【手続補正書】
【提出日】平成29年2月23日(2017.2.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のエキソンを、多機能性対立遺伝子で置き換えるための核酸構築物であって、
（ａ）細胞の核酸の標的遺伝子に対して前記核酸構築物を誘導するための標的化アーム；
（ｂ）前記標的遺伝子の転写に関してセンス方向の動作配列、および、センス方向またはアンチセンス方向の薬剤選択カセット（ＤＳＣ）であって、前記動作配列が、第１のスプライシングアクセプターと、第１のレポーターと、第１のポリアデニル化配列とを含む、動作配列およびＤＳＣ；
（ｃ）アンチセンス方向の目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、および、アンチセンス方向のＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）であって、前記ＮＳＩが第２のエキソンを含み、前記ＣＯＩＮが、第２のスプライシングアクセプターと、第２のレポーターと、第２のポリアデニル化配列とを含む、ＮＳＩおよびＣＯＩＮ；ならびに、
（ｄ）組み換え可能なユニットであって、
第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第１の対および第２の対と
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記動作配列、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと、
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、
第２のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第３の対および第４の対と、
第３のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第５の対と、
を含み、ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではない、組み換え可能なユニット；
を含み、
前記組み換え可能なユニットは、第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記動作配列と前記ＤＳＣを欠失し、かつ、前記ＮＳＩをセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成するように組み換わり；そして、
前記条件的対立遺伝子は、前記第２のリコンビナーゼに対してさらに暴露されると、前記ＮＳＩを欠失し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で有する対立遺伝子を形成するように組み換わる、核酸構築物。
【請求項２】
第１のエキソンを、多機能性対立遺伝子で置き換えるための核酸構築物であって、
（ａ）細胞の核酸の標的遺伝子に対して前記核酸構築物を誘導するための標的化アーム；
（ｂ）前記標的遺伝子の転写に関してセンス方向の動作配列、および、センス方向またはアンチセンス方向の薬剤選択カセット（ＤＳＣ）であって、前記動作配列が、第１のスプライシングアクセプターと、第１のレポーターと、第１のポリアデニル化配列とを含む、動作配列およびＤＳＣ；
（ｃ）アンチセンス方向の目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、および、アンチセンス方向のＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）であって、前記ＮＳＩが第２のエキソンを含み、前記ＣＯＩＮが、第２のスプライシングアクセプターと、第２のレポーターと、第２のポリアデニル化配列とを含む、ＮＳＩおよびＣＯＩＮ；ならびに、
（ｄ）組み換え可能なユニットであって、
第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第１の対および第２の対と
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記動作配列、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと、
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、
第２のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第３の対および第４の対と、
第３のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第５の対と、
を含み、ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではない、組み換え可能なユニット；
を含み、
前記組み換え可能なユニットは、第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記動作配列と前記ＤＳＣを欠失し、かつ、前記ＮＳＩをセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成するように組み換わり；そして、
前記条件的対立遺伝子は、前記第２のリコンビナーゼに対してさらに暴露されると、
（ｉ）前記ＮＳＩを欠失し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で有する対立遺伝子、または、
（ｉｉ）前記ＮＳＩをアンチセンス方向で有し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で有する対立遺伝子
を形成するように組み換わる、核酸構築物。
【請求項３】
リコンビナーゼ部位の前記第５の対が、前記第３のリコンビナーゼに対して暴露され、かつ前記第１のリコンビナーゼまたは前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されないときに、前記第３のリコンビナーゼが前記ＣＯＩＮ、前記ＮＳＩ、および前記ＤＳＣを切り出し、そして前記動作配列をセンス方向で維持するように並べられている、請求項２に記載の核酸構築物。
【請求項４】
前記核酸構築物が１つの遺伝子に挿入される、請求項２に記載の核酸構築物であって、前記遺伝子の転写方向に関して５’から３’へ、前記核酸構築物が、センス方向の前記動作配列、センス方向またはアンチセンス方向の前記ＤＳＣ、アンチセンス方向の前記ＮＳＩ、およびアンチセンス方向の前記ＣＯＩＮを含む、核酸構築物。
【請求項５】
前記ＤＳＣがセンス方向である、請求項４に記載の核酸構築物。
【請求項６】
前記核酸構築物が１つの遺伝子に挿入される、請求項２に記載の核酸構築物であって、前記遺伝子の転写方向に関して５’から３’へ、前記核酸構築物が、アンチセンス方向の前記ＣＯＩＮ、アンチセンス方向の前記ＮＳＩ、センス方向またはアンチセンス方向の前記ＤＳＣ、およびセンス方向の前記動作配列を含む、核酸構築物。
【請求項７】
前記ＤＳＣがセンス方向である、請求項６に記載の核酸構築物。
【請求項８】
