マニュアル
Ver. 4.0

Code No. 317-06361

GM
quicker
は、「食品表示基準について（消食表
GM
quickerは「組換え DNA 技術応用食品
第の検査方法」に準拠した試薬です。
139 号）」の別添 遺伝子組換え食品表示関係に(食安発第 0629002 号)
収載されています。

目 次
Ⅰ 製品説明2

Ⅱ キット内容

2

Ⅲ 保存

3

Ⅳ 使用上の注意

3

Ⅴ プロトコール3＜トウモロコシ DNA 抽出プロトコール（検査法に準拠したプロトコール）＞4＜トウモロコシ DNA 抽出プロトコール（キット標準プロトコール）＞

5＜100 mg トウモロコシ種子粉砕試料からの DNA 抽出プロトコール＞

6＜ダイズ DNA 抽出プロトコール（検査法に準拠したプロトコール）＞7＜ダイズ DNA 抽出プロトコール（キット標準プロトコール）＞

8＜100 mg ダイズ種子粉砕試料からの DNA 抽出プロトコール＞

9

Ⅵ データ集11

１．トウモロコシおよびダイズ種子からの DNA 抽出

11

２．トウモロコシおよびダイズ種子から抽出した DNA の吸収スペクトル11

３．トウモロコシおよびダイズ種子から抽出した DNA の制限酵素消化

12４．PCR による内在性遺伝子の検出

12

Ⅶ トラブルシューティング

13

Ⅷ 関連製品

14

Ⅸ 簡易プロトコール

15

１

GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅰ 製品説明GM quicker は、トウモロコシやダイズなどの穀粒から DNA を抽出するためのキットです。本キット
は、カオトロピックイオン存在下で DNA がシリカへ吸着する原理（Boom Technology）を採用しており、抽出操作にフェノールやクロロホルムなどの毒性有機溶媒を使用しません。遺伝子組換え作物（Genetically Modified Organisms：GMO）の検査においては、DNA を用いた方法が広く普及していますが、これまでの植物 DNA 抽出キットは抽出対象を「葉」としていたため、トウモロコシやダイズなどの穀粒からの DNA 抽出には必ずしも効率的ではありませんでした。
本キットでは、抽出対象を穀粒へ特化させることによって、約 45 分間という短い時間で高い精製度の DNA を抽出することができます。また、本キットは検査用試料の調製におけるクロスコンタミネー
ションなど、抽出操作上の問題に配慮した設計となっています。さらに、本キットで使用するスピンカ
ラムは、カラム容積を最大限確保しており、内封されたシリカゲル膜は、充分な DNA 吸着容量と高い溶出効率を確保しています。
本キットによって抽出された DNA は、PCR や制限酵素反応に適用することができます。

Ⅱ キット内容
GE1 Buffer

100 ml × 3 本

GE2 Buffer

37.5 ml × 1 本

GB3 Buffer

12.5 ml × 1 本

GW Buffer

40 ml × 1 本TE（pH8.0）

10 ml × 1 本

RNase A(100mg/ml)

0.5 ml × 2 本

Spin Column

50 個

マニュアル

1部

＊ トウモロコシ粉末試料 1ｇの場合、DNA 抽出を 50 回行うことができます。
ダイズ粉末試料 1g での DNA 抽出を 50 回行う場合には、GE1 Buffer、GE2 Buffer および
RNase A が不足しますので別途購入して下さい。
関連製品
314-06371

GE1 Buffer

500 ml

311-06381

GE2 Buffer

200 ml

318-06391

RNase A（100 mg/ml）

0.5 ml×5２

GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅲ 保存
本キットに含まれる全ての試薬および Spin Column は、室温保存（15℃～25℃）が可能です。
RNase A は室温保存が可能ですが、長期間ご使用にならない場合には、冷蔵保存もしくは冷凍保存（－20℃）して下さい。 GW Buffer にはエタノールが含まれていますので、ご使用後は蒸発を防ぐために必ず蓋を閉めて下さい。

