【手続補正書】
【提出日】平成29年5月12日(2017.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性の決定因子を含む植物を同定するための方法であって、
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーに関して植物から単離核酸分子をスクリーニングするステップとを含み、マーカーが配列番号１０の６１位のアデニンヌクレオチドで定義される一塩基多型（ＳＮＰ）、配列番号１１の９８位のチミンヌクレオチドで定義されるＳＮＰからなる群から選択されるマーカーと遺伝的に連鎖しており、および、前記マーカーの存在がダイズ品種におけるＳＣＮ耐性の決定因子を示す、方法。
【請求項２】
ダイズ品種がダイズ品種９８８６０−７１である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マーカーに関してスクリーニングするステップが、前記単離核酸分子に対するオリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合を決定するステップを含み、
オリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合がマーカーの存在を示し、および、
前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号１０の６１位のアデニン（Ａ）ヌクレオチドを含む配列番号１０のポリヌクレオチドに安定的かつ特異的に結合し、前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号１０の６１位のシトシン（Ｃ）ヌクレオチドを含む配列番号１０に安定的に結合しない場合、前記オリゴヌクレオチドプローブの結合が特異的である、
または
前記オリゴヌクレオチドプローブが、配列番号１１のヌクレオチド９８位のチミン（Ｔ）ヌクレオチドを含む配列番号１１のポリヌクレオチドと安定的かつ特異的に結合し、前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号１１の９８位のシトシン（Ｃ）ヌクレオチドを含む配列番号１１に安定的に結合しない場合、前記オリゴヌクレオチドプローブの結合が特異的である、
請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーに関して単離核酸分子をスクリーニングするステップを、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーが配列番号１０の６１位のアデニンヌクレオチドで定義されるＳＮＰである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記マーカーに関してスクリーニングするステップが、単離核酸分子に対するオリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合を決定するステップを含み、
オリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合がマーカーの存在を示し、そして、前記オリゴヌクレオチドプローブは配列番号１０の６１位のアデニン（Ａ）ヌクレオチドを含む配列番号１０のポリヌクレオチドと安定的かつ特異的に結合し、前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号１０の６１位のシトシン（Ｃ）ヌクレオチドを含む配列番号１０に安定的に結合しない場合、前記オリゴヌクレオチドプローブの結合が特異的であるとする、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーに関して単離核酸分子をスクリーニングするステップが、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して実施される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーに関する植物の遺伝子型を決定するステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記核酸分子は、ＳＣＮ耐性の形質を有するダイズ植物とＳＣＮ耐性の形質を有しない対象のダイズ品種からのダイズ植物との交配により生産された、Ｆ１ダイズ植物から単離され、そして、前記同定したＦ１ダイズ植物は、対象のダイズ品種の任意の望ましい形質および／またはアレルを有し、前記方法がさらに、
同定したＦ１ダイズ植物を繁殖させ、それによってＳＣＮ耐性ダイズ植物を生産するステップとを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ＳＣＮ耐性がＳＣＮレース３に対する耐性である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＳＣＮ耐性の形質を有するダイズ植物が品種９８８６０−７１のダイズ植物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドプローブが、
第１１染色体上の塩基対１，６７４，５１１にチミンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチまたは、
第１１染色体上の塩基対１，６６３，６７１にアデニンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチ
と特異的にハイブリダイズ可能である、請求項３、４および９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記オリゴヌクレオチドプローブが、配列番号４または配列番号７のヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーが、配列番号１０の６１位のアデニンヌクレオチドにより決定されるＳＮＰである、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記マーカーに関してスクリーニングするステップが、単離核酸分子に対するオリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合を決定するステップを含み、
