(57)【要約】  本発明は、患者が２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測する方法であって、ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測するステップと、を含む方法、ならびに膵臓癌を治療する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者が、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測する方法であって、化合物１が、構造：
【化１】
2020508675.tif 000009
を有し、
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定することと、
ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測することと、を含む前記方法。
【請求項２】
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定することと、
ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者に投与される治療剤として、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を特定することであって、化合物１が、構造：
【化２】
2020508675.tif 000010
を有する、前記特定することと、
ステップ（３）：前記患者に治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を投与することと、を含む膵臓癌を有する患者を治療する方法。
【請求項３】
前記患者が、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させることによって、膵臓癌を有する患者を治療する方法であって、化合物１が、構造：
【化３】
2020508675.tif 000011
を有し、
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定することと、
ステップ（２−１）：前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳである場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する向上していない可能性を予測し、前記患者を化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物が投与される患者群から除外することと、
ステップ（２−２）：前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳでない場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測し、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記患者に投与することと、を含む方法。
【請求項４】
ステップ（１’）：前記患者由来の前記試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定することと、
ステップ（２’）：前記患者にＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）と組み合わせてＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）が存在する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答するさらに増加した可能性を予測することと、をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（１’）：前記患者からの前記試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定することと、
ステップ（２’）またはステップ（２−２’）：前記患者にＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）と組み合わせてＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）が存在する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答するさらに増加した可能性を予測することと、を含む、請求項２または請求項３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分裂周期７（Ｃｄｃ７）阻害剤の効果を予測するのに有用であり得る方法に関する。より具体的には、本発明は、患者がＣｄｃ７阻害剤での治療に治療的に応答する可能性を予測するのに有用であり得る方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんの特徴は、壊れた制御メカニズムでの異常な細胞増殖である。ほとんどのがん細胞は、正常組織の細胞よりも急速に増殖する。細胞分裂周期において、染色体の重複は必須であり、Ｓ期におけるＤＮＡの複製は厳密に調節される。ＤＮＡ複製の阻害は、がん治療の効果的な療法であることが確認されており、例えば、ヒドロキシウレア（ＨＵ）、ゲムシタビン、５−フルオロウラシルの活性代謝物などのようなＤＮＡ複製阻害剤は、臨床診療においてがんの治療剤として広く使用されている。
【０００３】
Ｃｄｃ７は、進化的によく保存されたセリン／トレオニンキナーゼであり、ＤＮＡ複製の開始において重要な役割を果たす（非特許文献１）。Ｃｄｃ７のキナーゼ活性は、その活性化パートナーと結合することによって制御される。Ｇ１期の後期からＳ期まで、Ｃｄｃ７は、Ｄｂｆ４（ＡＳＫとしても知られる）との複合体を形成し、Ｃｄｃ７基質（複数可）をリン酸化して、Ｇ１期からＳ期への移行を制御する（非特許文献２）。さらに、最近の研究は、Ｃｄｃ７がＤＮＡ複製及びＤＮＡ損傷シグナル伝達経路の両方において重要な役割を果たすことを報告している（非特許文献３）。
【０００４】
近年、Ｃｄｃ７キナーゼは、がん治療の魅力的な標的として注目されている。Ｃｄｃ７の過剰発現は、乳癌、結腸直腸癌、肺癌などのような臨床腫瘍、及び多くのがん細胞株において観察される（非特許文献４）。いくつかのがん細胞株において、活性化因子、Ｄｂｆ４の染色体コピー数の増加が見られる。興味深いことに、がん細胞株及び非形質転換線維芽細胞株は、ｓｉＲＮＡを用いるＣｄｃ７発現の抑制に対して異なる応答を示す。ｓｉＲＮＡを用いるＣｄｃ７発現の抑制は、がん細胞株ではＳ期停止を引き起こし、アポトーシスを誘導するが、正常細胞ではｐ５３活性依存的な手法でＧ１期停止を誘導する（非特許文献５）。さらに、Ｃｄｃ７キナーゼは、複製ストレス下の細胞において活性化され、ヒドロキシウレア及びエトポシドによって誘導されるアポトーシスは、Ｃｄｃ７を下方調節した細胞において増加する（非特許文献６）。従って、Ｃｄｃ７阻害剤は、単剤として、または他の化学療法剤と組み合わされて、選択的ながん治療に有用である。
【０００５】
特許文献１は、Ｃｄｃ７キナーゼ阻害剤として有用であり得る化合物であって、式Ｉ：
【０００６】
【化１】
2020508675.tif 000002
【０００７】
によって表され、式中、Ｘ及びＹのうちの１つは硫黄原子であり、他はＣＨであり、Ｒ１は任意にハロゲン原子（複数可）によって置換されたＣ１−６アルキル基であり、Ｒ２は置換基である、化合物、またはその塩について記載する。
【０００８】
特許文献１は、式（Ｉ）の化合物を、血液癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌などを含むがんの予防または治療に使用することができることについて記載する。
【０００９】
個別化した患者の療法を促進し得る新たな予後及び予測マーカーが、最良の治療レジメンを特定するために、治療に対する患者の応答を正確に予測し、特に小分子または生体分子薬物への耐性の発達を特定するのに必要である。課題は、治療に対する患者の感受性を良好に予測することができる新たなパラメータの特定によって解決され得る。患者試料の特徴付けは、がん診断及び治療の重要な態様である。治療に対する患者の応答の分子及び遺伝子マーカーとの関連付けは、非応答の患者における治療開発への新たな機会を開くか、または有効性におけるより高い信頼性のために他の治療選択肢の中で治療の指標を区別することができる。さらに、医薬品、薬物、または併用療法に十分に応答する可能性が高い患者の事前選択は、臨床研究に必要な患者の数を低減するか、または臨床開発プログラムを完了するのに必要な時間を加速し得る。
【００１０】
しかしながら、Ｃｄｃ７キナーゼ阻害剤に応答する患者を予測するのに使用することができる予後及び予測マーカーは開発されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】ＷＯ２０ １１／１０２３９９  Ａ１
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】ＥＭＢＯＪ．１９９９，１８（２０），ｐ．５７０３−５７１３
【非特許文献２】Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００２，１９０（３），ｐ．２８７−２９６
