Sept. 2022

〈原

THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

75―3

45（ 1 ）

著〉

Vancomycin resistant Enterococcus spp. スクリーニング培地の評価
上田舞衣子 1,2）・村谷哲郎 1,2,3）・朔晴久 1,2,3）

ひびき AMR 研究会

1）

ひびき臨床微生物研究会

2）

愛信会小倉到津病院

3）（2022 年 9 月 11 日受付）

VRE による院内感染に関する報告は国内でも多数あり，早期に検出し封じ込める必要がある耐性菌である。Vancomycin resistant Enterococcus spp.（VRE）保菌者が見つかった時や入院時耐性菌スクリーニングとしては，全株分離同定，薬剤感受性試験を行うことは，効率的ではなく，VRE 選択培地の使用が有用である。今回，カナダ
で 既 に 使 用 さ れ て い る 新 し い VRE 選 択 培 地 で あ る「CHROMagar™ VRE blue
（CHROMagar）」（CH-blue）を評価する機会を得たので，既存の関東化学が販売して（CH-VRE）および日本ベクトン・ディッ
いる「CHROMagar™ VRE（CHROMagar）」
キンソンの「BD BBL™ VRE 選択培地（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）」（BD-VRE）を対照として，各種検討を行った。vanA, vanB, vanD を保有する 153 株およびそれらを保有しない Enterococcus gallinarum 25 株，Enterococcus casseliﬂavus 25
株を含む wild type 114 株の計 267 株を用いた。これらの菌株は，ミスラ法に準じた方法で血液寒天培地，CH-VRE, CH-blue, BD-VRE の 4 種類の培地を用い菌の発育を評価した。
感度は外来性 VCM 耐性因子 vanA, vanB, vanD 保有株を検出できるか否かとし，特異度は外来性 VCM 耐性因子を有さない株（vanC 保有株を含む）を検出しないこととした。108 cfu/spot では 3 種類の培地とも感度 97% 以上，106 cfu/spot では 93% 以上であった。103 cfu/spot では少し感度は落ちたが，82.4〜85.0% であった。特異度は，CH-

blue は 106 cfu/spot でも 100% であり，CH-VRE の 83.3%，BD-VRE の 99.1% よりも優れていた。103 cfu/spot では，CH-blue および BD-VRE の特異度は 100% であったが，CH-VRE は 92.1% であった。カナダでは既に使用されている CH-blue は，現在使用されている CH-VRE と比較して，VanC 型の発育を阻止するという点において，明らかに優れていた。また，CH-blue は VCM の MIC が低い vanB 保有 E. faecium に関しては，106 cfu/spot での検出感度は，CH-VRE よりは劣るものの 108 cfu/spot では同等であり，臨床現場で使用するには優れた培地であり，BD-VRE と同等の性能を有する選
択培地であると考えられた。

46（ 2 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

75―3

Sept. 2022

めて分離された 3）。VRE の VCM 耐性機序は，ペ序文

プチドグリカンモノマーのペンタペプチド末端のd-Ala が d-Ser または d-lactate に置換することによ
バ ン コ マ イ シ ン（VCM）は， 1956 年 に 放 線

り，VCM の親和性が低下することによるもので菌 の Streptomyces orientalis の 培 養 ろ 液 中 か らある。VRE は Ligase のタイプにより，VanA, B, C,

分離されたグリコペプチド系抗生物質である。 D, E, G, L, M, N の 9 種類のタイプが報告されていStaphylococcus aureus を含むグラム陽性菌に対しる 4）。ペンタペプチド末端が d-lactate に置換したて優れた抗菌力を有するが，腎毒性があり，有効

