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アーケオシンの合成に関わる新奇ラジカル SAM 酵素の同定○横川 隆志 1,2,3、能村 友一朗 1、安田 旭宏 1、尾木野 弘実 1、日浦 恵太 1、
仲田 沙織 1、岡 夏央 1,2、安藤 香織 1、河村 卓哉 4、平田 章 4、堀 弘幸 4、大野 敏 1
1

岐阜大・工、2 岐阜大・生命の鎖統合研究センター、3 岐阜大・院連合創薬、4 愛媛大・工連絡先: don@gifu-u.ac.jp

アーケオシンは、塩基部に 7-formamidino-7-deazaguanine を持つアーキア特異的な修飾ヌクレ
オシドで、主にアーキア tRNA の 15 位に見出される。アーケオシンは tRNA の立体構造のコアに位置し、塩基部に正電荷を持つことから、tRNA の立体構造の安定化に寄与すると考えられている。これまで、アーケオシンは、1) アーケオシン tRNA グアニントランスグリコシラーゼ（ArcTGT）
が tRNA の 15 位のグアニン塩基を 7-cyano-7-deazaguanine（preQ0）と交換し、2) ArcTGT のパラログであるアーケオシン合成酵素（ArcS）が preQ0 のシアノ基にアンモニアを付加する、という二段階の反応で合成されると信じられてきた。しかし、我々は、ユリアーキオタ門の Methanosarcina

acetivorans、Thermococcus kodakarensis、Thermoplasma acidophilum 由来の ArcS がいずれもpreQ0 のシアノ基にリシンを付加する活性を持つことを見出した。このことは、アーケオシンの合成には、第三の反応経路が存在することを強く示唆している。そこで、例外的に arcTGT 遺伝子を持たない Haloquadratum walsbyi のゲノムと、いくつかのアーキアゲノムを比較することで、第三の反応を触媒する酵素の候補遺伝子を絞り込んだ。絞り込まれた遺伝子の中から、機能が不明のラジカル S-アデノシルメチオニン（SAM）酵素遺伝子に注目した。T. kodakarensis のゲノムからこの遺伝子を欠損させるとアーケオシンが見られなくなったことから、このラジカル SAM 酵素を
RaSEA (Radical SAM enzyme for archaeosine formation) と命名した。 M. acetivorans と T.

kodakarensis に関して、RaSEA 遺伝子と ArcS 遺伝子を大腸菌内で共発現させると、どちらのアーキア由来のリコンビナントタンパク質も強固な複合体を形成することを見出した。さらに嫌気性条件下で反応を行うと、どちらの複合体を用いても、リシンと SAM を加えることで、preQ0 を含む
tRNA をアーケオシンを含む tRNA に変換できることを確認した。この結果より、ArcS と RaSEA の複合体こそが真のアーケオシン合成酵素であると考えられる。本研究から我々は、ArcS をアーケオシン合成酵素 α サブユニット、RaSEA をアーケオシン合成酵素 β サブユニットと呼ぶことを提案したい。

