ISSN 1347-4804

April 2004
Vol.72 No.2

〔総 説〕
「分子内に二つの認識点を有する新規不斉相間
柴 正勝、大嶋孝志 ……… 2
移動触媒」「DNA塩基配列を正確に認識するピロールｰイミダゾール
ポリアミド」
杉山 弘 ……… 5「新規トリアジン型脱水縮合剤の合成と用途開発」
国嶋崇隆 ……… 8〈テクニカルレポート〉「ゲル電気泳動を出発点とするプロテオーム解析で成功するために」
田尻道子、和田芳直 ………12「LC-MS法による農薬の一斉分析」 吉田貴三子 ………14〈Talking of LAL〉
「第55話 エンドトキシンと添加剤」

土谷正和 ………15〔化学大家〕「ロバート･ボイル」

島尾永康 ………24〔製品紹介〕
有機合成
新規不斉相間移動触媒
ピロール、
イミダゾール
新規トリアジン系縮合剤

4
7
11

環境・分析
アフラトキシン分析関連製品
ひ素測定試薬12種揮発性有機化合物混合標準液

16
28
28

生化学
高純度マトリックス
プレキャストゲル ｢スーパーセップTM」
クイックCBBプラス

17
18
19

細胞生物
ユビキチン関連試薬
アルドステロン

2020㈱ホクドー ネイティブオステオポンチン
ELISAキット
蛍光試薬

21
22

遺伝子
Evrogen社 新規DNAヌクレアーゼ

23〔お知らせ〕「環境分析用試薬総合カタログ2004」発行のご案内 ……28

1

R

esearch
分子内に二つの認識点を有する新規不斉相間移動触媒
東京大学大学院薬学系研究科

不斉アルキル化反応といった、一般に金属

チが事実上不可能であるため、有機分子触媒が苦手とする反応を相間移動触媒が自身に高い多様性が要求される。そこで我々

実に効果的に促進させるからである。そこは、種々の反応系に柔軟に対応可 能な多医薬品、農薬、機能性材料などの機能性で本稿では、最近我々が行った分子内に二様性を有し、強塩基性条件下でも安定な不分子を大量・容易に、しかも必要なエナンチ

つの認識点を有する新規不斉相間移動触

斉相間移動触媒を新規にデザインすること

1 はじめに

5）

オマーのみを実用レベルで供給することは、媒（ TaDiAS ）の創製 とその応用

21世紀の有機化学における最も重要な研いて概要する。

6ｰ8 ）につとした。まず 、分子内の適当な位置に二つの認識点（この場合四級アンモニウム塩 ）究課題の一つである。光学活性体として目的物を得る方法として、
アトムエコノミー、環を配置し、それらが協同的に不斉空間内に2 新規不斉相間移動触媒の設計

境調和性、反応コストなどの観点から、極微アニオンを位置固定することを基本コンセプ
トとし、次にこれまでの全合成研究で培った少量の不斉源を用いて大量の光学活性化

相間移動触媒反応は、一般に含水溶媒中、経験から、安価に、大量に、そして様々な誘合物を合成し得る触媒的不斉合成が最も解 放 系で反 応を行うことができるため、特導体を簡単に合成できる触媒として、図1に理想的である。しかしながら、プロセス化学殊な反 応 装 置や反 応 操 作を必 要とせ ず 、

示す酒石酸由来の触媒TaDiAS（Tartrate-

のみならず学術領域の研究ですら触媒的

反 応コストの面からも工 業プロセスに適し

derived DiAmmonium Salt）（1）を設

不斉反応が用いられている例は少なく、そた反 応であり、
また最 近 、地 球 環 境に優し

計した5）。本触媒はケタール部位（R 1, R 2 ）、のほとんどが不斉水素化か不斉酸化反応

い触 媒 反 応としても注目を集めている。そ芳香環部位（Ar）、
カウンターアニオン部位（X）を用いたものである。このような状況の中我々の不斉反応への展開はシンコナアルカロイの３カ所を、
３次元的に最適化することが可の研究室では、実用的な触媒的不斉炭素

ド由来の不斉相間移動触媒を中心に行われ、能であり、またその合成は、安価なキラル源−炭素結合形成反応の開発を目指し研究

また最近になって、人工的にデザインされたである酒石酸エステルから５工程で、安価を行い、これまでに、希土類あるいは13属金骨格を有する触媒もいくつか報告されるよな試薬と簡便な反応操作のみで行うことが属などを含有する多機能不斉金属触媒のうになった 4 ）。これらの触媒の内いくつかはできる（式1）5, 6）。

開 発に成 功し、様々な高 選 択 的な触 媒 的

高い不斉誘起を発現するものの、触媒の不不斉反応を実現するとともに、天然物の不安定さ、触媒合成の困難さとコストの高さ、斉全合成や工業スケールでの反応への展それに伴う触 媒の多 様 性の低さなどが問開を行ってきた 1 ｰ 3 ）。我々は触 媒 的 不 斉 反題であった。我々がこれまで検討を行ってき

様々にケタール部位（ R 1 , R 2 ）、 芳香環

応の更なる展開の一つとして、金属触媒のた金属触媒の場合、中心金属を変えること

部位（Ar）を変化させた触媒ライブラリーを

3 光学活性α-アミノ酸の合成

機能を有機分子で実現できないであろうか、で微妙な触媒のチューニングが可能である。

構築し、氷冷下50%KOH水溶液ｰトルエン

そして有機分子触媒の特徴を生かすことで、特に希土類金属とアルカリ金属とからなる

ｰ塩化メチレンという条件で不斉アルキル化

金属触媒では実現困難な反応を効果的に複合金属触媒の場合、市販の16種類の希反応における触媒のスクリーニングを行っ促進させることができるのではないかと考え、土類元素とLiからKまでの3種のアルカリ金たところ、 ケタール部位が非対称な、 C 2対

新規不斉有機分子触媒の開発研究をスター

属の組み合わせにより、不斉配位子を変え称性を持たない触媒1aが最も良い結果をトさせた。これまでに様々な不斉有機分子

ることなく触媒の不斉空間の大きさ、Lewis

与えることが分かった。この反応条件では触媒反応が開発されているが、我々はその酸性、Brønsted塩基性を微妙に調整する

その不斉収率は70%ee程度にとどまるものの、中で不斉相間移動触媒反応に特に興味をことが可能であり、このことが本触媒系の大すべての反応基質を試験管に入れて氷冷持った 4 ）。それはK O Hなどの強 塩 基 存 在

きな成功の理由の一つであると考えられる1ｰ3）。

下数時間撹拌させるだけで反応が完結す

下でのエノラートのアルキルハライドによる一方 、有機分子触媒はこのようなアプロー

るため、触媒ライブラリーのスクリーニングに

図1.

2

柴 T正勝、大嶋孝志

式1.

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

式2.

図2.
式3.
は非常に適している。最終的に最適化した

反応性の低さが問題であったα,αｰジアルキ

条件で基質一般性を調べたところ、様々なルアミノ酸の不斉合成も可能となった6）。

求電子剤との反応が90%eeを超える選択性で進行することが分かった（式2）5, 6）。同

4 触媒の回収再利用様にして、不斉Michael反応の検討を行っ

5 Aeruginosin 298-A および誘導体の不斉合成への応用高い基質一般性を有する実用的な光学活性αｰアミノ酸合成法の開発は、天然物おたところ、
この場合は C 2 対称性を有する触

次項で述べる全合成研究のために、大よびその誘導体の不斉合成への適応も可媒1cが最も良い結果を与えることが分かっ

量スケールで触媒1aを用いる不斉アルキル

能とした（ 図2 ）6 ）。Aeruginosin類は村上た。しかしながら、触媒活性が十分満足の化反応を行っていた時、反応後処理後（ 水らによってアオコから単離された、二環性アいくものではなかったので、更なる検討を行っとエーテルの添加 ）水層と有機層との間にミノ酸部位（Choi）と3-（4-hydroxyphenyl）

た結果、劇的なカウンターアニオン効果を見白色固体が析出することが分かった。得ら

lactic acid部位（Hpla）を特徴とする天然

いだすことができた6 ）。カウンターアニオンをれた白色固体を調べてみると触媒1aそのペプチドである9 ）。Aeruginosin類の中でからハードなアニオンであるBF4（1d）
I（1c）

−

ものであることが分かった。そこで、触媒のAeruginosin 298-Aはセリンプロテアーゼに変更すると、触媒量を1/10に、用いる塩回収方法を種々検討したところ、反応の後処活 性を有 することが報 告されており、医 薬

基の量を1/100にしても依然4倍以上の速理後さらに撹拌を続けると、析出した白色品としての応用も期待される化合物である。

さで反応は進行し、不斉収率も向上するこ

固体は反応容器のガラス壁面に付着し、こ

これまでにBonjochら10）、Wipfら11）によってとが分かった。その結果、
まだ満足のいく結

れにより生成物を含む有機層と水層を分液

光学活性な天然アミノ酸を出発原料とする果 で は な い が 、最 適 条 件 下 で は 最 高

ロートに移し替えるだけで触媒を容易に分全合成が達成されているが、我々は構造活86%eeの選択性でMichael付加体4を得る

離することができるようになった。ガラス壁性相関研究を視野に入れ 、天然物のみなことができるようになった（ 式3 ）。この様な面に付着した触媒を酢酸エチルで一度溶らずその誘導体合成も容易に可能とする、劇的なカウンターアニオンの効果はこれまで解し、ろ紙濾過によって無機塩を分離する

一般性の高い柔軟な合成ルートの確立を報告されておらず、
また、同じ触媒を用いたと90%程度の収率でほぼ純粋な触媒1aを目的とし検討を行った。D-Hpla部位は先に我々

場 合 にも不 斉 ア ル キ ル 化 反 応 と不 斉

回収することができた 6 ）。また、回収した触が報告していた基質一般性の高いα,β-不−Michael反応によって得られてくる化合物

媒を用いて再度不斉アルキル化反応を行っ

飽 和イミダゾライドの触 媒 的 不 斉エポキシの絶対配置が異なるという現象も初めてのたところ、触媒活性、選択性とも全く同じ結化反応で、残り３つのアミノ酸部位（ D -Leu,

報告であり、分子内に二つのカチオニックな果を与えた。このことは本触媒が強塩基性

L -Choi, L -Argol）
は不斉相間移動触媒反認識点を有する本相間移動触媒に特徴的条件下でも非常に安定であることを示すと応で合成することとした。最も合成の困難な反応性であると考えられる。このカウンター

ともに、更なる検討は必要であるが、特別なであったL -Choi部位に関しては、求電子剤

アニオン効果は、大過剰の強塩基（CsOH）

操作なしで簡単に触媒を回収再利用できとして5を用い、得られた化合物をメタノール存在下での不斉アルキル化反応においてる工業プロセスの可能性を示すものである。

中4 N 塩酸と処理することで二環式化合物も観測され、触媒1bを用いることでこれまでを効率よく合成することができた。また誘導

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）3

体に関しては、我々の合成法はエナンチオマー
を含めて多種多様な天然および非天然光学活性アミノ酸を容易に合成できることから、
その組み合わせは無 限であるが 、今 回はAeruginosinの構造的な特徴となっている
HplaおよびChoi部位を固定し、他の２つのアミノ酸部位を変換することとした。触媒的式4.
〔参考文献〕

不斉エポキシ化反応および不斉相間移動
触媒反応で合成した各部位から、
まず左ジない 1 2 ）。種々検 討したところ、基 質としてペプチド
（Hpla-Leu部位）と右ジペプチド（Choi-

Bocで保護されたイミン6を用い、触媒としてArgol部位 ）を合成し、最後に両フラグメン

1eを用いることで、依然エナンチオ選択性

トをHATUを用いてカップリング反応を行い、は十分満足のいくレベルには達していない

最終的にAeruginosin 298-Aおよび9つ

ものの、高い syn 選択性で目的とする光学の誘導体の合成を達成した6, 7）。北海道大活性α,β-ジアミノ酸7の保護体を得ることが学の沖野助教授にご協力いただき、これらできた。本反応系はJøgensenらの方法にの化合物のトリプシンに対する阻害活性評

比べ、芳香族イミンを用いた場合のジアステ価を行った結果、Argol部位の構造だけで

レオ選 択 性が高い点 、二つの保 護 基を温なく立体配座が活性の発現に非常に重要和な条件で選択的に脱保護できる点で優であることが分かった。今後 、計算化学的れている（JøgensenらはTsで保護されたイ

手法も取り入れ、更なる誘導体の論理的なミンを基質として用いている）。

デザインと合成を通して構造活性相関研究を行い、メディシナルケミストリーに貢献した

7 おわりにいと考えている。
以上 、最近我々が行った新規不斉相間

6 光学活性α,β-ジアミノ酸の合成

移動触媒（ TaDiAS ）の創製とその応用に

１）Shibasaki, M., Sasai, H., Arai, T.: Angew. Chem.,
Int. Ed. Engl., 36, 1237（ 1997）.
２）Shibasaki, M., Iida, T., Yamada, Y. M. A.: 有機合成協会誌, 56, 344（ 1998）.
３）Shibasaki, M., Yoshikawa, N.: Chem. Rev., 102,2187（ 2002）.
４）Maruoka, K., Ooi, T.: Chem. Rev., 103, 3013（ 2003）.
５）Shibuguchi, T., Fukuta, Y., Akachi, Y., Sekine,A., Ohshima, T., Shibasaki, M.: Tetrahedron Lett., 43,9539（ 2002）.
６）Ohshima, T., Gnanadesikan, V., Shibuguchi, T.,
Fukuta, Y., Nemoto, T., Shibasaki, M.: J. Am.
Chem. Soc., 125, 11206（ 2003）.
７）Fukuta, Y., Ohshima, T., Gnanadesikan, V.,
Shibuguchi, T., Nemoto, T., Kisugi, T., Okino, T.,
Shibasaki, M.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, in press.
８）Okada, A., Shibuguchi, T., Ohshima, T., Shibasaki,
M. submitted.
９）Murakami, M., Okita, Y., Matsuda, H., Okino, T.,
Yamaguchi, K.: Tetrahedron Lett., 35, 3129（ 1994）.
１０）Valls, N., López-Canet, M., Vallribera, M.,
Bonjoch, J.: J. Am. Chem. Soc., 122, 11248（2000）.
１１）Wipf, P., Mthot, J.-L.: Org. Lett., 2, 4213（ 2000）.
１２）Bernardi, L., Gothelf, A. S., Hazell, R. G.,
Jøgensen, K. A.: J. Org. Chem., 68, 2583（ 2003）.

ついて紹介した。本研究は相間移動触媒

本触媒はその多様性を生かすことで他に関して何の経験的蓄積がない状態からの触媒的不斉反応にも柔軟に対応するこ

試行錯誤を繰り返しながら行ったものであり、とができる。ここでは最近我々が行ったイミ

苦労をともにした学生諸氏に深く感謝したい。

相間移動触媒としてはアミンやクラウンンに対する不斉Mannich型反応による光また、本研究はまだ検討の初期段階であり、エーテルも知られているが、長鎖アルキ

学活性α,β-ジアミノ酸の合成を紹介する8）。

触 媒 反 応の機 構 解 明や他の反 応 系 へのル基を有する四級オニウム塩（特にアン

光 学 活 性α,β-ジアミノ酸の潜 在 需 要は非適応等を現在積極的に検討している。今後、常に 高 いもの の 、アキラルな原 料 から直我々の最終目標である環境調和性の高いしており、水相に存在するイオンをイオ

接 的 、触 媒 的に合 成 する方 法はごく最 近工業プロセスの実現 、新規多機能不斉有ン対の形で有機相に移動させ、有機相にJøgensenらによって報告されたキラル銅触機分子触媒の創製などを通して社会に貢存在する反応剤との反応を加速化する働媒による不斉Mannich型反応以外に例が献していきたいと考えている。

相間移動触媒

モニウム塩）が広く用いられている。これらは親水性と疎水性の両方の性質を有きを持つ。

P roducts
金属触媒の機能を有機分子で実現！ 新規不斉相間移動触媒
コードNo.

