原著論文

診療と新薬 2018; 55: 713-717

ミルタザピン錠「明治」のラット脳内ノルアドレナリン並びに診療と新薬 Web

セロトニン遊離に及ぼす影響大山昌代 1）／松倉スチトラ 1）／村澤寛泰 2）／パブラック晶子 2）／
小林洋之 2）／山内美紀 1）／今西泰一郎 1）／三浦有紀 1）● 要約
ミルタザピン錠「明治」（試験製剤）は，抗うつ薬であるリフレックスⓇ錠（標準製剤）／レメロ
ン 錠と有効成分を同量含有する同一剤型の後発医薬品として大蔵製薬株式会社が製造販売承認を取得した錠剤である。今回，試験製剤が標準製剤と同様に抗うつ作用を発揮するかを推察する目的で，両製剤がラット海馬ノルアドレナリン並びにセロトニン遊離に及ぼす影響を，微小透析法を用いて検討した。
試験製剤及び標準製剤を磨砕・懸濁し，ミルタザピンとして 20 mg/kg の用量でラットに経口投与した。投与 60 分前から投与 180 分後にわたり，20 分毎の海馬のノルアドレナリン並びにセロトニン遊離量を測定した。その結果，試験製剤群では投与前値に比べて最大 3.3 倍，標準製剤群では最大4.1 倍までノルアドレナリン遊離量が上昇した。ノルアドレナリン遊離量を投与 0 〜 180 分間までプロットした曲線下面積（以下，AUC）では，溶媒群に比べて試験製剤群は 3.0 倍，標準製剤群は 2.8倍に増加し，いずれも有意な増加が認められた。また，試験製剤群では投与前値に比べて最大 2.1倍，標準製剤群は最大 1.8 倍までセロトニン遊離量が上昇した。セロトニン遊離量の AUC では，溶媒群に比べて試験製剤群，標準製剤群とも 1.8 倍に増加し，いずれも有意な増加が認められた。
以上の結果より，試験製剤は標準製剤と同様にラット脳内ノルアドレナリン並びにセロトニン遊離を促進させることが確認された。
Ⓡ

キーワード：ミルタザピン，うつ，ノルアドレナリン，セロトニン，ラット，脳内微小透析，後発医薬品

1．は じ め に
ミルタザピン錠「明治」（以下，試験製剤と略Ⓡす）は，リフレックス 錠（以下，標準製剤と略Ⓡ類される唯一の薬剤である 1）2）。他の選択的セロト
ニ ン 再 取 り 込 み 阻 害 薬（selective serotonin
reuptake inhibitor, SSRI），セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（serotonin noradrenalineす）／レメロン 錠と有効成分を同量含有する同一

reuptake inhibitor, SNRI）や 三 環 系 抗 う つ 薬剤型の後発医薬品として大蔵製薬株式会社が製造販（tricyclic antidepressant, TCA）とは異なり，ミル売承認を取得した錠剤である。

タザピンのノルアドレナリンとセロトニン再取り込

ミルタザピンは，ノルアドレナリン作動性・特異み阻害作用は極めて弱い。ミルタザピンはアドレナ的セロトニン作動性抗うつ薬（noradrenergic andリンα2 受容体拮抗作用によりノルアドレナリン並

speciﬁc serotonergic antidepressant, NaSSA） に 分びにセロトニンの遊離を促進すると考えられている。ミルタザピンはセロトニン 5-HT2A，5-HT2C 並

1）Meiji Seika ファルマ株式会社
2）株式会社日本バイオリサーチセンターびに 5-HT3 受容体拮抗作用を有するため，親和性が 低 い 5-HT1A 受 容 体 が 選 択 的 に 刺 激 さ れ る。 ま2（714）

診療と新薬・第 55 巻

第 10 号（2018 年 10 月）

た，ミルタザピンはヒスタミン H1 受容体拮抗作用

2．3．試験方法を有するが，アドレナリンα1 受容体，ムスカリン2．3．1．ガイドカニューレの装着手術

受容体，ドパミン受容体との親和性は低い。ミルタ

ラ ッ ト を ペ ン ト バ ル ビ タ ー ル 麻 酔 下（40 mg/ザピンは，これらの特徴的な薬理作用により有効kg，腹腔内投与）で，頭皮にレボブピバカイン塩

