平成30年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

安心・安全な養殖魚生産技術開発事業（病気に強い養殖魚生産技術開発事業）
福留慶，柳宗悦【目的】

カンパチ養殖におけるハダムシ症は，直接的な被害のみならず，寄生部位が他の病原体の感染門戸となるなど，より大きな被害に結び付く可能性がある。さらに，現在，ハダムシ症対策として実施されている水産用医薬品による薬浴作業は，多大な労力とコストが必要である。そのため，医薬品に頼らないハダムシ対策技術を確立することにより，養殖業者の作業・経済的負担を軽減するとともに，安心で安全な養殖魚の生産に資することを目的とする。

【方法】

本事業では，これまで様々な天然素材等をエクストルーデッドペレット飼料（以下，「EP飼料」という。）に添加して一定期間カンパチへ投与後，ハダムシ（Neobenedenia girellae）を暴露し，試験区と対照区のハダムシ平均寄生数を比較することにより，天然素材等のハダムシ寄生抑制効果を検証している。平成30年度は，前年度までの結果を踏まえ，以下の方法で試験を実施した。
１

甘草根と同様の成分を含み，より低価格な天然素材によるハダムシ寄生抑制効果の検証
甘草根に含まれているフラボノイド成分1)に着目し，フラボノイド成分を多く含む柑橘類 2)について，普段は廃棄処分される摘果果実の果汁及び絞りかすの乾燥粉末を用いてハダムシ寄生抑制効果を検証した。また，ハダムシ寄生抑制効果を示す成分を特定するために，鹿児島県工業技術センターの協力を得て，柑橘類の摘果果実（以下，「摘果果実」という。）に多く含まれるフラボノイド成分について，高速液体クロマトグラフィーによる分析を行った。
１−１

摘果果実の果汁によるハダムシ寄生抑制効果の検証

試験区ごとの設定内容については表１のとおりとした。鹿児島県立農業大学校農学部果樹科提供の平成30年６月に摘果したウンシュウミカン（露地栽培及びハウス栽培）を鹿児島県水産技術開発センターで絞り器を用いて果皮ごと果汁を絞った。絞った果汁を添加したEP飼料を人工種苗カンパ
チ（当歳魚 各区30尾ずつ）に10回給餌（開始時平均魚体重の3〜4％量を1日1回）して飼育した後，各区から15尾ずつを１つの暴露用水槽（540L）に収容し，ハダムシ（Neobenedenia girellae）の虫卵を24時間暴露することにより，ハダムシの孵化幼生を人為的に寄生させた。さらに寄生させたハダムシの孵化幼生が目視可能なサイズに成長するまで通常のEP飼料のみで６〜11日間飼育した後，淡水浴（４分間）を行い，供試魚から脱落したハダムシの数を各区ごとに計数し，各区ごとの寄生抑制効果を検証した。各区の残りの15尾ずつについては，その後も摘果果実の果汁を添加したEP飼料による飼育を継続し，合計で30回給餌して飼育した後，前述と同様にハダムシを寄生させ，各区ごとの寄生抑制効果を検証した。
ハダムシの数は目視可能なサイズの虫体のみを対象として計数した。
（試験期間：平成30年７月30日〜９月18日，期間水温：28.7〜26.5℃）

平成30年度

表１

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

各試験区の設定内容（果汁）
素材内容

添加率※

給餌回数

開始時平均魚体重対照区

素材添加なし−−91.3g

ウンシュウミカン(露地栽培)10%

果汁

10%

10回･30回

92.7g

ウンシュウミカン(露地栽培)20%

果汁

20%

10回･30回

89.0g

ウンシュウミカン(ハウス栽培)10%

果汁

10%

10回･30回

88.1g

ウンシュウミカン(ハウス栽培)20%

果汁

20%

10回･30回

90.5g

試験区

※添加率は飼料の重量に対する果汁（cc）の割合
１−２

摘果果実の乾燥粉末によるハダムシ寄生抑制効果の検証

試験区ごとの設定内容については表２のとおりとした。１−１で果汁を搾り取った後の摘果果実の絞りかすを乾燥器を用いて６０℃で５時間乾燥させ，フードプロセッサーで粒径１mm以下の粉末にした。この粉末を添加したEP飼料を人工種苗カンパチ（当歳魚各区10尾ずつ）に合計で10回給餌（開始時平均魚体重の3％量を1日1回）して飼育した後，前述と同様に各区ごとの寄生抑制効果を検証した。
（試験期間：平成30年9月3日〜9月25日，期間水温：28.5〜26.0℃）
表２

