌糸性であった．卵胞子の大きさは平均

菌糸の生育は，CMA 培地上では 10℃～42℃で認められ，20.7 ㎛で，非充満性であった．また，P. aphanidermatum に特

適温は 35～38℃付近であった．なお，24 時間当たりの菌糸

異的なプライマーを用いた PCR 検定の結果，本菌に特異的伸長量は，38℃では 40.0mm であった（図 2-3）．

な増幅断片が認められた．菌糸の生育は，CMA 培地上では

５）種特異的プライマーによる PCR 検定

10～42℃で認められ，適温は 35～38℃であった．これらの特徴を van der Plaats-Niterink（1981）の検索表および形態数値

材料および方法と比較するとともに，PCR 検定の結果と併せて，分離菌株を P.

（１）供試菌株
分離菌株 TO-01 を供試した．

aphanidermatum と同定した（中山ら，2007）．
トマトでの P. aphanidermatum による病害としては，楠元（２）PCR 検定
分離菌株を CMA 平板培地で 25℃，暗条件で 5 日間培養

（1950）が地面に近接した果実が白色綿状の菌糸で覆われ，し，PrepMan Ultra Reagent（Applied Biosystems 社製）を用いその軟化腐敗した部位から本菌を分離しており，病名を「トマて全 DNA を抽出後，松本ら（1999）の方法に準じて，Pythiumト綿腐病」と命名した．また，草刈・田中（1982, 1987）は，トマト

aphanidermatum に種特異的なプライマーAPH1/APH2 を用

水耕栽培での根腐性病害の原因を究明し，病原として P.

いて PCR 検定を行った．

aphanidermatum，P. myriotylum，P. dissotocum を報告してい結果

る．今回の栃木県での発生は，土耕栽培トマトの育苗中に発P. aphanidermatum に種特異的なプライマーを用いた PCR

生した根腐症状であり，P. aphanidermatum によるトマトでの根検定の結果，対照とした岐阜県各務原市のニンジンからの分腐症状を伴う苗の生育不良として初めての報告である（中山離菌株 TOc159（NBRC100101）と同様に，730bp 付近に本菌

ら，2007）．

に特異的な増幅断片が認められた（図 2-4）．

菌糸伸長量 （mm/24h）

50

40
30
20
10
0

0

10

20

30

40

50

温度 (℃）
図2-3 トマト分離菌株（ Pythium sp., TO-01菌株 ）の菌糸生育と温度との関係（CMA上）40

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

41栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

第３章

イチゴピシウム根腐病の発生（病原追加）

イチゴ圃場で品種「とちひとみ」，「とちおとめ」の下葉の葉
柄が小豆色に変色し，生育の停滞や萎凋，枯死を呈する病られた（図 3-1）．
２

病原菌の同定１）病原菌の分離害が発生した．発病株の根は黒色～暗褐色水浸状に腐敗し，

2007 年 5 月，那須塩原市のイチゴ栽培圃場の品種「とちひクラウンにも病徴の進展が認められた．発病株の根部罹病組

とみ」，佐野市のイチゴ栽培圃場の品種「とちおとめ」の生育

織からは Pythium 属菌が高率に分離された．

停滞や萎凋，根腐症状を呈する株を採取し，根部罹病組織

こ れ ま で イ チ ゴ に 発 生 す る Pythium 属 菌 に は ， P.

から WA 培地を用いて常法により病原菌を分離した．その後，

myriotylum（Watanabe,1977），P. ultimum（草刈・田中，1985；

WA 培地上で単菌糸分離を行い，供試菌株とした（表 3-1）．

Watanabe et al. , 1977）の報告がある．近年では，静岡県，岐分離菌株 07KST-1，07KST-2，07KST-3，07KST-5，07SST-4

阜県における P. helicoides によるイチゴピシウム根腐病の発は，農業生物資源ジーンバンク（農研機構遺伝資源センター）

生報告がある（鈴木ら，2005；渡辺ら，2005）．

にそれぞれ MAFF241782，MAFF241783 ，MAFF241784 ，そこで，本症状の原因を究明し今後の防除対策の資とする
ため，病原菌の分離，接種による病徴の再現性の確認およびMAFF241786，MAFF241785 として寄託登録した．
２）イチゴに対する病原性病原菌の同定を行った．

材料および方法（１）供試菌株
分離菌株 07KST-1，07KST-2，07KST-3，07KST-5 および
07SST-4 の計 5 菌株を供試した（表 3-1）．

表3-1 供試菌株（イチゴ分離菌株）
菌 株

分離場所

栽培様式

分離源（品種）07KST-1

栃木県那須塩原市

土耕栽培

とちひとみ

07KST-2

栃木県那須塩原市

土耕栽培

とちひとみ

07KST-3

栃木県那須塩原市

土耕栽培

とちひとみ

07KST-5

栃木県那須塩原市

土耕栽培

とちひとみ

07SST-4

栃木県佐野市

土耕栽培

とちおとめ

（２）供試イチゴ品種
品種「とちひとみ」および「とちおとめ」を供試した．
（３）接種
接種は，東條ら（1993）の方法に準じて行った．ベントグラス
種子 3g に蒸留水 12ml を加え，オートクレーブで殺菌して作製した培地上で分離菌株を 25℃，暗条件で 7 日間培養した後，500ml の殺菌蒸留水を加えてホモジナイザーで 30 秒間粉砕し，4ℓ の殺菌土（鹿沼土，くん炭を 2：1 で混和）と混和し保菌土壌とした．接種には，それぞれ殺菌土壌で育苗したイ
チゴ苗を保菌土壌に移植した（土壌接種）．
イチゴ苗の管理や接種は，ガラス温室（15～35℃）で行っ
図 3-1 現地でのイチゴ発病株の病徴（品種「とちひとみ」）

た．

１

（４）調査

発生状況，病徴2007 年 5 月，那須塩原市のイチゴ栽培圃場（土耕栽培）の接種 50 日後にイチゴでの発病状況を調査した．

品種「とちひとみ」，佐野市のイチゴ栽培圃場（土耕栽培）の結果

品種「とちおとめ」で，下葉の葉柄が小豆色に変色し，生育の供試した 5 菌株のいずれも，イチゴ品種「とちひとみ」，「とち停滞や萎凋枯死を呈する病害が発生した．発病株の根は黒おとめ」の両品種において，発病株では葉の葉脈や葉柄が色～暗褐色水浸状に腐敗し，クラウンにも病徴の進展が認め

小豆色になり，しだいに萎凋，枯死症状を呈した（図 3-2）．

42主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

図 3-2 イチゴ分離菌株（Pythium spp.）のイチゴ接種株での病徴（品種「とちひとみ」）
上：葉脈が小豆色に変色
中：萎凋下：根部の黒変43栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

（２）形態

表3-2 イチゴ分離菌株（ Pythium spp. ）のイチゴ品種に殺菌したシバ葉に分離菌株を CMA 平板培地上で感染させ，対する病原性
供試菌株

とちひとみ

とちおとめ

07KST-1

３/５a)

