【手続補正書】
【提出日】平成29年1月26日(2017.1.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド１４３１からヌクレオチド１４６２までのヌクレオチド配列またはその相補体を含み、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド３０１からヌクレオチド３２２までのヌクレオチド配列またはその相補体を含む、核酸分子の対。
【請求項２】
第１の核酸分子が配列番号３のヌクレオチド２２０からヌクレオチド２６１までのヌクレオチド配列またはその相補体を含み、第２の核酸分子が配列番号１５のヌクレオチド４９７からヌクレオチド５１８までのヌクレオチド配列またはその相補体を含む、核酸分子の対。
【請求項３】
第１の核酸分子が配列番号２のヌクレオチド配列またはその相補体を含み、第２の核酸分子が配列番号１４のヌクレオチド配列またはその相補体を含む、請求項１に記載の核酸分子の対。
【請求項４】
第１の核酸分子が配列番号３のヌクレオチド配列またはその相補体を含み、第２の核酸分子が配列番号１５のヌクレオチド配列またはその相補体を含む、請求項２に記載の核酸分子の対。
【請求項５】
第１の核酸分子が、配列番号２０のヌクレオチド配列または配列番号２０と少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列を含み、該第１の核酸分子はＨＰＰＤ阻害剤除草剤および／またはグリホセートに対する耐性をもたらす、ならびに
第２の核酸分子が、以下のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列、
ｃ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列、および
ｄ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列
を順次含むか、または前記配列ａ）〜ｄ）と少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列を含み、グルホシネートに対する耐性をもたらす、
核酸分子の対。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸分子の対を含む、ダイズゲノムＤＮＡ。
【請求項７】
ダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫であって、それぞれがＨＰＰＤ阻害剤除草剤及び／又はグルホシネート及び／又はグリホセートに対して耐性であり、それぞれが以下のヌクレオチド配列：
・配列番号２のヌクレオチド１４３１からヌクレオチド１４６２までのヌクレオチド配列、
・配列番号３のヌクレオチド２２０から２６１までのヌクレオチド配列、
・配列番号１４のヌクレオチド３０１からヌクレオチド３２２のヌクレオチド配列、および
・配列番号１５のヌクレオチド４９７から５１８のヌクレオチド配列
をそのゲノム中に含む、前記ダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫。
【請求項８】
配列番号２、３、１４および１５の配列を含む、請求項７記載のダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫。
【請求項９】
請求項７記載のダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫であって、
配列番号２０のヌクレオチド配列、ならびに
順次以下のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列、
ｃ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列、および
ｄ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列
を含む、前記ダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫。
【請求項１０】
ダイズ植物、細胞、部分、又は種子であって、それぞれがＨＰＰＤ阻害剤除草剤及び／又はグルホシネート及び／又はグリホセートに対して耐性であり、そしてそれぞれが優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２をそのゲノム中に含み、
ここで前記優良イベントＥＥ−ＧＭ３は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラＨＰＰＤ  ＰｆＷ３３６コード遺伝子及びキメラ２ｍＥＰＳＰＳコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座であり、
前記優良イベントＥＥ−ＧＭ２は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座である、
前記ダイズ植物、細胞、部分、又は種子。
【請求項１１】
請求項１０記載のダイズ植物、細胞、部分、又は種子の子孫植物、細胞、部分、又は種子であって、
それぞれがＨＰＰＤ阻害剤除草剤及び／又はグルホシネート及び／又はグリホセートに対して耐性であり、
配列番号２のヌクレオチド１４３１からヌクレオチド１４６２までのヌクレオチド配列、配列番号３のヌクレオチド２２０から２６１までのヌクレオチド配列、配列番号１４のヌクレオチド３０１からヌクレオチド３２２のヌクレオチド配列、および配列番号１５のヌクレオチド４９７から５１８のヌクレオチド配列を含む、
前記子孫植物、細胞、部分、又は種子。
【請求項１２】
請求項１０記載のダイズ植物、細胞、部分、又は種子であって、
そのゲノムＤＮＡが、それぞれ配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーによるＰＣＲを使用して分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、かつ
そのゲノムＤＮＡが、それぞれ配列番号１８及び配列番号１９のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーによるＰＣＲを使用して分析した場合に、約１５１ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、前記ダイズ植物、細胞、部分、又は種子。
【請求項１３】
請求項７〜１２のいずれか一項に記載のダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫から製造される、ダイズ製品。
【請求項１４】
ダイズ穀粉、粉砕種子、ダイズ粉末、若しくはダイズフレークであるか、又はそれを含む、請求項１３記載のダイズ製品。
【請求項１５】
イベントＥＥ−ＧＭ３に対して診断的又は特異的であるアンプリコンを生成する核酸及びイベントＥＥ−ＧＭ２に対して診断的又は特異的であるアンプリコンを生成する核酸を含む、請求項１３又は１４記載のダイズ製品。
【請求項１６】
請求項７〜１２のいずれか一項記載のダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫を得ること、及びそれからダイズ製品を製造することを含む、ダイズ製品を製造する方法。
【請求項１７】
前記ダイズ製品が、ダイズ穀粉、粉砕種子、ダイズ粉末、若しくはダイズフレークであるか、又はそれを含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記ダイズ製品が、イベントＥＥ−ＧＭ３に対して診断的又は特異的であるアンプリコンを生成する核酸及びイベントＥＥ−ＧＭ２に対して診断的又は特異的であるアンプリコンを生成する核酸を含む、請求項１６又は１７記載の方法。
【請求項１９】
請求項７〜１２のいずれか一項記載のダイズ植物又は種子を植栽又は播種した圃場において雑草を抑制する方法であって、
該圃場を、有効量のＨＰＰＤ阻害剤除草剤系及び／又はグルホシネート系及び／又はグリホセート系の除草剤で処理することを含み、
前記植物又は種子は、前記ＨＰＰＤ阻害剤除草剤系、グルホシネート系及びグリホセート系の除草剤に耐性である、
前記方法。
【請求項２０】
発芽成長中の請求項７〜１２のいずれか一項記載のダイズ植物を雑草による競合から保護する方法であって、前記ダイズ植物を植栽すべき圃場を、前記ダイズ植物を植栽するか又は種子を播く前に、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤で処理し、続いて、予備処理された前記圃場に前記ダイズ植物を植栽するか又は種子を播くことを含む、前記方法。
【請求項２１】
雑草を抑制する方法であって、
請求項７〜１２のいずれか一項記載のダイズ種子を播種した圃場を、ダイズ植物が出芽する前であるが種子を播種した後に、有効量のＨＰＰＤ阻害剤除草剤で処理することを含み、
前記種子及び前記植物は、前記ＨＰＰＤ阻害剤除草剤に耐性である、
前記方法。
【請求項２２】
請求項７〜１２のいずれか一項記載のダイズ植物又は種子を植栽又は播種すべき圃場において雑草を抑制する方法であって、