Ⅳ 使用上の注意
・ 本キットは試験研究用試薬ですので、医薬品、その他の目的にはご使用になれません。
・ 試薬についての基本的な知識のある方以外は取り扱わないで下さい。
・ 本キットのお取り扱いは、マニュアル記載内容通りに行って下さい。
・ マニュアル記載内容と異なったお取り扱いによるトラブルにつきましては、弊社では責任を負いか ねます。

Ⅴ プロトコール＜本キット以外に必要な試薬、機器など＞
・ 100% エタノール
・ イソプロパノール
・ 氷・ マイクロピペット
・ ピペットチップ
・ 50 ml チューブ・ 2 ml マイクロチューブ
・ 1.5 ml マイクロチューブ
・ フードミル・ 冷却遠心機・ ボルテックスミキサー

３

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜トウモロコシ DNA 抽出プロトコール＞ * 検査法に準拠したプロトコール*「食品表示基準について（消食表第 139 号）」の別添 遺伝子組換え食品表示関係に準拠したプロトコールです。
詳細は、消費者庁が通知している「(別添) 遺伝子組換え食品表示関係」をご確認下さい。

① トウモロコシ種子をフードミル等で均質に粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
② トウモロコシ粉末試料 1.0 g を 50 ml 遠心チューブに量り採り、6 ml の GE1 Buffer および

20 μl のRNase A をそれぞれ添加する。試料塊がないようにボルテックスミキサーにて 30 秒
間攪拌する。（注１）③ 10 分間 室温で静置する。
④ 750 μl の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 10 分間 氷上に静置する。
⑥ 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 4 ml 程度を新しい 50 ml チューブに移す。（注４）⑧ ⑦で回収した上清から 400 μl を 1.5 ml マイクロチューブに移し，残った上清は 4℃ で保存する。（注５）⑨ 50 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑩ 200 μl のエタノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑪ ⑩の混合液を Spin Column に全量（650μl）移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ 600 μl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑬ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑭ Spin Column を乾燥させるため、遠心（≧13K×g, 3 分間, 4℃）する。
⑮ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑯ 50 μl の 水 を Spin Column に滴下した後、3 分間 室温で静置する。
*

回収した DNA を定量 PCR に使用する場合は、水 の代わりに TE（pH8.0） を使用する。

⑰ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。
⑱ 得られた濾液を DNA 試料原液とする。

４

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜トウモロコシ DNA 抽出プロトコール＞ * キット標準プロトコール① トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
② 50 ml チューブで 1.0 g のトウモロコシ粉末試料を秤量し、6 ml の GE1 Buffer および

20 μl の RNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。（注１）③ 10 分間室温で静置する。
④ 750 μl の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 10 分間氷冷する。
⑥ 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 4 ml 程度を新しい 50 ml チューブに移す。（注４）⑧ ⑦で回収した上清から 400 μl を 1.5 ml マイクロチューブに移し，残った上清は 4℃ で保存する。（注５）⑨ 50 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑩ 200 μl のエタノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑪ ⑩の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ 600 μl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑬ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑭ 50 μl の TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。

⑮ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。

５

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜100mg トウモロコシ種子粉砕試料からの DNA 抽出プロトコール＞* 小スケールプロトコール① トウモロコシ種子をフードミル等で粉砕し、トウモロコシ粉末試料を調製する。
② 2 ml チューブで 100 mg のトウモロコシ粉末試料を秤量し、600 μl の GE1 Buffer および

4 μl の RNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。（注１）③ 5 分間室温で静置する。
④ 75 μl の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 5 分間氷冷する。
⑥ 遠心（13K×g, 5 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 400 μl 程度を新しい 1.5 ml チューブに移す。（注４）⑧ 50 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑨ 200 μl のエタノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑩ ⑨の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑪ 600 μl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑬ 50 μl の TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。
⑭ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。

６

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜ダイズ DNA 抽出プロトコール＞ * 検査法に準拠したプロトコール*「食品表示基準について（消食表第 139 号）」の別添 遺伝子組換え食品表示関係に準拠したプロトコールです。
詳細は、消費者庁が通知している「(別添) 遺伝子組換え食品表示関係」をご確認下さい。

