ISSN 1347-4804

October 2017Vol.85 No.4

〔総説〕

「アリル位アリール化反応を超高効率で触媒するパラジウム NNC －ピンサー錯体」

浜坂

剛………   2

〈テクニカルレポート〉「Wakopak® Ultra APDS TAG® を用いたアミノ酸含有飲料中のアミノ酸類の定量」【連

須藤

勇紀………   6由起子、富田泰輔………   8載】〈神経変性疾患研究の最前線〉「第 3 回

アルツハイマー病（3）アミロイドβ」

堀〈なるほど !!  ELISA －基礎とコツ－〉「第 3 回ELISA の操作法とそのポイント（中編）」

株式会社シバヤギ編……… 12〈The Gateway to qNMR 〜定量 NMR への扉〜〉「第 2 話qNMR で精確な測定をするために」

三浦

亨……… 14山崎

昶……… 28〔化学大家〕「アーネスト ･ ラザフォード」〔製品紹介〕
有機合成

免

カップリング反応用触媒「DPP-NNC Pd」……………… 5
カーボネート溶媒…………………………………………… 18
硫酸化ジルコニア… ……………………………………… 18
酸性有機溶媒……………………………………………… 19

抗アミロイドβ抗体… ……………………………………… 11
SmartEnzymesTM Genovis AB… ……………………… 21
オレキシンA ELISAキットワコー… ………………………… 24
抗ポドプラニン抗体………………………………………… 26

疫

環境・分析

培

ワコーパック ® ウルトラ APDS タグ ®……………………… 7
定量 NMR 用内標準物質………………………………… 17
アドバンテーム標準品……………………………………… 19
ポジティブリスト関連標準品… …………………………… 20

神経細胞用分散液………………………………………… 22
サイトカイン………………………………………………… 23
StemSure® hPSCリムーバー【rBC2LCN-PE38】… … 32
病

細胞生物

キシレン代替品「パソクリーンTM」………………………… 26

ロイコマラカイトグリーン反応用試薬… …………………… 20
OX2Rアゴニスト「YNT-185･2HCl」……………………… 25

機

養

理
器

MPR エンドトキシン測定システム for BT… ……………… 23〈ScreenF ectTM 通信〉「HeLa 細胞への siRNA 導入データ」……………………………………………………………………………………………… 27〔お知らせ〕
qNMR Summit 2018 in Tokyo 開催のご案内……………………………………………………………… 16
第 33 回 Wako ワークショップ開催のご案内… ……………………………………………………………… 25

1

R

esearch
アリル位アリール化反応を超高効率で触媒するパラジウム NNC－ピンサー錯体
自然科学研究機構

分子科学研究所

生命・錯体分子科学研究領域

錯体触媒研究部門

浜坂剛

1 はじめに遷移金属を用いた触媒的有機分子変換工程は、様々な有用化合物を合成するための強力な手法である。特に、パラジウム触媒を用いた炭素−炭素結合形成反応は、実験室スケールから化学工業プロセスに至るまで広範に用いられている 1）。一方でこれらの反応では、標的分子を高収率で得るためにはパーセントオーダーのパラジウムが一般に必要とされている。そのため、しばし

図１．代表的なパラジウムピンサー錯体

ば生成物中へのパラジウムの混入が問題となる。特に、医薬品や機能性有機材料等を合成する場合、製品中への遷移金属類の混入が制限されているため、その除去には大きなコストがかかる（ICH-Q3D ガイドライン 2） に従え
ば、例えば経口薬でのパラジウムの許
容混入量の上限は 10 ppm である）。
また、クラーク数が低いため資源枯渇

は、DPP-NNC Pd を触媒として用いは、触媒的炭素－炭素結合形成反応のの可能性がある等の問題もある。これた高効率アリル位アリール化反応につ一つである 8）。本反応では、一般に、らの問題を解決しうる一つの方法としいて紹介する。

標的生成物を得るためには 1 mol% 以て、ppm オーダー以下で機能する超高効率触媒の開発が注目されている 3）。
高効率錯体触媒の一つとして、ピン2 DPP-NNC Pdの合成

上の触媒量が必要とされており、ppm
オーダー以下の触媒量で本反応を実現している例は限られている 9）。我々はサー錯体がある 4）。溝呂木−ヘック反触 媒 機 能 検 討 を 始 め る に 当 た り、

DPP-NNC Pd がアリル位アリール化

応や鈴木−宮浦反応をモデル反応とDPP-NNC Pd の大量合成を行うこと

反応を ppm オーダー以下の触媒量でし、その触媒活性が評価されている。

とした。塩谷先生らの合成法に改良

効果的に進行させることを見出してい図 1 には溝呂木−ヘック反応を効果的を加え、DPP-NNC Pd の 10 g スケー

る。 本 節 で は、DPP-NNC Pd を 触 媒に触媒する代表的なピンサー錯体触媒

ルでの合成に成功した（図 2）。すなとして用いたアリル位アリール化反応を示す 5）。我々も高効率錯体触媒開発

わち、2,9－ジフェニル－1,10－フェナの条件検討について述べる。

に興味を持ち、ピンサー錯体触媒の研

ンスロリンとジクロロビス（アセトニ

DPP-NNC Pd を 0.1 mol% 量 用 い、究を進める中で、1,10−フェナンスロトリル）パラジウムをトルエン－メタ

酢酸シンナミル（1a）とテトラフェリン骨格を有するパラジウム NNC －ノール混合溶媒中で室温にて 30 分間

ニルホウ酸ナトリウム（2a）の反応

ピンサー錯体（図 2：DPP-NNC Pd）

攪拌後、50 ℃に昇温しさらに 6 時間

をメタノール中 50 ℃にて実施したとが、酢酸アリル誘導体と有機ホウ素化

攪拌後、ろ過することで標的錯体がころ、反応は 1 時間以内に完結し、標合物によるアリル位アリール化反応を

10.05 ｇ、97% 収率で得られる。本錯的生成物 3aa が 91％の単離収率で得極めて高い効率で触媒することを見出体は空気下で安定であり、その取り扱られた（表 1, entry 1）。この結果をし た 。 な お、DPP-NNC Pd は 2013

いは容易である。

受け、本触媒系では触媒量の更なる低

年、東京大学理学研究科の塩谷先生ら

アリル位アリール化反応：
3
錯体触媒ならびに溶媒検討減が可能であると考え、触媒量を 1かとされているものの、その触媒機能

アリル酢酸エステルと有機ホウ素化て行った反応条件と同様に、メタノー

については未検討であった。本稿で合物によるアリル位アリール化反応

ル中 50 ℃にて反応を実施したところ、

6）7）によってその合成が報告され 、X 線
結晶構造解析等によりその構造は明ら

2

図２．DPP-NNC Pd の合成

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

mol ppm（0.0001 mol%）まで減らし、反応を試みた。0.1 mol% の触媒量に

メチル－1,10－フェナンスロリンを配表１．酢酸シンナミルとテトラフェニルホウ酸ナトリウムとの反応位子とした錯体（4－6）を用いて反応を 実 施 し た と こ ろ、 そ れ ぞ れ、16%（TON = 160,000）、45% （TON =450,000）、そして 56%（TON = 560,000）の収率で標的化合物が得られた。立体障害が触媒活性に影響していると考えられる。一方、同様の反応条件下で
DPP-NNC Pd を触媒として用いた場
合 の TON は 270,000,000 回 に 達 し ており、錯体 4－6 を触媒として用いた場合と比較してその値は 3 桁大きく、ピンサー構造をとることでより高い活性を示すことが示唆された。

4

アリル位アリール化反応：
基質一般性

本触媒システムを用いた基質一般性
反応開始 24 時間後には原料は完全にろ、1 mol ppb（0.0000001 mol%）の触について検討した（図 4）。反応は酢消費され、3aa が 87％の単離収率で媒量でも反応が進行した（図 3）。反酸アリル誘導体（1）を 10 mmol、テ得られた（entry 2）。なお、本反応は応時間 24 時間では収率が 27% であり、トラアリールホウ酸ナトリウム（2）出発原料の酢酸アリルを 10 mmol 用

触媒回転数（TON）は 270,000,000 回、を 20 mmol の ス ケ ー ル に て、1 mol

いて行っており、比較的大きなスケー

触 媒 回 転 頻 度（TOF） は 11,250,000

ppm の DPP-NNC Pd を触媒として用ルでも本触媒システムが問題なく機能

h-1 であった。さらに反応時間を 96 時

い、メタノール中 50 ℃にて実施した。

することを示している。また、無触媒

間まで延ばしたところ、収率は 50%

電子供与性基（MeO、Me、t Bu、Ph）

下では反応は進行しない（entry 3）。

となり、TON は 500,000,000 回に達し

お よ び 電 子 吸 引 性 基（CF 3 、NO 2 、

溶媒検討したところ、THF あるいはた。この触媒回転数は我々が知る限り

C（O）Me、COOMe）を有する酢酸シ

水中では 7 割程度反応が進行すること

において、アリル位アリール化反応のンナミル誘導体とテトラフェニルホウ

を確認した（entries 4 and 5）。DMF、

世界最高記録である。

酸ナトリウムの反応が進行し、目的のテトラクロロエタン、トルエン中では

DPP-NNC Pd と 同 様 に 1,10－ フ ェ

アリール化生成物（3ba-3ia）が 77-95

反応は進行しなかった（entries 6-9）。

ナンスロリン骨格を有する錯体につい% 単離収率で得られた。ナフチル基

メタノールが本反応において最も適して、その触媒活性を検討した。1,10－を有する酢酸アリル誘導体（1j）およ

た溶媒であると言える。

フェナンスロリン、2－フェニル－1,10び立体的に嵩高い 2－メチル基および－フェナンスロリン、そして 2,9－ジ

2－メトキシ基置換酢酸シンナミル（1kさらに触媒量の低減を試みたとこおよび 1l）の反応も DPP-NNC Pd は効果的に触媒した。酢酸シンナミル（1a）とテトラアリールホウ酸ナトリ
ウ ム（2b-d） と の 反 応 も 1 mol ppmの触媒量で効率的に進行し、アリール
化 生 成 物 4ab-ad を 59-84% の 収 率 で与えた。反応性が乏しい脂肪族置換酢
酸アリル誘導体（1m-q）についても検討を加えた。直鎖脂肪族アルキル（1m）、分岐状脂肪族アルキル（1n）、
環状脂肪族アルキル（1o）置換酢酸
図３．1 mol ppb の DPP-NNC Pd を用いたアリル位アリール化反応

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

アリルとテトラフェニルホウ酸ナトリ

3を示唆している。続いて、DPP-NNC
Pd とテトラフェニルホウ酸ナトリウ
ム（2a）の等量反応を行ったところ、フェニル化した錯体（8）がほぼ定量
的 に 得 ら れ た（ 図 5b）。 一 方 で、
DPP-NNC Pd と酢酸シンナミルの等量反応を行った場合、反応は進行しなかった（図 5c）。得られた錯体 8 と酢
酸シンナミルを反応させたところ、化合物 3aa が得られた（図 5d）。また、錯体 8 を触媒として用い、酢酸シンナ
ミル（1a）とテトラフェニルホウ酸ナトリウム（2a）との反応を実施した
ところ、反応は良好に進行し、3aa が93% 単離収率で得られた（図 5e）。以上の結果より、錯体 8 が本アリル位ア
リール化反応における中間体であることが推定される。

6 おわりに我 々 は、ppb か ら ppm 量 の DPPNNC Pd が、穏和な反応条件下、種々の酢酸アリル誘導体とテトラフェニル
ホウ酸ナトリウムとのアリル位アリール化反応を極めて高い効率で触媒し、対応するアリール化生成物を高収率で与えることを見出した。TON は最大で 500,000,000 回に達する。本研究に
図４．種々の置換基を持つ酢酸アリル誘導体とテトラアリールホウ酸ナトリウムとの反応

より、DPP-NNC Pd がアリル位アリール化反応を極めて高い効率で触媒することを示した。

ウム（2a）の反応が進行し、対応する

5 予備的反応機構検討および酢酸ゲラニル（1q）も同様に反DPP-NNC Pd を用いたアリル位ア反応へと適用し、ppm あるいは ppb

応が効果的に進行することを確認しリール化反応の反応機構に関する知見

オーダーの触媒量で種々の反応を効率た。 ま た、DPP-NNC Pd は 2 級 酢 酸を得るためにいくつかの検討を行っ的に進行させることを目指し、研究をアリル誘導体（1r および 1s）と 2a のた。初めに、分岐状酢酸アリル誘導体

展開しているところである。

反応も効果的に触媒した。以上のよう（7）とテトラフェニルホウ酸ナトリウ% 収率で得られた。酢酸ネリル（1p）4

我々は DPP-NNC Pd が他の触媒反応へも同様に高い効率を示すものと期

アリール化生成物（3ma-oa）が 71-78

待している。現在、本錯体を他の触媒

7 謝

辞に、本触媒系は広い範囲の基質一般性

ム（2a） の 反 応 を、DPP-NNC Pd（1を示した。一方、残念ながら、同様の

mol ppm）存在下、実施したところ、反応条件下では、ピリジンやチオフェ

酢酸シンナミル（1a）を基質として本研究は自然科学研究機構分子科学

ンを持つ酢酸アリル誘導体を基質とし用いた場合と同じ生成物が得られた

研究所 錯体触媒研究部門 魚住研究室て用いた場合では反応がほとんど進行（図 5a）。この結果は、反応中、πアにて行われました。研究室主宰者であしなかった。

リルパラジウム中間体が生成することる魚住泰広教授には、本研究全体を通和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

Acc. Chem. Res ., 47, 494-503（2014）.
4）最 近 の 総 説：Selander, N. and Szabó, K. J. :Chem. Rev ., 111, 2048-2076（2011）.
（a）Ohff, M., Ohff, A., van der Boom, M. E.
5）
and Milstein, D. : J. Am. Chem. Soc ., 119,11687-11688 （1997）.（b） Miyazaki, F.,
Yamaguchi, K. and Shibasaki, M. :Tetrahedron Lett ., 40, 7379-7383（1999）.（c）Jung, I. G., Son, S. U., Park, K. H., Chung, K.-C.,
Lee, J. W. and Chung, Y. K. : Organometallics ,22, 4715-4720（2003）.（d）Huang, M.-H. andLiang, L.-C. : Organometallics , 23, 2813-2816（2004）.（e）Takenaka, K. and Uozumi, Y. :Adv. Synth. Catal ., 346, 1693-1696（2004）.（f）Yoon, M. S., Ryu, D., Kim, J. and Ahn, K. H. :Organometallics , 25, 2409-2411（2006）.
6）Hamasaka, G., Sakurai, F. and Uozumi, Y. :Chem. Commun ., 51, 3886-3888（2015）.
7）Kuritani, M., Tashiro, S. and Shionoya, M. :Chem.—Asian J ., 8, 1368-1371（2013）.
8）Pigge, F. C. : Synthesis , 1745-1762（2010）.
（a）Sarkar, S. M., Uozumi, Y. and Yamada, Y.
9）
M. A. : Angew. Chem. Int. Ed ., 50, 9437-9441（2011）.（b）Yamada, Y. M. A., Sarkar, S. M.
and Uozumi, Y. : J. Am. Chem. Soc ., 134, 31903198（2012）.

触媒回転数
触媒性能の指標の一つで、触媒回転数 = 生成物のモル数／触媒のモル数と定義される。その数が多いほど高効率な触媒であると言える。

図５．反応機構検討

してご指導いただきました。深謝いた

ピンサー錯体
金属を橋頭位に有する 2 環性メタラ
サイクルである。配位子は、一般に、
1 つのアニオン性配位部位（例えばC）と 2 つの中性配位部位（例えばN、P、S）を有する。触媒としての利用のみならず、機能性有機金属化
合物としての応用も試みられている。

and Dunetz, J. R. : Chem. Rev ., 111, 2177-2250（2011）.
2）ICH Q3D は以下の web ページからダウンロー
ド可能である。
：http://www.ich.org/products/
guidelines/quality/article/quality-guidelines.
html（a）Farina, V. : Adv. Synth. Catal ., 346, 15533）
1582（2004）.（b）Deraedt, C. and Astruc, D. :します。また、実験を実施した、櫻井
扶美恵博士に感謝いたします。
〔参考文献〕1）
（a）Torborg, C. and Beller, M. : Adv. Synth.
Catal ., 351, 3027-3043（2009）.（b）Magano, J.

超高活性 カップリング反応用パラジウム触媒
DPP-NNC Pd
本品は、ppm オーダーの触媒使用量で反応が進行する高活性なカップリング反応用のN

パラジウム触媒です。

Cl〔参考文献〕

C24H15ClN2Pd＝473.26
CAS No. 1499115-56-8

1）Hamasaka, G., Sakurai, F. and Uozumi, Y. : Chem. Commun ., 51, 3886（2015）.

