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診療と新薬・第 52 巻

第 1 号（2015 年 1 月）

レトロゾール 2.5 mg「明治」のDMBA 誘発ラット乳腺腫瘍に対する抗腫瘍効果の検討
Meiji Seika ファルマ株式会社

倉田靖

土屋敏行

奥山裕一

斉藤健

酒井東日

青山式孝
要

間中正恵

旨

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したレトロゾール 2.5 mg「明治」（以下，Letrozole「Meiji」）Ⓡ
について，先発医薬品であるノバルティス ファーマ株式会社のフェマーラ 錠 2.5 mg（以下，Femara Ⓡ ）を対照に，7,12-Dimethylbenz[a ]anthracene（DMBA）誘発ラット乳腺腫瘍モデルを用いて抗腫瘍効果を比較検討した。
7 週齢の Crl:CD（SD）雌ラットに DMBA を 75 mg/kg の用量で 1 回経口投与後，外表観察で乳腺腫瘤（直径 8 〜 20 mm の腫瘤が 1 〜 3 個）が確認できた動物について群分けを実施した。
群分け翌日より Femara Ⓡもしくは Letrozole「Meiji」ともに 1.0 mg/kg の用量を 1 日 2 回（午前及び午後）に分けて 5 週間反復経口投与した。媒体対照群は投与期間中に腫瘍径を測定し，各群に発生した乳腺腫瘤の発生個数と発生した乳腺腫瘤の総体積の推移により，乳腺腫瘍発生に対する両製剤投与の影響について比較検討した。
その結果，Letrozole「Meiji」投与群では媒体対照群と比較して有意な腫瘍増殖抑制効果が観察された。Letrozole「Meiji」の平均総腫瘍体積の推移と 1 匹あたりの腫瘍発生個数を標準製剤である
Femara Ⓡ投与群と比較すると，ほぼ同様の著明な抑制効果が示され，Letrozole「Meiji」と Femara Ⓡのラット乳腺腫瘍発生に対する抗腫瘍効果は同様であると考えられた。
以上から，Letrozole「Meiji」のラット乳腺腫瘍発生に対する抗腫瘍効果は先発医薬品である
Femara Ⓡと同様であることが示された。
キーワード：レトロゾール，アロマターゼ阻害剤，抗腫瘍効果，後発医薬品，DMBA 誘発乳腺腫瘍

す る 抗 腫 瘍 作 用 に つ い て，7,12-Dimethylbenz[a ]は じ め にanthracene（DMBA）誘発のラット乳腺腫瘍モデルⓇ

アロマターゼ阻害剤であるフェマーラ 錠 2.5 mg（以下，Femara Ⓡ ）は，エストロゲン合成経路中の系を用いて，標準製剤である Femara Ⓡ と比較検討した。

アロマターゼを阻害し，血漿中等のエストロゲン濃材料及び試験方法

度を低下させることにより，エストロゲン依存性の乳がんに抗腫瘍効果を発揮する 1）2）。

1．使用製剤

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したレトロ試 験 製 剤 と し て レ ト ロ ゾ ー ル 2.5 mg「 明 治 」

ゾール 2.5 mg「明治」（以下，Letrozole「Meiji」）（Meiji Seika ファルマ株式会社）を，標準製剤としⓇは，先発医薬品である Femara と，有効成分であてフェマーラⓇ 錠 2.5 mg（ノバルティス ファーマ

るレトロゾールを同量含有する同一剤型の製剤であ株式会社）を使用した。

る。本稿では，Letrozole「Meiji」の乳腺腫瘍に対診療と新薬・第 52 巻

第 1 号（2015 年 1 月）

15 （15）2．腫瘍起始物質mL/kg）は直近の体重に基づいて個体別に算出し乳腺腫瘍起始物質は DMBA（東京化成工業株式た。 媒 体 対 照 群 の 動 物 に は 媒 体 を 同 じ 投 与 ス ケ会社）を使用した。

ジュール及び投与経路で投与した。なお，投与量及び投与期間は既報を参考に設定した 1）2）。

3．使用動物
6 週齢の雌性 Crl:CD（SD）ラット（日本チャール4）腫瘍径の測定

ス・リバー株式会社）を 6 日間の馴化飼育の後，試毎週 2 回，すべての動物について，触診して確認験に供した。生後 50 〜 65 日の雌性 SD ラットにできるすべての腫瘤の発生部位及び数を個体別に記DMBA を投与した場合，乳腺腫瘍の発生率が高い録するとともに，確認した腫瘤は電子ノギスを用い