6

負染色電子顕微鏡像によるニトリラーゼ会合体の観察○松田大佑 1, 藤澤哲郎 1,2
1

岐阜大学・自然科学研究科、2 岐阜大学・工学部
連絡先: fujisawa@gifu-u.ac.jp

Rhodococcus rhodochrous J1 由来ニトリラーゼ（以下 J1-NTase)は、自己会合によってニトリル
化合物加水分解の制御を行っており、 温度や濃度の上昇により不活性のプロトマー (dimer)から、活性型のオリゴマーへと転移することが示されている。また、会合体転移に関しては、 C 末端残基が重要な役割を果たしており、C 末端部を切除した J1-NTase の変異体 DC327(以下 DC327)
は、高会合状態をとることが 2007 年 Thuku らの負染色法電子顕微鏡像(EMD-1313)で報告されている[1]。
本研究室では、ニトリラーゼ会合体の構造形成機構を調べるために X 線小角散乱(SAXS)実験より DC327 の溶媒条件、温度、圧力の会合挙動についての観察を行ってきた。その結果 、
DC327 の会合体は、溶媒条件、温度、圧力のいずれのパラメータにも敏感に反応して会合状態が変わることが確認された。しかも、平衡定数が比較的小さいためほとんど全ての条件で複数の成分(会合種)が存在することが示唆された。このような複雑な系においては各成分の構造情報を得るには SAXS からの情報だけでは不十分であり、さらなる構造情報を得るために負染色法電子顕微鏡像を得ることを試みた。
実験は、本学共用推進支援センター所有透過型電子顕微鏡装置
JEM-2100F を用いて DC327 の観察を行った。左図は解析により得られた三次元の初期モデルと Thuku らの電子密度マップを基に作成した原子モデルを比較したものである。大きさ、環状構造、左巻きピッチなど Thuku らの構造と共通の特徴を持つ結果が得られた。
グリッド作成方法等は
https://www1.gifu-u.ac.jp/~fujilab/JEM_html/index.html
EMAN2 による画像解析方法[2]は、https://www1.gifu-u.ac.jp/~fujilab/EMAN2_html/index.html
をご参照ください。参考になれば幸いです。
グリッド作成に関しては本学科学研究基盤センターの鎌足雄司博士にご協力いただきました。
[1]Thuku et al., FEBS.J. (2007) 274 ,2099-2108.
[2]Tang et al., J Struct Biol. (2007) 157, 38-46.

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NMR を用 いた異 種 間 プリオン感 染 障 壁 の解 析

○志田俊信 1、鎌足雄司 2,3、桑田一夫 3、田中元雅 1
1

理化学研究所 脳神経科学研究センター タンパク質構造疾患研究チーム

2

岐阜大学 科学研究基盤センター、3 岐阜大学 連合創薬医療情報研究科
連絡先: stoshi@brain.riken.jp

ウシからヒトへのプリオン病の感染事例などに代表されるように、哺乳類においては稀にタン
パク質のみを介したプリオン感染が報告されてきた。このような異種間のプリオン感染は、生体内に存在する可溶性プリオンタンパク質が、外来種由来のプリオンタンパク質凝集体と偶発的に反応することで引き起こされていると考えられる。しかしながら、生体内の可溶性プリオンタンパ
ク質の構造の揺らぎが、どのように異種間のプリオン感染効率を制御しているかは不明のままである。
本研究では、2 つの遠縁種由来の酵母プリオン Sup35 タンパク質 1 を用いて、異種間プリオン
感染障壁の解析を試みた。研究を遂行する上では、高分解能 NMR 測定法を中心として、in vitro
での系統的な遺伝子変異解析、酵母を用いた in vivo でのプリオン感染実験及び分子動力学を用いたシミュレーションなどの多様な手法を取り入れ、Sup35 タンパク質における短い天然変性
領域を詳細に調べた。その結果、可溶性 Sup35 プリオンタンパク質の短い天然変性領域において、少数のアミノ酸残基を置換することにより、局所的に動きと構造が変化し、in vitro および invivo での異種間プリオン感染が生じることを見出した。驚くべきことに、このような短い天然変性
領域内においては、メチレン基というアミノ酸側鎖間のわずかな構造の違いでさえ、短い天然変性領域の構造を大きく変化させ、外来種由来のプリオンタンパク質凝集体との凝集反応を制御することを明らかにした。
このような結果から、生体内に存在する可溶性プリオンタンパク質の短い天然変性領域での特定の揺らいだ構造が、異 種 間 プリオン感 染 効率を高度に制御していることを見出した 2。本研 究 成 果 は 、 よ り 幅 広 く、 こ れ まで に 不 明 な 点 が 多 か った 異 種 間 タン パ ク質 間 で の 共
凝 集 反応などの理解に役立つものと期待される。

参考文献
1. Ohhashi et al., Molecular basis for diversification of yeast prion strain conformation, Proc. Natl.

Acad. Sci. U. S. A., 115, 2389-2394 (2018).
2. Shida et al., Short disordered protein segment regulates cross-species transmission of a yeast
prion, Nat. Chem. Biol., In Press (2020).

