モダンメディア 59 巻 8 号 2013［ニューテクノロジー］ 209

次世代型シーケンサーを用いた新しいウイルスの発見方法
Discovery of novel viruses used by next generation sequencer

みずたにてつや水 谷 哲 也Tetsuya MIZUTANIを防止する方策として低温殺菌法を開発したことでも有名である。現代の細菌学では、寒天培地を用いはじめにた細菌の単離は当たり前の技術である。しかし、当
微生物発見の歴史は、紀元前 400 年くらいまで遡時、微生物の培養は多くの微生物が混在した状態でることができる。ヒポクラテスは、悪疫の原因がミおこなわれており、単一の微生物を培養することはアズマに汚染された空気に人が触れることによって困難であった。その理由は肉エキスにゼラチンを添病気になると考え「ミアズマ説」を唱えた。感染症

加したものが培養液として用いられており、約 30

学的に重要なことは、原因微生物を特定していない度で液体になってしまうからであった。細菌を単離ものの、外因性の原因物質により病気が発生するとするためには固形の培地を用いなければならないこ考えていたことである。その後、人類は 14 から 15とに気が付いたコッホは、約 45 度以下で固形にな

世紀にかけて天然痘、発疹チフス、ペスト（黒死る寒天を用いた培地を考案した。ここで独立したコ病）、梅毒などを経験し、フラカストロが接触感染ロニーを分離するという純培養の概念が生まれたのにより病気が発生するという「コンタギオン説」をである。彼はこの方法を用いて炭疽菌、結核菌、コ唱えるに至った。この説は、患者の移動に伴い病気レラ菌などを発見していった。北里柴三郎もコッホが発生することからミアズマ説のような空気感染だのもとで破傷風菌を発見し、血清療法を開発して医けでは説明がつかないという発想による。1600 年学に貢献した。教科書に必ず登場するコッホの 4 原

代の後半になると、自然哲学者であり建築家のロ則は感染症学では非常に重要である。すなわち、（1）

バート・フックが顕微鏡を用いて生体の最小単位をある病気の病変部からいつも特定の微生物がとられcell（細胞）と名付けた。フックは、弾性のあるバる、（2）その微生物を純培養できる、（3）純培養しネの伸びに対して張力が比例することを示した法則

た微生物が実験動物への接種で病気を再現できる、（フックの法則）でも有名である。アオカビの観察（4）その動物から微生物が再び分離できる、という記録などが教科書に掲載されているが、他にも精子病原微生物を確定するための基本的条件である。こや赤血球も観察していた。彼の顕微鏡は 50 からの法則はウイルスにもあてはまる。

300 倍の低倍率であった。その後、約 100 年間はレン微生物発見の歴史的背景を踏まえて、「ある微生ズの技術が進まなかったので顕微鏡の性能が上がら物が特定の病気の原因であるための条件」というなかったといわれている。それゆえ、当時の科学者コッホの 4 原則が生み出されたのである。現代のよの興味は微生物の発見よりも、それらがどのようにうな高速ハイスループットなシーケンサーの全盛期発生してくるかに集中した。このころ、ハエは腐っにあっても、コッホの 4 原則は最も重要である。

た肉から発生し、ネズミは泥から生まれるという「自然発生説」が信じられていたが、1800 年代の中Ⅰ. 新しいウイルス感染症 − SARS の場合−

ごろにパスツールが有名なスワンの首型試験管を用
2003 年、最も大きなニュースのひとつは SARS

いてこの自然発生説を否定した。彼はワインの変質
東京農工大学 農学部附属国際家畜感染症防疫研究教育センター・センター長
伝染病疫学解明部門・教授
0183 - 8509 東京都府中市幸町 3 - 5 - 8

Director, Research and Education center for Prevention of GlobalInfectious Diseases of Animals
Tokyo University of Agriculture and Technology(3-5-8 Saiwai-cho, Fuchu-shi, Tokyo)
（1）

