ISSN 1347-4804

April 2015

Vol.83 No.2

〔総説〕

「アルキル Z 試薬：亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いるケトン及びイミノエステルへの高効率 Grignard 付加反応の開発」
波多野

学、石原

一彰……… 2

浩隆、藤原

淑記、中村

一平……… 6

「アルツハイマー病患者脳切片における老人斑・神経原線維変化の波長選択的な蛍光染色」 原田龍一、工藤幸司……… 11

「環境・安全に配慮した独創的な水系硬化材料の開発」
天生

聡仁、安田

浩司、北川

「創薬スクリーニングに有用な高感度かつ低コストの糖転移酵素およびキナーゼのアッセイ系の開発」
熊谷

和夫、小島

宏建、岡部

隆義、長野

哲雄……… 14

〈テクニカルレポート〉「蛍光標識未分化マーカーレクチン rBC2LCN【AiLecS1】〜未分化ヒト万能性幹細胞を生きたまま検出する〜」新井華子……… 18

梶雅範……… 32

〔化学大家〕「ピョートル・ペトローヴィチ・フォン・ヴェイマルン（ワイマルン）」〔製品紹介〕
有機合成

アルキル Z 試薬 …………………………………………

遺5

水溶性多官能アクリルアミドモノマー FFM-2 ………… 10

伝子

MagCaptureTM タマビジン® 2-REV …………………… 25
病理

位置選択的カップリング配位子 Cy-DHTP･HBF4 …… 20

16w/v% パラホルムアルデヒド溶液，メタノールフリー … 26

環境・分析

培

シリカゲル 70F254TLC プレート - ワコー………………… 20

未分化ヒト万能性幹細胞ライブセルイメージング試薬

養

生薬試験用標準品 ……………………………………… 21

rBC2LCN【AiLecS1】……………………………… 19

フザリウムトキシン混合標準液 ………………………… 22

新規三次元培養培地 FCeM® シリーズ ……………… 27

ポジティブリスト関連標準品 …………………………… 23

細胞培養用容器 G-Rex ……………………………… 27

定量 NMR 用標準液 …………………………………… 36

CultureSure® 滅菌水、糖類、無機塩類 …………… 28

細胞生物・生化学

Y-27632 ……………………………………………… 28
汎用粉末培地、緩衝剤 ………………………………… 29

アルツハイマー病：老人斑・神経原線維変化特異的蛍光プローブ BF-168、BF-170、BF-187、BF-188 … 13
フルオロスパーク TM キナーゼ /ADP マルチアッセイキット

17

コラゲナーゼ , 精製品 ………………………………… 30
rBC2LCN ストリッピング溶液【AiWashS1】 ………… 30

スーパーセップ TMPhos-tag® シリーズ…………………… 24
活性酸素特異的蛍光プローブ ………………………… 26
GLP-1 ELISA キットワコー、高感度品 ………………… 31〔お知らせ〕
和光純薬時報 Vol.82 No.4 訂正案内 ……………………………………… 21

1

R

esearchアルキル Z 試薬：亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いるケトン及びイミノエステルへの高効率 Grignard 付加反応の開発
名古屋大学

大学院工学研究科

化学・生物工学専攻

波多野

学、石原

一彰

1 はじめに

3）。教科書に書かれていないこう
１b）6）に着目した。
アート錯体（ate complex）

した副反応は、極低温下でも制御が例えば Mg（Ⅱ）アート錯体 6 は、1

困 難 で あ る。 副 反 応 の 主 な 原 因 は、当量の Grignard 反応剤と 2 当量の有アルコールは、医農薬品やファイン

Grignard 反応剤の塩基性が求核性よ機リチウム反応剤から系中で速やかにケミカルズの合成に欠かせない工業的りも勝っていることにある。この問題

調製できる（図 2、式 1）。しかし、こに重要な化合物である。アルコールのを解決するには、塩基性を最小限に抑の方法では、付加させたい Grignard

最も簡便な合成法のひとつは、有機金

え、求核性を最大限に高めた新たな反反応剤と有機リチウム反応剤のアルキ

属反応剤を用いるカルボニル化合物

応剤を創製するしかない。そこで筆者

ル基（R）を一致させる必要があり、へのアルキル付加反応である 。なからは Grignard 反応剤の原点に戻って導入できるアルキル基は限られる。そで も、 歴 史 の 古 い Grignard 反 応 剤解決を試みることにした。

こで、１当量の Grignard 反応剤と比

1）（RMgX）は、今なお研究室での小ス
ケールから工業的な大スケールまで広2）

く 用 い ら れ て い る 。Grignard 反 応

2Grignard 反応剤とマグネ
シウム（Ⅱ）アート錯体 4）

較的安定な MeLi を 2 当量用いて、反応に直接関与しない 2 つの Me 基をダ
ミー配位子とした [RMe2Mg] − [Li]+[LiX]剤は、安価なハロゲン化物（RX）とGrignard 反応剤を用いるケトンへ（7）を系中で調製して、これを反応に金属マグネシウム（Mg）から安全かのアルキル付加反応は、図 1a に示す用いることにした（図 2、式 2）。そのつ簡便に調製でき、比較的安定である

ように、通常は 1 分子のケトンと 2 分

結果、目的のアルキル基（R）の付加

ため、長期間保存できるという高い利子の RMgX からなる六員環の協奏機は Me 基の付加より圧倒的に優先し、便性を持つ。このため、市販品の数も構で進行する 5）。この環状遷移状態でアルキル基（R）選択的に生成物が得優に 300 種類を超えている。しかし、は、2 分 子 の Grignard 反 応 剤 は 1 つら れ た（ 図 3）。 な お、 通 常 の MeLi

実際に教科書通りに Grignard 反応剤のアルキル基（R）を共有し、1 分子には一定量の LiBr が含まれており、でアルキル付加反応を行なったとき、

目 の RMgX の Mg 中心が強い Lewis

筆者らは比較的早い段階でこれを用い反応性が高いアルデヒドとは異なり、酸 と し て 機 能 す る 一 方、2 分 子 目 のるとよいことに気付いた。塩を含まな反応性が低いケトン（1）では、思いRMgX の Mg 中心は過電子状態にあっ

い純粋な MeLi を用いた場合は、収率のほか望む第三級アルコール（2）のて、アルキル基（R）が活性化されてが や や ば ら つ い た。 こ の こ と は、収率が低かったという苦い経験をもい る。 つ ま り、Grignard 反 応 剤 が 2Knochel らが報告している Grignard

つ読者は多いのではないだろうか（図分子間で正負に自発的に不均化して活反応剤への LiCl の添加効果（ターボ１a）。 実 は 多 く の ケ ト ン に つ い て、性化することで、アルキル付加反応がGrignard 反応剤）や 7）、後述する亜Grignard 反応剤は過剰量必要な上に、進行する。そこで筆者らは、こうした鉛（Ⅱ）アート錯体における LiCl によアルドール体（3）、還元体（4）、ピナ

効率の悪い不均化機構に頼らずに、錯る塩効果とも符合している。

コール体（5）などが副生成する（図イオン化により強制的に分極できる

3

化学量論量の亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いるアルキル付加反応 8）

さらに筆者らは、Zn（Ⅱ）アート錯
体も高い反応活性を持つことを見つけた。しかも、亜鉛源には安価で安全な無機試薬である塩化亜鉛を使うことが

図１．Grignard 反応剤を用いるケトンへのアルキル付加反応（a）
図２．各種アート錯体の調製法と活性化機構と副反応（b）

2

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

図３．化学量論量の Mg（Ⅱ）アート錯体を用いるアルキル付加反応

図４．化学量論量の亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いるアルキル付加反応に限られていた。もし臭化物（RMgBr）
やヨウ化物（RMgI）への適用ができれば、汎用性はより高くなる。そこ
で、Zn（Ⅱ）アート錯体にもダミー配位子を導入することにした。この際、
特に β- ケイ素効果 12） の見込まれる図５．松尾らによるブレマゾシンの全合成 9）。
Me3SiCH2 基 を 選 ん だ（ 図 7、 式 4）できた（図 2、式 3）。調製時に若干のある i -Pr 基付加反応でも種々の基質

すなわち、炭素−ケイ素間の σ 結合

濁りや沈殿物を伴うこともまれにあるについて対応する生成物が高収率でから亜鉛の空の p 軌道への電子の供が、性能上ほぼ問題ない。Zn（Ⅱ）アー得られた。また、一般にアルキル付加

与によって、目的のアルキル基（R）

ト錯体は Mg（Ⅱ）アート錯体よりも反が困難とされる 2- アダマンタノンにの反応性が大きく向上すると同時に応性が穏やかで、反応温度を 0 ℃にしおいて、フォトレジスト材料の主原料（図 7a）、亜鉛上から炭素−ケイ素間ても制御可能で、様々なケトンに対しである第三級アルコールのグラムスの反結合性 σ* 軌道への電子の逆供与て第三級アルコールを高収率で得た

ケール合成にも成功した。筆者らが知により、炭素−亜鉛結合は強化され、（図 4）。さらに本技術を用いて、松尾

るかぎり、この例がケトンに対する

Me3SiCH2 基のダミー基としての効果

らは κ- オピロイドのアゴニストであGrignard 付加反応の初めての触媒化が高くなると期待した（図 7b）。検討るブレマゾシンの全合成に成功したの報告である。Grignard 付加反応のの結果、この修飾型 Zn（Ⅱ）アート錯

9）。Zn（Ⅱ）アート錯体を用いた（図 5）

触媒化の難しさは、触媒が関与するこ

体触媒（9）では RMgBr を用いても場合は、立体選択的なエチル基付加反となく元来活性の高い Grignard 反応

様々な基質で効率良くアルキル付加

応が進行し、88% 収率で鍵中間体を剤のみで反応が無秩序に進行してしま反応が進行し、対応する第三級アル得ている。

うことにある。従って Zn（Ⅱ）アート

コールを高収率で得た（図 8）。この亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いる
4触媒的アルキル付加反応 10）

錯体触媒は、こうしたバックグラウン

際、 試 行 錯 誤 に よ り、 収 率 向 上 にドの反応が無視できるほど高い触媒活

LiCl の 添 加 が 効 果 的 だ と が わ か っ性を持つことを示している。

た。 こ れ は、 い わ ゆ る 塩 効 果 で あ

幸運にも、Zn（Ⅱ）アート錯体を用いるアルキル付加反応は、塩化亜鉛を
触媒量（10 mol%）にすることができ

5

修飾型亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いる触媒的アルキル付加反応 11）り 8）、ハライド交換（Br から Cl）とともに、対応する Zn（Ⅱ）アート錯体（[R（Me3SiCH2）2Zn] −[MgX ] +[MgX 2] 2）た（図 6）。これに伴い、化学量論反前述の化学量論量または触媒量のにおける陽イオン交換（[MgCl]+ また応時には 3.3 当量必要だった Grignard

Zn（Ⅱ ）ア ー ト 錯 体 に よ る ア ル キ ル

は [MgBr]+ から Li+ への交換）が起き、反応剤は 1.3 当量まで低減できた。副付 加反応では、用いることができる

錯体の会合状態とケトンの活性化を制反応が起きやすい第二級アルキル基でGrignard 反 応 剤 は 塩 化 物（RMgCl）

御していると考えられる。本反応では、メチル基導入において MeMgI を利用できた。さらに、1- ナフチル基のような嵩高いアリール基も導入できた。また、アルジミンは窒素上の置換基によってケトン以上に反応性が悪い場合があるが、本法では高収率で望む生成物が得られた。

図６．亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いる触媒的アルキル付加反応

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）3特に反応性が低いことで知られる αケチミノエステルに対して、イミノ炭
素選択的アルキル付加反応の検討を行った。その結果、β,γ- アルキニル α- イミノエステル 18）が、構造的理由（E 体、s -cis -N=C−C=O）により例外
的に非常に高い反応性を示した（図図７．修飾型亜鉛（Ⅱ）アート錯体の調製と活性化機構

11）20）。特に、嵩高いキラル 8- フェニ
ルメンチル基 19）を導入した基質（14）を用いて、完璧な位置（path a）及び立体選択性（dr = >99:1）で光学活性
β,γ- アルキニル -α- アミノ酸誘導体（15）を収率よく得た。得られた生成物 15 はアルキニル基の（E ）/（Z ）選択的な部分還元や立体選択的な環化により、様々な合成上有用な光学活性化合物へ高収率で変換できた。

7 おわりに
図８．修飾型亜鉛（Ⅱ）アート錯体を用いる触媒的アルキル付加反応

本稿では、Grignard 反応剤をもとにした Mg（Ⅱ）アート錯体および Zn（Ⅱ）アート錯体を用いるカルボニル化合物への高選択的付加反応について概説した。特にケトンを原料とする
Grignard 付加反応による第三級アルコールの合成は、いわゆる教科書通り

図９．シプロヘプタジンの合成には行かない反応のひとつであるが、さらに、抗ヒスタミン剤であるシプの反面、有機金属反応剤による位置選

本手法は副反応を大幅に低減できた。

ロヘプタジンを合成した（図 9）。メ

択的アルキル付加反応の制御は極めてGrignard 反応剤や塩化亜鉛は、安価

ルク社の報告によれば、鍵となるアル

困難で、通常は多種の生成物の混合物で取り扱いも容易なため、スケーラブ

キル付加反応の収率は 50％に留まっになる。これまでに、清水らによるルで工業化にも向いている。通常の。一方、修飾型 Zn（Ⅱ）アー

path b に始まるタンデム型の N - アル

Grignard 付加反応を行う以上の特別

ト錯体触媒（9）を用いると、目的のキル付加− C - アリル化等の先駆的なな技術を必要とせずに、確実に収率

ている

13）

16）

第三級アルコールが常に定量的に得ら

報告や、Kozlowski らによる path

アップにつながる実用的で信頼性の高れ、その後シプロヘプタジンへ定量的

b に始まるタンデム型の N - アルキル

いアルキル付加反応として、今後もさに変換した。

付加− C - アシル化等の報告がある。

らに磨きをかけたい。なお、和光純薬

α- イミノエステルに対するイミ
6ノ炭素選択的アルキル付加反応 14）

しかし、path a に始まる選択的 C - ア

工 業 よ り、 数 種 類 の 調 製 済 み の Zn

ルキル付加反応の報告はなかった。

（Ⅱ）アート錯体反応剤が『アルキル Z

ごく最近筆者らは、修飾型 Zn（Ⅱ）

試薬』というシリーズ名で発売となっ極性転換が生じている α- イミノエ

アート錯体（9）を化学量論量用いて、た。Z はアルファベットの最後である

17）

ス テ ル（10） は、 イ ミ ノ 炭 素（patha）、イミノ窒素（path b）、エステル
炭素（path c）に連続する 3 つの反応点が存在し、多様な分子変換が可能な
15）。そ
アミノ酸前駆体である（図 10）4図 10．α- イミノエステルへのアルキル付加反応

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

図 11．α- ケチミノエステルに対するイミノ炭素選択的アルキル付加反応

ことから、これより上位のものは存在り、この研究分野が益々発展していく

しない・最終・最高・究極、などの意

ことを期待したい。最後に、本稿で紹味で使われる。すなわち、『アルキル介した研究は、日夜一生懸命に研究を

Z 試薬』の Z には、究極のアルキル化

進めてくれた共同研究者である松村季剤という意味と亜鉛試薬という意味の

彦修士、鈴木伸治博士、伊藤織恵修

両方の意味を込めて名付けた。これら士、山下賢二君（D1）、水野麻依さんのアルキル Z 試薬は調製時は透明な（M1）の努力の賜物であり、深く感謝

溶液だが、長期保存中の温度条件にします。

よっては無機結晶性の濁りや沈殿が生〔参考文献〕

ずることがある。しかし、懸濁液また

１）（a）Hatano, M., Miyamoto, T. and Ishihara,
K. : Curr. Org. Chem ., 11, 127（2007）. ;（b）Hatano, M. and Ishihara, K. : Synthesis ,1647（2008）.
２）Wakeﬁeld, B. J. : Organomagnesium Methods
in Organic Chemistry , Academic Press,
San Diego, CA（1995）.
３）今本らは CeCl3、Knochel らは LaCl3・2LiClを用いて、ケトンに対する Grignard 付加

は上澄み液のアルキル付加剤としての性能は調製から半年程度経過してもほぼ不変である。アルキル Z 試薬が販売されることで、より Zn（Ⅱ）アート
錯体を用いることのハードルが下が反 応 を 報 告 し て い る。（a）Imamoto, T.,
Takiyama, N., Nakamura, K., Hatajima, T.
and Kamiya, Y. : J. Am. Chem. Soc ., 111,
4392（1989）. ;（b）Krasovskiy, A., Kopp, F.
and Knochel, P. : Angew. Chem. Int. Ed ., 45,497（2006）.
４）Hatano, M., Matsumura, T. and Ishihara, K. :Org. Lett ., 7, 573（2005）.
５）（a）Swain, C. G. and Boyles, H. B. : J. Am.
Chem. Soc ., 73, 870（1951）. ;（b）Yamazaki,
S. and Yamabe, S. : J. Org. Chem ., 67, 9346
（2002）.
６）Knochel, P. : Handbook of Functionalized
Organometallics , Wiley-VCH, Weinheim,
Germany（2005）.
７）Krasovskiy, A. and Knochel, P. : Angew.
Chem. Int. Ed ., 43, 3333（2004）.
８）Hatano, M., Suzuki, S. and Ishihara, K. :Synlett , 321（2010）.
９）Matsuo, J., Okado, R. and Ishibashi, H. : Org.
Lett ., 12, 3266（2010）.
10）Hatano, M., Suzuki, S. and Ishihara, K. : J.
Am. Chem. Soc ., 128, 9998（2006）.
11）（a）Hatano, M., Ito, O., Suzuki, S. and Ishihara,
K. : Chem. Commun ., 46, 2674（2010）. ;（b）Hatano, M., Ito, O., Suzuki, S. and Ishihara,
K. : J. Org. Chem ., 75, 5008（2010）.
12）（a）Eaborn, C. : J. Chem. Soc ., 4858（1956）. ;（b）Haaland, A., Green, J. C., McGrady, G. S.,
Downs, A. J., Gullo, E., Lyall, M. J., Timberlake,J., Tutukin, A. V., Volden, H. V. and Østby,
K.-A. : Dalton Trans ., 4356（2003）.
13）Engelhardt, E. L., Zell, H. C., Saari, W. S.,
Christy, M. E., Colton, C. D., Stone, C. A.,
Stavorski, J. M., Wenger, H. C. and Ludden,
C. T. : J. Med. Chem ., 8, 829（1965）.
14）Hatano, M., Yamashita, K., Mizuno, M., Ito, O.
and Ishihara, K. : Angew. Chem. Int. Ed ., 54,2707（2015）.
15）（a）Dickstein, J. S. and Kozlowski, M. C. :Chem. Soc. Rev ., 37, 1166（2008）.（b）;Shimizu,M., Hachiya, I. and Mizota, I. : Chem. Commun .,874（2009）.
16）Niwa, Y. and Shimizu, M. : J. Am. Chem.
Soc ., 125, 3720（2003）.
17）Dickstein, J. S., Fennie, M. W., Norman, A.
L., Paulose, B. J. and Kozlowski, M. C. : J.
Am. Chem. Soc ., 130, 15794（2008）.
18）Mizota, I., Matsuda, Y., Kamimura, S., Tanaka,
H. and Shimizu, M. : Org. Lett ., 15, 4206
（2013）.
19）Yamamoto, Y. and Ito, W. : Tetrahedron , 44,5415（1988）.

