(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）【化１】2020509068.tif 000199（式中、基は、本明細書において定義されるとおりである）に示される構造を有する三環系のβ−セクレターゼ阻害剤ならびにその互変異性体および立体異性形態に関する。本発明は、このような化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するプロセスならびにアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、βアミロイドに伴う認知症、加齢黄斑変性、２型糖尿病および他の代謝障害など、β−セクレターゼが関与する障害を防止および処置するためのこのような化合物および組成物の使用も対象とする。
2020509068.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）
【化１】
2020509068.tif 000195
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜３アルキル、シアノ、ニトロ、Ｈｅｔ、Ａｒ、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル−、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ａｒ−オキシ−、Ｈｅｔ−オキシ−、Ａｒ−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基、Ｃ１〜４アルキル（Ｃ＝Ｏ）−、Ａｒ（Ｃ＝Ｏ）−ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３および−ＯＣＦ３でそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３で任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜３アルキルから選択され；および
Ｒｂは、Ｃ１〜３アルキル、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−またはＨｅｔ１（Ｃ＝Ｏ）−から選択され；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキルオキシ−ＣＦ３または−ＯＣＦ３で任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３および−ＯＣＦ３からなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、１Ｈ−インドリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルケニル、（Ｃ３〜６シクロアルキル）Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＮＲｘＲｙ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシ−Ｃ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、ホモアリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
Ｒｘは、水素またはＣ１〜３アルキルであり；
Ｒｙは、ハロ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキルまたはフェニルであり；
ヘテロシクリルは、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルおよびオキソからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるピペリジニル、モルホリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルおよびテトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルからなる群から選択され；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂ、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、１もしくは２個のメチル置換基で任意選択的に置換される１Ｈ−ピラゾリルからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、１−ピロジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニルもしくは４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニル、４−モルホリニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物またはその互変異性体もしくは立体異性形態あるいはその薬学的に許容される付加塩または溶媒和物。
【請求項２】
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜３アルキル、シアノ、ニトロ、Ｈｅｔ、Ａｒ、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル−、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ａｒ−オキシ−、Ｈｅｔ−オキシ−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、フェニルであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜３アルキルから選択され；および
Ｒｂは、Ｃ１〜３アルキルおよび（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−から選択され；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、１Ｈ−インドリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシＣ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
ヘテロシクリルは、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルであり；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂおよび−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニル、４−モルホリニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｈｅｔ、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ−オキシ−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、フェニルであり；
Ｒａは、Ｈであり；おより
Ｒｂは、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、Ｃ１〜３アルキルからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシＣ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
ヘテロシクリルは、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルであり；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂおよび−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、４−ピペラジニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒは、ハロおよびＨｅｔからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシおよびＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、Ｃ１〜３アルキルからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；ここで、
ホモアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１、または２、または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；
ヘテロアリールは、ハロ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジルおよびイソキサゾリルからなる群から選択され；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒ１は、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；ここで、
ホモアリールは、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジルおよびイソキサゾリルからなる群から選択され；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
治療有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項８】
医薬組成物を調製するプロセスであって、薬学的に許容される担体を治療有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物と混合することを含むプロセス。
【請求項９】
医薬品として使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症またはβアミロイドに伴う認知症の処置、防止または予防に使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症およびβアミロイドに伴う認知症からなる群から選択される障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物または請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１２】
β部位アミロイド切断酵素の活性を調節する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物または請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項１３】
アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症またはβアミロイドに伴う認知症を処置または防止するための薬剤の製造のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物または請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１４】
式（Ｉ−ａ）または（Ｉ−ｂ）（式中、Ｒ、Ｈｅｔ１ａ、Ｒ１ａおよびＲ２は、請求項１〜６のいずれか一項に定義されるとおりである）による化合物を調製するプロセスであって、工程ａ）またはｂ）
ａ）式（ＸＩＶ）の化合物を、好適な塩基の存在下において、適切な触媒を使用して、好適な溶媒中で適切なボロン酸またはボロン酸エステルと共に加熱することによって鈴木型反応に供する工程
【化２】
2020509068.tif 000196
ｂ）式（ＩＩＩ−ｉ）（式中、Ｒ２は、請求項１〜６のいずれか一項に定義されるとおりであり、ＰＧは、塩基不安定性保護基であり、かつＲは、ヒドロキシルから選択される少なくとも置換基を有するフェニルである）の化合物が、最初に、塩基の存在下において、好適なアルキル化剤でフェノールにおいてアルキル化され、および続いて鈴木反応が適切な塩基を用いて行われる工程
【化３】
2020509068.tif 000197
を含むプロセス。
【請求項１５】
式（ＩＩＩ−ｉ’）
【化４】
2020509068.tif 000198
（式中、Ｑ’は、Ｈまたは保護基であり、ハロは、ブロモまたはクロロ、特にブロモであり、かつＲ２は、請求項１〜６のいずれか一項に定義されるとおりである）
の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）
【化１】
2020509068.tif 000003
（式中、基は、本明細書において定義されるとおりである）
に示される構造を有する三環系のβ−セクレターゼ阻害剤ならびにその互変異性体および立体異性形態に関する。本発明は、このような化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するプロセスならびにアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、βアミロイドに伴う認知症、加齢黄斑変性、２型糖尿病および他の代謝障害など、β−セクレターゼが関与する障害を防止および処置するためのこのような化合物および組成物の使用も対象とする。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、老化に伴う神経変性疾患である。ＡＤ患者は、認知障害および記憶喪失を患い、不安症などの行動問題も抱えている。ＡＤに罹患している人の９０％超が散発型の障害を有する一方、この症例の１０％未満は、家族性または遺伝性である。米国では、６５歳で１０人に約１人がＡＤを有し、８５歳で２人に１人がＡＤに罹患している。初期診断からの平均余命は、７〜１０年であり、ＡＤ患者は、介護付き生活施設でのまたは家族による広範な介護を必要とする。人口に占める高齢者の数が増加するにつれ、ＡＤに対する医学的関心が高まっている。現在使用可能なＡＤの治療は、この疾患の症状を単に処置するものに過ぎず、それには認知性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤ならびにこの病気に伴う行動問題をコントロールするための抗不安薬および抗精神病薬が含まれる。
【０００３】
ＡＤ患者の脳における顕著な病理学的特徴は、タウタンパク質の過剰リン酸化によって生じる神経原線維変化およびβアミロイド１−４２（Ａβ１−４２）ペプチドの凝集によって形成されるアミロイド斑である。Ａβ１−４２は、オリゴマー、次いで原線維を形成し、最終的にアミロイド斑を形成する。オリゴマーおよび原線維は、特に神経毒性があると考えられており、ＡＤに関連する神経損傷の大部分を引き起こし得る。Ａβ１−４２の形成を防止する薬剤は、ＡＤを処置するための疾患修飾薬となる可能性がある。Ａβ１−４２は、７７０個のアミノ酸から構成されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生成する。Ａβ１−４２のＮ末端がβ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ１）により切断された後、γセクレターゼによりＣ末端が切断される。γセクレターゼは、Ａβ１−４２に加えて、主要な切断産物であるＡβ１−４０ならびにＡβ１−３８およびＡβ１−４３も遊離する。これらのＡβ型も凝集してオリゴマーおよび原線維を形成し得る。したがって、ＢＡＣＥ１の阻害剤は、Ａβ１−４２ならびにＡβ１−４０、Ａβ１−３８およびＡβ１−４３の形成を防止することが期待され、ＡＤの処置における治療薬となる可能性がある。
【０００４】
２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、インスリン耐性により、および膵β細胞からのインスリン分泌が不十分になることにより、血糖調節が良好に機能せず、高血糖になることが原因となる。Ｔ２Ｄの患者は、微小血管および大血管の疾患ならびに糖尿病性腎症、網膜症および心血管疾患を含む一連の関連合併症のリスクが高い。Ｔ２Ｄの罹患率の上昇は、世界の人々のますます体を動かすことが減ってきているライフスタイルおよび高エネルギー食品の摂取と関係がある。
【０００５】
β細胞の機能不全ならびにその結果として生じるインスリン分泌の大幅な低下および高血糖は、Ｔ２Ｄの発症を示す。現行の処置のほとんどは、顕性Ｔ２Ｄを特徴付けるβ細胞量の減少を防止するものではない。しかしながら、ＧＬＰ−１類似体、ガストリンおよび他の薬剤が最近開発されたことでβ細胞の維持および増殖が実現可能になり、これにより糖耐性を高め、顕性Ｔ２Ｄの進行を遅くすることが示されている。
【０００６】
Ｔｍｅｍ２７は、β細胞の増殖およびインスリン分泌を促進するタンパク質として同定されている。Ｔｍｅｍ２７は、β細胞の表面から構成的に脱落している４２ｋＤａの膜糖タンパク質であり、完全長細胞Ｔｍｅｍ２７の分解から生じる。トランスジェニックマウスにおいてＴｍｅｍ２７を過剰発現させると、糖尿病の食事性肥満ＤＩＯモデルにおいてβ細胞量が増加し、糖耐性が改善する。さらに、齧歯類のβ細胞増殖アッセイ（例えば、ＩＮＳ１ｅ細胞を使用）においてＴｍｅｍ２７のｓｉＲＮＡをノックアウトすると、増殖速度が低下する。これは、β細胞量の調節におけるＴｍｅｍ２７の役割を示すものである。
【０００７】
ＢＡＣＥ２は、Ｔｍｅｍ２７の分解を担うプロテアーゼである。これは、膜結合アスパルチルプロテアーゼであり、ヒト膵β細胞中でＴｍｅｍ２７と共存している。これは、ＡＰＰ、ＩＬ−１Ｒ２およびＡＣＥ２を分解する能力があることも知られている。ＡＣＥ２を分解する能力があることは、高血圧の調節におけるＢＡＣＥ２の役割の可能性を示すものである。
【０００８】
さらに、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２の阻害剤は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、動脈血栓症、自己免疫性／炎症性疾患、乳がんなどのがん、心筋梗塞および脳卒中などの心血管疾患、皮膚筋炎、ダウン症候群、胃腸疾患、多形性膠芽腫、グレーブス病、ハンチントン病、封入体筋炎（ＩＢＭ）、炎症性反応、カポジ肉腫、コストマン病、エリテマトーデス、マクロファージ性筋膜炎、若年性突発性関節炎、肉芽腫性関節炎、悪性黒色腫、多発性骨髄腫、関節リウマチ、シェーグレン症候群、脊髄小脳失調症１、脊髄小脳失調症７、ウィップル病またはウィルソン病の治療処置および／または予防処置にも使用することができる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、式（Ｉ）および（ＩＩ）
【化２】
2020509068.tif 000004
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜３アルキル、シアノ、ニトロ、Ｈｅｔ、Ａｒ、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ａｒ−オキシ−、Ｈｅｔ−オキシ−、Ａｒ−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基、Ｃ１〜４アルキル（Ｃ＝Ｏ）−、Ａｒ（Ｃ＝Ｏ）−ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３および−ＯＣＦ３でそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３、−ＯＣＦ３で任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜３アルキルから選択され；および
Ｒｂは、Ｃ１〜３アルキル、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−またはＨｅｔ１（Ｃ＝Ｏ）−から選択され；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、シアノ−Ｃ１〜３アルキルオキシ−ＣＦ３または−ＯＣＦ３で任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＣＦ３および−ＯＣＦ３からなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、１Ｈ−インドリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルケニル、（Ｃ３〜６シクロアルキル）Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、−ＮＲｘＲｙ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシ−Ｃ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、ホモアリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
Ｒｘは、水素またはＣ１〜３アルキルであり；
Ｒｙは、ハロ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキルまたはフェニルであり；
ヘテロシクリルは、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルおよびオキソからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピペリジニル、モルホリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルおよびテトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルからなる群から選択され；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂ、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、１もしくは２個のメチル置換基で任意選択的に置換される１Ｈ−ピラゾリルからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、１−ピロジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニルもしくは４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニル、４−モルホリニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物、その互変異性体および立体異性形態ならびにそれらの薬学的に許容される付加塩および溶媒和物を対象とする。
【００１０】
本発明の実例となるものとして、薬学的に許容される担体と、上記化合物のいずれかとを含む医薬組成物がある。本発明の一例として、上記化合物のいずれかと、薬学的に許容される担体とを混合することによって作製される医薬組成物がある。本発明を例示するものとして、医薬組成物を作製するプロセスであって、上記化合物のいずれかと、薬学的に許容される担体とを混合することを含むプロセスがある。
【００１１】
本発明を例示するものとして、β−セクレターゼ酵素によって媒介される障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の上記化合物または医薬組成物のいずれかを投与することを含む方法がある。
【００１２】
本発明をさらに例示するものとして、β−セクレターゼ酵素を阻害する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の上記化合物または医薬組成物のいずれかを投与することを含む方法がある。
【００１３】
本発明の一例として、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、βアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、好ましくはアルツハイマー病、２型糖尿病および他の代謝障害からなる群から選択される障害を処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の上記化合物または医薬組成物のいずれかを投与することを含む方法がある。
【００１４】
本発明の別の例として、（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老衰、（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体型認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）脳卒中に伴う認知症、（ｈ）パーキンソン病に伴う認知症、（ｉ）βアミロイドに伴う認知症または（ｊ）加齢黄斑変性、（ｋ）２型糖尿病および（ｌ）他の代謝障害の処置を、それを必要としている対象において行うのに使用するための、上記化合物のいずれかがある。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、上に定義した式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容される付加塩および溶媒和物を対象とする。式（Ｉ）の化合物は、β−セクレターゼ酵素（β部位切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２もしくはメマプシン２またはＢＡＣＥ２としても知られる）の阻害剤であり、アルツハイマー病、軽度認知障害、老衰、認知症、脳卒中に伴う認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、βアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、好ましくはアルツハイマー病、軽度認知障害または認知症、より好ましくはアルツハイマー病、２型糖尿病および他の代謝障害の処置に有用であり得る。
【００１６】
一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）および（ＩＩＩ）
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、Ｃ１〜３アルキル、シアノ、ニトロ、Ｈｅｔ、Ａｒ、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル−ＮＨ−Ｃ１〜３アルキル−、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ａｒ−オキシ−、Ｈｅｔ−オキシ−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、フェニルであり；
Ｒａは、ＨまたはＣ１〜３アルキルから選択され；および
Ｒｂは、Ｃ１〜３アルキルおよび（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−から選択され；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、チエニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、１Ｈ−インドリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシＣ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
ヘテロシクリルは、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルであり；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂおよび−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３で任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニル、４−モルホリニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物に関する。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）および（ＩＩ）