210

（Severe Acute Respiratory Syndrome）のアウトブレを検出するための有効な手段のひとつには電子顕微イクであった。幸い日本では患者を出すことなく終鏡がある。電子顕微鏡ではウイルス科（たとえば、息したが、当時は大きな社会現象になった。SARSヘルペスウイルス科）まで特定可能であるが、いわは近年の新興ウイルス感染症を語るうえで重要な要ゆるウイルス種（たとえばサイトメガロウイルス）素を持っている。一般に、ヒトなどに重篤な疾病をまで決定できない。電子顕微鏡でコロナウイルスに起こすウイルス感染症は、遺伝子検出、ワクチン、特徴的な写真（太陽のコロナのような像）が撮影さ治療薬、防疫体制、法律改正などを劇的に変化させれた場合でも、SARS コロナウイルスなのか、古典る。ここでは、特に遺伝子検出法を中心に、SARS的なヒトコロナウイルス（229E もしくは OC43）なによるテクノロジーの向上を振り返ってみたい。のか、最近発見されたコロナウイルス（HKU や NH

SARS という現象にはいくつかのキーワードがなど）なのかはわからない。何らかの方法でゲノムあった。たとえば、ハクビシン、ホテル M、スーの塩基配列を決定してからウイルス種を特定するこパースプレッダーなどである。今ではもう、ハクビとになる。このように、ウイルスゲノムの塩基配列シンと SARS を結びつけて考える人はほとんどいなを明らかにすることは、未知のウイルスを既知のウいのかもしれない。当時、感染源とされていたハクイルスにするために非常に重要なステップと言えビシンは患者が発生した付近で売られていた個体だる。SARS コロナウイルスが発見された当時はまだけが感染していたことがわかり、ハクビシンは自然次世代型シーケンサーがデビューする前であったの宿主ではないことが明らかになっている。すなわち、で、コロナウイルスの遺伝子を発見するまでに時間別の感染源が存在するという説が有力になってきがかかっていた。

た。一方、エボラウイルスやニパウイルスなどの人獣共通感染症の原因ウイルスは、自然宿主がコウモ

Ⅱ. SARS と MERSリであるということもわかってきた。そして今では、
SARS コロナウイルスもコウモリが自然宿主である

2012 年 7 月、サウジアラビアにおいて 60 歳の男という説に落ち着いている。ホテル M に宿泊した性が重症肺炎で亡くなり、その肺組織から新しいコ中国の広東の感染者が、そこに宿泊していたさまざロナウイルスが発見された。このウイルスの全遺伝

まな国の人に感染させて、一気に世界中に広まった。

子配列が解析され、コウモリコロナウイルス（Bat-SARS にはこのようなスーパースプレッダーというCoV）と近縁のウイルスであることが明らかとなっ爆発的に感染を広める感染者が存在した。SARS はた 。当初、解析にあたったオランダのエラスムス

呼吸器感染症ということもあり、インフルエンザと大学医療センターにちなんで Human Coronavirus-比較されることが多く、感染力の非常に強いウイル

Erasmus Medical Center（HCoV-EMC）と呼ばれてスという誤解があるが、通常は一人の感染者から一いたが、ウイルス命名国際委員会の提案により今で人か二人にしか感染しない。ところが、スーパース

は Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus

プレッダーは 10 人以上に感染させるので、ここか（MERS-CoV）と呼ばれている。MERS -CoV の潜伏ら感染者が増大したのである。未だにどのような素期間は最大 7 日程度であり、呼吸器症状の他、発熱因を持った人がスーパースプレッダーになるのか科がみられる。体外式膜型人工肺による呼吸補助が行学的に説明するのは難しいとされているが、彼らのわれた例もある。2013 年 7 月までに報告されてい予後が悪いという点で一致した特徴を持つ。SARSる確定患者は 91 人で、46 人が死亡している。特にのように短期間に世界的大流行を起こし、比較的短2013 年の 5 月になり患者数および死亡者数が 2 倍近期間に終息に至ったウイルス感染症は珍しい。

くに増加しているので、本稿が出版される頃には感1）

現在、われわれが知っているウイルス（既知のウ染者数が増えているかもしれない。このように、現イルス）も発見される前は未知のウイルスであった。

在は感染拡大が懸念されており、事態は深刻になり既知のウイルスとして認識されるためには、ウイルつつある。また、ヒトからヒトへの感染が現実に起スゲノムの塩基配列の少なくとも一部が決定されるこりつつあると考えられる。ヒトコブラクダの血清ことが必要である。原因不明疾患から原因ウイルスから MERS -CoV の抗体が発見されたという報告が（2）211あったが、国連食糧農業機構は、ラクダを感染源と原因不明のヒトや動物の検体結論づけるのは時期尚早との声明を出した。
SARS コロナウイルスは 2002 年 11 月 16 日に中国

