(57)【要約】  インドール−ホルムアミド誘導体、その製造方法および薬剤におけるその使用を開示する。特に、式(I)のインドール−ホルムアミド誘導体、その製造方法、該誘導体を含む医薬組成物、ならびにRORアゴニストとしてのその使用および腫瘍または癌を予防および/または治療するためのその使用を開示する。2020525419.tif 000072
2020525419.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2020525419.tif 000063
[式中、
2020525419.tif 000064
は、二重結合または単結合であり；
G1、G2およびG3は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、C、CH、CH2およびNからなる群から選択され；
環Aは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
各R1は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
R2は、ハロアルキルであり；
R3は、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アルコキシおよびアミノからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
各R4は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、からなる群から選択され水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール；
R5は、水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、NR10R11、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アミノ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
各R6は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
R7は、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され、ここで、アルキルは、ハロゲン、ニトロ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
R8およびR9は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
R10およびR11は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
nは、0、1、2、3または4であり；
sは、0、1、2または3であり；および
tは、0、1、2または3である]
の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
式(IA)：
【化２】
2020525419.tif 000065
[式中、
Raは、水素またはアルキルであり；
2020525419.tif 000066
、環A、G1〜G3、R1、R4〜R7、n、sおよびtは、請求項１と同意義である]
の化合物である、請求項１に記載の式(I)の化合物。
【請求項３】
式(II)：
【化３】
2020525419.tif 000067
[式中、
Raは、水素またはアルキルであり；
2020525419.tif 000068
、環A、G1〜G3、R1、R4〜R7、n、sおよびtは、請求項１と同意義である]
の化合物である、請求項１または２に記載の式(I)の化合物。
【請求項４】
環Aが、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、ピラゾリルおよびモルホリニルからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項５】
式(III)：
【化４】
2020525419.tif 000069
[式中、R1、R5〜R7、nおよびtは、請求項１と同意義である]
の化合物である、請求項１〜４のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項６】
式(IV)：
【化５】
2020525419.tif 000070
[式中、R1、R5〜R7、nおよびtは、請求項１と同意義である]
の化合物である、請求項１〜５のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項７】
R1が、水素、ハロゲンおよびアルキルからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項８】
R5が、アルキル、NR10R11およびシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、アルキルおよびシクロアルキルがそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アミノ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；R10およびR11が、請求項１と同意義である、請求項１〜７のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項９】
R6が、水素またはハロゲンである、請求項１〜８のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項１０】
R7が、アルキル、シクロアルキルおよびハロアルキルからなる群から選択される、請求項１〜９のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項１１】
【化６】
2020525419.tif 000071
からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか1つに記載の式(I)の化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか1つに記載の治療有効量の式(I)の化合物、および1つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１３】
