ISSN 1347-4804

January 2004
Vol.72 No.1

Iba1

F-actinPhase contrast

Mergedザイモサン貪食時のIba1の細胞内局在〔総 説〕「ミクログリアの役割とIba1タンパク質」
大澤圭子 ……… 2「環境調和型酸化オスミウムによるジオールの合成反応」
竹本佳司、柳田玲子 ……… 5〈テクニカルレポート〉「PresepR-C DNPHショートタイプの開発（その2）」
久保田守 ……… 8〈Talking of LAL〉
「第54話 リムルス試薬の将来」

土谷正和 ……… 9〈脳科学一口メモ〉「神経科学・精神科学の一層の発展を！」野村靖幸 ………10
WAKO ワークショップ見聞録

小林真紀子 ………26〔百年前の化学〕「1904年の化学を顧みて」

芝 哲夫 ………29〔製品紹介〕
有機合成
酸化オスミウム触媒㈱ワコーケミカル カーボンナノチューブ

7
14

環境・分析
プレセップR-C DNPH
8
プレセップR活性炭埋蔵シリカゲル（リバース）12
改正水道法対応水質分析用試薬
13㈱エルメックス アクアテストⅡ ATB-100 14
エンドファイトトキシン試験用試薬
15
局方対応生薬標準品
15

細胞生物
抗Iba1, ウサギ
4
アルカリホスファターゼ活性測定キット「ラボアッセイTM ALP」
16
サイトカイン新製品
16
UBI社 H2A.Xりん酸化アッセイキット
17
Mg2＋検出用蛍光プローブ「KMG-20-AM」 18
Mass Consortium社「DIOS」
18
リシルエンドペプチダーゼ、質量分析グレード
19
トリプシン、質量分析グレード
19
Sidec Technologies社 タンパク質構造解析
受託分析サービス
19
Toll-like receptor抗体
28

生化学
プレキャストゲル「スーパーセップTM」

20

遺伝子
Evrogen社 蛍光タンパク質発現ベクター
逆転写酵素「リバースクリプトTMⅢ」
リボヌクレーゼⅢ，
組換え体，
溶液
amaxa社 NucleofectorTMを使用した
siRNA導入アプリケーション

22
24
25
25

〔お知らせ〕
トライアルサンプル準備しました！
NO測定・除去用試薬 ……………………………………11

20/20 GeneSystem社
Multi-replica Blotting Kit−ULTRA モニター募集………21
1

R

esearchミクログリアの役割とIba1タンパク質
国立精神・神経センター

はじめに

神経研究所

代謝研究部

大澤

圭子

この時期には分裂を終えたニューロンの多量産生・放出され、また、細胞膜上の補体レな細胞死が生じており、活発な貪食能を示

セプターの発現が上昇する。 脳内では、こすアメボイドミクログリアは死細胞の除去に働れらの分子によりミクログリアの増殖と老人斑

従来、ミクログリアは、脳内の死細胞や異くと考えられる。 生後２週間後にはアメボイドへの集積がおこり、貪食能が活性化され、ミ物を除去し炎症時の免疫反応に関わる細胞

ミクログリアは減少し、かわりに細胞体が小さクログリアは凝集 Aβを除去する可能性が指であると考えられてきた。しかし、近年、脳く長く多数に分岐した突起を持つラミファイドミ

摘されている。 一方、Aβの刺激によりミクロの環境変化をいち早く察知して反応する感

クログリアが現れる。ラミファイドミクログリアは

グリアは炎症性サイトカイン（IL-1β、IL-6、度の高いセンサー細胞で、脳の恒常性を維静止状態にあると考えられており、成熟した

TNF-αなど）や酸化窒素（NO）も産生・持するために重要な役割を果たしていること

正常脳のあらゆる部位に散在している（図１放出する。これらの因子が周囲の細胞に作が明らかになりつつある。 本稿では、現在

B）。

用して、脳内炎症の誘発や Aβの産生と凝考えられているミクログリアの役割について述べるとともに、ミクログリアの新しいマーカー分

集を逆に促進し、神経細胞の変性や細胞死活性化ミクログリアの役割

子として有用な Iba1タンパク質について説明する。

ミクログリアとは中枢神経系には、ニューロンの他にアストを引き起こすと推定されている 3，4）。
損傷や多くの疾患は血液脳関門の破壊を

脳の損傷時や神経変性疾患（アルツハイ

伴い、末梢血液中から浸潤してきた単球・マー病、クロイツ・ヤコブ病、パーキンソン病

マクロファージと脳内在性のミクログリアとがなど）、多発性硬化症、脳梗塞、ウイルス感

区別できないため、今までミクログリアの挙動

染や脳腫瘍などの病態時に、ミクログリアがは不明瞭であった。しかし、ラットの顔面神経、変化（活性化）することが見出され、病態

舌下神経、座骨神経軸索の切断は血液脳

2）

ロサイト、オリゴデンドロサイトとミクログリアのとの関連が注目されてきた 。たとえば、ア

関門を維持したまま神経の変性を引き起こす

３種類のグリア細胞が存在する。ミクログリア

ルツハイマー病の脳では、広範囲にわたるミことから、近年、これらの神経切断モデルをは他のグリア細胞とは異なり、幼弱期の脳にクログリアの活性化と老人斑への集積が認め

用いて脳内ミクログリアの反応が観察されて入った骨髄由来の単球を起源とする説が有られる。そのため、老人斑の主要成分であいる。 新生児ラットの顔面神経を切断すると力で、これを裏付けるようにマクロファージとるβアミロイド（Aβ）によるミクログリアの活

神経細胞死が起こるのに対し、アダルトの場

共通したマーカータンパク質を発現する１）。

性化について多くの研究が行われている。

合は細胞死は起こらず、神経は再生するこ

ラットの場合、ミクログリアは胎生初期から不溶化凝集した Aβで刺激したミクログリアとが知られている。 新生児ラットの切断側の脳内に認められるが、胎生後期から出生直から、増殖を促す M-CSF や、ケモタキシス

神経核では、貪食能の活性化したミクログリ

後に細胞体が比較的大きく突起をほとんど持を誘導するケモカイン類（IL-8、MIP-1α、アが観察されるが、アダルトでは貪食能を伴たないアメボイ
ドミクログリアが現れる（図１A）。

MIP-1β、MCP-1）や補体成分（C3）がう活性化はほとんど起こらず、ミクログリアの増殖と運動神経細胞体を取り囲むようにした

生後０日目

アダルト正常脳集積が観察される 5，6）（図２）。この活性化は神経の再生に伴い沈静化することから、活性化ミクログリアの神経再生・修復過程への関与が推測されている。
活性化ミクログリアの細胞特性は、増殖能や移動能、貪食能、抗原提示能の亢進と、神経栄養因子（NGF、BDNF、GDNFなど）
やサイトカイン類、ケモカイン類、TGF-β、
TNF-α、活性酸素や NO などの神経障害性物質など、様々な生理活性物質を産生・分泌することである 7，8）。活性化ミクログリアは、末梢血から脳内に浸潤してきた免疫系細胞と相互作用して免疫反応を調節すると共に、

図1. ミクログリアの組織像
抗 Iba1 抗体を用いてラット脳組織切片を免疫染色した（DAB 発色）。 A：生後直後のラット白質のアメボイドミクログリア、B：正常時のアダルトラット大脳皮質のラミファイドミクログリア。 スケー
ルバーは 500μm。 文献（10）より改変。

2

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

周囲のニューロンやグリア細胞にも作用し、炎症や病変部の細胞死または組織修復に重要な役割を担うと考えられている。

図2. 顔面神経軸索切断により活性化された顔面神経核のミクログリア
アダルトラット顔面神経の軸索切断 7 日後に、脳幹部の組織切片を作製し、抗 Iba1 抗体を用いて免疫染色した。 A：顔面神経核を含む脳幹部の低倍率像。 顔面神経切断側の神経核に Iba1の強い染色性を示すミクログリアの増殖が認められる。 スケールバーは 500μm。 B：神経切断
側神経核の高倍率像。 変性神経細胞体の周囲を取り囲むようにして活性化ミクログリアが配置している。 C：非切断側神経核の高倍率像。 スケールバーは 50μm。 文献（6）より改変。

マクロファージ／ミクログリア
特異的タンパク質 Iba1

Iba1 変異体は Rac の活性化による膜ラッフ

おわりにルの形成を特異的に阻害し 11）、また、Iba1の強制発現によりRac の活性化が促進され

Iba1（ Ionized calcium binding adapter

12）

ミクログリアは、脳の異常を感知して活性、Iba1 は Rac シグナル系に特化し、周囲の細胞と相互作用することで脳molecule 1）は、マクロファージとミクログリ

異的に関わる分子であると考えられる。 Rac

機能の維持に必要な役割を果たしている。

アに特異的に発現する、EF ハンド構造をシグナル系は細胞運動能の調節だけでなく、脳内におけるミクログリアの多彩な機能がどることから持つ 17kDa のカルシウム結合タンパク質で活性酸素の産生や遺伝子発現などミクログリのように調節されているのか、まだ多くの点

ある 9，10）。ラットの顔面神経切断によるミクロ

アの活性化を制御する主要なシグナル系であが謎であり、今後の研究が期待される。

グリアの活性化に伴い、その発現量が増加る。

することから、Iba1 はミクログリアの活性化に関わる分子であることが推察された 6）。 Iba1のミクログリア細胞内局在を抗 Iba1 抗体を用いた免疫染色で調べてみると、Iba1 は M注 1）

CSF 刺激により誘導される膜ラッフル

Iba1F-actin

Merged部

位（図 3）や、ザイモサン貪食時に形成されるファゴサイティックカップ注 2）にアクチンフィ
ラメント（Ｆｰアクチン）と共に集積した（次頁図 4）。 Iba1 欠損変異体をミクログリアに発現させると、膜ラッフルやファゴサイティックカッ
プの形成が抑制されることから、Iba1 は活性化ミクログリアの重要な機能である細胞移動や貪食を調節する分子であるといえる 11）。
ミクログリアの膜ラッフルやファゴサイティック
カップの形成は、アクチン細胞骨格再編成を制御する低分子量Ｇタンパク質 Rhoファミリー

図3. Iba1のM-CSF刺激による膜ラッフル部位への集積とF-アクチンとの共存
血清非存在下の培地中で 4 時間培養した初代培養ミクログリアを M-CSF で刺激し、5 分後に細胞を固定、抗 Iba1 抗体と F- アクチンと特異的に結合するテキサスレッド標識ファロイジンで二重染色した。 緑が Iba1、赤が F- アクチン、黄色は両者の共存を示す。 細胞質に存在した Iba1 は、刺激により膜ラッフル部位に集積した。 スケールバーは 20μm。 文献（11）参照。

の一つであるRac の活性化に依存している。

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

3

〔参考文献〕

Iba1

F-actinPhase contrast

Merged１）Ling, E.A. and Wong, W.C. : Glia, 7, 9-18
（1993）.
２）Kreutzberg, G.W. : Trends. Neurosci., 19,
312-318（ 1996）.
３）Eikelenboom, P. et al. : Glia, 40, 232-239（2002）.
４）Rogers, J. et al. : Glia, 40, 260-269（ 2002）.
５）Graeber, M.B. et al. : Brain Res., 813, 241253（ 1998）.
６）Ito, D. et al. : Brain Res. Mol. Brain Res.,57, 1-9（ 1998）.
７）Raivich, G. et al. : Brain Res. Rev., 30, 77105（ 1999）.
８）Hanish, U.K. : Glia, 40, 140-155（ 2002）.
９）Imai, Y. et al. : Biochem. Biophys. Res.
Commun., 224, 855-862（ 1996）.
１０）Imai, Y. and Kohasaka S. : Glia, 40, 164174（ 2002）.
１１）Ohsawa, K. et al. : J. Cell Sci., 113, 30733084（ 2000）.
１２）Kanazawa, H. et al. : J. Biol. Chem., 277,
20026-20032（ 2002）.

注１）

膜ラッフル

細胞の辺縁部でF-アクチンが集積し波打
つようにめくれ上がった細胞膜構造。移動時の細胞先端部や増殖因子などによる

図4. ザイモサン貪食時のIba1の細胞内局在
ミクログリア細胞株 MG5 細胞にザイモサンを添加し、取込み開始 5 分後に細胞を固定、抗 Iba1
抗体とテキサスレッド標識ファロイジンで二重染色した。 緑が Iba1、赤が F- アクチン、黄色は両者の共存を示す。 スケールバーは 20μm。 ザイモサン粒子（矢印）を取り囲むファゴサイティックカップ（矢じり印）に Iba1 の集積が認められる。 ザイモサンが細胞内に完全に取り込まれると、粒子の周囲の Iba1 と F- アクチンの集積は観察されなくなる。 スケールバーは 20μm。 文献 （ 11 ）刺激時に観察される。
注２）

ファゴサイティックカップ

貪食時に、細胞が粒子を取り込むために粒子の周囲を取り囲むようにして伸展した細胞膜構造。F-アクチンなどアクチン参照。

細胞骨格系タンパク質が集積している。

P roducts
ミクログリア特異抗体
Anti Iba1, Rabbit
Iba1はマクロファージ／ミクログリアに特異的に発現している分子量17,000のカルシウム結合タンパク質です。本品はミクログリアと特異的に反応するウサギポリクローナル抗体ですので、アストロサイトに特異的なGFAPモノクローナル抗体などとの二重染色に適しています。
形

状 : TBS溶液（ 0.5mg/mr ）特異性 : ミクログリア、
マクロファージに特異的に反応する。ニューロン、
アストロサイトとは交差反応しな
い。
ヒト、
マウス、
ラットIba1と反応する。
精

製 : 抗原アフィニティー精製

使用法 :①抗Iba1，ウサギ（ Immunocytochemistry用）は Immunocytochemistry に最適で
（ Western blotting用）
はWestern blottingに最適です。
②抗Iba1，ウサギ

0.5〜1μg/mrで使用可能です。

■Immunocytochemistry用
コードNo.

品

名019-19741 Anti Iba1, Rabbit

4

rat primary mixed culture cellsの二重染色像
緑：抗 Iba1 抗体（Immunocytochemistry 用）
赤：抗 GFAP 抗体
データ提供：国立精神・神経センター神経研究所
代謝研究部

す。1〜2μg/mrで使用可能です。

■Western blotting用
規 格

容 量

希望納入価格（円）

免疫化学用 50μg（ 100μr） 30,000

和光純薬時報コードNo.

