July 2000

Vol.68 No.3

高速液体クロマトグラフ用
りん酸塩溶液
本品は吸光度・蛍光性物質などを保証しており、高速液体クロマト
グラフ用の溶離液として最適です。

規

格Na2HPO4濃K2HPO4度

吸光度

KH2PO4

NaH2PO4

0.24 〜 0.26 mol/l
220nm：max.0.08

220nm：max.0.02

230nm：max.0.04

230 〜 400nm：max.0.01

240nm：max.0.02
254 〜 400nm：max.0.01

pH（ 25℃）

8.8 〜 9.4

蛍光試験
コード No.

4.2 〜 4.6
試験適合

品

名

041-27715 0.25mol/l Dipotassium Hydrogenphosphate Solution
048-27725 0.25mol/l Disodium Hydrogenphosphate Solution
168-19965 0.25mol/l Potassium Dihydrogenphosphate Solution
197-12135 0.25mol/l Sodium Dihydrogenphosphate Solution

容量 希望納入価格（円）

500mL
500mL
500mL
500mL

3,000
3,000
3,000
3,000

Wako

目 次
化学大家━━━━━━━━━━━━━━━━「三崎嘯輔」
芝哲夫 ………2
総説━━━━━━━━━━━━━━━━━━「アクチビンの作用とその制御」
杉野 紀志子、杉野
弘 ………6「合成ペプチドを使った培養細胞へのトランス
フェクション法」
新留 琢郎 ……10シリーズ━━━━━━━━━━━━━━━━＜ Talking of LAL ＞「第 40 話 エンドトキシンと Toll-like receptor」
土谷 正和 ……25
<How to アポトーシス >「第 11 話（最終回）アポトーシスと免疫」
中島
泉 ……18< 脳科学一口メモ >「プロスタノイドの中枢神経系での作用（2）」
牛首 文隆 ……20
テクニカルレポート━━━━━━━━━━━「5% 含水シリカゲルの商品化と性能評価結果」
上森 仁志 ……32
新製品フラッシュ━━━━━━━━━━━━
りん酸塩溶液 …………………………………1
シバヤギ 自己抗体価測定キット、クラリスロ
マイシン ………………………………………5
アクチビン、ホリスタチン、タウタンパク質溶液 ……9
トランソーム TM Ⅳ, ペプチドタイプ、エンブリオ
マウス cDNA ………………………………13
DNA アイソレーター PS- ラピット試液、エキ
ソヌクレアーゼ ……………………………14
GFP、BFP 発現ベクター …………………15
ビラヌエバ骨染色液 …………………………16
アポトーシス研究用抗体 他 ………………19
スクレロチオリン、抗マウス COX-2, ウサギ 他 …21
ACE、ACE 阻害剤、スタチン試薬 ………22
プロテインキナーゼ C、プロテインキナーゼ阻害剤 他 …23
セレノ-DL- メチオニン、界面活性剤、CBB ……24
PIERCE 社 スライド-A- ライザー …………26
ワ コ ー パ ック ® WS-Ⅱ 3C8RS、Mallinckrodt Baker,
Inc. スピーディスクカラム用加圧プロセッサー …28
DPD 試薬、活性塩素-DPD テストワコー 他 ……29
7 種農薬混合標準液、HPLC 用標準液、ダイオ
キシン類分析用溶媒 ………………………30
8 種フタル酸エステル混合標準液、アフラトキ
シンセット ……………………………………31
5% 含水シリカゲル、環境分析用ジクロロメタ
ン、エーテル、BSTFA ……………………33
16 種 DNPH 混 合 標 準 液、プ レ セップ ®-C
DNPH 他 ……………………………………34
残留溶媒試験用高純度溶媒 ………………35
アネキシンⅤ- フルオレセイン染色キット、抗ラット iNOS, モノクローナル抗体 他 ………36
Q&A ━━━━━━━━━━━━━━━━━
オステオレジン TM 包埋キット………………17

1
1

385

三

崎

嘯

輔（1847 〜 1873）
大阪大学名誉教授哲夫

今年は日蘭交流 400 年に当り、両国

三崎嘯輔は弘化 4 年（1847）5 月 11

で多彩な行事がくりひろげられている。

日に福井の医家三崎草庵の末子とし交流 400 年というのはオランダ人が初て生まれた。宗元、尚史、尚之、嘯とめて日本に到来したのが、慶長 5 年も称した。福井藩に出仕後、文久 3 年

4 月 19 日であったことにもとづ（1600）（1863）に江戸に出て、緒方洪庵の適いている。この日一隻のオランダの帆塾出身の大鳥圭介に就いて蘭学を学

船リーフデ号が豊後、現在の大分県臼んだ。大鳥は江川塾や開成所で蘭学

杵市佐志布の海岸に漂着し、その船長を講義するくらいの高い実力を持ってウィリャム・アダムスと航海長ヤン・いたから、三崎はここで蘭書を読みこ

ヨーステンは徳川家康に重用されて、なす能力を十分獲得したことと思われヨーロッパの知識を江戸開府に役立てる。しかし当時の蘭学教育では会話は1）たのが日蘭交流のはじまりであった 。

無視されていたから、三崎がハラタマに始まる鎖以後、寛永 16 年（1639）の口述を同時通訳するほどのオランダ

写真 1. 三崎嘯輔

語の聴き取り能力をどのようにして身国体制のもとでも、唯一の西欧国として、オランダは長崎出島を通じて、日書を与え、これが河野によって『舎密につけたかが不思議である。わずかに本との貿易、文化交流を続けて、ヨー便覧』として翻訳されたのが資料に残想像を許されるならば、三崎よりすこ

ロッパに始まった 近代化の波をアッる最初である 。その後、医学伝習のし前に長崎でポンぺに就学して、そのプ・ツウ・デイトに日本に伝えてくれた一環として蘭医ポンぺ J.L.C.Pompe

講義を理解できた語学の天才司馬凌ことが、奇跡的な日本の近代化の成功

van Meerdervoort、ついでボードウィ
ン A.F.Bauduin によって医学教育の海との関係である。史実の上では司馬と三崎との出会いを証するものはない。

日本における化学のはじまりもオラ

基礎としての化学の講義が実施されしかし僅か 5 年を隔てて長崎でオランンダを抜きにしては語れない。化学とたが 6）、これらはいずれも医学者の副

ダ人教師の講義の通訳という同じ仕事

いう学問の存在を、蘭書を通じて知っ

業としての化学教育であった。ボードをした偶然以上に、司馬の諱、盈之にた宇田川榕菴がその畢生の労作としウィンが医学教育とは切り離した独立

通じる尚之の名を名乗った三崎に司馬の鍵となったのである。

2

芝

5）

て『舎密開宗（せいみかいそう）』の著の化学教育が必要であることを長崎奉

凌海を標榜する気持があったとしても述を始めたのが天保 8 年（1837）で、行を通じて幕府に建言し、それが容れおかしくない。慶応 2 年（1866）長崎でそれは弘化 3 年（1846）の榕菴の死をられてわが国最初の化学専門教師とし

ハラタマの講義を通訳した三崎は 19

もって完結しなかった。その後、万て招聘されたのがハラタマ Koenraad

歳であった。分析究理所にはハラタマ

延元年（1860）には幕府の蕃書調所内の講義のオランダ語を理解できるもうに精煉方（化学方）の設置、文久元年

Wolter Gratama であった 1、7）。
ハラタマは慶応 2 年（1866）4 月に（1861）の川本幸民の『化学新書』の著

来日し、長崎の医学校精得館の傍に建のハラタマの離日まで終始その傍を述 4）など、蘭学者による化学知識の吸てられた分析究理所においてはじめ離れず、通訳の任に当ったのは三崎で収が鋭意進められたが、所詮それらはて化学の専門教育を行った。このハラあった。

文書研究の域を出るものではなかっ

タマの化学講義を受講した者の多くは長崎の分析究理所でのハラタマの化た。

精得館の医学生達であったが、それと学教育は半年余で幕を閉じ、ハラタマ

2、3）

一人の学生松本太郎 8）がいたが、後実験を伴う本格的な化学のわが国は別に幾人かの化学者がこの中からは江戸開成所内に新設される予定の理への導入は長崎におけるオランダ人

育つことになり、後にベルリン大学ホ化学校に赴任するために、慶応 3 年

科学者の活動に俟たねばならなかっ

フマン研究室に留学した松本太郎、（1867）1 月に長崎を発った。この時三た。長崎における近代化学の伝授は

東京大学鉱山学教授になる今井巌ら

崎もハラタマに同船して江戸に移った。

嘉永 2 年（1849）のオランダ医ファン・の名を挙げることができる。このハラ

予定より遅れて理化学校の建築工事がデル・ブルック Van den Broek が河野

タマのオランダ語の講義を通訳して日始まった直後に江戸は維新の戦乱の舞

禎造にオランダのクラマー・ホンメス

本 人 学 生に 伝え たのが 三 崎 嘯 輔で台となり、結局ハラタマも三崎も為すと

K.Kramer Hommes の定性化学分析あった。

ころなく 1 年余を江戸で空費した。

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

共に大助教に任命された。舎密局の開校記念写真（写真 3）に三崎はハラタマの傍に礼装で写っている。舎密局職員録には「格致学化学講授記述

三崎大助教」と記されていて、専らハラタ
マの物理学・化学の講義通訳・翻訳を任としていたことがわかる。
ハラタマは開校日の翌週から毎日
理化総論の講義を行った。これも逐一
三崎によって訳されて 4 巻より成る『理化新説』として明治 3 年（1870）に刊行された。第 1 巻の内容は理化総論、
第 2 巻は物理学各論、第 3 巻は化学各論、第 4 巻は化学元素論より構成されている。開校 2 ヶ月後にはハラタマにより講義実験も開始された。毎日午前、午後の講義の通訳、筆録整理、翻訳書

写真 2. 舎密局錦絵

執筆に三崎は多忙をきわめたことと思われる。
ハラタマは舎密局での講義のかた
わら、近くの川崎に開設される造幣寮のために、金銀貨幣の化学分析法の講義も行った。この講義録も三崎により明治 5 年（1872）上下 2 巻の『金銀精分』
として刊行された。
ハラタマは明治 3 年（1870）12 月に
舎密局での契約期限が終了して、翌年日本を発ってオランダへ帰国した。
来日以来 5 年間、三崎は常にハラタマの身辺を離れず、通訳の任に当った。
その経験から三崎自身深く化学の習得、
写真 3. 舎密局開校記念写真。前列右より 2 人目 ハラタマ、その右側 三崎嘯輔、
左側 2 人目 ボードウィン。

伝達に使命感を持つに至り、独自に化学に関する著書、訳書を多く残した。

明治元年（1868）江戸幕府に代った

事以下の役人、各国領事の来賓ら約

まず明治 3 年（1870）刊行三崎嘯輔

明治政府は、長崎、江戸で成らなかっ200 人の聴衆の前で、開校記念講演を

訳『試薬用法』2 巻はドイツのフレゼニ

た新学校の構想を大阪で実現しようと行った。その全 文が 三 崎にして、まずハラタマを江戸より招いた。

よって訳されて『舎密局開講

三崎と共に大阪に入ったハラタマは大之説』として刊行された。そ阪城西の地に舎密局（せいみきょく）すの内容は日本文としても格調

なわち化学校の新設を計画した。その高く、西欧学術の発祥、発達

開局に備えて、ハラタマは連日三崎とより説き起して、東西学問の共に、オランダから輸送され、長崎、

性格の違い、化学の将来の予

江戸と回送されてきた実験器具、薬品測にまで及び、この国におけを詰めた 400 余箱をはじめて開いてる理化二学の重要性を強調し整理、補修の作業を 2 ヶ月続けた。

た 7）。

5 月 1 日、舎密局は
明治 2 年（1869）
創立の日を迎え、ハラタマは大阪府知舎密局では教頭ハラタマの下で、三崎は松本太郎と

写真 4. 『試薬用法』

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

3

いて、注目すべきはその巻た人々の中からアドレナリンの高峰譲

頭に「獨逸

吉、味の素の池田菊苗、エフェドリンの

日本

弗列摂紐斯

三崎嘯輔

著。

譯」
と書か

長井長義などわが国化学の先覚者がれていて、この書は蘭訳を通輩出している一方で、直接ハラタマのさず、直接上記フレゼニウス

教えを受けた舎密局の教員の松本のドイツ語原書よりの訳と思太郎、三崎嘯輔、岸本一郎らがいずれわれる点である。三崎と同じも 30 歳を待たずに早世したことは、日福井出身で後年政治家とな

本の化学の出発に当って惜しみても余る杉 田 定 一 は 明 治6年りある痛恨事である。

（1873）頃、東京の三崎嘯輔
写真 5. 『化学器械圖説』

塾でドイツ語を学んだという記録 9）があるから、当時三崎はオランダ語から転じてドイツ語を得意としていたことが明らかで、『試験階梯』がドイツ原本からの翻訳としても不思議でない。
三崎はわが国におけるそれまでの蘭書翻訳による西欧化学の知識の吸収というパターンを乗り越えて、直接ド
イツ化学のわが国への導入

写真 6. 『試験階梯』

価されてよい。また三崎はこのように門』 Anleitung zur Qualitativen
Chemischen Analyse （1841）の翻訳を駆使して、ハラタマの薫陶を最も親で、湿式、乾式両法の解説である。次

しく受けて、化学実験特に分析化学をに明治 4 年（1871）刊行の『薬品雑物主体とする実質的な化学教育をわが試験表』1 巻は当時の輸入薬品の粗悪国に実施しようとした先覚者であると品を見分ける目的で、三崎が同じくフもみなされる。三崎の貢献がなければ、レゼニウスの書より各種試薬、薬品に

ハラタマによる近代化学の日本への混入する雑物の名とその試験法を抜紹介とその影響はあり得なかったと思粋して表にして出版したものである。

われ、日本の化学の出発に当り、その三崎はハラタマが舎密局を去った

功績は忘れられるべきでないと考える。

後、明治 4 年（1871）に東京の大学東明治 6 年（1873）5 月、三崎は福井に校予科の大助教に任命された。ここで帰郷して同月 11 日に結婚した。その化学実験の講義を担当して、初学者に後直ちに離婚したと伝えられていて、実験器具の用法を説く必要に迫られ、同月 15 日に急死している。26 歳にを明治 5『化学器械圖説』1 巻（写真 5）年（1872）に著した。これには各種のにも唐突であるので、その調査のためはじめにオランダ語、ついでドイツ語

化学実験器具を図示して解説していに筆者は先年、福井の三崎の墓（写真7）がある安養寺を尋ねて墓前に額ずの著書もある。明治 7 年（1874）にはき、住職に聞いて福井市内の三崎家『試験階梯』（写真 6）5 巻内外 2 篇を

子孫を探し当ることができたが、遂に刊行しているが、これもフレゼニウス

三崎家には嘯輔の事蹟を伝える記憶の分析書に拠ったものである。この書は何も残っていなかった。

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

1）芝哲夫 :「日本の化学とオランダ」、化
学、55（4）、27（2000）.
2）芝哲夫 「日本の化学を開いた:『舎密開宗』、化学、53（10）、21（1998）.
3）芝哲夫 :「宇田川榕菴の舎密開宗未刊部分の復元」、化学史研究、25（1）、66（1998）.
4）川本幸民『化学新書』:
化学古典叢書 1、
化学史学会、菜根出版、平成 10 年 2 月
25 日 .
5）芝哲夫「河野禎造」:
和光純薬時報、61（3）、2（1993）.
6）芝哲夫「長崎における:A.F. ボードウィ
ンの舎密学傳習講義録」、化学史研究、
22（3）、239（1995）.
7）芝哲夫 :「ハラタマと日本の化学」、化
学史研究、1982 年第 1 号（No.18）、1（1982）.
8）芝哲夫「松本 太郎」、和光純薬時報、
64（3）、2（1996）.
9）石橋重吉編『若越文化史』:、
咬菜文庫 .

なったばかりであった。その死がいかる。三崎はこの他に『定性試験升屋』の序言は明治 5 年（1872）に書かれて4をはかった最初の人として評

ウス K. R. Fresenius の『定性分析入〔参考文献〕

舎密局の影響を何らかの形で受け

写真 7. 福井安養寺の三崎嘯輔墓自己抗体価測定キット
自己免疫疾患を自然発症する実験動物や、人工的に炎症を発症させた実験動物を使用して自己免疫疾患を対象とした新薬の開発が進められています。自然発症する代表的なマウスの系統としては MRL/lpr マウスが用いられています。MRL/lpr
マウスはリンパ節腫瘍とともに腎炎、血管炎、関節炎を高率に発症するのでヒト慢性関節リウマチのモデル等、自己免疫疾患の発生機構を解明する有効なモデルとなっています。

MRL/lpr マウスの血清中に検出される自己抗体には IgG 型リウマチ因子（RF-IgG）、IgM 型リウマチ因子（RF-IgM）、抗ssDNA 抗体、抗 dsDNA 抗体、抗 Sm 抗体等があります。
今回、シバヤギよりマウス、ラットの自己抗体を ELISA 法により測定するキットを販売します。
〔特長〕

1. 短時間（5 時間以内）で測定可能
2. 微量な検体量（1 〜 5FL）で測定可能
3. 環境にやさしい防腐剤を使用
4. すべての試薬が溶液タイプで即座に使用可能
5. 高度な再現性〔操作方法〕〔キット構成〕
1. 抗原固相化プレート

96 ウエル
2. 標準溶液（10U/mL）
100FL
3. 緩衝液60mL4. 標識抗体（HRP 標識）
20FL
5. 発色剤（TMB）
12mL
6. 反応停止液（0.5M H2SO4）12mL
7. 濃縮洗浄液（10 ×）50mL〔抗体価標準曲線〕

1.2
1.0

イムノグロブリンまたは抗原固相化プレート
洗 浄検体または標準抗体
100@l/well
A450

0.8

室温 2時間反応
洗 浄
POD標識抗体

発

色

0.4
0.2
0.0
1

浄
100@l/well〔精

室温 20分反応

定（450nm)＊室温 20〜25℃

コード No.
633-02671
630-02681
637-02691
630-02701
637-02711
634-02721

メーカーコードAKRRG-101
AKRRG-111
AKRDD-061
AKRSD-051
AKRDD-060
AKRSD-050

マウスリウマチ因子 IgG 型
マウスリウマチ因子 IgM 型
マウス抗 dsDNA KIT
マウス抗 ssDNA KIT

感染症の研究にご利用頂けます。

容

日差再現性
（平均 C,V 値％）
8.7
7.6
4.7
4.9

量

希望納入価格（円）80,00080,00080,00080,00080,00080,000

96 回用
96 回用
96 回用
96 回用
96 回用
96 回用
CH3

HO

OH

H3C

〔規

格〕

クロロホルム溶状 ： 試験適合
力 価（ 脱 水 物 換 算 ）： 960〜1,040Fg/mg

OCH3
CH3

H5C2

菌作用を示すマクロライド系抗生物質です。ブドウ球菌、連鎖球菌等による

1000

O

生化学用

タンパク質合成を阻害することにより抗同時再現性（平均 C,V 値％）
6.9
8.1
4.2
4.6

H3C

Clarithromycin

ボソームの 50S サブユニットと結合し、100

抗dsDNA力価（mU/ml)

