(57)【要約】  本発明は、抗ＳＩＲＰＡ抗体、このような抗体を作製する方法、並びにその抗体を使用する治療的使用及び方法を提供する。【選択図】図３Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰＡ）に選択的に結合し、細胞表面上に発現するＳＩＲＰＡを下方制御する、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２】
ヒトＳＩＲＰＡの一又は複数の多型変異体に結合する、請求項１に記載の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３】
ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡの総レベルを減少させる、又はそれらの任意の組合せである、請求項１又は２に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４】
ＳＩＲＰＡ分解、ＳＩＲＰＡ切断、ＳＩＲＰＡ内在化、ＳＩＲＰＡ脱落、ＳＩＲＰＡ発現の下方制御、又はそれらの任意の組合せを誘導する、請求項１から３の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５】
インビボで細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させる、請求項１から４の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項６】
ＳＩＲＰＡの細胞表面クラスター形成を阻害する、請求項１から５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項７】
一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害する、請求項１から６の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項８】
（ａ）一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドへのＳＩＲＰＡ結合であって、任意選択的に、一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドが、ＣＤ４７、サーファクタントタンパク質Ａ及びＤ、並びにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ＳＩＲＰＡ結合；
（ｂ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の増殖を減少させること；
（ｃ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の遊走を阻害すること；
（ｄ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の一又は複数の機能を阻害すること；
（ｅ）アポトーシスニューロンの除去、神経組織残屑の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織残屑の除去、細菌の除去、他の異物の除去、疾患原因となるタンパク質の除去、疾患原因となるペプチドの除去、及び腫瘍細胞の除去からなる群から選択される一又は複数の除去の阻害であって、任意選択的に、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、腫瘍細胞は、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、及び甲状腺がんからなる群から選択されるがんに由来する、阻害；
（ｆ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数による腫瘍細胞死滅の阻害；
（ｇ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数の抗腫瘍細胞増殖活性を阻害すること；
（ｈ）一又は複数の炎症性受容体の発現調節であって、任意選択的に、一又は複数の炎症性受容体はＣＤ８６を含み、一又は複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数に発現する、発現調節；
（ｉ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、及び制御性Ｔ細胞の一又は複数の機能性を促進又はレスキューすること；
（ｊ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の、腫瘍への浸潤を増加させること；
（ｋ）腫瘍、末梢血、又は他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄性／顆粒球性免疫サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を増加させること；
（ｌ）骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の腫瘍促進活性を増強すること；
（ｍ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の生存を増強すること；
（ｎ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を減少させること；
（ｏ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること；
（ｐ）腫瘍体積を増加させること；
（ｑ）腫瘍増殖速度を増加させること；並びに
（ｒ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させることであって、任意選択的に、一又は複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せ、又は一又は複数のがんワクチンからなる群から選択される一又は複数の標的タンパク質を標的とする免疫療法である、抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性減少させること
からなる群から選択される一又は複数のＳＩＲＰＡ活性に対抗する、請求項１から７の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項９】
（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること；
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する減少；
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、低下させること；
（ｄ）一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｅ）一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｆ）一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｇ）一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｈ）一又は複数の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｉ）一又は複数の細胞におけるＣＤ１６３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｊ）一又は複数の細胞におけるＣＤ２０６レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖速度を減少させること；
（ｌ）腫瘍体積を低下させること；
（ｍ）一又は複数のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること；
（ｎ）一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、又はそれらの任意の組合せのうちの一又は複数を標的とする、増加させること；
（ｏ）一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、増加させること；
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖を増加させること；
（ｌ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／又は一又は複数の機能を阻害すること；並びに
（ｒ）化学的又は放射性毒素とコンジュゲートした場合に、固形腫瘍及び関連血管中のＣＤ３３を発現する免疫サプレッサー非腫瘍形成性骨髄細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４を発現する細胞を死滅させること
からなる群から選択される一又は複数の活性を誘導する、請求項１から８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１０】
ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドの間の相互作用を阻害する、請求項１から９の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１１】
細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドの間の相互作用を阻害する、請求項１０に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１２】
ＣＤ４７のヒトＳＩＲＰＡへの結合を遮断する、請求項１から９の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１３】
抗体がＳＩＲＰＡに選択的に結合し、細胞上に発現するＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を実質的に遮断せず、さらにＳＩＲＰＡへの抗体の結合が細胞表面上のＳＩＲＰＡレベルを減少させ、任意選択的にＳＩＲＰＡはヒトＳＩＲＰＡである、請求項１から９の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１４】
ＳＩＲＰＡのＤ１ドメイン、ＳＩＲＰＡのＤ２ドメイン、又はＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する、請求項１３に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１５】
抗体（ａ）が、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ配列及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む抗体と競合する、請求項１３又は１４に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１６】
配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１７】
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３
を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１８】
ＶＨ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１７に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項１９】
配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２０】
図１４Ａに示されるＶＨ領域のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含み、又は図１４ＡのＶＨ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２１】
配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域を含む、請求項１３から２０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２２】
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３
を含むＶＬ領域を含む、請求項１３から２０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２３】
ＶＬ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項２２に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２４】
ＶＬ領域が、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１３から２０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２５】
ＶＬ領域が、図１４Ｂに示されるＶＬ領域のアミノ酸配列を含み、又は図１４ＢのＶＬ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む、請求項１３から２０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２６】
配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２７】
（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３
を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２８】
ＶＨ領域が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項２７に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項２９】
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３０】
図１４Ｃに示されるＶＨ領域のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含み、又は図１４ＣのＶＨ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む、請求項１３から１５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３１】
ＶＬ領域が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む、請求項２６から３０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３２】
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３
を含むＶＬ領域を含む、請求項２６から３０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３３】
ＶＬ領域が、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項３２に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３４】
配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む、請求項１３から２０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３５】
ＶＬ領域が、図１４ＤのＶＬ領域のアミノ酸配列を含み、又は図１４ＤのＶＨ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む、請求項２６から３０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３６】
抗ＳＩＲＰＡが、ＳＩＲＰＡへの結合について一又は複数の抗体と競合し、抗体が、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択される、請求項１３又は１４に記載の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３７】
抗ＳＩＲＰＡが、３Ｆ９、９Ｃ２、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択される一又は複数の抗体と本質的に同じエピトープに結合する、請求項１３又は１４に記載の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３８】
抗体がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域、ＶＬ領域、又は両方が、３Ｆ９、９Ｃ２、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択されるモノクローナル抗体のうちの少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む、請求項３６又は３７に記載の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項３９】
モノクローナル抗体である、請求項１から３８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４０】
ヒト化抗体である、請求項１から３９の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４１】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片である、請求項１から４０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４２】
多価抗体である、請求項１から４１の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４３】
ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、又はＩｇＡクラスのものである、請求項１から４２の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４４】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項４３に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４５】
阻害性Ｆｃ受容体に結合する、請求項４４に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４６】
阻害性Ｆｃ受容体が阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である、請求項４５に記載の抗ＳＩＲＰａ抗体。
【請求項４７】
細胞レベルのＦｃγＲを減少させる、請求項１から４２の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項４８】
細胞レベルのＦｃγＲＩＩＢを減少させる、請求項４７に記載の抗ＳＩＲＰａ抗体。
【請求項４９】
（ａ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従うか、又はグリシン２３６に対応する位置でＦｃ領域においてアミノ酸欠失を含み；
（ｂ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意選択的にＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP（配列番号３４）のアミノ酸配列を含み、任意選択的に抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、又はその両方、及び／又はＮ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う；
（ｃ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；
（ｄ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；又は
（ｅ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意選択的に抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う、請求項４６に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５０】
（ａ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスのＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；
（ｂ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；又は
（ｃ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う、請求項４４に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５１】
（ａ）Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；
（ｂ）Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従い；又は
（ｃ）Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けに従うＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む、請求項５０に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５２】
ＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項１から４０の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５３】
残基位置２２８でのＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でのＦ２３４Ａアミノ酸置換、及び残基位置２３５でのＬ２３５Ａアミノ酸置換を含み、残基位置の番号付けはＥＵ番号付けに従う、請求項４０に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５４】
二重特異性抗体である、請求項１から５３の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５５】
抗体が第１及び第２の抗原を認識し、第１の抗原がＳＩＲＰＡであり、第２の抗原が
（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｃ）疾患原因となるペプチド若しくはタンパク質、又は疾患原因となる核酸からなる群から選択される疾患原因となる作用物質であって、疾患原因となる核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡大ＲＮＡであり、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、作用物質；並びに
（ｄ）免疫細胞上に発現するリガンド及び／又はタンパク質であって、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択されるリガンド及び／又はタンパク質；並びに一又は複数の腫瘍細胞上に発現するタンパク質、脂質、多糖、又は糖脂質
である、請求項５４に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５６】
抗抗ＳＩＲＰＡ抗体がコンジュゲート抗体である、請求項１から５５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５７】
検出可能なマーカー、毒素、又は治療薬にコンジュゲートされている、請求項５６に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５８】
リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアマイシン、サポナリアオフィシナリスインヒビター、グルココルチコイド、オーリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素にコンジュゲートされている、請求項５７に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項５９】
アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質若しくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される疾患原因となるタンパク質に特異的に結合する一若しくは複数の抗体と組み合わせて；又はＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、疾患原因となる核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡大ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質に結合する一若しくは複数の抗体と組み合わせて使用される、請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項６０】
それを必要とする個体における制御性Ｔ細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサー樹状細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサーマクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能性、又は生存率を減少させる方法であって、ＳＩＲＰＡに結合するか又はそれと相互作用する、治療有効量の薬剤を個体に投与することを含む方法。
【請求項６１】
それを必要とする個体において一又は複数の免疫細胞の生存、成熟、機能性、遊走、若しくは増殖を誘導又は促進する方法であって、細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドの相互作用を阻害し、又はその両方である治療有効量の薬剤を個体に投与することを含む方法。
【請求項６２】
一又は複数の免疫細胞が、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＣＤ４７を発現する腫瘍を有する患者に、治療有効量の請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法。
【請求項６４】
細胞内レベルのＳＩＲＰＡを減少させる治療有効量の薬剤を投与することを含む、がんを治療する方法。
【請求項６５】
薬剤が、請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３を阻害する治療薬を投与することをさらに含む、請求項６３、６４、又は６５に記載の方法。
【請求項６７】
治療薬が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３を阻害する抗体である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／又は１つ以上の標準的若しくは治験的な抗がん療法を個体に投与することをさらに含む、請求項６３、６４、又は６５に記載の方法。
【請求項６９】
阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、拮抗性抗ＴＲＥＭ１抗体、拮抗性抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項６６又は６７に記載の方法。
【請求項７１】
一又は複数の標準的又は治験的な抗がん療法が、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的化療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することをさらに含む、請求項６３から７１の何れか一項に記載の方法。
【請求項７３】
阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項６６又は６７に記載の方法。
【請求項７５】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することをさらに含む、請求項６３から７４の何れか一項に記載の方法。
【請求項７６】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される、請求項６６に記載の方法。
【請求項７７】
刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項７５又は７６に記載の方法。
【請求項７８】
少なくとも１つの刺激性サイトカイン、任意選択的にＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びそれらの任意の組合せを個体に投与することをさらに含む、請求項６３から７７の何れか一項に記載の方法。
【請求項７９】
ＳＩＲＰＡを発現する骨髄系統のがん細胞を有する患者に治療有効量の請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法。
【請求項８０】
がんを有する対象に治療有効量の請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含むがんを治療する方法であって、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、及び線維肉腫からなる群から選択される方法。
【請求項８１】
がんを有する対象に治療有効量の請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、がんは、多形性神経膠芽腫、腎明細胞癌、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、肺腺癌、膵臓腺癌、腎細胞がん、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、乳房浸潤癌、頸部扁平上皮細胞癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、嫌色素性腎細胞癌、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣癌漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体癌、子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫からなる群から選択される方法。
【請求項８２】
抗ＳＩＲＰａ抗体が細胞傷害剤にコンジュゲートされており、及び／又はＡＤＣＣを誘導する、請求項８０又は８１に記載の方法。
【請求項８３】
請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体及び生理学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項８４】
がんの治療に使用するための、請求項１から５８の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体。
【請求項８５】
がんの治療のための医薬を調製する方法において使用するための、請求項１から５８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項８６】
認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウオマシー（taupathy）病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳傷害、脳卒中、前頭側頭型認知症、脊髄傷害、ハンチントン病、感染、及びがんからなる群から選択される疾患、障害、又は傷害を予防し、危険性を低下させ、又は治療する方法であって、細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドの相互作用を阻害し、又はその両方である治療有効量の薬剤をそれを必要とする個体に投与することを含む方法。
【請求項８７】
疾患、障害、又は傷害ががんであり、薬剤が、
（ａ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の増殖、成熟、遊走、分化、及び／又は機能性を促進すること；
（ｂ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の、腫瘍への浸潤を増大させること；
（ｃ）腫瘍、末梢血、又は他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄性／顆粒球免疫抑制性細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を増加させること；
（ｄ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の腫瘍促進活性を増大させること；
（ｅ）腫瘍又は末梢血において腫瘍促進性サイトカインの発現を増加させることであって、任意選択的に腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−ベータ又はＩＬ−１０である、腫瘍又は末梢血において腫瘍促進性サイトカインの発現増加させること；
（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を増加させること；
（ｇ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を減少させること；
（ｈ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤を減少させること；
（ｉ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること；
（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍殺傷能を減少させること；
（ｋ）免疫応答を増大させる可能性を有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤を減少させること；
（ｌ）腫瘍体積を増加させること；
（ｍ）腫瘍増殖速度を増加させること；
（ｎ）転移を増加させること；
（ｏ）腫瘍再発率を増加させること；
（ｐ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させることであって、任意選択的に一又は複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される一又は複数の標的タンパク質、又は一又は複数のがんワクチンを標的とする免疫療法である、抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させること；
（ｑ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；並びに
（ｒ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害
からなる群より選択される一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
疾患、障害、又は傷害ががんであり、薬剤が、
（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること；
（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＣＤ３３を減少させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤性細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＣＤ３３を減少させること；
（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させること；
（ｄ）一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ１レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ１レベルを低下させること；
（ｅ）一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ２レベルを低下させること；
（ｆ）一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ２レベルを低下させること；
（ｇ）一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ３レベルを低下させること；
（ｈ）一又は複数の細胞においてＣＤ２００Ｒレベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＣＤ２００Ｒレベルを低下させること；
（ｉ）一又は複数の細胞においてＣＤ１６３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＣＤ１６３レベルを低下させること；
（ｊ）一又は複数の細胞においてＣＤ２０６レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、一又は複数の細胞においてＣＤ２０６レベルを低下させること；
（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖速度を減少させること；
（ｌ）腫瘍体積を低下させること；
（ｍ）一又は複数のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること；
（ｎ）一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、又はそれらの任意の組合せのうちの一又は複数を標的とする、一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させること；
（ｏ）一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させること；
（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖を増加させること；
（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／又は一又は複数の機能を阻害すること；並びに
（ｒ）化学的又は放射性毒素とコンジュゲートした場合に、固形腫瘍及び関連血管中のＣＤ３３を発現する免疫サプレッサー骨髄細胞及び／又はＣＤ１４を発現する細胞を死滅させることからなる群から選択される一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を示す、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
がんがＳＩＲＰＡ又は一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドを発現する、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９０】
疾患、障害、又は傷害が、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウオマシー（taupathy）病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳傷害、脳卒中、前頭側頭型認知症、脊髄傷害、及びハンチントン病からなる群から選択され、薬剤はＳＩＲＰＡを下方制御する抗ＳＩＲＰＡ抗体である、請求項８５に記載の方法。
【請求項９１】
請求項１から５５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体のＶＨ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９２】
請求項１から５５の何れか一項に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体のＶＬ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項９３】
請求項９１に記載のポリヌクレオチド又は請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項９４】
請求項９１に記載のポリヌクレオチド及び請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項９５】
請求項９１に記載のポリヌクレオチド又は請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項９６】
請求項９１に記載のポリヌクレオチド及び請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
【請求項９７】
請求項９３又は９４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項９８】
抗ＳＩＲＰＡ抗体を産生する方法であって、抗体が発現される条件下で請求項９５から９７の何れか一項に記載の宿主細胞を培養することを含む方法。
【請求項９９】
宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項９８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、その全体が出典明示により本明細書に援用される、２０１６年１２月９日に出願された米国仮特許出願第６２／４３２５０３号の利益を主張する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
下記のＡＳＣＩＩテキストファイルの提出内容は、その全体が出典明示により本明細書に援用される。配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）、ファイル名０９９０６１−１０６９１９７＿ＳＬ．ＴＸＴ、２０１７年１２月７日作成。
【０００３】
本発明は、抗ＳＩＲＰＡ抗体及びこのような抗体の治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