アルキル 試薬
高活性アルキル化剤
アルキル Z 試薬は、Grignard 試薬と亜鉛から調製される高活性アルキル化剤です。本品とケトンの反応では副生成物の生成が抑えられ、効率的に反応が進行します。
コード No.
品
名規 格 容 量危 有機合成用 100mℓ
058-09021 Ethylmagnesium Chloride-Zinc（Ⅱ）Ate Complex, Tetrahydrofuran Solution（abt. 0.3mol/ℓ）
NEW
097-07091 Isopropylmagnesium Chloride-Zinc（Ⅱ）Ate Complex, Tetrahydrofuran Solution（abt. 0.3mol/ℓ） 危 有機合成用 100mℓ
NEW

希望納入価格（円）13,00013,000

Grignard 試 薬 の 取 扱 い も ご ざ い ま す。 当 社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/chemical/Gr/index.
htm）をご参照下さい。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。

掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.83, No.2（2015）

5

R
1 緒

esearch
環境・安全に配慮した独創的な水系硬化材料の開発
天生

聡仁、安田

富士フイルム株式会社 R&D 統括本部

浩司、北川

浩隆、藤原

淑記、中村

一平

ほとんどの多官能モノマーで、化合物

言そのものが皮膚刺激性、感作性（アレルギー）を有することである。そのた

本稿で紹介する技術は、顧客にとっめ使用時に、作業者は安全かつ慎重なて環境・安全に配慮した硬化性材料と取り扱いをしなければならない 2）（図いう新しい価値を提供するとともに、

１）。

硬化性材料分野における分子設計のイ

上記課題を解決するには、多官能モ

ノベーションを起こすものと考えていノマーがそもそも有している特性「硬る。

化性」と「安定性」に加え、「水溶性」

図１．溶剤系モノマーの課題
出典：経済産業省ウェブサイト（http://
www.meti.go.jp/policy/voc/top/）を編集して作成

光や熱などの刺激によりバインダーと「安全性」を含む 4 つの基本特性を等の場を硬化する特性は種々の産業用満たす必要があるが、これらの特性は途に幅広く利用されている。例えば、密接に関りあうためトレードオフとなの溶解性を有することを目標とした。

コーティング材、塗料、印刷インク、る場合が多く、これまでに報告されて分子内へのエチレンオキシ（EO）鎖、接着剤、光学材料、電子材料、レジス

いる既存技術で解決することはできてプロピレンオキシ（PO）鎖、又はイ

ト材等では、硬化性材料が適用されていなかった。

オン性基の導入等が有効と考えられたいる。硬化性材料は、光や熱などの刺そこで我々は、顧客の強いニーズにが、１分子あたりの重合性基密度の低激を伝達する化合物（以下、開始剤）

お応えすべく、今までにない価値を持下による硬化性の悪化や、製造適性上と、刺激付与された場を硬化させる化つ材料創出にチャレンジすることにしの問題で適用できなかった（図２）。

合物（以下、モノマー）を主成分とした。富士フイルムが写真で構築した硬化性は、一般的に UV 硬化性が高て構成される。モノマーは硬化性を有「独自の分子設計技術」と「量産可能く、既存の架橋剤としてよく用いられする部位として、重合性基を内包すな有機合成技術」を駆使することで実ている重合性基であるアクリレートとる。

現できると考えたからである。

同等以上であることを目標とした。硬産業用途で広く用いるために、モノ

以下、本技術の詳細説明を行うが、化性を高めるためには、重合性基の多マーは高い硬化性を持つことが必要で前半で、従来技術の問題点と我々が着官能化や重合性基密度の向上などの分ある。そのために同一分子内に複数の目した分子設計のポイントを基本特性

子設計が考えられたが、この場合、分重合性基を含有する分子設計が有効で間のトレードオフ解消という観点で解子が疎水化して水溶性を担保することある。このように同一分子内に複数の説し、後半で、達成した諸特性の説明ができず、適用できなかった（図３）。

重合性基を有する化合物を本稿では多と想定される用途の提案について記載

安定性は、高い耐加水分解性と、少する。

しでも分解が懸念される連結鎖（ウレ

目標性能と既存技術の2
関係

タン、（ヘミ）アセタール、（ヘミ）ア

解しないことである。つまり、大気・開発に先立ち、上記４つの性能に対基（アリル基、ビニル基）や、化学的環境汚染の原因物質として世界各国でする目標と従来の分子設計・合成指に安定な炭素−炭素結合のみの連結鎖使用量削減が求められている揮発性有針、トレードオフの関係について整理の採用を考えたが、硬化性が悪化する

機化学物質（VOC）に溶解して使うした（表１）。

トレードオフがあった（図４）。

＊

官能モノマー と称する。
環境、安全という観点における多官能モノマーの重要課題は、ほとんどの化合物が水に難溶で有機溶媒にしか溶1）ことになる 。もうひとつの課題は、ミナール等の結合基）を含まないことを目標とした。加水分解しない重合性

水溶性は、水に対して 10wt％以上

表１．目標性能・従来技術まとめ
項目

目標性能

従来の分子設計・合成指針 主なトレードオフ

水溶性

水への溶解性10wt% 以上

エチレンオキシ（EO）鎖、
プロピレンオキシ（PO） 硬化性・製造適性
鎖イオン性基の導入

硬化性

アクリレート同等
以上の硬化性多官能化、重合性基密度
UP、低分子量化

水溶性

高い耐加水分解性
分子量 UP/ 重合性基変
皮膚刺激性・感作性・ 更（メタクリレート等）
安全性
変異原性が無い

硬化性

安定性

図２．水溶性付与技術例＊通常は重合性多官能モノマーを称する

6

有機合成化学研究所

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

安全性は、皮膚刺激性・感作性・変硬化性がトレードオフ

水溶性がトレードオフ

図３．硬化性付与技術例

図５．安全性付与技術例
硬化性がトレードオフ

図４．安定性付与技術例

異原性（Ames）が無いことを目標と低下、すなわち硬化性の低下に直結した。しかし、高分子量化や、アクリ

し、高純度化も困難になることが予想

レート基からメタクリレート基への変される EO 鎖、PO 鎖、製造適性付与

更等の重合性基の反応性を低下させるが難しくなるイオン性基、少しでも分設計も、硬化性悪化のトレードオフに

解の懸念のある、ウレタン、（ヘミ）より適用できなかった（図５）。

アセタール、（ヘミ）アミナール等の

図６．従来技術の適用によるトレードオフ

以上のことから、モノマーに要求さ結合基を用いず、化学的に安定な炭素れる４つの目標性能について、それら−炭素結合のみのコンパクトな連結鎖を個々に向上させる技術はあるが、その採用で、水溶性、安定性、安全性をれぞれの性能は互いにトレードオフの実現した。また、水溶性、安定性、硬関係となっていることがわかり、従来化性を付与するために（メタ）アクリのある物質と世の中では認識されてい技術の適用では全ての性能を向上させレート基ではなく、アクリルアミド基る。FFM-2 はそれを分子内に４つ含ることは困難であることがわかったを採用した新規な構造を有している。

有している構造であるにも関わらず、

一般に、アクリルアミドの単分子は合成原料には使用しておらず、加水分

毒物、劇物に指定され、変異原性（発解等でも発生しないことを確認できてがん性）も確認されている安全上問題

おり、アクリルアミド単分子は全く含（図６）。

3 新規技術の開発

図７．新規技術の開発

当社では独自の分子設計と有機合成技術を駆使することにより、従来技術の各々の適用だけでは解決できなかった複数のトレードオフの脱却を可能とし、高い硬化性、水溶性、安定性、安OH全性を実現する新規技術の開発に成功

H2Nした（図７）。

H
N

OH

O

OH

4

4 モノマーの開発
HN

先述した新規技術を適用し、新規水
溶性多官能アクリルアミドモノマー

H
N（FFM-2）を開発した（図８）。
FFM-2 は、既存の多官能モノマー

O

で汎用されているポリオール（グリセ

O

O

O
O

N
H

O

O
N
H

リン、トリメチロールプロパン、ペン
タエリスリトール等）とは異なる、多FFM-2

官能かつコンパクトな独自コアを採用している。連結鎖は、重合性基密度の

図８．新規水溶性多官能アクリルアミドモノマー（FFM-2）

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）7

有していない。

表２．溶解性の評価

5 各種性能の詳細評価【硬化性の評価】
硬化性の評価は、大気下で UV 露光を行い、露光中のアクリルピークの減
少率を FT-IR 光度計（フーリエ変換
赤外分光光度計）を用いて測定し、重合率を算出する方法で行った。比較化

溶媒名

SP 値

質量％濃度

分

酢酸エチル

9.0

＜ 0.1％

無極性

メチルエチルケドン

9.3＜ 0.5％

極性・非プロトン性

アセトン

10

＜ 1％

極性・非プロトン性

イソプロパノール

11.5

＜ 40％

極性・プロトン性

アセトニトリル

11.9

＜ 1％

極性・非プロトン性

エタノール

12.7

＞ 50％

極性・プロトン性

メタノール

14.5

＞ 50％

極性・プロトン性

水

23.4

＞ 50％

極性・プロトン性※ モノマーの SP 値は 12.8

類

※ 液温 30℃で測定

合物としては、市販の４官能アクリ

アセトンを１：１で混合した溶媒に4.01）、 中 性（pH 6.86）、 ア ル カ リ 性

レートモノマーであるペンタエリスリ

は、50% 以上の溶解性を示すことを（pH 9.18）の緩衝溶液に溶解し、45℃

ト ー ル テ ト ラ ア ク リ レ ー ト（ 以 降実験により確認しており、この例からで２週間の経時し、モノマー残存量をTM-0 と呼ぶ）を使用した。

も わ か る よ う に、 混 合 溶 媒 次 第 でHPLC で 定 量 評 価 し た。 そ の 結 果、FFM-2 の溶解性を大きく変えること

FFM-2 は、TM-1, TM-2 と比較して、て硬化速度が速いことがわかった。まは可能である。

強酸性〜アルカリ性の各 pH におい

た、酸素による重合阻害を受けにくい【安定性の評価】

そ の 結 果、FFM-2 は TM-0 と 比 べて、高い安定性を有することがわかっことも明らかになった（図９）。これ

FFM-2 を用い、酸性〜アルカリ性た（ 図 10）。 な お、TM-1 は ホ ル マ リ

は、低露光量（0 mJ/cm2 〜 100 mJ/cm2）

条件での安定性を評価した。比較化合

ンとアクリルアミドへの分解 4）、TM-2の際、顕著に現れている。

物としては、市販の２官能アクリルア

は、エステルの加水分解のパスが進行

なお、測定には、モノマー（FFM-2

ミドモノマーである N,N- メチレンビ

し、経時で減少したと考えられる。

又 は TM-0）/ 開 始 剤（IRGACURE®

スアクリルアミド（以降 TM-1 と呼【安全性の評価】2959）/ 溶剤（MeOH）の比が 10/1/40

ぶ）、EO が導入された４官能アクリ

FFM-2 の皮膚刺激性・腐食性試験、の組成物を用いた。

レートである EO 変性ペンタエリスリ

皮膚感作性試験、変異原性（Ames）【水溶性の評価】

ト ー ル テ ト ラ ア ク リ レ ー ト（ 以 降試験を実施した（表３）。

水と各種溶媒に対する溶解性を、液TM-2 と呼ぶ）を用いた。評価は、モそ の 結 果、FFM-2 は 皮 膚 刺 激 性 /温 30℃で 24 時間後の析出の有無を目

ノマーを強酸性（pH 1.68）、酸性（pH

腐食性が無く、感作性・変異原性も陰視観察して調べた。その結果、水、メ
タ ノ ー ル、 エ タ ノ ー ル に 対 し て は
50wt％以上、イソプロパノールに対しては 40wt％程度の溶解性を示すこ

FFM-2

FFM-2

とがわかった（表２）。このことから、

TM-1

TM-1

TM-2

TM-2

FFM-2 はプロトン性極性溶媒に対して良好な溶解性を示すことがわかった。一方で非プロトン性の極性溶媒にはほとんど溶解しないが、例えば水と80

重合率（％）

70

FFM-2

60
50

FFM-2

FFM-2

40

TM-1

TM-0

30

TM-2

20
10
0
0

100

200

300

400

500

露光量（mJ/cm2）
モノマーの重合率経時変化（254nm, 1mW/cm2）※モノマー溶液組成 : モノマー/IRGACURE®2959/MeOH=10/1/40

図９．硬化性の評価

8

図 10．安定性の評価

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

TM-1
TM-2

表３．安全性の評価
試験項目
皮膚刺激性・腐食性

結

果

PⅡ＝ 0
無刺激

皮膚感作性

陰性

変異原性（Ames）

陰性

ら構成される組成物を用意し、UV 露

性基同士の距離が離れていると推測さ

光前後の密度を乾式密度計にて計測れる。重合すると重合性基同士の距離

し、その数値を用いて FFM-2 単独のは縮まるため、その距離差が硬化収縮

硬化収縮率を算出する方法で行った。

の大小に関連しているのでは無いかとその結果、FFM-2 の添加量と組成考察している。上記考察は、同じ骨格物の硬化収縮率には非常に良い相関がでエステル、アミド違いの単官能モノ性であり、反応性のモノマーとしてはあることがわかり、表４から作成したマーである、ヒドロキシエチルアクリ

稀に見る高い安全性を有することがわ

関数を用いて算出した FFM-2 の硬化

レート、ヒドロキシエチルアクリルア

かった。先に示したような高い反応性

収縮率は 3.3％となった（図 11）。

ミドの重合前の密度がアクリルアミドを有するアクリレートモノマーに勝る既存の多官能アクリレートモノマーの方が高いことを示している比較デーとも劣らない性能を有しながら、皮膚は一般に 10％〜 20％程度の硬化収縮

タからも支持されている（表５）。

刺激性 / 腐食性、感作性・変異原性が率を示すのに対し、FFM-2 は硬化収【物全くなく、GHS（Globally Harmonized

縮率が小さいという特徴を有すること

FFM-2 の物性情報を以下にまとめ

System） 分 類 3） も 区 分 外 と い うがわかった。多官能アクリルアミドのる（表６）。特筆すべき物性としては、

FFM-2 のようなモノマーは、世の中

FFM-2 が、既存の多官能アクリレー

FFM-2 は固体であり、モノマー特有で知られていない。

トモノマーよりも低効果収縮率であっの臭いを有さず無臭である。また、一た 1 つの要因として、アクリルアミド

般に、多官能化するに連れ、反応の制基とアクリレート基の官能基違い、す御や精製の難易度は格段に上がり、困

なわち、重合前後の重合性基間距離差難を極めるが、FFM-2 は、４官能モが、アクリレート＞アクリルアミドとノ マ ー で あ り な が ら、95 ％ 以 上 の

6 その他の化合物情報【硬化収縮率の測定】

性】

FFM-2 の 硬 化 収 縮 率 を 測 定 し た。

なっているのでは無いかと考えた。具

HPLC 純度を有している点が特徴とし一般的な多官能モノマーとは異なり、体的には、アクリルアミド基はアミドて挙げられる。

FFM-2 は固体のため、硬化収縮率を官能基由来の水素結合性が強く、モノそのまま測定することは難しいため、マーの段階からそれぞれの重合性基同溶解可能な単官能モノマーで液化して士が反発すること無く、互いに近傍に測定することを考えた。測定は、表４存在していると推測される。一方、ア

FFM-2 は、水素結合性の強いアミに 示 す 割 合 で FFM-2 と N,N- ジ メ チ

クリレート基は、電子的な反発によりド基が高密度に複数含有されているこ

ルアクリルアミド（希釈モノマー）か

モノマーの状態では、それぞれの重合とから、極性基（例えば水酸基、アミ7 期待される効果・性能ノ基）を有した基材との密着性を向上

表４．組成物と硬化収縮率
FFM-2（wt%）

N,N- ジメチルアクリルアミド（wt%） 硬化収縮率（％）

0.0

100.0

17.6

12.5

87.5

15.5

16.7

83.3

15.1

25.0

75.0

14

33.3

66.7

12.8

x = 1000y

表５．単官能アクリレート / アクリルアミドモノマーの密度比較
名

称

構

造

O

ヒドロキシエチル
アクリレートO
O

ヒドロキシエチル
アクリルアミドNH

密度（g/cm3）

OH

1.011

OH

1.111

表６．物性情報
名

称

FFM-2
外

観

個

体

形

態

粉

体

色
物

性

図 11．FFM-2 の添加量比率と硬化収縮率の関係

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

白色〜淡黄色

臭

い

無

融

点

111℃

臭

純度（HPLC Area%）

95％以上

SP 値

12.8

Log P ow

1.39

させる効果が期待できる。更に、硬化されているものが主であり、FFM-2

収縮率が、既存の多官能アクリレート

をそれら組成物に対して、そのまま使系モノマーと比較して小さいことも、用することは溶解性の点から困難であ

密着性の向上やフィルム上に塗布したることが予想される。この問題への対今回開発した新規水溶性多官能アク

際に問題となるカールの抑制などに寄策としては、処方上許容される範囲内

リ ル ア ミ ド モ ノ マ ー（FFM-2） は、与すると考えられる。

で良溶媒であるアルコール系溶剤、水既存技術では解決できなかった複数の

9 最後に

更に、硬化後、化学的に安定な結合を適量混合することが推奨される。こトレードオフの条件を克服し、人と環であるアミド基によりネットワークがの方法により FFM-2 の溶解性が良化

境に優しい独創的な材料である。

形成されるため、例えば加水分解などすることは、一部の組成において既にこの新材料は、環境と安全に貢献す

による劣化も抑えることができ、耐久確認できている。しかし、処方上、良るにとどまらず、これまでに実現でき性の向上も見込まれる。

溶媒の添加がどうしても困難な場合になかった製品コンセプトをカタチにす

また、酸素による重合阻害がアクリ

は、相溶性の高い不揮発性の液体の単るチャンスを提供する可能性を持ってレートモノマーと比較し少なく、硬化

官能モノマー、例えばヒドロキシル基いる。

速度が速いことから、露光量の低減

含有の単官能（メタ）アクリレートや今後も人々の安全・快適な生活とビ（硬化感度の向上）や使用量の削減が（メタ）アクリルアミドモノマー等にジネスの発展を目指して、これら特期待できる。

溶かし、擬似的に FFM-2 を液体とし徴、機能を活かした材料および用途開て取り扱う方法も適用できるのでは無発を進めていく。

最後に、モノマー自身の安全性が高いことから作業安全性向上が期待でいかと考えている。

き、人体と環境に優しい。

上記とは別に、FFM-2 の特徴である水溶性、安全性を最大限に活かした8 想定される用途〔参考文献〕
１）経済産業省 HP http://www.meti.go.jp/policy/
voc/top/２）ス リ ー ボ ン ド 社 テ ク ニ カ ル ニ ュ ー ス
http://www.threebond.co.jp/ja/technical/
technicalnews/pdf/tech40.pdf
３）環境省 HP http://www.env.go.jp/chemi/ghs/４）シーエムシー出版 ケミカルプロファイル
http://www.cmcbooks.co.jp/user̲data/pdf/
cp08053.pdf

使用法として、水系硬化性組成物の開発が大いに期待できる。具体的には、

FFM-2 は、 各 種 材 料（ フ ィ ル ム、

水系のインク、塗料、コーティング、

光学、電子、印刷版、膜等）の架橋

接着剤、粘着剤や、親水性ゲル、親水剤、コーティング剤として用いられて性膜、医療用素材等への架橋剤としている既存のモノマーとの併用、又は代好適に使用できるのではないかと期待替が可能と考えられる。しかし、現在している。

用いられている組成物は溶剤系で構成

P roducts
水溶性多官能アクリルアミドモノマー・FFM-2

O

O

H
N

本品は、溶剤系モノマーと同等の高い硬化性、水を溶剤として使用できる水溶性、化N
H

O

合物の安定性、安全性を兼ね備えた新規アクリルアミド系モノマーです。

O

O
N
H

O
HN

O

C25H40N4O7＝508.61
CAS No. 1393329-90-2
コード No.
201-20051
209-20052

品

名

N -[Tris（3-acrylamidopropoxymethyl）methyl]acrylamide

規

格

有機合成用

容

量
5g
25g

希望納入価格（円）8,500
25,000

当社ではアゾ重合開始剤の品揃えもございます。水溶液重合、乳化重合などの条件検討に最適です。
詳しくは当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/chemical/monomer/index.htm）をご参照下さい。

10

和光純薬時報 Vol.83, No.2（2015）

R

esearchアルツハイマー病患者脳切片における老人斑・神経原線維変化の波長選択的な蛍光染色
東北大学加齢医学研究所

原田

龍一、工藤

幸司

はじめに
アルツハイマー病（AD）は認知症の代表的疾患であり、その神経病理学
的特徴は神経細胞脱落に伴う大脳皮質の萎縮に加え、アミロイド β 蛋白質（Aβ）を主成分とした老人斑と過剰リン酸化されたタウ蛋白質を主成分とした神経原線維変化の出現である。これら両病理像は蛋白質が重合して βシート構造が平行に重なったクロス

図１．各化合物の化学構造式

β シート構造、すなわち「アミロイド構造」を形成していることが知られは老人斑を、BF-170 は神経原線維変化（タウ蛋白質）は黄色からオレンジている。現在、Aβ あるいはタウ蛋白化を比較的選択的に染色するのに対色に観察することができる。さらに、が形成したβシート構造に特異的・

し、BF-187、BF-188 は両病理像を明UV-1A フ ィ ル タ ー（ 励 起 波 長：360-

選択的に結合し、かつ血液 - 脳関門透瞭に染色する特徴を有している（図370 nm, 蛍光波長：400 nm 〜）ある過性を有する低分子化合物が開発さ2）。しかし、特に BF-188 は著者らがい は V-2A フ ィ ル タ ー（ 励 起 波 長：

