(57)【要約】  本発明は、ＩＬＴ４（免疫グロブリン様転写産物４）に結合する抗体およびその抗原結合性フラグメント、ならびに例えば抗ＰＤ１抗体とのその組合せを提供する。また、例えば、対象における癌の治療または予防のためのその使用方法、ならびにそのような抗体およびフラグメントの製造方法を提供する。【選択図】図17
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）からなる群から選択されるヒト免疫グロブリン様転写産物４（ＩＬＴ４）エピトープにおける１以上のアミノ酸残基に結合し、重水素源の存在下の重水素交換から該エピトープを保護する抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項２】
ＩＬＴ４エピトープがＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）である、請求項１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項３】
ＩＬＴ４エピトープがＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）である、請求項１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項４】
ＩＬＴ４エピトープがＮＧＱＦ（配列番号６１）である、請求項１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項５】
ＩＬＴ４エピトープがＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）である、請求項１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項６】
ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）からなる群から選択されるヒトＩＬＴ４エピトープへの結合に関して基準抗体と競合する抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、基準抗体が、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンおよび配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む、抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項７】
ＩＬＴ４エピトープがＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）である、請求項６記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項８】
ＩＬＴ４エピトープがＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）である、請求項６記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項９】
ＩＬＴ４エピトープがＮＧＱＦ（配列番号６１）である、請求項６記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１０】
ＩＬＴ４エピトープがＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）である、請求項６記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１１】
（１）ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、
ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＸＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ここで、ＸはＳまたはＡである）（配列番号１７）、および
ＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）
を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、
ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＸ１Ｘ２ＮＲＰＳ（ここで、Ｘ１はＮ、Ｑ、ＥまたはＤであり、Ｘ２はＳまたはＡである）（配列番号２０）、および
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）
を含む軽鎖可変ドメイン；
（２）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２２）、
ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２３）、および
ＣＤＲ−Ｈ３：ＹＦＸ１Ｘ２ＳＧＷＹＫＧＧＡＦＤＩ（ここで、Ｘ１はＤまたはＳであり、Ｘ２はＳまたはＡである）（配列番号２４）
を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＨ（配列番号２５）、
ＣＤＲ−Ｌ２：ＹＫＳＤＳＤＫＨＱＧＳ（配列番号２６）、および
ＣＤＲ−Ｌ３：ＡＩＷＹＳＳＴＷＶ（配列番号２７）
を含む軽鎖可変ドメイン；
（３）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＭＨ（配列番号２８）、
ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）、および
ＣＤＲ−Ｈ３：ＶＧＥＷＩＱＬＷＳＰＦＤＹ（配列番号３０）
を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３１）、
ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）、および
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号３３）
を含む軽鎖可変ドメイン、または
（４）ＣＤＲ−Ｈ１：ＥＬＳＭＨ（配列番号３４）、
ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）、および
ＣＤＲ−Ｈ３：ＡＧＰＬＹＴＩＦＧＶＶＩＩＰＤＮＷＦＤＰ（配列番号３６）
を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号３７）、
ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３８）、および
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＧＶＶ（配列番号３９）
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１２】
ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、
ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）、および
ＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）
を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、
ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）、および
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１３】
配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖免疫グロブリン、および／または、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖免疫グロブリンを含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１４】
配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む軽鎖免疫グロブリン、および／または、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含む重鎖免疫グロブリンを含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１５】
配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、および／または、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンを含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１６】
配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、および／または、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１７】
（１）配列番号１または７９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（２）配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（３）配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（４）配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（５）配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（６）配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（７）配列番号８または８２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（８）配列番号９または８３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（９）配列番号１０または８４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、
（１０）配列番号１２または８５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、または
（１１）配列番号１４または８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１８】
（１）配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（２）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（３）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７２に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（４）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（５）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（６）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（７）配列番号６４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（８）配列番号６５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（９）配列番号６６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、
（１０）配列番号６７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または
（１１）配列番号６８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および
配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項１９】
配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項２０】
配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項２１】
配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および
配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン
を含む、請求項１１記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項２２】
抗体またはその抗原結合性フラグメントが、操作された酵母Ｎ−結合グリカンまたはＣＨＯ  Ｎ−結合グリカンでグリコシル化されている、請求項１〜２１のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む医薬組成物。
【請求項２４】
治療用物質を更に含む、請求項２３記載の医薬組成物。
【請求項２５】
薬学的に許容される担体を更に含む、請求項２３または２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１〜２１のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントのＶＨ、ＶＬ、ＶＨとＶＬとの両方、重鎖免疫グロブリン、軽鎖免疫グロブリン、または重鎖免疫グロブリンと軽鎖免疫グロブリンとの両方をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２７】
請求項２６記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２８】
請求項２６記載のポリヌクレオチドまたは請求項２７記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２９】
請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法。
【請求項３０】
請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む、それを要するヒト対象における癌の治療方法。
【請求項３１】
ヒト対象に対して治療手技を行い、および／または治療用物質を投与することを更に含む、請求項２９または３０記載の方法。
【請求項３２】
請求項２８記載の宿主細胞を培養して、抗体またはその抗原結合性フラグメントを発現させることを含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントの製造方法。
【請求項３３】
請求項２６記載のポリヌクレオチドを発現させることを含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントの製造方法。
【請求項３４】
請求項３２または３３記載の製造方法の産物である、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項３５】
請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントとサンプルを接触させ、抗体またはその抗原結合性フラグメントとＩＬＴ４ペプチドまたはその断片との複合体の存在を検出することを含む、サンプルにおけるＩＬＴ４ペプチドまたはその断片を検出するための方法であって、ここで、複合体の検出がＩＬＴ４ペプチドまたはその断片の存在を示す、方法。
【請求項３６】
癌の治療のための、請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用。
【請求項３７】
癌の治療における使用のための、請求項１〜２２のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合性フラグメント。
【請求項３８】
２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体であって、各軽鎖が、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖が、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項３９】
軽鎖が、配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を更に含み、および／または、重鎖が、配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を更に含む、請求項３８記載の抗体。
【請求項４０】
２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体であって、各軽鎖が、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖が、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む、抗体。
【請求項４１】
２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体であって、ここで、各軽鎖が配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、そして、各重鎖が配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる、抗体。
【請求項４２】
（ｉ）２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体であって、ここで、各軽鎖が配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、そして、各重鎖が配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる、抗体、および、（ｉｉ）ペンブロリズマブ、
を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１７年４月７日付け出願の米国仮特許出願第６２／４８３，０１９号（その開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に基づく利益を主張するものである。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫グロブリン様転写産物４（ＩＬＴ４）に結合する抗体およびその抗原結合性フラグメント、ならびにそのような抗体および抗原結合性フラグメントの製造方法、ならびに例えば、がんのような疾患を治療するためのそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
自然免疫および適応免疫応答を回避するために腫瘍細胞が用いる一般的な戦略はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ｇの異常発現に関連している（Ｃｕｒｉｇｌｉａｎｏら，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１３およびＧｏｎｚａｌｅｚら，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｓｃｉ．２０１２）。ＨＬＡ−Ｇは、受容体結合により、ならびに／またはトロゴサイトーシスおよび走化性の阻害により、免疫細胞機能を直接的に抑制しうる（Ｍｏｒａｎｄｉら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗ．２０１４およびＬｉｎら，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０１５）。例えば結腸直腸、膵臓、子宮内膜、肺、乳房、卵巣および胃癌を含む複数の腫瘍型におけるその高い発現は、進行した病期、腫瘍浸潤、転移能および予後不良に関連している（Ｌｉｎら，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．  ２０１５およびＬｏｕｍａｎｇｅら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１４）。トランスジェニックマウスモデルにおけるＨＬＡ−Ｇ機能の抗体媒介性遮断は腫瘍発生を抑制し、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の増殖を阻害することが示されている（Ｌｏｕｍａｎｇｅら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１４、Ｌｉｎら，Ｈｕｍ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３およびＡｇａｕｇｕｅら，Ｂｌｏｏｄ．２０１１）。ＩＬＴ４へのＨＬＡ−Ｇの結合は単球、樹状細胞および好中球の機能を直接的に抑制して、自然免疫抗腫瘍応答を阻害しうる。ＩＬＴ４によるＨＬＡ−Ｇと単球との間の相互作用はヒト単球由来抗原提示細胞（ＡＰＣ）の成熟を抑制して、Ｓｔａｔ３活性化によるＭＨＣクラスＩＩ抗原および共刺激分子の発現の低減をもたらす（Ｃｏｌｏｎｎａら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８；Ａｌｌａｎら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９９およびＬｉａｎｇら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００８）。ヒト単球由来樹状細胞（ＤＣ）およびＩＬＴ４トランスジェニックマウスを使用して、ＨＬＡ−Ｇは、骨髄性ＤＣの成熟／活性化の停止を伴う免疫寛容原性ＡＰＣの発生を誘導することが示され、ＨＬＡ−Ｇによる免疫寛容原性ＤＣの誘導はＭＨＣクラスＩＩ提示経路の破壊によるものであった（Ｒｉｓｔｉｃｈら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５）。
【０００４】
Ｔ細胞療法には応答しないが、組織関連マクロファージ／ＭＤＳＣ媒介性腫瘍耐性（例えば、骨髄「に富む（ｒｉｃｈ）」腫瘍）の軽減から利益を受けうる患者には、満たされていない医学的要求性が存在する。ＩＬＴ４遮断は、腫瘍微小環境における免疫寛容原性骨髄細胞の抑制を軽減することにより、この要求性を満たし、現在のＴ細胞標的抗体（例えば、抗ＰＤ１、抗ＴＩＧＩＴ）から区別するであろう。
【発明の概要】
【０００５】
発明の概略
本発明は、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。ある実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）からなる群から選択されるヒト１ＬＴ４エピトープの、１以上のアミノ酸残基に結合する。ある実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントはＤ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、エピトープＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）の、１以上のアミノ酸残基に結合する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、エピトープＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）の、１以上のアミノ酸残基に結合する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、エピトープＮＧＱＦ（配列番号６１）の、１以上のアミノ酸残基に結合する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、エピトープＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）の、１以上のアミノ酸残基に結合する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）からなる群から選択される２、３または４個のＩＬＴ４エピトープにおける１以上のアミノ酸残基に結合する。１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはエピトープＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）における１以上のアミノ酸残基に結合し、Ｄ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。もう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはエピトープＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）における１以上のアミノ酸残基に結合し、Ｄ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはエピトープＮＧＱＦ（配列番号６１）における１以上のアミノ酸残基に結合し、Ｄ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントはエピトープＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）における１以上のアミノ酸残基に結合し、Ｄ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。更にもう１つの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）からなる群から選択される２、３または４個のＩＬＴ４エピトープにおける１以上のアミノ酸残基に結合し、Ｄ２Ｏのような重水素源との重水素交換からエピトープを保護する。
【０００６】
本発明は、本明細書に開示されているいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントと同じヒトＩＬＴ４のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。ある実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号１および３、２および４、２および５、２および６、２および７、２および３、８および１１、９および１１、１０および１１、１２および１３、１４および１５、７９および３、８０および４、８０および５、８０および６、８０および７、８０および３、８２および１１、８３および１１、８４および１１、８５および１３ならびに８６および１５に記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントと同じ、ヒトＩＬＴ４のエピトープに結合する。幾つかの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号６３および７０、５７および７１、５７および７２、５７および７３、５７および５８、５７および７０、６４および７４、６５および７４、６６および７４、６７および７５、６８および７６に記載されている重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントと同じ、ヒトＩＬＴ４のエピトープに結合する。
【０００７】
本発明は更に、ヒトＩＬＴ４への結合に関して、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントと競合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。ある実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号１および３、２および４、２および５、２および６、２および７、２および３、８および１１、９および１１、１０および１１、１２および１３、１４および１５、７９および３、８０および４、８０および５、８０および６、８０および７、８０および３、８２および１１、８３および１１、８４および１１、８５および１３ならびに８６および１５に記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントと、ヒトＩＬＴ４への結合に関して競合する。幾つかの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号６３および７０、５７および７１、５７および７２、５７および７３、５７および５８、５７および７０、６４および７４、６５および７４、６６および７４、６７および７５、６８および７６に記載されている重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントと、ヒトＩＬＴ４への結合に関して競合する。
【０００８】
また、本発明は、（ａ）配列番号３〜７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの相補性決定領域−Ｌ１（ＣＤＲ−Ｌ１）、相補性決定領域−Ｌ２（ＣＤＲ−Ｌ２）および相補性決定領域−Ｌ３（ＣＤＲ−Ｌ３）、および／または、（ｂ）配列番号１、２、８〜１０、１２、１４、４４もしくは７９〜８６に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の重鎖可変（ＶＨ）ドメインの相補性決定領域−Ｈ１（ＣＤＲ−Ｈ１）、相補性決定領域−Ｈ２（ＣＤＲ−Ｈ２）および相補性決定領域−Ｈ３（ＣＤＲ−Ｈ３）を含む、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０００９】
本発明の１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、（１）ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＸＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ここで、ＸはＳまたはＡである）（配列番号１７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＸ１Ｘ２ＮＲＰＳ（ここで、Ｘ１はＳまたはＡであり、Ｘ２はＮ、Ｑ、ＥまたはＤである）（配列番号２０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメイン；（２）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２２）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２３）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＹＦＸ１Ｘ２ＳＧＷＹＫＧＧＡＦＤＩ（ここで、Ｘ１はＤまたはＳであり、Ｘ２はＳまたはＡである）（配列番号２４）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＨ（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＹＫＳＤＳＤＫＨＱＧＳ（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＡＩＷＹＳＳＴＷＶ（配列番号２７）を含むＶＬドメイン；（３）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＭＨ（配列番号２８）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＶＧＥＷＩＱＬＷＳＰＦＤＹ（配列番号３０）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３１）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号３３）を含むＶＬドメイン、ならびに／または、（４）ＣＤＲ−Ｈ１：ＥＬＳＭＨ（配列番号３４）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＡＧＰＬＹＴＩＦＧＶＶＩＩＰＤＮＷＦＤＰ（配列番号３６）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号３７）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３８）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＧＶＶ（配列番号３９）を含むＶＬドメインを含む。
【００１０】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１１】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１２】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１３】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１４】
１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１５】
もう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１６】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１７】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１８】
１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００１９】
