ISSN 1347-4804

April 2022

Vol.90 No.2

〔総説〕

「バッチならびにフロー式 Fischer-Speier エステル化に適用可能な高分子酸触媒 PAFR Ⅱ」
山田

陽一、間瀬

俊明、魚住

「歯科用接着系材料の概略」「細胞外小胞の臨床プロテオミクス解析 －血液を巡る細胞外小胞の多検体自動精製技術の開発－」 村岡「超高純度ヒト骨髄由来間葉系幹細胞 REC」

陶山

泰広……… 2坂本

猛……… 5賢、足立淳……… 8隆史、松崎有未……… 11

福地

大樹……… 14

河田

幸寿……… 16

安達

直樹……… 18

〈テクニカルレポート〉「遺伝子組換えタンパク質を用いたエンドトキシン測定試薬」【連載】〈微量元素分析―さまざまな分野での活用事例とその重要性―〉 最終回「第 4 回半導体製造にかかわる薬品の微量金属（不純物）の影響とその分析方法」〈よくわかる BDNF―基礎から臨床まで―〉「第 4 回BDNF/TrkB シグナル

もう一つの顔」〈ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用〉 最終回「第 4 回ヒト iPS 細胞由来神経細胞における神経回路機能評価法の構築の試み」

馬場

敦……… 22〔化学大家〕「アンリ・ベクレル」

中辻

慎一……… 33

〔製品紹介〕
有機合成

培

エステル化触媒「PAFR-Ⅱ」…………………………… 4
歯質接着性モノマー …………………………………… 7
硫化物系固体電解質 …………………………………… 28

超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）…………………… 13
iCell® 神経細胞製品 …………………………………… 25
SCF溶液，ヒト，組換え体 ……………………………… 32

分

免

析

養

疫

ICP分析用単元素標準液 ……………………………… 17
食品分析用標準品 ……………………………………… 26
局方試験用試薬 ………………………………………… 26
ポジティブリスト関連農薬標準品 ……………………… 27
PFCs（PFOS, PFOA, PFHxS）試験用試薬 ……… 28

抗proBDNF，モノクローナル抗体（3C10H）………… 21
レビス® Human MCP-１（CCL2）ELISA Kit………… 29
タマビジンTM 2-REV，組換え体，溶液 ………………… 29
抗Arg1，ウサギ、抗iNOS，ウサギ …………………… 30
蛍光標識 抗Iba1，ウサギ ……………………………… 30

遺

細胞生物

伝

子

MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキットPS Ver.2…………………………………………………… 10
精製EV用マイクロRNAエキストラクター®キット ………… 36

アセチルCoA検出用蛍光プローブ「RH-NH2」 ……… 31
L

A

L

パイロスター TM ネオ……………………………………… 15
機

器

CellVoyagerTM CQ1 …………………………………… 25〔お知らせ〕
農薬・動物用医薬品混合標準液検索のご案内 ………… 27

動物細胞用培地カタログのご案内………………………… 32

1

R

esearchバッチならびにフロー式Fischer-Speierエステル化に適用可能な高分子酸触媒PAFR Ⅱ
山田
俊明、魚住

理化学研究所 環境資源科学研究センター
分子科学研究所

はじめに

間瀬

陽一
泰広

触媒は、高い触媒活性（バッチ反応およ凝集体が多量に生成した。24 時間後温び連 続フロー反 応で触 媒 量0.7 mol%、

度を下げた。得られた固体を、水、塩酸

最長4日間の運転時間）など、前述のエ

水溶液、水、2-プロパノール、メタノール

ステル化反応の長所を満たしているが、で順次洗浄した。真空乾燥後、黒色石原料）の向上とE-factor（廃棄物／原

触媒の再利用性は不十分だった。連続

炭状固体としてPAFR Ⅱが得られた。

料）の低減は、有機化学やグリーンケミス

フロー反応では、4日間で触媒が失活しこの手順により、機械攪拌式タンクリア

トリーだけでなく、産業応用においても重た。そこで、水の除去を必要とせず、よ

クターを用いて、87グラムまでのPAFR Ⅱ

要なファクターである。脱水反応は最も基り安定で高活性、再利用可能かつ実用の調製を実現した。また、元素分析によ有機合成反応の原子効率（生成物／

本的な反応の一つであり、理想的な触媒性を兼備したFischer-Speierエステル化

り触媒の再現性を確認したところ、異なるを用いた脱水反応では水が唯一の副生用高分子酸触媒を開発した。

反応スケールで得られた触媒の硫黄含有成物となるため、生合成・化学合成のい第 一 世 代PAFRが失 活した理 由は、
p -フェノールスルホン酸の脱スルホニル化

ことがわかった。PAFR Ⅱの表面画像を

具体的には、カルボン酸とアルコールを反が、高温の酸性反応条件下で容易に起走査型電子顕微鏡（SEM）で観察した。

応させてエステルを得るFischer-Speier

こるためである（ 図1）。この脱スルホ粉砕されたPAFR Ⅱは、比較的均一な

エステル化反応 が、油、香水、医薬

ニル化反応を防ぐために、我々は新規な粒子径を持つ平坦な鉱石状の凝集体を品、化粧品、塗料、接着剤、樹脂、溶

m -フェノールスルホン酸樹脂触媒PAFR Ⅱ

示した。SEM上のエネルギー分散型X線

ずれにおいても頻繁に利用されている。

1）

4）

量は11±0.8 wt%の範囲で再現性がある剤などの製造に工業規模で実施されていを設計した 。ここでは、より活性が高く（EDX）分光分析（EDX/SEM）では、る。高活性で再利用可能な触媒を用い、再利用可能な第二世代m -フェノールスル

高分子マトリックス上に硫黄原子が均一

脱水剤を使用せず、無溶媒の条件でエホン酸-ホルムアルデヒド樹脂触媒（PAFR Ⅱ）に分散しており、ナトリウムは検出されなステル化ができれば、より安全で経済的を開発し、バッチおよび連続フロー条件をかった。

な工業規模の合成経路を提供することが考慮してFischer-Speierエステル化反応

PAFRとPAFR Ⅱの熱安定性を比較すできる。この反応は、カルボン酸とアルコーに適用した結果を紹介する。PAFR Ⅱは、るために、熱重量測定/質量分析（TG-

ルが反応することでエステルと水が生成

連続フロー条件下で、市販のイオン交換

MS）を行った。スルホン酸基の分解は、する平衡反応である。高収率で生成物

型スルホン酸樹脂触媒よりも高いエステル

触媒が不活性化したことを示す直接的なを得るためには平衡を傾けるための方法

収率を示すことが明らかになった。

証拠である。両PAFR触媒のスルホン酸を考える必要がある。今までに様々なエス
テル化触媒が報告されているものの、触媒量や使用するアルコール量、反応温度、水除去などの点でまだ発展途上の段階にある2）。

基の分解に対応するピークを確認すると、

触媒調製

PAFR Ⅱが、分解温度130 ℃のPAFRよりもはるかに安定している（分解温度180

PAFR Ⅱは、硫酸水溶液中でm -フェノールスルホン酸ナトリウムとホルムアルデヒ

私たちのグループは、Fischer-Speierド（2 mol equiv）を 120 ℃（オイルバス

エステル化反応の不均一系触媒として、

温度）、24 時間縮合重合して調製された多孔質フェノールスルホン酸-ホルムアルデ（図2）。溶液の色は徐々に薄くなり、重ヒド樹脂（PAFR）
を開発していた3）。この合中に暗緑色から黒色の石炭状の固体℃）ことが明らかになった。

PAFR と PAFR Ⅱのバッチ反応での比較
バッチ反応によるアクリル酸とメタノールの直接エステル化において、2つの触媒の再利用性を確認したところ、PAFR Ⅱの方がPAFRよりも安定であることが裏付

図１．PAFR の脱スルホニル化による分解とその抑制のための触媒設計（PAFR II）

2

和光純薬時報図２．PAFR II の調製

Vol.90, No.2（2022）

けられた（図3）。0.5 mol%の触媒を同系酸触媒の触媒活性を、水を除去するこ

様々なカルボン酸とアルコールの直接エス

一の反応条件で試験したところ、最初のとなく反応温度90 ℃で比較した（図４）。

テル化について検討した（図５）。連続フ反応サイクルでは同様の触媒活性を示し、アクリル酸とエタノール（2 mol equiv）のロー反応系の模式図を示す。アクリル樹

アクリル酸メチルがそれぞれ83%（PAFR）

混合物を、1.1 mmol SO3HのPAFR Ⅱ

脂は需要が高く、プレキシガラスなどの建および86%（PAFR Ⅱ）の収率で得られまたは他の様々な触媒を充填した触媒

築材料や装飾材料として建築業界で広た。触媒は回収され、前回の反応条件

充填カラムに、25 μL/minの流速で通く使用されている。フロー式の条件におで次の反 応サイクルに再 利 用された。

液した。PAFR Ⅱは、DIAION SK104H

いて、水の除去をすることなく、90 ℃で

PAFR Ⅱは触媒活性を失うことなく9回再（収率76％）、DIAION PK208（収率98%という高い収率でアクリレートエステル利用できたのに対し、PAFRの再利用性74％）、Dowex 50Wx2（ 収 率76％）、生成物が得られた。また、脂肪酸エステ

は徐々に低下した。

Amberlyst 16 wet（収率70％）および

ルも高収率で生成した。末端オレフィン結

フロー式エステル化での様々な固体触媒と PAFR Ⅱとの比較

Amberlyst 15 dry（収率57％）などの合を有するエステル、例えば酢酸アリル

他の触媒に比べ高い収率でアクリル酸エは80%以上の収率で、酢酸3-フェニルプ

チルを与えた（収率95％）。

ロピルは77%で得られた。多くの連続フバッチ式・フロー式エス
テル化での基質一般性

高活性で安定した不均一系高分子酸
触媒PAFR Ⅱが得られたので、次の段
階は、連続フローでのFischer-Speierエ
ステル化反応5）を実現することだった。

PAFR Ⅱが高い触媒活性を示したた

PAFR IIをはじめ、市販の様々な不均一

め、フロー式およびバッチ式の両条件で、ロー反応では、バッチ反応よりも高い生成物収率が得られた。連続フロー反応では、生成したエステルとともに水が生成したが、凝集して水滴となった。

図３．PAFR と PAFR II のバッチ式反応での再利用性

図４．フロー式エステル化での触媒活性の比較

図５．バッチ・フロー式での基質一般性

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）3フロー式バイオディー
ゼル燃料合成への応用
オレイン酸とリノール酸を主成分とする
バイオマスをバイオディーゼルに変換する
モデル反応にもPAFR Ⅱを適用した（図６）。連続フローによる直接エステル化は、

ノール酸は1週間にわたり90％の変換率が失うことなく数ヶ月間基質を変換した。現得られた。これらの結果は、この第二世

在、さらなるエステル化の可能性、なら

代PAFR触媒を用いたバイオディーゼル

びに様々な酸触媒促進型有機変換反応

生産プロセス応用の可能性を示すものでへの適用を進めている。

あった。

謝辞

終わりに

PAFR Ⅱ開 発 研 究は多くの共 同 研

リサイクル食用油からバイオディーゼルを第一世代PAFRよりもスルホン酸含有究 者とともに実施された。理化学研究製造するための有力なルートとなり得る。

量が高く、熱安定性に優れた第二世代メ所のHao Hu博士、太田元氏、Heeyoel

この用途では、固体酸触媒は、過剰なア

タフェノールスルホン酸-ホルムアルデヒド樹

Baek博士、篠原賢太氏、大野綾氏にルコールや大きな触媒負荷のために、うま脂触媒PAFR Ⅱが開発された。より大き深謝申し上げる。これら一連の研究の一く機 能しないことが 報 告され ている。

なスケールで調製しても、触媒活性や触部はJST ACT-C（#JPMJCR12ZC）、JST

PAFR Ⅱによるバッチ反応条件下では、

媒 反 応 温 度での安 定 性に悪 影 響はな

ACCEL （#JPMJAC1401）、AMED

オレイン酸およびリノール酸は、それぞれかった。この触媒はカルボン酸とアルコー（#19ak0101115h）、日本 学 術 振 興 会

82%および90%の収率で対応するエステ

ルの直接エステル化を連続フローとバッチ（#24550126, #20655035, #15K05510）、

ルに変換された。また、連続フローエス

処理の両方で促進し、対応するエステル

武田科学振興財団、内藤記念財団、公テル化では、オレイン酸は2週間以上にわを高収率で与えた。また、PAFR Ⅱを充

益信託医用薬物研究奨励富岳基金、理たって92%から94%の変換率が得られ、リ填したフローリアクターでは、触媒活性を化学研究所のご支援により進められたものである。心より御礼申し上げる次第である。
〔参考文献〕
1）Fischer, E. and Speier, A. : Chem. Ber ., 28,3252（1895）.
2）最近の優れた例については以下の論文を参考にされたい。（a）Ishihara, K. et al . : Science ,290, 1140（2000）.（b）Manabe, K. et al . : J.

Am. Chem. Soc ., 123, 10101 （2001）.（c）Sakakura, A. et al . : Org. Lett ., 14, 30（2012）.
（d） Pirez, C. et al . : ACS Catal ., 2, 1607
（2012）.（e）Xu, X-H. et al . : RSC Adv ., 3, 3848
（2013）.
3）（a）Minakawa, M. et al . : Org. Lett ., 15, 5798
（2013）.（b）Baek, H. et al . : Sci. Rep ., 6, 25925（2016）.（c）Kim, Y-H. et al . : Synlett , 27, 29（2016）.
4）Hu, H. et al . : Org. Lett ., 22, 160（2020）.
5）Furuta, A. et al . : Bull. Chem. Soc. Jpn ., 90,607（2017）.

図６．フロー式連続エステル化によるバイオディーゼル燃料の合成

メタ位がポイント！
！フェノールスルホン酸エステル化触媒
PAFR-Ⅱ
本品は、フロー反応及びバッチ反応に使用できる「エステル化」に有効な固体酸触媒です。
コード No.
品
名
規格
162-28971 PAFR-II
有機合成用
168-28973 【m -Phenolsulfonic Acid-Formaldehyde Resin】

容量
1g
5g

希望納入価格（円）23,00080,000

詳細はこちら☞…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年４月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

4

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

R

esearch
歯科用接着系材料の概略

はじめに

坂本

猛

YAMAKIN 株式会社、高知大学医学部

次世代歯科医療開発講座

通する部分が多いが、用途は多少異なる。また、光増感剤としてカンファーる。前者は、虫歯を切削などで取り除

キノンが代表的である。モノマーは、

いた後、その空隙を修復する際に、修近年アクリルアミドを用いる製品もあ

歯科用接着系材料とは、歯質と修復復用充填材（コンポジットレジン）のるが、ほとんどメタクリレートであ物や補綴物を接着するための材料であ充填前に歯質にあらかじめ塗布して光り、複数の機能性モノマーが用いられる。歯が虫歯になったとき、虫歯ににより予備的に硬化させて充填材によている 2）。

なった部分を削り、修復物あるいは補る充填を行い、最終的に充填材も光に

歯科用接着材の歯質に対する接着機

綴物といわれる「詰め物」をする。こより硬化させて充填を完了する（図構は、脱灰（エッチング）、浸透（プのような物質は、貴金属または非貴金

2）。後者は、歯冠（クラウン）などのライミング）と硬化（ボンディング）

属の合金、セラミックスや有機 - 無機

補綴物と虫歯除去後、形状を調整したからなる（図3）。脱灰とは、歯質の複合体から構成されており、それら自歯質と接着し、かつ両者の間隙を充た

表面を化学的に削ることである。ハイ体には接着性はない。

しながら装着させるために使用する。

ドロキシアパタイトのカルシウム分

特に、充填材（フィラー）を含む歯科用有機材料の特徴として、金属冠の装着とは異なり、虫歯の部分のみの最歯科用接着材について

が、接着材の酸性成分によって処理されることで、表面が部分的に溶かされ粗造化される。脱灰過程はエナメル質

低限の切削で、修復を行うことができ接着材を構成する材料は、メタクリと象牙質では多少異なる。エナメル質

る た め 21 世 紀 に な っ て 提 唱 さ れ た

レートモノマー、添加剤（開始剤なが 95％以上無機質（ハイドロキシア

MI（Minimal Intervention）治療のコ

ど）、増粘剤（ヒュームドシリカなど

パタイト）から構成されているのに対ンセプトに合致した材料として普及しの無機物）と溶媒である。このようなして、象牙質では、約 20％の有機物

た。また、高分子材料は色調が調整し接着系材料は可視光あるいは化学的反を含み、その 60％程度がコラーゲンやすいので、有機材料が現在では歯科応で開始するラジカル重合を用いて硬線維である 2）。

医院での虫歯治療の主な手法の1つと化させ、光重合では可視光によって硬したがって、象牙質は脱灰を受ける化させることが歯科特有の技術であとコラーゲン線維が海綿状に露出す1）なっている （図 1）。
このような接着性のない修復物には、専用の接着材が必要であり 1）、歯科用接着系材料はこれらの多様な材質に対して、十分な接着性が求められる。さらに、口腔内は、常に唾液による湿った環境で、歯質や修復物は咬合や咀嚼のような強い荷重にさらされて

図２．１液性歯科用接着材の使用方法

おり、かつ摂食により急激な酸性度や温度変化にも暴露されている環境であるので、このような過酷な接着環境に対して長期に耐えなければならない。
歯科用接着系材料には、接着材と接着性レジンセメントがあり、成分は共

