【手続補正書】
【提出日】平成29年5月22日(2017.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マクロファージのサブタイプＭ１とＭ２とを識別する方法であって、有機化合物を付与して得られた分光特性から前記Ｍ１と前記Ｍ２とを識別する方法。
【請求項２】
前記有機化合物が、分子量２０００以下の色素化合物である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記有機化合物が、下記一般式（１）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【化１】
2015006173.tif 000001
（一般式（１）中、Ｒ１は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、またはアリール基を表し、Ｒ２〜Ｒ５は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボキシル基、カルボキシルアルキル基、または、アルキルカルボニル基を表し、Ｒ２とＲ４が互いに結合して脂肪族環を形成しても良い。Ｒ６は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ７〜Ｒ８は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ９は、ジシアノメチレン基、シアノカルボキシメチレン基、または下記一般式（２）〜（４）を表し、Ｙ１は、アリール基置換炭素原子、シクロペンテン環、シクロヘキセン環、または炭素原子を表し、ｎは０または１を表す。）
【化２】
2015006173.tif 000002
（一般式（２）中、Ｒ１０は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１１は、硫黄原子、２−チオキソチアゾリジン−４−オン基、チアゾリン−２，４−ジオン基、または一般式（５）を表す。「＊」は連結部を表す。）
【化３】
2015006173.tif 000003
（一般式（５）中、Ｒ１２は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１３〜Ｒ１４は、水素原子を表し、Ｒ１３とＲ１４が互いに結合してベンゼン環を形成しても良い。Ｑ１は、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）−を表し、Ｒ１５〜Ｒ１６は、各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ１５とＲ１６は互いに結合して、環を形成しても良く、Ｘ１−は、陰イオン性基を表す。「＊」は連結部を表す。一般式（３）中、Ｒ１７は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１８〜Ｒ１９は、水素原子を表し、Ｒ１８とＲ１９が互いに結合してベンゼン環を形成しても良い。Ｑ２は、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）−を表し、Ｒ２０〜Ｒ２１は、各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ２０とＲ２１は互いに結合して、環を形成しても良く、Ｘ２−は、陰イオン性基を表す。「＊」は連結部を表す。一般式（４）中、Ｒ２２は、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ２３は、アルキル基、またはカルボキシル基を表す。
「＊」は連結部を表す。）
【請求項４】
前記一般式（１）で表わされるＲ２とＲ４が互いに結合して結合される環が、シクロペンタン環である請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（２）で表わされる化合物である請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（３）で表わされる化合物である請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（４）で表わされる化合物である請求項３または４に記載の方法。
【請求項８】
前記有機化合物が、下記一般式（６）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【化４】
2015006173.tif 000004
（一般式（６）中、Ｒ２４〜Ｒ２５は、各々独立して、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ２６〜Ｒ３３は、各々独立して、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン原子、アルコキシスルホニル基、Ｎ−アルキルスルファモイル基、アルキルオキシカルボニル基、カルバモイル基、またはＮ−アルキルカルバモイル基を表し、Ｒ２６とＲ２７、Ｒ２８とＲ２９、Ｒ３０とＲ３１及びＲ３２とＲ３３はそれぞれ独立に環化してベンゼン環を形成しても良く、Ｘ１−は陰イオン性基を表し、Ｙ２は＊１，＊２，＊５を含む基で、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ３４）（Ｒ３５）−を含むか、あるいは、＊１，＊２，＊５を含んで、＊１−Ｃ＊５−ＣＨ＝ＣＨ−＊２、または、＊１−ＣＨ＝ＣＨ−＊５−＊２を表し、Ｙ３は＊３，＊４，＊６を含む基で、−酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ３４）（Ｒ３５）−を含むか、あるいは、＊３，＊４，＊６を含んで、＊３−Ｙ３−＊６−＊４、＊３−Ｃ＊６−ＣＨ＝ＣＨ−＊４、または、＊３−ＣＨ＝ＣＨ−＊６−＊４を表し、
ただし、Ｒ３４〜Ｒ３５は各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ３４とＲ３５は互いに結合して、環を形成してもよく、