れ、これらの化合物を陽電子放出核種

使用している一般的な蛍光顕微鏡

380-420 nm, 蛍 光 波 長：450 nm 〜 ）である C-11 や F-18 で標識した薬剤を（Nikon エクリプス 80i）の BV-2A フィで観察すると、老人斑のみが選択的にAD 患者に投与し、陽電子断層撮影装

ルター（励起波長：400-440 nm, 蛍光

青 か ら 青 緑 色 に 観 察 さ れ、 一 方 で置（Positron Emission Tomography ;波長：470 nm 〜）で観察すると、老B-2A フィルター（励起波長：450-490

PET）を用いて撮影することにより、

人斑（Aβ）は緑色に、神経原線維変nm, 蛍光波長：520 nm 〜）あるいは

これまで死後解剖でしか知り得なかった脳内の病理像（Aβ、タウ）の局在を知ることが可能となっている。
著者らは PET プローブの開発過程
で様々な化合物を検討してきた。βシート構造に結合する化合物は平面性を有し、蛍光性の化合物が多く存在する。これまでに、老人斑に比較的選択
1）性の高い BF-168 、神経原線維変化に選択性の高い BF-1702） と呼ばれる化合物を開発している。本稿では、放射図２．AD 患者脳切片（前頭葉）における BF-187（左）と BF-188（右）の染色像
矢印：老人斑（Aβ）、矢じり：神経原線維変化（タウ）線を用いずに基礎研究で利用できる特徴的な染色性・蛍光特性を示す化合物
BF-187、BF-188 を紹介したい（図 1）。

BF-187 と BF-188 の特徴
BF-187、BF-188 は 前 述 し た BF168、BF-170 と同様、Aβ あるいはタウ蛋白質が形成しているβシート構造を認識する化合物である。パラフィ
ン包埋 AD 患者脳切片を用いてこれ
らの化合物で染色を行うと、BF-168

図３．AD 患者脳切片における BF-188 の波長依存的な染色像
矢印：老人斑（Aβ）、矢じり：神経原線維変化（タウ）
左から、BV-2A フィルター、B-2A フィルター、G-2A フィルターの画像
BV-2A フィルターでは老人斑、神経原線維変化が描出されているのに対し、G-2A フィルターでは神経原線維変化が選択的に描出されている。

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）11

G-2A フィルター（励起波長：510-560

い S/N 比で一度に両病理像を個別にあまり染色しないが、これらの化合物

nm, 蛍光波長：590 nm 〜）で観察す

評 価 す る こ と も 可 能 で あ る（ 図 4）。

では明瞭に Ghost tangle を染色する。

ると、神経原線維変化のみが選択的にこのことは、AD 患者脳を BF-188 でその一方で、AT8 で染色される重合

オレンジ色から赤色に観察することが染色するだけで、老人斑と神経原線維

した線維を含まない Pretangle はこれできる性質を有している（図 3）、す変化という二つの病理像を個別に定量

らの化合物では染色されない。このよ

なわち「波長選択性」を有している 3）。

的に評価できることを意味している。

うに、抗体、低分子化合物で認識する

タウの病理像は神経原線維変化の他に、さらに、近赤外光領域の色素（Cy5.5,

様式が異なるため、100% 一致しない

Neuropil threads、Neuritic plaques

Cy7 など）を二次抗体などに用いれことを理解しておくことは実験結果をの変性突起（Aβの周りに局在するタ

ば、Aβ・ タ ウ 病 変 は BF-188 で、 興

解釈する上で重要であると思われる。

ウ病変）などがある。BF-188 は老人味がある蛋白質は抗体を用いた免疫染では、なぜ BF-188 は老人斑、神経斑の中に含まれているタウ病変を色色を行うことで多重染色も可能であ

原線維変化に結合した際に異なる蛍光で明瞭に区別することが可能であるる。

特性を示すのか？ 両病理像の主成分（図 3）。BF-187 も BV-2A および B-2A

前述したように、これらの低分子化である Aβ、タウ蛋白質は共通してフィルターを用いることにより両病理

合物は病理像の蛋白質が形成した「ββ シート構造を有していることは前像を明瞭に観察することが可能である

シート構造を認識」しており、一般的

述した通りである。この二つの違いはが、BF-188 ほどの波長選択的な性質に抗体が認識するアミノ酸配列、すな何なのか？ 神経原線維変化に含まれは有していない。

わち「エピトープを認識」することとるタウ蛋白質の特徴として過剰リン酸は異なる。特に、タウ病変に関しては化が挙げられる。アルカリフォスファ

さらに、マルチスペクトル CCD カ®

メ ラ Nuance （Perkin Elmer） を 用

Pretangle、Intracellular tangle,

ターゼで脱リン酸化処理後 BF-188 の

いて BF-188 で染色した AD 患者脳切extracellular tangle（Ghost tangle）

染色性を検討したところ、違いは認めといくつかの種類の神経原線維変化がられなかったことからリン酸基の影響存在し、その種類によって重合していはほとんどないと考えられる。これら

神経原線維変化由来の蛍光スペクトル

る構造、露出しているエピトープなどのことから、Aβ、タウ蛋白質は共通

は大きく異なっていることがわかるが異なる。このことは、βシート化

した β シート構造を有しているが、（図 4）。そのため、スペクトルイメー

合物と抗体を用いた免疫染色が一致

その構造は微妙に異なっており、低分ジングを行うことにより、自家蛍光をしない部分があることを意味してい子化合物との相互作用は異なっている

取り除くことができるとともに老人斑る。例えば、AT8 と呼ばれるタウ蛋ものと考えられる。それを改めて証明

由来のシグナルと神経原線維変化由来

白 質 のリン酸化抗体（エピトープ：

しているのが、近年臨床での生体画像のシグナルを分離することができ、高pSer202/Thr205） は Ghost tangle を化が実現されたタウ選択的な PET プ

Normalized ﬂuorescence（a.u.）

片を BV-2A で観察した画像を撮影す
ると、老人斑由来の蛍光スペクトルと

1.0

老人斑

神経原線維変化

0.8
0.6
0.4
0.2
0.0

450

500 550 600 650
wavelength
（nm）

700

図４．AD 患者脳切片における BF-188 のマルチスペクトルイメージング
矢印：老人斑（Aβ）、矢じり：神経原線維変化（タウ）左グラフ：スペクトルイメージングにより得られた老人斑と神経原線維変化の蛍光スペクトル。写真：左からスペクトルイメージング画像（Raw）、緑
色のスペクトルで描出した画像（Green spectrum）、赤色のスペクトルで描出した画像（Red spectrum）それぞれの画像が Aβ、タウの免疫染色と一致している。スケールバー：50 μm

12

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

ローブである 4, 5）。これらも β シートの点に注意が必要である。化合物染とにより老人斑と神経原線維変化を一構造を認識する低分子化合物だが、A色を行った後に、免疫染色を行うこ

度にかつそれぞれを「色」で選択的にβ、タウ蛋白質への結合親和性は異なとは可能であるが、化合物の染色の捉えることができる。モデル動物を用り、タウ病変に選択的に結合する性質

コントラストが低下する可能性があいた前臨床研究への応用は、リアルタ

るため、著者らは最初の手順で行っ

イムに Aβ およびタウ蛋白質のタイている。また、必要に応じて自家蛍

ムコースおよびそれらの相互作用を理

光消光処理（リポフスチン処理）を解する上で極めて有効なツールになる行うことでバックグランドである自と期待している。

を有している5, 6）。

BF-187、BF-188 の染色手順および観察方法

家蛍光を軽減させることが可能であ

基本的には、BF-168、BF-170 の染る。

色手順と同様である。

BF-187 と BF-188 の応用①パラフィン脳切片に対して脱パラフィン処理を行う。

ま た、BF-187、BF-188 は BF-168、②BF-187、BF-188 を 200μM に な る
ように 100% エタノールで溶解。

BF-170 同様に高い血液 - 脳関門透過③純水にて希釈を行い、100μM に化性を有している。したがって、蛍光化合物である BF-187、BF-188 は前臨床合物溶液を調製。
④化合物溶液を切片に滴下。

研究の二光子励起顕微鏡を用いた In⑤10 分間反応させた後、PBS で洗浄。

vivo イメージングへの利用が可能で⑥蛍光褪色防止剤を用いて封入する。

ある。しかし、トランスジェニックマ

⑦蛍光顕微鏡で観察し、写真を撮影す

ウスなどのモデル動物などでの検討はる。

行っていないので、マウスにおける老* 免疫染色との多重染色の場合は、

人斑、神経原線維変化に対して結合

必要に応じてオートクレーブなどの性、波長選択性を示すのかは不明であ抗原賦活化処理を行い、免疫染色をる。

行った後に化合物染色を行うこと

おわりにで、多重染色が可能である。ただし、蟻酸処理を行うと化合物が認識するβシート構造が破壊されてし化合物を用いた蛍光染色は免疫染色まうため、化合物での染色が失われと比較して簡便に行うことができる。

てしまう。多重染色の場合は、上記

本化合物、特に BF-188 を使用するこ〔参考文献〕
１）Okamura, N. et al . : Styrylbenzoxazole
derivatives for in vivo imaging of amyloid
plaques in the brain. , J. Neurosci ., 24, 25352541（2004）.
２）Okamura, N. et al . : Quinoline and benzimidazole derivatives : candidate probes
for in vivo imaging of tau pathology in
Alzheimer's disease. . J. Neurosci ., 25, 1085710862（2005）.
３）Harada, R. et al . : Use of a benzimidazole
derivative BF-188 in fluorescence multispectral imaging for selective visualizationof tau protein fibrils in the Alzheimer's
disease brain. , Mol. Imaging Biol ., 16, 19-27（2014）.
４）Okamura, N. et al . : Non-invasive assessmentof Alzheimer's disease neurofibrillarypathology using 18F-THK5105 PET. , Brain,
137, 1762-1771（2014）.
５）Okamura, N. et al . : Tau PET imaging in
Alzheimer's disease. . Curr. Neurol. Neurosci.
Rep ., 14, 500（2014）.
６）Harada, R. et al . : Comparison of the binding
characteristics of [18F]THK-523 and otheramyloid imaging tracers to Alzheimer's
disease pathology. , Eur. J. Nucl. Med. Mol.
Imaging , 40（2013）.

P roducts

アルツハイマー病：老人斑・神経原線維変化特異的蛍光プローブ
BF-168、BF-170、BF-187、BF-188
BF- 168 は、老人斑を、BF- 170 は、神経原線維変化を蛍光で検出できます。
BF- 187、BF- 188 は、老人斑、神経原線維変化の両病理像を明瞭に検出する特長を有しています。さらに BF188 は、観察するフィルターを変更することで、老人斑を青から緑色、神経原線維変化をオレンジ色から赤色で観察することが可能な波長選択性を有しています。

NEW
NEW

コード No.
029-16361
026-16371
022-18811
025-18801

品

名

BF-168
BF-170
BF-187
BF-188…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存規格
細胞生物学用
細胞生物学用
細胞生物学用
細胞生物学用

容 量
1mg
1mg
1mg
1mg

希望納入価格（円）15,00015,00025,00030,000

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掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.83, No.2（2015）13

R

esearch

創薬スクリーニングに有用な高感度かつ低コストの糖転移酵素
およびキナーゼのアッセイ系の開発
神戸大学 大学院工学研究科・東京大学 創薬オープンイノベーションセンター 熊谷
東京大学 創薬オープンイノベーションセンター 小島 宏建、岡部 隆義、長野

はじめに生体中の酵素は創薬における非常に重要な薬物標的である。例えばキナー
ゼの選択的阻害剤はいわゆる分子標的

アッセイできるアッセイ法を開発し生成を定量する方法の利点は、ヒトでた。本稿では、筆者らの開発した、ヌ500 種類以上も存在するキナーゼの分

クレオチドの高感度蛍光定量に基づく子種の何れに対しても、同じ手法で糖転移酵素とキナーゼの新規蛍光アッアッセイができること、即ち汎用性がセイ法を紹介する。

高いことである。これまで ADP を定

従来の糖転移酵素及びキナーゼのアッセイ

量する手法としては、ADP に対する

CoA（3-hydroxy-3-methylglutaryl-

まず、従来用いられてきたアッセイに再変換してルシフェラーゼによる化

CoA）還元酵素阻害剤は高コレステロー法を概説する。糖転移酵素は生体中で学発光として定量する方法がよく用い

ル血症の治療薬として用いられている。

タンパク質や脂質などの基質分子に糖られ、両方法ともアッセイキットとし糖尿病の治療では DPP4（dipeptidyl

鎖修飾を行う酵素であり、ヒトでは９て市販されている。しかしながら、こ

peptidase-4）阻害剤が用いられていタイプ 200 種類以上の分子種が知られれらキットを用いる方法では、マイクる。このように、酵素阻害剤は様々なている。これまで糖転移酵素について

ロプレート１枚のアッセイに数万円を疾患で治療薬として開発が行われていは HTS に適した簡便なアッセイ系は要するので、コスト面の負担が大きる。酵素を標的とする創薬を行うにほとんど開発されてこなかった。生成かった。

は、一般に、酵素アッセイによるスク物である糖化合物のハイ・スループッ

リーニングを行って、創薬リードとなトな定量法がなかったことが大きい。

る化合物をまず取得する必要がある。

糖転移酵素反応では、糖ドナー基質でそのためには使いやすく高感度のアッある糖ヌクレオチドから糖アクセプ

セイ系が必要であるが、それに加えター分子へ糖が転移することで、ヌク

上記のような課題に対処するため筆て、アッセイコストが低くなければス

レオチドが遊離生成する。よって、こ者らがとった方法は、酵素カップリン

クリーニングには不向きである。特のヌクレオチドの生成を指標とするこグを利用した新しいヌクレオチドの定に、多数の化合物をアッセイするハとによっても糖転位酵素の活性を測定量法の開発である。ヌクレオチドを定薬としてがんの治療薬として用いられている。スタチンと総称される HMG-

14

和夫
哲雄

抗体を用いて結合アッセイで定量する
方法、酵素カップリングにより ATP

酵素カップリングによるヌクレオチドの新規高感度蛍光検出法の確立

イ・スループット・スクリーニング

することができる。しかしながら、こ量対象とすることで汎用性を、酵素（HTS）では、扱う化合物の数が膨大れまで開発されたヌクレオチドの定量

カップリングを用いることで低コストであるため、１化合物当たりのアッセ

法は主に、酵素カップリングを用いてを、蛍光検出を用いることで高感度をイコストを低く抑えることが重要とな

NADH の生成として吸光度で測定す実現した 5）。図１に糖転移酵素における。従来、多くの酵素アッセイ法が開る方法、リン酸を遊離させ無機リるアッセイの反応原理を示す。ヒトの発され、アッセイキットも種々市販さン酸として比色定量する方法 4） など

糖転移酵素の場合、糖転移酵素反応でれているが、高感度でかつアッセイコに限られ、検出感度に乏しいものがほ生成するヌクレオチドは GDP、UDP、ストが安く、しかも多くの標的酵素にと ん ど で あ る。 最 近、GDP、UDP、

CMP のいずれかである。これらはヌ適用できるといった汎用性を持った

CMP を抗体を用いて蛍光偏光法で定クレオチド二リン酸キナーゼ（NDP

アッセイ法はほとんどない。近年、東量するキットが市販されたが、アッセ

キナーゼ）或いはヌクレオチド一リン

京大学に 21 万種類を超える化合物をイコストが高い。

2,3）酸キナーゼ（NMP キナーゼ）の存在集めた公的大型化合物ライブラリーが一方、キナーゼのアッセイでは、各整備され、アカデミア・企業を問わず

種のアッセイ方法が開発され、HTS

で、定量的に ADP を生成させること

1）
HTS に利用できるようになったが 、にも利用されている。キナーゼのアッができる。ADP は、ADP 依存性ヘキ

アッセイコストがネックとなって、大セイ方法は２種類に大別され、１つはソキナーゼ、グルコース - 6 - リン酸デ

量スクリーニングの実施が困難となる

リン酸化された生成物（例えばリン酸

ヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼを用い場合があった。筆者らは、このような化されたペプチド）を抗体を用いて結た酵素カップリングを行うことで、定課題の克服を目指して、低コストでし合アッセイ等で定量する方法である。

量的にレゾルフィンの高感度蛍光に誘かも汎用性を持った新しい酵素アッセ

もう１つは、基質の ATP から生じた導できる。従って、糖転移酵素の活性イ法の開発に取り組んだ。その結果、

ADP を定量する方法（もしくは ATP

をレゾルフィンの蛍光測定で定量でき

糖転移酵素やキナーゼを対象に、全ての消費を定量する方法）である。どちるようになった。一方、キナーゼアッの分子種を高感度で安くかつ簡便にら も HTS で 用 い ら れ る が、ADP のセイの場合は生成物が ADP であるの

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

下に過剰量の ATP を作用させること

図２．ADP、UDP、GDP、CMP の本方法による検量線
少容量 384 穴マイクロプレートに 5 μlの各ヌクレオチド液を添加し、本方法を用いて検量線測定を行った。データは２連測定の平均値で示した。

糖転移酵素アッセイへの応用
図１．酵素カップリングを利用した新規なヌクレオチド定量法に基づく糖転移酵素の蛍光
アッセイ法の原理
ヒトの糖転移酵素は９種類の糖ヌクレオチド（図中、緑色四角内）のいずれかを糖ドナー分子として、糖アクセプター分子に糖を転移する。その結果、UDP、GDP、CMP のいずれかのヌクレ
オチドが生成する。これらの遊離ヌクレオチドは、NDP キナーゼ或いは NMP キナーゼを使って過剰量の ATP とともに作用させることで、定量的に ADP を産生させることができる（第１工程）。生成した ADP は、ADP- ヘキソキナーゼ、G6P デヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼを用いた
酵素カップリングにより、レゾルフィンの蛍光へと定量的に導くことができる（第２工程）。
ADP 定量のための第２工程は、キナーゼのアッセイ法としても用いることができる。第１工程における添加試薬組成：UDP または GDP 定量の場合：200 μM ATP、2 U/ml NDP キナーゼ、
100 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl2；CMP 定 量 の 場 合：200 μM ATP、3 μg/ml
NMP キナーゼ、4 mM DTT、100 mM Tris-HCl（pH 9）、13.5 mM MgCl2、150 mM KCl。第２工程における添加試薬組成：2 mM グルコース、2 U/ml ADP- ヘキソキナーゼ、2 U/ml G6P
デヒドロゲナーゼ、2 U/ml ジアホラーゼ、200 μM NADP、100 μM レサズリン、100 mM
Tris-HCl（pH 7.5）
、10 mM MgCl2、20 mM N- エチルマレイミド（定量しようとする液中にDTT を含む場合）。各試薬は安定性を高めるため牛血清アルブミンと界面活性剤を添加して用いる。

前述したように糖転移酵素反応では
GDP、UDP、CMP のいずれかが生成するので、これらのヌクレオチドを定量することで糖転移酵素のアッセイが可能である。しかも我々の方法は、当初からマイクロプレートを用いたアッセイを想定しており、測定試薬を添加するだけの簡単な操作でアッセイが終了する便利な方法である。一例として、ヒトガラクトシルトランスフェ
ラーゼ hB4GALT1 に対する阻害剤探索を本方法を用いて行った結果を図３に示す。市販生理活性物質化合物ライ
ブラリー 1280 化合物を 384 穴プレー

で、上記のスキームの中の ADP 定量

添加操作が２回、キナーゼアッセイのトを使って終濃度 10 μM でスクリーのスキームを用いればよい。こうし場合は試薬添加操作が１回のみと非常ニングした。測定は２回行いその平均て、全ての糖転移酵素とキナーゼを蛍に簡単であり、アッセイ時間もそれぞ

値で阻害率を求めた（図３Ａ）。また、

光アッセイで測定できるようになっ

れ２時間、１時間という短さである。

本アッセイ法自体への化合物の影響をた。図２に本方法を用いて測定したヌ

また、本定量法は、酵素アッセイでよ測 定 す る た め、20 μM 濃 度 の UDP

ク レ オ チ ド の 検 量 線 の 一 例 を 示 す。

く 用 い ら れ る 緩 衝 液 組 成 や 添 加 物、を定量するカウンターアッセイを並行

384 穴マイクロプレートを用いたアッATP の影響をほとんど受けないのもして同様に実施した（図３Ｂ、通常のセイで、5 μl という微量サンプル量利点である（後述）。必要試薬を購入