抗PD-1抗体をさらに含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
RORアゴニストの製造における、請求項１〜１１のいずれか1つに記載の式(I)の化合物または請求項１２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１５】
腫瘍または癌の予防および/または治療用薬剤の製造におけるRORアゴニストとしての、請求項１〜１１のいずれか1つに記載の式(I)の化合物または請求項１２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１６】
腫瘍または癌を予防および/または治療するための薬剤の製造におけるRORアゴニストとしての、抗PD-1抗体と組み合わせての、請求項１〜１１のいずれか1つに記載の式(I)の化合物または請求項１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤の分野に属し、インドール−ホルムアミド誘導体、その製造方法および薬剤におけるその使用に関する。特に、本発明は、式(I)のインドール−ホルムアミド誘導体、該誘導体の製造方法、該誘導体を含む医薬組成物、RORアゴニストとしてのその使用、および腫瘍または癌を予防および/または治療するための薬剤の製造におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
レチノイド関連オーファン受容体(ROR)は、核内受容体ファミリーのメンバーであり、リガンド依存性転写因子のクラスでもある。生殖発達、代謝、免疫系調節などを含む、さまざまな生理学的および生化学的プロセスを調節することができる(Mech Dev. 1998 Jan、70(1-2：147-53； EMBO J. 1998 Jul 15、17(14)：3867-77)。RORファミリーには、RORα、RORβおよびRORγの3種類があり(Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2004 Dec、3(4)：395-412)、そのうち、RORγは、胸腺、肝臓、腎臓、脂肪、骨格筋などの多くの組織で発現することができる(Immunity. 1998 Dec、9(6)：797-806)。
【０００３】
RORγは、2つのサブタイプ：RORγ1およびRORγt(RORγ2)を有し、RORγ1は胸腺、筋肉、腎臓、肝臓などの多くの組織で発現するが、RORγtは免疫細胞でのみ発現する(Eur J Immunol. 1999 Dec、29(12)：4072-80)。RORγtは、免疫細胞の分化中にT細胞の生存を調節し、CD4+およびCD8+細胞のヘルパーT細胞17(Th17)および細胞傷害性T細胞(Tc17)への分化を活性化および促進することができることが文献で報告されている(J Immunol. 2014 Mar 15、192(6)：2564-75)。TH17およびTc17細胞は、インターロイキン-17(IL-17)およびIL-21などの他の炎症因子を分泌することにより、炎症反応を促進し、後天性免疫反応および自己免疫反応を促進するエフェクター細胞のクラスである。さらに、既存の研究では、Th17細胞およびTc17細胞を担癌マウスに移植することにより、移植腫瘍の増殖を有意に阻害することができることが示されている(J Immunol. 2010 Apr 15、184(8)：4215-27)。Th17はまた、細胞傷害性CD8+ T細胞およびナチュラルキラー細胞を動員して腫瘍微小環境に入り、それによって抗腫瘍を目的として腫瘍細胞を殺すことができる(Blood. 2009 Aug 6、114(6)：1141-9； Clin Cancer Res. 2008 Jun 1、14(11)：3254-61)。したがって、RORγtの活性化は、新規な抗腫瘍療法である可能性が高い。
【０００４】
現在、製薬会社は、Lycera Corp.が開発した小分子薬LYC-55716など、RORγtのアゴニストを開発している。前臨床研究では、そのアナログであるLYC-54143が2つの異なる経路を介して腫瘍の成長を阻害し、優れた抗癌活性を示すことが明らかにされている。まず、LYC-54143は、RORγtを活性化して、従来の経路を介してTh17およびTc17細胞の分化を調節し、IL-17などの他のサイトカインの発現を促進し、T細胞の活性を高める。さらに、活性化されたRORγtは、免疫系のさまざまな遺伝子の発現を調節し、細胞チェックポイント受容体におけるPD-1の発現を阻害し、それによって免疫抑制を減少させ、抗癌活性を増加させることができる(Oncoimmunology. 2016 Nov 4、5(12)：e1254854； ACS Chem Biol. 2016 Apr 15、11(4)：1012-8)。LYC-55716は現在臨床フェーズIIに入っているが、このターゲットに関連する薬はまだ非常に少なく、市場には薬はない。開示された特許出願として、たとえば、WO2015171558、WO2008152260、WO2007068580、WO2007068579、WO2005056516、WO2005056510、WO2005066116およびWO00228810が挙げられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
患者に新規で効果的な抗癌剤を提供するために、新規でより効率的なRORγtアゴニストの開発を継続する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、RORをアゴナイズする顕著な効果を示す式(I)で表される構造を有するインドール−ホルムアミド化合物を設計した。RORアゴニストの研究中に、本発明者らは、本発明の式(I)の化合物において、環Aのオルト基の変化が、その調節効果を変更することができることも発見している。環Aのオルト基が小さな立体障害(Hなど)を持つ基である場合、式(I)の化合物は逆アゴニストである。環Aのオルト基が大きな立体障害を有する基、たとえば、ハロアルキル(トリフルオロメチルなど)、アルキル(エチルなど)およびハロアルコキシ(トリフルオロメトキシなど)である場合、式(I)の化合物は、RORアゴニストである。本発明は、本発明の化合物が単独で投与された場合に良好な抗腫瘍活性を示す薬力学的試験も提供する。さらに、本発明の化合物は、PD-1抗体と組み合わせて投与された場合に相乗効果を示し、免疫療法の有効性を改善する新規な方法をもたらす。
