(57)【要約】  一態様において、止血を促進するための組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は、止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、親水性ポリウレタンフォームを含む。こうした組成物を用いて対象者において止血を促進するための方法、およびこうした組成物を製造する方法もまた、提供される。
2020509094.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物が、
止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質であって、ここで多孔性非繊維基質が親水性ポリウレタンフォームを含む、多孔性非繊維基質
を含む、止血促進のための組成物。
【請求項２】
止血剤が、血管収縮剤または化学的焼灼剤である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
血管収縮剤がエピネフリンである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
エピネフリンを約０．４５ｍｇから約０．７５ｍｇの量で含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
化学的焼灼剤が、硫酸第二鉄または硫酸カルシウムである、請求項２に記載組成物。
【請求項６】
ペレットの形状である、請求項１から５までのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
親水性ポリウレタンフォームが、組成物の質量の少なくとも８０％を構成する、請求項１から６までのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
親水性ポリウレタンフォームが、オープンセル型である、請求項１から７までのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
親水性ポリウレタンフォームが、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンドの密度を有する、請求項１から８までのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
親水性ポリウレタンフォームが、１立方フィートあたり約３．８ポンドの密度を有する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
親水性ポリウレタンフォームが、フォーム表面に約５秒以内の塗布により適用される水溶液を吸収する、請求項１から１０までのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
方法が、
止血剤を含む水溶液を、親水性ポリウレタンフォームを含む多孔性非繊維基質の表面に適用すること
を含み、水溶液が基質によって吸収される、止血を促進するための組成物の製造方法。
【請求項１３】
止血剤を含む水溶液が、基質によって完全に吸収される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
止血剤を含む水溶液が、水溶液の適用の５秒以内に、基質によって完全に吸収される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
止血剤が、血管収縮剤または化学的焼灼剤である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
止血剤が、血管収縮剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
止血剤がエピネフリンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
水溶液がさらに抗酸化剤を含む、請求項１２から１７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
抗酸化剤が、メタ重硫酸ナトリウムである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
水溶液がエピネフリンを約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの量で含み、さらにメタ重硫酸ナトリウムを約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量で含む、請求項１２から１９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
親水性ポリウレタンフォームが、非繊維基質の質量の少なくとも８０％を構成する、請求項１２から２０までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
親水性ポリウレタンフォームが、オープンセル型である、請求項１２から２１までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
親水性ポリウレタンフォームが、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンドの密度を有する、請求項１２から２２までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
多孔性非繊維基質が、約３ｍｍから約５ｍｍの厚さを有する親水性ポリウレタンフォームシートである、請求項１２から２３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
適用ステップが、約９ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの量のエピネフリンおよび約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量のメタ重硫酸ナトリウムを含む水溶液をフォームシートの表面に適用することを含み、ここで水溶液は、フォームシート１平方ｃｍあたり約１９０μＬから約３２５μＬの量でフォームシートの表面に適用される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
適用ステップの後に、方法がさらに、多孔性非繊維基質から本質的に全ての水を除去することを含む、請求項１２から２５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
水が空気乾燥によって除去される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
水が凍結乾燥によって除去される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
止血を促進することを必要とする対象者において、止血を促進する方法であって、請求項１から１１までのいずれか１項に記載の組成物を、対象者の活動性出血部位に適用することを含む方法。
【請求項３０】
活動性出血部位が手術部位である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
活動性出血部位が歯内手術部位である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
活動性出血部位が創傷である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
活動性出血部位が鼻出血である、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれる、２０１７年３月３日に出願の米国仮特許出願第６２／４６６，５０７号に基づく優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
止血およびドライな手術野の獲得は、歯内手術を成功裏に管理するための重要な要因である。局所的出血制御は可視性および歯根構造の評価を向上させるのみならず逆根管充填置換のための適切な環境を確実にし、かつ逆根管充填の汚染を最小限にする。このように、歯内手術の間の適切な止血は、手術者にとってより良い作業環境を創出する。
歯内手術の間の一次止血は、通常、エピネフリンによる局所麻酔の投与によって達成される。局所止血剤は、エピネフリンによる局所麻酔投与後の止血の良好な補助剤である。局所止血剤は、小血管または毛細血管からの出血を制御することにより局所止血をもたらす。Kim et al., J. Endod, 2006, 32:601-623を参照のこと。歯内手術に使用される止血剤としては、エピネフリン綿ペレット、硫酸第二鉄、硫酸カルシウム、ボーンワックス、コラーゲンベースの材料、ＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）、Ｇｅｌｆｏａｍ（登録商標）、塩化アルミニウム、およびＨｅｍＣｏｎが挙げられる。
ラセミ体エピネフリンＨＣｌを含む綿ペレットは、市販されている。しかし、エピネフリン含侵綿ペレットの使用による、手術部位における綿繊維の残存は、重大な懸念である。例えば、Ibarrola et al., J. Endodo, 1985, 11:75を参照のこと。綿繊維のストランドはペレットから容易に離脱し、手術部位に残されることがある。手術部位に残った遊離綿繊維は、逆根管窩洞形成と逆根管充填剤との間に捕捉されることにより逆根管封鎖に影響を及ぼすことがある。さらに、綿繊維は、手術部位において異物として作用して、創傷治癒の障害または遅延の原因となることがある。Gutmann et al., Surgical Endodontics, Ishiyaku EuroAmerica, St. Louis, MO (1994)。