スクリーニングではカウンターアッセ

でも Z'-factor 値 0.8 以上の高精度で、して自家調製した場合、本方法のアッイはヒットした化合物についてのみ行

数十 nM の低濃度から数十 μM まで

セイコストは、384 穴プレートの場合、えば良いが、ここでは検証のため全化

３桁の濃度域で直線性が得られた。ま

１ウェル当たり数円以下であり、従来合物についてアッセイした）。前者のた、酵素カップリング反応の操作自体

法と比べはるかに安価にアッセイを実阻害率から後者の阻害率を差し引いたは、糖転移酵素アッセイの場合は試薬施できる。

値を、hB4GALT1 に対する正味の阻

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）15

も ADP の蛍光定量に悪影響を及ぼすことはなく、DTT の作用のみを打ち消すことができた。こうして、CMPを生成する糖転位酵素であるシアリル
トランスフェラーゼの場合も、高シグ
ナル / バックグランド比でアッセイが可能となった。
シアリルトランスフェラーゼ以外の糖転移酵素は、GDP、UDP の生成に基づく定量に NDP キナーゼを用いる
ので、DTT を使用する必要がない。
この場合は、糖転移反応と酵素カップ
リング反応を同時に行わせることが可
図３．1280 化合物から成る市販生理活性物質化合物ライブラリー（LOPAC）を対象としたヒトガラクトシルトランスフェラーゼ hB4GALT1 に対する阻害剤スクリーニングの結果（A）384 穴プレートを用いて 5 mM N- アセチルグルコサミンと 50 μM UDP- ガラクトースを基質として、10 μM のライブラリー化合物存在下、37℃で１時間、hB4GALT1 反応を行った。
これに、100 μM ATP と 1 U/ml NDP キナーゼを加え、室温で１時間インキュベートした後、前述の ADP 検出試薬（第２工程試薬）を加え、室温で１時間放置後、プレートリーダーで蛍光（励起波長 540 nm、蛍光波長 590 nm）を測定した。アッセイは２回実施しその平均値で化合物の阻害率を求めた。
（B）hB4GALT1 反応の代わりに 384 穴プレートに 20 μM UDP を分注し、本方法による UDP 定量を行って本アッセイ法に対するライブラリー化合物の阻害作用を測定した。測定は同様に２回行った。（C）A で求めた hB4GALT1 に対する阻害率から B で求めたアッセイ系自体に対する阻害率を差し引き、hB4GALT1 に対する正味の阻害率とした。正味阻害率
50% 以上を示した 12 化合物をヒットとした。（D）２回アッセイした hB4GALT1 に対する化合物の阻害活性の測定結果の相関図。対角線上にプロットが並んでいることから、ばらつきの少ない結果が得られていることが分かる（Z'-factor = 0.80 〜 0.81）。（E）２回アッセイした UDP 定
量に対する阻害活性の測定結果の相関図。D に比べさらにばらつきの少ないアッセイができている（Z'-factor = 0.85 〜 0.86）。（F）12 個のヒット化合物について、HPLC を用いた UDP 定量
による hB4GALT1 阻害アッセイを行い、本蛍光アッセイ法の結果との相関性を調べた。両測定
結果はほぼ一致していることが分かる。

能で（即ち図１の糖転移反応から第２工程までを同時に行わせることが可能）、糖転位酵素活性を連続的にモニターするコンティニュアス・アッセイが可能である。

キナーゼアッセイへの応用
上述したように、本方法の後半（第２工程）は ADP の定量反応であるので、そのままキナーゼアッセイに用いることができる。また、第１工程はキナーゼ反応そのものであるので（図４）、NDP キナーゼ、NMP キナーゼと同様に、DTT 要求性、非要求性のいずれのキナーゼに対してもアッセイ

害率と定義した（図３Ｃ）。その結果、

い る NDP キ ナ ー ゼ と、CMP の 変 換が 可 能 で あ る。DTT 非 要 求 性 の キ

12 化合物が 10 μM で正味阻害率 50%に用いる NMP キナーゼとでは性質がナーゼであればコンティニュアス・

以上を示すことが分かり、hB4GALT1

大きく異なる点がある。前者は DTT

アッセイが可能な点も糖転移酵素の場に対する阻害ヒットとして特定するこ

要求性がないのに対し、後者は mM合と同様である。また、本アッセイはとができた。２回の実験間の測定値

レベルの還元剤（DTT 等）が必要でキナーゼのアッセイで用いられる多く

は、どの測定でもよい一致を示した

ある点である。本蛍光アッセイ系での添加物による影響を受けないことも（図３Ｄ、Ｅ）。さらに、ヒット化合物

は、最終段階でレサズリンからレゾル確認された（表１）。このアッセイ法の活性を検証するため、HPLC を用い

フィンへの還元反応を用いているたは、我々が調べた範囲で、これまで市て生成 UDP を定量する比較アッセイ

め、DTT が存在すると酵素反応に関販のキナーゼアッセイキットよりも精を実施したところ、HPLC により定量

係なく自動還元が徐々に進んでしま度（Z'-factor）が良く、また大幅に低した阻害活性と本方法で定量した阻害

い、蛍光バックグランドが高くなる。

コストが達成できた。我々は既に幾つ

活性はほぼ一致した（図３Ｆ）。従っ

そこで、DTT を含む反応液中のヌク

かのプロテインキナーゼを標的に本方て、本方法での糖転移酵素の活性測定

レオチドを定量する場合は、図１の第法を用いて HTS を実施しており、そ結果は妥当なものであり、糖転移酵素

２工程において SH 試薬である N- エ

れぞれの標的で選択的なヒット化合物

阻害剤探索に利用しうると結論でき

チルマレイミド（NEM）を存在させ、が得られている（論文投稿準備中）。

5）

DTT を不活性化させることにした。

また、本方法自体を阻害する化合物はところで、GDP、UDP の変換に用

幸い、10 mM の NEM を存在させて多くないことを、東京大学創薬オープ

た 。

16

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

る HTS が容易になったことで、今後

表１．本アッセイ法における添加物の影響 a）
添加物

無影響濃度 b）
400 mM
20 mM
100 mM
20 mM
10%
0.4%
0.4%
15 mM
1 mM
20 mM
6 mM

NaCl
CaCl2
MgCl2
MnCl2
Dimethyl sulfoxide
Triton X-100
Tween 20EDTA
Na3VO4NaF
DTT

図４．キナーゼアッセイの一例
CMP を基質として NMP キナーゼの活性を本アッセイ法で測定した。

これらの領域で、未開拓の酵素分子種を標的とした創薬研究が一層活発になることが期待される。
〔参考文献〕

40 mM Tris-HCl（pH7.5）, 20 mM MgCl2,
0.1 mg/ml BSA 溶液中において、10 μM ADP
を定量
b）
本方法による蛍光値への影響が 5% 以下（和光純薬工業 提供データ）a）

ンイノベーションセンターの全ライブ
ラリー化合物をアッセイして確認している。従って、本方法はキナーゼのグを用いたヌクレオチドの新しい蛍光アッセイ法としても非常に有用であ定量法を確立することで、スクリーニ

り、使いやすい方法と言える。本方法

ングに必要な高感度、高精度、低コスは キ ナ ー ゼ に 限 ら ず、ATP ア ー ゼ、ト、簡便性の全てを満足する酵素アッアセチル -CoA カルボキシラーゼ、ピセイ法を構築できた。これにより、標ルビン酸カルボキシラーゼなど ADP

的酵素と基質さえ用意できれば、必要を産生する酵素全般のアッセイにも適試薬を購入して自家調製した場合、20用できるので、応用範囲は広い。

万化合物を対象とした HTS であっても、数十万円の試薬コストで実施できおわりにるようになった。アッセイキット化す
れば、利便性はさらに向上すると予想以上述べたように、酵素カップリンされる。糖転移酵素やキナーゼに対す

１）東京大学創薬オープンイノベーションセン
タ ー web サ イ ト http://www.ocdd.u-tokyo.
ac.jp/
２）Mulder, G. J. et al . : Biochem. J ., 151, 131-140（1975）.
３）Gosselin, S. et al . : Anal. Biochem ., 220, 92-97（1994）.
４）Wu, Z. L. et al . : Glycobiology , 21, 727-733（2011）.
５）Kumagai, K. et al . : Anal. Biochem ., 447, 146155（2014）.

Z'-factor
スクリーニングにおけるアッセイ系の最適度を表す指標。Z -factor=1−（3×SDH +3×SDL）/（AvH-AvL）で計算される（SDHとSDLはhigh control群とlow control群の各標準偏差を、 Av HとAv L はhighcontrol群とlow control群の各平均値を表す）。１に近い値となるほど感度が良
く、ばらつきの少ないアッセイ系であると言える。 再現性の良いHTSを行うには
通常、0.5以上の値が必要。

HTSキナーゼ活性アッセイキット
フルオロスパーク TM キナーゼ /ADP マルチアッセイキット
本キットは、酵素カップリング蛍光法によるキナーゼ活性のハイスループットスクリーニング（HTS）に適したアッセイキットです。キナーゼ活性によって生成された ADP 量を簡便な操作で高精度に測定できます。
●基質液

1 , 000 回用
9 mℓ

10 , 000 回用
90 mℓ

●酵素液

500 μℓ5 mℓ●色素液

100 μℓ1 mℓ●還元剤ブロッカー

400 μℓ4 mℓ●反応停止液10 mℓ

100 mℓ● 10 mmol/ℓ ATP 溶液

100 μℓ1 mℓ● 10 mmol/ℓ ADP 溶液

100 μℓ1 mℓ

コード No.
NEW

291-77401

NEW

297-77403

品…− 20℃保存■プロテインキナーゼAに対するH-89によるIC 50 測定

名FluorosparkTM Kinase/ADP Multi-Assay Kit…2 〜 10℃保存

デ ー タ
RFU(Ex540nm/Em590nm)

キット構成…− 80℃保存

15,00010,000IC50=43.7nmol/ℓ

5,000

0

-3

-2

規
危

1
2
3
0
Log(H-89)(nmol/ℓ)

4

格

容

-1

酵素活性測定用

5量

希望納入価格（円）1,000 回用

65,00010,000 回用

照会

表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。

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和光純薬時報 Vol.83, No.2（2015）17

echnical Report

蛍光標識未分化マーカーレクチン rBC2LCN【AiLecS1】〜未分化ヒト万能性幹細胞を生きたまま検出する〜
和光純薬工業株式会社

はじめに
近年、幹細胞研究分野は目覚しい発

ライフサイエンス研究所

DIC

rBC2LCN-FITC

Hoechst33342

Merge

DIC

rBC2LCN-635

Hoechst33342

Merge

新井

華子

展を遂げ、ヒト万能性幹細胞（ES 細胞及び iPS 細胞）を用いた再生医療に大きな期待がよせられている。iPS 細胞をさまざまな細胞に分化させ、治療や創薬に用いる研究が世界中で進められている。わが国では昨年、世界で初
めて iPS 細胞を使用した臨床研究が行
われ、iPS 細胞を利用した再生医療が実現に向けて大きく動き出した。iPS細胞を利用した再生医療を一般に広めるためには、iPS 細胞の未分化状態を維持し、安定して培養を行い、目的の

図１．rBC2LCN-FITC、rBC2LCN-635 を用いたヒト iPS 細胞の生細胞染色
ヒト iPS 細胞（201B7 株）の培養液に各蛍光標識 rBC2LCN を添加し、2 時間後に撮影（使用濃度：
1/1,000）

細胞に確実に分化させ移植する必要がTra-1-60ある。また、移植細胞の中に腫瘍化のTra-1-81

SSEA-4rBC2LCN可能性のある未分化な iPS 細胞が残存しないことが重要とされている。そのため、未分化な iPS 細胞を高感度で検出できるマーカーが望まれていた。こ

生細胞染色
2hr後

れまで、iPS 細胞の未分化状態を判別する方法として、未分化マーカーに対する抗体を用いた染色法があったが、細胞を染色するために iPS 細胞の固定が必要な場合や、生細胞染色ができて

図２．rBC2LCN-FITC を用いたヒト iPS 細胞の生細胞染色
ヒト iPS 細胞（201B7 株）の培養液に FITC で標識した各抗体及び rBC2LCN を添加し、2 時間後に撮影（使用濃度： 1/100）

も感度面で不十分なものが多かった。
今回、当社では、高感度で簡便に未分

ヒト iPS 細胞の良好な染色像を得る

た と こ ろ 同 等 以 上 で あ っ た（ 図 2）。

化なヒト万能性幹細胞を検出する蛍光ことができる（図 1）。これら蛍光標抗体による染色と比較して蛍光標識

標識マーカーを上市したため紹介す識 rBC2LCN に よ る 染 色 は 培 養 液

rBC2LCN は、添加後、速やかに細胞る。

を交換しても数日間持続し、培養液と結合することや、培養液に添加し観rBC2LCN【AiLecS1】 に よ る
ライブセルイメージング

交換のたびに蛍光標識 rBC2LCN を

察を続けることが可能であることから添加することにより長期間観察できる

非常に使用しやすい。また、固定細胞

rBC2LCN【AiLecS1】は、未分化なことから、ヒト iPS 細胞樹立時の観察ではより鮮明な染色画像の取得が可能

ヒト万能性幹細胞の細胞膜上糖鎖の 1やヒト ES/iPS 細胞の品質管理への利で、他の抗体との多重染色も可能でつである O 型糖鎖 H タイプ 3（Fucα1-

用が期待できる。結合性や特異性につあった（図 3）。

2Galβ1-3GalNAc）に結合するレクチ

いて従来広く使用されてきたヒト ES/

フローサイトメトリーへの適用ンとして同定されたリコンビナントタ

iPS 細胞表面マーカーである抗 Tra-1-

蛍光標識 rBC2LCN はフローサイト

ンパク質である 1, 2, 3）。rBC2LCN-FITC、

60/81 抗体、抗 SSEA-4 抗体と比較しメトリーへの適用も可能である。蛍光rBC2LCN-635、rBC2LCN-547 は、 そ
れぞれ FITC、Cy5、Cy3 領域蛍光色

rBC2LCN-FITC

Oct3/4

DAPI

Merge

素で蛍光標識した製品（rBC2LCN-547
は近日発売予定）で、細胞毒性をほとんど示さないため、細胞を生きたまま染色できる安全性の高いマーカーである。また、培養液中に添加するだけで使用できるため非常に簡単で、生きた

18

図３．rBC2LCN-FITC を用いた固定ヒト iPS 細胞の染色4% パ ラ ホ ル ム ア ル デ ヒ ド で 固 定 し た ヒ ト iPS 細 胞（201B7 株 ） を 抗 Oct3/4 抗 体 及 び
rBC2LCN で染色した（使用濃度：1/1,000）

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

800

800

500

600

600

400

化したヒト二倍体線維芽細胞とを明確

count

ころ、未分化であるヒト iPS 細胞と分

400

200

0

0

100

から、残存した未分化細胞を分離でき

101

102

rBC2LCN-FITC

103

400
300

300
200

100

101

102

103

200
100

100

rBC2LCN-FITC

rBC2LCN-FITC

ヒト二倍体線維芽細胞

600

400

200

に分離可能であった（図 4）。この方法を応用して、分化誘導した細胞集団

ヒトiPS細胞（201B7株）

1,000

count

し、フローサイトメトリーに供したとヒト二倍体線維芽細胞

1,000

count

ヒトiPS細胞（201B7株）

及びヒト正常二倍体線維芽細胞を染色

count

標識 rBC2LCN を用いてヒト iPS 細胞

0

100

101

102

rBC2LCN-635

control

103

rBC2LCN-635

0

100

101

102

rBC2LCN-635

103

control

図４．rBC2LCN-FITC、rBC2LCN-635 を用いたヒト iPS 細胞の分離
分散したヒト iPS 細胞（201B7 株）とヒト二倍体線維芽細胞を各蛍光標識 rBC2LCN で染色しフローサイトメトリーに供した（使用濃度：1/1,000）

る可能性が示され、今後再生医療分野への応用が期待される。

rBC2LCN の応用

rBC2LCN-FITC
30min

従来、細胞の未分化性のチェックに

rBC2LCN Stripping Solution
30minは抗体が使用されているが、抗体で

図５．rBC2LCN-FITC で染色したヒト iPS 細胞から rBC2LCN の剥離

染色した細胞から抗体を剥離することは現実的にはほとんど不可能である。rBC2LCN ス ト リ ッ ピ ン グ 溶 液

ヒ ト iPS 細 胞（201B7 株 ） の 培
養 液 に rBC2LCN-FITC（ 使 用 濃
度：1/100）を添加し 30 分間染
色した後、培養液を rBC2LCN ス
トリッピング溶液に置換し 30 分
後に撮影

【AiWashS1】は、rBC2LCN で染色した細胞から rBC2LCN を剥がすことができる試薬である。rBC2LCN で染色したヒト iPS 細胞の培養液を rBC2LCN
ストリッピング溶液に置換し 30 分間

さまざまな研究に活用いただきたい。

〔参考文献〕

培養するだけで染色を剥離することが※rBC2LCN-FITC、rBC2LCN-635、できる（図 5）。このストリッピング

rBC2LCN-547 はいずれも同様の使溶液による培養中の細胞への影響はほ用法で細胞を染色でき、rBC2LCN

とんど見られず、染色を剥離後の細胞

ストリッピング溶液を用いて剥離がを、その後の培養や実験に使用するこ可能である。

１）Onuma, Y., Tateno, H., Hirabayashi, J., Ito,Y. and Asashima, M. : Biochem. Biophys.
Res. Commun ., 431（3）,524-529（2013）.
２）Tateno, H., Matsushima, A., Hiemori, K.,
Onuma, Y., Ito, Y., Hasehira, K., Nishimura,K., Ohtaka, M., Takayasu, S., Nakanishi, M.,
Ikehara, Y., Nakanishi, M., Ohnuma, K.,
Chan, T., Toyoda, M., Akutsu, H., Umezawa,
A., Asashima, M. and Hirabayashi, J. : StemCells Transl. Med ., 2（4）,265-273（2013）.
３）Tateno, H., Toyota, M., Saito, S., Onuma, Y.,
Ito, Y., Hiemori, K., Fukumura, M., Matsushima,A., Nakanishi, M., Ohnuma, K., Akutsu, H.,
Umezawa, A., Horimoto, K., Hirabayashi, J.
and Asashima, M. : J. Biol. Chem ., 286（23）,20345-53（2011）.

rBC2LCN は国立研究開発法人産業とが可能となる。
従来、染色に使用されてきた抗体と比べ、低分子なレクチンによる未分化

技術総合研究所

創薬基盤研究部門との共同開発品である。

細胞の染色手法は、非常に簡便に鮮明な細胞染色を可能とし、さらに剥離することが可能であるため、この領域の未分化ヒト万能性幹細胞のライブセルイメージング試薬
コード No.

品

名

Excitation

Emission規格

rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】

495nm

520nm

細胞染色用

rBC2LCN-547【AiLecS1-547】

551nm

565nm

細胞染色用

rBC2LCN-635【AiLecS1-635】

634nm

654nm

細胞染色用

容

量

希望納入価格（円）rBC2LCN【AiLecS1】

近日
発売
近日
発売

180-02991
186-02993
186-03211
182-03213
185-03161
181-03163
029-18061
025-18063

BC2LCN【AiLecS1】Lectin, recombinant,Solution

未標識品

糖鎖研究用

100μℓ
100μℓ×5100μℓ
100μℓ×5100μℓ
100μℓ×51mg
1mg×5

20,00080,00030,000120,000
30,000120,000
30,000照会

10mℓ

15,000rBC2LCN 剥離溶液
☞ NEW 182-03171

P.30

rBC2LCN Stripping Solution【AiWashS1】…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

−

−

細胞培養用

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掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報 Vol.83, No.2（2015）19

ew Products
特

位置選択的カップリング配位子●粒子径の均一なシリカゲルを使用し、分離能が向上

Cy-DHTP・HBF4
本品は、DHTP（Dihydroxyterphenylphosphine）系の配位子です。本品を配位子として用いたカップリング反応
では、フェノールの OH 基やアニリンの NH 2 基に対してオ
ルト位選択的にカップリング反応が進行します。
OH

OH

特

長

PCy2・HBF4

C30H36O2 P・BF4＝546.38
CAS No. 1219499-55-4

長●アミノ基や水酸基のオルト位選択的にカップリングが可能●インドールやベンゾフランのワンポット合成が可能

物性情報
シリカゲルの粒子径5〜15μmシリカゲルの細孔径7nm（70Å）

シリカゲルの比表面積450m2/g

シリカゲルの細孔容量

0.8mℓ/g

シリカゲル層の厚さ

230〜250μm

支持体

ガラスプレート

蛍光指示薬

単色蛍光物質［254nm］

実 験 例■ 標準試料の展開

反 応 例■ ワンポット 2 置換インドール合成

実験条件
［試料］
1. カフェイン
2. ナプロキセン
3. - アセトアミドフェノール
4. - ヒドロキシ安息香酸〔参考文献〕
1）Yamaguchi, M., Katsumata, H. and Manabe, K. : J. Org. Chem ., 78, 9270
（2013）.
2）Yamaguchi, M. and Manabe, K. : Org. Lett ., 16, 2386（2014）.
コード No.

