(57)【要約】【課題】癌の治療のための免疫療法剤の全身送達と組み合わせた抗腫瘍粒子の局所送達に関する。【解決手段】タキサン粒子などの抗腫瘍粒子を含有する組成物の局所投与を免疫療法剤を含有する組成物の全身投与と組み合わせることによって、癌の治療的処置に有用な併用療法方法が開示される。局所投与法には、局所適用、肺投与、腫瘍内注射、腹腔内注射、および嚢胞内注入が含まれる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において癌を治療する方法であって、
（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を前記対象の皮膚腫瘍の罹患領域に局所投与することと、
（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を前記対象に全身投与することと、
を含み、それにより前記癌を治療し、前記抗腫瘍粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）が、任意の順序でまたは同時に行われ得る、方法。
【請求項２】
前記皮膚腫瘍が、良性皮膚腫瘍であり、前記対象が、皮膚以外の身体の領域の癌を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記良性皮膚腫瘍が、日光角化症である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記皮膚腫瘍が、皮膚悪性腫瘍（悪性皮膚腫瘍）である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記皮膚悪性腫瘍が、皮膚癌を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記皮膚癌が、黒色腫、基底細胞癌、または扁平上皮癌を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記皮膚悪性腫瘍が、皮膚転移を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記皮膚転移が、肺癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、卵巣癌、腎臓癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、および／またはカポジ肉腫からのものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が、身体の他の領域の癌を有する、請求項４〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記タキサン粒子が、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１の組成物が、無水である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１の組成物が、疎水性である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の組成物が、疎水性担体を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記疎水性担体が、不揮発性である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記疎水性担体が、非極性である、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記疎水性担体が、炭化水素を含む、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記炭化水素が、ワセリン、鉱油、もしくはパラフィンワックス、またはそれらの混合物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記鉱油が、重鉱油である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疎水性担体が、前記疎水性組成物の５０％ｗ／ｗを超える、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１の組成物が、１つ以上の揮発性シリコーン流体をさらに含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記１つ以上の揮発性シリコーン流体の濃度が、前記第１の組成物の５〜２４％ｗ／ｗである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記揮発性シリコーン流体が、シクロメチコンである、請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記シクロメチコンが、シクロペンタシロキサンである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１の組成物が、半固体である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１の組成物の粘度が、室温で４５秒間、１０ＲＰＭのＴ−Ｅスピンドルを用いて、ヘリパスがオンのヘリパススタンド上のＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計で測定したときに、２５，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記第１の組成物が、軟膏である、請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記第１の組成物が、揮発性Ｃ１〜Ｃ４脂肪族アルコールを含有せず、追加の浸透促進剤を含有せず、追加の揮発性溶媒を含有せず、界面活性剤を含有せず、タンパク質を含有せず、かつ／またはアルブミンを含有しない、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗腫瘍粒子が、前記第１の組成物中に分散している、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記組成物中の前記抗腫瘍粒子の濃度が、約０．１〜約２％ｗ／ｗである、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
対象において癌を治療する方法であって、
（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を肺投与によって前記対象に投与することと、
（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を前記対象に全身投与することと、
を含み、それにより前記癌を治療し、前記抗腫瘍粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、前記対象が、肺疾患を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）が、任意の順序でまたは同時に行われ得る、方法。
【請求項３９】
前記肺疾患が、非癌性であり、前記対象が、肺以外の身体の領域の癌を有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記非癌性肺疾患が、拘束性または閉塞性肺疾患である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記拘束性肺疾患が、肺線維症である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記閉塞性肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記肺疾患が、癌性である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記癌性肺疾患が、悪性腫瘍または中皮腫である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記悪性腫瘍が、非小細胞肺癌腫瘍である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象が、身体の他の領域の癌を有する、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、請求項３８〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記タキサン粒子が、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４７または４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項５０または５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記第１の組成物が液体担体をさらに含み、前記抗腫瘍粒子が、前記担体中に分散している、請求項３８〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１の組成物が、無水である、請求項３８〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記液体担体が、水性担体である、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記水性担体が、０．９％食塩水溶液を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記水性担体が、界面活性剤を含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、前記ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記第１の組成物中の前記タキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項４７〜６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、請求項３８〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記肺投与が、噴霧化を含み、前記噴霧化が、前記第１の組成物のエアロゾル液滴の前記対象への肺送達をもたらす、請求項３８〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記エアロゾル液滴が、直径約０．５μｍ〜約６μｍ、または直径約１μｍ〜約３μｍ、または直径約２μｍ〜約３μｍの空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）を有する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記抗腫瘍薬が、前記第１の組成物の投与後少なくとも４日間、または少なくとも１４日間、前記対象の肺組織において検出可能である、請求項３８〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
対象において癌を治療する方法であって、
（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腫瘍内注射によって前記対象の固形腫瘍に直接に投与することと、
（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を前記対象に全身投与することと、
を含み、それにより前記癌を治療し、前記抗腫瘍粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）が、任意の順序でまたは同時に行われ得る、方法。
【請求項６９】
前記固形腫瘍が、良性腫瘍であり、前記対象が、体内の他の場所に癌を有する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記固形腫瘍が、悪性腫瘍である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記悪性腫瘍が、肉腫、癌腫、リンパ腫、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、頭頸部腫瘍、膠芽腫、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、皮膚腫瘍、皮膚転移、リンパ系、および／または胃腸腫瘍を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記対象が、身体の他の領域の癌を有する、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、請求項６８〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記タキサン粒子が、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７３または７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
前記パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項７６または７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項７９または８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記第１の組成物が液体担体をさらに含み、前記抗腫瘍粒子が、前記担体中に分散している、請求項６８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記液体担体が、水性担体である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記水性担体が、０．９％生理食塩水を含む、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記水性担体が、界面活性剤を含む、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、前記ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記第１の組成物中の前記タキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項７３〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、請求項６８〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
対象において癌を治療する方法であって、
（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腹腔内注射によって前記対象の腹腔内臓器腫瘍に投与することと、
（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を前記対象に全身投与することと、
を含み、それにより前記癌を治療し、前記抗腫瘍粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）が、任意の順序でまたは同時に行われ得る、方法。
【請求項９１】
前記腫瘍が、良性であり、前記対象が、体内の他の場所に癌を有する、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記腫瘍が、悪性である、請求項９０に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象が、身体の他の領域の癌を有する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記腫瘍が、卵巣腫瘍である、請求項９０〜９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、請求項９０〜９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記タキサン粒子が、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９５または９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項９８または９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、請求項９７に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記第１の組成物が液体担体をさらに含み、前記抗腫瘍粒子が、前記担体中に分散している、請求項９０〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
前記液体担体が、水性担体である、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
前記水性担体が、０．９％食塩水溶液を含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記水性担体が、界面活性剤を含む、請求項１０５または１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、前記ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記第１の組成物中の前記タキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項９５〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、請求項９０〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記免疫療法剤が、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である、請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記免疫療法剤が、モノクローナル抗体である、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記モノクローナル抗体が、ペンブロリズマブである、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記第２の組成物が、薬学的に許容される担体を含む、請求項１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記全身投与が、静脈内（ＩＶ）注射または経口送達である、請求項１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記第１の組成物が、前記第２の組成物の前記投与の少なくとも１日前に投与される、請求項１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記第２の組成物が、前記第１の組成物の前記投与の少なくとも１日前に投与される、請求項１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記第１の組成物および前記第２の組成物が、同じ日に投与される、請求項１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記第１の組成物中の抗腫瘍粒子の量および前記第２の組成物中の免疫療法剤の量が、前記対象において前記癌を治療し、かつ任意に前記対象の前記腫瘍を治療するのに有効な量である、請求項１〜１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記第１の組成物の前記局所投与が、前記第２の組成物の前記全身投与後、前記対象において前記免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する、請求項１〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２２】
キットであって、
（ａ）タキサン粒子を含む第１の組成物であって、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、第１の組成物と、
（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物と、
（ｃ）
（ｉ）前記第１の組成物を対象に局所投与すること、および
（ｉｉ）前記第２の組成物を前記対象に全身投与すること、に関する指示書と、を含む、キット。
【請求項１２３】
前記免疫療法剤が、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である、請求項１１２に記載のキット。
【請求項１２４】
前記タキサン粒子が、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項１２２または１２３に記載のキット。
【請求項１２５】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである、請求項１２２〜１２４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１２６】
前記タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、請求項１２５に記載のキット。
【請求項１２７】
前記パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１２６に記載のキット。
【請求項１２８】
前記パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項１２６または１２７に記載のキット。
【請求項１２９】
前記タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、請求項１２５に記載のキット。
【請求項１３０】
前記ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、請求項１２９に記載のキット。
【請求項１３１】
前記ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、請求項１２９または１３０に記載のキット。
【請求項１３２】
前記第１の組成物が、疎水性軟膏である、請求項１２５に記載のキット。
【請求項１３３】
前記第１の組成物が、水性懸濁液である、請求項１２５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、２０１７年１０月３日に出願された米国仮特許出願第６２／５６７，４４５号の優先権を主張する。
【発明の概要】
【０００２】
本発明は、組み合わせた局所および全身療法の使用、すなわち、免疫療法剤の全身投与に対する補助剤として、直接腫瘍にタキサン粒子などの抗腫瘍薬粒子（化学療法粒子）局所投与することを通して、癌を治療する方法を提供する。
【０００３】
本発明の一態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を対象の皮膚腫瘍の罹患領域に局所投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、皮膚腫瘍は、良性皮膚腫瘍であり、対象は、皮膚以外の身体の領域に癌を有する。他の実施形態において、皮膚腫瘍は、皮膚悪性腫瘍（悪性皮膚腫瘍）である。いくつかの実施形態において、対象は、身体の他の領域に癌を有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子を含む。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む。
【０００４】
本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を肺投与によって対象に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、対象は、肺疾患を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、肺疾患は、非癌性であり、対象は、肺以外の身体の領域に癌を有する。いくつかの実施形態において、非癌性肺疾患は、拘束性または閉塞性肺疾患である。他の実施形態において、肺疾患は、癌性である。いくつかの実施形態において、癌性肺疾患は、悪性腫瘍または中皮腫である。いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、非小細胞肺癌腫瘍である。いくつかの実施形態において、対象は、身体の他の領域に癌を有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子を含む。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、肺投与は、噴霧化を含み、噴霧化は、第１の組成物のエアロゾル液滴の対象への肺送達をもたらす。いくつかの実施形態において、抗腫瘍薬は、第１の組成物の投与後少なくとも４日間、または少なくとも１４日間、対象の肺組織において検出可能である。
【０００５】
本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腫瘍内注射によって対象の固形腫瘍に直接投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、固形腫瘍は、良性腫瘍であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。他の実施形態において、固形腫瘍は、悪性腫瘍である。いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、肉腫、癌腫、リンパ腫、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、頭頸部腫瘍、膠芽腫、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、皮膚腫瘍、皮膚転移、リンパ系、および／または胃腸腫瘍を含む。いくつかの実施形態において、対象は、身体の他の領域に癌を有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子を含む。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む。
【０００６】
本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腹腔内注射によって対象の腹腔内臓器腫瘍に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は、良性であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。他の実施形態において、腫瘍は、悪性である。いくつかの実施形態において、対象は、身体の他の領域に癌を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、卵巣腫瘍である。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子を含む。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む。
【０００７】
本発明の様々な実施形態において、第２の組成物の免疫療法剤は、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である。いくつかの実施形態において、第２の組成物の全身投与は、静脈内（ＩＶ）注射または経口送達である。いくつかの実施形態において、第１の組成物は、第２の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される。他の実施形態において、第２の組成物は、第１の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される。さらに他の実施形態において、第１の組成物および第２の組成物は、同じ日に投与される。
【０００８】
様々な実施形態において、第１の組成物中の抗腫瘍粒子の量および第２の組成物中の免疫療法剤の量は、対象において癌を治療し、かつ任意に対象の腫瘍を治療するのに有効な量である。様々な実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。
【０００９】
本発明の別の態様において、（ａ）タキサン粒子を含む第１の組成物であって、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、第１の組成物と、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物と、（ｃ）（ｉ）第１の組成物を対象に局所投与すること、および（ｉｉ）第２の組成物を対象に全身投与すること、に関する指示書と、を含む、キットが開示される。
【００１０】
本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を嚢胞内注射によって対象の嚢胞に直接投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。様々な実施形態において、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、上皮嚢胞である。いくつかの実施形態において、嚢胞は、良性嚢胞であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、悪性嚢胞である。いくつかの実施形態において、悪性嚢胞は、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、体の他の領域に悪性嚢胞および癌を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、膵嚢胞である。他の実施形態において、抗腫瘍薬は、タキサンであり、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。タキサン粒子は、タキサン粒子の薬学的に許容される塩を含むことができる。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。
【００１１】
本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を体腔内への注射によって対象の体腔内に位置する腫瘍に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。様々な実施形態において、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、良性腫瘍であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、悪性腫瘍である。いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、身体の他の領域に悪性腫瘍および癌を有する。他の実施形態において、抗腫瘍薬は、タキサンであり、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。タキサン粒子は、タキサン粒子の薬学的に許容される塩を含むことができる。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。
【００１２】
本発明の文脈において開示されるのは、以下の実施形態１〜１３３である。
実施形態１は、対象において癌を治療する方法であり、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を対象の皮膚腫瘍の罹患領域に局所投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。
実施形態２は、皮膚腫瘍が、良性皮膚腫瘍であり、対象が、皮膚以外の身体の領域の癌を有する、実施形態１に記載の方法である。
実施形態３は、良性皮膚腫瘍が、日光角化症である、実施形態２に記載の方法である。
実施形態４は、皮膚腫瘍が、皮膚悪性腫瘍（悪性皮膚腫瘍）である、実施形態１に記載の方法である。
実施形態５は、皮膚悪性腫瘍が、皮膚癌を含む、実施形態４に記載の方法である。
実施形態６は、皮膚癌が、黒色腫、基底細胞癌、または扁平上皮癌を含む、実施形態５に記載の方法である。
実施形態７は、皮膚悪性腫瘍が、皮膚転移を含む、実施形態６に記載の方法である。
実施形態８は、皮膚転移が、肺癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、卵巣癌、腎臓癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、および／またはカポジ肉腫からのものである、実施形態７に記載の方法である。
実施形態９は、対象が、身体の他の領域の癌を有する、実施形態４〜８のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１０は、抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１は、タキサン粒子が、少なくとも９５％のタキサンを含み、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態１０に記載の方法である。
実施形態１２は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態１０または１１に記載の方法である。
実施形態１３は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、実施形態１２に記載の方法である。
実施形態１４は、パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態１３に記載の方法である。
実施形態１５は、パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態１３または１４に記載の方法である。
実施形態１６は、タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態１２に記載の方法である。
実施形態１７は、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態１６に記載の方法である。
実施形態１８は、ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態１６または１７に記載の方法である。
実施形態１９は、第１の組成物が、無水である、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態２０は、第１の組成物が、疎水性である、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態２１は、第１の組成物が、疎水性担体を含む、実施形態２０に記載の方法である。
実施形態２２は、疎水性担体が、不揮発性である、実施形態２１に記載の方法である。
実施形態２３は、疎水性担体が、非極性である、実施形態２１または２２に記載の方法である。
実施形態２４は、疎水性担体が、炭化水素を含む、実施形態２１〜２３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態２５は、炭化水素が、ワセリン、鉱油、もしくはパラフィンワックス、またはそれらの混合物である、実施形態２４に記載の方法である。
実施形態２６は、鉱油が、重鉱油である、実施形態２５に記載の方法である。
実施形態２７は、疎水性担体が、疎水性組成物の５０％ｗ／ｗを超える、実施形態２１〜２６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態２８は、第１の組成物が、１つ以上の揮発性シリコーン流体をさらに含む、実施形態１〜２７のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態２９は、１つ以上の揮発性シリコーン流体の濃度が、第１の組成物の５〜２４％ｗ／ｗである、実施形態２８に記載の方法である。
実施形態３０は、揮発性シリコーン流体が、シクロメチコンである、実施形態２８または２９に記載の方法である。
実施形態３１は、シクロメチコンが、シクロペンタシロキサンである、実施形態３０に記載の方法である。
実施形態３２は、第１の組成物が、半固体である、実施形態１〜３１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態３３は、第１の組成物の粘度が、室温で４５秒間、１０ＲＰＭのＴ−Ｅスピンドルを用いて、ヘリパスがオンのヘリパススタンド上のＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計で測定したときに、２５，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓである、実施形態３２に記載の方法である。
実施形態３４は、第１の組成物が、軟膏である、実施形態３２〜３３に記載の方法である。
実施形態３５は、第１の組成物が、揮発性Ｃ１〜Ｃ４脂肪族アルコールを含有せず、追加の浸透促進剤を含有せず、追加の揮発性溶媒を含有せず、界面活性剤を含有せず、タンパク質を含有せず、かつ／またはアルブミンを含有しない、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態３６は、抗腫瘍粒子が、第１の組成物中に分散している、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態３７は、組成物中の抗腫瘍粒子の濃度が、約０．１〜約２％ｗ／ｗである、実施形態１〜３６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態３８は、対象において癌を治療する方法であり、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を肺投与によって対象に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、対象は、肺疾患を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。
実施形態３９は、肺疾患が、非癌性であり、対象が、肺以外の身体の領域の癌を有する、実施形態３８に記載の方法である。
実施形態４０は、非癌性肺疾患が、拘束性または閉塞性肺疾患である、実施形態３９に記載の方法である。
実施形態４１は、拘束性肺疾患が、肺線維症である、実施形態４０に記載の方法である。
実施形態４２は、閉塞性肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、実施形態４０に記載の方法である。
実施形態４３は、肺疾患が、癌性である、実施形態３８に記載の方法である。
実施形態４４は、癌性肺疾患が、悪性腫瘍または中皮腫である、実施形態４３に記載の方法である。
実施形態４５は、悪性腫瘍が、非小細胞肺癌腫瘍である、実施形態４４に記載の方法である。
実施形態４６は、対象が、身体の他の領域の癌を有する、実施形態４３〜４５のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態４７は、抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、実施形態３８〜４６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態４８は、タキサン粒子が、少なくとも９５％のタキサンを含み、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態４７に記載の方法である。
実施形態４９は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態４８または４９に記載の方法である。
実施形態５０は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、実施形態４９に記載の方法である。
実施形態５１は、パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態５０に記載の方法である。
実施形態５２は、パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態５０または５１に記載の方法である。
実施形態５３は、タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態４９に記載の方法である。
実施形態５４は、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態５３に記載の方法である。
実施形態５５は、ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態５３または５４に記載の方法である。
実施形態５６は、第１の組成物が液体担体をさらに含み、抗腫瘍粒子が、担体中に分散している、請求項３８〜５５のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５７は、第３８の組成物が、無水である、実施形態１〜５６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態５８は、液体担体が、水性担体である、実施形態５６に記載の方法である。
実施形態５９は、水性担体が、０．９％食塩水溶液を含む、実施形態５８に記載の方法である。
実施形態６０は、水性担体が、界面活性剤を含む、実施形態５８または５９に記載の方法である。
実施形態６１は、界面活性剤が、ポリソルベートである、実施形態６０に記載の方法である。
実施形態６２は、ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、実施形態６１に記載の方法である。
実施形態６３は、第１の組成物中のタキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、実施形態４７〜６２のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６４は、組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、実施形態３８〜６３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６５は、肺投与が、噴霧化を含み、噴霧化が、第１の組成物のエアロゾル液滴の対象への肺送達をもたらす、実施形態３８〜６４のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６６は、エアロゾル液滴が、直径約０．５μｍ〜約６μｍ、または直径約１μｍ〜約３μｍ、または直径約２μｍ〜約３μｍの空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）を有する、実施形態６５に記載の方法である。
実施形態６７は、抗腫瘍薬が、第１の組成物の投与後少なくとも４日間、または少なくとも１４日間、対象の肺組織において検出可能である、実施形態３８〜６６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態６８は、対象において癌を治療する方法であり、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腫瘍内注射によって対象の固形腫瘍に直接投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。
実施形態６９は、固形腫瘍が、良性腫瘍であり、対象が、体内の他の場所に癌を有する、実施形態６８に記載の方法である。
実施形態７０は、固形腫瘍が、悪性腫瘍である、実施形態６８に記載の方法である。
実施形態７１は、悪性腫瘍が、肉腫、癌腫、リンパ腫、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、頭頸部腫瘍、膠芽腫、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、皮膚腫瘍、皮膚転移、リンパ系、および／または胃腸腫瘍を含む、実施形態７０に記載の方法である。
実施形態７２は、対象が、身体の他の領域の癌を有する、実施形態７０または７１に記載の方法である。
実施形態７３は、抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、実施形態６８〜７２のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態７４は、タキサン粒子が、少なくとも９５％のタキサンを含み、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態７３に記載の方法である。
実施形態７５は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態７３または７４に記載の方法である。
実施形態７６は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、実施形態７５に記載の方法である。
実施形態７７は、パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態７６に記載の方法である。
実施形態７８は、パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態７６または７７に記載の方法である。
実施形態７９は、タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態７５に記載の方法である。
実施形態８０は、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態７９に記載の方法である。
実施形態８１は、ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態７９または８０に記載の方法である。
実施形態８２は、第１の組成物が液体担体をさらに含み、抗腫瘍粒子が、担体中に分散している、請求項６８〜８１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８３は、液体担体が、水性担体である、実施形態８２に記載の方法である。
実施形態８４は、水性担体が、０．９％食塩水溶液を含む、実施形態８３に記載の方法である。
実施形態８５は、水性担体が、界面活性剤を含む、実施形態８３または８４に記載の方法である。
実施形態８６は、界面活性剤が、ポリソルベートである、実施形態８５に記載の方法である。
実施形態８７は、ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、実施形態８６に記載の方法である。
実施形態８８は、第１の組成物中のタキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、実施形態７３〜８８のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態８９は、組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、実施形態６８〜８８のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９０は、対象において癌を治療する方法であり、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腹腔内注射によって対象の腹腔内臓器腫瘍に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。
実施形態９１は、腫瘍が、良性であり、対象が、体内の他の場所に癌を有する、実施形態９０に記載の方法である。
実施形態９２は、腫瘍が、悪性である、実施形態９０に記載の方法である。
実施形態９３は、対象が、身体の他の領域の癌を有する、実施形態９２に記載の方法である。
実施形態９４は、腫瘍が、卵巣腫瘍である、実施形態９０〜９３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９５は、抗腫瘍粒子が、タキサン粒子を含む、実施形態９０〜９４のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態９６は、タキサン粒子が、少なくとも９５％のタキサンを含み、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、実施形態９５に記載の方法である。
実施形態９７は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態９５または９６に記載の方法である。
実施形態９８は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、実施形態９７に記載の方法である。
実施形態９９は、パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態９８に記載の方法である。
実施形態１００は、パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態９８または９９に記載の方法である。
実施形態１０１は、タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態９７に記載の方法である。
実施形態１０２は、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態１０１に記載の方法である。
実施形態１０３は、ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態１０１または１０２に記載の方法である。
実施形態１０４は、第１の組成物が液体担体をさらに含み、抗腫瘍粒子が、担体中に分散している、請求項９０〜１０３のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１０５は、液体担体が、水性担体である、実施形態１０４に記載の方法である。
実施形態１０６は、水性担体が、０．９％食塩水溶液を含む、実施形態１０５に記載の方法である。
実施形態１０７は、水性担体が、界面活性剤を含む、実施形態１０５または１０６に記載の方法である。
実施形態１０８は、界面活性剤が、ポリソルベートである、実施形態１０７に記載の方法である。
実施形態１０９は、ポリソルベートが、ポリソルベート８０であり、ポリソルベート８０が、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖの濃度で水性担体中に存在する、実施形態１０８に記載の方法である。
実施形態１１０は、第１の組成物中のタキサン粒子の濃度が、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、実施形態９５〜１０９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１１は、組成物が、アルブミンなどのタンパク質を含有しない、実施形態９０〜１１０のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１２は、免疫療法剤が、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である、実施形態１〜１１１のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１３は、免疫療法剤が、モノクローナル抗体である、実施形態１１２に記載の方法である。
実施形態１１４は、モノクローナル抗体が、ペンブロリズマブである、実施形態１１３に記載の方法である。
実施形態１１５は、第２の組成物が、薬学的に許容される担体を含む、実施形態１〜１１４のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１６は、全身投与が、静脈内（ＩＶ）注射または経口送達である、実施形態１〜１１５のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１７は、第１の組成物が、第２の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される、実施形態１〜１１６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１８は、第２の組成物が、第１の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される、実施形態１〜１１６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１１９は、第１の組成物および第２の組成物が、同じ日に投与される、実施形態１〜１１６のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１２０は、第１の組成物中の抗腫瘍粒子の量および第２の組成物中の免疫療法剤の量が、対象において癌を治療し、かつ任意に対象の腫瘍を治療するのに有効な量である、実施形態１〜１１９のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１２１は、第１の組成物の局所投与が、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する、実施形態１〜１２０のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１２２は、（ａ）タキサン粒子を含む第１の組成物であって、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、第１の組成物と、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物と、（ｃ）（ｉ）第１の組成物を対象に局所投与すること、および（ｉｉ）第２の組成物を対象に全身投与すること、に関する指示書と、を含む、キットである。
