マニュアル（第 3 版）

GM quicker 96 は「(別添)安全性審査済みの組換え DNA技術応用食品の検査方法」及び「(別添)安全性未審査の組換え DNA 技術応用食品の検査方法」のナタネ(RT73B. rapa)の検査方法に準拠した試薬です。

目 次Ⅰ 製品説明

2Ⅱ キット内容

2Ⅲ 保存

3Ⅳ 使用上の注意

3Ⅴ プロトコール

3＜トウモロコシ種子 1 粒からの DNA 抽出プロトコール＞

4

Ⅵ データ集

6Ⅶ トラブルシューティング

8

Ⅷ 関連製品9１

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

Ⅰ 製品説明GM ｑuicker ９６ は、トウモロコシ種子粉砕物から DNA を抽出するためのキットです。本キットは、カオトロピックイオン存在下で DNA がシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査等では、DNA を用いた方法が広く普及しています
が、これまでのスピンカラムを用いた DNA 抽出法で同時に大量のサンプルを処理することは必ずしも効率的ではありませんでした。
本キットは、抽出対象をトウモロコシ種子へ特化させることによって、96 粒の種子から約 1.5 時間という短い時間で簡便に高品質な DNA を抽出することが可能です。使用するポリスチレン製の 96
ウェルカラムプレートは、最大 1800×g までの遠心力を許容し、内封されたシリカゲル膜は、充分なDNA 吸着容量を確保しています。
本キットによって抽出された DNA は、PCR や制限酵素反応等に適用することができます。

Ⅱ キット内容
96 ウェルプレート×4 回分（最大 384 サンプル抽出可能）
GE1 Buffer

240 ml × 4 本

GE2-K Buffer

150 ml × 1 本

GB3 Buffer

120 ml × 1 本

GW Buffer

150 ml × 2 本

TE （pH8.0）

50 ml × 1 本

RNase A (100mg/ml)

0.8 ml × 4 本96 ウェルカラムプレート

4枚

1.00 ml コレクションプレート

4枚

0.35 ml コレクションプレート

4枚

コレクションプレートキャップ

4枚

２GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

Ⅲ 保存
本キットに含まれる試薬は、96 ウェルカラムプレート以外は、室温保存（15℃～25℃）が可能です。
96 ウェルカラムプレートは製品到着後、チャック式袋に密閉した状態で、冷蔵保存（2℃～10℃）して下さい。 RNase A は室温保存可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存（2～10℃）もしくは冷凍保存（－20℃）して下さい。 GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用後は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めて下さい。

Ⅳ 使用上の注意
・本キットは試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。
・試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。
・本キットのお取り扱いは、マニュアル記載内容通りに行って下さい。
・マニュアル記載内容と異なったお取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いかねます。

Ⅴ プロトコール＜本キット以外に必要な試薬、機器など＞
・

マイクロピペット・ピペットチップ

・マイクロチューブ・

1 ml 容 96 穴プレート

・

フードミルまたはビーズ式破砕機

・プレート遠心機・

ボルテックスミキサー

３

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

＜トウモロコシ種子 1 粒（およそ 250 mg）からの DNA 抽出プロトコール＞①

トウモロコシ種子（1 粒）をフードミルまたはビーズ式破砕機等で粉砕する。

② トウモロコシ種子粉砕物の入ったチューブに、1.5 ml の GE1 Buffer および 5 l の RNase Aをそれぞれ添加する。ボルテックスミキサー等にて 30 秒間攪拌する。（注 1）
96 サンプルを同時に抽出する場合は、240 ml の GE1 Buffer に対し、予め 0.8 ｍl のＲＮase A を添加し混合した後すぐに、サンプルの入ったチューブへ 1.5 ml ずつ添加しても良い。（注 2）③

10 分間、室温で静置する。

④ 180 l の GE2-K Buffer を添加し、ボルテックスミキサー等にてよく混和する。（注 3）⑤遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）する。