4

品

名

規 格

容 量

希望納入価格（円）201-16141

TaDiAS-[(4R,5R)-2-t-butyl-2-methyl-N,N,N',N'-tetrakis(4-methoxybenzyl)]Diiodide

有機合成用

100mg

8,500

208-16151

TaDiAS-[(4S,5S)-2-t-butyl-2-methyl-N,N,N',N'-tetrakis(4-methoxybenzyl)]Diiodide

有機合成用

100mg

8,500

205-16161

TaDiAS-[(4R,5R)-2,2-dipropyl-N,N,N',N'-tetrakis(4-methylbenzyl)]Bis(tetrafluoroborate)

有機合成用

100mg

8,500

202-16171

TaDiAS-[(4S,5S)-2,2-dipropyl-N,N,N',N'-tetrakis(4-methylbenzyl)]Bis(tetrafluoroborate)

有機合成用

100mg

8,500

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

R

esearch
DNA塩基配列を正確に認識するピロール-イミダゾールポリアミド

1 はじめに京都大学大学院

理学研究科

化学専攻

あり、
遺伝子発現の制御などの応用にはあまり利用されていない 4 ）。またPy/Imペアと塩基対との間には微妙にピッチのずれがある。

3

生物化学分科杉山

弘

Py-Imポリアミドによる特定遺伝子の発現制御

ゲノムプロジェクトの完了と分子生物学のそのため長い塩基配列をポリアミドで読むにDervanとGottesfeldらはZnフィンガータン

急速な進歩によって、ガンや遺伝病を含む多はこのひずみを解消するために３、４塩基対パクであるTFIIIAの認識配列中の４番目のくの疾病がDNA配列レベルで理解されるよ

ごとにA・T塩基対に対して柔軟なβｰアラニ

フィンガーの結合配列である5'-AGTACT-3'

うになった。これらの知見を生かした診断、
治

ン／βｰアラニンのペアを導入することが必要

を標 的とするヘアピンポリアミドを設 計し、療、予防が期待され、研究が急速に進んでである。これを利用したホモダイマーにより最T F I I I Aの 結 合を阻 害 することにより5 S -いる。最近、N-メチルピロール（Py）とN-メチ

長16塩基対を認識した例もある 。また、Py-rRNA遺伝子の転写の選択的な抑制に成ルイミダゾール（Im）
を基本ユニットとするPy-

Imアミドをγｰアミノ酪酸（γｰturn）
で連結する

功した9）。DervanらはさらにHIV-1の複製のImポリアミドが任意のDNAの塩基配列を正とヘアピン型に分子がおれまがり、
γｰturn部阻害を目的として、転写因子であるTATA-

確に認識することが見いだされた。これらの分には強いA・T塩基対選択性がある。また

box結合蛋白（TBP）、
Lymphoid-enhancer

Py-Imポリアミドは転写因子などに匹敵する

これによって、逆平行に配向したポリアミドのPy、結合因子（LEF-1）、Ets-1に拮抗して結合

配列認識能と結合力をもち、細胞膜や核膜Imのユニットを組み合わせることにより特定

するPy-Imポリアミドを合成し、HIV-1の転写の透過性にもすぐれている。特定遺伝子のの塩基配列に選択的に結合する分子が設と複製を押さえることにも成功している10）。図

発現を選択的にコントロールできることが様々

6）計できるようになった 。このようなヘアピン型

2にまとめたように、これまでに様々な遺伝子な実験で示されているので、新しいアンチジー

ポリアミドは１分子でターゲットの塩基配列にの発現のコントロールが試みられている2）。さン法として応用が期待されている。

強く結合をするので、特定の遺伝子の発現らにDNA結合部分をPy-Imポリアミドに置き25）の制御には、主にこのヘアピン型ポリアミドが換えたアクチベーターも設計され、転写の活

Py-Imポリアミドによる用いられている。Py-Imポリアミドの化学合成性化も可能であることも示されている。これら

塩基配列認識Fmoc法8）による固相合についてはBoc法7）、の結果は、Py-Imポリアミドにより遺伝子の成について報告があり、市販の自動合成機

発現がコントロールできることを示している。

を用いて合成が可能である。

しかし、
このアプローチには問題点もある。そ図１に示すようにN末端→C末端が逆平行に配向したPy-ImポリアミドはDNAのマイナーれは多くの遺伝子の発現の調節が共通のグルーブに結合し、Py-Imの並び方（ペアリン

転写因子を利用しているので、特定遺伝子

グコード）
によって２本鎖DNAの塩基配列を認識できる。即ち、G・C塩基対を認識するためにはIm/Pyペア、C・G塩基対にはPy/Im
ペア、A・T塩基対とT・A塩基対にはPy/Py
ペアを並べればよい１ｰ3）。A・T塩基対のAとTを読み分けるために、
ヒドロキシピロール（Hp）も開発されたが、化合物の安定性に問題が

図1. DNAマイナーグルーブから見たPy-lmポリアミドによるDNA塩基配列の認識の模式図とペアリングコード表

和光純薬時報図2. Py-lmポリアミドによる遺伝子発現制御の例

Vol.72, No.2（2004）5に対する正確なターゲティングがむずかしい

かり、反応の効率も低かった。分子モデリング

果、
コード領域におけるテンプレートのDNA点である。Py-Imポリアミドの設計の際にユニーの結果、反応するシクロプロパン部分の位置

鎖のアルキル化が転写を阻害し、２の特異的クな周辺配列を含ませるのもその理由である。

が反応するアデニンやグアニンのN3位からアルキル化による短いmRNAが生成した。

遠すぎることがこれらの原因であることが示

対照的に、
非テンプレート側では４か所のアル4 アルキル化Py-Imポリアミド

唆された。そこで、1の末端Pyをビニルを変えキル化がおこるがRNAポリメラーゼの阻害

ガンはDNAの変異が原因であるので、変ることにより距離を修正し、さらにアルキル化は起こらない。さらに、
２を加水分解してアル部分を安定化させた分子２を合成した。そのキル化能を失活させた４を用いて、転写阻害

異した塩基配列を分子標的とすることができ結果、反応性が劇的に向上し、反応は５分でが全く起こらないので、転写の阻害にはアル

れば、様々なガンに対応した、抗ガン剤が理もほぼ完了するアルキル化分子が完成した14）。

キル化が必須であることが示された。

論的にはできる。
しかし変異はコード領域に興味深い点は１に新しいアルキル化部を直

現在、アルキル化ポリアミドを用いて細胞内みられるので、
コード領域をターゲットにできる

接結合させた３では全く反応が起こらなかっでの選択的発現阻害の実験を行なっている。

ポリアミドの開発が必要である。そこで我々はた点である。この結果はアルキル化部の反ホタルおよび海椎茸ルシフェラーゼをコードす

Py-Imポリアミドにアルキル化剤を結合させて応性よりも反応する部位の位置が重要であるベクターを用い、それぞれを選択的にアル配列特異性をもつアルキル化剤の開発を試ることを示している。

キル化する2種類のアルキル化ポリアミドAとみた。天然の抗生物質であるデュオカルマイ

Bを用意した。
２種のベクターをコトランスフェ

シンAとディスタマイシンAが共存下、DNAのクトしたHeLa細胞に対して100nMのAまたマイナーグルーブ内でヘテロダイマーを形成し、アルキル化Py-Imポリアミドに5 よる特定遺伝子の発現の抑制

配列特異的にアルキル化する現象を見い出はBを投与した結果、ホタルおよび海椎茸ル
シフェラーゼの発現が、選択的に抑制される

このマイナー
していたのでこの系を利用した11）。

次にアルキル化ポリアミドが、コード領域でことが明らかとなった。この結果は、DNAのグルーブ内でのダイマー形成による配列認識

アルキル化することによって実際にRNAポリ

アルキル化により特定の遺伝子の発現を翻は先のPy-Imポリアミドと非常に類似している。

メラーゼによる転写を阻害するかどうかを調訳レベルでも阻害できることを示している。ア

実際、デュオカルマイシンAのPyをImに置換

べた。GFP遺伝子をコードするDNAを２により、ルキル化能のあるポリアミ
ドによる発現制御は、することにより反応する配列が変わる12）。そ

アルキル化し、それを鋳型として用いて転写

反応性のないポリアミドと比べて非常に低濃

こで、
我々は、
デュオカルマイシンAのアルキルにより生成するmRNAを観察した15）。その結度で起こることが示された。

化部と配列認識ヘアピン型ポリアミドを連結した１を合成し、DNAアルキル化能を評価した。
その結果、DNA中のターゲット配列を認識し、しかし、特異的なアルキル化を観察できた13）。
１によるアルキル化反応の完結には時間がか

図3. ポリアミド1ー3の構造とDNAとの複合体モデル

6

和光純薬時報図4. ポリアミド2による転写阻害と短いmRNAの生成

Vol.72, No.2（2004）

アルキル化ポリアミドの6
抗ガン活性〔参考文献〕

7 おわりに

１）Dervan, P.B., Edelson, B.S.: Curr. Opin. Stru.
２）Murty, M.S.R.C., Sugiyama, H.: Biol. Pharm.
Bull., in press.
３）飯田博一、杉山 弘：有合化（1999）.

Biol., 13, 284（ 2003）.

アルキル化ポリアミドはヒト培養ガン細胞に

Py-Imポリアミドはディスタマイシンやネトロ

対して比 較 的 強い 活 性（ 3 9 種 類 の 平 均

プシンなどの抗生物質によるDNAの塩基配をもち、配列特異性と相logIC 50は−６〜−９）

列の読み取り機構を詳しく検討することによっ関した興味深い抗ガン活性を示す。例えばて生まれた画期的な人工分子である。転写

ポリアミ
ド２と５は、構造はほとんど同じであるが、因子などのDNA結合蛋白による認識の機

１箇所でNとCHが異なっている。図５に示す

構と比べ単純であり、分子の大きさという点

ように、両者は非常に類似した構造でありなでも非常に経済的なシステムである。特定のがら、異なる塩基配列認識能をもち、ヒト培養遺伝子の発現のコントロールは遺伝子の機ガン細胞に対しての活性を示すフィンガープ

能解析のツールとして利用可能である。また

リントパターンもかなり異なり、低い相関係数

Py-Imポリアミドを蛍光色素でラベルすること

16）をもつことが明らかになった 。アルキル化ヘによって配列選択的な標識試薬としての利

アピンポリアミドのアルキル化部分は、天然物用も検討されている18ｰ19）。酵素により加水分のデュオカルマイシンから合成しており、動物解を受けない性質を生かし、経口投与可能

実験に必要な量の供給は非常に困難である。

な薬剤となる可能性もある。前半で紹介した

しかし、
ナフタレンジオールから合成される誘

DNAに可逆的に結合する分子は、新しいタ導体に置き換えることによって、この問題は克イプの抗生物質や生活習慣病などの治療薬

服できることが最近明らかになった。さらに、として、後半で示したアルキル化ポリアミドはテー３９種ガン細胞のスクリーニングパネルの結果

ラーメード抗ガン剤としての可能性を今後追でも、さらに強い活性が得られている。

求したいと考えている。

４）Marques, M.A., Doss, R.M., Urbach, A.R., Dervan,
P.B.: Helv. Chem. Acta, 85, 4485（ 2002）.
５）Trauger, J.W., Baird, E.E., Dervan, P.B.: J. Am.
Chem. Soc., 120, 3534（ 1998）.
６）White, S., Szewczyk, J.W., Turner, J.M., Baird, E.E.,
Dervan, P.B.: Nature（London）,391, 468（1998）.
７）Baird, E.E., Dervan, P.B.: J. Am. Chem. Soc.,
118, 6141（ 1996）.
８）Wurtz, N.R., Turner, J.M., Baird, E.E., Dervan,
P.B.: Org. Lett., 3,1201（ 2001）.
９）Gottesfeld, J.M., Neely, L., Trauger, J.W., Baird,
E.E., Dervan, P.B.: Nature（London）,387, 202（1997）.
１０）Dickenson, L.A., Gulizia, R.J., Trauger, J.W., Baird,
E.E., Mosier, D.E., Gottesfeld, J.M., Dervan, P.B.:

Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 95, 12890-12895（1998）.
１１）Sugiyama, H., Lian, C., Isomura, M., Saito, I.,
Wang, A.H.-J.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA.,
93., 14405（ 1996）.
１２）Fujiwara, T., Tao, Z.-F., Ozeki, Y., Saito, I., Wang,
A.H.-J., Lee, M., Sugiyama, H.: J. Am. Chem. Soc.,
121, 7706（ 1999）.
１３）Tao, Z.-F., Fujiwara, T., Saito, I., Sugiyama, H.: J.

Am. Chem. Soc., 121., 4961（1999）.
１４）Bando, T., Narita, A., Saito, I., Sugiyama, H.:
Chem. Eur. J., 8., 4781（ 2002）.
１５）Oyoshi, T., Kawakami, W., Narita, A., Bando, T.,
Sugiyama, H.: J. Am. Chem. Soc., 125, 4752（2003）.
１６）Bando, T., Narita, A., Iwai, A., Kihara, K., Sugiyama,
H.: J. Am. Chem. Soc., 126, 3406（2004）.
１７）Shinohara, K., Narita, A., Oyoshi, T., Bando, T.,
Teraoka, H., Sugiyama, H.: J. Am. Chem. Soc., inpress.
１８）Rucker, V.C., Foister, S., Melander, C., Dervan,
P.B.: J. Am. Chem. Soc., 125, 1195（ 2003）.
１９）Maeshima, K., Janssen, S., Laemmli, U.K.: EMBO
J., 20, 3218（ 2001）.

図5. ヘアピンポリアミドのヒトがん細胞パネルによる評価（両者の相関係数＝0.65）

P roducts
コードNo.
320-64531
326-64533
327-64541
323-64543
324-64551
320-64553
321-64561
327-64563

株式会社ワコ−ケミカル品

名4-（FMOC-amino）-1-methyl-1H-pyrrole-2-carboxylic Acid
4-（FMOC-amino）-1-methyl-1H-imidazole-2-carboxylic Acid
1-Methyl-4-nitro-2-（trichloroacethyl）-1H-pyrrole
1-Methyl-4-nitro-2-（trichloroacethyl）-1H-imidazole

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

容 量
1g
5g
1g
5g
1g
5g
1g
5g

希望納入価格（円）9,000
32,0009,000
32,0006,000
18,0006,000
18,0007

Research
新規トリアジン型脱水縮合剤の合成と用途開発
神戸学院大学薬学部

国嶋崇隆

1 はじめに（１）酸アミドやエステルは医薬品、化成品、高分子から生体分子にいたるまで広く存在す
る重要な構造単位であり、その最も一般的で直接的な構築法は、カルボン酸誘導体とアミンやアルコールを原料にする方法である。

（２）

それ故、いわゆる脱水縮合剤を用いるもの
から、酸クロリドや酸無水物を始めとする活性化したカルボン酸誘導体を利用する方法（ 4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl ）- 4-とから、
アルコール中でのカルボン酸とアミン

発されてきた。従って、新しい手法として評

methylmorpholinium chloride（ DMT-MM）との脱水縮合反応を検討した。多くの脱水価を受けるためには、
化学量論的条件の下、が沈殿として定量的に生成することを見出

縮合剤がプロトン性溶媒と反応することや、に至るまで、多岐に亘る試薬や反応系が開

2）

温和、高収率に進行することは今や最低限した （式1）。脂溶性で飛散性の固体であっアルコール中での脱 水 縮 合 反 応はエステの条件であり、広く利用されるためにはこれたCDMTを不揮発性の塩にすることによっ