実施形態１２３．免疫療法剤が、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である、実施形態１１２に記載のキット。
実施形態１２４は、タキサン粒子が、少なくとも９５％のタキサンを含み、タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する、請求項１２２または１２３に記載のキットである。
実施形態１２５は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである、実施形態１２２〜１２４のいずれか１つに記載の方法である。
実施形態１２６は、タキサン粒子が、パクリタキセル粒子である、実施形態１２５に記載のキットである。
実施形態１２７は、パクリタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態１２６に記載のキットである。
実施形態１２８は、パクリタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態１２６または１２７に記載のキットである。
実施形態１２９は、タキサン粒子が、ドセタキセル粒子である、実施形態１２５に記載のキットである。
実施形態１３０は、ドセタキセル粒子が、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する、実施形態１２９に記載のキットである。
実施形態１３１は、ドセタキセル粒子が、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する、実施形態１２９または１３０に記載のキットである。
実施形態１３２は、第１の組成物が、疎水性軟膏である、実施形態１２５に記載のキットである。
実施形態１３３は、第１の組成物が、水性懸濁液である、実施形態１２５に記載のキットである。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「抗腫瘍薬」という用語は、癌を含む新生物を治療するために使用される薬物であり、癌を治療するために使用される薬物である「化学療法薬」を含む。好ましい実施形態において、抗腫瘍薬は、タキサンである。
【００１４】
本明細書で使用する用語「抗腫瘍薬粒子」、「抗腫瘍粒子」、または「抗腫瘍薬（複数可）の粒子」は、抗腫瘍薬の粒子であり、直径が約０．１ミクロン〜約５ミクロン（約１００ｎｍ〜約５０００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。
【００１５】
本明細書で使用される場合「腫瘍」という用語は、細胞が本来分裂するべきよりも多く分裂するか、または本来死滅するべきときに死滅しないときに生じる、組織の１つ以上の異常な塊を意味する。腫瘍は、良性（癌ではない）または悪性（癌）の場合がある。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「疎水性」という用語は、室温で１０ｍｇ／ｍＬ以下の水への溶解度を有する化合物、組成物、または担体を表す。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「揮発性」という用語は、室温で１０Ｐａ以上の蒸気圧を有する化合物、組成物、または担体を表す。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「不揮発性」という用語は、室温で１０Ｐａ未満の蒸気圧を有する化合物、組成物、または担体を表す。
【００１９】
本発明の組成物または担体に関して本明細書で使用される場合、「無水」という用語は、３％ｗ／ｗ未満、好ましくは２％ｗ／ｗ未満、より好ましくは１％ｗ／ｗ未満、または最も好ましくは０％ｗ／ｗの水が組成物または担体中に存在することを意味する。これは、存在している少量の水（例えば、組成物または担体の成分のうちのいずれかに本質的に含有される水、大気から収縮した水など）を説明することができる。
【００２０】
本明細書で使用される場合、「皮膚（ｓｋｉｎ）」または「皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）」という用語は、表皮および／または真皮を意味する。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「皮膚腫瘍」という用語は、良性皮膚腫瘍および悪性皮膚腫瘍を含む。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「皮膚悪性腫瘍」または「悪性皮膚腫瘍」という用語は、皮膚癌および皮膚転移を含む癌性皮膚腫瘍を含む。
【００２３】
皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍の「罹患領域」は、皮膚の最外表面上または皮膚表面の真下（上皮／真皮被覆）に皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍が目に見えて存在する、皮膚の少なくとも一部分を含むことができ、目に見えて検出不能な前臨床病変を含む可能性が高い皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍の近くの皮膚の領域を含むことができる。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（皮膚（ｓｋｉｎ））転移」または「皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（皮膚（ｓｋｉｎ））転移（複数）」という用語は、身体の別の場所における、癌腫瘍の原発性増殖から生じる二次増殖（悪性腫瘍）としての皮膚の悪性腫瘍の発現を意味する。原発腫瘍からの広がりは、リンパ系もしくは血液循環系を介して、または他の手段による可能性がある。
【００２５】
癌の治療および／または腫瘍の治療に関して本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」という用語は、以下のうちの１つ以上を達成することを意味する。（ａ）腫瘍サイズの低減、（ｂ）腫瘍成長の低減、（ｃ）腫瘍の除去、（ｄ）転移の発生および／または広がりの低減または制限、（ｅ）癌の部分または完全寛解を得ること。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」という用語は、脊椎動物を意味する。いくつかの実施形態において、脊椎動物は、哺乳動物であり得る。いくつかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトを含む霊長類であり得る。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「室温」（ＲＴ）という用語は、１５〜３０℃または２０〜２５℃を意味する。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「浸透促進剤」または「皮膚浸透促進剤」という用語は、皮膚（表皮および真皮）への薬物吸収を促進する化合物または材料または物質を意味する。
【００２９】
本明細書で使用される場合、「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」または「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」という用語は、水の表面張力を低下させる能力、または２つの非混和性物質間の界面張力を低減する能力を示す化合物または材料または物質を意味する。
【００３０】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の指示対象を含む。本明細書で使用される場合、「および」は、特に明記しない限り、「または」と互換的に使用される。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、列挙された測定単位の＋／−５パーセント（５％）を意味する。
【００３２】
本出願について、１桁以上の小数位を有する数値は、標準的な丸めガイドラインを使用して、小数第１位で四捨五入して整数にされ得、すなわち、丸められる数値が５、６、７、８、または９である場合は切り上げられ、丸められる数値が０、１、２、３、または４の場合は切り捨てられ得る。例えば、３．７は、４に丸められ得る。
【００３３】
文脈上明白に他の意味に解すべき場合を除き、本明細書および特許請求の範囲全体を通して、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「備えること（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの語は、排他的または網羅的な意味とは対照的に包括的または非限定的（ｏｐｅｎ−ｅｎｄｅｄ）な意味で、つまり、「〜が挙げられるが、これらに限定されない）」の意味で解釈されるものとする。単数または複数を使用する語は、それぞれ、複数、単数も含む。さらに、「ｈｅｒｅｉｎ（本明細書において）」、「ａｂｏｖｅ（上に）」、および「ｂｅｌｏｗ（以下に）」といった語、ならびに類似の意味の語は、本出願において使用されるときには、全体としての本出願を指すものであり、本出願のいずれの特定の個所も指すものではない。組成物およびそれらの使用方法は、本明細書全体を通して開示される成分またはステップのうちのいずれかを「含む」、「から本質的になる」、または「からなる」ことができる。「〜から本質的になる」という語句に関して、本発明の方法の基本的かつ新規な特性は、免疫療法剤の組成物の全身送達と組み合わせた抗腫瘍粒子の組成物の局所送達によって、癌を治療する能力である。
【００３４】
本明細書で考察される任意の実施形態が、本発明の任意の方法または組成物に関して実行され得、逆もまた同様であることが企図される。さらに、本発明の組成物が本発明の方法を達成するために使用され得る。
【００３５】
本開示の実施形態の説明は、網羅的であることも、本開示を、開示された正確な形態に限定することも意図していない。本開示の特定の実施形態および実施例は、例示目的で本明細書に記載されているが、当業者が認識するように、本開示の範囲内で様々な同等の修正が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】フォーミュラＦ１〜Ｆ７について、インビトロで表皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。
【図２】フォーミュラＦ６＊（反復分析）およびＦ８〜Ｆ１３について、インビトロで表皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。
【図３】フォーミュラＦ１〜Ｆ７について、インビトロで真皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。
【図４】フォーミュラＦ６＊（反復分析）およびＦ８〜Ｆ１３について、インビトロで真皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。
【図５】皮膚転移研究における、ベースライン（１日目）のステージ４乳癌の女性の胸部上の皮膚転移病変の写真である。
【図６】皮膚転移研究の局所治療中の８日目における、ステージ４乳癌の女性の胸部上の皮膚転移病変の写真である。
【図７】皮膚転移研究の局所治療中の１５日目における、ステージ４乳癌の女性の胸部上の皮膚転移病変の写真である。
【図８ａ】皮膚転移研究の研究終了時の局所治療中の２９日目における、ステージ４乳癌の女性の胸部上の皮膚転移病変の写真である。
【図８ｂ】皮膚転移研究において局所治療が終了した２週間後、４３日目におけるステージ４乳癌の女性の胸部上の皮膚転移病変の写真である。
【図９】カスケードインパクターによって測定したときに、６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルの粒度分布のプロットである。
【図１０】カスケードインパクターによって測定したときに、２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルの粒度分布のプロットである。
【図１１】ラットへの肺投与後の経時的な血漿中のパクリタキセルレベルのグラフである。
【図１２】ラットへの肺投与後の経時的な肺組織のパクリタキセルレベルのグラフである。
【図１３】同所性肺癌研究からの経時的な動物体重のグラフである。
【図１４】同所性肺癌研究からの経時的な動物体重変化のグラフである。
【図１５】同所性肺癌研究からの動物肺重量のプロットである。
【図１６】同所性肺癌研究からの動物の肺対体の重量比のプロットである。
【図１７】同所性肺癌研究からの動物の肺対脳の重量比のプロットである。
【図１８】同所性肺癌研究からの平均腫瘍面積のグラフである。
【図１９】同所性肺癌研究からの平均腫瘍面積のプロットである。
【図２０】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０の顕微鏡写真である。肺腫瘍塊の主要な特徴。（２ｘ）．
【図２１】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−２００３（ＩＶアブラキサン）腺癌−１、原始−１、退縮−１の顕微鏡写真である。退縮中の肺腫瘍塊の特徴。（４ｘ）．
【図２２】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−２０１０（ＩＶアブラキサン）腺癌−３、原始−１、退縮−０の顕微鏡写真である。肺腫瘍塊の主要な特徴。（２ｘ）．
【図２３】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−４００９（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）１×高）腺癌−０、原始−０、退縮−４の顕微鏡写真である。完全に退縮した肺腫瘍塊の特徴。（２ｘ）．
【図２４】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−５０１０（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）２×低）腺癌−１、原始−０、退縮−３の顕微鏡写真である。退縮中の肺腫瘍塊の特徴。（２ｘ）．
【図２５】Ｈ＆Ｅ染色された同所性肺癌組織スライド−６００５（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）２×高）腺癌−１、原始−０、退縮−４の顕微鏡写真である。退縮中の肺腫瘍塊の特徴。（２ｘ）．
【図２６】同所性肺癌研究からの腫瘍退縮のプロットである。
【図２７】同所性肺癌組織スライド−（対照）の様々な顕微鏡写真である。上列：Ｈ／Ｅ染色切片。下列：ケラチンまたはＣＤ１１ｂによる免疫組織化学的染色。
【図２８】同所性肺癌組織スライド−（ＩＶアブラキサン）の様々な顕微鏡写真である。上列：Ｈ／Ｅ染色切片。下列：ケラチンまたはＣＤ１１ｂによる免疫組織化学的染色。
【図２９】同所性肺癌組織スライド−（吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標））の様々な顕微鏡写真である。Ｈ／Ｅ染色、トリクローム、ケラチン、およびＣＤ１１ｂによる様々な染色。
【図３０】ＴＬＳの存在を示す同所性肺癌組織スライドの様々な顕微鏡写真である。
【図３１】膀胱癌異種移植片研究からの経時的な平均腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の矢印は、投与時点を表す。
【図３２】膀胱癌異種移植片研究からのビヒクル３サイクルについての、経時的な個々の腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【図３３】膀胱癌異種移植片研究からのドセタキセルＩＶ  ３サイクルについての、経時的な個々の腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【図３４】膀胱癌異種移植片研究からのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  １サイクルについての、経時的な個々の腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、単回の投与時点を表す。
【図３５】膀胱癌異種移植片研究からのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ２サイクルについての、経時的な個々の腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【図３６】膀胱癌異種移植片研究からのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクルについての、経時的な個々の腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【図３７】膀胱癌異種移植片研究からの１日目の治療時の腫瘍体積に対する研究終了時の腫瘍体積の散布図である。
【図３８】膀胱癌異種移植片研究からの経時的な平均体重のグラフである。ｘ軸の矢印は、投与時点を表す。
【図３９】膀胱癌異種移植片研究からの各投与群についての、６１日目における平均腫瘍体積のグラフである。
【図４０】膀胱癌異種移植片研究からの腫瘍移植後２７日目、４０日目、および６１日目の各投与群の動物の写真である。
【図４１】膀胱癌異種移植片研究からのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）１サイクル、２サイクル、および３サイクルについての、腫瘍組織内のドセタキセルの濃度のグラフである。
【図４２】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴビヒクル対照の顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２．５２×。
【図４３】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴビヒクル対照の顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図４４】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴビヒクル対照の顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２５．２×。
【図４５】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２．５２×。
【図４６】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図４７】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２５．２×。
【図４８】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）２サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２．５２×。
【図４９】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）２サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図５０】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２．５２×。
【図５１】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２．５２×。
【図５２】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率２５．２×。
【図５３】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴビヒクル対照３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図５４】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＶドセタキセル３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図５５】膀胱癌異種移植組織スライド−ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクルＦ４／８０染色の顕微鏡写真である。倍率２．５２×。
【図５６】雌ラットからの腎細胞腺癌異種移植片組織スライド−未処置の顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図５７】雌ラットからの腎細胞腺癌異種移植片組織スライド−ビヒクル対照（ＩＴ）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図５８】雌ラットからの腎細胞腺癌異種移植片組織スライド−ドセタキセル溶液（ＩＶ）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図５９】雌ラットからの腎細胞腺癌異種移植片組織スライド−ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ＩＴ）３サイクルの顕微鏡写真である。Ｈ＆Ｅ．倍率６．３×。
【図６０】腎細胞腺癌異種移植組織スライドの対照症例の様々な顕微鏡写真である。上列：Ｈ＆Ｅ染色切片。下列：免疫組織化学的染色。
【図６１】腎細胞腺癌異種移植組織スライドのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）症例の様々な顕微鏡写真である。１列目：１サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（１×）。２列目：１サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（１×）。３列目：２サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（２×）。４列目：２サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（２×）。５列目：３サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（３×）。
【図６２】腎細胞腺癌異種移植片研究からのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群のラットの経時的な平均腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【図６３】腎細胞腺癌異種移植片研究からのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群のラットの経時的な平均腫瘍体積のグラフである。ｘ軸の三角形は、投与時点を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明は、組み合わせた局所および全身療法の使用、すなわち、免疫療法剤の全身投与に対する補助剤として、直接腫瘍にタキサン粒子などの抗腫瘍薬粒子（化学療法粒子）局所投与することを通して、癌を治療する方法を提供する。
【００３８】
タキサン粒子などの抗腫瘍粒子（例えば、パクリタキセル粒子またはドセタキセル粒子）を良性または悪性腫瘍のいずれかに局所投与する場合（すなわち、腫瘍内注射、腹腔内注射、吸入による肺内沈着、または皮膚腫瘍もしくは皮膚転移などの皮膚悪性腫瘍への局所投与）、抗腫瘍薬の分子（例えば、パクリタキセルまたはドセタキセル）は、抗腫瘍薬が高濃度でＩＶにより溶液として投与される場合よりも長い時間にわたって腫瘍部位に残る。したがって、タキサン粒子などの局所投与された抗腫瘍粒子は、全身免疫療法に対する局所補助剤として機能することができる。いかなる特定の機構にも限定されないが、そのような補助剤効果は、例えば、ＩＶ化学療法の関連する毒性が追加されることなく、リンパ球が腫瘍に対するそれらの先天性免疫応答ならびに適応免疫応答の両方を活性化するのに十分な時間を提供することを含み得る。
【００３９】
腫瘍抗原に対する局所樹状細胞応答の活性化を含む、タキサン粒子の局所投与に応答して生じる免疫系刺激は、例えば、皮膚へのタキサン粒子の局所投与またはタキサン粒子の肺吸入によって強化され得る。いかなる特定の機構にも限定されないが、タキサン粒子の投与による局所腫瘍細胞死滅は、樹状細胞に付着した腫瘍細胞抗原を放出する。活性化された樹状細胞は、次いで、患者の血管系全体を循環するＴ細胞および他の殺腫瘍細胞に腫瘍特異的抗原を提示し、かつ患者全体にわたる癌の破壊を可能にする腫瘍を含有する組織に侵入し得る。したがって、局所粒子投与の使用により、直接的な局所療法、ならびに間接的な免疫系媒介全身癌細胞死滅が可能になる。
【００４０】
皮膚腫瘍の局所療法、固形腫瘍の腫瘍内注射、腹腔内注射、または肺疾患の吸入療法のいずれかによるタキサン粒子の局所投与によって、局所タキサン分子は、免疫応答を刺激する補助剤として作用する。タキサンの局所濃度は、４日間よりも長く上昇したままであり、これは、局所腫瘍細胞の死滅、ならびに全身に広範囲に広がり得る癌の死滅に適した免疫応答の刺激に十分な時間を提供する。タキサン粒子の局所投与による免疫系のこの刺激は、患者の循環血液中に付随する高レベルのタキサンを産生することなく生じる。したがって、粒子タキサンの局所投与は、リンパ球などの白血球数の低減を伴う骨髄の造血を低減しない。骨髄抑制は、高濃度の循環タキサンによるＩＶ投与時のタキサンの一般的な副作用である。
【００４１】
いかなる特定の機構にも限定されないが、タキサン粒子の局所投与は、樹状細胞における活性化を通して免疫療法に対する局所免疫応答を刺激するために、長期間にわたって十分な濃度のタキサンを産生し得る。樹状細胞の活性化は、それらが豊富に見られる皮膚または肺で最も顕著に生じ得る。皮膚腫瘍へのタキサン粒子の局所投与は、腫瘍細胞へのパクリタキセルの侵入を引き起こし、これは、細胞の分裂周期中にそれらを死滅させ、免疫療法による免疫認識によりアクセスしやすい状態にする。次いで、リンパ球は、患者の体全体を循環し、腫瘍細胞の細胞表面抗原に特異的である液性メディエーターを産生する。リンパ球は、皮膚に位置する腫瘍および遠隔転移を破壊する。リンパ球腫瘍死滅はまた、細胞の免疫監視経路を介しても生じ得る。例えば、皮膚転移へのタキサン粒子の局所投与は、皮膚転移だけでなく、患者の癌の体全体の根絶をもたらす。体内の癌の同じ排除は、吸入されたタキサン粒子に応答して転移性肺癌に起こるであろう。
【００４２】
したがって、本発明の癌治療方法には、局所療法と全身療法の併用、すなわち、免疫療法剤を含む組成物の全身投与と組み合わせた、タキサン粒子などの抗腫瘍薬粒子を含む組成物の腫瘍への直接の局所投与が含まれる。抗腫瘍薬粒子、例えば、タキサン粒子の局所投与は、全身免疫療法の局所補助剤として機能し、リンパ球が腫瘍に対するそれらの先天性免疫応答ならびに適応免疫応答の両方を活性化するのに十分な時間を提供する。
【００４３】
抗腫瘍粒子を含む組成物の局所投与および免疫療法剤の全身投与の組み合わせによる処置は、以下のうちの少なくとも１つから明らかなように、免疫療法剤単独での処置、および／または抗腫瘍粒子を含む組成物単独による処置（単剤療法）よりも高い有効性を実証する。
（ａ）免疫療法剤単独で処置した動物よりも、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの大きい低減、または
（ｂ）免疫療法剤単独で処置した動物よりも、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の大きい低減、または
（ｃ）免疫療法剤単独で処置した動物の腫瘍排除の発生がないことと対比した、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の１つ以上の発生、または
（ｄ）抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物よりも、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの大きい低減、または
（ｅ）抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物よりも、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の大きい低減、または
（ｆ）抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物の腫瘍排除の発生がないことと対比した、抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の１つ以上の発生。
また、有効性に対する相乗効果は、以下のうちの少なくとも１つから明らかなように、局所投与される抗腫瘍粒子を含む組成物と、全身投与される免疫療法剤の組み合わせで実現される。
（ｇ）抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの低減は、免疫療法剤単独で処置した動物の腫瘍サイズの低減と抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物の腫瘍サイズの低減の合計よりも大きい、または
（ｈ）抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の低減は、免疫療法剤単独で処置した動物の腫瘍成長の低減と抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物の腫瘍成長の低減の合計よりも大きい、または
（ｉ）抗腫瘍粒子を含む組成物と免疫療法剤の組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の発生数は、ペンブロリズマブ単独で処置した動物の腫瘍排除の発生数と抗腫瘍粒子を含む組成物単独で処置した動物の腫瘍排除の発生数の合計よりも大きい。
【００４４】
Ｉ．抗腫瘍薬粒子
抗腫瘍薬は、癌を含む新生物を治療するために使用される薬物であり、癌を治療するために使用される薬物である「化学療法薬」を含む。好適な抗腫瘍薬には、対象に投与されたときに免疫学的応答を刺激するものが含まれる。抗腫瘍薬の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｗｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，２０００によって発行された“Ａｓｈｇａｔｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ”に列挙されているのが見られ得る。抗腫瘍薬粒子は、直径が約０．１ミクロン〜約５ミクロン（約１００ｎｍ〜約５０００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍薬粒子は、直径が約０．１ミクロン〜約１．５ミクロン（約１００ｎｍ〜約１５００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍薬粒子は、直径が約０．１ミクロン〜１ミクロン未満（約１００ｎｍ〜１０００ｎｍ未満）の平均粒径（数）を有する。抗腫瘍薬粒子は、全身循環によって腫瘍から運び出される可能性が低いサイズ範囲にあり、それにもかかわらず高い比表面積の恩恵を受けて、強化された薬物の可溶化および放出を提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、固体の、コーティングされていない（「純」または「裸」の）個々の粒子である。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、いかなる物質にも結合していない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子の表面にはいかなる物質も吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍薬または抗腫瘍粒子は、いかなる物質内にもカプセル化、含有、封入、または埋め込みされていない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、いかなる物質でもコーティングされていない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、抗腫瘍薬を含有するマイクロエマルション、ナノエマルション、ミクロスフェア、またはリポソームではない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンに結合、それらの中にカプセル化、またはそれらでコーティングされていない。いくつかの実施形態において、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンは、抗腫瘍粒子の表面に吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、結晶形態である。他の実施形態において、抗腫瘍粒子は、非晶質形態、または結晶形態と非晶質形態の両方の組み合わせである。いくつかの実施形態において、本発明の抗腫瘍粒子は、抗腫瘍薬の調製中に典型的に見られる微量の不純物および副生成物を含有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の抗腫瘍薬を含み、抗腫瘍粒子が、実質的に純粋な抗腫瘍薬からなるか、または本質的になることを意味する。
【００４６】
いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質でコーティングされているか、またはそれらに結合している。いくつかの実施形態において、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質は、抗腫瘍粒子の表面に吸着または吸収される。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質内にカプセル化、含有、封入、または埋め込みされている。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、抗腫瘍薬を含有するマイクロエマルション、ナノエマルション、ミクロスフェア、またはリポソームである。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、非凝集の個々の粒子であり、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合される複数の抗腫瘍粒子のクラスターではない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々の抗腫瘍粒子であり、これらは、一緒に融合してより大きい個々の抗腫瘍粒子を形成し、これらの全てが抗腫瘍粒子の処理中に生じる。他の実施形態において、抗腫瘍粒子は、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合される抗腫瘍粒子のクラスターまたは凝集体である。
【００４７】
好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。タキサンは一般に、室温で１０ｍｇ／ｍＬ以下の水への溶解度を有する難水溶性化合物である。タキサンは、抗腫瘍薬および化学療法薬として広く使用されている。本明細書で使用される場合、「タキサン」という用語には、パクリタキセル（Ｉ）、ドセタキセル（ＩＩ）、カバジタキセル（ＩＩＩ）、および任意の他のタキサンもしくはタキサン誘導体が含まれ、その非限定的な例は、タキソールＢ（セファロマニン）、タキソールＣ、タキソールＤ、タキソールＥ、タキソールＦ、タキソールＧ、タキサジエン、バッカチンＩＩＩ、１０−デアセチルバッカチン、タクスキニンＡ、ブレビホリオール、およびタクススピンＤであり、また、タキサンの薬学的に許容される塩も含まれる。
（Ｉ）パクリタキセル
【化１】
2020536052.tif 000002
【００４８】
パクリタキセルおよびドセタキセル医薬品有効成分（ＡＰＩ）は、Ｐｈｙｔｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＬＬＣ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａから市販されている。ドセタキセルＡＰＩは、無水の無溶媒ベースで計算されたドセタキセルを９０％以上、または９５％以上、または９７．５％以上含有する。パクリタキセルＡＰＩは、無水の無溶媒ベースで計算されたパクリタキセルを９０％以上、または９５％以上、または９７％以上含有する。いくつかの実施形態において、パクリタキセルＡＰＩおよびドセタキセルＡＰＩは、ＵＳＰおよび／またはＥＰグレードである。パクリタキセルＡＰＩは、半合成化学プロセスから、または植物細胞の発酵または抽出などの天然源から調製され得る。パクリタキセルはまた、商標名ＴＡＸＯＬによって呼ばれることもあるが、ＴＡＸＯＬが、静脈内注入前に好適な非経口液で希釈することを目的とした、ポリオキシエチル化ヒマシ油およびエタノール中のパクリタキセルの溶液の商標名であるため、これは誤称である。タキサンＡＰＩは、タキサン粒子を作製するために使用され得る。タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、もしくはカバジタキセル粒子、またはタキサンの薬学的に許容される塩の粒子を含む他のタキサン誘導体の粒子であり得る。
【００４９】
タキサン粒子は、直径が約０．１ミクロン〜約５ミクロン（約１００ｎｍ〜約５０００ｎｍ）の平均粒径（数）を有する。好ましい実施形態において、タキサン粒子は、固体の、コーティングされていない（「純」の）個々の粒子である。タキサン粒子は、全身循環によって腫瘍から運び出される可能性が低いサイズ範囲にあり、それにもかかわらず高い比表面積の恩恵を受けて、強化された薬物の可溶化および放出を提供する。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、いかなる物質にも結合していない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子の表面にはいかなる物質も吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態において、タキサンまたはタキサン粒子は、いかなる物質内にもカプセル化、含有、封入、または埋め込みされていない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、いかなる物質でもコーティングされていない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、タキサンを含有するマイクロエマルション、ナノエマルション、ミクロスフェア、またはリポソームではない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンに結合、それらの中にカプセル化、またはそれらでコーティングされていない。いくつかの実施形態において、モノマー、ポリマー（もしくは生体適合性ポリマー）、タンパク質、界面活性剤、またはアルブミンは、タキサン粒子の表面に吸収または吸着されていない。いくつかの実施形態において、組成物およびタキサン粒子は、アルブミンを除外する。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、結晶形態である。他の実施形態において、タキサン粒子は、非晶質形態、または結晶形態と非晶質形態の両方の組み合わせである。いくつかの実施形態において、本発明のタキサン粒子は、タキサンの調製中に典型的に見られる微量の不純物および副生成物を含有する。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のタキサンを含み、タキサン粒子が、実質的に純粋なタキサンからなるか、または本質的になることを意味する。
【００５０】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質でコーティングされているか、またはそれらに結合している。いくつかの実施形態において、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質は、タキサン粒子の表面に吸着または吸収される。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、タンパク質（例えば、アルブミン）、モノマー、ポリマー、生体適合性ポリマー、または界面活性剤などの物質内にカプセル化、含有、封入、または埋め込みされている。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、タキサンを含有するマイクロエマルション、ナノエマルション、ミクロスフェア、またはリポソームである。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、非凝集の個々の粒子であり、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合される複数のタキサン粒子のクラスターではない。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々のタキサン粒子であり、これらは、一緒に融合してより大きい個々のタキサン粒子を形成し、これらの全てがタキサン粒子の処理中に生じる。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合されるタキサン粒子のクラスターまたは凝集体である。
【００５１】
抗腫瘍粒子またはタキサン粒子（パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、またはカバジタキセル粒子を含む）は、０．１ミクロン〜５ミクロン、０．１ミクロン〜２ミクロン、０．１ミクロン〜１．５ミクロン、０．１ミクロン〜１．２ミクロン、０．１ミクロン〜１ミクロン、または０．１ミクロン〜１ミクロン未満、または０．１ミクロン〜０．９ミクロン、０．１ミクロン〜０．８ミクロン、０．１ミクロン〜０．７ミクロン、０．２ミクロン〜５ミクロン、０．２ミクロン〜２ミクロン、０．２ミクロン〜１．５ミクロン、０．２ミクロン〜１．２ミクロン、０．２ミクロン〜１ミクロン、または０．２ミクロン〜１ミクロン未満、または０．２ミクロン〜０．９ミクロン、０．２ミクロン〜０．８ミクロン、０．２ミクロン〜０．７ミクロン、０．３ミクロン〜５ミクロン、０．３ミクロン〜２ミクロン、０．３ミクロン〜１．５ミクロン、０．３ミクロン〜１．２ミクロン、０．３ミクロン〜１ミクロン、または０．３ミクロン〜１ミクロン未満、または０．３ミクロン〜０．９ミクロン、０．３ミクロン〜０．８ミクロン、０．３ミクロン〜０．７ミクロン、０．４ミクロン〜５ミクロン、０．４ミクロン〜２ミクロン、０．４ミクロン〜１．５ミクロン、０．４ミクロン〜１．２ミクロン、０．４ミクロン〜１ミクロン、または０．４ミクロン〜１ミクロン未満、または０．４ミクロン〜０．９ミクロン、０．４ミクロン〜０．８ミクロン、０．４ミクロン〜０．７ミクロン、０．５ミクロン〜５ミクロン、０．５ミクロン〜２ミクロン、０．５ミクロン〜１．５ミクロン、０．５ミクロン〜１．２ミクロン、０．５ミクロン〜１ミクロン、または０．５ミクロン〜１ミクロン未満、または０．５ミクロン〜０．９ミクロン、０．５ミクロン〜０．８ミクロン、０．５ミクロン〜０．７ミクロン、０．６ミクロン〜５ミクロン、０．６ミクロン〜２ミクロン、０．６ミクロン〜１．５ミクロン、０．６ミクロン〜１．２ミクロン、０．６ミクロン〜１ミクロン、または０．６ミクロン〜１ミクロン未満、または０．６ミクロン〜０．９ミクロン、０．６ミクロン〜０．８ミクロン、０．６ミクロン〜０．７ミクロンの平均粒径（数）を有することができる。抗腫瘍粒子またはタキサン粒子は、全身循環によって腫瘍から運び出される可能性が低いサイズ範囲にあり、それにもかかわらず高い比表面積の恩恵を受けて、強化された薬物の可溶化および放出を提供する。
【００５２】
タキサン粒子を含む抗腫瘍粒子の粒径は、粒径アナライザー計器によって決定され得、測定値は、数分布（数）に基づく平均直径として表される。好適な粒径アナライザー計器は、フォトゾーンまたは単一粒子光学検知法（ＳＰＯＳ）とも呼ばれる光遮蔽の分析技法を用いるものである。好適な光遮蔽粒径アナライザー計器は、Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｏｒｔ  Ｒｉｃｈｅｙ，Ｆｌｏｒｉｄａから入手可能なＡＣＣＵＳＩＺＥＲ  ７８０  ＳＩＳなどのＡＣＣＵＳＩＺＥＲである。別の好適な粒径アナライザー計器は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＡＬＤ−７１０１などのレーザー回折を用いるものである。
【００５３】
タキサン粒子を含む抗腫瘍薬粒子は、当技術分野において既知の様々な粒径低減方法および装置を使用して製造され得る。そのような方法には、湿式または乾式粉砕、微粉化、崩壊、および微粉砕などの従来の粒径低減方法が含まれるが、これらに限定されない。他の方法には、超臨界二酸化炭素などの「圧縮抗溶媒を用いた沈殿」（ＰＣＡ）が含まれる。様々な実施形態において、抗腫瘍薬粒子および／またはタキサン粒子は、米国特許第５８７４０２９号、同第５８３３８９１号、同第６１１３７９５号、同第７７４４９２３号、同第８７７８１８１号、同第９２３３３４８号、米国公開第２０１５／０３７５１５３号、同第２０１６／０３５４３３６号、同第２０１６／０３７４９５３号、ならびに国際特許出願公開第２０１６／１９７０９１号、同第２０１６／１９７１００号、および同第２０１６／１９７１０１号で開示されるようなＰＣＡ方法によって作製され、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。
【００５４】
超臨界二酸化炭素を使用したＰＣＡ粒径低減方法では、十分に特徴付けられた粒径分布内で０．１〜５ミクロンほど小さいコーティングされていない抗腫瘍粒子またはタキサン粒子を生成するために、超臨界二酸化炭素（抗溶媒）および溶媒、例えば、アセトンまたはエタノールが用いられる。二酸化炭素および溶媒が処理中に除去され（最大０．５％の残留溶媒が残る場合がある）、抗腫瘍粒子またはタキサン粒子を粉末として残す。安定性研究は、パクリタキセル粒子粉末が、室温で最大５９か月、促進条件下（４０℃／７５％相対湿度）で最大６か月保管した場合、バイアル投与形態で安定していることを示す。
【００５５】
様々な超臨界二酸化炭素粒径低減方法によって生成されたタキサン粒子は、物理的衝撃または研削、例えば、湿式または乾式粉砕（ｍｉｌｌｉｎｇ）、微粉化、崩壊、粉砕（ｃｏｍｍｉｎｕｔｉｎｇ）、微小流動化、または微粉砕を使用した従来の粒径低減方法によって生成されたタキサン粒子と比較して、独自の物理的特性を有することができる。参照により本明細書に組み込まれる米国公開第２０１６／０３７４９５３号で開示されるように、そのような独自の特性は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）、および少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）のタキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）粒子を含み、これらは、米国公開第２０１６／０３７４９５３号に記載され、かつ以下に記載される超臨界二酸化炭素粒径低減方法によって生成される。このかさ密度範囲は一般に、従来の手段によって生成されたタキサン粒子のかさ密度よりも低く、ＳＳＡは一般に、従来の手段によって生成されたタキサン粒子のＳＳＡよりも高い。これらの独自の特性により、従来の手段によって生成されたタキサンと比較して、水／メタノール媒体中の溶解速度が大幅に高まる。本明細書で使用される場合、「比表面積」（ＳＳＡ）は、次の方法によるブルナウアー−エメット−テラー（「ＢＥＴ」）等温線によって測定されるタキサン質量単位当たりのタキサン粒子の総表面積である：２００〜３００ｍｇの既知の質量の検体が３０ｍＬ試料管に添加される。次いで、装填された管は、Ｐｏｒｏｕｓ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｉｎｃ．ＳＯＲＰＴＯＭＥＴＥＲ（登録商標）、モデルＢＥＴ−２０２Ａに載置される。次いで、自動試験が、ＢＥＴＷＩＮ（登録商標）ソフトウェアパッケージを使用して行われ、各試料の表面積が続いて計算される。当業者によって理解されるように、「タキサン粒子」は、凝集タキサン粒子および非凝集タキサン粒子の両方を含むことができ、ＳＳＡがグラム単位で決定されるため、組成物中の凝集タキサン粒子および非凝集タキサン粒子の両方が考慮される。凝集タキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々のタキサン粒子として本明細書で定義され、これらは、一緒に融合してより大きい個々のタキサン粒子を形成し、これらの全てがタキサン粒子の処理中に生じる。ＢＥＴ比表面積試験手順は、米国薬局方および欧州薬局方の両方に含まれる公定法である。かさ密度の測定は、室温でのタッピングなしでタキサン粒子をメスシリンダーに注ぎ、質量および体積を測定し、かさ密度を計算することによって行われ得る。
【００５６】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号で開示されるように、研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで、パクリタキセルを粉砕することによって生成されたパクリタキセル粒子について、１５．０ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．３１ｇ／ｃｍ３のかさ密度を示した。また、米国公開２０１６／０３７４９５３に開示されているように、１ロットのパクリタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法によって生成された場合、３７．７ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．０８５ｇ／ｃｍ３のかさ密度を有した：６５ｍｇ／ｍＬのパクリタキセルの溶液をアセトン中で調製した。ＢＥＴＥ  ＭｉｃｒｏＷｈｉｒｌ（登録商標）噴霧ノズル（ＢＥＴＥ  Ｆｏｇ  Ｎｏｚｚｌｅ，Ｉｎｃ．）および音波プローブ（Ｑｓｏｎｉｃａ、型番Ｑ７００）を、約８ｍｍ離して結晶化チャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを結晶化チャンバに取り付けて、沈殿したパクリタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の結晶化チャンバ内に配置し、約３８℃および２４ｋｇ／時間の流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。パクリタキセルを含有するアセトン溶液を、約３６時間、４．５ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。上記の超臨界二酸化炭素法によって生成されたパクリタキセル粒子の追加のロットは、２２．２７ｍ２／ｇ、２３．９０ｍ２／ｇ、２６．１９ｍ２／ｇ、３０．０２ｍ２／ｇ、３１．１６ｍ２／ｇ、３１．７０ｍ２／ｇ、３２．５９ｍ２／ｇ、３３．８２ｍ２／ｇ、３５．９０ｍ２／ｇ、３８．２２ｍ２／ｇ、および３８．５２ｍ２／ｇのＳＳＡ値を有した。
【００５７】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号で開示されるように、研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルで、ドセタキセルを粉砕することによって生成されたドセタキセル粒子について、１５．２ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．４４ｇ／ｃｍ３のかさ密度を示した。また、米国公開２０１６／０３７４９５３に開示されているように、ドセタキセル粒子は、次の方法を使用した超臨界二酸化炭素法によって生成された場合、４４．２ｍ２／ｇのＳＳＡおよび０．０７９ｇ／ｃｍ３のかさ密度を有した：７９．３２ｍｇ／ｍＬのドセタキセルの溶液をエタノール中で調製した。ノズルおよび音波プローブを、約９ｍｍ離して加圧可能なチャンバ内に位置付けた。約１００ｎｍの穴を有するステンレス鋼メッシュフィルタを加圧可能なチャンバに取り付けて、沈殿したドセタキセル粒子を収集した。超臨界二酸化炭素を製造装置の加圧可能なチャンバ内に配置し、約３８℃および６８ｓｌｐｍの流速で約１２００ｐｓｉにした。音波プローブを、２０ｋＨｚの周波数で６０％の総出力に調整した。ドセタキセルを含有するエタノール溶液を、約９５分間、２ｍＬ／分の流速でノズルを通して送り出した。次いで、沈殿したドセタキセル凝集粒子およびより小さいドセタキセル粒子を、混合物がステンレス鋼メッシュフィルタを通して送り出されるときに超臨界二酸化炭素から収集した。ドセタキセルの粒子を含むフィルタを開き、得られる生成物をフィルタから収集した。
【００５８】
