原著論文

診療と新薬 2022; 59: 425-428

マウスの恐怖条件付け試験を用いた
エスシタロプラム錠「明治」とレクサプロⓇ錠の抗不安作用の検討

診療と新薬 Web今西泰一郎 1）／茂木麻実 1）／小林洋之 2）／村澤寛泰 2）／伊藤貴博 2）／
パブラック晶子 2）／平岡秀一 1）／三浦有紀 1）● 要約
Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したエスシタロプラム錠「明治」（試験製剤）について，先発医薬品でうつ病・うつ状態と社会不安障害を効能又は効果とするレクサプロⓇ錠（持田製薬株式会社，標準製剤）を対照として，マウスを用いて抗不安作用を検討した。抗不安作用は，恐怖条件付け試験におけるすくみ行動を指標に評価した。
実験 1 日目にマウスに条件付けの電気刺激を与えた。両製剤を磨砕後に懸濁液を調製し，条件付け刺激終了直後から 1 日 1 回，7 日間，反復経口投与した。両製剤の投与量は，エスシタロプ
ラムとして 3 または 10 mg/kg とした。7 日目の投与 1 時間後に電気刺激を与えない条件下です
くみ行動を測定した。その結果，両製剤はともに用量依存的にすくみ行動を減少させ，抗不安作用が認められた。10 mg/kg では，両製剤とも有意な効果が観察された。
以上のように，マウスの恐怖条件付け試験において，試験製剤は標準製剤と同様に抗不安作用を示した。
キーワード：エスシタロプラム，SSRI，恐怖条件付け試験，後発医薬品，マウス

は じ め にある。
マウスやラットを用いた恐怖条件付け試験は抗不エスシタロプラムシュウ酸塩は選択的セロトニン安作用の評価系の一つであり，電気ショックを負荷

再 取 り 込 み 阻 害 剤（Selective Serotonin Reuptake

さ れ た 動 物 が 再 び 同 じ 環 境 に 置 か れ る と， 電 気Inhibitor，以下，SSRI と記載する）の一つである。

ショックが負荷されなくても，過去に電気ショック経口投与後，脳内に移行し，セロトニン再取り込みを受けた環境に対して強いストレスを感じて動けなを強力かつ選択的に阻害することにより，シナプスくなる「すくみ行動」を指標とする 3）4）。そこで今間隙のセロトニン量を高めてセロトニン作動性神経回，マウスの恐怖条件付け試験を用いて試験製剤と伝達を賦活化する

1）2）標準製剤の抗不安作用を評価した。

。

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したエスシ

Ⅰ．材料および実験方法

タロプラム錠「明治」（以下，試験製剤と記載する）は，うつ病・うつ状態と社会不安障害を効能又Ⓡ

1．使用薬剤と薬剤の調製は効果とするレクサプロ 錠（持田製薬株式会社

試験製剤としてエスシタロプラム錠 10 mg「明以下，標準製剤と記載する）と有効成分（エスシタ治」（Meiji Seika ファルマ株式会社）を，標準製剤ロプラムシュウ酸塩）を同量含有する後発医薬品でとしてレクサプロⓇ錠 10 mg（持田製薬株式会社）

1）Meiji Seika ファルマ株式会社 2）株式会社日本バイオリサーチセンター

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第 8 号（2022 年 8 月）

すくみ行動（％）

403020**100溶媒

310レクサプロ 錠（標準製剤）

310（mg/kg, p.o.）

エスシタロプラム錠「明治」（試験製剤）

各カラムは平均値 ± 標準誤差を表す。
*; p ＜ 0.01 溶媒投与群との比較（Dunnett多重比較検定）

図 1 標準製剤および試験製剤のマウス恐怖条件付け試験における効果を使用した。両製剤は，濃度毎に必要錠数をメノウ測装置に入れ，電気刺激なしの条件で 4 分間のすく乳鉢にいれてよく磨砕後，0.5％メチルセルロースみ行動を測定した。すくみ行動は動物が動いた時の（以下，溶媒と記載する）で懸濁液を調製した。エ