⑥ 上清 400 l を新しいマイクロチューブもしくは 1 ml 容 96 穴プレートに移す。（注 4）⑦250 l の GB3 Buffer を添加し、マイクロチューブを 10～12 回激しく転倒させ、よく混和する(1 ml 容 96 穴プレートを使用する場合はピペッティング等にてよく混和する)。

⑧ キット添付の 1.00 ml コレクションプレート上に 96 ウェルカラムプレートをセットした後、⑦の混合液 650 l を 96 ウェルカラムプレートへ移す。遠心（1.4～1.8K×g, 20 分間, 室温）（注5）した後、濾液はピペットチップで廃棄する。

⑨ 650 l の GW Buffer を（1.00 ml コレクションプレート上にセットした）96 ウェルカラムプレートに添加し、遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）した後、濾液は廃棄する。
⑩ 96 ウェルカラムプレートを乾燥させるため、遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）した後、濾液は廃棄する。
⑪ 96 ウェルカラムプレートを 0.35 ml コレクションプレート上にセットする。
⑫100 l の TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温にて静置する。

⑬ 遠心（1.4～1.8K×g, 10 分間, 室温）した後、濾液を回収する。
サンプルの保存には、付属のコレクションプレートキャップをご使用下さい（コレクションプレートキャップの耐温度は、-80℃～121℃です）。

４GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

(注 1)

攪拌操作が不十分な場合、DNA 収量が著しく減少します。しっかりと攪拌を行って下さい。攪拌が不十分であれば、更に 30～60 秒間攪拌を行って下さい。

（注 2） GE1 Buffer へ RNase A を添加した混合液は、混合後 30 分以上経過すると、ＲＮＡの分解効率が著しく低下します。使用後、余った混合液は廃棄し、次の DNA 抽出には使用しないで下さい。

(注 3)②の混合液は粘度が高くなっています。添加した GE2-Ｋ Buffer が十分に混ざるよ
うにしっかりと攪拌を行って下さい。

(注 4) 沈殿や浮遊物を可能な限り取らないように上清を回収して下さい。
(注 5)

使用するプレート遠心機の回転数等を確認し、1.8K×g 以上にならないように十分注意して下さい。また、使用するローターがコレクションプレート上にセットした 96 ウェルカラムプレートに干渉しないことや、使用するローターのバケットの高さがコレクションプレートと 96 ウェルカラムプレートの繋ぎ目よりも高いことを確認して下さい。

５

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

Ⅵ データ集
1.トウモロコシ種子からの DNA 抽出
本キットを用いてトウモロコシ種子（甘味種）から DNA 抽出を行った。いずれのウェルも良好にDNA を抽出することができた。

Well：A1-12、B1-12

Well：C1-12、D1-12

Well：E1-12、F1-12

Well：G1-12、H1-12
Marker：OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest)
本キットで回収した DNA 溶液 2.5 l を 1% Agarose S で電気泳動した。

６GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

2.トウモロコシから抽出した DNA 溶液の吸収スペクトル比と DNA 収量
本キットで抽出したトウモロコシの DNA は、いずれのウェルも A260/280 = 1.8 以上であり、高純度な DNA であることが示唆された。
１） トウモロコシ種子（甘味種）から本キットを用いて抽出した DNA の A260/280
ABCDEFGH

1
1.918
1.920
1.920
1.915
1.889
1.904
1.903
1.903

2
1.913
1.922
1.913
1.915
1.912
1.909
1.908
1.906

3
1.919
1.918
1.9161.917
1.904
1.912
1.911
1.901

4
1.915
1.925
1.924
1.904
1.907
1.911
1.909
1.908

5
1.923
1.922
1.919
1.912
1.909
1.909
1.912
1.898

260/280 nm
6
7
1.915
1.912
1.954
1.924
1.916
1.924
1.919
1.917
1.911
1.914
1.907
1.909
1.910
1.905
1.902
1.903