もう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２０】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２１】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２２】
１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２３】
もう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２４】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２５】
更にもう１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【００２６】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有し、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００２７】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有し、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００２８】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００２９】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖可変ドメインは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００３０】
更に、重鎖免疫グロブリンと軽鎖免疫グロブリンとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する：（１）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（３）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（４）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（５）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（６）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（７）配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（８）配列番号９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（９）配列番号１０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１０）配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１１）配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１２）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１３）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１４）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１５）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１６）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１７）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１８）配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１９）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２０）配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２１）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、または（２２）配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン。
【００３１】
また、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する：（１）配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（２）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（３）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７２に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（４）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（５）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（６）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（７）配列番号６４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（８）配列番号６５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（９）配列番号６６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（１０）配列番号６７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または（１１）配列番号６８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン。
【００３２】
１つの好ましい実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
【００３３】
もう１つの好ましい実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【００３４】
更にもう１つの好ましい実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【００３５】
１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００３６】
もう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、軽鎖は更に、配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００３７】
更にもう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、重鎖は更に、配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００３８】
更にもう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、軽鎖は更に、配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、重鎖は更に配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００３９】
１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含み、そして、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む。
【００４０】
もう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、そして、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる。
【００４１】
本発明の１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、例えば操作された酵母Ｎ−結合グリカンまたはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞Ｎ−結合グリカンでグリコシル化されている。本発明の１つの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは抗体である。
【００４２】
本発明はまた、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む医薬組成物を提供する。ある実施形態においては、該組成物は更に、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）を含む。幾つかの実施形態においては、該組成物は更に、薬学的に許容される担体を含む。他の実施形態においては、該組成物は更に、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）および薬学的に許容される担体を含む。
【００４３】
１つの実施形態において、医薬組成物は、（ｉ）２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体であって、ここで、各軽鎖が配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、そして、各重鎖が配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる、抗体、および、（ｉｉ）ペンブロリズマブ、を含む。
【００４４】
本発明は更に、本明細書に開示されている任意の抗体またはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン軽鎖および／または免疫グロブリン重鎖またはそれらの可変ドメインを含むポリペプチド（例えば、単離されたポリペプチド）を提供する。例えば、本発明の１つの実施形態においては、ポリペプチドは、配列番号１〜３９、４４、４５、４７〜５８、６３〜７７および７９〜８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。また、本発明は、本明細書に開示されている任意のポリペプチドをコードする任意のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を提供する。もう１つの態様においては、本明細書に開示されているポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。本発明はまた、本明細書に開示されているポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を提供する。
【００４５】
本発明は、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法であって、例えば、インビトロまたはインビボにおける、例えば、それを要する対象（例えば、ヒト対象）の体内における方法を提供する。ある実施形態においては、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は更に、対象に対して治療手技（例えば、抗がん放射線療法または外科的腫瘍摘出）を行うことを含む。幾つかの実施形態において、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は更に、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）を対象に投与することを含む。他の実施形態において、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は更に、対象に対して治療手技（例えば、抗がん放射線療法または外科的腫瘍摘出）を行い、そして、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）を投与することを含む。
【００４６】
本発明はまた、本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、対象（例えば、ヒト対象）におけるがんの治療方法を提供する。ある実施形態において、がんの治療方法は更に、対象に対して治療手技（例えば、抗がん放射線療法または外科的腫瘍摘出）を行うことを含む。幾つかの実施形態において、がんの治療方法は更に、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）を対象に投与することを含む。他の実施形態において、がんの治療方法は更に、対象に対して治療手技（例えば、抗がん放射線療法または外科的腫瘍摘出）を行い、そして、治療用物質（例えば、ペンブロリズマブ）を投与することを含む。
【００４７】
本発明はまた、抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチド（例えば、ここで、該ポリヌクレオチドはベクター内に存在し、および／または、宿主細胞の、１以上の染色体内に組み込まれている）を含む宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を培養して、抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖を発現させることを含む、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖（例えば、そのＶＨおよび／またはＶＬ）の製造方法を提供する。
【００４８】
また、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチドを発現させることを含む、本発明の抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖（例えば、そのＶＨおよび／またはＶＬ）の製造方法を提供する。
【００４９】
前記製造方法の産物である、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントまたはその免疫グロブリン鎖も、本発明の一部である。
【００５０】
サンプルにおけるＩＬＴ４ペプチドまたはその断片の存在を検出するための方法も本発明の一部を構成する。該方法は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントとサンプルを接触させ、抗体または抗原結合性フラグメントとＩＬＴ４ペプチドまたはその断片との複合体の存在を検出することを含み、ここで、該複合体の検出は、ＩＬＴ４ペプチドまたはその断片の存在を示す。本発明の１つの実施形態においては、該方法は、インビトロで、例えば生物学的サンプル、例えば対象の外科摘出片または血液サンプルにおいて行われる。もう１つの実施形態においては、該方法はインビボで、例えば対象の体内で行われる。更にもう１つの実施形態においては、対象はヒトである。
【００５１】
発明の詳細な説明
本発明がより容易に理解されうるように、幾つかの科学技術用語を以下に具体的に定義する。本明細書中の他の箇所で特に定義されていない限り、本明細書中で用いる他の全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解される意味を有する。
【００５２】
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において用いる、“ａ”、“ａｎ”、“ｔｈｅ”のような単数形の語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、その対応複数対象物を含む。
【００５３】
「アフィニティ」は分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総計の強度を意味する。特に示されていない限り、本明細書中で用いる「結合アフィニティ」は、結合ペア（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を表す固有の結合アフィニティを意味する。分子Ｘの、その相手Ｙに対するアフィニティは、一般に、解離定数（ＫＤ）により表されうる。アフィニティは、ＫｉｎＥｘＡおよびＢｉａｃｏｒｅを含む当技術分野で公知の一般的方法で測定されうる。
【００５４】
本明細書中で用いる「抗体」なる語には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、完全ヒト抗体およびキメラ抗体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５５】
本明細書中で用いる「抗原結合性フラグメント」は、特に示されていない限り、抗体の抗原結合性フラグメント、すなわち全長抗体により結合される抗原に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗体結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、および個々の抗体重鎖または軽鎖、および個々の重鎖または軽鎖可変領域が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５６】
「Ｆａｂフラグメント」は、１個の軽鎖、ならびに１個の重鎖のＣＨ１および可変領域から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
【００５７】
「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは、２以上のジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
【００５８】
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分または断片、そしてまた、ＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
【００５９】
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２個の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、抗体のペプシン切断の産物でありうる。
【００６０】
「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
【００６１】
「単離された抗体」は精製状態に関するものであり、そのような文脈においては、分子が、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物のような他の生物学的分子、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質を実質的に含有しないことを意味する。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような物質の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在を意味するものではなく、ただし、それらは、本明細書に記載されている結合性化合物の実験的または治療的使用を実質的に妨げる量で存在しないことを要する。
【００６２】
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」なる語は実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる考えられうる自然突然変異以外はアミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には異なるエピトープに対して特異的であることが多い可変ドメイン内に異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による抗体の製造を要すると解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  ２２２：５８１−５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
【００６３】
「完全ヒト抗体」なる語は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、マウスにおいて、マウス細胞において、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、完全ヒト抗体は、ラットにおいて、ラット細胞において、またはラット細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、ラット炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。
【００６４】
一般に、基本的な「抗体」構造単位は四量体を含む。単一特異性抗体においては、各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００〜１１０個またはそれ以上のアミノ酸の「可変領域」または「可変ドメイン」を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。
【００６５】
典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト定常重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとしての、抗体のアイソタイプを定める。これらのＩｇＧのサブタイプには、例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４が含まれる。本発明は、これらの軽および／または重定常鎖のいずれかを含む抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメントを含む。
【００６６】
本明細書中で用いる「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」または「Ｖ鎖」は、異なる抗体間で配列において可変性であるＩｇＧ鎖のセグメントを意味する。抗体の「可変領域」は、単独又は組合されて、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を意味する。重鎖の可変領域は「ＶＨ」と称されうる。軽鎖の可変領域は「ＶＬ」と称されうる。典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変領域は、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ  ｅｄ．；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１−７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３の定義に基づいている。
【００６７】
「ＣＤＲ」は、抗体ＶＨβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２またはＨ３）の１つ、または抗体ＶＬβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２またはＬ３）の１つを意味する。したがって、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。ＣＤＲ領域は当業者によく知られており、例えば、抗体可変ドメイン内の最も超可変性の領域として、Ｋａｂａｔ（カバット）によって定義されている。また、保存されたβシートフレームワークの一部ではなく、したがって、異なるコンホメーションに適応可能である残基として、ＣＤＲ領域配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ（チョチア）によって構造的に定義されている。どちらの用語も当技術分野で十分に認識されている。ＣＤＲ領域配列は、ＡｂＭ、ＣｏｎｔａｃｔおよびＩＭＧＴによっても定義されている。標準（カノニカル）抗体可変領域内のＣＤＲの位置は多数の構造の比較により決定されている（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−４８；Ｍｏｒｅａら，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９）。超可変領域内の残基数は抗体によって異なるため、標準位置に対する追加的残基には、通常、標準可変領域番号付け法における残基番号の隣にａ、ｂ、ｃなどの符号が付けられる（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら，前掲）。そのような命名法も同様に当業者によく知られている。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けおよびＩＭＧＴ固有番号付け系を含む番号付け系の間の対応は当業者によく知られており、以下の表１に示されている。幾つかの実施形態においては、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付け系により定義されているとおりである。他の実施形態においては、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付け系により定義されているとおりである。更に他の実施形態においては、ＣＤＲは、ＡｂＭ番号付け系により定義されているとおりである。更に他の実施形態においては、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け系により定義されているとおりである。更に他の実施形態においては、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ番号付け系により定義されているとおりである。
【表１】
2020519235.tif 000003
【００６８】
配列同一性は、２つの配列が最適に整列された場合に同等位置で２つのポリペプチドのアミノ酸が同一である度合を意味する。
【００６９】
配列類似性は、同一残基、および非同一の生化学的に関連したアミノ酸を含む。類似特性を共有し、互換可能でありうる生化学的に関連したアミノ酸は前記に記載されている。
【００７０】
「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、タンパク質におけるアミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されて、変化が、しばしばタンパク質の生物活性を変化させることなく行われうることを意味する。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を表２に示す。
【００７１】
【表２】
2020519235.tif 000004
【００７２】
本明細書中で用いる「エピトープ」なる語は、抗体または抗原結合性フラグメントが結合する、抗原上の領域または範囲を意味する。本明細書に開示されている抗体またはその抗原結合性フラグメントのエピトープへの結合は、抗体またはその抗原結合性フラグメントがエピトープ内の１以上のアミノ酸残基に結合することを意味する。
【００７３】
「単離された」核酸分子またはポリヌクレオチドは、単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡもしくは合成由来またはそれらの何らかの組合せ）を意味する。本開示の目的において、特定のヌクレオチド配列を「含むポリヌクレオチド」（など）は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離されたポリヌクレオチドは、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／または、ベクター配列を含むことが可能である。
【００７４】
「制御配列」なる語は、特定の宿主生物における機能的に連結されたコード配列の発現に必要な又は有用なポリヌクレオチド配列を意味する。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、所望によりオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを用いることが公知である。本発明の１つの実施形態において、ポリヌクレオチドは、プロモーター、例えばウイルスプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーターまたは非ウイルスプロモーターまたは伸長因子（ＥＦ）−１プロモーター、および／またはイントロンに機能的に連結されている。
【００７５】
核酸が「機能的に連結」されていると言えるのは、それが別のポリヌクレオチドに対して機能的な関係で配置されている場合である。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡがポリペプチドのＤＮＡに機能的に連結されていると言えるのは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合であり；プロモーターまたはエンハンサーがコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、それが配列の転写に影響を及ぼす場合であり；あるいは、リボソーム結合部位がコード配列に機能的に連結されていると言えるのは、翻訳を促進するようにそれが位置している場合である。一般に（しかし常にそうである必要はないが）、「機能的に連結（されている）」は、連結されているそれらのポリヌクレオチド配列が連続的であり、分泌リーダーの場合には、連続的であり、かつ、リーディングフェーズにおけるものであることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。連結は簡便な制限部位における連結により達成される。そのような部位が存在しない場合には、通常の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが使用される。
【００７６】
本明細書中で用いる「細胞」、「細胞系」および「細胞培養」なる表現は互換的に用いられ、全てのそのような表示は後代を含む。したがって、「形質転換体」および「形質転換細胞」なる語は、導入（トランスファー）の数には無関係に、初代対象細胞、およびそれに由来する培養を含む。また、意図的な又は故意でない突然変異ゆえに、全ての後代が厳密に同一のＤＮＡ含量を有するわけではないと理解される。元の形質転換細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体後代も含まれる。異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかであろう。
【００７７】
宿主細胞には、哺乳類細胞を含む真核宿主細胞および原核宿主細胞が含まれる。宿主細胞は、抗ＩＬＴ−４抗体およびその抗原結合性フラグメントの発現のための宿主として使用されうる。宿主細胞には、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞およびＨＥＫ−２９３細胞が含まれる。哺乳類宿主細胞には、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよびハムスター細胞が含まれる。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系［例えば、スポドプテラ・フルジペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）またはトリコプルシア・ニー（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ）］、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。真菌細胞には、例えば以下のものを含む酵母および糸状菌細胞が含まれる：ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピチア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピチア・トレハロフィラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピチア・コクラメ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピチア・メンブラネファシエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピチア・ミヌタ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｉｎｕｔａ）［オガタエア・ミヌタ（Ｏｇａｔａｅａ  ｍｉｎｕｔａ）、ピチア・リンドネリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｌｉｎｄｎｅｒｉ）］、ピチア・オプンチエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピチア・テルモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピチア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピチア・グエルクウム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピチア・ピエペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピチア・スチプティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クライベロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、フィスコミトレラ・パテンス（Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  ｐａｔｅ���ｓ）およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、ピチア属種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、任意のサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、ハンゼヌラ・ポリモルファ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、任意のクライベロミセス属種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、任意のアスペルギルス属種（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ルックノウエンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、任意のフザリウム属種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ヤロウィア・リポリティカ（Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、およびニューロスポラ・クラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）。本発明は、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントを含有する、あるいはそのような抗体またはフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含有する、あるいは該ポリヌクレオチドを含有するベクターを含有する任意の宿主細胞［例えば、ＣＨＯ細胞、またはピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞、例えばピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）］を含む。