マクロファージ（ＭΦ）及び樹状細胞（ＤＣ）などの食細胞は、細胞活性化状態、増殖、及び／又はエフェクター機能を調節する複雑な一連の細胞表面受容体を通じて、健康細胞を異常細胞と区別している。これらの受容体の多くは、不要な細胞を、除去するようにマークする（いわゆる「ｅａｔ−ｍｅ」シグナル）か、又は正常な細胞を破壊から保護する（いわゆる「ｄｏｎ’ｔ−ｅａｔ−ｍｅ」シグナル）多様なリガンドを認識する。近年、ＳＩＲＰα−ＣＤ４７軸は、がん細胞の生存から造血細胞移植の成功した生着に及ぶ様々な臨床設定において、マクロファージによるプログラム細胞除去の重要な決定因子として出現している。この経路に影響を与える治療薬は、多種のヒトのがんにおいて特に関連性がある疾患を改善するための関連する医学的必要性を満たす可能性がある。
【０００５】
ＳＩＲＰα（シグナル制御タンパク質−α、ＳＩＲＰＡ）は、（ＭΦ、ＤＣ、顆粒球などを含む）骨髄性細胞系統内で主に発現する、ＳＩＲＰファミリーの膜貫通受容体に属し、２つの膜近位ＩｇＣドメイン及び遠位ＩｇＶドメインを含有する細胞外領域によって特徴付けられる。このファミリーの中でも固有のＳＩＲＰＡは、細胞内の細胞質免疫受容体チロシンベースの抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有している。受容体が架橋されると、チロシン−リン酸化されたＩＴＩＭ部位は、ＳＨＰホスファターゼを動員して、活性化し、食作用又は炎症性サイトカイン放出などの細胞機能を負に制御する。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰＡの主要なリガンドとして機能し、内皮細胞／上皮細胞、白血球、及び赤血球などのほとんどの細胞型における幅広い発現は、食細胞依存性の除去から健康な細胞を保護するために「ｄｏｎ’ｔ−ｅａｔ−ｍｅ」シグナルを仲介することを示唆している。この見解を支持して、いくつかの研究は、ＣＤ４７ノックアウトマウスから野生型レシピエントへの赤血球又は白血球の養子移入がＣＤ４７欠損細胞の迅速な除去をもたらすことを示している。逆に、ヒト造血細胞を受け入れている免疫障害マウスの複数の株のポジショナル遺伝学的分析は、異種移植モデルにおける成功した生着の原因因子としてＮＯＤマウスにおけるＳｉｒｐα対立遺伝子を同定した。その後の研究は、ＮＯＤマウスにおいてのみ発現するＳＩＲＰＡの対立遺伝子変異体が、ヒト造血幹細胞上に発現するヒトＣＤ４７に結合する能力を保持し、したがって、マクロファージ依存性の移植片拒絶反応を抑制することを実証した。
【０００６】
ＳＩＲＰＡ及びＣＤ４７の制御された発現は、食細胞活性を調節するための恒常性コントロール機構を確立する。例えば、アポトーシス細胞は、ＣＤ４７の発現を下方制御して、常在性マクロファージによる貪食を促進する一方、生細胞は無傷のままである。同様に、ＬＰＳなどの炎症性刺激は、ＭΦ及びＤＣにおけるＳＩＲＰＡ発現を減少させて、炎症の間、それらの活性化を増強する。しかしながら、ＳＩＲＰＡ及びＣＤ４７発現の制御不全は、がんに見られるように、免疫関連疾患の一因となる。いくつかの腫瘍は、通常、悪性細胞を排除する免疫監視機構を回避するために、非がん性細胞と比較してＣＤ４７の発現を有意に増大する。前臨床試験は、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫などの同系腫瘍モデルにおけるＣＤ４７の遺伝的ノックダウンは、免疫適格マウスにおける腫瘍増殖を阻害するのに十分であることを明らかにしている。免疫障害マウスに移植された、ＣＤ４７ノックダウンされたヒトがん細胞株でも同様の結果が観察されている。あるいは、抗ＣＤ４７抗体などのＳＩＲＰＡ−ＣＤ４７相互作用を破壊する生物学的物質もまたマウスモデルにおける腫瘍除去を増強する。トラスツズマブ又はリツキシマブなどの市販の抗腫瘍抗原抗体と組み合わせた場合、抗ＣＤ４７抗体は、標準的な単独療法と比較して、抗腫瘍反応の相乗的な増加を促進する。それでも、ＣＤ４７の遍在性発現を考えると、抗ＣＤ４７抗体は、それらの治療効果を制限するオフターゲット効果のために重度の毒性負担の危険がある。それにもかかわらず、これらの研究は、がん免疫療法において潜在的な用途を有する骨髄細胞の制御におけるＳＩＲＰＡ−ＣＤ４７経路の重要な役割を確立している。
【発明の概要】
【０００７】
特定の態様では、本開示は、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。このような薬剤は、ＳＩＲＰＡの発現、活性、又はシグナル伝達に関連する疾患又は病理学を治療し、予防し、又はその危険性を低下させるために使用することができる。一部の態様では、本開示は、ヒトマクロファージ及び樹状細胞上のＳＩＲＰＡを下方制御する、すなわちそのレベルを減少させることができる抗ＳＩＲＰＡ抗体、並びにＳＩＲＰＡを発現する細胞株の同定に関する。一部の態様では、本開示は、免疫抑制性ＳＩＲＰＡ−ＣＤ４７相互作用に拮抗し、ＣＤ４７を発現する腫瘍細胞の食作用を促進する抗ＳＩＲＰＡ抗体に関する。さらなる態様では、本開示は、非競合的阻害を介してＣＤ４７結合を妨害する固有のＳＩＲＰＡ特異的抗体を提供する。
【０００８】
したがって、一態様では、本開示は、ＳＩＲＰＡに選択的に結合し、細胞表面上に発現したＳＩＲＰＡを下方制御するＳＩＲＰＡ抗体に関する。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡの総レベルを減少させる、又はそれらの任意の組合せである。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡ分解、ＳＩＲＰＡ切断、ＳＩＲＰＡ内在化、ＳＩＲＰＡ脱落、ＳＩＲＰＡ発現の下方制御、又はそれらの任意の組合せを誘導する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、インビボでＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させる。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞表面クラスター形成を阻害する。前述の任意の実施態様と組み合わせることができるさらなる実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害し、又は一又は複数のＳＩＲＰＡ活性に対抗し、ＳＩＲＰＡ活性は以下からなる群から選択され得る：（ａ）一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドへのＳＩＲＰＡ結合であって、任意選択的に、一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドは、ＣＤ４７、サーファクタントタンパク質Ａ及びＤ、並びにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、結合；（ｂ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の増殖を減少させること；（ｃ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の遊走を阻害すること；（ｄ）樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の一又は複数の機能を阻害すること；（ｅ）アポトーシスニューロンの除去、神経組織残屑の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織残屑の除去、細菌の除去、他の異物の除去、疾患原因となるタンパク質の除去、疾患原因となるペプチドの除去、及び腫瘍細胞の除去からなる群から選択される一又は複数の除去の阻害であって、任意選択的に、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、並びに腫瘍細胞は、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、及び甲状腺がんからなる群から選択されるがんに由来する、阻害；（ｆ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数の腫瘍細胞死滅の阻害；（ｇ）ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数の抗腫瘍細胞増殖活性を阻害すること；（ｈ）一又は複数の炎症性受容体の発現調節であって、任意選択的に、一又は複数の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、一又は複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数に発現する、発現調節；（ｉ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の機能性を促進又はレスキューすること；（ｊ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の、腫瘍への浸潤を増加させること；（ｋ）腫瘍、末梢血、又は他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄性／顆粒球性免疫サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を増加させること；（ｌ）骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の腫瘍促進活性を増強すること；（ｍ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の生存を増強すること；（ｎ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を減少させること；（ｏ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること；（ｐ）腫瘍体積を増加させること；（ｑ）腫瘍増殖速度を増加させること；並びに（ｒ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させることであって、任意選択的に、一又は複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せ、又は一又は複数のがんワクチンからなる群から選択される一又は複数の標的タンパク質を標的とする免疫療法である、減少させること。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、以下からなる群から選択される一又は複数の活性を誘導する：（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させることであって、任意選択的に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、減少させることこと；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させることであって、任意選択的に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、低下させること；（ｄ）一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｅ）一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｆ）一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｇ）一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｈ）一又は複数の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｉ）一又は複数の細胞におけるＣＤ１６３レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｊ）一又は複数の細胞におけるＣＤ２０６レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖速度を減少させること；（ｌ）腫瘍体積を低下させること；（ｍ）一又は複数のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること；（ｎ）一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させることであって、任意選択的に、一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、又はそれらの任意の組合せのうちの一又は複数を標的とする、増加させること；（ｏ）一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させることであって、任意選択的に、一又は複数の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、増加させること；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖を増加させること；（ｌ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／又は一又は複数の機能を阻害すること；並びに（ｒ）化学的又は放射性毒素とコンジュゲートした場合に、固形腫瘍及び関連血管中のＣＤ３３を発現する免疫サプレッサー非腫瘍形成性骨髄細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４を発現する細胞を死滅させること。
【０００９】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＣＤ４７のヒトＳＩＲＰＡへの結合を遮断する。
【００１０】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、ヒトＳＩＲＰＡに選択的に結合し、細胞上に発現するヒトＳＩＲＰＡへのＣＤ４７結合の結合を実質的に遮断せず、さらに、ヒトＳＩＲＰＡへの結合は細胞表面上のＳＩＲＰＡレベルを減少させる。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えばヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えばヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、このような抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む抗体と競合する。一部の実施態様では、このような抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１０のアミノ配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、若しくは２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；又は配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；並びに（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；又は配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡは、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨ領域を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、図１４Ａに示されるＶＨ領域のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含むか、又は図１４ＡのＶＨ領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含むＶＬ領域を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、ＶＬ領域は、図１４Ｂに示されるＶＬ領域のアミノ酸配列を含むか、又は図１４ＢのＶＬ領域のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、細胞の表面に発現するＦｃγＲのレベルを減少させるＦｃ領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、細胞の表面上のＦｃγＲＢＩＩのレベルを減少させるＦｃ領域を含む。
【００１１】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、ヒトＳＩＲＰＡに選択的に結合するが、マウスＳＩＲＰＡには結合せず、細胞上で発現するヒトＳＩＲＰＡへのＣＤ４７結合の結合を実質的に遮断しない。さらに、ヒトＳＩＲＰＡへの結合は、細胞表面のＳＩＲＰＡのレベルを減少させる。一部の実施態様では、このような抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む抗体と競合する。一部の態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡの、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含むＶＨ領域を含む。一部の実施態様では、ＶＨ領域は、ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＨ領域は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＨ領域は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、図１４ＣのＶＨ領域のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を含むか、又は図１４ＣのＶＨ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、ＶＬ領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、２個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の同一性を有するＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、又は１個以下のアミノ酸置換を有する配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施態様では、ＶＬ領域は、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、ＶＬ領域は、図１４ＤのＶＬ領域のアミノ酸配列を含み；又は図１４ＤのＶＬ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬ領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、細胞表面上のＦｃγＲレベルを減少させるＦｃ領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、細胞表面上のＦｃγＲＢＩＩレベルを減少させるＦｃ領域を含む。
【００１２】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができるさらなる態様では、本開示の単離された抗ＳＩＲＰＡは、ＳＩＲＰＡに結合させるため３Ｆ９、９Ｃ２、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択される一又は複数の抗体と競合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体はｍＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体は、３Ｆ９、９Ｃ２、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択される一又は複数の抗体と本質的に同じエピトープに結合する。一部の実施態様では、単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域、ＶＬ領域、又はその両方は、３Ｆ９、９Ｃ２、８Ａ９、８Ｆ４、１Ｅ２、７Ｈ９、及び４Ｄ８からなる群から選択されるモノクローナルの少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む。
【００１３】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体はモノクローナル抗体である。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体はヒト化抗体である。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ若しくはｓｃＦｖ断片；又は多価抗体であり、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、又はＩｇＡクラスのものである。
【００１４】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、又はＩｇＡクラスのものである。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプを有する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＲＩＩＢ）である。一部の実施態様では、抗体は、細胞表面上のＦｃγＲＩＩＢレベルを減少させる。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、（ａ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｔ３９４Ｄ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ又はＫａｂａｔ番号付けに従うか、又はグリシン２３６に対応する位置でＦｃ領域においてアミノ酸欠失を含み；（ｂ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含み、任意選択的にＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCP（配列番号３４）、のアミノ酸配列を含み、任意選択的に抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、又はその両方、及び／又はＮ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う；（ｃ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ又はＫａｂａｔ番号付けに従う；（ｄ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一���は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ又はＫａｂａｔ番号付けに従う；又は（ｅ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有し、任意選択的に抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けはＥＵ又はＫａｂａｔ番号付けに従う。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、（ａ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスのＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う；（ｂ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う；又は（ｃ）抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域において一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、（ａ）Ｆｃ領域は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う；（ｂ）Ｆｃ領域は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数の追加のアミノ酸置換をさらに含み、残基の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う；又は（ｃ）Ｆｃ領域は、ＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従うＳ２２８Ｐアミノ酸置換をさらに含む。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、残基位置２２８でのＳ２２８Ｐアミノ酸置換、残基位置２３４でのＦ２３４Ａアミノ酸置換、及び残基位置２３５でのＬ２３５Ａアミノ酸置換を含み、残基位置の番号付けはＥＵ若しくはＫａｂａｔ番号付けに従う。
【００１５】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は二重特異性抗体である。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、第１及び第２の抗原を認識し、第１の抗原はＳＩＲＰＡであり、第２の抗原は（ａ）血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；（ｂ）トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質形質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペプペプチド、及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；（ｃ）疾患原因となるペプチド若しくはタンパク質、又は疾患原因となる核酸からなる群から選択される疾患原因となる作用物質であって、疾患原因となる核酸は、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡大ＲＮＡであり、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、作用物質；並びに（ｄ）免疫細胞上に発現するリガンド及び／又はタンパク質であって、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択されるリガンド及び／又はタンパク質；並びに一又は複数の腫瘍細胞上に発現するタンパク質、脂質、多糖、又は糖脂質である。
【００１６】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体はコンジュゲート抗体である。例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、検出可能なマーカー、毒素、又は治療薬にコンジュゲートさせることができる。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レトストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアマイシン、サポナリアオフィシナリスインヒビター、グルココルチコイド、オーリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素にコンジュゲートされている。
【００１７】
前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができるさらなる実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質若しくはその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチド、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される疾患原因となるタンパク質に特異的に結合する一若しくは複数の抗体と組み合わせて；又はＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３３、Ｓｉｇｌｅｃ−５、Ｓｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９、Ｓｉｇｌｅｃ−１１、ホスファチジルセリン、疾患原因となる核酸、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復拡大ＲＮＡ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される免疫調節タンパク質に結合する一若しくは複数の抗体と組み合わせて使用される。
【００１８】
さらなる態様では、本開示は、それを必要とする個体における制御性Ｔ細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサー樹状細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサーマクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の活性、機能性、又は生存率を減少させる方法であって、ＳＩＲＰＡに結合するか又はそれと相互作用する、治療有効量の薬剤、例えば、上記の実施態様のいずれかの抗体を個体に投与することを含む。
【００１９】
さらなる態様では、本開示は、それを必要とする個体における一又は複数の免疫細胞の生存、成熟、機能性、遊走、又は増殖を誘導するか又は促進する方法であって、治療有効量の薬剤、例えば、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害し、又はその両方である、上記の実施態様のいずれかの抗体を個体に投与することを含む方法を提供する。一部の実施態様では、一又は複数の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００２０】
別の態様では、本開示は、ＣＤ４７を発現する腫瘍を有する患者に治療有効量の上記の実施態様のいずれかの抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。
【００２１】
さらなる態様では、本発明は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させる治療有効量の薬剤、例えば、上記の実施態様のいずれかの抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。一部の実施態様では、本方法は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３を阻害する治療薬を投与することをさらに含む。一部の実施態様では、治療薬は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３を阻害する抗体である。
【００２２】
さらなる態様では、本発明は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させる、治療有効量の薬剤、例えば、上記の実施態様のいずれかの抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。一部の実施態様では、本方法は、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体、及び／又は一又は複数の標準的若しくは治験的な抗がん療法を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施態様では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、及び抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー阻害性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、拮抗性抗ＴＲＥＭ１抗体、拮抗性抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、一又は複数の標準的又は治験的な抗がん療法は、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的化療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法からなる群から選択される。
【００２３】
前述の方法の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、本方法は、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施態様では、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、本方法は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、前述のいずれかの実施態様の抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与される。一部の実施態様では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、本方法は、少なくとも１つの刺激性サイトカインを個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様では、刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００２４】
さらなる態様では、本開示は、ＳＩＲＰＡを発現する骨髄系統のがん細胞を有する対象に治療有効量の前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。
【００２５】
別の態様では、本開示は、がんを治療する方法を提供し、本方法は、がんを有する対象に治療有効量の前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体を投与することを含み、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、及び線維肉腫からなる群から選択され；又はがんは、多形性神経膠芽腫、腎明細胞癌、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、肺腺癌、膵臓腺癌、腎細胞がん、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、乳房浸潤癌、頸部扁平上皮細胞癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、嫌色素性腎細胞癌、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣癌漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体癌、子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫からなる群から選択される。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰａ抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートし、及び／又はＡＤＣＣを誘導する。
【００２６】
一部の実施態様では、本開示は、前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体及び生理学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。一部の実施態様では、本開示は、がんの治療に使用するための；及び／又はがんの治療用の医薬を調製する方法において使用するための前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体を提供する。
【００２７】
さらなる態様では、本開示は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウオマシー（taupathy）病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳傷害、脳卒中、前頭側頭型認知症、脊髄傷害、ハンチントン病、感染、及びがんからなる群から選択される疾患、障害、又は傷害を予防し、危険性を低下させ、又は治療する方法であって、それを必要とする個体に、細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドの相互作用を阻害し、又はその両方である、治療有効量の薬剤を投与することを含む方法を提供する。一部の実施態様では、疾患、障害、又は傷害ががんであり、薬剤は、（ａ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の増殖、成熟、遊走、分化、及び／又は機能性を促進すること；（ｂ）免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連サプレッサー好中球、腫瘍関連サプレッサーＮＫ細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の、腫瘍への浸潤を増大させること；（ｃ）腫瘍、末梢血、又は他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄性／顆粒球免疫抑制性細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を増加させること；（ｄ）骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の腫瘍促進活性を増大させること；（ｅ）腫瘍又は末梢血において腫瘍促進性サイトカインの発現を増加させることであって、任意選択的に腫瘍促進性サイトカインはＴＧＦ−ベータ又はＩＬ−１０である、増加させること；（ｆ）腫瘍促進性ＦｏｘＰ３＋制御性Ｔリンパ球の腫瘍浸潤を増加させること；（ｇ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を減少させること；（ｈ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の浸潤を減少させること；（ｉ）腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること；（ｊ）ＮＫ細胞の腫瘍殺傷能を減少させること；（ｋ）免疫応答を増大させる可能性を有する腫瘍特異的Ｂリンパ球の浸潤を減少させること；（ｌ）腫瘍体積を増加させること；（ｍ）腫瘍増殖速度を増加させること；（ｎ）転移を増加させること；（ｏ）腫瘍再発率を増加させること；（ｐ）抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させることであって、任意選択的に一又は複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びそれらの任意の組合せからなる群から選���される一又は複数の標的タンパク質、又は一又は複数のがんワクチンを標的とする免疫療法である、減少；（ｑ）ＰＬＣγ／ＰＫＣ／カルシウム動員の阻害；並びに（ｒ）ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害からなる群より選択される一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害する。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、疾患、障害、又は傷害はがんであり、薬剤は、（ａ）腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること；（ｂ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＣＤ３３を減少させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤性細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する減少させること；（ｃ）非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させることであって、任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、低下させること；（ｄ）一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ１レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｅ）一又は複数の細胞においてＰＤ−Ｌ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｆ）一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ２レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｇ）一又は複数の細胞においてＢ７−Ｈ３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｈ）一又は複数の細胞においてＣＤ２００Ｒレベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｉ）一又は複数の細胞においてＣＤ１６３レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｊ）一又は複数の細胞においてＣＤ２０６レベルを低下させることであって、任意選択的に一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；（ｋ）固形腫瘍の腫瘍増殖速度を減少させること；（ｌ）腫瘍体積を低下させること；（ｍ）一又は複数のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること；（ｎ）一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、又はそれらの任意の組合せのうちの一又は複数を標的とする、増加させること；（ｏ）一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させることであって、任意選択的に一又は複数の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ド��ソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、増加させること；（ｐ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖を増加させること；（ｑ）非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／又は一又は複数の機能を阻害すること；並びに（ｒ）化学的又は放射性毒素とコンジュゲートした場合に、固形腫瘍及び関連血管中のＣＤ３３を発現する免疫サプレッサー骨髄細胞及び／又はＣＤ１４を発現する細胞を死滅させることからなる群から選択される一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を示す。一部の実施態様では、がんは、ＳＩＲＰＡ又は一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドを発現する。
