−報文−

新型コロナウイルス抗体検出試薬の開発
小江大河北新崎川竹合
岡谷慎則信憲晃

矢＊ 1
叶＊ 2
久＊ 3之＊ 2二＊ 1司＊ 4Development of the four type tests detecting Anti-SARS-CoV-2 antibodies
Shinya KOZAKI
Kanae EGAWA
Norihisa OHTAKE
Nobuyuki KAWAI
Kenji KITAOKA
Koji SHINTANI

We have developed four high-throughput serological tests available of simultaneously detecting total
immunoglobulins and immunoglobulin G against nucleocapsid protein (NP) and spike protein (SP) and report its
performance in detecting Anti-SARS-CoV-2 antibodies in clinical samples. The sensitivity of the assay increased
proportionally to the elapsed time from symptoms onset, and all of the four tests achieved 100% sensitivity after 13days from symptoms onset. Most COVID-19 survivors had sustained neutralizing antibodies approximately 6 months
after infection. Furthermore, SP-IgG titers were found to have positive correlation with NT50 titer by analysis forsamples from Japanese healthcare workers who had completed two doses of the BNT162b2 vaccine.

法については血液中の抗 SARS − CoV − 2 抗体を検出す

1．序論

るものであり、感染既往など過去の感染を間接的に知2019 年 12 月に中国武漢市で最初の報告があった新ることができるとされているものの、本邦では体外診型コロナウイルス（SARS − CoV − 2）感染症（COVID

断用医薬品として承認を得たキットはなく（2021 年− 19）は世界的パンデミックをきたした。COVID − 1910 月時点）
、WHO は診断を目的として単独で用いるの検査法としては、SARS − CoV − 2 のゲノム RNA を検ことは推奨せず、疫学調査等で活用できる可能性を示

出する遺伝子検査法や抗原蛋白質を標的とした抗原検唆している 1）。

査法が知られており、検査時点の感染を直接的に判定

こ の う ち、 抗 体 検 査 に 使 用 す る 抗 SARS − CoV − 2する方法として保険収載されている。一方、抗体検査

抗体検出試薬については、免疫グロブリンのクラス（IgG、IgM、IgA など）に加え、試薬により用いられ＊1＊2＊3＊4バイオサイエンス事業部
バイオサイエンス事業部
バイオサイエンス事業部
バイオサイエンス事業部

第一開発部
第一開発部
第一開発部
第一開発部

試薬グループ
探索グループ
技術グループる抗原が異なっている。具体的には、ヌクレオカプシド蛋白質（NP）あるいはスパイク蛋白質（SP）のいずれかが使用されており、SARS − CoV − 2 の NP もし31TOSOH Research & Technology Review Vol.65（2021）

くは SP どちらかの抗原に対する免疫グロブリンを検ル（1）においては凍結乾燥試薬が溶解すると同時に出できるよう設計されている。

第一反応が開始する。一定時間、一定温度でインキュ

これまでにイムノクロマト法や酵素免疫測定法ベートした後、洗浄水で洗浄することにより、未反応（ELISA 法 ）、 化 学 発 光 酵 素 免 疫 測 定 法（CLEIA 法 ）の検体成分を除去する（B ／ F 分離）。B ／ F 分離後、セなどといった様々な測定原理に基づくキットが研究用

ル（2）の内容物を一定量、セル（1）に移すことによ試薬として上市されているが、性能はキット間でばらり第二反応が開始される。一定時間、一定温度でインつきが認められており、疫学調査やワクチン有効性評キュベートした後、洗浄水で洗浄することにより、未価に有用なキットの開発が望まれていた。

反応の酵素標識抗体・抗原を除去する。その後、磁性

今 回、 我 々 は 全 自 動 化 学 発 光 酵 素 免 疫 測 定 装 置®

微粒子に結合した酵素活性を測定するために化学発光（AIA − CL2400 又はそれと同等の性能を有する専用機基質として 3 −（5 − tert −ブチル− 4,4 −ジメチル− 2,6,7 −器）を用いて、簡便かつ迅速に NP と SP に対する免トリオキサビシクロ［3.2.0］ヘプト− 1 −イル）フェニ

疫グロブリン G（IgG）と総免疫グロブリン（Total −ルリン酸エステルジナトリウム塩（DIFURAT®）を添Ig）を検出できる４種類の抗 SARS − CoV − 2 抗体検出

