平成 30 年度研究助成事業

成果報告会 要旨集

期日2019 年 10 月 10 日（木）会場

ＡＰ品川アネックス 1 階
東京都港区高輪 3 丁目 23-17

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団

平 成 30年 度 研 究 助 成 事 業

成果報告会

第一部

プログラム

ポスター発表ポスター掲示室開場：2019年10月10日（木）11時00分より
場所：AP品川アネックス 1階 Dルーム
発

表者 ：平成30年度研究助成事業

個人研究採択者

コ ア タ イ ム ：13時45分〜14時45分(発表者がポスター前で研究内容を発表、質疑応答する時間)
ポス
ター
番号

課題名

01

食物アレルギー児の食事指導における葛根湯併用の耐性誘導獲得効果の検討

02

母親の腸内環境が胎児の出生後の食物アレルギー発症に及ぼす影響の解析

03

新入大学生を対象とした
成人食物アレルギー調査研究04

経口免疫療法のよるエフェクター細胞の形質変化の誘導機序の解析

05

06

07
08
09

所属機関・氏名

新規生理活性物質 SCGB3A2 の食物アレルギー改善薬としての検証
魚類アレルゲン（パルブアルブミン）のデータベース構築に向けた基礎的研究：
多魚種にわたる魚類アレルゲン含有量および免疫化学的性状の解明
新規アナフィラキシー治療薬の開発－ビオチニル化ペプチドの有効性評価－
急速経口免疫療法後に残存する運動誘発症状の機序に関する検討－生体内における好塩基球活性化の可能性－
食物アレルギーに対する舌下免疫療法の有効性の検証と作用機序の解明

10

アナフィラキシー低血圧時の交感神経興奮を惹起する脳内機構の全容解明

11

低アレルゲン化食品を用いた
魚アレルギーに対する新規治療法の開発

12

13
14

頁

富山大学医学部小児科
助教 伊藤靖典
徳島大学大学院医歯薬学研究部
予防環境栄養学分野
特任助教 上番増 喬
昭和大学医学部小児科学講座 助教
岡田祐樹
東京大学医科学研究所
国際粘膜ワクチン開発研究センター
特任准教授 倉島洋介
山形大学大学院理工学研究科
バイオ化学工学部 准教授 黒谷玲子
国立大学法人東京海洋大学
小林征洋
医療創生大学准教授 佐藤薬学部
陽助教

衛生薬学部門

5
6
7
8
9

10

11

あいち小児保健医療総合センター
アレルギー科 医長 杉浦至郎

12

宮崎大学医学部医学科感染症学講座
免疫学分野 助教 高木秀明

13

金沢医科大学准教授 谷田14

医学部
守

生理学Ⅱ講座藤田医科大学医学部小児科 講師
15中島陽一
群馬大学大学院医学系研究科
新生児・乳児消化管アレルギーの医科学専攻 小児科学分野
16
診断にむけた革新的検査法の開発
医員大学院生 八木久子
大阪大学 微生物病研究所
独自の機能性ペプチドを用いたワクチン創成プロジェクト
17
食物アレルギーに対する根治療法の開発
特任准教授 吉岡靖雄
新規脱顆粒インディケーターを用いた
岡山大学 医歯薬学総合研究科
18
アレルゲン検出システムの構築とその応用
細胞生理学分野 助教 吉川宗一郎※50 音順・敬称略、所属・役職は 2019 年 4 月 30 日時点

1

平 成 30年 度 研 究 助 成 事 業
第二部

口頭成果報告会

成果報告会
プログラム

日時：2019年10月10日（木） 15時00分より
場所：AP品川アネックス 1階 A+B ルーム
発

表

15:00

者：平成30年度研究助成事業

共同研究採択者挨 拶
山田 良司
公益財団法人ニッポンハム食の未来財団 理事長

15:05〜15:25（座長 穐山 浩：国立医薬品食品衛生研究所 食品部 部長)
抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発・・・・・・・・・・・・・・・・・・20
北浦 次郎
順天堂大学大学院医学研究科 アトピー疾患研究センター 先任准教授
15:25〜15:45（座長 伊藤 浩明：あいち小児保健医療総合センター 副センター長)経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・27
常山 幸一
徳島大学大学院 医歯薬学研究部 疾患病理学分野 教授
15:45〜16:05（座長 新井 克彦：東京農工大学農学部付属硬蛋白質利用研究施設 教授)
食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明・・・・・・・・・・・・・・・・・35
林田 直樹
山口大学大学院 医学系研究科 医化学分野 講師
16:05〜16:25（座長 立花 宏文：九州大学大学院農学研究院 主幹教授)
魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発・・・・・・・・・・43
松永 佳世子
藤田医科大学 教授-----（休憩）16：25 から 16：40（D ルームでポスター掲示中）-----

16:40〜17:00（座長 楠 隆：滋賀県立小児保健医療センター 小児科主任部長)
ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発・・・・・・・・・・・・・・・・・58
松本 健治
国立成育医療研究センター研究所 感染研究部 部長
17:00〜17:20（座長 倉園 久生：徳島大学 研究支援・産学官連携センター副センター長)
食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・65
村田 幸久
東京大学大学院農学生命科学研究科 応用動物科学専攻 准教授

2

17:20〜17:40（座長 森山 達哉：近畿大学農学部 教授)
ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて・・・・69
森田 栄伸
島根大学医学部皮膚科学講座 教授

17:40

閉会挨拶
一色 賢司
一般財団法人日本食品分析センター 学術顧問
北海道大学名誉教授
公益財団法人ニッポンハム食の未来財団 理事・研究助成審査委員長

17:45

写真撮影

評議員・役員・研究助成委員名簿・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・77

当財団案内・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・79

3平成30年度研究助成事業

個人研究助成〈ポスター発表〉
要旨※報告書全文は当財団Webサイトに掲載予定

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 01】
食物アレルギー児の食事指導における葛根湯併用の耐性誘導獲得効果の検討

フリガナ

イトウ

代表者名

伊藤

ヤスノリ
靖典

所属機関（機関名）富山大学医学部小児科（役職名）助教

本助成金による発なし
表論文，学会発表

研究結果要約
食物アレルギーの管理・治療としては、必要最低限度の除去を行い、自然な耐性獲得を待つのが主たる方針であるが、耐性獲得の見込めない重症食物アレルギー児も存在する．経口的摂取による経口免疫寛容誘導が近年注目されているが 1)、病理学的・免疫学的メカニズムについては、明らかになっていな
い点が多く、免疫寛容を適正に誘導することができれば、多くの食物アレルギー患者の救いとなる．
葛根湯は、感冒症状で使用される代表的な漢方薬であるが、研究指導者の山本らによりマウス食物アレ
ルギー病態モデルにおける葛根湯の食物アレルギーの発症抑制効果が報告され、これらの研究結果より
葛根湯が食物アレルギー患者に対する経口免疫寛容の治療手段となりえる可能性が明らかとなった 2-4)．
今回、ヒトの食物アレルギー患者に対して、葛根湯を併用した食事指導による治療効果を検討するために、当院にて単施設の葛根湯併用有無による非ランダム化比較試験を計画した．食物負荷試験結果に基づき食事指導を行い、6 ヶ月間葛根湯の内服を併用し、その後の食物負荷試験による閾値変化を評価することを主評価項目としている．2017 年より承認を得て開始し、目標症例数 60 例（葛根湯内服群・非内服群各 30 症例）とした．2019 年２月末現在 21 名登録（内服 11 名、非内服 10 名）しており、現在も臨床研究遂行中である．現在のところ重篤な有害事象なく経過しており、今後更に症例を登録して臨床的効果について検討してく予定である．

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 02】
母親の腸内環境が胎児の出生後の食物アレルギー発症に及ぼす影響の解析

フリガナ

ウエバンソウ

代表者名

上番増

タカシ

喬

所属機関（機関名）徳島大学大学院医歯薬学研究部（役職名）特任助教

予防環境栄養学分野

本 助 成金 によ る 発なし
表論文，学会発表

研究結果要約ヒトの腸管内には、多種多様な細菌が生息し個々に独自の腸内細菌叢を形成している。腸内細菌叢は摂取した食物を分解・利用する過程で独自の代謝産物を産生する。産生された代謝産物は近傍の細菌だ
けでなく宿主に吸収されて作用する。そのため、様々な疾患に腸内細菌叢が関与することが明らかとなってきている。本研究では、母親の腸内細菌叢の違いが、産まれてくる次世代、次々世代の将来の疾病リスクに及ぼす影響を明らかにすることを目的に、近年、患者数が増加している食物アレルギー疾患を対象モデルとして検討した。母親マウスに対して抗菌薬を投与すると、腸管内の代謝動態が変動し、特に遺伝子のメチル化に関与する代謝産物濃度が変化した。この母親マウスから産まれた仔において腸内細菌叢のα多様性の低下が見られた。しかしながら、食物アレルギー試験において有意な違いは認められなかった。仔マウスを交配し、孫マウスを作出し、食物アレルギー試験を行った結果、抗菌薬群において、アレルギーの強度は対照群と差はないもののアレルギー発症頻度が高値を示した。仔マウス、孫マウスの食物アレルギー試験の過程で、新規環境下における糞便排出数を観察した結果、仔マウスにおいても孫マウスにおいても糞便排出数が高値を示した。糞便排出数は、腸管の運動性やストレスの強度と関係することが報告されており、今後血中コルチゾール等のストレスマーカーも検討していく予定である。

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 03】
新入大学生を対象とした成人食物アレルギー調査研究

フリガナ

オカダ

代表者名

岡田

ユウキ
祐樹

所属機関（機関名）昭和大学医学部小児科学講座（役職名）助教

本 助 成金 によ る 発 第 55 回 日本小児アレルギー学会（2018 年 10 月 岡山）
表論文，学会発表 2019 年韓国小児アレルギー学会（KAPARD）（2019 年 5 月 韓国ソウル）

研究結果要約【背景】近年食物アレルギー(以下 FA)の有病率増加に伴い成人期の FA 有病率も増加傾向にあると予測されるが、その実態は十分には解明されていない。
【目的】小児から成人への移行期である若年成人期の FA 有病率や特徴を明らかにする。
【方法】1 次調査として、2018 年度に昭和大学に入学した新入学生全員を対象にアンケートを行い、自己申告に基づく食物除去割合及び医師診断に基づく FA 有病率を算出した。2 次調査として病型や発症年齢等さらに詳しいアンケートを、3 次調査としてアレルギー専門医による構造化面接及び皮膚プリックテストを行い、FA 群、FA 疑い群、非 FA 群に分類した。4 次調査として、FA 疑い群に分類された対象に対し食物傾向負荷試験(以下 OFC)にて診断を確定した。
【結果】1 次調査では 602 名中、593 名から回答を得た（平均 18.3±0.7 歳、男性 35.4%）。現在何らかの食物除去を行っている対象は 63 名(10.6%)、医師に食物アレルギーと診断されている対象は 30 名
(5.1%)であった。2 次及び 3 次調査の解析対象となった 36 名のうち、食物アレルギー群は 10 名、食物アレルギー疑い群は 20 名であった。4 次調査の結果、OFC に基づく FA 有病率は 2.0%であった。
【結語】本調査では 3 つの疾患定義（自己申告の食物除去、医師診断に基づく FA、OFC に基づく FA）
による FA 有病率を算出した。今後の成人 FA 診療の基礎情報としてさらに調査を進めていきたい。

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 04】
経口免疫療法によるエフェクター細胞の形質変化の誘導機序の解析

フリガナ

クラシマ

代表者名

倉島

ヨウスケ

洋介

所属機関（機関名）東京大学 医科学研究所（役職名）特任准教授

国際粘膜ワクチン開発研究センター

1.Kurashima Y et al., Front Immunol 2019 in press
2.倉島洋介 他、臨床免疫・アレルギー科 in press
3.3rd Annual Symposium for the Center for Mucosal Immunology, Allergy and
Vaccine Development, Kurashima Y. 「Orally-desensitized mast cells acquired
regulatory characteristics for the control of allergy」(San Diego, US) 2019 年 2 月
4.第 47 回日本免疫学会学術集会, Kurashima Y., Takasato Y., Kiuchi M., Hirahara K.,
本 助 成金 によ る 発 Murasaki S., Kunisawa J., Kubo M., Uematsu S., Nakayama T., and Kiyono H.
「Orally-desensitized mast cells acquired regulatory characteristics for the control
表論文，学会発表
of food allergy」 (福岡) 2018 年 12 月(Oral)
5.第 55 回日本消化器免疫学会, Kurashima Y. 「Purinergic regulation of mast cells
for symbiosis and elimination」 (福岡) 2018 年 12 月
6.第 67 回日本アレルギー学会学術大会 シンポジウム, Kurashima Y. 「Bringing
mast cells over to our side to overcome allergy」(千葉) 2018 年 6 月
7.第 22 回腸内細菌学会 (奨励賞受賞講演), 倉島洋介. 「共生と排除を司る粘膜マス
ト細胞の研究」(東京) 2018 年 6 月
研究結果要約
食物アレルギーは乳幼児に好発し、10 歳以上での寛解率は極端に低くアナフィラキシーといった重篤な症状を呈する疾患である。抗原の除去と抗ヒスタミン薬の投薬が主たる対症法であり、治療法としては近年、抗原を徐々に増量しながら継続的に摂取するといった免疫療法が注目を集めている。しかしな
がら、現在の免疫療法での治療成功率は 2 割程度にすぎず、重篤な副作用も多々報告されている。これは適したマウスモデルが存在せず、基礎的な知見が乏しく免疫療法の作用機序が不明瞭であることに起因すると考えられる。これまで、アレルギー免疫療法の解析は主にヒト末梢血を用いた解析が中心であり、食物アレルゲンに直接触れる粘膜面での免疫細胞の構成や挙動についての解析はされていない。そこで我々は、独自で開発した鶏卵白アルブミンをアレルゲンとする食物アレルギー・免疫療法マウスモ
デルを構築し、マウスモデルを用いて経口免疫療法の粘膜免疫学的機序の解析を行った。そして新たに、
食物アレルギーのエフェクター細胞であるマスト細胞の性質の変化が免疫療法による治療効果に関係している可能性を見出した。つまり、免疫療法による寛容誘導には、アレルギー誘発因子として働くマスト細胞に対して、免疫療法によって低活性化且つ免疫反応を抑制する性質を付与することが重要であることが示された。in vitro、in vivo の実験系を駆使し、マスト細胞の機能的変化の誘導機序が明らかとなった。

8公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 05】
新規生理活性物質 SCGB3A2 の食物アレルギー改善薬としての検証

フリガナ

クロタニ

代表者名

黒谷

レイコ

玲子

所属機関（機関名）国立大学法人（役職名）准教授

山形大学

発表論文：なし
本 助 成金 によ る 発学会発表：第 66 回日本栄養改善学会学術集会「SCGB3A2 による食物アレルギー改表論文，学会発表
善効果の検証」2019 年 9 月 5 日-9 月 7 日

研究結果要約
食物アレルギー罹患者とその家族の QOL の向上のために，我々が注目する SCGB3A2 が腸における抗炎症剤として開発につなげたい。我々は，SCGB3A2 の種々の呼吸器疾患における機能を解明し，SCGB3A2 がアレルギー薬として有効であることを示してきた。肺で産生・分泌される SCGB3A2 の機能は，肺に限定されると考えていたが，SCGB3A2 は血中にも存在することから，肺以外のアレルギーに対しても効果があると期待した。そこで，SCGB3A2 の腸における抗炎症作用の検証を目的として，
Scgb3a2-WT と Scgb3a2-KO マウスを用いて OVA による食物アレルギーモデルを作製し，直腸温測定と腸組織観察を行った。食物アレルギーモデルマウスの直腸温は Scgb3a2-WT に比べて Scgb3a2-KO マウ
スで低下し，回復しなかった。また，腸組織観察では，Scgb3a2-WT に比べて Scgb3a2-KO マウスでの炎症や細胞破壊の悪化が認められた。これらの結果，SCGB3A2 は腸の炎症においても重要な役割をもつ
ことが示唆された。また，SCGB3A2 の腸での効果には，マクロファージを介する可能性も見出された。
これらの結果は，SCGB3A2 が肺以外の臓器でも抗炎症薬としての可能性を示した点で意義のある結果である。本研究の発展は，SCGB3A2 の腸組織における炎症抑制効果のメカニズムを解明する可能性も高い。

9公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 06】
魚類アレルゲン（パルブアルブミン）のデータベース構築に向けた基礎的研究：
多魚種にわたる魚類アレルゲン含有量および免疫化学的性状の解明

フリガナ

コバヤシ

代表者名

小林

マサヒロ

征洋

所属機関（機関名）国立大学法人東京海洋大学（役職名）助教

本 助 成金 によ る 発
表論文，学会発表

研究概要説明魚類アレルギーの主要アレルゲンはパルブアルブミンであり、アレルギー症
状は魚肉中のパルブアルブミン含有量に依存する。そこで、様々な魚種についてパルブアルブミンを定量するとともに、アレルゲン性、抗原交差性およびア
ミノ酸配列の解析を行う。これにより、アレルゲン性の解釈や含有量データベースの作成に必要な情報を取得し、加工食品の表示制度の是正や医療従事者等による患者への食事指導に貢献することを目的とする。

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 07】
新規アナフィラキシー治療薬の開発－ビオチニル化ペプチドの有効性評価－

フリガナ

サトウ

代表者名

佐藤

アキラ
陽

所属機関（機関名）医療創生大学（旧 いわき明星大学）薬学部（役職名）准教授

衛生薬学部門【学会発表】
・佐藤 陽, 蝦名敬一, ビオチニル化ペプチドの新規アナフィラキシー治療薬としての有効性評価, 一般学術発表（ポスター）, 日本薬学会第 139 年会, 2019 年 3 月
本 助 成金 によ る 発
23 日, 千葉.
表論文，学会発表【論文】
・ Akira Sato, Keiichi Ebina, A biotinylated peptide, BP21, alleviates
hypotension in anaphylactic mice, J. Pept. Sci., submitted.
研究結果要約
血小板活性化因子（platelet-activeting factor: PAF）は、アナフィラキシーの発症に関与する脂質
メディエーターとして知られており、その活性を抑えることで致死的なアナフィラキシーを予防、改善できる。最近私達は、PAF 結合特異性ビオチニル化ペプチド（特許第 5982676 号）が、アナフィラキシー・ショックによる体温低下や血管透過性亢進を顕著に抑制することを疾患モデル動物を用いて明らかにしてきた。本研究では、ビオチニル化ペプチドのアナフィラキシー治療薬としての実用化を目指して、疾患モデル動物を用いて、本ペプチドのアナフィラキシー症状に対するさらなる有効性を調べるとともに、現在のアナフィラキシー治療における第一選択薬のアドレナリンと、本ペプチドの効果を比較した。
その結果、本ペプチドの一種 BP21 が、アナフィラキシーによる血圧低下を用量依存的かつ顕著に抑制
し（特に投与から 20 分以内）、特に高用量では血圧を上昇させた。一方、アドレナリンは、血圧低下を抑制する（高用量では血圧上昇を起こす）が、体温低下を抑制しなかった。さらに、低用量の BP21-ア
ドレナリン併用は、アナフィラキシーによる体温低下および血圧低下に対して顕著な抑制効果を示した。
以上より、BP21 を含むビオチニル化ペプチドは新規アナフィラキシー治療薬として、単独もしくはアドレナリンとの併用により有用であると考えられた。今後は、本ペプチドの安全性や体内動態など臨床研究に向けたさらなる研究を進めていきたい。

11公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 08】
急速経口免疫療法後に残存する運動誘発症状の機序に関する検討—生体内における好塩基球活性化の可能性—

フリガナ

スギウラ

代表者名

杉浦

シロウ

至郎

所属機関（機関名）あいち小児保健医療総合センター（役職名）アレルギー科 医長
本研究の結果は平成 31 年 6 月に開催される第 68 回日本アレルギー学会学術大会に本助成金による発 おいて、
「アレルゲン摂取後の運動誘発における生体内好塩基球活性化の検出に関す
表論文，学会発表 る検討」の演題名で、代表者と同施設のスタッフが発表予定である。また英語論文の作成中である。
研究結果要約[目的]
経口免疫療法後に抗原摂取のみでは症状が誘発されず、摂取後の運動により誘発されるアレルギー症状（運動誘発症状）及び食物依存性運動誘発アナフィラキシー (food-dependent exercise-induced
anaphylaxis, FDEIA)は抗原摂取後に生体内で subclinical な好塩基球活性化が存在し、運動によってこれが顕性化することを仮説とし、これを検証することが本研究の目的である。本研究はこれらの疾患の病態解明の一助となると考えられる。
[方法]
経口免疫療法後の運動誘発症状(n=20)もしくは FDEIA(n=3)が疑われる計 23 人の対象者（年齢 8.3 15.0 歳、抗原：卵・乳・小麦・ピーナッツ・ゴマ）に対して抗原摂取後の運動(運動誘発試験)を施行し、その前後で継時的に採血を行なった。運動誘発試験は十分量の抗原摂取 30 分後に 2km、20 分程度のランニングを行なった。抗原摂取前、摂取 30 分後、運動後、症状誘発時に末梢血全血を採取し、採取後は抗原刺激を加えず、Allergenicity kit®を用いて CD203c 及び CD63 を指標とした好塩基球の活性化を評
価した。
[結果]
運動誘発試験陽性者は 11 人で、アナフィラキシーを 3 人に認めたがアナフィラキシーショックは認められなかった。運動誘発試験陽性者陰性者共に、抗原摂取前後において末梢血活性化好塩基球割合に有意な変化を認めなかった。また、FDEIA を含む運動誘発症状出現時の末梢血活性化好塩基球割合は症状出現前と比較し有意な変化を認めなかった。運動誘発症状及び FDEIA には末梢血好塩基球が関与していない可能性が示唆された。

