(57)【要約】  本発明は、対象にＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路を遮断する剤を投与する工程を含み、それによって該対象においてヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連悪性腫瘍を抑制する、ＨＰＶ関連悪性腫瘍を抑制する方法を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象にＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路を遮断する剤を投与する工程を含み、それによって該対象においてヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連悪性腫瘍を抑制する、ＨＰＶ関連悪性腫瘍を抑制する方法。
【請求項２】
剤がＰＤ−１を遮断し、ＴＧＦベータを捕捉する、請求項１の方法。
【請求項３】
剤が融合タンパク質である、請求項１又は２の方法。
【請求項４】
融合タンパク質が（ｉ）ＰＤ１阻害剤、及び（ｉｉ）ＴＧＦベータ阻害剤を含む、請求項３の方法。
【請求項５】
ＰＤ１阻害剤が抗体又は抗体断片である、請求項４の方法。
【請求項６】
抗体又は抗体断片がヒトＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項５の方法。
【請求項７】
抗体又は抗体断片がヒトＰＤ−Ｌ１に対するＩｇＧ１モノクローナル抗体である、請求項５の方法。
【請求項８】
抗体又は抗体断片がアベルマブである、請求項７の方法。
【請求項９】
ＴＧＦベータ阻害剤が、抗体又は抗体断片のＦｃ領域と融合した、請求項５〜８の何れか1項の方法。
【請求項１０】
ＴＧＦベータ阻害剤がヒトＴＧＦベータＲＩＩの細胞外ドメインである、請求項４〜８の何れか１項の方法。
【請求項１１】
ヒトＴＧＦベータＲＩＩの細胞外ドメインが、ＴＧＦベータＲＩＩの可溶性細胞外ドメインである、請求項１０の方法。
【請求項１２】
剤がＭ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）である、請求項１〜１１の何れか１項の方法。
【請求項１３】
融合タンパク質が、該融合タンパク質をコードする核酸として投与される、請求項３〜１１の何れか１項の方法。
【請求項１４】
融合タンパク質をコードする核酸がベクター中にある、請求項１３の方法。
【請求項１５】
ベクターがプラスミド又はウイルスベターである、請求項１４の方法。
【請求項１６】
ベクターが、ポックスウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ポリオウイルス、アルファウイルス、バキュロウイルス、及びシンドビスウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターである、請求項１５の方法。
【請求項１７】
ウイルスベクターが、オルソポックス、アビポックス、フォウルポックス、ラクーンポックス、ラビットポックス、カプリポックス、レポリポックス、及びスイポックスからなる群から選択されるポックスウイルスである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
剤が、該剤と医薬的に許容可能な担体を含む組成物で投与される、請求項１〜１７の何れか1項の方法。
【請求項１９】
組成物が、1つ以上の追加の活性剤を含む、請求項１８の方法。
【請求項２０】
1つ以上の追加の活性剤が、抗がん剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、シクロホスファミド、抗炎症剤、免疫療法、及びその組み合わせからなる群から選択される、請求項１８の方法。
【請求項２１】
対象がヒト対象である、請求項１〜２０の何れか1項の方法。
【請求項２２】
ＨＰＶ関連悪性腫瘍が、子宮頸がん、中咽頭がん、直腸がん、肛門がん、膣がん、外陰がん、及び陰茎がんからなる群から選択される、請求項１〜２１の何れか1項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に関する相互参照
本特許出願は、２０１７年５月９日に出願された米国仮特許出願番号６２／５０３，４０５の利益を主張し、それは参照として組み込まれる。
【０００２】
連邦に支援された研究又は開発に関する記載
本発明はアメリカ国立衛生研究所、米国国立がん研究所による、プロジェクト番号Z01BC010666-12のもとにおける政府支援により行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
転移性又は難治性／再発性のＨＰＶ関連悪性腫瘍（子宮頸がん、肛門がん、中咽頭がん、外陰がん、膣がん、陰茎がん、及び扁平上皮直腸がん）は不治であり、標準療法により緩和されることが乏しい。これらの疾患がもたらす奏功率（response rate）は１０〜１５％未満の確率であるために、これらの疾患の多くについて、進行した疾患のための標準的な第二選択療法又は第二選択の化学療法は存在しない(Nascimento de Oliveiraら, Journal of Cancer Therapy, 4: 1095-1099 (2013)；Readeら., Gynecologic Oncology, 132: 780-789 (2014)；及びHakenbergら, The Adv. Urol., 4(3): 133-138 (2012))。
【０００４】
これらの疾患におけるＰＤ−１単剤の阻害からの早期の証拠は、１２〜２１％の範囲内の奏功率を示している。ペンブロリズマブは、ＨＰＶ陽性及び陰性の疾患において類似する１７．７％の奏功率に基づいて、再発性又は転移性の頭頚部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）のためにＦＤＡに認可されている（Mehraら, J. Clin. Oncol. 34(suppl; abstr 6012) (2016)）。特にペンブロリズマブは、転移性子宮頚がんと転移性肛門がんにおいて１７％の全奏効率（overall response rate）を有する（Frenelら, J. Clin. Oncol., 35(36): 4035(2017), 及びOttら, Ann. Oncol., 28(5): 1036 (2017)）。ペンブロリズマブは単独で、再発性／転移性の子宮頸がんにおいて１２．５％の奏功率（Frenelら, J Clin Oncol., 34(suppl; abstr 5515) (2016)）、再発性／転移性の扁平上皮肛門がんにおいて２０％の奏功率（Frenelら, J Clin Oncol., 34(suppl; abstr 5515) (2016)）、及び再発性／転移性の頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）において１９．６％の全奏効率（Powellら. J. Clin. Oncol., 33(suppl; abstr TPS3094) (2015)）を生み出す。ニボルマブは単独で、難治性の転移性扁平上皮肛門がんにおいて２１％の奏功率（Morrisら, J. Clin. Oncol. 34, (suppl; abstr 3503) (2016)）、及びＨＮＳＣＣ患者において１３．３％の奏功率（Ferrisら, N. Engl. J. Med., 375(19): 1856 (2016)）を生み出す。
【０００５】
ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路に加えて、幾つかのデータは、ＴＧＦベータ経路もまたＨＰＶ＋悪性腫瘍において役割を果たしているかもしれないと示唆している（Levovitzら, Cancer Res. 74(23): 6833-44 (2014)）。しかしながら、ＴＧＦベータ経路を標的とする剤は開発されていない、又はＨＰＶ関連がんの治療に採用されていない。
【０００６】