加し、酵素による分解で得られる発光強度を測定する試薬の開発を行った。基本性能および COVID − 19 回ことにより、検体中の抗 SARS − CoV − 2 抗体の陽性又復者やワクチン接種者に対する研究結果について報告は陰性を判定する。

する。

測定の際、検体のカップへの分注、一定時間下での抗原抗体反応、B ／ F 分離、基質分注、発光強度の測定は全自動化学発光酵素免疫測定装置により自動で行

2．測定原理と材料

われ、各試薬ともに測定開始から約 15 分後に結果が開発した４種類の抗 SARS − CoV − 2 抗体検出試薬
は抗原抗体反応を利用し血清又は血漿中の抗 SARS −得られる。（試薬の主な仕様および本報文での略称を表１、測定原理を図１に示す。）

CoV − 2 抗体を検出する試薬であり、反応に必要な物質は凍結乾燥し、試薬カップ内に密封されている。
反応試薬の試薬カップには 2 つのセル（セル（1）、3．試薬の開発

セル（2））がある。セル（1）には磁性微粒子に固定

抗 SARS − CoV − 2 抗 体 試 薬 は、SARS − CoV − 2 の 疫化された SARS − CoV − 2 抗原を含む凍結乾燥体が、セ学調査やワクチン有効性評価に用いるために感度や特ル（2）には酵素としてアルカリ性ホスファターゼが異性が高く、短時間で抗体を検出できる性能が求めら標識された抗ヒト IgG マウスモノクローナル抗体もれる。抗体検出試薬における感度や特異性は、使用すしくは同酵素で標識された SARS − CoV − 2 抗原の凍結る抗原の特性に左右されることから、抗原の選定に重乾燥体が封入されている。この試薬カップのセル（1）点を置いて測定系の構築を行った。に分注水と検体を、セル（2）には分注水を加え、そNP は、他のヒトコロナウイルスと抗原性の類似性れぞれ凍結乾燥試薬を溶解する。検体が注入されたセを有しており、完全長のタンパク質として血清検査に表１
AIA®－CL 用 SARS－
CoV－2－NP－IgG
抗体試薬

AIA®－CL 用 SARS－
CoV－2－NP－Total
抗体試薬

AIA®－CL 用 SARS－
CoV－2－SP－IgG
抗体試薬

AIA®－CL 用 SARS－
CoV－2－SP－Total
抗体試薬

NP－IgG
IgG 型抗 SARS－
CoV－2－NP 抗体

NP－Total
抗 SARS－CoV－2－NP
抗体（IgG を含む総免疫グロブリン）

SP－IgG
IgG 型抗 SARS－
CoV－2－SP 抗体

SP－Total
抗 SARS－CoV－2－SP抗体（IgG を含む総免疫グロブリン）

SARS－CoV－2－NP

SARS－CoV－2－SP
抗ヒト IgG マウス
モノクローナル抗体
血清
EDTA 血漿
ヘパリン血漿SARS－CoV－2－SP

対象検体種

SARS－CoV－2－NP
抗ヒト IgG マウスモノクローナル抗体
血清
EDTA 血漿

検体量10μL（10 倍希釈）

20μL

試薬名称
本報文での略称
検出対象
固相抗原
標識抗原／標識抗体32

抗体試薬の主な仕様

SARS－CoV－2－NP
血清
EDTA 血漿10μL（10 倍希釈）

SARS－CoV－2－SP
血清
EDTA 血漿20μL

東ソー研究・技術報告

IgG 抗体検出法（間接的抗体免疫測定法）

第 65 巻（2021）

総免疫グロブリン検出法（抗原サンドイッチ測定法）

酵素標識された
抗ヒト IgG 抗体

酵素標識された
NP または SP 抗原
測定対象
検体中の総免疫グロブリン
IgG
IgM
IgA
IgE IgD

測定対象
検体中のIgG 抗体

NP またはSP 抗原

NP またはSP 抗原

磁性微粒子

磁性微粒子

図１

抗体試薬の測定原理用いた場合には交差反応性を示す可能性があるが、N

抗 SARS − CoV − 2 抗体検出試薬で前述の検体を測定し、末端のアミノ酸残基がない場合には SARS − CoV − 2 に得られた発光強度を基に ROC 分析を行い、感度およ2）高い特異性を示すことが報告されている 。従って、び特異度が 100％となる発光強度をカットオフ値（1.0NP − IgG および NP − Total 抗体試薬には N 末端を切断Index）と設定した。