品
名
レビス リウマチ因子 IgG 型- マウス ELISA KIT
レビス リウマチ因子 IgM 型- マウス ELISA KIT
レビス 抗 dsDNA- マウス ELISA KIT
レビス 抗 ssDNA- マウス ELISA KIT
レビス 抗 dsDNA- ラット ELISA KIT
レビス 抗 ssDNA- ラット ELISA KIT

マクロライド系抗生物質
クラリスロマイシンは、細菌の 70S リ

10度〕
タイプ（N=30）

100@l/well

反応停止液
測

0.6

100@l/well

室温 2時間反応
洗
液

1枚
1本
1本
1本
1本
1本
1本

O

O

H3C

H
O

O

032-17871
038-17873

100mg
500mg

7,000 円
25,000 円

N

OH

H
H3C

H3C
H
O

CH3
CH3

O
OCH3

CH3
H

H

H

OH
H

CH3

C38H69NO13=747.95

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

5

アクチビンの作用とその制御
徳島大学分子酵素学研究センター

1. はじめに

杉野紀志子、杉野弘

ビンやアクチビンと異なり一本鎖の糖類が存在するので、その組み合わせタンパク質であり、その後の研究によにより多様なアイソフォームが存在す

1980 年代の半ば頃、脳下垂体前葉

りアクチビン結合タンパク質であるこることになる。これまでに、図 3 に示す

ホ ル モン である卵 胞 刺 激 ホ ル モンとが明らかにされ、アクチビンの作用

分子種が自然界から単離されている。

FSH の合成分泌を調節するペプチド

調節因子としての作用が注目を集め

いずれにしても、サブユニットの組み性因子が発見され多くの関心を集めた。

ている 。ここでは、アクチビン作用の合わせを変化させることにより、全く正FSH の分泌を特異的に促進する因子
1,2）としてアクチビン（Activin）
が、逆多様性とフォリスタチンによるその制反対の作用を発現するという巧妙な調御機構をまとめた。

節機構は広く関心を集めている 9, 10）。

8）に 抑 制 す る 因 子とし て インヒビ ン
3, 4）（Inhibin）とフォリス タ チ ン

2. アクチビンの分子構造

3. アクチビン作用の多様性 9, 10, 11, 12）

巣や精巣から単離された（図 1）。アクインヒビンは独立した 2 種類の遺伝

インヒビンはいろいろな場面でアクチビンとインヒビンはいずれも TGF-

子にコードされている A サブユニットとチビンに対して拮抗的に働くが、その5）（Follistatin）
が次々に哺乳動物の卵

B スーパーファミリーに属する因子でB サブユニットの前駆体タンパク質と活性は弱くこれまでに FSH の分泌抑ある（図 2）。インヒビンの受容体※）はして翻訳された後、S-S 結合を介して制作用以外には目立った作用は見い未だ明らかにされていないのに対し、二量体を形成し、プロセシングを受けだされていない。これとは逆に、アクアクチビンの細胞内情報伝達機構は、

成 熟 型 イン ヒビ ン（AB ダ イマ ー、

チビンはその後の研究により実に様々

最近の研究によりその主要な部分が32kD）に変換される。アクチビンは Bな作用を持つことが明らかにされてい解明され、他の TGF-B ファミリーの因

サブユニットの二量体であり、インヒビる。アクチビンはそもそも培養下垂体子、例えば TGF-B や BMP などと基本

ンと同 様 な プロ セシン グを 受 け て細胞からの FSH 分泌を促進する活性的には多くが共通していることが判明

24kD の成熟型が生成する（図 3）。B
サブユニットには A、B、C、E の 4 種を持つ因子として発見された。事実、した。一方、フォリスタチンはインヒ

6, 7）

FSH及びLH分泌調節機構
＋／−

視床下部
ゴナドトロピン放出ホルモン
脳下垂体前葉
ゴナドトロープ細胞＋／−
LH

ステロイドホルモン

インヒビン
フォリスタチン

TGFβ1
TGFβ4
TGFβ2
TGFβ3
BMP4
BMP2
Dpp
BMP5
BMP6 (Vgr-1)
BMP7 (OP1)
BMP8a (OP2)
BMP8b (PC-8 / OP3)
60A
GDF5 (Mp52 / CDMP1)
GDF6 (BMP13 / CDMP2)
GDF7 (BMP12 / CDMP3)

FSH−

アクチビンは下垂体前葉の FSH 産生

＋

アクチビン

UnivinVg1
GDF1
GDF3 (Vgr-2)
Dorsalin-1
BMP9
BMP3 (Osteogenin)
GDF10 (BMP3b)
Screw
Nodal
activinβA (inhibinβA)
activinβB (inhibinβB)
activinβD
activinβE
activinβC

生殖器官
卵巣

精巣

図 1. FSH の分泌調節機構とアクチビン、フォリスタチン

6

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

MIS
GDF9
inhibinα
GDNF

図 2. TGF-B スーパーファミリーの分子系統樹

データが蓄積されつつある。これまで
インヒビン（αβダイマー）

アクチビン（ββダイマー）に、ある種の神経細胞の生存維持、毛様体神経節細胞の分化誘導などの作用が報告されていた。ところが、最近

S-SA

βAサブユニット前駆体
A

与によっててんかんを誘導すると海馬

S-Sに BA mRNA が一過性に高まる。また、
S-SAB

αサブユニット前駆体
Bになって、ラットへのカイニン酸の投海馬に電気刺激を加え長期記憶を惹起すると、同様に BA mRNA の発現がS-S

海馬に認められている。さらにハンチ
S-S

B

βBサブユニット前駆体

ントン病や脳虚血のモデル動物にアクチビン A を脳室内投与すると有意にFSH分泌抑制因子

FSH分泌促進因子

病状が改善されるとする報告もある。

図 3. A, BA, BB サブユニット前駆体から形成されるアクチビンおよびインヒビンの二量体構造

一方で、筆者らは最近、アクチビン II型受容体と相互作用する分子 ARIP1

細 胞 の 数を 増 加させること や FSH

中胚葉誘導作用は特に多大の関心をを見いだした 17）。ARIP1 は WWドメ

mRNA の安定性を高める。興味深い集めた。ツメガエル初期胚の予定外インや PDZドメインといったタンパク

ことに、アクチビンの数多くのアイソ

胚葉片を各種濃度のアクチビン溶液

質相互作用に必要なドメインを複数個フォームの中でアクチビン B が下垂中で培養すると濃度に依存して血液有する高分子の細胞内タンパク質で体で産生されオートクライン因子とし細胞、筋肉、脊索などの腹側から背側あり、興味深いことに、脳に特異的にて働き FSH 分泌を高めているという。

にいたる各種中胚葉系の組織が誘導高い発現が認められる。特に神経シナ

逆に、成長ホルモン、プロラクチン、コされることが明らかにされている 。さプスでアクチビン受容体及びアクチビ

ルチコトロピンなどの他の下垂体ホルらに、ツメガエル初期発生においてアンの細胞内シグナル伝達分子である

モンの分泌はアクチビンにより抑制さクチビンのシグナルを遮断すると神経

Smad2/3 と複合体を形成して存在しれると報告されている。一方、アクチ

誘導が起こるとする報告もある。一方、ていることも観 察し ている。さらにビンの産生量が最も高いと考えられる

ラット肝再生系でのアクチビンの作用

ARIP1 はグルタミン酸受容体をはじ

卵巣や精巣では、卵巣顆粒膜細胞のが最近注目されている。アクチビン A

めシナプスに存在する各種イオンチャ

分化促進、卵胞の退行誘導、初期卵胞をラット静脈内に投与すると、肝臓のネルとも相互作用することが明らかにの成熟促進、アントラールの黄体化抑DNA 合成が抑制された上、アポトー

されている。このような結果は、アクチ

制、精子形成促進などの多くの重要なシスが誘導され、その結果、有意に肝ビンとその細胞内シグナル伝達系が役割を果たしている。こうした、主とし細胞数が減少するという。また、ラット

神経回路網形成に深く関わりを持ってて生殖に関わるホルモン様の作用以正常肝ではわずかなアクチビン BA

いることを示唆している

外に多彩なアクチビンの作用が注目される契機となったのは、前赤芽球系

mRNA の発現が 認められているが、70% 肝切除手術を施すと急激にそれからのインスリンの分泌を促進する。

細胞に対する分化誘導能が発見されが上昇する。逆に、肝臓 に特異的に発また、ラット頭頂骨由来細胞の増殖をてからである。アクチビンの投与によ現しているアクチビン BC 及び BE の促進することやプロリンのコラーゲン

り BFU-E や CFU-E の総数が増加す

mRNA はいずれも肝切除により減少

への取り込みを促進することなどからること、エリスロポエチンの共存下でする。ところが、肝切除直後にフォリス

BMP とともに骨の形成に関与してい赤血球産生を促進することなどが観察

タチンを投与すると肝再生が顕著にると考えられる。

されている 。また、B 細胞ハイブリ促進されることが観察されている。恐ド ー マ に お い て、ア ク チ ビ ン はらく肝形成ならびに肝機能の制御に

p21CIP/WAF1 を誘導することにより G1 ア
レストをもたらす 14）。IL-6 や IL-11 とTGF-B や HGF とともに、アクチビン

拮抗して形質細胞腫の増殖を抑制す

スタチンが重要な機能を担っているもることも知られている。

のと思われる 。

13）

アフリカツメガエル初期胚における15）及びその結合タンパク質であるフォリ
16）

脳・神経系での働きに注目すべき

アクチビンはランゲルハンス島細胞

4. フォリスタチンによるアクチ
ビン作用の制御 12, 18）
アクチビンのシグナルは 2 種類のア
クチビン受容体 I 型及び II 型を介して細胞内へ伝えられる。いずれもセリン /和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

7

FS315

activin/FS315
complexactivin288 はアクチビンと複合体を形成した

activin/FS288
complexpeptide andamino acidactivinP

Smad2/3

activinreceptors

P

membraneheparansulfateproteoglycanの後、エンドサイトーシスにより、アクチビン /FS-288 受容体は細胞内に取

Smad4

Smad7

結合しうる。つまり、アクチビンは FS-

288 を介して細胞表層にとどまる。そGS domain P
P

ままでも強く細胞表層ヘパラン硫酸に

FS288

proteolytic
degradation

endocytosis

り込まれて、リソソーム内でタンパクP分解を受けて最終的に細胞外へ放出

Smad2/3 Smad4
lysosome

される 21）。

nucleusp300
P

Smad2/3
FAST Smad4

このように、フォリスタチンはアクチ

transcription

ビンと複合体を形成することによりアクチビンとその複合体との相互作用を

図 4. フォリスタチンによるアクチビン作用の阻害様式
フォリスタチンがアクチビンと複合体を形成するとアクチビンは受容体との結合能を失い、そのシグナル伝達は遮断される。さらにアクチビン / フォリスタチン複合体は細胞表層ヘパラン硫酸に結合した後、エンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれ、分解・代謝される。

阻害しアクチビンの細胞内へのシグナル伝達を遮断する。一方、細胞表層からアクチビンの細胞内へのエンドサ
イトーシスによって取り込みを促進しスレオニンキナーゼ型受容体である。

をより強く抑制する in vivo の実験結

分解してしまう（図 4）。こうしたアクチ

アクチビンが恒常的にリン酸化された果とよく符合している。さらに、フォリビン調節作用がフォリスタチン分子種

II 型受容体に結合した後、この複合体と I 型受容体が会合し膜上で四量体を形成する。そのことにより I 型受容体の膜直下の GS 領域がリン酸化される。

スタチンの重要な性質として、細胞表により異なることは注目すべき点であ層へのヘパラン硫酸糖鎖への親和性

ろう。

だ領域を欠く FS-288 はある特定のヘこのリン酸化により細胞内情報伝達分

パラン硫酸の構造を認識して高い親子である Smad のリン酸化カスケード

和性を示したのに対し、FS-315 はほが惹起され、アクチビンのシグナルがとんど結合能を示さない。こうしたして、その調節因子であるフォリスタ

核まで伝達されることになる。Smad

フォリスタチンの分子種の性質の違い

チンもやはり多様な分子種を準備して分子群の中にはシグナル伝達に対しは、C 末領域に存在するアスパラギン

厳密にアクチビンの働きを監視する機て抑制的に働くものもある。こうしたア酸やグルタミン酸などの酸性アミノ酸構が必要であるものと考えられる。

クチビンのシグナル伝達系をフォリス

を多く含有するクラスターの有無によ

タチンは細胞の外で遮断することによるものと考えられる。

り、アクチビンの多彩な作用を阻害す
る（図 4）。
フォリスタチンには RNA スプライ

20）

5. おわりに
アクチビンの多彩な作用発現に対アクチビンは貧血症や骨粗鬆症への治療応用が考えられている。最近、このようなフォリスタチン分子種のハンチントン病に有効であるとの報告

構造上の違いは、アクチビンの阻害様もある。他方、フォリスタチンは慢性肝式の違いとしても観察される。フォリス炎、慢性腎炎、進行性固型癌などの患

シングによって翻訳されるタンパク質

タチンはアクチビンと結合し、アクチ者で高値を示すことが認められている。

領域の長さの違いから 2 種類の分子種、ビン分子の受容体への結合領域をマ

しかしながら、疾病とのかかわりにつFS-315 と FS-288（それぞれ、315 残基と 288 残基のアミノ酸から成る）が存在する。FS-315 は C 末端に酸性に富む領域を持っているが、FS-288 がスクすることにより II 型受容体への結いてはほとんど明らかにされておらず、合を阻害する。この際、FS-315 に比今後の臨床面での研究の展開が待たべ FS-288 の方がアクチビンと強く結れる。

合するために、より効率的にアクチビ

その領域を欠く。それ以外は両者の構

ンの II 型受容体への結合を阻害する。

造は同一である。興味深いことに、最その結果、アクチビンの II 型受容体へ

近、FS-288 の方が FS-315 に比べアの結合によって惹起される細胞内リンクチビンと約 10 倍ほど強く結合し、よ酸化カスケード応答反応が、FS-288

り強くアクチビン活性を抑制することによりより効果的に抑制されるものとが判明した。これは、FS-288 の静脈考えられる。

内投与が脳下垂体からの FSH の分泌8が挙げられる 。C 末端の酸性に富ん
19）

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

フォリスタチン 分 子の 中 でも FS-〔参考文献〕
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fluid. Nature 321, 776-779（1986）.
2）Ling, N. et al. : Pituitary FSH isreleased by a heterodimer of the Bsubunits from the two forms ofinhibin. Nature 321, 779-782（1986）.
3）Miyamoto, K. et al. : Isolation of
porcine follicular fluid inhibin of 32K
daltons. Biochem. Biophys. Res.
Commun. 129, 396-403（1985）.
4）Robertson, D. M. et al. : Isolation of
inhibin from bovine follicular fluid.
Biochem. Biophys. Res. Commun. 126,
220-226（1985）.
5）Ueno, N. et al. : Isolation and partial
characterization of follistatin : A
signal-chain Mr 35,000 monomeric
protein that inhibits the release offollicle-stimulating hormone. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA. 84, 8282-8286（1987）.
6）Mathews, L. S. et al. : Activin
receptors and cellular signaling by thereceptor serine kinase family. Endocr.
Rev. 15, 310-325（1994）.
7）Heldin, C. H. et al. : TGF-B signalingfrom cell membrane to nucleus
through SMAD proteins. Nature 390,465-471（1997）.
8）Nakamura, T. et al. : Activin-binding
protein from rat ovary is follistatin.
Science 247, 836-838（1990）.
9）杉野弘 , 中村隆範 : 多様な生理作用と情報伝達機構 . 生化学 68, 1405-1428（1996）.
10）Mather, J. P. et al. : Paracrine
regulation of reproductive function by

inhibin and activin. Proc. Soc. Exp.
Biol. Med. 201, 1-15（1992）.
11）De Paolo, L. V. et al. : Follistatin andactivin : A potential intrinsic regulatory system within diverse tissues.
Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 198,500512（1991）.
12）Aono, T. et al. : Inhibin, activin andfollistatin : regulatory functions insystem and cell biology. Springer, NewYork（1996）.
13）Shiozaki, M. et al. : Evidence for theparticipation of endogenous activin
A/erythroid differentiation factor in
the regulation of erythropoiesis. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA. 89, 1553-1556（1992）.
14）Yamato, K. et al. : Activin A inductionof cell-cycle arrest involves modulation of cyclin D2 and p21CIP/WAF1 inplasmacytic cells. Mol. Endocrinol.
11, 1044-1052（1997）.
15）Asashima, M. et al. : Presence ofactivin（erythroid differentiation factor）in unfertilized eggs and brastulaeof Xenopus laevis. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA. 88, 6511-6514（1991）.
16）安田宏 : 肝再生の停止機構とアクチビ
ン・フォリスタチン系 . 医学のあゆみ
185, 177-180（1998）.
17）Shoji, H. et al. : Identification andcharacterization of a PDZ protein thatinteracts with activin type II receptors.
J. Biol. Chem. 275, 5485-5492（2000）.
18）Sugino, H. et al. : Follistatin and its
role as an activin-binding protein. J.
Med. Invest. 44, 1-14（1997）.
19）Nakamura, T. et al. : Follistatin, an
activin-binding protein, associates withheparan sulfate chains of proteoglycans on follicular granulosa cells. J.
Biol. Chem. 266, 19432-19437（1991）.
20）Sugino, K. et al . : Molecular heterogeneity of follistatin, an activin-binding protein: Higher affinity of the
carboxyl-terminal truncated forms forheparan sulfate proteoglycans on theovarian granulosa cell. J. Biol. Chem.
268, 15579-15587（1993）.
21）Hashimoto, O. et al. : A novel role offollistatin, an activin-binding protein,in the inhibition of activin action in rat
pituitary cells : Endocytotic degradation of activin and its accelaration byfollistatin associated with cell-surface
heparan sulfate. J. Biol. Chem. 272,
13835-13842（1997）.
※）本稿脱稿後、Lewis, K. A. らにより、
III 型 TGF-B 受容体である B- グリカン
が、II 型アクチビン受容体とともに働くインヒビン受容体機能をもつことを明らかにした（Nature 404, 411414 （2000））。

TGF-βスーパーファミリー
アクチビン、ホリスタチン
コード No.
017-17961
014-17971
011-17981
063-04011

品
名Activin A, from Bovine Ovarium
Activin AB, from Bovine Ovarium
Activin B, from Bovine Ovarium
Follistatin, from Porcine Ovarium

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

2Fg
2Fg
2Fg
2Fg

希望納入価格（円）30,00030,00030,00030,000アルツハイマー病研究用
Tau Protein, Human, recombinant, Solution
生化学用
チューブリン重合促進因子として単離された Tau は、微小管の安定性を担っていると考えられており、現在では 中 枢 神 経 軸 索 の み ならず 多くのニューロン、グリアに発現していることが知られてきました。アルツハイマー病では Tau の過りん酸化による神経原
線維変化の形成によりニューロンの変性が起こると判明しています。アルツ
ハイマー病の他、ダウン症、パーキン

ソン病などの神経変性疾患においても、
Tau が発症に関与していると報告があり、神経病変の研究に有用なツールとなります。
起

源 : Human tau-441（N-terminal
histidine tagged）cDNA ex-pressed in E.coli
形 状 : 100mmol/L 塩化ナトリウム、
1mmol/L EDTA、5mmol/L
DTT、1mmol/L PMSF を含む

50mmol/L MOPS 溶液、pH6.8
濃 度 : 2mg/mL
分子量 : 65,000〔参考文献〕
1）Goedert, M. : Trends Neurosci., 16,
460（1993）.
2）Lu, Q. and Wood, J.G. : J.Neurosci.,
13, 508（1993）.

