プロファイルシート

名

中腸腺微胞子虫症
Hepatopancreatic microsporidiosis (HPM)
学名からEHPと称されることがある。

２．病 原 体微胞子虫 Enterocytozoon hepatopenaei

１．病a) 分 類

Eukaryota 真核生物
superphylum (上門) Opisthosporidia （この分類群は菌類の姉妹群とされる）
phylum Microsporidia (微胞子虫門)
family Enterocytozoonidae (科)Enterocytozoon （属）b) 形 態1)胞子は卵型で、短径0.7 x 1.1 mmc) 特 徴1)

電顕観察によれば、成熟胞子は1個の核を持ち、極管は直径75nmほどで胞子殻の内側を一重に5－6回旋回する。胞子殻は電子密度の低いendospore（10nm）と電子密度の高いexospore(2nm)からなる。

1)

３．地理的分布４．宿 主タイ1）2），ベトナム2），インド4）, 9)，インドネシア，マレーシア，中国
ブラックタイガーPenaeus monodon , バナメイエビPenaeus vannamei
クルマエビへの感染性も疑われる。

５．発生情報a) 潜伏期間不明b) キャリアー不明c) 感染経路
水平感染によるものと思われる7）。
d) ベクター不明e) 蔓延状況（死 本疾病による死亡報告は無い。文献2）において，感染実験のために対照群として準備したバナメイエビ
亡率、罹患率な の1/3がPCRで陽性になった。また，インドでの事例では調査したバナメイエビの63.5%が陽性を示した
6）ど）。
f) 感染ステージ 少なくともポストラーバ以降は感染する。
g) 感染要因
６．症

不明状a) 臨床症状b) 組織検査1）2）
6）

エビ自体には特徴的な外観症状はないが成長が阻害され3)被害が起きる。大量死は報告されていない。水面に浮かぶ白いフンをする（white faeces syndrome）という症状がE. hepatopenaei の感染と相関するという報告もあるが6),文献2）によれば白いフンと E. hepatopenaei の感染とは直接の関係はないという。
中腸腺の上皮細胞に寄生し，細胞質中で成熟胞子が発達する。 上皮細胞中に多くの胞子がある場合は部分的に上皮の崩壊が見られることもある。他の組織に異常は認められない。

７．検 査 法a) 標的器官

中腸腺上皮細胞b) 簡易検査法

中腸腺のスタンプ標本を作製し，Uvitex2Bで蛍光染色し，蛍光顕微鏡を用いてUV励起で胞子を観察する。蛍光染色でなくとも通常のメイグリュンワルド－ギムザ染色などにより明視野顕微鏡で診断可能だが，いずれにせよ微胞子虫の種まで同定することはできない。

c) サーベーラン
Nested PCR8）ないしLAMP法5）11)。
ス
Nested PCR8）ないしLAMP法5）11)。一部の遺伝子配列が公開されているので，これら以外の適当ななプライマーで遺伝子を増幅し，配列決定をすることでも確定診断可能である。なお，シリンジで中腸腺のバd) 確定診断
イオプシー行いPCR検査をすることによってエビを生かしたまま検査可能であるという10)。LAMP法を報告している文献には5)と11）があるが，後から報告された文献11)には5)が引用されておらず，比較できない。
文献8）によるnested PCRを示す。文献2)はSSUrDNAを標的にしたnested PCRを報告しているが，文献8)によれば，文献2)の方法は近縁の微胞子虫による擬陽性バンドが出現し，また，感度もここに記載す
Nested PCRる文献8)の方法より劣るという。

DNA 抽出法

中腸腺組織を 5mg/ml のproteinase K を含む 500mLのバッファ中でホモジナイズし，55℃で30分間インキュベートする。バッファの組成は以下のとおり。
50 mM Tris (pH 9)
50 mM NaCl
0.1M MEDTA (pH 8)
2% SDS
ここから市販のDNA抽出キットを用いてDNAを抽出する。