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 09】
食物アレルギーに対する舌下免疫療法の有効性の検証と作用機序の解明

フリガナ

タカギ

代表者名

高木

ヒデアキ
秀明

所属機関（機関名）宮崎大学医学部医学科感染症学講座免疫学分野（役職名）助教

本助成金による発表論文，学会発表

1 高木秀明、宮永宣明、宇都倫史、深谷知宏、奈須遵太、福井丈仁、佐藤克明. Crucialrole of conventional dendritic cells in the protective effect of sublingual
immunotherapy (SLIT) on allergic disorders. 第 46 回日本免疫学会総会・福岡・
2018
2 宮永宣明、高木秀明、宇都倫史、深谷知宏、奈須遵太、福井丈仁、佐藤克明.
Tolerogenic function of conventional dendritic cells in the protective
effect of sublingual immunotherapy (SLIT) on allergic disorders. 第 46 回日本免疫学会総会・福岡・2018

研究結果要約
食物アレルギーの治療では他のアレルギー疾患と同様に副腎皮質ステロイドホルモン、免疫抑制剤、抗アレルギー薬などを用いた対処療法に留まり、アナフィラキシーショックの治療ではエピネフリンのみ有効である。このため、食物アレルギーに対する予防的な治療法の確立が急務となっている。一方、減感作療法は免疫反応の是正を目指したアレルギー疾患に対する根治的治療法として知られているが、体内へのアレルゲンの投与は皮下投与（皮下免疫療法）であるために副作用としてのアナフィラキシー
ショックの発症が常に危惧され問題となる。近年では、スギ花粉症とダニアレルギー性鼻炎に対する新
しい減感作療法である舌下免疫療法の治療効果が判明しつつあり、皮下免疫療法よりもアナフィラキシーショックの発現率が著しく軽減していることが報告されているが、その作用機序は未だ不明な点が多く、食物アレルギーに対する効果も不明であった。
本研究では、食物アレルギーに対する安全性の高い根治的予防法の開発を目的として、舌下免疫療法の有効性を検証し、その作用機序について免疫反応の司令塔として作用する樹状細胞（DCs）の機能に着目し検討を行った。その結果、舌下免疫療法は食物アレルギーに対して予防効果を示すこと、さらにその予防効果の獲得に顎下リンパ節移動性 CD11b+DCs が重要な役割を果たすことが明らかとなった。

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公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 10】
アナフィラキシー低血圧時の交感神経興奮を惹起する脳内機構の全容解明

フリガナ

タニダ

代表者名

谷田

マモル
守

所属機関（機関名）金沢医科大学（役職名）准教授

医学部

生理学Ⅱ講座

発表論文
1, Kuda Y#, Tanida M#*, Chen F, Kurata Y, Shibamoto T. Anaphylaxis
stimulates afferent vagal nerve activity and efferent sympathetic nerve
activity in the stomach of anesthetized rats.
Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2019 in press, # equal contribution,* Corresponding author
2, Tanida M*, Zhang T, Sun L, Song J, Yang W, Kuda Y, Kurata Y, Shibamoto
本 助 成金 によ る 発
T. Anaphylactic hypotension causes renal and adrenal sympathoexcitaion and
表論文，学会発表
induces c-fos in the hypothalamus and medulla oblongata.
Exp Physiol. 2018 Jun;103(6):790-806. * Corresponding author
学会発表
1, Mamoru Tanida, Sympathetic regulation in anaphylactic shock or feeding
suppression. The 9th FOPS 2019, Kobe, Japan March 29
2, 谷田 守、アナフィラキシーショック時の交感神経調節機構、第 33 回日本 shock
学会総会シンポジウム、東京、2018 年 6 月
研究結果要約
アナフィラキシーが惹起されると、低血圧や呼吸困難など重篤な状態へ発症することが多い為、迅速に対応できる治療法の開発が急務である。我々の先行研究において、ラットを卵白アルブミンで感作させて抗原投与でアナフィラキシーを惹起させると交感神経腎臓枝と腰椎枝が活性化することを見出している。交感神経系の調節機構として、脳・延髄の神経核（弧束核-延髄腹外側部）を経由する動脈圧受
容器反射経路や、自律神経調節部位や脳・視床下部が存在するが、アナフィラキシー時に脳内でどのような調節経路が関与しているかよくわかっていない。そこで、本研究はラットにおいてアナフィラキシ
ー低血圧時における交感神経系制御機構を明確にすることを目的に、脳内での神経連絡網を同定することを試みた。
その結果、脳内の視床下部室傍核、延髄孤束核、吻側延髄腹側野及び尾側延髄腹側野における c-fos
陽性細胞数が増大していた。さらに延髄 GABA シグナルやカテコラミンニューロンなどの関与も認めた。
今後は、視床下部と延髄の連絡経路をより詳細に同定することや分子経路の探索を行うことで、アナフィラキシーによる交感神経活性化作用の脳内機構の全貌を明らかにすることが期待される。

14

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 11】
低アレルゲン化食品を用いた魚アレルギーに対する新規治療法の開発

フリガナ

ナカジマ

代表者名

中島

ヨウイチ

陽一

所属機関（機関名）藤田医科大学医学部小児科学（役職名）講師

本助成金による発
未表論文，学会発表

研究結果要約
多魚種に対する魚アレルギー患者は魚全般の除去を指示される場合もある。魚はビタミン D の主要な供給源であり、魚全般の除去によりビタミン D 欠乏性くる病を発症した報告もあるため、魚アレルギー患者が摂取できる魚を増やすことは栄養面でも重要と考えられる。魚アレルギーは卵や小麦、乳などと比べて自然耐性獲得しにくいとされており、多魚種にアレルギーがある重症な患者では治療的介入が必要と考えている。
食物アレルギーの治療として経口免疫療法の有効性が報告されているが、安全面の課題が多く、研究段階の治療と位置づけられている。経口免疫療法の安全面での問題を改善するための手法として、我々は以前から鶏卵にて低アレルゲン化食品を用いた治療を行ってきた。本研究では、多魚種にアレルギーがある患者に対する治療として、一般に市販されている食品酵素を用いてサケを低アレルゲン化処理した粉末を作成した。7 名の患者での Pilot study にて有効性と安全性が確認されている。この低アレル
ゲン化食品での治療の有効性と安全性を確認するため多施設共同ダブルブラインドランダム化プラセ
ボ比較試験を行うこととした。全国の 7 施設での患者登録をすすめている段階である。

15

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 12】
新生児・乳児消化管アレルギーの診断にむけた革新的検査法の開発

フリガナ

ヤギ

ヒサコ

代表者名

八木

久子

所属機関（機関名）群馬大学大学院医学系研究科医科学専攻小児科学分野（役職名）医員大学院生

・Allergology International 誌に投稿中
本助成金による発
・第 56 回日本小児アレルギー学会学術集会（2019 年 11 月）での発表、およびもう
表論文，学会発表
一編、海外誌への論文投稿を予定している。

研究結果要約
新生児・乳児消化管アレルギーは、臨床症状が多様であり、一般のアレルギー疾患と異なり特異的 IgE抗体が検出されないことより診断は容易ではない。アレルゲン特異的リンパ球刺激検査(ALST）は、本疾患の補助的診断になり得るが、新鮮末梢血が多量に必要であること、培養時間が長いことなどの問題点がある。これらを克服し迅速、簡便、かつ少量の採血量で実施可能な定量的 PCR 法を利用した新規診断法の確立を目的とした。
乳の消化管アレルギー児と疾患対照児の末梢血全血を採取し、4 種類の牛乳アレルゲンコンポーネントの混合物（Pmix）または α カゼインで 24 時間刺激した。その後、マイクロアレイによる網羅的遺伝子
発現解析により発現が有意に変化する遺伝子を同定した。Pmix 刺激では 232 遺伝子、α カゼイン刺激では 9 遺伝子が患者群特異的に変化し、そのうち 4 遺伝子は両刺激に共通していた。アレルギー性炎症に関わる既知遺伝子も含まれていた。次に、同定された遺伝子を本検査法のマーカー候補とし、各マーカ
ーの mRNA 発現量を定量的 PCR 法で測定し、ALST 法や臨床診断との関連を検討した。ALST 法との相関がみられ、臨床診断能の高いマーカーを見出した。以上より、本検査法は消化管アレルギーの補助的診断において有用である可能性が示された。

16

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 13】
独自の機能性ペプチドを用いた食物アレルギーに対する根治療法の開発

フリガナ

ヨシオカ

代表者名

吉岡

ヤスオ

靖雄

所属機関（機関名） 大阪大学 微生物病研究所（役職名） 特任准教授（常勤）本助成金による発表
該当無し
論文，学会発表

研究結果要約
食物アレルギーなどのアレルギー疾患は、非自己の抗原に対して免疫機能が異常活性化する免疫疾患であり、未だ、有効な根本的治療法に乏しい現状にある。食物アレルギーでは、食物抗原特異的な IgE抗体が産生された後、抗原との複合体がマスト細胞を活性化させることでアレルギー症状を呈することから、抗原特異的 IgE の産生を抑制する、もしくは、マスト細胞の活性化を抑制することが、予防・治療に重要と考えられている。そこで本研究では、独自に創成した、樹状細胞に結合する 2 種類の機能性ペプチドを用い、食物抗原に対する免疫応答の改変による治療法開発に関する基礎検討を実施した。まず、卵アレルギーの主要抗原であるニワトリ卵白アルブミン（OVA）由来の抗原ペプチドに機能性ペプチドを付与したうえで、CpG 核酸と共に皮下投与することで、OVA 特異的 IgG2 の産生を伴う Th1 型免疫応
答を強力に誘導することに成功した。食物アレルギーモデルマウスにおける有用性を未だ詳細には評価できていないものの、免疫応答の改変によるアレルギー症状の軽減に向けた基盤技術になり得るものと期待される。また、他の抗原を用いた検討から、免疫寛容を誘導し得る可能性が見出されていた機能性ペプチドについて、OVA 由来ペプチドを用いて免疫寛容の誘導を評価した結果、期待される効果を得ることができなかった。本結果については、より詳細な解析の必要があるものと考えられた。

17

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
平成 30 年度研究助成事業 個人研究助成 ポスター発表要旨

研究課題名【ポスター番号 14】
新規脱顆粒インディケーターを用いたアレルゲン検出システムの構築とその応用

フリガナ

ヨシカワ

代表者名

吉川

ソウイチロウ宗一郎

所属機関（機関名）東京医科歯科大学医歯学総合研究科（役職名）助教

免疫アレルギー学分野

1. *Yoshikawa, S., Oh-hora, M., Hashimoto, R., Nagao, T., Peters, L., Egawa
M., Ohta, T., Miyake, K., Adachi, T., Kawano, Y., Yamanishi, Y., andKarasuyama, H.: Pivotal role of STIM2 but not STIM1 in IL-4 productionbyIL-3-stimulated
murinebasophils. Sci.
Signal. 12,576,
2019. (*:corresponding author)
本 助 成金 によ る 発
2. Tabakawa, Y., Ohta, T., *Yoshikawa S., Robinson, EJ., Yamaji, K.,
表論文，学会発表
Ishiwata, K., Kawano, Y., Miyake, K., Yamanishi, Y., Ohtsu, H., Adachi,T., Watanabe, N., Kanuka, H., and Karasuyama, H.: Histamine released
from skin-infiltrating basophils but not mast cells is crucial for
acquiredtickresistanceinmice. Front.
Immunol. 3;9:1540, 2018.(*:corresponding author)

研究結果要約
近年我が国では、アレルギーを有する患者が年々増加しており、その予防と対策が急がれている。アレルギーには、イムノグロブリン E（IgE）とアレルゲンによってマスト細胞が活性化することで引き起こされる、「脱顆粒」という免疫現象が深く関わっているが、正確で簡便にアレルゲンを検出でき、さらにはその脱顆粒を正確に評価することのできるツールはほとんど存在していなかった。さらに、生体内でマスト細胞の脱顆粒を検出する方法は皆無であったため、食物アレルギー発症モデルマウスなどにおいて、生体内のマスト細胞がアレルゲン摂取後に、どういったタイミングでどこのマスト細胞が脱顆粒しているのかをリアルタイムで検出することは困難であった。近年我々は、マスト細胞の脱顆粒を蛍光によって評価できるインディケータータンパク質、impH を開発した。本研究では impH を応用させることで、ヒトのマスト細胞の脱顆粒を評価することができるツールの開発を行なった。さらに、impH をマ
ウス生体内のマスト細胞に発現させることで、食物アレルギー時のマスト細胞の脱顆粒の様子を生体イ
メージングで観察することにも成功した。本研究で完成させたツールは、アレルゲン検出や抗アレルギ
ー薬のスクリーニングを簡便で安価に行うことができる、画期的なツールであると考えられる。

18

平成30年度研究助成事業

共同研究助成〈口頭成果報告〉
要旨

研究結果要約
研究目的
研究計画及び研究手法
結果と考察
今後の研究活動について
参考文献

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抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

研究課題名

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

フリガナ

キタウラ

代表者名

北浦

ジロウ

次郎

所属機関（機関名）順天堂大学大学院医学研究科アトピー疾患研究センター（役職名）先任准教授
氏
共同研究者

名（フリガナ）

瀬藤光利（セトウミツトシ）

所属機関・役職名
浜松医科大学・教授

役割分担
組織における脂質分析

本 助 成金 によ る 発
現在、国際雑誌への論文投稿準備中である。
表論文，学会発表

研究結果要約
近年増加の一途をたどる食物アレルギーは国民の健康を脅かす大きな社会問題である。本助成研究の目的は、ミエロイド系細胞に発現する受容体 CD300f が食物アレルギーを抑制するメカニズムの全容を明らかにすること、さらに CD300f のリガンドであるセラミド vesicle の投与が食物アレルギーの予防と治療に有効であることを証明することである。本助成研究の意義は、食物アレルギーの画期的な予防・治療法を開発するための分子基盤を形成することにある。本助成研究により、CD300f は IgE とマスト細胞に依存する食物アレルギーの病態形成を抑制することが明確になった。また、CD300f には IgE と抗原による小腸マスト細胞の活性化を抑制する作用と直接・間接的に Treg 誘導を促進する作用及び Th2 誘
導を抑制する作用があることが示され、それらの複合作用が食物アレルギーの病態形成を抑えると考えられた。さらに、CD300f とそのリガンドであるセラミドの結合を阻害すると野生型マウスの食物アレル
ギー症状は悪化し、CD300f リガンドを組織で増加させるセラミド vesicle の投与は食物アレルギー症状を軽減させることが明らかになった。従って、CD300f は食物アレルギーの予防・治療における有望な分子標的であることが示唆された。今後、CD300f リガンドを利用した食物アレルギーの予防・治療法開発が期待される。

20

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

研究目的の画期的な予防・治療法開発につながり、本助成

安全で豊かな食生活は健康長寿社会の実現に研究は大きな意義をもつことになる。

不可欠であるが、近年増加の一途をたどる食物ア
レルギーは国民の健康を脅かす大きな社会問題

研究計画及び研究手法である。マウスモデルの解析により、食物アレル①定常状態のマウスの小腸から粘膜固有層の細ギー（特に、IgE 依存性の食物アレルギー）のメ

胞 を 分 離 し て 、 各 種 抗 体 で 染 色 し て flow

カニズムの解明は大きく進んだが、その成果は必

cytometry で 解 析 す る 。 小 腸 粘 膜 固 有 層 のずしも予防・治療法の開発に直結していない。基

（ FcRI+c-Kit+ ） マ ス ト 細 胞 、（ Lin-c-

礎研究により食物アレルギーのメカニズムを理

Kit+ST2+integrin 7+）mast cell progenitor

解した上で画期的な予防・治療法を開発すること（MCP）、（Lin-c-Kit+ST2+ integrin 7-）IL-9

が本研究において取り組むべき課題である。研究producing mucosal mast cell（MMC9）におけ

代表者は食物アレルギーのエフェクター細胞でる CD300f の発現レベルを解析する。また、小あるマスト細胞が IgE と抗原により活性化され腸 粘 膜 固 有 層 の 細 胞 を 抗 CD11b 抗 体 と 抗る機序とそのアレギー反応を抑制する生体内のCDD11c 抗 体 で 二 重 染 色 し た う え で仕組みに関して研究を続けてきた。その過程で、、（CD103+CD11b+）（CD103+CD11b-）樹状細胞（DC）

マスト細胞に発現する受容体 CD300f（別名 LMIR3）

DC、マクロファージ、好酸球における CD300f のが脂質セラミドに結合してアレルギー反応を抑発現レベルを解析する。

制することを明らかにした（Immunity, 2012）。
１）②野生型及び CD300f 欠損マウス（BALB/c）に対

そこで、本助成研究の目的は、CD300f が食物アしてオボアルブミン（OVA）(100 g)と（アジレルギーを抑制するメカニズムの全容を明らかュバントである）Alum（1 mg）を腹腔投与（Dayにすること、さらに CD300f のリガンドであるセ

0, 14: 2 週間間隔で計 2 回）する。その 2 週

ラミド vesicle の投与が食物アレルギーの予防

間後から、OVA（25 mg）を経胃管投与（Day 28-と治療に有効であることを証明することである。

38: 2 日間間隔で計 6 回）して重症の食物アレ

本研究助成の意義は、本研究助成の目的を達成

ルギーを誘導する。経時的に、食物アレルギーすることによって受容体 CD300f が食物アレルギ

症状（下痢・血便など）の有無を確認する。OVA

ーの予防・治療における有望な分子標的となる可の最終投与 24 時間後の血液、小腸を採取する。

能性を見出せることである。特に、CD300f のリガ

血清中の総 IgE 値、OVA 特異的 IgE 値、MCPT-1

ンドである脂質セラミドの vesicle の前投与が値を ELISA で測定する。小腸の組織切片を作製

食物アレルギーの症状を抑えることが示されれ

して chloroacetate esterase 染色をしてマス

ば、CD300f リガンドを利用した食物アレルギー

ト細胞数を計測する。重症の食物アレルギーモ

21

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

デルでは、マウスの小腸から粘膜固有層の細胞が誘導される。

を分離すると腸管粘膜の死細胞が多く flow
⑤マスト細胞欠損（KitW-sh/W-sh）マウスに OVA(100cytometry による解析は困難である。

g)と Alum（1 mg）を腹腔投与（Day 0, 14）し③野生型及び CD300f 欠損マウス（BALB/c）に対た後、野生型あるいは CD300f 欠損 BMMC（1 x

してオボアルブミン（OVA）(100 g)と（アジ106）を静脈注射（Day 20, 27: １週間間隔でュバントである）Alum（1 mg）を腹腔投与（Day計２回）する。その後、OVA（25 mg）を経胃管

0, 14: 2 週間間隔で計 2 回）する。その 2 週投与（Day 28-38: 2 日間間隔で計 6 回）して間後から、OVA（5 mg）を経胃管投与（Day 28-

食物アレルギーを誘導して、経時的に食物アレ

46: 2 日間間隔で計 10 回）して軽症の食物ア

ルギー症状（下痢・血便など）の有無を調べる。

レルギーを誘導する。経時的に、食物アレルギ
ー症状（下痢・血便など）の有無を確認する。

⑥野生型及び CD300f 欠損マウス（BALB/c）に対OVA の最終投与 24 時間後の血液、小腸、腸間膜

して OVA（100 g）と Alum（1 mg）を腹腔投与

リンパ節を採取する。血清中の総 IgE 値、OVA（Day 0, 14: 2 週間間隔で計 2 回）した後、特異的 IgE 値、MCPT-1 値を ELISA で測定する。

OVA（25 mg）を経胃管投与（Day 28-38: 2 日間

小 腸 の 組 織 切 片 を 作 製 し て chloroacetate

間隔で計 6 回）して食物アレルギーを誘導する。

esterase 染色をしてマスト細胞数を計測する。

その際、抗セラミド抗体あるいはコントロール

軽症の食物アレルギーモデルでは、マウスの小抗体（5 g）を腹腔注射（Day 27-37: 2 日間隔

腸から分離した粘膜固有層の細胞を各種抗体で計 6 回）する。経時的に食物アレルギー症状

で染色して flow cytometry で解析することが（下痢・血便など）の有無を調べる。

可能である。OVA の最終投与後の小腸粘膜固有層における D45+血球系細胞中のマスト細胞や⑦野生型及び CD300f 欠損マウス（BALB/c）に対MMC9 細胞の比率を測定する。また、粘膜固有層して OVA（100 g）と Alum（1 mg）を腹腔投与における CD4+T 細胞中の Foxp3+ Treg 細胞の比（Day 0, 14: 2 週間間隔で計 2 回）した後、率を測定する。

OVA（50 mg）を経胃管投与（Day 28-36: 2 日間間隔で計 5 回）して食物アレルギーを誘導する。

④野生型マウスあるいは CD300f 欠損マウスから

その際、Extruder で作製したセラミド vesicle

骨髄細胞を採取して、IL-3（10 ng/ml）の存在

あるいはコントロール vesicle（100 g）を静

下 で 5 週 間 培 養 す る と そ の 95 ％ 以 上 が脈注射（Day 28-36: OVA 投与の 2 時間前に 2 日

FcRI+c-Kit+マスト細胞となり、骨髄由来マス

間隔で計 5 回）する。１）経時的に、食物アレル

ト細胞（bone marrow-derived mast cell: BMMC）

ギー症状（下痢・血便など）の有無を調べる。

22

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

また、セラミド vesicle の投与前あるいは 1 回現したが、CD300f 欠損マウスでは野生型マウス

投与後のマウスの小腸や血清を採取してセラの場合と比較して下痢の発症が早く頻度も多ミドや類似脂質の量を質量分析装置で測定すかった。また、どちらのマウスでも OVA 摂取にる。