【００７８】
「治療する」または「治療」は、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントを、抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメントが有効である疾患の症状の１以上を有する対象に、例えば、物質が治療活性を示す癌もしくは感染症を有する又は有する疑いのある対象の治療において投与することを意味する。典型的には、抗体またはフラグメントは、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮もしくは消失の誘導またはそのような症状（例えば、癌の症状、例えば、腫瘍の成長または転移）の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の症状（例えば、癌または感染症）を軽減する「有効量」または「有効用量」で投与される。抗体またはフラグメントの有効量は、患者の病期、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。
【００７９】
本明細書中で用いる「抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント」は、ヒトＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントを意味する。
【００８０】
本発明は、ＩＬＴ４に特異的に結合する、本明細書に記載されている抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。抗体または抗原結合性フラグメントが所定配列（例えば、ヒトＩＬＴ４）を含むポリペプチドに「特異的」に結合すると言えるのは、それが約２０ｎＭまたはそれ以上（例えば、約１７ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭまたは１ｐＭ）のアフィニティのＫＤで該配列を含むポリペプチドには結合するが、該配列を欠くタンパク質には結合しない場合である。例えば、ヒトＩＬＴ４を含むポリペプチドに特異的に結合する抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒトＩＬＴ４のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付き形態には結合しうるが、ＩＬＴ４配列を欠く他のＦＬＡＧ（登録商標）タグ付きタンパク質には結合しない。
【００８１】
ＩＬＴ４
本発明の１つの実施形態においては、ヒトＩＬＴ４のアミノ酸配列は以下のアミノ酸配列を含む。
【化１】
2020519235.tif 000005
【００８２】
本発明のもう１つの実施形態においては、ヒトＩＬＴ４のアミノ酸配列は、シグナル配列を含有しない以下のアミノ酸配列を含む。
【化２】
2020519235.tif 000006
【００８３】
本発明のもう１つの実施形態においては、カニクイザルＩＬＴ４のアミノ酸配列は以下のアミノ酸配列を含む。
【化３】
2020519235.tif 000007
【００８４】
本発明のもう１つの実施形態においては、ＩＬＴ４または本明細書に記載されている任意の他のポリペプチドの発現のためのシグナル配列は、ＭＴＰＩＬＭＶＬＩＣＬＧＬＳＬＧＰＲＴＨＶ（配列番号４０のアミノ酸１〜２１）、または、ＭＴＰＩＶＴＶＬＩＣＬＧＬＳＬＧＰＲＴＨＶ（配列番号４３のアミノ酸１〜２１）、または、ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ（配列番号４６）である。
【００８５】
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントはＩＬＴ４の細胞外ドメイン：
ＱＴＧＴＩＰＫＰＴＬＷＡＥＰＤＳＶＩＴＱＧＳＰＶＴＬＳＣＱＧＳＬＥＡＱＥＹＲＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷＩＴＲＩＲＰＥＬＶＫＮＧＱＦＨＩＰＳＩＴＷＥＨＴＧＲＹＧＣＱＹＹＳＲＡＲＷＳＥＬＳＤＰＬＶＬＶＭＴＧＡＹＰＫＰＴＬＳＡＱＰＳＰＶＶＴＳＧＧＲＶＴＬＱＣＥＳＱＶＡＦＧＧＦＩＬＣＫＥＧＥＥＥＨＰＱＣＬＮＳＱＰＨＡＲＧＳＳＲＡＩＦＳＶＧＰＶＳＰＮＲＲＷＳＨＲＣＹＧＹＤＬＮＳＰＹＶＷＳＳＰＳＤＬＬＥＬＬＶＰＧＶＳＫＫＰＳＬＳＶＱＰＧＰＶＶＡＰＧＥＳＬＴＬＱＣＶＳＤＶＧＹＤＲＦＶＬＹＫＥＧＥＲＤＬＲＱＬＰＧＲＱＰＱＡＧＬＳＱＡＮＦＴＬＧＰＶＳＲＳＹＧＧＱＹＲＣＹＧＡＨＮＬＳＳＥＣＳＡＰＳＤＰＬＤＩＬＩＴＧＱＩＲＧＴＰＦＩＳＶＱＰＧＰＴＶＡＳＧＥＮＶＴＬＬＣＱＳＷＲＱＦＨＴＦＬＬＴＫＡＧＡＡＤＡＰＬＲＬＲＳＩＨＥＹＰＫＹＱＡＥＦＰＭＳＰＶＴＳＡＨＡＧＴＹＲＣＹＧＳＬＮＳＤＰＹＬＬＳＨＰＳＥＰＬＥＬＶＶＳＧＰＳＭＧＳＳＰＰＰＴＧＰＩＳＴＰＡＧＰＥＤＱＰＬＴＰＴＧＳＤＰＱＳＧＬＧＲＨＬＧＶ（配列番号４０のアミノ酸２２〜４６１）、またはその免疫グロブリン融合体（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）、または細胞の表面上で発現される細胞表面膜貫通（ＴＭ）形態：
ＱＴＧＴＩＰＫＰＴＬＷＡＥＰＤＳＶＩＴＱＧＳＰＶＴＬＳＣＱＧＳＬＥＡＱＥＹＲＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷＩＴＲＩＲＰＥＬＶＫＮＧＱＦＨＩＰＳＩＴＷＥＨＴＧＲＹＧＣＱＹＹＳＲＡＲＷＳＥＬＳＤＰＬＶＬＶＭＴＧＡＹＰＫＰＴＬＳＡＱＰＳＰＶＶＴＳＧＧＲＶＴＬＱＣＥＳＱＶＡＦＧＧＦＩＬＣＫＥＧＥＥＥＨＰＱＣＬＮＳＱＰＨＡＲＧＳＳＲＡＩＦＳＶＧＰＶＳＰＮＲＲＷＳＨＲＣＹＧＹＤＬＮＳＰＹＶＷＳＳＰＳＤＬＬＥＬＬＶＰＧＶＳＫＫＰＳＬＳＶＱＰＧＰＶＶＡＰＧＥＳＬＴＬＱＣＶＳＤＶＧＹＤＲＦＶＬＹＫＥＧＥＲＤＬＲＱＬＰＧＲＱＰＱＡＧＬＳＱＡＮＦＴＬＧＰＶＳＲＳＹＧＧＱＹＲＣＹＧＡＨＮＬＳＳＥＣＳＡＰＳＤＰＬＤＩＬＩＴＧＱＩＲＧＴＰＦＩＳＶＱＰＧＰＴＶＡＳＧＥＮＶＴＬＬＣＱＳＷＲＱＦＨＴＦＬＬＴＫＡＧＡＡＤＡＰＬＲＬＲＳＩＨＥＹＰＫＹＱＡＥＦＰＭＳＰＶＴＳＡＨＡＧＴＹＲＣＹＧＳＬＮＳＤＰＹＬＬＳＨＰＳＥＰＬＥＬＶＶＳＧＰＳＭＧＳＳＰＰＰＴＧＰＩＳＴＰＡＧＰＥＤＱＰＬＴＰＴＧＳＤＰＱＳＧＬＧＲＨＬＧＶＶＩＧＩＬＶＡＶＶＬＬＬＬＬＬＬＬＬＦＬＩＬＲＨＲＲＱＧＫＨ（配列番号４０のアミノ酸２２〜４９１）に結合する。
【００８６】
抗体および抗原結合性フラグメント
本発明は、ＩＬＴ４に結合する抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、完全ヒト抗体）（本明細書においては「抗ＩＬＴ４」と称される）、ならびに疾患の治療または予防における抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用方法を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、アンタゴニスト性抗ＩＬＴ４抗体、および疾患の治療または予防における該抗体またはその抗原結合性フラグメントの使用方法を提供する。
【００８７】
１つの態様において、本出願は、以下に記載されている特性の１以上を有する本明細書に記載されている抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【００８８】
・ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）および／またはＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）における１以上のアミノ酸残基においてヒトＩＬＴ４に結合し、および／または、例えば水素−重水素交換質量分析により測定された場合に、ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）および／またはＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）を重水素（例えば、Ｄ２Ｏ）交換から保護し、および／または、本質的には図１に示されているとおりのヒートマップでＩＬＴ４に結合する。
【００８９】
・ドメイン１においてヒトＩＬＴ４に結合する（Ｗｉｌｃｏｘら，ＢＭＣ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：６（２００２）を参照されたい）。
【００９０】
・細胞表面、例えばプレＢ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、Ｕ９３７細胞またはＪｕｒｋａｔ（ジャーカット）ＪＥ６細胞において発現されたＩＬＴ４のヒトＩＬＴ４細胞外ドメインまたはＴＭ形態に結合する。
【００９１】
・計算ｐＩ約７．２９（例えば、７．２９または７．３０）。
【００９２】
・実験的に決定されたｐＩ約７．２。
【００９３】
・Ｔｍ開始＞６０℃、Ｔｍ１約６５．２℃およびＴｍ２約７８．８℃を有するサーモグラムにより特徴づけられる。
【００９４】
・約１．７×１０−８Ｍ（例えば、表面プラズモン共鳴、例えば、ポリヒスチジンタグ付きヒトＩＬＴ４への抗ＩＬＴ４の結合により測定されたもの）のＫＤでヒトＩＬＴ４に結合する。
【００９５】
・Ｋａ＝５．５×１０５Ｍ−１ｓ−１（例えば、表面プラズモン共鳴、例えば、ポリヒスチジンタグ付きヒトＩＬＴ４への抗ＩＬＴ４の結合により測定されたもの）。
【００９６】
・Ｋｄ＝９×１０−３ｓ−１（例えば、表面プラズモン共鳴、例えば、ポリヒスチジンタグ付きヒトＩＬＴ４への抗ＩＬＴ４の結合により測定されたもの）。
【００９７】
・ＨＬＡ−Ｇ（例えば、Ｆｃ融合ＨＬＡ−Ｇ）の、ヒトＩＬＴ４（例えば、ＩＬＴ４でトランスフェクトされたＩＬＴ４発現マウス３Ａ９  Ｔ細胞上のＩＬＴ４）への結合を、例えば約０．２５マイクログラム／ｍｌ（±０．０６マイクログラム／ｍｌ）（例えば、表面プラズモン共鳴により測定された場合）のＩＣ５０で遮断する。
【００９８】
・ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ（例えば、ＨＬＡ−Ａ、例えばＨＬＡ＊Ａ２：０１またはＨＬＡ−Ｂ、例えばＨＬＡ＊Ｂ７：０２の蛍光色素標識デキサマー）および／またはＨＬＡ−Ｆ（例えば、ＨＬＡ−Ｆの蛍光色素標識四量体）の、ＩＬＴ４（例えば、ＩＬＴ４でトランスフェクトされたＩＬＴ４発現マウス３Ａ９  Ｔ細胞上のＩＬＴ４）への結合を、例えば表面プラズモン共鳴により測定された場合に遮断する。
【００９９】
・ＩＬＴ４（例えば、ＩＬＴ４でトランスフェクトされたＩＬＴ４発現マウス３Ａ９  Ｔ細胞上のＩＬＴ４）の、ＡＮＧＰＴＬ１、ＡＮＧＰＴＬ４および／またはＡＮＧＰＴＬ７（例えば、ビオチン化ＡＮＧＰＴＬタンパク質）への結合を、例えば表面プラズモン共鳴により測定された場合に遮断する。
【０１００】
・ＩＬＴ２、ＩＬＴ３、ＩＬＴ５、ＬＩＬＲＢ５、ＬＩＬＲＡ１、ＩＬＩＬＲＡ２、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８および／またはＩＬＴ１１に結合しない。
【０１０１】
・ＩＬＴ４トランスフェクト化３Ａ９細胞におけるＩＬ２のＩＬＴ４媒介性抑制を、例えば、０．４３マイクログラム／ｍｌ（±０．１４マイクログラム／ｍｌ）のＥＣ５０で逆転させる。
【０１０２】
・マスト細胞脱顆粒のＩＬＴ４：ＨＬＡ−Ｇ誘導性抑制（例えば、プレート結合ＨＬＡ−Ｇ四量体の存在下）をレスキューし、例えば、この場合、マスト細胞はＩＬＴ４およびＣＤ２００ＲＬａを発現し、例えば、ＣＤ２００ＲＬａの抗体媒介性架橋で刺激される。
【０１０３】
・末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からの、ＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＴＮＦアルファのような炎症誘発性骨髄性サイトカインのリポ多糖（ＬＰＳ）誘導性発現を増強する。
【０１０４】
・末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からの、ＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＴＮＦアルファのような炎症誘発性骨髄性サイトカインの抗ＣＤ３誘導性発現を増強する。
【０１０５】
・ヒト、または例えばマウス（例えば免疫不全ＮＳＧマウス）のような他の哺乳動物であって、ヒト造血幹細胞で再構成されたもの、例えば、ヒト末梢血ＣＤ４５＋  免疫細胞を含むもの、例えば、細胞系ＳＫＭＥＬ５由来のようなヒト皮膚メラノーマ腫瘍である腫瘍を有するものにおける、腫瘍成長を抑制する。
【０１０６】
・腫瘍を有する対象（例えば、ヒト対象）の身体における、マクロファージ／骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）媒介性腫瘍耐性を軽減する。
【０１０７】
・カニクイザルＩＬＴ４および／またはマウスｐｉｒＢに結合しない。および／または
・ＣＤ１４＋  ヒト単球および／またはＣＤ１１Ｂ＋  ヒト顆粒球を染色する。
【０１０８】
・表７に記載されているヒトＩＬＴ４ハプロタイプの１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個全て）に結合する。
【０１０９】
【化４】
2020519235.tif 000008
【０１１０】
2020519235.tif 000009
2020519235.tif 000010
2020519235.tif 000011
【０１１１】
2020519235.tif 000012
2020519235.tif 000013
【０１１２】
2020519235.tif 000014
2020519235.tif 000015
【０１１３】
2020519235.tif 000016
2020519235.tif 000017
【０１１４】
2020519235.tif 000018
2020519235.tif 000019
【０１１５】
2020519235.tif 000020
2020519235.tif 000021
【０１１６】
１Ｅ１重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは１Ｅ１  ＶＨおよびＶＬまたは１Ｅ１重鎖および軽鎖（またはその変異体、例えば、本明細書に記載されているもの）を含む抗体およびその抗原結合性フラグメントは、「１Ｅ１」と称されうる。
【化５】
2020519235.tif 000022
2020519235.tif 000023
【０１１７】
2020519235.tif 000024
2020519235.tif 000025
【０１１８】
本発明は、配列番号８、９、１０、６４、６５または６６の残基１がＥではなくＱである、抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【化６】
2020519235.tif 000026
【０１１９】
本発明は、配列番号１１または７４の残基１がＱではなくＥである、抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【０１２０】
２Ａ６軽鎖ＣＤＲ
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＨ（配列番号２５）
ＣＤＲ−Ｌ２：ＹＫＳＤＳＤＫＨＱＧＳ（配列番号２６）
ＣＤＲ−Ｌ３：ＡＩＷＹＳＳＴＷＶ（配列番号２７）。
【０１２１】
２Ａ６重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または、２Ａ６  ＶＨおよびＶＬ、または、２Ａ６重鎖および軽鎖（またはその変異体、例えば、本明細書に記載されているもの）を含む抗体およびその抗原結合性フラグメントは、「２Ａ６」と称されうる。
【化７】
2020519235.tif 000027
【０１２２】
本発明は、配列番号１２または６７の残基１がＥではなくＱである、抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【０１２３】
３Ｇ７重鎖ＣＤＲ
ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＭＨ（配列番号２８）
ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）
ＣＤＲ−Ｈ３：ＶＧＥＷＩＱＬＷＳＰＦＤＹ（配列番号３０）
【化８】
2020519235.tif 000028
【０１２４】
３Ｇ７軽鎖ＣＤＲ
ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３１）
ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号３３）。
【０１２５】
３Ｇ７重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または、３Ｇ７  ＶＨおよびＶＬ、または、３Ｇ７重鎖および軽鎖（またはその変異体、例えば、本明細書に記載されているもの）を含む抗体およびその抗原結合性フラグメントは、「３Ｇ７」と称されうる。
【化９】
2020519235.tif 000029
【０１２６】
本発明は、配列番号１４または６８の残基１がＥではなくＱである、抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【０１２７】
２Ｃ１重鎖ＣＤＲ
ＣＤＲ−Ｈ１：ＥＬＳＭＨ（配列番号３４）
ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）
ＣＤＲ−Ｈ３：ＡＧＰＬＹＴＩＦＧＶＶＩＩＰＤＮＷＦＤＰ（配列番号３６）
【化１０】
2020519235.tif 000030
【０１２８】
本発明は、配列番号１５または７６の残基１がＥではなくＱである、抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。
【０１２９】
２Ｃ１軽鎖ＣＤＲ
ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号３７）
ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３８）
ＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＧＶＶ（配列番号３９）。
【０１３０】
２Ｃ１重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または、２Ｃ１  ＶＨおよびＶＬ、または、２Ｃ１重鎖および軽鎖（またはその変異体、例えば、本明細書に記載されているもの）を含む抗体およびその抗原結合性フラグメントは、「２Ｃ１」と称されうる。
【０１３１】
抗体またはその抗原結合性フラグメントの種々の実施形態においては、重鎖免疫グロブリンのＣ末端リジンが存在しない。
【０１３２】
したがって、幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンもしくは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１または７９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３４】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３５】
他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３６】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３７】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３８】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号２または８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１３９】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号８または８２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１４０】
他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号９または８３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１４１】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１０または８４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１４２】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１２または８５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１４３】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号１４または８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む。
【０１４４】
ある他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖可変ドメインは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１４５】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４６】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４７】
他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７２に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４８】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１４９】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５０】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５１】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５２】
他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５３】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５４】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５５】
更に他の実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号６８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および、配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１５６】
もう１つの実施形態においては、ＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントは、１Ｅ１のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号１９〜２１）を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに、１Ｅ１のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号１６〜１８）を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。
【０１５７】
もう１つの実施形態においては、ＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントは、２Ａ６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号２５〜２７）を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに、２Ａ６のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号２２〜２４）を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。
【０１５８】
もう１つの実施形態においては、ＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントは、３Ｇ７のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号３１〜３３）を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに、３Ｇ７のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号２８〜３０）を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。
【０１５９】
もう１つの実施形態においては、ＩＬＴ４に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントは、２Ｃ１のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号３７〜３９）を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、ならびに、２Ｃ１のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号３４〜３６）を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む。
【０１６０】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６１】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６２】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６３】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６４】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６５】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６６】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６７】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６８】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１６９】
もう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７０】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７１】
更にもう１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７２】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７３】
１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７４】
更に１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７５】
更に１つの実施形態においては、抗体または抗原結合性フラグメントは、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１７６】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体１Ｅ１のＶＬドメイン（例えば、配列番号７０、７１、７２、７３、５８または７７）および／または抗体１Ｅ１のＶＨドメイン（例えば、配列番号６３、５７または６９）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１７７】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体２Ａ６のＶＬドメイン（例えば、配列番号７４）および／または抗体２Ａ６のＶＨドメイン（例えば、配列番号６４、６５または６６）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１７８】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体３Ｇ７のＶＬドメイン（例えば、配列番号７５）および／または抗体３Ｇ７のＶＨドメイン（例えば、配列番号６７）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１７９】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体２Ｃ１のＶＬドメイン（例えば、配列番号７６）および／または抗体２Ｃ１のＶＨドメイン（例えば、配列番号６８）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１８０】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体１Ｅ１の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号３、４、５、６、７または４５）および／または抗体１Ｅ１の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１、２、４４、７９、８０または８１）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１８１】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体２Ａ６の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１１）および／または抗体２Ａ６の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号８、９、１０、８２、８３または８４）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１８２】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体３Ｇ７の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１３）および／または抗体３Ｇ７の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１２または８５）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１８３】
本発明は更に、ＩＬＴ４に結合し、抗体２Ｃ１の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１５）および／または抗体２Ｃ１の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１４または８６）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントを提供する。
【０１８４】
本発明は更に、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体を提供し、ここで、各軽鎖は抗体１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１のＶＬまたは軽鎖免疫グロブリンを含み、各重鎖は抗体１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１のＶＨまたは重鎖免疫グロブリンを含む。
