原著論文

診療と新薬 2022; 59: 643-653

4'-デメチルノビレチンと4'-デメチルタンゲレチン含有サプリメントによる診療と新薬 Web

健常人の認知機能に対する効果の検証：
ランダム化二重盲検クロスオーバー試験

宮田晃史 1）／小林憲正 2）／北尾 聡 2）／草野崇一 2）● 要旨
目 的：本研究の目的は，4'-デメチルノビレチンと 4'-デメチルタンゲレチンを含むサプリメン
トが認知機能の改善にどのように寄与するかを明らかにすることである。
方 法：ランダム化プラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験デザインにより実施した。主要アウトカムとして，WMS-R スコアにより記憶機能を評価し，副次アウトカムとして，WFT とTMT-J を評価した。被験品の効果を単回摂取によりプラセボ品と比較した。各々，3 週間のウォッシュアウト期間を設けて摂取した。また，安全性も評価した。
結 果：被験品またはプラセボ品の一回目摂取のため，36 人の被験者がランダムに 2 つのグルー
プに分けられた。1 人の被験者が個人的な理由で 2 回目の摂取を辞退し，残りの 35 人の被験者が研究を完了した。35 人の被験者から得られたデータは適格であり，分析対象とした。その結果，WMS-R の結果をまとめた指標において，言語記憶，視覚記憶，一般記憶，遅延再生で有意な改善が認められた。また，安全上の問題は発生しなかった。
結 論：4'-デメチルノビレチンと 4'-デメチルタンゲレチンを含むサプリメントは，認知機能を改善することが明らかとなった。また，被験品の摂取による悪影響はなかった。
キーワード：ノビレチン，タンゲレチン，PMF；polymethoxyﬂavonoid, カンキツ類，認知機能，記憶，遅延再生緒

言もある 4）〜 6）。そのため，早期から適切な対策を行う
ことが認知症の発症を防ぐと考えられている 7）。ま認知症の有病率は年齢とともに急激に増加していた，食事を中心とした食習慣の重要性も指摘されて

1）

おり，食品由来成分の認知症予防への有用性も知らる 。九州大学の二宮らは，久山町の大規模・長期
2）

コホート研究のデータ から，2025 年には認知症の有病率が 19 〜 20.6％に達し，患者数は約 700 万3）れている 8）。
ノビレチンやタンゲレチンなどのポリメトキシフ

人に達すると推計している 。現在でも，自動車のラ ボ ノ イ ド は カ ン キ ツ 果 皮 に 多 く 含 有 さ れてい逆走や引きこもり，認知症高齢者の孤独死などが深る 9）10）。体内においては，小腸や肝臓において代謝刻な社会問題となっている。一方，正常と認知症のされ，3'，4'，5 位などのメトキシ基がシトクロム

中間的な状態である軽度認知障害（MCI）は，必ずP450（CYP）酵素により脱メチル化し，一部が水しも認知症に進行するとは限らず，正常に戻ること酸基になることが報告されている 10）。4'-デメチルノ
ビレチン（4'-DeNOB）および 4'-デメチルタンゲレ

1）日本橋エムズクリニック
2）富士産業株式会社

チン（4'-DeTAN）はその代謝産物のひとつであるが，ポリメトキシフラボン骨格 B 環 4' 位が脱メチ

100 （644）

診療と新薬・第 59 巻

第 10 号（2022 年 10 月）

ル化され水酸基となった 4'-DeNOB はノビレチンにンクに登録した治験ボランティアであり，2020 年

比べ，長期記憶形成の認知機能と関連する cAMP

10 月から 12 月にかけて募集された。

応答配列エレメント（CRE）を介した転写活性なら

2.1

びにコリン作動性機能を有するコリンアセチルトラ⑴ 40 歳から 69 歳の健常な日本人男女（MMSE

ンスフェラーゼ（ChAT）転写活性がノビレチンに

スコアでは 24 以上，MCI：軽度認知症の疑い

11）

比べて，増強されていることが報告されている 。
加えて，NMDA 受容体阻害剤 MK801 で誘発した健忘症モデルマウスにおいては 4'-DeNOB および選択基準の方を含む）⑵ 認知症に罹患していないが，加齢に伴う認知機能低下の自覚がある方

4'-DeTAN を含有するエキスの経口摂取により恐怖

2.2

体験，すなわち恐怖記憶の固定化が促進され，エピ⑴ 認知症と判断される方，認知症により医師に

11）

除外基準

ソード記憶が向上していることが示された 。これよる治療，投薬，生活指導を受けている方，らのことは 4'-DeNOB および 4'-DeTAN 摂取による過去に受けたことがある方

