カイネティック測定

エンドポイント測定

骨芽細胞様細胞株細胞質画分を用いた PTP 活性測定
（データ提供：北海道大学歯学部歯科薬理学講座）

消光蛍光法を用いた PTP 活性アッセイキット

Fluorospark™ PTP Assay Kit
Fluorospark™ PTP アッセイキットは、消光された蛍光性りん酸化ペプチドを基質として、RI 法に匹敵する感度で簡便にプロテインチロ
シンホスファターゼ（PTP）活性を測定することができます。マイクロプレートへの適用が可能ですので、多検体処理に非常に有用です。

特長

1. RI 法に匹敵する感度（りん酸の絶対量としてサブピコモル）で測定可能

2. 遊離したりん酸を測定しませんので、りん酸存在下でも測定可能3. ホモジーニアスアッセイが可能
4. 細胞抽出物を用いた測定が可能
5. マイクロプレートを用いた多検体処理が可能

キット内容

Substrate Solution
Reaction Buffer
Chymotrypsin Solution
Calibrator
Stop Solution（10mmol/L Vanadate）
299-55601

100 回用

110FL
1.5mL
220FL
40FL
220FL

30,000 円

キットの性能につきましては、P.9 をご参照下さい。

Wako

目 次
化学大家 ━━━━━━━━━━━━━━━「ゲーリュサック」
島尾 永康 …………2
総説 ━━━━━━━━━━━━━━━━━「プロテインチロシンホスファターゼの活性測定法」
西方
眞 …………6「生体成分試料のダイオキシン分析」
中尾 晃幸、宮田 秀明 ………10シリーズ ━━━━━━━━━━━━━━━━＜ Talking of LAL ＞「第 37 話 リムルス試薬の活性化に伴う反応タ
イムコース」
土谷 正和 ………18＜ How to アポトーシス＞「第 8 話 アポトーシスとエンドヌクレアーゼ」
塩川 大介 ………20＜脳科学一口メモ＞「脳内 NO と海馬長期増強現象（LTP）」
吉岡 充弘、森
清 ………24
テクニカルレポート ━━━━━━━━━━━「Wakopak Combi ODS カラムについて」
上森 仁志 ………14
新製品フラッシュ ━━━━━━━━━━━━
フルオロスパーク TM PTP アッセイキット …1,9
VAI 社 除菌剤・潤滑剤 ………………………5
ワコーパック Combi ODS、多環芳香族炭化水
素標準品、ワコーパック WS PAHs ………15
Mallinckrodt Baker,Inc. スピーディスク SPE
カラム、ベンゾジアゼピン系向精神薬 ……16
マトリックス修 飾 剤、プロテアー ゼ 阻 害 剤 ,混合品 ………………………………………17
ビラヌエバ骨染色試薬、㈱サンギ BMP カクテル 他 …19
活性型組換えカスパーゼ 他 ……………22
タンパク質標準品 ,IgG 溶液、アスコルビン酸 2- グル
コシド、ビタミン D3 レセプター , ヒト , 組換え体 …23
抗 sGC, モノクローナル抗体 ………………25
日 本レ ー ザ 電 子 ㈱ GTMASS シ ス テ ム、
SPR670、SPR-CELLIA …………………26
MPI 社 Alexa Fluor 標識抗体 他 ………27
OPD 錠、DAB 錠 …………………………28
リボヌクレアーゼ混合溶液、デオキシリボヌク
レアーゼⅠ 他 ……………………………29
デオキシリボヌクレイン酸溶液、㈱ニッポン
ジーン カスタム CapSiteTM Hunting………30
ラボシートTM、㈱ニッポンジーン カスタムノー
ザンブロッティングメンブレン ……………31
サイトカラシン、オカダ酸アンモニウム 他 ……32
SOD 活性検出キット ………………………33
ラットケモカイン ELISA キット ……………34
アクチビン A,AB,B 他 ……………………35
アポトーシススクリーニングキットワコー ……36

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

11

化学大家 383

ゲーリュサック（1778.12.6 〜 1850.5.9）
科学史家

島尾

永康

エコール・ポリテクニク
ジョーセフ・ルイ・ゲーリュサックはリモージュ地方のサン・レオナールで生まれた。祖父は医師、父は始めは検事、のちに判事となったが、革命が起こると貴族寄りとして逮捕され、釈放後は不遇となり、一家は困窮した。16
歳のときパリに出て進学の準備をした。
父は 法 律を学ぶことを期 待したが、ゲーリュサックは革命期に新設された科学のエリート校、エコール・ポリテク
ニクに合格し、1797 年 12 月に入学した。この学校は文民と軍人の技術者の養成を目的としていた。革命前の旧制
図１. ゲーリュサック

図 2. ベルトレ

生を入学させたのに対して、エコーにしたいと希望してゲーリュサックを学と物理の実験室や図書室を設け、私

ル・ポリテクニクは全国的な選抜試験推薦された。ちょっとしたリサーチを的な研究施設とした。ゲーリュサックをおこない、能力によって学生を取っやらせたところ、ベルトレの予想と正反はここでベルトレの指導の許で研究し度の学校では身分や家柄によって学た最初の学校である。授業料は不要

対の結果を出してきたので戸惑った

た。少し遅れて物理学者ラプラスも近で、逆に政府から月 45 フラン支給されが、若いゲーリュサックの率直さが気くに邸宅を買い、弟子のビオと研究したから、親に負担をかけずにすんだ。

に入り、これからは私が科学で君の父た。1807 年にはベルトレとラプラスの革命政府は徴兵制を敷いており、ゲー

親になろう、君はきっと私の自慢の息許に 9 人の若者が集まり、アルクイユ

リュサックはこれを苦にしていたが、子になるだろうといった。このときベル協会を結成し、研究紀要を発行するよエコール・ポリテクニクの学生は徴兵

トレは 52 歳、ゲーリュサックは 22 歳、うになった。ゲーリュサック、ビオ、探を免除された。卒業後は将校として軍ベルトレには 20 歳の息子アメデーが検家アレキサンダー・フンボルト、化務に入る者が 多かったが、ゲーリュ

おり、エコール・ポリテクニクの学生

学者テナール、ベルトレの息子、植物サックは 1800 年末に卒業し、最優秀だったが、すでに中退して化学工業に学者ド・カンドル、物理学者アラゴ、マの学生が進むルートとなっていたエ

従事していたが、純粋化学にも未練をリュス、化学者デュロンである。それ

コール・デ・ポンゼ・ショウセ（橋梁土残していた。かれには偉大な父親をは私的な排他的なエリート・クラブで木学校）に進んだ。これは 1747 年創もった息子の悲哀がある。30 歳のときあった。エコール・ポリテクニクは教育立の旧制度の名門校で、土木技師は一酸化炭素で自殺した。時間と朦朧状機関にすぎず、研究はできなかった

立派な職業と見なされていた。革命後態の進行を刻々に記録しながら。ゲーから、アルクイユ協会が今日の大学院

はエコール・ポリテクニクの卒業者だ

リュサックはエコール・ポリテクニクののような、またはポスト・ドクトラルのリけが入学できた。月給 75 フランを支

最終学年に、ベルトレの指導で塩素にサーチ・スクールとなった。二人の大給され、未来の技術官僚の地位が約よる亜麻の漂白というリサーチをおこ

御所は若者たちに研究の便宜を与え、束されていた。

なった。

パリの高等教育機関や学士院に空席

ベルトレはナポレオンが砲兵将校

有力科学者ベルトレの引き立てによる早い栄達

1800 年、ナポレオンとともにエジプ

2だったころからの友人で、ナポレオンを推薦した。

が権力を掌握すると、元老院を設置しゲーリュサックが 28 歳の若さで学てベルトレをその議員に任命した（図士院会員となれたのは、ベルトレの強ト遠征から帰還した化学者ベルトレは、

2）。閑職でしかも給料は莫大だった。
1801 年、ベルトレはその富でパリ南方

エコール・ポリテクニクの学生を助手

数キロのアルクイユに邸宅を買い、化

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）の地位ができると、ただちに弟子たち力な推薦があったればこそである（図3）。また学士院会員になったからこそ31 歳でナポレオンが創設したパリ理科大学の教授にもなれたのである。学はシャルルに言及しているので、普通、だったかも知れない。この一週間後、士院では化学の空席がなかったので、シャルルの法則、またはシャルル・

ゲーリュサックは職歴の第一歩として、

ゲーリュサックは物理学のポストにつゲーリュサックの法則といわれている。

エコー ル・ポリテクニクのレ ペ ティ

いた。気体の熱膨張や、地磁気の測定

次にゲーリュサックが 26 歳で挑んの業績があるので物理学で通ったのだのは、熱気球による高度の上空の研トゥール（復習教師）に任命された。
ゲーリュサックには 150 篇の単独論である。ナポレオンが帝位にあった時究という危険な科学的探検である。高文と約 30 篇の共著論文がある。科学期（1804 〜 14）、ベルトレは栄え、ア度が上がるにつれて地磁気の強さと研究の生産性のピークは 31 歳と 37 歳

ルクイユ協会も栄えたが、ナポレオン

空気の成分に変化があるかどうかを調のときである。
気体反応の法則（1808）、の没落とともにベルトレも引退し、協べるためであった。1804 年 8 月 24 日、

化 学 的 方 法に よるカリウ ムの 量 産

会も消 滅した。しかしそのころにはビオとともに高度 4000 メートルまで飛（1808）、ホウ素の遊離（1808）、液体

ゲーリュサックが指導的科学者になっび、地磁気の強さには変化はないことの蒸気密度の測定法（1811）、沃素

ていた（図 1）。そしてこの小さなグを確認した（図 4）。二人は気温、圧力、（1814）、シアン基（1815）、銀の容量ループから、ゲーリュサック、テナー

湿度を読むのに忙しく、もう一つの目

分析法（1832）、など研究は多岐にわル、アラゴ、シャプタル、ポアッソン、的である空気の採集ができなかった。

たる。容量分析法はフランスの科学とデュロンと次々に 1820 年代の科学ア

そこで二回目の飛昇をすることになり、いわれるほど、大きくそれを発展させカデミーの会長が出たのである。

今度はゲーリュサックが独りで乗り込た。
「滴定する」、「ピペット」、「ビュレッ

み、気球を軽くして、より高度を目指しト」の用語はゲーリュサックに始まる。

た（図 5）。1804 年 9 月 16 日に海抜

ゲーリュサックの最大の弟子はドイツから留学に来たリービッヒである。

ゲーリュサックの最初の研究は、247016 メートルに達した。この記録はゲーリュサックが死去した 1850 年ま歳のときの気体の熱膨張に関する研で破られなかった。真空にしておいた

クールというべきアルクイユ・グルー

究で、0℃、定圧のすべての気体は、1℃ の温度上昇に対して一定の比で膨フラスコを二個用意して、6000 メート

プで育ったにもかかわらず、ついにリルを越えたとき開いた。後にテナール

サーチ・スクールを創始しなかった。

張 するというもの である。この 値をと分析した結果、高所の空気もパリのそれをおこなったのはリービッヒであ

科学の業績

ゲーリュサックは一種のリサーチ・ス

0.00375とした（現在の値は 0.00366）。

空気と成分には変わりはないことが分る。注目に値するのは、ゲーリュサック

他に何もしなくても、これだけで科学かった。生理学的観察もおこなった。

が、ブドウ農家はブドウを生産するば

史に名前が残ったであろう。これは同自分の脈拍と呼吸を記録したのである。

かりで土地には何も返さないと、後年時に発表されたイギリスのドールトン

着陸地はルーアンの北方だった。上昇のリービッヒが強調した農業的サイクの研究や、15 年前の J.A.C. シャルル

するにつれて気温が下がり、滞空 6 時

ルの重要性に言及していることであの未発表の研究より、はるかに精密で間でほとんど凍死の寸前だった。現在る。

優れた研究だったが、ゲーリュサックの人工衛星での科学研究以上に危険

図 3. フランス学士院

図 4. 気球による飛昇（ビオとともに）。ゲー
リュサック（左）がガラスのフラスコをもっているのは、ゲーリュサックといえば気体の研究で有名だったからである。ビオ（右）は温度計と気圧計を組み合わせたものをもっている。肝心の磁気測定装置と電池は図示されていない。

図 5. ゲーリュサック単独の第二回目の飛昇。

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

3

教授の地位と講義はいえなかった。事実このころの関心

中年からは政府機関と企業のコンサ

1808 年、ゲーリュサックはナポレオ

学士院では物理学のポストだったが、ルタントの仕事を手広く引き受けた。

ンが設立したフランス大學の一環であカロリック（熱物質論）に固執し、光学るパリ理科大学の教授に任命された。

や電気への関心がなかったことも立派

大學は講義をおこない、試験を実施し、な地位のある物理学者としては異例

1818 年、政府の火薬と硝石の諮問委員（4000 フラン）、1829 年、造幣局の硬貨分析部部長（20000 フラン）となり、バカロレア、学士、博士の資格を授与であった。

銀の含有量の分析を灰吹法から塩化する機関で、研究機能はなかった。一1832 年、自然史博物館の化学教授

銀の沈殿法に変える改革をおこなった。

流の科学者を教授に揃えていたが、が死んで空席となったとき、ゲーリュ

1832 年、十七世紀創業の板ガラス工

か れらは 研 究はよそ で おこなった。

サックは理科大学教授を辞任するとい場に始まる大化学会社、サン・ゴバン

1818 年のゲーリュサックの物理学の講義の受講者は 700 人だったという。

う条件で、その後任に立候補して選出社に監査役（5000 フラン）として経営された。自然史博物館は旧制度の科に参加した。この会社の硫酸製造にか

この数字にはいくらか誇張があるとも学機関で革命を生き残った唯一のもかわって、1830 年代の後半に有名ないわれるが、十九世紀の十年代のパリ

ので、もと王立植物園といわれ、歴史

ゲーリュサック塔を考案し、1842 年にには、一人の教授の講義にこれだけのは古く、その教授職は由緒ある地位

使用し始め、特許を取った。これに受講者があったことに驚かされる。半だった。政府の管轄下にあった理科大

よって硫酸製造の原料の硝酸カリウム

円形階段講堂の席は 300 人程度だっ学と比べて、博物館にはより多くの学または硝酸ナトリウムの 2/3 を節約でたというから、超満員だったであろう。

問的自由があり、試験もなかった。住きるとした。サン・ゴバン社の重役をテナールの化学の講義にも 550 人ほ宅も付設されていた。毎週、三日、伝経て、1843 年、社長に就任、1847 年

どの受講者がいた。受講者は、資格試

統に従って午前 7.30 〜 9.00 という早以降は上級コンサルタント（6000 フラ験を目指す者、それほど熱心ではな

い時間に講義した。

ン）となった。1843 年、タバコ実習学

いが科学知識を求める貴族や上層中産階級の子弟、そして外国人学生である。これだけの受講者があったのだ

校 教 授（3000 フ ラ ン）。1840 年 にコンサルタントと収入

ポリテクニクを辞 任した 時 点 で、計50400 フランの収入があったと推定さから、ゲーリュサックが有名になった

ゲーリュサックは革命によって家計れる。教職は博物館教授だけだったかのはこの大學の教授としてであるといが逼塞した中産階級の出身である。か

ら、収入のほとんどはコンサルタントとうのも納得できる。

れが生涯を通じて金銭につよい関心してである。五人の子持ちという大家

1810 年、ゲーリュサックはエコーをもったのはこのためである。フラン族であり、家計を掌握していた夫人のル・ポリテクニクの化学教授にも任命

スでは科学の職業化が早く進み、科学圧力もあったようだが、企業へのこれされた。フランスでは有給の地位を兼の有給のポストが多かった。しかもそほどの入れ込みは当時のフランスの化任することができ、収入も加算された。

れはパリに集中していた。その有給の学者としても異例である。現にポリテ

これによってポリテクニクの研究設備

ポストは兼任でき、給料を累積できるクニク教授のデュロンは給料を研究にを利用できるようになった。ポリテクのがフランスの特色だった。早く栄達使って家計を圧迫したし、ローランのニクは選り抜きの学生だったから、大したゲーリュサックは栄職を次々に兼死後、その妻子は極貧状態に陥った。

學より程度の高い講義ができた。1813

任して、収入を累積させるに巧みで1835 年、ゲーリュサックはフランス

年にイギリスのデーヴィとファラデーあった。1804 年にエコール・ポリテク

下院議員としてエコール・ポリテクニ

がゲーリュサックを訪問して、その講ニクのレペティトゥール（1500 フラン）クの教育の改革を求めて議会で発言義を聴いている。ファラデーの日記にから出発し、学士院会員として 1500

し、
「フランスにはもはや厳密な意味でよると、受講者は約 200 人だったという。ゲーリュサックは 30 年間この地位にあり、1840 年に辞めている。まだ 62

フラン、
パリ理科大学教授として 1500のポリテクニクは存在しない。それはフラン、エコール・ポリテクニクでは教

科学者や技術者を養成しないで、もっ授に昇進して 6000 フラン、これに技

ぱら行政官僚を養成している」と述べ、歳だったが、すでに同僚からかなり批

術・製造協議局の委員としての 2400

有能な若者が、科学者や教師にならな判が出ていたのである。ゲーリュサッ

フランを加えると、1810 年（32 歳）でいで給料の良い政府の行政官僚に吸クはベルトレの影響もあり、原子論にい取られていくのを嘆いたが、その原子量や化学当量の使用にも消極的

早くも計 11400 フランの収入となった。
1832 年に、理科大学教授（1500 フラン）から自然史博物館教授（5000 フラ

で、もはや科学研究の最前線にいるとンで住宅付き）に移ったのも鮮やかとていたのである。

は懐疑的で、新しい原子記号も使わず、4いうほかない。

はもっぱら応用科学に向けられていた。

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

ゲーリュサック自身も、純粋科学よりはるかに収入の多い応用科学に移っ医薬品メーカーのク
医薬品メーカーのクリーンルームにリーンルームに滅菌済二重包装 除菌剤・潤滑剤◆ すべての製品は 0.2Fm フィルターで無菌ろ過されているため、さらなるろ過が必要ありません。
◆ 無菌充てん・二重袋包装・γ線照射滅菌されているため、クリーンルームへの持込みが安全です。
◆ USP 規格に基づいて無菌試験されており、ロットごとに無菌保証書がついています。
◆ クラス 100 のクリーンルームで使用できるように製造されています。
コード
No.

メーカー
コード

品

名

容量

希望納入 コード価格（円） No.

