(57)【要約】  本発明はヒト被験者における炎症性腸疾患の治療において使用するための、５'-ＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴＧＧＣ-３'（配列番号２）の配列を含むオリゴヌクレオチドを提供し、ここで前記オリゴヌクレオチドの１５０ｍｇ〜３５０ｍｇの個々の用量が少なくとも２つの別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れている。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験者における炎症性腸疾患の治療において使用するための、５’-ＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴＧＧＣ-３’（配列番号２）の配列を含むオリゴヌクレオチドであって、ここで前記オリゴヌクレオチドの１５０ｍｇ〜３５０ｍｇの個々の用量が少なくとも２回の別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れている、オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項１に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記潰瘍性大腸炎が活動性潰瘍性大腸炎である、請求項２に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記潰瘍性大腸炎が慢性の活動性潰瘍性大腸炎である、請求項２又は３に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
前記被験者が抗炎症療法に対して、難治性であるか、又は十分に応答しないか、又は不耐性である、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項６】
前記被験者が大腸切除術について選択できる、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項７】
少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドが骨格修飾を有する、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項９】
前記骨格修飾が、ホスホロチオエート又はホスホロジチオエート修飾により表されるリン酸骨格の修飾である、請求項８に記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
前記骨格修飾が、前記オリゴヌクレオチドの５’及び／又は３’端に位置する、請求項８と９の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドが、５’-ＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴＧＧＣ-３’（配列番号２）の配列を有し、ここでＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドが５’-Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊ＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ-３’（配列番号１）の配列を有し、ここでＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
前記オリゴヌクレオチドがコビトリモドである、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
前記オリゴヌクレオチドの２４０ｍｇ〜２６０ｍｇの個々の用量が投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
前記オリゴヌクレオチドの約２５０ｍｇの個々の用量が投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
前記オリゴヌクレオチドの個々の用量が、３週間離れている２回の別々の機会にのみ被験者に投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドの個々の用量が、該被験者が寛解するまで、３週間離れている２回以上の別々の機会に被験者に投与される、請求項１〜１５の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
前記被験者が、炎症性腸疾患、典型的には潰瘍性大腸炎の治療のための１つ以上の追加の治療剤の投与を受ける、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
前記オリゴヌクレオチドが粘膜に局所的に投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項２０】
前記オリゴヌクレオチドが直腸に投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項２１】
該オリゴヌクレオチドがコビトリモドであり、コビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は、３週間離れている２回の別々の機会にのみ該被験者に投与される、先行する請求項の何れかに記載の使用のためのオリゴヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１及び７〜１３の何れかにおいて規定されたオリゴヌクレオチドを、１つ以上の医薬的に許容可能な担体と共に含む、請求項１、５及び６の何れかにおいて規定されたヒト被験者において、請求項１〜４の何れかにおいて規定された炎症性腸疾患の治療において使用するための医薬組成物であって、ここで前記組成物の個々の投与は、少なくとも２回の別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記の別々の機会は３週間離れており、及びここで該組成物の各々の投与は、請求項１、１４及び１５の何れかにおいて規定された量のオリゴヌクレオチドを送達する、医薬組成物。
【請求項２３】
医薬的に許容可能な担体が水である、請求項２２に記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
該医薬組成物は実質的に前記オリゴヌクレオチドと水からなる、請求項２２と２３の何れかに記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
請求項１及び７〜１３の何れかにおいて規定されたオリゴヌクレオチド又は請求項２１〜２３の何れかにおいて規定された組成物を前記被験者に投与することを含む、請求項１、５及び６の何れかにおいて規定されたヒト被験者において、請求項１〜４の何れかにおいて規定された炎症性腸疾患を治療する方法であって、ここで前記オリゴヌクレオチド又は組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に患者に投与され、ここで前記の別々の機会は３週間離れており、ここで該オリゴヌクレオチド又は該組成物の各々の投与は請求項１、１４及び１５の何れかにおいて規定された量のオリゴヌクレオチドを送達する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症性腸疾患、例えば活動性潰瘍性大腸炎（active ulcerative colitis）（ＵＣ）を治療するための新たな療法に関連し、ここでオリゴヌクレオチド、特にコビトリモド（cobitolimod）が最適化された投与計画（dosage regime）に従って投与される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
潰瘍性大腸炎（ulcerative colitis）（ＵＣ）は直腸と結腸の粘膜の慢性的な炎症により特徴付けられる疾患であり、最初の段階で最も内側の内壁を冒す。この疾患は再発性であり、病理学、症状及び治療において異なる、活動性と非活動性の両方の段階を有する。ＵＣの発症の基となる原因は理解されておらず、何が引き金となってその疾患がその非活動型と活動型の間を繰り返すかも判っていない(Irvine, E. J. (2008) Inflamm Bowel Dis 14(4): 554-565)。活動性ＵＣの症状は、出血を伴う進行性の軟便と排便頻度の増加を含む。活動性の粘膜の炎症は内視鏡検査により診断される。
【０００３】
便は膿、粘液及び血液を含み、便意の切迫性を有する腹部の痙攣（渋り腹（tenesmi））をしばしば伴う。下痢は潜行して発症することもあり、又はより稀には非常に突然に開始することもある。重度の場合には症状は、発熱と全身倦怠感を含むことがある。重度の段階では、腹部圧痛、頻脈、発熱、及び腸穿孔の危険を伴う、腸壁の深部の炎症を発症することもある。さらにＵＣを有する患者は、例えば関節痛及び関節炎、結節性紅斑、壊疽性膿皮症、並びに眼の炎症等の、腸管外の兆候を患っていることもある。寛解又は非活動性のＵＣの場合には、患者は通常は腸の症状を有さない。
【０００４】
粘膜が炎症を起こす又は損傷を受ける程度は、ＵＣを有する患者の間で異なる。直腸のみが冒されているＵＣは潰瘍性直腸炎と呼ばれている。炎症性変化が結腸の左側から脾湾曲部までに存在するときには、その状態は遠位又は左側大腸炎（left sided colitis）と呼ばれる。広範囲に及ぶＵＣにおいては横行結腸もまた冒されており、全大腸炎（pancolitis）は結腸全体が関連している疾患を言う。
【０００５】
活動性の粘膜の炎症は内視鏡検査により診断され、それは血管のパターンの消失、浮腫、点状出血、特発性出血、及び線維性滲出液により特徴付けられる。内視鏡画像は継続的な炎症のものであり、直腸から始まり、結腸の近位に様々な程度で伸展する。内視鏡検査で得られ組織学的な試験にかけられた生検は、状態の診断の助けとなる。クロストリジウム・ディフィシル、カンピロバクター（camphylobacter）、サルモネラ、及び赤痢菌（Shigella）を含む感染性の要因はＵＣを模倣することがあり、便の培養により考慮しなくし得る。
【０００６】
ＵＣの医学的管理は、活動型疾患の治療と寛解の維持に分けられる。
【０００７】
活動型ＵＣを有する患者の治療は、炎症の低減、並びに結腸の治癒及び粘膜の回復の促進を目的とする。軽度な場合には疾患は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）（Sutherland, L., F. Martin, S. Greer, M. Robinson, N. Greenberger, F. Saibil, T. Martin, J. Sparr, E. Prokipchuk及びL. Borgn (1987) Gastroenterology 92: 1894-1898）、及び糖質コルチコステロイド（ＧＣＳ）（Domenech, E., M. Manosa及びE. Cabre (2014). Dig Dis 32(4): 320-327）を含む通常の薬剤により制御され得る。
【０００８】
ＧＣＳの長期使用には重大な副作用があり、ステロイド依存性疾患を発症する可能性があるので、ＧＣＳは一般的には疾患の再発（flare-up）を治療するのに使用され、寛解の維持には推奨されない。糖質コルチコイド薬剤は非選択的に作用するために、長期的には多くの健康的な同化（anabolic）プロセスを損なうかもしれない。結果として、全身的なＧＣＳによる維持治療は勧められない（Prantera, C.及びS. Marconi (2013) Therap Adv Gastroenterol 6(2): 137-156）。
【０００９】
ＧＣＳに対して難治性となり、重度の又は中等度の重篤度のＵＣの発作を患っている患者については、例えばシクロスポリン、６−メルカプトプリン、及びアザチオプリン等の免疫調節剤の追加を用いることがある。しかしながら、免疫調節剤は作用が遅く、これらの患者における寛解誘導はしばしば一時的なものである（Khan, K. J., M. C. Dubinsky, A. C. Ford, T. A. Ullman, N. J. Talley及びP. Moayyedi (2011) Am J Gastroenterol 106(4): 630-642）。
【００１０】
さらなるＵＣの治療選択肢は生物学的な薬剤を含む（Fausel, R.及びA. Afzali (2015) Ther Clin Risk Manag 11: 63-73）。中等度から重度のＵＣの治療のために現在認可されている３つのＴＮＦ−α阻害剤は、インフリキシマブ、アダリムマブ、及びゴリムマブである。３つ全ては、それらの使用に伴う潜在的な危険性があり、一定の患者においては避けなければならず、それは例えば制御不能な感染症、進行した心不全、神経学的な状態を有する患者、及び、悪性腫瘍の病歴を有する患者（腫瘍の成長を促進させる潜在的な危険性があるため）である。ＴＮＦ−α阻害剤療法の他の潜在的な副作用は、好中球減少症、肝毒性、血清病、白血球破砕性血管炎、乾癬様皮疹を含む発疹、自己免疫の誘導、並びに、アナフィラキシー、痙攣、及び低血圧を含む注射又は注入部位反応を含む。
【００１１】
３つ全てのＴＮＦ−α阻害剤とそれらに関連したバイオシミラー／誘導体の同等物を、ＵＣを有する患者において、臨床応答と寛解を誘導して維持するのに使用してもよい。アザチオプリンを用いた組み合わせ療法もまた、寛解の誘導に使用される。しかしながら、ＴＮＦ−α阻害剤の投与を受けている患者の５０％超は誘導用量に対して応答しないか、又は時間と共にＴＮＦ−α阻害剤に対する応答を消失する（Fausel, R.及びA. Afzali (2015) Ther Clin Risk Manag 11: 63-73）。