より血清中総 IgE 値、OVA 特異的 IgE 値、（粘膜型マスト細胞の活性化マーカーである）⑧野生型及び CD300f 欠損マウス（BALB/c）に対

MCPT-1 値の上昇や小腸組織中のマスト細胞増して OVA（100 g）と Alum（1 mg）を腹腔投与

加が認められた。しかし、CD300f 欠損マウスで（Day 0, 14: 2 週間間隔で計 2 回）した後、は野生型マウスの場合と比較して血清中総 IgE

OVA（25 mg）を経胃管投与(Day 28: 計 1 回)し値、OVA 特異的 IgE 値、MCPT-1 値の上昇や小腸て翌日（Day 29）に腸間膜リンパ節を採取する。

マスト細胞数の増加が顕著に高かった。

腸 間 膜 リ ン パ 節 の CD11c+B220- 細 胞 中 のCD103+CD11b+DC あるいは CD103＋CD11b- DC の比③食物アレルギーの軽症モデルでは、野生型マウ率を測定する(flow cytometry)。他方、腸間膜

スでは明らかな食物アレルギー症状（下痢）はリンパ節細胞を OVA 存在下で 4 日間培養して出現せず、CD300f 欠損マウスの約 40％にのみ産生される IL-4 や IL-5 量を測定する（ELISA）。

下痢が認められた。野生型マウスと比較してまた、CD4+ T 細胞中の Foxp3+ Treg 細胞の比率

CD300f 欠損マウスでは血清中 OVA 特異的 IgEを測定する（flow cytometry）。

の上昇や小腸組織におけるマスト細胞の増加が顕著に認められた。また、このモデルでは小結果と考察

腸組織の障害による死細胞の混入が少ないの

マスト細胞、①小腸粘膜固有層の（FcRI+c-Kit+）

で、分離した小腸粘膜固有層の細胞を flow

（Lin-c-Kit+ST2+integrin 7+ ）MCP、（Lin-c-

cytometry で解析することができた。
その結果、Kit+ST2+ integrin 7- ）、 IL-9 producing

野生型マウスと比較して CD300f 欠損マウスのmucosal mast cell（MMC9）に CD300f の発現が小腸粘膜固有層ではマスト細胞や MMC9 の比率認められた。
小腸粘膜固有層の CD103+CD11b+ DCが著しく高いかとが確認された。他方、どちらと好酸球には CD300f の発現が認められるが、のマウスでも OVA の経口摂取により小腸粘膜

CD103+CD11b- DC とマクロファージには CD300f

固有層 CD4+細胞中の Foxp3+Treg 細胞の比率はの発現が認められなかった。

低下するが、野生型マウスと比較して CD300f
欠損マウスでは Foxp3+Treg 細胞の比率の低下が有意に認められた。

②食物アレルギーの重症モデルにおいて、野生型
及び CD300f 欠損マウスは OVA 摂取回数が増え

これらの結果から、IgE とマスト細胞に依存するとともに食物アレルギーの症状（下痢）が出

23

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

ると考えられる食物アレルギーモデルにおいて、が得られた。小腸組織におけるセラミド及び類

２）

似脂質の解析については共同研究者が行い、現が増悪することが示された。また、CD300f 欠損マ

在、詳細な定量分析が行われている。

CD300f を欠損するマウスでは食物アレルギー

ウスでは小腸マスト細胞の増加と活性化亢進及び Th2 誘導の促進と Treg 誘導の抑制を示唆する

これらの結果から、食物アレルギーモデルにお結果が得られた。マスト細胞の CD300f は細胞外

いて、CD300f とセラミドの結合は小腸のマスト

セラミドと結合して IgE と抗原によるマスト細細胞の活性化を抑制して食物アレルギー症状を胞の活性化を抑えるので、１）食物アレルギーモデ

抑えると考えられた。

ルにおける小腸マスト細胞の CD300f とセラミドの役割を明確にする実験を行った。

⑦CD300f の Th2 誘導や Treg 誘導における役割を明らかにするために、OVA あるいは PBS（コン④作製した野生型及び CD300f 欠損 BMMC（④）をトロール）の経胃管摂取 1 回後の腸間膜リンパマスト細胞欠損（KitW-sh/W-sh）マウスに静脈注射節を解析した。その結果、OVA 摂取により野生してから同様の食物アレルギーを誘導した。そ型マウスの腸間膜リンパ節では（CD300f を発現の結果、野生型 BMMC と比較して CD300f 欠損マする）CD103+CD11b+ DC の比率が有意に増加す

ウスを投与されたマウスにおいて下痢の頻度

るが、CD300f 欠損マウスではその上昇が認めらが著しく多かった。

れなかった。他方、両マウスにおいて OVA 摂取
により（CD300f を発現しない）CD103+CD11b- DC⑤野生型マウスに（組織で CD300f と脂質セラミの比率は有意に変化しなかった。また、OVA にドの結合を阻害する）セラミド抗体を投与した

よる再刺激実験では野生型マウスと比較して場合、食物アレルギー（下痢）の頻度は著しく

CD300f 欠損マウスの腸間膜リンパ節細胞にお増加した。

いて、Th2 サイトカイン（IL-4 や IL-5）産生の亢進や Treg 細胞比率の低下が認められた。小

⑥野生型マウスに（組織で CD300f リガンドを増腸粘膜固有層の CD103+ DC は抗原を取り込み、加させる）セラミド vesicle を投与した場合、腸間膜リンパ節へ遊走して抗原特異的な Treg

食物アレルギー（下痢）の頻度は著しく減少し細胞を誘導すると考えられているので、 ３ ）た。他方、セラミド vesicle の投与は CD300f

CD300f は CD103+CD11b+ DC の腸管膜リンパ節へ欠損マウスの食物アレルギー（下痢）の頻度にの遊走を促して Treg 誘導を促進する可能性がは影響しなかった。セラミド投与後の小腸組織示唆された。他方、IgE と抗原によるマスト細をセラミド抗体で染色するとコントロール群胞の活性化や Th2 が Treg 誘導を抑制すること、と比較してセラミド量の増加を示唆する結果

逆に、Treg がマスト細胞の活性化や Th2 誘導

24

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発を抑制することも知られている。3)４）現時点に今後の研究活動について

おいて、CD300f が食物アレルギーを抑える機序

食物アレルギーに対するセラミド vesicle のにおいて、マスト細胞に発現する CD300f とそ

静脈投与が有効であることは明らかになった。セ

れ以外のミエロイド系細胞、特に CD103+CD11b+

ラミド vesicle の静脈投与による小腸組織におDC、における CD300f の相対的な役割を明確にけるセラミドあるいは類似脂質の量を質量分析することは難しかった。また、CD300f がどのよ装置で解析することにより、セラミド vesicle の

うに CD103+CD11b+ DC の腸管膜リンパ節への遊投与量や方法を改良できると思われる。また、そ走を制御するのかは今後の研究課題である。

の解析結果をもとに質量顕微鏡も利用して、セラ
ミド vesicle の静脈投与が小腸組織におけるセ

いずれにせよ、CD300f には食物アレルギーの病

ラミドあるいは類似脂質の動態に及ぼす影響を態形成を抑える作用があること、また、CD300f リ

明らかにして、治療法の開発につなげたいと考え

ガンドであるセラミドの vesicle の静脈投与がている。他方、安定した大量のセラミド vesicle

食物アレルギーの予防・治療に有効であることをの作製法が確立されると、さまざまな実験により明らかにした。本研究により本研究目的の大半を予防・治療効果を検討できるようになる。従って、達成することができた。今後、詳細な脂質分析のセラミド vesicle 自体の作製方法の改良も大き結果に基づき、セラミド vesicle の投与量や投与な課題の一つである。

方法の改良が期待される。それにより、経皮感作

CD300f が食物アレルギーの病態形成を抑制すによる食物アレルギーのモデルでも治療効果のる機序においてマスト細胞や CD103+CD11b+ DC に検討を行うことが可能になると思われる。セラミ発現する CD300f の相対的な役割を明確にするた

ド vesicle の作製方法を改良して大量の安定しめには、マスト細胞や DC 特異的に CD300f を欠損たセラミド vesicle を作製できれば、経口摂取のするマウスの解析が必要であり、現在、準備中で予防効果を検討することも可能になると考えらある。また、Treg などの抑制性 T 細胞による免疫れる。

寛容に CD300f がどのように関与するかは基礎研
究における大きな課題である。今後、各種遺伝子

本研究の途中結果は第 67 回日本アレルギー学

改変マウスを使用してそのメカニズムの解明に会（平成 30 年 6 月 22 日）や第 47 回日本免疫学

挑みたいと考えている。
会（平成 30 年 12 月 11 日）で発表され、当該研いずれにせよ、CD300f を標的とした食物アレ

究分野の研究者から注目を集めた。現在、本研究

ルギーの予防・治療法開発を目指した研究を継続

内容をまとめて国際雑誌への論文投稿を準備ししていく予定である。

ている。

25

抑制型受容体に着目した食物アレルギーの予防・治療法開発

induced diarrhea. J Clin Invest 2003

参考文献
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26

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

研究課題名

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

フリガナ

ツネヤマ

代表者名

常山

コウイチ

幸一

所属機関（機関名）徳島大学（役職名）教授
氏

共同研究者

大学院

医歯薬学研究部

名（フリガナ）

疾患病理学分野

所属機関・役職名

役割分担

市村

真祐子

徳島大学・助教

動物モデル作成菊池健太郎

帝京大学・准教授

免疫動態解析

守時

由起

秋田大学・特任講師

生化学的検査福島大学・教授

イメージング平修

本助成金による発 英文論文準備中
表論文，学会発表 学会報告予定（2020 日本病理学会総会、2020 Digestive disease week, USA）

研究結果要約
生活環境の変化に伴い食物アレルギー患者は増加傾向にある。アナフィラキシーで死に至るような重篤例から口腔不快感にとどまるものまで症状は個人差が大きいが、総じて患者や家族の QOL を大きく損なっている。
近年、食物アレルギーがアレルゲンの皮膚への曝露によって誘導されるという経皮感作説が注目されている。
我々は、成人の食物アレルギーで過半数を占めるとされる甲殻類アレルギーに注目し、主要アレルゲンである
エビトロポミオシン（ｒMet e1）の経皮感作による新規モデルマウスの開発に取り組んだ。まず、従来の経口負荷と同量の rMet e1 を経皮的に継続的に塗布したところ、経口負荷よりも血中 IgE 値が上昇することがわかった。次に、rMet e1 塗布時に皮膚のバリア機能を障害する操作を追加することで、皮膚局所に好酸球浸潤を伴う炎症が惹起され、血中 IgE 値が無処置よりも上昇することを明らかにした。なかでも、市販の皮膚塗り薬とともに rMet
e1 塗布した際の IgE 値上昇が顕著であり、経口抗原曝露では軽度のアナフィラキシー症状を呈した。このことか
ら、皮膚を保護する目的で使用した外用薬がかえって抗原の皮膚からの取り込みを促進している可能性が推測された。次に、新規モデルマウスにフラクトオリゴ糖を投与し、アレルギー状態が軽減するかどうかを検討した。フ
ラクトオリゴ糖投与群では IgE 値の上昇が抑制されており、腸内細菌叢を改善することでアレルギー状態が軽減する可能性が示された。

27

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

研究目的れておらず、モデル動物の確立は研究の推進に非生活環境の変化に伴い食物アレルギー患者は増常に有用である。さらに、経皮感作の程度を皮膚の加傾向にある。小児の食物アレルギーは成長ととも状態から検討することで、皮膚が置かれた環境がアに軽快することも多いが、成人で発症する食物アレ

レルゲンへの感作にどのような役割を果たしている

ルギーは難治性であり、QOL を大きく損なう要因となかを知る手がかりとなり、成人の経皮感作の予防にっている。成人の場合は対象物を避けるなどの対応

繋がる情報が得られると期待される。また、医療行為がしやすく、患者総数などの実態がなかなか表面化の対象になりにくい食物アレルギーを、プレバイオテ

していないが、形を変えた食事を誤って摂取してアィクスという食によって軽快できれば、潜在的な食物

ナフィラキシーに陥るなどの重篤例も報告されており、アレルギー患者にも取り入れやすい容易な方法となその対策が望まれている。成人の食物アレルギー患

り、QOL の改善に寄与することができる。これらの取者の上位を占めているのはエビ、カニ、イカなどの甲り組みは、食の問題を食で解決する画期的なもので

殻類アレルギーであり、そのアレルゲンとしてトロポミあり、その意義は大きいと考えられる。

オシンが同定された。我々はアメリカや香港の研究者と共同でエビトロポミオシンで経口感作したモデル

研究計画及び研究手法

動物を作成し、種々の解析を行ってきたが、コレラト

予備実験：

キシンによるアジュバントを用いるなど実際のヒトの患

エビアレルゲン（トロポミオシン）の作製

者とは発症機序に相違があるモデルであった。

エビアレルゲンであるトロポミオシン（rMet

近年アレルゲンに対する感作が腸管ではなく皮膚e1）は MTA を締結し、Chinese University of

で起こっているとの仮説が提唱された。経口免疫寛Hong Kong の Wai 博士に供与頂いた。そのタン容が皮膚からの曝露では生じないため、経皮感作でパク質は遺伝子組換えによって E.coli に発現さはより強い免疫反応が惹起され、食物アレルギー発せ、固定化金属イオンアフィニティークロマトグ症のトリガーとなっている可能性が推測される。経皮

ラフィーで精製したものである１）。それらの濃度

感作食物アレルギーモデル動物は未だ数が少ない

お よ び 純 度 は BCA protein assay (Thermo

ことから、本研究では、トロポミオシンの経皮感作モ

Fisher)を用いたタンパク質の定量および SDS-

デル動物の確立を第一の目的とした。さらに、確立さPAGE によって確認した（図１）。

れたモデル動物を用いて、皮膚局所の免疫学的な変化や成体内輸送経路について検証するとともに、
プレバイオティクスによる食物アレルギーの予防とそのメカニズムの解明に取り組んだ。
成人型食物アレルギーの半数以上を占める甲殻類アレルギーの経皮感作モデル動物は未だ確立さ28

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

実験１：
経皮感作による食物アレルギーモデルと同時に従来の経口感作によるモデル１）も作成して比較検証した（図２）。

実験２：
感作によって産生されるトロポミオシン特異的
IgE の増加を目的とし、皮膚バリアの破壊方法（tape-stripping 法、SDS 塗布法、抗生物質塗布法）を比較検討した（図３）。マウスおよび感作に用いた rMet e1 は実験１と同様である。感作は実験開始後 0、7、14、21 日目に実施した。
4 週齢雌性 Balb/c マウスを経口感作（IS）群、経皮感作（ES）群、およびそれらのコントロール群の 4 群に分けた。IS 群には胃ゾンデで rMet e10.1mg を投与し、ES 群には背中の皮膚に rMet
e1 0.1mg を塗布した。皮膚バリアの破壊には
tape-stripping 法を用いた。各コントロール群には rMet e 1 の代わりに PBS を用いた。感作は実験開始後 0、12、19、26 日目に行い、感作の 24
時間後に採血した。最後の感作から 1 週間後に
rMet e1 を胃ゾンデで経口負荷をした。経口負荷実験３：後、1 時間の間、基準に従ってアナフィラキシー

プレバイオティクスによる食物アレルギーの予および糞便を観察した（表１、２）。経口負荷の翌防効果を評価した。マウスおよび感作、経口負荷

日に解剖し、血液および臓器を採取した。

のスケジュールは実験１と同様である。プレバイ
オティクスにはフラクトオリゴ糖（FOS）を用い、5％添加した飼料を自由摂取させた（図４）。

29

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析（UHPLC-MS / MS）を用いて、酢酸（AA）、プ
ロピオン酸、酪酸（BA）、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、4-メチル吉草酸およびコハク酸（SA）などの短鎖脂肪酸（SCFA）の同時定量を行う方法を確立した 2,3,4）。実験１－３で組
織学的に顕著な変化を示した個体を選択し各個
体より 25μl の血清を採取し、凍結保存の上で同各実験における検索項目

法による SCFA 網羅的同時測定を検討中である。

１）血中トロポミオシン特異的 IgE の測定
実験１－３の全ての検体について、血中トロポ

結果と考察

ミオシン特異的 IgE 値を文献１に準じ、ELISA

実験１：
感作 3 回目（19 日目）で血中トロポミオシン

法により測定した。

特異的 IgE が増加し、IS 群より ES 群が高値を
２）組織学的評価

示す傾向にあった（図５）。

実験１－３の全ての検体について、解剖時に採取した臓器はすべて 10％中性緩衝ホルマリン溶液で固定し、パラフィン包埋、薄切後、HE 染色、
特殊染色および免疫染色を行った。また、アレルゲン曝露部位の皮膚については凍結標本を作成
し、rMet e1 のイメージング質量分析や、樹状細胞等のマーカーの免疫染色を試みた。
経口負荷後、アナフィラキシー等のアレルギー反応は IS 群、ES 群ともにみられなかった。組織学

3) サイトカイン解析（解析中）
実験１－３で組織学的に顕著な変化を示した

的には腸管および肝臓において各群で有意な差個体を選択し、腸に発現するサイトカイン等をはみられなかった（図６－８）。従来の経口感作Real time-PCR 法によって現在解析を行っていモデルでは、コレラトキシンを併用することで腸る。

内環境を破壊して抗原曝露を促進していたが、今回はコレラトキシンを使用せず、同量のアレルゲ

4) 短鎖脂肪酸（SCFA）解析

ンを経腸管経路と経皮経路で曝露している。実験（解析中）立命館大学の井之上、長友らは最近、2-ピコリ

１の結果からは、正常に近い腸内環境の際には、ルアミンの簡単な誘導体化を伴う高感度超高速

経皮的な感作のほうが生じやすい可能性を示し

液体クロマトグラフィータンデム質量分析ていると考えられた。

30

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

実験２：
感作 3 回目（14 日目）で血中トロポミオシ
ン特異的 IgE が増加し、そのレベルは tapestripping 法に比べて SDS および抗生物質塗布法の方が高い傾向を示した（図９）。

また、本実験による SDS、及び抗生物質塗布群
では、経口負荷後に、実験１ではみられなかった
アナフィラキシー反応が軽度に観察された。
次に、抗生物質塗布法の皮膚を Day 21 に採取し、組織像をホルマリン固定標本、及び凍結標本で解析した。ホルマリン固定標本において、HE染色では浅層から皮下の筋肉内に至るまで炎症細胞浸潤が軽度に認められた。核が分葉した細胞が多く、ルナ染色では細胞質が好酸性を示し、好酸球浸潤と考えられた（図１０）。

筋層内に炎症細胞浸潤（HE染色）

肥満細胞（HE染色）
図１０31

皮下脂肪内に炎症細胞浸潤（HE染色）

好酸球（ルナ染色）

抗生物質塗布法によるアレルゲン塗布部

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

その他、肥満細胞も散見され、アレルゲン曝露部

diet 群に比べて FOS diet 群で低値を示す傾向が位で炎症反応が生じていると考えられた。次に、みられた（図１１）。

同部の凍結標本を用いて CD207， CD103 の免
疫染色で樹状細胞の同定を、及びイメージング質量分析（福島大・平教授に依頼）によるｒMet e1の局在解析を試みた。しかしながら、皮膚の凍結
標本は膠原線維の変性が強く、挫滅によって細胞成分が離開し、十分な解析ができなかった。現在、ホルマリン固定標本を用いたイメージング質量分析により、rMet e1 の局在解析を検討中である。
Tape-stripping 法も SDS 塗布も、皮膚のバリア
機能を機械的に破壊する方法としてすでに報告された手法である。一方、抗生剤塗布法は我々のオリジナルであり、機械的破壊なしに皮膚のバリア機構が破綻しうる可能性を示す結果となった。
その機序としては、皮膚の表在菌叢の減少や消失
現在、腸内細菌叢が産生する短鎖脂肪酸(SCFA)が関与している可能性が考えられる。現代人は日の解析を施行中である。今回の結果から、腸内細焼け止めや皮膚の保護を目的に様々な薬剤を皮菌叢への介入によって、食物アレルギーの病態が膚に使用しているが、それら皮膚を保護する目的

軽快する可能性が示された。今後は、フラクトオ

で使用している薬剤が、アレルゲンの皮膚からのリゴ糖のみならず、他のオリゴ糖群を検証する予感作を促進している可能性は否定できない。今後定である。また、短鎖脂肪酸の変化が見られた群は抗生物質に加え、ハンドクリームや日焼け止めについては、腸内細菌叢の次世代シークエンスをなど様々な皮膚に関する薬剤による抗原曝露の用いた解析を追加する予定である。

増強の可能性を検証する予定である。

残された課題実験３：

現時点で結果が出ていない項目（サイトカイン

感作２回目（12 日目）で血中トロポミオシン特測定や短鎖脂肪酸解析など）については、可能な異的 IgE が増加し、そのレベルは Normal diet 群

限り早い段階で検討を行い、作用機序についてのと FOS diet 群では同等であった。しかし、感作考察を行う。また、より広範な介入実験を計画し、3 回目（19 日目）、および感作 4 回目（26 日目）

食による食物アレルギーの予防・治療の実現を目には血中トロポミオシン特異的 IgE は Normal

指す。

32

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

学会発表・論文作成の予定

破綻があり、その要因として皮膚に使用している

本研究内容は、サイトカイン解析や短鎖脂肪酸

様々な薬剤が悪影響を与えている可能性が示唆

解析の結果が揃った時点で、国内外の学会での発される。皮膚を強くすることで、皮膚からの感作

表や英文論文作成を計画している。具体的には、の成立が抑制される可能性もあり、食物アレルギ

2020 年の日本病理学会総会、及び 2020 年の米ーを皮膚を標的に予防する試みも必要であると

国消化器病週間（DDW）での発表を予定してい考えられる。

る。
参考文献
今後の研究活動について

1 ） Leung PS, Lee YS, Tang CY, Kung WY,

本研究で、成人型食物アレルギーモデルの過半

Chuang YH, Chiang BL, Fung MC, Chu KH.