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、Ｈｅｔ、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ−オキシ−、−ＮＲａＲｂ、ハロおよびオキソからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換される二価の−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−置換基ならびにＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択され；
Ａｒは、フェニルであり；
Ｒａは、Ｈであり；かつ
Ｒｂは、（Ｃ１〜３アルキルオキシ）Ｃ１〜３アルキル（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｈｅｔ１、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、Ｃ１〜３アルキルからそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｃ１〜３アルキルオキシＣ２〜３アルケニル、（ハロ−フェニル）−Ｃ２〜３アルケニル−、ヘテロシクリル、ホモアリール、ヘテロアリール、ホモアリール−ＣＨ２−オキシおよびヘテロアリール−ＣＨ２−オキシからなる群から選択され；ここで、
ヘテロシクリルは、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラニルであり；
ホモアリールは、ハロ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ、Ｃ１〜３アルキルオキシ−（Ｃ＝Ｏ）−、フェニルオキシ−、ＮＲ１ａＲ１ｂおよび−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２もしくは３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであるか、またはＣ１〜３アルキルもしくはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるナフタレニルであり；ここで、Ｒ１ａは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、かつＲ１ｂは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ａＲ１ｂは、４−モルホリニルを一緒に形成し；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−ハロＣ１〜３アルキル、ポリ−ハロ−Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されるフェニルおよび−ＮＲ１ｃＲ１ｄからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジニル、６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、インドリル、インダゾリル、１−ベンゾチエニル、１−ベンゾフラニル、イソキノリニル、５，６，７，８−テトラヒドロキノリニル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−クロメニルおよび３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジニルからなる群から選択され；ここで、
Ｒ１ｃは、水素もしくはＣ１〜３アルキルであり、Ｒ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルであるか、またはＮＲ１ｃＲ１ｄは、Ｃ１〜３アルキルでそれぞれ任意選択的に置換される１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、４−ピペラジニルもしくは１Ｈ−イミダゾリルを一緒に形成し；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物に関する。
【００１８】
さらなる実施形態では、本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）および（ＩＩ）
（式中、Ｒは、ハロおよびＨｅｔからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｈｅｔは、シアノでそれぞれ任意選択的に置換され得るピリジニルおよびピリミジニルから選択される）
の化合物に関する。
【００１９】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）および（ＩＩ）
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒは、ハロ、シアノまたはＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルオキシ、Ｃ２〜６アルキニルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシおよびＲ３−Ｃ１〜６アルキルオキシ−からなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；ここで、
Ｒ３は、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ａｒ１、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、Ｃ３〜６シクロアルキルオキシ、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニルオキシ、Ｈｅｔ１−オキシ−およびＡｒ１−オキシ−からなる群から選択され；ここで、
Ａｒ１は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシで任意選択的に置換されるフェニルであり；
Ｈｅｔ１は、Ｃ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、イソキサゾリル、１Ｈ−イミダゾリル、チアゾリルおよび１Ｈ−インダゾリルからなる群から選択され；
Ｒ１は、水素、ハロ、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；ここで、
ホモアリールは、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１、２または３個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；
ヘテロアリールは、ハロ、Ｃ１〜３アルキルおよびＣ１〜３アルキルオキシからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジルおよびイソキサゾリルからなる群から選択され；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物に関する。
【００２０】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の式（Ｉ）および（ＩＩ）
（式中、
Ｘは、ＳまたはＯであり；
Ｒ１は、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；ここで、
ホモアリールは、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基で任意選択的に置換されるフェニルであり；
ヘテロアリールは、ハロ、シアノおよびＣ１〜３アルキルからなる群からそれぞれ独立に選択される１または２個の置換基でそれぞれ任意選択的に置換されるピリジルおよびイソキサゾリルからなる群から選択され；および
Ｒ２は、水素またはＣ１〜３アルキルである）
の化合物に関する。
【００２１】
本発明は、特に、三環式骨格中の炭素中心Ｃ４ａおよびＣ１０ａがシス配置である（すなわち、ＨおよびＲは、骨格平面の同じ側に突出している）化合物
【化３】
2020509068.tif 000005
に関する。したがって、特に、本発明は、以下に示す式（Ｉ’）および（ＩＩ”）の化合物ならびに式（Ｉ’）および（ＩＩ”）の化合物に関し、ここで、（Ｉ’）および（ＩＩ’）において、三環のコアは、図面の平面にあり、ＨおよびＲは、図面の平面の上方に突出している（結合が太い楔
【化４】
2020509068.tif 000006
で示される）か、または三環のコアは、図面の平面にあり、ＨおよびＲは、図面の平面の下方に突出している（結合が平行線の楔
【化５】
2020509068.tif 000007
で示される）。
【化６】
2020509068.tif 000008
【００２２】
定義
「ハロ」は、フルオロ、クロロおよびブロモを意味し、「Ｃ１〜３アルキル」および「Ｃ１〜６アルキル」は、１、２もしくは３個の炭素原子または１、２、３、４、５もしくは６個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状の飽和アルキル基、例えばメチル、エチル、１−プロピル、２−プロピルなどをそれぞれ意味し、「Ｃ１〜３アルキルオキシ」は、エーテル基を意味し、但し、Ｃ１〜３アルキルは、前に定義したとおりであり、「モノ−およびポリハロＣ１〜３アルキル」は、前に定義したとおりの１、２、３または可能であればそれを超えるハロ原子で置換された、前に定義したとおりのＣ１〜３アルキルを意味し、「モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシ」は、エーテル基（但し、モノ−およびポリハロＣ１〜３アルキルは、前に定義したとおりである）を意味し、「Ｃ３〜６シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを意味し、「Ｃ３〜６シクロアルケニル」は、Ｃ＝Ｃ結合を有するＣ３〜６シクロアルキル基を意味し、「Ｃ２〜６アルキニル」が２〜６個の炭素原子を有する直鎖状または分岐鎖状の非環式基（但し、少なくとも１つの炭素−炭素結合は、三重結合である）を意味し、「Ｃ２〜３アルケニル」は、２〜３個の炭素原子を有する直鎖状または分岐鎖状の非環式基（但し、炭素−炭素結合は、二重結合である）を意味する。
【００２３】
本明細書で使用する「対象」という用語は、処置、観察または実験の目的物となるかまたは目的物となっている動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００２４】
本明細書で使用する「治療有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって求められている、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医学的応答（処置されている疾患または障害の症状の軽減を含む）を誘発する活性化合物または医薬剤の量を意味する。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、特定の成分を特定の量で含む生成物および特定の成分の特定の量での組合せから直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含するものとする。
【００２６】
上記および下記では、「式（Ｉ）の化合物」という用語は、その付加塩、溶媒和物および立体異性体を含むものとする。
【００２７】
「立体異性体」または「立体化学的異性形態」という用語は、上記または下記で同義的に使用される。
【００２８】
本発明は、式（Ｉ）の化合物の全ての立体異性体を純粋な立体異性体または２種以上の立体異性体の混合物として含む。
【００２９】
エナンチオマーは、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。エナンチオマーの対の１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、エナンチオマーではない立体異性体であり、すなわち鏡像の関係にない。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ配置またはＺ配置となり得る。化合物が二置換シクロアルキル基を含有する場合、置換基は、シス配置またはトランス配置となり得る。したがって、本発明は、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体およびこれらの混合物を含む。
【００３０】
絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ表示法に従って特定される。不斉原子における配置は、ＲまたはＳで特定される。絶対配置が不明である分割化合物は、平面偏光を回転させる方向によって（＋）または（−）で示すことができる。
【００３１】
特定の立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が実質的に他の異性体を含まない、すなわち他の異性体を５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、より一層好ましくは５％未満、特に２％未満、最も好ましくは１％未満のみ伴うことを意味する。したがって、式（Ｉ）の化合物が例えば（Ｒ）と特定される場合、これは、その化合物が実質的に（Ｓ）異性体を含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が例えばＥと特定される場合、これは、その化合物が実質的にＺ異性体を含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が例えばシスと特定される場合、これは、その化合物が実質的にトランス異性体を含まないことを意味する。
【００３２】
医薬で使用される場合、本発明の化合物の付加塩は、毒性のない「薬学的に許容される付加塩」を指す。しかしながら、他の塩が本発明による化合物またはその薬学的に許容される付加塩の調製に有用であることがある。本化合物の好適な薬学的に許容される付加塩としては、例えば、化合物の溶液を塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。さらに、本発明の化合物が酸部分を有する場合、その薬学的に許容される好適な付加塩としては、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばカルシウム塩またはマグネシウム塩および好適な有機配位子と形成される塩、例えば第四級アンモニウム塩を挙げることができる。
【００３３】
薬学的に許容される付加塩の調製に使用することができる代表的な酸として、以下に限定されるものではないが、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、樟脳スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸およびウンデシレン酸が挙げられる。薬学的に許容される付加塩の調製に使用することができる代表的な塩基として、以下に限定されるものではないが、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレン−ジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、第二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミンおよび水酸化亜鉛が挙げられる。特定の塩は、トリフルオロ酢酸付加塩である。
【００３４】
化合物の名称は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）によって取り決められた命名規則に従って、または国際純正・応用化学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（ＩＵＰＡＣ）によって取り決められた命名規則に従って命名された。互変異性形態の場合、その構造の示される互変異性形態の名称が命名された。示されていない他の互変異性形態も本発明の範囲内に含まれる。
【００３５】
化合物の調製
実験手順１
式（Ｉ）および（ＩＩ）による最終化合物は、式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）（式中、Ｑは、塩基不安定性（例えば、アシル）または酸不安定性（例えば、トリチル）保護基を示す）の中間体化合物を脱保護することによって調製することができる（反応スキーム１）。このような反応は、当該技術分野で知られている反応条件下で行うことができる。代わりに、式（Ｉ）による最終化合物は、例えば、鈴木反応などの標準的な交差カップリング反応を使用することによって臭素を複素環と交換するなど、当該技術分野で知られている方法によるＲ１の官能基相互変換によって得ることができる。
【化７】
2020509068.tif 000009
【００３６】
中間体化合物の調製
実験手順２
式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）（式中、Ｒ１ａは、Ｃ１〜３アルキル、（Ｃ３〜６シクロアルキル）Ｃ１〜３アルキル、ホモアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルを示す）の中間体（本明細書では、それぞれ式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＶ−ａ）の中間体と称する）は、対応する式（ＩＩＩ−ｂ）または（ＩＶ−ｂ）（式中、Ｒ１ｂは、ハロ、好ましくはブロモを示す）の中間体と、式（Ｖ）（式中、Ｒ１ａは、上で定義されるとおりであり、ＲａおよびＲｂは、水素もしくはＣ１〜４アルキルであるか、または一緒になって式ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２もしくはＣ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２の二価の基を形成し得る）の中間体との鈴木−宮浦クロスカップリング反応によって調製することができる（反応スキーム２）。反応は、トルエンなどの好適な反応不活性溶媒または例えば１，４−ジオキサン／水などの不活性溶媒の混合物中、例えばリン酸三カリウムまたは炭酸カリウムなどの好適な塩基、例えば酢酸パラジウム（ＩＩ）などの好適なＰｄ錯体触媒および例えばトリシクロヘキシルホスフィンなどの好適な配位子の存在下、６０〜１２０℃の範囲の高温において、反応を確実に終了させる時間にわたって行うことができる。式（Ｖ）の中間体は、市販品を購入するか、または文献の手順に従って合成することができる。
【化８】
2020509068.tif 000010
【００３７】
実験手順３
式（ＩＶ）（式中、Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキルである）（本明細書では、式（ＩＶ−ｃ）の中間体と称する）の中間体は、対応する式（ＩＩＩ）（式中、Ｒ２は、メチルである）の中間体（本明細書では、式（ＩＩＩ−ｃ）の中間体と称する）と、ヨウ化Ｃ１〜３アルキルとの反応によって調製することができる（反応スキーム３）。反応は、例えば、反応混合物を１００℃で加熱するなどの熱条件下で行うことができる。反応スキーム３では、可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化９】
2020509068.tif 000011
【００３８】
実験手順４
式（ＩＶ）（式中、Ｒ２は、水素である）の中間体化合物（本明細書では、（ＩＶ−ｄ）と称する）は、当該技術分野で知られているＯ−脱メチル化手順に従って式（ＩＩＩ−ｃ）の中間体化合物から調製することができる。前記変換は、ヨウ化ナトリウムなどの好適な添加剤の存在下、アセトニトリルなどの好適な不活性溶媒中、好適な反応条件下、例えば好都合な温度、通常５０℃において、反応が確実に完了する時間にわたって中間体（ＩＩＩ−ｃ）をトリメチルクロロシランなどの好適なＯ−脱メチル化剤で処理することによって都合よく行うことができる。反応スキーム４では、可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化１０】
2020509068.tif 000012
【００３９】
実験手順５
式（ＩＩＩ）（式中、Ｒ１は、シアノである）の中間体化合物（本明細書では、（ＩＩＩ−ｄ）と称する）は、当該技術分野で知られているシアノ化手順に従って、対応する式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体から調製することができる（反応スキーム９）。前記シアノ化は、例えば、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）などの好適なＰｄ触媒、例えば１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンなどの好適な配位子および亜鉛末の存在下、例えばＤＭＡなどの好適な不活性溶媒中、例えば１２０℃などの好適な温度において、反応が完了するまで、対応する式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物を例えばシアン化亜鉛などのシアン化剤で処理することによって都合よく行うことができる。反応スキーム５では、可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化１１】
2020509068.tif 000013
【００４０】
実験手順６
式（ＩＩＩ）（式中、Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルオキシカルボニルまたはヒドロキシカルボニルである）の中間体化合物（本明細書では、（ＩＩＩ−ｅ）と称する）は、当該技術分野で知られているパラジウム触媒カルボニル化手順に従って、対応する式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物から調製することができる（反応スキーム６）。前記カルボニル化は、一酸化炭素雰囲気において、例えば酢酸パラジウムなどの好適なパラジウム触媒、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンなどの好適な配位子および酢酸カリウムなどの好適な塩基の存在下、例えばＴＨＦ／ＥｔＯＨなどの好適な反応溶媒または溶媒の混合物中で式（ＩＩＩ−ｂ）の中間化合物を撹拌することによって都合よく行うことができる。反応は、オートクレーブ中、好適な圧力、例えば３０バール、好都合な温度、通常１２０℃において、反応が確実に完了する時間にわたって行うことができる。反応スキーム６では、可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化１２】
2020509068.tif 000014
【００４１】
実験手順７
式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られている臭素化手順に従って式（ＩＩＩ−ｄ）（式中、Ｒ１は、水素である）の中間体化合物から調製することができる。前記臭素化は、例えば、アセトニトリルなどの好適な不活性溶媒中、例えば室温などの好適な温度において、反応が完了するまで、例えば１６時間にわたり、対応する式（ＩＩＩ−ｆ）の中間体化合物を例えばＮ−ブロモコハク酸イミドなどの臭素化剤で処理することによって都合よく行うことができる。
【００４２】
式（ＩＩＩ−ｆ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られている手順に従って、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などの保護基ＰＧによって保護する必要があり得る。前記反応は、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（ＤＭＡＰ）などの好適な触媒の存在下、ＴＨＦなどの好適な不活性溶媒中、好適な反応条件下、例えば好都合な温度、通常ｒ．ｔ．において、反応が確実に完了する時間にわたって中間体化合物（ＩＩＩ−ｆ）を二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルで処理することによって都合よく行うことができる。
【００４３】
次いで、保護した中間体（ＩＩＩ−ｇ）を上記のように臭素化して（ＩＩＩ−ｈ）を得、次いでこれを周囲温度において好適な溶媒中または無溶媒で、例えばトリフルオロ酢酸またはギ酸などの好適な酸で処理して脱保護することにより、中間体（ＩＩＩ−ｂ）を得ることができる。
【００４４】
反応スキーム７では、ＱおよびＰＧは、保護基であり、他の可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化１３】
2020509068.tif 000015
【００４５】
実験手順８
式（ＩＩＩ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られている環化手順に従って式（ＶＩ）の中間体化合物から調製することができる。前記環化は、例えば、ＤＣＭなどの好適な反応溶媒中、好適な反応条件下、例えば好都合な温度、通常ｒ．ｔ．において、反応が確実に完了する時間にわたって式（ＶＩ）の中間体化合物を１−クロロ−Ｎ，Ｎ−２−トリメチルプロペニルアミンなどの好適な試薬で処理することによって都合よく行うことができる。
【００４６】
式（ＶＩＩ）の中間体化合物は、例えば、ＤＣＭなどの好適な不活性溶媒中、好都合な温度、通常ｒ．ｔ．において、反応が完了するまで、例えば３時間にわたり、対応する式（ＶＩＩＩ）の中間体化合物を例えばベンジルイソチオシアネートなどの好適な試薬と反応させることにより（その結果、化合物（ＶＩ）および（ＩＩＩ）（式中、Ｑは、フェニル（Ｃ＝Ｏ）−である）を生じる）調製することができる。
【００４７】
式（ＶＩＩ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られているアジリジン環の開環手順に従って、対応する式（ＶＩＩＩ）の中間体化合物から調製することができる。前記反応は、水素雰囲気下、例えばアルカノール（例えば、メタノール、エタノールなど）などの好適な溶媒中、ラネーニッケルなどの好適な触媒の存在下、好都合な温度、通常ｒ．ｔ．において、反応が完了するまで、例えば６時間にわたって反応物を撹拌することによって実施することができる。
【００４８】
式（ＶＩＩＩ）の中間体化合物は、対応する式（ＩＸ）の中間体化合物を式（Ｘ）の中間体と反応させることにより調製することができる。この反応は、ＴＨＦなどの好適な反応不活性溶媒中、好適な反応条件下、例えば好都合な温度、通常−７８℃〜室温の範囲において、確実に反応が完了する時間にわたって行われ得る。式（Ｘ）の中間体化合物は、市販品を購入するか、または文献の手順に従って合成することができる。
【化１４】
2020509068.tif 000016
【００４９】
実験手順９
式（ＩＸ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られている環化手順に従って、対応する式（ＸＩ）の中間体化合物を反応させることによって調製することができる。前記環化は、例えば、ＴＨＦなどの好適な反応不活性溶媒中、好適な反応条件下、例えば好都合な温度、通常５０℃において、反応が確実に完了する時間にわたって式（ＸＩ）の中間体化合物を例えば塩酸などの好適な酸で処理することによって都合よく行うことができる。
【００５０】
式（ＸＩ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られているカップリング手順に従って式（ＸＩＩ）の中間体化合物を反応させることによって調製することができる。前記変換は、イソプロピルマグネシウムクロリド−塩化リチウム錯体などの好適なメタル化試薬および例えばシアン化銅（Ｉ）ジ（塩化リチウム）錯体溶液などの好適な有機銅アート試薬前駆体の存在下で式（ＸＩＩ）の中間化合物を対応するシアノ銅酸塩試薬に変換し、続いて臭化アリルなどの適切なハロゲン化物を添加することによって都合よく行うことができる。反応は、例えば、ＴＨＦなどの好適な反応不活性溶媒中、好都合な温度、通常−７０℃〜ｒ．ｔ．において、確実に反応が完了する時間にわたって行われ得る。
【００５１】