ル生成を伴うこと等の理由から、酸アミド合

らに加えて、安定性、安全性、簡便性、およて、水溶性を獲得させるとともに、刺激性を成の溶媒としてアルコールを使用することは、

び経済性など実用面で優れていることが必も抑えることができた。

有機化学者にとって常識とは言い難いこと

須であると思われる。さらに来るべき持続可

奇しくも同 時 期にKaminskiらがDMT-

であった。
しかし、
低分子アルコール（MeOH,

能社会にマッチした次世代の試薬としては、MMの構 造とその反 応 性に関 する論 文を

EtOH, 2-PrOH）は、水と比べて多様な有機

リサイクルや環境調和が一層求められると報 告したが 3 ）、結 論から述 べると、彼らは物を可溶化すること、
ロータリーエバポレー

考えられる。一方で、合成化学の視点からは、

DMT-MMの分解物である脱メチル化体をタで除去が容易であること、安価であること複雑化した化学物質の合成に役立つ新機

間違えて同定したため、縮合剤としての収から、これらの溶媒を利用できればDMFや能 、新 用途がなお要 求されており、優れた

率も悪く、
DMT-MMが本来有するポテンシャ

DMSOのような高い沸点を有する非プロト

脱水縮合反応の開発は古いテーマであり

ルを見 出 すことができなかった 。我々は 、ン性の極性溶媒より、合成上の有用性が高ながら、依然として高いニーズを有している。

DMT-MMの塩素イオンがこの脱メチル化

いと考えられた。

このような背景の下に我々は、新しい脱反 応を起こすことを初めて見出し（ 式 2 ）、

そこで、
フェニルプロピオン酸1aとフェネ

水縮合剤の開発を目指して研究を行ってき

DMT-MMならびにその分解物の構造を正チルアミン2aのMeOH溶液にDMT-MMをた。ここではこれまでの成果について述べ

しく同定するとともに、それらの化学的性質

加え室温で３時間撹拌したところ、酸アミド

１）を明らかにする中で 、以下に述べるような98％に対して、エステル１％と非常に高い用途開発へと展開することに成功した。

収率と選択性で酸アミドが得られた（表1）4）。

3 酸アミド合成（EDC）を用いて同一条件で反応を行ったが、たい。

比較のためにDCCや水溶性カルボジイミド

2 新規縮合剤の開発

収率、選択性ともにDMT-MMには及ばなかっ新規縮合剤開発に当たって、我々は2-ク
ロロ-4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン（CDMT）

我々は、DMT-MMがMeOHや水の中でた。この反応は、式３に示すような二段階機に着目した 1 ）。良好な反応性を持ちながら、予想外の安定性を有することを見出したこ

構で進行していると考えられる。すなわち、刺激性が強く、
ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（DCC）などの既存の汎用試薬と比べて、取り立てて優位な特徴が知られておらず、ほとんど利用されていなかった。しかしながら、原料の塩化シアヌルが安価なことから潜表1. メタノール中での酸アミド合成
Ph(CH2)2COOH + Ph(CH2)2NH2
1a

在的な経済性に優れており、刺激性の問題

2aCondensing Agent
MeOH, rt, 3h

Ph(CH2)2CONH(CH2)2Ph + Ph(CH2)2COOMeを解決できれば、その有用性は格段に高まると考えられた。我々は、CDMTのTHF溶
液にN -メチルモルホリン（NMM）を加えると、
室温数分でトリアジン環上での求核置換反応が進 行し、四 級アンモニウム塩である4-8

Condensing
Agent

Amide

Ester

Amide/Ester

DMT-MM
DCC
EDC

98%
27%
53%

1.0%
7%
16%

98
3.9
3.3

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

（３）

（４）

カルボン酸がトリアジノ基に付加し、活性エ

特別な中和剤を加えることなく反応が進行やアミンに対して高収率で進行することがステル中間体3を与え、次にそのカルボニルする。表1の結果から、3のアミノリシス速度

明らかである。当然のことながら、アミノエタ

基をアミノ基が攻撃して酸アミドを与える。

は少なくともアルコリシスの2万倍以上速い

ノールではアミノ基での反応が完全な選択

一連の反応で発生する塩酸は、一段階目ことになる。メタノール中での反応例を幾つ性で進 行 する（ run 12）。セフェム系 化 合で脱離したNMMによって捕捉されるため、

か表2に示すが、
いずれも多用なカルボン酸物の合成に於いては、ATAのアミノ基を保護することなく選択的に7-ACA誘導体のアミノ基とカップリングさせることができる（式4）。

表2. DMT-MMを用いた酸アミド合成
123R COOH (1;1.0 eq) + R R NH (2;1.1 eq)

ジカルボン酸は殆どの有 機 溶 媒に難 溶
DMT-MM(1.1 eq), rt

12であるため、
ジアミドへの直接的な変換は容3

R CONR R

MeOH or THF
run
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

MeOH
carboxylic acidamine
time yield(%)
98
3h
Ph(CH2)2NH2 (2a)Ph(CH2)2COOH (1a)2aovernight 96
CH3(CH2)4COOH (1b)2a924hPhCH=CHCOOH (1c)2a843ht-BuCOOH (1d)2a854hp-MeO-C6H4CH2COOH (1e)2a972hPhCOOH (1f)2a932hp-O2N-C6H4COOH (1g)
2a
100
3h
p-MeO-C6H4COOH (1h)1a963hPhCH2NH2 (2b)1a982hEt2NH (2c)
1a
100
3h
PhCH2NMeH (2d)
1a
96
0.5h
HO(CH2)2NH2 (2e)1f
91
3hcyclo-C6H11NH2 (2f)1g823hPhNH2 (2g)

THF
time yield(%)
84
4hovernight 83
70
4h
62
3h
82
4h
81
4h
82
3h
95
3h
77
3h
68
4h
not performed
not performed
92
3h
92
20h

易ではない。しかしながら、DMT-MMを用いれば、水を溶媒にすることで高収率にジアミドへと変換できる（式5）。グルコサミン塩
酸 塩の N -アセチル化は、取 扱い容 易な酢
酸 ナトリウムをアセチル 化 剤 に 用 いて 、
90% MeOH水溶液中で定量的に進行する（式6）。
DMT-MMは有機溶媒に難溶であるが、殆どの有機溶媒中で利用できる。例えば表2に示すようにTHF中でのアミド化反応は、MeOH中の結果と比べて若干の収率低下を伴うものの、十分に良好な収率で進行する。
DCCを用いた反応ではしばしば溶媒効果
これと比を受けることが知られているが 5 ）、
べて、DMT-MMは溶媒を選ばないため、反応基質の物性に合わせた最も適切な溶媒（５）を用いることができる。特にアルコール−水やTHF−水のような混合溶媒系も自由に利用できることは大きな利点である。

（６）

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）9表4. セグメント縮合におけるラセミ化と溶媒効果

表3. オリゴペプチドの固相合成におけるDMT-MMとPyBOPの比較
peptideBz-Phe-Leu-Gly-OH
Fmoc-Ala-Ser-Phe-Met-OH
Fmoc-Phe-Pro-Asp-Met-OH
DMT-Leu-Met-Phe-Met-OH

Using DMT-MM
yield
purity
90%
86%
91%
87%

91%
89%
90%
85%

4 ラセミ化Z(OMe)-Gly-Ala-OH + H-Phe-OBzl・HCl

Using PyBOP
yield purity
90%
80%
90%
89%

DMT-MM, Et3N

Z(OMe)-Gly-Ala-Phe-OBzl + Z(OMe)-Gly-D-Ala-Phe-OBzl

90%
88%
91%
88%

Solvent

Conditions

Ratio (%)
-D-Ala-L-Ala-

AcOEt
THF
DMF
CH3CN
DMSO
2-PrOH
EtOH
MeOH
Water

rt, 2.5h
rt, 3hrt, 2hrt, 2hrt, 2hrt, 20 min
rt, 2hrt, 5.5h
rt, 24h

>99.9
>99.9
>99.9
>99.9
97.7
99.3
96.6
96.7
89.5

<0.1
<0.1
<0.1
<0.1
2.3
0.7
3.4
3.3
10.5

Yield(%)
quant
quant
quant
quant
97
quant
quant
96
69

応が、
アルコール中、強酸性条件下に進行

5 エステル化

するのに対して、DMT-MMを用いた本反DMT-MMは、ペプチド合成においても有アミド合成に於いて、アルコール中で殆ど

応は弱塩基性条件下に進行することから、

望なカップリング剤である。一 般にウレタンエステルが生成しないからといって、エステ

相補的なFischer型反応として価値が高い。

型の保護基を有するアミノ酸のラセミ化がル化が進行しないわけではない。カップリン

起きにくいとおり、Boc-Leu-OHとH-Phe-

グするアミンが存在しなければ、活性エステ

OMeとのMeOH中での脱水縮合反応では、

ル中間体は溶媒のアルコールと速やかに反生成物であるジペプチド（Boc-Leu-Phe-OMe：

カルボン酸とNMMのア
応する9）。すなわち、上述のとおり有機溶媒を使用せず、水や収率88％ ）のラセミ化体は全く確認されてルコール溶液にDMT-MMを加えると、多く

生分解性のアルコールが利用できることから、いない 4 ）。T a d d i eらはオリゴ ペプチドのの場合に室温数時間で高収率にエステル

DMT-MMは環境にやさしい試薬と位置づ

Fmoc法による固 相 合 成において、DMT-が得られる（ 表５）。アルコールは市販品をけることができる。しかしながら、試薬に由6 環境調和を目指した利用

MMが 、収 率 、純 度ともbenzotriazol-1-

乾燥せずそのまま使用しても殆ど問題ない。

来する化合物のヒドロキシトリアジン（ HO-yloxytripyrrolidinophosphonium

DMT-MMは理論上１当量で十分だが、過D M T ）1 0 ）の発 生は免れない。これは例え

hexafluorophosphate（ PyBOP）と同等の

剰 に 用 い れ ば 収 率 は 更 に 向 上 する。t -ば縮合反応が100％の収率で進行したら、結果を与えることを報告している（表3）6）。

BuOHを溶 媒にすれば、t -ブチルエステル

必ず100％の収率で副生する避けようのな

木曽らの方法に従ったZ（ OMe）-Gly- L-が良好な収率で得られる。THF中、化学量

い廃棄物である。HO-DMTは水溶性が高

Ala-OHとH-L-Phe-OBzlを用いたトリペプチ

論程度のアルコールを用いてもエステル化

いので水洗によって容易に除去できるが、7）ドのセグメントカップリングモデルでは 、は進行するが、反応時間の延長が必要で可能なら回収して再利用することが最も望DMSOを除く非プロトン性溶媒（酢酸エチル、あり、収率の低下も無視できない。これは、ましい。そこで、MeOH中での反応をモデル

THF、アセトニトリル、DMF）中の場合には、活性エステルのアルコリシスに対する反応にして回収を検討したところ、図１に示すよ

アラニン残基のラセミ化はほとんど進行しな性が控えめであることを考えれば、当然のうな濃縮、濾過という簡単な操作で純度よくい（ 表４）8 ）。一方、水中では10％以上のラ

結果かも知れない。Fischerエステル化反単離できることが明らかとなった11）。

セミ化が起きるのに対し、MeOH、EtOH中では３％程度に、2-PrOH中では1％未満までラセミ化の割合を下げることができる。カ
ルボジイミド系で有効性が認められているヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）の添加は、全く効果が無く、逆に15％と収率は大幅に
低下する。

10

表5. DMT-MMを用いたエステル化反応
R1COOH (1)DMT-MM, R4OH

carboxylic acid

DMTMM
(eq)
1.2
MeOH (solvent)
2.0
MeOH (2.0 eq) in THF
2.0
EtOH (solvent)i-PrOH (solvent)
2.0
t-BuOH (solvent)
2.0
PhCH2OH (1.1 eq) in THF 3.0
MeOH (solvent)
1.2
MeOH (solvent)2.0
alcohol

Ph(CH2)2COOH (1a)
1a
1a
1a
1a
PhCH=CHCOOH (1c)Boc-Leu-OH
p-CH2=CH-C6H4COOH

和光純薬時報R1COOR4

Vol.72, No.2（2004）

NMM
(eq)
1.2
2.0
1.2
1.2
1.2
3.0
1.2
1.2

temp

time

yield(%)

rt
rt
rt
rt
50℃
rt
rt
50℃

2h
22h
1.5h
5h
21h
22h
5h
2h

90
67
95
72
72
89
83
88

図1. HO-DMTの単離得られたHO-DMTは、オキシ塩化リン/

図2. DMT-MMの再生であろう。その他にも、a利用できる基質のジエチルアニリンで処理することにより高収多様性が大きい；s条件が温和（室温，中性）

率 で C D M T へと再 生 でき、このもの はd短時間，高収率で進行；f多用な有機溶

NMMと混ぜるだけでDMT-MMへと変換

媒や水、あるいはこれらの混合液中でも縮できる（ 図２）11 ）。一方、HO-DMTをトリフル

合が進行；gラセミ化が起きにくい；h添加

オロメタンスルホン酸無水物で処理し、得ら剤が不要；jアレルギー性が観察されない；

れた中間体にそのまま過剰量のNMMを加kコプロダクトのHO-DMTは水洗により除えると、対アニオンとして塩素イオンの代わり

去容易で、リサイクルも可能である；l吸湿にトリフラートを有するDMT-MM（OTf）が性が無く安定な固体；¡0 安 価な塩化シアヌ得られる。

ルから短工程で調製可能等を列挙でき、汎DMT-MM（ OTf ）は、従来の塩素イオン

用性 、簡便性 、経済性に加え、環境面でもを有するDMT-MMと比べて、縮合剤とし優れた試薬であると言える。これらの特徴て全く同じ反応性を示すが、有機溶媒中でや新用途は、多様化したニーズ、複雑化し式２のような分解反応を起こさないので、有た化合物の合成にもうまくマッチし得るもの

害なクロロメタンの発生しない試薬として特であり、今後その利用は一層高まるものと期に環境面から好ましい。

待される。

１）（a）Kaminski, Z. J.: Tetrahedron Lett. 26, 29012904（ 1985）.（b）Kaminski, Z. J.: Synthesis, 917920（ 1987）.
２）Kunishima, M., Kawachi, C., Iwasaki, F.,
Terao, K., Tani, S.: Tetrahedron Lett., 40,
5327-5330（ 1999）.
３）Kaminski, Z. J., Paneth, P., Rudzinski, J.: J.

Org. Chem., 63, 4248-4255（ 1998）.
４）Kunishima, M., Kawachi, C., Hioki, K., Terao,K., Tani, S.: Tetrahedron, 57, 1551-1558（ 2001）.
５）Balcom, B. J., Petersen, N. O.: J. Org. Chem., 54,
1922-1927（1989）.; Albert, J. S., Hamilton, A. D.:
Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis ,Ed.; John Wiley & Sons: Chichester, Paquette, L.
A., Vol. 3, pp 1715（1995）.
６）Falchi, A., Giacomelli, G., Porcheddu, A., Taddei,
M.: Synlett, 275-277（ 2000）.
７）Kiso, Y., Satomi, M., Miyazaki, T., Hiraiwa, H.,
Akita, T.: Peptide Chemistry, ed. by Okawa,
K., Protein Research Foundation, pp. 71-74（1980）.
８）Kunishima, M., Kitao, A., Kawachi, C., Watanabe,Y., Iguchi, D., Hioki, K., Tani, S.: Chem. Pharm.

Bull., 50, 549-550（ 2002）.
９）Kunishima, M., Morita, J., Kawachi, C., Iwasaki,F., Terao, K., Tani, S.: Synlett, 1255-1256（ 1999）.
１０）化合物単体としてはケト互変異性体のトリアジ

7 おわりにDMT-MMの特徴として特筆すべき点は、ノンが安定と考えられるが、ここでは便宜上エノー
ル構造を用いる１１）Kunishima, M., Hioki, K., Wada, A., Kobayashi,
H., Tani, S.: Tetrahedron Lett., 43, 3323-3326（2002）.

市販の溶媒中で基質と試薬を同時に混ぜるだけで進行するため、合成の知識が殆どなくても簡単に反応を行うことができること

P roducts

株式会社ワコ−ケミカル

新規トリアジン系縮合剤
コードNo.