542-01011

50Fg

25,000 円

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

9合成ペプチドを使った培養細胞へのトランスフェクション法
長崎大学

1. はじめに＋＋物種の全ゲノム配列情報は、生命シス

＋

新留

琢郎

いことから、20 残基弱の短いペプチドで遺伝子キャリアーとなりうる理由は、＋

この疎水性アミノ酸の効果であると考

α‐ヘリックス構造

テムの全体像を明らかにするための出

応用化学科

ンではあまり遺伝子導入効率は高くな

46∆8 : Ac-LARL-LRAL-LRAL-LRAL-NH2
Hel∆1: LLKL-LLKL-WKKL-LKLL-K

急速な勢いで増加しつつある各生

工学部

えられる。

発点である。しかしながら、遺伝情報
はあくまで生命システムを構成する部品の構造であり、その情報のみで生命＋＋

3. プラスミド DNA との複合体＋ ＋形成とトランスフェクション

システムを十分に語ることは出来ない。
したがって、ゲノム解析からポスト・ゲ
ノム解析へ向かう重要なステップとして、遺伝子間相互作用やタンパク質間相互作用を、系統的に明らかにしてい実際のトランスフェクションの手法
＋

＋

＋

＋

について筆者のプロトコールを図 2 に紹介する。ペプチド中には不安定なア

図 1. ペプチドのアミノ酸配列と会合体形
成の様子

ミノ酸は存在していないので、水溶液くことが必要である。その手段として、として冷蔵保存すれば数年は安定に

未知遺伝子を細胞内へトランスフェク性アミノ酸と疎水性アミノ酸から構成

保存できる点で一般に市販されていションし、その遺伝子産物の機能を評される、16 あるいは 17 残基の両親媒る脂質系のトランスフェクション試薬

価する方法や対象遺伝子のアンチセ

性 A- ヘリックスペプチド、46Δ8、Hel

より、取り扱いが容易なのではないか

ンスオリゴヌクレオチドを用いた発現Δ1 で ある（図 1） 。自 動 合 成 機とと思う。そのペプチド溶液とプラスミド

制御が挙げられる。しかし、現在、市ちょっとしたペプチド合成に関する知販されている細胞内核酸導入試薬は識があれば、百ミリグラム程度（24 穴DNA 溶液を培地中（血清無し）に電荷
比 2.0 で混合し、細胞に添加するだけその処方が複雑で、高価なものも多い

シャーレでおよそ 1 万穴分）のペプチである。トランスフェクションの時間はため、数多くの未知遺伝子のスクリー

ドを十万円以下で合成できる。これら

3 時間で行っている。また、このときのニングには膨大な労力と費用がかかのペプチドは水溶液中で A- ヘリックス

細胞毒性を評価した結果、80% 以上ることが予想される。そこで、より簡便

構造を形成し、数分子からなる会合体の細胞生存率を認めた。しかし、これで安価、そして、高効率な細胞内へのの状態で存在していることが考えられ

らペプチド自身にリン脂質膜破壊能が3）

核酸キャリアー（運搬体）が必要となるている。したがって、この会合体が一あることから、電荷比を 4 以上に上げことは言うまでもない。また、この細胞種のポリカチオンのような状態になり、ると、細胞毒性が現れてしまうので注内へ核酸を導入する技術は、現在注

核酸（プラスミド DNA 等）と凝集体を意が必要である。

目されている遺伝子治療をより現実的形成する。この凝集体が細胞の中へ取なものとするための重要な鍵ともなっり込まれるわけである。

ている。

ペプチドとの電荷比（ペプチ合成が容易で、かつ、安定性の高い合ドのカチオン /DNA のリン成ペプチドを細胞内への遺伝子キャリ酸基）1.0 以上において認めアーとして利用可能であることを見いられ、電荷比 2.0 では数百だした

。ここではその利用方法と導から数千 nm 程度の凝集体

入機構、さらに、導入能促進の手法等を形成する。また、凝集体

1,2）について紹介したい。

形成にはペプチド中のカチオンだけでなく、疎水性ア

2. DNA との凝集体形成について筆者の推奨しているペプチドは塩基10フェクション効率をプラスミド DNA 上

プラスミド DNA との凝集体形成は

このような背景の中、筆者は比較的

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

ミノ酸も重要な働きをしてさて、そのトランジェントなトランスにコードされているルシフェラーゼの※24穴シャーレ1穴分
2.5[gプラスミドDNA/250[l血清無し培地
ペプチド水溶液（1.6mM（正電荷濃度）10[l ）すばやく混合して、15分程度静置細胞（前日に1×105個まいたもの）に添加「あらかじめ培地を十分吸い出しておく」
3時間インキュベーション
1mlの血清入り培地を添加
12時間インキュベーション
新しい血清入り培地に交換し、さらに24時間培養発現確認いることが明らかになっている。実際、20 残基のポリリジ

図 2. トランスフェクションプロトコール

Luciferase activity (RLU / mg protein)

サイトカラシン B（マクロピノサイトーが分解への運命をたどっていることが105

シスの阻害剤）の添加により発現効率考えられる。そこで、エンドソームからは低下し、2）クロロプロマジン（クラス

細胞質への移行をもっと積極的に行わ

リン依存的エンドサイトーシス阻害剤）せることを試みた。筆者はある酸性で影響されず、3）N- エチルマレイミ
で低下し、4）ノコダゾール（初期エンペ プ チ ド（Ac（Leu-Ala-Glu-Leu）
3NH3）の添加剤としての利用に着目した。このペプチドは分子内に 3 個の酸

ドソームから後期エンドソームへの輸性アミノ酸を含み、弱酸性条件下で、送を阻害）添加で効率が促進されたこ

A- ヘリックス構造を形成し、リン脂質と等から、ペプチド-DNA 凝集体はレ

膜破壊能を獲得する。そこで、前述のセプター非依存的なマクロピノサイ

塩基性ペプチド-DNA 凝集体に、このトーシス経路で細胞内に取り込まれ、

酸性ペプチドをさらに加え、塩基性ペ

その一部が初期エンドソームより細胞

プチド-DNA- 酸性ペプチドの 3 者の

106

107

108

109

46∆8
Hel∆1
COS-7

DNA only
lipofectin
105

106

107

108

109

46∆8
Hel∆1
HuH-7

DNA only
lipofectin
105

106

107

108

46∆8
Hel∆1
HeLa

DNA only
lipofectin

図 3. トランスフェクションの効率

ド（エンドソームへの輸送を阻害）添加

質へ移行していることが示唆された

凝集体を形成させた。シナリオとして、（図 4）。細胞質への移行に関しては、

この 3 者の凝集体が細胞内へ取り込ま

前に少し触れたがペプチド自身の持れ、エンドソームへ達すると、そこはつ膜破壊能が関与していることが指摘

弱酸性の環境となり、酸性ペプチドの発現を指標にして解析した結果を図 3されている。その根拠として、似たよ

膜破壊能がオンとなることを期待した。

に示す。各ペプチドの遺伝子導入効率

うな凝集体を形成するペプチドであれ

実際にトランスフェクション効率を解はリポフェクチン（GIBCO BRL）と比ば、細胞内へは取り込まれるが、その析した結果、予想通り、酸性ペプチド

較して同等かあるいは 10 倍程度下ペプチドの膜破壊能が低ければ十分の添加量に従って、発現効率が上昇回っていた。大量発現の必要がある以な遺伝子発現が認められないことがわすることがわかった（図 5）。また、その外においては十分使用に耐えうるもの

かっている。また、核への移行につい際の細胞毒性は認められていない。

と考えられる。

てはどのようにおこなわれているのか、

では、どのような経路でペプチドDNA 凝集体は細胞内へ取り込まれて現時点ではわかっていない。

4-2. レセプターを介した積極的な細胞内への取り込みいるのか。まず、クロロキン（エンド

次にペプチド-DNA 凝集体を細胞

4. 導入効率上昇への試み

ソーム内の酸性化を押さえ、DNA の表面のレセプターに認識させることによるトランスフェクション効率の向上を不安定化させる）をトランスフェクショ

4-1. 細胞質への積極的な移行
前項でペプチド-DNA 凝集体はマン時に共存させた結果、10 倍程度のクロピノサイトーシス様経路で細胞内修飾するわけだが、そのリガンドを選発現効率向上が認められた。また、1）

取り込まれていることから、多くの分子択することにより細胞特異的な遺伝子分解を抑制し、また、リソソーム膜を試みた。ペプチドを特定のリガンドでプラスミドDNA

+

+

+

+

+

+

+

+

Luciferase activity (RLU / mg protein)
105

+
++ +
+ + +
++ +

ペプチド会合体

ペプチド- DNA凝集体

ピノサイト
ーシス経路

膜破壊
初期エンドソーム

細胞質

核

図 4. ペプチド-DNA 凝集体形成と細胞内取り込み経路

106

107

108

109 1010

00.1
0.5※酸性ペ 1プチド 2
4
8
16
chloroquine
lipofectin
DNA only
塩基性ペプチド：KLLK-LLLK-LWKK-LLKL-LK
酸性ペプチド ：Ac-LAEL-LAEL-LAEL-NH2※DNAの負電荷に対する比図 5. 酸性ペプチドの添加効果

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

11

Gal

１世代

Ac- α-helical peptide Ac-46

Gal βAla-Lys

２世代

Gal βAla-Lys-βAla-Lys-Aea- α-helical peptide Gal4-46

６世代

Gal

HOOH

Gal = HO

NH

O

O
OH HO

NH

NH
NH

OH
OH
CH2OH

O

Aea = -NH-CH2CH2O-CH2CO-NH

α-helical peptide = -WARL-LARL-LARL-LRAL-LRAL-LRAL-NH2

O

図 6. ガラクトース修飾ペプチドの構造= Lys= -NH(CH2)6NH-

導入を可能にし、また、特定の細胞専

シン B 処理用の高効率トランスフェクション試薬

では影響をというものも出来るかもしれない。一受けなかったこと等より、このガラク方で、この技術は遺伝子治療へ応用しトース修飾ペプチド-DNA 凝集体はていくためのジーンターゲティングのターゲットとしたレセプターを介した手法にも関連し、重要課題である。

クラスリン依存的エンドサイトーシス

その 一 例とし て 筆 者 は 肝 細 胞をターゲットとして上記塩基性ペプチド

図 8. デンドリティックポリリジンの構造

経路で細胞内に取り込まれていることが示された。

をガラクトース修飾した（図 6）。肝細胞表面には糖鎖末端のガラクトースを認識し、エンドサイトーシスを誘起す

5. その他のトランスフェクショ
ン試薬開発

るアシ アログリコプロテ インレ セプ

Luciferase activity (RLU / mg protein)
105

106

107

６世代
DNA only
Lipofectin
105

108

COS-7
106

107

６世代
DNA only
Lipofectin
105
６世代
DNA only108

109 1010

CHO
106

107

108

Hela

Lipofectin

ターの存在が知られている。このレセ

ここまで、塩基性 A- ヘリックスペプ

プターは枝分かれ状の糖鎖を認識す

チドという直鎖状のペプチドを用いたることが報告されているので、一つのトランスフェクション法について紹介しペプチド鎖に対して 4 つのガラクトーてきたが、最近、興味深い遺伝子キャ

スフェクション能を持つデンドリマー

スで修飾したペプチドを合成した。ヒ

リー分子を見いだしたので紹介する。

分子を作成した。そして、数種の培養ト肝がん由来培養細胞（HuH-7）に対

それは、ヘキサメチレンジアミンをコ細胞に対して評価した結果、いずれのしてトランスフェクション効率を評価しアとして、塩基性アミノ酸であるリジン細胞でも十分なトランスフェクション

た結果、コントロールのペプチド（Ac-が放射状に伸びているデンドリティッ効率を示した（図 9）。さらに、トランス

46）と比較して、400 倍程度の向上が認められた（図 7）。さらに、トランス

クポリリジンという分子である（図 8）。

フェクション時において、血清 10% 存

このような対称性を持つ枝状分子をデ在させても発現効率の低下は少ない

図 9. デンドリティックポリリジンのトラ
ンスフェクション効率

フェクションの際にアシアロフェチュイ

ンドリマ ーと呼 ぶ が、直 鎖 状の ポリ

ことがわかった。血清を抜けない培養

ン（アシアログリコプロテインレセプ

マーと比較してその物性は大きく異な細胞への利用に適しているだろう。現ターのリガンド）添加で阻害を受けるこり機能性材料としての利用も興味深

在、筆者はこの分子にリガンド修飾等と、そして、クロロプロマジン処理するい 。実は、既に「ポリアミドアミンデンを施し、さらなる効率向上を試みていことで発現効率は低下し、サイトカラドリマー」が高性能遺伝子キャリアーとる。さらに、マウスを対象に in vivo でし て QIAGEN から市 販され て いるの有効性の評価を進めている。

4）

Luciferase activity (RLU / mg protein)が 、一定の熱分解処理しているため

105

単一組成の分子ではなく、将来行われ

106

107

108

109 1010

DNA only
Ac-46
Gal4-46

図 7. ヒト肝がん細胞由来培養細胞（HuH7）へのトランスフェクション効率

12

O

NH

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

5）

るであろうリガンド修飾等といった精

6. おわりに

密な分子設計に障害が生じるおそれ

遺伝子治療への応用を目指して、がある。そこで、筆者は主鎖と側鎖に数多くの細胞内への遺伝子導入法がアミノ基を二つ有するリジンに着目し、提案されている。現在、遺伝子治療の単一分子組成でかつ高効率なトラン

主流はウイルスを遺伝子キャリアーとして用いた方法で、純粋な化学的手が続いているが、しかし、その多くの法はその簡便性と安全性に優れてい研究の中から培養細胞への遺伝子導るにもかかわらず導入効率の悪さから入用の一般試薬として採用されたもの

応 用 例は 少ない。その 理 由として、は多い。今後、さらに詳細な導入機構

キャリアー分子と血清との非特異的なや凝集体の物性研究が進み、また、新相互作用や、導入遺伝子の体内動態

たなアイデアを取り入れることにより、制御の難しさ、また、細胞内での核ま

これまでにない高効率かつ簡便なトラでの移行およびその後の転写制御がンスフェクション試薬が現れるだろう。

ウイルスに比べれば解決されていな

そして、近い将来、遺伝子導入技術のい点が多いといったことが挙げられる

発展とともにゲノムの機能解明が進み、だろう。結局、遺伝子治療への応用とまた一方で、遺伝子治療が効果的ないう観点から言えば暗中模索の状況

治療法として確立されることを期待したい。

〔参考文献〕
1）T. Niidome et al., J. Biol. Chem., 272,
15307-15312（1997）
2）N. Ohmori et al., Biochem. Biophys.
Res. Commun., 245, 259-265（1998）
3）T. Niidome et al., Bioconjugate
Chem., 10, 773-780（1999）
4）丸尾直樹、西野憲和、高分子論文集 ,54, 731-737（1997）5）M. X. Tang et al., Bioconjugate
Chem., 7, 703-714（1996）

ペプチドを用いた安価な新規遺伝子導入試薬
Transome™ Ⅳ, Peptide Type
遺伝子研究用11 残基の疎水性アミノ酸と 6 残基の塩基性アミノ酸からなる新規のペプチ
ド性遺伝子導入試薬です。このペプチ
ドが A- ヘリックス構造をとり、これが会合体を形成し一種のポリカチオン状態になり、DNA との複合体を形成、エン〔ペプチド構造〕
LLKLLLKLWKKLLKLLK・6TFA （MW=2788.86）〔参考文献〕
1）Ohmori, N., Niidome, T., Kiyota, T., Lee, S., Sugihara, G., Wada, A., Hirayama, T. andAoyagi, H. : Biochem. Biophys. Res. Commun., 245, 259（1998）.
2）Niidome, T., Takaji, K., Urakawa, M., Ohmori, N., Wada, A., Hirayama, T. and Aoyagi,
H. : Bioconjug. Chem., 10, 773（1999）.