VanA, B, D, M タ イ プ は VCM の 耐 性 度 が 高 く，

な濃度範囲が狭いため，同様の抗菌スペクトルを

VanC, E, G は d-Ser に 置 換 し た タ イ プ で あ り，有し，安全性の高いβ-lactamase に安定なペニシリ

VCM の耐性度は低い。また，vanC は菌種特異的

ンやセフェム系が存在したため，国内では使用さに染色体上に存在し自然耐性であるが，その他はれていなかった。1980 年代の中盤以降より，メチ

外来遺伝子であり，様々な菌種から見出されていシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）が増加した

る。VCM の耐性度が高く，院内感染に関する報告ことより，欧米で使用されていた注射用 VCM のが多いのは，vanA および vanB 保有 VRE である。

使用が待望され，1991 年より，国内でも使用でき

海外では vanD が E. faecalis, E. faecium, E. avium,

るようになった。その後，MRSA に有効な薬剤とE. raﬃnosus, E. gallinarum など様々な菌種に関しして，テイコプラニン，アルベカシン，リネゾリて報告されている 5,6）ことから，今後注意が必要

ド，ダプトマイシンなどが上市されたが，VCMである。

は現在でも重症感染症を含む MRSA 感染症の第Enterococcus spp. は，腸管内常在菌であり，便一選択薬として推奨されている 。また現在でから多量に排泄されるので，便から Enterococcus

は，適応菌種も拡大され，添付文書では，MRSA

spp. が分離されても，通常は薬剤感受性試験はもだけでなく，メチシリン耐性コアグラーゼ陰性ブ

ちろん，同定も行わない。したがって，VRE が見

1）

ドウ球菌（MRCNS），ペニシリン耐性肺炎球菌， つかるのは，尿や血液培養などから分離された場

MRSA または MRCNS 感染が疑われる発熱性好合に同定および薬剤感受性試験を実施した時であ

中球減少症となっている。

る。腸管内では乳酸菌の一種として働いており，

VCM は，細菌の細胞膜の外側に存在する膜構

病原性は低いものの，臓器移植後の患者，免疫低造である細胞壁の構成成分であるムレインモノ下患者では，重症感染症の起炎菌となり得ること

マーと水素結合して，細胞壁の構築を阻害する。 が知られており 7），院内感染対策が重要な耐性菌

VCM の作用機序は，細菌細胞壁のペプチドグリ

である 8）。VRE 保菌者が見つかった時や入院時耐カンの前駆体であるペプチドグリカンモノマーの性菌スクリーニングとしては，全株分離同定，

ペ ン タ ペ プ チ ド l-Ala-d-Glu-l-Lys-d-Ala-d-Ala の

薬剤感受性試験を行うことは，効率的ではなく，4 番目と 5 番目の -d-Ala-d-Ala 部位に水素結合する

VRE 選択培地の使用が有用である。今回，カナダ

ことにあり，その結果ペプチドグリカンモノマー

で既に使用されている新しい VRE 選択培地であと架橋酵素の結合を阻害し，細菌の発育を阻害す

る 「CHROMagar™ VRE blue （CHROMagar）」

る。VCM-resistant Enterococcus spp.（VRE）とは， （CH-blue）を評価する機会を得たので，既存のVCM に耐性を獲得した Enterococcus spp. の総称

関東化学が販売している「CHROMagar™ VREである。1988 年に英国で 2），本邦では 1996 年に初 （CHROMagar）」（CH-VRE）お よ び 日 本 ベ ク トSept. 2022

THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

47（ 3 ）

75―3

ン・ディッキンソンの「BD BBL™ VRE 選択培地

Table 2 に示す primer を用い PCR 法により決定し（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）」
（BD-