式（ＸＩＩ）の中間体化合物は、当該技術分野で知られているウィッティヒ反応手順に従って式（ＸＩＩＩ）の中間体化合物を反応させることによって調製することができる。前記反応は、例えば、カリウムビス（トリメチルシリル）アミドなどの好適な塩基の存在下、例えばトルエンなどの好適な反応不活性溶媒中、好適な温度、通常−１０℃〜ｒ．ｔ．において、確実に反応が完了する時間にわたって式（ＸＩＩＩ）の中間体化合物を例えばメトキシメチルトリフェニルホスホニウムクロリドなどの好適なホスホニウム塩で処理することによって都合よく行うことができる。式（ＸＩＩＩ）の中間体化合物は、一般に、市販品を購入するか、または文献の手順に従って合成することができる。反応スキーム９では、可変要素は、全て式（Ｉ）におけるように定義される。
【化１５】
2020509068.tif 000017
【００５２】
実験手順１０
代わりに、式（ＩＸ）の中間体化合物は、式（ＸＩＶ）（式中、Ｒ’は、例えば、クロスカップリング反応、アルキル化反応および脱保護反応などの当業者に知られた手順を使用することによってＲに変換することができる任意の基である）の有機金属種の添加を受けることができる。中間体化合物（ＶＩＩＩ−ａ）は、前述の実施例に記載したのと同じ合成経路を用いて合成を続けることができる。当業者であれば、合成過程のいずれの時点でＲ’からＲへの変換を行うことが適切であるかを判断することができるであろう。
【化１６】
2020509068.tif 000018
【００５３】
化合物の調製  −  フローケミストリー
本明細書に記載のＣｙｃｌＯｐｓ（商標）プラットフォームを用いて、多くの化合物を合成し、スクリーニングし、それは、高い成功範囲（６１〜９６％の成功率）で機能した。フロー合成システムは、ＦｌｏｗＣｏｍｍａｎｄｅｒ（商標）ソフトウェアによって制御される一体化されたバルブおよび試薬ループを備えたＶａｐｏｕｒｔｅｃ（登録商標）Ｒ４反応器およびＲ２ポンプモジュールを利用した。ケミストリーの複雑さに応じて、最大で４つまでの反応器、ポンプおよびバルブを使用した。最終反応器からの生成物は、生成物のアリコートを精製システムに注入することを可能にするＨＰＬＣ注入バルブに流入した。合成システムにおける分散による材料の損失は、いくつかの方法で最小限に抑えられた。最初に、分散を最小限に抑えるために、システム全体にわたって小口径の管を使用した。第２に、反応物および生成物の定常状態濃度が反応器内で確実に達成されるように試薬ループサイズを選択した。最後に、最大生成物濃度の時点において、すなわち定常状態条件下でアリコートが確実に採取されるようにＨＰＬＣへの注入の時間を調節した。一般に、試薬のフレッシュボトルの使用および／またはその場での試薬の生成は、合成結果を改善し得る。
【００５４】
鈴木反応
式（Ｉ）（式中、Ｒ１は、ヘテロアリールである）の化合物（本明細書では、（Ｉ−ａ）と称する）は、スキーム１１に示すように、鈴木反応などの当業者に知られた変換によって調製することができる。反応１に類似した式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体における保護基Ｑの開裂から式（ＸＩＶ）の中間体を得、これを、好適な塩基、例えば炭酸カリウムまたはＤＢＵ、好ましくはＤＢＵの存在下、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２などの適切な触媒を用いて、例えばＩＰＡ／ＮＭＰおよびＴＨＦなどの好適な溶媒中で適切なボロン酸または式（Ｖ−ａ）のエステルと共に加熱した。反応結果の補助するために水を加えることもできる。反応は、通常、中間体（ＸＩＶ）に対して２倍過剰のカップリング剤および３当量の塩基を用いて、適切な反応条件下、通常１５０℃で２０分間にわたって実施される。反応混合物をシリカカートリッジに通してパラジウム触媒を除去した後、自動ＬＣＭＳにより精製する。
【化１７】
2020509068.tif 000019
【００５５】
アルキル化反応、続いて鈴木
２ステップケミストリーは、バッチで展開し、まずアミノ保護中間体（ＩＩＩ−ｉ）（式中、ＰＧは、塩基不安定性保護基、例えばＢｏｃであり、Ｒは、ヒドロキシルから選択される少なくとも１つの置換基を有するフェニルである）が、塩基、好ましくはＤＢＵの存在下、好適なアルキル化剤を用いてフェノールでアルキル化される。その後、炭酸カリウムなどの適切な塩基を使用する鈴木反応により、炭酸塩は、アミノ保護基を開裂するために使用することができるため、最終化合物が得られる。この反応順序は、依然としてフローで試みられていないが、移動は、ルーチン的であると予想される。
【化１８】
2020509068.tif 000020
【００５６】
式（ＩＩＩ−ｉ）の中間体は、本発明の化合物の合成に有用かつ多用途の中間体である。したがって、一実施形態では、本発明は、式（ＩＩＩ−ｉ’）の化合物
【化１９】
2020509068.tif 000021
（式中、Ｑ’は、Ｈまたは保護基であり、ハロは、ブロモまたはクロロ、特にブロモであり、かつＲ２は、本明細書中の式（Ｉ）の化合物で定義されるとおりである）
に関する。
【００５７】
薬効薬理
本発明の化合物およびその薬学的に許容される組成物は、ＢＡＣＥを阻害し、したがってアルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、老衰、認知症、レビー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、アルツハイマー型認知症、血管性認知症、ＨＩＶ疾患による認知症、頭部外傷による認知症、ハンチントン病による認知症、ピック病による認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病による認知症、前頭側頭型認知症、ボクサー認知症、βアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、２型糖尿病ならびに他の代謝障害の処置または防止に有用であり得る。
【００５８】
本明細書で使用する場合、「処置」という用語は、疾患の進行を遅延、中断、阻止もしくは停止するかまたは症状を軽減し得る全てのプロセスを指すものとするが、必ずしも全症状の完全な排除を示すものではない。
【００５９】
本発明は、ＡＤ、ＭＣＩ、老衰、認知症、レビー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、アルツハイマー型認知症、βアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、２型糖尿病ならびに他の代謝障害からなる群から選択される疾患または病態の処置または防止に使用するための、一般式（Ｉ）による化合物、その立体異性形態またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩にも関する。
【００６０】
本発明は、ＡＤ、ＭＣＩ、老衰、認知症、レビー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、アルツハイマー型認知症、βアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、２型糖尿病ならびに他の代謝障害からなる群から選択される疾患または病態の処置、防止、改善、調節またはそれらのリスクの軽減に使用するための、一般式（Ｉ）による化合物、その立体異性形態またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩にも関する。
【００６１】
上で既に述べたように、「処置」という用語は、必ずしも全症状の完全な排除を示すものではないが、上記の障害のいずれかの対症処置を指す場合もある。式（Ｉ）の化合物の有用性に鑑みて、上記の疾患のいずれか１つに罹患しているヒトを含む温血動物などの対象を処置する方法または上記の疾患のいずれか１つに罹患しているヒトを含む温血動物などの対象を予防する方法が提供される。
【００６２】
前記方法は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性形態、その薬学的に許容される付加塩または溶媒和物の、ヒトを含む温血動物などの対象への投与、すなわち全身投与または局所投与、好ましくは経口投与を含む。
【００６３】
したがって、本発明は、上記の疾患のいずれかを防止および／または処置する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の本発明による化合物を投与することを含む方法にも関する。
【００６４】
本発明は、βサイトアミロイド切断酵素の活性を調節する方法であって、それを必要とする対象に治療有効量の本発明によるかつ特許請求の範囲で定義される化合物または本発明によるかつ特許請求の範囲で定義される医薬組成物を投与することを含む方法にも関する。
【００６５】
処置方法は、１日に１〜４回摂取する投薬計画で活性成分を投与することも含み得る。これらの処置方法では、本発明による化合物は、投与前に製剤化されることが好ましい。本明細書で下記に記載するように、好適な医薬製剤は、よく知られ、容易に入手可能な成分を使用して既知の手順で調製される。
【００６６】
アルツハイマー病またはその症状を処置または防止するのに好適であり得る本発明の化合物は、単独で投与されるか、または１種または複数の追加の治療剤と併用投与され得る。併用療法には、式（Ｉ）の化合物および１種または複数の追加の治療薬を含有する単一医薬投与製剤の投与ならびに式（Ｉ）の化合物および各追加の治療薬（それ自体個別の医薬投与製剤）の投与が含まれる。例えば、式（Ｉ）の化合物および治療薬は、患者に錠剤またはカプセル剤などの単一経口投与組成物で一緒に投与され得、または各薬剤が個別の経口投与製剤で投与され得る。
【００６７】
当業者は、本明細書に記載の疾患または病態の別の命名法、疾病分類および分類体系に精通しているであろう。例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎのＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ＆Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ第５版（ＤＳＭ−５（商標））は、神経認知障害群（ＮＣＤ）（重度と軽度との両方）、特にアルツハイマー病による神経認知障害、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）による神経認知障害、レビー小体病による神経認知障害、パーキンソン病による神経認知障害または血管性ＮＣＤ（多発性梗塞を伴って存在する血管性ＮＣＤなど）などの用語を使用している。このような用語は、本明細書に記載の疾患または病態の一部の別の名称として当業者が使用する場合がある。
【００６８】
医薬組成物
本発明は、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老衰、認知症、レビー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症およびβアミロイドに伴う認知症および加齢黄斑変性、２型糖尿病ならびに他の代謝障害など、β−セクレターゼの阻害が有益である疾患を防止または処置するための組成物も提供する。前記組成物は、治療有効量の式（Ｉ）による化合物と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む。
【００６９】
活性成分を単独で投与することが可能であるが、医薬組成物としてそれを提供することが好ましい。したがって、本発明は、本発明による化合物を薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物をさらに提供する。担体または希釈剤は、組成物の他の成分と混合可能であり、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。
【００７０】
本発明の医薬組成物は、薬学の技術分野においてよく知られる任意の方法によって調製され得る。治療有効量の特定の化合物は、有効成分として、塩基形態または付加塩形態において、薬学的に許容される担体と組み合わされて均質な混合物にされるが、これは、投与に所望される製剤の形態に応じて多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、好ましくは、経口、経皮もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、鼻腔スプレー、点眼剤を介したものもしくはクリーム、ゲルもしくはシャンプーなどを介したものなどの局所投与に好適な単位剤形であることが望ましい。例えば、経口剤形の組成物の調製では、懸濁剤、シロップ、エリキシル剤および液剤などの経口液体製剤の場合、例えば水、グリコール、油、アルコールなど；または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤および崩壊剤などの固体担体など、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。錠剤およびカプセル剤は、その投与が容易であるため、最も有利な経口単位剤形であり、その場合、固体医薬担体が明らかに使用される。非経口組成物の場合、担体は、通常、滅菌水を少なくとも大部分含むことになるが、例えば溶解性を促進する他の成分が含まれ得る。例えば、担体が生理食塩水、ブドウ糖溶液または生理食塩水とブドウ糖溶液との混合物を含む注射用溶液を調製することができる。注射用懸濁剤も調製することができ、その場合、適切な液体担体および懸濁化剤などが使用され得る。経皮投与に好適な組成物では、担体は、皮膚に重大な有害作用を引き起こさない任意の性質の少量の好適な添加剤と任意選択により組み合わせて、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を任意選択により含む。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、かつ／または所望の組成物の調製に役立ち得る。これらの組成物は、様々な方法で例えば経皮パッチ、スポットオンまたは軟膏として投与され得る。
【００７１】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述の医薬組成物を単位剤形に製剤化することが特に有利である。本明細書および特許請求の範囲で使用する単位剤形は、一体型投与に好適な物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤またはコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸剤、分包散剤、カシェ剤、注射用溶液または懸濁剤、小さじ量および大さじ量など、ならびにそれらを分割して複合したものがある。
【００７２】
正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、処置される特定の病態、処置される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、障害の程度および全身の健康状態ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、前記有効１日量は、治療対象の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて減少または増加され得ることが明らかである。
【００７３】
投与方法に応じて、医薬組成物は、有効成分を０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％および薬学的に許容される担体を１〜９９．９５重量％、好ましくは３０〜９９．９重量％、より好ましくは５０〜９９．９重量％含むことになるであろう。パーセンテージは、全て組成物の全重量に基づく。
【００７４】
本化合物は、経口、経皮もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、鼻腔スプレー、点眼剤を介したものもしくはクリーム、ゲルもしくはシャンプーなどを介したものなどの局所投与のために使用することができる。本化合物は、経口投与されることが好ましい。正確な投与量および投与頻度は、当業者によく知られているように、使用される式（Ｉ）による特定の化合物、処置される特定の病態、処置される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、障害の程度および全身の健康状態ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、前記有効１日量は、治療対象の応答に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて減少または増加され得ることが明らかである。
【００７５】
単回剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる式（Ｉ）の化合物の量は、処置される疾患、哺乳動物種および特定の投与方式に応じて変動するであろう。しかし、一般的な指針として、本発明の化合物の好適な単位用量は、例えば、好ましくは０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇの有効化合物を含有し得る。好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約５００ｍｇである。より好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約３００ｍｇである。より一層好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約１００ｍｇである。このような単位用量は、１日２回以上、例えば１日２、３、４、５または６回、しかし好ましくは１日当たり１または２回投与することができるため、体重７０ｋｇの成人のための総用量は、１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇの範囲である。好ましい投与量は、１回の投与につき対象の体重１ｋｇ当たり０．０１〜約１．５ｍｇであり、このような治療は、数週間または数カ月間、場合により数年間にわたり得る。しかし、当然のことながら、当業者によく理解されているように、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、使用する特定の化合物の活性、処置される個体の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事、投与時間および投与経路、排泄率、以前投与された他の薬物ならびに治療を受ける特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存するであろう。
【００７６】
典型的な投与量は、１ｍｇ〜約１００ｍｇの錠剤もしくは１ｍｇ〜約３００ｍｇの錠剤を１錠、１日１回もしくは１日数回服用または活性成分の含量を比較的多く含有する徐放カプセル剤もしくは錠剤を１つ、１日１回服用とすることができる。徐放効果は、異なるｐＨ値で溶解するカプセル材料により、浸透圧で徐々に放出するカプセルにより、または他の既知の任意の放出制御手段により得ることができる。
【００７７】
当業者に明らかであろうように、これらの範囲外の投与量を使用することが必要となる場合があり得る。さらに、臨床医または治療医は、個々の患者の応答に応じて治療を開始、中断、調整または終了する方法および時点を知っているであろうことにも留意されたい。
【００７８】
上記の組成物、方法およびキットについて、当業者は、それぞれに使用するのに好ましい化合物が上記で好ましいと記載されている化合物であることを理解するであろう。組成物、方法およびキットについてより一層好ましい化合物は、下記の非限定的な実施例で提供される化合物である。
【実施例】
【００７９】
実験の部
以下では、「ａｑ．」という用語は、水性を意味し、「ｒ．ｍ．」は、反応混合物を意味し、「ｒ．ｔ．」は、室温を意味し、「ＤＩＰＥＡ」は、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミンを意味し、「ＤＩＰＥ」は、ジイソプロピルエーテルを意味し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを意味し、「ＤＭＦ」は、ジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを意味し、「ＥｔＯＨ」は、エタノールを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は、エチルアセテートを意味し、「ＡｃＯＨ」は、酢酸を意味し、「ｉＰｒＯＨ」は、イソプロパノールを意味し、「ｉＰｒＮＨ２」は、イソプロピルアミンを意味し、「ＭｅＣＮ」は、アセトニトリルを意味し、「ＭｅＯＨ」は、メタノールを意味し、「Ｐｄ（ＯＡｃ）２」は、パラジウム（ＩＩ）ジアセタートを意味し、「ｒａｃ」は、ラセミを意味し、「ｓａｔ．」は、飽和を意味し、「ＳＦＣ」は、超臨界流体クロマトグラフィーを意味し、「ＳＦＣ−ＭＳ」は、超臨界流体クロマトグラフィー／質量分析を意味し、「ＬＣ−ＭＳ」は、液体クロマトグラフィー／質量分析を意味し、「ＧＣＭＳ」は、ガスクロマトグラフィー／質量分析を意味し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ＲＰ」は、逆相を意味し、「ＵＰＬＣ」は、超高速液体クロマトグラフィーを意味し、「Ｒｔ」は、保持時間（分）を意味し、「［Ｍ＋Ｈ］＋」は、化合物の遊離塩基のプロトン化質量を意味し、「ＤＡＳＴ」は、三フッ化ジエチルアミノ硫黄を意味し、「ＤＭＴＭＭ」は、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドを意味し、「ＨＡＴＵ」は、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを意味し、「ＨＢＴＵ」は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチル−Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェートを意味し、「Ｘａｎｔｐｈｏｓ」は、（９，９−ジメチル−９Ｈ−キサンテン−４，５−ジイル）ビス［ジフェニルホスフィン］を意味し、「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を意味し、「Ｅｔ２Ｏ」は、ジエチルエーテルを意味し、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを意味し、「ＮＭＲ」は、核磁気共鳴を意味し、ＬＤＡは、リチウムジイソプロピルアミドを意味し、「ＤＩＰＡ」は、ジイソプロピルアミンを意味し、「ｎ−ＢｕＬｉ」は、ｎ−ブチルリチウムを意味する。「ｈ」は、時間を意味する。「ｍｉｎ」は、分を意味し、「Ｎａ２ＣＯ３」は、炭酸ナトリウムを意味し、「ＮａＨＣＯ３」は、重炭酸ナトリウムを意味し、「ｓｏｌ．」は、溶液を意味し、「ＭｇＳＯ４」は、硫酸マグネシウムを意味し、「ＮＨ４Ｃｌ」は、塩化アンモニウムを意味し、「ＢＯＣ」は、ｔ−ブトキシカルボニルを意味し、「ＤＭＡＰ」は、ジメチルアミノピリジンを意味し、「ＮＢＳ」は、Ｎ−ブロモスクシンイミドを意味し、「Ｐｄ（ＰＰｈ３）４」は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）を意味し、「ＤＢＵ」は、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンを意味し、「ＳＱＤ」は、シングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は、質量選択検出器を意味し、「ＢＥＨ」は、架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」は、ダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は、高強度シリカを意味し、「Ｑ−Ｔｏｆ」は、四重極飛行時間型質量分析計を意味し、「ＣＬＮＤ」は、化学発光窒素検出器を意味し、「ＥＬＳＤ」は、蒸発光散乱検出器を意味する。
【００８０】
立体化学的配置の割り当ておよび図形表示
中間体／化合物の中心Ｃ４ａおよびＣ１０ａの立体配置は、以下のように示されている：
ａ）中間体／化合物がエナンチオピュアであり、絶対立体配置が知られている場合、例えば立体配置がＣ４ａ（Ｒ）、Ｃ１０ａ（Ｓ）に対応し、化合物が単一のジアステレオ異性体およびエナンチオピュアである場合、コアは、
【化２０】
2020509068.tif 000022
として表され；
ｂ）中間体／化合物がエナンチオピュアであるが、絶対立体配置が知られていない場合、コアは、
【化２１】
2020509068.tif 000023
（ここで、楔は、シスジアステレオ異性体を示すためにランダムに割り当てられている）として表され；シス相対配置の他の純粋なエナンチオマーが単離されている場合、中間体／化合物は、他の単離エナンチオマー中間体／化合物と区別するために、
【化２２】
2020509068.tif 000024
として表され；
ｃ）中間体／化合物がシス相対配置の２つのエナンチオマーのラセミ混合物である場合、コアは、
【化２３】
2020509068.tif 000025
として表されている。
【００８１】
中間体／化合物の立体化学的絶対配置は、化学合成法およびＮＭＲ（相対立体配置の割り当て）ならびに化合物２、３、１６、２５、８７〜８９、２００および他のエナンチオピュア類似体のＢＡＣＥ１酵素との共結晶化（示された化合物のインビトロ活性と共に、これにより化合物におけるＲ基の好ましい配向を確認することができる）に基づいて理論的に説明されている。
【００８２】
Ａ．中間体の調製
中間体１
【化２４】
2020509068.tif 000026
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＤＩＰＡ（３．５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）の混合物を−２０℃に冷却し、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘプタン中２．７Ｍ、９．２ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分間撹拌した後、ｒ．ｍ．を−７５℃に冷却し、ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の２−フルオロ−３−ヨードピリジン（５．５５ｇ、２５ｍｍｏｌ）を滴下した。−６５℃で２ｈ撹拌を続けた。ｒ．ｍ．を−７５℃に冷却し、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中のギ酸エチル（２．３ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分後、ナトリウムメトキシド（５．８ｍＬ、０．９５ｇ／ｍＬ、２５ｍｍｏｌ、純度２５％）を滴下した。冷却浴を取り除き、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．にし、塩水（５０ｍＬ）、Ｅｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で処理し、層を分離した。水層をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめて塩水（５０ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体１（６．１５ｇ、９４％）を得、これをそのまま次の反応工程で使用した。
【００８３】
中間体２
【化２５】
2020509068.tif 000027
トルエン（１５０ｍＬ）中のメトキシメチルトリフェニルホスホニウムクロリド（８．４ｇ、２４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にカリウムビス（トリメチルシリル）アミド（トルエン中０．７Ｍ、３４ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を−１０℃で滴下した。この温度で３０分間撹拌を続けた。トルエン（２０ｍＬ）中の中間体１（２．１ｇ、８ｍｍｏｌ）を滴下し、２時間後、水（５０ｍＬ）でｒ．ｍ．の反応を停止させ、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して黄褐色の油状物を得た。この油状物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜１０／９０）により精製して、中間体２を油状物（１．８６ｇ、８０％）として得た。
【００８４】
中間体３
【化２６】