記憶の形成，想起への有用性を示している。
そこで，本研究では 4'-DeNOB および 4'-DeTANを含有するサプリメントの認知機能に及ぼす効果について，WMS-R によりワーキングメモリならびにエピソード記憶を中心に評価する

12）ことを目的と⑵ 重篤な脳血管疾患，心疾患，肝疾患，腎疾患，
消化器疾患，届出が必要な感染症などに罹患している方⑶ 血圧測定，血液検査で著しい異常が認められる方

し，軽度認知機能障害（MCI）を含む健常人のボラ⑷ 高度の貧血のある方

ンティアを対象にプラセボ対照のランダム化二重盲⑸ 40 歳以降，難聴と診断されたことがある方

検クロスオーバー試験を実施した。

⑹ 認知機能に影響する医薬品，健康食品，サプ

試

験

方

法

1．試験デザイン
2020 年 12 月から 2021 年 1 月にかけて日本臨床試験協会（JACTA，東京都）においてプラセボ対
照二重盲検単回投与クロスオーバーデザイン試験が実施された。試験の追跡期間は 2020 年 12 月から
2021 年 1 月までであり，すべての試験は JACTA で実施された。本試験は，ヘルシンキ宣言の倫理原則リメントを常用している方⑺ 閉経前後の女性で体調の著しい変化がみられる方⑻ 薬物または食品に対しアレルギー症状を示す
恐れのある方⑼ 過度の喫煙者＊およびアルコールの常用者＊＊な
らびに食生活が極度に不規則な方⑽ 妊娠中，授乳中の者，およびその予定のある方と，ヒトを対象とする医学および健康研究に関する⑾ 同意取得時から遡って 1 カ月以内に本試験に倫理指針に従って実施した。試験プロトコルは薬事影響される他の臨床試験に参加していた方お法有識者会議倫理審査委員会の承認を得た（東京都

よび参加予定がある方

承認番号：1200011）。すべての被験者から自由意⑿ その他，試験責任医師が不適切と判断した方思による同意を書面で取得した。本試験は UMIN

3．ランダム化

臨 床 試 験 登 録 シ ス テ ム に 登 録 さ れ て い る（ 試 験

50 人の応募者のうち，4 人が研究への参加を辞

ID：UMIN 000042623）。

退し，46 人がスクリーニング検査の MMSE（mini-

2．被 験 者

mental state examination）を受けた。選択 / 除外基

本試験には健常者が参加している。すべての被験準に従って，MMSE で満点（30 点）となった 10

者は株式会社ブレイクスルー（東京）のモニターバ人を除外した。残る 36 人を被験者として，乱数表＊：概ね 1 日 21 本以上の喫煙者を指す。

＊＊：概ね 1 日純アルコールで 20 g（日本酒 1 合 180 mL，ビール中瓶 1 本 500 mL，ウイスキーダブル 60 mL，焼酎 0.5 合 90 mL，ワイングラス 2 杯弱 200 mL 程度）以上の量を，週 6 日以上飲酒している者を指す。

診療と新薬・第 59 巻

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101 （645）

適格性（eligibility）評価（n = 50）〔M：28, F：22〕

登録除外（n = 14）〔M：9, F：5〕・MMSE得点（n = 10）〔M：5, F：5〕
・参加辞退（n = 4）〔M：4, F：0〕

グループ A

ランダム化（n = 36）〔M:19, F：17〕

グループ B

割付け
被験品を最初に使用（n = 18）〔M：9, F：9〕
割り付けられた介入を受けた（n = 18）

プラセボ品を最初に使用（n = 18）〔M：10, F：8〕
割り付けられた介入を受けた（n = 18）

介入を受けなかった（n = 0）

介入を受けなかった（n = 0）
追跡
介入継続せず（n = 1）〔M：1, F：0〕
・個人的理由（n = 1）

介入継続せず（n = 0）

解析
解析対象（n = 18）〔M：9, F：9〕
解析から除外（n = 0）

図1

解析対象（n = 17）〔M：9, F：8〕
解析から除外（n = 0）

被験者割付けのフローチャート

で 18 人毎の 2 グループに分けた。割付けの過程

表 1 試験食品の栄養成分表（3 錠あたり）

で，性別，年齢，MMSE スコア等の背景要因を考

成 分

被験品

プラセボ品

慮して分布の偏りを抑えた（層別ランダム化）
。割

エネルギー
たんぱく質
脂 質
炭水化物
食塩相当量

4.8 kcal
0.3 g
0.06 g0.8 g0.007 g

4.8 kcal
0.004 g0.01 g1.2 g0.001 g

振り順の作成，被験者の組み込み，各グループへの
被験者の割付けは，各担当者が行った。割付けリス
トは，割付け担当者が施錠できる保管庫に保管され，臨床試験データが確定した後に公開された。被験者は割付けに基づき，被験品またはプラセボ品のいずれかを受け取った。被験者が最初に被験品を摂験品とプラセボ品の栄養成分を表 1 に示す。