よってＨＰＶ＋悪性腫瘍を治療するために新たな剤を同定することの需要がある。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、対象にＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路を遮断する剤を投与する工程を含み、それによって該対象においてヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連悪性腫瘍を抑制する、ＨＰＶ関連悪性腫瘍を抑制する方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
本発明は少なくとも部分的には、単離されたＰＤ−Ｌ１単独の遮断などの現在の治療に対して、ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータの経路の遮断は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）＋悪性腫瘍の患者において、有意に高い奏功率をもたらすという本発明者らの発見に根拠を置く。
【０００９】
本発明は、対象にＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路を遮断する剤を投与する工程を含み、それによって該対象においてＨＰＶ関連悪性腫瘍（即ちＨＰＶ＋悪性腫瘍）を抑制する、ＨＰＶ関連悪性腫瘍を抑制する方法を提供する。
【００１０】
ＨＰＶ＋悪性腫瘍はＨＰＶと関連している任意のがんであってもよい。がんの例には、限定するものではないが、子宮頸がん、中咽頭がん（舌と扁桃腺の基部を含む、喉の奥のがん等の頭頚部がん）、直腸がん（例えば、扁平上皮直腸がん）、肛門がん、膣がん、外陰がん、及び陰茎がんが挙げられる。１態様においてＨＰＶ＋悪性腫瘍はＨＰＶ１６感染に関連するがんである。他の態様においてＨＰＶ＋悪性腫瘍はＨＰＶ１８感染に関連するがんである。
【００１１】
本発明の方法において、ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータの経路を遮断する任意の剤を使用することができる。１態様において剤はＰＤ−Ｌ１を遮断し、ＴＧＦベータを捕捉（sequester）する。例えば剤は：
（１）ＰＤ−Ｌ１阻害剤：例えば、ＰＤ−Ｌ１抗体若しくは抗体断片、ＰＤ−Ｌ１小分子阻害剤、ＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２との相互作用を標的とする抗体、又はＰＤ−１シグナル伝達を阻害する抗体。ＰＤ−Ｌ１阻害剤の例には、限定するものではないが、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８又はＭＤＸＩ１０６としても知られている）、ペムボロリズマブ、ピディリズマブ、アベルマブ、及びＭＫ−３５７５が挙げられる（例えば、Sunshineら, Curr. Opin. Pharmacol., 23: 32-38 (2015)； Weber, Semin. Oncol., 37(5): 430-4309 (2010)；Tangら, Current Oncology Reports, 15(2): 98-104 (2013)； Patnaikら, 2012 American Society of Clinical Oncology (ASCO) Annual Meeting, Abstract # 2512)；及びClinicalTrials.gov Identifier NCT00730639を参照）。
（２）ＴＧＦベータ阻害剤：例えば、ＴＧＦベータ抗体又は抗体断片、ＴＧＦベータ小分子阻害剤、ＴＧＦベータとその受容体との相互作用を標的とする抗体、及びＴＧＦベータ受容体のドミナントネガティブ型。ＴＧＦベータ阻害剤の例には、限定するものではないが、ガルニセルティブ（galunisertib）、ＳＢ−４３１５４２、フレソリムマブ、レルデリムマブ、メテリムマブ、及びＴＧＦベータＲＩＩの可溶性細胞外ドメインが挙げられる。
（３）（１）と（２）の各々からの１つ以上の組み合わせ及び融合タンパク質：例えばＭ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）（例えば、ClinicalTrials.gov Identifier: NCT02517398を参照）。
【００１２】
剤は、ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータの経路を遮断する融合タンパク質（二機能性融合タンパク質）であってもよい。融合タンパク質は、互いに直接的に融合した又はリンカーを介して接合（joined）した、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれ以上）の成分を含んでもよい。リンカーを、アミノ酸長が例えば少なくとも約１５（例えば、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、又はその範囲）の、任意の長さの任意の適切なリンカーとすることができる。１態様では、リンカーは、宿主の免疫グロブリン分子内に天然に存在するアミノ酸配列であって、そのリンカーが存在することにより、哺乳動物によるリンカー配列に対する免疫応答を引き起こさないようなものである。例えばリンカーは、Ｇ４Ｓモチーフを１つ以上（例えば２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、又は１０個以上）含んでもよい。
【００１３】
１態様において、融合タンパク質は、（ｉ）抗体又は抗体断片（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ｅＡｄ等）、及び（ｉｉ）ＴＧＦベータ中和捕捉成分（neutralizing trap component）を含む。ＴＧＦベータ中和捕捉成分は、抗体又は抗体断片のＦｃ領域と融合する等、任意の適切な様式で抗体又は抗体断片と接合することができる。融合タンパク質の抗体又は抗体断片部分は、ヒトＰＤ−Ｌ１抗体又は抗体断片等、任意の適切な抗体又は抗体断片であってもよい。１態様において、抗体又は抗体断片は、ヒトＰＤ−Ｌ１に対するＩｇＧ１モノクロ−ナル抗体である。融合タンパク質のＴＧＦベータ中和捕捉成分は、例えばトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦベータ）受容体ＩＩ（ＴＧＦベータＲＩＩ）の細胞外ドメイン等（例えば、ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、及び／又はＴＧＦベータ３に結合するヒトＴＧＦベータＲＩＩの細胞外ドメイン）、任意の適切なＴＧＦベータ中和捕捉成分であってもよい。
【００１４】
具体的な態様において、剤は、ＴＧＦベータ捕捉として作用するＴＧＦベータＲＩＩの可溶性細胞外ドメインと融合した、ＰＤ−Ｌ１に対する完全なヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体（アベルマブ）からなる二機能性融合タンパク質である、Ｍ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）である。如何なる特定の理論に縛られることも望むものではないが、ＭＳＢ００１１３５９ＣのＴＧＦベータＲＩＩ部分は、ＴＧＦベータと結合して中和すると考えられており、一方、アベルマブ部分は同時にＰＤ−Ｌ１と結合する。これがＴＧＦベータとＰＤ−Ｌ１が仲介するシグナル伝達を妨げ、ナチュナルキラー（ＮＫ）細胞と細胞傷害性Ｔリンパ球細胞（ＣＴＬ）の活性を増加させる。これにより、感受性を有する腫瘍細胞において腫瘍細胞増殖が阻害される。
【００１５】
