博士（理学）吉田上と学 位論文 題名
新規ヒトCC型ケモカインELCとレセプターCCR7の同定
ならびにそのりガンド・レセプター系に関する研究

学位論文内容の要旨
ケモカインは自血球に作用して、炎症部位へ細胞を遊走する活性を持つ低分子量のポリペプチドである。近年多くのケモカインが同定され、生体内で重要な働きをしていることが明らか にされ つっある 。本研 究では新規ヒトCC型ケモカインE
L
Cについて、そのcDN
Aをク口一ニングし、組換えタンバク質を用いてその活性についてI
nvitroにおいて検討し、その結果をまとめたものである。骨子は以下の4章からなる。
第 1章： EL
Cの cD
NAク ロ 一二 ン グ およ び 組 換え ELC
夕 ン バク質 の作製： EST
デ一 夕
ベースを 利用し て新規ヒ トC
C型ケ モカイン を検索 し、cD
NAをク口ーニングした。この遺伝子は 染色体 9p13に位置し 、また mRN
Aは免疫 系の組織 に強い発現が認められることから、新 しいタイプのCC型ケモカインである可能性が考えられた。後の実験結果からこの新規ケモカインをEBIl‑ligandchemokine： ELCと名付けた。後に行う実験に用いるため、2種類の組換えELC夕ンバク質を作製、精製した。
第2章 ： EL
Cの レ セプ タ ー EBIl/C
CR7の同 定 ： 組換 え EL
C夕 ンバク 質を用 いて、ELCが示すケモカイン受容体発現細胞に対する結合能、カルシウム濃度上昇の誘導能、遊走能について検討した。その結果E
LCのレセプターがEBIl(Epstein‑Barrvlrus．mducedgene11
で あること を明ら かとした 。リガ ンドが判明した7番目のCC型ケモカインレセプターであるのでEBIlをCCR7と提唱した。
第3章 ： 末梢リ ンバ球 に対する ELCの活 性：末 梢血を用 いてELCのター ゲット 細胞を調べた。ELCは単球や好中球には作用せず、リンパ球、特に活性化したりンパ球に対して強 い 遊 走 活 性 を 示 し た 。 ま た ELCは CD45RO陰 性 ナ イ ー ヴ T細 胞 と CD45RO陽性 メ モリ ‑T
細 胞 を 両方 と も 同程 度 の 活性 で 遊 走し た 。 レ セプ 夕 ‑CCR7 mRN
Aは活性 化T細胞に強く発現し、また主に免疫組織内で強い発現が認められた。組織分布はELCの発現とよく 似 てい た 。 リン バ 節 や虫 垂 に おい て E
LC、CCR7 mRNAは お互いに 非常に近 い領域 に局 在 して お り 、免 疫 組 織内 で の ルン バ 球の移 動に関与 してい ることが 示唆され た。

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第 4章 ： レ セ プ タ ー CCR7を 共 有 す る S
LCと ELCの 比較 ： CC
R7を レ セプ タ ー とす るの は ELCだ け でな く 、 SL
Cと い う新 し い C
C型 ケ モカ イ ン もCCR7
を レ セ プ ター と し ているこ とが判っ た。そこで両者の活性を比較した。その結果、CCR7を発現させた細胞に対して はS
LCとELCはほぼ同等の活性を示した（結合能、カルシウム濃度上昇の誘導能、遊走能 ）。しか し末梢 血T
細 胞に対し てはSLCはEL
Cに比べ、カルシウム濃度上昇誘導能が弱かった。末梢血T細胞に対する結合実験の結果、両者の活性の違いは細胞上に発現しているレセプターへの親和性の違いであることが示唆された。
以上 のことか らE
LCがりンバ 球に対し て特異的に働く新しいカテゴリーのCC型ケモカインであることが明らかとなった。またE
LC(リガンド）、CCR7(レセプター）がどちらも免疫系の組織に強く発現しており、その局在も非常に近接していることなどから、従来のケモカインのように炎症友応において機能しているだけでなく免疫系の組織へのりンバ球のホー ミング、 あるいは 組織内 でのりン パ球の 移動に関 与して いることが示唆された。

