SR17138

最終報告書

表

題：2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールの哺乳類培養細胞を用いる
染色体異常試験

試験番号：SR17138

株式会社化合物安全性研究所-1-

SR17138

試験責任者の署名

表

題： 2
‑
[
(
2
‑エチルヘキサン＿ 1‑イル）オキシ］エタノールの哺乳類培養細胞を用いる
染色体異常試験

試験番号： SR17138

株式会社化合物安全性研究所

試験責任者

20/8

3 月.2.ユ日に‑2‑

SR17138

陳述書
表題： 2
‑
[
(
2
‑エチルヘキサン＿ l‑イル）オキシ］エタノールの哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験

試験番号： SR17138

本試験は GLP基準「新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について」（平成 23年 3月 3
1 日薬食発 033
1第 8号・平成 23・03・29製局第 6号・環保企発第 110331010号 厚 生
労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知）を遵守して実施した（ただし，被験物質の安定性を除く）．
本試験に用いた試験方法は，試験法ガイドライン「新規化学物質等に係る試験の方法について」（平成23年 3月 3
1 日薬食発 033
1第 7号・平成 23・03・29製局第 5号・環保企発第 110331009号 厚 生
労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知），「新規化学物
質等に係る試験の方法についての一部改正について」（平成 27年 1
2月 2
1 日薬生発 1
2
2
1第 1号・
20151209製局第 1号・環保企発第 1
5
1
2
2
1
1号）に準拠した．

株式会社化合物安全性研究所
試験責任者

.
.
2o/8里

3月

.2ユ日

L

﹂

‑3‑

SR17138

信頼性保証書
表題

：2
‑
[
(
2
‑エチルヘキサン＿1‑イル）オキシ］エタノールの哺乳類培養細胞を用いる染色体異
常試験

試験番号

：SR17138

本試験は，株式会社化合物安全性研究所Q
AUによって，下記のとおり査察された．
査察段階

査察日

試験責任者

運営管理者

への報告日

への報告日

試験計画書

1月 29日2017年 1
1月 29日 2017年 1
1月 29日 2017年 1

被験物質の管理2月 18日
2017年 1
2月 1
8日 2017年 1
2月 1
8日 2017年 1

被験物質の調製2017年 12月 1
8日

2017年 1
2月 1
8日 2017年12月 1
8日

被験物質処理2017年12月 1
8日

2017年 1
2月 1
8日

生データ

2018年 3月 6日 2018年 3月 6日 2018年 3月 6日

最終報告書（草案）：図表

2018年 3月 6日 2018年 3月 6日 2018年 3月 6日

最終報告書（草案）：本文

2018年 3月 6日

2018年 3月 6日

2018年 3月 6日

最終報告書

2018年 3月 22日

2018年 3月 22日

2018年 3月 22日

試験責任者

運営管理者

への報告日

への報告日

プロセス調査による査察段階

査察日

2017年 1
2月 1
8日

標本作製

2017年 1
1月 29日2017年 1
1月 29日2017年 1
1月 29日観察2017年 1
1月 29日2017年 1
1月 29日2017年 1
1月 29日

本試験は，「新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について」

（平成 2
3

年 3月 3
1日薬食発 03
3
1第 8号・平成 23• 03• 29製局第 6号・環保企発第 110331010号 厚 生 労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知）に従い実施された．
本試験は，試験計画書に従って実施され，また，本報告書には当該試験に使用した方法および手順が正確に記載されており，試験成績には当該試験の実施過程において得られた生データが正・に確に反映していることを確認した．

株式会社化合物安全性研究所
QAU責任者四 (8‑4‑3月ユ..l.日

SR17138

目次頁

表紙 ·························································································································· 1
試験責任者の署名 ········································································································ 2
陳述書 ······················································································································· 3
信頼性保証書 ·············································································································· 4
目次 ·························································································································· 5
表題 ·························································································································· 7
試験番号 ···················································································································· 7
試験目的 ···················································································································· 7
試験実施基準および試験法ガイドライン ·········································································· 7
試験委託者 ················································································································· 7
試験施設 ···················································································································· 7
試験責任者 ················································································································· 8
試験従事者およびその業務分担 ······················································································ 8
試験日程 ···················································································································· 8
1 要約 ······················································································································· 92 緒言 ····················································································································· 10
3 材料および方法 ······································································································ 10
4 成績 ····················································································································· 20
5 考察 ····················································································································· 21
6 試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因 ················································ 21
7 資料の保存 ············································································································ 21
8 参考資料 ··············································································································· 22

Tables1

Effects of EGEHE on growth rate of CHL/IU with or without S9 in preliminary test
(cell-growth inhibition test)··············································································· 23

2Effects of EGEHE on growth rate of CHL/IU with or without S9 in main test
(chromosomal aberration test)············································································ 24

3-1

Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours without S9 ················· 25

3-2

Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours with S9 ····················· 26

3-3

Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 24 hours without S9 ················ 27-5-SR17138

Figures1

Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours without S9 ······························ 28

2Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours with S9·································· 29

3Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 24 hours without S9 ···························· 30

4Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours
without S9 ··································································································· 31

5Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours
with S9······································································································· 32

6Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with EGEHE for 24 hours
without S9 ··································································································· 33

Annexes1

被験物質の安定性分析 (IR 測定) 簡易報告書 (NCAS 17-307NG-20180220-1) ··············· 34

2

Historical control data for chromosomal aberration test in CHL/IU (2017) ··························· 35
最終頁

-6-

35

SR17138

表題
2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールの哺乳類培養細胞を用いる染色体異常試験

試験番号SR17138

試験目的
チャイニーズハムスター肺由来細胞 (CHL/IU) を用いて，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]
エタノールの in vitro における染色体異常誘発性の有無を検討した．

試験実施基準および試験法ガイドライン
試験実施基準 (GLP) ：｢新規化学物質等に係る試験を実施する試験施設に関する基準について｣(平成 23 年 3 月 31 日薬食発 0331 第 8 号・平成 23･03･29 製局第 6 号・環保企発第 110331010 号 厚生労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策局長連名通知)
試験法ガイドライン ：｢新規化学物質等に係る試験の方法について｣ (平成 23 年 3 月 31 日薬食
発 0331 第 7 号・平成 23･03･29 製局第 5 号・環保企発第 110331009 号 厚
生労働省医薬食品局長・経済産業省製造産業局長・環境省総合環境政策
局長連名通知)｢新規化学物質等に係る試験の方法についての一部改正について｣ (平成27 年 12 月 21 日薬生発 1221 第 1 号・20151209 製局第 1 号・環保企発第
1512211 号)