品

名016-20001 Anti Iba1, Rabbit

Vol.72, No.1（2004）

規 格

容 量

希望納入価格（円）

免疫化学用 50μg（ 100μr） 30,000

R

esearch
環境調和型酸化オスミウムによるジオールの合成反応
京都大学大学院薬学研究科

合試薬を用いるとオレフィンが高い不斉収率1 はじめにでジヒドロキシル化されることを見い出し、触媒

竹本佳司、 柳田玲子

2 イオン性液体

1）的不斉合成反応として完成の域に達した 。
有機合成化学が今後目指すべき課題の１

しかし、触媒量とはいえ、使用しているオスミウ

イオン性液体（Ionic Liquid）
とは、
陽イオン

つに、
既存の有用な反応をよりクリーンで安全

ムの回収と再利用はできておらず、
グリーンケ

や陰イオンを有機イオンに置き換えたもので、な化学プロセスにするグリーンサスティナブル

ミストリーの観点からは、
まだまだ問題を残して無機イオンと異なり融点が著しく低下し、室温ケミストリーを指向した研究がある。現在、高いた。これらの問題を克服するため相次いでで液体になるものもある。有機イオンが含まれ活性な新触媒の開発、触媒の極限量までの趣向を凝らした研究が発表された。1998年、

ると陽イオンと陰イオン間の距離、イオンの大き低減、簡便な触媒の回収・再利用法の開発

小林らによりマイクロカプセル化四酸化オスミ

さ、かたち、対称性などが結晶構造の安定性等をめざしたさまざまなアプローチが検討されウムが開発され、NMOを共酸化剤とする不に影響を与え、著しい融点降下をもたらしたている。本稿では、オレフィンを1,2-ジオールに均一系反応がこれまでの均一系反応に遜色

結果、
室温付近で液体状態をとったものであ変換する優れた試薬ではあるが、その毒性かさない反応性を示すことが明らかにされた2）。

る（次頁図４）。またイオン性液体は水や有機ら使用が敬遠されている四酸化オスミウムをらに（DHQD）2PHALを不斉配位子として用

溶媒などと混じりにくいという特徴がある一方

例にとりグリーンケミストリーの動向を紹介した

いた高エナンチオ選択的不斉ジヒドロキシル

で、非極性有機分子や遷移金属まで溶かすい。

化にも応用された3,4）。現在マイクロカプセル化ことができる利点もある。イオン性液体は蒸気

四酸化オスミウムは無揮発性、回収・再利用

圧が殆どないため環境中に有害な気体が蒸162mg）、
さらに揮発性があるため回収・再利可能な触媒として和光純薬から市販されてい発することもなく、引火性、可燃性もないため用が困難であることから、
合成プロセスでの実

イオン交換樹脂6）、る。その後、
シリカゲルや5）、安全性が高い。従来の溶媒よりはるかに高濃四酸化オスミウムは、高価で毒性が高く（LD50用化にはかなりの困難を伴う。その一方で、オ

層状複水酸化物（Layered Double Hydroxide;度の溶液とすることができる。構造的特徴でレフィンに当量の四酸化オスミウムを反応させ、7）等に固定化された四酸化オスミウムも開LDA）あるアルキル鎖や対イオンの種類や組み合わ

還元的加水分解によりジオールを得るジヒドロ

発され、オレフィンのジヒドロキシル化反応に利用

せの変換も可能である。これらの性質を利用

キシル化反応は非常に有用であり古くから利

されている
（図３）
。

してイオン性液体を反応溶媒として使用した後、用されてきた（ 図１）。近 年 、共 酸 化 剤（ t -分離・回収・再利用することは、生産過程のコBuOOH, NMO, K3Fe（ CN）6など）存在下反

スト削減、資源の有効利用などの点からも興応を行えば触媒量の四酸化オスミウムでも収味あり、最近活発に研究されている環境調和

率良くジオール体が得られることがわかり、そ型溶媒の一つである。

の有用性は飛躍的に増大した。さらに、第三級アミンによりオスミウム酸エステルの生成が加速することを利用してSharplessらは、触媒量のK 2OsO 4・2H 2O、光学活性第三級アミン
2PHAL,（DHQ）
2PHALなど（図２）］、［（DHQD）O O
Mg Mg Al+O O
OsO42ClO O
Mg Mg Al
+
O O
O=OH

そして共酸化剤としてK3Fe（ CN）6からなる混
O OMe
Si
O
O

NEt3)2OsO4
NEt3)2OsO4

O
Os

O

O

加水分解

HO

OH

(a) SiO2-OsO4
図1.

(b) Resin-OsO4(c) LDA-OsO 4

図3.

O

H

Et

Et

Et
Et
N N

N

N

N
O

OMe
N

N
(DHQD)2PHAL

O

H

H

MeO

N

N N
O

OMe
N

N

Et

O

H

H

MeO

Et

N

N

MeO

N
O

H

N

N

OMe
N

(DHQ)2PHAL(DHQD)2PYR

図2.

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）5

anionCl

cation

Na

NO3

801

MeN + NEt

306

77-79

38-41

図4. ナトリウム塩とエチルメチルイミダ
ゾール塩の融点(°C)

3 四酸化オスミウムのイオン性液体中への固定化

四酸化オスミウムの均一系溶媒への固定得ることが可能である。使用したイオン性液体

高い光学純度を得るために基質のオレフィン

酸化オスミウム溶液は再利用可能で、基質とをシリンジポンプで長時間かけて加えなけれ

NMOを再度加えて初回と同様に攪拌するだ

ばならない点である。NMOを共酸化剤にすけでよい。最終的に5ｰ6回の繰り返し反応がる場合、触媒的オスミウム酸化では基質を一可能なことを確認した。表１はこの方法による度に加える方法よりも、シリンジポンプを用いて各種オレフィンのジヒドロキシル化反応の結果

ゆっくりと加える方法（slow addition）
をとるとである。芳香族オレフィン、脂肪族オレフィン、

光学純度が飛躍的に向上することが報告さ

末端オレフィン、
内部オレフィン、一置換、二置換、

れている11, 12）。

三置換オレフィンを用いた場合も反応は円滑［bmim］PF6:H2O=1:2
同様にAfonsoら13）も、に進行し、目的とするジオールを高収率で合あるいは［bmim］PF6:H2O:t-BuOH=1:1:2から成できる。イオン性液体を用いるオレフィンの4 2H2O（0.5mol%）、
なる混合溶媒を用いK2OsO・

四酸化オスミウム酸化は、実験操作が非常に（DHQD）2PHALあるいは（DHQD）2PYR

簡便で常温、
常圧、開放系（通常は念のため

（3eq）
6
、
K2CO（3eq）
3（1.0mol%）、
K3Fe（CN）

平栓などをかぶせて反応させている）で行え

存在下に基質を24時間反応させることにより、化法として2002年、
著者ら およびYaoら によるため極めて工業化しやすいシステムといえる。

高い光学純度で光学活性ジオールを合成すってイオン性液体のユニークな特徴をいかし

著者らと異なり、
Yaoらは反応溶媒として［bmim］

る手法を開発した（表２）。繰り返し実験で再たジヒドロキシル化反応がほぼ同時期に発表

PF 6/H 2O/ t-BuOH=1/1/2を用いているが、

（3eq）
6
と
度加えるのは共酸化剤K3Fe（ CN）された。医薬品などの原料として重要な1,2-ジ

ほぼ同様の結果を得ている
（図５）。

3
だけで、
５回程度の繰り無機塩K2CO（3eq）8）9）

返し反応が可能である。収率と光学純度がオールを合成する際、四酸化オスミウムを蒸気
圧が殆どないイオン性液体に溶解して使用す
ると、
四酸化オスミウムの揮発性を激減するばかりでなく、回収・再利用も可能となった。
実際の操作は、触媒量のOsO 4を含むイオ

イオン性液体中、四酸化オス
4 ミウムによるエナンチオ選択的ジヒドロキシル化反応
著者、
Yaoらによるイオン性液体中でのジヒ基質とNMO（我々ン性液体［emim］BF4に、

ドロキシル化が公表されたあと、イオン性液体の場合は反応系に水が含まれていないので、

酸化オスミウムを用いたエナンチオ選択的ジヒ生成するオスミウム酸エステルを加水分解す

ドロキシル化の論文が相次いで報告された。

を加え、室温でる目的でNMO・H 2Oを使用）

世界各国で似たような発想に基づき同様の

20時間前後反応させたのち、少量のエーテ研究がなされていたことになる。2002年に低下した場合、K2OsO4・2H2Oと不斉配位子を追加する必要はあるものの、基質のオレフィンをシリンジポンプを使い長時間かけて滴下しなくても光学純度良くジオール体が得られることから、非常に簡便な環境調和型不斉ジヒド
ロキシル化が達成されたといえる。

四酸化オスミウム/PEG400
5 による高速エナンチオ選択的ジヒドロキシル化反応

ルあるいは酢酸エチルを加え攪拌し、目的の

4、不斉配位子SongらによりOsO（1.0mol%）

ジオールを抽出するというものである。有機層

共酸化剤NMO、（DHQ）2PHAL（2.5mol%）、

ごく最近Chandrasekharらによりポリエチ（NMM）にはジオールの他にN-メチルモルホリン

溶媒 acetone/H2O/ionic liquid（[bmim]PF6,

レングリコールPEG400（ MW400）を溶媒とすが混入しているが、短いシリカゲル充填カラムを用いる反応が報告された10）。
［bmim］SbF6）

る四酸化オスミウム酸化反応が報告された14）。

にサッと通すだけでジオールのみを高収率で欠点は共酸化剤にNMOを用いているため、

4（、DHQD）2PHAL
極少量のOsO（0.5mol%）表1. オレフィンのジヒドロキシル化反応（OsO4 in［emim］BF4）
run

product

olefinyield (%)

OH

1

Ph

OH

Ph

92

OH

2

96

HO

OH
NMM

OH

3

Ph

Ph

96

t-BuOH

Ph

6

93
HO OH

Ph

5

Os-catalyst

Me

Me

H 2O

Os-catalyst
ionic liquid

OH
Ph

4

OH

NMO

Ph

Ph

N

N+ OsO4-(2 mol%)

Ph
OH
OH

91

図5.

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

run

1

2

3

4

5

6

isolated yield (%)

95

93

96

95

93

93

表2. オレフィンの不斉ジヒドロキシル化反応（IL=［bmim］PF6）

表3. PEG400を用いた不斉ジヒドロキシル化反応

IL/H2O/t-BuOH

IL/H2O

entry

product

time (h)yield (%)

ee (%)

2

95

94

2

92

91

olefinligandPHAL

yield (%)

yield (%)

ee (%)878662

ee (%)

OH

1

94

Ph

Ph

Ph

PYR

86

75

90

89

PHAL

47

92

53

87

PYR

66

86

57

83

PHAL

87

98

92

99

PYR

81

96

79

77

（2mol%）とNMO・H2O（1.3eq）
を使用し、
反

Ph

Ph

OH
OH

2

〔参考文献〕

１２）Lohray, B. B., Kalantar, T. H., Kim, B. M., Park,

応溶媒にPEG400を用いる。目的物のジオー
ルの単離はエーテル抽出によるが、
エーテル

L., Crispino, G. A., Hartung, J., Jeong, K.-S.,
Kwong, H.-L., Morikawa, K., Wang, Z.-M.,

層に混入するOsO4量は2ppm以下であること

Xu, D., Zhang, X.-L.: J. Org. Chem., 57,

を原子吸光法により確認している。この反応

配位子が有機溶媒抽出の際一部溶出する

Tetrahedron Lett., 30, 2041（1989）.
１３）Branco, L. C., Afonso, C. A. M.: Chem. Commun.
3036（2002）.
S., Reddy, N. R.: Chem. Commun., 1716（2003）.

Org. Chem., 63, 6094（1998）.
３）Kobayashi, S., Endo, M., Nagayama, S.: J.

Am. Chem. Soc., 121, 11229（1999）.

の反応でも5回程度の繰り返し反応が可能である。
しかし、本反応ではPEG400中の不斉C. Y., Shibata, T., Wai, J. S. M., Sharpless, K. B.:

１４）Chandrasekhar, S., Narsihmulu, C., Sultana, S.

2768（1992）.
２）Nagayama, S., Endo, M., Kobayashi, S.: J.

非常に短いにもかかわらず光学純度が高いことである。イオン性液体中の反応と同様にこOEt
OH１）Sharpless, K. B., Amberg, W., Bennani, Y.

の特徴は表3からもわかるように反応時間がO

Ph４）Kobayashi, S., Ishida, T., Akiyama, R.: Org.

Lett., 3, 2649（2001）.
５）Severeyns, A., Vos, D. E., Fiermans, L.,ため、適宜不斉配位子を補充する必要がある。

Verpoort, F., Grobet, P. J., Jacobs, P. A.:

Angew. Chem. Int. Ed., 40, 586（2001）.
６）Choudary, B. M., Chowdari, N. S., Jyothi,

6 おわりにK., Kantam, M. L.: J. Am. Chem. Soc., 124,

揮発性、毒性の高い四酸化オスミウムを種々

5341（2002）.
７）Choudary, B. M., Chowdari, N. S., Kantam,の方法で固定化し、触媒として繰り返し使用する方法が開発され、オレフィンからジオールの合成、さらに高エナンチオ選択的合成へのた方法であると言えるが、未だクリーンで安全

エナンチオ選択的反応骨を破壊吸収する

123, 9220（2001）.

通常、不斉を持たない基質と試薬からは

８）Yanada, R., Takemoto, Y.: Tetrahedron Lett.,

ラセミの生成物が得られる。これは、基質の反応点（例えば二重結合の面）に試43, 6849（2002）.

応用が可能であることが示された。煩雑な操作を必要とせず一般性と実用性を兼ね備え

M. L., Raghavan, K. V.: J. Am. Chem. Soc.,

薬が両方向から等価に攻撃するためであ（2002）.
９）Yao, Q.: Org. Lett., 4, 2197
１０）Song, C. E., Jung, D.-U., Roh, E. J., Lee, S.（2002）.
G., Chi, D. Y.: Chem. Commun., 3038

な反応とは言い難い。今後の課題として、空１１）Wai, J. S. M., Marko, I., Svendsen, J. S.,

気中の酸素などよりクリーンで安価な酸化剤

Finn, M. G., Jacobsen, E. N., Sharpless, K.

を利用した合成法の開発が望まれる。

（1989）.
B.: J. Am. Chem. Soc., 111, 1123

る。しかし、遷移状態に関与しうる何らかのキラル分子を反応系内に添加すると、2つの攻撃方向に差が生じ、片方のエナンチオマーが優先して得られることがある。

P roducts
揮発性を低減！ 回収・再利用可能な環境調和型酸化オスミウム触媒
コードNo.

品

名157-02481

Osmium（Ⅷ）oxide, 1-Ethyl-3-methylimidazolium
Tetrafluoroborate

和光純薬時報規 格

容 量

希望納入価格（円）

有機合成用

10g

照 会

Vol.72, No.1（2004）

7

echnical Report
PresepR-C DNPHショートタイプの開発（その2）
和光純薬工業株式会社

大気及び室内空気中のアルデヒド類測定
R

４．ブランク値と実試料測定例

久保田守

アセトアルデヒド、アセトンが検出された。ブラン

R

R

試薬研究所

用捕集管Presep -C DNPH及びPresep -C

Presep -C DNPH（Short）
１本をポータブ

ク成分は捕集管及び抽出時に用いたアセトニ

DNPH（Short）
に関して、
空気サンプリング時

ルポンプに接続し、実験室中の空気を流速

トリル由来と思われるが、抽出操作（環境、器

1.0r/min.で30r採取した。試料採取した捕具類）から汚染を受ける場合があるので注意

を本誌Vol.71,No.2で報告した。Presep -C

集管及び未使用の捕集管を各々アセトニトリル（和を要する。ブランク値測定の際、捕集管から

高
DNPH（Short）
はPresepR-C DNPHと同様、

光アルデヒド分析用）
にて流速約1.5mr/min.で抽出後、直ちにHPLC分析を行うことが望まし

純度ポリエチレン製カートリッジにDNPH
（２，
４−ジ

抽出、
5mrにメスアップ後、抽出液各10μrをい。Fig.2は空気30r採取したときのクロマトグ

ニトロフェニルヒドラジン）と酸触媒をコーティング

HPLCに注入した。

ラムである。

の通気速度と吸引抵抗（真空度）比較結果
R

したシリカゲルが充てんされている。
ショートタイ

未使用捕集管の抽出液測定例をFig.1に

プは基材ゲル物性、
フィルター性能の見直しを行示した。ブランク成分としてホルムアルデヒド、い、高速サンプリングが可能である。以下、（Short）の特長と製品仕様
PresepR-C DNPH

Table 1
PresepR-C DNPH（Short）

ならびに上記2品目の選択方法、
ブランク値と実試料測定例について記載した。
基

１．PresepR-C DNPH（Short）の特長

材

PresepR-C DNPH

ポリエチレン製カートリッジ

ポリエチレン製カートリッジ

破砕状シリカゲル

破砕状シリカゲル

粒子径 150-450μm

粒子径 75-150μm

通気時の抵抗が低く、高流速でのサンプリン

細孔径 7nm

細孔径 7nm

グが可能

比表面積 450cm2/g

比表面積 450cm2/g●

室内空気捕集に好適（厚生労働省法に準拠）

充てん剤量

約0.4g(シリカゲル)/カートリッジ

約0.8g（シリカゲル）/カートリッジ

バックグラウンド値が低い

DNPH量

約1mg/カートリッジ

約2mg/カートリッジ

●
●

サ イ ズ

２．製品仕様試料負荷量

Table 1に示す。

全長 3.8cm、最大幅 1.9cmφ

全長 5.0cm、最大幅 1.9cmφ

充てん部 1.0φ×0.8cm

充てん部 1.0φ×1.6cm

約75μg（ホルムアルデヒドとして）約150μg(ホルムアルデヒドとして)

３．捕集管の選択
PresepR-C DNPH

1. Formaldehyde-2,4-DNPH
2. Acetaldehyde-2,4-DNPH
3. Acetone-2,4-DNPH●＊

汎用タイプ。大気捕集などに好適 。充てん
量がショートタイプの約2倍。
PresepR-C DNPH（Short）●

室内空気や高通気速度での捕集に好適。
サンプリングポンプの吸引能力に応じて本品を複数連結して使用することが可能。
＊：大気捕集の際、測定値がオゾンの影響を受ける場合は、
オゾンスクラバー（Presep R-C
Ozone Scrubber）
を大気吸引側に取り付けて捕集を行う。

Fig.2. 空気30R
HPLC Conditions
Column:Wakosil-Ⅱ 5C18 RS, 4.6×250mm, Eluent: CH3CN/H2O=60/40(v/v), Flow rate 1.0mR/min
at 40℃, Detection: UV360nm, 0.005AUFS(Fig.1), 0.04AUFS(Fig.2), Injection Vol.: 10μR
Fig.1. 捕集管ブランク

P roducts
コードNo.