Ａは、３−オキソシクロブテノレート環、一般式（７）または、（８）で示される。）
【化５】
2015006173.tif 000005
【化６】
2015006173.tif 000006
（一般式（７）中、Ｒ３６〜Ｒ３８は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、ｎは０〜２の数字を表し、
一般式（８）中、Ｒ３９は、水素原子、フェニル基、チオール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、またはハロゲン原子を表し、
Ｒ４０〜Ｒ４１は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアルキルオキシカルボニル基を表す。）
【請求項９】
前記一般式（６）で表わされる化合物が、一般式（９）である請求項８に記載の方法。
【化７】
2015006173.tif 000007
（一般式（９）中、Ｒ４２〜Ｒ４３は、各々独立して、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルキルカルボニルオキシアルキル基、またはアルコキシカルボニルアルキル基を表し、Ｒ４４〜Ｒ５１は、各々独立して、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン原子、アルコキシスルホニル基、Ｎ−アルキルスルファモイル基、アルキルオキシカルボニル基、またはＮ−アルキルカルバモイル基を表す。Ｒ４４とＲ４５、Ｒ４６とＲ４７、Ｒ４８とＲ４９及びＲ５０とＲ５１はそれぞれ独立に環化してベンゼン環を形成しても良く、
Ｒ５２〜Ｒ５４は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、ｍは０〜２の数字を表す。Ｘ２−は陰イオン性基を表し、
Ｙ４、Ｙ５は酸素原子、硫黄原子、またはアルキレン基を表し、アルキレン基は置換基を有してよく、その場合の置換基はアルキル基であり、置換基どうしが結合して、脂肪族環を形成してもよい。）
【請求項１０】
前記一般式（６）中、Ａが３−オキソシクロブテノレート環である請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記有機化合物が、下記一般式（１０）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【化８】
2015006173.tif 000008
（一般式（１０）中、Ｒ５５、Ｒ５６は、各々独立してアルキル基を表し、Ｒ５７、Ｒ５８は、各々独立して水素原子、またはアルキル基を表し、Ｒ５５とＲ５７、Ｒ５６とＲ５８は、各々独立してお互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ５９は、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、Ｘ５は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＲ６−を表し、Ｙ６は炭素原子、または窒素原子を表す。） 
【請求項１２】
前記有機化合物が、下記一般式（１１）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【化９】
2015006173.tif 000009
（一般式（１１）中、Ｒ６０は水素原子、アルキル基、アリール基、チオアルキル基、アミノ基、ヘテロ環基、アルケニル基、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、またはアルコキシ基を表し、Ｒ６１〜Ｒ６６は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、アラルキル基、またはスルホニル基を表し、Ｒ６２とＲ６３、Ｒ６５とＲ６６が互いに結合してヘテロ環を形成しても良く、Ｒ６７〜Ｒ６８は各々独立してフッ素原子、またはアルキニル基を表す。）
【請求項１３】
Ｍ１マクロファージの染色性がＭ２マクロファージと異なることを利用して、生物試料中のＭ１マクロファージを識別する請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
Ｍ１マクロファージの染色性がＭ２マクロファージと異なることを利用して、生物試料中のＭ２マクロファージを識別する請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
Ｍ１マクロファージの染色性がＭ２マクロファージと異なることを利用して、生物試料中のＭ１マクロファージとＭ２マクロファージをそれぞれ識別する請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
マクロファージのサブタイプＭ１とＭ２とを識別するためのマクロファージ識別剤であって、有機化合物を１種類以上含み、付与したときに得られる分光特性が前記Ｍ１と前記Ｍ２で異なることを特徴とするマクロファージ識別剤。
【請求項１７】
前記有機化合物が、分子量２０００以下の有機化合物である請求項１６に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項１８】
前記有機化合物が、下記一般式（１）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項１７に記載のマクロファージ識別剤。
【化１０】
2015006173.tif 000010