数を占める甲殻類アレルギーモデルマウスを経Induction

皮的に作成することに成功した。また、腸内細菌

hypersensitivity in mice. Int Arch Allergy

叢への介入によって、食物アレルギーの症状が軽Immunol. 2008;147(4):305-14.

ofshrimptropomyosin-specific

快する可能性が示された。食物アレルギーは程度の差こそあれ、患者の QOL を大きく損なう疾患で

2） Nishitsuji K, Watanabe S, Xiao J, Nagatomo

あるが、その治療法は未だ確立されていない。成R, Ogawa H, Tsunematsu T, Umemoto H,

人の場合は病院にも行かず、個人で対応している

Morimoto Y, Akatsu H, Inoue K, Tsuneyama K.

ケースも多く、容易に取り入れられる食による病
Effect of coffee or coffee components on gut

態改善法の確立は多くの患者にとって福音となると考えられる。本検討ではプレバイオティクス

microbiome and short-chain fatty acids in a mouse

による介入を試みたが、プレバイオティクスにも、

model of metabolic syndrome. Sci Rep. 2018 Nov

様々な種類があり、ガラクトオリゴ糖や乳菓オリ

1;8(1):16173.

ゴ糖、コーヒーオリゴ糖など他のオリゴ糖類の検討も必要と考えられる。さらに、乳酸菌などの有3) Nishitsuji K, Xiao J, Nagatomo R, Umemoto H,

用な菌叢の摂取とオリゴ糖の摂取を組み合わせ

Morimoto Y, Akatsu H, Inoue K, Tsuneyama K.

た、シンバイオティクスの本モデル動物への応用

Analysis of the gut microbiome and plasma short-も重要なトライアルになると考えられる。さらに、
chain fatty acid profiles in a spontaneous mouse

漢方薬や天然薬物、サプリメントなど、食に近く安価に長期間摂取が可能な候補物質の有用性をmodel of metabolic syndrome. Sci Rep. 2017 Nov

検証することも重要な課題である。

20;7(1):15876.

また、経皮感作の成立には皮膚のバリア機構の4)33

Nagatomo R, Okada Y, Ichimura M,

経皮感作による甲殻類アレルギーモデル動物の作成とプレバイオティクス投与による予防効果の解析

Tsuneyama K, Inoue K. Application of
2-Picolylamine

Derivatized

Short-chain Fatty Acids in Feces Samples. Anal
Ultra-highSci. 2018 Sep 10;34(9):1031-1036.

Performance Liquid Chromatography Tandem
Mass Spectrometry for the Determination of34食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

研究課題名

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

フリガナ

ハヤシダ

代表者名

林田

直樹

所属機関（機関名）山口大学（役職名）講師
氏
共同研究者

角田

ナオキ

大学院医学系研究科

名（フリガナ）

所属機関・役職名

役割分担

茂（カクタシゲル）東京大学大学院准教授

変異マウスの樹立

徳永康子、山田悟生、足立はるよ、Mark Joseph M. DESAMERO、角田茂、八村敏志、
本 助 成金 によ る 発
林田直樹 「卵白アルブミン接種で食物アレルギーを発症した OVA23-3 マウスにお表論文，学会発表
ける転写因子 NFATc2 の関与」 第 65 回日本実験動物学会、富山

研究結果要約
免疫系は生体に有害な異物の排除に不可欠な防御システムであるが、有害でない物質に対して異常な反応を示すことがある。この反応が食物に対して起こるのが食物アレルギーである。我々は意外なことに、神経難病のハンチントン病 (HD) について解析を行っていた際に、IL-2 や IL-4 を転写誘導する免疫系転写因子 Nuclear Factor of Activated T-cell cytoplasmic 2 (NFATc2) が HD を抑制するという全く新しい機能を発見した (Hayashida et al., EMBO J 2010; Hayashida, Exp Anim 2015)。にもかかわらず、NFATc2 と食物アレルギーの関係はほとんど解析が進んでいない。その大きな理由は、ほとんどの変異マウスは B6 背景マウスで作製されており、これらの掛け合わせで研究が容易に進んでいたが、B6 背景ではアレルギーが起こしにくいため、NFATc2 欠損マウスは B6 背景では作られていなかった。
そこで我々は、B6 背景の NFATc2 欠損マウス、および恒常的に活性化している変異型 NFATc2 のノッ
クインマウスの作製を計画し、また、アレルギーを起こしやすい BALB/c 背景でも同様のマウスの作製を開始した。現在、B6 背景のマウス 2 種類の樹立に成功している。B6 背景でこれらのマウスが樹立できたことは今後の食物アレルギー解析に重要なツールとなることは間違いない。

35

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

研究目的が出来ないのである。そこで研究代表者らは、食物アレルギーの患者は年々増加の一途をた

C57BL/6J 背景で NFATc2 を欠損したマウス、おどっており、アレルギー反応の強さは個人によっ

よび恒常的に活性化したマウスを樹立し、食物アて異なるものの、ほぼ日本人全員が何らかのアレ

レルギーをこれらのマウスで再現することを目

ルギーを持っているとも言える。食物の種類によ的として本研究を開始した。これに成功すれば、っては数分以内で患者をショック状態に陥らせ世界中の遺伝子改変マウスとの交配による食物ることがあり、対処療法ではなく確実にアレルギ

アレルギーの研究が飛躍的に進むのは間違いなー反応が起きるのを防ぐ、あるいは食物アレルギ

く、このマウスでの食物アレルギー発症モデルをーを完治させる治療法開発が求められている。

樹立して世界に供給したい。

研究代表者は、免疫機構の中でも中心的な役割を果たす NFATc2 の研究を長年にわたって続け研究計画及び研究手法ており、それまで知られていた NFATc2 の常識を・研究計画覆すような発見にも成功した 1) 2)。本研究の成果

NFATc2 の食物アレルギーにおける役割を解は世界でも多くの研究者に認められており、析するにあたり、遺伝子改変マウスは強力なツー

Nature Review Drug Discovery 誌などにも引用ルとなる。NFATc2 の転写因子としての機能は、されている 3)。

カルシウムシグナル（カルシニューリン分子によ多くの疾患の原因の解析や治療薬の開発研究り仲介）や複数のリン酸化酵素（キナーゼ）によには、必ずと言って良いほど遺伝子改変マウスがり調節されている。その中でカルシニューリンお使われ、2 種類、時には 3 種類以上のマウスを掛

よび CK1 キナーゼ結合サイトに特定の変異を導け合わせ、複数の遺伝子が改変されたマウスを作入することにより機能亢進型 NFATc2 となるが、製することによって、最終的な疾患メカニズムのこれら変異をもつ遺伝子導入型変異マウスは、設

解明にたどり着いている。一方で、食物アレルギ

計上発現量の調節ができず過剰発現の状態になーにはこのような研究が行われてこなかったが、っており、詳細な解析には不向きであった。そこ

その大きな理由として、食物アレルギーを起こす

で、内在の Nfatc2 遺伝子に機能亢進型変異を導には BALB/c という種類のマウスが用いられ、他入した“ノックイン”変異マウス（と同時に KOのマウスでは食物アレルギーを起こすことが難マウス）を共同研究者の角田が担当し、東大におしい。しかし、世界中で樹立されているほとんど

いて新たに作製することを計画した。

の遺伝子改変マウスは C57BL/6J という、食物ア・研究手法

レルギーを起こさない種類のマウスが用いられ導入する変異は、（１）NFATc2 の N 末端 TADており、他の疾患研究で行われているような、「遺部位に存在する CK1 キナーゼ結合サイト

伝子改変マウスの交配による個体レベルの研究」

36

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明てしまい、研究遂行に大幅な遅れが生じてしまっ（FSILF）を低結合型（ASILA）に変換（２）た。そこで、マウス胚へのマイクロインジェクシ

NFATc2 の N 末側調節領域に存在するカルシニ

ョンのステップを（株）特殊免疫研究所に委託しューリン結合サイト（SPRIEITPS）を高結合型て作製を進めることに計画を変更して進めるこ（HPVIVITGP）に変換、の２箇所になる（図１）
。

ととした。

異

遺伝子解析に最もよく利用されている

図１ NFATc2 の構造と変 ターゲット部位

C57BL/6J 背景での Nfatc2 遺伝子改変マウス作出を試みた。遺伝子導入は、上述の（１）CK1 キ
ナーゼ結合サイトをターゲットとしたcrRNA+ssODN（２）カルシニューリン結合サイ
新規のゲノム編集技術である CRISPR/Cas9 法を

トをターゲットとした crRNA+ssODN（３）両方用いて、これら２つの変異を導入したノックインの crRNA+ssODN、の３種類とした。これらを実マウスの作製を検討し、変異導入のためのデザイ

施したところ、それぞれ（１）26 匹（２）37 匹ンを行った。角田はこのような変異マウスを作成（３）29 匹の G0 マウスを得ることができた。こする際の変異導入デザインに非常に優れており、れらについて PCR による１次スクリーニング、

ここまでは研究開始から一ヶ月もかからなかっシークエンスによる２次スクリーニングによりた（図２）。

変異の導入の確認を行なったところ（表１）、全

しかし、実際にマウスの作製を開始しようとしての実験において高い変異導入効率が認められたところ、発生工学室での微生物汚染が見出されたが、カルシニューリン結合サイトをターゲットたため、本実験のノックインマウス作製が当初のとしたノックイン変異を持つ G0 個体は、高度モ

計画通りできなく実施することができなくなっザイク持つ１匹（N1-EP1_1）のみであった（図３）。なお、本実験から CK1 キナーゼ結合サイトのノックイン変異を持つ G0 個体に加えて、

Nfatc2 欠損型変異を持つ G0 個体も多く得ることができた。

37

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

続いて、これらの G0 マウスから Nfatc2 変異

KO 型変異Δ117bp（Δ138bp + Ins21bp の複合

マウスの系統化を試みた。CK1 キナーゼ結合サ型変異）を持つ個体の系統化は成功することがイト（FSILF）を低結合型（ASILA）に変換し出来た（図５）。crRNA の変異導入効率は十分たノックイン変異アリルを持つ G0 個体（N2-高いこと、同時に行った CK1 部位へのノックイ

EP1_1）に野生型 C57BL/6J メスマウスを交配

ン変異導入は成功していることから、ゲノム編したところ、他の G0 オス個体に比べて仔マウ

集ストラテジーはほぼ問題ないと示唆される。

スの出生が遅れたが、ノックイン変異の次世代

カルシニューリン結合サイト（Nfatc2 遺伝子エへの伝達を確認することができ、系統化に成功

クソン２部位）に高度モザイク型の複数の変異した（図４）。また、カルシニューリン結合サイを持つ G0 個体（N1-EP1_1）の交配においてノト（Nfatc2 遺伝子エクソン２部位）に高度モザックイン変異の伝達を認めることは出来なかっ

イク型の複数の変異を持つ G0 個体（N1-

た原因としては、先行研究 4)から懸念されていEP1_1）について同様に交配を行ったところ、たことであるが、ノックイン変異が伝達された

ノックイン変異の伝達を認めることは出来なか

マウスは胎生致死の表現型を持っていたため、ったが、Nfatc2 遺伝子機能を完全に欠損する

仔マウスが得られなかった可能性が最も高いと38

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

・NFATc2 機能低下型変異ノックインマウス

考えている。

②NFATc2 完全欠損（KO）マウス

一方、CK1 キナーゼ結合サイトは Nfatc2 遺伝③NFATc2 機能低下（Nfatc2Δex1b）マウス

子のエクソン 1B 部位に位置するが、欠損型変異を持つ G0 個体（N2-EP2_3）よりエクソン 1B の先に述べたとおり、これらの 3 系統のマウスは、

スプライスドナー（SD）部位を含む 140bp を欠

マウスを用いた in vivo における遺伝子解析に損する欠失型変異の系統化も試みたところ、無事

おいて、群を抜いて汎用されている C57BL/6J 背成功することができた。この変異マウスは、

Nfatc2 遺伝子に存在する複数のバリアントうち、景にて樹立できており、このことは、このマウスの生命科学研究における有用性を考えた上で非

一部のみ欠損する新規の Nfatc2 変異マウスとな常に重要である。

ることから、Nfatc2Δex1b マウスと命名した（図６）。

（予備の研究手法）既存のモデルマウスを用いた

これらの一連の実験により、我々は以下の 3 系

食物アレルギーにおける NFATc2 の役割の解析

統のマウスの樹立および系統化に成功した。

当初の計画から外れた実験ではあるが、
NFATc2 機能亢進型変異ノックインマウスの作・NFATc2 機能亢進型変異ノックインマウス

製を進める一方で、既存の食物アレルギーモデル①CK1 キナーゼ結合サイト FSILF→ASILA ノ

マウスを用いて、食物アレルギーにおけるックイン変異マウス

NFATc2 の機能の解析を行った。東大・食の安全39

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

研究センターの八村らから、卵白アルブミン

これらの実験により、以下の 3 系統のマウスの樹（OVA）を認識する T 細胞受容体（TCR）トラン

立・系統化に成功した。

スジェニック（OVA 23-3 TCR Tg）マウスを用い―NFATc2 機能亢進型変異ノックインマウス①CK1 キナーゼ結合サイト FSILF→ASILA ノて、OVA 摂取によって食物アレルギーを発症させ、小腸において免疫染色による組織解析をおこ

ックイン変異マウスなった。その結果、OVA を摂取させなかったマ―NFATc2 機能低下型変異ノックインマウス

ウスに比べ、OVA を摂取したマウスの小腸では②NFATc2 完全欠損（KO）マウス

顕著な T 細胞の浸潤と共に、NFATc2 の明瞭な発③NFATc2 機能低下（Nfatc2Δex1b）マウス

現上昇が認められた。しかしながら、NFATc2 の発現細胞は T 細胞とは一致しておらず、他の細胞

すでに述べたことであるが、これらの 3 系統のにおいて NFATc2 の発現が顕著に増加したと考マウスは、マウスを用いた in vivo における遺伝

えられた。また、B 細胞は、OVA 摂取マウスに

子解析において、群を抜いて汎用されている

おいても小腸においては浸潤の増加が明瞭では

C57BL/6J 背景にて樹立できており、このことは、なく、NFATc2 の発現とも一致していなかった。

このマウスの生命科学研究における有用性を考残念ながら変異マウス作製におけるトラブル

えた上で非常に重要である。というのは、多くののため、当初計画から大幅な遅れが生じてしまっ

遺伝子改変マウスが C57BL/6J 背景で作製されたが、少なくともいくつかの新たな遺伝子改変マており、生命科学の他の分野における重要な知見

ウスの作製には成功したことで、当初の目的にはも、この背景の遺伝子変異マウス同士を掛け合わ

近づいているのは間違いない。最終的には、当初せる方法で得られているからである。NFATc2 にの目的だった 4 種類のマウスの作製は達成出来

ついては、20 年前に KO マウスが BALB/c 背景

そうである。本研究は、食物アレルギーの新たなで作られていたが、このマウスが広く他の研究に発生機序の解明と発症抑制機構を NFATc2 を切使われることはなかった。また、機能亢進型のり口として明らかにすることであり、上記で用い

NFATc2 ノックインマウスの樹立は、いかなる背た既存のモデルマウスも有効と言える。数ヶ月以景のマウスでも樹立は初めてである。食物アレル

内に系統化できたマウスに OVA を摂取させる実ギーの誘導は、OVA を含む餌を摂取させること験を繰り返し、食物アレルギーにおける NFATc2であるが、通常の C57BL/6J 背景のマウスではこの役割を明らかにすることで、治療法や予防法のの方法では上手くいかない。このような点を踏ま開発に貢献したい。

えて、我々は機能亢進型の NFATc2 ノックイン
マウスを C57BL/6J 背景で作製することで、結果と考察

C57BL/6J 背景のマウスでも食物アレルギーを【結果】再現できるのではないかと期待している。OVA40

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明を含む餌で上手くいかない場合でも、アレルゲン

ウスを C57BL/6J 背景で樹立することには成功の種類を変えるなどして、食物アレルギーを再現したため、同じ遺伝子変異導入マウスを、アレルする実験系の樹立を行いたい。

ギーを起こしやすい BALB/c 背景のマウスでも樹立したい。繰り返しになるが、C57BL/6J 背景【残された課題】のマウスで食物アレルギーを再現するという最達 成 出 来 た 課 題 は 、「 C57BL/6J 背 景 の初のステップがまだ実現できていないので、角田

NFATc2 変異型マウスを樹立する」ことのみであによって作製された C57BL/6J 背景の機能亢進るので、実験を行う上での最も重要なツールの作

型 NFATc2 ノックインマウスを中心に、この目製には成功したが、本助成では、このマウスを使的の達成に最も力を注ぎたい。仮にこのマウスでって解析を行い、食物アレルギーにおける食物アレルギーの再現に成功すれば、まず最初に

NFATc2 の機能を解明するところまでが課題で特許等の権利取得申請を行ったあとは、様々なあったので、当然ながら、当初の目標の半分以下

C57BL/6J 背景の遺伝子変異マウスとの交配にしか研究は進んでいない。従って、残された課題

よって、文字通り無数の解析が可能になる。最初というと、「解析全て」と言うことになり、これをに行う研究は、当初、申請した研究計画に記した

早急かつ丁寧に進めて行きたいと考えている。新ものであり、それらを最初に着手し、良好な結果

たなマウスでの実験がどこまで進められるかはが得られた場合には、再度研究報告をさせてもらわからないが、得られた結果は、研究報告会で発えれば、と考えている。

表させて頂きたい。

食物アレルギーに関する遺伝子レベルでの研究はまだ未知の領域が多く、これまで報告されて【学会および論文等の発表予定】

いない多くの遺伝子群が実際には関係している

すでに 1 回行っているが、日本実験動物学会ではずである。それらのノックアウトマウスがすでの発表を考えている。同時に、論文の作製も行うに樹立されていれば、それらと、我々のマウスとのは当然であるが、繰り返し述べているように、を交配して新たな変異マウスを生み出す方法を

C57BL/6J 背景の NFATc2 機能亢進型マウスで基本に、研究を広げていく所存である。

食物アレルギーを再現できた場合には、特許ある
いは実用新案など、法的な権利の取得申請を最優

参考文献

先にしたい（研究代表者は NFATc2 関連の解析

1）Hayashida N, Fujimoto M, Tan K, Prakasam

途中で見つけた薬剤でを、神経難病の新たな治療

R, Shinkawa T, Li L, Ichikawa H, Takii R,薬として、2 回の特許申請を行っている）。

Nakai A.

Heat shock factor 1 ameliorates

proteotoxicity

incooperationtranscription factor NFAT.

今後の研究活動について

Oct: 20;29(20):3459-69.

今回は、目的とした遺伝子変異が導入されたマ

41

with

the

EMBO J. 2010

食物アレルギーにおける免疫系転写因子 NFATc2 の役割の解明

2）Hayashida N. Non-Hsp genes are essential4）Ghosh S, Koralov SB, Stevanovic I, Sundrudfor HSF1-mediated maintenance of whole body

MS, Sasaki Y, Rajewsky K, Rao A, Müller MR.

homeostasis. Exp Anim. 2015; 64(4):397-406.

Hyperactivation of nuclear factor of activated T3）Neef DW, Jaeger AM, Thiele DJ. Heat shock

cells 1 (NFAT1) in T cells attenuates severity oftranscription factor 1 as a therapeutic target inmurine autoimmune encephalomyelitis. Proc

neurodegenerative diseases. Nat Rev Drug

Natl

Discov. 2011 Dec:1; 10(12):930-44.

107(34):15169-74.