290-34251

8

品

名

R

Presep -C DNPH（Long）

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

規 格

容 量

希望納入価格（円）

試料前処理用20個

29,000SERIES

Talking ofLAL
和光純薬工業株式会社

土谷正和

第54話 リムルス試験の将来
エンドトキシン測定に関してはリムルス試薬はないと思われます。
また、価格が安いだけでの独壇場ですが、この試験が開発されてから性能の悪い試薬が出てきても、
エンドトキシン

すでに30年もの年月が経っています。この間、試験で試験している製品は、試薬よりずっと種々の技術は開発されたものの、カブトガニの

高価なものですから、
結果の信頼性を落とす

献血によって試薬原料をまかなっている部分

リスクはとらないでしょう。

は変わっていません。科学技術が進歩する中、

Factor Cの活性測定は、これを最初に精エンドトキシン測定は、
今後どのようになってい製した九州大学のグループが測定しています。

くのでしょうか。また、エンドトキシン試験法はしかし、エンドトキシン測定にこの方法は採用

各国の局方に収載されていますが、公定法とされてきませんでした。CAMREX社の方法

してのエンドトキシン測定はどのようになっていgov/ohrms/dockets/dailys/03/Aug03/

くのでしょうか。
ということで、今回は、リムルス

081403/03P-0278̲emc-000001-01.doc）。

だ判断できませんが、この製品が市場に出て試験の将来について考えてみましょう。

9月にはACC社がCAMBREXの反論文書にきたとしても、その性能判定にある程度の時が以前の方法より優れているかどうかは、ま再反論するということで、事態は混沌としてき間がかかることは間違いありません。その後、米国のAssociates of Cape Cod（ACC）社ています（www.fda.gov/ohrms/dockets/

実際に使えるかを判断することになるでしょう。

が、FDAに請願書を提出したのです。事のdailys/03/Sept03/092603/03p-0278-

起こりは、C A M B R E X 社のリコンビナント

rc00001-vol1.pdf）。

今年の6月に興味深い出来事がありました。

アメリカのLALメーカーであるEndosafe社は、Endosafe-PTSという製品を発売しています。

Factor Cを使ったエンドトキシン測定試薬が、論議の焦点は、
遺伝子組み換えによって作

リムルス試薬を0.025mrのサンプルと、
カートリッ

FDAの認可を受けることなく発売されたことられた動物血液由来の蛋白を、血液由来のジ上の細い溝中で反応させ、小さい機械でエです。このPyoGeneという製品は、リムルス試製品として管理するかどうかということ、
FDA

ンドトキシン濃度を測定する製品です。彼らは、

薬 中 の エンドトキシン感 受 性 因 子 であるがリムルス試薬の規制をどのようにしていくの使っているリムルス試薬がFDAにライセンスさ

Factor Cを遺伝子組み換えによって製造し、かというところでしょう。前者は当局の判断にれたものであるから、この製品は、最終製品の活性化型のFactor Cの基質と組み合わせて、任せるとしても、後者は筆者らにとって大きな試験に使わないかぎり、FDAの認可なしで検産生される蛍光色素を測定するものです。

影響がある部分です。今回のテーマであるリ査に使えると言っています。

FDAがこの製品を認可なしで発売することをムルス試験の将来にも大きな関わりがあります。

リムルス試薬の将来を考えるとき、次世代の許したことに対して、ACC社は、以下の要求

リムルス試薬は、単なる試験試薬であるにも関エンドトキシン試験法が必要になってくると思を行いました。

わらず無菌製造される生物製剤として扱われわれます。今後の流れとして、遺伝子組み換（1）認可が必要ないという決定を取り消し、てきました。おそらく注射用の医薬品と同等のえ技術によってリムルス試薬の因子を製造する、

premarket approvalを要求する。

規制はリムルス試薬には厳しすぎるとの反省

現在のリムルス試験の微量化、物理化学的な（2）
もし（1）ができなければ、ライセンスされてもあり、現在はCFR 21 Part 660のリストから

測定方法の応用などが考えられ、実際にこれいないエンドトキシン試験を使用しようとする

外されています。
しかし、
リムルス試薬は、
もとらの製品が出ようとしています。
しかし、現在製造業者は、バリデーションデータを申請し、もと生物製剤としてライセンスされた製品ですのところ、リムルス試薬を越える方法は出てき

当局の承認を受けるようにする。また、すでにから、CFR 21 Part 600の規制を受けており、ていないように思えます。また、医薬品等のエライセンスされたエンドトキシン試験法に対して、

CFR 21 Part 600と医療用具や臨床検査薬

ンドトキシン試験として何か新しい方法が採用の品質管理に関する規定（CFR 21 Part 820）されるためには、
その有効性を検証するためすぐに規制を解く。
この、ACC社の嘆願書には、リムルス試薬とによって規制されているという見方が主流でに長い期間が必要です。今後、新技術、当局のFDAによる規制の歴史なども書かれており、す。今回の嘆願書は、
これが規制廃止になるによる規制、製造業者の思惑などが絡み合っ

興味のある方は一度読まれるとおもしろいか

可能性にも言及しています。現在のエンドトキて、
新しい流れが作られていくことでしょう。現もしれません。
この文書は、
FDAのホームペー

シン試験は、
そのバリデーション方法も確立さ在の状態は、
そろそろ次世代のエンドトキシン

ジ からダウンロード す ることが できます

れてきており、
試薬自身に問題がある場合も、試験を考える時期に来ているが、その有力な（www.fda.gov/ohrms/dockets/dailys/03

これが検出できるようになっています。すなわち、候補はまだ現れていないというのが実情かと思うのですがいかがでしょう。

/Jun03/061803/03p-0278-cp00001-01-vol1.pdf）。

試薬の性能に問題があると、日常試験におけこれに対してCAMBREX社も8月に文書を提る規格に入らないという事態が予想されます。

出し、ACC社が要求した再審査やその他の

この意味からは、
もしFDAの規制が無くなっ指摘に対して、反論しています（ www.fda.

ても、
エンドトキシン試験自体には大きな影響

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

次回は、第55話「エンドトキシンと添加剤」の予定です。

9

R

esearchSERIES

脳科学一口メモ ２０（最終回）

神経科学・精神科学の一層の発展を！
北海道大学大学院薬学研究科

野村

神経変性疾患の発症機序に関してゲノム促進することを報告した。 一般に一卵性双が低下するとDNA-ヒストン複合体を構成す

科学や分子生物学、生化学的な研究が活

生児はその遺伝子は同一であると考えられてるヒストンアセチル化酵素活性が上昇し、ヒ発に展開されている。その基本的な機序がいるが、今回、XBP-1という小胞体（ER）

ストンがアセチル化されクロマチン構造がゆる解明されるのもそう遠くないと期待されている。

ストレス応答蛋白質の遺伝子プロモーター領

み、その結果 RNA ポリメラーゼが結合・作

一方、躁うつ病、統合失調症等の精神医

域に変異が見出されたのである。また、ER用しやすくなり転写が促進し、D 2 受容体発学領域の難病については、神経変性疾患にストレス応答に関わるXBP-1レベルの低下が、現が高まると説明されている（図 1）。この関する知見に比べまだ不明な点が多い。 精双極性障害の発症のリスクファクターであると報告は統合失調症発症の原因が、D 2 受容神病態はデリケートな面が多く、疾患発症機提唱された訳である（図 1）。 ER が低酸素体遺伝子の塩基配列の差でなく、DNA メチ

序解析も容易でないことによるのかもしれない。

等のストレスを受け、折りたたみ異常の蛋白

ル化の程度の差というepigenetic（後生的）

これまで、躁うつ病の発症に関し、脳モノア質が蓄積したりするとXBP-1 が誘導され、こな差によることを示唆している。がん、心疾患、ミン系機能異常によるという神経化学的仮説（脳れにより分子シャペロン（ER ストレスに伴う変

気 管 支 喘 息 、糖 尿 病 等の生 活 習慣 病にカテコールミンとセロトニンの濃度バランス異常、性蛋白質の再折りたたみに関わるGRP78 等）

epigenetic な要因が関与する可能性も論じ両系のシナプス伝達機能の異常、モノアミンが誘導される。 躁うつ病（双極性障害）発られていることを考えると興味深い。

受容体とシグナリングの異常等の仮説）が提症に、環境からのストレスといった要因が関「脳科学一口メモ」は、1999 年 4 月号掲

案されてきた。 治療薬がこれらの異常を正わる事を示唆している。

載分を第 1 回として、これまで（今回も加え）常化するという薬理学的研究結果も当仮説

一方、統合失調症の病態に関して、脳ドを支持している。 最近、Kakiuchiら１）は、

パミン D2 受容体活性過剰仮説が一般に受け画では、進展の著しい生命科学の中で 21

1 人が双極性障害患者でもう1 人は健康人

入れられている。この度、一卵性双生児の世紀に発展の期待される脳科学のトピックス

である一卵性双生児のリンパ球を用いて、リンパ球を使用し、双子のうちの健常者に比の最近の成果と問題点、今後の展望等につ双極性障害者の転写因子 XBP-1 遺伝子の

較し、統合失調症発症者では、ドパミン D 2

いて、当該課題に取り組んでいる第一線の計 20 回にわたり掲載させて頂いた。この企

プロモーター領域に 1 塩基置換が生ずること

受容体の遺伝子プロモーターの DNA（シト

研究者に解説して頂いた。 取り扱ったテーによりXBP-1 の発現が低下すること、一方、シン）のメチル化の程度が低下していること

マは、記憶・学習、老化、痴呆、アルツハ

気分安定薬バルプロ酸がこの XBP-1 発現をが報告された 2）。 DNA のメチル化の程度

イマー病、パーキンソン病、精神疾患、スト

双極性障害

統合失調症

ストレス

ドパミンD2受容体遺伝子異常
変性蛋白質
XBP-1の変異，誘導低下（DNAメチル化）

細胞死

分子シャペロンの誘導低下

DNAｰヒストン複合体の構造変化

双極性障害
発症？

転写促進

小胞体

核

神経細胞

神経細胞

D2受容体の高発現複合失調症発症？
小胞体で分子シャペロン誘導に関する転写因子XBPｰ1
プロモーターが塩基置換により発現低下、その結果、
分子シャペロン（GRP72）発現低下（Kakiuchiら，
2003）

ドパミンD2受容体遺伝子プロモーターのメチル化の低下によりクロマチン構造が変化し、D2受容体発現が増加（Petronicsら，2003）

図1. 双極性障害と統合失調症発症機序についての仮説 １，２）

10

靖幸

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

レス、及び神経免疫内分泌相関等、多岐に口メモ」をシリーズで企画・編集させて頂い〔参考文献〕

わたる。また、生理学、生化学、分子生物た者としては幸いである。 最後に、ご多忙

１）Kakiuchi, C. et al.: Nature Genetics Published

学、ゲノム科学、組織学、薬理学、行動科の中、執筆いただいた諸先生、さらに終始学、さらに心理学等、関連分野も広くカバー

ご支援頂いた和光純薬工業（株）試薬化されたといえる。この「脳科学一口メモ」が、成品事業部の岸井松司氏、及び大西礼子

日夜発展する脳科学理解の一助となり、また氏に深謝したい。

online, 31 August（ 2003）.
２）Petronics, A. et al.: Schizophrenia Bulletin,29（ 1）, 169（ 2003）.

今後の新たな研究展開に少しでも示唆を与えることができたとすれば、この 「脳科学一Information
トライアルサンプル準備しました！

NO測定・除去用試薬
NO還元酵素（P450nor）
P450norは、
モノオキシゲナーゼとしてではなく、NOをN2Oに還元するレダクターゼとして働くユニークなP450酵素です。ヘモグロビン法のように前処理を必要とせず、好気的な実験環境下でNO還元反応を行うことができます。この他、
NAD（P）Hの減少、
N2Oガス発生をモニタリングすることでNO測定することができます。NOとの結合速度定数はPTIOなどのNOトラップ剤に比べ非常に速くなっています。NO測定、NO除去に使用できます。
発売に先立ち、
トライアルサンプルを準備しました。
起 源 : Aspergillus oryzae
形 状 : 液状（凍結品）
分子量 : 45,600
最適pH : 5.5〜7.2
熱安定性 : T50＝53.9
等電点 : 5.44

（37℃，pH 7.2）
活 性 : 43,000 mol NO/min/mol enzyme以上

krea：1.5×107 M−1s−1

酵素活性測定原理+

2NO + NAD（P）H + H+

N2O + NAD（P） + H2O

瞬間的なNO消去反応

ご希望の方は、当社代理店／営業担当者もしくは下記までご請求下さい。
和光純薬工業（株）試薬開発部 サンプル係
FAX：06ｰ6201ｰ5965
E-mail：tanabashi.shinji@wako-chem.co.jp

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）11

ew Products
ダイオキシン類分析の前処理にダイオキシン類分析適合性試験

プレセップR活性炭埋蔵シリカゲル（リバースカラム）

ジベンゾ-p-ジオキシン 規格値 ジベンゾ-p-フラン 規格値
TeCDFs1↓
1↓
TeCDDsPeCDFs1↓
1↓
PeCDDsHxCDFs1↓
1↓
HxCDDsHpCDFs5↓
5↓
HpCDDs
OCDF
5↓
5↓
OCDD

ご好評いただいております活性炭埋蔵シリカゲルを、ガラス製の単管に充てんしたカラムです。本品は、 逆溶出法 （バックフラッシュ法）
で使用することにより、溶媒使用量の低減と、前処理作業時間の短縮がCo-PCBTeCBs
PeCBs
HxCDBsHpCDBs

規格値
10↓
10↓
10↓
5↓

（単位：pg/本）可能になります。

特分画性能試験

長（参考データ）120●ダイオキシン類分析適合性試験を実施

100
Recovery（％）

ダイオキシン類のブランクを、
高分解能GC-MSにより保証●個別アルミパック包装を採用
必要な個数だけ使用可能●溶離液の使用量が低減
逆溶出法での使用により、溶媒使用量が低減

80
60
40
20
0

カラムの構成Hex 0-50mR

25v/v% CH2Cl2/Hex
0-150mR

2,2',3,4,4',5,5'-HpCB#180
2,3,4,4',5-PeCB#114
3,3',4,4'-TCB#77
3,3',4,4',5-PeCB#126
1,3,6,8-TCDF

ガラス管：内径10mm

Tol 0-100mR

2,2',3,3',4,4',5-HpCB#170
2,3,3',4,4',5'-HxCB#156
3,4,4',5-TCB#81
3,3',4,4',5,5'-HxCB#169
1,2,3,4,6,7,8,9-OCDD

PTFE製シール［トルエン分画でのダイオキシンとノンオルト体Co-PCBの溶出］

円柱状脱脂綿100

活性炭埋蔵シリカゲル 1g
80

円柱状脱脂綿60
40

3,4,4',5-TCB#81
3,3',4,4'-TCB#77

PTFE製シール

3,3',4,4',5-PeCB#126

20

3,3',4,4',5,5'-HxCB#169
1,3,6,8-TCDF
1,2,3,4,6,7,8,9-OCDD

010mR 20mR 30mR 40mR 50mR 60mR 70mR 80mR 90mR100mR（分画試験条件）

1 ）試料1mR（ Co-PCB14種各10ng/mR、1,3,6,8-TCDF及びOCDD各15ng/mRヘキサン溶液）を本品の上層にチャージする。
2 ）ガラス管の壁面を少量のヘキサン（約0.5mR）で洗浄後、10分間静置す

使用例

る。

3）ヘキサン50mR、25v/v％ ジクロロメタン/ヘキサン150mRで溶出する｡（ジオルト体及びモノオルト体Co-PCBの分取）
4）カラムを反転させた後、さらにトルエン100mR（10mRずつ10画分分取）で溶出する。
（ノンオルト体Co-PCB及びダイオキシンの分取）

滴下ろうと

コードNo.
プレセップRカラムレデューサー（PTFE製）

プレセップR活性炭埋蔵シリカゲル（リバースカラム）

プレセップRカラムジョイント（TS15/25）

12

品

名

規 格

PresepR Active Carbon297-43051 impregnated Silica Gel ダイオキシン
類分析用(Reverse Column)
R
Presep Column Reducer
295-42751−(PTFE)
PresepR Column Joint
291-42851−(TS15/25)
PresepR Column Joint
297-42951−(TS19/38)

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

容 量 希望納入価格（円）
5本

13,000

1個

6,300

1個

3,500

1個

3,700

ew Products■ハロ酢酸試験用

改正水道法対応

コードNo.