ウイルス分離既知のウイルスの可能性で最初の患者が確認され、2013 年 3 月下旬にウイルス分離に成功、4 月中旬にゲノムの全塩基配列がPCRなどの遺伝子検出

ELISAなどの抗体検出

陽性

陰性確定

未知のウイルスの可能性決定された。患者が確認されてからゲノムが明らかになるまで約 5 カ月を要している。この間、SARSは世界各地に広まってしまった。一方、MERS では患者発生から約 1 週間でゲノム配列が明らかになっている。この差は、ひとえに遺伝子解析手法の進歩、次世代型シーケンサーなどすなわち次世代型シーケンサーの開発による。
図 1 原因不明の検体の解明手順
原因不明の疾患は、そもそも感染症かどうかについても不明である。今後、感染症であることを証明できるようなバイオマーカーの発見はこの分野では重要な課題である。
インターフェロンや誘導される遺伝子などの活用が考えられている。図には載せていないが、不明検体を直接次世代型シーケンサーで解析することも可能であるが、ウイルス分離や細菌培養を行うことや、できる限り既知の病原ウイルスを検出するという試みは重要である。

Ⅲ. 次世代型シーケンサーの開発
近年のバイオテクノロジーの発達により、ウイルスの研究も大きく変わってきた。たとえば、実験レ
ベルのウイルス核酸の検出はノーザンおよびサザンブロッティング法から PCR に変わり、検出速度・感度が大幅に上昇した。塩基配列のシーケンスもサことが可能である。図 1 に不明検体を解明するためンガー法からサイクルシーケンス法によるキャピラの理想的な戦略を示した。

リーシーケンスに変わっている。そして、世界的なこのように、次世代型シーケンサーは、ウイルスハイスループットシーケンスの時代に突入し、次世ゲノムの塩基配列の決定に絶大な力を発揮してい代型シーケンサーが登場した。

る。次世代型シーケンサーが登場した経緯を概説

次世代型シーケンサーの出現は、ウイルス研究のする。

方法論を大幅に変えることになった。これまでのウ

まず、最初に開発されたシーケンシングの方法はイルス検査では培養細胞などを用いたウイルス分離

DNA を断片化するマクサム・ギルバート法と、停はもっとも基本的な方法であった。ウイルス分離は止ヌクレオチドを用いるサンガー法であった。これ

検体からウイルスだけを取り出して増幅する作業でらの方法は同じ年の 1977 年に発表されている。サあり、ウイルス遺伝子をクローニングしてゲノムのンガー法は後に PCR を用いて効率化され、現代の塩基配列を決定するだけでなく、実験動物などに接シーケンシングの主流になっている（サイクルシー種することにより病原性を再現したり、抗ウイルスケンス法）。また、核酸を放射線標識してポリアク剤の効果を判定するための材料となる。このようにリルアミドゲル電気泳動しオートラジオグラフィー

ウイルス分離は、ウイルス学のもっとも基礎的な作により検出していたが、キャピラリー電気を利用す業であり、コッホの 4 原則の根幹にあたるといえよることにより飛躍的に発展した。キャピラリー電気

う。新しい病原微生物らしきゲノム配列を発見した

泳動によるサイクルシーケンス法では、機器の性能ときには、コッホの 4 原則を満たすかを検討して、にもよるがおおよそ 1 回で 800 塩基を決定できる。

病気の原因を特定するという作業は非常に重要であこの方法が、いわゆる第 1 世代のシーケンシングでる。しかし、ヒトのノロウイルスなどのようにウイある。

ルス分離ができない重要なウイルスも少なからず存

次世代型シーケンシングという用語は、この第 1在する。一方、次世代型シーケンスは検体中に含ま世代に対比して用いられている。アメリカ合衆国をれる遺伝子配列を網羅的に解読していくことができ中心に多くのベンチャー企業や研究機関が開発競争るので、ウイルス分離というステップを踏むことなした結果、第 2 世代の機器が産まれた。日本では主く、未知のウイルスであっても存在を明らかにするにロシュ社、イルミナ社、ライフテクノロジー社の（3）212

機器が導入されている。さらに、第 3 世代として 1は自己増殖できないことや、細胞壁をもたないこと分子シーケンシング技術を搭載した機器が販売されからウイルスに分類されている。ウイルスの直径はている。各次世代型シーケンサーの性能の比較につ約 680nm であり、正二十面体のカプシドをエンベいては多くの成書があるので、ここでは著者の研究ロープが包んでいる。それゆえ、メガウイルスは光室が所有しているイルミナ社の MiSeq という機器学顕微鏡で観察できる。メガウイルス発見以前には、に絞って概説する。