品

329-53751
327-53752

4-(4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium Chloride n-Hydrate【DMT-MM】

名

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

容 量

希望納入価格（円）

5g
25g

7,000
21,00011

echnical Report
ゲル電気泳動を出発点とするプロテオーム解析で成功するために科学技術振興機構 研究成果活用プラザ大阪
大阪府立母子保健総合医療センター研究所

田尻
和田

道子
芳直

今世紀に入って、ゲノムや遺伝子cDNA情報の充実が、
ゲル電気泳動によって分離したタンパク質の同定に革新的な変化をもたらした。
ここではその基本的な方法であるゲル内消化やペプチドマスフィンガープリント法の概要と、それらを実施する上での注意点などについて、全体の操作の流れ（図１）に沿って解説する。

Step1．組織や血清などからタンパク質
混合物を抽出し、一次元ないし二次元電気泳動によって分離する。
同定・定量されるタンパク質群の種類と数は最初の抽出により最大値が決まるので、例
えば膜タンパクを逃さないような抽出が必要であるが、完璧な方法はまだ確立されていない。

Step2．染色によって分離したタンパク質を可視化する。
例えば、銀染色は1ｰ10ngのタンパク質を検図1.

などアルカリ金属イオンが残った場合には、質

Step4．MSによってペプチドの質量や

量分析
（ＭＳ）
において単一ペプチドのイオンが、配列情報を得る。

++

出する感度があるとされているが、以下の分

Na 付加イオンなど複
プロトンH 付加以外に、ペプチドの質量を得るためのイオン化法には、析はこの程度の量のタンパク質に対して十分数のイオン種として観測されるため、質量測定

マトリックス支援レーザー脱離イオン化（matrix-

適用できる。ただし、微量分析を可能にするの対象となるプロトン付加分子イオンのシグナ

assisted laser desorption/ionization; MALDI）には、
染色に際してグルタルアルデヒドを使わず、ル強度が相対的に下がるだけでなく、
ペプチ

法とエレクトロスプレイイオン化（Electrospray

低い銀濃度によって染色を行う必要があり、ド質量の決定にも困難を来すからである。

ionization; ESI）法がある。多検体を短時間そのための染色キットも市販されている。まなお、一連の操作の過程において、ケラチに処理するスループットにおいてMALDIがた、
ネガティブ染色ではタンパク質が修飾をンなど分析環境からのタンパク質混入は、特優れており、
タンデムMSでペプチドの配列情受けないので、以下の分析に適しているとに微量試料を解析する際に、深刻な問題とな

報も得たい場合にはESIを用いるのが一般考えられる。

るので、ゲルを直接手で触れたりしないなど細的である。ただ、ESIの場合にはペプチド混心の注意が必要である。

合物試料をMSに導入する前にある程度分

Step3．分離タンパク質をゲル内消化法

離しておく必要があり、高速液体クロマトグラ

でペプチドに断片化し、ペプチド混合物を得る。
酵素としてはトリプシンが最もよく用いられる。
その際、リシルエンドペプチターゼを併用する
ことでリシン残基における切断が改善され、切リシン残基における切断が改善された結果、新たに検出できたシグナル

れ残りのないペプチド質量情報を得ることができるし、トリプシンだけでは切り出されないタ
ンパク部分に由来するペプチドを得ることも期待できる（図２）。その結果、PMF法によるデー
タベース検索において、いっそう確かな同定ができることになる。
酵素消化によってゲル内で生成したペプ
チドはゲルから遊出させて回収する。
しかし、この状態では不純物や塩類が混入しており、逆相樹脂を充填した微量脱塩器具などを用いて試料を精製する必要がある。実際、Na +

12

図2.

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

mass fingerprinting; PMF）とは、
リシルエ
ンドペプチターゼやトリプシンなどの特異性の高い酵素でタンパク質を分解し、得られたペプチド混合物のMSスペクトルと、
配列データベースに登録されているタンパク質のアミノ酸配列から予想されるペプチドの質量の組合せを比較することによりタンパク質を同定する方法である。その際、ペプチド質量の測定精度は検索による同定の切れ味を高める上で重要な要素である。著者らはゲル内消化過程で生じる酵素タンパク質自体に由来するペプチ
ドを、内部質量較正用に用いることで、質量測定精度を向上させている。
PMFによって得られるのはあくまで同定の「確からしさ」であり、「決定」ではない。
しかし、
検
図3.

索によってヒットしたペプチド配列が本当にマフィー（LC）とオンラインで接続したLC-MSとる。混合結晶を観察したときにマトリックスがススペクトルにおいて検出された質量をもつして用いるのが一般的である。

細かく一面に均一に広がっている場合は、
よペプチドであるかどうかは、観測されたイオン

いスペクトルが得られやすいようである。そのをタンデムＭＳ法によって配列解析することでこととも関係するが、マトリックスの純度はマス判定できる。上でタンデムMSにはESIが一般

MALDIでは試料に化学マトリックスと呼ばスペクトルの質（すなわち感度）に影響するの的であると述べたが、最近ではMALDIにお以下、
MALDI法による測定について説明する。
れる小分子溶液を加えて混合結晶を作製し、で、再結晶化したものを用いるべきである。再いてもタンデムMSを実施できる装置が普及しそれにレーザー光を照射して励起してイオン結晶化CHCAと非再結晶化CHCAのサンプつつある。

化する。混合結晶の励起には一般的に安価

ルプレート上の結晶の状態を観察し、スペクトでハンドリングが容易な窒素レーザー（337nm）

ルを比較してみると、非再結晶化のものは不以上、銀染色の感度限界である数ngのタが多く用いられている。従って、
マトリックスに

均一で塊になっておりスペクトルもノイズが多ンパク質をゲル上に検出できれば、それぞれは337nmに吸収帯をもつ物質が使用され、ペいのに対し、再結晶化したものは細かく均一の操作段階における熟練が必要ではあるが、プチド試料に対してはα-シアノ-4-ヒドロキシケ

でスペクトルもノイズが少なくきれいである（図３）。

ヒトやマウスなど遺伝子データベースの充実

イ皮酸（CHCA）、タンパク質試料にはシナピ

している種のタンパク質については、
かなりのン酸（SA）、ペプチド、糖、糖脂質には2,5-ジ

Step5． 質量デ ータあるいはタンデムヒドロキシ安息香酸（DHB）が使用されることMSによる開裂断片の質量データをゲノム・が多い。

タンパク質データベースに対して検索し〔参考文献〕て、タンパク質を同定する。

丹羽利充編：「ポストゲノム・マススペクトロメトリー

MALDI法では混合結晶のでき方によって、得られるマススペクトルの質が大きく左右され成功率で同定できるはずである。

ペプチドマスフィンガープリント法（peptide−生化学のための生体高分子解析」（化学同人）.

プロテオーム解析関連試薬
コードNo.

品

規

名

格

電気泳動用

299-58901 Silver Stain MS Kit

容量

希望納入価格（円）

20回用

19,000

電気泳動用

20回用

11,000125-05061 Lysyl EndopeptidaseR, Mass Spectrometry Grade

プロテオーム研究用

20μg×5本

15,000293-57701 Negative Gel Stain MS Kit

202-15951 Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry Grade

プロテオーム研究用

20μg×5本

15,000☞P.16

037-19261 α-Cyano-4-hydroxycinnamic Acid【CHCA】

プロテオーム研究用

50mg×5本

20,000☞P.16

192-13361 Sinapic Acid【SA】

プロテオーム研究用

50mg×5本

20,000☞P.16

044-29101 2,5-Dihydroxybenzoic Acid【DHB】

プロテオーム研究用

50mg×5本

20,000

電気泳動用

−

−

☞P.18

−

SuperSepTMシリーズ（プレキャストゲル）

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）13

echnical Report
LC-MS法による農薬の一斉分析
和光純薬工業株式会社

試薬研究所

吉田貴三子

水道水質管理の充実・強化が求められている28種類の農薬について、分析条件

図4に、結果を表1に示したが、UVで検出さている状況で、水質検査の合理的、効率的の検討と固相抽出カラムによる農薬の回収れないダラポンを除く27種類の農薬のうちなあり方について検討がなされており、水道率を確認したので紹介する。

25種類について良好な回収率が得られた。
R

水質基準の見直しが全面的に行われている。

分析用カラムにはWakopak MS-Agri-

酸で分解し易いベンフラカルブはpH3.5に

厚生労働省より平成15年5月30日に水道水

9GT（ 2.0φ×150mm ）を、移 動 相にはL C -調整した検水からは回収できなかったが、質基準に関する省令が公布され 、平成16MSに対応可能な酢酸緩衝液とアセトニトリ

pH未調整の検水からは回収可能であった。

年4月1日から施行されることとなった。

ルを使用してグラジエント分析法による一斉

また、極性の高いメソミルは固相への保持

農薬に関しては、地域 、時期による格差分析条件を設定した。その時の分析条件が弱く回収率は約50%となった。

が大きく、毒性評価値の1/10に相当する値とクロマトグラムを図1〜3に示したが、
ポジティ

以上、
WakopakR MS-Agri-9 GTとPresepRを超えて検出される可能性が少ないことか

ブモードにより22種類の農薬を、ネガティブモー-C Agri（short）
を使用したLC-MS法へのら水質基準項目から削除され、水質管理目

ドにより14種類の農薬を検出した。MSによ適応性を紹介した。今後さらなる至適条件

標設定項目に位置付けられた。101種の農る検出は、UV検出に比べて保持時間が重の検討は必要であるが、LC-MS分析の前処薬が目標値とともに示され 、精度の高い測なる農 薬も効 率よく検出可 能であり、分 析

理と分 離にWakopak R MS-Agri-9GTと定方法としてGC法が削除されGC-MS法（73

時間はカラムの安定化も含めて30分となった。

PresepR-C Agri（short）が有効なツールで農薬）へ移行し、新たにLC-MS法（30農薬）

農薬の回収率の確認は、固相抽出カラムにあると考える。本稿が何かのお役に立てれが採用された。筆者らは、新たに採用されを使用して、
公定法
PresepR-C Agri（short）

ば幸いである。

たLC-MS法による一斉分析の対象となっに準 拠した方 法で検 討した。操 作 方 法を
Fig.1〜3
HPLC Conditions
Column：WakopakR MS-Agri-9GT, 2.0mmφ×150mm
4
3.7）
Eluent：A）10mmol/R CH3COONH（pHB）CH3CN
0ｰ20min. B 20ｰ80%
Flow rate：0.2mR/min. at 40℃
Detection：（1）UV230nm（2）TIC Full：ESI（＋）（3）TIC Full：ESI（−）
Inj.vol.：2μR

MS Conditions
LCQ（Thermo Quest)：ESI（＋）, ESI（−）
Sheath Gas Flow（arb）：80
Aux Gas Flow（arb）：10
Spray Voltage（kV）：5
Capillary Twmp（℃）：240
Capillary Voltage（V）：ｰ46
Tube Lens Offset（V）：ｰ20

カラム：PresepR-C Agri（Short）
カラムコンディショニング： ①CH3CN 10mR
②CH3OH 10mR
10mR
③H2O

再溶解：H2Oで1mRにメスアップ*検水の通液：500mR

Fig.1.

10μR注入HPLC-UV

5mR

洗 浄：H2O

濃 縮：N2気流下で濃縮(約0.2〜0.3mR)

LC-MS,TIC F Positive mode

*検水500mR：0.2mol R/ EDTA･2Na 10mR添加
pH 3.5←HNO3(1+10)
農薬標準品添加溶 出：CH3CN 5mR

Fig.4. 農薬回収率測定 固相抽出条件
表1. 農薬回収率測定結果
101種
農薬No.

Fig.2.
LC-MS,TIC F Negative mode

品
R

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）296-32651 Presep -C Agri（Short） 試料前処理用 10個×514

名

回収率（%）

101種
農薬No.

品

回収率（%）

名

1

チウラム

94.3

68

ジウロン（DCMU）

17

ベンタゾン

99.3

74

メソミル

18

カルボフラン（カルボスルファン代謝物）

103.1

75

ベノミル

19

2,4-ジクロロフェノキシ酢酸（2,4-D）

99.1

76

ベンフラカルブ

分解（85.5）20

トリクロピル101.2

82

プロベナゾール

98.6

26

イプロジオン

98.9

84

ダイムロン

99.6

28

オキシン銅

96.2

86

ベンスルフロンメチル

100.7

36

アシュラム

99.6

87

トリシクラゾール

99.1

42

ベンスリド
（SAP）

96.7

90

アゾキシストロビン

99.6

45

メコプロップ（MCPP）

99.9

94

ハロスルフロンメチル

99.1

48

カルバリル（NAC）

101.0

95

フラザスルフロン98.6

48

カルバリル2

99.3

96

チオジカルブ99.6

55

チオファネートメチル

96.9

98

シデュロン

99.7

58

カルプロパミド

101.8

98

シデュロン2

98.3

64

ダラポン

未確認

75+

メチル-2-ベンツイミダゾールカルバメート（MBC）

97.5

100.4
50.8（85.2）
91.0* ベンフラカルブ：酸で分解し易い、pH 3.5の検水から回収できない。カルボフラン他に変化する（）内はpH未調整の検水からの回収率* メソミル（）内の回収率はPresepR-Agri使用時* ベノミル：分解し易い、MBCに変化する* シデュロン：2ピーク検出* カルバリル、ベンタゾン：条件によってピーク分割する* ダラポン：UV検出不可、回収率未確認

Fig.3.
コードNo.

品

38,000

和光純薬時報コードNo.

品
R

名

カラムサイズ 記

号 希望納入価格（円）001-00030 Wakopak MS-Agri-9GT 2.0φ×150mm シ AD

Vol.72, No.2（2004）

73,000SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

第55話

土谷

正和

エンドトキシンと添加剤したところ、
ポリスチレン製試験管を使用してにマンニトールを添加して凍結乾燥を行うと、剤が使用されています。添加剤はそれぞれ目調製した希釈液では、ガラス製試験管を使用

凍結乾燥後の水懸濁エンドトキシンに、若干的をもって使用されていますが、時としてエン

した場合に比べて約60%の活性しか示さな

平均粒度が大きくなっているものの、粒度のピー

ドトキシン測定に影響を与える場合があります。

いことがわかりました（表2）。この原因の証明

クが認められました。当時の国立衛生試験所

今回は、この添加剤について考えてみましょう。

は難しいのですが、BSAがエンドトキシンとよくの先生方がマンニトールを日本薬局方標準エ

エンドトキシンの添加剤として、
日本薬局方

結合すること、
また、
ポリスチレンは蛋白をよくンドトキシンの添加剤として選択されたのです

エンドトキシン標準品にはいろいろな添加

標準エンドトキシン10000に使用されているマ

吸着することが知られており、
BSAと結合したが、この結果を見てなるほどと感心してしまい

ンニトール、
米国標準エンドトキシンに使用されエンドトキシンがBSAと共にポリスチレン製試ました。

ているラクトースとポリエチレングリコールなど

験管の表面に吸着したというのが、最も可能

エンドトキシンの添加剤によって、
リムルス試

の他、
アルブミンやグリシンなどが使用されて性の高い説明ではないかと思うのですがいか験に及ぼす試料や容器の影響が異ることがいます。これらの添加剤は、
主にエンドトキシンがでしょう。BSAは、エンドトキシンを分散させ、わかります。このような現象はエンドトキシン添の分散性を向上させ、溶液中のエンドトキシン

活性をよく発現させます。また、金属イオンの加剤でのみ認められるわけではなく、試料の活性を一定に保つために添加されています。

影響も受けにくくなるため、添加剤としてはよ

種類によっては、
エンドトキシンの挙動に影響

エンドトキシンを扱う場合の注意点としては、い面も持っています。以前はよく使用されたを与える場合があります。これらのことは、
エン

エンドトキシンの分散性の他、容器への吸着、

BSAですが、最近はあまり使用されていません。

ドトキシン測定における注意点を再確認させ共存物質の影響、などがあります。添加剤はその理由として、
BSA自体がエンドトキシンにてくれます。以下に注意点を挙げてみます。

これらの点でも影響を与える場合があります。

汚染されていることが多く、これを取り除くこと（1）測定への影響は、
リムルス試薬に対する例えば、アルブミンを添加剤として使用していが難しいこと、吸着の問題、
天然素材なのでロッものとエンドトキシンに対するものがあること。