水質分析用試薬
水道法は、平成4年の改正以来10年が経過し、水道水の水質を取り巻く環境も大きく変化した事、
また世界保健機構（WHO）での飲料水
水質ガイドライン全面改訂などを踏まえ、
平成15年5月に水質基準が改定されました。
当社では、この改正に合わせ新たに水質基準に追加された1,4-ジオ
キサン、
臭素酸、
総有機炭素などの各種標準液及び、試験方法が変更
された濁度、陰イオン界面活性剤などの各種標準液を追加発売しました。

■誘導結合プラズマ発光分光分析装置による一斉分析用 金属類混合標準液
コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）Multielement Standard
Solution W-Ⅵ
混合元素種

139-14551（mg/R in 0.1mol/R HNO3）

ICP分析用 50mr

12,000

Al:100, B:100, Ca:100, Cd:100,
Cr:100, Cu:100, Fe:100, Mg:100,
Mn:100, Na:100, Pb:100, Zn:100■イオンクロマトグラフ（陽イオン類）一斉分析用
陽イオン混合標準液
コードNo.

品

名

規 格Multication Standard
Solution Ⅰ

イオン
クロマト
136-14561 混合陽イオン種（mg/R in 0.02mol/R HNO3） グラフ用

容 量 希望納入価格（円）品

コードNo.

品

規 格

名

コードNo.

品

名

8,400

名

イオン
Bromate Ion Standard
クロマト
028-15091 Solution−（BrO3 :2,000mg/R in Water） グラフ用

■揮発性有機化合物試験用
コードNo.

品

名

容 量 希望納入価格（円）

4,000

50mr

容 量 希望納入価格（円）Sodium Dodecylbenzenesulfonate
199-13131 Standard Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRMethanol Solution）

7,500

Sodium Tridecylbenzenesulfonate
196-13141 Standard Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mR Methanol Solution）

7,500

Sodium Tetradecylbenzenesulfonate
193-13151 Standard Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRMethanol Solution）

7,500

品

名

p-BromofluorobenzeneFluorobenzene Mixture1mr029-15021 Standard Solution
水質試験用
×5A
（each 1mg/mRMethanol
Solution）

5,500

Fluorobenzene Standard
1mr
水質試験用
069-04471 Solution
×5A（1mg/mRMethanol Solution）

5,000

容 量 希望納入価格（円）

水質試験用 1mr
×5A

8,000

Phenol Standard Solution
166-21291（1mg/mRWater Solution） 水質試験用 1mr
×5A

5,400

品

内部標準液

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）Acenaphthene-d10 Standard
013-19881 Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRAcetone Solution）

品

名

規 格

■濁度試験用 ポリスチレン系品

名Turbidity Standard Solution639-04471（Polystyrene）100

Vol.72, No.1（2004）

8,000

標準液
容 量 希望納入価格（円）

Potassium Hydrogen
167-21341 Phthalate Standard Solution 水質試験用 50mr
（as C:1mg/mRWater Solution）

コードNo.

和光純薬時報規 格

内容：2-クロロフェノール、4-クロロフェノール、
2,4-ジクロロフェノール、2,6-ジクロロ
フェノール、2,4,6-トリクロロフェノール

コードNo.

容 量 希望納入価格（円）

標準液

5 Chlorinated Phenols MixtureStandard Solution（each 1mg/mRAcetone Solution）■総有機炭素試験用

内部標準液

規 格

規 格

7,500

コードNo.
規 格

標準液

Sodium Undecylbenzenesulfonate
192-13121 Standard Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRMethanol Solution）■フェノール類試験用

標準液

5,000

7,500

030-19251

1,4-Dioxane Standard
049-28791 Solution
水質試験用 2mr
×10A
（1mg/mRMethanol Solution）

品

容 量 希望納入価格（円）Sodium Decylbenzenesulfonate
195-13111 Standard Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRMethanol Solution）

容 量 希望納入価格（円）5,800

コードNo.

5,500

内部標準液
規 格

■陰イオン界面活性剤試験用■フェノール類試験用

1,4-Dioxane-d8 Standard
1mr042-29021 Solution
水質試験用
×5A
（1mg/mRMethanol Solution）■臭素酸試験用容 量 希望納入価格（円）1-Chlorodecane Standard
034-19031 Solution
水質試験用 1mr
×5A
（1mg/mRHexane Solution）

コードNo.

名

規 格■ホルムアルデヒド試験用■1,4-ジオキサン試験用 標準液（水質基準追加項目）品

名1,2,3-Trichloropropane
203-15981 Standard Solution
水質試験用 1mr
（1mg/mRt-Butyl Methyl
×5A
Ether Solution）

5,500

50mr

Ca2+:100, Mg2+:100, Na+:100

コードNo.

内部標準液

4,000

標準液

メーカー名 容 量 希望納入価格（円）
JSR㈱

100mr

15,00013

ew Products
関連商品

検水100mR中の大腸菌と大腸菌群を24時間で検出
アクアテストⅡ ATB-100

コードNo. メーカーコード

ピルビン酸添加X-GAL・MUG培地

水質基準が改定!
2004年4月1日に改定される水道法では品

名

容 量 希望納入価格（円）AquaTestⅡ ATB-100用
１本
306-14581 ATB-100C
コンパレータ
309-09441 BL-02 ミニブラックライト蛍光ランプ １台
ミニブラックライト用
１本
300-09471 BL4BLB
交換用蛍光管
１ラック304-13421 PXR-01 収納ラック

検水100mr中に大腸菌が検出されない事、■50mR用のバックタイプ及び10mR用の試験管タイプとなっておりその際使用する培地はピルビン

308-13201 ATB-50

酸添加X-GAL/MUG培地が認定されてい（50mr用×5バッグ）×20

AquaTestⅡ ATB-50用
1本
コンパレータ
307-14251 ATⅡ-10 AquaTestⅡ AT-10
10mr×200本
307-13411 ATB-50C

ます。

特

AquaTestⅡ ATB-50

3,000
5,600
1,700
5,000

25,0002,000
28,000長●試験管は要りません

株式会社ワコ−ケミカル

樹脂製バッグに、調製済粉末培地が密封されています。

新素材

バッグを開封して、検水を入れるだけで検査が開始できます。

カ−ボンナノチュ−ブ

面倒な前準備や後作業が無いため、省力効果は抜群です。

炭素だけでできた結晶性巨大分子のカ−ボンナノチュ−ブは非常に●目視判定が容易
樹脂製ボトルや試験管に比べて、発色と蛍光発光が明瞭に観察でいます。単層及び多層のカ−ボンナノチュ−ブを多種類揃えています。

きます。

また、
別容量のご注文もお受けできますので、お問合せ下さい。

●使う人の身になった設計
培養後はバッグごとオートクレーブ滅菌し、そのまま廃棄ができます。
保管場所も、
驚くほど省スペースで済みます。

蛍光発光（E.coli 陽性）組

青色発色（大腸菌群陽性）

外径（nm） 内径（nm） 壁厚（nm）長さ（μm） 純 度

Single-walled,
1~2nm
Multi-walled,
3~10nmMulti-walled,
10~30nmMulti-walled,
20~30nmMulti-walled,
20~50nmMulti-walled,
40~70nmMulti-walled,85~200nm

1-2

ー

ー

0.2-100

90%以上

3-10

1-3

ー

0.1-10

80%以上

10-30

3-10

ー

1-10

80%以上

20-30

ー

1-2

0.5-2

95%以上

20-50

ー

1-2

0.5-2

95%以上

40-70

5-40

ー

0.5-2

95%以上

85-2005-10

ー

0.5-10

95%以上

変色無し
（陰性）

成

ペプトン

Carbon Nanotube,
Single-walled, 1〜2nm
電子顕微鏡像（HRTEM）

5.0ｇ

りん酸水素二カリウム

4.0ｇ

塩化ナトリウム

5.0ｇ

りん酸二水素カリウム

1.0ｇ

硝酸カリウム

１.0ｇ

X-Gal

0.10ｇ

コードNo.

ピルビン酸ナトリウム

1.0ｇ

MUG

0.10ｇ

ラウリル硫酸ナトリウム

0.10ｇ

IPTG

0.10ｇ

324-63071 Carbon Nanotube, Single-walled,1~2nm
250mg
1g
323-43381 Carbon Nanotube, Multi-walled, 3~10nm
5g329-43383
1g
320-43391 Carbon Nanotube, Multi-walled, 10~30nm
5g
326-43393
1g
323-43401 Carbon Nanotube, Multi-walled, 20~30nm
5g329-43403
1g
320-43411 Carbon Nanotube, Multi-walled, 20~50nm
5g
326-43413
1g
327-43421 Carbon Nanotube, Multi-walled, 40~70nm
5g323-43423
1g
327-63061 Carbon Nanotube, Multi-walled, 85~200nm
5g
323-63063

当組成は、2001年改訂上水試験法の糞便性指標である大腸菌群及び大腸菌の試験方法として収載された特定酵素基質培地法に基づくものです。

コードNo. メーカーコード品

名容 量 希望納入価格（円）（100mr用×
304-14401 ATB-100 AquaTestⅡ ATB-100 5バッグ）×20

14

注目されており、新しい用途、
特に電子材料関係の応用が期待されて

30,000

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

品

名容 量 希望納入価格（円）17,00010,00035,00010,00035,00010,00035,00010,00035,00010,00035,0008,000
28,000ew Products
エンドファイトトキシン

局方対応の生薬標準品

ロリトレムＢ

ヒルスチン標準品

日本は牛や競走馬などの飼料として年間数十万トンもの牧草

生薬チョウトウコウより分離精製されたアルカロイドです。

を輸入しています。これらの牧草に寄生する真菌（エンドファイト）が産生する神経毒素（エンドファイトトキシン）が問題

N

N
Hになっています。

H

H

C2H 5

ロリトレムBは、主にイネ科牧草などに寄生もしくは共生す

H
OCH3

H3COOCる真菌が産生するエンドファイトトキシンのひとつで、この菌

立障害、痙攣などのBSE様の症状を引き起こすことが知られて

C22H28N2O3=368.47

Hに汚染された牧草を牛が摂取するとふらつき、筋肉の攣縮、起起 源 : Uncaria rhynchophylla Miquel, Uncaria sinensis

Haviland, Uncaria macrophylla Wallich（ Rubiaceae）

います。

E ）-16,17-Didehydro-17-methoxycorynan-16化学名 （3β,16:

薬理的特長は、

carboxylic acid methyl ester

１）Caイオンチャンネルに作用し痙攣誘発の可能性

CAS No. : 7729-23-9２）GABAを放出させる可能性

メタノール溶状 : 澄明

３）ロリトレムBを1,800ppb以上含む飼料を牛に与えると中毒

含量（HPLC）: 98.0%以上症が生じる

コードNo.

など報告されています２, ３）。

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）

生薬試験用 ５ｍｇ

082-08081 Hirsutine Standard

35,000

ロリトレムBは畜産局長通達｢飼料分析基準｣により分析法とカプサイシン標準品

１）
基準値が定められています。（基準値1,800ppb）

O
N
H
O

HO
H

OCH3
H

H
O

化学名 : N-[（4-Hydroxy-3-methoxyphenyl）methyl]-8-methyl-6-

H
O
N
H

C18H27NO3=305.41

起 源 : Capsicum annuum Linné
nonenamide

OOH

CAS No. : 404-86-4

O
O
H

メタノール溶状 : 澄明

H

含量（HPLC）: 99.0%以上

C42H55NO7=685.89

コードNo.

品

名039-18981 Capsaicin Standard

規 格

容 量 希望納入価格（円）

生薬試験用 ２０ｍｇ

25,000CAS No. : 81771-19-9ジヒドロカプサイシン標準品

ジクロロメタン溶状 : 澄明
含量（HPLC） : 98％以上

O
N
H〔参考文献〕

HO

１）畜産局長通達「飼料分析基準」，2001年1月.

OCH3

C18H29NO3=307.43

２）Hawkes, Allan. D. et al.: J. Agric. Food Chem., 43, 1283
（1955）.
３）Pirelli, G. et al.: "Endophyte toxins in grass seed field and straw",

起 源 : Capsicum annuum Linné
化学名 : 8-Methyl-N-vanillylnonanamide
CAS No. : 19408-84-5（1995）.

メタノール溶状 : 澄明
含量（HPLC）: 99.0%以上
コードNo.

品

122-05071 Lolitrem B

名規 格

容 量 希望納入価格（円）

エンドファイト
1.3μg
トキシン試験用

コードNo.

40,000

和光純薬時報品

名規 格

容 量 希望納入価格（円）045-28911 Dihydrocapsaicin Standard 生薬試験用 ２０ｍｇ

Vol.72, No.1（2004）

32,00015

ew Products
性アルカリホスファターゼ
活性測定キット
ラボアッセイTM ALP能

測 定 範 囲：>0.06mmol/r
標準曲線範囲：0〜0.5mmol/r（0.5mmol/r 以上の直線性も確認していますので外挿して求めることができます。）

アルカリホスファターゼ（ALP）
は肝臓をはじめ、骨、小腸などに分布しているホスホモノエステラーゼでアルカリ性に最適pHをもちます。血再現性：C.V.<10%

清中のALP活性の上昇は肝・胆道、骨病態に関連しますが、特に骨代謝の研究分野では、骨芽細胞の分化段階で発現するマーカーの一つであることから、
骨形成マーカーとしてその組織学的、生化学的検出が〔参考文献〕
１）Yamamoto, M., Takahashi, Y., Tabata, Y.: Biomaterials, 24（ 24）, 4375（ 2003）.

行われています。一般に骨芽細胞培養上清、
実験動物血清を検体とした測定には、
少量・多検体同時処理のためマイクロプレートリーダーが汎用されています。本品はこのような測定法に適したALP活性測定（注）本品は体外診断用としては使用できません。

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）

キットです。
291-58601 LabAssayTM ALP

細胞生物学用 900回用

15,000

キット内容
●基質錠

20錠

（溶解時 p-ニトロフェニルりん酸二ナトリウム 6.7mmol/r）●基質溶解液 100mr（2.0mmol/r 塩化マグネシウム含有 0.1mol/r 炭酸塩緩衝液 pH 9.8）

BMPアンタゴニスト●反応停止液 100mr（0.2mol/r 水酸化ナトリウム溶液）●標準液

サイトカイン類 3品目追加
ノギン, ヒト, 組換え体

10mr

（0.5mmol/r p-ニトロフェノール溶液）

ノギンはBMP（Bone Morphogenetic Protein）
アンタゴニストの一

測定原理

つで、
BMP受容体に競合してBMP活性を制御し、広くは発生学におp-ニトロフェニルりん酸を含む炭酸塩緩衝液（pH 9.8）中で検体を作用させると、
検体中のアルカリホスファターゼによりp-ニトロフェニルりん
生成したp-ニトロフェノール
酸はp-ニトロフェノールとりん酸に分解され、はアルカリ性側で黄色を呈します。この405nmの吸光度を測定することにより検体中のアルカリホスファターゼ活性値を求めます。

p-ニトロフェニルりん酸 ＋ H2O

ALP
Mg2+

いて背腹軸の形成に関与しています。
また、神経誘導因子として未分化の外胚葉細胞に作用させると中枢神経系細胞を分化誘導することが知られています。
起 源 : Human noggin cDNA expressed in E.coli
活 性 : ED50＝0.05〜0.08μg/mr（ 5.0ng/mrのBMP-4によるATDC-5軟骨様細胞へのアルカリホス

p-ニトロフェノール ＋ りん酸

ファターゼ誘導阻害作用）

コードNo.