モニター画像のズレにより検出し，4 分間中のすくスシタロプラムとして 0.3 ならびに 1 mg/mL の 2

み行動発現時間を％として算出した。試験製剤およ濃度の懸濁液を調製した。

び標準製剤の懸濁液または溶媒は，1 日目の条件付

2．使用動物

け刺激終了直後から 1 日 1 回，7 日間反復経口投与

C57BL/6NCrl 系雄性マウス（日本チャールス・（10 mL/kg）した。なお，7 日目はすくみ行動測定リバー株式会社）を 10 週齢で入荷し，床敷（サン1 時間前に投与した。各群の例数は 12 匹とした。

フレーク，日本チャールス・リバー株式会社）を入

4．統計学的処理れたプラスチック製ケージ（W 175 × D 245 × H

データは平均値および標準誤差で示した。溶媒に125 mm）を用いて 1 ケージ 5 匹までの群飼育とし対する試験製剤または標準製剤の有意差検定には，た。動物は 5 日間の検疫期間，その後 2 日間以上

Dunnett 多重比較検定を用いた。両製剤の同一用量の馴化期間を設け，実験に用いた。設定温度：23℃間の検定には，Student の t 検定を用いた。有意水（許容範囲：20.0 〜 26.0℃），設定湿度：55％（許準は両側 5％とした。なお，有意差検定には，統計容範囲：40.0 〜 70.0％），明暗各 12 時間（照明：プログラム GraphPad Prism9（GraphPad Software,午前 6 時〜午後 6 時）
，換気回数：12 回／時（フィInc）を使用した。

ルターを通した新鮮空気）に維持された飼育室で動5．動物倫理物を飼育した。固型飼料（CRF-1，オリエンタル酵

本試験は，Meiji Seika ファルマ株式会社動物実母工業株式会社）および水道水は自由に摂取させ

験管理委員会および株式会社日本バイオリサーチセた。

ンター実験動物委員会で審査・承認された方法に従3．試験方法

い，株式会社日本バイオリサーチセンター羽島研究

恐怖条件付け試験は，マウスをフェアードコン所で実施した。

ディション計測装置（Actimetrics 社）の中に入れ，15 秒毎に 0.4 mA，1 秒間の電気刺激負荷を 4 分間Ⅱ．結果行い，条件付けした。条件付けの日を 1 日目とし，試験製剤および標準製剤の恐怖条件付け試験での7 日目にマウスを再びフェアードコンディション計

成績について図 1 に示した。溶媒投与群のすくみ診療と新薬・第 59 巻

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行動は 4 分間の観察時間中，29.3％であったが，標多かった 9）。エスシタロプラムの不安症状に対する準製剤の 3 および 10 mg/kg はすくみ行動を 21.9

有効性には，上述のセロトニン再取り込み作用の選および 11.7％に用量依存的に減少させ，10 mg/kg択性の高さが寄与している可能性が示唆される。

では有意差が認められた（3 mg/kg；p ＝ 0.484，10エスシタロプラムが効能又は効果とする社会不安mg/kg；p ＝ 0.009）。一方，試験製剤の 3 および 10

障害の動物モデルとして確立されたものはないが，mg/kg もすくみ行動を 16.3 および 11.5％に用量依不安障害モデルにおけるエスシタロプラムの抗不安存的に減少させ，10 mg/kg では有意差が認められ作用として，ラットの電撃誘発による超音域発声抑た（3 mg/kg；p ＝ 0.077，10 mg/kg；p ＝ 0.008）。

制と恐怖条件付けモデルにおける探索行動距離の延両製剤の同一用量間比較では有意な差異は認められ長，隔離飼育マウスの攻撃行動の抑制が報告されてな か っ た（3 mg/kg；p ＝ 0.346，10 mg/kg；p ＝いる 10）。また，エスシタロプラムの抗うつ作用につ0.959）。

いては，マウスを用いた強制水泳モデルにおける無Ⅲ．考動時間の短縮 11），ラットを用いた慢性緩和ストレス察モデルにおけるショ糖溶液摂取量減少の改善 11）12）

レクサプロⓇ錠は海外ではルンドベック社にて開と，社会的ストレスモデルにおいては居住ラットの発され，日本では持田製薬株式会社によって開発さ侵入ラットに対する攻撃行動の減少 7）が報告されてれた医薬品であり，本邦では 2011 年にうつ病・ういる。一方で，これらの報告ではいずれの試験におつ状態を効能又は効果として承認され，その後，いても皮下または腹腔内投与で評価されており，臨2015 年に社会不安障害の効能又は効果が追加承認