42

Acad

Sci

USA

2010

Aug:24;

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

研究課題名

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

フリガナ

マツナガ

代表者名

松永

カヨコ

佳世子

所属機関（機関名）藤田医科大学（役職名）教授
氏
共同研究者

名（フリガナ）

所属機関・役職名

役割分担田中宏幸(タナカヒロユキ) 岐阜薬科大学・准教授 モデルマウスの作製
大野敏(オオノサトシ)

岐阜大学・准教授

蛋白質の調製

第 67 回日本アレルギー学会学術大会、日本薬学会第 139 年会、および第 1 回日
本 助 成金 によ る 発 本アレルギー学会東海地方会にて発表した（共同研究者：田中宏幸）。
表論文，学会発表 第 68 回日本アレルギー学会学術大会および第 135 回日本薬理学会近畿部会にて発表（共同研究者：田中宏幸）。および海外誌への論文投稿を予定している。
研究結果要約背景：魚アレルギーは免疫学的寛解が成立しにくいアレルギーの一つであり、新規治療法の創製が切望されている。
目的：アレルギー症状の誘発を極力抑えた免疫療法剤を創製するために、魚アレルギーマウスの作製、目的遺伝子改変技術を利用した低アレルゲン化コンポーネントの合成、ならびに低アレルゲン化
コンポーネントに対する IgE 反応性を評価する。
結果：ヒトが摂取しうる蛋白質成分を多く含有した生魚身、加熱魚身、コラーゲン画分の 3 種を調製し、従来の腹腔内感作に加えて経皮感作モデルを新たに構築した。総 IgE 値や脾細胞による IL-13 産
生量を測定した結果、コラーゲンを腹腔内感作させた場合に高値であったが、経皮感作では生魚身を塗布した場合に高値であった。粗抽出物による経口惹起試験を実施した結果、感作試験時に比べ総 IgE 値がさらに上昇した。原核生物により作製されたアレルゲンコンポーネントの ELISAの結果、エノラーゼやパルブアルブミンに対して IgE が顕著に反応した。これらパルブアルブミンに対して強い反応を示す群の血清を用いて、低アレルゲン化パルブアルブミンの ELISA を実施した結果、IgE 反応性が著しく減少した。
結論：実際の魚アレルギー症例の発症機序に近似した魚アレルギーモデルマウスを構築し、コンポーネントや低アレルゲン化コンポーネントの作製系を確立した。今後は、特定された他の蛋白質の変異型を順次作製し、その組み合わせによる最適な免疫療法剤を創製する。

43

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

研究目的

すでに特定された抗原や IgE エピトープ解析に【背景】魚アレルギーは、食物アレルギーにおけよって得られた抗原情報をもとに低アレルゲン

る新規発症例で上位を占め、小児より成人に多い

化コンポーネントの作製系を確立し、これらを複のが特徴である 1)。特に、寿司職人など鮮魚を扱合的に用いた免疫療法剤開発の着想に至った。

った特殊な環境下での職業性アレルギーが複数【意義】アレルギー症状の誘発を極力抑え、かつ例報告され、これらは経皮感作によって発症した

効率的な寛容状態へ誘導させる免疫療法を確立と考えられる 2)。魚アレルギーの最大の特徴は、させることにより、患者のリスク低減や患者 QOL

1 種類の魚で感作が成立した場合でも他魚種にも向上につながる。また、免疫療法を実施する医療

類似した蛋白質が含まれていることから、様々な従事者への医療現場での負担軽減にも寄与する魚種で交差反応が生じアレルギーを引き起こすと考える。

可能性がある。そのため、摂取により発症する魚【研究目的】魚アレルギーマウスを用いて、複合種の回避指導や、負荷試験により摂取可能な魚種

的低アレルゲン化コンポーネント免疫療法剤のを確認する必要があり、魚食文化が浸透した日本基盤研究を開始する。つまり、１）魚アレルギーにおいて魚アレルギー発症は患者の QOL を低下

モデルマウスを作製してコンポーネントを特定させる。

し、２）コンポーネント改変に伴う低アレルゲン

魚アレルギーの免疫療法研究は、主要アレルゲ化を構築し、３）低アレルゲン化コンポーネントンであるパルブアルブミンを用いた SCIT の臨床の IgE 反応性を評価することを目的とする。これ

研究が第二相まで完了している 3)。当該研究の興らを達成することで、最終的にはアレルギー症状

味深い点として、魚のパルブアルブミンそのままの誘発を極力抑えた免疫療法剤を創製する。

の状態ではアレルゲン性を有しているため、IgE
エピトープ領域をアレルゲン性のないアミノ酸

研究計画及び研究手法に置換した、つまり低アレルゲン化パルブアルブ

魚粗抽出物の作製

ミンを使用している点にあり、効能・安全性や今魚種について、魚アレルギーの中で発症の割合

後の動向に注目したい 4)。

が高く、かつ、NCBI における遺伝子登録数の多い

これまで、当講座ではプロテオミクス手法によ銀鮭（Oncorhynchus kisutch）を選択した。粗抽るアレルゲンコンポーネントを探索し、予想に反出物については銀鮭の生魚身、加熱魚身、コラーして多くの新規コンポーネントを特定した(特許

ゲン画分の 3 種を作製した。

出願済)5,6)。この成果から、魚アレルギー症例は

生魚身：生魚 100 g に対し氷冷した超純水1 種の蛋白質だけでなく、複数の蛋白質により感500mL を添加し、ホモジェナイザーにて 15 分間

作・発症している可能性が示唆された。そこで、氷上で破砕した。次に、破砕した溶液をガーゼで44

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

ろ過して水溶液を回収した。その後、1,000×g、

mL/匹）と共に PBS に懸濁させた。これらの粗抽

4℃、10 分間遠心し、得られた上清溶液を凍結乾出物溶液を 0 日目および 12 日目に BALB/c マウス燥した。

の腹腔内に投与した。次いで、22 日目にマウスを加熱魚身：生魚 100 g に対し 95 度 30 分加熱処

屠殺し脾臓を採取した後、96 穴プレートに脾細理した。その後、氷冷した超純水 500mL を添加し、胞を播種し、粗抽出物溶液および concanavalin A

ホモジェナイザーにて 15 分間氷上で破砕した。

(以下、Con A) で脾細胞を刺激した。粗抽出物溶

次に、破砕した溶液をガーゼでろ過して水溶液を液の添加濃度については終濃度が 100 μg/mL と回収した。その後、1,000×g、4℃、10 分間遠心なるように、また、Con A は終濃度が 5 μg/mL とし、得られた上清溶液を凍結乾燥した。

なるようにそれぞれ添加した。粗抽出物溶液添加

コラーゲン画分：Hamada らの文献を参照してコ

72 時間後に脾細胞培養上清を回収し、IL-13 産生

ラーゲンを抽出した 7）。加熱魚身と同手法により量を ELISA にて測定した。さらに、感作前および水溶性部分を回収した。その後、15,000×g、4℃、

感作後に血清を回収し、血清中総 IgE 値を ELISA

15 分間遠心し、得られた上清溶液を凍結乾燥しにて測定した。

た。

経皮感作モデル：抗原として、コラーゲン画分および生魚身粗抽出物溶液を用いて 100 μg/20 μ

魚アレルギーマウスモデルを用いた感作試験

L/匹となるように PBS に溶解させた。これらの粗「魚粗抽出物の作製」の項にて作製した 3 種の抽出物溶液をフィンチャンバーに滴下し、マウス

粗抽出物を用いて感作試験の前検討を実施した。

背部皮膚に貼付する操作を、週 1 回計 4 回繰り返

感作経路については、摂取食物からの感作およびし実施した。フィンチャンバーの最終貼付 1 週間

生魚との接触による感作を鑑み、腹腔内、ならび後に脾臓を回収し、腹腔内感作の際と同様に、細に経皮による感作を選択した。その結果、腹腔内

胞播種および抗原刺激を実施した。また、IL-13

感作においては加熱魚身とコラーゲン画分に対産生量ならびに血清中総 IgE 値の測定も同時にする効率的な感作が認められた。一方で、経皮感実施した。

作においては生魚身とコラーゲン画分に対して効率的な感作が認められた。以上の結果より、当魚アレルギーマウスモデルを用いた症状誘発試

試験では 3 種の粗抽出物の中から、効率的に感作

験（経口惹起試験）が成立した 2 種を用いて以下の試験を実施した。

感作については「魚アレルギーマウスモデルを腹腔内感作モデル：抗原として、加熱魚身、およ

用いた感作試験」の項と同法で実施した。経口惹

びコラーゲン画分を用いた。50 μg/0.5 mL/匹と起に用いる粗抽出物については、腹腔内感作ではなるように水酸化アルミニウムゲル（1 mg/0.5

コラーゲン画分、または加熱魚身を、また、経皮45魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

感作ではコラーゲン画分、または生魚身を用いた。

バイオより市販されている pNCMO2 を用いた。な

各粗抽出物溶液は 30 mg/0.2 mL/匹となるように

お、ブレビバチルス菌発現系でも、目的蛋白質のPBS に懸濁させた。また、aspirin については、4N 末端側に精製を容易にするためにヒスチジンタ

mg/0.2 mL/匹(200 mg/kg)となるように 0.5%

グが融合されるように設計した。

carboxymethyl cellulose-Na (CMC-Na) 溶液に大腸菌での発現と精製：作製したプラスミドベク

溶解させた。経口惹起の際には、各マウスを 1 時

ターを大腸菌に加え形質転換し、抗生物質を含む間馴化させた後に、直腸温を測定し、次いで、CMC-

LB 寒天培地にて培養した。翌日、抗生物質を含む

Na 溶液もしくは aspirin 溶液を経口ゾンデによLB 培地へ植菌し 37℃で培養し、濁度（OD600）がり胃内投与した。その 30 分後、PBS もしくは各粗0.6

抽出物溶液を胃内投与し、さらにその 1 時間後に

thiogalactopyranoside (IPTG)（FUJIFILM）を加

直腸温を測定した。

え発現誘導を行い、さらに室温で一晩培養した。

を 超 え た ら

isopropyl

β -D-

また、感作前、感作後および経口惹起後に血清培養した菌体は遠心操作により回収した。次に、を回収し、血清中総 IgE 値を ELISA にて測定し菌体を超音波破砕し、遠心した上清を菌体抽出液た。

とした。回収した菌体抽出液より、固定化金属ア
フ ィ ニ テ ィ カ ラ ム 樹 脂 、 Ni-NTA

原核生物を用いた蛋白質作製

agarose（FUJIFILM）を用いて目的蛋白質を精製した。

各種抗原に対し原核生物を用いた蛋白質発現

回収した溶液の一部を SDS-PAGE により分離し、系を構築した。

CBB-R250 にて染色を行い、精製の確認を行った。

発現用プラスミドベクターの作製：各種アレルゲ

また目的蛋白質を含む溶液の一部は限外濾過フ

ンコンポーネント遺伝子は人工遺伝子作製サーィルターユニット Amicon Ultra（Merck Milipore）

ビス、GeneArtTM（Thermo Fisher Scientific）にで濃縮し、液体窒素で凍結後保存した。回収したより作製した。大腸菌発現系で用いるプラスミド

蛋白質の濃度は、紫外吸収もしくは BCA 法を利用

ベクターの作製においては、村上らにより報告さして定量した。

れたシームレスクローニング法により、これら各
種アレルゲンコンポーネント遺伝子を大腸菌発

ブレビバチルス菌での発現と精製

現 用 ベ ク タ ー （ pET-21a(+),Merck Millipore-

作製したプラスミドベクターを用い、キット添

Novagen）に挿入した 8)。なお、大腸菌発現系では付手順に従い形質転換し、抗生物質を含む MT 寒目的蛋白質の C 末端側に精製を容易にするため

天培地にて培養した。翌日、プレート上のコロニにヒスチジンタグが融合されるように設計した。

ーを突き、抗生物質を含む 2SY 培地に植菌し、24

一方、ブレビバチルス菌発現用ベクターはタカラ

時間 30℃で培養した。培養開始 24 時間後に培養

46

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

液を遠心操作により培養上清を得た。その後、マウス血清を用いた各種蛋白質の ELISASDS-PAGE もしくは WIDE RANGE Gel Preparation

2 μg/mL となるように蛋白質を PBS で希釈し、Buffer（4×）for PAGE（ナカライテスク）を用い

384 プレートへ一晩 4℃で静置し固相化した。翌

た電気泳動により分離し、培地への分泌発現状況

日、溶液を除去して PBS-T（0.05%）洗浄後、Pierceを確認した。回収した培養上清シリンジフィルタ

Protein Free (Thermo Fisher Scientific)で 1ー（33 mm マイレクス 0.22μm）に通し、Ni-

時間室温ブロッキングを行った。血清は各群６匹

NTA agarose（FUJIFILM）を用いて目的蛋白質をのマウス血清を混和させたプール血清を用いた。

精製した。また目的蛋白質を含む溶液の一部は洗浄後、Can Get Signal 1（TOYOBO）で希釈したSlide-A-Lyzer MINI Dialysis Devices（Thermo

5％マウス血清を添加して 1 時間室温で振とうしFisher Scientific）を用いて透析した。

て反応した。洗浄後、Can Get Signal 2（TOYOBO）

回収した蛋白質の濃度は、紫外吸収もしくはで希釈したビオチン化ヤギ抗マウス IgE 抗体

BCA 法を利用して定量した。

（1:4,000、Bio-Rad）を添加して 1 時間室温で振とうして反応した。洗浄後、PBS-T（0.05%）で希変異型パルブアルブミン発現用プラスミドベク

釈した HRP 標識ストレプトアビジン（1:2,500、

ターの作製

Dako）を添加して 1 時間室温で振とうして反応しパルブアルブミン遺伝子を組込んだ各種発現た。洗浄後、TMB 試薬（Thermo Fisher Scientific）

用ベクターを鋳型に、クイックチェンジ法によりを添加して 15 分間室温で振とうして発色後、2N51 残基目と 90 残基目のアスパラギン酸をアラニの H2SO4 溶液で反応停止し、EnSpireTM（Bio-Rad）

ンへそれぞれ置換した D51A、D90A 変異型、ならにて 450nm で測定した。

びに 51、90 両残基を置換した D51/90A 変異型の低アレルゲン化パルブアルブミンの ELISA にパルブアルブミンを作製した 9,10)。アミノ酸置換

ついては、野生型パルブアルブミン、51 残基目のの確認は DNA シーケンサーを実施し、DNA の塩基

アスパラギン酸をアラニンに置換したもの、90 残配列をもって確認した。

基目のアスパラギン酸をアラニンに置換したもの、ならびに、51 と 90 残基目のアスパラギン酸

エンドトキシン量の測定
ToxinSensor

Chromogenic

をアラニンに置換したもの、の計 4 種を用いた。
LAL

Endotoxin

血清については、腹腔内にコラーゲンで感作・経Assay Kit（GenScript）を利用し、キット添付の口惹起させた群、生魚身で経皮感作・コラーゲン

手順に従った。

＋aspirin 経口惹起させた群を用いてマウスの血清による ELISA 同様の試験系を実施した。

47

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

電気泳動

質の含有数や量と比べて非常に近似した組成で粗抽出物の蛋白質、大腸菌により作製されたリあった。アレルギー症例の中には複数のコンポー

ンコンビナント蛋白質の確認には Laemmli の方

ネントに感作されて発症する症例がいるため 6)、法 11）による SDS-PAGE により確認した。

このように実際に含まれる蛋白質組成の粗抽出物を用いたモデル動物作製は極めて重要である。

質量分析装置を用いた蛋白質の特定

一方、コラーゲン感作による魚アレルギー発症

蛋白質の特定にはタンデム型高速液体クロマが近年報告されており、コラーゲン分子の重要性

トグラフ質量分析計システム（TripleTOF®6600、が再認識されている。そこで、Hamada らが確立し

ABSCIEX）を用いて、Shimojo らの論文を参考にした魚身からのコラーゲン単離方法 6）を参考とし、て実施した 5）。

加熱魚身から得られるコラーゲン画分を 3 つ目の粗抽出物として作製した。その結果、若干のパ

結果と考察

ルブアルブミンの混入は確認されたものの、精製

魚粗抽出物の作製

度の高いコラーゲンを抽出した。

電気泳動の結果と質量分析装置により特定した各蛋白質を図 1 に示す。

魚粗抽出物を用いた感作性試験・総 IgE・IL-13の結果
コラーゲン画分と加熱魚身の粗抽出物溶液を用いて腹腔内感作を実施した結果、両粗抽出物において血清中総 IgE 値が上昇した(図 2)。

銀鮭の生魚身、加熱魚身を電気泳動した結果、低分子量域から約 110kDa までは両抽出物に含まれる蛋白質は同一であった。一方で、110kDa 以上の領域では異なる蛋白質が特定され、生魚身の高感作においては、特にコラーゲン画分で感作し分子領域にはミオシン重鎖が、また、加熱魚身でた場合が最も高値であった。一方、コラーゲン画

はコラーゲンが特定された。これら調製した粗抽分と生魚身の粗抽出物を用いて経皮感作を実施

出物は実際の生魚身や加熱魚身に含まれる蛋白した結果、両粗抽出物において血清中総 IgE 値が48

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発上昇したが、特に生魚身の粗抽出物溶液で感作し魚粗抽出物を用いた経口惹起試験・総 IgE・体温た場合が最も高値であった。脾細胞による IL-13

低下の結果

産生量について測定した結果、感作に用いた粗抽

図 4A-C についてはコラーゲン画分（図 4B）、な出物溶液で脾細胞を再刺激した際に、顕著に上昇

らびに加熱魚身（図 4C）の粗抽出物で腹腔内感作した(図 3)。

したマウスにおいて、両粗抽出物をそれぞれ反復
的に経口投与し惹起試験を実施し、マウスの血清
中総 IgE 値を測定した。さらに、各抽出物に対し、aspirin の併用群を設け、aspirin によるアレル
ギー反応の増強の可能性を検討した。図 4B にお
いて、PBS 群と比較してコラーゲン画分で腹腔内感作させた場合、コラーゲン画分の経口惹起＋
aspirin 併用群が有意な高値を示した。さらに、
図 4C において、加熱魚身による腹腔内感作させた場合においても同様にコラーゲン画分の経口惹起＋aspirin 併用群が有意な高値を示した。

両感作の結果から、腹腔内感作モデルではコラーゲン画分により、また、経皮感作モデルでは生

図 4D-F についてはコラーゲン画分（図 4E）、な魚身により血清中総 IgE 値が高値を示した。すな

らびに生魚身（図 4F）の粗抽出物で経皮感作した

わち、感作経路の違いにより反応抗原が異なる可

マウスにおいて、両粗抽出物をそれぞれ反復的に能性が示唆された。IL-13 については、感作経路

経口投与し惹起試験を実施した。その結果、図 4Eによらず、感作に用いた粗抽出物で脾細胞の再刺においてコラーゲン画分で経皮感作させた場合、激により応答することが観察された。

生魚身の経口惹起＋aspirin 併用群、ならびにコ

寿司職人など鮮魚を扱う業務に従事している

ラーゲン画分の経口惹起＋aspirin 併用群は有意

中で、生魚身を素手で接触することで繰り返し抗な高値を示した。さらに、図 4F において、生魚原に暴露されて発症する職業性魚アレルギーが身で経皮感作させた場合、生魚身の経口惹起＋問題になっている。今回の実験結果の中で、生魚

aspirin 併用群、ならびにコラーゲン画分の経口

身で経皮感作させたマウスはこの感作機序に近惹起＋aspirin 併用群に加え、生魚身の経口惹起似したモデルであることが示唆され、抗原と感作群でも有意な高値を示した。
次に、経口投与最終回後における直腸温を測定に関する発症形態の機序の解明に役立つモデル

した（図 5）。

と期待している。

49

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

まず、コラーゲン画分、ならびに加熱魚身を用いて、コラーゲン画分、または生魚身を反復的にいて腹腔内感作、経口惹起させた群の直腸温を測経口投与したが、顕著な差はみられなかった。

定した。その結果、図 5A において、コラーゲン

経口惹起試験の結果から、腹腔内感作モデルで画分による腹腔内感作群の中で、コラーゲン画分

はコラーゲン画分の感作＋コラーゲン画分の経の経口惹起群、ならびにコラーゲン画分の経口惹

口惹起＋aspirin 併用投与により、また、経皮感起＋aspirin 併用群が PBS 群と比較して有意に直作モデルでは生魚身の感作・生魚身の経口惹起＋

腸温低下を示した。また、加熱魚身による腹腔内aspirin 併用投与により直腸温低下を示した。す感作の中で、コラーゲン画分の経口惹起＋

なわち、両粗抽出物に関しては、感作させた物質

aspirin 併用群も同様に直腸温低下が認められたを経口的に投与することで重篤な体温低下を引が、一方で、加熱魚身の経口惹起した全群では有き起こす可能性が示唆された。一方、加熱魚身に意な差がみられなかった。

よる腹腔内感作モデルの中で、コラーゲン画分の次に、コラーゲン画分、ならびに生魚身を用いて経皮感作、経口惹起させた群の直腸温を測定した。その結果、図 5B において、生魚身による経皮感作群の中でコラーゲン画分の経口惹起＋
aspirin 併用群と生魚身の経口惹起＋aspirin 併
用群において有意な直腸温低下が認められた。一方、コラーゲン画分で経皮感作させたマウスにお50

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

経口惹起＋aspirin 併用投与によって顕著な体温

コラーゲンに関しては、構成されるアミノ酸の低下が認められた。これについて図 1 より加熱魚中でプロリンがヒドロキシプロリンに修飾され身の粗抽出物にはコラーゲンが含まれており、おていることが知られているが、原核生物ではプロ

そらくこのコラーゲンに対する著しい免疫応答

リンのヒドロキシ化は不可能であるため、銀鮭かが発生したものと推察される。ただ、コラーゲンら抽出したコラーゲン（n コラーゲン）を採用し単体投与では有意な差が認められなかったことた（図 6C）。

を踏まえると、aspirin による生体内へのコラー

またパルブアルブミンに関しては、低アレルゲ

ゲン取り込みの増加により高い抗原性を獲得し、ン化コンポーネントのモデルとして、IgE エピト

結果的に直腸温低下を引き起こしたものと考えープ領域のアミノ酸残基を置換した変異型

る。

（D51/90A、D51A、D90A）3 種を作製し、マウスのIgE 反応性を検証した（図 7）。

原核生物を用いた蛋白質発現系の構築調製したアレルゲンコンポーネントを動物実

発現・精製・エンドトキシン測定

験などへ利用する際、発熱などの生体反応や各試

原核生物発現系により銀鮭由来リコンビナン

験の偽陽性を示すエンドトキシンの混入が危惧

トパルブアルブミン（以下、r パルブアルブミン）、

されるが、ブレビバチルス菌はグラム陽性菌であ

リコンビナントβ-エノラーゼ（以下、rβ-エノ

り、大腸菌とは異なりエンドトキシンを持たない。

ラーゼ）を作製した。例としてブレビバチルス菌

実際にエンドトキシン活性を測定したところ、蛋発現系により産生し、24 時間培養した 2SY 培地

白質 1 mg あたり大腸菌発現系では 368 エンドト

（図 6A）から Ni-NTA agarose で r パルブアルブ

キシンユニット（EU）、ブレビバチルス菌発現系

ミンを精製した結果、１回のカラム操作で培地上

では 3 EU と、ブレビバチルス菌発現系を用いた

清中由来の他蛋白質の含有もなく、非常に精製度方が低値となった。このことは動物実験での利用の高い蛋白質が単離された（図 6B）。当該行程をなどを考慮した際、ブレビバチルス菌発現系が有もとに rβ-エノラーゼも同様に調製した（図 6C）。