146-07771

標準曲線

Absorbance

0.7

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）Noggin, Human, recombinant
細胞生物学用 20μg
【rhNoggin】

39,0000.6

ヘッジホッグファミリー

0.5

ソニックヘッジホッグ, ヒト, 組換え体

0.4

ヘッジホッグファミリー（Shh、Ihh、Dhh）の一つで、体軸の左右や肢0.3芽の前後軸の決定など、形態形成に関与するサイトカインです。

0.2
0.1

起 源 : Human sonic hedgehog cDNA expressed in E.coli
活 性 : 未試験

0
0

0.2

0.4

0.6

p-Nitrophenol（mmol/R）

分子量 : 19,600
コードNo.

199-12891

使用マイクロプレートリーダー：サファイア（TECAN Austria GmbH）

16

品

和光純薬時報品

名規 格

容 量 希望納入価格（円）Sonic Hedgehog, Human, 細胞生物学用 25μg
recombinant【rhShh】

Vol.72, No.1（2004）

39,000ew Products
軟骨細胞分化制御因子

接着細胞が培養されたマイクロプレートが含まれており、これをDNA損

副甲状腺ホルモン関連タンパク質, ヒト, 組換え体傷／H2A.Xりん酸化を誘導する試薬などで処理した後、固定化と透過PTH（副甲状腺ホルモン）と相同なN末端アミノ酸配列を有し、その部分でPTH類似作用を示します。さらに軟骨細胞成熟阻害物質として知られ、その作用機序は前肥大軟骨細胞に発現しているPTHrP（副甲状腺ホルモン関連タンパク質）
レセプターを介して軟骨細胞分化を制御します。
起 源 : Human parathyroid hormone related protein cDNA
expressed in E.coli

処理を行います。セリン139でりん酸化されたヒストンH2A.Xが抗りん酸化H2A.X（Ser139）抗体と抗マウスIgG-HRP標識抗体を用いて発光検出をします。

キット内容●Black View 96-well Cell Culture Plates

2platesTM●20% Tween-20 （v/v）

3mr

活 性 : 未試験

●Anti Mouse IgG Antibody, HRP conjugate10μg

分子量 : 9,800●20× TBS

50mr

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）Parathyroid Hormone
165-21141 Related Protein, Human, 細胞生物学用 50μg
recombinant【rhPTHrP】（Ser 139）, clone JBW301 200μg●Anti Phospho Histone H2A.X●10% BSA in TBS（Blocking Buffer）

39,000TM

Chemiluminescent Substrate Reagent A

10mr●LumiGLOTM Chemiluminescent Substrate Reagent B

10mr●LumiGLO

DNA損傷の検出に！
！
H2A.X Phosphorylation Assay Kit〔参考文献〕

H2A.Xはヒストンコアを構成するヒストンタンパク質の一つである

コードNo. メーカーコード

H2Aのサブタイプで、
全ヒストンの数％を占めるといわれています。このヒストンH2A.Xタンパク質はヒストンH2Aファミリーの中でも、
そのユニー

25mr

１）Rogakou, E. P. et al.：J. Biol. Chem., 273, 5858（ 1998）.

品

名容 量 希望納入価格（円）

H2A.X Phosphorylation Assay
562-56661 17-327A Kit
１Kit（Chemiluminescence Detection)

120,000

クなC末端配列により、他のH2Aヒストンサブタイプと区別されます。この
ユニークな配列は真核生物において高く保存されており、DNA二本鎖切断（DBS）反応においてC末端から4番目のアミノ酸が（哺乳類においてSer139）速やかにりん酸化されます。DNA損傷時においては非常に早い時期に起こる反応であり、放射線（Ionizing Radiation）照射後、1分もかからないうちに起こると報告されています1）。

関連商品
コードNo. メーカーコード―

07-376―07-290―07-386―07-289

本品は細胞ベースELISAキットです。マイクロプレート細胞培養中のりん酸化されたH2A.Xを速く、簡易に測定するために開発されました。

564-54661 07-146
DNA損傷を様々な条件で誘導562-56161 07-219
560-52821 07-164

569-56171 05-636―

固定化と透過処理
インキュベート・抗りん酸化H2A.X抗体
・抗マウス-HRP標識抗体
・LumiGLOTM基質

05-678568-56641 16-193
569-55711 14-409
565-56651 14-493

マイクロプレートルミノメーター
によりシグナルを検出

563-56071 12-406

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

品

名容 量 希望納入価格（円）Anti-acetyl-Histone H2A 100μr
Anti-acetyl-Histone H2A
100μr（Lys5）
Anti-acetyl-Histone H2A
100μr（Lys7）, ChIP Grade
Anti-acetyl-Histone H2A
200μr（Lys9）
Anti-Histone H2A
200μr（acidic patch）
Anti-Histone macroH2A1 200μr
Anti-phospho-H2A.X
200μg（Ser139）
Anti-phospho-Histone
H2A.X（Ser139）, clone
200μg
JBW301Anti-ubiquityl-Histone
200μr
H2A, clone E6C5
Anti-phospho-Histone
H2A.X（Ser139）, clone
100μg
JBW301, biotin conjugate
Histone H2A
100μg
Histone H2A, Human
100μg
Histone H2A Peptide,
100μg
biotinylated

56,90056,90056,90058,90059,10049,00059,00057,00058,90064,90059,10059,10029,10017

ew Products
マグネシウムイオン検出用
蛍光プローブKMG-20-AM

色素に脂溶性を持たせ細胞膜を通過させる
アセトキシメチル基

OO

Mg 2+は、必須元素であり、筋肉の収縮やホルモンの分泌など様々

O

な機能が知られていますが、既存のMg 2+プローブを用いても生体中Oに存在するCa 2+の影響により正確にMg 2+を検出することはできませ2+んでした。一方、これに対し『KMG-20-AM』は、Ca との反応性がN

O

低く抑えられているため、Mg 2+に対する選択性が非常に高くなってマグネシウムイオン
認識部位います。従って、『KMG-20-AM』はMg 2+とだけ反応し蛍光を発する
ため、従来不可能であったMg 2+の可視化を蛍光顕微鏡で簡便に行O

電子移動を起こす
非共有電子対うことができます。さらに細胞膜を容易に通過することから、細胞内C19H19NO6=357.36

2+

イメージングを行うことができます。今後、『KMG-20Mg の可視化、AM』を用いた研究によりMg 2+の機能及びMg 2+の関与する疾患の解明が期待されます。

特〔参考文献〕
１）Suzuki,Y. et al. : Anal. Chem., 74, 1423
（2002）.
（2003）.
２）Kubota,T. et al. : Biochem. Biophys. Res. Commun., 303, 332

長３）鈴木祥夫、岡浩太郎、鈴木孝治：和光純薬時報, Vol.71, No.3, p.2（2003）.

●Ca2+の影響を受けずMg2+の検出が可能●蛍光顕微鏡で容易に観察が可能

本品は、神奈川県地域結集型共同研究事業による研究成果に基づき製造●生細胞中のMg2+のイメージングが可能されたものです。
データ提供：（財）神奈川科学技術アカデミー

A

B

コードNo.

品

名

規 格110-00711
KMG-20-AM
116-00713

細胞生物学用容 量 希望納入価格（円）1mg
5mg

10,00040,000

図. カリウムイオン添加前後の蛍光顕微鏡像

0.4

0.3

[Mg2＋]
0.0mM

0.2

500mM

Fluorescence Intensity(A)
Absorbance

マトリックスなしでタンパク質のMS分析できるプレート
DIOS

2,000

0.1

(B)

[Mg2＋]
500mM

1,500

1,000

DIOSは他の市販の製品に比べて、無添加のままでタンパク質の0.0mM

質量分析ができる画期的な性能をもっています。従来は、無機金属（コ

500

バルトなど）の添加が必要で混入される添加物は、不要な測定ピーク
0
350

400

450

500

Wavelength / nm

0
450

500

550

600

650

Wavelength / nm

図. Mg2＋添加前後のKMG-20-AMの吸収スペクトル（A）と蛍光スペクトル（B）

規が発生して問題でした。DIOSはこれを解決したもので、表面の特殊なシリカの効果により、タンパク質のレーザー照射による分析が無添加で実施できます。

格形 状：褐色粉末
含量（HPLC）：95％以上

λex/em：440nm/500〜530nm
錯形成定数 : Kd（Mg）0.01M
コードNo. メーカーコード

Kd（Ca）0.03M

573-78731

18

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

00P2

品

DIOS

名

容 量 希望納入価格（円）
1枚30,000ew Products
Table. TpとLep及びこれらを併用した場合の比較

プロテオーム研究用

Lep単独使用では、missed cleavageがほとんどないことがわかりま す 。T p と L e p の 併 用 で は 、T p 単 独と 比 較し て m i s s e dcleavageが減少し、同定できたペプチド数が増加しています。

リシルエンドペプチダーゼ、質量分析グレード
トリプシン、ブタ膵臓由来、質量分析グレード
プロテオーム解析において、質量分析はタンパク質の同定や翻訳

Tp
Lep
TpとLepの併用
Arg,LysのC末端 LysのC末端 Arg,LysのC末端

切断部位

missed cleavage

多い

ほとんどない

少ない

（8%）

（0%）

（3%）

17

19

22

後修飾に関する情報を得る手法の一つです。質量分析を行うには、（切れ残ったペプチドの割合）※

電気泳動後のゲルより目的タンパク質を切り出し、酵素処理し、ペプチ同定できたペプチド数

ド断片にする必要があります。

※missed cleavage 1でデータベース検索した時のcoverage（得られたペプチドが配列全体に占める割合）からmissed cleavage 0で検索した
時のcoverageを引いた値。

本品は、使用頻度の高いタ
ンパク質分解酵素であるトリプ（データ提供：大阪府立母子医療センター

和田芳直先生）シンとリシルエンドペプチダーゼ
を質量分析の前処理用として〔参考文献〕

使い易い容量に微量小分けし１）Wada, Y. and Kadoya, M.: J. Mass Spectrom., 38, 117（ 2003）.

た凍結乾燥品です。

２）Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O. and Mann, M.: Anal. Chem., 68,
850（ 1996）.

コードNo.

特長●リシルエンドペプチダーゼは、タンパク質の切断部位を特異的かつになる。
基における切断の確実性が増し、得られるペプチド数が増加する。
●自己消化が非常に少ない。
●使用量に応じて微量小分けされている。

トリプシン（Tp）、リシルエンドペプチダーゼ（Lep）
及びこれらを併用した場合の比較
SDS-PAGE後のBSAバンド（100ng）
をトリプシン、
リシルエンドペ
プチダーゼ及びこれらの併用によってゲル内消化し、MALDI-TOFMS装置で質量分析した。Figureではそのマススペクトル、Tableではその評価を示した。

名規 格

容 量 希望納入価格（円）125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass プロテオーム 20μg×5本Spectrometry Grade
研究用

15,000Trypsin, from Porcine Pancreas, プロテオーム
20μg×5本
Mass Spectrometry Grade
研究用

15,000202-15951

効率的に分解でき、ペプチド質量によるデータベース検索が容易●リシルエンドペプチダーゼとトリプシンと併用することにより、
リシン残

品

関連商品
コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）293-57701 Negative Gel Stain MS Kit 電気泳動用 20回用

11,000299-58901 Silver Gel Stain MS Kit 電気泳動用 20枚用

19,000Sidec Technologies社
タンパク質構造解析受託分析サービス
特

長●結晶化不要で構造解析を行います。
●試料は溶液またはパウダー

トリプシン単独

サイデックテクノロジー社は、スウェーデンの国立カロリンスカ研究所で開発された技術を元に商業ベースで分析受託サービスを行ってます。溶液状態でタンパク質の立体構造を明らかにするもので注目されています。結晶化困難の対象に対して溶液での３次元構造画像を提供します。
リシルエンドペプチダーゼ併用活性化したホルモンレセプター複合体の実現3次元画像の一部

Figure. Tp単独とTpとLepを併用した場合のマススペクトルTp と Lep の 併用では、Tp 単独では得られないピークが、m/z
2,000付近に得られました。これはペプチドの回収率が上がったこ

詳細は、当社営業担当者までお問合せ下さい。

とを示します。

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）19

ew Products［核酸］

安定性、再現性の良い
低コストプレキャストゲル
SuperSepTM

（bp）
311
200
151

本品は、
タンパク質、
核酸の電気泳動用ポリアクリルアミドプレキャスト

（bp）
100
80
60
50
40

100

ゲルです。ゲル中には、SDSが含まれておりませんが、SDSを含む緩衝液を用いることにより、
SDS-PAGEに使用できます。
また、
SDS不含の緩衝液を用いることによりNative-PAGEにも使用できます。

30
20
ゲル：SuperSepTM15%，
12well［コードNo.194-13061］
サンプルバッファー：5mmol/RTris（pH 7.9）, 1mmol/REDTA, 30% Sucrose,

0.004% BPB
泳動バッファー：0.025mol/RTris, 1.92mol/RGlycine
染色：臭化エチジウム
サンプル：DNAマーカー

分画分子量範囲

特分 子 量
40,000〜200,000
20,000〜130,000
14,000〜80,000
6,000〜60,000
10,000〜200,000
10,000〜130,000

SuperSepTM 7.5%
SuperSepTM 10%
SuperSepTM 12.5%
SuperSepTM 15%
SuperSepTM 5-20%
SuperSepTM 10-20%長●濃縮ゲルにより、シャープなバンドが得られます。

核酸のbp
100〜2,000
50〜50030〜30020〜30050〜75050〜500●再現良く泳動できます。
●保存安定性が良く、製造日から６ヶ月使用できます。
●17ウェルは8連ピペットに対応しており、多検体処理に有効です。

保存条件
2〜10℃保存（凍結不可）
・遮光保存●SDS-PAGE、
Native-PAGEに使用できます。

コードNo.

泳動例［タンパク質］

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112
分子量

200k
116k
66k
42k
30k
17k
10k
ゲル：SuperSepTM 5-20%，
12well［コードNo.194-12961］
サンプルバッファー：Sample Buffer Soln（×. 2、2-ME＋）［コードNo.196-11022］
泳動バッファー：Running Buffer Soln.（×10）［コードNo.184-01291］
染色：Quick CBB［コードNo.299-50101］
サンプル：Lane1, 2, 7, 8 ラダーマーカー
Lane3, 4, 9, 10 低分子量マーカー
Lane5, 6, 11, 12 高分子量マーカー20

和光純薬時報品

名192-12901 SuperSepTM 7.5%, 12well
199-12911 SuperSepTM 7.5%, 17well
196-12921 SuperSepTM 10%, 12well
193-12931 SuperSepTM 10%, 17well
190-12941 SuperSepTM 12.5%, 12well
197-12951 SuperSepTM 12.5%, 17well
194-13061 SuperSepTM 15%, 12well
191-13071 SuperSepTM 15%, 17well
194-12961 SuperSepTM 5-20%, 12well
191-12971 SuperSepTM 5-20%, 17well
198-12981 SuperSepTM 10-20%, 12well
195-12991 SuperSepTM 10-20%, 17well

濃縮ゲル 規 格

5%
5%
5%
5%
5%
5%
5%
5%
ー
ー
ー
ー

容 量 希望納入価格（円）

電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚
電気泳動用 10枚

12,00012,00012,00012,00012,00012,00018,00018,00012,00012,00012,00012,000

関連商品
コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）196-11022 Sample Buffer Soln.（×2、2-ME＋） 電気泳動用 25mr
193-11032 Sample Buffer Soln.（×2、2-ME−） 電気泳動用 25mr
184-01291 Running Buffer Soln.（×10） 電気泳動用 1r299-50101 Quick CBB
電気泳動用 2r用
299-13841 Silver Stain Kit Wako
電気泳動用 10枚用
291-50301 Silver Stain Ⅱ Kit Wako 電気泳動用 10枚用
299-58901 Silver Stain MS Kit
電気泳動用 20回用
293-57701 Negative Gel Stain MS Kit 電気泳動用 20回用

Vol.72, No.1（2004）

3,100
3,100
5,200
9,000
9,000
9,000
19,00011,000ew Products
中分子量マーカー

分子量マーカー
SDS-PAGE用のタンパク質分子量マーカーです。高分子量タイプと

内

中分子量タイプが安価で新発売となりました。

高分子量マーカー
内

容

分子量

ミオシン

200k

βｰガラクトシダーゼ

116k

容

分子量

BSA

79k

アルドラーゼ42k

カルボニックアンヒドラーゼ

30k

トリプシンインヒビター

20k

リゾチーム

14k

ウシ血清アルブミン

79k

コードNo.