【００１２】
α４β７インテグリン阻害剤であるベドリズマブは、ＵＣの治療のために最近認可された。ＧＥＭＩＮＩ  １治験においてベドリズマブは、臨床上の応答、臨床上の寛解の誘導と維持、及び粘膜治癒においてプラセボよりも有効性が高いことが見出された（Feagan, B. G., P. Rutgeerts, B. E. Sands, S. Hanauer, J. F. Colombel, W. J. Sandborn, G. Van Assche, J. Axler, H. J. Kim, S. Danese, I. Fox, C. Milch, S. Sankoh, T. Wyant, J. Xu, A. Parikh及びG. S. Group (2013). "Vedolizumab as induction and maintenance therapy for ulcerative colitis." N Engl J Med 369(8): 699-710）。
【００１３】
慢性的に活動性であり既知の治療に対して難治性である潰瘍性大腸炎の患者は、医学上の深刻な課題をもたらし、大抵は残る唯一の行動方針は結腸切除術である。全結腸切除術は重度のＵＣを治療する可能性がある選択肢であるが、嚢の不全、回腸嚢炎、骨盤内敗血症、女性の不妊、及び夜間の便失禁などの合併症が続くかもれしれないので、危険性を伴う人生を変えてしまう手術である。よって手術は、重度の難治性の疾患、手術上の若しくは他の緊急性を有する患者、又は直腸結腸の異形成若しくはがんを有する患者のために取っておかれるのが通常である。
【００１４】
ＵＣに対する新興の三次治療は、修飾された一本鎖デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に基づいた、長さが１９塩基の合成オリゴヌクレオチドであるコビトリモド（カッパプロクト（Kappaproct）/DIMS0150）である。コビトリモドは５'-Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊ＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ-３'（配列番号１）の配列を有し、ここでＣＧジヌクレオチドはメチル化していない。
【００１５】
コビトリモドは、免疫細胞に存在するトール様受容体９（ＴＬＲ９）を標的とすることにより、免疫調節剤として機能する。これらの免疫細胞（すなわち、Ｂ細胞及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ））は、結腸及び鼻の粘膜等の粘膜表面に多量に存在する。免疫システムは、ＵＣの変化の鍵となるメディエーターである。ＵＣを有する患者の結腸と直腸の粘膜は慢性的に炎症を起こしており、活性の免疫細胞を含む。コビトリモドを炎症部位に局所的に投与してもよく、その局所投与では薬剤は多数の意図する標的細胞と近接して接触するように置かれ、ＴＬＲ９発現細胞が豊富な場所に薬剤が到達するであろうことを保証する。コビトリモドによるこれらの細胞の活性化は、古典的な抗炎症性サイトカインであり、コビトリモドの臨床効果のために重要な因子であると信じられている、Ｉ型インターフェロン及びインターロイキン１０（ＩＬ−１０）等の様々なサイトカインを誘導する。
【００１６】
コビトリモドを用いて、様々な非臨床安全性試験のみならず、４つの臨床試験が行われている。試験の大部分は、比較的に低い用量（３０ｍｇ）のコビトリモドの投与に関係している。全体としてコビトリモドに関するデータは、慢性の活動性ＵＣを有する患者に対する肯定的な利益−危険性評価を支持している。コビトリモドは安全であり、耐容性が良好であり、且つ、慢性的な活動性のＵＣを有する患者における臨床応答と寛解を誘導するのみならず、治療難治性の、中程度から重度の慢性の活動性のＵＣを有する患者の症状と内視鏡上の寛解の誘導にも有用であると示されている。
【００１７】
臨床的な使用のために有効性／安全性プロファイルを最大化する、コビトリモドのための改善された投与計画に対する需要が、今や存在する。
【発明の概要】
【００１８】
発明の要旨
驚くべきことに、今回、ＵＣ等の炎症性腸疾患の治療のために、コビトリモドを１５０ｍｇ〜３５０ｍｇ、好ましくは２５０ｍｇくらいの投与量で、少なくとも２回、好ましくは２回、３週間離れた別々の機会（separate occasion three weeks apart）に投与することが、例えば寛解を誘導するのに最適であることが見出された。２５０ｍｇにおけるその薬剤の有効性の増加は、ずっと低い用量で実施された過去の臨床試験からの予測を上回る。
【００１９】
よって本発明は、ヒト被験者における炎症性腸疾患の治療において使用するための、５’-ＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴＧＧＣ-３’（配列番号２）の配列を含むオリゴヌクレオチドを提供し、ここで前記オリゴヌクレオチドの１５０ｍｇ〜３５０ｍｇの個々の用量が少なくとも２つの別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れている。
【００２０】
本発明は、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドを、１つ以上の医薬的に許容可能な担体と共に含む、本明細書に規定されたヒト被験者において、本明細書に規定された炎症性腸疾患の治療において使用するための医薬組成物もまた提供し、ここで前記組成物の個々の投与は、少なくとも２回の別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記の別々の機会は３週間離れており、及びここで該組成物の各々の投与は、本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する。
【００２１】
本発明は、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチド又は本明細書において規定される組成物を前記被験者に投与することを含む、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される炎症性腸疾患を治療する方法もまた提供し、ここで前記オリゴヌクレオチド又は組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に患者に投与され、ここで前記の別々の機会は３週間離れており、ここで該オリゴヌクレオチド又は該組成物の各々の投与は本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する。
【００２２】
好適な態様において、該オリゴヌクレオチドは５’-Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊ＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ-３’（配列番号１）の配列を有し、ここでＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない。よって好適な態様において該ヌクレオチドはコビトリモドである。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、便中の血液がゼロである（７日間の患者報告アウトカムの最大）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験（placebo-controlled clinical trial）からの結果を示す。
【図２】図２は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、１週間当たりの排便頻度が１８回未満である（７日間の患者報告アウトカムの概要）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験からの結果を示す。
【図３】図３は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、１週間当たりの排便頻度が３５回未満である（７日間の患者報告アウトカムの概要）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験からの結果を示す。
【図４】図４は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、１日当たりの排便頻度が３回未満である（７日間の患者報告アウトカムの1日当たりの平均）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験からの結果を示す。
【図５】図５は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、１日当たりの排便頻度が４回未満である（７日間の患者報告アウトカムの1日当たりの平均）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験からの結果を示す。
【図６】図６は、治療群とプラセボ群の、本発明のオリゴヌクレオチド又はプラセボ（標準治療（S.o.C）に加えられた）の投与に続く週毎の、１日当たりの排便頻度が５回未満である（７日間の患者報告アウトカムの1日当たりの平均）と報告している割合の、プラセボ比較臨床試験からの結果を示す。
【図７】図７は、ＤＳＳ誘導大腸炎マウスモデルにおけるマウスの、１０日間に亘る体重減少の結果を示す。
【図８】図８は、ＤＳＳ誘導大腸炎マウスモデルの、１０日間に亘る疾患活動性指数（ＤＡＩ）の結果を示す。
【図９】図９は、ＤＳＳ誘導大腸炎マウスモデルの、１０日間に亘る内視鏡上の大腸炎の等級付け（endoscopic colitis grading）の結果を示す。
【図１０】図１０は、１０日目にＤＳＳ誘導大腸炎マウスモデル内のマウス結腸標本から単離された、粘膜固有層（Lamina propria）単核細胞（ＬＰＭＣ）のＣＤ４+Ｔ細胞サブセット内の、ＩＬ１７＋，ＲＯＲγＴ＋及びＩＬ１７＋ＲＯＲγＴ＋細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリー解析を示す。
【図１１】図１１は、１０日目にＤＳＳ誘導大腸炎マウスモデル内のマウス結腸の標本から単離された、骨髄由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ  ＣＤ１１＋Ｇｒ＋）集団のフローサイトメトリー解析を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
発明の詳細な説明
本明細書で引用された全ての特許、特許出願、及び刊行物は、その全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【００２５】
本明細書で使用される用語「被験者（subject）」は、ヒト被験者／患者を言う。用語「被験者」と「患者」は、本明細書では交換可能なように使用される。
【００２６】
本明細書で使用される用語である炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸及び消化管の炎症状態の１群を言う。ＩＢＤの主要な型は潰瘍性大腸炎（ＵＣ）（ulcerative colitis）とクローン病である。ＵＣとクローン病の間の主要な差は、炎症性変化の位置と性質である。クローン病は口から肛門まで消化管の任意の部位を冒すことができるが、一方、ＵＣは結腸（colon）と直腸（rectum）に限定されている。いくつかの場合には、症状（presentation）の特異性のために、クローン病又はＵＣの何れであるかの最終的な診断を行うことができない。この場合には中間型大腸炎（intermediate colitis）の診断が行われ得る。他の型のＩＢＤは、限定されるものではないが、コラーゲン性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎（ischaemic colitis）、空置大腸炎（diversion colitis）、ベーチェット病、及び中間型大腸炎を含む。
【００２７】
典型的には、炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。
【００２８】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の疾患は本技術分野の当業者に良く知られている。本発明に従って治療される潰瘍性大腸炎は、潰瘍性直腸炎、遠位又は左側大腸炎、広範性大腸炎（extensive colitis）、全大腸炎、及び嚢炎の治療に関連し得る。
【００２９】
ＵＣを有する患者は典型的には、寛解から重度の活動性までに及ぶ疾患重篤度のスペクトルを示す。D’Haens, Gastroenterology 2007; 132: 763-786（この全体は参照により本明細書に援用される）の中で規定されるように、臨床的評価を使用してＵＣの患者を疾患活動性の４つの亜群に分類することができる：（１）寛解（１日当たり排便が２回又は３回以下、便中に血液及び／又は膿が存在せず、全身症状がない）；（２）軽度の活動性疾患（１日当たり排便は３回又は４回、及び／又は毎日ではないが便に血液及び／又は膿が存在し、発熱又は体重減少の全身症状がない）；（３）中等度の活動性疾患（１日当たり排便が４回超、及び／又は毎日便に血液及び／又は膿が存在し）最小限の全身症状がある；並びに（４）重度の活動性疾患（１日当たり血便が６回超、及び発熱、頻脈、貧血、又は赤血球沈降速度ＥＳＲにより実証される毒性の証拠）。