【００２８】
さらなる態様では、本開示は、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤を含む、疾患、障害、又は傷害のリスクを治療、予防又は軽減する方法を提供し、疾患、障害、又は傷害は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、タウオマシー（taupathy）病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、外傷性脳傷害、脳卒中、前頭側頭型認知症、脊髄傷害、及びハンチントン病からなる群から選択される。一部の実施態様では、薬剤は、ＳＩＲＰＡを下方制御する、例えば前述の実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体である。
【００２９】
さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載される実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体のＶＨ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド；及び／又は本明細書に記載される実施態様のいずれか１つの抗ＳＩＲＰＡ抗体のＶＬ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。さらなる実施態様では、本開示は、ＶＨ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、又はＶＬ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。一部の実施態様では、本開示は、ＶＨ領域をコードするポリヌクレオチド及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。さらなる態様では、本開示は、ＶＨ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞、又はＶＬ領域をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。一部の実施態様では、本開示は、ＶＨ領域をコードするポリヌクレオチド及びＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。一部の実施態様では、本開示は、前述の実施態様のいずれか１つの発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。さらなる態様では、本開示は、抗ＳＩＲＰＡ抗体を産生する方法であって、抗体が発現される条件下で前述の実施態様のいずれかの宿主細胞を培養することを含む方法を提供する。一部の実施態様では、宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞である。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】リガンド結合ドメイン内の異なる残基を記述する、ヒトＳＩＲＰＡタンパク質の２つの最も一般的な対立遺伝子（ｖ１（配列番号１及びｖ２（配列番号４５）））の間のアミノ酸配列アラインメントを示す。受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＣＡＡ７１４０３である。
【図１Ｂ】２つのタンパク質間の相同性を記述する、ヒトＳＩＲＰＡ  ｖ１タンパク質（配列番号１）とヒトＳＩＲＰＢ１タンパク質（配列番号４６）との間のアミノ酸配列アライメントを示す。受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＯ００２４１である。
【図２】２つのタンパク質間の相同性を記述する、ヒトＳＩＲＰＡタンパク質（配列番号１）とマウスＳＩＲＰＡタンパク質（配列番号４７）との間のアミノ酸配列アライメントを示す。受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＱ６Ｐ６Ｉ８である。
【図３Ａ】ヒトＳＩＲＰＡ（ＨｕＳＩＲＰＡ）又はマウスＳＩＲＰＡ（ＭｕＳＩＲＰＡ）のいずれかを発現するげっ歯類チャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）に結合する選択されたＳＩＲＰＡ抗体の左パネルのＦＡＣＳヒストグラムを示す。影付きヒストグラムはＣＨＯ−ＭｕＳＩＲＰＡ細胞を表す。黒い白抜きのヒストグラムはＣＨＯ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞を表す。右パネルは、ＭｕＳＩＲＰＡと比較した、ＨｕＳＩＲＰＡに結合するＳＩＲＰＡ抗体の相対ＭＦＩ値を示す。結果はバックグラウンドに対する倍数として表す。バックグラウンドレベルはｙ軸上で１に設定されている。抗体ｍＩｇＧはアイソタイプ陰性コントロールである。
【図３Ｂ】初代ヒトマクロファージに結合する選択されたＳＩＲＰＡ抗体のＦＡＣＳヒストグラムを示す。抗体ｍＩｇＧは陰性アイソタイプコントロールを表す。影付きヒストグラムは、抗マウスＩｇＧ二次抗体のみで染色された細胞を表す。黒い白抜きのヒストグラムは、ＳＩＲＰＡ陽性細胞集団を表す。
【図３Ｃ】組換え可溶性ＨｕＳＩＲＰＡタンパク質に結合する示された抗ＳＩＲＰＡ抗体の表面プラズモン共鳴センサーグラムを示す。ＣＭ５チップ上に固定化された抗マウスＩｇＧ抗体は抗ＳＩＲＰＡ抗体を捕捉し、Ｈｉｓタグ化された可溶性ＨｕＳＩＲＰＡタンパク質の連続希釈物が抗体上を流れた。Ｋｄ値は曲線あてはめ分析によって決定された。
【図３Ｄ】ＣＨＯ細胞上で過剰発現されたヒトＳＩＲＰＡに対する漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ抗体の結合を示す。Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてシグモイド曲線にデータを適合させることによってＥＣ５０値を計算した。
【図４Ａ】抗ＳＩＲＰＡ抗体（破線のヒストグラム）又はマウスＩｇＧ１アイソタイプコントロール（黒塗りの実線のヒストグラム）のいずれかの存在下でＣＨＯ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞に結合する組換え可溶性ヒトＣＤ４７（ＨｕＣＤ４７）のＦＡＣＳヒストグラムを示す。Ｈｉｓタグ化されたＨｕＣＤ４７は、ＰＥ標識された抗ＨＩＳタグ二次抗体で検出された。陰性コントロール（影付きヒストグラム）として、ＣＨＯ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞は、ＨｕＣＤ４７の非存在下で、抗ＨＩＳタグ化されたＰＥ二次抗体で染色された。
【図４Ｂ】示された抗ＳＩＲＰＡ抗体又はマウスＩｇＧ１アイソタイプコントロールの存在下でのＣＨＯ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞へのＨｕＣＤ４７の結合の相対ＭＦＩ値を示す。結果は、ＨｕＣＤ４７及び抗体で処理された試料のＭＦＩ値を、ＨｕＣＤ４７の非存在下で、抗ＨＩＳタグ化されたＰＥで染色した細胞のＭＦＩ値で割ることによってバックグラウンドに対する倍数として表す。
【図５Ａ】細胞ベースのレポーターアッセイにおけるヒトＳＩＲＰＡ依存性ルシフェラーゼ発現の誘導を示す。ＢＷＺ／ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞（ＢＷＺ）は、ヒトＳＩＲＰＡ−ＤＡＰ１２キメラ（ＢＷＺ−ＨｕＳＩＲＰＡ）を安定的に発現するように操作された。細胞を漸増濃度のプレート結合した組換えＨｕＣＤ４７で刺激した。発光シグナルによって測定されるように、ＨｕＳＩＲＰＡキメラを発現する細胞のみが用量依存的にルシフェラーゼ発現を誘導した。結果はバックグラウンドに対する倍数として表す。バックグラウンドレベルはｙ軸上で１に設定されている。
【図５Ｂ】細胞ベースのレポーターアッセイにおいて、ＨｕＳＩＲＰＡ依存性ルシフェラーゼ発現に影響を及ぼすＣＤ４７遮断及びＣＤ４７非遮断の抗ＳＩＲＰＡ抗体の能力を示す。プレートに結合したＣＤ４７タンパク質の有無にかかわらず、ＢＷＺ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞をウェルに播種した。全てのＣＤ４７遮断抗体（１Ｂ３、１２Ｄ６、１Ｈ１１、５Ｆ７）は発光シグナルを強力に抑制する。２つのＣＤ４７非遮断性抗ＳＩＲＰＡ抗体はルシフェラーゼ発現を低下させなかった。結果はバックグラウンドに対する倍数として表す。バックグラウンドレベルはｙ軸上で１に設定されている。
【図６Ａ】細胞ベースのレポーターアッセイにおけるヒトＳＩＲＰＡ依存性又はヒトＳＩＲＰＢ１依存性ルシフェラーゼ発現の誘導を示す。ＢＷＺ−ＨｕＳＩＲＰＡ及びＢＷＺ−ＨｕＳＩＲＰＢ１レポーター細胞をプレート結合させた全長抗ＳＩＲＰＡ抗体又はｍＩｇＧ１アイソタイプコントロールで刺激した。ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを発現している細胞とＳＩＲＰＢ１を発現しているレポーター細胞の両方を活性化したが、ＣＤ４７非遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体（３Ｆ９及び９Ｃ２）はＢＷＺ−ＨｕＳＩＲＰＡ細胞のみを特異的に活性化した。
【図６Ｂ】図６Ｂは、組換え可溶性ＨｕＳＩＲＰＡ抗原又はＨｕＳＩＲＰＢ１抗原に結合する、示された抗ＳＩＲＰＡ抗体の表面プラズモン共鳴センサーグラムを示す。ＣＭ５チップ上に固定化された抗マウスＩｇＧ抗体は抗ＳＩＲＰＡ抗体を捕捉し、等モル濃度の抗原が捕捉された抗体上を流れた。
【図７Ａ】抗体刺激に応答した初代ヒトマクロファージにおけるＳＩＲＰＡ受容体の下方制御を示す。細胞を可溶性全長アイソタイプコントロール又は可溶性全長抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかで処理し、続いて別個のエピトープビンに結合するＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲートした抗ＳＩＲＰＡ参照抗体（ＳＡ５６−ＤｙＬ６５０）で染色した。
【図７Ｂ】ＣＤ４７非遮断抗体で処理された初代ヒトマクロファージにおけるＳＩＲＰＡ受容体の下方制御を示す。比較のために、マクロファージはまた２つのＣＤ４７遮断抗体（１２Ｄ６及び５Ｆ７）で処理された。結果は、抗ＳＩＲＰＡ抗体で処理された試料のＭＦＩ値を、アイソタイプコントロールで処理された試料のＭＦＩ値で割ることによって参照抗体結合のパーセントとして提示される。
【図８Ａ】エフェクター細胞としてのマクロファージ、及び標的としてのｐＨｒｏｄｅ標識された腫瘍細胞を用いた生細胞食作用アッセイを確立する。マンノース結合レクチンである、ビオチン化されたレンズマメ（Lens culinaris）凝集素（ＬＣＡ）を、アビジンコンジュゲートしたｐＨｒｏｄｏレッド色素と複合体を形成させた。次に、細胞膜上のＬＣＡ結合炭水化物構造を通じて細胞表面をｐＨｒｏｄｏで被覆するために、ＬＣＡ−ｐＨｒｏｄｏ複合体をＲａｊｉ細胞（ヒトＢ細胞リンパ腫系）と混合した。単独又は抗ＣＤ２０抗体でオプソニン化された標識Ｒａｊｉ細胞（Ｒａｊｉ−Ｒｅｄ）をマクロファージと２：１の比で混合し、２時間インキュベートして細胞を食作用させた。食作用活性は、ＦＡＣＳ分析によってＣＤ１４−ＡＰＣ＋／ＰＥ＋マクロファージのパーセントをカウントすることによって測定された。
【図８Ｂ】ＣＤ４７非遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体で処理されたマクロファージの増強された食作用活性を示す。マクロファージは、５μｇ／ｍＬの３Ｆ９、９Ｃ２、１Ｂ３（ＣＤ４７−ブロッカー）、又はアイソタイプコントロールを含む２．５％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ培地中で終夜培養された。単独又は抗ＣＤ２０抗体でオプソニン化されたＲａｊｉ−Ｒｅｄ細胞をマクロファージと２：１の比率で混合し、食作用活性を前述のように決定した。
【図８Ｃ】ＣＤ４７遮断抗ＳＩＲＰＡ抗体で処理されたマクロファージの増強された食作用活性を示す。マクロファージは、５μｇ／ｍＬの１２Ｄ６、９Ｃ５、１Ｈ１１、５Ｆ７、１Ｂ３、３Ｆ９（ＣＤ４７−非ブロッカー）又はアイソタイプコントロールを含む２．５％ＦＢＳ  ＲＰＭＩ培地中で終夜培養した。食作用活性を前述のように測定した。
【図９Ａ】抗体刺激に応答した初代ヒト単球におけるＳＩＲＰＡ受容体の下方制御を示す。細胞を可溶性全長アイソタイプコントロール又は抗ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９のいずれかで処理し、続いて別個のエピトープビンに結合するＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲートした抗ＳＩＲＰＡ参照抗体（ＳＡ５６−ＤｙＬ６５０）で染色した。
【図９Ｂ】２人の健康なドナー（ＨＤ）から単離された初代ヒト単球からの呼吸バーストを示す。細胞を可溶性全長マウスＩｇＧ１アイソタイプコントロール又は抗ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９及び９Ｃ２で刺激した。全ての実験において、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生は、細胞を２μＭの蛍光指示薬ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで標識することによってモニターされた。
【図９Ｃ】ＣＤ４７非遮断抗体で終夜刺激された初代ヒト単球からのＩＬ−８分泌を示す。上清を回収し、サイトカイン濃度を製造業者（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の指示に従って標準的なＥＬＩＳＡプロトコルにより決定した。
【図１０Ａ】ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスにおけるＦＡＣＳ染色による末梢血単球（実線）及び顆粒球（破線）におけるマウス及びヒトＳＩＲＰＡの発現を示す。ヒトＳＩＲＰＡは、抗ｈＳＩＲＰα／β−ＡＰＣ（クローンＳＥ５Ａ５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出された。マウスＳＩＲＰＡは、抗ｍＳＩＲＰα−ＡＰＣ（クローンｐ８４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で検出された。アイソタイプ染色は、陰影付きヒストグラムとして示されている。
【図１０Ｂ】Ｒａｊｉ  Ｂ細胞リンパ腫細胞を皮下移植したｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスの腫瘍体積測定値を示す。１群あたり３匹のマウスに５×１０５個又は１×１０６個のＲａｊｉ細胞のいずれかを与えた。固形腫瘍形成は、１週間に２回のキャリパー測定によって決定された。
【図１０Ｃ】１０ｍｇ／ｋｇの３Ｆ９（実線のヒストグラム）又はアイソタイプコントロール（影付きヒストグラム）抗体のいずれかを投与されたマウスからの末梢血細胞におけるｈｕＳＩＲＰＡ発現を示す。図１０Ｃの上段パネルは、３Ｆ９とは異なるエピトープに結合する抗体である、市販の抗ｈＳＩＲＰα／β−ＡＰＣ（クローンＳＥ５Ａ５、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いたｈｕＳＩＲＰＡの検出を示す。図１０Ｃの下段パネルは、３Ｆ９と同じエピトープに結合する抗体である、内部で生成された抗ｈＳＩＲＰα−ＤｙＬｉｇｈｔ６５０（クローン９Ｃ２）によるｈｕＳＩＲＰＡの検出を示す。
【図１０Ｄ】インビボでの抗体処置後の脾細胞におけるｈｕＳＩＲＰＡ発現の下方制御を示す。図１０Ｄの上段パネルは、抗マウスＦ４／８０  ＦＩＴＣ及び抗マウスＣＤ１１ｂパシフィックブルーで染色したマウス脾臓からの単一の細胞懸濁液のゲート処理戦略を示す。図１０Ｄの下段パネルは、２つの脾臓骨髄集団（Ｆ４／８０ＬｏＣＤ１１ｂＬｏ及びＦ４／８０ＨｉＣＤ１１ｂＨｉ）からのｈｕＳＩＲＰＡ発現を示す。実線のヒストグラムは、アイソタイプコントロール抗体を投与されたマウスにおけるｈｕＳＩＲＰＡ発現を表し、破線のヒストグラムは、３Ｆ９を投与されたマウスにおけるｈｕＳＩＲＰＡ発現を表す。
【図１１Ａ】インビボでの抗体処置後の腫瘍関連骨髄細胞におけるｈｕＳＩＲＰＡ発現の下方制御を示す。図１１Ａの上段パネルは、抗マウスＦ４／８０  ＦＩＴＣ及び抗マウスＣＤ１１ｂパシフィックブルーで染色された腫瘍からの単一の細胞懸濁液のゲート処理戦略を示す。図１１Ａの下段パネルは、２つの脾臓骨髄集団（Ｆ４／８０＋及びＣＤ１１ｂ＋）からのｈｕＳＩＲＰＡ発現を示す。実線のヒストグラムは、アイソタイプコントロール抗体を投与されたマウスにおけるｈｕＳＩＲＰＡ発現を表し、破線のヒストグラムは、３Ｆ９を投与されたマウスにおけるｈｕＳＩＲＰＡ発現を表す。
【図１１Ｂ】ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスに皮下注射されたＲａｊｉ−ルシフェラーゼリンパ腫細胞の放射輝度値を示す。１０日目に、マウスを放射輝度値に基づいて処置群又はコントロール群に無作為化し、研究が終結するまで、３〜４日ごとに１０ｍｇ／ｋｇの３Ｆ９又はマウスＩｇＧ１抗体のｉ．ｐ．注射により投薬した。投薬開始後の腫瘍発光値は、無作為化の日の発光値で補正され、有意性について線形回帰により分析した。
【図１２Ａ】インビボでの抗体処置後にＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍を保有するヒト化マウスから回収されたｈｕＳＩＲＰＡ発現ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋細胞の下方制御を示す。図１２Ａの上段パネルは、アイソタイプコントロール、３Ｆ９、又はＫｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ、Ｍｅｒｃｋ）のいずれかのｉ．ｐ．注射で投与されたマウスからの末梢血ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋細胞におけるｈｕＳＩＲＰＡ発現レベルを示す。図１１Ａの下段パネルは、アイソタイプコントロール、３Ｆ９、又はＫｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ、Ｍｅｒｃｋ）のいずれかのｉ．ｐ．注射で投与されたマウスからの腫瘍浸潤性ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋細胞におけるｈｕＳＩＲＰＡ発現レベルを示す。
【図１２Ｂ】アイソタイプコントロール、３Ｆ９、又はＫｅｙｔｒｕｄａ（ペムブロリズマブ、Ｍｅｒｃｋ）のいずれかのｉ．ｐ．注射で投与されたマウスからの末梢血中（図１２Ｂ、上段パネル）又は腫瘍内（図１２Ｂ、下段パネル）に存在するｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋細胞のパーセントを示す。
【図１２Ｃ】ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９を投薬後、ヒト化マウスの血中のヒトＣＤ４５＋細胞％が減少することを示すデータを提供する。ドナー、初期血液パラメーター（ＣＤ４５、ＣＤ３３、ＣＤ３）、初期動物体重、及び初期腫瘍体積についてデータを補正する。＊＊＊コントロール群（ｍｕＩｇＧ１）に対する多重線形回帰（Ｒｌｍ（）関数）によりｐ＜０．００２。
【図１３Ａ】種々の臍帯血ドナー（ドナー５０３１、５０４８、１２９）由来のヒト免疫幹細胞を移植したＮＳＧマウスにおける平均腫瘍体積をプロットする。ヒト化マウスにヒト乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を皮下移植し、−１日目の腫瘍体積、ｈｕＣＤ３４＋幹細胞ドナー、無作為化前の体重、及び無作為化前のｈｕＣ４５＋生着率に基づいて無作為化して処置群又はコントロール群とした。マウスは、ｉ．ｐ．注射で４日ごとに４０ｍｇ／ｋｇのマウスＩｇＧ１若しくは３Ｆ９、又は５日ごとに１０ｍｇ／ｋｇのＫｅｙｔｒｕｄａのいずれかを投薬された。灰色の実線は、アイソタイプコントロール処置されたマウスの平均腫瘍体積を表し、黒色の実線は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ処置されたマウスの平均腫瘍体積を表し、黒い破線は、３Ｆ９処置されたマウスの平均腫瘍体積を表す。
【図１３Ｂ】ｈｕＣＤ３４＋幹細胞ドナーによるヒト化ＮＳＧマウスにおける平均腫瘍体積をプロットする。図１３Ｂの上段パネルは、ドナー５０３１及び５０４８由来の幹細胞を移植した処置マウス及びコントロールマウスからの平均腫瘍体積を示す。図１３Ｂの下段パネルは、ドナー１２９由来の幹細胞を移植した処置マウス及びコントロールマウスからの平均腫瘍体積を示す。灰色の実線はアイソタイプコントロール処置されたマウスの平均腫瘍容積を表し、黒色の実線はＫｅｙｔｒｕｄａ処置されたマウスの平均腫瘍容積を表し、黒色の破線は３Ｆ９処置されたマウスラットからの平均腫瘍容積を表す。
【図１４Ａ】３Ｆ９の重鎖可変ドメインの潜在的なヒト化配列を列挙する。ヒト化配列は、ＩＧＨＶ３−２３＊０１アクセプターフレームワーク及びＩＧＨＪ４＊０１接続領域に基づく。図１４Ａは、出現順にそれぞれ配列番号４８〜５３を開示する。
【図１４Ｂ】３Ｆ９の軽鎖可変ドメインの潜在的なヒト化配列を列挙する。ヒト化配列は、ＩＧＫＶ３−１１＊０１アクセプターフレームワーク及びＩＧＫＪ２＊０１接続領域に基づく。図１４Ｂは、出現順にそれぞれ配列番号５４〜６０を開示する。
【図１４Ｃ】９Ｃ２の重鎖可変ドメインの潜在的なヒト化配列を列挙する。ヒト化配列は、ＩＧＨＶ１−４６＊０１アクセプターフレームワーク及びＩＧＨＪ４＊０１結合領域に基づく。図１４Ｃは、出現順にそれぞれ配列番号６１、４９及び６２〜６７を開示する。
【図１４Ｄ】９Ｃ２の軽鎖可変ドメインの潜在的なヒト化配列を列挙する。ヒト化配列は、ＩＧＫＶ３−１１＊０１アクセプターフレームワーク及びＩＧＫＪ２＊０１接続領域に基づく。図１４Ｄは、出現順にそれぞれ配列番号６８、５５及び６９〜７４を開示する。ＣＤＲ配列は太字で記されている。ＣＤＲ定義は、Ｗｅｂサイトのwww.bioinf.org.uk/abs/のＡｂＭである。「ｂ」は埋め込み側鎖を記す。「ｐ」は部分的に埋め込まれている。「ｉ」は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間の界面における側鎖を示す。ヒトとマウスの生殖細胞系の間の配列の相違はアスタリスク（＊）で示されている。フレームワークにおける潜在的なさらなる突然変異は、配列の下に記されている。ＣＤＲ配列における潜在的な変化は各ＣＤＲ配列の下に記されている。これらはアスパラギン（Ｎ）脱アミド化を妨げる場合がある。
【図１５Ａ】ＥｎｄｏＳ（１６Ａ）での処理による３Ｆ９の脱グリコシル化を示し、その脱グリコシル化は抗原認識に影響を及ぼさなかった（１６Ｂ）。
【図１５Ｂ】ＥｎｄｏＳ（１６Ａ）での処理による３Ｆ９の脱グリコシル化を示し、その脱グリコシル化は抗原認識に影響を及ぼさなかった（１６Ｂ）。
【図１６】３Ｆ９の両方のグリコフォームがアイソタイプコントロール処置されたマクロファージと比較してＳＩＲＰＡの表面発現を有意に下方制御したが、脱グリコシル化形態はグリコシル化形態と比較して部分的に低下した活性を示したことを示すデータを提供する。
【図１７Ａ】コントロール又は３Ｆ９抗体で処理されたマクロファージにおけるＦｃγＲＩＩＩＡ（パネル１８Ａ、ＣＤ１６）及びＦｃγＲＩＩＡ／Ｂ（パネル１８Ｂ、ＣＤ３２Ａ／Ｂ）の表面発現レベルを示すデータを提供する。この分析のためにＦｃγＲＩＩを検出するために使用される抗体は、活性化受容体（ＦｃγＲＩＩＡ）を抑制性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）と区別しない。
【図１７Ｂ】コントロール又は３Ｆ９抗体で処理されたマクロファージにおけるＦｃγＲＩＩＩＡ（パネル１８Ａ、ＣＤ１６）及びＦｃγＲＩＩＡ／Ｂ（パネル１８Ｂ、ＣＤ３２Ａ／Ｂ）の表面発現レベルを示すデータを提供する。この分析のためにＦｃγＲＩＩを検出するために使用される抗体は、活性化受容体（ＦｃγＲＩＩＡ）を抑制性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）と区別しない。
【図１８】３Ｆ９のグリコシル化形態及び脱グリコシル化形態で処理されたマクロファージにおける受容体特異的抗体を用いたＦｃγＲＩＩＡ（左パネル）及びＦｃγＲＩＩＢ（右パネル）の細胞表面レベルを示すデータを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
用語
本明細書で使用するとき、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、その内容が明確に指示していない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のこのような分子の組合せなどを任意選択的に含む。
【００３２】
本明細書で使用される用語「約」は、この技術分野の当業者に容易に知られるそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。
【００３３】
用語「抗体」は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されないが、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体などの様々な抗体構造を包含する。
【００３４】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、例えば、天然に存在する突然変異体を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造中に生じる可能性がある変異抗体を除いて同一であり、及び／又は同じエピトープに結合し、このような変異体は一般に少量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示し、いずれの特定の方法によって抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含む、様々な技術によって作製することができる。
【００３５】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直線抗体；一本鎖抗体分子、例えば、ｓｃＦｖ分子；並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。
【００３６】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」又は「同じ結合特異性を有する」抗体は、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいてその抗原への抗体の結合を５０％以上遮断する。同じエピトープに結合する抗体は、参照抗体と同じエピトープに結合し得、又はエピトープの一部に結合し得る。例示的な競合アッセイを本明細書に提供する。
【００３７】
本明細書で使用されるとき、「Ｖ領域」は、ＣＤＲ３及びフレームワーク４を含む、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、及びフレームワーク３のセグメントを含む抗体可変領域ドメインを指し、これらのセグメントは、Ｂ細胞分化中の重鎖及び軽鎖Ｖ領域遺伝子の再配列の結果としてＶセグメントに加えられる。
【００３８】
本明細書で使用するとき、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、軽鎖及び重鎖の可変領域によって確立された４つの「フレームワーク」領域を妨害する各鎖中の３つの超可変領域（ＨＶＲ）を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの結合に対する主な寄与因子である。各鎖のＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から開始して連続的に番号付けられ、また、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても同定される。したがって、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置され、一方、ＶＬ  ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲ１である。用語「ＣＤＲ」は、「ＨＶＲ」と互換的に使用され得る。
【００３９】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野における様々な周知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、インターナショナルＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、及びＡｂＭ（例えば、Johnson等, 前掲; Chothia & Lesk, 1987, Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J. Mol. Biol. 196, 901-917; Chothia C.等, 1989, Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature 342, 877-883; Chothia C.等, 1992, structural repertoire of the human VH segments J. Mol. Biol. 227, 799-817; Al-Lazikani等, J.Mol.Biol 1997, 273(4)を参照）を用いて決定することができる。抗原結合部位の定義はまた、以下：Ruiz等, IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res., 28, 219-221 (2000); 及びLefranc,M.-P. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res. Jan 1;29(1):207-9 (2001); MacCallum等, Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography, J. Mol. Biol., 262 (5), 732-745 (1996); 及びMartin等, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272 (1989); Martin等, Methods Enzymol., 203, 121-153, (1991); Pedersen等, Immunomethods, 1, 126, (1992); 及びRees等, In Sternberg M.J.E. (編), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 1996に記載される。Ｋａｂａｔ番号付けによって決定されるＣＤＲへの参照は、例えば、Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)に基づく。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａによって定義されているように決定される（例えば、Chothia及びLesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)を参照されたい）。
【００４０】
「エピトープ」又は「抗原決定基」は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質の三次元折り畳みによって並置された連続アミノ酸又は非連続アミノ酸の両方から形成することができる。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次元折り畳みによって形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも３個、より一般的には、少なくとも５個又は８〜１０個のアミノ酸を固有の空間的立体配座で含む。エピトープの空間的立体配座を決定する方法には、例えば、Ｘ線結晶学及び二次元核磁気共鳴が含まれる。例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris編 (1996)を参照されたい。
【００４１】
「Ｆｃ領域」は、天然の免疫グロブリンの第一定常領域を除く、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指す。この用語は、天然型Ｆｃ領域及び変異のＦｃ領域を指す。したがって、天然の免疫グロブリンとの関連での「Ｆｃ領域」は、典型的には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにこれらのドメインのＮ末端にあるフレキシブルヒンジを指す。ＩｇＡ及びＩｇＭについて、ＦｃはＪ鎖を含み得る。ＩｇＧについて、天然のＦｃは免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３並びにＣγ１とＣγとの間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得ることが当該技術分野において理解されているが、しかしながら、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Kabat等 (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, Va.)におけるなどのＥＵインデックスによる番号付けを使用すると、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６又はＰ２３０を含むものとして定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ、又はＫａｂａｔ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生若しくは精製の間に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去することができる。したがって、インタクトな抗体の組成は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を含む及び含まない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本開示の抗体に使用するのに適した天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。用語「Ｆｃ領域」は、Ｆｃ領域の天然に存在する対立遺伝子変異体、並びにエフェクター機能を調節する修飾を含む。Ｆｃ領域はまた、生物学的機能の変化をもたらさない変異体を含む。例えば、生物学的機能を実質的に喪失することなく、免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端又はＣ末端から一又は複数のアミノ酸を欠失させることができる。
【００４２】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を示す。本発明における使用に適したＦｃＲは、典型的には、天然のヒトＦｃＲ又は変異体である。
【００４３】
「天然型配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然型配列ヒトＦｃ領域には、天然型配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然型配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；天然型配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；天然型配列のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、並びにその天然に存在する変異体が含まれる。
【００４４】
「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは一又は複数のアミノ酸置換によって、天然型配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然型配列Ｆｃ領域又は親のポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然型配列Ｆｃ領域又は親のポリペプチドのＦｃ領域における約１〜約１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１〜約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異型Ｆｃ領域は、好ましくは天然型配列Ｆｃ領域及び／又は親のポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくはそれと少なくとも約９０％の同一性、より好ましくはそれと少なくとも約９５％の同一性を有する。
【００４５】
「アンタゴニスト」抗体、又は「阻害性」抗体は、抗体が抗原に結合した後に、抗原の一又は複数の活性又は機能を阻害又は低下させる（例えば、減少させる）本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体である。一部の実施態様では、アンタゴニスト抗体は、抗原への一又は複数のリガンドの結合を遮断し得る。一部の実施態様では、アンタゴニスト抗体又は阻害性抗体は、抗原の一又は複数の活性若しくは機能、及び／又は抗原へのリガンドの結合を実質的に若しくは完全に阻害する。
【００４６】
用語「平衡解離定数」（ＫＤと省略される）は、会合速度定数（ｋａ、時間−１Ｍ−１）で割った解離速度定数（ｋｄ、時間−１）を指す。平衡解離定数は、任意の方法を用いて測定することができる。したがって、一部の実施態様では、本開示の抗体は、３７℃で実施されるＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用する表面プラズモン共鳴分析によって決定した場合、約５０ｎＭ未満、典型的には約２５ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満、例えば、約５ｎＭ未満又は約１ｎＭ未満、多くの場合、約１００ｐＭ未満のＫＤを有する。一部の実施態様では、本開示の抗体は、二価抗体として測定した場合、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、又は１０−１５以下ＭのＫＤを有する。本発明との関連で、「改善された」ＫＤは、より低いＫＤを指す。
【００４７】
本明細書で使用される用語「二価分子」は、２つの抗原結合部位を有する分子を指す。一部の実施態様では、本発明の二価分子は、二価抗体又はその二価断片である。一部の実施態様では、本発明の二価分子は二価抗体である。一部の実施態様では、本発明の二価分子はＩｇＧである。一般的に、モノクローナル抗体は二価の基本構造を有する。ＩｇＧ及びＩｇＥはただ１つの二価単位を有し、一方、ＩｇＡ及びＩｇＭは、複数の二価単位（それぞれ２及び５）からなり、したがってより高い価数を有する。この二価性は、抗原に対する抗体の結合力を増加させる。
【００４８】
本明細書で使用される「二価結合」又は「二価的に結合する」という用語は、二価分子の両方の抗原結合部位のその抗原への結合を指す。好ましくは、二価分子の両方の抗原結合部位は、同じ抗原特異性を共有する。
【００４９】
本明細書で使用される用語「原子価」は、抗原に対する抗体の異なる結合部位の数を指す。一価抗体は、抗原に対する１つの結合部位を含む。二価抗体は、同じ抗原に対する２つの結合部位を含む。
【００５０】
抗原若しくは標的に「特異的に（又は選択的に）結合する」又は「特異的に（又は選択的に）免疫反応する」という語句は、タンパク質又はペプチドを指す場合、抗体が目的とする抗原又は標的に結合する結合反応を指す。本発明との関連で、抗体は、典型的には、他の抗原に対するその親和性より少なくとも１００倍大きいＫＤでＳＩＲＰＡに結合する。一部の実施態様では、抗体は、他の抗原に対するその親和性より少なくとも１００倍大きいＫＤでヒトＳＩＲＰＡに結合する。一部の実施態様では、抗体は、マウス及びヒトのＳＩＲＰＡに結合する。したがって、本明細書で使用するとき、「特異的結合」又は「選択的結合」は、（それを含むことができるが）排他的結合を必ずしも必要としない。標的に特異的に結合する抗体は、少なくとも約１０３Ｍ−１又は１０４Ｍ−１、時には約１０５Ｍ−１又は１０６Ｍ−１、他の場合には約１０６Ｍ−１又は１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１〜１０９Ｍ−１、又は約１０１０Ｍ−１〜１０１１Ｍ−１又はそれより高い会合定数を有し得る。様々なイムノアッセイフォーマットを使用して、特定のタンパク質と特異的に免疫反応する抗体を選択することができる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応するモノクローナル抗体を選択するために日常的に使用されている。特異的な免疫反応性を決定するために使用することができるイムノアッセイフォーマット及び条件の説明については、例えば、Harlow及びLane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New Yorkを参照されたい。
【００５１】
本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを発現する細胞の細胞表面に存在するＳＩＲＰＡのレベルを「下方制御」する。したがって、本開示において使用される場合、「下方制御」とは、ＳＩＲＰＡを発現する細胞、例えば、ヒトマクロファージの細胞表面上に存在するＳＩＲＰＡのレベルを減少させる抗体の能力を指す。本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞表面上で検出されたＳＩＲＰＡのレベルが、アイソタイプが一致したコントロール抗体と比較して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％減少した場合に、ＳＩＲＰＡを下方制御すると考えられる。
【００５２】
本開示の抗ＳＩＲＰａ抗体などの「単離された」抗体は、その産生環境の成分から（例えば、天然に又は組換えにより）同定され、分離され及び／又は回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドはその産生環境からの他の全ての汚染成分と会合していない。組換えトランスフェクト細胞から生じるものなどの、その産生環境からの汚染成分は、抗体の研究、診断又は治療用途を典型的には妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様の溶質を含み得る。好ましい実施態様では、ポリペプチドは（１）例えばローリー法により決定される、抗体の９５重量％超まで、一部の実施態様では９９重量％超まで、（２）スピニングカップシークエネーターを用いてＮ末端又は内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、又は（３）クマシーブルー、好ましくは銀染色を用いて非還元若しくは還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで、精製される。抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、単離された抗体には組換えＴ細胞内のインサイチュの抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離されたポリペプチド又は抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【００５３】
