原著論文

診療と新薬 2023; 60: 173-178

腹圧性尿失禁モデルラットに対する
八味地黄丸の骨盤底筋修復作用と診療と新薬 Web

尿漏れ改善効果菅谷公男 1）2）／西島さおり 2）／稲木萌翔 3）／松下哲也 3）／赤木淳二 3）● 要約
八味地黄丸は泌尿器疾患へ頻用される漢方薬である。今回，雌ラットの腟内にバルーンを挿入して拡張させ（Vaginal distension：VD），骨盤底筋群に障害を与えた腹圧性尿失禁モデルラットを用いて，八味地黄丸の尿漏れ改善効果および骨盤底筋群に及ぼす影響について検討した。八味地黄丸エキス（以下，HE）を 2 週間混餌投与した後に腹壁への電気刺激を行い，膀胱内に注入した生理食塩水が排出した時の腹圧下漏出時圧（Abdominal leak point pressure：ALPP）を測定したところ，VD により低下した ALPP は HE 投与により有意に改善し，尿漏れ改善効果が確認された。次に，骨盤底筋群を標的とした作用機序を明らかにするため，HE もしくは八味地黄丸末（以下，HP）の投与から 1 週間後に外尿道括約筋を含む尿道全体を摘出し，筋転写調節因子の mRNA 発現量を解析した。その結果，VD によって上昇した myogenin および Myf6 の発現量は，HE もしくは HP の投与により低下傾向を示し，筋損傷状態からの早期回復の様子がうかがえた。またこの時の外尿道括約筋深部より漏出した尿道灌流液中のカテコラミン量は，VD で高値を示したのに対し，HE もしくは HP の投与では正常レベルへ改善していた。このことから八味地黄丸は障害を受けた骨盤底筋群の修復を促進することで外尿道括約筋の収縮反応を正常化し，尿道閉鎖圧を高めて腹圧性尿失禁を改善するものと考えられた。
Key words：八味地黄丸，腹圧性尿失禁，骨盤底筋群

は じ め に

その剤形の多くはエキス製剤であるが，古くから生薬末を蜂蜜で練り合わせた丸剤としても用いられて骨盤底は，骨盤内の内臓を支えるとともに，尿やいる。八味地黄丸についてはこれまでに，頻尿や排便を貯めたり出したりする排泄の機能を担ってい尿障害，前立腺肥大などを中心に臨床効果に関するる。一方，妊娠・出産，荷重労働，加齢などにより報告がいくつかあるが 1）〜 4），作用機序に関する薬理

骨盤底筋群や膀胱・尿道周囲の靭帯が障害を受ける

研究は限定的である 5）6）。そこで本研究では八味地と，膀胱や尿道が骨盤内で不安定になり，腹圧性尿黄丸の薬理評価研究の一環として，八味地黄丸の一失禁を引き起こすことが知られている。

般用医薬品の効能・効果「軽い尿漏れ」に着目し，八味地黄丸は 8 種の生薬から構成される漢方薬であり，主に体力中等度以下のものの頻尿，残尿感，腹圧性尿失禁モデルラット 7）を用いた尿漏れ改善効
果およびその作用機序について検討した。

排尿困難などの慢性泌尿器疾患に用いられている。
1）北上中央病院 泌尿器科，2）株式会社サザンナイトラボラトリー，3）小林製薬株式会社 中央研究所
連絡先：北上中央病院 泌尿器科 菅谷公男
〒 904-0101 沖縄県中頭郡北谷町字上勢頭 631-9
TEL：098-936-5111 FAX：098-936-9225 E-mail：sugaya@sklabo.co.jp

22 （174）

診療と新薬・第 60 巻

第 3 号（2023 年 3 月）

（cmH₂O）
60.0

矢印は尿漏出を示す。

0.0
無処置

VD

HE

図 1 ALPP 測定の典型例

Ⅰ．材料および実験方法

n.s.
70.0

1．使用薬物（3）， サ ン ヤ ク（3）， タ ク シ ャ（3），ブクリョウ（3），ボタンピ（3），ケイヒ（1），ブシ末（1）を括弧内の重量比で混合した生薬を熱水抽出し，乾燥ALPP（cmH₂O）