ドサイトーシスにより細胞内に取込ま

209-15101 1mL（100 回用 : 24 穴シャーレ）

れます。
〔特

長〕

● 安価

〔関連商品〕● 非常に安定● 細胞毒性が低い

コード No.
074-03621
070-04441
202-14091
546-01271
543-01281

品
名
Genetransfer ®
Genetransfer ® Iyo
Transome™
Transome™ Type ⅡTransome™ Type Ⅲ

容

量

1mL
5 × 0.2mL
1mL
1mL
1mL

近日発売

希望納入価格（円）21,00029,00030,000
近日発売
近日発売

マウス胎児より抽出した RNA から調製した cDNA
Embryotic, Mouse, cDNA
遺伝子研究用
本品は、各受胎後のマウス胎児のTotal RNA から Oligo（dT）primer を用いて合成した 1st strand cDNA です。
来 : 受胎した CD1 outbred miceの胎児より調製
調製方法 : Guanidium isothiocyanate / acid phenol 法 で 抽出した Total RNA 10Fg を、
Oligo （dT18）primer を用
い、42℃ で AMV 由来の
逆 転 写 酵 素 に よ り 1st
strand cDNA を 合 成 し、RNase H で処理。反応に用いた酵素は熱処理によ
り不活化。
由

濃
純

度 : 0.5 〜 2ng/FL
度 ： マウス GAPDH に特異的な primer を用いた PCRで、963bp 断片の増幅により確認

コード No.
544-01191
546-01151
543-01161
540-01171
547-01181
544-01211
542-01251
545-01241
547-01201
548-01231
541-01221
549-01261

形

状 ： 25mmol/L Tris-HCl（pH8.3）, 50mmol/L KCl, 2

mmol/L DTT, 5mmol/L
MgCl2

品
名
容 量
希望納入価格（円）1vial（40 FL） 60,000
Embryotic, Whole Mouse, cDNA（9.5 day）
Embryotic, Whole Mouse, cDNA（10.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Whole Mouse, cDNA（12.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Whole Mouse, cDNA（14.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Whole Mouse, cDNA（16.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Mouse Brain, cDNA（11.5 day） 1vial（40 FL）
60,0001vial（40 FL） 60,000
Embryotic, Mouse Lung, cDNA（12.5 day）
1vial（40 FL） 60,000
Embryotic, Mouse Liver, cDNA（13.5 day）
Embryotic, Mouse Blood, cDNA（17.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Mouse Kidney, cDNA（13.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Mouse Heart, cDNA（12.5 day） 1vial（40 FL）
60,000
Embryotic, Mouse Muscle, cDNA（13.5 day） 1vial（40 FL）
60,000

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

13

パラフィン包埋切片から、わずか 15 〜 20 分で DNA 抽出が可能 !
DNA Isolator PS-Rapid reagent
遺伝子研究用DNA アイソレーター PS- ラピット試液は、プロテアーゼ処理やアルコール沈殿等を行うことなく、特殊な界面活性剤を使用することにより組織切片の煮沸と遠心分離だけの簡略化した方法で、短時間で PCR に適用できる DNA の分離が可能です。
〔特

〔内

長〕

● 15 〜 20 分で DNA 抽出が可能

容〕

10mL × 5 本

DNA Isolation Solution

脱パラフィン処理やタンパク質分解処理が不要です。
●遠心ろ過で DNA を回収することができるので、操作が簡単

PCR 阻害剤の混入を極力抑え数百 bp の DNA 増幅反応に有効です。
〔使用例〕
肝臓
本品

すい臓
Ａ社

M 1 2 3 1

2 3

心臓

本品

Ａ社

本品

1 2 3

1 2 3

M 1 2 3 1

大腸
Ａ社
2 3

胃

本品

Ａ社

1 2 3

1 2 3

腎臓

本品

Ａ社

M 1 2 31

本品

Ａ社

2 3 1 2 3

1 2 3

各組織のパラフィン包埋切片より分離した DNA を鋳型としたβ- グロビン遺伝子の増幅

Lane1 : β- グロビン（205bp ）, Lane2 : β- グロビン（325bp ）, Lane3 : β- グロビン（408bp ）コード No.
291-56401

品

名

規

格

容

遺伝子研究用DNA Isolator PS-Rapid reagent

量

希望納入価格（円）100 回用

14,000〔関連商品〕
コード No.
369-26101

品

名0.2[m 遠心ろ過チューブ（セントリザルト C4）

容

量

25 個

希望納入価格（円）5,500

新規エキソヌクレアーゼ
Exonuclease Ⅸ, recombinant
遺伝子研究用本酵素は、1 本鎖 DNA において、
3' -5' エキソヌクレアーゼ活性を持つと同 時に 3' -incised apurinic / apyrimidinic（AP）site を含む DNA 上で
3' -Phosphodiesterase 活 性を 持 ちます。また、5' -incised AP site 上では、Deoxyribophosphodiesterase 活性を示さない性質を持ちます。

起

14

源 : Escherichia coli より単離したエキソヌクレアーゼⅨ
遺伝子をプラスミドに組み

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

込 み Escherichia coli JM
109 中で発現。
比 活 性 : 2,000units/mg 以上
活 性 の 定 義 ：熱 変 性 DNA から下 記 反応条件にて 37℃、30 分間に、1nmol の酸可溶性核
酸を遊離させる酵素量を1unit とする。
形
状 : 50mmol/L Tris-HCl,

1mmol/L DTT, 1mmol/L
Na2EDTA, 250mmol/L
NaCl, 50% グリセロール ,（pH 7.6）〔貯 法〕 −20℃ 保存〔参考文献〕
1）Shafritz, K. M., Sandigursky, M. andFranklin, W. A. : Nucleic Acids Res.,26, 2593（1998）.

546-00931

5,000 units

23,000 円

GFP、BFP
BFP 融合タンパク質発現が増した
フレキシブルリンカーより
フレキシブルリンカーより GFP
融合タンパク質発現が増した
レポーターアッセイ用蛍光タンパク質発現ベクター
レポーターアッセイ用蛍光タンパク質発現ベクター
GFP pQBI 25-fA
BFP pQBI 50-fC
オワンクラゲ（Aequorea victoria）由来の野生型蛍光タンパク質 GFP の遺伝子配列を改変して作ったもので、細胞内におけるタンパク質の発現や局在を経時的、かつ可視的に検出できるレポーターとして有用です。
本品は、フレキシブルリンカー※を含み GFP・BFP 融合タンパク質を発現しやすくしたベクターです。
※：Gly × 5 の配列から成るリンカーで、短いペプチドをコードする配列のクローニングを可能にします。リンカーの存在により GFP 融合タンパク質が発現しやすくなります。

調
純
波

製 : それぞれの pQBI 25-fA, 50-fC を保持した E. coli
より、CsCl-EtBr 密度勾配遠心法により分離、精製。
度 : OD260 /OD280 = 1.7 〜 1.9
長 : GFP Ex. 474 nm Em. 509 nm

BFP Ex. 386 nm Em. 450 nm（フィルター : Excitation filter 460/40nm Emission filter 360/40 nm ）形
貯状 : 10mmol/L Tris-HCl, 1.0 mmol/L EDTA
（pH 8.0）
法 : −20℃（フィルター : Excitation filter 530/30nm Emission filter 485/20 nm）

GFP pQBI 25-fA1, -fA2, -fA3

Bgl Ⅱ (12)クローニングされたタンパク質遺伝子を C 末端で GFP 融

CM
V

R

p
Am

pr
o

合タンパク質として生成させるためにデザインされています。

P
GF

pQBI 25ori' Kozak-oprimized' ATG 開始コドン、下流にマルチクロー
ニングサイト、GFP シークエンスの順で配置しています。マ
ルチクローニングサイト中にフレキシブルリンカーを含みま

XhoⅠ

ScaⅠ
PvuⅠ

-fA1, 2, 36252 bp

ClaⅠ
stop,stop,stop

MluⅠ
BGH poly A

962
Sac Ⅱ
Start
ApaⅠ
BstE Ⅱ
AgeⅠ
KpnⅠ
BamHⅠ
EcoR Ⅴ
BstXⅠ
NotⅠ
EspⅠ
Hind Ⅲ
NruⅠ
EcoRⅠ
NheⅠ
1064

BsmⅠ(4005)
SV 40 poly A

す。

Dra Ⅲ (2351)

neo

BstBⅠ*SV 40 pro

BsaBⅠ(2944)（pQBI 25-fA1,-fA2,-fA3 のクローニングサイト）

Bgl Ⅱ (12)
ScaⅠ
PvuⅠ

BFP pQBI 50-fC1, -fC2, -fC3

XhoⅠ

CM
V

R

p
Am

Sac Ⅱ

pr
o

NheⅠ

クローニングされたタンパク質遺伝子を N 末端で BFP 融
ori

BFP

合タンパク質として生成させるためにデザインされています。

pQBI 50-fC1, 2, 36254 bp

フレキシブルリンカーを含みます。

BGH poly A

BsmⅠ(4007)
SV 40 poly A
BstBⅠ*（pQBI 50-fC1,-fC2,-fC3 のクローニングサイト）

n eo

Dra Ⅲ (2353)
SV 40 pro

1696
ClaⅠ
ApaⅠ
BstE Ⅱ
AgeⅠ
KpnⅠ
BamHⅠ
EcoR Ⅴ
BstXⅠ
NotⅠ
EspⅠ
Hind Ⅲ
NruⅠ
EcoRⅠ
stop
VluⅠ
1797

BsabⅠ(2946)〔次頁に続く〕和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）15

コード No.

品
名Green Fluorescent Protein Vector pQBI 25-fA1【GFP pQBI 25-fA1】
Green Fluorescent Protein Vector pQBI 25-fA2【GFP pQBI 25-fA2】
Green Fluorescent Protein Vector pQBI 25-fA3【GFP pQBI 25-fA3】
Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 50-fC1【BFP pQBI 50-fC1】
Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 50-fC2【BFP pQBI 50-fC2】
Blue Fluorescent Protein Vector pQBI 50-fC3【BFP pQBI 50-fC3】

549-01021
546-01031
543-01041
540-01051
547-01061
544-01071

規

格

容

量

希望納入価格（円）遺伝子研究用20Fg

33,000

遺伝子研究用20Fg

33,000

遺伝子研究用20Fg

33,000

遺伝子研究用20Fg

33,000

遺伝子研究用20Fg

33,000

遺伝子研究用20Fg

33,000〔関連商品〕

R

Aat Ⅱ
EcoRⅠ
ClaⅠ
Hind Ⅲ
BamHⅠ

oripQBI 63

BclⅠ

5158 bp

Amp6361 bp

BGH
poly A

P
BF

P
GF

PvuⅠ

o
ne

pQBI pol Ⅱ

SV 40 poly A
o ri

SV 40 poly
o ri

AvaⅠ

SV 40 pro

BstBⅠ*BsaBⅠ

抗Dra Ⅲ (2332)

neo

EcolCrⅠ
SacⅠ
ScaⅠ
BclⅠ

R

PvuⅠ

BsmⅠ
SV 40 poly A

SV 40 pro

BGH
poly A

Eco RⅠ
Eco R Ⅴ
Bsa BⅠ
NotⅠ
XbaⅠ
Sp6 pro

PvuⅠ
ScaⅠ

Aat Ⅱ
EcoRⅠ
ClaⅠ
Hind Ⅲ
BamHⅠ

R

BsrGⅠ
NheⅠ
XbaⅠ
T7 proBgl Ⅱ
SphⅠ

pQBI 67
6361 bp

BsrGⅠ
NheⅠ
XbaⅠ
T7 pro
Bgl Ⅱ
SphⅠ

R

Dra Ⅲ (2332)

neo

BstBⅠ*

5387 bp

Amp

BFP pQBI 67

p

BsmⅠ

SV 40 poly A

BGH poly A

GFP

Ⅱ
o

Sp6 propQBI pgk
Am

BGH poly A

BamHⅠ
EcoRⅠ Hind Ⅲ
EcoR Ⅴ ClaⅠ
NotⅠ
AatⅡ
XbaⅠ
ApaⅠ

PvuⅠ
ScaⅠ

NheⅠ

Bsa BⅠBst XⅠ
NotⅠ
Ppu 10Ⅰ
NsiⅠ
Hind Ⅲ
XbaⅠ
Bsp 120Ⅰ NruⅠ
Bgl Ⅱ
ApaⅠ
Aat Ⅱ

GFP

Amp

6238 bp

NheⅠ

Ad L
TP

o
ne

pQBI 50

BamHⅠ
Sac Ⅱ
NheⅠ (982)

GFP pQBI 63

or
i

CM
Vp
ro

BFP

6238 bp

Bgl Ⅱ (12)

R

p
Am

BamHⅠ
EcoRⅠ
EcoR Ⅴ
NotⅠ
XbaⅠ
ApaⅠ

P
GF

pQBI 25

ScaⅠ
PvuⅠ
Sac Ⅱ
NheⅠ (982)

ori

CM
Vp
ro

R

p
Am

GFP pQBI-pol Ⅱ

GFP pQBI-pgk

Po
pr l

Bgl Ⅱ (12)

ScaⅠ
PvuⅠ

ori

BFP pQBI 50

PG
pro K

GFP pQBI 25

BsaBⅠ

NruⅠ

546-00811

546-00791

容量：各 20Fg

希望納入価格：各 33,000 円

540-00831

547-00841

MluⅠ
BclⅠ
ApaⅠ
BsaHⅠ

MluⅠ
BclⅠ
ApaⅠ
BsaHⅠ

AvaⅠ
NruⅠ

543-00821

549-00801

体
コード No.
542-00771
549-00781

品
名Anti-Auto Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody（Clone：3E6）
Anti-Auto Fluorescent Protein, Monoclonal Antibody（Clone：11E5）

規

格

容

量

希望納入価格（円）

免疫化学用

150Fg

28,500

免疫化学用

150Fg

28,500

規
格
生化学用
生化学用

容

組換えタンパク質
コード No.
545-00901
542-00891

品
名Green Fluorescent Protein, recombinant, Soln.
Blue Fluorescent Protein, recombinant, Soln.

量

25Fg
25Fg

希望納入価格（円）14,00014,000※関連商品の詳細につきましては、別途お問合せ下さい。

ビラヌエバ骨染色液
病理研究用
非脱灰硬組織の染色にビラヌエバ
骨染色が使用されますが、この染色法は石灰部と類骨の染め分けが可能な上、蛍光観察によりテトラサイクリン等の標識を含めた骨組織の観察に適しています。あらかじめメタノールで調製済みですので、そのままお使い頂けます。
明視野（× 400）
〔染色方法〕〔染色結果〕① 70% エタノール固定済みまたは未固定の標本をビラヌエバ骨染色液
類骨に入れる。室温下 3 〜 10 日間置く。
石灰化骨
時々、真空引きをすると色素の浸透細胞質が良くなりムラのない染色ができる。
核② 染色操作後は、脱水→樹脂包埋→
テトラサイクリン
薄切切片作製 を行う。
カルセイン
コード No.
222-01445

16

品
名Villanueva Bone Stain Solution

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

蛍光（テトラサイクリン）（× 400）
明視野赤紫色
無色〜薄茶色薄紫色〜桃色
青紫色
−
−
容

蛍 光
赤色
黄緑色〜緑色
無色〜橙色
赤色
黄色
黄緑色
量

500mL

希望納入価格 ( 円 )9,500

骨や歯の樹脂包埋がより手軽に !
前号 Vol.68 No.2 で非脱灰硬組織の樹脂包埋用キット「オステオレジン TM 包埋キット」
をご紹介しました。
今回はキットご使用に際し、技術的な内容を Q&A の形式にまとめました。

〜オステオレジン TM 包埋キット Q & A 〜
Q： 包埋容器は何を使用すれば良いですか？
A： 蓋付きのガラス瓶やポリ容器が手軽にご使用頂

A： エタノールでは約 40 分、キシレンでは約 30 分をけます。重要なことは MMA 樹脂包埋は密栓下で気泡が出始めることがありますが、最終的に気泡行うことが必要なので必ずしっかりと蓋が締るが出ないことを確認することが重要です。

容器をお使い下さい。なお、基本的に包埋完了後樹脂の浸透時は約 10 〜 60 分を目安にします。こは容器を壊してブロックを取出すことになるののとき減圧ポンプを保護する（気化した MMA がで容器の再利用は困難です。市販品で高価ではあ

ポンプ中に入ると固まってしまう）ために減圧しりますが、繰り返し使用が可能な専用容器「密栓た後すぐにコックを閉めてポンプを止め、ホース式テフロンモールドトレイ（ライカマイクロシスを抜き取っておきます（減圧状態は保たれます）。

テムズ（株）製）」もあります。当社までお問合せ下

時々衝撃を与えて脱気を促します。終了時、大気さい。

圧へは静かに徐々に戻します。減圧の強さは標本

Q： 包埋ブロックに気泡が残ってしまいます。どうす

目安にして下さい。引き始めてから約 30 分後にから気泡がでる程度を目安にして下さい。

Q： 染色工程や脱樹脂の最中に切片が剥がれてしま

ればきれいに包埋できますか？

A： 標本のまわりに粒状に気泡がついている場合はうがどうしたらよいでしょうか？

脱水操作不良が原因です。エタノールによる脱水

A： 一般のスライドグラスでもお使いになれますが、時間を長くするか、液の交換をこまめにして脱気切片が剥がれるようでしたら、シランコート処理を繰り返し行って下さい。

されたスライドグラスをお使い下さい。大切なこ専用のテフロンモールドトレイをご使用時にトとは圧力と熱により皺延ばしとスライドグラス

レイの上部にできる気泡は密栓不良が原因です

への固定をしっかり行うことです。

が、薄切には特に影響ありません。また、重合温
度が約 60℃ 以上になると包埋ブロックに気泡が残りやすいので、包埋容器を冷やしながら重合さ

Q： in situ ハイブリダイゼーションも可能ですか？
A： 現在のところ実施データはありません。しかしながら、従来より MMA 樹脂包埋においては可能とせ温度が上がりすぎないようにご注意下さい。

の知見があります。基本的にパラフィン包埋によ

Q： 重合熱により何度くらいまで温度が上昇します

る染色方法は可能です。また TRAP 染色や免疫染か？

色も可能です。

A： 包埋容器にガラス容器を使用し、これを水の張った容器（例：シャーレ）に浸した状態で重合させると、約 40 〜 45℃ に温度が上昇します。組織が大きいと樹脂量も多くなりますので重合熱も上昇

Q： ミクロトームはどういったものを使えば良いでしょうか？

A： 樹脂ブロックの薄切には樹脂専用のミクロトー
ムをお使い下さい。パラフィンブロック用のミクします。なお、長期間を要してもかまわない場合

ロトームは使用できません。パラフィンブロック

は冷蔵庫で約 2 ヶ月かけてゆっくり重合させる方

用ミクロトームの刃を樹脂用のタングステン

法もあります。

カーバイト製に付け替えても切片が均一に切れ

Q： 真空引きはどのくらいの時間で引くのが良いですか？

またどのくらいの強さが必要でしょう

ず、最悪の場合は機械そのものに支障がでる恐れがあります。

か？
コード No.
297-56001

品
TM

名

OsteoResin Embedding Kit

規格

病理組織包埋用

容

量

1kit

希望納入価格（円）20,000

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

17名古屋大学

医学部

免疫学教室

中島

泉

第 11 話（最終回） アポトーシスと免疫プログラム化された細胞の死、アポ表 1. T リンパ球とアポトーシスのかかわり

トーシスは、免疫系の発生過程における構築、抗原刺激に対する免疫応答の調節、免疫系のエフェクター活性の発

事

項

正の選別
（ポジティブセレクション）

現の 3 つのステージで重要な働きを負の選別する。各ステージにおけるアポトーシ（ネガティブセレクション）

スの機序にはそれぞれ特徴があり、不明な点も多い。一方、リンパ球はアポトーシスに向かわないために生のシグ関与する T リンパ球亜群
CD4 ＋ CD8 ＋初期
自己 MHC と弱く結合する
TCR を発現CD4 ＋ CD8 ＋末期
自己 MHC ＋自己抗原と強く結合する TCR を発現伝達されるシグナルの種類
生のシグナルTCR →？

死のシグナル

TCR、補助膜刺激分子→
ミトコンドリア→カスパーゼ 9 →カスパーゼ３

ナイーブ細胞の生存

末梢の成熟 T リンパ球

生のシグナルIL-3, CD28 → Pl3-K →Akt → Bad/NF-kB

活性化誘導細胞死

活性化 Th リンパ球

死のシグナルTCR → Fas 発現
カスパーゼ 8 →カスパーゼ３

標的細胞破壊CTL, NK 細胞（エフェクター細胞）

死のシグナル

パーホリン / グランザイム
Fas →カスパーゼ８

ナルを受けつづける必要がある。免疫系は、生と死のシグナルの絶妙なバラ

シグナル伝達の概要

ンスのもとで、動的に均衡を保っており、これが破綻すると自己免疫病や免は明らかでないが、TCR から伝達され特定の分化段階の B リンパ球でもおこ

疫系の腫瘍が発生する。以下、T リン

る生のシグナルが欠除することによっる。

パ球の場合を例として、免疫系とアポてアポトーシスが誘導されると考えら

トーシスのかかわりの要点を記す（表れている。関連してこの分化段階の胸活性化 Th リンパ球のフィードバッ

腺細胞は、X 線やコルチコステロイド

ク制御とアポトーシス

1）。

に特に高い感受性を示し、アポトーシ

T リンパ球のレパトア形成とアポ正の選別を受けて生き残った胸腺リ

トーシス

た成熟 Th リンパ球は、抗原刺激を受けて活性化した後、多くがアポトーシ

ヒトを含む哺乳動物の場合、2 つのン パ球のうち、自己抗原ペプチドとスにより死滅していく。これは、活性化

リンパ球ポピュレーション、T リンパ球に伴って細胞表面に Fas などの「死」のと B リンパ球のレパトアは、それぞれ

MHC 分 子の複 合 物と強く結 合 する
TCR を発現するポピュレーションが、胸腺と骨髄で形成される。胎生 14 〜

次に負に選別される。この負の選別は、受容体が発現するようになり、これに15 週に完成する胸腺は、胎児肝や骨胸腺髄質に移動した末期の分化段階

Fas リガンド（FasL）などを発現する調節性 T リンパ球（Tc リンパ球 /CTL な

髄で一定の分化段階を終えた細胞をの CD4 ＋ CD8 ＋細胞におこる 2）が、正ど）が作用するというフィードバック制

前胸腺細胞として受け入れる。前胸腺の選別で生き残った細胞の 80% 以上

御によっておこるものと考えられてい細胞は胸腺被膜下で増殖分化を繰りが負の選別によって細胞死するといわる。Fas または FasL の機能が遺伝的返して多数の胸腺リンパ球をつくる。