【０１８５】
１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１８６】
もう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、軽鎖は更に、配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１８７】
更にもう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、重鎖は更に、配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１８８】
更にもう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含み、ここで、軽鎖は更に、配列番号９０に記載されているアミノ酸配列を含み、重鎖は更に、配列番号８９に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１８９】
１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含み、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む。
【０１９０】
もう１つの実施形態においては、抗体は２つの重鎖および２つの軽鎖からなり、ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる。
【０１９１】
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、ＩＬＴ４に尚も結合する一方で、多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の保存的または非保存的アミノ酸置換を有するＶＬ（シグナル配列を含有する又は含有しない）、例えば、配列番号５８または７０〜７７のいずれかにおけるＶＬを含み、および／または、多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の保存的または非保存的アミノ酸置換を有するＶＨ（シグナル配列を含有する又は含有しない）、例えば、配列番号５７または６３〜６９のいずれかにおけるＶＨを含む。
【０１９２】
本発明はまた、本明細書に開示されているアミノ酸配列、例えば配列番号１〜３９、４４、４５、４７〜５８、６３〜７７または７９〜８６を含むポリペプチド、ならびにそれらにおける多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０個またはそれ以上の保存的または非保存的アミノ酸置換までのアミノ酸配列を有するそのようなアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
【０１９３】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有し、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０１９４】
幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方を含み、ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含み、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含む。
【０１９５】
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン重鎖は、例えばアミノ酸配列ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号４１）を含むシグナル配列に機能的に連結されており、および／または、本発明の抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン軽鎖は、例えばアミノ酸配列ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号４２）を含むシグナル配列に機能的に連結されている。
【０１９６】
本発明の１つの実施形態においては、本明細書に記載されている免疫グロブリン鎖（例えば、重鎖および／または軽鎖）のＮ末端グルタミン（Ｑ）は、ピログルタミン酸により置換されている。１つの実施形態においては、重鎖免疫グロブリンのＮ末端Ｑは、ピログルタミン酸により置換されている。もう１つの実施形態においては、軽鎖免疫グロブリンのＮ末端Ｑは、ピログルタミン酸により置換されている。更にもう１つの実施形態においては、重鎖免疫グロブリンのＮ末端Ｑおよび重鎖免疫グロブリンのＮ末端Ｑは、ピログルタミン酸により置換されている。
【０１９７】
本明細書は更に、本明細書で開示されている任意の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）と同じ、ＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。１つの実施形態においては、該エピトープはＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）である。もう１つの実施形態においては、該エピトープはＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）である。更にもう１つの実施形態においては、該エピトープはＮＧＱＦ（配列番号６１）である。更にもう１つの実施形態においては、該エピトープはＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）である。ある実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号１および３、２および４、２および５、２および６、２および７、２および３、８および１１、９および１１、１０および１１、１２および１３、１４および１５、７９および３、８０および４、８０および５、８０および６、８０および７、８０および３、８２および１１、８３および１１、８４および１１、８５および１３ならびに８６および１５に記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントと同じ、ヒトＩＬＴ４のエピトープに結合する。幾つかの実施形態においては、該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号６３および７０、５７および７１、５７および７２、５７および７３、５７および５８、５７および７０、６４および７４、６５および７４、６６および７４、６７および７５、６８および７６に記載されている重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントと同じヒトＩＬＴ４のエピトープに結合する。
【０１９８】
本発明は、本明細書に開示されている任意の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）の、ＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）への結合を交差遮断する、あるいは本明細書に開示されている任意の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）と、ＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）に関して競合する抗体および抗原結合性フラグメントを含む。本明細書に記載されている交差遮断性抗体およびその抗原結合性フラグメントは、結合アッセイ（例えば、バイオレイヤーインターフェロメトリー（ＢＬＩ；例えば、ＦＯＲＴＥＢＩＯ  ＯＣＴＥＴ結合アッセイ；Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｃｏｒｐ；Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＩＡＣｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー）において、本明細書に具体的に記載されている抗体またはフラグメントのいずれかがＩＬＴ４に結合するのを遮断するそれらの能力に基づいて特定されうる。例えば、本発明の１つの実施形態においては、ＢＬＩを使用する場合、光ファイバープローブの先端をリガンド（例えば、ＩＬＴ４）でコーティングし、バイオセンサーとして作用させ、この場合、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントの、ＩＬＴ４への結合は、ＩＬＴ４に結合したプローブ層および内部基準層から反射した白色光の干渉パターンを変化させる。このシフト（変化）はＩＬＴ４／抗ＩＬＴ４結合を示す。本発明の１つの実施形態においては、ＩＬＴ４でコーティングされた先端を、例えば９６ウェルまたは３８４ウェルプレートのウェル内で、抗体または抗原結合性フラグメントを含有するアナライトの溶液に浸漬する。本発明の１つの実施形態においては、プレートを読取り中に振とうしてオービタル・フロー（ｏｒｂｉｔａｌ  ｆｌｏｗ）を生成させる。アッセイを読取るために、白色光をファイバーの長さの方向に下に向ける。前記のとおり、先端のＩＬＴ４を含有する固定化表面および基準層で反射する光の間の干渉は、ファイバーを通って上へ戻ってくる光の特徴的パターンを生成する。分子が固定化センサー表面に結合するにつれて、そのパターンは結合の度合に比例して変化する。例えば、ＢＬＩプローブまたはプレート上にＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）タンパク質を固定化し、基準抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントを（例えば、飽和濃度で）ＩＬＴ４に結合させ、試験抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントを加えるアッセイが用いられうる。ついで、ＩＬＴ４結合に関して試験抗体が基準抗体と競合する能力を測定する。ＢＬＩ方式においては、ＩＬＴ４複合体の光干渉をモニターして、試験抗体が基準抗体と有効に競合するかどうかを決定する。例えば、経時的な数ナノメートルの光波長シフトをモニターし、ここで、シフトは試験抗体の追加的結合および交差遮断の欠如を示す。本発明の１つの実施形態においては、ＢＬＩ方式において、試験抗体の追加的結合が観察されないならば、抗体間で交差遮断が生じたと定性的にみなされる。本発明の１つの実施形態においては、対照として、基準抗体のそれ自体との交差遮断を確認する。この場合、基準抗体がそれ自体をＩＬＴ４結合��ら交差遮断しうるならば、アッセイは適切に機能していると判断される。試験抗体がＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）への例えば抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメント１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１の結合を抑制しうることは、試験抗体がＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）への結合に関して抗体またはフラグメントを交差遮断することが可能であり、したがって、幾つかの場合には、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１と同じ、ＩＬＴ４（例えば、ヒトＩＬＴ４）上のエピトープに結合しうることを証明している。前記のとおり、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントのいずれかと同じエピトープに結合する抗体およびフラグメントも本発明の一部を構成する。本発明の１つの実施形態においては、ＢＬ１をサンドイッチ方式で行い、この場合、基準抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントをプローブに固定化し、ついでＩＬＴ４に結合させる。ついで試験抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントを、該基準抗体またはフラグメントの結合を遮断する能力に関して試験する。
【０１９９】
ある実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号１および３、２および４、２および５、２および６、２および７、２および３、８および１１、９および１１、１０および１１、１２および１３、１４および１５、７９および３、８０および４、８０および５、８０および６、８０および７、８０および３、８２および１１、８３および１１、８４および１１、８５および１３ならびに８６および１５に記載されている重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントと、ヒトＩＬＴ４への結合に関して競合する。幾つかの実施形態においては、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それぞれ配列番号６３および７０、５７および７１、５７および７２、５７および７３、５７および５８、５７および７０、６４および７４、６５および７４、６６および７４、６７および７５、６８および７６に記載されている重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む抗体またはフラグメントと、ヒトＩＬＴ４への結合に関して競合する。
【０２００】
本発明は、チャイニーズハムスター卵巣細胞において産生される免疫グロブリン（ＣＨＯ  Ｎ結合グリカン）に又は操作された酵母細胞（操作された酵母Ｎ結合グリカン）、例えばピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）に典型的に付加されるＮ結合グリカンを含む抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。例えば、本発明の１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントは、図１６に記載されている「操作された酵母Ｎ結合グリカン」または「ＣＨＯ  Ｎ結合グリカン」（例えば、Ｇ０および／またはＧ０−Ｆおよび／またはＧ１および／またはＧ１−Ｆおよび／またはＧ２−Ｆおよび／またはＭａｎ５）の１以上を含む。本発明の１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントは、操作されたＮ結合グリカン、すなわち、Ｇ０および／またはＧ１および／またはＧ２を含み、所望により、Ｍａｎ５を更に含みうる。本発明の１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントは、ＣＨＯ  Ｎ結合グリカン、すなわち、Ｇ０−Ｆ、Ｇ１−ＦおよびＧ２−Ｆを含み、所望により、Ｇ０および／またはＧ１および／またはＧ２および／またはＭａｎ５を更に含みうる。本発明の１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント免疫グロブリン鎖上の全てのＮ結合グリカンの約８０％〜約９５％（例えば、約８０〜９０％、約８５％、約９０％または約９５％）が、操作された酵母Ｎ結合グリカンまたはＣＨＯ  Ｎ結合グリカンである。Ｎｅｔｔら，Ｙｅａｓｔ．２８（３）：２３７−２５２（２０１１）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３１３（５７９２）：１４４１−１４４３（２００６）；Ｈａｍｉｌｔｏｎら，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８（５）：３８７−３９２（２００７）を参照されたい。例えば、本発明の１つの実施形態においては、操作された酵母細胞は、ＧＦＩ５．０またはＹＧＬＹ８３１６、または米国特許第７，７９５，００２号またはＺｈａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．９８８：３１−４３（２０１３）に記載されている株である。国際特許出願公開番号ＷＯ２０１３／０６６７６５も参照されたい。
【０２０１】
ポリヌクレオチド
本発明は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖をコードするポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を含む。例えば、本発明は、本明細書に記載されている抗体１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および２Ｃ１（例えば、配列番号１〜１５、４４および４５またはそれらの可変ドメイン）の免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖をコードする核酸ならびにそれらにハイブリダイズする核酸を含む。
【０２０２】
本発明は、１Ｅ１のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号１９〜２１に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、および／または、１Ｅ１のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号１６〜１８に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０３】
本発明は、２Ａ６のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号２５〜２７に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、および／または、２Ａ６のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号２２〜２４に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０４】
本発明は、３Ｇ７のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号３１〜３３に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、および／または、３Ｇ７のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号２８〜３０に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０５】
本発明は、２Ｃ１のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３（例えば、配列番号３７〜３９に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、および／または、２Ｃ１のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３（例えば、配列番号３４〜３６に記載されているアミノ酸を含む）を含む抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０６】
本発明は、抗体１Ｅ１のＶＬドメイン（例えば、配列番号７０、７１、７２、７３、５８または７７）、および／または、抗体１Ｅ１のＶＨドメイン（例えば、配列番号６３、５７または６９）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０７】
本発明は、抗体２Ａ６のＶＬドメイン（例えば、配列番号７４）、および／または、抗体２Ａ６のＶＨドメイン（例えば、配列番号６４、６５または６６）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０８】
本発明は、抗体３Ｇ７のＶＬドメイン（例えば、配列番号７５）、および／または、抗体３Ｇ７のＶＨドメイン（例えば、配列番号６７）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２０９】
本発明は、抗体２Ｃ１のＶＬドメイン（例えば、配列番号７６）、および／または、抗体２Ｃ１のＶＨドメイン（例えば、配列番号６８）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２１０】
本発明は、抗体１Ｅ１の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号３、４、５、６、７または４５）、および／または、抗体１Ｅ１の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１、２または４４）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２１１】
本発明は、抗体２Ａ６の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１１）、および／または、抗体２Ａ６の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号８、９または１０、）をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２１２】
本発明は、抗体３Ｇ７の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１３）、および／または、抗体３Ｇ７の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１２）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２１３】
本発明は、抗体２Ｃ１の軽鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１５）、および／または、抗体２Ｃ１の重鎖免疫グロブリン（例えば、配列番号１４）、をコードするポリヌクレオチドを含む。
【０２１４】
１つの特定の実施形態においては、ポリヌクレオチドは、配列番号８７に記載されているヌクレオチド配列を含む。もう１つの特定の実施形態においては、該ポリヌクレオチドは、配列番号８８に記載されているヌクレオチド配列を含む。更にもう１つの実施形態においては、該ポリヌクレオチドは、配列番号８７に記載されているヌクレオチド配列および配列番号８８に記載されているヌクレオチド配列を含む。
【０２１５】
本発明はまた、本発明の単離された核酸を含む発現ベクターを提供し、ここで、該核酸は１以上の制御配列に機能的に連結されており、例えば、該ベクターで宿主細胞がトランスフェクトされた場合に宿主細胞により認識される１以上の制御配列に機能的に連結されている。本発明の発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。ある実施形態においては、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０２１６】
抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、組換え的に製造されうる。この実施形態においては、本発明の抗体および抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖（例えば、配列番号１〜１５、４４、４５または７９〜８６のいずれか、あるいは配列番号５７、５８、６３〜７７のいずれかに記載されている１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１のＶＨまたはＶＬを含むもの）の１以上をコードする核酸をベクターおよび／または宿主細胞染色体内に挿入し、組換え宿主細胞において発現させ得る。組換え抗体を製造するための幾つかの方法が当技術分野で公知である。
【０２１７】
抗体（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの本発明の免疫グロブリン鎖の発現は、幾つかの公知技術により増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。本発明は、免疫グロブリン鎖およびグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）遺伝子の１以上をコードする１以上のポリヌクレオチドを含むベクターを含む。本発明の１つの実施形態においては、該ベクターは、機能的グルタミンシンテターゼを欠く宿主細胞内に存在する。本発明の１つの実施形態においては、宿主細胞は、グルタミンを実質的に欠く培地内に存在する。グルタミンを実質的に欠く培地においてそのような宿主細胞を培養することを含む、そのような免疫グロブリン鎖または抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントの１以上の製造方法は、そのような方法により製造されたそのような鎖、抗体およびフラグメントと同様に、本発明の範囲内である。
【０２１８】
一般に、特定の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを有する。したがって、免疫グロブリン鎖または抗体または抗原結合性フラグメント（免疫グロブリン鎖を含有するもの）の特定のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される特定の細胞系またはトランスジェニック動物に依存する。非フコシル化Ｎ−グリカンのみを含むグリコシル化パターンを有する抗体および抗原結合性フラグメントが有利であり、なぜなら、これらの抗体および抗原結合性フラグメントは、インビトロおよびインビボの両方において、それらのフコシル化対応物より高い効力を典型的に示すことが示されているからである（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６−３４７３（２００３）；米国特許第６，９４６，２９２号および第７，２１４，７７５号を参照されたい）。非フコシル化Ｎ−グリカンを有するこれらの抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）は本発明の一部である。
【０２１９】
本発明は更に、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）の抗体フラグメントを含む。該抗体フラグメントにはＦ（ａｂ）２フラグメントが含まれ、これは例えばペプシンによるＩｇＧの酵素的切断により製造されうる。Ｆａｂフラグメントは、例えば、ジチオトレイトールまたはメルカプトエチルアミンでのＦ（ａｂ）２の還元により製造されうる。Ｆａｂフラグメントは、ジスルフィド架橋によりＶＨ−ＣＨ１鎖に連結されたＶＬ−ＣＬ鎖である。Ｆ（ａｂ）２フラグメントは、今度は２つのジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントである。Ｆ（ａｂ）２分子のＦａｂ部分は、ジスルフィド架橋が間に位置しているＦｃ領域の部分を含む。ＦＶフラグメントはＶＬまたはＶＨ領域である。
【０２２０】
本発明は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのものである抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）を含む。１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書に記載されているＶＨ、および、重鎖定常領域、例えばヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３もしくはγ４ヒト重鎖定常領域またはそれらの変異体を含む。本発明の１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書に記載されているＶＨ、および、軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダもしくはカッパヒト軽鎖領域またはそれらの変異体を含む。例えば、限定的なものではないが、ヒト重鎖定常領域はγ１またはγ４であることが可能であり、ヒト軽鎖定常領域はカッパであることが可能である。例えば、限定的なものではないが、ヒト重鎖定常領域はγ１またはγ４であることが可能であり、ヒト軽鎖定常領域はラムダであることが可能である。本発明の１つの実施形態においては、該抗体のＦｃ領域は、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ突然変異を有するγ４である（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，Ｊら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１−８，２００１）。
【０２２１】
本発明の幾つかの実施形態においては、異なる定常ドメインが、本発明で提供されるＣＤＲに由来するＶＬおよびＶＨ領域に連結されうる。例えば、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの特定の意図される使用がエフェクター機能の改変を求めるものである場合には、ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用可能であり、あるいはハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ４が使用可能である。ＩｇＧ１およびＩｇＧ４定常ドメインを含むそのような抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）およびそれらのハイブリッドは、本発明の一部である。
【０２２２】
１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインはＥＵ系における２２８位およびＫＡＢＡＴ系における２４１位に対応する位置において天然ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なることが可能であり、この場合、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうるＣｙｓ１０６およびＣｙｓ１０９（ＥＵ系におけるＣｙｓ２２６およびＣｙｓ２２９位ならびにＫＡＢＡＴ系におけるＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位に対応する）間の潜在的鎖間ジスルフィド結合を妨げるために、天然Ｓｅｒ１０８はＰｒｏにより置換される。Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５を参照されたい。他の場合においては、半減期を増加させるために又はエフェクター機能を低減するために、修飾された修飾ＩｇＧ１定常ドメインが使用されうる。修飾されたＩｇＧ４定常ドメインを含むそのような抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）は本発明の一部である。
【０２２３】
本発明は、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７または２Ｃ１）またはその免疫グロブリン鎖の組換え製造方法を含み、該製造方法は、（ｉ）該抗体またはフラグメントの免疫グロブリン鎖（例えば、配列番号１〜１５、４４および／４５に記載されている配列の任意の１以上を含むアミノ酸配列を含むもの）の１以上をコードするポリヌクレオチドを導入し、ここで、該ポリヌクレオチドはベクター中に存在し、および／または、プロモーター（例えば、ウイルスプロモーター、ＣＭＶプロモーターまたはＳＶ４０プロモーター）に機能的に連結されており、（ｉｉ）ポリヌクレオチドの発現に好ましい条件下、宿主細胞［例えば、哺乳類宿主細胞、真菌宿主細胞、細菌宿主細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ＨＥＫ−２９３細胞、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）細胞またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）細胞］を培養し、そして、（ｉｉｉ）所望により、該宿主細胞から、および／または該宿主細胞を増殖させた培地から、該抗体またはフラグメントまたは鎖を単離する、ことを含む。２以上の免疫グロブリン鎖を含む抗体または抗原結合性フラグメント、例えば、２個の免疫グロブリン重鎖と２個の免疫グロブリン軽鎖とを含む抗体を製造する場合、単一の宿主細胞における鎖の共発現は、例えば細胞内または細胞表面上または細胞の外部（そのような鎖が分泌される場合）において、鎖の会合をもたらして、該抗体または抗原結合性フラグメント分子を形成する。本発明の方法は、免疫グロブリン重鎖のみ又は免疫グロブリン軽鎖（例えば、成熟フラグメントおよび／またはその可変ドメインを含む本明細書に記載されているもののいずれか）のみを発現させる方法を含む。そのような鎖は、例えば、そのような鎖を含む抗体または抗原結合性フラグメントの発現における中間体として有用である。
【０２２４】
Ｆｃ領域の抗体操作
本発明の抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）はまた、Ｆｃ領域内の修飾を含むように、典型的には、抗体の機能特性、例えば血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合および／またはエフェクター機能（例えば、抗原依存性細胞傷害性）の１以上を変化させるために操作されうる。更に、本明細書に開示されている抗体およびフラグメントは化学的に修飾可能であり（例えば、１以上の化学的部分が抗体に結合可能である）、あるいは、再び抗体またはフラグメントの機能特性の１以上を変化させるために、そのグリコシル化を改変するように修飾されうる。これらの実施形態のそれぞれは後記に更に詳細に記載されている。Ｆｃ領域内の残基の番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。
【０２２５】