各試験区の設定内容（乾燥粉末）
試験

区

素材内容

添加量※ 給餌回数

開始時平均魚体重対照区

素 材 添 加 な し−−102.6g

ウンシュウミカン(露地栽培)

絞りかすの乾燥粉末

2.0g

10回

106.7g

ウンシュウミカン(ハウス栽培)

絞りかすの乾燥粉末

2.0g

10回

104.3g※添加量は１日あたり魚体重１kgあたりの投与量（g）
１−３

摘果果実に多く含まれるフラボノイド成分の分析

ハダムシ寄生抑制効果を示す成分を特定するために，１−１及び１−２で使用した摘果果実の果汁及び絞りかす（果皮と果肉）の乾燥粉末について，鹿児島県工業技術センターの協力を得て，高速液体クロマトグラフィーによるフラボノイド成分の分析を実施した。フラボノイド成分の分析方法については，鹿児島県工業技術センター報告書No.23(2009)の「青切り桜島小みかんを利用した新商品の開発−フラボノイドの成分分析−（安藤ら）」3)に基づき，抽出溶媒にはメタノール(MeOH)−ジメチルスルホキシド(DMSO)（１：１）を用いて，計29種類の標準試薬によりフラボノイド成分の同定及び一括分析を行った。
（分析期間：平成30年８月20日〜平成30年11月30日）
２

甘草根によるハダムシ寄生抑制効果の検証
前年度に引き続き，甘草根粉末を添加したEP飼料を人工種苗カンパチに給餌し，ハダムシ寄生抑制効果を検証した。検証結果は肝付町，（株）グリーンイノベーションの協力によるもののため，割愛する。
（試験期間：平成30年11月27日〜12月27日，期間水温：20.0〜17.8℃）

平成30年度【結１鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

果】

甘草根と同様の成分を多く含み，より低価格な天然素材によるハダムシ寄生抑制効果の検証
１−１

摘果果実の果汁によるハダムシ寄生抑制効果の検証

摘果果実の果汁を添加したEP飼料を10回給餌して飼育した人工種苗カンパチについて，ハダムシ暴露後６日目における各区ごとの供試魚１尾あたりのハダムシ平均寄生数を図１に示す。また，同様に30回給餌して飼育した人工種苗カンパチについて，ハダムシ暴露後11日目における各区ごとの供試魚１尾あたりのハダムシ平均寄生数を図２に示す。
10回給餌後にハダムシを暴露した結果では，各試験区のハダムシ平均寄生数は，対照区と比較して有意な差は認められなかった（図１）。
30回給餌後にハダムシを暴露した結果では，対照区に比べ，ハウス栽培されたウンシュウミカンの10%区及び20%区でハダムシ平均寄生数が有意に少なかった（図２）。
5050
ハダムシ平均寄生数 虫( )ハダムシ平均寄生数 虫( )（n=15）

403020100
対照区

ウンシュウ
ミカン露地
10%

ウンシュウ
ミカン露地
20%

ウンシュウ
ミカンハウス
10%4030100

ウンシュウ
ミカンハウス20%

図１ ハダムシ平均寄生数(果汁10回給餌後暴露)

＊＊

＊＊

20

n=15n=15対照区

ウンシュウミカン露地
10%n=14n=15

ウンシュウ ウンシュウ
ミカン露地 ミカンハウス
20%
10%

n=15
ウンシュウ
ミカンハウス20%

図２ ハダムシ平均寄生数(果汁30回給餌後暴露)＊＊は対照区との有意差を示す（ｐ＜0.01）。バーは標準偏差を示す。
１−２

摘果果実の乾燥粉末によるハダムシ寄生抑制効果の検証

摘果果実の絞りかすの乾燥粉末を添加したEP飼料を10回給餌して飼育した人工種苗カンパチについて，ハダムシ暴露後11日目における各区ごとの供試魚１尾あたりのハダムシ平均寄生数を図３に示す。
対照区に比べ，ハウス栽培されたウンシュウミカン区でハダムシ平均寄生数が有意に少なかった。
25（n=10）
ハダムシ平均寄生数 虫( )