3）〔長径て長径及び短径を測定し，腫瘤体積（mm3）ことが報告されている 。
試験期間中は，体重測定，外観，行動などの一般（mm）× 短径（mm）2 × 0.5〕を算出した。各個体で発生した腫瘤体積の総和を算出し，各群における症状観察を行った。
動物は，温度 23 ± 3℃，相対湿度 50 ± 15％，照腫瘤のサイズの推移を比較した。

明時間 12 時間 / 日（7:00 〜 19:00）の環境下で飼5．統計学的処理

育し，飲料水は水道水を，飼料は固型飼料 MF（オ体重，子宮重量，腫瘍に関するデータ（体積，個リエンタル酵母工業株式会社）を自由摂取させた。

数，重量）における媒体対照群と各製剤投与群間の4．試験方法

差の検定は，Bartlett 法による等分散検定（1％有1）投与液の調製

意水準）により等分散の場合はパラメトリックのDMBA はコーンオイル（ナカライテスク株式会

Dunnett 法による両側検定を行い，不等分散の場合社）に溶解し，DMBA 投与液（15 mg/mL）を調製はノンパラメトリックの Steel 法による両側検定をした。

行った。同様のデータで製剤間の差の検定は F 検Ⓡ

Letrozole「Meiji」及び Femara 各製剤の投与液定を用い，等分散である場合は Student の t 検定

は，各製剤の錠（2.5 mg）を乳鉢にて粉砕し，媒体（両側）を用い，等分散でない場合には Welch 検定として日本薬局方注射用水（株式会社大塚製薬工（両側）を用いて解析した。有意水準は 5％（P ＜場）を用い，0.1 mg/mL の濃度となるように調製0.05）又は 1％（P ＜ 0.01）のレベルで判定した。

した。

解析には StatLight シリーズ（ユックムス社）を用いた。

2）DMBA 誘発乳腺腫瘍ラットの作製
DMBA の投与量及び投与方法は既報

1）3）に基づ

6．動物倫理き，試験開始時に 7 週齢の雌性ラットに DMBA を

本実験は，株式会社 DIMS 医科学研究所におい75 mg/kg の用量で経口ゾンデを用いて 1 回強制経て実施された。本実験は「動物の愛護及び管理に関口投与した。本系で誘発された乳腺腫瘍はヒト乳がする法律（昭和 48 年 10 月法律第 105 号）」，「実験

んでみられるホルモン（エストロゲン）依存性の増動物の飼養及び保管並びに苦痛の軽減に関する基準

殖と病理組織型に類似性が認められており，乳がん（平成 18 年 4 月環境省告示第 88 号）」，「厚生労働治療薬の非臨床研究によく用いられる動物モデルで省の所管する実施機関における動物実験等の実施に4）ある 。

関する基本指針」（厚生労働省大臣官房厚生科学課3）投与方法

長 通 知 平 成 18 年 6 月 科 発 第 0601005 号 ） 並 び にDMBA を経口投与したラットの外表観察で乳腺「動物実験の適正な実施に向けたガイドライン」（日腫瘤（直径 8 〜 20 mm の腫瘤が 1 〜 3 個）が確認

本学術会議できた動物を選択して群分けを実施し，1.0 mg/kg/

科学研究所動物実験指針（平成 26 年 5 月 2 日）にⓇ

平成 18 年 6 月）に基づいた DIMS 医

日 の Letrozole「Meiji」 及 び Femara を 5 週 間，1従い，同研究所の実験動物委員会の承認を得て実施

日 2 回（午前及び午後）に分けて，反復経口投与しされた。

た。経時的に触診し，乳腺に発生した腫瘤の個数と各々の体積測定を行い，乳腺腫瘍発生に対する両製剤投与の影響を検討した。両製剤の投与容量（5結果

投与期間中に被験物質の投与に起因する顕著な一16 （16）

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第 1 号（2015 年 1 月）

16000
Total tumor volume (mm3）Vehicle control
14000

Letrozole 「Meiji」 1.0 mg/kg/day
Femara12000

1.0 mg/kg/day

10000
8000
6000
4000
2000
*

0026**
**
**
**
**
**
**
**
91316
20**
23**
Days after start of treatment

**
**
27

**
**
30

**
34**

Daily total dose of 1.0 mg/kg test compound was halved. Rats with DMBA-induced mammary
tumors were administered orally with vehicle, Letrozole「Meiji」or Femara Ⓡ twice daily for
34 concecutive days.
Each value represents the mean ± SD.
Signiﬁcant diﬀerence from the value in vehicle control group at the same time point.
＊，＊＊ : P < 0.05 and 0.01, respectively
No significant difference in any mean total tumor volumes between Letrozole「Meiji」andFemara Ⓡ groups.