るエンドトキシンでは、
プラスチック容器への吸ト管理が難しいなどが考えられます。

（2）測定条件の決定時には、エンドトキシンに着が認められたり、ガラスから溶出するアルミ

日本薬局方標準エンドトキシン10000に添

ニウムイオンや鉄イオンの影響を受けにくいな

加されているマンニトールについて、筆者の経対する影響を回避した状態で行うこと。
（3）試料の影響を調べるときは、
エンドトキシン

験をご紹介しましょう。Westphal法と呼ばれるへの影響が少ない適切なエンドトキシン標品

吸着の例について、
もう少し詳しくご紹介し熱フェノールを用いた方法で大腸菌エンドトキを選ぶこと。

どの現象が認められます。
ましょう。筆者らは，滅菌済使い捨てポリスチレ

シンを精製した時の話です。精製品は最終的（4）測定への影響は、
リムルス試薬とエンドトン試験管をエンドトキシン溶液の希釈にしばしに凍結乾燥を行います。この凍結乾燥品をキシンだけではなく、容器にも注意が必要であば使用します。ガラス製試験管とポリスチレン

水に懸濁させ、
レーザー粒度分布計でその粒ること。

製試験管を用いて、米国標準エンドトキシン度分布を測定してみました。その結果、凍結

エンドトキシンはやんちゃ坊主のようなもので

Lot EC-6と牛血清アルブミン
（BSA）
を添加

乾燥品の平均粒度は得られず、分布が非常す。ちょっと注意を怠ると、すぐにわれわれの目剤としたエンドトキシン（CSE）を希釈して、シンに広いことがわかりました。この懸濁液を超音を盗んでいたずらをしてきます。
リムルス試験

グルESタイプのLALで活性を測定しました。

波処理していくと粒度が揃ってくる様子が観が採用されて20年以上が過ぎていますが、未

その結果、EC-6ではトキシノメーターにおける察されました。最終的に60nm程度の粒度ピー

だにこのやんちゃ坊主を完全に管理すること

ゲル化時間（Tg）がほとんど変わらなかった

クが観察されるようになりました。これを凍結はできていないのではないでしょうか。

のに対し
（表1）、
BSA入りCSEではTgの延長

乾燥して再度水に懸濁させ、粒度分布を測が認められました（表2）。EC-6で得られた結定すると、またランダムな分布が得られ、元に戻っ果をもとに検量線を作成しCSEの濃度を計算てしまいました。超音波処理したエンドトキシン

表1. 米国標準エンドトキシンLot EC-6の活性に対する容器の材質の影響

表2. アルブミン添加エンドトキシンの活性に対する容器の材質の影響

EC-6（EU/mR）

Tg（min）

CSE（ng/mR）

次回は、
第56話「再認識されるペプチドグリ
カン」の予定です。

Glass（GL）

Polystylene（PS）

Tg（min）Endotoxin（EU/mR）Tg（min）Endotoxin（EU/mR）

PS/GL

Glass

Polystylene

0.02

29.4

29.2

0.005

26.2

0.030429.6

0.0197

65%

0.2

17.2

17.2

0.05

15.6

0.313

17.2

0.187

60%

2

11.6

11.6

0.5

10.6

4.73

11.4

2.52

53%

20

9.4

9.2

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）15

ew Products
アフラトキシンの簡易迅速検査から
精密検査までサポート

アフラトキシン分析関連製品
アフラトキシンはAspergillus flavusなどから産生されるカビ毒で、最も強力な天然物由来発がん物質として知られています。収穫前やMultiSepTM #228
● MycoSep TM#228のシリンジタイプ

AutoprepR MF-A 1000
● MycoSep TM 、
MultiSep TMとともに食監発第0326001号の「穀類、収穫後貯蔵された作物中に生じるカビが産生するため、食品、飼料検

豆類、種実類及び香辛料中のアフラトキシンB 1試験法」に掲載

査で特に重要な規制項目となっています。食監発第0326001号の「穀●コンディショニングが不要でランニングコス
トの低減が可能なシリンジ（平成14
類、豆類、種実類及び香辛料中のアフラトキシンB 1試験法」

タイプ

1）

年3月26日）など に分析法が示されています。

コードNo.

分析には簡易迅速分析と機器定量分析が行われ、簡易迅速分析
はスクリーニングを目的にELISAキットが、機器定量分析には試料のクリーンアップ用カートリッジ及びHPLC用カラムがそれぞれ用いられます。
〔参考文献〕

品

638-03221 MycoSep

名

容

#226

25本

37,50025本

40,000633-03271 MultiSep

25本

40,00050本

48,000TM#228

636-03881 AutoprepR MF-A 1000

1）白井裕治ら：「多機能クリーンナップカラム法／高速液体クロマトグラフィーに
B2、
G1及びG2の同時定量」，飼料研究報告，24，
よる飼料中のアフラトキシンB1、

量 希望納入価格（円）635-03231 MycoSepTM #228

TM

※MycoSep、MultiSepはRomerLabs,Inc.、Autoprepは昭和電工㈱の商標です。

10-26（ 1999）．

簡易迅速分析ELISAキット

HPLC用カラム

アフラトキシンB 1 、B 2 、G 1 、G 2に特異的な抗体を使用した直接競合

WakopakR Navi C18-5法によるELISAキットです。

親水性の高いアフラトキシンを保持可能なODSカラムです。

Agri-ScreenTM For Aflatoxin● ODS基の導入法の改良、徹底的なエンドキャッピングによりアフラト

キシン分析に適したカラム● 簡便：
目視定性判定が可能で、5分以内に判定が可能● 正確：
コントロールとの比較により正確な評価が可能

分析例●アメリカUSDA／FGISによる承認済● AOAC-International（990.32）の公定法

AgraQuantTM AFL（4/40）96● 手操作によるブレが極少● 4-40ppbの範囲で定量が可能

コードNo. メーカーコード

ー

品

名

容

量 希望納入価格（円）

Agri-Screen For Aflatoxin 18検体用

26,000637-05251 COKAQ1000 AgraQuantTM AFL(4/40)96 96回用

80,0008010

TMSample : 1. Aflatoxin G1 2. Aflatoxin B1 3. Aflatoxin G2 4. Aflatoxin B2※Agri-ScreenはNeogen社、AgraQuantはRomerLabs,Inc.の商標です。

品

クリーンアップ用カートリッジ
逆相用樹脂に陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂を加えた多機能カートリッジです。

カラムサイズ規格

4.6φ×150mm 高速液体
WakopakR Navi C18-5
クロマト
14.6φ×250mm グラフ用

容

量 希望納入価格（円）

1本45,0001本

48,000

関連商品

MycoSepTM #226、#228

コードNo.

●コンディショニングが不要●わずか30秒のワンプッシュだけで操作が完了● MycoSep TM#226は一般用、#228は色素など

夾雑物の多い試料用品

和光純薬時報名規格

容量 希望納入価格（円）019-17661 Aflatoxin B1

生化学用

10mg

20,000016-17671 Aflatoxin B2

生化学用

10mg

36,000010-17691 Aflatoxin G2

生化学用

10mg

58,000018-18351 Aflatoxin M1

生化学用 100μg

30,000012-18371 Aflatoxin（B1, B2, G1, G2）

生化学用 1mg×4

20,000セット

MycoSepTM #228

16

名Vol.72, No.2（2004）

ew Products
プロテオーム研究用

100

高純度マトリックス

80

プロテオーム解析では、質量分析計を用いてタンパク質の同定や

60

4.9E+490

翻訳後修飾の研究が行われています。質量分析計には、イオン化法と分析計の組合わせにより様々な種類がありますが、ペプチド質% intensity

70

50
40
30

量を測 定 する場 合 には 、M A L D I（ m a t r i x - a s s i s t e d l a s e r

20

desorption ionization、マトリックス支援レーザー脱離イオン化 ）法

10

やESI（ Electrospray ionization：エレクトロスプレーイオン化）法に0

よりイオン化します。MALDI法は多検体の短時間処理に優れてお

1

201

401

601

0
1001

801

Mass (m/z)

図1-b. 再結晶処理 CHCA

り、一方、ESI法はタンデムMSでペプチドの配列情報を得たい場合■ペプチド試料を測定したマススペクトルに有用です。

764

100

MALDI法では、
マトリックスと呼ばれる化合物を試料に加えて混

90
80
70

Acid（CHCA）
やSinapic Acid（SA）、
それに2,5-Dihydroxy benzoic

60

acid（DHB）です。これらのマトリックスはサンプルによって使い分け% intensity

合結晶を作成し、この結晶表面にレーザー光を照射してイオン化します。マトリックスとして汎用されているのは、
α-Cyano-4-hydroxycinnamic

5040

られ、一般的に、ペプチド試料に対してはCHCAを、
タンパク質試料30に対してはSAを、ペプチド、糖、糖脂質に対してはDHBを使用します。

20

しかし、市販されているマトリックスをそのまま使用すると、質量分析

10
0
99.0

データにマトリックス由来のピークが現れ、バックグラウンドが高くなり、SN比が低くなります。そのため、使用前に再結晶処理を行い、
マトリッ

479.4

859.8
1240.2Mass (m/z)

1620.6

0
2001.0

図2-a. 未処理CHCA

クス由来のピークをできるだけ除く必要があります。

1446.010090

本品は、再結晶処理済の高純度マトリックスです。再結晶処理を80

行わなくても非常にきれいなマススペクトルが得られます。
% intensity

70

CHCAの再結晶処理の効果

60
50
40
30

市 販されているC H C Aと再 結 晶 処 理したC H C AのM A L D I -20

TOFMSデータを比較した。図1は、マトリックスのみのマススペクトル。

10

図2は、
マトリックスとペプチドサンプルの混合結晶を作成し、レーザー照射したマススペクトル図 。再結晶化した高純度CHCAのマスス
ペクトルの方がノイズが少なくきれいであることが分かる。
（データ提供：大阪府立母子保健総合医療センター

和田芳直先生）■マトリックスのみのマススペクトル100

2.9E+4

90
80

0
99.0

479.4

859.8
1240.2Mass (m/z)

1620.6

0
2001.0

図2-b. 再結晶処理 CHCA
コードNo.

品
名
α-Cyano-4037-19261 hydroxycinnamic Acid
【CHCA】

規格

容量

希望納入価格（円）プロテオーム 50mg
研究用
×5本

20,000192-13361 Sinapic Acid【SA】

プロテオーム 50mg
研究用
×5本

20,000044-29101 2,5-Dihydroxybenzoic
Acid【DHB】

プロテオーム 50mg
研究用
×5本

20,000% intensity

70

関連商品

60
50

コードNo.

40

名

規

格

容

量 希望納入価格（円）

R

30
20
10
0

品

1

201

401

601

801

0
1001

Mass (m/z)

図1-a. 未処理CHCA

和光純薬時報プロテオーム 20μg
125-05061 Lysyl Endopeptidase ,Mass Spectrometry Grade
×5本
研究用

15,000202-15951 Trypsin, from Porcine Pancreas, プロテオーム 20μg
×5本
Mass Spectrometry Grade
研究用

15,000293-57701 Negative Gel Stain MS Kit 電気泳動用 20回用

11,000299-58901 Silver Stain MS Kit

19,000Vol.72, No.2（2004）

電気泳動用 20回用

17

ew Products
分画分子量範囲

安定性、再現性の良い
低コストプレキャストゲル
SuperSepTM
本品は、
タンパク質、核酸の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャ
ストゲルです。ゲル中には、SDSが含まれておりませんが、SDSを含む
緩衝液を用いることにより、SDS-PAGEに使用できます。また、SDS不分 子 量
40,000〜200,000
20,000〜130,000
14,000〜 80,000
6,000〜 60,000
10,000〜200,000
10,000〜130,000

SuperSepTM 7.5%
SuperSepTM 10%
SuperSepTM 12.5%
SuperSepTM 15%
SuperSepTM 5-20%
SuperSepTM 10-20%

核酸のbp100〜2,000
50〜 500
30〜 300
20〜 300
50〜 750
50〜 500

含の緩衝液を用いることによりNative-PAGEにも使用できます。

二次元電気泳動用ゲルが新発売！
二次元電気泳動用ゲルが新発売
一次元目に等電点電気泳動、二次元目にSDS-PAGEを行う二次元電気泳動は、タンパク質の分離が良いため、
プロテオーム解析で汎用されています。本品は、二次元目のSDS-PAGEに使用するポリア
クリルアミドゲルです。ウェル幅が7cmのミニゲルサイズですので、市販されている7cmの等電点電気泳動用ストリップゲルに対応します。

泳動例

特

長

●濃縮ゲルにより、シャープなバンドが得られます。
●再現良く泳動できます。
●保存安定性が良く、製造日から６ヶ月使用できます。
●17ウェルは8連ピペットに対応しており、多検体処理に有効です。
●SDS-PAGE、
Native-PAGEに使用できます。
ゲル：SuperSepTM5-20%,2D[コードNo.197-13291]
染色：銀染色サンプル：培養細胞(TM4マウスセルトリ細胞)(データ提供：大阪府立大学大学院 農学生命科学研究科 獣医学専攻 細胞生物学研究室 竹中重雄先生)

泳動例［ SDS-PAGE］

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112
分子量

200k

保存条件
2〜10℃保存（凍結不可）
・遮光保存

116k
コードNo.

66k
42k
30k
17k
10k
ゲル：SuperSepTM 5-20%，
12well［コードNo.194-12961］
サンプルバッファー：Sample Buffer Soln（×. 2、2-ME＋）［コードNo.196-11022］
泳動バッファー：Running Buffer Soln.（×10）［コードNo.184-01291］
染色：Quick CBB［コードNo.299-50101］
サンプル：Lane1, 2, 7, 8
ラダーマーカー
Lane3, 4, 9, 10
低分子量マーカー
Lane5, 6, 11, 12 高分子量マーカー18

和光純薬時報品

名

濃縮ゲル 規 格

192-12901 SuperSepTM 7.5%, 12well
5%
199-12911 SuperSepTM 7.5%, 17well
5%
196-12921 SuperSepTM 10%, 12well5%
193-12931 SuperSepTM 10%, 17well
5%190-12941 SuperSepTM 12.5%, 12well 5%
197-12951 SuperSepTM 12.5%, 17well 5%
194-13061 SuperSepTM 15%, 12well5%
191-13071 SuperSepTM 15%, 17well
5%
194-12961 SuperSepTM 5-20%, 12well ー
191-12971 SuperSepTM 5-20%, 17well ー
198-12981 SuperSepTM 10-20%, 12well ー
195-12991 SuperSepTM 10-20%, 17well ー
190-13301 SuperSepTM 12.5%,2Dー
197-13291 SuperSepTM 5-20%,2Dー

Vol.72, No.2（2004）

容 量 希望納入価格（円）

電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚

12,00012,00012,00012,00012,00012,00018,00018,00012,00012,00012,00012,00018,00018,000ew Products
2. クイックCBBプラスとネガティブ染色の二重染色

有機溶媒を使用せず簡単に
CBB染色できます！
クイックCBB プラス

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

電気泳動後のタンパク質バンドの染色には、
クーマシーブリリアン
トブルー（ CBB ）が汎用されています。当社でも、CBBを色素に用いた脱色操作のいらない簡易染色キット『クイックCBB』やCBB粉末を販売しております。
これらの商品群に加えて『クイゲル：SuperSepTM5ｰ20％, 12well [コードNo. 194-12961]
サンプル：Lane1,2,11,12
タンパク質分子量マーカー、高分子[コードNo. 134-14501]
Lane3, 4, 10
タンパク質分子量マーカー、中分子[コードNo. 131-14511]

ックC B Bプラス』が新 発 売となりました。本品は、『クイックCBB』とLane5, 6, 7, 8, 9 BSA 10μg、5μg、2.5μg、0.6μg

同様に脱色操作を必要としないだけでなく、固 定 処 理も要りませ

ゲルを染色液に浸すと数分でタンパク質バンドが確認できました。

んので、酢酸やメタノールなどの有機溶媒の廃液がでません。また、
バックグラウンドが低いのも特長です。操作法も簡便になり、どなたでも安心してお使い頂けます。

水洗して、染色を終わらせても良いですか？
本品を用いた染色では、多くの場合、
１０〜２０分でタンパク質バンドが現れます。
そのまま水洗して、染色を終わらせても構いませんが、確実に染色するためには、
３０〜６０分の染色時間をお薦めします。
染色後、水洗しなくてもタンパク質バンドをはっきりと確認できます。バックグ

特ラウンドも低いです。このような場合でも水洗が必要ですか？

長

水洗しなくても問題はありません。しかし、水洗をすることにより、よりきれいな染色像が得られます。もし６０分水洗してもタンパク質バンドが薄く感じる場●メタノールや酢酸などの有機溶媒を使用しません。

合には、一晩水洗して下さい。そうするとさらにきれいな染色像が得られます。

●簡単かつ迅速に染色できます。

廃液の処理方法を教えて下さい。
本品は、特に有害な物質を含んでおりません。しかし、染色液は濃青色をして●バックグラウンドはほとんど染まりません。

いますので、専用容器などに集めて廃棄して下さい。
染色の感度はどれくらいですか？

使用方法

１０ng前後のタンパク質バンドを確認できます。

電気泳動後のゲル

コードNo.

