博 士 （ 医 学 ） 浜坂 明 日 香
学位論文題名DNA vaccination against macrophage mlgrationinhibitory
faCtorinlprOVeSatopiCdernlatitiSinnlurinen10delS（MIF−DN
Aワクチンはアトピー性皮膚炎モデルマウスの症状を改善させる）

学位論文内容の要旨【背景と目的】
アトピー性皮膚炎(AD)はアトピー素因の保有をべースに増悪・寛解を繰り返す広範囲の湿疹病変を特徴とする皮膚疾患である。A
Dの病因として近年皮膚バリア機能の低下（フィラグリン遺伝子変異）が報告されたが、その他に免疫学的異常、環境的要因などが複合していると
考 え ら れ 、 特 に サ イ ト カ イ ン は 皮 膚 炎の 病 態 形成 に 重 要な 役 割 を果 た し てい る 。
Macrophagemigrationinhibitor
yfactor(MIF)は、TN
F‑のやIL―iBを誘導して炎症反応 を惹起 する炎症性サイトカインである。A
D患者では健常人と比べM
IF発現量が血中・病変部皮膚ともに多いことから、MI
Fは病変部局所にとどまらず、全身のサイトカインネットワークの中でADの病態に関与していると考えられる。
M
IF中和抗体は、アレルギー接触過敏反応モデルマウスへの投与実験においてその炎症抑制 効果が 認められており、MIFの活性を抑える抗体療法はADに対して有用であると考えられる。しかし、抗体自体を投与する受動的抗体療法では持続性に欠けること、コストが高いこと、投与抗体に対する抗体産生が惹起され薬効が減弱することなど臨床応用上その限界も指摘されている。このような課題を克服するために、MIFを抗原に宿主を免疫して、MIFに対する自己中和抗体産生を誘導し、MIF活性を抑えることを検討した。生体はサイトカインのような自己成分に対しては免疫寛容にあり抗体を産生しにくいというのが定説であったが 、Thエピ トープ（主要組織適合抗原によルヘルパーT細胞に提示される約20アミノ酸程度のペプチド）として既に知られる破傷風トキソイドの一部でM
IFの第2ループ部分を置換することにより、宿主は免疫寛容から逃れ自己成分であるMIFに結合する抗体の産生が容易に誘導されるようになる。私たちはこれまでに、この改変MIF発現プラスミド(
MIF/TTXDNAワクチン）を関節リウマチおよび敗血症のモデルマウスに投与し、その治療効果を報告している。
本研究では、M
IF―DNA
ワクチンのADに対する発症予防的かつ治療的効果を検討した。AD
モデルマウスとして、黄色ブドウ球菌を抗原にAD様皮膚炎を自然発症するD
SーN
hマウスと、
ダ ニ を 抗 原 に AD様 皮 膚 炎 を 自 然 発 症 す る NC/Ngaマ ウ ス の 2系 統 を 用 い た 。
【方法・結果】
最 初にMIF/TTXD
NA
ワクチンのAD
発症予防効果について調べるために、皮膚炎発症前の9週齢の D
S―Nhマウ スにMIF/TTX DN
Aワク チンまたはコントロールpCAGGS
プラスミドを投与 し、Clinic
al skinscore、血 中抗MIF抗体価、血中Ig
E濃度、血中MIF濃度および病変部皮膚組織中のサイトカイン発現量を測定した。pCA
GGSプラスミドを投与したマウスは顔や 肩に紅 斑、びらんを生じAD様皮膚炎の発症を認めたが、MIF/TTXD
NA
ワクチンを投与した マウス は21週齢になっても皮膚炎症状を生じなかった。MIF/TTXDNA
ワクチンマウスではClinical sk
in scoreは21週齢ま で低い値が維持され、血中抗MIF
抗体価は有意に高値だった。血中IgE濃度とMIF濃度の上昇は、コントロールと比較して軽度であり、病変部皮一 25―