図１．天然歯の構造とコンポジット修復の模式図

図３．歯質に対する接着機構

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）5

る。一般に象牙質の方が脱灰を受けや（ジメタクレート）あるいは接着材成

きる（図 5）。M-TEG-OH は、水酸基

すく、過度に脱灰が進むとコラーゲン

分の接着対象への浸透やぬれ拡がりををもち M-TEG-P® の前駆体であるが、線維が収縮するので、接着材成分が浸（図
担う低粘度のモノマーなどがある 2）

中性の両親媒性モノマーである。M-

透しにくくなり、接着力低下の要因と

4）。

TEG-P® に比べ粘度が低く、相溶性がなる。浸透とは、粗造化された表面に

特に、接着性モノマーは、1液性接高いモノマーなので、反応性希釈剤に対して接着材成分が浸透することであ

着材の発展に大きく貢献したモノマー使用できる。また、水酸基をもつモノ

り、ボンディングでは浸透したモノであり（図 5）、酸性基がリン酸であ

メタクリレートであり、ビルディング

マーが光によって硬化することによっる MDP が代表的であり、歯科用接着ブロックとしても有用である。

て接着の工程が完結する。

材としての MDP に関する科学的蓄積

接着材の技術的変遷では、接着の過の実績が多くある 3）。

程ごとに3液性であったものから2 液

また、酸性基がジカルボン酸である性や1液性へ移行しているが、これは4-MET は、接着材に古くから用いら

レジンセメントは、歯科の発展にお接着工程における簡便性やテクニカル

れているモノマーであり、接着材

いて合着材に分類される。従来、自己エラーを追求した結果である。ただ組成としては、その酸無水物である

接着性をもたず、材質の異なるいろい

し、操作の簡便性の追求と接着耐久性

4-META として配合し、接着材組成

ろな種類があり多岐にわたる。これらのバランスが求められ、2液性は接着内で加水分解させて用いられることがのうち、有機系のものはメタクリレー

耐久性において1液性よりも臨床的に多い。4-MET の機能は、リン酸モノ

トが主流で、接着材の原料と共通する

信頼が高いというように、それぞれ利マーよりも酸性度が低く、象牙質へのが用途は異なる。自己接着性はないた

点と欠点が相補的である 。理想的に作用を比較的温和にすることができる

め、接着材が必要である 4）。

は、簡単な手順で、どのような条件でことである（図 5）。

2）

レジンセメントの分類の中で、接着も、多様な接着対象に対して再現性よ

近年、接着性モノマーとして開発し性をもつものが 2003 年より登場し現く接着できることであるが、この課題

た M-TEG-P® は、両親媒性であるこ

在では多数の接着性レジンセメントが解決は非常に難しい。

とが大きな特徴である。既存のリン酸

発売されている 5）。これらは、接着性

モノマーは、水に対して不溶性であモノマーを含有し接着機構も接着材とり、接着材は硬化する直前に溶媒を風同じであるが、溶媒を含まず脱灰は限乾させる。多くのモノマーは非水溶性定的である。

構成する成分とは？
接着材は、複数のモノマーが用いらなので、硬化する直前に成分が不均一

補綴物を装着時に使用するので、光れ、それらの機能性に応じて使い分けになる課題があり、これが接着の不首照射で効果的に開始できないことを考る。例えば、歯質に対するエッチング

尾につながる可能性がある。

慮して、2 種類のペーストあるいは粉を行い、その後ポリマーのネットワー

M-TEG-P® は連結基部分をテトラエ

末を混和することによる酸化還元重合

クに取り込まれる接着性モノマーと呼チレングリコール鎖にすることによと併用する（Dual cure）。レジンセメ

ばれる酸モノマー、硬化した接着材のり、リン酸モノマーが両親媒性となントの課題は、接着材と同様に、接着

物理的な強度を保つための複数のメタ

り、組成の分離を防ぐことができる。

力や接着耐久性の問題と操作性などがクリレート基をもつ架橋性モノマー

また、接着材のぬれ性の改善も期待である。とくに接着耐久性に関しては、

図４．歯科で一般的なメタクリレート

6

2, 3）

レジンセメントとは？

図５．接着性モノマー

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

材料工学的試験結果と臨床結果との隔たりも指摘されている。
レジンセメントの組成は、接着材組成と比較して溶媒が省かれるが、接着剤と同様に無機フィラーを含み、その含有量は 60 重量％程度である。無機
フィラーには、シリカ、アルミナ、ジルコニアなどの複合体が用いられるが、接着材（レジンセメント）層の構造を強固に保ち、重合収縮を低減する
ための成分である。
また、フィラーは、酸モノマーと併用する硬化の過程で中和にも作用し、

図６．球状多孔質ジルコニア粒子（左：SEM

右：TEM）と名付けられ、応用研究が進められてラーの形状、成分などを工夫して有機いる（図 6）。

物と共同し、歯科接着の要求に耐える組成物の初期は酸性であるが、中和がこの「MARIMO」のジルコニア粒

硬化物を形成することである。このよ

進み加水分解によるポリマーネット

7）

子 （比表面積 300 m /g）は、非多孔うな材料の応用によって、接着材を必

ワークなど結合開裂防止に寄与し、材質ジルコニア（比表面積4～ 9 m2/g）

要としないコンポジットレジン（0 ス

料の劣化を防ぐことに貢献する。

2と比較すると、「MARIMO」配合のレ

テップ、修復材料）の実現の可能性が

近年、工業用用途で開発された特殊

ジンセメントの接着強さの向上に寄与期待できる。

な形状の無機フィラーが注目されていすることが明らかとなった。新規の歯る。この粒子は 2012 年、多孔質の二科用レジンセメントに応用すると、簡

酸化チタンナノ粒子を超高速で合成で便な操作（光照射のみ）によって、強きる画期的な手法を開発したことに力に接着することができる。このよう。この方法でな新規無機フィラーの応用は、歯科だ

は、メタノールに原料のチタンイソプ

けでなく他の分野での接着材料に対しロポキシドと補助剤のカルボン酸を加て、性能向上が期待できる。

よって生み出された

6, 7）

え、約 300 ～ 400 ℃に加熱するシン分と短時間である 6）。さらにこの手法

1）Bart, V. M. et al . : Dent. Mater ., 24, 1（2005）.
2）坂本猛，木村洋明，大川内一成，水田悠介，
林未季：日本接着学会誌，52，152（2016）.
3）Norbert, M., Ulrich, S. and Jörg, Z. : Dent.

Mater. J ., 21, 895（2005）.
4）Tomas, H. et al . : Dent. Mater ., 28, 1183
（2012）.

まとめ

プルな手法で、合成時間はわずか 10〔参考文献〕

5）William, M. and Jack, L. F. :“Resin-based
cements used in dentistry, Handbook of oralを用いて、内部が詰まった中実構造

歯科用接着系材料に関する課題は、と内部が中空の構造を作り分けるこ

簡便性と接着の信頼性を共存させることにも成功し、得られたナノ粒子がとである。有機化合物には、良好な日本の特別天然記念物、阿寒湖のマリエッチング、化学的相互作用あるいはモによく似た形をしていることから組織や構造への浸透性、重合性が望ま（Mesoporously Architected「MARIMOれ、無機フィラーに関しては、強固でRoundly Integrated Metal Oxide）」

耐久性のある構造実現のために、フィbiomaterials”, Pan Stanford Publishing Pte
Ltd（2014）.
6）Farkfun, D. et al . : Chem. Commun ., 53, 6704
（2017）.
7）Pengyu, W. et al . : J. Supercrit. Fluids , 80, 71（2013）.

歯質接着性モノマー
容量

希望納入価格（円）139-19051 4-MET

コード No.

品

名

有機合成用

規

格

5g

35,000136-19061 4-META

有機合成用

5g

30,000

CH2

O
O

H3C

O

O

O
O

C15H14O8＝322.27
CAS RN® 68183-31-3
4-MET

CH2
OH
OH

O
O

H3C

O

O

O
O
O

C15H12O7＝304.25
CAS RN® 70293-55-9
4-META…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

7

R

esearch

細胞外小胞の臨床プロテオミクス解析－血液を巡る細胞外小胞の多検体自動精製技術の開発－
医薬基盤・健康・栄養研究所

はじめに
近年、がん、神経疾患、心血管疾
患、感染症など様々な医学研究分野にプロテオームリサーチプロジェクト

村岡

賢、足立

淳

侵襲的であることから継続的な観察に在することが報告された3）。2012年において患者の負担が軽減され、疾患のはSamanらによってもう一つの原因因変化を捉えることができるため開発が子であるタウタンパク質の過剰発現細急がれている。

胞由来の細胞外小胞にタウタンパク質が内包されていることが確認された4）。

神経変性疾患における細胞外小胞

筆者は、アルツハイマー病疾患の脳組らの構成成分が細胞や疾患ごとに違い

加齢にともないリスクが高くなる神要であるSerine396のリン酸化（pS396

を示し、様々な機能を持ち疾患の病態

経変性疾患は、高齢化が進む日本におtau）が確認され、コントロール群と変化に大きく影響を与えていることがいて、目を背けることができない疾患

比較して有意に上昇していることを見知られている。そのため、血液などかの一つとなっている。アルツハイマー

出した（図1a, b）5）。更には、それらら採取した細胞外小胞は、病気の早期病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソのタウタンパク質はオリゴマーを形成発見、モニタリング、薬効効果などのン病を含む神経変性疾患における細胞した状態で細胞外小胞に内包されていバイオマーカーを含むのではないかと

外小胞の役割についての研究は、ここることが確認され、マウス、細胞の実期待されている。本稿では、筆者が現10年ほどで目覚ましい進展が見られ

験でタウの凝集、伝播のためのseed

在までに行ってきた神経変性疾患におた。2006年にRajendranらによりアル（種）として細胞外小胞と共に重要な

ける細胞外小胞の機能解析とバイオツハイマー疾患の原因因子の一つであ機能を持つことを報告した6）。また、マーカー探索、大規模なプロテオミク

るアミロイドベータが細胞外小胞の内アルツハイマー病の脳組織由来（スクス解析に向けた血液由来細胞外小胞の外に存在すること、細胞外小胞の特異ロース濃度勾配遠心法）、脳脊髄液由多検体自動精製技術について紹介す的タンパク質であるALIXがアルツハ

来（MagCaptureTM Exosome Isolation

る。

イマー患者の脳内のアミロイド斑に存

Kit PS；富士フイルム和光純薬、293-

おいて、細胞外小胞の研究が進められている。細胞外小胞は、タンパク質、核酸や脂質などを内包しており、これ織由来の細胞外小胞に内包されている
タウタンパク質は、凝集体の形成に重細胞外小胞
細胞外小胞は、様々な組織、細胞により分泌される脂質二重膜で囲まれた膜小胞の総称であり、分泌経路、生合
成、サイズの違いから、多胞体と細胞膜が融合し細胞外へ分泌されるエクソ
ソーム（40-200nm）、細胞膜から直接出芽し細胞外へ分泌されるマイクロベ
シクル（200-1000nm）、アポトーシスを起こした細胞から分泌されるアポトーシス小胞（1000-5000nm）に分類されている。細胞外小胞は血液、尿、唾液、脳脊髄液などの体液中で観察され、様々なタンパク質、核酸、脂質などが含まれており、細胞間の情報伝達に重要であることが報告されている1）。
近年、悪性腫瘍、炎症性疾患や神経疾
患などの疾患との関連性が数多く報告されており、疾患の診断、予後予測のバイオマーカー探索、治療への応用研
2）

究に期待が集まっている 。また、血液中の細胞外小胞を用いた診断は、低8図１．神経変性疾患における細胞外小胞の機能とバイオマーカー開発（a）透過型電子顕微鏡による細胞外小胞（b）細胞外小胞の内外に存在するタウ、リン酸化タウ（c）プロテオーム解析によるタンパク質の発現比較（d）アルツハイマー疾患脳組織由来細胞外小胞の ANXA5 の発現上昇（e）脳脊髄液由来細胞外小胞のバイオマーカー候補タンパク質
CTRL：健常者
MCI：軽度認知障害
AD：アルツハイマー認知症＊：p < 0.05

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

77601）の 細 胞 外 小 胞 の プ ロテオミ
クス解析によりANXA5、PTGFRNがコントロール群と比較して発現が上昇
5, 7）していることを示した（図1c, d, e）。

脳髄液は疾患をモニタリングするには最適であるが、脳髄液をその都度採取するのは患者への負担が大きく、侵襲性が低い血液による検査が望まれている。そこで筆者らは、多検体の血液サ
ンプルの細胞外小胞を用いて候補タン
パク質を解析、評価することを考え、多検体の処理が可能でかつ、人為的ブ
レをなくすために、体液由来の細胞外小胞を自動精製可能な技術開発を行った。

血清・血漿由来細胞外小胞の自動精製技術開発

図２．MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS を用いた細胞外小胞の自動精製技術開発

テオミクス解析するためには、再現性に精製する自動精製技術の開発に成功

細胞外小胞が体液中に多数含まれて高く精製するシステムの開発が重要した（図2）。

おり、由来する細胞の変化を包含してとなる。筆者らは、96検体の血清、血いると考えられることから、大規模な漿を96ウェルプレート用加圧送液プ

臨床検体を用いた細胞外小胞のタンパ

ロ セッサーによりfiltrationの前処理

ク質の網羅的プロテオミクス解析が盛を行い、KingFisher Flex向けにアレんに行われている。血液から細胞外小ン ジ し たMagCapture TM Exosome

筆者らは、自動精製技術により精製

胞を濃縮する方法は、遠心を組み合わ

Isolation Kit PSに よ り96検 体 を 一 度した細胞外小胞の網羅的プロテオミク

血清・血漿細胞外小胞のプロテオミクス解析せる方法や、平衡密度勾配遠心法、サイズ排除クロマトグラフィー法、親和性を利用した精製法など数多くの方法が報告されている8）。細胞外小胞を単離する方法によって、単離される細胞
外小胞は異なり、また、夾雑物が含まれる割合も異なることから、純度の高
い細胞外小胞の精製方法、及び精製方法の標準化も必要となっている。その中でも細胞外小胞のホスファチジル
セリンと高い親和性を示すTim4タン
パク質を介して精製する方法は、他の方法と比較しても夾雑物を最小限に抑制して高純度に濃縮することができる9, 10）。細胞外小胞を高純度で精製、濃縮することは、タンパク質のダイナ
ミックレンジを低くすることができ、プロテオミクス解析において微量なタンパク質の同定・定量を可能とする。また、大規模な臨床検体をプロ

図３．自動精製した血清、血漿由来細胞外小胞のプロテオミクス解析（a）手動・自動精製した細胞外小胞のマーカー比較 （b）血清、血漿由来細胞外小胞のプロテオー
ム解析の結果和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）9ス解析を行ったところ、手動精製と比を含む体液中でがん、変性疾患、感染は、 ボ ス ト ン 大 学（ 現Mayo clinic）

較して自動精製技術では、サンプル間症などの検出やモニタリングができるの池津庸哉先生の下で行った研究であのブレを低く抑えられること、細胞外と期待される検査方法であり、細胞外

り、細胞外小胞の自動化精製について

小胞マーカーのイオン強度が上昇する

小胞のリキッドバイオプシーへの応用

は富士フイルム和光純薬株式会社の協一方で、血液タンパク質であるアポリが期待されており、研究開発が益々盛

力の下医薬基盤研究所にて進められた

ポプロテインBのイオン強度が大幅にんになることが予測される。血液の細ものである。この場を借りて、心から減少していることを確認した（図3a）。

胞 外 小 胞 の プ ロ テ オ ミ ク ス 解 析 は、お礼申し上げます。

臨床検体を用いた解析では、細胞外小マーカーの探索だけではなく病態の機胞マーカーを含む4079種類のタンパク能解明にも役立つことが期待され、大質の同定に成功し、血清、血漿由来の規模な臨床検体を解析することは非常

細胞外小胞にはいくつかのタンパク質に重要となる。我々が開発した自動精で定量値に大きな違いが見られた（図製技術は一度に多検体処理が可能であ11）〔参考文献〕
1）Kowal, J. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,
113, E968（2016）.
2）S hiromizu, T. et al . : Sci. Rep ., 7, 12782（2017）.

3b） 。評価するタンパク質においてり、再現性に優れ、血液中のタンパク

血清、血漿のどちらを選択すべきか目

質のコンタミネーションも抑えること

的に応じて議論が必要である。現在が確認されている。さらに、現在はプ

は、自動精製技術を用いて、大規模な

ロテオミクス解析のための前処理の自臨床検体のプロテオミクス解析を行っ動化にも成功しており（論文投稿中）、ており、脳組織由来の細胞外小胞特異疾患のバイオマーカー探索、診断キッ的マーカータンパク質候補の同定に成トの開発に大きく貢献することが期待功している11）。

される。

おわりに

3）Rajendran, L. et al . : Proc. Natl. Acad. Sci.

U.S.A ., 103, 11172（2006）.
4）Saman, S. et al . : J. Biol. Chem ., 287, 3842
（2012）.
896（2020）.
6）R uan, Z. et al . : Brain , 21, 72（2020）.
7）Muraoka, S. et al . : Cells , 9, 1959（2020）.
8）Li, P. et al . : Theranostics , 7, 789（2017）.
9）N akai, W. et al . : Sci. Rep ., 6, 33935（2016）.