2020509068.tif 000028
撹拌し冷却した（−７０℃）、ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の中間体２（３０ｇ、１００ｍｍｏｌ）の混合物に、内部温度を−６５℃未満に維持しながら、イソプロピルマグネシウムクロリド−塩化リチウム錯体（１０５ｍＬ、１．３Ｍ、１４０ｍｍｏｌ）を滴下した。添加が完了したところで、撹拌を１．５ｈ続けた。次いで、シアン化銅（Ｉ）ジ（塩化リチウム）錯体溶液（１０５ｍＬ、１Ｍ、１１０ｍｍｏｌ）を−７０℃で滴下し、１５分後、臭化アリル（２８ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を滴下した。ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．にし、次いで塩水（１００ｍＬ）で反応を停止させ、Ｅｔ２Ｏ（０．３Ｌ）および水（０．１Ｌ）で希釈し、層を分離した。有機層をまずアンモニアで少しずつ青色が消失するまで洗浄し（５×０．２Ｌ）、次いで塩水（０．１Ｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＤＣＭ／ヘプタン  ９８／２〜１００／０）で精製して、中間体３（１９．６ｇ、９３％）を得た。
【００８５】
中間体４
【化２７】
2020509068.tif 000029
中間体３（１９．６ｇ、９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を撹拌し、６ＭのＨＣｌ水溶液（７０ｍＬ、４２０ｍｍｏｌ）で処理し、ｒ．ｍ．を５０℃で３０分間加熱した。ｒ．ｍを氷水（０．２Ｌ）に注ぎ入れ、ｐＨが中性になるまでＮａ２ＣＯ３飽和溶液で処理した。ｒ．ｍ．をＤＣＭ（３×０．１Ｌ）で抽出し、有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させた。得られた溶液にトリエチルアミン（４０ｍＬ、２９０ｍｍｏｌ）、次いで塩酸ヒドロキシルアミン（８ｇ、１２０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を１ｈ続けた。ｒ．ｍ．をＮａＨＣＯ３飽和溶液（０．１Ｌ）で希釈し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、メカニカルスターラーを備えた１Ｌの四つ口フラスコに移し、０℃（内部温度）に冷却した。この冷却した溶液に次亜塩素酸ナトリウム（２１０ｍＬ、４７０ｍｍｏｌ）を滴下した。添加完了後、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．にし、ｒ．ｔ．で終夜撹拌を続けた。層を分離し、水層をＤＣＭ（０．２ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、固体を得、これをＤＩＰＥ（０．１Ｌ）から再結晶させて、中間体４（８．６４ｇ、４４％）を得た。
【００８６】
中間体５
【化２８】
2020509068.tif 000030
撹拌し冷却した（−７０℃）中間体４（０．３５ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液にＴＨＦ中の臭化フェニルマグネシウム（８．６ｍＬ、１Ｍ、８．６ｍｍｏｌ）を滴下し、ｒ．ｍ．をこの温度に１ｈ維持し、次いで室温にし、終夜撹拌を続けた。ｒ．ｍ．の反応をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（５ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で停止させ、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめて塩水（１０ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜５／１００）により精製し、得られた残渣（０．３５ｇ）をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ２０／８０〜９０／１００）によりさらに精製して中間体５を白色固体（０．１４ｇ、２８％、シス／トランス  ８５／１５）として得た。
【００８７】
中間体６
【化２９】
2020509068.tif 000031
水素化フラスコにラネーニッケル（０．１５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）および中間体５（０．１５ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を投入した。ｒ．ｍ．を水素雰囲気下で６ｈ撹拌し、次いで珪藻土の小プラグで濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜５／９５）により精製して、中間体６（０．１５ｇ、９９％、シス／トランス  ９６／４）を得た。
【００８８】
中間体７
【化３０】
2020509068.tif 000032
中間体６（０．１５ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．２ｍＬ）溶液を撹拌し、ベンゾイルイソチオシアナート（１２０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）で処理した。ｒ．ｔ．で３時間後、ｒ．ｍ．を水（１ｍＬ）で処理し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜５／９５）により精製して、中間体７（０．１３ｇ、５３％、シス）を得た。
【００８９】
中間体８
【化３１】
2020509068.tif 000033
中間体７（０．１３ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を撹拌し、１−クロロ−Ｎ，Ｎ−２−トリメチルプロペニルアミン（５８μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）で処理し、その後のｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で終夜撹拌した。ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（６ｍＬ）を添加し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して油状物を得た。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜４０／６０）で精製して、中間体８を白色固体（０．１ｇ、８３％、シス）として得た。
【００９０】
中間体９
【化３２】
2020509068.tif 000034
撹拌し冷却した（５℃）２−フルオロフェニルマグネシウムブロミド（２０ｍＬ、１Ｍ、２０ｍｍｏｌ）の不均一混合物に中間体４（２ｇ、９．８ｍｍｏｌ）のトルエン（４０ｍＬ）溶液を滴下した。添加が完了したところで、３０分間撹拌を続け、次いでｒ．ｍ．の反応をＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（５０ｍＬ）、水（０．１Ｌ）で停止させ、層を分離した。水相をＥｔＯＡｃ（３×０．１Ｌ）で抽出し、有機層をまとめて塩水（０．１Ｌ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００〜１００／０）により精製して、中間体９をオフホワイト色の泡状物として得た（２．４５ｇ、８３％、シス／トランス  ９３／７）。
【００９１】
中間体１０
【化３３】
2020509068.tif 000035
中間体６の合成について報告したものと同様の合成手順に従って中間体１０を調製した。中間体９（２．８ｇ、９．３２ｍｍｏｌ）から出発して中間体１０を得、これをそのまま次の工程に使用した（２．８ｇ、定量的、シス／トランス  ９６／４）。
【００９２】
中間体１１
【化３４】
2020509068.tif 000036
中間体７の合成について報告したものと同様の合成手順に従って中間体１１を調製した。中間体１０（１．６ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）から出発して中間体１１を白色泡状物として得た（２．２２ｇ、９０％、シス）。
【００９３】
中間体１２
【化３５】
2020509068.tif 000037
中間体８の合成について報告したものと同様の合成手順に従って中間体１２を調製した。中間体１１（２．２２ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）から出発して中間体１２を白色固体として得た（１．４ｇ、６６％、シス）。
【００９４】
中間体１３
【化３６】
2020509068.tif 000038
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の中間体１２（１．５ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にＢＯＣ−無水物（０．９ｇ、４．１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０１ｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を添加し、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で３ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（５ｍＬ）で希釈し、層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜２／９８）で精製して、中間体１３を白色固体として得た（１．１ｇ、６０％、シス）
【００９５】
中間体１４
【化３７】
2020509068.tif 000039
中間体１３（１．１ｇ、２ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（５０ｍＬ）懸濁液を撹拌し、ＮＢＳ（０．４６ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。１６ｈ後、ｒ．ｍ．をＤＣＭ（０．１Ｌ）およびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈し、層を分離した。有機層を塩水で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して固体を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜５０／５０）で精製して、中間体１４を白色固体として得た（０．８ｇ、６４％、シス）。
【００９６】
中間体１５
【化３８】
2020509068.tif 000040
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の中間体１４（０．８ｇ、１．３ｍｍｏｌ）の混合物を撹拌し、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）で処理した。１ｈ後、ｒ．ｔ．において、この混合物をＮａＨＣＯ３飽和水溶液でｐＨが約８になるまで希釈し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体１５を白色粉末として得た（０．６７ｇ、９９％、シス）。
【００９７】
中間体１６
【化３９】
2020509068.tif 000041
マイクロ波管に中間体１５（１５０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、シクロプロピルボロン酸（３５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（１０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム三塩基性（２００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）、トルエン（５ｍＬ）および水（０．１ｍＬ）を投入した。ｒ．ｍ．を５分間激しく撹拌しながら窒素でパージし、次いで管に蓋をし、ＤｒｙＳｙｎ金属ヒーティングブロック中、１２０℃で３ｈ加熱した。ｒ．ｍ．を冷却し、水（５ｍＬ）およびトルエン（２０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、続いて有機層を塩水（１０ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜４０／６０）で精製して、中間体１６を固体として得た（７２ｍｇ、５２％、シス）として得た。
【００９８】
中間体１７
【化４０】
2020509068.tif 000042
マイクロ波管に中間体１２（０．２ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（２ｍＬ、３２ｍｍｏｌ）を投入した。管に蓋をし、ＤｒｙＳｙｎ金属ヒーティングブロック中、１００℃で１６ｈ加熱し、次いでｒ．ｍ．を真空中で濃縮した。粗生成物をＤＣＭ（１０ｍＬ）および水（１ｍＬ）で希釈した。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、黄褐色の固体を得た。この混合物を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ；移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３溶液（水中）、ＭｅＯＨ）により精製して、中間体１７を白色固体として得た（０．０８ｇ、４０％、シス）。
【００９９】
中間体１８
【化４１】
2020509068.tif 000043
化合物２（１０４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルメチルクロリド（１１５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を撹拌し、トリエチルアミン（６５μＬ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を８０℃で４ｈ加熱した。混合物を冷却し、氷水（約１０ｍＬ）に注ぎ、次いで濾過した。残った固体をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、黄褐色の油状物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜５／９５）で精製して、中間体１８を白色固体として得た（０．１４ｇ、８０％、シス）。
【０１００】
中間体１９
【化４２】
2020509068.tif 000044
ＭｅＣＮ（１５ｍＬ）中の中間体１８（０．１４ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の混合物を投入したマイクロ波管をトリメチルクロロシラン（０．１２ｍＬ、０．９７ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（０．１５ｇ、０．９８ｍｍｏｌ）で処理した。管に蓋をし、５０℃で３日間加熱した。ｒ．ｍ．をＤＣＭ（５０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で希釈し、層を分離した。有機層を塩水（１０ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、暗褐色の油状物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１０／９０）で精製して、中間体１９を黄色がかった固体として得た（０．１１ｇ、８１％、シス）。
【０１０１】
中間体２０
【化４３】
2020509068.tif 000045
窒素下において１−ブロモ−２，４−ジフルオロベンゼン（９．６９９ｍＬ、７０．５１ｍｍｏｌ）を４３ｍＬのＴＨＦ中で攪拌し、ｒ．ｍ．を−１５℃に冷却した。イソプロピルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中２Ｍ、４３．０４８ｍＬ、８６．１ｍｍｏｌ）を−１５℃で滴下し、ｒ．ｍ．を０〜５℃で１ｈ撹拌し、次いで再度−１５℃に冷却した。４３ｍｌのＴＨＦに溶解した中間体４（７．２ｇ、３５．２６ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を室温に到達させた後、６０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和溶液に滴下し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体２０を得た（１１．１５ｇ、９９％、シス／トランス混合物）。
【０１０２】
中間体２１
【化４４】
2020509068.tif 000046
ＥｔＯＨ（４７３ｍＬ）中のＲａｎｅｙ（登録商標）−Ｎｉｃｋｅｌ（６４ｇ）およびチオフェン（ＤＩＰＥ中４％、８５ｍＬ）を水素化フラスコに入れた後、ＥｔＯＨ（４７３ｍＬ）に溶解した中間体２０（１７．２ｇ、５４ｍｍｏｌ）を加えた。フラスコを脱気し、次いで水素ガスでフラッシュした後、１４℃で６ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．をｄｉｃａｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＨおよびＴＨＦで洗浄した後、生成物を蒸発により濃縮した。生成物を精製した（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜６／９４）。純粋な画分を蒸発させて、中間体２１を得た（１０．３４ｇ、６０％）。
【０１０３】
中間体２２
【化４５】
2020509068.tif 000047
中間体２１（２．３２ｇ、７．２４ｍｍｏｌ）を氷浴中の１３０ｍＬのＤＣＭに溶解した後、２０ｍＬのＤＣＭ中のベンゾイルイソチオシアナート（１．６６ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）を混合物に滴下し、反応物をｒ．ｔ．で１．５ｈ撹拌した。少量の氷を依然として撹拌しているｒ．ｍ．に加え、生成物を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発によって濃縮した。有機層をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜８０／２０）により精製した。生成物を含む画分を集め、蒸発により濃縮して、中間体２２（３．５０ｇ、定量的）を得た。
【０１０４】
中間体２３
【化４６】
2020509068.tif 000048
窒素フロー下、ｒ．ｔ．において、中間体２２（３．３４ｇ、６．９１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）中で撹拌した後、１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（２．５ｍＬ、１８．９０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応混合物を１０分間撹拌した。反応が完了に至ったところで、２０ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和水溶液で反応を停止させ、１０分間撹拌した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。この物質を氷−ＥｔＯＨ浴中のＤＩＰＥ中で撹拌して、白色固体を得、これを濾別し、オーブン中で乾燥させて、中間体２３を得た（２．５ｇ、７８％）。
【０１０５】
中間体２３Ａおよび２３Ｂ
【化４７】
2020509068.tif 000049
窒素フロー下、ｒ．ｔ．において、中間体２２（３．５ｇ、７．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（９１ｍＬ）中で撹拌した後、１−クロロ−Ｎ，Ｎ，２−トリメチルプロペニルアミン（２．６２ｍＬ、１９．８０ｍｍｏｌ）を滴下し、ｒ．ｍ．を１０分間撹拌した。反応が完了に至ったところで、２０ｍＬのＮａＨＣＯ３飽和水溶液で反応を停止させ、１０分間撹拌した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。この物質をＤＩＰＥ中で撹拌して白色固体を得、これを濾別し、オーブン中で乾燥させて２．４６ｇの混合物を得、これをＰｒｅｐ  ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ３０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％のｉＰｒＮＨ２を含有するＭｅＯＨ）により精製して、中間体２３ａ（１．９９ｇ、３３％、純粋なエナンチオマー）および中間体２３ｂ（１．６７、２８％  純粋なエナンチオマー）を得た。
【０１０６】
中間体２４
【化４８】
2020509068.tif 000050
中間体２３（２．２ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７５ｍＬ）に溶解した後、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．０６ｇ、９．４５ｍｍｏｌ）を添加し、続いて４−ジメチルアミノピリジン（１７３．２１ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加した。ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で３０分間撹拌し、次いで４０ｍＬの水で希釈し、１ＭのＨＣｌを用いてこの物質を酸性化した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた後、濾過し、蒸発により濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製し、生成物を含有する画分を合わせ、蒸発により濃縮して、中間体２４（２．７４ｇ）を得た。
【０１０７】
中間体２４Ａ
【化４９】
2020509068.tif 000051
ＴＨＦ（２０ｍＬ、０．８９ｇ／ｍＬ、０．２５ｍｏｌ）中の中間体２３ａ（２．２ｇ、０．００４７ｍｏｌ）の混合物を撹拌し、ＢＯＣ無水物（１．２４ｇ、０．００５７ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ、０．０００４１ｍｏｌ）で処理した。ｒ．ｔ．で１ｈ撹拌した後、ｒ．ｍ．をＮａＨＣＯ３飽和溶液（２０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめて塩水（２０ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体２４ａを白色泡状物（２．７７ｇ、９９％）として得た。
【０１０８】
中間体２５
【化５０】
2020509068.tif 000052
中間体２４（２．７４ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（８０ｍＬ）に溶解した後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．１２ｇ、６．３０ｍｍｏｌ）をｒ．ｔ．で少量ずつ添加し、次いでｒ．ｍ．を２２ｈ撹拌した（終夜が必要であった）。次いで、ｒ．ｍ．の反応をＫ２ＣＯ３で停止させ、１０分間撹拌した後、有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、次いでＯＬをＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮して、中間体２５（３．１ｇ、ＬＣＭＳは、後処理後に１８％のＢＯＣ脱保護生成物を示した）を得た。
【０１０９】
中間体２５Ａ
【化５１】
2020509068.tif 000053
ＡＣＮ（２５０ｍＬ、０．７９ｇ／ｍＬ、４．８１ｍｏｌ）中の中間体２４ａ（２．７７ｇ、０．００４９ｍｏｌ）の混合物を撹拌し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１ｇ、０．００５６ｍｏｌ）を少量ずつ加え、そのｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で４日間撹拌した後、さらにＮ−ブロモスクシンイミド（０．２ｇ、０．００１１ｍｏｌ）を加え、撹拌をさらに３ｈ続けた。ｒ．ｍ．を４０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３、水（０．１Ｌ）、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめて塩水（０．１Ｌ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、オフホワイト色の固体を得た。これを、ヘプタン中、０〜５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出する１２０ｇのＲｅｄｉｓｅｐフラッシュカラムを使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、中間体２５ａを明るい白色の固体として得た（２．１ｇ、収率６７％）。
【０１１０】
中間体２６
【化５２】
2020509068.tif 000054
中間体２５（３．４４ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）およびギ酸（２０ｍＬ、５３０．１４ｍｍｏｌ）をｒ．ｔ．で１ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．を真空中で濃縮し、粗生成物をＮａ２ＣＯ３飽和水溶液で塩基性化した。ｒ．ｍ．をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、中間体２６を得た（２．９ｇ、９９％、シス）。
【０１１１】
中間体２６Ａ
【化５３】
2020509068.tif 000055
中間体２５ａ（１３．７１ｇ、２１ｍｍｏｌ）およびギ酸（７９．７ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）をｒ．ｔ．で１ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．中に存在するギ酸を蒸発させ、生成物をＮａ２ＣＯ３で塩基性化した後、ＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮し、ＤＩＰＥから結晶化させて、生成物を得た。この結晶を濾別し、乾燥させて、中間体２６ａを得た（９．３２ｇ、８１％）。
【０１１２】
中間体２６Ｂ
【化５４】
2020509068.tif 000056
中間体２３ａ、２４ａ、２５ａおよび２６ａの（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体２３ｂから出発して中間体２６ｂを得た。
【０１１３】
中間体２７
【化５５】
2020509068.tif 000057
中間体１８の合成について報告したものと同様の合成手順に従って中間体２７を調製した。化合物１６（０．４７ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）から出発して中間体２７を得た（０．３９６ｇ、５４％、シス）。
【０１１４】
中間体２８
【化５６】
2020509068.tif 000058
マイクロ波管にジメチルアセトアミド（１０ｍＬ）中のトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）、１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（３０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）を投入し、窒素で脱気し、次いで中間体２７（１５０ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）、亜鉛末（５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（１０８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加した。管に蓋をし、１２０℃で１２ｈ加熱した。ｒ．ｍ．を冷却し、氷水（３０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめて水（２×５ｍＬ）で処理し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、褐色の固体を得た。この固体をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製して、中間体２８を白色固体として得（０．１５９ｇ、定量的、シス）、これをそのまま次の工程で使用した。
