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Cell‐able® について

2014年11月14日
東洋合成工業株式会社

Cell‐able® 外観と培養表面

１

Cell‐able® 外観と培養表面

１

Cell‐able® 外観と培養表面

１

培養表面

100 µmCell‐able® 外観と培養表面

１

培養表面

100 µm

細胞接着領域（コラーゲンコート）

Cell‐able® 外観と培養表面

１

培養表面

100 µm細胞非接着領域（水溶性感光材）

細胞接着領域（コラーゲンコート）

Cell‐able® 外観と培養表面

１100 µm

ラット初代肝細胞播種から48時間の動画
5min

12hrs

24hrs

48hrs

Cell‐able® 外観と培養表面

１100 µm

ヒト初代肝細胞播種5日目

一般的な培養操作で直径約100µm, 厚み20～40µmの3Dスフェロイドを形成

Cell‐able®上で培養した初代肝細胞の形態と肝特異的機能維持

Feeder cells
Disse spacelike structure

Hepatocyte

ラット初代肝細胞スフェロイド 断面TEM写真

２Cell‐able®上で培養した初代肝細胞の形態と２

肝特異的機能維持
Feedercells

Dissespacelike
Hepatoc
structureyte

ヒト初代肝細胞アルブミン産生能経時変化
接着ロット

非接着ロットLot: HC5-71050

Lot: HC2-6

15Albumin secretionfor 24 hrs (µg/ml)

15Albumin secretionfor 24 hrs (µg/ml)

ラット初代肝細胞スフェロイド 断面
TEM写真

10500102030Days

40500102030Days

4050

Cell‐able®上で培養した初代肝細胞の形態と２

肝特異的機能維持1500

Feedercells
Dissespacelike
Hepatoc
structureyte

Lot: HC5‐71000

ラット初代肝細胞スフェロイド 断面TEM写真

5000Conntrol

Induction
Day 7

ConntrolInduction
Day 14Conntrol

Induction
Day 54

ヒト初代肝細胞CYP3A4 活性（基礎活性と誘導活性）
誘導：リファンピシン
アルブミン産生能経時変化
15Albumin…

Albumin…

6βHydroxytestosterone
pmole/106 cells/min

Lot: HC2‐60010 20 30 40 50-5 01020304050

Cell‐able®上で培養した初代肝細胞の形態と２

肝特異的機能維持
Feedercells

Dissespacelike
Hepatoc
structureyte

排泄トランスポーター機能
CDFDAは肝細胞に取り込まれた後、蛍光物質であるCDFに加水分解され、ABCCトランスポーターによって胆汁管へ排泄される。図は、Cell‐able®で培養7日目のヒト初代肝細胞スフェロイドにCDFDA添加10分後の共焦点レーザー
顕微鏡写真。

ラット初代肝細胞スフェロイド 断面TEM写真

CDFDA; Carboxydichlorofluorescein diacetate
CDF; Carboxydichlorofluorescein

CYP3A4 活性（基礎活性と誘導活性）

アルブミン産生能経時変化
Albumin…

Albumin…

150010 20 30 40 50-5 01020304050

Cell-able®の適⽤市場(創薬応⽤と再⽣医療)
ベースは細胞培養技術

再生医療の平成25年9月 経済産業省製造産業局生物化学産業課「再生医療の実用化・産業化に向けて」から引用

３

Cell-able®の適⽤市場(創薬応⽤と再⽣医療)
４
培養容器：再⽣医療の臨床⽤途で⼤きな伸びを予測
日本国内市場

世界市場億円億円
臨床 278倍(2012→2050）

臨床 384倍(2012→2050）

創薬 2倍

創薬 2倍

平成25年2月 経済産業省 再生医療の実用化・産業化に関する報告書 資料から引用

Cell‐able®のアプリケーション：創薬応用が主体
肝細胞の三次元培養
・薬物動態、薬物代謝（脂肪酸、脂質、胆汁酸、他）・肝毒性（逸脱酵素、アルブミン産生能、トランスポーター阻害､核、ミトコンドリア、細胞内グルタチオン、活性酸素、油滴）・肝炎（HBV）
がん細胞の三次元培養
・がん細胞株（Eurofins Panlab 144種)・初代がん細胞（Molecular Response 11種）
・白血病細胞
幹細胞、iPS細胞の三次元培養
・iPS心筋細胞,・iPS肝細胞
・間葉系幹細胞５

3次元培養細胞のon Plateでの輸送・運搬
本実験における肝細胞播種Cell‐able®プレートの移動(肝毒性試験で実施）
フィーダー細胞の播種
PXB‐cellsの播種

薬物暴露
培養

マーカー染色画像取得
解析

６

フェニックスバイオ
広島県

東洋合成工業千葉県

モレキュラーデバイスジャパン
東京都

3次元培養の種類
1. モジュール充填培養（中空糸)2. マイクロパターニング培養（足場を用いた培養法）
3. 不繊布培養
4. 浮遊三次元培養
5. 細胞積層培養
6. コラーゲン微小空洞培養
7. 灌流三次元培養
8. 酸素透過型培養
9. ガス透過性培養バッグを用いた三次元スフェア培養（大量培養）

７

Cell-able®の特徴：マイクロパターン三次元培養（比較）

８Cell‐able®
Toyogosei

NanoCulturePlate
Scivaxナノピラープレート
HitachiElplasia
Kurarey

6well‐384well

24‐384well

24,96well

24‐384well

20,000～
（◎）

不明

不明

75,000

単培養

○

○

○

○

共培養

○

N/A

N/A

N/A

スフェロイド均一性

○

×

○

○

サイズコントロール○×××

スフェロイド形成時間

48時間

不明

72時間

不明

長期培養>54日間>7日間>20日間

不明

洗浄操作

易

難

可能と想定される

難

ボトムからの撮影

○

××

○

操作手技

簡単

N/A

N/A

前処理が必要Well数
播種細胞数(96well )（経済性）

Cell‐able®はがん細胞の三次元培養に適している(比較) ９

がん細胞のスフェロイドサイズコントロールが出来る１０注)DLD‐1 :ヒト結腸線がん（大腸がん）細胞

がん細胞スフェロイドをサイズコントロールする意義

注）ＰＴＸ：抗がん剤（パクリタキセル<タキソール>）

１１

がん細胞の共培養が出来ることの意義

１２

間質系細胞：生体組織の支持構造を構成し、実質細胞を支える細胞22

がん細胞を三次元培養する意義(薬剤の感受性） １３

EdU:5‐エチニル‐2‘‐デオキシウリジン,DNA合成の際にDNAに取り込まれるがん細胞を三次元培養する意義

１４

がん細胞をCell‐able®で三次元培養する意義（まとめ）１５

EurofinsのOncoPanelTM３D に採用された理由

１６

240種の2Dアッセイパネル
144種の3Dアッセイパネル
2D,3Dともがん種を増加する計画(Top) Representative bright field andLOX‐1 fluorescent images of WiDr and
NCI‐H460 demonstrating that themajority of cells exist in spheroids.
(Bottom) Dose response curves for four
inhibitors with distinct mechanisms ofaction generated after 7 days oftreatment either in 2D or 3D cellculture. Note, the difference between
these two culture conditions is more
pronounced, in general, for NCI‐H460
than for WiDr with some, but not all,inhibitors.