多様な症例報告が、残存綿繊維により誘発された望ましくない組織反応について警告している。例えば、Ｓｅｘｔｏｎら（Skeletal Radiol, 1981, 7:211-213）は、大腿骨に大きな軟部組織腫瘤を発現した残存綿スポンジによる強い異物反応を報告している。Ｋａｌｂｅｒｍａｔｔｅｎら（Skeletal Radiol., 2001, 30:415-417）もまた、綿スポンジ遺残によって誘発された大腿骨の偽腫瘍を報告している。さらに別の報告は、以前の脳腫瘍手術の間に残された微細綿繊維に起因する頭蓋内異物肉芽腫を示した。Nakayama et al., No Shinkei Geka., 1994, 22:1081-1084。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、止血を促進する組成物の必要性は、歯内手術および他の応用の両方において、依然として存続する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様において、止血を促進するための組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は、止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、親水性ポリウレタンフォームを含む。いくつかの実施形態において、組成物は止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、ポリウレタンおよびポリエチレングリコールまたは酸化ポリエチレンの親水性ブレンドを含む。
いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤または化学的焼灼剤である。いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤である。いくつかの実施形態において、血管収縮剤はエピネフリンである。いくつかの実施形態において、止血剤は、化学的焼灼剤である。いくつかの実施形態において、化学的焼灼剤は、硫酸第二鉄または硫酸カルシウムである。
【０００５】
いくつかの実施形態において、組成物はエピネフリンを約０．４５ｍｇから約０．７５ｍｇ（例えば１デバイス当たり）の量で含む。いくつかの実施形態において、組成物はエピネフリンを約０．４５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．７ｍｇ、または約０．７５ｍｇの量で含む。
いくつかの実施形態において、組成物はペレットの形状である。いくつかの実施形態において、ペレットは、約３〜５ｍｍ×３〜５ｍｍ×３〜５ｍｍの寸法を有する。
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、組成物の質量の少なくとも８０％を構成する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約３．８ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、フォーム表面に約５秒以内の塗布により適用される水溶液（例えば、界面活性剤を含まないおよび／または有機共溶媒を含まない水溶液）を吸収する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、オープンセル型である。
【０００６】
別の一態様において、止血を促進するための組成物の製造方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、
止血剤を含む水溶液を、親水性ポリウレタンフォームまたは親水性ポリウレタンブレンドを含む多孔性非繊維基質の表面に適用することを含み、水溶液が基質によって吸収される。
いくつかの実施形態において、止血剤を含む水溶液は、基質によって完全に吸収される。いくつかの実施形態において、止血剤を含む水溶液は、水溶液の適用の５秒以内に、基質によって完全に吸収される。
いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤または化学的焼灼剤である。いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤である。いくつかの実施形態において、血管収縮剤はエピネフリンである。いくつかの実施形態において、止血剤は、化学的焼灼剤である。いくつかの実施形態において、化学的焼灼剤は、硫酸第二鉄または硫酸カルシウムである。いくつかの実施形態において、水溶液はさらに抗酸化剤を含む。いくつかの実施形態において、抗酸化剤は、メタ重硫酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、水溶液はエピネフリンを約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの量で含み、さらにメタ重硫酸ナトリウムを約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量で含む。
【０００７】
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンまたはポリウレタンブレンドフォームは、非繊維基質の質量の少なくとも８０％を構成する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンまたはポリウレタンブレンドフォームは、１立方フィートあたり約２ポンド／から１立方フィートあたり約５ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約３．８ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンまたはポリウレタンブレンドフォームは、フォーム表面に約５秒以内の塗布により適用される水溶液（例えば、界面活性剤を含まないおよび／または有機共溶媒を含まない水溶液）を吸収する。
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、約３ｍｍから約５ｍｍの厚さを有する親水性ポリウレタンまたはポリウレタンブレンドフォームシートである。いくつかの実施形態において、適用ステップは、約９ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの量のエピネフリンおよび約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量のメタ重硫酸ナトリウムを含む水溶液をフォームシートの表面に適用することを含み、ここで水溶液は、フォームシート１平方ｃｍあたり約１９０μＬから約３２５μＬの量でフォームシートの表面に適用される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、適用ステップの後に、方法はさらに、多孔性非繊維基質から本質的に全ての水を除去することを含む。いくつかの実施形態において、水は空気乾燥によって除去される。いくつかの実施形態において、水は凍結乾燥によって除去される。
さらに別の一態様において、止血を促進することを必要とする対象者において、止血を促進する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載の組成物（例えば、止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含む組成物であって、ここで多孔性非繊維基質は、親水性のポリウレタンフォーム、またはポリウレタンおよびポリエチレングリコールまたは酸化ポリエチレンを含むブレンドを含む）を、対象者の活動性出血部位に適用することを含む。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は手術部位である。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は歯内手術部位である。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は創傷である。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は鼻出血である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】陰性対照群（止血剤の適用なし）、エピネフリン含有ポリウレタンフォーム群、陽性対照群（ボーンワックス）、およびＲａｃｅｌｌｅｔ＃３群に対する止血効力を示す図である。
【図２Ａ】止血剤を適用していない陰性対照群からの代表的な組織学的画像である。
【図２Ｂ】陽性対照群（ボーンワックス）、からの代表的な組織学的画像である。
【図２Ｃ】エピネフリン含有ポリウレタンフォーム群からの代表的な組織学的画像である。
【図２Ｄ】Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３群からの代表的な組織学的画像である。
【図３】陰性対照（ＮＣ）群（止血剤の適用なし）、陽性対照（ＰＣ）群（ボーンワックス）、エピネフリン含有ポリウレタンフォーム群、およびＲａｃｅｌｌｅｔ＃３群において誘発された異物反応の度合を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
Ｉ．定義