本明細書に開示されている抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、改変されたエフェクター機能をもたらすための、修飾（または遮断）されたＦｃ領域を有する抗体をも含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って、免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。Ｆｃに対する変化はまた、治療用抗体における抗体の半減期を改変することが可能であり、それほど頻繁でない投与ならびにそれによる便利さの向上および物質の使用の減少を可能にする。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４−３５を参照されたい。
【０２２６】
１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、重鎖定常領域のヒンジ領域内の２２８位に対応する位置におけるセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体またはフラグメントである。この突然変異は、ヒンジ領域内の重鎖間ジスルフィド架橋の不均一性を排除することが報告されている（Ａｎｇａｌら，前掲；２４１位はＫａｂａｔ番号付け系に基づく）。
【０２２７】
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）のＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が増加または減少（例えば、±１、２または３）するように修飾される。このアプローチは米国特許第５，６７７，４２５号に更に詳細に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進させるために、または抗体の安定性を増強もしくは低減するために改変される。
【０２２８】
もう１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）のＦｃヒンジ領域は、抗体またはフラグメントの生物学的半減期を減少させるために突然変異される。より詳細には、抗体が、天然ＦｃヒンジドメインＳｐＡ結合と比べて低減したスタヒロコッカスプロテインＡ（ＳｐＡ）結合を示すように、Ｆｃ−ヒンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン境界領域内に１以上のアミノ酸突然変異が導入される。このアプローチは米国特許第６，１６５，７４５号に更に詳細に記載されている。
【０２２９】
もう１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、その生物学的半減期を増加させるために修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許６，２７７，３７５号に記載されているとおり、以下の突然変異の１以上が導入されうる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号に記載されているとおり、生物学的半減期を増加させるために、抗体は、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ（ｓａｌｖａｇｅ）受容体結合性エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で改変されうる。
【０２３０】
更に他の実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）のエフェクター機能を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を別のアミノ酸残基により置換することにより、Ｆｃ領域を改変する。例えば、抗体がエフェクターリガンドに対する改変されたアフィニティを有するが、親抗体の抗原結合能を保有するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０および３２２から選択される１以上のアミノ酸が、別のアミノ酸残基により置換されうる。アフィニティが改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。このアプローチは米国特許第５，６２４，８２１号および第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されている。
【０２３１】
もう１つの例においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）がＣ１ｑ結合の変化および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の低減もしくは消失を示すように、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１以上のアミノ酸が、別のアミノ酸残基により置換されうる。このアプローチは米国特許第６，１９４，５５１号に詳細に記載されている。
【０２３２】
もう１つの例においては、アミノ酸２３１位および２３９位における１以上のアミノ酸残基を改変して、それにより、補体を固定する抗体の能力を改変する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１に更に詳細に記載されている。
【０２３３】
更にもう１つの例においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）をもたらす能力を増強または低減するために、および／またはＦｃγ受容体に対する抗体またはフラグメントのアフィニティを増強または低減するために、以下の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位における１以上のアミノ酸を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。このアプローチはＰＣＴ公開ＷＯ  ００／４２０７２に更に詳細に記載されている。更に、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位が位置決定されており、改善した結合を示す変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照されたい）。２５６、２９０、２９８、３３３、３３４および３３９位における特異的突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。また、以下の組合せ突然変異体が、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ。
【０２３４】
１つの実施形態においては、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）がエフェクター機能をもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３および２６４を修飾することによりＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、２４３位および２６４位における残基をアラニンへと変化させることにより、抗体のＦｃ領域を修飾する。１つの実施形態においては、エフェクター機能を抗体がもたらす能力を低減するために、および／または抗炎症特性を増強するために、残基２４３、２６４、２６７および３２８を修飾することにより、Ｆｃ領域を修飾する。
【０２３５】
翻訳後修飾
更にもう１つの実施形態においては、抗体は特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、グリコシル化を欠く非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は本発明の一部である。抗体またはフラグメントのグリコシル化パターンは、例えば、抗原に対する抗体のアフィニティまたはアビディティを増強するために改変されうる。そのような修飾は、例えば、抗体またはフラグメント配列内のグリコシル化部位の１以上を改変することにより達成されうる。例えば、可変領域フレームワークグリコシル化部位の１以上の除去をもたらし、それによりその部位におけるグリコシル化を排除する１以上のアミノ酸置換が施されうる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体またはフラグメントのアフィニティまたはアビディティを増強しうる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および第６，３５０，８６１号を参照されたい。
【０２３６】
グリコシル化パターンが低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）または非フコシル化グリカンを含む、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）も製造され、例えば、低フコシル化抗体および抗原結合性フラグメントまたは非フコシル化抗体およびフラグメントは、低減した量のフコシル化残基をグリカン上に有する。抗体または抗原結合性フラグメントは、増加した量の二分岐ＧｌｃＮａｃ構造を有するグリカンをも含みうる。そのような改変されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を増強することが実証されている。そのような修飾は、例えば、特定のグリコシル化パターンを有する糖タンパク質を産生するようにグリコシル化経路が遺伝的に操作された宿主細胞において抗体またはフラグメントを発現させることにより達成されうる。これらの細胞は当技術分野において記載されており、本発明の組換え抗体を発現させて、改変されたグリコシル化を有する抗体を産生させるための宿主細胞として使用されうる。例えば、細胞系Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）−フコシルトランスフェラーゼ）を欠いており、その結果、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９細胞系において発現される抗体は、それらの炭水化物上のフコースを欠いている。本発明は、フコースを欠くかまたはＦＵＴ８を欠く宿主細胞により産生された抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメントを含む。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５およびＭｓ７０９  ＦＵＴ８−／−細胞系は、２つの置換ベクターを使用するＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的化破壊により作製された（米国特許公開第２００４０１１０７０４号およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２を参照されたい）。もう１つの例として、ＥＰ  １１７６１９５は、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞系を記載しており、そのような細胞系において発現される抗体は、α−１，６結合関連酵素を低減または除去することにより低フコシル化を示す。ＥＰ  １，１７６，１９５はまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加するための低い酵素活性を有するかまたは酵素活性有さない細胞系、例えば、ラット骨髄腫細胞系ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）を記載している。ＰＣＴ公開ＷＯ  ０３／０３５８３５は、変異体ＣＨＯ細胞系、Ｌｅｃ１３細胞を記載しており、これは、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物へフコースを結合させる能力の低減を示し、また、その宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化をもたらした（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０も参照されたい）。修飾されたグリコシル化プロファイルを有する抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ  ０６／０８９２３１に記載されているとおり、鶏卵内でも製造されうる。あるいは、修飾されたグリコシル化プロファイルを有する抗体は、植物細胞、例えばアオウキクサ（Ｌｅｍｎａ）において製造されうる（米国特許第７，６３２，９８３号��。植物系における抗体の製造方法は、米国特許第６，９９８，２６７号および第７，３８８，０８１号に開示されている。ＰＣＴ公開ＷＯ  ９９／５４３４２は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞系を記載しており、操作細胞系において発現される抗体は、抗体のＡＤＣＣ活性の増強をもたらす増加した二分岐ＧｌｃＮａｃ構造を示す（Ｕｍａｎａら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０も参照されたい）。そのような宿主細胞により産生される抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントは、本発明の一部である。
【０２３７】
あるいは、抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断除去され、例えば、フコシダーゼであるα−Ｌ−フコシダーゼはフコシル残基を抗体から除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏら（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−２３）。本発明は、フコシダーゼ酵素で処理された抗体およびフラグメントを含む。
【０２３８】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は更に、下等真核宿主細胞において産生されるものを含み、特に、酵母および糸状菌のような真菌宿主細胞は、哺乳類またはヒト様グリコシル化パターンを有する糖タンパク質を産生するように遺伝的に操作されている（例えば、Ｃｈｏｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１００：５０２２−５０２７；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１：１２４４−１２４６；Ｈａｍｉｌｔｏｎら（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１３：１４４１−１４４３を参照されたい）。現在使用されている哺乳類細胞系と比較した場合の、これらの遺伝的に修飾された宿主細胞の格別の利点は、細胞内で産生される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルの制御が可能なことであり、その結果、特定のＮ−グリカン構造が優勢な糖タンパク質の組成物が製造されうる（例えば、米国特許第７，０２９，８７２号および米国特許第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝的に修飾された宿主細胞は、特定のＮ−グリカン構造を主に有する抗原結合性フラグメントを製造するために使用されている（例えば、Ｌｉら（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：２１０−２１５を参照されたい）。
【０２３９】
抗体コンジュゲート
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、ペプチドまたは化学的部分にコンジュゲート化（結合）されることも可能である。化学的部分は、とりわけ、重合体（ポリマー）、放射性核種または治療用物質または細胞毒性薬剤でありうる。本発明の特定の実施形態においては、化学的部分は、対象の体内の抗体分子の半減期を増加させる重合体である。重合体には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を有するＰＥＧ）、デキストランおよびモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）（これらに限定されるものではない）を包含する親水性重合体が含まれるが、これらに限定されるものではない。Ｌｅｅら（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３−９８１）は、ＰＥＧコンジュゲート化一本鎖抗体を開示している。Ｗｅｎら，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５−５５３）は、放射性金属キレーター（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に結合したＰＥＧに対して抗体をコンジュゲート化することを開示している。
【０２４０】
本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、標識、例えば放射能標識ともコンジュゲート化されうる。標識には、９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈおよび４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒおよび５６Ｆｅが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２４１】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、例えば、その生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化（ＰＥＧｙｌａｔｅ）されることも可能である。抗体またはその抗原結合性フラグメントをペグ化するためには、典型的には、１以上のＰＥＧ基が抗体または抗体結合性フラグメントに結合する条件下、抗体またはフラグメントを、反応性形態のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。特定の実施形態においては、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似反応性水溶性重合体）とのアルキル化反応またはアシル化反応により行われる。本明細書中で用いる「ポリエチレングリコール」なる語は、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれか、例えばモノ（Ｃ１−Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを含むことが意図される。ある実施形態においては、ペグ化されるべき抗体は非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用されうる。例えば、ＥＰ  ０  １５４  ３１６およびＥＰ  ０  ４０１  ３８４を参照されたい。
【０２４２】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、標識、例えば蛍光標識または化学発光標識、例えば発蛍光団、例えば希土類キレート、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、イソチオシアナート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド、フルオレスカミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェリン、ルミナール標識、イソルミナール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジミウム塩標識、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識および安定フリーラジカル、とコンジュゲート化されることも可能である。
【０２４３】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、細胞毒性因子、例えばジフテリア毒素、シュードモナス・エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質および化合物（例えば、脂肪酸）、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトイアッカ・アメリカナ（Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ、モモルディカ・カランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシンおよびエノマイシンにコンジュゲート化されることも可能である。
【０２４４】
抗体および抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）を種々の部分にコンジュゲート化するための当技術分野で公知のいずれかの方法が利用可能であり、該方法は、Ｈｕｎｔｅｒら（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５；Ｄａｖｉｄら（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４；Ｐａｉｎら（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；およびＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７に記載されている方法を包含する。抗体をコンジュゲート化するための方法は常套手段であり、当技術分野において非常によく知られている。
【０２４５】
医薬組成物および投与
抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）およびその抗原結合性フラグメントを含む医薬組成物は、所望の純度を有する抗体またはその抗原結合性フラグメントを、所望により生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより、水溶液の形態または凍結乾燥もしくは他の乾燥形態で、貯蔵用に製造されうる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版，１９８０）を参照されたい）。
【０２４６】
１つの実施形態においては、医薬組成物は、２つの重鎖と２つの軽鎖とからなる抗体を含み、ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる。
【０２４７】
もう１つの実施形態においては、医薬組成物は、（ｉ）２つの重鎖と２つの軽鎖とからなる抗体（ここで、各軽鎖は、配列番号７に記載されているアミノ酸配列からなり、各重鎖は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列からなる）、および、（ｉｉ）ペンブロリズマブを含む。
【０２４８】
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
【０２４９】
単独で又は別の治療剤と組合せて投与される抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において有効である用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は、治療係数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。特定の態様においては、高い治療係数を示す抗体が望ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。投与量は、使用される剤形および投与経路に依存して、この範囲内で変動しうる。
【０２５０】
もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）と組合せて対象に投与されるもう１つの治療剤は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与される。
【０２５１】
投与様式は変動し得る。投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、非経口；筋肉内、皮下、皮内、髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内、眼内、吸入、吹送、局所、皮膚、経皮または動脈内が含まれる。
【０２５２】
本発明は、抗体またはフラグメントを対象に体内に導入することを含む、抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）を投与するための方法を提供する。例えば、該方法は、対象の体をシリンジの針で穿刺し、抗体またはフラグメントを対象の体内に、例えば対象の静脈、動脈、腫瘍、筋肉組織または皮下に注射することを含む。
【０２５３】
本発明は、本明細書に記載されている抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）のいずれか、または、医薬上許容される担体を含むその医薬組成物を含む容器（例えば、プラスチックまたはガラスバイアル、例えば、キャップまたはクロマトグラフィーカラム、中空穿孔針またはシリンジシリンダーを有するもの）を提供する。
【０２５４】
本発明はまた、本明細書に記載されている抗ＩＬＴ４抗体もしくは抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）またはその医薬組成物のいずれかを含む注射装置を提供する。注射装置は、非経口経路、例えば筋肉内、皮下または静脈内経路により患者の体内に物質を導入する装置である。例えば、注射装置はシリンジ（例えば、医薬組成物が予め充填されたもの、例えば、自動注入装置）であることが可能であり、これは、例えば、シリンダーまたは注射すべき流体を保持するための筒状物（例えば、抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含むもの）、流体の注射のために皮膚および／または血管を穿刺するための針、ならびにシリンダーから及び針穿孔を介して該流体を押出すプランジャーを含む。本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む注射装置は、静脈内（ＩＶ）注射装置である。そのような装置は、カニューレまたはトロカール／針を介して患者の体内に導入される流体（例えば、生理食塩水；またはＮａＣｌ、乳酸ナトリウム、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、及び、所望によりグルコースを含む乳酸リンゲル液）を保持するためのバッグ（袋）またはリザーバ（貯蔵容器）に接続されうるチューブに接続されうるカニューレまたはトロカール／針の中に抗体もしくはフラグメントまたはその医薬組成物を含む。
【０２５５】
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。該医薬組成物を含むそのような無針装置も本発明の一部である。本明細書に開示されている医薬組成物は、注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られており、本発明の医薬組成物を含むものは本発明の範囲内である。
【０２５６】
本明細書に開示されている抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は連続的注入により投与可能であり、あるいは、例えば、毎日、週１〜７回、毎週、隔週、毎月、隔月、年４回、年２回、毎年などで投与される用量で投与されうる。投与は、例えば、静脈内、皮下、局所、経口、鼻腔内、直腸、筋肉内、脳内、脊髄内に、または吸入により行われうる。本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量は、例えば癌または感染症の治療または予防には、約０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約３０ｍｇ／ｋｇ（体重）である。
【０２５７】
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又は疑われているパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量を決定する場合、用量は、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適効果が得られるまで少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。一般に、使用される生物学的物質は、治療のために標的化される動物と同じ種に由来し、それにより、薬剤に対する免疫応答を最小化することが望ましい。ヒト対象の場合には、例えば、キメラおよび完全ヒト抗体が望ましいかもしれない。抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントの適当な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照されたい）。
【０２５８】
疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練医療提供者により典型的に用いられるいずれかの臨床的測定により評価されうる。本発明の或る実施形態（例えば、治療方法または製造品）は全ての対象における標的疾患症状の軽減において有効であるとは限らないかもしれないが、それは、当技術分野で公知のいずれかの統計的検定、例えばスチューデントｔ検定、カイ２検定、マン（Ｍａｎｎ）およびホイットニー（Ｗｈｉｔｎｅｙ）によるＵ検定、クルスカル−ワリス（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）検定（Ｈ検定）、ヨンケーレ−テルプストラ（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａ）検定およびウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）検定により決定されるように、統計的に有意な対象数において標的疾患症状を軽減するべきである。
【０２５９】
抗ＩＬＴ４抗体の治療用途
本発明はまた、癌の治療または予防に有効でありうる本明細書に開示されている本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）の有効量を投与することによる、癌の治療または予防を要する対象（例えば、ヒト対象）における癌の治療または予防方法を提供する。
【０２６０】
ある実施形態においては、癌は固形腫瘍である。他の実施形態においては、癌は血液癌である。ある実施形態においては、癌は転移性である。幾つかの実施形態においては、癌は再発性である。他の実施形態では、癌は難治性である。更に他の実施形態においては、癌は再発性かつ難治性である。
【０２６１】
幾つかの実施形態においては、癌は未分化星状細胞腫、星状細胞腫、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌（例えば、ＢＲＣＡ１および／またはＢＲＣＡ２における突然変異により特徴づけられる）、カルチノイド癌、子宮頸癌、軟骨肉腫、脈絡叢乳頭腫、結腸直腸癌、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、胆嚢癌、胃癌、膠芽腫、頭頸部癌、肝芽腫、肝細胞癌、特発性骨髄線維症、腎癌、白血病、肝癌、肺癌（例、非小細胞肺癌）、リンパ腫、髄芽腫、メラノーマ、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乏突起膠腫、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、真性多血症、原発神経外胚葉腫瘍、前立腺癌、腎細胞癌、腎移行細胞癌、網膜芽細胞腫、腎ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌（例えば、皮膚扁平上皮癌）、滑膜肉腫、血小板血症、甲状腺癌、子宮癌、前庭神経鞘腫またはウィルムス腫瘍である。本発明の１つの実施形態においては、癌は、例えば前記の種類の転移癌である。
【０２６２】
本発明の１つの実施形態においては、癌は、骨髄に富む（骨髄リッチ）腫瘍（例えば、中皮腫、腎臓癌、リンパ腫、肉腫、黒色腫、頭頸部癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、卵巣癌または甲状腺癌である；例えば、Ｂｕｒｔら，Ｃａｎｃｅｒ．１１７（２２）：５２３４−４４（２０１１）；Ｄａｎｎｅｎｍａｎｎら，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２（３）：ｅ２３５６２（２０１３）；Ｓｔｅｉｄｌら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６２：８７５−８８５（２０１０）；Ｆｕｊｉｗａｒａら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．．１７９（３）：１１５７−７０（２０１１）；Ｂｒｏｎｋｈｏｒｓｔら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５２（２）：６４３−５０（２０１１）；Ｂａｌｅｒｍｐａｓら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１１（８）：１５０９−１８（２０１４）；およびＺｈａｎｇら，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７（１２）：ｅ５０９４６（２０１２）を参照されたい）。ＩＬＴ４は主に骨髄細胞および顆粒球により発現されるため、腫瘍内への骨髄細胞浸潤は一般に、Ｔ細胞による抗腫瘍応答に拮抗しうるこれらの細胞の免疫抑制効果ゆえに、予後不良に関連しているため、本発明の抗ＩＬＴ４抗体または抗原結合性フラグメントでの治療は、高い骨髄性または免疫抑制性骨髄細胞浸潤を有する対象に利益をもたらすであろう。
【０２６３】
