診療と新薬・第 50 巻

第 10 号（2013 年 10 月）

11 （953）

ピタバスタチン Ca 錠「明治」の正常イヌ及びモルモット高脂血症モデルにおける血中脂質低下作用
Meiji Seika ファルマ株式会社

打 田 光 宏蓮 沼 恵 子富 岡 聡 子

伊 藤 富 美平 塚 一 幸梅 木 祐 仁要約

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したピタバスタチン Ca 錠「明治」（試験製剤）は，高コレステロール血症及び家族性高コレステロール血症治療薬であるリバロ錠（興和株式会社，標準製剤）と有効成分を同量含有する同一剤型の後発医薬品である。
今回，正常イヌ及びモルモット高脂血症モデルを用いて，試験製剤の血中脂質に対する低下作用を標準製剤と比較検討した。
1）正常イヌを用いた血中脂質低下作用
正常イヌを用いて，試験製剤又は標準製剤をピタバスタチンカルシウムとして 1 mg/kg/ 日の用量で2 週間反復経口投与したところ，血漿中総コレステロール，LDL コレステロール，トリグリセリド及びリン脂質値は経時的に低下し，どちらの製剤も投与前値に比べ有意な低下がみられた。投与終了時点の血漿中総コレステロールの低下率は，試験製剤群及び標準製剤群で，それぞれ 26％及び 24％と同程度であった。また，その低下は 2 週間の休薬により，投与前値と同程度まで回復した。
2）モルモット高脂血症モデルを用いた血中脂質低下作用
高脂肪食を給餌して作製したモルモット高脂血症モデルを用いて，試験製剤又は標準製剤をピタバスタチンカルシウムとして 0.3 及び 3 mg/kg/ 日の用量で 2 週間反復経口投与したところ，どちらの製剤も溶媒投与群に比べ，血漿中総コレステロール及び LDL コレステロール値は用量依存的に低下した。
3 mg/kg/ 日群における，投与終了時点の血漿中総コレステロールの低下率は，試験製剤群及び標準製剤群で，それぞれ 86％及び 94％と同程度であった。
以上より，正常イヌ及びモルモット高脂血症モデルにおいて，試験製剤は血中脂質に対する低下作用を示し，その程度は標準製剤と同程度であった。このことから，臨床においても同様な治療効果を発揮することが期待される。
キーワード：ピタバスタチン，高コレステロール血症，家族性高コレステロール血症，後発医薬品【略語】LDL：Low density lipoprotein，HMG-CoA：3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A，ALT：Alanine aminotransferase，AST：Aspartate aminotransferase，HDL：High density lipoprotein

は じ め にHMG-CoA 還元酵素はコレステロール合成の律速制 し， リ ポ 蛋 白 分 泌 を 抑 制 す る と と も に 肝 臓 のLDL 受容体数を増加させ，血中コレステロール量を低下させる 1）。

酵素であり，HMG-CoA 還元酵素阻害剤は，この働

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したピタバきを阻害することで肝臓のコレステロール合成を抑スタチン Ca 錠 1 mg「明治」及びピタバスタチン

12 （954）

診療と新薬・第 50 巻

第 10 号（2013 年 10 月）

Ca 錠 2 mg「明治」（試験製剤）は，HMG-CoA 還

セリド，リン脂質，ALT 及び AST を自動分析装置

元酵素阻害剤であるリバロ錠 1 mg 及びリバロ錠 2（TBA120-FR，東芝メディカルシステムズ株式会

mg（興和株式会社，標準製剤）と有効成分を同量社）を用いて測定した。

含有する同一剤型の後発医薬品である。
今回，試験製剤及び標準製剤の非臨床薬理学的な有効性の比較を行うために，正常イヌ及びモルモッ⑶ 一般状態観察と体重測定投与及び休薬期間中，一般状態観察は毎日，体重測定は 1 週間に 1 回実施した。

ト高脂血症モデルを用いて両製剤の血中脂質に対す⑷ 統計学的方法

る低下作用を評価した。

群毎に平均値及び標準誤差を算出した。血液生化

材料及び実験方法

学検査の各項目に関して，各群の投与前値（Day‒1） に 対 す る 投 与 期 間 中 の 測 定 値 に つ い て，

1．正常イヌを用いた血中脂質低下作用の検討

Paired-t 検 定 を 実 施 し た。 検 定 は EXSAS Ver.8.0

1-1．使用薬剤（株式会社 CAC エクシケア）を用いて，有意水準試験製剤としてピタバスタチン Ca 錠 2 mg「明は両側 5％とし，5％未満（p ＜ 0.05）と 1％未満（p治」を，標準製剤としてリバロ錠 1 mg 及びリバロ錠 2 mg を使用した。
1-2．使用動物
3 〜 4 歳 の 雄 性 ビ ー グ ル 犬（Marshall＜ 0.01）とに分けて表示した。
2．モルモット高脂血症モデルを用いた血中脂質低下作用の検討
2-1．使用薬剤