れる。この負の選別には、Fas などのに欠損する MRL/lpr マウスや MRL/

胸腺リンパ球は、CD4 − CD8 −のダブ「死」の受容体は必須の因子としてはルネガテイブ細胞、CD4 CD8 のダ

関与せず、ミトコンドリアとミトコンドリ

gld マウスでは、この機序が欠除する
ため、異常な表現型を示す T リンパ球

ブルポジテイブ細胞、ついで CD4＋アの働きを調節する Bcl-2 ファミリーが排除されることなく増加し、抗核抗＋（Th）または CD8 （Tc）のシングルポの分子群、すなわち、「生」を促進する体の産生を伴う自己免疫病が発症す

ジテイブ細胞へと分化する。初期分化

る。IL-2RB 鎖欠損マウスや IL-2 欠損

ター（TCR）
を発現するポピュレーショ

Bcl-2 サブファミリーの分子と「死」を促進する Bax/BH3 サブファミリーの分 子 が 重 要 な 働きを する。TCR や
CD28 などの補助膜刺激分子から細ンが、胸腺皮質において正の選別を受胞内に入るシグナルの質と量 3）に規定

パ球にアポトーシスを誘導する調節性

けて生き残る 。胸腺リンパ球の 95%

されてこれらの働きが調節され、生死T リンパ球のはたらきが欠失すること

以上が、この正の選別を受けることなが決定されるものと推定される。なお、によることが証明されている 4）。

く細胞死に至る。この細胞死のしくみ

負の選別は、同様のしくみによって、＋＋段階の CD4 ＋ CD8 ＋細胞のうち、自己の MHC と弱く結合する T 細胞レセプ

1）18

スによる細胞死を起こしやすい。

胸腺から末梢リンパ組織に放出され和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

マウスでも、活性化 Th リンパ球の異常な増加を伴って自己免疫病が発症するが、この場合には、活性化 Th リン

Tc リンパ球（CTL）、NK 細胞のエ

TNF
FasL

IL-3
CD80/CD86

抗原
MHC

「死」
の受容体
TNFR
Fas

「生」
の受容体
IL-3R
CD28

抗原受容体

フェクター活性とアポトーシス
免 疫 の エ フェクタ ー 活 性 を 担う

CTL や NK 細胞は、ウイルス感染細胞やがん細胞に、2 つの機序でアポトーシスを誘導する。一つは、補体第

細胞膜

PI3-K

ROS

Ras

Akt

JNK

ERK

9 成分類似のパーホリンによって膜に小 穴があけられ、ここから細 胞 内に「死」促進
Bax/BH3

入ったグランザイムによるもの、もう

「生」促進
Bcl-2

カスパーゼ 8一つは、エフェクター細胞上の FasL
が標的細胞上の Fas に作用することにカスパーゼ 9

ミトコンドリアよるものである。また、マクロファージ
カスパーゼ 3や CTL がつくる TNF も、がん細胞など 標 的 細 胞 上 の TNF レ セ プ タ ー

核

DNA断片化細胞死（TNFR）に作用してアポトーシスを誘
NF-kB

導する。

AP-1

「生」
と「死」
の受容体と
シグナル伝達分子の発現制御

生死決定の細胞内シグナル伝達の経路

図 1. リンパ球の生死を決定するシグナル伝達経路の概要：活性化等の促進：活性化等の抑制

免疫系の細胞の生死を決定する細胞内シグナル伝達の経路は、他の細胞系におけるそれと基本的に同じであ

終的に、カスパーゼ 3 などのアポトー

る（図 1）。抗原受容体や補助膜刺激分

シスの実行分子や DNase の活性が促子を介して細胞内に伝達されるシグ

進または抑制されて、細胞の生死がナルは、Ras/MAPK（ERK）/AP-1 経決定される。

路や PI3-K/Akt/NF-kB 経路を介して、または受容体の活性化等に伴って産生される活性酸素種（ROS）を介して、ミトコンドリアとカスパーゼ 9 の経路を活性化し、あるいは抑制する 5）。また、「死」の受容体とそのリガンドの発現を促進して、両方の結合により起動する
カスパーゼ 8 の経路を活性化する。最

コード No.
010-16851
013-16101
017-16481
015-18121
010-17331
018-17131
039-17401
036-17411
019-16181
015-17261
012-17271
019-18521〔参考文献〕
1）Anderson, G., Hare, K.J. and Jenkinson, E.J.: Positive selection ofthymocytes: the long and winding
road. Immunol. Today 20:463-468,
2000.
2）Sprent, J. and Kishimoto, H.: T cell
tolerance and the thymus. Annals NY.
Acad, Sci. 841:236-245, 1998.
3）Akhand, A.A., Pu, M., Du, J., Kato,

品
名Anti Human Bcl-xL, Monoclonal Antibody（HBx-2F3）
Anti Human Bcl-2, Monoclonal Antibody（Bcl-2/100）
Anti Rat Bcl-2, Monoclonal Antibody（B248）
Anti Human Activated Caspase-3,
Monoclonal Antibody
Anti Human Activated Caspase-3, Rabbit
Anti Human Activated Caspase-4, Rabbit
Caspase-3, Human, recombinantCaspase-8, Human, recombinantAnti Human Fas, Rabbit
Anti Mouse Fas, Rabbit
Anti Rat Fas Ligand, Rabbit
Anti Human DNase γ, Monoclonal Antibody

用途M., Suzuki, H., Hamaguchi, M. andNakashima, I.: Magnitude of protein
tyrosine phosphorydlation-linked signals determines growth versus deathof thymic T lymphocytes. Eur. J.
Immunol. 27:1254-1259, 1997.
4）Suzuki, H., Zhou, Y. W., Kato, M. andNakashima, I.: Normal regulatory AB
T cells effectively eliminate abnormally activated T cells lacking the IL2 receptor B in vivo. J. Exp. Med.
190:1561-1571, 1999.
5）中島 泉 : 新たなアポトーシス誘導因子（AIF）の発見 特集 II「アポトーシ
スの新たな動向」臨床免疫 32 （4） :417-425, 1999

量

希望納入価格（円）

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35,000

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規格容

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

19

6
脳科学一口メモ◯プロスタノイドの中枢神経系での作用（2）旭川医科大学前稿では、プロスタノイドの中枢作用として、発熱と痛覚の可塑性について紹介した。本稿では、プロスタノイドの睡眠・覚醒作用と神経内分泌系に対する作用を中心に、プロスタノイドの中枢作用を紹介したい。
二十世紀に入って、多くの液性因子が睡眠調節物質として取り上げられてきた。これらの物質の中で、早石修先生を中心とするグループが、プロスタ
グランジン（PG）の睡眠調節因子としての役割と、その分子機構を明らかにしつつある。睡眠には、いくつかの側面が存在する。睡眠には、日内リズムがあり、一日のなかでの睡眠の時間帯が決まっている。また、一回の睡眠においても、ノンレム睡眠とレム睡眠が周期的に繰り返される。これらの、周期性は中枢神経系自身が作り出していると考えられている。一方、液性の睡眠物質は、これらの周期性が乱れた場合の調節や、種々の病態下における睡眠の変化に関与することが考えられる。
従来、PGD2 が睡眠を惹起し、PGE2 が覚醒作用を示すことが知られている 1）。
PGD2 を脳室内に投与すると、睡眠が惹起される。この睡眠は、脳波、体温や心拍数などのパラメータで比較すると生理的睡眠と差がないことが知られている 2）。また、この外因性の PGD2 の作用部位が詳細に解析され、前脳基底部吻側の腹側部表面に存在することが明らかにされた 3）。一方、PGD2 は脳内で産生される主要な PG であり、その合成酵素は脳軟膜や脈絡膜に存在している。また、この合成酵素は脳脊 髄 液 中に多 量に分 泌され て おり、
PGD2 の合成以外にその標的細胞へのキャリアーとして働くことが示唆されている。実際、PGD2 受容体は脳軟膜に発現しており、特に脳底部での発現が強い 4）。一方、視束前野腹外側部に存在する抑制性ニューロンは、脳の覚
醒維持に重要な結節乳頭核に存在するヒスタミン性ニューロンを抑制する

20

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

ことが知られている。PGD2 投与により、
c-fos を指標とした神経活動が視束前
野腹外側部で上昇し、結節乳頭核で低下することから 5）、PGD2 はこの視床下部に存在する睡眠・覚醒調節に関与する神経に影響を与え、睡眠を惹起すると考えられる。そこで、残された問題として、PGD2 がその作用部位である前脳基底部吻側の腹側部表面に存在する受容体に作用した後に起こる情報 伝 達 が 擧 げられる。この 部 位 で、PGD2 で刺激された軟膜細胞が何らかの液性因子を産生し、それが視束前
野腹外側部に存在する抑制性ニューロンを刺激する可能性が考えられる。
この点に関連して、PGD2 の睡眠作用にはアデノシン受容体 A2a の関与が示
唆されている 6）。最近、PGD2 合成酵素
欠損マウス 7）や PGD2 受容体欠損マウス 8）が作出されており、これらの動物を用いた解析により、PGD2 の睡眠作用のメカニズムが解明されることが期待される。図 1 に、PGD2 の睡眠作用の経路を模式的に示す。
一方、PGD2 とは逆に、PGE2 には睡眠抑制・覚醒作用が知られている 9）。
前稿で紹介したように、PGE2 は発熱の最終メディエーターとして作用するが、その作用部位は第 3 脳室前部のOVLT である。しかし、外因性 PGE2の覚醒作用は、視床下部後部の結節乳頭核で強いことが知られている 10）。
さらに、視床下部の PGE2 含量は、睡眠 時に 低く、覚 醒 時に 高 い。ま た、PGE2 の覚醒作用には、グルタミン酸
受容体である AMPA の関与が示唆されている。しかし、PGE2 の産生細胞やその調節機構の詳細は不明である。
また、4 種類存在する PGE2 受容体サブタイプのどれが、この覚醒作用に関与するのかも不明であり、今後の解析が必要である。
種々のストレスによって、視床下部
下垂体 副腎系が活性化され、副腎からそのストレスに対抗するための

薬理学講座

牛首

文隆

液性・神経性刺激
脳軟膜PGD2合成酵素活性化
PGD2産生亢進
脳軟膜PGD2受容体刺激
第２のメディエーターの産生（アデノシン−アデノシンA2a受容体系が関与？）
視束前野腹外側部抑制性ニューロン刺激
結節乳頭核ヒスタミン性ニューロン刺激
睡眠誘導
図 1. プロスタグランジン D2 の睡眠作用の経路ホルモンである鉱質コルチコイドや糖質コルチコイドが分泌される。この過程で、PGE2 を中心とした PG がその制御に関与することが知られている。
特に、視床下部での CRH 分泌の制御に PGE2 が働くと考えられている。例えば、PGE2 を脳室内に投与すると、視床 の 傍 室 核 に 存 在 す る CRH 含 有
ニューロンでの c-fos や CRH の発現が観察される 11）。また、PGE2 受容体
サブタイプである EP1 受容体が、傍室
核 に 発 現 し て い る こ と が in situ
hybridization 法によって確認されている 12）。一方、脳内での PGE2 産生にはストレスによって産生されるサイト
カインが、血液 脳関門が脆弱となっている脳室周辺器官に働いて産生される。なかでも、視床下部視束前野が注目されている。この部位に PGE2 を投与すると、傍室核に c-fos が発現誘導され 13）、ACTH の分泌が亢進する。
ま た、この ACTH の 分 泌 亢 進 は 抗
CRH 抗体によって抑制される 14）。これ
らの結果は、PGE2 の視床下部 下垂体 副腎系に対する作用部位として、視床傍室核や視床下部視束前野など
複数存在する可能性を示唆している。
現在、PGE2 が視床下部 下垂体 副腎系の制御にどの程度重要な役割を果たすかについて、PGE2 受容体欠損
マウスを用いた解析が進められている。
プロスタノイドの中枢神経系における作用には、まだ不明な点が多く残されている。最近、種々の刺激にともな

い、プロスタノイド産生の律速酵素と考えられているサイクロオキシゲナー
ゼの誘導型（COX-2）が脳において発現誘導されることが報告されている。
また、多種類のプロスタノイド受容体が、脳に発現していることも報告されている。これらの結果は、プロスタノイ
ドが中枢神経において、今回紹介した以外にも生理的・病態生理的に重要な役割を果たすことを示唆している。近い将来、これらの役割が解明されることが期待される。
〔参考文献〕
1） Hayaishi, O.: FASEB J, 5, 2575
（1991）
2）Onoe, H., Ueno, R., Fujita, I.,
Nishino, H., Oomura, Y. & Hayaishi,
O.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 85,4082（1988）
3）Matsumura, H., Nakajima, T., Osaka,T., Satoh, S., Kawase, K., Kubo, E.,
Kanta, S.S., Kasahara, K. & Hayaishi,
O.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 91,
11998（1994）
4）Oida, H., Hirata, M., Sugimoto, Y.,
Ushikubi, F., Ohishi, H., Mizuno, N.,
Ichikawa, A. & Narumiya, S.: FEBS
Lett., 417, 53（1997）5）Scammell, T., Gerashchenko, D.,
Urade, Y., Onoe, H., Saper, C. &Hayaishi, O.: Proc. Natl. Acad. Sci.
USA., 95, 7754（1998）
6）Satoh, S., Matsumura, H., Suzuki, F.
& Hayaishi, O.: Proc. Natl. Acad. Sci.
USA., 93, 5980（1996）
7）Eguchi, N., Minami, T., Shirafuji, N.,
Kanaoka, Y., Tanaka, T., Nagata, A.,
Yoshida, N., Urade, Y., Ito, S. &Hayaishi, O.: Proc. Natl. Acad. Sci.
USA., 96, 726（1999）
8）Matsuoka, T., Hirata, M., Tanaka, H.,

Sclerotiorin

〔規
格〕 含量
（HPLC）：97.0% 以上〔参考文献〕
1）Curtin T.P. et al : Biochem. J., 34,1419（1940）.
2）Udagawa, S. et al : Chem. Pharm.
Bull., 11, 366（1963）.
3）Schwenk et al : Arzneimittel-Forsh.,
12, 114（1962）.
4）Natsume, M. et al : Agric. Biol.

CH3
O
O

C21H23ClO5=390.86

Chem., 52, 307（1988）.
5）Omura, S. et al : J. Antibiot., 46, 1908
（1993）.
6）Pairet, L. et al : J. Antibiot., 48, 913（1995）.
7）Nakamura, K. et al : 公開特許広報 ,平 2-255615.
8）Tomoda, H. et al : J. Antibiot., 52, 160（1999）.

196-12161

25mg

18,000 円

近日発売 ご案内

Anti Mouse COX-2, Rabbit

ばれ、アラキドン酸からプロスタグラ
ンジン H の合成を触媒します。COXに は、胃 や 腎 臓の 機 能に 不 可 欠 なCOX-1 と感染等により一過性に誘導され炎症・発熱などを惹起する COX2 が知られています。本抗体は種を超えて COX-2 のみを認識する特異性の高いもので、現在精力的に進められている COX-2 阻害剤の開発に有用なツールとなります。

CH3

O（CETP）を非常に低濃度 H3C
で阻害 8）（IC50= 19.4FM）
Oすることが報告され、高O
H3C
脂血症への応用に注目されています。
〔起源〕 Penicillium sclerotiorum

COX-2 特異抗体
免疫化学用
COX（シクロオキシゲナーゼ）は、
プロスタグランジン H 合成酵素とも呼

CH3

Cl

生化学用
糸状菌 Penicillium sclerotiorum の
黄色色素成分から分離されたスクレロ
チオリン 1）,2）は抗腫瘍活性 3）、菌類の厚膜 胞 子 様 細 胞 誘 導 活 性 4）、gp120CD4 結合阻害 5）、エンドセリンアンタゴ
ニスト活性 6） など幅広い生理活性を持つ事が知られています。最近ではアラ
キドン酸カスケードの開始酵素として位置づけられているホスホリパーゼ A2 の阻害作用 7）が知られています。またトリ
アシルグリセロールなどの非極性脂質をリポタンパク質間で輸送するコレス
テロー ル エ ステ ル 輸 送 タン パク質

Takahashi, Y., Murata, T., Kabashima,K., Sugimoto, Y., Kobayashi, T.,
Ushikubi, F., Aze, Y., Yoshida, N.,
Honda, Y., Nagai, H. & Narumiya, S.
Science, 287, 2013（2000）
9）Matsumura, H., Honda, K., Goh, Y.,
Ueno, R., Sakai, T., Inoue, S. &Hayaishi, O.: Brain Res., 481, 242（1989）
10）Onoe, H., Watanabe, Y., Ono, K.,
Koyama, Y. & Hayaishi, O.: J.
Neurosci., 12, 2715（1992）
11）Lacroix, S., Vallieres, L. & Rivest, S.:
J. Neuroimmunol., 70, 163（1996）
12）Batshake, B., Nilsson, C. & Sundelin,
J.: Eur. J. Biochem., 231, 809（1995）
13）Scammell, T.E., Elmquist, J.K., Griffin, J.D. & Saper, C.B.: J. Neurosci.,
16, 6246（1996）14）Watanabe, T., Morimoto, A., Sakata,Y. & Murakami, N.: Experientia, 46,
481（1990）

Anti Bovine COX, Rabbit
免疫原：COX-2 の C 末端アミノ酸配列 580-594 に相当する合成ペプチド

特異性 / 交叉性 : ヒト、ラット、マウスのCOX-1, COX-2 を認識
実用希釈倍率 :ウェスタンブロット 1：1,000形

015-18501

状：ウサギ抗血清の凍結乾燥品（3%BSA 含）

特異性：マウス、ラット、ヒト COX2 を認識
実用希釈倍数 :ウエスタンブロット

1：2,000

014-18071

20,000 円

100FL 用100FL 用照会

Anti Human COX-1,
Monoclonal Antibody
特異性 / 交叉性：ヒト、ラット、マウス、ヒツジの COX-1 を認識
使用濃度 :
ウェスタンブロット 5Fg/mL
012-18511

500Fg

照

会

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）21高血圧の研究に高血圧の研究にアンギオテンシン変換酵素（ACE）と阻害剤
血圧の調節はいくつかの調節系のアンギオテンシン変換酵素（ACE）

