PXB-cells LAを用いた実験例-1
LipoCULTUREによる測定- For Research Use-

LipoCultureによる培養経過、薬剤添加におけるCholesterol／TGの変化
試験１:培養１日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取→脂肪肝モデル
試験２:培養３日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取→正常肝モデル
試験３:培養８日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取→正常肝モデル

脂肪肝モデル

巨大な脂肪滴が細胞内に確認され、高レベルの中性脂肪の蓄積が見られる

正常肝モデル
正常肝細胞としての反応・動態が見られる
培養用培地 : PXB-cells培養用培地（型式番号:PPC-M100）
分析用培地 : William’s E Medium no Phenol Red（A1217601:Thermo Fisher Scientific）
with CM4000:Thermo Fisher Scientific）
添加剤:ロミタピド
0 , 1uM , 10uM 100uM／DMSO含有バッファー
ラクトフェリン 0 , 10ug/mL , 100ug/mL , 1000ug/mL／PBS〇薬剤未添加のコントロール群におけるCho/TGの産生量を調べた。
培養が進むにつれて産生量が低下した。
株式会社免疫生物研究所 〒375-0005 群馬県藤岡市中1091-1

TEL: 0274-50-8666

Email: do-ibl@ibl-japan.co.jp

URL: www.ibl-japan.co.jp

PXB-cells LAを用いた実験例-1
LipoCULTUREによる測定- For Research Use-

薬剤添加によるCholesterol／TGの変化

Total Cholesterol (mg/dL)

試験１:培養１日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取
試験２:培養３日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取
試験３:培養８日後、試験用培地に交換＋薬剤添加→2日間培養→上清採取

LipoCULTURE
CholesterolTG測定

試験① 試験➁ 試験③

Total TG (mg/dL)

試験① 試験➁ 試験③

ロミタピド添加群

ラクトフェリン添加群〇試験①から③と培養が進むにつれてCho,TG共に産生が低下した。
〇ロミタピド添加によりCho、TG共に産生が低下した。
〇ラクトフェリン添加によりTGの産生が低下した。
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PXB-cells LAを用いた実験例-２
LipoCULTUREによる詳細測定- For Research Use-

LipoCultureによる培養経過、薬剤添加におけるCholesterol／TGの変化－２０分画リポプロテイン詳細分画における影響－
ロミタピド添加による影響
試験②

試験③

TG (mg/dL)

Cholesterol (mg/dL)

試験①

ラクトフェリン添加による影響
試験②

試験③

TG (mg/dL)

Cholesterol (mg/dL)

試験①〇主にVLDLにおいてCho,TG共に産生が低下した。
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PXB-cells LAを用いた実験例-３
ELISAによる各種因子の測定- For Research Use-

培養経過、薬剤添加における培養上清中各種因子量の変化

*
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*

*

*

*

〇Angptl3以外は、培養が進むにつれて産生量が低下した。
〇ロミタピド添加によりApoA5は産生が低下した。
〇ラクトフェリン添加によりAngptl3、Angptl8、ApoA5は産生が低下し、Angptl4は増加した。

株式会社免疫生物研究所 〒375-0005 群馬県藤岡市中1091-1

TEL: 0274-50-8666

*

* **

＊：参考値

Email: do-ibl@ibl-japan.co.jp

URL: www.ibl-japan.co.jp

PXB-cells LAを用いた実験例-３
ELISAによる各種因子の測定- For Research Use-

培養経過、薬剤添加における培養上清中各種因子量の変化**** *** ** *** ** * * *** **

*

*

*

*

〇ApoB100は、培養が進むにつれて産生量が低下し、Albuminは増加した。
〇ラクトフェリン添加によりApoB100、FGF21、Albuminは産生が低下し、ＨＴＧＬは増加した。

株式会社免疫生物研究所 〒375-0005 群馬県藤岡市中1091-1*

TEL: 0274-50-8666＊：参考値

Email: do-ibl@ibl-japan.co.jp

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PXB-cells LAを用いた実験例-４
ELISAによる各種因子の測定- For Research Use-

試験プロトコール添加剤:
ロミタピド, 0 , 1uM , 10uM, 100uM
ラクトフェリン, 0, 10, 100, 1000ug/mL

使用試薬No.27362 Human Mac-2 binding protein(Mac-2bp) Assay Kit – IBL
No.27158 Human Osteopontin Assay Kit - IBL
No.27412 Human Total Angiotensinogen Assay Kit - IBL

株式会社免疫生物研究所 〒375-0005 群馬県藤岡市中1091-1

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PXB-cells LAを用いた実験例-５細胞内脂質量の測定- For Research Use-

Control Lactoferrin
100ug/mL

試験①

Control Lactoferrin Control Lactoferrin
100ug/mL
100ug/mL

試験➁

試験③

測定方法
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.

試験プロトコール

細胞上清を除く
TG/TC試薬①、200 μLを1well/24wellに添加
37°C、10分間静置
マイクロピペットで細胞を剥離剥離後の細胞懸濁液を回収
室温、10,000 g、10分間遠心分離
上清を回収
直ぐに測定しない場合は­80°C以下で保存
96マルチウェルプレートに上記サンプル、希釈済み標準物質などを各15 μL添加
TG/TC試薬①を68 μLずつ添加
プレートミキサーで攪拌
37°C、10分間静置反応後のウェルに、TG試薬②を25 μL添加
プレートミキサーで攪拌
37°C、10分間静置
550 nmおよび800 nmの吸光度を測定する。

株式会社免疫生物研究所 〒375-0005 群馬県藤岡市中1091-1

培養↓←薬剤を添加
↓培養
↓
細胞回収
↓
コレステロール、中性脂肪を測定

添加剤:ラクトフェリン, 0, 100ug/mL

TEL: 0274-50-8666

使用試薬1.
2.
3.

コレステスト🄬 TG/TC 試薬①
コレステスト🄬 TG/TC 試薬②
コレステスト🄬 Nキャリブレーター（積水メディカル株式会社）

Email: do-ibl@ibl-japan.co.jp

URL: www.ibl-japan.co.jp