BioResources 社）を 12 頭使用した。飼料は固型飼試験製剤としてピタバスタチン Ca 錠 2 mg「明料（ラボ D ストック，日本農産工業株式会社）を治」を，標準製剤としてリバロ錠 2 mg を使用した。

毎日約 250 g 給餌し，飲料水は水道水を自由に摂取

2-2．使用動物させた。血漿中総コレステロール値，体重及び一般

7 週齢の Hartley 系雄性モルモット（日本エスエ状態を基に，試験製剤又は標準製剤投与群（全 2ルシー株式会社）を 40 匹用いた。高脂血症モデル群）に 1 群 6 匹ずつ振り分けた。

を作製するために，高脂肪食として，15％パーム

1-3．試験方法

核油（不二製油株式会社，脂肪酸組成；ラウリン酸⑴投48％，ミリスチン酸 16％，オレイン酸 16％）を含

与

ピタバスタチンカルシウムとして 1 mg/kg の用有させた RC-4 固型飼料（オリエンタル酵母工業株

量となるように，試験製剤又は標準製剤を錠剤のま式会社にて作製）を自由摂取させた。通常食コント

まプルランカプセル 0 号（株式会社松屋）に充填

ロール群の動物には，RC-4 固型飼料を自由摂取さし，1 日 1 回 2 週間反復経口投与した。投与は午前せた。4 週間高脂肪食を給餌させた後，高脂肪食コ中に実施した。試験製剤は体重に応じて 2 分割し，ントロール，試験製剤又は標準製剤（それぞれ 0.31 mg 錠として使用した。投与直後に約 10 mL の水及び 3 mg/kg/ 日）群に，体重，一般状態及び血液生道水を与え，カプセルの嚥下を促した。さらに，回化学検査値を基に 1 群 6 〜 7 匹ずつ振り分けた。な復性の確認のため 2 週間の休薬期間を設定した。ピお，高脂肪食の給餌は，薬剤投与期間中も継続した。

タバスタチンカルシウムをイヌに経口投与した時の2-3．試験方法

有効用量範囲は，0.1 〜 1 mg/kg/ 日と報告されて⑴投いることから，両製剤の用量は 1 mg/kg/ 日とし試験製剤又は標準製剤をメノウ乳鉢及びメノウ乳2）

与た 。薬剤投与開始日を Day 1，その前日を Day ‒1棒を用いて磨砕した後，0.5 w/v％メチルセルローとした。

ス（MC）溶液を加えてピタバスタチンカルシウム⑵ 採血及び血液生化学検査として 0.06 又は 0.6 mg/mL の濃度に懸濁調製し薬剤投与開始前に 2 回，投与期間及び休薬期間中た。投与溶媒（0.5％ MC 溶液），試験製剤又は標準

は 1 週間に 1 回，ヘパリンを添加したシリンジを製剤を 1 日 1 回 14 日間反復経口投与した。投与容用いて橈側皮静脈から採血した。血漿を分取し，総量は 5 mL/kg とし，投与は 16：00 〜 17：00 に実コレステロール，LDL コレステロール，トリグリ施した。ピタバスタチンカルシウムをモルモットに

診療と新薬・第 50 巻

第 10 号（2013 年 10 月）（a）総コレステロール（b）LDL コレステロール

120
＊＊

10080

＃＃18LDL コレステロール（mg/dL）

総コレステロール（mg/dL）

140

＊＊

＃＃604020161412‒181522＊＊＃8＃＃642029‒14‒1815Time（Day）

Time（Day）（c）トリグリセリド（d）リン脂質4522292229300

40
リン脂質（mg/dL）

トリグリセリド（mg/dL）＊

100‒1413 （955）353025＊＊2015＃10＃250
＊＊

＊＊

200
＃＃

150

＃＃

100
50

500
‒14

‒18152229‒14‒1815Time（Day）

Time（Day）
：試験製剤

：標準製剤

平均値 ± 標準誤差（n＝6）
Day 1 〜 15 は薬剤投与期間，Day 16 〜 29 は休薬期間を示す。
＊：p＜0.05，＊＊：p＜0.01，試験製剤群について投与前値（Day ‒1）に対する Paired-t 検定#：p＜0.05，##：p＜0.01，標準製剤群について投与前値（Day ‒1）を基準とした Paired-t 検定