用語「同一の」又は「同一性」パーセントは、２つ以上のポリペプチド配列との関連で、比較ウィンドウ又は指定領域にわたって最大一致のために比較並びに整列させた場合に、特定領域にわたって、同じであるか、又は指定されたパーセンテージの同じ種類のアミノ酸残基（例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はより高い）を有する２つ以上の配列又は部分配列を指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用する方法を含む、様々な方法で実施することができる。配列同一性パーセント及び配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これはAltschul等, Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 (1977) 及びAltschul等, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)に記載されている。したがって、本発明の目的には、ＢＬＡＳＴ  ２．０は、核酸配列又はポリペプチド配列についての配列パーセントを決定するために記載されたデフォルトパラメーターとともに使用することができる。
【００５４】
本発明の特定の態様の概要
本開示は、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）；このような薬剤（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）を製造及び使用する方法；このような薬剤（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）を含む薬学的組成物；このような薬剤（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）をコードする核酸；このような薬剤（例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体）をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
【００５５】
ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する本開示の薬剤は、以下の特徴：（１）一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害又は低下させる；（２）一又は複数のそのリガンドへのＳＩＲＰＡの結合を阻害又は低下させる能力；（３）ＳＩＲＰＡ発現細胞における（ｍＲＮＡレベル及び／又はタンパク質レベルなどの）ＳＩＲＰＡ発現を低下させる能力；（４）ＳＩＲＰＡタンパク質と相互作用し、結合し、又は認識する能力；（５）ＳＩＲＰＡタンパク質と特異的に相互作用するか又は結合する能力；並びに（６）本明細書に記載又は企図される疾患又は障害の任意の態様を治療、改善、又は予防する能力、の１つ以上を有する分子である。
【００５６】
ＳＩＲＰＡの産生を阻害する例示的な薬剤としては、限定されないが、ＳＩＲＰＡ合成及び／又は放出を特異的に阻害する化合物、ＳＩＲＰＡに対して指向されるアンチセンス分子、又はＳＩＲＰＡをコードする核酸に対して指向される低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子が挙げられる。一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を阻害するさらなる例示的な薬剤としては、限定されないが、ＳＩＲＰＡタンパク質に特異的に結合する抗ＳＩＲＰＡ抗体、小分子阻害剤及び／又はペプチド阻害剤などの一又は複数のＳＩＲＰＡ活性を特異的に阻害する化合物、一又は複数のリガンド、ＳＩＲＰＡ構造類似体、又はＳＩＲＰＡに結合するＲＮＡ若しくはＤＮＡアプタマーに結合するＳＩＲＰＡを特異的に阻害する化合物が挙げられる。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、アロステリック阻害剤である。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、オルソステリック阻害剤である。
【００５７】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、限定されないが、小ペプチド又はペプチド様分子、可溶性ペプチド、及び合成非ペプチジル有機又は無機化合物を含む小分子阻害剤である。小分子阻害剤は、約１００〜約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００〜約１５，０００Ｄａ、約１０００〜約１０，０００Ｄａのいずれかの分子量を有し得る。一又は複数のＳＩＲＰＡ活性における、小分子が有する阻害効果を作製及び試験する方法は当該技術分野において周知であり、このような方法は、ＳＩＲＰＡ活性における小分子阻害剤の効果を評価するために使用され得る。例えば、本明細書に開示される方法及びアッセイのいずれかを使用して、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する小分子阻害剤についてスクリーニングすることができる。
【００５８】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、ＳＩＲＰＡをコードする核酸を標的化することによって機能性ＳＩＲＰＡの発現を遮断又は減少させることができる少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。ＳＩＲＰＡの核酸配列は当該技術分野において公知である。例えば、ヒトＳＩＲＰＡは、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿０８０７９２又はＹ１０３７５．１に示される核酸配列を有することができ、マウスＳＩＲＰＡは、ＮＣＢＩ受託番号ＢＣ０６２１９７に示される核酸配列を有することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチド分子を調製する方法は公知であり、このような方法は、他のポリヌクレオチドと交差反応せずに、一又は複数のＳＩＲＰＡ  ｍＲＮＡに特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するために使用することができる。例示的な標的化部位としては、限定されないが、開始コドン、５’調節領域、任意の保存されたコンセンサス領域を含むコード配列、及び３’非翻訳領域が挙げられる。特定の実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが約１０〜約１００ヌクレオチド、長さが約１５〜約５０ヌクレオチド、長さが約１８〜約２５ヌクレオチド、又はそれ以上である。特定の実施態様では、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性などを増加させるための化学修飾、例えば、当業者に公知であるホスホロチオエート結合及び２’−Ｏ−糖修飾などをさらに含む。
【００５９】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、ＳＩＲＰＡをコードする核酸を標的化することによって、機能性ＳＩＲＰＡの発現を遮断又は減少させることができる少なくとも１つのｓｉＲＮＡ分子を含む。ｓｉＲＮＡ分子を調製する方法は当該技術分野において周知であり、このような方法は、他のポリヌクレオチドと交差反応せずに、ＳＩＲＰＡ  ｍＲＮＡを特異的に標的化するｓｉＲＮＡ分子を調製するために使用することができる。ｓｉＲＮＡ分子は、典型的な固相オリゴヌクレオチド合成などの方法によって生成され得、多くの場合、ｓｉＲＮＡ剤の半減期及び／又は有効性を増加させるために、及び／又はより頑強な送達処方を可能にするために化学修飾を組み入れる。あるいは、ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡの細胞内転写のための発現カセットをコードするベクターを用いて送達される。
【００６０】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、ＳＩＲＰＡと結合又は物理的に相互作用するＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーであり、ＳＩＲＰＡと一又は複数のそのリガンドとの相互作用を遮断する。特定の実施態様では、アプタマーは、成熟型のＳＩＲＰＡに結合する少なくとも１つのＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーを含む。
【００６１】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、少なくとも１つのＳｉｇｌｅｃ−９構造類似体を含む。用語「ＳＩＲＰＡ構造類似体」は、ＳＩＲＰＡの一部と類似した三次元構造を有し、インビトロ又はインビボの生理学的条件下で一又は複数のＣＤ３リガンドに結合する化合物を指し、結合は、少なくとも部分的にＳＩＲＰＡの生物学的活性を阻害する。適切なＳＩＲＰＡ構造類似体は、本開示のＳＩＲＰＡリガンドなどのリガンドに結合するＳＩＲＰＡの分子モデリングを通じて設計及び合成することができる。ＳＩＲＰＡ構造類似体は、改善された親和性及び生物学的効果を得るために、同一又は異なる構造の任意の所望の組合せにおけるモノマー、ダイマー、又は高次のマルチマーであり得る。一部の実施態様では、薬剤は、ＳＩＲＰＡのアミノ酸配列に結合するか又はそれと相互作用する。
【００６２】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、可溶性ＳＩＲＰＡ受容体タンパク質、可溶性ＳＩＲＰＡ−Ｆｃ融合タンパク質を含む。特定の実施態様では、このような薬剤は、一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドと結合し、それによってＳＩＲＰＡリガンドとＳＩＲＰＡ受容体との間の相互作用を妨げる。
【００６３】
アッセイ
ＳＩＲＰＡの細胞レベルを低下させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は同定され得、及び／又は当該技術分野において周知である方法を用いて、例えば、放射性標識阻害剤アッセイ、光学アッセイ、タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、質量シフト測定アッセイ、蛍光アッセイ、及び／又は蛍光性ペプチド切断アッセイを用いて特徴付けられる。
【００６４】
結合アッセイ及び他のアッセイ
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、及び／又はＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドとの間の相互作用を阻害する薬剤は、ＳＩＲＰＡ薬剤候補の相互作用の存在及び／又はＳＩＲＰＡに対する結合親和性を検出するための、当該技術分野において周知である技術によって同定することができる。
【００６５】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤は、放射性標識阻害剤アッセイを使用して同定することができる。例えば、公知量の放射性標識剤候補は、公知量の固定化ＳＩＲＰＡ及び緩衝液とともにインキュベートされ得る。その後、固定化ＳＩＲＰＡを緩衝液で洗浄し、固定化ＳＩＲＰＡは、放射性標識ＳＩＲＰＡ剤候補の残存について、例えば、ガンマカウンターなどの当該技術分野において公知である技術を用いて測定され得る。放射性標識物質の存在を示す測定値は、放射性標識剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用し、及び／又はそれに結合することができることを示し得る。
【００６６】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤は、光学技術を使用して同定され得る。ＳＩＲＰＡ相互作用剤を検出するための例示的な光学技術は、例えば、ＳＩＲＰＡを比色共鳴グラフト表面に付着させ、それによって光がとらなければならない光路の変化に起因する反射光の波長がシフトし、その後、候補薬剤がＳＩＲＰＡと相互作用することを可能にする場合の反射光の波長における追加の変化を測定することを含み得る。例えば、薬剤をＳＩＲＰＡとともにインキュベートした場合に測定された反射光の波長が変化しないことは、薬剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用することができないことを示し得る。薬剤候補をＳＩＲＰＡとともにインキュベートした場合の測定された反射光の波長が変化することは、薬剤候補がＳＩＲＰＡに結合し、及び／又はそれと相互作用することができることを示し得る。
【００６７】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤は、タンパク質結合アッセイを使用して同定され得る。ＳＩＲＰＡ結合剤を検出するための例示的なタンパク質結合アッセイは、例えば、薬剤候補の存在下でのＳＩＲＰＡの免疫共沈降を含み得る。例えば、ＳＩＲＰＡを緩衝剤中で薬剤候補とともにインキュベートし、続いて、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体などのＳＩＲＰＡを捕捉するのに特異的な固定化分子を用いて、薬剤候補の存在下でＳＩＲＰＡを捕捉し、当該技術分野において公知である洗浄手順中に、潜在的に相互作用剤候補を用いてＳＩＲＰＡを結合し得る。その後、ＳＩＲＰＡは、潜在的に相互作用剤候補とともに放出され得、薬剤候補の存在は、薬剤候補の特徴に基づいて、例えば、質量分析及び／又はウエスタンブロットなどの技術によって検出され得る。
【００６８】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤は、当該技術分野において周知である生化学的アッセイ及び／又は免疫アッセイアッセイを使用して同定され得る。例示的な技術は、例えば、ウエスタンブロット、免疫染色、及び共免疫沈降などの技術を使用して、ＳＩＲＰＡ濃度及び／又はタンパク質半減期の変化を定量的に測定するためのアッセイを含み得る。例えば、薬剤候補は、ＳＩＲＰＡを発現する細胞などのＳＩＲＰＡを含有する試料とともにインキュベートされ、その後、ＳＩＲＰＡタンパク質の量及び／又は細胞レベルは、経時的研究中の時点で測定され得る。コントロール治療と比較したタンパク質量、細胞レベル、及び／又はタンパク質半減期の変化は、ＳＩＲＰＡ剤候補がＳＩＲＰＡ半減期及び／又は活性を変更させることができる可能性があることを示し得る。
【００６９】
特定の実施態様では、質量シフト測定アッセイは、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤を同定するために使用され得る。例示的な質量シフト測定アッセイは、薬剤候補が、例えば、限定されないが、質量分析計などの機器を用いることによって、ＳＩＲＰＡと相互作用している場合のＳＩＲＰＡ質量の変化を測定することにより、強く及び／又は共有結合したＳＩＲＰＡ剤の存在を検出することを含み得る。例えば、質量シフトアッセイは、薬剤候補相互作用の性質に応じて、全タンパク質及び／又はペプチドベースの分析において実施され得る。ＳＩＲＰＡへの上記薬剤候補の添加と相関する質量シフトの検出は、薬剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用し得るか、又はそうでなければＳＩＲＰＡを阻害し得ることを示し得る。さらに、例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、表面プラズモン共鳴などの技術を使用して、薬剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用している場合に、それぞれの薬剤候補質量と相関するＳＩＲＰＡへの質量の付加を検出することを含み得る。例えば、光の屈折率の変化を測定し、センサー表面に付着したＳＩＲＰＡの質量の変化と相関させることができる。
【００７０】
特定の実施態様では、化学架橋アッセイを使用して、ＳＩＲＰＡと相互作用するＳＩＲＰＡ剤を同定し得る。例えば、薬剤候補は、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤候補を上記ＳＩＲＰＡ分子に共有結合させることができる分子架橋剤と一緒に、インビボ又はインビトロでＳＩＲＰＡとともにインキュベートされ得る。その後、限定されないが、質量分析法及び／又はウエスタンブロット法などの技術を使用して、ＳＩＲＰＡと相互作用し得るか又はそうでなければＳＩＲＰＡを阻害し得る薬剤候補を同定し得る。例えば、薬剤候補と共有結合的に架橋されたＳＩＲＰＡの検出は、薬剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用し得るか又はそうでなければＳＩＲＰＡを阻害し得ることを示し得る。
【００７１】
特定の実施態様では、ＳＩＲＰＡと相互作用する薬剤は、蛍光アッセイを用いて同定され得る。例えば、公知量の蛍光剤候補は、公知量の固定化ＳＩＲＰＡ及び緩衝液とともにインキュベートされ得る。その後、固定化ＳＩＲＰＡを緩衝液で洗浄し、固定化ＳＩＲＰＡは、蛍光ＳＩＲＰＡ剤候補の残存について、当該技術分野において公知である技術、例えば、限定されないが、蛍光検出を用いて測定され得る。蛍光物質の存在を示す測定値は、蛍光剤候補がＳＩＲＰＡと相互作用し、及び／又はそれに結合することができることを示し得る。
【００７２】
当該技術分野において公知であり、本明細書（例えば、実施例２〜１１）に記載されるアッセイは、本開示のＳＩＲＰＡ剤の生物学的活性を同定及び試験するために使用することができる。一部の実施態様では、一又は複数のＳｉｇｌｅｃ−９活性を調節するためのＳＩＲＰＡ剤の能力を試験するアッセイが提供される。
【００７３】
抗ＳＩＲＰ−アルファ（ＳＩＲＰＡ）抗体
本開示の特定の抗ＳＩＲＰＡ抗体の態様の簡単な概要
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、少なくとも部分的には、細胞ＳＩＲＰＡを下方制御する抗体の能力による一又は複数の拮抗活性を有する。一部の実施態様では、本開示の単離されたＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡに選択的に結合し、ＳＩＲＰＡを下方制御する。一部の実施態様では、抗体は、細胞上に発現するＳＩＲＰＡへのＳＩＲＰＡリガンド、例えばＣＤ４７の結合を遮断しない。代替の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡリガンド、例えばＣＤ４７のＳＩＲＰＡへの結合を遮断する。一部の実施態様では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、多価抗体、又はキメラ抗体である。このような抗体の例示的な説明は、本開示を通じて見出される。一部の実施態様では、抗体は、第一の抗原及び第二の抗原を認識する二重特異性抗体である。
【００７４】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、本明細書で「多型」変異体としても明らかにされているが、マウスＳＩＲＰＡではなく、ヒトＳＩＲＰＡ、例えば、ヒト対立遺伝子変異体に選択的に結合し、ＳＩＲＰＢには結合しない。図１Ａは、ヒトＳＩＲＰＡタンパク質の２つの最も一般的な対立遺伝子（それぞれｖ１及びｖ２、受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＣＡＡ７１４０３である）の間のアミノ酸配列アラインメントを示し、リガンド結合ドメイン内の異なる残基を記す。したがって、一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡの対立遺伝子変異体に存在するが、ＳＩＲＰＢ又はマウスＳＩＲＰＡには存在しない線状又は立体構造的エピトープに結合する。図１Ｂは、ヒトＳＩＲＰＡｖ１タンパク質とヒトＳＩＲＰＢ１タンパク質との間のアミノ酸配列アラインメントを示し、受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＯ００２４１であり、２つのタンパク質間の相同性を記す。図２は、ヒトＳＩＲＰＡタンパク質とマウスＳＩＲＰＡタンパク質との間のアミノ酸配列アラインメントを示し、受託番号はそれぞれＮＰ５４２９７０及びＱ６Ｐ６Ｉ８であり、２つのタンパク質間の相同性を記す。一部の実施態様では、本開示の抗体は、ヒト及びマウスのＳＩＲＰＡに選択的に結合し、ＳＩＲＰＢに結合しない。
【００７５】
ＳＩＲＰＡは、Ｉ型の１回膜貫通タンパク質である。ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸配列（配列番号１）内で、細胞外ドメインは、アミノ酸残基３１〜３７３に位置する；膜貫通ドメインは、アミノ酸残基３７４〜３９４に位置する；細胞内ドメインは、アミノ酸残基３９５〜５０４に位置する。
【００７６】
ヒトＳＩＲＰＡは、それぞれＤ１ドメイン、Ｄ２ドメイン、及びＤ３ドメインと呼ばれる、Ｉｇスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）ドメインの１つのＶセット及び２つのＣ１セットを含む。Ｄ１ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基３２〜１３７を含む；Ｄ２ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基１４８〜２４７を含む；Ｄ３ドメインは、ヒトＳＩＲＰＡのアミノ酸残基２５４〜３４８を含む。
【００７７】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基３２〜１３７を含むヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメイン内のエピトープに結合し、エピトープは、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基３２〜１３７、アミノ酸残基３２〜５２、アミノ酸残基５５〜１２１、アミノ酸残基５８〜７３、アミノ酸残基６８〜８３、アミノ酸残基７８〜９３、アミノ酸残基８８〜１０３、アミノ酸残基９８〜１１３、アミノ酸残基１０８〜１２３、及びアミノ酸残基１１８〜１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７８】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基１４８〜２４７を含むヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメイン内のエピトープに結合し、エピトープは、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基１４８〜２４７、アミノ酸残基１４８〜１６８、アミノ酸残基１５８〜１７３、アミノ酸残基１６８〜１８３、アミノ酸残基１７０〜２２８、アミノ酸残基１７８〜１９３、アミノ酸残基１８８〜２０３、アミノ酸残基１９８〜２１３、アミノ酸残基２０８〜２２３、アミノ酸残基２１８〜２３３、及びアミノ酸残基２２８〜２４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００７９】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基２５４〜３４８を含むヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメイン内のエピトープに結合し、エピトープは、配列番号１のヒトＳＩＲＰＡアミノ酸配列のアミノ酸残基２５４〜３４８、アミノ酸残基２５４〜２７４、アミノ酸残基２６４〜２７９、アミノ酸残基２７４〜２８９、アミノ酸残基２７３〜３３１、アミノ酸残基２８１〜３１５、アミノ酸残基２８１〜３３７、アミノ酸残基２８４〜２９９、アミノ酸残基２９４〜３０９、アミノ酸残基３０４〜３１９、アミノ酸残基３１４〜３２９、アミノ酸残基３２４〜３３９、及びアミノ酸残基３３４〜３４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００８０】
一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ１ドメインに結合する。一部の実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ２ドメインに結合する。一部の態様では、抗体は、ＳＩＲＰＡ、例えば、ヒトＳＩＲＰＡのＤ３ドメインに結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表２において３Ｆ９として示される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する同じＳＩＲＰＡエピトープ又はＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡへの結合に関して３Ｆ９と競合し、３Ｆ９と同じエピトープの一部の全部に結合する。表２において９Ｃ２として示される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する同じＳＩＲＰＡエピトープ又はＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合する。したがって、一部の実施態様では、本開示の抗体は、表２において３Ｆ９として示される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する同じＳＩＲＰＡエピトープ又はＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合し、表２において９Ｃ２として示される抗体のＣＤＲを有する抗体が結合する同じＳＩＲＰＡエピトープ又はＳＩＲＰＡエピトープの一部に結合する。
【００８１】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡへの結合に関して３Ｆ９及び９Ｃ２と競合する。
【００８２】
好ましい実施態様では、前述の３段落のそれぞれの抗体は、ＣＤ４７のＳＩＲＰＡへの結合を遮断しない。
【００８３】
ＳＩＲＰＡ下方制御
本開示の特定の態様は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを下方制御する、すなわち減少させる抗ＳＩＲＰＡ抗体に関する。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンド（例えば、ＣＤ４７）との間の相互作用（例えば、結合）を阻害することなく、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させる。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを減少させ、ＳＩＲＰＡと一又は複数のＳＩＲＰＡリガンド（例えば、ＣＤ４７）との間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。
【００８４】
ＳＩＲＰＡの細胞レベルは、限定されないが、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベル、ＳＩＲＰＡの細胞内レベル、及びＳＩＲＰＡの総レベルを指す。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルの減少は、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルの減少を含む。本明細書で使用するとき、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、本明細書に記載され又は当該技術分野において公知である任意のインビトロ細胞ベースアッセイ又は適切なインビボモデルによって、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーを利用して、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを測定することによって測定されるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルの２５％以上の減少を誘導する場合、ＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを減少させる。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルの減少は、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルの減少を含む。本明細書で使用するとき、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、本明細書に記載され又は当該技術分野において公知である任意のインビトロ細胞ベースアッセイ又は適切なインビボモデルによって、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット分析、免疫共沈降法、及び細胞サイトメトリーによって測定されるＳＩＲＰＡの細胞内レベルの２５％以上の減少を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ−９の細胞内レベルを減少させる。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞内レベルの減少は、ＳＩＲＰＡの総レベルの減少を含む。本明細書で使用するとき、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、それが、本明細書に記載され又は当該技術分野において公知である任意のインビトロ細胞ベースアッセイ又は適切なインビボモデルによって、例えば、免疫染色、ウエスタンブロット分析、免疫共沈降法、及び細胞サイトメトリーによって測定されるＳＩＲＰＡの総レベルの２５％以上の減少を誘導する場合、ＳＩＲＰＡの総レベルを減少させる。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡ分解、ＳＩＲＰＡ切断、ＳＩＲＰＡ内在化、ＳＩＲＰＡ脱落、ＳＩＲＰＡ発現の下方制御、又はそれらの任意の組合せを誘導する。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの細胞レベルは、ＳＩＲＰＡ細胞アッセイを利用して、初代細胞（例えば、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、単球、ミクログリア、及びマクロファージ）又は細胞株において測定される。
【００８５】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体の下方制御は、３７℃でのヒトマクロファージの抗体への４時間の曝露後、２００ｎＭ以下、典型的には１００ｎＭ以下（細胞表面に発現するＳＩＲＰＡの５０％が下方制御される）のＩＣ５０を有する。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡは、本発明の抗体への少なくとも２４時間の曝露の間、下方制御されたままである。細胞は、任意の技術、例えばフローサイトメトリーを用いてＳＩＲＰＡ表面発現について分析することができる。
【００８６】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞レベルを抗ＳＩＲＰＡ抗体の非存在下でのＳＩＲＰＡの細胞レベルと比較して、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれを超えて減少させる。
【００８７】
前段落に要約されたいずれかの下方制御活性と組み合わせることができる一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの細胞表面クラスター形成を阻害する。
【００８８】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを下方制御するが、ＳＩＲＰＡリガンド、例えばＣＤ４７のＳＩＲＰＡへの結合を遮断しない。本発明との関連で、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断しない抗体は、抗体をＣＤ４７、及びＳＩＲＰＡを発現する細胞とともにインキュベートした場合にＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合の有意な減少をもたらさない抗体を指す。ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７結合との関連での「有意な減少」は、ＳＩＲＰＡに結合しないアイソタイプ適合したコントロール抗体の存在下でのＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合と比較して、３０％以下、典型的には少なくとも２５％、少なくとも２０％、少なくとも１５％、若しくは少なくとも１０％又はそれよりも少ない結合の減少を指す。遮断活性を評価するための例示的なアッセイは、実施例に記載されている。例えば、ヒトＳＩＲＰＡを発現する細胞、例えばヒトマクロファージは、ヒトＳＩＲＰＡを発現するように修飾されたＣＨＯ細胞などの細胞であり、９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルで播種され、洗浄され、１．０μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体又はアイソタイプコントロールを含有する蛍光活性化細胞選別のために１００μｌの緩衝液中でインキュベートされる。次に、細胞を洗浄し、可溶性ヒトＣＤ４７とともに氷上で３０分間インキュベートする。続いて、細胞を、表面結合したＣＤ４７について分析する。
【００８９】
あるいは、一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを下方制御するが、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断する。ＣＤ４７結合を遮断する抗体は、典型的には、ＣＤ４７結合を５０％若しくはそれを超えて、典型的には７５％、又は９０％若しくはそれを超えて遮断する。
【００９０】
ＳＩＲＰＡ活性の阻害
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、限定されないが以下を含む、ＳＩＲＰＡの一又は複数の活性を阻害する：一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドへのＳＩＲＰＡ結合であって、任意選択的に、一又は複数のＳＩＲＰＡリガンドは、ＣＤ４７、サーファクタントタンパク質Ａ及びＤ、並びにそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ＳＩＲＰＡ結合；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の増殖を減少させること；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の遊走を阻害すること；樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、Ｍ１マクロファージ、Ｍ１好中球、Ｍ１  ＮＫ細胞、活性化Ｍ１マクロファージ、活性化Ｍ１好中球、活性化Ｍ１  ＮＫ細胞、Ｍ２マクロファージ、Ｍ２好中球、Ｍ２  ＮＫ細胞、単球、破骨細胞、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、顆粒球、好中球、ミクログリア、Ｍ１ミクログリア、活性化Ｍ１ミクログリア、及びＭ２ミクログリアからなる群から選択される一又は複数の細胞の一又は複数の機能を阻害すること；アポトーシスニューロンの除去、神経組織残屑の除去、機能不全シナプスの除去、非神経組織残屑の除去、細菌の除去、他の異物の除去、疾患原因となるタンパク質の除去、疾患原因となるペプチドの除去、及び腫瘍細胞の除去からなる群から選択される一又は複数の除去の阻害であって、任意選択的に、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳生成物、ジペプチド反復（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択され、並びに腫瘍細胞は、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、線維肉腫、及び甲状腺がんからなる群から選択されるがんに由来する、阻害；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数による腫瘍細胞死滅を阻害すること；ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細胞のうちの一又は複数の抗腫瘍細胞増殖活性を阻害すること；一又は複数の炎症性受容体の発現調節であって、任意選択的に、一又は複数の炎症性受容体は、ＣＤ８６を含み、一又は複数の炎症性受容体は、ミクログリア、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、樹状細胞、骨髄由来樹状細胞、好中球、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、又は細胞傷害性Ｔ細のうちの一又は複数に発現する、発現調節；免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の機能性を促進又はレスキューすること；免疫サプレッサー樹状細胞、免疫サプレッサーマクロファージ、免疫サプレッサー好中球、免疫サプレッサーＮＫ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、腫瘍関連好中球、腫瘍関連ＮＫ細胞、非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄細胞、及び制御性Ｔ細胞のうちの一又は複数の、腫瘍への浸潤を増加させること；腫瘍、末梢血、又は他のリンパ系器官における腫瘍促進性骨髄性／顆粒球性免疫サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を増加させること；骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の腫瘍促進活性を増強すること；非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ４５＋ＣＤ１４＋骨髄性細胞の生存を増強すること；腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的Ｔリンパ球の活性化を減少させること；腫瘍殺傷能を有する腫瘍特異的ＮＫ細胞の浸潤を減少させること；腫瘍体積を増加させること；腫瘍増殖速度を増加させること；並びに抗腫瘍Ｔ細胞応答を調節する一又は複数の免疫療法の有効性を減少させることであって、任意選択的に、一又は複数の免疫療法は、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＳＦ−１受容体、及びそれらの任意の組合せ、又は一又は複数のがんワクチンからなる群から選択される一又は複数の標的タンパク質を標的とする免疫療法である、減少させること。
【００９１】
上記の他の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、以下からなる群から選択される一又は複数の活性を誘導する：腫瘍浸潤性ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を増加させること；非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞における細胞レベルのＳＩＲＰＡを減少させることであって、任意選択的に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、減少させること；非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞の数を低下させることであって、任意選択的に、非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は腫瘍浸潤細胞であるか、又は任意選択的に非腫瘍形成性ＣＤ１４＋骨髄性細胞は血中に存在する、低下させること；一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ１レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＰＤ−Ｌ２レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ２レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＢ７−Ｈ３レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＣＤ２００Ｒレベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＣＤ１６３レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；一又は複数の細胞におけるＣＤ２０６レベルを低下させることであって、任意選択的に、一又は複数の細胞は非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、低下させること；固形腫瘍の腫瘍増殖速度を減少させること；腫瘍体積を低下させること；一又は複数のＰＤ−１阻害剤の有効性を増加させること；一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法の有効性を増加させることであって、任意選択的に、一又は複数のチェックポイント阻害剤療法及び／又は免疫調節療法は、ＣＴＬＡ４、アデノシン経路、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、又はそれらの任意の組合せのうちの一又は複数を標的とする、増加させること；一又は複数の化学療法剤の有効性を増加させることであって、任意選択的に、一又は複数の化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））、タキサン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、及びそれらの任意の組合せである、増加させること；非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の存在下でのＴ細胞の増殖を増加させること；非腫瘍形成性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化、生存、及び／又は一又は複数の機能を阻害すること；並びに化学的又は放射性毒素とコンジュゲートした場合に、固形腫瘍及び関連血管中のＣＤ３３を発現する免疫サプレッサー非腫瘍形成性骨髄細胞及び／又は非腫瘍形成性ＣＤ１４を発現する細胞を死滅させること。