１/５

07KST-2

５/５

２/５

07KST-3

５/５

２/５

07KST-5５/５

０/５

07SST-4

５/５

４/５

無接種

０/５

０/５

感染したシバ葉を殺菌した雨水に入れて無性器官および有性器官の形態を調査した（Waterhouse, 1967）．
結果
分離菌株 07KST-1，07KST-5 は，遊走子のうは形成せず，球形の Hyphal swelling を形成した．有性器官は単独培養では形成されず，両菌株とも Pythium sylvaticum の雌株と反応し，反応部分に有性器官を多く形成していた（図 3-3）．造卵
器の大きさは 14.9－26.6（平均値 21.7）㎛で，表面は平滑でa)発病株数／供試株数あった．造精器は異菌糸性であった．卵胞子の大きさは 13.2
－22.4（平均値 18）㎛で，非充満性で多くは成熟せず退化し両品種の発病状況を比較すると，「とちひとみ」は「とちおとめ」に比較して，発病株率が高い傾向にあった（表 3-2）．両品種の接種株を掘り上げて観察すると，発病株の根は黒変しており，原病徴が再現された．また，その根部罹病組織から接種菌が再分離された．なお，無接種区では両品種とも病徴は認められなかった．

た（図 3-4，表 3-3）．
分離菌株 07KST-2，07KST-3 は，遊走子のうは形成せず，球形の Hyphal swelling を形成した．造卵器の大きさは 15－22.4（平均値 17.7）㎛で，表面には指状の棘が認められた．造精器は同菌糸性であった．卵胞子の大きさは 12.7－21.3（平均値 16.3）㎛で，充満性であった（図 3-4，表 3-3）．
分離菌株 07SST-4 は，球形，亜球形で乳頭状の突起のある

３）分離菌株の形態

遊走子のうを形成した．造卵器の大きさは 23.4－38.9（平均

材料および方法

値 33.4）㎛で，表面は平滑であった．造精器は異菌糸性で，（１）供試菌株
分離菌株 07KST-1，07KST-2，07KST-3，07KST-5 および
07SST-4 の計 5 菌株を供試した．

造精器柄が造卵器柄にコイリングしていた．卵胞子の大きさ
は 18.6－31.5（平均値 28.0）㎛で，非充満性であった（表 3-3）．

07KST-1
表3-3 イチゴ分離菌株（ Pythium spp. ）と既知種の形態比較
造卵器
供試菌株・既知種

遊走子のう

有性器官
形成様式

07KST-1

形成しない

雌雄異株性

頂生，間生，平滑

07KST-5

形成しない

雌雄異株性

頂生，間生，平滑

07KST-2形成しない 同一菌株で形成

07KST-3

頂生，間生，指状の棘あり頂生，間生，指状の棘形成しない 同一菌株で形成あり

07SST-4形成する同一菌株で形成

頂生，間生，平滑

Ｐ. ｓｙｌｖａｔｉｃｕｍ a)

形成しない

雌雄異株性

頂生，間生，平滑

Ｐ. ｓｐｉｎｏｓｕｍ a)形成しない 同一菌株で形成

P. helicoides a)

形成するa) van der Plaats-Niterink(1981)44

同一菌株で形成

頂生，間生，指状の棘あり頂生，間生，平滑

大きさ(µm)(平均）14.9－26.6（21.7）

造精器
の形状
異菌糸性
異菌糸性

15－22.4（17.7）

同菌糸性
同菌糸性

23.4－38.9(33.4)
18－20（19.3）
17－21（18.5）
31－38(33.5)

異菌糸性
異菌糸性
同菌糸性
異菌糸性

卵胞子
形状

大きさ(µm)(平均）13.2－22.4
（18）

球形
非充満
球形
非充満
球形 雄株12.7－21.3
充満（16.3）
球形
充満
球形
18.6－31.5
非充満
(28)
球形
15－18
非充満
（16.5）
球形
15－19
充満（17.2）
球形
27－32
非充満(30.5)

雌株

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

07KST-1

雄 株

雌 株

図 3-3 イチゴ分離菌株 07KST-1 と Pythium sylvaticum の雌雄菌株との対峙培養

a

b

c

d

e

f

Bars=20µm
図 3-4 イチゴ発病株から分離された Pythium 属菌の形態
a-c. 07KST-1 菌株, a. Hyphal swelling, b. c. 造卵器，造精器，非充満性卵胞子d-f. 07KST-2 菌株, d. Hyphal swelling, e. 棘のある造卵器，同菌糸性造精器, f. 棘のある造卵器，充満性卵胞子45栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

Reagent（アプライドバイオシステムズジャパン，東京）

４）菌糸の生育温度

を用いて全 DNA を抽出した．rDNA ITS 領域の PCR

材料および方法

は，White et al.（1990）の方法に準じ，プライマーITS5（１）供試菌株
分離菌株 07KST-1，07KST-2，07KST-3，07KST-5 および（5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’），ITS4

07SST-4 の計 5 菌株を供試した．

（ 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）によりサーマル（２）生育温度

サイクラー（Gene Amp PCR system 2700，アプライドバ

分離菌株を CMA 平板培地で 25℃，暗条件で前培養したイオシステムズジャパン，東京）で行った．PCR 産物を後，菌叢をコルクボーラー（直径 4mm）で打ち抜き CMA 平板

GeneElute PCR Clean-up Kit（シグマアルドリッチジャパ

培地上に置床した．それを 5，10，15，20，25，28，30，35，37，

ン，東京）で精製後，BigDye Terminator v. 3.0（アプライ

40，42，45℃の各温度で，暗条件，24 時間培養した後，菌糸ドバイオシステムズジャパン，東京）でシーケンシング

伸長を測定した．1 処理当たりペトリ皿は 3 枚供試した．

PCR を行い，常法に従い ABI3700 DNA

結果

sequencer（アプライドバイオシステムズジャパン，東京）を用いて塩分離菌株 07KST-1，07KST-2，07KST-3 および 07KST-5 は，いずれも 5～35℃で菌糸の生育が認められ，適温はそれぞ

基配列を決定した．得られた塩基配列について DDBJ のBLAST による相同性検索を行った．

れ 28～30℃付近であった．分離菌株 07SST-4 は，20～42℃

結果

で菌糸の生育が認められ，適温は 37℃付近であった（図 3-

分離菌株の rDNA ITS 領域の塩基配列を調べ，DNA デー

5）．

タベース登録菌株との相同性検索を行ったところ，分離菌株

５）rDNA ITS 領域の塩基配列の相同性検索

07KST-1 は既報の P. sylvaticum 菌株と 99.8％以上，分離菌
株 07KST-2 は既報の P. spinosum 菌株と 99.5％以上の相同材料および方法性を示した（表 3-4 ）．分離菌株 07KST-1 の塩基配列を（１）供試菌株
分離菌株 07KST-1，07KST-2 を供試した．

AB906339，07KST-2 のものを AB906340 として DNA データ（２）相同性検索

ベースに登録した．

分離菌株を V8 ジュース寒天培地上で 25℃，暗条件で7 日間培養し，伸長した気中菌糸より Prepman Ultra
30

０７ＫＳＴ－１菌糸伸長（mm/24hr）

25

０７ＫＳＴ－２
０７ＫＳＴ－３

０７ＫＳＴ－５

20

０７ＳＳＴ－４

15

10

5

0
0

5

10

15

20

25

30

35
温度（℃）

40

45

図3-5 イチゴ分離菌株（Pythium spp. ）の菌糸生育と温度との関係（CMA上）4650

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表3-4 イチゴ分離菌株（ Pythium spp. ）のrDNA ITS領域のDNAデータベース登録菌株との相同性
供試菌株・既知種

登録番号

菌株名

分離場所

相同性(%)