前記核酸構築物が１つの遺伝子に挿入される、請求項２に記載の核酸構築物であって、前記遺伝子の転写方向に関して５’から３’へ、前記核酸構築物が、アンチセンス方向の前記ＮＳＩ、センス方向またはアンチセンス方向の前記ＤＳＣ、センス方向の前記動作配列、およびアンチセンス方向の前記ＣＯＩＮを含む、核酸構築物。
【請求項９】
前記ＤＳＣがセンス方向である、請求項８に記載の核酸構築物。
【請求項１０】
前記核酸構築物が１つの遺伝子に挿入される、請求項２に記載の核酸構築物であって、前記遺伝子の転写方向に関して５’から３’へ、前記核酸構築物が、アンチセンス方向の前記ＣＯＩＮ、アンチセンス方向の前記ＮＳＩ、センス方向またはアンチセンス方向の前記ＤＳＣ、およびセンス方向の前記動作配列を含む、核酸構築物。
【請求項１１】
前記ＤＳＣがセンス方向である、請求項１０に記載の核酸構築物。
【請求項１２】
前記ＮＳＩが、
（ａ）遺伝子の１つまたは複数の野生型エキソン；
（ｂ）１つ以上の核酸置換、欠失、または付加を有している、遺伝子の１つまたは複数のエキソン；
（ｃ）１つのエキソンと、隣接するイントロン配列；
（ｄ）１つの野生型エキソンと、隣接するイントロン配列；
（ｅ）１つ以上の核酸置換、欠失、または付加を有している、遺伝子の１つのエキソンと、隣接するイントロン配列；あるいは
（ｆ）１つのマウスエキソンに相同である１つのヒトエキソン
を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の核酸構築物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の構築物を含有している哺乳動物細胞。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の構築物を含有しているヒト以外の胚またはヒト以外の動物。
【請求項１５】
核酸構築物を含む哺乳動物細胞であって、前記核酸構築物は、
（ａ）細胞の核酸の標的遺伝子に対して前記核酸構築物を誘導するための標的化アーム；
（ｂ）前記標的遺伝子の転写に関してセンス方向の動作配列、および、センス方向またはアンチセンス方向の薬剤選択カセット（ＤＳＣ）；
（ｃ）アンチセンス方向の目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、および、アンチセンス方向のＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）；ならびに、
（ｄ）組み換え可能なユニットであって、
第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第１の対および第２の対と
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記動作配列、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと、
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、
第２のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第３の対および第４の対と、
第３のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第５の対と、
を含み、ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではない、組み換え可能なユニット；
を含み、
前記組み換え可能なユニットは、第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記動作配列と前記ＤＳＣを欠失し、かつ、前記ＮＳＩをセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成するように組み換わり；そして、
前記条件的対立遺伝子は、前記第２のリコンビナーゼに対してさらに暴露されると、前記ＮＳＩを欠失し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で有する対立遺伝子を形成するように組み換わる、哺乳動物細胞。
【請求項１６】
核酸構築物を含むヒト以外の胚またはヒト以外の動物であって、前記核酸構築物は、
（ａ）細胞の核酸の標的遺伝子に対して前記核酸構築物を誘導するための標的化アーム；
（ｂ）前記標的遺伝子の転写に関してセンス方向の動作配列、および、センス方向またはアンチセンス方向の薬剤選択カセット（ＤＳＣ）；
（ｃ）アンチセンス方向の目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、および、アンチセンス方向のＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）；ならびに、
（ｄ）組み換え可能なユニットであって、
第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第１の対および第２の対と
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記動作配列、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと、
前記第１のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、
第２のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第３の対および第４の対と、
第３のリコンビナーゼによって認識される類似するリコンビナーゼ認識部位の第５の対と、
を含み、ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではない、組み換え可能なユニット；
を含み、
前記組み換え可能なユニットは、第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記動作配列と前記ＤＳＣを欠失し、かつ、前記ＮＳＩをセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成するように組み換わり；そして、
前記条件的対立遺伝子は、前記第２のリコンビナーゼに対してさらに暴露されると、前記ＮＳＩを欠失し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で有する対立遺伝子を形成するように組み換わる、ヒト以外の胚またはヒト以外の動物。
【請求項１７】
核酸構築物を含む哺乳動物細胞であって、前記核酸構築物は、
薬剤選択カセット（ＤＳＣ）、レポーター、ＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）、目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、ならびに前記レポーター、前記ＤＳＣ、前記ＣＯＩＮ、および前記ＮＳＩの間に並べられた、リコンビナーゼ部位の第１の対、第２の対、第３の対、第４の対、および第５の対
を含み、