謝辞

リキッドバイオプシーは、血液や尿5）M uraoka, S. et al . : Alzheimers Dement ., 16,10）Muraoka, S. et al . : Methods , 177, 35（2020）.
11）Muraoka, S. et al . : iScieuce ,（2022）in press,
DOI 10.1016/j.isci.2022.104012

神経変性疾患の細胞外小胞の研究

エクソソーム抽出・精製試薬
MagCaptureTM エクソソームアイソレーションキット PS Ver.2
本品は、当社独自の精製法「PSアフィニティー法」を採用したエクソソーム抽出・精製試薬です。

PS アフィニティー法の原理

Ca2+存在下でPS結合分子（Tim4）を用い細胞外小胞を捕捉した後、キレート剤により溶出

コード No.
294-84101
290-84103

品
MagCapture

TM

名

規

Exosome Isolation Kit PS Ver.2

格遺伝子研究用

容 量
2回用
10回用

希望納入価格（円）20,00080,000

容 量
2回用
10回用

希望納入価格（円）20,00080,000本品を使用したエクソソーム多検体精製受託サービスも開始しました。
詳細は当社HPまたは担当営業にお問合せ下さい。

関連製品
コード No.
299-77603
293-77601

品
MagCaptureTM

名

Exosome Isolation Kit PS

規格

遺伝子研究用※本品は在庫がなくなり次第、終売となります。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年４月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

10

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

R

esearch
超高純度ヒト骨髄由来間葉系幹細胞REC
島根大学

医学部

生命科学講座、PuREC 株式会社

陶山

隆史、松崎

有未

はじめに
間葉系幹細胞（MSC）は、抽出した骨髄細胞から、MSCの培養皿への接着性を利用して比較的簡単な手順で分離することができ、主にin vitro で軟骨や骨への分化誘導を行い、その後、局所移植を行うなどの臨床研究が行われてきた。
近年、MSCはサイトカインなどの様々な体液性因子を産生し、T細胞や樹状細胞などの炎症細胞に作用して、強い免疫抑制・抗炎症作用を発揮することが報告されている1）。この効果を
利 用 し て、 ヒ ト 骨 髄 由 来 のMSCは、
移植片対宿主病（GVHD）の再生医療

図１．間葉系幹細胞が持つ機能と臨床応用製品として承認され、臨床現場で使用されている2, 3）。その他にも、低ホス
4）ファターゼ症 、潰瘍性大腸炎やク5）

ローン病などの炎症性腸疾患 、心筋6）

7）

梗塞、B型肝炎 、糖尿病 、全身性エ

胞は1000細胞あたり1～3個という低い
15）

頻度でしか含まれていない 。また、

如は投与方法が限定される、などの困培養MSCは、増殖サイクル数が限ら難が生じることが容易に予想できる。

れており、通常4～6回の継代で増殖能9）を失い、分化能も著しく低下する（以脊髄損傷 、変形性関節症 、乳がん

上、未発表データ）。また、継代中に保存療法後の乳房再建12）、筋ジストロ

細胞の性質に変化が生じ、骨髄では遊8）リテマトーデス 、進行多発性硬化症 、
10）

11）

量培養の制約となる。また遊走性の欠

超高純度間葉系幹細胞
REC の発見など、幅広い疾患を対象と走性を維持していたMSCが培養中に

こ れ ら の 問 題 を 解 決 す る た め に、した臨床研究が進行中である（図1）。

遊走性を失ってしまうため、経静脈投

我々は接着培養に頼らずに骨髄細胞か

そのほとんどで、治療に必要な細胞数

与による全身疾患治療には適用できな

ら直接MSCを分離する先行分離法を

いことも報告されている16, 17）。

開発した（図2下段）。LNGFR（CD271）

フィー

13）

は1患者あたり1～10億個

14）

と設定さ

れており、この場合、品質を維持した

培養MSCが持つこれらの欠点は特とTHY-1（CD90）の2つの細胞表面タ

まま大量の細胞を培養する必要がある。

に臨床応用の現場で大きな問題となりンパク質を指標に、セルソーターを用培養 MSC の性質と問題点うる。すなわち、細胞集団の純度の低

いて、LNGFRとTHY-1の共陽性細胞

さは製造されたロット間での細胞機能（LT細胞）を直接分離することで、ヒの差となり、培養による細胞老化は大ト骨髄由来単核細胞からヒトMSCを

現在広く用いられているMSCの多
くは、骨髄単核細胞を培養皿に播種し、2～3週間の培養後に出現する線維芽細胞様のコロニー形成細胞を回収して得られる（図2上段）。しかし、この方法で得られた接着性細胞集団（以下、培養MSCと記載）には、分化能が低い、あるいは完全に失われた老化細胞や間葉系以外の血球その他の細胞が混入していることはよく知られており、我々が調べた限り、分化・増殖能を有する未分化細胞、つまり真の幹細図２．一般的な MSC 培養プロセスと超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）の分離法

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）11濃 縮 分 離 で き る こ と を 報 告 し た18）。
LT細胞は、6個に1個という極めて高い頻度で線維芽細胞様のコロニーを形成する。計算上、全骨髄単核細胞の約3万倍にコロニー形成細胞が濃縮されている。
さらに、96ウェルプレートでLT細胞をシングルセルソーティングした
後、各ウェルを個別に観察し、増殖が速 く2週 間 後 に は コ ン フ ル エ ン トに な っ た ク ロ ー ン をREC（Rapidly
Expanding MSC Clone）、3週 間 後 にコンフルエントになったクローンをMEC（Moderately Expanding MSC
Clone）、さらに遅れてコンフルエン
ト に な っ た ク ロ ー ン をSEC（Slowly
Expanding MSC Clone） と 分 類 し た図３．超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）の特徴（a）増殖能 （b）分化能 / 骨分化（ALP 染色）、脂肪分化（Oil Red O 染色）（c）遊走能 / マウスへの移植実験（ルシフェラーゼによる発光イメージング解析）（図3）。
これら3グループの細胞機能を詳細に 解 析 し た 結 果、RECはMECやSECに比べて、①細胞形態が小さく均一であること、②細胞老化の指標の一つであるSA-β-galで染色されない新鮮な細胞であること、③増殖期の指標であるKi67がほぼ全細胞で陽性であること、④10継代以上の長期培養が可能であること、⑤脂肪、骨、軟骨への高い分化能を保持していることなどがわかった。またRECの最も大きな特長
として、⑥マウスに静脈内投与しても肺毛細血管に捕捉される細胞は見られず、遊走性を保持していた。
以上の結果から、RECは現在市販されている培養MSCと比較して、増殖能・分化能・遊走能全てにおいて高く、かつ形態的にも機能的にも均一性が高い細胞集団である。

おわりに我々はこの超高純度ヒト骨髄由来間葉系幹細胞RECを臨床に応用すべく、2021年には低ホスファターゼ症に対する探索的治験を開始した。また、脊柱管狭窄症、変形性関節症などの疾患をターゲットとした非臨床および臨床研12

図４．REC を用いた椎間板ヘルニアモデル（ヒツジ）の治療効果（a）HE 染色 （b）Safranin-O 染色 （c）Histological grade

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

究を現在進めている。特に大動物を用いたヘルニアモデルでは、RECとア
ルギン酸ナトリウムゲルの混合物を髄核摘出後の髄腔内に投与することで椎間板変性を効果的に予防できるなどの高い臨床効果を認めており19）、来年度中に探索的治験に入る予定である（図4）。
一般的な培養MSCが持つ全ての問
題点をクリアーしたRECはMSCによる治療効果が認められた全疾患をより効果的に治療できる可能性を秘めており、今後より多くの難治性疾患治療への展開が期待される。
〔参考文献〕
1）G h a n n a m , S . , B o u f f i , C . , D j o u a d , F . ,Jorgensen, C. and Noël, D. : Stem Cell Res.
Ther ., 1（1）,2（2010）.
2）M u r o i , K . , M i y a mura, K . , O kada, M. ,Yamashita, T., Murata, M., Ishikawa, T.,
Uike, N., Hidaka, M., Kobayashi, R.,
Imamura, M., Tanaka, J., Ohashi, K.,
Taniguchi, S., Ikeda, T., Eto, T., Mori, M.,
Yamaoka, M. and Ozawa, K. : Int. J.
Hematol ., 103（2）,243（2016）.
3）Miyamura, K. : Int. J. Hematol ., 103（2）, 155（2016）.
4）Taketani, T., Oyama, C., Mihara, A., Tanabe,11）Koizumi, K., Ebina, K., Hart, D. A,, Hirao, M.,
Noguchi, T., Sugita, N., Yasui, Y., Chijimatsu,
R., Yoshikawa, H. and Nakamura, N. :Osteoarthritis Cartilage , 24（8）,1413（2016）.
12）O'Halloran, N., Courtney, D., Kerin, M. J. andLowery, A. J. : Breast Cancer（Auckl）, 11,1178223417726777（2017）.
13）I chim, T. E., Alexandrescu, D. T., Solano, F.,
Lara, F., Campion, R. de N., Paris, E., Woods,
E. J., Murphy, M. P., Dasanu, C. A., Patel, A. N.,
Marleau, A. M., Leal, A. and Riordan, N. H. :Cell. Immunol ., 260（2）,75（2010）.
14）Galipeau, J. and Sensébé, L. : Cell Stem Cell ,22（6）,824（2018）.
15）Colter, D. C., Class, R., DiGirolamo, C. M. andProckop, D. J. : Proc. Natl. Acad. Sci. USA .,97（7）,3213（2000）.
16）R ombouts, W. J. and Ploemacher, R. E. :Leukemia , 17（1）,160（2003）.
17）M orikawa, S., Mabuchi, Y., Kubota, Y.,
Nagai, Y., Niibe, K., Hiratsu, E., Suzuki, S.,
Miyauchi-Hara, C., Nagoshi, N., Sunabori, T.,
Shimmura, S., Miyawaki, A., Nakagawa, T.,
Suda, T., Okano, H. and Matsuzaki, Y. : J.
Exp. Med ., 206（11）,2483（2009）.
18）M abuchi, Y., Morikawa, S., Harada, S.,
Niibe, K., Suzuki, S., Renault-Mihara, F.,
Houlihan, D. D., Akazawa, C., Okano, H. andMatsuzaki, Y. : Stem Cell Reports , 1（2）,152（2013）.
19）Ukeba, D., Yamada, K., Suyama, T., Lebl, D.
R., Tsujimoto, T., Nonoyama, T., Sugino, H.,
Iwasaki, N., Watanabe, M., Matsuzaki, Y.
and Sudo, H. : EBioMedicine , 76, 103845（2022）.

Y., Abe, M., Hirade, T., Yamamoto, S., Bo, R.,
Kanai, R., Tadenuma, T., Michibata, Y.,
Yamamoto, S., Hattori, M., Katsube, Y.,
Ohnishi, H., Sasao, M., Oda, Y., Hattori, K.,
Yuba, S., Ohgushi, H. and Yamaguchi, S. :Cell Transplant ., 24（10）,1931（2015）.
5）Otagiri, S., Ohnishi, S., Miura, A., Hayashi, H.,
Kumagai, I., Ito, Y. M., Katsurada, T.,
Nakamura, S., Okamoto, R., Yamahara, K.,
Cho, K. Y., Isoe, T., Sato, N. and Sakamoto, N. :BMJ Open Gastroenterol ., 5（1）, e000206（2018）.
6）Volarevic, V., Markovic, B. S., Gazdic, M.,
Volarevic, A., Jovicic, N., Arsenijevic, N.,
Armstrong, L., Djonov, V., Lako, M. andStojkovic, M. : Int. J. Med. Sci ., 15（1）, 36（2018）.
7）B hansali, A., Asokumar, P., Walia, R.,
Bhansali, S., Gupta, V., Jain, A., Sachdeva, N.,
Sharma, R. R., Marwaha, N. and Khandelwal,
N. : Cell Transplant ., 23（9）,1075（2014）.
8）Sun, L., Wang, D., Liang, J., Zhang, H., Feng,
X., Wang, H., Hua, B., Liu, B., Ye, S., Hu, X.,
Xu, W., Zeng, X., Hou, Y., Gilkeson, G. S.,
Silver, R. M., Lu, L. and Shi, S. : Arthritis
Rheum ., 62（8）,2467（2010）.
9）C onnick, P., Kolappan, M., Crawley, C.,
Webber, D. J., Patani, R., Michell, A. W., Du,
M. Q., Luan, S. L., Altmann, D. R.,
Thompson, A. J., Compston, A., Scott, M. A.,
Miller, D. H. and Chandran, S. : Lancet
Neurol ., 11（2）,150（2012）.
10）Pal, R., Venkataramana, N. K., Bansal, A.,
Balaraju, S., Jan, M., Chandra, R., Dixit, A.,
Rauthan, A., Murgod, U. and Totey, S. :Cytotherapy , 11（7）,897（2009）.

超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）
超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）は、フローサイトメトリーと選択的マーカーを用いた細胞分離方法により得られた間葉系幹細胞（MSC）です。通常の接着法で得た間葉系幹細胞とは異なり、RECは一切の夾雑細胞を含まず、長期間の培養増幅が可能です。また、一定期間の培養後も分化・遊走能が維持されています。さらに凍結細胞として保存が可能で、いつでも研究に用いることができます。
▶間葉系幹細胞に求められる性質●増殖性：未分化性を失わずに自己増殖する機能●分化能：多種多様な細胞に変化することのできる機能●遊走性：体内を循環し適切な場所へ移動し生着する機能●用途：骨疾患・免疫疾患・慢性的な炎症性疾患など、治療の難しい疾患を治癒に導く作用●移植方法：従来型の局所移入だけでなく全身性移入が可能
コード No.
387-16591

メーカーコード
REC-LU-05

品
名
超高純度ヒト間葉系幹細胞（REC）

150

➡
容量
1Vial

RECはこれらの条件をすべて満たしています

希望納入価格（円）75,000［使用上の注意］
本品は、試験・研究の目的のみに使用されるもので、ヒトへの使用や商業利用は禁止されています。
ヒト由来原料を含むためバイオセーフティーレベル2施設での取扱いをお願いします。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年４月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）13遺伝子組換えタンパク質を用いたエンドトキシン測定試薬
富士フイルム株式会社

バイオサイエンス＆エンジニアリング研究所

福地

大樹

1 はじめに◆エンドトキシンはグラム陰性細菌の細胞壁外膜に存在するリポ多糖（Lipopolysaccharide）であり、血中に入ると極微量で発熱性を示し、大量ではエンドトキシンショックから死に至るよ
うな強い毒性を示すことがある1）。グ
ラム陰性細菌は環境中に広く存在しているため製造工程に混入するリスクが

図１．エンドトキシン、β- グルカンによる凝固反応カスケードあり、また混入したエンドトキシンは耐熱性のため容易に失活しないことか

コアギュリンに変換し、生じた不溶性

キシン測定試薬は、C因子の遺伝子組

ら、注射剤や医療機器はエンドトキシ

ゲルにより凝固が起こる。また、カブ

換えタンパク質を使用した1因子系試

ン汚染を厳密に管理することが求めら

トガニの血球抽出成分にはβ-グルカ

薬と、C因子、B因子、凝固酵素前駆れている。近年、再生医療、ワクチ

ン に 反 応 す るG因 子 か ら 始 ま る カ ス

体の遺伝子組換えタンパク質を使用しン、抗体や核酸医薬に関連する製品のケード反応も存在しておりβ-グルカ

た3因子系試薬の2種類に分類される開発が盛んに行われているが、そのよンによっても凝固反応が起こるが（図（図2）。前者の1因子系試薬は3因子系

うな製品においてもエンドトキシン管

1）、エンドトキシンのみを対象とする試薬に比べ1テストあたりのコストは理は重要である。

場合にはG因子の除去、またはG因子

安く抑えられるが、カスケード反応にから始まるカスケード反応を抑制してよる増幅がないため生成するプロテ測定する。

アーゼ活性が小さく蛍光基質を使用し3 エンドトキシンの測定方法◆

た蛍光検出を行う必要がある。3因子

Lysate, LAL）を用いて測定されていエンドトキシン測定には大きく分け

系試薬は1因子系に比べ生成する酵素

るのが現在の主流であるが、カブトガて、ライセート試薬のゲル形成を指標

活性が大きく、発色で検出可能なためニ保護、試薬の安定供給、製品ロットとするゲル化法、ゲル化に伴う濁度変

一般的なプレートリーダーで測定可能間差の解消及び試験の安定性の向上を化を吸光度または透過率を用いて測定である。また近年、エンドトキシンに目的として、人工原料である遺伝子組する比濁法、及び合成基質の加水分解

対する特異性に関してB因子が重要

換えタンパク質を用いたエンドトキシによる発色を指標にする比色法の3種な 役割を果たしているという報告がン測定試薬の開発が各LALメーカー

類がある。比色法はゲル化法、比濁法

あり

で進められるようになってきた。

に比べ感度が高い。遺伝子組換えタン

く、C因子、B因子、凝固酵素前駆体

2 エンドトキシン試験法の測定原理◆

パク質を用いたエンドトキシン測定試

を含む3因子系でエンドトキシンを測

エンドトキシン試験法はカブトガニ

薬には、発色合成基質を用いた比色法定する意義は大きい。富士フイルム和の血球成分より調製されたライセート

以外に蛍光合成基質を用いた測定法も光純薬では3因子系での開発を進め、試薬を用いてエンドトキシンを検出ま存在する。

他社商品と同等以上の性能を有する遺4 遺伝子組換えタンパク質を用いた◆

伝子組換えタンパク質を使用したエンエンドトキシンは、カブトガニの血球抽出成分の血液凝固系を利用した試薬（ライセート試薬；Limulus Amebocyte

たは定量する方法である。カブトガニ

2, 3）、C因子のみの1因子系ではな

エンドトキシン測定試薬

ドトキシン測定試薬（パイロスター TM

対して凝固を引き起こす反応系が存在

現在、各社より上市されている遺伝ネオ）を発売した。

し、この凝固反応は複数のセリンプロ

子組換えタンパク質を用いたエンドトの血球抽出成分にはエンドトキシンに

テアーゼ前駆体が順次活性化するカス
ケード反応に基づいている（図1）。エンドトキシンがカブトガニ血球抽出成分に含まれるC因子を活性化し、続いて活性型C因子がB因子を活性化する。
次に活性型B因子が凝固酵素前駆体を活性化し、活性化した凝固酵素が基質であるコアギュローゲンを加水分解することにより凝固性タンパク質である

14

図２．遺伝子組換えタンパク質を使用したエンドトキシン検出試薬の種類

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

TM
5 パイロスターネオ◆

表１．パイロスター TM ネオと他社商品との比較

今回富士フイルム和光純薬が発売し較して以下のような特長を有してい

他社商品 1
他社商品 2 他社商品 3
3 因子系
1 因子系
0.001 〜 50
0.005 〜 50（比色時間分析法）
定量範囲（EU/mL）
0.005 〜 5 0.005 〜 50
（比色時間分析法） 0.002 〜 0.1（反応速度法）
検出方法
発色
発色
蛍光
蛍光

る。ブランク値上昇を極力抑え、安定たエンドトキシン測定試薬はまだ歴史を確認する必要があり、そのような比的な制御が可能となったため、他社3が浅く普及していないのが現状であ較検討の取組みが報告されている 。

因子系よりも低濃度のエンドトキシン

る。こうした中、2021年に欧州薬局方

今後、遺伝子組換えタンパク質を用い濃度から測定可能となった（表1）。までは蛍光法を用いた遺伝子組換えC因たエンドトキシン測定試薬の使用検討

たライセート試薬の一般的な解析方法

子試薬が一般試験法として収載されが進むと思われるが、代替法として検の一つである比色時間分析法で測定すた。最新版である第十八改正日本薬局討している製薬企業などのユーザーにるため、カイネティック測定のできる方では参考情報として、「エンドトキ

受け入れられるにはこうした要求事項

恒温プレートリーダー、及び一般的な

シン試験法と測定試薬に遺伝子組換えに応える必要がある。ユーザーニーズ

ソフトウェアを用い、測定・解析可能

タンパク質を用いる代替法」が記載さと、環境及びカブトガニ保護を両立できるよう取り組んでいきたい。

たパイロスターTM

ネオは遺伝子組換

えタンパク質を使用した他社商品と比因子

パイロスター TM ネオ

ネオは0.001

れたが、エンドトキシン試験法で規定

EU/mL ～ 50EU/mLま で の 幅 広 い エ

されている「カブトガニの血球抽出成

ンドトキシン濃度を定量でき、高い相分より調製されたライセート試薬」に関の検量線（相関係数0.980以上）がは該当しないとされている。米国薬局得られる試薬である。

方でも遺伝子組換えエンドトキシン測

6 おわりに◆

定試薬は代替法としての位置づけであである。パイロスター

TM

現在使用されているエンドトキシン

る。代替法として使用する際は、ライ測定試薬は生物原料を使用したライ

セート試薬を用いたエンドトキシン試

セート試薬が主流であり、人工原料で験法と比較して同等以上の真度、精ある遺伝子組換えタンパク質を使用し度、感度、特異性などが得られること

4）〔参考文献〕
1）棚 元憲一：エンドトキシンと医薬品の品質管理，国立医薬品食品衛生研究所報告，126，
19（2008）.
2）K obayashi, Y. et al . : J. Biol. Chem ., 290,
19379（2015）.
3）T suchiya, M. : Int. J. Dev. Res ., 10, 36751（2020）.
4）菊池裕 他：医薬品医療機器レギュラトリーサ
イエンス，48，252（2017）.