英国の冷却塔の水中のアメーバから発見されたミミ

イルミナ社は親機種として HiSeq、子機種としてウイルスが最大のウイルスであった。ミミウイルス

MiSeq を開発、発売している。MiSeq はデスクトッは細菌に似ている（mimic）ことが名前の由来であプ型次世代シーケンサーであり、50 から 250bp のリーる。当初は細菌と考えられていたが、1998 年にウド長で約 700 万の遺伝子断片をシーケンスできる。

イルスに分類された。直径約 400nm でゲノムサイ

たとえば、著者らは 125bp のペアエンドで 800 万

ズは約 120 万塩基対である。さらに 2008 年にはフリード× 2 のシーケンスを経験している。数年前まランスの冷却水からミミウイルスよりも大きいママで、イルミナ社の機械はショートリード、ロシュ社はウイルスが検出されている。このママウイルスにはロングリードと言われており、イルミナ社は de novo

スプートニックウイルス（衛生の名前に由来）といの解析には不向きとされていた。しかし、現在では

う直径約 50nm のウイルスが感染していた。今のとロシュ社と同様のリード長が得られるので、もはやころ、ヒトには感染しないとされている。

ショートリードの機器とは呼べなくなっている。

2. エボラウイルスの起源?蛇のウイルス
ヘビには封入体病という病気が知られている。こⅣ. 新しいウイルスの発見に使われるの病気は昔から飼育されているボア科のヘビに流行次世代型シーケンサーしていた。主に神経症状で、ヘビが虚空を凝視する
MERS コロナウイルスのように、近年、感染症学ような仕草をして、慢性の経過をたどったのちに免の分野でも次世代型シーケンサーが多用されてい疫低下による口内炎、穿孔性胃炎によって死亡する。

る。最近話題のウイルスについて、いくつかの例を病理学的には細胞質内好酸性封入体が特徴であり、示してみる。

病名の由来になっている。2001 年にはレトロウイ
ルスが原因とする論文が報告されたが、2012 年に1. メガウイルスなりアレナウイルスやフィロウイルスに近縁のウイ
3）

メガウイルス・キレンシス（Megavirus chilensis）

ルスが原因であることが報告された 。この新しい

2）ウイルスはアレナウイルスやフィロウイルスの起源（本稿の校正時にさらに大きいパンドラウイルスのにあたる可能性があり、注目を集めている。ウイル存在が報告された。）。チリのラスクルーセル沖で採スの発見には、次世代型シーケンサーのイルミナ社

取された海水から発見され、自然宿主は不明である。

HiSeq 2000 が使われた。

は 2011 年に報告された最大級のウイルスである

そもそも海はウイルスの宝庫であり、沿岸部の海水3. ヒトの新しい出血熱ウイルスには 1ml あたり 1 億個のウイルスが存在すると試算されている。メガウイルスの実験感染では、アメー2012 年、中央アフリカで出血や下痢で死亡するバ（アカントアメーバ属）の共生細菌に感染できる。

症例が報告された。先に感染して死亡した二人の子

ゲノムサイズは約 126 万塩基対であり、真核生物よ供を看護していた看護師から、新しいウイルスが発りは短いがある種の細菌よりは長い。メガウイルス見された。このウイルスは狂犬病などを含むラブドの全ゲノム塩基配列は、次世代型シーケンサーのウイルスに属することがわかった 。今のところ、454 社 titanium とイルミナ社 Hiseq を用いて決定さこの 3 人の他にこのウイルスに感染した形跡をもつれている。メガウイルスの遺伝子数は 1000 以上あヒトは見つかっていない。感染源も不明のままであると考えられているが、大腸菌は 4000 個ほどあるるが、吸血昆虫が媒介する可能性を否定できないのので、巨大なウイルスでも細菌には及ばない。これで、今後の患者発生に気を配るべきである。この研

