装置ラインナップ
375445

アプリケーション

メソッド

変性中点温度

Fluor

✓✓

✓

✓

SLS

✓

✓✓

✓

DLS

✓

Fluor, SLS

✓✓

✓

✓

DLS

✓

ΔG（構造の自由エネルギー変化）

Fluor

✓✓

✓

✓

リフォールディング評価

Fluor

✓✓

✓

✓

ビリアル係数（B22）DLS✓

拡散係数の濃度依存性（kD）

DLS✓

粒子径測定と多分散性評価

DLS

✓

粘度測定

DLS

✓

相対粘度測定Fluor

膜タンパク質安定性

Fluor

凝集開始温度
等温安定性

蛍光・静的光散乱・動的光散乱
ハイスループット同時解析✓✓

UNcle 装置仕様
最小サンプル容量

9 µL

同時測定数

48 サンプル

温度レンジ

15 〜 95 ℃

サンプル濃度

0.05 mg/ml 〜 150 mg/ml IgG（タンパク質による）

昇温速度0.01 〜 10 ℃/min

測定温度確度±1℃（＜ 70 ℃ ）、± 1.5 ℃（＞ 70 ℃）

設備環境

温度 : 18 〜 28 ℃、湿度 : 40 〜 60 %RH（結露のないこと）電源環境

110 〜 240 VAC、50/60 Hz、
ヒューズ容量 : 6 A、最大消費電力 : 600 W

寸法（D×W×H）、重量

500 × 540 × 580 mm、50 kg

蛍光および静的光散乱
測定精度＜ 2 % CV（Tm）

励起

266 nm および 473 nm レーザー

検出

蛍光：CCD スペクトロメーター（250 〜 720 nm レンジ）
SLS：266 nmおよび 473 nm の散乱強度

SLS分解能〜 15 kDa（平均分子量）

動的光散乱
測定範囲

（流体力学半径）0.3 〜 1000 nm

多分散性＜ 0.1（標準粒子において）最小サンプル濃度

0.1 mg/ml（リゾチームにおいて）分子量測定範囲

192 Da 〜 25 MDa

光源

660 nm 半導体レーザー

検出

光ダイオードモジュール

科学機器部〒143-0006 東京都大田区平和島 6-1-1, 東京流通センター AE5-7
Phone 03-3767-4510, Fax 03-3767-4569
tp.labtyo@dksh.com

オール・イン・ワン タンパク質物性解析装置

タンパク質の様々な安定性評価をワンストップ測定

Trp Fluorescence

10SLS266

140

Formulation
A
Formulation
A
140

120

Formulation
B
Formulation
B120
Formulation
C
Formulation
C

100

Formulation
D
Formulation
D
100

80

80

60

60

4040

20

200

左上：装置ダイアグラム
0300

400

500

600

Wavelength (nm)

700

9 ul

10-2 10-1

100 101 102 103 104 105 106 107
Hydrodynamic Diameter (nm)

107

106

105

04084

128

1612

356

2016242028
2428

Amplitude347

20
Tagg = 73.8 °C

346

1034534425354555657585950Temperature (°C)

ビリアル係数（B22）と拡散係数の濃度依存性（kD）

104108103107102106103101105102

DLSによる粘度測定

5.5 5.5

104101104651046570707575808085

1008590

10090

Temp (°C)
Temp (°C)

昇 温 測 定を蛍 光 / S L SではなくDLSでモニターしたい。その測定もUNcleで簡単に実施することができます。タンパク質のみならず、幅広い高分子の熱安定性評価に応用可能です。

変性剤による化学変性測定。
一定温度での可逆的なアンフォー
ルディングにより、構造のギブス自由エネルギー変化（ΔG）
を下記の式より計算可能できます。

∆G = 14 kJ/mol

354352350
348346

ΔGo = C½ * m

344

4.5 4.50.250.25
B22 =B0.0007
22 = 0.0007
B22 =B0.0004
22 = 0.0004
B22 =B-0.0002
22 = -0.0002

Increasing
Increasing
Viscosity
Viscosity

0.200.20

B22 =B0.0002
22 = 0.0002

4.0 4.0
3.5 3.5

3.0 3.0

0.15 0.15

0.10 0.10

2.5 2.5

2.0 2.00.050.05

1.0 1.00022446688 1010 1212

Concentration
Concentration(mg/mL)(mg/mL)タンパク質のコロイド安定性の予測において、ビリアル係数と拡散係数は有用なパラメータです。
正の値は分子間に斥力的な相互作用、負の値は引力的な相互作用があると考えられ、凝集性を予測することが可能です。

123456Denaturant Concentration (M)0.000.00
101 101

102 102103 103

Hydrodynamic
Hydrodynamic
Diameter
Diameter(nm)(nm)