NEW
NEW

コード No.
044-34351
040-34353

N
Pd

品

名

規

Diphenyl Phenanthroline NNC Palladium【DPP-NNC Pd】

格

有機合成用

容 量
100mg
500mg

希望納入価格（円）10,00030,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）5

echnical Report
Wakopak® Ultra APDS TAG® を用いたアミノ酸含有飲料中のアミノ酸類の定量
和光純薬工業株式会社

須藤

試薬化成品研究所

勇紀

２．3 - ア ミ ノ ピ リ ジ ル -N - ヒ ド ロ キ

汎 用 の LC/M S/M S 装 置 を 用 い た

シスクシンイミジルカルバメート

APDS- アミノ酸誘導体の分離分析がの汁からアスパラギンが単離、発見さ（APDS）による誘導体化可能となる専用分析カラムです。今れて以来、栄養素としての利用、呈味

HPLC におけるアミノ酸分析の誘導

回、本カラムを用いて市販のアミノ酸成分としての利用、生理作用の利用、体化手法は古くから存在し、ニンヒド

含有飲料中のアミノ酸類を分析しまし

反応性の利用の 4 つに大別される機能

リンをはじめ o -フタルアルデヒドなたのでご紹介します。

で私たちの生活の中で欠かせない存在

ど数多くの誘導体化試薬が存在しまとなっています 1）。また、動物が体内す。今回、ご紹介する APDS によるで合成できないアミノ酸はその動物のアミノ酸の誘導体化法は、疎水性が高

試料前処理及び誘導体化のフローを

必須アミノ酸であり、食品栄養素としまり、また、イオン化効率が上がるた

図 1、LC/MS/MS 条 件 を 表 1 に 示 して重要です。

め逆相 LC/MS（/MS）に有利な手法ます。定量は内部標準法にて行いましです 5, 6）。

た。今回対象にした飲料中にはアミノ

１．はじめにアミノ酸は 1806 年にアスパラガス

日本では 1991 年に特定保健用食品

３．実験方法及び結果

制 度、2002 年 に 保 健 機 能 食 品 制 度、本法は味の素株式会社の「アミノイ酸類がグリシン（Gly）、 ア ラ ニ ン

2015 年に機能性表示食品制度が実施

ンデックス ® がんリスクスクリーニン（Ala）、バリン（Val）、ロイシン（Leu）、

されており、国民のセルフメディケー

グ」（AICS）の中で利用されており 7）、

イソロイシン（Ile）、アルギニン（Arg）

2, 3）

。

食品分析においてもアミノ酸分析専用の 6 成分を含むと記載されていました

また、機能性表示食品制度は届出制度装置である UF-Amino Station を用いが、表 1 中の No.13 〜 20 のアミノ酸であるために新規企業が参入しやすた分析例 8）があります。

類は市販飲料中には含まれておりませ

く、特定保健用食品が 2017 年 3 月で®

ションの実践が期待されています

Wakopak Ultra APDS TAG

1,127 品目に対し、機能性表示食品は®

は＜試料前処理＞

2017 年 3 月 で 既 に 815 品 目 で あ り、

＜誘導体化＞
上清 20 μＬ

サンプルまたは標準液 20 μＬ

急激に増加していることで、食品市

APDS TAG ® ワコー用

4）

場の拡大が期待されています 。アミ

アミノ酸内部標準混合液 20 μＬ

撹拌ノ酸の栄養素としての機能は既に広く

撹拌

アセトニトリル 40 μＬ
撹拌

認知されており、飲料、ドリンク剤、

撹拌

ゼリーなど幅広い形態でアミノ酸を含遠心分離 , 15,000 rpm, 10 min., 20 ℃

APDS TAG ® ワコー用
ほう酸緩衝液 60 μＬ
アミノ酸分析試薬
（LC/MS 用）（APDS TAG®）
アセトニトリル溶液（20mg/mL）
20 μＬ

55 ℃, 10 min.

む食品が市場に存在していることか撹拌ら 1）、これからも多くのアミノ酸を含む新商品が生まれると考えられます。

ん。分析した市販飲料中の 6 成分の希釈液＊ 730 μＬ＊0.1 % ぎ酸水溶液：APDS TAG ® ワコー用
溶離液 =1：3

図１．試料前処理及び誘導体化のフロー

表１．LC/MS/MS 条件

6

機器

Prominence LC-20A XR（島津製作所）カラム

Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 × 100 mm（W）

ガードフィルター

SunShell RP ガードフィルタ（クロマニックテクノロジーズ）

移動相 A

APDS TAG ワコー用溶離液

移動相 B

60 % アセトニトリル

グラジエント条件

0min.
（A：B=94：6）→0.05min.
（92：8）→1.70min.
（92：8）→1.71min.
（88：12）→4.95min.
（70：30）→5.95min.
（40：60）→5.96min.
（5：95）→6.70min.
（5：95）→6.71min.
（94：6）→12min.
（94：6）®

流量0.3 mL/min.

カラム温度

40 ℃

注入量

1 μL

機器

LCMS-8030 Plus
（島津製作所）

イオン化

ESI positive

測定モード

MRM

DL 温度

250 ℃

ネブライザーガス流量

1.5 L/min.

ヒートブロック温度

250 ℃

ドライングガス流量

10 L/min.

和光純薬時報

No.

成分名
（略称）

分子量

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

グリシン（Gly）
グリシン-13C2, 15N（Gly-IS）アラニン（Ala）
アラニン-13C（Ala-IS）
3バリン（Val）
バリン-13C5, 15N（Val-IS）
ロイシン（Leu）
イソロイシン（Ile）
ロイシン-5,5,5-d（Leu-IS）
3イソロイシン-13C6, 15N（Ile-IS）
アルギニン（Arg）
アルギニン-15N（Arg-IS）
4サルコシン（Sar）
ヒドロキシプロリン（Hypro）
アスパラギン（Asn）
アスパラギン酸（Asp）
グルタミン（Gln）
グルタミン酸（Glu）
α-アミノアジピン酸（α-AAA）
シトルリン（Cit）

75.1
78.1
89.1
92.1
117.2
123.1
131.2
131.2
134.2
138.1
174.2
178.2
89.1
131.1
132.1
133.1
146.1
147.1
161.2
175.2

Vol.85, No.4（2017）

モニターイオン（m/z）
プリカーサー プロダクト
196.1
121.0
199.1
121.1
210.1
121.0
213.1
121.1
238.1
121.0
244.1
121.1
252.1
121.0
252.1
121.0
255.1
121.1
259.1
121.1
295.1
175.1
299.1
179.1
210.0
121.0
252.1
121.0
253.1
121.0
254.1
121.0
267.1
121.0
268.1
121.0
282.1
121.0
296.3
121.0

120

Intensity
650,000
600,000
550,000
500,000
450,000
400,000
350,000
300,000
250,000
200,000
150,000
100,000
50,000
0

回収率
︵％︶

100
80
60
40
20
0

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

9.0

10.0

11.0

RT
（min.）

Gly

Ala

Val

Leu

Ile

Arg

図４．添加回収試験の結果効であると考えられます。今回、ご紹

図２．市販飲料中の 6 成分の MRM クロマトグラム

介した結果は飲料のみですが、その他

Intensity
600,000の食品や培養液などの試料の分析でも550,000

有用であると考えられますので是非ア

500,000

ミノ酸類の定量にご活用下さい。

450,000
400,000
350,000
300,000〈謝

250,000
200,000

辞〉

本商品の検討にご協力頂きました

150,000

味の素株式会社の皆様に深謝申し上げ

100,000
50,000
0
1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

8.0

9.0

10.0

11.0

RT
（min.）

図３．標準添加後の市販飲料の MRM クロマトグラム

MRM クロマトグラムを図 2 に示しま

験の結果を図 4 に示します。回収率はす。次に、このクロマトグラムが得ら99 〜 103 % であり、高い回収率を示れたサンプルにアミノ酸類の標準品をしました。

添加し、添加回収試験を行いました。

今 回 の 検 討 結 果 か ら Wakopak®

標準添加後の市販飲料の MRM クロ

Ultra APDS TAG® を 用 い た APDS

マトグラムを図 3 に示し、添加回収試

誘導体化によるアミノ酸類の定量は有ます。
〔参考文献〕
1）味の素株式会社 編：「アミノ酸ハンドブック」（工業調査会）（2003）.
2）大澤 俊彦：化学と生物，44（6），406（2006）.
3）和田 他：分析化学，65（6），301（2016）.
4）湯 田 直樹：健康・栄養食品研究，16（1），1（2017）.
5）特許第 4453363 号．
6）宮野 博：和光純薬時報，79（1），2（2011）.
7）今泉 明：化学と生物，53（3），192（2015）.
8）渡邊 他：島津評論，69（1・2），47（2012）.

ワコーパック® ウルトラAPDSタグ®
汎用 LC/MS で高感度・高速アミノ酸分析を実現できます。
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NEW

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品

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量

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019-08393
013-08391
293-73701
010-23061
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380-04131

品
名Amino Acid Analysis Reagent（for LC/MS）（APDS TAG®）

規格 / メーカー
アミノ酸自動分析用

Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2

アミノ酸自動分析用

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APDS TAG® Wako Borate Buffer
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容 量
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5mL
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5mL
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5mL

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20,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）7

神経変性疾患研究の最前線

第３回

アルツハイマー病（3）アミロイドβ
東京大学大学院薬学系研究科

機能病態学教室

由起子、富田泰輔

体 蛋 白 質 amyloid precursor protein

る 10, 11）。Aβは APP から 2 段階の切（APP）をコードする APP 遺伝子、そ断を受けて産生される（図 1）。まず、し て APP 切 断 酵 素 γ-secretase 複 合

APP の 細 胞 外 領 域 が β-secretase に体の活性中心蛋白質である presenilin

よ っ て 切 断 さ れ、 細 胞 外 領 域 断 片

ease; AD）患者脳における特徴的な病

1 及 び 2 を コ ー ド す る PSEN1 及 び（sAPPβ）が分泌される。続いて細胞理学所見の一つとして挙げられる老人

PSEN2 遺伝子が同定された。これら

膜に残った APP の C 末端断片（C99）

斑は、異常に凝集し不溶化した蛋白質の 3 つの遺伝子上には、FAD 家系にがγ-secretase によって切断され、Aβがβシート構造に富んだアミロイド線

おいて同定された FAD 変異がいくつと AICD が 産 生 さ れ る。Aβ の C 末維とよばれる線維構造を形成し脳実質も存在し、その変異効果として① A

端側のバリエーションはγ-secretaseの細胞間隙に蓄積した構造物であるβ産生総量の増加、②凝集性の高いによる切断に起因し、切断されるアミ（http://bsd.neuroinf.jp/wiki/ ア ミ ロ

Aβ 42 の産生比率増加、③ Aβ自体

ノ酸部位の異なる Aβ 37 から Aβ 49

イドβタンパク質）。近年開発された、の凝集性の亢進が報告されている。こまでの複数種の Aβが産生される 12）。

ヒト脳内に蓄積した老人斑をイメージのことから、産生された Aβが凝集・

産 生 量 の 多 い Aβ 40、また凝集性・ングするアミロイド PET による画像

蓄積することが AD 発症を導くとする

毒性の高い Aβ 42 が古典的に注目さ解析から、認知機能障害が見られる「アミロイド仮説」の提唱へと繋がっれてきたが、近年では Aβ 43 も凝集

10 〜 15 年程前から出現していることた 5）。加えて、AD に対して protective性・毒性が高い Aβ分子種の一つとしが明らかとなっており、AD 発症過程な変異として APP 遺伝子上に A673Tて注目されている 13）。また、γ-secretaseにおける最初期病変であると考えられ変異が同定され、その変異効果としての切断阻害ではなく切断活性調節を目ている。1984 年 Glenner らによって脳

Aβ産生の減少が報告されたことか的としたγ-secretase modulator（GSM）

血管アミロイドから、1985 年 Mastersら 6）、AD 発 症 メ カ ニ ズ ム と し て のの開発と作用機序研究が進んでおり、らによって老人斑アミロイドから、単「アミロイド仮説」はさらに強く支持

Aβ 37 や Aβ 38 と い っ た 短 い Aβ

離精製とそれに次ぐアミノ酸同定を経されることとなった。

種 の 産 生 機 構 も 注 目 を 集 め て い る。

1．はじめにAβとはアルツハイマー病（Alzheimer dis-て、老人斑の主要構成成分は amyloid

脳内の Aβ濃度は産生とクリアラ

β-secretase は BACE1、γ-secretase

β peptide（Aβ）であることが報告

ンスのバランスで調節され、そのバラは presenilin 1 あるいは presenilin 2 を

1, 2）

。

ンスが崩れることによって凝集の活性中心とする Aph-1, Pen-2, nicastrin

Aβは、約 40 〜 43 アミノ酸からなフェーズへと移行すると考えられてとの 4 者複合体がその分子実態である。

るペプチド断片である。N 末端側、Cいる。本稿では、この産生、クリアラ

APP の代謝過程には、Aβ産生経

末端側にそれぞれいくつかのバリエー

ンス、凝集の 3 点から Aβを記述し、路のほかに非 Aβ産生経路が存在す

ションがあるが、老人斑に蓄積していAβを治療標的とした AD 根本治療法る（図 1）。非 Aβ産生経路もまた 2

る代表的な Aβとしては、40 アミノへ向けた展開について述べたい。

段階の切断によって起こり、2 段階目

された酸からなり 40 番目 Val 残基で終わる
Aβ 40 と、42 ア ミ ノ 酸 か ら な り 42

3．Aβ産生過程の切断を担う酵素は Aβ産生経路と同様にγ-secretase であるが、1 段階
目の切断を担う酵素はα-secretase で番目 Ala 残基で終わる Aβ 42 がある。
Aβ 40 に比べ、Aβ 42 の凝集性は非Aβは、その前駆体蛋白質 APP か

あ る。 α-secretase は APP 上 の A β

常に高く、また老人斑として早期よりら切り出されるペプチド断片である。

領 域 内 部 16 番 Lys 残 基 と 17 番 Leu

蓄積している 3）。また蓄積 Aβの一部

APP は I 型 1 回 膜 貫 通 型 蛋 白 質 で、残基の間で切断するため、産生されるは修飾も受けており、3 番目 Glu 残基

様々な組織にユビキタスに発現してい約 3 kDa のフラグメント（p3）は Aが pyro 化修飾された Aβも存在する 4）。

る。スプライシングの違いから主にβの N 末端領域 16 アミノ酸を欠いた

695、751、770 アミノ酸からなる 3 つ

ペプチド断片である。神経細胞においのアイソフォームが存在するが、脳にては、ADAM10 が主要なα-secretase

おいては特に 695 アミノ酸の APP695である。

2．アミロイド仮説
AD の大多数は孤発性であるが、ごが多く発現している 7, 8, 9）。

近年、Aβ産生量が神経活動依存

く一部に常染色体優性遺伝形式を示す

Aβは健常者の脳脊髄液中からも検的に変動することが報告されている。

家族性 AD（Familial AD ; FAD）が出され、AD 患者脳において病的に産マウス脳内において、脳部位ごとの神報告されている。遺伝学的研究から、生されるのではなく、APP の正常な経活動量の差と Aβ産生量、Aβ蓄積

FAD の原因遺伝子として Aβの前駆代謝過程で産生、分泌される分子であ

量の差に相関関係があることや、神経本シリーズの企画・構成に際し、東京大学大学院医学系研究科 岩坪威先生にご助言頂きました。

8

堀

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

神経変性疾患研究の最前線

さらに、アデノ随伴ウイルスベクターを用いて NEP を発現させると Aβ蓄積の減少がみられるなど 21）、これらの Aβ分解酵素が AD 治療標的となりうる可能性も示唆されている。
脳内のミクログリアやアストロサイ
トといったグリア細胞による Aβ貪
食も推定されている。ミクログリアには、Aβ貪食に関与する可能性がある
scavenger receptor などの受容体が発現している。加えて、近年のゲノムワイド関連研究（Genome wide association
study ; GWAS）から見つかった AD
リスクに連関する可能性がある遺伝子群の中に、ミクログリアに発現が高い
遺伝子が複数含まれており 22）、このことはグリア細胞が何らかの形で AD発症に関わる可能性を示唆するものと考えられ興味深い。また実際これらの
図１．Aβ産生経路と非 Aβ産生経路（A）Aβ産生経路の模式図。APP が、β-secretase、γ-secretase によって切断されることにより Aβが（Aβ産生経路）、α-secretase、γ-secretase によって切断されることにより p3 が（非 Aβ産生経路）産生される。
（B）Aβ配列と切断部位の図。青色で示す領域が Aβ配列。

遺伝子の中で、CD33 や TREM2 など
は Aβクリアランスに影響を及ぼすことが報告されている 23, 24）。

5．Aβ凝集過程

活動が抑えられる睡眠時には Aβ産においては、Aβ産生の亢進ではな

生量が減少することが明らかになっく Aβクリアランスが破綻している

Aβは単量体では特定の構造をとらた 14, 15）。またオプトジェネティクス技

ことが明らかになった 17）。この結果

ないが、凝集して蓄積した Aβはβ術を用い長期的に神経活動を亢進し続は、Aβ産生過程だけでなく、Aβク

シート構造に富んだアミロイド線維をけると、Aβ蓄積量が増えることも示

リアランス過程の詳細な分子機構研究

形成している。Aβ 42 は Aβ 40 よりされた 16）。神経活動によって Aβ産の重要性を示唆している。この Aβ凝集性が高く、脳内において老人斑と生が亢進するメカニズムは明らかでは

クリアランスの主な機構として、Aβ

して最初期に蓄積する Aβ種である。

ないが、神経活動亢進によるエンドサ

分解酵素による分解、グリア細胞など

Aβ 40 より Aβ 42 の方が構造変化しイトーシス亢進により、細胞表面に輸による貪食、血液脳関門（BBB）をやすい理由は不明ではあるが、31 〜送された APP がエンドサイトーシス