4）

（4）

213

究においてもイルミナ社 HiSeq 2000 が使用されてが起こることにより致死的に変化するウイルスの報いる。

告がある。本来の生息地域では決して出会わないはずの動物種を人為的に接触させてしまうことが原因

4. 重症熱性血小板減少症候群ウイルスと考えられる。他には、ニホンザルの血小板減少症

この長い漢字の名前のウイルスは、新型ブニヤウの例が挙げられる。これは、カニクイザルが自然感

イルスやダニ媒介性ウイルス、SFTSV（Severe

染していたサルレトロウイルス 4 型が、実験室の同Fever with Thrombocytopenia syndrome virus）と居によりニホンザルに感染したことによる。カニクいう名前で報道されているかもしれない。2009 年

イザルでは無症状であるウイルスが、ニホンザルにに中国で患者が発生して、2011 年に原因ウイルス感染して急激な血小板の減少により死亡したのであ5）が特定された 。このウイルスは 2013 年になってる。

日本でも重症例が報告されている。SFTSV はクリ

6. ウナギの古くて新しいウイルス

ミアコンゴ出血熱やリフトバレー熱と同じブニヤウ
イルス科に属することがわかっている。SFTSV は次世代型シーケンサーが普及する少し前に、われマダニが媒介すると考えられており、日本の患者にわれは RDV 法（Rapid determination system of viral

付着していたタカサゴキララマダニからも検出されRNA/DNA sequences）を開発していた。この方法た。発熱と消化器官症状（下痢や腹痛）が主に顕れ、はウイルス分離を前提として、分離後に既知のウイ血小板や白血球の減少が特徴的である。2011 年にルスを検出できなかった培養上清中に含まれるウイ発表された論文では次世代型シーケンサーが使われルスゲノムの塩基配列を決定する方法である。RDVている形跡はない。Sequence-independent single-法は次世代型シーケンサーのような特別の機器を必

primer amplification（SISPA）法などの古典的な方要とせず、PCR を行うことのできる実験室で実施法が用いられている。論文が投稿されるまでの経緯可能である。わずか 2 日間で結果が出るので、我田は不明であるが、2009 年に患者が発生してから 2引水ながら有用な方法である。RDV 法を用いてさ年後にウイルスゲノム配列が発表されているというまざまな動物から新規・稀少ウイルスを発見してき事実は、現代のウイルス学においては解明速度が遅た。現在、当研究室では検体に応じて次世代型シーいと考えられる。あるいは、次世代型シーケンサー

ケンサーと RDV 法を使い分けた解析を行っている。

を使えば、より早い解明が可能だったのかもしれない。

近年、ニホンウナギの稚魚の漁獲量が激減して、ついには絶滅危惧種に指定されてしまった。数年前

5. ゾウのヘルペスウイルスまでウナギの養殖場で問題になっていた感染症は、ゾウ内皮性ヘルペスウイルス（elephant endothe-ウイルス性血管内皮壊死症とパラコロ病であった。

liotropic herpesvirus : EEHV）は、1999 年にゾウに前者の病気は古くから電子顕微鏡写真が撮られてお出血性疾患を引き起こすウイルスとして初めて報り、アデノウイルスの一種と考えられていた。東海6）

告された 。全ゲノム塩基配列の決定にはイルミナ大学の小野信一教授がウナギの内皮細胞から培養細社の次世代型シーケンサーが使用されている。EEHV胞系を確立し、患部の抽出液を用いてウイルス分離

感染はアジアゾウでの検出報告が多い。米国の動に成功した。ここから一気にこのウイルスの解明が物園では若齢アジアゾウの死亡原因の 6 割にも達す進んだ。われわれは小野先生と共同研究で、ウイルるほど大きな問題となっているウイルス感染症であスが増殖した培養上清を用いて RDV 法で解析した

7）

る 。EEHV は内皮細胞に傷害を起こし、口腔潰瘍、ところ、ポリオーマウイルスの large T antigen にチアノーゼ、頭部・頚部などの浮腫、無気力、食欲やや相同性のある遺伝子断片の検出に成功した 。

不振などが観察される。また、血液検査所見として、そこで、次世代型シーケンサー（ロシュ社の GS

白血球や血小板の減少も特徴的である。このウイルジュニア）を用いてウイルスゲノムの全長を決定しスは、アフリカゾウに感染しても多くは無症候性でたところ、約 15kbp の環状二本鎖 DNA ウイルスであるが、アジアゾウに感染すると致死性になることあることが明らかになった。面白いことに、ポリが知られている。近年、このような種を越えた感染