【非特許文献３】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００８，２７（２４），ｐ．３４７５−３４８２
【非特許文献４】Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．２００８，１０（９），ｐ．９２０−９３１
【非特許文献５】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４，６４（１９），ｐ．７１１０−７１１６
【非特許文献６】Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００７，２８２（１），ｐ．２０８−２１５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、患者がＣｄｃ７キナーゼ阻害剤での膵臓癌治療に応答する可能性を特定するのを可能にすることができる予測マーカーまたはマーカーを提供すること、及びＣｄｃ７キナーゼ阻害剤での膵臓癌に罹患している対象を治療するための治療方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）を有する膵臓癌が、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異を有さない膵臓癌と比較して、Ｃｄｃ７キナーゼ阻害剤、化学構造：
【００１５】
【化２】
2020508675.tif 000003
【００１６】
を有する２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物に十分に応答することを見出した。本発明者らは、さらなる研究を実施し、本発明を完成させた。従って、本発明は、以下に関する。
【００１７】
１．患者が、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測する方法であって、化合物１が、構造：
【００１８】
【化３】
2020508675.tif 000004
【００１９】
を有し、
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測するステップと、を含む方法、
２．  ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者に投与される治療剤として、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を特定するステップと、化合物１が、構造：
【００２０】
【化４】
2020508675.tif 000005
【００２１】
を有し、
ステップ（３）：前記患者に治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を投与するステップと、を含む膵臓癌を有する患者を治療する方法、
３．前記患者が、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させることによって、膵臓癌を有する患者を治療する方法であって、化合物１が、構造：
【００２２】
【化５】
2020508675.tif 000006
【００２３】
を有し、
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２−１）：前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳである場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する向上していない可能性を予測し、
前記患者を化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物が投与される患者群から除外するステップと、
ステップ（２−２）：前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳでない場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測し、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記患者に投与するステップと、を含む方法、
４．１の方法において、
ステップ（１’）：前記患者由来の試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２’）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）と組み合わされたＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答するさらに増加した可能性を予測するステップと、をさらに含む方法、
５．２または３の方法において、
ステップ（１’）：前記患者由来の試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２’）またはステップ（２−２’）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）と組み合わされたＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答するさらに増加した可能性を予測するステップと、を含む方法、
３’．前記患者が膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させることによって膵臓癌を有する患者を治療する方法であって、
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２）：２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与が、前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳである場合、前記患者が膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させないことを予測するステップと、化合物１が、構造：
【００２４】
【化６】
2020508675.tif 000007
【００２５】
を有し、
ステップ（３）：化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与が、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させないことが予測される患者を、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物が投与される患者群から除外するステップと、
ステップ（４）：化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を、野生型ＫＲＡＳではないＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を有する前記患者に投与するステップと、を含む方法、
５’．２、３または３’の方法であって、
ステップ（１’）：前記患者由来の試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２’）またはステップ（２−２’）：化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与が、前記患者のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が野生型ＫＲＡＳであることと組み合わされて、前記患者のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態が野生型Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４である場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を向上させないことを予測するステップと、
ステップ（４’）：化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を、野生型Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４ではないＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を有する前記患者に投与するステップと、を含む方法。
【００２６】
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を含む遺伝子突然変異の状態の決定は、当該技術分野に周知の方法を用いて、例えば、患者における遺伝子突然変異の状態を決定するステップが、前記患者から試料を採取し、次いで、前記試料の遺伝子突然変異の状態を決定することを含む、インビトロ方法によって行われ得る。前記試料は、例えば、血清、全新鮮血、末梢血単核細胞、凍結全血、新鮮血漿、凍結血漿、尿、唾液、皮膚、毛包、骨髄、腫瘍組織、腫瘍生検、または保管されたパラフィン包埋腫瘍組織のうちの少なくとも１つを含み得る。
【００２７】
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異を含む遺伝子突然変異の状態は、例えば、ＫＲＡＳ遺伝子のゲノムＤＮＡ、タンパク質、及び／またはｍＲＮＡ転写物のレベルであり得る。