介した排出輸送などが報告されてい34 番目、38 〜 41 番目のアミノ酸残基

され BACE1 による切断を受けやすくる。

でβヘアピン構造をとり C 末端が構なる可能性が考えられている。

代 表 的 な Aβ 分 解 酵 素 と し て は、造的に安定化することがβシート構造

メ タ ロ プ ロ テ ア ー ゼ で あ る Insulin

への構造変化を容易にしている可能性

degrading enzyme（IDE）や Neprilysinが指摘されている 27）。またアミロイ（NEP）、セリンプロテアーゼである

ド線維は、Aβ分子内で 25 番から 29

通常、産生された Aβは速やかに

Kallikrein-related peptidase 7番のアミノ酸にかけてターン構造を除去されることにより、脳内でその濃（KLK7）などが同定されている 18, 19, 20）。

とってβシート構造を形成し、さらに度は一定に保たれている。しかし一部

いずれもマウス脳内内因性 Aβを分分子間で相互作用することでクロスβの FAD 患者においては、その FAD

解することがノックアウトマウスの解シート構造をとっていると考えられて変異効果によって Aβ産生量が増加

析から明らかになっており、また ADいる 25, 26）。分子内ターン構造をとるア

し、このバランスが崩れることで AD

患者脳において量の減少や分解活性がミノ酸領域の近傍は、Aβの凝集性を発症に至る。一方、孤発性 AD 患者

低下していることも報告されている。

亢進する効果をもつ遺伝子変異が集中

4．Aβクリアランス過程

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）9神経変性疾患研究の最前線する hot spot であり、これらの変異る」と一部修正された形で「アミロイsecretase による切断は Aβ産生過程

によって Aβの構造変化が促進され、ド仮説」が認知されている。Aβ凝集の律速段階であることから、BACE1線維形成が加速する可能性が構造的な中間体は、アミロイド線維構造をとり阻害剤は有望な AD 治療薬となる可側面からも推測される。

不溶化した Aβとは異なり、可溶性能性がある。

Aβがアミロイド線維を形成する過の低分子量 Aβ重合体と定義づけら

2 つ目は、Aβクリアランスの促進

程は、in vitro の実験系から核形成過れている。このような可溶性中間体とである。この観点において臨床試験が程と伸長過程の 2 つの過程を経るといし て in vitro の 実 験 か ら paranuclei、

進んでいるのが、受動免疫としての抗うモデルが考えられている 28, 29）。核形

protofibrils、Aβ-derived diffusible

Aβ抗体、能動免疫としての Aβワク

成過程は、Aβ単量体が構造変化を生

ligands（ADDL） な ど 様 々 な Aβ 凝

チ ン で あ る。1999 年、Schenk ら は

じつつ線維伸長の核となる重合核

集中間体が報告されている 31, 32, 33）。in

APP トランスジェニックマウスに凝（seed）を形成する最初の過程であり、

vivo に お い て も、dimer や trimer な

集した Aβを免疫すると、脳内の Aβ

ゆっくりと進行しアミロイド形成の律

ど の low-n oligomer に 加 え、12-mer

蓄 積 が 減 少 す る こ と を 報 告 し た 36）。

速段階となる。Aβ 42 は、Aβ 40 にからなる 56 kDa の Aβ* などが同定

その後、抗 Aβ抗体を投与した場合で比べこの核形成過程が早い。続く伸されている 34, 35）。これらの A β凝集も同様の効果があることが示され 37）、

長過程は、形成された seed を起点に中間体に共通して強いシナプス障害性抗 Aβ抗体によって Aβクリアラン

Aβが構造変化しつつ次々と結合してや細胞障害性をもつことが報告されてスが促進されることが示された。そのいくことにより線維が伸長する、急速おり、その形成機序や性質は興味深

クリアランスメカニズムは完全には明進行性の過程である。in vitro においい。

らかになっていないが、ミクログリアて、Aβ 40 を単独でインキュベート
しても凝集の進行は遅いが、あらかじ
め線維化させた Aβを少量加えると6．A βを治療標的とした AD
根本治療法

一気に凝集が加速する。また in vivo

への Aβ引き抜きの亢進（sink 仮説）などが考えられている。ただし、脳内への抗体の移行量が極めて少ないことにおいても同様に、AD 患者脳由来あ「アミロイド仮説」に立脚し、Aβや、抗体のエピトープによる効果の違る い は A β 蓄 積 を も つ AD モ デ ル

を標的とした様々な AD 根本治療法

いなど、まだ詳細なメカニズム解明がマ ウス由来の脳ライゼートを若齢のが考えられている。主に（1）Aβ産必要とされる。

Aβ蓄積を持たないマウスの脳に注入

生阻害、（2）Aβクリアランス促進、

しかし、これらの Aβを治療標的すると、注入された Aβが seed とし（3）Aβ凝集阻害を目的にした研究がとした治療薬は、臨床試験において苦て働き Aβ蓄積が促進される 30）。こ

進められており、基礎実験レベルでは戦しているのが現状である。その理由のことは Aβ蓄積における seed 形成

いくつかの候補化合物の探索・同定がの 1 つに、治療開始時期が遅いことが制御の重要性を示唆する。また前述のなされているが、ここでは特に臨床試考えられている。前述の通り老人斑はAD 患者脳由来 Aβアミロイドの構造

験まで進んでいる以下の 2 つの観点に

認知機能障害を示す 10 〜 15 年前から解析において、アミロイド構造は一様ついて記載したい。

蓄積が開始していることから、認知機ではなく、病状経過の異なる患者に

1 つ目としては、Aβ産生阻害を目能障害を示し AD 病態が進んだ患者

よって異なるアミロイド構造をとる可的 と し た 各 secretase 活 性 制 御 法 でに対しては、Aβを標的とした治療戦能性が示唆されており、最初に形成さあ る。 し か し γ-secretase に は APP

略のみでは必ずしも症状の改善に繋がれる seed 構造の重要性を示唆し興味以外にも様々な切断基質があり、特らない可能性がある。そこで Aβの深い10による Aβ貪食作用の活性化、末梢26）。

に Notch 切断阻害による副作用が大蓄積病態が開始しているが未発症期、初期に提唱された「アミロイド仮きな問題となっている。そのためγ-もしくは早期段階であるプレクリニカ

説」は、Aβが老人斑として蓄積する

secretase 阻害剤ではなく、Aβ 42 産

ル期に対する予防的な介入、すなわちことが AD 発症の原因であるとして生を特異的に減少させるような切断先制医療としての開発が進められていいた。しかし、老人斑と認知機能低下

活 性 調 節 を 目 的 と し た γ-secretase

るの間に明確な相関関係がないことや、

modulator（GSM）の開発が求められなものとするためには、Aβアミロイ

アミロイド線維よりも oligomer などて い る。 一 方 β-secretase で あ る

ドの簡便な画像診断法の開発やバイオAβ凝集中間体が強い毒性を示すこと

BACE1 は、BACE1 ノ ッ ク ア ウ ト マ

マーカーの探索など、Aβ蓄積の早期が明らかになったことから、現在ではウスが presenilin ノックアウトほどの診断を可能にする手法の開発もあわせ「特に凝集中間体が強い毒性を発揮す

異 常 な 表 現 型 を 示 さ な い こ と、 β-て求められている。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）38, 39）。そのためこの治療戦略を有効

神経変性疾患研究の最前線

7．おわりに長年の AD に関する基礎研究結果
か ら、Aβ を AD 発 症 の 原 因 と す る「アミロイド仮説」及び Aβを標的とする治療戦略の妥当性は概ね示されていると考える。しかし未だ AD 根本
治療には至っていないことから、ADにおける Aβの寄与について、さらなる詳細な分子メカニズム解明が望まれるとともに、臨床応用が期待される。
〔参考文献〕
1）Glenner, G. G. et al . : Biochem. Biophys. Res.
Commun ., 120, 885-890（1984）.
2）Masters, C. L. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci.
USA , 82, 4245-4249（1985）.
3）Iwatsubo, T. et al . : Neuron , 13, 45-53（1994）.
4）S aido, T. C. et al . : Neuron , 14, 457-466（1995）.
5）S elkoe, D. J. and Hardy, J. : EMBO Mol.
Med ., 8, 595-608（2016）.
6）Jonsson, T. et al . : Nature , 488, 96-99（2012）.

7）Ponte, P. et al . : Nature , 331, 525-527（1988）.
8）T anzi, R. E. et al . : Nature , 331, 528-530（1988）.
9）Kitaguchi, N. et al . : Nature , 331, 530-532（1988）.
10）Haass, C. et al . : Nature , 359, 322-325（1992）.
11）S eubert, P. et al . : Nature , 359, 325-327（1992）.
12）Qi-Takahara, Y. et al . : J. Neurosci ., 25, 436445（2005）.
13）Saito, T. et al . : Nat. Neurosci ., 14, 1023-1032（2011）.
14）Kang, J. E. et al . : Science , 326, 1005-1007（2009）.
15）Bero, A. W. et al . : Nat. Neurosci ., 14, 750756（2011）.
16）Yamamoto, K. et al . : Cell Rep ., 11, 859-865（2015）.
17）M awuenyega, K. G. et al . : Science , 330,
1774（2010）.
18）Iwata, N. et al . : Nat. Med ., 6, 143-150（2000）.
19）Qiu, W. Q. et al . : J. Biol. Chem ., 273, 3273032738（1998）.
20）Kidana, K. et al . : unpublished21）Iwata, N. et al . : Sci. Rep ., 3, 1472（2013）.
22）Lambert, J. C. et al . : Nat. Genet ., 45, 14521458（2013）.
23）Griciuc, A. et al . : Neuron , 78, 631-643（2013）.
24）Wang, Y. et al . : Cell , 160, 1061-1071（2015）.

25）Petkova, A. T. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci.
USA , 99, 16742-16747（2002）.
26）Lu, J. X. et al . : Cell , 154, 1257-1268（2013）.
27）Sgourakis, N. G. et al . : J. Mol. Biol ., 368,
1448-1457（2007）.
28）Come, J. H. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci.
USA , 90, 5959-5963（1993）.
29）Jarrett, J. T. et al . : Biochemistry , 32, 46934697（1993）.
30）Meyer-Luehmann, M. et al . : Science , 313,
1781-1784（2006）.
31）W alsh, D. M. et al . : J. Biol. Chem ., 272,
22364-22372（1997）.
32）Bitan, G. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci. USA ,100, 330-335（2003）.
33）Lambert, M. P. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci.
USA , 95, 6448-6453（1998）.
34）Shankar, G. M. et al . : Nat. Med ., 14, 837-842（2008）.
35）Lesne, S. et al . : Nature , 440, 352-357（2006）.
.
36）Schenk, D. et al . : Nature , 400, 173-177（1999）37）Bard, F. et al . : Nat. Med ., 6, 916-919（2000）.
.
38）Sperling, R. et al . : Neuron , 84, 608-622（2014）39）Reiman, E. M. et al . : Nat. Rev. Neurol ., 12,56-61（2016）.

次回は、「アルツハイマー病（4）イメー
ジング」の予定です。

Aβ関連試薬当社では、Aβ関連試薬を取り扱っています。詳しくは、当社 HP をご覧下さい。
抗体
コード No.

近日
発売
近日
発売

品

名

Clone エピトー
プ
No.

サブ
クラス 適応実験Aβペプチドとの反応性
ヒト

マウス / ラット

Aβ1-40 Aβ1-42 Aβ1-43 Aβ1-40 Aβ1-42 Aβ1-43

希望納入
規格 容量 価格（円）017-26871 Anti Human Amyloidβ, Monoclonal
AβN 末端 マウス WB/IHC/
BAN50
1 － 16 IgG1・κ IP/ELISA
013-26873 Antibody（BAN50）

○

○

○

×

×

×

免疫 10μL 10,000
化学用 50μL 35,000014-26881 Anti Amyloidβ, Monoclonal
010-26883 Antibody（BNT77）

BNT77

Aβ
11 － 28

IHC/IP/
ELISA

○

○

○

○

○

○

免疫 10μL 照 会
化学用 50μL 照 会

018-26921 Anti Amyloidβ40, Monoclonal014-26923 Antibody（BA27）BA27

Aβ40 マウス WB/IHC/
C 末端 IgG2a・κ ELISA

○

×

×

○

×

×

免疫 10μL 10,000
化学用 50μL 35,000014-26901 Anti Amyloidβ42（43）, Monoclonal
010-26903 Antibody（BC05）

BC05

Aβ42
C 末端

マウス WB/IHC/
IgG1・κ ELISA

×

○

○

×

○

○

免疫 10μL 10,000
化学用 50μL 35,000

マウス
IgA・κ

製品情報：http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/Amyloid_b/index.htm
ELISAキット
製品情報：http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/life/article/betaamyloidELISAkit.htm
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/hs_amyloid/index.htm
染色キット
製品情報：http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/amyloid/index.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）11

なるほど !!

ELISA

−基礎とコツ−

全４回
株式会社シバヤギ編

第３回 ELISA の操作法とそのポイント（中編）
ポイント⑤；試薬の希釈

まって反応が速くなり、吸光度が高くなります。発色液の【試薬希釈作業の準備について】温度が低い場合は顕著に現れます。冬ではヒーターの温風■キ ット構成試薬のうち、希釈が必要な試薬を確認しま

またはストーブの輻射熱の影響を受け、夏ではクーラーのしょう。

冷風の影響を受ける可能性があります。その結果、Blank■キ ット構成試薬の室温化が必要な場合は室温化をしま（ゼロ濃度）の吸光度が最低濃度の標準溶液のウェルよりしょう。

高く（暖められた場合）なったり、Blank を含めた二重測特に冬季や春先は実験台の表面温度は暖房を入れても直定の標準品ウェルのプレート端側が常に吸光度が高いなどぐに上昇しません。実験台の上にキムタオルなどを敷いという現象が見られることになります。

て、その上にキット構成品のすべてを並べ、室温化することをお薦めします。

【エッジ現象対策】■試薬原液を分取する前に良く攪拌しましょう。この時、泡立てないように注意しましょう。

■測 定する 1 時間半から 2 時間前にウェルプレートや試薬、検体を冷蔵庫から出し反応温度に合わせましょう。

■標 識試薬など液量が少ない試薬は攪拌後、軽く遠心して、キャップ、壁面に付いたものを落としてから使用しましょう。

■測定開始前に試薬の温度を確認しましょう。
■空調機器／恒温槽／ PC ／人など熱源となるものの影響を直接受けないところで測定を行いましょう。

■試薬原液を緩衝液で 1,000 倍以上に希釈する時は、段階希釈することをお薦めします。

■反応温度を一定に保ちましょう。
■洗浄液の温度管理には特に注意しましょう。洗浄液は容・10 倍希釈の一例：

量が多いので温度を合わせるのに時間がかかります。洗

試薬原液 20μL+ 緩衝液 180μL

浄液の温度が反応温度と異なると洗浄の都度プレートの試薬原液 10μL+ 緩衝液 90μL

温度が変化してしまいます。

・1,000 倍希釈の一例：■プレートシールやプレートカバーを使用しましょう。

10 倍希釈した溶液 100μL+ 緩衝液 9,900μL■プレートに温度が均一に伝わるようにしましょう。

緩衝液は 10,000μL を分取したところから、100μL を■インキュベータを使用する場合は緩衝液や洗浄液もイン抜き取っても構いません。

キュベータに入れておきましょう。

・希釈後は良く攪拌しましょう。この時、泡立てないよ
うに注意しましょう。

＊ただし、試薬の安定性は事前に確認して下さい。

ポイント⑦；洗浄■試薬は用時調製するようにしましょう。

ELISA 操作において洗浄はとても重要です。特に洗浄ポイント⑥；エッジ現象

不足は非特異的反応によるブランクの吸光度が上がり、測【エッジ現象（エッジ効果とも言う）とは？】定範囲の低濃度域での感度が得られなくなります。このよウェルプレートの外周部に位置するウェルは、他の内側

うなことを防ぐためにも洗浄操作を確実に行いましょう。

のウェルと比べて外部からの温度の影響を受けやすいことから、その部分で反応が他の部分より進行し過ぎる、或い【洗浄のポイント（手洗浄の場合）】は抑制されることを言います。

■濃縮洗浄液が付属の場合は、精製水の温度を室温に戻し

一般的には冷蔵庫に保管してあったウェルプレートや試てから希釈しましょう。ご存じのように液体の温度は室

薬、検体を室温より低い状態で使用すると外側が先に暖温に比べ変化しにくいため操作開始時に洗浄液の温度が反応温度と違う場合があります。特に汲み置きした精製A

水を使用する場合は注意しましょう。操作前に温度確認

Bすることをお薦めします。

C■イ ンキュベータを使用する場合は、洗浄液もインキュDE

ベータに入れ温度を同じにしましょう。

F■検体、標準溶液を分注後指定時間反応させた後の 1 回目

Gの洗浄については、反応液を捨て、洗浄液を各ウェルに

H
1

12

2

3

4

5

6

7

8

9 10 11 12満たす時、洗浄液が溢れたり、飛び跳ねたりして、隣り和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

なるほど !!