八味地黄丸エキス末（以下，HE）は，第十八改
正日本薬局方 8） に従い，ジオウ（5），サンシュユ

50.0
40.0
30.0
20.00.0

薬末として同様の重量比で混合したものを八味地黄
含量が 1.0％ HE および 1.6％ HP（w/w）となるよ＃10.0させたものを使用した。また，各生薬を粉砕し，生丸末（以下，HP）として使用した。それぞれ粉末

＊60.0

無処置VD

HE

平均値 ± 標準誤差（n ＝ 8），＊：p ＜ 0.05 vs. 無処置群，＃：p ＜ 0.05 vs. VD 群，n.s.：有意差なし

うに粉末飼料（CE-2，日本クレア株式会社）に混合して試験飼料を調製した。なお，使用薬物は小林

図 2 ALPP に対する HE の影響製薬株式会社より提供されたものを使用した。
2．実験動物
8 週齢の Sprague Dawley 雌性ラット（56 頭，日8 頭）および HE を投与する群（HE 群，8 頭）と本エスエルシー株式会社）を購入し，1 週間予備飼した。また，VD を施していない正常ラットを無処育後，実験に使用した。飼育期間中，飼料および水置群（8 頭）とした。無処置群および VD 群は通常道水は自由に摂取させた。なお，動物実験は，沖縄

飼料，HE 群は試験飼料で 2 週間飼育した後，ウレ

動物実験委員会（承認番号 2022007）にて承認され

タン麻酔（1.2 g/kg，1/3 腹腔内，2/3 皮下投与）た内容にて実施した。

下に左右の骨盤神経と下腹神経を尿管とともに結紮

3．腟バルーン拡張して膀胱収縮が出現しないようにし，膀胱頂部よりイソフルレン吸入麻酔下に腟内に挿入した 10 F膀胱瘻を造設した。左右腹壁に刺激電極を設置してバルーンカテーテルのバルーン内に 4 mL の水を注

10 秒毎に 1 秒間の電気刺激（duration：0.2 ms，50入し，腟口を閉じて 3 時間放置して骨盤底筋群を損Hz，最大 35 V）を行い，刺激強度を徐々に強め

傷 し た（40 頭 ）（Vaginal distension：VD）。VD 後て，膀胱内に入れた赤色の食紅生食（0.2 mL）がは抗生物質（セファゾリンナトリウム 30 mg，ニプ

外 尿 道 口 か ら 排 出 さ れ る と き の ALPP を 測 定 しロ株式会社）を皮下投与した。

た 9）。

4．尿漏出最小膀胱内圧測定5．外尿道括約筋および尿道灌流液評価

VD ラット 16 頭を 2 群に分け，対照群（VD 群，VD ラット 24 頭を 3 群に分け，VD 群（8 頭），診療と新薬・第 60 巻

Myogenin＊

8.0

Relative expression / GAPDH

Relative expression / GAPDH

n.s.
n.s.

n.s.

12.0
10.0
8.0
6.0
4.0
2.0

n.s.

7.06.0
5.0
4.0
3.0
2.0
1.00.00.0

無処置

VD

HE

無処置

HP

Myf6VD

PCNA

3.5

n.s.

HP

n.s.

1.2

n.s.
Relative expression / GAPDH

＊

HE

＊

n.s.
Relative expression / GAPDH

23 （175）

Myf5

n.s.