水

洗（5分×3回）

染色（30〜60分）

水

洗

（60分）

品

名

174-00553
Quick-CBB PLUS
178-00551

規 格
電気泳動用

容 量 希望納入価格（円）
250mr
1r

4,200
11,000

関連商品
コードNo.

染色例
1. クイックCBBプラス染色
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

和光純薬時報品

名規 格

容 量 希望納入価格（円）■染色液299-50101 Quick-CBB
電気泳動用 2r用
299-13841 Silver Stain Kit wako
電気泳動用 10枚用
291-50301 Silver Stain Ⅱ Kit wako 電気泳動用 10枚用
299-58901 Silver Stain MS Kit
電気泳動用 20回用
293-57701 Negaive Gel Stain MS Kit 電気泳動用 20回用
■色素25g
038-17932 CBB G-250
電気泳動用
25g
031-17922 CBB R-250
電気泳動用■泳動用緩衝液
196-11022 Sample Buffer Soln.（×2,2-ME＋） 電気泳動用 25mr
193-11032 Sample Buffer Soln.（×2,2-ME−） 電気泳動用 25mr
1r
184-01291 Running Buffer Soln.（×10）
電気泳動用■タンパク質分子量マーカー
Molecular Weight Marker,
134-14501
電気泳動用 1mr用
High Range
Molecular Weight Marker,
131-14511
電気泳動用 1mr用
Middle Range

Vol.72, No.2（2004）

9,000
9,000
9,000
19,00011,000
5,200
5,200
3,100
3,100
5,200

12,80012,80019

ew Products
コードNo.

翻訳後修飾の研究に
ユビキチン関連試薬
ユビキチンｰプロテアソームシステムによるタンパク質の分解は、ユビキチン活性化酵素（ E1 ）やユビキチン転移酵素（ E2 ）が標的タン
パク質にユビキチンを修飾し、それをシグナルとして26Sプロテアソー
ムが標的タンパク質を補足することにより行われます（下図）。このシステムは、タンパク質の分解機構として良く知られており、
アポトーシ
ス、
シグナル伝達、代謝調節などの高次機能の制御やタンパク質の品質管理などにおいて重要な役割を果しています。
また、ユビキチンと同じく標的タンパク質を修飾して様々な機能を発揮するユビキチン様タンパク質（ Ubl ）としてSUMO-1やNEDD8が知られています。これらの機能はいまだ明らかではありませんが、
SUMO-1については、基質の細胞内局在制御や安定性制御に影響するとの報告があります。一方、NEDD8についてはポリユビキチ
ン活性を増加させるとの報告があります。

図. ユビキチンｰプロテアソームシステム

品
名
規格 容量 希望納入価格（円）Ubiquitin Conjugating Enzyme Ubc7,
細胞生100μg 48,000
213-01251 Histidine Tag, Human, recombinant, Soln.
物学用
細胞生
Ubiquitin Conjugating Enzyme Ubc8,
100μg 48,000
210-01261 Histidine Tag, Human, recombinant Soln.
物学用
Ubiquitin Conjugating Enzyme Ubc9（SUMO-1）, 細胞生100μg 30,000
210-01141 Histidine Tag, Human, recombinant, Soln.
物学用
Ubiquitin Conjugating Enzyme Ubc10, 細胞生100μg 48,000
217-01271 Histidine Tag, Human, recombinant, Soln.
物学用
Ubiquitin Conjugating Enzyme Ubc12, 細胞生100μg 30,000
217-01151 Histidine Tag, Human, recombinant Soln.
物学用■UBL（ユビキチン様タンパク質）
30,000199-12771 SUMO-1（1-97）, Human, recombinant, Soln. 細胞生物学用 200μg
30,000145-07621 NEDD8（1-76）, Human, recombinant, Soln. 細胞生物学用 100μg■Inhibitor（阻害剤）
生化学用 5mg 24,000
131-14011 MG-115
生化学用 5mg 22,000
138-14021 MG-132
生化学用 100μg 39,000
135-14031 MG-262
生化学用 50μg 38,000
215-01071 Ubiquitin Aldehyde
ー 0.2mg 20,000
333-43681 Lactacystin[ペプチド研究所]
031-18201 clasto-Lactacystin β-Lactone 生化学用 100μg 36,000
生化学用 100μg 32,000058-06841 Epoxomicin■Substrate（基質）164-20511 20S Proteasome, Fluorogenic Substrate 生化学用 5mg 24,000■Proteasome（プロテアソーム）
161-20521 20S Proteasome, from Human Erythrocyte 生化学用 50μg 34,000■Antibody
Anti Human Ubiquitin, Monoclonal
ー 200μr 169,000
535-50391 Antibody(Clone:3-39)〔Senetek Ltd.〕
Anti Human Ubiquitin, Monoclonal
ー 200μr 169,000
538-50381 Antibody(Clone:525)〔Senetek Ltd.〕
Anti Ubiquitin, Monoclonal Antibody
305-06741 (Clone:FK1) 〔日本バイオテスト研究所〕 ー 1mg 35,000
Anti Ubiquitin, Monoclonal Antibody
302-06751 (Clone:FK2) 〔日本バイオテスト研究所〕 ー 1mg 35,000572-28751 Anti-Ubiquitin, Bovine (Rabbit) 〔Calbiochem〕 ー 50μr 42,500

当社では、ユビキチン活性化酵素（ E1 ）を始め、ユビキチン転移酵素（ E2 ）やプロテアソーム、及びその阻害剤などユビキチンｰプロ
テアソーム関連試薬を安価にラインアップしています 。また、ユビキ

ミネラルコルチコイド

チン様タンパク質としてSUMO-1、NEDD8も取揃えています。

アルドステロン

コードNo.

副腎皮質で作られるステロイドホルモンは糖質代謝に関わる「グル

品

名

規格

容量 希望納入価格（円）■E1（ユビキチン活性化酵素）
Ubiquitin Activating Enzyme,
219-01111 Mouse, recombinant, Soln.

細胞生
25μg
物学用
細胞生
SUMO-1 Ubiquitin Activating
198-13341 Enzyme, Human, recombinant, Soln. 物学用 25μg
■E2（ユビキチン転移酵素）

ココルチコイド」と電解質代謝に関わる「ミネラルコルチコイド」に大別
30,00030,000されます。アルドステロンはミネラルコルチコイドの代表であり、遠位の尿細管末部においてナトリウムと水の再吸収を促進する作用をもつ
ため、
アンギオテンシン系と協調して血圧上昇を引き起こします。

細胞生

Conjugating Enzyme Ubc1,
212-01221 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant, Soln. 物学用 100μg 48,000
Conjugating Enzyme Ubc2,
219-01231 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant Soln.

細胞生100μg 48,000
物学用

Conjugating Enzyme Ubc3（cdc34）,
213-01131 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant ,Soln.

細胞生100μg 30,000
物学用
Conjugating Enzyme UbcH5a, 細胞生215-01191 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant, Soln. 物学用 100μg 30,000
細胞生

Conjugating Enzyme UbcH5b,
218-01201 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant, Soln. 物学用 100μg 30,00020

純度（HPLC）：97%以上

細胞生コードNo.

細胞生100μg 48,000
物学用

010-19891 Aldosterone
5mg
細胞生物学用25mg
016-19893 【d- Aldosterone, (+)-Aldosterone】

Conjugating Enzyme UbcH5c,
216-01121 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant, Soln. 物学用 100μg 30,000
Conjugating Enzyme Ubc6,
216-01241 Ubiquitin
Histidine Tag, Human, recombinant, Soln.

C21H28O5=360.44

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）8,000
32,000ew Products
測定方法

天然オステオポンチンを用いた
オステオポンチンELISAキット
Native OPN ELISA kit

固 相 化 プレート

プレ反応プレート

固相化用OPN 50μr/well

検 体 or 標準品 100μr/well
HRP標識OPN抗体 20μr/well

室温、1時間洗浄×2

オステオポンチン（ OPN ）は分子量約６万前後のりん酸化糖タン

室温、2時間ブロッキング液 200μr/well

パク質です。最近、オステオポンチンがHIV感染症に合併する難治

室温、30分
洗浄×2

性日和見真菌症における感染防御機構に大きく関与していること

100μr/well

プレ反応溶液オステオポンチンの機能がTRAP（ 酒石酸が示されました１）。また、

室温、4時間洗浄×4

抵抗性ホスファターゼ）に制御されていることも報告されており2）、多発色液 100μr/well

くの関心を集めています。
停止液

本キットはヒト初乳由来の天然オステオポンチンを抗原として得られた抗オステオポンチンモノクローナル抗体５D10を用いたOPN定

測50μr/well

定（490nm）

量キットです。Antibody capture assay法を採用することにより天然
オステオポンチン量を高感度（ 100pg/mr-100ng/mr）で定量することが可能です。母乳中、各組織中、培養上清中などのオステオポ

測定例
1. Human milk中のOPN濃度の比較（参考データ）

ンチン含量測定にご利用下さい。
OPN concentration(μg/mr)

900

キット内容
●ヒト初乳OPN（固相化用）

5μg/tube×2本●ヒト初乳OPN（スタンダード）

0.5μg/tube×1本

800
700
600
500
400
300
200
100
0

●HRP標識抗OPNモノクローナル抗体

4mr×1本初乳A 初乳B 初乳C 初乳D 初乳E 初乳F●ブロッキング原液

10mr×2本2. ヒト初乳OPN精製（ gel permeation chromatography ）過程●OPD tablet

13mg×2錠●洗浄原液（20倍濃縮）

20mr×1本●H2O2

40μr×1本●PBS

30mr×1本●ELISA用96wellプレート

96well×4枚●発色停止液（2N H2SO4 ）10mr×1本

注意：●OPNは微量であり、壁面に付着する場合がありますので、フラッシングしてからお使い下さい。
●ブロッキング原液、洗浄原液はお手持ちの精製水で希釈してお使
い下さい。

母乳

におけるOPN含量
O.D.（230nm）
0.08

OPN（μg/mR）
400

0.06

300

0.04

200

0.02

100

0

1

Fig.1. Gel permeation chromatography chart に各フラクションの OPN測定結果を重ねた図。メインピークに OPN が

0
10
20
fraction No.

30

集中していることがわかります。

標準曲線

1.2

OD(490nm)

1

0.4

Fig.2. Gel permeation chromatographyの各フラクションをSDS-PAGE
し、Stains Allゲル染色キット（コードNo.307-08881 ）で染色したものです。Fig.1において認められたメインピークが、50-80kDaのインタクト
OPNであることがわかります。

0.2〔参考文献〕

0.8
0.6

0
0.1

1

10

100

1000

OPN concentration(ng/mr)１）Koguchi, Y. et al.: Infect. Immun., 70, 1042（ 2002）.
２）Hayman, A.R. and Cox,T.M.: J. Bone Miner. Res., 18（ 10）, 1905（ 2003）.

コードNo. メーカーコード

301-15131

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

OP20

品

名

容

量 希望納入価格（円）Native Osteopontin ELlSA kit 192回用

90,00021

ew Products
Di-4-ANEPPS

蛍光試薬
現在、標識の目的別にさまざまな蛍光試薬が使用されています。そ

膜電位感受性蛍光試薬。

の中でも汎用性の蛍光試薬を取揃えました。この機会に是非ご利用下

含量（ HPLC）：94%以上

さい。

測定波長：λex＝496nm、
λem＝705nm
溶解性：DMSO、
メタノール、
エタノール、DMF

5-Carboxyfluorescein Diacetate

CAS No.：［90134-00-2］

pHプローブ。細胞内で蛍光物質5-Carboxyfluoresceinに加水分解され強い蛍光をもつようになります。

C28H36N2O3S=480.66

含量（ HPLC）：94%以上
測定波長：λex＝492nm、
λem＝518nm〔参考文献〕

溶解性：DMSO、
メタノール、
エタノール、
アセトン

１）Davidenko, J.M. et al. : Nature, 355, 349（ 1992）.
２）Fromherz, P. et al. : Biochim. Biophys. Acta, 1068, 149（ 1991）.

CAS No.：［79955-27-4］

コードNo.

品

名

規 格

Di-4-ANEPPS【Pyridinium,4-{2[6-(dibutylamino)-2-naphthalenyl]041-29111 ethenyl}-1-(3-sulfopropyl)細胞生物学用
hydroxide, inner salt】

容 量 希望納入価格（円）5mg

31,000CPM
C25H16O9=460.39
チオール反応性蛍光試薬。

〔参考文献〕

含量（ HPLC）：94%以上

１）Boitano, S. et al. : J. Cell Sci., 98, 343（ 1991）.
２）Goodall, H. et al. : Nature, 295, 524（ 1982）.
３）Hansson, Y. et al. : J. Immunol. Methods, 100, 261（ 1987）.
４）Bruning, J. W. et al. : J. Immunol. Methods, 33, 33（ 1980）.

コードNo.

品

名

規 格

溶解性：DMSOCAS No.：［76877-33-3］

容 量 希望納入価格（円）5-Carboxyfluorescein038-19291 Diacetate【5-CFDA】 細胞生物学用 100mg

22,000C24H22N2O4=402.44

DiI【DiIC18（3）】〔参考文献〕

生体膜標識蛍光試薬。脂質二重膜中に2つのC18アルカン鎖構造を挿入することによって細胞膜をラベル化するカルボシアニン色素です。

１）Grossman, H. S. : Biochemistry, 22, 5369（ 1983）.
２）Zot, G. H. et al. : J. Biol. Chem., 265, 14796（ 1990）.

測定波長：λex＝550nm、
λem＝565nm

コードNo.

溶解性：DMSO、エタノール

CPM【7-Diethyamino-3-（4-maleimido045-29131 phenyl）-4-methylcoumarin】
細胞生物学用 25mg

CAS No.：［41085-99-8］

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）30,000

Fluorescein-5-maleimide
特異性の高いチオール反応性蛍光試薬。

C59H97ClN2O4=933.87

測定波長：λex＝492nm、
λem＝515nm〔参考文献〕
１）Derzko,Z. et al. : Biochemistry, 19, 6050（ 1980）.
２）Leuther, M.D. et al. : J.Immunol., 127, 893（ 1981）.
３）Honig,M.G. and Hume, R.I. : Trends Neurosci., 12, 333（ 1989）.
４）McConnell, S.K. et al. : Science, 245, 978（ 1989）.

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）

溶解性：DMF、水(pH>6）

CAS No.：［75350-46-8］〔参考文献〕
Bigelow, J. D. et al. : Biochemistry,

C24H13NO7=427.36

30, 2113（ 1991）.