したがって、本発明は、（ａ）配列番号３〜７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３、および／または、（ｂ）配列番号１、２、８〜１０、１２、１４、４４もしくは７９〜８６に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の重鎖可変（ＶＨ）ドメインのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３、を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法を提供する。
【０２６４】
本発明の１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、（１）相補性決定領域−Ｈ１（ＣＤＲ−Ｈ１）：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、相補性決定領域−Ｈ２（ＣＤＲ−Ｈ２）：ＥＩＮＨＸＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ここで、ＸはＳまたはＡである）（配列番号１７）および相補性決定領域−Ｈ３（ＣＤＲ−Ｈ３）：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、相補性決定領域−Ｌ１（ＣＤＲ−Ｌ１）：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、相補性決定領域−Ｌ２（ＣＤＲ−Ｌ２）：ＧＸ１Ｘ２ＮＲＰＳ（ここで、Ｘ１はＳまたはＡであり、Ｘ２はＮ、Ｑ、ＥまたはＤである）（配列番号２０）および相補性決定領域−Ｌ３（ＣＤＲ−Ｌ３）：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメイン；（２）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２２）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２３）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＹＦＸ１Ｘ２ＳＧＷＹＫＧＧＡＦＤＩ（ここで、Ｘ１はＤまたはＳであり、Ｘ２はＳまたはＡである）（配列番号２４）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＨ（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＹＫＳＤＳＤＫＨＱＧＳ（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＡＩＷＹＳＳＴＷＶ（配列番号２７）を含むＶＬドメイン；（３）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＭＨ（配列番号２８）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＶＧＥＷＩＱＬＷＳＰＦＤＹ（配列番号３０）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３１）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号３３）を含むＶＬドメイン、および／または、（４）ＣＤＲ−Ｈ１：ＥＬＳＭＨ（配列番号３４）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＡＧＰＬＹＴＩＦＧＶＶＩＩＰＤＮＷＦＤＰ（配列番号３６）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号３７）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３８）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＧＶＶ（配列番号３９）を含むＶＬドメイン、を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２６５】
１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２６６】
もう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２６７】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２６８】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２６９】
１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０２７０】
もう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７１】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７２】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７３】
１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７４】
もう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７５】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７６】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７７】
１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７８】
もう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２７９】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８０】
更にもう１つの実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８１】
更に他の実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方（ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列を含む）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８２】
更に他の実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方（ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖可変ドメインは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列を含む）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８３】
より詳細な実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、重鎖免疫グロブリンと軽鎖免疫グロブリンとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む：（１）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（３）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（４）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（５）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（６）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（７）配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（８）配列番号９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（９）配列番号１０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１０）配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１１）配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１２）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１３）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１４）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１５）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１６）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１７）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１８）配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１９）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２０）配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２１）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、または（２２）配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン。
【０２８４】
より一層詳細な実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む：（１）配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（２）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（３）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７２に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（４）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（５）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（６）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（７）配列番号６４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（８）配列番号６５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（９）配列番号６６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（１０）配列番号６７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または（１１）配列番号６８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン。
【０２８５】
１つの好ましい実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８６】
もう１つの好ましい実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンおよび配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８７】
更にもう１つの好ましい実施形態においては、癌の治療を要するヒト対象における癌の治療方法は、配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２８８】
本発明は、（ａ）配列番号３〜７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の軽鎖可変（ＶＬ）ドメインのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３、および／または、（ｂ）配列番号１、２、８〜１０、１２、１４、４４もしくは７９〜８６に記載されているアミノ酸配列を含む免疫グロブリン鎖の重鎖可変（ＶＨ）ドメインのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための、それを要するヒト対象における方法を提供する。
【０２８９】
本発明の１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、（１）相補性決定領域−Ｈ１（ＣＤＲ−Ｈ１）：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、相補性決定領域−Ｈ２（ＣＤＲ−Ｈ２）：ＥＩＮＨＸＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（ここで、ＸはＳまたはＡである）（配列番号１７）および相補性決定領域−Ｈ３（ＣＤＲ−Ｈ３）：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、相補性決定領域−Ｌ１（ＣＤＲ−Ｌ１）：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、相補性決定領域−Ｌ２（ＣＤＲ−Ｌ２）：ＧＸ１Ｘ２ＮＲＰＳ（ここで、Ｘ１はＳまたはＡであり、Ｘ２はＮ、Ｑ、ＥまたはＤである）（配列番号２０）および相補性決定領域−Ｌ３（ＣＤＲ−Ｌ３）：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメイン；（２）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＩＳ（配列番号２２）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号２３）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＹＦＸ１Ｘ２ＳＧＷＹＫＧＧＡＦＤＩ（ここで、Ｘ１はＤまたはＳであり、Ｘ２はＳまたはＡである）（配列番号２４）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＬＲＳＧＩＮＶＤＴＹＲＩＨ（配列番号２５）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＹＫＳＤＳＤＫＨＱＧＳ（配列番号２６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＡＩＷＹＳＳＴＷＶ（配列番号２７）を含むＶＬドメイン；（３）ＣＤＲ−Ｈ１：ＳＹＡＭＨ（配列番号２８）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２９）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＶＧＥＷＩＱＬＷＳＰＦＤＹ（配列番号３０）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ（配列番号３１）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号３２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＱＹＮＳＹＰＰＴ（配列番号３３）を含むＶＬドメイン、ならびに／または、（４）ＣＤＲ−Ｈ１：ＥＬＳＭＨ（配列番号３４）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＧＦＤＰＥＤＧＥＴＩＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３５）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＡＧＰＬＹＴＩＦＧＶＶＩＩＰＤＮＷＦＤＰ（配列番号３６）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号３７）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３８）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＧＶＶ（配列番号３９）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９０】
１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９１】
もう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９２】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９３】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９４】
１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む。
【０２９５】
もう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９６】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９７】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４７）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９８】
１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、ならびに／またはＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号４９）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０２９９】
もう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＳＮＲＰＳ（配列番号５０）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３００】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＳＮＲＰＳ（配列番号５１）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０１】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＳＮＲＰＳ（配列番号５２）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０２】
１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＮＡＮＲＰＳ（配列番号５３）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０３】
もう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＱＡＮＲＰＳ（配列番号５４）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０４】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＥＡＮＲＰＳ（配列番号５５）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０５】
更にもう１つの実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＹＷＳ（配列番号１６）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＥＩＮＨＡＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４８）およびＣＤＲ−Ｈ３：ＬＰＴＲＷＶＴＴＲＹＦＤＬ（配列番号１８）を含むＶＨドメイン、および／または、ＣＤＲ−Ｌ１：ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号１９）、ＣＤＲ−Ｌ２：ＧＤＡＮＲＰＳ（配列番号５６）およびＣＤＲ−Ｌ３：ＱＳＦＤＮＳＬＳＡＹＶ（配列番号２１）を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０６】
更に他の実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方（ここで、軽鎖免疫グロブリンは、配列番号３、４、５、６、７、１１、１３、１５もしくは４５に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖免疫グロブリンは、配列番号１、２、８、９、１０、１２、１４、４４、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５もしくは８６に記載されているアミノ酸配列を含む）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０７】
更に他の実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、軽鎖免疫グロブリン、重鎖免疫グロブリンまたは軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンとの両方（ここで、軽鎖可変ドメインは、配列番号７０、７１、７２、７３、５８、７４、７５、７６もしくは７７に記載されているアミノ酸配列を含み、および／または、重鎖可変ドメインは、配列番号６３、５７、６４、６５、６６、６７、６８もしくは６９に記載されているアミノ酸配列を含む）を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３０８】
より詳細な実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、重鎖免疫グロブリンと軽鎖免疫グロブリンとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む：（１）配列番号１に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（３）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（４）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（５）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（６）配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（７）配列番号８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（８）配列番号９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（９）配列番号１０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１０）配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１１）配列番号１４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１２）配列番号７９に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１３）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１４）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１５）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１６）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１７）配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１８）配列番号８２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（１９）配列番号８３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２０）配列番号８４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、（２１）配列番号８５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン、または（２２）配列番号８６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリン。
【０３０９】
より一層詳細な実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインとの以下の組合せのいずれかを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む：（１）配列番号６３に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（２）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７１に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（３）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７２に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（４）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７３に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（５）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（６）配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７０に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（７）配列番号６４に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（８）配列番号６５に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（９）配列番号６６に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７４に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（１０）配列番号６７に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７５に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または、（１１）配列番号６８に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号７６に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン。
【０３１０】
１つの好ましい実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、配列番号５７に記載されているアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび配列番号５８に記載されているアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３１１】
もう１つの好ましい実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリンおよび配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３１２】
更にもう１つの好ましい実施形態において、それを要するヒト対象における、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂおよび／またはＨＬＡ−ＦへのＩＬＴ４の結合を遮断するための方法は、配列番号８０に記載されているアミノ酸配列を含む重鎖免疫グロブリン、および配列番号７に記載されているアミノ酸配列を含む軽鎖免疫グロブリンを含む抗体またはその抗原結合性フラグメントの有効量をヒト対象に投与することを含む。
【０３１３】
本発明はまた、感染症の治療または予防に有効でありうる本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）の有効量を対象に投与することによる、対象における感染症の治療または予防方法を提供する。本発明の１つの実施形態においては、感染症はウイルス感染症である。本発明の１つの実施形態においては、感染症は細菌感染症である。本発明の１つの実施形態においては、感染症は寄生生物（寄生虫）感染症である。本発明の１つの実施形態においては、感染症は真菌感染症である。
【０３１４】
本発明は、所望により本明細書に記載されている他の化学療法剤または治療方法と組合された抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）の治療的有効量を投与することによる、本明細書に記載されている癌または感染症のいずれかの治療方法を含み、また、そのような他の化学療法剤と組合されたそのような抗体またはフラグメント（例えば、共配合された抗体またはフラグメントおよび他の化学療法剤）を含む組成物を含む。
【０３１５】
「対象」は、哺乳動物、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、マウス、ラット、サル［例えば、カニクイザル、例えば、マカカ・ファシクラリス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）またはマカカ・ムラッタ（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）］またはウサギである。
【０３１６】
本発明の１つの実施形態においては、本発明の抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、他の化学療法剤、例えば抗体またはその抗原結合性フラグメントと組合される。本発明の１つの実施形態においては、他の化学療法剤としては、制吐薬、エリスロポエチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ワクチン、抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ−Ｌ２抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、ペンブロリズマブまたはニボルマブ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、白金化合物、ベバシズマブ、ダウノルビシン、ドキソルビシン、テモゾロミドトポテカン、イリノテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、イマチニブまたはリツキシマブである。
【０３１７】
「組合される（組合された）」なる語は、成分、本発明の抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）、および例えばペンブロリズマブまたはニボルマブのような別の物質が、例えば同時運搬のために単一組成物へと製剤化（処方）されることが可能であり、あるいは２以上の組成物（例えば、キット）に別々に製剤化されることが可能であることを示す。各成分は、その他の成分が投与される時点とは異なる時点で対象に投与され、例えば、各投与は、ある時間にわたって、間隔をあけて非同時（例えば、別々または連続的）に行われうる。更に、そのような別々の成分は、同じ経路または異なる経路［例えば、この場合、抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は非経口投与され、パクリタキセルは経口投与される］によって対象に投与されうる。
【０３１８】
アッセイならびに実験的および診断的用途
本発明は、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントとＩＬＴ４またはその断片との複合体を形成させるための任意の方法を含み、該方法は、結合および複合体形成に適した条件下、ＩＬＴ４ポリペプチドまたは断片を抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントと接触させることを含む。
【０３１９】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、アフィニティ精製剤として使用されうる。このプロセスにおいては、当技術分野でよく知られた方法を用いて、抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメントを、固相、例えばセファデックス、ガラスもしくはアガロース樹脂または濾紙上に固定化する。固定化抗体またはフラグメントを、精製すべきＩＬＴ４タンパク質（またはその断片）を含有するサンプルと接触させ、ついで、固定化抗体またはフラグメントに結合したＩＬＴ４タンパク質以外のサンプル中の物質を除去する適切な溶媒で支持体を洗浄する。最後に、結合ＩＬＴ４（例えば、プロテインＡ）を溶出する溶媒で支持体を洗浄する。そのような固定化抗体およびフラグメントは、本発明の一部を構成する。