前記植物又は種子を植栽又は播種すべき圃場を、有効量のＨＰＰＤ阻害剤除草剤及び／又はグリホセート及び／又はグルホシネートで処理し、続いて、前記圃場に前記植物又は種子を植栽又は播種することを含み、
前記植物又は種子は、前記ＨＰＰＤ阻害剤除草剤及びグリホセート及びグルホシネートに耐性である、
前記方法。
【請求項２３】
前記ＨＰＰＤ阻害剤除草剤がイソキサフルトールであり、ここで前記処理の後、グリホセート及び／又はグルホシネートあるいはＨＰＰＤ阻害剤とグリホセート及び／又はグルホシネートとの混合物を植物の上面から出芽後除草剤として適用する、請求項２０又は２２記載の方法。
【請求項２４】
グルホシネート、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤およびグリホセートに耐性であるダイズ植物を製造する方法であって、
（ｉ）優良イベントＥＥ−ＧＭ３を含むダイズ植物を優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物と交雑させることにより、グルホシネートに対して耐性である植物に、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤およびグリホセートに対する耐性を導入すること、
ここで優良イベントＥＥ−ＧＭ３は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラＨＰＰＤ  ＰｆＷ３３６コード遺伝子及びキメラ２ｍＥＰＳＰＳコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座であり、
優良イベントＥＥ−ＧＭ２は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座である、および
優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２を含む子孫を選択すること、または
（ｉｉ）ＨＰＰＤ阻害剤除草剤、グリホセートおよびグルホシネートに対する耐性を欠く異なる遺伝的背景を有するダイズ植物に、優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物を交雑させることにより、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤、グリホセートおよびグルホシネートに対する耐性を導入すること、
ここで優良イベントＥＥ−ＧＭ３は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラＨＰＰＤ  ＰｆＷ３３６コード遺伝子及びキメラ２ｍＥＰＳＰＳコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座であり、
優良イベントＥＥ−ＧＭ２は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているレファレンス種子中に見出される、キメラホスフィノスリシンアセチルトランスフェラーゼコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡ並びに前記外来性ＤＮＡに直接隣接する５’及び３’フランキング配列を含む遺伝子座である、および
優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２を含む子孫を選択すること
を含む、前記方法。
【請求項２５】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在又は非存在を検出する方法であって、
前記方法は、少なくとも２つの特異的プライマーを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、ここで該少なくとも２つの特異的プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内の配列を特異的に認識し、他方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ３の前記５’又は３’フランキング領域に隣接する外来性ＤＮＡ内の配列を特異的に認識する、及び
２つの特異的プライマーを用いたＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、ここで該２つの特異的プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ２中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内の配列を特異的に認識し、他方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ２の前記５’又は３’フランキング領域に隣接する外来性ＤＮＡ内の配列を特異的に認識する、
を含み、
ここでＥＥ−ＧＭ３の前記５’フランキング領域は、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の前記３’フランキング領域は、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むか、または前記５’もしくは３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２０のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１６６３８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記５’フランキング領域は、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記３’フランキング領域は、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むか、あるいは前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列および配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体を含む、
前記方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の方法であって、
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ここで前記プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’または３’フランキング領域を認識し、前記プライマーの他方のプライマーは、前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内の配列を認識する、および
少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ここで前記プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ２中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’または３’フランキング領域を認識し、前記プライマーの他方のプライマーは、前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内の配列を認識する、
を使用して、前記生物学的試料中に存在する核酸から５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅させることを含み、ここで前記第１および第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても同時であってもよい、前記方法。
【請求項２７】
請求項２６記載の方法であって、
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内の配列を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、または配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、または配列番号２０のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１６６３８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含み、
ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内の配列を認識する前記プライマーが、その最３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、または配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、または配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列および配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列もしくはそれらの相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、