米国公開第２０１６／０３７４９５３号で開示されるように、溶解研究は、室温において６０分間６００ＲＰＭで、５ｍｍボールサイズを使用したＤｅｃｏ−ＰＢＭ−Ｖ−０．４１ボールミルを使用して、パクリタキセルおよびドセタキセルを粉砕することによって作製されたパクリタキセルおよびドセタキセル粒子と比較して、米国公開第２０１６／０３７４９５３号に記載される超臨界二酸化炭素法によって作製されたパクリタキセルおよびドセタキセル粒子のメタノール／水媒体中の溶解速度の増加を示した。溶解速度の決定に使用される手順は、次のとおりである。パクリタキセルの場合、約５０ｍｇの材料を、約１時間バイアル内で材料およびビーズを混転させることによって、約１．５ｇの１ｍｍガラスビーズ上にコーティングした。ビーズをステンレス鋼メッシュ容器に移し、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水５０／５０（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に配置した。１０、２０、３０、６０、および９０分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２２７ｎｍにおいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。ドセタキセルの場合、約５０ｍｇの材料を、３７℃、ｐＨ７のメタノール／水１５／８５（ｖ／ｖ）媒体および７５ｒｐｍで動作するＵＳＰ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ  ＩＩ（Ｐａｄｄｌｅ）を含む溶解浴内に直接配置した。５、１５、３０、６０、１２０、および２２５分で、５ｍＬのアリコートを除去し、０．２２μｍフィルタを通して濾過し、２３２ｎｍにおいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で分析した。試料の吸光度値を、溶解媒体中で調製した標準溶液の吸光度値と比較して、溶解した材料の量を決定した。パクリタキセルの場合、溶解速度は、粉砕によって作製された粒子についての３０分で３２％溶解と対比して、超臨界二酸化炭素法によって作製された粒子については３０分で４７％溶解した。ドセタキセルの場合、溶解速度は、粉砕によって作製された粒子についての３０分で９％溶解と対比して、超臨界二酸化炭素法によって作製された粒子については３０分で２７％溶解した。
【００５９】
いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。一実施形態において、抗腫瘍粒子は、約１０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、約０．０５０ｇ／ｃｍ３〜約０．２０ｇ／ｃｍ３のかさ密度を有する。
【００６０】
さらなる実施形態において、抗腫瘍粒子は、以下のＳＳＡを有する。
（ａ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｂ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｃ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｄ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｅ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｆ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｇ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｈ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｉ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｊ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｋ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｌ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは３３ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、
（ｍ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｈ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｉ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｊ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｋ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｌ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３２ｍ２／ｇ、
（ｍ）１６ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ、
（ｎ）１７ｍ２／ｇ〜３１ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ、
（ｏ）１６ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ、
（ｐ）１７ｍ２／ｇ〜３０ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ、
（ｑ）１６ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ、または
（ｒ）１７ｍ２／ｇ〜２９ｍ２／ｇ、もしくは≧３３ｍ２／ｇ。
【００６１】
いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子またはタキサン粒子は、より小さい粒子の凝集によって形成される個々のタキサン粒子であり、これらは、一緒に融合してより大きい個々のタキサン粒子を形成し、これらの全てがタキサン粒子の処理中に生じる。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子またはタキサン粒子は、非凝集の個々の粒子であり、非共有結合相互作用、ファンデルワールス力、親水性もしくは疎水性相互作用、静電相互作用、クーロン力、分散材料との相互作用、または官能基を介した相互作用などの相互作用力によって一緒に結合される複数の抗腫瘍粒子またはタキサン粒子のクラスターではない。
【００６２】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、または少なくとも３５ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態において、パクリタキセル粒子は、１８ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜４５ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２０ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜４０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００６３】
いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３、または０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．２０ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する。
【００６４】
いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子は、３７℃および７のｐＨにおいて、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置で、５０％メタノール／５０％水（ｖ／ｖ）の溶液中に３０分以内で少なくとも４０％ｗ／ｗ溶解する溶解速度を有する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、ドセタキセル粒子であり、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、または少なくとも４２ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。他の実施形態において、ドセタキセル粒子は、１８ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または４０ｍ２／ｇ〜６０ｍ２／ｇ、または１８ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２２ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または２６ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または３５ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇ、または４０ｍ２／ｇ〜５０ｍ２／ｇのＳＳＡを有する。
【００６６】
いくつかの実施形態において、ドセタキセルの粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する。
【００６７】
いくつかの実施形態において、ドセタキセル粒子は、３７℃および７のｐＨにおいて、７５ＲＰＭで動作するＵＳＰ  ＩＩパドル装置で、１５％メタノール／８５％水（ｖ／ｖ）の溶液中に３０分以内で少なくとも２０％ｗ／ｗ溶解する溶解速度を有する。
【００６８】
ＩＩ．局所投与のための組成物
局所投与に有用な組成物は、本明細書および本開示全体に記載のタキサン粒子を含む抗腫瘍粒子を含む組成物であり、様々なタイプの局所投与、すなわち、局所適用、肺投与、腫瘍内（ＩＴ）注射、および腹腔内（ＩＰ）注射に適した組成物である。組成物は、懸濁液であってもよい。例えば、組成物は、担体が連続相であり、抗腫瘍粒子が分散（懸濁）相であるように、抗腫瘍粒子が担体内に分散している担体を含むことができる。抗腫瘍粒子は、組成物および／または担体中に完全に分散、または部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、抗腫瘍粒子は、組成物および／または担体中に完全に溶解することはできない。
【００６９】
Ａ．局所適用のための組成物
局所適用のための組成物（局所用組成物）は、タキサン粒子などの抗腫瘍粒子を含む。抗腫瘍粒子は、局所用組成物中に分散（懸濁）することができる。局所用組成物は、局所送達に適した任意の組成物であり得る。局所用組成物は、疎水性組成物であり得る。局所用組成物は、無水親水性組成物または無水疎水性組成物を含むことができる、無水組成物であり得る。無水親水性組成物の非限定的な例には、ポリオール、グリコール（例えば、プロピレングリコール、ＰＥＧ）、および／またはポロキサマーベースの組成物が含まれる。局所用組成物は、水性系組成物などの非無水であり得る。局所用組成物は、滅菌であり得るか、自己保存性であり得るか、または防腐剤を含み得る。
【００７０】
局所用組成物は、局所送達に適した様々な形態で製剤化され得る。非限定的な例には、半固体組成物、ローション、液体懸濁液、エマルション、クリーム、ゲル、軟膏、ペースト、エアロゾルスプレー、エアロゾルフォーム、非エアロゾルスプレー、非エアロゾルフォーム、フィルム、およびシートが含まれる。半固体組成物には、軟膏、ペースト、およびクリームが含まれる。局所用組成物は、ガーゼ、包帯、または他の皮膚被覆材に含浸され得る。いくつかの実施形態において、局所用組成物は、半固体組成物である。いくつかの実施形態において、局所用組成物は、軟膏である。他の実施形態において、局所用組成物は、ゲルである。さらに他の実施形態において、局所用組成物は、液体懸濁液である。いくつかの実施形態において、局所用組成物は、スプレーではなく、スプレー可能ではない。
【００７１】
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、ポリマー／コポリマーまたは生体適合性ポリマー／コポリマーを有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、アルブミンを有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸とタキサンの抱合体を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸とパクリタキセルの抱合体を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ポロキサマー、ポリアニオン、ポリカチオン、修飾ポリアニオン、修飾ポリカチオン、キトサン、キトサン誘導体、金属イオン、ナノベクター、ポリ−ガンマ−グルタミン酸（ＰＧＡ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）、アルギン酸（ＡＬＧ）、ビタミンＥ−ＴＰＧＳ、ジメチルイソソルビド（ＤＭＩ）、メトキシＰＥＧ  ３５０、クエン酸、抗ＶＥＧＦ抗体、エチルセルロース、ポリスチレン、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリエステル、ポリアミド、ポリサッカライド、ポリタンパク質、スチレン−イソブチレン−スチレン（ＳＩＢＳ）、ポリ無水物コポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビス（Ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン−セバシン酸、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＡＧＡ）、および／またはポリ（Ｄ，Ｌ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）を有しない／含まない、または含有しない。
【００７２】
局所用組成物は、局所製品に適した任意のパッケージ構成でパッケージ化され得る。非限定的な例には、ボトル、ポンプ付きボトル、トトル、チューブ（アルミニウム、プラスチック、またはラミネート）、ジャー、非エアロゾルポンプ噴霧器、エアロゾル容器、パウチ、およびパケットが含まる。パッケージは、単回投与または複数回投与用に構成され得る。
【００７３】
好適な局所用組成物の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ  ２０１７／０４９０８３号で開示されている。
【００７４】
１．疎水性局所用組成物
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、疎水性組成物である。本開示の目的のために、疎水性組成物は、組成物中の疎水性構成成分の総量が組成物中の非疎水性構成成分の総量よりも多い組成物である。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、無水である。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、疎水性担体を含む。
【００７５】
疎水性担体は、植物、動物、パラフィン、および／または合成由来の供給源からの物質を含むことができる。疎水性物質は一般に、水に対する親和性がなく、水をはじく物質として知られている。疎水性担体は、局所用組成物の連続相であり得、抗腫瘍粒子は、分散相であり得る。様々な実施形態において、疎水性担体は、非極性および／または不揮発性である。疎水性担体の非限定的な例には、脂肪、バター、グリース、ワックス、溶媒、および油；鉱油；植物油；ワセリン；非水溶性有機エステルおよびトリグリセリド；ならびにフッ素化合物が含まれる。疎水性担体は、シリコーン材料も含むことができる。シリコーン材料は、ポリジアルキルシロキサンベースの化合物として定義され、ポリマー、エラストマー（架橋シリコーン）、および接着剤（分枝状シリコーン）を含む。シリコーン材料の非限定的な例には、ジメチコン（ポリジメチルシロキサン）、ジメチコンコポリオール、シクロメチコン、シメチコン、ＳＴ−ｅｌａｓｔｏｍｅｒ  １０（ＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ）などのシリコーンエラストマー、シリコーン油、シリコーンポリマー、揮発性シリコーン流体、およびシリコーンワックスが含まれる。いくつかの実施形態において、疎水性担体は、シリコーン材料を含まない。植物由来の材料には、ラッカセイ（ピーナッツ）油、バルサムペルー油、カルナバワックス、キャンデリラワックス、ヒマシ油、水添ヒマシ油、ココアバター、ココナッツ油、トウモロコシ油、綿実油、ホホバ油、マカダミア種子油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジワックス、パーム核油、菜種油、ベニバナ油、ゴマ油、シアバター、大豆油、ヒマワリ種子油、ティーツリー油、植物油、および水添植物油が含まれるが、これらに限定されない。動物由来の材料の非限定的な例には、蜜蝋（黄蝋および白蝋）、タラ肝油、エミュー油、ラード、ミンク油、サメ肝油、スクアラン、スクアレン、および獣脂が含まれる。パラフィン系材料の非限定的な例には、イソパラフィン、微結晶ワックス、重鉱油、軽鉱油、オゾケライト、ワセリン、白色ワセリン、およびパラフィンワックスが含まれる。有機エステルおよびトリグリセリドの非限定的な例には、Ｃ１２〜１５安息香酸アルキル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、中鎖トリグリセリド、モノ−およびジ−グリセリド、トリラウリン、ならびにトリヒドロキシステアリンが含まれる。フッ素化化合物の非限定的な例は、Ｓｏｌｖａｙ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓから市販されているＦＯＭＢＬＩＮ（登録商標）ＨＣ０４などのペルフルオロポリエーテル（ＰＦＰＥ）である。疎水性担体は、医薬品グレードの疎水性物質を含むことができる。
【００７６】
様々な実施形態において、疎水性担体は、ワセリン、鉱油、パラフィン、またはそれらの混合物を含む。ワセリンは、石油から得られる半固体飽和炭化水素の精製混合物であり、濃琥珀色から明るい黄色まで色が異なる。白色ワセリンは、完全にまたはほぼ脱色され、クリーム色から雪白色まで異なる。異なる融点、粘度、および稠度の特性を有するワセリンが利用可能である。ワセリンは、酸化防止剤などの安定剤も含有し得る。医薬品グレードのワセリンには、Ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ  ＵＳＰおよびＷｈｉｔｅ  Ｐｅｔｒｏｌａｔｕｍ  ＵＳＰが含まれる。鉱油は、石油から得られる液体炭化水素の混合物である。軽鉱油、重鉱油、および超重鉱油などの様々な粘度グレードの鉱油が入手可能である。軽鉱油は、４０℃で３３．５センチストーク以下の動粘度を有する。重鉱油は、４０℃で３４．５センチストーク以上の動粘度を有する。医薬品グレードの鉱油には、重鉱油であるＭｉｎｅｒａｌ  Ｏｉｌ  ＵＳＰおよび軽鉱油であるＬｉｇｈｔ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｏｉｌ  ＮＦが含まれる。いくつかの実施形態において、鉱油は、重鉱油である。パラフィンワックスは、石油から得られる固体炭化水素の精製混合物である。それはまた、フィッシャー・トロプシュ法によって、パラフィン炭化水素の混合物に触媒的に変換される一酸化炭素および水素から合成的に誘導され得る。パラフィンワックスは、酸化防止剤を含有し得る。医薬品グレードのパラフィンワックスには、Ｐａｒａｆｆｉｎ  ＮＦおよびＳｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐａｒａｆｆｉｎ  ＮＦが含まれる。
【００７７】
いくつかの実施形態において、疎水性組成物中の疎水性担体の濃度は、全組成物重量の１０％ｗ／ｗより大きい。他の実施形態において、疎水性組成物中の疎水性担体の濃度は、全組成物重量の１５％超、または２０％超、または２５％超、または３０％超、または３５％超、または４０％超、または４５％超、または５０％超、または５５％超、または６０％超、または６５％超、または７０％超、または７５％超、または８０％超、または８２％超、８５％超、８７％超、または９０％ｗ／ｗ超である。他の実施形態において、疎水性組成物中の疎水性担体の濃度は、全組成物重量の１０％ｗ／ｗ超〜９５％ｗ／ｗである。他の実施形態において、疎水性組成物中の疎水性担体の濃度は、全組成物重量の１１％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１２％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１３％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１４％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１５％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１６％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１７％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１８％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または１９％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗ、または２０％ｗ／ｗ〜９５％ｗ／ｗである。好ましい実施形態において、疎水性組成物中の疎水性担体は、疎水性組成物の５０％より大きい。
【００７８】
疎水性組成物は、疎水性担体を含むことができ、１つ以上の揮発性シリコーン流体をさらに含むことができる。揮発性シリコーンオイルとしても既知の揮発性シリコーン流体は、環状または直鎖状であり得る揮発性液体ポリシロキサンである。それらは、室温で液体である。揮発性シリコーン流体は、疎水性材料である。直鎖状揮発性シリコーン流体には、ポリジメチルシロキサン、ヘキサメチルジシロキサン、およびオクタメチルトリシロキサンが含まれ、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇから商標名ＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ  Ｑ７−９１８０  Ｓｉｌｉｃｏｎｅ  Ｆｌｕｉｄ  ０．６５  ｃＳｔおよびＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ  Ｑ７−９１８０  Ｓｉｌｉｃｏｎｅ  Ｆｌｕｉｄ  １．０  ｃＳｔのそれぞれで市販されている。環状揮発性シリコーン流体は一般に、シクロメチコンとして知られている。シクロメチコンは、式（ＩＶ）：
（ＩＶ）［−（ＣＨ３）２ＳｉＯ−］ｎ
（式中、ｎは、３、４、５、６、もしくは７である）の繰り返し単位を含む完全にメチル化された環状シロキサン、またはそれらの混合物である。シクロメチコンは、透明、無色、揮発性液体シリコーン流体である。シクロメチコンは、皮膚軟化特性があり、皮膚のべたつき感を少なくすることによって、油性製品の触感を改善するのに役立つ。医薬品グレードのシクロメチコンには、Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ＮＦが含まれる。Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ＮＦは、式（ＩＶ）（式中、ｎは、４（シクロテトラシロキサン）、５（シクロペンタシロキサン）、もしくは６（シクロヘキサシロキサン）である）、またはそれらの混合物によって表される。デカメチルシクロペンタシロキサン、シクロメチコンＤ５、またはシクロメチコン５としても既知のシクロペンタシロキサンは、式（ＩＶ）（式中、ｎは、５（五量体）である）によって表されるシクロメチコンであるが、これは、少量（一般に１％未満）の他の環状鎖長シクロメチコンのうちの１つ以上を含有することができる。シクロペンタシロキサンは、Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ＮＦとして医薬品グレードで入手可能である。シクロメチコンは、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇから商標名ＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ  ＳＴ−Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ５−ＮＦ、ＤＯＷ  ＣＯＲＮＩＮＧ  ＳＴ−Ｃｙｃｌｏｍｅｔｈｉｃｏｎｅ  ５６−ＮＦ、およびＸＩＡＭＥＴＥＲ  ＰＭＸ−０２４５で市販されている。これはまた、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｆｇ．Ｃｏｒｐ．からも市販されている。シクロペンタシロキサンは、２５℃で約２０〜約２７Ｐａの蒸気圧を有する。
【００７９】
一実施形態において、疎水性組成物中のシクロメチコンの濃度は、２５％ｗ／ｗ未満である。別の実施形態において、疎水性組成物中のシクロメチコンは、５〜２４％ｗ／ｗの濃度である。別の実施形態において、シクロメチコンの濃度は、５〜２０％ｗ／ｗである。別の実施形態において、シクロメチコンは、５〜１８％ｗ／ｗの濃度である。別の実施形態において、シクロメチコンの濃度は、１３％ｗ／ｗである。様々な実施形態において、シクロメチコンの濃度は、全組成物重量の５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３、２３．５、もしくは２４％ｗ／ｗ、またはそれらの中から導き出される任意の割合であり得る。いくつかの実施形態において、揮発性シリコーン流体は、シクロメチコンである。いくつかの実施形態において、シクロメチコンは、シクロペンタシロキサンである。
【００８０】
疎水性組成物は、疎水性担体と揮発性シリコーン流体の混合物内の、タキサン粒子などの抗腫瘍粒子の懸濁液であり得る。抗腫瘍粒子は、疎水性組成物中に完全に分散、または部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、抗腫瘍粒子は、疎水性組成物中に完全に溶解することはできない。疎水性担体は、疎水性組成物の連続相であり得、抗腫瘍粒子は、分散相であり得る。したがって、疎水性組成物は、連続疎水性担体相および分散（懸濁）抗腫瘍粒子相の少なくとも２つの相を含むことができる。揮発性シリコーン流体は、連続相内で可溶化および／または分散され得る。
【００８１】
いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、追加の浸透促進剤を有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、ラウロカプラムを有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（ＤＧＭＥ）を有しない／含まない。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、ミリスチン酸イソプロピルを有しない／含まない。他の実施形態において、疎水性組成物は、アルファトコフェロールを有しない／含まない。他の実施形態において、疎水性組成物は、追加の揮発性溶媒または化合物を有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、いかなるアルコールまたはＣ１〜Ｃ４脂肪族アルコールを有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、Ｃ１〜Ｃ５脂肪族アルコールを有しない／含まない、または含有しない。他の実施形態において、疎水性組成物は、界面活性剤を有しない／含まない、または含有しない。他の実施形態において、疎水性組成物は、ポリマー／コポリマー（または生分解性ポリマー／コポリマー）を有しない／含まない。他の実施形態において、疎水性組成物は、ポロキサマー、スチレン−イソブチレン−スチレン（ＳＩＢＳ）、ポリ無水物コポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ（ビス（Ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン−セバシン酸、および／またはポリ（Ｄ，Ｌ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）を有しない／含まない。
【００８２】
いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、半固体組成物である。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、軟膏である。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、軟膏を含む半固体組成物であり、２分の平衡時間で、５ｒｐｍにおいて、ＳＣ４−１４スピンドルおよび６Ｒチャンバを備えた小さい試料アダプターを使用したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計によって室温で測定したときに、１２，５００ｃｐｓ〜２４７，５００ｃｐｓ、または２５，０００ｃｐｓ〜１５０，０００ｃｐｓの粘度を有する。疎水性半固体組成物の粘度測定を実施する代替の方法は、室温で４５秒間、１０ＲＰＭのＴ−Ｅスピンドルを用いて、ヘリパスがオンのヘリパススタンド上のＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計を使用することである。いくつかの実施形態において、疎水性組成物は、軟膏を含む半固体組成物であり、室温で４５秒間、１０ＲＰＭのＴ−Ｅスピンドルを用いて、ヘリパスがオンのヘリパススタンド上のＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計を使用して、２５，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓ、または２５，０００ｃｐｓ〜４００，０００ｃｐｓ、または２５，０００ｃｐｓ〜３５０，０００ｃｐｓ、または２５，０００ｃｐｓ〜３００，０００ｃｐｓ、または５０，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓ、または５０，０００ｃｐｓ〜４００，０００ｃｐｓ、または５０，０００ｃｐｓ〜３５０，０００ｃｐｓ、または５０，０００ｃｐｓ〜３００，０００ｃｐｓ、または７５，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓ、または７５，０００ｃｐｓ〜４００，０００ｃｐｓ、または７５，０００ｃｐｓ〜３５０，０００ｃｐｓ、または７５，０００ｃｐｓ〜３００，０００ｃｐｓ、または１００，０００ｃｐｓ〜５００，０００ｃｐｓ、または１００，０００ｃｐｓ〜４００，０００ｃｐｓ、または１００，０００ｃｐｓ〜３５０，０００ｃｐｓ、または１００，０００ｃｐｓ〜３００，０００ｃｐｓの粘度を有する。
【００８３】
２．水性系局所用組成物
局所水性系組成物は、タキサン粒子などの抗腫瘍粒子、および水性担体を含む。水性組成物は、水性担体中の抗腫瘍粒子の分散液（懸濁液）である。抗腫瘍粒子は、水性担体中に完全に分散、部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、完全に溶解することはできない。水性系組成物は、水が主要な構成成分（５０％超）である組成物である。水性担体には、単相水溶液、ならびに水中油型および油中水型エマルションなどの多相水性系エマルションが含まれ得る。水性担体の非限定的な例には、水および緩衝液が含まれる。
【００８４】
局所水性系組成物の非限定的な例は、国際特許公開第ＷＯ  ２０１７／０４９０８３号で開示されるように、ポロキサマー４０７、四級アンモニウム化合物、および／または架橋アクリル酸ポリマーを含む水性担体（例えば、水）を含む。四級アンモニウム化合物の非限定的な例には、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムが含まれる。架橋アクリル酸ポリマーの非限定的な例には、カルボマー（ＩＮＣＩ名）、アクリレートコポリマー（ＩＮＣＩ名）、アクリレート／Ｃ１０〜３０アルキルアクリレートクロスポリマー（ＩＮＣＩ名）、アクリレートクロスポリマー−４（ＩＮＣＩ名）、およびポリアクリレート−１クロスポリマー（ＩＮＣＩ名）が含まれる。
【００８５】
３．局所用組成物の追加の成分および賦形剤
局所用組成物は、局所用組成物での使用に適した機能性成分をさらに含むことができる。非限定的な例には、吸収剤、酸性化剤、抗菌剤、酸化防止剤、結合剤、殺生物剤、緩衝剤、増量剤、結晶成長抑制剤、キレート剤、着色剤、消臭剤、エマルション安定剤、皮膜形成剤、香料、保湿剤、溶解剤、酵素剤、乳白剤、酸化剤、ｐＨ調整剤、可塑剤、防腐剤、還元剤、エモリエントスキンコンディショニング剤、保湿スキンコンディショニング剤、保湿剤、界面活性剤、乳化剤、洗浄剤、発泡剤、ヒドロトープ（ｈｙｄｒｏｔｏｐｅ）、溶媒、懸濁剤、粘度制御剤（レオロジー変性剤）、粘度増加剤（増粘剤）、および噴射剤が含まれる。本明細書に記載の機能性成分の例のリストおよび研究論文は、参照により本明細書に組み込まれるＴｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  （ＩＮＣＩ），１２ｔｈ，２００８で開示されている。
【００８６】
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、浸透促進剤を含む。他の実施形態において、局所用組成物は、追加の浸透促進剤を有しない／含まない。「浸透促進剤」という用語は、皮膚を通した薬物吸収を促進する化合物または材料または物質を説明するために使用されている。これらの化合物もしくは材料もしくは物質は、皮膚の透過性に直接影響を与えることができるか、またはそれらは、浸透剤の熱力学的活性を高めることによって経皮吸収を増強し、それにより拡散種の効果的な逃散傾向および濃度勾配を高めることができる。これらの促進剤の主な効果は、角質層の水和度を高めるか、またはそのリポタンパク質マトリクスを破壊することのいずれかであり、いずれの場合の最終結果も、薬物（浸透剤）拡散に対する耐性の低下である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  ｅｄ．）。皮膚浸透促進剤の非限定的な例には、オレイルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル、商標名ＡＲＬＡＳＯＬＶＥ  ＤＭＩで入手可能なジメチルイソソルビド（ＤＭＩ）、および商標名ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ  Ｐで入手可能であるジエチレングリコールモノエチルエーテル（ＤＧＭＥ）が含まれる。皮膚浸透促進剤の他の例は、参照により本明細書に組み込まれる“Ｓｋｉｎ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ  Ｃｉｔｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ”，Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｄａｖｉｄ  Ｗ．，ａｎｄ  Ｈｅｎｋｅ，Ｊｉｌｌ  Ｊ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９７で見ることができる。そのような例には、脂肪アルコール、例えば、脂肪族アルコール、デカノール、ラウリルアルコール（ドデカノール）、リノレニルアルコール、ネロリドール、１−ノナノール、ｎ−オクタノール、オレイルアルコール、脂肪酸エステル、酢酸ブチル、乳酸セチル、デシルＮ，Ｎ−ジメチルアミノアセテート、デシルＮ，Ｎ−ジメチルアミノイソプロピオネート、ジエチルグリコールオレエート、セバシン酸ジエチル、コハク酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル、ドデシルＮ，Ｎ−ジメチルアミノアセテート、ドデシル（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）−ブチレート、ドデシルＮ，Ｎ−ジメチルアミノイソプロピオネート、ドデシル２−（ジメチルアミノ）プロピオネート、ＥＯ−５−オレイルエステル、酢酸エチル、アセト酢酸エチル、プロピオン酸エチル、グリセリンモノエーテル、モノラウリン酸グリセロール、モノオレイン酸グリセロール、モノリノール酸グリセロール、イソステアリン酸イソプロピル、リノール酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル／脂肪酸モノグリセリドの組み合わせ、ミリスチン酸イソプロピル／エタノール／Ｌ−乳酸（８７：１０：３）の組み合わせ、パルミチン酸イソプロピル、酢酸メチル、カプリン酸メチル、ラウリン酸メチル、プロピオン酸メチル、吉草酸メチル、１−モノカプロイルグリセロール、モノグリセリド（中鎖長）、ニコチン酸エステル（ベンジル）、酢酸オクチル、オクチルＮ，Ｎ−ジメチルアミノアセテート、オレイン酸オレイル、ｎ−ペンチルＮ−アセチルプロリネート、モノラウ��ン酸プロピレングリコール、ジラウリン酸ソルビタン、ジオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、トリラウリン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、スクロースココナッツ脂肪エステル混合物、モノラウリン酸スクロース、モノオレイン酸スクロース、およびテトラデシルＮ，Ｎ−ジメチルアミノアセテート；脂肪酸、例えば、アルカン酸、カプリン酸、二酸、エチルオクタデカン酸、ヘキサン酸、乳酸、ラウリン酸、リノエライジン酸、リノール酸、リノレン酸、ネオデカン酸、オレイン酸、パルミチン酸、ペラルゴン酸、プロピオン酸、およびバクセン；脂肪アルコールエーテル、例えば、α−モノグリセリルエーテル、ＥＯ−２−オレイルエーテル、ＥＯ−５−オレイルエーテル、ＥＯ−１０−オレイルエーテル、およびポリグリセリンとアルコールのエーテル誘導体（１−Ｏ−ドデシル−３−Ｏ−メチル−２−Ｏ−（２’，３’−ジヒドロキシプロピル）グリセロール）；生物製剤、例えば、Ｌ−α−アミノ酸、レシチン、リン脂質、サポニン／リン脂質、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、およびタウログリココール酸ナトリウム；酵素、例えば、酸性ホスファターゼ、カロナーゼ、オルゲラーゼ、パパイン、ホスホリパーゼＡ−２、ホスホリパーゼＣ、およびトリアシルグリセロールヒドロラーゼ；アミンおよびアミド、例えば、アセトアミド誘導体、非環式アミド、Ｎ−アダマンチルｎ−アルカンアミド、クロフィブリン酸アミド、Ｎ，Ｎ−ジドデシルアセトアミド、ジ−２−エチルヘキシルアミン、ジエチルメチルベンズアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−トルアミド、Ｅｔｈｏｍｅｅｎ  Ｓ１２［ビス−（２−ヒドロキシエチル）オレイルアミン］、ヘキサメチレンラウラミド、ラウリル−アミン（ドデシルアミン）、オクチルアミド、オレイルアミン、不飽和環状尿素、および尿素；錯化剤、例えば、β−およびγ−シクロデキストリン複合体、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、リポソーム、ナフタレンジアミドジイミド、およびナフタレンジエステルジイミド；大環状化合物、例えば、大環状ラクトン、ケトン、および無水物（最適な環−１６）、ならびに不飽和環状尿素；典型的な界面活性剤、例えば、Ｂｒｉｊ  ３０、Ｂｒｉｊ  ３５、Ｂｒｉｊ  ３６Ｔ、Ｂｒｉｊ  ５２、Ｂｒｉｊ  ５６、Ｂｒｉｊ  ５８、Ｂｒｉｊ  ７２、Ｂｒｉｊ  ７６、Ｂｒｉｊ  ７８、Ｂｒｉｊ  ９２、Ｂｒｉｊ  ９６、Ｂｒｉｊ  ９８、セチルトリメチルアンモニウム臭化物、Ｅｍｐｉｃｏｌ  ＭＬ２６／Ｆ、ＨＣＯ−６０界面活性剤、ヒドロキシポリエトキシドデカン、イオン性界面活性剤（ＲＯＯＮａ、ＲＯＳＯ３Ｎａ、ＲＮＨ３Ｃｌ、Ｒ＝８〜１６）、ラウロイルサルコシン、非イオン性界面活性剤、ノノキシノール、オクトキシノール、Ｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｎａｔｅ  ＣＡ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ  １２７、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ６２、ポリオレイン酸塩（非イオン性界面活性剤）、Ｒｅｗｏｐａｌ  ＨＶ  １０、ラウリン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム（ドデシル硫酸ナトリウム）、オレイン酸ナトリウム、ジラウリン酸ソルビタン、ジオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、トリラウリン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、Ｓｐａｎ  ２０、Ｓｐａｎ  ４０、Ｓｐａｎ  ８５、Ｓｙｎｐｅｒｏｎｉｃ  ＮＰ、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ４０、Ｔｗｅｅｎ  ６０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、およびＴｗｅｅｎ  ８５；Ｎ−メチルピロリドンおよび関連化合物、例えば、Ｎ−シクロヘキシル−２−ピロリドン、１−ブチル−３−ドデシル−２−ピロリドン、１，３−ジメチル−２−イミダゾリキノン、１，５ジメチル−２−ピロリドン、４，４−ジメチル−２−ウンデシル−２−オキサゾリン、１−エチル−２−ピロリドン、１−ヘキシル−４−メチルオキシカルボニル−２−ピロリドン、１−ヘキシル−２−ピロリドン、１−（２−ヒドロキシエチル）ピロリジノン、３−ヒドロキシ−Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、１−イソプロピル−２−ウンデシル−２−イミダゾリン、１−ラウリル−４−メチルオキシカルボニル−２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ピログルタミン酸エステル、および２−ピロリドン（２−ピロリジノン）；イオン化合物、例えば、アスコルビン酸塩、両性カチオンおよびアニオン、チオグリコール酸カルシウム、セチルトリメチルアンモニウム臭化物、３，５−ジヨードサリチル酸ナトリウム、ヨウ化ラウロイルコリン、５−メトキシサリチル酸ナトリウム、リン酸モノアルキル、２−ＰＡＭクロリド、４−ＰＡＭクロリド（Ｎ−メチルピコリニウムクロリドの誘導体）、カルボン酸ナトリウム、およびヒアルロン酸ナトリウム；ジメチルスルホキシドおよび化合物、例えば、環状スルホキシド、デシルメチルスルホキシド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、および２−ヒドロキシウンデシルメチルスルホキシド；溶媒および関連化合物、例えば、アセトン、ｎ−アルカン（７〜１６の鎖長）、シクロヘキシル−１，１−ジメチルエタノール、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、エタノール、エタノール／ｄ−リモネンの組み合わせ、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、エトキシジグリコール（ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ）、グリセロール、グリコール、塩化ラウリル、リモネン、Ｎ−メチルホルムアミド、２−フェニルエタノール、３−フェニル−１−プロパノール、３−フェニル−２−プロペン−１−オール、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエステル、ポリプロピレングリコール、第一級アルコール（トリデカノール）、プロピレングリコール、スクアレン、トリアセチン、トリクロロエタノール、トリフルオロエタノール、トリメチレングリコール、およびキシレン；アゾンおよび関連化合物、例えば、Ｎ−アシル−ヘキサヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−アゼピン、Ｎ−アルキル−ジヒドロ−１，４−オキサゼピン−５，７−ジオン、Ｎ−アルキルモルホリン−２，３−ジオン、Ｎ−アルキルモルホリン−３，５−ジオン、アザシクロアルカン誘導体（−ケトン、−チオン）、アザシクロアルケノン誘導体、１−［２−（デシルチオ）エチル］アザシクロペンタン−２−オン（ＨＰＥ−１０１）、Ｎ−（２，２−ジヒドロキシエチル）ドデシルアミン、１−ドデカノイルヘキサヒドロ−１−Ｈ−アゼピン���１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン（ＡＺＯＮＥまたはラウロカプラム）、Ｎ−ドデシルジエタノールアミン、Ｎ−ドデシル−ヘキサヒドロ−２−チオ−１Ｈ−アゼピン、Ｎ−ドデシル−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド、Ｎ−ドデシル−Ｎ−（２−メトキシエチル）イソブチルアミド、Ｎ−ドデシル−ピペリジン−２−チオン、Ｎ−ドデシル−２−ピペリジノン、Ｎ−ドデシルピロリジン−３，５−ジオン、Ｎ−ドデシル１ピロリジン−２−チオン、Ｎ−ドデシル−２−ピロリドン、１−ファメシルアザシクロヘプタン−２−オン、１−ファメシルアザシクロペンタン−２−オン、１−ゲラニルアザシクロヘプタン−２−オン、１−ゲラニルアザシクロペンタン−２−オン、ヘキサヒドロ−２−オキソ−アゼピン−１−酢酸エステル、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２−ピロリドン、１−ラウリルアザシクロヘプタン、２−（１−ノニル）−１，３−ジオキソラン、１−Ｎ−オクチルアザシクロペンタン−２−オン、Ｎ−（１−オキソドデシル）−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン、Ｎ−（１−オキソドデシル）−モルホリン、１−オキソヒドロカルビル置換アザシクロヘキサン、Ｎ−（１−オキソテトラデシル）−ヘキサヒドロ−２−オキソ−ｌＨ−アゼピン、およびＮ−（ｌ−チオドデシル）−モルホリン；ならびにその他、例えば、脂肪族チオール、アルキルＮ，Ｎ−ジアルキル置換アミノアセテート、アニス油、抗コリン薬前処理、アスカリドール、二相性基誘導体、ビサボロール、カルダモン油、１−カルボン、Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ（７０％アスカリドール）、ヘノポジ油、１，８シネオール（ユーカリプトール）、タラ肝油（脂肪酸抽出物）、４−デシルオキサゾリジン−２−オン、ジシクロヘキシルメチルアミンオキシド、ジエチルヘキサデシルホスホネート、ジエチルヘキサデシルホスホルアミデート、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン−Ｎ−オキシド、４，４−ジメチル−２−ウンデシル−２−オキサゾリン、Ｎ−ドデカノイル−Ｌ−アミノ酸メチルエステル、１，３−ジオキサシクロアルカン（ＳＥＰＡ）、ジチオトレイトール、ユーカリプトール（シネオール）、ユーカリ油、オイゲノール、ハーブ抽出物、ラクタムＮ−酢酸エステル、Ｎ−ヒドロキシエタラセアミド、Ｎ−ヒドロキシエチルアセトアミド、２−ヒドロキシ−３−オレオイルオキシ−１−ピログルタミルオキシプロパン、
メントール、メントン、モルホリン誘導体、Ｎ−オキシド、ネロリドール、オクチル−β−Ｄ−（チオ）グルコピラノシド、オキサゾリジノン、ピペラジン誘導体、極性脂質、ポリジメチルシロキサン、ポリ［２−（メチルスルフィニル）エチルアクリレート］、ポリロタキサン、ポリビニルベンジルジメチルアルキルアンモニウムクロリド、ポリ（Ｎ−ビニル−Ｎ−メチルアセトアミド）、ピログルタミン酸ナトリウム、テルペンおよびアザシクロ環化合物、ビタミンＥ（α−トコフェロール）、ビタミンＥ  ＴＰＧＳおよびイランイラン油が含まれる。上記に列挙されていない浸透促進剤のさらなる例は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ”，Ｆｉｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎで見ることができ、グリコフロール、ラノリン、軽鉱油、ミリスチン酸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、およびチモールが含まれる。浸透促進剤の他の例には、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジエチレングリコール、モノエチルエーテル、クエン酸、コハク酸、ルリヂサ油、テトラヒドロピペリン（ＴＨＰ）、メタノール、エタノール、プロパノール、オクタノール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、およびポリエチレングリコールモノラウレートが挙げられる。
【００８７】
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、アルコール、Ｃ１〜Ｃ４脂肪族アルコール、および／またはＣ１〜Ｃ５脂肪族アルコールを含む。他の実施形態において、局所用組成物は、Ｃ１〜Ｃ４脂肪族アルコール、および／またはＣ１〜Ｃ５脂肪族アルコールを有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、局所用組成物は、揮発性溶媒を含む。他の実施形態において、局所用組成物は、揮発性溶媒を有しない／含まない。揮発性溶媒は、「逃散性」溶媒としても知られている。揮発性溶媒の非限定的な例には、揮発性アルコール、例えば、Ｃ１〜Ｃ４脂肪族アルコール；Ｃ１〜Ｃ５アルコール、および揮発性Ｃ１〜Ｃ４脂肪族ケトン、例えば、アセトンが含まれる。
【００８８】
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、界面活性剤を含む。他の実施形態において、局所用組成物は、界面活性剤を有しない／含まない。「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）」または「界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｅ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）」という用語は、水の表面張力を低下させる能力、または２つの非混和性物質間の界面張力を低減する能力を示す化合物または材料または物質を意味し、アニオン性、カチオン性、非イオン性、両性、および／またはリン脂質界面活性剤を含む。界面活性剤の非限定的な例は、参照により本明細書に組み込まれるＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ’ｓ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ  ＆  Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，２００１  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、および参照により本明細書に組み込まれるＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（ＩＮＣＩ），１２ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００８でも見ることができる。そのような例には、ブロックポリマー、例えば、ポロキサマー１２４；エトキシ化アルコール、例えば、セテス−２、セテアレス−２０、ラウレス−３；エトキシ化脂肪エステルおよび油、例えば、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−３６ヒマシ油、ＰＥＧ−１５０ジステアレート；グリセロールエステル、例えば、ポリグリセリル−３ジイソステアレート、グリセリルステアレート；グリコールエステル、ＰＥＧ−１２ジオレエート、ＬＥＸＥＭＵＬ  Ｐ；リン酸エステル、例えば、リン酸セチル；高分子界面活性剤、例えば、ＰＶＭ／ＭＡコポリマー、アクリレート／Ｃ１０〜３０アルキルアクリレートクロスポリマー；四級界面活性剤、例えば、セトリモニウムクロリド；シリコーン系界面活性剤、例えば、ＰＥＧ／ＰＰＧ−２０／６ジメチコン；ソルビタン誘導体、例えば、ステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート８０；スクロースおよびグルコースエステルおよび誘導体、例えば、ＰＥＧ−２０メチルグルコースセスキステアレート；ならびにアルコールの硫酸塩、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムが含まれるが、これらに限定されない。より一般的には、界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、非イオン性、または両性などのそれらのイオン型によって分類され得る。それらは、ブロックポリマー、エトキシ化アルコール、エトキシ化脂肪エステルおよび油、グリセロールエステル、グリコールエステル、リン酸エステル、高分子界面活性剤、四級界面活性剤、シリコーン系界面活性剤、ソルビタン誘導体、スクロースおよびグルコースエステルおよび誘導体、ならびにアルコールの硫酸塩などのそれらの化学構造によっても分類され得る。
【００８９】
いくつかの実施形態において、局所用組成物は、アルブミンなどのタンパク質を含む。他の実施形態において、局所用組成物は、アルブミンなどのタンパク質を有しない／含まない。
【００９０】
好ましい実施形態において、局所用組成物は、疎水性担体、１つ以上の揮発性シリコーン流体、およびタキサン粒子を含む疎水性組成物であり、タキサン粒子の平均粒径（数）は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンである。さらに好ましい実施形態において、疎水性担体は、ワセリン、鉱油、パラフィンワックス、またはそれらの混合物を含む。さらに好ましい実施形態において、１つ以上の揮発性シリコーン流体は、組成物の５〜２５％ｗ／ｗの濃度のシクロメチコンである。さらに好ましい実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。
【００９１】
４．局所用組成物中の抗腫瘍粒子の濃度