【００２８】
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異を含む、本明細書に記載される任意の遺伝子突然変異の決定は、（ａ）ＰＣＲ、（ｂ）ＲＴ−ＰＣＲ、（ｃ）ＦＩＳＨ、（ｄ）ＩＨＣ、（ｅ）免疫検出法、（ｆ）ウェスタンブロット、（ｇ）ＥＬＩＳＡ、（ｈ）ラジオイムノアッセイ、（ｉ）免疫沈降、（ｊ）ＦＡＣＳ、（ｋ）ＨＰＬＣ、（ｌ）表面プラズモン共鳴、（ｍ）光学分光、及び（ｎ）質量分析を含む群から選択される方法を用いて行われ得る。ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在は、ジデオキシシーケンシング、パイロシーケンシング、ＰＹＲＯＭＡＲＫ（登録商標）、ＫＲＡＳアッセイ、及び対立遺伝子特異的なＰＣＲアッセイを含む、任意のシーケンシング方法によってさらに検出することができる。
【００２９】
ＫＲＡＳ遺伝子の決定は、当該技術分野で公知のキット、例えば、ＲＡＳＫＥＴキット（商品名、ＭＥＢＧＥＮ）を用いて検出され得る。
【００３０】
本発明はまた、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するための成分を含む、患者が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測するのに有用であり得る診断試薬キットを提供する。そのキットは、Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するための成分をさらに含み得る。そのキットは、ＫＲＡＳ、Ｔｐ５３、及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）突然変異の状態を決定するための説明書をさらに含むことができる。
【００３１】
本発明はまた、（ａ）ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するための成分と、（ｂ）治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物と、を含む、膵臓癌を有する患者を治療するのに有用であり得るキットを提供する。前記キットは、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）が患者に存在する場合、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記患者に投与するための説明書をさらに含み得る。前記キットは、膵臓癌についてＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するための成分をさらに含み得る。
【００３２】
本発明はまた、患者に治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を投与することを含む、それを必要とする前記患者における膵臓癌を治療するための方法を提供し、前記膵臓癌は、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）を含む。一態様では、前記がんは、ＫＲＡＳが突然変異した膵臓癌であり、前記がんは、Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）をさらに含む。
【発明の効果】
【００３３】
本発明の方法によって、膵臓癌を有する患者の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での治療に対する感受性の正確な予測が期待され得る。本発明の方法によって、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物に十分に応答する可能性が高い膵臓癌患者の事前選択が行われ得る。これは、患者の治療成功の可能性を増加させ、患者を成功する可能性が低い治療の負荷に供する可能性を低減し、医療資源の使用における向上した効率をさらに促進する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ＫＲＡＳ突然変異型の膵臓腫瘍及びＫＲＡＳ非突然変異型（ｗｔ）の膵臓腫瘍における化合物１半水和物のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本発明は、治療の前またはそれと同時に、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での療法への耐性または感受性を予測するためのマーカーとしてのＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態の使用、そのような耐性またはそのような感受性を有する患者を治療する方法に加えて、それに関連する治療レジメンに関する。
【００３６】
具体的には、本発明者らは、Ｃｄｃ７キナーゼ阻害剤、２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（化合物１）及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物でのインビトロ及びインビボの研究を実施し、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態（複数可）を有する膵臓癌が、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異を有さない膵臓癌と比較して、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物に対してより感受性であり得ることを見出した。
【００３７】
一態様では、本発明は、患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定することを含む、患者が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測する方法を提供する。
【００３８】
一実施形態では、本発明の予測方法は、以下のステップ：
ステップ（１）：患者由来の試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を決定するステップと、
ステップ（２）：前記患者がＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）の存在を有する場合、前記患者が前記膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を予測するステップと、を含む。
【００３９】
ステップ（１）において、膵臓癌患者から採取された試料のＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態が決定される。
本明細書において、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異は、単一の対立遺伝子における突然変異及び両方の対立遺伝子における突然変異を包含する。ＫＲＡＳ遺伝子突然変異が両方の対立遺伝子において見られる場合、各対立遺伝子における遺伝子突然変異は、同じでも異なってもよい。
【００４０】
膵臓癌は、例えば、膵管癌または膵内分泌腫瘍であり得る。
【００４１】
ステップ（１）に使用される試料の例は、これらに限定されないが、血清、全新鮮血、末梢血単核細胞、凍結全血、新鮮血漿、凍結血漿、尿、唾液、皮膚、毛包、骨髄、腫瘍組織、腫瘍生検、または保管されたパラフィン包埋腫瘍組織を含む、生物学的試料であり得る。試料は、好ましくは、膵臓癌細胞を含む腫瘍組織または腫瘍生検である。
【００４２】
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態は、例えば、ＫＲＡＳ遺伝子のゲノムＤＮＡ、タンパク質、及び／またはｍＲＮＡ転写物のレベルであり得る。好ましくは、ＫＲＡＳ遺伝子における突然変異の存在または不在は、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡ転写物のレベルで決定される。
【００４３】
ＫＲＡＳ突然変異を含む遺伝子突然変異を決定するための方法は、当該技術分野において周知である。そのような方法の例には、これらに限定されないが、ＲＦＬＰ（制限断片長多型）法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（一本鎖ＤＮＡ高次構造多型）法、ＡＳＯ（対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチド）ハイブリダイゼーション法、配列決定法、ＡＲＭＳ（増幅屈折突然変異系）法、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法、ＲＮＡｓｅ  Ａ切断法、ＤＯＬ（色素標識オリゴヌクレオチドライゲーション）法、ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ法、プライマー伸長法、インベーダー法、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ−ＡＲＭＳ法、Ｆ−ＰＨＦＡ法、パイロシーケンス法、ＢＥＡＭｉｎｇ法、ＲＴ−ＰＣＲ、ＦＩＳＨ、ＩＨＣ、免疫検出法、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降、ＦＡＣＳ、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光、及び質量分析が含まれる。