どのリコンビナーゼ部位の対も、任意の他の対とは同一ではなく、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対は同じ第１のリコンビナーゼによって認識され、リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対は同じ第２のリコンビナーゼによって認識され、そしてリコンビナーゼ部位の前記第５の対は第３のリコンビナーゼによって認識され；
ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではなく、転写方向に関して、前記レポーターはセンス方向であり、前記ＮＳＩはアンチセンス方向であり、前記ＣＯＩＮはアンチセンス方向であり、そして前記ＤＳＣはセンス方向またはアンチセンス方向であり；
ここで、前記リコンビナーゼ部位は、（ｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記レポーター、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと；（ｉｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、を含む組み換え可能なユニットにおいて並べられ；そして、
ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対、前記第２の対、前記第３の対、および前記第４の対は、前記第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、条件的対立遺伝子が形成するように並べられており、ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対が前記レポーターの切り出し、前記ＤＳＣの切り出し、前記ＮＳＩのセンス方向への反転を誘導し、前記ＣＯＩＮがアンチセンス方向で維持され、かつ（ａ）リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩが切り出され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられているか；または（ｂ）リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩがアンチセンス方向で配置され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられているかのいずれかである、哺乳動物細胞。
【請求項１８】
核酸構築物を含むヒト以外の胚またはヒト以外の動物であって、前記核酸構築物は、
薬剤選択カセット（ＤＳＣ）、レポーター、ＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）、目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、ならびに前記レポーター、前記ＤＳＣ、前記ＣＯＩＮ、および前記ＮＳＩの間に並べられた、リコンビナーゼ部位の第１の対、第２の対、第３の対、第４の対、および第５の対
を含み、
どのリコンビナーゼ部位の対も、任意の他の対とは同一ではなく、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対は同じ第１のリコンビナーゼによって認識され、リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対は同じ第２のリコンビナーゼによって認識され、そしてリコンビナーゼ部位の前記第５の対は第３のリコンビナーゼによって認識され；
ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではなく、転写方向に関して、前記レポーターはセンス方向であり、前記ＮＳＩはアンチセンス方向であり、前記ＣＯＩＮはアンチセンス方向であり、そして前記ＤＳＣはセンス方向またはアンチセンス方向であり；
ここで、前記リコンビナーゼ部位は、（ｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記レポーター、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと；（ｉｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、を含む組み換え可能なユニットにおいて並べられ；そして、
ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対、前記第２の対、前記第３の対、および前記第４の対は、前記第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、条件的対立遺伝子が形成するように並べられており、ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対が前記レポーターの切り出し、前記ＤＳＣの切り出し、前記ＮＳＩのセンス方向への反転を誘導し、前記ＣＯＩＮがアンチセンス方向で維持され、かつ（ａ）リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩが切り出され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられているか；または（ｂ）リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩがアンチセンス方向で配置され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられているかのいずれかである、ヒト以外の胚またはヒト以外の動物。
【請求項１９】
マウス細胞またはラット細胞である、請求項１３、１５または１７のいずれか一項に記載の哺乳動物細胞。
【請求項２０】
幹細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、人工多能性細胞、多能性細胞、または全能細胞である、請求項１９に記載の哺乳動物細胞。
【請求項２１】
マウスまたはラットである、請求項１４、１６または１８のいずれか一項に記載のヒト以外の動物。
【請求項２２】
ヒト以外の細胞を修飾するための方法であって、前記方法は：
請求項１〜２のいずれか一項に記載の核酸構築物で前記ヒト以外の細胞中の標的遺伝子を標的化して、標的化された細胞を形成させる工程、
前記標的化された細胞を前記第１のリコンビナーゼに対して暴露して、前記条件的対立遺伝子を形成させる工程、および
前記条件的対立遺伝子を、前記ＮＳＩを切り出し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で配置する第２のリコンビナーゼに対して暴露する工程
を包含する、方法。
【請求項２３】
ヒト以外の細胞を修飾するための方法であって、前記方法は：
請求項２に記載の核酸構築物で前記ヒト以外の細胞中の標的遺伝子を標的化して、標的化された細胞を形成させる工程、
前記標的化された細胞を前記第１のリコンビナーゼに対して暴露して、前記条件的対立遺伝子を形成させる工程、および
前記条件的対立遺伝子を、前記ＮＳＩをアンチセンス方向で配置し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で配置する第２のリコンビナーゼに対して暴露する工程
を包含する、方法。
【請求項２４】
ヒト以外の細胞を修飾するための方法であって、前記方法は：