9立体構造を認識する抗体の抗原認識機構○織田 昌幸京都府立大学・生命環境科学研究科
連絡先: oda@kpu.ac.jp
抗体は様々な大きさや形の抗原を特異的に認識し、結合する。イミュノグロブリン・フォールドという同様構造を持ちながら、6 つのループ（相補性決定領域）のアミノ酸残基を中心に、個々の抗原を特異的に認識する分子機構の解明は、基礎研究としてはもちろん、抗体医薬の創製といった応用面でも興味深い。我々は卵白リゾチーム（HEL）に対するモノクローナル抗体の１つ・HyC1
が、HEL の立体構造を識別し、その認識される構造の分布率が、結合速度論量に反映されることを論文報告した（1）。抗原となるタンパク質（ここでは HEL）は溶液中で揺らいでおり、ジスルフィ
ド結合の欠損など、内部構造の変化でも、その構造分布は変化する。抗体が認識する立体構造の分布率が高ければ、抗原エピトープ濃度に依存する結合速度論量が大きくなることは自明で、これを実験的に証明した。この知見は、タンパク質の分子認識における「population shift」にも繋がり、溶液中のタンパク質の揺らぎや構造変化を理解する上でも重要となる。そこで我々は、さらに詳細な抗原認識機構の解明を目指し、抗体の低分子化、すなわち HyC1 の一本鎖 Fv 抗体（scFv）を作製し、NMR を用いた構造解析を進めている。初報として最近、HyC1 scFv が、元の抗体と同様に、HEL の構造分布を検出できることを、さらに HEL 結合に伴い、HyC1 scFv の構造が硬くなることを論文報告した（2）。抗体が抗原認識に伴い、柔らかい構造から硬い構造に変化す
ることは、配列の異なる複数のペプチド抗原を特異的に認識する抗体・G2 でも示されており（3,4）、
その分子認識機構解明を目指して、G2 scFv を作製した研究も進めている（5）。
【参考文献】
1, Oda et al. Evaluation of the conformational equilibrium of reduced hen egg lysozyme by
antibodies to the native form. Arch. Biochem. Biophys. 494, 145-150, 2010.
2, Yamaoka et al. Structural and functional evaluation of single-chain Fv antibody HyC1
recognizing the residual native structure of hen egg lysozyme. Biosci. Biotechnol. Biochem. 84,
358-364, 2020.
3, Kamatari et al. Identification and characterization of a multispecific monoclonal antibody G2
directed against chicken prion protein. Protein Sci. 23, 1050-1059, 2014.
4, Mahmud et al. A multispecific monoclonal antibody G2 recognizes at least three completely
different epitope sequences with high affinity. Protein Sci. 26, 2162-2169, 2017.
5, Usui et al. Light-chain residue 95 is critical for antigen binding and multispecificity of
monoclonal antibody G2. Biochem. Biophys. Res. Commun. 490, 1205-1209, 2017.