た。

VRE）を対照として，各種検討を行った。
2. 試験方法

材料と方法

凍結保存されている被検菌を血液寒天培地に接種し，35°C1 晩培養した菌株を用いた。血液寒天

1. 使用菌株

培 地，CH-VRE, CH-blue, BD-VRE の 4 種 類 の 培

ひびき臨床微生物研究会共同研究として収集さ地を用い，ミスラ法 13）に準じた方法で菌の発育をれた 1998 年〜2019 年までに日本国内の医療機関評価した。すなわち，被検菌を 0.9% 生理食塩水ににて分離された VRE を含む Enterococcus spp. を懸濁し，McFarland 0.5 の菌液を作成した。この菌用いた。収集株の中から，同一患者同一菌種は液 0.1 mL を 0.9% 生理食塩液 0.9 mL に添加するこ1 株とし，同時期の同一施設由来株をなるべく避とにより，10 倍希釈液 5 段階作成した。それぞれけ，Table 1 に 示 す vanA, vanB, vanD を 保 有 す るの培地を 6 分画し，4 種類の培地に薄い濃度から

153 株 お よ び そ れ ら を 保 有 し な い Enterococcus

10 μL ずつ滴下した。すなわち原液は 106 cfu/spot

gallinarum 25 株， Enterococcus casseliﬂavus 25 株となる。35°C 通常大気で 48 時間培養後に菌の発を含む wild type 114 株の計 267 株を用いた。vanA ,育を判定した。また，最高濃度で発育しなかった

9）

10）

11）

9）

12）

vanB , vanD , vanC1 , vanC2に つ い て は， vanA および vanB 保有株については，107 およびTable 1. Used strains
No. of isolates
VanA

VanB

VanD

Enterococcus faecalisEnterococcus faecium
Enterococcus avium
Enterococcus raﬃnosus
Enterococcus gallinarum
Enterococcus casseliﬂavus

28
31
14
19
5

22
29

5

Total

97

51

VanC
alone

25
25
5

50

non

Total

35
26
1
2

90
86
15
21
30
25

64

267

Table 2. Primers used in this study for detection of diﬀerent resistancegenes by PCR-based method
Gene

Primer nameNucleoteide sequence（5′–3′）Size of PCR product（bp）

Reference

vanA

VanA-173F
VanA-908R

GAATGGGAAAACGACAATTGCGTACAATGCGGCCGTTA

736

9

vanB

VanB-148F
VanB-683R

AAGCTATGCAAGAAGCCATG
CCGACAATCAAATCATCCTC

536

10

vanD

VanD-396F
VanD-856R

TAAGGCGCTTGCATATACCGTGCAGCCAAGTATCCGGTAA

461

11

vanC1

VanC1-139F
VanC1-967R

TGGTATTGGTATCAAGGAAACC
CTTCCGCCATCATAGCT829

This study
9

vanC2

VanC2-318F
VanC2-801R

CGGGGAAGATGGCAGTATCGCAGGGACGGTGATTTT

484

12

48（ 4 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

108 cfu/spot についても実施した。1 コロニーでも75―3

Sept. 2022

Fig. 1. Results of Misraʼs method.

発育を認めた場合は，陽性と判定した。また，

CH-VRE の 添 付 文 書 で は， vanA お よ び vanB 保
有 E. faecalis/E. faecium の コ ロ ニ ー は 藤 色，

E. gallinarum/E. casseliﬂavus のコロニーは青色また は 発 育 抑 制 と 記 載 さ れ て い る が，vanA 保 有

E. faecalis で 青 色 の コ ロ ニ ー， E. gallinarum,
E. casseliﬂavus でピンク色のコロニーを形成する株が複数存在し，また，ピンク色と青色の中間色を示す株も多数存在したので，CH-VRE に発育するピンク色から青色のコロニーはすべて発育とし，他の 2 種類の培地も含め，無色のコロニーは除外した。
いずれかの培地に発育しなかった株については，

Upper: Enterococcus faecalis SVR1117（VanA type, MIC of vancomycin
256 μg/mL）
Lower: Enterococcus faecalis SVR1534（VanB type, MIC of vancomycin
4 μg/mL）
A: Blood agar, B: BD BBL™ VRE selective Agar, C: CHROMagar™
VRE, D: CHROMagar™ VRE Blue
Inoculum size: 1, 10 6 cfu/spot; 2, 10 5 cfu/spot; 3, 10 4 cfu/spot;
4, 103 cfu/spot; 5, 102 cfu/spot; 6, 10 cfu/spot.