（一般式（１）中、Ｒ１は水素原子、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、またはアリール基を表し、Ｒ２〜Ｒ５は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、カルボキシル基、カルボキシルアルキル基、または、アルキルカルボニル基を表し、Ｒ２とＲ４が互いに結合して脂肪族環を形成しても良い。Ｒ６は水素原子、アルキル基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、Ｒ７〜Ｒ８は各々独立して水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ９は、ジシアノメチレン基、シアノカルボキシメチレン基、または下記一般式（２）〜（４）を表し、Ｙ１は、アリール基置換炭素原子、シクロペンテン環、シクロヘキセン環、または炭素原子を表し、ｎは０または１を表す。）
【化１１】
2015006173.tif 000011
（一般式（２）中、Ｒ１０は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１１は、硫黄原子、２−チオキソチアゾリジン−４−オン基、チアゾリン−２，４−ジオン基、または一般式（５）を表す。「＊」は連結部を表す。）
【化１２】
2015006173.tif 000012
（一般式（５）中、Ｒ１２は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１３〜Ｒ１４は、水素原子を表し、Ｒ１３とＲ１４が互いに結合してベンゼン環を形成しても良い。Ｑ１は、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）−を表し、Ｒ１５〜Ｒ１６は、各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ１５とＲ１６は互いに結合して、環を形成しても良く、Ｘ１−は、陰イオン性基を表す。「＊」は連結部を表す。一般式（３）中、Ｒ１７は、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ１８〜Ｒ１９は、水素原子を表し、Ｒ１８とＲ１９が互いに結合してベンゼン環を形成しても良い。Ｑ２は、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）−を表し、Ｒ２０〜Ｒ２１は、各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ２０とＲ２１は互いに結合して、環を形成しても良く、Ｘ２−は、陰イオン性基を表す。「＊」は連結部を表す。一般式（４）中、Ｒ２２は、アルキル基、またはアリール基を表し、Ｒ２３は、アルキル基、またはカルボキシル基を表す。「＊」は連結部を表す。）
【請求項１９】
前記一般式（１）で表わされるＲ２とＲ４が互いに結合して結合される環が、シクロペンタン環である請求項１８に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項２０】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（２）で表わされる化合物である事を特徴とする請求項１８または１９に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項２１】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（３）で表わされる化合物である事を特徴とする請求項１８または１９に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項２２】
前記一般式（１）で表わされる化合物のＲ９が、前記一般式（４）で表わされる化合物である事を特徴とする請求項１８または１９に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項２３】
前記有機化合物が、下記一般式（６）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項１７に記載のマクロファージ識別剤。
【化１３】
2015006173.tif 000013
（一般式（６）中、Ｒ２４〜Ｒ２５は、各々独立して、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルコキシカルボニルアルキル基、またはアルキルカルボニルオキシアルキル基を表し、Ｒ２６〜Ｒ３３は、各々独立して、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン原子、アルコキシスルホニル基、Ｎ−アルキルスルファモイル基、アルキルオキシカルボニル基、カルバモイル基、またはＮ−アルキルカルバモイル基を表し、Ｒ２６とＲ２７、Ｒ２８とＲ２９、Ｒ３０とＲ３１及びＲ３２とＲ３３はそれぞれ独立に環化してベンゼン環を形成しても良く、Ｘ１−は陰イオン性基を表し、Ｙ２は＊１，＊２，＊５を含む基で、酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ３４）（Ｒ３５）−を含むか、あるいは、＊１，＊２，＊５を含んで、＊１−Ｃ＊５−ＣＨ＝ＣＨ−＊２、または、＊１−ＣＨ＝ＣＨ−＊５−＊２を表し、Ｙ３は＊３，＊４，＊６を含む基で、−酸素原子、硫黄原子、Ｎ−アルキル窒素原子、または、−Ｃ（Ｒ３４）（Ｒ３５）−を含むか、あるいは、＊３，＊４，＊６を含んで、＊３−Ｙ３−＊６−＊４、＊３−Ｃ＊６−ＣＨ＝ＣＨ−＊４、または、＊３−ＣＨ＝ＣＨ−＊６−＊４を表し、
ただし、Ｒ３４〜Ｒ３５は各々独立して、アルキル基を表し、Ｒ３４とＲ３５は互いに結合して、環を形成してもよく、
Ａは、３−オキソシクロブテノレート環、一般式（７）または、（８）で示される。）
【化１４】
2015006173.tif 000014
【化１５】
2015006173.tif 000015
（一般式（７）中、Ｒ３６〜Ｒ３８は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、ｎは０〜２の数字を表し、