局所用組成物中の抗腫瘍粒子の濃度または量は、（１）対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激するための、かつ（２）対象の腫瘍（複数可）を治療するための、すなわち、以下：（ａ）腫瘍サイズの低減（ｂ）腫瘍成長速度の低減、（ｃ）腫瘍の排除のうちの１つ以上を達成することによって腫瘍に治療効果をもたらすための「有効量」である。タキサン粒子であり得る抗腫瘍粒子の濃度は、全組成物重量の０．０５〜１０％ｗ／ｗであり得るか、または抗腫瘍粒子の濃度は、０．０５〜５％ｗ／ｗであり得るか、または抗腫瘍粒子の濃度は、０．１〜５％ｗ／ｗであり得るか、または抗腫瘍粒子の濃度は、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．７５、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．２５、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．７５、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．２５、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．７５、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．２５、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．７５、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．２５、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．７５、４．８、４．９、５、６、７、８、９、もしくは１０％ｗ／ｗ、またはそれらの中から導き出される任意の割合であり得る。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、パクリタキセルナノ粒子、ドセタキセルナノ粒子、またはカバジタキセルナノ粒子などのタキサン粒子である。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、組成物中約０．０５〜３％ｗ／ｗ未満、または約０．０５〜約２％ｗ／ｗ、または約０．０５〜約１％ｗ／ｗ、または約０．０５〜約０．３％ｗ／ｗ、または約０．０５〜約０．２％ｗ／ｗ、または約０．０５〜約０．１５％ｗ／ｗ、または約０．１〜約２％ｗ／ｗ、または約０．１〜約１％ｗ／ｗ、または約０．１〜約０．３％ｗ／ｗ、または約０．１〜約０．２％ｗ／ｗ、または約０．１５〜約２％ｗ／ｗ、または約０．１５〜約１％ｗ／ｗ、または約０．１５〜約０．３％ｗ／ｗ、または約０．３〜約２％ｗ／ｗ、または約０．３〜約１％ｗ／ｗ、または約１〜約２％ｗ／ｗ、または約０．２〜約０．４％ｗ／ｗ、または約０．５〜約１．５％ｗ／ｗ、または約１．５〜約２．５％ｗ／ｗの濃度である。他の実施形態において、タキサン粒子の濃度は、１％ｗ／ｗの８０〜１２０％（すなわち、０．８〜１．２％ｗ／ｗ）、または０．０５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．１％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．１５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．２％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．２５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．３％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．３５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．４％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．４５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．５％ｗの８０〜１２０％／ｗ、または０．５５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．６％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．６５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．７％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．７５％ｗ／ｗの８０％〜１２０％、または０．８％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．８５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．９％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または０．９５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または１．５％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または２％ｗ／ｗの８０〜１２０％、または２．５％ｗ／ｗの８０〜１２０％である。
【００９２】
Ｂ．肺投与、腫瘍内（ＩＴ）注射、および／または腹腔内（ＩＰ）注射用の組成物
肺投与、腫瘍内（ＩＴ）注射、および／または腹腔内（ＩＰ）注射に適した組成物は、例えば、タキサン粒子などの抗腫瘍粒子を含み、以下に記載される。組成物は、担体をさらに含むことができる。組成物は、無水であり得、無水担体を含み得る。担体は、水性担体などの液体（流体）担体であり得る。好適な水性担体の非限定的な例には、注射用滅菌水ＵＳＰ；注射用０．９％塩化ナトリウムＵＳＰなどの０．９％食塩水溶液（生理食塩水）；注射用５％デキストロースＵＳＰなどのデキストロース溶液；および注射用乳酸リンゲル液ＵＳＰが含まれる。非水性系液体担体および他の水性系液体担体が使用され得る。担体は、薬学的に許容される担体、すなわち、注射、肺経路、または他の投与経路による対象への投与に適した担体であり得る。担体は、エマルションまたは流動性半固体などの他のタイプの液体であり得る。流動性半固体の非限定的な例には、ゲルおよび熱硬化性ゲルが含まれる。組成物は、懸濁液、すなわち、タキサン粒子などの抗腫瘍粒子が連続担体／および／または希釈剤内に分散（懸濁）している懸濁液剤形組成物であり得る。抗腫瘍粒子は、担体中に完全に分散、部分的に分散、および部分的に溶解することができるが、完全に溶解することはできない。いくつかの実施形態において、組成物は、連続担体内に分散したタキサン粒子の懸濁液である。好ましい実施形態において、担体は、薬学的に許容される担体である。好ましい実施形態において、組成物は、滅菌である。様々な実施形態において、組成物は、抗腫瘍粒子および液体担体を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなり、組成物は、液体担体内に分散した抗腫瘍粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態において、組成物は、抗腫瘍粒子および担体から本質的になるか、またはそれらからなり、担体は、水性担体であり、組成物は、懸濁液である。
【００９３】
抗腫瘍粒子および担体の組成物は、そのまま投与され得る。任意に、抗腫瘍粒子および担体の組成物は、所望の濃度（用量）の抗腫瘍粒子を達成するために、組成物を希釈するための好適な希釈剤をさらに含むことができる。いくつかの実施形態において、担体は、希釈剤として機能することができ、別の言い方をすれば、組成物中の担体の量は、組成物中の所望の濃度の抗腫瘍粒子を提供し、さらなる希釈は必要ではない。好適な希釈剤は、水性流体などの流体であり得る。好適な水性希釈剤の非限定的な例には、注射用滅菌水ＵＳＰ；注射用０．９％塩化ナトリウムＵＳＰなどの０．９％食塩水溶液（生理食塩水）；注射用５％デキストロースＵＳＰなどのデキストロース溶液；および注射用乳酸リンゲル液ＵＳＰが含まれる。注射による投与に適した他の液体および水性系希釈剤が使用され得、任意に塩、緩衝剤、および／または他の賦形剤を含むことができる。好ましい実施形態において、希釈剤は、滅菌である。組成物は、所望の濃度投与量の抗腫瘍粒子を提供する比率において希釈剤で希釈され得る。例えば、希釈剤に対する組成物の体積比は、１：１〜１：１００ｖ／ｖの範囲または他の適切な比率であり得る。いくつかの実施形態において、組成物は、抗腫瘍粒子、担体、および希釈剤を含み、担体および希釈剤は、混合物を形成し、組成物は、担体／希釈剤混合物中に分散した抗腫瘍粒子の懸濁液である。いくつかの実施形態において、担体／希釈剤混合物は、連続相であり、抗腫瘍粒子は、分散相である。
【００９４】
組成物、担体、および／または希釈剤は、機能性成分、例えば、緩衝剤、塩、浸透圧剤、界面活性剤、粘度調整剤、レオロジー変性剤、懸濁化剤、アルカリ化剤または酸性化剤などのｐＨ調整剤、張度調整剤、防腐剤、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムなどの四級アンモニウム化合物を含む抗菌剤、粘滑剤、酸化防止剤、消泡剤、キレート剤、ならびに／または着色剤を含ことができる。例えば、組成物は、タキサン粒子、ならびに水、塩、界面活性剤、および任意に緩衝液を含む担体を含むことができる。一実施形態において、担体は、水性担体であり、界面活性剤を含み、界面活性剤の濃度は、ｗ／ｗまたはｗ／ｖ基準で１％以下である。他の実施形態において、界面活性剤は、０．５％未満、０．２５％未満、０．１％未満、または約０．１％である。他の実施形態において、水性担体は、界面活性剤ＧＥＬＵＣＩＲＥ（登録商標）（モノ−、ジ−、およびトリグリセリドならびにポリエチレングリコールのモノ−およびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリド）および／またはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）（ポリエトキシ化ヒマシ油）を除外する。いくつかの実施形態において、組成物または担体は、ポリマー、タンパク質（アルブミンなど）、ポリエトキシ化ヒマシ油、ならびに／またはモノ−、ジ−、およびトリグリセリドおよびポリエチレングリコールのモノ−およびジエステルから構成されるポリエチレングリコールグリセリドを除外する。
【００９５】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の界面活性剤を含むことができる。好適な界面活性剤には、限定ではなく例として、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩、アセチル化モノグリセリド、ジアセチル化モノグリセリド、およびポロキサマー４０７などのポロキサマーが含まれる。ポリソルベートは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであり、これは、ソルビトールおよびその無水物の一連の部分脂肪酸エステルであり、ソルビトールおよびその無水物のモル毎に約２０、５、または４モルのエチレンオキシドと共重合している。ポリソルベートの非限定的な例は、ポリソルベート２０、ポリソルベート２１、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６１、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１、ポリソルベート８５、およびポリソルベート１２０である。約２０モルのエチレンオキシドを含有するポリソルベートは、親水性非イオン性界面活性剤である。約２０モルのエチレンオキシドを含有するポリソルベートの例には、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、およびポリソルベート１２０が含まれる。ポリソルベートは、商標名ＴＷＥＥＮ（商標）でＣｒｏｄａから市販されている。ポリソルベートの番号指定は、ＴＷＥＥＮの番号指定に対応し、例えば、ポリソルベート２０は、ＴＷＥＥＮ  ２０であり、ポリソルベート４０は、ＴＷＥＥＮ  ４０であり、ポリソルベート６０は、ＴＷＥＥＮ  ６０であり、ポリソルベート８０は、ＴＷＥＥＮ  ８０などである。ＵＳＰ／ＮＦグレードのポリソルベートには、ポリソルベート２０  ＮＦ、ポリソルベート４０  ＮＦ、ポリソルベート６０  ＮＦ、およびポリソルベート８０  ＮＦが含まれる。ポリソルベートは、ＰｈＥｕｒグレード（欧州薬局方）、ＢＰグレード、およびＪＰグレードでも入手可能である。「ポリソルベート」という用語は、一般的名称である。ポリソルベート２０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノラウレートである。ポリソルベート４０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノパルミテートである。ポリソルベート６０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノステアレートである。ポリソルベート８０の化学名は、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエートである。いくつかの実施形態において、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベートの混合物を含むことができる。いくつかの実施形態において、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５、および／またはポリソルベート１２０を含む。いくつかの実施形態において、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、および／またはポリソルベート８０を含む。一実施形態において、組成物、担体、および／または希釈剤は、ポリソルベート８０を含む。
【００９６】
いくつかの実施形態において、組成物は、抗腫瘍粒子、担体、および任意に希釈剤を含み、担体および／または希釈剤は、水およびポリソルベートを含む。一実施形態において、組成物は、懸濁液であり、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子であり、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。他の実施形態において、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１．５％ｖ／ｖの濃度で組成物、担体、および／または希釈剤中に存在する。驚くべきことに、本発明者らは、列挙した非常に少量のポリソルベート８０が、抗腫瘍粒子と水性担体（食塩水溶液など）の界面における表面張力を低減することを発見した。これらの実施形態は、典型的には、組成物の使用時が近づくと製剤化される。いくつかの実施形態において、粒子は、ポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされてもよい。他の実施形態において、粒子は、ポリソルベートまたはポリソルベート８０でコーティングされていない。様々な他の実施形態において、ポリソルベートまたはポリソルベート８０は、組成物、担体、および／または希釈剤中に、約０．０１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．３５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．３％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．２％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．１５％ｖ／ｖ、約０．０１％ｖ／ｖ〜約０．１％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．３５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．３％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．２％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．１５％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ〜約０．１％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．３５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．３％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．２％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ〜約０．１５％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約０．３５％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約０．３％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ〜約０．２５％ｖ／ｖ、約０．３％ｖ／ｖ〜約１％ｖ／ｖ、約０．３％ｖ／ｖ〜約０．５％ｖ／ｖ、約０．３％ｖ／ｖ〜約０．４％ｖ／ｖ、もしくは約０．３％ｖ／ｖ〜約０．３５％ｖ／ｖ、または約０．０１％、約０．０５％、約０．１％ｖ／ｖ、約０．１５％ｖ／ｖ、約０．１６％ｖ／ｖ、約０．２％ｖ／ｖ、約０．２５％ｖ／ｖ、約０．３％ｖ／ｖ、約０．３５％ｖ／ｖ、約０．４％ｖ／ｖ、約０．４５％ｖ／ｖ、約０．５％ｖ／ｖ、もしくは約１％ｖ／ｖの濃度で存在する。
【００９７】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の張度調整剤を含むことができる。好適な張度調整剤には、限定ではなく例として、１つ以上の無機塩、電解質、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、ナトリウム、硫酸カリウム、重炭酸ナトリウムおよびカリウム、ならびにアルカリ土類金属塩、例えば、アルカリ土類金属無機塩、例えば、カルシウム塩、およびマグネシウム塩、マンニトール、デキストロース、グリセリン、プロピレングリコール、ならびにそれらの混合物が含まれる。
【００９８】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の緩衝剤を含むことができる。好適な緩衝剤には、限定ではなく例として、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン、および炭酸水素ナトリウム、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。腹腔内使用に望ましい範囲にｐＨを調整するために、緩衝液が一般に使用される。通常、約５〜９、５〜８、６〜７．４、６．５〜７．５、または６．９〜７．４のｐＨが望ましい。
【００９９】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の粘滑剤を含むことができる。粘滑剤は、腹膜およびその中の臓器を覆う膜などの粘膜の上に滑らかな薄膜を形成する薬剤である。粘滑剤は、軽度の痛みおよび炎症を和らげる場合があり、粘膜保護剤と呼ばれることもある。好適な粘滑剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびメチルセルロースなど、約０．２〜約２．５％の範囲のセルロース誘導体；約０．０１％のゼラチン；グリセリン、ポリエチレングリコール３００、ポリエチレングリコール４００、およびプロピレングリコールなどの約０．０５〜約１％も含む、約０．０５〜約１％のポリオール；約０．１〜約４％のポリビニルアルコール；約０．１〜約２％のポビドン、ならびに本明細書に記載の別の高分子粘滑剤と共に使用される場合、約０．１％のデキストラン７０が含まれる。
【０１００】
組成物、担体、および／または希釈剤は、ｐＨを調整するために１つ以上のアルカリ化剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「アルカリ化剤」という用語は、アルカリ性媒体を提供するために使用される化合物を意味するよう意図される。そのような化合物には、限定ではなく例として、アンモニア溶液、炭酸アンモニウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、および水酸化ナトリウム、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。
【０１０１】
組成物、担体、および／または希釈剤は、ｐＨを調整するために１つ以上の酸性化剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「酸性化剤」という用語は、酸性媒体を提供するために使用される化合物を意味するよう意図している。そのような化合物には、限定ではなく例として、酢酸、アミノ酸、クエン酸、硝酸、フマル酸、および他のアルファヒドロキシ酸、塩酸、アスコルビン酸、および硝酸、ならびに当業者に既知のその他が含まれる。
【０１０２】
組成物、担体、および／または希釈剤は、１つ以上の消泡剤を含むことができる。本明細書で使用される場合、「消泡剤」という用語は、充填組成物の表面に形成される発泡を防止するか、またはその量を低減する化合物（複数可）を意味するよう意図される。好適な消泡剤には、限定ではなく例として、ジメチコン、ＳＩＭＥＴＨＩＣＯＮＥ、オクトキシノール、および当業者に既知のその他が含まれる。
【０１０３】
組成物、担体、および／または希釈剤は、懸濁液の粘度を増加または減少させる１つ以上の粘度調整剤を含むことができる。好適な粘度調整剤には、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マンニトール、ポリビニルピロリドン、カルボマーなどの架橋アクリル酸ポリマー、および当業者に既知のその他が含まれる。組成物、担体、および／または希釈剤は、組成物の流動特性を変更して、それが注射針またはチューブなどのデバイスを通して適切に流動することができるようにするレオロジー変性剤をさらに含むことができる。粘度調整剤およびレオロジー変性剤の非限定的な例は、“Ｒｈｅｏｌｏｇｙ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ−Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”Ｂｒａｕｎ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ａｎｄｒｅｗ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００で見ることができる。
【０１０４】
肺投与、腫瘍内注射、または腹腔内注射のための組成物中の抗腫瘍粒子の濃度または量は、（１）対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激するための、かつ（２）対象の腫瘍（複数可）を治療するための、すなわち、以下：（ａ）腫瘍サイズの低減（ｂ）腫瘍成長速度の低減、（ｃ）腫瘍の排除のうちの１つ以上を達成することによって腫瘍に治療効果をもたらすための「有効量」である。一実施形態において、組成物中のタキサン粒子であり得る抗腫瘍粒子の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬである。様々なさらなる実施形態において、組成物中のタキサン粒子であり得る抗腫瘍粒子の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ〜約８ｍｇ／ｍＬ、もしくは約４ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６１、６５、７０、７５、もしくは１００ｍｇ／ｍＬ、または約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６１、６５、７０、７５、もしくは１００ｍｇ／ｍＬである。抗腫瘍粒子は、投与される唯一の治療薬であってもよく、または他の治療薬と共に投与されてもよい。
【０１０５】
様々な実施形態において、組成物は、タキサン粒子（パクリタキセル粒子またはドセタキセル粒子）、担体、および希釈剤を含み、組成物（担体および希釈剤を含む）中のタキサン粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬ、もしくは約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１５ｍｇ／ｍＬ、または約６ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、もしくは約１５ｍｇ／ｍＬである。さらなる実施形態において、担体は、約０．９％塩化ナトリウム溶液などの食塩水溶液であり得る水性担体であり、希釈剤は、約０．９％塩化ナトリウム溶液などの食塩水溶液であり得る水性希釈剤である。さらなる実施形態において、水性担体は、ポリソルベート８０などのポリソルベートを含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態において、組成物は、ポリマー／コポリマーまたは生体適合性ポリマー／コポリマーを有しない／含まない、または含有しない。いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、アルブミンを有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸とタキサンの抱合体を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ヒアルロン酸とパクリタキセルの抱合体を有しない／含まない、または含有しない。本発明のいくつかの態様において、組成物は、ポロキサマー、ポリアニオン、ポリカチオン、修飾ポリアニオン、修飾ポリカチオン、キトサン、キトサン誘導体、金属イオン、ナノベクター、ポリ−ガンマ−グルタミン酸（ＰＧＡ）、ポリアクリル酸（ＰＡＡ）、アルギン酸（ＡＬＧ）、ビタミンＥ−ＴＰＧＳ、ジメチルイソソルビド（ＤＭＩ）、メトキシＰＥＧ  ３５０、クエン酸、抗ＶＥＧＦ抗体、エチルセルロース、ポリスチレン、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリホスファゼン、ポリオルトエステル、ポリエステル、ポリアミド、ポリサッカライド、ポリタンパク質、スチレン−イソブチレン−スチレン（ＳＩＢＳ）、ポリ無水物コポリマー、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビス（Ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン−セバシン酸、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＡＧＡ）、および／またはポリ（Ｄ，Ｌ乳酸−コ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）を有しない／含まない、または含有しない。
【０１０７】
好ましい実施形態において、肺投与、腫瘍内注射、および／または腹腔内注射に適した組成物は、タキサン粒子および液体担体を含み、タキサン粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。さらに好ましい実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。さらに好ましい実施形態において、液体担体は、水性担体である。
【０１０８】
ＩＩＩ．免疫療法剤および免疫療法剤の全身送達のための組成物
癌の治療に使用される免疫療法剤にはいくつかのクラスがあり、以下のクラスが含まれるが、これらに限定されない。
モノクローナル抗体：体内の特定の標的に結合するように設計された薬物。モノクローナル抗体の非限定的な例には、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アド−タストルズマブエムタンシン、ベバシズマブ、ラムシルマブ、マルゲツキシマブ、バンチクツマブ、グレンバツムマブベドチン、セツキシマブ、バビツキシマブ、リロツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびアテゾリズマブが含まれる。
癌ワクチン：これらの薬剤は、癌細胞に対する免疫系の応答を高めることによって、癌に対して作用する。癌ワクチンの非限定的な例には、ネリペピムト−Ｓ、テルジェンプマツセル−Ｌ、およびラコツモマブが含まれる。
非特異的免疫療法／サイトカイン：身体の細胞によって作られ、身体の正常な免疫応答および癌に応答する免疫系の能力においても重要な役割を果たすタンパク質。非限定的な例には、コロニー刺激因子、インターフェロン、ならびにインターロイキン−２およびインターロイキン−７などのインターロイキンが含まれる。
免疫チェックポイント阻害剤／免疫モジュレーター：免疫系から「ブレーキ」を外し、それが癌細胞を認識および攻撃するのを助ける。非限定的な例には、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、およびニボルマブが含まれる。
養子細胞移入／Ｔ細胞療法／細胞療法：癌と戦うＴ細胞の自然な能力を高める試み。非限定的な例には、腫瘍浸潤リンパ球、ＨＥＲ２を標的とするＴ細胞、ｃＭＥＴタンパク質、ＣＥＡ、ＶＥＧＦＲ−２、ＭＡＧＥ−Ａ３、およびＮＹ−ＥＳＯ−１癌抗原を発現させる肺癌が含まれる。
腫瘍溶解性ウイルス療法：遺伝子組み換えウイルスを使用して、癌細胞を死滅させる。非限定的な例には、レオウイルスが含まれる。
ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）：結核を引き起こす細菌の弱毒化形態。癌細胞に対する免疫応答を引き起こす。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、免疫療法剤は、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である。いくつかの実施形態において、免疫療法剤は、ペンブロリズマブである。
【０１１０】
全身投与に有用な組成物、すなわち、本発明の第２の組成物は、本明細書およびに本開示全体に記載の免疫療法剤を含み、経腸投与または非経口投与などの全身投与に適している組成物である。全身投与経路の非限定的な例には、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、関節内、注入、経口、直腸、頬側、および舌下が含まれる。組成物は、薬学的担体などの好適な担体を含むことができる。好ましい実施形態において、組成物は、滅菌である。
【０１１１】
ＩＶ．投与および治療方法
本発明の一態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を対象の悪性腫瘍に局所投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する。
【０１１２】
Ａ．局所投与方法
腫瘍に対して抗腫瘍薬粒子を含む組成物を直接局所投与することは、局所適用、肺投与、腫瘍内注射、および腹腔内注射が含まれる。本明細書および本開示全体に記載の局所投与用組成物は、様々なタイプの局所投与、すなわち、局所適用、肺投与、腫瘍内注射、および腹腔内注射での使用に適した組成物である。
【０１１３】
１．局所適用方法
本発明の一態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を対象の皮膚腫瘍の罹患領域に局所投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。皮膚腫瘍は、良性、例えば日光角化症、または悪性（皮膚悪性腫瘍）、例えば、皮膚癌もしくは皮膚転移であり得る。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍は、良性腫瘍であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍は、悪性腫瘍であり、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍は、悪性腫瘍であり、対象は体内の他の場所にも癌を有する。良性皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍の「罹患領域」は、皮膚の最外表面上または皮膚表面の真下（上皮／真皮被覆）に良性皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍が目に見えて存在する、皮膚の少なくとも一部分を含むことができ、目に見えて検出不能な前臨床病変を含む可能性が高い良性皮膚腫瘍または皮膚悪性腫瘍の近くの皮膚の領域を含むことができる。皮膚悪性腫瘍は、皮膚癌または皮膚転移であり得る。いくつかの実施形態において、皮膚悪性腫瘍は、皮膚転移である。他の実施形態において、皮膚悪性腫瘍は、皮膚癌である。皮膚転移は、以下の原発性癌の非限定的な例などの様々な原発性癌からのものであり得る：乳房、肺、鼻、副鼻腔、喉頭、口腔、結腸（大腸）、直腸、胃、卵巣、精巣、膀胱、前立腺、子宮頸部、膣、甲状腺、子宮内膜、腎臓、食道、膵臓、肝臓、黒色腫、およびカポジ肉腫（エイズ関連カポジ肉腫を含む）。いくつかの実施形態において、皮膚転移は、肺癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、卵巣癌、腎臓癌、食道癌、胃癌、または肝臓癌からのものである。いくつかの実施形態において、皮膚転移は、乳癌からのものである。皮膚癌の非限定的な例には、黒色腫、基底細胞癌、および扁平上皮癌が含まれる。いくつかの実施形態において、方法は、電気化学療法（ＥＣＴ）、光線力学療法（ＰＤＴ）、放射線療法（ＲＴ）、または病変内局注療法（ＩＬＴ）などの追加の皮膚指向療法を含まない。
【０１１４】
皮膚悪性腫瘍の罹患領域に局所適用される組成物の量は、罹患領域のサイズおよび組成物中の抗腫瘍粒子の濃度によって異なり得るが、一般に、罹患領域を完全に覆うためにほぼ１０セント硬貨の厚さで適用され得る。適用する組成物の量を決定する別の好適な方法は、「フィンガーティップユニット」（ＦＴＵ）アプローチである。１ＦＴＵは、成人の指先に沿って標準チューブから絞り出される局所用組成物の量である（これは、チューブが標準的な５ｍｍノズルを有すると仮定する）。指先は、指の一番端から指の第１の線までである。組成物は、手袋をはめた手、またはスパチュラ、または他の局所投与手段で適用され得る。いくつかの実施形態において、組成物は、無傷の皮膚被覆（上皮／真皮被覆）を有する皮膚悪性腫瘍に適用される。いくつかの実施形態において、組成物は、皮膚悪性腫瘍病変が皮膚の表面上にあるか、または皮膚被覆が分解されて皮膚悪性腫瘍病変が露出している潰瘍化領域に適用される。罹患領域は、適用前に水（および必要に応じて低刺激石鹸）で優しく洗浄し、乾燥させることができる。いったん組成物が適用されると、適用部位は、ＴＥＧＡＤＥＲＭ（登録商標）またはＳＯＬＯＳＩＴＥ（登録商標）などの密封包帯で被覆され得る。組成物の投与量は異なり得るが、一般に、状態が改善または排除されるまで、毎日ほぼ同じ時間に１日１回、２回、または３回の適用を含むことができる。
【０１１５】
２．肺投与方法
対象において癌を治療する方法が本明細書で開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を肺投与によって対象に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、対象は、肺疾患を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。肺疾患は、非癌性または癌性であり得る。いくつかの実施形態において、肺疾患は、非癌性であり、対象は、肺以外の身体の領域に癌を有する。非癌性肺疾患は、肺線維症などの拘束性肺疾患または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの閉塞性肺疾患である。他の実施形態において、肺疾患は、癌性である。いくつかの実施形態において、癌性肺疾患は、悪性腫瘍または中皮腫である。悪性肺腫瘍は、肺内に存在する任意の腫瘍であり、原発性または転移性肺腫瘍であり得る。悪性肺腫瘍の非限定的な例には、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）が含まれる。一実施形態において、悪性肺腫瘍は、ＳＣＬＣである。別の実施形態において、悪性肺腫瘍は、ＮＳＣＬＣである。本発明の方法によるタキサン粒子の肺投与は、任意の他のタキサン製剤を使用して以前に可能であったよりも肺内でのタキサンのはるかに長い滞留時間をもたらすことが示されている。以下の例に示されるように、タキサンは、投与後少なくとも９６時間（４日間）または少なくとも３３６時間（１４日間）、対象の肺組織内で検出可能なままである。様々なさらなる実施形態において、タキサンは、投与後少なくとも１０８、１２０、１３２、１４４、１５６、１６８、１８０、１９２、２０４、２１６、２２８、２４０、２５２、２６４、２７６、２８８、３００、３１２、３２４、または３３６時間、対象の肺組織内で検出可能なままである。いくつかの実施形態において、癌性肺疾患は、体内の唯一の癌である。いくつかの実施形態において、対象は、癌性肺疾患および身体の他の領域の癌を有する。
【０１１６】
本発明の１つの特定の実施形態において、肺投与は、鼻、経口吸入、またはその両方などによる、抗腫瘍粒子を含む第１の組成物の吸入を含む。この実施形態において、抗腫瘍粒子を含む第１の組成物は、エアロゾルとして製剤化され得る（すなわち、気体媒体中の抗腫瘍粒子の安定な分散液または懸濁液の液滴）。エアロゾル組成物として送達される抗腫瘍粒子は、重力沈降、慣性衝突、および／または拡散によって気道内に堆積し得る。加圧定量噴霧式吸入器（ｐＭＤＩ）、ネブライザー、およびソフトミスト吸入器が含まれるがこれらに限定されない、エアロゾルを生成するための任意の好適なデバイスが使用され得る。いくつかの実施形態において、抗腫瘍粒子は、乾燥粉末形態であり、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）で使用されてもよい。薬物粒子は典型的には、ＤＰＩデバイスのカプセル内に配置される。作動すると、カプセルは破裂され、乾燥粉末の煙が放出される。薬物粉末は、所望の空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）に調整され得るが、最も一般的な方法は、に小さい薬物粉末を肺送達用のラクトースのような担体とブレンドすることである。薬物粒子は、静的付着によってラクトース粒子に付着する。肺送達用のラクトースは、約２．５ミクロンなどの所望のＭＭＡＤにサイズ決定され得る。マンニトールなどの他の糖も使用され得る。
【０１１７】
１つの特定の実施形態において、方法は、噴霧化によってエアロゾル化された抗腫瘍粒子を含む第１の組成物の吸入を含む。ネブライザーは一般に、圧縮空気または超音波出力を使用して、エアロゾル粒子を含む組成物の吸入可能なエアロゾル液滴を作り出す。この実施形態において、噴霧化は、抗腫瘍粒子を含む組成物のエアロゾル液滴の対象への肺送達をもたらす。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。さらに好ましい実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。好適なネブライザーは、Ｈｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーである。
【０１１８】
別の実施形態において、方法は、ｐＭＤＩを介してエアロゾル化された抗腫瘍粒子を含む第１の組成物の吸入を含み、抗腫瘍粒子を含む組成物は、好適な噴射剤系（計量バルブで密閉された加圧容器内の少なくとも１つの液化ガスを含有するヒドロフルオロアルカン（ＨＦＡ）を含むがこれに限定されない）中に懸濁している。弁の作動は、抗腫瘍粒子を含む組成物のエアロゾルスプレーの計量された用量の送達をもたらす。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。さらに好ましい実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子である。
【０１１９】
抗腫瘍粒子を含む組成物が投与のためにエアロゾル化される実施形態において、抗腫瘍粒子を含む組成物のエアロゾル液滴の空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）は、本発明での使用のための任意の好適な直径であってもよい。一実施形態において、エアロゾル液滴は、直径約０．５μｍ〜約６μｍのＭＭＡＤを有する。様々なさらなる実施形態において、エアロゾル液滴は、直径約０．５μｍ〜約５．５μｍ、直径約０．５μｍ〜約５μｍ、直径約０．５μｍ〜約４．５μｍ、直径約０．５μｍ〜約４μｍ、直径０．５μｍ〜約３．５μｍ、直径約０．５μｍ〜約３μｍ、直径約０．５μｍ〜約２．５μｍ、直径約０．５μｍ〜約２μｍ、直径約１μｍ〜約５．５μｍ、直径約１μｍ〜約５μｍ、直径約１μｍ〜約４．５μｍ、直径約１μｍ〜約４μｍ、直径約１μｍ〜約３．５μｍ、直径約１μｍ〜約３μｍ、直径約１μｍ〜約２．５μｍ、直径約１μｍ〜約２μｍ、直径約１．５μｍ〜約５．５μｍ、直径約１．５μｍ〜約５μｍ、直径約１．５μｍ〜約４．５μｍ、直径約１．５μｍ〜約４μｍ、直径約１．５μｍ〜約３．５μｍ、直径約１．５μｍ〜約３μｍ、直径約１．５μｍ〜約２．５μｍ、直径約１．５μｍ〜約２μｍ、直径約２μｍ〜約５．５μｍ、直径約２μｍ〜約５μｍ、直径約２μｍ〜約４．５μｍ、直径約２μｍ〜約４μｍ、直径約２μｍ〜約３．５μｍ、直径約２μｍ〜約３μｍ、および直径約２μｍ〜約２．５μｍのＭＭＡＤを有する。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子であり、エアロゾル液滴は、直径約０．５μｍ〜約６μｍ、または直径約１μｍ〜約３μｍ、または直径約２μｍ〜約３μｍの空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）を有する。エアロゾル液滴の空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）を測定するのに適した計器は、Ｍｅｒｃｅｒ−Ｓｔｙｌｅ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒなどの７段階エアロゾルサンプラーである。
【０１２０】
３．腫瘍内（ＩＴ）注射方法
対象において癌を治療する方法が本明細書で開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腫瘍内注射によって対象の固形腫瘍に直接投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」は、通常嚢胞または液体領域を含まない組織の異常な塊である。固形腫瘍は、良性（癌ではない）または悪性（癌）の場合がある。異なるタイプの固形腫瘍は、それらを形成する細胞のタイプに応じて命名される。固形悪性腫瘍の例は、肉腫、癌腫、およびリンパ腫である。いくつかの実施形態において、固形腫瘍は、良性腫瘍であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。１つの特定の実施形態において、固形腫瘍は、悪性固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、悪性固形腫瘍は、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、身体の他の領域に悪性固形腫瘍および癌を有する。
【０１２２】
本明細書で使用される場合、「腫瘍に直接注射される」または「腫瘍内注射（ＩＴ）」とは、懸濁液などの組成物の一部または全てが腫瘍塊に注射されることを意味する。当業者によって理解されるように、そのような直接注射は、懸濁液、例えば、組成物またはその懸濁液の量が多すぎて、全てを固形腫瘍塊に直接注射できない場合などの固形腫瘍の辺縁（「腫瘍周囲」）の薬剤などの組成物の一部分の注射を含んでもよい。一実施形態において、組成物またはその懸濁液は、その全体が固形腫瘍塊に注射される。本明細書で使用される場合、腫瘍は、骨および軟組織転移が含まれるがこれらに限定されない、腫瘍塊および腫瘍転移の両方を含む。
【０１２３】
腫瘍への抗腫瘍粒子の組成物の腫瘍内注射は、当業者に既知の任意の好適な手段によって達成され得る。非限定的な実施形態において、注射は、磁気共鳴映像法−経直腸的超音波融合（ＭＲ−ＴＲＵＳ）ガイダンス（前立腺腫瘍の注射などのための）を介して、または内視鏡超音波ガイド下細針注射（ＥＵＳ−ＦＮＩ）を介して行われ得る。好適な腫瘍内注射方法および組成物は、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１７／２５７１８号に開示されている。
【０１２４】
様々な実施形態において、固形腫瘍は、肉腫、癌腫、およびリンパ腫、乳房腫瘍、前立腺腫瘍、頭頸部腫瘍、膠芽腫、膀胱腫瘍、膵臓腫瘍、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺、皮膚、リンパ系、および／または胃腸腫瘍から選択される。特定の実施形態において、固形腫瘍は、前立腺腫瘍であり、化学療法粒子は、パクリタキセルまたはドセタキセル粒子である。別の特定の実施形態において、固形腫瘍は、卵巣腫瘍であり、化学療法粒子は、パクリタキセルまたはドセタキセル粒子である。別の特定の実施形態において、固形腫瘍は、乳房腫瘍であり、化学療法粒子は、ドセタキセル粒子である。別の特定の実施形態において、固形腫瘍は、膵臓腫瘍であり、化学療法粒子は、パクリタキセルまたはドセタキセル粒子である。これらの実施形態のいずれにおいても、腫瘍は、例えば、腺癌であり得る。
【０１２５】
４．腹腔内（ＩＰ）注射方法
対象において癌を治療する方法が本明細書で開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を腹腔内注射によって対象の腹腔内臓器腫瘍に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、腫瘍は、良性であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、悪性である。いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、対象における唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、身体の他の場所に悪性腫瘍および癌を有する。
【０１２６】
腹腔内臓器には、胃、回腸、空腸、横行結腸、虫垂、Ｓ状結腸、脾臓、肝臓、膵尾部、十二指腸の最初の５センチメートル、および直腸の上部３分の１が含まれる。女性では、腹腔が開いて生殖器と連通するため（卵管がこの連通を容易にする）、子宮、卵巣、卵管、および性腺血管は全て腹腔内にあり、本開示の目的のために腹腔内臓器として含まれる。
【０１２７】
腫瘍への抗腫瘍粒子の組成物の腹腔内注射は、当業者に既知の任意の好適な手段によって達成され得る。好適な腹腔内注射方法および組成物は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８２２１７７９号に開示されている。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、卵巣癌、子宮癌、胃癌、結腸癌、脾臓癌、肝臓癌、直腸癌、および／または膵臓癌である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、卵巣癌腫瘍である。いくつかの実施形態において、良性腫瘍は、卵巣、子宮、胃、結腸、脾臓、肝臓、直腸、および／または膵臓の良性腫瘍である。いくつかの実施形態において、良性腫瘍は、卵巣腫瘍である。
【０１２９】
５．嚢胞内注射方法
対象において癌を治療する方法が本明細書で開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を嚢胞内注射によって対象の嚢胞に直接投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。様々な実施形態において、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、上皮嚢胞である。いくつかの実施形態において、嚢胞は、良性嚢胞であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、悪性嚢胞である。いくつかの実施形態において、悪性嚢胞は、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、体の他の領域に悪性嚢胞および癌を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、膵嚢胞である。他の実施形態において、抗腫瘍薬は、タキサンであり、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。タキサン粒子は、タキサン粒子の薬学的に許容される塩を含むことができる。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。
【０１３０】
本明細書で使用される場合、「嚢胞」という用語は、液体または半固体物質で充填され得る体内の異常な嚢を意味する。「上皮」嚢胞は、上皮内層を有する。いくつかの実施形態において、嚢胞は、良性および／または前癌性である。いくつかの実施形態において、嚢胞は、癌性（悪性）である。上皮嚢胞の非限定的な例には、肝嚢胞、膵嚢胞、脾嚢胞、結腸嚢胞などの胃腸嚢胞；腎嚢胞、精巣上体嚢胞、前立腺嚢胞などの泌尿器嚢胞；卵巣嚢胞および膣嚢胞などの婦人科嚢胞；甲状腺嚢胞、上皮小体嚢胞、および他の頭頸部嚢胞などの頭頸部嚢胞；ならびにベーカー嚢胞、肺嚢胞、リンパ嚢胞、および心膜嚢胞などの他の嚢胞が含まれる。いくつかの実施形態において、上皮嚢胞は、膵嚢胞である。膵嚢胞は、膵管内乳頭粘液性腫瘍（ＩＰＭＮ）、粘液性嚢胞腫瘍（ＭＣＮ）、または漿液性嚢腺腫であり得る。いくつかの実施形態において、膵嚢胞は、膵管内乳頭粘液性腫瘍（ＩＰＭＮ）である。他の実施形態において、膵嚢胞は、粘液性嚢胞腫瘍（ＭＣＮ）である。さらに他の実施形態において、膵嚢胞は、漿液性嚢腺腫である。
【０１３１】
上皮嚢胞への組成物の注射（嚢胞内注射）は、「内視鏡超音波ガイド下細針注射」（ＥＵＳ−ＦＮＩ）として既知の手順を使用して行われ得、これは、内視鏡検査が超音波と組み合わされて、嚢胞の位置決めを補助し、嚢胞への組成物の注射を容易にする手順である。膵嚢胞への組成物の注射の非限定的な例示的手順は、次のとおりである：リニアアレイエコー内視鏡が口を介して挿入され、胃または十二指腸へと前進させられ、いずれも嚢胞への最良のアクセスを提供する。２２ゲージ細針吸引（ＦＮＡ）針は、エコー内視鏡の付属チャネルにルアーロックされる。針先端部は、処置の間中、嚢胞内に維持される。注射器を使用して、嚢胞液を嚢胞から吸引する（通常、嚢胞の元の体積の最大８０％であるが、嚢胞液の８０％超が吸引され得る）。引き出された嚢胞液の体積が決定される。次いで、針に組成物が充填され、嚢胞に直接注射される。嚢胞に注射される組成物の体積は、吸引される嚢胞液の体積に等しい体積であり得る。
【０１３２】
６．体腔への注射方法
本明細書に開示されるのは、本発明の別の態様において、対象において癌を治療する方法が開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を体腔内への注射によって対象の体腔内に位置する腫瘍に投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を対象に全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有し、ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序でまたは同時に行われ得る。様々な実施形態において、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、良性腫瘍であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、腫瘍は、悪性腫瘍である。いくつかの実施形態において、悪性腫瘍は、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、対象は、身体の他の領域に悪性腫瘍および癌を有する。他の実施形態において、抗腫瘍薬は、タキサンであり、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。タキサン粒子は、タキサン粒子の薬学的に許容される塩を含むことができる。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、カバジタキセル粒子、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。体腔は、管（血管など）以外の流体で充填された任意の空間である。人体の空洞には、腹側腔および背側腔が含まれる。腹側腔には、胸腔および腹骨盤腔ならびにそれらの下位区分が含まれる。背側腔には、頭蓋腔および脊髄腔が含まれる。
【０１３３】
Ｂ．全身投与方法
全身用組成物、すなわち、本発明の第２の組成物の全身投与方法には、腸内投与方法および／または非経口投与方法など、当業者に既知の好適な方法が含まれる。全身投与経路の非限定的な例には、静脈内（ＩＶ）、筋肉内、関節内、注入、経口、直腸、頬側、および舌下が含まれる。
【０１３４】
Ｃ．併用療法の方法
