【手続補正書】
【提出日】平成29年1月6日(2017.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
枯草菌変異株であって、
ｐｒｏｐｈａｇｅ６領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ１領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ４領域、ＰＢＳＸ領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ５領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ３領域、ｓｐｂ領域、ｐｋｓ領域、ｓｋｉｎ領域、ｐｐｓ領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ２領域、ｙｄｃＬ−ｙｄｅＫ−ｙｄｈＵ領域、ｙｉｓＢ−ｙｉｔＤ領域、ｙｕｎＡ−ｙｕｒＴ領域、ｃｇｅＥ−ｙｐｍＱ領域、ｙｅｅＫ−ｙｅｓＸ領域、ｐｄｐ−ｒｏｃＲ領域、ｙｃｘＢ−ｓｉｐＵ領域、ＳＫＩＮ−Ｐｒｏ７領域、ｓｂｏ−ｙｗｈＨ領域、ｙｙｂＰ−ｙｙａＪ領域及びｙｎｃＭ−ｆｏｓＢ領域が欠失したゲノムを有し、且つ
枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子の発現と、枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子の発現とが強化された、
枯草菌変異株。
【請求項２】
前記枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、下記（i）及び（ii）に記載の遺伝子からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１記載の枯草菌変異株：
（i）下記（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される、少なくとも１つの枯草菌ジピコリン酸シンターゼ・サブユニットＡ遺伝子又はこれに相当する遺伝子：
（ａ）配列番号３に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号３に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｄ）配列番号４に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号４に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号４に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ii）下記（ｊ）〜（ｏ）からなる群より選択される、少なくとも１つの枯草菌ジピコリン酸シンターゼ・サブユニットＢ遺伝子又はこれに相当する遺伝子：
（ｊ）配列番号５に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号５に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号５に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｍ）配列番号６に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオ
チド；
（ｎ）配列番号６に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号６に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、下記（ｐ）〜（ｕ）からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１又は２記載の枯草菌変異株：
（ｐ）配列番号１に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号１に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｒ）配列番号１に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｓ）配列番号２に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｔ）配列番号２に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｕ）配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、枯草菌ｓｐｏＶＦＡ遺伝子及び枯草菌ｓｐｏＶＦＢ遺伝子からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１〜３のいずれか１項記載の枯草菌変異株。
【請求項５】
前記枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、枯草菌ｐｙｃＡ遺伝子である、請求項１〜４のいずれか１項記載の枯草菌変異株。
【請求項６】
枯草菌変異株の製造方法であって、
ｐｒｏｐｈａｇｅ６領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ１領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ４領域、ＰＢＳＸ領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ５領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ３領域、ｓｐｂ領域、ｐｋｓ領域、ｓｋｉｎ領域、ｐｐｓ領域、ｐｒｏｐｈａｇｅ２領域、ｙｄｃＬ−ｙｄｅＫ−ｙｄｈＵ領域、ｙｉｓＢ−ｙｉｔＤ領域、ｙｕｎＡ−ｙｕｒＴ領域、ｃｇｅＥ−ｙｐｍＱ領域、ｙｅｅＫ−ｙｅｓＸ領域、ｐｄｐ−ｒｏｃＲ領域、ｙｃｘＢ−ｓｉｐＵ領域、ＳＫＩＮ−Ｐｒｏ７領域、ｓｂｏ−ｙｗｈＨ領域、ｙｙｂＰ−ｙｙａＪ領域及びｙｎｃＭ−ｆｏｓＢ領域が欠失したゲノムを有する枯草菌変異株において、枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子の発現と、枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子の発現とを強化することを含む、方法。
【請求項７】
前記枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、下記（i）及び（ii）に記載の遺伝子からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項６記載の方法：
（i）下記（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される、少なくとも１つの枯草菌ジピコリン酸シンターゼ・サブユニットＡ遺伝子又はこれに相当する遺伝子：
（ａ）配列番号３に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号３に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｃ）配列番号３に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｄ）配列番号４に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｅ）配列番号４に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｆ）配列番号４に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ（ii）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ii）下記（ｊ）〜（ｏ）からなる群より選択される、少なくとも１つの枯草菌ジピコリン酸シンターゼ・サブユニットＢ遺伝子又はこれに相当する遺伝子：
（ｊ）配列番号５に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｋ）配列番号５に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｌ）配列番号５に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｍ）配列番号６に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｎ）配列番号６に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｏ）配列番号６に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ（i）に記載の遺伝子がコードするタンパク質の存在下でジピコリン酸シンターゼ活性を発揮するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、下記（ｐ）〜（ｕ）からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項６又は７記載の方法：
（ｐ）配列番号１に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；
（ｑ）配列番号１に示すヌクレオチド配列と９０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｒ）配列番号１に示すヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドの相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで該ストリンジェントな条件が、５×ＳＳＣ中、８５℃以上でハイブリダイゼーションし、且つ１×ＳＳＣ中、７３℃以上で洗浄する条件である；
（ｓ）配列番号２に示すアミノ酸配列からなるタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｔ）配列番号２に示すアミノ酸配列において１又は複数個のアミノ酸が欠失、置換、付加又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド；
（ｕ）配列番号２に示すアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つピルビン酸カルボキシラーゼ活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記枯草菌ジピコリン酸シンターゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、枯草菌ｓｐｏＶＦＡ遺伝子及び枯草菌ｓｐｏＶＦＢ遺伝子からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項６〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
前記枯草菌ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子又はこれに相当する遺伝子が、枯草菌ｐｙｃＡ遺伝子である、請求項６〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか１項記載の枯草菌変異株を用いるジピコリン酸又はその塩の製造方法。