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学 位 論 文 審 査 の要 旨
主査
副査

教授 東 市郎教 授 菊 池九二三

副査
副査

教授
講師

矢澤道生
劉 永春

学 位 論 文 題 名

新 規 ヒ ト CC型 ケ モ カ イ ン ELCと レ セ プ タ ー CCR7の 同 定
ならびにそのりガンド・レセプター系に関する研究

ケモカインは自血球に作用して、炎症部位ヘ細胞を遊走する活性を持つ低分子量のポリベプチドである。近年多くのケモカインが同定され、生体内で重要な働きをしていることが明らかにされっつある 。本研究では新規ヒ卜C
C型ケモカインELCについて、そのcDNAをク口ーニングし、組換えタンバク質を用いてその活性についてI
nvitroにおいて検討したものである。
本論文の要旨は以下の 4点である。
1． ELCの cDNAク ロ ー ニ ン グ お よ び 組換 えELC夕ン バク 質の 作製 ：EST
デ 一 夕ベ ースを 利用 して 新規 ヒト CC型 ケモ カイ ン を検索し、cDNAをク口ーニン グした。この遺伝子は染色体9p13に位置し、またmRNAは免疫系の 組織に強い発現が認められることから、新しいタイプのCC型ケモカインである可能性が 考えられた。後の実験結果からこの新規ケモカインをEBIl‑ligandcheDユokine： ELCと名付けた。後に行す実験に用いるため、2種類の組換えELC夕 ンバク質を作製、精製した。
2． E
LCのレ セブ ター EB
Il/CCR7の同 定： 組換 えELC夕ン バク 質を 用い て、 EL
Cが示すケモカインレセプタ一発現細胞に対する結合能、カルシウム濃度上昇の誘導能、遊走能について検討した。その結果ELCのレセプターがEBIl(Epstein‑Barrvrus．lnducedgenel） であることを明らかとした。リガンドが判明した7番目のC
C型ケモカインレセプ夕一であるのでEBnをCCR7と提唱した。
3．末 梢リ ンバ 球に 対す るELCの活 性： 末梢 血を 用いてELCのターゲット細胞を調ぺた 。E
LCは単球や好中球には作 用せず、リンバ球、特に活性化したりンパ球に対して強い― 72―

遊 走 活 性 を 示 し た 。 ま た ELCは CD45RO陰 性 ナ イ ー ヴ T細 胞 と CD45RO陽 性メ モリ ーT
細胞 を両 方と も同 程度の活性で遊走した。レセプターCC
R7 m
RN
Aは活性化T細胞に強く発現レ、また主に免疫組織内で強い発現が認められた。組織分布はE
LCの発現とよく似ていた 。リ ンバ 節や 虫垂 にお いて EL
C、 C
CR7 mRNAはお 互い に非 常に 近い領 域に局在してお り、 免疫組 織内 での りン バ球 の移 動に 関与 レて いる こと が示 唆され た。
4． レ セ プ タ ー CCR7を 共 有 す る SLCと ELCの 比 較 ： CCR7を レ セ プ タ ー と す る の は
ELCだけ でな く、 SLCと いう 新し いCC型ケ モカ イン も C
CR7をレ セプ ター とし てい ることが判った。そこで両者の活性を比較した。その結 果、CCR7を発現させた細胞に対してはSLCとELCはほぽ同等の活性を示した（結合能、カルシウム濃度上昇の誘導能、遊走肓と）。
しか し末 梢血 T
細 胞 に対 して はSLC
は EL
Cに 比ベ 、カ ルシ ウム 濃度上昇誘導能が弱か った。末梢血T細胞に対す る結合実験の結果、両者の活性の違いは細胞上に発現しているレセプターへの親和性の違いであることが示唆された。
以上の点 からELCがりンバ球に対して 特異的に働く新しいカテゴリーのCC型ケモカインであることが明らかとなった。またELC(リガンド）、CCR7(レセプタ一）がどちらも免疫系の組織に 強く発現しており、その局在も非常に近接していることなどから、ELCが免疫系の組織へのりンパ球のホーミング、あるいは組織内でのりンバ球の移動に関与していることが示唆された。本研究の成果は、ケモカインが炎症反応だけでなくりンバ球のホーミングなど広く免疫反応に関わっていることを示唆するものであり、ケモカインの生理活性に新たな知見を与えるものと考えられる。
よって、申請者は、北海道大学博士（理学）の学位を授与される資格を有するものと認めた。

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