衣笠繊研輯13．染料植物：ツルムラサキ絹
アルミ銅韻
鉄

5GY7／4ア淋毒

調田海嘩法師嘗ぎ虎

11ⅣE亨／：

ii面頭稜媒染鐘㌧∵ナ謙二J＋

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使用した染料植物の例一10−脚

10YR9ノ2衣笠繊研報郎og一ノ＼ソクアウトマウスは兄弟間で交髄し、遺1．まえがき伝的に均→なマウスを作製した後、オスを実験に動脈疾患は、血璧低比重リポタンパク貨（LDL）用いた［17，18］。

レベルおよびコレステロ‥ルレベル、酸化ヤ凝集マlラスは明（14時間卜晴（10時間）の光同期といったLDLの修飾など様々な危険因子によってで、温度制御した施設内で自由に食餌と水を摂収起こる。酸化型L上〕L（0Ⅹ−LDL）は動脈硬化症のできる条件で銅管したrJ4適齢で椎乳後、実験を進行に関与していることが報告されている［ト3］。

開始する6週齢までの期間、通常の食餌（8．7（．払脂（￣）x−LnLは単球の接着先進［4］、より強い細胞毒性肪と0．（略3％コレステロールを含むC二＼′1F、オリエン［5］、泡沫細胞の形成促進［6，7］およびサイトカイタル惜母）を与えた。マウスは一一晩、絶食させたンや訓胞増殖因子の発現の変化誘導［8，9トなどの活後に尾部静眠より採血し、エチレンシアミン四酢性を持っており、これらの生理油性によって動脈酸（EI）TA、1（）川心ル／L）を含むチューブに入れ、硬化病変部位の形成が促進される。0Ⅹ−LT）Lの生鳳柴を調製した。研究の終F時に誼椎骨折によっ成は膜化ストレスによって加速されるため、抗酸て全てのマウスを屠殺し、心臓を以後の実験に川化物質は動脈傾化症を抑制することが示唆きれていた。なお、本研究は京都大学の実験動物委員会いる。これまでに、1別旨血痕ウサギやサルにおいの承認を受けて、京都大学の実験施設で実施したて抗酸化剤プロブコールによって動脈硬化症の進ものであるくつ行が抑制されることが報告されている「10，11］。し2．2 投与試料かし、ビタミンE、S一カロテン、ビタミンCやポリフェノールなど食馳に含まれる抗醸化物質が、委棄は8秒間、180℃の温風（ドライマイス丁．DLの酸化に対する感受性や動脈硬化症に与えター、ホソカワミクロン社）により乾燥・粉砕しる影響についてはまだ不明な点が多い［12］し．これた、・）6過齢のマウスをランダムにコントロール群らのどタミンなどに加えて、いくつかのハーブ類（7匹）および桑葉投一与＼群（7匹〕の2群に分け、がLDLの酸化を抑制することが報告されている試験試料を一っ・えた。コン1、U−ル群には粉砕Lた［13．14］。

CMF、桑柴投与群には1％（w．．ノw）桑黄粉未を含むCMFを6過齢から18週齢までの12週聞投与L桑葉は、カイコの糾であるとともに、中国やIl本で漢方薬として用いられている〔，また、桑葉は抗た。

酸化物質を多く含むことが報告されている［15］し、本研究では、桑葉をアポリポタンパク質Eノック2．3 血葉コレステロールレベルアウトマウス（／卸Og￣′￣）に轟到1投ノJ・し、リポタ6、10、14、18週齢において、マウスを一一塊絶ンパク質の憤化に与える影響や動脈硬化址に与え食させ、血渠を採取した。山楽コレステロールレ