血液寒天培地に発育したコロニーから煮沸法により， DNA を 抽 出 し， Table 2 に 示 す vanA, vanB,

すべての培地で全株発育を認めた。E. avium では，vanD の primer を用いて，PCR を実施し，陰性でCH-VRE 培地で 105 cfu/spot まで 2 株発育せず，そあった場合は，プラスミド脱落株として，wildのうち 1 株は，108 cfu/spot でも発育しなかった。

type 株として集計した。

E. raﬃnosus では，CH-VRE および CH-blue で 2 株

薬 剤 感 受 性 測 定 は， Clinical and Laboratory

Standards Institute（CLSI）に準じた寒天平板希釈法で測定した 14）。

は，108 cfu/spot でも発育を認めなかった。

vanB 保 有 株 に つ い て は， E. faecalis 22 株，
E. faecium については VCM の MIC が 2 μg/mL 以下の 17 株 と VCM の MIC が 4 μg/mL 以 上 の 12 株 の結果

3 群に分けて示す。E. faecalis では，105 cfu/spot まではすべての培地で発育を認めた。VCM の MIC

Figure 1 にミスラ法実施時の結果を示す。上段はが 2 μg/mL 以 下 の E. faecium に つ い て は， MIC

VCM の MIC が 256 μg/mL の vanA 保 有 E. faecalis

1 μg/mL の 1 株は 108 cfu/spot でも 3 種類いずれのであり，3 種類いずれの培地とも 10 cfu/spot まで

培地でも発育を認めなかった。これらの株につい非選択培地である血液寒天培地と同等の発育を認て，血液寒天培地に発育したコロニーから DNA

め て い る が，下 段 の VCM の MIC が 4 μg/mL のtemplate をとり，PCR を行ったところ，全株 vanB

vanB 保有 Enterococcus faecalis は，10 cfu/spot 以

陽性であった。106 cfu/spot での検出率は，3 種類の下では，BD-VRE で 1 colony 発育を認めたが，他培地とも E. faecalis 100%（22/22），VCM 4 μg/mLの 2 種類の培地は発育を認めていないのがわか

以上の E. faecium 91.7%（11/12）であった。VCMる。これらの結果のうち，vanA, vanB, vanD 保有の MIC 2 μg/mL 以下の E. faecium 株の 106 cfu/spot

株について Table 3 に示す。vanA 保有株についてでの検出率は，CH-VRE 94.1%, BD-VRE 66.7%,

は， E. faecalis は 10 cfu/spot ま で， E. faecium はCH-blue 55.6% の順であったが，108 cfu/spot では

103 cfu/spot まで，E. gallinarum は 10 cfu/spot まで

3 種類の培地とも 94.1%（16/17）と同じであった。

44

Sept. 2022

THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

49（ 5 ）

75―3

Table 3. Results of Misraʼs method for vancomycin-resistant Enterococcus spp.
MIC
of VCM
（μg/mL）
Enterococcus faecalisEnterococcus faecium

Enterococcus avium

Enterococcus raﬃnosus

Enterococcus gallinarum

Enterococcus faecalisEnterococcus faecium

Enterococcus faecium

Enterococcus faecalis

CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VREThe ratio of growth strains（%）
Inoculum size（cfu/spot）
8