対象において癌を治療する方法が本明細書で開示され、方法は、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物を対象の腫瘍または嚢胞に局所投与することと、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物を全身投与することと、を含み、それにより癌を治療し、抗腫瘍粒子は、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する。好ましい実施形態において、第１の組成物の局所投与は、第２の組成物の全身投与後、対象において免疫療法剤に対する免疫学的応答を刺激する。ステップ（ａ）および（ｂ）は、任意の順序で、または同時に行われ得る。いくつかの実施形態において、第１の組成物は、第２の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される。いくつかの実施形態において、第１の組成物は、第２の組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１日前に投与される。他の実施形態において、第２の組成物は、第１の組成物の投与の少なくとも１日前に投与される。いくつかの実施形態において、第２の組成物は、第１の組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１日前に投与される。さらに他の実施形態において、第１の組成物および第２の組成物は、同じ日に投与される。いくつかの実施形態において、対象における癌および対象の悪性腫瘍は、同じ癌である。いくつかの実施形態において、第１の組成物中の抗腫瘍粒子の量および第２の組成物中の免疫療法剤の量は、対象において癌を治療し、かつ任意に対象の腫瘍または嚢胞を治療するのに有効な量である。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍または嚢胞は、良性腫瘍または嚢胞であり、対象は、体内の他の場所に癌を有する。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍は、悪性腫瘍または嚢胞であり、対象の体内の唯一の癌である。他の実施形態において、ステップ（ａ）の腫瘍または嚢胞は、悪性腫瘍または嚢胞であり、対象は、体内のどこかに癌も有する。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。
【０１３５】
併用療法の方法は、以前の化学療法による治療が癌に対して好ましい効果を示さなかった対象を治療するのに特に有用である。いくつかの実施形態において、本発明の併用療法治療を受ける前に、対象は、少なくとも１つの他の形態の化学療法治療を受けており、他の形態の化学療法治療中および／または後に癌が進行していた。いくつかの実施形態において、以前の化学療法治療は、白金ベースの化学療法レジメンである。
【０１３６】
Ｖ．キット
本発明の一態様において、（ａ）抗腫瘍粒子を含む第１の組成物であって、抗腫瘍粒子が、０．１ミクロン〜５ミクロンの平均粒径（数）を有する、第１の組成物と、（ｂ）免疫療法剤を含む第２の組成物と、（ｃ）（ｉ）第１の組成物を対象の悪性腫瘍に局所投与すること、および（ｉｉ）第２の組成物を対象に全身投与すること、に関する指示書と、を含む、キットが開示される。好ましい実施形態において、抗腫瘍粒子は、タキサン粒子である。いくつかの実施形態において、免疫療法剤は、モノクローナル抗体、癌ワクチン、非特異的免疫療法剤、サイトカイン、インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、チェックポイント阻害剤、免疫調節剤、養子細胞移入剤、Ｔ細胞治療剤、細胞治療剤、腫瘍溶解性ウイルス治療剤、ＢＣＧ、および／または補助剤免疫療法剤である。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、少なくとも９５％の前記タキサンを含み、前記タキサン粒子が、０．１ミクロン〜１．５ミクロンの平均粒径（数）を有する。いくつかの実施形態において、タキサン粒子は、パクリタキセル粒子、ドセタキセル粒子、またはカバジタキセル粒子である。いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子またはドセタキセル粒子は、少なくとも１８ｍ２／ｇの比表面積（ＳＳＡ）を有する。いくつかの実施形態において、パクリタキセル粒子またはドセタキセル粒子は、０．０５ｇ／ｃｍ３〜０．１５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する。いくつかの実施形態において、第１の組成物は、疎水性軟膏である。いくつかの実施形態において、第１の組成物は、水性懸濁液である。
【実施例】
【０１３７】
本発明が特定の実施例によってさらに詳細に説明される。以下の実施例は、例示のみを目的として提供され、いかなる方法でも本発明を限定することを意図するものではない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または修正され得る様々な重要ではないパラメータを容易に認識するであろう。
【０１３８】
実施例１−パクリタキセル粒子の粒径、ＳＳＡ、およびかさ密度分析
表１および表９に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットの粒径を、ＡＣＣＵＳＩＺＥＲ  ７８０を使用した以下の粒径法によって分析した。
【０１３９】
計器パラメータ：最大濃度：９０００粒子／ｍＬ、容器数：１、センサ範囲：総和、検出下限：０．５μｍ、流速：３０ｍＬ／分、分析プル数：４、プル間隔：１秒、プル体積：１０ｍＬ、風袋体積：１ｍＬ、プライム体積：１ｍＬ、第１のプルを含む：選択されず。
【０１４０】
試料調製：ひとすくいのパクリタキセル粒子ＡＰＩをきれいな２０ｍＬバイアルに入れ、濾過した（０．２２μｍ）０．１％ｗ／ｗのＳＤＳ溶液を約３ｍＬ添加してＡＰＩを湿潤させ、次いでバイアルの残りをＳＤＳ溶液で充填した。５〜１０分間ボルテックスし、水バッチで１分間超音波処理した。
【０１４１】
方法：濾過した（０．２２μｍ）０．１％ｗ／ｗのＳＤＳ溶液でプラスチックボトルを充填し、バックグラウンドを分析した。少量の１００μＬ未満のパクリタキセル粒子試料懸濁液を、撹拌しながら０．１％ｗ／ｗのＳＤＳ溶液のボトルにピペットで移し、ＡＣＣＵＳＩＺＥＲ注入チューブをボトルに入れ、試料を計器に通した。必要に応じて、ＳＤＳ溶液またはパクリタキセル試料懸濁液をさらに添加して、６０００〜８０００の粒子数の所望の実行濃度を達成した。
【０１４２】
粒径の結果（数加重微分分布に基づく）：表１に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロット：平均：０．８６１μｍ。表９に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロット：平均：０．８３μｍ。
【０１４３】
表１および表９に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットの比表面積（ＳＳＡ）を、上記のブルナウアー−エメット−テラー（「ＢＥＴ」）等温法によって分析した。表１に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットは、４１．２４ｍ２／ｇのＳＳＡを有した。表９に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットは、２６．７２ｍ２／ｇのＳＳＡを有した。
【０１４４】
表１に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットのかさ密度（非タップ）は、０．０５ｇ／ｃｍ３であった。表９に列挙されるフォーミュラで使用されるパクリタキセル粒子ロットのかさ密度（非タップ）は、０．０９ｇ／ｃｍ３であった。
【０１４５】
実施例２−疎水性担体を有するパクリタキセル粒子の無水疎水性局所用組成物
疎水性担体を含むパクリタキセル粒子の無水疎水性局所用組成物が表１に列挙される。
【表１】
2020536052.tif 000003
【０１４６】
Ｆ４〜Ｆ１３の手順：シクロメチコン（または鉱油（Ｆ４）もしくはＦＯＭＢＬＩＮ（Ｆ７））の一部分を有するパクリタキセル粒子のスラリーを調製した。ワセリンを５２±３℃に加熱し、残りの成分を添加し、溶解して均質になるまで混合した。パクリタキセルスラリーを添加し、均質になるまで混合した。混合し、バッチを３５℃以下に冷却した。軟膏が形成された。
【０１４７】
実施例３−疎水性担体を有するパクリタキセル粒子の無水局所用組成物の物理的および化学的安定性
無水疎水性局所用組成物試料を、２０ｍＬガラスシンチレーションバイアル内で２５℃および３０℃において保存した。パクリタキセルのアッセイを、ＨＰＬＣを使用して行った。アッセイおよび外観安定性研究の結果は、以下の表２および表３に示される。粘度を、２分の平衡時間で、５ｒｐｍにおいて、ＳＣ４−１４スピンドルおよび６Ｒチャンバを備えた小さい試料アダプターを使用したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  ＲＶ粘度計を用いて、室温で測定した。粘度の結果は、以下の表４に示される。
【表２】
2020536052.tif 000004
【表３】
2020536052.tif 000005
【表４】
2020536052.tif 000006
【０１４８】
実施例４−疎水性担体を有する無水局所用組成物中のパクリタキセル粒子の粒径分析
ＡＣＣＵＳＩＺＥＲモデル７７０／７７０Ａを使用した粒度法。
【０１４９】
計器パラメータ：センサ：ＬＥ０．５μｍ〜４００μｍ、センサ範囲：総和、検出下限：０．５μｍ、収集時間：６０秒、チャネル数：１２８、槽流体体積：１００ｍＬ、流速：６０ｍＬ／分、最大一致：８０００粒子／ｍＬ、試料槽：Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ  Ｖｅｓｓｅｌ、試料計算：なし、電圧検出器：１０Ｖ以上、粒子濃度計算：なし、濃度範囲：５０００〜８０００粒子／ｍＬ、自動データ保存：選択、バックグラウンド減算：はい、自動サイクル数：１。
【０１５０】
試料調製：試料のアリコートをシンチレーションバイアルに添加した。スパチュラを使用して、バイアルの内壁に沿って試料を塗りつけた。ＩＳＯＰＡＲ−Ｇ（商標）（Ｃ１０〜１１イソパラフィン）溶液中２％レシチンを約２０ｍＬ、バイアルに添加した。バイアルを１分間超音波処理した。試料が溶液中に十分に分散していることを確認した。
【０１５１】
方法：ＩＳＯＰＡＲ−Ｇ溶液中の濾過した（０．２２μｍ）２％レシチンで試料槽を充填し、バックグラウンドを分析した。ピペットを使用して、調製した試料の一部分を撹拌しながら槽に移した。５０００〜８０００粒子／ｍＬの一致レベルを提供するために、必要に応じて試料を希釈または槽に添加した。計器を通して分析を開始し、一致レベルがこの分析について５０００〜８０００粒子／ｍＬであったことを検証した。
【０１５２】
粒径分析の結果は、以下の表５および表６に示される。
【表５】
2020536052.tif 000007
【表６】
2020536052.tif 000008
【０１５３】
実施例５−パクリタキセル粒子の水性系局所用組成物
パクリタキセル粒子の水性系局所用組成物が表７に示される。
【表７】
2020536052.tif 000009
【０１５４】
実施例６−水性系局所用組成物中のパクリタキセル粒子の粒径分析
ＡＣＣＵＳＩＺＥＲモデル７７０／７７０Ａを使用した粒度法。
【０１５５】
計器パラメータ：センサ：ＬＥ０．５μｍ〜４００μｍ、センサ範囲：総和、検出下限：０．５μｍ、収集時間：６０秒、チャネル数：１２８、槽流体体積：１００ｍＬ、流速：６０ｍＬ／分、最大一致：８０００粒子／ｍＬ、試料槽：Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ  Ｖｅｓｓｅｌ、試料計算：なし、電圧検出器：１０Ｖ以上、粒子濃度計算：なし、濃度範囲：５０００〜８０００粒子／ｍＬ、自動データ保存：選択、バックグラウンド減算：はい、自動サイクル数：１。
【０１５６】
試料調製：試料のアリコートをシンチレーションバイアルに添加した。スパチュラを使用して、バイアルの内壁に沿って試料を塗りつけた。０．２μｍの濾過した蒸留水を約２０ｍＬ、バイアルに添加した。バイアルを１分間超音波処理した。試料が溶液中に十分に分散していることを確認した。
【０１５７】
方法：０．２μｍの濾過した蒸留水で試料槽を充填し、バックグラウンドを分析した。ピペットを使用して、調製した試料の一部分を撹拌しながら槽に移した。５０００〜８０００粒子／ｍＬの一致レベルを提供するために、必要に応じて試料を希釈または槽に添加した。計器を通して分析を開始し、一致レベルがこの分析について５０００〜８０００粒子／ｍＬであったことを検証した。
粒径分析の結果は、以下の表８に示される。
【表８】
2020536052.tif 000010
【０１５８】
実施例７−皮膚悪性腫瘍への局所適用で使用するためのパクリタキセル粒子の局所用組成物
表９に示される以下の軟膏製剤を、皮膚悪性腫瘍への局所適用で使用するために調製した。
【表９】
2020536052.tif 000011
【０１５９】
パクリタキセル粒子を含有する表９に列挙されるフォーミュラを、それぞれ６ｋｇのバッチサイズで製造した。次いで、フォーミュラを１５ｇｍラミネートチューブに包装した。
【０１６０】
ロットＦ１４、Ｆ１５、およびＦ１６の製造プロセスは、次のとおりであった。ワセリン、鉱油、パラフィンワックス、およびシクロメチコンの一部分を槽に添加し、溶解して均質になるまで、プロペラミキサで混合しながら５２±３℃に加熱した。パクリタキセル粒子をシクロメチコンの別の部分を含む槽に添加し、最初にスパチュラで混合して粒子を湿潤させ、次いで、槽を氷／水浴内に保持しながら、均質なスラリーが得られるまで、Ｓ２５−２５Ｇ分散ツールを備えたＩＫＡ  Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーで混合した。次いで、プロペラミキサで混合しながらワセリン／パラフィンワックス容器にスラリーを添加し、続いて、シクロメチコンの残りの部分で洗い流し、５２±３℃で、バッチが視覚的に均質になるまで混合した。次いで、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎホモジナイザーを使用してバッチを均質化した。その後、均質な軟膏が形成されるまでバッチをプロペラミキサで混合し、バッチを３５℃以下に冷却した。
【０１６１】
ロットＦ１７の製造プロセスは、次のとおりであった。ワセリンおよびパラフィンワックスを槽に添加し、溶解して均質になるまで、プロペラミキサで混合しながら５２±３℃に加熱した。パクリタキセル粒子をシクロメチコンおよび鉱油の一部分を含む槽に添加し、最初にスパチュラで混合して粒子を湿潤させ、次いで、槽を氷／水バッチ内に保持しながら、均質なスラリーが得られるまで、Ｓ２５−２５Ｇ分散ツールを備えたＩＫＡ  Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーで混合した。次いで、プロペラミキサで混合しながらワセリン／パラフィンワックス容器にスラリーを添加し、続いて、鉱油の残りの部分で洗い流し、５２±３℃で、バッチが視覚的に均質になるまで混合した。次いで、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎホモジナイザーを使用してバッチを均質化した。その後、均質な軟膏が形成されるまでバッチをプロペラミキサで混合し、バッチを３５℃以下に冷却した。
【０１６２】
表９の各フォーミュラの化学的および物理的分析結果は、２５℃でのＴ＝０、１か月、および３か月について表１０〜１３に示される。
【表１０】
2020536052.tif 000012
【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【０１６３】
実施例８−インビトロ皮膚浸透拡散研究
フランツ拡散セルシステムを使用して、無傷のヒト死体皮膚内およびそれを通したフォーミュラＦ１〜Ｆ１３のインビトロ皮膚浸透の速度および程度を決定する研究を行った。パクリタキセルの濃度を、異なる時点で拡散セルの受容体チャンバにおいて測定した。拡散研究の終わりに、皮膚をテープ剥離し、表皮層および真皮層に分割した。表皮および真皮組織内のパクリタキセルを、抽出溶媒を使用して抽出し、分析もした。
【０１６４】
分析方法：質量分析（ＭＳ）法を、パクリタキセルを分析するために開発した。ＭＳ条件は、以下の表１４のとおりであった。
【表１４】
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【０１６５】
フランツ拡散セル（ＦＤＣ）研究−方法
皮膚の準備：無傷のヒト死体皮膚を、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｆｉｒｅｆｉｇｈｔｅｒｓ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｂａｎｋ（ＮＦＦＴＢ）から購入した。組織バンクによって、皮膚を上背部から採取し、約５００μｍの厚さに採皮刀で切除した。組織バンクから皮膚を受け取ると、皮膚を実験の朝まで−２０℃で冷凍保存した。使用する前に、皮膚を冷凍庫から取り出し、室温で完全に解凍させた。次いで、皮膚をＰＢＳ浴に短時間浸して、あらゆる残留抗凍結剤および防腐剤も除去した。視覚的に無傷である皮膚の領域のみを実験中に使用した。各研究では、２つの別々のドナーを使用し、各ドナーは、対応する３つの複製を有していた。
【０１６６】
受容体流体調製：予備溶解度データの結果に基づいて、ｐＨ７．４の９６重量％のリン酸塩緩衝生理食塩水（「ＰＢＳ」）および４重量％のヒドロキシルプロピルベータシクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）の受容体流体を選択した。受容体流体中の活性物質の溶解度（約０．４μｇ／ｍＬ）は、研究中にシンク条件を維持するのに十分であることが示された。真空を引きながら、ＺａｐＣａｐ（商標）ＣＲ  ０．２μｍ膜を通して受容体流体を濾過することによって、受容体流体を脱気した。真空を維持しながら、濾過した受容体流体をさらに２０分間撹拌して、完全な脱気を確実にした。
【０１６７】
拡散セルの組み立て：死体皮膚を冷凍庫から取り出し、バイオセーフティフードで３０分間解凍した。パッケージを開ける前に、皮膚を完全に解凍した。死体皮膚をパッケージから取り出し、角質層側を上にしてバイオセーフティフードカウンタ上に置いた。皮膚をキムワイプで軽くたたいて乾燥させ、次いで、新鮮なＰＢＳを噴霧し、再び軽くたたいて乾燥させた。このプロセスをさらに３回繰り返して、皮膚上に存在するいかなる残留物も除去した。次いで、受容体ウェルを脱気した受容体流体で充填した。テフロンコーティングされた撹拌棒を各受容体ウェルに加えた。解凍された死体皮膚を検査し、厚さが均一で、表面に目に見える損傷がない領域のみを使用した。皮膚を約２ｃｍ×２ｃｍの正方形に切断した。皮膚片は、角質層（ＳＣ）側を上にして、ドナーウェルの中心に置いた。皮膚を中央に配置し、縁部を平らにした。次いで、ドナーウェルおよび受容体ウェルを整列させ、クランプで一緒に固定した。必要に応じて、さらなる受容体流体を追加した。セルを傾けていかなる気泡も除去し、試料ポートに沿って空気を逃がした。次いで、拡散セルを撹拌ドライブロックヒータに入れ、受容体流体から２０分間再水和させた。ブロックヒータを連続的に撹拌しながら、実験全体を通して３２℃に維持した。皮膚を２０分間水和させ、各皮膚切片のバリア完全性を試験した。いったん膜完全性チェック研究が完了すると、受容体チャンバの体積全体を受容体流体で置き換えた。
【０１６８】
製剤適用手順：製剤を皮膚の角質層に適用した。１回投与レジメンをこの研究に使用した。容積式Ｎｉｃｈｉｒｙｏ（商標）ピペッターを使用して、試験物品を１０μＬの用量で皮膚に適用した。次いで製剤を、ガラス棒を使用して皮膚の表面全体に広げた。実験中、セルをキャップなしで放置した。セル当たりのパクリタキセルの理論用量は、以下の表１５に示される。
【表１５】
2020536052.tif 000017
【０１６９】
受容体流体のサンプリング：３、６、１２、および２４時間において、目盛り付きハミルトン型インジェクタシリンジを使用して、３００μＬの試料アリコートを受容体ウェルから採取した。新鮮な受容体培地を添加して、３００μＬの試料アリコートを置き換えた。
【０１７０】
テープ剥離および熱分割：２４時間において、ＰＢＳ／エタノールに浸したＫｉｍＷｉｐｅｓ（商標）を使用して、皮膚をきれいに拭き取った。残留製剤を拭き取り、皮膚をＫｉｍＷｉｐｅｓ（商標）で乾燥させた後、角質層を３回テープ剥離し、各テープ剥離は、均一な圧力でセロハンテープを皮膚に適用すること、およびテープを剥がすことからなる。テープストリップを収集し、将来の分析のために冷凍した。最初の３つのテープストリップは、角質層の最上層を除去し、追加の皮膚洗浄ステップとして機能する。活性物質は典型的には、この領域に完全に吸収されるとは見なされない。これらのテープストリップは通常、質量バランスアッセイのためだけに分析される。皮膚をテープ剥離した後、次いで、ピンセットまたはスパチュラを使用して各片の表皮を下層の真皮組織から分離した。表皮および真皮組織を採取し、４ｍＬホウケイ酸ガラスバイアルに入れた。全ての皮膚片を分離した後、抽出溶媒のアリコートをガラスバイアルに添加した。このプロセスは、２ｍＬのＤＭＳＯをバイアルに添加すること、および３２℃で２４時間インキュベートすることからなった。抽出時間が終了した後、抽出流体の３００μＬの試料アリコートを収集および濾過した。
【０１７１】
試料の分析：上記の分析方法を使用して、試料アリコートをパクリタキセルについて分析した。
【０１７２】
結果：
以下の表１６の結果は、製剤Ｆ１〜Ｆ１３についての、様々な時点での受容体流体中のパクリタキセルの送達用量（μｇ／ｃｍ２）、ならびに２４時間経過後の表皮および真皮に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）（浸透）を示す。図１は、フォーミュラＦ１〜Ｆ７について、表皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。図２は、フォーミュラＦ６＊（反復分析）およびＦ８〜Ｆ１３について、表皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。図３は、フォーミュラＦ１〜Ｆ７について、真皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。図４は、フォーミュラＦ６＊（反復分析）およびＦ８〜Ｆ１３について、真皮内に送達されたパクリタキセルの濃度（μｇ／ｃｍ２）をグラフで示す。
【０１７３】
注：フォーミュラＦ１〜Ｆ６を１つのインビトロ研究で試験し、フォーミュラＦ６＊およびＦ８〜Ｆ１３を、異なる死体皮膚ロットを用いて第２の別個のインビトロ研究で試験した。フォーミュラＦ６の分析を、第２の研究で繰返し（Ｆ６＊と表記される）、これにより、それを第２の研究で評価し、他のフォーミュラと比較することができた。
【表１６】
2020536052.tif 000018
【０１７４】
表１６の結果からわかるように、皮膚（表皮および真皮）を通るパクリタキセルの経皮フラックスは、ゼロまたはごくわずかな量、すなわち、０．０１μｇ／ｃｍ２未満であった。表１６ならびに図１、２、３、および４の結果からわかるように、皮膚（表皮および真皮）内へのパクリタキセルの浸透は、水性製剤が皮膚浸透促進剤ＤＧＭＥ（ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ  Ｐ）を含有していたが、水性製剤（Ｆ１〜Ｆ３）よりも無水疎水性製剤（Ｆ４〜Ｆ１３）の場合にはるかに大きかった。結果はまた、シクロメチコンを有する無水疎水性製剤が、シクロメチコンを有しない無水疎水性製剤よりも大きい皮膚浸透（表皮および真皮）を示したことも示す。加えて、結果は、シクロメチコンを含有する無水疎水性製剤への他の皮膚浸透促進剤の添加が、これらの組成物の皮膚浸透（表皮および真皮）にほとんどまたは全く影響を及ぼさなかったことを示す。
実施例９−皮膚転移に対するフェーズ１／２用量増加、安全性、忍容性、および有効性研究
表９の製剤のうち３つ、上記のＦ１４（０．１５％）、Ｆ１６（１．０％）、およびＦ１７（２．０％）を、ヒトにおける皮膚転移について、ＦＤＡ承認のフェーズ１／２の用量増加、安全性、忍容性、および有効性研究で使用した。研究は、現在進行中である。これは、非黒色腫皮膚転移に２８日間、１日２回局所適用された、表７からの製剤のうちの３つ、Ｆ１４（０．１５％）、Ｆ１６（１．０％）、およびＦ１７（２．０％）の安全性、忍容性、および予備的有効性研究を評価するフェーズ１／２、非盲検、用量増加研究であった。
【０１７５】
少なくとも１つの適格な病変を含む胴体または四肢の５０ｃｍ２の処置領域を、測定可能な腫瘍（その最長径で１０ｍｍ以上）のＲＥＣＩＳＴ（ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１）定義によってベースラインで決定した。処置領域内の全ての病変をキャリパーによって測定して、適格性を確認した。対象は、手袋をはめた手を使用して、フィンガーティップユニット（ＦＴＵ）の製剤を２８日間、毎日ほぼ同じ時間に１日２回、５０ｃｍ２の処置領域に適用した。ＦＴＵは、直径５ｍｍのノズルを備えたチューブから搾り出される、大人の人さし指の遠位の皮膚線から先端まで適用される、軟膏製剤の量として定義される。対象は、用量適用のトレーニングおよび最初の処置適用の観察のために、１日目にクリニックに参加した。追加の訪問は、８、１５、２９、および４３日目にあった。最後の訪問は、有害事象をレビューするために、最後の治験薬投与の３０日後に完了した。研究への参加は、用量漸増段階および用量拡大段階に分離される。
【０１７６】
用量漸増段階：用量漸増段階中、研究は、標準的な３＋３用量上昇設計に従い、３名の対象の第１のコホートが、製剤Ｆ１４（０．１５％）による処置を開始した。安全性監視委員会は、３名の対象の各コホートの最後の対象が１５日間の処置を完了した後、利用可能な全てのデータをレビューして、用量漸増が続くかどうかを判断した。
【０１７７】
用量拡大段階：用量拡大段階では、追加の対象が登録して、用量漸増段階で決定した用量レベルで最大１２名の合計対象に達した。用量拡大段階の対象は、同じ訪問日にクリニックに参加し、上記の用量漸増段階と同じ評価を受けた。
【０１７８】
目的：この研究の主な目的は、製剤の予備的安全性および忍容性を決定することであった。副次的目的は、製剤の予備的有効性を決定し、処置領域の疼痛の潜在的な低減を研究し、かつ転移病変に適用された製剤の薬物動態を説明することであった。
【０１７９】
集団：非黒色腫皮膚転移を有する、１８歳以上の最少２名から最大２４名の男性および女性ヒト対象。
【０１８０】
主要エンドポイント：有害事象、臨床検査評価の変化、身体検査の所見、およびバイタルサインによって実証される安全性および忍容性。
【０１８１】
副次的エンドポイント：有効性に関する次の副次的エンドポイントの目的のために、適格病変を、測定可能な腫瘍（その最長径で１０ｍｍ以上）のＲＥＣＩＳＴ（Ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１）定義によってベースラインで決定した（ＥＩＳＥＮＨＡＵＥＲ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ：ｒｅｖｉｓｅｄ  ＲＥＣＩＳＴ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１）．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．２００９；４５；２２８−２４７）。
ベースラインから４３日目（すなわち、投与レジメンに応じて、用量漸増および拡大段階の最終投与の１４日後）の処置領域内の適格腫瘍径（複数可）の合計の差として定義される、客観的腫瘍応答。全ての訪問時に腫瘍表面積および応答を評価した。表面積の変化を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（ＮＩＨ）によって提供される較正済みグリッド測定システム（ＩｍａｇｅＪフリーウェア）を使用して評価した。ＩｍａｇｅＪを使用して病変を測定および分析した。
客観的臨床応答は、完全臨床応答（ＣＲ）＋部分応答（ＰＲ）を有する対象として定義され、さらに、製剤での最終処置から１４日後に完全臨床応答または部分応答を達成する患者の割合として定義され、最終処置から１４日後の処置領域内の適格標的病変（複数可）の最長径（複数可）の合計の変化として測定される。処置に対する応答を、処置後の全直径を処置前の全直径で割った関数として評価した。
最良の全体的応答は、研究処置の開始から処置の終わり、すなわち４３日目までに記録された最良の応答として定義される。
完全臨床応答（ＣＲ）は、処置領域内の適格病変（複数可）においていかなる検出可能な残存病変もないこととして定義され、部分応答（ＰＲ）は、ベースラインと比較して、処置領域内の適格病変（複数可）の直径の合計の少なくとも３０％の減少であり、進行性疾患（ＰＤ）は、研究の最小合計を基準として、処置領域内の適格病変（複数可）の直径の合計の少なくとも２０％の増加である。加えて、合計はまた、少なくとも５ｍｍの絶対的な増加を示す必要がある。安定疾患（ＳＤ）は、ＰＲまたはＰＤとして定義された病変径の間の適格病変径（複数可）の合計として定義される。
この研究への参加中の新しい非標的病変の出現は、進行性疾患を構成しない。
処置領域の疼痛は、数値評価尺度（ＮＲＳ−１１）による測定基準になる。ベースラインから４３日目までの疼痛の変化が分析される。
Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ、ＡＵＣによって決定される全身曝露。
【０１８２】
予備的結果：進行中の研究の予備的結果は、ステージ４の乳癌の女性の胸部の皮膚転移病変の写真を含む。対象は、乳癌に対するｎａｂ−パクリタキセルによるＩＶ療法を完了した後、研究に登録された。１ヵ月後、製剤Ｆ１４（０．１５％）の局所適用により処置を開始した。図５は、ベースライン（１日目）に撮影した写真であり、潰瘍性病変からの凝固滲出液で覆われた指標病変（矢印）を示す。図６は、１日２回、同じ処置部位上に適用した製剤Ｆ１４（０．１５％）の局所処置後の８日目に撮影した写真である。病変の表面は、表皮が失われ、真皮に限定された推定的潰瘍化の領域を含む。図７は、１日２回、同じ処置部位上に適用した製剤Ｆ１４（０．１５％）の局所処置後の１５日目の写真である。病変の内側部分には少量の古い滲出液が見られ、明らかな表皮潰瘍化は見られない。図８ａは、１日２回、同じ処置部位上に適用した製剤Ｆ１４（０．１５％）の局所処置後の２９日目の写真である。２８日間の処置中、対象の皮膚病変、紅斑に囲まれ、潰瘍化することなく拡大し、局所免疫応答を示す（図８ａ）。処置終了の１１日後、対象を再び全身性パクリタキセルで処置した。全身性パクリタキセルによる処置の３日後、研究処置が終了した２週間後、図８ｂに示されるように、対象の病変のサイズおよび体積が著しく減少した。局所製剤Ｆ１４（０．１５％）による局所処置は、ＩＶパクリタキセルへのその後の応答に対して皮膚病変を感作した。病変は、潰瘍化の所見なく上皮化されたように見える。対照的に、潰瘍性皮膚乳癌転移の自然歴は、いったん表皮表面が腫瘍によって破られると急速に拡大し、真皮をさらに貫通し、典型的には潰瘍化をもたらすことである。
【０１８３】
実施例１０−皮膚毒性研究
表１７に示される局所用組成物を使用して、皮膚毒性研究を行った。
【表１７】
2020536052.tif 000019
【０１８４】
２８日間毎日１０％の体表面積に局所適用した製剤の毒性を特徴付けるために、ＧＬＰ準拠の研究をゲッティンゲンミニブタにおいて行った。表１７に示される４つの製剤を２ｍＬ／ｋｇの最大実行可能体積で適用し、０．０、０．３、１．０、および３％の用量濃度に相関し、これは、０、４．９、１６．５、および４９．９ｍｇ／ｋｇ／日のそれぞれの用量レベルに変換される。所見の可逆性も、２週間の回復期間後に評価した。評価したパラメータには、臨床的観察結果、死亡率および瀕死状態チェック、真皮スコアリング、体重、食物消費、眼検査、試験部位の写真、心電図、臨床病理学、生体分析および毒物動態評価、臓器重量、肉眼的病理学および組織病理学が含まれた。生存率、臨床的徴候、真皮刺激、体重、体重増加、食物消費、眼科所見、または心臓病学パラメータに対する製剤関連の影響はなかった。投与段階中、全ての群で最小の真皮刺激が観察され、プラセボ対照群と活性製剤で処置された群との間で所見の頻度および重症度が同等であったため、ビヒクルまたは処置に関連すると見なされた。したがって、製剤中のパクリタキセル粒子の存在は、真皮刺激に対してごくわずかな影響しかなかった。
【０１８５】
実施例１１−ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（すなわち、本明細書で開示されるパクリタキセル粒子、約９９％のパクリタキセルが、これらの実施例において０．８７８ミクロンの平均粒径（数）を有する）吸入安全性および有効性開発プログラム−Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットにおけるパイロット薬物動態研究
概要
このパイロット研究の目的は、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を用いた完全薬物動態（ＰＫ）研究のためのサンプリング時点を定義することであった。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤が肺内の保持の増加をもたらす可能性により、０．５〜１６８時間の９つの時点を評価して、完全薬物動態研究のための適切なサンプリング戦略を決定した。
【０１８６】
一回、鼻のみの吸入によって、１６匹のＳｐｒａｇｕｅ  ＤａｗｌｅｙラットをＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（パクリタキセル、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を、曝露後０．５、６、１２、２４、４８、７２、１２０、および１６８時間の指定された時点で安楽死させた。血液（血漿）および肺組織の試料を採取した。
【０１８７】
曝露の日に、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤（６ｍｇ／ｍＬ）をスポンサーによって提供される指示書に従って調製した。
【０１８８】
総エアロゾル曝露時間は、全ての動物に対して６３分であった。エアロゾル濃度を、鼻のみの曝露チャンバ内の呼吸ゾーンに位置付けられた４７ｍｍのＧＦ／Ａフィルタ上に蓄積された製剤の量を測定することによって、６３分のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾル曝露全体を通して監視した。エアロゾル粒径（液滴サイズ）を、曝露チャンバ上の動物呼吸ゾーンからのＭｅｒｃｅｒスタイルカスケードインパクターを使用して測定した。
【０１８９】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤を、２つＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザー（平均パクリタキセルエアロゾル濃度：目標８２．６５μｇ／Ｌ）を使用してエアロゾル化した。ＧＦ／Ａフィルタから測定した全体の平均エアロゾル濃度は、０．２４ｍｇ／Ｌであり、平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、７３．５μｇ／ｍＬであった。粒径分布は、２．２のＧＳＤで２．０μｍのＭＭＡＤであると測定された。測定した７３．５μｇ／Ｌの平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、８２．６５μｇ／Ｌの目標平均パクリタキセルエアロゾル濃度よりも約１１％低かった（実施例３で報告した±１５％の分析アッセイの精度／回復性能基準内）。酸素および温度を、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾル曝露全体を通して監視した。記録した酸素および温度範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜２０．８℃であった。
【０１９０】
パクリタキセルの肺への沈着用量を、７３．５μｇ／Ｌのパクリタキセル平均エアロゾル濃度、３２６ｇのげっ歯類の平均体重、１０％の推定沈着率、および６３分の曝露時間に基づいて計算した。達成されたげっ歯類の平均沈着用量を０．３３ｍｇ／ｋｇと決定した。達成された平均沈着用量は、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標沈着用量と比較した場合に約１１％低かったが、噴霧化曝露について予想される変動（目標から±１５％）の範囲内であった。
【０１９１】
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。剖検時に、数匹の動物が、肺に最小の赤変を有した。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。剖検で得られた体重および肺重量から、全ての時点における動物間の平均最終体重（標準偏差）は、３４６．２６ｇ（２４．０１）であり、平均肺重量（標準偏差）は、１．６０ｇ（０．１３）であった。
【０１９２】
全身血液（Ｋ２  ＥＤＴＡからの血漿の形態）を液体クロマトグラフィ−質量分析（ＬＣＭＳ）アッセイによってアッセイし、肺組織をセクション（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）で簡単に説明されるようにアッセイして、パクリタキセルの量を時間の関数として定量化した。肺組織分析は、１６８時間まで検出可能な量のパクリタキセルによる肺への曝露を示した。全身血液は、２４時間後に検出可能なパクリタキセルがないこと（１ｎｇ／ｍＬ未満）を示した。これらのデータに基づいて、ＰＫ研究のための次のサンプリング時点が示唆される：吸入曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）、１６８（±３０分）、２４０（±３０分）、および３３６（±３０分）時間。
【０１９３】
目的
このパイロット研究の目的は、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を用いた完全薬物動態（ＰＫ）研究のためのサンプリング時点を定義することであった。腹腔内（ＩＰ）注射によって投与したＮａｎｏＰａｃ（登録商標）での予備的データは、腹腔内腔における有意な保持時間を示す。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤が肺内の保持の増加をもたらす可能性により、１６８時間までの時点を評価して、完全薬物動態研究のための適切なサンプリング戦略を決定した。
材料および方法
試験系：
種／系統：Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット
研究開始時の動物の年齢：８〜１０週齢
研究開始時の体重範囲：３０８〜３５３ｇ
研究中の数／性別：１８匹の雄（１６匹の研究動物および２匹の予備）
供給源：Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）
識別：油性マーカーによる尾の印付け
【０１９４】
物品製剤および投与の試験および制御
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤（６ｍｇ／ｍＬ）をスポンサーによって提供される指示書に従って調製した。簡潔に、１％ポリソルベート８０  ５．０ｍＬを、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（３０６ｍｇ）粒子を含むバイアルに添加した。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアルを激しく振盪し、反転させて、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアル内に存在する全ての粒子の湿潤を確認した。振盪直後、０．９％塩化ナトリウム４６ｍＬをＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアルに添加し、バイアルを少なくとも１分間振盪して、懸濁液の十分な混合および適切な分散を確認した。得られた製剤を少なくとも５分間そのままにしておき、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内のいかなる空気／泡も低減した。最終製剤を室温に保ち、再構成後３時間以内に使用した。
【０１９５】
実験計画
一回、鼻のみの吸入によって、１６匹のＳｐｒａｇｕｅ  ＤａｗｌｅｙラットをＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（パクリタキセル、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を血液（血漿）および肺組織採取のために曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）、および１６８（±３０分）時間に安楽死させた。特定のＰＫモデリングを行わず、むしろ、データは、ＰＫ研究のための曝露後のパクリタキセルの検出可能な量の持続時間を定義する。
【０１９６】
畜産、隔離、および研究への割り当て
雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（６〜８週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）から入手し、１４日間隔離した。隔離の終わりに、動物の体重を測定し、次いで、研究への割り当てのために体重によって無作為化した。尾の印付けおよびケージカードによって、動物を識別した。標準的な技法を使用して、水、照明、湿度、および温度制御を維持および監視した。非曝露時間中、ラットに標準的なげっ歯類飼料を自由に供給した。
【０１９７】
体重および毎日の観察
体重を、無作為化時、研究期間全体を通して毎日、および安楽死時に収集した。研究中の各動物を、異常、瀕死状態、または死亡の臨床的徴候がないか、Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ＣＭＡＲ）担当者によって１日に２回観察した。
【０１９８】
鼻のみのエアロゾル曝露
条件付け
動物を、標準的な技法を使用して最大７０分間、鼻のみの曝露チューブに条件付けた。曝露前の３日間にわたって３つの条件付けセッションを行い、第１のセッションは３０分、第２のセッションは６０分、第３のセッションは７０分続いた。動物を条件付け期間全体を通して、かつ曝露中に綿密に監視して、動物が一時的な苦痛以上のものを経験しないことを確実にした。
【０１９９】
曝露システム
吸入曝露システムは、２つの圧縮空気ジェットネブライザー（Ｈｏｓｐｉｔａｋ）およびげっ歯類の鼻のみの吸入曝露チャンバからなった。曝露酸素レベル（％）を曝露全体を通して監視した。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁エアロゾルを、２０ｐｓｉの入口圧力で、２つの圧縮空気ジェットネブライザーのセット（最大４０（±１）分間、次いで、残りの曝露持続時間に対して２つの圧縮空気ジェットネブライザーの第２のセットと置き換える）を用いて生成した。エアロゾルを、２４インチのステンレス鋼エアロゾル送達ライン（直径１．５３ｃｍ）を通して鼻のみの曝露チャンバに方向付けた。
【０２００】
濃度監視
エアロゾル濃度監視を、エアロゾルを予め計量したＧＦ／Ａ  ４７ｍｍフィルタに収集することによって行なった。フィルタを、げっ歯類曝露全体を通して、鼻のみの曝露チャンバのげっ歯類呼吸ゾーンからサンプリングした。ＧＦ／Ａフィルタを通過するエアロゾルサンプリング流速を、１．０±０．５Ｌ／分に維持した。１３分後に収集した最後のフィルタを除いて、合計６つのＧＦ／Ａフィルタを曝露持続時間全体にわたって１０分毎に１つ収集した。試料の収集後、フィルタの重量を測定して、曝露システム内の総エアロゾル濃度を決定した。フィルタを抽出し、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって分析して、各フィルタ上で収集されたパクリタキセルの量を定量化した。エアロゾルの総量および収集されたパクリタキセルエアロゾルを、フィルタを通過する全空気流で割ることによって、各フィルタの総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を計算した。平均パクリタキセルエアロゾル濃度を使用して、以下に示される等式１を使用して、げっ歯類の肺への達成されたパクリタキセルの平均沈着用量を計算した。
【０２０１】
エアロゾル粒子（液滴）サイズ測定
エアロゾルの粒径分布を、Ｍｅｒｃｅｒスタイル７段階カスケードインパクター（Ｉｎｔｏｘ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ，ＮＭ）によって、鼻のみの曝露チャンバのげっ歯類呼吸ゾーンから測定した。粒径分布を、空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）の観点から決定した。カスケードインパクター試料を、２．０±０．１Ｌ／分の流速で収集した。
【０２０２】
用量の決定
等式１を使用して沈着用量を計算した。この計算では、曝露から測定した平均エアロゾル濃度をラットの平均群体重と共に使用した。このようにして、ラットの肺内に沈着したパクリタキセルの推定量を、測定したパクリタキセルエアロゾル濃度を使用して計算した。
【数１】
2020536052.tif 000020
式中、
沈着用量＝（ＤＤ）μｇ／ｋｇ
２毎分換気量（ＲＭＶ）＝０．６０８×ＢＷ０．８５２
エアロゾル曝露濃度（ＡＣ）＝パクリタキセルエアロゾル濃度（μｇ／Ｌ）
沈着率（ＤＦ）＝１０％の想定沈着率
ＢＷ＝研究中の動物の平均体重（無作為化時、−１日目）（ｋｇ）
【０２０３】
安楽死および剖検
動物を、安楽死溶液のＩＰ注射によってそれぞれの時点で安楽死させた。剖検中、血液（血漿用）を心臓穿刺によってＫ２  ＥＤＴＡチューブに採取し、肺の重量を測定し、肺組織試料を採取し、生物学的分析のために液体窒素中で急速凍結させた。加えて、資格のある剖検担当者によって完全肉眼検査を実施した。身体の外側表面、開口部、ならびに頭蓋、胸部、および腹腔の内容物を検査した。形態、量、形状、色、稠度、および重症度についての用語集を使用して、病変を記述および記録した。
【０２０４】
生物学的分析
全身血液（Ｋ２  ＥＤＴＡからの血漿の形態）および肺組織を液体クロマトグラフィ−質量分析（ＬＣＭＳ）アッセイによってアッセイして、パクリタキセルの量を時間の関数として定量化した。簡潔に、アッセイは、超高性能液体クロマトグラフィタンデム質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）アッセイを利用して、パクリタキセルを定量化する。血漿試料は、タンパク質沈殿法によって抽出され、分離は、逆相クロマトグラフィによって達成される。肺試料を、４：１（水：肺組織）の比の水で均質化した。次いで、ホモジネートは、ＬＣＭＳで分析する前に同様のタンパク質沈殿法を受けた。マトリクスベースの較正曲線を用いて定量化を行った。
【０２０５】
これらのデータに対して薬物動態モデリングは実施しなかった。しかしながら、パクリタキセルがアッセイの感度限界（１ｎｇ／ｍＬ）を下回る濃度を使用して、主要なＰＫ研究のサンプリング時点を定義した。
【０２０６】
結果
臨床的観察結果および生存率
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存し、体重が増加した。研究の継続期間を通して、異常な臨床的観察結果は認められなかった。
【０２０７】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）曝露
エアロゾル濃度
表１８は、曝露中に各ＧＦ／Ａフィルタをサンプリングすることによって測定した総エアロゾルおよびパクリタキセルエアロゾル濃度を示す。７３．５μｇ／Ｌの吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、８２．６５μｇ／Ｌの目標平均パクリタキセルエアロゾル濃度よりも約１１％低かった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露について予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。
【表１８】
2020536052.tif 000021
【０２０８】
酸素および温度
記録した酸素および温度範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜−２０．８℃であった。
【０２０９】
粒径
粒径分布を、カスケードインパクターを使用して６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルのＭＭＡＤ（ＧＳＤ）の観点から決定し、２．０（２．２）μｍであった。
【０２１０】
沈着用量
７３．５μｇ／Ｌのパクリタキセル平均エアロゾル濃度、３２６ｇのげっ歯類の−１日目（無作為化）の平均体重、１０％の想定沈着率、および６３分の曝露持続時間に基づいて、達成されたげっ歯類の平均沈着用量を０．３３ｍｇ／ｋｇと決定した。達成された平均沈着用量は、曝露平均引エアロゾル濃度の予想される変動（目標から±１５％）により、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標沈着用量と比較した場合に約１１％低かった。
【０２１１】
剖検
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。剖検時に、数匹の動物が、肺に最小の赤変を有した。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。個々および平均の肺重量、体重、および比率を決定した。平均最終体重（標準偏差）は、３４６．２６ｇ（２４．０１）であった。平均肺重量（標準偏差）は、１．６０ｇ（０．１３）であった。臓器肺重量および肺重量対体重比は、吸入物質に対する潜在的な毒性学的応答を評価するために使用される一般的なパラメータである。全体として、データは、過去のデータと一致しており、これらのエンドポイントのいずれでも応答がなかったことを示す。
【０２１２】
生物学的分析
結果は、以下の表１９に要約される。血漿中の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で１６．７０５ｎｇ／ｍＬであり、次いで、２４時間の時点まで徐々に減少し、その後の全ての時点で定量化の下限（１ｎｇ／ｍＬ）を下回った。肺組織の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で２１９４０ｎｇ／ｇであり、１６８時間の時点までに４１９．６ｎｇ／ｇに徐々に減少した。これは、最小限の全身曝露を伴う肺内の有意なＮａｎｏＰａｃ（登録商標）保持を示す。
【表１９】
2020536052.tif 000022
【０２１３】
結論
一回、鼻のみの吸入によって、１６匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ  ＤａｗｌｅｙラットをＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（パクリタキセル、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標用量）に曝露した。２匹の動物（ｎ＝２）を、血液（血漿）および肺組織採取のために曝露後０．５、６、１２、２４、４８、７２、１２０、および１６８時間後に安楽死させた。
【０２１４】
６３分間の吸入曝露中の７３．５μｇ／Ｌの平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、８２．６５μｇ／Ｌの目標平均パクリタキセルエアロゾル濃度よりも約１１％低かった。平均曝露エアロゾル濃度は、噴霧化吸入曝露について予想される目標エアロゾル濃度の±１５％以内であった。粒径分布を、カスケードインパクターを使用して６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルのＭＭＡＤ（ＧＳＤ）の観点から２．０（２．２）μｍと決定した。記録した酸素および温度範囲は、それぞれ１９．７％〜２０．９％および２０．４℃〜２０．８℃であった。
【０２１５】
パクリタキセルの沈着用量を、７３．５μｇ／Ｌのパクリタキセル平均エアロゾル濃度、３２６ｇのげっ歯類の平均体重、１０％の推定沈着率、および６３分の曝露時間に基づいて計算した。達成されたげっ歯類の平均沈着用量を０．３３ｍｇ／ｋｇと決定した。達成された平均沈着用量は、予想される変動（目標から±１５％）により、０．３７ｍｇ／ｋｇの目標沈着用量と比較した場合に約１１％低かった。
【０２１６】
全ての動物は、それらの計画された剖検時点まで生存した。剖検時に、数匹の動物が、肺に最小の赤変を有した。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。剖検で得られた体重および肺重量から、平均最終体重（標準偏差）は、３４６．２６ｇ（２４．０１）であり、平均肺重量（標準偏差）は、１．６０ｇ（０．１３）であった。臓器肺重量および肺重量対体重比は、吸入物質に対する潜在的な毒性学的応答を評価するために使用される一般的なパラメータである。全体として、データは、これらのエンドポイントのいずれでも応答がなかったことを示す。
【０２１７】
血漿中の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で１６．７０５ｎｇ／ｍＬであり、次いで、２４時間の時点まで徐々に減少し、２４時間後の全ての時点で定量化の下限を下回った。肺組織の平均パクリタキセル濃度は、曝露後０．５時間で２１９４０ｎｇ／ｇであり、１６８時間の時点までに４１９．６ｎｇ／ｇに徐々に減少した。これは、最小限の全身曝露を伴う肺内の有意なＮａｎｏＰａｃ（登録商標）保持を示す。ＰＫ研究のための次のサンプリング時点が示唆される：曝露後０．５（±１０分）、６（±１０分）、１２（±１０分）、２４（±３０分）、４８（±３０分）、７２（±３０分）、１２０（±３０分）、１６８（±３０分）、２４０（±３０分）、および３３６（±３０分）時間。
【０２１８】