遺伝子組換えエンドトキシン検出用試薬
パイロスター TM ネオ
本品は、カブトガニの血球抽出成分を原料として使用せず、遺伝子組換え技術により製造した次世代のエンド
トキシン測定用試薬です。従来の当社のライセート試薬及び世界の主要LAL製品と同じカブトガニ種（Limulus

polyphemus ）由来配列の組換え3因子（C因子、B因子、凝固酵素前駆体）と、p NA発色合成基質の組合せで開発した高感度エンドトキシン特異的測定試薬です。

特長●定量範囲は0.001 ～ 50EU/mLであり、高感度で広範囲の定量が可能●比色法でお使いの測定システム（吸光プレートリーダー）にて測定可能●ライセート試薬と同じカスケード反応のため、従来法と高い相関性●（1→3）-β-D-グルカン感受因子を含まないため、（1→3）-β-D-グルカンによる偽陽性のリスクなし●溶解後、約4時間の冷蔵保存が可能で、−30℃で2週間までの凍結保存が可能なため、試薬の無駄を減らすことが可能●バキュロウイルス不含でカルタヘナ法非該当
コード No.
NEW

294-36731

品

PYROSTAR

名
TM

Neo

定量範囲

0.001 〜 50EU/mL

規

格

内容量

50回用
エンドトキシン検出用（2.7mL 用×１本）

希望納入価格（円）30,000

詳細は当社 HP をご覧下さい。
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/lal/products/pyrostar_neo.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

15

最終回

微量元素分析 －さまざまな分野での活用事例とその重要性－

第４回

半導体製造にかかわる薬品の微量金属（不純物）の影響とその分析方法
富士フイルム株式会社

R&D 統括本部

エレクトロニクスマテリアルズ研究所

河田

幸寿

求められる超高純度化技術
近年、半導体の微細化・高性能化により製造プロセスの複雑さが増している。それに伴い、品質トラブルが増加し、従来のような歩留り立ち上げ及び安定生産が困難になってきた。

図１．欠陥検査プロセスフロー

特に難解な問題と考えられているのているが、市販されている装置だけで般的な手法は、ICP-MSを用いた薬液が、歩留りに影響を与える欠陥の特定は検出が困難な領域であり、検査手法の検査である。この手法は、汎用的なとその欠陥を引き起こす原因物質の特自体が技術課題となっている。

計測では最も感度が高く、一桁pptレ定である。半導体の製造には多くの装置や薬品が使用され、これらが複雑に絡み合うため、その特定にはメーカー

微量金属（不純物）の影響とその分析方法の薬液中の微量金属濃度を管理する場
合にも、歩留りもしくは致命的と判断

各社の協力が必要になる。そこで、半超高品質において特に管理が必要と導体製造に関わるすべての薬品、装置なるのが、微量金属である。薬液中にから部品まで、欠陥の発生リスク低減

残存する微量金属は、電気特性およびのために、サプライチェーン全体を通加工形状に異常を発生させる可能性がしてそれぞれ厳しい品質管理が求めらある。そこで、特に厳しい管理が必要

当社EM事業における主力製品の一れている。

できているウェハ上の欠陥との間に相関関係を見いだす必要はある。

品質管理、昔と今となり、可能な限り微量金属を除去すつとして、ArF液浸レジストがある。

富士フイルム株式会社 エレクトロることが求められる。フォトリソグラ

ArF液浸レジストを使用したリソグラ

ニクスマテリアルズ（EM）事業の製

フィープロセスにおける薬液、例えば

フ ィ ー プ ロ セ ス は、2007年 の45nm品群に対しても、「超高品質＝超高純

レジスト、シンナー、現像液、リンス

ノードから実用化されたが、当時の品

度」薬液の要望が高まり、薬品の精製

液や下層材料に金属不純物が残存し、質管理では、微量金属の要求は、一桁技術の開発が必要な状況となっていそれがパターン中もしくはパターン上

ppbレベルにすぎなかった。

る。しかし、それ以前に目指す超高純に存在すると、続くエッチングプロセ

管理の対象となる金属元素として度における評価技術（品質見極め）がスにおいて加工異常を発生させる恐れ

は、一般的には、装置や設備、人が介確立されておらず、半導体業界全体のがある。当社では、当社薬液製品が顧在する作業が汚染源となる、Al、Ca、

課題ともなっている。

客プロセスにおいて、品質事故を起こ

Cr、Cu、Fe、K、M g、Mn、Na、

すことを未然に防ぐために独自の検査

Ni、Znが挙げられるが、半導体メー手法を開発している。

カーもしくは薬液によっては、その他

長い間、半導体業界において技術開発の指標として活用されてきたITRS

20元素を超える管理が必要な場合も多（International Technology Roadmap

しかし、この加工異常のような致命

for Semiconductors） に 代 わ っ て ス

的と判断できるウェハ上の欠陥を確認

タートしたIRDS（International Roadmap

する評価（図1）には、多くの特殊なところが、微細化によってプロセス

for Devices and Systems） で は、 歩装置やプロセス材料が必要となる。

が煩雑化し、より多くの新規薬液が必くある。

留まり改善における2023年までの短期

そこで、薬液供給メーカーが用いる

要になり始めた22nmノード以降、品的な重要課題として、複数種類の致命

微量金属の計測手段としてもっとも一

質トラブルにより量産化までが長期化的な欠陥の検出および分類とS/N比が挙げられている。
欠陥の検出および分類が困難な理由の一つは、微細化に伴って、管理が求められる欠陥のサイズがますます小さ
くなっていることがある。2019年7月に公開された最新ロードマップ2018年
版では、2020年に対応が求められる
ウェハ上の電気的に活性な微細粒子（主に金属）のサイズを3.5nmと掲げ

16

ベルの管理を可能にする。ただし、こ図２．一般的な管理対象金属元素

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

微量元素分析 －さまざまな分野での活用事例とその重要性－

その後は3D VLSI化が進行するとしている。このように今後さらなる微細緻密構造化が計画されており、これらのプロセスに適用される薬品は、ppqレベルの管理が必要になると考えられ、計測装置および計測の正確さを判定するための標準試料においてもさらなる改善が必要である。
図３．現像プロセス

本 記 事 は、2020年4月 に 当 社HP（siyaku blog）

するようになった。これによりサブたしているが、さらなる改善も評価技

10nmノードからは、一桁pptを見据え術開発と併せて継続している。

た微量金属の管理やそれに付随した
ウェハプロセスを用いた検査が必要に終わらないテクノロジーの進化
2007年ITRSでは、微細化・高集積なってきている。

向けにご執筆いただきました内容となります。

―シリーズ終了にあたって―2021 年 7月（Vol. 89 No. 3）から始まりました「微量元素分析―さまざまな分野での活用事例とその重要性―」は本稿をもちま

また、レジストだけでなく、その周化を進めるMooreの法則を極限まで追辺薬液にも品質要求が高まっている。

求するMore Mooreに対して、微細化

アルカリ現像液やレジスト希釈塗布

限界論によって登場した機能的多様化

げます。おかげさまで本シリーズでは微量元

液、ArF露光技術の延命として、当社をMore than Mooreと定義した。

素分析、特にICP 分析に関する情報をさまが推進しているNTI（Negative Tone

半導体メーカーによって戦略は様々

Imaging）プロセスで用いられる有機だが、現在、最先端の7nm世代の量産

溶剤現像液やリンス液、これら薬液はでは、微細化継続を可能にするEUV

非常に厳しい品質要求を受け開発した

プ ロ セ ス の 適 用 も 開 始 さ れ て い る。

ものであり、現状では顧客の要望を満IRDSで は 微 細 化 は2028年 ま で 続 き、して最終回を迎えました。本誌に寄稿いただ
きました先生方にこの場を借りてお礼申し上

ざまな視点でお届けできました。
読者の皆様におかれましては、全 4 回にわたって続いた本連載をご愛読いただきお礼申し上げます。皆様のICP 分析の一助になりましたら幸いです。

ICP分析用単元素標準液
不純物元素を保証しているICP分析用単元素標準液にオスミウム標準液を追加しました。

NEW

コード No.
157-03601
217-01651

品
名オスミウム標準液（Os 1000）
超純水

規 格
ICP分析用
ICP分析用

容量
100mL
1L

希望納入価格（円）30,0006,000

ラインアップQ&A

青塗りの元素のICP分析用標準液を取扱っています。

クエスチョン：クロム標準液（コードNo. 039- 25451）とクロム（Ⅲ）標準液（コードNo. 039 - 25831）は何が違うの？
アンサー：使用しているクロムの価数が異なります。クロム標準液は六価クロム［CrO 3］を使用しており、クロム（Ⅲ）標準液は三価クロム［Cr（NO3）3］を使用しています。
六価クロムは劇物になりますが、三価クロムは普通物のため保管や、使用時の取扱いが容易です。
また、多元素一斉分析に用いる混合標準液を調製する際に、六価クロムと一部の金属（例 . 鉛など）が反応し、沈殿が析出する可能性があります。
沈殿物が析出すると、標準液の濃度が変化し、測定結果の信頼性を損なう

詳細は、当社HPをご覧下さい。

恐れがあります。六価クロムと反応する元素種を測定する際には、クロム（Ⅲ）

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/00442.html
ICP分析用単元素標準液

和光

検索

標準液（コードNo. 039 - 25831）の使用をおすすめします。
・クロム標準液（コードNo. 039 - 25451） 組成：CrO3 in 5 w/w% HNO3・クロム（Ⅲ）標準液（コードNo. 039 - 25831）→

組成：Cr（NO3）3・9 H2 O in 5 w/w% HNO3

…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年４月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）17よくわかる BDNF －基礎から臨床まで－

第４回

BDNF/TrkB シグナル

もう一つの顔
昭和大学

医学部

安達

直樹

はじめに
シリーズ第3回までで見てきたように、BDNF/TrkBシグナルは、神経回路の正常な発達や神経伝達調節において 有 益 な 機 能 を 果 た す。 そ の た め、
BDNF/TrkBシグナルの障害は脳の疾患の原因ともなり、その賦活化をター
ゲットとした創薬研究も数多くなさ
れ て い る。 し か し 今 回 は、 そ ん な
BDNF/TrkBの機能が、私たちの健康にとって「敵」となりうる事例について見ていきたい。
最初に主要なBDNF/TrkBシグナルについてもう一度確認をして、個別の疾患におけるBDNF/TrkBシグナルの関わりを紹介する。

BDNF/TrkB シグナル経路
MAPK/ERK 経路
TrkB受容体のTyr490とTyr515残基が活性化されると、これらのチロシン
部 位 にShcア ダ プ タ ー タ ン パ ク 質 が図．BDNF/TrkB シグナル経路 筆者ら文献 37）より改変

ドッキングし、Grb2（Growth factor
receptor-bound protein 2）をリクルートの薬物依存症に関わる1）。報酬系を担

ク質群を制御する。

う脳領域の基底状態において、BDNFすることで、GTPase Rasと複合体を形成し、次にMAPK（mitogen activatedは腹側被蓋野（VTA）、扁桃体、海馬、

TrkB受 容 体 のTyr816残 基 が リ ン

前頭皮質で高発現している一方で、背signal regulated kinase）経路を活性酸化されると、PLCγ（phospholipase

側線条体と側坐核（NAc）での発現化する。MAPK/ERKキナーゼは、転Cγ） 経 路 が 活 性 化 さ れ、IP3、DAG

量は低い2）。これに対しTrkBは脳全写因子CREB（cAMP response element（diacyl glycerol）が生成される。PLCγ/体に広く発現している3）。齧歯類を用

binding protein）をリン酸化して活性IP 3 経 路 は、 小 胞 体 か ら の カ ル シ ウ

いた研究において、コカイン曝露は、2＋化する。リン酸化されたCREBは核内

ム 放 出 を も た ら し、CaMKⅡ（Ca /これら報酬関連領域のBDNFレベルをに移動し、様々な遺伝子のプロモー

calmodulin-dependent protein kinase

上昇させることがわかっている4, 5）。

ターに結合して転写を調節することⅡ）を活性化し、これによりCREBリ

また、コカイン中毒の動物モデルでで、細胞の生存や分化、増殖を促進す

ン酸化を活性化する。一方、DAGのは、VTAやNAcへ のBDNF注 入 やる。

生成は、PKC（Protein kinase C）を

BDNF/TrkBの強制発現によっては、活性化する。CaMKII・PKCの活性化

条件付け場所嗜好性やコカイン探索行

は、細胞の生存や神経突起伸長、シナ動、離脱症状が亢進し、抗BDNF抗体

プス可塑性を担う。

の注入やBDNF/TrkBのノックダウン

PI3 K/Akt 経路
PI3（Phosphoinositide 3）キナーゼ
経路の活性化は、Tyr515残基のRasの複合体を取り込み、PI3K/Akt経路と

18

PLCγ経路

protein kinase）/ERK（extracellular

薬 物 中 毒 に お け る BDNF/

によっては、これらの行動が抑制される6）。コカインによるNAcなどにおけ

MEK/MAPK経 路 と い う 複 数 の カ ス

TrkB シグナル

るBDNF/TrkBシ グ ナ ル の 増 強 が、ケードを活性化させる。PI3K/Aktカ

BDNF/TrkBシグナルは、脳の「報AMPA型グルタミン酸受容体のサブ

スケードの活性化は、神経細胞の生酬系」神経回路の可塑的な変化を促進

ユニットの構成を転写・翻訳レベルで存、成長および分化に不可欠なタンパすることによって、コカイン中毒など調節することによってシナプスの可塑本シリーズの企画・構成に際し、金沢工業大学

バイオ・化学部
和光純薬時報応用バイオ学科

小島 正己先生にご協力頂きました。

Vol.90, No.2（2022）よくわかる BDNF －基礎から臨床まで－的変化を引き起こし、中毒症状の発現

K252aの髄腔内投与によって、末梢神とTNF-α放出を増加させることから、に関わるというモデルが示されてい経損傷による脊髄後角のKCC2発現低神経損傷時にはミクログリア由来のる 。一方、齧歯類の研究において、下がブロックされ、神経障害性疼痛が

BDNFがオートクラインに作用して、内側前頭前野皮質（mPFC）のBDNF/

緩和される11）。まだ詳細はわかっていさらに自身を活性化するという、正のTrkBシグナル増強が、コカイン中毒

ないが、BDNF/TrkBシグナルの中で循環ループ機構が存在する可能性があ症状において抑制的な役割を果たすこも、Shc経路とPLCγ経路とが連動しる18）。また、脊髄後角のアストロサイとから7）、BDNF/TrkBシグナル抑制て活性化された場合に、KCC2の転写

ト の 活 性 化 に よ っ て も、BDNFと 炎をターゲットとしたコカイン中毒治療

抑制が起こるようである12）。

症性サイトカインレベルが上昇するな

1）ど19）、アストロサイトも、持続的な中は、NAcやVTA領域に限定したものであれば、十分に効果を発揮する可能性がある。

慢 性 疼 痛 に お け る BDNF/
TrkB シグナル②興奮性の増強

枢感作の主要な構成要素とみなされて神経損傷モデルにおいて、BDNFにいる20）。本来、BDNFの産生と放出はよるTrkB受容体の活性化は、前シナ神経細胞を保護し、生存を促進するた

プス部におけるグルタミン酸のシナプ

め、急性の危険因子（神経損傷など）

ス小胞の蓄積を増やすことでシナプスへの応答としてのBDNFの産生や放出痛 み の 感 覚 刺 激 は、 後 根 神 経 節伝達が増強することや、NMDA型受増加は、生物として適応的であるはず

ニューロンが一次求心性神経となり、容体の機能を増強させることで、神経なのだが、負のフィードバック機構が脊髄後角に存在する二次ニューロンに障害性疼痛を発症させる可能性も指摘存在しないことが原因で、神経障害性

興奮性の入力を送ることによって伝達されている13）。脊髄後角ニューロンの疼痛の進行に伴って、中枢神経系が非されるが、この脊髄後角ニューロンのTrkB受 容 体 にBDNFが 結 合 す る と、適応状態へと変化しているのかもしれ

興奮性増大が、神経障害性疼痛の大き

FynキナーゼによるGluN2B（NR2B）ない。

な要因となっていることが知られていサブユニットのリン酸化を介して、後る。脊髄後角のBDNF/TrkBシグナル

根神経節ニューロン−脊髄後角ニューの増強が、神経障害性疼痛発症と進行

ロン間シナプスの長期増強を誘導し、TrkB シグナルに、以下の3つのメカニズムで、大き中枢性感作と神経障害性疼痛を引き起現在、世界の人口の約0.5 ～ 1％がく寄与する可能性が指摘されている。

こすと考えられている

14, 15）。

① KCC2て ん か ん に お け る BDNF/

罹患しているてんかんは、脳の神経細胞群が突然過活動する慢性進行性の中脊髄には、一次求心性神経のシナプ③グリア細胞の活性化

枢神経系障害である21）。てんかんは、ス前抑制と後角投射ニューロンのシナ上でBDNFによる脊髄後角ニューロ

自発的反復発作を特徴とし、一時的なプス後抑制という、2つの異なる抑制

ンの興奮性増大が神経障害性疼痛を引

脳機能障害や神経障害、認知機能低下

メカニズムが存在し、痛みの信号をき起こすメカニズムを見てきたが、神など、さまざまな深刻な事態を引き起制 御 し て い る。BDNFは こ の 抑 制 性

経損傷時に、最初にBDNFを供給する

こす22）。臨床研究において、てんかん

GABA作動性シナプスの調節に関与しのはどの細胞であろうか？ これまで患者の大半が健常者よりも血清中の8）て痛覚過敏を引き起こす 。ここでの研究によって、BDNFの供給源がグ

BDNF値が高いことが知られている

鍵 と な る の は、potassium chloride

リア細胞であることがわかってきてい（Iughettiら、2018年）（Demirら、2020

co-transporter 2（KCC2）の機能である。

年）。また、てんかんの動物モデルでる。KCC2は膜貫通型のタンパク質で、細胞内の塩化物イオン（Cl-）を細胞外

末梢神経損傷などによって活性化しは、BDNFとTrkBが、 特 に 側 頭 部 とたミクログリアは、多くのサイトカイ

海馬領域で増加する23）。このようなマン（IL-2、TNF-α、BDNFなど）を産

ウスてんかんモデルにおいて、TrkB

を高め、GABAを受容したシナプス後生・放出し、神経炎症反応と神経免疫を欠失させたり24）、TrkB受容体を一細胞がGABA受容体開口時に過分極す応答の両方を誘導することで、疼痛過過性に阻害したりすることで25）、てんるという、GABAの抑制性を担保す