取したグループを A，および被験者が最初にプラセ

5．試験手順

ボ品を摂取したグループを B とする（図 1）。

5.1 試験プロトコル

4．試験食品

被験者はセッション 1 に参加した後，3 週間の試験食品として，被験品とプラセボ品を用意しウォッシュアウト期間を経てからセッション 2 に参た。被験品は，みかん麹 FJ-319（富士産業㈱製）

加した。各セッションは，試験食品の摂取 1 週間前を 配 合 し た 錠 剤 で あ り，1 回 摂 取 量 あ た りのベースラインを評価するための最初の試験，1 回

4'-DeNOB：10 mg，4'-DeTAN：5.2 mg を 含 有 すの摂取，および摂取後を評価するための摂取 1 時間

る。プラセボ品は，みかん麹 FJ-319 を含まない錠後の 2 回目の試験で構成される。被験者は，セッ剤である。被験品，プラセボ品とも 1 回の摂取量はションより前に実施されるスクリーニング検査，お3 錠である。両方とも富士産業㈱より供与されておよび各セッションの摂取前後の検査を受けるためにり，色，匂い，形，味では区別できず，識別用マー

試験会場に来訪した。スケジュール（図 2）に従っ

クで管理していたためブラインド化されている。被て，サプリメントの有効性に関するパラメーターを

102 （646）

診療と新薬・第 59 巻

第 10 号（2022 年 10 月）＜スクリーニング＞ ＜セッション 1＞ ＜ウォッシュアウト期間＞ ＜セッション 2＞〔グループ A〕

〔グループ B〕
2 週間

〔期間〕

1 週間

3 週間

1 週間

単回摂取
〔来院〕

2）3）

1）

4）

3）

単回摂取
4）

1）インフォームドコンセント, MMSE
2）割付け
3）摂取前試験
4）摂取後試験

図2

試験スケジュール

表 2 被験者背景（解析対象者）

測定した。試験期間中，被験者は以下の指示を受け遵守した。
通常のライフスタイルと習慣を維持する。他のサプリメントや薬を新たに服用しないようにする。過剰な量の食事，またはアルコールを避ける。認知機
能に影響を与える可能性のある食品やトクホ（特定保健用食品）を避ける。
5.2 アウトカム

項 目

グループ A

グループ BP値

人 数
男女比 1）

18
9：9
54.9 ± 5.3
27.4 ± 1.7

17
9：8
54.2 ± 7.3
27.8 ± 1.5

1.000
0.745
0.428

年

齢 2）

MMSE 2）

Mean ± SD
1）Fisher's exact test
2）Student's t-test

本試験の目的は，4'-DeNOB および 4'-DeTAN を含む被験品の摂取による認知機能の改善作用を解明
す る こ と で あ る。 こ の 目 的 を 評 価 す る た め に，

上記の下位検査の結果をまとめた主要な指標である

WMS-R を主要アウトカムとして測定し，WFT と「一般的記憶」，「注意 / 集中力」，「遅延再生」を求

TMT-J を副次アウトカムとして定めた。

め，一般的記憶を細分化した「言語性記憶」，「視覚5.3 WMS-R（ウェクスラー記憶検査）

性記憶」の指標を求めた。1 問につき 1 〜 5 点の得

原著は David Wechsler によるもので，1987 年に点を合算した合成得点を被験者の年齢に従い換算し13）

米国で改訂版（WMS-R）が発表された 。国際的て指標を算出した 14）。表示の値は指数で，数値が大に最もよく使用されている記憶検査で，日本ではきいほど良好である。