① ダイズ種子をフードミル等で均質に粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
② ダイズ粉末試料 1.0 g を 50 ml 遠心チューブに量り採り、12 ml の GE1 Buffer および 40 μlの RNase A をそれぞれ添加する。試料塊がないようにボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。（注１）③ 10 分間 室温で静置する。
④ 1.5 ml の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 10 分間 氷上に静置する。
⑥ 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 8 ml 程度を新しい 50 ml チューブに移す。（注４）⑧ ⑦で回収した上清から 700 μl を 2.0 ml マイクロチューブに移し，残った上清は 4℃で保存する。（注５）⑨ 250 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑩ 250 μl の イソプロパノール を添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑪ ⑩で得られた混合液から 600 μl を Spin Column に移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ ⑩で得られた残りの混合液全量を⑪の Spin Column に移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間,4℃）し、濾液は廃棄する。
⑬ Spin Column に 600 μl の GW Buffer を添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑭ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑮ 50 μl の 水 を Spin Column に滴下した後、3 分間 室温で静置する。
*

回収した DNA を定量 PCR に使用する場合は、水の代わりに TE（pH8.0）を使用する。

⑯ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。
⑰ 得られた濾液を DNA 試料原液とする。

７

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜ダイズ DNA 抽出プロトコール＞ * キット標準プロトコール① ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
② 50 ml チューブで 1.0 g のダイズ粉末試料を秤量し、12 ml の GE1 Buffer および 40 μlの RNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。（注１）③ 10 分間室温で静置する。
④ 1.5 ml の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 10 分間氷冷する。
⑥ 遠心（≧5K×g, 10 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 8 ml 程度を新しい 50 ml チューブに移す。（注４）⑧ ⑦で回収した上清から 700 μl を 2.0 ml マイクロチューブに移し，残った上清は 4℃で保存する。（注５）⑨ 250 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑩ 250 μl の イソプロパノール を添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑪ ⑩で得られた 600 μl の混合液を Spin Column に移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ ⑩で得られた残りの混合液全量を⑪の Spin Column に移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間,4℃）し、濾液は廃棄する。
⑬ Spin Column に 600 μl の GW Buffer を添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑭ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑮ 50 μl の TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。
⑯ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。

８

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜100 mg ダイズ種子粉砕試料からの DNA 抽出プロトコール＞* 小スケールプロトコール① ダイズ種子をフードミル等で粉砕し、ダイズ粉末試料を調製する。
② 2 ml チューブで 100 mg のダイズ粉末試料を秤量し、600 μl の GE1 Buffer および 4 μlの RNase A をそれぞれ添加する。ボルテックスミキサーにて 30 秒間攪拌する。（注１）③ 5 分間室温で静置する。
④ 75 μl の GE2 Buffer を添加し（注２）、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。
⑤ 5 分間氷冷する。
⑥ 遠心（≧13K×g, 5 分間, 4℃）する。（注３）⑦ 上清 400 μl 程度を新しい 1.5 ml チューブに移す。（注４）⑧ 150 μl の GB3 Buffer を添加する。
⑨ 150 μl のイソプロパノールを添加し、10～12 回チューブを激しく転倒させ、よく混和する。（注６）⑩ ⑨の混合液を Spin Column に全量移し、遠心（≧13K×g, 30 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑪ 600 μl の GW Buffer を Spin Column に添加した後、遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液は廃棄する。
⑫ Spin Column を新しい 1.5 ml マイクロチューブに移す。
⑬ 50 μl の TE（pH8.0）を滴下した後、3 分間室温で静置する。
⑭ 遠心（≧13K×g, 60 秒間, 4℃）し、濾液を回収する。

９

GM quicker Manual Ver. 4.0

(注１)攪拌操作が不十分な場合、DNA の収量が著しく減少します。また、50 ml チューブをボル
テックスミキサーへ斜めにあてた場合、泡が大量に発生し攪拌効率が低下します。ボルテッ
クスミキサーに対して 50 ml チューブを垂直にあて、そのまま 30 秒間、しっかりと攪拌を行って下さい。攪拌が不十分であれば、更に 30～60 秒間攪拌を行って下さい。

(注２)②の操作で発生した泡がチューブ内に残っていても、続けて GE2 Buffer を加えて下さい。
②の混合液の粘度が高くなっているので、添加した GE2 Buffer が十分に混ざるように転倒
混和して下さい。