敏症の病態形成において重要な役割を

かん発作の発生を著しく減少させるこるポンプである9）。神経障害性疼痛の果たす16）。活性化したミクログリア細とができる。さらに、ラットの海馬領

動 物 モ デ ル で は、 脊 髄 後 角 に お い

胞では、BDNF産生が増加し、細胞移域にBDNFを投与すると、てんかん発てBDNFの発現が上昇し、KCC2タン

動が活発になり、TNF-α放出を増加

作を誘発しうる26）。

パク質の発現が低下する10）。さらに、する17）。さらに、外因性BDNFによっ

BDNF/TrkBシグナルは、どのよう

TrkB/Fcキ メ ラ ま た はTrkB阻 害 剤てミクログリアが活性化し、細胞遊走にてんかん発症にかかわるのだろうに汲み出すことで、細胞外のCl-濃度

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）19よくわかる BDNF −基礎から臨床まで−か。現在までに、主に3つのメカニズ

ら離れることで起こる細胞死（アノイだ、BDNF/TrkBシグナルが異所的に、

ムが提唱されている。①BDNFはリアキス）の壁を突破し32）、遺伝子発現をもしくは過剰に活性化されることで、2+ノジン受容体を介したCa 放出と活性変化させることによって、上皮性から

私たちの健康を脅かす存在にもなるの

酸素種（ROS）産生を誘導し27）、神経間葉性へと性質を変え（上皮―間葉転だ。

細胞の損傷とアポトーシスを促進す換）、血液を介して離れた臓器への移脳の疾患や機能障害に対する治療効る28）。②TrkB活性化の上昇がKCC2の動に耐えられるようにしなければなら

果や、視床下部を介した抗がん作用へ

発 現 を 低 下 さ せ る こ と で、GABA

ない32, 33）。興味深いことに、腫瘍細胞の期待から、脳におけるBDNFの発現

ニューロンによる抑制効果を低下させは、TrkBの活性化によってPI3キナー

を 上 昇 さ せ る こ と を 目 的 と し て、る 。③BDNF/TrkBシグナルの増強

ゼが常時活性化状態となることで、アAMPA型グルタミン酸受容体の反応が、海馬歯状回顆粒細胞の軸索であるノイキスに対する抵抗性を上げ、転移を高めるアロステリックモジュレー25）

苔状線維において異常発芽を起こし、の成功率を高めるようだ。本稿でター（ampakineと総称される）の開

脳内の異常興奮回路の形成を引き起こは詳細なメカニズムについては割愛す発が行われてきた。あるampakineで

29）

る が、BDNF/TrkBシ グ ナ ル が 内 因は、急性投与から数日以内に脳のいく

BDNF/TrkBのてんかん発症におけ性・外因性のアポトーシスに対して抑つかの領域でBDNF産生を最大20倍まる正確な役割は、BDNFの発現量、発制的に働くことで、抗がん剤化学療法

で増加させることが示されたが、意図現する脳部位、その上流および下流分に対する抵抗性を付与していると考えしない発作原性作用が現れるなど、こす 。

子などとの関係から、まだまだ議論の34）られている 。

れらの薬剤の臨床応用には高い壁があ余地があるが、BDNF/TrkBシグナル

このように、BDNF/TrkBシグナルる。しかし最近、発作性の副作用を示

伝達経路に含まれる多くのタンパク質

はがんの形成や転移、治療抵抗性に寄さず、加齢に伴う記憶障害を改善するや分子は、臨床的なてんかんの検出や与する一方で、 有益

36）
最初のampakineが報告され 、明る治療の分子標的として期待されておされている。メラノーマを移植したマ

り、てんかんの臨床治療やリスクの評

ウスは、環境エンリッチメント（遊び今回、負の側面に焦点を当てること

価、予後予測に活用できる可能性があ

道具などがいくつもあるケージで飼

で、BDNF/TrkBシグナルが適切な領る。

育）の条件では、ナチュラルキラー細域で適度に活性化されることの必要性

胞およびT細胞による細胞傷害性が増と、臨床応用に向けた基礎的な研究の強され、腫瘍の成長が著しく抑制され積み重ねの重要性を再認識できたかとが ん に お け る BDNF/TrkB
シグナル

ることが見いだされたな機能も報告35, 36）。環境エン

BDNF/TrkBシグナルは、細胞のがリッチメントマウスの視床下部ではん化、浸潤や転移の促進、そして化学BDNFの 発 現 が 増 加 し て お り、 こ の療法に対する抵抗性の原因となること

BDNFをノックダウンすると、環境エが明らかにされている。

ンリッチメントによる腫瘍抵抗性が消TrkBを過剰発現させた神経堤由来

失することから35）、視床下部におけるの細胞株をマウスに移植すると、10日

BDNF上昇が環境エンリッチメントに後に急速に成長する腫瘍を形成し、腫よる抗腫瘍作用の鍵となっていると考瘍形成後7日以内にすべてのマウスがえられている。

死亡した30）。また、脳腫瘍形成細胞は、TrkBを過剰に発現し、自身がBDNF

20

32, 33）

おわりにを産生する限り、EGFなど本来の成本稿では、我々の健康にとって都合

長因子がなくても生存できることかの悪い、BDNF/TrkBシグナルの「もら、オートクラインで自身の生存を維う一つの顔」を見てきたが、基本的に持する能力を獲得していると考えられ

はBDNFがTrkBに 結 合 す る こ と にる31）。

よって、種々の細胞内シグナルカス

腫瘍の治療を困難にする要因としケードが活性化され、その結果、シナて、他の臓器への転移がある。腫瘍細プス伝達を調節したり、細胞の生存や胞からすると転移は自身の生き残りを増殖を促進したりする点では、有益なかけたイベントである。細胞外基質か機能を果たす場合と変わらない。た和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

い光も見えてきている。

思う。
〔参考文献〕
1）Li, X. and Wolf, M. E. : Behav. Brain Res .,279, 240（2015）.
2）Conner, J. M. et al . : J. Neurosci ., 17, 2295
（1997）.
3）Krause, S. et al . : J. Neurosci. Res ., 86, 411（2008）.
4）Graham, D. L. et al . : Nat. Neurosci ., 10, 1029
（2007）.
5）Horger, B. A. et al . : J. Neurosci ., 19, 4110
（1999）.
6）Bahi, A. et al . : Psychopharmacology（Berl）,
199, 169（2008）.
7）Berglind, W. J. et al . : Eur. J. Neurosci ., 26,757（2007）.
8）Malan, T. P. et al . : Anesthesiology , 96, 1161
（2002）.
9）Janssen, S. P. et al . : Neurochem. Int ., 60, 21（2012）.
10）Malcangio, M. : Neurobiol. Pain , 1, 1（2017）.
11）Yajima, Y. et al . : J. Neurochem ., 93, 584（2005）.
12）Lee-Hotta, S. et al . : Neurochem. Int ., 128, 32（2019）.

よくわかる BDNF －基礎から臨床まで－

13）Wang, L. N. et al . : J. Neurosci. Res ., 90, 1249
（2012）.
14）Li, S. et al . : Neurochem. Res ., 42, 2712（2017）.
15）Ding, X. et al . : Neurobiol. Dis ., 73, 428（2015）.
16）Tsuda, M. et al . : Trends Neurosci ., 28, 101（2005）.
17）Zhang, X. et al . : Cell. Physiol. Biochem ., 34,715（2014）.
18）Zhou, W. et al . : Neurosci. Lett ., 756, 135965（2021）.
19）Chiang, C. Y. et al . : Neurochem. Res ., 37,2419（2012）.

20）Liu, T. et al . : Neurosci. Bull ., 28, 131（2012）.
21）Fisher, R. S. et al . : Epilepsia , 55, 475（2014）.
22）Thijs, R. D. et al . : Lancet , 393, 689（2019）.
23）Wang, X. et al . : Front. Pharmacol ., 12,758232（2021）.
24）He, X. P. et al . : Neuron , 43, 31（2004）.
25）Liu, G. et al . : Neuron , 79, 31（2013）.
26）Scharfman, H. E. et al . : Exp. Neurol ., 174,
201（2002）.
27）Yang, N. et al . : Oxid. Med. Cell. Longev .,2020, 6687185（2020）.
28）Ghadiri, T. et al . : Neurosci. Lett ., 709,
134384（2019）.
29）Skupien-Jaroszek, A. et al . : PLoS One , 16,e0239111（2021）.
30）Yin, B. et al . : Oncogene , 34, 761（2015）.
31）Lawn, S. et al . : J. Biol. Chem ., 290, 3814
（2015）.
32）Bao, W. et al . : PLos One , 8, e70616（2013）.
33）Kupferman, M. E. et al . : Oncogene , 29, 2047
（2010）.
34）Radin, D. P. and Patel, P. : Anticancer Res .,37, 3983（2017）.
35）Cao, L. et al . : Cell , 142, 52（2010）.
36）Radin, D. P. et al . : Biomed. Pharmacother .,84, 806（2016）.
37）Numakawa, T. et al . : World J. Biol. Chem .,1, 133（2010）.

神経分野の研究に！
抗 proBDNF, モノクローナル抗体（3C10H）
BDNF（Brain-derived Neurotrophic Factor、脳由来神経栄養因子）は NGF ファミリーに属する神経栄養因子の一つで、神経発生、神経保護作用、シナプス形成などに関与し、うつ病をはじめとした精神神経マーカー候補と考えられています。
BDNF には前駆体である proBDNF が存在し、proBDNF はプロセシングを受けることで成熟した mBDNF（mature
BDNF）となります。一方、proBDNF は mBDNF とは異なり、細胞死、成長円錐の収縮、樹状突起棘の収縮、及び長期抑圧を促進する作用を示すことが知られています 1）。
本品は、proBDNF を特異的に認識するマウスモノクローナル抗体です 1）。

製品概要●組成：PBS，0.05% アジ化ナトリウム●抗体サブクラス：IgG2b・κ

●抗体濃度：ラベル記載●種交差性：マウス

初回製造ロット：1.09mg/mL●クローンNo.：3C10H●エピトープ：proBDNF 76-90 a.a.

●抗原：合成ペプチド（KVRPNEENNKDADLY）●アプリケーション：ELISA●免疫動物：マウス

免疫沈降

1 : 100-10,000
1μg/mL〔参考文献〕
1）Kojima, M. et al . : Int. J. Mol. Sci ., 21, 3984（2020）.

NEW

コード No.
019-28411

品
名Anti proBDNF, Monoclonal Antibody（3C10H）

規 格
免疫化学用

容量
100μL

希望納入価格（円）50,000品
名Mature BDNF ELISA Kit Wako
Mature BDNF ELISA Kit Wako , High Sensitive

規 格
免疫化学用
免疫化学用

容量
96回用
96回用

希望納入価格（円）69,00083,000品
名Anti BDNF, Monoclonal Antibody（2D7）Anti BDNF, Monoclonal Antibody（3C8）

規 格
免疫化学用
免疫化学用

容量
100μL
100μL

希望納入価格（円）50,00050,000関連製品
Mature BDNF ELISAキット
コード No.
296-83201
298-83901

抗BDNF抗体
コード No.
017-28071
014-28081

当社では、神経精神疾患関連製品を多数取揃えています。詳細は当社HPをご覧下さい。
試薬事業トップ→ライフサイエンス→神経科学→ELISA/アッセイキット（神経科学）
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/lifescience/assay_kit/neuro_disease/index.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

21

最終回

ヒト iPS細胞由来分化細胞の創薬応用

第４回

ヒト iPS 細胞由来神経細胞における神経回路機能評価法の構築の試み
東京大学大学院

はじめに

薬品作用学教室

馬場敦

Neurobasal PlusTMなど）、②プレートとが可能である14）。Genocel®として日上での配置と自己集積を可能にする培

本毛織（株）より販売されているゼラ

®

® 6）

医薬品開発の過程において、中枢神養プレート（Cell-able 、MicroBrain

チンハイドロゲル繊維不織布（GHFN）

経系への安全性の問題により脱落したなど）、③アストロサイトなどグリア

は繊維同士が結合したネットワーク構

化合物は約1/4程度を占めると報告さ

7）細胞との共培養法 、④3D培養脳オル造を有し、光透過性に優れ、長期培養れており、依然として大きな課題であガノイド作製5，8，9） など種々の開発がにも安定である。今回我々は繊維素

1）る 。その内訳をみると、中枢神経系

行われている。現状で市販のhiPSC-N

材・繊維径・空隙・不織布の厚みなどへの副作用発現により脱落する候補化を使用した場合、一ヶ月程度の培養期を改変し最適化したGHFNを用いた。

合物の割合は、非臨床試験の段階では間が必要であり、更なる改良とスルー

GHFNを培養プレートに設置し、hiPSC-

約7％程度であるのに対し、臨床試験

プット性を高めた簡便な評価系の必要

N（iCell® DopaNeurons）を播種したでは34％と全臓器のうち最大となって性が高い。

ところ、細胞は網目構造の間隙においいる2）。この結果は、非臨床試験段階

こ れ ま で の と こ ろhiPSC-Nを 用 いてGHFN-培養プレート界面に凝集体での副作用予測が必ずしも十分に機能て 微 小 電 極 ア レ イ（microelectrodeを形成した。培養2日目には各凝集体していないことを示唆し、in vitro にarray : MEA） に よ るin vitro 評 価 系

より複数の神経突起が伸展しており、

おいてよりヒト生体神経系に近い評価の開発が進んでおり、2D培養で化合培 養16日 目 ま で に 各 凝 集 体 が 接 続系を開発する必要性を示している。ま物の痙攣誘発性の予測を可能にしていした。この構造体はある程度まとまっ

10）た、中枢神経疾患は医薬品開発の主要る 。しかしながら生体内では、これた大きさの球状の凝集体より複数のな標的のひとつであるが3）、神経機能

らの神経細胞は個々にランダムなネッ

神経突起が束状にまとまって連結しを指標とする有効な探索スクリーニン

トワークを形成しているように見えたて い た。 共 焦 点 イ メ ー ジ ン グ 装 置

グ系は乏しい。これらの課題に対しヒとしても、巨視的に見ればある程度均

CellVoyagerTM CQ1（横河電機）を用

トiPS細胞由来神経細胞（hiPSC-N）は、

質かつ限定された種類の細胞がクラスい確認したところ、3D構造体の性質①実験動物の代替として利用できるこター（たとえば大脳皮質の各層や、海をもちつつほぼ同一平面上での撮影がと②動物とヒトとの種差を克服できる

馬の領域など）を形成しており、他の可能であった。凝集体の大きさと神経可能性があること③疾患患者由来iPS

クラスターへと神経線維を伸展し接続突起の太さは、使用するGHFNの網目細胞からの分化誘導によりアプローチ

している 。in vitro でこのようなク径によりある程度制御できる。Ca蛍の難しい中枢神経疾患の病態モデルがラスタードネットワークを再現する試

光指示薬を用いて神経発火を経時測定作製できることから、創薬過程で有効みは古くから存在したが、実験系の安したところ、クラスター内部では各細利用することが期待されている4）。

定性や再現性に課題があり、これまで

胞の神経発火とともに複数細胞の同時評 価 系 構 築 に お け る ヒ ト iPS
由来神経細胞利用の現状と課題

11）

12，13）。これらが簡発火、さらに複数クラスターでの同期便に実現すれば神経ネットワークの機発火が観察できた。これらCa変動の普及してこなかった

能評価に繋がることが期待される。現幅・頻度もGHFNの網目径に依存した。

生体内の神経細胞は細胞種毎に異在私たちが3D網目構造足場材を用い各クラスター領域のCa変動を図１Dになった形状、神経伝達物質とその受容て行なっている研究について以下に紹示す。大きなCa変動に着目した場合、体、イオンチャネルを発現しており、介する。

各クラスターの同期しやすさは明確に

これらの性質は分化誘導したhiPSC-N
でも保持されている。しかしながら汎用されているげっ歯類由来培養神経細22

薬学系研究科

ゼラチン不織布を用いたクラス
タードネットワーク作製の試み

わかれており、複数回測定しても再現可能であった。すなわち構造体内部には連結強度の異なる複数のネットワー胞に比べ、hiPSC-Nは機能的に成熟すゼラチンは動物結合組織の主成分でクが互いに重なり合う状態で存在するるのにより多くの時間を要することがあるコラーゲンより抽出されたアミノことが示唆される。また、画像中のクわかっている。このことはヒト生体内酸ポリマーであり、親水性で細胞接着

ラスター間距離は最長で数mm以上離では最終位置に移動し分化を終了した

性に優れているため、培養用コーティ

れているが、一定頻度で全てのクラス神経細胞が一年以上かけて成熟する

ング基材として古くから用いられてきターが同期し発火する。各クラスターということと対応し、細胞内部の固有た。これらゼラチンを繊維状に成形しの同期発火のタイミングには再現性よの機構によるものと考えられる5）。成作製した網目構造は、細胞が生存増殖

くわずかなズレがあり、同一平面上の熟促進の目的で、①生体内を摸倣しできる空隙をもち、足場材あるいは撮影で単一クラスターからの伝達が評た 培 地 や 培 地 添 加 物（BrainPhysTM、

3D構造体の封入体として利用するこ

価可能と考えられた。作製した構造体

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用

Diameter（μm）

空隙小
空隙大

空隙小
空隙大

Ca amplitude

空隙小
空隙大

空隙大

Frequency

Frequency

空隙小Neurite width（μm）

Time（sec.）

図１．ゼラチンハイドロゲル繊維不織布（GHFN）を用いた iPS 細胞由来神経細胞クラスタードネットワークの構築
実 験 に は iCell® DopaNeurons（FUJIFILM Cellular Dynamics） を 使 用 し た。 培 養 プ レ ー ト 上 に 設 置 し た GHFN 上 に 6,000 cells/mm2 で 播 種 し、BrainPhys Neuronal Medium（STEMCELL Technologies）で維持培養した標本を使用した。EarlyTox（Molecular Device）を負荷した標本で Ca イメー
ジングを行なった（3 frame/ 秒）。画像取得および解析には、共焦点イメージング装置（CellVoyagerTM CQ1, 横河電機）および CellPathﬁnderTM（横河電機）を用いた。（A）（上段）作製した標本の模式図。播種した細胞は GHFN を通過し培養プレートとの界面で凝集体を形成し保定されている。各凝集体は神経突起由来の太い線維状構造体で連結しており、培養底面から離れた空間に GHFN 繊維に支持される。（下段左）培養２日目標本の明視野像。赤矢頭は凝集体より伸展する神経突起を示す。（下段中右）16 日目標本の明視野像と、Ca イメージング画像。（B）培養 15 日目の固定標本の蛍光抗体染色像。
PFA 固定・洗浄ののち、anti-Tyrosine Hydroxylase（ドーパミン神経；緑）・anti-βIII-Tublin（神経突起；赤）・Hoechst33342（核；青）で三重染色した。神経細胞の細胞体がほぼ凝集体内部に集積し、突起状構造体内部に複数の神経突起が存在する。（C）GHFN の網目径を変え作製した標本例。（上段）
播種前 GHFN の明視野像と作製した培養 16 日目の標本の Ca 蛍光像。（下段）作製した標本のクラスター径（左）、突起状構造体の直径（中）の分布、
Ca 変動の代表例（右）。空隙径によりクラスター径、突起径、Ca 変動いずれも変化する。（D）同期発火伝達の評価法。（右上）任意３点のクラスターの Ca 変動の重ね合わせたもの。クラスター間でタイミングが同期する大きな変動の他に、法則のみられない小さな変動が観察できる。多点クラスター
間で Ca 変動が同期した場合、Ca 蛍光変化の傾きをプロットし（右下）変曲点を検出しピークのタイミングのずれを可視化した。元波形でほぼ同期していたとしても、厳密にピーク位置のズレがあることがわかる。（左）作製した構造体の Ca 蛍光像。同期発火の伝達図中３点のクラスターはそれぞれの左のトレースに対応する。各クラスター間をどのように伝達していたかを矢印で示した。この標本では中心２箇所で生じた発火が、それぞれクラスターを乗り越えて伝達していたことが可視化できた。