3）次に設定したカットオフ値の妥当性を確認するた

した NP を選定した 。
SP は、抗体受容体結合ドメイン（RBD）を介してめ、COVID − 19 感染拡大前に採取した国内の健常人ウイルスの宿主細胞への侵入を仲介しており、RBD検体 1,000 例（横浜市立大学先端医療センターバイオに対する抗体は SARS − CoV − 2 感染に対する防御免バンク部門より提供）と、COVID − 19 発症後 13 日経

4）

疫を表すと予測されている 。疫学的観点から、SP −過した国内の患者検体 154 例を 4 種の抗 SARS − CoV −IgG および SP − Total 抗体試薬には RBD 蛋白質を選定

2 抗体検出試薬で測定して抗体価を比較した。得られ

3）

した 。
さらに、十分な感度が得られるように磁性微粒子への抗原固定化方法や標識抗原への酵素標識方法の最適化を行った。反応液組成については、検体中に含まれる可能性のある異好性抗体（Heterophilic Antibodies、た抗体価を基に ROC 分析を行った結果、4 種類全ての抗体検出試薬で陰性と陽性を正確に識別し、感度と特異度はともに 100％であった（図２）。
以上の結果より、設定したカットオフ値は妥当であることを確認した。

Human Anti − Goat Antibodies 等）との非特異的反応を抑えるためにブロッキング剤を添加するとともに、安定性を向上すべく各種蛋白質および糖質濃度の最適化を行った。また、IgG 検出試薬については検出目的以外の抗体による非特異反応を抑制するために、検体を10 倍希釈して測定する仕様とした。

5．基本性能評価［1］再現性
測定内再現性、測定間再現性試験を抗体価の異なる2 種のプール血清およびプール血漿を用いて行った。

その結果、抗体価の強弱や経時的変化を評価するこ使用した 2 種（Low、High）は 1 回の測定分を小分けとができる 4 種類の抗 SARS − CoV − 2 抗体検出試薬を分注し使用まで凍結保存した。5 重同時測定による測開発することができたので、評価結果を以下に報告する。

定内再現性試験の結果、各試料の測定値の変動係数（coefficient of variation；CV）は NP − IgG：1.0 ～ 1.9％、4．カットオフ値の設定 3）

NP − Total：1.4 ～ 2.7 ％、SP − IgG：2.4 ～ 3.6 ％、SP −Total：2.8 ～ 4.2％であった。各試料を 1 日 1 回測定し、カットオフ値の設定には、COVID − 19 感染拡大前試薬、装置を変えずに 20 回繰り返して行った測定間に採取した海外の健常人検体 600 例（購入検体）と、再現性試験の結果（検量線作成後 90 日間に渡って 20Abbott 社 の Architect SARS − CoV − 2 IgG で 陽 性 を 示回測定）、各試料の測定値の CV は NP−IgG：2.3 ～ 2.8％、した抗 SARS − CoV − 2 抗体陽性検体 17 例（購入検体、

NP − Total：3.0 ～ 3.9 ％、SP − IgG：4.2 ～ 5.0 ％、SP −カットオフ値近辺を含む）を用いた。開発した 4 種のTotal：3.5 ～ 4.9％であった（表２）。
33