相互作用によって行われていますが、

コード No.
011-18341
017-18343
015-18344

このうち最も重要なのがレニン・アン
ギオテンシン（RA）系です。この RA系は腎臓の傍糸球体細胞からのレニ品

ACE 阻害剤

テンシンⅡが受容体に作用して血圧

コード No.
011-18081
017-18083
024-14091
020-14093
128-04711
124-04713
051-06711
057-06713

在、ア ン ギ オ テ ン シ ン 変 換 酵 素（ACE）の阻害剤や、アンギオテンシンⅡ受容体の拮抗薬が降圧剤として利用されていますが、RA 系のもたらす様々な生理活性については、まだま規

アンギオテンシン変換酵素、ウシ肺製

ン分泌にはじまり、最終的にアンギオ
上昇などの生理活性を発現します。現

名

品

名

格

容

量

生化学用

0.2unit
1unit
5units規容格アラセプリル

生化学用

塩酸ベナゼプリル

生化学用

リシノプリル二水和物

生化学用

マレイン酸エナラプリル

生化学用

量

希望納入価格（円）4,400
15,00060,000

希望納入価格（円）8,000
26,0009,800
39,2008,000
26,0008,000
26,000

1g
5g
1g
5g
1g
5g
1g
5g

だ十分に解明されたとは言えません。
最近は、RA 系と心不全等の関係も指

生理活性ペプチド

摘されており、今後も循環器系における重要なテーマです。
当社では、RA 系に関わる様々な試薬を取揃えておりますので、ご活用下さい。

コード No.
016-18151
012-18153
014-18211
013-18161
019-18163

品

名

規

格

アンギオテンシンⅠ

生化学用

アンギオテンシンⅡ

生化学用[VAL5] アンギオテンシンⅡ

生化学用

容

量

1mg
10mg
10mg
5mg
50mg

希望納入価格（円）3,800
18,00013,0008,000
48,000

HMG-CoA レダクターゼ阻害剤
プラバスタチン, シムバスタチン, ロバスタチン, コンパクチン
生化学用HO

3- ヒドロキシ-3- メチルグルタリル- 補酵素
A（HMG-CoA）レダクターゼは一連のコレス

HO

O

COONa

O

OH

O

テロール生合成反応における律速酵素であR2るため、その阻害剤はとりわけ高脂質治療薬

O
O

Oとして注目されてきました。1976 年にコンパクチンが最初に開発され、現在では構造が類似したロバスタチン、シムバスタチンやプラ
バスタチンがスタチン系薬剤として臨床応用されています。その他の用途としてファルネ
シル化をこれらの薬剤で阻害することにより、

Ras タンパク質の膜局在化を阻止することが報告されており、がん研究の分野でも脚光を浴びています。また昆虫ホルモン分泌の抑制、糖尿病など幅広い分野にてその薬理作用が解明されつつあります。最近では破骨細胞による骨吸収を抑制することも分かり、骨粗鬆症研究にもご利用頂けます。

R1
品 名Lovastatin
Compactin
Simvastatin

HO
R2
CH2CH3
CH2CH3
C(CH3)2

分子量404.54390.51418.57

Pravastatin Sodium
C23H35NaO7=446.51

1）松本省吾 : バイオサイエンスとインダストリー , 53
（9）
, 16（1995）.
2）吉田稔 : 蛋白質・核酸・酵素 , 41（12）, 1751
（1996）.
3）Singer, I.I. et al : Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5264
（1988）.
4）Endo, A. et al : FEBS LETTERS, 72, 323（1976）.
5）Ozawa, R. et al : Regul. Pept., 57, 319（1995）.
コード No.
162-19821
168-19823

品

名Pravastatin Sodium
Simvastatin〔規格〕

199-12053

含量：95.0% 以上

125-04581

Lovastatin

溶状：メタノールに可溶

033-17301

Compactin

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

分子式
C24H36O5
C23H34O5
C25H38O5〔参考文献〕

193-12051

22

R1
CH3
H
CH3

容

量

25mg
100mg
25mg
100mg
25mg
25mg

希望納入価格（円）13,00039,00013,00039,00017,00019,000プロテインキナーゼ C、ヒト、組換え体、溶液
生化学用
プロテインキナーゼ C（PKC）は、

形

状 : 20mmol/mL HEPES（pH

種々の細胞外刺激に伴って生成する

りん脂質依存性プロテインキナーゼで7.4）, 2mmol/L EDTA,
2mmol/L EGTA, 5mmol/L
DTT, 100mmol/L NaCl,
0.05% Triton X-100, 50 %す。この酵素は細胞内情報伝達などに

グリセロール溶液

細胞膜りん脂質代謝産物により活性化されるセリン /トレオニンキナーゼで、深く関わるキナーゼとして知られてい純

ます。哺乳類においては、3 群に分類

比 活 性 : ロット毎に表示される 11 種の異なった分子種が存在

貯し、各分子種おのおの酵素的性質、発〔参考文献〕

現の細胞特異性等が異なります。
本品は、バキュロウイルスより、発現した組換え体ヒト プロテインキナー

度 : 95 % 以上（SDS-PAGE）
法 : −80℃

1）Nishizuka, Y. : Science, 233, 305（1986）.
2）Jaken, S. : Curr. Opin. Cell Biol., 8,
168（1996）.

ゼ C です。
起

源 : 昆虫細胞に感染させたバ
キュロウイルスより、発現したヒト プロテインキナー
ゼC

コード No.
541-01081
548-01091
541-01101
548-01111
545-01121

3）Hug, H. and Sarre, T.F. : Biochem. J.,
291, 329（1993）.
4）Kazanietz, M.G. et al. : Mol.
Pharmacol., 44, 298（1993）.
5）Newton, A.C. : J. Biol. Chem., 270,
28495（1995）.
6）Epand, R.M. : Anal. Biochem., 218,
241（1994）.
7）Dekker, L.V. and Parker, P.J. : Trends
Biochem. Sci., 19, 73（1994）.
8）Nishizuka, Y. : Science, 258, 607（1992）.
9）Asaoka, Y. et al. : Trends Biochem.
Sci., 17, 414（1992）.
10）Bell, R.M. and Burns, D.J. : J. Biol.
Chem., 266, 4661
（1991）.
11）Dekker, L.V. et al. : J. Biol. Chem.,
268, 19498（1993）.

品
名Protein Kinase Cα, Human, recombinant, Soln.
Protein Kinase CβⅠ, Human, recombinant, Soln.
Protein Kinase CβⅡ, Human, recombinant, Soln.
Protein Kinase Cδ, Human, recombinant, Soln.
Protein Kinase Cη, Human, recombinant, Soln.

容量

希望納入価格（円）25,00025,00025,00025,00025,000

5Fg
5Fg
5Fg
5Fg
5Fg

プロテインキナーゼ阻害剤
K-252a, K-252b, K-252c, KT 5720, KT 5823
生化学用
H
N

プロテインキナーゼは情報伝達のキーエンザイムとして主要な細胞内リック AMP 依存性プロテインキナーゼ）、PKC（りん脂質依存性プロテインキナーゼ）、PKG（サイクリック GMP
依存性プロテインキナーゼ）などが知られています。それらの阻害剤として、
ブロードな阻害能力を持つ K-252a を始め、PKA,PKC,PKG に特異的な阻害剤を揃えました。情報伝達系の研究用試薬としてお使い下さい。
〔規

格〕

含
溶

量 : 95.0% 以上
状 : メタノールに可溶〔参考文献〕
1）Kase, H. et al : Biochem. Biophys.
Res. Commun., 142, 436（1987）.

〜近日発売〜〜近日発売〜

H
N

O
品

機能を担っており、セリン /トレオニン
キナーゼの 1 種である PKA（サイク

O

N
H3C
R2
R1O

N
O

名

R1

R2

分子式

分子量

H

COOCH3

C27H21N3O5

467.45K-252b1,2,3） H
COOH
C26H19N3O5
KT 57201） H COO（CH2）5CH3 C32H31N3O5
KT 5823
CH3
COOCH3
C29H25N3O5

453.45537.61495.53K-252a1,2,3）

H2）Hashimoto, T. et al : Biochem.
Biophys. Res. Commun., 181, 423（1991）.
3）Yasuzawa, T. : J. Antibiot., 39, 1072
コード No.
113-00561
119-00563
117-00564
110-00571
116-00573
114-00574
542-01131
548-01133
117-00581
113-00583
111-00584
114-00591
110-00593
118-00594

品

名

N
H

N
H

K-252c3,4）
C20H13N3O=311.34（1986）.
4）Fabre, S. et al : Bioorg. Med. Chem., 1（3）, 193-6（1993）.
容

量

50Fg
100Fg
250Fg
50Fg
100Fg
250Fg
1mg
5mg
50Fg
100Fg
250Fg
50Fg
100Fg
250Fg

K-252aK-252b
K-252cKT 5720

KT 5823

希望納入価格（円）10,00016,80032,00012,00020,40039,5008,000
28,00013,00022,00043,00013,00022,00043,000

新規の IP3 レセプター阻害剤

Xestospongin C, Xestospongia sp.
生化学用
海綿より単離された IP3 レセプターの膜透過性阻害剤（IC50=358nM）です。

244-00721

100Fg

近日発売

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

23

タンパク質の高次構造解析に
Seleno-DL-methionine
生化学用
タンパク質の三次構造の解析法で分子置換法は、類似タンパク質の既知ある X 線結晶構造解析法には、同型構造情報を利用して解析する方法で子の導入に使用されます。通常メチオ

置換法、多波長異常分散法、分子置換

す。

ニンの代わりにセレノ-DL- メチオニ

本品は、この異常分散効果を示す原法があります。同型置換法では、ネイ

このうち、近年注目を浴びているのンを用いた制限培地でメチオニン要

ティブ結晶のほかに重原子を入れたが多波長異常分散法です。この方法

求株を培養するとタンパク質中にセレ誘導体結晶が必要となり、両者の回折は、シンクロトロン放射光からの強力

ン原子を導入できます。

強度の差から反射の位相を計算し構な連続 X 線が回折実験に利用できる造を決定します。多波長異常分散法でようになり、可能となった解析法です。

は、異常分散効果が異なると予想されこの方法では、異常分散効果を示す原るいくつかの波長で回折データを収集

子が導入された結晶があれば構造解し、その強度差から構造を決定します。

析でき、同型置換法のように、ネ イ

199-12151

50mg

6,000 円結晶は、異常分散効果を示す原子がティブ結晶のほか重原子誘導体結晶

195-12153

500mg

36,000 円

結晶中に含まれている必要があります。

を作製する手間がいりません。

193-12154

5g

216,000 円

膜タンパク質の可溶化に膜タンパク質の可溶化に
界面活性剤
膜タンパク質の研究では、生体膜内部に埋もれている膜タンパク質の可溶

Polyoxyethylene（8）Octylphenyl Ether【Triton X-114】
生化学用化が必要となります。可溶化には、酵
素処理や超音波処理などがあります

本品は、非イオン性界面活性剤です。温度に依存して相分離する性質があり、内在性膜タンパク質と表在性膜タンパク質の分離に利用されます。

が、タンパク質の変性などが心配され

164-19881

100mL

3,600 円ます。そこで、比較的温和な条件で可溶化できる界面活性剤を用いる方法が汎用されています。

Polyoxyethylene（9）Octylphenyl Ether【NP-40,Nonidet P-40】
生化学用
本品は、非イオン性界面活性剤です。
161-19911

100mL

6,000 円

100g

4,500 円Cethyldimethylethylammonium Bromide
生化学用
本品は、陽イオン性界面活性剤です。
035-17741

タンパク質染色試薬
Coomassie Brilliant Blue
（CBB）
電気泳動用

CBB R-250

CBB G-250

Quick CBB

ポリアクリルアミドゲル等を支持タンパク質と結合すると色が赤か

CBB R-250 法を改良し、短時間で体とした各種の電気泳動後、タンパ

ら青に変わり、差スペクトルからタ染色できるようにした調製済染色液

ク質の位置を検出するのに用いられンパク質の定量に利用できます。

です。脱色作業が省略できます。

038-17932

299-50101

ます。
031-17922

24

25g

5,200 円和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

25g

5,200 円

2L 用

9,000 円

和光純薬工業株式会社

第 40 話土谷正和

エンドトキシンと Toll-like receptor

今回は、エンドトキシンの細胞への一方、エンドトキシン低応答マウス

作用に関する最近の知見についてごとし て 知ら れ て い る C3H/HeJ で、紹介したいと思います。
血管内に侵入したエンドトキシンは、

TLR4 遺伝子の欠損が認められたことから 6）、TLR4 がエンドトキシンに対す

LPS Binding Protein（LBP）と結合し、る反応性に関与している可能性が示さ

白血球膜上の CD14 まで運ばれます。

れました。さらに、日本の研究グルー

そして、膜上の CD14 にエンドトキシ

プが、TLR2 並びに TLR4 のノックアンが結合すると、炎症性サイトカイン

ウトマウスを作製し、各種菌体成分にの産生が起こるというのが、これまで

対する反応性を解析しました 2）。そののエンドトキシンによる炎症の理解で結果、エンドトキシンに対する反応性し た。し か し、CD14 は Glycosyl-

は、TLR2 ノックアウトマウスでは野生phosphatidyl inositol（GPI）アンカー型と変わらず、TLR4 ノックアウトマウ

タイプのタンパク質で、細胞内へシグスで消失しました。この結果は、エンドナルを伝えることができません。このトキシンの受容体が、TLR2 ではなく、持つリポタンパク質によるサイトカイ

ことから、白血球膜上には別のエンドト

TLR4 であることを示しています。

ン産生の誘導など、以前から話題に

キシン受容体があると考えられてきま

エンドトキ シ ン の 真 の 受 容 体 がした。最近、この分野に関連して、国TLR2 か TLR4 かは、まだ結論がでてのレベルで解明されようとしています。

内外で盛んに研究されているのが、おらず、今後世界的に論議が盛んにな

これからはエンドトキシンだけを注目

Toll-like receptor（TLR）です 1,2）。
Toll は、ショウジョウバエの発生にると思われます。エンドトキシンに携するのではなく、ペプチドグリカンやリわってきた我々にとっても、なかなか

ポタンパク質など、他の微生物成分もなっていたことが、まさに分子生物学

おける背腹軸の決定に必須の因子と興味深いところです。この話題につい考慮した検討が必要になってくるようしてクローニングされました 3）。さらに、ては、欧州に思われます。

このタンパク質は、真菌や細菌の感染

ムのバトルということになるのでしょう

に対する特異的な抗菌物質の産生にか。

日本チームと米国チー

も、重 要な 働きをしていることが わ

前 出 の 日 本 の 研 究 グ ル ー プ は、

かってきました 4）。最近、Toll のヒトホモログとして TLR が発見され、すでTLR2 がペプチドグリカンを認識する
こと、TLR2 及び TLR4 の細胞内シグに 6 種類が報告されています 2）。このナ ル 伝達機構に必須の因子が中でエンドトキシンに関連すると思わ

MyD88 であることなども解明していれる TLR が、TLR2 と TLR4 です。

ます。海外の研究者たちは、CD14 が米国の研究グループは、TLR2 を発

エンドトキシンのみならず、ペプチドグ

現させた細胞がエンドトキシンに対すリカンをはじめとする細菌細胞壁成分

る反応性を獲得すること、その反応性を認識することを報告しています。エ

は CD14 の存在で増幅されることを報

ンドトキシンが最も強い生理活性物質

告しています 5）。さらに、TLR4 を発現の一つであるという認識に変化はありさせた場合は、TLR2 を発現させた場

ませんが、実際の生体内反応は種々の合のようなエンドトキシンに対する反物質が関与した複雑系であり、エンド

応性の獲得は認められなかったことか

トキシンの活性自身も修飾された形でら、エンドトキシンのシグナル伝達を現れてくると考えるべきでしょう。

担う受容体は TLR2 であるとしています。

ペプチドグリカンや B- グルカンによるエンドトキシン活性の促進、細菌が〔参考文献〕
1）赤 司 祥 子 , 三 宅 健 介 : Molecular
Medicine, 36, 488（1999）.
2）竹内 理 , 審良静男 : 実験医学 , 18,343（2000）.
3）Hashimoto, C. et al. : Cell, 52, 269（1988）.
4）Lemaitre, B. et al. : Cell, 86, 973（1996）.
5）Kirschning, C. J. et al. : J. Exp. Med.,
188, 2091（1998）.
6）Poltorak, A. et al. : Science, 282, 2085
（1998）.

次回は「第 41 話 エンドトキシンショック」の予定です。

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

25貴重な試料を簡単に無駄なく扱うための透析カセット
Slide-A-Lyzer 透析カセット〔特長〕

煮沸や透析膜のカットが必要ありません※。また、チューブをクリップする必要もありません。
試料の注入、回収が容易です。透析中に試料を一部回収するなどの操作も簡単に行えます。
試料に合わせて最適なサイズのカセットを選択頂けます。
（0.1 〜 0.5mL 用、0.5 〜 3mL 用、3 〜 12mL 用、

3 〜 15mL 用の 4 サイズがあります。）
ごみ、埃などが入らないように、個別包装のディスポーザブルタイプです。
※ 重金属がほとんど含まれておらず、煮沸の必要がないので前処理の手間がなく便利です。

〔使用法〕
シリンジでカセット上部のシリンジガ
イド部位のシリコンガスケットを突き刺しサンプルをカセット内に満たす。
操作は手袋をはめて行って下さい。

透析液の中に浮かせ透析を行う。

注射針がカセット腔に挿入されている状態で、シリンジの内筒を引き、カセッ
ト腔から空気を除去する。

透析液からカセットを取出し、サンプルを注入していない方のシリコンガス
ケットにシリンジを突きさし、カセット
腔にシリンジで注意深く空気を入れる。

カセットをブイ（浮き）の溝にはめ込む。

カセットの透析済サンプルをシリンジで採取する。

カセットによる透析には ブイ（浮き）が必要です。初回ご購入の際は、専用ブイをお買い求め下さい。

Slide-A-Lyzer ®
Dialysis Cassettes
cut dialysis time inhalf and won't leak!