メーカー
コード

24 本 76,500 525-39471 DCY-01
24 本 76,500 522-39481 DCY-02
24 本 76,500 528-39483 DCY-03-2Z
525-39111 DECAH-SP-91 DECON-AHOL 91% イソプロピルアルコール USP, 11oz. ミスト S, γ
24 本 76,500 529-39491 PA-01
522-39121 DECAH-ST-91 DECON-AHOL 91% イソプロピルアルコール USP, 11oz. ストリーム S, γ
4 本 75,900 522-39501 PA-02
529-39131 DECB-70
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 1Gal. C, γ
1 本 62,700 529-39511 DC-01
525-39133 DECB-5G-70 DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 5Gal. C, γ
4 本 75,900 526-39521 DC-02
526-39141 DECB-91
DECON-AHOL 91% イソプロピルアルコール USP, 1Gal. C, γ
4 本 69,600 522-39523 DC-03-4Z
523-39151 DECB-A-99
DECON-AHOL 99% イソプロピルアルコール USP, 1Gal. C, A
12 本 33,000 523-39531 DQ100-01
520-39161 DEC-TR-01
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 16oz. トリガー S, N
12 本 45,600 520-39541 DQ100-02
527-39171 DEC-TR-02
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 16oz. トリガー S, A
12 本 51,900 526-39543 DQ100-03-8Z
524-39181 DEC-TR-03
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 16oz. トリガー S, γ
12 本 54,000 527-39551 SHC-01-5.25
521-39191 DEC-TR-04
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 16oz. トリガー S, γ , 噴霧器付
24 本 53,400 528-39581 SHC-02-5.25
524-39201 DECSQ-8Z
DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 8oz. スクイーズ B, γ
12 本 53,400 524-39583 SHC-8Z-5.25
520-39203 DECSQ-16Z DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 16oz. スクイーズ B, γ
521-39211 DECWFI-SP-70 DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール／注射用水 USP 溶液 , 11oz. ミスト S, γ 24 本 79,800 522-39584 SHC-13Z-5.25
4 本 75,900 525-39591 SHC-02-0.52
528-39221 DECWFI-B-70 DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール／注射用水 USP 溶液 , 1Gal. C, γ
24 本 76,500 521-39593 SHC-8Z-0.52
539-81701 DSTER-SP-70 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 11oz. ミスト S, γ
4 本 69,600 528-39601 SHC-02-0.25
525-39231 DSTER-A-70 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 1Gal. C, A
1 本 62,700 524-39603 SHC-8Z-0.25
521-39233 DSTER-5G-70 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 5Gal. C, A
4 本 75,900 525-39611 SPER-01-3%
522-39241 DSTER-B-70 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 1Gal. C, γ
12 本 33,000 522-39621 SPER-01-6%
529-39251 DSTER-TR-01 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 16oz. トリガー S, N
12 本 45,600 529-39631 SPER-02-3%
526-39261 DSTER-TR-02 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 16oz. トリガー S, A
12 本 54,000 525-39633 SPER-8Z-3%
523-39271 DSTER-TR-03 STER-AHOL 70% 変性エタノール , 16oz. トリガー S, γ
100 枚 42,600 526-39641 SPER-02-6%
520-39281 VEL6-6X6
ALCOH-WIPE 6" X 6" フラットワイプ , N
100 枚 47,700 522-39643 SPER-8Z-6%
527-39291 VEL6-6X6-S
ALCOH-WIPE 6" X 6" フラットワイプ , γ
100 枚 50,100 523-39651 DS100-02
520-39301 VEL6-12X12 ALCOH-WIPE 12" X 12" フラットワイプ , N
100 枚 57,900 529-39653 DS100-03-32Z
527-39311 VEL6-12X12-S ALCOH-WIPE 12" X 12" フラットワイプ , γ
100 枚 62,700 520-39661 DS200-02
524-39321 VEL6-18X18 ALCOH-WIPE 18" X 18" フラットワイプ , N
100 枚 67,800 526-39663 DS200-03-32Z
521-39331 VEL6-18X18-S ALCOH-WIPE 18" X 18" フラットワイプ , γ
100 枚 57,900 527-39671 STWA-01
528-39341 AG-02-70
ALCOH-GLOVE 手袋型ワイプ , N
100 枚 62,700 524-39681 STWA-02
525-39351 AG-04-70
ALCOH-GLOVE 手袋型ワイプ , γ
1 個 105,000 520-39683 STWA-5G
522-39361 DEC-50
ALCOHOL ディスペンサー（ハンドフリー式）
1 個 140,700 528-39684 STWA-8Z
529-39371 DEC-100
ALCOHOL ディスペンサー（ハンドフリー フットペダル式）
4 個 3,000 521-39691 SO-01
526-39381 200-P
ALCOHOL ディスペンサー（1 Gallon ポンプ S 用）, γ
4 個 3,000 524-39701 SO-02
523-39391 300-T
ALCOHOL ディスペンサー（1 Gallon トリガー S 用）, γ
24 本 23,100 521-39711 SDG-01
526-39401 DH-02
DECON-HAND ハンド消毒剤インスタント , 4oz. S, N
12 本 27,600 528-39721 SDG-02
522-39403 DH-04
DECON-HAND ハンド消毒剤インスタント , 16oz. S, N
12 本 29,100 525-39731 SG-01
523-39411 DH-05
DECON-HAND ハンド消毒剤インスタント , 4oz. S, γ
12 本 33,600 522-39741 SG-02
529-39413 DH-06
DECON-HAND ハンド消毒剤インスタント , 16oz. S, γ
1 個 52,500 529-39751 SSIL-01
520-39421 DH-100
DECON-HAND 壁掛式ディスペンサー（ハンド消毒剤用）
4 本 46,500 526-39761 SSIL-02
527-39431 DP-01
DECON-PHENE 殺菌洗浄剤（低濃度）, 1Gal. C, N
4 本 63,000 527-39791 SB-01
524-39441 DP-02
DECON-PHENE 殺菌洗浄剤（低濃度）, 1Gal. C, A
24 本 40,800 523-39793 SB-02
520-39443 DP-03-4Z
DECON-PHENE 殺菌洗浄剤（低濃度）, 4oz. B, A
4 本 46,500 520-39801 SB-03
521-39451 DPH-01
DECON-PHASE 殺菌洗浄剤（高濃度）, 1Gal. C, N
4 本 71,400 527-39811 SBW-12X12-S
528-39461 DPH-02
DECON-PHASE 殺菌洗浄剤（高濃度）, 1Gal. C, A
24 本 40, 800 524-39821 DG-03-16Z
524-39463 DPH-03-2Z
DECON-PHASE 殺菌洗浄剤（高濃度）, 2oz. B, A

品

名525-39091 DECAH-SP-70 DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 11oz. ミスト S, γ

DECON-CYCLE 殺菌洗浄剤（低 pH）, 1Gal. C, N

528-39101 DECAH-ST-70 DECON-AHOL 70% イソプロピルアルコール USP, 11oz. ストリーム S, γ

DECON-CYCLE 殺菌洗浄剤（低 pH）, 1Gal. C, A
DECON-CYCLE 殺菌洗浄剤（低 pH）, 2oz. B, A
PHENE-AHOL 70% エタノール／フェノール混合溶液 , 11oz. ミスト S, N
PHENE-AHOL 70% エタノール／フェノール混合溶液 , 11oz. ミスト S, γ
DECON-Clean 消毒薬除去剤 , 1Gal. C, N
DECON-Clean 消毒薬除去剤 , 1Gal. C, A
DECON-Clean 消毒薬除去剤 , 4oz. B, A
DECON-QUAT 100 10% アンモニア水 , 1Gal. C, N
DECON-QUAT 100 10% アンモニア水 , 1Gal. C, A
DECON-QUAT 100 10% アンモニア水 , 8oz. B, A
HYPO-CHLOR 5.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 1Gal. C, N
HYPO-CHLOR 5.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 1Gal. C, A
HYPO-CHLOR 5.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 8oz. トリガー S, A
HYPO-CHLOR 5.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 13oz. トリガー S, A
HYPO-CHLOR 0.52% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 1Gal. C, A
HYPO-CHLOR 0.52% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 8oz. トリガー S, A
HYPO-CHLOR 0.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 1Gal. C, A
HYPO-CHLOR 0.25% 次亜塩素酸ナトリウム溶液 , 8oz. トリガー S, A
STERI-PEROX 3% 過酸化水素水 , 1Gal. C, N
STERI-PEROX 6% 過酸化水素水 , 1Gal. C, N
STERI-PEROX 3% 過酸化水素水 , 1Gal. C, A
STERI-PEROX 3% 過酸化水素水 , 8oz. トリガー S, A
STERI-PEROX 6% 過酸化水素水 , 1Gal. C, A
STERI-PEROX 6% 過酸化水素水 , 8oz. トリガー S, A
DECON-SPORE 100 過酸化水素／過酢酸／酢酸混合溶液（低濃度）, 1Gal. C, A
DECON-SPORE 100 過酸化水素／過酢酸／酢酸混合溶液（低濃度）, 32oz. B, A
DECON-SPOER 200 過酸化水素／過酢酸／酢酸混合溶液（高濃度）, 1Gal. C, A
DECON-SPOER 200 過酸化水素／過酢酸／酢酸混合溶液（高濃度）, 32oz. B, A
STERI-WATER 純水 USP, 1Gal. C, N
STERI-WATER 純水 USP, 1Gal. C, γ
STERI-WATER 純水 USP, 5Gal. C, γ
STERI-WATER 純水 USP, 8oz. トリガー S, γ
STERI-OIL 潤滑油 , 8oz. エアゾール S, N
STERI-OIL 潤滑油 , 8oz. エアゾール S, γ
STERI-DEGREASE 脱脂洗浄用 8oz. エアゾール S, N
STERI-DEGREASE 脱脂洗浄用 8oz. エアゾール S, γ
STERI-GREASE 油差し用 8oz. エアゾール S, N
STERI-GREASE 油差し用 8oz. エアゾール S, γ
STERI-SILICON シリコーン潤滑剤 , 8oz. エアゾール S, N
STERI-SILICON シリコーン潤滑剤 , 8oz. エアゾール S, γ
STEEL-BRIGHT ステンレス鋼洗浄用 8oz. エアゾール S, N
STEEL-BRIGHT ステンレス鋼洗浄用 8oz. エアゾール S, γ
STEEL-BRIGHT ステンレス鋼洗浄用 11oz. エアゾール S, γ
STEEL-BRIGHT ステンレス鋼洗浄用 12" X 12" ワイプ , γ
DECON-GLASS ガラス洗浄剤 , 16oz. トリガー S, γ

容量

希望納入
価格（円）

4 本 46,500
4 本 71,400
24 本 40,800
24 本 68,100
24 本 86,700
4 本 36,600
4 本 42,900
24 本 40,800
4 本 61,200
4 本 69,600
24 本 61,200
4 本 61,200
4 本 69,600
24 本 61,200
12 本 54,000
4 本 69,600
24 本 61,200
4 本 69,600
24 本 61,200
4 本 61,200
4 本 61,200
4 本 69,600
24 本 61,200
4 本 69,600
24 本 61,200
4 本 36,000
4 本 17,100
4 本 123,000
4 本 42,000
4 本 61,200
4 本 69,600
1 本 61,200
24 本 61,200
24 本 87,300
24 本 102,000
24 本 87,300
24 本 102,000
24 本 87,300
24 本 102,000
24 本 87,300
24 本 102,000
24 本 87,300
24 本 102,000
24 本 114,000
100 枚 57,900
12 本 51,900

γ : 無菌充てん + 二重包装 + γ線照射 , A: 無菌充てん + 二重包装 , N: 非滅菌 , S: スプレー , C: コンテナ , B: ボトル

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）5プロテインチロシンホスファターゼの活性測定法
北海道大学

細胞内情報伝達の主要なメカニズ

歯科薬理学講座西方

眞るという優れた特徴を有する。そのたわけだが、この反応が化学量論的に進ムの一つであるタンパク質のチロシン

め、速度論的研究にはすこぶる有利でまないことが普通である。不均一な基

リン酸化レベルの調節は、リン酸化をある。吸光度を測定する場合の感度は質のまま使用しても構わない場合もあ触媒する酵素であるプロテインチロシ

低い（検出限界は数ナノモル）が、蛍

るが、それでは不都合な場合はクロマンキナーゼと脱リン酸化を触媒する酵光を測定するならばさらに感度を上げ

トグラフィーなどで均一な分子種を分離しなければならない。

素であるプロテインチロシンホスファ

ることができる（検出限界は数 10 ピコ

ターゼ（以下 PTP と略）との拮抗的なモル）。ところが、この方法では吸光度

筆者の所属する研究室では、従来作用によって行われている。本稿では、測定も蛍光測定も共に 280nm 付近のより骨形成に関与する細胞が産生する

そのうち PTP の活性測定法について、

紫外線を照射するため、精製度の低い

PTP の研究を行ってきた。PTP の活

はじめに従来の方法を概説し次に筆酵素標品を用いたり安定化剤として緩性測定には感度のよいアイソトープ法者らが最近開発した方法を紹介したい。

衝液中に BSA などのタンパク質を加を採用してきたが、上に述べたようなえたりすると、バックグラウンド値が上

欠点について常々不満を抱いていた。

がり測定を妨害する。HPLC 法の感度

最近筆者らは、この様な不満を解消す

従来の活性測定法の概説は高い。Fmoc 基を結合させた基質をべく全く新しい発想に基づく PTP の活

PTP の活性測定に使用される基質

使用する場合、蛍光検出を行うと数 10性測定法を開発したので 5）、以下にそは、いうまでもなくリン酸化チロシン残フェムトモルの脱リン酸化体を検出での紹介をしたいと思う。

基を含むタンパク質やペプチドである。

きるという。しかし、この方法では反応新しい活性測定法の原理

そして、その脱リン酸化を測定するわ

物をいちいち HPLC によって分離しなけであるが、すでに報告されている方ければならず、とても実用的とはいえ法は（a）基質から遊離したリン酸イオない。アイソトープ法は現在最もよくこの方法はアイソトープを一切用い

ンを直接定量するものと、（b）脱リン酸

採用されている方法であろう。読者のることなしに、アイソトープ法と同等の化にともなって生じる基質の物理化学中にもこの方法をつかわれている方は感度を得ることができ、しかも実際の的性質の変化を利用するものとに大き大勢おられることと思われる。この方

操作はアイソトープ法よりも簡便であく分けられる。
（a）としては、遊離したリ法の長所は、何といってもアイソトー

る。さらに、用いる基質は化学合成しン酸イオンをマラカイトグリーン- リン

プを使用するため感度が高いというこたものなので、均一で長期間安定であモリブデン酸複合体として比色する方とである。比 活 性が 1000cpm/pmol

る。この方法を開発するに当たって最法（比色法）1）と、放射性のリンで標識程度の基質を用いるとすると、1 ピコ

初に合成した 基質は Mca-Gly-Asp-

した基質から遊離した放射能を測定

モル以下の遊離リン酸イオンを検出でする方法（アイソトープ法） が一般的きる。活性測定の一連の操作も割と簡である。（b）としては、脱リン酸化に

便だし、妨害物質もほとんどない。さよって増加する基質の吸光度や蛍光らに、タンパク質も基質にできること

強度を測定する方法（差スペクトルから、特定のタンパク質の脱リン酸化法） や脱リン酸化すると溶出位置がの研究にも有利である。しかし、この変化することを利用した高速液体クロ方法にも欠点がある。一度でもこの方

Ala - Glu - pTyr -Ala - Ala - Lys（DNP）Arg-NH2 である。ご覧のとおりペプチド性の基質である。ここで、Mca は（7methoxycoumarin-4-yl）acetyl 基、
pTyr はリン酸化チロシン残基、そしてLys（DNP）はリジン残基の側鎖のアミノ基に DNP（2,4-dinitrophenyl）基をマトグラフィーによる定量法（HPLC

法を試したことのある方ならおわかり結合させたものである。なお、この配法） などがあげられる。比色法は操作だと思うが、基質の放射能の減衰があ

列は pp60src 中の自己リン酸化部位周は簡便であるが、感度はそれほど高く

まりにも速く、同一ロットの基質を長期辺の配列に若干似せてある。

2）

3）

4）

6

歯学部

なく
（検出限界は 1 ナノモル程度）、試

間にわたっては使用できないのであ図 1 に、この基質を用いた活性測定料や緩衝液中のリン酸イオンが測定をる。基質の作成も結構面倒である。適法の原理を示してあるので参照してい妨害する。差スペクトル法は操作が非当なタンパク質やペプチドを、[ γ-32P

ただきたい。基本的には、PTP の作用

常に簡便であるだけでなく、脱リン酸（または P）]ATPと適当なチロシンキによる脱リン酸化の程度を蛍光強度の化反応を連続的に追跡することができナーゼを用いて酵素的にリン酸化する

変化としてとらえるものである。基質

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）33

図 1. 新しい活性測定法の原理

光 度 計 F-3000 のMca-Gly-Asp-Ala-Glu-Tyr の蛍光強励 起 波 長 を 328
nm、蛍 光 波 長を395nm にセットし度と比較することによって、脱リン酸た。この光度計でたことがわかった。PTP の濃度を変化化された基質の濃度を求めた。その結果、29% の基質が PTP の作用を受けは、バンド幅は励させて同様の実験を行ったところ、脱起側、蛍光側とも

リン酸化率が 30% までは脱リン酸化に 5nm に 自 動 的

速度（蛍光強度の増加分）は PTP 濃度にセットされるが、に完全に比例することがわかった。な

このバンド幅で基お、この基質の場合は脱リン酸化率

質の蛍光強度を測定すると、恐らく紫100% で、基質の蛍光強度は 100 倍強に増加する。上記の活性測定は、PTP

外線が強すぎるのの添加からキモトリプシン添加後の蛍だと思 わ れるが、光強度測定まで全て単一のセル中で値が徐々に上昇し行うことができ、非常に簡便である。していく現象が観察

かし、クロマト溶出液などの多数のサ

さ れ る。こ れ は、ンプルを測定する場合は、試験管中励起側のバンド幅

で一連の反応を行い、最後にまとめてを 1.5nm にせばめ、蛍光強度を測定してもよい。ただし、中の Mca 基は、それ自身蛍光を発す

蛍光側のバンド幅を 40nm に広げるこ

脱リン酸化反応がバナジン酸で完全る蛍光団であり、DNP 基はその蛍光とで解決できた。緩衝液は、0.01%に停止することが条件である。粗酵素を共鳴エネルギー移動により抑える働
これら二つの基が同一分子内に存在

BSA を含む 20mM ジメチ ル グ ルタ
標品を用いるときは PTP 以外のホスレート（pH 6.6） を用いた。Yersinia
ファターゼの存在に注意を払う必要がenterocolitica 由来の PTP（YOP PTP、 ある。

すると、Mca 基本来の蛍光は非常に市販品）を用いた活性測定の実例を図ここで述べた活性測定法は、一定時低く抑えられた状態にある。この状態の基質に PTP を作用させると、リン酸2 に示す。まず、5 × 5mm の石英製ミクロセルに 1FM の基質溶液 200FL をン酸化された基質の量を測定するもの

化チロシン残基が脱リン酸化される。

加えた。これを光度計のセルホルダー

である（エンドポイント測定）。しかし、

しかし、蛍光団と消光団が依然としてにセットして数分間保温した後、2FLもし基質とキモトリプシンをはじめか

同一分子内に存在したままであるので、 の PTP 溶液を加えて混合した（終濃度
蛍光強度の変化はほとんどみられない。 1.9 ユニット /mL）。1 分間酵素反応を
ところが、ここにキモトリプシンを作用
行 わ せたあと、10mM のら混合しておき、そこに PTP を加えれきをする消光団である。したがって、させると、新たに生じたチロシン残基

バナジン酸ナトリウム水溶の C 末端側でペプチド結合が切断さ液を 2FL 加えて反応を停れ（キモトリプシンの基質特異性に基止させた。次に、5% のキづく）、蛍光団と消光団が遠く離れるこ

モトリプシン溶液（3 回結晶ととなる。その結果、Mca 基本来の蛍化 標 品を 1mM 塩 酸に 溶

光が回復するわけである。キモトリプ

解したもの）2FL を加えた

シンはリン酸基が結合したままの元のところ、蛍光強度が大きく

基質には作用しないので、脱リン酸化増加した。20 秒ほどでプを認識しているといえる。

ラトーに達し、脱リン酸化

間後に反応を停止させ、この間に脱リば、基質が脱リン酸化されるそばからされた基質がキモトリプシ

新しい活性測定法の実際ンによって完全に切断されたことがわかる。この蛍光基質を用いた活性測定法の実際を強度の増加分を、レファレ

具体例によって示そう。日立蛍光分光

ンス化合物として合成した

図 2. Mca-Gly-Asp-Ala-Glu-pTyr-Ala-Ala-Lys（DNP）-ArgNH2 を基質として用いたエンドポイント測定

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

7キモトリプシンによって切断を受け、蛍光強度の上昇を連続的にリアルタイ

わかるように、保温中ムでモニターできる（カイネティックには蛍光強度の上昇は測定）ことが期待できる。もし実際にそほとんど 見られ ない。

うなれば、初速度が正確に測定でき速次に、2FL の YOP PTP

度論的研究に非常に好都合である。試を加えたところ（終濃度

しに、基質とキモトリプシンを混合し0.2 ユ ニット /mL）、時

た中に PTP を加えたところ、予想通り

間とともに蛍光強度の蛍光強度が時間とともに上昇した。詳上昇が見られた。はじしく調べて見ると、この基質の脱リン酸

めの 1 分間は蛍光強度化反応を連続的に追跡するためには、が直線的に上昇し、こキモトリプシンの終濃度が 0.03% 以の部分より初速度を求上は必要なことがわかった。ところが、めることができた。この