る影響を調べたリベルは分光法（Ctl（）1esc01nrLiqtlidKit、凍洋紙）
によって測定した。

2．材料および方法2．4 マウス非HDL−リポタンパク質の単離2．1 マウスEnTA（25汀爪ノt）存在下で搾明した新鮮血を低速遠心（3（）00rpm、4℃、10分）し、血清せ得たLl郎〃g￣′ノ￣］290laXC57Bし／6ハイブリッドマウスはEdwar・dM，Rubin悼上（UrlivcrsityofCallifol−nia密度勾配遠心によってマウス山菜より非HDL−リatRerkel〉r，て＿JSA）より提供された［16］1そのハイポタンパク質けと重＜1．063g′／1TIL）を単離した。具ブリッドマウスをC57BL／ノ6マウスと交配L、Fl体的には、700〟Lの血柴が入ったチューブに、最ハイブリッドを作製Lたし，Flαク〃g十■￣は5世代終比車が1悌3g′ノ′mLとなるようにKl〕rを加えた。間C57RL／6マウスとバッククロスした。さらに、チューブを4℃で1（）0．000rpm、2ノ1時間遠心（TC−11ニヱーー（調）Ⅲ止25▲UくP▲u▲d﹂▲2一∧U臥副計

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lu帖orryll1．11￠ont「山4つー︻UFig．4，Representadvephotomicr喝raphsoftheaortLcsinus血〕m卸虚∵￣mice．TheanimalsinthecontroI亡On鵬IMul叫Fig．5．Quanti鮎ationoLatheroscleroticlesionarea（left）andmul加rry（right）groupsweresacr血：edat18weeksofage．andtheaortjcr朋t＄WereStainedWi也oilred・Oandhematoxylin．

Stained by oiL red・0．The atheros亡IeroticlesionWaS quaTltined asthefra亡tionareaofcontrolandmulberry訂OupS．Themultxrrygroupshowed61％1e随atherosderosiscomparedwiththe亡Ontmlgroup，応分のコントロール群に比べで翠著に長かった。

ることが分かった（国6A）。一方、義幸投与群でこれは桑葉の軽口投与によって、桑葉の杭醒化物は繊維性皮膜構造は認められなかった（園6B）。

質が卸娼￣ノ￣マウスの血中に取り込まれ、その結続いて、マクロファージ特異的抗体應用いてマク果、血中リポタンパク賓の酸化が抑制きれたことロファージを染色Lた結果、コントロール詳ではを示している。

血管内皮下にマクロフ丁−ジが検出されたが（図6C）く、轟薫投与群では検出されなかった（囲63．8 動廉硬化に対する桑♯の影■D）。
以上の結果より、コントロール群のオイルレッド続いて動脈硬化病変部位叡解析した。これまでに、通常食を投与Lた亜娼￣ノ￣マウスは18適齢ま0で染色きれた部位は動脈硬化病変部位であり、でに線純増殖性病変部位を発症することが明らか一方、桑葉投与群では動脈硬化症の進行が抑制きにされている［25．訂］。本研究においても、コントれたことが確認きれた。

ロール群の大動脈基始部でオイルレッド0で染色される帯状動脈硬化病変部位が聴められた（園44．考♯左）。一方、桑葉投与群では病変部位が顕著に小さいことが分かった（固4右）。東亜解析の蘇果、亜娼小マウスに6適齢−1名適齢の期臥1池轟葉投与群では動脈硬化病変部位の面積はコント魚兼（w／W）を含む食餌を軽口投与した着果、動ロール群に比べて約61％（囲．014、回5）に減脈硬化症が抑制層れることが示された。しかL、少していることが明らかとなりた。

体重および血清コレステロール濃度は通常食投与群と有意な叢は認められなかった。また、桑華投与群のマウスから得たリポタンパク質は酸化に卸3．4 動脈硬化病変部世の免癌組■学的♯析動脈硬化病変部位における血管平滑筋細胞およする抵抗性が増加していた。

ぴマクロファージの分布を解析した。ローアクチ硬化ストレスが動脈硬化に関係してい品ことはンに対する抗：体を用いて平滑筋細胞を染色した結広く認められている。これまでに、ビタミンEが果、コントロール群では平滑筋細胞が血管内膜でLDLの酸化を抑制することが報告きれている［盟一凝集L、オイルレッド0で染色される部位で血管別］。Lかし、ビタミンEが高脂血症の動物におけ内皮下の空間を覆う繊維性皮膜構造を形成している動脈硬化病変部世の進展を遅らせるという報告ー15−