試験委託者
名称

：厚生労働省 医薬・生活衛生局

所在地：東京都千代田区霞が関 1-2-2 (〒100-8916)

試験施設
名称

：株式会社化合物安全性研究所

所在地：札幌市清田区真栄 363 番 24 (〒004-0839)

運営管理者

-7-

SR17138

試験責任者
氏名
所属

一

：株式会社化合物安全性研究所 安全性研究部

試験従事者およびその業務分担
被験物質の調製試験操作・観察

試験日程
試験開始日

：2017 年 11 月 29 日

実験開始日

：2017 年 12 月 4 日

予備試験
被験物質処理開始 ：2017 年 12 月 7 日
細胞増殖率の測定 ：2017 年 12 月 8 日
本試験
被験物質処理開始 ：2017 年 12 月 18 日
標本作製：2017 年 12 月 19 日

標本観察終了日：2018 年 1 月 19 日

実験終了日

：2018 年 1 月 19 日

試験終了日

：2018 年 3 月 22 日

-8-

SR17138

1 要約
チャイニーズハムスター肺由来細胞 (CHL/IU) を用いて，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]
エタノールの in vitro における染色体異常誘発性の有無を検討した．2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールは短時間処理法 -S9 処理 (-S9 処理)，短時間処理法 +S9 処理 (+S9 処理)および連続処理法 24 時間処理 (24h 処理) の 3 試験系列で実施した．

予備試験 (細胞増殖抑制試験：14.1，28.1，56.3，113，225，450，900 および 1800 µg/mL) の結果，3 試験系列の 450 µg/mL 以上の用量で，試験液の処理開始時および処理終了時に析出が観察された．培養液 pH への影響はいずれの試験系列にもみられなかった．-S9 処理では 225 µg/mL 以
上，+S9 処理および 24h 処理では 113 µg/mL 以上の用量で 50%以上の細胞増殖抑制が認められた．
それぞれの 50%細胞増殖抑制濃度 (IC50) は，-S9 処理で 127 µg/mL，+S9 処理で 82.7 µg/mL，24h
処理で 62.7 µg/mL であった．
本試験 (染色体異常試験) は，予備試験の結果に基づき，-S9 処理では 10，40，70，100，130 お
よび 160 µg/mL，+S9 処理および 24h 処理では 5，10，40，70，100 および 130 µg/mL の用量を設定した．各試験系列のいずれの用量においても析出ならびに培養液 pH への影響はみられなかった．
細胞増殖率の測定結果より，-S9 処理では 70，100 および 130 µg/mL，+S9 処理および 24h 処理
では 40，70 および 100 µg/mL について標本観察を実施した．その結果，いずれの試験系列においても，被験物質群の染色体の構造異常および数的異常の出現率に有意な増加はみられなかった．
陰性対照群の染色体の構造異常および数的異常の出現率ならびに陽性対照群の染色体の構造異常の出現率は各々の背景データの管理範囲内であった．また，陽性対照群では，染色体の構造異常の出現率に有意な増加が認められ，本試験が適切な条件下で実施されたことが確認された．

以上のことから，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールの処理による染色体の構造異常および数的異常の出現率の増加はみられず，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールは本験条件下において哺乳類の培養細胞に対し染色体異常誘発性を有しないと判断した．

-9-

SR17138

2 緒言
チャイニーズハムスター肺由来細胞 (CHL/IU) を用いて，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]
エタノールの in vitro における染色体異常誘発性の有無を検討した．

3 材料および方法
3.1 被験物質
名称：2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノール

別名：2-(2-エチルヘキシルオキシ)エタノール 1)
Ethylene Glycol 2-Ethylhexyl Ether 2)

略称 2)：EGEHE

CAS 番号：1559-35-9

官報公示整理番号(化審法) 1)：(2)-2424，(7)-97
化学式 1)：CH3(CH2)3CH(C2H5)CH2OCH2CH2OH

構造式 2)

：

＾
］
三
シ

c ^
H3

シ
0,/'

゜H

C
H3

分子量 1)：174.28

物理化学的性質 1)：外観；澄明液体，無色 ~ わずかにうすい黄色
沸点，初留点及び沸騰範囲；229°C
引火点；106°C
比重・密度；0.88

ロット番号：ECP4663

純度：99.5% (含量)

製造業者
試験施設受領日：2017 年 6 月 26 日

保存場所および保存期間 ：被験物質保存室 [2017 年 6 月 26 日(試験施設受領) ~ 2017 年
12 月 18 日(本試験の処理日)]
保存条件：冷蔵 (実測範囲 5.5 ~ 7.5ºC )，気密，遮光

安定性 (非 GLP)

：日曹分析センターから被験物質の安定性分析 (IR 測定) 結果を入手し，試験実施期間中被験物質が安定であったことを確認した (Annex 1)．

- 10 -

SR17138

被験物質管理責任者
からの移管量：10.021 g

使用量：0.5203 g

取扱上の注意：ゴム手袋，マスク，保護メガネ着用

3.2 被験物質の調製
調製方法：被験物質をパスツールピペットを用いてメスフラスコに移し入れ，精秤した．媒体を適量加え，溶解した後，さらに媒体を加え定容した．よく混和した後，プラスチック製試験管に移し入れ，最高濃度
調製液を調製した．最高濃度調製液をタッチミキサーで混和しながら希釈し，必要な調製液を調製した．
予備試験では被験物質 0.3600 g を 2 mL に定容し，最高濃度調製
液 (180 mg/mL) を調製した．最高濃度調製液 (180 mg/mL) を公比
2 で希釈し，90，45，22.5，11.3，5.63，2.81 および 1.41 mg/mL 調
製液を調製した．
本試験では被験物質 0.1603 g を 10 mL に定容し，最高濃度調製
液 (16 mg/mL) を調製した．最高濃度調製液 (16 mg/mL) を段階希釈し，13，10，7，4，1 および 0.5 mg/mL 調製液を調製した．