TOSOH Research & Technology Review Vol.65（2021）

ボックス図
NP－IgG
1000NP－Total
100p ＜ 0.0001

SP－IgG

Index

IndexIndex

Index

10010

健常人
1000

ROC 曲線

1COVID－19154

n＝NP－IgG

健常人
1000

1COVID－19154

n＝95％Cl
1.000
1.000
1.000

感度0.5

1.095％Cl
AUC
感度
特異度

0.00.0n＝

1.000
1.000
1.000

0.595％Cl

図２

AUC
感度
特異度

0.0
0.0

1.0

COVID－19154

1.0

1.000 to 1.000
0.9763 to 1.000
0.9963 to 1.000

0.5
1－特異度

表２

健常人
1000

SP－Total

1.00.51.000 to 1.0000.9963 to 1.000
0.9763 to 1.000

1COVID－19154

SP－IgG

1.00.5
1－特異度

健常人
1000

NP－Total

1.0AUC感度
特異度101.000
1.000
1.000

0.5
1－特異度

感度

n＝

感度

1p ＜ 0.0001

1000

1001010

感度

10000
p ＜ 0.0001

100

0.00.0SP－Total

1000

p ＜ 0.0001

0.5

1.000 to 1.000
0.9763 to 1.000
0.9963 to 1.000

1.0

95％Cl
AUC
感度
特異度

0.0
0.0

0.5
1－特異度

1.000
1.000
1.000

1.000 to 1.0000.9763 to 1.000
0.9963 to 1.000

1.0

感度と特異度

測定内および測定間再現性

1）Pooled Serum
NP－IgGHigh
Low

NP－Total
HighLow

SP－IgGHighLow

SP－Total
HighLow

測定内再現性（n＝5）
Mean［Index］
SD
CV［％］

1.4
0.03
1.9

4.20.06
1.4

1.9
0.05
2.7

4.5
0.10
2.2

2.4
0.06
2.6

5.4
0.19
3.6

1.4
0.06
4.2

3.9
0.16
4.1

測定間再現性（n＝20）
Mean［Index］
SD
CV［％］

1.5
0.04
2.8

4.3
0.12
2.7

1.6
0.06
3.9

4.1
0.14
3.5

2.5
0.13
5.0

5.6
0.28
5.0

1.5
0.06
4.2

4.0
0.14
3.52）Pooled Plasma
NP－IgGHighLow

NP－TotalHigh
Low

SP－IgGHighLow

SP－Total
HighLow

測定内再現性（n＝5）
Mean［Index］
SD
CV［％］

1.4
0.02
1.4

4.4
0.04
1.0

1.3
0.03
2.6

3.7
0.05
1.42.50.06
2.45.60.17
3.1

1.70.06
3.6

3.80.112.8

測定間再現性（n＝20）
Mean［Index］
SD
CV［％］

1.50.04
2.6

4.50.102.3

1.30.05
3.9

3.8
0.11
3.0

2.50.10
4.2

5.3
0.25
4.7

1.70.08
4.9

4.00.164.2［2］共存物質および抗凝固剤の影響
検体中に含まれる可能性のある各物質をプール血清

ら物質は表３に記載の濃度まで添加しても影響しないと判断した。

又はプール血漿へ添加し、測定値への影響を確認した。共存物質としてはヘモグロビン、遊離型ビリルビン、抱合型ビリルビン、脂質、ヒト血清アルブミン、アスコルビン酸、ビオチン（Total 抗体試薬のみ）を、

6．臨床評価［1］急性期における抗体評価 3）

抗凝固剤としては EDTA およびヘパリン（SP − IgG のCOVID − 19 患者の急性期（発症後 3 ヶ月以内）にみ）を各々表３に記載の濃度まで添加し測定した。そおける抗体価並びに経時的変化について検討を実施しの結果、未添加に対して抗体陰性検体は陰性判定（1.0た。COVID − 19 と診断された 44 名の患者から、発症Index 未満）を示し、抗体陽性検体（1.0 Index 以上）

後 7 日以降に採取した検体 202 例について、発症後 7の測定値はいずれも± 10％以内であったため、これ～ 9 日、10 ～ 12 日、13 ～ 20 日、21 ～ 30 日、31 日

34東ソー研究・技術報告

表３
ヘモグロビン［mg ／ dL］
［mg ／ dL］
遊離型ビリルビン［mg ／ dL］
抱合型ビリルビン［mg ／ dL］
脂質
ヒト血清アルブミン ［mg ／ mL］［mg ／ dL］
アスコルビン酸［mg ／ mL］
EDTA
［U ／ mL］
ヘパリン［ng ／ mL］
ビオチン

第 65 巻（2021）

共存物質および抗凝固剤の影響
NP－IgG430
17181,600
502010N.T.
N.T.

NP－Total
430
17181,600
502010N.T.
7,000

SP－IgG
450
17171,600
502010100
N.T.