ELISA

−基礎とコツ−のウェルに移ることのないように注意しましょう。

場合があります（例えば、指定回数が 4 回の場合は 6 〜

この時の洗浄液量の目安は 250 〜 300μL/ ウェルです。

8 回）。

2 回目からは溢れても構いません。

■洗浄液をウェルに満たした後は手のひらの上で軽く水平■洗浄液をウェルに満たす時、ある程度の水流の強さで行方向に円を描くように 5 〜 10 秒程攪拌してから一気にわないと洗浄不良を起こす可能性があります。

プレートを逆さまにして洗浄液を振り捨てて下さい。軽

特に 8 連、12 連ピペットで分注する場合、洗浄が弱い

く攪拌することにより洗浄効果が上がります。

ことがあるので注意しましょう。

■洗浄後、次の試薬を分注するまでにウェルを乾燥させな■ペルオキシダーゼ結合物反応後の洗浄工程は重要です。

いように注意しましょう。ウェルの乾燥はブランクが上

ピペットでウェルに洗浄液を分注する場合には洗浄不良

がる原因になります。洗浄操作を始める前に、必ず次にを起こしやすいので洗浄回数を増やすことで改善される分注する試薬を準備しましょう。

ELISA トラブルシューティング

B：目で見て発色しているのに測定してみると吸光度が出ない
原因と対策
プレートリーダーの測定波長のずれが考えられます。リーダーの波長の調整を行いましょう。フィルター式のリーダーではフィ
ルターの波長が正しいかどうか確認しましょう。

A：最後の段階で発色が薄い、または発色しない
原因と対策
1）標準品や検体を入れ忘れた
2）発色に関連する試薬液を入れ忘れた①ビオチン抗体②ペルオキシダーゼ結合抗体③アビジン HRP
④ TMB
3）発色に関連する溶液の取り違えや希釈調製不良
ビオチン抗体、アビジン HRP など
4）酵素阻害剤の混入 希 釈に使用した容器にアジ化ナトリウム（NaN 3）が付着していたためにアビジン HRP 溶液に混入し、HRP が失活した。
＊アジ化ナトリウムは防腐剤としてさまざまな溶液（特に緩衝液）に加えられています。そのような溶液を取扱った器具は要注意です。抗凝固剤として NaF を含む採血管が使用されている場合、或いは検体の保存にアジ化ナトリウムが使用されている場合、抗原抗体反応後、洗浄操作で洗い流されるはずですが、使用を避けるのが望ましいです。

5）プレートの過剰な洗浄 特に自動洗浄機の洗浄パワーの調節が強すぎると固相化されている抗体や反応物を剥がしてしまうことがあります。適当な強さに設定しましょう。また、洗浄モードはプレートモー
ドでの洗浄をお薦めします。
 マニュアルでの洗浄の場合はピペットや洗浄瓶の先端がウェ
ル表面に接触しないように洗浄液を分注しましょう。
6）TMB 溶 液 を 冷 蔵 庫 か ら 出
してすぐに加えていませんか？
 充 分室温に戻してから加えないと発色が弱くなります（室温反応の場合）。
噴射ビンを用いて洗浄を行うと便利です。

次回は、「第４回

ELISA の操作法とそのポイント（後C：標準曲線が上手く描けない
原因と対策●標準曲線が右上がりにならない
全て低い吸光度
検体は発色している⇒・標準品の入れ忘れ・標準品原液の入れ忘れ・標準品原液の取り違え●検体も発色していない⇒・発色試薬の希釈ミス
・発色試薬の取り違え
・第 2 抗体の取り違え
・第 2 抗体の入れ忘れ・第 2 抗体の変性、希釈ミス●すべて高い吸光度⇒・発色試薬の変性（酸化）●標準曲線が右下がりになった⇒・標準曲線の添加順序が逆転した●標準曲線が凸凹になった⇒・標準品の希釈途中でミスがあった●標準曲線が右寄りで感度が出ない⇒・標準品の失活
・反応時間を間違えた●ブ ランク（ゼロ濃度）を含めた 2 重測定の標準品用のウェルのプレート端側の吸光度が内側のものよりも常に高くなる⇒・エッジ現象が起きている可能性があります。
●一般的注意事項
標準溶液の原液を分注する際まず Vortex で攪拌して下さい。
この際、泡立てないように注意して下さい。
標準溶液の希釈系列を作製する際、高濃度の標準溶液を採取して緩衝液の入った試験管に加えた後、よく攪拌してから次の操作に移って下さい。
本記事は、若林克己著「ELISA A to Z」（株式会社シバヤギ発行）
をもとに、株式会社シバヤギで編集したものです。

編）」（最終回）の予定です。

ELISAトレーニングキット
コード No.
639-31581

メーカーコード
AKRBS-TR2

品
ELISA training Kit

名

容 量
1kit

希望納入価格（円）40,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）13

The Gateway to qNMR
〜定量 NMR への扉〜
和光純薬工業株式会社

第2話

試薬化成品研究所

三浦亨

qNMR で精確な測定をするために

qNMR の手法は、大きく分けて内標準法と外標準法の 2
種類があります。試料溶液に qNMR 用基準物質を内標準物質として添加して測定するのが内標準法です。これに対試料調製
qNMR の操作の中で軽視しがちなのが試料調製です。

して外標準法は、試料溶液とは別に qNMR 用基準物質を

NMR を長年扱ってこられた方からすれば試料調製なんて

一定量溶かした濃度既知の標準溶液を用意して、試料溶液“混ぜれば終わり”と思われるかもしれませんが、実は重と標準溶液を別々に測定し定量する手法です。外標準法は要な操作です。日本薬局方（E ）-ケイ皮酸 qNMR 純度規

試料に qNMR 用基準物質を加える必要がなく、試料をそ定の試料調製を Figure 3 に示しました 1）。この中では、のまま回収できる点が大きな利点です。内標準法と外標準

ウルトラミクロ天秤（日本薬局方の記載では“ウルトラミ法の測定パラメータは基本的に同じと考えることができま

クロ化学はかり”となっています）の使用が規定されていすが、外標準法によって純度や含有率を測定する場合、計

ますが、これは、数 mg の試料や qNMR 用基準物質を精算式によって補正される項に加えて、NMR 試料管の違い

確に計量するためには、このぐらい高精度な天秤を使用しなどを考慮する必要があるので、内標準法と比べて操作がないと精確な分析結果を得ることが難しいという理由から複雑です。したがって、外標準法は内標準法と比べて、一です。なお天秤での採取量の目安の参考になるものとし

般的に精度の保証が難しいといわれています。

て、米国薬局方（United States Pharmacopeia；USP）のそこで今回は、日本薬局方に採用済みの内標準法の測定

最小計量値（minimum weight；W min）があります。こ

フローに従って、qNMR で精確な測定をするためのポイン

れは、天秤での計量の要求精度を満たす下限値のことで、トをご紹介したいと思います。内標準法の測定フロー概略

はかりとる質量は、最小計量値より大きいことが目安とな

図を Figure 1 に示しました。試料調製、NMR 測定、デー

ります。最小計量値 W min は、下記 Eq.（1）に示したよう

タ解析の 3 つのパートに分かれていますが、ご覧の通り、に、風袋など（一例として、試料採取用容器として用い

測定フローはいたって単純です。実際には、これらの操作るアルミ秤量皿（約 60 mg）などがあげられます）の質で得られた天秤での秤量値や NMR スペクトルの信号面積

量 を 10 回 繰 り 返 し 測 定 し た 際 の 標 準 偏 差（standardなどの値を Figure 2 の計算式に代入して分析結果を得る

deviation；SD）σに、安全係数 2 を計量における許容範囲ことになります。qNMR と聞くと NMR 測定だけを正確に（0.10 %）で除した値 2000（= 2/（0.10/100））を乗じて算行えば良いと思われがちですが、実際には試料調製、NMR

出することができます 2）。みなさんも普段使っている天秤

測定、データ解析のすべてのパートを定量に適した方法でで最小計量値を一度測定してみることをお勧めします。

実施しなければ、最終的に精確な分析結果を得ることは困難です。ここからは、それぞれのパートに分けて精確な測定をするためのポイントをご紹介したいと思います。
試料調製

NMR 測定W min=σ× 2000 Eq.（1）また、使用する qNMR 用基準物質についても注意が必要です。昨今、qNMR 用基準物質として複数の製品が供解析給されていますが、その中でも国際単位系（International
System of Units；SI）にトレーサビリティ（この場合は試料
BalanceNMRas

物質量（モル；mol））が確保された認証標準物質（Certified
Reference Material；CRM）を使用することが望ましいと

qNMR用基準物質言えます。qNMR の測定原理は、NMR スペクトル上に観Balance

測された物質量が既知の基準物質の信号面積と分析種の信号面積を比較することで、分析種の物質量をもとめる方法

Figure 1．内標準法の測定フロー概略図ですので、物質量の基準となる qNMR 用基準物質としては、やはり SI トレーサブルな純度が精確に値付けされている認証標準物質の使用をお勧めします。qNMR 用基準
物質に求められるその他のポイントとしては、高純度なもの、安定して精確に秤量できるもの、信号の数やスピン結合による信号の分裂が少ないもの、特異的な領域に化学シフトを与えるもの、重溶媒中で安定かつ試料と反応しない
もの、重溶媒への溶解性が良好であるもの、などが挙げられます 3）。試料調製におけるその他のポイントとしては、

Figure 2．計算式

14

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）使用する重水素化溶媒由来の信号が、定量分析の対象とな度が良く、積算効率が高いからです。⑤ 13C 核デカップリる信号に重ならないことや、試料と qNMR 用基準物質がングはありに設定されています。13C 核デカップリングと重水素化溶媒に完全に溶解していることなどが挙げられまは、13C 核とのスピン結合によって起こる微小な信号の分す。前者に関しては、ブランクとして重水素化溶媒だけの裂（13C サテライトサイドバンド）を解消する手法です。

NMR スペクトルを取得し確認することをお勧めします。

13

後者に関しては、溶媒の種類、温度、pH などさまざまな号に重なることで精確な信号面積が得られなくなるのを防条件で溶解性が異なるため、溶解性に関する情報があればぐことが目的です。⑥遅延時間は繰り返しパルス待ち時間

参考にすることができます。

60 秒以上に設定されています。遅延時間とは、パルス系

C サテライトサイドバンドが、定量分析の対象となる信列において最初のパルスを打ってから、次の積算で同じパルスを打つまでの待ち時間です。定性測定などで一般的に用いられる遅延時間は 5 秒程度と短いですが、qNMR では信号面積の飽和を防ぐために、有効数字 2 桁以上の定量精度を目標とするとき、遅延時間を縦緩和時間（spinlattice relaxation time、T 1）の 7 倍以上設定する必要があ
ります 5）。日本薬局方では、通常の化合物の T 1 が長いものでも 7 秒程度ですので、その 7 倍を十分に確保している
60 秒以上を設定しています。
Figure 3．日本薬局方（E ）- ケイ皮酸 qNMR 純度規定の試料調製
出典：「第十七改正日本薬局方」（厚生労働省）（http://www.
mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/0000066530.html）

NMR 測定qNMR に用いる NMR 測定条件としては、日本薬局方
qNMR 純度規定の試験条件が参考になります。Figure 4に示した日本薬局方（E ）-ケイ皮酸 qNMR 純度規定の試
験条件を参考に、NMR 測定条件についてポイントをご紹介したいと思います 1, 4）。①装置は 1H 共鳴周波数 400MHz

Figure 4．日本薬局方（E ）- ケイ皮酸 qNMR 純度規定の試験条件以上と設定されています。NMR の感度と分解能は外部磁

出典：「第十七改正日本薬局方」（厚生労働省）（http://www.
mhlw.go.jp/stf/seisakunitsuite/bunya/0000066530.html）

場が大きくなるにしたがって向上するため、十分な感度と分解能が得られるように 400MHz 以上に設定されています。装置の共鳴周波数は、測定の目的（目標とする精度など）に合ったものを選択することをお勧めします。②デジ

データ解析

タル分解能は 0.25Hz 以下に設定されています。NMR 信

データ解析における主なポイントを以下に記載します。

号は最初アナログ信号として取得されますが、その後デジ

まず窓関数（ウィンドウ関数）処理について注意が必要でタル信号に変換されます（パルス FT-NMR を前提としてす。窓関数とは、FID 信号をフーリエ変換するときに、います）。その際、データポイント数が少ないと、フーリ

スペクトルの感度や線幅などを改善させるために掛け合わエ変換後の NMR スペクトルにおける信号の形状を正しくせる関数のことを言います。窓関数処理をすることによっ再現することができません。日本薬局方では信号の形状をて目的に合ったスペクトルに加工することができますが、再現するための十分なデジタル分解能として 0.25Hz 以下

その一方で、不適切な窓関数処理によって信号面積の精確が設定されています。③スピニングをオフ（試料管の無回さを失うことがあります。qNMR では、精確さを検証し転）に設定しているのは、試料管を回転したときに現れるている場合を除いて、窓関数処理を行わないことが望まし

スピニングサイドバンドが、定量分析の対象となる信号に

いと言えます。ゼロフィリング処理は、データポイントが重なる可能性があり、これを回避するのが目的です。④パ

補完され、スペクトル形状が滑らかになることで、信号面ルス角が 90°に設定されているのは、単位時間当たりの感積の精度が向上するので、実施することをお勧めします。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）15なおゼロフィリングとは、得られた FID 信号の後ろに強わる場合があるので注意が必要です。ベースライン補正

度ゼロのデータポイントを補完し、見かけ上のデジタル分

は、信号面積に大きな影響を与える場合があるため、一定解能を向上させる方法のことです。また NMR 信号の位相のルールを決めて慎重に行うことが望ましいといえます。

は NMR 信号取得前には不明であるため、測定後に位相を合わせる必要があり、この操作を位相補正といいます。解

次回は、実際の測定例を中心にお話ししたいと思います。

析ソフトウェアによって、NMR 信号の位相補正を自動的に行うことが可能ですが、位相のずれが残ることが多々あ〔参考文献〕

ります。qNMR では、位相のずれは信号面積のばらつき

１）The Japanese Pharmacopoeia, Seventeenth Edition（E ）-Cinnamicの原因となるため、手動操作で位相のずれを解消する必要があります 6）。NMR スペクトルのベースラインは必ずしも強度 0 とならない場合が多いです。これは信号面積の取得においてばらつきの要因となるため、qNMR ではベーacid for assay 2（Purity value by quantitative NMR）.
２）USP“General Chapter 41 Balances”, US Pharmacopeia USP 39-NF 34（2016）.
３）Miura, T., Sugimoto, N., Suematsu, T., Millis, K. K., Asakura, K. and
Yamada, Y. : New Horizons of Process Chemistry , 275 - 285（2017）.

スライン補正を行うことをお勧めします 6）。ベースライン

４）H osoe, J., Sugimoto, N., Suematsu, T., Yamada, Y., Miura, T.,

補正には様々なアルゴリズムがありますが、qNMR では、

Hayakawa, M., Suzuki, H., Katsuhara, T., Nishimura, H., Kikuchi, Y.,

ベースラインと見なされるデータポイントを補正点として利用してベースラインを平らにする処理を行うことをお勧めします。選択したアルゴリズムによっては、信号の裾の一部などのデータポイントが補正点として利用され、その結果、信号形状が大きく影響を受けて信号面積が極端に変Yamashita, T. and Goda, Y. : Pharmaceutical and Medical Device

Regulatory Science , 45 , 243 - 250（2014）.
５）Saito, T., Nakaie, S., Kinoshita, M., Ihara, T., Kinugasa, S., Nomura, A.
and Maeda, T. : Metrologia , 41 , 213 - 218（2004）.
６）Yamazaki, T., Saito, T., Miura, T. and Ihara, T. : BUNSEKI KAGAKU ,61 , 963 - 967（2012）.

qNMR Summit 2018 in Tokyo
2018 年 1 月 29 日（月）、30 日（火）丸の内オアゾ 16 階 （フクラシア丸の内オアゾ）
東京都千代田区丸の内 1 - 6 - 4 オアゾ 16 階
主催
和光純薬工業株式会社、日本電子株式会社
参 加 費
無料
定
員
200 名（申し込み先着順、定員になり次第締め切らせて頂きます。）
申し込み方法当社ホ－ムペ－ジをご参照願います。
お問合せ先： 和光純薬工業株式会社 qNMR サミット事務局 TEL 03 - 3270 - 9130
日
付
開催場所

〈スケジュ－ル〉
1 / 29（月） PM 1 : 30 - 5 : 10
International qNMR Forum
Working toward ISO - Understanding NMR standards in the world
ISO に向けたポジティブな取り組み：世界の NMR 規格を把握する・標準化に向けた第一歩
1 / 30（火） AM 9 : 00 - 11 : 30
USP qNMR Summit in Tokyo
NMR and qNMR in Pharmacopeial Context
Compendial NMR and qNMR
1 / 30（火） PM 5 : 40 - 7 : 00

1 / 30（火） PM 1 : 00 - 5 : 40
International qNMR Symposium
qNMR in the phamaceutical science：Present and Future
製薬分野における qNMR : 現在とこれから

情報交換会●講演会はすべて日英の同時通訳が入ります。
※qNMR summit 2018 in Tokyo は経済産業省の委託事業で実施されます。

平成 29 年度「戦略的国際標準化加速事業（政府戦略分野に係る国際標準活動）」

The qNMR logo is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License.

16

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

ew Products〔参考文献〕

定量NMR用内標準物質1）
「qNMR プライマリーガイド」ワーキング・グループ：「qNMR プライ

定量 NMR 用の基準物質として用いる標準物質には、①
吸湿や昇華などによる質量変動が小さく、安定してはかり
取れること、②純度値のトレーサビリティが保証されていること、③ NMR において単純な形状（可能であればシン
グルピーク）を示すことなどが挙げられます。また分析試料、重水素溶媒に応じて適切な標準物質を選定することが重要です 1）。当社では定量 NMR 用の基準物質として最適な商品をラインアップしています。特に当社から販売している 4 種の標準物質（1,4-BTMSB-d4、DSS-d6、ジメチル
スルホン、マレイン酸）は、IAJapan から ASNITE 認定
プログラムによって認定を取得した認証標準物質（CRM（TraceSure®））であり、計量トレーサビリティが表明された信頼性の高い標準物質です。

マリーガイド

基礎から実践まで」（共立出版㈱）（2015）.