【０３２０】
本発明は、本発明の抗ＩＬＴ４抗体およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）を使用する、細胞に基づくＥＬＩＳＡ法を含む。本発明の１つの実施形態においては、該方法は、細胞がＩＬＴ４を含有するかどうかを決定するためのものであり、該方法は、以下の：（ｉ）ＩＬＴ４の存在に関して試験される、固体表面（例えば、マイクロプレート）に固定化された細胞を、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させ、（ｉｉ）所望により、混合物を洗浄して、未結合抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントを除去し、（ｉｉｉ）抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントを、抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントに結合する標識二次抗体またはその抗原結合性フラグメントと接触させ、（ｉｖ）所望により、複合体を洗浄して未結合抗体またはフラグメントを除去し、そして、（ｖ）二次抗体またはフラグメント上の標識の存在を検出する工程を含み、ここで、標識の検出は、ＩＬＴ４を含有する細胞が固体表面に固定化されていることを示す。
【０３２１】
本発明は、本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）の使用を組み込んでいるＥＬＩＳＡアッセイ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）を含む。例えば、サンプルがＩＬＴ４またはそのフラグメントを含有するかどうかを決定するためのそのような方法は、以下の工程を含む：
（ａ）抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）で基体（例えば、マイクロタイタープレートウェル、例えばプラスチックプレート）をコーティングし；
（ｂ）ＩＬＴ４の存在に関して試験されるべきサンプルを基体に適用し；
（ｃ）基体を洗浄して、サンプル中の未結合物質を除去し；
（ｄ）ＩＬＴ４抗原に同様に特異的である検出可能な様態で標識された抗体（例えば、酵素結合抗体）を適用し；
（ｅ）基体を洗浄して、未結合標識抗体を除去し；
（ｆ）抗体上の標識を検出する；標識抗体が酵素結合体である場合には、酵素により検出可能な例えば蛍光シグナルに変換される化学物質を適用する。
【０３２２】
標識、例えば基体に結合した標識の検出は、ＩＬＴ４タンパク質の存在を示す。
【０３２３】
本発明の１つの実施形態においては、標識抗体またはその抗原結合性フラグメントはペルオキシダーゼで標識され、これはＡＢＴＳ（例えば、２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸））または３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンと反応して、検出可能な変色をもたらす。あるいは、標識抗体またはフラグメントは、検出可能な放射性同位体（例えば、３Ｈ）で標識され、これは、シンチラントの存在下、シンチレーションカウンターにより検出されうる。
【０３２４】
本発明の抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、ウエスタンブロットまたは免疫−タンパク質ブロット法において使用されうる。そのような方法は本発明の一部を構成し、例えば、
（１）ＩＬＴ４またはその断片の存在に関して試験すべきサンプルを含む膜または他の固体基体を準備し［所望により、方法は、当技術分野で公知の方法（例えば、半乾燥ブロッティングまたはタンクブロッティング）を用いて、（例えば、サンプル中のタンパク質のＰＡＧＥまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動分離からの）ＩＬＴ４の存在に関して試験すべきサンプルから膜または他の固体基体上へタンパク質をトランスファー（転移）する工程を含み］、そして、結合ＩＬＴ４またはその断片の存在に関して試験すべき膜または他の固体基体を、本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）と接触させ；
（２）膜を１回以上洗浄して、未結合抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントおよび他の未結合物質を除去し；そして
（３）結合した抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントを検出する、ことを含む。
【０３２５】
そのような膜は、例えば、非変性ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルまたはＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）ゲルにおいてＩＬＴ４の存在に関して試験すべきタンパク質が（例えば、ゲルにおける電気泳動分離の後で）トランスファー（転移）された、ニトロセルロースまたはビニル系（例えば、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ））膜の形態をとりうる。膜を抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントと接触させる前に、所望により、膜上の非特異的タンパク質結合部位に結合するように、膜を例えば脱脂乾燥乳などでブロッキングしてもよい。
【０３２６】
結合した抗ＩＬＴ４抗体またはフラグメントの検出は、膜または基体上およびサンプル中にＩＬＴ４タンパク質が存在することを示す。結合抗体またはフラグメントの検出は、検出可能な様態で標識された二次抗体（抗免疫グロブリン抗体）に抗体またはフラグメントを結合させ、ついで二次抗体標識の存在を検出することによるものでありうる。
【０３２７】
本明細書に開示されている抗ＩＬＴ４抗体（例えば、完全ヒト抗体、例えば、アンタゴニスト完全ヒト抗体）およびその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）は、免疫組織化学的方法にも使用されうる。そのような方法は本発明の一部を構成し、例えば、
（１）ＩＬＴ４タンパク質の存在に関して試験すべき細胞（例えば、骨髄系細胞、例えば、単球、マクロファージまたは樹状細胞）を本発明の抗ＩＬＴ４抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、１Ｅ１、２Ａ６、３Ｇ７および／または２Ｃ１）と接触させ、そして
（２）細胞の表面上または内部の抗体またはフラグメントを検出する、ことを含む。
【０３２８】
抗体またはフラグメント自体が検出可能な様態で標識されている場合、それは直接的に検出されうる。あるいは、抗体またはフラグメントは、検出可能な様態で標識された二次抗体に結合されることが可能であり、この場合、ついで標識を検出する。
【図面の簡単な説明】
【０３２９】
【図１】１ＬＴ４−Ｈｉｓに結合するｐ１Ｅ１（Ｇ１）の重水素標識ヒートマップである。
【図２Ａ】図２Ａおよび２Ｂは、ヒトＩＬＴ４の結晶構造を示す。図２Ａは、ヒトＩＬＴ４の構造上で位置決定された重水素標識レベルを示す。図２Ｂは、ＨＬＡ−Ｇと複合体形成したヒト１ＬＴ４のドメイン１および２の結晶構造を示す。ＩＬＴ４、ＨＬＡ−Ｇ重鎖およびベータ−２−ミクログロビンが示されている。残基ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）を有するヒトＩＬＴ４エピトープが示されている。
【図２Ｂ】図２Ａおよび２Ｂは、ヒトＩＬＴ４の結晶構造を示す。図２Ａは、ヒトＩＬＴ４の構造上で位置決定された重水素標識レベルを示す。図２Ｂは、ＨＬＡ−Ｇと複合体形成したヒト１ＬＴ４のドメイン１および２の結晶構造を示す。ＩＬＴ４、ＨＬＡ−Ｇ重鎖およびベータ−２−ミクログロビンが示されている。残基ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（配列番号５９）、ＴＲＩＲＰＥＬ（配列番号６０）、ＮＧＱＦ（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（配列番号６２）を有するヒトＩＬＴ４エピトープが示されている。
【図３Ａ】図３Ａおよび３Ｂは、ＩＬＴ４  ＨＬＡ−Ｇ結合および１Ｅ１（Ｇ４）遮断を示す。ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞をＦｃブロックでブロッキングし、ついで滴定濃度の１Ｅ１（Ｇ４）（２７μｇ／ｍＬから開始、１：３希釈）またはｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（２７μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。図３Ａ．１Ｅ１（Ｇ４）またはｈＩｇＧ４を蛍光色素標識ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２で検出し、フローサイトメトリーで検出した。図３Ｂ．１Ｅ１（Ｇ４）前処理後、細胞を２μｇ／ｍＬ  ビオチン化ＨＬＡ−Ｆｃまたは対照Ｆｃ（ｍＶＩＳＴＡ−Ｆｃ）と共にインキュベートした。Ｆｃ結合をＰＥ結合ストレプトアビジンで検出し、フローサイトメトリーで検出した。示されているプロットは３つの独立した実験の代表例である。示されているＩＣ５０およびＥＣ５０値はこれらの実験の平均＋／−標準偏差である。
【図３Ｂ】図３Ａおよび３Ｂは、ＩＬＴ４  ＨＬＡ−Ｇ結合および１Ｅ１（Ｇ４）遮断を示す。ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞をＦｃブロックでブロッキングし、ついで滴定濃度の１Ｅ１（Ｇ４）（２７μｇ／ｍＬから開始、１：３希釈）またはｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（２７μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。図３Ａ．１Ｅ１（Ｇ４）またはｈＩｇＧ４を蛍光色素標識ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２で検出し、フローサイトメトリーで検出した。図３Ｂ．１Ｅ１（Ｇ４）前処理後、細胞を２μｇ／ｍＬ  ビオチン化ＨＬＡ−Ｆｃまたは対照Ｆｃ（ｍＶＩＳＴＡ−Ｆｃ）と共にインキュベートした。Ｆｃ結合をＰＥ結合ストレプトアビジンで検出し、フローサイトメトリーで検出した。示されているプロットは３つの独立した実験の代表例である。示されているＩＣ５０およびＥＣ５０値はこれらの実験の平均＋／−標準偏差である。
【図４】ＩＬＴ４への非ＨＬＡ−Ｇ  ＭＨＣクラスＩリガンドの結合およびｐ１Ｅ１（Ｇ１）遮断である。ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞を滴定濃度のｐ１Ｅ１（Ｇ１）（１０μｇ／ｍＬから開始、１：３希釈）またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照（１０μｇ／ｍＬ）で前処理した後、ＨＬＡ−ＦもしくはＣＤＩｄの蛍光色素標識四量体またはＨＬＡ＊Ａ２：０１もしくはＨＬＡ＊Ｂ７：０２の蛍光色素標識デキサマーと共にインキュベートした。四量体／デキサマーの結合をフローサイトメトリーで測定し、それぞれの平均蛍光強度をプロットした。各デキサマー／四量体に用いた希釈度／濃度は以下のとおりである：ＨＬＡ＊Ａ２：０１−ｄｅｘＰＥ：１：２５；ＨＬＡ＊Ｂ７：０２−ｄｅｘＦＩＴＣ：１：２５；ＣＤ１ｄ−ｔｅｔＰＥ：１：５０；ＨＬＡ−Ｆ−ｔｅｔＰＥ：１μｇ／ｍＬ。
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、ＩＬＴ４へのＡＮＧＰＴＬの結合およびｐ１Ｅ１（Ｇ１）遮断を示す。図５Ａ．ビオチン化ＡＮＧＰＴＬタンパク質を、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）またはヒトＩｇＧ１と共に２０分間プレインキュベートし、それぞれの最終濃度は２０μｇ／ｍＬであった。ついで溶液を、ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞に加え、更に３０分間インキュベートした。ＡＮＧＰＴＬ結合をＰＥ結合ストレプトアビジンで検出し、フローサイトメトリーにより分析した。また、ＰＥ標識ＨＬＡ−Ｇ四量体を、陽性ＩＬＴ４結合／ブロッキング対照として加えた。ＡＮＧＰＴＬタンパク質はＲ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳから購入し、ビオチン化した。図５Ｂ．ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞をＦｃブロックでブロッキングし、ついで２０μｇ／ｍＬのｐ１Ｅ１（Ｇ１）またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と共にインキュベートした。インキュベーション後、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）またはｈＩｇＧ１を蛍光色素標識ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２で検出し、フローサイトメトリーにより分析した。図５Ｃ．ベクター対照３Ａ９  Ｔ細胞をＡＮＧＰＴＬ結合の陰性対照として使用した。抗体での処理を行わなかったこと以外は（Ａ）に記載されているとおりに、細胞を処理した。
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂは、ＩＬＴファミリー１Ｅ１（Ｇ４）結合特異性を示す。Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースに公開されているコンセンサス配列に由来するヒトＩＬＴファミリーメンバーでトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞を使用して、１０μｇ／ｍＬの一定量のｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体または１Ｅ１（Ｇ４）の結合を試験した。ベクター対照３Ａ９  Ｔ細胞を、追加的な陰性対照として使用した。また、ＩＬＴファミリーメンバーの発現を示すために、商業的に入手可能なＩＬＴ反応性抗体の結合が、それらのそれぞれのアイソタイプ対照と比較して示されている。示されているデータは、類似した結果を示す２つの実験の代表例である。図に埋め込まれた凡例を参照されたい。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂは、ＩＬＴファミリー１Ｅ１（Ｇ４）結合特異性を示す。Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースに公開されているコンセンサス配列に由来するヒトＩＬＴファミリーメンバーでトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞を使用して、１０μｇ／ｍＬの一定量のｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体または１Ｅ１（Ｇ４）の結合を試験した。ベクター対照３Ａ９  Ｔ細胞を、追加的な陰性対照として使用した。また、ＩＬＴファミリーメンバーの発現を示すために、商業的に入手可能なＩＬＴ反応性抗体の結合が、それらのそれぞれのアイソタイプ対照と比較して示されている。示されているデータは、類似した結果を示す２つの実験の代表例である。図に埋め込まれた凡例を参照されたい。
【図７】１Ｅ１（Ｇ４）を使用する１ＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントからのＩＬ−２放出のレスキューである。ヒトＩＬＴ４でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞を、可溶性１Ｅ１（Ｇ４）またはアイソタイプ対照（ｈｕＩｇＧ４）（２７μｇ／ｍＬから開始；０．３μｇ／ｍＬまで３倍系列希釈）の存在下、プレート結合抗ＣＤ３抗体で処理した。２４時間のインキュベーションの後、上清を除去し、マウスＩＬ−２をＥＬＩＳＡにより測定する。示されているプロットは５つの独立した実験の代表例である。示されているＥＣ５０値は、これらの実験の平均＋／−標準偏差である。
【図８】ｐ１Ｅ１（Ｇ４）および１Ｅ１（Ｇ４）はマスト細胞脱顆粒のＩＬＴ４：ＨＬＡ−Ｇ誘導性抑制をレスキューした。マウスＷＴＭＣマスト細胞をヒト１ＬＴ４でトランスフェクトし、滴定濃度の１Ｅ１（Ｇ４）、ｐ１Ｅ１（Ｇ４）またはｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（１０μｇ／ｍＬから開始、１：３希釈）で前処理した後、プレート結合抗ＣＤ２００ＲＩａ（Ｃｌｏｎｅ  ＤＸ８９；１μｇ／ｍＬ）およびプレート結合ＨＬＡ−Ｇ四量体（０．６２５μｇ／ｍＬ）で刺激した。１時間の刺激の後、マスト細胞から上清を回収して、比色定量酵素アッセイを用いてβ−ヘキソサミニダーゼの放出を測定することにより脱顆粒を評価した。示されているデータは、データポイント当たり３回の技術的反復を伴う２つの独立した実験の代表例である。
【図９】図９Ａおよび９Ｂ。１Ｅ１（Ｇ４）は、炎症性骨髄サイトカインのＬＰＳ誘導性発現を増強した。健常患者からの全ＰＢＭＣを白血球除去チャンバーから単離し、ｈＩｇＧ４（３０μｇ／ｍＬ；白丸）または１Ｅ１（Ｇ４）（図には「１Ｅ１」と表示されている）（３０μｇ／ｍＬ〜３ｐｇ／ｍＬ；黒丸）の存在下、０．２５μｇ／ｍＬ  ＬＰＳで３日間処理した。刺激後、メソスケールディスカバリー（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）マルチサイトカインアッセイキットを使用して、サイトカイン発現（（図９Ａ）ＧＭ−ＣＳＦおよび（図９Ｂ）ＴＮＦａ）に関して上清をアッセイした。各色は個々の患者からのデータを表す。いずれの刺激も伴わない状態も示されている（閉じた三角形）。
【図１０】図１０Ａおよび１０Ｂ。１Ｅ１（Ｇ４）は炎症性骨髄サイトカインの抗ＣＤ３誘導性発現を増強した。（Ａ〜Ｂ）健常患者からの全ＰＢＭＣを白血球除去チャンバーから単離し、ｈＩｇＧ４（３０μｇ／ｍＬ；白丸）または１Ｅ１（Ｇ４）（図には「１Ｅ１」と表示されている）（３０μｇ／ｍＬ〜３ｐｇ／ｍＬ、黒丸）の存在下、０．０１μｇ／ｍＬ  抗ＣＤ３（ＨＩＴ３ａ）で３日間処理した。刺激後、メソスケールディスカバリーマルチサイトカインアッセイキットを使用して、サイトカイン発現（ＧＭ−ＣＳＦ（（図１０Ａ）およびＴＮＦａ（図１０Ｂ））に関して上清をアッセイした。各色は個々の患者からのデータを表す。いずれの刺激も伴わない状態も示されている（閉じた三角形）。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜１１Ｅ。ｐ１Ｅ１（Ｇ４）治療は、ヒト化マウスＳＫＭＥＬ５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらす。２名の異なる臍帯血ドナーからのＣＤ３４＋  臍帯血移植ヒト化ＮＳＧマウスの左脇腹に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞を皮下接種した。接種後、腫瘍を成長させ、１５０ｍｍ３の平均サイズに達した腫瘍を６つの群に無作為に分けた（各幹細胞ドナーから３；群全体でｎ＝６）。ついでマウスを５日ごとにｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、研究の終了まで腫瘍および体重を毎週測定した。アイソタイプ対照およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおける腫瘍成長を経時的に追跡した。図１１Ａは両群の経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示し、図１１Ｂおよび１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ処理体およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理体の経時的な個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１１Ｄは、経時的に追跡されたアイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスの腫瘍重量を示し、図１１Ｅは、各治療群の体重減少も経時的に測定されたことを示している。研究の終了後、マウスを犠死させ、腫瘍を採取し、体重を測定した。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｅ。ｐ１Ｅ１（Ｇ４）治療は、ヒト化マウスＳＫＭＥＬ５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらす。２名の異なる臍帯血ドナーからのＣＤ３４＋  臍帯血移植ヒト化ＮＳＧマウスの左脇腹に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞を皮下接種した。接種後、腫瘍を成長させ、１５０ｍｍ３の平均サイズに達した腫瘍を６つの群に無作為に分けた（各幹細胞ドナーから３；群全体でｎ＝６）。ついでマウスを５日ごとにｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、研究の終了まで腫瘍および体重を毎週測定した。アイソタイプ対照およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおける腫瘍成長を経時的に追跡した。図１１Ａは両群の経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示し、図１１Ｂおよび１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ処理体およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理体の経時的な個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１１Ｄは、経時的に追跡されたアイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスの腫瘍重量を示し、図１１Ｅは、各治療群の体重減少も経時的に測定されたことを示している。研究の終了後、マウスを犠死させ、腫瘍を採取し、体重を測定した。
【図１１Ｃ】図１１Ａ〜１１Ｅ。ｐ１Ｅ１（Ｇ４）治療は、ヒト化マウスＳＫＭＥＬ５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらす。２名の異なる臍帯血ドナーからのＣＤ３４＋  臍帯血移植ヒト化ＮＳＧマウスの左脇腹に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞を皮下接種した。接種後、腫瘍を成長させ、１５０ｍｍ３の平均サイズに達した腫瘍を６つの群に無作為に分けた（各幹細胞ドナーから３；群全体でｎ＝６）。ついでマウスを５日ごとにｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、研究の終了まで腫瘍および体重を毎週測定した。アイソタイプ対照およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおける腫瘍成長を経時的に追跡した。図１１Ａは両群の経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示し、図１１Ｂおよび１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ処理体およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理体の経時的な個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１１Ｄは、経時的に追跡されたアイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスの腫瘍重量を示し、図１１Ｅは、各治療群の体重減少も経時的に測定されたことを示している。研究の終了後、マウスを犠死させ、腫瘍を採取し、体重を測定した。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜１１Ｅ。ｐ１Ｅ１（Ｇ４）治療は、ヒト化マウスＳＫＭＥＬ５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらす。２名の異なる臍帯血ドナーからのＣＤ３４＋  臍帯血移植ヒト化ＮＳＧマウスの左脇腹に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞を皮下接種した。接種後、腫瘍を成長させ、１５０ｍｍ３の平均サイズに達した腫瘍を６つの群に無作為に分けた（各幹細胞ドナーから３；群全体でｎ＝６）。ついでマウスを５日ごとにｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、研究の終了まで腫瘍および体重を毎週測定した。アイソタイプ対照およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおける腫瘍成長を経時的に追跡した。図１１Ａは両群の経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示し、図１１Ｂおよび１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ処理体およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理体の経時的な個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１１Ｄは、経時的に追跡されたアイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスの腫瘍重量を示し、図１１Ｅは、各治療群の体重減少も経時的に測定されたことを示している。研究の終了後、マウスを犠死させ、腫瘍を採取し、体重を測定した。
【図１１Ｅ】図１１Ａ〜１１Ｅ。ｐ１Ｅ１（Ｇ４）治療は、ヒト化マウスＳＫＭＥＬ５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらす。２名の異なる臍帯血ドナーからのＣＤ３４＋  臍帯血移植ヒト化ＮＳＧマウスの左脇腹に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５腫瘍細胞を皮下接種した。接種後、腫瘍を成長させ、１５０ｍｍ３の平均サイズに達した腫瘍を６つの群に無作為に分けた（各幹細胞ドナーから３；群全体でｎ＝６）。ついでマウスを５日ごとにｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）（それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、研究の終了まで腫瘍および体重を毎週測定した。アイソタイプ対照およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおける腫瘍成長を経時的に追跡した。図１１Ａは両群の経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示し、図１１Ｂおよび１１Ｃは、それぞれ、アイソタイプ処理体およびｐ１Ｅ１（Ｇ４）処理体の経時的な個々のマウス腫瘍体積（ｍｍ３）を示す。図１１Ｄは、経時的に追跡されたアイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスの腫瘍重量を示し、図１１Ｅは、各治療群の体重減少も経時的に測定されたことを示している。研究の終了後、マウスを犠死させ、腫瘍を採取し、体重を測定した。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｄは、１Ｅ１（Ｇ４）処理がヒト化マウスＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制をもたらしたことを示す。図１２Ａは１Ｅ１（Ｇ４）処置マウスおよびＩｇＧ４アイソタイプ対照処理マウスの両方における経時的な平均腫瘍体積（ｍｍ３）＋／−ＳＤを示す。図１２Ｂは両群の経時的な体重変化を示す。図１２Ｃは、アイソタイプ対照または１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスにおけるエンドポイント腫瘍重量を示す。図１２Ｄは、アイソタイプ対照または１Ｅ１（Ｇ４）で処理された個々のマウスにおけるエンドポイント脾臓重量を示す。
【図１３】ＩＬＴ４ハプロタイプ結合を示す。ヒトＩＬＴ４対立遺伝子変異体でトランスフェクトされたマウス３Ａ９  Ｔ細胞を使用して、１０μｇ／ｍＬの一定量のｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体または１Ｅ１（Ｇ４）の結合を試験した。追加的な陰性対照として、ベクター対照３Ａ９  Ｔ細胞を使用した。ハプロタイプは表２に説明されている。示されているデータは、類似した結果を示す２つの実験の代表例である。
【図１４Ａ】図１４Ａおよび１４Ｂ。公開データベースによる種々の腫瘍型または細胞型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。図１４ＡはＴＣＧＡデータベースによる種々の腫瘍型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。図１４ＢはＢｌｕｅｐｒｉｎｔデータベースによる種々の細胞型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび１４Ｂ。公開データベースによる種々の腫瘍型または細胞型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。図１４ＡはＴＣＧＡデータベースによる種々の腫瘍型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。図１４ＢはＢｌｕｅｐｒｉｎｔデータベースによる種々の細胞型におけるＩＬＴ４  ＲＮＡ発現を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａおよび１５Ｂは、腎細胞癌（ＲＣＣ）（図１５Ａ）および結腸直腸癌（ＣＲＣ）（図１５Ｂ）腫瘍組織培養サンプルからの骨髄細胞への１Ｅ１（Ｇ４）の結合を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ａおよび１５Ｂは、腎細胞癌（ＲＣＣ）（図１５Ａ）および結腸直腸癌（ＣＲＣ）（図１５Ｂ）腫瘍組織培養サンプルからの骨髄細胞への１Ｅ１（Ｇ４）の結合を示す。
【図１６】チャイニーズハムスター卵巣細胞において産生されるモノクローナル抗体の主要Ｎ−結合グリカン（ＣＨＯ  Ｎ−結合グリカン）および操作された酵母細胞において産生されるモノクローナル抗体の主要Ｎ−結合グリカン（操作酵母Ｎ−結合グリカン）：正方形：Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮａｃ）；丸：マンノース（Ｍａｎ）；菱形：ガラクトース（Ｇａｌ）；三角形：フコース（Ｆｕｃ）。
【図１７】図１７は、ヒト化マウスＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍モデルにおける種々の高ＩＬＴ抗体の抗腫瘍効力を示す。
【０３３０】
実施例
これらの実施例は本発明を例示することを意図したものであり、本発明を限定するものではない。実施例に記載されている組成物および方法は本発明の一部を構成する。
【０３３１】
本明細書中で用いる「ｐ１Ｅ１（Ｇ１）」なる語は、ヒトＩｇＧ１およびヒトラムダ定常ドメインを有する生殖細胞系Ｖ遺伝子であるそれぞれＩＧＨＶ４−３４＊０およびＩＧＬＶ１−４０＊０１に由来する完全ヒト抗ＩＬＴ４  １Ｅ１  ｍＡｂを意味する。
【化１１】
2020519235.tif 000031
【０３３２】
本明細書中で用いる「ｐ１Ｅ１（Ｇ４）」は、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）およびヒトラムダ定常ドメインを有する生殖細胞系Ｖ遺伝子であるそれぞれＩＧＨＶ４−３４＊０およびＩＧＬＶ１−４０＊０１に由来する完全ヒト抗ＩＬＴ４  １Ｅ１（重鎖内の突然変異Ｑ１Ｅおよび軽鎖内のＱ１Ｅを有する）ｍＡｂを意味する。
【化１２】
2020519235.tif 000032
2020519235.tif 000033
【０３３３】
本明細書中で用いる「１Ｅ１（Ｇ４）」は、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）およびヒトラムダ定常ドメインを有する生殖系列Ｖ遺伝子であるそれぞれＩＧＨＶ４−３４＊０およびＩＧＬＶ１−４０＊０１に由来する完全ヒト抗ＩＬＴ４  １Ｅ１（軽鎖内の突然変異Ｑ１ＥおよびＮ５３Ｄならびに重鎖内のＱ１ＥおよびＳ５４Ａを有する）ｍＡｂを意味する。
【化１３】
2020519235.tif 000034
【０３３４】
実施例１：抗ＩＬＴ４抗体の同定および特徴づけ
抗体の製造および同定
ＲＥＴＲＯＣＹＴＥ  ＤＩＳＰＬＡＹプラットフォームを使用して、抗ＩＬＴ４親ヒトｍＡｂ  １Ｅ１を同定した（Ｂｒｅｏｕｓ−Ｎｙｓｔｒｏｍａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５（１）：５７−６７（２０１４））。ＲＥＴＲＯＣＹＴＥ  ＤＩＳＰＬＡＹプラットフォームは、哺乳動物プレＢ細胞内へのヒト抗体遺伝子のレトロウイルス遺伝子導入を利用して、安定した高多様性抗体ディスプレイライブラリーを作製する。ナイーブＢ細胞を含有するヒト臍帯血を抗体の重鎖および軽鎖の原料として使用した。細胞性抗体ライブラリーは、典型的には、プレＢ細胞の細胞表面上に１０８個を超える異なる完全長（ｈＩｇＧ１〜４アイソタイプ）モノクローナルヒト抗体を発現した。