床適応経路である経口投与での評価は見当たらなされている。Meiji Seika ファルマ株式会社が開発い。そこで本稿では，マウスの不安モデルとして汎Ⓡ用される恐怖条件付けモデル試験におけるすくみ行

錠の後発医薬品であり，「後発医薬品の生物学的同動を指標として，エスシタロプラム錠「明治」と先等性試験ガイドライン」に従い製剤評価（溶出試験発医薬品であるレクサプロⓇ錠の抗不安作用についおよびヒトでの生物学的同性試験）を実施し，先発て，経口投与により比較した。

したエスシタロプラム錠「明治」は，レクサプロ5）医薬品と同等であることが認められ ，製造販売承認された医薬品である。

恐怖条件付け試験は，一度電気ショックを負荷された動物が再び同じ環境に置かれた時，電気ショッ

エスシタロプラムは国内ではフルボキサミン，パクが負荷されなくても，過去に電気ショックを受けロキセチン，セルトラリンに続く SSRI として登場た環境に対して強いストレスを感じ動けなくなる行した。エスシタロプラムは他の SSRI と比べて，①動を観察することが多い 3）4）。上記に記述したエス

ノルアドレナリンおよびドパミン再取り込み作用とシタロプラムの既報では探索行動距離を測定してい比べたセロトニン再取り込み作用の選択性が最も高るが，今回はすくみ行動を指標として検討した。

1）

く，いずれも 1000 倍以上乖離していること ，②

ラットやマウスを用いた恐怖条件付試験において，

CYP に対する阻害作用が弱く，薬物間相互作用のベンゾジアゼピン系抗不安薬や 5-HT1A 作動薬のブ6）

リスクが少ないこと ，③開始用量 ＝ 有効量である
7）

スピロンがすくみ行動を短縮することが報告されてため漸増が不要であること などの特徴を有する。

おり，シタロプラム，フルボキサミンなどの SSRI

また，最近の論文で散見されるネットワーク・メタに対しても抗不安作用の検出に優れた動物モデルで解析では，抗うつ薬 21 種の中で有効性は 8 番目である 13）〜 15）。以上のことから，恐怖条件付け試験はあり，忍容性は 3 番目に高い結果であった。Head-

不安障害を効能又は効果とするセロトニン系の薬剤

to-head 比較に絞ると有効性，忍容性とも 3 番目にが有効性を示す不安障害モデルとしての有用性が示8）高いことが示されている 。日本臨床精神神経薬理唆されている。

学会に所属する専門医 114 名を対象に 2019 年に実今回の評価により，標準製剤，試験製剤とも用量施されたエキスパート・コンセンサスのアンケート

依存的にすくみ行動を減少させ，3 mg/kg ではすく

では，不安の症状が前景にあるうつ病の最善の治療

み行動に有意な影響を示さなかったが，10 mg/kg

薬としてエスシタロプラムを選択した専門医が最もの投与では両製剤ともすくみ行動を有意に減少させ

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第 8 号（2022 年 8 月）た。両製剤の同一用量間で有意な差は認められなof 5-HT1A receptors. Br J Pharmacol. 142: 469-78,

かった。以上の結果より，試験製剤はマウスを用い2004

た恐怖条件付け試験において標準製剤と同様の抗不安作用を示すことが明らかになった。

3）Fanselow MS, Helmstetter FJ. Conditional analgesia,defensive freezing, and benzodiazepines. Behav
Neurosci 102: 233-43, 1988

ヒトにエスシタロプラムの臨床有効投与量である
10 mg を反復経口投与した時，CYP2C19 の遺伝子型が EM（extensive metabolizer）の被験者におけ4）斎藤顕宜，山口和正，村沢寛泰，他． 動物モデルによる抗うつ薬の創薬：「恐怖条件付けストレスモデル」および「嗅球摘出モデル」を用いた抗うつ薬創薬のアプ