10

7

10

（n＝28）

32–1024（n＝31）

128–512（n＝14）

64–512（n＝19）

64–512

103

102

10

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
96.4

100
100
96.4

100
100
96.4

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
96.8

93.5
100
96.8

85.7
100
100

85.7
100
100

85.7
92.9
100

85.7
92.9
100

78.6
92.9
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
100

89.5
89.5
94.7

89.5
84.2
94.7

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

95.5
95.5
100

95.5
95.5
95.5

95.5
90.9
90.9

90.9
90.9
81.8

4–512

4–32

104

92.9
100
100

（n＝22）（n＝12）

105

92.9
100
100

256–512

0.5–2

10

92.9
100
100

（n＝5）

（n＝17）

6

94.1
94.1
94.1

94.1
82.4
76.5

94.1
58.8
70.6

88.2
52.9
58.8

47.1
35.3
47.1

5.9
5.9
17.6

0
0
0

0
0
0

100
100
100

100
91.7
91.7

91.7
91.7
91.7

75.0
83.3
75.0

75.0
58.3
66.7

58.3
41.7
41.7

41.7
16.7
25.0

8.3
16.7
8.3

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

100
100
100

（n＝5）

32–512

CH-VRE: CHROMagar™ VRE（CHROMagar）, CH-blue: CHROMagar™ VRE blue（CHROMagar）, BD-VRE: BD BBL™ VRE selective agar
（Becton Dickinson and Company）

今 回 使 用 し た VCM 2 μg/mL 以 下 の vanB 保 有

DPS192（栄研化学），BD フェニックス ™（日本

E. faecium は，パルスフィールド電気泳動によるBD）ではほぼ同じ値となるが，VITEK-2（ビオメ遺伝子タイプが同じ株でも VCM の MIC が 1〜64

リュー・ジャパン），RAISUS（日水製薬）では 8〜

μg/mL まで異なるタイプである。また，使用した＞16 μg/mL となった。

全株を実施したわけではないが，CLSI に準拠しvanD 保有 E. faecalis 5 株については 3 種類の培た寒天平板希釈法，微量液体希釈法では VCM の地とも 10 cfu/spot まで，非選択培地である血液寒MIC が 2 μg/mL 前後となる株を，市販の方法で測天培地と同等の発育を認めた。

定すると，栄研ドライプレート（栄研化学），栄研

Table 4 に 108 cfu/spot 接種した場合でもいずれか

50（ 6 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

75―3

Sept. 2022

Table 4. The strains that did not grow on some or any medium when inoculated with 108 cfu/mL
MIC（μg/mL）

No. of growth colonies at 108 cfu/spot**

Organism

Strain No.

Resistant
gene

VCM

TEIC

CH-VRE

CH-blue

BD-VREEnterococcus avium
Enterococcus raﬃnosus
Enterococcus raﬃnosus
Enterococcus faecium

SVR1384
SVR163
SVR1312
SVR1792

vanA
vanA
vanA
vanB

256
256
1024
1

2
32
512
0.5

0
0
0
0

1＋
1
2＋
0

3＋
3＋
3＋
0

*

Abbreviations: VCM, vancomycin; TEIC, teicoplanin; the others, see footnote of Table 3.
: vanS mutation strain**: 3＋, equivalent to control growth; 2＋, slightly less than control growth; 1＋, less than control growth, 0 and 1, number of growth colony.
*

Table 5. Results of Misraʼs method for non-possesing exogenous vancomycin-resistant factor
MIC of
VCM（μg/mL）
Enterococcus gallinarum

Enterococcus casseliﬂavus

Enterococcus faecalisEnterococcus faecium

Enterococcus avium

Enterococcus raﬃnosus

CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE
CH-VRE
CH-blue
BD-VRE（n＝25）

4–16（n＝25）

2–8（n＝35）

1–4（n＝26）

0.5–2
（n＝1）

0.5
（n＝2）

0.5, 4

The ratio of growth strains（%）
Inoculum size（cfu/spot）
6

10

5

10

104

103

102

10

60.0
0
0

52.0
0
0

48.0
0
0

32.0
0
0

ND
ND
ND

ND
ND
ND

16.0
0
4.0

12.0
0
4.0

8.0
0
4.0

4.0
0
0

ND
ND
ND

ND
ND
ND

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

ND
ND
ND

ND
ND
ND

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

ND
ND
ND

ND
ND
ND

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

0
0
0

Abbreviations: See footnote of Table 3.
ND: not doneの培地に発育しなかった 4 株について個別データ

る。E. avium SVR1384 は，既報 15）の株と同じくを示す。E. faecium SVR1792 は，VCM の MIC はvanS の 50, 54, 69 番目のアミノ酸に変異を有する株

