研究用試薬

製品データシート2017 年 5 月

Code No. 27179(2) 標識抗体濃縮液の希釈方法

Human GPIHBP1 Assay Kit - IBL

標識抗体濃縮液を別に用意した採取用容器にて、標識抗体用溶解液で 30倍希釈してください。これを標識抗体とします。
希釈例)
１スリット（8 ウェル）使用する場合＝800μL 必要(最低量)(標識抗体濃縮液を 30 μL とり、標識抗体用溶解液 870 μL を加え良く和し、100 μL ずつ使用します。)
この操作は、標識抗体添加の直前におこなってください。
標識抗体濃縮液の残りは、蓋をしっかり閉め冷蔵にて保存してください。
有効期限内に再度使用できます。

96 Well
ご使用の際はこの添付文書をよく読んでから使用してください。
全般的な注意本キットは、研究用試薬です。診断等に用いることはできません。

形状・構造等（キットの構成）
1 抗体プレート(3) 標準物質の希釈方法(Anti-Human GPIHBP1-CH79A4 Rat IgG MoAb.固相)2 標識抗体濃縮液 (30 倍濃度)
(HRP 標識 Anti- Human GPIHBP1-HE20A6 Rat IgG Fab’)
3 標準物質 (Recombinant Human GPIHBP1)
4 希釈用緩衝液
5 標識抗体用溶解液
6 TMB 基質液
7 停止液
8 濃縮洗浄液

96Well x 1

標準物質バイアル瓶に希釈用緩衝液を 0.5 mL 加えて完全に溶解します。
この時標準物質濃度は 1000 pg/mL となります。凍結融解の繰り返しはできません。
希釈用テストチューブを 7 本用意し希釈用緩衝液を 230 μL ずつ量り取ります。
500 pg/mL の希釈用テストチューブに 1000 pg/mL の標準物質溶液を230 μL 加え混和しその溶液 230 μL を 250 pg/mL の希釈用テストチューブに加え混和します。順次 2 倍連続希釈をおこない 500 pg/mL～7.8 pg/mLまでの 7 点を希釈標準品とします。

0.4mL x 1
0.5mL x 2
30mL x 1
12mL x 1
15mL x 1
12mL x 1
50mL x 1

Tube-1Tube-2Tube-3Tube-4Tube-5Tube-6Tube-7

測定対象
ヒトの血清および EDTA 血漿※EDTA 血漿を測定する場合は、性能 9 相関性データを考慮し測定してください。
※検体は血清分離後、室温および 2～8℃で 15 時間安定です。15 時間以内に測定しない場合は-20℃以下で凍結保存し、検体の凍結融解は繰り返さないでください。

500
250
125
62.5
31.3
15.6
7.8

本製品は、サンドイッチ法による ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)キットです。1 次抗体はプレートに固相されていますので、検体および標準物質を加え 1 次反応をおこないます。その後、HRP 標識された 2 次抗体を加え 2 次反応をおこない、反応後過剰の 2 次抗体を洗浄除去した後、Tetra Methyl Benzidine(TMB) により発色させます。

3 測定操作方法 (測定操作一覧 参照)(1) 検体ブランクの添加
検体ブランクのウェルを設定し、希釈用緩衝液を 100 μL 入れます。
(2) 検体、希釈標準品の添加
検体 100 μL および希釈標準品各 100 μL をそれぞれのウェルに入れます。
(3) プレートカバーをして第１反応(4) 洗浄（操作上の注意 8.9 参照）
ウェルの反応液を除去します。洗浄液を加え除去します。
(5) 標識抗体の添加
標識抗体を 100 μL 添加します。
(6) プレートカバーをして第２反応(7) 洗浄（操作上の注意 8.9 参照）
ウェルの反応液を除去します。洗浄液を加え除去します。
(8) TMB 基質液の添加
TMB 基質液を 100 μL 添加します。
(9) 遮光して発色反応(10) 停止液の添加停止液を 100 μL 添加します。
(11) 吸光度測定
プレート底面のよごれや水滴を拭き取り液面に気泡がないことを確認した後、検体ブランクを対照とした検体および標準の吸光度を測定してください。
測定波長：450 nm、2 波長の場合は主波長：450 nm、副波長：600～650 nm