P. sylvaticum

AB259316

MAFF712264

日本

99.9

P. sylvaticum

AB108008

Py77

日本

99.9

P. sylvaticum

AY598645

CBS453.67

アメリカ

99.8

P. spinosum

AJ233457

OD231

日本

99.8

P. spinosum

AB108007

TN254

日本

99.6

P. spinosum

DQ437648

CBS290.31

南アフリカ

99.5

07KST-1

07KST-2６）種特異的プライマーによる PCR 検定
Ｍ

材料および方法

123（１）供試菌株
分離菌株 07SST-4 を供試した．
（２）PCR 検定
分離菌株を PDA 平板培地で 25℃，暗条件で 3 日間培養
し，PrepMan Ultra Reagent（Applied Biosystems 社製）を用いて全 DNA を抽出後，銀ら（2007）の方法に準じて，Pythium
helicoides に種特異的なプライマーhel-F2/hel-R4 を用いてPCR 検定を行った．
結果

300bp

P. helicoides に特異的なプライマーによる PCR 検定の結果，分離菌株 07SST-4 は，対照としたミニバラからの分離菌株 H5と同様に，300bp 付近に特異的な増幅断片が認められた（図
3-6）．
３

考察
イチゴ圃場（土耕栽培）で品種「とちひとみ」および「とちお図3-6 種特異的なプライマーによるイチゴ分離菌株07SST-4（ Pythium sp. ）のPCR増殖
Ｍ：100bpラダー
１：対照
２：07SST-4菌株
３：H5(対照菌株)とめ」の下葉の葉柄が小豆色に変色し，生育の停滞や萎凋，枯死を呈する病害が発生した．その根部罹病組織から適温は 28～30℃であった．また，rDNA ITS 領域の塩基配列

Pythium 属菌が高率に分離されたため，病原菌の分離，接種は，既報の P. sylvaticum 菌株と 99.8％以上の相同性を示しによる病徴の再現性の確認および病原菌の同定を行った．

た．以上から，分離菌株を van der Plaats-Niterink（1981）の検分離菌株は，品種「とちひとみ」および「とちおとめ」の葉の葉索表および形態数値，rDNA ITS 領域の DNA データベース

脈や葉柄が小豆色になり，しだいに萎凋，枯死を引き起こし，

登録菌株との相同性等から P. sylvaticum Campbell &根部罹病組織から接種菌が再分離された．

Hendrix と同定した（中山ら，2008；中山ら，2014）．

分離菌株 07KST-1 および 07KST-5 は，遊走子のうは形成

分離菌株 07KST-2 および 07KST-3 は，遊走子のうは形成

せず，球形の Hyphal swelling を形成した．有性器官は単独せず，球形の Hyphal swelling を形成した．造卵器の大きさは培養では形成されず，P. sylvaticum の雌株と反応し，反応部

平均 17.7 ㎛で，表面には指状の棘が認められた．造精器は分に有性器官を多く形成した．造卵器の大きさは平均 21.7 ㎛

同菌糸性であった．卵胞子の大きさは平均 16.3 ㎛で，充満性

で，表面は平滑であった．造精器は異菌糸性であった．卵胞であった．菌糸の生育は，CMA 培地上では 5～35℃で認め子の大きさは平均 18 ㎛で，非充満性で多くは成熟せず退化

られ，適温は 28～30℃であった．また，rDNA ITS 領域の塩した．菌糸の生育は，CMA 培地上では 5～35℃で認められ，基配列は，既報の P. spinosum 菌株と 99.5％以上の相同性を47

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

示した．以上から，分離菌株を van der Plaats-Niterink（1981）

造精器柄が造卵器柄にコイリングしていた．卵胞子の大きさの検索表および形態数値，rDNA ITS 領域の DNA データベ

は平均 28.0 ㎛で，非充満性であった．菌糸の生育は，CMA

ース登録菌株との相同性等から P. spinosum Sawada と同定し培地上では 20～42℃で認められ，適温は 37℃付近であった．

た（中山ら，2008；中山ら，2014）．

P. helicoides に特異的なプライマーによる PCR 検定の結果，

こ れ ま で に イ チ ゴ ピ シ ウ ム 根 腐 病 の 病 原 と し て ， P.

300bp 付近に特異的な増幅断片が認められた．以上から，分

helicoides が報告されており（鈴木ら，2005；渡辺ら，2005），

離菌株を van der Plaats-Niterink (1981) の検索表および形態

本病の病原に P. sylvaticum および P. spinosum を追加するこ

数値，PCR 検定結果等から P. helicoides Drechsler と同定しとを提案した（中山ら，2008；中山ら，2014）．

た．P. helicoides は，既報ではイチゴ養液栽培での発生報告

また，品種「とちおとめ」からの分離菌株 07SST-4 は，乳頭状の突起のある遊走子のうを形成した．造卵器の大きさは平均 33.4 ㎛で，表面は平滑であった．造精器は異菌糸性で，48であったが，今回初めて土耕栽培での発生を報告した（Ishiguro et al., 2014）．

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

第４章

リンドウ炭疽病の発生（新称）リンドウ（エゾ系）圃場で夏季に葉枯れや激しい株枯症状が発生し問題となった．また，その病斑部からは Colletotrichum
属菌が高率に分離された．
そこで，今後の防除対策の資とするため，病原菌の分離，接種による病徴再現および病原菌の同定を行った．

ab

図 4－1 Colletotrichum spp. によるリンドウ現地発病株の病徴（ａ：葉の斑点症状，ｂ：激しい株枯症状）

１

発生状況，病徴（１）供試菌株

2001 年および 2002 年の夏季（特に 8 月下旬以降）に，県北部のリンドウ産地である那須町の現地圃場において，茎葉に斑点を生じ，病勢が進展すると激しい株枯症状を呈した．

分離菌株 01R-A2，01R-B の 2 菌株を供試した．
（２）供試植物接種試験には，リンドウ（エゾ系）の一系統である 99D02-5S，症状は，葉，茎および花の各部位に認められた．葉では，は99D02-7M を供試した．

じめ円形でやや褐色を帯びた壊死斑が形成され，しだいにそ（３）接種

れぞれの病斑が融合拡大して大型病斑となり，葉枯れや茎分離菌株を PDA 平板培地で 25℃，暗条件で 8 日間培養壊疽を呈した．さらに，病勢が進展すると株枯症状に至った

後，それぞれ殺菌蒸留水で 10４個/ml に調整した分生子懸濁（図 4-1）．本病は夏季に発生するが，圃場内での蔓延や株枯液をペーパークロマトグラフ用噴霧器で，リンドウの各系統に症状は主に 8 月下旬以降，急激に進展がみられた．

接種した．接種は，有傷接種区と無傷接種区を設けた．接種
後，2 日間は湿室下に置き，その後は人工気象器（30℃，湿２2001 年分離菌株の同定

１）病原菌の分離

度 80％，24 時間照明）またはガラス温室で管理した．
（４）調査

2001 年 8 月に那須郡那須町のリンドウ圃場から発病株を接種 30 日後に，リンドウでの発病状況を調査した．

採取し，葉の病斑部から常法により病原菌を分離したのち，結果分生子を単胞子分離し供試菌株とした．分離菌株 01R-A2，

分離菌株 01R-A2，01R-B は，その分生子懸濁液の噴霧接

01R-B の 2 菌株を以後の試験に用いた．分離菌株 01R-A2

種により接種 2 週間後頃から有傷接種および無傷接種とも茎は，農業生物資源ジーンバンク（農研機構遺伝資源センター）に褐色の壊死斑が形成され，リンドウに対する病原性が認めに MAFF241877 として寄託登録した．