オリゴヌクレオチドプローブの安定的かつ特異的な結合がマーカーの存在を示し、そして、前記オリゴヌクレオチドプローブは配列番号１０の６１位のアデニン（Ａ）ヌクレオチドを含む配列番号１０のポリヌクレオチドと安定的かつ特異的に結合し、前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号１０の６１位のシトシン（Ｃ）ヌクレオチドを含む配列番号１０に安定的に結合しない場合、前記オリゴヌクレオチドプローブの結合が特異的であるとする、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記オリゴヌクレオチドプローブが、
第１１染色体上の塩基対１，６６３，６７１にアデニンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドプローブが配列番号４のヌクレオチド配列を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
第１１染色体上の塩基対１，６７４，５１１にチミンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチまたは、
第１１染色体上の塩基対１，６６３，６７１にアデニンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチ
と特異的にハイブリダイズ可能である、オリゴヌクレオチドプローブ。
【請求項１９】
第１１染色体上の塩基対１，６６３，６７１にアデニンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である、請求項１８に記載のオリゴヌクレオチドプローブ。
【請求項２０】
ダイズ品種におけるＳＣＮ耐性の決定因子を移動させるための方法であって、
（ａ）請求項１８に記載のオリゴヌクレオチドプローブで、ドナーの遺伝子型を有する第１の植物のゲノムＤＮＡおよびレシピエントの遺伝子型を有する第２の植物のＤＮＡを分析するステップであって、前記第１の植物のゲノムＤＮＡが、前記プローブと安定的かつ特異的に結合するステップ、
（ｂ）２つの親植物遺伝子型を有性交配して子孫集団を得るステップと、
（ｃ）子孫集団の個体から単離したゲノムＤＮＡを前記プローブと安定的かつ特異的に結合するか分析するステップと、
（ｄ）前記プローブと安定的かつ特異的に結合するゲノムＤＮＡを含む子孫集団由来の個体をレシピエントの遺伝子型と戻し交配させて、次世代集団を生成するステップと、
（ｅ）次世代集団のメンバーが、前記プローブと安定的かつ特異的に結合するゲノムＤＮＡおよびレシピエントの遺伝子型由来の望ましい形質を含むかどうか決定するステップと、
（ｆ）次世代集団のメンバーが、前記プローブと安定的かつ特異的に結合するゲノムＤＮＡおよびレシピエントの遺伝子型由来の望ましい形質を含まない場合、前記プローブと安定的かつ特異的に結合するゲノムＤＮＡおよびレシピエントの遺伝子型由来の望ましい形質を含む個体が同定されるまでステップ（ｄ）および（ｅ）を繰り返すステップとを含む方法。
【請求項２１】
前記各交配および戻し交配ステップにおいて得られる個々の子孫から単離されたゲノムＤＮＡが、前記プローブに安定的かつ特異的に結合するか分析される、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記プローブが、第１１染色体上の塩基対１，６６３，６７１にアデニンヌクレオチドを含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記オリゴヌクレオチドプローブと安定的かつ特異的に結合するゲノムＤＮＡのセグメントを前記同定された植物から単離するステップと、
宿主生物中にゲノムＤＮＡの単離セグメントを導入するステップと、および、
前記オリゴヌクレオチドプローブで宿主生物のゲノムＤＮＡを分析して、宿主生物中のダイズ品種におけるＳＣＮ耐性の決定因子を同定するステップとをさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項２４】
ＤＮＡの単離セグメントを宿主生物のゲノムに安定的に組み込む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
宿主生物がマメ科植物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
宿主生物がダイズ、緑莢インゲン、サヤインゲン、ドライビーンズ、赤インゲン豆、ライマメ、リョクトウ、ツルナシインゲンマメ、アズキマメ、サヤエンドウ、およびササゲからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ダイズ植物にＳＣＮ耐性を導入するための方法であって、ダイズ品種９８８６０−７１におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーをＳＣＮ感受性ダイズ植物中に導入するステップを含み、前記マーカーが配列番号１０およびこれらと連鎖したマーカーからなる群から選択される方法。
【請求項２８】
ダイズ品種９８８６０−７１におけるＳＣＮ耐性表現型と連鎖したマーカーが配列番号１０である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
第１８染色体上の塩基対１，６７４，５１１を含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である核酸プローブ。
【請求項３０】
第１８染色体上の塩基対１，６６３，６７１を含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である核酸プローブ。
【請求項３１】
第１８染色体上の塩基対１，７１４，７４１を含むＷｉｌｌｉａｍｓ８２ダイズゲノム中の連続ヌクレオチドのストレッチと特異的にハイブリダイズ可能である核酸プローブ。