【手続補正書】
【提出日】平成29年10月17日(2017.10.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を生産する方法であって、
小胞体にターゲッティングされたアルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを発現するように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞を提供する工程；および
前記細胞にターゲットタンパク質をコードする核酸を導入する工程であって、前記細胞が改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を生産する、工程
を含む、方法。
【請求項２】
前記細胞が外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠失を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態を有する前記ターゲットタンパク質のＮ―グリカン構造のうちの少なくとも９０％がＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＭＮＳ１であるか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＭＮＳ１ポリペプチドもしくはＲ２７３Ｌ、Ｒ２６９ＳおよびＳ２７２Ｇからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＭＮＳ１ポリペプチドであるか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ  アルファ−１，２−マンノシダーゼである、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドが、ＨＤＥＬ小胞体貯留ペプチドに融合された前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを含むか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドが、アルファ−１，２−マンノシダーゼおよびＨＤＥＬ小胞体貯留ペプチドを含む融合タンパク質である、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を単離する工程をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ターゲットタンパク質が外因性タンパク質であるか；あるいは
前記ターゲットタンパク質が内因性タンパク質であるか；あるいは
前記ターゲットタンパク質が哺乳動物タンパク質であるか；あるいは
前記ターゲットタンパク質がヒトタンパク質であるか；あるいは
前記ターゲットタンパク質が病原体タンパク質、リソソームタンパク質、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または融合タンパク質であるか；あるいは
前記ターゲットタンパク質が融合タンパク質であり、前記融合タンパク質が病原体タンパク質、リソソームタンパク質、成長因子、サイトカインまたはケモカインと抗体またはその抗原結合フラグメントの融合体である、
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ターゲットタンパク質がリソソーム貯蔵障害（ＬＳＤ）に関連したタンパク質であるか；または
前記ターゲットタンパク質がグルコセレブロシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼもしくはガラクトセレブロシダーゼであるか；または
前記ターゲットタンパク質がアルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、ベータ−ヘキソサミニダーゼ、ベータ−Ｄ−マンノシダーゼ、アルファ−Ｌ−フコシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、アリールスルファターゼＡ、アルファ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、アスパルチルグルコサミニダーゼ、イズロネート−２−スルファターゼ、アルファ−グルコサミニド−Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ、ベータ−Ｄ−グルコロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、アルファ−Ｌ−マンノシダーゼ、アルファ−ノイラミニダーゼ、ホスホトランスフェラーゼ、酸性リパーゼ、酸性セラミダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、チオエステラーゼ、カテプシンＫ、およびリポタンパク質リパーゼからなる群から選択される、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
その改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質の追加のプロセッシングをさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記追加のプロセッシングがインビトロで行われるか；または
前記追加のプロセッシングがインビボで行われるか；または
前記追加のプロセッシングが修飾糖タンパク質への異種部分の付加を含むか；または
前記追加のプロセッシングが修飾糖タンパク質への異種部分の付加を含み、前記異種部分がポリマーまたは担体であるか；または
前記追加のプロセッシングが前記改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質の酵素的または化学的処理を含むか；または
前記追加のプロセッシングがマンノシダーゼ、マンナナーゼ、ホスホジエステラーゼ、グルコシダーゼもしくはグリコシルトランスフェラーゼでの前記改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質の処理を含むか；または
前記追加のプロセッシングがフッ化水素酸での前記改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質の処理を含むか；または
前記追加のプロセッシングが前記改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質のリン酸化を含む、
請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
小胞体にターゲッティングされたアルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを発現するように遺伝子操作された、単離されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞。
【請求項１２】
前記細胞が外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠失を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項１１に記載の単離された細胞。
【請求項１３】
前記細胞がターゲットタンパク質をコードする核酸をさらに含み、その結果前記細胞が改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を生産する、請求項１１または１２に記載の単離された細胞。
【請求項１４】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態を有する前記ターゲットタンパク質のＮ―グリカン構造のうちの少なくとも９０％がＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２である、請求項１３に記載の単離された細胞。
【請求項１５】
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＭＮＳ１であるか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＭＮＳ１ポリペプチドもしくはＲ２７３Ｌ、Ｒ２６９ＳおよびＳ２７２Ｇからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＭＮＳ１ポリペプチドであるか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼがＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ  アルファ−１，２−マンノシダーゼである、
請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の単離された細胞。
【請求項１６】
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドが、ＨＤＥＬ小胞体貯留ペプチドに融合された前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを含むか；または
前記アルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドが、アルファ−１，２−マンノシダーゼおよびＨＤＥＬ小胞体貯留ペプチドを含む融合タンパク質である、
請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の単離された細胞。
【請求項１７】
改変Ｎ−グリコシル化形態のターゲットタンパク質を生産する方法であって、
ターゲットタンパク質を、小胞体にターゲッティングされたアルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを発現するように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞から調製された細胞溶解産物と接触させる工程であって、前記細胞溶解産物と前記ターゲットタンパク質の接触が結果として、改変されたＮ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を生じさせる、工程
ターゲットタンパク質をＮ−グリコシル化活性を有する１つ以上のタンパク質と接触させる工程であって、Ｎ−グリコシル化活性を有する前記１つ以上のタンパク質は、小胞体にターゲッティングされたアルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを発現するように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞から得られ、Ｎ−グリコシル化活性を有する前記１つ以上のタンパク質と前記ターゲットタンパク質の接触が結果として、改変されたＮ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を生じさせる、工程
を含む、方法。
【請求項１８】
前記細胞が外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠失を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態を有する前記ターゲットタンパク質のＮ―グリカン構造のうちの少なくとも９０％がＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２である、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
小胞体にターゲッティングされたアルファ−１，２−マンノシダーゼポリペプチドを発現するように遺伝子操作されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓ細胞の培養物。
【請求項２１】
前記細胞が外鎖伸長部（ＯＣＨ１）活性の欠失を含むようにさらに遺伝子操作される、請求項２０に記載の培養物。
【請求項２２】
前記細胞がターゲットタンパク質をコードする核酸をさらに含み、その結果前記細胞が改変Ｎ−グリコシル化形態の前記ターゲットタンパク質を生産する、請求項２０または２１に記載の培養物。
【請求項２３】
前記改変Ｎ−グリコシル化形態を有する前記ターゲットタンパク質のＮ―グリカン構造のうちの少なくとも９０％がＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２である、請求項２２に記載の培養物。