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図するものではない。本発明の範囲は、付記の特許請求の範囲によってのみ限定されることになるからである。特段の定めがない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書およびそれに続く特許請求の範囲において、逆の意図が明らでない限り、以下の意味を有すると定義されるものとするいくつかの用語を参照することとする。いくつかの場合、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするためおよび／または参照を容易にするために本明細書において定義され、こうした定義の本明細書への包含は、当技術分野において一般的に理解される用語の定義における実質的な相違と解釈されるべきではない。
全ての数字表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および分子量は、範囲も含め、場合に応じて０．１または１．０の増加単位により（＋）または（−）に変動する近似値である。しかし、全ての数字表示の前に用語「約」が置かれることを、必ずしも明示的に述べるものではないことを理解されたい。
【００１１】
単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が特段、明確に規定しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「１つの化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は、複数形の化合物を含む。
用語「含む」は、化合物、組成物および方法が、記述された要素を含むが、他を除外するものではないことを意味するよう意図されている。「から本質的になる」は、化合物、組成物および方法を定義するために使用されるとき、特許請求された発明の基本的および新規な特徴に大きく影響するであろう他の要素を除外することを意味するものとする。「からなる」は、特許請求の範囲において明記されていないいかなる要素、ステップまたは成分をも除外することを意味するものとする。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。
本明細書で使用するとき、「止血」は、細動脈の、静脈のまたは毛細血管などだがこれらに限定されることのない、障害されたかまたは損傷された血管または毛細血管の出血を止めるプロセスおよび／または凝固を促進するプロセスをいう。
【００１２】
本明細書で使用するとき、「止血剤」は、止血を促進する物質（例えば、化学的、生物学的生成物、または生物学的に誘導された生成物）をいう。いくつかの実施形態において、止血剤は、局所血管収縮を促進することによって止血を促進する。いくつかの実施形態において、止血剤は、血液凝固を促進することによって止血を促進する。いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤または化学的焼灼剤である。
本明細書で使用するとき、用語「非繊維基質」は、非繊維材料からなる基質をいう。いくつかの実施形態において、非繊維基質は、例えば、その中に基質が置かれた活動性出血部位から除去する際に、線維を脱落または遊離させない基質である。
用語「含侵させた」は、「止血剤を含侵させた基質」に対して使用されるとき、基質（例えば、オープンセル親水性ポリウレタンフォームを含む基質）への、止血剤（例えば、水溶液中の止血剤）の吸収をいう。
「対象者」は、哺乳類、いくつかの実施形態においては、ヒトである。哺乳類はまた、霊長目（例えば、サル）、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、ラットおよびモルモットをも含んでよいが、これらに限定されるものではない。
【００１３】
ＩＩ．止血を促進するための組成物
一態様において、止血を促進するための組成物が提供される。いくつかの実施形態において、組成物は、止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、親水性ポリマー物質を含む。いくつかの実施形態において、組成物は止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、親水性ポリウレタンフォームを含む。いくつかの実施形態において、組成物は止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、ポリウレタンおよび酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコールの親水性ブレンドを含む。いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、いかなるヒトまたは動物由来成分をも含まない。いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、合成である。
親水性ポリウレタンフォーム
【００１４】
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、親水性ポリウレタンフォームを含む。本明細書で使用するとき、「ポリウレタン」は、繰り返し単位がウレタン部分を含むポリマーをいう。いくつかの実施形態において、ポリウレタンは、「ハード」および「ソフト」セグメントの組合せを含む。ハードおよびソフトセグメントの組合せの使用は、ポリウレタンに、柔軟性および力学的強度などの、特定の物理的特性を与えることができる。非限定的例として、いくつかの実施形態において、ポリウレタンは、ＤＬ−ラクチドおよびε−カプロラクトンのソフトセグメントならびにブタンジオールおよび１，４−ブタンジイソシアネートから合成されたハードセグメントを含む。例えば、van Minnen et al., J Biomed Mater Res A, 2006, 76:377-385を参照のこと。
【００１５】
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、フォーム表面に適用される水溶液を吸収することができる医療グレードのポリウレタンフォームである。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、オープンセル型（例えば、相互接続したセルを含む）である。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンド、例えば、１立方フィートあたり約２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５ポンド、の密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約３．８ポンドの密度を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、高度に吸収性である。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、約３０秒以内の塗布、例えば、約１５秒以内の塗布、約１０秒以内の塗布、または約５秒以内の塗布、によりフォーム表面に適用される水溶液（例えば、界面活性剤を含まないおよび／または有機共溶媒を含まない水溶液）を吸い込むかまたは吸収する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、約３０秒以内の塗布、例えば、約１５秒以内の塗布、約１０秒以内の塗布、または約５秒以内の塗布、によりフォーム表面に適用される水溶液を完全に吸収する（水溶液で満たされる）。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、その質量の１０倍までの流体を、例えば、その質量の１５倍までの流体を、その質量の２０倍までの流体を、またはその質量の３０倍までの流体を吸収することができる。
【００１７】
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、市販されているものである。市販のフォームとしては、例えば、Ｃａｐｕ−Ｃｅｌｌ（商標）（Ｆｏａｍ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニューヨーク州バッファロー）、Ｈｙｄｒａｓｏｒｂ（登録商標）（Ｃａｒｗｉｌｄ  Ｃｏｒｐ．、コネチカット州ニューロンドン）、ＲｅｓＱＦｏａｍ（Ａｒｓｅｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ウォータータウン）、Ｌｕｏｆｕｃｏｎ  ｆｏａｍ  ｄｒｅｓｓｉｎｇ  （Ｆｏｒｙｏｕ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、中国広東省）、およびＡｌｌｅｖｙｎ  ｈｙｄｒｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｏｌｙｕｒｅｔｈａｎｅ  ｄｒｅｓｓｉｎｇ  （Ｓｍｉｔｈ＆Ｎｅｐｈｅｗ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州アンドーバー）が挙げられる。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、国際公開第２０１３／１５５２５４号または米国特許第５，６５０，４５０号において開示のフォームである。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、生分解性ポリウレタンである。例えば、van Minnen et al., J Biomed Mater Res A, 2006, 76:377-385を参照のこと。