【００９２】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、制御性Ｔ細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサー樹状細胞、腫瘍内包型免疫サプレッサーマクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍関連マクロファージ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞、又は慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の活性、機能性、又は生存率を減少させる。
【００９３】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、一又は複数の免疫細胞の生存、成熟、機能性、遊走、若しくは増殖を誘導又は促進し、例えば、個体における一又は複数の免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、好中球、ＮＫ細胞、ミクログリア、Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、ＳＩＲＰＡのレベルは、ＳＩＲＰＡをコードする遺伝子の発現レベル；ＳＩＲＰＡをコードする一又は複数の転写物の発現レベル；ＳＩＲＰＡタンパク質の発現レベル；並びに／又は細胞内及び／若しくは細胞表面に存在するＳＩＲＰＡタンパク質の量を指すことができる。遺伝子発現、転写、翻訳、及び／若しくはタンパク質の存在量又は局在化のレベルを測定するための当該技術分野において公知である任意の方法を使用して、ＳＩＲＰＡのレベルを決定することができる。
【００９５】
一部の実施態様では、本開示の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体はマウス抗体である。一部の実施態様では、本開示の単離された抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、モノクローナル抗体、多価抗体、又はキメラ抗体である。このような抗体の例示的な説明は、本開示を通じて見出される。
【００９６】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト対立遺伝子変異体を含むヒトＳＩＲＰＡに結合する（図１Ａ、受託番号ＮＰ５４２９７０及びＣＡＡ７１４０３）。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡを含む霊長類ＳＩＲＰＡに特異的に結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡと霊長類ＳＩＲＰＡの両方に特異的に結合する。一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒトＳＩＲＰＡに特異的に結合し、マウスＳＩＲＰＡと交差反応する。
【００９７】
ＣＤ４７結合を遮断しないＳＩＲＰＡを下方制御する抗体のＨＶＲ配列
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを下方制御し、ＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断しない。一部の実施態様では、このような抗体は、配列番号１１に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ３を含む重鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１１に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１１に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、又は３個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている、配列番号１１に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１１に記載される配列と比較して、置換された１又は２個のアミノ酸を有する。一部の実施態様では、配列番号１１に対して１又は２個のアミノ酸が欠失している。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の同一性又は少なくとも７５％の同一性を有する。
【００９８】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＲＰＡ抗体の重鎖可変領域は、前段落に記載されるＨＶＲ３、並びに表３に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ１及び／又はＨＶＲ２を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号９の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号９の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１０の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１０の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の同一性を有する。
【００９９】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１１のＨＶＲ３、配列番号９のＨＶＲ１、及び配列番号１０のＨＶＲ２を含む重鎖可変領域を含む。
【０１００】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表２に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号８に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、又は３個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号８に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号８に記載される配列と比較して、１又は２個のアミノ酸が置換されている。一部の実施態様では、配列番号８に対して、１又は２個のアミノ酸が欠失している。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する。
【０１０１】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＲＰＡ抗体の軽鎖可変領域は、前段落に記載されるＨＶＲ３、並びに表２に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ１及び／又はＨＶＲ２を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、３、４、５、若しくは６個、又は１、２、３、４、又は５個のアミノ酸が置換されている、例えば保存的に置換されている配列番号６の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば保存的に置換されている配列番号６の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば保存的に置換されている配列番号６の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、若しくは３個のアミノ酸；又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば保存的に置換されている配列番号７の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８５％の同一性を有する。
【０１０２】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号８のＨＶＲ３、配列番号６のＨＶＲ１、及び配列番号７のＨＶＲ２を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１０３】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表３に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ３、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ１を含む重鎖可変領域、並びに表２に記載される抗体３Ｆ９のＨＶＲ３、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、３Ｆ９の６つのＣＤＲを含み、少なくとも１つのＨＶＲは、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個、又は１若しくは２個のアミノ酸で３Ｆ９のＨＶＲと相違する。一部の実施態様では、このような抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸で、対応するＨＶＲと相違する２個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸で、３Ｆ９の対応するＨＶＲと相違する３個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、又は３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸で、３Ｆ９の対応するＨＶＲと相違する４個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個アミノ酸の対応するＨＶＲと相違する５つのＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、各ＨＶＲにおいて、１、２、若しくは３個のアミノ酸の変化、又は１若しくは２個のアミノ酸変化を含む。
【０１０４】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１７に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ３を含む重鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１７に記載される配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、又は３個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号７に記載の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１７に記載される配列と比較して、１又は２個のアミノ酸置換を有する。一部の実施態様では、配列番号１７に対して、１又は２個のアミノ酸が欠失している。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する。
【０１０５】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＲＰＡ抗体の重鎖可変領域は、前段落に記載されるＨＶＲ３、並びに表３に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ１及び／又はＨＶＲ２を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１５の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１５の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１６の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１６の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲは、配列番号１６のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の同一性を有する。
【０１０６】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１７のＨＶＲ３、配列番号１５のＨＶＲ１、及び配列番号１６のＨＶＲ２を含む重鎖可変領域を含む。
【０１０７】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表２に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１４に記載の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、１、２、又は３個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号４に記載の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１４に記載される配列と比較して１又は２個のアミノ酸が置換されている。一部の実施態様では、配列番号１４に対して１又は２個のアミノ酸が欠失している。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ３は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する。
【０１０８】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体の軽鎖可変領域は、前段落に記載されるＨＶＲ３、並びに表２に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ１及び／又はＨＶＲ２を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、３、又は４個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１２の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１２の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ１は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、少なくとも８０％の同一性、又は少なくとも９０％の同一性を有する。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が置換されている、例えば、保存的に置換されている配列番号１３の配列を含む。一部の実施態様では、ＨＶＲ２は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８５％の同一性を有する。
【０１０９】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、配列番号１４のＨＶＲ３、配列番号１２のＨＶＲ１、及び配列番号１３のＨＶＲ２を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１１０】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、表３に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ３、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ１を含む重鎖可変領域、並びに表２に記載される抗体９Ｃ２のＨＶＲ３、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、対応する９Ｃ２のＨＶＲと比較して、１、２若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が９Ｃ２のＨＶＲと異なる少なくとも１個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、このような抗体は、９Ｃ２の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が９Ｃ２の対応するＨＶＲと異なる２個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、９Ｃ２の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が９Ｃ２の対応するＨＶＲと異なる３個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、３Ｆ９の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が９Ｃ２の対応するＨＶＲと異なる４個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、９Ｃ２の対応するＨＶＲと比較して、１、２、若しくは３個のアミノ酸、又は１若しくは２個のアミノ酸が９Ｃ２の対応するＨＶＲと異なる５個のＨＶＲを含む。一部の実施態様では、抗体は、９Ｃ２の対応するＨＶＲと比較して、各ＨＶＲにおいて、１、２、若しくは３個のアミノ酸の変化、又は１若しくは２個のアミノ酸変化を含む。
【０１１１】
一部の実施態様では、３Ｆ９からの軽鎖ＣＤＲ２（配列番号７）に存在するＮ残基は、Ｑ、Ｓ、Ａ、又はＤで置換され得る。一部の実施態様では、表２の３Ｆ９からの軽鎖ＣＤＲ３（配列番号８）のＮ残基はＱ、Ｓ、Ａ又はＤで置換され得る。いくつかの場合では、軽鎖ＣＤＲ２とＣＤＲ３の両方のＮ残基は、Ｑ、Ｓ、Ａ、又はＤで置換される。一部の実施態様では、３Ｆ９からの軽鎖ＣＤＲ３（配列番号８）のＣは、Ａ、Ｓ、又はＬで置換され得る。
【０１１２】
一部の実施態様では、９Ｃ２からの重鎖ＣＤＲ１（配列番号１５）に存在するＮ残基は、Ｑ、Ｓ、又はＡで置換され得る。一部の実施態様では、９Ｃ２からの重鎖ＣＤＲ２（配列番号１６）に存在する一方又は両方のＮ残基は、Ｑ、Ｓ、又はＡで置換され得る。一部の実施態様では、配列番号１７の重鎖ＣＤＲ３残基Ａｓｐ−Ｇｌｙ（ＤＧ）のＤは、Ａ、Ｓ、又はＥで置換され得る。一部の実施態様では、９Ｃ２からの軽鎖ＣＤＲ２（配列番号１３）のＮ残基は、Ｑ、Ｓ、Ｄ、又はＡで置換され得る。一部の実施態様では、９Ｃ２からの軽鎖ＣＤＲ３（配列番号１４）のＮ残基は、Ｑ、Ｓ、Ｄ、又はＡで置換され得る。配列番号１４の軽鎖ＣＤＲ３はまた、９Ｃ２軽鎖ＣＤＲ３のＴｒｐ残基の代わりに置換されるＨ、Ｙ、又はＦ残基を含有し得る。
【０１１３】
抗体フレームワーク
本明細書に記載される抗体のいずれも、フレームワーク、好ましくはヒト免疫グロブリンフレームワークをさらに含む。例えば、一部の実施態様では、抗体は、上記の実施態様のいずれかにおけるＨＶＲを含み、さらに、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。ヒト免疫グロブリンフレームワークは、ヒト抗体の一部であり得るか、又は非ヒト抗体は、一又は複数の内因性フレームワークをヒトフレームワーク領域（単数又は複数）と置き換えることによってヒト化され得る。ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては、限定されないが、「最良適合」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Sims等 J. Immunol. 151:2296 (1993)参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 及びPresta等  J. Immunol., 151:2623 (1993)参照）；ヒト成熟（体細胞突然変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro及びFransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)参照）；及びＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Baca等, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 及びRosok等, J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)参照）が含まれる。
【０１１４】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、３Ｆ９の結合特異性を有し、上記のように重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含み、さらに、図１４Ａに示されるように少なくとも１つの重鎖フレームワークを含む。例えば、図１４ＡのｈＳＢ−３Ｆ９−Ｈ１又はｈＳＢ−３Ｆ９−Ｈ２の配列が挙げられる。この文脈における「フレームワーク」は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列を指し、ＣＤＲ配列を除く。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ａに示されるフレームワークに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するフレームワークを有し、同一性パーセントは、ＣＤＲを除くＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列に基づいて決定される。
【０１１５】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、３Ｆ９の結合特異性を有し、上記のように軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含み、さらに、図１４Ｂに示されるように少なくとも１つの軽鎖フレームワークを含む。例えば、図１４ＢのｈＳＢ−３Ｆ９−Ｌ１、ｈＳＢ−３Ｆ９−Ｌ２、又はｈＳＢ−３Ｆ９−Ｌ３の配列が挙げられる。この文脈における「フレームワーク」は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列を指し、ＣＤＲ配列を除く。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ｂに示されるフレームワークに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するフレームワークを有し、同一性パーセントは、ＣＤＲを除くＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列に基づいて決定される。
【０１１６】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、前２段落に記載されるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。
【０１１７】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、９Ｃ２の結合特異性を有し、上記のように重鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含み、さらに、図１４Ｃに示されるように少なくとも１つの重鎖フレームワークを含む。例えば、図１４ＣのｈＳＢ−９Ｃ２−Ｈ１、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｈ２、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｈ３、又はｈＳＢ−９Ｃ２−Ｈ４の配列が挙げられる。この文脈における「フレームワーク」は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列を指し、ＣＤＲ配列を除く。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ｃに示されるフレームワークに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するフレームワークを有し、同一性パーセントは、ＣＤＲを除くＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列に基づいて決定される。
【０１１８】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、３Ｆ９の結合特異性を有し、上記のように軽鎖ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、及びＨＶＲ３配列を含み、さらに、図１４Ｄに示されるように少なくとも１つの軽鎖フレームワークを含む。例えば、図１４ＤのｈＳＢ−９Ｃ２−Ｌ１、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｌ２、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｌ３、又はｈＳＢ−９Ｃ２−Ｌの配列が挙げられる。この文脈における「フレームワーク」は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列を指し、ＣＤＲ配列を除く。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ｄに示されるフレームワークに対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するフレームワークを有し、同一性パーセントは、ＣＤＲを除くＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４配列に基づいて決定される。
【０１１９】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、前２段落に記載されるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。
【０１２０】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１０Ａ〜１０Ｄに示されるＣＤＲ及びフレームワーク領域の配列に対して一又は複数のｅ置換を含む。一部の実施態様では、置換は保存的置換である。例示的な置換を以下に提供する。
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【０１２１】
一部の実施態様では、置換は、非保存的置換であり得る。天然に存在する残基は、一般的な側鎖の性質に基づいてグループに分けられる：
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
一部の実施態様では、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０１２２】
抗体の適切な立体配座の維持に関与しないいずれのシステイン残基はまた、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止するために、一般的にセリンで置換され得る。逆に、システイン結合（単数又は複数）を抗体に付加してその安定性を改善することができる（特に、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合）。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ａ〜図１４Ｄに示される配列の一又複数のＣ残基に置換を含む。
【０１２３】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体はまた、潜在的な脱アミド化部位である、Ｎ残基に置換を含み得る。一部の実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、図１４Ａ〜１４Ｄに示される配列の一又は複数のＮ残基に置換を含む。
【０１２４】
一部の実施態様では、Ｗ残基は酸化を感受性であり得るため、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｗ残基に置換を含む。一部の実施態様では、置換は、図１４Ａ〜１４Ｄに示される配列の一又は複数のＷ残基におけるものである。
【０１２５】
一部の実施態様では、イソアスパラギン酸形成に感受性であり得るＡｓｐ−Ｇｌｙ（ＤＧ）配列を含有する抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｇｌｙに置換されたＡ若しくはＳ、又はＡｓｐに置換されたＥを有し得る。
【０１２６】
抗ＳＩＲＰＡ１抗体結合親和性
本開示の抗ＳＩＲＰＡは、ＳＩＲＰＡに対してナノモル又はさらにはピコモルの親和性を有し得る。特定の実施態様では、抗体の解離定数（ＫＤ）は、約０．０５〜約１００ｎＭである。例えば、抗体のＫＤは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約９００ｐＭ、約８００ｐＭ、約７９０ｐＭ、約７８０ｐＭ、約７７０ｐＭ、約７６０ｐＭ、約７５０ｐＭ、約７４０ｐＭ、約７３０ｐＭ、約７２０ｐＭ、約７１０ｐＭ、約７００ｐＭ、約６５０ｐＭ、約６００ｐＭ、約５９０ｐＭ、約５８０ｐＭ、約５７０ｐＭ、約５６０ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５４０ｐＭ、約５３０ｐＭ、約５２０ｐＭ、約５１０ｐＭ、約５００ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４００ｐＭ、約３５０ｐＭ、約３００ｐＭ、約２９０ｐＭ、約２８０ｐＭ、約２７０ｐＭ、約２６０ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２４０ｐＭ、約２３０ｐＭ、約２２０ｐＭ、約２１０ｐＭ、約２００ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１００ｐＭ、又は約５０ｐＭのいずれかから約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、又は約４０ｐＭのいずれかである。
【０１２７】
一部の実施態様では、ヒトＳＩＲＰＡへの結合に対する抗ＳＩＲＰＡのＫＤは、約２００ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約１ｎＭ以下であり得る。一部の実施態様では、ヒトＳＩＲＰＡに対する抗ＳＩＲＰＡ抗体のＫｄは、約１００ｐＭ以下又は約５０ｐＭ以下、約１０ｐＭ未満、又は約１ｐＭ未満である。一部の実施態様では、結合親和性は、約１ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲内である。一部の実施態様では、ＫＤは、約１ｐＭ〜約１００ｎＭの範囲内である。
【０１２８】
一部の実施態様では、ヒトＳＩＲＰＡに対する抗ＳＩＲＰＡ抗体のＫＤは、１５ｎＭ未満、１４．５ｎＭ未満、１４ｎＭ未満、１３．５ｎＭ未満、１３ｎＭ未満、１２．９ｎＭ未満、１２．８ｎＭ未満、１２．７ｎＭ未満、１２．６ｎＭ未満、１２．５ｎＭ未満、１２．４ｎＭ未満、１２．３ｎＭ未満、１２．２ｎＭ未満、１２．１ｎＭ未満、１２ｎＭ未満、１１．５ｎＭ未満、１１ｎＭ未満、１０．９ｎＭ未満、１０．８ｎＭ未満、１０．７ｎＭ未満、１０．６ｎＭ未満、１０．５ｎＭ未満、１０．４ｎＭ未満、１０．３ｎＭ未満、１０．２ｎＭ未満、１０．１ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、９．５ｎＭ未満、９ｎＭ未満、８．５ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７．５ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６．９ｎＭ未満、６．８ｎＭ未満、６．７ｎＭ未満、６．６ｎＭ未満、６．５ｎＭ未満、６．４ｎＭ未満、６．３ｎＭ未満、６．２ｎＭ未満、６．１ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５．５ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４．５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３．５ｎＭ未満、３．４ｎＭ未満、３．３ｎＭ未満、３．２ｎＭ未満、３．１ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２．９ｎＭ未満、２．８ｎＭ未満、２．７ｎＭ未満、２．６ｎＭ未満、２．５ｎＭ未満、２．４ｎＭ未満、２．３ｎＭ未満、２．２ｎＭ未満、２．１ｎＭ、２ｎＭ未満、１．９ｎＭ未満、１．８ｎＭ未満、１．７ｎＭ未満、１．６ｎＭ未満、１．５ｎＭ未満、１．４ｎＭ未満、１．３ｎＭ未満、１．２ｎＭ未満、１．１ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９５ｎＭ、又は０．９ｎＭ未満である。一部の実施態様では、解離定数は、約５０ｎＭ〜約１００ｐＭの範囲である。
【０１２９】
解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、生物層干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏによるＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ参照）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、走査熱量測定（ＤＳＣ）、円二色性（ＣＤ）、ストップトフロー分析、及び比色分析又は蛍光タンパク質融解分析などの任意の生化学的又は生物物理学的技術を含む任意の分析技術によって決定することができる。
【０１３０】
抗体断片
本開示の特定の態様は、本明細書に記載されるＳＩＲＰＡ抗体の断片に関し、断片はＳＩＲＰＡ結合活性を保持している。一部の実施態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片である。一部の実施態様では、抗体断片は、多価フォーマットで提供される。
【０１３１】
多価抗体
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞によって二価抗体よりも速く内在化される多価フォーマットであり得る。本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体又はその抗体断片は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（ＩｇＭクラス以外のもの）（例えば、四価抗体）であり得、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生することができる。多価抗体は、二量体化ドメイン及び３つ以上の抗原結合部位を含み得る。典型的な実施態様では、二量体化ドメインは、Ｆｃ領域又はヒンジ領域を含む。このシナリオでは、抗体は、Ｆｃ領域、及びＦｃ領域に対してアミノ末端の３つ以上の抗原結合部位を含む。一部の実施態様では、多価抗体は、３〜８個、例えば４個の抗原結合部位を含有する。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（及び好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含有し、ポリペプチド鎖又は複数のポリペプチド鎖は２つ以上の可変ドメインを含む。
【０１３２】
二重特異性及び多重特異性抗体
本開示の特定の態様は、二重特異性抗体、又は本明細書に記載の抗ＳＩＲＰＡ抗体及び第二の抗原又は第二のＳＩＲＰＡエピトープに結合する抗体を含む多重特異性抗体に関する。二重特異性抗体及び多重特異性抗体は、任意の方法を用いて作製することができる。
【０１３３】
一部の実施態様では、抗体は、本開示に記載される抗ＳＩＲＰＡ抗体の可変領域、及び第２の抗原に結合する抗体を含む二重特異性抗体である。一部の実施態様では、第２の抗原は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３からなる群から選択されるタンパク質である。一部の実施態様では、第２の抗原は、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）、ジフテリア毒素受容体、ＣＲＭ１９７、ラマ単一ドメイン抗体、ＴＭＥＭ３０（Ａ）、タンパク質導入ドメイン、ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ、ペネトラチン、ポリアルギニンペプチド、アンジオペップペプチド、及びＡＮＧ１００５からなる群から選択される血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；疾患原因となるペプチド若しくはタンパク質、又は疾患原因となる核酸からなる群から選択される疾患原因となる作用物質であって、疾患原因となる核酸が、アンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）反復伸長ＲＮＡであり、疾患原因となるタンパク質は、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、タウ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（第９染色体のオープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メジン、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピテリン、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）反復ペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）反復ペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）反復ペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）反復ペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）反復ペプチドからなる群から選択される、作用物質；又は免疫細胞上で発現されるリガンド及び／若しくはタンパク質であって、ＰＤ１／ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、ＣＤ７３、及びホスファチジルセリンからなる群から選択されるリガンド及び／若しくはタンパク質；並びに一又は複数の腫瘍細胞に発現されるタンパク質、脂質、多糖、又は糖脂質である。
【０１３４】
Ｆｃ領域
一部の実施態様では、本開示の抗体は、Ｆｃ領域を含む。例えば、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、又はＩｇＡクラスのものであり得る。一部の実施態様では、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプを有する。典型的には、Ｆｃ領域は天然のヒトＦｃ領域又はその変異体である。
【０１３５】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｆｃガンマ受容体に結合する能力を保持している。一部の実施態様では、このような抗体は、ＳＩＲＰＡのクラスター形成及び一過性刺激をもたらす特徴を有し得る。このような抗体は、その後、ＳＩＲＰＡ分解、ＳＩＲＰＡ脱感作、ＳＩＲＰＡ切断、ＳＩＲＰＡ内在化、ＳＩＲＰＡ脱落、ＳＩＲＰＡのリソソーム分解又はそうでなければＳＩＲＰＡの下方制御を誘導することによって、ＳＩＲＰＡ発現の長期阻害剤及び／又はＳＩＲＰＡの一若しくは複数の活性として作用し得る。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、細胞表面上のＦｃガンマ受容体のレベルを減少させる。
【０１３６】
一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、対立遺伝子変異体及びこれらの受容体の選択的スプライス形態を含む、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスなどの受容体に結合するＦｃ領域である。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）が含まれ、それらの細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する（例えば、M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照されたい）。ＦｃＲは、Ravetch及びKinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991); Capel等, Immunomethods 4:25-34 (1994); 並びにde Haas等, J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)に概説されている。ＦｃＲはまた、抗体の血清半減期を増加させることができる。
【０１３７】
Ｆｃ領域は、例えば、Ｆｃ受容体との結合において、Ｆｃ領域の活性に影響を及ぼす一又は複数の突然変異を含むことができる。
【０１３８】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施態様では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。一部の実施態様では、本開示の抗体は、細胞表面上の阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢの発現レベルを減少させる。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、一又は複数の修飾を含む。例えば、一部の実施態様では、Ｆｃ領域は（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）一又は複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換は、Ｖ２３４Ａ（Alegre等, (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xuら, (2000) Cell Immunol, 200:16-26）、Ｇ２３７Ａ（Cole等 (1999) Transplantation, 68:563-571）、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７号; Armour等 (1999) Eur J Immunol 29: 2613-2624; Armour等 (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27; Armour等 (2000) The Haematology Journal 1(Suppl.1):27）、Ｃ２３２Ｓ、及び／又はＣ２３３Ｓ（White等 (2015) Cancer Cell 27, 138-148）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Chu等, (2008) Mol Immunol, 45:3926-3933）、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／又はＴ２５６Ｅから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔ番号付け規則に従う。