14）

2001 年に杉下により標準化された 。短期記憶，

5.4

WFT（言語流暢性課題）

長期記憶，言語性・非言語性記憶，即時記憶・遅延

言語流暢性課題（WFT；Word ﬂuency test）は，記憶など，記憶が持つさまざまな側面を総合的に測一定の時間内に意味カテゴリーより語想起を促す意

定することができ，認知症を始めとする種々の疾患

味流暢性課題（CFT；Category ﬂuency test）と，の記憶障害を評価するのに有効である。言語を使っ頭文字より語想起を促す文字流暢性課題（LFT；

た問題と図形を使った問題とで構成され，13 の下

Letter ﬂuency test）がある 15）。WFT は認知症を評

位検査〔⑴ 情報と見当識 / ⑵ 精神統制 / ⑶ 図形の価 す る の に 有 用 な 神 経 心 理 学 的 検 査 の 一 つであ

記憶 / ⑷ 論理的記憶Ⅰ / ⑸ 視覚性対連合Ⅰ / ⑹ 言る 16）。CFT では，「野菜」「果物」などのカテゴリー

語性対連合Ⅰ / ⑺ 視覚性再生Ⅰ / ⑻ 数唱 / ⑼ 視覚

を，LFT では「し」「た」などの頭文字から始まる

性記憶範囲 / ⑽ 論理的記憶Ⅱ / ⑾ 視覚性対連合Ⅱ

語を 1 分以内にできるだけ多く想起して口頭で述べ/ ⑿ 言語性対連合Ⅱ / ⒀ 視覚性再生Ⅱ〕がある。

させた 17）。単語数が多いほど良好である。

診療と新薬・第 59 巻

言語記憶103 （647）

視覚記憶

＊＊＊

20

第 10 号（2022 年 10 月）

一般記憶

＊＊

30

25

＊＊＊

20

15
20

10
5

15
10

10

5

0

0

0

−5
− 10

−5
− 10

− 10

− 15

− 15

− 20

− 20

− 20

被験品 プラセボ品

被験品 プラセボ品

被験品 プラセボ品

d = 0.88
95％CI = 5.981 to 15.724

d = 0.77
95％CI = 4.996 to 20.088

d = 1.17
95％CI = 9.642 to 17.270

遅延再生注意／集中力

＊＊＊

30

15

20

10

10

5

0

0

− 10

−5

− 20

− 10

− 30

− 15

n.s

Mean ± SD＊＊＊

p ＜ 0.001，＊＊p ＜ 0.01：paired t-test

被験品 プラセボ品

被験品 プラセボ品

d = 0.99
95％CI = 9.536 to 21.896

d = 0.26
95％CI = − 2.355 to 7.691

図3

WMS-R 主要指標における試験食品の摂取前後での変化量

5.5 TMT-J（Trail making test‐日本語版）

な医学的事象があった場合は，有害事象と定義す

Trail making test（TMT）は，数字を順番に結ぶる。ただし，必ずしも被験品と因果関係があるとはPart A と，数字と五十音を交互に結ぶ Part B で構限らない。有害事象を確認した場合は発症と経過，成され，注意機能の評価スケールとして広く用いら