【０００７】
発明の概略
本発明の目的は、式(I)：
【化１】
2020525419.tif 000003
[式中、
2020525419.tif 000004
は、二重結合または単結合であり；
G1、G2およびG3は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、C、CH、CH2およびNからなる群から選択され；
環Aは、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され；
各R1は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
R2は、ハロアルキルであり；
R3は、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、ハロゲン、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アルコキシおよびアミノからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
各R4は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、からなる群から選択され水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール；
R5は、水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、NR10R11、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アミノ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
各R6は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
R7は、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択され、ここで、アルキルは、ハロゲン、ニトロ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；
R8およびR9は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、アミノ、ニトロ、ヒドロキシおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択され；
R10およびR11は、同一もしくは異なり、それぞれ独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
nは、0、1、2、3または4であり；
sは、0、1、2または3であり；および
tは、0、1、2または3である]
の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を提供することである。
【０００８】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物は、式(II)：
【化２】
2020525419.tif 000005
[式中、
Raは、水素またはアルキルであり；
2020525419.tif 000006
、環A、G1〜G3、R1、R4〜R7、n、sおよびtは、式(I)と同意義である]
の化合物である。
【０００９】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物は、式(II)：
【化３】
2020525419.tif 000007
[式中、
Raは、水素またはアルキルであり；
2020525419.tif 000008
、環A、G1〜G3、R1、R4〜R7、n、sおよびtは、式(I)と同意義である]
の化合物である。
【００１０】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物は、下記式(I')：
【化４】
2020525419.tif 000009
[式中、環A、R1〜R9、n、sおよびtは、式(I)と同意義である]
の化合物である。
【００１１】
本発明のもう1つの好ましい実施態様では、式(II)の化合物は、下記式(II')：
【化５】
2020525419.tif 000010
[式中、環A、R1、R4〜R7、n、sおよびtは、式(II)と同意義である]
の化合物である。
【００１２】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、環Aは、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、ピラゾリルおよびモルホリニルからなる群から選択される。
【００１３】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、
【化６】
2020525419.tif 000011
は、
【化７】
2020525419.tif 000012
からなる群から選択される。
【００１４】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物は、式(III)：
【化８】
2020525419.tif 000013
[式中、R1、R5〜R7、nおよびtは、式(I)と同意義である]
の化合物である。
【００１５】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物は、式(IV)：
【化９】
2020525419.tif 000014
[式中、R1、R5〜R7、nおよびtは、式(I)と同意義である]
の化合物である。
【００１６】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、R1は、水素、ハロゲンおよびアルキルからなる群から選択される。
【００１７】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、R5は、アルキル、NR10R11およびシクロアルキルからなる群から選択され、ここで、アルキルおよびシクロアルキルはそれぞれ独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、アルキル、アミノ、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群から選択される1つ以上の置換基によって任意に置換され；R10およびR11は、式(I)と同意義である。