【０１３９】
一部の実施態様では、本発明の抗体は、一部の実施態様ではＣ１２７Ｓ又はＣ２２１４Ｓのアミノ酸置換を含有する重鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有し、アミノ酸の位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔ番号付け規則に従う（White等, (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle等, (2010) PROTEIN SCIENCE 19:753-762; 及び国際公開第２００８／０７９２４６号）。
【０１４０】
特定の実施態様では、本開示の抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施態様では、Ｆｃガンマ受容体結合抗体は、阻害性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施態様では、阻害性Ｆｃ受容体は、阻害性Ｆｃ−ガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。一部の実施態様では、本開示の抗体は、細胞の表面に発現される阻害性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢのレベルを減少させる。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、一又は複数の修飾を含有する。例えば、一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）一又は複数のアミノ酸置換を含有する。一部の実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Bolt S等 (1993) Eur J Immunol 23:403-411）、Ｄ２６５Ａ（Shields等 (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-6604）、Ｄ２７０Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Hutchins等 (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre等, (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu等, (2000) Cell Immunol, 200:16-26）、Ｇ２３７Ａ（Alegre等 (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu等 (2000) Cell Immunol, 200:16-26）、Ｐ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（McEarchern等, (2007) Blood, 109:1185-1192）、Ｐ３３１Ｓ（Sazinsky等, (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ２３８Ｓ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、及び／又はＴ３９４Ｄから選択され、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔ番号付けの規則に従う。
【０１４１】
一部の実施態様では、本開示の抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有し、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（White等, (2015) Cancer Cell 27, 138-148）。特定の実施態様では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCP（配列番号３４）のアミノ酸配列を含有する。一部の実施態様では、抗体Ｆｃ領域は、Ｓ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換、若しくはその両方、及び／又はＮ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含有し、アミノ酸位置は、ＥＵ又はＫａｂａｔ番号付け規則に従う。
【０１４２】
一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２１４Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ２６８Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｌ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基の位置でＦｃ領域内の一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付け規則に従う。
【０１４３】
特定の実施態様では、本開示の抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施態様では、ヒトＩｇＧ４定常領域を含み、（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域に対して）一又は複数のアミノ酸置換を含有するＦｃ領域を含む。一部の実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換は、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Reddy等, (2000) J Immunol,164:1925-1933）、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｌ２３５Ｅ、及びそれらの任意の組合せから選択され、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【０１４４】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。特定の実施態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ２のアミノ酸１１８〜２６０、及びヒトＩｇＧ４のアミノ酸２６１〜４４７を含むアミノ酸配列を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【０１４５】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ヒト又はマウスのＩｇＧ１アイソタイプを有し、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２７０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｐ２３８Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｐ２３８Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、Ｔ３９４Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基の位置でＦｃ領域内の一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
【０１４６】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有し、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｅ、Ｖ３０９Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基の位置でＦｃ領域内の一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
【０１４７】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ／Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３６Ｅ、Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、Ｔ３９４Ｄ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される残基位置でＦｃ領域内に一又は複数のアミノ酸置換を含み、残基の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
【０１４８】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数のさらなるアミノ酸置換をさらに含むＦｃ領域を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【０１４９】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される位置で一又は複数の追加のアミノ酸置換をさらに含むＦｃ領域を含み、残基の番号付けはＥＵ番号付けに従う。
【０１５０】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＥＵ番号付けに従ってＳ２２８Ｐのアミノ酸置換をさらに含むＦｃ領域を含む。
【０１５１】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有し、残基２２８の位置にＳ２２８Ｐのアミノ酸置換、残基２３４の位置にＦ２３４Ａのアミノ酸置換、及び残基２３５の位置にＬ２３５Ａのアミノ酸置換を含み、残基の位置の番号付けは、ＥＵ番号付けに従う。
【０１５２】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、エフェクター機能を調節するために、及び／又は抗体の血清半減期を増加させるために修飾され得る。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位は、抗体依存性の細胞を媒介した細胞毒性を減少させるために、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体への結合親和性を除去又は低下させるように修飾又は突然変異され得る。一部の実施態様では、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン中）のＮ−グリコシル化を除去することによって阻害される。一部の実施態様では、エフェクター機能は、ＰＣＴ国際公開９９／５８５７２号及びArmour等, Molecular Immunology 40: 585-593 (2003); Reddy等, J. Immunology 164:1925-1933 (2000)に記載されるようにヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／又は３２７〜３３１などの領域を修飾することによって阻害される。他の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を修飾して、ＩＴＩＭ含有ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する結合選択性を増加させて、ＡＤＣＣなどのエフェクター機能を活性化することなく隣接細胞上のＳＩＲＰＡ抗体のクラスター形成を増加させるようにエフェクター機能を修飾することが望ましい場合もある。
【０１５３】
一部の実施態様では、抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体断片）に組み込むことができる。本明細書で使用するとき、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加に関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０１５４】
他のアミノ酸配列の修飾
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体、又はその抗体断片のアミノ酸配列修飾はまた企図される。例えば、抗体又は抗体断片の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。
【０１５５】
一部の実施態様では、追加のアミノ酸配列は、抗ＳＩＲＰＡ抗体のアミノ末端又はカルボキシ末端に融合させることができる。例としては、限定されないが、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、細胞傷害性ポリペプチドへの融合、又は抗体の血清半減期を増加させる酵素若しくはポリペプチドへの融合が挙げられる。
【０１５６】
一部の実施態様では、本発明の抗体は、例えば、特定の炭水化物部分によるグリコシル化を防ぐために一若しくは複数の突然変異部位を欠失させること、及び／又は一若しくは複数のグリコシル化部位を加えて、所望の炭水化物部分を導入することによって、抗体の元のグリコシル化パターンを変更させるために突然変異され得る。
【０１５７】
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型又はＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が生じる。Ｏ−結合型グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンもまた使用され得るが、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースのうちの１つの結合を指す。
【０１５８】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、都合よくは、上記のトリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位について）の一又は複数を含有するようにアミノ酸配列を変更することによって達成される。変更はまた、元の抗体の配列（Ｏ結合型グリコシル化部位について）の一若しくは複数のセリン又はスレオニン残基の付加、又はそれによる置換によっても行うことができる。
【０１５９】
他の抗体修飾
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体、又はその抗体断片は、さらなる部分、例えば、抗体の誘導体化のための部分、抗体にコンジュゲートされるべき薬物部分などを含むようにさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分の例は、水溶性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物である。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造において有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であり得、分枝状又は非分枝状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は様々であり得、１を超えるポリマーが結合している場合、それらは同じ又は異なる分子であってもよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、改良されるべき抗体の特定の性質又は機能、抗体誘導体が定義される条件下で治療に使用されるかどうかを含む考慮事項に基づいて決定することができる。このような技術及び他の適切な製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, Alfonso Gennaro編, Philadelphia College of Pharmacy and Science (2000)に開示されている。
【０１６０】
一部の実施態様では、細胞傷害剤又は薬物は、例えば、細胞表面にＳＩＲＰＡを発現する多発性骨髄腫又は他のがんなどのがんの治療のために、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体にコンジュゲートされ得る。抗体をコンジュゲートするための技術は開示されていおり、当該技術分野において公知である（Jane de Lartigue, OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-drug conjugates; 及びDucry等, (2010). Bioconjugate Chemistry 21 (1): 5-13を参照されたい）。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、リシン、リシンＡ鎖、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メイタンシノイド、タキソール、臭化エチジウム、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ジヒドロキシアントラシンジオン、アクチノマイシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素（ＰＥ）Ａ、ＰＥ４０、アブリン、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファサルシン、ゲロニン、ミトゲリン、レクストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、クリシン、クロチン、カリケアマイシン、サポンソウ（Saponaria officinali）阻害剤、グルココルチコイド、オーリスタチン、オーロマイシン、イットリウム、ビスマス、コンブレスタチン、デュオカルマイシン、ドラスタチン、ｃｃ１０６５、及びシスプラチンからなる群から選択される毒素にコンジュゲートされる。
【０１６１】
核酸、ベクター、宿主細胞
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、通常、組換え法を用いて生成される。したがって、一部の態様では、本発明は、本明細書に記載される抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかをコードする核酸配列ｅを含む単離された核酸；このような核酸を含むベクター、並びに抗体をコードする核酸を複製し及び／又は抗体を発現させるために使用される核酸が導入される宿主細胞を提供する。このような核酸は、抗ＳＩＲＰＡ抗体のＶＬを含有するアミノ酸配列及び／又はＶＨを含有するアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。一部の実施態様では、宿主細胞は、（１）ＶＬアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド及びＶＨアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含有するベクター、又は（２）ＶＬアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含有する第１のベクター、及びＶＨアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含有する第２のベクター、を含有する。一部の実施態様では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；又はヒト細胞である。一部の実施態様では、宿主細胞は、リンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞はまた、限定されないが、単離された細胞、インビトロ培養細胞、及びエクスビボ培養細胞を含む。
【０１６２】
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載される抗ＳＩＲＰＡ抗体を作製する方法を提供する。一部の実施態様では、本方法は、抗体の発現に適した条件下で前段落に記載される宿主細胞を培養することを含む。一部の実施態様では、抗体は、続いて宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収される。
【０１６３】
本開示の抗体をコードするポリヌクレオチド又はその断片を含有する適切なベクターは、クローニングベクター及び発現ベクターを含む。選択されるクローニングベクターは使用されることが意図される宿主細胞に従って変化し得るが、有用なクローニングベクターは、一般的に自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有し得、及び／又はベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を保持し得る。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、並びにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらの及び多数の他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市販業者から入手可能である。
【０１６４】
発現ベクターは、一般的に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして又は染色体ＤＮＡの不可欠な部分として宿主細胞中で複製可能であり得る。適切な発現ベクターには、限定されないが、プラスミド、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、及び他の任意のベクターが含まれる。
【０１６５】
本明細書に記載される抗ＳＩＲＰＡ抗体を発現させるのに適した宿主細胞には、原核細胞又は真核細胞の両方が含まれる。例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌中で産生され得る。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。あるいは、宿主細胞は、真核宿主細胞、例えば、グリコシル化経路が「ヒト化」されて、部分的又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌及び酵母菌などの糸状菌又は酵母菌などの真核微生物、脊椎動物、無脊椎動物、及び植物細胞であり得る。無脊椎動物細胞の例には、昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞とともに使用することができる多数のバキュロウイルス株が同定されている。植物細胞培養物はまた、宿主細胞として利用することができる。
【０１６６】
一部の実施態様では、脊椎動物宿主細胞は、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を産生するために使用される。例えば、哺乳動物細胞株、例えばＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児腎臓株（例えば、Graham等, J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載される２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）；例えば、Mather等, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞は、抗ＳＩＲＰＡ抗体を発現するために使用され得る。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、例えば、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；及び骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が含まれる。抗体産生に適切な特定の哺乳動物宿主細胞株の概要については、例えば、Yazaki及びWu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照されたい。
【０１６７】
抗ＳＩＲＰＡ抗体を用いた医薬組成物及び治療
医薬組成物
抗ＳＩＲＰＡ抗体は、抗体を適切な薬学的に許容される担体又は希釈剤と組み合わせることによって治療的投与のための様々な製剤に組み込むことができ、固体、半固体、液体又は気体形態の調製物に製剤化され得る。このような製剤の例としては、限定されないが、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、軟膏、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、ミクロスフェア、及びエアロゾル剤が挙げられる。医薬組成物は、所望の製剤に応じて、動物又はヒトに投与するための医薬組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、希釈剤の薬学的に許容される無毒な担体を含むことができる。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与えないように選択される。このような希釈剤の例としては、限定されないが、蒸留水、緩衝水、生理食塩水、ＰＢＳ、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液が挙げられる。本開示の医薬組成物又は製剤は、他の担体、アジュバント、又は無毒性の非治療的な非免疫原性安定剤、賦形剤などをさらに含むことができる。組成物はまた、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤、湿潤剤及び界面活性剤などの生理学的条件に近似させるためのさらなる物質を含むことができる。
【０１６８】
本開示の医薬組成物はまた、例えば、抗酸化剤などの任意の様々な安定化剤を含むことができる。医薬組成物がポリペプチドを含む場合、ポリペプチドは、そのポリペプチドのインビボ安定性を増強するか、又はそうでなければその薬理学的性質を増強する（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させ、その毒性を減少させ、及び溶解性又は摂取を増強する）様々な周知化合物と複合体を形成することができる。このような修飾剤又は複合化剤の例には、限定されないが、硫酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩及びリン酸塩が含まれる。組成物のポリペプチドはまた、それらのインビボ特性を増強する分子と複合体を形成することができる。このような分子には、限定されないが、炭水化物、ポリアミン、アミノ酸、他のペプチド、イオン（例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、マンガン）、及び脂質が含まれる。
【０１６９】
様々な種類の投与に適した製剤のさらなる例は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 第22版 (2012)に見出すことができる。
【０１７０】
経口投与について、活性成分は、カプセル剤、錠剤、及び粉末剤などの固体剤形で、又はエリキシル剤、シロップ剤、及び懸濁剤などの液体剤形で投与することができる。活性成分（単数又は複数）は、不活性成分及び粉末担体、例えば、グルコース、ラクトース、スクロース、マンニトール、デンプン、セルロース又はセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、サッカリンナトリウム、タルカム、炭酸マグネシウムとともにゼラチンカプセルに封入することができる。所望の色、味、安定性、緩衝能、分散又は他の公知の所望の特徴を提供するために加えることができる追加の不活性成分の例は、赤色酸化鉄、シリカゲル、ラウリル硫酸ナトリウム、二酸化チタン、及び食用白色インクである。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を製造することができる。錠剤とカプセル剤はともに、数時間にわたって医薬の連続的な放出を提供するための持続放出製造物として製造することができる。圧縮錠剤は、いずれもの不快な味をマスクし、錠剤を大気から保護するために糖衣又はフィルムコートすることができ、あるいは胃腸管内で選択的に崩壊させるために腸溶コーティングすることができる。経口投与用の液体剤形は、患者の受け入れを増加させるために着色料及び香味料を含有することができる。
【０１７１】
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張滅菌注射溶液、並びに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び保存剤を含むことができる水性及び非水性の滅菌懸濁液が含まれる。
【０１７２】
医薬組成物を製剤化するために使用される成分は、好ましくは高純度であり、潜在的に有害な汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくとも国民食品（ＮＦ）等級、一般的には少なくとも分析用等級、より典型的には少なくとも医薬等級）。さらに、インビボでの使用が意図される組成物は、通常、無菌である。所与の化合物が使用前に合成されなければならない限りにおいて、得られる製造物は、典型的には、合成又は精製プロセスの間に存在し得るいずれもの潜在的に毒性な薬剤、特に任意のエンドトキシンを実質的に含まない。非経口投与用の組成物はまた無菌であり、実質的に等張性であり、ＧＭＰ条件下で作製される。
【０１７３】
製剤は、脳又は中枢神経系における保持及び安定化のために最適化され得る。薬剤が頭蓋コンパートメントに投与される場合、薬剤は、コンパートメント内に保持され、拡散せず、又はそうでなければ血液脳関門を横断しないことが望ましい。安定化技術は、分子量の増加を達成するために、架橋、多量体化、又はポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性タンパク質担体などの基への連結を含む。
【０１７４】
保持を増大させるための他の戦略は、生分解性又は生侵食性インプラントにおける本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体などの抗体の捕捉を含む。治療活性剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを通る輸送速度、及びインプラントの生分解性によって調節される。ポリマーバリアを通る薬物の輸送はまた、化合物の溶解度、ポリマー親水性、ポリマー架橋の程度、ポリマーバリアを薬物に対してより透過性にするように吸水時のポリマーの膨張、インプラントの幾何学的形状などによって影響される。インプラントは、インプラント部位として選択された領域のサイズ及び形状に見合った寸法のものである。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセルなどであり得、選択された挿入部位に適合する任意のサイズ又は形状であり得る。
【０１７５】
インプラントは、活性剤をポリマーマトリックスを通じて分布させるか、又は封入し得、活性剤の貯蔵部はポリマーマトリックスによって封入される。使用されるポリマー組成物の選択は、投与部位、所望の治療期間、患者の寛容性、治療される疾患の性質などによって変わる。ポリマーの特徴は、移植部位での生分解性、目的の薬剤との適合性、カプセル化の容易性、生理学的環境における半減期を含む。
【０１７６】
使用され得る生分解性ポリマー組成物は、分解された場合に、モノマーを含む生理学的に許容される分解製造物を生じる有機エステル又はエーテルであり得る。無水物、アミド、オルトエステルなどが、それ自体で又は他のモノマーと組み合わせて使用され得る。ポリマーは、縮合ポリマーである。ポリマーは、架橋されてもよく、又は非架橋でもよい。特に興味深いのは、ホモポリマー又はコポリマーのいずれかのヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、及び多糖類である。目的のポリエステルに含まれるものは、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及びそれらの組合せのポリマーである。Ｌ−乳酸塩又はＤ−乳酸塩を使用することによって、ゆっくりと生分解するポリマーが達成され、一方、ラセミ化合物により分解が実質的に増強される。グリコール酸と乳酸のコポリマーは特に関心があり、生分解速度は、乳酸に対するグリコール酸の比率によって調節される。最も急速に分解するコポリマーは、ほぼ同量のグリコール酸及び乳酸を有し、いずれかのホモポリマーは、分解に対してより耐性がある。乳酸に対するグリコール酸の比率はまた、インプラント内の脆さに影響を及ぼし、より大きな形状にはより柔軟なインプラントが望まれる。目的の多糖類には、アルギン酸カルシウム、及び官能化セルロース、特に水不溶性である、約５ｋＤ〜５００ｋＤの分子量などによって特徴付けられるカルボキシメチルセルロースエステルがある。生分解性ヒドロゲルはまた本発明のインプラントに使用することができる。ヒドロゲルは、典型的には、液体を吸収する能力によって特徴付けられるコポリマー材料である。使用され得る例示的な生分解性ヒドロゲルは、Heller in: Hydrogels in Medicine and Pharmacy, N. A. Peppes編, Vol. III, CRC Press, Boca Raton, Fla., 1987, pp 137-149に記載されている。
【０１７７】
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体を含有する本開示の医薬組成物は、抗ＳＩＲＰＡ抗体による治療を必要とする個体、好ましくはヒトに、ボーラスとしての静脈内投与などの公知の方法に従って、又はある期間にわたる連続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、頭蓋内、脊髄内、皮下、関節内、滑液内、髄腔内、経口、局所又は吸入経路によって投与され得る。
【０１７８】
本開示の医薬組成物の投薬量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて変化し得る。適切な投薬量又は投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。動物実験は、ヒト治療のための有効量を決定するための信頼できるガイダンスを提供する。有効量の種間スケーリングは、Mordenti, J.及びChappell, W. “The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics,” In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi等編, Pergamon Press, New York 1989, pp.42-46に記載されている原理に従って行うことができる。
【０１７９】
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかのインビボ投与について、通常の投薬量は、投与経路に依存して、１日あたり、個体体重１ｋｇあたり約１０ｎｇ〜最大約１００ｍｇ又はそれを超え、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で変動し得る。治療する疾患、障害、又は状態の重症度に応じて、数日以上にわたる反復投与について、症状の所望の抑制が達成されるまで治療が続けられる。
【０１８０】
例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰＡ抗体の初期用量を投与し、続いて隔週で約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を投与することを含み得る。医師が達成を望む薬物動態学的な崩壊のパターンに応じて、他の投薬レジメンが有用であり得る。例えば、週に１回から２１回の個体への投薬が本明細書において企図される。特定の実施態様では、約３μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、約３μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約２ｍｇ／ｋｇ）の投薬量を使用することができる。特定の実施態様では、投薬頻度は、１日３回、１日２回、１日１回、２日１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、又は１カ月に１回、２カ月に１回、３カ月に１回であり、又はそれより長い。治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。投与される抗ＳＩＲＰＡ抗体を含む投薬レジメンは、使用される用量とは無関係に経時的に変化し得る。
【０１８１】
特定の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投薬量は、抗ＳＩＲＰＡ抗体の一又は複数の投与を受けた個体において経験的に決定され得る。個体には、漸増用量の抗ＳＩＲＰＡ抗体が与えられる。抗ＳＩＲＰＡ抗体の有効性を評価するために、本開示の疾患、障害、又は状態（例えば、がん）の臨床症状をモニターすることができる。
【０１８２】
本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、及び当業者に公知である他の因子に応じて、連続的又は断続的であり得る。抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であり得るか、又は一連の間隔を空けた投薬であり得る。
【０１８３】
異なる製剤が異なる治療及び異なる障害に効果的であり、特定の臓器又は組織を治療することを意図した投与が他の臓器又は組織へのそれとは異なる様式での送達を必要とし得ることは、本開示の範囲内である。さらに、投薬量は、一若しくは複数の別々の投与によって、又は連続注入によって投与され得る。状態に応じて数日以上にわたる反復投与について、治療は、疾患症状の所望の抑制が起こるまで持続される。しかしながら、他の投薬レジメンは有用であり得る。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０１８４】
本発明の一態様では、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体が治療薬として使用される。このような薬剤は、対象におけるＳＩＲＰＡの発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は病理学を治療、軽減及び／又は予防するために投与される。治療レジメンは、標準的な方法を用いて、ＳＩＲＰＡの発現、活性及び／又はシグナル伝達に関連する疾患又は障害、例えば、がん又は他の腫瘍性障害に罹患している（又は発症する危険性がある）対象、例えば、ヒト患者を同定することによって行われる。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの発現、活性、及び／又はシグナル伝達に関連する病理学を有する細胞は、ＳＩＲＰＡリガンド、例えば、ＣＤ４７を発現する。一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡの発現、活性、及び／又はシグナル伝達に関連する病理学を有する細胞は、ＳＩＲＰＡを発現する。
【０１８５】
以下にさらに詳述するように、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡの発現、活性、又はシグナル伝達に関連する疾患又は病理学を治療するために使用される追加の治療薬と組み合わせて使用することができる。「組み合わせて」及び「一緒に」という用語は、本開示において互換的に使用される。追加の治療薬は、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体の投与前、投与後、又はそれと同時に投与することができる。
【０１８６】
本開示の一態様では、例えば、細胞表面上のＳＩＲＰＡの発現を減少させるが、リガンド、例えば、ＣＤ４７のＳＩＲＰＡへの結合を実質的に遮断しない抗ＳＩＲＰＡ抗体を含む、抗ＳＩＲＰＡ抗体調製物は、ヒト対象に投与される。抗体の投与は、リガンド結合、例えば、ＣＤ４７結合によって媒介されるＳＩＲＰＡの発現、活性及び／又はシグナル伝達機能を無効にするか又は阻害するか又は妨害し得る。一実施態様では、ＳＩＲＰＡ発現に関連する疾患又は障害はがんである。一部の実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰＡを発現する骨髄性細胞の血液増殖性障害などのがんを有する患者に投与される。典型的な実施態様では、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＣＤ４７を発現するがんを有する患者に投与される。
【０１８７】