アルドラーゼ42k

12,800カルボニックアンヒドラーゼ

30k

Molecular Weight Marker,
134-14501
電気泳動用 1mr用
High Range

ミオグロビン

17k

Molecular Weight Marker,
電気泳動用 1mr用
Middle Range

12,800131-14511

品

名

規 格

容 量 希望納入価格（円）Information
モ ニ タ ー 募 集 （先着30名様）
20/20 GeneSystem社のMulti-Replica Blotting Kit−ULTRAのモニターを募集しています。ご使用後、アンケートにお答え頂ける方に1×3-Stack、1キットをご提供させて頂きます。
本品は、1枚の電気泳動ゲルから一度に複数のウエスタンブロッティング用膜に転写できるキットです。1×3-Stackは3枚転写用です。今回、従来製品の改良品としてULTRAが発売されました。この機会に是非、お試し下さい。
改良点：①転写されるタンパク質量の膜間差が改善されました。（膜間の差 最大15%）②膜順にかかわらずばらついていたタンパク質量の減少が段階的になりました。
製品の詳細は当社ホームページ（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/index̲elc.htm）、パンフレットをご覧下さい。
対象商品：Multi-Replica Blotting Kit−ULTRA（1×3-Stack）［キット内容］●Membrane Stack：1×3-Stack
Transfer Buffer 5×：1×200mr●

Reaction Folders：2枚●Protein Transfer Control：1バイアル●

Product Manual：1部●

注 意

製品マニュアルはBioRad製とNovex製タンク式ブロッティング装置を使用した転写プロトコールです。他のタイプの装置でもお使い頂けますが、条件検討が必要となる場合があります。セミドライタイプ式のプロトコールも別途ご提供できます。

［通常販売価格］

コードNo. メーカーコード

576-76401
573-76411
579-75151
576-75161
573-75171

GS1202
GS1204
GS2031
GS2032
GS2033

品

名Multi-Replica Blotting Kit-ULTRA for Protein Gels, 10-Stack
Multi-Replica Blotting Kit-ULTRA for Protein Gels, 2×5-Stack
Multi-Replica Blotting Kit-ULTRA for Protein Gels, 1×3-Stack
Multi-Replica Blotting Kit-ULTRA for Protein Gels, 2×3-Stack
Multi-Replica Blotting Kit-ULTRA for Protein Gels, 3×3-Stack容 量 希望納入価格（円）
1KIT
1KIT
1KIT
1KIT
1KIT

26,00028,00010,00015,00022,000

お申し込み方法
当社ホームページ（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/index̲elc.htm）より申し込み用紙をプリントアウトして必要事項を記入の上、当社代理店/営業担当者もしくは下記まで送付下さい。
申し込み先：和光純薬工業（株）試薬海外営業部 マルチレプリカモニター係
FAX：06ｰ6201ｰ5964
E-mail：kamada.hiroko@wako-chem.co.jp

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）21

ew Products
蛍光タンパク質発現ベクター

Cop-GreenTM Expression vectors

蛍光タンパク質は、タンパク質としての性質と蛍光物質としての性質

C o p - G r e e n T Mは、甲殻 生 物であるを合せ持つことで、目的タンパク質の局在や細胞、オルガネラの挙動をリ

Copepod由来の緑色蛍光タンパク質で、刺胞動物以外の生物から初めてクロー

アルタイムに検出するin vivoマーカーとして広く使用されています。
Evrogen社では、独自の技術によりクラゲ及びその他の生物由来のニングされました。enhancedタイプの新規の緑色（Green）、
黄色（Yellow）、
赤色（Red）
をコードする蛍光タ

GFPより約1.3倍の輝度があります。
また、

Copepod

広域のpHで安定であり、細胞内の凝集

ンパク質発現ベクターをラインナップしています。

や細胞毒性がありません。

製品内容
形

状 : 10mmol/r Tris-HCl（pH 8.0）

濃度 : 0.5μg/μr（20μg）

各種蛍光タンパク質の特性
タンパク質 励起波長（nm） 蛍光波長（nm）ε（cm−1･M−1）※1 蛍光収率（φ） 分子量
構造
Ace-GreenTM 480
505
50,000 0.55
27k モノマー
Cop-GreenTM 482
502
70,000 0.60
25k モノマー
Phi-YellowTM 525537
130,000 0.40
26k モノマー
HcRed-TandemTM 590
637
160,000 0.04
52k 非オリゴマー※2
TM
Kindling-Red−
600
123,000 <0.001 26k テトラマー(initial)
Kindling-RedTM
580
600
59,000 0.07
26k テトラマー(kindled)※1 : それぞれの最大吸収波長により測定※2 : HcRed自体は、2量体であるが、タンデムでつなげているため、モノマー

CopGFPの3T3細胞での発現例

CopGFPのpH安定性

FITCフィルターを用いた蛍光顕

CopGFP（緑）、enhancedタイプのGFP（青）

微鏡により観察宿 主 プロモーター 選択マーカー
ベクター
コド ン
humanized 哺乳動物 CMV IE
pCop-GreenTM-N
Kan/Neohumanized 哺乳動物 CMV IE
pCop-GreenTM-C
Kan/Neohumanized
pCop-GreenTM-B
細菌
lac
Amp
pCop-GreenTM-PRL humanized 哺乳動物
なし
Kan/NeopCop-GreenTM-YB S. cevevisiae
細菌
lac
Amp

様に挙動

Ace-GreenTM Expression vectors

Phi-YellowTM Expression vectors

AceGFPは、クラゲであるAequorea coerulescence由来で、本来はPhi-YellowTMは、実用的な最初のモノマータイプの黄色蛍光タンパ

無色である野生型GFP様のタンパク質を変異により増強させた変異体

ク質であり、
enhancedタイプのGFPの約1.6倍の輝度があります。蛍光です。enhancedタイプのGFPとほぼ同等の輝度を示します。大腸菌、

波長が537nmと真の黄色蛍光を示すのが最大の特長です。HcRed-

哺乳細胞、
線虫、
キイロタマホコリカビ用にコドンをあわせた製品をライン

FRETアッセイにも使用できます。
また、広域のTandemTMとの併用で、ナップしています。

pHで安定であり、細胞内の凝集や細胞毒性がありません。

AceGFP発現例
293T細胞（A）、Vero細胞（B）、3T3細胞（C）、L929細胞（D）、COS細胞（E）
宿 主 プロモーター 選択マーカー
ベクター
コド ン
humanized
pAce-GreenTM-N1/-N2/-N3
哺乳動物 CMV IE Kan/Neo
humanized
pAce-GreenTM-C1/-C2/-C3
哺乳動物 CMV IE Kan/Neo
humanized
pAce-GreenTM-B
細菌
lac
Amp
pAce-GreenTM-DB Dictyostelium discoideum
細菌
lac
Amp
pAce-GreenTM-CB Caenorhabditis elegans
細菌
lac
Amp

〔参考文献〕
１）Gurskaya, N.G. et al.: Biochem. J., 373, 403（2003）.

22

和光純薬時報PhiYFPの3T3細胞への一過 PhiYFPのpH安定性性の発現例
PhiYFP（黄）、enhancedタイプのGFP
FITCフィルターを用いた蛍光顕 （青）微鏡により観察ベクター
pPhi-YellowTM-N
pPhi-YellowTM-C
pPhi-YellowTM-PRL
pPhi-YellowTM-B

Vol.72, No.1（2004）

コド ン
humanized
humanized
humanized
humanized

宿 主 プロモーター 選択マーカー
哺乳動物 CMV IE Kan/Neo
哺乳動物

CMV IE

哺乳動物

なし

細菌

lac

Kan/Neo
Kan/NeoAmp

ew Products
HcRed-TandemTM Expression vectors
TM

特

長

HcRed-Tandem ベクターは、
HcRed1の持つ細胞内凝集の欠点●細胞に無毒な530ｰ550nmを照射します。

をタンデムタイプにすることにより解決した、より融合タンパク質に適した●目的細胞の赤色蛍光ラベルができます。

赤色蛍光タンパク質をコードします。図のように共有結合で分子内に2量体を形成することで新たな重合を防ぐことができます。
また、
FRETア
ッセイにおける受容体としても有用です。

●kindling後は励起極大波長580nm、蛍光極大波長600nmを持つよ
うになります。
●直接的な光照射で、蛍光のスイッチのON/OFFができます。
●緑色光によりkindlingされ、青色光ですみやかにクエンチングされます。
●可逆的なkindleでは、その前後でKFP-Redの輝度差は約70倍です。
●不可逆的なkindlingは、
72時間以上安定に明るい蛍光を維持します。
●ミトコンドリア局在化ベクターもラインナップしています。

t-HcRedの構成

L929細胞におけるt-HcRedを用いたアクチン繊維のin vivo標識
宿 主 プロモーター 選択マーカー
ベクター
コド ン
pHcRed-TandemTM
humanized 哺乳動物 CMV IE
Kan/Neo-C1/C2/C3
pHcRed-TandemTM
humanized 哺乳動物 CMV IE
Kan/Neo-N1/N2/N3
pHcRed-TandemTM-YB S. cerevisiae
細菌
lac
Amp

〔参考文献〕

KFP-Redの特性（A）KFP-Redの可逆的なkindlingとrelaxation。kindling光の照射開始を0分とした（532nmレーザー光、1％ power）。2分後にkindling照射光を止めた。

（B）KFP-Redの不可逆的なkindling。0分は、kindling光照射時にセットした（532nmレーザー光、20％ power）。kindling照射光は、20分後に止めた。

（C）不可逆的なkindling（赤）/unkindling（青）のKFP-Red蛍光スペクト
ル。内写真は、室温で1年間インキュベーション後のintactと不可逆的なkindling KFP-Redを示している。

１）Gurskaya, N.G. et al.: FEBS Lett., 507, 16（2001）.

Kindling-RedTM in vivo tracking vectors

ベクター
pKindling-RedTM-N
pKindling-RedTM-B
pKindling-RedTM-Mito

Kindling-RedTM in vivo トラッキングベクターは、光で活性化する〔参考文献〕

２）Fradkov, A. F. et al.: Biochem. J., 368, 17（2002）.

コド ン
humanized
humanized
humanized

宿 主 プロモーター 選択マーカー
哺乳動物 CMV IE Kan/Neo
細菌
哺乳動物

lac
CMV IE

Kindling Red Fluorescent Protein（KFP-Red）をコードする新１）Lukyanov, K. A. et al.: J. Biol. Chem., 275, 25879（2000）.

規のベクターです。KFP-Redは、そのままでは非蛍光ですが、緑色

２）Chudakov, D. M. et al.: Nat. Biotechnol., 21, 191（2003）.

光（530ｰ550nm）を照射すると明るい赤色蛍光（kindling）
を示すよ

３）Chudakov, D. M. et al.: J Biol. Chem., 278, 7215
（2003）.

Amp
Kan/Neo

うになります。また、照射する光の強さや長さにより、可逆的または不可逆的に光らせることができます。個々の細胞、オルガネラ、
タンパク
質を直接かつ正確に蛍光ラベルし追跡することができます。

Notice to Purchaser : Evrogen Fluorescent Protein Products (theProducts) are available to : Not-For-Profit-Entities for non-commercial
research use. With purchase of the Products, non-profit entities are
granted a worldwide, non-exclusive, royalty-free, limited license to use
the Products for non-commercial life science research only. Suchlicense specifically excludes the right to sell or otherwise transfer the
Products, its components or derivatives to third parties. For any otheruse of the Products please contact Evrogen at license@evrogen.com※詳しくは、弊社ホームページ（http://www.wako-chem.co.jp/
siyaku/info/gene/article/evrogen/index.htm）をご覧下さい。

KFP-Redのkindlingとクエンチング［次頁に続く］和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）23

ew Products575-79651

FP104

572-79661
579-79671

FP105
FP106

574-79621

FP101

571-79631
578-79641
576-79681

FP102
FP103
FP107

品

名

pAce-GreenTM-N1 vector（N末端側融合用）

pAce-GreenTM-N2 vector
pAce-GreenTM-N3 vector
pAce-GreenTM-C1 vector（C末端側融合用）
TM

pAce-Green -C2 vector
pAce-GreenTM-C3 vector
pAce-GreenTM-B vector（細菌発現用）容 量 希望納入価格（円）
20μg

59,40020μg
20μg

59,40059,40020μg

59,40020μg
20μg

59,40059,40020μg

59,40020μg

76,300TM573-79691

FP108

pAce-Green -DB vector（Dictyostelium discoideum 発現用）

FP109

570-79721
573-79711

FP111
FP110

572-90661

FP502

pAce-Green -CB vector（Caenorhabditis elegans 発現用）

pAce-GreenTM-N vector set
pAce-GreenTM-C vector set
pCop-GreenTM-N vector

20μg

103,340
103,34020μg

101,65020μg

101,65020μg

101,65020μg

101,65020μg

101,700

20μg

126,99020μg

126,99020μg

126,990

pPhi-YellowTM-PRL vector 20μg

127,000

pKindling-RedTM-N vector

20μg

126,99020μg

126,99020μg

126,990

pHcRed-TandemTM-N1 vector 20μg

101,650TM

570-79461

FP501

577-79471

FP503

575-98331

FP504

pCop-Green -C vector（C末端側融合用）

pCop-GreenTM-B vector（細菌発現用）pCop-GreenTM-YB vector（酵母発現用）TM

586-69591

FP505

pCop-Green -PRL vector（プロモーターなし）
TM

571-79491

FP602

pPhi-Yellow -N vector（N末端側融合用）
TM

574-79481

FP601

574-79501

FP603

589-69601

FP604

571-79511

FP301

578-79521

FP302

575-79531

FP401

573-79571

FP204

76,3001Set
1Set（N末端側融合用）

pPhi-Yellow -C vector（C末端側融合用）

pPhi-YellowTM-B vector（細菌発現用）（プロモーターなし）（N末端側融合用）

pKindling-RedTM-B vector（細菌発現用）pKindling-RedTM-Mito（ミトコンドリア局在化用）

TM

101,650
101,650572-79541
579-79551
576-79561

FP202
FP203

pHcRed-TandemTM-C2 vector 20μg
pHcRed-TandemTM-C3 vector 20μg
pHcRed-TandemTM-YB vector 20μg
FP209 （酵母発現用）

101,650
101,650

572-98341
577-79611
570-79601

FP208
FP207

TM

pHcRed-Tandem -N vector set
pHcRed-TandemTM-C vector set

構

成

10回用

100回用

●ReverScript Ⅲ

10μr

100μr

●5×Reaction Buffer

40μr

100μr

●25mmol/r MgCl2

750μr

1.2mr

他社製品

ReverScriptRⅢ

CyTM3

CyTM5

カナマイシンRNAを鋳型としReverScriptRⅢによりCyTM3-dCTP、

CyTM5-dCTPの取り込み効率を比較した。

（N末端側融合用）

FP205
FP206

取り込み率が高く、
8.9kbまでの長鎖cDNAを合成可能です。マイクロアレイの蛍光標識プローブにも使用可能です。

実験データ

pHcRed-Tandem -N2 vector 20μg
pHcRed-TandemTM-N3 vector 20μg
TM
-C1 vector 20μg
FP201 （pHcRed-Tandem
C末端側融合用）

570-79581
577-79591

本品はRNA依存性DNAポリメラーゼです。蛍光標識ヌクレオチドのR

TM

576-79701

蛍光標識産物の取り込みに優れた逆転写酵素
ReverScriptRⅢ

1Set
1Set

101,650

101,650
189,500
189,500

Relative Fluorescence units

コードNo. メーカーコード

90
80
70
60
ReverScriptRⅢ

50
40

他社製品

30
20
10
0

CyTM3

CyTM5

バックグラウンドを補正したCyTM3、CyTM5標識プローブの蛍光相対ユニット
コードNo.