【００３０】
典型的には、患者は中等度から重度のＵＣを患っている。好ましくは、患者は上記で規定されたような中等度から重度のＵＣを患っている。
【００３１】
本明細書で使用される用語「治療」及び「治療する」とは、疾患（disease）又は状態（condition）の症状の、治療及び／又は改善（amelioration）及び／又は予防、若しくは深刻化（aggravation）／悪化（worsening）の低減のみならず、疾患又は状態の原因の治療も包含すると理解されるべきであり、症状、臨床兆候、及び状態の基となる病理を、被験者の状態を改善（improvement）又は安定化する様な態様で逆転し、低減し、又は停止することを含んでもよい。
【００３２】
特に潰瘍性大腸炎と関連において「治療する」とは、典型的には活動性の潰瘍性大腸炎を有する患者を応答又は寛解に誘導することを言う。よって典型的に、オリゴヌクレオチドは患者において活動性の潰瘍性大腸炎の応答又は寛解を誘導するためのものである。応答を誘導するとは、例えば活動性疾患の症状と臨床兆候を低減し及び／又は停止することにより、患者の状態を改善することを意味する。寛解を誘導するとは患者を、彼らが疾患の活動性の段階であると見做される状態から、彼らが寛解していると見做される状態に移行させることを意味する。
【００３３】
ＵＣ患者の応答又は寛解の誘導は、典型的には、内視鏡検査、組織学、患者記録アウトカム（patient recorded outcome）、及びクオリティ・オブ・ライフ・アウトカムの1つ以上により評価される。よって応答又は寛解の誘導への言及は、内視鏡検査上の寛解、内視鏡検査上の応答、組織学的な寛解、組織学的な応答、医師により又は患者記録アウトカムにより測定された応答又は寛解、及び、クオリティ・オブ・ライフにより測定された応答又は寛解の1つ以上の誘導を含む。典型的には1つ以上の標準的な指数を参照にすることによりこれを評価することができる。
【００３４】
典型的には、潰瘍性大腸炎は慢性の活動性潰瘍性大腸炎である。
【００３５】
本明細書で使用される用語「慢性の活動性潰瘍性大腸炎」は、活動性であり且つ慢性の両方である潰瘍性大腸炎を有する患者に対して言う。活動性潰瘍性大腸炎は典型的には本明細書において規定されるものであり、すなわち、患者は寛解していない。慢性の潰瘍性大腸炎は、直腸と結腸の粘膜の慢性的な炎症により特徴付けられる疾患を言う。
【００３６】
好ましくは、本明細書において「治療する」への言及は、慢性の活動性潰瘍性大腸炎を有する患者において応答又は寛解を誘導することを言う。よって典型的には、オリゴヌクレオチドは、患者において慢性の活動性潰瘍性大腸炎の応答又は寛解を誘導するためのものである。
【００３７】
ＵＣ患者における応答及び寛解の誘導は、１つ以上の標準的な疾患指数に従って測定されてもよい。典型的な疾患指数は限定されるものではないが、以下に述べるもの；（ｉ）臨床上の及び生化学的な疾患活動性により測定される疾患活動性、（ｉｉ）内視鏡上の疾患活動性により測定される疾患活動性、（ｉｉｉ）臨床上と内視鏡上の疾患活動指数の複合により測定される疾患活動性、（ｉｖ）クオリティ・オブ・ライフ、（ｖ）組織学上の疾患活動性を含む。これらの指数はD’Haens（同上）の中で議論されている。
【００３８】
臨床上の及び生化学上の疾患活動性により測定される疾患活動性に基づく指数は、TrueloveとWittsの重篤度指数（Truelove and Witts Severity Index）；Powell-Tuck (St. Mark’の)指数（Powell-Tuck (St. Mark’s) Index）;臨床上の活動性(Rachmilewitz)指数（Clinical Activity (Rachmilewitz) Index）；活動性(Seo)指数（Activity (Seo) Index）；医師総合評価（Physician Global Assessment）；Lichtigerの(改変されたTrueloveとWittsの重篤度)指数（Lichtiger (Modified Truelove and Witts Severity) Index）；治験責任医師による総合評価（Investigators Global Evaluation）；簡易臨床的大腸炎活動性指数（Simple Clinical Colitis Activity Index）；個々の症状のスコアに基づく改善（Improvement Based on Individual Symptom Scores）；潰瘍性大腸炎臨床スコア（Ulcerative Colitis Clinical Score）；及び患者が規定する寛解（Patient-defined remission）を含む。これらの指数はD’Haens（同上）の中で議論されている。
【００３９】
内視鏡上の疾患活動性により測定される疾患活動性に基づく指数は、Truelove and WittsのＳ状結腸鏡検査評価（Truelove and Witts Sigmoidoscopic Assessment）；Baronスコア（Baron score）；Powell-TuckのＳ状結腸鏡検査評価（Powell-Tuck Sigmoidoscopic Assessment）；内視鏡（Rachmilewitz内視鏡）指数（Endoscopic (Rachmilewitz Endoscopic) Index）；Ｓ状結腸鏡検査指数（Sigmoidoscopic Index）；Ｓ状結腸鏡検査炎症等級付けスコア（Sigmoidoscopic Inflammation Grade Score）；Mayoスコア・フレキシブル直腸Ｓ状結腸鏡検査評価（Mayo Score Flexible Proctosigmoidoscopy Assessment）；Sutherlandの粘膜外観評価（Sutherland Mucosal Appearance Assessment）；及び改変Baron スコア（Modified Baron Score）を含む。これらの指数はD’Haens（同上）の中で議論されている。
【００４０】
臨床上と内視鏡上の疾患活動性指数の複合により測定される疾患活動性に基づく指数は、Mayoスコア（Mayoクリニックスコア/疾患活動性指数）（Mayo Score (Mayo Clinic Score/Disease Activity Index)）；改変Mayoスコア（Modified Mayo Score）及びSutherland 指数（疾患活動性指数/ＵＣ疾患活動性指数）（Sutherland Index(Disease Activity Index/UC Disease Activity Index)）を含む。MayoスコアとSutherland指数はD’Haens（同上）の中で議論されている。
【００４１】
クオリティ・オブ・ライフに基づく指数は、ＩＢＤ患者の懸念事項の評価表（Rating Form of IBD Patient Concerns）；及び炎症性腸疾患問診票（Inflammatory Bowel Disease Questionnaire）（ＩＢＤＱ）を含む。これらの指数はD’Haens（同上）の中で議論されている。
【００４２】
組織学的な疾患活動性に基づいた指数は、Geboes指数（Geboes Index）及びRiley指数（Riley Index）等のD’Haens（同上）の中で議論されているもの、及びNancy指数（Nancy Index）及びRobarts指数（Robarts Index）等のさらなる指数を含む。
【００４３】
ＵＣ患者を評価するための好適な指数は、臨床上の活動性（Rachmilewitz）指数、Mayoスコア、及び改変Mayoスコアを含む。
【００４４】
臨床上の活動性（Rachmilewitz）指数は、７つの変数：排便の回数、便の中の血液、症状状態の治験責任医師による総合評価（Investigator’s Global Evaluation）、腹部の疼痛又は痙攣、大腸炎による発熱、腸管外の兆候、及び研究室の所見、を考慮に入れる指数である。これはD’Haens（同上）とRachmilewitz D., BMJ 1989; 298: 82-86（その全体は参照により本明細書に援用される）の中でさらに議論されている。臨床上の活動性（Rachmilewitz）指数の測定は、０〜２９点の範囲の患者のためのスコアを作成する（より高いスコアはより重度の疾患を意味する）。
【００４５】
臨床上の寛解は、臨床上の活動性（Rachmilewitz）指数スコアが４点以下であると見做すことができる。臨床上の活動性（Rachmilewitz）指数により測定される応答は、患者が治療後に、治療前よりも低いスコアを有することを意味する。
【００４６】
Mayoスコアは４つの項目：排便の頻度、直腸の出血、下部消化管（ＧＩ）内視鏡検査上の所見、及び医師総合評価（Physician Global Assessment）（ＰＧＡ）、を考慮に入れる指数である。これはD’Haens（同上）とSchroeder KWらN Engl J Med 1987; 317: 1625-1629（その全体は参照により本明細書に援用される）の中でさらに議論されている。Mayoスコアの測定は、０〜１２点の範囲のスコアを作成する（より高いスコアはより重度の疾患を意味する）。４つの特定の項目に加えて、患者の機能的評価も測定され、それは１２点の指数計算の中に含まれることを意図するものではないが、ＰＧＡスコアを測定するときに全般的な健康状態の尺度として使用されるべきである。
【００４７】
４つの各々の項目についてのMayoスコアは下記の表に述べられたように測定される。
【００４８】
【表１】
2020519619.tif 000003
【００４９】
Mayoスコアに従う寛解は、（１）排便頻度（正常な排便頻度）、（２）直腸出血（直腸出血なし）、（３）患者の機能評価スコア（全般的に良好）、（４）内視鏡上の所見（正常）の完全な解決、及び０のＰＧＡスコアにより規定され得る。Mayoスコアにより測定される応答は典型的には、ＰＧＡスコアにおける改善（ベースラインから最小でも１点の減少）と少なくとも１つの他の臨床評価（排便頻度、直腸出血、患者の機能評価、内視鏡検査上の所見）における改善、及び他の何れの臨床評価においても悪化がないことを必要とする。
【００５０】
あるいは臨床上の寛解は、０のMayoスコア、及びMayoスコアのベースラインからの３点以上の低減としての臨床上の改善（応答）として規定され得る。
【００５１】
あるいは臨床上の寛解は、０のMayoスコア、及びMayoスコアのベースラインからの３点以上の低減（又はベースラインのMayoスコアが３点以下であった場合には、２点以上の低減）としての臨床上の改善（応答）として規定され得る。
【００５２】
あるいはMayoスコアにより測定される寛解は、Ｓ状結腸鏡検査と直腸出血の両方についてサブスコアが０であり、排便頻度とＰＧＡサブスコアについてスコアが０又は１であることを要すると規定され得る。応答はMayoスコアのベースラインからの３点以上の低減として規定され得；臨床応答はMayoスコアのベースラインからの２点以上の低減として規定され得（内視鏡検査サブスコアなしで、部分的Mayoスコア（Partial Mayo Score）としても知られている）、内視鏡上の応答は内視鏡上のサブスコアのベースラインからの１点以上の低減として規定され得る。
【００５３】
あるいは臨床上の寛解は、個々のサブスコアが１点を超えず、合計のMayoスコアが２点以下であると規定され得、臨床上の応答は、合計Mayoスコアのベースラインからの３点以上及び３０％以上の低減、及び直腸出血サブスコアの１点以上の低減又は０若しくは１の絶対直腸出血サブスコアとして規定され得、並びに粘膜治癒は０又は１の内視鏡上の絶対サブスコアとして規定され得る。
【００５４】
１態様において活動性潰瘍性大腸炎を有する患者は、２を超えるMayoスコアを有する。潰瘍性大腸炎の寛解の段階にある患者は、典型的には２以下のMayoスコア有する。
【００５５】
改変Mayoスコアは上記で規定したMayoスコアと関連している。改変Mayoスコアは、大腸内視鏡検査/Ｓ状結腸鏡検査のスコア付けは易出血性（friability）をあまり考慮しない点でMayoスコアと異なる。よって改変Mayoスコアについての点数表は以下の通りである。
【００５６】
【表２】
2020519619.tif 000004
【００５７】
改変Mayoスコアにおける寛解と応答の値は、上記でMayoスコアについて述べた通りである。改変Mayoスコアは典型的には、http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/UCM515143.pdfに見出される、ＦＤＡのガイダンス案文書“Ulcerative Colitis: Clinical Trial Endpoints Guidance for Industry”に従って評価される。
【００５８】
あるいは、改変Mayoスコアは、大腸内視鏡検査/Ｓ状結腸鏡検査のスコア付けは易出血性をあまり考慮しないこと、及び医師総合評価は決定的ではないことにおいてもMayoスコアと異なるかもしれない。よって改変Mayoスコアについてのスコア表も下記のようであるかもしれない。
【００５９】
【表３】
2020519619.tif 000005
【００６０】
この代替の改変Mayoスコアについての寛解と応答の値は典型的には、上記でMayoスコアについて述べた通りである。あるいはこの代替の改変Mayoスコアに従って寛解を、ｉ）０の直腸出血、ｉｉ）０又は１の排便頻度（ベースラインである０週から少なくとも１点低減する）、及びｉｉｉ）０又は１の内視鏡検査スコア（易出血性を除く）、のサブスコアにより規定し得る。
