【手続補正書】
【提出日】平成29年2月17日(2017.2.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸を産生する方法であって、
齧歯動物のリンパ球、または該リンパ球から産生されたハイブリドーマ由来の該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする配列を含む核酸を獲得するステップであって、該齧歯動物は、生殖系列ゲノム中、
（ｉ）内在性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に、内在性重鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結される再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ヌクレオチド配列であって、該再構成された重鎖可変領域ヌクレオチド配列が、ＶＨ３−２３／Ｘ１Ｘ２／ＪＨの配列をコードし、ここで、Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ２が任意のアミノ酸である、配列、および
（ｉｉ）免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子セグメント（ＶＬ）、および少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖Ｊ遺伝子セグメント（ＪＬ）を含む免疫グロブリン軽鎖遺伝子座
を含む、ステップを含み、
ここで、該リンパ球が
（ａ）該内在性重鎖定常領域遺伝子配列に連結された、再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ＶＨ３−２３／Ｘ１Ｘ２／ＪＨ遺伝子由来、かつ
（ｂ）該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインと同起源
である免疫グロブリン重鎖可変ドメインを発現する、方法。
【請求項２】
前記核酸を獲得する前に、関心の抗原で前記齧歯動物に免疫付与し、該抗原に対する前記齧歯動物に免疫応答を開始させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記リンパ球が、前記関心の抗原に特異的に結合する抗原結合タンパク質を発現する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
増幅された再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列が、少なくとも１つの体細胞超変異を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｘ１がＧｌｙであり、Ｘ２がＴｙｒである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、およびそれらの多型変異体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子配列が、ＶＨ３−２３／ＧＹ／ＪＨ４−４（配列番号１３７）の配列をコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記重鎖定常領域遺伝子配列が、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
実質的に全ての内在性機能性ＶＨ、Ｄ、およびＪＨ遺伝子セグメントが、前記齧歯動物の前記免疫グロブリン重鎖遺伝子座から欠失させられるか、または非機能性にされる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記軽鎖定常領域遺伝子配列が、齧歯動物およびヒト定常領域遺伝子配列から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＶＬ遺伝子セグメント、および前記少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリンＪＬ遺伝子セグメントが、内在性遺伝子座において、齧歯動物免疫グロブリン定常領域遺伝子配列に作動可能に連結される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、野生型より少ない数のヒト免疫グロブリン軽鎖ＶＬおよびＪＬ遺伝子セグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記野生型よりも少ない数のヒト免疫グロブリン軽鎖ＶＬおよびＪＬ遺伝子セグメントが、内在性遺伝子座において、齧歯動物軽鎖定常領域核酸配列に作動可能に連結される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの前記ヒト軽鎖ＶＬまたはＪＬ遺伝子セグメントが、対応するヒト生殖系列軽鎖可変遺伝子セグメントによってはコードされない１つ以上のヒスチジンコドンをコードする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
付加または置換されたヒスチジンコドンが、ＣＤＲ３中に存在する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、２つの再構成されていないヒトＶκ遺伝子セグメント配列および１つ以上の再構成されていないＪκ遺伝子セグメント配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記２つの再構成されていないヒトＶκ遺伝子セグメントが、各々、１つ以上の非ヒスチジンコドンの、ヒスチジンコドンでの置換を含む、ヒトＶκ１−３９およびＶκ３−２０遺伝子セグメントである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ヒトＶκおよびＪκ遺伝子セグメントが、（ＩＭＧＴ付番方式にしたがう）１０５位、１０６位、１０７位、１０８位、１０９位、１１１位、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される位置にて１つ以上のヒスチジンを含む、ヒト軽鎖可変ドメインを再構成およびコードすることができ、該１つ以上のヒスチジンが、１つ以上の置換に由来する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リンパ球がＢ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記齧歯動物が、ハムスター、ラット、およびマウスからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記齧歯動物が、マウス、およびＡｄａｍ６ａ遺伝子、Ａｄａｍ６ｂ遺伝子、またはその両方を含むマウスである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記軽鎖定常領域遺伝子配列が、非ヒト動物定常領域遺伝子配列である、請求項１に記載の方法であって、該方法が、適切なヒト定常領域核酸配列をコードする配列を含むヌクレオチドと共にフレーム内で核酸をクローン化することをさらに含む、方法。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法にしたがい産生される核酸。
【請求項２４】
請求項２３に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２５】
前記宿主細胞が、ＣＨＯ細胞、ＣＨＯ  Ｋ１細胞、ＤＸＢ−１１  ＣＨＯ細胞、Ｖｅｇｇｉｅ−ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ−７細胞、網膜細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＣＶ１細胞、腎臓細胞、ＨＥＫ２９３細胞、２９３ＥＢＮＡ細胞、ＭＳＲ２９３細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＨａＫ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、ＷＩ３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ｃｏｌｏ２０５細胞、ＨＢ８０６５細胞、ＨＬ−６０細胞、ＢＨＫ２１細胞、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｄａｕｄｉ細胞、Ａ４３１表皮性細胞、ＣＶ−１細胞、Ｕ９３７細胞、３Ｔ３細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ−０細胞、ＭＭＴ０６０５６２細胞、Ｓｅｒｔｏｌｉ細胞、ＢＲＬ３Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、および腫瘍細胞から選択される、請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む細胞を獲得する方法であって、生殖系列ゲノム中、
（ｉ）内在性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に、内在性重鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結される再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ヌクレオチド配列であって、該再構成された重鎖可変領域ヌクレオチド配列が、ＶＨ３−２３／Ｘ１Ｘ２／ＪＨの配列をコードし、ここで、Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ２が任意のアミノ酸である、配列、および
（ｉｉ）免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖可変遺伝子セグメント（ＶＬ）、および少なくとも１つの再構成されていないヒト免疫グロブリン軽鎖Ｊ遺伝子セグメント（ＪＬ）を含む免疫グロブリン軽鎖遺伝子座
を含む齧歯動物からリンパ球を単離するステップを含み、
ここで、該リンパ球が
（ａ）該内在性重鎖定常領域遺伝子配列に連結された、再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ＶＨ３−２３／Ｘ１Ｘ２／ＪＨ遺伝子由来、かつ
（ｂ）該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインと同起源
である免疫グロブリン重鎖可変ドメインを発現する、方法。
【請求項２７】
前記単離されたリンパ球からハイブリドーマを産生することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２６〜２７のいずれか１項に記載の方法によって獲得された細胞。
【請求項２９】
請求項２６〜２７のいずれか１項に記載の方法にしたがい獲得された細胞、または請求項２４および２８のいずれか１項に記載の細胞を培養することを含む、ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを作製する方法。
【請求項３０】
前記細胞が、重鎖定常領域遺伝子配列に連結された、再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ＶＨ３−２３／Ｘ１Ｘ２／ＪＨ遺伝子由来の免疫グロブリン重鎖可変ドメインと同起源である、ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が、前記ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインと対を成すことができるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする第２の核酸をさらに含む、請求項２９に記載の方法。