調製頻度：被験物質調製液は用時に調製し，調製後，予備試験では 35 分以内，本試験では 30 分以内に使用した．

調製液の添加容量：プレート内の液に対し 1 vol%の割合で添加した．

調製上の注意：ゴム手袋，マスク，保護メガネ等を着用して扱い，皮膚との接触を避けた．

残余調製液の処理：残余試験液は焼却処分するために，産業廃棄物として回収した．

3.3 対照物質およびその調製
3.3.1 陰性対照物質 (媒体)
名称

：ジメチルスルホキシド (DMSO)(モレキュラーシーブによる脱水処理済み)

規格/等級 (グレード)：試薬特級
純度：100.0%

ロット番号：TWN2527

製造者：和光純薬工業株式会社

使用期限：2018 年 5 月 21 日

- 11 -

SR17138

媒体の選択理由：試験施設において，日本薬局方注射用水およびジメチルスルホキシドを用いて調製確認を行った．その結果，被験物質は，日本薬局方注射用水 (18 mg/mL) に溶解および懸濁せず調製困難であった．一方，ジメチルスルホキシド (180 mg/mL) に溶解した．反応性 (発熱，発泡，変色等) はみられなかった．このことから，当該試験の媒体として適用ガイドラインで推奨されているジメチルスルホキシドを使用した．

3.3.2 陽性対照物質
3.3.2.1 短時間処理法 -S9 処理 (-S9 処理) および連続処理法 24 時間処理 (24h 処理)
名称：マイトマイシン C (MMC)

ロット番号：577AEE

含量：102.6%

使用期限：2019 年 5 月

製造者：協和発酵キリン株式会社

調製方法：MMC 2 mg の入ったバイアル瓶に日本薬局方注射用水 (ロット番号；K6C71，株式会社大塚製薬工場) 5 mL を加え溶解した後，日本
薬局方生理食塩液 (ロット番号；K7A87，株式会社大塚製薬工場) を用いて希釈し 5 および 10 µg/mL の濃度に調製した (調製日：2017 年
6 月 7 日)．調製の際には 1 mg (力価) を 1 mg として換算した．

保存条件：0.3 mL ずつ分注し，-20°C 以下で凍結保存した．

調製液の使用期限：2018 年 6 月 6 日 (調製後 1 年)

調製液の添加容量：プレート内の液に対し 1 vol%の割合で添加した．

3.3.2.2 短時間処理法 +S9 処理 (+S9 処理)
名称：3,4-ベンゾピレン (BP)

ロット番号

：NPEZF

純度：97.4%

使用期限：2021 年 7 月 25 日 (購入後 5 年)

製造者

：東京化成工業株式会社

調製方法：BP 21.7 mg をジメチルスルホキシド (ロット番号；DSJ0526，和光純
薬工業株式会社) 2.2 mL に溶解し，これをさらにジメチルスルホキ
シドを用いて 10 倍希釈し，1 mg/mL の濃度に調製した (調製日：2017 年 6 月 7 日)．調製に際して含量の補正は行わなかった．

保存条件：0.3 mL ずつ分注し，-20°C 以下で凍結保存した．

調製液の使用期限：2018 年 6 月 6 日 (調製後 1 年)
- 12 -

SR17138

調製液の添加容量：プレート内の液に対し 1 vol%の割合で添加した．

3.4 細胞
細胞名：CHL/IU

種 (由来組織)：チャイニーズハムスター (新生チャイニーズハムスター (雌) の肺)細胞の選択理由：増殖速度，継代における染色体の安定性，染色体標本の観察の容易さおよび既知の変異原物質に対する感受性を考慮し選択した．

入手先：DS ファーマバイオメディカル株式会社

入手年月日：2016 年 8 月 2 日

入手時継代数：14

凍結条件：10 vol% ジメチルスルホキシドを含む培地を用いて 1×106 cells/mL 細胞浮遊液を調製し，1 mL ずつアンプルに分注したものを液体窒素内で保存した．

培養条件：75 cm2 培養フラスコを用いて，5.0%CO2，37.0 ºC に設定した CO2 イ
ンキュベーター [MCO-18AIC (UV)；パナソニック ヘルスケア株式会社] 内で培養し，3 日あるいは 4 日毎に継代を行った．

マイコプラズマ：供試細胞と同時に凍結保存した細胞を用いて蛍光染色法によりマイコプラズマチェックを行なわれ，陰性であることが確認されている．

染色体数 (モード)

：25

倍加時間

：13.6 時間 (供試細胞と同時に保存した細胞での測定結果)

供試細胞の継代数：30 以下 (予備試験：18，本試験：21)

3.5 培地培地：イーグル MEM 培地 (Code 05900，ロット番号；739703，739707，日水製薬株式会社)血清：牛胎児血清 (ロット番号；1860672，GIBCO) を，56°Cで30分間非働化した後，使用した．

調製方法：イーグルMEM培地7.52 gに，日本薬局方注射用水 (ロット番号；7A93，
株式会社大塚製薬工場) 800 mLを加え溶解させた．オートクレーブ滅菌
後，室温まで冷却し，滅菌済みの7.5%炭酸水素ナトリウム溶液 (ロット番号；606H1849，関東化学株式会社) 26.9 mLを添加した．使用前に，ろ過除菌したL-グルタミン溶液 (ロット番号；LKK2032，和光純薬工業株
式会社) 0.292 g/Lおよび牛胎児血清を10%となるように添加した．

3.6 S9 mix
製造者：キッコーマンバイオケミファ株式会社- 13 -

SR17138

ロット番号：CAM201710A

製造年月日：2017 年 10 月 6 日

製造方法：フェノバルビタール (1 日目 30 mg/kg を 1 回腹腔内投与，2 日目以降
60 mg/kg を 1 日 1 回 3 日間腹腔内投与) および 5,6-ベンゾフラボン(フェノバルビタール投与 3 日目に 80 mg/kg を 1 回腹腔内投与) で酵
素誘導を行った Slc：SD ラット (雄，7 週齢，体重；184 ~ 227 g) の肝
ホモジネートから調製した S9 (ロット番号；RAA201710A，S9 中蛋白
含量 21.28 mg/mL，細胞処理時の最終蛋白含量：1.06 mg/mL) 1.05 mLに，コファクターミックス 2.45 mL を加え調製されている．S9 mix 1
mL 中のコファクターの成分濃度を次表に示す．
S9 mix 1 mL 中のコファクターの成分濃度MgCl2(和光純薬工業株式会社 SAL6750)