1 μg/mL と低い株であるが，10 cfu/spot を接種しであり，VCM の MIC は 256 μg/mL と高い株であても 3 種類すべての培地とも発育しなかった。対るが，teicoplanin の MIC は 2 μg/mL と低い株であ8照として用いた血液寒天培地のコロニーを釣菌し， る。この株に対しては，CH-blue および BD-VRE

PCR を行ったところ，vanB は検出されたので， とも接種菌量 10 cfu/spot でも対照と同様の発育をvanB を含む vanB gene cluster のどこかに変異があ認めており，発育しないのは CH-VRE のみの現象

り，VCM 耐性に寄与していない可能性が考えられであった。E. raﬃnosus SVR163 株と SVR1312 株

Sept. 2022

THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

51（ 7 ）

75―3

Table 6. Sensitivity and speciﬁcity for detecting vancomycin resistant Enterococcus spp.
No. of isolates and its ratio
108 cfu/spot
SensitivitynCH-VRE
CH-blue
BD-VRE106 cfu/spot
Speciﬁcity

Sensitivity

153

153

149
150
152

97.4%
98.0%
99.3%

ND
ND
ND

148
143
147

103 cfu/spot
Speciﬁcity

114
96.7%
93.5%
96.1%

95
114
113

Sensitivity
153

83.3%
100.0%
99.1%

127
126
130

Speciﬁcity
114

83.0%
82.4%
85.0%

105
114
114

92.1%
100.0%
100.0%

Abbreviations: See footnote of Table 3.
ND: not done
Sesitivity: the ratio of the number of growth strains in number of test strains that have vanA, vanB, or vanD.
Spesicity: the ratio of the number of no growth strains in number of test strains that have no vanA, vanB, or vanD.

の VCM の MIC は 256 および 1024 μg/mL と高い株

CH-blue は 106 cfu/spot でも 100% であり，CH-VRE

であり，BD-VRE は接種菌量 10 cfu/spot でも対照の 83.3%，BD-VRE の 99.1% よりも優れていた。

と同等の発育を認めたが，CH-VRE は 108 cfu/spot

103 cfu/spot では，CH-blue および BD-VRE の特異でも全く発育せず，CH-blue も 108 cfu/spot では発

度は 100% であったが，CH-VRE は 92.1% であっ育を認めたが，10 cfu/spot では発育を認めなかった。

7たことより，ChromAgar 社の培地成分の何かがこの 2 株の発育に影響を与えていると考えられる。

考察

Table 5 に vanC1 を 染 色 体 上 に 保 有 す る E.
gallinarum， vanC2 を 保 有 す る E. casseliﬂavus を感染症予防法では，五類感染症全数報告の対象

含む外来性の VCM 耐性遺伝子を保有しない 113としてバンコマイシン耐性腸球菌感染症が指定さ株の結果を示す。CH-blue は 106 cfu/spot においてれている。2013 年に vanA, vanB の検出という文も，113 株すべての発育を阻止した。BD-VRE は

言 は は ず れ た が，VCM の MIC 16 μg/mL 以 上 の

E. casseliﬂavus 1 株のみ 10 cfu/spot でも発育を認Enterococcus spp. で感染症の起炎菌と推定されためた。この株は他の 2 種類の培地では 10 cfu/spot

場合は，7 日以内の報告が必要である。この報告はでも発育しなかった。CH-VRE は，E. gallinarum

感染症発症患者のみであり，また，VanC 型 VREは，10 cfu/spot で 60.0%（15/25），10 cfu/spot でも含んでいるため，感染対策上重要な VanA 型や