【００１８】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、R5は、エチル、シクロプロピル、シクロプロピルメチルおよび-NH-シクロプロピルからなる群から選択される。
【００１９】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、R6は、水素またはハロゲンである。
【００２０】
本発明の好ましい実施態様では、式(I)の化合物中、R7は、アルキル、シクロアルキルおよびハロアルキルからなる群から選択される。
【００２１】
典型的な式(I)の化合物として、以下の化合物：
【表１−１】
2020525419.tif 000015
【表１−２】
2020525419.tif 000016
【表１−３】
2020525419.tif 000017
【表１−４】
2020525419.tif 000018
またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
本発明は、治療有効量の式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、ならびに1つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物に関する。本発明はまた、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合するステップを含む、医薬組成物の製造方法にも関する。本発明の1つの実施態様では、医薬組成物は、抗PD-1抗体、好ましくは抗マウスPD-1抗体をさらに含む。
【００２３】
本発明はさらに、RORアゴニストの製造における、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、あるいはそれを含む医薬組成物の使用に関する。
【００２４】
本発明はさらに、腫瘍または癌の予防および/または治療用薬剤の製造におけるRORアゴニストとしての、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物の使用に関する。
【００２５】
本発明はさらに、腫瘍または癌を予防および/または治療するための薬剤の製造における、抗PD-1抗体と組み合わせての、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩(RORアゴニストとして)、またはそれを含む医薬組成物の使用に関する。
【００２６】
本発明はさらに、薬剤としての使用のための、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物に関する。
【００２７】
本発明はまた、RORアゴニストとしての使用のための、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物に関する。
【００２８】
本発明はまた、腫瘍または癌を予防および/または治療するための薬剤の製造における、RORとしての使用のための、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物に関する。
【００２９】
本発明はまた、腫瘍または癌の予防および/または治療における使用のための、式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれらを含む医薬組成物と、抗PD-1抗体との組み合わせに関する。
【００３０】
本発明はまた、RORアゴニストとしての治療有効量の式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、腫瘍または癌を予防および/または治療する方法に関する。
【００３１】
本発明はまた、治療有効量の式(I)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩、またはそれを含む医薬組成物ならびに抗PD-1抗体を、それを必要とする患者に投与するステップを含む、腫瘍または癌を予防および/または治療する方法に関する。
【００３２】
有効成分を含む医薬組成物は、経口投与に適した形態、たとえば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬または軟カプセル、シロップまたはエリキシルでありうる。経口組成物は、医薬組成物を調製するための当該技術分野で既知の任意の方法に従って製造することができる。そのような組成物は、心地よい味の良い医薬製剤を提供するために、甘味料、香味料、着色料および防腐剤からなる群から選択された1つ以上の成分を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適した非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合された有効成分を含む。これらの賦形剤は、不活性賦形剤、造粒剤、崩壊剤、結合剤および滑沢剤でありうる。錠剤はコーティングされていないか、または既知の技術によりコーティングされて、薬物の味をマスクするか、または胃腸管での有効成分の崩壊と吸収を遅延させることができ、それにより長期間にわたる徐放性が提供される。
【００３３】
経口製剤を、有効成分が不活性固体希釈剤と混合されるか、または有効成分が水溶性担体または油性媒体と混合される軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【００３４】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された有効成分を含む。そのような賦形剤は、懸濁化剤、分散剤または湿潤剤である。水性懸濁液は、1つ以上の防腐剤、1つ以上の着色料、1つ以上の香味料、および1つ以上の甘味料も含むことができる。
【００３５】
油性懸濁液は、有効成分を植物油または鉱物油に懸濁させることによりって製剤化することができる。油性懸濁液には、増粘剤を含めることができる。前述の甘味料および香味料を加えて、味の良い製剤を提供することができる。これらの組成物を、酸化防止剤を添加することによって保存することができる。