親水性ポリウレタンブレンド
【００１８】
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、ポリウレタンおよび酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコールの親水性ブレンドを含む。いくつかの実施形態において、ブレンドはポリウレタンおよび酸化ポリエチレンポリマーを含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタンおよびポリエチレングリコールのポリマーを含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタン、酸化ポリエチレンおよびポリエチレングリコールを含む。
いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタンおよびポリエチレングリコールのポリマーを含む。いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールは、少なくとも３００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも４００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも６００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも１，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも１，５００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも２，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも３，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも４，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも６，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも８，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも１０，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも２０，０００ｇ／ｍｏｌ、または少なくとも３５，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールは、約３００ｇ／ｍｏｌ、４００ｇ／ｍｏｌ、６００ｇ／ｍｏｌ、１，０００ｇ／ｍｏｌ、１，５００ｇ／ｍｏｌ、２，０００ｇ／ｍｏｌ、３，０００ｇ／ｍｏｌ、４，０００ｇ／ｍｏｌ、６，０００ｇ／ｍｏｌ、８，０００ｇ／ｍｏｌ、１０，０００ｇ／ｍｏｌ、２０，０００ｇ／ｍｏｌ、または３５，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、ブレンドは、約２０，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有するポリウレタンおよびポリエチレングリコールのポリマーを含む。
いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタンおよび酸化ポリエチレンのポリマーを含む。いくつかの実施形態において、酸化ポリエチレンは、少なくとも１００，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも２００，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも３００，０００ｇ／ｍｏｌ、少なくとも４００，０００ｇ／ｍｏｌ、または少なくとも６００，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有する。いくつかの実施形態において、ポリエチレングリコールは、約１００，０００ｇ／ｍｏｌ、２００，０００ｇ／ｍｏｌ、３００，０００ｇ／ｍｏｌ、４００，０００ｇ／ｍｏｌ、または６００，０００ｇ／ｍｏｌの平均分子量を有する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ブレンドは、前述のようなポリウレタンを含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、ハードおよびソフトセグメントを含むポリウレタンブロックコポリマーを含む。非限定的例として、いくつかの実施形態において、ブレンドは、ＤＬ−ラクチドおよびε−カプロラクトンのソフトセグメントならびにブタンジオールおよび１，４−ブタンジイソシアネートから合成されたハードセグメントを含むポリウレタンを含む。例えば、van Minnen et al., J Biomed Mater Res A, 2006, 76:377-385を参照のこと。
【００２０】
いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタンを約４０％から約９０％の量で、および酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコールを約１０％から約６０％の量で含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、ポリウレタンを約４０％から約７０％の量で、および酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコールを約３０％から約６０％の量で含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコールを約６０％まで、約５５％まで、約５０％まで、約４５％まで、約４０％まで、約３５％まで、約３０％まで、約２５％まで、または約２０％までの量で含む。いくつかの実施形態において、ブレンドは、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、または約６０％の酸化ポリエチレンまたはポリエチレングリコール含有量を有する。
いくつかの実施形態において、多孔質非繊維基質は、米国特許出願公開第２０１２／０１４４５９２号に開示のような親水性ポリウレタンブレンドを含む。
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンブレンドは、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンド、例えば、１立方フィートあたり約２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５ポンド、の密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンブレンドは、高度に吸収性である。例えば、いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンブレンドは、約３０秒以内の塗布、例えば、約１５秒以内の塗布、約１０秒以内の塗布、または約５秒以内の塗布、により親水性ポリウレタンブレンド表面に適用される水溶液（例えば、界面活性剤を含まないおよび／または有機共溶媒を含まない水溶液）を吸い込むかまたは吸収する。
【００２１】
止血剤
いくつかの実施形態において、止血剤は、血管収縮剤である。適切な血管収縮剤としては、これらに限定されるものではないが、エピネフリン、ノルエピネフリン、およびレボノルデフリンが挙げられる。いくつかの実施形態において、止血剤はエピネフリン（例えば、ラセミ体エピネフリン）である。いくつかの実施形態において、エピネフリンは、塩の形態、例えば、塩酸（ＨＣｌ）エピネフリンである。本明細書でいうエピネフリンはまた、特段の指示がない限りあるいは文脈から明らかでない限り、薬学的に許容されるエピネフリンの塩への言及をも含む。いくつかの実施形態において、２つ以上の血管収縮剤の組合せが使用される。
いくつかの実施形態において、止血剤は、化学的焼灼剤である。適切な化学的焼灼剤としては、これらに限定されるものではないが、硫酸第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸カルシウム、塩化アルミニウム、塩化亜鉛、および硝酸銀が挙げられる。いくつかの実施形態において、２つ以上の化学的焼灼剤の組合せが使用される。いくつかの実施形態において、血管収縮剤と化学的焼灼剤の組合せが使用される。
いくつかの実施形態において、止血剤はエピネフリンであり、エピネフリンは、１デバイス（例えば、ペレット）あたり約０．３ｍｇから約１．５ｍｇ、例えば、１デバイスあたり約０．４５ｍｇから約０．７５ｍｇ、１デバイスあたり約０．５ｍｇから約１ｍｇ、または１デバイスあたり約０．５ｍｇから約１．５ｍｇの量で存在する。いくつかの実施形態において、止血剤はエピネフリンであり、エピネフリンは、１デバイス（例えば、ペレット）あたり約０．３ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．８５ｍｇ、約０．９ｍｇ、約０．９５ｍｇ、約１ｍｇ、約１．１ｍｇ、約１．２ｍｇ、約１．３ｍｇ、約１．４ｍｇ、または約１．５ｍｇの量で存在する。
【００２２】
組成物の特徴