特定の実施態様では、がんは、扁平上皮癌、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸がん、腎がん（例えば、明細胞癌）、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例えば、ホルモン難治性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、神経膠芽腫（神経膠芽腫多形）、子宮頸がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸癌腫、及び頭頸部がん（又は癌腫）、胃がん（gastric cancer）、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、皮膚又は眼球内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域のがん、精巣がん、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、上皮小体腺のがん、副腎のがん、軟組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄の軸の腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘導されるものを含めた環境誘導性がん、ウイルス関連がん（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連腫瘍）、及び２種の主要な血液細胞系統のいずれか、すなわち、骨髄系細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ及び肥満細胞を産生する）又はリンパ球系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫ及び形質細胞を産生する）に由来する血液悪性腫瘍、例えば、全ての種類の白血病、リンパ腫、及び骨髄腫、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３又はＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４又は好酸球増加症を伴うＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫及び緑色腫などの急性、慢性、リンパ性及び／又は骨髄性白血病；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ  １＋）大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；及びリンパ腫／白血病（Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系統の造血器腫瘍、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大��胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症又はセザリー症候群とも呼ばれる）、及びワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性度骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、及び多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞リンパ腫；骨髄系統の造血器腫瘍、線維肉腫及び横紋筋肉腫（rhabdomyoscarcoma）を含めた間葉系起源の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星状細胞腫、シュワン腫を含む中枢及び末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫（rhabdomyoscarcoma）、及び骨肉腫を含む間葉系起源の腫瘍；並びに黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性がん及び奇形癌腫を含む他の腫瘍、リンパ球系統の造血器腫瘍、例えば、限定されないが、小細胞及び大脳様細胞型を含めたＴ前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含むＴ細胞及びＢ細胞腫瘍；好ましくは、Ｔ細胞型の大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ  Ｔ−ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／胸腺後Ｔ細胞リンパ腫（多形性及び免疫芽球性亜種）；血管中心性（鼻腔の）Ｔ細胞リンパ腫；頭頸部のがん、腎がん、直腸がん、甲状腺のがん；急性骨髄系リンパ腫、並びに前記のがんの任意の組合せである。本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体はまた、転移性がんを治療するために使用され得る。
【０１８８】
一部の実施態様では、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、及び線維肉腫からなる群から選択される。
【０１８９】
一部の実施態様では、がんは、多形性神経膠芽腫、腎明細胞癌、副腎皮質癌、膀胱尿路上皮癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、肺腺癌、膵臓腺癌、腎細胞がん、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、乳房浸潤癌、頸部扁平上皮細胞癌、子宮頸部腺癌、胆管癌、結腸腺癌、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、嫌色素性腎細胞癌、腎乳頭細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、卵巣癌漿液性嚢胞腺癌、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体癌、子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫からなる群から選択される。
【０１９０】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、チェックポイント阻害剤として作用する治療薬と組み合わせて投与され得る。一部の実施態様では、チェックポイント阻害剤はＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、及びＣＤ７３を標的とする。典型的な実施態様では、治療薬は、Ｄ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、又はＣＤ７３から選択されるチェックポイント阻害剤に対する抗体である。一部の実施態様では、チェックポイント阻害剤に対する抗体の組合せは、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体とともに投与される。
【０１９１】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１つのアゴニスト抗体、例えば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びそれらの任意の組合せと組み合わせて投与され得る。
【０１９２】
一部の実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、放射線療法及び／又は化学療法剤と組み合わせて投与される。化学療法剤には、限定されないが、例えば、以下の群を含む：代謝拮抗剤／抗がん剤、例えば、ピリミジン類似体（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリン類似体、葉酸アンタゴニスト及び関連する阻害剤（メトトレキセート、ペメトレキセド、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；
抗増殖剤／抗有糸分裂剤、例えば、天然物質、例えばビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビン）、微小管かく乱物質、例えばタキサン（パクリタキセル、ドタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、エリブリン及びナベルビン；エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）；ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン（merchlorehtamine）、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾラミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホラミド及びエトポシド（ＶＰ１６））；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（アザシチジン）；抗生物質、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミスラマイシン）及びマイトマイシン；酵素（Ｌ−アスパラギンを全身的に代謝し、それら自身がアスパラギンを合成する能力を持たない細胞を欠乏させるＬ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルホネート（ブスルファン）、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン）、トリアゼン（ダカルバジン（ＤＴＩＣ））；葉酸類似体（メトトレキセート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；血栓溶解剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレベルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン、ポマリドミド）及びｚｉｖ−アフリベルセプトなどの増殖因子阻害剤（血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アポトーシスタンパク質（ＩＡＰ）アンタゴニストの阻害剤（ビリナパント）；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（ボリノスタット、ロミデプシン、チダミド、パノビノスタット、モ��チノスタット、アベキシノスタット、ベリノスタット、エンチノスタット、レスミノスタット、ギビノスタット、キシノスタット、ＳＢ９３９）；プロテアソーム阻害剤（イキサゾミブ）；アンジオテンシン受容体遮断剤；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、アレムツズマブ、アブシキシマブ、アトリズマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、エロツズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン（brentuximb vedotin））；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤（フラボピリドール、ロスコビチン、ブリオスタチン−１）及び分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤；トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン（methylpednisolone）、プレドニゾン、及びプレニゾロン）；ＰＡＲＰ阻害剤（ニラパリブ、オラパリブ）；接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤（デファクチニブ（ＶＳ−６０６３）、ＶＳ−４７１８、ＶＳ−６０６２、ＧＳＫ２２５６０９８）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤（セジラニブ、ガルニセルチブ、ロシレチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ＥＧＦ８１６、ＡＺＤ４５４７）；ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（カプマチニブ、ＩＮＣ２８０）；ＡＬＫ阻害剤（セリチニブ、クリゾチニブ）；ミトコンドリア機能障害誘導剤；毒素、例えば、コレラ毒素、リシン、シュードモナス外毒素、百日咳菌アデニレートシクラーゼ毒素、又はジフテリア毒素及びカスパーゼ活性剤；並びにクロマチンかく乱物質。一部の実施態様では、化学療法剤は、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗有糸分裂剤、又はそれらの任意の組合せである。
【０１９３】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、養子細胞移入（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移入（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及び／又はサイトカイン療法と組み合わせて投与される。
【０１９４】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体、例えば、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、又は抗ＩＬ−２抗体と組み合わせて投与される。
【０１９５】
一部の実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰＡ抗体は、少なくとも１つの刺激性サイトカインと組み合わせて投与される。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができる一部の実施態様では、少なくとも１つの刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１−ベータ、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１９６】
一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、神経学的障害を有する患者に投与されるか、又は神経学的障害の危険性を軽減し、その発症を遅らせ、又はそれを予防するために投与される。一部の実施態様では、神経学的障害は、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、又は血管性認知症を含む認知症である。一部の実施態様では、患者は、軽度の認識機能障害を有する。
【０１９７】
一部の実施態様では、ＳＩＲＰＡを下方制御する薬剤、例えば、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパチー（Taupathy）病、又は多発性硬化症を有する患者に投与される。一部の実施態様では、薬剤は、クロイツフェルト−ヤコブ病、正常圧水頭症、那須−ハコラ病、脳卒中、感染症、外傷性脳損傷、進行性核上性麻痺、拳闘家認知症（慢性外傷性脳症）、１７番染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ−ボディグ（Lytico-Bodig）病（グアムのパーキンソン−認知症合併症複）、もつれ優勢型認知症、神経膠腫及び神経膠細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛性脳症、結節性硬化症、ハラーフォルデン−シュパッツ病、リポフスチン症、ピック病、皮質側頭変性、嗜銀顆粒性疾患（ＡＧＤ）、前頭側頭葉変性症、レビー小体を伴う認知症、多系統萎縮症、シャイドラガー症候群、進行性核上性麻痺、又は皮質基底核神経変性を有する患者に投与される。
【実施例】
【０１９８】
以下の実施例は例示のためにのみ提供され、限定のために提供されない。当業者は、本質的に同様の結果を得るために変更又は修飾することができる様々な重要ではないパラメーターを容易に認識する。
【０１９９】
実施例１：  抗ＳＩＲＰＡ抗体の生成
ヒトＳＩＲＰＡプレタンパク質のアミノ酸配列は、以下の配列番号１に記載される。ヒトＳＩＲＰＡは、配列番号１のアミノ酸残基１〜３０に位置するシグナルペプチドを含有する。ヒトＳＩＲＰＡは、配列番号１のアミノ酸残基３２〜１３７に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン；配列番号１のアミノ酸残基１４８〜２４７及び２５４〜３４８に位置するさらなる細胞外免疫グロブリン様定常型（ＩｇＣ）ドメイン配列；配列番号１のアミノ酸残基３７４〜３９４に位置する膜貫通ドメイン；配列番号１のアミノ酸残基３９５〜５０４に位置する細胞内ドメインを含有する。
ＳＩＲＰＡｖ１アミノ酸配列（配列番号１）：
10         20         30         40         50
MEPAGPAPGR LGPLLCLLLA ASCAWSGVAG EEELQVIQPD KSVLVAAGET
60         70         80         90        100
ATLRCTATSL IPVGPIQWFR GAGPGRELIY NQKEGHFPRV TTVSDLTKRN
110        120        130        140        150
NMDFSIRIGN ITPADAGTYY CVKFRKGSPD DVEFKSGAGT ELSVRAKPSA
160        170        180        190        200
PVVSGPAARA TPQHTVSFTC ESHGFSPRDI TLKWFKNGNE LSDFQTNVDP
210        220        230        240        250
VGESVSYSIH STAKVVLTRE DVHSQVICEV AHVTLQGDPL RGTANLSETI
260        270        280        290        300
RVPPTLEVTQ QPVRAENQVN VTCQVRKFYP QRLQLTWLEN GNVSRTETAS
310        320        330        340        350
TVTENKDGTY NWMSWLLVNV SAHRDDVKLT CQVEHDGQPA VSKSHDLKVS
360        370        380        390        400
AHPKEQGSNT AAENTGSNER NIYIVVGVVC TLLVALLMAA LYLVRIRQKK
410        420        430        440        450
AQGSTSSTRL HEPEKNAREI TQDTNDITYA DLNLPKGKKP APQAAEPNNH
460        470        480        490        500
TEYASIQTSP QPASEDTLTY ADLDMVHLNR TPKQPAPKPE PSFSEYASVQ
VPRK
【０２００】
ＳＩＲＰＡ−ＣＤ４７複合体の結晶構造分析は、リガンド結合部位をＳＩＲＰＡのＩｇＶドメイン中のβ−シート鎖を連結する可変ループに分解する。ＣＤ４７結合界面は、アミノ酸残基Ｓ５９〜Ｐ６５、Ｌ９６〜Ｆ１０４、及びＫ１２３〜Ｄ１３０からなる。
【０２０１】
ＳＩＲＰＡの複数の多型は、ヒトにおいて同定されている。ＳＩＲＰＡ  ｖ１及びｖ  ２と呼ばれる２つの最も共通した変異体のアミノ酸配列のアラインメントは、２−ｗａｙ  ｂｌａｓｔによって生じさせた（図１Ａ）。配列におけるほとんどの変異はリガンド結合部位の向こう側に存在するため、両方のＳＩＲＰＡ変異体は、類似の親和性でＣＤ４７に結合することが報告されている。あるいは、ＳＩＲＰファミリーの別のメンバーであるＳＩＲＰＢ１は、ＳＩＲＰＡと高い配列相同性を共有するが、ＣＤ４７には結合しない。ＳＩＲＰＡｖ１及びＳＩＲＰＢ１のアミノ酸配列のアラインメントは、２−ｗａｙ  ｂｌａｓｔによって生じさせたものであり（図１Ｂ）、両方のタンパク質の細胞外ドメイン（リーダー配列を除く）は約９０％の同一性を共有することを示す。しかしながら、単一のＡ５７Ｍ置換は、ＳＩＲＰＢ１がＣＤ４７に結合するのを妨げるためにＳ５９−Ｐ６５リガンド−結合界面を再配列するのに十分である。さらに、ＣＤ４７結合は、ＮＯＤマウスによってのみ発現されるマウスＳＩＲＰＡの単一の対立遺伝子変異体を認識するヒトＣＤ４７と非常に種特異的である。ヒトＳＩＲＰＡｖ１及びＣ５７ＢＬ６  ＳＩＲＰＡのアミノ酸配列のアラインメントは、２−ｗａｙ  ｂｌａｓｔによって生じさせたものであり（図２）、両方のタンパク質の細胞外ドメイン（リーダー配列を除く）は約６０％の同一性を共有することを示す。
【０２０２】
抗ＳＩＲＰＡ抗体生成
免疫化手順
ラピッドプライム法：４匹の５０日齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを以下の手順を用いて免疫した。ヒトＳＩＲＰＡ抗原を含むがアジュバントを含まない一連の皮下水性注射剤を１９日間にわたって与えた。マウスは、Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓからの換気型ラックシステムに収容された。４匹のマウス全てを１９日目に安楽死させ、リンパ球をハイブリドーマ細胞系生成のために採取した。
【０２０３】
標準方法：以下の手順を用いて、５０日齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃ又はＮＺＢ／Ｗマウス４匹を免疫した。マウスは、Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓからの換気型ラックシステムに収容された。マウス１匹あたり２５μｇのタンパク質抗原（マウス１匹あたり総容量１２５μＬ）のＣｐＧ−ＯＤＮアジュバントと混合したヒトＳＩＲＰＡ抗原をマウスに３週間ごとに腹腔内注射した。試験出血は、２回目の追加免疫の７日後に伏在静脈穿刺によって行われた。試験採血（免疫血清）を間接ＥＬＩＳＡアッセイにより試験して、融合に最もよく反応する２匹のマウスを決定した。マウスは、融合前の力価を評価するために、追加免疫の７日後に、３回目及び４回目の追加免疫及び別の試験出血を必要とする場合がある。抗体力価が十分に高い場合、最も反応の良い２匹のマウスに外側尾静脈を介して最後の静脈内追加免疫を与える。ＩＶ追加免疫の４日後、マウスを融合のために安楽死させた。脾臓を採取し、脾臓から単離されたリンパ球を、ハイブリドーマを生成するための融合過程で使用した。
【０２０４】
ハイブリドーマの開発
リンパ球を単離し、標準的なＲｏｓｈｅプロトコルに従って、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ  １５００）の存在下でマウスＳＰ２／０ミエローマ細胞と融合させた。融合細胞を一段階クローニング法（ＨＡＴ選択）を用いて培養した。この方法では、ハイブリドーマの選択及びクローニングを１つのステップに組み合わせるために、半固体のメチルセルロースベースのＨＡＴ選択培地を使用する。単一の細胞由来ハイブリドーマは、半固体培地上で増殖してモノクローナルコロニーを形成する。融合事象の１０日後、９４８個の得られたハイブリドーマクローンを９６ウェル組織培養プレートに移し、対数増殖が中期増殖に達するまで（５日間）ＨＴ含有培地中で増殖させた。
【０２０５】
ハイブリドーマスクリーニング
９４８個のハイブリドーマからの組織培養上清は、抗原をスクリーニングするための間接ＥＬＩＳＡ（一次スクリーニング）によって試験され、ヤギ抗ＩｇＧ／ＩｇＭ（Ｈ＆Ｌ）−ＨＲＰ二次を用いてＩｇＧとＩｇＭ抗体の両方についてプローブし、ＴＭＢ基質で発色させた。このアッセイにおいて＞０．２ＯＤのクローンを次の試験ラウンドに用いた。陽性培養物を、分泌を確認するための抗原のスクリーニング及び非特異的又は「粘着性」ｍＡｂを排除し、偽陽性を除外するために無関係の抗原（Ｈｕｍａｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）について再試験された。目的とする全てのクローンは、それらがＩｇＧ又はＩｇＭアイソタイプであるかどうかを決定するために抗体捕捉ＥＬＩＳＡによってアイソタイプ決定された。
【０２０６】
ハイブリドーマ細胞培養
目的とするハイブリドーマ細胞株は、９６ウェルプレートに移した後の３２日間、２４ウェル培養プレート中で培養が維持された。これは安定期間と呼ばれ、クローンが安定して分泌している状態であるかどうかを試験する。この安定期間の間、一時的な凍結細胞株のバックアップは、−８０℃の保存のために目的とする全てのクローンで行われる（生存可能な６カ月）。ハイブリドーマは、この期間中に分泌及び特異性について定期的に試験された。
【０２０７】
サブクローニング
単クローン性を確実にするために、トップハイブリドーマ細胞系（クローン）をサブクローニングした。サブクローニングは、シングルステップクローニングシステムを用いて親クローンを再びプレーティングすることによって実施された。２４〜９０個のサブクローンを９６ウェル培養プレートに移した。サブクローンを間接ＥＬＩＳＡ及び抗体捕捉ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。各親についてのトップサブクローンを培養における拡大のために採取した。５０％未満のクローンであるいずれの親クローンも第２ラウンドのサブクローニングを実施した。
【０２０８】
次に、抗体をＳＩＲＰＡ結合についてスクリーニングした。ヒトＳＩＲＰＡへの結合について陽性である抗体を、リガンド結合を遮断する能力、及び複数の細胞型におけるリガンド誘導ＳＩＲＰＡ活性を阻害する能力について試験した。各抗体のアイソタイプ及びビンカテゴリーを表１に列挙する。表１において、「ＮＤ」はビンカテゴリーが決定されていない抗体を指す。
2020500540.tif 000004
【０２０９】
抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、生成された抗体の軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を表２−５に記載する。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を表２に記載する。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列を表３に記載する。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表４に記載する。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を表５に示す。
３Ｆ９：重鎖可変ドメイン配列
EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQT PEKRLEWVATISDYGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNAKYTLYLQMSSLRSEDTAL
YYCARPPYDDYYGGFAYWGQGTLVTVSA（配列番号２）
３Ｆ９：軽鎖可変ドメイン配列
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSSSGYSYMHWY QQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQH
NRELPCTFGGGTKLEIK （配列番号３）
９Ｃ２：重鎖可変ドメイン配列
EFQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYSLTGYNMNWVKQS
RGKSLEWIGNINPHYGSSTYNQNFKDKATLTVDKSSSAAYMQFNSLTSEDSAVY
YCAREGYDGVFDYWGQGTTLTVSS （配列番号４）
９Ｃ２：軽鎖可変ドメイン配列
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQQKPG
SSPKPWIYVTSNLASGVPTRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNP
RTFGGGTKLEIK （配列番号５）
８Ａ９：重鎖可変ドメイン配列
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWMHWVKQR
PGQGLEWIGVIDPSDSYTNYNQKFKGKATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVY
YCTRSGYGKYDFDYWGQGTTLTVSS（配列番号３５）
８Ａ９：軽鎖可変ドメイン配列
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASQSVSTSSYSYMHWY
QQKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQH
NWEIPWTFGGGTKLEIK（配列番号３６）
８Ｆ４：重鎖可変ドメイン配列
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASDYTFTDYSMHWVKQA
PGKDLKWMGWINTETGEPTYADDFKGRFAFSLEASASTAYLQINNLKNEDTATY
FCARHGYPHYYFDYWGQGTTLTVSS（配列番号３７）
８Ｆ４：軽鎖可変ドメイン配列
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNVPTAVAWYQQKP
GQSPKALIYLASNRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSEDLADYFCLQHWNY
PRTFGGGTKLEIK（配列番号３８）
１Ｅ２：重鎖可変ドメイン配列
EVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFSFSSYAMSWVRQT
PAKRLEWVATISGSGGYTYYPDSMKGRFTISRDNAKDILYLQMSSLRSEDTAMY
YCARDPRYTTLYAMDYWGQGTSVTVSS（配列番号３９）
１Ｅ２：軽鎖可変ドメイン配列
NIMMTQSPSFLAVSAGEKVTMSCKSSQSIFSGSNQKNYLA
WYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYC
HQHLSSCTFGGGTKLEIK（配列番号４０）
７Ｈ９：重鎖可変ドメイン配列
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGFSISRGYDWHWIRH
FPGNILEWMGYITYSGISNYNPSLKSRISITHDTSKNHFFLRLNSVTAEDTATY
YCARGGGAWFTYWGQGTLVTVSA（配列番号４１）
７Ｈ９：軽鎖可変ドメイン配列
DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDSLHWYHQKS
HESPRLLIKYASQSISGIPSRFSAGGSGSDFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSL
PWTFGGGTKLEIK（配列番号４２）
４Ｄ８：重鎖可変ドメイン配列
EVKLEESGGGLVKPGGSMKLSCAASGFTFSDAWMDWVRQS
PEKGLEWVAEIRGKTTNYATYYAESVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNSFSTEDTG
IYYCTRRNWGFAYWGQGTLVTVSA（配列番号４３）
４Ｄ８：軽鎖可変ドメイン配列
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQTIGTSIHWYQQRT
NGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQTNSW
PLTFGAGTKLELK（配列番号４４）
2020500540.tif 000005
2020500540.tif 000006
2020500540.tif 000007
2020500540.tif 000008
【０２１０】
実施例２：  抗ＳＩＲＰＡ抗体の特徴付け
ＳＩＲＰＡ抗体の最初の特徴付けは、以降ではＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡと呼ばれるげっ歯類チャイニーズハムスター卵巣細胞株上に異所的に発現するヒト受容体に結合するそれらの能力をスクリーニングし、続いて初代ヒトマクロファージ上でスクリーニングすることを伴った。細胞を採取し、９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルで播種し、洗浄し、Ｆｃブロッキング試薬及び１．０μｇ／ｍｌの示されたモノクローナル抗体を含有する１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中でインキュベートした。次に、細胞を２回洗浄し、氷上で３０分間、１：２００に希釈したＡＰＣコンジュゲートした二次抗体を含有するＦＡＣＳ緩衝液中でインキュベートした。細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏで獲得した。データ分析及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値又は陽性細胞％の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて実施された。
【０２１１】
いくつかの抗体、例えば３Ｆ９及び９Ｃ２は、ＦＡＣＳ分析によって検出された陽性ＳＩＲＰＡ抗体染色によって示されるようにＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡへの結合を示した（黒い白抜きのヒストグラム）（図３Ａ）。陰性アイソタイプコントロール（示さず）は細胞に結合しなかった。同様に、３Ｆ９及び９Ｃ２は、マウスＳＩＲＰＡ（ＣＨＯ−ｍＳＩＲＰＡ）を高度に過剰発現しているＣＨＯ細胞に結合しなかった（図３Ａ、陰影ヒストグラム）。これは、ヒト抗原に対する抗体の特異性を確認した。重要なことに、３Ｆ９及び９Ｃ２はまた、インビボでの有効性についての主要な標的細胞集団である初代ヒトマクロファージに結合した（図３Ｂ）。ＳＩＲＰＡ抗体が結合する細胞株についてのＭＦＩ値を図３Ａにグラフ化し、表６に列挙し、典型的には、バックグラウンドレベルの１００倍を超えるＭＦＩ値を示す。
2020500540.tif 000009
【０２１２】
３Ｆ９及び９Ｃ２についての抗原親和性測定値は、標準的な表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を用いて獲得された（図３Ｃ）。結合試験はＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ）を用いて実施された。抗マウスＩｇＧ捕捉抗体を標準的なＮＨＳ／ＥＤＣ活性化を用いてＣＭ５センサーチップにアミンカップリングさせた。ＳＩＲＰＡ抗体を１×ＨＢＳ−ＥＰ＋泳動緩衝液で５０ｎＭに希釈し、センサーチップ表面に捕捉した。センサーグラムトレースを記録するために、組換え可溶性ヒトＳＩＲＰＡ抗原の連続希釈物を捕捉ＳＩＲＰＡ抗体上に注入した。緩衝液注入と同様に、参照セルからＲＵ値を差し引くことによってデータを処理した。結合曲線を１：１相互作用モデルに全体的に適合させて、表７に列挙した速度定数を得た。３Ｆ９及び９Ｃ２は、それぞれ１．０×１０−８及び８．０×１０−８ＭのＫＤでヒト単量体ＳＩＲＰＡ抗原に結合した。
2020500540.tif 000010
【０２１３】
細胞表面抗原に対する３Ｆ９及び９Ｃ２の見かけの親和性を確かめるために、細胞ベースの親和性測定もまた行った。モノクローナル抗体の連続希釈物を１０５個のＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞に添加し、４℃で結合平衡を達成させた蛍光標識した二次抗体の添加及び短時間の洗浄工程の後、滴定された抗体濃度の関数としてのＭＦＩ値をＦＡＣＳ分析により記録した（図３Ｄ）。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いた非線形回帰分析を用いて曲線をあてはめた。３Ｆ９及び９Ｃ２を用いた細胞ベースの滴定実験により、それぞれ２．６ｎＭ及び１．６ｎＭのＥＣ５０値が得られた。
【０２１４】
実施例３：  ＣＤ４７遮断及び非遮断ＳＩＲＰＡ抗体の同定
食作用性細胞エフェクター機能の抑制におけるＳＩＲＰＡ−ＣＤ４７経路の役割を考慮すると、これまでに記載された全ての拮抗療法は、受容体−リガンド相互作用を遮断するための競合的阻害に依存している。同様に、本出願におけるＳＩＲＰＡ抗体は、ＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡへのＣＤ４７の結合を遮断するそれらの能力についてスクリーニングされた。細胞を回収し、９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルで播種し、洗浄し、１．０μｇ／ｍｌの示されたモノクローナル抗体又はアイソタイプコントロールを含有する１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中でインキュベートした。次に、細胞を洗浄し、２５０ｎＭのＨｉｓタグ化された可溶性ヒトＣＤ４７を含有するＦＡＣＳ緩衝液中で氷上で３０分間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、表面結合したＣＤ４７を検出するためにＰＥコンジュゲートした抗Ｈｉｓタグモノクローナル抗体で染色した。ＭＦＩ値又は％陽性細胞のデータ分析及び計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７を用いて実施された。
【０２１５】
図４Ａに示されるように、可溶性ＣＤ４７は、ＦＡＣＳ分析による陽性ＰＥ染色によって示されるように、ＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞に特異的に結合した（黒い白抜きのヒストグラム）。ＣＤ４７−Ｈｉｓの非存在下では、抗Ｈｉｓタグ抗体は細胞に結合することができなかった（影付きヒストグラム）。ＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞を示されたＳＩＲＰＡ抗体とともにプレインキュベートした場合、いくつかのクローン、例えば１２Ｄ６及び１Ｂ３は、可溶性ＣＤ４７結合のほぼ完全な遮断を示した（破線ヒストグラム）。しかしながら、３Ｆ９及び９Ｃ２は、ＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞への可溶性ＣＤ４７の結合を阻害しない２つの固有のクローンを表す。可溶性ＣＤ４７が結合した細胞のＭＦＩ値は、図４Ｂにおいてバックグラウンドに対する倍数としてグラフ化され、３Ｆ９及び９Ｃ２は、ＣＤ４７相互作用を干渉しないことを確認する。
【０２１６】
実施例４：  ＳＩＲＰＡ抗体はＳＩＲＰＡ依存性遺伝子発現を調節する
リガンド遮断に加えて、ＳＩＲＰＡ抗体はまた、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）プロモーターの制御下でルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いてＣＤ４７誘導性遺伝子発現を阻害する能力についてスクリーニングされた。マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球に由来する細胞株ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４８（商標））に、Ｃｉｇｎａｌ  Ｌｅｎｔｉ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）、及びＳＩＲＰＡの細胞内ＩＴＩＭモチーフが、ＤＡＰ１２の細胞内ＩＴＡＭモチーフで置換されているヒトＳＩＲＰＡ−ＤＡＰ１２キメラを発現するレンチウイルスを感染させた。可溶性ヒトＣＤ４７タンパク質は、ＰＢＳで段階希釈し、組織培養プレートに吸着された。洗浄後、ｈｕＳＩＲＰＡ／ＤＡＰ１２キメラ（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡ）を発現する１０５個のＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞をプレートに播種し、そして３７℃で終夜インキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上で試料を室温で３分間インキュベートすることによって測定された。ＧＥＮ５（商標）２．０４ソフトウェアを用いてＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）マイクロプレートリーダーを使用して発光シグナルを定量した。
【０２１７】
図５Ａに示されるように、プレート結合させたヒトＣＤ４７は、キメラヒトＳＩＲＰＡ／ＤＡＰ１２を発現するレポーター細胞において用量依存的にルシフェラーゼ活性を誘導した。重要なことに、ＳＩＲＰＡ／ＤＡＰ１２発現を欠く親のＢＷＺレポーター細胞は、ＣＤ４７に応答して発光シグナルを放出しなかった。これは、キメラ受容体がリガンド結合を介して開始されるシグナル伝達事象を模倣することを証明した。次に、抗ＳＩＲＰＡ抗体は、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡレポーター細胞においてＣＤ４７依存性ルシフェラーゼ活性を遮断するそれらの能力について評価された。上記したように、可溶性ヒトＣＤ４７タンパク質をＰＢＳで希釈し、９６ウェル組織培養プレートに吸着させた。洗浄後、１０５個のＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡレポーター細胞は、アイソタイプコントロール抗体又は示された抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかとともにプレートに播種され、３７℃で終夜インキュベートされた。図５Ｂは、前述のＣＤ４７結合アッセイに従って、１２Ｄ６及び５Ｆ７などのＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞へのＣＤ４７の結合を遮断する抗ＳＩＲＰＡ抗体はまたレポーター細胞中のＣＤ４７依存性ルシフェラーゼ活性を阻害することを実証する。同様に、９Ｃ２及び３Ｆ９などのＣＨＯ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞へのＣＤ４７の結合を遮断しない抗ＳＩＲＰＡ抗体はまた、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞におけるＣＤ４７依存性ルシフェラーゼ活性を阻害しない。さらに、可溶性ＳＩＲＰＡ抗体とともにインキュベートされたレポーター細胞はプレート結合したＣＤ４７の非存在下では発光シグナルを発しないため、抗ＳＩＲＰＡ抗体は溶液中でシグナル伝達を誘導しない。
【０２１８】
実施例５：  ＳＩＲＰＡ特異的抗体の同定
ＳＩＲＰＡ抗体の最初の特徴付けは、初代ヒト骨髄細胞に結合することができるＣＤ４７遮断及び非遮断抗体のクラスを同定した。しかしながら、ＳＩＲＰαとＳＩＲＰβ１との間の高い配列相同性（約９０％の同一性）を考えると、ＳＩＲＰＡ特異的結合は、理想的な抗ＳＩＲＰＡリード抗体の重要な特徴のままである。ＳＩＲＰβ１交差反応性についてＳＩＲＰＡ抗体をスクリーニングするために、ＢＷＺ−ＮＦＡＴ／ルシフェラーゼレポーター細胞にレンチウイルス発現ヒトＳＩＲＰβ１で形質導入した。ＳＩＲＰαとは異なり、ＳＩＲＰβ１は、全細胞表面局在化のためにＤＡＰ１２アダプターの同時発現を必要とする。結果として、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１細胞に、別個にヒトＤＡＰ１２を発現するレンチウイルスでも形質導入した。ルシフェラーゼ活性化を試験するために、選択されたＳＩＲＰＡ抗体又はアイソタイプコントロールをＰＢＳで１０μｇ／ｍＬに希釈し、組織培養プレート上に吸着させた。洗浄後、ｈｕＳＩＲＰＡ／ＤＡＰ１２キメラ（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡ）又はｈｕＳＩＲＰβ１＋ＤＡＰ１２（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１）のいずれかを発現する１０５個のＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞をプレートに播種し、３７℃で終夜インキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上で試料を室温で３分間インキュベートすることによって測定された。ＧＥＮ５（商標）２．０４ソフトウェアを用いてＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）マイクロプレートリーダーを使用して発光シグナルを定量した。
【０２１９】