SP－Total
450
17171,600
502010N.T.
7,000※N.T.：Not tested以降（最大 96 日まで）に区分した上で、4 種類の抗ルシフェラーゼレポーター遺伝子をコードし、SARSSARS − CoV − 2 抗 体 検 出 試 薬（NP − IgG、NP − Total、− CoV − 2 スパイク蛋白質を有したシュードウイルスをSP − IgG、SP − Total）で測定して抗体価の経時的推移調製し、希釈した COVID − 19 患者血清を含む培地とを比較した。発症後 7 ～ 9 日での感度は NP − IgG で混合して、感染感受性細胞である VeroE6 ／ TMPRSS259.3 ％、NP − Total で 74.1 ％、SP − IgG で 40.7 ％、SPに接種した。接種後 48 時間後に基質を添加してルシ− Total で 37.0％であり、COVID − 19 の初期段階では、フェラーゼ活性を GloMax Discover System（Promega）

NP − Total が他の抗体よりも高い感度を示した。また、を用いて測定し、緩衝液等の非血清対照と比較してル4 種類の抗体価はいずれも経時的な上昇傾向が認めらシフェラーゼ活性が 50％減少した血清の希釈係数をれ、13 日以降の感度は 100％に達した（表４）。NP −中和抗体価（NT50）とした（図４）。また、中和抗体IgG の抗体価は発症後 30 日以上経過した時点でわず

価の判定基準は既報の研究結果 6，7） などから、NT50

か に 低 下 し た が、NP − Total、SP − IgG、SP − Total の＞ 50 を中和抗体陽性とした。

抗体価は発症後 21 ～ 30 日まで継続して上昇する傾向が見られた（図３）。

前述の回復期における検体を 4 種の抗 SARS − CoV− 2 抗体検出試薬で測定した結果、抗体陽性を示した
検体は NP − IgG（314 例、84％）、NP − Total（365 例、［2］回復期における抗体評価5）97 ％）、SP − IgG（344 例、91 ％）、SP − Total（369 例、

COVID − 19 患 者の回復期（発症から 6 ヶ月 以 降 ）98％）であり、ほとんどの感染既往者が抗体を保持しにおける抗体価並びに中和抗体価（NT50）についてていることが示された（図５A）。また、中和抗体陽検討を実施した。検体は 2020 年 2 月 4 日から 5 月 26

性を示した検体は 367 例（98％）であり、317 例（85％）

日までの間に SARS − CoV − 2 感染検査結果が陽性とが中程度以上の NT50（≧ 201）を示した（図５B）。

なった国内の既往感染者 376 人について、陽性判定後

NT50 と 4 種の抗 SARS − CoV − 2 抗体検出試薬での6 カ月が経過した時点で採取したものを用いた。中和測定値との相関係数（スピアーマンの順位相関係数）

抗体価（NT50）はヒト免疫不全ウイルス（HIV）由来

は、NT50 対 SP − IgG で 最 も 高 く（r ＝ 0.63）、 次 いのシュードウイルスを用いて以下の方法で測定した。

で SP − Total（r ＝ 0.57） で あ り、NP 抗 原 に 対 す る表４
陽性率（95％Cl）

NP－IgG
NP－Total
SP－IgG
SP－Total

感度の経時的推移

発症後日数（血液サンプル数）
10－1213－7－9（27）
（22）
（153）
69.6
100.0
59.3
（38.8－77.6） （41.7－86.8） （97.6－100.0）
91.3
100.0
74.1
（53.7－88.9） （72.0－98.9） （97.6－100.0）
81.8
100.0
40.7
（22.4－61.2） （59.7－94.8） （97.7－100.0）
90.9
100.0
37.0
（19.4－57.6） （70.8－98.9） （97.7－100.0）