【０３３５】
３つの別々のＲＥＴＲＯＣＹＴＥ  ＤＩＳＰＬＡＹスクリーニングキャンペーンにおいて特定された抗体ヒットから抗体プレパネルを集めた。Ｂ細胞クローンへの組換えヒトＩＬＴ４抗原結合のＦＡＣＳ検出に基づいて、候補体を富化させた。推定Ｂ細胞クローンを選別し、それらの抗体配列を決定した。ついでこれらの配列を使用して抗体候補を得、ＩＬＴ４  ＣＨＯトランスフェクタント細胞結合アッセイを用いてＩＬＴ４結合を確認し、親ＣＨＯ細胞を陰性対照として使用した。また、候補体を、密接に関連するＩＬＴファミリーメンバー（ヒトＩＬＴ２、ＬＩＬＲＡ１およびＬＩＬＲＡ２  ＣＨＯトランスフェクタントＦＡＣＳ）に対して、およびフローサイトメトリー評価によるＩＬＴファミリーメンバー（ＬＩＬＲＡ１、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＬＲＡ４、ＬＩＬＲＡ５、ＬＩＬＲＡ６、ＩＬＴ２、ＩＬＴ５およびＩＬＴ３）に対して、ＩＬＴ４特異性に関してカウンタースクリーニングした。
【０３３６】
モノクローナル抗体を、カニクイザルＩＬＴ４（ＮＣＢＩからの推定配列）ＣＨＯトランスフェクタントに結合するそれらの能力に関してＦＡＣＳにより更に試験した。また、候補ｍＡｂを、Ｌｕｍｉｎｅｘに基づくアッセイにおいては組換えＩＬＴ４タンパク質への、そしてＦＡＣＳに基づくアッセイにおいてはＩＬＴ４発現ＣＨＯ細胞への組換えＨＬＡ−Ｇ  Ｆｃリガンドの結合を遮断するそれらの能力に関してスクリーニングした。候補抗体機能活性を、以下の３つの方法により評価した：１）ＩＬＴ４トランスフェクト化マウス３Ａ９  Ｔ細胞における自発的ＩＬ２抑制のレスキュー；２）マウスＷＴＭＣ  ＩＬＴ４トランスフェクタントにおけるＣＤ２００ＲＬａ刺激マスト細胞脱顆粒のＨＬＡ−Ｇ依存的抑制のレスキュー；および３）全ＰＢＭＣ混合リンパ球反応におけるサイトカイン調節。
【０３３７】
前記のスクリーニング基準に基づいて、８つの抗ＩＬＴ４抗体（１Ｅ１、１Ｇ２、２Ａ６、２Ｄ５、３Ｅ６、３Ｇ７、２Ｃ１および５Ａ６）を、それらの機能的および生物物理学的特性に基づいて選択した。抗体を更に分析し、一連の生体機能アッセイ、生物物理学的アッセイおよび物理化学的アッセイにおいて再評価した。機能アッセイは、前記の３Ａ９細胞のＩＬ−２抑制およびマスト細胞脱顆粒の抗体媒介性用量依存的レスキューを評価した。Ｌｕｍｉｎｅｘおよび細胞に基づくリガンド遮断アッセイおよびリガンド競合アッセイを行い、ＩＬＴ４標的抗原、オフターゲット抗原およびＰＢＭＣサブセットに対する結合特性およびアフィニティを、それぞれＢｉａｃｏｒｅおよびフローサイトメトリーに基づくアッセイを用いて決定した。生物物理学的アッセイは、抗体の安定性（温度、ｐＨ）および分解ならびに凝集挙動を評価した。潜在的な抗体産生リスクを排除するために、配列ライアビリティ（ｌｉａｂｉｌｉｔｙ）および潜在的翻訳後修飾モチーフに関する対処を行った。最後に、ＳＫＭＥＬ５メラノーマ・チャレンジ・ヒト化マウスを使用するインビボ腫瘍退縮試験において候補体を試験した。
【０３３８】
生物物理学的特性
ＣＨＯ細胞において一過性に発現されたヒト１Ｅ１配列（Ｓ２２８Ｐ突然変異を有するヒトＩｇＧ４バックボーン）に関して研究を行った。１Ｅ１は以下の物理化学的特性を示した：計算された等電点（ＰＩ）および実験で決定された等電点（ＰＩ）は、それぞれ、約７．２９および約７．２であり、凝集レベル（ＨＭＷ種）は５％未満であり、Ｔｍ開始は６０℃を超え、Ｔｍ１は約６５．２℃であり、Ｔｍ２は約７８．８℃であり、少なくとも５回の凍結／解凍サイクルで安定していた。１Ｅ１の配列は元々ＶＨ−ＣＤＲ２においてＮ−グリコシル化部位を有していたが、これは、ＢＩＡＣＯＲＥによる結合および機能アッセイにおいて悪影響を与えることなくＳ５４Ａ突然変異によって成功裏に矯正された。ストレス研究は、ＶＬ−ＣＤＲ３におけるＮ５３残基の脱アミド化を示した（高ｐＨ条件下で１３％超）。Ｎ５３は、結合および機能アッセイ（１Ｅ１を使用するＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントからのＩＬ−２放出のレスキュー）に悪影響を与えることなく、成功裏に矯正された（Ｎ５３Ｄ）。脱アミド化による不均一性のリスクを低減するために、１Ｅ１  ＶＨおよびＶＬにおけるＮ末端Ｑ残基の両方をＥに突然変異させた（ＶＨ−Ｑ１ＥおよびＶＬ−Ｑ１Ｅ）。突然変異１Ｅ１配列（１Ｅ１  ＶＨ  Ｑ１Ｅ、Ｓ５４Ａ／ＶＬ  Ｑ１Ｅ、Ｎ５３Ｄ）ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ／ラムダ）に関して行ったストレス研究は、ＡＡＰＨ（２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩）での６時間の強制酸化条件下、結合および機能に対する最小の影響を伴って、ＶＨ−ＣＤＲ３におけるＷ１０２残基の約１７％の酸化を示した。ＡＡＰＨは、ＴｒｐおよびＭｅｔ残基の酸化を強制するために使用される。同じ条件下、ＶＨフレームワークにおけるＷ７の約８％の酸化が検出され、結合および機能に対する影響は認められなかった。ペプチドマッピングにより、約８％のアフコシル化抗体が検出された。この知見は、一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞において発現された分子に関連している可能性がある。
【０３３９】
エピトープマッピング
抗体クローンｐ１Ｅ１（Ｇ１）のＩＬＴ４上のエピトープを、水素−重水素交換質量分析により特定した。抗体ｐ１Ｅ１（Ｇ１）をＩＬＴ４の組換えヒスチジンタグ付き細胞外ドメインと予め混合し、ついで複合体を重水素バッファー中でインキュベートした。重水素の取り込み量を質量分析により測定した。ＩＬＴ４残基ＬＹＲＥＫＫＳＡＳＷ（シグナル配列を伴わないＩＬＴ４の３９〜４８）（配列番号５９）およびＴＲＩＲＰＥＬ（シグナル配列を伴わないＩＬＴ４の５０〜５６（配列番号６０）、そしてより低い度合であったがＮＧＱＦ（シグナル配列を伴わないＩＬＴ４の５９〜６２（配列番号６１）およびＨＴＧＲＹＧＣＱ（シグナル配列を伴わないＩＬＴ４の７１〜７８）（配列番号６２）は、抗原のみのサンプルと比較して重水素標識における最大の差異を示すものとして特定され、このことは、それらがｐ１Ｅ１（Ｇ１）と相互作用する残基である可能性が高いことを示している（図１）。これらのペプチドは、ＩＬＴ４のドメイン１上に存在する。より少ない重水素標識差異を示したドメイン１および２上の他のペプチドは、抗体結合の際のコンホメーション安定性により保護されている可能性がある。ドメイン３および４においては標識における有意な差異は見られなかった。
【０３４０】
ヒトＩＬＴ４の結晶構造上にマッピングされた場合、ｐ１Ｅ１（Ｇ４）により保護された残基は、３つのベータ鎖とループとを含む非線形コンホメーションエピトープを形成する（図２Ａ）。
【０３４１】
ＩＬＴ４は以下の２つの結合境界を用いて、そのリガンドであるＨＬＡ−Ｇに嵌合する（Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉら，２００６）：ＩＬＴ４のドメイン２内に位置するベータ−２−ミクログロブリン結合のための部位１、およびＩＬＴ４のドメイン１内に位置するＨＬＡ−Ｇ重鎖結合のための部位２（図２Ｂ）。部位１は、ＩＬＴ４残基Ｔｒｐ−６７、Ａｓｐ−１７７、Ａｓｎ−１７９およびＶａｌ−１８３（Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉらによる番号付け，２００６）を含む。部位２は、ＩＬＴ４残基Ａｒｇ−３６、Ｔｙｒ−３８、Ｌｙｓ−４２、Ｉｌｅ−４７およびＴｈｒ−４８（Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉらによる番号付け，２００６）を含む。本出願のＨＤＸ−ＭＳデータは、Ｔｙｒ−３８、Ｌｙｓ−４２およびＴｈｒ−４８（Ｓｈｉｒｏｉｓｈｉらによる番号付け，２００６）がヒトＩＬＴ４の残基Ｔｙｒ−４０、Ｌｙｓ−４４およびＴｈｒ−５０としてのＩＬＴ４ドメイン１上のｐ１Ｅ１（Ｇ１）エピトープの一部であることを示している。（図２Ａ）。これは、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）により結合されたヒトＩＬＴ４エピトープが、ＨＬＡ−Ｇリガンドにより結合された部位２エピトープと重複することを示している。
【０３４２】
実施例２：抗ＩＬＴ４  ｍＡｂ  １Ｅ１のアフィニティ、結合および遮断特性
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定されたヒトＩＬＴ４に対する１Ｅ１（Ｇ４）およびＨＬＡ−Ｇ１の結合アフィニティ
ＩＬＴ４−Ｈｉｓ（可溶性ＩＬＴ４タンパク質を生成するようにポリヒスチジンタグに融合したヒトＩＬＴ４の組換え細胞外ドメイン）への１Ｅ１（Ｇ４）およびＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃ（可溶性ＨＬＡ−Ｇ１タンパク質を生成するようにヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインに融合したＨＬＡ−Ｇの組換え細胞外ドメイン（アイソフォーム１））の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅにより評価した。１Ｅ１（Ｇ４）またはＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃのいずれかを、Ｆｃ捕捉によりＢｉａｃｏｒｅチップ上に捕捉した。ついで単量体ＩＬＴ４−Ｈｉｓを結合に関して試験し、データは、ＩＬＡ４−ＨｉｓがＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃより６００倍高いアフィニティで１Ｅ１（Ｇ４）に結合することを示した（表３）。
【表３】
2020519235.tif 000035
【０３４３】
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ）装置での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを用いて、ポリヒスチジンタグ付きヒトＩＬＴ４（ＩＬＴ４−Ｈｉｓ）に対する抗ヒトＩＬＴ４  ＩｇＧ４  ｍＡｂ（１Ｅ１（Ｇ４））およびＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃ融合（ＨＬＡ−Ｇ１−Ｆｃ）の１価アフィニティを決定した。ｍＡｂまたはＦｃ融合タンパク質のいずれかを、ヒトＦｃ捕捉キット（ＧＥ  ＨＥＡＴＨＣＡＲＥ）を使用して調製したＣＭ５センサーチップ上に捕捉し、この表面に一連の滴定濃度のＩＬＴ４−Ｈｉｓを注入した。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、各滴定系列を１：１結合モデルにフィットさせた。結合（ｋａ、Ｍ−１  ｓ−１）および解離（ｋｄ、ｓ−１）速度定数を滴定の各セットに関して決定し、各滴定に関する解離定数であるＫＤ（Ｍ）＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎを計算するために用いた。表１に示されているとおり、ヒトＩＬＴ４−Ｈｉｓに対する１Ｅ１（Ｇ４）ｍＡｂおよびＨＬＡ−Ｇ１−Ｆｃの１価アフィニティ（ＫＤ）は、それぞれ、１７ｎＭおよび１１μＭであり、６３０倍の差異がＫＤ比により示された。高速のｋａおよびｋｄ速度論定数ゆえに、定常状態近似（ＳＳＡ）も用いて、ＩＬＴ４−Ｈｉｓに対するＨＬＡ−Ｇ１−Ｆｃの低いアフィニティを確認した。
【０３４４】
１Ｅ１（Ｇ４）を使用するＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへのＨＬＡ−Ｇ結合の遮断
ＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントを１Ｅ１（Ｇ４）またはアイソタイプ対照で種々の用量で前処理し、ついで１Ｅ１（Ｇ４）の二次検出を行い（図３Ａ）、または一定濃度のビオチン化ＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃキメラで処理して、同族（コグネイト）リガンドを１Ｅ１（Ｇ４）が遮断する能力を評価した（図３Ｂ）。１Ｅ１（Ｇ４）およびＨＬＡ−Ｇ  Ｆｃをフローサイトメトリーにより検出した。データは、１Ｅ１（Ｇ４）がＨＬＡ−Ｇ１  Ｆｃ結合を用量依存的に遮断したことを示している。
【０３４５】
Ｌｕｍｉｎｅｘ（ルミネックス）および細胞に基づくリガンド遮断および競合アッセイ
抗体１Ｅ１、２Ａ６、２Ｃ１および３Ｇ７を、ＣＨＯ／ＩＬＴ４＋  細胞により発現された又はビーズに結合したＩＬＴ４抗原との組換え二量体ＨＬＡ−Ｇの相互作用を阻害するそれらの可能性に関して、Ｌｕｍｉｎｅｘおよび細胞に基づくリガンド遮断アッセイおよびリガンド競合アッセイにおいて試験した。
【０３４６】
Ｌｕｍｉｎｅｘに基づくリガンド遮断および競合アッセイは、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズに化学的に結合した組換えヒトＩＬＴ４抗原を使用した。遮断アッセイにおいては、抗ＩＬＴ４抗体１Ｅ１、２Ａ６、２Ｃ１または３Ｇ７の或る用量範囲（１：３系列希釈における０．５〜９，０００ｎｇ／ｍＬ）のｈＩｇＧ４変異体と共にビーズをプレインキュベートした。ついでビーズ結合ＩＬＴ４抗原を５０ｎＭの濃度における可溶性ビオチン化ＨＬＡ−Ｇ／Ｆｃ融合タンパク質への結合に関して試験した。Ｌｕｍｉｎｅｘリガンド競合アッセイにおいては、抗原結合Ｌｕｍｉｎｅｘビーズを５０ｎＭの濃度における可溶性ビオチン化ＨＬＡ−Ｇ／Ｆｃ融合タンパク質と共にプレインキュベートした後、抗ＩＬＴ４抗体１Ｅ１、２Ａ６、２Ｃ１または３Ｇ７のｈＩｇＧ４変異体の用量滴定体（１：３系列希釈における０．５〜９，０００ｎｇ／ｍＬ）と共にプレインキュベートした。どちらのアッセイ設定においても、ＩＬＴ４：ＨＬＡ−Ｇ相互作用が抗ストレプトアビジン−ＰＥ抗体で検出され、ＩＣ５０値を決定した。全ての試験抗体がＬｕｍｉｎｅｘ結合ＩＬＴ４／ＦｃへのＨＬＡ−Ｇ結合の用量依存的遮断を示し、ＩＣ５０値を表４に要約する。全ての試験抗体は、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズ結合ＩＬＴ４／Ｆｃへの結合に関して、ＨＬＡ−Ｇとの用量依存的競合も示した（データ非表示）。
【表４】
2020519235.tif 000036
【０３４７】
細胞に基づくリガンド遮断およびリガンド競合アッセイは、Ｌｕｍｉｎｅｘに基づくアッセイに関して記載されているのと同様の原理に従い、抗原の表面発現のためにＣＨＯ／ＩＬＴ４細胞系を使用した。遮断アッセイにおいては、１：３系列希釈における１〜２０，０００ｎｇ／ｍＬの用量範囲を用いて、細胞を試験抗体と共にプレインキュベートした。ついでＩＬＴ４抗原を、５μｇ／ｍｌの濃度における可溶性ビオチン化ＨＬＡ−Ｇ／Ｆｃ融合タンパク質への結合に関して試験した。競合アッセイは逆の設定を用いた。細胞を５μｇ／ｍｌの濃度の可溶性ビオチン化ＨＬＡ−Ｇ／Ｆｃ融合タンパク質と共にプレインキュベートした後、試験抗体の用量滴定体を１：３系列希釈における１〜２０，０００ｎｇ／ｍＬの範囲で加えた。ＩＬＴ４：ＨＬＡ−Ｇ相互作用が抗ストレプトアビジン−ＰＥ抗体で検出された。全ての試験抗体はＣＨＯ発現ＩＬＴ４へのＨＬＡ−Ｇ結合の用量依存的遮断を示し、ＩＣ５０値を表５に要約する。全ての試験抗体は、ＣＨＯ発現ＩＬＴ４への結合に関して、ＨＬＡ−Ｇとの用量依存的競合も示した（非表示データ）。
【表５】
2020519235.tif 000037
【０３４８】
ｐ１Ｅ１（Ｇ１）を使用するＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへの非ＨＬＡ−Ｇ  ＭＨＣクラスＩリガンド結合の遮断
ＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントを種々の用量のｐ１Ｅ１（Ｇ１）またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照と共に前処理し、ついで一定濃度の蛍光色素標識ＨＬＡ−ＦもしくはＣＤ１ｄ四量体またはＨＬＡ−Ａ０２：０１もしくはＨＬＡ＊Ｂ７：０２デキサマーで処理して、非ＨＬＡ−Ｇ  ＭＨＣクラスＩリガンドをｐ１Ｅ１（Ｇ１）が遮断する能力を評価した。ＩＬＴ４へのＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｆの結合は、用量滴定可能な様態で、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）により阻害され（図４）、このことは、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）が他の報告されているＭＨＣクラスＩリガンドを遮断しうることを示している。
【０３４９】
ｐ１Ｅ１（Ｇ１）を使用するＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへのＡＮＧＰＴＬ結合の遮断
アンジオポエチン様（ＡＮＧＰＴＬ）タンパク質は、ヒト造血幹細胞により発現されたＩＬＴ４に結合することが最近報告された（Ｚｈｅｎｇら，Ｎａｔｕｒｅ．２０１２年５月３０日；４８５（７４００）：６５６−６０およびＤｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ．２０１４年８月７日；１２４（６）：９２４−３５）。ＩＬＴ４へのＡＮＧＰＴＬファミリーメンバーの結合をｐ１Ｅ１（Ｇ１）が遮断しうるかどうかを試験するために、商業的に入手可能なＡＮＧＰＴＬタンパク質またはタンパク質断片を購入し、ｐ１Ｅ１（Ｇ１）で前処理されたＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへの結合に関して試験した。結合データが示すところによると、試験したタンパク質濃度において、ＡＮＧＰＴＬ１、４および潜在的に７は、ＩＬＴ４には結合可能であり、ベクター対照細胞には結合できなかった。ｐ１Ｅ１（Ｇ１）は飽和用量でＡＮＧＰＴＬタンパク質の結合を完全に遮断することが可能であった（図５）。
【０３５０】
ヒトＩＬＴ  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへの１Ｅ１（Ｇ４）のＩＬＴファミリー特異的結合
ヒトＩＬＴ４、ＩＬＴ２、ＩＬＴ３（２つの変異体）、ＩＬＴ５、ＬＩＬＲＢ５、ＬＩＲＬＡ１、ＬＩＲＬＡ２、ＩＬＴ７、ＩＬＴ８またはＩＬＴ１１を発現するようにトランスフェクトされた３Ａ９  Ｔ細胞系を使用する細胞に基づくフローサイトメトリーにより、ヒトＩＬＴファミリーメンバーへの１Ｅ１（Ｇ４）のＩＬＴファミリー特異的結合を評価した。１Ｅ１（Ｇ４）はヒトＩＬＴ４に特異的に結合し、試験された他のいずれのＩＬＴファミリーメンバーとの交差反応性をも示さなかった（図６Ａおよび６Ｂ）。
【０３５１】
実施例３：操作された細胞および初代細胞における抗ＩＬＴ４  ｍＡｂ  １Ｅ１の生物活性
操作されたＩＬＴ４  ３Ａ９細胞に基づくアッセイにおいてインターロイキン２抑制を１Ｅ１（Ｇ４）、２Ａ６、２Ｃ１および３Ｇ７が逆転させる能力
抗ＣＤ３抗体を使用して、対照マウス３Ａ９  Ｔ細胞を刺激して、ＩＬ−２放出を増加させた。これとは対照的に、ＩＬＴ４  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントは、ＣＤ３刺激の存在下、ＩＬ  ２を発現させることができず、これはおそらく、マウスＭＨＣクラスＩ分子とＩＬＴ４との交差反応性または未知の異種リガンドによるものであろう。この相互作用はＩＬＴ４受容体の自発的な多量体化／活性化をもたらして、抗ＣＤ３媒介ＩＬ−２放出の抑制をもたらすようであった。したがって、ＩＬＴ４に機能的に結合し、異種リガンドとのＩＬＴ４の相互作用を遮断し、および／または受容体多量体化を阻害する抗体は、ＩＬ放出を回復させるはずである。
【０３５２】
１Ｅ１（Ｇ４）、２Ａ６、２Ｃ１および３Ｇ７を、ＩＬＴ４マウス３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントのＩＬ−２放出の媒介に関して試験した。１Ｅ１（Ｇ４）、２Ａ６、２Ｃ１または３Ｇ７をＩＬＴ４＋  マウス３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントに加え、２４時間の抗ＣＤ３媒介性細胞刺激の後、ＩＬ−２放出をＥＬＩＳＡにより測光的に測定した。１Ｅ１（Ｇ４）の代表的な用量反応曲線を図７に示す。試験抗体のＥＣ５０値を用量反応曲線から決定し、表６に示す。
【表６】
2020519235.tif 000038
【０３５３】
ＷＴＭＣ（野生型マスト細胞）マウス細胞脱顆粒アッセイ（定性的のみ）
ｐ１Ｅ１（Ｇ４）および１Ｅ１（Ｇ４）を、ＩＬＴ４：ＨＬＡ−Ｇ依存的マスト細胞脱顆粒のレスキューに関して試験した。マウスＷＴＭＣマスト細胞にヒトＩＬＴ４でトランスフェクトし、ＣＤ２００ＲＬａに対して産生されたプレート結合抗体で刺激した。ＣＤ２００ＲＬａの抗体媒介性架橋は、ＣＤ２２０ＲＬａの細胞内ドメイン内で見出されるＩＴＡＭモチーフの活性化によるマスト細胞脱顆粒を引き起こした。脱顆粒は、アッセイ上清における顆粒含量放出をアッセイすることにより比色法で測定されうる。プレート結合ＨＬＡ−Ｇ四量体の存在下、ＣＤ２００ＲＬａ媒介性マスト細胞脱顆粒はＩＬＴ４トランスフェクタントにおいて阻害された。プレート結合抗ＣＤ２００ＲＬａおよびＨＬＡ−Ｇ四量体での刺激の前のｐ１Ｅ１（Ｇ４）または１Ｅ１（Ｇ４）でのＩＬＴ４  ＷＴＭＣトランスフェクタントの前処理は、用量滴定可能な様態で脱顆粒阻害を逆転させた（図８）。
【０３５４】
初代ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）による骨髄由来サイトカイン分泌に対する１Ｅ１（Ｇ４）の効果
ヒト初代ＰＢＭＣ  ＬＰＳ刺激アッセイにおける１Ｅ１（Ｇ４）の評価
原型骨髄由来炎症性サイトカインであるＴＮＦαの発現は、ＬＰＳで刺激された場合、低レベルのＩＬＴ４を発現する単球により発現されることが報告された。高いＩＬＴ４発現を示す単球はそれほど多量のＴＮＦαを発現せず、ＩＬＴ４の発現の欠如は、乾癬性関節炎患者から単離された単球の特徴であることが判明した（Ｂｅｒｇａｍｉｎｉら，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１４年３月２７日；９（３）：ｅ９２０１８）。単球上のＩＬＴ４発現は、炎症性刺激（例えば、ＬＰＳ）の存在下、骨髄細胞エフェクター活性を阻害し、炎症性サイトカイン誘導（例えば、ＴＮＦα）に拮抗しうる。したがって、健康なヒトドナーから単離された全ＰＢＭＣをＬＰＳで処理し、炎症性骨髄性サイトカイン発現をＩＬＴ４拮抗作用が増強する能力を１Ｅ１（Ｇ４）で評価した。図９Ａおよび９Ｂは、それぞれ３人のドナーによる３つの実験の１つからのデータを示し、１Ｅ１（Ｇ４）が、用量滴定可能な様態でＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαの両方（共に骨髄由来サイトカイン）のＬＰＳ依存的発現を増強したことを示している。
【０３５５】
ヒト初代ＰＢＭＣ抗ＣＤ３刺激アッセイにおける１Ｅ１（Ｇ４）の評価
最適以下のＴ細胞刺激の存在下で１Ｅ１（Ｇ４）処理がＴ細胞または骨髄性エフェクターサイトカイン発現を増強しうるかどうかを評価するために、健康なヒトドナーから単離された全ＰＢＭＣを抗ＣＤ３で処理してＴ細胞増殖を誘導し、サイトカイン発現をＩＬＴ４拮抗作用が修飾する能力を１Ｅ１（Ｇ４）で評価した。図１０Ａおよび１０Ｂは、それぞれ３人のドナーによる３つの実験の１つからのデータを示し、１Ｅ１（Ｇ４）が、用量滴定可能な様態でＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαの抗ＣＤ３依存的発現を増強したことを示している。
【０３５６】
実施例４：ヒト化マウスＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍モデルにおける抗ＩＬＴ４抗体の抗腫瘍効果
ヒト化マウス腫瘍モデルにおける１Ｅ１、２Ａ６、２Ｃ１および２Ｄ５の抗腫瘍効果
抗体１Ｅ１、２Ａ６、２Ｃ１および２Ｄ５をインビボ腫瘍退縮アッセイにおいて試験した。ヒト化マウス（ヒト免疫細胞構成を確立するためにヒト造血幹細胞で再構成されたＮＳＧマウス）に１×１０６個のＳＫＭＥＬ５メラノーマ細胞（ＨＬＡクラスＡ＊０２：０１）を接種し、約３５日後に１５０ｍｍ３の平均サイズが観察されるまで、腫瘍成長をモニターした。それぞれ６匹の動物を含む７つの無作為群のマウスに、アイソタイプ対照抗体（ｈＩｇＧ１＋ｈＩｇＧ４、それぞれ２０ｍｇ／ｋｇ）または２０ｍｇ／ｋｇの以下の抗ＩＬＴ４抗体のいずれかを皮下投与した：１Ｅ１−ＩｇＧ１、１Ｅ１−ＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｑ）（Ｆｃヌル突然変異体）、１Ｅ１−ＩｇＧ４、２Ａ６−ＩｇＧ４、２Ｃ１−ＩｇＧ４および２Ｄ５−ＩｇＧ４。マウスに７日ごと（第３５日、第４２日、第４９日、合計３回投与）に投与し、腫瘍サイズを第６３日まで測定した。結果は、アイソタイプ対照が投与された動物と比較して、１Ｅ１（ＩｇＧ１、ＩｇＧ１−（Ｎ２９７Ｑ）、ＩｇＧ４）、２Ａ６−ＩｇＧ４および２Ｄ５−ＩｇＧ４で処理されたマウスにおいて腫瘍成長障害を示した（図１７）。これとは対照的に、アイソタイプ対照または抗ＩＬＴ４候補２Ｃ１のいずれかで処理されたマウスは、腫瘍成長障害を示さなかった。
【０３５７】
ヒト化マウス腫瘍モデルにおけるｐ１Ｅ１（Ｇ４）の抗腫瘍効果
腫瘍成長阻害に関するｐ１Ｅ１（Ｇ４）のインビボ効果を試験するために、ヒト化マウス腫瘍モデルを開発した。免疫不全ＮＳＧマウスをヒト造血幹細胞で再構成させた。末梢ヒトＣＤ４５＋  免疫細胞（ＰＢＭＣの２５％以上）をマウスが有することを確認した後、ヒト皮膚メラノーマ由来腫瘍系であるＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍細胞をそれらに接種した。これらの細胞をＨＬＡ−Ｇのそれらの遺伝的発現に関して選択した。接種後、腫瘍を約１５０ｍｍ３のサイズまで成長させた。マウスを無作為に幾つかの群に分け、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照またはｐ１Ｅ１（Ｇ４）でチャレンジした。
【０３５８】
ｐ１Ｅ１（Ｇ４）で処理されたマウスは、研究の経過にわたって腫瘍成長阻害を示した（図１１Ａ）。１つの完全な回帰および１つの部分的な回帰がｐ１Ｅ１（Ｇ４）で観察された（図１１Ｃ）。
【０３５９】
ヒト化マウス腫瘍モデルにおける１Ｅ１（Ｇ４）の抗腫瘍効果
１Ｅ１（Ｇ４）の抗腫瘍活性をヒト化マウスＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍モデルにおいて試験した。このモデルにおいて、免疫不全ＮＳＧ（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに照射し、臍帯血から単離されたヒトＣＤ３４＋  造血幹細胞を注射した。数か月間の生着の後、マウスの血液中にヒト免疫細胞が検出されうる。ついでヒトメラノーマ由来ＳＫ−ＭＥＬ−５細胞系をマウスに皮下（ＳＣ）移植した。
【０３６０】
この研究では、３名の別々のドナーからのヒト臍帯血由来ＣＤ３４＋  細胞を３〜４週齢で移植したＮＳＧマウスに、約２０週齢で１×１０６個のＳＫ−ＭＥＬ−５細胞をＳＣ注射した。ＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍を担持するヒト化ＮＳＧマウスを、腫瘍接種の２１日後（Ｄ０腫瘍無作為化）に平均腫瘍サイズが約１００ｍｍ３になった際に、群当たりマウス６匹（処理群当たり各ヒトＣＤ３４＋  ドナーコホートからの３匹のマウス）で、２つの処理群に割り当てた。２０ｍｇ／ｋｇの１Ｅ１（Ｇ４）またはｈＩｇＧ４アイソタイプ対照ｍＡｂの合計４用量を、７日ごとに腫瘍担持マウスにＳＣ注射した。処理開始後７日ごとに腫瘍体積をモニターした。１Ｅ１（Ｇ４）処理群における抗腫瘍効果は、アイソタイプ対照群より有意に大きかった（第２８日〜第４９日まで、ｐ＜０．００１）（図１２Ａ）。１Ｅ１（Ｇ４）処理マウスにおけるエンドポイント腫瘍重量は、アイソタイプ処理マウスの場合より低かった（図１２Ｃ）。全体として、結果はヒト化マウスＳＫ−ＭＥＬ−５腫瘍モデルにおける２０ｍｇ／ｋｇの１Ｅ１（Ｇ４）の有意な抗腫瘍効果を示した。１Ｅ１（Ｇ４）処理による体重に対する影響（図１２Ｂ）および脾臓重量に対する影響（図１２Ｄ）は認められなかった。
【０３６１】
実施例５：ヒトＩＬＴ  ３Ａ９  Ｔ細胞トランスフェクタントへの１Ｅ１（Ｇ４）のＩＬＴ４ハプロタイプ結合
公的に入手可能なデータ源（１Ｋゲノム・プロジェクト・フェーズ３（Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｐｈａｓｅ  ３））からの一塩基多型データを用いて、アフリカ、欧州、アジアおよび南アジア集団に関するＩＬＴ４対立遺伝子頻度を決定した。いずれかの集団における５％以上の保有率で発現されたハプロタイプの配列（表７におけるハプロタイプ１、２、５、７、９および１０）を決定し、３Ａ９  Ｔ細胞において発現させた。１Ｅ１（Ｇ４）は、抗体の飽和用量を使用して試験した全てのハプロタイプに結合した（図１３）。ハプロタイプ２は、Ｕｎｉｐｒｏｔにおいて報告されているコンセンサス配列に対応した。ハプロタイプ５を機能的アッセイおよびリガンドに基づくアッセイにおいて使用した。ハプロタイプ結合データは、１Ｅ１（Ｇ４）が、試験した全ての対立遺伝子変異体に結合することを示している。
【表７】
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【０３６２】
実施例６：ＴＣＧＡおよびＢｌｕｅｐｒｉｎｔデータベースに基づく腫瘍型および細胞型におけるＩＬＴ４のＲＮＡ発現
Ｏｍｉｃｓｏｆｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）により、公的に入手可能なＲＮＡｓｅｑデータセットを使用して、腫瘍型および細胞集団にわたるＩＬＴ４の発現を決定した。ＴＣＧＡデータセット（ＴＣＧＡ Ｂ３８ ２０１７１００２ ｖ４，ｈｔｔｐｓ：／／ｇｄｃ−ｐｏｒｔａｌ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）は、ＲＮＡ−Ｓｅｑデータを含む１１，２９２個のサンプルから構成される。Ｂｌｕｅｐｒｉｎｔデータセット（Ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ Ｂ３８ ２０１７０２１６ ｖ２，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｌｕｅｐｒｉｎｔ−ｅｐｉｇｅｎｏｍｅ．ｅｕ／）は、ＲＮＡ−Ｓｅｑデータを含む５５個の細胞型からの２５８個の正常血液サンプルから構成される。ＲＮＡレベルでＩＬＴ４の最高発現を示す腫瘍型はＬＡＭＬ（すなわち、ＡＭＬ）、ＤＬＢＣ（すなわち、ＤＬＢＣＬ）、ＴＧＣＴ、ＭＥＳＯ、ＫＩＲＣを含む（図１４Ａ）。ＲＮＡレベルでＩＬＴ４の最高発現を示す細胞型は好中球、単球、破骨細胞、好酸球、マクロファージおよび樹状細胞を含む（図１４Ｂ）。このデータセットにおいては、リンパ球は、低いＩＬＴ４発現を示し、またはＩＬＴ４発現を全く示さなかった。１のＦＰＫＭ（または０のＬＯＧ２（ＦＰＫＭ＋０．１））は最も広く受け入れられている発見的（ヒューリスティック）固定閾値であるが、より低いＦＰＫＭ値はサンプルにおける「低発現」遺伝子を報告しうる。
【０３６３】
実施例７：腫瘍組織培養サンプル由来の骨髄細胞への１Ｅ１（Ｇ４）の結合
組織培養を新鮮なヒト腫瘍サンプル（外科切除物）から調製し、２０μｇ／ｍＬの抗ＲＳＶ  ＩｇＧ４（アイソタイプ対照）または１Ｅ１（Ｇ４）で３７℃で１８〜２４時間処理した。処理後、腫瘍薄片を単細胞浮遊液へと消化し、ＦＡＣＳのために染色した。ドットプロットおよび等高線プロットはＲＣＣ（図１５Ａ）またはＣＲＣ（図１５Ｂ）腫瘍組織培養単細胞浮遊液からのＦＡＣＳデータを表す。骨髄細胞全体は、ＣＤ６６ｂおよび／またはＣＤ１４の発現に基づいて４つのサブセットに細分されうる。これらの４つの骨髄系サブセットを、非競合的な市販の抗ＩＬＴ４−ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，カタログ番号３３８７０６，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用してＩＬＴ４発現に関して、そして抗ＩｇＧ４二次抗体を使用して細胞表面結合１Ｅ１（Ｇ４）に関して同時に分析した。１Ｅ１（Ｇ４）処理組織培養においては、ＩＬＴ４＋  細胞と１Ｅ１（Ｇ４）＋  細胞との間に良好な相関関係が認められた。これらのサンプルにおいては、腫瘍浸潤リンパ球はＩＬＴ４−かつ１Ｅ１（Ｇ４）−であることが観察された。
【０３６４】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態により範囲において限定されるものではない。実際、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載されている実施形態、および本明細書に具体的には記載されていない他の実施形態を含む。本明細書に具体的に記載されている実施形態は必ずしも網羅的であるとは意図されない。本明細書に記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明から当業者に明らかとなるであろう。そのような修飾は特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
【０３６５】
特許、特許出願、刊行物、製品説明およびプロトコルが本出願の全体にわたって引用されており、それらの開示の全体をあらゆる目的のために参照により本明細書に組み入れることとする。
【０３６６】
配列表
本明細書は配列表のコンピューター可読形態（ＣＲＦ）コピーと共に出願されている。２０１８年３月２２日付けで作成され１２８，０４２バイトのサイズを有する２４４４３ ＰＣＴ ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔなる名称のＣＲＦの全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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