診療と新薬・第 52 巻

第７号（2015 年７月）

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セルトラリン錠「明治」のマウスを用いた抗うつ作用と抗不安作用の検討
大 山 昌 代 1）

中 村 美 栄 2）

今 西 泰一郎 1）

三 浦 哲 也 1）

要

三 國 谷 雄 1）

約

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したセルトラリン錠「明治」（試験製剤）について，先発医薬品でうつ病・うつ状態，パニック障害治療剤であるジェイゾロフト Ⓡ 錠（ファイザー株式会社，標準製剤）を比較対照として，マウスを用いて抗うつ作用と抗不安作用を検討した。抗うつ作用は尾懸垂試験における不動時間を，抗不安作用については恐怖条件付け試験におけるすくみ行動を指標として評価した。
両製剤を磨砕後，懸濁液を調製し，セルトラリンとして 10 または 30 mg/kg の用量でマウスに経口投与した。尾懸垂試験において，両製剤はともに 10 および 30 mg/kg の両用量において不動時間を有意に短縮した。また，恐怖条件付け試験では，両製剤ともに 30 mg/kgのみですくみ行動を有意に短縮した。
以上の結果より，マウスを用いた尾懸垂試験ならびに恐怖条件付け試験において，両製剤は同程度の抗うつ作用と抗不安作用を示すことが認められた。これより，試験製剤はヒトにおいても標準製剤と同等のうつ症状改善および不安症状改善効果を発揮することが期待される。
キーワード：セルトラリン，SSRI，尾懸垂試験，恐怖条件付け試験，後発医薬品

は じ め に
塩酸セルトラリンは選択的セロトニン再取り込み阻 害 剤（Selective Serotonin Reuptake Inhibitor，は，うつ病・うつ状態，パニック障害治療薬である
ジェイゾロフトⓇ錠（ファイザー株式会社，以下，標準製剤と記載する）と有効成分を同量含有する後発医薬品である。

以下，SSRI と記載する）である。経口投与後，良マウスの尾懸垂試験はマウスの尾を固定して一定好に脳内移行し，セロトニン再取り込みを強力かつ時間吊り下げた時に出現する不動状態を測定するも選択的に阻害することにより，シナプス間隙のセロので，イミプラミンなど三環系抗うつ薬やフルボキトニン量を高めてセロトニン作動性神経伝達を賦活サミンやパロキセチンなどの SSRI をあらかじめ投

1）2）化する。

与 し て お く と， 不 動 状 態 が 短 縮 さ れ る こ と かMeiji Seika ファルマ株式会社が開発したセルトら3）〜5），抗うつ薬の評価系として汎用されている。

ラリン錠「明治」（以下，試験製剤と記載する）

一方，恐怖条件付け試験は，電気ショックを負荷された動物が再び同じ環境に置かれると，電気ショッ

1）Meiji Seika ファルマ株式会社
2）株式会社日本バイオリサーチセンター

クが負荷されなくても，過去に電気ショックを受けた環境に対して強いストレスを感じて動けなくなる4（680）

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「すくみ行動」を指標とする6）。ベンゾジアゼピン系
7）〜9）

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尾懸垂装置（M s 工房）に吊るして測定開始とし，ことマウスを 7 分間懸垂させた。マウスの尾懸垂時の動から，抗不安効果を評価する動物モデルとして位置作をビデオカメラで撮影し，DVD レコーダーを用付けられている。

いて DVD-R に録画した。DVD-R の映像から，開抗不安薬や SSRI がすくみ行動を短縮する

以上のことから，今回試験製剤の抗うつ作用につ始後 1 分間を除く 6 分間における静止状態を不動いてマウスを用いた尾懸垂試験を，また抗不安作用状態とし，その時間（秒）をストップウォッチで測についてはマウスの恐怖条件付け試験を用いて標準定した。試験の 2 日前に 1 日 2 回（測定間隔を 2製剤と比較した。

時間以上空ける）測定し，2 回目の不動時間が 40Ⅰ．材料および実験方法
1．使用薬剤と調製秒以上示す個体を選別し，各群の不動時間および体重の平均がほぼ等しくなるように群分けして試験に用いた。試験製剤および標準製剤の懸濁液または溶試験製剤としてセルトラリン錠 100 mg「明治」Ⓡを，標準製剤としてジェイゾロフト 錠 100 mg を媒は，試験開始 1 時間前に経口投与（10 mL/kg）した。なお，各群の例数は 12 匹とした。