はGHFNによりプレート上に保持されした。ラスタープロットで多点クラス

シン、カルバマゼピンの適用によりクており、一ヶ月以上維持できた。

ターの発火と同期を可視化したとこ

ラスター間の大発火が同期しなくな

上記手法により作製した構造体に、ろ、発火数の増加とともに同期発火のり、最終的には大発火が消失した。ま各種薬物を添加した例を図2に示す。

シグナルが埋没することが観察された、グルタミン酸遊離および受容体阻

in vitro でてんかん様活性を引き起こた。図1Dで示すように同期発火のタ害薬であるリルゾールの適用により、すことが知られているK チャネル阻

イミングのずれから伝達の順番が解析

発火振幅は著しく減弱した。これらの害薬4-アミノピリジン（4-AP）を適用できたことから、神経伝達あるいは伝結果から、①すくなくとも大発火（同した場合、濃度依存的に総発火数が増導を抑制する各種薬物の効果を検討し期発火）が神経伝達・伝導を介するこ加するとともに同期発火の間隔が短縮た。Na+チャネル阻害薬テトロドトキとが示唆され、②各クラスターにはド+

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

23

ヒト iPS細胞由来分化細胞の創薬応用の利活用とその構造評価によりin vitro
評価系構築への応用も期待したい。

謝辞
本稿の執筆にご協力いただきました、日本毛織（株）早乙女俊樹様、東京大学大学院薬学系研究科化学物質安
全性評価システム構築社会連携講座の澤田光平客員教授、加藤英里子様、テクノプロR&D（株）岸森弘子様に御礼申し上げます。
〔参考文献〕
1）Walker, A. L. et al . : Exp. Biol. Med.

（Maywood）, 243, 1037（2018）.
2）Cook, D. et al . : Nat. Rev. Drug Discov ., 13,419（2014）.
3）Authier, S. et al . : J. Pharmacol. Toxicol.

Methods , 81, 37（2016）.
4）Silva, M. C. and Haggarty, S. J. : Ann. N.Y.

Acad. Sci ., 1471, 18（2020）.
5）Woodruff, G. et al . : PLoS One , 15, e0240991（2020）.
6）Suzuki, I. K. and Vanderhaeghen, P. : Develop-

ment , 142, 3138（2015）.
7）Kayama, T. et al . : Biochem. Biophys. Res.

Commun ., 495, 1028（2018）.
8）Sakaguchi, H. et al . : Stem Cell Reports , 13,458（2019）.
9）Costamagna, G. et al . : Int. J. Mol. Sci ., 22,2659（2021）.
10）Ishibashi, Y. et al . : Toxicol. Sci ., 184, 265（2021）.

図２．iPS 細胞由来神経細胞クラスタードネットワークにおける薬剤応答の評価
培養 15 日目の標本に EarlyTox®（Molecular Device）を負荷し、薬物を累積投与 10 分後、各濃度毎に３分間の Ca イメージングを行なった（3 frame/ 秒）。画像取得および解析には、共焦点
イメージング装置（CellVoyagerTM CQ1, 横河電機）および CellPathﬁnderTM（横河電機）を用いた。
（A）神経細胞の興奮性を上昇させる K+ チャネル阻害薬 4- アミノピリジン（4-AP）を適用した
ときの実験例。タイムラプス画像より Ca 蛍光像（上段左）の各クラスター部の平均蛍光強度を算出し、代表的２クラスターのトレースを示した（中段）。このクラスター間では大きな変動パターンが一致しているが、小変動はクラスター毎に異なる。変動にはクラスター内小集団の発火も含まれる。全クラスターについて全ての変動のピークを算出しラスタープロットを作成した（下段）。
4-AP の濃度依存的に発火数が増加（上段右）し、かつ同期の間隔が延長した。（B）電位依存性Na+ チャネル阻害薬テトロドトキシン（TTX、上段）、カルバマゼピン（中段）、グルタミン酸遊離および受容体阻害薬であるリルゾール（下段）を適用したときの、各３クラスターのトレース。

パミン神経のみでなく多種の神経が含リア細胞などとの混合播種により改良まれる集合体であることが明らかとを試みる予定である。今後はMEA計なった。

測や各種薬剤の適用により既存の評価

最後に

24

11）Bassett, D. S. et al . : Nat. Rev. Neurosci ., 19,566（2018）.
12）Gabay, T. et al . : Physica A , 350, 611（2005）.
13）Teller, S. et al . : PLoS Comput. Biol ., 10,e1003796（2014）.
14）Matsuno, K. et al . : Regen. Ther ., 14, 160（2020）.

シリーズ終了にあたって
2021 年 04月（Vol. 89 No. 2）から始まりました「ヒトiPS 細胞由来分化細胞の創薬応用」は、本稿をもちまして最終回を迎えました。本誌に寄稿いただきました先生方に、この場を借りて御礼申し上げます。本シリー
ズではヒトiPS 細胞由来分化細胞について、系との補完性あるいは外挿性を検証す

その創薬応用に視点を据えた情報をお届ける。また、近年、複雑な精神症状を呈しました。皆様のiPS 細胞研究、そして創本系における薬剤の効果はクラスする疾患が神経ネットワーク形成の破ターを構成する細胞種に依存すること

綻に起因することが少しずつ明らかにが予想され、興奮性/抑制性神経やグなってきており、本系での疾患hiPSC-N

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

薬への展開の一助になりましたら幸いです。
全 4 回に渡った本連載をご愛読いただき御礼申し上げます。

ヒト iPS 細胞由来分化細胞の創薬応用

iCell® 神経細胞製品
コード No.

メーカーコード

品

名iCell® ドーパミン神経細胞 01279 株
551-33511
C1087
iCell® DopaNeurons 01279 Cells
551-33371
C1028
iCell® GABA 作動性神経細胞 01434 株
556-33321
C1012
iCell® GABANeurons 01434 Cells®
iCell GABA 作動性神経細胞 01279 株
559-33311
C1008
iCell® GABANeurons 01279 Cells®
iCell グルタミン酸作動性神経細胞 01279 株
554-33501
C1060
iCell® GlutaNeurons 01279 Cells
558-33381
C1033
iCell® 運動神経細胞 01279 株
554-33481
C1050
iCell® Motor Neurons 01279 Cells
557-33471
C1048

容

納入単位

希望納入価格（円）≥1.0×106 cells/vial≥5.0×106 cells/vial

1Vial
1Vial

131,000
236,000

150≥4.0×106 cells/vial

1Vial

270,000

150≥4.0×106 cells/vial

1Vial

270,000≥1.0×106 cells/vial≥6.0×106 cells/vial

1Vial
1Vial

131,000
246,000≥1.0×106 cells/vial≥3.0×106 cells/vial

1Vial
1Vial

131,000
241,000

150

150

150

量

iCell® 神経細胞製品の推奨培養液・サプリメント及びアプリケーション情報を

iCell Products

検索→含めた iCell® 製品情報は当社 HP をご覧下さい。

共焦点定量イメージサイトメーター
CellVoyagerTM CQ1
本品は、細胞を高精度に撮影し、簡単な操作で数値解析できるイメージ
サイトメーターです。マルチビームスキャン方式は高速なだけでなく、1ビームあたり非常に低いレーザ強度で高効率に蛍光色素を励起できるので、低光毒性かつ蛍光退色を大幅に抑えられます。
CQ1 は、広視野ニポウディスク方式の採用により、従来機の 4 視野分を一度にスキャンできるため、より高速かつ高精細な撮影が可能になりま
した。

特

長

アプリケーション例●共焦点画像撮影からスクリーニング、タイムラプス■ 神経突起伸長のタイムラプスラベルフリー解析＊1

3D解析まで対応●コンパクトかつ操作しやすいソフトウェア●ラベルフリー解析・機械学習機能＊1●各種ロボットに対応

3次元解析●共焦点画像を立体構築し、三次元解析ができる。
●体積や3次元の位置情報を簡単に測定できる。
サンプル：SH-SY5Y cell
対物レンズ：10x
光源：明視野タイムラプス：1.5 時間間隔 67.5 時間
認識：ピンク：Neurite
水色：Cell body

明視野画像から DPC（デジタル位相差）画像を作成、機械学習機能を使用して神経突起、細胞質を認識した。
＊1 DPC（デジタル位相差）画像を作成、機械学習機能にはハイコンテント解析ソフトウェア CellPathfinderTM（オプション）が必要です。

詳細は、当社 HP をご覧下さい。試薬事業トップ→機器・機材→イメージング関連機器→ CellVoyagerTM CQ1
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/equipment/products/00053.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

25

ew Products
品目追加

コード No.

品名

食品分析用標準品■ 機能性成分分析用標準品

038-22001 Coptisine Chloride

25,500

ドオウレン

10mg

15,50025mg

32,000

コレウス・
フォルスコリー

085-08691（E ）-Isoferulic Acid

局方一般
20mg
試験法用

18,700ブラックコホシュ

112-01131 Kwakhurin Standard※3

食品
分析用30,000

プエラリア・
ミリフィカ

は特定の保健の目的に資する成分と定義され、定性確認及
067-02191

近年、食品の機能性成分に対して成分基原や含量を正確

063-02193

Forskolin

えています。この度、下記品目を新たに発売しました。
※1 消 費 者 庁HP（https://www.caa.go.jp/policies/policy/food_labeling/foods_with_function_claims/assets/foods_with_function_claims_210322_0002.pdf（2022年3月8日閲覧））より（薄層クロマトグラフィー用）

生化学用に定性・定量する意識が高まってきています。当社では、機能性成分の定性・定量にご使用いただける標準品を取揃

局方生薬
試験用

容量 希望納入価格（円） 指定成分10mg

機能性表示食品のガイドラインでは「機能性関与成分とび定量確認が可能な成分である。」とされています※1。

規格

5mg

※ 3 qNMR により値付けされた純度（％）が表示された標準品で
す。

名※2

規格

1-Deoxynojirimycin
NEW046-34811
Standard

食品
分析用

コード No.

品

容量 希望納入価格（円）

詳細は当社 HP をご覧下さい。

主な試験対象となる機能性成分

試薬事業トップ→分析→食品衛生・自然毒→無承認無許可
医薬品分析→無承認無許可医薬品等分析用試薬

近日
発売

NEW

3-Hydroxy-3-methylbutyric087-10621 Acid Calcium Salt Standard

084-10631

3-Hydroxytyrosol Standard
危

50mg

35,000

桑の葉
イミノシュガー

食品
100mg
分析用

照会

HMB
カルシウム

18,000

オリーブ由来ヒドロキシチロ
ソール

食品
100mg
分析用

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/01985.html

品目追加
局方試験用試薬
当社では、局方試験にご使用いただける試薬を多数取揃えています。この度、下記の新製品を発売しました。

局方生薬試験用※ 2 製品の由来は「主な試験対象となる機能性成分」の項目に記載の由来植物とは異なる場合があります（由来を保証する製■ ジフェニルスルホン

品ではありません）。

日本薬局方 一般試験法 試薬・試液に収載されている定その他標準品・測定用キットも取揃えています。詳細は当量用ジフェニルスルホンとしてご使用いただけます。定量

社 HP をご覧下さい。

用ジフェニルスルホンは生薬「ソヨウ」定量法に使用され試薬事業トップ→分析→食品・栄養・機能性成分ます。

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/analysis/
nutrition_functionality/index.html

C12H10O2S ＝ 218.27
CAS RN® 127-63-9■ 平成30年6月改正食品衛生法「指定成分等」分析用標準品

健康食品に「医薬品に該当する成分を配合したり、医薬

コード No.

品と紛らわしい効能などの表示・広告を行うこと」は薬機法で禁止されています。近年、ダイエットや強壮を標榜し

NEW

品

名

040-34831 Diphenyl Sulfone

た「いわゆる健康食品」に医薬品が添加された「無承認無規格

容量 希望納入価格（円）

局方生薬試験用
100mg
（定量用）

許可医薬品」による健康被害が発生し、問題となっていま

上記以外にも局方生薬試験用製品を取揃えています。詳細す。平成30年6月の食品衛生法改正により、食品衛生上のは当社 HP をご覧下さい。

危害発生防止の観点から、特別の注意を必要とする「指定試薬事業トップ→分析→医薬品品質試験・局方試験→生薬成分等」が選定されました。当社では、「指定成分等」の試験→生薬分析にご使用いただける標準品を取揃えています。

https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/00683.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

26

24,000

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

ew Products
追加品目のお知らせ

ポジティブリスト関連農薬標準品
当社では、ポジティブリスト制度の対象となる農薬・動物用医薬品の標準品を取扱っています。
下記品目を新たに発売しました。

農薬標準品

コード No.

品名■ ブロフラニリド標準品

NEW025-19641 Broflanilide Standard■ フェナザキン標準品

NEW064-06981 Fenazaquin Standard■ シラフルオフェン標準品

NEW

199-11193 Silafluofen Standard■ ペンフルフェン標準品

NEW

166-28991 Penflufen Standard

危

規格

容量

希望納入価格（円）

残留農薬試験用

100mg

30,000残留農薬試験用

100mg

14,000残留農薬試験用

100mg

14,000残留農薬試験用

100mg

30,000

随時、当社 HP のリストに発売品目を追加・更新しています。詳細は当社 HP をご覧下さい。
試薬事業トップ→分析→残留農薬・動物用医薬品→標準品→残留農薬・動物用医薬品分析用標準品
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/01942.html

欲しい混合標準液がすぐに見つかる！

農薬・動物用医薬品混合標準液検索
農薬・動物用医薬品混合標準液検索は、当社の約250種類の農薬・動物用医薬品混合標準液を「成分名」及び「CASRN®」から検索することができます。検索結果には製品の他にも、当社推奨カラムや関連する公定法へのリンクも掲載
しています。
一斉分析の際の混合標準液の選定に是非ご活用下さい。

POINT !
1）
「成分名で探す」または「CASRN®で探す」から「検索キーワード」を設定し、検索できます。
※「成分一覧から探す」では、表示されるキーワード一覧からの一括登録が可能です。

2）検索結果には、下記の情報が表示されます。
・成分名❶をクリック→単品標準品のページへ移動
・当社推奨の分析カラム❷のリンクをクリック→製品詳細ページへ移動
・公定試験法❸のリンクをクリック→試験法のページへ移動

詳細は当社HPをご覧下さい。
試薬事業トップ→分析→農薬・動物用医薬品混合標準液検索バナー
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/search/pesticides.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

27

ew Products
溶媒

有機ふっ素化合物の分析に！

コード No.

PFCs（PFOS, PFOA, PFHxS）試験用試薬名

規格

容量 希望納入価格（円）011-22251 Acetonitrile

危PFOS・PFOA
分析用

1L

6,250

スルホン酸（PFOS）やペルフルオロオクタン酸（PFOA）は130-15941 Methanol

危PFOS・PFOA
分析用

1L

3,520

環境中で分解されにくく、高い蓄積性も有するため、POPs

216-01361
Ultrapure Water
212-01363

PFOS・PFOA
分析用

1L
3L

2,600
7,350

有機ふっ素化合物（PFCs）であるペルフルオロオクタン条約を始めとしたさまざまな規制の対象となっています。
国内では、2020年4月1日にPFOS・PFOAの水道水質規制における位置づけが「要検討項目」から「水質管理目標設定項目」に変更され、暫定目標値が適用されました。また、2021年4月よりペルフルオロヘキサンスルホン酸（PFHxS）
が「要検討項目」に追加されました。当社ではPFCs分析に使用できる分析カラム、溶媒、標準品を取揃えています。この度、PFOA、PFHxS標準品を発売しました。

PFOS・PFOA分析適合性試験において、溶媒中のPFOS、PFOAが基準値以下であることを保証した溶媒です。
詳細は当社HPをご覧下さい。
試 薬 事 業 ト ッ プ → 分 析 → 水 質 → 環 境 水・ 排 水 →PFCs（PFOS, PFOA, PFHxS）分析用試薬
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/00353.
html

標準品
規格/メーカー 容量 希望納入価格（円）

全固体電池の研究・開発に

環境分析用 100mg

照  会

硫化物系固体電解質

Perfluorooctane Sulfonic Acid AccuStandard
1mL（100μg/mL in MeOH）危
Inc.

8,100

コード No.

品

名

Perfluorohexanesulfonic AcidNEW
168-28951
Potassium Salt※
518-28833
NEW

品

161-28941

Perfluorooctanoic Acid
Standard※

現在の主流電池であるリチウムイオン二次電池は、軽量でエネルギー密度が大きいという特長がある一方、電解液

環境分析用 100mg 13,000に有機溶媒が用いられているため、発火する懸念があり安※直鎖化合物の含量が明確な標準品です。

全性に問題があります。リチウムイオン二次電池より高い

安定同位体標識化合物

た次世代電池として、近年全固体電池が注目を集めていま

コード No.

品

名

メーカー

安全性を有し、高出力特性、高エネルギー密度を兼ね備えす。当社では、全固体電池の電解質として有望視されてい容量 希望納入価格（円）

る硫化物系固体電解質の原料をラインアップしました。全

Potassium Perfluoro-1Cambridge
552-40251 hexanesulfonate（13C6, 99%）,
Isotope
1.2mL 149,000
危50μg/mL in Methanol
Laboratories, Inc.

固体電池の研究・開発にぜひご利用下さい。

Perfluorooctanesulfonate（PFOS）,
Cambridge
Isotope
1.2mL 143,000
550-37621 Sodium Salt（13C8, 99%）,50μg/mL in Methanol 危Laboratories, Inc.