【０１１５】
中間体２９
【化５７】
2020509068.tif 000059
化合物１７（１．８９ｇ、４．２９ｍｍｏｌ、Ｅ４、第２工程に記載のようにＤＢＵによるＣｂｚ切断で中間体２６から得られた）をＤＭＦ（１４３．８ｍＬ）に溶解した後、トリメチルアミン（１．１９ｍＬ、８．６ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリフェニルメチルクロリド（３．５９ｇ、１２．８８ｍｍ）を加えた。次いで、ｒ．ｍ．を８０℃に１８ｈ加熱し、次いで約２００ｍＬの氷水に注いだところ、褐色の固体が沈殿した。これを濾別した後、ＤＣＭに溶解し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。水層をＥｔＯＡｃで３回洗浄し、有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。有機層を全て合わせ、蒸発により濃縮して、粗中間体２９を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜２／９８）により精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発により濃縮し、次いでＤＩＰＥ中で結晶化させて、中間体２９（１．４２ｇ、４９％）を白色固体として得た。
【０１１６】
中間体２９Ａ
【化５８】
2020509068.tif 000060
化合物４０（０．８７ｇ、１．９７６ｍｍｏｌ）を乾燥ＡＣＮ（７６ｍＬ）に溶解し、次いでＥｔ３Ｎ（０．５５ｍＬ．３．９５ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリフェニルメチルクロリド（０．８２６ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、ｒ．ｍ．を８０℃に１．５ｈ加熱し、次いで溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｋ２ＣＯ３を用いて混合物を塩基性化した後、有機層を塩水（×３）で洗浄し、相を分離した。有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜１０／９０）により精製した。所望の画分を集め、真空下で蒸発させた。化合物をＭｅＯＨからトリチュレートし、結晶を濾別し、乾燥させて、中間体２９ａ（１．３ｇ、９６％）を白色固体として得た。
【０１１７】
中間体３０
【化５９】
2020509068.tif 000061
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５１９．４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（６４９．７ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）をｍｗバイアル内のＤＭＡ（１０６．７ｍＬ）中で混合し、この混合物を、窒素を用いて１０分間脱気した。次いで、中間体２９ａ（１．６ｇ、２．３４ｍｏｌ）を添加し、続いて亜鉛（１８３．９ｍｇ、２．８１ｍｍｏｌ）およびＺｎ（ＣＮ）２（２．２０ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルに蓋をし、１５０℃で４ｈ加熱した。このｒ．ｍ．を氷水に注ぎ、撹拌したところ、褐色の固体が生成した。固体を濾別し、ＤＣＭに溶解し、水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製した。純粋な画分を合わせ、蒸発により濃縮して、中間体３０（１．４７ｇ、定量的）を得た。
【０１１８】
中間体３１
【化６０】
2020509068.tif 000062
１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（１７９．５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、窒素で脱気した、マイクロ波バイアル中の中間体２９（１５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、３−ピリジンボロン酸ピナコールエステル（５４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６０．７ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８ｍＬ）および水（２ｍＬ）の溶液に添加し、マイクロ波バイアルに蓋をして、１００℃で１７ｈ加熱した。ｒ．ｍ．をＤＣＭで抽出し、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）で精製して、中間体３１（６０ｍｇ、４０％、シス）を得た。
【０１１９】
中間体３１Ａ
【化６１】
2020509068.tif 000063
１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（３００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を、Ｎ２で脱気した、マイクロ波バイアル中の中間体２９ａ（２５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、３−ピリジンボロン酸ピナコールエステル（９０．１ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１０１．２ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１３．３ｍＬ）および蒸留水（３．３ｍＬ）の溶液に添加し、マイクロ波バイアルに蓋をして、１００℃で１７ｈ加熱した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を塩水で洗浄し、次いでこの有機物質をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）により精製した。生成物を含有する画分を合わせ、蒸発により濃縮して、中間体３１ａ（２００ｍｇ、８０％）を得た。
【０１２０】
中間体３２
【化６２】
2020509068.tif 000064
７５ｍＬのステンレス鋼オートクレーブに窒素雰囲気下で中間体２９（１６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（３．９ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（４６ｍｇ、０．４６９ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０ｍＬ）を投入した。オートクレーブを閉じ、３０バールＣＯに加圧した。ｒ．ｍ．を１２０℃で１６ｈ撹拌し、次いで溶媒を蒸発させ、水を加え、生成物を、ＤＣＭを用いて抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜２／９８）により精製して、中間体３２をエステルと酸の混合物として得、これをそのまま次の工程で使用した（シス）。
【０１２１】
中間体３２Ａ
【化６３】
2020509068.tif 000065
７５ｍＬのステンレス鋼オートクレーブに窒素雰囲気下で中間体２９ａ（１．１ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（７７．２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（４４ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３８５ｍｇ、３．９３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２０ｍＬ）を投入した。オートクレーブを閉じ、３０バールＣＯに加圧した。ｒ．ｍ．を１２０℃で１９ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．を蒸発させた後、ＤＣＭを加え、混合物をｄｉｃａｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発によって濃縮して、１．４８ｇの生成物を得、これをカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜２／９８）により精製し、生成物を含有する画分を合わせ、蒸発により濃縮して中間体３２ａ（０．９０２ｇ、８３％）を得た。
【０１２２】
中間体３２Ｂ
【化６４】
2020509068.tif 000066
中間体２６ａ、実施例Ｅ２５、中間体２９ａおよび中間体３２ａの（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体２６ｂから出発して中間体３２ｂを得た（３工程にわたって３５％）。
【０１２３】
中間体３３
【化６５】
2020509068.tif 000067
中間体３１の合成について報告したものと同様の合成手順に従って中間体３３を調製した。市販の１−（２−テトラヒドロピラニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−ボロン酸ピナコールエステル（１４７ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）および中間体２９（３００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）から出発して中間体３３を得た（２１５ｍｇ、６５％、シス）。
【０１２４】
中間体３４
【化６６】
2020509068.tif 000068
２−ブロモ−４−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］−１−フルオロベンゼン（ＣＡＳ  １０３７０８８−９８−４，９．３２７ｇ，３０．５５４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下においてＴＨＦ（１８．７ｍｌ）中で攪拌し、次いでこの混合物を−２０℃に冷却した。イソプロピルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中２Ｍ、１８．６５ｍＬ、３７．３０８ｍｍｏｌ）を−２０℃で滴下した。ｒ．ｍ．を０〜５℃で１ｈ撹拌し、次いで−４０℃に冷却した。中間体４（３．１２ｇ、１５．２７７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１８．７ｍＬ）に溶解し、ｒ．ｍ．に滴下し、その後、ｒ．ｔ．に到達させた。次いで、ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液を添加して反応を停止させ、この混合物をＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １／９９〜２／９８）により精製した。所望の画分を集め、溶媒を真空中で蒸発させて、黄色がかった泡状物として中間体３４を得た（４．５５ｇ、６９％、シス／トランス）。
【０１２５】
中間体３５
【化６７】
2020509068.tif 000069
中間体６、中間体７および中間体８の（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体３４から出発して中間体３５を調製した（３工程にわたって６６％、シス）。
【０１２６】
中間体３６
【化６８】
2020509068.tif 000070
トリブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中１Ｍ、２．４２ｍＬ、２．４２ｍｍｏｌ）を中間体３５（１ｇ、１．７３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１９．７ｍＬ）溶液に滴加した。ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で４０分間撹拌し、次いで１００ｍＬのＤＣＭで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和溶液、ＭｅＯＨ中のアンモニアで５℃未満の温度を維持しながら塩基性化し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製した。所望の画分を集め、溶媒を蒸発させて、中間体３６を得た（７９０ｍｇ、９９％、シス）。
【０１２７】
中間体３７
【化６９】
2020509068.tif 000071
中間体３１ａの合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体２９ａおよび２−メトキシフェニルボロン酸から出発して中間体３７を調製した。
【０１２８】
中間体３８
【化７０】
2020509068.tif 000072
中間体３６（２６０ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１８ｍＬ）中で撹拌した。Ｎａ２ＣＯ３（１７８ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）および（ブロモメチル）シクロプロパン（６０６ｍｇ、４．４９ｍｍｏｌ）を加え、反応物を４０℃で１２０ｈ撹拌した。この後、ｒ．ｍ．を真空中で濃縮し、次いで残留物をＤＣＭに溶解し、有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製して、中間体３８を得た（１３０ｍｇ、４５％、シス）。
【０１２９】
中間体３９、３９Ａおよび３９Ｂ
【化７１】
2020509068.tif 000073
中間体１５の合成（中間体１２から）について報告したものと同様の合成手順に従って中間体３９ａを調製した。中間体３５から出発して（それぞれ１〜４時間の範囲の反応時間の２．４１ｇ、１ｇおよび５．１５ｇの３つのバッチを精製のために合わせた）、中間体３９を得、次いでこれを分取ＳＦＣ（固定相：Ｋｒｏｍａｓｉｌ（Ｒ、Ｒ）Ｗｈｅｌｋ−Ｏ  １（２５×２５０ｍｍ）、移動相：ＣＯ２、０．４％ｉＰｒＮＨ２を含有するｉＰｒＯＨ）により分離して、所望の中間体３９ａ（９４２ｍｇ、１６％）および中間体３９ｂ（９１４ｍｇ、１６％）を得た。
【０１３０】
中間体４０
【化７２】
2020509068.tif 000074
中間体３６（４６０ｍｇ、０．９９２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下においてＤＣＭ（１９ｍＬ）中で撹拌した。ＤＩＰＥＡ（６４１ｍｇ、４．９６２ｍｍｏｌ）を添加し、ｒ．ｍ．を０℃に冷却した。トリフリン酸無水物（ＤＣＭ中１Ｍ、１．７ｍｌ、１．７ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．に到達させ、１時間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ制御後、トリフリン酸無水物０．６ｍＬを加え、ｒ．ｍを加え、ｒ．ｔ．で１ｈ撹拌した。次いで、４０ｍＬのＤＣＭを加え、ｒ．ｍ．を５℃に冷却した。１０ｍＬの水を滴下し、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で１０分間撹拌した。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＤＣＭ）によって精製して、中間体４０（５２０ｍｇ、８８％、シス）を得た。
【０１３１】
中間体４１
【化７３】
2020509068.tif 000075
中間体４０（２００ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ）を１，２−ジメトキシエタン（２ｍＬ）中で撹拌した。ピリミジン−５−ボロン酸（５４ｍｇ、０．４３７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１５ｍｇ、０．０６７２ｍｍｏｌ）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（４２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３溶液（２Ｍ、１ｍＬ）を加えた。ｒ．ｍ．を９０℃で４ｈ撹拌し、次いでｒ．ｔ．に冷却し、ＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。続いて行う２回のフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９、次いでＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  １０／９０〜３０／７０）により、中間体４１を得た（２０５ｍｇ、７７％、シス）。
【０１３２】
中間体４２
【化７４】
2020509068.tif 000076
中間体３１ａの合成について報告したものと同様の合成手順に従って、中間体２９ａおよび５−メトキシピリジン−３−ボロン酸から出発して中間体４２を調製した（７７ｍｇ、収率９９％）。
【０１３３】
中間体４３
【化７５】
2020509068.tif 000077
中間体３１ａの合成について報告したものと同様の合成手順に従って、中間体２９ａおよび５−メトキシピリジン−３−ボロン酸から出発して中間体４３を調製した（１００ｍｇ、ＬＣ−ＭＳ純度３８％）。
【０１３４】
中間体４４
【化７６】
2020509068.tif 000078
中間体３１ａの合成について報告したものと同様の合成手順に従って、中間体２９ａおよび４−メトキシ−３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジンから出発して中間体４４を調製した（２８０ｍｇ、ＬＣ−ＭＳ純度３７％）。
【０１３５】
中間体４５
【化７７】
2020509068.tif 000079
中間体１３および中間体１４の（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体３５から出発して中間体４５（シス）を得た（２工程にわたって４０％、シス）。
【０１３６】
中間体４６および中間体４７
【化７８】
2020509068.tif 000080
中間体４５（６．３ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６７ｍＬ）懸濁液にＫ２ＣＯ３（５．７５ｇ、４１．６２ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を５０℃で４５分間加熱した後、真空中で濃縮した。ＥｔＯＡｃを加え、有機層をＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、ラセミ混合物を得、これをＰｒｅｐ  ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％のｉＰｒＮＨ２を含有するｉＰｒＯＨ）により精製して、中間体４６を黄色固体として得（２．６１ｇ、５８％）、かつ中間体４７を黄色固体として得た（２．５８ｇ、５８％）。
【０１３７】
中間体４８
【化７９】
2020509068.tif 000081
シアン化亜鉛（１４ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中の中間体４０（１４０ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１４ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に窒素下で添加した。この混合物を１２０℃で２０分間、マイクロ波照射下で加熱し、次いで５４ｍｇの中間体４０の使用から得られたｒ．ｍ．からの別のバッチの物質と混合し、得られた混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、固体をｃｅｌｉｔｅパッドにより濾別した。濾液をＮａ２ＣＯ３飽和水溶液で塩基性化した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜３０／７０）により精製した。所望の画分を集め、溶媒を真空中で蒸発させて、中間体４８（７１ｍｇ）を白色固体（シス）として得た。
【０１３８】
中間体４９
【化８０】
2020509068.tif 000082
窒素下で１−ブロモ−４−クロロ−２−フルオロベンゼン（２０．５１ｇ、９７．９３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ中で攪拌し、ｒ．ｍ．を−１５℃に冷却した。イソプロピルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中２Ｍ、５９．８ｍＬ、１１９．６ｍｍｏｌ）を−１５℃で滴下した。ｒ．ｍ．を０〜５℃で１ｈ撹拌し、次いで−１５℃に冷却した。ＴＨＦ（ＴＨＦの総量１２０ｍＬ）に溶解した中間体４（１０ｇ、４８．９７ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物をｒ．ｔ．に到達させた。次いで、ＮＨ４Ｃｌ飽和溶液を滴下し、このｒ．ｍ．をＤＣＭで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）により精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体４９を得た（８．３ｇ、５１％）。
【０１３９】
中間体５０
【化８１】
2020509068.tif 000083
中間体６、中間体７および中間体８の（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体４９から出発して中間体５０（シス）を得た（３工程にわたって４２％、シス）。
【０１４０】
中間体５１
【化８２】
2020509068.tif 000084
中間体２４ａ（３８０ｍｇ、０．６７２ｍｍｏｌ）をマイクロ波バイアル中の乾燥ＭｅＣＮ（１３８ｍＬ）に溶解した後、Ｎ−クロロスクシンイミド（１３７ｍｇ、１．０３１ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、管に蓋をし、８０℃で８ｈ加熱した。有機層をＤＣＭで希釈し、Ｋ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。有機残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＤＣＭ）により精製して、中間体５１（４００ｍｇ、この物質は、脱ＢＯＣ生成物も含有する）を得た。
【０１４１】
中間体５２
【化８３】
2020509068.tif 000085
中間体２６ａの合成に使用したものと同様の合成手順に従って、中間体５１から出発して中間体５２を得た（２００ｍｇ、６０％）。
【０１４２】
中間体５３
【化８４】
2020509068.tif 000086
中間体３１の合成に使用したものと同様の合成手順に従い、かつ炭酸カリウムの代わりにフッ化セシウムを使用して、中間体３９（ラセミ体）から出発して中間体５７を調製した（２００ｍｇ、７９％、シス）。
【０１４３】
中間体５４
【化８５】
2020509068.tif 000087
中間体４０および中間体４１の（順序での）合成に使用したものと同様の合成順序に従って、中間体５３から出発して中間体５４を調製した（１５％、シス）。
【０１４４】
中間体５５
【化８６】
2020509068.tif 000088
中間体４１の合成に使用したものと同様の合成手順に従って、中間体４０（シス）（４２０ｍｇおよび１００ｍｇの２つのバッチをカラムクロマトグラフィーによる精製前に合わせた）および５−シアノ−３−ピリジニルボロン酸から出発して中間体５５を得た（３２０ｍｇ、６７％）。
【０１４５】
中間体５６
【化８７】
2020509068.tif 000089
中間体３２ａ（５００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で乾燥ＴＨＦ（８３ｍＬ）に溶解した。リチウムトリエチルボロヒドリド（１Ｍ、３．７ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．終夜撹拌した。次いで、ＭｅＯＨを添加し、続いてｐＨ４になるまで１ＭのＨＣｌ（滴下）を添加した。その後、ＤＣＭおよび水を添加し、有機層を分離し、乾燥させ、溶媒を蒸発させた。粗生成物を次の反応工程にそのまま使用した（４４０ｍｇ）。
【０１４６】
中間体５７
【化８８】
2020509068.tif 000090
中間体５６（３４０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．１８５ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ）を添加した。氷バッチで冷却しながらｒ．ｍ．を撹拌し、メタンスルホニルクロリド（６３μＬ、０．８１ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、ＬＣ−ＭＳが所望の生成物への完全な変換を示すまでｒ．ｍを０℃で３ｈ撹拌した。ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。粗生成物を次の反応にそのまま使用した。
【０１４７】
中間体５８
【化８９】
2020509068.tif 000091
中間体５７（３４０ｍｇ、粗製物）をＭｅＯＨ（２２ｍＬ）に溶解した。ナトリウムメトキシド（２８２ｍｇ、５．２１ｍｍｏｌ）を加え、ｒ．ｍ．を６０℃で４ｈ撹拌した後、ｒ．ｔ．に到達させた。ＤＣＭおよび水を添加し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜５０／５０）によって精製して、中間体５８を得た（２００ｍｇ）。
【０１４８】
中間体５９
【化９０】
2020509068.tif 000092
シアン化亜鉛（４７ｍｇ、０．３９２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３．３ｍＬ）中の中間体４０（４６７ｍｇ、０．７８４ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（４５ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に窒素下で添加した。このｒ．ｍ．をマイクロ波照射下において１２０℃で２０分間加熱し、次いでＥｔＯＡｃで希釈し、ｃｅｌｉｔｅパッドに通して固形物を濾別した。濾液をＮａ２ＣＯ３飽和水溶液で塩基性化し、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜３０／７０）で精製して、中間体５９を白色固体として得た（２４１ｍｇ、６５％、シス）。
【０１４９】
中間体６０
【化９１】
2020509068.tif 000093
水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中２Ｍ、０．２１ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を、−２０℃に冷却した窒素下で中間体５９（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１３．３ｍＬ）溶液に滴下した。この溶液をｒ．ｔ．で１６ｈ撹拌し、次いで氷浴で冷却し、５％ロッシェル塩溶液で反応を停止させた。この混合物をＤＣＭで抽出し、有機層を集め、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製して、中間体６０を無色の油状物として得た（５８ｍｇ、純度７８％、４５％、シス）。
【０１５０】
中間体６１
【化９２】
2020509068.tif 000094