る血中濃度 Cmax は 26.8 ng/mL であることが示さ

ローチ．日本神経精神薬理学雑誌 23：75-82，2003
5）Meiji Seika ファルマ株式会社．社内資料，2022

れている 7）。一方，ラットを用いた結果ではある

6）Spina E, Santoro V, D Arrigo C. Clinically relevant

が，エスシタロプラムの 10 mg/kg を反復経口投与

pharmacokinetic drug interactions with second-10）

した時の Cmax は 20 ng/mL であった 。ヒトでの10 mg と ラ ッ ト で の 10 mg/kg で ほ ぼ 同 程 度 のCmax が得られることから，今回，マウスにエスシ

generation antidepressants: an update. Clin Ther. 30:1206-27, 2008
7）持田製薬株式会社．レクサプロⓇ錠 医薬品インタビュー
フォーム 2021 年 1 月改訂（第 11 版）

タロプラムの 10 mg/kg を反復経口投与した場合に8）Cipriani A, Furukawa TA, Salanti G, et al. Comparative

もヒトに臨床有効投与量を投与した時と同程度のeﬃcacy and acceptability of 21 antidepressant drugs forCmax に到達し，その結果，抗不安作用が示された

the acute treatment of adults with major depressive

可能性が考えられる。今回の試験では，有効成分でdisorder: a systematic review and network metaanalysis. Lancet. 391: 1357-66, 2018

あるエスシタロプラムだけでなく，両製剤ともに添9）Sakurai H, Uchida H, Kato M, et al. Pharmacological

加剤も含む製剤を粉砕・懸濁して評価を実施した

management of depression: Japanese expert consensus.

が，両製剤に明らかな差異はなく，同じ投与量で抗J Aﬀect Disord. 266: 626-32, 202010）持田製薬株式会社．レクサプロⓇ錠の医薬品製造承認申

不安作用が発揮された。
以上，エスシタロプラム錠「明治」の抗不安作用について，先発医薬品であるレクサプロⓇ錠を比較

請資料
11）Sánchez C, Bergqvist PB, Brennum LT, et al.
Escitalopram, the S-(+)-enantiomer of citalopram, is a

対照として，マウスの恐怖条件付け試験により検討

selective serotonin reuptake inhibitor with potent eﬀects

した。その結果，エスシタロプラム錠「明治」はレin animal models predictive of antidepressant andⓇ

クサプロ 錠と同様に抗不安作用を示すことが確認できた。

anxiolytic activities. Psychopharmacology (Berl) 167:
353-62, 2003
12）Montgomery SA, Loft H, Sánchez C, et al. Escitalopram

利 益 相 反(S-enantiomer of citalopram): clinical eﬃcacy and onsetof action predicted from a rat model. Pharmacol Toxicol.

本試験は，Meiji Seika ファルマ株式会社が起案し，試験計画書作成，試験実施と統計解析を株式会社日本バイオリサーチセンターで委託実施した。なお，今西泰一郎，茂木麻実，平岡秀一，三浦有紀は Meiji Seika ファルマ株式会社の社員であり，小林洋之，村澤寛泰，伊藤貴博，パブラック晶子は株式会社日本バイオリサーチセンターの社員である。
文

献88: 282-6, 200113）Inoue T, Tsuchiya K, Koyama T. Serotonergic
activation reduces defensive freezing in the conditioned
fear paradigm. Pharmacol Biochem Behav 53: 825-31,
199614）Li XB, Inoue T, Hashimoto S, et al. Effect of chronic
administration of ﬂesinoxan and ﬂuvoxamine on freezingbehavior induced by conditioned fear. Eur J Pharmacol

1）Owens MJ, Knight DL, Nemeroff CB. Secondgeneration SSRIs: human monoamine transporter
binding profile of escitalopram and R-fluoxetine. Biol
Psychiatry. 50: 345-50, 20012）Ceglia I, Acconcia S, Fracasso C, et al. Effects ofchronic treatment with escitalopram or citalopram on
extracellular 5-HT in the prefrontal cortex of rats: role425: 43-50, 200115）Kakui N, Yokoyama F, Yamauchi M, et al. Anxiolyticlike proﬁle of mirtazapine in rat conditioned fear stressmodel: Functional significance of 5-hydroxytryptamine
1A receptor and alpha1-adrenergic receptor. Pharmacol
Biochem Behav 92: 393-8, 2009