薬剤選択カセット（ＤＳＣ）、レポーター、ＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）、目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、ならびに前記レポーター、前記ＤＳＣ、前記ＣＯＩＮ、および前記ＮＳＩの間に並べられた、リコンビナーゼ部位の第１の対、第２の対、第３の対、第４の対、および第５の対
を含む核酸構築物で、前記ヒト以外の細胞中の標的遺伝子を標的化して、標的化された細胞を形成させる工程、
前記標的化された細胞を第１のリコンビナーゼに対して暴露して、前記動作配列と前記薬剤カセットを欠失し、かつ、前記目的のヌクレオチド配列をセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成させる工程、および
前記条件的対立遺伝子を、前記目的のヌクレオチド配列を切り出し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で配置する第２のリコンビナーゼに対して暴露する工程、
を包含し、
どのリコンビナーゼ部位の対も、任意の他の対とは同一ではなく、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対は同じ前記第１のリコンビナーゼによって認識され、リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対は同じ前記第２のリコンビナーゼによって認識され、そしてリコンビナーゼ部位の前記第５の対は第３のリコンビナーゼによって認識され；
ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではなく、転写方向に関して、前記レポーターはセンス方向であり、前記ＮＳＩはアンチセンス方向であり、前記ＣＯＩＮはアンチセンス方向であり、そして前記ＤＳＣはセンス方向またはアンチセンス方向であり；
ここで、前記リコンビナーゼ部位は、（ｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記レポーター、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと；（ｉｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、を含む組み換え可能なユニットにおいて並べられ；そして、
ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対、前記第２の対、前記第３の対、および前記第４の対は、前記第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記条件的対立遺伝子が形成するように並べられており、ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対が前記レポーターの切り出し、前記ＤＳＣの切り出し、前記ＮＳＩのセンス方向への反転を誘導し、前記ＣＯＩＮがアンチセンス方向で維持され、かつリコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩが切り出され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられている、方法。
【請求項２５】
ヒト以外の細胞を修飾するための方法であって、前記方法は：
薬剤選択カセット（ＤＳＣ）、レポーター、ＣＯＩＮ（反転による条件的エレメント）、目的のヌクレオチド配列（ＮＳＩ）、ならびに前記レポーター、前記ＤＳＣ、前記ＣＯＩＮ、および前記ＮＳＩの間に並べられた、リコンビナーゼ部位の第１の対、第２の対、第３の対、第４の対、および第５の対
を含む核酸構築物で、前記ヒト以外の細胞中の標的遺伝子を標的化して、標的化された細胞を形成させる工程、
前記標的化された細胞を第１のリコンビナーゼに対して暴露して、前記レポーターと前記薬剤カセットを欠失し、かつ、前記目的のヌクレオチド配列をセンス方向で、前記ＣＯＩＮをアンチセンス方向で含む条件的対立遺伝子を形成させる工程、および
前記条件的対立遺伝子を、前記目的のヌクレオチド配列をアンチセンス方向で配置し、前記ＣＯＩＮをセンス方向で配置する第２のリコンビナーゼに対して暴露する工程、
を包含し、
どのリコンビナーゼ部位の対も、任意の他の対とは同一ではなく、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対は同じ前記第１のリコンビナーゼによって認識され、リコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対は同じ前記第２のリコンビナーゼによって認識され、そしてリコンビナーゼ部位の前記第５の対は第３のリコンビナーゼによって認識され；
ここで、前記第１のリコンビナーゼ、前記第２のリコンビナーゼ、および前記第３のリコンビナーゼは同じではなく、転写方向に関して、前記レポーターはセンス方向であり、前記ＮＳＩはアンチセンス方向であり、前記ＣＯＩＮはアンチセンス方向であり、そして前記ＤＳＣはセンス方向またはアンチセンス方向であり；
ここで、前記リコンビナーゼ部位は、（ｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記レポーター、前記ＤＳＣおよび前記ＮＳＩを含む第１の組み換え可能なユニットと；（ｉｉ）前記第１のリコンビナーゼによって認識されるリコンビナーゼ部位の前記第１の対または前記第２の対に隣接した、前記ＮＳＩを含む第２の組み換え可能なユニットと、を含む組み換え可能なユニットにおいて並べられ；そして、
ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対、前記第２の対、前記第３の対、および前記第４の対は、前記第１のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記条件的対立遺伝子が形成するように並べられており、ここで、リコンビナーゼ部位の前記第１の対と前記第２の対が前記レポーターの切り出し、前記ＤＳＣの切り出し、前記ＮＳＩのセンス方向への反転を誘導し、前記ＣＯＩＮがアンチセンス方向で維持され、かつリコンビナーゼ部位の前記第３の対と前記第４の対が、前記第２のリコンビナーゼに対して暴露されると、前記ＮＳＩがアンチセンス方向で配置され、前記ＣＯＩＮがセンス方向で配置されるように並べられている、方法。
【請求項２６】
前記標的遺伝子が、１つの表現型と関係がある１つのエキソンまたは１つのヌクレオチド配列を含む、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記標的遺伝子が前記核酸構築物により置き換えられる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記標的化された細胞が形成された後であるが、前記第１のリコンビナーゼに対して暴露させる前に、前記表現型が最初に決定される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１のリコンビナーゼに対して暴露した後に、前記表現型が２回目に決定される、請求項２８に記載の方法。