104 104100nmのポリスチレン標準粒
子のみかけの粒子径をDLSにより測定することにより、下記の式より粘度を決定できます。
K = ボルツマン定数
D = 拡散係数
RH = 流体力学半径11アプリケーションを1台で！

Refolding

Kinetics∆G

ΔGo=ギブス自由エネルギー変化[kcal/mol]
C1/2 =変性中点濃度[M]m値=比例定数

342

030

凝集

108

化学変性測定Unfolding at Static Temp. (Fluorescence)

1サンプルわずか

0.00

1.5 1.5

等温測定は昇温測定とは異なる観点での安定性評価アプロー
チです。UNcleでは一定温度下でのリアルタイムの変性、凝集をサン
プルを蒸発させることなく長時間測定することが可能です。

専用サンプル容器：UNi

348

40

Tm1 = 65.3 °C

5.0 5.0

Hours Hours

左下：266 nm、473 nm のレーザーの同時照射で得られるトリプトファンの蛍光と2波長の静的光散乱ピーク

専用のサンプル充填容器 UNiを使用することにより、1サンプルわずか9µlで複数な物性パラメータを迅速に取得することが可能です。1度にセットアップできるのは48サンプル。
サンプル充填後、DLS測定を実施、そのままサンプルを入れ替えることなく熱安定性測定を実施することで、48サンプルの変性、凝集、粒子径、多分散性等の評価を短時間で効率よく取得できます。

00.05

DLSによる熱安定性
108160変性

0.10

Z Diameter (nm)

20

等温安定性
160

50

Amplitude

SLS473Tm2 = 76.7 °C

多分散性

0.15

Z Diameter (nm)Intensity30349

粒子径0.20

Amplitude

400.25

Normalized Intensity

Heating/Cooling PlateDLS Before
DLS After

Normalized IntensitySamples in UNi

昇温測定前に動的光散乱測定を行うことによりタンパク質溶液の多分散状態をあらかじめ評価。そのまま昇温測定により変性中点温度（T m）と凝集開始温度（T agg）を同時に取得し、さらに昇温後の凝集の粒度分布もも確認。1度の昇温測定でサンプルを無駄に消費することなく粒子径、多分散性、T m 、T aggを全て取得。48サンプルの同時測定でタンパク質溶液の物性を迅速に把握できます。

Intensity (counts/min)Collection
Optics350

600.30351

Intensity (counts/min)

660 nm(Dynamic light Scattering)UNcleは、蛍光スペクトル測定・静的光散乱（SLS）・動的光散乱（DLS）の３つの測定を1台で可能な、これまでにない新しい構成を持つハイスループットタンパク質物性解析プラットフォームです。
266nmと473nmのレーザーは、それぞれの波長の静的光散乱強度からタンパク質の凝集状態を評価できます。266nmのレーザーは、散乱測定と同時にタンパク質中の主にトリプトファンを励起し、その蛍光を検出することで、標識色素を使うことなくタンパク質の変性状態を評価できます。
さらに660nmのレーザーによる動的光散乱の測定により凝集の粒子径や多分散性を評価できます。
UNcleは、これらレーザー照射を温度スキャンを行いながら連続的に実施することで、タンパク質の変性温度、凝集開始温度、粒度分布といった多様な物性情報を微量かつハイスループットに取得することが可能となっています。
また従来の2レーザーモデルである UNit、3レーザーモデルであるUNit375、UNit445も引き続きラインナップ。UNit375では375nmのレーザーでCPM標識を励起することで膜タンパク質の安定性評価を実施可能です。UNit445ではアミロイドなどのタンパク質の線維化の評価や分子ローターを用いた相対粘度測定が実施できるなど、ユーザーの幅広い測定ニーズに対応します。

352

Tm

専用のシリコンシールとフレームで完全に密閉可能

Tagg

48 サンプル同時測定

Viscosity

リフォールディング
100344803436034240341203400.00.00.5

1.0

1.5

2.0

Time (hours)

2.5

3.0

Temperature °C

Unfolding/Recovery (Fluorescence)

16 サンプル/UNi

Aggregation (SLS)

473 nm
(Tm & Tagg)

変性中点温度 Tm
凝集開始温度 Tagg
粒子径多分散性

Aggregation (SLS)

266 nm
(Tm & Tagg)

ワンショットで得られる豊富なデータ

Aggregation (SLS)

Imaging
Spectrometer

Unfolding (Fluorescence)

UNcle 測定原理

温度シフトがタンパク質のフォールディングに与える影響を評価できます。昇温・降温のプログラムは自由に設計可能。

B22 / KD

バイオ医薬品の開発候補や製剤処方条件のスクリーニング
膜タンパク質の安定性評価
低分子化合物のリガンドスクリーニング など