コード No.

品

名024-17031 1,4-BTMSB-d4 Reference
020-17033 Material044-31671
DSS-d6 Reference Material040-31673
Dimethyl Sulfone Reference048-33271
Material
Maleic Acid Reference
135-17951
Material
4 Internal Standard Set for
093-06731
Quantitative NMR

規格

容量

50mg
TraceSure
50mg×450mg
TraceSure®
50mg×4®

希望納入価格（円）30,00075,00030,00075,000TraceSure® 100mg

15,000TraceSure® 100mg

15,000定量
NMR 用55,000

1セット

関連商品
NMIJ CRM（1H,19F）の標準物質として使用可能です。
コード No.

品

名

メーカー

3,5-Bis（trifluoromethyl）
産業技術
634-29181 benzoic Acid for
総合研究所
Quantitative NMR（1H,19F）

容量

希望納入価格（円）200mg

18,750標準品
標準物質を用いて定量 NMR によって値付けされた標準品です。純度には不確かさがついています。
コード No.

TraceSure® 認証書

デ ー タ■ 1 H NMR スペクトル（＊ケミカルシフトは条件によって多少変化します。）
Maleic Acid

Dimethyl Sulfone

品

名028-19011 Benzoic Acid Standard
046-34171 Dimethyl Terephthalate Standard
Potassium Hydrogen Phthalate
166-27911
Standard
207-20411 1,3,5-Trimethoxybenzene Standard
204-20421 Triphenylmethane Standard

1,4-BTMSB-d4

DSS-d6規格

容量

定量 NMR 用 500mg
定量 NMR 用 500mg

希望納入価格（円）

7,500
7,500

定量 NMR 用 500mg

7,500

定量 NMR 用 500mg
定量 NMR 用 500mg

7,500
7,500

標準液
内外標準法に使用できる定量 NMR 用標準液です。
コード No.

品

041-33641

名

規格

容量

DSS-d6 Standard Solution（500mg/L 定量
1mL×5A
NMR 用
Deuterium Oxide Solution）

希望納入価格（円）18,000秤量皿
低質量（約 70mg）で帯電しにくいため、繰り返し性が良く精密な秤量が可能です。
コード No.

品

名

容量 希望納入価格（円）013-26351 Aluminium Weighing Dishes（φ8mm, 0.05mL） 100個

20,000NMRチューブ
定量 NMR に最適なハイグレードタイプです。
7.5

7.0

6.5

6.0

5.5

5.0

4.5

4.0

3.5 3.0 2.5
f1
（ppm）

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0 -0.5 -1.0

溶解性情報
Acetone-d6
CDCl3
D2O
DMSO-d6
CD3OD
CD2Cl2

マレイン酸
○
×
○
○
○
×

ジメチルスルホン 1,4-BTMSB-d4
○
○
○
○
○
×
○
△
○
○
○
○

DSS-d6××○○○×

コード No.

品

名

規格

容量

希望納入価格（円）297-47951 NMR Test Tube HG-Type10本    4,000
NMR 用
293-47953 （φ4.951〜4.965mm×7インチ）
100本
38,000295-48351 NMR Test Tube HG-Type10本    4,400
NMR 用
291-48353 （φ4.951〜4.965mm×8インチ）
100本
41,800295-35161 NMR Test Tube SHG-Type
10本
13,000NMR 用
291-35163 （φ4.951〜4.965mm×7インチ）
10本×10 110,000

NMR装置
日本電子㈱の NMR 装置を取扱っています。
品

名

JNM-ECZ400S FT-NMR

メーカー

日本電子㈱

容量

1台

希望納入価格（円）照 会…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）17

ew Products
電池研究用

コード No.

カーボネート溶媒
当社では、リチウムイオン電池の電解液として使用される溶媒を取り揃えています。

特●水分、塩化物、金属含量を保証

規 格 例
炭酸ジメチル【DMC】
H3CO

OC2H5

OCH3

規格項目

H5C2O
O

O

含量
（cGC）

98.0％以上

98.0％以上

水分20ppm 以下20ppm 以下酸（H2CO3として）0.02% 以下

0.1% 以下

塩化物

5ppm 以下

5ppm 以下

1.0ppm 以下

1.0ppm 以下

Na
規格値

規格項目

O

O
O

炭酸フルオロエチレン【FEC】
F
O
O

98.0％以上

99.5％以上

水分50ppm 以下

200ppm 以下酸（H2CO3として）

−

−

塩化物

5ppm 以下

−

Fe
K
Na

酸（H2CO3として）−塩化物

5ppm 以下

K

名

規

格

容量

21,00080,00011,00030,00015,00051,00014,00041,00012,00035,000硫酸化ジルコニア（SO4/ZrO2）長●高温条件下の反応でも使用可能●装置腐食性が低い●廃酸処理が不要

反 応 例■ アシル化反応
H3CO

1.0ppm 以下

O

O
+

O
O

O

SO4/ZrO2
120℃, 24 h

O

O

Na

Yield : 87%…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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18

希望納入価格（円）●硫酸より高い強酸度

Ca
Fe

品

固体超強酸触媒

特O

98.0％以上

コード No.

048-32291 Diethyl Carbonate-ｄ10
1g
有機合成用
危
5g
044-32293 【DEC-ｄ10】
041-33141 1,2-Dimethoxyethane-d10
250mg
有機合成用
危
1g
047-33143 【DME-ｄ10】
041-32301 Dimethyl Carbonate-d6
1g
有機合成用
危
5g
047-32303 【DMC-ｄ6】
051-08911 Ethylene Carbonate-ｄ4
250mg
電池研究用
1g
057-08913 【EC-ｄ4】
168-26131 Propylene Carbonate-ｄ6
250mg
電池研究用
危
1g
164-26133 【PC-ｄ6】

ざまな酸触媒反応に優れた触媒性能を示します。

O

20ppm 以下

ることができます。

テルの合成、アルキル化、不均化、重合、分解など、さま

CH3

水分

重水素で標識した溶媒を電解液に混合し、充放電後の分−

炭酸プロピレン【PC】

含量
（cGC）

重水素置換カーボネート溶媒

−
−

O

3,000
6,000
4,500
6,200
3,600
6,000
7,900
23,0002,950
4,900

硫酸化ジルコニアは、固体でありながら硫酸より高い酸

規格値

規格項目

希望納入価格（円）強度を有しており、エステル化、アシル化、異性化、エー−
1.0ppm 以下

危

容量

100ｍL
電池研究用
500mL
100ｍL
電池研究用
500ｍL
100g
電池研究用
500g
   5g
電池研究用
25g
100mL
電池研究用
500mL

O

含量
（cGC）

Ca

危

格

解物を分析することで、電池内での電解液の挙動を確認すCa

炭酸エチレン【EC】

規

関連商品

規格値
炭酸ジエチル【DEC】

K

名057-08491 Ethylene Carbonate059-08495 【EC】
NEW 063-06711
Fluoroethylene CarbonateNEW
危061-06712 【FEC】
169-25201 Propylene Carbonate危161-25205 【PC】

長

Fe

品

047-31921 Diethyl Carbonate049-31925 【DEC】
044-31931 Dimethyl Carbonate046-31935 【DMC】

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）［次頁に続く］ew Products
注意事項

合成甘味料の分析に●本品の触媒活性を充分に発揮させるため、使用直前に、

アドバンテーム標準品

加熱乾燥することをおすすめします。

アドバンテームは、砂糖の 20,000 〜 40,000 倍の甘さを●吸湿性があるため、使用後は湿気を避けて保管下さい。

持つといわれている高甘度合成甘味料です。アドバンテー
ム及びその主要な代謝産物であるアドバンテームアシッド〔参考文献〕

は、第９版食品添加物公定書に収載予定です。

１）Matsuhashi, H. et al . : Appl. Catal. A Gen ., 360 , 89（2009）.
コード No.

品

名

規262-02201
Zirconia, Sulfated
NEW 260-02202
NEW

食品成分中のアドバンテームの分析に適した標準品をご格

容量

希望納入価格（円）

和光一級

5g
25g

7,000
15,000

紹介します。

製品仕様●含量（無水物換算）：99.0% 以上●外観：白色〜黄白色、粉末

塩化水素ガスを用いる反応に●化学名：Methyl N -[3-（3-Hydroxy-4-methoxyphenyl）

酸性有機溶媒

propyl]-L-α-aspartyl-L-phenylalaninate Monohydrate
OH

本品は、有機溶媒に塩化水素ガスを溶かして調製した酸性有機溶媒です。保護基の脱保護反応や塩酸塩の合成など

CH3

O

H 3C

H
N

強酸を用いる反応に使用できます。
ご希望の容量、濃度、溶媒がございましたら特注調液を

N
H
・H2O

C24H30N2O7・H2O＝476.52
CAS No. 714229-20-6

長

コード No.

●あらかじめ塩化水素を有機溶媒に溶かしているため、塩

O

O

い。

特

O

HO

承りますので、当社営業員または代理店にお問合せ下さO

NEW

化水素のガスボンベが不要

品

名

規

018-26801 Advantame Standard

格容量

食品分析用 100mg

希望納入価格（円）10,000関連商品●医薬品・農薬の中間体となる塩酸塩の合成が可能

アドバンテームアシッド標準品
アドバンテームアシッドは、アドバンテームの加水分解

反 応 例物であり、主要代謝物の一つです。

OH O
HN

製品仕様

OH O
HCl/CPME

O
O

O
NH2

0℃, 6 h97%

O

●含量：94.0% 以上

・HCl●外観：白色〜黄色、粉末●化学名：N -[3-（3-Hydroxy-4-methoxyphenyl）propyl]-L-αaspartyl-L-phenylalanine〔参考文献〕●別名：ANS 9801 -acid

１）Watanabe, K., Kogoshi, N., Miki, H. and Torisawa, Y. : Synth. Commun .,39 , 2008（2009）.
コード No.

品

名

Hydrogen Chloride,080-10415 Cyclopentyl Methyl Ether
Solution（abt. 2mol/L） 危
Hydrogen Chloride,
近日
発売 087-10425 1,4-Dioxane Solution
危（abt. 4mol/L）
Hydrogen Chloride,083-10405 Ethyl Acetate Solution
危（abt. 4mol/L）
Hydrogen Chloride,
近日
発売 084-10435 2-Propanol Solution
危（abt. 2mol/L）

規

格

容量

有機合成用 500mL

OH

希望納入価格（円）H 3C

13,000O
H
N
HO

有機合成用 500mL

照 会

有機合成用 500mL

9,800
照 会

OH

N
H

O

C23H28N2O7＝444.48
CAS No. 713524-95-9
コード No.

有機合成用 500mL

O

O

NEW

品

名

015-26811 Advantame Acid Standard

規

格

容量

食品分析用 100mg

希望納入価格（円）10,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）19

ew Products
血痕判定用試薬

コード No.

品

名

Leucomalachite GreenNEW 126-06711
Reaction Reagent【S leuco】危ロイコマラカイトグリーン反応用試薬
ロイコマラカイトグリーン反応は、血液の判定において

規格

容量

希望納入価格（円）

法医学
研究用

100本

25,000規格

容量

希望納入価格（円）関連商品

反応特異性が高く、誤判定が少ない血痕予備検査法として

コード No.

知られています。この反応は、無色のロイコマラカイトグ

品

名

生化学用 3g×5包 20,000
124-06511 Luminol Reaction Reagent Set
危リーンが血液中のヘモグロビンに含まれるヘムによって触媒される酸化還元反応により酸化され、青緑色のマラカイ
トグリーンに変換されるという機序によって起こります。

追加品目のお知らせ

本品は、反応液を用時調製する従来法に対して、反応液

ポジティブリスト関連標準品の調液が不要ですぐに使用可能な血液判定用試薬です。

当社では、ポジティブリスト制度の対象となる農薬標準

H2 O2品、動物用医薬品標準品を品揃えしています。

Hb

H

−

N

OH

N

下記品目を新たに発売しました。
+

NN

ロイコマラカイトグリーン

マラカイトグリーン

（還元型）

（酸化型）

無色

発色

特

農薬標準品
■ 2,4-DB- イソオクチル標準品■ 2,4-PA- ブトキシエチル標準品■ 2,4-PA- エチル標準品■ 2,4-PA- イソプロピル標準品■キンクロラック代謝産物 C 標準品■テブフロキン標準品■テブフロキン代謝産物 M1 標準品

Hb：ヘモグロビン
赤血球に含まれる成分

長●反応液の調製不要●簡単な操作●１回分ごとの包装で、携帯に便利

動物用医薬品標準品●従来法（反応液を用時調製）と同等の性能■アザペロール標準品■クロルマジノン標準品

使用方法■イプロニダゾール代謝産物 B 標準品

１．1mol/Lくえん酸溶液を調製する。

コード No.

２．綿棒の先に 1mol/Lくえん酸溶液を付ける。

NEW

３．1mol/Lくえん酸溶液で湿らせた綿棒を使って検体を拭い取る。
４．検体を拭い取った綿棒の先を、本試薬に押し付ける。
５．本試薬の発色を観察する。
※発 色は、おおよそ数秒後から開始されます。ただし、検体により差があります。

名

2,4-PA-butoxyethyl
Standard

規格
危

NEW

163-28141

NEW

160-28151 2,4-PA-ethyl StandardNEW

166-28131 2,4-PA-isopropyl Standard 危NEW

174-00771

NEW

206-20621 Tebufloquin Standard

危
危

Quinclorac Metabolite C
Standard

Tebufloquin Metabolite M1
NEW
203-20631
Standard

綿棒の先端にくえん酸溶液を付ける。

NEW

くえん酸
本試薬 溶液 綿棒

NEW

検体を綿棒で拭い取る。

本試薬の他、くえん酸
溶液、綿棒を用意する。

品

049-34301 2,4-DB-isooctyl Standard

015-26791 Azaperol Standard
034-25141 Chlormadinone Standard

Ipronidazole Metabolite BNEW
095-07271
Standard

容量

残留農薬
50mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
残留農薬
100mg
試験用
高速液体クロ100mg
マトグラフ用
高速液体クロ100mg
マトグラフ用
高速液体クロ20mg
マトグラフ用

希望納入価格（円）14,00014,00014,00014,00030,00025,00025,00020,00030,00055,000

随時、当社 HP のリストに発売品目を追加・更新しています。詳細は、当社 HP をご覧下さい。
当社試薬 HP →分析→食品分析「ポジティブリスト」
発色の様子

和光 ポジティブリスト

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

20

和光純薬時報検索➡

検体を拭い取った綿棒の先を本試薬に押し付ける。

Vol.85, No.4（2017）

ew Products■ GlyCLICKTM

新規取扱いメーカーのご紹介
バイオ医薬研究用 酵素・試薬キット

本品は、Fc グライカンリモデリング反応とクリック
ケミストリーにより目的分子（ビオチン，deferoxamine

SmartEnzymesTM Genovis AB（DFO），Azide 活性化など）の部位特異的修飾が可能です。

Genovis 社は、抗体医薬研究用のバイオ医薬プロセス酵
素 SmartEnzymesTM を開発・製造しているスウェーデン（ルンド）のメーカーです。モノクローナル抗体、ADCs（antibody drug conjugates）、Fc 融合タンパク質、バイオ
シミラーなどのバイオ医薬品の研究開発に使用できるユGlycINATOR ® （EndoS2） に よ る 脱 糖 鎖 反 応 後、
galactosyl transferase, GalT（Y289L） に よ り、GlcNAc
を GalNAz 残基に変換し、この azide 基をリガンドとして
dibenzocyclooctyne（DIBO）によるクリック反応で Fc 領
域特異的に目的分子で修飾します。

ニークな酵素（プロテアーゼ、グリコシダーゼ）、試薬キットをラインアップしています。

■ FabRICATOR®
本品は、IgG のヒンジ領域直下を特異的に切断するプロテアーゼです。さまざまな生物種の IgG アイソタイプに使用でき、消化反応約 30 分で F（ab’）2 と Fc を生成できます。

〈切断サイト〉
Species &Subclasses
Human IgG1
Human IgG2
Human IgG3
Human IgG4
Mouse IgG1
Mouse IgG2a

Native IgG..CPAPELLG / GPSVF..
..CPAPPVA / GPSVF..
..CPAPELLG / GPSVF..
..CPAPELLG / GPSVF..
X..CPAPNLLG / GPSVF..

Species &Subclasses
Mouse IgG2b
Mouse IgG3
Rat IgG2b
Rhesus Monkey
RabbitNative IgGX..CPPGNILG / GPSVF..
..CPVPELLG / GPSVF..
..CPAPELLG / GPSVF..
..CPPPELLG / GPSVF..