ジクロロエタン（１．６ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２．７ｍＬ）中の中間体６０（５８ｍｇ、純度７８％）の溶液に酢酸ナトリウム（１３ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびメトキシアセトン（２３μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。３０分間撹拌した後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（５２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。その後、ｒ．ｍ．を３０分間撹拌し、次いで残留物をＤＣＭで希釈した。有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液および塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させて、中間体６１を無色の油状物として得、次の反応にそのまま使用した（５８ｍｇ、シス）。
【０１５１】
中間体６２
【化９３】
2020509068.tif 000095
Ｂｏｃ無水物（１５０μＬ、０．７０ｍｍｏｌ）を化合物３０（８０ｍｇ、０２３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２００μＬ、１．１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液にｒｔで添加した。ｒ．ｍ．をｒ．ｔ．で終夜撹拌した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液を添加し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ；フラッシュ精製システム、勾配ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜９０／１０  ステップ２０／８０、４０／６０、６０／４０および８０／２０  １２ｇ  ２０分）により精製した。生成物画分を集め、溶媒を蒸発させて、中間体６２（８０ｍｇ、７８％）を無色の油状物として得た。
【０１５２】
中間体６３
【化９４】
2020509068.tif 000096
中間体６２（８０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（３ｍＬ）に溶解した後、Ｎ−ブロモスクシンイミド（４８ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）をｒ．ｔ．で少量ずつ添加し、次いでｒ．ｍ．を６０℃で６ｈ（ＲＴで終夜）撹拌し、反応を完了させた。次いで、ｒ．ｍ．の反応をＮａＨＣＯ３の飽和溶液で停止させ、有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出した。次いで、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ；フラッシュ精製システム、勾配ｎ−ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １００／０〜５０／５０  １２ｇ  ３０分）により精製した。生成物画分を集め、溶媒を蒸発させて、中間体６３（２５ｍｇ、２７％）を白色固体として得た。
【０１５３】
中間体６６
【化９５】
2020509068.tif 000097
ヒドラジン水和物（４６μＬ、０．７６１ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１．４ｍＬ）中のラセミ中間体３９（１００ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ）の混合物に添加して懸濁液を得た。これは、ｒ．ｔ．で１６ｈ撹拌することによって溶液に変化した。次いで、ｒ．ｍ．を蒸発させ、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜１／９９）により精製して、中間体６９（６４ｍｇ、７６％、シス）を白色固体として得た。
【０１５４】
中間体６７
【化９６】
2020509068.tif 000098
トリエチルアミン（１４μＬ、０．１ｍｍｏｌ）およびトリフェニルメチルクロリド（３７ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）を化合物１８（３９ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＣＮ（５ｍＬ）溶液に添加した。ｒ．ｍ．を８０℃に３ｈ加熱した。追加のトリフェニルメチルクロリド（０．４当量）を加え、ｒ．ｍ．を加え、８０℃に１ｈ加熱し、次いで溶媒を蒸発させ、有機残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ｒ．ｍ．をＫ２ＣＯ３で塩基性化した。有機層を塩水（３×）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００〜１０／９０）により精製した。所望の画分を集め、溶媒を蒸発させて、中間体７０を白色固体として得た（２２ｍｇ、３７％、シス）。
【０１５５】
中間体６８および６９
【化９７】
2020509068.tif 000099
Ｉ−２９（４００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１１．４ｍＬ）溶液を−７８℃に冷却した。ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、０．８４ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。次いで、ベンズアルデヒド（０．１８ｍＬ、１．７６ｍｍｏｌ）を滴下し、−７８℃で５分後、反応物をｒｔまで温めた。反応物の反応を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１０ｍＬ）で停止させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（２４ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃ  １００／０〜７０／３０）により精製して、Ｉ−６８（１５５ｍｇ、３４％）およびＩ−６９（１１４ｍｇ、２７％）を得た。
【０１５６】
中間体Ｉ−７０〜Ｉ−７３を、以下に示した出発物質から類似の方法で調製した。
【０１５７】
【表１】
2020509068.tif 000100
【０１５８】
中間体７４
【化９８】
2020509068.tif 000101
Ｎ２下において−７８℃でテトラヒドロ−３−メチル−４Ｈ−ピラン４−オン（［１１９１２４−５３−７］、１ｇ、８．７６ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液にＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１．０Ｍ、９．６４ｍＬ、９．６４ｍｍｏｌ）を添加した。４５分後、１，１，１−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−メタンスルホンアミド（［３７５９５−７４−７］、３．４４ｇ、９．６４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液として滴下し、反応物をｒｔまでゆっくりと温めた。反応物の反応を水（１０ｍＬ）で停止させ、Ｅｔ２Ｏ（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。粗生成物をシリカゲルのゲルクロマトグラフィー（１２ｇ、勾配：ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０：１００〜２０：８０）により精製した。生成物をＥｔＯＡｃで汚染された無色の油状物として単離した（７５０ｍｇ、純度３３％、収率１１％）。
【０１５９】
中間体７５
【化９９】
2020509068.tif 000102
１０ｍＬのＭＷバイアルにＩ−７４（２５０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（［７３１８３−３４−３］、３８６．７８ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）（７４．３０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）およびＫＯＡｃ（２９８．９６ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を投入した。バイアルをＮ２でフラッシュし、次いでジオキサンを加え、反応物を８０℃で終夜撹拌した。反応物を冷却し、ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（勾配：ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、０：１００〜１０：９０）により精製した。前の工程の副生成物と種々の量のヘプタンおよびＥｔＯＡｃとで汚染された生成物を単離した（１５５ｍｇ）。
【０１６０】
Ｂ．最終化合物の調製
実施例Ｅ１  −  化合物１の調製
【化１００】
2020509068.tif 000103
中間体８（３１．３ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液をＤＢＵ（８０μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）で処理し、７０℃で１６ｈ撹拌した。次いで、ｒ．ｍ．を真空中で濃縮した。油状物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜１０／９０）により精製して、化合物１を白色固体として得た（１５．７ｍｇ、６６％、シス）。
【０１６１】
実施例Ｅ２  −  化合物２の調製
【化１０１】
2020509068.tif 000104
化合物１の合成について報告したものと同様の合成手順に従って化合物２を調製した。中間体１２（０．１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）から出発して化合物２を白色固体として得た（７６．６ｍｇ、１００％、シス）。
【０１６２】
実施例Ｅ３  −  化合物２０の調製
【化１０２】
2020509068.tif 000105
化合物１の合成について報告したものと同様の合成手順に従って化合物２０を調製した。中間体１６（７２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）から出発して化合物２０を白色固体として得た（１２．２ｍｇ、２１％、シス）。
【０１６３】
実施例Ｅ４  −  化合物１６の調製
【化１０３】
2020509068.tif 000106
（工程１）ＤＣＭ（５ｍＬ）中の中間体１４（０．１５ｇ、０．２４ｍｏｌ）の混合物を撹拌し、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ｒ．ｍ．をＤＣＭ（２０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３飽和水溶液でｐＨが塩基性になるまで希釈し、層を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して油状物を得た。（工程２）この油状物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、ＤＢＵ（０．３６ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）で処理した。ｒ．ｍ．を６５℃で１６ｈ加熱し、次いでｒ．ｍ．を真空中で濃縮して油状物を得た。この油状物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）により精製して油状物を得、これをＥｔ２Ｏでトリチュレートした。得られた白色固体を乾燥させて（真空オーブン、６０℃、１ｈ）、化合物１６を得た（４７ｍｇ、４７％、シス）。
【０１６４】
実施例Ｅ５  −  化合物３４の調製
【化１０４】
2020509068.tif 000107
化合物１の合成について報告したものと同様の合成手順に従って化合物３４を調製した。中間体１７（８０．１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）から出発して化合物３４を白色固体として得た（２０ｍｇ、３３％、シス）。
【０１６５】
実施例Ｅ６  −  化合物３の調製
【化１０５】
2020509068.tif 000108
マイクロ波管に中間体１９（０．１４ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）およびＡｃＯＨ（１０ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を投入した。管に蓋をし、ＤｒｙＳｙｎ金属ヒーティングブロック中、８０℃で２０ｈ加熱した。次いで、ｒ．ｍ．を真空中で濃縮して、黄色の油状物を得た。この油状物を分取ＳＦＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ；移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３溶液（水中）、ＭｅＯＨ）により精製して、化合物３を白色固体として得た（０．０３７ｇ、４６％、シス）。
【０１６６】
実施例Ｅ７  −  化合物３５および化合物１８２の調製
【化１０６】
2020509068.tif 000109
中間体２３（０．４５ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）溶液をＤＢＵ（１．４ｍＬ、９．６７ｍｍｏｌ）で処理し、密閉容器中、７０℃で１６ｈ撹拌した。次いで、ｒ．ｍ．を真空中で濃縮した。この油状物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜５／９５）により精製して油状物を得た。次いで、この残留物を分取ＨＰＬＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＡＳ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％ｉＰｒＮＨ２を含むｉＰｒＯＨ）により精製して、２つの画分（２つのエナンチオマー）を得た。各画分をＤＩＰＥから結晶化させて、化合物３５（１２７ｍｇ、３６％）および化合物１８３（４２ｍｇ、１２％）を白色固体として得た。
【０１６７】
実施例Ｅ８  −  化合物２２の調製
【化１０７】
2020509068.tif 000110
化合物３の合成について報告したものと同様の合成手順に従って化合物２２を調製した。中間体２８（０．１６ｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）から出発して化合物２２を白色固体として得た（４１．５ｍｇ、４３％、シス）。
【０１６８】
実施例Ｅ９  −  化合物２５の調製
【化１０８】
2020509068.tif 000111
化合物３の合成について報告したものと同様の合成手順に従って化合物２５を調製した。中間体３１（６０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）から出発して化合物２５を固体として得た（２０ｍｇ、５２％、シス）。
【０１６９】
実施例Ｅ１０  −  化合物２４の調製
【化１０９】
2020509068.tif 000112
マイクロ波管に中間体３２（０．１３ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（２ｍＬ）およびＡｃＯＨ（６０ｍＬ）を投入した。管に蓋をし、８０℃で２４ｈ加熱した。ｒ．ｍ．を真空中で濃縮し、粗生成物を水、ＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３で希釈した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００〜２０／８０）により精製した。純粋な画分を集め、蒸発させ、生成物をＥｔ２Ｏから結晶化させた。結晶を濾別し、乾燥させて、化合物２４を得た（２２ｍｇ、２６％、シス）。
【０１７０】
実施例Ｅ１１  −  化合物の８７調製
【化１１０】
2020509068.tif 000113
中間体３１ａ（２００ｍｇ、０．２９４ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（５ｍＬ）を６０℃で１ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．を真空中で濃縮し、次いでＮａ２ＣＯ３飽和水溶液で中和した。ｒ．ｍ．をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜６／９４）により精製して、化合物８７（７９ｍｇ、６１％）を無定形固体として得た。
【０１７１】
実施例Ｅ１２  −  化合物２９の調製
【化１１１】
2020509068.tif 000114
中間体３３（２１５ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を圧力管に入れ、蓋をし、８０℃で１７ｈ撹拌した。ｒ．ｍ．を真空中で濃縮し、次いでＮａ２ＣＯ３で中和した。この混合物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜１０／９０）により精製した。生成物を含有する画分を合わせ、真空中で濃縮して、２５ｍｇの混合物を得、さらに分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ３０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％ｉＰｒＮＨ２を含むＥｔＯＨ）により精製して、化合物２９を得た（７ｍｇ、６％、シス）。
【０１７２】
実施例Ｅ１３  −  化合物３６および１８３の調製
【化１１２】
2020509068.tif 000115
中間体３６から出発して、化合物１の合成について報告されたものと同様の合成手順に従ってラセミ化合物５を得た。化合物５を分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％ｉＰｒＮＨ２を含むＥｔＯＨ）により単一のエナンチオマーに分離して、化合物１８３（９ｍｇ、２３％）および化合物３６（７ｍｇ、１８％）を得た。
【０１７３】
実施例Ｅ１４  −  化合物１８４および１３６の調製
【化１１３】
2020509068.tif 000116
中間体３８から出発して、化合物１の合成について報告されたものと同様の合成手順に従って化合物１４をラセミ混合物として得た。この混合物を分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．２％ｉＰｒＮＨ２を含むＥｔＯＨ）により単一のエナンチオマーに分離して、化合物１８４（３０ｍｇ、２９％）および化合物１３６（２８ｍｇ、２７％）を得た。
【０１７４】
実施例Ｅ１５  −  化合物１０６の調製
【化１１４】
2020509068.tif 000117
１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（７ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下においてマイクロ波バイアル中の化合物４０（２５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、２−メトキシ−４−メチルピリジン−５−ボロン酸（２８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）およびフッ化セシウム（１７ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）の溶液に添加した。バイアルに蓋をし、マイクロ波照射下において１６０℃で５分間、ＬＣ−ＭＳが所望の生成物への完全な変換を示すまで加熱した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜７．５／９２．５）により精製して、化合物１０６を得た（９ｍｇ、３３％）。
【０１７５】
実施例Ｅ１６  −  化合物４２の調製
【化１１５】
2020509068.tif 000118
炭酸カリウム（７４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を中間体３９ａ（７０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（０．８５ｍＬ）懸濁液に加え、この混合物を６５℃で４ｈ加熱した。溶媒を真空中で除去し、次いでＥｔＯＡｃを添加した。有機層をＮａＨＣＯ３飽和溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、７Ｍアンモニア（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）により精製して、化合物４２を白色固体として得た（３３ｍｇ、７０％）。
【０１７６】
実施例Ｅ１７  −  化合物１０８の調製
【化１１６】
2020509068.tif 000119
中間体４３から出発して、化合物８７の合成について報告されたものと同様の合成手順に従って、化合物１０８を含有する粗混合物を得た。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３溶液（水中）、ＭｅＣＮ）により精製して、化合物１０８（２ｍｇ、８％）を得た。
【０１７７】
実施例Ｅ１８  −  化合物１０３の調製
【化１１７】
2020509068.tif 000120
中間体４４から出発して、化合物８７の合成について報告されたものと同様の合成手順に従って、化合物１０３を含有する粗混合物を得た。ＭｅＯＨ（２×）およびＤＩＰＥによる共蒸着後、分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３溶液（水中）、ＭｅＣＮ）により精製して、化合物１０３を得た（２４ｍｇ、３５％）。
【０１７８】
実施例Ｅ２０  −  化合物２７の調製
【化１１８】
2020509068.tif 000121
中間体５６から出発して、化合物１の合成について報告されたものと同様の合成手順に従って、化合物２７を含有する粗混合物を得た。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．４％ｉＰｒＮＨ２を含むＥｔＯＨ）により精製して、化合物２７を得た（６ｍｇ、２６％、シス）。
【０１７９】
実施例Ｅ２１  −  化合物１２、３７および１８６の調製
【化１１９】
2020509068.tif 000122
中間体５５から出発して、化合物１の合成について報告されたものと同様の合成手順に従ってラセミ化合物１２を得た。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．４％ｉＰｒＮＨ２を含むｉＰｒＯＨ）により精製して、化合物３７（４７ｍｇ、２２％）および化合物１８６（５０ｍｇ、２４％）を得た。
【０１８０】
実施例Ｅ２２  −  化合物１０、１８５および３８の調製
【化１２０】
2020509068.tif 000123
中間体４１から出発して、化合物１の合成について報告されたものと同様の合成手順に従ってラセミ化合物１０を得た。分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ、２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、０．４％ｉＰｒＮＨ２を含むＥｔＯＨ）により精製して、化合物１８５（４３ｍｇ、２７％）および化合物３８（４２ｍｇ、２６％）を得た。
【０１８１】
実施例Ｅ２３  −  化合物３０の調製
【化１２１】
2020509068.tif 000124
中間体２１（６５０ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１２ｍＬ）溶液に臭化シアン（５４０．９ｍｇ、５．１１ｍｍｏｌ）のＡＣＮ（３ｍＬ）溶液を加え、この混合物を密閉管中、８５℃で５ｈ撹拌した。反応物をＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカ；フラッシュ精製システム、勾配ＮＨ３（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜５０／５０、ステップ１０／９０、２０／８０、３０／７０および３５／６５  １２ｇ、２５分）により精製した。生成物画分を集め、溶媒を蒸発させて、化合物３０（３４０ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。
【０１８２】
実施例Ｅ２４  −  化合物３１の調製
【化１２２】
2020509068.tif 000125
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（５．８４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下においてマイクロ波バイアル中の中間体６３（２５ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）、ピリジン−３−ボロン酸（１９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（１５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２ｍＬ）および蒸留水（０．５ｍＬ）の溶液に添加し、バイアルに蓋をし、ＭＷ照射下で１６０℃に５分間加熱した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発によって濃縮して、化合物３１（１０ｍｇ、５０％）を得た。
【０１８３】
実施例Ｅ２５  −  化合物４０の調製
【化１２３】
2020509068.tif 000126
中間体２６ａ（９．３２ｇ、１７ｍｍｏｌ）、ＤＢＵ（２５．５ｍＬ、１７１ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（１９２．８ｍＬ）を圧力管に入れ、６０℃で終夜撹拌した。このｒ．ｍ．を蒸発により濃縮した後、この物質をカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＤＣＭ〜５％ＭｅＯＨ（ＤＣＭ中））により２回精製した。生成物を含有する画分を合わせ、蒸発により濃縮して、化合物４０（６．８４ｇ、９１％）を得た。
【０１８４】
実施例Ｅ２６  −  化合物２０２の調製
【化１２４】
2020509068.tif 000127
１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン−パラジウム（ＩＩ）ジクロリドジクロロメタン錯体（２７．８２ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下においてマイクロ波バイアル中の化合物番号４０の溶液、１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および蒸留水（１．２５ｍＬ）中の５−シクロプロピル−３−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−イソキサゾール［１６２８８３２−９５−０］および３−シクロプロピル−５−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−イソキサゾール［１６２８８３２−９６−１］（１７８ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（６９ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、バイアルに蓋をし、マイクロ波照射下で１６０℃に５分間加熱した。有機物質を、ＤＣＭを用いて抽出し、有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ／、ＮＨ３  ７Ｎ  ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００〜５／９５）により精製した。所望の画分を集め、真空中で蒸発させ、Ｐｒｅｐ  ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ２０×２５０ｍｍ、移動相：ＣＯ２、ＥｔＯＨ＋０．４ｉＰｒＮＨ２）により精製して、５９ｍｇの固体を得。これをヘプタンでトリチュレートして、化合物２０２（４０ｍｇ、３６％）を黄色固体として得た。