Fig.1 Eﬀects of 1.0 mg/kg Letrozole「Meiji」or Femara Ⓡ treatment on the mean tumor
volume of DMBA-induced mammary tumors in female SD rats.

8Vehicle control
Number of tumors per rat

7Letrozole 「Meiji」 1.0 mg/kg/day
Femara6

1.0 mg/kg/day

5432*
10026**
**

**

**
**
913162023Days after start of treatment******

**
**
27

**
**
30

**
**
34

Each value represents the mean ± SD.
Signiﬁcant diﬀerence from the value in vehicle control group at the same time point.
＊，＊＊ : P < 0.05 and 0.01, respectively
No signiﬁcant diﬀerence in any mean number of tumors between Letrozole「Meiji」andFemara Ⓡ groups.

Fig.2 Eﬀects of 1.0 mg/kg Letrozole「Meiji」or Femara Ⓡ treatment on the mean numberof DMBA-induced mammary tumors per rat in female SD rats.

診療と新薬・第 52 巻

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Table 1 Eﬀects of Letrozole「Meiji」or Femara Ⓡ treatment on the multiplicity and total
volume of DMBA-induced mammary tumor in female SD rats on day 34 of treatment.
GroupsDose

No. ofTotal no.

（mg/kg/day）ratsof tumors （no. of tumor/rat）

01.0
1.0

13
13
14

Vehicle control
Letrozole「Meiji」
Femara Ⓡ

Multiplicity

55
32Total volumeof tumor（mm3）4.2 ± 2.7
0.2 ± 0.4 ＊＊

8351.6 ± 6477.3
25.7 ± 57.3 ＊＊0.1 ± 0.5 ＊＊60.4 ± 226 ＊＊Each value represents the mean ± SD.
＊＊: Signiﬁcantly diﬀerent from vehicle control at P < 0. 01.
No signiﬁcant diﬀerence in any mean values between Letrozole「Meiji」and Femara Ⓡ groups.

Table 2Eﬀects of Letrozole「Meiji」or Femara Ⓡ treatment on the body weights, and uterine
and mammary tumor weights in female SD rats.
Body weights（g）

GroupsDose（mg/kg/day）

InitialVehicle control
Letrozole「Meiji」
Femara Ⓡ

01.0
1.0

289.5 ± 24.9
293.7 ± 24.7
290.7 ± 36.5

FinalUterine weight（g）Tumor weight（g）

294.8 ± 30.6
374.2 ± 23.6 ＊＊0.564 ± 0.274
0.187 ± 0.021 ＊＊9.978 ± 7.763
0.104 ± 0.113 ＊＊365.9 ± 42.5 ＊＊0.184 ± 0.025 ＊＊0.232 ± 0.573 ＊＊Each value represents the mean ± SD.
＊＊: Signiﬁcantly diﬀerent from vehicle control at P < 0. 01.
No signiﬁcant diﬀerence in any mean values between Letrozole「Meiji」and Femara Ⓡ groups.

般症状の変化は認められなかった。
各群における平均総腫瘍体積及び平均腫瘍個数の推移を各々 Fig.1 と 2 に示した。また，各群の最終認めなかった。
考察

投与日（投与 34 日目）の総腫瘍個数と 1 匹当たり

Meiji Seika フ ァ ル マ 株 式 会 社 が 開 発 し たの平均腫瘍個数及び総腫瘍体積を Table 1 に，各群

Letrozole「Meiji」は，閉経後乳がん治療剤であるの平均体重（試験開始時及び終了時）と剖検時に摘Femara Ⓡの後発医薬品である。後発医薬品は，薬食出した子宮及びすべての腫瘍の平均重量を Table 2