【００４４】
ステップ（１）において検出されるＫＲＡＳ遺伝子突然変異は特に限定されないが、それは好ましくはミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異である。そのようなＫＲＡＳ遺伝子突然変異の例には、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン５、コドン１２、コドン１３、コドン１４、コドン１８、コドン１９、コドン２３、コドン３１、コドン３８、コドン５９、コドン６１、コドン６２、コドン９７、コドン１１７、コドン１１８、コドン１１９、コドン１２１、コドン１４０、コドン１４３、コドン１４５、コドン１４６、コドン１５１、コドン１５３、コドン１６８、コドン１７１、コドン１８０、コドン１８５、コドン１８７、コドン１８８におけるミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異が含まれる。より具体的なその例には、これらに限定されないが、ｐ．Ｙ５Ｎ、ｐ．Ｇ１２Ａ、ｐ．Ｇ１２Ｃ、ｐ．Ｇ１２Ｄ、ｐ．Ｇ１２Ｒ、ｐ．Ｇ１２Ｓ、ｐ．Ｇ１２Ｖ、ｐ．Ｇ１３Ｃ、ｐ．Ｇ１３Ｄ、ｐ．Ｖ１４Ｉ、ｐ．Ａ１８Ｎ、ｐ．Ｌ１９Ｆ、ｐ．Ｌ２３Ｒ、ｐ．Ｑ３１＊、ｐ．Ｄ３８Ｎ、ｐ．Ａ５９Ｇ、ｐ．Ａ５９Ｔ、ｐ．Ｑ６１Ｈ、ｐ．Ｑ６１Ｋ、ｐ．Ｅ６２Ｙ、ｐ．Ｑ６１Ｌ、ｐ．Ｒ９７Ｉ、ｐ．Ｋ１１７Ｎ、ｐ．Ｍ１１８Ｖ、ｐ．Ｄ１１９Ｎ、ｐ．Ｐ１２１Ｈ、ｐ．Ｐ１４０Ｈ、ｐ．Ｄ１４３Ｇ、ｐ．Ｓ１４５Ｌ、ｐ．Ａ１４６Ｔ、ｐ．Ｇ１５１Ａ、ｐ．Ｄ１５３Ｖ、ｐ．Ｅ１６８ｆｓ、ｐ．Ｉ１７１Ｍ、ｐ．Ｋ１８０ｄｅｌ、ｐ．Ｋ１８５ｆｓ、ｐ．Ｉ１８７Ｖ、ｐ．Ｍ１８８Ｖなどが含まれる。コドン１２におけるＫＲＡＳ遺伝子突然変異（好ましくはミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異）の状態が好ましくは検出される。コドン１２におけるＫＲＡＳ突然変異のより具体的な例には、これらに限定されないが、ｐ．Ｇ１２Ａ、ｐ．Ｇ１２Ｃ、ｐ．Ｇ１２Ｄ、ｐ．Ｇ１２Ｒ、ｐ．Ｇ１２Ｓ、ｐ．Ｇ１２Ｖなどが含まれる。
【００４５】
実施例に示されるように、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）を有する膵臓癌は、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異を含まない膵臓癌と比較して、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物に対してより感受性であることが期待され得る。これらの結果に基づき、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異のうちの少なくとも１つの存在が患者において（膵臓癌患者由来の試料において）検出される場合（すなわち、ＫＲＡＳ突然変異型の場合）、前記患者及び前記患者における膵臓癌が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性が予測され得る（すなわち、前記患者及び前記患者における膵臓癌は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性が高いことが予測され得る）。ＫＲＡＳ遺伝子突然変異の存在が患者において（膵臓癌患者由来の試料において）検出されない場合（すなわち、ＫＲＡＳ非突然変異型（野生型ＫＲＡＳ）の場合）、前記患者及び前記患者における膵臓癌が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に応答しない可能性が予測され得る（すなわち、前記患者及び前記患者における膵臓癌は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性が低いことが予測され得る）。
【００４６】
膵臓癌を有する患者は、前記患者が、上記の本発明の予測方法に従って、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を有すると予測される場合（すなわち、前記患者及び前記患者における膵臓癌は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性が高いことが予測され予測される場合）（すなわち、少なくとも１つのＫＲＡＳ遺伝子突然変異（ＫＲＡＳ突然変異型）が膵臓癌患者において検出される場合）、治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を投与することによって治療され得る。本発明の前述の予測方法において、患者が、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与によって、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩への治療的応答の向上した可能性を有すると予測されない場合（すなわち、前記患者及び前記患者における膵臓癌は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性が低いことが予測される場合）（すなわち、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異が患者において検出されない、ＫＲＡＳ非突然変異型（野生型ＫＲＡＳ）の場合）、前記患者は、投与対象がん患者群から除外され得、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物は、前記患者が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を有することが予測される膵臓癌患者（すなわち、少なくとも１つのＫＲＡＳ遺伝子突然変異（ＫＲＡＳ突然変異型）が検出される膵臓癌患者）に投与され得、これによってＫＲＡＳ突然変異型膵臓癌を有する患者は、より高い信頼性で治療され得る。本発明はまた、そのような膵臓癌患者の治療方法を提供する。膵臓癌患者は、低応答者である可能性が高い膵臓癌患者を投与対象群から除外し、高応答者である可能性がより高い膵臓癌患者を選択し、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を高応答者である可能性が高い膵臓癌患者に投与することによって、より確実に治療され得る。
【００４７】
一態様では、本発明の予測方法は、患者由来の試料のＴｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するステップをさらに含み得る。Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４の決定のための試料の例には、ステップ（１）で使用される試料などが含まれる。
【００４８】
この態様では、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異（複数可）に加えて、Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異（複数可）の存在が患者において（膵臓癌患者由来の試料において）検出される場合、前記患者及び前記患者における膵臓癌が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での治療に治療的に応答するさらに増加した可能性があることが予測され得る（すなわち、前記患者及び前記患者における膵臓癌は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性がさらに高いことが予測され得る）。
【００４９】
化合物１は、以下の化学構造を有する。
【００５０】
【化７】
2020508675.tif 000008
【００５１】
化合物１の互変異性体または化合物１の薬学的に許容される塩もしくは水和物も本発明に包含される。化合物１が互変異性体を有する場合、各異性体も本発明に包含される。
【００５２】
化合物１及び／またはその互変異性体は、薬学的に許容される塩の形態で使用することができる。薬学的に許容される塩の例には、無機塩基を有する塩、有機塩基を有する塩、無機酸を有する塩、有機酸を有する塩、及び塩基性または酸性アミノ酸を有する塩が含まれる。
【００５３】
化合物１及び／またはその互変異性体は、水和物（例えば、半水和物）、非水和物、溶媒和物、または非溶媒和物であり得、その全ては本発明に包含される。
【００５４】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物またはその結晶形態は、それらの全体が全ての目的について参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公報第ＷＯ２０１１／１０２３９９号、米国特許第８，７２２，６６０号、米国特許第８，９２１，３５４号、米国特許第８，９３３，０６９号、米国特許公報第ＵＳ２０１５／１５８８８２号、２０１６年３月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／３１４０８０号、及び２０１６年７月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／３６７８４２号に記載される生成方法、またはそれらに類似する方法に従って得ることができる。