本発明は剤（例えば、融合タンパク質）をコードする核酸もまた提供する。核酸はＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及び／又はＲＮＡを含んでもよく、一本鎖又は二本鎖であってもよく、天然由来、合成、及び／又は組み換えたものでもよい。更に核酸は、ヌクレオチドアナログ又は誘導体（例えば、イノシン又はホスホロチオエートヌクレオチド（phophorothioate）等）を含んでもよい。コード配列におけるサイレント変異は、遺伝子コードの縮重（即ち冗長性）からもたらされ、それによって、１つ以上のコドンが同じアミノ酸残基をコードすることができる。よって例えば、ロイシンはＣＴＴ、ＣＴＣ、ＣＴＡ、ＣＴＧ、ＴＴＡ又はＴＴＧによりコードされ得；セリンはＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＡ、ＴＣＧ、ＡＧＴ又はＡＧＣによりコードされ得；アスパラギンは、ＡＡＴ又はＡＡＣによりコードされ得；アスパラギン酸はＧＡＴ又はＧＡＣによりコードされ得；システインはＴＧＴ又はＴＧＣによりコードされ得；アラニンはＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＡ又はＧＣＧによりコードされ得、グルタミンはＣＡＡ又はＣＡＧによりコードされ得；チロシンはＴＡＴ又はＴＡＣによりコードされ得；及びイソロイシンはＡＴＴ、ＡＴＣ又はＡＴＡによりコードされ得る。標準的な遺伝子コードを示す表は様々な情報源に見出すことができる（例えば、L. Stryer, 1988, Biochemistry, 第３版, W.H. 5 Freeman and Co., ニューヨーク州）。
【００１６】
核酸、及びその核酸を細胞に送達し、及び／又は細胞中でのその核酸の発現を可能とする要素、を含むコンストラクトの一部として、核酸を提供することができる。例えば、剤をコードするヌクレオチド配列（例えば融合タンパク質）を、発現制御配列と作動可能に連結することができる。コード配列に作動可能に連結された発現制御配列は、発現制御配列に適合する条件下でコード配列の発現が達成されるように結合している。発現制御配列には、限定するものではないが、適切なプロモーター、エンハンサー、転写終結因子、タンパク質コード遺伝子の先頭にある開始コドン（即ちＡＴＧ）、その遺伝子の正しい読み枠を維持してｍＲＮＡの適切なトランスロケーションを許容する、イントロンのためのスプライシングシグナル、及び停止コドンが挙げられる。適切なプロモーターには、限定するものではないが、ＳＶ４０早期プロモーター（SV40 early promotor）、ＲＳＶプロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター（adenovirus major late promotor）、ヒトＣＭＶ即時早期Ｉプロモーター（human CMV immediate early I promotor）、ポックスウイルスプロモ−ター、３０Ｋプロモーター、Ｉ３プロモーター、ｓＥ／Ｌプロモーター、７．５Ｋプロモーター、４０Ｋプロモーター、及びＣ１プロモーターが挙げられる。Ｔ  ＤＮＡワクチンは、米国特許番号５，５８９，４６６；米国特許番号５，９７３，９７２の中に述べられており、それらはそれぞれ参照として本明細書に組み込まれる。それらの出願の中で述べられている送達プロトコールに加えて、ＤＮＡを送達する代わりの方法が、米国特許番号４，９４５，０５０及び５，０３６，００６の中に述べられている。
【００１７】
剤（例えば融合タンパク質）をコードする核酸を、インビトロの方法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、転写に基づく増幅システム（ＴＡＳ）、自家持続配列複製システム（３ＳＲ）及びＱβレプリカーゼ増幅システム（ＱＢ）等によりクローン化又は増幅することができる。例えば、剤（例えば融合タンパク質）をコードするヌクレオチド配列は、その分子のＤＮＡ配列に基づいたプライマーを用いて、ｃＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応により単離することができる。広範で様々なクローニングとインビトロ増幅の方法論は、本技術分野の当業者に良く知られている。ＰＣＲの方法は、例えば、米国特許番号４，６８３，１９５；Mullisら, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51:263, 1987；及びErlich編, PCR Technology, (Stockton Press, ニューヨーク, 1989)の中に述べられている。ストリンジェントなハイブリダイゼーションの条件下で、望みのポリヌクレオチドの配列から選択されたプローブにより、ゲノム又はｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによっても、ポリヌクレオチドを単離することができる。
【００１８】
本発明はさらに核酸を含むベクターを提供する。適切なベクターの例には、プラスミド（例えばＤＮＡプラスミド）、細菌ベクター、及びウイルスベクター、例えばポックスウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ポリオウイルス、アルファウイルス、バキュロウイルス（baculorvirus）、及びシンドビスウイルス等が挙げられる。ベクターがプラスミド（例えばＤＮＡプラスミド）であるときには、そのプラスミドをキトサンと複合化してもよい。ベクターがポックスウイルスベクターであるときには、ポックスウイルスは、オルソポックス（orthopox）、アビポックス（avipox）、フォウルポックス（fowlpox）、ラクーンポックス（raccoon pox）、ラビットポックス（rabbit pox）、カプリポックス（capripox）（例えば、山羊痘（goat pox）及び羊痘（sheep pox））、レポリポックス（leporipox）、及びスイポックス（suipox）（例えば、豚痘（swinepox））からなる群から選択することができる。アビポックス（avipox）ウイルスの例には、フォウルポックス（fowlpox）、ピゲオンポックス（pigeonpox）、及びカナリアポックス（canarypox）例えばＡＬＶＡＣが挙げられる。オルソポックス（orthopox）ウイルスの例には、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、Ｗｙｅｔｈ、ＮＹＶＡＣ、ＴＲＯＹＶＡＣ、Ｄｒｙ-Ｖａｘ、ＰＯＸＶＡＣ−ＴＣ（シェリング・プラウ・コーポレーション）、及びその誘導体が挙げられる。例えば、Ｗｙｅｔｈ株の誘導体には、限定するものではないが、機能性Ｋ１Ｌ遺伝子を欠く誘導体が挙げられる。ベクターが哺乳動物対象（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ブタ、牛、ウマ、又は霊長類（例えばヒト））に投与するためのものであるときには、そのベクター（例えばポックスウイルス）は、標的細胞内で好ましくは低い複製効率（例えば、細胞当たりわずか約１個の子孫、又はより好ましくは細胞当たりわずか０．１個の子孫が作製される）を有する。複製効率は、標的細胞の感染後にウイルス力価を経験的に測定することにより容易に測定することができる。
【００１９】
ベクターは、転写制御要素又はエンハンサー等の、適切なプロモーター及び制御要素を含んでもよい。ベクターがポックスウイルスベクターであるときには、限定するものではないが、ワクシニア７．５Ｋプロモーター、ワクシニア３０Ｋプロモーター、ワクシニア４０Ｋプロモーター、ワクシニアＩ３プロモーター、合成早期／後期（ｓＥ／Ｌプロモーター）（synthetic early/late (sE/L) promotor）、７．５プロモーター、ＨＨプロモーター、１１Ｋプロモーター、及びＰｉプロモーターなどのポックスウイルスプロモーターを使用することができる。プロモーターは典型的には構成的プロモーターであるが、本発明のベクターにおいて誘導性プロモーターもまた使用することができる。そのような誘導性のシステムにより遺伝子発現を制御することができる。
【００２０】