10

オートファゴソーム膜形成の阻害を作用点とする
新規オートファジー阻害剤の創製○遠藤 智史 1
1 岐阜薬科大学・生化学研究室

連絡先:sendo@gifu-pu.ac.jp
腫瘍におけるオートファジーの誘導は腫瘍悪性化や抗がん剤耐性獲得に関与するため、オー
トファジー阻害剤は新規抗がん剤として期待されている。しかし、現時点で用いられるオートファ
ジー阻害剤は PI3 キナーゼとリソソームの阻害剤のみであり、特異的オートファジー阻害剤は存在しない。本研究では、オートファジーに特徴的なイベントであるオートファゴソーム膜形成に関わるシステインプロテアーゼ Atg4B の阻害剤を探索し、ヒト前立腺がん細胞を用いて前立腺がん
治療における有効性を評価した。
東京大学創薬機構の 21 万種のドラッガブルケミカルズについて長崎大学で開発されたスーパ
ーコンピューターDEGIMA を用いて Atg4B 結晶構造 (PDB: 2Z0E) に対する in silico スクリーニ
ングを行った。創薬展開可能な分子量 600 をしきい値に設定し、ランク上位 960 化合物を創薬機
構より入手し、示差走査熱定量法 (DSF) で高い有効性が示唆された 17 化合物について in vitro
cleavage assay を用いて Atg4B 阻害活性を評価した。17 化合物すべてにおいて有意な Atg4B 阻
害活性が確認され、中でも化合物 17 (20 μM) はほぼ完全に Atg4B 阻害活性を阻害した。次に、前立腺がん LNCaP と 22Rv1 細胞を用いて化合物 17 のオートファジー阻害活性を評価した。アミノ酸枯渇培地で 3 時間培養することによってオートファジーを誘導し、その 2 時間前に化合物 17で処理した。オートファジー誘導によって、オートファジー基質 p62 のタンパク質量は低下し、化合物 17 の前処理によって p62 タンパク質量は増加した。また、PI3 キナーゼ阻害を介したオートファ
ジー阻害剤 wortmannin の前処理でも同様に p62 発現量の増大が認められた。また、DAPGreenを用いた蛍光観察によっても化合物 17 のオートファジー阻害活性が示された。最近、前立腺がん細胞において去勢抵抗性前立腺がん (CRPC) 治療薬がアポトーシス性細胞死と同時にオー
トファジーを誘導することが報告されたため、CRPC 治療薬 abiraterone に対する化合物 17 の効果について検討した。化合物 17 の前処理によって、abiraterone 誘導性オートファジーは抑制され、
abiraterone 誘導性アポトーシスはさらに増強された。
以上、本研究では、in silico スクリーニングと DSF、in vitro cleavage assay を用いて、オートフ
ァジー阻害活性を示す新規 Atg4B 阻害剤 17 の開発に成功した。また、CRPC 治療薬 abirateroneとの併用で抗がん活性増強効果を示した。これらの知見は今回見出した Atg4B 阻害を作用点とするオートファジー阻害剤が既存の抗がん剤の作用増強を可能にする新規アジュバント薬になることを示唆している。

11

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量子化学計算による RNA ウイルス薬剤耐性変異予測の試み○石川 岳志 11

鹿児島大学学術研究院理工学域工学系化学生命･化学工学専攻
連絡先: ish@cb.kagoshima-u.ac.jp

抗ウイルス薬の開発には多額の費用と時間がかかる一方で、インフルエンザなどの RNA ウイ
ルスはアミノ酸変異の頻度が高く、すぐに薬剤耐性株が出現してしまう。したがって、耐性株が出現しにくい薬剤設計が望まれるが、それぞれの薬剤に対して耐性変異を効率的に予測する方法は未だ確立されていない。そこで我々は、量子化学計算の一つであるフラグメント分子軌道（FMO）法と分子動力学（MD）計算から、薬剤耐性アミノ酸変異を予測する方法を提案した。
我々の耐性変異予測法では、抗ウイルス薬の標的タンパク質において「薬剤との結合に重要なアミノ酸」かつ「タンパク質の機能に重要ではないアミノ酸」が耐性変異を引き起こすと仮定し、これら 2 つの条件を満たすアミノ酸を FMO 計算から特定する。検証として、ノイラミダーゼとその阻害薬である Oseltamivir の複合体に対する FMO 計算を行ったところ、実際に耐性変異が報告されている GLU119 が上の条件を満たす「変異予測グループ」に分類された。一方、同様に耐性変異が報告されている HIS274 と ARG292 は「変異予測グループ」には分類されなかったが、MD 計
算による解析から、HIS274 の変異が Oseltamivir の結合親和性を低下させることが示された。つまり、標的タンパク質と薬剤および基質との結合構造情報があれば、FMO 法と MD 法を利用して薬剤耐性アミノ酸変異の予測が可能であることが示唆された。
次に、インフルエンザ RNA ポリメラーゼの PA タンパク質とその阻害剤である Baloxavir（商品名ゾルフーザ）について耐性変異予測を行なった。FMO 計算から、TYR024・LYS034・LYS134 が「変異予測グループ」に分類されたが、既に耐性変異が報告されている ILE038 については、タンパク質の機能にも重要であると予測されたため「変異予測グループ」には分類されなかった。しかし、
I38T の変異体は増殖能が低いことが報告されており、この点においては計算結果と一致していると言える。TYR024・LYS034・LYS134 については薬剤耐性株として臨床疫学的報告はまだない
が、本年より上市された Baloxavir を継続的に使用していれば、耐性株として分離される可能性がある。現在、岐阜大学との共同研究で、インフルエンザ RNA ポリメラーゼに関する変異予測を検証するための実験系を構築しており、実験による検証を計算にフィードバックすることで、より精度の高い薬剤耐性変異予測法の開発に繋げたいと考えている。
本研究は、平成 29 年度日本医療研究開発機構（AMED）感染症研究革新イニシアティブ（J-PRIDE）の採択課題「薬剤耐性 RNA ウイルス出現予測法の確立と迅速制御のためのインシリコ創薬」において行われた。