このキモトリプシン濃度では PTP の方基質を用いたエンドポ

も加水分解を受けてしまい、活性が急

イント測定によって得られた速度と比速に失われることもわかった。これは較したところ、0.002% のキモトリプシ

YOP PTP の場合であるが、キモトリプ
シンに特に抵抗性の高い PTP でなけ

ンは、YOP PTP を少なくとも 1 分間は

筆者らは、従来の PTP の活性測定

失活させないことがわかった。他の市法の欠点を排除すべく新しい活性測定

れば、この基質を用いたカイネティッ

販の PTP（T-cell PTP と LAR PTP）や法を開発した。性能については、従来

ク測定は不可能であることがわかった。

筆 者らの 骨 芽 細 胞 様 細 胞 株 由 来のの方法に比べ優れたものであると自負

そこで筆者らは、多くの種類の PTP に

PTP も、この濃度のキモトリプシンにしている。しかし、キモトリプシンに非

カイネティック測定が適用できるようは安定であった。反応を連続的に追跡常に弱い PTP には、カイネティック測にするために、脱リン酸化後にキモトリできるということは、先にも述べたよう定が困難であるなどの弱点も有していプシンによる切断をより受けやすい基に速度論的研究にまことに好都合である。他にもまだまだ多くの欠点がある

質の合成を試みた。アミノ酸配列を変るばかりでなく、小さな蛍光強度の上かもしれない。今後多くの研究者の図 3. Mca-Gly-Asp-Gly-Val-pTyr-Ala-Ala-Lys（DNP）-ArgNH2 を基質として用いたカイネティック測定

おわりに化させて合成した数種類の基質の中昇も正確に捉えやすいという利点があ

方々に本法を試していただき、不都合

で、特にカイネティック測定に適したる。実際には、0.1 ピコモル程度の脱リな点を指摘していただければ幸いでMcaものの一つを紹介しよう。これは、ン酸化なら十分に検出できる感度を有ある。改良に役立てたいと思う。

Gly-Asp-Gly-Val-pTyr-Ala-Ala-Lys-Arg-NH2 の構造を有するもの（DNP）
で、p85gag-fes 中の自己リン酸化部位周している。多数の試料を一度に測定し辺のアミノ酸配列に類似させてある。

質溶液に試料を加えて一定時間後にこの基質の特徴は、先の基質とアミノバナジン酸で反応を停止させ、キモ酸残基の種類が 2 ヵ所で異なっている

トリプシンを添加してもよいし、あだけであるが、脱リン酸化後のキモト

らかじめ基質とキモトリプシンを含リプシンによる切断速度が 10 数倍もんだ溶液に試料を加え、一定時間後大きいことである。そのため、より低いにバナジン酸で反応を停止させても濃度のキモトリプシン存在下で、PTP

よい。PTP 以外のホスファターゼがの失活を抑えながらカイネティック測混在している試料の場合は、バナジ定を行うことができる。この基質を用

ン酸では完全に反応を停止できない

いた反応の連続的追跡の結果を図 3ことがある。そのような懸念のあるに示す。まず、1FM の基質溶液 200FL
をミクロセルに入れ、続いて 0.2% のキモトリプシン溶液 2FL を加えてキモ
トリプシン濃度を 0.002% とした。この時は後者の方法を用いて、バナジン

セルをセルホルダーにセットし、数分8間保温した。図からも和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

たい場合は、試験管内でエンドポイ
ント測定をすればよい。この場合、基酸のかわりにキモトリプシンの阻害剤（例えばキモスタチン）を加えて反応を停止させた方がよい。

〔参考文献〕
1）Hess, H. H. and Derr, J. E.（1975）
Anal. Biochem. 63, 607-613.
2）Lau, K.-H. W., Farley, J. R. andBaylink, D. J.（1989）Biochem. J. 257,
23-36.
3）Zhang, Z.-Y., Maclean, D., ThiemeSefler, A. M., Roeske, R. W. andDixon, J. E.（1993）Anal. Biochem.
211, 7-15. Nash, K., Feldmuller, M.,
de Jersey, J., Alewood, P. and Hamilton, S.（1993）Anal. Biochem. 213,
303-309.
4）Zhao, Z., Zander, N. F. and Malencik,
D. A.（1992）Anal. Biochem. 202, 361366. Madden, J. A., Bird, M. I., Man,
Y., Raven, T. and Myles, D. D.（1991）
Anal. Biochem. 199, 210-215.
5）Nishikata, M., Suzuki, K., Yoshimura,Y., Deyama, Y. and Matsumoto, A.
（1999）Biochem. J. 343, 385-391.

消光蛍光法を用いた PTP 活性アッセイキット
TM

Fluorospark PTP Assay Kit
タンパク質りん酸化反応は、細胞機能の制御機構として細胞増殖、免疫応答、がん化など様々な生命現象で重要な働きを担っています。特に、りん酸化チロシンを特異的に脱りん酸化するプロテインチロシンホスファターゼ（PTP）
は、情報伝達系
で重要な調節的役割を果たしています。最近では、ホスファターゼ阻害剤の医薬品化が進展しており、例えば新規な阻害剤の開発にもホスファターゼの活性測定は益々有用となっています。
本キットは、消光された蛍光性りん酸化ペプチドを基質として、RI 法に匹敵する感度で簡便に PTP 活性を測定することができます。マイクロプレートへの適用が可能ですので、多検体処理に非常に有用です。

反応原理

測定方法

非蛍光性のりん酸化ペプチドを基質として、ホスファター

カイネティック測定

ゼで脱りん酸化した後、キモトリプシン消化により生じた蛍光┃┃ ━━━反応溶液 196FL/well
Substrate Solution
1FL┃ Reaction Buffer
┃
10FL

┃
185FL
水
┃
┃
25℃、2 分┃ ━━━ Chymotrypsin Solution 2FL/well┃┃ ━━━サンプル
2FL/well┃▼
蛍光測定（Ex:328nm, Em:395nm）性ペプチドを測定します。

エンドポイント測定┃┃ ━━━反応溶液 198FL/well
Substrate Solution
1FL┃ Reaction Buffer
┃
10FL

┃
187FL
水
┃
┃
25℃、2 分┃ ━━━サンプル
2FL/well┃ ━━━ Stop Solution
2FL/well
Chymotrypsin Solution 2FL/well
25℃、1 分┃┃ ━━━▼蛍光測定（Ex:328nm, Em:395nm）

5000
8000
0unit

4000

25units

6000

Fluorescence Intensity

Fluorescence Intensity

7000

50units

5000

100units

4000

200units

3000
2000

YOP PTP（25 〜 200units/mL）を用いて、カイネティック測定を行った（左）。反応開始 120 秒後の蛍光強度を PTP 濃度に対してプロットした（右）
。

3000

2000

1000

1000
0

0

50

100

150
200
Time (sec.)250

コード No.

299-55601

関連商品

0

300

品

0

50

100
150
PTP conc. (units/mL)

名規

コード No.

メーカーコード

534-52061
536-67031

F129.003
F129.005

品格PTP 測定用

Fluorospark™ PTP Assay Kit
名内

スペクトラフルオ
スペクトラフルオプラス

容

1台
1台

200

容量

希望納入価格（円）100 回用

30,000特長

蛍光／吸光マルチプレートリーダー
蛍光／発光／吸光マルチプレートリーダー

励起吸光用及び蛍光用フィルターにつきましては、ご照会下さい。

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）9生体成分試料のダイオキシン分析
摂南大学 薬学部

1. はじめに

中尾

晃幸、宮田

秀明

強く、その生体作用は PCDD と類似

性体の実測濃度に TEF を乗じた値のする。Co-PCB は PCB 製品中に存在総 和 を 2,3,7,8-TCDD 毒 性 等 価 量

ダイオキシン類はいずれも強毒性

し、廃棄物の焼却過程で生成すること（TEQ）とし、これを用いてダイオキシであり、現在の環境レベルの汚染で人から、PCDD、PCDF とともに広範囲

ン類の毒性評価が行われる。

体に生殖障害や免疫抑制などの影響に環境汚染を引き起こしている。従っ

上記の背景を基に、本文では生体を及ぼす可能性があるために、世界諸て、これらの三化合物はダイオキシン

成分試料（母乳、毛髪、血液など）を中

国で汚染軽減対策が進められている類として総称され、総合的に毒性評価心とした分析法について解説したい。

塩素系環境汚染物質である。ダイオが行われている。Co-PCB はノンオ

キシン〔ポリ塩化ジベンゾ-p- ジオキ

ル ト（Non-Co-PCB）、モ ノ オ ルト

シン（PCDD）〕
は、75 種類の構造異性（Mono-Co-PCB）お よ び ジ オ ルト

体が存在するが、毒性の強い 2,3,7,8-（Di-Co-PCB）に大別できる。しかし、塩素置換体の 7 異性体を対象として毒用を有し、135 種類の構造異性体が存1997 年 8 月に、WHO は Non-CoPCB と Mono-Co-PCB の み の 12 種類の異性体を Co-PCB とする改正案を提案した（表 1）。さらに、PCDD、
PCDF についても TEF を若干変更し在するが、生体作用の強い 10 種類のた。今後、わが国でもこの提案が受け性評価が行われる（図 1、表 1）。ポリ塩
化ジベンゾフラン（PCDF）は PCDDと類似した物理化学的性質や生体作

2,3,7,8- 塩素置換体が毒性評価対象
入れられていくものと考えられる。
毒性評価対象となっているダ イオとなる（図 1、表 1）。
キシン 類異性体はいずれも 2,3,7,8一方、ポリ塩化ビフェニル（PCB）
も
209 種類の構造異性体が存在するが、 TCDD 毒性を 1としたときの相対毒性、共扁平構造を持つ 13 種類のコプラ
即ち、2,3,7,8-TCDD 毒 性 等 価 係 数
ナー PCB（Co-PCB）異性体は毒性が（TEF）が定められている（表 1）。各異

9
8
Clm
7

O

1

9
2
Cln

6

O

3
4

8
Clm
7

上記したように 2,3,7,8-TCDD は極めて強毒性であり、また、その他のダ
イオキシン類の各異性体も強い生体
作 用を 示 すことから、一 般 的に ppt
オーダーの高精度超微量分析が要求される。環境、食品、人体などの試料
中には母体マトリックスの他に多種類の汚染物質がダイオキシン類に較べて高濃度で含まれている。そのために、

1）夾雑物をいかに効率よく除去し、
2）精製画分中の各ダイオキシン類異性体をいかに高精度で分析するかが

1

3'

2'

2

3

2
Cln
6

PCDD (m+n=1~8)

2. ダイオキシン類測定のための溶媒、試薬及び器具について

O

3
4

4'
Clm

4
5'

6'

6

5

Cln

Co-PCB (m+n=4~7)

PCDF (m+n=1~8)

図 1. PCDD、PCDF および Co-PCB の化学構造式とナンバリングシステム
表 1. 毒性評価対象のダイオキシン類異性体と 2,3,7,8-TCDD 毒性等価係数（WHO, 1997）
化合物

PCDD
2,3,7,8-TCDD
1,2,3,7,8-PeCDD
1,2,3,4,7,8-HxCDD
1,2,3,6,7,8-HxCDD
1,2,3,7,8,9-HxCDD
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD
1,2,3,4,6,7,8,9-OCDD
PCDF
2,3,7,8-TCDF
1,2,3,7,8-PeCDF

10

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

TEF
1
1
0.1
0.1
0.1
0.01
0.0001
0.1
0.05

化合物

2,3,4,7,8-PeCDF
1,2,3,4,7,8-HxCDF
1,2,3,6,7,8-HxCDF
1,2,3,7,8,9-HxCDF
2,3,4,6,7,8-HxCDF
1,2,3,4,6,7,8-HpCDF
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF
1,2,3,4,6,7,8,9-OCDF
Non-Co-PCB
3,4,4’,5-TCB
3,3’,4,4’-TCB

TEF
0.5
0.1
0.1
0.1
0.1
0.01
0.01
0.00010.00010.0001化合物

3,3’,4,4’,5-PeCB
3,3’,4,4’,5,5’-HxCB
Mono-Co-PCB
2,3,3’,4,4’-PeCB
2,3,4,4’,5-PeCB
2,3’,4,4’,5-PeCB
2’,3,4,4’,5-PeCB
2,3,3’,4,4’,5-HxCB
2,3,3’,4,4’,5’-HxCB
2,3’,4,4’,5,5’-HxCB
2,3,3’,4,4’,5,5’-HpCB

TEF
0.1
0.01
0.00010.00050.00010.00010.00050.00050.00001
0.0001

重要となる。特に、現在、毒性評価対回の散髪で 7 g の採取が可能であるが、象となっている PCDD で 7 種、PCDF
で 10 種および Co-PCB で 12 種類を

毛髪の少ない人の場合には困難であ

0.5 〜 2N のKOH エタノール溶液中で2 時間程度振とうし、脂肪をケン化す

るため、数回の散髪で得られる毛髪をる方法である。酸処理はヘキサンに溶

正確に定量することである。

混合して使用しても良い。毛髪試料は解した抽出脂肪に濃硫酸を添加、振と有機塩素系化合物は微量から超微

1% 程度の中性洗剤水で洗浄し、乾燥

うするか、あるいは生体試料に 1N HCl

量の分析が要求されるために、分析汚した後、分析に供するまで冷蔵庫またを直接添加し、振とうして脂肪を沈殿

染物質の汚染がない試薬や器具類なは冷凍庫で保存する。

除去する方法である。分子篩カラム処

どを使用することが極めて重要となる。

3-3 血液理法は分子篩カラムを用いて高分子

従って、溶媒類は残留農薬分析用、

血液中の脂肪含量は食事により大量の脂肪・着色成分を溶出除去した後、PCB 分析用またはダイオキシン類分

ダイオキシン類を分取する手法であり、いる。また、溶媒や試薬類は分析に先きく影響されるために、採血は食後 3時間以降に行う。血液を約 20mL ずつを 3 〜 5 本 の 試 験 管に 合 計、60 〜
100mL を採取する。血清を使用する

析用、あるいはそれらと同等品を、試薬類は特級以上の高品質のものを用

カラ ム 充 填 剤に は Bio-Rad 製 Bio-

血清は分析に供するまで、凍結保存

Beads SX-3 が一般的に用いられる。
4-1 母乳約 100g の母乳にシュウ酸ナトリウ
ム 1 g を 加え、溶 解 後、エタノー ル
100mL を加え、よく混和する。続いて、エーテル 50mL、石油エーテル 50mLを加え、1 分間激しく振とうする。有機

一方、精製過程で使用するカラムク

する。一方、後者の場合は、予め血液溶媒層を分離し、水層をさらにエーテ

ロマト充填剤や HPLC 用カラムは製

凝固防止剤を添加した採取管に血液

ル・石油エーテル（1:1）50mL で 2 回造ロットにより分離能や極性が異なるを採取し、分析に供するまで、冷暗所ために、事前に標品を使用してチェッ

ま た は 凍 結 保 存 す る。採 血 量 が抽 出 する。抽 出 液 は 2% NaCl 溶 液
500mL で洗浄後、水で洗浄する。無立って、妨害物を含まないことを確認

場合と全血を使用する場合があり、前しておく必要がある。水はヘキサン洗者の場合は、約 10°の角度に試験管浄水を用いる。また、器具は予めアセを傾斜させて凝血するまで放置する。

トンやヘキサンなどの脂溶性溶媒で洗その後、遠心分離し、血清を分取する。

浄し、乾燥したものを使用する。

クする必要がある。一般的に使用され100mL の場合、50mL（分析用）、10mL
るチェック用の標準品は 1,3,6,8-TCDD、 （脂肪分析用）、40mL（再分析用）の 3
1,3,6,8-TCDF、OCDD、OCDF と本に分けて保存するのが望ましい。
Co-PCB 異性体が用いられる。

3. 生体試料の採取方法

水硫酸ナトリウムで脱水後、あらかじめ秤量しておいたナス型フラスコに入れてエバポレーターを用いて乾固し、脂肪重量を測定する。得られた脂肪は4. 抽出

0.5N KOH エタノール溶液（5% 水）で
室温下 2 時間ケン化し、ヘキサンで分すべての試料に対して抽出操作に

配抽出を行い、濃縮後、精製用試料と先立って C- ラベル化ダイオキシンする。

母乳中のダイオキシン類濃度は経類異性体をクリーンアップスパイクと4-2 毛髪産度が大きくなるにつれて減少するのして添加する。クリーンアップスパイ

毛髪の前処理法としては細切し、トで、対象者を限定することが重要であクは回収率補正を目的として添加されルエン還流抽出が適用されているが、る。一般的には、初産者が対象にしてるものであり、添加される種類は現在、抽出効率が細切度で大きく左右される

分析されることが多い。通常、約一ヶ

毒性評価対象異性体の 13C ラベル化体

欠点がある。一方、約 7 g の毛髪試料

月以内の母乳を対象として採取し、採である。ただし、 C-OCDF は添加しに対して 2N KOH 水溶液 100mL を添

取量は約 100mL である。一度に採取ない。OCDF の回収率は C-OCDD

加し、室温下 4 時間振とう処理で毛髪が困難な場合には、数日〜一週間にのものを用いる。

を溶液状にする。続いて、n- ヘキサン

3-1 母乳13

13

13

わたって採取してもよい。予め溶媒で生体試料は直接あるいは抽出脂肪で分配抽出を行う。得られた抽出液は洗浄した採乳器で採取し、密閉可能について前処理が行われる。前処理の水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱なガラス容器に入れた後、目的の採取目的としてはマトリックス中に大量に水し、濃縮後、精製用試料とする。こ量になるまでの期間は冷蔵庫または含まれる分析の妨害物となる脂肪、着の毛髪試料のアルカリ分解・n- ヘキサ

冷凍庫に保存する。

色物質などの除去である。一般的にアン分配抽出は良好な再現性を与える

3-2 毛髪ルカリ分解処理、酸処理、あるいは分ことを確認した 1）。

散髪時に採取する。採取量は約 7 g

子篩カラム精製が前処理法として適4-3 血液以上が必要である。通常の人では一用される。アルカリ分解処理は室温下、最近、人体汚染の実態把握のため

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）11

に血液が最適な試料と考えられている。

本化したカラムを使用している。そのそれは、広範囲な年齢の男女から採概略を図 2 に示す。下からシリカゲル、取が可能だからである。血液分析につに記載したように分析用と脂肪分析用

2%KOH シリカ ゲ ル、シリカ ゲ ル、
44%H2SO4 シリカゲル、22%H2SO4 シ
リカゲル、シリカゲル、10%AgNO3 シの 2 段階の操作となる。分析用の血液

リカゲル、無水硫酸ナトリウムを積層

試料 50mL に 2N KOH エタノール溶したカラムクロマト管に抽出試料を添

シリカゲル液（5% 水）30mL を添加し、攪拌した

加後、n- ヘキサンでダイオキシン類

２％ 水酸化カリウムシリカゲル

後一夜放置する。エタノール 10mL、を溶出する。各種化学修飾シリカゲル

水 20mL、ヘキサン 30mL を添加し、30 分間振とう抽出を行う。ヘキサン層を分画後、水層にヘキサン 30mL を添加し、さらに 30 分間振とう抽出を行う。
2 回の抽出によるヘキサン分画を混合で除去可能な物質は次の通りである。