14.0

第 3 号（2023 年 3 月）

3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5

1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0

0.0

無処置

VD

HEHP

無処置

VD

HEHP

平均値 ± 標準誤差（n ＝ 3），＊：p ＜ 0.05 vs. 無処置群，n.s.：有意差なし

図 3 mRNA 発現に対する HE および HP の影響

HE 群（8 頭）および HP 群（8 頭）とした。また，

レナリン受容体（A1a，A1d），インターロイキン

VD を施していない正常ラットを無処置群（8 頭）IL-6 の発現レベルを調べた。とした。無処置群および VD 群は通常飼料，HE 群

尿道灌流液採取 10）：各群の 5 頭について，ウレタ

および HP 群は試験飼料で 1 週間飼育した後，以下ン麻酔（1.2 g/kg，1/3 腹腔内，2/3 皮下投与）下のとおり外尿道括約筋および尿道灌流液を採取し，に尿道右側の外尿道括約筋深部（内外尿道括約筋境評価した。

界部）に 24 G のサーフロー針（SROT2419C；テル外尿道括約筋採取：各群の 3 頭について，イソフモ）を挿入し，内針をぬいて，その内針（27 G）

ルレン吸入麻酔下に膀胱頸部で膀胱と尿道を切断

を尿道左側の外尿道括約筋深部に刺入し，そこからし，尿道と一体化している腟前壁を付けて尿道を摘

約 2 時間にわたって生理食塩水を緩徐（2 mL/h）

出し，凍結保存した。その後，RT-qPCR 法にて筋に注入した。サーフロー外針に流入する生理食塩水組 織 中 の 筋 転 写 調 節 因 子（myogenin,myogenic

や尿道周囲に漏れ出てくる生理食塩水（尿道灌流factor 5：Myf5，myogenic factor 6：Myf6，液）を採取して凍結保存し，カテコラミン量（アドmyoblast determination protein 1：MyoD），筋増殖レナリン，ノルアドレナリンおよびドパミン）を株

抑 制 因 子（myostatin）， 増 殖 細 胞 核 抗 原式会社ビー・エム・エルにて委託して測定した。

（proliferating cell nuclear antigen：PCNA），アド

24 （176）

診療と新薬・第 60 巻

Adrenaline

＃＃

4.0

3.5

3.5

3.0

Noradrenaline（ng/mL）

Adrenaline（ng/mL）

Noradrenaline＃＊＊

第 3 号（2023 年 3 月）

3.0
2.5
2.0
1.5
1.00.50.0

＊＊

n.s.

2.5
2.0
1.5
1.00.50.0

無処置

VDHEHP

無処置VD

HEHP

Dopamine
＃
＊

1.6

n.s.

Dopamine（ng/mL）

1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4

平均値 ± 標準誤差（n ＝ 5），＊：p ＜ 0.05，＊＊：p ＜ 0.01 vs. 無処置群，＃：p ＜ 0.05 vs. VD 群，n.s.：有意差なし

0.20.0

無処置

VD

HE

図4HP

カテコラミン量に対する HE および HP の影響

6．統計解析

傾向を示し，また無処置群との間に有意差は認めな

結果はすべて平均値および標準誤差で示した。統かった。Myf5 は無処置群に対して有意差はないも計解析は，一元配置分散分析を行い，群間に有意差のの，VD 群，HE 群および HP 群のいずれも増加が認められた場合，3 群間の比較は Fisher s LSD，傾向にあった。増殖細胞核抗原である PCNA の発4 群間の比較は Tukey で多重比較検定を行った。

現量は，無処置群に対して HP 群でのみ有意に低値いずれの検定においても有意水準は 5％とした。統を 示 し た。 な お，MyoD，myostatin，A1a，A1d，計解析には Excel 統計 Ver.3.21 を使用した。

IL-6 は測定限界値以下であった。

Ⅱ．結果

尿道灌流液内アドレナリン，ノルアドレナリンおよびドパミンはいずれも無処置群に対して VD 群でALPP の結果を図 1 および図 2 に示した。VD 群有意に増加した（図 4）。これに対して HE 群のアの ALPP は無処置群に対して有意に低下した。一ドレナリンは VD 群に対して有意に低下し，また方，HE 群の ALPP は VD 群よりも有意に高く，無HP 群においてはアドレナリン，ノルアドレナリ処置群と同程度まで回復した。