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アーケオシン合成酵素を活用した RNA の蛍光標識○大澤 美紀 1、尾木野 弘実 1、大野 敏 1、横川 隆志 1,2,3
1

岐阜大・工、2 岐阜大・生命の鎖統合研究センター、3 岐阜大・院連合創薬連絡先: don@gifu-u.ac.jp

細胞中の RNA の局在や RNA と他の分子の相互作用を解析するためには、RNA を標識して調べる方法が有効である。tRNA の修飾酵素を RNA の標識に利用したという先行研究もあるが、tRNA の修飾酵素を RNA 標識に利用するためには、その修飾酵素が多くの RNA に共通する部
位や配列を認識すること、そして修飾酵素の反応によって得られるヌクレオシドに特異的な化学修飾法が存在すること、の 2 つの条件を満たす必要がある。
本研究では、アーケオシンに着目した。アーケオシンは、ほとんどのアーキア tRNA の 15 位に存在し、その生合成には、ArcTGT およびアーケオシン合成酵素(ArcS と RaSEA の複合体)が関与する。ArcTGT は tRNA15 位の guanine を preQ0-base に交換し、アーケオシン合成酵素中のArcS は、preQ0-base へ lysine を付加する。lysine はアミノ基を有しており、第一級アミン特異的に標識することができる。ほとんどの tRNA は 15 位に guanine を持つことから、15 位に付加された
lysine を標的にすることで、tRNA を汎用的に標識できるのではないかと考えた。
ArcTGT を用いて preQ0-base を含む Methanosarcina acetivorans の tRNAMet および tRNAPhe 転
写物を作製し、ArcS を用いた反応で lysine を取り込ませた。これをアミノ基特異的な蛍光標識試
薬と反応させたところ、両者とも蛍光標識することができたが、蛍光標識された tRNA のアミノ酸受容活性は大幅に低下してしまうことがわかった。今後、活性低下の原因を究明し、解決できるか検討する必要がある。
次に、この方法を tRNA 以外の RNA の標識に応用するため、M. acetivorans tRNAMet を 5’末端から 21 位までの部分配列(1/4RNA, 21 nt)と、22 位から 3’末端までの部分配列(3/4RNA, 56 nt)の 2 つの断片に分割することを考えた。もし分割した 1/4RNA の 15 位に lysine が取り込まれる
なら、1/4RNA を標識用タグとし、1/4RNA の 3’末端に標識したい RNA を付加することで、任意の配列の RNA に lysine を取り込ませて、蛍光標識することが可能である。
14

C で標識された lysine を用いて 1/4RNA への lysine の取り込みを測定したところ、1/4RNA と3/4RNA を混合すると、lysine が取り込まれるようになることがわかった。これは、両者が複合体を形成し、tRNA 様の構造を形成したためだと考えられる。そこで、1/4RNA をタグとして、3’末端に Cricket paralysis virus internal ribosome entry site 相当の RNA（216 nt）を付加したもの（CrPV_1/4RNA）で同様の反応を行ったところ、こちらも 3/4RNA を加えれば、lysine の取り込みを検出することができた。また、lysine を取り込んだ 1/4RNA および CrPV_1/4RNA を蛍光標識することができた。
18