エステル類、炭化水素、色素類料に適用し、PCDF の定量の妨害物とする。得られたヘキサン抽出液を水で

3）KOH シリカゲル : 水酸化 PCB、塩なっていたクロルデン類が除去でき、いては「3. 生体試料の採取方法」の項

洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮し、精製用試料とする。
一方、脂肪分析用の血液試料 10mL

10％ 硝酸銀シリカゲル
シリカゲル
22％ 硫酸シリカゲル
44％ 硫酸シリカゲル

シリカゲル
石英ウール

1）AgNO3 シリカゲル : 含硫化合物、不図 2．多層シリカゲルカラム

飽和炭化水素、色素類

2）H2SO4 シリカゲル : 脂肪、フタル酸

化フェノール、色素類

4）
シリカゲル : 多環芳香族炭化水素の大部分、HCHにエタノール 3mL、n- ヘキサン 20mL

ppt レベルのダイオキシン類の測定が可能となった 1）。

6. 機器分析

および飽和硫酸アンモニウム 3mL を多層シリカゲルカラムに続きアルミそれぞれ添加し、30 秒間、6 サイクル

ナカラム精製が適用されることが多い。

ダイオキシン類測定には一般的にの超音波処理を行う。続いて、分液

一般的には活性度Ⅰの塩基性や中性

ガスクロマトグラフ（GC）および質量ロートに移し、30 分間の振とう抽出をアルミナが使用される。ここでは、上分析計（MS）を連結して使用される。

行う。ヘキサン層を分画後、水層にヘ記の多層カラムで除去できない塩化

これはガスクロマトグラフの分離能お

キサン 20mL を添加し、さらに 30 分間

ベンゼン、低極性 PCB を溶出除去しよび定量的情報が極めて優れている

振とう抽出を行う。2 回の抽出によるヘことと、質量分析計の微量な試料の定

キサン分画を混合する。得られたヘキ

た 後に Co-PCB を、続 い て PCDD、
PCDF を分取する。

サン抽出液を水で洗浄した後、無水硫

アルミナカラムクロマトグラフィー

れの利点を生かし、短所を補うもので酸ナトリウムで脱水後、あらかじめ秤

での精製後、さらにダイオキシン類なある。以上で述べてきた精製法を採用

性的情報が得られることによりそれぞ量しておいたナス型フラスコに入れてどの扁平化合物に強い親和力をもつ、しても、ダイオキシン類精製画分中にエバポレーターを用いて乾固し、脂肪

活性炭カラムクロマトグラフィーを用はまだ他の環境汚染物質が混在して重量を測定する。

いて精製することが多い。この精製にいるため、高分離能（キャピラリーカラより活性炭に低親和性の PCB、塩化

ム装着）、高分解能 GC/MS による高ジフェニルエーテル、塩化ベンゼン等

精度分析が行われる。しかし、分析にが除去可能となる。一般的に 2% 程度

必要な分解能は 10,000 以上が要求さ各試料の精製法は、主として多層シの活性炭を混合したシリカゲル、ガラれ、試料中に存在する汚染物質によっリカゲルカラム、アルミナカラムおよ

スウール、セライトが充填剤として使てはモニターイオンに測定対象物質

5. 精製

び活性炭カラムクロマトグラフィーがわれる。しかし、これらのものは活性度以外の化合物が検出される場合があ繁用されている。多層カラムクロマトが変動しやすいために、安定した分離る。

グ ラ フ ィ ー の 原 理 は 1980 年 にが困難である。さらに、最近問題視さ分析には EI（電子衝撃型）― SIM

Lamparski ら によって考案され、妨害 物を 効 率よく除 去 できる H2SO4 、AgNO3 、KOH を化学修飾させたシリカゲルに吸着させた後、2 本のカラムれている Co-PCB のノンオルト、モノ（選択イオンモニタリング）法が用いら

オルトおよびジオルト体の相互分離もれ、その設定質量数は表 2 に示したイ

難しい。そこで、黒鉛炭素を充填した

オンが採用され、そのイオンは強度のHPLC カラムはこれらの問題点を克服

強い 2 つのイオンである。定性についに充填して精製する方法である。著者

した再現性、分離能ともに優れたものては標準品と保持時間が一致し、塩素らは処理時間の短縮を計るために一である。著者らはこのカラムを毛髪試

同位体比が± 15% 以内の誤差で一致

2）

12

硫酸ナトリウム（無水）

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

することが条件となる。定量に

表 2．ダイオキシン類の設定質量数とその強度比

ついては相対検量線法が主に
用 いら れ、13C ラ ベ ル 化 体とNative 体の相対比からダイオキシン類を算出する。
ダ イオキシン類の異性体分析を行うために繁用されるキャ
ピラリーカラムを以下に示す。

4塩化〜6塩化PCDD、PCDF
異性体分析用：Supelco 製 SP2331（シアノプロピル系、60m）、
Chrompack製 CP-Sil88 あるいは相当品

7 塩 化、8 塩 化 PCDD、PC
DF 分析用：Supelco 製 SPB-5（5% フェニル基含有メチルシリ
コン系、30m）、J&W 社製 DB5 あるいは相当品
4 塩化〜 7 塩化 Co-PCB 分
析用：J&W 社製DB-17（50%フェニル基含有メチルシリコン
系、30m）あるいは SGE 社製

HT-8（8% フェニル基含有カル
ボラン系、50m）
分析結果の評価はクリーン

TCDDs
PeCDDsHxCDDsHpCDDs
OCDD
TCDFs
PeCDFsHxCDFsHpCDFsOCDF
13
C12-TCDDs
13
C12-PeCDDs
13
C12-HxCDDs
13
C12-HpCDDs
13
C12-OCDD
13
C12-TCDFs
13
C12-PeCDFs
13
C12-HxCDFs
13
C12-HpCDFs
13
C12-OCDF
TCB
PeCB
HxCB
HpCB
13
C12-TCB
13
C12-PeCB
13
C12-HxCB
13
C12-HpCB[M]+
319.8965（76.42）
353.8576（61.26）

303.9016（77.55）

331.9368

315.9419

289.9224（76.67）

301.9626[M+2]+
321.8936（100）355.8546（100）389.8156（100）423.7767（100）457.7377（87.65）
305.8987（100）339.8597（100）373.8207（100）407.7818（100）441.7428（87.74）
333.9338
367.8949
401.8559
435.8169
469.7780
317.9389
351.9000
385.8610
419.8220453.7830
291.9194（100）325.8804（100）359.8415（100）393.8025（100）303.9197
337.9207
371.8817
405.8428[M+4]+
357.8517（65.54）
391.8127（81.72）
425.7737（97.91）
459.7348（100）341.8568（65.41）
375.8178（81.60）
409.7788（97.78）
443.7398（100）369.8919
403.8530437.8140
471.7750
353.8970
387.8580
421.8191
455.7801
327.8775（65.29）
361.8385（81.48）
395.7995（97.67）
339.9177
373.8788
407.8398

アップスパイクの回収率で行い、50 〜 120% の範囲であることを確認し、 〔参考文献〕
1）H. Miyata et al.: Organohaligen Compounds, 30, 154-157, 1996
2）L. L. Lamparski et al.: Anal. Chem.,
52, 2045-2054, 1980

この範囲からはずれている試料については信頼性のないデータと見なし再分析を行う。

コード No.

040-27481
167-19251
197-11611
191-11631
194-11621
010-17831
016-17833
048-26321
044-26323
049-27451
050-06661
083-07391
089-07393
136-13461
132-13463
203-14141
209-14143

品

名ダイオキシントラップビーズ

規

格

容

量

希望納入価格（円）ダイオキシン類分析用

200g

25,0002% 水酸化カリウムシリカゲル
10% 硝酸銀シリカゲル
44% 硫酸シリカゲル
22% 硫酸シリカゲル

ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類分析用

100g
100g
100g
100g

17,00017,00017,00017,000アセトン

ダイオキシン類分析用

ジクロロメタン

ダイオキシン類分析用

ジエチルエーテル
エタノール（99.5）

ダイオキシン類分析用
ダイオキシン類分析用

ヘキサン（n-〃）ダイオキシン類分析用

メタノール

ダイオキシン類分析用

トルエン

ダイオキシン類分析用

1L
3L
1L
3L
1L
1L
1L
3L
1L
3L
1L
3L

2,900
6,900
3,500
8,800
6,200
5,000
2,400
6,000
2,800
6,700
3,300
8,300

（煙道中ダイオキシン吸着剤）

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

13

Wakopak Combi ODS カラムについて
和光純薬工業株式会社

約 10 年前から始まったコンビナトリ

く判 断 することが 困 難との見 知 から

大阪研究所

上森

仁志

基性化合物までシャープなピークとし

アルケミストリーは、医薬開発での有種々の精製操作が取入れられるようにて検出可能である。また、高流速グラ

用性が認められ、ハイスループットス

なってきた。精製方法としては、固相

ジェント法に対応できるようカラムのクリーニング技術と合わせて創薬研究

抽出ミニカラム、フラッシュクロマト、

圧力損失を最小限に抑えるよう設計さに欠かせない手法として定着している

れ ている。Wakopak Combi ODS カ
ラムは、カラム長が 50mm で、汎用タは、より短時間に多種多様な化合物をHPLC 法が行われているが、とりわけ短時間分離が可能で、MS と直結すれば直接構造解析が可能となる HPLC

一度に合成できるメリットを持ち、目的

グラジェント溶出法が主流と考えられとして内径 2.0mm、分取用として内径とする化合物を一つ一つ合成している。

20mm と 28mm の 4 種類をラインナッ

た従来の方法に比べ格段のスピードプした。下図に高速分離例を示したが、のまま有効性の評価にかけられる場合

今 回、開 発し た Wakopak Combi
ODS カラムは、コンビナトリアル合成
後の HPLC 精製に最適となるように設計開発した ODS カラムであり、親水も多かったが、 多種多様な化合物の性の高い化合物から疎水性の高い化

混じりもの のままで作用を見ることは合物まで広範囲に適応可能で、金属有用な作用を見逃したり、効果を正し配位性化合物はもちろん、酸性から塩ように思われる。コンビナトリアル合成化がはかられた。この合成された 多種多様な化合物の混じりもの は、そイプとして内径 4.6mm、構造解析用

内径 2.0mm から 28mm まで完全な相関性が認められ、使用目的に応じて簡
単に条件移行が可能である。
〔参考資料〕
現代化学 11（1998）特集 : コンビナトリ
アルケミストリーの新展開

移動相：A）H2O, B）CH3CN, 5-10min（100%）
グラジェント： 0-5min（Bconc. 20-100%）
温 度：room temperature
検 出：UV 254nm sens. 0.512aufs

カラムサイズ：流 速：
注入量：
ミキシング容量：

2.0mmH × 50mm
0.2mL/min
4FL
6.8FL

4.6mmH × 50mm
1.0mL/min
20FL
6.8FL

20mmH × 50mm
18.9mL/min
380FL
12mL

図 1. Wakopak Combi ODS カラムを使用した分離例

14

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

28mmH × 50mm
37.1mL/min
740FL
12mL

コンビナトリアルケミストリー用
ワコーパック Combi ODS
ワコーパック Combi ODS は粒子径 5Fm 高純度シリカゲル使用の ODS を充てんした HPLC 用カラムです。コンビナトリア
ルケミストリーにおいて要求される、迅速な分析・分離精製が可能です。
〔特

長〕

品 名

カラムサイズ
2.0H × 50mm

1. 高分離・高保持能2. 塩基性化合物の分析に優れる高エカラムタイプウォーターズウォーターズデュポン
ウォーターズデュポン
ウォーターズウォーターズ

4.6H × 50mm

ンドキャッピング充てん剤

4.6H × 50mm
× 4 本セット

Wakopak® Combi ODS

3. 分析から分取へのスケールアップ

20.0H × 50mm
28.0H × 50mm

が容易

記 号
エニ W
エカ W
エカ D
エイ W
エイ D
エ X W
エツ W

希望納入価格（円）27,00027,00080,00090,000220,000

多環芳香族炭化水素標準品
HPLC 用カラム ワコーパック WS-PAHs
環境中に広く存在する環境汚染物質である多環芳香族炭化水素（Polycyclic aromatic hydrocarbons:PAHs）標準品です。
ワコーパック WS-PAHs を使用することで、16 成分の短時間一斉分析が可能です。
〔現品説明書〕〔分析例〕 EPA 手法 610 記載の PAHs16 成分のクロマトグラム
4.481

コード No. 010-17571

アセナフテン標準品

10

充てん剤：Wakosil-PAHs
カラムサイズ：4.6H × 250mm
溶離液：A;CH3OH/H2O=80/20（V/V）

Acenaphthene Standard
CAS 登録番号：〔83-32-9〕

5
4

構造式 :

LIQUID CHROMATOGRAM

C12H10=154.21
品

9 11

1

別名 :1,8-Ethylenenaphthalene

Sample質 : 白色結晶

m.p. 94.8℃

Acenaphthene
WakosilStandard
PAHs
Column0.01%（4.6×250mm）
CH3CN, 10FL
30℃
Lot. YWP9230

含量 100.0%（HPLC による）

Flow rate 1.0mL/min

CH3CN：
EluentH2O=9：1

本品の液体クロマトグラムを示し
ます。

Atten

Detection UV 254nm

Instrument Shimadzu LC 9A Operator S. Nakao

7

8
7

2
3

13
12

6

流
温
検
試

15 16
14

0

5

10

15

20

WAKO PURE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.

コード No.
010-17571
017-17581
015-04211
021-13641
028-13651
025-13661
022-13671
020-13591
032-17511
041-26791
063-03891
066-03881
091-04451
145-06881
162-19441
169-19451

品
名アセナフテン標準品
アセナフチレン標準品
アントラセンベンゾ [a] アントラセン標準品
ベンゾ [b] フルオランテン標準品
ベンゾ [k] フルオランテン標準品
ベンゾ [ghi] ペリレン標準品
ベンゾ [a] ピレン標準品
クリセン標準品
ジベンゾ [a,h] アントラセン標準品
フルオランテン標準品
フルオレン標準品
インデノ [1,2,3-cd] ピレン標準品
ナフタレン標準品
フェナントレン標準品
ピレン標準品品

カラムサイズ

名

2.0H × 250mm
Wakopak® WS-PAHs
4.6H × 250mm

規 格
環境分析用
環境分析用
99.5+%（cGC）標準品
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
環境分析用
カラムタイプデュポン
ウォーターズデュポン
ウォーターズ

B;CH3CN100%
0-4min. B:10%
4-7min. B:10100%
7-25min. B:100%
速：1.0mL/min.
度：30℃
出：UV 254nm
料：1）Naphthalene
2）Acenaphthylene
3）Acenaphthene4）Fluorene

容

量

100mg
100mg
5g
100mg
100mg
100mg
20mg
100mg
100mg
100mg
100mg
100mg
20mg
100mg
100mg
100mg
記 号
モ W D
モ WW
モ I D
モ I W

5）Phenanthrene6）Anthracene7）Fluoranthene
8）Pyrene9）Benzo[a]anthracene10）Chrysene11）Benzo[b]fluoranthene12）Benzo[k]fluoranthene13）Benzo[a]pyrene14）Dibenz[a,h]anthracene15）Benzo[ghi]perylene16) Indeno[1,2,3-cd]
pyrene

希望納入価格（円）5,500
12,0003,500
10,00012,00012,00014,00010,00010,00014,0005,500
5,500
14,000
5,500
5,500
5,500
希望納入価格（円）60,00060,000

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

15

新固相抽出カラム
スピーディスク SPE カラム
新構造のディスクがハイスピード固相抽出を可能にしました。
〔特 長〕・10Fm の充てん剤をディスク内に保持させた新構造の高性能 SPE カ
ラムで、従来の 40FmSPE と比較して 1/6 の溶媒量、1/10 の時間で固相抽出が可能です。
・フィルター状のため微粒子等による目詰まりがありません。
・10Fm の充てん剤ですから高効率で短時間で固相抽出操作が可能です。
・豊富な充てん剤種とサイズをラインアップしています。

コード No.
566-25992
560-25995
564-25998
567-26022
561-26025
565-26028〔充てん剤種〕
逆相：8 種類、吸着：1 種類、順相：
3 種類、イオン交換：3 種類
他に特殊用途：1 種類、ポリマー：1
種類〔サイズ〕
1mL シリンジ（10, 20, 35mg ゲルディスク）
3mL シリンジ（35, 50, 100mg ゲルディスク）
6mL シリンジ（10, 100, 200mg ゲルディスク）

Speedisk®
固相抽出ディスク
スクリーン（ポリエチレン）〔用 途〕
・医薬品分析、環境分析
・ハイスループットスクリーニング、コンビナトリアルケミストリー精製メーカーコード
7606-017606-047606-08
8163-01
8163-04
8163-08

品名 ( ゲル充てん量 )スピーディスク C18 (20mg)
スピーディスク C18 (50mg)
スピーディスク C18 (100mg)
スピーディスク シリカ SI (20mg)
スピーディスク シリカ SI (50mg)
スピーディスク シリカ SI (100mg)

グラスファイバーフィルター
充てん剤（10μm）
グラスファイバーフィルタースクリーン
Speedisk® Column is proteected U.S.Patent No.5,595,653

容量

1mL × 100 本
3mL × 50 本
6mL × 30 本
1mL × 100 本
3mL × 50 本
6mL × 30 本

希望納入価格（円）37,50025,00027,60036,70025,00030,000その他の充てん剤、サイズもございますので、お問合わせ下さい。

ベンゾジアゼピン系向精神薬
ベンゾジアゼピン骨格を基本構造とする化合物群の総称で、この一連の化合物は特有の抗不安作用、催眠鎮静作用、骨格筋弛緩作用を有しています。
動物実験及び薬毒物試験のための標準品として用いられます。
＊ご購入に際しては、「向精神薬試験研究施設設置者登録証」等の許認可証が必要です。
コード No.
016-17171
020-13471
031-17221
038-17231
045-18901
067-03791
060-03801
122-04591
139-12971
142-04831
158-02031
162-19181
205-14221

品
Alprazolam
Bromazepam
Chlordiazepoxide
Clonazepam
DiazepamFlunitrazepam
Flurazepam
Lorazepam
Medazepam
Nitrazepam
Oxazepam
Prazepam
Triazolam

名

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

ここに記載されている試薬は試験・研究用にのみ使用されるものであり、医療には用いられません。

16

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

容

量

500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg
500mg

希望納入価格（円）30,00025,00015,00025,0003,780
25,00020,00025,00020,0003,600
25,00030,00030,000硝酸マグネシウム溶液【10mg/ml Mg 15% 硝酸溶液】
硝酸ニッケル（Ⅱ）溶液【10mg/ml Ni 15% 硝酸溶液】
原子吸光分析用
原子吸光分析において、共存金属やイオンなどの影響を受けやすい元素を

〔規 格〕
銀（Ag）

分析する際に、マトリックス修飾剤として使用されます。セレン、カドミウム、鉛
及びひ素などの微量分析に最適です。

：50ppb 以下：50ppb 以下
カドミウム（Cd）
タリウム（Tl） ：100ppb 以下：100ppb 以下
鉛（Pb）

コード No.