られ，原病徴が再現された（図 4-2，表 4-1）．また，その病斑２）リンドウに対する病原性部から接種菌が再分離された．なお，無接種区では病徴は材料および方法

認められなかった．

49

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

図 4－2 リンドウ分離菌株（Colletotrichum sp., 01R-B 菌株）のリンドウ接種株での病徴

表4-1 2001年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）のリンドウに対する病原性供試菌株

リンドウ(99D02-5S)a)
有傷b)

リンドウ(99D02-7M)a)

無傷

有傷

無傷

4／4

4／4

1／4

01R-A2

4／4

01R-B

0／4

1／4

4／4

1／4

無接種

c)

0／5

－

0／5

－

a)カッコ内はリンドウの系統名b)発病株数/供試株数
c)未実施
３）イチゴ，シクラメンに対する病原性材料および方法「女峰」に対する病原性は認められなかったが，シクラメン品
種「シュトラウス」に葉縁からやや円形で褐色を帯びた壊死斑
や花柄の軟化腐敗が認められた（図 4-3，表 4-2）．さらに，シ（１）供試菌株
分離菌株 01R-A2，01R-B の 2 菌株を供試した．
（２）供試植物

クラメン接種株の病斑部から接種菌が再分離された．なお，
無接種区ではイチゴ，シクラメンとも病徴は認められなかった．

イチゴ品種「とちおとめ」および「女峰」，シクラメン（Cyclamen persicum）品種「シュトラウス」を供試した．
（３）接種
分離菌株を PDA 平板培地で 25℃，暗条件で 8 日間培養後，それぞれ殺菌蒸留水で 10５個/ml に調整した分生子懸濁液をペーパークロマトグラフ用噴霧器で，イチゴおよびシクラ
メンの各品種に接種した．接種後，2 日間は湿室下に置き，その後は人工気象器（28℃，湿度 80％，24 時間照明）または
ガラス温室で管理した．
（４）調査
接種 31 日後に，供試植物での発病状況を調査した．
結果
分離菌株 01R-A2，01R-B は，イチゴ品種「とちおとめ」，

図 4-3 リンドウ分離菌株（Colletotrichum sp., 01R-A2 菌株）のシクラメン品種「シュトラウス」接種株での病徴

50主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

表4-2 2001年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）のイチゴ，
シクラメンに対する病原性
イチゴ

供試菌株

シクラメン

「とちおとめ」「女峰」「シュトラウス」

01R-A20／3 a)

0／3

3／3

01R-B

0／3

0／3

3／3

無接種

0／3

0／3

0／3

a)発病株数/供試株数
表4-3 2001年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）および既知種の形態菌株または既知種

分生子の形態

分生子の大きさ（㎛）

付着器の大きさ（㎛）a）

01Ｒ－Ａ2円筒形

11.3－19.5×5－7.5 b)

7.5－15×5－10（14.0×5.8）（11.5×7.6）

10－17.5×4.8－7 b)

8－17.5×5－10（14.6×5.8）（11.7×6.9）

12－17×3.5－6

6－20×4－12

01Ｒ－Ｂ

円筒形

C. gloeosporioides

c)

円筒形

a)PCA培地上の測定値．（ ）は平均値
b)PDA培地上の測定値．（ ）は平均値
c)Sutton (1992)

図 4-4 2001 年リンドウ分離菌株（Colletotrichum sp. ）の菌糸生育と温度との関係（PDA 上）（PCA）平板培地（Sutton, 1980）または WA 平板培地上で調

４）分離菌株の形態
材料および方法

査した．

（１）供試菌株
分離菌株 01R-A2，01R-B の 2 菌株を供試した．
（２）形態

結果
分離菌株 01R-A2 の分生子は，無色，単胞で両端が丸い
円筒形で，大きさは 11.3－19.5×5－7.5（平均値 14.0×5.8）

分離菌株を PDA 平板培地で，25℃，暗条件で 5～8 日間㎛であった．PCA 培地上での付着器は，暗褐色，不整形で，培養し，形成された分生子の形態を調査した．さらに，分離

大きさ 7.5－15×5－10（平均値 11.5×7.6）㎛であった（表 4-菌 株の 付着器 の形 態は，ジ ャガ イ モ・ ニンジン煎 汁寒 天

3）．

51

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

8 9 10 M

M 1 2 3 4 5 6 7

500bp

500bp

図4-5 種特異的プライマーによるリンドウ分離菌株（ Colletotrichum spp. ）のPCR増幅
M：100bp
1～5：CgInt/ITS4（450bp）
6～10：CaInt2/ITS4（490bp）
1, 6：H20
2, 7：01R-A2 4, 9：02R-3A
3, 8：01R-B 5, 10：02R-3C
付近にそれぞれ特異的な増幅断片が認められた（図 4-5）．

５）菌糸の生育温度
材料および方法（１）供試菌株

３

分離菌株 01R-A2，01R-B の 2 菌株を供試した．

2002 年分離菌株の同定

１）病原菌の分離
2002 年 8 月に那須郡那須町のリンドウ圃場から発病株を（２）生育温度
分離菌株を 25℃，暗条件，PDA 平板培地で前培養した後，採取し，茎の病斑部から常法により病原菌を分離したのち，コルクボーラー（直径 4mm）で打ち抜いた菌叢片を PDA 平板

分生子を単胞子分離し供試菌株とした．分離菌株 02R-3A，培地上に置床し，5，10，15，20，25，28，30，35，37℃の各温

02R-3C の 2 菌株を以後の試験に用いた．分離菌株 02R-3A，度で，暗条件，5 日間培養後の菌叢直径を調査した．1 処理

02R-3C は，農業生物資源ジーンバンク（農研機構遺伝資源当たりペトリ皿は 3 枚供した．

センター）にそれぞれ MAFF241878，MAFF241879 として寄結果
菌糸の生育は 10～37℃で認められ，適温は 28～30℃であ託登録した．
２）リンドウ等に対する病原性った（図 4-4）．

材料および方法

６）種特異的プライマーによる PCR 検定
材料および方法（１）供試菌株
分離菌株 02R-3A，02R-3C およびイチゴ炭疽病菌（C.

（１）供試菌株

acutatum）Na91-016 菌株（石川ら，1992）の 3 菌株を供試した．

分離菌株 01R-A2，01R-B の 2 菌株を供試した．

（２）供試植物接種試験には，リンドウ（エゾ系）の一系統である 99D02-7S，（２）PCR 検定
分 離 菌 株 を ブ ド ウ 糖 加 用 ジ ャ ガ イ モ 煎 汁 液 体 （ Potato