35

TOSOH Research & Technology Review Vol.65（2021）

NP－IgG

NP－Total
40300

3020Index

Index

200

100

100021－3

発症後日数発症後日数

COVD－19 患者

COVD－19 患者

SP－IgG

31－013－22－110

健常人

7－9021－331－013－210－17－
9健常人

20SP－Total
3000200Index

10001000

発症後日数
COVD－19 患者

HIV－1 コア
Luc 遺伝子－31021－3013－2210－19－

発症後日数COVD－19 患者

図３

SAR－CoV－2－SP

健常人

31021－3013－2210－17－

健常人

907－Index

2000

抗体価の時系列分析

COVU－19 患者血清（50～31,250 倍希釈）Luc

感染
シュードウイルス

48hr
感染細胞で Luc 遺伝子が発現

VeroE6 ／ TMPRSS2 細胞

図４Luciferase 活性を定量（感染価の測定）

中和抗体価 NT50 測定方法

抗体価（NP − IgG および NP − Total）では低値を示した SP − IgG で測定するとともに NT50 との比較を行った（図６）。

た。
検体は BNT162b2 ワクチンを接種した横浜市立大学［3］ワクチン評価

8）

附属病院の日本人医療従事者 168 名から採取した。採武漢株の SARS − CoV − 2 スパイク蛋白質（SP）を

取はワクチン接種前、1 回目の接種から 2、4、6 週間

主な標的として設計された mRNA ワクチンである後（2 回目の接種は 1 回目の接種から 3 週間後に実施）「BNT162b2 ワクチン」の接種によって誘発された抗の 4 つの時点で実施した。被験者の年齢は 23 ～ 62 歳

体について、中和抗体価との相関性が最も良好であっであり中央値は 43 歳であった。男性 42 名、女性 12636

東ソー研究・技術報告

A ：抗体保有率

第 65 巻（2021）

B ：中和抗体価NT50
undetectable

NP－IgG

51－200NT50NP－Total
SP－IgG

201－500
501－2,000

SP－Total

2,001－75808590
抗体保有率（％）

図５950100102030割合（％）

4050

回復期における抗体保有率と NT50 分布

10000

10000

r = 0.371000

r = 0.32

NT50

NT50

1000

100

100.01

10000

1000.1

110NP－IgG (Index)

100.011000.1110100NP－Total (Index)

1000

10000

r = 0.63r = 0.57

1000
NT50

NT50

1000

100

100.011000.1110SP－IgG (Index)

図６100

1000

100.010.1

110100SP－Total (Index)

1000 10000

NP または SP 抗原に対する抗体価と NT50 の相関名で構成されており、併存疾患は、「なし」が 146 人、ていたが、特に接種 4 週間後（2 回目の接種から 1 週「気管支喘息」が 16 人、「糖尿病」が 2 人、「抗腫瘍化間後）には急激に抗体価が上昇した。

学療法または免疫抑制療法を受けている」が 1 人、「慢初回接種から 4 週間後および 6 週間後の NT50 と性肺疾患」が 1 人であった。また、NP − IgG は全て陰SP − IgG との相関を図８に示す。BNT162b2 ワクチン性であったことから既往者がいる可能性は低いと判断

を 2 回接種した後の NT50 は 100 以上に達することがした。

報告されており 9，10）、本研究でも、初回投与後 4 週目

SP − IgG および NT50 中和抗体価の経時的推移を表５および図７に示す。すべての被験者は、ワクチン

では 167 名（99.4％）の被験者が、初回投与後 6 週目
ではすべての被験者がこの閾値に達していた。

接種前に SP−IgG がカットオフ値の 1.0 Index を下回っ
37

TOSOH Research & Technology Review Vol.65（2021）

表５ワクチン接種者 SP－IgG および NT50 の経時的推移
SP－IgG（Index）
1 回目接種後の経過期間
2 週間
4 週間
6 週間
1.4
60.8
97.4
0.6
26.2
51.4
3.3
102.8
167.4
0.1－45.1
0.2－449.6 3.8－927.6

ワクチン
接種前
中央値
0.1
25％tile0.1
75％tile
0.1
下限－上限
0－0.4

NT50
1 回目接種後の経過期間
4 週間
6 週間
783.6
629.8
351.2
386.8
1,389
1,14869.6－10,073 162.6－8,933

SP－IgG（Index）

1000
100
1010.1ワクチン
接種前

図７2 週間4 週間

6 週間（1 回接種からの経過期間）

ワクチン接種者 SP－IgG および NT50 の経時的推移

ワクチン接種4週後ワクチン接種6週後10000.0

1000.01000.0NT50

NT5010000.0

100.0

100.0

10.00.1

図81.0

10.0
100.0
SP－IgG (Index)

1000.0

10.0

0.1

1.0

10.0
100.0
SP－IgG (Index)