5 μmolKCl(和光純薬工業株式会社 LKQ2606)

33 μmol

G-6-P(オリエンタル酵母工業株式会社 118503)

5 μmolNADP(オリエンタル酵母工業株式会社 045407)

4 μmolHEPES 緩衝液

(pH7.2，株式会社同仁化学研究所 JR060)

4 μmol

保存条件：-80°C で凍結保存

使用期限：製造後 6 ヵ月 (製造より 3 ヵ月以内に使用した)

3.7 試験方法
3.7.1 予備試験 (細胞増殖抑制試験)
3.7.1.1 試験系列
-S9 処理，+S9 処理および 24h 処理の 3 試験系列について実施した．
3.7.1.2 試験群
最高用量を試験法ガイドラインの規定 (10 mM 又は 2 mg/mL の低い濃度) に従い 1800µg/mL (約 10 mM に相当) とし，以下公比 2 で低下させた計 8 用量 (1800，900，450，225，
113，56.3，28.1，および 14.1 µg/mL) の試験群を設定した．更に，試験系列ごとに陰性対照群を設定した．
処理開始前プレート (Pretreatment Plate；PP) および各群に 2 枚のプレートを使用し，プ
レートには識別番号を明記した．
3.7.1.3 細胞の播種
直径 60 mm のプレートに，0.4×104 cells/mL の濃度の細胞浮遊液を 5 mL ずつ播種し，5.0%CO2，37.0°C に設定した CO2 インキュベーター [MCO-175；パナソニック ヘルスケア- 14 -

SR17138

株式会社] 内で培養した．
3.7.1.4 試験液の処理
試験液の処理は下記方法で実施し，陰性対照物質についても同様に処理を行った．
a -S9 処理
細胞播種後 3 日目にプレートの培養液を除去し，新鮮培地 3.0 mL，試験液 30 µL を加え
6 時間培養した．6 時間経過後にプレートの液を除去して PBS (-) 3 mL で 3 回細胞を洗い，新鮮な培地 5 mL を加えて 18 時間培養した．
b +S9 処理
細胞播種後 3 日目にプレートの培養液を除去し，新鮮培地 2.5 mL と S9 mix 0.5 mL (S9 の最終濃度約 5 vol%)，試験液 30 µL を加え 6 時間培養した．6 時間経過後にプレートの液を除去して PBS (-) 3 mL で 3 回細胞を洗い，新鮮な培地 5 mL を加えて 18 時間培養した．
c 24h 処理
細胞播種後 3 日目にプレートの培養液を除去し，新鮮培地 5.0 mL，試験液 50 µL を加え，
24 時間培養した．
3.7.1.5 試験液による析出の有無の確認
試験液による処理の開始時と終了時に，試験液による析出の有無を目視確認した．
3.7.1.6 試験液による培養液 pH への影響の有無の確認
試験液による処理の開始時と終了時に，pH の変化の有無を目視確認した．培養液色に変化が認められない場合には，試験液処理による培養液 pH への影響は無いものと判断した．
3.7.1.7 細胞増殖率 (RICC) の算出および 50%細胞増殖抑制濃度 (IC50) の算出
PP および処理終了後のプレート毎に以下の処理を行った．プレートの液を除去して PBS(-) 3.0 mL で細胞を洗い，0.02%EDTA-0.25%トリプシン 0.5 mL を加えて細胞を剥離し，新たに培地 5.0 mL を加えてピペッティングし細胞浮遊液を調製した．この細胞浮遊液の一部を採取し，血球計算盤を用いて細胞数を計数した．
各プレートの細胞数より，次式により Relative increase in cell counts (RICC) を算出し，試験群毎にその平均値を算出した．なお，RICC が負の値となった場合は 0 とした．
処理プレートの細胞増加数 (処理終了時の細胞数 － PP の細胞数*)
RICC =

× 100
対照プレートの細胞増加数 (処理終了時の細胞数 － PP の細胞数*)*；PP 2 枚の平均値を用いた．

RICC が 50%以下まで低下した試験系列については，50%細胞増殖抑制濃度 (IC50) を算出した．IC50 は，RICC が 50%となる点を挟む 2 用量の結果を用いて算出した．

- 15 -

SR17138

3.7.2 本試験 (染色体異常試験)
3.7.2.1

試験系列-S9 処理，+S9 処理および 24h 処理の 3 試験系列について実施した．

3.7.2.2

試験群

a 被験物質予備試験の結果，IC50 は，-S9 処理で 127 µg/mL，+S9 処理で 82.7 µg/mL，24h 処理で 62.7µg/mL であった．この結果に基づき，染色体異常試験の用量は全ての試験系列において最高用量が 50%以上の細胞増殖抑制を示す用量となるように以下の用量を設定した．
–S9 処理：10，40，70，100，130 および 160 µg/mL+S9 処理：5，10，40，70，100 および 130 µg/mL
24h 処理：5，10，40，70，100 および 130 µg/mL
b 対照物質各試験系列について，陰性対照群ならびに次表の陽性対照群を設定した．
試験系列

陽性対照物質用量 (µg/mL)-S9 処理MMC

0.1+S9 処理BP1024h 処理MMC

0.05

c プレート数
PP および各群に 2 枚のプレートを使用した．プレートには識別番号を明記した．
3.7.2.3

細胞の播種
3.7.1.3 細胞の播種に準じた．

3.7.2.4

試験液の処理a -S9 処理3.7.1.4 の a -S9 処理に準じ，陽性対照物質についても同様に処理した．
b +S9 処理3.7.1.4 の b +S9 処理に準じ，陽性対照物質についても同様に処理した．
c 24h 処理3.7.1.4 の c 24h 処理に準じ，陽性対照物質についても同様に処理した．
3.7.2.5

試験液による析出の有無の確認
3.7.1.5 試験液による析出の有無の確認に準じた．

3.7.2.6

試験液による培養液 pH への影響の有無の確認
3.7.1.6 試験液による培養液 pH への影響の有無の確認に準じた．

- 16 -

SR17138

3.7.2.7

細胞増殖率 (RICC) の算出
3.7.2.8 で得られた細胞浮遊液を使用し，その測定方法は 3.7.1.7 細胞増殖率 (RICC) の算
出および 50%細胞増殖抑制濃度 (IC50) の算出に準じた．IC50 の算出は行わなかった．