【００５５】
化合物１の異性体（例えば、光学異性体、立体異性体、位置異性体、回転異性体など）及びその混合物も本発明に包含される。例えば、化合物１が光学異性体を有する場合、回転異性体から分解された光学異性体も本発明に包含される。これらの異性体は、それ自体が知られている合成技法及び分離技法（例えば、濃縮、溶媒抽出、カラムクロマトグラフィー、再結晶化）によって単一の生成物として得ることができる。
【００５６】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物は、結晶の形態（例えば、結晶形態Ａ、結晶形態Ｉなど）であり得、前記結晶の結晶形態は、単一または複数であり得、その両方は、化合物１に包含される。前記結晶は、２０１６年３月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／３１４０８０号、２０１６年７月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／３６７８４２号、ならびに／または本明細書における参照例１及び２に記載される方法によって生成することができる。
【００５７】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物は、医薬品として、そのまままたは薬学的に許容される担体との混合物で前述の患者に経口または非経口投与され得る。
【００５８】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む医薬品（「本発明における使用のための医薬品」と略されることもある）を以下で詳細に説明する。
【００５９】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の経口投与のための本発明における使用のための医薬品の剤形の例には、カプセルなどの経口調製物が含まれる。
【００６０】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含み、充填剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記充填剤は、マンニトールまたはラクトースである。いくつかの実施形態では、前記充填剤は、医薬品の４９〜９０重量％の範囲の量で存在する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含み、滑剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素である。いくつかの実施形態では、前記滑剤は、医薬品の１〜４重量％の範囲の量で存在する。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の混合物を含む。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物、ならびにマンニトール及びラクトースから選択される少なくとも１つの充填剤を含む。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物、ならびにマンニトールを含み、前記マンニトールは、医薬品の４９〜９０重量％の範囲の量で存在する。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物、ならびにラクトースを含み、前記ラクトースは、医薬品の４９〜９０重量％の範囲の量で存在する。
【００６６】
上記実施形態のいずれにおいても、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む本発明における使用のための医薬品は、コロイド状二酸化ケイ素をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記コロイド状二酸化ケイ素は、医薬品の１〜４重量％の範囲の量で存在する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む医薬品は、カプセルの形態である。いくつかの実施形態では、前記カプセルは、少なくとも１つの充填剤及び少なくとも１つの滑剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前記充填剤は、マンニトールである。いくつかの実施形態では、前記滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、カプセルの形態の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む医薬品は、カプセルシェルを除く、前記カプセルの重量に対して５〜１５重量％の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物、８５〜９５重量％の充填剤、ならびに０．５〜２％の滑剤を含む。いくつかの実施形態では、前記充填剤は、マンニトールである。いくつかの実施形態では、前記滑剤は、コロイド状二酸化ケイ素である。いくつかの実施形態では、前記カプセルシェルは、前記カプセルの総重量に対して２０〜３０重量％を含む。
【００６９】
本発明における使用のための医薬品中の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の量は、医薬品の形態に応じて変動するが、それは、一般的には、医薬品全体の重量に対して、０．０１〜９９．９重量％、例えば、２〜８５重量％、例えば、５〜７０重量％の範囲の量で存在する。
【００７０】
本発明における使用のための医薬品中の添加剤の量は、医薬品の形態に応じて変動するが、それは、一般的には、医薬品全体の重量に対して、１〜９９．９重量％、例えば、１０〜９０重量％の範囲の量で存在する。
【００７１】
化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物は、安定であり、低い毒性を有し、安全に使用することができる。１日用量は、患者の状態及び体重、投与経路などに応じて変動するが、例えば、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の場合、本明細書に記載される医薬品の形態で患者に治療のために経口投与され得る。
【００７２】
いくつかの実施形態では、本発明における使用のための医薬品は、１０〜２００ｍｇの範囲の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の用量強度を含む。例えば、いくつかの実施形態では、医薬品は、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、または２００ｍｇの化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の用量強度を含む。いくつかの実施形態では、成人（体重約６０ｋｇ）に投与される１日用量は、１０〜２００ｍｇの範囲である。いくつかの実施形態では、成人に投与される１日用量は、１日１回または２回につき経口で３０ｍｇである。
【００７３】
本発明はまた、少なくとも１つのＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を検出するための試薬を含む、患者が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性を予測するための診断試薬を提供する。前記診断試薬は、突然変異（複数可）の状態を決定するための成分としてキットに含まれ得、前記キットは、突然変異（複数可）の状態を決定するための診断試薬を使用するための説明書をさらに含み得る。
【００７４】
少なくとも１つのＫＲＡＳ遺伝子突然変異の状態を検出するための試薬の例には、（１）ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムもしくはｍＲＮＡ配列における少なくとも１つの突然変異（好ましくは、ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムもしくはｍＲＮＡ配列におけるＯＲＦ）を特異的に検出することができる核酸プローブ、または（２）ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムもしくはｍＲＮＡ配列における少なくとも１つの突然変異（好ましくは、ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムもしくはｍＲＮＡ配列におけるＯＲＦ）を含有する領域を特異的に増幅することができるプライマーなどが含まれる。
【００７５】