用であることを示唆している。

51

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

一方で、ブレビバチルス菌によってエンドトキ投与の有無に関係なく r パルブアルブミンと rβ

シンの対策を実施しているが、それだけでは不十-エノラーゼに対する IgE 反応性が最も高値を示分であることがわかってきた。エンドトキシンをした。さらに、rβ-エノラーゼに関しては、加熱産生するグラム陰性菌は至る所に常在しており、魚身で感作＋コラーゲン画分の経口惹起群にお実験室の中ではシンクなど水回りに多く存在しいても高値を示した。一方、経皮感作群の中で、ていることが知られている。そのため、器具や調

生魚身で感作させ生魚身の経口惹起群、ならびに製した試薬中にも微量のエンドトキシンが含ま

コラーゲン画分の経口惹起群において、aspirin

れている可能性も否定できない。その対策として、投与の有無に関係なく rβ-エノラーゼに対するエンドトキシンフリーの純水やディスポの器具

IgE 反応性が最も高値を示した。パルブアルブミを準備する必要がある。

ンに対する IgE については、同様の 2 群においてaspirin を併用投与した群の方が併用していない

経口惹起試験マウス血清を用いた蛋白質の群に比べ高値を示した。n コラーゲンに対する

ELISA

IgE 反応性については上述の 2 蛋白質と比較し、経口惹起試験を実施したマウスのプール血清

両感作群において顕著な差はみられなかった。

を用いて r パルブアルブミン、n コラーゲン、rβ

まず特筆すべき点として、感作試験のみ実施し-エノラーゼの ELISA を実施した（図 8）。

たマウスの血清を用いて各蛋白質の ELISA を実

腹腔内感作群の中で、コラーゲン画分で感作＋施したが（データ非公表）有意な差が認められなコラーゲン画分の経口惹起群において、aspirin

かったのに対し、経口惹起試験を実施した場合で52

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

は各抗原に対して IgE が反応した。その中で、腹ラーゲンの ELISA の低反応性については加熱魚

腔内・経皮による両感作において rβ-エノラー

身から抽出されたものを利用しており、抽出物かゼに対する IgE が顕著に反応していた。魚アレルらの単離による抗原性の担保について詳細に調ゲンの中でパルブアルブミンやコラーゲンはよ査する必要がある。

く知られているが、エノラーゼに関する報告は数

マウスを用いて感作・惹起させた実験系で血清例のみである 12,13)。各粗抽出物内のエノラーゼ含学的検討を実施する場合、IgE に加えて IgG1 の有量を図 1 の電気泳動の結果で確認すると、生魚存在も考慮に入れる必要がある。血清中 IgG1 の身や加熱魚身には多く含まれているが、コラーゲ

濃度は IgE の数百～数千倍といわれ、ELISA など

ン画分にはほとんど含まれていなかった。それでを実施する場合には IgG1 による競合阻害の可能もコラーゲン画分の投与によって rβ-エノラー性を視野に入れ ELISA の系を構築する必要があゼに対して IgE が反応した理由については、微量る。

のエノラーゼでも継続的な惹起によって高い抗原性を獲得した可能性が示唆された。他のコンポ

経口惹起試験マウス血清を用いた低アレルゲン

ーネント含め今後詳細な解析が必要である。

化パルブアルブミンの ELISA

一方、パルブアルブミンについてはコラーゲン

パルブアルブミンの抗原性に関わるアミノ酸

画分による腹腔内感作・経口惹起させた群で顕著残基をアラニンに置換した変異型 r パルブアルに反応している結果であった。これについても同ブミンを作製し、ELISA により各マウス IgE の反じく図 1 より、コラーゲン画分内にはコラーゲン

応性を測定し低アレルゲン性を検証した（図 9）。

以外にもパルブアルブミン分子が含まれている

パルブアルブミンに対して IgE が顕著に反応すことがわかるが、当モデル作製法ではパルブアル

る２群を抽出し、各マウスの IgE を測定した結果、ブミンの方がコラーゲンよりもアレルゲンとし

腹腔内・経皮感作ともに野生型 r パルブアルブミて成立しやすい可能性が示唆された。また、生魚ンに対する反応性に対し、変異型 r パルブアルブ

身で経皮感作させた aspirin 併用の 2 群では併ミンの方が低下していた。特に、51 残基目のアス用していない群に比べパルブアルブミンに対しパラギン酸をアラニンに置換した D51A の変異型て顕著に反応した結果が得られている。Aspirinにおいては著しく反応が低下した。D51/90A 変異

は消化管の抗原取り込みの吸収を促進させ抗原型についてもほぼ同様の結果が得られ、D51A に性の上昇や症状誘発に関与することが知られて依存していることが示唆された。一方、D90A に関いるが、aspirin によってパルブアルブミンの抗してはマウスによって IgE 反応性が下がるもの

原性が高くなったことは非常に興味深く、臨床でと下がらないものの両方が確認された。各群 6 匹も同様の事例があるか確認する必要がある。n コから構成されているが、感作惹起後に野生型パル53

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

ブアルブミンに反応しなかったマウスが各群 1ビジン結合固相化ビーズを混合する。この測定手匹存在していたため当マウスの結果は除外した。

法においては、スポンジやマイクロプレートウェ

パルブアルブミンは、様々な魚種間で交差反応

ルなどの固相反応と比較して立体障害が最小限

性が高く、特にカルシウムイオン結合領域においになり、また球形のビーズが液相中で回転するこてアミノ酸類似性が高いことから、同領域が主要とにより抗原を認識する確率が高くなると考えな IgE エピトープと考えられている。また、同領られている 14,15)。これらを踏まえ、本研究で取り域に変異を入れたコイ由来パルブアルブミンに上げたアレルゲンコンポーネントについて、ビオ

おいて、マウスモデルを用いた実験では IgE 反応

チン化蛋白質の作製を可能にする Avitag 技術を性が著しく低下したことが報告されている 10)。今検 討 し た 。 Avitag は ア ミ ノ 酸 配 列 と し て回、当報告を参考に変異型 r パルブアルブミンをGLNDIFEAQKIEWHE をもち、このリシン残基に大腸作製し同様の結果が得られたことから、今後、エ菌内に含まれる酵素反応によりビオチンが付加

ノラーゼ含め、すでにヒト症例の抗原解析によりされる。このため、発現操作を行うだけで、ビオ特定した様々なアレルゲンコンポーネントに対チン化されたアレルゲンコンポーネントが作製し、同様の手法で低アレルゲン化を実施し、免疫可能となる 16)。

療法剤の原薬候補を選定していきたい。
残された課題及び発表予定
動物モデルの課題：今回の検討では、腹腔内感計画に追加して行ったこと
アラスタット 3g Allergy®はビオチン化した粗作を用いて全身感作のマウスモデルの作製を試抽出物などを抗原とし、患者血清とストレプトア

みた。しかしながら、臨床において、腹腔内感作

54

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

モデルは応用しづらく、摂取食物からの感作を鑑

139 年会および第 1 回日本アレルギー学会東海地

みるには、経口投与による全身感作モデルを作製方会にて発表した。今後、第 68 回日本アレルギするのが好ましい。そのため、今後はコレラトキー学会学術大会および第 135 回日本薬理学会近シンを用いた経口感作マウスモデルの作製を試

畿部会では経口惹起の成績を加えて発表する予みる必要がある。また、今後、アレルギー抑制試定である。

験の実施を想定しているが、その際にはフローサ
イトメーターによる制御性 T 細胞の population

今後の研究活動についてを確認する必要があるが、そのためには、マウス

前述したように、今回作製した魚アレルギーモの免疫細胞系の活性化を確認する必要があり、細デルマウスにおいて、アレルギー症状の誘発を確胞増殖試験を現在検討している。

認できた。しかしながら、臨床における摂取食品

蛋白質発現系の課題：ブレビバチルス菌発現系からの感作を鑑みた経口感作のマウスモデルをで産生したパルブアルブミンの回収量は、培地作製する必要があると考え、コレラトキシンおよ

100mL あたりで計算した場合、大腸菌発現系と比び抗原を併用する経口感作モデルを確立したい。

べると非常に少ないことがわかった。これについ今後、これらモデル系を用いて低アレルゲン化しては今後、最大 10L までの培地で培養可能なジャたコンポーネントを複数作製して投与し、症状抑ーファーメンタを利用し、発現条件の最適化など

制に関する研究を遂行する予定である。

により解決したい。また、ブレビバチルス菌発現最後に、本研究を遂行するにあたり、臨床医と系では、rβ-エノラーゼの培地上清へ分泌されなして「患者にとって有益な免疫療法剤とは何か？」かった。今回は市販されている pNCMO2 を利用しを常に意識した上で、得られた研究結果に対し共たが、今後プロモーターや分泌シグナルの検討に同研究者とともに議論してきた。患者にとって本より高産生される条件を検討していきたい。

当の意味での有益な免疫療法剤を提供するため

抗原解析：今回、3 種のアレルゲンコンポーネに、臨床と基礎がより一層密に連携して本研究をントに対し研究を進めてきたが、魚アレルギー症

継続していく。

例で特定した全てのコンポーネントに対して実参考文献

施できていない。抗原性について課題の残る n コ

1) 食物アレルギーの診療の手引き, 2017

ラーゲンも含め抗原・エピトープ解析を実施予定

2) Leung NY, Wai CY, Shu S, et al. Currentである。また ELISA については特異的 IgE を検出

immunological and molecular biologicalできるような系を構築し、精度の高い結果を提供

perspectives

し、動物実験との対比が必要である。

comprehensive

今回得られた成果の一部は、既に日本薬学会第55

onseafoodreview.

allergy:
ClinicaRev

魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

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魚アレルギー免疫療法を見据えた複合的低アレルゲン化コンポーネントの開発

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57

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

研究課題名

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

フリガナ

マツモト

代表者名

松本

ケンジ

健治

所属機関（機関名）国立成育医療研究センター研究所（役職名）部長
氏
共同研究者

名（フリガナ）

川上敏明(カワカミトシアキ)

免疫アレルギー・感染研究部

所属機関・役職名

役割分担

La Jolla Institute forAllergy and Immunology,
研究計画の立案と解析
University of California
San Diego, 教授

Kashiwakura JI, Ando T, Karasuyama H, Kubo M, Matsumoto K, Matsuda T,
Kawakami T.
本 助 成金 によ る 発
The basophil-IL-4-mast cell axis is required for food allergy.
表論文，学会発表
Allergy. 2019 Apr 21. doi: 10.1111/all.13834. [Epub ahead of print] PMID:
31006132

研究結果要約IgE 依存性の食物アレルギーは即時型アレルギー反応を起こし、時に生命の危険を来すアナフィラキシーが誘発される。経口免疫療法や経皮免疫療法の試みがなされているが、現時点で食物アレルギーにはアレルゲンの除去以外には確立された治療法はない。本研究はヒスタミン遊離因子(HRF)の機能を抑制することによる食物アレルギーの治療法の開発を最終目標としている。これまでの研究から、HRF はマ
スト細胞表面の IgE や IgG に結合して IgE を介したマスト細胞の活性化を増幅し、結果的にマスト細胞の増殖をも誘導して腸管の炎症を増悪させることが明らかとなった。また、マウスの IgE を介した免疫応答に HRF の結合の阻害活性を有するペプチドを前投与することによって症状をほぼ完全に抑制し、また症状発現後に投与することでも約 70%の効果が得られることを明らかにした。この結果は生体内でHRF が in vivo での IgE を介した反応を増幅しており、その阻害が IgE を介するアレルギー応答の治療薬として有用である事を示唆する。HRF の阻害活性は HRF の N 末を用いたペプチドが最も強かった。
また、HRF の二量体形成に関わる酵素は消化管に強く発現していることから、HRF 阻害剤の投与は経口的に行う事が有益と考えられた。

58

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発する HRF 阻害剤を、ヒト患者に使用することを研究目的
食物アレルギーは近年患者数が増え、社会問題

最終目標として開発する。阻害効果の強い 3 種のとなっている。IgE 依存性の食物アレルギーは即ペプチド由来阻害剤候補から最大の予防･治療効

時型アレルギー反応を起こし、時に生命の危険を果を示すペプチドをマウスモデルで同定を試み来すアナフィラキシーが誘発される。経口免疫療る。また、これらのペプチドに化学的な修飾を施法による免疫寛容の成功例が報告されつつある

したものも検討する。

が、食物アレルギーには確立された治療法はなく、(II) HRF 二量体形成酵素系の解析。HRF が IgE と新規の治療法の開発は喫緊の研究課題である。

結合して FcRI を会合させるためには、ジスルフ

IgE 依存性の食物アレルギーの解析に用いられる

ィド結合による二量体でなければならない。HRF

マウスモデルでは、IgE とその受容体 FcRI を介

二量体の 3 次構造は英国の Brian Sutton 博士らとしたマスト細胞の活性化が重要であることが知の共同研究ですでに明らかにした（Mol Immunol.

られている。

2018;93:216-222）6)。また、各種サイトカインで刺ヒスタミン遊離因子(HRF)は、N 末端の 19 アミ

激されたマクロファージなどの細胞が HRF 二量

ノ酸と H3 ドメインの 2 箇所で約 30%の IgE 抗体

体を産生分泌することも明らかにした。そこで、（および IgG 抗体）と直接結合する。ジスルフィ

培養細胞を用いて、HRF をジスルフィド結合させド結合による二量体の HRF は IgE と結合してる酵素系を同定したい。さらに、(III) HRF のジス

FcRI を会合させてマスト細胞を活性化できるこ

ルフィド結合ができない、HRF 単量体マウスを用と 1)、さらに一昨年度までの本財団研究費によっいて、食物アレルギー実験を施行する。HRF 阻害て、マウスの食物アレルギーモデルで、HRF には剤は FcRI と複数の IgG 受容体（FcRs）によるアレルギー症状の誘発期に炎症増悪作用があり、活性化を抑えることから、FcRI による活性化の②経口投与した HRF 阻害剤（HRF 単量体）は特みを抑制する Omalizumab（抗 IgE 抗体）より高

異的に小腸のマスト細胞に結合して活性化を抑い治療効果が期待でき、かつ安価に製造できる。

制する、③食物アレルギー誘発モデルでは、HRF

その効果推定と、阻害剤使用時の副反応の予見のと HRF 反応性抗体が増加し、Th2 サイトカイン

ために動物実験を行う。ペプチド由来の HRF 阻

が上皮細胞、線維芽細胞、マクロファージに HRF

害剤は、アレルゲンを含む可能性のある食品を摂産生を誘導する、④急速経口免疫療法を施行１年取する前に服用することで、食物アレルギーを未後の有効例やマウスでは、血中 HRF 反応性 IgE

然に防ぐ、あるいは症状を軽減することが出来るが低いのに対して、経口免疫療法が無効例や経口と思われる。また、少なくとも、免疫療法施行時

免疫療法を施行しなかったマウスでは血中 HRFの抗原投与によるアナフィラキシーを防ぐこと

反応性 IgE が増加に転じた、ことなどを明らかにが期待できる。また、HRF 反応性 IgE 抗体価が免してきた 4)。本年度は(I) HRF-IgE 間の結合を抑制

疫療法の治療効果の客観的指標となる可能性が59

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発ある。

遺伝子発現解析を行う。

研究計画及び研究手法

II.

I.

食物アレルギー治療に最適な HRF 阻害剤のHRF 二量体形成酵素系の解析

ジスルフィド結合を推進する酵素には、15 種
類の protein disulfide isomerases (PDIs)とそれらの選択
抗原 ovalbumin (OVA)を i.p.注射によって感作

酸化酵素(Ero1l, Ero1lb, Prdx4, Gpx7/8, VKOR)が連したマウスに、同じ抗原を複数回経口投与して下結して行われる場合と, PDIs なしでジスルフィド

痢を発症させる。HRF 阻害剤(GST-N19 または結合を直接触媒する QSOX などが知られている。

HRF-2CA [HRF の単量体])を抗原投与の直前に投食物アレルギーの誘発前後の腸管の網羅的な遺与すると下痢の発症が抑えられることは、理研で伝子発現解析から、Ero1l と Ero1lb の mRNA が食おこなった 10 回以上の実験で確かめられている。

物アレルギーの誘発によって増加することが判

下痢発症後に HRF 阻害剤を投与した場合も、下明した。15 種類の PDIs とほかの酸化酵素にはそ

痢の発症頻度と重症度を 70%以上低下させられのような変化がみられないことから、Ero1l とる。アナフィラキシーによる体温の低下が最も大

Ero1lb および、これらの酵素と連関することが知きいのは 3、4 回目の抗原投与時であることが判られている PDI が、HRF 二量体形成酵素系の候明した。ヒト患者に使用できる HRF 阻害剤とし補として浮上した。さらに、各種サイトカインでて、HRF の N 末端部分に由来する N19、N25、刺激されたマクロファージなどの培養細胞がN32、および単量体の HRF (HRF-2CA)が考えられ

HRF 二量体を産生分泌することを証明した。以上る。これらのペプチドをそのまま、または化学修より、二量体形成酵素系候補に対する siRNA (ま飾（N 末端のアセチル化や PEG 化、C 末端のア

たは CRISPR/Cas9 使ってノックアウト)をこれらミド化）して安定性と可溶性を高めて検討する。

の 細 胞 に 導 入 し て か ら 、 HRF 二 量 体 の 量 を

3、4 回目の抗原投与前に HRF 阻害剤を種々の経

western blot 法を用いて測定する。また、培養細胞路で投与し、下記①～⑤を指標として阻害剤の治で得られた結果は、PDI、Ero1l、Ero1lb の欠損マ

療効果とその機序を検討する。①下痢の重症度・ウスの脾臓細胞を用いて再現することが可能で体温。②最終抗原暴露後に腸管組織を染色。炎症ある。

度は、H&E 染色で、マスト細胞数は、chloroacetate
esterase 染色で測定。③血中 HRF 濃度および HRF

III. HRF 単量体マウスを用いた食物アレルギー

反応性抗体価を ELISA 法で測定。④抗原暴露後、実験

リンパ節を回収し、抗原で再刺激後、各種のサイ

HRF のジスルフィド結合ができない、C172A

ト カ イ ン 産 生 を ELISA 法 で 測 定 。 ⑤ DNA

mutant マウスを樹立した。現在食物アレルギーに

microarray (または RNA-Seq)法で腸管の網羅的な最適な Balb/c マウスに backcross しており、H30

60

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

年度には食物アレルギー実験が可能となる。このーモデル（2 回の OVA と Alum の腹腔内投与によマウスは食物アレルギー抵抗性を示すことが期

る感作、連続 9 日間の OVA 経口負荷による下痢待される。

の発症を検討）を用いて、効果相の直前に好塩基球を除去する抗体を投与してから抗原チャレン

計画から外れて実施した内容：ジを行い、その影響を検討した。
その結果、好塩基球を除去したマウスでは下痢

高親和性 IgE 受容体を発現して即時型の免疫応の発症頻度が有意に低下した。また、好塩基球の答を行う細胞はマスト細胞と好塩基球である。ヒ

コンディショナルノックアウトマウスである

トマスト細胞は組織中にしか存在しない。一方、

Bas-TRECK マウスを用いて、効果相の直前にジ

ヒト好塩基球は定常状態では末梢血内にしか存

フテリアトキシンを投与して好塩基球を除去し在しない。IgE 依存性の食物アレルギーの症状発ても全く同様の結果であった。

現にはマスト細胞と好塩基球のどちらが重要で次に、好塩基球が下痢の発症に与える影響を検あるかは、長らく議論の的であるが結論は出てい討するため、好塩基球が IgE 抗体の架橋後に特異なかった。

的に産生する IL-4 が重要であると仮説を立て、本研究に用いているマウスモデルは IgE 依存性

好塩基球を除去したマウスに OVA を負荷する際に下痢を発症するモデルであり、ヒトの食物アレに IL-4 を同時に投与して影響を検討した。そのルギーに見られるような皮膚所見や体温低下な結果、好塩基球除去マウスでも IL-4 を投与する

どは惹起されない。しかし、IgE や IgE 受容体、ことで下痢の発症頻度は増加した。そのため、IL-

マスト細胞のいずれかを欠損するマウスでは下4 の役割の少なくとも一部は IL-4 を介している

痢がほとんど誘発されないことから、IgE 依存性

可能性が示唆された。さらに、マウス食物アレルにマスト細胞が活性化されているとされて来た。

ギーモデルの抗原チャレンジに際して抗 IL-4 抗

この系における、好塩基球の関与は不明であった。

体を投与してその影響を検討した。その結果、抗このマウス実験系では、抗原感作時に好塩基球

IL-4 抗体投与マウスでは著明な下痢の発症抑制を除去すると、IgE 抗体産生が著しく低下するこが認められた。

とから、抗体産生に好塩基球由来の IL-4 が重要以上の結果から、IgE 依存性のマウス食物アレルであることが知られている。そのため、好塩基球

ギーモデルの発症には好塩基球由来の IL-4 が重欠損マウスでは感作自体が誘導できないので食要な役割を演じていることが示唆された。

物アレルギーモデルが樹立できず、好塩基球の関
上記の検討は研究計画書には記載されていなか与の検討が行えなかった。

ったが、本研究の標的分子である HRF の作用機序を検討する上で極めて重要な意義を持つこと

今回、私達は IgE 依存性のマウス食物アレルギ

61

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

種類の中では、N19 が最も阻害の potency が高いから、一部本研究の一環として行った。

事が明らかとなった。GST-N19 はマウスだけで無以上の成果は欧州免疫アレルギー学会の機関

く、ヒトの好塩基球を用いた実験でも同等に HRF誌である Allergy（Impact Factor: 6.048）に 2019 年

による IgE 抗体の架橋を阻害する事が明らかとな

4 月 21 日に掲載された。本論文の謝辞にはニッっていることから、今後は GST-N19 を臨床応用

ポンハム食の未来財団のサポートを受けた事がの第一候補として前臨床試験を目指す。

記載されている。
II.
結果と考察
I.