NMR を用いたタイトジャンクション制御化合物の探索
天野剛志 1、久田美咲 1、野田翔太 1、中倉由香子 1、中島美緒 2、平沼南美 1、合田名都子 1、廣明秀一 1
1 名大・院・創薬科学、2 名大・理・生命理学

上皮細胞の頂端部に形成されるタイトジャンクション（TJ）は、物質透過を制限するバリア機能を担っている。主な構成タンパク質である膜タンパク質ク
ローディン（CLD）の細胞内 C 末端が、細胞内足場タンパク質 ZO の N 末端にある PDZ1 ドメインに相互作用すると、TJ の形成が促進される。一方で、ZO
タンパク質を発現させないように処理した細胞では、TJ は適切に形成されない。
したがって、PDZ1 ドメインとクローディン C 末端との相互作用を低分子化合物等で阻害すれば、TJ 形成が減弱すると仮定できる。そこで、溶液 NMR を使って、PDZ1 ドメインに結合する化合物の探索を行い、培養細胞を用いて TJ への効果を調べた。
調べる化合物は、他の PDZ ドメインに対する in silico ドッキングスクリーニ
ングで見出したものであったり、他の PDZ ドメインへの結合が報告されていた
りする化合物とそれらの類似体とした。これまでの研究により、PDZ ドメイン上の結合部位において、クローディン C 末端のカルボキシ基と PDZ ドメインのアミノ酸主鎖間の水素結合、および側鎖による各種相互作用が PDZ ドメインへの結合に重要であることが報告されている。化合物を PDZ ドメインと混合し、結合部位を構成しているアミノ酸のアミド基由来のシグナル変化を指標に、ZO-1 PDZ1 ドメインに結合しうる化合物を探索したところ、相互作用が弱いものも含めると 48 個の結合化合物を発見した。結合した化合物の多くはカルボキシ基を置換基としてもっていたが、一部もっていない化合物もあり、異なる相互作用機序で結合している可能性がある。
TJ 構成タンパク質の局在変化や量の変動を MDCK II 細胞を使って調べると、現在までに 8 個の化合物において細胞境界の CLD2 量の減少が観察された。また、Caco-2 細胞をこれらの化合物に曝露し、分子量約 6000 の FITC-insulin を
トレーサーとしてその透過量を観察したところ、24 時間で最大 1.5 倍の透過量を示す化合物があった。これらの結果から、ZO-1 PDZ1 ドメインへの結合を示す化合物の中には、TJ のバリア機能を緩和し、透過促進効果をもたらす化合物を含むことが示唆された。

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愛知東営業所
浜松営業所
三重営業所
神奈川営業所
大阪営業所

TEL.052-971-6551
TEL.0564-66-1580
TEL.053-431-6801
TEL.059-236-2531
TEL.045-326-6651
TEL.06-6389-2411

Ver201311282

高濃度電解質対策用 サンプルチューブ
シゲミのスロット チューブは高塩濃度を含むサンプルに対し、他のサンプルチューブと比べ最も短い90°パルス幅、最も高い感度を実現できます。

特徴＊RFのホットスポットを回避する場所にサンプルを注入できる。
＊従来の円形型サンプルチューブに比べ感度の減少は非常に少ない。
＊従来の円形型サンプルチューブに比べ90°パルス幅の増加は非常に少ない。
＊CryoTM probe(Bruker)600,950MHz and Cold Probe(Varian/Agilent)600MHzで性能確認済み。
y

RF のホットスポットy

磁化率調整ガラス

サンプル注入箇所
B
１

x

x

スロット

従来の円形型チューブ☎ 042-624-2207(9 時～16 時)
FAX 042-622-0937

チューブ

http://www.shigemi.co.jp
26

Ver201311282

Slot tube 170uL
5mm o. d. microtube 280uL
Oval-shaped tube380uL

SNR per unit volume (ml)