品

名

規

格

■ 生薬標準品の展開
実験条件※
［試料］
サイコサポニン a［移動相］
酢酸エチル : エタノール : 水 =8:2:1［呈色試薬］
4- ジメチルアミノベンズアルデヒド試液を噴霧し、105℃で 5 分間加熱
［展開距離］10cm

容量 希望納入価格（円）042-33811 2''-（Dicyclohexylphosphino）-p 250mg
terphenyl-2,6-diol Tetrafluoroborate 有機合成用
NEW 048-33813
1g【Cy-DHTP・HBF4】
NEW

［移動相］
クロロホルム : メタノール =a）95:5b）90:10c）85:15 d）80:20［検出］UV254nm［展開距離］10cm

11,00030,000※日本薬局方 第 16 局
「サイコ」確認試験（2）薄層クロマトグラフ用 TLC プレート
シリカゲル 70F254TLC プレート - ワコー
シリカゲル 70 F 254 TLC プレート - ワコーは、細孔径 7 nm
（70 Å）で粒子のそろった多孔質シリカゲルをガラス板上に均一に塗布してあります。緑の蛍光物質が添加されており、分離されたスポットは紫外（254 nm）の照射により、緑色地に暗いスポットとして観察されます。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

コード No.

品

名

層厚［mm］ 規

Silicagel 70F254
NEW 193-17811
TLC Plate-Wako

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20

和光純薬時報0.25

格Vol.83, No.2（2015）

容量

希望納入価格（円）薄層クロマト
25枚
16,800グラフ用 （20cm×20cm）

ew Products■ ラポンチシン

品目追加

本品は、日本薬局方一般試験法 試薬・試液のラポンチ

生薬試験用標準品

シン，薄層クロマトグラフィー用に適合します。ダイオウの純度試験に使用されます。

当社は、局方規格の生薬試験用標準品 80 品目、自主規

OH

含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：白色〜うすい黄褐色の結晶性の粉末

格の高純度生薬試験用標準品 70 品目、計 150 品目を取り揃えており、品目は順次追加しています。生薬試験用標準品

OHOを網羅した生薬ガイドブックをご用意していますのでご要HO■ カピラリシン標準品

カピラリシンは、生薬インチンコウなどに含まれる成分

■ ルチン

です。

本品は、日本薬局方一般試験法

HO
H3C

O

O

OH

C21H24O9＝420.41
CAS No. 155-58-8

試薬・試液のルチン，

薄層クロマトグラフィー用に適合します。サンザシの確認

O試験に使用されます。

OH
OH

OH

含量
（HPLC）：95.0% 以上
外 観：うすい黄色〜黄緑色の結晶又は結晶
性の粉末
HO

O

C16H12O7＝316.26
CAS No. 56365-38-9

OHOO■ イソリクイリチゲニン標準品

OH O
HO

イソリクイリチゲニンは、生薬カンゾウに含まれている

成分です。

O
O

HO
OH

含量
（HPLC）：96.0% 以上
外 観：黄色〜赤褐色、結晶性粉末〜粉末

HO

OH

O

本品は、日本薬局方一般試験法

コード No.

の確認試験に使用されます。
含量（qNMR）：95.0% 以上
外 観：白色〜黄みのうすい灰色の結晶

O

品

名

規

034-22461 Capillarisin Standard
NEW
099-06951 Isoliquiritigenin Standard
NEW

ロリンヨウ化物，定量用に適合します。葛根湯加川芎辛夷NEW134-18381 Magnoflorine IodideNEW

162-26771 Phlorin StandardNEW

187-03121 Rhaponticin

NEW

184-03131 Rutin

CH3

HO
OH

容量 希望納入価格（円）格

生薬試験用 20mg
生薬試験用 10mg
局方生薬試験用
10mg
（定量用）
5mg
生薬試験用
局方生薬試験用（薄層クロマトグ 5mg
ラフィー用）
局方生薬試験用（薄層クロマトグ 20mg
ラフィー用）

45,00017,00038,00020,00016,0008,000

・I

和光純薬時報 Vol. 82 No. 4 訂正案内
和光純薬時報 Vol. 82 No. 4 の記事中に誤りがございました。下記の通り訂正をご案内させていただくとともに、深くお詫び申し上げます。

−

C20H24INO4＝469.31
CAS No. 4277-43-4

記〈訂正内容〉
掲載箇所：p. 14■ フロリン標準品

フロリンは、生薬トウヒ、キジツに含まれている成分で

イオン液体

訂正箇所：構造式

HO

⑤【正】

⑥【正】

HO

Me

HO

N

+

F

OH

C12H16O8＝288.25
CAS No. 28217-60-9…− 20℃保存…− 80℃保存

O
S

F

OH

Me

Me

Me

O
O

Pr

（CH2）
5

OH

⑤、⑥

訂正内容：
Me

…2 〜 10℃保存

OH

O
N+
H
H3C CH3

す。

HO

CH3

C27H30O16＝610.52
CAS No. 153-18-4

OH

試薬・試液のマグノフ

H3C

O

OH

C15H12O4＝256.25
CAS No. 961-29-5■ マグノフロリンヨウ化物

含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：白色の粉末

CH3

O

HO

望の方は、当社営業または、代理店へお問合せ下さい。

含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：白色〜わずかにうすい黄色、結晶〜粉末

O

OH

F

O

O
−

N

O

Me

F

S

N+ Me

F
F

C9H22N・C2F6NO4S2＝424.42
CAS No. 210230-43-6

F

O
S

F
F

O

O
−

N

F

S
O

F
F

C6H16N・C2F6NO4S2＝382.34
CAS No. 268536-05-6

当社 HP 掲載 pdf ファイルは訂正しています。
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和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）21

ew Products
分析用カラムマイコトキシン試験用標準液 品目追加

コード No.

本品は、小麦及び大麦を汚染する主要フザリウムトキシ

アフラトキシン標準液

シン、HT- 2 トキシン、ゼアラレノン）の混合標準液です。
一斉分析法の検討などにぜひご活用下さい。

混合成分●デオキシニバレノール（25 μg/mℓ）（25μg/mℓ）● HT- 2 トキシン（5 μg/mℓ）●ニバレノール●ゼアラレノン（25 μg/mℓ） ● T- 2 トキシン（5 μg/mℓ）

分 析 例■ LC/MS によるクロマトグラム
Peak No.5

コード No.

18.4349.595

15.372

7.883

Peak No.1

17.635

Peak No.3

Peak No.
成分名
モニタリングイオン（m/z） モード
1
ニバレノール371−
2
デオキシニバレノール
355−
3
HT-2トキシン
483−
4T-2トキシン484+
5
ゼアラレノン
317−〈装置〉
LC/MS-2020（島津製作所製）〈LC〉
カラム：Wakopak® Ultra C18-5, 3.0mmφ×25cm
溶離液：A）0.1% 酢酸−0.5mmol/ℓ酢酸アンモニウム溶液
B）0.1％ 酢酸−アセトニトリル溶液
グラジェント： 時間（分） B（%）
0〜15 10〜90
15〜2590
流速：0.3mℓ/min.
イオン化法：ESI
検出器：質量検出
コード No.

品

名

規

格

希望納入価格（円）容量

Fusarium Toxins Mixture Standard Solution マイコトキシン 1mℓ×5A
068-06401 （Acetonitrile
危 毒素等
Solution）
試験用

40,000

関連商品
フザリウムトキシンを分析する際に、ベルカロール及びゼアララノンを内部標準物質として使用する手法が提案されています 1）。
〔参考文献〕
1）Nakagawa, H. et al . : J. Anal. Bioanal. Tech ., S6-002（2014）.
コード No.
NEW

品

名225-02231 Verrucarol Standard
264-02141 Zearalanone Standard規
毒素等…2 〜 10℃保存

格

容量 希望納入価格（円）

マイコトキシン試験用 5mg
マイコトキシン試験用 5mg…− 20℃保存名格

容量60,00034,000…− 80℃保存品

名

和光純薬時報含量保証

規格

希望納入価格（円）28,00020,00020,00020,00020,00040,000

容量 希望納入価格（円）3-Acetyldeoxynivalenol
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
014-22621 Standard
毒素等（HPLC）
試験用
15-Acetyldeoxynivalenol
95.0％以上
マイコ
トキシン 5mg
018-23481 Standard
毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
98.0％以上 マイコトキシン015-23491 Aflatoxin B1 Standard 毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
5mg
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
014-24201 Aflatoxin B2 Standard 毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
98.0％以上
マイコトキシン
018-23501 Aflatoxin G1 Standard 毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
5mg
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
015-23511 Aflatoxin G2 Standard 毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
Deoxynivalenol
Standard047-31041
毒素等（HPLC）
試験用
Diacetoxyscirpenol
98.0％以上
マイコ
トキシン 5mg
044-31051 Standard
毒素等（qNMR、cGC） 試験用
95.0％以上 マイコトキシン061-05771 Fumonisin B1 Standard
5mg（qNMR、HPLC） 試験用
95.0％以上 マイコトキシン 5mg
066-06181 Fumonisin B2 Standard（qNMR、HPLC） 試験用
マイコトキシン 5mg
065-05431 Fusarenon-X Standard 毒素等 95.0％以上（HPLC）
試験用
97.0％以上
マイコ
トキシン 5mg
HT-2
Toxin
Standard
087-09871
毒素等（qNMR、ｃGC） 試験用
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
142-08971 Neosolaniol Standard 毒素等 （qNMR、
cGC） 試験用
Nivalenoln-Hydrate
98.0％以上
マイコトキシン 5mg
149-08741 Standard
毒素等（HPLC）
試験用
98.0％以上
マイコ
トキシン 5mg
153-02961 Ochratoxin A Standard（HPLC）
試験用
98.5％以上 マイコトキシン 10mg
168-21631 Patulin（HPLC）
試験用
98.0％以上
マイコ
トキシン 5mg
Sterigmatocystin
Standard
190-16081
毒素等 （qNMR、HPLC） 試験用
98.0％以上 マイコトキシン 5mg
204-17731 T-2 Toxin Standard 毒素等 （qNMR、
cGC） 試験用
98.0％以上
マイコトキシン 5mg
Zearalenone
Standard
266-01981
毒素等（HPLC）
試験用
毒素等

70,00080,00070,00070,00090,000110,000
90,00030,00090,000照会

130,000
100,000
80,00090,00075,00030,00080,00045,00050,000：生物・毒素兵器の製造、使用防止のため「毒素等」を試験研究用に使用することを確認する証が必要です。

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22

規62,000

マイコトキシン標準品

Peak No.4
Peak No.2

品

Aflatoxins Mixture Standard Solution マイコトキシン018-24341（B1, B2, G1, G2 each 25μg/mℓ
1mℓ×5A
試験用
危 毒素等
Acetonitrile Solution）
B1 Standard Solution（25μg/mℓ マイコトキシン 1mℓ×5A
010-24301 Aflatoxin
危 毒素等
Acetonitrile Solution）
試験用
マイコトキシンAflatoxin
B（
25μg/mℓ2 Standard Solution
1mℓ×5A
017-24311 Acetonitrile Solution）
危 毒素等
試験用
マイコ
トキシン
Aflatoxin
GStandard
Solution（
25μg/mℓ
1mℓ×5A
014-24321 Acetonitrile1 Solution）
危 毒素等
試験用
G2 Standard Solution（25μg/mℓ マイコトキシン 1mℓ×5A
011-24331 Aflatoxin
危 毒素等
Acetonitrile Solution）
試験用
マイコトキシンAflatoxin
M（0.5μg/mℓ
1 Standard Solution
013-25751
危 毒素等
試験用 1mℓ×5A
Acetonitrile Solution）

コード No.

近日発売

容量 希望納入価格（円）

名233-63751 Wakopak® Ultra C18-5 Φ3.0mm × 250mm（D） 1本

ン 5 種（デオキシニバレノール、ニバレノール、T- 2 トキNEW

品

フザリウムトキシン混合標準液

Vol.83, No.2（2015）

ew Products■トリフロキシストロビン代謝産物 B 標準品

品目追加

化学名：
（E ,E ）-α（Methoxyimino）-2{{{1-[3（trifluoromethyl）
phenyl]ethylidene}amino}oxymethyl}
benzeneacetic Acid
含量
（qNMR）：98.0% 以上
外 観：白色、結晶性粉末〜粉末

ポジティブリスト関連標準品
ポジティブリスト関連の残留農薬試験用標準品及び HPLC
用動物用医薬品標準品の追加品目をご紹介します。品目は順

CH3
O
H3C

コード No.

OH

化学名：N 1-[（6-Chloro-3-pyridyl）
methyl]N 2-cyanoacetamidine
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：白色〜わずかにうすい黄色、結晶性
粉末〜粉末

CH3
N
H

N
N

N

C9H9ClN4＝208.65

品

名

規

Acetamiprid Metabolite
NEW 019-25851
IM-2-1 Standard
NEW 034-24041
Cinidon-ethyl Standard
Difenoconazole MetaboliteNEW045-33661
D Standard
NEW
090-07101 Isoxaflutole StandardNEW
116-01031 2-Ketomolinate Standard■ アセタミプリド代謝産物 IM-2-1 標準品

Cl

危■シニドンエチル標準品
化学名：Ethyl（Z ）-2-Chloro-3-[2-chloro-5（1,2-cyclohex-1-enedicarboximido）
phenyl]acrylate
別 名：Lotus
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：白色、結晶性粉末〜粉末
溶解性：水 0.057mg/ℓ（20 ℃）。 ア セト ン
213、メタノール 8、トルエン 384
（g/ℓ、
20℃）
備 考：除草剤

O

NEW

N

Cl
Cl
C
H

O

O

N

C19H17F3N2O4＝394.34
CAS No. 252913-85-2

次追加しています。

■ 農薬標準品

O

208-20061

Trifloxystrobin Metabolite B
Standard

格

希望納入価格（円）

容量

残留農薬試験用 100mg

28,000残留農薬試験用 100mg

18,000残留農薬試験用 100mg

30,000残留農薬試験用 100mg

20,000残留農薬試験用 100mg

40,000残留農薬試験用 100mg

30,000■ 動物用医薬品標準品

C■ バクイノレート標準品

OCH2CH3

化学名：Ethyl 4-Hydroxy-6,7-bis（2-methylpropoxy）-3quinolinecarboxylate
含量（HPLC）：98.0% 以上
外 観：白色〜うすい黄色、結晶性粉末〜粉
H3C
末

O

C19H17Cl2NO4＝394.25
CAS No. 142891-20-1

CH3

O

N

N

O

CH3
CH3

O
O

Cl

O

N

OH

CH3

C20H27NO5＝361.43
CAS No. 5486-03-3■ジフェノコナゾール代謝産物 D 標準品
化学名：1-[2-Chloro-4（4-chlorophenoxy）
phenyl]-2（1H -1,2,4-triazole-1-yl）
ethanol
Cl
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：白色〜ほとんど白色、結晶性粉末〜
粉末

CF3

N

■ファムフール標準品

N

化学名：O -4-Dimethylsulfamoylphenyl O ,O Dimethyl Phosphorothioate
含量（qNMR）：98.0% 以上
外 観：白色、結晶性粉末〜粉末OH

C16H13Cl2N3O2＝350.20
CAS No. 117018-19-6

O

N S
H3C

OCH3

S

O

H3C

P

OCH3

O

C10H16NO5PS2＝325.34
CAS No. 52-85-7■イソキサフルトール標準品■オルビフロキサシン標準品

化学名：5-Cyclopropyl-4（2-methylsulfonylSO2CH3O
4-trifluoromethylbenzoyl）
isoxazole
別 名：Balance
N
含量（qNMR）：98.0% 以上O
CF3
外 観：白色〜わずかにうすい黄色、結晶性
粉末〜粉末
C15H12F3NO4S＝359.32
溶解性：水 6.2mg/ℓ（pH 5.5、20℃）。アセ
トン 293、ジクロロメタン 346、酢酸
CAS No. 141112-29-0
エチル 142、n - ヘキサン 0.10、トルエン 31.2、メタノール 13.8（g/ℓ、20℃）
備 考：除草剤

化学名：1-Cyclopropyl-7-[（3S ,5R ）CH33,5-dimethylpiperazin-1-yl]-5,6,8trifluoro-4-oxoquinoline-3HN
carboxylic Acid
N
含量
（qNMR）：98.0% 以上
H3C
外 観：白色〜わずかにうすい黄色、結晶性
粉末〜粉末

化学名：S -Ethyl Hexahydro-2-oxo-1H azepine-1-carbothioate
含量（cGC）：98.0% 以上
外 観：白色〜うすい黄色、塊、又は融解時、無色〜うすい黄色、澄明の液体

OO

C9H15NO2S＝201.29
CAS No. 24928-89-0

COOH
F

O

C19H20F3N3O3＝395.38
CAS No. 113617-63-3
品

名

規

格

容量

希望納入価格（円）NEW021-18761 Buquinolate Standard

高速液体用
100mg
クロマトグラフ用NEW

069-06431 Famphur Standard

高速液体用
100mg
クロマトグラフ用

18,000NEW

154-03351 Orbifloxacin Standard

高速液体用
100mg
クロマトグラフ用

15,000SCH2CH3
N

N

F

コード No.

■ 2- ケトモリネート標準品

F

45,000

その他のポジティブリスト関連品目は下記よりご参照下さい。
当社 HP →カテゴリーから選ぶ→分析・環境→食品分析→ 01 . 残留農薬・動物用医薬品（ポジティブリスト制度）…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

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掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）23

ew Products
抗りん酸化抗体不要！
りん酸化タンパク質研究用ポリアクリルアミドゲル■ りん酸化状態の経時変化Ⓡ

スーパーセップ

TM

Time after X-irradiation

Phos-tag シリーズ
®

-

1

2

4

6

8

(h)

p53

®

本品は、Phos-tag アクリルアミドを重合させたタンパ
X

ク質電気泳動用プレキャストゲルです。 Phos-tag® は広島大学医薬分子機能科学研究室で開発されたりん酸基を捕捉する機能性分子です。ゲルに含まれる Phos-tag® がりん酸
化タンパク質を捕捉し、りん酸化タンパク質の泳動速度を遅らせます。これにより、りん酸化タンパク質と非りん酸化タンパク質を異なるバンドとして検出できます。本品は電気泳動槽「イージーセパレーター TM」と併せてご使用下さい。

製品仕様
13
17
30
25
100×100×3（mm）
90×85×1（mm）〈Phos-tag® 製品が使用された文献数の推移〉

Phos-tag® SDS-PAGE の原理
りん酸化タンパク質と非りん酸化タンパク質とでは、分子量があまり変わらないないため、通常の SDS-PAGE で
それらを分離することは困難です。
Phos-tag® が含まれたゲルで SDS-PAGE（Phos-tag® SDSPAGE）を行うと、りん酸化タンパク質はそのりん酸化の程度に応じて泳動速度が遅くなります。

Number of publications

ウェル数
ウェル容積
（μℓ）
プレートサイズ
ゲルサイズ

ヒト肺がん由来 Lu99 細胞に X 線（5Gy）を照射し、経時的に細胞を回 収した。 細 胞 抽 出 液を調 製し、スーパーセップ TM Phos-tag ®
（50μmol/ℓ）, 10%, 13 ウェルを用いて SDS-PAGE を行った。
ゲルを 10mmol/ℓ EDTA を含むトランスファーバッファーで振とう後、
PVDF 膜へ転写した。メンブレンは、2%Milk/TBS-T でブロッキングした後、一次抗体と反応させた（上段：p53, 下段：細胞周期関連タン
パク質）。検出は化学発光試薬を用いて行った。
p53 は、X 線照射により、タンパク質の蓄積が 4 時間後をピークに見られた。プロテイン X は、X 線照射により、りん酸化の状態が変化することがわかった。
（データ提供：東京大学大学院医学系研究科 疾患生命工学センター
放射線分子医学部門 榎本助教）

100

50

0

2008年

コード No.