【００６１】
ＵＣの寛解の誘導は、S. P. L. Travis, Aliment Pharmacol Ther 2011; 34: 113-124（その全体は参照により本明細書に援用される）の中で設定された基準、すなわち、直腸出血、便意の切迫性及び増加した排便頻度の完全な中断に従ってもよく、好ましくは内視鏡検査上の粘膜治癒により確認される。
【００６２】
あるいは応答又は寛解の誘導は、E.F. Stange, Journal of Crohn's and Colitis (2008) 2, 1-23；S.P.L. Travis, Journal of Crohn's and Colitis (2008) 2, 24-62; K Geboes, Gut 2000; 47: 404-409（その全体は参照により本明細書に援用される）の中で設定された基準に従ってもよい。
【００６３】
クローン病患者における応答又は寛解の誘導は、１つ以上の標準的な疾患指数に従って測定され得る。典型的な指数としてクローン病活動性指数（Crohn’s Disease Activity Index）（ＣＤＡＩ）が挙げられる。ＣＤＡＩは、Loveの“Pharmacotherapy for Moderate to Severe Inflammatory Bowel Disease：Evolving Strategies”, Am J Manag Care. 2016;22:S39-S50；Peyrin-Birouletら“Defining disease severity in inflammatory bowel diseases: current and future directions” Clin Gastroenterol Hepatol. 2015；pii: S1542-3565(15)00787-00789. doi: 10.1016/j.cgh.2015.06.001；及びUngarら“Advances in the development of new biologics in inflammatory bowel disease”, Annals of Gastroenterology (2016) 29, 243-248の中で議論されている。クローン病患者を評価する代わりの指数は、Harvey-Bradshaw指数（Harvey-Bradshaw index）及び炎症性腸疾患問診票（Inflammatory Bowel Disease Questionnaire）を含む。
【００６４】
ＣＤＡＩはクローン病に関連する多数の症状を考慮に入れる複合スコアであり、液状の便又は軟便の回数；腹部の疼痛；全般的な健康状態；合併症の存在（関節の疼痛（関節痛）又はフランク関節炎（frank arthritis）の存在；虹彩の炎症又はぶどう膜炎；結節性紅斑、壊疽性膿皮症、又はアフタ性潰瘍の存在；肛門の裂傷、瘻又は膿瘍；他の瘻；前の週の間の発熱）；下痢のためロモティル（lomotil）又はオピエートの使用；腹部腫瘤の存在；ヘマトクリット値；及び標準体重からのパーセント偏差を含む。ＣＤＡＩによる臨床上の寛解は、典型的には１５０未満のスコアで示される。
【００６５】
本発明により治療される被験者は典型的には、抗炎症療法に対して難治性（refractory）又は十分に応答しない又は不耐性（intolerant）であり、及び／又は、少なくとも１つの免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤、又は抗インテグリン剤に対して不適切な応答、応答の消失、又は不耐性を示すか又は過去に示した。よって典型的には被験者は、抗炎症療法、好ましくはＵＣに対する抗炎症療法及び／又は免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤又は抗インテグリン剤療法、好ましくはＵＣに対するそのような療法を過去に受けたか、又は現在受けている。ＵＣのための抗炎症療法は本明細書で議論され、典型的にはＧＣＳ、スルファサラジン、及び５−ＡＳＡを含む。
【００６６】
免疫調節剤、ＴＮＦ−α阻害剤及び抗インテグリン剤は本明細書で議論され、典型的には、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、並びに、ＴＮＦ−α阻害剤であるインフリキシマブ及びそのバイオシミラー及び誘導体、ゴリムマブ及びそのバイオシミラー及び誘導体、アダリムマブ及びそのバイオシミラー及び誘導体、及び抗インテグリン剤であるベドリズマブ及びそのバイオシミラー及び誘導体を含む、生物学的製剤を含む。
【００６７】
難治性の疾患又は療法に対して応答が不十分である疾患は、典型的には、少なくとも１コースの療法、本発明の関連における抗炎症療法を受けた治療歴があるにも関わらず、活動性疾患の兆候と症状が持続する疾患である。典型的にはＵＣの治療の関連において、抗抗炎症療法の２コース以上の治療歴にも関わらず、活動性疾患の兆候と症状が持続する。ＵＣに対する抗炎症療法による治療の典型的なコースは、本技術分野の当業者に良く理解されるであろうし、典型的には、典型的な患者において寛解を誘導するのに十分な用量での十分な回数の投薬に関連するであろう。
【００６８】
療法に対する不耐性、本発明との関連における抗炎症療法に対する不耐性とは、その療法がその被験者に認容されない、例えば典型的には療法の中断をもたらす副作用を引き起こしていることを意味する。
【００６９】
典型的には、被験者はアミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）、好ましくはＵＣのために５−ＡＳＡ療法を過去に受けたか又は現在受けている。
【００７０】
典型的には被験者は、経口の糖質コルチコステロイド（ＧＣＳ）、好ましくはＵＣのための経口ＧＣＳ療法を過去に受けたか、又は現在受けている。
【００７１】
典型的には、抗炎症療法に対して難治性であるか又は応答が不十分であるか又は不耐性である被験者は、直腸の、経口の、及び／又は非経口のＧＣＳ治療に対する不適切な応答、若しくは応答の消失（すなわち難治性である）、若しくは不耐性（早期の副作用のためにＧＣＳ療法を行わないことを含む）を示すか、又は過去に示している。
【００７２】
典型的には、抗炎症療法に対して難治性であるか又は応答が不十分であるか又は不耐性である被験者は、ＧＣＳ治療に対する不適切な応答（例えばステロイド難治性）、若しくはステロイド依存性、若しくは対する応答の消失、若しくは不耐性の治療歴を有するか、又は現在その状態にある。潰瘍性大腸炎の治療コースの中で典型的には、被験者はステロイド／ＧＣＳ投与を受けているであろう。
【００７３】
ステロイド難治性は、典型的には意義のある臨床応答が欠けている、すなわち、少なくとも１コースのステロイド治療の治療歴、例えばプレドニゾンを１日当たり４０〜６０ｍｇと同等の用量を、３０日に亘る期間経口投与する、又は７日〜１０日に亘る期間静脈内（ＩＶ）投与することを含む導入療法（induction regimen）にも関わらず、持続的な活動性潰瘍性大腸炎の兆候及び症状を示す患者に対して言う。
【００７４】
ステロイド依存は典型的には、活動性の潰瘍性大腸炎が再発することなく、ステロイドを開始して３か月以内に、プレドニゾロン１０ｍｇ／日と同等未満にステロイドを低減することができないか、又はステロイドを中止して３か月以内に再発している患者に対して言う。
【００７５】
ＧＣＳ治療の不耐性とは典型的には、被験者が、ＧＣＳ治療に続いて、それに限定されるものではないが、例えばクッシング症候群、骨減少症／骨粗鬆症、高血糖、不眠症、又は感染症等の被験者により容認されない副作用を経験したことを意味する。
【００７６】
免疫調節剤に対する不適切な応答又は応答の消失とは典型的には、少なくとも１つの免疫調節剤による過去の治療、例えば経口でアザチオプリン（１．５ｍｇ／ｋｇ以上）又は６−メルカプトプリン（０．７５ｍｇ／ｋｇ以上）を８週間という１回の投与計画にも関わらず、活動性潰瘍性大腸炎の兆候及び症状が持続することを意味する。
【００７７】
免疫調節剤に対する不耐性とは典型的には、被験者が、免疫調節剤の投与を受けた後に、吐き気／嘔吐、腹部の疼痛、膵炎、肝機能試験（ＬＦＴ）異常、リンパ球減少症、チオプリン・メチルトランスフェラーゼ（ＴＰＭＴ）遺伝子変異、若しくは感染症、又は他の副作用を経験していることを意味する。
【００７８】
ＴＮＦ−α阻害剤に対する不適切な応答又は応答の消失とは、少なくとも１つのＴＮＦ−α阻害剤、例えば、インフリキシマブ（５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、少なくとも２週間離して２回投薬）又はそのバイオシミラー若しくは誘導体；ゴリムマブ（２００／１００ｍｇ（ＳＣ）、少なくとも２週間離して２回投薬）又はそのバイオシミラー若しくは誘導体；アダリムマブ（１６０／８０ｍｇ（ＳＣ）、少なくとも２週間離して２回投薬）又はそのバイオシミラー若しくは誘導体、の４週間の導入療法（induction regimen）（又は現在のラベルにより推奨される用量）等の過去の治療にも関わらず、活動性潰瘍性大腸炎の兆候及び症状が持続すること、又は先の臨床利益を受けての維持的投薬の間に症状が再発することを意味する。
【００７９】
ＴＮＦ−α阻害剤に対する不耐性とは、ＴＮＦ−α阻害剤の投与を受けた後に続く、インフュージョン関連反応、脱髄、うっ血性心不全、感染症、又は他の副作用を意味する。
【００８０】
抗インテグリン剤に対する不適切な応答又は応答の消失とは、例えば、ベドリズマブ３００ｍｇ（ＩＶ）又はそのバイオシミラー若しくは誘導体の少なくとも１０週間の（又は現在のラベルで推奨されているような）投与計画等の、抗インテグリン剤による過去の治療にも関わらず、活動性潰瘍性大腸炎の兆候及び症状が持続すること、又は先の臨床利益を受けての維持的投薬の間に症状が再発することを意味する。
【００８１】
典型的には被験者は、左側の潰瘍性大腸炎、すなわち直腸Ｓ状結腸炎を含む遠位大腸炎であると診断されている。
【００８２】
典型的には、前記の患者は結腸切除術について選択できる（elective for colectomy）。
【００８３】
本明細書で使用される用語「結腸切除術」とは、大腸（結腸）を任意の程度、手術で切除することを言う。本明細書において結腸切除術には、限定されるものではないが、右半結腸切除術、左半結腸切除術、拡大（extended）半結腸切除術、横行結腸切除術、Ｓ状結腸切除術、直腸Ｓ状結腸切除術、ハルトマン手術、「二連銃式（double-barrel）」又はミクリッツ（Mikulicz）人工肛門造設術、結腸全摘術（レーン術式（Lane’s Operation）としても知られている）、大腸全摘術、及び結腸亜全摘術を含む。本明細書で使用されるフレーズ「結腸切除術について選択できる（elective for colectomy）」とは、医師と執刀医の評価に基づいて、緊急では無い結腸切除術の手法を受けることを選択するかもしれない被験者に対して言う。結腸切除術について選択できる被験者は、限定されるものではないが、（潰瘍性大腸炎のために）利用できる療法に対して難治性か、又は（潰瘍性大腸炎のために）利用できる療法に不耐性の被験者であり得る。急性の疾患又は損傷を有し、即時の治療を必要とする被験者のための急性の治療介入である緊急の結腸切除術とは、この点で異なる。このフレーズは結腸切除術を選択する（elected for colectomy）被験者もまた含む。
【００８４】
本明細書で使用される用語「オリゴヌクレオチド」とは、複数の連結した個々のヌクレオシド単位から形成されるポリオリゴヌクレオシドを言う。そのようなオリゴヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡ若しくはｃＤＮＡ、プラスミド、ベクター、又は細菌のＤＮＡを含む既存の核酸源から得ることができるが、好ましくは合成法により作製される。ヌクレオシド残基は多数の既知のヌクレオシド間連結の何れかにより、互いに結合することが可能である。そのようなヌクレオシド間リンケージ（linkage）は、限定されるものではないが、天然のヌクレオシド間のホスホジエステル結合、又は、限定されるものではないが、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデ−ト、シロキサン、カーボネート、カルボアルコキシ、アセトアミデート（acetamidate）、カルバメート、モルホリノ、ボラノ（borano）、チオエーテル、架橋ホスホロアミデ−ト、架橋メチレンホスホネート、架橋ホスホロチオエート、及びスルホンのヌクレオシド間リンケージ等の実際に修飾されたヌクレオシド間リンケージを含む。用語「オリゴヌクレオチド」は、１つ以上の立体特異的なヌクレオシド間リンケージ（例えば（Ｒｐ）−又は（Ｓｐ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、又はホスホトリエステルリンケージ）を有するポリヌクレオシドもまた包含する。本明細書で使用される用語「オリゴヌクレオチド」と「ジヌクレオチド」は、リンケージがリン酸基を含むか含まないかに関わらず、任意のそのようなヌクレオシド間リンケージを有するポリヌクレオシド及びジヌクレオチドを含むことを明示的に意図している。ある好適な態様においてこれらのヌクレオシド間リンケージは、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、若しくはホスホロジチオエートリンケージ、又はその組み合わせであってもよい。
【００８５】