3.7.2.8

染色体標本の作製
培養終了の 2 時間前に，プレートに最終濃度 0.2 µg/mL のコルセミド (ロット番号；1831516，GIBCO) を加えた．培養終了時間に，プレートの液を遠沈管に回収した．プレー
トを 0.02 % EDTA-0.25 %トリプシン (0.5M EDTA：ロット番号；1852916，GIBCO，2.5%
トリプシン：ロット番号；1861534，GIBCO) で処理して細胞を剥離させ，得られた細胞浮遊液を同上の遠沈管に回収し，細胞浮遊液の一部を細胞計数用に採取した．細胞浮遊液を
約 1000 rpm で約 5 分間遠心した．上清を除去し，0.075 mol/L 塩化カリウム (ロット番号；
811H1490，関東化学株式会社) を加え，穏やかにピペッティングし 37°C で 15 分間細胞を膨満化 (低張処理) させた．氷冷したカルノア固定液 (メタノール：酢酸＝3：1，メタノー
ル：ロット番号；908B1064，関東化学株式会社，酢酸：ロット番号；TWN2665，和光純薬工業株式会社) を加えて細胞を固定した後，約 1000 rpm で約 5 分間遠心して上清を除去し，新しいカルノア固定液を加えた．この固定操作を 3 回繰り返した後，細胞浮遊液をス
ライドグラス上に滴下し，乾燥させた．各プレートより 2 枚の染色体標本を作製した．ス
ライドは，3%ギムザ液 [ギムザ液：ロット番号；DJ741，和光純薬工業株式会社，インス
タント燐酸緩衝液 (pH6.8) ：ロット番号；M616，株式会社 LSI メディエンス] で 20 分間
染色し，水洗および風乾の後，封入剤 (マリノール，ロット番号；1700201，武藤化学薬品株式会社) で封入した．

3.7.2.9

観察用量の選択
観察用量は，いずれの試験系列においても 3.7.2.7 の細胞増殖率 (RICC) の算出において細胞増殖率が陰性対照群の 40～50%の間を最高用量とする用量を最高用量に下記用量を選択した．
-S9 処理：70，100 および 130 µg/mL+S9 処理 ：40，70 および 100 µg/mL
24h 処理 ：40，70 および 100 µg/mL
3.7.2.10 標本の確認
3.7.2.9 で選択した用量の標本ならびに対照群の標本について実施した．
作製した 1 枚の標本あたり約 75 個以上の分裂中期細胞が得られることを確認した．
3.7.2.11 染色体標本のコード化選択した観察用量の標本について，1 プレートにつき 1 枚の標本を選択しコード化した．

- 17 -

SR17138

3.7.2.12 染色体標本の観察 3)
総合倍率 1000 倍の顕微鏡 (BX53F；オリンパス株式会社) で，1 枚あたり 150 個 (用量
あたり 300 個) の分裂中期像を選択して観察した．
以下の分類に従って染色体異常の判定を行った．なお，構造異常については 25±2 の染色体をもつものを観察対象とした．
a 構造異常 (structural aberration)
・染色分体切断 (ctb：chromatid break)
染色分体のはっきりした不連続部分 (切断部分) で，不連続部分が染色分体の幅以上である場合，あるいは切断片が染色分体の長軸線上から外れている場合．
・染色分体交換 (cte：chromatid exchange)
染色分体の 2 ヵ所以上の切断部位が相互に交換 (結合反応) しているもの．
・染色体切断 (csb：chromosome break)
両方の染色分体の同じ位置に切断が生じている場合，切断の判定基準は染色分体切断に準じる．
・染色体交換 (cse：chromosome exchange)
両方の染色分体の同じ位置で同じ方向に交換が生じている場合．
・その他 (others)
その他の構造異常として，断片化 (fragmentation) がある．一つの分裂中期細胞のほとんど全ての染色体に切断やギャップが現れ，交換型の異常が含まれていな
い場合に断片化とする．
b ギャップ (gap)
染色分体あるいは染色体上に生じた非染色部分 (染色性が全くみられない部分)で，非染色部分の幅が染色分体の幅より狭い場合．
c 数的異常 (numerical aberration)
・倍数体 (poly：polyploid)
染色体数 (25±2) が倍加し，染色体数が 36 以上 (三倍体，四倍体等) となった
もの．
・その他 (others)
その他の数的異常として核内倍加がある．倍加した染色体が分離せずに平行に並んでいる場合に核内倍加 (end：endoreduplication) と判定し，倍数体とは区別す
る．
3.7.2.13 観察結果の集計方法
プレートおよび用量毎に，構造異常および数的異常それぞれについて，分類毎の異常細胞- 18 -

SR17138

数ならびに総異常細胞数 (total) を求めた．また，各用量の総異常細胞の出現率を求めた．
出現率 (%) は観察した細胞数 (分裂中期像の数) に対する出現数の百分率で算出した．なお，
構造異常は 1 個の細胞に複数の構造異常がある場合にも構造異常を有する細胞数は 1 として計数し，ギャップは構造異常には含めなかった．
a 構造異常について
・ctb：染色分体切断をもつ細胞数
・cte：染色分体交換をもつ細胞数
・csb：染色体切断をもつ細胞数
・cse：染色体交換をもつ細胞数
・others：その他の構造異常をもつ細胞数
・total：何らかの構造異常をもつ細胞数b ギャップについて
・gap：ギャップをもつ細胞数
c 数的異常について・poly：倍数体の細胞数・others：その他の数的異常をもつ細胞数
・total：何らかの数的異常をもつ細胞数3.7.2.14 観察結果の採用基準
観察可能な分裂中期細胞数がプレートあたり 150 個 (用量あたり 300 個) の標本のデータを採用データとした．
3.7.2.15 試験の成立条件
以下の基準を満たした場合を，試験結果が正しく評価出来る条件とした．試験の結果，全ての試験系列でその条件を満たした．
a 陰性対照群および陽性対照群ならびに 3 用量以上の被験物質群について，観察結果の採用基準を満たしている．
b 各試験系列の陰性対照群の染色体の構造異常および数的異常の出現率が背景データに基づく管理範囲 (平均値± 3SD；平均値+ 3SD < 1%の場合の上限：1%) 内である．
c 各試験系列の陽性対照群の染色体の構造異常の出現率が背景データに基づく管理範囲(平均値± 3SD) 内であり，陰性対照群と比較して有意な増加がみられる．かつ，RICC が40%以上である．
3.7.2.16 試験結果の評価
a 統計処理染色体の構造異常または数的異常の出現率 (%) について，EXSUS (Version 8.1，CAC Croit- 19 -