使用した。両製剤は，濃度毎に必要錠数をメノウ乳2）恐怖条件付け試験

鉢にいれてよく磨砕後，0.5％メチルセルロース（以恐怖条件付け試験は，マウスをフェアードコン下，溶媒と記載する）で懸濁液を調製した。セルトディション計測装置（Acti Metrics 社）の中に入れ，ラリンとして 1 ならびに 3 mg/mL の 2 濃度の懸濁15 秒毎に 0.4 mA，1 秒間の電気刺激負荷を 4 分間液を調製した。

行い，条件付けした。条件付けの日を 1 日目とし，2．使用動物

7 日目にマウスを再びフェアードコンディション計

尾懸垂試験では ICR 系雄性マウス（日本チャー測装置に入れ，電気刺激無しの条件で 4 分間のすくルス・リバー株式会社）を用い，12 週齢で入荷し，み行動を測定した。すくみ行動は動物が動いた時のステンレス製金網を敷いたプラスチック製ケージ

モニター画像のズレにより検出し，4 分間中の％と（W 175 × D 245 × H 125 mm）を用いて個別飼育として算出した。試験製剤および標準製剤の懸濁液ました。恐怖条件付け試験では C57BL/6NCrl 系雄性

たは溶媒は，1 日目の条件付け刺激終了直後から 1マウス（日本チャールス・リバー株式会社）を用

日 1 回，7 日間反復経口投与（10 mL/kg）した。ない，10 週齢で入荷し，床敷（サンフレーク，日本

お，7 日目はすくみ行動測定 1 時間前に投与した。

チャールス・リバー株式会社）を入れたプラスチッ

各群の例数は 12 匹とした。

ク製ケージ（W 175 × D 245 × H 125 mm）を用い4．統計学的処理て 1 ケージ 5 匹までの群飼育とした。動物は 5 日

データは平均値および標準誤差で示した。溶媒に間の検疫期間，その後 2 日間以上の馴化期間を設対する試験製剤または標準製剤の有意差検定では，け，実験に用いた。設定温度：23℃（許容範囲：Bartlett 検定による等分散性の検定後，Dunnett 検20.0 〜 26.0℃），設定湿度：55％（許容範囲：40.0

定 を 行 っ た。 両 製 剤 の 同 一 用 量 間 の 検 定 に は，〜 70.0％），明暗各 12 時間（照明：午前 6 時〜午Student の t 検定を用いた。有意水準は 5％とした。

後 6 時），換気回数：12 回 / 時（フィルターを通しなお，有意差検定には，統計プログラム（SAS シた新鮮空気）に維持された飼育室で動物を飼育しステム；SAS Institute Japan 株式会社）を使用した。

た。固型飼料（CRF-1，オリエンタル酵母工業株式

5．動物倫理会社）および水道水は自由に摂取させた。

本試験は，Meiji Seika ファルマ株式会社横浜研

3．試験方法究所動物実験管理委員会および株式会社日本バイオ1）尾懸垂試験

リサーチセンター実験動物委員会で審査・承認され10）

尾懸垂試験法は，Steru ら（1985） の方法に準拠して行った。マウスの尾の先から約 1 cm の位置にセロハンテープを貼り，ダブルクリップで尾部のセロハンテープを挟み，ダブルクリップの輪の部分をた方法に従い，株式会社日本バイオリサーチセン
ター羽島研究所で実施した。

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180160

不動時間（秒）

140120
**

100

**

80**

60

**

40
20010301030（mg/kg p.o.）

溶媒
セルトラリン錠「明治」

ジェイゾロフトⓇ錠

各カラムは平均値±標準誤差を表す。
**; p＜0.01 溶媒投与群との比較（Dunnett 型多重比較検定）

図 1 試験製剤および標準製剤のマウス尾懸垂試験における効果

60

すくみ行動（％）

504030****2010010301030（mg/kg p.o.）

溶媒
セルトラリン錠「明治」

ジェイゾロフトⓇ錠

各カラムは平均値±標準誤差を表す。
**; p＜0.01 溶媒投与群との比較（Dunnett 型多重比較検定）

図 2 試験製剤および標準製剤のマウス恐怖条件付け試験における効果Ⅱ．結果

試験製剤および標準製剤の尾懸垂試験の成績につ媒投与群に比較して有意な短縮（p ＜ 0.01）が認められた。また，両製剤の同一用量間で比較したところ有意な差はなかった。

いて図 1 に示した。両製剤は用量依存的に不動時間

また，試験製剤および標準製剤の恐怖条件付け試を短縮させ，いずれも 10 ならびに 30 mg/kg で溶験での成績について図 2 に示した。両製剤はすくみ6（682）