〔関連商品〕

ひ素（As） ：100ppb 以下
セレン（Se） ：100ppb 以下：9.5 〜 10.5 mg /mL
濃
度

品 名

Ni として）（各々 Mg、規格

容量

希望納入価格（円）132-13321

硝酸マグネシウム溶液【10mg/mL Mg 15% 硝酸溶液】

原子吸光分析用

100mL

6,000

141-06981

硝酸ニッケル（Ⅱ）溶液【10mg/mL Ni 15% 硝酸溶液】

原子吸光分析用

100mL

6,000

品 名
塩化ランタン溶液 La：abt.10%

規 格
原子吸光分析用

容

コード No.
124-02351
124-01832
128-01835

酸化ランタン, 99.99%

光学用

100mL
25g
500g

量

希望納入価格（円）
2,850
2,100
9,400

163-17531

硝酸パラジウム（Ⅱ）溶液【5mg/mL Pd 硝酸（1+1）溶液】

原子吸光分析用

100mL

10,500

195-07361

塩化ストロンチウム六水和物

原子吸光分析用

100g

4,400

Protease Inhibitor Mixture
生化学用
様々なプロテアーゼをカクテルにした物です。タンパク質の精製等に有効です。

プロテアーゼ・エステラーゼ用
形 状 : 凍結乾燥品
再溶解 : 100mL の蒸留水で溶解した
時の各プロテアーゼの濃度は右記（内容）の通りです。
溶液状態で保存する場合は、
あらかじめ必要量を小分けして、−20℃保存して下さい。

内

容:

阻害剤
AEBSF, Hydrochloride

M.W.
239.70

バイアル中の濃度

Aprotinin, Bovine Lung

6511.45

150nmol/L

E-64, Protease Inhibitor
EDTA, Disodium

357.41372.24

1Fmol/L
0.5mmol/L

Leupeptin, Hemisulfate475.591Fmol/L貯

法 : −20℃

内容:

500Fmol/L

ターゲット プロテアーゼ
Serine Proteases
Serine Proteases
Esterases
Cysteine Proteases
Metalloproteases
Cystein Proteases
Tripsin-like Proteases

167-19511

1 バイアル6,500 円細菌抽出液用形

状： 凍結乾燥品

再溶解： 初 め に 1mL の DMSO を 添
加しゆっくりと溶解します。
その後、4mL の蒸留水を添加します。この時の各プロ
テアーゼの濃度は右記（内容）の通りです。溶液状態では、−20℃ 保存で 1 ヶ月安
定です。

阻害剤
AEBSF, Hydrochloride

M.W.
239.70Bestatin308.381.7mmol/L

E-64, Protease Inhibitor
EDTA, Disodium
Pepstatin A

357.41372.24685.89200Fmol/L
85mmol/L
2mol/L貯

法 : −20℃
容:

バイアル中の濃度20mmol/L

ターゲット プロテアーゼ
Serine Proteases
Aminopeptidase Bs
Leucine Aminopeptidase
Cysteine Proteases
Metalloproteases
Aspartic Proteases

167-19491

1 バイアル 13,000 円

動物細胞 ・ 組織抽出液用
形

状：1mL DMSO 溶液（凍結品）

内貯法： −20℃

阻害剤
AEBSF, Hydrochloride
Aprotinin, Bovine Lung

M.W.
239.706511.45

Bestatin308.385mmol/L

E-64, Protease Inhibitor

357.411.5mmol/L

Leupeptin, Hemisulfate475.592mmol/L

Pepstatin A

685.891mmol/L

160-19501

1 バイアル

11,000 円

バイアル中の濃度100mmol/L
80Fmol/L

ターゲット プロテアーゼ
Serine Proteases
Serine Proteases（Broad Spectrum）
Aminopeptidase Bs
Leucine Aminopeptidase
Cysteine Proteases
Cystein Proteases
Trypsin-like Proteases
Aspartic Proteases

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

17和光純薬工業株式会社

大阪研究所

土谷

正和

第 37 話 リムルス試薬の活性化に伴う反応タイムコース
リムルス試薬（LAL）のゲル化は、
複数のプロテアーゼ前駆体の活性化を伴うカスケード機構によって起こり
トキシノメーターを用いた比濁ます 1）。
時間分析法では、このゲル化の過程を観察しています。この反応タイムコー
スは特長的な形状をしているのですが、今回はその意味について考えてみたいと思います。
トキシノメーターに表示される反応
タイムコースを観ていると、次のことに気がつきます。すなわち、反応にはラグがあり、透過光量が減少し始めると徐々にその変化率が大きくなり、最終的には変化率の減少とともに一定の透過光量に落ち着くという現象です。
トキシノメーターではゲルの生成を観察していると考えられます。それでは、リムルス試験におけるゲルの生成は、必ずラグを持つタイムコースになるのでしょうか。この点に関して、LAL のカスケード機構から考えてみましょう。
LAL のゲル化は、図 1 のように複数のプロテアーゼ前駆体が順次活性化され、最終的に生成する Coagulin が重合 す ること に よ っ て 起 こりま す。
Coagulin の生成過程における、各因子の活性の変化を考えてみましょう。
エンドトキシンによる LAL の活性化
では、まず Factor C が活性化されます。活性化型 Factor C の量が反応液中のエンドトキシン量に比例すると仮定すると、その活性は、ごく短い時間で一定となります。次に、Factor B は

図 1. リムルス試験の原理

18

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

生成物量
ほ ぼ 一 定 量の 活 性 化 型 Factor C に
よって活性化されることになりますか
Coagulogen
ら、活性化型 Factor B の生成速度は、
Clotting Enzyme
初期に最大となりますが、基質となる
Activated Factor B
Factor B の減少と活性化型の Factor
Activated Factor C
B の増加により徐々に減少し、ついには生成が止まると予想されます。さて、反応時間次に出現する Clotting enzyme はどの
図 2. リムルス試験における各活性化型因ような挙動を示すでしょうか。Factor
子の継時的変化
B の場合と違い、Proclotting enzyme
濁度変化も緩やかに起こるというもの
を水解する活性化型 Factor B の量がです。このことも、LAL のカスケード
変化しますから、Clotting enzyme の生成量の変化は少し複雑です。活性機構で、B- グルカンによるゲル化の系は、エンドトキシンに比べ、関連す化型 Factor B 量が徐々に増加する初期には、Clotting enzyme の生成速度
る因子が 1 つ少ないということから理が徐々に速くなることになります。この解できると思われます。
生成速度は、活性化型 Factor B 量がいずれにしても、リムルス試験では、一定になったところで最大になり、そ比濁時間分析法、合成基質法に関わらの後、基質である Proclotting enzyme
ず、反応系の最終生成物のタイムコー
量 の 減 少と 生 成 物 で あ る Clotting
スはラグを持つことが予想されます。
enzyme の増加により徐々に減少、最そして、これは実際の測定で観察され終的に生成が止まるということになりている通りです。すなわち、ラグのな
ます。Clotting enzyme の生成量のタ
い反応タイムコースが認められた場合
イムコースを予想すると、初期にラグは、エンドトキシンや B- グルカンによる LAL の活性化とは異なる変化を観があり、活性出現初期には下に膨らん察しているということになります。比濁だ形状、後期には上に膨らんだ形状と時間分析法の場合、反応液の初期のなった後、一定になると思われます。
透過光量を 100% として測定を始める
さらに、Coagulin の生成を考えてみると、タイムコースの形状自体は同様でため、試料が少々濁っていても測定中
すが、ラグはさらに長くなると思われに濁度変化が起こらなければ、測定値ます。図 2 は、これらの活性化型因子に影響はありません。しかし、筆者らもの生成タイムコースの予想図です。トまれにラグのないタイムコースを観察
キシノメーターの場合、ゲルの量を透することがあるので、新しい種類の試
過光量の減少として観察しますから、料を測定する場合にはタイムコースのタイムコースの形は 上下観察も重要です。異常タイムコースに逆になります。
ついては、次回に詳しく考えてみたい
以前筆者らは、この反応と思います。
タイムコースの特長がエン〔参考文献〕
ドトキシンと B- グルカンで1）Iwanaga, S. et al. : Thromb. Res., 68,
異 な ることを 報 告しまし1-32（1992）.
た 2）。すなわち、エンドトキ
2）Tsuchiya, M. et al. : Chem. Pharm.
.
シンの場合は、ラグが長く、
Bull., 38, 2523-2526（1990）
濁度変化が 急激に起こるのですが、B- グルカンの次回は「第 38 話 非特異的濁り」の場合は、ラグが比較的短く、 予定です。

類骨 ( オステオイド ) の染色
ビラヌエバ骨染色試薬
通常、病理染色において「骨」はパラフィン包埋するために脱灰しなければならず、結果カルシウム分の溶出により、骨本来の組識状態で染色させる事は困難でした。しかしながら、非脱灰のまま樹脂包埋し、研磨切片や薄切切片を得ることができるようになり、ますます骨組識の形態観察の重要性が高まっています。
ビラヌエバ骨染色試薬は非脱灰硬組識の染色試薬であり、類骨（骨の表層部にある未石灰化骨）と石灰化骨を明確に染め分ける事が可能です。骨軟化症や骨粗鬆症などの骨疾患の研究や骨形成能の評価に有用です。
コード No.
221-01351〔染色液調製方法〕
試薬 500mg を 70% メタノール 100
mL に溶解させる。
＊溶けにくい場合の処理＊
・メタノールに一度に入れずに少しずつ添加し攪拌しながら溶かす。
・50℃ くらいに温めながら溶かす。
＊多少の溶け残りがあっても使用上問題はな
く、そのまま置いておくと時間と共に完全に溶ける。

〔染色結果〕
明視野
類骨
赤紫色
石灰化骨
無色〜薄茶色
細胞質
薄紫色〜桃色核
青紫色
テトラサイクリン
−
カルセイン
−

蛍 光
赤色
黄緑色〜緑色
無色〜橙色
赤色
黄色
黄緑色

ラット大腿骨（10Fm）〔染色法〕
70% エタノール固定済み、または未固定の標本を上記染色液に入れる。
室温下 3 〜 10 日間置く。時々真空引きをすると色素の浸透が良くなりム
ラのない染色ができる。
＊染色操作後は通常の樹脂包埋と同様に、脱水・脱脂 ( エタノール ) →樹脂浸透 (MMA) →樹
脂包埋 (MMA) →薄切切片作製へと移行する。

品 名
ビラヌエバ骨染色試薬

規 格
病理研究用

容

明視野

蛍

量

希望納入価格（円）
照 会

500mg × 10 包光

天然 BMP 成分
BMP カクテル
担体 IBCBMP（Bone Morphogenetic Protein）カクテルとは、牛骨から抽出し、３〔用段階のクロマトグラフィーを経て部分●造血組織の初期発生実験

精製した、ほとんどすべての骨誘導活●軟骨形成実験途〕●骨の分化、誘導実験

性成分を含む BMP 画分（天然 BMPカクテル）です。動物実験用に汎用性があるのみならず、未知の生理活性物
質をも含む可能性があるため、今後〔使用例〕
BMP カクテルを担体 IBC に含浸させ、ラットの背部皮下にインプラント後の継時変化

BMP 研究の新展開の出発点となる研究用試薬です。
また、BMP カクテルが埋植実験で骨誘導活性を持つためには担体が必
要となります。これまで各種の担体が開発されてきましたが、現在までに知られている最も効率が良い担体が天然由来の精製された不溶性骨コラー

２週目；軟骨形成

３週目；骨形成

４週目；造血を伴った骨の形成

ゲン（IBC）担体です。
コード No.
309-07001
305-07003
306-07011

メーカーコード
BG0001
BG0002BC0040品
BMP カクテル
担体 IBC

名

容

量

100Fg
1mg
200mg

希望納入価格（円）30,000290,000
40,000

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

19東京理科大学

薬学部

生化学

塩川

大介

第 8 話 アポトーシスとエンドヌクレアーゼ
アポトーシスの本質は、DNA の遺ゼなのであろうか。これまでにい伝情報を消去することにあると考えら

くつかの候補が挙げられてきたが、れる。その実行過程を遂行する分子とその主なものについてまとめてみして、DNA エンドヌクレアーゼが注目る。

を集めている。最近、 FasL/Fas 系や

TNF/TNFR 系のアポトーシス誘導機

アポトーシスエンドヌクレアーゼ

構の解析が 進み、カスペースファミ
リーがその下流に直結していることが

1）DNase I
DNase I は真核生物の DNase

明らかとなった。一方、アポトーシスのの中で最もよく研究されているエ顕 著な 特 徴 である DNA のヌクレオ

ンドヌクレアーゼであり、Kunitz

ソーム単位での断片化を司るエンド

によりウシ膵臓から結晶化された。

ヌクレ ア ー ゼ の 有 力 な 候 補とし てその活性は 2 価陽イオン（Ca2+、

DNase C、CAD がクローニングされ、

Mg2+、Mn2+ のいずれか 1 つでよ

いよいよアポトーシスの実行機構の全い）依存性でアクチンにより阻害容が解明されようとしている。

される。また、二本鎖 DNA を一本 鎖 で 切 断し、切 断 様 式 は 3' -OH/

発させたときの DNA 断片化が、細胞

アポトーシスの定義ともなっている

5' -P である。
Peitsch らは、ラット胸腺、リンパ節を見出し、DNase II がアポトーシスに

DNA のヌクレオソーム単位での断片

アポトーシスにおける DNA 断片化

内 pH の下降（酸性化）と相関することの細胞核抽出液中に存在するアポトー

関与する可能性を提唱した。彼らは、化を触媒するエンドヌクレアーゼの実

シス様にクロマチン DNA を断片化す

CHO 細胞の核画分に DNase II が存

体は何であろうか。それを究明する一るエンドヌクレアーゼ活性が、抗ラット

在することを示し、さらにその単離核

つの手掛りとして、アポトーシスにおをインキュベートすると、酸性条件下

べることは重要である。そこでまず始DNase I 抗体により阻害され、さらに
DNase I 遺伝子を発現させた COS 細胞の単離核を Ca2+/Mg2+ 存在下にイン

めに、断片化した DNA がどのようなキュベートすると、アポトーシス様のまた CHO 細胞を酸性条件、H+ イオノ

末端をもっているか、DNA 末端標識

DNA 断片化が対照細胞由来の核にフォア存在下で培養すると、アポトー法を用いて解析した。放射線照射やけるクロマチン DNA の切断様式を調20

図 1. アポトーシスにおける DNA 切断様式。X 線照射、デキサメタゾン、アクチノマイシン D 処理によりア
ポトーシスを誘発した胸腺細胞、HL-60 細胞より
DNA を抽出し、3' 末端をターミナルトランスフェ
2）、5' 末端をポリヌクレオチドキ
ラーゼ（レーン 1、4）を用いて 32P 標識することによナーゼ（レーン 3、り DNA 切断様式の決定を行った。それぞれの反応
においてアルカリフォスファターゼ（APase）により末端リン酸基をのぞいた DNA をポジティブコン
トロールとして用いた。

で 2 価陽イオン非依存的にアポトーシ
ス様の DNA 断片化が観察されること、比較して増強されることを見出した。

シスを起こすことなどを明らかにした。

デキサメサゾンによりアポトーシスを

彼らはこれらの結果より、細胞がアポ

こ れらの 結 果 を 踏 ま え て、彼らは誘発したラット胸腺細胞、あるいは転トーシ スを起こすと、分泌小胞内の

DNase II がアポトーシスのエンドヌク

写阻害剤であるアクチノマイシン D に

DNase I が核に移行し DNA 断片化をレアーゼであると結論している 2）。

よりアポトーシスを誘発した HL-60 細行うようになるのではないかと考察し

昨年 DNase II 研究の上で最大の障胞のいずれにおいても、断片化したている 。その後、前立腺上皮細胞に壁であった cDNA が単離されていな

DNA の末端は 3' -OH/5' -P であった
（図 1）。また、その後 の解析により、アポトーシスにおける DNA 切断は、一本鎖 DNA 切断の蓄積により起こるこ

おいて、アポトーシスに伴う DNase I

い という問題もようやく解決し 3）、今レベルの上昇が報告されている。

後これらの cDNA を用いた早急な解析が期待されている。しかし、DNaseとが示された。これらの結果を考え合

2）DNase II
DNase II はリソソームに局在する
至適 pH を酸性側（pH 5 以下）にもつ

1）

わせると、少なくともこれらの系におけエンドヌクレアーゼで、臓器特異性はII の DNA 切断様式（3' -P/5' -OH）とアポトーシス細胞におけるそれ （3' OH/5' -P） が一致しないことに対するるアポトーシスのエンドヌクレアーゼ

無い。また、活性には 2 価陽イオンを説明は未だない。

はクロマチン DNA を 3' -OH/ 5' -P 型

必要とせず、DNA を 3' -P/5' -OH 型に一本鎖で切断していることになる。

で切断する。

3）CAD/DFF40/CPAN
1993 年、Lazebnik らは M 期の 細それでは、この DNA 断片化を触媒

Barry らは、 HL-60 細胞に Ca2+ イ

胞抽出液中と単離核を用いて、試験管するのはどのようなエンドヌクレアー

オノフォアを用いてアポトーシスを誘

内でアポトーシスに特徴的な変化を再

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

現すること、すなわちアポトーシスのこれら DNase C に特徴的

無細胞系の構築に成功した 4）。その後、な基本構造は、ラット、マ

いくつかのグループにより、それぞれウ ス、ヒトの み なら ず、の無細胞系を用いたアポトーシスの分

Xenopus においても保存

子機構に関する解析が行われたが、されている（図 2）。

特に注目を集めたのはアポトーシス細この DNase C は 実 際、胞より調製した細胞質液中に DNA 断

細胞内でアポトーシスに片化を引き起こす因子が存在するとい

伴い活性化をうけ、クロう発見である。この因子は 1997 年、マチン DNA をラダー状

Liu らにより DFF 45（DNA fragmentation factor 45）として同定された 5）。
その後、Enari らによりマウス WR19L
細胞から Caspase-3 により活性化される DNase, CAD の精製及びクローニングが報告された 6）。この CAD はそのインヒビターである ICAD とヘテロに切断するのかを知るた
め DNase C の安定発現株を作 製し解 析を行った。

HeLa S3 細胞及びコント
ロ ー ル で あ る HeLa S3/
neo は、C2 セラミド , 24
時間処理により細胞死は

図 2. 哺乳動物 DNase C の一次構造。マウス、ラット、及びヒト
DNase C の cDNA から予想されるアミノ酸配列を示した。

ダイマーを作り不活性化されており、

起 こ す も の の DNA ラ

アポトーシス誘導時には Caspase-3 にダーの出現は観察されなより ICAD が分解され活性化が起こる。

かった。しかし、HeLa S3/DNase C 細

非常に興味深いことに、この ICAD は胞においては細胞死に伴う DNA 断片

ヒト DFF 45 のマウスホモログであっ化が観察された（図 3）。

た。現 在 で は CAD/DFF40/CPAN
同一のエンドヌクレアーゼであること

我々は最近、完全長の DNase C のC 末 端に GFP （Green fluorescence
protein, 緑色の蛍光を発する）を融合が示されている。CAD の性状についし た 組 み 換 え タン パ クを 用 い てては、Mg2+ 依存性、Zn2+, ATA により

DNase C が通常、核膜に局在し、アポ阻害されることが分かっているが、そトーシスの誘発に伴い核内へと移行す

れ以外については不明である。

ることを明らかとしている（未発表デー

4）DNase C
DNase C は分子量が 33 kDa、至適
pH を 7.2 に持つ Ca2+/Mg2+ 依存性中性エンドヌクレアーゼであり、Zn2+ によって強く阻害され、クロマチン DNA
を 3' -OH/5' -P 型で切断することからアポトーシスの DNA 断片化を触媒しタ）。以上の結果より、DNase C がアポ（caspase activated endonuclease）はトーシ スの 刺 激に 伴い 核 へ 移 行し、DNA 断片化を触媒することが示された。

おわりにアポトーシスの分子機構の解析が、ていることが示唆されていた。

ここ数年急速に進展してきている。そcDNA クローニングの結果、ラット
DNase C は 310 アミノ酸残基の分子量 35.7 kDa の前駆体として合成され、N 末端の 25 アミノ酸残基が切断されることにより、分子量 33 kDa の成熟型
DNase C に なることが 明らかとなった 7）。また、DNase C の C 末端側にはSV40 型核移行シグナルが存在し、このなかでも DNA 断片化に関与するエれは本酵素が核内に局在する事実と一致する。また酵素本体を構成している 285 アミノ酸 残 基 の 中 央 部 に は

DNase I に類似した活性中心が存在し、ンドヌクレアーゼに関する研究はホットな話題を提供している。様々な刺激によるアポトーシスおいて、細胞がどの様にエンドヌクレアーゼを使い分けているかを解明することが今後の課題である。
〔参考文献〕
1）Peitsch, M. C. et al. : Characterization of
the endogenous deoxyribonuclease involved in nuclear DNA degradation during apoptosis（programmed cell death）.