重症度，治療の有無，治療内容，予後の詳細を記録

18）

れている 。日本では 2019 年に一般社団法人日本
高次脳機能障害学会 Brain Function Test 委員会に19）

して，有害事象の原因と結果との関係を決定する。
7．データ解析より TMT 日本版（TMT-J）が発表された 。Part

計画されたサンプルサイズ（n ＝ 35）は，検出

A，B とも，紙面にバラバラに配置されている対象

力 80％，有意水準 5％，脱落率 10％との仮定で，を線で結ぶまでの時間を測定した。数値が少ないほ

予備検討での遅延再生スコアにおけるプラセボ品群

ど良好である。

と被験品群との群間差が 9 ポイントであり，統合し6．安 全 性

た標準偏差が 13.0 であったことに基づく。統計値

被験品の安全性を評価した。試験期間中，不都合

は平均値±標準偏差で示した。測定値については，

104 （648）

診療と新薬・第 59 巻

表3
試 験

WMS-R

第 10 号（2022 年 10 月）

認知機能試験の結果

アウトカム

測定単位

タイミング

言語記憶

スコア

視覚記憶

試験食品 1）
被験品（n ＝ 35）

プラセボ（n ＝ 35）

摂取前
摂取後

107.9 ± 17.2
117.1 ± 16.8 ＊＊114.3 ± 15.0
112.9 ± 18.5

スコア

摂取前
摂取後

103.9 ± 21.0
113.1 ± 15.9 ＊＊109.6 ± 20.0
106.4 ± 22.2

一般記憶

スコア

摂取前
摂取後

107.5 ± 19.4
118.6 ± 16.3 ＊＊114.4 ± 17.3
112.3 ± 19.6

注意 / 集中力

スコア

摂取前
摂取後

110.1 ± 13.1
111.3 ± 14.8

113.7 ± 12.9
112.2 ± 13.9

遅延再生

スコア

摂取前
摂取後

106.5 ± 21.4
118.5 ± 16.5 ＊＊112.3 ± 19.4
108.9 ± 23.5

CFT

語 数

摂取前
摂取後

15.8 ± 4.2
15.4 ± 4.3

17.1 ± 4.2
17.1 ± 3.7

LFT

語 数

摂取前
摂取後

11.0 ± 3.6
12.7 ± 3.5 ＊＊10.8 ± 3.4
12.2 ± 2.8 ＊＊

TMT-A

秒

摂取前
摂取後

37.1 ± 21.0
29.3 ± 8.8 ＊31.2 ± 10.5
31.5 ± 13.6

TMT-B

秒

摂取前
摂取後

67.7 ± 31.1
64.7 ± 37.8

69.0 ± 44.6
58.4 ± 15.4

WFT

TMT-J

Mean ± SD1）＊ p ＜ 0.05，＊＊ p ＜ 0.01：Student's t-test で摂取前後を比較

対応のある t 検定を摂取前後および試験食品間の分

プ A，B 間で有意差は確認されなかった（表 2）。

析に用いた。被験者背景のグループ間比較には，

2．試験結果

フィッシャーの正確確率検定とスチューデントの t

表 3 に，認知機能試験の結果を示す。WMS-R に検定を用いた。解析対象は FAS とし，欠損値は無

関しては主要指標のうち，言語記憶，視覚記憶，一かった。多重度の調整は実施していない。効果量の般記憶，および遅延再生が，被験品摂取により摂取指標として Cohen's d（d）を記載した。両側検定で前に比べて有意にスコアが改善した。一方，プラセ

危険率 5％未満（p ＜ 0.05）を有意差ありと判定しボ品摂取ではスコアの有意な変化は認められなかった。統計解析には Excel 統計 3.21（Bell Curve），

た。さらに，各々の試験食品摂取前後でのスコア変20）

Statce l4（柳井，2015），EZR（Ver.1.54） を使用

化量において，被験品摂取時はプラセボ品摂取時とした。

比較して，言語記憶（p ＜ 0.001），視覚記憶（p ＜結果0.01），一般記憶（p ＜ 0.001），および遅延再生（p＜ 0.001）で有意な改善を示した（図 3）。副次アウ

1．被験者背景

トカムである WFT と TMT-J は，いずれも被験品

36 人の被験者がランダムに 2 つのグループに割摂取時とプラセボ品摂取時の変化量の比較で有意差

り当てられ，セッション 1 が開始された。グループを示さなかった。ただし，摂取前後の比較では，被B の被験者 1 人は個人的な理由で離脱し，残りの験品摂取時とプラセボ品摂取時の両方で，摂取前と35 人の被験者が試験を完了した。除外された被験比較して有意な変化が見られ，TMT-A は被験品摂者 は い な か っ た た め，35 人（ 男 性：18， 女 性：

取時のみ有意に変化した（表 3）。

17）からのデータが分析に使用された（図 1）。被3．有害事象験者の性別，年齢，および MMSE の得点にグルー

本試験において，被験品摂取による有害事象は確

診療と新薬・第 59 巻

認されなかった。

第 10 号（2022 年 10 月）

105 （649）

刺激が興奮性ニューロンに届くと，NMDA 型グル考

タミン酸受容体によるカルシウムイオン流入と，電察

位依存性カルシウムイオンチャンネルからのカルシ

我々は，4'-DeNOB と 4'-DeTAN を含む被験品がウムイオン流入が起こり，カルシウムイオン濃度上認知機能に及ぼす効果を検証するため，ランダム化

昇によりカルシウムイオン情報伝達経路が強く活性プラセボ対照二重盲検単回摂取クロスオーバー試験化される。その結果カルシウム / カルモジュリン依を 実 施 し た。4'-DeNOB 10.0 mg と 4'-DeTAN 5.2

存性キナーゼⅣ（CaMK Ⅳ）が活性化される。まmg の摂取で，主要アウトカムの言語性記憶，視覚た，カルシウムイオン依存的アデニル酸シクラーゼ

性記憶，一般的記憶，遅延再生が有意に向上した。

も活性化され，cAMP（環状アデノシン 3',5'-リン

この結果から，4'-DeNOB と 4'-DeTAN を含むサプ酸；cyclic adenosine monophosphate，cyclic

リメントには認知機能改善作用のあることが示されAMP）が産生され，PKA（プロテインキナーゼ A；

た。また，試験期間中に有害事象の発生はなかっprotein kinase A）も活性化される。CREB はこれた。

らのキナーゼ群によってリン酸化を受け活性型とな

4'-DeNOB には強い抗炎症作用があることが知らり，標的遺伝子の転写を活性化する 30）31）。記憶が保れており，一酸化窒素（NO）産生を阻害し，PGE2存される際に神経回路に誘導される可塑的変化を長（Prostaglandin E2），IL-1βおよび IL-6 の発現を減期 増 強（LTP；long-term potentiation） と い う