SR17138

Corporation) および SAS (Version 9.3，SAS Institute Japan Ltd.) を用いて統計処理を行った．
陰性対照群と被験物質群および陽性対照群の比較には Fisher の正確検定を用いた (有意水準は両側 5%とし，1%と 5%を区別して示した)．Fisher の正確検定で陰性対照群と被験物
質群に有意差が認められた場合は，Cochran-Armitage 検定により用量依存性を確認することとしたが，当該事例は生じなかった (有意水準 5%とし，1%と 5%を区別して示すこととした)．
b 結果の判定
被験物質群における染色体異常の出現率が陰性対照群と比較して有意に増加し，かつ陰性対照群の背景データに基づく管理範囲 (3.7.2.15 b) の上限を超えており，また，その増加に用量依存性がみられる場合を陽性とした．被験物質群において染色体異常の出現率に有意な増加がみられない場合，陰性と判定した．
3.7.2.17 再試験
以下のいずれかの場合，その試験系列について確認試験を実施することとしたが，該当事
例は生じなかった．
a

陰性あるいは陽性の判定基準 (3.7.2.16) に合致せず，結果判定ができない場合．ただし，他の試験系列等において陽性判定される場合には実施しない．

b

試験結果より再確認が必要と判断された場合．

4 成績
4.1 予備試験
細胞増殖率の結果を Table 1 および Figure 1 ~ 3 に示す．
3 試験系列の 450 µg/mL 以上の用量で，試験液の処理開始時および処理終了時に析出が観察された．培養液 pH への影響はいずれの試験系列にもみられなかった．-S9 処理では 225µg/mL 以上，+S9 処理および 24h 処理では 113 µg/mL 以上の用量で 50%以上の細胞増殖抑制が認められた．それぞれの 50%細胞増殖抑制濃度 (IC50) は，-S9 処理で 127 µg/mL，+S9
処理で 82.7 µg/mL，24h 処理で 62.7 µg/mL であった．
4.2 本試験
染色体異常試験の結果を Table 2，Table 3-1 ~ 3-3 および Figure 1 ~ 6 に示す．
各試験系列のいずれの用量においても析出ならびに培養液 pH への影響はみられなかった．
細胞増殖率 (RICC) の測定結果より，-S9 処理では 70，100 および 130 µg/mL，+S9 処理
および 24h 処理では 40，70 および 100 µg/mL を選択し，選択標本ならびに対照群の標本について標本の確認を実施した．その結果，いずれの試験系列のいずれの用量においても 75個以上の分裂中期細胞が認められたため，引き続き標本観察を実施した．標本観察の結果，- 20 -

SR17138

いずれの試験系列においても，被験物質群の染色体の構造異常および数的異常の出現率は陰性対照群との比較で統計学的に有意な増加はみられなかった．
各試験系列の陰性対照群の染色体の構造異常および数的異常の出現率は，背景データに基づく管理範囲 (Annex 2) 内であった．各試験系列の陽性対照群の染色体の構造異常の出現率は，背景データに基づく管理範囲 (Annex 2) 内であり，陰性対照群と比較し統計学的に有意な増加が認められた．また，全ての試験系列において陽性対照群の細胞増殖率 (RICC)
は 40%以上であった．

5 考察
チャイニーズハムスター肺由来細胞 (CHL/IU) を用いて，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールの in vitro における染色体異常誘発性の有無を検討した．

本試験の結果，いずれの試験系列においても，被験物質の処理による染色体の構造異常および数的異常の出現率に有意な増加はみられず，結果は陰性と判定した．
各試験系列の陰性対照群および陽性対照群の染色体の構造異常および数的異常の出現率は，試験施設の背景データの管理範囲内であり，陽性対照群では陰性対照群と比較して有意な増加がみられたことから本試験が適切な条件下で実施されたことが確認された．

以上のことから，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノールの処理により染色体の構造異常および数的異常の出現率の増加はみられず，2-[(2-エチルヘキサン-1-イル)オキシ]エタノー
ルは本試験条件において哺乳類の培養細胞に対し染色体異常誘発性を有しないと判断した．

6 試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因
試験成績の信頼性に影響を及ぼしたと思われる環境要因はなかった．

7 資料の保存7.1 資料の種類
以下の資料を，株式会社化合物安全性研究所の資料保存室に保存する．
1．試験計画書
2．生データその他の記録文書
3．最終報告書
4．染色体標本- 21 -

SR17138

7.2 保存期間
試験終了後 10 年間保存し，その後の保存については試験委託者との協議により決定する．

8 参考資料1)

安全データシート 2-(2-エチルヘキシルオキシ)エタノール．2016.7.6．和光純薬工業株式会社

2)

Chemical Information Profile for Ethylene Glycol 2-Ethylhexyl Ether[CAS No.1559-35-9].
Supporting Nomination for Toxicological Evaluation by the National Toxicology Program. 2008.
National Toxicology Program.

3)

化学物質による染色体異常アトラス；日本環境変異原学会・哺乳動物試験分科会編，1988 年，朝倉書店- 22 -

SR17138

Table 1

Effects of EGEHE on growth rate of CHL/IU with or without S9 in preliminary test
(cell-growth inhibition test)

RICC (%)
Group

Concentration(μg/mL)

Control a

EGEHE

IC50 (μg/mL)

S9-

S9+

S9-

b

6-18 hb

24-0 h b(Mean)(Mean)(Mean)―

103.2 , 96.8
(100.0)106.0 , 94.0
(100.0)99.1 , 100.9(100.0)14.1

104.1 , 88.2
( 96.2)99.8 , 94.0
( 96.9)78.3 , 92.9
( 85.6)28.1

80.4 , 93.3
( 86.9)72.3 , 78.1
( 75.2)69.9 , 65.6
( 67.8)56.3

52.5 , 66.7
( 59.6)69.9 , 58.8
( 64.4)54.6 , 52.8
( 53.7)113

58.1 , 50.3
( 54.2)44.3 , 32.3
( 38.3)28.1 , 31.0
( 29.6)225

34.4 , 24.5
( 29.5)

14.5 , 20.2
( 17.4)0.0 ,0.0( 0.0)

450

0.0 ,
0.0 *
( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)

900

0.0 ,
0.0 *
( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)

1800

0.0 ,
0.0 *
( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)0.0 ,0.0 *( 0.0)

6-18 h127

82.7

RICC : Relative increase in cell counts
a : Dimethylsulfoxideb : Treatment time - recovery time
* : Precipitation was observed at the beginning and the end of treatment.
Change of pH in culture medium was not observed.

