LAAN-A-LM044

SHIMADZU APPLICATION NEWS
島津アプリケーションニュース●LC/MSC72No.

LIQUID CHROMATOGRAPHY MASS SPECTROMETRY

イオンペア試薬を用いない高極性化合物の不純物分析
Impurity Analysis of Polar Compounds without Using Ion-pair Reagents

逆相モードでカラムにほとんど保持されないような高■ネオマイシンBの不純物分析

極性化合物の分離に，イオンペアクロマトグラフィーがImpurity Analysis of Neomycin B有効な場合があります。フッ素を含むLC/MS用のイオンネオマイシンBの構造をFig. 1に示します。ネオマイシ

ペア試薬はよく使用されています。ただし，カラムやインB（10 mg/mL水溶液）を注入したときのTICクロマト

ンターフェイスなどにイオンペア試薬が残留するため，グラム，マスクロマトグラムをFig. 2に示します。いくつ

他の分離モードに切り替える場合は洗浄に相当の時間をかの不純物ピークが検出されましたが，メインピークと要することがあります。ここではイオンペア試薬を使用

Compound XのマススペクトルをFig. 3に示します。ベー

しない分析条件をご紹介します。両イオン交換型カラム

スピークが信号飽和しない保持時間でのネオマイシンBのを用い，移動相に酢酸および酢酸塩の水溶液のみ使用しマススペクトルです。Compound Xのマススペクトルのベーました。通常イオンペアクロマトグラフィーで分離されスピークはm/z 455でした。ネオマイシン生合成経路におる化合物のうち，アミノグリコシド系抗生物質は数個のける中間生成物を考慮すると，この成分はribostamycinの糖やアミノ糖などから構成されます。光吸収をほとんど可能性があると思われます。

示さず，アミノ基を有しイオン化が容易であるため，こ

参考文献：Aminoglycoside antibiotics, D.P.Arya, WileyInterscience (2007)

れらの検出には質量分析計が最も有用です。
S. KawanoOHH2 N
O

1:TIC
3500000 1:365.00
1:455.00
1:616.00
3000000 1:657.001:615.00
2500000

OHCH2NH2NH2 O

H2N
HOO CH2OHO

2000000
1500000

OHCH2NH2O
H2N

Compound XO

1000000
500000

OHOH00.0

Fig. 1 ネオマイシンBの構造
Structure of Neomycin B

5.0

7.5

10.0

12.5

min

700m/zFig. 2 ネオマイシンBのクロマトグラム
Chromatograms of Neomycin B

Inten. (×100,000)

Inten. (×1,000,000)
2.0

2.5

615 [M+H]+

455

Neomycin B

Compound X
5.0

1.5
1.0

2.5
323

0.5
308
0.0

0.0
200

300

400

500

600

700m/z200300400

Fig. 3 ネオマイシンBとCompound Xのマススペクトル
Mass Spectra of Neomycin B and Compound X

500600No.C72■カナマイシンAの不純物分析
Impurity Analysis of Kanamycin A
カナマイシンAの構造をFig. 4に示します。カナマイシ

Compound YおよびZのマススペクトルのベースピークはンA（10 mg/mL水溶液）を注入したときのTICクロマトグそれぞれm/z 486，m/z 484でした。生合成経路における中ラム，マスクロマトグラムをFig. 5に示します。メインピー

間生成物を考慮し，これらはそれぞれ6-O-Glc-paromamine，クとCompound YのマススペクトルをFig. 6に示します。

カナマイシンBであると推定しました。

2500000 1:TIC
1:484.00
2250000 1:485.00
1:486.00
2000000

H2NH2C

OHOHO

1750000

H2N
OHO
HO

Compound Z

1500000
NH2O

1000000
750000

CH2OH
OHO

HO

Compound Y

1250000

500000NH2250000
00.0

5.0

7.5

10.012.5min700m/z

Fig. 5 カナマイシンAのクロマトグラム
Chromatograms of Kanamycin A

Fig. 4 カナマイシンAの構造
Structure of Kanamycin A

Inten. (×1,000,000)
2.0

2.5

Inten. (×100,000)
485 [M+H]+

486
3.0

Kanamycin A

Compound Y

1.5
2.0
1.0
1.0

0.5

584

324

243
0.0

0.0
200

300

400

500

600

700m/z

200

300

400

500

600

Fig. 6 カナマイシンAとCompound Yのマススペクトル
Mass Spectra of Kanamycin A and Compound Y

Table 1

分析条件
Analytical Conditions: Imtakt Scherzo SM-C18 (150 mmL. ×2.0 mmI.D., 3 μm): A: 20 mmol/L ammonium acetate in water
B: 20 mmol/L acetic acid in water: 10 %B (0 min) -90 %B (10 min) 90 %B (14 min)Time Program-10 %B (14.01 min) -STOP (24 min): 0.4 mL/min
Flow Rate
Column Temperature : 40 ˚C: 2 μL
Injection Volume: 100 μL
Mixer Volume
ColumnMobile Phase: LCMS-2020
MS: +4.5 kV(ESI-Positive mode)
Probe Voltage: 1.5 L/min
Nebulizing Gas Flow
: 20.0 L/min
Drying Gas Flow
: 300 ˚CDL Temperature
Block Heater Temperature : 450 ˚C: default values
DL, Q-array Voltages: 0.2 sec
Event Time: m/z 120 - 800
Scan Range

初 版 発 行：2010年7月

分析計測事業部
応用技術部※本資料は発行時の情報に基づいて作成されており，予告なく改訂 す る こ と が ありま す 。改 訂 版 は 下 記 の 会 員 制 W e b
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3100-06001-580-IK
2010.7