1000.0

BNT162b2 ワクチンを 2 回接種した被験者における SP－IgG と NT50 の相関性

7．総括

定間再現性は 5％以内と良好であり、検体中の共存物質の影響を受けにくいことが確認された。

今回、我々は AIA − CL システムをベースに新型コロ

疫学的な観点から COVID − 19 回復者から採取したナウイルスのヌクレオカプシド蛋白質（NP）とスパ

臨床検体を用いて評価において、4 種類の抗 SARS −イク蛋白質（SP）に対する免疫グロブリン G と総免

CoV − 2 抗体検出試薬すべての抗体価は発症後 13 日目

疫グロブリンを同時に検出し、抗体価の強弱や経時的まで上昇傾向が認められ、13 日以降の感度は 100％変化を評価することができる試薬を開発した。これらに達した。また、感染後 6 カ月が経過した時点でも4 種類の抗 SARS − CoV − 2 抗体検出試薬は測定機器と生存者の 98％が中和活性を有する抗体を保持していして全自動化学発光酵素免疫測定装置 AIA − CL シリーた。さらに SP 抗原に対する抗体が中和抗体価と高いズを用いて、迅速（約 15 分）かつ多検体の測定が可相関性を有していることを確認した。これらの結果は、能である。また、試薬の基本性能として、測定内、測COVID − 19 感染後の長期的な液性免疫反応に関する38東ソー研究・技術報告第 65 巻（2021）

知見を示すとともに、COVID − 19 生存者のほとんど

doi:10.1038/s41467 − 020 − 16638 − 2（2020）

が中和活性を検出可能なレベルで維持しているという

５）Goto, A., et al., Front Microbiol , 12:661187（2021）考えを支持するものであった。

６）Luchsinger, L. L., et al., J. Clin. Microbiol .

一方、BNT162b2 ワクチン接種者に対する研究では、2 回目の接種から 1 週間後には急激な抗体価の上昇が確認されるとともに、ワクチンを 2 回接種することでSP − IgG は 10 Index 以上、NT50 は 100 以上を示すと

58:e02005 − 20（2020）７）Seow, J., et al., Nat. Microbiol . 5, 1598 − 1607
（2020）
８）Kato, H., et al., medRxiv preprint doi:

いう結果が認められた。本研究から感染防御の閾値をhttps://doi.org/10.1101/2021.09.23.21263927

設定することは困難であるが、COVID − 19 の発症リ

９）Wang Z., et al., Nature . 592, 616 − 22（2021）

スクを低下させるためには、一定以上の高い抗体価が10）Gilbert PB., et al., medRxiv 2021.08.09.21261290.

必要であることを類推させるものといえる

10）

。さらに、

本試薬で抗体価を定期的に確認することは感染防御の点から一定の意義があると考えられる。
以上より、今回開発した新型コロナウイルス抗体検出試薬は、感染既往者やワクチン接種者の液性免疫のモニタリングに有用であることが示された。特に現時点での新型コロナウイルスに対するワクチンは SP を主な標的としていることから、感染既往には NP 抗体試薬、ワクチン評価には SP 抗体試薬という使用方法が実用的であると考えられる。今後も新型コロナウイ
ルスの基礎的、臨床的研究での活用を通じて研究現場や医療現場への貢献が期待される。

8．謝辞
本研究は国立研究開発法人日本医療研究開発機構（AMED）令和 2 年度ウイルス等感染症対策技術開発事業（実証・改良研究支援）「新型コロナウイルス抗体検出を目的としたハイスループットな全自動免疫測定方法の開発及び同測定方法の社会実装に向けた研究（研究開発代表者：梁明秀）」の支援を受けて行われました。臨床検体の収集や研究方針策定に多大なご協力をいただいた横浜市立大学 学術院医学群 微生物学
梁明秀 主任教授、宮川エンス研究科 後藤敬 准教授、同データサイ

温 教授および山中竹春 先生（元横浜市立大学 学術院医学群 臨床統計学 教授）に心より感謝を申し上げます。

9．文献
１）厚生労働省．新型コロナウイルス感染症（COVID− 19）診療の手引き（第 5.3 版）
２）Yamaoka, Y., et al., Clin. Infect. Dis . 23:ciaa637. doi:
10.1093/cid/ciaa637（2020）３）Kubo, S., et al., Front Microbiol , 11:628281（2021）
４）Poh, C. M., et al., Nat. Commun . 11:2806.
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