X = no digestion confirmed■ FabULOUS®
本品は、IgG のヒンジ領域上部を特異的に切断するプロテアーゼです。さまざまな生物種の IgG アイソタイプに使用でき、消化反応約 60 分で Fab と Fc を生成できます。
また、Fab 精製用のマウス L 鎖 -Kappa 特異的カラムを含むキットもラインアップしています。

その他の製品ラインアップ●IgG Proteases
・FragITTM：FabRICATOR® 固定化ビーズ充てんスピン
カラム
・FabRICATOR® Z：FabRICATOR® のホモログプロテ
アーゼ・GingisKHAN®：ヒト IgG 1 ヒンジ領域上部 K223 -T224
を認識するプロテアーゼ
・FabALACTICATM：ヒト IgG 1 ヒンジ領域上部 KSCDKT/HTCPPCP を認識するプロテアーゼ●IgG Glycosidases
・GlycINATOR®：IgG 特異的エンドグリコシダーゼ
・Immobilized GlycINATOR®：GlycINATOR® 固 定 化ビーズ充てんスピンカラム・IgGZERO®：血清存在下でも使用可能な IgG 特異的エ
ンドグリコシダーゼ・deGlycITTM（Immobilized IgGZERO®）：IgGZERO®
固定化ビーズ充てんカラム●Site-specific Endopeptidase
・GingisREXTM：アルギニン C 末端側を特異的に認識・切断するプロテアーゼ●O -Glycan Elimination〈切断サイト〉
Species &Subclasses
Human IgG1
Human IgG2
Human IgG3
Human IgG4
Mouse IgG1
Mouse IgG2aDigestion under reduced condition.
Primary digestion site.
..KTHT/CPPCPAPA.. ＊Yes（Site N.D.）
Yes（Site N.D.）
X..KPCIC/TVPEVS..
Yes（Site N.D.）＊

Species &Subclasses
Mouse IgG2b
Mouse IgG3
Rat IgG2b
Rhesus Monkey
RabbitDigestion under reduced condition.
Primary digestion site.
Yes（Site N.D.）
Yes（Site N.D.）
Yes（Several sites）
N.D.
..KPT / CPPPE.. ＊＊X = no digestion confirmed
N.D. = Not determined・OglyZORTM：糖タンパク質からコア 1、コア 3O 結合型
糖鎖を除去するエンドグリコシダーゼ
・OpeRATORTM：糖タンパク質のO 結合型糖鎖修飾部位のセリンまたはスレオニンの N 末端を認識するプロテアーゼ・SialEXOTM：O 結合型、N 結合型タンパク質からシアル酸を除去するシアリダーゼ
詳細情報及びその他の製品情報は当社 HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/
genovis/index.htm…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）21

ew Products■ Neurosphere の分散

簡単に神経細胞を回収可能

本品にて分散後、接着培養

神経細胞用分散液

Neurosphere のまま接着培養

本品は、ラットやマウスの中枢神経組織から神経細胞を分散、回収することができます。3 種類の溶液（酵素液、分散液、除去液）で構成されており、調液の手間なく、高い生存率を保持したまま簡単に神経細胞を回収することができます。
本品を用いて Neurosphere を分散することで接着培養
時に死細胞が少なく、観察しやすい状態で神経細胞を培養できることが新たに分かりました。

特長●中 枢神経組織や Neurosphere から簡単に安定して神経細胞を回収可能● Ready-to-Use

科学講座

デ ー タ

日暮 憲道先生）

セット内容■ 凍結神経細胞の分散時の生細胞率
生細胞率（％）（生細胞数/分散回収した総細胞数）

正常ヒト iPS 細胞より Neurosphere を形成し、接着培養、神経細胞への分化を行った。
本品を用いることで Neurosphere のまま接着培養した条件と比較して死細胞が少なく、神経細胞を観察しやすい状態で培養できることが確認できた。
（データご提供：東京慈恵会医科大学 再生医学研究部 岡野
ジェイムス洋尚先生、田原 麻由様、東京慈恵会医科大学 小児

神経細胞用分散液

神経細胞用分散液 S

酵素液

5.0mL × 4 本

2.5mL × 10 本

分散液

5.0mL × 4 本

2.5mL × 10 本除去液

5.0mL × 4 本

2.5mL × 10 本

100
80
60
40

コード No.

品

20291-78001

Neuron Dissociation
Solutions

細胞培養用

297-78101

Neuron Dissociation
Solutions S

細胞培養用 10セット 50,000

0

海馬,
大脳皮質,
海馬,
大脳皮質, 線条体,
マウス由来 マウス由来 ラット由来 ラット由来 ラット由来

細胞名
海馬, マウス（胎生16日）由来

大脳皮質, マウス（胎生15日）由来

海馬, ラット（胎生19日）由来

大脳皮質, ラット（胎生17日）由来

線条体, ラット（胎生17日）由来

総細胞数（cells/vial） 4.32 × 105
生細胞数（cells/vial） 3.83 × 105
生細胞率（%）
89
総細胞数（cells/vial） 6.64 × 106
生細胞数（cells/vial） 6.09 × 106
生細胞率（%）
92
総細胞数（cells/vial） 1.37 × 106
生細胞数（cells/vial） 1.24 × 106
生細胞率（%）
90
総細胞数（cells/vial） 1.32 × 107
生細胞数（cells/vial） 1.17 × 107
生細胞率（%）
89
総細胞数（cells/vial） 2.73 × 106
生細胞数（cells/vial） 2.58 × 106
生細胞率（%）
95

各種脳組織を凍結融解し、本品にて細胞を分散、回収して生細胞率を確認した。
本品を用いることで凍結脳組織から約 90% の高い生細胞率で細胞を回収可能であると確認できた。

名

規格

容量

4セット 31,100

関連商品
凍結神経細胞
コード No.

品

名

規格

容量

和光純薬時報希望納入価格（円）030-24881

Cerebral Cortex, from Mouse
細胞培養用 2胎児/本150（embryonic day 15）

43,800033-24871

Cerebral Cortex, from Rat
細胞培養用 2胎児/本150（embryonic day 17）

50,000036-24861

Cerebral Striatum, from Rat
細胞培養用 2胎児/本150（embryonic day 17）

50,000082-10291

Hippocampus, from Mouse
細胞培養用 2.5胎児/本150（embryonic day 16）

56,300085-10301

Hippocampus, from Rat（embryonic day 19）

62,500150

細胞培養用 2.5胎児/本神経細胞用培地
コード No.

品

名148-09671 Neuron Culture Medium

規格

容量

細胞培養用 100mL…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

22

希望納入価格（円）Vol.85, No.4（2017）

希望納入価格（円）50,000ew Products
品目追加
サイトカイン
サイトカイン 2 品目が追加となりました。

■ 骨形成因子 7，ヒト，組換え体
骨形成因子 7（Bone Morphogenetic Protein 7；BMP-7）
は、TGF- βスーパーファミリーに属する成長因子です。
骨誘導因子 -1（Osteogenic Protein-1；OP-1）とも呼ばれ、コラーゲンなど特定の骨誘導キャリアーとともに骨欠損治療への応用が研究されています。BMP-7 は発生過程の組織で広く発現しており、BMP-7 ノックアウトマウスでは、眼、腎臓、骨格形成などに異常が認められ、出生後致死となります。

■ 可溶性インターロイキン -6レセプターα，ヒト，組換え体
インターロイキン - 6（Interleukin-6；IL-6）は、B 細胞の活性化などに関わる炎症性サイトカインです。IL-6 は特長●多検体の同時測定が可能（96 ウェルマイクロプレート対応）●ライセート試薬の選択により、比色法 / 比濁法に適用●日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験をサポート●厚生労働省 ER/ES 指針 /FDA 21 CFR Part 11 に対応（ER/ES セットのみ）

ソフトウェア●解析ソフトウェア「トキシマスター ®」使い易い画面設計で簡便かつ正確な測定をサポート

IL-6 レセプターα（IL-6Rα）と複合体を形成し、gp130 と会合して細胞内へのシグナル伝達を行います。本品は、細胞外領域から成り、低濃度で IL-6 活性のアゴニストとして作用します。
コード No.

品

名Bone Morphogenetic Protein 7,NEW026-19171
Human, recombinantInterleukin-6 Receptor αNEW092-07301
soluble, Human, recombinant

略名

規格 容量 希望納入価格（円）

細胞生
BMP-7
10μg 39,000
物学用
細胞生
sIL-6Rα20μg 39,000
物学用

大入り包装
サイトカインのお得な大入り包装を多数揃えています。
使用量の多い方におすすめです。アニマルフリーサイトカ
イン※も豊富に取り揃えています。
※アニマルフリーサイトカインとは、製造工程において動物由来原料を使用せずに E. coli を培養し、発現させ精製したサイトカインです。動物に起因するウイルスの混入リスクを低減させた製品です。
サイトカイン大入り包装の製品一覧は、当社 HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/
cytokine_oo/index.htm● ER/ES 指針 / FDA 21 CFR Part 11 への主な対応項目
・ユーザー認証・電子署名
・ユーザー毎の操作機能制限・監査証跡＜その他の機能＞
データ変更時は上書きされず新たなデータとして記録登録、設定変更時は変更事由の入力、バックアップ、復元などが可能
コード No.

品

名MPRエンドトキシン測定システムER/ES
セット for BT［セット内容］

エンドトキシン測定の多検体処理に最適！
マイクロプレート法 エンドトキシン測定システム
MPR エンドトキシン測定システム for BT
本システムは、吸光リーダー ELx808IU と標準装備の解析ソフトウェア「トキシマスター ®」を用いたエンドトキ

内容量 希望納入価格（円）299-35441 ・吸光リーダーELx808IU

・Toximaster®ER/ES MPR
・パソコン（サーバー兼クライアント）
・検証資料 ・IQ/OQサービス

MPRエンドトキシン測定システム標準セット
for BT292-35431 ［セット内容］

・吸光リーダーELx808IU ・Toximaster®MPR
・パソコン

１式

3,100,000

１式

1,900,000

シン測定専用システムです。医薬品、医療機器の品質管理

詳細情報は当社専用 HP をご覧下さい。

などさまざまなエンドトキシン試験に使用できます。

Wako LAL システム：www.wako-chem.co.jp/lal/…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）23

ew Products
睡眠研究に

測 定 例

（n=2）

オレキシンA ELISAキットワコー

検体
ヒト脳脊髄液①ヒト脳脊髄液②ヒト脳脊髄液③ラット脳脊髄液①測定値（pg/mL）
21.48
18.37
16.50
47.47

オレキシンは、摂食及び睡眠・覚醒を制御する神経ペプチドです。オレキシンには同一の前駆体（プレプロオレキシン）から切り出されてできるオレキシン A とオレキシ
ン B の 2 種があり、オレキシン受容体に結合して作用し測定値（pg/mL）
126.06116.04
1.45
2.28

キット内容

ます。オレキシン受容体には OX1R と OX2R の 2 種があ●抗体固相化 96 ウェルプレート

り、OX1R はオレキシン A への親和性がオレキシン B より約 50 倍高く、OX2R はオレキシン A と B で同等の親和性を示すと報告されています。特に OX2R は、睡眠・覚醒の制御に重要であると考えられています。睡眠障害である
ナルコレプシー患者において、脳脊髄液中のオレキシン
A の顕著な低下が見られたことからも、オレキシンは覚醒・睡眠制御において重要と考えられています。
本品は、ヒト脳脊髄液及びラット脳脊髄液、血清、血漿1 プレート●オレキシン A 標準品

300 pg × 1 本●ビオチン標識抗オレキシン A 抗体

12 mL × 1 本●ペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン溶液

12 mL × 1 本● TMB 溶液

12 mL × 1 本●緩衝液

20 mL × 1 本●反応停止液12 mL × 1 本●濃縮洗浄液（20 ×）50 mL × 1 本●プレートシール

中のオレキシン A を簡便に測定可能な ELISA キットです。
オレキシン B には交差反応しません。

コード No.
NEW

プレプロオレキシン

検体
ラット脳脊髄液②ラット脳脊髄液③ラット血漿①
ラット血漿②

4枚
品

名

規格

293-79801 Orexin A ELISA Kit Wako

容量

希望納入価格（円）

免疫化学用 96回用

95,000

規格 / メーカー

容量

希望納入価格（円）Orexin A（Human）

細胞生物学用 0.1mg

20,000337-44821 4482-S

Orexin A（Human, 17-33）

㈱ペプチド
研究所

0.1mg

8,000

156-03171−

Orexin B（Human）

細胞生物学用 0.1mg

14,500−Orexin B（Rat, Mouse）

細胞生物学用 0.1mg

14,500

関連商品
オレキシン A

オレキシン B

コード No. メーカーコード

品

名

オレキシン
159-03161
OX2R

OX1R

153-03181

基本性能

オレキシン受容体アゴニスト

検量線範囲4.69 〜 300pg/mL

測定対象検体ヒト脳脊髄液、ラット脳脊髄液、ラット血漿、
ラット血清

必要検体量
測定時間
同時再現性
日差再現性

25μL
約 20 時間CV ＜ 5％
CV ＜ 16％013-24771−[Ala11, D-Leu15]Orexin B

細胞生物学用1mg

53,000194-17221−

SB-668875

細胞生物学用1mg

65,000オレキシン受容体アンタゴニスト
104-00171
100-00173
108-00174

細胞生物学用10mg 25,000
50mg 99,000
250mg 370,000

10.000585-82244 1960/1
581-82241 1960/10 SB 334867
587-82243 1960/50

Tocris1mg 24,000
10mg 50,000
50mg 244,000

1.000

196-17421
192-17423−−

SB-408124

細胞生物学用5mg
25mg

11,00039,0000.100

192-17761
198-17763−−

SB-674042

細胞生物学用5mg
25mg

23,00090,0000.010

516-76461 3371/10
TCS OX2 29
512-76463 3371/50

Tocris10mg 54,000
50mg 235,000

513-96491 3818/10
TCS 1102−3818/50Tocris10mg 41,000
50mg 184,000〈検線量〉

吸光度(450nm)

−

1

10
100
Orexin A(pg/mL)

1,000

−
−
−

JNJ 10397049…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
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24

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

ew Products
非ペプチド性オレキシン 2 受容体アゴニスト

CH3

YNT-185･2HCl

H3C

YNT-185･2HCl は、非ペプチド性のオレキシン 2 受容体

N

CH3

O

脳室内にオレキシンを投与することにより、症状が改善さ

H
N

N

CH3

N
H

O

・ H2O

・2HCl

C33H37N5O5S・2HCl・ H2O（C33H37N5O5S・2HCl＝688.66）
CAS No. 1804978-82-2（無水物）

ため、血液脳関門を通過できず、脳内に投与しない限り、治療効果は期待できません。YNT-185･2HCl は、マウス脳室内投与、腹腔内投与のいずれの場合においても、覚醒時

H
N

S

O

（OX2R）アゴニストです。ナルコレプシーモデルマウスのれることが報告されていますが、オレキシンはペプチドの

H3C
O

O

間の延長効果を示し、またナルコレプシーモデルマウスの〔参考文献〕

症状を改善すると報告されています。

1）N agahara, T., Saitoh, T., Kutsumura, N., Irukayama-Tomobe, Y.,
Ogawa, Y., Kuroda, D., Gouda, H., Kumagai, H., Fujii, H., Yanagisawa, M.
and Nagase, H. : J. Med. Chem ., 58 , 7931（2015）.

製品概要2）I rukayama-Tomobe, Y., Ogawa, Y., Tominaga, H., Ishikawa, Y.,●外観：白色〜わずかにうすい褐色、結晶性粉末〜粉末

Hosokawa, N., Ambai, S., Kawabe, Y., Uchida, S., Nakajima, R., Saitoh, T.,●含量（HPLC）：98.0% 以上

Kanda, T., Vogt, K., Sakurai, T., Nagase, H. and Yanagisawa, M. : Proc.

●溶解性：生理食塩水（pH 2.4 ※）…1.3mol/L1）

Natl. Acad. Sci. USA , 114（22）,573（2017）.

※本品溶解時の至適 pH は、約 2.4 以下です。

コード No.