性・安全性の両面で他のカテゴリーの抗うつ薬とは酸塩（ポプスカイン Ⓡ 0.25％注，丸石製薬株式会

異なった薬理プロファイルを示す。この薬理プロ社）を皮下投与（0.1 mL）した。動物の頭頂部のファイルから，ミルタザピンの抗うつ効果の発現

毛 を 刈 り， 頭 部 を 脳 定 位 固 定 装 置（ST-7，は，少なくともフルボキサミンよりも早いことが示

NARISHIGE）に固定後，頭皮を切開して皮下組織

3）されている 。また，ミルタザピンの副作用としを取り除いた。Paxinos & Watson 6）の脳図譜に従って，傾眠，食欲増加及び体重増加が主に認められて右背側海馬の位置（Teeth bar を− 3.3 mm にセッ4）

ト し，bregma よ り 右 側 方 に 1.2 mm， 後 方 に 3.6

ミルタザピンによるラット海馬ノルアドレナリンmm）に歯科用ドリル（NE-120，株式会社ナカニ

並びにセロトニンの遊離の促進は，Yamauchi M らシ）を用いて穴を開け，マニピュレーターに取り付によりミルタザピン原薬を用いた結果が報告されてけたガイドカニューレ（AG-4，株式会社エイコム）

る 。

5）

いる 。そこで本研究では，試験製剤が標準製剤とを硬膜下（深さ 2.3 mm）に挿入後，3 本のビス（特同様に抗うつ作用を発揮するかを推察する目的で，注品）及び歯科用セメント（株式会社ジーシーデン

脳内微小透析法を用いて試験製剤がラット海馬ノルタルプロダクツ）を用いて固定した。術後，ガイドアドレナリン並びにセロトニンの遊離に及ぼす影響

カニューレにダミーカニューレ（AD-4，株式会社について，標準製剤の作用と比較検討した。

エイコム）を挿入し，頭皮を縫合した後，飼育ケー2．実験材料及び実験方法
2．1．使用動物ジに戻した。なお，ガイドカニューレ装着手術は，馴化期間中に行い，手術 3 日以上経過後に実験に使用した。

6 週齢（受入時）の雄性ラット（Wistar 系，日本

2．3．2．脳内微小透析チャールズ・リバー株式会社）を，5 日間の検疫期試験当日，ラットからダミーカニューレを取り外間と，その後 8 日間の馴化飼育を経て実験に使用しし，透析用プローブ（A-I-4-02，株式会社エイコた。動物は，オートクレーブ処理した床敷（ペパーム）をガイドカニューレに沿って挿入した。ラット

クリーン，日本エスエルシー株式会社）を入れたプは無麻酔で，アクリル製観察ケージ（W : 300 × D :ラスチック製ケージ（W : 310 × D : 360 × H : 175

300 × H : 350 mm）に入れ，自由に行動できるようmm）を用いて 1 ケージ 4 匹までの群飼育とした。にし測定開始時まで動物を馴化させた。透析用プ

管理温度： 20 〜 26℃，管理湿度： 40 〜 70％，明ローブ内にインフュージョンポンプ（ESP-64，株

暗各 12 時間（照明：午前 6 時〜午後 6 時），換気式会社エイコム）を用いてリンゲル液（リンゲル液

回数：12 回／時（フィルターを通した新鮮空気）「オーツカ」: 塩化ナトリウム 8.6 g / 1000 mL，塩に維持した環境下で飼育した。飼育期間中，水道水

化カリウム 0.3 g / 1000 mL，塩化カルシウム 0.33と固型飼料（CRF-1，オリエンタル酵母工業株式会

g / 1000 mL, 株式会社大塚製薬工場）を 2.0 µL/min社）を自由摂取させた。の流速で灌流し，2 時間以上動物を馴化した。その2．2．使用薬剤と薬剤の調製後，透析液（1 サンプル / 20 分）を 20 分毎に回収

