研究用試薬

製品データシート2020 年 7 月

Code No. 27104

第 1 版作成

Rat Total Angiotensinogen Assay Kit - IBL(2) 標識抗体濃縮液の希釈方法

96 Well

標識抗体濃縮液を別に用意した採取用容器にて、標識抗体用溶解液で30 倍希釈してください。これを標識抗体とします。

ご使用の際はこの添付文書をよく読んでから使用してください。
全般的な注意(3) 標準物質の希釈方法

本キットは、研究用試薬です。診断等に用いることはできません。

標準物質バイアル瓶に精製水を 0.5 mL 加えて完全に溶解します。
この時標準物質濃度は 10 ng/mL となります。溶解後の標準物質は凍結保存することができます。凍結融解の繰り返しはできません。
希釈用テストチューブを 7 本用意し希釈用緩衝液を 230 μL ずつ量り取ります。
5 ng/mL の希釈用テストチューブに 10 ng/mL の標準物質溶液を 230 μL加え、混和し、その溶液 230 μL を 2.5 ng/mL の希釈用テストチューブに加え混和します。順次 2 倍連続希釈をおこない、5 ng/mL～0.08 ng/mL までの 7 点を希釈標準品とします。

形状・構造等（キットの構成）
1 抗体プレート(Anti- Rat AGT (135) Rabbit IgG A.P.固相)2 標識抗体濃縮液(30 倍濃度)
(HRP 標識 Anti-Rat AGT (405) Rabbit IgG Fab’ A.P.)
3 標準物質(Recombinant Rat Angiotensinogen)
4 希釈用緩衝液
5 標識抗体用溶解液
6 TMB 基質液
7 停止液
8 濃縮洗浄液

96Well x 10.4mL x 1
0.5mL x 230mL x 112mL x 115mL x 112mL x 150mL x 1

Tube-1Tube-2Tube-3
Tube-4Tube-5Tube-6Tube-7

測定対象

5ng/mL
2.5 ng/mL
1.25 ng/mL
0.63 ng/mL
0.31 ng/mL
0.16 ng/mL
0.08 ng/mL

ラット血清および EDTA-血漿(4) 検体の希釈方法
検体は添付の希釈用緩衝液で、下記の希釈倍率にて希釈してください。
ラットの血清及び EDTA-血漿の場合は、2,000 倍以上添付の希釈用緩衝液で足りない場合は、追加購入用専用希釈用緩衝液(Rat Angiotensinogen EIA buffer 100mL、製品番号：27104D100)の用意がございますので、ご利用ください。

測定原理
本製品は、サンドイッチ法による ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)キットです。1 次抗体はプレートに固相されていますので、検体および標準物質を加え 1 次反応をおこないます。その後、HRP 標識された 2 次抗体を加え 2 次反応をおこない、反応後過剰の 2 次抗体を洗浄除去した後、Tetra MethylBenzidine (TMB) により発色させます。

3 測定操作方法 (測定操作一覧 参照)(1) 検体ブランクの添加
検体ブランクのウェルを設定し、希釈用緩衝液を 100 μL 入れます。
(2) 検体、希釈標準品の添加
検体 100 μL および希釈標準品各 100 μL をそれぞれのウェルに入れます。
(3) プレートカバーをして第１反応(4) 洗浄（操作上の注意 8.9 参照）
ウェルの反応液を除去します。洗浄液を加え除去します。
(5) 標識抗体の添加
標識抗体を 100 μL 添加します。
(6) プレートカバーをして第２反応(7) 洗浄（操作上の注意 8.9 参照）
ウェルの反応液を除去します。洗浄液を加え除去します。
(8) TMB 基質液の添加
TMB 基質液を 100 μL 添加します。
(9) 遮光して発色反応(10) 停止液の添加停止液を 100 μL 添加します。
(11) 吸光度測定
プレート底面のよごれや水滴を拭き取り液面に気泡がないことを確認した後、検体ブランクを対照とした検体および標準の吸光度を測定してください。
測定波長：450 nm、2 波長の場合は主波長：450 nm、副波長：600～650 nm

操作上の注意検体は、採取後速やかに測定してください。保存する場合は、凍結保存とし、検体の凍結融解を繰り返さないでください。また、融解は低温でおこない測定前に十分混和してください。
2 検体は希釈用緩衝液で希釈してください。
3 検体や標準物質は、二重測定することをおすすめします。
4 測定に当たってはその都度検量線を作成してください。
5 検体は、中性域のものを使用してください。また、有機溶媒等の混入も反応に障害がありますので注意してください。
6 試薬は使用前に常温に戻し、数回静かに転倒混和し変化のないことを確かめてください。
7 抗体プレ－トの洗浄は必ず付属の洗浄液を使用してください。不十分な洗浄は、測定誤差の原因となりますので正確におこなってください。
8 洗浄は機械洗浄（wait time 0 秒）で設定し、反応後直ちにプレート洗浄してください。洗浄の浸漬時間が長くなるほど吸光度が低下する傾向があります。
マルチチャネルピペットおよび洗浄瓶を用いて洗浄する場合は、洗浄液をウェルに満たした後、直ちにプレートを逆さまにして振り払い洗浄液を除去します。この洗浄操作を規定回数おこなってください。操作は洗浄むらのないよう十分注意しておこなってください。
9 洗浄操作を規定回数おこなった後に、プレートをペーパータオルの上でたたいて、完全に水分を除去してください。この時ペーパータオルがウェルの中に入らないよう注意してください。
10 TMB 基質液は、光に対して敏感です。遮光保存してください。金属との接触も避けてください。使用に際しては必要量を採取用容器にとり分けてください。
11 TMB 基質液添加後、反応液は徐々に青色に変ります。この時の反応は、遮光してください。また、採取用容器に残った TMB 基質液は、コンタミの原因になりますので元に戻さないでください。
12 吸光度測定は、停止液添加後 30 分間以内におこなってください。
1