【０１８５】
化合物２０３を化合物番号４０から類似の方法で調製した。
【０１８６】
【表２】
2020509068.tif 000128
【０１８７】
実施例Ｅ２７  −  化合物２０４の調製
【化１２５】
2020509068.tif 000129
ＡｃＯＨ（２．５ｍＬ、４３．６７ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中のＩ−２９（１１４ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）をＭＷバイアル中で８０℃に終夜加熱した。この反応混合物を減圧下で濃縮した。残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）と飽和Ｎａ２ＣＯ３（２０ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、水層をＤＣＭ（２０ｍＬおよび１０ｍＬ）で抽出した。次いで、有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発により濃縮した。粗生成物をシリカゲルのクロマトグラフィー（１２ｇ、勾配：ＤＣＭ１００％からＤＣＭ／ＭｅＯＨ（ＮＨ３）９７／３まで）により精製した。２種のジアステレオマーの混合物として白色の泡状固体の化合物番号２０４を得た（６４ｍｇ、８５％）。
【０１８８】
化合物２０５〜２０６を、以下に示した出発物質から類似の方法で調製した。
【０１８９】
【表３】
2020509068.tif 000130
【０１９０】
実施例Ｅ２８  −  化合物２０７の調製
【化１２６】
2020509068.tif 000131
化合物番号２０４（６４ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、デス・マーチン・ペルヨージナン（８７．０９ｍｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をｒｔで３ｈ撹拌し、次いでＤＣＭ（１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（５ｍＬ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ３飽和溶液（５ｍＬ）で希釈した。二相混合物を１０分間激しく撹拌し、次いで分液漏斗に移した。有機相を分離し、水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ；移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）により精製して、化合物番号２０７を得た（２５ｍｇ、３９％）。
【０１９１】
化合物２０８を化合物番号２０６から類似の方法で調製した。
【０１９２】
【表４】
2020509068.tif 000132
【０１９３】
実施例Ｅ２９  −  化合物２０９および２１０の調製
【化１２７】
2020509068.tif 000133
Ｎ２雰囲気下において１０ｍＬのＭＷバイアルにＩ−２５ａ（５０ｍｇ、０．０７７６ｍｍｏｌ）、Ｉ−７５（４３．４６３ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１７．９３ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を投入した。ＤＭＥ（０．６ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３飽和溶液（０．２ｍＬ）をシリンジにより添加し、この混合物を１２０℃で３ｈ撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめてＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物をＭｅＯＨに溶解し、密閉容器に移し、８０℃で２ｈ、ＤＢＵで処理した。ＬＣ−ＭＳ分析は、所望の生成物の生成と、副生成物としての化合物番号３５の生成とを示した。揮発物を真空中で除去し、粗生成物をＰｒｅｐ  ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−５μｍ、３０×２５０ｍｍ；移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）による精製に供して、化合物番号２０９（４ｍｇ、１１％）および化合物番号２１０（３．５ｍｇ、１０％）を得た。
【０１９４】
化合物２１１〜２１３をＩ−２５ａから類似の方法で調製した。
【０１９５】
【表５】
2020509068.tif 000134
【０１９６】
実施例Ｅ３０  −  化合物４７の調製
【化１２８】
2020509068.tif 000135
化合物番号４０（５０ｍｇ）を水（２５０μＬ）、ＩＰＡ（１５０μＬ）、ＴＨＦ（１５０μＬ）およびＮＭＰ（１５０μＬ）中の炭酸カリウム（４７ｍｇ、３当量）と混合した。次に、（Ｅ）−２−（３−メトキシプロパ−１−エニル）−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（２２．４９ｍｇ、１当量）およびジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）アセトン付加物（４．３ｍｇ）を添加した。試薬を混合し、ｍｗ照射下において１５０℃で３０分間加熱した。この粗物質を水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物を乾燥し、濾過し、蒸発させて、ガムを得、これを逆相ＨＰＬＣ（溶媒Ｂ−最小１０％、中間６０％、最大９５％）によって精製して、化合物番号４７（１０．４ｍｇ、２１％）を白色固体として得た。
【０１９７】
この実施例におけるＲＰ  ＨＰＬＣへの言及は、分取ＨＰＬＣを用いる精製に関連する。画分を凍結乾燥法により凍結乾燥した。勾配プロファイルは、必要とする化合物と任意の中間体との間の分解能を最大にするために試料毎に調節した。分取ＨＰＬＣシステムは、以下の構成要素から構成された。
Ｈ２ヘッドを備えたＧｉｌｓｏｎ  ３２２ポンプ（０．３〜３０ｍｌ／ｍｉｎ）
半分取フローセルを備えたＧｉｌｓｏｎ１５５検出器（経路長０．５ｍｍ）
Ｇｉｌｓｏｎ  ８１９インジェクタモジュール
Ｇｉｌｓｏｎ  ５０６システムインターフェースモジュール
１００×１６ｍｍチューブが装着されるようにセットされたＧｉｌｓｏｎ  ＦＣ２０４フラクションコレクター
Ｕｎｉｐｏｉｎｔ  ５．１１により制御した。
ＨＰＬＣカラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ、５μｍ  Ｃ１８（２）、１５０ｍｍ×２１．２ｍｍ
【０１９８】
溶媒Ａ：１０ｍＭの酢酸アンモニウムを含有するＨＰＬＣグレード水（ｐＨ未調整）
溶媒Ｂ：ＨＰＬＣグレードアセトニトリル
検出：２３０ｎｍおよび２６０ｎｍ
温度：周囲
【０１９９】
実施例Ｅ３１  −  基本手順フローケミストリーによる化合物の調製（鈴木）
１つの容器にＮＭＰ／ＩＰＡ／ＴＨＦ（４００μＬ）中の化合物番号４０（２０ｍｇ）を入れた。第２の容器において、ボロン酸エステル（３当量）および炭酸カリウム（３１．４ｍｇ、５当量）をＮＭＰ／ＩＰＡ／ＴＨＦ（４００μＬ）に溶解した。第３の容器において、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．６ｍｇ、０．０５当量）をＴＨＦ（４００μＬ）に溶解した。３つの容器をＧｉｌｓｏｎ  ２１５に装填し、２５０μＬの注入ループに注入し、続いて各ポンプを３３μＬ／ｍｉｎで作動させながら、１５０℃に加熱した２ｍＬのステンレス鋼コイル上に注入した。流出物は、２０μＬのループを通して、精製（以下に記載されるように）およびプラットフォームのアッセイ部に自動的に注入された。
【０２００】
ＨＰＬＣ−ＭＳは、ベンダーソフトウェア（ＯｐｅｎＬｙｎｘ  Ｂｒｏｗｓｅｒ（商標）ｖ４．１、ＳＱ検出器ｖ４．１、Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｄｒｉｖｅｒ  Ｖ４．１およびＭａｓｓＬｙｎｘ（商標）ｖ４．１）を使用する、質量分析システム（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ、Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）にタンデム連結された、ＰＤＡ検出器、二元溶媒マネージャーおよびＳＱ検出器を含むＡｃｑｕｉｔｙ（商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ、Ｅｌｓｔｒｅｅ、ＵＫ）を使用して実施した。平行蒸発光散乱検出器（３８５−ＬＣ、Ｖａｒｉａｎ；Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗｏｋｉｎｇｈａｍ、Ｕ．Ｋ．）を、アクティブスプリッタ（Ｍｏｄｅｌ  ＥＨＭＡ、１０ポートバルブ；Ｖａｌｃｏ  Ｉｎｔｒｕｍｅｎｔｓ、独自のＣｙｃｌｏｆｌｕｉｄｉｃハードウェアによりアクティブスプリットを実現）を介してシステムに組み込んだ。直接注入質量分析を、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）ｖ２．０  ＳＲ２、Ｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ  ｖ２．０およびＱｕａｌ  Ｂｒｏｓｗｅｒ  ｖ２．０ベンダーソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用するＴｈｅｒｍｏＱｕｅｓｔ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱｄｕｏで行った。
【０２０１】
以下の条件を採用した。
【０２０２】
【表６】
2020509068.tif 000136
【０２０３】
次の試料分析前にスタートアップ方法を用いて平衡化を行った。
【０２０４】
実施例Ｅ３２  −  フローケミストリーによる化合物の調製（アルキル化、続いて鈴木）
【化１２９】
2020509068.tif 000137
１つの容器に対し、ＮＭＰ（０．２５ｍＬ）に溶解したＩ−４７（１５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（０．０１２ｍＬ、０．０８４ｍｍｏｌ）を入れ、第２の容器に例えばＮＭＰ（０．２５ｍＬ）中の臭化ベンジル（６．６２μＬ、０．０５６ｍｍｏｌ）を入れた。これらの材料を、Ｇｉｌｓｏｎ  ２１５を用いて２５０μＬの注入ループに自動的に注入し、続いて２ｍＬの加熱コイル中において８０℃で２０分間混合した。流出物に例えばＩＰＡ（０．１００ｍＬ）中のフェニルボロン酸（５．１０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１１．５５ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を混合し、ＴＨＦ（０．１００ｍＬ）および水（０．０５ｍＬ）を２５０μＬの注入ループにロードし、ＩＰＡ（０．２５ｍＬ）中のＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１．０５９ｍｇ、１．３９３ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（０．２５ｍＬ）を２５０μＬの注入ループにロードした。この材料を２ｍＬの加熱コイル中で１４０℃に１０分間加熱した。生成物を注入バルブに通し、実施例Ｅ３１に記載のように精製して、化合物番号１３８（収率４％）を得た。
【０２０５】
実施例Ｅ３３  −  化合物１８８の調製
【化１３０】
2020509068.tif 000138
ＤＭＦ（１．１９２ｍＬ）中のＩ−４６（５０ｍｇ、０．０９２９ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（９０．７６８ｍｇ、０．２７９ｍｍｏｌ）および２−フルオロピリジン（［３７２−４８−５］、９．７８７μＬ、０．１１１ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃に３ｈ加熱した。溶媒を蒸発により除去した。Ａをカラムクロマトグラフィー（シリカ、７ＭのＮＨ３（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００〜４／９６）により精製した。所望の画分を集め、溶媒を真空下で蒸発させた。化合物をヘプタンでトリチュレートして、化合物番号１８８（２０．５ｍｇ、４３％）を黄色がかった固体として得た。
【０２０６】
下の表１〜４に例示され（＊Ｅｘ．Ｎｏ．）、上記実施例の１つと同様に調製された（Ｅｘ  Ｎｏ．で示される）式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物を列挙する。塩の形態が示されていない場合、その化合物は、遊離塩基として得られたものである。「Ｅｘ．Ｎｏ．」は、実施例番号を指し、そのプロトコルに従ってその化合物が合成された。「Ｃｏ．Ｎｏ．」は、化合物番号を意味する。
【０２０７】
【表７】
2020509068.tif 000139
【０２０８】
【表８】
2020509068.tif 000140
【０２０９】
【表９】
2020509068.tif 000141
【０２１０】
【表１０】
2020509068.tif 000142
【０２１１】
【表１１】
2020509068.tif 000143
【０２１２】
【表１２】
2020509068.tif 000144
【０２１３】
【表１３】
2020509068.tif 000145
【０２１４】
【表１４】
2020509068.tif 000146
【０２１５】
【表１５】
2020509068.tif 000147
【０２１６】
【表１６】
2020509068.tif 000148
【０２１７】
【表１７】
2020509068.tif 000149
【０２１８】
【表１８】
2020509068.tif 000150
【０２１９】
【表１９】
2020509068.tif 000151
【０２２０】
【表２０】
2020509068.tif 000152
【０２２１】
【表２１】
2020509068.tif 000153
【０２２２】
【表２２】
2020509068.tif 000154
【０２２３】
【表２３】
2020509068.tif 000155
【０２２４】
【表２４】
2020509068.tif 000156
【０２２５】
【表２５】
2020509068.tif 000157
【０２２６】
【表２６】
2020509068.tif 000158
【０２２７】
【表２７】
2020509068.tif 000159
【０２２８】
【表２８】
2020509068.tif 000160
【０２２９】
【表２９】
2020509068.tif 000161
【０２３０】
【表３０】
2020509068.tif 000162
【０２３１】
【表３１】
2020509068.tif 000163
【０２３２】
【表３２】
2020509068.tif 000164
【０２３３】
【表３３】
2020509068.tif 000165
【０２３４】
【表３４】
2020509068.tif 000166
【０２３５】
Ｃ．分析の部
融点
値は、ピーク値または融解範囲であり、この分析方法に通常付随する実験上の不確実性を伴って得られる。
【０２３６】
ＤＳＣ８２３ｅ
複数の化合物について、ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）で融点を測定した。融点を１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は、３００℃であった。
【０２３７】
ＬＣＭＳ
ＬＣＭＳ基本手順１
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定を、それぞれの方法で指定されたＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）検出器またはＵＶ検出器およびカラムを使用して行った。必要に応じて追加の検出器を含めた（下の方法の表を参照されたい）。
【０２３８】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を備えた質量分析計（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。化合物は、それらの実測保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データの表で別に指定しない場合、報告した分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に対応する。化合物を直接イオン化できなかった場合、付加物の種類を記載する（すなわち［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）について、報告される値は、最も低い同位体質量について得られた値である。全ての結果は、用いられた方法に通常付随する実験上の不確実性を伴って得られた。
【０２３９】
以下では、「ＳＱＤ」は、シングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は、質量選択検出器を意味し、「ＲＴ」は、室温を意味し、「ＢＥＨ」は、架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」は、ダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は、高強度シリカを意味し、「Ｑ−Ｔｏｆ」は、四重極飛行時間型質量分析計を意味し、「ＣＬＮＤ」は、化学発光窒素検出器を意味し、「ＥＬＳＤ」は、蒸発光散乱検出器を意味する。
【０２４０】
【表３５】
2020509068.tif 000167
【０２４１】
【表３６】
2020509068.tif 000168
【０２４２】
【表３７】
2020509068.tif 000169
【０２４３】
ＬＣＭＳ基本手順２
ＨＰＬＣ−ＭＳを、ベンダーソフトウェア（ＯｐｅｎＬｙｎｘ  Ｂｒｏｗｓｅｒ（商標）ｖ４．１、ＳＱ検出器ｖ４．１、Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｄｒｉｖｅｒ  Ｖ４．１およびＭａｓｓＬｙｎｘ（商標）ｖ４．１）を使用する、質量分析システム（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ、Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）にタンデム連結された、ＰＤＡ検出器、二元溶媒マネージャーおよびＳＱ検出器を含むＡｃｑｕｉｔｙ（商標）Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＬＣシステム（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ、Ｅｌｓｔｒｅｅ、ＵＫ）を使用して実施した。平行蒸発光散乱検出器（３８５−ＬＣ、Ｖａｒｉａｎ；Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｗｏｋｉｎｇｈａｍ、Ｕ．Ｋ．）を、アクティブスプリッタ（Ｍｏｄｅｌ  ＥＨＭＡ、１０ポートバルブ；Ｖａｌｃｏ  Ｉｎｔｒｕｍｅｎｔｓ、独自のＣｙｃｌｏｆｌｕｉｄｉｃハードウェアによりアクティブスプリットを実現）を介してシステムに組み込んだ。直接注入質量分析を、Ｘｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）ｖ２．０  ＳＲ２、Ｔｕｎｅ  Ｐｌｕｓ  ｖ２．０およびＱｕａｌ  Ｂｒｏｓｗｅｒ  ｖ２．０ベンダーソフトウェア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用するＴｈｅｒｍｏＱｕｅｓｔ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱｄｕｏで行った。
【０２４４】
【表３８】
2020509068.tif 000170
【０２４５】
【表３９】
2020509068.tif 000171
【０２４６】
次の試料分析前にスタートアップ方法を用いて平衡化を行った。
【０２４７】
【表４０】
2020509068.tif 000172
【０２４８】
【表４１】
2020509068.tif 000173
【０２４９】
【表４２】
2020509068.tif 000174
【０２５０】
ＳＦＣＭＳ
基本手順
ＳＦＣ測定を、二酸化炭素（ＣＯ２）およびモディファイアを供給するバイナリポンプ、オートサンプラー、カラムオーブン、４００バールまで耐用する高圧フローセルを備えたダイオードアレイ検出器で構成される分析超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）システムを使用して行った。質量分析計（ＭＳ）が配置されている場合、カラムからの流れを（ＭＳ）に導入した。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ取込時間など）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。データ取得は、適切なソフトウェアを用いて行った。
【０２５１】
【表４３】
2020509068.tif 000175
【０２５２】
【表４４】
2020509068.tif 000176
【０２５３】
異性体溶出順：Ａは、最初の溶出異性体を意味し、Ｂは、２番目の溶出異性体を意味する。
【０２５４】
ＮＭＲ
複数の化合物について、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、３００ＭＨｚ  Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄマグネットを備えたＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ、４００ＭＨｚで運転するＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００分光器、５００ＭＨｚで運転するＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  Ｉ、３６０ＭＨｚで運転するＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−３６０または６００ＭＨｚで運転するＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ６００分光器において、クロロホルム−ｄ（重水素化クロロホルム、ＣＤＣｌ３）またはＤＭＳＯ−ｄ６（重水素化ＤＭＳＯ、ジメチル−ｄ６スルホキシド）を溶媒として用いて記録した。化学シフト（δ）は、内部標準として使用したテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で報告する。
【０２５５】
【表４５】
2020509068.tif 000177
【０２５６】
【表４６】
2020509068.tif 000178
【０２５７】
【表４７】
2020509068.tif 000179
【０２５８】
【表４８】
2020509068.tif 000180
【０２５９】
【表４９】
2020509068.tif 000181
【０２６０】
薬理学的な実施例
本発明で提供される化合物は、β部位ＡＰＰ切断酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。アスパラギン酸プロテアーゼであるＢＡＣＥ１の阻害は、アルツハイマー病（ＡＤ）の処置に適していると考えられている。βアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からのβアミロイドペプチド（Ａβ）の産生および蓄積は、ＡＤの発症および進行において重要な役割を果たしていると考えられている。Ａβは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からＡβドメインのＮ末端側およびＣ末端側をそれぞれβ−セクレターゼおよびγセクレターゼで順次切断することにより産生される。
【０２６１】
式（Ｉ）の化合物は、その酵素活性阻害能により、ＢＡＣＥ１において実質的にその効果を有すると予想される。このような阻害剤の挙動は、下記の生化学的蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイおよびＳＫＮＢＥ２細胞における細胞αＬｉｓａアッセイを用いて試験され、これらのアッセイは、このような化合物、とりわけ式（Ｉ）による化合物の同定に好適であり、表８および表９に示す。
【０２６２】
ＢＡＣＥ１の生化学的ＦＲＥＴに基づくアッセイ
このアッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイのための基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ切断部位の「スェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有する、ＡＰＰ由来の１３アミノ酸ペプチドである。この基質は、２つのフルオロフォアも含有する。すなわち、（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は、３２０ｎｍの励起波長と４０５ｎｍの発光とを有する蛍光ドナーであり、２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）は、専有の消光剤アクセプターである。これらの２つの基間の距離は、光励起すると、共鳴エネルギー移動を通してドナー蛍光エネルギーがアクセプターにより顕著に消光されるように選択されている。ＢＡＣＥ１により切断されると、フルオロフォアＭｃａが消光基Ｄｎｐから分離され、ドナーの十分な蛍光収率が回復される。蛍光の増強は、タンパク質分解速度と直線的に相関する。
【０２６３】
簡潔に述べると、３８４ウェルフォーマットで最終濃度０．０４μｇ／ｍｌの組換えＢＡＣＥ１タンパク質を化合物またはＤＭＳＯの存在下においてインキュベーションバッファ（５０ｍＭクエン酸バッファ  ｐＨ５．０、０．０５％ＰＥＧ）中、２０μＭ基質と共に室温で４５０分間インキュベートする。次に、様々なインキュベーション時間（０、３０、６０、９０、１２０および４５０分）で蛍光測定（励起３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍ）によってタンパク質分解量を直接測定する。全ての実験に対して、時間曲線（０分〜１２０分で３０分毎）を使用して、高対照の最小基底シグナルが見出される時間を決定する。この時点（Ｔｘ）のシグナルを、４５０分の時点のシグナルから減算するために使用する。結果をＴ４５０とＴｘとの間の差としてＲＦＵで表す。
【０２６４】
最小二乗和法により、％対照ｍｉｎ対化合物濃度のプロットに対して最良適合曲線をフィットさせる。これから、ＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：酵素を用いない反応
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：酵素を用いた反応
％効果＝１００−［（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００］
％対照＝（試料／ＨＣ）×１００
％対照ｍｉｎ＝（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００
【０２６５】
次の例示化合物を基本的に上記のように試験し、次の活性が示された。
【０２６６】
【表５０】
2020509068.tif 000182
【０２６７】
【表５１】
2020509068.tif 000183
【０２６８】
ＳＫＮＢＥ２細胞における細胞αＬＩＳＡアッセイ