実施例１２−ラットにおけるＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（すなわち、（すなわち、本明細書で開示されるパクリタキセル粒子、約９８％のパクリタキセルが、０．８３ミクロンの平均粒径（数）、２７．９ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０８０５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する）吸入研究−低用量および高用量
概要
本研究の全体的な目的は、６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤で雄のラットに鼻のみの吸入曝露を行うことであった。ラット吸入曝露は、それぞれ６５分間行った。
【０２１９】
６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤をスポンサーによって提供される指示書に従って調製した。げっ歯類吸入曝露チャンバへのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤のエアロゾル化のために、２０ｐｓｉで２つＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーを同時に使用した。各曝露中に、１．０±０．５Ｌ／分の流速で４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルタにサンプリングすることによって、動物呼吸ゾーンからエアロゾル濃度を測定した。２．０±０．１Ｌ／分の流速でＭｅｒｃｅｒスタイルカスケードインパクターを使用して、動物呼吸ゾーンからエアロゾルをサンプリングすることによって、粒径を決定した。フィルタを、総ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）エアロゾル濃度を決定するために重量測定的に、かつ各曝露のためのパクリタキセルエアロゾル濃度を決定するために高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を介して分析した。吸入曝露全体を通して、酸素および温度を監視および記録した。
【０２２０】
平均総ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を、６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤で行われる吸入曝露に対して、それぞれ７．４３％のＲＳＤで０．２５ｍｇ／Ｌおよび１０．２３％のＲＳＤで８５．６４μｇ／Ｌと決定した。カスケードインパクターを使用して測定された平均空気動力学的質量中央径（幾何標準偏差）は、６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルに対して１．８（２．０）μｍであった。平均総ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を、２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤で行われる吸入曝露に対して、それぞれ１０．９５％のＲＳＤで０．４６ｍｇ／Ｌおよび１１．９９％のＲＳＤで２６２．２７μｇ／Ｌと決定した。カスケードインパクターを使用して測定された空気力学的質量中央径（幾何標準偏差）は、２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルに対して２．３（１．９）μｍであった。
【０２２１】
０．３８ｍｇ／ｋｇおよび１．１８ｍｇ／ｋｇの平均パクリタキセル沈着用量を、６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤のそれぞれの６５分の曝露に対して等式１を使用して計算した。
製剤および吸入曝露
製剤調製
材料
試験物品：吸入曝露に使用される試験物品が以下に示される。
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）：
識別：ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（滅菌ナノ粒子パクリタキセル）
説明：３０６ｍｇ／バイアルとして送達されるパクリタキセルの新規乾燥粉末製剤
ビヒクル
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤の調製のために使用されるビヒクルが、以下に示される。
１％ポリソルベート８０溶液
識別：注射用０．９％塩化ナトリウム中滅菌１％ポリソルベート８０
説明：透明な液体
生理食塩水希釈剤
識別：注射用滅菌０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ
説明：透明な液体
【０２２２】
製剤および吸入曝露
製剤調製
６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤を次のように調製した：簡潔に、１％ポリソルベート８０  ５．０ｍＬを、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（３０６ｍｇ、粒子を含むバイアルに添加した。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアルを激しく振盪し、反転させて、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアル内に存在する全ての粒子の湿潤を確認した。振盪直後、０．９％塩化ナトリウム溶液４６ｍＬをＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアルに添加し、バイアルを少なくとも１分間振盪して、懸濁液の十分な混合および適切な分散を確認した。
【０２２３】
１０．３ｍＬの０．９％塩化ナトリウム溶液が、６．０ｍｇ／ｍＬの製剤のために使用される４６ｍＬの代わりにＮａｎｏＰａｃ（登録商標）バイアルに添加される事を除いて、６．０ｍｇ／ｍＬの製剤のための上記のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤化手順を使用して、２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤を調製した。
【０２２４】
得られた製剤を少なくとも５分間そのままにしておき、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内のいかなる空気／泡も低減した。６．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温に保ち、再構成後２時間以内に噴霧化した。２０．０ｍｇ／ｍＬの最終製剤を室温に保ち、再構成後３０分以内に噴霧化した。
曝露システムの設定／エアロゾルの生成：実施例１１と同様
エアロゾル濃度監視：実施例１１と同様
粒径分布：実施例１１と同様
沈着用量計算：実施例１１と同様
【０２２５】
結果
エアロゾル濃度および粒径
エアロゾル濃度を、鼻のみの曝露チャンバ上の動物の呼吸ゾーンから、４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルタを使用して、各ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾル曝露全体を通して監視した。７つの４７ｍｍ  ＧＦ／Ａフィルタを各曝露中にサンプリングした。ＦＳ−１〜ＦＳ−６のフィルタをそれぞれ１０分間サンプリングし、ＦＳ−７フィルタを各低用量群および高用量群の間で５分間サンプリングした。粒径を、曝露チャンバ上の動物呼吸ゾーンからのＭｅｒｃｅｒスタイルカスケードインパクターを使用して測定した。表２０および２１は、それぞれ低用量および高用量の曝露中にＧＦ／Ａフィルタをサンプリングすることによって測定した総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を示す。
【表２０−２１】
2020536052.tif 000023
【０２２６】
粒径（エアロゾル液滴サイズ）分布を、カスケードインパクターを使用して、各ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルに対して、ＭＭＡＤ（空気動力学径に対する空中浮遊粒子質量の分布の中央値）（ＧＳＤ、粒径分布の変動を特徴付けるＭＭＡＤ測定を伴う）の観点から決定した。６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）エアロゾルについて、ＭＭＡＤ（ＧＳＤ）を１．８（２．０）μＭおよび２．３（１．９）μｍのそれぞれと決定した。図９および図１０は、６．０ｍｇ／ｍＬおよび２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルのそれぞれに対する粒径分布を示す。
【０２２７】
沈着用量
パクリタキセル沈着用量を、パクリタキセル平均エアロゾル濃度、ラットの平均体重、１０％の想定沈着率、ならびに等式１を使用することによる各低用量および高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤曝露に対する６５分の曝露持続時間に基づいて計算した。表２２は、平均パクリタキセルエアロゾル濃度、ラットの平均体重、曝露時間、および各曝露の沈着用量を示す。達成されたげっ歯類の平均沈着用量を、６．０ｍｇ／ｋｇおよび２０．０ｍｇ／ｋｇのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤曝露のそれぞれに対して、０．３８ｍｇ／ｋｇおよび１．１８ｍｇ／ｋｇと決定した。
【表２２】
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【０２２８】
酸素および温度
酸素および温度を、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾル曝露全体を通して監視した。記録した酸素および温度範囲は、６．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）曝露に対して１９．８％〜２０．９％および２０．７℃〜２０．８℃のそれぞれであった。２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤の曝露に対して、記録された酸素値は、曝露全体を通して１９．８％であり、温度範囲は、２０．７℃〜２０．８℃であった。
予備データ：図１１および１２を参照されたい。
【０２２９】
実施例１３−ヌードラット同所性肺癌モデルにおける吸入Ｎａｎｏｐａｃ（登録商標）（すなわち、（すなわち、本明細書で開示されるパクリタキセル粒子、約９８％のパクリタキセルが、０．８３ミクロンの平均粒径（数）、２７．９ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０８０５ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する）の有効性評価−研究ＦＹ１７−０９５
実施要領
−１日目に１２７匹のＮＩＨ−ｒｎｕヌードラットにＸ線を照射して免疫抑制を誘発した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）点滴注入によってＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は、３週間の成長期間を経た。３週間目の間、５つの研究群への体重層別化によって動物を無作為化した。４週目に始まって、群２の動物に、２２、２９、および３６日目に静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）によって週１回用量のアブラキサン（登録商標）を投与した。群３および４の動物に、低い（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）目標用量のそれぞれの週１回（月曜日）吸入（ＩＮＨ）用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群５および６の動物に、低い（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高い（最大１．０ｍｇ／ｋｇ）用量のそれぞれの週２回（月曜日および木曜日）目標吸入用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞の成長の対照として未処置のままにした。８週目で全ての動物を剖検した。
【０２３０】
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関連する臨床的観察結果は、皮膚発疹および呼吸困難を含んだ。研究の全期間を通して、全ての群がほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０２３１】
週１回の低用量および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２７０．５１μｇ／Ｌおよび２６３．５６μｇ／Ｌのそれぞれであった。週１回の高用量および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌのそれぞれであった。
【０２３２】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の平均群体重、１０％の推定沈着率、および３３分（低用量）または６５分（高用量）の曝露持続時間に基づいた。４週間の処置中、週１回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。週１回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。アブラキサン（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、２２、２９、および３６日目の平均用量は、４．９４、４．６４、および４．４６ｍｇ／ｋｇのそれぞれであった。
【０２３３】
予定された剖検において、各群からの動物の大多数が、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤色もしくは黄褐色の斑状変色を有した。他の散発性の観察結果は、１匹の動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜の結節を含んだ。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。
【０２３４】
アブラキサン処置動物の肺重量では、肺対ＢＷ比および肺対脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量群は、アブラキサン群と同様の重量を有し、未処置の対照と比較して有意に低い肺重量および肺対脳比を有した。
【０２３５】
組織学的には、全ての群の動物の大多数の肺は、腫瘍形成の何らかの証拠を含んだ。肺実質内にランダムに散在している拡大性の可変サイズの小さい塊、ならびに肺実質、より小さい気道、および血管の最大７５％を消失させたより大きい拡大し融合する塊の存在によって、腫瘍形成を特徴付けた。より大きい塊は、主に肺門領域に分布しているか、または軸方向の気道に並列しており、より小さい塊は、一般に末梢に位置していた。
【０２３６】
肺腫瘍塊の主要な形態学的細胞特性は、肺の腺癌の未分化から非常に高分化のパターンの存在まで異なった。主な腫瘍細胞型は、未分化腺癌の形態を示し、細胞は多形性、大型、退生、淡両染性染色であり、粘液小胞に似た微細な細胞質内液胞を有し、中程度から顕著な核大小不同を示し、個別化またはシート状に成長し、腺癌への分化に対する明確な特徴を欠いていることが観察された。しかしながら、他の塊内で観察された、または上記の未分化塊内で成長している細胞形態学的特性は、より組織化され、明確な腺房腺分化を示す高分化肺腺癌と一致していた。これらの両染性染色腫瘍細胞は、主に巣または腺パターンで配置され、これは、肺胞中隔によって結合されることが観察された。この腫瘍細胞集団では、有糸分裂像はめったに観察されなかった。これらの塊内であまり頻繁に観察されなかったのは、少量から中程度の量の淡好塩基性細胞質、卵形および可変小胞核、ならびに中程度の核大小不同を伴う、原始様の比較的小さい原始腫瘍細胞の局所領域であった。これらの原始腫瘍細胞は、ランダムに、かつシート状に成長していることが観察された。この好塩基性原始腫瘍細胞集団では、有糸分裂像およびアポトーシス小体の数の増加が最も頻繁に認められた。間質性線維症を伴う混合炎症細胞（主に好酸球、リンパ球、泡沫状マクロファージ、および偶発的な巨細胞）浸潤によって特徴付けられる炎症が、一般的に観察された。重要な実質壊死は、まれであったか存在しなかった。
【０２３７】
病理学者は、腫瘍細胞の漸進的な損失から、肺実質の残存線維形成結合組織足場を伴い、かつ泡沫状マクロファージの浸潤を伴う腫瘍細胞の完全な損失によって特徴付けられる、個々の腫瘍塊の縁部の浸食像の存在を、腫瘍退縮の証拠と見なした。
【０２３８】
陽性対照群１およびアブラキサン処置比較群２と比較して、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）処置群（群３〜６）において全体的な肺腫瘍量が減少し、これは、腺癌腫瘍塊および原始腫瘍細胞集団の重症度の低下、ならびに腫瘍退縮の証拠によって特徴付けられた。他の処置療関連の病変または所見は観察されなかった。広範囲の単核細胞浸潤を、吸入を通してＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した動物の肺において観察した。使用されるモデルがＴ細胞を欠損しているため、細胞は、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である可能性が高い。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）への腫瘍の局在的なより高い濃度の可能性がある曝露は、肺に影響を及ぼし、肺に単核細胞浸潤物を引き込む環境の変化をもたらしたと仮定される。
【０２３９】
目的
本研究の目的は、肺癌の同所性モデルにおける腫瘍量の低減において、静脈内投与アブラキサンの臨床参照用量と比較して、吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤の有効性を評価することであった。
材料および方法
試験系
【化２】
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【０２４０】
アブラキサン製剤
ＩＶ製剤に使用される臨床標準物質は、医薬品アブラキサン（登録商標）であった。医薬品を、投与日に食塩水で５．０ｍｇ／ｍＬに再構成し、製造業者の指示書に従って保管した。
【０２４１】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤
曝露のための２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤を、スポンサーの推奨に従って調製した。具体的には、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を、１％ポリソルベート８０で再構成した。全ての粒子が湿潤するまでバイアルを手で振盪した。注射用の追加の０．９％塩化ナトリウムを（所望の濃度目標まで）添加し、バイアルをさらに１分間手で振盪した。大きい塊が見えなくなり、懸濁液が適切に分散するまで振盪を続けた。
【０２４２】
得られた製剤を少なくとも５分間そのままにしておき、エアロゾル化作業のためにネブライザーに入れる前に、バイアル内のいかなる空気／泡も低減した。最終製剤を室温に保ち、再構成後２時間以内に噴霧化した。最終の２０．０ｍｇ／ｍＬを室温に保ち、再構成後３０（＋５）分以内に噴霧化した。
【０２４３】
実験計画
１２７匹の動物を研究に使用した。Ｘ線照射および腫瘍細胞の投与前に、７匹の動物を予備として指定した（予備の動物に照射も細胞株点滴注入もなかった）。−１日目に、全ての研究動物にＸ線を照射して免疫抑制を誘発した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）点滴注入によってＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は、３週間の成長期間を経た。３週間目の間、以下の表２３に概説される群への体重層別化によって動物を無作為化した。４週目に始まって、群２の動物に、静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）によって週１回目標用量のアブラキサン（登録商標）を投与した。群３および４の動物に、低い（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量のそれぞれの週１回（月曜日）吸入（ＩＮＨ）目標用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群５および６の動物に、低い（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）のそれぞれの週２回（月曜日および木曜日）吸入目標用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞の成長の対照として未処置のままにした。８週目で全ての動物を剖検した。
【表２３】
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【０２４４】
畜産、隔離、および研究への割り当て
隔離後、全ての動物の体重を測定し、体重に基づいて７つの予備を取り除くために無作為化した。１週目から３週目までは、ケージカード（ＬＣ番号）および尾の印付けによって動物を識別した。
【０２４５】
処置を開始する前の３週目の間、動物の体重を測定し、体重層別化によって上記に列挙した群に無作為化し、研究ＩＤを割り当てた。この時点から先、ケージカードおよびシャーピーによる尾の印付けによって動物を識別した。
【０２４６】
免疫抑制および照射
−１日目に、動物は、２５０ｋＶｐ、１５ｍＡで設定された約５００ラド（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ＲＴ  ２５０  Ｘ−ｒａｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｕｎｉｔ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＣＴ）、および１００ｃｍの線源と対象物の距離で、全身Ｘ線曝露を受けた。動物を、パイのスライス当たり２〜３匹、パイチャンバユニットに入いれた。照射プロセスは、１０〜１５分かかった。
【０２４７】
腫瘍細胞移植
０日目に、動物は、ＩＴによって投与した腫瘍細胞（Ｃａｌｕ３）を受けた。簡潔に、誘発チャンバ内で３〜５％イソフルランで麻酔した後、傾斜した吊り下げ式点滴注入プラットフォームに上顎切歯を引っ掛けて、動物を配置した。スタイレットを、喉頭を過ぎて気管内へと挿入する間、動物の舌を優しく固定した。ＥＤＴＡ懸濁液中の細胞の体積（目標用量体積：５００μＬ；濃度：０．５ｍＬ当たり約２０×１０６）を気管内点滴注入によって肺に送達した。点滴注入後、動物の呼吸および運動を注意深く監視した。腫瘍細胞移植に続いて、動物は、処置前の約３週間の腫瘍成長期間を経て、腫瘍細胞の生着および肺癌の発生を可能にした。
【０２４８】
Ｃａｌｕ３成長および調製
Ｃａｌｕ３細胞を、細胞培養フラスコ内で５％ＣＯ２で３７℃において成長させた。これらを、８０％コンフルエンスになるまで、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０培地で成長させた。細胞を点滴注入の日まで維持した。点滴注入前に、細胞をＰＢＳで洗浄することによって採取し、次いで、トリプシンを添加してフラスコから細胞を除去した。１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で細胞を中和した。次いで、細胞を１００×ｇで５分間遠心分離し、培地を除去し、細胞を４５０μＬの無血清ＲＰＭＩで２，０００万細胞の濃度に再懸濁した。点滴注入前に、ラット当たり５００μＬの総ＩＴ用量体積に対して、７０μＭのＥＤＴＡを５０μＬ、細胞懸濁液に添加した。
【０２４９】
体重および毎日の観察
無作為化のために、３週目まで毎週、４週目に始まって研究の終わりまで週２回、および剖検時に体重を収集した。
【０２５０】
研究中の各動物を、異常、罹患率、または死亡の臨床的徴候がないか１日に２回観察した。技術者は、投薬および体重セッション中に動物を観察した。
【０２５１】
アブラキサン投与ＩＶ−尾静脈注射
アブラキサン（５ｍｇ／ｍＬ、２５０μＬの最大用量体積）を、２２、２９、および３６日目にＩＶ尾静脈注射によって、群２の動物に投与した。
【０２５２】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）投与−鼻のみのエアロゾル曝露
条件付け
動物を最大７０分間、鼻のみの曝露チューブに条件付けた。曝露前の３日間にわたって３つの条件付けセッションを行い、第１のセッションは３０分、第２のセッションは６０分、第３のセッションは７０分続いた。動物を条件付け期間全体を通して、かつ曝露中に綿密に監視して、動物が一時的な苦痛以上のものを経験しないことを確実にした。
【０２５３】
曝露システム
２０ｐｓｉのネブライザー圧力で２つの圧縮空気ジェットＨｏｓｐｉｔａｋを用いて、エアロゾルを生成した。２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁製剤を、低用量および高用量曝露のために使用した。エアロゾルを、送達ラインを通して３２ポートの鼻のみの曝露チャンバ内へと方向付けた。げっ歯類吸入曝露を３３または６５分間行った。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁エアロゾルを、２つのＨｏｓｐｉｔａｋ圧縮空気ジェットネブライザーのセット（最大４０（±１）分間、次いで、残りの曝露持続時間に対して２つのＨｏｓｐｉｔａｋネブライザーの第２のセットと置き換える）を用いて生成した。各吸入曝露全体を通して、酸素および温度を監視および記録した。
【０２５４】
濃度監視
エアロゾル濃度監視を、エアロゾルを予め計量したＧＦ／Ａ  ４７ｍｍフィルタに収集することによって行なった。フィルタを、各吸入曝露全体を通して、鼻のみの曝露チャンバの動物呼吸ゾーンからサンプリングした。ＧＦ／Ａフィルタを通過するエアロゾルサンプリング流速を、１．０±０．５Ｌ／分に維持した。最後のフィルタを除き、フィルタを１０毎に各曝露持続時間全体を通して収集した。３３分続く低用量曝露（群３および５）では、１３分後に最終フィルタを収集し、６５分続く高用量曝露（群４および６）では、１５分後に最終フィルタを収集した。試料収集後、フィルタを計量して、曝露システム内の総エアロゾル濃度を決定した。
【０２５５】
計量後、各フィルタを７ｍＬガラスバイアルに入れた。ガラスバイアル内のフィルタを抽出し、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によって分析して、フィルタ上に収集されたパクリタキセルの量を定量化した。エアロゾルの総量および収集されたパクリタキセルエアロゾルを、フィルタを通過する全空気流で割ることによって、各フィルタの総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を計算した。平均パクリタキセルエアロゾル濃度を使用して、以下の用量の決定セクションに示されるように、以下に示される等式１を使用して、げっ歯類の肺への達成されたパクリタキセルの平均沈着用量を計算した。
【０２５６】
用量の決定
実施例４と同じように等式１を使用して沈着用量を計算した。
【０２５７】
安楽死および剖検
予定された剖検で、過量のバルビツレート系鎮静剤の腹腔内注射によって動物を安楽死させた。
【０２５８】
血液および組織採取
全ての剖検について、最終体重および脳重量を収集した。予定された安楽死のために、血液（血漿用）を心臓穿刺によってＫ２ＥＤＴＡチューブに採取した。肺を除去し、重量を測定した。腫瘍含む肺組織の切片である気管気管支リンパ節を、可能性がある将来の分析のために液体窒素で凍結させた。残りの肺を、可能性がある組織病理学のために固定した。
【０２５９】
組織病理学
固定した左肺葉を「ブレッドローフ」方法でトリミングし、２つのカセットに交互の切片を入れて、左肺の３つの代表的な切片をそれぞれ有する２つのスライドを得た。組織を決められた方法で処理し、パラフィン包埋し、約４μｍで切片化し、載置し、顕微鏡検査のためにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。所見を主観的、半定量的に等級付けした。
【０２６０】
縦方向にトリミングした、研究中の１２０匹の処置されたヌードラットのうち６０匹から得られた肺の切片（１〜４／動物）を、光学顕微鏡評価のためにＨ＆Ｅ染色グラススライドに処理した。
【０２６１】
このレビュー中に、顕微鏡所見を記録し、次いで、電子病理報告システム（ＰＤＳ−Ａｓｃｅｎｔｏｓ−１．２．０，Ｖ．１．２）に転送し、これは、肺負荷特性データの発生率および重症度を要約し、結果を集計し、個々の動物データを生成した。６０匹のヌードラットからの肺を組織学的に検査した：群１［１００１〜１０１０］、群２［２００１〜２０１０］、群３［３００１〜３０１０］、群４［４００１〜４０１０］、群５［５００１〜５０１０］、および群６［６００１〜６０１０］）。これらの肺の腫瘍量のレベルを評価するために、肺を組織病理学的検査中に評価およびスコアリングした。それぞれの累積肺負荷特性診断：１）腺癌（未分化および分化）、２）原始腫瘍細胞（低分化多形性細胞）、ならびに３）腫瘍退縮について、次のとおり提供される肺組織全体の関与割合を示す４ポイント等級スケールを使用して半定量的に、肺を等級付けした：０＝証拠なし、１＝最小（関与する肺切片の合計面積の約１〜２５％）、２＝軽度（関与する肺切片の合計面積の約２５〜５０％）、３＝中程度（関与する肺切片の合計面積の約５０〜７５％）、４＝顕著（関与する肺切片の合計面積の約７５〜１００％）。
【０２６２】
組織形態計測
組織形態計測分析を、各群からの最初の１０匹の動物の固定した左肺葉を使用して実施した。形態計測（「ブレッドスライス」）スタイルのトリミングを使用して、組織をトリミングした。簡潔に、トリミングを、肺の頭部末端から２〜４ｍｍのランダムな点で開始した。各肺切片を約４ｍｍの厚さに切断した。奇数番号の切片を、尾側を下にしてカセット１に入れた一方で、偶数番号の切片をカセット２に入れた。次いで、組織切片を処理し、パラフィン包埋し、４μｍで切片化し、検査のためにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。両方のスライド（奇数および偶数のスライス）を使用して、動物当たりの平均腫瘍率を決定した。
【０２６３】
Ｌｏｖｅｌａｃｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌによって指定した動物からのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した肺組織に対して、形態計測分析を実施した。スライド全体（左肺全体の横断方向切片を含む、動物当たり２枚）をＨａｍａｍａｔｓｕ  Ｎａｎｏｚｏｏｍｅｒ（商標）を使用してスキャンした。スキャンを、Ｖｉｓｉｏｐｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍソフトウェア（ＶＩＳ，ｖｅｒｓｉｏｎ  ２０１７．２．５．３８５７）で分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５（ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０４）で腫瘍面積率の統計分析を実施した。
【０２６４】
各スライド上に存在する腫瘍面積の量を定量化するように設計されたコンピューター制御画像定量化を、スライド全体のスキャンを使用して全ての左肺組織に実施した。肺転移の面積を定量化するためのＶｉｓｉｏｐｈａｒｍ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して、細胞密度、染色強度、ならびにサイズおよび染色強度に基づいて腫瘍細胞を正常肺組織と区別した。単純なＨ＆Ｅ染色に基づくこの定量化は、完全ではないことに留意されたい（すなわち、腫瘍組織のタイプ、壊死腫瘍組織と生存腫瘍組織を完全に区別することはできず、一部の正常な構造が腫瘍として含まれる場合がある）。このプロセスをＨ＆Ｅ切片に適用する価値は、それが腫瘍定量化に対する公平なアプローチだということである。肺全体の面積を決定し、次いで、転移として識別された構造が占める面積を、総面積の割合として表す。肺外構造が除外され、肺全体が含まれることを確実にするために分析される面積の微調整は、手動で実施され得る。全ての群にわたる一貫性を確実にし、不公平な判断が導入される可能性を排除するために、他の手動操作は回避される。可能な場合、腫瘍組織のみを識別するための特定の免疫組織化学的染色の開発が、この分析の特異性を高める。
【０２６５】
採血および処理
剖検で採取した血液を、４℃において最低１３００ｇで１０分間遠心分離することによって血漿に処理した。血漿試料を、分析またはスポンサーへの出荷まで−７０〜−９０℃で保存した。
【０２６６】
追加の形態学的および免疫組織化学的（ＩＨＣ）研究
ヘマトキシリンおよびエオシン、マッソントリクローム染色、ＡＥ１／ＡＥ３（パン−ケラチン）、ならびにＣＤ１１ｂ（樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、およびマクロファージ）で調製したスライドを使用して、形態学的および免疫組織化学的（ＩＨＣ）特徴をレビューするために、１７匹の動物のサブセットを選択した。このサブセットは、対照動物（ｎ＝２）および各処置群からの処置動物（群当たりｎ＝３）を含んだ。ラット肺ブロックを４μｍの厚さで切片化し、正に帯電したスライド上に採取した。
【０２６７】
方法
Ｈ＆Ｅおよびマッソントリクローム染色を、標準プロトコルに従って実施した。抗パンサイトケラチン抗体［ＡＥ１／ＡＥ３］については、対照として組織バンクからラット子宮を切片化した。Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ自動免疫染色機、ならびに４つの異なる希釈におけるマウス抗パンサイトケラチン［ＡＥ１／ＡＥ３］（Ａｂｃａｍ、番号ａｂ２７９８８、ロット番号ＧＲ３２０９９７８−１）抗体、および陰性対照：一次抗体なし、１：５０、１：１００、１：２００、および１：４００を使用して、組織バンクからのホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ラット子宮組織に対して最適化を実施した。Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ  １（クエン酸緩衝液、ｐＨ６．０）を２０分間（ＥＲ１（２０））、およびＬｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２（ＥＤＴＡ溶液、ｐＨ９．０）を２０分間（ＥＲ２（２０））使用して、熱誘発抗原賦活化を実施した。非特異的バックグラウンドを、Ｒｏｄｅｎｔ  Ｂｌｏｃｋ  Ｍ（Ｂｉｏｃａｒｅ、番号ＲＢＭ９６１Ｈ、ロット番号０６２１１７）でブロックした。
【０２６８】
抗パンサイトケラチン抗体［ＡＥ１／ＡＥ３］抗体を、Ｍｏｕｓｅ−ｏｎ−Ｍｏｕｓｅ  ＨＲＰＰｏｌｙｍｅｒ（Ｂｉｏｃａｒｅ、番号ＭＭ６２０Ｈ、ロット番号０６２０１６）を使用して検出し、３’３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ、茶色）で可視化した。ヘマトキシリン核対比染色（青色）を適用した。最適化スライドを検査し、ＥＲ２（２０）との１：５０の希釈における抗パンサイトケラチン抗体［ＡＥ１／ＡＥ３］を用いて、試料スライドの最適な染色条件を決定した。
【０２６９】
抗ＣＤ−１１ｂ抗体の場合、Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ自動免疫染色機、ならびに４つの異なる希釈におけるウサギ抗ＣＤ１１ｂ抗体、および陰性対照：一次抗体なし、１：２５０、１：５００、１：１０００、および１：２０００を使用して、組織バンクからのホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ラットリンパ節組織に対して最適化を実施した。
【０２７０】
Ｌｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ  １（クエン酸緩衝剤、ｐＨ６．０）を２０分間（ＥＲ１（２０））、またはＬｅｉｃａ  Ｂｏｎｄ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２（ＥＤＴＡ溶液、ｐＨ９．０）を２０分間（ＥＲ２（２０））使用して、熱誘発抗原賦活化を実施した。
【０２７１】
抗ＣＤ１１ｂ抗体を、Ｎｏｖｏｃａｓｔｒａ  Ｂｏｎｄ  Ｒｅｆｉｎｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎを使用して検出し、３’３−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ、茶色）で可視化した。ヘマトキシリン核対比染色（青色）を適用した。最適化スライドを検査し、ＥＲ２（２０）との１：２０００の希釈における抗ＣＤ１１ｂを用いて、ＦＦＰＥ組織の最適な染色条件を決定した。ラットリンパ節対照を、ラット肺試料と並行して使用した。
【０２７２】
研究結果
臨床的観察結果、生存率、および体重
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関連する臨床的観察結果は、皮膚発疹および呼吸困難を含んだ。１匹の動物は、上腹部ヘルニアを有することが観察された。獣医の推奨に従って、動物を、吸入曝露を受けない、したがって曝露チューブの拘束が必要ではない群１（未処置対照）と交換した。
【０２７３】
図１３は、研究の継続期間を通した平均体重を示す。図１４は、０日目からの平均体重のパーセント変化を示す。研究の期間を通して、全ての群がほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０２７４】
アブラキサンＩＶ尾静脈注射
アブラキサンのＩＶ注射を受けた群では、２２、２９、および３６日目の平均用量は、４．９４、４．６４、および４．４６ｍｇ／ｋｇのそれぞれであった。
【０２７５】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）曝露
エアロゾル濃度および沈着用量
総エアロゾル濃度およびパクリタキセルエアロゾル濃度を、各曝露中にＧＦ／Ａフィルタのサンプリングによって測定した。週１回の低用量および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２７０．５１μｇ／Ｌおよび２６３．５６μｇ／Ｌのそれぞれであった。週１回の高用量および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌのそれぞれであった。酸素および温度レベルを、各曝露全体を通して監視した。
【０２７６】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の平均群体重、１０％の推定沈着率、および３３分または６５分の曝露持続時間に基づいた。４週間の処置中、週１回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。
【０２７７】
週１回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。
【０２７８】
粒径（ＭＭＡＤおよびＧＳＤ）
粒径分布を、カスケードインパクターを使用して、各ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤エアロゾルについて、空気動力学的質量中央径（ＭＭＡＤ）および幾何標準偏差（ＧＳＤ）の観点から決定した。２０．０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）エアロゾルについて、平均ＭＭＡＤを２．０１ミクロン、およびＧＳＤを１．８７と決定した。
【０２７９】
剖検観察結果および臓器重量
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。剖検において、各群からの動物は、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤色もしくは黄褐色の斑状変色を有した。他の散発性の観察結果は、１匹の動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜の結節を含んだ。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。１匹の動物が、剖検時にいかなる目に見える腫瘍（結節）も有しなかった。
【０２８０】
個々の動物の臓器重量データが、図１５、図１６、および図１７にグラフで示される。アブラキサン処置動物の肺重量では、肺対ＢＷ比および肺対脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量群は、アブラキサン群と同様の重量を有し、未処置の対照と比較して有意に低い肺重量および肺対脳比を有した。週１回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）、週２回の低用量および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群は、一般に、同様の平均肺重量および比率を有した。
【０２８１】
形態計測
全ての処置群は、対照群と比較して、平均肺腫瘍率の減少を示した。しかしながら、群間に統計学的有意差はなかった。断面肺スライド上で検査した腫瘍面積率に関して、ＩＶアブラキサン処置とＮａｎｏＰａｃ（登録商標）処置レジメンのいずれかとの間にも、統計学的有意差はなかった。このモデルに特有であるように、腫瘍率において全ての群内の動物間に大きいばらつきがある。これらのデータは、最終解釈のための肺対脳重量比および標準組織病理学を含む、このモデルにおける肺腫瘍量の他の指標と組み合わせて考慮されるべきである。形態計測分析および組織病理学的検査を、左肺葉からの固定した肺組織に対して実施する一方で、肺組織に対する他の分析を、右肺葉からの凍結組織に対して実施し得ることに留意することが重要である。平均腫瘍面積が、図１８および図１９に示される。
【０２８２】
病理学結果
Ｈ＆Ｅ染色肺スライドが、図２０、２１、２２、２３、２４、および２５に示される。腫瘍性細胞の特定された集団のスライド検査の結果として、病理学者は、次のことを決定した：（１）未処置対照群１（２．１）と比較して、全ての処置群（群２（１．７）、群３（１．８）、群４（１．７）、群５（１．６）、および群６（１．６）において、腺癌の全肺腫瘍量の重症度のわずかな減少があった（未分化および分化細胞）。（２）対応する対照群１（０．９）および群２（１．０）と比較して、群３（０．３）、群４（０．３）、群５（０．２）、および群６（０．２）における重症度の減少によって明らかな原始腫瘍細胞集団の低減があった。ならびに３）対応する対照群１（０．０）および群２（０．１）と比較して、群３（０．６）、群４（１．０）、群５（０．８）、および群６（１．０）に腫瘍退縮が存在した。肺負荷特性データの発生率および重症度が、表２４および図２６に要約される。
【表２４】
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【０２８３】
Ｈ＆Ｅ染色肺スライドの観察結果は、図２０、２１、２２、２３、２４、および２５に示される。
一般的な観察結果：
対照：増殖細胞を有し、免疫細胞浸潤がほとんどまたはまったくない広範なレベルの生存腫瘍。
【０２８４】
アブラキサンＩＶ：ある程度の腫瘍退縮を伴うある程度のリンパ球応答を有する、多くの生存しているように見える腫瘍塊。
【０２８５】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週１回、高：残っている生存腫瘍細胞がほとんどない、肺からの腫瘍のクリアランス。残っている塊は、免疫細胞浸潤物および線維形成のように見える。
【０２８６】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週２回、低：マクロファージおよび単核細胞を含む免疫細胞浸潤物に囲まれた、腫瘍結節がいくつか残っている。
【０２８７】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週２回、高：免疫浸潤物および間質性線維症に置き換わる腫瘍を伴い、腫瘍結節はほとんどない。
【０２８８】
広範囲の単核殺腫瘍細胞浸潤を、吸入を通してＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した動物の肺において観察した。使用されるモデルがＴ細胞を欠損しているため、細胞は、Ｂ細胞もしくはＮＫ細胞、または両方である可能性が高い。Ｂ細胞は、抗体の産生に寄与し、抗体依存性細胞介在性細胞傷害を通して腫瘍細胞の死滅に関与し得る（抗体は、Ｆｃ受容体を発現させる細胞に結合し、これらの細胞の死滅能力を高める）。ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の死滅に重要である自然リンパ系細胞である。腫瘍のある患者では、ＮＫ細胞活性が低減され、腫瘍の成長を可能にする。Ｔ細胞に加えて、ＮＫ細胞は、それらの活性を高めるためのいくつかのチェックポイント阻害剤の標的である。
【０２８９】
トリガーシグナルまたは阻害シグナルのいずれかを送達することが可能な幅広い表面受容体を使用することによって、ＮＫ細胞は、それらの環境内の細胞を監視して、細胞が異常（腫瘍またはウイルス感染）であり、細胞毒性によって排除される必要があるかどうかを確認することができる。
【０２９０】
ＮＫ細胞の細胞毒性および走化性は、腫瘍細胞およびそれらの副産物を含む多くの病理学的プロセスによって変更され得る。ある特定のシグナルに応じて、それらの機能は、強化または増強される。異なるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を使用して、いくつかの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に応答して、ＮＫ細胞は、サイトカイン産生および／または細胞溶解活性を高めることができる。ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＦＮ  α／βを含むサイトカインも、ＮＫ細胞の活性を変更することができる。ＮＫ細胞は、異なる腫瘍細胞標的を死滅させることが可能な細胞溶解性エフェクターのみである単純な細胞ではなく、むしろ、それらは、多様な環境状況でそれらの活性を細かく調整することができる異種の集団を表す。
【０２９１】
腫瘍量は、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）で処置した動物の肺において大幅に低減されているように見え、アブラキサンＩＶに対する腫瘍量よりも低い。したがって、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）の形態のパクリタキセルの局所投与は、付加的な効力を提供する。これは、長期にわたる化学療法へのより長い曝露および腫瘍部位への活発な細胞浸潤の両方による可能性が高い。この後者の応答は、用量密度（実際の用量および投与頻度）に依存しているように見えた。
【０２９２】
特定の顕微鏡写真の観察結果：
図２０：対象１００６（対照）腺癌−３、原始−１、退縮−０肺胞腔内または肺胞中隔を覆う未分化、多形性、大型、退生腫瘍細胞の一般的な分布を示す、低倍率（２倍）。細胞の大部分は、腺癌の特徴を有さず、隣接する腫瘍のシート状に見られる。多くの細胞は、好塩基性細胞質を有するが、他の細胞は、大型、退生であり、淡両染性染色を含む。肺胞マクロファージの既存の常在集団の存在および腫瘍退縮の欠如に留意されたい。
【０２９３】
図２１：対象２００３（ＩＶアブラキサン）腺癌−１、原始−１、退縮−１。主に辺縁における腫瘍塊の一般的な分布、ならびに肺胞腔を満たす複数のより小さい拡大性腫瘍塊を示す、低倍率（４倍）。腫瘍細胞は、多形性、大型、退生であり、淡両染性染色を有し、腺癌の未分化から分化のパターンまで異なる。腫瘍退縮の証拠は、塊の辺縁の周囲に存在し、主にマクロファージの浸潤によって特徴付けられる。
【０２９４】
図２２：対象２０１０（ＩＶアブラキサン）腺癌−３、原始−１、退縮−０大部分の肺胞腔を満たす大型の拡大性腫瘍塊の一般的な分布、ならびに辺縁の腫瘍性細胞を示す、低倍率（２倍）。大部分の腫瘍細胞は、主に淡両染性染色を有し、未分化、多形性、大型、退生である。原始細胞は、より小型、卵形であり、可変性の小胞核を伴うより好塩基性の染色細胞質、および中等度から顕著の核大小不同を有する。炎症性細胞浸潤は、主に好中球およびマクロファージである。この画像は、腫瘍退縮がないことを実証する。
【０２９５】
図２３：対象４００９（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週１回、高）腺癌−０、原始−０、退縮−４。すでに密集している腫瘍塊の一般的な分布、線維性結合組織、中央の膠原性間質、および線維細胞の複数の小さい領域の存在が周辺の肺胞腔に見られること、ならびに肥厚した肺胞中隔が腫瘍退縮の兆候を裏付けることを示す、低倍率（２倍）。加えて、肺胞腔は一般的に、腫瘍退縮のさらなる兆候と共に、マクロファージおよびリンパ球の浸潤物で満たされる。
【０２９６】
図２４：対象５０１０（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週２回、低）腺癌−１、原始−０、退縮−３。すでに密集している腫瘍塊の一般的な分布を示す、低倍率（２倍）。退縮している塊は、可変的に小さく、ランダムに分布している。線維性結合組織が肺胞腔を満たす／に置き換わるのが見られ、退行性腺癌の病巣を示唆する。急性壊死、線維性結合足場、上皮ならびに間質周囲のマクロファージ、巨細胞、およびリンパ球の混合細胞浸潤が、腫瘍退縮の兆候である。
【０２９７】
図２５：対象６００５（ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）週２回、高）腺癌−１、原始−０、退縮−４。腺癌細胞の以前の浸潤物の病巣を示唆する、肺胞腔を満たす／に置き換わる線維性結合組織の複数の小さい領域における、すでに密集している腫瘍塊の一般的な分布を示す、低倍率（２倍）。腫瘍退縮は、すでに密集している腫瘍塊の線維形成、肺胞腔を満たす／に置き換わる中央の膠原性間質核および辺縁の線維性結合組織、中隔の肥厚、ならびにリンパ球およびマクロファージによって浸潤した肺胞腔を満たす線維細胞の存在によって証明される。
【０２９８】
追加の形態学的および免疫組織化学的（ＩＨＣ）研究の結果
この研究の１２０匹全ての動物のＨ＆Ｅスライドをレビューした後、処置群で免疫応答の可能性が見られたことが注目された。この所見をさらに調査するために、動物のサブセットをさらなる免疫組織化学的評価のために各群から選択した。
【０２９９】
最初に、１２０匹全ての動物をレビューする病理学者によって評価された腫瘍退縮の傾向を、試料サイズ間の同様の傾向を示すために、１７匹の動物のサブセットをレビューする異なる病理学者と比較した。
【０３００】
１２０匹全ての動物の腫瘍退縮の程度の初期評価を、肺組織全体の関与割合を示すポイントスケールを使用して半定量的に等級付けする病理学者によって行った。等級付けシステムは、０＝兆候なし、１＝肺切片の総面積の１〜２５％、２＝肺切片の総面積の２５〜５０％、３＝肺切片の総面積の５０〜７５％、４＝肺切片の総面積の７５〜１００％の等級付けスケールに基づく。この評価は、以下のようにスコアリングされた腫瘍退縮を呈する動物の発生率を示す。非処置対照の０％、ＩＶアブラキサンの１０％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）低用量、週１回の５５％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）低用量、週２回の５５％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量、週１回の５５％、およびＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量、週２回の６５％。
【０３０１】
同様の半定量的等級付けスケール（０＝兆候なし、１＝肺切片の総面積の１〜１９％、２＝肺切片の総面積の１１〜５０％、３＝肺切片の総面積の５０％超、４＝完全退縮）として使用して、腫瘍退縮を評価する別の病理学者によって行われた１７匹の動物のサブセットのレビュー。この評価は、以下のようにスコアリングされた腫瘍退縮を呈する動物の発生率を示す。非処置対照の０％、ＩＶアブラキサンの−６５〜６９％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）低用量、週１回の１００％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）低用量、週２回の１００％、ＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量、週１回の１００％、およびＩＨ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量、週２回の１００％。このレビュー（１７匹の動物）は、以前のレビュー（１２０匹の動物）と同様のパターンを示し、吸入群は、腫瘍退縮のある動物の割合が最も高かった。
【０３０２】
この研究から１７匹の動物のサブセットの組織学的レビューで、腫瘍退縮および免疫応答に関する興味深いパターンが見られた。様々な群間で２つの主な特徴、特に腫瘍退縮の存在および程度、ならびに付随する免疫反応の存在および強度が異なっていた。以下は、組織学的レビューの観察結果および注意点である。
【０３０３】
未処置群
観察結果：図２７：対照症例。上列：Ｈ／Ｅ染色切片。下列：免疫組織化学的染色。
列１：（Ａ）多形性核、有糸分裂の増加、および腺分化の欠如を伴う、シート状の大型細胞からなる腺癌の低分化領域。腫瘍細胞の密集したコンパクトな配置、右下角の周囲の正常肺からの鋭い境界、および腫瘍を囲む線維性被膜の欠如に留意されたい。（Ｄ）Ａに示される同じ領域からの対応するケラチン免疫染色。これは、パンサイトケラチンによる癌腫細胞の高感度かつ特異的な標識化を示す（実線矢印）。