99D02-6S，02D05-S，イチゴ品種「とちおとめ」，トマト品種「マDextrose Broth：PDB）培地で 25℃，暗条件で 5 日間振とう培

イ ロ ッ ク 」 を供 試 し た ．な お ，築 尾 ら（ 1993 ）は Gromerella

養し，DNA 抽出キット（QIAGEN 社製）を用いて全 DNA を抽

cingulata と C. acutatum の判別にトマト品種「桃太郎」に対す

出後，Peter et al.（1992）の方法に準じて，C. gloeosporioides

る病原性の有無を利用しており，本試験ではトマト品種「マイを特異的に識別するプライマーを用いて PCR 検定を行った．

ロック」を供試した．

結果

（３）接種

C. gloeosporioides に特異的なプライマー（Cglnt，ITS4）を分離菌株および Na91-016 菌株を PDA 平板培地で 25℃，

用いた PCR 検定の結果，分離菌株 01R-A2，01R-B は 450bp

暗条件で 9 日間培養後，それぞれ殺菌蒸留水で 10６個/ml に52

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究調整した分生子懸濁液をペーパークロマトグラフ用噴霧器で，リンドウ，イチゴおよびトマトの各品種・系統に接種した．なお，
Na91-016 菌株は 107 個/ml とした．また，接種は，有傷接種区と無傷接種区を設けた．接種後，2 日間は湿室下に置き，その後は人工気象器（30℃，湿度 80％，24 時間照明）またはガラス温室で管理した．
（４）調査
接種 42 日後に供試植物での発病状況を調査した．
結果
分離菌株 02R-3A，02R-3C は，その分生子懸濁液の噴霧接種により接種 2 週間後頃から茎に褐色の壊死斑が形成され，リンドウに対する病原性が認められ，原病徴が再現された（表 4-4）．また，その病斑部から接種菌が再分離された．無図 4-6 リンドウ分離菌株（Colletotrichum sp., 02R-3A 菌株）

傷接種区ではリンドウに対する病原性は認められなかった．

のイチゴ品種「とちおとめ」接種株での病徴

また，Na91-016 菌株は，有傷接種でリンドウに対する病原性が認められたが，無傷接種ではリンドウに対する病原性は菌株の付着器の形態は，PCA 平板培地（Sutton, 1980）または認められなかった（表 4-4）．なお，無接種区では病徴は認めWA 平板培地上で調査した．

られなかった．

結果

分離菌株 02R-3A，02R-3C は，イチゴ品種「とちおとめ」に分離菌株 02R-3C の分生子は，無色，単胞で紡錘形～両葉縁から赤褐色で不整形の病斑を形成した（図 4-6，表 4-5）．

端が尖った長楕円形で，大きさは 10－17.5×3.8－6.5（平均さらに，接種株の病斑部から接種菌が再分離された．両分離

値 13.5×5.1）㎛であった．PCA 培地上での付着器は，暗褐

菌株は，トマト品種「マイロック」茎葉に明瞭な病徴は認められ

色，棍棒形で，大きさ 7.5－12.5×5－8.8（平均値 9.2×6.2）㎛

なかった（表 4-5）．なお，無接種区では病徴は認められなかであった（表 4-6）．

った．

４）ベノミル添加培地での生育度

３）分離菌株の形態

材料および方法

材料および方法（１）供試菌株（１）供試菌株

分離菌株 02R-3A，02R-3C およびイチゴ炭疽病菌（C.

分離菌株 02R-3A，02R-3C の 2 菌株を供試した．

acutatum）Na91-016 菌株（石川ら，1992）の 3 菌株を供試した．

（２）形態（２）生育度分離菌株を PDA 平板培地で，25℃，暗条件で 5～8 日間

ベノミル添加培地での生育度（佐藤，1996）は，PDA 培地

培養し，形成された分生子の形態を調査した．さらに，分離にベノミルが 1250ppm になるよう添加し，25℃，PDA 平板培

表4-4 2002年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）のリンドウに対する病原性
供試菌株

リンドウ

リンドウ

リンドウ

(99D02-7S)(99D02-6S)(02D05-S)

有傷

無傷

有傷

無傷

有傷

無傷

02R-3A

1／3 a)

0／3

2／3

0／3

0／3

0／3

02R-3C

1／3

0／3

0／3

0／3

0／3

0／3

Na91-016 b)

2／3

0／3

2／3

0／3

－

－

c)

0／3

－

0／3

－

0／3

無接種

－

a)発病株数/供試株数b)イチゴ炭疽病菌（石川ら，1992）c)－：未実施53

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

表4-5 2002年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）のイチゴ、トマトに対する病原性
イチゴ

トマトa)

「とちおとめ」「マイロック」

供試菌株b)02Ｒ－3Ａ

3／3

0／3

02Ｒ－3Ｃ

1／3

0／3

無接種

0／3

0／3

a)品種「がんばる根3号」に接ぎ木b)発病株数/供試株数
表4-6 2002年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）および既知種の形態菌株または既知種
02Ｒ－3Ａ

分生子の形態
紡錘形

02Ｒ－3Ｃ

紡錘形

分生子の大きさ（㎛）10.5－17.5×4.3－6.3

付着器の大きさ（㎛）c)5－12.5×4.3－6.5 d)（13.2×5.0）（8.5×5.1）

10－17.5×3.8－6.5 c)

7.5－12.5×5－8.8 e)（13.5×5.1）（9.2×6.2）

C. acutatum

a)

紡錘形

8.3－14.4×2.5－4－

C. acutatum

b)

紡錘形

8.5－16.5×2.5－4

8.5－10×4.5－6a)Simmonds(1965)b)Sutton(1980)c)PDA培地上の測定値．（ ）は平均値
d)WA培地上の測定値．（ ）は平均値
e)PCA培地上の測定値．（ ）は平均値
表4-7 2002年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）の性状
供試菌株

生育度a)

ｼ ｴﾄﾌｪﾝｶﾙﾌ 添加(%)

培地上での生育02R-3A
02R-3C
Na91-016

b)

30.3

＋

28.7

＋

29.7

＋

a)佐藤(1996）b)イチゴ炭疽病菌（石川ら，1992）
地で前培養した分離菌株および Na91-016 菌株をコルクボー

また，PDA 培地にジエトフェンカルブが 625ppm になるようラー（直径 4mm）で打ち抜き，薬剤添加培地へ菌叢面を下にに添加し，ベノミル添加培地での生育度調査と同様に 25℃，して置床した．25℃，暗条件で 5 日間培養後の菌叢直径を調暗条件で 5 日間培養後に菌糸伸長の有無を調査した．

査し，次式により算出した．

結果
ベノミル添加培地での生育度は，分離菌株 02R-3A，02R-

生育度=［（25℃5 日間ベノミル添加 PDA 平板培地上で生3C がそれぞれ 30.3％，28.7％となり，C. acutatum の特徴とさ育した菌叢直径）/（同無添加 PDA 平板培地上でれる 20％以上の数値を示した（表 4-7）．対照とした Na91-016の菌叢直径）］×100

菌株は 29.7％であった．また，いずれの菌株もジエトフェンカ
ルブ添加培地で菌糸伸長が認められた（表 4-7）．

54主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

図 4-7 2002 年リンドウ分離菌株（ Colletotrichum sp. ）の菌糸生育と温度との関係（PDA 上）５）菌糸の生育温度

４
材料および方法考察
リンドウ圃場で夏季に葉枯れや激しい株枯症状が発生し，その病斑部から Colletotrichum 属菌が高率に分離されたため，（１）供試菌株
分離菌株 02R-3A，02R-3C の 2 菌株を供試した．
（２）生育温度

病原菌の分離，接種による病徴の再現性の確認および病原菌の同定を行った．分離菌株はリンドウ（エゾ系）の茎に褐色分離菌株を 25℃，暗条件，PDA 平板培地で前培養した後，コルクボーラー（直径 4mm）で打ち抜いた菌叢片を PDA 平板の壊死斑を形成し，原病徴が再現され，病斑部から接種菌が再分離された．