剤（例えば、融合タンパク質、核酸、又はベクター）を含む細胞もまた、本明細書で提供される。適切な細胞には原核細胞及び真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、真菌、および細菌（例えば、大腸菌、サルモネラ菌（例えば、サルモネラ・ティフィムリウム）、又はリステリア菌（例えば、リステリア・モノサイトゲネス））が挙げられる。培地中で哺乳細胞を増殖させる技術は良く知られている（JakobyとPastan (編), 1979, Cell Culture. Methods in Enzymology, volume 58, Academic Press, Inc., Harcourt Brace Jovanovich, ニューヨーク参照）。一般的に使用されている哺乳動物宿主細胞株の例は、ＶＥＲＯ及びＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞、及びＷＩ３８、ＢＨＫ、及びＣＯＳ細胞株であるが、より高い発現、望ましいグリコシル化パターン、又は他の特徴を提供をするように設計された細胞等の細胞株を使用してもよい。
【００２１】
組み換えＤＮＡによる宿主細胞の形質転換は、本技術分野の当業者に良く知られている通常の技術により実施することができる。宿主が、限定するものではないが、大腸菌等の原核細胞であるときには、ＤＮＡの取り込みをすることができるコンピテント細胞を、指数関数的増殖期の後に採取された細胞から調製し、続いて本技術分野で良く知られている操作を用いてＣａＣｌ２法により処理することができる。代わりに、ＭｇＣｌ２又はＲｂＣｌを使用してもよい。形質転換を、もし望むならば非酵母菌の宿主細胞のプロトプラストの形成の後に、又は電気穿孔法により行ってもよい。
【００２２】
細胞が真核細胞であるときには、リン酸カルシウム共沈殿としてＤＮＡをトランスフェクションする方法、マイクロインジェクション等の一般的な機械的手法、電気穿孔法、リポソーム中に封入されたプラスミドの挿入、又はウイルスベクターによる感染を使用することができる。真核細胞を、剤をコードするポリヌクレオチド配列、及びヘルペスシンプレックスチミジンキナーゼ遺伝子等の選択可能な表現型をコードする第２の外来ＤＮＡ分子と共形質転換することも可能である。真核細胞を形質転換するためにウイルスベクターを使用する方法は既知である（例えば、Eukaryotic Viral Vectors, Cold Spring Harbor Laboratory, Gluzman編 1982を参照）。
【００２３】
剤（例えば、融合タンパク質、核酸、又はベクター）を単独で、又は少なくとも１つの担体（例えば医薬的に許容可能な担体）を含み得る組成物（例えば医薬組成物）として投与してもよい。代わりに又は加えて組成物は、１つ以上の他の活性（例えば、治療又は予防）剤又は薬物を含んでもよい。医薬組成物の中で使用するのに適しうるるような、他の活性剤又は薬物の例には、抗がん剤（例えば、化学療法剤）、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、シクロホスファミド、抗炎症剤、免疫療法、及びその組み合わせが挙げられる。適切な抗がん剤には、限定するものではないが、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤、紡錘体毒、トポイソメラーゼ阻害剤、アポトーシス誘導剤、血管形成阻害剤、ポドフィロトキシン、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、インターフェロン、アスパラギナーゼ、タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、メゲストロール、マイトマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イリノテカン、タキソール、ゲルダナマイシン（例えば１７−ＡＡＧ）、並びに本技術分野で知られている様々な抗がんポリペプチド及び抗体が挙げられる。
【００２４】
医薬的に許容可能な担体（又は賦形剤）は好ましくは、剤に対して化学的に不活性なもの、及び使用する条件下で有害な副作用又は毒性が無いものである。そのような医薬的に許容可能な担体には、限定するものではないが、水、生理食塩水、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬ（シグマケミカル社、セントルイス、ミズーリ州）、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、アルコール、及びその組み合わせが挙げられる。担体の選択は、部分的に特定の剤によるのみならず、組成物を投与するのに使用される特定の方法によっても決定されるであろう。従って組成物の広範で様々な適切な製剤がある。
【００２５】
本明細書で使用される用語「免疫療法」とは、免疫応答の誘導、促進、又は抑制により疾患を治療することを言う。免疫応答を引き起こす又は促進するように設計された免疫療法は活性化免疫療法と言われ、一方、免疫応答を抑制するように設計された免疫療法は抑制免疫療法と言われる。免疫療法の型として、限定するものではないが、免疫調節剤、細胞に基づいた免疫療法、モノクローナル抗体、放射性医薬品、及びワクチンが挙げられる。がんの免疫療法の戦略は例えば、Waldmann, T.A., Nature Medicine, 9: 269-277 (2003)の中に述べられている。
【００２６】
免疫調節剤は、組み換えたもの、合成物、又は限定するものではないが、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、及びインターフェロン）、共刺激分子（例えば、Ｂ７−１及びＢ７−２）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ３、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ７）、グルカン、及びオリゴデオキシヌクレオチドを含む天然物質でもよい。
【００２７】
細胞に基づいた免疫療法は典型的には、対象からの免疫細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又は抗原提示細胞（ＡＰＣ））の除去、免疫細胞の改変（例えば活性化）、及び改変された免疫細胞を患者に戻すことを伴う。細胞に基づいた免疫療法は、無症候性又は症候が最小限であるＣＲＰＣの治療において使用され、自家の活性細胞の免疫療法である、Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（ＰＲＯＶＥＮＧＥ（商標））であってもよい（Plosker, G.L., Drugs, 71(1): 101-108 (2011)；及びKantoffら, New Engl. J. Med., 363: 411-422 (2010)）。
【００２８】
幾つかのモノクロ−ナル抗体が、がんの治療のために認可されており、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体に基づいた、ネイキッド（naked）抗体及び抗体−薬物コンジュゲートを含む（Scotttら, Nat Rev Cancer, 12(4): 278-87 (2012)；Hardingら, MAbs, 2(3): 256-65 (2010)；及びWeinerら, Nature Rev. Immunol., 10(5): 317-327 (2010)）。
【００２９】
放射性医薬品は放射活性の薬物であり、現在ではがんを含む様々な疾患の治療と診断に使用されている。例えば放射線核種を抗体に標的化して（即ち放射免疫療法）、血液由来のがんを治療することができる（Sharkey, R.M.及びGoldenberg, D.M., Immunotherapy, 3(3): 349-70 (2011)）。ヨウ素−１２５、ヨウ素−１３１、及びラジウム−２２３（ＸＯＦＩＧＯ（商標）として販売されている）を含む幾つかの放射性同位元素が、がんの治療のために認可されている。ラジウム−２２３は、転移性骨がんとＣＲＰＣを治療する放射性医薬品として認可されている。ＣＲＰＣにおいて、ラジウム−２２３が抗腫瘍免疫応答を促進することも示されている。
【００３０】