列２：（Ｂ）局所原基痕跡管形成（右上の破線矢印）を伴う腺癌。小リンパ球および局所マクロファージからなる中央の局所、限局性免疫細胞成分に留意されたい（中央の実線矢印）。（Ｅ）腫瘍細胞結節の辺縁の最小数のＮＫ細胞およびマクロファージを示すＣＤ１１ｂ染色（実線矢印）。
列３：（Ｃ）高密度に密集した小さい成熟リンパ球からなる気管支関連リンパ組織（ＢＡＬＴ）の病巣に隣接して成長する腺癌（実線矢印で印付け）。ＢＡＬＴと隣接する正常な気管支内層との密接な関連に留意されたい（左上角の破線矢印）。（Ｆ）癌腫細胞の陽性染色およびリンパ系細胞の染色の欠如を示す、ケラチンで染色したＣに見られる病巣に対応する病巣。
【０３０４】
注意点：両方の動物は、腺癌の固形の高密度に密集した集合体の均一な成長を示した。腫瘍は、周囲の正常な肺実質に隣接する比較的良好に境界が定められた縁を有し、腫瘍退縮および衰えない腫瘍細胞成長の兆候はなかった。これらの動物のリンパ浸潤物は軽度であり、三次リンパ構造はわずかであった。
【０３０５】
静脈内（ＩＶ）アブラキサン陽性処置対照群
観察結果：図２８：関連する免疫細胞浸潤物の増加を伴い、漸進的に小さくなる腫瘍細胞クラスターおよび単一腫瘍細胞へと結節の辺縁に向かう腫瘍の分離からなる腫瘍退縮を伴う腺癌の結節を示す、ＩＶアブラキサン（２００３）。
列１：（Ａ）浸潤性腺癌の結節の低倍率画像（破線矢印で強調）。片縁での腫瘍細胞の進行性分離および免疫細胞応答の増加による、結節の不規則な辺縁境界に留意されたい（実線矢印）。（Ｄ）Ａに示される同じ領域からの対応するケラチン免疫染色。これは、辺縁に向かう腫瘍細胞結節の漸進的に小さくなるサイズ（破線矢印）、およびそれらの間に介在する間質の増加（実線矢印）を明確に実証する。
列２：（Ｂ）画像Ａの領域の高倍率画像。腫瘍細胞の漸進的に小さくなるクラスターを示す（破線矢印）。（Ｅ）分離したより小さい腫瘍細胞結節を強調する、Ｄに示されるケラチン染色領域の高倍率画像。右上から、腫瘍が個々の単一腫瘍細胞として存在する左下角に向かって移動する腫瘍細胞クラスターサイズの漸進的な減少に留意されたい（破線矢印）。実線矢印は、免疫細胞と共に介在する間質が増加することを強調する。
列３：（Ｃ）腫瘍結節の中心内に見られる免疫細胞（実線矢印で強調）（破線矢印は、腫瘍細胞を強調）。（Ｆ）画像Ａに見られる同じ領域を強調するＣＤ１１ｂ染色切片の低倍率画像。これは、結節の辺縁における、かつ腫瘍結節内の免疫細胞の密度の増加（実線矢印）を示す。破線矢印は、ＣＤ１１ｂ抗体で標識されていない残存癌腫細胞を強調する。
【０３０６】
注意点：３匹全ての動物は、腺癌の高密度に密集した集合体での腫瘍成長を示したが、動物のうち２匹は、腫瘍退縮と適合するいくつかの特徴を示した。この退縮を、周囲の正常な肺実質に隣接する境界が不鮮明な腫瘍結節の辺縁での腫瘍細胞クラスターの進行性分離および消失の存在によって特徴付けた。腫瘍消失を示す領域のリンパ浸潤物は、間質のリンパ浸潤物の増加を示した。
【０３０７】
吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）処置群
観察結果：図２９：吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）症例。
上列：低用量、週１回（ＬＤ１×）（症例３００６）。（Ａ）辺縁の腫瘍細胞の顕著な分離および消失を伴う結節内の腫瘍退縮を示すＨ／Ｅ染色（破線矢印は、残存腫瘍を示し、実線矢印は、炎症を伴う介在する間質を示す）。（Ｂ）ケラチン染色は、リンパ球およびマクロファージを有する背景間質からなる腫瘍消失の大きい介在領域（実線矢印）を伴う、残存癌腫（破線矢印）を強調する。（Ｃ）ＣＤ１１ｂ免疫染色は、腫瘍細胞脱落がある領域内の顕著なリンパ組織球性免疫細胞浸潤物を強調する（実線矢印）。残存未染色癌腫は、破線矢印で強調される。
２列目：低用量、週２回（ＬＤ２×）（症例４００９）。（Ｄ）Ｈ／Ｅ染色は、残存する生存可能な腺癌がないことを示した。この症例は、背景間質内の小リンパ球およびマクロファージの集合体からなったこのような散在性病巣を含んだ。これらの結節または肺切片の他の場所には診断的に生存可能な腫瘍細胞は見られなかった。（Ｅ）染色の欠如を示し、したがって、残存する生存可能な癌腫がないことおよび完全退縮の解釈のための免疫組織化学的裏付けを加える、Ｄと同じ領域のケラチン染色。（Ｆ）ＣＤ１１ｂ染色は、この病巣が、軽度から中程度の免疫細胞浸潤物を有することを示す。
３列目：高用量、週１回（ＨＤ１×）（症例５００８）。（Ｇ）辺縁の腫瘍細胞の顕著な分離および消失を伴う結節内の腫瘍退縮を示すＨ／Ｅ染色（破線矢印は、残存腫瘍を示し、実線矢印は、炎症を伴う介在する間質を示す）。（Ｈ）ケラチン染色は、残存癌腫（破線矢印）、ならびにリンパ球およびマクロファージを有する背景間質からなる腫瘍消失の大きい非染色領域（実線矢印）を強調する。（Ｉ）ＣＤ１１ｂ免疫染色は、腫瘍細胞脱落がある領域内の顕著な免疫細胞浸潤物を強調する（実線矢印）。未染色癌腫の残存ポケットは、破線矢印で強調される。
４列目：高用量、週２回（ＨＤ２×）（症例６００５）。（Ｊ）Ｈ／Ｅ染色は、好酸球性および泡沫状細胞質を伴う細胞を含むこの集合体などの多数の集合体を示した（低倍率）。（Ｋ）同じ領域のより高い倍率は、紡錘形の核（実線矢印）およびほとんど可能性がない管様構造または再生小血管（破線矢印）を伴う細胞を示す。（Ｌ）マッソントリクローム染色は、初期膠原線維形成および組織化と一致する間質の青色染色を示す。
５列目：高用量、週２回（ＨＤ２×）（症例６００５続き）。（Ｍ）ケラチン染色は、局所の単一細胞および管様構造の標識化を示す（破線矢印）。介在細胞は、ケラチンに対して陰性である（実線矢印）。（Ｎ）ＣＤ１１ｂ免疫染色は、腫瘍細胞脱落がある領域内の免疫細胞浸潤物を強調する（実線矢印）。この画像の倍率は、Ｊの倍率と一致する。
【０３０８】
注意点：１２匹の動物のうち、１匹の動物は、残存腺癌を示さず、完全レスポンダーと解釈された（非生着に対して）。１匹の動物は、腫瘍として、または再生小血管および／もしくは再生／萎縮性非腫瘍性肺実質として区別することが困難であった腫瘍陽性染色の稀な症例を含んだため、分類が困難なものであることを示した。したがって、この第２の症例も、広範でほぼ完全なレスポンダーと解釈された。これら２つの症例では、以前に腺癌の固体クラスターを含んでいたと推定される領域に、免疫細胞の散在性病巣があった。１つの症例は、マッソントリクローム染色によって認められた線維性コラーゲンの沈着を伴う組織化の兆候を示した。残りの１０匹全ての動物は、異なる程度の明らかな腫瘍退縮を伴う腫瘍結節を示し、１０匹のうち８匹の動物は、腫瘍結節の５０％を超える腫瘍退縮を示した。吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群は、明確に定義されたリンパ濾胞、および胚中心、および毛包間領域、および傍皮質領域を伴う、高密度に密集した成熟リンパ系細胞の明確に定義された組織化した集合体とは異なった、リンパ浸潤物を示した。同様に、腫瘍結節の辺縁における、かつ局所的に中心内のリンパ系組織のより小さい高密度の集合体。
【０３０９】
三次リンパ構造（ＴＬＳ）の観察
二次リンパ器官は、胚形成中に遺伝的に予めプログラムされたプロセスの一部として発達し、主に適応免疫応答を開始し、稀な抗原特異的ナイーブリンパ球と局所組織から排出する抗原提示細胞との間の相互作用の場所を提供する働きをする。二次リンパ組織の器官形成は、三次リンパ構造（ＴＬＳ）の新たなリンパ新生中、成人期に繰り返され、癌を含む様々な病的状態を患う炎症組織に形成され得る。気管支関連リンパ組織などの粘膜関連リンパ組織の臓器形成は、１つのそのような例である。ＴＬＳという用語は、リンパ球の単純なクラスターから、二次リンパ器官に非常によく似た高度化、分離構造まで、異なる組織の構造を指し得る。リンパ節とＴＬＳとの間の顕著な違いは、リンパ節が被包型である場合、ＴＬＳは、臓器または組織内に閉じ込められた免疫細胞および間質細胞の集合を表すことである。
【０３１０】
観察結果：図３０：治療および未処置の症例のリンパ構造。
第１の列：濾胞過形成を伴う三次リンパ構造（ＴＬＳ）を実証する、吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）の症例。高用量、週２回（ＨＤ２×）（症例６００７）。（Ａ）２つの隣接するＴＬＳを示すＨ／Ｅ染色（実線矢印で強調）。肺において、これらは、気管支関連リンパ組織（ＢＡＬＴ）と呼ばれる。これらのＴＬＳのオルガノイド出現に、それらが、顕著な胚中心、毛包間領域、および傍皮質領域を伴うリンパ濾胞を含む明確なトポロジーを有する高密度のリンパ組織の境界が明瞭な集合体からなるという点で留意されたい。破線矢印は、腫瘍退縮と一致する不規則な辺縁境界を有する腫瘍の隣接病巣を強調する。（Ｂ）Ａの領域からのより高倍率の画像。より小さいＴＬＳは、顕著な胚中心（矢印の先端におけるより淡い領域）を伴うリンパ濾胞を含む。リンパ濾胞における胚中心形成のこのプロセスは、リンパ濾胞過形成と呼ばれ、活性化され、かつ異物および腫瘍破片を含む様々な抗原に対する免疫応答を開始するプロセスにあるリンパ組織を示している。胚中心は、リンパ系細胞の明るい領域および暗い領域を有する偏光を特徴的に示す。この画像では、胚中心の淡い領域は、隣接する腫瘍結節に向いている。（Ｃ）不規則な辺縁境界を有する隣接する癌腫結節を示す、ケラチン染色。実線矢印は、ＴＬＳを示す。ＡおよびＢに示されるＨ／Ｅ染色切片と比較して、この組織切片がパラフィン包埋組織のより深い部分に由来するため、このＴＬＳは、この切片ではより小さく見える。
第２の列：異なる群における腫瘍結節に関連するより小さいリンパ集合体の数および密度の違いを例示するための、対照（Ｄ）、ＩＶアブラキサン（Ｅ）、およびＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（Ｆ）症例間の比較。これらの３つの画像は、全て同じ低倍率（４倍の対物レンズ）である。（Ｄ）対照症例（１００３）は、いかなる個別のリンパ集合体も伴わない、高密度に密集した腺癌（破線矢印）を示す。（Ｅ）腺癌の結節（破線矢印）および右下の１つのみの稀な小さいリンパ集合体（実線矢印）を示す、ＩＶアブラキサン症例（２００９）。（Ｆ）小リンパ系細胞の多数の関連する小型および中型集合体を伴う、腺癌結節（破線矢印）を示す、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）症例、高用量、週２回（ＨＤ２×）。これらは、腫瘍の辺縁に、かつ局所的に腫瘍内に配置される（実線矢印）。
【０３１１】
注意点：吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群は、対照およびＩＶアブラキサン群（低倍率視野当たり１）と比較して増加したＴＬＳの数および密度（低倍率視野当たり２）を示し、これらＴＬＳのうちのより多くが、顕著な胚中心を含むリンパ濾胞過形成を伴い、サイズおよび活性化の増加を示した。
【０３１２】
要約すると、１７匹の動物のサブレビューは、腫瘍退縮および免疫応答に関していくつかの興味深いパターンを示した。具体的に、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）で処置した動物の全てが、完全および／またはほぼ完全な退縮を示す２匹の動物を含む、腫瘍退縮と適合する少なくともくつかの特徴を示した一方で、この群の残りの１０匹の動物のうち８匹は、腫瘍結節の５０％超において腫瘍退縮と適合するいくつかの特徴を示した。これは、動物が応答を示さなかった対照群、３匹のうち２匹の動物が腫瘍結節の１〜１０％において腫瘍退縮を示したＩＶアブラキサン群と比較して、応答が増加した。
【０３１３】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群を互いと評価すると、より高い用量およびより頻繁な投与量（週２回対週１回）は両方、腫瘍応答に対するより大きい効果と関連していた。データは、腫瘍退縮との免疫ベースの関連付けを裏付け、吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群もまた、対照およびＩＶアブラキサン群（低倍率視野当たり１）と比較して増加したＴＬＳの数および密度（低倍率視野当たり２）を示し、これらＴＬＳのうちのより多くが、顕著な胚中心を含むリンパ濾胞過形成を伴い、サイズおよび活性化の増加を示した。また、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群では、腫瘍結節の辺縁において、かつ腫瘍結節内に、より高い密度の免疫細胞があった。
【０３１４】
結論
−１日目に１２７匹のＮＩＨ−ｒｎｕヌードラットにＸ線を照射して免疫抑制を誘発した。０日目に、動物に気管内（ＩＴ）点滴注入によってＣａｌｕ３腫瘍細胞を投与した。動物は、３週間の成長期間を経た。３週間目の間、研究群への体重層別化によって動物を無作為化した。４週目に始まって、群２の動物に、２２、２９、および３６日目に静脈内（ＩＶ）投与（５ｍｇ／ｋｇ）によって週１回用量のアブラキサン（登録商標）を投与した。群３および４の動物に、低い（０．５ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）目標用量のそれぞれの週１回（月曜日）吸入（ＩＮＨ）用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群５および６の動物に、低い（０．５０ｍｇ／ｋｇ）および高い（１．０ｍｇ／ｋｇ）用量のそれぞれの週２回（月曜日および木曜日）目標吸入用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した。群１の動物は、正常な腫瘍細胞の成長の対照として未処置のままにした。８週目で全ての動物を剖検した。
【０３１５】
全ての動物は、それらの指定された剖検時点まで生存した。このモデルに関連する臨床的観察結果は、皮膚発疹、呼吸困難を含んだ。研究の期間を通して、全ての群がほぼ同じ割合で体重が増加した。
【０３１６】
週１回の低用量および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２７０．５１μｇ／Ｌおよび２６３．５６μｇ／Ｌのそれぞれであった。週１回の高用量および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群に対する吸入曝露平均パクリタキセルエアロゾル濃度は、２４４．８２μｇ／Ｌおよび２４５．７６μｇ／Ｌのそれぞれであった。
【０３１７】
用量は、平均エアロゾルパクリタキセル濃度、最新の平均群体重、１０％の推定沈着率、および３３分または６５分の曝露持続時間に基づいた。４週間の処置中、週１回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の低用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、０．６５５ｍｇ／ｋｇおよび０．６４０ｍｇ／ｋｇ（１．２８ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。週１回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群、および週２回の高用量のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）群の達成されたげっ歯類の平均沈着用量は、１．１６６ｍｇ／ｋｇおよび１．１７６ｍｇ／ｋｇ（２．３５２ｍｇ／ｋｇ／週）のそれぞれであった。アブラキサン（登録商標）のＩＶ注射を受けた群では、２２、２９、および３６日目の平均用量は、４．９４、４．６４、および４．４６ｍｇ／ｋｇのそれぞれであった。
【０３１８】
予定された剖検において、各群からの動物の大多数が、肺に黄褐色の結節および／または肺の赤色もしくは黄褐色の斑状変色を有した。他の散発性の観察結果は、１匹の動物の腹部ヘルニアおよび別の動物の心膜の結節を含んだ。剖検時に他の異常な肉眼的観察は認められなかった。
【０３１９】
アブラキサン処置動物の肺重量では、肺対ＢＷ比および肺対脳重量比は、未処置の対照と比較して有意に低かった。週１回のＮａｎｏＰａｃ（登録商標）高用量群は、アブラキサン群と同様の重量を有し、未処置の対照と比較して有意に低い肺重量および肺対脳比を有した。
【０３２０】
陽性対照群１およびアブラキサン処置比較群２と比較して、明らかな有害事象なしで、肺／脳重量比の低下および全体的な肺腫瘍量の低下によって測定される治療効果があった。吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）で処置した肺腫瘍量の組織学的分析は、腫瘍塊の減少、原始腫瘍細胞集団の減少、および腫瘍退縮の増加を示した。広範囲の単核細胞浸潤を、吸入を通してＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を投与した動物の肺において観察した。使用されるモデルがＴ細胞を欠損しているため、細胞は、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である可能性が高い。ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）への腫瘍の局在的なより高い濃度の可能性がある曝露は、肺に影響を及ぼし、肺に単核細胞浸潤物を引き込む環境の変化をもたらしたと仮定される。
【０３２１】
実施例１４−ヒト膀胱癌（ＵＭ−ＵＣ−３）マウス異種移植片研究
免疫不全（Ｈｓｄ：Ａｔｈｙｍｉｃ  Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１ｎｕヌード）マウスにおける皮下（ＳＣ）ＵＭ−ＵＣ−３膀胱癌細胞株（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１７４９）腫瘍の成長に対する、ＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標）（本明細書で開示されるナノ粒子ドセタキセル、本実施例で使用される１．０７８ミクロンの平均粒径（数）、３７．２ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０７２３ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する約９９％のドセタキセル）懸濁液の１、２、および３回の毎週の腫瘍内注射（ＩＴ）投与（投与サイクル）の効果を評価するために、研究を行った。ビヒクルの腫瘍内注射投与およびドセタキセル溶液の静脈内（ＩＶ）投与も、対照群として研究に組み込んだ。
【０３２２】
腫瘍を、右脇腹に１×１０７個の細胞（１００μＬ体積）で移植した（マトリゲル：ＢＤ３５６２３４を含むＰＢＳ  １：１）。腫瘍体積をキャリパーで決定した。式：Ｖ＝ｒ長さ＊ｒ幅＊ｒ高さ）＊π＊４／３。動物の体重を週２回測定した。腫瘍体積を、腫瘍移植後３〜４日毎に（合計で約２０回の測定）および安楽死の日に決定した。腫瘍の写真画像を、移植後２、３、および４週間において、かつ安楽死の日に得た。いったん腫瘍が３，０００ｍｍ３のサイズ、または重大な腫瘍の潰瘍化の点まで達すると、動物を安楽死させた。安楽死の時点で、腫瘍を分離し、半分にした。腫瘍の半分は、−８０℃で保存したＬＮ２中で急速凍結され、その後に分析される。腫瘍のもう半分をホルマリンで固定した。２つのＨ＆Ｅ染色スライド／腫瘍を調製した（最大４個の腫瘍／群を処置した）。
【０３２３】
腫瘍移植後１８日目に、平均腫瘍サイズは、５０〜３２５ｍｍ３であり、動物を等しい平均腫瘍サイズの５つの群に分類し、以下の表２５に示されるように処置した。
【表２５】
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【０３２４】
ＩＴ投与（ビヒクル／ＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標））のために、注射（２７Ｇ、１／２”針を使用）を、腫瘍内の３つの部位で投与して（４０ｍｇ／ｍＬのＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標）原液および２５ｇのマウス＝６３μＬに基づいて計算した総注射体積。３つの注射部位に均一に分割）、腫瘍全体にわたる試験製剤の分布を最大化した。第２の処置（第２のサイクル）を第１の処置（第１のサイクル）の７日後に行い、第３の処置（第３のサイクル）を第１の処置の１４日後に行った。ドセタキセル溶液ＩＶを、尾静脈を介して投与した。
【０３２５】
試験製剤を次のように調製した。
ビヒクル（対照）：生理食塩水（注射用０．９％塩化ナトリウム）再構成溶液中１％ポリソルベート８０／８％エタノール１ｍＬを、１．５ｍＬの生理食塩水（０．９％注射用塩化ナトリウム、ＵＳＰ）で希釈した。ビヒクル中、ポリソルベート８０の最終濃度は、０．４％であり、エタノールの最終濃度は、３．２％であった。
ＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標）懸濁液：生理食塩水（注射用０．９％塩化ナトリウム）再構成溶液中１％ポリソルベート８０／８％エタノール１ｍＬを、ＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標）粒子粉末のバイアル（１００ｍｇ／６０ｃｃのバイアル）に添加した。ＮＡＮＯＤＯＣＥ（登録商標）粒子粉末の平均粒径（数）は、１．０ミクロンであった。バイアルを反転させて１分間手で激しく振盪した。振盪直後、１．５ｍＬの生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウムＵＳＰ）をバイアルに添加し、バイアルをさらに１分間手で振盪して、４０ｍｇ／ｍＬの懸濁液を作製した。懸濁液を少なくとも５分間そのままにさせて、封入された空気および泡を低減した。
ドセタキセル溶液：５０％エタノール／５０％ポリソルベート８０中で２０ｍｇ／ｍＬのドセタキセル原液を調製した。生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウム）を原液に添加して、最終の３ｍｇ／ｍＬドセタキセル溶液を作製した。ボルテックスして混合した。
【０３２６】
結果：
腫瘍体積を、研究継続期間（６１日間）、週２回決定した。この研究の結果は、図３１、図３２、図３３、図３４、図３５、図３６、図３７、図３８、図３９、および図４０に示される。図３１に見られるように、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ２サイクルおよびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ３サイクルの投与量の場合、腫瘍体積が減少し、腫瘍を効果的に排除した。腫瘍体積は、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  １サイクルおよびドセタキセルＩＶ  ３サイクルの投与量の場合、最初に減少したが、その後増加した。これらの観察結果は、図３２、図３３、図３４、図３５、図３６、図３９、および図４０にも反映されている。
【０３２７】
図３７の散布図は、処置の１日目対研究終了時（屠殺の日）の動物当たりの腫瘍体積を示す。図３７から分かるように、本質的に、全ての腫瘍が効果的に排除されたため、研究終了時の所与の動物における腫瘍の体積は、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ２サイクルおよびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ３サイクルで処置した動物の場合、同じ動物の初期の腫瘍サイズに依存しなかった。しかしながら、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物の場合、研究終了時の腫瘍の体積は一般に、所与の動物の初期腫瘍体積に依存し、すなわち、初期腫瘍体積が大きいほど、研究終了時の腫瘍体積はより大きかった。ドセタキセルＩＶ  ３サイクルによる処置は、小さい腫瘍の処置においてある程度効果的であったが、大きい腫瘍の処置ではあまり効果的ではなかった。初期腫瘍サイズに関わらず、２サイクルまたは３サイクルのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ（腫瘍内）の投与は、腫瘍を効果的に処置した。
【０３２８】
図３８から分かるように、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物の初期の動物体重減少は一般に、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  １サイクル、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ２サイクル、およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ３サイクルで処置した動物よりも大きかった。体重は最終的に、全ての処置においてある程度回復した。これは、初期食欲喪失の副作用が、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ投与よりもドセタキセルＩＶ投与で大きいことを示唆し得る。また、ドセタキセルＩＶ  ３サイクルで処置した動物が、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  ３サイクルで処置した動物よりも末梢神経障害の大きい兆候を有したことが観察され、末梢神経障害の兆候は、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＩＴ  １サイクルまたは２サイクルで処置した動物では観察されなかった。
【０３２９】
死亡または安楽死の日に、腫瘍組織試料を採取し、ドセタキセル分析、組織学、および免疫組織化学（ＩＨＣ）観察のためにＬＮ２中で凍結させた。ＩＶドセタキセル対照群では、１つの腫瘍のみ（測定した７つのうち）が、アッセイの定量限界（１ｎｇ／ｇ）を超えるドセタキセルレベルを有した。ドセタキセルの測定可能なレベルは、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群からの全ての腫瘍で見られ、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクル群は、腫瘍内に残っているドセタキセルの最高濃度を有する傾向があった（図４１を参照）。組織学スライド、Ｈ＆Ｅ染色の顕微鏡写真が、図４２〜５２に示される。Ｆ４／８０抗体染色で染色したＩＨＣスライドの顕微鏡写真が、図５３、図５４、および図５５に示される。
【０３３０】
図４２〜５２の顕微鏡写真の組織学的概要
一般的な観察結果：
対照：増殖細胞を有し、単核免疫細胞浸潤がほとんどまたはまったくなく、時折マクロファージが見られる、広範なレベルの生存腫瘍。
【０３３１】
ドセタキセル溶液：ある程度の腫瘍壊死を伴う、ある程度のマクロファージおよび時折のリンパ球応答応を有する、多くの生存しているように見える腫瘍塊。
【０３３２】
ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）２サイクル：単離された腫瘍細胞がいくつか残り、皮膚損傷の小さい領域、瘢痕／線維症が見られ、マクロファージおよび単核細胞を含む免疫細胞浸潤物。
【０３３３】
ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクル：単離された腫瘍細胞がいくつか残り、皮膚損傷の小さい領域、瘢痕／線維症が見られ、マクロファージおよび単核細胞を含む免疫細胞浸潤物。
【０３３４】
広範囲の単核細胞浸潤が、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）の腫瘍内注射を受けた動物の皮下空間の腫瘍移植部位において観察された。サイクル数が増えると、腫瘍応答が増加するが、おそらくヌードマウスの脇腹に注射するための小さい空間および浅い領域により、ある程度の皮膚損傷がある（例えば、腫瘍上できつく引っ張られている皮膚に対してすぐの腫瘍）。使用されるモデルがＴ細胞を欠損しているため、リンパ系細胞は、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である可能性が高い。Ｂ細胞は、細胞傷害の生成に寄与する（抗体は、Ｆｃ受容体を発現させる細胞に結合し、これらの細胞の死滅能力を高める。ＮＫ細胞は、腫瘍細胞の死滅に重要である自然リンパ系細胞である。腫瘍のある患者では、ＮＫ細胞活性が低減され、腫瘍の成長を可能にする。Ｔ細胞に加えて、ＮＫ細胞は、それらの活性を高めるためのいくつかのチェックポイント阻害剤の標的である。提供された全ての組織学的試料において、マクロファージが腫瘍内に存在していたが、その数は、大幅に増加するようには見えなかった。
【０３３５】
トリガーシグナルまたは阻害シグナルのいずれかを送達することが可能な幅広い表面受容体を使用することによって、ＮＫ細胞は、それらの環境内の細胞を監視して、細胞が異常（腫瘍またはウイルス感染）であり、細胞毒性によって排除される必要があるかどうかを確認することができる。ＮＫ細胞の細胞毒性および走化性は、腫瘍細胞およびそれらの副産物を含む多くの病理学的プロセスによって変更され得る。ある特定のシグナルに応じて、それらの機能は、強化または増強される。異なるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を使用して、いくつかの病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に応答して、ＮＫ細胞は、サイトカイン産生および／または細胞溶解活性を高めることができる。ＩＬ−２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、およびＩＦＮ  α／βを含むサイトカインも、ＮＫ細胞の活性を変更することができる。ＮＫ細胞は、異なる腫瘍細胞標的を死滅させることが可能な細胞溶解性エフェクターのみである単純な細胞ではなく、むしろ、それらは、多様な環境状況でそれらの活性を細かく調整することができる異種の集団を表す。
【０３３６】
腫瘍負荷は、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置した動物の異種移植片注射部位において大幅に低減され、腫瘍内注射は、静脈内ドセタキセルよりも効果的である。したがって、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）の形態のドセタキセルの局所投与は、付加的な効力を提供する。これは、長期にわたる化学療法へのより長い曝露および腫瘍部位への活発な細胞浸潤の両方による可能性が高い。この後者の応答は、用量密度（実際の用量および投与頻度）に依存しているように見えた。解剖学的に、マクロファージは、腫瘍の縁に多数存在し、腫瘍内でより深く移動する間質全体にわたって頻度が減少する。
【０３３７】
図５３、図５４、および図５５の免疫組織化学の概要
図５３：広いシート状の生存腫瘍細胞であり、単核免疫細胞はない（茶色の染色なし）。
【０３３８】
図５４：膨大な数の生存腫瘍細胞の中で、腫瘍細胞破壊は非常に少なく、散在性単核免疫細胞はほとんどない。
【０３３９】
図５５：実質上、腫瘍細胞が残っておらず、膨大な数の単核免疫細胞が明確なパターン（おそらく大部分はマクロファージ）に組織化されている。
【０３４０】
実施例１５−ヒト腎細胞腺癌のラット異種移植片モデルにおける薬物有効性研究
非ＧＬＰ研究を実施して、ヒト腎細胞腺癌のラット異種移植片モデルにおける腫瘍内注射によって投与した、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（ナノ粒子パクリタキセル）懸濁液およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ナノ粒子ドセタキセル）懸濁液の薬物有効性を決定した。
【０３４１】
目的
この研究の目的は、ヒト腎細胞腺癌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｇ２；Ｉｌ２ｒｇ  ｎｕｌｌ（ＳＲＧ（登録商標））ラット異種移植片モデル（７８６−Ｏ細胞株）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１９３２（商標））における長期にわたる腫瘍内（ＩＴ）注射によって投与した、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（ナノ粒子パクリタキセル）およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ナノ粒子ドセタキセル）の潜在的有効性を調査することであった。５〜７週齢のＳＲＧラットにＣｕｌｔｒｅｘ（登録商標）内の５００万個の７８６−Ｏ細胞を皮下接種して、腫瘍異種移植片を成長させた。いったん腫瘍体積が１５０〜３００ｍｍ３に達すると、ラットを試験物品（ＩＴ投与）、陽性対照（パクリタキセルおよびドセタキセル、静脈内（ＩＶ）投与）、ならびにビヒクル対照（ＩＴ投与）からなる処置群に回転方式で登録し、次いで、腫瘍の成長または退縮について監視した。
【０３４２】
細胞培養
細胞株：７８６−Ｏ細胞株（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１９３２（商標））。細胞を液体窒素中に保存した。解凍後、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で培養した。細胞を移植用に調製した後、それらを注射まで氷上で維持した。
【０３４３】
細胞培養条件：細胞を３７℃、５％ＣＯ２で、組織培養処理したフラスコ上で、ＲＰＭＩ  １６４０（Ｇｉｂｃｏ番号４１０４９１−０１）および１０％ＦＢＳ中で培養した。接種前に細胞を２〜３週間増殖させた。細胞の解凍、培養、および継代をＡＴＣＣによって行った（ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／Ｐｒｏｄｕｃｔｓ／Ａｌｌ／ＣＲＬ−１９３２．ａｓｐｘ）。
【０３４４】
細胞接種：ラット当たり５×１０６細胞。皮下の左後側腹、背側。
【０３４５】
接種ビヒクル：５０％Ｃｕｌｔｒｅｘ  ＢＭＥタイプ３（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ番号３６３２−００１−０２。インビボ腫瘍成長用に配合されたＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）のような基底膜マトリクスのタイプ）０．５ｍＬの総体積で５０％の培地。５ｍｇ／ｍＬのＣｕｌｔｒｅｘの最終濃度のために、１０ｍｇ／ｍＬのＣｕｌｔｒｅｘと１：１で混合した細胞懸濁液。最終接種体積は、５００ｕＬである。
【０３４６】
試験物品（ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）懸濁液）の調製
薬物：６０ｍＬバイアル内の、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（ナノ粒子パクリタキセル粉末、本実施例で使用される０．８７８ミクロンの平均粒径（数）、２６．７ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０７６３ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する約９８％のパクリタキセル）３０６ｍｇ、ならびに、６０ｍＬバイアル内の、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ナノ粒子ドセタキセル粉末、本実施例で使用される１．０７８ミクロンの平均粒径（数）、３７．２ｍ２／ｇのＳＳＡ、および０．０７２３ｇ／ｃｍ３のかさ密度（非タップ）を有する約９９％のドセタキセル）１００ｍｇ。
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）懸濁液（最終濃度：生理食塩水溶液中２０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）および０．３２％ポリソルベート８０−最終体積：１バイアル当たり１５．３ｍＬ）：
【０３４７】
滅菌の１８ゲージ以上の針を有する滅菌シリンジを使用して、５．０ｍＬの滅菌１％ポリソルベート８０再構成溶液を、６０ｍＬのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）粉末バイアル（３０６ｍｇのＮａｎｏＰａｃ（登録商標）粉末を含む）に添加した。
【０３４８】
バイアルを反転させて手で激しく振盪して、バイアルの内部および栓に接着している全ての粒子が湿潤していることを確認した。
【０３４９】
１分間振盪を続け、大きい粒子の塊がないか懸濁液を検査した。
【０３５０】
振盪直後、滅菌の１８ゲージ以上の針を有する滅菌シリンジを使用して、１０．３ｍＬの生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウム溶液）をバイアルに添加し、バイアルをさらに１分間手で振盪した。大きい目に見える塊がないか懸濁液を定期的に検査した。存在する場合、懸濁液が適切に分散するまで手で混合し続けた。
【０３５１】
混合後、懸濁液を少なくとも５分間そのままにさせて、封入された空気および泡を低減した。
ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）懸濁液（最終濃度：生理食塩水溶液中２０ｍｇ／ｍＬのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）および０．２０％ポリソルベート８０および１．６％エタノール−最終体積：１バイアル当たり５ｍＬ）の場合：
【０３５２】
滅菌の１８ゲージ以上の針を有する滅菌シリンジを使用して、１ｍＬの滅菌１％ポリソルベート８０／８％エタノール再構成溶液を、６０ｍＬのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）粉末バイアル（１００ｍｇのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）粉末を含む）に添加した。
【０３５３】
バイアルを反転させて手で激しく振盪して、バイアルの内部および栓に接着している全ての粒子が湿潤していることを確認した。
【０３５４】
１分間振盪を続け、大きい粒子の塊がないか懸濁液を検査した。
【０３５５】
振盪直後、滅菌の１８ゲージ以上の針を有する滅菌シリンジを使用して、４ｍＬの生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウム）をバイアルに添加し、バイアルをさらに１分間手で振盪した。大きい目に見える塊がないか懸濁液を定期的に検査した。存在する場合、懸濁液が適切に分散するまで手で混合し続けた。
【０３５６】
混合後、懸濁液を少なくとも５分間そのままにさせて、封入された空気および泡を低減した。
【０３５７】
腫瘍内（ＩＴ）ビヒクル（最終濃度：生理食塩水溶液中０．２％ポリソルベート８０および１．６％エタノール）：各１ｍＬの１％ポリソルベート／８％エタノール再構成溶液を、４ｍＬの生理食塩水溶液（０．９％注射用塩化ナトリウム溶液）で希釈した。
【０３５８】
陽性対照製剤の調製
薬物：ドセタキセル：ＣＡＳ  １１４９７７−２８−５、およびパクリタキセル：ＣＡＳ  ３３０６９−６２−４。純度９７％超
【０３５９】
ドセタキセル溶液の場合：５０％エタノール：５０％ポリソルベート８０中２０ｍｇ／ｍＬのドセタキセル溶液を作製した。ボルテックスして混合した。生理食塩水溶液を添加して、３ｍｇ／ｍＬのドセタキセル溶液に希釈した。
【０３６０】
パクリタキセル溶液の場合：バルクパクリタキセルを使用して、
５０％エタノール：５０％クレモフォールＥＬ中６ｍｇ／ｍＬの製剤を作製した。必要に応じてボルテックスして混合した。生理食塩水溶液を添加して、３ｍｇ／ｍＬのパクリタキセル溶液に希釈した。ボルテックスして混合する。
【０３６１】
試験系
種／系統：Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ背景上のラット（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）／Ｒａｇ２−ｉ−；１１２ｒｇ−ｉ−（ＳＲＧ（登録商標））。
【０３６２】
動物数／おおよその年齢および体重：６０匹の健康なラット（３０匹の雄および３０匹の雌）をこの研究に割り当て、異種移植片の成長に使用した。合計で少なくとも５４匹の腫瘍を有する動物（２７匹の雄および２７匹の雌）が、必要な腫瘍体積に達したため、処置に登録した。これらの動物に、動物が利用可能になるまで、同じ日にスタガードバッチで７８６−０細胞を接種した。動物は、研究の開始時に約５〜７週齢であった。おおよその重量は、１５０〜２７５ｇであった。腫瘍サイズが１５０〜３００ｍｍ３に達したときに、動物を回転方式で処置群に登録した。
【０３６３】
治療群の構成、投与量レベル、治療計画
以下の表２６は、研究群の配置を示す。
【表２６】
2020536052.tif 000029
【０３６４】
処置レジメン：
体積が１５０〜３００ｍｍ３に達した腫瘍が発生した全てのラットを処置に登録した。全ての処置が、腫瘍が１５０ｍｍ３を超える接種７日後に開始する。
【０３６５】
群３、４、および５のラットは、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を受け、群７、８、および９のラットは、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を受けた。群３および７は、分類日（処置の初日）にのみＩＴ注射を受け、群４および８は、分類日および処置開始の７日後にＩＴ注射を受け、群５および９は、分類日、処置開始の７および１４日後にＩＴ注射を受けた。陽性対照試験物品（パクリタキセルおよびドセタキセル）を、分類日、群２（パクリタキセル）および６（ドセタキセル）ラットへの処置開始の７および１４日後に、尾静脈注射によって静脈内投与した。ビヒクル対照を、分類日、群１の動物への処置開始の７および１４日後に、ＩＴ注射によって投与した。
【０３６６】
投与方法：
試験物品およびビヒクルを、滅菌針および注射器を用いて、投与群に応じてＩＴ注射またはＩＶ注射によって投与した。全てのＩＶ注射を、２７Ｇ針を使用して投与した。
【０３６７】
ＩＴ注射を、腫瘍が無傷の場合は６回の注射、潰瘍性腫瘍の場合は３回の注射で腫瘍全体に分布させた。全ての投与日の間の腫瘍当たりのＩＴ注射の回数を生データに記録した。
【０３６８】
投与体積は、ビヒクル、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）に対して１ｍＬ／ｋｇ、パクリタキセルおよびドセタキセルに対して１．６７ｍＬ／ｋｇであった。群６の場合、ドセタキセルの投与量を２．５ｍＬ／ｋｇに変更し、投与体積を０．８３５ｍＬ／ｋｇに減少させた。用量投与の時点で、用量除去の直前にＮａｎｏＰａｃ（登録商標）およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）バイアルを優しく５〜１０回反転させて、懸濁液の均一性を確実にした。
【０３６９】
滅菌１８ゲージ＊針またはより大きい穴を備えた滅菌シリンジを使用して、バイアルを反転させ、反転したバイアルのセプタムに針を挿入した。ちょうど必要な懸濁液の量まで引き抜き、バイアルから針を取り外し、所望の量に調整した。針に再び蓋をした。＊注：ＩＴ注射の場合、投与には２７Ｇ針を使用した。
【０３７０】
ＩＴ注射を腫瘍全体にＺパターンで（上部にわたって、対角線を通って、次いで下部にわたって）投与し、続く投与の機会（複数可）毎に反転させた。注射を、注射後のＴＡの漏れを最小限に抑えるために、針の斜面を下向きにして投与した。また、注射後のＴＡの漏れを最小限に抑えるために、針を入れる前および注射中に皮膚をわずかに引き戻した。ＩＴ注射の投与パターンが全ての動物および投与日で一貫していることを確実にする努力がなされた。
【０３７１】
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を再構成の１時間以内に、およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を２４時間以内に使用した。陽性対照およびドセタキセルを室温で維持し、製剤化の８時間以内に使用した一方で、パクリタキセルを再構成後に温水中で保持し、２０分以内に使用した。
【０３７２】
観察結果：
個々の体重：接種時から始まって週３回（月、水、金）。
【０３７３】
個々の腫瘍体積：腫瘍接種の翌日から始まって毎日動物を触診した。腫瘍の長さおよび幅をデジタルキャリパーで測定し、腫瘍体積が５０ｍｍ３に達した時点から始まって記録し、この時点で、腫瘍を週３回（月、水、金）および剖検時に測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）を、＝（Ｌ×Ｗ２）／２として計算し、式中、「Ｌ」は、最大直径である。
【０３７４】
腫瘍画像：全ての腫瘍の写真を、処置開始前の分類日、ならびに処置開始の７、１４、２１、２８、３５、および４２日後に撮影した。研究終了前にエンドポイントに達した動物を含む全てのラットの剖検時に、追加の腫瘍写真も撮影した。全ての写真は、動物ＩＤ、研究日、日付を示す写真タグを付けて、前方から後方の方向に動物を用いて撮影した。
【０３７５】
分析のための血液試料採取：研究終了時、すなわち、処置開始の５０日後に、全ての処置動物の尾または頸静脈から２００〜２５０ｕＬの血液を採取した。
【０３７６】
予定された剖検：全ての動物は、処置開始の５０日後に剖検が予定されていた。０日目は、腫瘍接種の日であった。
【０３７７】
解剖病理学：
肉眼検査：自然死したか、切迫安楽死させたか、または処置開始の５０日後の予定された剖検において安楽死させた全ての動物に剖検を行った。切迫安楽死させたか、または研究終了時に安楽死させた動物は、ＣＯ２吸入によって安楽死させた。剖検は、外側表面、全ての開口部、ならびに内臓を含む胸腔、腹腔、および骨盤腔の検査を含んだ。剖検時に、最終的な体重および身体状態スコアを収集した。
【０３７８】
組織採取：原発腫瘍（接種部位）−切除前に最終腫瘍測定を行った。切除後に腫瘍の重量を測定した。各腫瘍の約１／２（視覚的評価に基づく）をドライアイス上の２−メチルブタンで瞬間凍結させ、可能な場合は腫瘍片が瞬間凍結する前にその重量を測定した。残りを１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。登録体積に達していない動物からも腫瘍を採取した。二次腫瘍−目に見える腫瘍を有するいかなる臓器も採取し、１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。ホルマリン固定組織を室温で保存した。凍結組織を−８０℃で保存した。全ての組織を最大３か月間保存した。全ての腫瘍、存在する場合、原発腫瘍および二次腫瘍の写真を撮影した。
【０３７９】
顕微鏡検査：１０％ＮＢＦで固定した組織をパラフィン包埋した。各腫瘍を２〜３個に切り分け、包埋し、一緒に切片化した。各腫瘍について、３枚のスライドを準備し、Ｈ＆Ｅで染色した。非処置、ビヒクル対照（ＩＴ）３サイクル、ドセタキセル（ＩＶ）３サイクル、およびＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ＩＴ）３サイクルに対する雌ラットからの予備的な組織学的スライドの顕微鏡写真が、図５６、図５７、図５８、および図５９のそれぞれに示される。
【０３８０】
追加のＨ＆Ｅおよび免疫組織化学的（ＩＨＣ）評価を、ドセタキセル群からの動物からのホルマリン固定組織に行い、図６０および６１に示す。
【０３８１】
図５７、図５８、および図５９の顕微鏡写真の組織学の概要。
ビヒクル対照（ＩＴ）３サイクル、図５７：顕微鏡写真は、細胞外マトリクスに囲まれた多核／二核腫瘍細胞の「パケット」を示す。
【０３８２】
ドセタキセル（ＩＶ）３サイクル、図５８：顕微鏡写真は、ビヒクル対照で見られる生存可能な腎細胞癌の形態学的に類似した「パケット」を示す：違いはない。
【０３８３】
ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（ＩＴ）３サイクル、図５９：顕微鏡写真は、腫瘍細胞に対する強い免疫応答を示す単核細胞の帯を示す。いくつかの死滅腫瘍または死にかけている腫瘍が存在し、細胞の「ゴースト」（単核免疫細胞の帯の左側に示される）として特徴付けられる。単核細胞の帯の右側には、単核免疫細胞の「点在」によって覆われた「ゴースト」がある。
【０３８４】
ドセタキセル群の追加のＨ＆Ｅおよび免疫組織化学的（ＩＨＣ）評価
観察結果：図６０の対照症例。上列：Ｈ＆Ｅ染色切片。下列：免疫組織化学的染色。
列１：（Ａ）多形性核および目に見える核小体を有する大きい腫瘍細胞の、近接して置かれた凝集クラスターおよび索からなる腎細胞癌。散在している小血管を含む最小限の介在間質に留意されたい（左下の破線矢印）。画像の上部にある多核癌細胞に留意されたい（実線矢印）。（Ｄ）Ａに示される同じ腫瘍に行ったケラチン（ＡＥ１／ＡＥ３）免疫染色。これは、パンサイトケラチンによる癌腫細胞の高感度かつ特異的な標識化を示す（実線矢印）。
列２：（Ｂ）均一に均質な不定形好酸球性物質からなる腫瘍細胞壊死の局所領域（破線矢印）。周囲の生存癌細胞からの明確な境界を有するこの病巣の分離の性質に留意されたい（実線矢印）。これは、対照群の壊死の典型的な外観であった。これは、腫瘍の中心領域に存在し、腫瘍面積の５％未満を占めた。（Ｅ）画像Ｂに示される同じ領域を強調するＣＤ６８染色（マクロファージマーカー）。これは、生存癌腫の限られた数のマクロファージ（実線矢印）および壊死の病巣で著しく増加したマクロファージ（破線矢印）を示す。後者の発見は、壊死破片の食作用の特徴的なマクロファージ機能を示す。
列３：（Ｃ）腫瘍周辺の周囲の非腫瘍性間質の限られた数の小リンパ球（破線矢印）。右上角の癌腫に留意されたい（実線矢印）。対照群では、典型的には、腫瘍自体の中あるリンパ球はほとんどなく、腫瘍周辺の軟組織は一般に、軽度のリンパ球浸潤物を含んだ。（Ｆ）リンパ系細胞で陽性の染色を示す、ＣＤ１１ｂで染色したＣで見られるものに対応する病巣（破線矢印）。右上角の癌腫に留意されたい（実線矢印）。
【０３８５】
注意点：２つの対照症例は、形態学的および免疫組織化学的レベルで同様の所見を示した。両方とも、別個の十分に形成された線維性被膜なしに、周囲の正常間質組織からの境界が非常に明瞭であった浸潤癌の高密度の結節を含んだ。腫瘍結節内で、癌細胞は、腫瘍細胞の小さい組織化されたクラスターおよび索に配置され、これらは、圧縮された小血管を含む最小量の介在ストーマと共に近接して密集していた（図６０−スライドＡ）。腫瘍細胞は大きく、小胞クロマチンを有する多形性核、ならびに１００倍の倍率（１０倍の接眼レンズおよび１０倍の対物レンズ）ではっきりと見える顕著な好酸球性核小体を伴った。核は、円形および紡錘形の形態を含み、散在性多核巨大腫瘍細胞が存在した（図６０−スライドＡ）。腫瘍細胞は、豊富な量の軽度に好酸球性で透明な細胞質を有し、それらは、有糸分裂活性の増加を示した（１０の高倍率視野当たり１３の有糸分裂［４００×ｈｐｆ］）。凝固性腫瘍細胞壊死の散在性離散病巣が存在し、これらは、腫瘍結節の中央部内でより頻繁に見られた（図６０−スライドＢ）。壊死の病巣は、周囲の生存腫瘍細胞からの境界が比較的明瞭であった均質な好酸球性壊死破片からなった。壊死の病巣は、腫瘍細胞面積の５％未満を占めた。パンサイトケラチンの免疫組織化学的染色（ＡＥ１／ＡＥ３）は、腫瘍細胞を強調し、細胞質および膜の局在化を示した（図６０−スライドＤ）。ケラチン標識化は強く、高感度で、かつ特異的であり、陽性に染色された腫瘍細胞と陰性に染色された周囲の非癌性組織との間に非常に明瞭な境界を有した。２匹の対照群の動物のうちのいずれにおいても、明らかな腫瘍退縮は認められなかった。腫瘍内に有意なリンパ球浸潤物はなく、特に、腫瘍組織または周囲の非腫瘍性間質組織には、別個の小リンパ球の集合体または三次リンパ組織（ＴＬＳ）はなかった。周囲の間質は、主に単一細胞として配置された散在性小リンパ球からなる斑状の軽度のリンパ球浸潤物を含んだ（図６０−スライドＣ）。ＣＤ１１ｂの免疫組織化学的染色（ＮＫ細胞および組織球のマーカー）は、周囲の非腫瘍性間質内の軽度の免疫細胞浸潤物を強調したが（図６０−スライドＦ）、腫瘍内に有意なリンパ系成分はなかった。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（マクロファージのマーカー）は、腫瘍内および周囲の軽度のマクロファージ浸潤物を強調し、腫瘍壊死の病巣内の染色密度の増加は、細胞破片の増加を含む領域のマクロファージの増加と一致した（図６０−スライドＥ）。
【０３８６】
観察結果：図６１。腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（１サイクル、２サイクル、および３サイクルを含んだ）。
１列目：１サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（１×）（症例７５０−２５８）。（Ａ）非生存壊死物質の均質な好酸球染色からなる広範囲の地理的腫瘍細胞壊死を示す低倍率Ｈ＆Ｅ染色（実線矢印）。壊死破片および混合免疫細胞の密集帯からなる境界の中央の垂直線に留意されたい（破線矢印）（Ｂ）境界線の高倍率画像。免疫細胞および混合破片の高密度集合体に留意されたい（右側の破線矢印）。画像の左側には、生存腫瘍細胞がない広範囲の壊死物質がある（実線矢印）（Ｃ）画像Ａの左半分に対応する壊死の中央部分の高倍率画像。実線矢印は、壊死腫瘍細胞のゴースト輪郭を指す。破線矢印は、変性した小血管を強調する。
２列目：１サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（１×）（症例７５０−２５８）。各画像は、その上のＨ＆Ｅ画像に対応する。（Ｄ）画像Ａに見られる領域のＣＤ１１ｂ免疫染色。これは、壊死破片および免疫細胞浸潤物の中央の帯にある免疫細胞の高密度の集合体を強調する。この染色はまた、右側の周囲組織における免疫細胞応答を強調するが、左側の腫瘍壊死の中央領域の炎症の程度はより低い。（Ｅ）Ｂに見られる同じ領域を示すケラチン染色。これは、染色の完全な欠如を示し、したがって、この領域に残存する生存可能な癌腫がないという解釈のための強力な免疫組織化学的裏付けを加える。（Ｆ）画像Ｃに示される壊死の中央領域からのケラチン染色。これは、壊死ゴースト細胞の輪郭（実線矢印）の変性ケラチンフィラメントのケラチン標識化を示し、これは、生存癌腫が後に完全退縮および壊死を経験したという仮説を裏付けるが、この領域に生存腫瘍細胞は残っていない（上記のＨ＆Ｅ画像で最もよくわかる生存可能な核の欠如）。