ミルタザピン錠 15 mg「明治」（大蔵製薬株式会した。回収した透析液をオートサンプリングインⓇ社 ） 並 び に リ フ レ ッ ク ス 錠 15 mg（Meiji Seika

ジェクター（M-510，株式会社エイコム）を用いてファルマ株式会社）を使用した。両製剤は，それぞ高速液体クロマトグラフ−電気化学検出器システムⓇ

れ磨砕後，0.5 w/v％メトローズ SM-100（信越化（EP-700，ECD-700，株式会社エイコム）へ連続自学工業株式会社，以下，溶媒）で懸濁し，いずれも動注入し，透析液中のノルアドレナリン並びにセロミルタザピンとして 4 mg/mL の濃度の懸濁液を調トニン濃度を分析した。電気化学検出器の加圧電圧製した。

は + 450 mV（Ag/AgCl 電極）に設定し，分析用カ診療と新薬・第 55 巻B）
80000
AUC（％ × time）

500
400
300
200

経口投与

100
03 （715）

溶媒試験製剤 20 mg/kg
標準製剤 20 mg/kgA）％ of baseline

第 10 号（2018 年 10 月）− 40 − 200204060
80 100 120 140
Time after administration （min）

160

溶媒試験製剤 20 mg/kg
標準製剤 20 mg/kg*60000*40000200000180A）ノルアドレナリンの100％換算値の経時変化を示した。各ポイントの測定値から100％換算値［％ of baseline：投与前の3サンプル（絶対値）の平均値を100％とし，ポイントごとに換算］を算出し，各群の平均値及び標準誤差を経時的に示した。
B）投与後0〜180分間のノルアドレナリン量（100％換算値）について曲線下面積（AUC）を算出し，各群の平均値及び標準誤差を示した。 ＊：p ＜ 0.05 対溶媒群（Dunnett検定）n ＝ 5

図1

ラット海馬ノルアドレナリン遊離に及ぼす試験製剤及び標準製剤の影響

溶媒
試験製剤 20 mg/kg
標準製剤 20 mg/kg％ of baseline

300200B）
40000
AUC（％ × time）

A）

経口投与

1000− 40 − 20020406080 100 120 140
Time after administration （min）

160

溶媒試験製剤 20 mg/kg
標準製剤 20 mg/kg

30000**20000
10000

1800A）セロトニンの100％換算値の経時変化を示した。各ポイントの測定値から100％換算値 ［％ of baseline：投与前の3サンプル（絶対値）の平均値を100％とし，ポイントごとに換算］を算出し，各群の平均値及び標準誤差を経時的に示した。
B）投与後0〜180分間のセロトニン量（100％換算値）について曲線下面積（AUC）を算出し，各群の平均値及び標準誤差を示した。 ＊；p ＜ 0.05 対溶媒群（Dunnett検定）n ＝ 5

図 2 ラット海馬セロトニン遊離に及ぼす試験製剤及び標準製剤の影響

ラ ム は 陽 イ オ ン カ ラ ム（EICOMPAK CAX，2.00準液（各モノアミンとも 5.55 ng / 10 µL）のピーク

mm, i.d. x 200 mm，株式会社エイコム）を用いた。

エリアを基準として算出した。透析液中のノルアド移 動 相 に は 0.1 mol/L 酢 酸 ア ン モ ニ ウ ム 緩 衝 液

レナリン及びセロトニンのピークの同定は，透析液（pH 6.0）/ メタノール / 硫酸ナトリウム / 50 mg/mL

測定前に標準液（測定用）を測定し，標準液のピーEDTA-2Na 溶液の混合液（700 mL / 300 mL / 7.102

ク保持時間により行った。なお，各群の例数は 5 匹g / 1 mL）を用いた（流速 0.20 mL/min）。とした。

リンゲル液の灌流開始から 2 時間以上経過後，2．4．動物倫理

20 分毎に 3 回基礎サンプルを回収した後，試験製

本試験は，Meiji Seika ファルマ株式会社横浜研剤または標準製剤のミルタザピンとして 20 mg/kg

究所動物実験管理委員会及び株式会社日本バイオリを，あるいは溶媒を 5 mL/kg の用量で経口投与しサーチセンター羽島研究所実験動物委員会で審査・た。投与直後から 180 分間（20 分毎に 9 サンプル）承認された方法に従い，株式会社日本バイオリサー