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行動を用量依存的に減少させ，いずれも 30 mg/kg

る8）9）12）。またマウスを用いた同様の検討においてもで溶媒投与群に比較して有意な減少が認められたベンゾジアゼピン系抗不安薬やフルボキサミンがす（p ＜ 0.01）。また，両製剤の同一用量間比較では有くみ行動を短縮する13）14）。以上のことから，不安障意な差は認められなかった。

害を適応症とするセロトニン系の薬剤が有効性を示Ⅲ．考す不安障害モデルとしての有用性が示唆されてい察る。

Meiji Seika ファルマ株式会社が開発したセルト

そこで，マウスの恐怖条件付け試験を用いて，両ラリン錠「明治」は，うつ病・うつ状態，パニック製剤の抗不安作用について検討した。両製剤ともⓇ

障害治療剤であるジェイゾロフト 錠の後発医薬品

10 mg/kg ではすくみ行動に有意な影響を示さなであり，「後発医薬品の生物学的同等性試験ガイドかったが，30 mg/kg の投与では溶媒投与群に比べライン」に従い製剤評価（溶出試験およびヒトでのてすくみ行動を有意に短縮した。両製剤の同一用量生物学的同性試験）を実施し，先発医薬品と同等で間で有意な差は認められなかった。以上の結果よ11）あることが認められ ，製造販売承認された医薬品

り，両製剤ともに同程度の抗不安作用が期待されるである。本稿ではマウスの尾懸垂試験と恐怖条件付ことが示唆された。

け試験を用いてセルトラリン錠「明治」と先発医薬Ⓡ塩酸セルトラリンの原薬を用いたこれまでの論文品であるジェイゾロフト 錠の抗うつ作用と抗不安で，抗うつ作用を評価するマウス強制水泳試験にお作用について比較検討した。

ける有効用量範囲は 3.2 〜 56 mg/kg の皮下投与，10）

尾懸垂試験は 1985 年に Steru ら により提唱さ抗不安作用を評価するガラス玉覆い隠し行動試験でれた抗うつ薬の評価方法で，マウスの尾を吊るしたは 5 〜 30 mg/kg/ 日の 14 日間経口投与で用量依存時の動物の動きを測定する方法である。マウスは尾的な効果が認められることが報告されている2）15）。

を固定して逆さ吊りの状態にされると最初は激しく

今回の試験では，有効成分であるセルトラリンだけ暴れるが，次第に活動量が低下するとともに不動状でなく，両製剤ともに添加剤も含む製剤を粉砕・懸3）態が出現する。その後，野村ら が活動量の低下よ濁して評価を実施したが，ほぼ同じ用量範囲で効果りも不動状態が抗うつ薬の効果をより感度良く検出が示されたものと考えられる。

できることを示したことから，不動時間を指標としセロトニン神経系を活性化することにより，尾懸た尾懸垂試験は三環系や SSRI などの抗うつ薬の効垂試験では不動時間の短縮，恐怖条件付け試験では果の簡便な評価系として汎用されるに至っている。

すくみ行動の短縮が認められるとされている。今回

そこで著者らは，尾懸垂試験を用いて両製剤の抗これらの評価系に対して両製剤の有効性が認められう つ 作 用 を 検 討 し た。 そ の 結 果， 両 製 剤 と も 10たことから，両製剤の SSRI 作用によりマウス脳内mg/kg 以上の投与で用量依存的に不動時間を短縮でセロトニン神経系が賦活化されたと考えられる。

し，溶媒投与群に比べて有意差が認められた。ま以上より，マウス尾懸垂試験および恐怖条件付けた，両製剤の同一用量間で有意な差は認められな試験において，試験製剤は標準製剤と同等の有効性かった。以上の結果より，両製剤ともに同程度の抗を示したことから，セルトラリン錠「明治」はヒトうつ作用が期待されることが示唆された。

においてジェイゾロフトⓇ錠と同様の効果を示すこ

一方，恐怖条件付け試験は，電気ショックを負荷とが期待される。

さ れ た 動 物 が 再 び 同 じ 環 境 に 置 か れ る と， 電 気文

献ショックが負荷されなくても，過去に電気ショックを受けた環境に対して強いストレスを感じ動けなくなる行動，すなわちすくみ行動を指標とする6）7）。
ラットを用いた恐怖条件付試験において，ベンゾジアゼピン系抗不安薬やシタロプラム，フルボキサミンなどの SSRI，さらに 5-HT1A 作動薬のブスピロン が す く み 行 動 を 短 縮 す る こ と が 報 告 さ れて い

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