ワクチンはがんを予防及び治療するための別の戦略も提示する。多くの異なるがんワクチンのプラットフォームが現在、フェーズＩＩ及び／又はフェーズＩＩＩ臨床試験において評価されており、例えば、ペプチドに基づいたワクチン、組み換えウイルスベクター、殺傷された腫瘍細胞、又はタンパク質で活性化された樹状細胞が挙げられる（例えば、Schlom, J., J. Natl. Cancer. Inst., 104: 599-613 (2012)を参照）。１態様において、ワクチンは、ブラキウリ（Brachyury）転写因子が発現するように遺伝的に改変されている組み換え酵母又はポックスウイルスを含むブラキウリワクチンでもよい（例えば、国際公開番号２０１４／０４３５１８及び国際公開番号２０１４／０４３５３５；及び米国特許８，１８８，２１４及び８，６１３，９３３を参照）。
【００３１】
剤（例えば、融合タンパク質、核酸、又はベクター）又はその組成物は、がんの出現を防ぐのに、がんの増殖を停止させるのに、又はがんを除去するのに有用である。より具体的には、剤は、腫瘍の発生を防ぎ、抑制し、又は遅らせるのに、及び／又は、腫瘍の移動及び／又は他の組織の腫瘍浸潤（転移）を防ぎ、抑制し、又は遅らせるのに、及び／又は個体において全般的にがんの進行を防ぎ又は抑制するのに使用することができる。剤又はその組成物は、例えばその個体における腫瘍負荷を低減することにより；その個体における腫瘍増殖を抑制することにより；個体の生存を増加させることにより；及び／又は個体におけるがんの進行を防ぎ、抑制し、逆転させ、又は遅らせることにより、がんの少なくとも１つの症状を改善するのに使用することもできる。
【００３２】
腫瘍は如何なる段階であってもよく、他の療法を受けていてもよい。本発明の方法は、放射耐性腫瘍等の他の型のがん療法に対して耐性であることが証明されている腫瘍等の治療（即ち、腫瘍細胞の破壊又は腫瘍の大きさの低減）に有用である。腫瘍は任意の大きさであってもよい。理想的には本発明の方法は、がん（腫瘍）細胞の死及び／又は腫瘍の大きさの低減をもたらす。例えば、支持細胞、血管新生、線維性マトリックス等の存在のために、腫瘍細胞の死は、実質的な腫瘍の大きさの低減が無くても起こり得ることは理解されるであろう。従って、腫瘍の大きさの低減は好適であるが、がんの治療においては必要とされない。
【００３３】
剤を、１つ以上の追加の活性剤（例えば抗炎症剤、及び／又は化学療法剤）と共に投与するときは、その剤と１つ以上の追加の活性剤を哺乳動物に同時投与（coadministration）してもよい。「同時投与」により、１つ以上の追加の活性剤と剤を、その剤が１つ以上の追加の活性剤の効果を促進することができる程に十分に近い時間に投与することを意味する。これに関連して、剤を最初に投与し、１つ以上の追加の活性剤を２番目に投与してもよく、又は逆もまた然りである。代わりに、剤と１つ以上の追加の活性剤を同時投与してもよい。
【００３４】
剤と組成物を、非経口、局所（topical）、経口、又は局部（local）投与を含む、任意の適切な経路で投与することもできる。経口、エアロゾル、非経口（例えば、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、及び脊髄内）、直腸内、及び膣内投与のための下記の製剤は単なる例示であり、如何なる意味でも限定するものではない。
【００３５】
経口投与に適した製剤は、（ａ）水、生理食塩水、又はオレンジジュース等の希釈剤中に溶解した有効量の化合物等の液体溶液、（ｂ）それぞれが所定量の活性成分を固体又は顆粒として含むカプセル、小袋（sachet）、錠剤、のど飴（lozenge）、及びトロ−チ；（ｃ）粉薬；（ｄ）適切な液体中の懸濁剤；及び（ｅ）適切な乳剤からなり得る。液体製剤は、水及びアルコール（例えばエタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコール等）等の希釈剤を、医薬的に許容可能な界面活性剤、懸濁化剤、又は乳化剤の添加の有り又は無しの何れかで含んでもよい。カプセル形態は、例えば、界面活性剤、滑沢剤、及び、非活性充填剤（例えばラクト−ス、スクロース、リン酸カルシウム、及びコーンスターチ）を含む、通常の硬い又は軟らかいシェルのゼラチン型のものであってもよい。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶化セルロース、アカシア、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、香味剤、及び医薬的に適合する担体の１つ以上を含み得る。のど飴（lozenge）形態は、香味料（通常はスクロース及びアカシア又はトラガカント）の中に活性成分を含み、またパスティル（pastille）は、活性成分に加えて、例えば本技術分野で知られている担体を含み、不活性な基剤（例えばゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシア）、乳剤、ゲル等の中に活性成分を含む。
【００３６】
剤単独で、又は他の適切な成分と組み合わせて、吸入を介して投与されるエアロゾル製剤とすることができる。これらのエアロゾル製剤を、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の圧縮化を許容できるプロペラント（propellant）中に置くことができる。それらを、ネブライザー又はアトマイザー等の非圧縮調製物の医薬品として製剤することもできる。
【００３７】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び、製剤を意図するレシピエントの血液と等張とする溶質を含み得る水性及び非水性の等張滅菌注射溶液、並びに、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、及び保存剤を含み得る、水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。剤を、医薬担体の中の生理学的に許容可能な希釈剤、例えば滅菌した液体又は液体混合物等（水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連糖溶液、アルコール（例えば、エタノール、イソプロパノール、又はヘキサデシルアルコール）、グリコール（例えば、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール）、グリセロールケタール（例えば、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール）、エーテル（例えばポリ（エチレングリコール）４００）、油、脂肪酸、脂肪酸エステル若しくはグリセリド、又はアセチル化脂肪酸グリセリド等）の中で、医薬的に許容可能な界面活性剤（例えば石鹸又は洗浄剤）、懸濁化剤（例えばペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、又はカルボキシメチルセルロース）、又は乳化剤、及び他の医薬アジュバントの添加の有り又は無しで、投与され得る。
【００３８】
非経口製剤において使用しうる油は、石油、動物油、植物油、又は合成油を含む。油の具体例には、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ワセリン、及び鉱油が挙げられる。非経口製剤に使用するのに適切な脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルとミリスチン酸イソプロピルは適切な脂肪酸エステルの例である。
【００３９】
非経口製剤に使用するのに適切な石鹸は、脂肪アルカリ金属、アンモニウム、及びトリエタノールアミン塩を含み、適切な洗浄剤には、（ａ）例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハロゲン化物、及びアルキルピリジニウムハロゲン化物等のカチオン性洗浄剤、（ｂ）例えば、アルキル、アリール、及びオレフィンスルホン酸塩、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリセリド硫酸塩、及びスルホサクシネート等のアニオン性洗浄剤、（ｃ）例えば、脂肪アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、及びポリオキシエチレン−ポリプロピレンコポリマー等の非イオン性洗浄剤、（ｄ）例えば、アルキル−ベータ−アミノプロピオン酸、及び２−アルキル−１−イミダゾリン４級アンモニウム塩等の両性洗浄剤、及び（３）それらの混合物が挙げられる。