用語「オリゴヌクレオチド」は、限定されるものではないが、タンパク質基、親油性基、挿入剤、ジアミン、葉酸、コレステロール及びアダマンタンを含む、追加の置換基を有するポリヌクレオシドもまた包含する。用語「オリゴヌクレオチド」は、限定されるものではないが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、リン酸基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、ロックド核酸（locked nucleic acid）（ＬＮＡ）、モルフォリノ骨格オリゴヌクレオチド、及びアルキルリンカー又はアミノリンカーを有する骨格部位を有するオリゴヌクレオチドを含む、任意の他のヌクレオ塩基含有ポリマーもまた包含する。アルキルリンカーは、分岐しているか又は分岐していなくてもよく、置換されているか又は置換されていなくてもよく、及び光学的に純粋であるか又はラセミ混合物であってもよい。
【００８６】
本発明のオリゴヌクレオチドは、天然由来のヌクレオシド、修飾されたヌクレオシド、又はその混合物を含むことができる。本明細書で使用される用語「修飾されたヌクレオシド」は、修飾された複素環塩基、修飾された糖部分（moiety）、又はその組み合わせを含むヌクレオシドである。幾つかの態様において修飾されたヌクレオシドは、本明細書で述べられる非天然のピリミジン又はプリンヌクレオシドである。幾つかの態様において修飾されたヌクレオシドは、２’−置換されたリボヌクレオシド、アラビノヌクレオシド、又は２’−デオキシ−２’−置換アラビノシドである。
【００８７】
本明細書において用語「ハイブリッドオリゴヌクレオチド」は、１超の型のヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチドである。
【００８８】
本明細書において用語「オリゴヌクレオチド」は、ハイブリッド又はキメラのオリゴヌクレオチドを含む。「キメラヌクレオチド」は、その配列構造の中に１超の型のヌクレオシド間リンケージを有するオリゴヌクレオチドである。そのようなキメラヌクレオチドの１つの好適な例は、ホスホロチオエート、ホスホジエステル又はホスホロジチオエート領域、及び例えばアルキルホスホネート又はアルキルホスホノチオエートリンケージ等の非イオン性リンケージを含むキメラオリゴヌクレオオチドである（米国特許第５６３５３７７号及び米国特許第５３６６８７８号）。
【００８９】
本明細書において用語「オリゴヌクレオチド」は、環状変異体と環状オリゴヌクレオチドもまた含む。
【００９０】
好ましくは、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの天然由来のホスホジエステル、若しくは１つの修飾されたホスホロチオエート、又はホスホロジチオネートのヌクレオチド間リンケージを含むが、好適なリンケージは又は実際の骨格修飾は、限定するものではないが、メチルホスホネート、メチルホスホノチオエート、ホスホトリエステル、ホスホチオトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、トリエステルプロドラッグ、スルホン、スルホンアミド、スルファメート、ホルムアセタール、Ｎ−メチルヒドロキシルアミン、２’ＯＭｅ（２’位におけるオキシメチル基）、カーボネート、カルバメート、モルフォリノ、ボラノホスホネート（boranophosphonate）、ホスホロアミデ−ト、特に１級アミノ−ホスホロアミデート、Ｎ３ホスホロアミデート、及びＮ５ホスホロアミデートを含み、立体特異的なリンケージ（例えば、（Ｒｐ）−又は（Ｓｐ）−ホスホロチオエート、アルキルホスホネート、又はホスホジエステルリンケージ）もまた想定される。
【００９１】
ヌクレオシドの糖部分は、非天然由来の糖部分であることも可能である。本明細書中における「天然由来の糖部分」とは、例えば、リボースと２’−デオキシリボース等の核酸の一部分として天然に生じる糖部分であり、「非天然由来の糖部分」とは、オリゴヌクレオチドのための骨格中に使用することができるが、核酸の一部分として天然に生じない任意の糖であり、例えばヘキソースであるがそれに限定されない。アラビノースとアラビノース誘導体は好適な糖部分の例である。
【００９２】
修飾された又は置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば促進された細胞内取り込み、核酸標的に対する促進された親和性、及びヌクレアーゼの存在下における増加した安定性等の望ましい性質のために、しばしば天然型よりも好まれる。オリゴヌクレオチドは通常は、１０個を超え１００個以上までのデキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチドからなるが、好ましくは約８個と約４０個の間、最も好ましくは約８個と約２０個の間である。正確な大きさは多くの要因に依って決まり、結局はオリゴヌクレオチドの最終的な機能又は用途に依って決まるであろう。オリゴヌクレオチドは、化学合成、ＤＮＡ複製、逆転写、又はその組み合わせを含む、任意の様式で作製できる。
【００９３】
本発明で使用するためのオリゴヌクレオチドは、配列５’-ＧＧＡＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴＧＧＣ-３’（配列番号２）を含む。典型的には少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドがメチル化されていない。
【００９４】
典型的には、前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、骨格の修飾を有する。典型的には、前記オリゴヌクレオチド中の少なくとも１つのヌクレオチドは、リン酸骨格の修飾を有する。骨格の修飾は典型的には、ホスホロチオエート又はホスホロジチオエート修飾である。
【００９５】
ホスホロチオエートリンケージは、配列中アスタリスク（＊）例えば配列：
５’−Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊ＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ−３’（配列番号１）で描くことができ、ここでＣＧジヌクレオチドはメチル化されていない。
【００９６】
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドは配列
５’−Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊ＡＣＡＧＴＴＣＧＴＣＣＡＴ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ−３’（配列番号１）を有し、ここでＣＧジヌクレオチドはメチル化されていない。よって好ましくは、前記オリゴヌクレオチドはコビトリモド（cobitolimod）である。
【００９７】
よって本発明は好ましくは、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される活動性潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここで本明細書において規定される量のコビトリモドの個々の用量が少なくとも２回の別々の機会に該被験者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れている。
【００９８】
本発明の療法において、前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドの１５０ｍｇ〜３５０ｍｇの個々の用量が投与される。典型的には同じ投与量のオリゴヌクレオチドが個々の用量／投与において投与されるが、異なる投与量もまた使用することができる。
【００９９】
通常は、前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドは、１００ｍｇ超〜３５０ｍｇまでの個々の用量で投与される。
【０１００】
典型的には前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドの１７５ｍｇ〜３２５ｍｇ、好ましくは２００ｍｇ〜３００ｍｇ、より好ましくは２１０〜２９０、さらにより好ましくは２２０〜２８０、いっそうより好しくは２３０〜２７０、なおさらにより好ましくは２４０〜２６０、なおさらにより好ましくは２４５〜２５５、なおさらにより好ましくは２４９〜２５１ｍｇの前記オリゴヌクレオチドが、各々の用量／投与において投与される。
【０１０１】
好ましくは、前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドの約２５０ｍｇが投与される。よって前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドの約２５０ｍｇが、少なくとも２回の別々の機会にそれぞれ投与される。
【０１０２】
活性薬剤の投与量に関連して、本明細書で使用される「約」は＋／−１０％、典型的には＋／−５％、好ましくは＋／−１％を意味する。
【０１０３】
より好ましくは、前記オリゴヌクレオチド、好ましくはコビトリモドの２５０ｍｇが投与される。
【０１０４】
本発明の療法において、前記オリゴヌクレオチドの（本明細書で特定される量の）個々の用量が、少なくとも２回の別々の機会に患者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れている。これは、患者の用量は３週間離れた特定された用量／投与の間に、如何なる追加オリゴヌクレオチドの投与を受けることはないことを意味している。３週間離れた特定された用量／投与の間の３週間のウィンドウの中で、患者は本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドの投与を受けないが、潰瘍性大腸炎の治療のための１つ以上の追加の治療剤の投与を受けてもよい。
【０１０５】
前記オリゴヌクレオオチドの用量が２回より多い機会に患者に投与されるときには、典型的には各々の機会は前回の機会の３週間後である。典型的には前記オリゴヌクレオチドの（本明細書で特定された量の）用量は、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０回の別々の機会に患者に投与され、各機会は前回の投与の３週間後である。典型的には、前記オリゴヌクレオオチドの用量が患者に、その患者が本明細書において規定される寛解に至るまで投与される。幾つかの態様において、個々の用量が被験者に２回の別々機会にのみ投与され、その別々の機会は３週間離れている。
【０１０６】
少なくとも２回の別々の機会（ここで前記別々の機会が３週間離れている）の投与との言及は、寛解を誘導するための単一の治療計画を言うことを理解するべきである。よって本発明による治療コースに続いての、例えば寛解の後の活動性疾患の状態の再発の後等、将来におけるオリゴヌクレオチドを用いたさらなる治療は除外されるものではない。
【０１０７】
２回の投与のみを受ける患者に関しては、１回目の用量は０日目に送達され、２回目の用量はその３週間後に送達されるであろう。３回の投与を受ける患者に関しては、１回目の用量は０日目に送達され、２回目の用量はその３週間後に送達され、３回目の用量はさらにその３週間後、即ち０日目から６週間後に送達されるであろう。
【０１０８】
本明細書で使用される用語「３週間離れている」とは、まさに２１日離れて投与する特定の態様を意味し、即ち、最初の用量は０日目に投与され、さらなる用量は２１日目に投与される。しかしながら、これからの僅かな変動はなお、本発明の範囲内であることが理解されるであろう。かかる僅かな変動は、例えば患者の病気の、又は薬剤が入手できないために、避けられないものであり得る。よって本明細書において使用される「３週間離れている」とは、１８〜２８日間離して、典型的には１８〜２４日間離して、あるいは、１９〜２３日間離して、又は２０〜２３日間離して投与することを意味する。
【０１０９】
よって態様によっては、本発明は、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドを、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される潰瘍性大腸炎の治療において使用するために提供し、ここで前記オリゴヌクレオチドの本明細書において規定される量の個々の用量が、少なくとも２回、例えば２回の別々の機会に患者に投与され、ここで前記の離れた機会は１８〜２４日間離れており、１９〜２３日間離れており、又は２０〜２３日間離れている。
【０１１０】
本発明で使用するための薬剤は、下記においてより詳細に述べるように、症状のための単剤療法として、又は症状のための補助療法として他の薬剤（複数可）と共に投与されてもよい。補助（又は「追加（add-on）」）療法の場合には、本発明で使用するための薬剤を、例えば固定した用量を組み合わせて又は別々の用量で、他の薬剤（複数可）と同時に、別々に、又は順次に投与してもよい。
【０１１１】
本明細書で使用される用語「追加（add-on）」とは、現在の療法又は投与計画を中断することなく、現在の療法又は投与計画に加えて前記オリゴヌクレオチドを投与することを言う。
【０１１２】
よってオリゴヌクレオチドを単剤療法として投与しても、又は潰瘍性大腸炎の治療のための１つ以上の追加治療剤と組み合わせて投与してもよい。典型的にはオリゴヌクレオチドは単剤療法として投与しても、又は免疫調節剤、抗ＴＮＦ療法剤、又は潰瘍性大腸炎の治療のための他の適切な薬剤から選択される、潰瘍性大腸炎の治療のための１つ以上の追加治療剤と組み合わせて投与してもよい。
【０１１３】