(注３)

使用する冷却遠心機のローターの最高回転数および 50 ml チューブの最大耐 g を確認して下さい。50 ml チューブの最大耐 g で遠心操作を行う場合は、事故防止のためにコニカル型遠沈管対応のローターまたは、コニカル型遠沈管用アダプターを使用し、予備検討
によりチューブの破損が生じないことを確認して下さい。

(注４)

沈殿や浮遊物を可能な限り取らないように上清を回収して下さい。

(注５)

DNA が大量に必要な場合、24 時間以内であれば⑦で回収した上清から再度⑧以降の抽出手順を行うことによって、さらに DNA を回収することができます。ただし、4℃ 保存した
上清は、白色の沈殿物が析出する場合があります。その場合は、室温でボルテックスミキ

サーにて攪拌し、十分に溶かしてから抽出操作を行って下さい。
(注６)

GB3 Buffer、続けてエタノール（ダイズからの DNA 抽出の場合はイソプロパノール）の順で添加した後に攪拌操作を行って下さい。その際に析出物が生じて白濁している場合には、液が透明になるまで十分に転倒混和して下さい。

１０

GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅵ データ集
1.トウモロコシおよびダイズ種子からの DNA 抽出
本キットを用いてトウモロコシおよびダイズの種子から DNA 抽出を行った。いずれの種子からもDNA を抽出することができた。
1

2

3

4

5

6

7

8
Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 6(λ/ StyⅠ digest)
Lane 2～4 ：トウモロコシ genomic DNA
Lane 5～7 ：ダイズ genomic DNA＊本キットで抽出した DNA の 1 / 25 量を 1%
Agarose S で電気泳動した。

2.トウモロコシおよびダイズ種子から抽出した DNA の吸収スペクトル
A260 付近に吸収ピークがあることから、本キットで抽出した DNA は高純度であることが示唆された。
0.3
0.25

Abs

0.2
0.15
0.1
0.05
0
220

240

260

280

300

320

Wavelength [ nm ]図 1．本キットでトウモロコシ種子から抽出した DNA の吸収スペクトル
0.25

Abs

0.2
0.15
0.1
0.05
0
220

240

260

280

300

320

Wavelength [ nm ]図 2．本キットでダイズ種子から抽出した DNA の吸収スペクトル

１１

GM quicker Manual Ver. 4.0

3.トウモロコシおよびダイズ種子から抽出した DNA の制限酵素消化
本キットで抽出した DNA を制限酵素 EcoRⅠ および HindⅢ で消化した。
1

2

3

4

5

6

7

8
Lane 1. 8：OneSTEP Marker6 (λ/ StyⅠdigest)
Lane 2：トウモロコシ genomic DNA intact

Lane 3：トウモロコシ genomic DNA digest / EcoRⅠ

Lane 4：トウモロコシ genomic DNA digest / HindⅢ

Lane 5：ダイズ genomic DNA intact

Lane 6：ダイズ genomic DNA / EcoRⅠ

Lane 7：ダイズ genomic DNA / HindⅢ

4.PCR による内在性遺伝子の検出
トウモロコシおよびダイズの内在性遺伝子検出用プライマーを用いて、本キットで抽出した DNAの PCR を行った。PCR 条件は、農林水産省「組換え食品検査・分析マニュアル」に従った。
1

2

3

4

5

6

7

8
Lane 1, 8 ：OneSTEP Marker 11(pUC19/MspⅠdigest)
Lane 2～4：トウモロコシ genomic DNA を鋳型にSSIIb 遺伝子を増幅 (114 bp)
Lane 5～7：ダイズ genomic DNA を鋳型に
Le1 遺伝子を増幅 (118 bp)＊PCR 産物の一部(5 μl)を 3% Agarose 21 ゲルで電気泳動。
結果