検出されるＫＲＡＳ遺伝子突然変異は特に限定されないが、それは好ましくはミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異である。そのようなＫＲＡＳ遺伝子突然変異の例には、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン５、コドン１２、コドン１３、コドン１４、コドン１８、コドン１９、コドン２３、コドン３１、コドン３８、コドン５９、コドン６１、コドン６２、コドン９７、コドン１１７、コドン１１８、コドン１１９、コドン１２１、コドン１４０、コドン１４３、コドン１４５、コドン１４６、コドン１５１、コドン１５３、コドン１６８、コドン１７１、コドン１８０、コドン１８５、コドン１８７、コドン１８８におけるミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異が含まれる。より具体的なその例には、これらに限定されないが、ｐ．Ｙ５Ｎ、ｐ．Ｇ１２Ａ、ｐ．Ｇ１２Ｃ、ｐ．Ｇ１２Ｄ、ｐ．Ｇ１２Ｒ、ｐ．Ｇ１２Ｓ、ｐ．Ｇ１２Ｖ、ｐ．Ｇ１３Ｃ、ｐ．Ｇ１３Ｄ、ｐ．Ｖ１４Ｉ、ｐ．Ａ１８Ｎ、ｐ．Ｌ１９Ｆ、ｐ．Ｌ２３Ｒ、ｐ．Ｑ３１＊、ｐ．Ｄ３８Ｎ、ｐ．Ａ５９Ｇ、ｐ．Ａ５９Ｔ、ｐ．Ｑ６１Ｈ、ｐ．Ｑ６１Ｋ、ｐ．Ｅ６２Ｙ、ｐ．Ｑ６１Ｌ、ｐ．Ｒ９７Ｉ、ｐ．Ｋ１１７Ｎ、ｐ．Ｍ１１８Ｖ、ｐ．Ｄ１１９Ｎ、ｐ．Ｐ１２１Ｈ、ｐ．Ｐ１４０Ｈ、ｐ．Ｄ１４３Ｇ、ｐ．Ｓ１４５Ｌ、ｐ．Ａ１４６Ｔ、ｐ．Ｇ１５１Ａ、ｐ．Ｄ１５３Ｖ、ｐ．Ｅ１６８ｆｓ、ｐ．Ｉ１７１Ｍ、ｐ．Ｋ１８０ｄｅｌ、ｐ．Ｋ１８５ｆｓ、ｐ．Ｉ１８７Ｖ、ｐ．Ｍ１８８Ｖなどが含まれる。コドン１２におけるＫＲＡＳ突然変異（好ましくはミスセンス突然変異またはナンセンス突然変異）の状態が好ましくは検出される。コドン１２におけるＫＲＡＳ突然変異のより具体的な例には、これらに限定されないが、ｐ．Ｇ１２Ａ、ｐ．Ｇ１２Ｃ、ｐ．Ｇ１２Ｄ、ｐ．Ｇ１２Ｒ、ｐ．Ｇ１２Ｓ、ｐ．Ｇ１２Ｖなどが含まれる。
【００７６】
本明細書において、「核酸プローブによるＫＲＡＳ突然変異の特異的検出」は、核酸プローブが、ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムまたはｍＲＮＡにおける特定の突然変異を含有する領域にハイブリダイズし、対応する野生型領域にハイブリダイズしないことを意味する。そのようなハイブリダイゼーションの条件は、当業者によって適切に選択され得る。ハイブリダイゼーションの条件として、例えば、低ストリンジェントな条件が言及され得る。低ストリンジェントな条件は、例えば、ハイブリダイゼーション後の洗浄における、４２℃、５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳの条件、好ましくは５０℃、２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ条件である。より好ましいハイブリダイゼーションの条件は、高ストリンジェントな条件を含む。高ストリンジェントな条件は、例えば、６５℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳである。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を及ぼす因子は、温度、塩濃度などのような複数の因子を含み、当業者は、これらの因子を選択することによって同様のストリンジェンシーを実現することができる。
【００７７】
（１）の核酸プローブは、好ましくは、核酸プローブによって標的化された特定の突然変異を含有するヒトＫＲＡＳをコードするゲノムまたはｍＲＮＡ（ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡ）についての親和性、及び前記突然変異を含まない野生型ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムまたはｍＲＮＡ（ヒトＫＲＡＳ野生型ゲノムまたはｍＲＮＡ）についての親和性との間の差を示し、適切な条件（例えば、高ストリンジェントな条件）下でヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡにハイブリダイズするが、ヒトＫＲＡＳ野生型ゲノムまたはｍＲＮＡにハイブリダイズしない。
【００７８】
（１）の核酸プローブは、例えば、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムもしくはｍＲＮＡ配列の連続部分配列（好ましくは、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムもしくはｍＲＮＡ配列におけるＯＲＦ）、または前記部分配列の相補配列を含有するポリヌクレオチドであり、前記部分配列は、少なくとも１つの突然変異を含有し、前記部分配列またはその相補配列は、少なくとも８、１０、１２、１４、１６、１８、または２０個のヌクレオチドの長さを有する。ヒトＫＲＡＳをコードするゲノムまたはｍＲＮＡ配列が知られており、膵臓癌に関連していることが指摘された前述のＫＲＡＳ突然変異も知られているので、当業者は、これらの情報に基づいてＫＲＡＳ突然変異の検出のための適切な核酸プローブを設計することができる。
【００７９】
上記（１）の核酸プローブは、ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはＤＮＡ／ＲＮＡキメラ、好ましくはＤＮＡであり得る。核酸は、二本鎖または一本鎖、好ましくは一本鎖であり得る。
【００８０】
核酸プローブがヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡ配列の連続部分配列（好ましくは、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡ配列におけるＯＲＦ）の相補配列を含有する場合、前記相補配列の相補性は、８０％〜１００％、好ましくは９０％〜１００％、より好ましくは１００％である。
【００８１】
核酸プローブに含有されるＫＲＡＳ突然変異型ゲノムもしくはｍＲＮＡ配列の連続部分配列、または前記部分配列の相補配列の長さは、８個以上のヌクレオチド、好ましくは１２、１４、１６、１８、または２０個以上のヌクレオチド（例えば、２５個以上のヌクレオチド）である。前記部分配列またはその相補配列の長さの上限は特に限定されないが、それは一般的には、突然変異の容易な合成及び高い検出感度の面から、１０００個以下のヌクレオチド、好ましくは１００個以下のヌクレオチド、より好ましくは５０個以下のヌクレオチド、さらに好ましくは３０個以下のヌクレオチドである。
【００８２】
核酸プローブの長さは、少なくとも８個以上のヌクレオチド、好ましくは１２、１４、１６、１８、または２０個以上のヌクレオチドである。本発明のポリヌクレオチドの長さの上限は特に限定されないが、それは一般的には、容易な合成の面から、１０００個以下のヌクレオチド、好ましくは１００個以下のヌクレオチド、より好ましくは５０個以下のヌクレオチド、さらに好ましくは３０個以下のヌクレオチドである。
【００８３】
核酸プローブは、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムもしくはｍＲＮＡ配列の連続部分配列（好ましくは、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムもしくはｍＲＮＡ配列におけるＯＲＦ）または前記部分配列の相補配列に加えて、任意の追加の配列を含有し得る。
【００８４】
加えて、核酸プローブは、適切な標識、例えば、放射性同位体（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓなど）、酵素（例えば、ベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼなど）、蛍光物質（例えば、フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネートなど）、発光物質（例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなど）、クエンチング物質などで標識され得る。
【００８５】
本明細書において、「プライマーによる突然変異の特異的増幅」は、プライマーセットが、ヒトゲノムＤＮＡの他の領域と区別可能な程度まで、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡ配列を含むＤＮＡにおける特定の突然変異を含有する領域をＰＣＲによって選択的に増幅することを意味する。
【００８６】
上記（２）のプライマーは、テンプレートとして、ヒトＫＲＡＳ突然変異型ゲノムまたはｍＲＮＡ配列を含むポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）を用いて、特定のＫＲＡＳ突然変異を含有することによって、選択された突然変異への相補鎖合成を開始することができるプライマーを含む。前記プライマーはまた、ＫＲＡＳ突然変異を含有するポリヌクレオチドにおいて、突然変異部位の３’側で複製起点を形成するためのプライマーとして表すことができる。プライマーのハイブリダイゼーション領域と突然変異部位との間の距離は任意である。それらの間の距離は、突然変異部位の塩基の解析方法に従って選択される任意の好ましい長さであり得る。例えば、ＤＮＡチップまたはダイレクトシーケンシングによる解析のためのプライマーとして、プライマーは、突然変異部位を含有する領域として、一般的には２５〜５００個、例えば、５０〜２００個のヌクレオチドの長さを有する増幅生成物をもたらすように設計することができる。当業者は、突然変異部位を含む周辺領域のＫＲＡＳゲノムまたはｍＲＮＡヌクレオチド配列に関する情報に基づいて、各解析方法に適したプライマーを設計することができる。上記（２）のプライマーを構成するヌクレオチド配列は、ヒトＫＲＡＳゲノムもしくはｍＲＮＡ配列の部分配列に完全に相補的なヌクレオチド配列、または前記部分配列の相補配列に限定されず、適切に修飾され得る。
【００８７】