前記オリゴヌクレオチドと組み合わせて使用するのに適している、かかる薬剤の例は、限定されるものではないが、ＧＣＳ又は誘導体；プレドニゾロン、デコルチン（Decortin）、抗ＴＮＦ剤又は誘導体；インフリキシマブ並びにそのバイオシミラー及び誘導体、アダリムマブ並びにそのバイオシミラー及び誘導体、ゴリムマブ並びにそのバイオシミラー及び誘導体、抗インテグリン剤又は誘導体；ベドリズマブ並びにそのバイオシミラー及び誘導体、天然ＩＦＮ−β、チオプリン又は誘導体；アザチオプリン、６−メルカプトプリン、５−ＡＳＡ、スルファサラジン、メトトレキサート、シクロスポリン、及びその同等物を含む。
【０１１４】
典型的には前記オリゴヌクレオチドの投与を受ける被験者は、ＧＣＳ、デコルチン、５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、スルファサラジン、メトトレキサート、プレドニゾロン、及びその同等物又は誘導体から選択される１つ以上の他の薬剤の投与もまた受ける。
【０１１５】
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドの投与を受けている被験者は、ＧＣＳ、５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、スルファサラジン、及びメトトレキサートから選択される１つ以上の他の薬剤の投与もまた受ける。
【０１１６】
より好ましくは、前記オリゴヌクレオチドの投与を受けている被験者は、経口ＧＣＳ、経口５−ＡＳＡ、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、及び経口メトトレキサートから選択される１つ以上の他の薬剤の投与もまた受ける。
【０１１７】
いくつかの態様において、前記オリゴヌクレオチドの投与を受けている被験者は、１つ以上のステロイド剤、例えばコルチコステロイド及び糖質コルチコステロイドの投与もまた受ける。
【０１１８】
本発明の目的において、用語「組み合わせて」と「追加（add-on）」は、同じ患者における同じ疾患の治療コースを意味し、オリゴヌクレオチドと１つ以上の追加治療剤を、同時投与のみならず、最大で数か月離れた時間間隔の順番を含む、任意の順番で投与することを含む。
【０１１９】
典型的には、前記オリゴヌクレオチドは例えば粘膜への局所投与等、局所的に投与される。
【０１２０】
典型的には、前記オリゴヌクレオチドは結腸内投与される。結腸内投与は典型的には、直腸を介して達成される。結腸内投与は典型的には、浣腸又はカテーテルを用いて達成される。結腸内投与には、直腸浣腸による投与が関与してもよい。結腸内投与は局所的なものでもよく、例えば結腸内視鏡検査の生検チャンネルを介して挿入された、噴霧カテーテル（spraying catheter）又は他の適切な医療器具を用いた結腸内視鏡検査の間に行われる。前記オリゴヌクレオチドは下行結腸の上部に又は結腸の横行領域に送達されてもよいが；しかしながら、適切な場合には他の領域もまた可能である。消化管の他の部分への局所送達もまた可能である。この観点のさらに別の態様において、限定されるものではないが、前記オリゴヌクレオチドを、例えば吸入、鼻腔内、非経口、経口、皮内、皮下、膣内、及び直腸投与等の、任意の適切な投与経路により投与することが可能である。さらに態様によっては、前記オリゴヌクレオチドの全身的な投与も使用することができる。
【０１２１】
オリゴヌクレオチドを、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドを１つ以上の医薬的に許容可能な担体と共に含む、医薬組成物の形で投与してもよい。本明細書中で使用される用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、増量剤、塩、緩衝液、水、安定化剤、可溶化剤、脂質、又は医薬製剤において使用されるために本技術分野で良く知られている他の材料を包含する。担体の特性は、特定の適用のための投与経路に依るであろうことは理解されるであろう。
【０１２２】
本明細書で使用される用語「医薬的に許容可能な担体」とは、免疫調節性オリゴヌクレオチドの有効性には干渉せず、且つ、例えば、細胞、細胞培養物、組織、器官、又は生物等の生物系に適合する材料を言う。好ましくは、生物系は脊椎動物等の生体である。
【０１２３】
典型的には、組成物は液体担体中のオリゴヌクレオチドの溶液である。
【０１２４】
典型的には担体は水であり、好ましくは滅菌水である。よって典型的には、組成物は本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドと水を含む。
【０１２５】
好ましくは、担体は水であり、（組成物の形の）オリゴヌクレオチドは、例えば直腸浣腸として結腸内に投与される。
【０１２６】
有利なことにオリゴヌクレオチドは水の中で安定であることが見出されており、よってオリゴヌクレオチドを、実質的に本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドと水からなる組成物として投与することが可能である。組成物は本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドと水からなってもよい。
【０１２７】
実質的に成分からなる組成物とは、その組成物を実質的に構成する成分のみならず、他の成分も含む組成物を言い、但し、その他の成分はその組成物の実質的な特性に大きく影響することはない。典型的には、実質的にある成分からなる組成物は、それらの成分を９５重量％以上（組成物の総重量に対して）、又はそれらの成分を９９重量％以上（組成物の総重量に対して）含むであろう。
【０１２８】
よって、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドと水から実質的になる組成物は、オリゴヌクレオオチドと水を９５重量％以上（組成物の総重量に対して）、又はオリゴヌクレオオチドと水を９９重量％以上（組成物の総重量に対して）含む。
【０１２９】
医薬組成物中のオリゴヌクレオチドの濃度は、投与されるオリゴヌクレオオチドの投与量を含む、いくつかの因子に依って変わるであろう。典型的には溶液である組成物中のオリゴヌクレオチドの濃度は、１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは４〜１０ｍｇ／ｍｌ、場合によっては１０〜２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは４．８ｍｇ／ｍｌ〜５．２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約５．０ｍｇ／ｍｌである。
【０１３０】
好ましくは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモド約２５０ｍｇの個々の用量は、２回の別々の機会にのみ患者に投与され、前記の別々の機会は３週間離れている。
【０１３１】
あるいは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は、被験者が寛解、典型的には本明細書において規定される指数により測定される寛解に至るまで、３週間離れている２回以上の別々の機会に患者に投与される。
【０１３２】
より好ましくは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される活動性潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は２回の別々の機会にのみ患者に投与され、前記の別々の機会は３週間離れており、ここでコビトリモドは、コビトリモドと水を含む医薬組成物の形で投与される。
【０１３３】
より好ましくは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される活動性潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は２回の別々の機会にのみ患者に投与され、前記別々の機会は３週間離れており、ここでコビトリモドは結腸内に又は直腸に投与される。
【０１３４】
より好ましくは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される活動性潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は２回の別々の機会にのみ患者に投与され、前記別々の機会は３週間離れており、ここでコビトリモドは、コビトリモドと水を含む医薬組成物の形で結腸内に又は直腸に投与される。
【０１３５】
なおさらに好ましくは、本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される慢性の活動性潰瘍性大腸炎の治療において使用するためのコビトリモドを提供し、ここでコビトリモドの約２５０ｍｇの個々の用量は２回の別々の機会にのみ患者に投与され、前記別々の機会は３週間離れており、ここでコビトリモドは、コビトリモドと水を含む医薬組成物の形で結腸内に又は直腸に投与される。
【０１３６】
本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される炎症性腸疾患の治療において使用するための、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチドを１つ以上の医薬的に許容可能な担体と共に含む医薬組成物もまた提供し、ここで前記組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に被験者に施され、ここで前記別々の機会は３週間離れており、ここで組成物の各々の投与は、本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する。
【０１３７】
上記で規定された使用のためのオリゴヌクレオチドの好適な特徴は、使用のための組成物の好適な特徴でもある。
【０１３８】
本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される炎症性腸疾患の治療に使用するための医薬の製造における、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチド、又は本明細書において規定される医薬組成物の使用もまた提供し、ここで前記オリゴヌクレオチド又は組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に患者に施され、ここで前記別々の機会は３週間離れており、ここでオリゴヌクレオチド又は組成物の各々の投与は、本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する。
【０１３９】
上記で規定した使用のためのオリゴヌクレオチドの好適な特徴は、オリゴヌクレオチド又は組成物の使用の好適な特徴でもある。
【０１４０】
本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される炎症性腸疾患の治療方法もまた提供し、その方法は、本明細書において規定されるオリゴヌクレオチド又は本明細書において規定される組成物を前記被験者に投与する工程を含み、ここで前記オリゴヌクレオチド又は組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に患者に施され、ここで前記別々の機会は３週間離れており、ここでオリゴヌクレオチド又は組成物の各々の投与は、本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する。
【０１４１】
本発明は、本明細書において規定されるヒト被験者において、本明細書において規定される炎症性腸疾患の治療方法もまた提供し、その方法は：
（ａ）本明細書において規定される患者を選択する工程；及び
（ｂ）本明細書において規定されるオリゴヌクレオチド又は本明細書において規定される組成物を、前記患者に投与する工程であって、ここで前記オリゴヌクレオチド又は組成物の個々の投与は少なくとも２回の別々の機会に患者に投与され、ここで前記別々の機会は３週間離れており、ここでオリゴヌクレオチド又は組成物の各々の投与は、本明細書において規定される量のオリゴヌクレオチドを送達する工程
を含む。
【０１４２】
上記で規定される使用のためのオリゴヌクレオチドの好適な特徴は、特許請求される方法の好適な特徴でもある。
【０１４３】
下記は本発明を説明する非限定的な実施例である。
【実施例】
【０１４４】
実施例１−臨床試験研究
無作為化二重盲検プラセボ比較試験（randomized double-blind placebo controlled, trial）は、確立された方法に従って、中等度から重度の活動性潰瘍性腸疾患患者における局所性コビトリモドの有効性と安全性を評価する。
【０１４５】
方法：下記を含む本分野における標準的な試験対象患者基準に従って、試験のために男性と女性を選択する：
１．１８歳以上の男性又は女性
２．診断からの時間が最短で３か月以上の確定したＵＣの診断
３．６〜１２の（内視鏡検査のサブスコアのグレード１の易出血性を除く）改変Mayoスコアにより測定された、中等度から重度の活動性の左側のＵＣ（疾患は肛門縁の上１５ｃｍ以上に伸展しているが、脾湾曲部を超えていない）であって、スクリーニングビジット１ｂ（７日目〜１０日目のスクリーニングビジット）において行われた内視鏡検査のセントラルリーディングにより評価された２以上の内視鏡検査上のサブスコアを有し、１未満の他の個々のサブスコアがない
４．現在の経口５−ＡＳＡ／ＳＰの使用、又は経口５−ＡＳＡ／ＳＰ使用の薬歴