品

名293-59401
ReverScriptRⅢ
299-59403

規 格
遺伝子研究用容 量 希望納入価格（円）
10回用
100回用

5,000
37,000

関連商品
組換えタンパク質
コードNo. メーカーコード

579-90671
583-69621
580-69631
587-69641
584-69651

24

FP112
FP251
FP351
FP551
FP651

品

名

容 量 希望納入価格（円）

100μg
rAce-GreenTM protein
rHcRed-TandemTM protein 100μg
rKindling-RedTM protein 100μg
rCop-GreenTM protein 100μg
100μg
rPhi-YellowTM protein

45,90045,00045,00045,00045,000

和光純薬時報関連商品
コードNo.

品

名186-01251 ReverScriptRⅠ
187-01781 ReverScriptRⅡ

Vol.72, No.1（2004）

規 格

容 量 希望納入価格（円）

遺伝子研究用 10,000units
遺伝子研究用 10,000units

16,80025,000ew Products
本品は2本鎖RNAの3'末端を2塩基突出した30bp以下に切断する

siRNA作製酵素酵素です。長鎖の2本鎖RNAからのsiRNA作製に有用です。

リボヌクレアーゼⅢ，
組換え体，溶液
RNAiは遺伝子発現抑制の簡便な方法として注目を浴びています。

活性：1unit/μr

活性の定義：1unitは37℃、1時間にて500bp dsRNA（1μg）を約2本鎖RNA
Dicer*により切断

12ｰ30bpに断片化する酵素量*RNaseⅢに相当

起

源：E.coli RNaseⅢ cloned plasmid expressed in E.coli

構
←RISC

成

●RibonucleaseⅢ, recombinant, Solution

250U●10×RNaseⅢ Reaction Buffer

500μr

1本鎖に解離標的配列と結合
AAAAA

mRNA

AAAAA

mRNA

切断

コードNo.

品名規 格

容 量 希望納入価格（円）543-02401 RibonucleaseⅢ,
遺伝子研究用 250U
recombinant, Solution

RNAiの作用機構

25,000Application
amaxa社 NucleofectorTMを使用したsiRNA導入アプリケーション
高導入効率でご好評を頂いているNucleofectorTMのsiRNA導入のアプリケーションをご紹介します。本システムはエレクトロポレーション法を応用し導入試薬を併用することによりsiRNAを細胞内へ導入します。RNAi効果を見るためには導入効率が重要ですが、
NucleofectorTMでは合成
siRNA、
siRNA発現ベクターなどの異なるタイプでも同一条件（試薬、プログラム）
にて高導入効率を実現します。

siRNA導入のためのプロトコール決定スキーム
Primary cells
専用プロトコール有り

Cell lines

導入例［Jurkat細胞へのsiRNA導入効率］

専用プロトコール無し細胞にあった専用試薬を選びます

Cell Line OptimizationTM Kitを使用します

一般的に初回は蛍光標識siRNAを使用します

プロトコールに従いpGFPなどを使用し最適条件を検討します

導入後3時間経過後の顕微鏡像 導入後3時間経過後の蛍光顕微鏡像
ローダミン標識したsiRNAをJurkat細胞（ATCC）へマニュアルの条件にて導入を行った。ほぼ100%に近い細胞に導入ができた。

陽性コントロールとしてvimentinやLamin
A/CでRNAi確証を行います。また遺伝子導入効率の陽性コントロールとしてGFPにて確認することを推奨します。

最適化した条件でRNAi実験を行います

Primary cellでの遺伝子抑制効果を見ます

Cell lineでの遺伝子抑制効果を見ます

製品の詳細は、当社ホームページ（http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/gene/article/amaxa/index.htm）
をご参照下さい。

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

25

第１９回

見 聞 録

Wako
自然免疫機構：病原体認識、シグナル伝達、疾患との連関

東京大学医科学研究所感染遺伝学 小林

26

真紀子

平成１５年１１月２８日（金）に全電通ホーました。病原体の認識、シグナル伝達、

興味深く思いました。核以外の細胞内微ルで行われた第１９回Wakoワークショッ

獲得免疫との連携、そして疾患との連関

少器官も消失していくことも、なるほど

プ「自然免疫機構：病原体認識、シグナとテーマが絶妙に変わりゆくプログラム

当たり前に思っていた水晶体の透明性がル伝達、疾患との連関」に参加しました。

になっており、免疫の世界を半日で一望

このようにして得られるのかと、目から自らの研究テーマであり、日本の免疫研したような気分でした。

鱗であったし、おもしろく拝聴しました。

究において常にトップにある著名な講師

病原体認識というテーマの第１部は第２部は自然免疫の注目されるその中らの話を聞けるとあっては是非参加しなNK細胞や、エンドトキシン認識機構、

心にいるTLRシリーズにおけるシグナル

い手はないと思い、非常に楽しみにしてアポトーシスに関係した免疫機構につい伝達に関わる分子について阪大の審良先いました。そして期待を裏切らない会でて講演がなされました。千葉大学の荒瀬生の講演から始まりました。今回はあったと思います。自分が関わる事項に先生はウイルス感染細胞を認識するNK

MyD88依存的経路に関わる新しい分子をは現在の動向に注意しているのですが、細胞表面のペア型レセプターの意味合い、いくつか紹介され、ますます複雑化する

本来のダイナミックな免疫機構を理解す

成り立ちを、ウイルスと宿主の攻防戦か

TLRシグナル伝達機構に圧倒されるととるには単眼的であり、あまりにも程遠いら現在の形に進化したという魅惑的なスもに、次々とノックアウトマウスを作成、場所にとどまっているようで焦りを覚え

トーリーを展開されました。三宅先生は解析を進める精力的な研究にただ圧倒さることがあります。かといってミクロか

TLR4/MD-2複合体によるLPS認識機構にれるばかりでした。続いて獲得免疫とのらマクロまで広く詳しく網羅し理解する

ついて、こちらは私の研究テーマでもあ連携について、まず京大の稲葉先生が、には私のメモリはあまりにも頼りなく、るのですが、現在まさに進行中である、T細胞の分化、制御性T細胞の調節およしかし全体像が大まかでもつかめる機会

会合分子MD-2の機能に関するフレッシュびTh1Th2への決定において司令塔であがないかと鈍らな心でおもっていた矢先なデータを提示されました。とりわけ昨る樹状細胞について、同じく京大の坂口のことでした。最先端の話もさることな

今MD-2の機能解析が各地で進み新しい論先生が樹状細胞に調節される側でもある

がら、基礎的な知識についてもわかりや文が次々と雑誌に掲載されており、私ら

制御性T細胞（CD25+T細胞）における、

すく説明され、学生や臨床を主とする医師、も戦々恐々としています。阪大の長田先

特殊な細胞表面分子とその役割、自己免免疫を専らとしない研究者でも、取っ付

生は、DNAが分解される機構がCAD、

疫疾患との関連についての講演でした。

きやすく興味をかき立てられるようなも

DNaseにかかっており、それらの障害は免疫反応を調節する側面から今後臨床応のだったと思います。会場である全電通

DNAの蓄積を引き起こし炎症を惹起する、用に発展する可能性を秘めており、非常ホールは開会から閉会のときまで常に満

即ちDNAは危険であるという話をされまに興味深く拝聴致しました。一方でその席の状態で、会場からの質疑も活発になした。特に目の水晶体を構成する細胞に作用の幅広さから、実際に治療に用いるされ、自然免疫への関心の高さを実感しおける核消失に関わる特殊なDNaseの話は、ためには臓器や機能の標的を狭く厳しく総合企画の三宅健介先生

会場風景

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

O O

W

RK SH

P

設定する工夫が重要であるのではないか等、
いろいろ考えさせられました。
最後のセクションは疾患との連関というタイトルでアレルギー疾患に関する講演でした。兵庫医科大の中西先生は従来のIgEを介する獲得免疫反応を基盤としたアトピーとは異なる、アレルゲン非存在下でIL-18が肥満細胞や好塩基球を直接

荒瀬

尚 先生

長田

重一 先生

審良

静男 先生

坂口

志文 先生

中西

憲司 先生

白川

太郎 先生

稲葉

カヨ 先生

刺激することで生じる自然型アトピーという新しい概念を提唱されました。IL-18
は蠕虫幹線防御に重要でありながら、実はアレルギー性炎症の誘導因子であるというまさに両刃の刃ということでした。
衛生環境の改善がアレルギー疾患増加の原因というHygiene hypothesisの説明・
証明は、まだ多くの課題や矛盾も多いよ
うですが、実際にサンプルを集め、環境
要因とSNPsの解析とをあわせてその説明を行うスケールの大きな仕事について、最後に京大の白川先生のお話を頂きました。
アミノ酸も替わらないような、たった一つの塩基の変化が、その後のアレルギー疾患を含めた様々な病気の発症に関わる

第１９回「自然免疫機構：病原体認識、シグナル伝達、疾患との連関」というのを証明するのは、非常に膨大な日

時：平成15年11月28日（金）10：00〜17：00

サンプルと時間、もちろん費用を必要と場

所：全電通ホール

します。一地域の結果が必ずしも地上全

総合企画：東京大学医科学研究所 感染遺伝学分野 三宅 健介 教授

体で反映されないこともあります。しかしそうやって積み上げられたデータから今確実にその結果が出つつあるのだと感講演プログラム開催挨拶

和光純薬

じました。改めて、一塩基の変化に注目

はじめに

東大医科研

三宅 健介

し解析を進めた先人らに畏敬の念を抱き

1. 病原体の認識「自然免疫によるウィルス感染細胞認識機構」

千葉大院医

荒瀬

「エンドトキシン認識機構」

東大医科研

三宅 健介

ます。
生体の免疫機構は多くの細胞や液性因子が複雑なネットワークを構成し、絶妙のバランスで作用し合って、生体の維持に役立っています。一つ一つの詳細を解明し、さらにそれらを再構成して壮大なる免疫の世界を眺望するために、私も一端を担っているということを改めて認識しました。厄介な世界に足を踏み込んでしまったものだという後悔の念がたつ一尚「DNA Degradation and its Failure in Programmed Cell Death andOther Developmental Processes」

阪大院医

長田 重一

「Toll-like receptors : 病原体認識とシグナル伝達」

阪大微研

審良 静男

「樹状細胞機能と免疫応答の制御」

京大院生命科学稲葉 カヨ「CD25+, CD4+制御性T細胞による免疫応答制御」

京大再生研

坂口 志文

兵庫医大医

中西 憲司

2. シグナル伝達、獲得免疫との連携

3. 疾患との連関方で、壮大なパズルを解き明かしたい欲「自然免疫とアレルギー」

望が沸々とわいてくる、使い古された表「自然免疫関連分子の遺伝子変異と疾患との関連
京大院医

白川 太郎

いただきました。また、道のりはまだ長

おわりに

東大医科研

三宅 健介

く険しいでしょうが、臨床への応用も期

閉会挨拶

和光純薬

現なら一言でわくわくどきどき、させて：気管支喘息とTLRsを中心に」待するところです。最後になりましたが、

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

27

O O

W

RK SH

P

講師の先生方、そしてこのような機会を設け、すばらしい時間を演出して下さった和光純薬の方々に感謝申し上げます。

活発な質疑応答が行われた

当社製品展示風景

P roducts
Toll-like receptor抗体
コードNo.

28

メーカーコード

品

名

メーカー名

容 量

希望納入価格（円）571-32871

IMG-416

Anti Human TLR2, Mouse, Monoclonal Antibody

Imgenex100μg

44,300573-77491

IMG-416C

Anti Human TLR2, Mouse, Monoclonal Antibody, FITC conjugated

Imgenex

100μg

48,500576-77501

IMG-416E

Anti Human TLR2, Mouse, Monoclonal Antibody, Azide free

Imgenex

100μg

48,500576-77481

IMG-410Anti Human TLR2, Rabbit, Polyclonal Antibody, Purified

Imgenex

100μg

41,200574-25031

IMG-315

Anti Human TLR3, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

Imgenex100μg

44,300578-77561

IMG-516

Anti Synthetic peptide TLR3, Rat, Polyclonal Antibody

Imgenex100μg

44,300571-25041

IMG-417

Anti Human TLR4（clone:HTA125）, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

Imgenex100μg

44,300573-77511

IMG-417C

Anti Human TLR4, Mouse, Monoclonal Antibody, FITC conjugated

Imgenex

100μg

48,500579-72591

IMG-417E

Anti Human TLR4, Mouse, Monoclonal Antibody, Azide free

Imgenex

100μg

48,500570-77521

IMG-428

Anti Mouse TLR4/MD-2, Rat, Monoclonal Antibody

Imgenex100μg

44,300577-77531

IMG-428E

Anti Mouse TLR4/MD-2, Rat, Monoclonal Antibody, Azide free

Imgenex

100μg

48,500571-77551

IMG-433

Anti Human TLR6, Mouse, Monoclonal Antibody

Imgenex100μg

44,300575-25061

IMG-304

Anti Human TLR6, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

Imgenex100μg

44,300579-25081

IMG-321

Anti Human TLR8, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

572-73441

OP185

Anti TLR9（Ab-1）, Monoclonal Antibody

576-25091

IMG-305

574-77541

IMG-431579-25101
575-77571

Imgenex100μg

44,300Calbiochem-Novabiochem

100μg

58,800Anti Human TLR9, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

Imgenex100μg

44,300Anti Mouse TLR9, Rabbit, Polyclonal Antibody, Purified

Imgenex100μg

44,300

IMG-386

Anti Human TLR10, Mouse, Monoclonal Antibody, Purified

Imgenex200μg

44,300

IMG-526

Anti Mouse TLR, Rabbit, Polyclonal Antibody

Imgenex100μg

44,300

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

百 年 前 の 化 学 121904年の化学を顧みて大阪大学名誉教授

長岡の土星型原子模型発表される
長岡半太郎は 1903 年 12 月 5 日の東京数芝

哲夫

州に好意的に紹介された。また当時の日本得ること」 と定 義した 8 ）。 もっともこの人として、今日の有核原子構造の先駆をな

Marckwald の実験結果には後に疑問が持す提案をしたものとして高い評価も与えられたれたが、今日では不斉合成は日常茶飯のている 5，6）。

有機合成手法となっている。わが国の野依学物理学会の常会で 「線および帯スペクト

良治教授がきわめて効率的な不斉合成法を

ルと放射能現象を示す理想原子内粒子の運確立して、2001 年にはその 「キラル触媒に動」と題する口頭発表を行った。 同じ内容の論文は翌 1904 年に 「東京数学物理学会
１）

液体空気の多量製造が実施されるよる不斉酸化反応の研究」によってノーベル化学賞を受賞されたことは記憶に新しいとこ

２）

1894 年以来 C.P.G.R.Linde は空気をジューろであって、この 100 年間の不斉合成化学とPhil.Mag. ３）誌上に印刷され発表された。

ル―トムソン効果を利用して臨界温度以下にの進歩に正に隔世の感を抱かさせられる。

記事概要」 として、またイギリスの Nature
土星型原子構造の提案であった。

冷却し、同時に加圧することにより液化させ

原 子 構 造 模 型に 関しては 1 9 0 2 年にていたが 、 1 9 0 4 年にオランダの H e i k e

L.Kelvin による陽電荷うず模型、1903 年にKamerlingh-Onnes がこの液体空気を大量は P.Lenard による正負両電荷が結びついたに製造、補給することに成功した。

ディナミド説、J.J.Thomson の均質に帯電し糖蜜から新アミノ酸イソロイシン
発見されるた球のプラム・プディング説が相次いで提案

1901 年に E.Fischer は蛋白質加水分解

されていて、正しい原子構造はまだ確定して物をエステル法で分画したロイシン画分に純いなかった。 一方太陽系の構造の類推からロイシンよりも大きい旋光度を示す未知アミノ

陽電荷を中心に電子がその外側を回転する酸が存在することを指摘していた９）。 1904 年という惑 星 構 造も 1 9 0 1 年 にフランスのに Felix Ehrlich はビート糖蜜からロイシンとJ.B.Perrin によって唱えられていた。 長岡は