- 23 -

62.7

SR17138

Table 2

Effects of EGEHE on growth rate of CHL/IU with or without S9 in main test
(chromosomal aberration test)
RICC (%)

S9Group

Concentration

6-18 h(Mean)

Concentration―

101.8 , 98.2
(100.0)

10S9b

24-0 h b(Mean)

6-18 h(Mean)

Concentration―

107.7 , 92.3
(100.0)―97.4 , 102.6(100.0)92.6 , 91.2
( 91.9)586.2 , 88.3
( 87.3)

5

91.4 , 90.6
( 91.0)40

93.5 , 88.9
( 91.2)

1085.4 , 77.3
( 81.4)10103.4 , 92.6
( 98.0)7085.7 , 77.4
( 81.6)40

85.4 , 64.0
( 74.7)40

78.6 , 97.4
( 88.0)100

58.1 , 70.5
( 64.3)7064.0 , 61.9
( 63.0)7053.3 , 72.5
( 62.9)13044.2 , 48.8
( 46.5)100

49.0 , 47.8
( 48.4)100

49.3 , 48.5
( 48.9)160

33.6 , 32.7
( 33.2)13017.4 , 25.5
( 21.5)13026.5 , 23.2
( 24.9)0.1

65.0 , 65.0
( 65.0)0.05

56.5 , 51.3
( 53.9)(μg/mL)
Control a

S9+b(μg/mL)(μg/mL)

EGEHE

Mitomycin C

3,4-Benzopyrene

―

―

10

RICC : Relative increase in cell counts
a : Dimethylsulfoxideb : Treatment time - recovery time
Precipitation was not observed.
Change of pH in culture medium was not observed.

- 24 -

53.0 , 51.8
( 52.4)―

- 25 --

S9b

Mitomycin C

EGEHE

Control

Group

0.1

65.0

33.2

160

81.6

70

46.5

91.2

40

130

91.9

10

64.3

100.0

―

100

RICC
(%)

Concentration(µg/mL)

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

Number of
metaphaseobserved
150
150
300

37
41
78

50
66
116

1
0
1
0
1
1
0
0
0

0
1
1

2
1
3

1
2
3
2
1
3
2
2
4

cte

ctb

2
1
3

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

csb

1
1
2

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

ND

( 1.3) NS( 1.3) NS( 1.0) NS

ND

ND( 1.3)

8193
174 (58.0) **

1
2
3
2
2
4
2
2
4

2
2
4

poly, polyploid

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

cse others total (%)

Structural aberrations

ctb, chromatid breakcte, chromatid exchange
csb, chromosome breakcse, chromosome exchangea : Time schedule ; treatment time-recovery timeb : Dimethylsulfoxide
RICC : Relative increase in cell counts
Precipitation was not observed
ND : Not determined
NS : No significant difference (Fisher's exact test)** : Statistically significantly different from the negative control, p < 0.01 (Fisher's exact test)

6-18

Time schedule a(hours)Table 3-1 Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours without S9

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

0
0
0

2
0
2
1
1
2
0
0
0

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

2
0
2
1
1
2
0
0
0

( 0.0) NS( 0.0) NS( 0.7) NS( 0.7) NS

Gap Number of
metaphase poly others total (%)
observed
0
150
2
0
2
0
150
1
0
1
0
300
3
0
3 ( 1.0)

Numerical aberrations

SR17138

- 26 -+

S9b

3,4-Benzopyrene

EGEHE

Control

Group

10

52.4

21.5

130

74.7

40

48.4

81.4

10

100

87.3

5

63.0

100.0

―

70

RICC
(%)

Concentration(µg/mL)

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

Number of
metaphaseobserved
150
150
300

41
48
89

55
55
110

1
1
2
1
0
1
1
1
2

1
2
3

0
0
0

1
0
1
0
0
0
1
1
2

cte

ctb

2
1
3

0
0
0
0
1
1
0
0
0

0
0
0

csb

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

ND

ND

( 1.0)

82
86
168 (56.0) **ND

2
1
3 ( 1.0) NS11
2 ( 0.7) NS2
2
4 ( 1.3) NS

123poly, polyploid

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

cse others total (%)

Structural aberrations

ctb, chromatid breakcte, chromatid exchange
csb, chromosome breakcse, chromosome exchangea : Time schedule ; treatment time-recovery timeb : Dimethylsulfoxide
RICC : Relative increase in cell counts
Precipitation was not observed
ND : Not determined
NS : No significant difference (Fisher's exact test)** : Statistically significantly different from the negative control, p < 0.01 (Fisher's exact test)

6-18

Time schedule a(hours)Table 3-2 Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours with S9

0
0
0

1
0
1
0
0
0
0
0
0

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

0
0
0

0
0
0
0
0
0
2
0
2

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

0
0
0
0
0
0
2
0
2

( 0.0) NS( 0.7) NS( 0.0) NS( 0.0) NS

Gap Number of
metaphase poly others total (%)
observed
1
150
0
0
0
1
150
0
0
0
2
300
0
0
0 ( 0.0)

Numerical aberrations

SR17138

- 27 --

S9b

Mitomycin C

EGEHE

Control

Group

24.9
53.9

130
0.05

88.0

40

48.9

98.0

10

100

91.0

5

62.9

100.0

―

70

RICC
(%)

Concentration(µg/mL)

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

Number of
metaphaseobserved
150
150
300

35
31
66

63
71
134

2
0
2
1
0
1
1
1
2

1
1
2

2
1
3

0
2
2
0
1
1
0
1
1

cte

ctb

0
0
0

0
0
0
1
0
1
1
0
1

0
0
0

csb

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

ND

( 1.3) NS( 1.0) NS( 1.3) NS

ND

ND( 1.7)