発第 0331015 号（平成 17 年 3 月 31 日）「医薬品のに示した。

承認申請について」に基づき，規格及び試験方法のLetrozole「Meiji」投与群の総腫瘍体積は投与 6設定，安定性試験（加速試験），生物学的同等性試日目から，腫瘍個数は投与 9 日目から，媒体対照群験を実施し，先発医薬品と同等であることが認めらに比較して統計学的に有意な抑制効果を示し，そのれ，製造販売承認される医薬品である。一方，後発後，最終投与 34 日目まで明瞭な抗腫瘍効果が認め医薬品は，これら承認申請に必要なデータのほかられた。また，剖検時に摘出した腫瘍の重量においに，可能な限り品質や治療効果，副作用に関する情ても Letrozole「Meiji」投与群は媒体対照群に比較報提供をすることが望ましいと考えられる。

し て 有 意 な 減 少 が 認 め ら れ た。 こ れ ら Letrozole

本稿ではさらに有効性面から DMBA 誘発ラット「Meiji」でみられた抗腫瘍効果は，標準製剤である乳腺腫瘍モデル系を用いて先発品と同様の抗腫瘍効Ⓡ

Femara 投与群と同様であり，両製剤間で有意な差は認められなかった。

果を示すかを検討した。
Letrozole「Meiji」は投与期間中に計測した腫瘍

各群の剖検時の平均体重は媒体対照群と比較して体積及び腫瘍個数の推移において，媒体対照群と比両製剤とも増加を示したが，一方，子宮重量は両製較して有意な抑制効果がみられた。また，剖検時の剤群ともに媒体対照群に比較して有意な減少が認め腫瘍の重量の比較でも有意な減少が認められ，乳腺られた。これらの変化は両製剤群間では有意な差を腫瘍の縮小効果が観察され，さらに，これら抗腫瘍18 （18）診療と新薬・第 52 巻効果とともに子宮重量についても有意な低値がみられた。

第 1 号（2015 年 1 月）

な毒性は示さなかった。
以上から，DMBA 誘発乳腺腫瘍ラット系を用いDMBA 誘発乳腺腫瘍ラット系は臨床で用いられた抗腫瘍評価におけるレトロゾール 2.5 mg「明治」ている様々なアロマターゼ阻害剤の薬効を裏付けるの薬効は，標準製剤であるフェマーラⓇ錠 2.5 mg と試験系として汎用されている 4）。また，本モデルで同様と考えられた。

発生したラットの乳腺腫瘍はホルモン依存性で，ヒ謝

辞トの乳腺腫瘍と類似の組織型を示すことが報告されている 3）。以前の本系を用いた Femara Ⓡ の報告では，抗腫瘍効果を示したラットにおいて血漿中のエ本研究実施にあたりご協力いただいた株式会社 DIMS 医科学研究所の萩原昭裕氏，今井則夫氏，竹之内紀子氏，古川文夫氏に深く感謝いたします。

ストロゲンの濃度の低下と子宮重量の減少が観察さ文れている 2）。したがって，本試験でみられた子宮重量の減少は血中のエストロゲン濃度の低下を間接的に示す結果であり，本製剤の DMBA 誘発乳腺腫瘍

献1）医薬品インタビューフォーム フェマーラⓇ錠 2.5 mg
ノバルティスファーマ株式会社（2010 年 1 月新様式第 4 版）．

に対する増殖抑制効果はアロマターゼ阻害作用に伴2）Schieweck K, Bhatnagar AS, Batzl C, Lang M: Anti-

うエストロゲンの低下に基づくものと考えられた。

tumor and endocrine eﬀects of non-steroidal aromatase

Letrozole「Meiji」投与群に認められた抗腫瘍効

inhibitors on estrogen-dependent rat mammary tumors.

果に伴う子宮重量の減少は標準製剤である
Femara Ⓡ 投 与 群 と 同 様 で あ り， こ の こ と か ら
Letrozole「Meiji」のエストロゲン依存性の DMBA
誘発乳腺腫瘍に対する薬効は標準製剤と同様のメカニズムであると考えられた。
Letrozole「Meiji」及び Femara Ⓡ 投与群の各平均体重は媒体対照群と比較して増加を認めたが，両製剤間に差はなく，本試験条件下では両製剤とも顕著

J Steroid Biochem Molec Biol 44: 633-636, 1993.
3）Russo J, Gusterson BA, Rogers AE, Russo IH, Wellings
SR, van Zwieten MJ: Comparative study of human andrat mammary tumorigenesis. Lab Invest 62: 244-278,1990.
4）Dukes M: The relevance of preclinical models to thetreatment of postmenopausal breast cancer. Oncology
54 (Suppl 2): 6-10, 1997.