本PCRは胞子殻のタンパク質（spore wall protein）遺伝子を標的にしている。
First step PCR
SWP 1F: TTGCAGAGTGTTGTTAAGGGTTT
SWP 1R: CACGATGTGTCTTTGCAATTTTC
プライマー、産物 産物サイズ：514ｂｐ
サイズ
Nested step PCR
SWP 2F: TTGGCGGCACAATTCTCAAACA
SWP 2R: GCTGTTTGTCTCCAACTGTATTTGA
産物サイズ：148ｂｐ

First step PCR（１）Pre-denaturation 95℃ 5min.
（２）以下を30サイクル
95 ℃ 30sec.
58 ℃ 30sec.
68 ℃ 45sec（３）Ｆinal extension
68 ℃ 5 min
プロトコル
Nested step PCR（１）Pre-denaturation 95℃ 5min.
（２）以下を20サイクル
95 ℃ 30sec.
64 ℃ 30sec.
68 ℃ 20sec（３）Ｆinal extension
68 ℃ 5 min
８．対策a) 殺菌・滅菌方 b) ワクチンｃ) その他-

９．発生事例

上記発生国ではかなりまん延していると思われるが，死亡があまり起こらないため，発生がはっきり認識されないものと推測される。

10．その他-出典1) Tourtip, S. et al. (2009) Enterocytozoon hepatopenaei sp. nov. (Microsporida: Enterocytozoonidae), a parasite of the black tiger shrimp
Penaeus monodon (Decapoda: Penaeidae): Fine structure and phylogenetic relationships. Journal of Invertebrate Pathology, 102, 21-29.
2) Tangprasittipap, et al. (2013) The microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei is not the cause of white feces syndrome in whitelegshrimp Penaeus (Litopenaeus) vannamei. BMC Veterinary Research, 9, 139-149Tangprasittipap et al. 2013. BMC Vet Res. 9:139-149
3) Chayaburakul et al.(2004) Multiple pathogens found in growth-retarded black tiger shrimp Penaeus monodon cultivated in Thailand.
Diseases of Aquatic Organisms, 60, 89-96.
4）Managing Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), microsporidial infections in vannamei shrimp farming: An advisory. 2016, CIBA epublication No. 29, Indian Council of Agricultural Research, Govt. of India.
5）Suebsing, R. et al. (2013) Loop-mediated isothermal amplification combined with colorimetric nanogold for detection of themicrosporidian Enterocytozoon hepatopenaei in penaeid shrimp. Journal of Applied Microbiology, 114, 1254-1263.
6）Rajendran, K. V. et al. (2016) Emergence of Enterocytozoon hepatopenaei (EHP) in farmed Penaeus (Litophenaeus) vannamei in India.
Aquaculture, 454, 272-280.
7) Salachan, P. V. et al. (2017) Laboratory cohabitation challenge model for shrimp hepatopancreatic microsporidiosis (HPM) caused byEnterocytozoon hepatopenaei (EHP). BMC Veterinary Research, 13, 9-15.
8）Jaroenlak, P., et al. (2016) A nested PCR assay to avoid false positive detection of the microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei(EHP) in environmental samples in shrimp farms. PLos ONE 11(11): e0166320. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0166320
9) Behera, B. K., et al. (2019) Prevalence of microsporidian parasite, Enterocytozoon hepatopenaei in cultured Pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) in West Bengal, east coast of India. Aquaculture International, 27, 609-620.
10）Cruz-Flores, R., et al. (2019) Detection of Enterocytozoon hepatopenaei using an invasive but non-lethal sampling method in shrimp(Penaeus nannamei). J. Microbiol. Methods 162, 38-41.
11) Cai S-X., et al (2018) Real-time loop-mediated isothermal amplification for rapid detection of Enterocytozoon hepatopenaei. PeerJ
6:e5993 DOI 10.7717/peerj.5993