ン，ドパミンのいずれにおいても有意に低下した。

mRNA 発 現 解 析 の 結 果 を 図 3 に 示 し た。
Myogenin および Myf6 の VD 群の発現量は無処置

Ⅲ．考察群に対して有意に増加した。一方，HE 群および

八味地黄丸は泌尿器疾患に頻用される処方であHP 群は，VD 群に対して有意差はないものの低下り，特に老人の泌尿器トラブルに利用される機会が診療と新薬・第 60 巻

第 3 号（2023 年 3 月）

25 （177）多い。今回，骨盤底筋群に弛緩・損傷の障害を加え十分に反映されず，一方で，八味地黄丸の投与にた腹圧性尿失禁モデルラットを用いて八味地黄丸のよって損傷からの回復が早まることでカテコラミン

評 価 を 行 っ た 結 果，2 週 間 の HE の 投 与 に よ り効果が発揮され易くなり，尿漏れの改善作用をもたALPP は有意に改善し，尿漏れに対する効果が確認らすと考えられた。

された。VD によって損傷を受けた骨盤底筋群は，通常，八味地黄丸は，エキス末として 1 日 3.3 g

その後 1 週間で myogenin などの筋転写調節因子の〜 4.4 g，生薬末として 1 日 6 g が満量処方としてmRNA 発現がピークとなり，修復に伴い発現が減服用されており 16），生薬末のほうが 1 日服用量が少していくことが報告されている 11）。そこで骨盤底1.3 〜 1.8 倍多い。今回，このヒト用量比をもとに筋群の治癒過程に対する八味地黄丸の影響を明らか

飼料配合量を 1.0％ HE ならびに 1.6％ HP（w/w）にする目的で，HE もしくは HP の投与から 1 週間に設定し，試験を行った。その結果，myogenin や後に外尿道括約筋を含む尿道を摘出し，筋転写調節

Myf6 の mRNA 発現については HE 群および HP 群

因子について評価した結果，VD によって上昇したで同様の挙動を示したが，増殖細胞核抗原の PCNA

myogenin や Myf6 の mRNA 発 現 は，HE や HP のは HP 群のみ有意に低下し，また，ノルアドレナリ投与群では低下傾向にあり，VD 群で認められた無ンおよびドパミンは HP 群でのみ有意に低下したこ

処置群との有意差も HE 群や HP 群では消失した。とから，骨盤底筋群の回復は HE より HP の方が早Myogenin は骨格筋の損傷に応答して速やかに上昇い可能性が推測された。

するものの，温熱療法などの治癒促進療法では自然以上，本研究の結果から，八味地黄丸は障害をう経過での治癒過程よりも数日のうちに早期に低下す

けた骨盤底筋群の修復を促進することで外尿道括約12）ることが報告されており ，今回の結果も八味地黄筋反応を正常化し，尿道閉鎖圧を高めて腹圧性尿失丸が VD に伴う外尿道括約筋損傷を自然経過よりも禁の改善に役立つものと考えられた。

早期に回復させることで筋転写調節因子が低下傾向

Ⅳ．引 用 文 献にあったものと考えられた。織部らは，子宮脱に対する術後の八味地黄丸の投与が，膀胱機能を早期に回復させ，膀胱周囲組織の修復を助けている可能性を報告しており 13），また，Takeda らはマウス骨格

1）鎌田正晴，安井敏之，苛原
香川征，桜井紀嗣，浜尾稔，青野敏博，山本晶弘，
巧：中高年婦人の排尿障害に対する八味地黄丸の効果．日本更年期医学会雑誌
1993; 1: 172-177.