３列目：２サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（２×）（症例７４８−８２７）。（Ｇ）広範囲の壊死物質（破線矢印）に囲まれた生存癌腫（実線矢印）の０．９ｍｍの残存病巣を示すＨ＆Ｅ染色。（Ｈ）核が保持された生存腫瘍細胞を示す、より高い倍率での癌腫の同じ病巣（実線矢印）。左下角に向かう生存腫瘍細胞の進行性消失に留意されたい（破線矢印）（Ｉ）生存腫瘍の前縁部（実線矢印）および腫瘍細胞死の隣接領域を示す同じ病巣のより高い倍率。ここで、細胞死の進行段階にある腫瘍細胞の残存物は、核の進行性消失および別個の細胞質膜の輪郭の消失（破線矢印）によって証明される。
４列目：２サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（２×）（症例７４８−８２７）。各画像は、その上のＨ＆Ｅ画像に対応する。（Ｊ）画像の左上に残存する生存癌腫の病巣（実線矢印）があるケラチン染色の低倍率画像。この病巣を囲んでいるのは、ケラチン染色の欠如（破線矢印）であり、壊死物質の程度を示す。（Ｋ）ケラチン抗体で強く標識された生存有核癌細胞（実線矢印）およびケラチン染色に対して陰性である周囲の壊死組織（破線矢印）を示す、同じケラチン染色腫瘍のより高い倍率の画像。（Ｌ）右上の生存有核ケラチン陽性癌細胞（実線矢印）から左下角に向かう壊死の様々な段階の腫瘍細胞（破線矢印）への進行性移行を示す、同じ領域のケラチン染色。後者は、残存する変性腫瘍細胞ケラチン中間体フィラメントのケラチン標識化を示す腫瘍細胞の無核ゴースト輪郭を含むが、これらの細胞は、生存不能である。これは、生存癌腫を囲む壊死物質が、その後の療法後に死滅した生存癌腫を前に含んでいたという印象を裏付ける。
５列目：３サイクルＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）（３×）（症例７４８−８２２）。（Ｍ）壊死破片および混合免疫細胞の帯（破線矢印）によって、左側の変性線維性脂肪組織の周囲領域から区別された右側の高密度の不定形壊死（実線矢印）を示す、低倍率Ｈ＆Ｅ染色切片。（Ｎ）生存有核癌細胞を示さない壊死領域（実線矢印）の高倍率画像。（Ｏ）染色の完全な欠如（実線矢印）を示し、したがって、療法後にこの領域において残存する癌腫がないことをさらに裏付ける、画像Ｎの同じ領域のケラチン染色切片。
【０３８７】
注意点：
腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）１サイクル：
この群の３匹の動物のうち２匹は、残存する生存浸潤癌を含んだ。Ｈ／Ｅ染色スライド上で測定した場合、これは、対照、ＩＴビヒクル、およびＩＶドセタキセル群（９〜１５ｍｍの範囲であり、これらのほとんどは、スライド上の最大断面寸法が１５ｍｍに近い）と比較して、サイズが有意に小さかった（スライド上の最大断面寸法が最大５ｍｍ）。存在する場合、これらの２つのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）症例における腫瘍細胞の形態は、上記の非ＩＴドセタキセル群で見られたものと本質的に同一であった。両方のＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）症例は、周囲の壊死の評価に十分な非生存腫瘍または非腫瘍性間質を有してなかったが、これらは、提出された組織の５％未満を占めた壊死の病巣辺縁を有した。対照群と同様に、周囲の非腫瘍性間質組織内のこれらの腫瘍に関連する軽度の免疫細胞浸潤のみがあり（評価可能な場合）、これは、ＣＤ１１ｂ免疫染色によって強調された。検査した切片では、三次リンパ構造（ＴＬＳ）は認められなかった。この群の第３の動物は、生存残存浸潤癌および広範囲の地理的腫瘍細胞凝固壊死を示さなかった。壊死の広範囲の領域は、周囲の間質線維、脂肪、および骨格筋組織と混合していた。領域では、不定形壊死と隣接する変性線維脂肪組織との間に境界線があり、これは、壊死破片および混合免疫細胞の密集帯からなった（図６１−スライドＡおよびＢ）。Ｈ／Ｅ染色切片検査では、診断上の生存腫瘍細胞は認められなかった（図６１−スライドＢ）。しかしながら、不定形壊死物質の中央部分には、核壊死性腫瘍細胞のゴースト輪郭が認められる小さい領域があった（図６１−スライドＣ）。これは、ケラチン抗体が壊死細胞の輪郭内の変性ケラチンフィラメントを標識したケラチン染色切片上でも強調された（図６１−スライドＦ）。加えて、変性および壊死性線維脂肪組織内で非常に局所的に、この動物のケラチン染色切片は、変性ケラチン中間体フィラメントの組織球貪食と一致するように見えた局所細胞質標識化を示した。重要なこととして、ケラチン染色は、生存癌細胞の別個の細胞質膜標識化を示さず、ケラチン標識された診断上の生存腫瘍細胞のいかなる凝集性集合体も示さなかった。いくつかの領域では、異栄養性石灰化を示唆した小さい均質な構造に合体した豊富な顆粒状の青色物質があった。この顆粒状物質を明確に識別することは困難であり、鑑別診断は、顆粒状壊死破片およびカルシウム、変性骨格筋線維およびナノ粒子を含んだ。完全な腫瘍退縮を伴う動物のＣＤ１１ｂの免疫組織化学的染色は、非腫瘍性組織の中程度のマクロファージ浸潤物を強調し、ＣＤ１１ｂ染色はまた、破片および混合炎症の領域も強調した（図６１−スライドＤ）。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（組織球のマーカー）は、中程度のマクロファージ浸潤物を強調した。３匹の動物のうちのいずれにおいてもＴＬＳは認められなかった。
腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）２サイクル：
この群の３匹の動物のうち２匹（７５０−２５４および７４８−８２７）は、残存する生存浸潤癌を含んだ。Ｈ＆Ｅ染色スライド上で測定した場合、これは、対照、ＩＴビヒクル、およびＩＶドセタキセル群（９〜１５ｍｍの範囲であり、これらのほとんどは、スライド上の最大断面寸法が１５ｍｍに近い）と比較して、サイズが有意に小さかった（スライド上の最大断面寸法が３ｍｍおよび０．９ｍｍのそれぞれ）。残存癌腫を有する両方のＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）症例において、残存生存浸潤癌の小さい病巣の周囲の広範囲の地理的腫瘍細胞壊死があった（図６１−スライドＧ、Ｈ、およびＩ）。これらの残存腫瘍のうち小さい方からのＨ＆Ｅ染色およびケラチン染色切片のより高倍率の検査は、生存癌細胞から壊死性癌細胞への進行性移行を示し、後者は、パンサイトケラチン免疫染色による残存変性ケラチン中間体フィラメントの標識化によって識別された（図６１−スライドＩおよびＬ）。残存癌腫を有する両方の動物において、ＣＤ１１ｂの免疫組織化学低染色は、壊死組織内の中程度の免疫細胞浸潤物を強調した。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（組織球のマーカー）は、両方の症例で壊死領域内の中程度のマクロファージ浸潤物を強調した。この群の第３の症例（７４８−８２６）は、Ｈ＆Ｅまたはケラチン染色切片上に残存する生存浸潤癌がない広範囲の地理的腫瘍細胞凝固壊死を示した。ＣＤ１１ｂの免疫組織化学的染色は、斑状の中程度の免疫細胞浸潤物を強調した。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（マクロファージのマーカー）は、斑状の中程度のマクロファージ浸潤物を強調した。３匹の動物のうちのいずれにおいてもＴＬＳは認められなかった。
腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクル：
この群の両方の症例（７４８−７９７および７４８−８２２）は、Ｈ＆Ｅまたはケラチン染色切片上に残存する生存浸潤癌がない広範囲の地理的腫瘍細胞凝固壊死を示した（図６１−スライドＭ〜Ｏ）。ＣＤ１１ｂの免疫組織化学的染色は、２匹の動物の壊死組織内の中程度のおよび顕著な免疫細胞浸潤物をそれぞれ強調した。ＣＤ６８の免疫組織化学的染色（組織球のマーカー）は、これら２つの症例の壊死領域内の軽度のおよび顕著なマクロファージ浸潤物をそれぞれ強調した。これら２匹の動物のうちのいずれにおいてもＴＬＳは認められなかった。
注：ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）処置群の動物は、おそらく腫瘍内に残ったナノ粒子堆積物から生じた、白色「石灰化」領域を伴う腫瘍を有した。
【０３８８】
追加の観察結果：（図面なし）
ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ビヒクル群：２つの腫瘍内ビヒクル症例は、形態学的および免疫組織化学的レベルで同様の所見を示し、両方とも本質的に、対照群で見られるものと同一の形態学的および免疫組織化学的外観を有した。
ＩＶドセタキセル：２つの腫瘍内ＩＶドセタキセル症例は、形態学的および免疫組織化学的レベルで同様の所見を示し、両方とも本質的に、対照およびＩＴビヒクル群で見られるものと同一の形態学的および免疫組織化学的外観を有した。
【０３８９】
パクリタキセル群およびドセタキセル群の腫瘍体積結果：
動物の体重を測定し、腫瘍の長さよび幅をデジタルキャリパーで週３回、５８日間、および剖検時に測定した。腫瘍体積（Ｖ）を次のように計算した：Ｖ（ｍｍ３）＝（（Ｌ＊Ｗ２））／２
式中、Ｌは、最大直径であり、Ｗは、腫瘍の幅（ｍｍ）である。Ｓｔｕｄｙ  Ｌｏｇ（登録商標）を腫瘍体積および体重の統計分析に用いた。
【０３９０】
パクリタキセル群の平均腫瘍体積結果が図６２に示される。ドセタキセル群の平均腫瘍体積結果が図６３に示される。図面から分かるように、ＩＴ  ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）およびＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）の両方が、腫瘍を効果的に処置した。
【０３９１】
ドセタキセル群の腫瘍体積の結果に関して、雄および雌の両方の最初の測定可能な腫瘍が接種の２日後に観察された。
【０３９２】
非処置およびビヒクル対照処置の腫瘍は、処置全体を通して成長し続け、雌ラットの最終体積は、５６５６ｍｍ３〜１０，０００ｍｍ３未満の範囲であった。ＩＶドセタキセル処置は、ビヒクル対照と比較して部分的な腫瘍成長阻害をもたらした。
【０３９３】
ＩＴ送達したＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）は、ビヒクルおよび他の全ての処置と比較して最も有効な処置だった。ほとんどの動物において、１、２、または３サイクルのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置した腫瘍は、完全に退縮したように見え、壊死組織のみが元の腫瘍部位に残っていた。
【０３９４】
剖検時、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）処置群の動物は、おそらく腫瘍内に残ったナノ粒子堆積物から生じた、白色「石灰化」領域を伴う腫瘍を有した。
【０３９５】
ドセタキセル群の結果：
組織内のドセタキセル濃度：内部標準としてその重水素化類似体ドセタキセル−ｄ９を使用したＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって、ドセタキセルの腫瘍組織濃度を決定した。Ｆｒｏｎｔａｇｅによって以前に開発された方法を使用して、１／×２の重み付けの線形回帰を使用して、ピーク面積比（内部標準に対する分析物）対分析物濃度をプロットすることによって作成された較正曲線からドセタキセルの濃度を得た。腫瘍組織内のドセタキセルについて、公称濃度範囲は、１．００〜２，０００ｎｇ／ｇであった。ラット対照腫瘍組織ホモジネートで作成した較正曲線を、各分析ランの開始時および終了時に分析した。２セットの品質管理（ＱＣ）試料を４つの濃度レベル（低、中−１、中−２、および高）で調製し、アッセイの信頼性を確実にするために使用した。
【０３９６】
ＩＶドセタキセル（５〜２．５ｍｇ／ｋｇ）の週３回サイクルの最後の３８日後、評価した４匹の動物のうち１匹が、２１．８ｎｇ／ｇの検出可能な（ＬＯＱ＝１．００ｎｇ／ｇ）ドセタキセルレベルを有した。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ１群の３匹全ての動物が、処置の５１日後に６５９ｎｇ／ｇ〜１．４×１０５ｎｇ／ｇの範囲の検出可能なドセタキセルレベルを有した。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ２群からの２匹の動物が評価され、処置の４４日後に２．４９および５．２６μｇ／ｇのレベルを有した。分析に利用可能な腫瘍がＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ３群になかったため、分析を行わなかった。
【０３９７】
動物：処置期間全体を通して、全ての群の動物は、いくつかの例外を除いて、非処置動物およびビヒクル対照と比較して比較的正常な体重増加を示した。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ１を受けた１匹の動物が、処置９日目に体重減少があった。補給にもかかわらず、その動物は体重減少し続け、その後、体重減少のエンドポイントに達したため、処置１６日目に安楽死させた。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ３を受けた１匹の動物が、補給にもかかわらず、多重がかなり減少し、処置３９日目にエンドポイントに達した。
【０３９８】
他の観察結果は、潰瘍化および明らかな末梢神経障害を含んだ。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を受けた全ての動物が、腫瘍の表面上に潰瘍化または病変を呈した。これらの病変は、乾燥した硬い組織の領域である「かさぶた」と呼ばれた。ほとんどの場合、創傷は無傷のままであった。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）ＱＷＸ３を受け単一の動物は、処置の３５日後に後肢虚弱および限られた可動性を示した。介入により、虚弱は、動物が研究に留まるのに十分安定した。しかしながら、腫瘍表面の５０％超を覆った潰瘍化のため、４９日目にその動物を安楽死させた。
【０３９９】
６つの群の残存腫瘍のサイズ範囲（スライド上のミリメートルで測定した生存癌腫の最大断面寸法）が、表２７に示される。
【表２７】
2020536052.tif 000030
【０４００】
３つのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群（合計８匹の動物）と、３つの非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群（合計６匹の動物）の残存癌結節のサイズを直接比較する表２７におけるデータの要約が、表２８に示される。
【表２８】
2020536052.tif 000031
【０４０１】
両方のＩＶドセタキセル動物を含む６匹の非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物のうち５匹が、１０ｍｍ超あった残存生存癌結節を有し、これらのほとんどが、１５ｍｍ近かった。残りの非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物は、最大寸法で９ｍｍある生存癌腫を有した。対照的に、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置した動物の半分（４／８）は、測定するためのスライド上の残存生存癌腫は有しなかった。残存生存癌腫を有したＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の残りの４匹全ての動物は、スライド上の最大寸法が５ｍｍ以下あった生存癌結節を有した。これは、腫瘍が０．９ｍｍあった１つの症例を含み、これは、顕微鏡検査前に腫瘍が肉眼で測定したときに明らかではなかった。
【０４０２】
残存浸潤癌がない症例の割合および残存生存癌結節のサイズに関する３つのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の比較が、表２９に示される。
【表２９】
2020536052.tif 000032
【０４０３】
ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）１および２サイクル群の両方が、残存生存癌腫がない１／３の症例を有した一方で、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクル群は、残存生存浸潤癌がない２／２の症例を有した。残存生存癌腫がある症例の中で、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）のサイクル数の漸進的増加は、残存生存癌結節のサイズの減少に関連していた。具体的には、残存生存癌結節は、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）１サイクル群において、４ｍｍおよび５ｍｍあり、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）２サイクル群では、結節は、０．９ｍｍおよび３ｍｍあった。ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）３サイクル群では、２つの症例において測定する残存生存癌腫がなかった。
【０４０４】
壊死を示す組織の割合が表３０に示される。
【表３０】
2020536052.tif 000033
【０４０５】
非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の６匹全ての動物が、５％未満の壊死を示した。これは、腫瘍領域の５％未満を占める小さい腫瘍内の壊死の局所的な小さい個別の病巣からなり、それらは、腫瘍結節の中央部分内にあり、これらが、腫瘍がその血液供給より大きくなることによる低酸素血症に続発する可能性があることを示唆する。８匹のＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物のうち４匹は、腫瘍の完全壊死を示した。残存癌腫を有する４匹のＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物のうち２匹は、周囲組織で広範囲の壊死（組織の５０％超）を示した。残存癌腫を有する２匹の残りのＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物は、壊死の決定的な評価に十分な周囲組織を有しなかったが、これらのうちの１匹は、提出された組織領域の５％超を表す壊死の病巣縁を含んだ。
【０４０６】
半定量的に等級付けした、Ｈ／Ｅの評価およびＣＤ１１ｂによる免疫組織化学的染色に基づいたリンパ組織球性浸潤物密度が、表３１に示される。
【表３１】
2020536052.tif 000034
【０４０７】
非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の６匹全ての動物が、軽度の免疫細胞浸潤物を含み、これは、腫瘍内にいかなる有意な免疫細胞浸潤物もない腫瘍周辺の非腫瘍性間質に存在していた。対照的に、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の８匹の動物うちの７匹が、中程度の免疫細胞浸潤物を含んだ一方で、残りの動物は、顕著な免疫細胞浸潤物を有した。これは、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）処置動物における壊死量の増加と相関した。
【０４０８】
ドセタキセル群の結果の考察：
腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）の有効性を評価することを目的とした腎細胞癌研究からの１４匹の雌ラットのサブセットの形態学的および免疫組織化学的特徴についてレビューを行った（研究全体は、３０匹の動物を含んだ）。１４匹の動物のこのサブセットは、２匹の対照動物、腫瘍内ビヒクルを投与した２匹の動物、静脈内ドセタキセル（３サイクル）で処置した２匹の動物、および腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置した８匹の動物を含んだ。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群を、投与したサイクル数に基づいて３つの群に分けた：群１（１サイクル、３匹の動物）、群２（２サイクル、３匹の動物）、および群３（３サイクル、２匹の動物）。
【０４０９】
様々な群間で異なった主な特徴は、腫瘍退縮の存在および程度であった。ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の全ての動物において、腫瘍退縮が顕著であったが、他の群の全ての動物において、腫瘍退縮はなかった。
【０４１０】
非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群（すなわち、対照、ＩＴビヒクル、およびドセタキセルＩＶ群）の６匹全ての動物は、残存生存腫瘍を有した。これは、周囲の正常間質組織からの境界が非常に明瞭であった浸潤癌の高密度の結節からなった。癌細胞は、高密度に密集しており、凝固性腫瘍細胞壊死の散在する別個の病巣が存在していたが、これらはサイズが小さく、全体で、６匹の動物の各々の腫瘍面積の５％未満を占め、腫瘍結節の中央部分内にあった。これらの観察結果は、これらの壊死領域が、腫瘍がその血液供給より大きくなることによる低酸素血症に続発する可能性があることを示唆する（表１０）。ケラチン染色は、腫瘍細胞の強く、高感度で、かつ特異的な染色を示した。染色スライド上で測定した生存腫瘍結節の最大寸法は、これら６匹の動物において９〜１５ｍｍの範囲であり、多くの場合、これは、１５ｍｍに近かった（表２７および２８）。スライド上のこの腫瘍のサイズは、肉眼解剖時に取った腫瘍測定値に対応した。
【０４１１】
対照的に、腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置した８匹の動物のうち４匹は、Ｈ＆Ｅおよびケラチン染色切片の評価によって決定される残存生存癌腫を有しなかった（完全応答）。残りの４匹の動物のうち、染色スライド上で測定した残存生存腫瘍は、非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群に見られるものよりも著しく小さかった（表２７および２８）。具体的には、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置したこれらの４匹の動物における残存生存腫瘍結節のサイズは、最大寸法が０．９ｍｍ〜５ｍｍの範囲であった（表２９）。これらの動物のうち３匹において、スライド上で測定した腫瘍サイズは、肉眼解剖時に取った腫瘍サイズ測定値と相関した。浸潤癌の０．９ｍｍの病巣を有する残りの動物において、これは、広範囲の壊死の中に存在し、肉眼解剖時には明らかではなかった。
【０４１２】
８匹のＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）動物のうち６匹では、いくつかの動物において隣接する壊死骨格筋および線維組織へと延在した広範囲の腫瘍細胞凝固壊死があった。加えて、壊死領域内に局所的に、死滅腫瘍細胞からの変性ケラチン中間体フィラメントの標識化と一致した、壊死性非生存ゴースト腫瘍細胞の輪郭のケラチン染色があった。これは、これらの領域が、療法に完全に応答していた生存癌腫をすでに含んでいたことをさらに裏付けた。残りの２匹の動物からスライドでは、壊死の評価のための周囲組織が非常に限られていたが、これらのうちの１つは、１つの領域内に壊死の病巣辺縁を含んでいた。
【０４１３】
非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群内では、均一に軽度の免疫細胞浸潤物があり、これは、主に腫瘍の周囲の非腫瘍性組織において見られた。有意な腫瘍内免疫細胞浸潤物はなかった。対照的に、腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群は、軽度の免疫細胞浸潤物を有する２つの症例、中程度の免疫細胞浸潤物を有する５つの症例、および壊死領域内に顕著な免疫細胞浸潤物を有する単一の症例を含んだ（表３１）。非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群のように、有意な腫瘍内リンパ球浸潤はなかった。この研究群の１４匹の動物のいずれにおいても、診断上の三次リンパ構造（ＴＬＳ）は見られなかった。
【０４１４】
要約すると、このレビューは、３０匹の雌の動物を含んだ研究のうち１４匹の雌の動物に限定された。しかしながら、腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群を非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群と比較したとき、療法に対する腫瘍応答のタイプおよび程度に顕著な差が認められた。６匹の非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の動物のいずれも、腫瘍退縮の明らかな兆候を示さず、全てが、スライドで測定したときに９〜１５ｍｍのサイズの範囲であった残存生存癌結節を有した。しかしながら、腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群の８匹全ての動物が、腫瘍応答の兆候を示し、広範囲の壊死が、評価するための十分な周囲組織を有した動物のうち６匹全てで認められた。腫瘍応答が、Ｈ＆Ｅおよびケラチン染色切片の検査で決定的な残存生存癌腫の欠如によって示されるように、この群の半分（４／８）における完全退縮を含んだ一方で、残りの４匹の動物は、局所的な小さい残存生存癌結節が含み、その最大は５ｍｍあり、その最小は０．９ｍｍあった。残存癌腫を有するこれらの４匹の動物のうち２匹において、スライド上には評価のために十分な周囲組織が存在し、これは、広範囲の壊死を示した。同様に、非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群における免疫細胞浸潤物の程度が軽度であった一方で、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群においては軽度から顕著の範囲であり、腫瘍応答および結果として得られる壊死破片の程度との関連を示唆する。
【０４１５】
３つのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群を互いと比較したとき、動物が増加するサイクル数の腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）療法を受けた場合に、より大きい程度の腫瘍応答を示したことが認められた。具体的には、１サイクルのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を受けた群の３匹のうち、３匹の動物のうち１匹が完全応答を示した一方で、残りの２匹の動物は、４および５ｍｍの残存結節を有した。２サイクルのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を受けた群の３匹のうち、１匹が完全応答を示した一方で、残りの２匹の動物は、０．９および３ｍｍある残存結節を有した。最後に、３サイクルのＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）を受けた群の両方の動物が、療法に対する完全応答を示した（評価した２匹のうち２匹）（表２９）。
【０４１６】
結論として、腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）で処置したこの研究の腎細胞癌を有する８匹全ての動物が、完全腫瘍退縮の５０％の割合ならびに残りの４匹の動物における残存腫瘍サイズの著しい減少を含んだ、顕著な組織学的応答を示した。関連する広範囲の壊死および免疫応答の増加が、ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）群において顕著であり、壊死領域における無核の非生存ゴースト腫瘍細胞の輪郭のケラチン標識化の病変領域は、これらの領域が、両法に完全に応答していた生存癌腫をすでに含んでいたことをさらに裏付けた。対照的に、非ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）処置群では、そのような腫瘍退縮はなかった。さらに、１サイクルから３サイクルへの腫瘍内ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）の増加するサイクル数は、ＩＴ  ＮａｎｏＤｏｃｅ（登録商標）コホート内の漸進的に大きくなる腫瘍退縮の程度、および漸進的に高くなる完全退縮の割合をもたらした。
【０４１７】
実施例１６−併用療法研究−ペンブロリズマブによる処置の前に吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）を用いた、再発性または転移性非小細胞肺癌を有する対象の前処置の第ＩＩ相研究。
概要
この第ＩＩ相研究では、免疫療法剤ペンブロリズマブによる処置を予定していた再発性または転移性非小細胞肺癌を有する患者は、ペンブロリズマブ処置を受ける２日前にネブライザーを介してＮａｎｏＰａｃ（登録商標）吸入療法を受ける。
【０４１８】
この研究は、２つのコホート、１）ペンブロリズマブ単独療法、および２）ペンブロリズマブによる処置前の吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）の併用療法。
【０４１９】
ペンブロリズマブ単独療法は、３週間毎に３０分にわたって７４ｍｇ／ｍ２のＩＶを介して投与され、７．０８ｍｇ／ｍ２の濃度の吸入ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）は、ペンブロリズマブ療法の２日前にジェットネブライザーを使用して投与される。
研究薬剤の説明：
試験物品：吸入曝露に使用される試験物品が以下に示される。
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）：
識別：ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（滅菌ナノ粒子パクリタキセル）
説明：３０６ｍｇ／バイアルとして送達されるパクリタキセルの新規乾燥粉末製剤
ビヒクル
ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）製剤の調製のために使用されるビヒクルが、以下に示される。
１％ポリソルベート８０溶液
識別：注射用０．９％塩化ナトリウム中滅菌１％ポリソルベート８０
説明：透明な液体
生理食塩水希釈剤
識別：注射用滅菌０．９％塩化ナトリウム、ＵＳＰ
説明：透明な液体
【０４２０】
試験物品、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）（パクリタキセル粒子、ビヒクル、および希釈剤）は、５ｍｇ／ｋｇの濃度での肺への吸入のために調製される。
【０４２１】
集団
ＥＣＯＧパフォーマンスステータスが０または１の１８歳以上の男女
【０４２２】
プラチナベースの化学療法の間または後のいずれかに進行した再発性または転移性ＮＳＣＬＣを組織学的に確認した。
【０４２３】
少なくとも１つのプラチナベースの化学療法レジメンを受けた。
【０４２４】
主な目的
再発性または転移性非小細胞肺癌を有する対象におけるペンブロリズマブ単独療法、およびＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせの独立したレビュー、および非小細胞腫瘍における応答評価基準に基づいた統合医療腫瘍専門医疾患調査（ＲＥＣＩＳＴ）Ｖ．１．１によって、全応答率（ＯＲＲ）を決定すること。
【０４２５】
二次目的
応答持続時間の推定、無増悪生存率（ＰＦＳ）および全生存率（ＯＳ）の推定。
【０４２６】
治験責任医師および独立判定委員会による、免疫介在性応答基準（ｉｒＲＣ）による最良の全応答および応答率の決定。
【０４２７】
この研究の結果は、全応答率、無増悪生存率、および全生存率によって証明されるように、併用療法が、単独での全身免疫療法剤療法（単独療法）よりも大きい有効性を有することを実証する。
【０４２８】
実施例１６−マウス脳の膠芽腫におけるパクリタキセル粒子の腫瘍内注射
この研究では、膠芽腫（ＧＢ）に対するパクリタキセル粒子の有効性を評価した。ヌードマウスの脳にＧＢ細胞を注射して原発腫瘍を確立し、２週間後にパクリタキセル粒子（Ｎａｎｏｔａｘ）を注射した。我々は、食塩水注射のみを受けた対照群およびＴａｘｏｌ（商標）（クレモフォール中で製剤化）注射を受けた対照群に対する生存利益を監視した。我々は、成長中の腫瘍に直接注射によって１００ｍｇ／ｍ２の用量を送達した。以下の表３２は、４つの異なる腫瘍サイズ、および腫瘍に対して球形の形状をとる本発明のパクリタキセル粒子の対応する用量を示す。対照実験として、クレモフォール中で製剤化され、食塩水で正確な濃度に希釈したＴａｘｏｌ（商標）を使用した。
【表３２】
2020536052.tif 000035
【０４２９】
注射当たり５μｇのパクリタキセルの最高用量では、毒性は観察されなかった。
【０４３０】
注射したマウスは、８〜９日間生存し続けたが、その後、神経学的症状は観察されなかった。９日後、マウスを屠殺し、脳を採取した。脳を注入経路に沿って解剖し、分析した。パクリタキセル粒子群もＴａｘｏｌ（商標）群も、壊死または病変を示さなかった。脳スライスをさらに調製することなく使用して、３つの異なる撮像技術で分析して、合成画像を作成した（データは図示せず）：
（ａ）第二次高調波発生（ＳＨＧ）：画像は青色に見え、ほとんどがコラーゲンおよび血管、ならびにパクリタキセル粒子である。
（ｂ）２光子励起蛍光（ＴＰＥＦ）：画像は緑色に見え、ほとんどが反応性細胞、小膠細胞、マクロファージ、神経細胞体である。
（ｃ）コヒーレント反ストークスラマン散乱（ＣＡＲＳ）：画像は赤色に見え、脂質を見るためのＣＨ２振動、主にＣＮＳのミエリンに調整されるが、泡沫細胞と呼ばれる細胞を含む脂肪滴も陽性シグナルを与える。脂質胞を伴う変性細胞およびマクロファージも現れる。
【０４３１】
パクリタキセル粒子結晶の非線形光学特性により、結晶は、第二次高調波発生イメージング技術で直接見ることができる。パクリタキセル粒子のクラスターは、５μｇのパクリタキセル粒子を注射したマウスにおいて注射の９日後に注射部位にはっきりと見えた（すなわち、腫瘍内に蓄積した）（データは図示せず）。
【０４３２】
実施例１７−マウスの腹腔内注射後のパクリタキセル粒子の薬物動態および組織分布
目的：パクリタキセル粒子懸濁液の腹腔内送達後の腹腔から全身循環へのパクリタキセルの吸収レベルを決定するために、この研究を行った。腹腔内投与後のパクリタキセル粒子懸濁液からのパクリタキセルの組織分布も評価した。
【０４３３】
実験の詳細：雌のＣ５７ＢＬ６マウスにＩＤ８卵巣癌細胞を接種し、腫瘍を４５日間成長させた。これらのマウスを、総体積４ｍＬの腹腔内投与を介して、０．９％食塩水中のパクリタキセル粒子懸濁液（３６ｍｇ／ｋｇ）で処置した。血漿および腹腔液試料を時間ゼロ（投与前）、１、６、２４、および４８時間に採取し（各時点で少なくとも４匹のマウス）、血漿および腹腔液中のパクリタキセルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定した。加えて、時間ゼロ（投与前）、パクリタキセル粒子の腹腔内投与の１、６、２４、および４８時間後に組織試料を採取した。パクリタキセル粒子を投与したマウスからの鼠経リンパ節、腹膜壁、卵巣、肝臓、心臓、肺、脳、および腫瘍組織試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。
【０４３４】
結果および重要性：血漿、腹腔液、および臓器組織試料中のパクリタキセルレベルの結果が、以下の表に示される。血漿パクリタキセルは、４８時間にわたって非常に低いレベルのままであった。腹腔液中のパクリタキセルレベルははるかに高く、かなりの量の変動を示した。パクリタキセルの分析法の定量限界は、０．０１μｇ／ｇｍであった。卵巣腫瘍、卵巣、鼠経リンパ節、および腹膜の結果によって実証されるように、腹腔内の組織のパクリタキセルレベルは、一貫して高かった。対照的に、肝臓、心臓、肺、および脳組織で示されるように、腹腔外の組織のパクリタキセルレベルは、一貫してより低かった。これらの同じ結果が、表３３に示される。
【０４３５】
このデータは、腹腔液と接触している組織（卵巣腫瘍、卵巣、鼠経リンパ節、および腹膜）内のパクリタキセルレベルが予想外に高く、かつ腹腔液と接触していない組織に対してパクリタキセルがほとんどないため、重要である。これらおよび他の研究に基づいて、パクリタキセル粒子からのパクリタキセルの放出は、数週間続き、連続的に大量のパクリタキセルを提供することが予想され、これは、パクリタキセルが腫瘍に直接注射されると非常に高いレベルで蓄積することを意味する。
【表３３】
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【０４３６】
実施例１８−ＴＭ００３０２を有するＨｕ−ＣＤ３４−ＮＳＧ（商標）−ＳＧＭ３における、ペンブロリズマブと組み合わせた（登録商標）ＮａｎｏＰａｃの時間差投与のパイロット毒性および有効性試験
プロジェクトの概要：ヒトＣＤ３４＋細胞が生着し、生着の１０週間後以降に末梢血中に２５％を超えるヒトＣＤ４５＋細胞を有する、雌ｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）ＳＧＭ３マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ  Ｔｇ（ＣＭＶ−ＩＬ３，ＣＳＦ２，ＫＩＴＬＧ）１Ｅａｖ／ＭｌｏｙＳｚＪ）が、この研究に使用される。２または３つのドナー（以下の相に応じて）からのＣＤ３４＋細胞が生着したｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）ＳＧＭ３マウスのコホートが使用される。マウスは、識別のために耳に切り込みが入れられ、ケージ当たり最大５匹の密度で、ＨＥＰＡフィルタ付き空気を備えた個々に換気されたポリスルホンケージに収容される。ケージは、２週間毎に交換される。動物室は、制御された１２時間の明／暗サイクル（午前６時から午後６時が明るい）で、人工蛍光灯を用いて全体に照明されている。動物室の標準温度および相対湿度の範囲は、それぞれ２０〜２６℃および３０〜７０％である。動物室は、１時間当たり最大１５回の空気交換を有するに設定される。２．５〜３．０のｐＨに酸性化した濾過水道水はおよび標準的な実験用固形飼料が自由に提供される。
１．１名のＣＤ３４ドナーからのｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）マウスの右脇腹に、ＴＭ００３０２  ＰＤＸモデルからの腫瘍断片が皮下移植される。
２．体重および臨床的観察結果は、週１回〜２回記録される。
３．腫瘍が触知可能になると、腫瘍体積を週１回〜２回決定するためにデジタルキャリパー測定が開始される。
４．マウスは、腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ３に達すると（研究−１日目または研究０日目）、表３４に従った腫瘍体積に基づいて無作為化される。
５．マウスは、研究０日目から表３４に従って投与される。
注：ＩＴ注射は、ファン技法によって実施される。ファン注射技法は、単一の表皮穿刺からの２〜５つの化合物沈着部位からなる。化合物沈着部位の量は、腫瘍のサイズによって決まる。腫瘍１００〜２００ｍｍ３は、２回の沈着を受け、２００〜４００は、３回受け、４００〜６００は、４回受け、６００超は、
５回受ける。
６．体重、臨床的観察結果、およびデジタルキャリパー測定値は、投与開始後週２回記録される。
７．２以下の身体状態スコア、２０％以上の体重減少、または２０００ｍｍ３を超える腫瘍体積に達した動物は、研究終了前に安楽死させられる。潰瘍性腫瘍のある動物も研究終了前に安楽死させられる。
注：死んでいるのが見つかった動物からの組織は採取されない。
８．研究３５日目に、全ての動物が、ＣＯ２窒息によって安楽死させられ、組織が採取される。腫瘍は採取され、フローサイトメトリー特性評価のために送られる。
【表３４】
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【０４３７】
結果は、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせによる処置が、以下によって証明されるように、ビヒクルによる処置よりも大きな有効性を有することを実証する。
（ａ）ビヒクルで処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの大きい低減、または
（ｂ）ビヒクルで処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の大きい低減、または
（ｃ）ビヒクルで処置した動物の腫瘍排除の発生がないことと対比して、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の１つ以上の発生。
【０４３８】
実施例１９−ＰＤＸモデルＴＭ００１７６の成長曲線分析、続くＨｕ−ＣＤ３４−ＮＳＧ（商標）−ＳＧＭ３における、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独、およびペンブロリズマブとの組み合わせの有効性試験
プロジェクトの概要：
研究は、２つの相に分けられる。
第１相：ＴＭ００３０２を有するｈｕ−ＳＧＭ３マウスにおける予備的薬物毒性および時間差投与の有効性（ｎ＝１０）
第２相：Ｈｕ−ＣＤ３４−ＮＳＧ（商標）−ＳＧＭ３マウス（ｎ＝１００）における有効性研究
ヒトＣＤ３４＋細胞が生着し、生着の１０週間後以降に末梢血中に２５％を超えるヒトＣＤ４５＋細胞を有する、雌ｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）ＳＧＭ３マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ  Ｔｇ（ＣＭＶ−ＩＬ３，ＣＳＦ２，ＫＩＴＬＧ）１Ｅａｖ／ＭｌｏｙＳｚＪ）が、この研究に使用される。２または３名のドナー（以下の相に応じて）からのＣＤ３４＋細胞が生着したｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）ＳＧＭ３マウスのコホートが使用される。
マウスは、識別のために耳に切り込みが入れられ、ケージ当たり最大５匹の密度で、ＨＥＰＡフィルタ付き空気を備えた個々に換気されたポリスルホンケージに収容される。ケージは、２週間毎に交換される。動物室は、制御された１２時間の明／暗サイクル（午前６時から午後６時が明るい）で、人工蛍光灯を用いて全体に照明されている。動物室の標準温度および相対湿度の範囲は、それぞれ２０〜２６℃および３０〜７０％である。動物室は、１時間当たり最大１５回の空気交換を有するに設定される。２．５〜３．０のｐＨに酸性化した濾過水道水はおよび標準的な実験用固形飼料が自由に提供される。
第１相：
１．１名のＣＤ３４ドナーからのｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）マウスの右脇腹に、ＴＭ００３０２  ＰＤＸモデルからの腫瘍断片が皮下移植される。
２．体重および臨床的観察結果は、週１回〜２回記録される。
３．腫瘍が触知可能になると、腫瘍体積を週１回〜２回決定するためにデジタルキャリパー測定が開始される。
４．マウスは、腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ３に達すると（研究−１日目または研究０日目）、表３５に従った腫瘍体積に基づいて無作為化される。
５．マウスは、研究０日目から表３５に従って投与される。
注：ＩＴ注射は、ファン技法によって実施される。ファン注射技法は、単一の表皮穿刺からの２〜５つの化合物沈着部位からなる。化合物沈着部位の量は、腫瘍のサイズによって決まる。腫瘍１００〜２００ｍｍ３は、２回の沈着を受け、２００〜４００は、３回受け、４００〜６００は、４回受け、６００超は、
５回受ける。
６．体重、臨床的観察結果、およびデジタルキャリパー測定値は、投与開始後週２回記録される。
７．２以下の身体状態スコア、２０％以上の体重減少、または２０００ｍｍ３を超える腫瘍体積に達した動物は、研究終了前に安楽死させられる。潰瘍性腫瘍のある動物も研究終了前に安楽死させられる。
注：死んでいるのが見つかった動物からの組織は採取されない。
８．研究３５日目に、全ての動物が、ＣＯ２窒息によって安楽死させられ、組織が採取される。
腫瘍は採取され、断片に分離される。１つの断片は、１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）で固定され、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）のために送られる。ＦＦＰＥブロックは、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。１つの断片は、急速凍結され、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。
【表３５】
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第２相：
１．３名のＣＤ３４ドナーからのｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）マウスの右脇腹に、ＰＤＸモデルからの腫瘍断片が皮下移植され、決定される。
２．体重および臨床的観察結果は、週１回〜２回記録される。
３．腫瘍が触知可能になると、腫瘍体積を週１回〜２回決定するためにデジタルキャリパー測定が開始される。
４．マウスは、腫瘍体積が約１００〜２００ｍｍ３に達すると（研究−１日目または研究０日目）、表３６に従った腫瘍体積に基づいて無作為化される。加えて、異なるドナーからのｈｕ−ＣＤ３４  ＮＳＧ（商標）ＳＧＭ３マウスを研究群全体に均等に分布する努力が行われる。各群は、所望の群サイズに達するまで複数回登録され得る。
５．マウスは、研究０日目から表３６に従って投与される。
６．注：ＩＴ注射は、ファン技法によって実施される。ファン注射技法は、単一の表皮穿刺からの２〜５つの化合物沈着部位からなる。化合物沈着部位の量は、腫瘍のサイズによって決まる。腫瘍１００〜２００ｍｍ３は、２回の沈着を受け、２００〜４００は、３回受け、４００〜６００は、４回受け、６００超は、５回受ける。
７．体重、臨床的観察結果、およびデジタルキャリパー測定値は、投与開始後週３回記録される。
８．２以下の身体状態スコア、２０％以上の体重減少、または２０００ｍｍ３を超える腫瘍体積に達した動物は、研究終了前に安楽死させられる。潰瘍性腫瘍のある動物も研究終了前に安楽死させられる。
注：死んでいるのが見つかった動物からの組織は採取されない。
９．研究４１日目または４２日目に、各腫瘍の写真が撮影される。
１０．研究４２日目に、全ての動物が、ＣＯ２窒息によって安楽死させられ、組織が採取される。
腫瘍は採取され、重量が測定され、断片に分離される。
１個のフラグメントが培地中に配置され、フローサイトメトリー分析のためにＦｌｏｗ  Ｃｏｎｔｒａｃｔ  Ｓｉｔｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＦＣＳ）に輸送される。次のマーカーが検査される：ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、７ＡＡＤ。
１つの断片は、１０％中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）で固定され、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）のために送られる。ＦＦＰＥブロックは、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。
１つの断片は、急速凍結され、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。
注：腫瘍が小さすぎて２個に切断できない場合（４００ｍｍ３以下）、単一の腫瘍片は、スポンサーの指示に従って処理される。
注：金曜日、土曜日、または日曜日にマウスを屠殺しなければならない場合、試料をフローサイトメトリーのために処理することができず、代わりに２つの断片に分け、１つはＦＦＰＥ用であり、もう１つは、急速凍結される。
全血は、研究の終了時に採取される。
約１００μＬの全血が、フローサイトメトリー分析のためにＦｌｏｗ  Ｃｏｎｔｒａｃｔ  Ｓｉｔｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＦＣＳ）に輸送される。次のマーカーが検査される：ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、７ＡＡＤ
残りの血液は血清に処理され、急速凍結され、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。
注：金曜日、土曜日、または日曜日にマウスを屠殺しなければならない場合、試料をフローサイトメトリーのために処理することができず、試料全体が血清に処理され、急速凍結され、必要に応じてスポンサーまたは第三者に輸送される。
【表３６】
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【０４３９】
この研究の結果は、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせによる処置が、以下のうちの少なくとも１つによって証明されるように、ペンブロリズマブ単独での処置および／またはＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独での処置（単剤療法）よりも大きい有効性を有することを実証する。
（ａ）ペンブロリズマブ単独で処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの大きい低減、または
（ｂ）ペンブロリズマブ単独で処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の大きい低減、または
（ｃ）ペンブロリズマブ単独で処置した動物の腫瘍排除の発生がないことと対比して、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の１つ以上の発生、または
（ｄ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの大きい低減、または
（ｅ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処置した動物よりも、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の大きい低減、または
（ｆ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処置した動物の腫瘍排除の発生がないことと対比して、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の１つ以上の発生、および／あるいは
研究の結果は、以下のうちの少なくとも１つによって証明されるように、ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせでの有効性に対する相乗効果を実証する。
（ｇ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍サイズの低減は、ペンブロリズマブ単独で処置した動物の腫瘍サイズの低減とＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処理した動物の腫瘍サイズの低減の合計よりも大きい、または
（ｈ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍成長の低減は、ペンブロリズマブ単独で処置した動物の腫瘍成長の低減とＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処理した動物の腫瘍成長の低減の合計よりも大きい、または
（ｉ）ＮａｎｏＰａｃ（登録商標）とペンブロリズマブの組み合わせで処置した動物の腫瘍排除の発生数は、ペンブロリズマブ単独で処置した動物の腫瘍排除の発生数とＮａｎｏＰａｃ（登録商標）単独で処置した動物の腫瘍排除の発生数の合計よりも大きい。
【０４４０】
参照文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2020536052.tif 000046
【図８ａ】
2020536052.tif 000047
【図８ｂ】
2020536052.tif 000048
【図９】
2020536052.tif 000049
【図１０】
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【図１１】
2020536052.tif 000051
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
2020536052.tif 000090
【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
2020536052.tif 000099
【図６０】
2020536052.tif 000100
【図６１】
2020536052.tif 000101
【図６２】
2020536052.tif 000102
【図６３】
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【国際調査報告】
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2020536052.tif 000105
2020536052.tif 000106
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