2015

＊

1050
対照区

図３

ウンシュウミカン露地

ウンシュウ
ミカンハウス

ハダムシ平均寄生数（乾燥粉末10回給餌後暴露）＊は対照区との有意差を示す（ｐ＜0.05）。バーは標準偏差を示す。

平成30年度

鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

１−３

摘果果実に多く含まれるフラボノイド成分の分析

標準試薬により同定された成分を図４及び図５に示す。標準試薬を用いた保持時間の比較により，
NHP（Neohesperidin），RFN（Rhoifolin），IRF（Isorhoifolin）の計３種を同定した。摘果果実の果汁は露地栽培もハウス栽培も同等にNHPの含有量が多く，絞りかすの乾燥粉末は露地栽培もハウ
ス栽培も同等にRFNの含有量が多かった。
RFN
IRF

NHP

RFN

標準液
（全29種類）標準液（全29種類）

NHP

RFN
IRF

RFN

ウンシュウミカン果汁（露地栽培）

ウンシュウミカン粉末（露地栽培）

RFN

NHP
IRF

RFN

100203040

ウンシュウミカン果汁（ハウス栽培）

5060708090 min

図４ フラボノイド成分のクロマトグラム(果汁)【考ウンシュウミカン粉末（ハウス栽培）

0102030405060708090 min

図５ フラボノイド成分のクロマトグラム(乾燥粉末)

察】

本試験では，甘草根粉末と同様にフラボノイド成分を多く含み，より低価格な柑橘類の摘果果実について，果汁と絞りかすの乾燥粉末を飼料に添加してカンパチへ投与することにより，ハダムシ寄生抑制効果を検証した。また，柑橘類の摘果果実のフラボノイド成分について分析を行い，ハダムシ寄生抑制効果を示す成分の特定を試みた。
摘果果実の果汁及び絞りかすの乾燥粉末の投与によるハダムシ平均寄生数の結果（図１〜３）から，ハウス栽培されたウンシュウミカンの摘果果実について，果汁及び絞りかすのいずれについても有意なハダムシ寄生抑制効果を確認することが出来た。しかしながら，露地栽培とハウス栽培でハダムシ寄生抑制効果に差が確認されたものの，成分分析結果で同定されたNHP，RFN，IRFの計３種のフラボノイド成分の種類と量は２つの栽培方法の間で差が確認されなかった（図４，５）ため，ハダムシ寄生抑制効果を示す成分は今回同定されたNHP，RFN，IRF以外又はフラボノイド成分以外と考えられ，その特定には至らなかった。
今後は，ハダムシ寄生抑制効果を示す成分及び作用機序の解明を行う必要がある。

平成30年度【謝鹿児島県水産技術開発センター事業報告書

辞】

本事業に協力して頂いた鹿児島県立農業大学校農学部果樹科及び鹿児島県農業開発総合センター，肝付町産業創出課，（株）グリーンイノベーション開発２部，鹿児島県工業技術センターに謝辞を申し上げる。

【参考文献】
1)尾崎和男 『生薬「甘草」の国内生産を目指して−ウラルカンゾウの栽培品種の育成とその化学的品質に関する研究−』大阪薬科大学博士学位論文(2014年)p.32
2)一般財団法人食品産業センター『2)機能性成分活用等調査−各種機能性成分を有した国産農作物（国産カンキツ類）−（２）ウンシュウミカン

②成分情報』平成21年度農産物機能性活用推進事業

報告書 (2010年)p.20
3)安藤浩毅，古川郁子，西元研了，中島孝子『青切り桜島小みかんを利用した新商品の開発−フラボノイドの成分分析−』鹿児島県工業技術センター報告書No.23(2009年)