4

6

6

3

も 32.0%（8/25）の 発 育 を 認 め た。CH-VRE は， VanB 型 VRE の蔓延状況についてはわからない。

E. casseliﬂavus 106 cfu/ml で 16.0%（4/25）の発育European Centre for Disease Prevention and Controlを認めた。

の 2020 年 の 報 告 で は 16），東 ヨ ー ロ ッ パ 諸 国 のTable 6 に 108, 106, 103 cfu/spot に お け る 感 度 と

E. faecium の VCM 耐性率は 30% 以上であり，ドイ特異度を示す。感度は外来性 VCM 耐性因子 vanA,ツ，イタリアでも 20% を超えている。米国では減vanB, vanD 保有株を検出できるか否かとし，特異度

少傾向にあるものの依然として分離数は多く，米は外来性 VCM 耐性因子を有さない株（vanC 保有

国 Centre for Disease Prevention and Control の 驚株を含む）を検出しないこととした。10 cfu/spot

異のレベルは 2 番目に高い Serious Threats に位置

では 3 種類の培地とも感度 97% 以上，10 cfu/spot

づけらている 17）。一方，JANIS の 2021 年の入院患では 93% 以上であった。103 cfu/spot では少し感度

者由来株の報告では，VCM 非感受性の E. faecalis

86，E. faecium は 2.6%（1,680/
は落ちたが，82.4〜85.0% であった。特異度は， は 0.01%（15/137,886）

52（ 8 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

75―3

Sept. 2022

62,810）と報告されており，欧米よりはかなり少的 に 働 い た も の と 考 え ら れ る。CH-VRE で は，

。現在では，リネゾリド，ダプトマイシン

VCM 256 μg/mL の vanA 保有 E. avium 1 株でも同

ない

18）

など VRE に有効な抗菌薬は複数存在するものの， 様の現象を認めた。
院内感染に関する報告は国内でも多数あり 19,20），

今回使用した CLSI 標準法で VCM の MIC を測早期に検出し封じ込める必要がある耐性菌である

定すると 2 μg/mL 以下となる vanB 保有 E. faecium

ことは間違いない。

は，測定する機器により感染症法の基準を満たす

腸管内の常在菌である Enterococcus spp. をすべかどうかという違いが出る株であるが，vanB をて同定して薬剤感受性試験を実施することは，コ保有している株であり，早期検出し感染対策をとストおよび労力面で現実的ではないので，選択培ることは重要であると考えられることより，VRE

地を使用してスクリーニングすることが有用であ選択培地で検出出来ることが望ましい。

る。VRE 選択培地に求められるのは，染色体上にカナダでは既に使用されている CH-blue は，現在

vanC を有する E. casseliﬂavus および E. gallinarum

使用されている CH-VRE と比較して，VanC 型の発の発育を抑制し，vanA および vanB など外来性の育を阻止するという点において，明らかに優れてい

VCM 耐性遺伝子を有する Enterococcus spp. を検た。VCM の MIC が低い vanB 保有 E. faecium に関出することである。以前はエスクリン培地に VCM

しては，106 cfu/spot での検出感度は，CH-VRE よを添加した培地も用いられていた 21）が，腸管内のりは劣るものの 108 cfu/spot では同等であり，臨床常在菌である VanC 型も検出してしまうため，特現場で使用するには優れた培地であり，BD-VREに便を用いたスクリーニング検査では，精査すると同等の性能を有する選択培地であると考えられ株数が膨大となり，検査室の負担が大きかった。 た。
今回使用した 3 種類の VRE 選択培地はこの欠点が改良されているものであり，106 cfu/spot におけ利益相反る感度は 93.5〜96.7%，特異度は 83.3〜100% と優本試験で使用した市販の VRE 選択培地 2 種類