【００３６】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルジョンの形態でもありうる。油相は、植物油、または鉱油、またはそれらの混合物でありうる。適切な乳化剤は、天然に存在するリン脂質でありうる。エマルジョンは、甘味料、香味料、防腐剤および酸化防止剤を含むこともできる。そのような製剤は、粘滑剤、防腐剤、着色料および酸化防止剤を含むこともできる。
【００３７】
本発明の医薬組成物は、無菌の注射可能な水溶液の形態でありうる。使用されうる許容可能なビヒクルまたは溶媒は、水、リンゲル液または等張性塩化ナトリウム溶液である。滅菌注射用製剤は、有効成分が油相に溶解している滅菌注射用水中油型マイクロエマルジョンでありうる。注射液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射により患者の血流に導入されうる。あるいは、溶液およびマイクロエマルジョンは、本発明の化合物の一定の循環濃度を維持する方法で投与されるのが好ましい。この一定の濃度を維持するために、連続静脈内送達デバイスを使用することができる。そのようなデバイスの一例は、Deltec CADD-PLUS. TM. 5400静脈注射ポンプである。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、筋肉内および皮下投与のための滅菌注射用水性または油性懸濁液の形態でありうる。そのような懸濁液は、既知の技術に従って、上記のような適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤とともに製剤化することができる。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒で調製された滅菌注射用溶液または懸濁液でもありうる。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒体として容易に使用されうる。この目的のために、任意のブレンドした固定油を使用することができる。さらに、脂肪酸もまた注射剤の調製に使用されうる。
【００３９】
本発明の化合物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与することができる。これらの医薬組成物は、薬物を、常温では固体であるが直腸内では液体であり、それにより直腸内で融解して薬物を放出する、適切な非刺激性賦形剤と混合することにより製造することができる。
【００４０】
薬物の投与量は、以下の因子を含むがこれらに限定されないさまざまな因子に依存することは、当業者に周知である：特定の化合物の活性、患者の年齢、患者の体重、患者の健康状態、患者の行動、患者の食事、投与時間、投与経路、排出率、薬物の組み合わせなど。さらに、治療モード、式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩の種類の毎日の用量などの最適な治療は、従来の治療計画によって検証されうる。
【００４１】
定義
他に 明記されない限り、本明細書および請求の範囲に使用される用語は、下記の意味を有する。
【００４２】
用語「アルキル」は、1〜20個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖基である飽和脂肪族炭化水素基、好ましくは、1〜12個の炭素原子を有するアルキル、およびより好ましくは、1〜6個の炭素原子を有するアルキルを示す。非限定的例として、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、n-ペンチル、1,1-ジメチルプロピル、1,2-ジメチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、1-エチルプロピル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、n-ヘキシル、1-エチル-2-メチルプロピル、1,1,2-トリメチルプロピル、1,1-ジメチルブチル、1,2-ジメチルブチル、2,2-ジメチルブチル、1,3-ジメチルブチル、2-エチルブチル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、4-メチルペンチル、2,3-ジメチルブチル、n-ヘプチル、2-メチルヘキシル、3-メチルヘキシル、4-メチルヘキシル、5-メチルヘキシル、2,3-ジメチルペンチル、2,4-ジメチルペンチル、2,2-ジメチルペンチル、3,3-ジメチルペンチル、2-エチルペンチル、3-エチルペンチル、n-オクチル、2,3-ジメチルヘキシル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、2,2-ジメチルヘキシル、3,3-ジメチルヘキシル、4,4-ジメチルヘキシル、2-エチルヘキシル、3-エチルヘキシル、4-エチルヘキシル、2-メチル-2-エチルペンチル、2-メチル-3-エチルペンチル、n-ノニル、2-メチル-2-エチルヘキシル、2-メチル-3-エチルヘキシル、2,2-ジエチルペンチル、n-デシル、3,3-ジエチルヘキシル、2,2-ジエチルヘキシル、およびそのさまざまな分枝異性体が挙げられる。より好ましくは、アルキル基は、1〜6個の炭素原子を有する低級アルキルであり、非限定的例として、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、n-ペンチル、1,1-ジメチルプロピル、1,2-ジメチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、1-エチルプロピル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、n-ヘキシル、1-エチル-2-メチルプロピル、1,1,2-トリメチルプロピル、1,1-ジメチルブチル、1,2-ジメチルブチル、2,2-ジメチルブチル、1,3-ジメチルブチル、2-エチルブチル、2-メチルペンチル、3-メチルペンチル、4-メチルペンチル、2,3-ジメチルブチルなどが挙げられる。アルキル基は、置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、任意の利用可能な結合点にて置換されうる。置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、オキソ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から選択される1つ以上の基である。