特●高純度品（99.9％以上）

Perfluorooctanoic Acid（PFOA）,
Cambridge
517-28901 （13C8, 99%）,50μg/mL in
Isotope
1.2mL 149,000
危MethanolLaboratories, Inc.

●鉄、コバルトなどの高遷移金属の不純物含量を保証●吸湿を防ぐため特殊な外装を使用

前処理カラム
コード No.

品

名

規格

291-33441 Presep® PFC-II（60mg/3mL） 試料前処理用
296-32651 Presep®-C Agri（Short）

試料前処理用

容量 希望納入価格（円）

10本
×10

55,00010個
×539,000

NEW

NEW
NEW

「Presep® PFC-Ⅱ」 は、シリンジ型、「Presep®-C Agri
（Short）」はコマ型の固相抽出カラムです。どちらも2020
年3月30日改訂の水質管理目標設定項目の検査方法を参考にしたPFOS、PFOAの添加回収試験において、良好な結果が得られています。また「Presep® PFC-Ⅱ」は、
PFOS、PFOA、PFHxSを含むPFCs 6成分を良好に回収することができます。

長

コード No.

品

名071-06791

Germanium（IV）Sulfide【GeS2】

128-06891 Lithium Sulfide
126-06892 【Li2S】

CAS RN® 規格 容量 希望納入価格（円）12025-34-2

電池
研究用

5g

26,00012136-58-2

5g
電池
研究用 25g

19,000165-28841 Phosphorus Pentasulfide
5g
電池1314-80-3
危NEW
研究用 50g
161-28843 【P2S5】
NEW

NEW

200-21121

Tin（IV）Sulfide【SnS2】

1315-01-1

電池
研究用

和光純薬時報7,000
12,00020,000その他の電池関連試薬は当社 HP をご覧下さい。
試薬事業トップ→合成・材料→電池材料
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/
synthesis/battery/index.html…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

285g

68,000Vol.90, No.2（2022）

ew Products
キット内容

ヒト血清、血漿、尿中の MCP-１を
短時間・微量検体・高感度で測定可能●抗体固相化96ウェルプレート

レビス® Human MCP-１（CCL2）ELISA Kit●緩衝液●標準品（凍結乾燥）

カインELISAキットシリーズに新たにHuman MCP-1が追加されました。既存品では感度が得られず測定できなかった
正常検体、低濃度検体を高感度に再現性良く測定可能です。
Monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）は、76
アミノ酸から成る分子量8,600の細胞遊走活性を示すサ
イトカインスーパーファミリーです。炎症性メディエー
ターとして単球・マクロファージなどの免疫担当細胞
からだけでなく、血管内皮細胞、線維芽細胞、尿細管
上皮細胞、平滑筋細胞などの多くの細胞から分泌されます。
MCP-1を含む多くのケモカインは分泌細胞及び平滑筋において炎症性刺激（TNF-α，IL-1などによる）を受けると誘導され、特にMCP-1とその受容体CCR2 は脂肪組織に骨髄由来のマクロファージを動員させ炎症を介したインスリン抵抗性の発症に深く関与しています。
また、炎症領域に単球・マクロファージを引き寄せると考えられ、慢性炎症疾患に対する治療のターゲットとしても注目されています。

1本
60mL×1本●ビオチン結合抗体（凍結乾燥）

富士フイルムワコーシバヤギ株式会社のレビス® サイト

特

1枚

1本

●ペルオキシダーゼ・アビジン結合物

100μL×1本●発色液（TMB）

12mL×1本●反応停止液12mL×1本●濃縮洗浄液（10×）

100mL×1本

コード No. メーカーコード

品名

容量 希望納入価格（円）

LBIS Human MCP-1（CCL2）
NEW 638-53411 AKH-MCP1
96回用
ELISA Kit

70,000ビオチンと可逆的結合可能な耐熱性
アビジン様タンパク質
タマビジンTM 2‐REV，組換え体，溶液
本品は、タモギタケ（Pleurotus cornucopiae ）から
クローニングされたアビジン様タンパク質タマビジンTM 2のアミノ酸改変体です。ビオチンと可逆的に結合する性質を持ち、ビオチンの過剰添加によりビオチン化物質とタマ
ビジンTM 2‐REVの結合を解離することができます。

製品概要●タンパク質濃度：約1mg/mL

長●形状：液体●等電点：約7.2●カルタヘナ法非該当（バキュロウイルス不含）●微量な検体で測定可能●熱安定性：T m＝約80℃●短時間で測定可能（全反応時間：3時間50分）●起源：E. coli expressed mushroom（Pleurotus cornucopiae ）TamavidinTM 2-REV●環境に優しい防腐剤を使用●高い精度と再現性

性

コード No.

品

名TamavidinTM 2-REV,
NEW
201-21271
recombinant, Solution

能●検体：ヒト血清、血漿（ヘパリン/EDTA）、尿、培養上清

コード No.

●アッセイ間変動（3重測定，3検体，4日間）：平均C.V.値：15%未満

品

名MagCaptureTM
136-18341
TamavidinTM 2-REV
MagCaptureTM HP
133-18611
TamavidinTM 2-REV

10.000Abs.450/620nm

免疫化学用 1mL

22,000

タマビジンTM 2-REV固定化磁気ビーズ●アッセイ内変動（5重測定，2検体）：平均C.V.値：15%未満

規格

容量 希望納入価格（円）

遺伝子研究用 2mL

40,000

遺伝子研究用 2mL

58,000

アビジン・ストレプトアビジン

1.000

コード No.

0.100

1

10

100

1,000

Human MCP-1（ｐｇ/ｍＬ）

品

名013-28291
Avidin, from Egg WhiteNEW 019-28293
015-24231 Avidin, Neutralized, from011-24233 Egg White
198-17861
194-17863 Streptavidin
192-17864
NEW

0.010

容量 希望納入価格（円）

関連製品●測定範囲：3.85 ～ 500pg/mL（標準曲線範囲）〈標準曲線（例）〉規格

規格

容量 希望納入価格（円）

10mg
生化学用
50mg
10mg
免疫化学用
50mg
1mg
免疫化学用 5mg
25mg

8,000
28,50010,50043,0005,700
13,00047,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

29

ew Products
マクロファージマーカー（B）抗iNOS抗体

抗 Arg1, ウサギ
抗 iNOS, ウサギ
中枢神経系グリア細胞の一つであるミクログリアや末梢で貪食細胞として働くマクロファージは通常静止型として存在しますが、LPSなどの刺激が加わることで活性化ミク
ログリア/マクロファージへと変化します。さらに活性化
ミクログリア/マクロファージには傷害性（M1型）と保護性（M2型）の2種類があり、それぞれ免疫機能に関与します1）。iNOSはM1型、Arg1はM2型 ミ ク ロ グ リ ア/マ ク ロ

サンプル：マウス骨髄由来マクロファージ（M2型）
LPS 濃度：500ng/mL
一次抗体：（A）抗 Arg1, ウサギ［コード No. 018-28361］（B）抗 iNOS, ウサギ［コード No. 015-28371］
抗体濃度：一次抗体（Arg1，iNOS ともに）1：500

ファージのマーカーとしてそれぞれ知られています。
本品は、iNOS及びArg1に対するウサギポリクローナル抗体です。マクロファージの免疫細胞染色に使用可能であることを確認しています。

マウス骨髄由来マクロファージを LPS 処置し、（A）抗 Arg1 抗体と（B）抗 iNOS 抗体を用いて免疫細胞染色を行った。

〔参考文献〕
1）Hu, X. et al . : Nat. Rev. Neurol ., 11（1）,56（2015）.

コード No.
NEW
NEW

品

名

018-28361 Anti Arg1, Rabbit
015-28371 Anti iNOS, Rabbit

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫化学用 100μL
免疫化学用 100μL

40,00040,000ミクログリアマーカー
SPICA DyeTM 594 標識 抗 Iba1, ウサギ＋：発現レベル高、−：発現レベル低緑色蛍光色素（488）標識 抗 Iba1, ウサギ

製品概要
バッファー組成抗体濃度
抗原
交差性
アプリケーション

PBS, 0.05%アジ化ナトリウム
ラベルに記載
合成ペプチドマウス
免疫細胞染色 1:100-500

Iba1は神経系のミクログリア特異的に発現している約
17kDaのタンパク質で、ミクログリアマーカーとして使用されます。この度、新たな蛍光標識抗体2製品をラインアップに追加しました。
本品は当社抗Iba1，ウサギ（コードNo. 019-19741）に新規
高耐光性蛍光色素である、Alexa Fluor594領域のSPICA

デ ー タ

DyeTM 594（Ex=575nm, Em=611nm）及びFITC領域の緑色■ 免疫細胞染色

蛍光色素（488）（Ex=501nm, Em=513nm）を標識した抗体で（A）抗Arg1抗体

す。標識二次抗体による検出操作の手間を省くことができ
ます。

製品概要
抗 Iba1，ウサギ，緑色
抗 Iba1，ウサギ，
SPICA DyeTM 594 結合 蛍光色素（488）結合
コード No.
012-28401
282-37691
バッファー組成PBS, 0.05%アジ化ナトリウム抗体濃度
ラベルに記載SPICA DyeTM 594
緑色蛍光色素（488）標識（Ex=575nm, Em=611nm）（Ex=501nm, Em=513nm）
抗原
合成ペプチド（Iba1 の C 末端配列相同）
交差性
マウス、ラットラット
アプリケーション 免疫組織染色（凍結切片）1 : 200-2,000

品名…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

30

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）［次頁に続く］ew Products
デ ー タ

アセチル CoA のアッセイに■ 免疫組織染色

蛍光プローブ「RH-NH2」〈SPICA DyeTM 594標識 抗Iba1, ウサギ抗体〉
ラット

アセチルCoAはエネルギー代謝で中心的な役割を果たす

マウス

重要な中間体であり、炭水化物、アミノ酸及び脂質を分解してエネルギーを得る場合、ほとんどがTCA回路でアセ
チルCoAとして酸化されます。一方、細胞内のアセチル
CoAをアッセイする方法はほとんどなく、アセチルCoAを可視化できるプローブはこれまでありませんでした。東京大学の山次先生らは、アセチルCoAを検出する蛍光プロー
ブとして、テトラメチルローダミン骨格を有するRH-NH2

サンプル：ラット、マウスの大脳皮質
抗体：抗 Iba1, ウサギ , SPICA DyeTM 594 結合
抗体希釈率：1 : 200を開発しました1, 2）。HeLa S3細胞をRH-NH2（2μmol/L）で処理すると、RH-NH2がミトコンドリアに局在し、アセ〈緑色蛍光色素（488）標識 抗Iba1, ウサギ抗体〉

チルCoAにより誘起された弱い蛍光を発する様子が観測さラット

サンプル：ラットの大脳皮質
抗体：抗 Iba1, ウサギ ,緑色蛍光色素（488）結合（プロトタイプ）
抗体希釈率：1 : 200

れ、さらに促進剤であるトリブチルホスフィンを加えると1分以内で蛍光強度の増大が確認できます（図）。アセチル
CoAのアッセイに、ぜひご活用下さい。
PBu3(5mmol/L)
1min

TM※ SPICA Dye ：富士フイルム株式会社によって開発された高耐光性の新規蛍光物質です。
コード No.

品

名規格

容量 希望納入価格（円）NEW

Anti Iba1, Rabbit, SPICA DyeTM
012-28401
594-conjugated

免疫
100μL
化学用

50,000NEW

Anti Iba1, Rabbit, Green282-37691 Fluorochrome（488）-conjugated（Prototype）

免疫
100μL
化学用

50,000

HeLa S3細胞(RH-NH2 2μmol/L)

図．RH-NH2 による細胞内アセチル CoA の蛍光検出

特長●細胞内のアセチルCoAの可視化が可能●使いきりの1mg包装

関連製品
コード No.

NH2

品

名Anti Iba1, Rabbit
019-19741（for Immunocytochemistry）
013-27691

Anti Iba1, Rabbit（for Paraffin Section）

規格

容量 希望納入価格（円）

免疫
化学用

50μg

40,000

免疫
化学用

50μg

45,000

CF3COO-

H3C

N

+
N

O

CH3

C25H24F3N3O3＝471.47
CAS RN® 1427006-06-1

免疫
100μL
化学用

45,000

免疫
100μL
化学用

45,000〔参考文献〕

免疫
100μL
化学用

48,5002）山次健三、金井求 : 和光純薬時報，90（1）,11（2022）.

Anti Iba1, Rabbit（for Western Blotting）

免疫
化学用

50μg

40,000181-03521 RH-NH2

012-26723 Anti Iba1, Monoclonal Antibody
016-26721 （NCNP24）017-27591 Anti Human Iba1, Monoclonal013-27593 Antibody（NCNP27）

免疫
化学用

10μL
50μL
10μL
50μL

15,00045,00018,00040,000

免疫
100μL
化学用

50,000その他の蛍光プローブ試薬は当社の HP をご覧下さい。
試薬事業トップ→ライフサイエンス→イメージング→蛍光
プローブ（生体分子）
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/category/lifescience/tissue_
clearing_imaging/fluorescence_probe_biomolecule/index.html

011-27991 Anti Iba1, Goat
Anti Iba1, Rabbit,
Biotin-conjugatedAnti Iba1, Rabbit, Red
013-26471 Fluorochrome（635）-conjugated016-26461

016-20001

015-28011

Anti Iba1, Rabbit, SPICA DyeTM
568-conjugated

免疫
化学用

CH3

CH3

1）Komatsu, H. et al . : Chem. Commun ., 49（28）,2876（2013）.

コード No.

品

名規格

細胞生物学用

容量 希望納入価格（円）1mg

25,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

31

ew Products
関連製品

血球系、免疫系細胞への分化誘導、培養にSCF 溶液，ヒト，組換え体

幹細胞因子（SCF）

SCF（Stem Cell Factor：幹細胞因子）は、c-KIT受容後、必要に応じフィルター減菌を行ったのちに培地に添加体を介したシグナル伝達により造血を調節する成長因子です。多能性幹細胞から造血幹細胞、赤血球や血小板のような血球系細胞、T細胞やNK細胞のような免疫系細胞への分化誘導や培養に使用されます。
本品は、フィルター滅菌済みの溶液品のため、溶解やフィルター滅菌操作を行わずにそのまま培地に添加でき、溶解時のコンタミやフィルター滅菌時のタンパク質のロスを防ぐことができます。
本品は、味の素株式会社が製造しています。また、独立行政法人 医薬品医療機器総合機構（PMDA）より再生医療等製品材料適格性確認書が発行されており、本品の構成
成分及び各種構成成分の製造工程に使用される成分に、生物由来原料基準への適合性を示す必要があるヒト・動物由来成分はない、と判断されています。

特SCFの粉末製品です。使用時には、適切な溶媒に溶解して下さい。
コード No.

品

名

製造工程で動物由来原料を使用
193-12811 Stem Cell Factor,
199-12813 Human, recombinant

規格

細胞生物学
用

容量 希望納入価格（円）

10μg
1mg

製造工程で動物由来原料を使用せずに製造
10μg
197-15511 Stem Cell Factor,
細胞生物学
191-15514 Human, recombinant,
250μg
用193-15513 Animal-derived-free
1mg●再生医療等製品材料適格性相談 確認書取得済み●溶解操作が不要な溶液品●フィルター滅菌済みのため、そのまま培地に添加可能

溶液品の利点

41,900照 会
照 会

サイトカイン溶液
いずれもフィルター滅菌済みのため、そのまま培地に添加してご使用いただけます。
コード No.

品

名

規格

再生医療等製品材料適格性確認書取得済み
014-27621 Activin A Solution,
細胞培養用010-27623 Human, recombinant

容量 希望納入価格（円）

10μg
50μg

原薬等登録原簿（マスターファイル：MF）登録品
50μL
062-06661
bFGF Solution, MF
細胞培養用
068-06663
50μL×4

長41,900照 会

44,000154,000
100,000
325,000※原薬等登録原簿（マスターファイル）への登録は、厚生労働省（独立行政法人医薬品医療機器総合機構）による、品質及び安全性に関する確認または評価が行われたことを意味するものではありません。

粉末溶解時に懸念される下記のリスクが回避できます。
●溶媒添加時のコンタミ●フィルター滅菌時のフィルターへの吸着によるロス●タンパク質濃度の保証

動物細胞用培地カタログ
当社取扱いの動物細胞培養に使用される培地をまと●溶媒選択ミスによる失活

めたカタログです。D-MEM や RPMI-1640 といった汎用培地から再生医療研究用培地まで幅広く約 50 品目収

製品概要●起源：Corynebacterium glutamicum expressed human
Stem Cell Factor●組成：20mmol/L HEPES, pH 7.7（0.2μmフィルター滅菌済み）

載しています。
カタログをご希望の場合は、当社 HP のカタログ請求ページより PDF 版をダウンロードいただけます。
https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/PG1857A1/
download/index.html●純度（SDS-PAGE）：95%以上●タンパク質濃度：0.10 ～ 0.14mg/mL●生物学的活性（EC50）：1.0 ～ 20ng/mL（レポーターアッセイ用U2OS細胞を用いたc-KITりん
酸化活性測定）●エンドトキシン：0.1EU/μg未満
コード No.