Phos-tag®
通常のSDS-PAGE
SDS-PAGE（バンドは 1 本） （バンドが複数）

Phos-tag®
りん酸化タンパク質
非りん酸化タンパク質

使 用 例■ α- カゼインとその脱りん酸化物の分離
泳動条件：30mA/ ゲル（定電流）, 60 分
サンプル：5μg/lane α-カゼイン, ウシ乳由来とその脱りん酸化物［コード No. 038-23221］
サンプルバッファー：試料用緩衝液（2ME+）（×4）［コード No. 191-13272］
ランニングバッファー：SDS-PAGE バッファー , pH 8.5［コード No. 192-16801］
染色：クイック CBB プラス［コード No. 174-00553］

α-カゼインα-カゼイン，脱りん酸化

P10%

P15%

®
,
P10%（左）：スーパーセップ TM Phos-tag（50μmol/ℓ）
10%, 13 ウェル®
P15%（中）：スーパーセップ TM Phos-tag（50μmol/ℓ）,
A15%15%, 13 ウェル
TM
A15%（右）：スーパーセップ エース , 15%, 13 ウェル（Phos-tag® 不含ゲル）…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

2009年

2010年

品

名

®
, 6%, 13well
192-17401 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）®
199-17391 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 6%, 17well®
195-17371 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 7.5%, 13well®
192-17381 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 7.5%, 17well®
193-16711 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 10%, 13well®
, 10%, 17well
190-16721 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）®
, 12.5%, 13well
195-16391 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）®
193-16571 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 12.5%, 17well®
193-16691 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 15%, 13well®
196-16701 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 15%, 17well®
197-16851 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）, 17.5%, 13well®
, 17.5%, 17well
194-16861 SuperSepTM Phos-tag（50μmol/ℓ）

和光純薬時報

2012年

規

2013年

格 容量 希望納入価格（円）

電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用
電気泳動用

5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚
5枚

30,00030,00030,00030,00030,00030,00030,00030,00030,00030,00030,00030,000

関連商品
コード No.

品

名規

格 容量 希望納入価格（円）058-07681 EasySeparatorTM

電気泳動用 1セット 52,000038-23221 α-Casein, from Bovine Milk,
Dephosphorylated

生化学用

α-カゼインと脱りん酸化α-カゼインが含034-23223 まれています。

1mg

5,000

10mg 15,000

Phos-tag® 製品一覧は当社 HP をご参照下さい。
http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/product/life/phos-tag/※Phos-tag® は、広島大学小池教授の登録商標です。
表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。

掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

24

2011年

Vol.83, No.2（2015）

ew Products
デ ー タアビジン - 磁気ビーズの決定版■ 細胞ライセートからのビオチン化 DYKDDDDK-BAP 回収

MagCaptureTM タマビジン ®2-REV〈銀染色〉

本品は、タマビジン® 2 -REV を固相化した磁気ビーズで

分子量
（k）

す。タマビジン® 2 -REV は新規アビジン様タンパク質 ｢ タ

2

3

4 5

6

250
150

マビジン® 2 ｣ のアミノ酸改変体で、ビオチンとの結合力100を低減することにより、可逆的なビオチン結合複合体を形75成することができます。そのため、過剰ビオチンの添加に50

より、ビオチン化分子の競合溶出が可能です。

37

タンパク質、核酸などさまざまなビオチン化分子の回ビオチン化
DYKDDDDK-BAP

M：分子量マーカー
1：1% Input
2：A 社 Streptavidin 磁気ビーズ
3：A 社 Streptavidin 磁気ビーズ（微粒子タイプ）
4：B 社 Streptavidin 磁気ビーズ
5：MagCaptureTM Tamavidin®2-REV
6：MagCaptureTM Tamavidin®2-REV（ビオチン競合溶出）

25
20
15
10

収・精製にご利用下さい。

特2×SDS Sample Buﬀer ビオチン
競合溶出
溶出

M 1

〈WB〉

長

WB : Anti-DYKDDDDK-HRP
2×SDS Sample Buﬀer ビオチン
競合溶出
溶出

●磁気でビーズを集積させることにより回収操作時間短縮

分子量
（k） M

1

2

3

4

5

6
ビオチン化
DYKDDDDK-BAP

50●非特異的吸着の低減●ビオチン競合溶出によりマイルドな条件下で回収可能●さまざまなアプリケーションへの適用

M：分子量マーカー
1：10% Input（40ng DYKDDDDK-BAP）
2：A 社 Streptavidin 磁気ビーズ
3：A 社 Streptavidin 磁気ビーズ（微粒子タイプ）
4：B 社 Streptavidin 磁気ビーズ
5：MagCaptureTM Tamavidin®2-REV
6：MagCaptureTM Tamavidin®2-REV（ビオチン競合溶出）

ビオチン 化 DYKDDDDK-BAP 10ng を添 加した K562 細 胞 溶 解液（5×106 cells 相当）から従来のストレプトアビジン磁気ビーズ及びMagCaptureTM タマビジン ®2-REV を用いてビオチン化 DYKDDDDKBAP を回収（SDS 溶出及びビオチン溶出）した。
従来品よりも低バックグラウンドでビオチン化 DYKDDDDK-BAPを回収することができた。

アプリケーション例●ビオチン化分子の回収・精製●免疫沈降●プルダウンアッセイ

その他のデータは当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/● RNA プルダウンアッセイ

siyaku/product/life/TMREV/index.htm）をご参照下さい。

操作概要〈ライセンスについて〉
Tamavidin®/ タマビジン® は日本たばこ産業株式会社のビオチン化分子登録商標です。当社では、日本たばこ産業株式会社からラTamavidin®2-REV
磁気ビーズ

イセンスを受けて販売しています。
〔参考文献〕
１）Takakura, Y., Sofuku, K. and Tsunashima, M. : J. Biotechnol ., 164（1）,19（2013）.
２）請川亮、西部隆宏、定村佳房：Med. Sci. Digest , 40 , 35（2014）.

ビオチン溶液洗浄溶液

コード No.

フロースルーNEW

136-18341

品

名MagCaptureTM Tamavidin®2-REV

規

格

容量 希望納入価格（円）

遺伝子
研究用

2mℓ 40,000

規

容量 希望納入価格（円）

関連商品
洗浄フロースルー

精製ビオチン化分子

コード No.

品

名023-08711（+）-Biotin
023-08716
209-18261
205-18263 Tamavidin®2, recombinant
203-18264
203-19401 Tamavidin®2-REV, recombinant
209-19403 ビオチンと可逆的結合性
202-19351 Tamavidin®2-LPI, recombinant
208-19353 非特異的結合低減性
209-19361 Tamavidin®2-HOT, recombinant
205-19363 超耐熱・有機溶媒耐性…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

格

2,400
100mg
和光一級
500mg
4,800
1mg
8,500
免疫化学用 5mg 25,000
25mg 120,000
1mg 18,000
免疫化学用
5mg 70,000
1mg 12,000
免疫化学用
5mg 48,000
1mg 18,000
免疫化学用
5mg 70,000

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和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）25

ew Products
関連商品

組織固定液
16w/v% パラホルムアルデヒド溶液，メタノールフリー
パラホルムアルデヒドは、高い反応性や、細胞透過性を持
つ試薬のため、細胞内のタンパク質や核酸の可逆的な架橋剤として、細胞・組織固定化剤として広く使用されています。
本品は、16w/v% パラホルムアルデヒド溶液に調製した
1mℓ と 10mℓ のアンプル包装（不活性ガス封入）ですので、保存時の酸化によるぎ酸産生の心配がなく、開封した時にいつでも フレッシュ な状態でご使用頂くことができます。

コード No.

品

名167-25981 16w/v% Paraformaldehyde
163-25983 Solution, Methanol free

規

格

容量

希望納入価格（円）1mℓ×10A 8,000
電子顕微鏡用
10mℓ×10A 10,500

関連商品
コード No.

品

名023-17361 Bouin Solution
危034-17711 Carnoy Solution
071-02031 10% Glutaraldehyde Solution
072-02262
20% Glutaraldehyde Solution
076-02265
077-06271 25% Glutaraldehyde Solution
危
071-01931 70% Glutaraldehyde Solution
4% Paraformaldehyde Phosphate161-20141
Buffer Solution

規

格

容量

希望納入価格（円）

病理研究用
1ℓ
8,000
組織固定用
6,200
1ℓ
電子顕微鏡用 2mℓ×5A
5,700
25mℓ
2,400
電子顕微鏡用
500mℓ 12,500
電子顕微鏡用 10mℓ×10A 11,000
電子顕微鏡用 2mℓ×5A 10,200
組織固定用

2,200

100mℓ

細胞観察に
活性酸素特異的蛍光プローブ
当社では、生細胞の過酸化水素及びスーパーオキシドのイメージングやフローサイトメトリーによる細胞分析に使用できる蛍光プローブをラインアップしています。
BES-H2O2-Ac、BES-H2O2 及び PF6-AM は、過酸化水素
を特異的に可視化可能な蛍光色素です。また、BES-SoAM 及び BES-So は、スーパーオキシドを特異的に可視化可能です。
コード No.

品

名028-17811 BES-H2O2-Ac
024-18751 BES-H2O（Cell-impermeant）
2
167-26841
PF6-AM
163-26843
021-17801 BES-So-AM
028-16211 BES-So（Cell-impermeant）…2 〜 10℃保存

規

格

容量

希望納入価格（円）細胞生物学用
細胞生物学用

1ｍｇ
1ｍｇ
1ｍｇ
5ｍｇ
1ｍｇ
1ｍｇ

25,00025,00033,000135,000
25,00025,000

細胞生物学用
細胞生物学用
細胞生物学用…− 20℃保存…− 80℃保存

コード No.

品

名その他シナプス観察蛍光プローブ
220-02161
ViVidFluor Neuro Green
226-02163
222-02121
ViVidFluor Neuro Red
228-02123
アクチン特異的蛍光プローブ
165-21641

Phalloidin, Rhodamine X
conjugated068-06261 Fluorescein, Phalloidin
181-02921 Rhodamine, Phalloidin
DNA特異的蛍光プローブ
4',6-Diamidino-2-phenylindole
045-30361
Dihydrochloride n -Hydrate【DAPI】

和光純薬時報格容量

希望納入価格（円）

1mg
5mg
1mg
5mg

12,50044,00013,00043,000

細胞生物学用 300回用

53,000

細胞生物学用 300units
細胞生物学用 300units

30,00035,000

分子生物学用10mg

12,000

細胞生物学用
細胞生物学用

083-09971

Bisbenzimide H33258
Trihydrochloride

細胞生物学用 100mg

13,500080-09981

Bisbenzimide H33342
Trihydrochloride

細胞生物学用 100mg

13,500

10mg
25mg
100mg
1mg
1mg

5,200
7,500
20,00020,00030,000

1mg
5mg

9,800
29,8001mg

14,8005mg

59,0001mg

14,5005mg

52,000169-26281
165-26283 Propidium Iodide
163-26284
016-25241 7-Aminoactinomycin D【7-AAD】
054-08761 Ethidium Homodimer 1
β-ガラクトシダーゼ蛍光プローブ
065-06271 Fluorescein Di-β-D061-06273 galactopyranoside【FDG】
048-33391 5-Dodecanoylaminofluorescein
Di-β-D-Galactopyranoside044-33393 【C12-FDG】

細胞生物学用
生化学用
生化学用
細胞生物学用
細胞生物学用

046-33331 9H（1,3-Dichloro-9,9-dimethylacridin2-one-7-yl）β-D-Galactopyranoside
細胞生物学用
042-33333 【DDAO Galactoside】

詳細は、当社 HP（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/
product/life/probe/index.htm）をご参照下さい。
表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。

掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

26

規

チオール反応性蛍光プローブ
1mg
8,000
229-02131
ViVidFluor Cell Blue CMAC
細胞生物学用225-02133
5mg 22,000
226-02141
1mg
8,000
ViVidFluor Cell Blue CMHC
細胞生物学用5mg 22,000
222-02143
223-02151 ViVidFluor Cell Green CMFDA
細胞生物学用1mg 22,000025-15481 BES-Thio
細胞生物学用1mg 25,000
224-02181 ViVidFluor Cell Orange CMTMR
細胞生物学用1mg 25,000
ミトコンドリア膜電位感受性蛍光プローブ
187-01703
25mg 12,000
Rhodamine123
生化学用
181-01701
50mg 17,000
Dihydrorhodamine 123
生化学用10mg 27,000047-28231
Hydrochloride
細胞生物学用5mg 57,000
106-00131 JC-1
Tetramethylrhodamine Methyl
細胞生物学用 25mg 26,900
203-18041
危
Ester Perchlorate【TMRM】
ニューロントレーシング蛍光プローブ/逆行性・順行性トレーサー蛍光プローブ
10mg
7,200
045-33421
危DiIC18（3）
生化学用50mg 23,000041-33423
ニューロン特異的プローブ
125-06281 Lucifer Yellow CH Dilithium Salt
生化学用25mg 23,500
Lucifer
Yellow
CH
Dipotassium
Salt
生化学用
25mg 17,000
128-06271

Vol.83, No.2（2015）

ew Products
新規三次元培養培地

細胞培養用容器

FCeM シリーズ

G-Rex（Gas Permeable Rapid Cell Expansion）®

®

FCeM は、細胞凝集塊を均一分散するポリマー FP 001を配合した三次元培養培地です。FP 001 含有培地の効果により、非接着状態での細胞の増殖や機能を維持／促進します。

特G-Rex は、WilsonWolf 社製の細胞培養用ガス透過性の培養容器であり、迅速な細胞増殖に貢献します。

特長●非接着性細胞の培養に有用
T 細胞、NK、TIL、Treg、CIK、HeLa、CHO、SF 9 など

長

●特別な設備は不要●スフェア（スフェロイド）の浮遊培養が可能

標準的なインキュベーターで培養でき、ポンプやミキ●スフェアの過凝集を抑制
増殖能が改善され、細胞本来の機能を取得できます。

サー、振動は不要です。

構

薬剤や栄養成分の浸透が改善されます。
●単一細胞からスフェアを作製可能

造

容器の底面からガスが供給されることから、従来の容器●粘性は水と同等であり、化合物添加が容易よりも多量の培養液下で培養が可能です。十分な栄養素、● BSA など動物由来物質は不含酸素が供給されます。
25A

10A
15A

Media height far
beyondconventional limits

デ ー タ

20A
CO2

O2

G-Rex 断面図

■がん細胞の増殖の様子（培養 5 日目）

10 A：細胞、15 A：ガス透過性膜、20 A：補助膜、25 A：培養液

仕

様

品 目

表面積 許容培養液量

サイズ

G-Rex102

10cm

40mℓ 2.0（D）×2.5（H）inch

G-Rex100

100cm2450mℓ 4.5（D）×4.0（H）inch

G-Rex100M 100cm2 1,300mℓ 4.5（D）×6.0（H）inch

細胞上限目安
1.0〜3.0×108（培地交換2回）
1.0〜3.0×109（培地交換2回）
1.0〜3.0×109（培地交換不要）※1inch=2.54cm

FCeM® は、A549 及び HCT116 による巨大凝集塊の形成を抑制した。
G-Rex10

G-Rex100

ベース培地

容量

希望納入価格（円）

コード No.

メーカーコード品

名

容量

希望納入価格（円）FCeM®-D

D-MEM

500mℓ

25,000

SJ000545

FCeM®-R

RPMI-1640

500mℓ

25,000384-06275

SJ000549

FCeM®-MEM

MEM

500mℓ

25,000551-21921558-21931555-21941

80040S
80500S
81100S

G-Rex 10
G-Rex 100
G-Rex 100M

1個
1個
1個

30,00036,00052,000383-06245

SJ000500

FCeM -D/F

D-MEM/
Ham'sF12500mℓ

25,000

コード No.

メーカーコード

387-06265

SJ000546

380-06255

製品名®

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

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参照、もしくは資料をご請求下さい。
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和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）27

ew Products
CultureSure® シリーズ 培地添加剤

ROCK 阻害剤 /ES・iPS 細胞研究に！

CultureSure 滅菌水、糖類、無機塩類

Y-27632

本品は、エンドトキシン試験、無菌試験、マイコプラズ

本品は、選択的かつ強力な ROCK 阻害剤です。ROCK

マ試験済みの細胞培養用試薬です。当社培地原料として実シグナル伝達系による血管平滑筋の収縮など、種々の作用績があり、安心してご使用いただけます。

を有しています。ヒト ES 細胞やヒト iPS 細胞の細胞分散®

特時に細胞死を抑制する、また凍結保存後の細胞生存率が向長上すると報告されています。

●エンドトキシン試験、無菌試験、マイコプラズマ試験済み［ROCK：Rho-associated coiled-coil forming kinase/Rho●当社培地原料としての実績あり

結合キナーゼ / セリン・スレオニンタンパクりん酸化酵素］●トレーサブルな細胞培養用試薬

特滅菌水
コード No.

長●数多くの論文掲載実績
品

名039-24155 CultureSure Sterile Water
®

格

容量

希望納入価格（円）

細胞培養用

500mℓ

2,500

規

各種プロトコールにも掲載されています。
●バルク対応可能
バルク容量はご相談下さい。

糖類
コード No.

●製造販売ライセンス受諾品
品

名032-23981 CultureSure® D（+）-Glucose,
NEW034-23985 Animal-derived-free
NEW

格

容量

希望納入価格（円）株式会社エーピーアイコーポレーションよりライセン

細胞培養用

100g
500g

15,00040,000スを受けて製造販売しています。

規

製品概要

無機塩類
コード No.

品

名

規

格

037-24031 CultureSure® Calcium Chloride,
Animal-derived-free
NEW 039-24035

細胞培養用

032-24081 CultureSure® PotassiumNEW
034-24085 Chloride, Animal-derived-free

細胞培養用

NEW

NEW

030-24261 CultureSure Manganese（Ⅱ）
Chloride Tetrahydrate,
NEW 032-24265
Animal-derived-free
NEW

®

細胞培養用

035-24191 CultureSure® Zinc Chloride,
Animal-derived-free
NEW 037-24195

細胞培養用

038-24181 CultureSure Magnesium030-24185 Sulfate, Animal-derived-free

細胞培養用

NEW

NEW

NEW

®

033-24251 CultureSure Cobalt（Ⅱ）
Chloride Hexahydrate,
NEW 035-24255
Animal-derived-free

細胞培養用038-24321 CultureSure Copper（Ⅱ）
Chloride Dihydrate,
NEW 030-24325
Animal-derived-free

細胞培養用

NEW

NEW

®

®

036-24241 CultureSure Hexaammonium
Heptamolybdate Tetrahydrate,
近日
発売 038-24245 Animal-derived-free

細胞培養用033-24011 CultureSure® Sodium Chloride,
近日Animal-derived-free
発売 035-24015

細胞培養用

近日
発売

®

近日
発売

®
032-24221 CultureSure Iron（Ⅱ）Sulfate
Heptahydrate,
NEW 034-24225
Animal-derived-free
NEW

細胞培養用

容量

希望納入価格（円）100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000100g

15,000500g

40,000

100g

照

会

500g

照

会

100g

照

会

500g

照

会

100g

15,000500g

40,000●外観：白色〜うすい黄色、結晶性粉末〜粉末●含量（HPLC）：98.0% 以上●溶解性：水（2.5mg/mℓ）●比旋光度［α］D20（c=0.25, H2O）：＋ 1 〜＋ 7°
N

O
N
H

・2HCｌ・H2O

CH3
H

C14H21N3O・2HCl・H2O＝338.27
CAS No. 331752-47-7

使用法例■無フィーダー細胞下でのヒト iPS 細胞 / ヒト ES 細胞の継代・凍結・凍結ストックの解凍
終濃度 10 μmol/ℓ（添加溶液は 10 mmol/ℓ）〔参考文献〕
１）Ito, H. et al . : Liver Int ., 32 , 592（2012）.
２）Kawamata, M. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci. USA ., 107 , 14223（2010）.
３）Claassen, D. A. et al . : Mol. Reprod. Dev ., 76 , 722（2009）.
４）Martin-Ibañez, R. et al . : Hum. Reprod ., 23 , 2744（2008）.
５）Watanabe, K. et al . : Nat. Biotechnol ., 25 , 681（2007）.
６）Sakamoto, K. et al . : J. Pharmacol. Sci ., 92 , 56（2003）.

ビタミン類も順次商品化予定です。当社営業または当社代

７）Nishimaru, K. et al . : J. Pharmacol. Sci ., 92 , 424（2003）.

理店へお問合せ下さい。

８）Uehata, M. et al . : Nature , 389 , 990（1997）.

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28

NH2

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）［次頁に続く］ew Products
コード No.

品

名257-00511
253-00513
Y-27632251-00514
NEW 257-00516

規格

細胞生物学用容量

希望納入価格（円）

1mg
5mg
25mg
1g

12,00036,000140,000
照会■ 粉末培地
品質試験
外観、浸透圧、pH、エンドトキシン、細胞増殖試験など
コード No.