図 1 正常イヌにおける試験製剤及び標準製剤の血漿中脂質パラメータに対する作用

経口投与した時の有効用量範囲は，0.3 〜 3 mg/kg/日と報告されていることから，両製剤の用量は 0.3

表 1 正常イヌにおける試験製剤及び標準製剤の体重，血漿中 ALT（U/L）及び AST（U/L）に対する作用及び 3 mg/kg/ 日とした 2）。高脂肪食の摂餌開始日

項目群Day ‒1

Day 15Day 29を Day 1，その前日を Day ‒1，薬剤投与開始日を体重試験製剤
標準製剤

7.8 ± 0.3
8.8 ± 0.5

7.8 ± 0.4
8.5 ± 0.5

7.8 ± 0.3
8.6 ± 0.6

ALT試験製剤
標準製剤49.3 ± 8.1
35.0 ± 2.4

56.2 ± 9.8
40.0 ± 2.4##

43.5 ± 8.7
33.5 ± 2.7AST試験製剤
標準製剤

53.2 ± 6.7
36.3 ± 4.5

50.5 ± 5.3
38.5 ± 3.3

44.5 ± 5.1
30.7 ± 2.0Day 28 とした。
⑵ 採血及び血液生化学検査
高脂肪食の給餌開始前に 1 回（Day ‒1），高脂肪食給餌期間（投与期間中含む）は 1 週間に 1 回，ヘパリンを添加したシリンジを用いて，頚静脈から採血した。血漿を分取し，総コレステロール，LDLコレステロール及び ALT を自動分析装置で測定した。
⑶ 一般状態観察，体重及び摂餌量測定
高脂肪食開始から投薬期間終了まで，一般状態観

平均値 ± 標準誤差＃＃

：p ＜ 0.01，各群の投与前値（Day ‒1）を基準としたPaired-t 検定

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診療と新薬・第 50 巻

第 10 号（2013 年 10 月）（b）体7004065030＃20＃＃＃＃＃＃体重（g）

摂餌量（g）（a）摂 餌 量
50＃＃600550500

104500400
1271421‒1277Time（Day）

総コレステロール（mg/dL）

＃＃

＃＃

＃＃100
＃＃

80

2127（d）LDL コレステロール

604020LDL コレステロール（mg/dL）（c）総コレステロール

120

14Time（Day）

1400

重120
＃＃
＃＃

100

＃＃80

＃＃

6040200‒17142127‒17142127

Time（Day）

Time（Day）
：通常食

：高脂肪食

平均値 ± 標準誤差（通常食：n＝6，高脂肪食：n＝34）
Day ‒1 は高脂肪食の給餌前日を示す。
＃：p＜0.05，＃＃：p＜0.01，高脂肪食コントロール群について通常食群に対する Student の t 検定

図2

モルモットの各種パラメータに対する高脂肪食給餌の影響

察は毎日，体重及び摂餌量測定は 1 週間に 1 回実関における動物実験等の実施に関する基本指針」を施した。

遵守し，Meiji Seika ファルマ株式会社の動物実験⑷ 統計学的方法群毎に平均値及び標準誤差を算出した。通常食群及び高脂肪食コントロール群間で Student の t 検定

管理委員会で審査承認された方法に従い実施した。
結果を行い，高脂肪食コントロール群に対する試験製剤

1．イヌを用いた血中脂質低下作用の検討

又は標準製剤群の間では，それぞれ Dunnett の多試験製剤又は標準製剤の反復投与により，血漿中重比較検定を行った。検定は EXSAS Ver.8.0 を使総コレステロール，LDL コレステロール，トリグ用し，いずれの検定も有意水準は両側で 5％とし，リセリド及びリン脂質値は有意に低下した（図 1）。

5％未満（p ＜ 0.05）と 1％未満（p ＜ 0.01）とに分投与 2 週目の血漿中総コレステロールの低下率は，けて表示した。

試験製剤群及び標準製剤群で，それぞれ 26％及び3．動物倫理24％であった。また，これらの脂質パラメータの本試験は，厚生労働省通知 科発第 0601001 号（平低下は 2 週間の休薬により，全て投与前値まで回復