品

名195-19071 SCF Solution, Human,NEW
191-19073 recombinant
NEW

規格

細胞培養用

容量 希望納入価格（円）

10μg
50μg

43,000160,000…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。その他の略号は、巻末をご参照下さい。
掲載内容は、2022 年 4 月時点での情報です。最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

32

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

化学大家 457
アンリ・ベクレル（1852 . 12 . 15 〜 1908 . 8 . 25）
兵庫県立大学名誉教授

中辻

慎一

は、エコール・デ・ポン・ゼ・ショセ（国１．ベクレル家の伝統の継承者

立土木学校）の工学コースに入学し、3

1）

天然に存在するウラン には、放射線年後（25歳）に学位を授与された。このを出す働き、すなわち放射能をもっている

学位は、後年の研究の基盤として役立っことは現在では当然のことのように知られたと言われる。

ている。ウランの化合物やウラン自身が放この間の1876年（24歳）には母校エ射能をもっていることは、フランスのアンリ・

コール・ポリテクニックの講師に任命されベクレルAntoine Henri Becquerelによったが、翌1877年（25歳）には、政府のて1896年に初めて発見された。今回は、橋梁・道路部門の技術者として任用され物質（ウランおよびその化合物）からのた。しかし、翌1878年（26歳）には自然放射能を初めて発見した、アンリ・ベクレ

史博物館の助手に任命され、父エドモン・

2, 3）。
ルを紹介する（図1）

ベクレルが行っていた“リン光”の研究を

アンリ・ベクレルは、エドモン・ベクレル

始めた。さらに自身も、光を当てた物質にAlexandre Edomond Becquerel（1820-

よる光吸収や発光と、それによる光色の1891）を父、Aurélie Quénard（18291890）を母として、1852年12月15日にパ

図１．アンリ・ベクレル（Wikipedia ※）※ https://ja.wikipedia.org/wiki/ アンリ・ベクレル（2021 年 11 月 30 日閲覧）

リで生まれ、本年は生誕170周年に当た変化に強く興味を引かれて研究を進め、これが博士論文（1888年）のテーマとなった。その後、再びエコール・ポリテクる。父エドモン・ベクレルは、当時パリのも長年に亘って国立自然史博物館応用

国立工芸院Conservatoire national des

物理学教授を務め、ベクレル家は科学の物館の応用物理学部門長であった父エド

arts et métiers（CNAM）の応用物理名門一家であった。後年にはアンリ・ベク

モンが逝去したのちの1892年（40歳）に

学 教 授 で、 後 に 国 立 自 然 史 博 物 館

レルも、祖父や父が占めていたポストを受はそのポストを継いで、博物館の教授とMuséum national d’histoire naturelle

け継ぐこととなり、約1世紀に亘って続くベなった。さらに、1895年（43歳）には母（MNHN）（図2）応用物理学部門の教クレル家の伝統の継承者となった。

校エコール・ポリテクニックの教授にも任授となる科学者であった4）。また、祖父
アントワ ー ヌ・ セ ザ ー ル・ ベ クレ ル
Antoine-César Becquerel（1788-1878）

ニックの物理部門に戻ったが、自然史博

命されて、講義を担当した。
２．青年期から壮年期へ
アンリ・ベクレル（以後アンリと略記）

アンリの初期の研究は主に光の吸収や発光（特にリン光）に関するものであっは、パリのルイ14世リセ（高校）で学び、て、結晶の光吸収（博士論文のテーマ：

この頃から理系科目が得意であった。20“Recherches sur l’absorption de la

歳になると、祖父や父も学んだ理工系のlumiére”光の吸収に関する研究）、円

名門校エコール・ポリテクニック（図3）

偏光の研究、リン光性結晶などの研究をに入学して（1872年）工学を学び、2年行った。これらの研究成果が認められて、後にそこを卒業した。1874年（22歳）に1889年（37歳）にフランス科学アカデミーの会員に推挙された。後述のように、この発光の研究が、のちに放射能の発見という世紀の大発見に繋がったのであった。
３．天然放射能の発見
1895年ドイツ・ヴュルツブルク大学のレントゲンが、真空管の中で電子を速いスピー
ドで陽極にぶつけると、発光とともに物体を透過する力の強い光線、すなわちX線

図２．アンリ・ベクレルが放射能を発見した国立自然史博物館の応用物理学研
究室（Wikipedia ※）※ https://fr.wikipedia.org/wiki/Muséum_
national_d'histoire_naturelle（2021
年 11 月 30 日閲覧）が出ることを発見した。レントゲンからX線
図３．エコール・ポリテクニックの正門（Wikipedia ※）※ h ttps://en.m.wikipedia.org/wiki/
École_Polytechnique（2021 年 11 月
30 日閲覧）和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）の発見を知らされた数学者・物理学者アンリ・ポアンカレは、科学アカデミーにおいてそれを報告するとともに、発光するもの
から X線が出るのではないかとの示唆を33

与えた。それを聞いたアンリ・ベクレルは、と晴れた３月１日に実験を再開しようとしてえた心 」（les esprits préparés）に女

リン光研究用として父エドモンより引き継い

サンプルを取り出した。そのとき、「何日も神が微笑んだ瞬間であった。

で手元にあったウランの化合物（硫酸ウ

暗所に置いたので、直射光線には当たっ

その後も彼はこの興味深い性質を示す

ラニルカリウム）を用いて、早速1896年ていないが、非常に薄いにしてもあるいウラン化合物について研究を進め、ウランの初頭に次のような実験を行った。すなは感光しているかも知れない」という考え化合物から発せられるこの放射線はまわ

わち、写真乾板を黒い紙で包んでおき、が頭に浮かんだ。そして、試しにその乾りの空気を帯電させることなどの知見を科その上にウラン化合物を載せて、太陽光板を現像してみたところ、薄いどころか今学アカデミーで次々と発表した（3月だけの当たるところに出しておいた。そして、までになくはっきりと感光していた。驚いたでも他に３報）。

その乾板を現像してみると、ウラン化合物

アンリは実験を繰り返し、ウラン化合物は、

アンリはまた、5月18日の 例 会 で はの形のとおりに感光していた。従って、こ太陽光線を当てようと当てまいと関係なく、“Émission de radiations nouvelles parの時点では、当初の予想通りX線が発生

写真乾板を感光させる働きをもっているこ

l’uranium métallique”（金属ウランからしているものと考えた。次に、ウラン化合とを確かめた（図4）。すなわち、ウランの新しい放射線の放出）というタイトルの物と黒い紙の間に硬貨を置いて実験する

化合物は、それまでに発見されていたX

発表を行い、ウラン元素を含むものであと、その硬貨の影ができたので、ある厚線やケイ光・リン光などと異なり、外かられば固体でも液体でも同じ放射線を出し、さの金属は通さないということもわかった。

エネルギーを与えなくても、自発的に放射金属ウランではその化合物よりも効果が強

さらに、光に当たった化合物が化学変化

線を出すということを発見したのであった。

いことを確認している 。

して蒸気のようなものを出し、それが黒い

この発見は、“Sur les radiations invisibles

このウランから発せられる放射線を、紙を通って感光する可能性もあったので、

émises par les corps phosphrescents”

彼自身は“ウラン線”（rayon uranique）

ガラス板を間に入れて実験したが、結果（リン光性物体から発せられる目に見えなと呼んだが、マリー・キュリーらは“ベクレは同じであった。アンリはこの実験結果

い放射について）というタイトルで、3月2ル線 ”（rayon de Becquerel）と呼び、を、“Sur les radiations émises par

日の科学アカデミーに於いて発表された

ウランが 放 射 線を出 す 能 力 はのちに

phosphrescence”（リン光によって発せら（図５）5）。

マリー・キュリー 7） によって“ 放 射 能 ”

5）れる放射について）というタイトルで、2月

この1896年３月１日の科学史上で有名24日の科 学アカデミーに於いて発 表しな放射能の発見は偶然の産物であって、このように、アンリは最初に計画してい5）

セレンディピティー Serendipityの代表的た、リン光性化合物に光照射してX線を

さらに、2月26日にこの実験を続けようとな例として挙げられる6）。しかしながら、こ発生させるという実験から、当初は思いもしたが、2月末のパリの空は曇って太陽がれは祖父や父から受け継いだリン光や写よらなかったセレンディピティーによって、ウ

顔を見せなかった。そこでアンリは、黒い真に関する研究と、アンリのもつ探究心

ラン化合物が自発的に放射線を発する放た 。

（Radioactivité）と名付けられた。

紙で包んだ写真乾板の上にウラン化合物や卓越した観察眼が結実した結果とみな射能をもっていることを発見したのであっを載せたまま、机の引き出しにしまっておすことができよう。まさに、同じフランスのた。

いた。しかし、天気の悪い日が続き、やっ碩学ルイ・パスツールが言った「待ち構４．その後の放射能研究の展開と晩年
アンリの発見は、当初は周囲の科学者を驚かせたものの、彼自身その後は次第

図４．感 光した写真プレート（上部に自筆メモ書きが見られる）（文献 2）

34

図５．３月２日に発表された論文の冒頭部分（原著論文コピー）

和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

に関心が薄れていった。ちょうどそのような頃に、ピエール・キュリーと結婚してマ射線がどのくらい出ているかという事を表示した。
また、当時新しく発見されたラジウム化

すのに、放射性核種が１秒間に崩壊する

リー・キュリーとなったばかりのポーランド

合物は、治療薬や人工肥料などへ適用

原 子の個 数を表す単 位としてベクレル

出身の女性科学者マニア・スクロドフスカ

することによって、新たに人類に幸せをも（Bq）が使われている（1975年の国際は、学位論文の研究テーマを探していた。

たらす夢の物質となることが期待された。

度量衡総会にて制定された）。その測定

そして彼女が注目したのが、新しい放射

このようなときに、アンリはピエール・キュ

は、シンチレーション検出器やガイガー・
ミュラー計数管などによって行われる。

線に関するアンリ・ベクレルの報告であっリーとともにラジウム放射線の生理学的作た。彼女は、ウランの放射線に似た性質

用について研究し、ラジウム化合物を長をもっている物質が他にもあるのではない

時間皮膚にさらすと炎症を生ずることを観事故以来、スウェーデンの科学者に由来かと考えて、新たな研究に着手した。そ察して1901年に発表した。恐らく当時のし、生体の被爆による生物学的影響の大して、1898年にドイツのG. C. シュミットとほアンリには放射能被ばくの恐怖は殆ど念きさを表す単位「シーベルト」とともに、

ぼ同時に、トリウム化合物が同様な性質

頭になく、キュリー夫妻からもらったラジウ

アンリ・ベクレルに由来するこの単位「ベを示し、ウランよりももっと強い活性を示す

ム化合物入りのガラス管をベストのポケットクレル」を日常的に耳にすることが多くなっことを見出した。

に入れて持ち歩いていたといわれる。彼たのは、まだ記憶に新しいところであろう。

さらに同年マリーは、ウラン鉱石ピッチ

はノーベル賞受賞から５年後の1908年8月

ブレンドではウラン含有量に比べて数倍の25日、放射能の被ばくがその原因とされ放射能があることから、何か未知の物質る心疾患によって亡くなった。享年55歳で（元素）があるのではないかと推察した。

あった。

アンリは1877年 にLucie Zoé Jaminで発見したのであった。この彼らの歴史（1857-1878） と 結 婚 し、2人 の 間 に的成果は、アンリ・ベクレルによって科学

ジャン・ベクレル Jean Becqurel（1878-

アカデミーで紹介された。

1953）が誕生したが、生後ほどなく妻を

また、 翌1899年にイギリスのE. ラザ

亡くしている。その後 1890年にはLouise

フォードは、ウランからの放射線が、薄い

Désirée Lorieux（1864-1945）と再婚しアルミニウム箔に吸収されるものとそれをたが、2人の間には子宝は恵まれなかっ

通過するものに分かれることを示し、前者

たようである。
ベクレル家の伝統は、幸いにもそのひと

このような新発見が相次いだことから、り息子ジャンによって受け継がれた。ジャアンリのウラン放射能の研究成果は、一ンは、父アンリと同様にエコール・ポリテク

般に広く受け入れられることとなり、そのニックを卒業し、国立土木学校を経て、発見から7年後の1903年度のノーベル物

父の死後の1909年に自然史博物館のポス理学賞が、アンリ・ベクレルとマリーおよびトを引き継いだ。彼は、結晶の光学的性

ピエール・キュリーに授与された。

質や磁性について研究し、特に磁場中でところで、マリーとピエール・キュリーは、の偏光面の回転を解析した。また、1919

同じパリ市内の自然史博物館やエコール・

年から1924年の間には母校エコール・ポ

ポリテクニックとそれほど離れていない市

リテクニックの教授も務め、特に相対論の立物理化学学校で研究しており、アンリと教 育や研 究を熱 心に進めた。 従って、は距離的にも近い関係にあった。マリー

国立自然史博物館やエコール・ポリテク

およびピエール・キュリーの目覚ましい発

ニックにおけるベクレル家の科学の伝統見に触発されたアンリは、2人と交わりなは、約1世紀半の長きに亘って守られたのがらさらに放射能の研究を展開した。そであった。

して、1899年にはラジウム化合物を用い辞
本稿の執筆を勧めていただいた大阪

感謝申し上げます。
５．後 継者と放射能の単位について

射性元素のポロニウムとラジウムを相次い

をα線、後者をβ線と呼んだ。

謝大学名誉教授鈴木晋一郎先生に心よりそして、化学的分離手法を丹念に適用して、夫ピエールとともに1898年に新しい放2011年の東京電力福島原子力発電所〔参考文献〕
1）桜井弘著：「元素111の新知識（第2版増補版）」,
p. 370-378（講談社ブルーバックス）（2013）.
2）Jean-Louis Basdevant :“Henri Becquerel :découverte de la radioactivité”, Bibnum（Open Edition Journal）, 1-12（2008）.
（https://journals.openedition.org/bibnum/848,
2021年7月28日閲覧）.
3）阪 上正信：「H. Becquerelと放射能の発見100年」,化学史研究, 23, 167（1996）.
4）中 辻慎一：「光起電力現象の発見者 EdmondBequerel」,化学, 75（8）,47（2020）.
5）物理学史研究刊行会編：物理学古典論文叢書
7「放射能」（東海大学出版会）（1970）.
6）R. M. ロバーツ著、安藤喬志訳：「セレンディ
ピティー

思いがけない発見・発明のドラマ」,

p. 202-206（化学同人）（1993）.
7）島 尾永康：「マリー・キュリー」, 和光純薬時
報, 70（4）,2（2002）．

また、アンリ・ベクレルについては、放て、ラザフォードによって確認されたα線射能の量を表す単位にその名前が残さおよびβ線が磁気的にも分離されることをれている。すなわち、放射性物質から放和光純薬時報Vol.90, No.2（2022）

35

精製エクソソームからのRNA抽出に！
精製 EV 用 マイクロ RNA エキストラクター ® キット
本品は、細胞培養上清や血清・血漿などから精製したエクソソーム溶液のmiRNAを含むTotal RNA抽出に最適化しよりも高濃度でのRNA回収を実現しました。
近年、エクソソームのmiRNAプロファイル解析の需要はますます高まっています。本品を使用することで、精製エクソソーム溶液から高効率にmiRNAを含むRNAを回収することができます。エクソソーム研究にお役立て下さい。

長

デ ー タ
■ RNA抽出・定量●精製エクソソーム溶液からのRNA抽出に最適化●高いRNA回収率

適応サンプル
ソソーム溶液86420

細胞培養上清及び血清・血漿などから精製したエク

5.0
Total RNA（ng）

可能

copy/uL（×10 3）●抽出RNAはRT-qPCR、マイクロアレイ、NGSに使用（B）Total RNA（A）miR-92a

10●フェノール及びクロロホルム不要

本品

他社品A

4.0
3.0
2.0
1.0
0.0

他社品B

本品

他社品A

他社品B

臍帯由来間葉系幹細胞をEV-Up MSCエクソソーム産生用培地［コードNo. 053-09451, 298-84001］で培養後、培養上清を回収した。回収後、PSアフィニティー法※を用いてエクソソームを精製し、本品及び他社品
でRNA抽 出 を 行 っ た。 抽 出 物 のRNA量 をRT-qPCRとQuantiFluor RNA
System（Promega）によりそれぞれ測定した。
（A）RT-qPCRによるmiR-92aの定量データ（B）QuantiFluor RNA SystemによるTotal RNA測定データ
本品は、他社品よりも高い抽出効率を示した。
TM

●溶解液

9.0mL×1本●還元剤

80μL×1本●タンパク質分解酵素液

200μL×1本●促進剤

200μL×1本●洗浄液Ⅰ

5mL×1本●洗浄液Ⅱ

5mL×2本●溶出液

1mL×2本●スピンカラム

20本●コレクションチューブ

20本＊キット以外に下記試薬が必要です。
1）2-プロパノール（コードNo. 168-21675）
2）エタノール（コードNo. 054-07225）
3）1-ブタノール（コードNo. 022-16035）■ 次世代シークエンサー（NGS）による解析
400
リード数（×10 3）

キット内容

350

miRNAリード数

400

300
200

145

100

本品

他社品A

377

300
200

本品でのみ同定できたものが184種

178

144

100

15

0

同定miRNA数

500

同定数

特

0
本品

他社品B

他社品A

他社品B

臍帯由来間葉系幹細胞をEV-Up MSCエクソソーム産生用培地［コードNo. 053-09451, 298-84001］で培養後、培養上清を回収した。回収後、PSアフィニティー法※を用いてエクソソームを精製し、本品及び他社品
でRNA抽出を行った。抽出物に対してNGS解析（Small RNA-Seq）を行った。
本品で抽出したサンプルは、他社品よりもmiRNAのリード数が多く、miRNAの同定数も多いことが示された。
TM※ホスファチジルセリン（PS）結合分子を用いて細胞外小胞を金属イオン依存的に捕捉した後、キレート剤により溶出する方法。
MagCaptureTM Exosome Isolation Kit PS Ver.2（コードNo. 290-84103）の使用により、本手法でのエクソソーム精製が行えます。
コード No.

294-84601

NEW

品

名

microRNA Extractor® Kit for Purified EV規
危格

遺伝子研究用容量

希望納入価格（円）40,00020回用

QuantiFluorはPromega Corporationの商標または登録商標です。
…2 〜 10℃保存…− 20℃保存…− 80℃保存
150 …− 150℃保存 表示がない場合は室温保存です。
…特定毒物
…毒物
…劇物
…毒薬
…劇薬 危 …危険物
…向精神薬
…特定麻薬向精神薬原料特定…化審法 第一種特定化学物質…化審法 第二種特定化学物質…化学兵器禁止法 第一種指定物質…化学兵器禁止法 第二種指定物質
毒素等 …国民保護法
覚 …覚せい剤取締法
掲載内容は、2022 年４月時点での情報です。上記以外の法律及び最新情報は、当社 HP をご参照下さい。

…カルタヘナ法収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
記載希望納入価格は本体価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol. 90 No. 2
2022 年４月 15 日 発行
発行責任者
編集責任者
発 行 所

印

36

刷

所

増田雅信
大西礼子
富士フイルム和光純薬株式会社〒 540-8605 大阪市中央区道修町三丁目 1 番 2 号
TEL.06-6203-3741（代表）URL http://fujifilm.com/ffwk
共進社印刷株式会社●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
E-mail ffwk-jiho@fujifilm.com●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。

Please contact us to get detailed information on products in this journal.

■富士フイルム和光純薬株式会社（Japan）
試薬 URL https://labchem-wako.fujifilm.com
フリーダイヤル（日本のみ）0120-052-099
フリーファックス（日本のみ）0120-052-806
E-mail ffwk-labchem-tec@fujifilm.com■Wako Overseas Offices :・FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A. Corporation http://www.wakousa.com
Toll-Free（U.S. only）+1 877 714 1920

Tel +1 804 714 1920 / Fax +1 804 271 7791

・FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH http://www.wako-chemicals.de
European Office（Neuss, Germany）：Tel +49 2131 311 0 / Fax +49 2131 311 100

Vol.90 No.2

たキットです。この最適化により、当社従来品（マイクロRNAエキストラクター ® SPキット；コードNo. 295-71701）