450

35

435 438
371

400
350
300

π/2 Pulse length (μs)

500

Slot tube 170uL
5mm o. d. microtube 280uL
Oval-shaped tube380uL

320
263

273
206

250
200

161

150

157 131123115

30

27.3

25
20
15

23
19.5
13.3

13.9
12.7 12.4

15.1

14.2

15.8
15.5

16.9

10

100
5

50
0
0mM

100mM

200mM

0

300mM

0mM

NaCl (mM)

100mM

200mM

300mM

NaCl (mM)

単位体積当たりの相対感度

塩濃度の濃さの変化させた時の 90°パル
ス幅の比較

塩濃度とサンプルチューブを比較

Data acquired at 14.1T (600 MHz CryoTMProbe) for the ubiquitin samples of 0.3mM of[U-13C/15N] containing 10mM sodium phosphate

スロット

ポジショニング

チューブ

ツール

NMR メーカー純正のサンプル位置を固定できるスピナータービンをお持ちでないお客様へ位置決め治具を開発いたしました。
ご注意ください。圧縮空気によるイ
ンサート・イジェクトは使うことができません。

磁化率調整ガラス
サンプル充填
スロット
高さ 18mm
幅 2mm
144.6μL

スロット位置確認マーク
位置決め治具
スロット位置確認マーク
スピナータービン
スロット

チューブ

アッパバレル

1 セット\25,000

1 セット\150,000☎ 042-624-2207(9 時～16 時)
FAX 042-622-0937

http://www.shigemi.co.jp
27

28

株式会社バイオモデリングリサーチ
分⼦シミュレーション等のIT技術を駆使した⼿法の利活⽤を⽀援する会社です

MolDeskの操作画⾯

ソフトウェアやライブラリの活⽤⽀援

スパコン
クラウドコンピュータ

プログラム開発

3Dプリンタ

主な業務内容創薬計算⽀援ソフトmyPresto の活⽤⽀援

創薬計算実習会開催

myPresto実⾏⽤GUIソフトウェアMolDeskの販売
ソフトウェア開発・保守

計算受託

IT関連の技術調査 分⼦模型製造・販売

myPrestoは、次世代天然物化学技術組合が開発している医薬品開発⽀援の分⼦シミュレーションシステムで、経済産業省、NEDO及びAMEDからの委託プロジェクトの中で開発されたものです。
myPrestoは、無料で利⽤可能です。
MolDeskは株式会社情報数理バイオの製品です。弊社は、MolDeskの正規販売代理店です。

お問い合わせ株式会社バイオモデリングリサーチ〒468-0058 名古屋市天⽩区植⽥⻄1-704-2
TEL: 052-720-7704
E-mail: info@biomodeling.co.jp
29
FAX: 052-740-6616 URL: http://www.biomodeling.co.jp

・ターゲット分子への結合評価
・結合メカニズムの理解
・ターゲットタンパク質の結合活性評価

・熱安定性を指標としたコンストラクト選定
・処方条件検討
・サンプル間の同等性評価（バイオシミラーなど）

分子間相互作用解析装置

熱安定性解析装置

MicroCal PEAQ-ITC

MicroCal PEAQ-DSC【得られるパラメータ】
・変性中点温度（Tm）
・熱力学的パラメータ（DH, DCp）
【システム特長】
・溶液中の熱変性に伴うサンプルの熱量変化をダイ
レクトに測定・ラベル化不要・希薄濃度（数十mg/mL～）で測定可能【得られるパラメータ】
・解離定数（KD）
・熱力学的パラメータ（DG, DH, DS）
・結合比（n）【特長】
・溶液中の分子間相互作用をダイレクトに測定・ラベル化、固定化不要
・分子量の制限なし
目的タンパク質の結合活性評価