成 18 年 6 月 1 日）
「厚生労働省の所管する実施機した。試験期間を通して，両群とも一般状態及び体診療と新薬・第 50 巻

第 10 号（2013 年 10 月）（a）総コレステロール（b）LDL コレステロール

＃＃
＃＃

＃＃

120
100

＊＊80

＊＊60

＊＊
＊＊40
20140

LDL コレステロール（mg/dL）

総コレステロール（mg/dL）

160
140

15 （957）

＃＃120

＃＃

＃＃

100
＊＊80
＊＊60
＊＊40

＊＊

020027（‒1）35（8）

42（15）

27（‒1）

Time（Day）：通常食：試験製剤 0.3 mg/kg/ 日：標準製剤 0.3 mg/kg/ 日

35（8）42（15）

Time（Day）：高脂肪食コントロール：試験製剤 3 mg/kg/ 日：標準製剤 3 mg/kg/ 日

平均値 ± 標準誤差（n＝6〜7）
薬剤投与期間は Day 28 〜 41，（ ）内は薬剤投与開始日を 1 とした日数を示す。
##：p＜0.01，高脂肪食コントロール群について通常食群に対する Student の t 検定＊＊
：p＜0.01，試験製剤群について高脂肪食コントロール群に対する Dunnett の多重比較検定：p＜0.01，標準製剤群について高脂肪食コントロール群に対する Dunnett の多重比較検定

図3

モルモット高脂血症モデルにおける試験製剤及び標準製剤の血漿中総コレステロール及び LDL コレステロールに対する作用重に変化はなかった。さらに，標準製剤群で Day
15 の ALT 値は，統計学的有意に増加したものの，

表 2 モルモット高脂血症モデルにおける試験製剤及び標準製剤の血漿中 ALT（U/L）に対する作用施設背景データの範囲内であり，その程度は僅かで群Day 27（‒1）

Day 42（15）あった（表 1）。試験期間を通して，試験製剤又は通 常 食

37.5 ± 1.3

56.5 ± 8.8

標準製剤投与に起因した毒性を示唆する変化はみら

高脂肪食コントロール

104.4 ± 19.8##

113.9 ± 20.5#

れなかった。

試験製剤

0.3 mg/kg/ 日
3 mg/kg/ 日

71.2 ± 9.3
87.6 ± 16.8

93.5 ± 17.7
74.6 ± 3.2

標準製剤

0.3 mg/kg/ 日
3 mg/kg/ 日

79.5 ± 15.6
81.7 ± 12.6

87.7 ± 22.6
79.3 ± 8.5

2．モルモット高脂血症モデルを用いた血中脂質低下作用の検討
既報 3）を参考に，餌を通常食から高脂肪食に変更することで，高脂血症モデルを作製した。摂餌量は変更初日（Day 1 〜 2 の摂餌量）に大きく低下し，その後も通常食に比べ低値で推移した。高脂肪食群の体重は，通常食群に比べ，大きな差はみられな

平均値 ± 標準誤差
薬剤投与期間は Day 28 〜 41
（ ）内は薬剤投与開始日を 1 とした日数を示す。
＃：p ＜ 0.05，＃＃：p ＜ 0.01，高脂肪食コントロール群について通常食群に対する Student の t 検定

かったものの，高脂肪食群の血漿中総コレステロー
ル及び LDL コレステロール値は経時的に増加した

肪食コントロール群の ALT 値は，通常食群に比（図 2）。試験製剤又は標準製剤の 0.3 及び 3 mg/kg/べ，高値を示した（表 2）が，全ての群で一般状態

日の反復投与により，血漿中総コレステロール及び又は体重変動に異常は認められなかった。試験期間

LDL コレステロール値は経時的かつ用量依存的にを通して，試験製剤又は標準製剤投与に起因した毒低下した。投与 2 週目の血漿中コレステロールの低性を示唆する変化はみられなかった。