1）●EC50：OX2R…0.028μmol/L（free base）

品

名

254-00641 YNT-185 Dihydrochloride
250-00643 Hydrate

1）
OX1R…2.750μmol/L（free base）

第 33 回 Wako ワークショップ

規格

容量

希望納入価格（円）   5mg 14,000
細胞生物学用
100mg 140,000「オートファジーの解析法と最新の話題」

時：平成 29 年 11 月 16 日（木）場：全電通ホール（御茶ノ水）http://www.zhall.or.jp/〒101-0062 東京都千代田区神田駿河台３丁目６ TEL 03-3219-2211（代）
総 合 企 画：水島 昇先生（東京大学 大学院医学系研究科）
主
催：和光純薬工業株式会社
参
加
費：無料
定
員：250 名（定員になり次第締め切らせていただきます）
参加申し込み：◆オンラインでのお申し込み：https://labchem.wako-chem.co.jp/workshop/◆ FAX でのお申し込み：上記ホームページに掲載しています案内パンフレットの裏面をご利用の上、FAX 下さい。
FAX：0120-052-806
問 合 せ 先：和光純薬工業株式会社 Wako ワークショップ係 TEL 06-6203-1788
日会〈講演プログラム〉
10：00
開会挨拶
和光純薬工業株式会社
10：10「オートファジーフラックス計測とノックアウトマウス表現型」
東京大学 大学院医学系研究科 分子生物学分野 教授 水島 昇
11：05
「オートファジーの形態学：電顕と免疫組織」
福島県立医科大学 医学部 解剖・組織学講座 教授 和栗 聡
12：00
休
憩
13：00
「ゼノファジーとリソファジー」
大阪大学 大学院医学系研究科 遺伝学教室 准教授 濱㟢 万穂
13：40「マイトファジーの誘導・検出と病態生理的意義」
東京都医学総合研究所 ユビキチンプロジェクト 松田 憲之
14：20「酵母オートファジーアッセイと初期因子の機能」
東京大学 大学院医学系研究科 分子生物学分野 講師 山本 林
15：00
コーヒーブレイク
15：20「オートファジー解析用の特殊蛍光プローブ」
理化学研究所 脳科学総合研究センター 片山 博幸
16：00「オートファジーとがん代謝解析：メタボローム解析からわかったこと」
新潟大学 大学院医歯学総合研究科 遺伝子制御講座 分子生物学分野 教授 小松 雅明
16：50
閉会挨拶
和光純薬工業株式会社…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）25

ew Products
リンパ管・腫瘍細胞マーカータンパク質
ポドプラニンの検出に

有機則非該当、キシレンと同性能で安心 ･ 安全な病理環境を抗ポドプラニン，モノクローナル抗体

キシレン代替品：パソクリーンTM

膜一回貫通型糖タンパク質であるポドプラニン（PDPN）

病理分野で汎用されているキシレンと同性能を有するパは、リンパ内皮や肺胞上皮のマーカーとして利用されていソクリーンTM の販売を開始しました。パソクリーンTM はます。また、脳腫瘍、悪性中皮腫、精巣腫瘍、卵巣がんや各種規制に抵触しない環境対応製品です※。

種々の扁平上皮がんなどで過剰発現すること、腫瘍細胞の

現在、労働安全衛生法施行令等の一部改正により、キシ浸潤や転移に関与すること、発現の強弱が腫瘍の予後や浸レンは「有機溶剤中毒予防規則」の適用を受け、50ppm の潤性と一定の相関性を示すことが知られています。

管理濃度を超える環境では女性の労働ができなくなっています。是非、この機会にキシレン代替品：パソクリーンTMの検討をお願いします。
※消防法には該当しますのでご注意下さい。

特

長

●透徹工程

：キシレンと同等●脱パラフィン工程：キシレンと同等

ポドプラニン配列上の各抗体エピトープ●揮発性■ 抗ポドプラニン, モノクローナル抗体（LpMab-19）：キシレンと同等

デ ー タ

本品は、PLAG4 領域近辺の Thr76-Arg79 を認識する抗■ キシレンとの比較体です。認識には Thr76 への糖鎖付加が必須となり、糖ペプチドを認識する抗体です。膠芽細胞腫、口腔扁平上皮
がん及び正常細胞のリンパ内皮細胞、肺胞 I 型細胞及び腎
糸球体上皮細胞のポドプラニン検出に使用できます。
●免疫動物：マウス●抗体サブクラス：IgG 2 b・κ●アプリケーション：ELISA、FCM、IHC

図１．ヘマトキシリン・エオジン染⾊（胃）左：キシレン、右：パソクリーンTM■ 抗ポドプラニン, モノクローナル抗体（LpMab-21）
本品は、PLAG4 領域近辺の Thr76-Arg79 を認識する抗体です。認識には Thr76 へのシアル酸糖鎖付加が必須となり、糖ペプチドを認識する抗体です。また、ADCC 活
性、CDC 活性があります。膠芽細胞腫、口腔扁平上皮がん、精上皮腫及び正常細胞のリンパ内皮細胞のポドプラニ
ン検出に使用できます。しかし、LpMab-19 など他の抗ポ

図２．過よう素酸シッフ染⾊（腎臓）左：キシレン、右：パソクリーンTM

ドプラニン抗体と異なり、肺胞 I 型細胞及び腎糸球体上皮細胞のポドプラニンを認識しません。
●免疫動物：マウス●抗体サブクラス：IgG 2 a・κ●アプリケーション：ELISA、FCM、IHC、ADCC、CDC
コード No.

品

名Anti Human Podoplanin, MonoclonalNEW017-27471
Antibody（LpMab-19）
Anti Human Podoplanin, MonoclonalNEW014-27481
Antibody（LpMab-21）

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫
100μg
化学用
免疫
100μg
化学用

34,000

図３．マッソントリクローム染⾊（肺）左：キシレン、右：パソクリーンTM
キシレンと同等であることが確認された。

34,000

上記以外の抗ポドプラニン抗体は、当社 HP をご覧下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/
PDPN/index.htm

コード No.

品

名161-28321
PathoCleanTM
NEW
169-28327

規

NEW

危

格

病理研究用

容量

希望納入価格（円）

1L
18L

2,800
26,800…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

26

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）安価で高性能な遺伝子導入試薬

ScreenFectTM 通信
vol. 3

HeLa細胞へのsiRNA導入データ

・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
Screen ectTMsiRNA を用いた HeLa 細胞への siRNA 導入実績及びリバーストランスフェクション（1-STEP）
プロトコールを紹介します。

〈トランスフェクション〉
１．
〈細胞懸濁液の調製〉で調液した細胞懸濁液 500 μL をウェルへ添加する。
１．
〈トランスフェクション試薬の調製〉の工程 8 でインキュベー
ションしておいた DNA-lipid complex 50 μL をウェルに添加し、 プ レ ー ト を 軽 く 揺 す っ て 混 合 さ せ る（ ウ ェ ル に 予 めDNA-lipid complex 50 μL を添加しておき、そこに細胞懸濁
液を 500 μL 添加しても構わない）。
３．CO2 インキュベータで 24 〜 48 時間培養し、実験に供する。

HeLa におけるノックダウン効率比較
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

SFsiRNA

他社品 A

播種細胞数：1×105 cells/wellsiRNA 量：5 pmol/assay
トランスフェクション試薬量：
Screen ectTMsiRNA reagent＝0.5μL
他社品＝1.5μL
フォーマット：24well プレート
検出時間：48 時間後確認

Phase
他社品 A 1.5μL〈細胞懸濁液の調製〉
１．
〈細胞の前培養〉で用意したフラスコをインキュベーターから取り出す。
２．培地を捨て、PBS で１回洗浄する。
３．トリプシン溶液を 2 mL 添加し、室温か CO2 インキュベーター
でインキュベーションし、細胞を培養容器から剥離させる。
４．FBS 添加培地を約 5 mL 添加し反応を止める。
５．ピペッティングでよく細胞を分散させ、遠沈管に全量移す。
６．150 × g, 5 分間遠心する。
７．ペレットを捨てないよう上清を除く。
８．新しい培地を 5 〜 10 mL 添加し、ピペッティングで細胞を分散させる。
９．血球計算盤などの細胞カウンターを用いて細胞数を測定する。
10．測定した細胞懸濁液の濃度から計算して、2.0 × 105 cells/mLの細胞懸濁液を調製する（調製する細胞懸濁液量は実験ス
ケールに応じて適宜調節する）。

〈リバーストランスフェクション（1-STEP）〉〈フォワードトランスフェクション（2-STEP）〉
HeLa におけるノックダウン効率比較
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0

SFsiRNA

他社品 A

コード No.

播種細胞数：0.5×105 cells/wellsiRNA 量：5 pmol/assay
トランスフェクション試薬量：
Screen ectTMsiRNA reagent＝0.5μL
他社品＝1.5μL
フォーマット：24well プレート
検出時間：48 時間後確認

Phase
他社品 A 1.5μL

buffer を 24 μL 添加する。
５．４ に 1 μL の 5μmol/L PIK3CB siRNA 溶液（5 pmol）を添加する。・・・溶液（B）
６．溶液（A）のチューブに溶液（B）全量を添加する。
７．混合したチューブをタッピングで良く混合し、卓上遠心機でスピンダウンする。
８．室温で 5 〜 20 分間インキュベーションする。

HeLa 細胞へリバーストランスフェクション法及びフォワード
トランスフェクション法で PIK3CB siRNA の導入実験を行い、リアルタイム定量 PCR で PIK3CB mRNA の発現量を測定しました。
定量結果を元に他社製品とノックダウン効率の比較を行ったとこ
ろ、ScreenF ectTMsiRNA は他社製品と同等以上のノックダウン効率を示しました。

PIK3CB expression〈トランスフェクション試薬の調製〉
１．滅菌処理した 1.5mL 容チューブを 2 本用意する。
２．上記工程で用意した 1 本のチューブに ScreenF ectTM Dilution
buffer を 24.5 μL 添加する。
３．２ に 0.5 μL の ScreenF ectTMsiRNA reagent を添加して全量で 25 μL にする。・・・溶液（A）（ScreenF ectTMsiRNA Reagent は使用前にボルテックスして下さい。）
４．１ で用意したもう 1 本のチューブに ScreenF ectTM Dilution■実験データSF siRNA 0.5μL〈細胞の前培養〉１．適当な培養容器（T-75 フラスコなど）を用いて、HeLa 細胞をセミコンフルエントになるまで培養する。

フォワードトランスフェクション（2-STEP）プロトコールを含む ScreenFectTMsiRNA のプロトコール電子版は、当社デー
タベースからダウンロードできます。
http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol

PIK3CB expression

コール例（24 ウェルプレート）

SF siRNA 0.5μL■ HeLa 細胞へのリバーストランスフェクションプロト

品

名299-75001
295-75003 ScreenF ectTMsiRNA
293-75004

規

格

容量

希望納入価格（円）0.2mL
遺伝⼦研究⽤   1mL1mL×5

11,00040,000175,000

上記以外の ScreenF ectTM シリーズの詳細情報は専用
HP（http://screenfect.jp/ja/）をご覧下さい。

さまざまな細胞に対するトランスフェクションプロトコール例をご紹介予定です。
掲載をご希望される細胞がございましたら、こちらのメールアドレスまでご連絡下さい。→ jiho@wako-chem.co.jp…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）27

化学大家 440
アーネスト・ラザフォード（1871〜1937）
理学博士

昶

ラザフォードの伝記はいろいろな大先

始めて参入を許された外部からの研究生

生方の執筆されたもの 1 - 10）がある。ラザの一人であった。1895 年に、はるばる

フォード家はもともとスコットランドで地球の反対側からやってきたラザフォーの古い家柄であった。十九世紀の半ば

ドの才能は、いちはやくトムソンの認め頃、その一員であったジョージ・ラザ

る所となった。トムソンはまず彼の卒業

フォード（1808 - 1875）と夫人のバーバ研究で考案した無線電波受信機の検知装ラ（1811 - 1876） が、 当 時 の 新 天 地 で置をもっと発展させないかと示唆したらあったニュージーランドへの開拓民の募しい。だが、ラザフォードはそれよりも集に応じて、まだ幼かった四人の息子達

当時産声を上げたばかりの分野、すなわとともに南島最北端のネルソン港付近に

ち物質と放射能の関連についての方へと一家を構えた。これがニュージーランド

興味を移し、無線電信の方は結局の所マのラザフォード家の初代で、アーネス

ルコーニの手によって実用化されること

ト・ラザフォードの祖父母に当たる。

となった。

アーネストの父君であるジェイムズ（1837- 1928）は、ジョージ、バーバラ夫
妻の三男で、やがてマーサ・トンプソン（1841- 1935）と結婚し、ネルソン近郊の
ワイメアの土地の一部を分けてもらい、家を建てた。ここがアーネストの生家で1895 年当時知られていた放射線とし
図１．アーネスト・ラザフォード

Wikimedia Commons, https://commons.
wikimedia.org/wiki/File:Ernest_
Rutherford_ 1908 .jpgを許可された。

ては、レントゲンのＸ線の他には、ヒッ
トルフの発見になる「陰極線」、ゴルトシュタインの命名になる「カナル線（陽極線）」くらいであった。やがてこれにベクレルの発見になる「ウラン線」が加ある。ほかの兄弟姉妹も、最初はネルソ

カンタベリー・カレッジを卒業した年

わり、キュリー夫妻のラジウム発見後はンやワイメア近傍に家庭をもったが、や（1894）に、大英帝国の万国博覧会記念「ラジウム線」、さらには「ベリリウム

がてそれぞれ独立し、島内各地に居を定

奨学金の給付枠がたまたまニュージーラ

線」などの新顔も加わった。

めた。みな子沢山であったから、アーネ

ンドへ回ってきた。アーネストも応募しラザフォードは、これらの放射線の照ストには父方だけでも従兄弟と従姉妹がたのだが、残念ながら次席であったの射による気体の電離（イオン化）を調併せて五十人以上いたのである。

で、やむなく帰郷し、当時北島のタラナ

べ、ウランやラジウム、トリウムなどかジェイムズとマーサ夫妻の間には十二キに移転していた両親の農場を手伝ってら出てくる放射線には、大気のイオン化

人の子供が生まれた。アーネストは次男いたところに吉報が届いた。折角選ばれや物質の透過性などから少なくとも二種で、上に兄が一人と姉が二人いた。さした候補者が家庭の事情で辞退してしまっ類が存在することを発見した、一方は気て年齢の違わない兄弟姉妹がたくさんいたのである。

体をイオン化する能力は大きいものの、たので、さぞ賑やかな環境であったと思28

山崎

数枚の紙やアルミ箔で遮ることが可能だ

われる。後年アーネストが、｢ 自分は周キャヴェンディッシュ研究所（1895-

が、もう一方は透過能力には優れている

囲の雑音にはあまり乱されることなく集1899）

が気体中のイオン生成能力ははるかに劣

中力を持続できるようになったのも幼時

当時のケンブリッジ大学の総長であっる。彼は前者を「α線」後者を「β線」の環境のおかげさ ｣ と話したという。

たデヴォンシャー公爵ウィリアム・キャと名付けた（後にフランスのヴィラール

1886 年、14 才になったアーネストは、

ヴェンディッシュの寄金によって 1874

によって第三の放射線が発見され、これすでにいろいろな教科で頭角をあらわ

年に創立されたキャヴェンディッシュ研にラザフォードが「γ線」と命名したのし、奨学金を受けて、寄宿制の ｢ ネルソ

究 所 は、 初 代 所 長 は マ ッ ク ス ウ ェ ル

は 1904 年のことである）。

ン・カレッジ（College を名乗っている（1831 - 1879、 在 任 期 間 1874 - 1879）、 二万国博覧会記念奨学金の期限が切れ

が、実質的にはわが国の「中高一貫校」

代目はレイリー卿（1842 - 1916、在任期て、トムソンの研究室に滞在することがにほぼ相当する学校であった）」に入学

間 1879 - 1884）で、当時は三代目の J. J.

不可能となったので、再びはるばる海をを認められた。だが大家族を抱えるラザ

ト ム ソ ン（1856 - 1940、 在 任 期 間 1884 -越えてカナダ（当時は大英帝国領）のモフォード家においては、奨学金が得られ1917）であった。

ントリオールのマギル大学へ赴任するこなくてはとても進学など難しかった。こ

ここからは親族と区別する必要がなくこでも優秀な成績を収め、1889 年に卒なるので、｢ ラザフォード ｣ の方に呼称

業して、クライストチャーチにあるカンを改めることとする。ご了承ありたい。

モントリオール時代（1899 -1907）

タベリー・カレッジに奨学金を得て入学

ラザフォードはこの光栄ある研究所に

マギル大学時代の最初の研究成果は

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）ととなった。

「トリウムエマナチオン（エマネーショ究室の新しいスタッフとしてオックス

る気体のイオン化を驗電器で測るか、電ンとも）」の発見である。1899 年のこと

フォード大学からソディがやってくる。

離した気体の発光の度合や、写真乾板ので、今日「ラドン」と命名されている

ラザフォードとソディのコンビはいろい

黒化度などを利用するしか計測方法がな

86 番元素の発見に外ならない。だが、ろと重要な業績を上げたのだが、実はソかったから、ここで始めて「これらの放通常のテキスト類には翌年（1900）の、ディがマギル大学にいたのはそれほど長射線には粒子としての性質もある」こと

ド イ ツ の ド ル ン（1848 - 1916） に よ る

期間ではない。1903 年（一年半後）にが示唆されたと言える。その結果、放射「ラジウムエマナチオン」の方だけが掲

は再び英国に戻り、ロンドン大学のラム

壊変の定量的な取扱が可能となった。

載されている。トリウムが放射線を放出

ゼイの研究室に入った。

「半減期」がかなり正確に測定できるよ

することはつとにキュリー夫妻によって報告されていた。

ラザフォードとソディは、ブルックス

うになると、これによって発生源を同定嬢と行った物理的分離法とは別の化学的することも容易になったし、放射能の変

この発見は偶然の事からはじまったと手法の導入によって、発生源の探索を試化（減衰、増加、平衡）も正確に記述でいう。ラザフォードも同じ結論を得たのみた。そこでトリウム塩（硝酸トリウ

きるようになった。

だが、同僚のオーウェン（電気工学の教ム）を水溶液とし、アンモニア水で水酸

それまでは放射線はもっぱらＸ線と同授）にあとを任せることとした。ところ

化トリウムを沈澱分離させてみた。驚い様の光線の一種（つまり「波」）としてがオーウェン教授がこのトリウムの放射たことにこの操作で、エマナチオンを発の性質の方に重点が置かれ、粒子性の存能の測定をしている際に、ラザフォード

生する源はほとんどが濾液の方へ移動し在は軽視されていたのだが、トムソンにがやってくると計測値が大きく揺らぐのてしまい、残った沈澱にはもともとのαよって陰極線が微細の荷電粒子（後にである。なかなか原因が突き止められな

放射能の数分の一しか残らなかった。濾「電子（electron）」と名付けられた）か

かったが、やがて、ドアの開閉によって液の方のα放射能はどんどん減衰し、ほらなっていることが解明されると、続々

気流の乱れが生じる、つまり放射性の気ぼ四日弱で強度が半分になってしまうのと発見されるそれぞれ別の放射能特性を体が発生していることを疑わせる。そこに、沈澱の放射能は逆に増大し、やがて持つ「新元素」を周期表のどこへ収容すで、トリウム化合物上の大気を薄いガラ