【００４３】
用語「アルコキシ」は、-O-(アルキル)または-O-(非置換シクロアルキル)基を示し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは、前記と同意義である。アルコキシの非限定的例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが挙げられる。アルコキシは、任意に置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
【００４４】
用語「シクロアルキル」は、3〜20個の炭素原子、好ましくは、3〜12個の炭素原子、およびより好ましくは、3〜6個の炭素原子を有する飽和または部分不飽和単環式または多環式炭化水素置換基を示す。単環式シクロアルキルの非限定的例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニルl、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチルなどが挙げられる。多環式シクロアルキルとして、スピロ環、縮合環または架橋環を有するシクロアルキルが挙げられる。
【００４５】
用語「スピロシクロアルキル」は、1つの共有炭素原子(スピロ原子と称する)を介して結合した個々の環を有する5〜20員の多環式基を示し、ここで、環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さない。スピロシクロアルキルは、好ましくは、6〜14員のスピロシクロアルキル、およびより好ましくは、7〜10員のスピロシクロアルキルである。環間で共有されたスピロ原子の数によって、スピロシクロアルキルを、モノ-スピロシクロアルキル、ジ-スピロシクロアルキル、またはポリ-スピロシクロアルキに分類することができ、スピロシクロアルキルは、好ましくは、モノ-スピロシクロアルキルまたはジ-スピロシクロアルキル、およびより好ましくは、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員、または5員/6員のモノ-スピロシクロアルキルである。スピロシクロアルキルの非限定的例として：
【化１０】
2020525419.tif 000019
が挙げられる。
【００４６】
用語「縮合シクロアルキル」は、5〜20員のすべて炭素の多環式基を示し、ここで、環系中の各環は、もう1つの環と隣接するペアの炭素原子を共有し、ここで、環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さない。縮合シクロアルキルは、好ましくは、6〜14員の縮合シクロアルキル、およびより好ましくは、7〜10員の縮合シクロアルキルである。員環の数によって、縮合シクロアルキルを、二環式、三環式、四環式または多環式縮合シクロアルキルに分類することができ、縮合シクロアルキルは、好ましくは、二環式または三環式縮合シクロアルキル、およびより好ましくは、5員/5員、または5員/6員の二環式縮合シクロアルキルである。縮合シクロアルキルの非限定的例として：
【化１１】
2020525419.tif 000020
が挙げられる。
【００４７】
用語「架橋シクロアルキル」は、5〜20員のすべて炭素の多環式基を示し、ここで、環系中の2つの環ごとに2つの離れた炭素原子を共有し、ここで、環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さない。架橋シクロアルキルは、好ましくは、6〜14員の架橋シクロアルキル、およびより好ましくは、7〜10員の架橋シクロアルキルである。員環の数によって、架橋シクロアルキルを、二環式、三環式、四環式または多環式架橋シクロアルキルに分類することができ、架橋シクロアルキルは、好ましくは、二環式、三環式または四環式 架橋シクロアルキル、およびより好ましくは、二環式または三環式架橋シクロアルキルである。架橋シクロアルキルの非限定的例として：
【化１２】
2020525419.tif 000021
が挙げられる。
【００４８】
シクロアルキル環は、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合する環は、シクロアルキルである。非限定的例として、インダニル、テトラヒドロナフチル、ベンゾシクロヘプチルなどが挙げられる。シクロアルキルは、任意に置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、オキソ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
【００４９】
用語「ヘテロシクリル」は、3〜20員の飽和または部分不飽和単環式または多環式炭化水素基を示し、ここで、ここで、1つ以上の環原子は、N、OおよびS(O)m(ここで、mは0〜2の整数である)からなる群から選択されるヘテロ原子であり、ただし、環中の-O-O-、-O-S-または-S-S-は除外され、残りの環原子は、炭素原子である。好ましくは、ヘテロシクリルは、3〜12個の環原子を有し、ここで、1〜4個の原子はヘテロ原子であり；より好ましくは、3〜8個の環原子を有し、ここで、1〜3個の原子はヘテロ原子であり；および最も好ましくは、3〜6個の環原子を有し、ここで、1〜2個の原子はヘテロ原子である。単環式ヘテロシクリルの非限定的例として、ピロリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピロリル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニル、ピラニルなど、が挙げられ、好ましくは、ピペリジニル、ピペラジニルまたはモルホリニルである。多環式ヘテロシクリルとして、スピロ環、縮合環または架橋環を有するヘテロシクリルが挙げられる。
【００５０】