分析値は一致するが、ロイシンに比べて水におそらくこの Perrin の論文を知らずに、独難溶で、高旋光度、低分解点を示すアミノ

立に土星型原子構造模型を提案したと考え酸を分離し、その銅塩を経て、新アミノ酸イられている。

ソロイシンの 単 離 、 発 見に成 功した 1 0 ）。

この長岡の土星型模型に対しては直ちに

Ehrlich は 1907 年にこの新アミノ酸の分解

イギリスの G.A.Schott の批判を受けることになっ反応からαｰアミノｰβｰメチルバレリアン酸の構４）た 。 長岡は理想的原子の構造に対する一造を推定した 11）。さらに Ehrlich はｄｰバレル

つの模型を提出した積りで、実際の物理的アルデヒドのストレッカー反応によってイソロイ

数値との対比に耐え得るものとは考えてはいなかった。しかし長岡の原子模型は日露戦

シンの合成を試みたが、この時、得られたジ写真2. H. Kamerlingh-Onnes

アステレオマーをｄｰイソロイシン（正しくは Lｰ争時という時代的背景もあったのか、イギリスのロッジやフランスのポアンカレらによって欧イソロイシン）とｄｰアロイソロイシン（正しくは不斉化学合成がはじめて行われた

D ｰアロイソロイシン）と称したが 、これがotherという意味の allo の語が使用された

E.Fischer が 1894 年に、不斉炭素を有最初である 11）。イソロイシンの４種の光学異する構造の分子を通常の方法で合成すると性体の合成は 1931 年に E.Abderhaldenとラセミ体のみが得られるが、生体内では光学

W.Zeisset によって成し遂げられた 12）。

活性体が生成されていることから考えて、ある特別な条件を見つければ、化学的にも不７斉合成が行える可能性を指摘していた ）。
1904 年に W.Marckwald はエチルメチルマ

写真1. 長岡半太郎

ブヒャラー反応見つかる

ロン酸のモノブルシン塩を脱炭酸してからブ芳香族アミノ酸のアミノ基が亜硫酸水素ナ

ルシンを除去してわずかではあるが旋光度を持っトリウムで水酸基に変わり、逆に水酸基が亜た光学活性αｰメチルエチル酢酸を得たと報

硫酸アンモニウムによってアミノ基に変わると告し、最初の不斉合成を実現できたとした。

いうブヒャラー反応が H.Bucherer によってナ

そして「不斉合成 asymmetric synthesis

フタリン誘導体で見出された 13）。ナフトールととは不斉構造を持たない分子から物理的手

フェニルヒドラジンからベンゾカルバゾールが段を用いず、中間に何らかの光学活性物質得られるブヒャラーのカルバゾール合成もこのを用いることによって光学活性体の生成物を反応の応用である。

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）29

ルモンの代表である 22）。

ニコチンの化学合成が行われた
煙草飲みには切っても切れないニコチンの構造は 1893 年に Pinner によって明かにされていたが 14）、その 3ｰ（1ｰメチルｰ 2ｰピロリジニ

物体内における脂肪酸のβ酸化の酵素系が補酵素の存在が明らかになる

完全に明らかにされて行った。

E.Bucher は 1896 年に酵母の搾汁が蔗糖ル）ピリジンの構造が、1904 年に A.Pictetらのアルコール醗酵を起させることを発見し、によって合成された 15）。

そ の 醗 酵 の 原 因となる酵 素をチ マーゼ

有機珪素化学が開かれる

分解が進行するというβ酸化説が提唱された。
その後、F. Linenらの研究によってその動

酵素アルギナーゼが発見される

zymaseと命名した。 1904 年に至ってイギリ

この年、アルギニンをオルニチンと尿素にスの生化学者 Arthur HardenとW.J.Young

加水分解する酵素アルギナーゼが A.Kossel

はチマーゼを含む酵母抽出液を半透膜で透とH.D.Dakin によって発見された。アルギナー

析することによって、膜を通過しない蛋白質

ゼは生物の窒素代謝に重要な役割を担って

1904 年に F.S.Kipping16）とW.Dilthey17）

部分と通過する小分子の非蛋白質部に分かいて、哺乳動物、植物種子、微生物などにが独立に四塩化珪素に有機マグネシウムハれることを見出した。 両者はそれぞれ単独

広く分布存在している。このアルギナーゼのロゲン化合物を作用させるグリニャール反応

では酵素作用を示さないが、一緒に合わさ発見と研究を基にして、1932 年の Krebs にによって容易に有機珪素化合物が合成されると再び元の酵素作用が現れることを認めよる尿素生成に関するオルニチンサイクル説る道を切り拓いた。それより以前にも四ハロて、非蛋白部を補酵素 coenzyme と名づが提出されるに至った。

23, 24, 25）

ゲン化珪素にハロゲン化アルキルまたはアリー

けたルから有機珪素化合物は作られてはいたが、Iと呼ばれるが、その構 造は D N P すなわ

Kippingらの方法により種々のタイプの有機

ちジホスホピリジンヌクレオチドであること

珪素化合物の調製が可能となり、今日のこが解 明されたのは 1 9 4 2 年で 26, 27）、1957。この補酵素は今日では補酵素

ヌクレオデアミナーゼが発見されるの分野の合成化学の発展が約束された 18）。

年には A.R.Todd による有機合成によってそ

W.Jones が胸腺の自己消化中に核酸の脱シリコンsilicon は珪素の英語名で、シリコーの構造が確定している。なおまたチマーゼはアミノ化反応が起っていることを見出し、核ン silicone はオルガノポリシロキサン類の総称

十数種の酵素から成る複合系であることが酸加水分解物の脱アミノ化を触媒する酵素ヌであるが、Kipping は炭素化合物のケトンと次第に明らかになったのも後年のことである。

クレオデアミナーゼを発見した。これには基の 構 造 類 似 性 から R 2 S i O 型 化 合 物 に質の構造にしたがって数種のデアミナーゼが"silicone" の名を与えて改めて定義したのが、存在する。

今日に至るまで使われている。

最初の化学療法が発表されるホルモンの名がはじめて現れる

明治 30 年（1897）に日本で赤痢菌を発1904 年に W.M.BaylissとE.Starling が生見していた志賀潔は 1901 年にドイツに留学し体の内分泌腺から出て血液により、他の器て、Paul Ehrlich に師事した。 Ehrlich は化官に運ばれ、少量でその有機体の代謝や成学療法剤の可能性を考えていて、反応物質長を司る生体にとって不可欠な物質をホルモの 「側鎖」 が微生物の 「受容体」にうまく

ン h o r m o n e と名 づけた 1 9 ）。 B a y l i s s と適合すれば免疫が成り立つとする側鎖説をStarling はそれより前の 1902 年に脳の粘膜提唱していたが、この自説に従って多くの染から分泌される蛋白質セクレチン secretin を

色剤を微生物に作用させる試みを開始してい分離していて、これを最初のホルモンの発見た。 1904 年に Ehrlichと志賀は睡眠病の病としているが、実はこのホルモンの定義に従えば、最初のホルモンの分離はその１年前

原体原虫トリパノゾーマによる病気を色素トリ写真3. A. Harden

パン赤により治療する方法を発表した。これ

1901 年の高峰譲吉のアドレナリンであった 20）。
ホルモンは動物体に限られるものと思われていたが、1929 年頃から同様な特性を持つ

30が化学療法の最初の報告である。この延長

脂肪酸のβ酸化説が提唱される物質が高等植物にも見出され、植物ホルモ

F.Knoop によって動物組織中の脂肪酸はン phytohormoneと名づけられるようになっカルボン酸からβ位の炭素が酸化されて、順た 21）。オーキシン、ジベレリンなどが植物ホ

次その酸化反応がくりかえされて、炭素鎖の和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

上に 発 見され たの が 有 名な秦 佐 八 郎とEhrlich による梅毒スピロヘータに対するサル
バルサンであった。

〔参考文献〕

化学繊維の乾式紡糸法が開発される
線状構造の合成高分子物質を適当な溶媒に溶解して、ノズルより噴出させて、熱風を送って溶媒を気化させて繊維状にする乾式紡糸法がフランスの H.B.de Chardonnet
によってはじめて行われた。 Chardonnet は
最初この方法でニトロセルロースを繊維状にしたが、その後、この方法は工業的に確立されて現在ではアセチルセルロース、アクリル
ニトリル、ポリ塩化ビニルなどの紡糸法に広く用いられている。

１）長岡半太郎 : 東京数学物理学会記事概要,
第２巻, 92（ 1904）.
２）Nagaoka, H.: Nature, Feb. 25（ 1904）.
３）Nagaoka, H.: Phil. Mag., [6], 7, 445（ 1904）.
４）Schott, G. A.: Nature, Mar. 10（ 1904）.
『量子力学の形成と論理』（銀座,５）武谷三男：出版）（ 1948）.
『量子力学史』（日本科学社）,（ 1948）.
６）天野清：
７）Fischer, E.: Ber., 27, 3230（ 1894）.
８）Marckwald, W.: Ber., 37, 349, 1368（ 1904）.
９）Fischer, E.: Z. Physiol. Chem., 33, 151（1901）.
１０）Ehrlich, F.: Ber., 37, 1809（ 1904）.
１１）Ehrlich, F.: Ber., 40, 2538（ 1907）.
１２）Abderhalden, E., Zeisset, W.: Z. Physiol.

Chem., 195, 721（ 1931）.

V.V.Markownikov逝く

写真4. P. Ehrlich

ロシアの有機化学者で炭素不飽和結合に対するハロゲン化水素の付加の位置に関す

アセチルセルロースの工業的製法成るる経験則のマルコフニコフの法則を発見した
Vladimir Vasilevich Markownikov がこの
年２月 11日に亡くなった。

アセチルセルロースは 1869 年に Baeyer

T.Becker がセルロースに無水酢酸と氷酢酸

A.W.Williamsonが没したの作用で得られるトリアセチルセルロースをア

ロンドン大学教授でウィリアムソンのエーテル合成で知られる Alexander William

行うことによって、有用なアセチルセルロース

W i l l i a m s o n が５月 6 日に 死 去し た 。

の工業的製法を確立した

１５）Pictet, A., Rotschy: Ber., 37, 1225（ 1904）.
１６）Kipping, F. S.: Proc. Chem. Soc., 20, 15（1904）.
１７）Dilthey, W.: Ber., 37, 1139（ 1904）.

A159, 139（ 1937）.

セトン溶液中で稀酢酸による部分加水分解を
29, 30）（1904）.
１４）Pinner: Ber., 26, 294（ 1893）.

（London）,
１
８）Kipping, F. S.: Proc. Chem. Soc.

社の P.Schützenberger により発見されていた 28）。 1904 年頃になって A.Eichengrünと１３）Bucherer, H.: J. prak. Chem., 69〔2〕,49。その溶解性、Williamson は明治初期に英国に渡った

耐熱その他の特性はそのアセチル化度により日本人留学生、伊藤博文、井上馨らを世異なるが、アセチル化度に応じてプラスチック、

話し、また桜井錠二の化学の師であった。

ラッカー、写真フィルム、繊維などの用途にまた東 京 開 成 学 校に外 人 教 師として迎え広く使われる 31）。 特にアセチルセルロース繊られた R.W.Atkinson も Williamson の維の製法は Baeyer 社により始動された。

弟子でその推薦を受けて来日した。

１９）Bayliss, W. M., Starling, E.: Proc. Roy.

Soc.（London）, Ser. B73, 310（ 1904）.
２０）芝哲夫：本誌, 69（ 1）, 2,（3）, 2（ 2001）.
２１）Went, F. W.: Rec. trav. bot. Neerl., 25, 1（1929）.
２２）Linser, H.: Angew. Chem., 78（ 18/19）, 895（1966）.

（London）,
２
３）Harden, A., Young, W. J.: J. Physiol.
32, 1（ 1904）.
２４）Harden, A., Young, W. J.: Proc. Chem

Soc., 21, 189（ 1905）.
２５）Harden, A., Young, W. J.: Proc. Roy. Soc.

（London）, B77, 405（ 1905）.
２６）Euler, H. v., Karrer, P., Usteri, E.: Helv.

世界最初のビスコース法による人絹製造工場が建設される

C.A.Winklerが死去した
ガス分析法を開発し、ニッケル、コバルト

イギリスの Samuel Courtaulds 社が世界の工業的製法を案出して、新元素ゲルマニ

最初のビスコース式人絹工場を建設、製産

ウムを発 見したドイツの化 学 者 C l e m e n s

を開始した。 溶解パルプを苛性ソーダ溶液

Alexander Winkler がこの年 10 月 8日にドに浸漬してアルカリセルロースにして、これにレスデンで亡くなった。

二硫化炭素を反応させて、セルロースキサン

Chim. Acta, 25, 323（ 1942）.
２７）Warburg, O., Christian, W.: Biochem. Z.,
311, 209（ 1942）.
２８）Schützenberger, P.: Compt. rend., 68, 814（1869）.

:,
２９）Eichengrün, A., Becker, T. et al.（BAEYER）
D.R.P. 159 524（ 1901/1905）.
:,３０）Eichengrün, A., Becker, T. et al.（BAEYER）
D.R.P. 252 706（ 1905/1912）.

トゲン酸ナトリウムにして、水または苛性ソー

３１）Zachrich, K. W.: Angew. Chem., 53, 144

ダ浸液に溶解してビスコースにし、ビスコース（1940）.

レーヨンやセロファンの製造に使用された。

和光純薬時報Vol.72, No.1（2004）

31

LC/MS関連試薬
LC/MS（液体クロマトグラフィー/質量分析計）
は、
生体・食品・環境分析など様々な分野で広く普及しています。特に近年では、
装置のインターフェイス部の開発・改良が飛躍的に進んだ結果、環境汚染物質や薬物代謝物の極微量分析などにも適用されています。

LC/MS用 溶媒
特長●LC/MS分析適合性試験を実施
m/z 50〜2,000でのノイズレベルを保証●アルミキャップを採用
プラスチックキャップから微量汚染物質が混入する可能性を低減

規格

従来の高速液体クロマトグラフ用の規格にLC/
MS分析適合性試験を加えました。
■アセトニトリル
含量（毛管カラムGC）：99.8％以上：0.780〜0.783g/mr
度（20℃）密蛍光

試

験：試験適合LC/MS 分析適合性：試験適合■メタノール
含量（毛管カラムGC）：99.7％以上：0.789〜0.792g/mr
度（20℃）密蛍光

試

験：試験適合従来品（ HPLC用）とLC/MS用との比較＿グラジエント時（TIC）

LC/MS 分析適合性：試験適合コードNo.

品

012-19851
018-19853
138-14521
134-14523

名規 格

Acetonitrile

LC/MS用Methanol

LC/MS用

容 量

希望納入価格（円）

１r
３r
１r
３r

5,600
13,0001,600
3,400

逆相系LC/MS用カラム WakopakRMS-5C18GT
カラム管内壁をグラスライニング処理した逆相系LC/MS用充てんカラムです。
また、両端のカラムフリットにも高純度チタンを使用し、非特異的吸着を最小限に抑えたカラムです。

特長●金属（鉄）との接触を避け、金属配位性化合物の影響を極限まで抑制●生体試料中の微量成分分析に優れたピーク形状と回収率
品

名

WakopakRMS-5C18GT

カラムサイズジョイントタイプ

カラム記号

容 量

希望納入価格（円）2.0mmφ×150mm

デュポンタイプ

ノAD

1本

59,000

収載されている試薬は、試験・研究の目的にのみ使用されるものであり、家庭用、医療用など他の用途には用いられません。
記載価格は希望納入価格であり消費税などが含まれておりません。

和光純薬時報 Vol.72 No.1

32

２００４年１月１５日 発行
発行責任者 金澤廣継
編集責任者 大西礼子
発 行 所 和光純薬工業株式会社
〒５
４
０-８
６
０
５ 大阪市中央区道修町三丁目１番２号
TEL.０
６-６
２
０
３-３
７
４
１（代表）
URL http://www.wako-chem.co.jp
印 刷 所 株式会社 林欧文堂

●和光純薬時報に対するご意見・ご感想はこちらまでお寄せ下さい。
E-mail oonishi.reiko@wako-chem.co.jp●製品に対するお問合せはこちらまでお寄せ下さい。
フリーダイヤル ０１
２
０ｰ０
５
２ｰ０
９
９
フリーファックス ０１
２
０ｰ０
５
２ｰ８
０
６
E-mail labchem-tec@wako-chem.co.jp

Vol.72 No.1

この度当社では、微量不純物を低減させたLC/MS用溶媒と、非特異的吸着を最小限にまで抑えた逆相系LC/MS用充てんカラムを発売しました。