9）なが 32），LTP の持続には CREB による記憶遺伝子発

どの報告がある。さらに 4'-DeNOB には抗動脈硬化

現 活 性 化 が 必 要 で あ る こ と も 明 ら か に さ れてい作 用 が あ り，TPA（12-O-tetradecanoylphorbol-13-

る 33）。前出の Rahim（2009）によれば，4'-DeNOB

acetate） に よ り 酸 化 LDL 受 容 体（lectin-like

は PKA を介して ERK（細胞外シグナル制御キナー

oxidized LDL receptor-1；LOX-1）遺伝子の発現上

ゼ；extracellular signal-regulated kinase）リン酸化

少させる ，マウスの炎症性耳浮腫を改善する

21）

22）

昇を抑える 。また 4'-DeNOB はアドレナリン受容と CREB リン酸化を促し，CRE（cAMP 応答配列；

体を刺激することにより，褐色脂肪細胞を活性化しcAMP responsive element）依存的転写活性を促進

23）

脂肪燃焼と熱産生を促すという報告や ，肺がん抑させるとの報告がある 27）。

制の報告 24） がある。タンゲレチンが脱メチル化し他方，アルツハイマー病者の大脳皮質では，アセチた 4'-DeTAN に も，NO 産 生，PGE2，IL-1 β，ルコリン（ACh）合成酵素であるコリンアセチルトラ

iNOS（誘導型一酸化窒素合成酵素；inducible nitric

ンスフェラーゼ（ChAT；choline acetyltransferase）

oxide synthase），COX-2（ シ ク ロ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ

活性が低下していることが発見され 34）35），ChAT 活

2；cyclooxygenase）を抑制するなどの抗炎症効果

性と記憶スコアが相関していることが分かった 36）。

や 25），乳がん抑制作用 26）が報告されている。

アセチルコリンは，1914 年に Dale によって発見さ4'-DeNOB には神経変性抑制作用があることが知れた神経伝達物質である 37）。海馬は内側中隔核かられている。Rahim（2009）は，4'-DeNOB がマウら，ACh を放出するコリン作動性神経の投射を受

27）

スの学習障害を改善したことを報告した 。

けており，ACh が錐体細胞や介在ニューロンのニ

Kawahara（2017） も ま た，4'-DeNOB に よ る マ ウ

コ チ ン 受 容 体（nAChR；nicotinic acetylcholine

11）

スの記憶改善効果を示した 。近年，記憶のメカニ

receptor） や ム ス カ リ ン 受 容 体（mAChR；

ズムが分子レベルで解明されているが，長期記憶のMuscarinic acetylcholine receptor）に作用すること

形成には記憶遺伝子の発現とタンパク質合成を介しで，記憶の形成や強化に関与するとされる 38）。また新規シナプスの形成や受容体の発現が必要であた，ACh は長期増強（LTP）や長期抑圧（long-term

28）

る 。核タンパク質である CREB（cAMP 応答配列

depression；LTD）などのシナプス可塑性に関与す

結合タンパク質；cAMP response element binding

ることが示されている 38）。先の Kawahara（2017）

protein）は，海馬においてシナプス形成に関係すは，4'-DeNOB が CRE を介した ChAT 転写を強力る遺伝子発現やタンパク質合成を制御し，長期記憶に促進することを示した 11）。

の形成に深く関与することが知られている 29）。強い

今回我々は，被験品の単回摂取による効果を評価

106 （650）

診療と新薬・第 59 巻

第 10 号（2022 年 10 月）した。Rahim（2009）は，マウスの腹腔に 4'-DeNOB

老年医学会（The Japan Geriatrics Society）が推奨を投与した後に，脳中に 4'-DeNOB を検出したことするスクリーニング検査の 1 つである。MMSE は27）を報告した 。Asakawa（2011）もまた，脱メチル

30 点満点の認知機能検査で，23 点以下は認知症疑化ノビレチンをマウスの尾静脈に投与すると，5 分

い 42），27 点 以 下 は MCI が 疑 わ れ る 41）。 本 研 究 で後に脳へ移行することを確認した 39）。これらのこと

は，平均年齢 54 歳，MMSE の平均得点は 27 点台から，4'-DeNOB および 4'-DeTAN が体内に吸収さで，23 点以下と 30 点（満点）を除外し，MCI の疑れると，血液を通して脳に達し，中枢神経に作用す