【００４０】
適切な保存剤と緩衝剤をそのような製剤において使用することができる。注射部位における刺激を最小化又は除去するために、そのような組成物は、約１２から約１７の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する非イオン性洗浄剤を１つ以上含んでもよい。そのような製剤中の洗浄剤の量は、約５重量％〜約１５重量％の範囲である。適切な洗浄剤には、例えばモノオレイン酸ソルビタン、及びプロピレンオキシドのプロピレングリコールとの縮合により形成され、疎水性塩基を有するエチレンオキシドの高分子量付加物等のポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルが挙げられる。非経口製剤を、アンプル及びバイアル等の単回投与又は複数回投与の密封容器内に提示することができ、滅菌した液体担体（例えば注射用の水）の使用直前の添加のみを必要とする、フリ−ズドライ（凍結乾燥）した状態で貯蔵することができる。滅菌した粉末、顆粒、及び錠剤から、即時注射溶液と懸濁液を調製することができる。
【００４１】
剤を注射可能な製剤として投与することができる。注射可能な組成物のために有効な医薬担体の要件は、本技術分野の当業者に良く知られている。Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Co., Philadelphia, Pa., Banker及びChalmers, 編, pages 238-250 (1982),及びASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 第４版, pages 622-630 (1986)参照。
【００４２】
経皮的な薬物の放出に有用なものを含む局所（topical）製剤は、本技術分野の当業者に良く知られており、本発明の文脈においては皮膚へ適用するのに適している。
【００４３】
乳化基剤又は水溶性基剤等の様々な基剤と混合することにより、剤を座薬として投与することができる。膣内投与に適している製剤を、活性成分に加えて本技術分野で適切であると知られている担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、又はスプレー製剤として提示してもよい。
【００４４】
医薬組成物中の本発明の化合物の濃度を変えることができ、例えば、約１％未満から、通常は約１０重量％であるか又は少なくとも約１０重量％であり、２０重量％〜５０重量％以上までも、選択された具体的な投与形式に従って、主として液量と粘度により選択することができる。
【００４５】
投与可能（例えば、非経口投与）な剤を調製するための方法は、本技術分野の当業者に既知であるか又は明らかであり、例えば、Remington’s Pharmaceutical Science (第１７版, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985)の中に詳細に述べられている。
【００４６】
述べられた医薬組成物に加えて、シクロデキストリン包接複合体（inclusion complex）等の包接複合体、又はリポソームとして剤を製剤化しうる。リポソームは、剤が特定の組織を標的とするために作用することができる。リポソームを、剤の半減期を増加するのに使用することもまたできる。リポソームの調製のために、例えば、Szokaら, Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9, 467 (1980)、及び米国特許４，２３５，８７１、４，５０１，７２８、４，８３７，０２８及び５，０１９，３６９の中に述べられているような多くの方法を利用できる。
【００４７】
下記の実施例において本発明をさら説明するが、もちろん、如何なる意味でも本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００４８】
実施例１
この実施例はＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータの経路の遮断は、ＨＰＶ関連悪性腫瘍の抑制をもたらすことを示す。
【００４９】
Ｍ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）は、ＴＧＦベータを捕捉する作用をする、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦベータ）受容体ＩＩの可溶性細胞外ドメインと融合した、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に対する完全なヒトＩｇＧ１モノクロ−ナル抗体からなる、二機能性の融合タンパク質である。
【００５０】
進行した固形がんにおけるＭ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）のフェーズ１試験が行われた。ＮＣＴ０２５１７３９８は、フェーズ１の、オープンラベルの、３＋３の用量漸増研究である。適格な患者は、１、３、１０、２０、又は３０ｍｇ／ｋｇでのＭ７８２４のＱ２Ｗの投与を、疾患の進行又は受容できない毒性が確認されるまで受けた。第１の目的は、Ｍ７８２４の安全性と最大耐用量（maximum tolerated dose）を決定することであり、第２の目的は、薬動力学（ＰＫ）、免疫原性、及びＲＥＣＩＳＴｖ１．１ごとの最良総合効果（best overall response）を含む。
【００５１】
ＨＰＶ関連悪性腫瘍の１６人の患者（子宮頚がん９人、肛門がん４人、及びＰ１６＋頭頚部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）３人）を含む、進行がんの患者を治療した。ＨＰＶの状態は、患者の１１人では陽性であり、他の５人では不明であった。グレード３の薬剤関連治療下の有害事象（drug-related treatment-emergent adverse events）（ＴＥＡＥ）は、これら１６人の患者の３人において起こった（大腸炎、膀胱炎、及び胃不全麻痺；全て子宮頸がん患者において）。特にこれら３人の患者全ては、疾患低減を伴う臨床利益の証拠も有していた。グレード３の胃不全麻痺に関連する、グレード４の低カリウム血症のＴＥＡＥも１例で見られた。それ以外には、他のグレード４〜５のＴＥＡＥは認められなかった。観察された唯一の用量制限毒性（ＤＬＴ）は、２０ｍｇ／ｋｇの用量における大腸炎であり、研究された用量では最大耐用量（ＭＴＤ）に達しなかった。
【００５２】
１６人の患者の中で、持続的な完全奏功（ＣＲ）を有する１人の患者（子宮頚がん；ＨＰＶ＋）を含む９人（５６％）は治療による疾患の低減を有し；４人の患者（ＨＮＳＣＣ２人、肛門がん２人；全てＨＰＶ＋）は持続的な部分奏功（ＰＲ）を有し、１人の患者（子宮頚がん；ＨＰＶ不明）は確認されていないＰＲを有し、２人の患者（子宮頚がん２人；両者のＨＰＶ不明）はＰＲに近く（−２５％、−２７％）、及び１人の患者（肛門がん；ＨＰＶ不明）はより少ない疾患の低減（−９％）を有した。
【００５３】
ＨＰＶ＋又は状態不明の患者全般について、６／１６（３７．５％）は継続する奏功を有し、これらの奏功の５／６は現在までに確認され、既知のＨＰＶ＋疾患を有する患者について、５／１１は（４５．５％）は継続している確認された奏功を有する。フェーズ１試験に登録されたＨＰＶ関連悪性腫瘍を有する患者のサブセットからの予備的なデータは、ＨＰＶ＋又は状態不明である患者の間で３７．５％の全奏効率（overall response rate）（ＯＲＲ）を伴う対処可能な安全性プロファイル、及び既知のＨＰＶ＋疾患を有する患者の間で４５．５％のＯＲＲが確認されたことを示唆している。
【００５４】
継続しているフェーズＩの臨床試験の結果に基づき、ＰＤ−１とＴＧＦベータの経路の二重の遮断（例えばＰＤ−１を遮断し、ＴＧＦベータを捕捉するＭ７８２４による）は、ＨＰＶ＋悪性腫瘍を有する患者において有意に高い奏功率を生み出す可能性があることは明らかである。この試験からの早期の証拠は、これらの２つの経路の遮断は、進行した又は標準的な第１選択療法に対して不耐性であるＨＰＶ＋進行がんの患者について、単離されたＰＤ−１単独の遮断を含めて、現在の如何なる治療よりもずっと高い奏功率を生み出すことを示唆している。