透析液を回収し，透析液中のノルアドレナリン及びチセンター羽島研究所で実施した。

セロトニン濃度を同時に連続測定した。各サンプル

2．5．結果のまとめ

中のモノアミン濃度は，分析開始直前に注入した標

ノルアドレナリン並びにセロトニンの測定値から

4（716）

診療と新薬・第 55 巻

第 10 号（2018 年 10 月）

100％換算値［％ of baseline：投与前の 3 サンプル

ニン遊離量の上昇は認められなかった。セロトニン（絶対値）の平均値を 100％とし，ポイントごとに遊離量の AUC については，試験製剤群並びに標準換算］を算出し，各群で平均値及び標準誤差を算出

製剤群ともに溶媒群の 1.8 倍に増加し，いずれも有した。

意な増加が認められた（図 2B；試験製剤群，p ＝さらに，投与後 0 〜 180 分間のノルアドレナリ

0.0380, 標準製剤群，p＝0.0412, vs 溶媒群，Dunnett

ン並びにセロトニン（100％換算値）について曲線検定）。なお，セロトニン遊離に対する影響は試験下面積（以下，AUC）を台形方式で算出し，各群製剤群と標準製剤群の間に有意な差は認められなで平均値及び標準誤差を算出した。

かった（p ＝ 0.8194，t- 検定）。

2．6．統計解析方法

4．考

ノルアドレナリン並びにセロトニン遊離量の薬剤

察

投与 0 〜 180 分間まで 20 分毎にプロットした AUC

ミルタザピン錠「明治」は先発医薬品である抗うについて，溶媒群に対する試験製剤群及び標準製剤

つ薬リフレックスⓇ錠／レメロンⓇ錠の後発医薬品と群の比較には Dunnett の多重比較検定を用いた。

して大蔵製薬株式会社が製造販売承認を取得した製

また，試験製剤群及び標準製剤群の 2 群間比較検定剤であり，「後発品の生物学的同等性試験ガイドラは Student の t 検定を用いた。いずれも，有意水準イン」に従い生物学的同等性が確認されている 7）。

は 5％とした。なお，有意差検定には，市販の統計本試験では，試験製剤がラット海馬ノルアドレナ

プ ロ グ ラ ム（SAS シ ス テ ム；SAS Institute Japan

リン並びにセロトニン遊離に及ぼす影響について，

株式会社あるいは EXSUS；株式会社 CAC クロア）

標準製剤の作用と比較検討した。その結果，試験製を使用した。

剤及び標準製剤それぞれの経口投与はラット海馬ノ3．結果

試験製剤及び標準製剤はいずれも投与 20 分後からノルアドレナリン遊離量を上昇させ，溶媒群と比ルアドレナリン並びにセロトニン遊離を有意に促進させた。なお，溶媒の経口投与は脳内ノルアドレナリン並びにセロトニン遊離に明らかな影響を及ぼさなかった。

較してその効果は投与 180 分後まで持続した（図ミルタザピンによるラット海馬ノルアドレナリン1A）。試験製剤群では投与前値に比べて最大 3.3

並 び に セ ロ ト ニ ン 遊 離 の 促 進 に つ い て は，倍，標準製剤群では最大 4.1 倍にまでノルアドレナ

Yamauchi M らにより腹腔内投与により検討されてリン遊離量が上昇した。一方，溶媒群では明らかないる 5）。本試験では，臨床で用いられる製剤をラッノルアドレナリン遊離量の上昇は認められなかっトに経口投与した。本試験で用いたミルタザピンのた。ノルアドレナリン遊離量を投与 0 〜 180 分間

投与量 20 mg/kg は，ヒトの血中濃度範囲を想定しまで 20 分毎にプロットした AUC については，試設定した。ヒトでの臨床 1 日最大用量の 45 mg を