図 3. DNase C 安定発現株におけるアポトーシ
スの DNA 断片化。DNase C 発現ベクターを安定導入した HeLa S3 細胞を用い、C2セラミドによるアポトーシスの DNA 断片化を観察した。（左、コントロール細胞、右、
DNase C 導入細胞）

EMBO J., 12（1）: 371-377, 1993
2）Barry, M. A. et al. : Identification of
deoxyribonuclease II as an endonucleaseinvolved in apoptosis. Arch. Biochem.
Biophys., 300（1）: 440-450, 1993
3）Shiokawa, D. et al. : Cloning of cDNAs
encoding porcine and human DNase II.
Biochem. Biophys. Res. Commun., 247（3）: 864-869, 1998
4）Lazebnik, Y. A. et al. : Nuclear events ofapoptosis in vitro in cell-free mitotic
extracts : a model system for analysis of
the active phase of apoptosis. J. Cell.
Biol., 123（1）: 7-22, 1993
5）Liu, X. et al. : DFF, a heterodimeric
protein that functions downstream of
caspase-3 to trigger DNA fragmentation
during apoptosis. Cell, 89（2）:175-184,
19976）Enari, M. et al. : A caspase-activated
DNase that degrades DNA during apoptosis, and its inhibitor ICAD. Nature,391（6662）: 43-50, 19987）Shiokawa, D. et al. : Molecular cloning
and expression of a cDNA encoding an
apoptotic endonuclease DNase C. Biochem. J., 332 : 713-720, 1998

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）21

活性型組換えカスパーゼ
カスパーゼは、通常プロカスパーゼとして細胞内に存在し、アポトーシス誘導因子のシグナルを受け取りプロセシングされ活性化されます。カスパーゼ-8 は Fas/FasL 系のカスパーゼカスケードの上流に位置し、細胞死のシグナルを伝える働きをし、カスパーゼ-3 は Fas/FasL 系、ミトコンドリア系で細胞死の実行段階を担っていると考えられています。
本品は、活性化されたカスパーゼであり、標的基質の活性化及び阻害剤のスクリーニングにご利用頂けます。

Caspase-3, Human, recombinant, Solution

Caspase-8, Human, recombinant, Solution

生化学用

生化学用

起

源：Human caspase-3 cDNA expressed in E.coli

起

源：Human caspase-8 cDNA expressed in E.coli

形状：50mmol/L HEPES 溶液（pH 7.4）の凍結品

形

状：20mmol/L TBS（pH 7.9）の凍結品

濃度：0.1mg/mL

活性：100units/FL

5Fg

039-17401

55,000 円

036-17411

3,000units

55,000 円

生理活性タンパク質測定 EIA キット（競合法）
Cytimmune Science Inc.

抗ガン剤にも検討されている血管新生阻害物質；エンドスタチンの測定にエンドスタチン EIA キット
適用サンプルタイプ：

キット内容：抗ヒトエンドスタチン , ウサギ抗体、エンドスタチン標準品、ビオチン結合エンドスタチン、ストレプトアビジン-ALP、抗ウサギ
抗体コート 96 穴マイクロプレート、アッセイ希釈液、血清希釈液、洗浄緩衝液、基質溶液 A&B、反応停止液、プレートシーラー、
現品説明書

血清、血漿、尿、培養上清など
感度：1.95ng/mL
測定範囲：1.95-500 ng/mL
測定時間：4 時間
コード No.

メーカーコード

品

524-33221

AC-215

Human Endostatin ACCUCYTE ELISA Kit

ソマトスタチン & サブスタンス P EIA キット

1-3 pg/well（/50FL sample）
測定範囲：0-10 ng/mL
測定時間：4.5 時間

22

容

量

96 回用

希望納入価格（円）123,000

ソマトスタチン産生腫瘍マーカーともなる成長ホルモン放出抑制因子；
ソマトスタチンの測定、多彩な生理活性を持つ知覚ニューロン伝達物質；
サブスタンス P の測定に

Peninsula Laboratories, Inc.

検出限界：

名

キット内容：一次抗体、標準品、ビオチン化ソマトスタチンまたはビオチン化
サブスタンス P、ストレプトアビジン-HRP、プロテイン A コート
96 穴マイクロプレート、アッセイ緩衝液、基質溶液（TMB）、反応停止液（2N HCl）、プレートシーラー、現品説明書

コード No.

メーカーコード

521-33231

EIAH-8001

Somatostatin High Sensitivity EIA Kit

96 回用

74,000528-33241

EIAH-7451

Substance P High Sensitivity EIA Kit

96 回用

74,000

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

品

名

容

量

希望納入価格（円）ロット間差が無く、正確なタンパク質定量に最適なスタンダード IgG
Protein Standard, IgG Solution（10mg/ml）
タンパク質定量用

Lowry 法や BCA 法等でタンパク質定量を行う場合の標準タンパク質としを定量する場合に用いる標準タンパクて最適です。

質です。高純度に精製し、またロット

溶, 30%グリセリン（pH 7.4）
溶液

関係数を確認していますので、ロット〔関連商品〕DC Protein 法でそれぞれ0.990 以上である事を確

状 : 5Fmol/L り ん 酸 緩 衝 液

毎に様々なタンパク質定量法を用い相間差がありません。正確なタンパク質

相関係数 : UV 吸 収 法、Lowry 法、
BCA 法、Bradford 法、

度 : ロット毎に実測値表示

濃

コード No.

品

163-18871

Protein Standard, BSA
Solution（10mg/mL）

名規認
160-18881

格タンパク質定量用

容

1mL × 5

量35,000 円

希望納入価格（円）5 × 1mL

27,000新規安定型ビタミン C
Ascorbic Acid 2-Glucoside

CH2OH

生化学用
本品は、ビタミン C の酸化還元反応に関与する部位を、グルコースの結合によりマスクした安定型ビタミン C で

H C OH

ため、酸化されない安定型ビタミ
ンC
ビタミン C とブドウ糖に分解されする実験に有効です。

るため、ビタミン C と同様の生理

H

O H

H

O

H

・細胞内では、内在する酵素によりす。組織培養等、ビタミン C を必要と

HO

CH2OH

OH

H

H

OH

O

HO

O

C6H7O5C6H11O6=338.27

作用を発揮
〔特 長〕

・水に可溶

・ビタミン C が酸化される部位にグ・従来のビタミン C に比べ、耐熱性、ルコースを結合しマスクしている

耐光性も向上074-04581

4,000 円1g
10g

070-04583

19,000 円

Vitamin D3 Receptor, Human, recombinant
生化学用
ビタミン D3 レセプターは、エストロ

〔分子量〕

25000

ゲンレセプターや甲状腺ホルモンレ

約 48kDa

20000

セプター等のステロイドレ セプター
15000

〔用

写調節因子として種々の生体反応に・ステロイド代謝関係の研究

関わっています。本品は、昆虫細胞に・医薬品等の代謝及び創薬研究5000感染させたバキュロウイルスより発現・エンドクリンの検出等の研究

0したビタミン D3 レセプターであり、ホ・神経伝達の研究

途〕

〔形

状〕

50% Glycerol, 500mmol/L KCl, 2
mmol/L DTT, 1mmol/L EDTA, 50
mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）

10000

0

1

2

3

4

5

[3H]1A, 25-Dihydroxyvitamin D3 (nM)

図 . [3H]1A, 25-Dihydroxyvitamin D3 に対するビタミン D3 レセプターの結合

ルモンの研究及び、医薬品開発他の研究に有用です。

cpm

ファミリーに属し、ホルモン依存性転〔参考文献〕
1）Sone, T. et al. : J. Biol. Chem., 265,
21997（1990）.
2）Ross, T. K. et al. : Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 88, 6555
（1991）.
3）Li, Z. et al. : Arch. Biochem. Biophys.,
310, 347（1994）.

548-00871

750 pmol

46,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

233
脳科学一口メモ◯脳内 NO と海馬長期増強現象（LTP）
北海道大学大学院

1949 年に刊行された "The Organization of Behavior" において、Hebb

医学研究科

情報薬理学講座

吉岡

充弘、森

清

を拡散して LTP 形成に作用していることが示されている 6）7）。こは、記憶は学習によって活性化されたのように NO は、CA1 領域にお神経間のより強固な結合によって貯蔵ける LTP 形成の逆行性神経伝されると提唱した 1）。しかしその仮説
達物質として着目されている。
が現実にシナプスの生理学的な現象
こ の LTP に 関 わ る NOS のとして捕らえられるまで 25 年を要した。 isoform に関してはいくつか議
1973 年に Blissらがウサギの海馬にお論 が あった が、最 近、神 経 型
NOS（nNOS）、血管内皮型 NOS
いて興奮性入力線維の高頻度刺激の後、シナプス伝達効率の長期的な増（eNOS）のノックアウトマウスの加を認めた 2）。この現象は長期増強現開発によってその議論も決着を象（long-term potentiation; LTP）とみそうである。nNOS、eNOS 単呼ばれ、現在までそのメカニズムを始
独 のノックア ウトマ ウ ス で は
LTP に変化は認められないもの
めとして多くの研究がなされてきた。
の、nNOS、eNOS のダブルノッ
さらに LTP が実際の記憶学習行動と関連性があるという報告も数多くなさ
クアウトマウスでは LTP の著明れている 3）。
な抑制が認められた 8）9）。このこ
一酸化窒素 nitric oxide（NO）は脳とから nNOS、eNOS とも に
LTP 形成に関わっていると考え 図 1. CA1 領域における LTP 形成の分子メカニズム
内で、生理学的、病態生理学的に重要
高頻度刺激によってシナプス後細胞にて、NOS がな役割を果たしていると考えられていられている。
活性化され NO の産生を引き起こす。産生されたNO は逆行性神経伝達物質として神経前終末に取りNO 合 成 酵 素（NO synthase;る。
シナプス前終末に取り込まれ込まれ guanylyl cyclase や cGMP 依存性蛋白 kinase を活性化し、興奮性神経伝達物質の遊離を促進
NOS）阻害薬により放射状迷路や水迷た NO は guanylyl cyclase
させる。
路などの記憶学習行動が障害される（GC）を介して cGMP を上昇さ
Glu ：グルタミン酸
ことから 4）、NO は記憶学習に重要なせる。 GC 阻害薬である ODQNOS ：一酸化窒素合成酵素
GC ：guanylyl cyclase
役割を果たしていることが推測される。 が CA1 領域における LTP を抑PKG ：cGMP 依存性蛋白 kinase
また NOS 阻害薬によって、CA1 領域
制し 10）、cGMP アナログである
8-Br-cGMP が LTP の形成を促
での LTP が 抑 制されることから 5）6）、
LTP 形成には、高頻度刺激により遊NO は LTP の形成においても神経伝進したことから 11）、CA1 領域におけるNOS
離されたグルタミン酸を介する
LTP の形成に cGMP が関与している
達様物質として作用していることが示
唆されている。
可能性が示唆された。さらに Son らは、 の活性化、それに引き続いて産生された NO が逆行性神経伝達物質として
CA1 領域における LTP の発現には、 NOS のノックアウトマウスでは ODQ
シナプス後細胞からシナプス前終末
シナプス後細胞におけるグルタミン酸
による LTP の抑制が認められなかっに取り込まれ、GC や PKG の活性化に受容体のサブタイプである NMDA 受たことを見出し 12）、LTP 形成におけるよって興奮性神経伝達物質の遊離をGC、cGMP の作用部位は NOS の下
容体の活性化が必要であり、LTP の維
長期的に制御していると考えられてい持にはシナプス前終末からの持続的流に存在することを証明した。
る。
また PKG は cyclic AMP responcGMP は cGMP-dependent proな興奮性神経伝達物質の遊離が関与
sive element binding protein（CREtein kinase（PKG）の活性化によってし ていると考えられ ている。つまりB）をはじめとする多くの蛋白をリン酸
LTP の形成にはシナプス後細胞からさまざまな効果を引き起こすと考えら
13）14）15）
化することで、シナプスの可塑れている。PKG の阻害薬、Rp-8-Brシナプス前終末への逆行性神経伝達
cGMPS や KT5823 が LTP を抑制し、 性をより強固なものにしていると考え
物 質が 存 在することが 示 唆される。
られるが、PKG のシナプス前終末でNO はシナプス後細胞で産生されるこ
PKG の活性化物質、8-pCPT-cGMP
11）の作用は多岐に渡っており、その大部と、NO 捕捉蛋白であり細胞膜を通過が LTP の形成を促進することから 、分が解明されていないのが現状であPKG が LTP 形成に関与していることできないヘモグロビンによって LTPる。
が抑制されたことから、NO は細胞間が示唆された。

24

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

〔参考文献〕
1）Hebb, D.O. : The Organization of
Behavior, Wily, New York（1949）
2）Bliss, T.V.P., and Gardner-Medwin,
A.R., : J. Physiol., 232, 331（1973）
3）Roman, F.S., Truchet, B., Marchetti, E.,
Chaillan, F.A. and Soumireu-Mourat, B.:
Progress in Neurobiol., 58, 61（1999）
4）山 田 清 文 : 日 本 薬 理 学 雑 誌、111、87（1988）
5）Bohne, G.A., Bon, C., Stutzmann, J.M.,
Doble, A. and Blanchard, J.C. : Eur. J.
Pharmacol., 199, 379（1991）
6）O' Dell, Hawkins, R.D., Kandel, E.R.,

and Arancio,O. : Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 88, 11285（1991）
7）Schuman, E.M. and Madison, D.V.：
Science, 254, 1503（1991）
8）O' Dell, Haung, P.L., Dawson, T.M.,
Dinerman, J.L., Snyder, S.H., Kandel,
E.R. and Fishman, M.C. : Science, 265,
542（1994）
9）Son, H., Hawkins R.D., Martin, K.,
Kiebler, M., Huang, P.L., Fishman, M.C.
and Kandel, E.R. : Cell, 87, 1015（1996）
10）Boulton, C.L., Southam, E. and Garthwaite, J. : Neuroscience, 69, 699（1995）
11）Zhou, M., Hu, Y., Schultz, C., Kandel,

E.R. and Hawkins, R.D. : Nature, 368,
635,（1994）
12）Son, H., Lu, Y. -F., Zhou, M., Arancio,O., Kandel, E.R. and Hawkins, R.D. :Learning and Memory, 5, 231（1998）
13）Peunova, N. and Enlkolopov, G., :Nature, 364, 450（1995）
14）Haby, C., Lisovoski, F., Aunis, D. and
Zwiller, J. : J. Neurochem., 62, 496（1996）
15）Fyske, E.M., Li, C. and Sudhof, T.C. : J.
Neurosci., 15, 2385（1995）

NO による立体構造変化を認識できる sGC 抗体
免疫化学用

SNAP 添加後のプルキンエ細胞における sGC の免疫蛍
光強度の変化血管内皮由来弛緩因子（EDRF）の本体である事が見出された NO（nitric（A）oxide）の生理作用は多様多岐に渡る事が知られています。その作用標的分子として知られている sGC（可溶性グ
アニル酸シクラーゼ）は、NO が sGCのヘムに結合すると立体構造が変わり、酵素活性が 100 倍以上に増強され、

cGMP の合成を促進します。その結果生じた cGMP が、血管系では血管弛
緩をもたらし、神経系では逆行性の神
経情報を伝達し、また脳虚血時の神経細胞死を引き起こすことが示唆されています。このように、NO により活性化され、cGMP の産生を促進する sGCの局在及び作用機序を知ることは生
理機能や疾患の病因の解明に必須であると考えられます。

mAB3221 抗体は、NO により活性化された sGC を強く認識するものであり、NO 研究伸展の手段としてご利用下さい。また、mAB28131 抗体は NO
による sGC の立体構造変化を認識しないため、NO 活性化のネガティブコ
ントロールとして使用できます。

〔参考文献〕
1）Tsuyama, S. et al., : FEBS Lett., 455,
291（1999）.
2）Suemastu, et al., in preparation.

（C）

SNAP(10Fmol/L) を各時間反応させた後、細胞をホルムアルデヒ（B） ドで固定した。一次抗体として抗sGC モノクローナル抗体を反応させ、ローダミン標識二次抗体で処理した。グラフの X 軸は細胞の縁からの距離を、Y 軸は蛍光強度を示す。
（A）0min（B）15min （C）30min（D) 60min（D）Anti-soluble Guanylate Cyclase (sGC), Monoclonal Antibody
免疫原 : ウシ肺由来の精製 sGC
形 状 : 0.1mol/L Glycine-Tris (pH7.4)
濃 度 : 500Fg/mL
精製法 : 硫安分画及びプロテイン A
アフィニティクロマトグラ
フィにて精製クローン : mAB3221
サブクラス : IgG1
特異性 : sGC と特異的に反応するだけでなく、NO による sGCの立体構造変化により抗原抗体反応が増強する。sGCの A と B サブユニットの両方を認識する。膜結合型のGC とは反応しない。
種交叉反応性 :ラット、ウシ、ヒトと反応する。
実用希釈倍数 :1 : 5,000
ウエスタンブロット（ALP による検出）
1 : 250
蛍光抗体法
019-17801

20Fg

30,000 円

Anti-soluble Guanylate Cyclase（sGC）, Monoclonal Antibody（NO insensitive）
免疫原 : ウシ肺由来の精製 sGC
形 状 : 0.1mol/L Glycine-Tris (pH7.4)
濃 度 : 500Fg/mL
精製法 : 硫安分画及びプロテイン A
アフィニティクロマトグラ
フィにて精製クローン : mAB28131
サブクラス : IgG1
特異性 : sGC B サブユニットと特異的に反応し、膜結合型の GCとは反応しない。NO による
sGC の立体構造変化により抗原抗体反応が増強しない。
種交叉反応性 :ラット、ウシ、ヒトと反応する。
実用希釈倍数 :1 : 5,000
ウエスタンブロット
1 : 250蛍光抗体法
20Fg017-18201
30,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）25

遺伝子発現モニタリングシステム
GTMASS SYSTEM− Gene Tip Micro Array Stamping & Scanner −日本レーザ電子株式会社の DNA マイクロアレイ作成装置及びスキャナーの販売を開始しました。
〔特 長〕Gene Tip Stamping
PCR プ レ ー ト（96well ま た は
384well）から直接あるいは MTP〔Stamping 例〕

プレートから、スライドグラスまたはメンブレン上に Stamping
スライドガラスへの Stamping 数
720 〜 43,200Spots
Stamping 分注量 0.2 〜 5.0 nL

Gene Tip Scanner
高エネルギーレーザ光による蛍光物質励起2 光電子増倍管（PMT）による高感度検出
2 蛍光同時取込み
最大 3 蛍光まで可能

900（30 × 30）Spots

スポットの拡大

コード No.