図６Ａに示されるように、プレート結合したＳＩＲＰＡ抗体は、プレート結合したＣＤ４７で以前に観察されたのと同程度に、キメラヒトＳＩＲＰＡ／ＤＡＰ１２を発現するレポーター細胞においてルシフェラーゼ活性を誘導した。しかしながら、ほとんどのＳＩＲＰＡ抗体はまた、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１レポーター細胞においてルシフェラーゼ活性を誘導し、これは、これらの抗体がＳＩＲＰαとＳＩＲＰβ１の両方と交差反応することを示した。興味深いことに、２つの抗体クローン、３Ｆ９及び９Ｃ２は、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰＡ細胞を特異的に活性化したが、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１は活性化しなかった。これは、これら２つのクローンが固有のＳＩＲＰＡ特異的抗体を表すことを示唆している。この観察を確認するために、本発明者らは、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ）を用いてＳＰＲに基づく結合研究を行った。抗マウスＩｇＧ捕捉抗体は、標準的なＮＨＳ／ＥＤＣ活性化を用いてＣＭ５センサーチップにアミン結合させた。３Ｆ９又は９Ｃ２のいずれかのＳＩＲＰＡ抗体は、１×ＨＢＳ−ＥＰ＋泳動緩衝液で５０ｎＭに希釈し、センサーチップ表面上に捕捉させた。等モル濃度の組換え可溶性ヒトＳＩＲＰＡ抗原又はヒトＳＩＲＰＢ１抗原は、捕捉されたＳＩＲＰＡ抗体上に注射されてセンサーグラムトレースを記録した。参照細胞並びに緩衝液注入からＲＵ値を差し引くことによってデータを処理した。図６Ｂのセンサーグラムは、捕捉抗体３Ｆ９及び９Ｃ２に対するＳＩＲＰＡ抗原の注射後の応答単位の増加を明らかに示す。対照的に、捕捉された抗体上にＳＩＲＰＢ１抗原を流すと、バックグラウンドを超える結合反応はほとんど記録されない。このようにして、図６Ａ及び６Ｂからの結果は、クローン３Ｆ９及び９Ｃ２をＳＩＲＰＡ特異的抗体として同定する。
【０２２０】
実施例６：  ＳＩＲＰＡ特異的抗体はヒトマクロファージにおいてＳＩＲＰαの細胞表面発現を減少させる
免疫細胞の表面に発現するある種のＩＴＩＭ／ＩＴＡＭ受容体を標的とする抗体は、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、及び／又はミクログリア上の上記受容体の表面レベルを低下させることができることがしばしば観察される。
【０２２１】
ＳＩＲＰαの細胞表面発現を低下させる抗ＳＩＲＰＡ抗体の能力は、初代ヒトマクロファージ（ｈｕＭａｃ）で評価された。ヒト単球を健康なドナーの末梢血から単離し、インビトロでマクロファージに分化させた。分化後、１０５個のｈｕＭａｃを採取し、１〜５μｇ／ｍｌのアイソタイプコントロール又は可溶性抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかとともに９６ウェル組織培養プレートに播種した。４時間処理又は終夜インキュベート後、細胞をフローサイトメトリーによりＳＩＲＰα表面発現について分析した。ＳＩＲＰα発現は、９Ｃ２及び３Ｆ９とは別のエピトープビンに属するＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲートした抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体を用いて検出された。
【０２２２】
図７Ａに示されるように、ＳＩＲＰＡ特異的抗体、３Ｆ９及び９Ｃ２は、アイソタイプコントロール処置されたマクロファージと比較して、ＳＩＲＰα発現を約９０％有意に低下させる。ＦＡＣＳ分析は、受容体の下方制御が抗体添加後の数時間以内に起こり、終夜の処理を通じて持続されることを明らかにする。これは、受容体発現を５０％以下しか減少させなかったＣＤ４７遮断抗体、例えば１Ｂ３又は３Ｄ２とは対照的である。抗体クローン３Ｆ９及び９Ｃ２はまたＣＤ４７非遮断抗体であるため、他のＣＤ４７非遮断抗体を受容体の下方制御についてスクリーニングした。図７Ｂは、ほとんどの場合、クラスとしてのＣＤ４７非遮断抗体がＳＩＲＰα発現を約９０％以上有意に低下させたことを示す。やはり、以前の観察と一致して、ＣＤ４７遮断抗体、つまりこの実施例では５Ｆ７及び１２Ｄ６は、比較すると、受容体の下方制御においてあまり効果的ではなかった。したがって、図７Ａ及び７Ｂは、非リガンド遮断ＳＩＲＰＡ抗体の明確な特徴としてＳＩＲＰαの下方制御を確立する。受容体発現を減少させることによって、これらの抗体は、非競合的阻害を介してＳＩＲＰα−ＣＤ４７シグナル伝達経路に拮抗する場合があり、これはこの分野ではこれまで研究されていなかった新規な機構である。
【０２２３】
実施例７：  ＳＩＲＰαの下方制御はヒトマクロファージによる腫瘍細胞の食作用を増強する
腫瘍細胞は、ＣＤ４７の上方制御を通じて免疫監視を回避し、それによって阻害性シグナルを食細胞に伝達する。したがって、拮抗抗体は、この阻害を打ち消して腫瘍細胞の食作用を増強する。ＳＩＲＰＡ抗体が受容体の下方制御によってＳＩＲＰαシグナル伝達を効果的に阻害するかどうかを決定するために、腫瘍細胞食作用アッセイがｐＨ細胞蛍光の獲得に基づいて開発された。レッドアビジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）は、ファゴソームなどの酸性環境で蛍光を獲得する蛍光マーカーであるｐＨｒｏｄｏレッド色素とコンジュゲートしたストレプトアビジン分子である。標的腫瘍細胞の標識のために、５００ｎＭのレッドアビジンを１５ｎＭのビオチン化Ｌｅｎｓ  Ｃｕｌｉｎａｒｉｓ  Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ（ＬＣＡ；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）と混合した。次に、レッドアビジン−ＬＣＡ複合体を氷上の無血清ＲＰＭＩ培地中で１：１の体積比で２５０，０００のＲａｊｉ細胞と混合した。ＬＣＡの糖結合特性は、レッドアビジンを腫瘍細胞表面の炭水化物構造に連結する。簡単な洗浄工程の後、レッドアビジン−ＬＣＡ標識されたＲａｊｉ細胞は、無血清ＲＰＭＩ培地中で単球由来のヒトマクロファージと混合され、３７℃で２時間インキュベートされた。次に、マクロファージを回収し、ＦｃγＲ遮断抗体を含有するＦＡＣＳ緩衝液中の抗ＣＤ１４  ＡＰＣで氷上にて染色した。食作用活性は、ＡＰＣ／ｐＨｒｏｄｏ−二重陽性マクロファージのパーセントを数えることによって測定された。コントロールとして、非標識Ｒａｊｉ細胞をマクロファージと混合してバックグラウンド蛍光を確立した。
【０２２４】
図８Ａ（ｉ〜ｉｉ）は、このアッセイの有効性を確立する。単球由来のマクロファージを１０５細胞／ウェルで９６ウェル組織培養プレートに播種し、アイソタイプコントロール抗体で終夜処理した。翌日、２５０，０００個のレッドアビジン標識されたＲａｊｉ細胞又は未標識Ｒａｊｉ細胞をマクロファージと２時間混合し、その後、フローサイトメトリーで分析した。図８Ａ（ｉ）のヒストグラムは、非標識細胞（影付きヒストグラム）と比較して、マクロファージをレッドアビジン標識されたＲａｊｉ細胞（黒塗りの白抜きのヒストグラム）と共培養した場合に観察されるｐＨ蛍光のシフトを実証する。しかしながら、このシフトした集団は、全ＣＤ１４＋マクロファージのほんの約５％を表す（図８Ａｉｉ）。抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）を用いたレッドアビジン標識されたＲａｊｉ細胞のオプソニン化は、ｐＨｒｏｄｏ＋マクロファージ集団をなおさらにシフトさせ（破線のヒストグラム）、腫瘍細胞除去を増強する抗体依存性食作用と一致する。リツキシマブを添加した結果として、ｐＨｒｏｄｏ＋マクロファージは、総ＣＤ１４＋マクロファージの約２０％を表し、食作用活性の約４倍の増加を表す。
【０２２５】
ＳＩＲＰＡ抗体を試験するために、マクロファージは、示された候補抗体又はアイソタイプコントロールで終夜処理された。翌日、標識されたＲａｊｉ細胞は、処理されたマクロファージに添加され、続いて、食作用活性を定量した。図８Ｂに示されるように、３Ｆ９と９Ｃ２の両方は、アイソタイプ処置されたマクロファージと比較して、ＣＤ１４＋／ｐＨｒｏｄｏ＋−マクロファージの集団をそれぞれ２．５倍及び１．５倍増加させた。リツキシマブ−オプソニン化されたＲａｊｉ細胞を３Ｆ９又は９Ｃ２処理されたマクロファージに添加した併用療法は、アイソタイプ処理されたマクロファージと比較して腫瘍細胞の貪食をさらに増強した。リツキシマブ単独では、未処理細胞に対して食作用活性が約４倍増加したのに対して、リツキシマブ＋３Ｆ９又はリツキシマブ＋９Ｃ２処理は、食作用をそれぞれ７倍及び６倍増加させた。３Ｆ９及び９Ｃ２はＣＤ４７結合を競合的に阻害しないＳＩＲＰＡ特異的抗体であるため、図８Ｃは、ＣＤ４７遮断抗体対ＣＤ４７非遮断抗体で処理されたマクロファージの食作用活性を比較する。ＣＤ４７遮断抗体のうち、１２Ｄ６及び５Ｆ７のみが、アイソタイプ処置されたマクロファージよりも腫瘍細胞取り込みを約３０〜４０％有意に増加させた。比較すると、３Ｆ９処理されたマクロファージの食作用活性は２倍増加した。したがって、図８Ａ〜Ｃからの結果は、マクロファージ上のＳＩＲＰαの抗体媒介性下方制御が腫瘍細胞の食作用性取り込みを増強することを確立する。ＳＩＲＰＡ抗体を抗腫瘍抗原抗体と組み合わせると、エフェクター細胞による腫瘍細胞除去がさらに高まる。最後に、ＣＤ４７相互作用を競合的に阻害する抗ＳＩＲＰＡ抗体と比較して、ＳＩＲＰα発現を低下させることによってＣＤ４７結合を非競合的に阻害する抗体は、マクロファージによる腫瘍細胞の貪食を刺激する優れた能力を実証する。
【０２２６】
実施例８：  ＳＩＲＰαの下方制御は初代ヒト単球を活性化する
マクロファージは、抗ＳＩＲＰＡ療法に応答して腫瘍細胞除去を推進する主要なエフェクター細胞集団であり得るが、ＳＩＲＰＡ抗体は、ＳＩＲＰαを発現する複数の骨髄細胞系列に関与する。これらの細胞の中には、末梢血を占める単球があり、したがって、インビボでの抗体投与の際にアッセイ標的関与に容易にアクセス可能である。潜在的なバイオマーカーを同定するために、初代単球を健康なドナーの末梢血から単離し、抗体処理後に活性化マーカーについてアッセイした。
【０２２７】
ＳＩＲＰαの表面発現を低下させる抗ＳＩＲＰＡ抗体の能力を単球上で検証した。単離後、１０５個の単球は、５μｇ／ｍｌのアイソタイプコントロール又は可溶性抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかとともに９６ウェル組織培養プレート上に播種された。細胞は、終夜インキュベートした後、ＳＩＲＰα表面発現についてフローサイトメトリーによって分析された。ＳＩＲＰα発現は、異なるエピトープビンに属するＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲートした抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体を用いて検出された。図９Ａは、３Ｆ９がアイソタイプコントロール処置された細胞と比較してＳＩＲＰαの表面発現を５０％減少させることを示す。受容体の下方制御は、マクロファージにおいて以前に観察されたものよりも単球ではあまり強くないように見えるが、単球は、炎症性メディエーターの産生、例えば活性酸素種（ＲＯＳ）及び炎症誘発性サイトカインの産生についてアッセイされた。ＲＯＳ産生を検出するために、１０５個の単球は、１０μｇ／ｍｌのアイソタイプコントロール又は可溶性抗ＳＩＲＰＡ抗体のいずれかとともに９６ウェル組織培養プレート上に播種された。続いて、細胞は、２μＭの蛍光色素、ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで標識された。３７℃で１時間の抗体媒介刺激後、細胞における相対蛍光単位を励起波長４９５ｎｍ及び発光波長５３０ｎｍで測定した。刺激された細胞の比蛍光指数は、培地単独で及び／又はアイソタイプコントロール抗体とともにインキュベートされた標識細胞のバックグラウンド蛍光を差し引くことによって得られた。ＧＥＮ５（商標）２．０４ソフトウェアを用いてＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ（商標）マイクロプレートリーダーを使用してプレートを読み取った。図９Ｂは、ＳＩＲＰＡ特異的抗体、３Ｆ９及び９Ｃ２が、２人の健康なドナーから単離された単球においてＲＯＳ産生を刺激したことを示す。さらに、図９Ｃは、ＳＩＲＰαを下方制御する抗体とともに終夜処理された１０５個の単球が、上昇した量のＩＬ−８を産生することを示す。このようにして、図９Ａ〜Ｃからの結果は、受容体表面発現の低下に加えて、抗ＳＩＲＰＡ抗体はまた細胞をより活性の高い表現型に偏らせることを示唆している。
【０２２８】
実施例９：  ＳＩＲＰＡ特異的抗体はインビボでＳＩＲＰαの細胞表面発現を減少させる
インビボモデル系において抗ＳＩＲＰＡ抗体が受容体の細胞表面発現を低下させるかどうかを決定するために、ＲＡＧ２欠損及びＩＬ２Ｒγ鎖欠損バックグラウンドでヒトＳＩＲＰＡ遺伝子をコードするヒトＢＡＣトランスジェニックマウスを得た。ｈｕＳＩＲＰＡの発現レベルをフローサイトメトリーによりマウス骨髄細胞上で分析した。図１０Ａに示されるように、マウス末梢血から単離された単球及び顆粒球は、ヒトＳＩＲＰＡ並びに内因性マウスＳＩＲＰＡを発現した。骨髄細胞由来のマクロファージ及び樹状細胞はまた、ｈｕＳＩＲＰＡを発現する。したがって、ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスは、マウス細胞においてヒトＳＩＲＰＡの発現パターンを忠実に再現する。さらに、ｈｕＳＩＲＰＡがその阻害機能を保持しているかどうかを決定するために、ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスは、ヒトＣＤ４７を過剰発現するヒトＢ細胞リンパ腫細胞株であるＲａｊｉ細胞を移植された。図１０Ｂに示されるように、Ｒａｊｉ細胞の皮下投与は固形腫瘍形成をもたらし、これはｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスがＣＤ４７＋ヒト細胞の生着を支持することを示唆している。
【０２２９】
抗体を媒介した受容体の下方制御をインビボで試験するために、ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの３Ｆ９（抗ＳＩＲＰＡ抗体）又はＭＯＰＣ２１（マウスＩｇＧ１アイソタイプコントロール）の単回の腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を受けた。翌日、血液試料をマウスからヘパリン被覆した回収チューブに採取し、そしてＦＡＣＳ分析用に処理した。さらに、脾臓も採取し、ＦＡＣＳ分析用に処理した。簡単には、血液及び脾細胞試料をＡＣＫ溶解緩衝液中で５分間インキュベートして、赤血球を溶解させ、次に冷ＰＢＳで十分に洗浄した。次に、細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋Ｆｃ受容体遮断溶液）に再懸濁した。末梢血骨髄性細胞を抗マウスＣＤ１１ｂ−パシフィックブルー、及び抗ヒトＳＩＲＰα／β−ＡＰＣ（クローンＳＥ５Ａ５）又はＤｙＬｉｇｈｔ  ６５０コンジュゲートした９Ｃ２であるハイブリドーマスクリーニングによって同定されたヒトＳＩＲＰＡ特異的抗体のいずれかで染色した。データをＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ（商標）ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。図１０Ｃに示されるように、抗ヒトＳＩＲＰα／β−ＡＰＣで標識されたＣＤ１１ｂ＋血液単球及び顆粒球のゲート処理は、アイソタイプコントロールで処理されたマウスと比較した場合、３Ｆ９処理が両方の細胞型のｈｕＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを減少させないことを明らかにする。しかしながら、３Ｆ９処理は、９Ｃ２−ＤｙＬｉｇｈｔ  ６５０が末梢血細胞上のｈｕＳＩＲＰＡに結合するのを遮断する。３Ｆ９及び９Ｃ２は同じエピトープに結合するため、この遮断は、３Ｆ９が発現を下方制御することなく末梢血細胞上の受容体を占有することを証明する。
【０２３０】
マウス脾臓からの単一の細胞懸濁液はまた、アイソタイプコントロール動物及び３Ｆ９処置された動物から得られた。脾細胞を抗マウスＣＤ１１ｂ−パシフィックブルー、抗マウスＦ４／８０−ＦＩＴＣ、及び抗ヒトＳＩＲＰα／β−ＡＰＣ（クローンＳＥ５Ａ５）で染色した。データをＢＤ  ＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ（商標）ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で獲得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。図１０Ｄに示されるように、２つの主要な骨髄性細胞集団は、Ｆ４／８０及びＣＤ１１ｂマーカーに基づいて脾臓において同定された：Ｆ４／８０ＬｏＣＤ１１ｂ＋／−集団（恐らくは赤色髄マクロファージ）及びＦ４／８０ＨｉＣＤ１１ｂＨｉ集団。コントロール処置されたマウスで示されるように、両方の集団がｈｕＳＩＲＰＡを発現するが、３Ｆ９処置は、主にＦ４／８０ＬｏＣＤ１１ｂ＋／−細胞においてｈｕＳＩＲＰＡ発現を下方制御した。さらに、Ｆ４／８０ＬｏＣＤ１１ｂ−集団は、３Ｆ９処置されたマウスの脾臓でのみ拡大する。ｈｕＳＩＲＰＡのわずかな減少は、Ｆ４／８０ＨｉＣＤ１１ｂＨｉ脾臓集団において観察される。
【０２３１】
これらの結果は、ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスを利用した場合、抗ＳＩＲＰＡ抗体がインビボでｈｕＳＩＲＰＡと結合し、骨髄細胞上の受容体を機能的に下方制御することを実証した。結果はさらに、ｈｕＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９が末梢血細胞及び脾臓骨髄細胞上のｈｕＳＩＲＰＡに関与するが、細胞型依存的又は文脈依存的に受容体を内在化することを実証する。
【０２３２】
実施例１０：  ＢＡＣトランスジェニックマウスモデルにおける抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍効果
抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍効果を評価するために、ｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスを用いた予備実験を行った。約８〜１２週齢の１２匹のｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇ雌マウスの右脇腹に、マトリゲル溶液中で混合した５００，０００個のＲａｊｉ−ルシフェラーゼ細胞を一方的に移植した。腫瘍体積のキャリパー測定及び生物発光イメージングにより、移植後の７日の開始から１０日目まで腫瘍生着をモニターした。１０日目に、腫瘍の体積が約８０〜１２０ｍｍ３に達したとき、マウスは、ｉ．ｐ．注射によりＤ−ルシフェリン基質を投与され。インビボイメージングシステムで画像化された。続いてマウスは、Ｒａｊｉ細胞からのルシフェラーゼシグナルの平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）値に基づいて、処置群又はコントロール群（１群あたり６匹のマウス）に無作為化された。１０日目に開始して、マウスは、研究期間中、１０ｍｇ／ｋｇの３Ｆ９（抗ＳＩＲＰＡ）又はマウスＩｇＧ１コントロール抗体のいずれかを週２回、腹腔内注射を受けた。マウスを毎日観察し、デジタル体重計を用いて週に２回体重を測定した。コントロール群の平均腫瘍体積が１５００ｍｍ３に達した時点で研究を終了した。研究終結時に腫瘍を回収し、ＦＡＣＳ分析用に処理した。簡単には、腫瘍試料をコラゲナーゼで３０分間３７℃で処理した。試料をセルストレーナーを通じて解離させ、ＰＢＳ中の２％ＦＢＳに再懸濁した。試料中の赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液を用いて溶解し、次に、細胞をＰＢＳ中の２％ＦＢＳ中で洗浄した。血球計を使用して細胞を計数し、１００万個の細胞を氷上で３０分間、蛍光色素コンジュゲートした抗体で染色し、次にＰＢＳ中の２％ＦＢＳで洗浄した。細胞をＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで固定した。染色された細胞全てをＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で分析した。腫瘍浸潤性骨髄細胞を抗マウスＣＤ１１ｂ−パシフィックブルー、抗マウスＦ４／８０−ＦＩＴＣ、及び抗ヒトＳＩＲＰα／β−ＡＰＣ（クローンＳＥ５Ａ５）で染色した。図１１Ａに示されるように、Ｆ４／８０及びＣＤ１１ｂマーカーに基づいて２つの主要な骨髄性集団であるＦ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋集団（Ｆ４／８０＋細胞）及びＦ４／８０−ＣＤ１１ｂ＋集団（ＣＤ１１ｂ＋細胞）が同定された。アイソタイプコントロール処置されたマウスに示されるように、両方の集団はｈｕＳＩＲＰＡを発現する。しかしながら、３Ｆ９処理はＦ４／８０−ＣＤ１１ｂ＋細胞でのみｈｕＳＩＲＰＡ発現を下方制御した。一方、Ｆ４／８０＋ＣＤ１１ｂ＋細胞ではｈｕＳＩＲＰＡ発現は減少しなかった。
【０２３３】
図１１Ｂに示されるように、抗ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９を投与することは、生物発光イメージングにより腫瘍量を測定した場合、ビヒクルコントロール処置された動物と比較してインビボで腫瘍増殖を阻害するように見えた。平均放射輝度値の線形回帰分析は、１０日目の治療前放射輝度値を補正した場合、有効性についてのほぼ有意な傾向が１７日目（ｐ＝０．０６）に現れることを示す。この傾向は、その後の測定においても継続するが（ｐ値は０．１６、０．７７及び０．１８である）、腫瘍増殖の変動性及び利用可能なｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスの数が限られていることを考えると、この研究は、所望の有意なレベルに達するためには統計的検出力が不十分である。
【０２３４】
実施例１１：  ヒト化マウスモデルにおける抗ＳＩＲＰＡ抗体の抗腫瘍効果
骨髄及びリンパ系細胞コンパートメントを含むヒト免疫細胞系統を再構成するためにヒト臍帯血由来のＣＤ３４＋造血幹細胞を移植した免疫不全雌ＮＳＧマウス（Ｊａｘ）は、抗ＳＩＲＰＡ抗体の免疫調節能を測定するためのプラットフォームとして役立った。成熟ヒト免疫細胞の成功した生着は、注射後１２週目の末梢血中の＞２５％のｈｕＣＤ４５＋細胞として定義される。さらに、ヒト化マウスは、末梢血中のヒトＣＤ１４＋細胞、ヒトＣＤ１１ｂ＋細胞、及びヒトＣＤ３３＋細胞の高細胞数についてスクリーニングされた。
【０２３５】
免疫腫瘍学有効性研究のために、ヒト化マウスの右側腹部に、このモデル系におけるチェックポイント阻害剤療法に反応するトリプル陰性ヒト乳がん細胞株であるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を皮下移植した。治療前の腫瘍体積は、腫瘍が触診可能になった場合にデジタルノギスで測定され、腫瘍体積が−１日目に６０〜１２０ｍｍ３に達したときにマウスを治療又はコントロール群（１群あたり１２匹のマウス）に無作為化した。０日目に開始して、マウスは、研究期間中、４日ごとに、４０ｍｇ／ｋｇの３Ｆ９（抗ＳＩＲＰＡ）又はマウスＩｇＧ１コントロール抗体のいずれかの腹腔内注射を受けた。第３の群は、代わりに、研究期間中、５日ごとに、１０ｍｇ／ｋｇのペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、Ｍｅｒｃｋ）の腹腔内注射を受けた。体重、臨床観察、及びデジタルノギス測定は、投与開始後、週２回記録された。コントロール群の平均腫瘍体積が２０００ｍｍ３に達した場合に、試験を終了した。終結時、血液、脾臓、及び腫瘍を採取し、ＦＡＣＳ分析用に処理した。簡単には、腫瘍試料をコラゲナーゼで３０分間３７℃で処理した。脾臓及び腫瘍試料をセルストレーナーを通じて解離させ、ＰＢＳ中の２％ＦＢＳに再懸濁した。試料中の赤血球をＡＣＫ溶解緩衝液を用いて溶解し、次に、細胞をＰＢＳ中の２％ＦＢＳで洗浄し、氷上で３０分間、蛍光色素コンジュゲートした抗体で染色した。細胞をＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドで固定した。染色された細胞全てをＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、データをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で分析した。
【０２３６】
図１２Ａに示されるように、ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９による処置は、アイソタイプコントロール処置されたマウス又はＫｅｙｔｒｕｄａ処置されたマウスのいずれかと比較した場合、腫瘍を保有するヒト化マウスの末梢血ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋骨髄性細胞におけるＳＩＲＰＡの細胞表面レベルを低下させた。しかしながら、ＳＩＲＰＡの細胞表面発現レベルは、腫瘍内ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋骨髄性細胞では低下しなかった。これらの結果は、抗体を媒介した受容体の下方制御が細胞型依存的又は文脈依存的に起こったｈｕＳＩＲＰＡ−ｔｇマウスにおける以前の観察と類似している。
【０２３７】
図１２Ｂに示されるように、ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９による処置は、アイソタイプコントロール処置されたマウス又はＫｅｙｔｒｕｄａ処置されたマウスのいずれかと比較した場合、腫瘍を保持するヒト化マウスにおける末梢血ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋骨髄性細胞細胞の割合を低下させた。対照的に、３Ｆ９とＫｅｙｔｒｕｄａはともに、腫瘍内ｈｕＣＤ４５＋ｈｕＣＤ１４＋骨髄細胞のパーセンテージを増加させた。さらに、３Ｆ９処置は、アイソタイプコントロール群と比較した場合、腫瘍を保有するヒト化マウスの末梢血中のヒトＣＤ４５＋白血球の全体のパーセンテージを減少させた（図１２Ｃ）。
【０２３８】
このモデル系における腫瘍増殖に影響を与える治療法以外の様々な因子を説明するために、Ｒ’ｓ  ｌｍ（）関数を用いた多重線形回帰分析を利用して、１）ｈｕＣＤ３４＋幹細胞ドナー、２）−１日目の腫瘍体積、３）無作為化前の動物の体重、及び４）無作為化前のｈｕＣＤ４５＋細胞の生着率、における差異について腫瘍体積を補正した。図１３Ａは、各時間点について群あたりの平均腫瘍体積をプロットする。３Ｆ９とＫｅｙｔｒｕｄａ処置群はともに、アイソタイプコントロール群と比較して早い時間点及び遅い時間点で腫瘍体積を有意に低下させるが、その効果は、２２日目〜２８日目において主に観察される。ｈｕＣＤ３４＋幹細胞ドナーによる腫瘍体積測定値のグラフ化は、図１３Ｂに示されるように、ドナー５０３１及び５０４８からのヒト免疫細胞を移植されたマウスが、アイソタイプコントロールと比較して、３Ｆ９又はＫｅｙｔｒｕｄａのいずれかで処置された場合、腫瘍増殖を有意に阻害したことを明らかにする。対照的に、ドナー１２９からのヒト免疫細胞を移植されたマウスは、アイソタイプコントロール群と比較して、いずれの処置群においても腫瘍体積の有意な低下を記録しなかった。しかしながら、ドナー１２９レシピエントからのコントロール群における平均腫瘍体積は、ドナー５０３１及び５０４８からのコントロール群よりも低かったことに留意されたい。腫瘍増殖におけるこのようなドナー間変動は、このプラットフォームにおける結果を適切に解釈するための適切なコントロールの必要性を強調する。
【０２３９】
上記で示されたデータは、ＳＩＲＰＡ抗体、３Ｆ９がインビボで受容体に関与し、特定の細胞集団においてＳＩＲＰＡの下方制御を誘導することを立証している。循環性及び腫瘍浸潤性の免疫細胞の両方の分析は、３Ｆ９処置が末梢血中のＣＤ１４＋骨髄細胞を減少させ、同時に腫瘍中のＣＤ１４＋細胞の増加を明らかにした。血液及び腫瘍中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を減少させたＫｅｙｔｒｕｄａとは異なり、３Ｆ９はＴ細胞数に有意な影響を及ぼさなかった。これは主に骨髄区画に作用することを示唆している。重要なことに、３Ｆ９を用いた受容体の下方制御及び骨髄性細胞集団の変化は、Ｋｅｙｔｒｕｄａ療法に匹敵する腫瘍増殖の有意な抑制と相関していた。まとめると、これらの研究は、ヒトがんを治療するための治療薬としての抗ＳＩＲＰＡ抗体の前臨床効果を支持している。
【０２４０】
実施例１２：  ３Ｆ９及び９Ｃ２のインシリコ抗体ヒト化
抗体のヒト化は、ヒト投与における免疫原性を防ぐために、異なる種で生成された抗体を、配列及び構造の関係を通じてヒト抗体に最もよく似るように変換するために使用される。異なる種由来の抗体は、非ヒト抗体の特異性決定領域（ＳＤＲ）をヒト抗体フレームワークに移植することを可能にする特徴的な配列及び構造的な特徴を共有する。これは、非ヒト抗体の特異性の保持をもたらす。ヒト化プロセスは、フレームワーク領域及びＳＤＲを含む、非ヒト抗体配列及び特徴の同定を伴う。以下の基準を用いて抗体をヒト化する：１）非ヒト抗体と公知のヒト抗体との間のフレームワーク領域における類似性パーセント、２）非ヒト抗体と公知のヒト抗体との間のＳＤＲにおける長さ類似性、３）ヒト抗体のフレームワーク領域を作製するために用いられる遺伝子、及び４）ヒト化において及び治療薬としてのヒト抗体フレームワークの以前の使用。フレームワーク領域の類似性及びＳＤＲの長さは重要であり、これは、相違が、抗体の特異性を変更し得る抗体の構造的な相違を生じさせるためである。ヒト抗体のフレームワークを作製するために使用される特定の遺伝子は、抗体の安定性又は特異性にとって有益又は有害であることが公知であり、したがって選択的に使用され又は回避される。最後に、良好な半減期で十分に許容される、ヒト治療において使用されているものを含む、以前に成功したヒト化フレームワークは、将来に成功するヒト化のための候補である可能性がある。
【０２４１】
図１４Ａ〜Ｄに示されるように、ヒト化軽鎖及び重鎖可変領域配列は、ＳＩＲＰＡ抗体、３Ｆ９及び９Ｃ２について同定された。３Ｆ９重鎖可変ドメインの最初のヒト化配列（ｈＳＢ−３Ｆ９−Ｈ１；図１４Ａ）は、ヒトフレームワークに変更を加えていない「ＣＤＲ−スワップ」である。その後のヒト化重鎖配列（ｈＳＢ−３Ｆ９−Ｈ２）は、フレームワーク残基を変更させる（その上の配列と比較して太字で示される変化）。図１４Ｂにおいて、ｈＳＢ−３Ｆ９−Ｌ１は、軽鎖可変ドメインの「ＣＤＲ−スワップ」であり、ヒトのフレームワークに変化はない。その後のヒト化軽鎖配列は、フレームワーク残基を変更させる（その上の配列と比較して太字で示される変化；灰色の四角で囲まれた残基は前のバージョンからのものである）。３Ｆ９からの軽鎖ＣＤＲはまた、Ｑ、Ｓ、Ａ、又はＤで置換され得る潜在的な脱アミド化部位（＃で印を付けられる）を含有する。さらに、３Ｆ９の可変ドメインは、製造中に潜在的に問題をもたらし得る９６位に遊離Ｃｙｓを含有する。この部位は、抗原結合が変更されない限り、Ａ、Ｓ、又はＬ残基で置換され得る。図１４Ｃにおいて、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｈ１は、ヒトフレームワークに変化がない、重鎖可変ドメインの「ＣＤＲスワップ」である。その後のヒト化重鎖配列は、フレームワーク残基を変更させる（その上の配列と比較して太字で示される変化；灰色の四角で囲まれた残基は前のバージョンからのものである）。９Ｃ２由来の重鎖ＣＤＲはまた、Ｑ、Ｓ、又はＡで置換され得る、潜在的なアミド分解部位（＃で印を付けられる）を含有する。９Ｃ２はまた、ＣＤＲ−Ｈ３中にＡｓｐ−Ｇｌｙ（ＤＧ）配列（＠で印を付け）を含有し、これは、イソアスパラギン酸形成の影響を受けやすい場合がある。この部位は、抗原結合が変更されない限り、Ａ、Ｓ、又はＥ残基で置換され得る。図１４Ｄにおいて、ｈＳＢ−９Ｃ２−Ｌ１は、ヒトフレームワークに変化がない、軽鎖可変ドメインの「ＣＤＲスワップ」である。その後のヒト化軽鎖配列は、フレームワーク残基を変更する（その上の配列と比較して太字で示される変化；灰色の四角で囲まれた残基は前のバージョンからのものである）。９Ｃ２由来の軽鎖ＣＤＲは、Ｑ、Ｓ、Ｄ、又はＡで置換され得る潜在的な脱アミド化部位（＃で印を付けられる）を含有する。９Ｃ２はまた、酸化に感受性であり得る、ＣＤＲ−Ｌ３中のＴｒｐ残基（＾で印を付けられる）を含有する。この部位は、抗原結合が変更されない限り、Ｈ、Ｙ、又はＦ残基で置換され得る。
【０２４２】
実施例１３：  抗ＳＩＲＰＡ抗体結合部位のエピトープマッピング
抗ＳＩＲＰＡ抗体のエピトープマッピングは、ヒトＳＩＲＰＡ  ｃＤＮＡ配列のショットガン突然変異誘発によって作製されたアラニンスキャニングライブラリーを使用して実施される。Ｃ末端Ｖ５エピトープタグをコードするＳＩＲＰＡ発現構築物は、ハイスループットアラニンスキャニング突然変異誘発（Davidson及びDoranz, 2014 Immunology 143, 13-20に概説されている）にかけて、包括的な突然変異ライブラリーを作製する。ＳＩＲＰＡ細胞外ドメイン（アミノ酸３１〜３７４）を表す各残基は、大部分がアラニンに突然変異しているが、アラニンコドンはセリンに突然変異していた。
【０２４３】
３８４ウェルマイクロプレートに配置されたＳＩＲＰＡ突然変異体ライブラリークローンは、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞に個々にトランスフェクトされ、２２時間発現させる。抗体を消化してＦａｂを生成し、その後、細胞を１０％正常ヤギ血清（ＮＧＳ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で希釈したＦａｂとともにインキュベートする。ライブラリースクリーニング前に、野生型ＳＩＲＰＡを発現する細胞に対する独立した免疫蛍光滴定曲線を用いて一次Ｆａｂ濃度を決定し、シグナルが検出の直線範囲内にあることを確実にする。Ｆａｂは、１０％ＮＧＳ中の７．５μｇ／ｍｌのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲートした二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を用いてＦａｂを検出する。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、０．１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を含むＣｅｌｌｓｔｒｉｐｐｅｒ（Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）に再懸濁する。場合によっては、ｐＨの上昇、温度の上昇、及び解離時間の増加など、より厳密な条件が使用される。平均細胞蛍光は、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔハイスループットフローサイトメーター（ＨＴＦＣ、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ、Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ、ＮＭ）を使用して検出される。各突然変異体クローンに対するＦａｂ反応性は、模擬的にトランスフェクトされたコントロールからのシグナルを差し引き、野生型ＳＩＲＰＡトランスフェクトされたコントロールからのシグナルに対して標準化することによって、野生型ＳＩＲＰＡタンパク質反応性に対して計算される。
【０２４４】
ライブラリークローン内の突然変異残基は、それらが試験Ｆａｂの反応性を支持しないが、市販の参照抗体、ＭＡＢ４５４６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、又はさらなる抗ＳＩＲＰＡ  Ｆａｂの反応性を支持する場合、Ｆａｂ結合エピトープにとって「決定的」であると同定される。このカウンタースクリーン戦略は、局所的にミスフォールドされているか又は発現欠陥を有するＳＩＲＰＡ突然変異体の排除を促進する。
【０２４５】
実施例１４：  抗ＳＩＲＰＡ抗体によるＦｃγＲＩＩＢ下方制御
目的とする標的抗原に加えて、骨髄系列の細胞はまた、治療用抗体のＦｃドメインに結合することができる複数のＦｃ受容体を発現する。Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）は、Ｆｃ依存性エフェクター機能を媒介するための最良に特徴付けられ、及び最も強力な受容体クラスを構成する。ＦｃγＲは、ＩＴＡＭ関連活性化受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＡ）とＩＴＩＭ保有阻害性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）の両方を含み、同じ細胞上での活性化／阻害性受容体の同時発現は、細胞活性化の閾値を確立する。一般的に、免疫複合体による活性化ＦｃγＲの連結は、細胞活性化及びそれに続くエフェクター機能の誘導をもたらすいくつかのシグナル伝達カスケードを開始する。これらの活性は骨髄性細胞型間で異なるが、抗体依存性の細胞傷害性、抗体依存性の細胞食作用、並びにいくつかの炎症誘発性サイトカイン及びケモカインの上方制御などを含み得る。対照的に、免疫複合体による阻害性受容体ＦｃγＲＩＩＢの連結は、組織恒常性の維持を支持する活性化ＦｃγＲの免疫刺激シグナルに対抗する。例えば、いくつかの研究は、ＦｃγＲＩＩＢの遺伝子ノックアウトが、免疫複合体媒介性炎症のマウスモデルにおいて炎症誘発性マクロファージ活性の増大をもたらすことを確立している。ＦｃγＲＩＩＢは阻害活性を有する唯一のＦｃγＲであるため、それは、骨髄性細胞によるＦｃγＲ媒介性炎症の調節において中心的役割を果たす。腫瘍微小環境との関連で、ＦｃγＲＩＩＢ発現レベルは、腫瘍関連マクロファージの偏りの状態及びインビボでのマクロファージエフェクター機能の調節を決定し得る。
【０２４６】
ＦｃγＲが抗ＳＩＲＰＡ抗体のインビトロ活性に関与するかどうかを評価するために、抗体３Ｆ９をＥｎｄｏＳ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で処理してＦｃ連結グリカンを除去した。Ｆｃグリカン上のマンノース残基を検出する図１５ＡにおけるＬＣＡブロットによって示されるように、酵素反応は炭水化物構造を完全に切断した。重要なことに、細胞ベースの結合アッセイにおいて３Ｆ９と脱グリコシル化３Ｆ９の両方がＳＩＲＰＡに同等に結合するため、脱グリコシル化反応は抗原認識に影響を及ぼさなかった（図１５Ｂ）。続いて、初代ヒトマクロファージ（ｈｕＭａｃ）上のＳＩＲＰＡの細胞表面発現を低下させる脱グリコシル化３Ｆ９の能力をグリコシル化３Ｆ９と比較した。簡単には、ヒト単球を２人の健康なドナー（ＨＤ１及びＨＤ２）の末梢血から単離し、インビトロでマクロファージに分化させた。分化後、１０５個のｈｕＭａｃを採取し、漸増濃度の抗ＳＩＲＰＡ抗体とともに９６ウェル組織培養プレート上に播種した。終夜インキュベートした後、ＳＩＲＰＡ表面発現についてフローサイトメトリーによって細胞を分析した。９Ｃ２及び３Ｆ９とは別のエピトープビンに属するＤｙＬｉｇｈｔ６５０コンジュゲートした抗ヒトＳＩＲＰＡ抗体を用いて受容体発現を検出した。
【０２４７】
図１６に示されるように、３Ｆ９の両方のグリコフォームは、アイソタイプコントロール処置されたマクロファージと比較してＳＩＲＰＡの表面発現を有意に下方制御した。しかしながら、両方のドナーにおいて、脱グリコシル化された３Ｆ９変異体は、グリコシル化抗体と比較して部分的に低い活性を示した。例えば、３Ｆ９は、ＨＤ１及びＨＤ２においてそれぞれＳＩＲＰＡ発現を９０％及び８５％程度に下方制御した。一方、脱グリコシル化された３Ｆ９は、同じドナーマクロファージにおいて、それぞれ７０％及び７５％の受容体の下方制御しか達成しなかった。この知見は、３Ｆ９などの抗ＳＩＲＰＡ抗体が最大の活性についてＦｃγＲの関与を必要とすることを示唆している。
【０２４８】
どのＦｃγＲが３Ｆ９のインビトロ活性に寄与するかを決定するために、２人の健康なドナーから得られた単球由来マクロファージを、アイソタイプコントロール抗体又は抗ＳＩＲＰＡ抗体３Ｆ９のいずれかで終夜処理し、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）及びＦｃγＲＩＩＡ／Ｂ（ＣＤ３２Ａ／Ｂ）の表面発現レベルについて評価した。図１７Ａに示されるように、３Ｆ９処理は、アイソタイプコントロール処置されたマクロファージと比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡの表面発現を中程度に減少させた。対照的に、ＦｃγＲＩＩＡ／Ｂの大きな下方制御は、アイソタイプコントロール処置された細胞と比較して、３Ｆ９処理マクロファージで明らかであった（図１７Ｂ）。
【０２４９】
ＦｃγＲＩＩ（クローンＦＵＮ−２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の表面レベルを測定するために使用される検出抗体は、活性化受容体（ＦｃγＲＩＩＡ）と阻害性受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）を区別しないため、このアッセイは受容体特異的抗体を用いて反復された。以前に記載されたように、２人の健康なドナーから得られた単球由来マクロファージは、アイソタイプコントロール抗体又は示された３Ｆ９のグリコフォームのいずれかで終夜処理された。図１８は、３Ｆ９がマクロファージ中のＦｃγＲＩＩＡをアイソタイプコントロール処置細胞と比較して約７０〜８５％に有意に下方制御したことを示す。抗体の脱グリコシル化が受容体の下方制御を無効にしたことから、この効果はＦｃドメインに依存していた。しかしながら、ＦｃγＲＩＩＢの表面発現を評価する場合、３Ｆ９処理は、アイソタイプコントロール処置マクロファージと比較して阻害性受容体の発現をほぼ検出不能なレベルに減少させた（図１８）。３Ｆ９の脱グリコシル化形態でさえもＦｃγＲＩＩＢの強力な下方制御を示し、これは３Ｆ９のマウスＩｇＧ１アイソフォームがヒトＦｃγＲＩＩＢと優先的に会合し得ることを示唆している。理論に束縛されるものではないが、２つのＩＴＩＭ保有受容体（ＳＩＲＰＡ及びＦｃγＲＩＩＢ）を、それらが下方制御されるように標的化することによって、３Ｆ９はマクロファージを活性化表現型に偏らせることができる。したがって、腫瘍生物学との関連で、抗ＳＩＲＰＡ抗体を用いて、腫瘍微小環境中の腫瘍関連マクロファージを前腫瘍表現型から抗腫瘍表現型に向けて再プログラミングすることは、がん免疫療法の有望な様式を表す。
【０２５０】
本明細書で引用した全ての特許、特許出願、受託番号、及び他の公開された参考資料は、それらが関連して本明細書に引用されている主題の開示について、それらの全体が出典明示により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
2020500540.tif 000049
【図１７Ａ】
2020500540.tif 000050
【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【配列表】
2020500540000001.app
【国際調査報告】
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2020500540.tif 000054
2020500540.tif 000055
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