５．現在のＧＣＳの使用、又はＧＣＳ依存性、難治性、若しくは早期の副作用によりＧＣＳ治療を行わないことを含む不耐性の病歴（ＧＣＳ基準の１つのみが満たされるべきである、欧州クローン病・大腸炎会議（ＥＣＣＯ）のガイドラインにおける規定を見よ）
【０１４６】
６．下記の薬剤の少なくとも１つに対する、不適切な応答、応答の消失、又は不耐性が示されたこと：
・免疫調節剤、例えばシクロスポリン、メトレキサート、ＡＺＡ／６−ＭＰ、タクロリムス、
○例えば、経口のＡＺＡ（１．５ｍｇ／ｋｇ以上）、又は６−ＭＰ（０．７５ｍｇ／ｋｇ以上）、又は不耐性又はチオプリン・メチルトランスフェラーゼ（ＴＰＭＰ）欠損により促されたより低い用量の８週間の投与計画による少なくとも１回の過去の治療にも関わらず、持続的な活動性疾患の兆候又は症状があること、又は
○例えば、少なくとも１つの免疫調節剤に対する過去の不耐性（限定されないが、吐き気／嘔吐、腹部疼痛、膵炎、肝機能試験（ＬＦＴ）異常、リンパ球減少症、ＴＰＭＰ遺伝子変異、感染症を含む）
・ＴＮＦ−α阻害剤及び／又は抗インテグリン剤：
○例えば、
・インフリキシマブ５ｍｇ／ｋｇ（静脈内注射（ＩＶ））、又は、
・ゴリムマブ２００／１００ｍｇ（皮下注射（ＳＣ））、又は、
・アダリムマブ１６０／８０ｍｇ（ＳＣ）、又は、
・ベドリズマブ３００ｍｇ（ＩＶ）
の少なくとも２週間離れた２回の投与（又は現在のラベルによる推奨された投与）による、少なくとも１回の誘導投与計画による過去の治療にも関わらず、持続的な活動性疾患の兆候及び症状があること、又は
○不耐性の病歴（があること）（限定されるものではないが、インフュージョン関連反応、脱髄、うっ血性心不全、感染症を含む）
先の臨床利益を受けての上記の薬剤の何れかによる維持的投与の間の症状の再発（２次性不全）［臨床利益が認定されないにも関わらずに中断すること］
【０１４７】
７．試験の間に下記のＵＣ薬剤の治療量の投与を受けることが許可されていること：
ａ）経口ＧＣＳ療法（１日当たり２０ｍｇ以下のプレドニゾン又は同等量）、但しその用量はビジット（visit）１ａ（１４日目）の前に２週間安定していることを条件とする
ｂ）ビジット（visit）１ａの少なくとも８週間前に開始された、経口ＭＭＸブデソニド療法（１日当たり９ｍｇ）
ｃ）経口５−ＡＳＡ／ＳＰ化合物、但しその用量はビジット（visit）１ａの前の２週間安定しており、ビジット（visit）１ａの少なくとも８週間前に開始されたことを条件とする
ｄ）ＡＺＡ／６−ＭＰ、但しその用量がビジット（visit）１ｂの前の８週間安定しており、ビジット（visit）１ａの少なくとも３か月前に開始されていることを条件とする
【０１４８】
８．治療を理解する能力があり、全ての試験要件に従う意思があり、及びインフォムド・コンセントを提供する能力があること
【０１４９】
下記を含むこの分野で既知の除外基準に従って患者を治験から除外してもよい：
１．例えば、クローン腸炎、虚血性大腸炎、放射線大腸炎、中間型大腸炎（intermediate colitis）、感染性大腸炎、憩室性疾患（diverticular disease）、関連大腸炎、顕微鏡的大腸炎、重度の偽ポリポーシス（massive pseudopolyposis）、又は通過不能な狭窄（non-passable stenosis）等の異なる診断の疑い
２．急性劇症ＵＣ及び／又は全身毒性の兆候
３．直腸に限定されたＵＣ（伸展が肛門縁の上１５ｃｍ未満の疾患）
４．以下を除く悪性腫瘍の病歴
・治療済みの（治癒した）基底細胞又は扁平上皮内がん
・治療済みの（治癒した）子宮頸部上皮内腫瘍、又はスクリーニングビジット１ａの前の過去５年以内に再発の証拠がない子宮頸部の上皮内がん
５．治験責任医師の意見において、プロトコール及びプロトコールの手順を患者が守る可能性に影響を及ぼすかもしれない、又は試験結果を混乱させる若しくは患者の安全性を損なうであろう、任意の臨床上顕著な疾患の病歴又は存在
６．登録時における、シクロスポリン、メトトレキサート、タクロリムス、ＴＮＦ−α阻害剤、抗インテグリン剤又は類似の免疫抑制剤と免疫調節剤による同時治療。そのような薬剤による如何なる先行治療も、ビジット（visit）１ａの少なくとも８週間前に中断されているか、又は測定不可能な血清濃度レベルを有していなければならない
７．直腸にＧＣＳ、５−ＡＳＡ／ＳＰ又はタクロリムスを用いることによる、ビジット（visit）１ｂの前の２週間以内の治療
８．ビジット（visit）１ａの前の２週間以内の、抗生物質又は非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）による長期治療（抗生物質の１回の短期の治療計画と時々のＮＳＡＩＤの使用は許される）
９．重篤な活動性の感染症
１０．クロストリジウム・ディフィシル便アッセイ陽性を含む胃腸感染症
１１．非経口栄養又は輸血を現在受けていること
１２．スクリーニング期間に授乳中であるか又は血清妊娠試験が陽性である女性
１３．研究の期間に亘って信頼できる避妊方法（信頼できる方法は、バリア保護、ホルモン避妊、子宮内避妊器具、又は禁欲である）を使用していない妊娠可能な女性
１４．試験治療を有する他の臨床試験への同時参加、又は５半減期以内であり且つ登録前の実験産物の最後の治療の後少なくとも３０日以内の過去の試験治療の使用
１５．過去におけるコビトリモドとの接触
【０１５０】
試験に選ばれた患者は、有効投与量のコビトリモド（３週間離して２５０ｍｇのコビトリモドの投与を２回受ける群を含む）とプラセボの、直腸浣腸による直腸投与を含む治療シークエンス（treatment sequence）に対して無作為化される。
【０１５１】
試験のエンドポイント／評価された臨床上の基準は以下の通りである：
・４週又は６週における、臨床上の寛解、症状の寛解、内視鏡上の寛解、又は（完全な）組織学上の寛解の誘導を有する患者の割合
・４週又は６週における、直腸出血がない患者の割合
・４週又は６週における、正常な又は促進された排便頻度を有する患者の割合
・６週及び１０週における、持続的な症状の寛解の誘導を有する患者の割合
・６週における、臨床応答中の患者の割合
・６週における、組織学的な応答を有する患者の割合
・便意の切迫性のスコアが低減している患者の割合
・０週と比較しての、１、２、３及び６週における便中カルプロテクチン（faecal calprotectin）の平均変化
・６週から１０週における、寛解中の患者におけるステロイド投与量の平均変化
・０週と比較しての６週における、炎症性腸疾患問診票（ＩＢＤＱ）サブドメインの各々における平均変化
・６週における、内視鏡上及び組織学上の寛解を有する患者の割合
【０１５２】
結論：中程度から重度の潰瘍性大腸炎を患っている患者において、３週間離して２５０ｍｇのコビトリモドを２回投与する治療は、臨床効果の改善をもたらし、潰瘍性大腸炎の治療におけるコビトリモドの有用性が示される。
【０１５３】
参照例１−最適な投与頻度を示す臨床試験結果
無作為化二重盲検プラセボ比較試験において、中等度から重度の活動性炎症性大腸炎を有する１３１人の患者を無作為化し、ベースラインと４週目の下部消化管（ＧＩ）内視鏡検査の間に、２回の単一用量のコビトリモド／カッパプロクト（Kappaproct）（３０ｍｇ）又はプラセボの局所投与を受けるようにした。
【０１５４】
治療群とプラセボ群の患者が、電子日記を使用して１２週間、彼らの毎週の便中の血液の最大量（なし、少量、又は多量として）、毎週の排便頻度（１８回未満、１８〜３５回、３６〜６０回、又は６１回＋として）、及び毎日の排便頻度（１回未満、１〜１．９９回、２〜２．９９回、３〜３．９９回、４〜４．９９回、５〜５．９９回、６〜６．９９回、７〜７．９９回、又は８回＋として）をモニターした。
【０１５５】
結果を収集し、プラセボ群と比較しての治療群の治療デルタ（treatment delta）を計算した。それらの結果から、最初の投与の３週間後に特に高い治療デルタがあることが見られる。
【０１５６】
治療群とプラセボ群についての結果は下記の表に示されている：
【０１５７】
図１は、治療群とプラセボ群の、便中の血液がゼロである（７日間の患者報告アウトカムの最大）と報告している割合を週毎に示す。
【０１５８】
図２は、治療群とプラセボ群の、１週間の排便頻度が１８回未満（７日間の患者報告アウトカムの概要）と報告している割合を週毎に示す。
【０１５９】
図３は、治療群とプラセボ群の、１週間の排便頻度が３５回未満（７日間の患者報告アウトカムの概要）と報告している割合を週毎に示す。
【０１６０】
図４は、治療群とプラセボ群の、１日当たりの排便頻度が３回未満（７日間の患者報告アウトカムの１日当たりの平均）と報告している割合を週毎に示す。
【０１６１】
図５は、治療群とプラセボ群の、１日当たりの排便頻度が４回未満（７日間の患者報告アウトカムの１日当たりの平均）と報告している割合を週毎に示す。
【０１６２】
図６は、治療群とプラセボ群の、１日当たりの排便頻度が５回未満（７日間の患者報告アウトカムの１日当たりの平均）と報告している割合を週毎に示す。
【０１６３】
試験で評価された様々な臨床アウトカムについての治療デルタは、下記の表中に与えられている。
【０１６４】
【表４】
2020519619.tif 000006
【０１６５】
【表５】
2020519619.tif 000007
【０１６６】
【表６】
2020519619.tif 000008
【０１６７】
【表７】
2020519619.tif 000009
【０１６８】
実施例２−デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導大腸炎マウスモデル
材料及び方法
マウス：Ｂａｌｂ／ｃマウスを、チャールスリバーラボラトリ−、リサーチモデル・アンド・サービス（ズルツフェルト、ドイツ）から得た。８週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウスを実験のために使用し、動物福祉法（Animal Welfare Act）に従い、個々に換気されたケージの中で飼育した。水と餌は自由に摂取させた。
【０１６９】
ＤＳＳ誘導大腸炎：３％（ｗ／ｖ）デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）（ＭＰバイオメディカルズ、イルキルシュ、フランス）を、８週齢のメスＢａｌｂ／ｃマウスの飲用水に１０日間投与した。全く処置がなされていない３匹のマウスの追加コントロール群もまた実験設定の一部とした。食物摂取と体重を０、２、４、６、７、８、及び１０日目にモニターした。
【０１７０】
コビトリモドの直腸投与：マウス当たり４０μｇ、８４μｇ、１０００μｇ又は１５６０μｇのコビトリモドを２回、直腸投与した（４日目と８日目）。個々の濃度のコビトリモドを滅菌水で希釈し、直腸投与のためにマウス当たり１００μｌを使用した。マウスにおける１０００μｇの用量は、ヒトにおける２５０ｍｇの用量とほぼ同等である（“Guidance for Industry - Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Health Volunteers”,アメリカ合衆国保健福祉省、食品医薬局品、医薬品評価研究センター、２００５年7月を見よ）。このマウスモデルにおいて観察された結果は、１５０ｍｇ〜３５０ｍｇの個々の用量のコビトリモドを、３週間離れた２回の別々の機会に投与されたヒトにおいて観察される効果を予測させるものと見做すことができる。マウスにおける８４μｇの用量はヒトにおける３０ｍｇの用量とほぼ同等である。
【０１７１】
コビトリモドを含まない滅菌水を７匹のコントロール群のマウス（プラセボ）に直腸に適用した。実験の開始前に、処置が異なる群に由来するマウスを無作為にケージ毎に混ぜ、実験条件が同程度であることを保証した。
【０１７２】
ＤＳＳ誘導大腸炎の評価：０、２、４、６、７、８及び１０日目に、体重減少をモニターした。疾患活動性指数（ＤＡＩ）は、当初の体重と比較した体重減少、便の硬さ、便中の目に見える血液を組み合わせたスコアである。マウス当たりの最大スコアは１２である。０、２、４、６、７、８及び１０日目にＤＡＩを評価した。加えて、小型の内視鏡（外径１．９ｍｍのスコープ）、キセノン光源、トリプルチップカメラ、及び空気ポンプ（全てカールストルツ、トゥットリンゲン（Tuzingen）、ドイツ）からなるＣｏｌｏｗｉｅｗ内視鏡システムを使用して、結腸の炎症をインビボで研究し、マウス結腸の制御された膨張（inflation）を達成した。内視鏡検査のために、０．２〜０．５Ｌ／分の流速で１００％酸素中の４％のイソフルランを用いてマウスを麻酔し、維持には２％イソフルランを用いた。内視鏡上の大腸炎の等級付けは５つのパラメーター：結腸の肥厚、正常な血管パターンの変化、フィブリンの存在、粘膜の細顆粒性（mucosal granularity）、及び便の硬さ、からなる。各パラメーター（スコア０〜３）について内視鏡上の等級付けを行い、０〜１５の間の累積スコアがもたらされた。０、２、４、６、７、８、及び１０日目に内視鏡上の等級付けを解析した。
【０１７３】
結果
図７は実験コースに亘っての、様々な治療群におけるマウスの体重変化を示す。ＤＳＳ処置を開始した４日後に、全てのＤＳＳ処置群は同様に体重が減少し始めた。４日目におけるコビトリモドの直腸適用は、プラセボ処置マウスと比較して、８４μｇのコビトリモド（＊Ｐ＝０．０４７２）と１０００μｇのコビトリモド（＊Ｐ＝０．０１２２）で処置されたマウスにおいて、６日目に有意に少ない体重の低減をもたらした。７日目に、１０００μｇのコビトリモド（＊Ｐ＝０．００１２）で処置されたマウス群は、８４μｇのコビトリモド（＊Ｐ＝０．０１２２）で処置されたマウスと比較して、体重減少はより有意に低減し、その後両群における体重減少は１０日目（実験の終了）まで、プラセボ処置群のそれよりも有意に少なくあり続けた。４０μｇのコビトリモドで処置されたマウス群もまた、７日目から僅かな体重減少の低減を示したが、この低減は有意ではなかった。１５６０μｇのコビトリモドで処置された群のマウスは、プラセボで処置されたマウスと比較して体重減少の増加を示した。１０日目の実験終了時に、プラセボ処置群と類似した体重減少を示した１５６０μｇのコビトリモドで処置された群は別として、全てのコビトリモド処置群は、プラセボ処置群と比較して体重減少の低減を示した。完全に無処理（ＤＤＳなし、コビトリモド／プラセボなし）のマウスの体重は、実験の間ずっと変化がなかった（図７）。