操作上の注意検体は、採取後速やかに測定してください。保存する場合は、凍結保存とし、検体の凍結融解を繰り返さないでください。また、融解は低温でおこない測定前に十分混和してください。
2 検体は希釈用緩衝液で希釈してください。
3 検体や標準物質は、二重測定することをおすすめします。
4 測定に当たってはその都度検量線を作成してください。
5 検体は、中性域のものを使用してください。また、有機溶媒等の混入も反応に障害がありますので注意してください。
6 試薬は使用前に常温に戻し、数回静かに転倒混和し変化のないことを確かめてください。
7 抗体プレ－トの洗浄は必ず付属の洗浄液を使用してください。不十分な洗浄は、測定誤差の原因となりますので正確におこなってください。
8 洗浄は機械洗浄（wait time 0 秒）を推奨いたします。洗浄瓶を用いて洗浄する場合は、洗浄液をウェルに満たした後、直ちにプレートを逆さまにして振り払い洗浄液を除去します。この洗浄操作を規定回数おこなってください。
操作は洗浄むらのないよう十分注意しておこなってください。
9 洗浄操作を規定回数おこなった後に、プレートをペーパータオルの上でたたいて、完全に水分を除去してください。この時ペーパータオルがウェルの中に入らないよう注意してください。
10 TMB 基質液は、光に対して敏感です。遮光保存してください。金属との接触も避けてください。使用に際しては必要量を採取用容器にとり分けてください。
11 TMB 基質液添加後、反応液は徐々に青色に変ります。この時の反応は、遮光してください。また、採取用容器に残った TMB 基質液は、コンタミの原因になりますので元に戻さないでください。
12 吸光度測定は、停止液添加後 30 分間以内におこなってください。
1測定操作一覧

試料

第１反応
洗検 体

標 準検体ブランク

検体

希釈標準品

希釈用緩衝液100 μL100 μL100 μL

プレートカバーをして 37°C 60 分間反応
4 回 (洗浄液 350 μL 以上)（操作上の注意 8.9 参照）

浄用法および用量 (操作方法)

2

必要な器具・器材
プレートリーダー
希釈用テストチューブ
精製水
プレートウォッシャー又は洗浄瓶
冷蔵庫

マイクロピペットおよびチップ
メスシリンダーおよびビーカー
ペーパータオル
採取用容器 (清潔な試験管など)
恒温器（37℃±1℃）

標識抗体

100 μL

第２反応

プレートカバーをして 2 ~ 8°C 30 分間反応

洗100 μL

発色反応(1) 濃縮洗浄液の希釈方法

停 止 液

濃縮洗浄液を精製水で 40 倍希釈してください。これを洗浄液とします。
必要量を調製してください。

株式会社

免疫生物研究所

吸光度測定

群馬県藤岡市中 1091-1

100 μL100 μL5 回 (洗浄液 350 μL 以上)（操作上の注意 8.9 参照）

浄TMB 基質液

準備製造販売元

pg/mL
pg/mL
pg/mL
pg/mL
pg/mL
pg/mL
pg/mL

(4) 検体の希釈方法
検体は添付の希釈用緩衝液で、下記の希釈倍率にて希釈してください。
ヒト血清の場合は、 10 倍
EDTA 血漿の場合は、10 倍

測定原理

1

第 1 版作成

100 μL100 μL

遮光常温 30 分間反応
100 μL100 μL100 μL450 nm / 600～650 nm

URL: http://www.ibl-japan.co.jp E-mail: do-ibl@ibl-japan.co.jp1

研究用試薬

製品データシート2017 年 5 月

Code No. 27179
8

測定結果の算出方法
グラフの X 軸に標準物質濃度を、Y 軸にその吸光度をプロットします。各
プロットに適当な回帰曲線を当てはめ(例：両対数変換の二次回帰等)、検量線を作成します。
検体の吸光度を検量線に当てはめ、濃度を読みとります。
その値に検体の希釈倍率を乗じ、検体の濃度を算出します。