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、組成物の質量の少なくとも８０％、例えば、組成物の質量の少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を構成する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームまたはポリウレタンおよび酸化ポリエチレンもしくはポリエチレングリコールの親水性ブレンドは、組成物の質量の少なくとも８０％、例えば、組成物の質量の少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％を構成する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームまたはポリウレタンおよび酸化ポリエチレンもしくはポリエチレングリコールの親水性ブレンドは、組成物の質量の１００％未満を構成する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームまたはポリウレタンおよび酸化ポリエチレンもしくはポリエチレングリコールの親水性ブレンドは、組成物の質量の少なくとも８０％であるが、組成物の質量の１００％未満、例えば、組成物の質量の約８０％から約９９％、または約８０％から約９０％を構成する。
【００２３】
止血を促進するための組成物は、いかなる適切な形状を有してもよい。例えば、いくつかの実施形態において、組成物は、ペレット、シリンダー、キューブ、コーン、またはディスクの形状である。いくつかの実施形態において、組成物はペレット、シート、キューブ、スクエア、またはパッチ形状のデバイスである。いくつかの実施形態において、組成物はペレット形状である。いくつかの実施形態において、組成物は、シートまたはパッチ形状である。いくつかの実施形態において、組成物は、約２〜１０ｍｍ×２〜１０ｍｍ×２〜１０ｍｍ、例えば、約３〜５ｍｍ×３〜５ｍｍ×３〜５ｍｍの寸法を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約２５ｍｍ3から約５００ｍｍ3、例えば、約２５ｍｍ3から約２００ｍｍ3、または約２５ｍｍ3から約１５０ｍｍ3である。いくつかの実施形態において、組成物は、不規則な形状、例えばフレークまたは約０．５〜１０ｍｍ、例えば、約１〜４ｍｍ、２〜６ｍｍ、または３〜５ｍｍの平均径を有する不規則に形作られたパッチ、を有する。
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、さらに抗酸化剤を含侵される。いくつかの実施形態において、抗酸化剤は、メタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重硫酸ナトリウムである。
【００２４】
ＩＩＩ．止血組成物の製造方法
別の一態様において、止血を促進するための組成物の製造方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、
親水性ポリウレタンフォームを含む多孔性非繊維基質を提供すること、および
止血剤を含む水溶液を、多孔性非繊維基質の表面に適用すること
を含み、水溶液が該基質によって吸収される。
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームを含む多孔性非繊維基質は、高度に吸収性である。いくつかの実施形態において、止血剤を含む水溶液は、基質によって完全に吸収される。いくつかの実施形態において、止血剤を含む水溶液は、約３０秒以内の塗布、例えば、約１５秒以内の塗布、約１０秒以内の塗布、または約５秒以内の塗布で、基質によって完全に吸収される。
いくつかの実施形態において、水溶液は血管収縮剤または化学的焼灼剤である止血剤を含む。いくつかの実施形態において、止血剤は血管収縮剤である。いくつかの実施形態において、血管収縮剤はエピネフリンである。いくつかの実施形態において、止血剤は化学的焼灼剤である。いくつかの実施形態において、化学的焼灼剤は、硫酸第二鉄または硫酸カルシウムである。
いくつかの実施形態において、水溶液はさらに、抗酸化剤を含む。いくつかの実施形態において、抗酸化剤は、メタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重硫酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、抗酸化剤（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重硫酸ナトリウム）は、約０．１ｍｇ／ｍＬから約２ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．５ｍｇ／ｍＬから約１．５ｍｇ／ｍＬ、または約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量で存在する。いくつかの実施形態において、抗酸化剤（例えば、メタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重硫酸ナトリウム）は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．２５ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．７５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１．２５ｍｇ／ｍＬ、約１．５ｍｇ／ｍＬ、約１．７５ｍｇ／ｍＬ、または約２ｍｇ／ｍＬの量で存在する。
【００２５】
いくつかの実施形態において、水溶液は、エピネフリンを約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬ、例えば、約７ｍｇ／ｍＬから約１２ｍｇ／ｍＬまたは約８ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの量で含む。いくつかの実施形態において、水溶液は、エピネフリンを約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、または約１５ｍｇ／ｍＬの量で含む。いくつかの実施形態において、水溶液は、エピネフリンを約９．５ｍｇ／ｍＬの量で含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、水溶液は、エピネフリンを約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの量（例えば、約７ｍｇ／ｍＬから約１２ｍｇ／ｍＬまたは約８ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ、約５．５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約６．５ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約７．５ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約８．５ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約９．５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１０．５ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１１．５ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１２．５ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１３．５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１４．５ｍｇ／ｍＬ、または約１５ｍｇ／ｍＬの量）で含み、かつ、メタ重硫酸ナトリウムを約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量でさらに含む。いくつかの実施形態において、水溶液は、エピネフリンを約９．５ｍｇ／ｍＬの量で含み、かつ、メタ重硫酸ナトリウムを約１ｍｇ／ｍＬの量でさらに含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、上述のセクションＩＩに記載のポリウレタンフォームまたは親水性ポリウレタンブレンドフォームであり、かつ／または上述のセクションＩＩに記載の１つまたは複数の特徴を有する（例えば、医療グレードのポリウレタンフォーム、またはポリウレタンおよびポリエチレングリコールもしくは酸化ポリエチレンを含むブレンド）。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、オープンセル型である。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約２ポンドから１立方フィートあたり約５ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、１立方フィートあたり約３．８ポンドの密度を有する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、高度に吸水性である。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、フォーム表面に約５秒以内の塗布により適用される水溶液（例えば、界面活性剤を含まないおよび／または有機共溶媒を含まない水溶液）を吸収する。いくつかの実施形態において、親水性ポリウレタンフォームは、非繊維基質の質量の少なくとも８０％を構成する。