HRF 二量体形成酵素系の解析

ジスルフィド結合を推進する酵素には、15 種

食物アレルギー治療に最適な HRF 阻害剤の類の protein disulfide isomerases (PDIs)とそれらの選択酸化酵素(Ero1l, Ero1lb, Prdx4, Gpx7/8, VKOR)が連

実験系が安定した後に行った結果では、経口投結して行われる場合と, PDIs なしでジスルフィド

与した HRF-2CA は特異的に小腸のマスト細胞表結合を直接触媒する QSOX などが知られている。

面に結合して、ex vivo での抗原や HRF によるマ

食物アレルギーの誘発前後の腸管の網羅的な遺スト細胞の活性化を抑制した。また、胃内に OVA

伝子発現解析から、Ero1l と Ero1lb の mRNA が食を反復投与することによって誘導される下痢や物アレルギーの誘発によって増加することが判

消化管のマスト細胞の増多は、HRF の IgE や IgG明した。15 種類の PDIs とほかの酸化酵素にはそへの結合を阻害するペプチド（GST-N19）や HRFのような変化がみられないことから、Ero1l と阻害剤（HRF-2CA：HRF の単量体）の投与によっ

Ero1lb および、これらの酵素と連関することが知て著明に阻害された。また、GST-N19 投与によっられている PDI が、HRF 二量体形成酵素系の候て腸管上皮の IL-4 や IL-13 の mRNA 発現も著明

補として浮上した。さらに、各種サイトカインでに低下した。これらのことから、HRF にはアレル刺激されたマクロファージなどの培養細胞がギー症状の誘発期（感作期ではなく）の炎症増悪

HRF 二量体を産生分泌することを証明した。

作用があることが示唆された。もっとも強く HRF

Ero1l と Ero1lb の mRNA は全身の臓器の中で、を阻害するペプチドの選別のために、HRF と免疫

消化管に最も強く発現しており、消化管におけるグロブリンの結合部位に相当する N 末の 19、25、

HRF 二量体の形成は HRF が産生される局所で誘32 残基をもちいたペプチドを合成した。また、導される可能性が強く示唆された。また、このこ

HRF の単量体 HRF-2CA にも HRF の阻害活性がとは食物アレルギーにおける HRF の阻害のため認められた。

には HRF 阻害剤の経口投与が有用である事を示今回用いた HRF の N 末端部分に由来する N19、

唆する事実と考えられた。

N25、N32、および単量体の HRF (HRF-2CA)の 4

62

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

III.

ます。また、HRF の二量体形成の機序は明らかと

HRF 単量体マウスを用いた食物アレルギ

ー実験

なってきましたが、その酵素の誘導機構や、HRF

HRF のジスルフィド結合ができない、C172Aの産生機序、免疫療法が HRF の産生や IgE 抗体

mutant マウスを 2017 年末に樹立した。食物アレの HRF 結合性に与える影響のヒトでのデータな

ルギーに最適な Balb/c マウスに backcross して実ど、重要な課題がまだまだ多く残されております。

験に供することを目指していたが、2018 年度中

本研究を更に強力に推進してゆきたいと考えてに実験に十分な匹数を確保することが出来ず、おります。今後もご指導ご鞭撻を宜しくお願い申HRF 単量体マウスのアレルギー免疫応答の全貌し上げます。

を明らかにするに至っていない。このマウスのフェノタイプと食物アレルギーモデルの解析は現

参考文献

在も継続しており、成果が出次第、論文化する方

1）Kashiwakura J, Ando T, Matsumoto K, Kimura M,
Kitaura J, Matho MH, Zajonc DM, Ozeki T, Ra C,

針である。

Macdonald SM, Siraganian RP, Broide DH,
Kawakami Y, Kawakami T. Histamine-releasing

論文発表

factor has a proinflammatory role in mouse models

Kashiwakura JI, Ando T, Karasuyama H, Kubo M,

of asthma and allergy. J. Clin. Invest. 2012

Matsumoto K, Matsuda T, Kawakami T. The

Jan;122(1):218-228.

basophil-IL-4-mast cell axis is required for food2）Brandt EB, Strait RT, Hershko D, Wang Q, Muntel

allergy. Allergy. 2019 Apr 21. doi: 10.1111/all.13834.

EE, Scribner TA, Zimmermann N, Finkelman FD,[Epub ahead of print] PMID: 31006132

Rothenberg ME. Mast cells are required forexperimental oral allergen-induced diarrhea. J. Clin.

今後の研究活動について

Invest. 2003;112 (11):1666-177.

HRF が食物アレルギーを始めとするアレルギ3）Yamashita H, Takahashi K, Tanaka H, Nagai H,ー疾患の増悪に寄与していることは、疑う余地がInagaki N. Overcoming food allergy throughないほどデータが蓄積してきております。また、

acquired tolerance conferred by transfer of Tregs in

HRF 阻害剤がヒトに応用できる可能性はまだ直a murine model. Allergy 2012 Feb; 67(2):201-209.

接の証拠がないもののマウスでの Proof of concept

4) Kawakami T, Blank U. From IgE to omalizumab.
J. Immunol. 2016;197:4187-4192.5）(POC)はほぼ固まったと考えております。今後、現在の候補群から最適な HRF 阻害剤を決定しま

5) Ando T, Kashiwakura JI, Itoh-Nagato N, Yamashita

したので、なるべく早く臨床試験に進むことを考H, Baba M, Kawakami Y, Tsai SH, Inagaki N,

えております。しかし、さらに薬物製剤法の改良

Takeda K, Iwata T, Shimojo N, Fujisawa T, Nagao
M, Matsumoto K, Kawakami Y, Kawakami T.

（たとえばコートする）や抗体の開発などの第二Histamine-releasing factor enhances food allergy. J

世代の HRF 阻害剤の開発にも注力したいと思い

Clin Invest. 2017;127(12):4541-4553

63

ヒスタミン遊離因子の阻害による食物アレルギー治療薬の開発

6) Doré KA, Kashiwakura JI, McDonnell JM, Gould

7) Kashiwakura JI, Ando T, Karasuyama H, Kubo M,

HJ, Kawakami T, Sutton BJ, Davies AM. Crystal

Matsumoto K, Matsuda T, Kawakami T. The

structures of murine and human Histamine-basophil-IL-4-mast cell axis is required for foodReleasing Factor (HRF/TCTP) and a model forallergy.

HRF dimerisation in mast cell activation. Mol

10.1111/all.13834. [Epub ahead of print] PMID:

Immunol. 2018;93:216-222.

31006132

64

Allergy.

2019

Apr

21.

doi:

食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発

研究課題名

食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発

フリガナ

ムラタ

代表者名

村田

タカヒサ
幸久

所属機関（機関名）東京大学（役職名）准教授
氏
共同研究

大学院農学生命科学研究科

名（フリガナ）

大矢幸弘

放射線動物科学研究室

所属機関・役職名
国立成育医療研究センターアレ
ルギーセンター・センター長

役割分担
患者の診断と採尿を担当

発表論文
・Epithelial cell-derived prostaglandin D2 inhibits chronic allergic lung inflammation in
mice.Maehara T, Nakamura T, Maeda S, Aritake K, Nakamura M, Murata T. FASEB J.
2019 Apr 24:fj201802817R.
・Therapeutic potential of D prostanoid receptor 1 signal enhancement in a murine model
本助成金による発of food allergy. Nakamura T, Hirai R, Tachibana Y, Masuko S, Nagata N, Murata T. J
表論文，学会発表
Allergy Clin Immunol. 2019 Jun;143(6):2290-2293.e4.
・L-PGDS-derived PGD2 attenuates acute lung injury by enhancing endothelial barrier
formation. Horikami D, Toya N, Kobayashi K, Omori K, Nagata N, Murata T. J Pathol.
2019 Feb 8. doi: 10.1002/path.5253.
学会発表(次ページへ続く)研究結果要約
食物アレルギーは食物抗原を取り込むことで起こるアレルギー反応であり、下痢や嘔吐、皮膚炎などの症状が出る他、ショックを起こして死に至るケースもある。現在この疾患を予防・治療するには、抗原を特定して摂食回避するか、減感作療法を行うより方法はない。食物アレルギーは子供に多い疾患であるが、その患者数は近年急激に増加しており、的確かつ簡便な診断方法と治療・管理方法の開発が求められている。
現在、食物アレルギーを診断するには、医師が患者に抗原を食べさせて症状の有無を観察する「食物経口負荷試験」行う必要がある。しかし、体調の変化に依存して誘発される食物アレルギーもあり、その診断は容易ではない。減感作療法では、確定診断により決定された食べられる量以下の抗原を、毎日食することで食べられる量を増やしていくが、この方法も医師の経験と勘によるところが大きく、客観的な指標が無い。
申請者は子供でも採取が簡単な尿に、PGDM という物質が食物アレルギーに特異的かつ症状の程度に比例して排泄されることマウスモデルを用いて発見し１）、このマーカーがヒトの経口抗原負荷試験の有用な診断指標になることも証明してきた２）。
本提案では、この尿中 PGDM を用いた食物アレルギーの診断法・治療法の標準化を目的に掲げ、尿中PGDM が広く食物アレルギーの診断や、免疫療法の治療指標として利用できる可能性を、ヒト患者やマウスの尿を用いて示すことに成功した。

65

食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発

学会発表
・「尿中 PGD2 代謝産物は食物アレルギーの新規バイオマーカーである」村田幸久、稲垣真一郎、前田
真吾、中村達朗、成田雅美、原田広顕、下澤達雄、矢冨裕、大矢幸弘、第 121 回日本小児科学会学術集会、2018 年 4 月 21 日
・「食物アレルギー減感作マウスモデルにおける尿中 tetranor-PGDM の動態」中村達朗、平井里奈、橘侑里、村田幸久、第 60 回日本脂質生化学会、2018 年 5 月 31 日
・
「PGD2 受容体 DP シグナル強化は食物アレルギーの進行を抑制する」益子櫻、中村達朗、平井里奈、
村田幸久、第 60 回日本脂質生化学会、2018 年 5 月 31 日
・「The role of PGD2/CRTH2 signal in defense reaction to bee venom」 Misato Kida, Tatsuro Nakamura, Yuki
Fujiwara, Takahisa Murata、東京大学生命科学シンポジウム、2018 年 6 月 9 日・「アレルギー性鼻炎モデルマウスの鼻汁中における脂質メディエーターの産生量の変化」橘
村達郎、村田 幸久、東京大学生命科学シンポジウム、2018 年 6 月 9 日

侑里、中・「小児食物アレルギー患者の免疫療法効果予測としてのプロスタグランジンＤ２尿中代謝産物の有用性」稲垣真一郎、成田雅美、中村達郎、石川史、苛原誠、佐藤未織、三井元子、齋藤麻耶子、宮田真貴子、宮地裕美子、山本貴和子、福家辰樹、野村伊知郎、村田幸久、大矢幸弘、第 67 回日本アレルギー学会、2018 年 6 月 22 日・
「 Urinary tetranor-PGDM predicts the change of oral food antigen-induced allergic symptom in mice」 Tatsuro
Nakamura, Rina Hirai, Takahisa Murata.第 67 回日本アレルギー学会、2018 年 6 月 22 日
・「L-PGDS-derived PGD2 attenuated acute lung injury by protecting endothelial cells」 Horikami D, Naoki T,
Kobayashi K, Omori K, Nakamura T, Aritake K, Murata T. 第 18 回 国際薬理学会、2018 年 7 月 2 日・「Signal enhancement of D prostanoid receptor prevents the development of food allergy」 Tatsuro Nakamura,
Rina Hirai, Takahisa Murata. 第 18 回 国際薬理学会、2018 年 7 月 2 日
・「マウス食物アレルギーモデルにおける DP1 作動薬の抑制効果」中村達朗、平井里奈、村田幸久、
第 161 回日本獣医学会、2018 年 9 月 11 日
・
「感染性およびアレルギー性結膜炎における涙液中の脂質産生量の比較」林亜佳音, 中村達朗, 永田
奈々恵, 村田幸久、第 161 回日本獣医学会、2018 年 9 月 11 日
・「アレルギー性結膜炎における涙液中脂質産生動態の解明および PGD2 シグナル阻害の治療効果の検討」林亜佳音、中村達朗、永田奈々恵、村田幸久、薬理学会関東部会、2018 年 10 月 20 日
・
「PGD2 シグナルの欠損と強化で変わる食物アレルギー病態フェノタイプ」中村達朗、平井里奈、橘侑里、村田幸久、第 1 回日本比較薬理毒性学会春季研究会、2019 年 1 月 26 日

66

食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発

研究目的

これらの背景を本提案では、尿中 PGDM を用い

食物アレルギーは食物抗原を取り込むことで起た食物アレルギーの診断法・治療法の標準化を目こるアレルギー反応であり、下痢や嘔吐、皮膚炎

的に掲げ、尿中 PGDM が様々な食物アレルギーなどの症状が出る他、ショックを起こして死に至の診断や、免疫療法の治療指標となりうるか否かるケースもある。現在この疾患を予防・治療するを、ヒト患者とモデルマウスの尿を用いて明らかには、抗原を特定して摂食回避するか、減感作療にすることを目的に研究を行った。

法を行うより方法はない。

食物アレルギーを診断するには、医師が患者に抗研究計画及び研究手法

原を食べさせて症状の有無を観察する「食物経口① 尿中 PGDM のアレルギー診断への応用（ヒ負荷試験」行う必要があり、非常に手間がかかる。

ト）：成育医療研究センターにおいて、診断をまた、食事後の運動によりや薬物投与により誘発行った患者の尿を採取し、質量分析装置を用される食物アレルギーもあり、その診断は困難をいて PGDM の濃度を測定した。これにより症極める。減感作療法では、確定診断により決定さ状と比例して PGDM が排泄されるか確認した。

れた食べられる量以下の抗原を、毎日食することで食べられる量を増やしていく。この方法も医師② 尿中 PGDM の免疫寛容療法への応用（マウの経験と勘によるところが大きく、寛解に数年をス）： 食物アレルギーモデルマウスに対し、要す。アナフィラキシーを起こすなどして、治療

脱感作療法を行った。これらのマウスの尿中を中断する患者も少なくない。つまり、安全かつPGDM 濃度が症状と共に推移し、治療指標と的確な食物アレルギーの診断や治療には、病状をなりうるか評価した。

反映できる病態マーカーの探索が必須である。
③ 症状を抑える目的で処置される、薬剤の投与
申請者は乳幼児でも採取が簡単な尿を対象に、脂が、PGDM の排泄量に影響を与えるかを、マ

質代謝産物の網羅的解析を行い、PGDM という物

ウスモデルを用いて確認した。

質が食物アレルギーに特異的かつ症状の程度に比例して排泄されることマウスを用いて発見し④ マウスのアナフィラキシーモデルを作製し、た（Maeda Scientific Reports 2017）。また、成育医

極度の症状を呈した場合にも尿中 PGDM の濃療研究センター大矢幸弘センター長に御協力い度が、診断の指標となるかを検証した。

ただき、このマーカーがヒトの食物経口負荷試験⑤ 免疫寛容療法への応用（ヒト）：成育医療研究の有用な診断指標になることの証明に成功したセンターにて免疫療法を受けている患者の尿（Inagaki J Allergy Clin Immunol 2018）。

中の PGDM 濃度を測定し、食物アレルギー患

67

食物アレルギー診断マーカーの応用と診断キットの開発

者の免疫療法時の症状とマーカー濃度の推移⑤ 結果：免疫寛容療法への応用（ヒト）：成育医に相関が確認されるか検証した。

療研究センターにてリクルートされた、免疫療法を受けている患者の尿中の PGDM 濃度を

上記研究実施内容は、ほぼ申請時の研究計画通測定した。その結果、尿中 PGDM 濃度が低下りに行った。

する傾向のある患者では、可食量が増える傾向が観察された。

結果と考察① 結果：成育医療研究センターにおいて、リク

今後の研究活動についてルートされた患者 11 名に対しして、抗原摂食

本研究では、尿中の PGDM 濃度が、食物アレルギ

後の尿中 PGDM の濃度を測定した。その結果、ーの診断や治療に有用な指標であることを実験

症状を呈した患者では、尿中 PGDM 濃度が上動物とヒト患者を対象とした研究で明らかにし昇する傾向が確認された。

た。安全な食物アレルギーの診断や管理ツールとして尿中 PGDM 濃度を応用・実用化していくこと② 結果：感作したマウスへ、卵白アルブミンを目標とし、今後それぞれの研究における例数を増連続投与するとアレルギー症状が、発現・悪やし、より詳細な検討を行っていきたい。

化した後、症状が改善した。これを脱感作モデルとした。これらのマウスの尿中 PGDM 濃

参考文献

度を測定したところ、症状の悪化や緩和に先

1）Prostaglandin D2 metabolite in urine is an index ofんじて、尿中 PGDM 濃度の上昇や低下が観察

food allergy. Maeda S, Nakamura T, Harada H,

されることが分かった。

Tachibana Y, Aritake K, Shimosawa T, Yatomi Y,
Murata T. Sci Rep. 2017 Dec 15;7(1):17687③ 結果：卵白アルブミンによる感作と刺激による食物アレルギーモデルを作製し、上記と同

2）Urinary PGDM, a prostaglandin D2 metabolite, is様に症状の評価を行った。これらのマウスに、

a novel biomarker for objectively detecting allergic
reactions of food allergy. Inagaki S, Maeda S,

治療に用いられる薬物を投与した。その結果、Narita M, Nakamura T, Shimosawa T, Murata T,

尿中の PGDM 濃度の上昇に影響を与える薬物

Ohyaと、与えない薬物があることが分かった。

Y.

J

AllergyClin

Nov;142(5):1634-1636.e10.

④ 結果：極度の血圧低下や体温低下を伴う、ア
ナフィラキシーモデルをマウスで作製した。
この時尿中の PGDM の濃度の上昇が確認できた。

68

Immunol.

2018ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて研究課題名

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根
絶に向けて

フリガナ

モリタ

代表者名

森田

エイシン
栄伸

所属機関（機関名）島根大学医学部皮膚科学講座（役職名）教授
氏

共同研究者

名（フリガナ）

遠藤 隆(エンドウタカシ)
松尾裕彰(マツオヒロアキ)
松原隆敏(マツバラタカトシ)
松本正人(マツモトマサト)

所属機関・役職名

役割分担

ω-5 グリアジン欠損小麦新品種の開発
ω-5 グリアジン欠損小麦の動物モ
広島大学薬学部教授
デルによる評価島根県中山間地域研究 ω-5 グリアジン欠損小麦の栽培法
センター研究員の改良
ω-5 グリアジン欠損小麦の実用化
株式会社メディカル工笑
栽培および食品加工
龍谷大学農学部教授

・発表（資料１参照）「小麦アレルギーの主要アレルゲンω-5 グリアジンを欠失した 1BS-18 系統
本 助 成金 によ る 発の市場展開に向けて」アグリビジネス創出フェア 2018（2018 年 11 月 22 日）
表論文，学会発表
・特願 2019-004081「低アレルゲン化小麦」2019 年 1 月 15 日、森田栄伸、河野邦江、遠藤隆、松尾裕彰、横大路智治
研究結果要約
小麦は世界各国で主食とされ、本邦においても市場に流通する多くの食品に含まれる。小麦アレルギ
ー患者は、日常の食事において常に気を配る必要があり生活の質が低下する。新生児から乳幼児期に発症する小麦アレルギーの多くは学童期までに治癒するが、成人の小麦アレルギーは比較的治癒しにくい。
成人期以降の小麦アレルギーは、特殊型の食物依存性運動誘発アナフィラキシーとして発症することが多い。本症は、小麦食品の摂取に加えて運動や薬剤、アルコール、ストレス等の二次的要因との組み合
わせにより、蕁麻疹等のアレルギー症状をきたし、重篤な場合はショックをきたす。成人患者の約 95％は ω-5 グリアジンを主要抗原として認識し、本 ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーは、国内成人で約0.2%の有病率を有する 1-3)。本共同研究では、これまでに育成してきた ω-5 グリアジン遺伝子が欠損した 1BS-18 系統小麦（1BS-18 ホクシン）4-6) を用いてヒトを対象とした臨床研究を計画し、ω-5 グリアジ
ン感作型小麦アレルギーの治療法の確立を試みた(UMIN: UMIN000024951)。また、既報のアレルギー動物モデルにおける 1BS-18 ホクシンの低感作性に関するエビデンスをより強固にするため、アレルギー
モデルラットを用いた低感作性の評価系を確立することを試みた。さらには、ω-5 グリアジン欠損食用
小麦の社会実装を視野に入れ、1BS-18 ホクシンと他の市場流通小麦の交配、島根県中山間地域に適した栽培条件の検討、６次産業化の検討等を行った。

69

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて目的２．治療法の確立（医師主導の臨床研究）

研究目的

ω-5 グリアジン特異的 IgE を有する成人小麦
食物アレルギーの対策および課題は、大きく分アレルギー患者に対して、ω-5 グリアジン欠損小けて感作予防と治療の 2 段階に分けられる。申請

麦系統 1BS-18 ホクシンから作製したパン（1BS-者らは 2016 年度までの研究成果として、小麦の18 ホクシンパン）の摂取可能量を確認し、その結1B 染色体上のω-5 グリアジン遺伝子が座乗する