用語「スピロヘテロシクリル」は、1つの共有された原子(スピロ原子と称する)を介して結合した個々の環を有する5〜20員の多環式ヘテロシクリル基を示し、ここで、1つ以上の環原子は、N、OおよびS(O)m(ここで、mは0〜2の整数である)からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素原子であり、ここで、環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さない。スピロヘテロシクリルは、好ましくは、6〜14員のスピロヘテロシクリル、およびより好ましくは、7〜10員のスピロヘテロシクリルである。環間で共有されるスピロ原子の数によって、スピロヘテロシクリルを、モノ-スピロヘテロシクリル、ジ-スピロヘテロシクリル、またはポリ-スピロヘテロシクリルに分類することができ、スピロヘテロシクリルは、好ましくは、モノ-スピロヘテロシクリルまたはジ-スピロヘテロシクリル、およびより好ましくは、3員/6員、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員、または5員/6員のモノ-スピロヘテロシクリルである。スピロヘテロシクリルの非限定的例として：
【化１３】
2020525419.tif 000022
が挙げられる。
【００５１】
用語「縮合ヘテロシクリル」は、5〜20員の多環式ヘテロシクリル基を示し、ここで、環系中の各環は、もう1つの環と隣接するペアの原子を共有し、ここで、1つ以上の環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さず、ここで、1つ以上の環原子は、N、OおよびS(O)m(ここで、mは0〜2の整数である)からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素原子である。縮合ヘテロシクリルは、好ましくは、6〜14員の縮合ヘテロシクリル、およびより好ましくは、7〜10員の縮合ヘテロシクリルである。員環の数によって、縮合ヘテロシクリルを、二環式、酸環式、四環式または多環式縮合ヘテロシクリルに分類することができ、縮合ヘテロシクリルは、好ましくは、二環式または三環式縮合ヘテロシクリル、およびより好ましくは、5員/5員または5員/6員の二環式 縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの非限定的例として：
【化１４】
2020525419.tif 000023
【化１５】
2020525419.tif 000024
が挙げられる。
【００５２】
用語「架橋ヘテロシクリル」は、5〜14員の多環式ヘテロシクリル基を示し、ここで、環系中の2つの環ごとに2つの離れた炭素原子を共有し、ここで、環は、1つ以上の二重結合を含むことができるが、いずれの環も完全に共役したπ電子系を有さず、ここで、1つ以上の環原子は、N、OおよびS(O)m(ここで、mは0〜2の整数である)からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素原子である。架橋ヘテロシクリルは、好ましくは、6〜14員の架橋ヘテロシクリル、およびより好ましくは、7〜10員の架橋ヘテロシクリルである。員環の数によって、 架橋ヘテロシクリルを、二環式、三環式、四環式または多環式架橋ヘテロシクリルに分類することができ、架橋ヘテロシクリルは、好ましくは、二環式、三環式または四環式架橋ヘテロシクリル、およびより好ましくは、二環式または三環式架橋ヘテロシクリルである。架橋ヘテロシクリルの非限定的例として：
【化１６】
2020525419.tif 000025
が挙げられる。
【００５３】
ヘテロシクリル環は、アリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合する環は、ヘテロシクリルである。その非限定的例として：
【化１７】
2020525419.tif 000026
が挙げられる。
【００５４】
ヘテロシクリルは、任意に置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、オキソ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
【００５５】
用語「アリール」は、共役したπ電子系を有する6〜14員のすべて炭素の単環式環または多環式縮合環(すなわち、環系中の各環が、環系中のもう1つの環と隣接するペアの炭素原子を共有する)を示し、好ましくは、6〜10員のアリール、たとえば、フェニルおよびナフチルである。アリールは、より好ましくは、フェニルである。アリール環は、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合する環は、アリールである。その非限定的例として：
【化１８】
2020525419.tif 000027
が挙げられる。
【００５６】
アリールは、置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
【００５７】
用語「ヘテロアリール」は、O、SおよびNからなる群から選択される1〜4個のヘテロ原子を有する5〜14員のヘテロ芳香族系を示す。ヘテロアリールは、好ましくは、1〜3個のヘテロ原子を有する5〜10員のヘテロアリール、より好ましくは、1〜2個のヘテロ原子を有する5または6員のヘテロアリール；好ましくは、たとえば、イミダゾリル、フリル、チエニル、チアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ピロリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラジニルなど、好ましくは、イミダゾリル、テトラゾリル、ピリジル、チエニル、ピラゾリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、およびより好ましくは、ピリジルである。ヘテロアリール環は、アリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合する環は、ヘテロアリール環である。その非限定的例として：
【化１９】
2020525419.tif 000028
が挙げられる。
【００５８】
ヘテロアリールは、任意に置換または非置換でありうる。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオ、カルボキシおよびアルコキシカルボニルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
【００５９】
用語「ハロアルキル」は、1つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基を示し、ここで、アルキルは、前記と同意義である。
【００６０】
用語「ハロアルコキシ」は、1つ以上のハロゲンで置換されたアルコキシ基を示し、ここで、アルコキシは、前記と同意義である。
【００６１】