Cassettes■試料容量 0.1 〜 0.5ml
コード No.
526-43931
522-43933
528-43991
524-43993
530-61711
534-61611
520-44051
526-44053

メーカーコード
66333
66334
66373
66374
66415
66416
66452 ★
66383
66384

■試料容量 0.5 〜 3.0ml

分画分子量
3,500
7,000

10,0001）
10,0002）
Extra-Strength

容量
10 個
50 個
10 個
50 個
10 個
50 個
10 個
10 個
50 個

希望納入価格（円）14,90066,10014,90066,10014,90066,10020,60014,90066,100

容量
8個
40 個
8個
40 個
8個
40 個

希望納入価格（円）18,30077,50018,30077,50018,30077,500■試料容量 3.0 〜 12ml
コード No.
525-43901
521-43903
527-43961
523-43963
529-44021
525-44023

26

メーカーコード
66110
66111
66710
66711
66810
66811

コード No.
522-43911
528-43913
524-43971
520-43973
535-39151
533-61561
526-44031
522-44033

メーカーコード
66330
66331
66370
66371
66425
66426
66450 ★
66380
66381

分画分子量
3,500
7,000
10,0001）
10,0002）
Extra-Strength

容量

10 個
50 個
10 個
50 個
10 個
50 個
10 個
10 個
50 個

希望納入価格（円）14,90066,10014,90066,10014,90066,10021,70014,90066,100■試料容量 3.0 〜 15ml

分画分子量
3,500
7,000
10,0002）
Extra-Strength

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

コード No.
533-61701
534-61591

メーカーコード
66410
66411
66451 ★

分画分子量

容量10,0001）

10 個
50 個
10 個

希望納入価格（円）18,30077,50023,300

1）オリジナルメンブレン 2）エクストラストレングスメンブレン：
オリジナルメンブレンに比べ浸透圧への耐久性が高い膜★はγ線滅菌済です。

アクセサリー◆ブイ
透析カセット用の 浮き です。繰り返し使用できます。カセットを 1 個取付けるタイプと一度に 10 個取付ける
Carousel Buoy
holding 10
Cassettes

ことのできるカラセルブイの 2 種類が
あります。

Buoy

コード No.

メーカーコード品

名容532-39161

66430

Slide-A-Lyzer Buoys For 0.1-0.5ml, 0.5-3.0ml,3.0-15ml
Cassettes

528-44091

66431

Slide-A-Lyzer Carousel Buoy For 0.1-0.5ml, 0.5-3.0ml
Cassettes

521-44101

66432

Slide-A-Lyzer Buoys For 3.0-12ml Cassettes量

希望納入価格（円）10 パック4,700

1個（カセット 10 個装着可能）

7,800

8 パック

3,900

◆シリンジ
コード No.
525-44121
539-39171
528-44111

メーカーコード
品
名66494
Slide-A-Lyzer Syringe（1ml）and 18-gauge needle
66490
Slide-A-Lyzer Syringe（5ml）and 18-gauge needle
66493
Slide-A-Lyzer Syringe（20ml）and 18-gauge needle

容量

希望納入価格（円）
3,900
3,900
4,200

10 パック
10 パック
10 パックSlide-A-Lyzer 透析カセットキット
透析カセットとブイ（浮き）及びシリンジがセットになっています。

■試料容量 0.1 〜 0.5ml■試料容量 0.5 〜 3.0ml〔キット内容〕〔キット内容〕●透析カセット 10 コ
●ブイ 10 コ●シリンジと交換針 各 10 コ

●透析カセット 10 コ
●シリンジと交換針●ブイ 10 コ

各 10 コ

コード No.

メーカーコード

分画分子量

容量

希望納入価格（円）

コード No.

メーカーコード

分画分子量

容量

希望納入価格（円）523-43941

66335

3,500

18,300529-43921

66332

3,500

66375

7,000

18,300521-43981

66372

7,000

524-44071

66408

10,0001）

18,300521-44081

66406

66385

10,0002）
Extra-Strength533-61681

66405 ※

1Kit
1Kit
1Kit
1Kit

20,400525-44001

1Kit
1Kit
1Kit

1Kit

19,900527-44061

18,3001Kit

523-44041

66382

10,0001）
10,0002）
Extra-Strength

19,90019,9003,900※ トライアルキットです。キット内容は、透析カセット，ブイ，シリジンと交換針が各 1 コです。

■試料容量 3.0 〜 12ml
〔キット内容〕■試料容量 3.0 〜 15ml

●透析カセット 8 コ●シリンジと交換針●ブイ 8 コ

〔キット内容〕

各 10 コ●透析カセット

10 コ●シリンジと交換針

コード No.

メーカーコード

分画分子量

容量

希望納入価格（円）522-43891

66107

3,500

22,900520-43951

66707

7,000

1Kit
1Kit

522-44011

66807

10,0002）
Extra-Strength

1Kit

22,900

コード No.

メーカーコード

530-61691

22,90066407●ブイ 10 コ

各 10 コ

分画分子量

容量

希望納入価格（円）

1）

1Kit

22,90010,000〔関連商品〕

Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Units

10 〜 100FL の微量サンプル用透析ユニットです。分画
分子量は、3.5K、7K、10K の 3 種類を揃えております。
Kit

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

27

HPLC 用〔ODS との比較〕®

ワコーパック Wakosil-Ⅱ 3C8RS

カラム : 4.6 φ× 50mm
移動相 : 0.02M KH2PO4/CH3CN=90/10（v/v）
流 速 : 1.0ml/min. at 40℃
検 出 : UV210nm, 0.16Aufs
サンプル : 1.Acesulfame K1

粒子径 3Fm 高純度シリカゲルにオクチル（C8）基を導入後、

1

残存シラノールを徹底的にエンドキャッピング処理した、短2

時間・高感度分析に最適な充てん剤です。ODS（C18）に比べアルキル鎖が短く、極性差のある成分が短時間で分析で2.Saccharin Sodium
3.Aspartame

2

きます。
〔特

長〕

● 理論段数、分離度の向上● 短時間分析の実現

3
3● サンプルの微量化
カラムサイズ
3.0 φ× 75mm
（ヌ）
4.0 φ× 100mm（ウ）
4.6 φ× 50mm
（カ）
4.6 φ× 150mm（Ｇ）

カラムタイプデュポン（D）
ウォーターズ（W）

希望納入価格（円）42,00045,00038,00047,00005

Wakosil-Ⅱ 3C8 RS

0

5

Wakosil-Ⅱ 3C18 RS

スピーディスクカラム用加圧プロセッサー
スピーディスクカラム用加圧プロセッサーは N2 ガスまたは圧
縮空気で spe カラムに試料・脱着溶液を流す加圧方式です。この装置は「48 カラム加圧プロセッサー」と「96 カラム加圧プロセッサー」の 2 タイプが有ります。両タイプとも流量の調整が容易で送液精度も高く、さらに送液に用いた同じガスで液切り、乾燥を行う事ができサンプル処理スピードが飛躍的に向上します。
〔特長〕● スピーディスクカラムを 48 本 、スピーディスク 96 カラムの 96 本を 1 度に処理
● エアー加圧方式のため検体吸着後の通気脱水が容易● 流量調整が容易でカラムの位置、数にかかわらず同量の送液が可能

スピーディスク 48 カラム加圧プロセッサー

スピーディスク96カラム
スピーディスク48カラム
加圧プロセッサー
加圧プロッセッサー
スピーディスク96カラムとコレクショントレイ

スピーディスク 96 カラム加圧プロセッサー

1、3 及び 6mL のスピーディスクカラムを 1 〜 48 個同時にスピーディスク 96 カラム専用の加圧プロセッサーです。

処理できます。各カラムは加圧時に耐圧シールで保護され本装置は、8 × 12 のマイクロプレートに合わせて設置されるためカラム間のコンタミネーションもありません。装置の標

た 96 個すべてのカラムへ同時に同量の送液を行うことが準仕様は 3mL spe カラムが使用できるようになっています。

できます。

コード No.
560-26051
567-26061

メーカーコード
8118-00
8129-00

品名スピーディスク 48 カラム加圧プロセッサー
スピーディスク 96 カラム加圧プロセッサー

スピーディスクカラム● 高回収率／高再現性／
高キャパシティー● 10Fm ディスク状 で 目詰まり等が少なく短時間

量

1式
1式

希望納入価格（円）480,000
450,000

スピーディスク 96 カラム
Speedisk®
固相抽出ディスク

● ハイスループット固相
抽出に最適●リムレス形状の 20mg ス● 使用溶媒量（溶出等）が少ない

容スクリーン（ポリエチレン）
グラスファイバーフィルター
充てん剤（10μm）
グラスファイバーフィルター
スクリーン

ピーディスクカラム 96
本が 1 セット● C18, シリカゲ ル 等 20

Speedisk® Column is proteected U.S.Patent No.5,595,653

抽出が可能

品種

＊加圧プロセッサーの詳しい資料や新構造ディスクを使用したスピーディスク spe カラムのパンフレットを用意しております。
ご請求下さい。

28

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

DPD 法による残留塩素の測定
飲料水、プール水には殺菌、消毒の目的で塩素剤が使用されています。塩素剤は水中で次亜塩素酸として消毒作用を発揮
しますが、水中の懸濁物、有機物、金属塩等と反応したり、大気中に逸散するなどしてその濃度が減少し殺菌効果が低下します。したがって、衛生管理面から水中残留塩素の測定が行われています。
現在、残留塩素の測定は o-トリジン法が主流となっておりますが、o-トリジンの発がん性が指摘され、DPD 法が注目されています。DPD 法は、残留塩素がジエチル-p- フェニレンジアミン（DPD）と反応して呈する桃〜桃赤色を標準比色液と比較
して残留塩素を測定する方法です。
〔DPD 法〕（1）遊離残留塩素の測定（Clmg/l）（2）残留塩素の測定（Clmg/l）

りん酸緩衝液2.5mlを共栓比色管50mlに採る（1）で発色させた溶液によう化カリウム0.5gを加える

DPD試薬0.5gを加える

混和後、約２分間静置する

検水を加えて全量を50mlとし、混和する

呈色を残留塩素標準比色列と比色する呈色を残留塩素標準比色列と比色する（3）結合残留塩素（Clmg/l）
残留塩素と遊離残留塩素の差を結合残留塩素とする〔参考文献〕
厚生省生活衛生局
コード No.
042-27642
015-18241
161-20185
042-28002
044-28001

水道環境部

監修：
「上水試験法」, p.210,（日本水道協会）（1993）.

品
名N,N-Diethyl-p-phenylenediamine Sulfate【DPD】
Acid Red 265
Phosphate Buffer Solution
DPD Reagent
内容量：DPD 4%
無水硫酸ナトリウム 96%

規

格

容

量

希望納入価格 ( 円 )残留塩素測定用

25 g

6,000

残留塩素測定用
残留塩素測定用

1g
500 mL2,500
照 会

残留塩素測定用

25 g
100 g

照
照

会
会

DPD 法による簡易測定キット
活性塩素-DPD テストワコー
〔特

長〕

〔内

● 操作が簡便容〕（1）DPD 錠

1）DPD, KI は、錠剤の採用により秤量の必要がありません。

2）緩衝液は、滴瓶に濃縮液が入っており、滴下するだ
けです。

3）測定は、目視により色調表と比較するだけです。

（

100 錠× 1 本

N,N- ジエチル-p-フェニレンジアミン（硫酸塩） 0.002g
0.048g
無水硫酸ナトリウム（2）KI 錠 （よう化カリウム

0.05g）（3）りん酸緩衝液 （0.2mol/L, pH 6.5）（4）色調表）100 錠× 1 本
8mL × 1 本
1枚

● 1 本の試験管で測定可能

1）遊離残留塩素も結合残留塩素も 1 本の試験管で測定できます。
コード No.
297-56501
294-34151

品名Active Cl-DPD test wako
Active Cl-DPD test tube
（Active Cl-DPD test wako 用試験管）

規 格
残留塩素測定用

容 量
100 回用

希望納入価格 ( 円 )8,500

残留塩素測定用5 本（栓付き）3,800

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）29

残留農薬試験（HPLC）用〔現品説明書〕

7 種農薬混合標準液

コードNo. 164-19901

７種農薬混合標準液
7 Pesticides Mixed Standard Solution

2
6.427
7.624

水質基準、ゴルフ場使用農薬目標基準1

カルボフラン、2,4-PA（2,4- ジクロロフェノ【ご使用上の注意】

水道環境部長通知 ; 平成 11 年 6 月 29 日

１.
２.
３.
４.
５.

キシ 酢 酸）、トリクロピ ル を 含 み ま す。
R

また、ワコーパック WS Agri-9（HPLC
専用カラム）を用いることで、オキシン銅

6
5 7

4

3

19.254【保存条件】 −20℃・遮光保存について」の一部改正（厚生省生活衛生局

14.539

完する項目として追加された、ベンタゾン、準液です。
「水道水質に関する基準の制定

13.549付生衛発第 959 号）に伴い、水質基準を補【内容】①アシュラム②ペンタゾン③カルボフラン④MCPP（メコプロップ）⑤2,4-PA（2,4-ジクロロフェノキシ酢酸［2,4-D］）⑥チウラム⑦トリクロピル（トリクロピル酸）
各100Fg/mLアセトニトリル溶液

9.992
11.378値などが設定されている 7 種農薬混合標

2〜10℃保存下では徐々に分解しますので、必ず上記保存条件にて保存して下さい。
希釈後の溶液は室温で徐々に分解します。
希釈後の溶液を保存する場合は2〜10℃で保存し、なるべく早くご使用下さい。
希釈に用いる溶媒は、高純度の分析用グレードをご使用下さい。
アンプル中には約1.5mL入っています。

参考のため、本品の液体クロマトグラムを示します。

Sample７種農薬混合標準液
本品 10[l 注入 Colum
Lot. HCR9509

Wakosil Agri-9(4.6×250mm)
35℃
CH3CN/pH3.6 50mM

Eluent KH2PO4,H3PO4=28/72
Flow rate
Atten
Instrument

Add. EDTA・2Na 0.01%
1.0ml/min
8
Detection UV 270-230nm
Shimadzu LC 9A Operator S. Nakaoを加えた 8 成分の一斉分析が可能であり、固相抽出カラム プ〔Presep® -C Agri 回収率〕

レ セップ R-C Agri
（Short）[ スチレン

農薬名

ジビニルベンゼン-

アシュラム

96.3

95.4

メタクリレート系ポ

ベンタゾン

97.1

97.4

リマーゲル ] により、カルボフラン

98.1

102.1

前 処 理も容 易に行

MCPP

98.9

99.8

えます。

2,4-PA

99.5

101.6

チウラム

93.9

96.6

トリクロピル

98.2

101.7

オキシン銅

94.2

97.2

コード No.
164-19901
159-01961
001-00030
296-32651〔 Wakosil Agri-9 によるオキシン銅を加えた
8 種農薬の一斉分析例 〕

1

回収率

HPLC Conditions
Column : Wakosil Agri-9 4.6φ× 250mm
Eluent: CH3CN/pH 3.6 50mM KH2PO4,H3PO4=28/72（v/v）, add.EDTA・2Na 0.01%
Flow rate : 1.0ml/min. at 35℃
Detection : 0-5.3min. UV240nm,
5.3-6.5min. UV270nm,
6.5min.- UV230nm,0.128Aufs
Sample : 1）Oxine-Cu 2）Asulam 3）Bentazone
4）2,4-PA 5）Triclopyr 6）Carbofuran
7）MCPP 8）Thiuram inj.vol. 10[g/ml, 10[l

2
3

8

4 5

7
6

0

品
名
7 種農薬混合標準液
オキシン銅標準液
Wakopak® WS Agri-9（4.6φ× 250mm）
Presep® -C Agri（Short）

5

10

15

20

規 格
残留農薬試験用
残留農薬試験用
残留農薬試験用
試料前処理用容量

希望納入価格（円）25,00010,00074,00038,0001mL × 5A
1mL × 5A
1本
10 個× 5

その他、4,8,13,32 種農薬混合標準液もございますのでお問合せ下さい。

高速液体クロマトグラフ用標準品
第十三改正日本薬局方では、液体クロマトグラフ法にて各種の医薬品を定量する際に内部標準物質としてパラオキシ安息
香酸エステル類やエチレフリン等が使用されます。
また、パラオキシ安息香酸エステル類は、飲食物に保存料として使用されており HPLC 法にて分析が行われています。
コード No.
021-14241
050-06801
164-20011
057-06791

品
名
Butyl p-Hydroxybenzoate Standard
Ethyl p-Hydroxybenzoate Standard
Propyl p-Hydroxybenzoate Standard
Etilefrine Hydrochloride Standard

3L
3L 包装追加！
包装追加！
ダイオキシン類分析用溶媒
エタノール
056-06663

30

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

3L

13,000 円

略 名
PHBA Butyl
PHBA Ethyl
PHBA Propyl

コード No.
010-17831
048-26321
049-27451
050-06661
083-07391
136-13461
203-14141

含量（HPLC）
99.0% 以上
99.0% 以上
99.0% 以上
98.0% 以上
品
名アセトン
ジクロロメタン
ジエチルエーテル
エタノール
ヘキサン（n- 〃）
メタノール
トルエン

容

量

希望納入価格（円）
5,000
5,000
5,000
5,000

200mg
200mg
200mg
200mg
容

量

1L
1L
1L
1L
1L
1L
1L

希望納入価格（円）
2,900
3,500
6,200
5,000
2,400
2,800
3,300

8 Phthalates Mixed Standrad

Solution

フタル酸エステル試験用
環境庁〔内

SPEED981）に記載されている、8 種類のフタル酸エステル類の混合標準液です。

容〕
ピーク No.
1
2
3
4
5
6
7
8

成 分 名
フタル酸ジエチル
フタル酸ジプロピル
フタル酸ジ-n- ブチル
フタル酸ジ-n- ペンチル
フタル酸ジ-n- ヘキシル
フタル酸ベンジルブチル
フタル酸ビス（2- エチルヘキシル）
フタル酸ジシクロヘキシル

7
3

1

6
8

6

8

10

12

コード No.
165-19931

14

16

CAS No.
84-66-2
131-16-8
84-74-2
131-18-0
84-75-3
85-68-7
117-81-7
84-61-7
各 100Fg/mL ヘキサン溶液

5

4
2

分 子 式
C6H（COOC
42H5）2C6H（COOCH
4
2CH2CH3）2
C6H4[COO（CH2）3CH3]2
C6H4[COO（CH2）4CH3]2
C6H4[COO（CH2）5CH3]2
C6H（COOCH
COO（CH2）3CH3
4
2C6H5）
C6H4[COOCH2CH（C2H5）（CH2）3CH3]2
C20H26O4

18

20

Sample : 8 種フタル酸エステル混合標準液
Carrier Gas : He 2.0ml/min.
Splitless: 0.5min.
Mode: GC/MS（TIC）
Instrument : Shimadzu GP-5000
Column: BPX-5 0.25[m、0.32mm × 30m
100℃（2min.）→ 270℃（1min.）、（10℃/min.）Injection: 210℃
Interface: 250℃

22

24

26〔参考文献〕
1）環 境 庁「環 境 ホ ル モ ン 戦 略 計 画
SPEED98」1998 年 5 月
2）第 26 回日本環境化学会講演予稿集（平成 10 年 10 月 29 日）

28品
名
8 Phthalates Mixed Standard Solution（each 100[g/ml in Hexane）

規

格

容

フタル酸エステル試験用

量1mL × 5

希望納入価格（円）20,000〔関連商品〕
標準品及びサロゲートも各種取扱っております。別途資料をご請求下さい。

アフラトキシン標準品セット
生化学用
アフラトキシンは Aspergillus flavus により生産されるカビ毒であり強力な発がん作用を持つ物質です。これらは特有の蛍光を発しその色によりアフラトキシン B
（青）、G
（緑）
と区別されています。
またそれぞれ 2 種類のサブタイプが知られており、本品は各 1mg のバイアルが 1 本ずつ入ったお得な標準品のセットです。
また単品もご用意しています。食品中のアフラトキシンの定量や発がん物質の作用機構などの解明に使用下さい。
コード No.
012-18371