１２

GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅶ トラブルシューティング
問題

考えられる原因考えられる対策
出来るだけ細かく試料を粉砕して下さい。

試料の粉砕が不十

また、粉砕試料の粒径が均一であることが望まししい分。

ので、必要に応じて「ふるい」等で粒径を揃えて下さい。
GE1 Buffer および RNase A を添加後、よくボルテッ
クスして下さい。特にダイズの場合では、ダマが生じ、抽出液が試料粉末表面に接触出来ない場合がありま

DNA の収量が抽出効率が低下し

す。

少ない。

ている。

50 ml チューブを斜めにボルテックスにあてた場合、泡が大量に出て攪拌効率が下がりますので、チューブをボルテックスに垂直にあてよく攪拌を行って下さい。
TE(pH8.0)を Spin Column へ添加した後、直ぐに遠心溶出が不十分。

溶出を行った場合、DNA 収量にばらつきが生じます。一定の DNA 収量を得るため、室温で数分間静置した後、溶出を行って下さい。

RNA の混入が多い。

RNase A の失活。

面積を大きくして下さい。

加後に現れたプロパノールおません。それぞれを別々に保存して下さい。
冷却効率を上げるため、氷と 50 ml チューブの接触

GB3 Buffer を添
白色沈殿がイソGE1 Buffer と RNase A は混合して保存することができ

また、ダイズの場合は、GE2 Buffer を添加後、粘性が氷冷が不十分。

生じるため十分攪拌を行って下さい。
（参考：トウモロコシおよびダイズ以外の試料では、白よびエタノール

沈が残る場合があります。この場合、GE2 Buffer を添添加後も多量加後に十分攪拌を行い、遠心分離を行った後、そのに残存する。

上清を Spin Column へ移して下さい。）
トウモロコシの場合は、50 ml チューブでの遠心分離
遠心分離後の沈殿

OD260/280 値が低物もしくは浮遊物をい。

Spin Column に持ち込んでいる。

後、液面に油膜が現れる場合があります。油膜状の物質は、1 ml チップを液面に対し垂直に挿し、ゆっく
り持ち上げる事でチップの先に吸着し除去することができます。
また、上清を回収する際は、沈殿をチップ先で挿さないように注意しながら行って下さい。

１３

GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅷ 関連製品
Code No.

製品名

包装単位

310-06591

GM quicker 2

50 回用

311-07241

GM quicker 3

50 回用

316-07791

GM quicker 4

50 回用

319-07161

GM quicker 96

96 ｳｪﾙﾌﾟﾚｰﾄ×4

317-07341

On-Site Column Set for GM quicker

20 回用

314-06371

GE1 Buffer

500 ml

311-06381

GE2 Buffer

200 ml

318-06391

RNase A（100 mg/ml）

0.5 ml×5

311-06641

GW Buffer

40 ml×2

318-06651

GE2-K Buffer

100 ml

315-06661

GB3 Buffer

12.5 ml×2

312-06671

GM quicker 2 Enzyme Set

1 Set(Proteinase K 2 ml, α-Amylase 0.2 ml)
316-90025

TE (pH8.0)

500 ml318-90105

Distilled Water, Deionized, Sterile

500 ml

312-01193

Agarose S

100 g

313-03242

Agarose 21

25 g

312-06512

Agarose XP

25 g

311-02682

Agarose X

25 g

311-05281

OneSTEP Marker 6

1,500 μl

318-05791

OneSTEP Marker 4

375 μl

312-05831

OneSTEP Marker 11

375 μl

319-08141

Collection Tube

100 回用１４GM quicker Manual Ver. 4.0

Ⅸ 簡易プロトコール*「遺伝子組換え食品表示関係」に準拠したプロトコールです。

１５

GM quicker Manual Ver. 4.0

１６

GM quicker Manual Ver. 4.0

１７

GM quicker Manual Ver. 4.0

＊「遺伝子組換え食品表示関係」に準拠したプロトコールです。

１８GM quicker Manual Ver. 4.0

１９

GM quicker Manual Ver. 4.0

２０

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜ メモ欄 ＞

２１

GM quicker Manual Ver. 4.0

＜ メモ欄 ＞

２２

GM quicker Manual Ver. 4.0

お問い合わせ先株式会社ニッポンジーン
研究試薬部 学術営業課
T E L 076 - 451 - 6548
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