下率は，試験製剤群及び標準製剤群の 3 mg/kg/ 日で，それぞれ 86％及び 94％であった（図 3）。高脂16 （958）

診療と新薬・第 50 巻

考第 10 号（2013 年 10 月）

標準製剤をピタバスタチンカルシウムとして 0.3 及察

び 3 mg/kg/ 日の用量で 2 週間の反復経口投与した

HMG-CoA 還元酵素阻害剤であるピタバスタチン

ところ，血漿中総コレステロール及び LDL コレス

カルシウムは，高脂血症患者並びに家族性高コレス

テロール値は用量依存的に低下し，その程度は両製テロール血症患者に対して優れた血中コレステロー剤で同様であった。また，モルモットの一般状態，

1）

ル低下作用を示すことが報告されている 。今回，体重，ALT は，両製剤群とも試験期間を通して，

Meiji Seika ファルマ株式会社が後発医薬品として毒性学的に有意な変動はみられず，副作用を示唆す開発したピタバスタチン Ca 錠「明治」（試験製剤）

る変化は認められなかった。

が，イヌ及びモルモットにおいて血中脂質の低下作

本試験のモルモット高脂血症モデルは，既報 3）の用を示すこと，その作用が有効成分を同量含有する方法を参考に作製した。高脂肪食群の摂餌量は，通リバロ錠（標準製剤）とほぼ同様であることを明ら常食群に比べ，餌を変更した初日に一時的に大きくかにした。

低下し，その後も低値で推移した。通常食（RC-4

イヌは錠剤をそのまま経口投与できる大型動物で固 型 飼 料 ） を 285 kcal/100 g， 高 脂 肪 食 を 381あり，より臨床での服薬に近い条件下で有効性を評kcal/100 g として，摂取カロリーを算出したとこ

価できることから，イヌを用いて血中脂質低下作用ろ，高脂肪食給餌開始 4 週目（Day 27）の摂取カについて，試験製剤と標準製剤とを比較した。試験

ロリーは，通常食群で 134 kcal/day，高脂肪食群で製剤又は標準製剤を，ピタバスタチンカルシウムと127 kcal/day と，同程度であった。血漿中総コレス

して 1 mg/kg/ 日の用量で 2 週間反復経口投与したテロール，LDL コレステロールは Day 27 の時点でところ，血漿中総コレステロール，LDL コレステ有意に高値を示したため，高脂血症病態は成立した

ロール，トリグリセリド及びリン脂質値は低下し，と考えられた。本試験では，本モデルにおいて試験その程度はいずれのパラメータにおいても両製剤で製剤の血中脂質に対する低下作用が示され，その程同様であった。また，2 週間の休薬により，全ての度は標準製剤と同様であることが確認された。

パラメータが投与前値まで回復したことから，これさらに，製剤の安全性評価として，6 週齢 SD 系

らの低下は薬剤の作用によるものであることが示唆

雄性ラットを用いて試験製剤及び標準製剤の単回投された。また，イヌの一般状態，体重，ALT 及び与毒性試験を実施した。一般状態，体重推移及び剖AST は，両製剤群とも試験期間を通して毒性学的検による肉眼的所見について評価を行ったが，両製に有意な変動がみられず，副作用を示唆する変化は剤とも 1 mg/kg（臨床最大用量の 10 倍以上）の用認められなかった。

量において，何ら毒性を示す変化は認められなかっリポ蛋白の組成は動物種により大きく異なり，た。このことから，標準製剤と比較して，試験製剤ラットやマウスではコレステロールのほとんどがが重篤な毒性を示す可能性は低いと考えられた。

HDL として運搬されるが，ヒトやモルモットでは以上より，試験製剤は，正常イヌ及びモルモット

コレステロールの大部分が LDL として運搬されて高脂血症モデルにおいて標準製剤と同程度の有効性いる

2）3）。さらに，モルモットではリポ蛋白の代謝を示した。さらに，いずれの試験系においても副作に lecithin-cholesterol acyltransferase（LCAT），用を示唆する変化は認められなかった。これらのこcholesteryl ester transfer protein（CETP） 及 びとから，ピタバスタチン Ca 錠「明治」は，臨床にLipoprotein lipase（LPL）などの脂質代謝酵素が関おいても標準製剤と同様の治療効果を発揮し，高コ与していることが報告されており，ヒトと類似した

レステロール血症及び家族性高コレステロール血症リポ蛋白代謝であることが報告されている

4）5）。このような類似性から，げっ歯類の中でもモルモットの治療に貢献するものと期待される。
参 考 文 献はヒトにおける血中脂質低下作用を類推するための試験系として適切であると考えられた。
そこで，モルモット高脂血症モデルを用いて，血中脂質の低下作用について検討した。試験製剤又は1）山崎裕之，藤野秀樹，金澤瑞穂，玉木太郎，佐藤文泰，鈴木幹夫，北原真樹：新規 HMG-CoA 還元酵素阻害薬
ピタバスタチン（リバロ錠）の薬理および薬物動態的診療と新薬・第 50 巻

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2）医療用医薬品の承認審査情報，申請資料概要「リバロ第 10 号（2013 年 10 月）

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