上記（２）のプライマーは、ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはＤＮＡ／ＲＮＡキメラ、好ましくはＤＮＡであり得る。核酸は、二本鎖または一本鎖、好ましくは一本鎖であり得る。
【００８８】
上記（２）のプライマーがハイブリダイズすることができるヒトＫＲＡＳゲノムもしくはｍＲＮＡ配列またはその相補配列を含む核酸における領域の長さは、１２個以上のヌクレオチド、好ましくは１５個以上のヌクレオチド、より好ましくは１８個以上のヌクレオチド、さらに好ましくは２０個以上のヌクレオチド（例えば、２５個以上のヌクレオチド）である。ハイブリダイゼーション領域の長さの上限は特に限定されないが、それは一般的には、容易な合成の面から、１００個以下のヌクレオチド、好ましくは５０個以下のヌクレオチド、より好ましくは３０個以下のヌクレオチドである。
【００８９】
上記（２）のプライマーの長さは、少なくとも１２個のヌクレオチド、好ましくは１５個以上のヌクレオチド、より好ましくは１８個以上のヌクレオチド、さらに好ましくは２０個以上のヌクレオチドである。本発明のポリヌクレオチドの長さの上限は特に限定されないが、それは一般的には、容易な合成の面から、１００個以下のヌクレオチド、好ましくは５０個以下のヌクレオチド、より好ましくは３０個以下のヌクレオチドである。
【００９０】
上記（２）のプライマーは、ヒトＫＲＡＳゲノムもしくはｍＲＮＡ配列の連続部分配列、または前記部分配列の相補配列に加えて、任意の追加の配列を含有し得る。
【００９１】
プライマーは、適切な標識、例えば、放射性同位体（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓなど）、酵素（例えば、ベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼなど）、蛍光物質（例えば、フルオレスカミン、フルオレセインイソチオシアネートなど）、発光物質（例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなど）、クエンチング物質などで標識され得る。
【００９２】
本発明の診断試薬は、ＫＲＡＳ突然変異の状態の検出方法に従って、様々な酵素、酵素基質、緩衝剤などと組み合わされ得る。酵素の例には、ＤＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡリガーゼ、制限酵素などのような、上記突然変異の検出方法として例示される様々な解析方法に必要な酵素が含まれる。緩衝剤として、解析に使用される酵素の活性の維持にとって好ましい緩衝剤が適切に選択される。酵素基質として、例えば、相補鎖合成のための基質などが使用される。
【００９３】
本発明の診断試薬は、Ｔｐ５３及び／またはｐ１６Ｉｎｋ４遺伝子突然変異の状態を決定するための手段をさらに含み得る。
【００９４】
本発明の診断試薬を使用して、患者が化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する可能性は、本発明の予測方法に従って容易に予測され得る。
【００９５】
本発明はまた、本発明の上記診断試薬と、治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物と、を含む、膵臓癌を有する患者の治療における使用のためのキットを提供する。化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物は、治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む医薬品または薬学的組成物として提供され得る。
【００９６】
本発明のキットは、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異が患者に存在する場合、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記患者に投与するための説明書をさらに含み得る。
【００９７】
本発明のキットを使用して、患者が、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む膵臓癌治療に治療的に応答する増加した可能性を有する膵臓癌を有する患者（すなわち、化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での膵臓癌治療に治療的に十分に応答する可能性が高いことが予測される膵臓癌を有する患者）（すなわち、ＫＲＡＳ遺伝子突然変異のうちの少なくとも１つを有することが検出された膵臓癌患者、ＫＲＡＳ突然変異型）は、本発明の上記予測方法に従って、容易に選択され、治療有効量の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を予測されたがん患者に投与することによって治療され得る。
【実施例】
【００９８】
本発明は、実施例、実験例、及び製剤例を参照することによって以下でより詳細に説明され、これらは限定的と解釈されるべきでなく、本発明は、本発明の範囲内で変更され得る。
【００９９】
以下の実施例において、「室温」は、一般的には約１０℃〜約３５℃を示す。混合溶媒の比は、別段の指定がない限り、体積混合比を示す。別段の指定がない限り、％は、重量％を示す。
【０１００】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、塩基性シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、アミノプロピルシランを結合したシリカゲルの使用を意味する。１Ｈ−ＮＭＲ（プロトン核磁気共鳴スペクトル）を、フーリエ変換ＮＭＲによって測定した。ヒドロキシル基、アミノ基などにおけるプロトンの非常に緩やかなピークは記載されていない。
【０１０１】
実施例及び実験例における略語は、この技術分野で現在使用される一般的な例に従い、例えば、以下を意味する。
ｓ：一重項
ｄ：二重項
ｔ：三重項
ｍ：多重項
ｂｒｓ：ブロードな一重項
Ｊ：結合定数
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
Ｈｚ：ヘルツ
１Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウム
【０１０２】
参照例１
ＤＭＳＯ／エタノール／水を用いる化合物１半水和物結晶形態Ｉの調製
２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−イル］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（粗製化合物１）を、米国特許第８，７２２，６６０（Ｂ２）号の実施例１７８に記載される方法に従って得た。粗製化合物１（３００ｇ）をＤＭＳＯ（１５６０ｍＬ）及びエタノール（９３０ｍＬ）に懸濁した。次いで、懸濁液を７５℃〜８５℃まで加熱することによって溶解した。溶解の確認後、粉塵除去濾過を行い、残渣をＤＭＳＯ（１０４０ｍＬ）及びエタノール（６２０ｍＬ）の混合溶液で洗浄した。粉塵除去濾過後の濾液及び洗浄液を組み合わせ、７５℃〜８５℃で撹拌した。沈殿なしの確認後、水（５５８０ｍＬ）を１時間以上同じ温度で滴下した。滴下後、混合物を同じ温度で１時間以上撹拌した。結晶の沈殿の確認後、混合物を２０℃〜３０℃まで冷却させ、２時間以上撹拌した。撹拌後、結晶を濾過によって収集し、水（３０００ｍＬ）及びアセトン（１５００ｍＬ）で連続的に濾過し、湿潤結晶を得た。得られた湿潤結晶を減圧下６０℃で乾燥させ、化合物１を結晶（化合物１半水和物結晶形態Ａ、２０７．３ｇ、収率６９．１％）として得た。得られた化合物１半水和物結晶形態Ａ結晶（１９３．３ｇ）をＪｅｔ  Ｍｉｌｌにおいて粉砕して、結晶粉末（粉砕生成物、形態Ａ結晶、１８８．９ｇ）を得た。得られた結晶は、２．５％の水を含有し、ＸＲＰＤパターンによって２１．５、１０．９、７．３、５．４、５．０、４．９、４．５、３．７、３．４、３．３、及び３．０オングストロームのｄ値（またはｄ−スペーシング）の特定のピークで特徴付けられた。
１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３９−１．４８（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．５８（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｔ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），１．８７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），２．２４−２．３６（ｍ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），２．５３−２．６５（ｍ，２Ｈ），２．８０−２．９７（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｓ，１Ｈ），８．０４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）．
Ｃ１７Ｈ１９Ｎ５Ｏ１．５Ｓの解析計算：Ｃ、５８．２７、Ｈ、５．７５、Ｎ、１９．９８、Ｏ、６．８５、Ｓ、９．１５。実験：Ｃ、５８．２２、Ｈ、５．８０、Ｎ、２０．０３、Ｓ、９．０９。
【０１０３】