8
1.920
1.913
1.920
1.918
1.901
1.905
1.906
1.904

9
1.919
1.922
1.922
1.923
1.908
1.905
1.908
1.910

10
1.918
1.917
1.920
1.911
1.907
1.908
1.905
1.902

11
1.921
1.895
1.913
1.912
1.909
1.902
1.905
1.904

12
1.919
1.917
1.915
1.902
1.894
1.903
1.906
1.901

10
87.14388.84490.84789.53786.71194.37396.90995.142

1189.84589.57190.63593.33697.86497.24896.11895.2501296.631
97.79698.941
94.23099.17097.21289.16198.677２） トウモロコシ種子（甘味種）から本キットを用いて抽出した DNA の収量
A
BC
DEF
G
H

177.448
83.49883.94783.98588.04993.70093.04885.697278.950
87.11386.16986.64390.28285.74693.93395.881

3
83.02288.31393.09189.50093.29683.94596.76095.638480.48990.89890.79076.53395.31789.07399.97279.980DNA Conc. (ng/μL)
56782.22688.03490.79880.64283.55892.64294.35187.07683.53194.32088.13275.78093.42295.51693.72198.06296.03584.75392.00193.102
94.94594.69091.49788.9248
83.62092.77992.06595.701
97.12896.73995.89587.941988.95390.64795.05692.21292.71294.73496.29288.054＊ TE、100 l にて DNA を回収

７

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

Ⅶ トラブルシューティング
問題考えられる原因考えられる対策

試料の粉砕が不出来るだけ細かく試料を粉砕して下さい。
十分。

抽出効率が低下している。
DNA の収量が少ない。

溶出が不十分。

GE1 Buffer および RNase A を添加後、よくボルテックス等で攪拌して下さい。
試料塊が残らないように目視にて確認しながら、攪拌を行って下さい。
TE(pH8.0)を 96 ウェルカラムプレートへ添加した後、すぐに遠心にて DNA を溶出した場合、DNA 収量にばらつきが生じることがあります。
一定の DNA の収量を得るためには室温にて3 分間静置した後、遠心を行って下さい。

RNA の混入が多い。

GE1 Buffer と RNase A は混合した状態では保存できません。それぞれを別々に保存して下さい。
RNase A の失活。
GE1 Buffer と RNase A を混合してから使用する場合は、混合後 30 分以内にご使用下さい。

OD 値が低い。

遠心分離後の沈殿物または、浮上清を回収する際は、沈殿をチップの先で触遊物を 96 ウェルれないように注意深く回収して下さい。
カラムプレートに持ち込んでいる。

８

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

Ⅷ 関連製品
Code No.
317-06361
310-06591
311-07241
316-07791
317-07341
314-06371
311-06381
318-06391
311-06641
318-06651
315-06661
312-06671
316-90025
318-90105
312-01193
313-03242
312-06512
311-02682
311-05281
318-05791
312-05831
319-08141

製品名

包装単位

GM quicker
GM quicker 2
GM quicker 3
GM quicker 4

50 回用

On-Site Column Set for GM quicker
GE1 Buffer
GE2 Buffer
RNase A（100 mg/ml）

20 回用

50 回用
50 回用
50 回用
500 ml200 ml
0.5 ml×5
40 ml×2
100 ml12.5 ml×2
1 Set

GW Buffer
GE2-K Buffer
GB3 Buffer

GM quicker 2 Enzyme Set(Proteinase K 2 ml, α-Amylase 0.2 ml)
TE (pH8.0)
Distilled Water, Deionized, Sterile
Agarose S
Agarose 21
Agarose XP
Agarose X
OneSTEP Marker 6
OneSTEP Marker 4
OneSTEP Marker 11
Collection Tube

９500 ml
500 ml
100 g
25 g
25 g
25 g
1,500 μl
375 μl375 μl
100 回用GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

１０

GM quicker 96 マニュアル（第 3 版）

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お問い合わせ先株式会社ニッポンジーン
研究試薬部 学術営業課

TEL 076 - 451 - 6548
www.nippongene.com
お問い合わせは、お電話もしくは WEB フォームより承っております