いや，加齢による認知機能の低下した正常域者でることで学習障害を回復したと考えられる。

の，日常生活の認知機能の衰えを自覚する健常者を以上のことから，ポリメトキシフラボンデメチル

対象とした。

体（4'-DeNOB，4'-DeTAN）は脳において，海馬で今回主要アウトカムとして採用した WMS-R は，の CRE の転写活性化と神経伝達物質アセチルコリ

総合的な標準化された検査として国際的に最も広くンを介したメカニズムにより中枢神経に作用するこ

用 い ら れ て い る 43）。 日 本 語 版 も 標 準 化 さ れ て おとで学習機能の改善効果を示したものと考えられり 14），妥当性も確認されている 44）。認知症をはじる。特に CREB は記憶固定化（長期記憶形成）をめ，記憶障害の評価へも国際的によく使用され，エ正に制御すると共に，BDNF 発現を増加させて短ピソード記憶とともにワーキングメモリも評価す30）

期記憶も促進することが報告されている 。

る 12）。ワーキングメモリ（作業記憶）は，即時・短

今回の被験品に含まれる 4'-DeNOB，4'-DeTAN2期の想起を一般的記憶，言語性記憶，視覚性記憶よ種の有効性について，被験品からの抽出物を用い，り評価し，新しい情報の獲得に関与している。一抽出物に含有する同濃度の 4'-DeNOB，4'-DeTAN

方，エピソード記憶は言語性，視覚性，聴覚性からの 単 独， な ら び に 4'-DeNOB，4'-DeTAN 混 合 物

なり，以前に自身が経験した記憶の長期システムでを，無添加を対照として，CRE 転写活性についてあるが，WMS-R での遅延再生検査からその評価を評価した。具体的には，PC12 細胞を用いて，4 ×

することが可能である 12）。記憶障害の例や認知症の104/well. 96 well プレートに播種し，トランスフェ

例でどのような成績を示すかについて資料の蓄積がクション後，サンプル添加を行い，8 時間後に細胞あるため，その有用性は大きい 43）。最近では高齢者を回収して，ルシフェラーゼアッセイを行った。そに対して，面接や簡便な検査で正常範囲と考えられの 結 果，4'-DeNOB 6.2μg/mL，4'-DeTAN 3.2μg/

るケースを対象に，MCI などを示唆する記憶機能

mL の各単独，その混合物，被験品抽出物のそれぞ低下がないかを詳細に検討するために実施する場合

れの相対活性は 11.1：3.3：15.2：16.5 倍であり，が多い 45）。今回 WMS-R において，「言語性記憶」，

4'-DeNOB，4'-DeTAN 添加により，顕著に CRE 転「視覚性記憶」，「一般的記憶」のワーキングメモリ

写活性は増大するとともに，被験品抽出物とその同ならびに言語性，視覚性，聴覚性評価からなる遅延

濃 度 の 4'-DeNOB，4'-DeTAN 混 合 物 と の 差 は な

再生記憶においてプラセボと比べて有意な改善効果

く，高い寄与率を示した（92％）。

が認められた。言語，視覚，聴覚課題の保持は「い上述のように，経験した事柄を記憶情報として保つ，どこで，どんなことがあったか，といった出来存するためには脳の神経細胞において CREB が新事の記憶」であるエピソード記憶のための長期シス

たな記憶遺伝子（BDNF など）を読み出す CRE のテムであるが，特に，加齢によりその機能が低下す

転 写 を 行 う 必 要 が あ る が，4'-DeNOB，4'-DeTANることが知られており 46），今回の対象者でもある中の高い寄与率から，これらが今回の臨床試験で得ら高年への有用性を示していると思われる。また，これた記憶改善効果に対する活性本体であると考えらのことは動物試験においても，恐怖体験（電気刺れた。

激）のエピソード記憶モデルマウス評価系におい我々は認知症（病者）を除外する目的で，スクて，4'-DeNOB および 4'-DeTAN 含有エキスでの有リ ー ニ ン グ と し て MMSE（Mini-Mental State

効性が示されたこと 11）からも裏付けられている。

Examination）40） を使用した。MMSE 日本版の信頼41）性と妥当性も確認されており ，一般社団法人日本

4'-DeNOB および 4'-DeTAN 摂取により，MCI を含む健康な中高年のワーキングメモリやエピソード

診療と新薬・第 59 巻

第 10 号（2022 年 10 月）

107 （651）

記憶が改善したことは，日常生活の QOL 向上およ5）Malek-Ahmadi M： Reversion From Mild Cognitive

び将来の認知症予防への可能性もあり大変意義のあ

Impairment to Normal Cognition： A Meta-Analysis.