筋筋芽細胞株 C2C12 細胞を用いた評価で，八味地2）有馬正明，佐川史郎，園田孝夫：排尿障害に対する保黄丸は分化プロセスに影響せず，未分化の筋芽細胞存的治療─八味地黄丸の使用経験について─．泌尿紀の増殖を促進し，筋組織の損傷修復を誘導するのに

要 1979; 25: 1231-1234.
3）八木宏，西尾浩二郎，佐藤両，川口真琴，小堀善役立つ可能性を報告している 14）。つまり，八味地黄友，芦沢好夫，宋丸は，骨盤底筋群の障害に対して組織修復を誘導

寛順：男性下部尿路疾患に対する八味地黄丸の効果のし，筋損傷状態を早期に回復させることにより尿漏れ改善作用を発揮するものと考えられた。
VD 群における尿道灌流液内カテコラミン濃度の上昇は VD による組織損傷に伴う何らかの機序によるものと考えられる。外尿道括約筋には速筋の収縮に 関 わ るβ2 ア ド レ ナ リ ン 受 容 体 が 発 現 し て おり 15），単純に考えればカテコラミン濃度が高いほど外尿道括約筋が収縮し ALPP は高くなると考えら

成浩，新井学，岡田弘，土佐検討．日東医誌 2015; 66: 49-53.
4）浦田英男，浜野耕一郎，多田夫，森茂，森幸夫，波部英脩，大串典雅，永野道夫：前立腺肥大症における八味地黄丸の使用による排尿動態の観察．泌尿紀
要 1979; 25: 983-990.
5）洲加本孝幸，伊藤敬三，能勢尚志：八味地黄丸エキスの膀胱に対する作用．基礎と臨床 1982; 16: 179-185.
6）鈴木孝憲，岡崎浩，鈴木光一，黒川公平，東洋臣，

鈴木和浩，山中英壽：麻酔下イヌ生体位膀胱機能に対する八味地黄丸の作用．北関東医学 2000; 50: 15-19.

れる。しかし，実際は VD は ALPP を低下させた

7）Kamo I, Kaiho Y, Canon TW, Chancellor MB, de groat

ことから（図 2），VD 群はカテコラミンによる外尿WC, Prantil RL, Vorp DA, Yoshimura N: Functional

道括約筋の収縮能が一部破綻していると推察されanalysis of active urethral closure mechanism underる。つまり，VD 群は損傷に伴いカテコラミン濃度が上昇するがそのカテコラミンの効果は尿道収縮に

sneeze-induced stress condition in a rat model of birthtrauma. J Urol 2006; 176: 2711-2715.

26 （178）

診療と新薬・第 60 巻8）第十八改正日本薬局方，令和 3 年 6 月 7 日厚生労働省
公示第 220 号．

第 3 号（2023 年 3 月）

585.
12）Hatade T, Takeuchi K, Fujita N, Arakawa T, Miki A:9）Kamo I, Hashimoto T: Involvement of reflex urethral

Effect of heat stress soon after muscle injury on theclosure mechanisms in urethral resistance under

expression of MyoD and myogenin during regeneration

momentary stress condition induced by electricalprocess. J Musculoskelet Neuronal Interact 2014; 14:

stimulation of rat abdomen. Am J Physiol Renal Physiol
2007; 293: F920-F926.
10）Nishijima S, Sugaya K, Kadekawa K, Ashitomi K, Ueda

325-333.
13）織部和宏，西田欣広：子宮脱の術後不快感に対する八味地黄丸の効用．月刊漢方療法 2006; 10: 50-56.

T, Yamamoto H: Propiverine increases urethral wall14）Takeda T, Tsuiji K, Li B, Tadakawa M, Yaegashi N:

catecholamine levels and bladder leak point pressure in

Proliferative eﬀect of Hachimijiogan, a Japanese herbalrats. Int J Urol 2016; 23: 93-99.

medicine, in C2C12 skeletal muscle cells. Clin Interv

11）Salerno GRF, Bortolini MAT, Gomes RCT, Feitosa SM,Simões MJ, Zanoteli E, Castanho FL, Castro RA: The
molecular eﬀects of electrical stimulation on the muscle
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by vaginal distention. Neurourol Urodyn. 2020; 39: 576-Aging 2015; 10: 445-451.
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16）西岡五夫，大塚恭男，菊谷豊彦：漢方の基礎と応用，
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