いくつかの実施形態において、多孔性非繊維基質は、親水性ポリウレタンフォームシートである。いくつかの実施形態において、フォームシートは、約２ｍｍから約１０ｍｍ、例えば、約２ｍｍから約５ｍｍ、約３ｍｍから約８ｍｍ、または約３ｍｍから約５ｍｍの厚さを有する。
【００２８】
いくつかの実施形態において、適用ステップは、多孔性非繊維基質（例えば、親水性ポリウレタンフォームシート）の表面に、約９ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの量のエピネフリンおよび約０．７５ｍｇ／ｍＬから約１．２５ｍｇ／ｍＬの量のメタ重硫酸ナトリウムを含む水溶液を適用することを含み、ここで水溶液は、多孔性非繊維基質（例えば、フォームシート）の表面に、１平方ｃｍあたり約１９０μＬから約３２５μＬの量で適用される。いくつかの実施形態において、止血剤（例えば、エピネフリン）および任意選択の抗酸化剤を含む水溶液は、多孔性非繊維基質内に完全に吸収される（例えば、親水性ポリウレタンフォームシートの内部に完全に吸収される）。
【００２９】
いくつかの実施形態において、適用ステップの後に、方法はさらに、多孔性非繊維基質から水を除去することを含む。いくつかの実施形態において、適用ステップの後に、方法はさらに、多孔性非繊維基質から本質的に全ての水を除去することを含む。本明細書で使用する場合、「本質的に全ての水を除去する」は、基質から少なくとも９０％の水が除去されることを意味する。いくつかの実施形態において、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の水が基質から除去される
いくつかの実施形態において、水の除去は空気乾燥、真空乾燥、加熱乾燥、凍結乾燥もしくはフリーズドライ、またはこれらの組合せ、によって遂行される。いくつかの実施形態において、水は空気乾燥によって除去される。いくつかの実施形態において、水は凍結乾燥によって除去される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、乾燥は、低湿度条件下、例えば相対湿度６０％未満、５０％未満または４０％未満、で行われる。いくつかの実施形態において、乾燥は、５０％未満の一定の相対湿度、例えば、約２５％〜３５％の一定の相対湿度において行われる。いくつかの実施形態において、乾燥は、２７℃未満、２５℃未満、または２０度未満などの、低温度条件下で行われる。いくつかの実施形態において、乾燥は、約１０℃から約２５℃、例えば、約１０℃から約１５℃の温度において行われる。いくつかの実施形態において、乾燥は、大気圧下、または２００ｍｍＨｇ未満または約５０ｍｍＨｇ未満などの減圧下、約２５℃から約９０℃などの温度下で行われる。
乾燥は、所望の結果を達成するいかなる所望の時間、例えば、約１から２０時間、または約４から１０時間、行われもてよい。乾燥はまた、製品の仕様に応じて、より短時間またはより長時間行われてよい。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の止血組成物は、長期間、例えば、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、またはより長期間、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２月間、保管される。止血組成物は、これらに限定されるものではないが、周囲室温（例えば、約２３℃から約３０℃）、冷蔵温度（例えば、約４℃）または冷凍温度（例えば、約−２０℃から約−８０℃）などの種々の温度において保管されてよい。いくつかの実施形態において、止血組成物は、少なくとも１、２、３、もしくは４週間、または４℃で保管した場合、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２月間、安定である。
【００３１】
ＩＶ．止血を促進するための組成物の使用方法
別の一態様において、本明細書に記載の止血組成物の使用方法が、提供される。いくつかの実施形態において、対象者において止血を促進する方法が提供される。いくつかの実施形態において、対象者において出血を制御する方法が提供される。いくつかの実施形態において、対象者において出血の重症度を低減する方法が提供される。
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載の組成物（例えば、親水性のポリウレタンフォームまたはポリウレタンブレンドフォームを含み、かつ、止血剤を含侵させた多孔質非繊維基質）を、対象者の活動性出血部位に適用することを含む。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は、出血を伴ういかなる歯科または医学的手順からのものであってもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、手術部位に適用される。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は、これらに限定されるものではないが、腹部手術、生検、頭蓋顎顔面手術、歯内手術（例えば、根管手術）、ＥＮＴ（耳鼻咽喉）手術、一般外科手術、歯肉手術、口腔手術、歯科矯正治療、下顎矯正手術、臓器切除、骨手術、歯周外科手術、抜歯、腫瘍切除、または血管外科手術などの手術または手順に関連するものである。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は、歯内手術部位、例えば根管手術部位である。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は、抜歯部位である。いくつかの実施形態において、活動性出血部位は、歯周外科手術部位である。
【００３２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物（例えば、親水性ポリウレタンフォームを含み、かつ、止血剤を含侵させた多孔質非繊維基質）は、創傷または外傷部位に適用される。いくつかの実施形態において、創傷は、皮膚および／または皮下組織の損傷である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は鼻出血に適用される。
いくつかの実施形態において、組成物は、活動性出血部位に、少なくとも約１０分間、少なくとも約１５分間、少なくとも約２０分間、少なくとも約３０分間、少なくとも約４５分間、または少なくとも約６０分間、適用される。いくつかの実施形態において、組成物は、活動性出血部位に、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約３時間、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約２４時間、またはより長時間、適用される。いくつかの実施形態において、組成物は、活動性出血部位に、当該部位における血流が検知できるほどに緩徐になるかまたは停止するまで、適用される。
【００３３】
いくつかの実施形態において、活動性出血部位に適用される止血組成物は、止血組成物が当該部位から除去された後に、検知できるほどの炎症を誘発しない。いくつかの実施形態において、止血組成物が部位から除去された後に、検知できるほどの異物反応。いくつかの実施形態において、止血組成物が適用された部位における、検知されるほどの炎症または検知されるほどの異物反応の有無は、止血組成物が部位から除去されてから、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間後、またはそれ以後に測定される。いくつかの実施形態において、検知されるほどの炎症および／または検知されるほどの異物反応は、以下の実施例セクションにおいて記載されるように、視覚的検査によって、顕微鏡検査によって、または組織学的検査によって測定される。
Ｖ．キット
【００３４】
さらに別の一態様において、止血を促進するための１つまたは複数の組成物を含むキットが、提供される。いくつかの実施形態において、キットは、止血剤を含侵させた多孔性非繊維基質を含み、ここで多孔性非繊維基質は、親水性のポリウレタンフォームまたはポリウレタンブレンドフォーム（例えば、上述のセクションＩＩに記載の組成物）を含む。
いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載の止血組成物を滅菌されたパッケージ中に含む。いくつかの実施形態において、キットはさらに、使用説明書を含む。いくつかの実施形態において、使用は、対象者において止血を促進するためである。いくつかの実施形態において、使用は、対象者において出血を制御するためである。いくつかの実施形態において、使用は、対象者において出血の重症度を低減するためである。
【実施例】
【００３５】
ＶＩ．例
以下の例は、特許請求された発明を限定するためではなく、例証するために提供される。
（例１）
骨欠損におけるエピネフリン含侵ポリウレタンフォームの止血効力および生体適合性
本研究の目的は、モルモットにおいて作製された骨欠損において、エピネフリン含侵ポリウレタン（ＰＵ）フォームキューブの止血効力および生体適合性を、エピネフリン含侵綿ペレットの止血効力および生体適合性と比較することであった。
材料および方法
【００３６】
ｉ．試験物質の調製