験製剤群では溶媒群の 3.0 倍，標準製剤群では 2.8

日本人（健康成人男性）に反復経口投与した場合の倍に増加し，いずれも有意な増加が認められた（図最高血漿中濃度（Cmax）は 146 ng/mL と報告され

1B； 試 験 製 剤 群，p ＝ 0.0060, 標 準 製 剤 群，p ＝ている 3）。ラット（雄）にミルタザピンを単回経口

0.0102, vs 溶媒群，Dunnett 検定）。なお，ノルア投 与 し た 場 合 の Cmax は，10 mg/kg で 106 ng/

ドレナリン遊離に対する影響は試験製剤群と標準製mL，40 mg/kg で 214 ng/mL であることから 3），今剤 群 の 間 に 有 意 な 差 は 認 め ら れ な か っ た（p ＝回の検討に用いた 20 mg/kg の Cmax は 140 ng/mL0.9716，t- 検定）。

程度と，おおむね臨床の範囲であると推定された。

また，試験製剤及び標準製剤はいずれも投与 20

なお，本試験で設定した製剤の用量である 20分後からセロトニン遊離量を上昇させ，溶媒群と比mg/kg は，ミルタザピン原末を用いたラットの 52

較してその効果は投与 180 分後まで持続した（図週間経口反復投与毒性試験の無毒性用量 3）と同じで2A）。試験製剤群では投与前値に比べて最大 2.1ある。参考として試験製剤及び標準製剤の単回投与倍，標準製剤群では最大 1.8 倍にまでセロトニン遊毒性試験を 30 mg/kg で実施した結果，両製剤とも離量が上昇した。一方，溶媒群では明らかなセロト

毒性所見はみられなかった 8）ことから，本試験の用診療と新薬・第 55 巻

量は適切であったと考えられた。
また測定部位については，ミルタザピンのノルア
ドレナリン遊離促進作用はいずれの脳部位でも観察第 10 号（2018 年 10 月）

5 （717）

本バイオリサーチセンターへ委託し実施した。なお，大山昌代，松倉スチトラ，山内美紀，今西泰一郎，三浦有紀は，Meiji Seika ファルマ株式会社の社員である。

されるが，セロトニン遊離については脳部位によっ

6．参 考 文 献て促進する部位と促進しない部位に分かれることが

1）S a r t o r i u s N , B a g h a i T C , B a l d w i n D S , e t a l :知られている 。そこで，本試験ではミルタザピン

Antidepressant medications and other treatments ofによるノルアドレナリン並びにセロトニン遊離がとdepressive disorders: a CINP Task Force report based5）

もに促進される海馬を測定部位として選択した。本試験において，試験製剤及び標準製剤は同様にラッon a review of evidence. Int J Neuropsychopharmacol
2007;10（Suppl 1）:S1-207.
2）De Boer T: The pharmacologic proﬁle of mirtazapine. J

ト海馬ノルアドレナリン並びにセロトニン遊離を促

Clin Psychiatry 1996; 57（Suppl 4）:19-25.

進させたことから，試験製剤は標準製剤と同様の作

3）リフレックスⓇ錠の医薬品製造承認申請資料．

用を有することが明らかとなった。
以上，ミルタザピン錠「明治」がラット海馬ノル

4）リフレックスⓇ錠 添付文書 2018 年 8 月改訂（第 14 版）
5）Yamauchi M, Imanishi T, Koyama T: A combination ofmirtazapine and milnacipran augments the extracellular

アドレナリン並びにセロトニン遊離に及ぼす影響にlevels of monoamines in the rat brain.

ついて標準製剤の作用と比較検討した。その結果，Neuropharmacology 2012; 62 :2278-87.

ミルタザピン錠「明治」は標準製剤と同様にノルアドレナリン及びセロトニン遊離を促進させることが確認された。

6）Paxinos G, Watson C. The Rat Brain in Stereotaxic
Coordinates, second ed. Academic Press, Inc. San
Diego 1986.
7）ミルタザピン錠「明治」添付文書 2018 年 8 月改訂（第5．利 益 相 反2 版）．
8）Meiji Seika ファルマ株式会社 社内資料．2018.

本試験は，Meiji Seika ファルマ株式会社が試験計画を立案し，試験計画書作成，試験実施と統計解析を株式会社日