前記方法。
【請求項２８】
前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーが、それぞれ配列番号５および配列番号４の配列、またはそれぞれ配列番号７および配列番号５の配列を含み、前記ＥＥ−ＧＭ２特異的プライマーが、それぞれ配列番号１８および配列番号１９の配列を含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
ＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２の特異的検出における使用に適する２つのプライマー対であって、
ＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２のそれぞれは、５’フランキング領域、外来性ＤＮＡおよび３’フランキング領域を含み、５’フランキング領域は外来性ＤＮＡの直近上流にありそれに隣接しており、３’フランキング領域は外来性ＤＮＡの直近下流にありそれに隣接しており、
第１のプライマー対の一方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ３中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’または３’フランキング領域内の配列を認識する配列を含み、第１のプライマー対の他方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ３中の前記５’または３’フランキング領域に隣接する外来性ＤＮＡ内の配列を認識する配列を含み、
第２のプライマー対の一方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ２中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’または３’フランキング領域内の配列を認識する配列を含み、第２のプライマー対の他方のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ２の前記５’または３’フランキング領域に隣接する外来性ＤＮＡ内の配列を認識する配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の前記５’フランキング領域は、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の前記３’フランキング領域は、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むか、または前記５’もしくは３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２０のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１６６３８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記５’フランキング領域は、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記３’フランキング領域は、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むか、あるいは前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列および配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体を含む、
前記プライマー対。
【請求項３０】
請求項２９記載のプライマー対であって、
前記第１のプライマー対の一方のプライマーが、その最３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列または配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
前記第１のプライマー対の他方のプライマーが、その最３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列または配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
前記第２のプライマー対の一方のプライマーが、その最３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列または配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
前記第２のプライマー対の他方のプライマーが、その最３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までのヌクレオチド配列の相補体または配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、
前記プライマー対。
【請求項３１】
請求項２９記載のプライマー対であって、
前記第１のプライマー対の一方が、その最３’末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列または配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、
前記第２のプライマー対の一方が、その最３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列または配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、
前記プライマー対。
【請求項３２】
ＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２特異的検出における使用に適するプライマーのセットであって、以下の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその最３’末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその最３’末端に含む第２のプライマー；
配列番号１８の配列をその最３’末端に含む第３のプライマー；および、
配列番号１９の配列をその最３’末端に含む第４のプライマー；
を含む、前記セット。
【請求項３３】
ダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫由来の生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別する方法であって、
生物学的試料の核酸を、ＥＥ−ＧＭ３の５’または３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの部分を含む領域に特異的にハイブリダイズするＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブとハイブリダイズさせること、および
生物学的試料の核酸を、ＥＥ−ＧＭ２の５’または３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの部分を含む領域に特異的にハイブリダイズするＥＥ−ＧＭ２に対する第２の特異的プローブとハイブリダイズさせることを含み、
前記第１の特異的プローブの配列は、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域または３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも９０％配列同一性を有し、
前記第２の特異的プローブの配列は、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域または３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも９０％配列同一性を有し、
ＥＥ−ＧＭ３の前記５’フランキング領域は、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の前記３’フランキング領域は、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むか、または前記５’もしくは３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２０のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１６６３８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記５’フランキング領域は、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記３’フランキング領域は、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むか、あるいは前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列および配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体を含む、