元の状態に戻ることが判った。

べきかが大問題となった。

ス製の長い管に通してみると、管の中にこのエマナチオンの発生源に対して、自然界において、原子が消滅したり生放射能をもつ気体が移動し、やがてこの二人は「トリウムＸ」という名を与え成したりすることが確かめられたのはこ

放射能は急速に衰えて、ガラス管の壁にた。前年（1900）クルックスが、硝酸ウのトリウムエマナチオンの発見が最初と別の種類の放射線（β線）を放出する生ラニルの水溶液から水酸化鉄を沈澱させされる。この放射能の変化はいろいろな成物が析出するのが認められた。

たときに、もともとのウラニル塩の持つ総説類

この放射能を持つ気体について、ラザ

放射能の大部分が沈澱の中に移行し、溶はPhil. Mag ., 4 , 370 - 96（1902）である。

フォードは研究助手のハリエット・ブ

液中にはほとんど残らないが、時間とと後にラザフォードが一代男爵に叙せらルックス孃とともにまず物理的単離を試もに沈澱中の放射能は減衰し、ウラニル

れたとき、選んだ紋章の中央に対称的にみた。酸化トリウム試料の上に放出され塩の放射能は逆に増大して元に戻ること

交叉する二本の曲線がデザインされたるらしい気体を細い薄手のガラス管に導を見出したのである。クルックスはこれが、これこそまさに「原子の消滅・生

くと、このガラス管の中に放射性の気体に「ウランＸ」と名付けた。この「ウラ成」を表現したものである（図３）11）。

のみが送り込まれてくるが、これは前述

ン X」は、今日風に考えればトリウム

ラザフォードも暗室の中で、α粒子やのように比較的急速に減衰して壁面に別- 234（およびトリウム - 230）に当たる

β粒子などによる蛍光を目視で数えていの析出物（実はトリウムエマナチオンのが、もちろんその頃は正体不明のままでたのだが、さすがに目を酷使したために壊変生成物で、主にβ放射体）が生じあった。

視力が低下してきた。後にマンチェス

1 - 8）に引用されているが、原論文る。発生源と計測装置との間に銅製の蛇トリウムＸの方は、もっとあとになっターでハンス・ガイガーが今日の GM

管を接続して液体窒素トラップで冷却すてからラジウムの同位体であることが判（ガイガー = ミュラ－）計数管の祖型でることで、このなかなか捕え所のない気明したのだが、当初はトリウムのα壊変ある計測装置を製作したのも、恩師の苦体を凝縮 ･ 捕集することになんとか成功生成物だと考えられていた。

労を見かねたためという。最初はα粒子したので、分子量の測定を試みたのだ

1903 年にクルックスがスピンサリスの計測を目的として作られたのだが、後が、何しろ量がわずかなので、およそのコープを発明し、当時までに知られていに改良されてβ線やγ線、さらには X 線

所 40 〜 100 程度だという不正確な値しかたいろいろな放射線による発光（シンチも計測できるようになった。

6）

得られなかった 。
やがて 1901 年にはラザフォードの研レーション）を数えることにはじめて成オットー・ハーンが（1905）ラムゼイ

功した。それまではこれらの放射線によの元からマギル大学へやってくる。ハー和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）29

なる。だが、ラザフォード自身は「自分がそれまで物理学者だと皆に思われていたのに、一朝にして化学者の仲間入りをすることになったのだから、これこそもっとも驚くべき「変成（transmutation）」にほかならないね」と述懐したという。
この年、α粒子がヘリウム原子核であることも証明された。α粒子は可視部に発光スペクトルを与えないが、粒子が消図２．トリウムエマナチオン（エマネーション）の生成と減衰滅（当時の用語では「崩壊」）した後の気体の発光スペクトルは明確にヘリウム

Rutherford, E. and Soddy, F. : Phil. Mag .,4 . 470 - 96（1902）.

ンはフランクフルト・アム・マインの生
まれで、マールブルク大学に進み、有機化学のツィンケに師事した。学位を得た
のち、ロンドン大学のラムゼイの元に留学した。ラムゼイはハーンに「君、ラジウムや放射能には興味ないかね」と尋のスペクトルを与えることを示した。以
図３．ラザフォードが一代男爵に叙爵されたときに選んだ紋章
左の人物は伝説的な錬金術師の「ヘルメス・トリスメギストス」右側はマオリ族の戦士。中央の楯の部分にある交叉した曲線は、左図のトリウムエマナチオンの生成と減衰の様子を表現している。
http://www.numericana.com/arms/
rutherford.htm

ね、ハーンは「興味はありますが、でもこのころ（1908）ガイガー = マース
デンの実験が開始される。マースデンは
当時まだ卒業研究生であったという。ラ
ジウムエマナチオン（ラドン）からのα粒子をアルミニウムや鉄などいろいろな
金属箔に衝突させたときの散乱の様子を自分は有機化学しかやってこなかったも頼し、その結果が以後の幾つもの輝かし観察し、重い元素ほど散乱角度が大きくので・・」と答えたところ、ラムゼイはい業績となった。もっとも物事がすべてなることを見出した。そこでラザフォー「君こそ理想的な人材だ、早速モントリ

順調に進んだわけではない。最大の問題

ドの示唆に従って、もっと原子量の大き

オールのラザフォードの所へ行ってくれ

は、彼の研究に必要なα線源、つまりラな金の箔を試料として同じ実験を試みたたまえ」と送り出してくれたという。

ジウムの入手であった。

ところ、α粒子の一部が極めて大きな角

ハーンはマギル大学で「メソトリウム」

キュリー夫妻が初めて 0 . 1 グラムほど

度（180°に近い）にまで曲げられること「ラジオトリウム」などを発見し、これの塩化ラジウムを単離してから一年後のが観測された（1910）。これが現代の優らをすでに発見されていた「トリウム1899 年には、１グラムのラジウムの市れた表面分析法の「ラザフォード後方散Ｘ」などとあわせてメンデレーエフ以来

価はおよそ一千ドルほどであったのだ

乱法（RBS）」の創始でもある。

の周期表のどこに収めるべきかが大問題

が、医療・診断などの用途が急速に拡大

彼らの最初の実験装置では、α粒子のとなった。「ソディ・ファヤンスの法則」

し、その結果価格が高騰して、1914 年

検出には蛍光板のシンチレーションを顕（1913）も「モーズレイの法則」（1913）にはグラムあたりで十数万ドル以上にも微鏡で観測する方式であったが、後にαもまだ提案すらされていなかったし、なったという。

粒子による気体のイオン化を利用した計「アイソトープ」という言葉をソディが幸いにして、オーストリアのウィーン

数装置（今日のガイガー = ミュラー計数

提案した（1913）よりも前のことであるに設立されていた「ラジウム研究所」が管の祖型）が用いられるようになり、観から、当時の物理・化学界の研究者たち

貴重なストックのラジウムの一部を貸与

測のために暗黒の環境で目を馴らさなくの困惑振りは、後世のわれわれにも想像してくれることとなった。

とも良くなった。

できる。

30

前にラムゼイがクレーヴ石中に存在を確認したヘリウムの起源がこれで判明した。

1908 年には、ラザフォードに「ノー『ティッシュペーパーを的にして、径ベル化学賞」が授与された。受賞の対象

が 15 インチもある大砲の弾丸を射った

マンチェスター時代（1907 -1920）

は、「元素の崩壊、放射性物質の化学にら、そのままもろに撃ち返されたような1907 年に、マンチェスター大学のシュ関する研究」であった。それまで元素やものだ』とラザフォードが形容したという。

スター教授が引退することとなり、その原子は「不生不滅、不増不減」のものとこの同じ年（1910）、ソディが、原子後任としてラザフォードが招かれた。ラ

いう概念を破壊して、自然界においても量（現代風には質量数）が異っても化学

ザフォードは、シュスターの助手を務め崩壊・生成が起きていることを証明した

的に同じ性質のものは同一の元素であていたハンス・ガイガーに、自分の研究のだから、当時の化学者や物理学者の暗り、核外電子の数は等しいから化学的にグループの一員となってくれるように依黙の了解事項が根本から覆されたことに同一の性質を示すというアイディアを発和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）

表した（この時点ではまだ「アイソトー

は「核子数」であるが）がそれぞれ４のが次第に大きくなるため、小山慶太先生

プ」という言葉は使われていない）。

差のある三種類の壊変系列に整理されるの御著書 1） などに詳しく記載があるのこととなった。

で、 そ ち ら に 譲 る こ と と す る。 ラ ザ

翌年（1911）、ガイガー = マースデンの実験結果をもとに新しい原子モデルがモーズレイの法則の論文が刊行されたフォードの伝記は多数 1 - 10）あるが、その提案される（ラザフォード散乱による原のもこの年である。特性Ｘ線の波長と原中でも早稲田大学の小山慶太教授の纏め

子核の発見）。原子の質量の大部分は、子番号との間に密接な関係があること。

られた「ケンブリッジの天才科学者た中心にある極めて小さなプラスに帯電しつまり「原子番号の重要性」が確立されち」（新潮選書）1） は、タイトルにこそた原子核によるもので、電子はそのまわた。だがモーズレイは 1915 年にトルコ

名 が 出 て い な い も の の、 優 れ た ラ ザりをめぐっているという、トムソンのモのガリポリで戦死した。

フ ォ ー ド 伝 で あ る。 あ と、 オ ッ ク ス

デルとは全く異なったモデルである。

1919 年に、Po- 214（ラジウム C’）かフォード大学の人物伝記シリーズの一冊

このころ、「ガイガー = ヌッタルの法ら生じるα粒子を窒素中に導いた時、水である「アーネスト・ラザフォード」

則」すなわち壊変定数とα粒子のエネル

素の原子核（陽子）の飛跡が観測され（梨本治男訳、大月書店）2）が比較的入手

ギーの関係式が提案される。最初は『半た。つまり人工的に核反応を起こさせるしやすい。

減期の短いものほど飛程が長い』ということに始めて成功したのである。

定性的な表現だったらしいが、後に定式化された。

この時用いられたα粒子源の Po- 214
は、ラジウム本体やラドン、ポロニウム

この原因は現在ではガモフの『量子トなどよりも飛程の長い（エネルギーが大ンネル効果』に基づくものとして、もうきい、現代風の尺度なら 7 . 833 MeV）強少し複雑な式（その代り精密になった）力なα粒子が得られるので、ラザフォー

で表現される。理化学研究所で 113 番元ドの研究グループの愛用する線源であっ素（ニホニウム）が作られた折（ 最 初 は 一

た。そのためか以後も長いこと、原子核原子のみであった）にも、きちんと半減の反応にはこのラジウムＣ”並みのエネ期が報告されたのは、α線のエネルギー

ルギーの粒子が必要だと考えられていたからこの法則で計算できたからである。

らしい。

デンマークからニールス・ボーアがラザフォードのもとへやってくる（1912）。

再びキャヴェンディッシュ研究所

ボーアはラザフォードの最初のモデルを（1919 -1937）

改訂し、電子が特定の軌道にあるときの第一次大戦が終了した頃、トムソンがみ安定となるというモデル（ラザフォー

研究所長を勇退することになり、後任とド ･ ボーアモデル）を考案。今日の原子し て ラ ザ フ ォ ー ド が 招 か れ た。 ラ ザ

構造論の礎が築かれた。

フォードは、ウィルソンやアストンなど

この翌年（1913）、ソディが「アイソの以前からの同僚達には比較的自由に仕トープ」（isotope すなわち「周期表で同事をさせ、新しい若手のスタッフとの共じ（iso）位置（topos）に入る元素（同

同研究に努めた。チャドウィック、カ

位元素）」という単語をギリシャ語のピッツァ、コックロフト、ウォルトン、「 同 じ（ισοϛ, isos.）」「 位 置（τοποϛ,ブラケットなどみなこの頃の共同研究者

topos）」から作る。なおこの年に「ソである。ラザフォードは早くも 1920 年

ディ = ファヤンスの法則」、すなわち放に「中性子」の存在を予見している。す射壊変に伴う陽子数と質量数の変化を纏

なわち原子核中に陽子と電子とが強固にめた法則が発表される。ファヤンスは当結合した別の粒子の存在の可能性を考え時マンチェスターのラザフォードの研究た。だが、電荷を持たない粒子なので、室に滞在中であった。

1932 年にチャドウィックが発見するま

これらの法則に従うと、それまでに報で待たなくてはならなかった。

告されていた 30 種以上の「新元素」が、ここから彼の逝去（1937）までの時代

周期表に残されていた 4 箇所の空白に巧については、紙面の制限もあり、核物理

みに収められ、かつ、原子量（今日風に学や物性物理学に関する研究のウェイト

和光純薬時報Vol.85, No.4（2017）〔参考文献〕
極めて多数に上るので、すべてをリ
ストアップすることは紙面の制約上不可能であるから、重要と思われるものだけを掲げる。
1）小山慶太：「ケンブリッジの天才科学者たち」（新潮選書）（1995）．
2）Heilbron, J. L. :“Ernest Rutherford ”,（2003）（Oxford Portraits in Science の一冊で、邦訳はハイルブロン「アーネスト・ラザフォード」（梨本治男訳）（2009）,（大月書店）
3）Campbell, J. :“Rutherford Ancestors ”,AAS
Publications, Christchurch, New Zealand（1996）.
4）C a m p b e l l , J . : “ R u t h e r f o r d ・ A B r i e f
Biography”, http://www.rutherford.org.nz/
biography.html
上 と 同 じ く Campbell 教 授 の 著 書 で あ る“Rutherford, Scientist Suprene ”（AAS
Publications, Christchurch, New Zealand（1999））からの抄出である。原著の記載の誤りの訂正を含む。
5）BIBNUM, BIBLIOTHÈQUE NUMÉRIQUE
D’HISTOIRE DES SCIENCES
www.bibnum.education.fr/tags/rutherford6）マ ギル大学のラザフォード博物館のウェブ
ページ
www.physics.mcgill.ca/museum/rutherford_museum.htm
7）AIP（アメリカ物理学協会）のウェブページ
http://history.aip.org/exhibits/rutherford
8）原子力百科事典 ATOMICA−高度情報科学
技術研究機構http://www.rist.or.jp/atomica9）Rayner-Canham, M. F. and Rayner-Canham,
G. W. :“Harriet Brooks — Pioneer Nuclear‘s University Press,
Scientist ”, McGill Queen
Montreal（1992）.
10）http://www.biography.com/people/ernestrutherford-39099
11）h t t p : / / w w w . n u m e r i c a n a . c o m / a r m s /rutherford.htm

31強力なヒトES/iPS細胞除去試薬
StemSure® hPSC リムーバー【rBC2LCN-PE38】
rBC2LCN（AiLecS1）は、Burkholderia cenocepacia 由来のレクチンである BC2L-C の N 末端ドメインを大腸菌で発
本品は、緑膿菌由来外毒素のトランスロケーションドメイン（38kDa）を rBC2LCN の N 末端部分に融合させた組
換えタンパク質です。細胞内に取り込まれ細胞死を引き起こすことで、ヒト ES/iPS 細胞を選択的に除去します。同作用を持つ rBC2LCN-PE23 と比較し数百倍高活性です。

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デ ー タ■ヒト iPS 細胞の除去
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0 μg/mL

0.1 μg/mL

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48 時間培養した。その後、培地交換し、さらに 24 時
間培養した。その結果、StemSure® hPSC リムーバーで処理したヒト iPS 細胞は、ほぼ除去できた（右上）。
一方、ヒト線維芽細胞は同様に処理しても、細胞は全く除去されなかった（右下）。

ヒト線維芽細胞〔参考文献〕
１）Tateno, H., Onuma, Y., Ito, Y., Minoshima, F., Saito, S., Shimizu, M., Aiki, Y., Asashima, M. and Hirabayashi, J. : Stem Cell Reports , 4 , 811（2015）.
２）Tateno, H., Minoshima, F. and Saito, S. : Molecules , 22 , 1151（2017）.

NEW
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コード No.
199-18511
195-18513

品

名

StemSure hPSC Remover【rBC2LCN-PE38】
®

規

格

細胞培養用

容 量
100μL
100μL × 5

希望納入価格（円）30,000120,000

容 量
1mg
1mg × 5100μL
100μL × 5
100μL
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100μL
100μL × 5
100μL
100μL × 5
96 回用

希望納入価格（円）30,000照会
20,00080,00030,000120,000
30,000120,000
30,000120,000
96,000

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025-18063
180-02991
186-02993
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182-03213
185-03161
181-03163
180-03231
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299-78301

品

名

規

格

BC2LCN【AiLecS1】Lectin, recombinant, Solution

糖鎖研究用

rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】

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rBC2LCN-547【AiLecS1-547】

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細胞染色用

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細胞培養用

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Excitation 551nm, Emission 565nm
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再生医療研究用…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。
…特定毒物
…毒物
…劇物
…毒薬
…劇薬 危 …危険物
…向精神薬
…特定麻薬向精神薬原料特定…化審法 第一種特定化学物質…化審法 第二種特定化学物質…化学兵器禁止法 第一種指定物質…化学兵器禁止法 第二種指定物質
毒素等 …国民保護法
覚 …覚せい剤取締法
掲載内容は、2017 年 10 月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 85 No. 42017 年 10 月 15 日 発行
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上田 衡
大西礼子
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Vol.85 No.4

現させた組換えレクチンです。rBC2LCN はヒト ES/iPS 細胞の細胞表面に存在する糖鎖に非常に高い特異性を持ちます。