膚組織中のサイトカイン発現量はI
Lー4で減少、IFN‑Vで増加する傾向がみられ、ILー1ロとI
Lー6は著明に抑制された。以上よりMI
F/T
TXD
N
A
ワクチンにはAD発症予防的効果があり、これはThl/Th2
サイ トカインバランスというよりは全般的な炎症の抑制による効果であることが示唆された。
続いてMIF/T
TX DNA
ワク チンにAD治療効果があるか調べるために，A
D様皮膚症状を生じた1
5週齢の DS−Nh
マウ スにM
IF/T
TXD
NA
ワクチンまたはコントロールpC
AGG
S
プラスミドを投与し、Clinic
alskinscore、血中抗MIF
抗体価、血中IgE濃度、血中MI
F濃度、血中TN
F‑a濃度を測定した。臨床的にコントロールでは皮膚症状の悪化を認めたのに対し、M
I
F/TTXD
NA
ワクチンを投与したマウスでは6週間後には改善した。MIF/T
TXDN
A
ワクチン投与マウスでは、Clinical skin scoreが低下し、21週齢時（ワクチン投与後6週目）の血中抗MIF抗体価は有意に高値だった。その他、血中IgE濃度は低下傾向で，血中MIF濃度は皮膚炎発症前と同程度まで低下、血中TNF‑a濃度は有意に低値であった。
臨床所見の改善を裏付けるように、組織学的にもM
I
F/T
T
XD
NA
ワクチン投与後6週目には表皮の過角化や肥厚、真皮の浮腫、炎症細胞浸潤が著明に改善し、好酸球数、肥満細胞数も有意に減少していた。以上より、MIF/T
TXDN
AワクチンのA
Dに対する治療効果が示された。
さらに別 系統の ADモデルマ ウスで あるNC
/Nga
マ ウスを用いて，同様にAD治療効果を検討した。 A
D様皮膚 症状を生 じた15
週 齢のNC/Nga
マ ウスにMIF/TTXD
NA
ワク チンまたはコントロー ルp
CAGGS
プラ スミドを 投与し 、Clinical skinscore、血中抗MI
F抗体価、血中MIF濃度を測定した。コントロールでは皮膚症状が悪化したのに対し、MIF/TTXDNA
ワクチンを投与したマウスの皮膚症状は6週間後には改善し、Clinicalskinscoreの低下がみられた。MIF/TTX DNA
ワク チン投 与マウス では21
週 齢時（ワクチン投与後6週日）の血中抗MIF抗体価が有意に高値であり、血中MIF濃度は皮膚炎発症前と同程度まで低下した。これ
らの結果 から， 2系統 のA
Dモデル マウス において MIF/
TTXDN
A
ワクチンのADに対する治療的効果が示された。
さらにMIF/TTXD
N
Aワクチンの治療効果は、ワクチンにより誘導された抗体によることを実証するために、9週齢のD
S―NhマウスにM
I
F/T
T
XD
NA
ワクチンまたはコントロールpC
AG
GS
プラスミ ドを投 与後6週間目の 血清か らI
gGを 精製し た。精製 したIg
GをAD様皮膚症状を生じた15週齢のD
S
一Nhマウスに3日に1度3週間にわたって静注し、臨床像とclinicalskinscoreで評 価した 。MIF/T
TX DN
Aワクチン 投与マ ウスのIg
Gを静注 したDS―NhマウスのA
D様皮膚症 状は改 善するの に対し、 コント ロールプ ラスミ ド投与マ ウスの I
gGを静注した
DS−Nhマウスの皮膚症状は改善が見られなかった。以上より、MIF/TTXD
N
A
ワクチンによる
治 療 効 果 は ワ ク チ ン 投 与マ ウ ス の血 中 Ig
Gを 介 して 移 入 でき る こ とが 示 唆 さ れた 。
【結論】
A
Dモデルマウスを用いてM
IF―DNA
ワクチン療法がADの予防および治療に有用であることを明らかにした。ワクチン療法は中和抗体自体を投与する受動的抗体療法で指摘される欠点（低持続性，抗体惹起性，経済性）を補うことができる新しい治療法であり、難治性で慢性の経過に苦しむAD患者にとっては福音となると考える。

ー 26−学位論文審査の要旨
主 査

教 授

西 村 正 治

副 査

准 教 授

遠 山 晴 一

副 査

教 授

清 水宏

学位論文題名DN
AvaccinationagainStmaCrophagemigrationinhibitor
yfaCtor
imprOVeS
atopiCdermatitiSi
nmurinemodelS(MIF―DNA
ワクチンはアトピー性皮膚炎モデルマウスの症状を改善させる）