一般式（８）中、Ｒ３９は、水素原子、フェニル基、チオール基、アルコキシ基、アリールオキシ基、またはハロゲン原子を表し、
Ｒ４０〜Ｒ４１は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアルキルオキシカルボニル基を表す。）
【請求項２４】
前記有機化合物が、下記一般式（９）で示される化合物である請求項２３に記載のマクロファージ識別剤。
【化１６】
2015006173.tif 000016
（一般式（９）中、Ｒ４２〜Ｒ４３は、各々独立して、アルキル基、カルボキシルアルキル基、アルキルカルボニルオキシアルキル基、またはアルコキシカルボニルアルキル基を表し、Ｒ４４〜Ｒ５１は、各々独立して、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン原子、アルコキシスルホニル基、Ｎ−アルキルスルファモイル基、アルキルオキシカルボニル基、またはＮ−アルキルカルバモイル基を表す。Ｒ４４とＲ４５、Ｒ４６とＲ４７、Ｒ４８とＲ４９及びＲ５０とＲ５１はそれぞれ独立に環化してベンゼン環を形成しても良く、
Ｒ５２〜Ｒ５４は、各々独立して、水素原子、アルキル基、またはアリール基を表し、ｍは０〜２の数字を表す。Ｘ２−は陰イオン性基を表し、
Ｙ４、Ｙ５は酸素原子、硫黄原子、またはアルキレン基を表し、アルキレン基は置換基を有してよく、その場合の置換基はアルキル基であり、置換基どうしが結合して、脂肪族環を形成してもよい。）
【請求項２５】
前記一般式（６）中、Ａが３−オキソシクロブテノレート環である請求項２３に記載のマクロファージ識別剤。
【請求項２６】
前記有機化合物が、下記一般式（１０）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項１７に記載のマクロファージ識別剤。
【化１７】
2015006173.tif 000017
（一般式（１０）中、Ｒ５５、Ｒ５６は、各々独立してアルキル基を表し、Ｒ５７、Ｒ５８は、各々独立して水素原子、またはアルキル基を表し、Ｒ５５とＲ５７、Ｒ５６とＲ５８は、各々独立してお互いに結合して環を形成しても良く、Ｒ５９は、水素原子、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、またはハロゲン原子を表し、Ｘ５は、硫黄原子、酸素原子、または−ＮＲ６−を表し、Ｙ６は炭素原子、または窒素原子を表す。） 
【請求項２７】
前記有機化合物が、下記一般式（１１）で表わされる化合物を１種類以上含むことを特徴とする請求項１７に記載のマクロファージ識別剤。
【化１８】
2015006173.tif 000018
（一般式（１１）中、Ｒ６０は水素原子、アルキル基、アリール基、チオアルキル基、アミノ基、ヘテロ環基、アルケニル基、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、またはアルコキシ基を表し、Ｒ６１〜Ｒ６６は各々独立して水素原子、アルキル基、アリール基、ヘテロ環基、アラルキル基、またはスルホニル基を表し、Ｒ６２とＲ６３、Ｒ６５とＲ６６が互いに結合してヘテロ環を形成しても良く、Ｒ６７〜Ｒ６８は各々独立してフッ素原子、またはアルキニル基を表す。）
【請求項２８】
生物試料に前記有機化合物を暴露することを特徴とする請求項１から１５のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
請求項１から１５のいずれか１項に記載の識別方法に基づいて識別した、マクロファージのサブタイプを分取する方法。
【請求項３０】
請求項１から１５のいずれか１項に記載の識別方法に基づいて識別した、マクロファージのサブタイプの種類や数や割合や光学特性を検出する工程を少なくとも含むことを特徴とするマクロファージのサブタイプの評価方法。
【請求項３１】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤と被験物質を生物試料の一部または全部に作用させる工程を含むことを特徴とする、マクロファージのサブタイプの評価方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載のマクロファージのサブタイプの評価方法に基づいて、マクロファージのサブタイプと被験物質との相関を分析する分析方法。
【請求項３３】
請求項３０に記載のマクロファージのサブタイプの評価方法に基づいて、マクロファージのサブタイプと被験物質との相関を分析する分析方法であって、前記被験物質に由来する光学特性を検出する工程を含むことを特徴とする分析方法。
【請求項３４】
請求項３２または３３に記載の分析方法を用いて、マクロファージのサブタイプと被験物質との相関を調べるスクリーニング方法。
【請求項３５】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を少なくとも含むことを特徴とする、マクロファージのサブタイプの識別用キット。
【請求項３６】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を２種類以上用いることを特徴とする、マクロファージの分取方法。
【請求項３７】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を２種類以上用いることを特徴とする、マクロファージの評価方法。
【請求項３８】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を２種類以上用いることを特徴とする、マクロファージの分析方法。
【請求項３９】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を２種類以上用いることを特徴とする、マクロファージのスクリーニング方法。
【請求項４０】
請求項１６から２７のいずれか１項に記載のマクロファージ識別剤を２種類以上含むことを特徴とする、マクロファージのサブタイプの識別用キット。