培地上に置床し，5，10，15，20，25，28，30，35，37℃の各温2001 年にリンドウから得られた分離菌株 01R-A2，01R-B は，度で，暗条件，5 日間培養後の菌叢直径を調査した．1 処理

イチゴ品種「とちおとめ」，「女峰」に対する病原性は認められ当たりペトリ皿は 3 枚供した．

なかったが，シクラメン品種「シュトラウス」に葉縁からやや円結果形で褐色を帯びた壊死斑や花柄の軟化腐敗を引き起こし，菌糸の生育は 10～35℃で認められ，適温は 25～28℃であ病斑部から接種菌が再分離された．分離菌株の分生子は，った（図 4-7）．

無色，単胞，両端が丸い円筒形で，大きさは平均 14.0×5.8６）種特異的プライマーによる PCR 検定㎛であった．PCA 培地上での付着器は，暗褐色，不整形材料および方法

で，大きさは平均 11.5×7.6 ㎛であった．菌糸の生育は，PDA
培地上では 10～37℃で認められ，適温は 28～30℃であった．

（１）供試菌株
分離菌株 02R-3A，02R-3C の 2 菌株を供試した．
（２）PCR 検定

C. gloeosporioides に特異的なプライマーを用いた PCR 検定の結果，本菌に特異的な増幅断片が認められた．以上から，分離菌株を PDB 培地で 25℃，暗条件で 5 日間振とう培養

2001 年分離菌株は，Sutton（1992）の検索表および形態数値，

し，DNA 抽出キット（QIAGEN 社製）を用いて全 DNA を抽出

PCR 検定結果等から，C. gloeosporioides (Penzig) Penzig &後 ， Sreenivasaprasad et al. （ 1996 ） の 方 法 に 準 じ て ， C.

Saccardo と同定した（中山，2005；中山ら，2004a；中山ら，

acutatum を特異的に識別するプライマーを用いて PCR 検定

2004b）．
2002 年にリンドウから得られた分離菌株 02R-3A，02R-3C

を行った．
結果

は，イチゴ品種「とちおとめ」に葉縁から赤褐色で不整形の病

C. acutatum に特異的なプライマー（Calnt2，ITS4）を用い斑を形成し，病斑部から接種菌が再分離された．分離菌株のた PCR 検定の結果，分離菌株 02R-3A，02R-3C は 490bp 付

分生子は，無色，単胞，紡錘形～両端が尖った長楕円形で，近にそれぞれ特異的な増幅断片が認められた（図 4-5）．

大きさは平均 13.5×5.1 ㎛であった．PCA 培地上での付着器は，暗褐色，棍棒上で，大きさは平均 9.2×6.2 ㎛であった．

55

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

分離菌株のベノミル添加培地での生育度（佐藤，1996）は，

ex Simmonds と同定した（中山，2005；中山ら，2004a；中山ら，28.7％または 30.3％となり，C. acutatum の特徴とされる 20％

2004b）．

以上を示した．さらに，ジエトフェンカルブ添加 PDA 平板培

2001 年分離菌株は C. gloeosporioides，2002 年分離菌株

地での生育が認められた．菌糸の生育は，PDA 培地上ではは C. acutatum と同定し，現地のリンドウ株枯症状の原因菌と10 ～ 35 ℃ で 認 め ら れ ， 適 温 は 25 ～ 28 ℃ で あ っ た ． C.

判断した．赤坂（1993）が「炭そ病（病名，病原菌とも未報告）」

acutatum に特異的なプライマーを用いた PCR 検定の結果，として紹介しているが，Colletotrichum 属菌によるリンドウ病害

本菌に特異的な増幅断片が認められた．以上から，2002 年

に関する正式な報告はない．そこで，病名をリンドウ炭疽病と分離菌株は，Simmonds（1965），Sutton（1980）の検索表およ

呼称し，病原菌に C. gloeosporioides および C. acutatum を併び形態数値，PCR 検定結果等から，C. acutatum Simmonds

記することを提案した（中山ら，2004a；中山ら，2004b）．

56

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

総合考察
本研究では，栃木県におけるトマト，イチゴ，リンドウという剤の本病に対する予防効果や治療効果を明らかにしていく必要がある．

主要な園芸作物で発生した各種糸状菌病について，効果的

また，本菌はジャガイモに対して病原性を有し，その茎基な防除対策の構築に資するため，原因菌の分離，同定なら部に褐色で腐敗した病斑を生じた．特に品種「男爵薯」は本びに，その発生生態の解明等を目的とした．

菌に対する感受性が高く，本菌を土壌中から簡便かつ短期

トマトフザリウム株腐病については，施設栽培トマト（土耕栽間で検出できる可能性が示唆された．さらに，本菌は品種「男培）で主根が激しく褐変し，しだいに立枯症状を呈する病害爵薯」での病徴の有無等から，トマト萎凋病菌，トマト根腐萎が発生し，地際部付近の茎の病斑部から分離した菌株により

凋病菌，トマト株腐病菌との識別が可能であった．一方，本菌

原病徴が再現され，その形態的特徴から Fusarium solaniとトマト立枯病菌の品種「男爵薯」での病徴はよく似ており，両

species-complex に属すと考えられた．さらに，ジャガイモに対菌の識別は困難であった．また，本技術の実用化に当たってする病原性，rDNA ITS 領域や TEF1-α 遺伝子の解析結果は，

は，無殺菌土壌に本菌を混和した保菌土壌を作製し今回とRomberg and Davis (2007) の報告した F. solani f. sp. eumartii

同様の試験を行うとともに，現地栽培圃場での実用性を検証とよく一致しており，分離菌株を F. solani f. sp. eumartii と同する必要がある．

定した．本菌によるトマト病害の報告は本邦初であり，病名をトマトフザリウム株腐病と提案した．

罹病残渣の適切な処理は，病原菌の伝染環を断ち切る上で有効な手段である．罹病切片中の本菌は，25℃，140 日のトマトの各種土壌病害では，台木品種が実用的な防除手

嫌気的発酵処理により不活化した．今後，栽培の現場におい段として広く普及している．本菌のトマト各品種に対する病原て本病罹病残渣の嫌気的発酵処理による防除効果を検証す性を検討したところ，高度な抵抗性を示す品種は見当たらなる必要がある．

かった．特に，台木品種が穂木品種に比較して発病株率，発本研究で得られた知見から以下のような防除対策が考えら

病度とも高い傾向であり，現時点では台木品種を用いた本病れる．まず，トマト育苗用セルの消毒または新たなセルを使用の防除は困難である．本菌に対する抵抗性遺伝子の存在はするとともに，培土の消毒または消毒済み培土を使用すること不明だが，今後，本病に対して高い抵抗性を発揮する台木が前提となる．本病は土壌病害であり，土壌中の菌密度を低品種の育成に期待したい．

下させるうえでクロルピクリン剤による土壌消毒や土壌還元消Sanchez et al. (1975) に準じ，本菌のトマト品種に対する病毒が有効と考えられる．本病はトマトの促成長期どり栽培で新原性を実験室内の WA 培地上で簡便かつ短期間に検定すたに発生した病害であり，本作型は収穫期間が約 10 か月にる方法の有効性を明らかにした．本法は土壌接種法と比較しもわたるため，根が土壌深くまで分布している．そのため，フて病徴発現までの日数や接種に係る労力を削減でき有効な