【００５５】
よって証拠は、これら２つの経路を一斉に遮断すると、進行した又は標準的な第１選択療法に対して不耐性であるＨＰＶ＋進行がんの患者について、単離されたＰＤ−１単独の遮断を含めて、現在の如何なる治療よりもずっと高い奏功率を生み出すことを示唆している。これら２つの経路の同時遮断は、これらの患者において実質的な臨床利益を有し、近い将来に実質的な臨床的な影響を有するであろう。
【００５６】
実施例２
この実施例は、ＨＰＶ＋悪性腫瘍を有する対象におけるＭ７８２４のフェーズＩＩ試験のためのデザインを提供する。
【００５７】
ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータの経路は、独立であり且つ補完的な免疫抑制機能を有する、２つの鍵となる免疫回避経路である。ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路の二重の標的化は相乗的な抗腫瘍活性をもたらす。
【００５８】
論拠  転移性又は難治性／再発性のＨＰＶ関連悪性腫瘍（子宮頚がん、肛門がん、及び中咽頭がん等）は不治であり、標準療法により緩和されることが乏しい。単独剤のＰＤ−１阻害剤はこれらの疾患について、１２〜２０％の範囲の奏功率を生み出した。ＰＤ−１を遮断するモノクローナル抗体ペンブロリズマブは、フェーズ１ｂのＫＥＹＳＴＯＮＥ０１２試験における１６％の奏功率（２８人／１７４人の患者）に基づき、再発性又は転移性の頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）についてのＦＤＡの認可を最近受けた。奏功率はＨＰＶ陽性とＨＰＶ陰性のＨＮＳＣＣの間で類似していた。フェーズ１ｂ試験（ＫＥＹＳＴＯＮＥ０２８）は、再発性又は転移性の子宮頸がんの患者において、ペンブロリズマブに対する１２．５％の奏功率（３／２４患者）と、肛門管の再発性又は転移性の扁平上皮がんの患者において２０％の奏功率（５／２５）を示した。Ｍ７８２４（ＭＳＢ００１１３５９Ｃ）のフェーズ１試験におけるＨＰＶ関連悪性腫瘍の患者の小コホート（small cohort）由来の早期のデータは、ＰＤ−Ｌ１とＴＧＦベータ経路の両方を標的とするこの剤は、この患者集団における他の単独剤のＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤と比較して、よい高い比率で奏功を生み出すことを示唆している。
【００５９】
目的  第１の目的は５つの亜集団：チェックポイント阻害剤未投与（naive to）の肛門がんの患者、チェックポイント阻害剤に対して難治性である肛門がんの患者、チェックポイント阻害剤に対して難治性である子宮頚がんの患者、チェックポイント阻害剤に対して難治性であるＰ１６＋頭頚部がんの患者、及びチェックポイント阻害剤未投与の稀なＨＰＶ関連腫瘍（扁平上皮直腸がん、外陰部がん、膣がん、陰茎がん）の患者において、再発性又は転移性のＨＰＶ陽性悪性腫瘍の患者におけるＭ７８２４の客観的奏功率（objective response rate）を決定することである。
【００６０】
第２の目的は、限定するものではないが、循環している腫瘍細胞の評価、循環している腫瘍ＤＮＡの評価、Ｅ６／Ｅ７がんタンパク質に対する抗原特異的なＴ細胞応答の評価、末梢免疫サブセットの解析、Ｔ細胞受容体解析、及びＨＰＶタイピングを含む、投与された治療を理解し及び改善するための探索的な免疫学的研究を行うことである。
【００６１】
適格性  フェーズＩＩ試験のための適格性は、転移性又は難治性／再発性のＨＰＶ関連悪性腫瘍、子宮頸がん（９９％がＨＰＶ＋）、Ｐ１６＋中咽頭がん、肛門がん（９０％がＨＰＶ＋）、扁平上皮細胞直腸がん（９０％がＨＰＶ＋）、又はＨＰＶ試験陽性の外陰部、膣、及び陰茎のがん（６０〜７０％がＨＰＶ＋）を有する、１８歳以上の患者を含む。ＨＰＶ試験陽性は、登録（enrolling）前に外陰部、膣、及び陰茎のがんの患者のみに必要とされるであろうが、ＨＰＶ試験は全ての他の腫瘍型について探索的エンドポイントとして行われ、ＨＰＶについて陰性である患者は入れ替えられるであろう。患者が標準治療を拒絶しない限り、事前の第１選択の全身療法は必要とされる。
【００６２】
デザイン  全ての患者は１２００ｍｇのＭ７８２４の６０分間に亘る静脈注射投与を、２週間毎に、ＰＤ又は毒性が起こるまで受けるであろう。５つのコホート：（１）チェックポイント阻害剤未投与（naive to）の肛門がんの患者、（２）チェックポイント阻害剤に対して難治性である肛門がんの患者、（３）チェックポイント阻害剤に対して難治性である子宮頚がんの患者、（４）チェックポイント阻害剤に対して難治性であるＰ１６＋頭頚部がんの患者、（５）チェックポイント阻害剤未投与の稀なＨＰＶ関連腫瘍（扁平上皮直腸がん、外陰部がん、膣がん、陰茎がん）の患者、があるであろう。５つの全てのコホートの試験は、シモンの２段階フェーズＩＩ試験デザインを使用して行われるであろう。
【００６３】
免疫チェックポイント未投与のコホート（肛門及び稀な腫瘍型）の両方について、第１段階では８人の評価可能な患者を登録する（enroll）であろうし、８人のうち２人以上が客観的奏功を有するときには、合計で１３人の評価可能な患者が治療されるまで追加（accrual）は継続するであろう。１３人のうち奏功を体験する者が４人以上（３０．８％）いるときには、これは十分に興味深く、後の試験でさらに研究されることが保証されるであろう。
【００６４】
３つ全ての免疫チェックポイント難治性のコホート（肛門、子宮頚部、頭頚部）について、第１段階では８人の評価可能な患者を登録するであろうし、８人のうち１人以上が客観的奏功を有するときには、全体で１２人の評価可能な患者が治療されるまで追加は継続するであろう。１２人のうち奏功を体験する者が２人（１６．７％）以上いるときには、これは十分に興味深く、後の試験でさらに研究されることが保証されるであろう。
【００６５】
統計学的考察  この試験の第１の目的は、ＨＰＶ陽性がんの患者において抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦベータ阻害剤の組み合わせに対する客観的奏功率を決定することである。患者は５つのコホート：（１）チェックポイント阻害剤未投与の肛門がんの患者、（２）チェックポイント阻害剤に対して難治性である肛門がんの患者、（３）チェックポイント阻害剤に対して難治性である子宮頚がんの患者、（４）チェックポイント阻害剤に対して難治性であるＰ１６＋頭頚部がんの患者、（５）チェックポイント阻害剤未投与の稀なＨＰＶ関連腫瘍（扁平上皮直腸がん、外陰部がん、膣がん、陰茎がん）の患者、に登録されるであろう。
【００６６】
抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法未投与（naive to）の２つのコホート（肛門及び稀な腫瘍型）について、文献由来のデータ（少なくとも肛門がんを有する）は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１単独剤治療についての奏功率は、およそ１５〜２０％であろうと示唆している。この試験は、提案された療法が改善された奏功率と関連しているかもしれないと示そうとするだろう。
【００６７】