バッチ１

スクリーニングで絞り込まれた候補物質のヒットバリデーション

Fabに変異を導入した抗体11種類の熱安定性比較

抗体の製剤条件検討（pH）

抗体の可変領域のわずかな配列の違い
が熱安定性にどのように影響するかを比較し、より安定なコンストラクトを候補として絞りこむことが可能

製剤の処方条件（緩衝液の種類、pH、添加剤など）を、各種溶液中の抗体の熱安定性、変性の開始点を比較し、条件を絞りこむことが可能

抗体のロット間の同等性評価

抗体に対する保存や輸送時等に生じる酸化の影響評価

バッチ２

n: 1.05 sites
KD: 97.1 nM

n: 0.235 sites
KD: 135 nM
20

アフィニティはほぼ同等であるが、結合比がバッチ２で0.235（理論的には
１）となっていることから、目的タン
パク質が約24%しか結合活性が保持されていないことを示唆している

ヒット化合物のリードオプティマイ
ゼーション

10
0
-10
-20
-30

ΔG

ΔH

－TΔS

ヒット化合物の擬陽性排除と絞り込みが可能
目的タンパク質に対する賦形剤
飽和濃度の評価

200000

T m2(Fab)

150000

T m1(Fc-CH2)

10000010

50000

コントロールs2 corr
wt1

強制酸化

5
0

Kcal/mol

0

-5

-10
-15
-20

-50000
50

∆G

∆H

60

70

80

90

100

temperature deg C-T∆S

製剤化後のロット間、拠点間の同等性
をDSCデータの形状をフィンガープリ
ントとして評価が可能。バイオシミ
ラーではイノベーターとの比較も可能

グラフの向きが下向きになればなるほど結合が有利になる
モル比で10倍の賦形剤を添加することでタンパク質の周りを飽和できる30

製剤化後の保存や輸送時等に生じる酸化などのアーティファクトな影響を、
熱安定性を指標として比較、検討する
ことが可能

31

組換えヒトアクチビンA溶液（試験研究用）
Recombinant Human Activin A
アクチビンAは幹細胞(iPS・ES細胞)を中胚葉，内胚葉へ分化誘導させる機能等を担う
116アミノ酸残基から成るβA鎖が2本結合したホモダイマーで、分子量約26,000の(TGF-β) ファミリーに属するサイトカインです。
 昆虫細胞での製造（非BEVS）
 安定品質

遺伝子の導入には化学的手法を用いており、ウイルスは使用しておりません
安定発現株として細胞構築し、高品質の発現タンパクを安定的に製造

製品仕様
・1バイアル中に組換えヒトアクチビンAを 10 μg / 50 μg / 0.5 mg 含む溶液凍結品（組成； 150 μg/ml アクチビンA／クエン酸・リン酸緩衝液）
・宿主：Drosophila melanogaster由来S2細胞
製品規格
試験項目名

試験方法名

アクチビンA含量

規格値／適否の判定基準

ビシンコニン酸法
液体クロマトグラフ法≥ 50 µg/tube

確認試験

SDS-PAGE法
ウェスタンブロット法

非還元：20 ～ 25 kDaにバンドを認める
還 元：10 ～ 15 kDaにバンドを認める

純度試験

液体クロマトグラフ法≥ 90%

エンドトキシン試験

エンドトキシン試験法< 50 EU/mg

力価

生物学的活性測定法≥ 0.5 × 103 IU/mg

アクチビンA濃度

 価格
コードNo
GF-001-010L
GF-001-050L
GF-001-500L

品名
組換えヒトアクチビンA溶液

150 µg/mL

容量
10 µg
50 µg
0.5 mg (50 µg×10本）

 総販売元

 製造元〒460-8558
愛知県名古屋市中区丸の内三丁目4番15号
伊勢久株式会社 再生医療部
TEL: (052)961-8318 FAX: (052)963-607532
担当：菊澤 悠 email: yu_kikuzawa@isekyu.co.jp

アピ株式会社

希望納入価格¥13,200¥36,000お見積もり

品質と技術と信頼の桂化学

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ｹﾐｶﾙﾊｻﾞｰﾄﾞｸﾘｰﾝﾙｰﾑ

桂化学株式会社〒252-0003
神奈川県座間市ひばりが丘4-15-19℡ 046-251-0948 Fax 046-256-6071