スマや米ぬかを用いる通常の土壌還元消毒法に比べて，土接種方法と考えられた．

壌のより深くまで防除効果を発揮する，糖蜜または低濃度エ

本菌は，トマト，ジャガイモだけでなく，インゲンマメ，ソラマ

タノールを用いる方法が有効と考えられる．また，本病が本圃メにも病原性を示すことを明らかにした．トマト栽培では，通常，で発生した場合，発病株を早めに抜き取り，圃場外で適切に他作物を同一の圃場に混作あるいは輪作することはないが，処分することが重要である．その手段として，罹病残渣の嫌気隣接圃場等においてジャガイモやインゲンマメ，ソラマメを栽

的発酵処理による不活化が有効と考えられる．以上のように培することは本病の防除対策上，避けた方がよいと考えられ

育苗用資材や培土に注意を払いながら，土壌消毒処理，罹る．

病残渣の適切な処理など総合的な防除対策が本病の発生を

本病は土壌病害であるが，トマト茎から自然感染し発病に抑制するうえで有効と考えられる．

至る場合があることを明らかにした．分生子の飛散やかん水

トマト綿腐病については，土耕栽培トマトの育苗中に根腐に伴う土壌の跳ね上がり（土壌中に存在する厚壁胞子等）に症状を伴う生育不良が発生し，その根部罹病組織から分離しよるトマト茎への本菌の感染が考えられるが，主たる伝染源にた Pythium 属菌により原病徴が再現された．分離菌株は，そついては今後の検討課題である．また，本菌の分生子が伝染の形態的な特徴，PCR 検定の結果等から P. aphanidermatum

源となってトマトの花器や果実が発病に至る可能性があることと同定し原因菌と判断した．これまで本菌はトマト果実腐敗のを明らかにした．

原因菌として報告があるが（楠元，1950），トマトでの根腐症状

トマトの主要薬剤の一つであるキャプタン水和剤は，本菌を伴う苗の生育不良として初めての報告である．本菌は耐久の菌糸伸長や分生子発芽を著しく抑制し，本病の防除薬剤と器官として卵胞子を形成し，遊走子が水を媒介として植物体して有効性が高いと考えられた．しかし，現時点で本病に対への感染を拡大するなど，本菌の発生生態や防除に関するする農薬登録はない．今後，トマト植物体上でキャプタン水和

これまでの知見を参考にすると，以下のような防除対策が考57

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

えられる．本病が発生した農業者は同一の黒ポリポットを他品

な く ， 病 名 を リ ン ド ウ 炭 疽 病 と 呼 称 し ， 病 原 菌 に C.

目と共用しながら数年間使用していたことから，黒ポリポットは

gloeosporioides および C. acutatum を併記することを提案した．

他品目と共用はせず，トマト育苗用の黒ポリポットの消毒また両菌は降雨等により分生子が飛散し植物体への感染が拡大

は新たな黒ポリポットを使用するとともに，培土の消毒またはするなど，本菌の発生生態や防除に関するこれまでの知見を消毒済み培土を使用することが前提となる．併せて，栽培圃参考にすると，以下のような防除対策が考えられる．本菌の場の排水対策の徹底や適正なかん水管理により，土壌の水

植物体への感染には一定の濡れ時間が必要であり，それを分過多の回避に努めることが必要不可欠である．さらに，本回避するためイチゴ炭疽病防除で実用化されている雨よけ栽

病が育苗中または本圃で発生した場合，圃場内等への蔓延

培（石川ら，1989）が最も有効な防除手段と考えられる．また，防止のため発病株を早めに抜き取り，圃場外で適切に処分

チウラム剤が本病の防除薬剤として農薬登録となっておりすることが重要である．これらの総合的な防除対策が本病の（2019 年 2 月現在），発生初期の防除対応への効果が期待発生を抑制するうえで有効であると考えられる．

できる．本病が発生した場合，圃場内での蔓延防止のため発イチゴピシウム根腐病については，イチゴ圃場（土耕栽培）

病株を早めに抜き取り，圃場外で適切に処分することが重要で品種「とちひとみ」および「とちおとめ」の生育停滞や萎凋，である．その手段として，イチゴ炭疽病罹病残渣処理で高い枯死が発生し，その根部罹病組織から分離した Pythium 属菌防除効果が明らかになっている嫌気的発酵処理（石川ら，により原病徴が再現された．分離菌株は，その形態的な特徴，

1990）が有効である．これらの総合的な防除対策が本病の発rDNA ITS 領域の塩基配列の解析，PCR 検定の結果等から，生を抑制するうえで重要と考えられる．

P. sylvaticum，P. spinosum，P. helicoides とそれぞれ同定し原

農作物栽培の現場では，さまざまな農業生産上の課題が因菌と判断した．これまでイチゴピシウム根腐病の病原として，見受けられる．中でも，病害虫の発生は，農業者の所得確保

P. helicoides が報告されており（鈴木ら，2005；渡辺ら，2005），

や農業経営の安定化，さらには産地の維持・発展の面で大き本病の病原に P. sylvaticum および P. spinosum を追加するこな阻害要因となっている．栽培現場で原因不明の生育不良とを提案した．また，P. helicoides については，イチゴ土耕栽株が発生した場合，通常，農業者は各県等にある最寄りの普培での初めての発生報告である．本病は，前記のトマト綿腐

及指導センターに相談し，普及指導センターを通じて農業試

病菌（P. aphanidermatum）と同じく Pythium 属菌による病害で

験研究機関または病害虫防除所に生育不良株が持ち込まれ，あることから，以下のような防除対策が考えられる．健全な親

その診断作業がスタートする．

株から子苗を採苗し，育苗用セルの消毒または新たなセルを

農作物の病害研究は，生育不良株などの原因を究明し，使用するとともに，培土の消毒または消毒済み培土を使用す

その病原の発生生態等を明らかにするとともに，それらの知ることが前提となる．併せて，栽培圃場の排水対策の徹底や見を総合して農業者が経営的に成り立つような処方箋（防除適正なかん水管理により，土壌の水分過多の回避に努めるこ対策）の策定・提案に大きく貢献するものである．農作物の生とが必要不可欠である．さらに，本病が育苗中または本圃で育不良株などと向き合う第一歩が「診断」という作業であり，正発生した場合，圃場内等への蔓延防止のため発病株を早め確で迅速な「診断」のためには病徴の詳細な記載や病原のに抜き取り，圃場外で適切に処分することも重要である．これ

分離，同定に関する知見の集積が必要不可欠である．そのらの総合的な防除対策が本病の発生を抑制するうえで有効意味において，栽培現場に近い位置にいる各県等農業試験であると考えられる．

研究機関の研究者の役割は大きいと考える．

リンドウ炭疽病については，リンドウ圃場で夏季に葉枯れや本研究は，栃木県の主要な園芸作物であるトマト，イチゴお激しい株枯症状が発生し，その病斑部から分離した

よびリンドウに新たに発生した糸状菌病について，栽培現場

Colletotrichum 属菌により原病徴が再現された．分離菌株は，からの強い要望に対応するため，病原菌の分離，同定，発生

その形態的な特徴，PCR 検定の結果，ベノミル添加 PDA 培

生態の解明等に取り組み，それらの成果を取りまとめたもの

地での生育度（佐藤，1996）などから，C. gloeosporioides，C.