前記方法。
【請求項３４】
請求項３３記載の方法であって、
前記第１の特異的プローブの配列が、配列番号２のヌクレオチド１４３１から１４７２もしくは配列番号３のヌクレオチド２２０から２６１、またはその相補体と少なくとも９０％配列同一性を有し、
前記第２の特異的プローブの配列が、配列番号１４のヌクレオチド３０１から３２２もしくは配列番号１５のヌクレオチド４９７から５１８、またはその相補体と少なくとも９０％配列同一性を有する、
前記方法。
【請求項３５】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３および優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための一対の特異的プローブであって、
ＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２のそれぞれは、５’フランキング領域、外来性ＤＮＡおよび３’フランキング領域を含み、５’フランキング領域は外来性ＤＮＡの直近上流にありそれに隣接しており、３’フランキング領域は外来性ＤＮＡの直近下流にありそれに隣接しており、
ＥＥ−ＧＭ３中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域もしくは３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの部分を含む配列と少なくとも９０％配列同一性を有するヌクレオチド配列またはその相補体を含む第１のプローブ、ならびにＥＥ−ＧＭ２中の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域もしくは３’フランキング領域の部分およびそれに隣接する外来性ＤＮＡの部分を含む配列と少なくとも９０％配列同一性を有するヌクレオチド配列またはその相補体を含む第２のプローブを含み、例えば前記第１のプローブは、配列番号２のヌクレオチド１４４１から１４６２もしくは配列番号３のヌクレオチド２３０から２５１、またはその相補体と少なくとも９０％配列同一性を有し、前記第２の特異的プローブの配列は、配列番号１４のヌクレオチド３０１から３２２もしくは配列番号１５のヌクレオチド４９７から５１８、またはその相補体と少なくとも９０％配列同一性を有し、
ＥＥ−ＧＭ３の前記５’フランキング領域は、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ３の前記３’フランキング領域は、配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むか、または前記５’もしくは３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ３の前記外来性ＤＮＡは、配列番号２０のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１６６３８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記５’フランキング領域は、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含み、
ＥＥ−ＧＭ２の前記３’フランキング領域は、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、
前記５’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、かつ前記３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むか、あるいは前記５’または３’フランキング領域に隣接するＥＥ−ＧＭ２の前記外来性ＤＮＡは、配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列および配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７のヌクレオチド配列、またはそれらの相補体を含む、
前記一対の特異的プローブ。
【請求項３６】
ＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２を特異的に認識するプライマー対またはプローブを含むキットであって、
前記プライマー対は、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載のプライマー対であり、
前記プローブは、請求項３５に記載のプローブである、
前記キット。
【請求項３７】
請求項２５または３３記載の方法であって、
前記生物学的試料が種子試料であり、
種子の純度を確認するか、または優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２の存在または非存在に関して種子をスクリーニングするためであり、
前記種子試料における、特異的プライマー対またはプローブ対によるＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出を含む、
前記方法。
【請求項３８】
実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介してダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫由来の生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３およびＥＥ−ＧＭ２の存在を検出する方法であって、
標的核酸配列の再利用を介して該標的核酸配列の検出シグナルが増幅され、
下記工程：
ａ）前記標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、または配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）前記標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、または配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること、ここで前記第１および第２のオリゴヌクレオチドは少なくとも１つのヌクレオチドで重複しており、そしてここで前記第１または該第２のオリゴヌクレオチドのいずれかが標識されて前記標識された核酸プローブとなる；
ｃ）デュプレックス解離をもたらす選択的プローブ切断を起こす酵素により、プローブ:標的核酸配列デュプレックス内の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）から（ｃ）を反復することにより標的核酸配列を再利用すること；および
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、標的核酸配列の存在を決定すること；ならびに
ｆ）前記標的核酸配列を、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド３２９までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、または配列番号１５のヌクレオチド４９０からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）前記標的核酸配列を、配列番号１４のヌクレオチド２９４からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、または配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド５２５までのヌクレオチド配列もしくはその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること、ここで前記第３および第４のオリゴヌクレオチドは少なくとも１つのヌクレオチドで重複しており、そしてここで前記第３または該第４のオリゴヌクレオチドのいずれかが標識されて前記標識された核酸プローブとなる；
ｈ）デュプレックス解離をもたらす選択的プローブ切断を起こす酵素により、プローブ:標的核酸配列デュプレックス内の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）から（ｈ）を反復することにより標的核酸配列を再利用すること；および
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む、前記方法。