関連商品
コード No.

品

名

規

格

030-24021 CultureSure® Y-27632
036-24023 マイコプラズマ試験、エンドトキシン 細胞培養用
034-24024 試験、細胞毒性確認済みの製品
253-00591 5mmol/ℓ Y-27632 Solution
細胞培養用
180-02991 rBC2LCN-FITC【AiLecS1-FITC】
細胞染色用
186-02993
185-03161 rBC2LCN-635【AiLecS1-635】
細胞染色用
181-03163
064-05381 Fibroblast Growth Factor（basic）, Human, recombinant,068-05384
Animal-derived-free
060-05383 【basicFGF/FGF2/FGFb】
195-16031 StemSure® Freezing Medium
197-17571 StemSure® hPSC Medium Δ
193-17573 ※bFGFは含まれておりません。
StemSure® Serum
197-16775
Replacement【SSR】

15,0001mg
40,0005mg
25mg 150,000
20,000300μℓ
100μℓ
20,000100μℓ×5 80,000
30,000100μℓ
100μℓ×5 120,000

細胞生物学用50μg

39,000100μg

66,000
照

1mg
細胞培養用

会

100mℓ
100mℓ
細胞培養用
100mℓ×4

12,0006,000
20,000

細胞培養用

40,000

500mℓ

D-MEM
045-33563 （High Glucose）,
297-72501 Powder
293-72503
054-09001 E-MEM, Powder050-09003
084-10153 Ham's F-12,
NEW
082-10154 Powder
NEW

NEW

NEW

043-33743 D-MEM/Ham's
041-33744 F-12, Powder●●●

希望納入価格（円）ー

炭酸水素 細胞 1ℓ用×10
Na不含 培養用 10ℓ用

9,000

ー

●

炭酸水素 細胞 1ℓ用×10
Na不含 培養用 10ℓ用

9,100

●

ー

炭酸水素 細胞 1ℓ用×10
Na不含 培養用 10ℓ用

8,500

品

●

●

●

●

●

●

炭酸水素 細胞 1ℓ用×10 11,500
Na不含 培養用 10ℓ用
9,500

1ℓ用×10

7,100

10ℓ用

5,800

格

容量

希望納入価格（円）

細胞培養用

100mℓ

1,800

細胞培養用

50mℓ

6,600

026-18711 10mg/mℓ Blasticidin S
1mℓ
Hydrochloride, HEPES Solution 遺伝子研究用
022-18713
1mℓ×10

7,200

関連商品

クス・使い切りタイプの製品に、Ham's F-12、D-MEM/

コード No.

195-16411

名品

名7.5w/v% Sodium Bicarbonate
Solution

019-23891 Amphotericin B Suspension

●安価

使 用 法
１．培地の最終容積よりも 2 〜 3% 少ない量の精製水を用意し、本品１袋を溶解します。
２．アルミ袋内をすすぎ、袋中の粉末をすべて溶解します。
３．ラベル記載量の NaHCO3 を添加します。※D-PBS（-）に NaHCO3 の添加は不要です。
４．精製水を加え最終容積とし、スターラーで泡立てないように撹拌して溶解します。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存

規

格

細胞培養用

規

071-06431 50mg/mℓ G-418 Sulfate077-06433 Solution, Animal-derived-free

遺伝子研究用

078-06061 Gentamicin Sulfate Solution

43,00020mℓ15,000100mℓ60,000

細胞培養用

10mℓ

8,000

117-00961 Kanamycin Sulfate Solution

細胞培養用

20mℓ

6,000

133-15931 1mg/mℓ Mitomycin C Solution
危

細胞培養用

1mℓ

10,000164-25251

Penicillin-Streptomycin Solution
細胞培養用
（×50）

100mℓ

3,000

168-23191

Penicillin-Streptomycin Solution
細胞培養用（×100）

100mℓ

3,500

Penicillin-Streptomycin161-23181 Amphotericin B Suspension（×100）

細胞培養用

100mℓ

4,600

Penicillin-Streptomycin-LGlutamine Solution（×100）

細胞培養用

100mℓ

4,000

161-23201

５．フィルター滅菌を行ってから使用します。

6,300

炭酸水素 細胞 1ℓ用×10 11,000
Na不含 培養用 10ℓ用
9,000

D-PBS（-）, Powder

試薬を多数取り揃えています。この度、粉末のプレミッ●省スペース

7,300

希望納入価格（円）299-72603●調製が簡単7,000

容量

汎用粉末培地、緩衝剤

長

●

容量

外観、浸透圧、pH、エンドトキシンなど
293-72601

特フェノール ピルビン酸
備考 規格
レッド ナトリウム

品質試験

プレミックスタイプ

Ham's F-12 を追加しました。

グルタミン

■ 緩衝剤

コード No.

当社では、汎用基礎培地をはじめとする細胞培養関連名

049-33561

希望納入価格（円）

容量品

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和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）29

ew Products
プロテアーゼ活性の低いコラゲナーゼ

rBC2LCN 剥離溶液

コラゲナーゼ，精製品

rBC2LCN ストリッピング溶液【AiWashS1】

本品は、クロマトグラフィー精製されたコラゲナーゼで本品は、ヒト ES 細胞 ･ ヒト iPS 細胞の細胞膜表面に存す。クルードのコラゲナーゼに比べ、プロテアーゼ活性が在する糖鎖と結合した rBC2LCN レクチンを細胞から剥離

低く、他のプロテアーゼと組合せて細胞分散に利用するたさせることができます。rBC2LCN 剥離後、細胞を他の抗めに有用です。膵臓や耳下腺腺房の分散の他に、コラーゲ

体で染色することや、生細胞の場合は培養を継続することンの構造解析などにも利用されます。

が可能です。
※rBC2LCN は、未分化ヒト ES 細胞・ヒト iPS 細胞の細●由来：Clostridium histolyticum

胞表面に存在する糖鎖に非常に高い特異性を有する組換●外観：褐色、結晶性粉末〜粉末

えレクチンです。

●コラゲナーゼ活性：500units/mg 以上

使 用 例●カゼイナーゼ活性：50units/mg 以下■ヒト iPS 細胞表面に結合した rBC2LCN-FITC の剥離●クロストリパイン活性：2.00units/mg 以下

A）●トリプシン活性：0.25units/mg 以下
コード No.
NEW035-24071

NEW

031-24073

品

名Collagenase, Purified

規

格

細胞分散用

容

rBC2LCN-FITC
添加直後

rBC2LCN-FITC
添加35分後

rBC2LCNストリッピング溶液
添加30分後

希望納入価格（円）量5,000units

16,00025,000units

62,000

関連商品
品

名

規

格

038-22361 Collagenase

コラゲナーゼだけでなく種々の加水分解
034-22363 酵素を含む粗製品。相乗効果で細胞分散 細胞分散用作用が強い。
コラゲナーゼ活性：300units/mg
032-22364（ロット：CTH2111）

031-17601 Collagenase Type Ⅰ

容量 希望納入価格（円）

100mg

6,000

1g

25,0005g

92,000

100mg

5,700

コラゲナーゼ、カゼイナーゼ、トリプシンの各活性がバランスよく含まれており、
037-17603 脂肪組織、副腎、上皮組織、肺や肝細胞 細胞分散用 500mgからの細胞単離に優れる。
コラゲナーゼ活性：260units/mg
035-17604
1g（ロット：CTH2298）

Collagenase Type Ⅴ

16,00026,5007,900

1g

32,000

100mg

7,900

1g

32,000031-22591 品。フィルター処理しているので、溶解後、 細胞分散用 50mg

8,000

トリプシン活性を抑えているため、膵臓
細胞分散用からの細胞分散に優れる。
032-17854 コラゲナーゼ活性：230units/mg（ロット：CTE6585）

035-17861

Collagenase Type Ⅹ

プロテアーゼ活性が高く、骨、心臓、胸腺、唾液腺などの硬組織の細胞分散に優れる。 細胞分散用
039-17864 コラゲナーゼ活性：230units/mg（ロット：SAR0377）

Collagenase Type Ⅰ, Filtered

コラゲナーゼタイプⅠのフィルターろ過
直接細胞分散に利用できる。
コラゲナーゼ活性：125units/mg 以上

Collagenase Type Ⅹ, Filtered

コラゲナーゼタイプⅩのフィルターろ過

038-23961 品。フィルター処理しているので、溶解後、 細胞分散用 50mg

8,500

Collagenase, recombinant,036-23141 Animal-derived-free

24,000直接細胞分散に利用できる。
コラゲナーゼ活性：125units/mg 以上

コラゲナーゼ活性：6,000units/mg 以上…2 〜 10℃保存

細胞分散用…− 20℃保存

240,000
units

600

400

100mg

038-17851

B）

Count

コード No.

…− 80℃保存

200

0

100

和光純薬時報102

103

controlrBC2LCNストリッピング溶液処理前
rBC2LCNストリッピング溶液処理後

ヒト iPS 細胞 201B7 株の培養液に 1/100 量の rBC2LCN-FITCを添加し、35 分間染色した。培地除去後、rBC2LCN ストリッピ
ング溶液を添加し、30 分間インキュベートした。
また、rBC2LCN-FITC 添加後の細胞と rBC2LCN ストリッピング
溶液添加 30 分後の細胞をフローサイトメトリーに供した。
A）rBC2LCN-FITC 添 加 に よ り ヒ ト iPS 細 胞 は 染 色 さ れ た が、
rBC2LCN ストリッピング溶液を添加することで、細胞表面に結合していた rBC2LCN-FITC が剥離された。
B）rBC2LCN-FITC により染色されたヒト iPS 細胞 201B7 株を
rBC2LCN ストリッピング溶液で処理し、フローサイトメト
リーに供すると、未処理の細胞に比べ処理された細胞のピー
クが左へシフトした。
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30

101

rBC2LCN-FITC

Vol.83, No.2（2015）［次頁に続く］ew Products■ rBC2LCN ストリッピング溶液処理によるヒト iPS 細

特

胞への影響

長

●高感度かつ特異的に GLP- 1 が測定可能●微量検体で測定可能●再現性が高いcontrol性
rBC2LCN-FITC
染色後

測定範囲
検量線範囲
必要検体量
測定サンプル
測定時間
種交差性
同時再現性
日差再現性

rBC2LCNストリッピング
溶液処理後
0

0.1
0.2
0.3
Cell Number（×106 cells/well）

能0.4

細胞株：ヒト iPS 細胞 201B7 株
培地組成：StemSure® hPSC 培地Δ［コード No. 197-17571］+ 35ng/mℓ bFGF
［コード No. 064-05381］
コーティング：Matrigel® hESC-Qualiﬁed Matrix［コード No. 643-55461］
播種細胞数：4×104 cells/well（12 ウェルプレートを使用）
培養日数：5 日※血液中の阻害物質の影響を避けるため、５倍希釈での測定を推奨し
ています。

デ ー タ
■検量線の一例

ヒト iPS 細胞 201B7 株を rBC2LCN-FITC で染色した後、
rBC2LCN ストリッピング溶液で rBC2LCN-FITC を剥離させた。
rBC2LCN-FITC で染色後の細胞と rBC2LCN-FITC による染色後
rBC2LCN ストリッピング溶液で処理した細胞を培養した。
rBC2LCN ストリッピング溶液で処理したヒト iPS 細胞も未処理の細胞と同等の細胞増殖を示し、rBC2LCN ストリッピング溶液による処理が細胞増殖に影響を与えないことを確認した。
コード No.
NEW

品

名182-03171 rBC2LCN Stripping Solution

規

格

容

細胞培養用

量

3

Abs. 450-620nm

2.5

1

0

10
20
GLP-1 (pmol/ℓ)

30■測定データ（マウス血漿）
品

名

規

格

容

量

1mg

30,0001mg×5

照180-02991 rBC2LCN-FITC
186-02993 【AiLecS1-FITC】

100μℓ

20,000100μℓ×5

80,000185-03161 rBC2LCN-635
181-03163 【AiLecS1-635】

細胞染色用
細胞染色用

マウス No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

希望納入価格（円）029-18061 BC2LCN【AiLecS1】Lectin,
糖鎖研究用025-18063 recombinant, Solution

会

100μℓ

30,000100μℓ×5

120,000

インクレチン GLP-1 を少量サンプルで高感度に測定！
GLP-1

2
1.5

0

希望納入価格（円）関連商品
コード No.

R2 = 0.99

0.5

15,00010mℓ

4.7 〜 150pmol/ℓ※
0.94 〜 30pmol/ℓ
10μℓ
血漿
4 時間
マウス、ラット
＜ 10%
＜ 10%

コード No.
NEW

GLP-1 は、腸管 L 細胞から分泌される消化管ホルモン
で、糖刺激によるインスリン分泌の増強やグルカゴン分泌抑制を介して血糖値降下作用を示します。新しい糖尿病治療薬として GLP-1 が 2 型糖尿病の治療に有用であるとの報告が出されています。
本品は、特異性の高い GLP-1 抗体を用いたマウス、ラッ
ト血漿中の GLP-1 を特異的に測定可能な ELISA キットで
ELISA キットワコー：

291-59201）の 10 倍以上の感度を有します。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存

備考

絶食マウス、8 週齢♂
※15 時間絶食後に採血糖投与マウス、8 週齢♂
※ 絶食後、グルコース（2g/kg）を投与し、その10 分後に採血

C.V値が小さい再現性の高いデータが得られた。

ELISAキットワコー、高感度品す。従来の製品（ラット GLP-1

測定値（pmol/ℓ） C.V 値
31.4
3.1
16.3
2.9
17.2
3.7
20.8
3.1
27.1
0.3
39.6
2.6
15.9
4.3
9.4
3.8
8.1
4.4
13.9
1.8

…− 80℃保存品

名299-75501 GLP-1 ELISA Kit Wako , High Sensitive

規

格

容量

希望納入価格（円）

糖尿病研究用 96回用

75,000規

希望納入価格（円）関連商品
コード No.

品

名291-59201 Rat GLP-1 ELISA Kit Wako
292-60601 Rat GLP-2 ELISA Kit Wako
295-57401 Rat C-Peptide ELISA Kit Wako
297-57101 Rat Glucagon ELISA Kit Wako
299-73801 Mouse GIP（Active）ELISA Kit Wako
298-65701 LabAssayTM Glucose
044-31291 DPPⅣ Inhibitor 1c Hydrochloride

格容量

糖尿病研究用 96回用
糖尿病研究用 96回用
糖尿病研究用 96回用
糖尿病研究用 96回用
糖尿病研究用 96回用
細胞生物学用 1,000回用
細胞生物学用 5ｍｇ

73,00086,00078,00078,00086,00026,00030,000

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和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）31化学大家 432
ピョートル・ペトローヴィチ・フォン・ヴェイマルン（ワイマルン）（1879 . 7 . 17 - 1935 . 6 . 2）

東京工業大学梶雅範

明治の前半期、日本政府が近代化のた

連隊大尉ピョートル・イヴァノヴィチ・

めに招聘して多くの西洋人専門家が来日

ヴェイマルンと彼の正式の妻ユーリヤ・した。その後、それほど大挙して西洋人

フョードロヴナ（夫妻はともにロシア正専門家が来日した例はない。ただ、第一教徒）の息子ピョートル」として生まれ次世界大戦によって世界規模で人の移動たとあるという 4）。墓碑銘との違いはどがもたらされ、1920 年代に来日西洋人のこから来るのか。

小さな波が生じた。その波に乗って来日

ロシア語では、「6 月の」（июня）とした西洋人の一人に、コロイド化学者と「7 月の」（июля）は字形が似ているので、して知られるヴェイマルン（ワイマルン）

これは単純に彫り間違いだろう。7 月としても日が 5 日と 18 日では合わないが、（図１）がいる。ヴェイマルンに関する
1）

日 、露

2）

の近著を手かがりに、彼が辿った軌跡を見ることにしよう。

１．ヴェイマルンの墓

図１．Kolloid-Zeitschrift の 追 悼 記（ 注 9）に掲載されたヴェイマルンの写真

これは暦法の違いからくる。帝政ロシア
では、ユリウス暦が使われていた。ユリる。小野浜墓地は 1898 年に一杯になっウス暦による一年（365.25 日）と実際のたので、翌年閉鎖され春日野（現在の中

太陽年（約 365.2424 日）の差から、紀元

ヴェイマルンは、現在、妻とともに神央区籠池通四丁目）に外国人墓地が設け

前 46 年にユーリウス・カエサルが制定

戸市立外国人墓地に眠っている。外国人られた。ヴェイマルンは当初ここに葬らしたユリウス暦による春分と実際の春分

墓地は、六甲山地の再度山（ふたたびされた。1954 年 5 月に春日野墓地が閉鎖さとのずれは、16 世紀には 10 日に達した。

ん）山頂の北に位置する再度公園の中にれて、同年 10 月から一年かけて現在のそのため 1582 年、ローマ教皇グレゴリ

3）ある。著者は今年（2015 年）3 月に、新地に移転した 。移転当時、夫人は健在

ウス 13 世が暦を 10 日進め、さらに 100

神戸駅から道幅が狭く急カーブの連続すだったが、1965 年 1 月 21 日に夫人も亡で割り切れて 400 で割り切れない年を閏る道をタクシーで登って、30 分弱かけてくなり、ヴェイマルンの隣に葬られた。

年にしないと定めた。これがグレゴリオ

この墓地を訪れ、墓地を管理する神戸市

墓碑銘は、ロシア語のアルファベット

暦（西暦）である。しかし、ロシア正教

建設局公園砂防部森林事務所の職員の方で記されているが、革命前の正書法で書は、このカトリック教会の改暦を採用しの案内でヴェイマルンの墓をお参りしかれている（図３）。まずピョートル・

なかった。両者の差は 18 世紀で 11 日、た。墓地は宗教別になっていて、ヴェイ

ペトローヴィチ・フォン・ヴェイマルン

19 世紀で 12 日、20 世紀で 13 日となる。

マルンの墓は、ギリシア正教（ロシア正と姓名が記され、続いて四等官（軍人でヴェイマルンは、ロシア暦（ユリウス暦）

教）地区の一角、C3 区の 8 番にあり、いえば少将にあたり、世襲貴族になれるの 1879 年 7 月 5 日に生まれたので、西夫人の墓は隣の 9 番にある（図２）。

高官である）と帝政ロシア官吏としての暦では 1879 年 7 月 17 日となる。ところ

神戸の外国人墓地は、神戸港（当時は官等が示され、鉱山技師、化学教授（職が 1935 年に亡くなったとき、12 日では兵庫港）が 1868 年 1 月 1 日に正式に開業というよりもこれも称号と考えた方がなく 20 世紀のずれの 13 日を足してしま

港する直前の 1867 年 12 月 25 日に当時よい）とあり、一番下に 1879 年 6 月 18

い、墓碑銘には 18 日と刻印してしまっの生田川（旧生田川）の河口近くの小野

日ペテルゴフ生まれ、1935 年 6 月 2 日上

たと考えられる。ロシアで西暦が採用さ

浜（現在の中央区浜辺通付近）に、英米海で死去とある。しかし、当時の教会のれたのは、ロシア革命後、1918 年 1 月

二人の海軍将校が埋葬されたことに始ま記録には、「1879 年 7 月 5 日、近衛騎兵

31 日であるので、以下ではそれ以前の日付はロシア暦で示す。
ヴェイマルン家は代々、軍人を輩出した家柄で、父も順調に出世し、退役時には少将であった（化学者になった息子も官等では同じ）。同家はもともとバルト海に面する北ドイツの都市リューベック
の出身で、先祖のヨプスト・ワイマルン（Jobst Weymarn, 1641-96）が現在のエス
トニアのエゼル島（サーレマー島）に移住し、当時同島を支配していたスウェー

図２．神戸市立外国人墓地のヴェイマルン
（左）と夫人（右）の墓（著者撮影）

32

デ ン の 陸 軍 に 入 っ て 大 尉 に な り、 ス
図３．ヴェイマルンの墓碑銘（著者撮影）

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

ウェーデン貴族に列せられた。スウェーを発表しており、ロシア化学会から物理化学分野の若手研究者に贈られる N. N.
ベケートフ賞を受賞していた。
さらに、1907 年にドイツのコロイド化学の専門誌 Kolloid-Zeitschrift にこの
8）
研究の要約を掲載した 。同誌を編集し、コロイド化学の研究の中心にいた Wo. オ
ス ト ワ ル ト（Wolfgang Ostwald, 18831943）は以後、ヴェイマルンを高く評価