である．ここで得られた知見が，現場段階での効果的な防除

acutatum と そ れ ぞれ 同 定 し 原因 菌 と 判 断 し た ．こ れま で対策の構築や園芸作物の生産安定につながり，農業者の経Colletotrichum 属菌によるリンドウ病害に関する正式な報告は営安定に貢献できれば幸いである．

58

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

要旨
トマト，イチゴおよびリンドウは，栃木県の園芸生産の中で嫌気的発酵処理による本菌の不活化を検討したところ，25℃，
140 日処理で本菌が不活化したと考えられた．

重要な品目となっている．現地圃場では，これら品目の生育

トマト綿腐病は，地面に近接したトマト果実が白色綿状の菌不良や萎凋，枯死など糸状菌による病害が発生し，安定生産

糸 で 覆 わ れ ， そ の 軟 化 腐 敗 し た 部 位 か ら Pythium

上の大きな阻害要因となっている．そこで，病原菌の分離，同aphanidermatum が分離され命名された病害である（楠元，定，その発生生態の解明等に取り組んだ．

1950）．今回，栃木県の土耕栽培トマトの育苗中に根腐症状

トマトフザリウム株腐病は，トマトの根が褐変腐敗し，地上部を伴う生育不良が発生し，根部罹病組織から Pythium 属菌ががしだいに萎凋，枯死する病害である．地際部付近の茎の病

高率に分離された．接種試験による原病徴の再現，分離菌

斑部から Fusarium 属菌が高率に分離され，接種試験により株の形態的な特徴，種特異的プライマーによる PCR 検定等

原病徴の再現，分離菌株の形態的な特徴，ジャガイモに対に よ り ， 分 離 菌 株 を P. aphanidermatum と 同 定 し た ． P.

する病原性，rDNA ITS 領域や TEF1-α 遺伝子の解析結果か

aphanidermatum によるトマトでの根腐症状を伴う苗の生育不ら，分離菌株を Fusarium solani f. sp. eumartii と同定した．本良として初めて報告した．

菌によるトマト病害の報告は本邦初であり，病名をトマトフザリ

イチゴピシウム根腐病は，イチゴが根腐症状を伴って下葉ウム株腐病と呼称することを提案した．本菌は，トマトの他，イの葉柄が小豆色に変色し，生育が停滞，萎凋する病害である．

ンゲンマメ，ソラマメに病原性を示した．菌糸の生育は 10～

生育不良株の根部罹病組織から Pythium 属菌が高率に分離

37℃で認められ，適温は 28～30℃付近であった．圃場では，され，接種試験による原病徴の再現，分離菌株の形態的な摘葉に伴う茎の傷口から感染し発病に至ったと考えられる病

特徴，rDNA ITS 領域の塩基配列，種特異的プライマーによ斑も見受けられる．本菌のトマト茎への接種により，茎に褐色る PCR 検定等により，分離菌株を P. spinosum，P. sylvaticum，

病斑を形成し原病徴が再現された．また，本菌のトマトに対す

P. helicoides とそれぞれ同定した．P. helicoides によるイチゴピ

る病原性を簡便かつ短期間に検定する方法として，トマト種

シウム根腐病の報告（鈴木ら，2005；渡辺ら，2005）があること

子を分生子懸濁液に浸漬した後，WA 培地に置床し，その幼から，P. spinosum，P. sylvaticum についてはイチゴピシウム根

植物体での病徴の有無で病原性を検定する方法が有効であ腐病への病原追加を提案した．なお，P. helicoides は，既報った．トマトに登録のある主要薬剤を供試し，本菌の最小生ではイチゴ養液栽培での発生報告であったが，今回初めて

育阻止濃度（MIC）を検討したところ，いずれの薬剤も MIC は土耕栽培での発生を報告した．

1600µg/ml より大きかった．各薬剤の実用濃度での菌糸伸長

リンドウ炭疽病は，リンドウ茎葉に斑点を生じ，病勢が進展抑制率は，トリフルミゾール水和剤，キャプタン水和剤がすると株枯症状を呈する病害である．茎葉の病斑部から94.0％と高かった．また，キャプタン水和剤は，分生子の発芽Colletotrichum 属菌が高率に分離され，接種試験による原病を著しく抑制し，本病の防除薬剤として有効である可能性が徴の再現，分離菌株の形態的な特徴，種特異的プライマー高いと考えられた．ジャガイモマイクロチューバーを用いて本による PCR 検定等により，分離菌株を C. gloeosporioides，C.

菌の土壌からの検出を試みた．その結果，品種「男爵薯」はacutatum とそれぞれ同定した．これまで，リンドウ病害では本菌に対する感受性が高く，萌芽した植物体の茎基部と根のColletotrichum 属菌による正式な報告はなく，本病の病名をリ境界付近に形成される淡褐色～褐色の腐敗症状を目印としンドウ炭疽病と呼称し，病原菌に C. gloeosporioides および C.

て，本菌を土壌から検出できる可能性が示唆された．さらに，

acutatum を併記することを提案した．

59

栃木県農業試験場研究報告 第 80 号

謝辞

腐病菌の同定について，著者の共同研究者であるとともに，この論文を草するに当たり，法政大学生命科学部の石川成

ご指導ならびに有益なアドバイスをいただいた．第 4 章では，

寿教授には，ご懇切な研究指導とご校閲を賜った．また，ご栃木県農業試験場の石川成寿博士（現在，法政大学生命科

多用であるにもかかわらず，種々のアドバイスをいただき，常学部）には病原菌の同定について丁寧なご指導をいただいに著者へのご配慮と激励を賜った．ここに衷心より感謝の意

た．栃木県農業試験場黒磯分場（現在，黒磯農場）の藤田雅を表する．

一氏（現在，栃木県農政部経営技術課）にはリンドウの接種

第 1 章の研究では，国立研究開発法人農業・食品産業技

植物を準備，提供していただいた．また，全ての章にわたり，術総合研究機構遺伝資源センターの青木孝之博士には著

各地域で活動している普及指導員の方々には現地調査等で者の共同研究者であるだけでなく，ご懇切なご指導ならびに多くのご協力をいただいた．ここにこれらの方々に対し，衷心

有益なアドバイスを終始いただくなど多大なご支援ご協力をより感謝申し上げる．

賜った．地方独立行政法人北海道総合研究機構道南農業

また，栃木県農業試験場研究開発部病理昆虫研究室の福試験場の三澤知央博士には貴重な菌株を分譲していただく

田 充室長をはじめ，小山田浩一氏（現在，栃木県那須農業とともに，有益なアドバイスをいただいた．宮崎県総合農業試

振興事務所），山城 都氏（現在，栃木県河内農業振興事務

験場の今村幸久氏には貴重な菌株を分譲していただいた．

所），和氣貴光氏（現在，栃木県畜産酪農研究センター），森

また，キリンホールディングス株式会社フロンティア技術研究

島正二氏（現在，栃木県農政部農村振興課），青木久美氏

所の大西 昇氏にはジャガイモ各品種のマイクロチューバー（元栃木県農業試験場）には実験の円滑な遂行に多大なごを分譲していただいた．第 2 章，第 3 章では，岐阜大学流域

協力をいただいた．ここに深甚なる感謝の意を表する．さらに，

圏科学研究センターの景山幸二教授，岐阜県農業技術セン

本研究の実験補助に労を惜しまずご協力いただいた栃木県

ターの渡辺秀樹博士にはトマト綿腐病菌，イチゴピシウム根

農業試験場の齋藤芳彦氏に厚く感謝申し上げる．

60

主要園芸作物のトマト，イチゴおよびリンドウの糸状菌病に関する研究

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