０．５ｃｍ3に等しい寸法の、親水性、高密度、オープンセルポリウレタンフォーム（Ｃａｐｕ−Ｃｅｌｌ；Ｆｏａｍ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニューヨーク州バッファロー）（３．８ｌｂ／ｆｔ3）キューブを商業的供給元から入手した。キューブは全て、滅菌するためにオートクレーブした。エピネフリンの２．２５％ラセミ体溶液を調製した。
１ｍｇ／ｍＬメタ重硫酸ナトリウム２５ｍＬ中２４０ｍｇエピネフリンＨＣｌ原液を、個々のフォームキューブに適用する直前に、新たに調製し、かつ、無菌ろ過した。無菌手法を用いて、１フォームキューブあたり０．５５ｍｇのエピネフリンを無菌層流フード下で、滅菌ピペットチップを用いて含侵させた。これにより、フォームキューブと、１ペレットあたり平均０．５５ｍｇのエピネフリンを含むＲａｃｅｌｌｅｔ（登録商標）＃３（Ｐａｓｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｉｎｃ．）との直接比較が可能になった。次いで、フォームキューブを４ｍＬのＨＰＬＣバイアルに入れ、層流フード中で２時間空気乾燥させた。次いでバイアルのキャップを密閉し、エピネフリンの酸化の可能性を最小限にするために、動物実験の日までバイアルを約−２０℃で保管した。
【００３７】
ｉｉ．手順
総計１８匹の雄性モルモット（７５０〜８５０ｇ）が実験に用いられた。全ての手順は、ロマリンダ大学研究委員会によって承認されたガイドラインに従って行われた。全ての手順は、無菌で行われた。
動物を３％イソフルランガスで鎮静させ、２７．５ｍｇの塩酸ケタミン（５５ｍｇの塩酸ケタミンが使用された最初の４動物を除く）および１．７５ｍｇのキシラジン（３．５ｍｇのキシラジンが使用された最初の４動物を除く）の筋肉内注射により麻酔した。１：１００，０００エピネフリン含有の１ｍＬリドカインの注射を局所麻酔として投与した。各動物の顎下手術部位を剃毛し、５％ヨードチンキで消毒した。長さ約１．５ｃｍの１本の顎外切開を下顎骨の正中線に＃１５ブレードで作製し、結合線を位置付けた。骨膜とともに組織フラップを持ち上げて、下顎皮質骨を露出した後、直径３ｍｍ、深さ２ｍｍの標準化された骨欠損を、ラウンドバーを用いて、生理食塩水持続洗浄下で、門歯と下顎骨の２つの半分を結ぶ結合線の尾部側との間に位置する骨の三角形の中で、下顎骨の各側に、作成した。
動物を無作為に、対照群（動物６匹）および実験群（動物１２匹）、の２群に分けた。対照群の各動物は、陰性対照部位を下顎骨の片側に、および陽性対照をその反対側に、無作為割り付けによって有した。陰性対照部位において、出血量を、骨欠損が作製された後にいかなる止血剤をも適用することなく、測定した。この陰性対照は、いかなる止血の介入もなしに、欠損からの正常な出血を測定し、かつ、正常な創傷治癒を示すのに役立った。出血量は、１５個の予め秤量した滅菌吸収紙ポイント（Ｄｅｎｔｓｐｌｙ  Ｔｕｌｓａ、米国オクラホマ州）によって、２分間、ブロットすることにより、測定した。ＨＰＬＣバイアルに入れた１５個の滅菌吸収紙ポイントを一緒に、予め秤量し、血液採取後に、紙ポイントを同一のＨＰＬＣバイアルに戻した。バイアルのキャップを直ちに密閉し、採取した血液のいかなる蒸発をも防止した。次いで、実験終了時に、ＨＰＬＣバイアル中のこれらの紙ポイントを採取した血液とともに、再度秤量し、血液採取前後の質量の違いを算出した。
【００３８】
陽性対照部位において、ボーンワックスを止血のために２分間、骨欠損に適用し、次いでできる限り除去した。この陽性対照は、局所止血剤として使用された場合に異物反応を起こし、治癒を障害することが知られているボーンワックスを用いることによって、動物が異物反応を誘発する能力を試験するのに役立った。例えば、Solheim et al., J Biomed Mat Res, 1992; 26:791-800を参照のこと。ボーンワックスの除去後、血液の量を、上記と同じ方法で、紙ポイントを用いて測定した。血液採取前後の質量の違いは、止血のための止血剤適用後の血液滲出量を、したがって、止血効力を表すことを意図されていた。
【００３９】
実験群において、各動物は、２つの異なる試験物質、エピネフリン含有の綿ペレット（Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３）およびエピネフリンを含侵させたＰＵフォーム、に無作為に割り付けられた２つの実験部位を有した。各実験部位は、試験物質の止血効力を調べるのに役立った。エピネフリン含有綿ペレットを割り付けられた実験部位において、１個のＲａｃｅｌｌｅｔ＃３綿ペレットが、穏やかな圧迫によって、２分間、骨欠損に適用された。ＰＵフォームを割り付けられた反対側部位において、上述のように調製されたエピネフリン含有のフォームキューブが、同様の方法で、穏やかな圧迫によって、２分間、骨欠損に適用された。全ての実験部位について、１５個の予め秤量した紙ポイントによって、前記説明と同じ方法で、止血剤除去後に２分間、止血効力を測定した。
次いで、フラップを再配置し、４−０吸収性Ｖｉｃｒｙｌ縫合糸で閉鎖した。エンロフロキサシン（５ｍｇ／ｋｇ）を各動物に、感染制御のために、かつブプレノルフィン（０．０１ｍｇ／ｋｇ）を疼痛制御のために投与した。
ｉｉｉ．組織学的評価のための準備
動物を、手術後７週時に、ケタミン（４４ｍｇ／ｋｇ）およびペントバルビタール（９０ｍｇ／ｋｇ）の過剰投与を用いて安楽死させた。次いで、下顎骨を切り裂き、骨欠損および隣接骨を含むように結合線で分割した。下顎骨の遠位部を除去した後、標本を１０％緩衝ホルマリン中に２週間、置いた。標本を、５％ギ酸中で脱灰し、それに続いて、３０％、７０％および１００％アルコール中で脱水した。パラフィンに包埋した後、厚さ５μｍの連続的な近遠心の切片を結合線から骨欠損へと切り出した。全骨欠損にわたって、１０〜１３スライドを得た。スライドをＨ＆Ｅで染色し、光学顕微鏡下で評価した。
【００４０】
ｉｖ．骨欠損の組織学的検査
組織学的切片を、炎症および異物反応の度合に関して、盲検で口腔病理医が検査した。炎症の重症度を、Torabinejad et al., J Endod, 1997, 23:225-228によって行われた以前の研究において使用された以下の記述スケールに基づき、１から４の順序尺度上でスコア化した。
１−なし、炎症細胞なし。
２−軽度、僅かな炎症細胞。
３−中等度、炎症細胞が正常組織を不明瞭にしていない。
４−重度、炎症細胞が正常組織を置換している。
創傷治癒を、Jeansonne et al, J Endod, 1993, 19:174によって行われた以前の研究において使用された以下の記述スケールに基づき、１から５の順序尺度上でスコア化した。
１−手術部位が健常な海綿骨で満たされた、完全治癒。
２−早期骨形成があるかまたはない、密なコラーゲンを伴う線維症。
３−慢性炎症があるかまたはない、手術部位を満たす肉芽組織。４−肉芽組織があるかまたはない、急性炎症。
５−膿瘍形成
異物反応の度合は、顕微鏡下、１視野４０Ｘで、異物巨細胞の増殖巣の数を数えることによって、段階分けされた。比較のために、各標本から、最大数の増殖巣を有する切片を選択した。異物反応の度合を段階分けするために、以下の記述スケールを使用した。
０−なし、０個の異物巨細胞の増殖巣（４０Ｘ視野で）。
１−軽度、１〜５個の異物巨細胞の増殖巣。
２−中等度、６〜１０個の異物巨細胞の増殖巣。
３−重度、＞１０個の異物巨細胞の増殖巣。
【００４１】
ｖ．統計解析
統計解析は、ＳＰＳＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２１（ＩＢＭ  ＳＰＳＳ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｗｉｎｄｏｗｓ用、ＩＢＭ  Ｃｏｒｐ、ニューヨーク州アーモンク）を用いて行った。スコアをピアソンのカイ二乗検定により分析し、実験群と対照群との間および各群内に統計的に有意な差が存在するかどうかを、独立サンプルのクラスカル・ウォリス検定により決定した。多重比較のための調整は行わなかった。統計的有意性は、Ｐ＜．０５に設定した。
【００４２】
結果
全１８匹の動物からの実験データは、止血効力の測定のために本研究に含まれた。対照群の動物のうち１匹は、全身麻酔から意識を回復することがなく、実験直後に死亡した。実験群の動物のうち１匹は、組織学的スライドの品質が悪く、組織学的解析から除外された。したがって、１８匹の動物のうち１６匹からの標本が組織学的解析に含まれ、５つの陰性対照部位、５つの陽性対照部位、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３についての１１の実験部位、エピネフリン含有のＰＵフォームキューブについての１１の実験部位からなるものであった。
止血効力に関して、全ての陽性群および実験群において、止血剤適用のために与えられた２分の間に完全な止血が達成された。結果は、陽性対照群（ボーンワックス）は、止血の達成において、止血剤の介入がなかった陰性対照群よりも有意に良好であったことを示した（Ｐ＜．０５）（図１）。エピネフリン含有のＰＵフォームもまた、止血の達成において、陰性対照群（Ｐ＜．０５）およびＲａｃｅｌｌｅｔ＃３群（Ｐ＜．０５）の両方よりも有意に良好であった。Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３群は、止血の達成において、陰性対照群よりも有意に良好であったが、統計解析により、２群の間に統計的に有意な差はないことが明らかになった。さらに、陽性対照群は、止血の達成において、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３群よりも有意に良好であったが、統計解析により、２群の間に統計的に有意な差はないことが明らかになった。止血効力において、エピネフリン含有のＰＵフォーム群と陽性対照群との間に統計的に有意な差はなかった。