れており，いずれの培地とも有用であると考えら

および CHROMagar™ VRE blue，ならびに血液寒れた。感度の点では，VCM の MIC が 2 μg/mL 以下

天培地は関東化学より提供を受けた。

の VanB 型 E. faecium に対しては，CH-VRE の検出率が優れていた。一方，特異度に関しては，

vanC を 染 色 体 上 に 有 す る E. gallinarum お よ び
E. casseliﬂavus が， CH-VRE で 発 育 す る 割 合 が多いため，他の 2 種類の培地よりも劣っていた。

BD-VRE では良好な発育を認めたが，CH-VRE お
よび CH-blue では 108 cfu/mL でも発育しなかった

vanA 保有 E. raﬃnosus が 2 株存在した。E. raﬃnosus
はこれら 2 株以外に 17 株使用したが，すべていずれの培地でも良好な発育を認めており，菌種特異的な現象ではない。これら 2 株の VCM の MIC は，

256 および 1024 μg/mL であり，再現性も確認できたことより，VCM ではない培地成分が菌株特異

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54（ 10 ）THE JAPANESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS

75―3

Sept. 2022

The evaluation of Vancomycin-resistant enterococci selective agar
Maiko Ueda1,2）, Tetsuro Muratani1,2,3）and Haruhisa Saku1,2,3）
1）

Hibiki AMR Laboratory
Hibiki Research Group for Clinical Microbiology
3）
Aishinkai Kokura Itozu Hospital

2）

There are some reports of nosocomial infections caused by vancomycin-resistant enterococci（VRE） in Japan, and it is an antimicrobial resistant bacterium that needs to be detected andprevention of outbreak at an early stage. As a screening method for VRE carriers, it is very
ineﬃcient to isolate and identify enterococci from clinical specimens, especially feces, and to
perform antimicrobial susceptibility test. In such cases, the use of VRE selective media is a useful”
method. This time, we had the opportunity to evaluate “CHROMagar™ VRE blue（CHROMagar）（CH-blue）, a new VRE selective medium already in use in the United States. To evaluate theperformance of CH-blue, VRE detect test were performed using “CHROMagar™ VRE（CHROMagar）”（CH-VRE）and “BD BBL™ VRE selective medium（Becton Dickinson and company）”（BD-VRE）,
as controls. A total of 267 strains were used, including 153 enterococcal strains having vanA,
vanB, and vanD, and 114 wild type enterococcal strains including 25 strains of Enterococcus
gallinarum and 25 strains of Enterococcus casseliﬂavus that do not have vanA, vanB, and vanD.
The growth of these strains was evaluated using four types of media, blood agar medium, CH-VRE,
CH-blue, and BD-VRE, according to the Misraʼs method. Sensitivity was deﬁned as whether
enterococcal strains carrying the exogenous vancomycin resistance factors as vanA, vanB, andvanD could be detected, and speciﬁcity was deﬁned as not detecting strains without exogenous
vancomycin resistance factors including vanC carrying strains. At 108 cfu/spot, sensitivity wasover 97% for all three media, and at 106 cfu/spot, sensitivity was over 93%. At 103 cfu/spot, thesensitivity was slightly lower, but it was 82.4–85.0%. The speciﬁcity was 100% for CH-blue evenat 106 cfu/spot, superior to 83.3% for CH-VRE and 99.1% for BD-VRE. At 103 cfu/spot, speciﬁcity
was 100% for VRE blue and BD-VRE, but 92.1% for CH-VRE. CH-VRE blue, which is alreadyin use in Europe and the United States, was clearly superior to the currently used CH-blue ininhibiting the development of VanC type. For VanB type E. faecium, which has a low MIC invancomycin, detection sensitivity of CH-blue at 106 cfu/spot was inferior to CH-VRE but
comparable at 108 cfu/spot. It is considered that CH-blue is an excellent VRE selective medium
with performance equivalent to that of BD-VRE.