アトピー性皮膚炎(AD)はアトピー素因の保有をべースに慢性の湿疹病変を形成する皮膚疾患である。M
acrophagem
igrationinhibitor
yfactor(MIF)
は、TNF
口やIL―1ロを誘導し全身の サイトカ インネットワークの中でADの病態に関与していると考えられる。M
IF活性を抑える抗体療法はADに有用と考えられるが、持続性に欠け、コストが高く、投与抗体に対する抗体産生により効果が減弱するなど限界も指摘される。このような課題を克服するた
め、MIFを抗原 に宿主を免疫して抗MIF自己抗体産生を誘導し、MIF活性を抑えることを検討した。
今回我 々は、ワ クチン の抗原惹 起性を 高めるためM
IFの第2ループをTh
エピトープで置換し、プラスミドに挿入した（MエF/TTXDNAワクチン）。AD
自然発症モデルマウスには黄色
ブ ド ウ 球 菌 を 抗 原 と す る DSー Nhと 、 ダ ニ を 抗 原 と す る NC/Ngaの 2種 類を 用 い た。
まず、 MIF/TTX DNA
ワクチンのAD発症予防効果を調べるため、皮膚炎発症前のDS→NhにMIF/TTXD
NA
ワクチンまたはコントロールプラスミドを投与した。その結果、ワクチンを投与する と21週齢時まで皮膚炎を認めず、Clinicalskinscoreは低値が維持され、血中抗MIF
抗 体価は有 意に高値だった。血中IgEとM
I
F濃度の上昇は、コントロールと比較し軽度であり、皮膚組織中のI
L―1ロとI
Lー6発現は著明に抑制されたが、ILー4とIFN‑vは有意差がなかった。以上よりこのワクチンは、全般的な炎症の抑制によりAD発症を予防すると考えた。
続いて M
IF/T
TX DN
A
ワクチンにAD治療効果があるか調べるために、皮膚症状を生じた15週齢のDS−NhにM
IF/TTXDN
A
ワクチンまたはコントロールプラスミドを投与した。．ワクチンを投与すると6週間後に臨床像の改善を認めた｜まか、Clinicalskins
coreが低下し、21
週齢時 の血中抗 MIF抗体価も上昇していた。血中IgE・ M
IF濃度は低下傾向で、血中TN
F‑a濃度は有意に低値だった。組織学的にもワクチン投与後6週目には表皮の過角化や肥厚、真皮の浮腫、炎症細胞浸潤が著明に改善し、好酸球数、肥満細胞数も有意に減少していた。さらにNC/Ngaを用いて同じ条件でAD治療効果を検討したところ、ほぼ同様の結果が得られ、2系 統のADモデ ルマウ スにおい てM
IF/TTXD
NA
ワクチンのA
Dに対する治療的効果が示された。
また、M
IF/TT
XD
N
Aワクチンの治療効果がワクチンで誘導された自己抗体の働きによることを実証するために、DSーNhにMIF/TTXD
N
Aワクチンまたはコントロールプラスミドを投与し6週後の血 清からIgGを精 製した。 A
D様皮膚症状を生じた15
週齢のDS―Nhに、これらのI
gGを3週間 静注した ところ 、MIF/TTX DN
Aワクチン投与マウスのIgGを静注したDSーNhの‑ 27→

皮膚症状は改善し、Clinicalskinscoreの低下を認めた。このようにMIF/TTXDN
A
ワクチンによる治療効果がワクチン投与マウスの血中Ig
Gを介して移入できたことから、ワクチン
投 与 は 皮 膚 炎 治 療 効 果 の あ る 自 己 抗 体 産 生 を 誘 導 す る こ と が 示 唆さ れ た 。
MIF−DNA
ワクチン療法は受動的抗体療法の欠点を補う新しい治療法であり、今回マウスモデルでA
Dに対する予防および治療効果が示されたことは、難治性で慢性の経過に苦しむAD患者の福音となる。
副査の遠山晴一准教授から、AD予防効果を調べた系でTN
F8発現の解析について、体内で恒常的にMIF中和抗体を産生させることの問題点について、臨床応用にむけでのワクチン導入方法にっいて質問があった。主査の西村正治教授からは、ワクチンにより血中MIFが下がったデータの解釈にっいて、ワクチンにより誘導された抗MIF抗体の中和活性能について、ワクチンによりIgEが低下したメカニズムにっいて、リンパ球に対する効果について、臨床応用に向けての課題について、それぞれ質問があった。最後に副査の清水教授から、臨床応用に際してどのようなタイプのAD患者をターゲットとするべきか、他にどのような疾患に応 用で き るか 、 との 質問 が あり 、 申請 者 は概ね 適切な回答をし た。
この論文は、ADに対する治療効果のみならず予防効果にっいても証明した点で高く評価され、今後はヒトヘの投与方法や直常的にMIF抗体をさせることに問題がないのかといった臨床応用に向けての課題が解決されてゆくことが期待される。
審査員一同はこれらの成果を高く評価し、大学院過程における研鑚や取得単位なども併せ申 請 者 が 博士 （ 医 学） の 学位 を 受 ける の に充 分 な 資格 を 有す る と 判定 し た 。

−28―