測定操作一覧

試料

第１反応
用法および用量 (操作方法)
1

必要な器具・器材
プレートリーダー
希釈用テストチューブ
精製水
ペーパータオル
冷蔵庫

洗マイクロピペットおよびチップ
メスシリンダーおよびビーカー
プレートウォッシャー又は洗浄瓶
採取用容器 (清潔な試験管など)

濃縮洗浄液を精製水で 40 倍希釈してください。これを洗浄液とします。
必要量を調製してください。

免疫生物研究所

検体

希釈標準品

希釈用緩衝液100 μL100 μL100 μL

プレートカバーをして 2～8℃ overnight 反応
4 回 (洗浄液 350 μL 以上)（操作上の注意 8.9 参照）
100 μL

第２反応

プレートカバーをして 2～8°C 60 分間反応

停 止 液
吸光度測定

群馬県藤岡市中 1091-1
1100 μL

100 μL

5 回 (洗浄液 350 μL 以上)（操作上の注意 8.9 参照）

浄100 μL

発色反応(1) 濃縮洗浄液の希釈方法

株式会社

検体ブランク浄TMB 基質液

製造販売元

標 準標識抗体

洗2 準備

検 体

100 μL100 μL

遮光常温 30 分間反応
100 μL100 μL450 nm / 600～650 nm

100 μL研究用試薬

製品データシート2020 年 7 月

Code No. 27104

測定結果の算出方法

使用上または取り扱い上の注意

グラフの X 軸に標準物質濃度を、Y 軸にその吸光度をプロットします。各
プロットに適当な回帰曲線を当てはめ(例：両対数変換の二次回帰等)、検量線を作成します。
検体の吸光度を検量線に当てはめ、濃度を読みとります。
その値に検体の希釈倍率を乗じ、検体の濃度を算出します。

123

測定値と検量線作成例
吸光度(450nm)
2.807

2.501.914

1.25

1.1210.630.638

0.310.342

0.160.1881

取り扱い上(危険防止)の注意(1) 構成試薬には動物血液成分を含む物があります。取り扱いに注意し使用後は手洗いなどをおこなってください。
(2) 停止液は強酸性 (1N 硫酸) です。衣服・皮膚等への接触および廃棄には十分注注意してください。

2

使用上の注意(1) 標準物質は、凍結乾燥品です。開封は、十分注意しゆっくりとおこなってください。
(2) 保存は、2～8°C としてください。
(3) 希釈用緩衝液、標識抗体濃縮液および濃縮洗浄液は、まれに析出を認める場合がありますが、性能に問題はありません。
(4) ロットが異なる製品の構成試薬や他のキットの構成試薬を混ぜたり、交換したりして使用しないでください。
(5) 期限切れの試薬は、使用しないでください。

3

廃棄上の注意使用後の抗体プレートや試薬は多量の水で洗い流してから廃棄してください。

101OD 450

標準品濃度
( ng/mL)
5.000.08

第 1 版作成

0.10.010.010.0970.1

110Rat Total Angiotensinogen (ng/mL)

貯蔵方法・有効期間

性能1

感度0.009 ng/mL (標準品を用いて NCCLS 法にて算出)

2

測定範囲0.08 ～ 5 ng/mL

2～8°C 保存
使用期限は外箱に記載

包装単位および製品番号
96 Well
製品番号

希釈直線性

332Dilution linearity
of Wistar rat serum

Dilution linearity
of Wistar rat plasma

問合せ先株式会社 免疫生物研究所〒375-0005 群馬県藤岡市中 1091-1
電話：0274-50-8666
FAX：0274-23-6055
URL: https://www.ibl-japan.co.jp
E-mail: do-ibl@ibl-japan.co.jp

ng/mLng/mL

211000.00

40.25
0.50
0.75
1.001/Dilution (1;1000-fold diluted of Wistar
rat serum)

0.00

0.25
0.50
0.75
1.00
1/Dilution (1;2000-fold diluted of Wistar
rat plasma)

添加回収試験
検体

Wistar rat
serum(x2,000)

Wistar rat
plasma(x2,000)5

添加量(ng/mL)

理論値(ng/mL)

測定値(ng/mL)

%

1.25

2.95

2.53

85.8

0.63

2.33

2.06

88.4

0.31

2.01

1.89

94.0

1.25

2.90

2.63

90.7

0.63

2.28

2.06

90.4

0.31

1.96

1.89

96.4

同時再現性

測定値(ng/mL)

SD(ng/mL)

CV (%)

n3.18

0.13

4.124

0.87

0.05

5.7240.250.028.024

測定値(ng/mL)

SD(ng/mL)

CV (%)

n3.17

0.11

3.5

100.870.06

6.9

100.250.02

8.0106727104

測定間再現性

特異性
ラット血清および血漿中の Angiotensinogen を特異的に検出

製造販売元

株式会社

免疫生物研究所

群馬県藤岡市中 1091-1
2