Ｘ線粉末回折パターンを、５０ｍＡ及び４０ｋＶで生成されたＣｕ−Ｋα放射線でＲｉｇａｋｕ  Ｕｌｔｉｍａ  ＩＶ（Ｒｉｇａｋｕ、東京、日本）を用いて収集した。試料をシリコンプレート上に室温で配置した。データを２°〜３５°（２θ）から０．０２°のステップサイズ及び６°／分の走査速度で収集した。
【０１０４】
参照例２
ＤＭＳＯ／アセトン／水を用いる化合物１半水和物結晶形態Ｉの調製
【０１０５】
２−［（２Ｓ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクタ−２−ｙｌ］−６−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（粗製化合物１）を、米国特許第８，７２２，６６０  Ｂ２号の実施例１７８に記載される方法に従って得た。粗製化合物１（３０ｇ）を、ＤＭＳＯ（３００ｍＬ）に２０℃〜３０℃で溶解した。溶解の確認後、粉塵除去濾過を行い、濾液を得た。残渣をＤＭＳＯ（６０ｍＬ）で洗浄し、洗浄液を得た。アセトン（１５０ｍＬ）及び水（１５０ｍＬ）の混合溶液を４５℃〜５５℃で撹拌し、４５ｍＬの濾液を１０〜３０分間同じ温度で滴下した。滴下後、混合物を同じ温度で１０分間撹拌した。混合物に、１５ｍＬの濾液を３〜１０分間同じ温度で滴下した。滴下後、混合物を同じ温度で１時間以上撹拌した。結晶の沈殿の確認後、濾液の残りを１〜２時間同じ温度で滴下した。滴下後、洗浄液を同じ温度で滴下した。滴下後、混合物を同じ温度で１時間撹拌した。撹拌後、混合物を２０℃〜３０℃まで冷却させ、１時間以上撹拌した。撹拌後、結晶を濾過によって収集し、水（１５０ｍＬ）及びアセトン（１５０ｍＬ）で連続的に濾過し、湿潤結晶を得た。得られた湿潤結晶を減圧下６０℃で乾燥させ、化合物１を結晶（化合物１半水和物結晶形態Ｉ、２５．９ｇ、収率８６．３％）として得た。
【０１０６】
実施例１
患者由来の腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）を保有する雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスにおける化合物１半水和物のインビボ抗腫瘍活性
材料及び方法
【０１０７】
ＰＤＸモデル
ＣｒｏｗｎＢｉｏ国際Ｒ＆Ｄセンター（Ｃｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、北京、中国）のＰＤＸモデルを化合物１半水和物のインビボ有効性研究に使用した。ＰＤＸモデルには、ＰＡ０７８７、ＰＡ１１６８、ＰＡ１３３８、ＰＡ１３８３、ＰＡ１６４４、ＰＡ３０１３、ＰＡ３０６５、ＰＡ３１２６、ＰＡ１１７０、ＰＡ１３５７、ＰＡ３１３７、ＰＡ１１９４、ＰＡ１１９８、ＰＡ１２８０、ＰＡ１３０１、ＰＡ１３０６、ＰＡ１３９０、ＰＡ１４０５、ＰＡ１４５９、ＰＡ３０６０、ＰＡ６２３７、ＰＡ６２３８、ＰＡ６２５８、ＰＡ６２５９、及びＰＡ６２６２を含む、２５個の膵臓モデルが含まれる。
【０１０８】
有効性試験
選択されたＰＤＸ腫瘍で接種されたシードマウス由来の腫瘍断片を採取し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスへの接種に使用した。各マウスの右横腹に１つの腫瘍断片（直径２〜３ｍｍ）を皮下接種した。平均腫瘍サイズが約２００〜２５０ｍｍ３に到達したとき治療を開始した。各モデルについて、６匹の腫瘍保有マウスを２群にランダム化した。マウスに、ビヒクル（０．５％重量：体積メチルセルロース）または化合物１半水和物形態Ａ結晶（６０ｍｇ／ｋｇ、Ｂｉｄ、ｐｏ、２１日、３日オン４日オフ）のいずれかを経口投与した。
【０１０９】
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）％をエンドポイントとして取り、腫瘍増殖を遅延させることができるか、またはマウスを治癒することができる時点を決定した。腫瘍サイズは、カリパスを使用して２次元で週２回測定し、体積は、下記式を用いてｍｍ３で表し、
Ｖ＝０．５ａ×ｂ２、
式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。％ＴＧＩは下記式を用いて計算した。
％ＴＧＩ＝（１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０））＊１００
【０１１０】
Ｔｉは、測定日の治療群の算術平均腫瘍体積とし、Ｔ０は、０日目の治療群の算術平均腫瘍体積とし、Ｖｉは、測定日の対照群の算術平均腫瘍体積とし、Ｖ０は、０日目の対照群の算術平均腫瘍体積とする。
【０１１１】
統計
各ＰＤＸモデルにおけるＫＲＡＳの突然変異データをＣｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．のデータベースから得た。ＫＲＡＳ突然変異型ＰＤＸモデルとＫＲＡＳ野生型ＰＤＸモデルとの間で、スチューデントｔ検定を用いて、化合物１治療の％ＴＧＩについて統計解析を行った。差は、ｐ≦０．０５で有意とみなした。
【０１１２】
結果及び結論
化合物１半水和物は、ＰＡ０７８７、ＰＡ１１６８、ＰＡ１３３８、ＰＡ１３８３、ＰＡ１６４４、ＰＡ３０１３、ＰＡ３０６５、ＰＡ３１２６、ＰＡ１１７０、ＰＡ１３５７、ＰＡ３１３７、ＰＡ１１９４、ＰＡ１１９８、ＰＡ１２８０、ＰＡ１３０１、ＰＡ１３０６、ＰＡ１３９０、ＰＡ１４０５、ＰＡ１４５９、ＰＡ３０６０、ＰＡ６２３７、ＰＡ６２３８、ＰＡ６２５８、ＰＡ６２５９、及びＰＡ６２６２  ＰＤＸモデルを含む、膵臓モデル（２５個中２２個）において、有意な抗腫瘍有効性（＞６０％腫瘍増殖阻害）を示した。相関試験は、ＫＲＡＳ突然変異型膵臓腫瘍が、ＫＲＡＳ野生型と比較して、化合物１半水和物に対してより感受性であったことを明らかにした（図１）。これらの結果に基づき、化合物１半水和物は、ＫＲＡＳ突然変異型腫瘍についてより効果的であることが期待され得る。
【０１１３】
実施例２
マウスにおける化合物１の試験
ＫＲＡＳ突然変異膵臓癌における化合物１の効果をインビボで理解するために、化合物１及び／またはその互変異性体または薬学的に許容される塩もしくは水和物をマウスモデルに投与する。マウスモデルは、Ｃｕｒｒｙ．２０１３．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ；３（８）９０８−２１、Ｋｉｓｓｉｌ．２００７．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６７（１７）：８０８９−８０９４、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｒｉｖｅｒａ．２０１４．Ｎａｔｕｒｅ．５１６：４２８−４４１、Ｓｈａｗ．２００７．Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．２１：６９４−７０７、ＵＳ２０１５０１５０８９２（Ａ１）、Ｔｕｖｅｓｏｎ．２００６．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６６：（１）２４２−２４７、Ｈｉｎｇｏｒａｎｉ．２００３．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．４：４３７−４５０、Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ．２００９．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．１６：３７９−３８９、Ｃｈｅｕｎｇ．２０１０．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２９（１２）：１８５７−１８６４に記載されている。マウスを化合物１及び／またはその互変異性体または薬学的に許容される塩もしくは水和物で治療する。個別の膵臓腫瘍を、治療の前及び治療の後にマイクロコンピュータ断層撮影（マイクロＣＴ）イメージングを用いて監視する。化合物１及び／またはその互変異性体または薬学的に許容される塩もしくは水和物での治療の長期的効果を解析するために、化合物１及び／またはその互変異性体または薬学的に許容される塩もしくは水和物の多用量レジメンが腫瘍保有マウスの生存を延長することができるかについて調査を行う。マウス（上に記載されるモデル）のコホートを使用して、腫瘍保有動物を４週間にわたって週１回治療し、生存率を監視する。
【産業上の利用可能性】
【０１１４】
本発明の方法によって、膵臓癌を有する患者の化合物１及び／またはその互変異性体またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物での治療に対する感受性の正確な予測が期待され得る。本発明の方法によって、化合物１及び／またはその互変異性体または薬学的に許容される塩もしくは水和物に十分に応答する可能性が高い患者の事前選択が行われることが期待される。
【０１１５】
本発明の実施形態のいくつかは上記に詳細に記載されているが、しかしながら、当業者にとって、本発明の教示及び利点から実質的に逸脱することなく、示された特定の実施形態に様々な修正及び変更を行うことが可能である。そのような修正及び変更は、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の趣旨及び範囲に包含される。
【図１】
2020508675.tif 000012
【国際調査報告】
2020508675.tif 000013
2020508675.tif 000014