図４．ヴェイマルン家の紋章（注 4）

図５．ヴェイマルンの墓にある紋章（著者
撮影）

し、ヴェイマルンが亡くなったときには、同誌に追悼録を書いた 9）。
このようにヴェイマルンは、コロイド

デンとロシアの長期にわたる北方戦争

門学校に再編されていた。ヴェイマルン

化学者として順調にその研究生活を滑り（1700-21）の結果同島がロシア帝国領には、同校で、専門だけでなく、数学・自出した。1911 年には鉱山高等専門学校のなると、ヨプストの子孫たちは、ロシア

然科学一般、建築関連科目、語学・人文

員外教授になり、同時に 1910-16 年にか貴族となり、その多くが主に軍人として学など幅広い教育を受けた。なかでも、けてサンクト・ペテルブルグ大学（第一次活躍した。その姓は、ドイツ人としては、

同校は、化学関係の教育に力を入れてい世界大戦が始まるとペトログラード大学

Weymarn な い し Weimarn と 綴 り、 ワ

たと言われている。

に改称）で「私講師」（Privatdozent 博

イマルンと発音するが、それをそのまま３年生に進級したばかりの 1903 年 10

士号のあと教授資格を取ると得られる

ロシア語にしたВеймарнからロシアで

月、サンクト・ペテルブルグに近い軍港職）を務め、そこでロシアで最初期に属は、その姓はヴェイマルンと読まれる。

クロンシュタット出身のナジェージダ・

する本格的なコロイド化学の講義を行っ

以下ではロシア流にヴェイマルンと呼ぶ

ニコラエヴナと結婚した。そのことは結た。彼の不幸は、35 歳という研究者としてことにする。ヴェイマルン家には紋章が婚許可を求める校長宛の手紙が残っていピークの時期に世界大戦が始まったことだ。

あった（図４）。斧を持つ獅子で表されるのでわかることだが、その種の手紙は

第一次世界大戦がはじまった翌年のて、その獅子が中央の水平線で分けられ多く残っており、当時、学生結婚は珍し

1915 年春、西シベリアのエカチェリンブて、上半分は獅子が金色で背景が黒、下7）いことでなかったという 。1908 年 4 月

ルグに開校予定の鉱山高等専門学校の校半分は獅子が黒で背景が金色になっていに優等の成績で同校を卒業し、その年の長のポストが商工省から提案された。彼る 5）。ヴェイマルンの墓にもこの紋章が秋、物理化学講座の助手に任命された。

は逡巡の末、9 月 1 日にウラル鉱山高等同年、審査を通った学位論文「沈殿の専門学校の建設委員長兼校長代理として

形状と構造に対する反応溶液の濃度の影

エカチェリンブルグに旅立った。予想通彫られている（図５）。

２．ロシアにおけるヴェイマルン

響について」が評価されて、助教授としり苦労はあったが、同校は 1917 年 10 月

ヴェイマルンは、首都サンクト・ペテて講義を任された。彼は、硫酸バリウム

初めに開校にこぎ着けた。ヴェイマルン

ルブルグにあるアレクサンドル陸軍幼年の生成系を使って、化学反応によって析

には、その功績でエカチェリンブルグの学校に入学し、1899 年 6 月 15 日に卒業出する粒子の大きさが濃度によってどの名誉市民号が贈られた。

した。その卒業証書によれば、トップとように変化するか詳しく検討した。従来、彼がエカチェリンブルグにいる間に、は言えないかもしれないが、各科目とも

硫酸バリウムなどのような無機塩は、晶

ロシア革命が勃発してロシア社会は大変そこそこの成績を取っており 6）、そのま質（クリスタロイド）と呼ばれコロイド動期を迎えた 10）。1917 年 2 月末の２月

ま上級の軍学校に進学すれば、父と同じ（膠質）から区別されていた。しかし、革命によって、帝政が倒れて臨時政府がく軍人としての道を歩んだだろう。

ヴェイマルンは、反応物質の濃度によっ設立されたが、10 月革命でレーニンを指しかし、彼は軍人にはならなかった。

ては、硫酸バリウムがコロイドになるこ

導者とするボリシェヴィキが武力蜂起に1899 年、サンクト・ペテルブルグ技術高とを示し、コロイドは気体・液体・固体

よって臨時政府を打倒して国家権力を掌等専門学校に入学した。理由は不明だが、と並ぶ一つの普遍的な状態であると主張握した。しかし、ボリシェヴィキ政権が翌年、申請して同じく首都にある鉱山高した。彼は、すでに 1906 年に『ロシア率いる赤軍と、それに抵抗する国内の白等専門学校に再入学した。同校は、1773

物理・化学会誌』（物理化学の雑誌では軍や外国の干渉軍との内戦が 1920 年末

年に鉱山学校として創立されたもっともなく、ロシア物理学会とロシア化学会のまで続いた。

古い専門学校の一つで 1866 年に高等専合同学会の雑誌）に次々にこの種の研究

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

エカチェリンブルグの支配者もこの間

33

何度も交替した。大戦中に捕虜になりそ（Friedrich Wilhelm Ostwald, 1853-1932の後のロシアにとどまっていたチェコスとその長男の Wolfgang Ostwald）とつ

ロバキア軍団（以下チェコ軍団）が、シ

ながりのある池田菊苗（1864-1936）をベリア経由での帰国途上反乱を起こし、頼って、日本に渡ったのだった。当初、

7 月 25 日に彼らが白軍とともにエカチェ

東京の築地に宿を取り、ついで横浜の山リンブルグを占領し、8 月 13 日に同市に手に移って住んだ。4 月 10 日には、第ウラル臨時政府が設立された。こうした

43 回東京化学会年会の懇親会に来賓とし中でヴェイマルンが校長を務めるウラルて招待されている。続けて、東京帝国大

鉱山専門学校は 1918 年秋、2 年目の学年

学（5 月 7 日− 7 月 12 日、毎週 2 時間）、を開始した。しかし、翌年 4 月末から赤東北帝国大学（7 月 15 日− 21 日、毎日軍の反攻がはじまり、7 月には赤軍がエ

2 時間）、京都帝国大学（9 月 24 日− 12

カチェリンブルグを奪還した。鉱山専門

月 17 日、毎週 2 時間）でそれぞれ「コ学校の教員と学生は、その直前にエカ

ロイドとクリスタロイドの溶解と沈殿」

チェリンブルグから東への脱出を図っというテーマでドイツ語の講義を行った。

た。ヴェイマルンと何人かの教員はまずオ

ドイツでウィルヘルム・オストワルト

ムスクに逃れ、さらに 2 ヶ月かけてウラジとネルンスト（Walther Hermann Nernst,

ヴォストークまで疎開することができた。

1864-1941） に 学 ん だ 京 大 の 大 幸 勇 吉

ヴラジヴォストークには 1917 年 11 月

（1867-1950）が、ヴェイマルンの日本滞在

29 日（ロシア暦）に 10 月革命を支持すを全面的に援助した 12）。先の講義も、1922る政権が成立したが、1918 年 6 月 29 日

年、大幸の尽力で単行本として刊行され（以下西暦）駐屯するチェコ軍団が蜂起た。その年の早々、大幸がヴェイマルン

の動向が警察によって逐次報告されていして政権を打倒した。8 月にはチェコ軍に京都帝国大学講師職を斡旋し、大幸がた。ヴェイマルンは例外的に優遇された団の救出という名目で、アメリカ軍と日京大を定年退職する 1926 年まで、ヴェが、いわゆる「白系ロシア人」は、日本

本軍を中心とする連合軍が同市に上陸しイマルンは週に一度、京大の大幸研を訪政府からは「過激思想取締」のために一た。1920 年 1 月にアメリカ軍は撤退した

れ、学生の研究指導や卒論生の指導をした。

般には警戒される対象であった。重名にが、 日 本 軍 は 残 留 し た。1920 年 4 月 6

さらに、商工省大阪工業試験所の嘱託

よれば、1926 年に Solgasow はブラジル

日、ロシアのソビエト政権は、日本軍とでもあった大幸は、所長の荘司一太郎にの衝突をさけるためにバイカル湖以東に口添えをして、1922 年 4 月ヴェイマルン

極東共和国という緩衝国家（1922 年 10を試験所の嘱託にしてもらった。彼のたまでの 6 年間と、彼の下でもっとも長く月まで存続）を建設した。こうした中でめに試験所内に巨額を投じてコロイド化研究したのが、後年、師の回想録を書い

1919 年 9 月にヴラジヴォストーク高等工学の硏究室が新築され、海外から研究用た重名潔（じゅうな・きよし）である。

科学校はヴラジヴォストーク工科大学とに機械や装置、器具、薬品に至るまで輸

ヴェイマルンの硏究室運営は、必ずしも改称され、その鉱山学部が創設され、ヴェ入された。ヴェイマルンの給与も破格で、順調ではなかった。「試験所の先生は研

イマルンは大学の副学長兼鉱山学部長代

当時、所長の年俸が 5,000 円のところ、究と論文作成に集中されて、研究員の指理に選ばれた。工科大学の 28 人の教員の18,000 円の年俸を得ていたという（図６）。

導は各員任せの感があった。言葉の問題

うち、15 人がウラル鉱山専門学校の教員

ヴェイマルンの硏究室には、何人も日と習慣の相違もあって、先生の偉大さをに去ったという 15）。
1924 年からヴェイマルンが退所するだった。1920 年 4 月、工科大学は国立と本人研究者が入所した。他に、ヴェイマ

把握することなく、1926 年に入ると 5 人なり、5 月にはヴェイマルンが学長に選

ルンとともに敦賀から入国し、行動を共の研究者は次々と退所」したと重名は書出された。しかし、同年秋には学長職をにしていた Solgasow という人物がおり、いている。1926 年には重名一人となり、同 僚 に 譲 り、 普 通 の 教 授 職 に 戻 っ た。

論文の整理をタイピストして手伝ってい去った Solgasow のかわりにヴェイマル

1921 年初め、ヴェイマルンは出張の名目たという。外交史料館に、1924 年（大ン夫人がタイピストとして研究所に来るで日本に渡り、敦賀から日本に入国した。

正 13）10 月 4 日付けで「大阪工業試験ようになった。同年秋に、のちに追悼録

しかし、彼は出張からは帰らなかった。

所技師ベイルマン博士助手露国人セルゲを書いた岩瀬榮一が入所し、1929 年（昭イ、ズロカソーフ」の動向についての記

和 4）4 月まで金コロイドの研究を行っ録があり、この助手と同一人物かもしれたという。

３．日本亡命と日本での活動

11）

ヴェイマルンは、オストワルト父子

34

図６．大阪工業試験所でのヴェイマルンと硏究室の所員（注 11 の重名論文から）前列左より米田種一、ヴェイマ
ルン、大塚鹿造、後列左より重名潔、
片岡重治、堀秀吉（1924 年頃、硏究室に所員が最も多かったとき）

13）

ない 14）。この報告に見るように、外国人

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

ヴェイマルンは、1920 年代の後半か

ら、次第に元気を失い病気がちになった。

かった。工業試験所での研究は短く、長その病が何であったかは、詳細は不明でく見積もって 9 年、その後半は病気がちある。しかし、重名の回想に、ヴェイマだったので、ほんとうに活動できたのはルンが「Nieren Krankheit（腎臓の病）」

ほんの数年であった。

と述べたということがあるので、腎臓疾

結局、ヴェイマルンが真に創造的な研患だったのかもしれない。

究ができたのは、学生時代を含めても 151931 年 3 月、病が進んだヴェイマル

年程度で、世界大戦と革命が彼の創造的図７．ヴェイマルン夫人の墓碑銘（著者撮影）な科学活動の十分な展開を許さなかった。

「大池に面し柳の並木のある夙川の家」

日は 1964 年 1 月 21 日になっており、ロ本滞在であったヴェイマルンの目は欧米と描写している。1924 年（大正 13）にシアで出された伝記的な記述でも夫人のを向いており、言語的にも知的にも日本西宮市の夙川（しゅくがわ）駅から甲陽

没年は 1964 年になっている。また墓碑

人化学者との交流は限られたものになっ園まで行く甲陽線が開通しており、甲陽

銘に生年月日の記載がなく、クロンシュた。それでも、ヴェイマルンの来日と日園の近くには大池という池があるから 16）、

タットで生まれたとだけある。しかし、本での活動は、自然科学上におけるロシ

高級邸街として知られる甲陽園の近くに墓地を管理する事務所には、「死体埋葬アと日本の間の本格的な学術交流の希有

夫妻は住んでいたのかもしれない。健康許可書」のコピーがあり、死亡年月日がの例として注目に値する。

ンは試験所を辞め、自宅で静養に専念す
ることになった。自宅について、重名は、回復後も、試験所に復帰することはなく、

昭和 40 年 1 月 21 日午後 0 時 35 分となっ自宅に実験室を設けて研究を続けた。

ている。神戸市灘区長名での許可日が昭1933 年（昭和 8）11 月 25 日には、学

和 40 年 1 月 22 日 で、1 月 23 日 に「 土位を取得して 25 年を記念する祝賀会が埋」したとしているから、墓碑銘の没年

日本の友人や弟子達によって 1928 年には誤りで、正しい没年月日は 1965 年 1

大阪の北浜に本格的な西洋レストランと

月 21 日であろう。この許可書には、生してオープンした「アラスカ」で開催さ年月日 1888 年 8 月 5 日（おそらく西暦）れた。しかし、1934 年 2 月に病気が再発と記載されている。そうであれば、夫人

し、神戸県立病院に入院しなければならは逝去時満 76 歳であり、ヴェイマルン

なくなった。意志の疎通が十分かなわず、との結婚はまだ 15 歳のことになる。

ロシア語の通じる病院ということで、そロシア人の病院に移ったが、回復かなわ

４．ヴェイマルンの業績と日本との関係

ず 6 月 2 日に逝去した（図１）。遺体はヴェイマルンは、コロイドの化学を、神戸に戻されて、春日野の外国人墓地に

分 散 系 の 化 学（Die Dispersoidchemie）

埋葬された。弟子の回想ではこの埋葬日として展開しようと考えたが、エカチェの年の暮れか年明け早々に、上海の白系、外国人墓

リンブルグでの新校の建設、ロシア革命

地の事務所には、この墓が現在の地に移による疎開・亡命で果たすことができな

転されるときになされたと思われる（昭かった。

を 6 月 11 日としているが17）

和 34 年 10 月 15 日付）役所の調査に対来日してからのヴェイマルンの仕事する夫人による英語の回答メモが残っては、（1）セルロースの濃厚塩水溶液、析

おり、そこには夫の埋葬日が 1935 年 6出とその応用、（2）絹フィブロインの濃

月 12 日とされている。実際の埋葬日は厚塩水溶液、析出とその応用、（3）金コ

12 日だったかもしれない。夫人の戦後のロイドの研究、（4）コロイドの安定性─

住所は西宮市ではなく、神戸市中山手通

吸着と分散、（5）レオペクシー（攪拌な57 になっている。

どで力を加えることで粘度が上がる現

なお、ヴェイマルン夫人は、夫の隣象）の研究、（6）その他と多方面にわ（C3 区 9）に葬られた。墓碑銘はロシアたったが 18）、日本のコロイド化学に大き語であるが、すでに夫とは違い革命後のな影響を与えるには、日本人研究者との正書法で書かれている（図７）。没年月

意志の疎通が十分でなく時間も足りな

和光純薬時報Vol.83, No.2（2015）

ロシア革命によって余儀なくされた日〔参考文献〕
1）北原文雄：「ロシアからの移住化学者ワイマ
ル ン ̶ そ の 生 涯 と 業 績 ̶」， 化 学 史 研 究，
41，121-130（2014）.
2）Н.В.Хисамутдинова,Энергетикакультуры
ПетраВеймарна［ピョートル・ヴェイマ
ルンの文化エネルギー論］, Владивосток :Издательство ВГУЭС,（2013）.
3）ポダルコ・ピョートル・E：「神戸とロシア人 ̶ 関西在留白系ロシア人の研究をめぐって ̶」， ス ラ ヴ ィ ア ー ナ，13，3-16（1998）から 12 頁。
4）前掲注 2、9 頁。
5）https://ru.wikipedia.org/wiki/Веймарны
ウィキペディア（ロシア語）からヴェイマ
ルン家 2015 年 3 月 15 日閲覧。
6）前掲注 2）,8 頁。
7）前掲注 2）,11 頁。
8）P.P. von Weimarn : Zur Lehre von den
kolloiden, amorphen und kristallinischen
Zuständen , Kolloid-Zeitschrift , 2（3）, 76-83（1907）.
9）W o . O . [ W o l f g a n g O s t w a l d ] : P . P . v o n
Weimarn, 1879-1935 , Kolloid-Zeitschrift , 74（1）,1-10（1936）.
10）田中陽兒、倉持俊一、和田春樹編：『世界史大 系 ロ シ ア 史 3』（ 山 川 出 版 社 ）p. 26-92（1997）．
11）岩瀬榮一：「Weimarn 先生を憶ふ」，科学，
5，351-353（1935） お よ び 重 名 潔：「Prof.
P.P.von Weimarn の 追 憶 」， 表 面 15（10），636-647（1977）を参照。
12）大幸甫：「父大幸勇吉の思出」，化学の領域 4（11），50-51（1950）から 51 頁。
13）前掲注 11）、重名、638 頁。
14）外交史料館、4 門（司法及び警察）、3 類（危険思想取締）、1 項（要視察人及団体）2-6 露国人乃部 大正 13 年 10 月 4 日「露国人帰来ノ件」。
15）前掲注 11）、重名、638 頁。
16）http://ja.wikipedia.org/wiki/ 甲陽園 2015 年
3 月 16 日閲覧。
17）前掲注 11）、岩瀬、353 頁；重名、638 頁。
18）前掲注 1）、124-125 頁。

35quantitative NMR
定量NMR 用標準液
定量 NMR 法は、標準物質を基準として測定対象物質（サンプル）の純度または濃度を評価する方法です。これまでの定量 NMR 用標準物質に加えて、内標準法に使用できる定量 NMR 用標準液をラインアップしました。
Vol.83 No.2

特長●定量 NMR 法による純度保証●信頼性の証である不確かさを付与●標準物質の精密な秤量が不要●外標準法の標準物質として使用可能

溶液法概略 1）
NMR用解析ソフト「Delta for qNMR」（JEOL RESONANCE）
URL（http://www.j-resonance.com/products/nmr/delta/）＊標準液添加前後の質量を測定することでより精確になります。

「Alice2 for qNMR」

標準液

秤量

測定対象物質〔参考文献〕
１）山﨑太一 他 : 分析化学, 63, 323（2014）.

コード No.

近日
発売

品

名

041-33641

DSS-d6 Standard Solution（500mg/ℓ Deuterium Oxide Solution）

085-10161

Hexamethyldisilane Standard Solution（500mg/ℓ Methanol-d4 Solution）

規

危

格

容

量

希望納入価格（円）定量 NMR 用

1mℓ×5A

18,000定量 NMR 用

1mℓ×5A

照

会

関連商品

標準物質
（独）産業技術総合研究所計量標準総合センター（NMIJ）によって国際単位系（SI）にトレーサブルな測定方法で値付けした純度（不確かさを含む）に、当社で均質性評価及び安定性評価などから得た不確かさを加えて標準物質の特性値を決定し、認証書付きの標準物質として供給しています。
コード No.
024-17031
020-17033
044-31671
040-31673
048-33271
135-17951
093-06731

品

名規

1,4-BTMSB-d4 Reference Material

TraceSureDSS-d6 Reference Material

TraceSure®

Dimethyl Sulfone Reference Material
Maleic Acid Reference Material
4 Internal Standard Set for Quantitative NMR

TraceSure®
TraceSure®

容 量
50mg
50mg×450mg
50mg×4
100mg
100mg

定量 NMR 用

1 セット【内容】1,4-BTMSB-d（50mg×1）, DSS-d（50mg×1）,46ジメチルスルホン（100mg×1）, マレイン酸（100mg×1）

格®

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
表示がない場合は室温保存です。
特定
…特定毒物
…毒物
…劇物
…毒薬
…劇薬 危 …危険物
…向精神薬
…特定麻薬向精神薬原料…化審法 第一種特定化学物質…化審法 第二種特定化学物質…化学兵器禁止法 第一種指定物質…化学兵器禁止法 第二種指定物質
ダイオキシン …ダイオキシン類
毒素等 …国民保護法
覚 …覚せい剤取締法
掲載内容は、2015 年 4 月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、siyaku.com（http://www.siyaku.com/）をご参照下さい。

希望納入価格（円）30,00075,00030,00075,00015,00015,00055,000…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 83 No. 2
2015 年 4 月 15 日 発行
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36

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上田 衡
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