ることと考えられる。これらの結果を基に，日常生
活での記憶の衰えに対して効果を示す場面を想定すると，相手の言葉の理解力の衰え（言語性記憶），
道順を覚えにくくなった（視覚性記憶），物忘れやひとの名前が覚えにくくなった（一般的記憶），何かを取りに来たかを忘れる（ワーキングメモリ），

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昨夜食べたものが思い出せない，カギや携帯電話を

9）Wu X, Song M, Rakariyatham K, Zheng J, Guo S, Tang

どこに置いたか忘れる（遅延再生，エピソード記

Z, Zhou S, Xiao H： Anti-inflammatory effects of

憶），といった状況の改善が期待できると考えられる。

4'-demethylnobiletin, a major metabolite of nobiletin. J

一方，WFT と TMT-J については，群間有意差は認められなかった。LFT と TMT-J は副次的アウ

Funct Foods 2015; 19（Pt A）：2782-2787.
10）Wu X, Song M, Wang M, Zheng J, Gao Z, Xu F, Zhang
G, Xiao H： Chemopreventive eﬀects of nobiletin and its

トカムであり，今回主要アウトカムの WMS-R の記

colonic metabolites on colon carcinogenesis. Mol Nutr

憶機能はその作用機序が反映されやすかったのと比Food Res 2015; 59（12）：2383-2394.

較して，言語流暢性評価の LFT あるいは注意評価の TMT-J については，単回摂取では，即効的効果が出難かったものと考えられる。反復での摂取効果についても検討の必要がある。
結Mimaki Y, Yamakuni T： Fermented Citrus reticulata（ponkan）fruit squeezed draff that contains a large
amount of 4'-demethylnobiletin prevents MK801-induced
memory impairment. J Nat Med 2017; 71（4）：617-631.

論

我々は 4'-DeNOB，4'-DeTAN 含有サプリメント
が，認知機能の一部である言語性記憶，視覚性記
憶，一般的記憶および遅延再生を向上する機能のあることを見出した。加えて，被験品摂取による有害12）中 島 恵 子： 実 践 講 座 神 経 心 理 学 的 検 査 の 実 際 ④
WMS-R．総合リハビリテーション 2016; 44（4）： 321324.
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事象は認められなかった。

15）Tombaugh TN, Kozak J, Rees L： Normative data

利 益 相 反本試験の費用および本論文の掲載費用は，富士産業株式
会社が出資した。

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16）大沢愛子，前島伸一郎，種村

文1）朝田

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町研究室．
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CREB1 encodes a nuclear activator, a repressor, and a4'-Demethylnobiletin, a Metabolite of Nobiletin, on

cytoplasmic modulator that form a regulatory unit

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診療と新薬・第 59 巻

第 10 号（2022 年 10 月）

Eﬀects of Supplement Containing
4'-Demethylnobiletin and 4'-Demethyltangeretinon Cognitive Function in Healthy Subjects：
A Randomized Double-Blind Crossover Trial
Akinobu MIYATA1）／ Norimasa KOBAYASHI2）／ Satoshi KITAO2）／ Shuichi KUSANO2）
1）Nihonbashi Mʼs Clinic2）Fuji Sangyo Co., Ltd.

Abstract
Objectives： The objective of this study is to elucidate how the supplement containing
4'-demethylnobiletin and 4'-demethyltangeretin contributes to improvements in cognitive function.
Methods： A randomized, placebo-controlled, double-blind, crossover study design was used. The
primary outcome of this study was memory function, which was assessed using WMS-R score. The
secondary outcomes included WFT and TMT-J. We investigated the eﬀects of a single ingestion of thetest food or placebo in the comparative study. Each treatment was separated by a 3-week washout
period. We also evaluated the safety of test food.
Results： 36 subjects were randomly divided into two groups, the test food or placebo for the ﬁrst
treatment. One subject discontinued the second treatment due to personal reasons, and the remaining
35 subjects completed the study. There was no rejection, thus the data obtained from 35 subjects
were eligible for the analysis. As a result, signiﬁcant improvement was conﬁrmed for placebo in theindex summarizing the results of WMS-R, verbal memory, visual memory, general memory, anddelayed recall. Further, no safety-related matter occurred.
Conclusion： It turned out that the supplement containing 4'-demethylnobiletin and4'-demethyltangeretin improved cognitive function. Additionally, there was no adverse eﬀect by theingestion of the food.
Key words: nobiletin, tangeretin, PMF; polymethoxyﬂavonoid, citrus, cognitive function, memory,delayed recall

109 （653）