メーカーコード

302-07471

NL-GTMASS-STⅡGTMASS SYSTEM/Stamping

品

名

包

305-07461

NL-GTMASS-SCGTMASS SYSTEM/Scanner

装

1台
1台

表面プラズモン共鳴バイオセンサ
SPR670SPR-CELLIASPR670 は、表面プラズ モン共鳴
（Surface Plasmon Resonance）現 象を応用し、共鳴角度変化をリアルタイ
ムでとらえることにより、ノンラベルで生体分子間の反応・結合量の測定及び速度論的解析ができる装置です。
SPR-CELLIA は、さらに細胞・菌体用の太径流路を装備したタイプで、生細胞レセプターアッセイ、生細胞のリ
アルタイム誘導率モニター、レセプ
ターの種別による細胞分集が可能です。
〔SPR670 と SPR-CELLIA の 共 通
な特長〕
分子間の相互作用をラベリングなしで測定可能反応の強度、速度、解離の状態をリ
アルタイムにモニタリング
反応の速度定数、解離定数の算出が可能
有機溶媒も使用可能（疎水性サン
プルの測定が可能）

26

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

濃度のキャリブレーション（検量線の作成）も可能
リファレンスを同時にモニタリン
グし、真の反応量を検出することが可能（差動センサシステム）
分子配列の整った固定化膜を用いるため、優れた感度、再現性
温度を 4 〜 95℃まで可変可能（バッ
チタイプ以外は標準装備）
ワイドレンジ（共鳴角 50°幅）であるため、多種の溶媒が使用可能
オートサンプラーをオプション装
備可能〔SPR-CELLIA の特長〕
太径と細径の流路を測定中に切り替え可能
サンプル回収用バルブを標 準 装 備
コード No.
307-07541
308-07191
304-07551
303-07141
301-07201
301-07681

メーカーコードNL-SPR670-Y
NL-SPR670-E
NL-SPR670-ES
NL-SPRNL-SPR670-PC
NL-UV253

SPR-CELLIA〔アプリケーション〕
生細胞固定化によるレセプター・
リガンドアッセイ・生細胞のリア
ルタイム誘電率変化モニター
ハイブリダイゼーション
免疫応答
生体膜を利用した新薬評価
低分子化合物のバインディング
アッセイ
環境ホルモンの測定
カイネテックス、アフィニティー
の測定・解析

品
名
包 装
1台
SPR670 ／標準タイプ Y
1台
SPR670 ／バッチタイプ E
SPR670 ／バッチタイプ ES（2 チャネル簡易フロー付） 1 台
1台
SPR-CELLIA
1台
コンピュータシステム
1台
UV オゾンクリーナ

Alexa Fluor 標識
抗体及び関連試薬
Alexa Fluor 標識二次抗体

Alexa Fluor 350 goat anti-mouse IgG

Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgG

蛍光強度が強く、光安定性が良い Alexa Fluor 蛍光色素で標識した抗 IgG 抗体です。蛍光顕微鏡や共焦点レーザー顕微鏡での Alexa Fluor 標識二次抗体は理想的な標識抗体です。蛍光色は青から赤まで 7 種類あります。Alexa Fluor 蛍光色
素は水溶性なため、FITC と比べてバックグランドは低くなります。
Molecular Probes 社のホームページ（http://www.probes.com）でメーカーコードから製品のデータシートを入手できます。
免疫Antibody
Anti-mouse IgG
Adsorbed against human IgG and serum.

Goat

Anti-mouse IgG F（ab'）
2
Adsorbed against human IgG and serum.

Goat

Anti-mouse IgG（highly cross-adsorbed）
Adsorbed against bovine, human, goat, rabbit and rat
IgG, and human serum.

Goat

Anti-mouse IgG
Adsorbed against human serum proteins.

RabbitAnti-rabbit IgG
Adsorbed against human IgG and serum, mouse IgG Goatand serum and bovine serum.
Anti-rabbit IgG F（ab'）
2
Adsorbed against human serum.

Goat

Anti-rabbit IgG（highly cross-adsorbed）
Adsorbed against human, mouse, bovine, goat and
rat IgG, and human, mouse and bovine sera.
Anti-guinea pig IgG（highly cross-adsorbed）
Adsorbed against bovine, chicken, goat, hamster,
human, mouse, rabbit, rat and sheep sera.

Goat

Goat

Anti-goat IgG
DonkeyAdsorbed against rabbit, mouse, rat and human IgG.
Anti-goat IgG
Adsorbed against human and rat serum proteins.

RabbitAnti-rat IgG
Adsorbed against mouse IgG and serum.

Goat

Anti-human IgG
Adsorbed against mouse, rabbit and bovine sera.

Goat

Anti-sheep IgG
Adsorbed against mouse, rabbit and bovine sera.

DonkeyAnti-chicken IgG

Goat

和光コード No.
メーカーコード
希望納入価格（円）Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 430 Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 532 Alexa Fluor 546 Alexa Fluor 568 Alexa Fluor 594
Abs/EmAbs/EmAbs/EmAbs/EmAbs/EmAbs/EmAbs/Em346/442431/541495/519531/554556/573578/603590/617529-44401 527-44441 539-82041 521-44461 537-81981 525-44481 536-81691
0.5mL
A-11045
A-11063
A-11001
A-11002
A-11003
A-11004
A-11005
29,10029,10029,10029,10029,10029,10029,100526-44411
534-81991
531-82001 522-44491 529-32291
A-11068
A-11017
A-11018
A-11019
A-11020250FL
21,70021,70021,70021,70021,700530-81971
533-81961 525-44501 529-44261
A-11029
A-11030
A-11031
A-110320.5mL
36,80036,80036,80036,800528-32261
525-44361 522-44511 521-32251
0.5mL
A-11059
A-11060
A-11061
A-11062
29,10029,10029,10029,100523-44421 524-44451 532-81671 528-44471 535-82021 529-44521 525-32271
0.5mL
A-11046
A-11064
A-11008
A-11009
A-11010A-11011
A-11012
29,10029,10029,10029,10029,10029,10029,100520-44431
528-44231
522-44371
526-44271
250FL
A-11069
A-11070
A-11071
A-11072
21,70021,70021,70021,700536-81951
539-81941 526-44531 523-44281
0.5mL
A-11034
A-11035
A-11036
A-11037
36,80036,80036,80036,800525-44241
529-44381 523-44541 520-44291
0.5mL
A-11073
A-11074
A-11075
A-11076
36,80036,80036,80036,800521-32871
526-44391 520-44551 523-44301
0.5mL
A-11055
A-11056
A-11057
A-11058
34,00034,00034,00034,000522-44251
527-44561 520-44311
0.5mL
A-11078
A-11079
A-11080
29,10029,10029,100538-82011524-44571 527-44321
0.5mL
A-11006
A-11077
A-11007
29,10029,10029,100532-82031
524-44331
0.5mL
A-11013
A-11014
29,10029,100522-32281
521-44341
0.5mL
A-11015
A-11016
29,10029,100532-81931
535-81921 521-44581 528-44351
0.5mL
A-11039
A-11040
A-11041
A-11042
29,10029,10029,10029,100容動物

Alexa Fluor 594 goat anti-mouse IgG

量Alexa Fluor Protein Labeling Kits
Alexa Fluor succinimidyl ester で簡単にタンパク質を標識するキットです。
Protein Labeling Kit

Abs

Em

メーカーコード

Alexa Fluor 350

346

442

A-10170

Alexa Fluor 430

434

540

A-10171

Alexa Fluor 488

495

519

A-10235

Alexa Fluor 532

531

554

A-10236

Alexa Fluor 546

556

573

A-10237

Alexa Fluor 568

578

603

A-10238

Alexa Fluor 594

590

617

A-10239

容

量

1 キット
1 キット
1 キット
1 キット
1 キット
1 キット
1 キット

希望納入価格（円）45,30045,30065,20065,20065,20065,20065,200Alexa Fluor Cytoskeleton
Probes
量

Alexa
Alexa
Alexa
Fluor 488 Fluor 568 Fluor 594

Phalloidin 300units

A-12379 A-12380 A-12381
70,900 70,900 70,900

標

識

容

DNase I

5mg

D-12371
48,200

actin

20Fg

A-12373 A-12374
35,400 35,400

D-12372
48,200Approximate absorption（Abs）and fluorescence emission（Em）maxima of protein conjugates, in nm.
和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）27

ペルオキシダ
ペルオキシダ- ゼ発色基質
ゼ発色基質

OPD 錠、DAB 錠 品揃え拡充 !
ご好評頂いております POD（ペルオキシダーゼ）の発色基質である OPD（o-Phenylenediamine・2HCl）と DAB（3,3' Diaminobenzidine・4HCl）の錠剤の種類が増えました。
〔特 長〕●溶解が速い緩衝液または水に約 1 分で発泡しながら溶解します。
●取出し易いPTP 包装のため、ワンタッチで取出せます。
●長期保存が可能
使用期間 2 年間●取扱い易い微量秤取や発がん性により粉末では取扱い難い OPD・2HCl や DAB・4HCl
を錠剤にすることにより取扱い易くしました。

PTP 包装された OPD 2mg/ 錠

OPD 錠
〔規

格〕

〔使用例〕

2mg/ 錠5mg/ 錠10mg/ 錠13mg/ 錠30mg/ 錠

一錠重量63 ± 6.3mg
63 ± 6.3mg
63 ± 6.3mg
63 ± 3mg
63 ± 6.3mg

含 量
2.0 ± 0.2mg
5.0 ± 0.5mg
10 ± 1.0mg
13 ± 1mg
30 ± 3.0mg< 基質緩衝液の調製 > 至適濃度は個々の試験条件により選定下さい。
錠 剤
2mg/ 錠× 1 錠
5mg/ 錠× 1 錠
10mg/ 錠× 1 錠
13mg/ 錠× 1 錠
30mg/ 錠× 1 錠

緩衝液

30% H2O 25mL
12.5mL
25mL
50mL
75mL

2FL
5FL
10FL
15FL
30FL

※ 緩衝液： 0.1M りん酸ナトリウム緩衝液（pH 5.0）

0.05M りん酸くえん酸緩衝液（pH 5.0）等

DAB 錠
〔規

格〕

〔使用例〕

5mg/ 錠10mg/ 錠

一錠重量80 ± 8.0mg
80 ± 4mg

含 量
5.0 ± 0.5mg
10 ± 1mg< 発色反応液の調製 > 至適濃度は個々の試験条件により選定下さい。
錠 剤
5mg/ 錠× 1 錠
10mg/ 錠× 1 錠

緩衝液

30% H2O 2

25mL
50mL

5FL
10FL

※ 緩衝液： 0.05M トリス- 塩酸緩衝液（pH 7.6）
208-14691
206-14697

NEW
NEW
NEW
NEW
NEW
NEW

NEW
NEW
NEW
NEW

コード No.
151-02141
157-02143
158-02151
154-02153
155-02161
151-02163
158-01671
154-01673
152-01674
152-02171
158-02173
040-27001
046-27003
049-22831
045-22833

品

名

規

格

OPD 2mg/ 錠

生化学用

OPD 5mg/ 錠

生化学用

OPD 10mg/ 錠

生化学用

OPD 13mg/ 錠

生化学用

OPD 30mg/ 錠

生化学用

DAB 5mg/ 錠

生化学用

DAB 10mg/ 錠

生化学用※上記錠剤価格は 11 月 1 日適用価格となっております。

28

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

容

量

50T
100T
50T
100T
50T
100T
50T
100T
2,000T
50T
100T
50T
100T
50T
100T

希望納入価格（円）
5,500
9,000
5,600
9,200
5,600
9,200
6,000
9,800
130,000
6,000
9,800
9,000
16,0009,500
16,500

1L
20L

4,000 円
14,000 円

静置したまま発泡溶解しますRibonuclease Mix Solution
遺伝子研究用Ribonuclease A（ウシ 膵 臓 製）とRibonuclease T1（Aspergillus oryzae

形,
状：10mmol/L HEPES（pH 7.2）

活性
（濃度）：

20mmol/L NaCl, 0.1%
Triton X-100, 1mmol/L
EDTA, 50% グ リセ ロ ー ル（v/v）

由来の遺伝子を大腸菌にて発現させた組換え体）の混合溶液です。制限酵
素処理前または処理時の RNA 処理に有用です。

Ribonuclease A
500 units/mL 以上
Ribonuclease T1
20,000 units/mL 以上
貯 法：−20℃
549-00921

1mL

8,500 円Deoxyribonuclease Ⅰ
遺伝子研究用1 本鎖及び 2 本鎖の DNA を同程度にランダムに分解し、5' -P 末端を持つオリゴヌクレオチドを生成させるエンドヌクレアー
ゼです。Mg 存在下では 2 本鎖にランダムにニックを入れるが、Mn 存在下では 2 本鎖の同時切断が起こり DNA を断片化させます。

Deoxyribonuclease Ⅰ, Bovine Pancreas

Deoxyribonuclease Ⅰ, Bovine Pancreas
Precrystalline起

源：ウシ膵臓製起

源：ウシ膵臓製形

状：凍結乾燥品

形

状：凍結乾燥品

活性：2,000 units/vial 以上

活性：1,400 units/mg 以上

単位の定義：DNA を基質として、pH 5.0、25℃ において、
反 応 液の 260nm における吸 光 度を 1 分 間に0.001 増加させる酵素量を 1unit とする。
044-26781
040-26783

2,000 units
2,000 units × 5

単位の定義：DNA を基質として、pH 5.0、25℃ において、
反 応 液の 260nm における吸 光 度を 1 分 間に0.001 増加させる酵素量を 1unit とする。

4,400 円047-26771

11,000 円

043-26773

新規エキソヌクレアーゼ

9,000 円

25mg
100mg

19,000 円

Exonuclease Ⅸ, recombinant

Chlorophenol Red-B - D - galactopyranoside Sodium Salt

遺伝子研究用

生化学用

本酵素は、1 本鎖 DNA において、3' -5' エキソヌクレアーゼ活性を持つと同時に 3' -incised apurinic/apyrimidinic（AP）site を含む DNA 上で 3' -Phosphodiesterase 活 性 を 持 ち ま す。ま た、5' -incised AP site 上 で は、Deoxyribophosphodiesterase 活性を示さない性質を持ちます。
起

源：Escherichia coli より単離したエキソヌクレアーゼⅨ遺伝子をプラスミドに組込み
Escherichia coli JM 109 中で発現
比活性：2,000 units/mg 以上
活性の定義：熱変性 DNA を基質として、37℃、30 分間に、1nmolの酸可溶性核酸を遊離させる酵素量を 1unit とする。
形 状：50mmol/L Tris-HCl,

1mmol/L DTT, 1mmol/L
Na2EDTA, 250mmol/L
NaCl, 50% グ リ セ ロ ー ル ,（pH 7.6）
貯 法：−20℃〔参考文献〕

B-ガラクトシダーゼ用の赤色基質
です。
〔規

格〕

Assay（HPLC） …………min. 99.0%
Solubility in water ………to pass test

OH
SO3Na
HO

O

HO

1）Shafritz, K. M., Sandigursky, M. andFranklin, W. A. : Nucleic Acids Res.,

O
OH

O
Cl

Cl

C25H21Cl2O10S・Na=607.39

26, 2593（1998）.

035-17501
546-00931

5,000 units

照会031-17503

100mg
500mg

6,500 円
26,000 円

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）29

ハイブリダイゼーション用 DNA Solution
Deoxyribonucleic Acid Solution, from Calf Thymus（Phenol-Chloroform extracted）
Deoxyribonucleic Acid Solution, from Salmon Sperm（Phenol-Chloroform extracted）
Deoxyribonucleic Acid Solution, from Herring Sperm（Phenol-Chloroform extracted）
遺伝子研究用形

状：DEPC 処理済み、蒸留水

ン 精子由来の DNA を高純度のフェ濃度：10mg/mL

ノール- クロロホルムで抽出し、超音DNA サイズ：平均 2,000bp 以下
貯 法：−20℃

本品は、ウシ胸腺・サケ精子・ニシゼーション用に有効です。

波処理を行った物です。ハイブリダイ
コード No.
047-27511
043-27513
041-27531
047-27533
044-27521
040-27523

品
名
10mg/mL Deoxyribonucleic Acid Solution, from Calf Thymus（Phenol-Chloroform extracted）
10mg/mL Deoxyribonucleic Acid Solution, from Salmon Sperm（Phenol-Chloroform extracted）
10mg/mL Deoxyribonucleic Acid Solution, from Herring Sperm（Phenol-Chloroform extracted）

容

量

1mL
1mL × 5 本
1mL
1mL × 5 本
1mL
1mL × 5 本

希望納入価格（円）7,500
25,0004,500
13,0004,500
13,000Deoxyribonucleic Acid Solution, from Salmon Testes（Heat Denaturation）
遺伝子研究用
本品は、サケ精巣を破砕処理により抽出した DNA を、熱変性させ 1 本鎖使用前に、本品を簡単に煮沸し、直ちに冷蔵してから使用下さい。

DNA サイズ：200bp~1,000bp
貯 法：−20℃にした物です。ハイブリダイゼーショ
ン用に有効です。
保存中に生じる巻き戻しを直すため、形

状：0.1M NaCl 溶液

濃度：5mg/mL049-27191

10mL

照

会

転写開始点、プロモーター、翻訳開始点などの決定にカスタム CapSiteTM Hunting
ニッポンジーンでは、真核生物 mRNA の 5' 末端に特長的に存在するキャップ構造を、合成オリゴリボヌクレオチドで置換した後、ランダムプライマーを用いて、逆転写反応を行って得た第一鎖 cDNA ライブラリーを、Cap Site cDNAR として製品化しています。Cap Site cDNAR はこれを鋳型として PCR を行うことによって、高い効率で転写開始点を含む領域を得ることができます。この方法によって転写開始点を決定することを CapSiteTM Huntingと呼びます。カスタム CapSiteTM Technology
では、お客様のご要望に応じて、次のような受託サービスを行います。

1. カスタム Cap Site cDNAR 合成+
RNA から Cap Site cDNAR を作製します（納期 約 1 カ月）。
ご提供された total RNA、あるいは poly（A）
2. カスタム CapSiteTM Hunting（1）お客様よりご提供いただいた RNA より Cap Site
cDNAR を合成し、ご開示いただいた配列情報をもと に 合 成 し た プ ラ イ マ ー を 用 い て、CapSiteTM
Hunting を行います（納期 約 1 カ月）。

（2）ニッポンジーン保有の Cap Site cDNAR を鋳型として、ご開示いただいた配列情報をもとに合成したプライマーを用いて、CapSiteTM Hunting を行います（納期

約 2 週間）。

転写開始点、プロモーター、翻訳開始点などの決定に取組んでおられる研究者は、是非お問合わせ下さい。事前調査
票にご記入の上、ご送付いただければお見積します。

30

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

優れた吸水力 !
ラボシート

TM

動物実験や解剖時にでる血液や体液などを吸収させるシートで、実験動物の下敷きや摘出した組識の処理台など多目的にご利用頂けます。

〔シート構造〕

30cm × 40cm の大きさで、高吸水

不織布性ポリマーを吸着させた特殊シート
をさらに不織布（表側）、ポリエチレ
ンフィルム（裏側）で挟み周囲全体をヒートシール加工しています。

吸水紙
吸水性樹脂
＋パルプ
ブレンド物
吸水紙
PEフィルム〔特長〕●高い吸水能力 : シート 1 枚（30cm × 40cm）
あたり約 800mL の水を吸収します。
＊対象が血液や体液の場合は吸収能力は多少低下します＊●吸水後もシートが水分を保持しますので液体が広がらず実験台を汚しません。シートの裏面はポリエチレンフィルムになっており、清潔・安全です。

〔使用後の処理〕＊水を吸水させたもの
普通ゴミとして焼却して下さい。
＊実験動物の血液・体液等を吸収させたもの●シート表面の毛羽立ち・発塵の心配はありません。
●適度の厚さがありますのでガラス製実験器具などの下敷きにも使用できま

各大学・研究施設の処理方法に従って下さい。

す。
コード No.
121-04701
127-04703

品

名LabsheetTM

規格

実験動物体廃液吸収用

容

量

10 枚
10 枚× 10 袋

希望納入価格（円）1,900
15,000＋RNA
マウス poly（A）

Custom Northern Blotting Membrane＋
RNA を、
カスタムノーザンブロッティングメンブレンは、マウス（BALB/c, 8 週齢）各組織より抽出した高純度の poly（A）

変性アガロースゲルで電気泳動し、陽性荷電ナイロンメンブレンにキャピラリー法でトランスファーしたものです。ノーザンハ
イブリダイゼーション用で、全 10 種類（Brain,Cerebellum, Cerebrum, Heart, Kidney, Liver, Lung, Spleen, Thymus, Testis）＋
RNA を最大で 10 レーン分まで選ぶことができます（同一種類複数可）。同時に泳動しているからご希望の組織の poly（A）

RNA marker のバンドの位置とマウス Liver 由来の total RNA の 18S と 28S rRNA の位置は、マーカーで印してあるためサイズ検討が容易に行えます。
〔内 容〕
・Northern Blotting Membrane 1 枚
poly（A）＋ RNA
2Fg/ レーン
RNA marker （0.2, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 10 kbase）
total RNA （Liver 由来）
5Fg
・コントロールプローブ調製用プラスミド（マウス B-actin）15FL（3Fg）（凍結乾燥品）
・マニュアル

007-04030 3 レーンまで 102,000 円＊ 1 レーン増えるごとに 12,000 円加算されます（最大 7 レーンまで追加できます）。

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）31

アクチン脱重合物質
アクチン脱重合物質 サイトカラシン
サイトカラシンは、よく知られたアク〔規格〕

チン重合阻害剤で、F- アクチンに結Cytochalasin B

Cytochalasin D

合して、G- アクチンが結合するのを起源 : Drechslera dematoidea

起源 : Zygosporium mansonii阻害するキャッピング機能により F- ア

含量（HPLC）: 98% 以上

含量（TLC）: 95% 以上

クチンの脱重合を促進します。その結OO果、核分裂のみを進行させ、細胞質分

H

H

H

H

裂を阻害します。細胞運動、白血球食O作用、血小板凝集などが阻害されます。

N

N

O

OCCH3
O

O

O

O

C29H37NO5=479.61
コード No.
030-17551
036-17553
034-17554
037-17561
033-17563

品O

O

C30H37NO6=507.62

名

規

格

Cytochalasin B

生化学用

Cytochalasin D

生化学用

容

量

希望納入価格（円）4,300
12,00023,00010,00062,000

1mg
5mg
10mg
1mg
10mg

海洋生物生理活性物質
Okadaic Acid Ammonium Salt
生化学用

CH3

オカダ酸はクロイソカイメン（Hali-

OH

chondria okadai）より単離された下痢

OH3C性貝毒の原因物質です。生理活性作

O

O
OH

OH

NH4+

用としてプロテインホスファターゼ 1〔参考文献〕

CH33）Ozaki, H. et al. : J. Pharmacol Exp.
Ther., 243, 1167
（1987）.