２つのαＬｉｓａアッセイにおいて、全Ａβレベルと、産生され、ヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地中に分泌されるＡβ１−４２のレベルとを定量する。このアッセイは、野生型アミロイド前駆体タンパク質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２に基づいている。本化合物を希釈し、これらの細胞に添加し、１８時間インキュベートし、次いでＡβ１−４２および全Ａβの測定を行う。全ＡβおよびＡβ１−４２をサンドイッチαＬｉｓａによって測定する。αＬｉｓａは、ストレプトアビジンコートビーズおよび抗体Ａｂ４Ｇ８またはｃＡｂ４２／２６結合アクセプタービーズに付着したビオチン化抗体ＡｂＮ／２５を用いる、それぞれ全ＡβおよびＡβ１〜４２を検出するためのサンドイッチアッセイである。全ＡβまたはＡβ１−４２の存在下において、ビーズは、極めて接近する。ドナービーズの励起により一重項酸素分子の放出が起こり、それによりアクセプタービーズで一連のエネルギー移動が起こり、その結果、発光が生じる。発光を１時間のインキュベーション後に測定する（励起６５０ｎｍおよび発光６１５ｎｍ）。
【０２６９】
最小二乗和法により、％対照ｍｉｎ対化合物濃度のプロットに対して最良適合曲線をフィットさせる。これから、ＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
【０２７０】
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：αＬｉｓａにおいてビオチン化Ａｂを用いることなく、化合物なしで予備インキュベートした細胞
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：化合物なしでプレインキュベートした細胞
％効果＝１００−［（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００］
％対照＝（試料／ＨＣ）×１００
％対照ｍｉｎ＝（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００
【０２７１】
次の例示化合物を基本的に上記のように試験し、次の活性が示された。
【０２７２】
【表５２】
2020509068.tif 000184
【０２７３】
【表５３】
2020509068.tif 000185
【０２７４】
【表５４】
2020509068.tif 000186
【０２７５】
【表５５】
2020509068.tif 000187
【０２７６】
ＢＡＣＥ２の生化学的ＦＲＥＴに基づくアッセイ
このアッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイのための基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ切断部位の「スェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ変異を含有する。この基質は、２つのフルオロフォアも含有する。すなわち、（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は、３２０ｎｍの励起波長と４０５ｎｍの発光とを有する蛍光ドナーであり、２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）は、専有の消光剤アクセプターである。これらの２つの基間の距離は、光励起すると、共鳴エネルギー移動を通してドナー蛍光エネルギーがアクセプターにより顕著に消光されるように選択されている。β−セクレターゼにより切断されると、フルオロフォアＭｃａが消光基Ｄｎｐから分離され、ドナーの十分な蛍光収率が回復される。蛍光の増強は、タンパク質分解速度と直線的に相関する。
【０２７７】
簡潔に述べると、３８４ウェルフォーマットで化合物の非存在下または存在下においてインキュベーションバッファ（５０ｍＭクエン酸バッファ  ｐＨ５．０、０．０５％ＰＥＧ、ＤＭＳＯなし）中、１０μＭ基質と共に最終濃度０．４μｇ／ｍｌの組換えＢＡＣＥ２タンパク質を室温で４５０分間インキュベートする。次に、タンパク質分解量をＴ＝０およびＴ＝４５０で蛍光測定（励起３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍ）によって直接測定する。結果をＴ４５０とＴ０との間の差としてＲＦＵ（相対蛍光単位）で表す。
【０２７８】
最小二乗和法により、％対照ｍｉｎ対化合物濃度のプロットに対して最良適合曲線をフィットさせる。これから、ＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
【０２７９】
ＬＣ＝低対照値の中央値
＝低対照：酵素を用いない反応
ＨＣ＝高対照値の中央値
＝高対照：酵素を用いた反応
％効果＝１００−［（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００］
％対照＝（試料／ＨＣ）×１００
％対照ｍｉｎ＝（試料−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）×１００
【０２８０】
次の例示化合物を基本的に上記のように試験し、次の活性が示された。
【０２８１】
【表５６】
2020509068.tif 000188
【０２８２】
【表５７】
2020509068.tif 000189
【０２８３】
生化学的アッセイ  −  自動
一般的方法
他に示さない限り、全ての生化学物質は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｏｏｌｅ、Ｄｏｒｓｅｔ、Ｕ．Ｋ．から購入し、分析用またはより高級な非水性溶媒はＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ、Ｕ．Ｋ．から購入した。ＭｉｌｌｉＱ水（Ｅｌｉｘ  ５＆ＭｉｌｌｉＱ  Ｇｒａｄｉｅｎｔ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を、生物学的バッファを作るためのベース水性溶媒として使用した。５０ｍＭクエン酸溶液（１．００２４４；Ｍｅｒｃｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を５０ｍＭクエン酸三ナトリウム（１．０６４４８；Ｍｅｒｃｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の撹拌溶液に最終ｐＨが５．０に達するまで添加することによってベースアッセイバッファを調製した。これに、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）（Ｐ１４５８；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）の４０％溶液を０．０５％の最終濃度まで添加し、したがって、ベースバッファは、０．０５％ＰＥＧを含有する５０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０から構成された。全てのアッセイを３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ４５１４；Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でルーチン的に実施し、３７±１℃で６０分間インキュベートした後、終点蛍光強度を読み取った。（７−メトキシルクマリン−４−イル）酢酸ベースの基質β−セクレターゼ基質ＶＩ（Ｍ２４６５；Ｂａｃｈｅｍ）を１００％ＤＭＳＯ（Ｄ／４１２１／ＰＢ０８；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中の１ｍＭストックとして調製した。ベースバッファにＤＭＳＯを最終濃度１％（体積／体積）まで添加することによってアッセイバッファを調整した。β−セクレターゼＩ（１８．６４μＭ；「ＢＡＣＥ１」）およびβ−セクレターゼＩＩ（４．６５μＭ；「ＢＡＣＥ２」）をＪａｎｓｓｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ、Ｂｅｅｒｓｅ、Ｂｅｌｇｉｕｍから入手し、凍結アリコート（約２０μｌ）として保存し、必要に応じて解凍した。
【０２８４】
手動アッセイ
典型的には、１２．５μｌのアッセイバッファをアッセイプレートのＢ〜Ｐ列に分配した。Ａ列に対し、アッセイバッファで適切に希釈した試験化合物１８．７５μｌを添加した。試料の６．２５μｌアリコートをＡ列からＢ列に移し、試料をピペットで３回混合した。このプロセスをプレートに沿って繰り返し、６．２５μｌの溶液をＮ列での混合後に廃棄した。Ｏ列およびＰ列を陽性および陰性対照とした。Ｐ列に６．２５μｌのベースバッファを加えた。Ａ列〜Ｏ列に対し、ベースバッファで希釈した６．２５μｌの酵素（新しく調製した４０ｎＭのＢＡＣＥ１または４０ｎＭのＢＡＣＥ２）を加えた。１００％ＤＭＳＯ溶液中の１ｍＭをＨＰＬＣグレードの水（Ｏｐｔｉｍａ  Ｗ６−２１２；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に希釈して作った、新たに調製した８０μＭ基質６．２５μｌを全ウェルに添加し、アッセイを開始した。アッセイプレートを覆い、３７±１℃で６０分間インキュベートした。ウェルの蛍光強度を、３６０／４０５ｎｍ（励起／発光）で１ウェル当たり９回の読み取りプロトコル（５０ｍｓインテグレーション；密度３、０．２５ｍｍ間隔；ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ  Ｐａｒａｄｉｇｍプレートリーダー；ＴＵＮＥカートリッジ；ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ  ｖ  ６．３ソフトウェア；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＵＫ  Ｌｔｄ．、Ｗｏｋｉｎｇｈａｍ、Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を用いて読み取り、９回の読み取りの中央値をテキストファイルとして出力した。ベンダーから供給される非線形回帰分析モデルを用いたＰｒｉｓｍソフトウェアｖ６．３（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｉｎｃ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）により、データの分析を行った。ＩＣ５０を決定するために、４パラメータロジスティック可変傾斜モデルを用いて、生蛍光強度データを陰性対照に固定された「ボトム」にフィットさせた。
【０２８５】
自動バイオアッセイハードウエア
ＣｙｃｌＯｐｓバイオアッセイモジュールは、画分収集ステーション、試薬ステーション、液体処理ロボット、プレートストアおよび統合プレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸ  Ｐａｒａｄｉｇｍ、ＴＵＮＥカートリッジ、ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ  ｖ６．３；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）から構成された。分画収集ステーションは、Ｈポータルキャリッジ（Ｆｅｓｔｏ  ＡＧ＆ＣｏＫＧ、Ｅｓｓｌｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）上に搭載された３８４ウェル収集プレート（Ｐ−３８４−２４０ＳＱ−Ｃ；Ａｘｙｇｅｎ、Ｕｎｉｏｎ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、ＵＳＡ）、シリンジドライブおよび２００μｌループを備えた２方向６ポート注入バルブ（ＶＩＣＩ  ＡＧ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｓｃｈｅｎｋｏｎ  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から構成された。注入バルブの出力は、３８４ウェル収集プレートの全ての位置にアドレス可能であった。試薬ステーションは、油圧冷却（１０〜１２℃）アルミニウムセグメントからなり、各セグメントは、ＳＢＳマイクロタイタープレートフットプリントを収容するように作製された。独立したアドレス可能な試薬ステーションをこれらのセクション内に収容した。必要に応じて、標準的な実験室用プラスチック器具（例えば、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ、Ｆａｌｃｏｎチューブなど）を収容するために特注のアルミニウムハウジングを使用した。必要に応じて、試薬リザーバを覆い、蓋は、テフロン（登録商標）被覆プローブが溶液に到達できる穴を含んだ。液体処理システムに存在する試薬は以下のとおりであった：
・覆った試薬リザーバ（３９０００７；Ｐｏｒｖａｉｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｌｅａｔｈｅｒｈｅａｄ、ＵＫ）に収容されたプローブ洗浄溶液（約１５０ｍｌ；３３．３：３３．３：３３．３  水：プロパン−２−オール（Ｐ／７５０８／１７；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）：メタノール（Ｍ／４０５８／１７；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ））
・アッセイバッファ溶液
・ＨＰＬＣグレード水
・５ｍｌ用Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ（００３０  １１９．４０１；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）に入った、ベースバッファで希釈された４０ｎＭのＢＡＣＥ１
・１．５ｍｌ用Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ（００３０  ０００．９１９；Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）に入った、１００ｍＭの塩化ナトリウムおよび２０％グリセロール（１６３７４；ＵＳＢ  Ｃｏｒｐ．、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ、ＵＳＡ）を含有する２５ｍＭのトリス（６４８３１１；Ｍｅｒｃｋ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ、Ｕ．Ｋ．）、ｐＨ７．５で希釈された４００ｎＭのＢＡＣＥ２
・１．５ｍｌ用Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入った、１００％ＤＭＳＯ中の１ｍＭの基質（周囲温度で保持）
・２本の空の１．５ｍｌ用Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ
液体処理システムは、グリッパーアームおよび単一のテフロン被覆ステンレス鋼プローブを備えたＬＩＳＳＹシステム（Ｚｉｎｓｓｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｋ  ＧｍｂＨ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から構成された。全ての液体処理工程間において、テフロン被覆ステンレス鋼プローブをプローブ洗浄溶液で洗浄し、続いてシステム液（水）で洗浄した。バイオアッセイシステムの制御は、ＷｉｎＬＩＳＳＹソフトウェア（Ｚｉｎｓｓｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｋ）およびＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ（これは、ＷｉｎＬＩＳＳＹ自動化コマンド制御下にあった）を使用して行った。プレートストアは、アッセイプレートのスタック（Ｃｏｓｔａｒ  ４５１４）を収容した。入力リレーおよび出力リレーは、バイオアッセイモジュールとＣｙｃｌＯｐｓ制御ソフトウェアとの間の接点閉鎖制御およびフィードバックを可能にした。プレートストアは、液体処理システムによって到達され得るアッセイプレートのスタックを収容するアルミニウムラックであった。
【０２８６】
自動バイオアッセイプロセス
希釈モジュールの出力は、「ロード」位置に設置された収集ステーション注入弁を通って流れた。入力ポーリングモードに設定されたＷｉｎＬＩＳＳＹにより、ＣｙｃｌＯｐｓ制御ソフトウェアによる接点閉鎖でバイオアッセイプロトコルを開始した。第１の動作は注入弁を「注入」位置に作動させ、ループ内容物を分離し、画分収集システムは、ループ内容物を収集プレート上のアドレス可能なウェルに分配した。同時に、液体処理システムは、アッセイプレートを液体処理ベッド上のアッセイステーションに送達した。アッセイプレートのカラムに対し、液体ハンドリングシステムは、１２．５μｌのアッセイ緩衝液をＢ列からＰ列までアッセイプレートの２つのカラムに分配した。Ａ列には、収集プレートの各ウェルから１８．７５μｌの試験化合物を加えた。Ａ列からのサンプルの６．２５μｌアリコートをＢ列に移した。このプロセスを両方のカラムに対してプレートに沿って繰り返し、６．２５μｌの試薬をＮ列で廃棄した。Ｏ列およびＰ列は、陽性対照および陰性対照とした。Ｐ列に６．２５μｌのアッセイバッファを加えた。第１のカラムのＡ列〜Ｏ列に対し、ベースバッファ中に保存された６．２５μｌの４０ｎＭのＢＡＣＥ１を添加した。ＢＡＣＥ２酵素を添加するために、１７．５μｌの４００ｎＭのＢＡＣＥ２を１５７．５μｌのベースバッファで希釈した。これを、指定された受入Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中で１７５μｌの溶液を５回ピペッティングすることによって混合し、次いで６．２５μｌの希釈ＢＡＣＥ２をそれぞれのカラムに加えた。ＭＣＡ基質について、１００％ＤＭＳＯ中の３０．８μｌの１ｍＭのＭＣＡ基質を３８５μｌのＨＰＬＣ水で希釈した。これを、指定された受入Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中で４００μｌを５回ピペッティングすることによって混合し、次いで６．２５μｌをそれぞれのカラムに加えた。次いで、アッセイプレートをプレートリーダーキャリッジに移し、引出しを閉じ、アッセイインキュベーションを開始した。６０分後、ＷｉｎＬＩＳＳＹは、蛍光強度を読み取るプロトコルファイルをロードして実行するようにプレートリーダーに指示するサブルーチンを実行した。このプロトコルファイルは、マイクロタイタープレートを読み取り、対応するデータをテキストファイルとして書き込むのに必要なパラメータを含んだ。１ウェル当たり９回の読み取りプロトコル（５０ｍｓインテグレーション；密度３、０．２５ｍｍ間隔）のプロトコルを用いて、蛍光強度を３６０／４０５ｎｍ（励起／発光）で読み取り、９回の読み取りの中央値をテキストファイルとして出力した。
【０２８７】
ＣｙｃｌＯｐｓバイオアッセイデータ分析
ＣｙｃｌＯｐｓソフトウェアを、バイオアッセイ共有データファイルフォルダをポーリングするように設定した。データを保存する際、ＷｉｎＬＩＳＳＹは、バイオアッセイが完了したことをＣｙｃｌＯｐｓソフトウェアに通知する出力接点閉鎖信号を送信した。ＣｙｃｌＯｐｓソフトウェアが開き、処理し、データを分析した。データ処理は、被験物質の各濃度を対応する列に（希釈モジュールから受け取ったデータと共に）付加することからなった。その後、データは、４パラメータロジスティックモデルを用いる非線形回帰分析によって分析され（ＭＡＴＬＡＢ；ＭａｔｈＷｏｒｋｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕ．Ｋ．）、ＩＣ５０が決定された。スパンは、ベースライン（すなわちＰ列）と最大観察陽性対照率（すなわちＯ列）との間で固定した。データの品質を維持するために、自動バイオアッセイデータ分析を管理するためのルールを設定した。第１の例において、７５パーセント以上の活性または２５パーセント以下の活性が観察された場合、データを排除した。これにより、良好な分析を実施するのに十分な滴定データが存在することが確実になった。その後、適合の質をＲ−２乗値によって判定した。この値が０．８５を下回った場合、データを排除した。全ての場合において、排除は、システムに報告されるバイオアッセイ失敗タグをもたらした。外れ値の分析を、以前に記載されているように（Ｍｏｔｕｌｓｋｙ，Ｈ．Ｊ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ，Ｒ．Ｅ．，（２００６），ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，７，１２３）、Ｑ値１０％で行った。自動ＩＣ５０分析では、適合フラグのエラーが生成される前に最大３つの外れ値を除外することができる。バイオアッセイデータの交差検証を、非線形回帰分析４パラメータロジスティック可変傾斜モデルを用いるＰｒｉｓｍソフトウェアｖ６．３（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｉｎｃ．）を用いて同じものを分析して、生蛍光強度データを陰性対照に固定された「ボトム」に適合させることによって達成した。
【０２８８】
【表５８】
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【０２８９】
【表５９】
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【０２９０】
【表６０】
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【０２９１】
【表６１】
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【０２９２】
インビボ効力の証明
本発明のＡβ低下剤は、ヒトなどの哺乳動物のＡＤを処置するために使用することができ、または代わりに、以下に限定されないが、マウス、ラットまたはモルモットなどの動物モデルで有効性を示す。哺乳動物は、ＡＤと診断されていなくてもよく、ＡＤに関する遺伝的素因を有していなくてもよいが、ＡＤに罹患しているヒトに見られるものと同様にＡβを過剰産生し、やがてそれを沈着するようなトランスジェニックとすることができる。
【０２９３】
Ａβ低下剤は、任意の標準方法を使用して任意の標準形態で投与することができる。例えば、以下に限定されないが、Ａβ低下剤は、経口または注射により摂取される、液剤、錠剤またはカプセル剤の形態とすることができる。Ａβ低下剤は、血液、血漿、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）中または脳内のＡβの濃度を有意に低減するのに十分な任意の用量で投与することができる。
【０２９４】
Ａβ低下剤の急性投与によりインビボでＡβ濃度が低下するかどうかを確認するため、非トランスジェニック齧歯類、例えばマウスまたはラットを使用した。Ａβ低下剤で処置した動物を検査し、非処置のものまたはビヒクルで処置したものと比較し、可溶性Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８およびＡβ３７の脳内濃度をＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）の電気化学発光検出技術により定量した。処置期間は、数時間（ｈ）〜数日の範囲とし、効果発現の時間経過を確認できた後、Ａβ低下の結果に基づいて調節した。
【０２９５】
インビボでのＡβ低下を測定する典型的プロトコルを示すが、それは、検出可能なＡβの濃度を最適化するのに使用し得る多くの変法の１つに過ぎない。例えば、Ａβ低下化合物を水中２０％のＣａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（β−シクロデキストリンのスルホブチルエーテル）または２０％ヒドロキシプロピルβシクロデキストリンに配合した。Ａβ低下剤を、一晩絶食させた動物に単一経口用量としてまたは任意の許容される投与経路で投与した。４ｈ後、動物を犠牲にし、Ａβ濃度を分析した。
【０２９６】
断頭し、ＥＤＴＡ処理採血管に全血を採取することにより採血した。血液を４℃において１９００ｇで１０分（ｍｉｎ）間遠心分離し、血漿を回収し、後の分析のために瞬間凍結した。脳を頭蓋および後脳から除去した。小脳を除去し、左半球と右半球を分離した。試験化合物レベルの定量的分析のために左半球を−１８℃で保存した。右半球をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、ドライアイス上で直ちに凍結し、生化学的アッセイのためにホモジナイズ処理するまで−８０℃で保存した。
【０２９７】
非トランスジェニック動物のマウス脳を、組織１グラム当たり、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ−１１８７３５８０００１または０４６９３１５９００１）を含有する０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）／５０ｍＭ  ＮａＣｌの８容量（例えば、脳０．１５８ｇに対して０．４％ＤＥＡを１．２６４ｍｌ添加する）に再懸濁させた。溶解マトリックスＤ（ＭＰＢｉｏ  ＃６９１３−１００）を使用し、ＦａｓｔＰｒｅｐ−２４システム（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）内で全試料を６ｍ／ｓで２０秒間、ホモジナイズした。ホモジネートを２０８００×ｇで５分間遠心分離し、上清を回収した。上清を２２１．３００×ｇで５０分間遠心分離した。次いで、得られた高速上清を未使用のｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに移した。上清９部を１部の０．５Ｍのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ６．８で中和し、Ａβの定量に使用した。
【０２９８】
脳ホモジネートの可溶性画分中のＡβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８およびＡβ３７の量を定量するために、ＭＳＤの電気化学発光多重検出技術を使用して、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８およびＡβ３７の同時特異的検出を実施した。このアッセイでは、Ａβ３７（ＪＲＤ／Ａβ３７／３）、Ａβ３８（Ｊ＆ＪＰＲＤ／Ａβ３８／５）、Ａβ４０（ＪＲＦ／ｃＡβ４０／２８）およびＡβ４２（ＪＲＦ／ｃＡβ４２／２６）に特異的な精製モノクローナル抗体をＭＳＤ  ４−ｐｌｅｘプレートに被覆した。簡潔に言えば、標準物質（合成Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８およびＡβ３７の希釈物）を１．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内においてＵｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅ中で最終濃度が１００００〜０．３ｐｇ／ｍの範囲となるように調製した。試料および標準物質を、検出抗体として、ＡβのＮ末端に対するスルホ−タグ標識ＪＲＦ／ｒＡβ／２抗体と共にインキュベートした。次いで、５０μＬの複合物／試料または複合物／標準物質混合物を抗体被覆プレートに添加した。抗体−アミロイド複合体を形成させるために、このプレートを４℃で終夜インキュベートした。このインキュベーションおよびその後の洗浄工程後、製造業者の使用説明書（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ，ＭＤ）に従って読み取りバッファを添加してアッセイを終了した。
【０２９９】
スルホ−タグは、電極で開始した電気化学的刺激を受けると発光する。ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ装置ＳＩ６０００をシグナル読み取りに使用した。
【０３００】
このモデルにおいて、未処置動物と比較してＡβ低下が有利であり、特に少なくとも１０％のＡβ低下、より特には少なくとも２０％のＡβ低下がある。
【０３０１】
結果
結果を表１２で示す（対照（Ｃｔｒｌ）としての未処置動物に対する値を１００に設定した）。
【０３０２】
【表６２】
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【国際調査報告】
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