品
名Aflatoxin（B1,B2,G1,G2）Set

容量

4 × 1mg

希望納入価格（円）20,000〔関連商品〕
コード No.
019-17661
016-17671
013-17681
010-17691
018-18351
150-02111

品
Aflatoxin B1
Aflatoxin B2
Aflatoxin G1
Aflatoxin G2
Aflatoxin M1
Ochratoxin A

名

容

量

10mg
10mg
10mg
10mg
100Fg
5mg

希望納入価格（円）17,00036,00030,00058,00030,00038,000

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）31

5% 含水シリカゲルの商品化と性能評価結果
和光純薬工業株式会社

大阪研究所

上森

仁志

表 . 5％含水シリカゲルの評価結果
私達の身の回りには人為的に塩素系農薬作り出された様々な有害化学物
Hexanae
1%Acetone-Hexane 1%Acetone-Hexane５%Acetone-Hexane 10%Acetone-Hexane 5%EtOH-Benzene
0-30ml0-50ml50-100ml
0-50ml0-50ml0-50ml質が存在し、長期的な暴露によ
自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品
91
96
り人間の健康および生態系への 4-Nitrotoluene
Benzophenon
98
99
影響が懸念されている。環境庁 α-HCH
90
95
14
12
94
99
「外因性内分泌 β-HCH
は 1998 年 5 月に
γ-HCH
93
96
撹乱化学物質問題への環境庁対 δ-HCH
79
91
13
6
HCB
103
100
応方針について」（環境ホルモン Chlordene
94
98
96
106
を発表し、 Alachlor
戦略計画 SPEED ' 98）
Heptachlor
94
99
汚染の実態調査、試験研究の推 Aldrin
106
98
99
進を図るなどの取組みについて Octachlorostylene 103
Oxychlordane
94
89
8
5
示すとともに、1998 年 8-9 月に Heptachlor-exo-epoxi 6
6
95
92
95
100
建設省と共同で第 1 次全国実態 Heptachlor-end-epoxi
2,4,8-TCDF
104
98
104
104
調査を実施し、同年 10 月に暫定 trans-Chlordaneo,p'-DDE
9894
63
的な分析法として「外因性内分 cis-Chlordane
105
103
100
99
泌撹乱化学物質調査暫定マニュ trans-Nonachlor
α-Endsulfan
49
51
68
58
アル」
（水質、底質及び生物）を発 p,p'-DDE
101
96
101
110
表した。
この暫定マニュアルには Dieldrino,p-DDD
13
12
91
84
8
12
140
75
試料の前処理を目的として、溶 Nitrofene（NIP）
Endrin99
95
媒抽出法、固相抽出法、カラム β-Endsulfon
20
19
90
84
82
80
22
19
処理法など様々な前処理法が紹 cis-Nonachlor
p,p'-DDD
111
107
介されているが、カラム処理法 o,p'-DDT
93
92
21
16
54
53
には、主に 5% 含水シリカゲル、 p,p'-DDT
Endsulfan Sulfate
98
81
26
18
5% 含水フロリジルが用いられて Methoxychlor
81
100
Kelthane（Dicofol）
64
102
いる。特に 5% 含水シリカゲルは、 Mirex
99
92
95
92
HCB、PAHs 等の非極性物質か Benzo[a]pyrene
農薬類
ら農薬等の極性物質までを多成Hexanae
1%Acetone-Hexane 1%Acetone-Hexane ５%Acetone-Hexane 10%Acetone-Hexane 5%EtOH-Benzene
50-100ml
0-50ml0-30ml0-50ml0-50ml0-50ml分分析するのに適しているが1）− 3）、
自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品 自家製 和光品
これら担体の調製には、市販カラ Trifluralin
98
98
131
135
ムクロマトグラフ用担体を購入 Simazine
Atrazine
120
127
133
101
後、乾燥と水分の調製操作が必 Carbaryl
Metribuzin
134
142
要となっている。今回商品化し Vinclozolin
87
103
108
101
た 5% 含水シリカゲルは、これら Malathion
Parathion
69
100の手間を省き分析時にすぐ使用 cis-Permethrin
92
112
87
112
できるよう含水率を 5% に調製 trans-Permethrin
Cypermethrin-1
69
107
した Wakogel C-200 である。
Cypermethrin-2
94
101
14
2
Cypermethrin-3
Cypermethrin-4
Fenvalerate
Esfenvalerate

-

-

-

-

67
65
104
90

96
112
107
109

35
28
-

4
4
-

-

-

-

-

〔5% 含水シリカゲルの調製方法〕
当社カラムクロマトグラフ用シ（注）標準品の添加量を 100 とした場合の回収率で表記
5% 含水シリカゲルの使用量：5g（内径 1cm のガラスカラム）
リカゲル Wakogel C-200 を 130
自家製：岡山県環境保健センター 劔持様より供与された 5% 含水シリカゲル 和光品：当社で商品化 5% 含水シリカゲル℃ で 15 時間乾燥後、密閉式ス〔性能評価結果〕〔参考文献〕
テンレス製混合機に入れて室温まで
1）劔持堅志他：ゴルフ場農薬の分析法：環境化学,
本製品の性能評価結果を表にまと冷却する。撹拌しながらシリカゲル重3, 41-58（1993）.
めて示したが、従来の自家製シリカゲ2）劔持堅志他：水質, 底質モニタリング調査の分量に対し 5% 重量の精製水を滴下し、
析方法, 環境化学, 3, 279-293（1993）.
ルと同等の分離特性を示し、本製品が密封して発熱が終了するまで静かに
3）環境庁環境安全課：平成 10 年度化学物質分析
環境ホルモン分析の迅速化に貢献で法開発調査報告書（その 2）：多環芳香族炭化水混合する。さらに 30 分間混合後 15 時
素類（PAHs）及び 有機リン 酸トリエステル類
きると考えられる。
間以上静置し調製した。
（OPEs）の分析法（2000）.

32

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

環境ホルモン分析の前処理に！
５％ Water-impregnated Silica Gel【Silica Gel water content ５％】
環境分析用
コード No.

品

239-01711

５％含水シリカゲル

環境分析用溶媒

名

規

格

環境分析用

容

量

希望納入価格（円）
4,000

100g

シリーズ追加！

Dichloromethane
Diethyl Ether
環境分析用
ご好評頂いている環境分析用溶媒に今回新たに、ジクロロメタン、ジエチルエーテルを追加しました。内分泌撹乱物質類の分析に安心してお使い頂けます。
〔規 格〕〔取扱上の注意〕＊

内分泌撹乱物質分析適合性試験 ：適合

本品はアルミキャップを使用しておりますが、お取扱い＊高分解能 GC/MS を用いて、フタル酸エステル類、アジピン酸 2- エの際は以下の点に注意してお使い下さい。

チルヘキシル、アルキルフェノール類、ビスフェノールＡ、スチレ
ンダイマー・トリマー等の内分泌撹乱物質を測定し、ほとんど存在しない事を確認。また、1,000 倍濃縮を行い、GC-ECD でハロゲ

1．栓の開閉によっても外気で汚染されるおそれがありますので、開栓後はできるだけ早く全量をご使用下さい。

2．本品の流出箇所を手で触れますと、汚染の原因になります。

ン化有機物がない事を確認。

3．器具はすべてガラス器具を使用して下さい。ポリエチレ
ン、ポリ塩化ビニルのようなプラスチック材質はすべて極微量の溶出成分含有のため汚染の原因になります。
コード No.

品

名

規

格

041-28055

Dichloromethane

環境分析用048-28065

Diethyl Ether

環境分析用

容

量

500mL
500mL

希望納入価格（円）
2,600
4,200

〔関連商品〕
コード No.

品

名

規

格

018-17815

Acetone環境分析用015-17825

Acetonitrile

環境分析用

085-07655

n-Hexane

環境分析用

容

量

500mL
500mL
500mL

希望納入価格（円）
1,900
2,600
1,800

ビスフェノールＡの GC 分析に！
N,O -Bis（trimethylsilyl）trifluoroacetamide【BSTFA】
環境分析用「外因性内分泌撹乱化学物質調査〔取扱上の注意〕

暫定マニュアル」（平成 10 年 10 月環

ビスフェノールＡを分析される場

境庁発行）には、ビスフェノールＡの合は、GC 導入口を新しいものに取替

GC 分析には BSTFA で誘導化する方

えたり、シリンジも針の交換できる法が示されています。

タイプのものを使用するなど、測定

本 品 は、試 薬 中 に 含 ま れ る ビ ス
フェノールＡがほとんどないことを環境からのビスフェノールＡの汚染を極力排除して行って下さい。

確認しています。
コード No.
020-14191

品

名N,O-Bis（trimethylsilyl）-trifluoroaceticamide

規

格

環境分析用

容

量

1mL × 5A

希望納入価格（円）8,000

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

33

DNPH アルデヒド分析をスムーズに !!
16 種アルデヒド-DNPH 混合標準液
ワコーパック® WS DNPH、専用溶離液
有害大気汚染物質として環境中に広く存在するアルデヒド類の 2,4- ジ
ニトロフェニルヒドラジン（DNPH）
誘導体 16 成分の混合標準液です。
ワコーパック® WS DNPH（HPLC
専用カラム）と専用溶離液による一斉分析が可能であり、従来の HPLC
カラムでは分離できなかった、DNPHn- ブチルアルデヒドと DNPH- イソブチルアルデヒドを分離分析できます。

〔成分〕 濃度：各アルデヒド 10[g/ml アセトニトリル溶液
化合物名

濃度 ([g/ml)[ アルデヒドDNPH として ]

示性式

分子量

ホルムアルデヒド-DNPH 誘導体
アセトアルデヒド DNPH 誘導体
プロピオンアルデヒド DNPH 誘導体
アクロレイン DNPH 誘導体
アセトン DNPH 誘導体
イソブチルアルデヒド DNPH 誘導体
n- ブチルアルデヒド DNPH 誘導体
クロトンアルデヒド DNPH 誘導体
イソ吉草酸アルデヒド DNPH 誘導体
n- 吉草酸アルデヒド DNPH 誘導体
ベンズアルデヒド DNPH 誘導体
n- ヘキサナール DNPH 誘導体
o- トルアルデヒド DNPH 誘導体
m- トルアルデヒド DNPH 誘導体
p- トルアルデヒド DNPH 誘導体
2,5- ジメチルベンズアルデヒド DNPH 誘導体

70.0
50.9
41.0
40.0
39.0
35.0
35.0
35.7
30.9
30.9
27.0
28.0
25.0
25.0
25.0
23.4

CH2=NNHC6H3(NO2)2
CH3CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3CH2CH=NNHC6H3(NO2)2
CH2=CHCH=NNHC6H3(NO2)2(CH3)2C=NNHC6H3(NO2)2(CH3)2CHCH=NNHC6H3(NO2)2
CH3(CH2)2CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3CH=CHCH=NNHC6H3(NO2)2(CH3)2CHCH2CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3(CH2)3CH=NNHC6H3(NO2)2
C6H5CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3(CH2)4CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3C6H4CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3C6H4CH=NNHC6H3(NO2)2
CH3C6H4CH=NNHC6H3(NO2)2(CH3)2C6H3CH=NNHC6H3(NO2)2

210.15224.17238.20236.18238.20252.23252.23250.21
266.25266.25286.24280.28300.27300.27300.27314.30

極めて低いカートリッジブランク
プレセップ ® -C DNPH
プレセップ ® - C DNPH は 2,4- ジニ
トロフェニルヒドラジンをシリカゲルに
コーティングした固相抽出用カート
リッジです。大気環境中のカルボニル化合物を DNPH 誘導体として捕集することに優れています。

カートリッジブランク（アセトニトリル 5ml にて抽出）〔仕 様〕
粒 子 径 : 75 〜 150Fm
細 孔 径 : 7.0nm
比 表 面 積 : 450m2/g
D N P H 量 : 約 2mg/ 個
標準品（アルデヒド、ケトンとして各 0.625[g/ml）

分析例（実験室中の空気 30l 採取）

1

5

2

4
8 10
9

3 5

11 12 13

6 7

16
15
14

1
2
0

5

10

15

20

25

30

35

40

0

5

10

15

20

25

30

35

0

40

5

10

15

20

25

30

35

40

カラム : Wakosil DNPH、4.6φ× 250mm
溶離液 : A;Wakosil DNPH 溶離液 A B;Wakosil DNPH 溶離液 B
0-16min. B;10%、16-35min. B;10-90%、35-45min. B;90%
流 速 : 0.6ml/min. at 37℃
検 出 : UV 360nm,0.016AUFS
注入量 : 10[l
試 料 : 1）Formaldehyde-2,4-DNPH 2）Acetaldehyde-2,4-DNPH 3）Propionaldehyde-2,4-DNPH 4）Acrolein-2,4-DNPH 5）Acetone-2,4-DNPH 6）Isobutyraldehyde-2,4-DNPH
7）n-Butyraldehyde-2,4-DNPH 8）Crotonaldehyde-2,4-DNPH 9）Isovaleraldehyde-2,4-DNPH 10）n-Valeraldehyde-2,4-DNPH 11）Benzaldehyde-2,4-DNPH12）Hexaldehyde-2,4-DNPH 13）o-Tolualdehyde-2,4-DNPH 14）m-Tolualdehyde-2,4-DNPH 15）p-Tolualdehyde-2,4-DNPH 16）2,5-Dimethylbenzaldehyde-2,4-DNPH
コード No.
018-18231
290-34251
品

品 名
16 種アルデヒド-DNPH 混合標準液
Presep® -C DNPH

名ワコーパック® WS DNPH

カラムサイズ
4.6 φ× 250mm

規 格
HPLC 用
試料前処理用カラムタイプデュポン
ウォーターズ容量1mL × 5
20 個
記 号
オ ID
オ IW

希望納入価格（円）30,000
照 会
希望納入価格（円）65,000〔次頁下へ続く〕

34

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

残留溶媒試験用

高純度溶媒

第十三改正日本薬局方第二追補において「残留溶媒試験法」が一般試験法に新たに追加されました。この試験法は、患者の安全のために「医薬品の残留溶媒ガイドライン」により勧告された残留溶媒の許容量を遵守するため、ガスクロマトグ
ラフ法により薬品中に残留する有機溶媒の量を測定する方法です。
この度当社では、ガスクロマトグラフ法で他の有機溶媒をほとんど認めない、高純度溶媒を商品化しました。「残留溶媒試験」に安心してお使い頂けます。
● 当社従来品との比較 cGC チャート
ジメチルスルホキシド《従来品》《残留溶媒試験用》

N,N- ジメチルホルムアミド《従来品》《残留溶媒試験用》

コード No.
045-27595
043-27591
048-27585

品

名

規

格

容

ジメチルスルホキシド

残留溶媒試験用N,N- ジメチルホルムアミド

残留溶媒試験用量

希望納入価格（円）9,000
36,000
8,000

500mL
3L
500mL

〔関連商品〕
コード No.
308-04771

品

名

住友精密 VOC 測定用水容量

希望納入価格（円）9,700300mL × 6

〔前頁より〕
コード No.
233-01611
230-01621

品 名ワコーシル DNPH 溶離液 A
ワコーシル DNPH 溶離液 B

規

格

容

量

希望納入価格（円）
5,000
1,200

HPLC 用HPLC 用1L
1L

規 格
アルデヒド分析用

200mL

希望納入価格（円）4,000

排ガス分析（HPLC）用

2mL × 5

10,500大気汚染物質測定（HPLC）用

2mL × 512,000

悪臭物質試験（HPLC）用

2mL × 5

15,700〔関連商品〕
コード No.
011-17741
062-03481
012-17391

品 名
アセトニトリル
ホルムアルデヒド-2,4- ジニトロフェニルヒドラゾン標準液（40[g HCHO/ml in acetonitrile）

2 種アルデヒド DNPH 混合標準液（ホルムアルデヒド-DNPH, アセトアルデヒド-DNPH, 各アルデヒドとして 0.1[g/[l in acetonitrile）

容

量

6 種アルデヒド化合物混合標準液
012-15451（アセトアルデヒド-DNPH, プロピオンアルデヒド-DNPH, ホルムアル
デヒド-DNPH, イソブチルアルデヒド-DNPH,n- 吉草酸アルデヒドDNPH, イソ吉草酸アルデヒド-DNPH, 各アルデヒドとして 0.1[g/[lin acetonitrile）

和光純薬時報 Vol.68, No.3（2000）

35

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
八
巻

細胞レベルでのアポトーシス検出、定量キット
Annexin V-Fluorescein Staining Kit
アポトーシス研究用

第三号

正常では細胞膜の内側に存在するホスファチジルセ 〔使用例〕
リン（PS）は、アポトーシスの初期段階で膜側に反転することが知られています。そのため Ca2+ の存在下で PSと特異的に結合するアネキシン V により早期のアポトーシスを確認できます。本品は蛍光色素を標識した
アネキシンⅤにより反転した PS を検出すると共に、核DNA をヨウ化プロピジウムで二重染色することにより初期段階のアポトーシスとネクローシスを容易に区別するキットです。
〔キット内容〕
Annexin V-Fluorescein
Propidium Iodide
Binding Buffer

297-55901

110FL
150FL
50mL

50 回用

カンプトテシン処理でアポトーシス誘導したＵ９３７細胞の FACS 分析（上段：カンプトテシン未処理
下段：カンプトテシン４時間処理）40,000 円〔関連商品〕
コード No.
013-16841
160-16723
168-16724
164-16721

品
Annexin V-FITC

名

規 格
生化学用

容

生化学用

Propidium Iodide

量

希望納入価格（円）45,0003,000
4,900
13,600

100Fg
10mg
25mg
100mg

Anti Rat iNOS, Monoclonal Antibody
免疫化学用
iNOS（誘導型 NO 合成酵素）は、サ
イトカインや細菌の LPS 等の刺激で発現誘導され、NO を発生させます。大量に産生した NO は細菌の感染防御に

実用希釈倍数：ウエスタンブロット

1:1,000 〜 1:3,000
免疫蛍光染色 未希釈

働くのみならず、炎症、自己免疫疾患などを誘起させると考えられています。
免 疫 原：ラット NOS
形
状：凍結乾燥品（水 1mL に溶解させた場合、2Fg/mL）
精 製 法：プロテイン G 精製
クローン No.：A2
サ ブ ク ラ ス：IgG1
特 異 性：ラット、マウス iNOS と
反応する。

kDa
175
iNOS

83

62

CBB

ウェスタン

活性化マウス
マクロファー
ジ可溶性タン
パク質に対するウエスタン
ブロット

活性化マクロファージ（RAW246.7）の免疫染色012-18631

1mL 用

30,000 円

Anti Rat iNOS Peptide, Rabbit

Anti Rat nNOS, Monoclonal Antibody

免疫化学用

免疫化学用

特異性：ラット、マウス iNOS を認識する
用 途：ウエスタンブロット 1：800（2.5Fg/mL）
015-18621
500FL
20,000 円

特異性：ラット nNOS を認識する
用 途：ウエスタンブロット（0.4Fg/mL）、免疫染色（4Fg/mL）
019-18641
1mL 用
30,000 円

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

記載価格は希望納入価格であり消費税等は含まれておりません。

発行所

36

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL. 06-6203-3741（代）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

2000 年 7 月 15 日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷株式会社