1）Tachibana, K. et al. : J. Am. Chem.
Soc., 103, 2469（1981）.
2）Suganuma, M. et al. : Proc. Natl.
Acad. Sci. USA., 85, 1768
（1988）.

での平滑筋の収縮などの生理活性作用が報告されています。本品はアンモ156-02211

100Fg
500Fg

152-02213

20,000 円
75,000 円〔関連商品〕

が容易です。
〔規

CH3

O
OH

ロモーター活性、カルシウム除去液中

ニウム塩のため、水に溶け易く取扱いOO

C44H67O13.・NH4=822.04

及び 2A の特異的な阻害剤として有名です。その他にも non-TPA タイププ

CH2H3COO格〕

水溶状：試験適合

コード No.
150-01653
154-01651
032-14451
161-15131
206-11071
131-10471

品

名

規

格

Okadaic Acid

生化学用

Calyculin A
Palytoxin
Tetrodotoxin
Manoalide

生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

25Fg
100Fg
100Fg
100Fg
1mg
1mg

希望納入価格（円）10,50030,00030,00030,00021,00030,000Coenzyme A 脂肪族誘導体
アセチルコエンザイム A のナトリウ

ンザイム A は、多くの生物にとって最アセチルコエンザイム A カルボキシム塩を新発売しました。アセチルコエ

も重要な代謝中間体であり、アセチルラーゼを阻害し、脂肪酸合成に必要なンザイム A は、コエンザイム A の SH

コリン、アセチルグルコサミンの生成、マロニルコエンザイム A の合成を抑基にアセチル基が高エネルギー結合

脂肪酸の生合成、くえん酸の生成など制します。

しており、アセチル基転移反応の基質

種々の反応に関与しています。

として働く補酵素です。アセチルコエ

32

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

S- パルミトイルコエンザイム A は、〔右へ続く〕

マイクロプレートリーダーを用い多検体測定に有効
O −2・による還元反応を利用した簡易キット
SOD Activity Detection Kit（NBT 還元法）
スーパーオキシドジスムターゼ（SOD）
は、活性酸素の 1 つであるスーパーオキシドアニオン（O −2・）を基質として、2O −2・+
2H+ → H2O2 + O2 の反応を触媒する酵素として 1969 年に Fridovich らにより発見されました。現在までに分離された SOD
は、その分子中に含まれる金属によって 3 種類に分けられています。
最近、皮膚の老化の促進や、がん化の原因として活性酸素の関与を示唆する結果が多く報告され、この活性酸素消去剤でが、化粧品の原料や食品の開発等で注目されています。
ある SOD 活性を持つ物質（抗酸化物）
SOD 活性の測定法としては、チトクローム C 還元法、亜硝酸法、テトラゾリウム塩還元法等の化学的測定法がありますが、
操作性及び試薬の安定性等に問題がありました。
本品は、O −2・の検出剤として、NO2-TB（ニトロブルーテトラゾリウム）
を用い、O −2・の生成反応（キサンチン・キサンチンオ−
キシダーゼ）と SOD による不均化反応とを共役させ、O 2・による還元呈色が低下する程度を阻害率として求める簡便な SOD
活性測定キットです。
〔操作法〕

2本
2本
2本
1本
1本

96 穴プレート
│
│
│
│
│
│
▼

サンプル（10FL / well）

│
│
│
│
│
│
│
│
│
│
▼

発色試液（100FL / well）

プレートミキサー 1 min 攪拌
│
│
│
│
│
│
▼

酵素液またはブランク液（100FL / well）

│
│
│
│
│
│
│
│
│
│
▼

100mL
50mL 用
50mL
100mL
40mL

│
│
│
│
│
│
│
│
│
│
▼

〔内 容〕
発色試液
酵素原液
酵素希釈液
ブランク液
反応停止液

プレートミキサー 1 min 攪拌〔参考文献〕│▼

インキュベーター 37℃ 28 min
│
反応停止液
│
│
│
（20FL / well）
│
│
│
│
│
│
│
│
│
│
│
▼

1）花田寿郎 , 茂手木皓喜 : 臨床検査機器 , 試薬 , 8, 629（1985）.
2）McCord, J. M. and Fridovich, L. : J. Biol. Chem., 244, 6049
（1969）.
3）Masaki, H. : FRAGRANCE JOURNAL, 8, 65（1995）.

│▼

プレートミキサー 5 min 攪拌│▼

マイクロプレートリーダー （560 nm）
コード No.
295-55701

品
名SOD Activity Detection Kit

規 格
生化学用

800 回用

容

量

規 格
生化学用
生化学用

4,500 units
35,000 units

希望納入価格（円）23,000〔関連商品〕
コード No.
192-11281
190-08771

品
名
スーパーオキシドジスムターゼ , ヒト , 組換え体
スーパーオキシドジスムターゼ , 牛赤血球製

容量

希望納入価格（円）
4,500
7,300

＊プレートリーダーについては、TECAN 社の商品を取扱っておりますので資料をご請求下さい。

S -Palmitoyl Coenzyme A
Potassium Salt

Acetyl Coenzyme A Sodium Salt
生化学用

生化学用

形 状：凍結乾燥品
緩衝液溶状：試験適合含量（吸光度）：80% 以上〔関連商品〕

コード No.
018-10811
014-10813
035-14061
031-14063
039-14064

015-17381
011-17383
019-17384
品

10mg
25mg
100mg
名

8,000 円
16,000 円
52,000 円
規

形 状：凍結乾燥品
緩衝液溶状：試験適合10mg162-18841
格

Acetyl Coenzyme A Trilithium Salt

生化学用

Coenzyme A Trisodium Salt

生化学用

容

量

10mg
100mg
25mg
100mg
500mg

22,000 円

希望納入価格（円）6,800
40,0002,600
7,500
20,400

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）33

ラットケモカイン ELISA キット
Rat CINC-1 ELISA Kit wako〔性 能〕
（1）感度 標準曲線範囲して働き、種々の炎症性疾患に関与すると考えられています。

（2）ラット CINC-1 標準品（1,600pg/mL）（3）サンプル希釈液（4）HRP 標識抗体（5）発色液（TMBz）（6）基質液（7）洗浄液（10 ×）（8）反応停止液

96 回用

2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
0

〔キット内容〕（1）抗体固定化マイクロプレート

297-55401

12.5-800pg/mL

2.5

AbsorbanceC I NC-1 測定用
CINC（Cytokine-induced neutrophil chemoattractant）
は、IL-1 などで刺激されたラット腎上皮細胞や正常ラット上皮細胞株 NRK-52E から産生される CXC ケモカインです。
IL-8 ファミリーに属す CINC は、好中球からの走化性因子と

1枚
2mL 用
40mL
12mL 用
0.5mL
20mL
40mL
15mL

200

400

600

800

Rat CINC-1（pg/mL）（2）交叉反応性
ラ ッ ト CINC-2A、CINC-2B 及 び MIP-2 と の 交 差 反
応性は 0.002% 未満です。
（3）添加回収
4 倍希釈

8 倍希釈

ヘパリン加血漿EDTA 加血漿
くえん酸ナトリウム加血漿
血清90 〜 113%
98 〜 115%
83 〜 99%
92 〜 125%

103 〜 117%
99 〜 142%
75 〜 97%
94 〜 103%

10%FCS 含有 DMEM 培養上清

99 〜 114%

80,000 円

原

液

2 倍希釈

99 〜 100%

Rat MIP-2 ELISA Kit wako〔性 能〕
（1）感度 標準曲線範囲

子として働き、種々の炎症性疾患に関与すると考えられてい
ます。

1枚
2mL 用
40mL
12mL 用
0.5mL
20mL
40mL
15mL

（2）ラット MIP-2 標準品（800pg/mL）（3）サンプル希釈液（4）HRP 標識抗体（5）発色液（TMBz）（6）基質液（7）洗浄液（10 ×）（8）反応停止液

96 回用

1.5
1.0
0.5
0.0
0

〔キット内容〕（1）抗体固定化マイクロプレート

293-55501

6.25-400pg/mL

2.0

AbsorbanceM I P-2 測定用MIP-2（Macrophage inflammatory protein-2）は、73 ア
ミノ酸からなる分子量 7,900 の CXC ケモカインです。IL-8
ファミリーに属し、CINC-3（Cytokine-induced neutrophil
chemoattractant-3）とも呼ばれており、好中球の走化性因

100

200

300

400

Rat MIP-2（pg/mL）（2）交叉反応性
ラット CINC-1、CINC-2A、CINC-2B との交差反応性は 0.001% 未満です。
（3）添加回収ヘパリン加血漿EDTA 加血漿
くえん酸ナトリウム加血漿
血清

4 倍希釈
64 〜 77%
85 〜 111%
67 〜 91%
74 〜 86%

10%FCS 含有 DMEM 培養上清

111 〜 114%

8 倍希釈
82 〜 93%
88 〜 99%
95 〜 96%
88 〜 94%

75,000 円
原

液

2 倍希釈

95 〜 100%〔関連商品〕
コード No.
297-53701
291-54201
293-53801
299-53901

34

品 名
Rat IL-1B ELISA Kit wako
Rat IL-2 ELISA Kit wako
Rat IL-4 ELISA Kit wako
Rat IL-6 ELISA Kit wako

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

包

装

96 回用
96 回用
96 回用
96 回用

希望納入価格（円）70,00070,00070,00070,000

コード No.
299-54001
293-53301
295-54101

品 名
Rat IL-10 ELISA Kit wako
Rat TNF-A ELISA Kit wako
Rat IFN- γ ELISA Kit wako

包

装

96 回用
96 回用
96 回用

希望納入価格（円）70,00070,00070,000TGF-B スーパーファミリー
Follistatin, from Porcine
Ovarium

Activin A, AB, B from Porcine Ovarium
生化学用

生化学用

TGF-B スー パ ーファミリーの 3 大アクチビンには A アイソフォーム

ファミリーの一つであるアクチビンは、, AB ア イソフォー ム（BA /（BA / BA）

インヒビンの精製過程で偶然に発見さBB）, B アイソフォーム（BB / BB）の 3 種

たホリスタチンはその抑制活性がインれた、脳下垂体前葉で産出される性類が確認されておりサブユニットの組

ヒビンの 5 分の 1 と低く本来の生理意

腺刺激ホルモンの一つです。インヒビ

合わせにより、互いに異なる生理活性義は不明でした。杉野らによってアクンとは正反対の活性、すなわち卵胞刺を示すユニークなタンパク質です。

チビンの活性発現を抑制・中和するア

FSH 分泌抑制因子として発見され激ホルモン（FSH）分泌促進活性をもクチビン結合タンパク質の本体がホリ

つタンパク質である事がわかりました。

スタチンであることが明らかになり、生アクチビンの発見当初は前述の様に体内でのアクチビン制御機構の解明

ホルモン様因子として位置づけられてきましたが、最近では造血、神経細胞増殖、発生、骨形成などを含むいろい
ろな生理活性を持つ多機能分子としての知見が明らかにされています。アクチビンの多くの作用の中でも特に初期胚における中胚葉誘導作用は注目を浴びています。
コード No.
017-17961
014-17971
011-17981
063-04011に注目を受けています。

〔参考文献〕
1）長 谷 川 喜 久：実 験 医 学 ,10（15）,（1992）.
2）杉野弘、中村隆範：実験医学 ,12（12）,（1994）.
3）杉野弘、
中村隆範：生化学, 68, 14051428（1996）.
4）杉野弘：医学の歩み ,185
（3）
（1998）,.
5）Albano. R. et al.：Development, 120,803-813（1994）.

品
名Activin A, from Porcine Ovarium
Activin AB, from Porcine Ovarium
Activin B, from Porcine Ovarium
Follistatin, from Porcine Ovarium

規 格
生化学用
生化学用
生化学用
生化学用

容

量

希望納入価格（円）30,00030,00030,00030,000

2Fg
2Fg
2Fg
2Fg

細胞増殖因子rhGH【Growth Hormone, Human, recombinant】
rr GH【Growth Hormone, Rat, recombinant】
生化学用
ヒト成長ホルモン（hGH、別名ソマトロピン）
は 191 のアミノ酸残基、分子量約 22kDa からなるポリペプチドです。作用は in vivo においてインスリン様増殖因子（別名ソマトメジン）の産出を介し、各組織・器官の成長を促進することから下垂体性小人症の治療薬として知られています。in vitro においてはソマトロピン自身が細胞に直接働き、増殖を促進している知見が得られ研究用試薬としても非常に有用なツールと考えられています。また、ヒトと共にラット成長ホルモンも取揃えました。

rhIGF-I【Insulin-Like Growth Factor-I, Human,
recombinant】
rhIGF-II【Insulin-Like Growth Factor-II, Human,
recombinant】
生化学用
インスリン様増殖因子は 2 種類のサブタイプが知られています。どちらも特異的な受容体をもち、培養系では各種細胞の増殖を促進させます。前述のソマトロピンとは密接な関係があり、協調して生体内でのクロストークに関与しています。最近の知見ではラットの細胞において細胞増殖と骨形成を濃度依存的に促進することが報告されています。その他の作用として脂肪組織及び筋でのグルコース取込み酸化の促進（インスリン様作用）や線維芽細胞等に対する DNA
合成の促進が挙げられます。

コード No.
074-04601
071-04591
077-04593
099-04511
096-04521

品
名Growth Hormone, Rat, recombinant

規 格
生化学用

Growth Hormone, Human, recombinant

生化学用Insulin-Like Growth Factor-I, Human, recombinantInsulin-Like Growth Factor-II, Human, recombinant

生化学用
生化学用

容

量

1mg
1mg
5mg
100Fg
75Fg

希望納入価格 ( 円 )23,0008,500
30,00037,00037,000

和光純薬時報 Vol.67, No.4（1999）

35

和
光
純
薬
時
報
第
六
十
七
巻

ドラッグスクリーニングにアポトーシススクリーニングキットワコー

第四号

アポトーシスの研究は、生命の本質を理解するとともに、そこで生起する様々な疾病の本態を解明し、適切な治療薬の開発や治療法を確立する上からも重要な意義を持っています。最近になり、アポトーシスを人為的にコントロールする新しい医薬品や医療技術の開発に期待が高まってきており開発された薬剤の生化学的スクリーニングが盛んに行われています。
本キットは、アポトーシスの生化学的検出法である TUNEL 法（TdT-mediateddUTP nick end labeling）の原理を応用し、アポトーシス細胞をマイクロプレート
内で標識、発色させ、アポトーシスの程度を数値化します。使用する主要な試薬が全て揃っており、かつ最適化されているため、簡便、迅速に多検体処理することができます。
〔特 長〕1）104 個の細胞に含まれる 103 個以上のアポトーシス細胞を検出

2）各ステップの主な反応試薬を全てセット化、操作が簡便
3）操作時間は約 3 時間と迅速〔HL60 細胞のアポトーシス誘導〕
104 個の HL60 を各ウェルに蒔き、1 時間おきに 1Fg/mL アクチノ
マイシン D を添加して、時系列的に最長 6 時間培養し吸光度を測定〔キット内容〕（1）細胞固定液（2）細胞浸透化液（3）TdT（4）TdT 基質溶液
（5）過酸化水素水（6）POD 標識抗体
（7）抗体希釈液（8）発色基質（9）発色基質緩衝液（10）発色停止液（11）滅菌プレート

580FL × 1 本
19.2mL × 1 本
20FL × 1 本
4.8mL × 1 本
340FL × 1 本
20FL × 1 本
9.6mL × 1 本
2mg × 5 錠
10mL × 1 本
9.6mL × 1 本
96 ウェル× 1 枚した。その後、プロトコールに従って検出を行い、顕微鏡下で細胞の形態的観察により死細胞率を算出し、吸光度との相関を見た。又、時系列的にラダーリングの検出を行った。

マイクロプレート（約 104 個 / ウェル）HL60 細胞（ActinomycinD 誘導）

遠心（1,500 rpm、5 分）

100
80

0.6

60
0.4
40
0.2

沈殿

死細胞率
（%）

0.8

吸光度

[ 実験操作フローチャート図 ]凍結（−80℃、15 分放置）← プレートへの固定（細胞固定液 /PBS）
遠心（1,500 rpm、5 分）← 浸透化処理（細胞浸透化液）

20

0

0
0

1

2

3

4

5

6

誘導時間
（hr）

死細胞率
アポトーシス検出

遠心（1,500 rpm、5 分）
氷上、10 分誘導時間(h r)

M 0 1 2 3 4 5 6

洗浄（PBS × 2 回）
← 標識反応（TdT 反応液：37℃、30 分）
洗浄（PBS × 2 回）
← 内因性 POD の不活性化処理（H2O2/PBS：室温、5 分）

DNA ラダー検出

洗浄（PBS × 3 回）
← 標識抗体による反応（POD 標識抗体希釈液：37℃、30 分）
洗浄（PBS × 5 回）
← 発色反応：室温、1 分〜 5 分← 発色反応停止
測定（490nm）
コード No.
291-55801

品 名
Apoptosis Screening Kit wako

包

装

96 回用

希望納入価格（円）46,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用等他の用途には用いられません。

希望納入価格には消費税等が含まれておりません。

発行所

36

和光純薬工業株式会社〒 540-8605
大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.
和光純薬時報 Vol.67, 06-6203-3741
No.4（1999）（代）

発 行 日
発行責任者
編集責任者
印 刷 所

1999 年 10 月 15 日
岸 井 松 司大 西 礼 子
共進社印刷（株）