果に基づいて、1BS-18 ホクシンパンを継続摂取

部分が欠損した 1BS-18 系統では、経口摂取によすることによる減感作療法の有効性を確認する

る小麦アレルギー感作が成立しにくいことをモための臨床試験を行う。

ルモットモデルにより証明した（文献１）。このことは、1BS-18 由来の小麦を普及させることで研究計画及び研究手法

小麦アレルギーの発症を予防できる可能性を示
研究計画および手法の概要している。一方、1BS-18 由来の小麦は、ω-5 グリ

本共同研究は、島根大学医学部皮膚科学講座を

アジンを含有しない事から、小麦アレルギー患者

中心にω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーのでも摂取できる可能性がある。小麦アレルギー患

感作予防および治療法の開発を目的として 2007

者が 1BS-18 由来小麦を少量ずつ継続摂取するこ

年に発足し、関係研究者らの協力によりエビデンとで、減感作が成立する可能性があると考えられ

スの構築が推進されて現在に至っている。今年度る。

は、島根大学（医学）、龍谷大学（農学）、広島大
目的１．感作予防学（薬学）、島根県中山間地域研究センター（社会申請者らの島根県下の疫学調査によれば、成人実装のための農業研究）、メディカル工笑（農業、のω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの有病

６次化産業推進）が参画してω-5 グリアジン欠損率は 0.2%であり、国内では数万人の小麦アレル

小麦の小麦アレルギーに対する感作予防およびギー患者が存在すると推定される。小麦アレルギ

治療可能性の検討を行った。

ーの主要抗原ω-5 グリアジンを欠損した小麦品
島根大学種が市場に流通すれば、小麦アレルギーに感作される患者数が減少すると考えられる。H30 年度は、研究統括機関として研究会の開催、研究進捗の管理、共同研究機関および連携機関との連絡調整

ラットモデルを用いて低アレルゲン性の評価系を行った。具体的には、2018 年度は年 3 回の研究を確立するとともに 1BS-18 の実用化を視野に入会の開催を予定し、関係機関の意思疎通および研れ、栽培や加工に適した実用品種に戻し交配する

究目的の共有を図るために情報交換および意見ことにより、多様なω-5 グリアジン欠損小麦品種交換の場を提供して、共同研究が円滑に推進されを確立する。

るよう努めた。また、本研究の将来的なアウトカ
ムを研究成果の社会実装（事業化）に定め、島根70ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて

県中山間地域の活性化に資する仕組みづくりに開始した。なお、本研究では臨床研究に用いる小関する基礎的検討を考案した。さらに、ω-5 グリ

麦の確保が最優先課題の一つであり、製粉方法のアジン感作型小麦アレルギー患者における ω-5

検討、製パン性の検討、1BS-18 ホクシンパンを継グリアジン欠失小麦の摂取可能量の判定、治療可

続的に提供できる体制の準備についても併せて能性を明らかにするために次に示す臨床研究を行った。

臨床研究の名称「低アレルゲン化小麦 1BS-18 ホクシンの臨床応用に関する多施設共同第 II 相臨床試験」
研究対象：ω-5 グリアジン感作型の成人小麦アレルギー患者 20 名
研究形態：多施設共同研究（研究代表機関：島根大学、共同研究機関：国立病院機構福岡病院、広島大学、神戸大学、大阪大学等）
島根大学医の倫理委員会承認番号：20160823-3
UMIN 登録番号：UMIN000024951
本研究で明らかにすること
1. 1BS-18 ホクシンパンの摂取可能量
2. 1BS-18 ホクシンパンを継続摂取することにより減感作療法が成立するか否か
3. 治療前後の、通常のパン小麦および 1BS-18 ホクシン由来のグルテンに対する患者由来 の末梢血好塩基球の反応性
研究方法
ω-5 グリアジン感作型の小麦アレルギー患者に対して 1BS-18 ホクシンパンの摂取の安全性および継続摂取による減感作療法の有用性を確認する臨床研究を実施する。ステップ１ では、摂取可能量を評価するために 1BS-18 ホクシンパンの段階的摂取（1BS-18 ホクシンパンの摂取を 10 グラムより開始し、段階的に 60 グラムまで摂取）を行い、アレルギー 症状の有無にて評価する。ス
テップ２では、ステップ１の摂取可能量の評価に基づいて安全な摂取量を定め、3 カ月継続して摂取し、開始前後の好塩基球活性化試験により判定する。

71

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて

小麦あるいは 1BS-18 から抽出したグルテンを静龍谷大学

脈内負荷した際の直腸温を測定することで評価

1BS-18 ホクシンに日本の春まき小麦 4 品種（ミ

した。さらに、1BS-18 の ω-5 グリアジンに対す

ナミノカオリ、ハルユタカ、はるきらり、春よ恋）

る感作予防効果を経口免疫寛容の点から明らかを交配して得た F1 雑種を制御植物培養室で世代にすることを目的に、予備的検討として、卵白ア促進栽培した。4 系統の F1 雑種にそれぞれの品

ルブミンを用いた経口免疫寛容モデルラットを種を戻し交配し（B1）、さらに自家受精した後、作製した。経口免疫寛容モデルは、あらかじめ溶

1BS-18 が ホ モ 接 合 に な っ た 個 体 を 選 抜 し た媒または卵白アルブミンを 5 日間経口摂取させ（B1F1）。この 4 品種由来の 1BS-18 ホモ接合個

た 4 週齢の Brown Norway ラットに、卵白アルブ

体を温室で栽培し、その自家受精子孫（B1F2）をミンを単回皮下感作することで作製した。経口免

野外のポットで栽培して優良な個体を選抜した。

疫寛容の誘導は、血清中の卵白アルブミン特異この優良個体の自家受精子孫（B1F3）を圃場でのIgE 抗体価と卵白アルブミンを静脈内投与した際形質調査を目的に栽培した。これらの個体の収穫の直腸温の低下を指標として評価した。

と形質調査は 2019 年の夏に行う予定である (図中山間地域研究センター

１参照)。

2017 年度産小麦の試験栽培までの検討では、播種時期を大きくずらすことにより収穫時期をずらし、赤かび病および穂発芽のリスクの高い梅
雨時期の収穫の回避を試みた（早区：9 月下旬、
図1 春まき小麦での1BS-18系統の育成過程．（龍谷大学）

対照区：10 月下旬、遅区：3 月播種）。しかし、いずれの播種時期でも収穫時期が梅雨時期と重広島大学なり、2018 年度産の試験栽培では、人体に影響を小麦アレルギーの発症における感作と誘発に及ぼす「赤カビ病」を回避する栽培方法を検討す

対する 1BS-18 の有用性をラットモデルで評価しるため、耕種的防除で赤カビ病の発病を抑制してた。感作に対する予防効果は、4 週齢の Brown

防除体系を確立するため、防除回数（無防除、防Norway ラットに通常小麦あるいは 1BS-18 から

除 1 回、防除 2 回）と赤かび病の発生に関する検抽出したグルテンを複数回腹腔内投与し、ω-5 グ

討を行った。併せて、臨床研究に供する良質なリアジンを静脈内負荷した際のアレルギー症状

1BS-18 ホクシンの確保のためハウス栽培を行っ誘発の有無とその強度を、直腸温の低下を指標とた。

して評価した。また、症状誘発に対する予防効果
メディカル工笑は、ω-5 グリアジンを複数回腹腔内投与すること2017 年 10 月下旬にホクシン 1BS-18 を播種し、で感作した小麦アレルギーモデルラットに、通常72

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて2018 年 6 月に収穫を行う予定とした。この栽培

ングの染色体部分欠失系統)6) とホクシン (一般検討を行うことにより、島根県西部における小麦

流通小麦品種) の交配によるものである。1BS-18

栽培の実施可能性を検証する。2018 年に収穫す

ホクシンは、ω-5 グリアジンを欠失したことでアる小麦を用いて６次化のためのアイテムづくり

レルギー症状発症に強く寄与する主要抗原が除を検討することとした（全粒粉クッキー、全粒粉

去されたが、その類似タンパク質が残存するため

うどん等）。2018 年 10 月下旬に、ホクシン 1BS-

抗原性は保持しており、減感作療法に有用な小麦18 を播種し、引き続き島根県西部での小麦栽培系統であると考えている（2019 年 10 月 17 日、の実施可能性の検討を行うこととした。

第 68 回農村医学会にて発表予定）。
龍谷大学（新規 1BS-18 品種の開発）

結果と考察
1BS-18 ホクシンと春まき小麦 4 品種（ミナミ島根大学

ノカオリ、ハルユタカ、はるきらり、春よ恋）と2018 年度は、2018 年 4 月 20 日（島根県益田市の交配および戻し交配は制御植物培養室と温室

＠やすらぎの里、小麦栽培予定地付近）、2018 年

を使って順調に行われた。当初は 2 回戻し交配を

8 月 18 日（島根県出雲市＠島根大学）、2019 年 2する予定であったが、なるべく早く新しい 1BS-

月 23 日（島根県出雲市、島根大学）3 回の研究会

18 系統を実用栽培することを優先し、1 回の戻しを開催した。また、低アレルゲン化小麦の事業化

交配子孫の自家受精子孫から 1BS-18 ホモ接合個を念頭にアグリビジネス創出フェア 2018（2018

体を顕微鏡観察により選抜した。その結果、ミナ

年 11 月 20-22 日）に出展した。臨床研究は、全体

ミノカオリ、ハルユタカ、はるきらり、春よ恋由で成人患者 20 例の登録を予定した中で、11 例が来の 1BS-18 ホモ接合個体をそれぞれ、4、3、12，

臨床研究に登録して試験を継続しており、所期の9 個体を得ることができた。これらの個体から出計画通り実施出来ている。課題として、本臨床研

穂日が戻し交配親に最も近い（早い）個体を 2 個

究の評価は、
20 症例全員の試験が終了した後に、体ずつ選び、各個体の自家受精子孫 10 個体をポ

1BS-18 ホクシンパンの摂取可能量、臨床的なアットで栽培して出穂日、稔性、草丈の調査を行っ

レルギー症状、好塩基球活性化試験の結果を総合た。この調査の結果から 1BS-18 ホモ接合個体か的に解釈して行う予定である。

ら最も有望な 12 個体を選抜し、子孫で ω-5 グリ

本研究に使用する 1BS-18 ホクシンは、小麦ア

アジンが欠損していることをウェスタンブロッ

レルギーの主要抗原である ω-5 グリアジンを遺ト法で確認して、これら 12 個体の子孫を新規の伝的に欠失するという特徴を持つ。由来は、1BS-

1BS-18 ホモ接合系統とした。そして、これら 12

18 ( ナ シ ョ ナ ル バ イ オ リ ソ ー ス プ ロ ジ ェ ク ト

系統と戻し交配親の 4 品種、各 12 個体ずつを圃

KOMUGI が保有する約 12,000 種類の小麦系統よ

場での形質調査に供した。現在、圃場では 192 個り選抜した研究用小麦品種チャイニーズスプリ

体（｛12 系統ｘ12 個体｝＋｛4 品種ｘ12 個体｝）73

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて状

写真1 1BS-18ホモ接合系統の栽培 況．スズメの被害を防ぐため防鳥ネットを掛けてある、撮影日2019.2.22．（龍谷大学）

が生育中である(写真 1)。これらの系統の中から将来の 1BS-18 品種が育成されることを期待している。

いことを明らかにした。また、ω-5 グリアジン感

広島大学（グリアジン感作型小麦アレルギー

作ラットに通常小麦グルテンを負荷した場合、の感作と症状惹起予防に対する 1BS-18 の有用性

ω-5 グリアジンを負荷したときと同程度の有意の検討）

な体温の低下が認められた (図 3)。

小麦アレルギーの発症における感作と誘発に対する 1BS-18 の有用性をラットモデルで評価

一方、1BS-18 グルテンを負荷した場合には、溶した。通常小麦グルテンで感作したラットに ω-媒投与群と同様に体温の変化が認められなかっ

5 グリアジンを負荷した結果、有意な体温の低た。これらの結果から、ω-5 グリアジン感作ラッ

下がみられた。一方、1BS-18 グルテンで感作しトにおいて、1BS-18 は通常小麦よりも、アレルたラットに ω-5 グリアジンを負荷した際にも、ギー症状の惹起能が低いことを明らにした。以体温の低下傾向が認められたが、通常小麦グルテンで感作したラットと比較して、その低下は緩やかであった (図 2)。

1BS-18 グルテンで感作したラットにおいても
ω-5 グリアジンの負荷で体温低下が認められた要因として、1BS-18 グルテン中のタンパク質がω-5 グリアジンと交差反応を示した可能性が考えられる。これらの結果から、1BS-18 は通常小麦よりも、ω-5 グリアジンに対する感作能が低74

ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて上の結果は、1BS-18 が ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの感作と症状惹起の予防に有用であることを示唆するものである（論文投稿中）。

中山間地域研究センター（赤かび病の防除体系の検討）
2017 年 10 月下旬にホクシン 1BS-18 の播種を行い生育状況 (表 1,2) および農薬による防除の回数（無防除区、防除 1 回区：開花始め、防除 2
回区：開花始めとその 10 日後）による赤かび病
メディカル工笑（島根県西部におけるホクシン抑制効果を検討した。2018 年 6 月の収穫各区サ

1BS-18 の栽培適性の検討と６次化アイテムの開ンプルを分析した結果、デオキシニバレノールが発）

すべての区で検出されたものの、平成 14 年に厚生労働省によって決定された暫定基準値 (1.1

島根県西部における小麦栽培の実施可能性を

mg/kg) 未満となった。防除回数が多い方が、デオ検討した結果、2017 年 10 月に播種した 10a の畑

キシニバレノールの検出量が少なくなる傾向に

におけるホクシン 1BS-18 を 2018 年 6 月に収穫あった(図 4)。今年度の結果から、赤カビ病の出し、その収量は約 120kg であった（写真 2）。

やすい当地域では、3 回以上の防除が必要である。
もしくは、ハウス栽培に統一し、医学臨床試験用の希少小麦として栽培していく方が望ましいと考えられた。

出穂後に穂が実るまでの時期においては、野鳥被害対策のため、畑をネットで覆う作業が生じ、ネットの連結のさいに生じるすき間をいかに最小限に抑えるかが課題となった。また、有機栽培を試みたところ、収穫物に雑草が混じるため選別機が必要となった。

75ω-5 グリアジン欠損食用小麦の開発：ω-5 グリアジン感作型小麦アレルギーの根絶に向けて小麦の６次化の試みにおいては、カステラやクいる。

ッキー、地元の西条柿を活用した西条柿サンドク
ッキー、全粒粉ピザおよび全粒粉うどんなどの試

参考文献

作に取り組んだ。ピザの試作は、地元の益田ドラ

1） 森田栄伸．【急増中!大人の食物アレルギー】、

イビングスクールにおいて取り組みを行った。ま食物アレルギー特殊型

た、試作した全粒粉クッキーは、アグリビジネス

発アナフィラキシー(FDEIA)(解説/特集)、診創出フェア 2018 出展の際に試食に供して好評を断と治療．2017 Dec;105(5):639–642.

食物依存性運動誘

2） 千貫祐子、森田栄伸．【成人食物アレルギー得た。

Update】、ω-5 グリアジン感作型小麦依存性
今後の研究活動について

運動誘発アナフィラキシーの病因・病態
Update(解説/特集)、アレルギーの臨床．2017

申請者らの研究グループは 2007 年に共同研究

Aug 37(9);827-831.

体制を確立して、低アレルゲン化小麦の研究事業

3） 森田栄伸．【最新アレルギー予防・治療戦略-を推進してきた。2017 年度、研究の節目を迎え、これからのアレルギーを考える-】、アナフィ本研究の将来的なアウトカムを研究成果の社会

ラキシー・薬物アレルギー

実装（事業化）に定めた。
2018 年度はこれに加え、

食物依存性運動誘発アナフィラキシー(解説/特集)、小児科臨

島根県中山間地域の活性化に資する仕組みづく

床．2017 May 70(12):1925–1930.

りに関する基礎的検討を開始した。今後は、「低4） Kohno K, Takahashi H, Endo TR, Matsuo H,

アレルゲン化小麦 1BS-18 ホクシンの臨床応用に

Shiwaku K, Morita E. Characterization of a

関する多施設共同第 II 相臨床試験」を完遂し、

hypoallergenic wheat line lacking ω-5

小麦アレルギー患者の低アレルゲン化小麦 1BS-

gliadin. Allergol Int. 2016 Oct;65(4):400–

18 の摂取量の確立および継続摂取による減感作

405.

療法の確立の可能性を評価する予定である。さら5） 河野 邦江、遠藤 隆、森田 栄伸．
【免疫療にその成果に基づいて大規模臨床試験も必要と法の現状と将来】 低アレルゲン化小麦の考えている。また、低アレルゲン化小麦 1BS-18 の樹立(解説/特集)、アレルギー・免疫．2016

普及により新たな小麦アレルギー患者の発症がJul;23(8):1120–1127

抑制される可能性が高いことから、低アレルゲン

6） Endo T, Gill B. The Deletion Stocks of

化小麦 1BS-18 製品販売の市場の確保のため、製Common Wheat. Journal of Heredity.

粉、保管施設の設立が必要と考え、準備を進めて1996 Jul;87(4):295–307.

76役員・評議員・研究助成審査委員名簿（2019年9月1日現在）

1.役員
理事長

山田良司

常勤

元 日本ハム（株）中央研究所

副理事長

村上

非常勤

日本ハム（株）中央研究所

専務理事

沖浦智紀

常勤

日本ハム（株）中央研究所より出向

一色賢司

非常勤

（一財）日本食品分析センター
北海道大学名誉教授

伊藤節子

非常勤

同志社女子大学

博

所長

所長

生活科学部

学術顧問、
特任教授

宇理須厚雄 非常勤

藤田医科大学

医学部

客員教授

大社啓二

非常勤

日本ハム（株)

相談役

畑江敬子

非常勤

お茶の水女子大学名誉教授

村田容常

非常勤

お茶の水女子大学

久木田 勝

非常勤

日本ハム（株）経理財務部

大谷敏郎

非常勤

（国研）農研機構 理事（研究推進担当Ⅲ）

小田信夫

非常勤

日本ハム（株）執行役員
中央研究所担当

菊田行紘

非常勤

TMI 総合法律事務所

河野陽一

非常勤

（独）労働者健康安全機構 千葉労災病院 名誉院長
千葉大学名誉教授

西藤久三

非常勤

（一財）食品産業センター

清水 誠

非常勤

東京大学名誉教授
東京農業大学客員教授

畑 佳秀

非常勤

日本ハム（株）代表取締役社長

理事

監事

基幹研究院自然科学系

教授

次長

2.評議員

評議員

77

経営企画部長、弁護士

顧問

3.研究助成審査委員
委員長

委員

一色賢司

(一財）日本食品分析センター

穐山

国立医薬品食品衛生研究所

浩

顧問

食品部

部長

新井克彦

東京農工大学農学部付属硬蛋白質利用研究施設

五十部誠一郎日本大学

伊藤浩明

あいち小児保健医療総合センター

川村

香川大学

理

生産工学部

農学部

教授
副センター長教授

楠 隆

滋賀県立小児保健医療センター

倉園久生

徳島大学 研究支援・産官学連携センター
教授・副センター長・産官学連携部門長

駒井三千夫

東北大学

小児科主任部長

下条直樹

千葉大学大学院医学研究院

教授

立花宏文

九州大学大学院農学研究院

主幹教授

柘植郁哉

藤田医科大学医学部

鍋谷浩志

農研機構

松本健治

国立成育医療研究センター研究所

三橋富子

元日本大学短期大学部

森山達哉

近畿大学

名誉教授

客員教授

食品研究部門

農学部

78

教授

部門長

教授

教授

部長

公益財団法人ニッポンハム食の未来財団
１．目

案内

的

食物アレルギーや食品分野における研究、研究支援及び啓発活動を行い、もって世界の人々においしさの感動と健康の喜びを提供することを目的とする。

２．事業内容本法人は、前条の目的を達成するため、次の事業を行います。
(1) 食物アレルギーや食品分野に関する講演会等の開催(2) 食物アレルギーや食品分野に関する印刷物の刊行及び広報活動(3) 食物アレルギーや食品分野に関する試験研究及び調査(4) 食物アレルギーや食品分野に関する研究を行う者に対する助成(5) 食物アレルギーや食品分野に関する指導者の育成及び啓発活動への支援(6) 食物アレルギーや食品分野に関する研究及び啓発活動に関し功績のある者の表彰(7) その他この法人の目的を達成するために必要な事業

３．沿革2015 年 1 月 27 日に日本ハム株式会社により「一般財団法人ニッポンハム食の未来財団」として設立されました。
内閣総理大臣より公益認定を受け、2017 年 4 月 1 日より「公益財団法人ニッポンハム食の未来財団」
として活動しています。

４．情報公開等
Web サイト： https://www.miraizaidan.or.jp/
Facebook： https://www.facebook.com/miraizaidan

Twitter： https://twitter.com/syokunomirai/

５．2019 年度主な事業活動
・2019 度研究助成の実施、2020 年度研究助成の公募及び 2018 年度研究助成の成果報告会の実施
・第 5 回食物アレルギー対応食料理コンテストの実施
・主催セミナーの実施
・2019 年度団体活動支援助成の公募及び実施
・当財団Ｗｅｂサイトからの情報発信
以上79බ┈㈈ᅋἲே䝙䝑䝫䞁䝝䝮㣗䛾ᮍ᮶㈈ᅋ
Ver.1 2019 ᖺ㻌 9 ᭶ 27 ᪥Ⓨ⾜Ver.2 2019 ᖺ 10 ᭶㻌 3 ᪥Ⓨ⾜䛈305-0047㻌 Ⲉᇛ┴䛴䛟䜀ᕷ༓⌧ 2-1-6䛴䛟䜀◊✲ᨭ᥼䝉䞁䝍䞊A-24
㟁ヰ㻌
029-893-4466
FAX㻌
029-893-4360
URL㻌
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