1239吸光度(450nm)
3.145

250.0

1.680

125.00.857

62.50.444

31.30.221

15.60.113

7.80.054

相関性(血清 vs EDTA 血漿)10 妨害物質の影響
溶血ヘモグロビン
遊離ビリルビン抱合型ビリルビン
乳ビ

10.00

1.00

OD 450

参考基準範囲(社内ボランティア)
ヒト血清：570.6～1625.6 pg/mL
ヒト EDTA 血漿 ：451.8～1339.6 pg/mL

N=28y = 0.7874x + 65.331(R² = 0.9626)(X:血清Y:EDTA 血漿)
ヒト EDTA 血漿を測定する場合、20%程度の低値を示します。

測定値と検量線作成例
標準品濃度( pg/mL)
500.0

第 1 版作成

490mg/dL
19.1mg/dL
20.7mg/dL
1650（ホルマジン濁度） まで測定値に影響ありません。

使用上または取り扱い上の注意
0.10

1

取り扱い上(危険防止)の注意(1) 構成試薬には動物血液成分を含む物があります。取り扱いに注意し使用後は手洗いなどをおこなってください。
(2) 停止液は強酸性 (1N 硫酸) です。衣服・皮膚等への接触および廃棄には十分注意してください。

2

使用上の注意(1) 標準物質は、凍結乾燥品です。開封は、十分注意しゆっくりとおこなってください。
(2) 保存は、2～8°C としてください。
(3) 希釈用緩衝液、標識抗体濃縮液および濃縮洗浄液は、まれに析出を認める場合がありますが、性能に問題はありません。
(4) ロットが異なる製品の構成試薬や他のキットの構成試薬を混ぜたり、交換したりして使用しないでください。
(5) 期限切れの試薬は、使用しないでください。

3

廃棄上の注意使用後の抗体プレートや試薬は多量の水で洗い流してから廃棄してください。

0.01

1101001000

Human GPIHBP1 (pg/mL)
性能
1

感度0.99 pg/mL (標準品を用いて NCCLS 法にて算出)

2

測定範囲
7.8 ～ 500 pg/mL

3

希釈直線性
400

400

Dilution linearityof Human Serum

Dilution linearityof Human EDTA-Plasma300

貯蔵方法・有効期間

200pg/mL

pg/mL

300

200

2～8°C 保存
使用期限は外箱に記載

100

100

0000.25
0.50.75
1/Dilution (1;4-fold diluted HumanSerum)

010.250.50.75
11/Dilution (1;4-fold diluted HumanEDTA-Plasma)

包装単位および製品番号
96 Well
製品番号4添加回収試験
検体

Human Serum(x10)

Human EDTAPlasma (x10)56727179

添加量(pg/mL)

理論値(pg/mL)

測定値(pg/mL)%125.00194.26193.71

99.7

62.50

131.76126.93

96.3

31.25

100.51

95.44

95.0

125.00176.12176.31

100.1

62.50

113.62109.66

96.5

31.25

82.37

79.26

96.2

問合せ先
株式会社 免疫生物研究所〒375-0005 群馬県藤岡市中 1091-1
電話：0274-22-2889
FAX：0274-23-6055

同時再現性測定値(pg/mL)

SD(pg/mL)

CV (%)

n240.91

16.69

6.9

2457.80

4.42

7.6

24

17.76

1.28

7.2

24

測定値(pg/mL)

SD(pg/mL)

CV (%)

n231.20

11.96

5.2

1357.18

2.95

5.2

1316.90

1.08

6.4

13

測定間再現性

特異性
ヒトの血清およびヒト EDTA 血漿中の GPIHBP1 を特異的に検出します。

製造販売元

株式会社

免疫生物研究所

群馬県藤岡市中 1091-1

URL: http://www.ibl-japan.co.jp E-mail: do-ibl@ibl-japan.co.jp
2