療法未投与の患者（patients naive to therapy）におけるこの治療の有効性を確立するために、これら２つのコホートにおける第１の目的は、提案された剤の使用は１５％の奏功率を除外し、４０％と矛盾しない奏功率をもたらすかどうかを決定することであろう。そのために、未投与患者（naive patient）の３つの疾患特異的なコホートの各々は、改善された奏功率である４０％（ｐ１＝０．４０）を支持し、受け入れがたく低い１５％（ｐ０＝０．１５）のＰＲ＋ＣＲの比率を除外するために、シモンのミニマックス二段階フェーズＩＩ試験デザイン（Simon R, Controlled Clinical Trials 10:1-10, 1989）を使用して実施されるであろう。アルファ＝０．１５（質が悪い治療を受け入れる確立＝０．１５）及びベータ＝０．２０（良い治療を拒絶する確率＝０．２０）を伴って、コホートを意図的に小さく保つ目的で、各疾患に基づいた未投与のコホート（naive cohort）の第１段階は８人の評価可能な患者を登録するであろうし、８人のうち０人から１人が臨床奏功を有するときには、そのコホートにさらなる患者は追加しないであろう。最初の８人の患者のうち２人以上が奏功を有するときには、各コホートにおいて合計で１３人の療法未投与の評価可能である患者が治療されるまで、追加は継続するであろう。患者が奏功を体験したかどうかを決定するには最大数か月要するかもしれないので、第２段階への登録が保証されることを確かにするためには、追加の一時的な中断が必要かもしれない。１３人の患者のうち奏功を有する患者が２人又は３人いるときには、これはそのコホートについて興味を持たれない低い奏功率であろう。１３人のうち奏功を体験した者が４人（３０．８％）以上いるときには、これは十分に興味深く、その型の疾患において後の試験でさらに研究されることが保証されるであろう。帰無仮説の下（奏功率１５％）では、早期終了の確率は６５．７％である。
【００６８】
抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１療法に対して難治性である３つのコホート（肛門、子宮頚部、頭頚部）について、この集団において可能性がある奏功率に関して、出版された文献には限られた情報はあるが、それは低いと予測されている。明らかに５％を超える奏功率の取得には興味を引かれるであろう。
【００６９】
療法に対して難治性である患者においてこの治療の有効性を確立するために、これら３つのコホートにおける第１の目的は、提案された剤を使用することは５％の奏功率を除外し、２５％と矛盾しない奏功率をもたらすかどうかを決定することであろう。そのために、難治性の患者における３つの疾患特異的なコホートの各々について、２５％の改善された奏功率（ｐ１＝０．２５）を支持し、受け入れがたく低い５％（ｐ０＝０．０５）のＰＲ＋ＣＲの比率を除外するために、シモンのミニマックス二段階フェーズＩＩ試験デザイン（Simon R, Controlled Clinical Trials 10:1-10, 1989）を使用して実施されるであろう。アルファ＝０．１５（質が悪い治療を受け入れる確立＝０．１０）及びベータ＝０．２０（良い治療を拒絶する確率＝０．２０）を伴い、各疾患に基づいたコホートにおける第１段階は８人の評価可能な患者を登録するであろうし、８人のうち０人が臨床奏功を有するときには、そのコホートに患者がさらに追加されることはないであろう。最初の８人の患者のうち１人以上が奏功を有するときには、各コホートにおいて合計で１２人の療法に対して難治性である評価可能な患者が治療されるまで、追加は継続するであろう。患者が奏功を体験したかどうかを決定するには最大数か月要するかもしれないので、第２段階への登録が保証されることを確かにするために、追加（accrual）の一時的な中断が必要かもしれない。１２人の患者のうち奏功を有する患者が１人いるときには、これはそのコホートについて興味をもたれない低い奏功率であろう。１２人のうち奏功を体験した者が２人（１６．７％）以上いるときには、これは十分に興味深く、その型の疾患において後の試験でさらに研究されることが保証されるであろう。帰無仮説の下（奏功率５％）では、早期終了の確率は６６．３％である。
【００７０】
これらの全ての場合において患者は、彼らが治療を受けた後に、ＨＰＶの確定試験を受けるであろうことに留意するべきであり；試験に登録された全ての患者のおそらく５〜１０％は、彼らの臨床診断にも関わらず、ＨＰＶ陰性であろうと予測される。これらの患者はＨＰＶ陽性であると推定される他の患者と入れ替えられるであろうし、その入れ替えられた患者は最終的な解析に含められるであろう者である。これは普通ではないが妥当である状況を意味し得、第２段階への追加はＨＰＶ陰性患者の奏功に基づいて行われるが、その入れ替えは奏功者（responder）のためではない。実際に第１段階において適格である患者に不適切な奏功があったときには、これは第２段階の継続に意図せぬ結果をもたらす。たとえ決定が第１段階における誇張された奏功に基づいて、第２段階で１人以上の患者の追加を行ったことを意味してしても、救済策として、その決定がされ次第、知得した新たな情報に基づいて試験は第２段階への追加を終了するであろう。ＨＰＶ陰性であるか又は他の理由に基づく評価不可能な患者の可能性を許容するために、試験は最大８人まで評価不可能な患者を許容するであろう。
【００７１】
１か月当たり、およそ３人の患者をこの試験に登録するかもしれないと予測される。よって最大２６人の評価可能な未投与（naive）の患者に加えて、３６人の評価可能な難治性の患者（合計で６２人の評価可能な患者）が登録されるためには２年が必要であろうと予測される。ＨＰＶ陰性であると遡及的に決定される患者を含めて、少数の評価不可能な患者を許容するために、追加の上限は７０人の患者に設定されるであろう。
【００７２】
本明細書で引用された出版物、特許出願、及び特許を含む全ての参照文献は、各参照文献が個々に且つ具体的に参照により本明細書中に組み込まれることが示され、本明細書に完全に記載されているのと同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【００７３】
用語「a」及び「an」及び「the」及び「少なくとも１つ」、並びに本発明の記述と関連する類似する指示対象物（特に下記の特許請求の範囲との関連における）の使用は、本明細書中に別段の指示がない限り、又は明確に文脈から否定されない限り、単数及び複数の両方を含むと解釈されるべきである。１つ以上の項目のリストに続く用語「少なくとも１つ」の使用（例えば「Ａ及びＢの少なくとも１つ」）は、本明細書中に別段の指示がない限り、又は明確に文脈から否定されない限り、リストされた項目から選択される１つの項目（Ａ又はＢ）又はリストされた項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味するものと解釈されるべきである。用語「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、及び「含む（containing）」は、特に断りがない限り、非限定的用語（open-ended term）（すなわち、「含むが、限定されない」という意味）と解釈されるべきである。本明細書の数値範囲の言及は、本明細書中に別段の指示がない限り、単にその範囲内に入る各々の別の値を個別に言及する短縮された方法として働くことを意図するものであり、それぞれの別の値は、本明細書に個別に記載されたかのように、本明細書中に組み込まれる。本明細書で述べられる全ての方法は、本明細書中に別段の指示がない限り、又は特に明確に文脈から否定されない限り、任意の適切な順番で実施することができる。本明細書で提供された任意の及び全ての例、又は例示的な言語（例えば「など（such as）」）の使用は、単に本発明をより良く説明することを意図するものであり、特に特許請求されない限り、本発明の範囲の限定をもたらすものではない。本明細書の言語は、特許請求されない如何なる要素についても、本発明の実施に必須であると示すものと解釈されるべきではない。
【００７４】
本発明を実施するための本発明者らに知られている最良の形態を含めて、本発明の好適な態様は本明細書に述べられている。それらの好適な態様の変形は、前記の記載を読んだ当業者にとって自明となり得る。本発明者らは当業者がそのような変形を適切に採用することを予測しており、本発明者らは本発明が、本明細書に明確に述べられた以外のように実施されることを意図している。従って本発明は、適用され得る法律により許可されるように、本明細書に添付された特許請求の範囲の中で述べられた対象の全ての改変と均等物を含む。さらに、本明細書中に別段の指示がない限り、又は特に明確に文脈から否定されない限り、上記で述べた要素の任意の組み合わせが、その可能な全ての改変において本発明に包含される。
【国際調査報告】
2020519614.tif 000002
2020519614.tif 000003
2020519614.tif 000004