オーマウイルスと相同性を有するのは一部だけで8）

（5）

214

（約 1kbp）、この領域も系統樹を作成するとポリ等にシーケンスされるようになっている。そうするオーマの集団から外れてしまうことがわかった。そと、ヒトのゲノムが大量に存在しているような臓器の他の領域は既知のウイルスと相同性を持たない新ではヒトの方が優先的に読まれてしまう。よほどウしいウイルスなので、さらに解析を進めている。

イルスが盛んに増殖している時期を狙わないと、感染しているウイルス断片が見つからないことになってしまう。また、下痢の原因を特定する場合には糞Ⅴ. 次世代型シーケンサーの問題点

便中に大量に含まれている腸管の細胞や細菌、食品
このように現代のウイルス学においては非常に有由来の遺伝子の陰に隠れてしまうことになる。

用な次世代型シーケンサーであるが、このハイス2. unknown な配列と新規ウイルスの区別がループットな機器にはウイルス学特有の問題点もあつかないる。

患部組織の解析により既知のウイルスの遺伝子配1. ヒトのゲノムが長すぎ、ウイルスが短すぎる列が得られた場合には、そのウイルスの病原性に照

たとえば、ある原因不明の感染症が疑われる患者らし合わせて原因か否かを判断することになる。たの組織から原因病原微生物を特定する場合を想定す

とえば、風邪症状の患者の咽頭拭い液を解析しヒトる。ウイルスには RNA ウイルスと DNA ウイルスがコロナウイルスの遺伝子配列が得られた場合、インあり、核酸の抽出方法も異なれば、次世代型シーケフルエンザウイルスや RS ウイルスなどメジャーなンサー用のサンプル調整方法も異なるので、RNAウイルスではないが原因ウイルスの可能性が高いとウイルスと DNA ウイルスを想定して両方の解析を言える。しかし、全く未知のウイルスの場合には、行わなければならない。ヒトのゲノム長は約 30 億既知のあらゆる遺伝子配列と相同性が低いと考えら塩基である。一方、RNA ウイルスは最大 3 万塩基、れるので、unknown な配列になってしまう。1 千万

平均 1 万塩基のゲノムを持ち、DNA ウイルスは最リードを超えるハイスループットな次世代型シーケ大でも 30 万塩基のゲノムである（図 2）（メガウインサーでは、かなりの数の unknown な配列が発生

ルスなどは除く）。次世代型シーケンサーのサンプする。これをひとつひとつについてウイルスか否ル調整は、基本的にゲノムをランダムに切断して均かを検証することは不可能である。このように、unknown な配列がウイルスゲノムの一部なのかを判断することは極めて難しい。
これらの問題点を解決するためには、「はじめに」

MiSeq

3 - 6G

哺乳類

3G

で述べたように古典的ではあるが重要な手法のウイルス分離を行い、培養上清中に大量に含まれるウイルスを解析しながら、コッホの 4 原則を満たす実験

昆虫

0.2G

大腸菌

4M

ウイルス

10Kを行うことが重要である。

おわりに1

2

生命科学と工学の融合により、次世代型シーケン3Gサーが開発された。現在では早ければサンプル調整からシーケンス、PC による解析まで最短 3 日で行

図 2 生物のゲノムの長さ
哺乳類に比べてウイルス（RNA ウイルス）のゲノムがいかに短いかがわかる。次世代型シーケンサーで解析する際には、たったひとつの哺乳類細胞が混入するだけでウイルスのリード数が激減することが予想される。これまでの解析で宿主ゲノムにマスクされ、ウイルスゲノムが検出されていない例は多いと考えられる。宿主ゲノムを除去できる方法が開発されると、ウイルスの解析はさらに進むだろう。

（6）

うことも可能になっている。コッホの 4 原則を満たすような実験は重要であるが、急性ウイルス感染症においては迅速性が求められている。以上のことから、費用と人材があれば、原因不明のウイルス感染症を解析する場合には、あらゆる既知のウイルスの215

Wei Wu, M.Sc., Qin Wang, Ph.D., Fa-Xian Zhan, Ph.D.,

PCR を行いつつ、ウイルス分離を行いながら、次Xian-Jun Wang, M.D., Biao Kan, Ph.D., Shi-Wen Wang,

世代型シーケンサーで解析するという方法を採用す

Ph.D., Kang-Lin Wan, Ph.D., Huai-Qi Jing, M.D., Jin-Xin

べきかもしれない。

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