【０１７４】
図８は実験のコースに亘っての様々な処置群における、マウスの疾患活動性指数（ＤＡＩ）の変化を示す。ＤＡＩのデータは、コビトリモドの直腸適用はＤＳＳ誘導大腸炎を改善することを示す。全てのコビトリモド処理マウスは、４０μｇコビトリモド処理マウスを除き、類似したＤＡＩの変化を示す。４０μｇのコビトリモドで処置されたマウス群は、プラセボコントロールと比較して、ＤＡＩの有意な低減を示さなかった。８４μｇと１０００μｇのコビトリモドで処置されたマウスは６日目以降、プラセボ群と比較してＤＡＩの低減を示す。投与量が最も早い時点（６日目）で有意なＤＡＩの低減（＊Ｐ＝０．０２１６）を示すのは、１０００μｇのコビトリモドで処置された群であった。８４μｇと１０００μｇのコビトリモドで処置されたマウスは、８日目と１０日目（＊＊＊Ｐ＝０．０００６）に、ＤＡＩの有意な低減を示した。１５６０μｇのコビトリモドで処置された群は、７日目にＤＡＩの低減を示し、８日目と１０日目の低減は有意であった（それぞれ、＊＊Ｐ＝０．００２３と＊＊＊Ｐ＝０．０００６）。完全に無処置（ＤＤＳなし、直腸適用なし）のマウスのＤＡＩは、実験の間ずっと変化がなかった（図８）。
【０１７５】
図９は実験のコースに亘っての様々な処置群における、内視鏡上の大腸炎の等級付けの変化を示す。内視鏡上の大腸炎の等級付けは、体重減少とＤＡＩの結果と一致していた。コビトリモドにより処置された全てのマウスは、プラセボ処置群と比較して、ＤＳＳ誘導大腸炎の兆候の発症が少なかった。プラセボ群と比較した内視鏡上の大腸炎の等級付けは、コビトリモドの最初の適用の後、実験が終了するまで、全てのコビトリモド処置群において低減した。４０μｇコビトリモド処置群を除いて、全てのコビトリモド処置群において、７日目から低減は有意であった（＊＊Ｐ≦０．０１）。投与量が内視鏡上の大腸炎等級付けにおいて最も早い時点（６日目）で有意な低減（＊Ｐ＝０．０４０８）を示すのは、１０００μｇのコビトリモドで処置された群であった（図９）。
【０１７６】
結論
まとめるとこれらの結果は、コビトリモド処置マウスの体重減少、疾患活動性指数、及び内視鏡上の大腸炎の等級を有意に低減することにより、コビトリモド処置はＤＳＳ誘導大腸炎を改善することを示している。４日目と８日目に１０００μｇのコビトリモドが投与されたマウスでは、体重減少、ＤＡＩ、及び内視鏡上の大腸炎の等級付けの有意な改善が達成された。特にＤＡＩと内視鏡上の大腸炎の等級付けにおける改善は、１０００μｇの用量については、他のコビトリモドの用量についてよりも早い時点で観察された。
【０１７７】
実施例３−デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導大腸炎マウスモデルにおけるフローサイトメトリーの結果
材料及び方法
マウス：Ｂａｌｂ／ｃマウスを、チャールスリバーラボラトリ−、リサーチモデル・アンド・サービス（ズルツフェルト、ドイツ）から得た。８週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウスを実験のために使用し、動物福祉法（Animal Welfare Act）に従い、個々に換気されたケージの中で飼育した。水と飼料は自由に摂取させた。
【０１７８】
ＤＳＳ誘導大腸炎：３％（ｗ／ｖ）デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）（ＭＰバイオメディカルズ、イルキルシュ、フランス）を、８週齢のメスＢａｌｂ／ｃマウスの飲用水に１０日間投与した。全く処置がなされていない３匹のマウスの追加コントロール群もまた実験設定の一部とした。
【０１７９】
コビトリモドの直腸投与：マウス当たり４０μｇ、８４μｇ、５００μｇ、又は１５６０μｇのコビトリモドを、２回直腸投与した（４日目と８日目）。個々の濃度のコビトリモドを滅菌水で希釈し、直腸投与のためにマウス当たり１００μｌを使用した。マウスにおける５００μｇの用量は、ヒトにおける１２５ｍｇの用量とほぼ同等である（HED、“Guidance for Industry - Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Health Volunteers”, アメリカ合衆国保健福祉省、食品医薬局品、医薬品評価研究センター、２００５年7月を見よ）。マウスにおける８４μｇの用量は、ヒトにおける３０ｍｇとほぼ同等である。
【０１８０】
コビトリモドを含まない滅菌水をコントロール群の７匹のマウス（プラセボ）に追加で直腸に適用した。実験の開始前に、処置が異なる群に由来するマウスを無作為にケージ毎に混ぜ、実験条件が同程度であることを保証した。
【０１８１】
フローサイトメトリー：１０日目に頸椎脱臼によりマウスを殺処分し、フローサイトメトリー解析のための結腸標本を採取した。消化管の標本由来の粘膜固有層（Lamina propria）単球細胞（ＬＰＭＣ）を、ラミナプロプリアキット（ミルテニーバイオテク、ベルギッシュ・グラートバッハ、ドイツ）を使用して単離した。細胞内染色の前に細胞を、ＰＭＡ、ゴルジ−ストップ及びイオノマイシン（イーバイオサイエンス、フランクフルト、ドイツ）を含む刺激カクテルで、３７℃で４時間処置した。トランスクリプション・ファクター緩衝液セット（ＢＤバイオサイエンス、ハイデルベルグ、ドイツ）を使用して、細胞を固定化して透過処理した。細胞をＣＤ４（ＢＤファーミンゲン、フランクリン、米国）、ＩＬ１７Ａ（バイオレジェンド、サンディエゴ、米国）、ＲｏｒｙＴ（ＢＤファーミンゲン、フランクリン、米国）、及び各々のイソタイプコントロールについて染色した。骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）について、単離されたＬＰＭＣを、ＣＤ１１ｂ（ミルテニーバイオテク、ベルギッシュ・グラートバッハ、ドイツ）及びＧｒ−１（ＢＤファーミンゲン、フランクリン、米国）について細胞外染色した。フローサイトメトリー解析は、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤバイオサイエンス、ハイデルベルグ、ドイツ）を用いて行った。ＦｌｏｗＪｏ  ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗｅａｒ（Ｖｅｒｓｉｏｎ１０．Ｉｒ５、ツリースター  アシュランド、米国）を用いて細胞を解析した。
【０１８２】
統計解析：統計解析は、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．０５、ラホヤ、カリフォルニア州）を用いて行った。シャピロ・ウィルク正規性検定により正規分布の検定を行った後に、対応のないスチューデントｔ検定（unpaired Student’s t test）又はマン・ホイットニーＵランク検定を用いて試料間の有意差を計算した（＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００１以下）。
【０１８３】
結果
図１０は、１０日目のマウスから採取した結腸試料内のＬＰＭＣの細胞内染色の結果を示す。古典的にはＩＢＤは、ＣＤ内のＴｈ１細胞又はＵＣ内のＴｈ２細胞により主として仲介されると思われていたが、今はＴｈ１７細胞及びそれらに関連したサイトカインが、両方の状態における重要なメディエーターであることが知られている。Ｔｈ１７細胞はＩＢＤ患者の炎症を起こした腸に大量に浸潤し、そこでそれらはＩＬ１７Ａと他のサイトカインを生成し、炎症の過程を引き起こし且つ増幅させる（Galvez J., Role of Th17 Cells in the Pathogenesis of Human IBD. ISRN Inflamm. 2014 Mar 25;2014:928461）。ＩＬ１７／Ｔｈ１７のレベルは、健康なコントロール被験者と比較して、ＵＣ患者の血清／結腸においては有意に高かったことが示されている（Gong, Y.ら, The Th17/Treg immune balance in ulcerative colitis patients with two different chinese syndromes: dampness-heat in large intestine and spleen and kidney yang deficiency syndrome. Evid Based Complement Alternat Med. 2015: p. 264317）。よってＴｈ１７とＩＬ１７の減少は、ＩＢＤ患者において臨床エンドポイントを改善する重要な過程である。
【０１８４】
Ｔｈ１７細胞と転写因子レチノイン酸受容体関連オーファン受容体ガンマｔ（ＲＯＲγｔ、Ｔｈ１７の分化を制御する転写因子）の存在について、結腸のＬＰＭＣを染色した。予期されたように、Ｔｈ１７（ＲＯＲγｔ＋、ＩＬ１７＋）、ＲＯＲγｔ＋、及びＩＬ１７＋細胞集団は、大腸炎を患っているマウス（ＤＳＳ処置）においては、健康な動物（コントロ−ル、ＤＳＳなし）と比較して増加していた。水処置と比較して、コビトリモド処置の後ではこの増加は有意に抑えられていた。１０日目の実験終了時に採取されたマウス結腸標本から単離されたＬＰＭＣのフローサイトメトリー解析から、コビトリモドで処理されたマウスではプラセボ処置マウスと比較して、ＲｏｒｙＴ＋ＩＬ１７＋、ＲｏｒｙＴ＋、及びＩＬ１７＋Ｔ細胞のレベルは、有意に減少していることが明らかとなった。５００μｇのコビトリモドで処置された群では、他の群よりも、ＣＤ４＋ＴＬ１７＋細胞の減少はより顕著であった（図１０）。
【０１８５】
図１１は、１０日目のマウス結腸から単離された粘膜固有層（Lamina propria）単球細胞（ＬＰＭＣ）中に存在する、骨髄由来のサプレッサー細胞（ＣＤ１１＋Ｇｒ１＋）のパーセンテージを示す、フローサイトメトリー解析を示す。
【０１８６】
骨髄細胞は白血球の、最も豊富であり不均一な集団である。それらは血液から炎症部位に迅速に動員され、多くの重要な生物学的な機能を行う。慢性的な炎症状態は、骨髄由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の生成に貢献する。これらの病的に活性化された細胞は、がんとＩＢＤにおける重要なプレーヤーであると次第に認識されてきている。ＩＢＤにおけるＭＤＳＣの役割は未だに議論の的であるが、腸の炎症状態により誘導されたＭＤＳＣは、Ｔｈ１７の生成とＩＬ１７の産生と炎症誘発性環境の確立に関与し、それによってＩＢＤの発症に役割を果たしている可能性があることが示されている（Yeon-Jeong Kim.ら, Myeloid-Derived Suppressor Cells in Inflammatory Bowel Disease. Intest. Res. 2015: 13(2): 105-111の中で概説されている）。よってＭＤＳＣの減少は、ＩＢＤ患者における腸内炎症の治療に寄与することが可能である。
【０１８７】
さらなる解析により、コビトリモド処置されたマウスと比較して、プラセボ処置マウスにおいては、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＤＳＣのレベルが上昇していることが明らかとなった。５００μｇのコビトリモドで処置されたマウスは、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＤＳＣのレベルを有意に（＊Ｐ≦０．０５）ダウンレギュレートした（図１１）。Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＤＳＣ集団の減少は、５００μｇのコビトリモドを投与されたマウスにおいて最も顕著であった。
【０１８８】
結論
これらの結果は、コビトリモド処置は、ＤＳＳ誘導大腸炎モデルのマウスの結腸における炎症誘導性ＩＬ１７＋粘膜Ｔ細胞とＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＤＳＣの集団を有意に減少させることを示している。５００μｇのコビトリモドを投与されたマウスは、結腸から採取された試料において最も有望な結果を示した（ＩＬ１７＋ＣＤ４＋細胞とＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＭＤＳＣの集団の減少）。驚くべきことに、５００μｇの用量におけるＩＬ１７＋ＣＤ４＋細胞の減少は、８４μｇと１５６０μｇの用量における減少よりも大きく、これらの値の間の投与量は、ＩＢＤで免疫応答を調節するのに最も有効であることを示唆している。この知見は、ヒトにおいて、１５０ｍｇから３５０ｍｇのコビトリモドを、３週間離した少なくとも２回の別々の機会に投与する計画は、他のより高い及びより低い用量よりも、免疫応答をより良く調節することができ、よってＩＢＤの治療により効果的であろうこともまた示唆している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020519619.tif 000022
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