8690
176 (58.7) **

2
2
4
2
1
3
2
2
4

3
2
5

poly, polyploid

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

cse others total (%)

Structural aberrations

ctb, chromatid breakcte, chromatid exchange
csb, chromosome breakcse, chromosome exchangea : Time schedule ; treatment time-recovery timeb : Dimethylsulfoxide
RICC : Relative increase in cell counts
Precipitation was not observed
ND : Not determined
NS : No significant difference (Fisher's exact test)** : Statistically significantly different from the negative control, p < 0.01 (Fisher's exact test)

24-0Time schedule a(hours)Table 3-3 Chromosome analysis of CHL/IU treated with EGEHE for 24 hours without S9

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

150
150
300

150
150
300
150
150
300
150
150
300

0
0
0

2
0
2
0
2
2
3
0
3

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

2
0
2
0
2
2
3
0
3

( 0.0) NS( 1.0) NS( 0.7) NS( 0.7) NS

Gap Number of
metaphase poly others total (%)
observed
0
150
0
0
0
0
150
0
0
0
0
300
0
0
0 ( 0.0)

Numerical aberrations

SR17138

SR17138

100.0

↓︱

Preliminary test (cell-growth inhibition test)

RICC (%)

Main test (chromosomal aberration test)

50.0

0.0
0

450

900

1350

1800

Concentration (μg/mL)

Figure 1

Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours without S9
Each point represents mean value (n=2).
RICC: Relative increase in cell counts- 28 -

SR17138

100.0

↓︱

Preliminary test (cell-growth inhibition test)

RICC (%)

Main test (chromosomal aberration test)

50.0

0.0
0

450

900

1350

Concentration (μg/mL)

Figure 2

Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 6 hours with S9Each point represents mean value (n=2).
RICC: Relative increase in cell counts- 29 -

1800

SR17138

100.0

↓︱

Preliminary test (cell-growth inhibition test)

RICC (%)

Main test (chromosomal aberration test)

50.0

0.0
0

450

900

1350

1800

Concentration (μg/mL)

Figure 3

Growth rate of CHL/IU treated with EGEHE for 24 hours without S9
Each point represents mean value (n=2).
RICC: Relative increase in cell counts- 30 -

SR1713820‑0‑Structural aberration

一

Incidence (%)

Numerical aberration

10

9

07
0

ーと］

̲
̲
L

0

20

40

60

80

100

120

Concentration (μg/mL)

Figure 4

Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with
EGEHE for 6 hours without S9- 31 -

SR17138

20↓︱

Structural aberration

Incidence (%)

Numerical aberration

10

0
0

20

40

60

80

Concentration (μg/mL)

Figure 5

Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with
EGEHE for 6 hours with S9- 32 -

100

SR17138

20↓︱

Structural aberration

Incidence (%)

Numerical aberration

10

0
0

20

40

60

80

Concentration (μg/mL)

Figure 6

Incidence of chromosome aberrations in CHL/IU treated with
EGEHE for 24 hours without S9- 33 -

100

Annex 1

SR17138
NCAS1
7
・
3
0
7
N
G
・
2
0
1
8
0
2
2
0
・l

簡易報告 書
化合物名：

試験番り：

NCAS1
7
‑
:
3
0
7
N
G

分析方法：

KBr液膜法 (
F
T
・
I
R
)

Lo
tNo.: ECP4663

測定波数：4000 400cm・1

分子式：

C10H2202

分解能：

4cm・1

分子量：

1
7
4
.
2
8

測定日：

Februar
y2
0
,2018

2
‑
[
(
2
・ エチルヘキサン一・lイル）オキシl
工タノール

構造式：

安定性評価：
試験番号 NCAS1
7・
2
0
9 において 2017年 8月 2
8日

0~0H

に測定された IRスペクトルと比較した結果、本被験物質における 2017年 8月 28日から 2018年 2月 20
日までの安定性が確認された。

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0050505050505050500r.l9887/665544
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J 322]]4

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1
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0
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)
(
1

c
m
‑
I

800

600

2
‑
[
(
2
‑エチルヘキサンートイル）オキシ］エタノール (LotN
o
.E
C
P
4
6
6
3
)の I
Rスペクトル
測定日： 201
8年 2月 20日
株式会社日曹分析センター(NCAS) 小田原事業所
〒2
5
0
‑
0
2
1
6 神奈川県小田原市高田 345番地20)8‑年 乙月 Z乙日

署名：- 34 -

400.
0Annex 2

SR17138

Historical control data for chromosomal aberration test in CHL/IU (2017)

Negative control data (Period: January, 2016 - December, 2016)
Structural aberration
Treatment recovery time

6-18 hrNumerical aberration
24-0 hr

6-18 hr24-0 hr

Metabolicactivation

-

+

-

-

+

-

No. of data

23

23

23

23

23

23

Mean ± S.D.

0.57 ± 0.45 0.60 ± 0.38

0.62 ± 0.51

0.14 ± 0.22 0.10 ± 0.18

0.09 ± 0.14

Maximum

1.3

1.3

1.7

0.7

0.7

0.3

Minimum

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

Acceptancecriteria a

0.0 b - 1.9

0.0 b - 1.7

0.0 b - 2.2

0.0 b - 1.0 c

0.0 b - 1.0 c

0.0 b - 1.0 c

Positive control data (Period: January, 2016 - December, 2016)
Structural aberration
Treatment recovery time

Metabolicactivation

6-18 hr-Numerical aberration
24-0 hr+

Mitomycin C Benzopyrene

Mitomycin C

6-18 hr-24-0 hr+

Mitomycin C Benzopyrene

Mitomycin C( µg/mL)

0.1

10

0.05

0.1

10

0.05

No. of data

23

23

23

23

23

23

Mean ± S.D.

47.2 ± 3.9

46.5 ± 4.7

49.4 ± 4.3

0.0 ± 0.1

0.0 ± 0.1

0.0 ± 0.1

Maximum

55.0

54.0

57.0

0.3

0.3

0.3

Minimum

37.0

37.3

42.3

0.0

0.0

0.0

36.5 - 62.3

0.0 b - 1.0 c

0.0 b - 1.0 c

0.0 b - 1.0 c

Acceptancecriteria a

35.5 - 58.9 32.4 - 60.6

a: Mean ± 3 SD
b: Lower limit is set at not less than 0.0%
c: Upper limit is set at not less than 1.0%

- 35 -