DiI【DiIC18（3）、
1,1 -

048-29121 Dioctadecyl-3,3,3,3 -tetramethylindocarbocyanine Perchlorate】

22

細胞生物学用 50mg

17,000

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）066-04501 Fluorescein-5-maleimide 細胞生物学用 25mg

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

39,000ew Products
100
80
60

RFI

カムチャッカカニの肝臓由来の新規のDNAヌクレアーゼ
Duplex-specific nuclease【DSN】

40

Evrogen社では、
カムチャッカカニの肝臓由来の新規のDuplex-

20

Specific Nuclease（ DSN）
を販売しています。DSNは、1本鎖DNAに0

比べ、 2本鎖DNA、 DNA-RNAハイブリッド中のDNAを優先的に切断するDNA分解酵素です。さらに、2本鎖中の不完全一致部分より、完全一致部分を特異的に分解する特長があるため、 SNP分析へ応用できます。また、cDNA Normalizationができるため、rare遺伝子のクローニングに威力を発揮します。

0

10

20

30

40

50

60
Time, min(B)1本鎖オリゴヌクレオチド（20mer）及び蛍光標識した2本鎖オリ（20mer）に対するDSNの効果
ゴヌクレオチド
蛍光標識オリゴヌクレオチドは、5'末端にfluorescein、3'末端にクエンチ
ャーをつけている。酵素処理は、35℃、各処理時間行った。蛍光強度は、
励起波長550nm、蛍光波長570nmで測定した。オリゴヌクレオチド中のRFI（ 相対的蛍光増加）は、（Fi-Fo/Fmax-Fo）x100% で決定した。
Fi:DSN処理後の基質の蛍光強度、F0:酵素なしでの基質の蛍光強度、

Fmax:100%分解時の蛍光強度をそれぞれ示す。

基質特異性の実験
Paralithodes camtschaticus

特RNAに対しての分解は認められないが、 DNA-RNAハイブリッド中のDNAを特異的に分解します。8−12bpの完全一致のDNA−DNAハ

長

イブリッドと少なくとも1塩基のミスマッチのある同じ長さのDNA−DNA●2本鎖DNA、DNA-RNAハイブリッド中のDNAを認識して切断

ハイブリッドを区別して切断することができます。

●RNAには作用しない
A

で、EDTAにより阻害●Mg2+要求性（7mmol/r）

T7C duplex

B

T9P duplex

C

TP duplex

600

600

600

500

500

500

Digestion efficiency, %●SNP解析にも応用2）

400

300

Fluorescence (arb units)●cDNA Normalizationにも応用可能1）

Fluorescence (arb units)●ヌクレアーゼ活性：pH 6以上、75℃以下で安定に作用●rare遺伝子のクローニングに有用

Fluorescence (arb units)●至適pH：7〜8●至適温度：55〜65℃

400

300

400

300

200

200

200

100

100

100

100

80

0

0
500

550
Wavelength, nm

60
40
20

0

10

20

30

40

50

60

70

80

Temperature, ℃

温度におけるDSNの酵素
活性基質となるDNAの特異的構造に対するDSNの作用
1

2

3

4

550
Wavelength, nm

500

550
Wavelength, nm

ミスマッチ（A、B）及び完全一致のDNA duplexに対するDSNの基質
特異性
5-carboxyfluorescein(Fl)-5'-gccctatagt-3'-TAMRAシグナルプローブとそれと相補的な各オリゴヌクレオチドとのduplex形成後、35℃で15分間、DSN処理した。蛍光スペクトルは、480nmの励起波長により得られた。赤線
は、酵素なしの基質蛍光強度、黒線は、DSN処理後の基質蛍光強度。

内容●Duplex-specific nuclease（凍結乾燥品）●DSN storage buffer 50mmol/r Tris-HCl（pH 8.0）

λ DNA
M13 DNA

0500(A)1本鎖M13ファージDNAと２本鎖λファージDNAにおけるDSNの効果
lane1:ss M13 pharge DNA
lane2:dsλDNA
lane3:ss M13 pharge DNAとdsλ
DNA を加え、DSN 処理 70℃、
1.5分間処理
lane4:ss M13 pharge DNAとdsλ
DNAを加え、DSN 処理 70℃、5分間処理

和光純薬時報●DSN reaction buffer 100mmol/r Tris-HCl,（pH 8.0）,10mmol/r MgCl2, 2mmol/r DTT〔参考文献〕
1）Zhulidov, P. A. et al.: Nucleic Acids Res., 32（ 3）, e37（ 2004）.
2）Shagin, D. A. et al.: Genome Res., 12, 1935（ 2002）.

コードNo. メーカーコード

580-69991

Vol.72, No.2（2004）

EA001

品

名

Duplex-specific nuclease, lyophilized(50 Kuniz-units)

容

量 希望納入価格（円）1Set

86,000

23

化学大家

396
ロバート・ボイル（1627.1.25〜1691.12.30）
科学史家

島尾

永康

呼吸、燃焼、温度計、寒剤、光、色、指示薬、血液と尿、リン、蛍光、電気、気圧

生涯とその時代

計、気象学などあらゆる問題を扱った。こロバート・ボイルは 1627 年 1 月 25 日、初れほど多様な研究をしたものは稀であろう。

代コーク伯爵、リチャード・ボイルの 14 人の徹底的な実験家であり、抽象的な理論の構子の末っ子、男児としては 7 男として、二築には興味がなかった。 22 歳から 64 歳で番目の妻キャサリンによってアイルランド、マ

死ぬまでほとんどの時間を研究室で過ごし

ンスターのリスモア城で生まれた。 父は 22

た生涯は、同時代の誰よりも現代の実験科

歳のとき徒手空拳でアイルランドに渡り、才学者の生涯に似ている（図 1）。 富裕なボ

覚と貪欲と人間的魅力と幸運によってアイル

イルはロンドンの貧困層やアイルランドのプロランドで広大な領地と絶大な権力をもつ人物

テスタントを財政的に支持し、マレー語、トにのし上がった。 他の兄弟姉妹と同様、ロルコ語、ウェールズ語、アイルランド語へのバートも生まれるとすぐ、強く育つように 3、聖書の翻訳を財的に援助した。 信仰心に

4 年も農家へ里子に出され、質素で不便なおいて同時代に突出していたボイルは、科生活に慣らされた。 満 2 歳のとき母が亡く学に親しむと無神論になるという非難につよなった。ロバートは母を知らずじまいだった

く反論し、科学は宗教を確証するという「ボことを生涯の不幸とした。 8 歳になるとすぐ

図1. ロバート・ボイル

上の兄とともに、紳士の子弟の学校であるイー

イル説教」 が毎年おこなわれるよう遺贈した。
ロバートは他の兄弟とは異なり、政治とのトン校へ遣られた。イートン校は 5 時半起床

究センターとなった。最初の科学的著書、『空かかわりを避け、知的探求を続けた。 実験の生活だった。 4 年後、教育のためフラン気の弾性と重量』（1660）で急速に名声を研究への没頭と著作の量は群を抜いている。

ス人チューターとともに大陸旅行に出かけ確立した。 1660 年、王政復古になると、王

ボイルはなぜそのような生涯を送ったのか。

（1639）、主としてスイスとイタリアで過ごした。

立協会設立の発起人となり（図 2）、創設

これについては次のような解釈がある。 生まこのとき父が死んだ。ジュネーヴでは 「生期の評議員や短期間の会長も務めた。 オ

れてすぐ乳母に預けられたが、アイルランド

涯の最も重大な出来事」を体験し、キリス

ルデンバーグとフックという2 人の重要な専には新生児をミイラのように布でくるむ習慣がト教徒としての強い自覚をもつにいたった。

門職員を協会に与えたのもボイルである。

あり、新生児は手足の自由を奪われ、大小以 後 、 積 極 的なキリスト教 徒となった 。

王立協会での真空実験の披露に臨席した

便ぐるみになって苦しんだ。ボイルには生涯

1644 年（17 歳）、イギリスに帰国した。
イギリス革命はすでに始まっており、王党・チャールズ 2 世は、長時間かけて空気の重続いた吃音があったのは、幼児期のこの苦さを測っているだけではないかと大笑した。

しい体験と、ほとんど母親の愛情を受けなかったことによると考えられる。 ボイルが生

国教派と議会・清教徒派とが戦った内戦でボイルは大学には入らなかったが、1665 年

はボイルの一族は二つに分かれた。 兄弟たにオックスフォード大学から医学博士を授与

涯結婚しなかったのは、父親が早くから決

ちはみな王党についたが、ロバートが大陸された。ロンドンがペストと大火に見舞われ、めた婚約者が他の男性と結婚してしまったこ

から帰国早々身を寄せた、最も頼りにしていミルトンが 『失楽園』を書き、レンが大聖堂とと関係があるかもしれない。 女性から逃れ、た姉キャサリンは議会派であった。 嫁しての建築を設計したころ、ボイルは科学の象研究室という非人間的な環境にいるとき安子爵夫人、レディ・ラネラーとなっていた 12徴的存在だった。 1668 年、ロンドンに移り、堵感をもったというのである。 母親代わりで歳年長のこの姉は、内戦時に詩人ミルトンを

生涯の終わりまで姉キャサリンの家に住み、あった姉レディ・ラネラーの存在は大きい。

庇護し、主なピューリタン知識人たちと親し研究室を作り化学を研究した。 1680 年 、彼女が死んだ 8 日後に後を追うようにボイルくしていた。 彼女は終生ロバートの面倒をよ

王立協会会長に選出されたが病身といっても死んだ。しかしこの解釈に対してはボイルく見た。 サミュエル・ハートリブの 「インヴィ断った。

の吃音がどの程度だったか不明であり、研ジブル・カレッジ」にロバートを紹介したのもボイルは、空 気の重 量 、気 体の法 則 、究室には絶えず訪問者がいて孤独だったこ彼女である。その影響で錬金術文献を広くとはなく、王立協会の中心的な存在だった

渉猟し、1649 年、化学実験に興味を持ちボイルが、人から逃げたことはないという反始めた。毎日熱（マラリア）を患い（1649）、論がありうる。

全身浮腫を患った（1654）、多病なボイル
は自分用の医薬を作った。オックスフォード
で自然研究が活況を呈し始めたので、1655
年、そこへ移った。 裕福なボイルは大金をかけて研究室を設け、それは人々が集う研

24

図2. 王立協会設立の発起人としてのボイルの署名（1660年12月5日）。

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

空気学の実験
真空の発見は 17 世紀半ばの劇的な出来事であった。最初に真空を作ったのはトリチェ

ボイルの空気学を追試した者は多かったが、わっている。この書物は空気に関するあらリであるが（1643）、真空ポンプを発明した

ボイルほど独創的な研究をしたものはなく、ゆる問題を網羅した、永年の研究の総括でのはゲリッケ（1654）である。 かれのポン

器用さと技量でボイルに及ぶものはいなかった。

ある。気象学的現象も論じ、研究協力者ジョプは屈強な男が 2 人がかりで操作するというボイルとフックは第 2 号機ポンプも考案した

ン・ロックの 17 年間のオックスフォードの気代物だったので、ボイルは簡単に操作でき（1669 年発表）（図 5）。 第 3 号機はドニ・

象観測記録も含まれている。

るポンプの製作を助手に命じた。これに成パパンが考案し、ボイルのところで研究する功したのがロバート・フックである（1658）。

ときフランスから持参した（1676）。 ボイル

ボイルはそれを「空気エンジン」と呼び（図 3）、は真空計も考案し、圧力下の空気を研究す

それによっておこなわれる空気の研究は当時、るた め 圧 搾 ポンプも作 った 。 ちな み に「空気学」（pneumatics）と呼ばれた。こbarometer という語の初出はボイルである。

当時の化学者の間では、四元素説（火、の新分野の科学に独創的な貢献をしたのがボイルは、真空とは何か、についても考え

空気、水、土 ）、もしくは三原質説 （ 塩、ボイルである。 真空ポンプは 19 世紀末のＸ

ざるを得なかった。ガラス器の真空中の対

イオウ、水銀、）がおこなわれており、どの線管や 20 世紀のサイクロトロンのように新し象が見えるのは光が通るからであり、同様

物質を熱分解しても四元素または三原質のい科学機器となった。ボイルは、真空は音、に磁気も真空中を通る。これは空気より微すべてを生じるとされた。このような元素・

懐疑的化学者

燃焼、生命を消滅するが、電気、磁気の細な物質が残留していて光や磁気の媒質と原質の実在を経験主義の立場から否定した

力を妨げないこと、温水を沸騰させることななると考えられた。とすれば完全に空虚でのがボイルの 『懐疑的化学者』（ 1661 ）

ど多数の実験を考案した。 昆虫は真空中はなく、単に空気がないだけではないか 。

である。ボイルが提出した、元素は一定数で死なないというボイルの観察は、20 世紀

そこでボイルは微細物質を検出するため巧かという疑問は、四元素より多い多数元素になって確認された。 43 篇の実験記述から妙な装置を考案したが、微細物質は実験を誘発する問いである。また、すべての物なる 『空気の弾性と重量』（ 1660 ）が最的には検出できないことを示す結果となった質は同数の元素からなるかという疑問も、当初の科学の著書であり、これによって一挙（図 6）。

に名声を博した（図 4）。ボイルの実験とそ

時の元素概念の否定であった。にもかかわボイルは呼吸や燃焼で消費される物質はらずボイルは現代的な元素概念には到達せず、の解釈に対して、強く攻撃してきたのが政空気ではなく、空気中の別の物質と考えて具体的な化学元素の提示もない。ボイルは

治哲学書、『リヴァイアサン』 の著者としていた。 実質的に水素、二酸化窒素、炭酸

化学に、新しい科学の基本理念である機械

有名なトーマス・ホッブスとイエズス会士フラガスなどの「人工空気」を発生させていたが、論、とくに原子論に触発された粒子論を導ンチスクス・リーヌスだった。 ホッブスは真それらと大気の違いは解明しなかった。 空

入しようとした。 粒子論を化学にもち込んで、

空否定論者で、リーヌスは空気が水銀柱

気は化学的に不活性と見ていた。しかし 18

錬金術師や職人の技として知識人から低く

76 センチという巨大な重量を支えられるはず

世紀の空気化学を誘発したのはボイルの空見られていた化学を学問的なものとし、化がないと主張した。この論争から、空気の気学の研究である。 死後に出版された最学者の社会的地位を高めようとしたのである。

圧力（弾性）と体積とは反比例するという後の著書は 『空気概説』（1692）であり、しかしそのボイルの粒子論では金属の相互ボイルの法則が生まれた。ホイヘンスその他、ボイルの科学研究は空気に始まり空気に終転換は可能である。ボイルの 『金の劣化』

a.
b.
図3. ボイルの最初の真空ポン
プ。ガラス製の受器の容量は約 28.5リットル、真鍮 製 の 円 筒 型 ポンプの長さは35.6センチであった。

図4. 『空気の弾性と重量』（1660）。
ボイル の 最 初の科学の著書。

図5. ボイルの真空ポン
プ、第2号機。円筒は水に浸けて気密性を高め、ガラ
ス受器は円筒から分離して管でつないである。

和光純薬時報c.