【００４３】
炎症の重症度に関して、全ての標本は、Ｔｏｒａｂｉｎｅｊａｄらによる以前の研究（２１）における記述スケールに基づくスコア１に該当し、炎症を呈さなかった。図２Ａ〜２Ｄを参照のこと。創傷治癒に関して、全ての標本は、Ｊｅａｎｓｏｎｎｅらによる以前の研究（２２）において使用されたスケールに基づくカテゴリー２の記述  −  早期骨形成があるかまたはない、密なコラーゲンを伴う線維症  −  と相関した。全ての標本が若干の骨形成を示した。
異物反応の度合に関して、結果は、エピネフリン含有のＰＵフォームが、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３よりも著しく少ない異物反応を誘発し、この差が統計的に有意であった（Ｐ＜．０５）（図３）ことを示した。実際、ＰＵフォーム群において、１１の標本中２つのみが、異物巨細胞を示したのに対して、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３群においては、１１の標本中１１が異物巨細胞を示した。しかもＰＵフォーム群で異物反応を示した２標本でも、異物巨細胞の小さな増殖巣１個のみの、非常に軽度の反応を示しただけであった。陰性対照群と比較した場合、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３が、有意により多くの異物反応を誘発した（Ｐ＜．０５）のに対して、エピネフリン含有のＰＵフォームは、統計的に有意な差は示さなかった。陽性対照群と比較した場合、異物反応において、Ｒａｃｅｌｌｅｔ＃３が、統計的に有意な差は示さなかったのに対して、エピネフリン含有のＰＵフォームは、有意により少ない異物反応を示した（Ｐ＜．０５）。陰性対照群は、陽性対照群よりも有意に少ない異物反応を誘発したが、統計解析により、この２群間で統計的に有意な差はないことが明らかになった。
【００４４】
考察
我々の研究の結果は、エピネフリンを含侵させたＰＵフォームが、止血の達成において、エピネフリンを含侵させた綿ペレットよりも有意により優れていたことを示している。これは、１つには、製造業者がフォームをその自質量の１５倍までの水溶液を吸収できるよう作製していることによる上述のＰＵフォームの親水性に起因すると思われる。臨床的に、これら２剤のハンドリング性においては、適用および除去の両方における特筆すべき差があった。ＰＵフォームキューブを使用する場合、材料のスポンジのようなコンシステンシーが骨欠損に適合しやすくしたが、材料の弾力性が欠損への充填をより難しくし、それに対して綿ペレットは、反発作用がなく、欠損に容易に充填された。欠損からの除去においては、ＰＵフォームキューブは非常に単純かつ明快であり、いかなる目に見える残留物をも残さなかった。対照的に、綿ペレットの除去は、骨欠損の表面に付着する綿繊維を生じ、可視化は非常に難しい非常に細い繊維のストランドを後に残した。本研究の目的上、骨欠損に残存するこれらの繊維の細いストランドを掻爬しようとはしなかった。
【００４５】
本研究の第二段階において、炎症、創傷治癒、および異物反応の度合を組織学的に調べることにより、綿ペレットとＰＵフォームキューブの生体適合性を比較した。創傷治癒は、止血から起こり、炎症、増殖、および成熟化へと進行する。例えば、Waldorf et al., Adv Dermatol., 1995, 10:77-96を参照のこと。炎症期は、創傷治癒の最初の数日の間に起こり、増殖期は血管新生、コラーゲン沈着として進行し、肉芽組織形成が起こる。本研究において、実験群に関わらず、いずれの標本においても、いかなる炎症をも見いだすことはできなかった。本研究において、手術後７週時に動物を安楽死させたとき、創傷治癒の炎症期は既に完了していたために、炎症の兆候はなかったものと推測される。創傷治癒の観察において見られたパターンによって立証されたように、これらの動物において創傷治癒は、増殖期および再構築期へと進行していたものと思われる。
創傷治癒の組織学的観察に関して、ウサギにおいて、硫酸第二鉄の骨の創傷治癒を対照と比較するために、Ｊｅａｎｓｏｎｎｅらによって以前に使用されたｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデルが、本研究の基礎として使用された。本研究の結果は、実験群に関わらず、全ての標本が創傷治癒スコア２、早期骨形成があるかまたはない、密なコラーゲンを伴う線維症、を有したことを示した。全ての標本が、骨芽細胞に囲まれた骨島形成を伴う早期骨形成を示したが、完全な骨形成を伴う手術部位の完全治癒を示した標本はなかった。標本の中に、膿瘍形成を有したものはなく、このことは、手術部位に感染を起こしたものはなかったことを示唆している。
【００４６】
異物反応は、移植された異材料に対する非特異性の免疫応答である（Anderson et al., Annu. Rev. Mater. Res. 2001, 31:81-110）。異物反応は、マクロファージおよび異物巨細胞とからなり、異材料の移植に続いての炎症性および創傷治癒反応の最終段階である。異物巨細胞は、マクロファージ融合の生成物であり、異物反応の特徴である。マクロファージは、貪食するには大き過ぎる異物に出会うと、融合して、最大数十の個々のマクロファージからなる、より大きな異物巨細胞を形成する。巨細胞は、スーパーオキシドおよびフリーラジカルなど、異物に局所損傷を引き起こす分解性作用物質を分泌する。最終的に慢性炎症後に、異材料は、線維性結合組織の密な層の中に被包され、宿主の免疫系から遮蔽され、かつ周囲の組織から分離される。Anderson et al.; Luttikhuizen et al., Tissue Eng, 2006, 12: 1955-1970を参照のこと。
【００４７】
本研究において、２つの止血剤の生体適合性もまた、骨損傷における異物反応の度合を比較することによって検査された。結果は、エピネフリン含有のＰＵフォームが、エピネフリン含有の綿ペレットよりも有意により少ない異物反応を誘発したことを示した。エピネフリン含有綿ペレット群において全ての標本は、異物（綿繊維）を取り囲む異物巨細胞を示し、１１のうちの７標本が重度の異物反応を示した。他方で、エピネフリン含有のＰＵフォーム群では、１１の標本のうち２標本のみが、異物巨細胞を有したが、いずれの事例においても、異物巨細胞の小さな増殖巣１つのみを伴う、非常に軽度の異物反応であった。ＰＵフォーム群におけるこの軽度の異物反応は、ＰＵフォームから血液または極微細な残留物を採取するために使用された紙ポイントからの繊維による実験中の汚染に起因していた可能性がある。本試験の結果は、エピネフリン含有綿ペレットが、骨欠損において局所止血剤として使用されるとき、綿ペレット除去後においてさえも小さな綿繊維が取り残されることがあり、かつ、これら繊維が術者によって完全に除去されない場合には、相当の異物反応の原因となることがあるということは十分にある得ることを示唆する。
【００４８】
さらに、エピネフリン含有のＰＵフォームが、陽性対照群（ボーンワックス）よりは、統計的に有意に少ない異物反応を示したが、陰性対照群とは有意差がなかったという事実は、本研究において試験したＰＵフォームは、綿ペレットの良好な代替材料であり、最小限何らかの異物反応がある場合、エピネフリンと組み合わせて局所止血剤として使用され得ることを確認するものである。エピネフリン含有のＰＵフォームと陰性対照群との間に有意差がなかったこともまた、ＰＵフォームに対する組織反応が、止血剤の介入がない組織反応に匹敵することを示唆する。エピネフリン含有の綿ペレットが、陽性対照群（ボーンワックス）と有意差がなく、かつ陰性対照よりも有意に強い異物反応を引き起こした事実は、治癒を損なうかまたは遅らせることにつながる可能性がある異物反応による宿主への負担を避けるために、綿繊維は、完全に除去されなければならないことを示している。
【００４９】
結論として、エピネフリンを含侵させたＰＵフォームキューブは、モルモットの下顎骨に作製された骨欠損において、局所止血のためのエピネフリン綿ペレットの良好な代替物である。手術部位に容易に存続する綿繊維が完全に除去されない場合には重度の異物反応を誘発する可能性があるエピネフリン綿ペレットと比較して、エピネフリンを含侵させたＰＵフォームキューブは、その非繊維構造のために最小限の異物反応でより良好な止血効力を発揮することができる。したがって、エピネフリン含有のＰＵフォームは、歯内手術のための手術用具一式の付属物として有望である。
本明細書において引用される全ての出版物および特許は、あたかも個々の出版物または特許が参照により具体的にかつ個々に組み込まれるよう示されているかのように、参照することにより本明細書に組み込まれ、かつそれに関連して出版物が引用されている方法および／または材料を開示し、かつ記述するために参照によって本明細書に組み込まれる。
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本発明はある特定の態様、実施形態および任意選択の特徴によって具体的に開示されてきたが、こうした態様、実施形態および任意選択の特徴の変更、改良および変形形態は、当業者がそれに頼ることが可能であること、および、こうした変更、改良および変形形態は、本開示の範囲内であると考えられることが理解されるべきである。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３】
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【国際調査報告】
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