図6. ボイルの真空実験の装置。a）真空中の音の伝播を検証。b）, c）空気より微細な媒質の検出の装置（『続・空気の弾性と重量』、
1669）。

Vol.72, No.2（2004）

25

（ 1678 ）は金を卑金属に転換するという、かった新しい植物性の色は 19 世紀半ばま

血液の凝固を遅らせる塩類にも詳しく、さま

錬金術の逆の実験である。 匿名出版だが、で現れなかった。

ざまな物質の抗凝血作用の実験をおこなっ

ボイルが錬金術を信じていたことを示す著作
である。

化学の研究

2）リンの研究。 夜光物質は熱を伴わている。 血液を蒸留して得られるエキスが、ない光として古来人々の好奇心を誘った。

初 期の卒中 、しびれ 、喘 息 、てんかん、

ボイルはドイツ人ダニエル・クラフトの 「冷た肺結核、頭痛に効き、尿のエキスが、ヒスい火」（燐光）を見て刺激され、わずかな

テリー、肋膜炎 、咳 、壊血病 、脳溢血 、ヒントを得ただけで、人間の尿から独自にリ

発熱、黄疸、に効くと述べているが、ボインを遊離した。リンは 1667 年にドイツ人ヘニルは本当にこれだけの効能を信じていたの

1） 指示薬の研究。『色に関する実験とッヒ・ブラントが発見し遊離したのであるが、だろうか。

考察』（1664）はボイルの著作中でも重要ボイルもリンを独立に発見したとされている。

4） 鉱水の研究。 当時、鉱水は医療になもので、白色、黒色、色一般、溶液のボイルはその製法を死後発表されるべく王広く用いられたので、化学者はたえず鉱水色を扱っている（図 7）。ボイルは 「プリズ立協会へ委託したが、それまでに著書、『気の有用性や成分についての助言を求められ

ムの虹彩」（のちニュートンはスペクトルと呼状のノクティルーカ』（1680）と『氷状のノた。 ボイルの 『鉱水の実験誌』（ 1685 ）んだ）に注目はしたが、白色光からの色光

クティルーカ』（ 1682 ）で発表した。 いずは未完だが、最良の概説書である。 鉱水の生成には思い及ばなかった。ボイルは光れもボイル著作中でも有名なものとなっている。

の物理的、化学的性質に関する 30 項目のよりも溶液の色に興味をもったので、化学と前者はリンの水への懸濁液を扱い、後者は検査には味、臭、酸性度、粘性などが含ま

くに指示薬を発展させた。リグヌム・ネフリ

純粋の、無色透明の固体リンを扱っている。

れる。 最後はさまざまな鉱水の医学的効用

ティクムという南米産の樹木の浸出液は腎臓

リンの英語 phosphorus には 「光を発する」の論述で結んでいる。 ボイルはまた海軍が結石（ボイルの生涯の病気でもあった）にというギリシア語に由来する意味があるにも大きな関心をもっていた海水から真水を製造効くとされていたが、その黄色い溶液に青かかわらず、ボイルは noctiluca（夜光虫）する問 題も扱った 。 ちなみに c h e m i c a l

色のオパール状の閃光がある。これは酸にを好んで使った。リンは空気の存在下でのanalysis の語はボイルが初出であり、ジョン

よって消え、アルカリによってまた元に戻る。

み燐光を放つこと、リンの可燃性、固体リン

ソンの英語辞典でも、オックスフォード英語

これを指示薬として最初に使ったのはボイルは水中で保管できること、白リン（ 黄リン）

辞典でもボイルの文章が初出例として引用さである。 簡単に入手しやすいスミレの青いと赤リンがあること、リン酸を生じること、種々れている（図 8）。

汁が酸で赤くなり、アルカリで緑色になることの溶剤への溶解度、きわめて微量のリン（水は古くから知られていたが、ボイルは、これの 50 万分の 1 ）でも燐光を検出できること

はすべての酸に適用でき、したがってこれなどを明らかにした。 19 世紀後半までこれで酸を定義できるとした。 中性点を決定でき以上のリンの研究は出なかった。

たので、おおまかに定量的でもあった。こ3） 血液と尿の研究。 ボイルの医学的れによって始めて物質を酸、アルカリ、中性

著作で最も重要なのが『人間の血液』（1684）に分類できた。 赤、白、黄などあらゆる色である。 生理化学の始まりというべきものでのおびただしい植物の汁の色の変化も調べある。「健康な人体の血液の記述」 の見た。リトマスの記述もある。ボイルが使わな出しで、動脈血と静脈血の色、人血の味、臭、
不燃性、比重、鮮血の熱、人血の漿液と赤色部分の相違、人血の化学分析、人血から化学的に得られる諸種の物質の比率、
人血の化学的用途、体質の異なる人の血図8. ボイルのメダイヨン（ジャン・カヴァリエ
作の象牙のメダイヨンから鋳造した真鍮製）。"Robertus Boylæus 1690"の銘がある（大英博物館蔵）。

液の相違、人血と哺乳類、鳥、魚、昆虫などさまざまな動物の血液との類似と相違な
ど 30 項目を扱い、また 「健康な人体の放出する尿の記述」についても30 項目を扱っ

図7. 『色に関する実験と考察』（ 1663 ）。ボ
イルの重要著作の一つ。

26

膨大な著作

ている。 血液と尿には多くの共通の性質がボイルは著書 42 篇、その他を含めて 300あることをボイルは十分に知っていた。 ボイ

万語という膨大な著作を遺した。 筆者はか

ルは実験のための血液の入手には困らなかっ

つて一つの書棚全部がボイル著作の初版た。 当時、瀉血がおこなわれていたから、本というコレクションをケンブリッジ大学で見た散髪屋で 5、6 オンス（約 160 ｍr）ほどのことがある。筆者の手許にあるトーマス・バー

新鮮な血液は簡単に手に入った。 かれはチ編、『ロバート・ボイル著作集』 全 6 巻

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）

（1772）は、著作 94 篇、ボイル書簡、ボイ型のもので、それまでボイルほど装置や操作

ルのところで研究したことがある。アンブロー

ル宛書簡、その他を含めて総 4769 ページ

法を詳しく記したものもなければ、かれほど

ズ・ハンクウィッツはボイルの助手としてリンをである。この他、未完という理由で除外さ

失敗や困ったことを率直に述べたものもなかっ研究し、ボイルの死後ロンドンで化学薬品製

れた草稿が 56 編ある。ジョン・フルトンのた（図 9）。

造業を始め、固体リンのヨーロッパでの販売

労作、『ロバート・ボイル書誌』第 2 版（1961）を独占した。

は、著書 42 篇、論文 39 篇を収録している。
最近、ハンター及びデーヴィス編、決定版 『ロバート・ボイル著作集』、全 14 巻（1999 〜

ボイル研究室の協力者たち
物理実験に巧みなフックがボイルの空気

後世に遺された実験記録の豊饒出版された。 著作には結構長編が多い。

学の研究にどれほど関与したかは明らかで知識人が実験研究を不信の目で見てい比較のためバーチ編、『ボイル著作集』 でない。ボイルはフックの役割について何も述た時代にボイルは実験に専心した。 ボイルのページ数をカッコで示して主なものを列挙

べていないし、自己を主張してやまないフッが死んだときホイヘンスやライプニッツは、ボすると、『懐疑的化学者』（129）、『空気クもとくに主張していない。 給料をもらっていイルが実験にその才能を浪費し、理性よりの弾性と重量』（117）、『続・空気の弾性る助手には発見の権利はなかったのかも知

観察に重きをおきすぎて、統一した思想体と重量』（115）、『続々・空気の弾性と重量』

れない。 2 人が同じ問題を別個に発表した系を残さなかったと哀悼の意を表した。しか（ 88 ）、『空気概説』（ 134 ）、『実験哲学のは毛細管現象で、これはフックの最初のしこれはボイルを理解しないものの言葉だった。

の有用性』（246）、『色についての実験と著作となっている。メイヨーも同じ頃、ボイル

演繹的なデカルト哲学が廃れても、ボイルの考察』（127）、『冷気についての実験と観察』の助手だった。ボイルの血液研究に協力し実験的発見は滅びなかったのである。ニュー（273）、『形相と性質の起原』（137）、『人たのは、後年、哲学で有名になるロックでトン科学の成功がボイルの影を薄くしたの間の血液』（165）などである。 中世ロマンある。ボイル研究室の協力者たちの顔ぶれ

は確かだが、そのニュートンはボイルの著作

2000）と、『書簡集』、全 6 巻（2001）がスの形をとった神学論、『清らかな愛』（51）、は国際的でもあった。フランスからパパンとを徹底的に研究し、それを発展させたので『神学の長所』など神学の著作も多く、『折々ギヨーム・オンベルグが来た。 創設期のフある。 18 世紀にボイル著作集がよく読まれの想い』（ 139 ）など自伝的なものもある。

ランスの科学アカデミーにはボイルほどの化たのは、その豊富な実験記録のためである。

著者名の前についている The Honourable

学者はいなかったので、オンベルグはパリへ

ボイルの百年後、ラヴォワジエほどの科学者という肩書きは、伯爵の子息への敬称である。

帰ると科学アカデミー会員として化学の改革でさえも実験結果がボイルと一致しなかった

ボイルはよく出版社に現れてはページ付けがに乗り出した。ドイツの神秘思想家、フロギ

ときはそれを気にした。 実験家ボイルにはそ済んでいる本に、削除や追加をさせる癖がストン説の創始者ヨーハン・ベッヒャーもボイ

れほど権威があった。 1 人の科学者の実験あり、出版社を困らせた。 裕福なボイルはが百年後の科学者に読まれたこと自体、希その費用を十分に支払ったので、出版社は有といわねばならない（図 10）。

天才人の奇癖と諦めていた。 ベーコンと同
じく、ボイルは体系を嫌い、体系に対して不信の目を向けていたから、ボイル著作は体〔参考文献〕

系的でなく、文体は冗長で脱線が多く、とりT. Birch ed., The Works of Robert Boyle, 6 vols.,（1772）,とめがない。しかし科学報文としては新しい

reprinted in 1965.； J.F. Fulton, A Bibliography of RobertBoyle, Oxford University Press,（1961）, second edition.；
M. Hunter ed., Robert Boyle by Himself and his Friends,
W. Pickering,（1994）.; M.B.Hall, Robert Boyle on Natural
Philosophy, Indiana University Press,（1966）；. Y.S.Kim,"Another Look at R. Boyle's Acceptance of Mechanical
Philosophy," Ambix, 38,1〜10（ 1991）；. D.T.Burns, "R.
Boyle: A Foundation Stone of Analytical Chemistry in
British Isles," Anal. Proc., 19, 224〜233, 288〜295（ 1982）；.
B. Kahr, "R. Boyle: ａFreudian perspective on an eminentscientist," British J. History of Science., 32, 277〜284（1999）.

図9. ロバート・ボイル彫像（ライスブラッ
ク作、ケンジントン宮殿蔵）。

（ヨー図10. ロバート・ボイル肖像、62歳。
ハン・ケルセボーム画、1689年）。
図1はこの一部分の拡大。

和光純薬時報Vol.72, No.2（2004）27

土壌汚染物質測定用

JIS K 0102対応
ひ素 測定試薬

１２種揮発性有機化合物混合標準液

ひ素は、農薬･顔料･染料･医薬品などの製造に用いられ、
これら「土壌汚染対策法」は2002年に制定され、2003年3月より施行さの工場排水から検出されることがあります。JIS K 0102（ 工場排水試れました。この法律では、有害物質を扱っていた工場を廃止する場
合や、土壌汚染の恐れがあり人の健康に被害を及ぼす場合に、
そ度法、水素化物発生原子吸光法、水素化物発生ICP発光分光分析の土地の所有者が土地の汚染状況を調査することを義務づけて法が収載されています。当社では、
これら公定法に対応した試薬をいます 。当社では、第1種特定有害物質に規定されている揮発性取揃えています。

有機化合物をガスクロマトグラフなどで一斉分析するための混合標

分析のフローシート

水素化物発生原子吸光法（JIS K 0102)

準液を発売しました。

内
100mRビーカー

着色するまで滴下

試料（Asとして0.1μg〜1μgを含む）
硫酸（1＋1）1mR
硝酸2mR
3g/R過マンガン酸カリウム溶液（0.3w/v％溶液）

加熱し、硫酸の白煙を発生
塩酸（1＋1）4mR容

1,1-ジクロロエチレン, ジクロロメタン, cis-1,2-ジクロロエチレン, 1,1,1-トリクロロ
エタン, 四塩化炭素, 1,2-ジクロロエタン, ベンゼン, トリクロロエチレン,
cis-1,3-ジクロロプロペン, trans-1,3-ジクロロプロペン, 1,1,2-トリクロロエタン,
テトラクロロエチレン（各1mg/mrメタノール溶液）

コードNo.

水素化ひ素発生装置への移送

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）228-01481 12 VOC Mixture Standard Solution 土壌汚染物質測定用 2mr×10A

14,000

水を加え20mRとする
注入

よう化カリウム溶液（200g/R）2mR
塩化すず（Ⅱ）溶液2mR
鉄（Ⅲ）（10mg Fe/mR）溶液1mR「環境分析用試薬総合カタログ2004」発行

撹拌後、15分静置
水素化ひ素発生装置と原子吸光分析装置の接続

マグネチックスターラーを作動
水素化ひ素の発生
水素−アルゴンフレームに導き
193.7nmの指示値を記録

環境分析用試薬をすべて網羅したカタロ

アルゴン置換グの「 環 境 分 析 用試 薬 総 合カタログ」の亜鉛1g（＊）

2004年度版を発行しました。

（＊）亜鉛の代わりにテトラヒドロほう酸ナト
リウムを用いることも可能。この場合は、塩化すず（Ⅱ）溶液、 鉄（Ⅲ）
（10mg
Fe/mR）溶液は添加不要。

◆内 容◆［参考］3g/R過マンガン酸カリウム溶液は、JIS K 0102工場排水試験法 クロム、バ
ナジウム、スズの分析でも使用します。

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）013-15481 Arsenic Standard Solution（As:1000mg/R） JCSS
100mr
013-15501 Arsenic Standard Solution（As:100mg/R） JCSS
100mr
084-01086 Hydrochloric Acid
ひ素分析用 500mr
097-00835 Ammonium Iron（Ⅲ）Sulfate 12-Water 試薬特級
500g

2,600
2,900
850
2,300

091-00872 Iron（Ⅲ）Chloride
095-00875 Hexahydrate

25g
500g

1,150
2,600

500mr
500mr

950
1,400

0.3w/v％ Potassium
排水試験用 500mr
Permanganate Solution

3,000

143-01326 Nitric Acid（1.42）
141-06785 35％ Nitric Acid（1＋1）
168-21175

試薬特級
試薬特級
−

164-03972
166-03971 Potassium Iodide
168-03975

試薬特級

196-10542
Sodium Tetrahydroborate
198-10541

原子吸光
分析用

25g
100g
500g

1,200
2,100
4,500

206-06681 Tin（Ⅱ）Chloride Dihydrate 有害金属測定用

25g
100g
100g

3,100
9,400
2,200

266-00901
Zinc, Powder
268-00905

100g
500g

2,200
3,500

500g
500g

3,300
3,300

267-00095 Znic, Sandy
266-00065 Znic, Shot

ひ素分析用
ひ素分析用
ひ素分析用

環境分析用試薬
環境分析用試薬総合カタログ総合カタログ
2004
2004

１．残留農薬試験用試薬：試験用溶媒、
標
準品、
標準液、
サロゲート、
クロマト器材、測定キット
２．水質試験用試薬：標準品、
標準液、
分析
例、
測定キット、キットの使用方法
３．大気分析用試薬：標準品、標準液、分析例
４．ダイオキシン類分析用試薬：標準品、標準液、試験用溶媒、
前処理試
薬、
測定キット
５．難燃剤分析用試薬：標準品、標準液
６．環境ホルモン分析用試薬：標準品、標準液、試験用溶媒、測定キット
７．食品分析用試薬：標準品
８．動物医薬品試験用試薬：標準品
９．原子吸光分析用試薬：金属標準液、ICP分析用多元素混合標準液
１０．有害金属測定用試薬
１１．精密分析用試薬
１２．高速液体クロマトグラフ用溶媒／LC/MS用溶媒
１３．分析機器・その他機器：マイクロプレートリーダー、ウォッシャー、
有機溶媒回収装置、標準液用バイアル瓶
１４．確約書１５．索引

標準品等は物性、含量、分析データの有無、
構造式、
CASナンバー、分子式、
別名などをできる限り記載しました。
また、
危険性情報、保存条件、法規制なども各項目の試薬について記載しました。
※カタログをご希望の方はご請求下さい※

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.72 No.2

28

２００４年４月１５日 発行
発行責任者 松田知憲
編集責任者 大西礼子
発 行 所 和光純薬工業株式会社
〒５
４
０-８
６
０
５ 大阪市中央区道修町三丁目１番２号
TEL.０
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２
０
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４
１（代表）
URL http://www.wako-chem.co.jp
印 刷 所 株式会社 林欧文堂

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Vol.72 No.2

験法）では、
ひ素の分析法としてジエチルジチオカルバミド酸吸光光