用語「ヒドロキシアルキル」は、1つ以上のヒドロキシで置換されたアルキル基を示し、ここで、アルキルは、前記と同意義である。
【００６２】
用語「ヒドロキシ」は、-OH基を示す。
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を示す。
用語「アミノ」は、-NH2基を示す。
用語「シアノ」は、-CN基を示す。
用語「ニトロ」は、-NO2基を示す。
用語「オキソ」は、=O基を示す。
用語「カルボニル」は、C=O基を示す。
用語「カルボキシ」は、-C(O)OH基を示す。
【００６３】
用語「アルコキシカルボニル」は、-C(O)O(アルキル)または-C(O)O(シクロアルキル)基を示し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは、前記と同意義である。
【００６４】
用語「ハロゲン化アシル」は、-C(O)-ハロゲン基を含む化合物を示す。
【００６５】
「任意の」または「任意に」は、その後に記載されるイベントまたは状況が発生する可能性があるが、発生する必要はないことを意味し、そのような記載には、イベントまたは状況が発生するか、または発生しない状況が含まれる。たとえば、「アルキルで任意に置換されたヘテロシクリル」は、アルキル基が存在する可能性があるが、存在する必要はないことを意味し、そのような記載には、ヘテロシクリルがアルキルで置換される状況およびヘテロシクリルがアルキルで置換されない状況が含まれる。
【００６６】
「置換された」は、対応する数の置換基で独立して置換された、基中の1つ以上の水素原子、好ましくは、5個まで、およびより好ましくは、1〜3個の水素原子を示す。置換基が可能な化学的位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は、過剰な努力を払うことなく、実験または理論によって置換が可能か不可能かを判断することができる。たとえば、遊離水素を有するアミノまたはヒドロキシと、不飽和結合を有する炭素原子(オレフィンなど)との組み合わせは、不安定である可能性がある。
【００６７】
「医薬組成物」は、1つ以上の本発明の化合物またはその生理学的/薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグと他の化学成分、および生理学的/薬学的に許容される担体および賦形剤などの他の成分との混合物を示す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することであり、これは生物学的活性を示すように有効成分の吸収を促す。
【００６８】
「薬学的に許容される塩」は、哺乳動物において安全かつ有効であり、所望の生物活性を有する本発明の化合物の塩を示す。
【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】C57BL/6マウスのMC38結腸直腸腫瘍増殖に対する、単独で、または抗マウスPD-1抗体と組み合わせて投与された実施例4の化合物の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
発明の詳細な記載
以下の実施例を参照して本発明をさらに説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではない。
【実施例】
【００７１】
化合物の構造は、核磁気共鳴(NMR)および/または質量分析(MS)により同定された。NMRシフト(δ)は、10-6(ppm)で表される。NMRは、Bruker AVANCE-400マシンで測定した。測定に使用した溶媒は、重水素化ジメチルスルホキシド(DMSO-d6)、重水素化クロロホルム(CDCl3)および重水素化メタノール(CD3OD)であり、内部標準は、テトラメチルシラン(TMS)であった。
【００７２】
MSは、FINNIGAN LCQAd(ESI)質量分析計(メーカー：Thermo、タイプ：Finnigan LCQ Advantage MAX)によって測定した。
【００７３】
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)は、Agilent 1200DAD高圧液体クロマトグラフ(Sunfire C18 150 x 4.6 mmクロマトグラフカラム)およびWaters 2695-2996高圧液体クロマトグラフ(Gimini C18 150 x 4.6 mmクロマトグラフカラム)で測定した。
【００７４】
キラルHPLC分析は、(CD3OD)(島津製作所)またはSFC分析(Berger Instruments Inc.)で測定した。
【００７５】
煙台黄海HSGF254または青島GF254シリカゲルプレートを薄層シリカゲルクロマトグラフィー(TLC)プレートとして使用した。TLCで使用されるシリカゲルプレートの寸法は、0.15 mm〜0.2 mmであり、生成物精製で使用されるシリカゲルプレートの寸法は、0.4 mm〜0.5 mmであった。
【００７６】
煙台黄海200から300メッシュのシリカゲルを、カラムクロマトグラフィーの担体として全般的に使用した。
【００７７】
Prep Star SD-1(Varian Instruments Inc.)またはSFC-multigram(Berger Instruments Inc.)をキラル分取カラムクロマトグラフィーに使用した。
【００７８】
使用されたCombiFlash迅速調製器具は、Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)であった。
【００７９】
平均キナーゼ阻害率およびIC50値は、NovoStar ELISA(BMG Co.、ドイツ)によって測定した。
【００８０】
本発明の既知の出発物質は、当該技術分野で既知の方法により調製することができるか、またはABCR GmbH & Co. KG、Acros Organnics、Aldrich Chemical Company、Accela ChemBio Inc.、Dari chemical Company、またはShanghai Bide Pharmatech Ltd.などから購入することができる。
【００８１】
特に明記しない限り、反応は、アルゴン雰囲気または窒素雰囲気下で行った。
【００８２】
「アルゴン雰囲気」または「窒素雰囲気」とは、反応フラスコがアルゴンまたは窒素バルーン(約1 L)が具備していることを意味する。
【００８３】
「水素雰囲気」とは、反応フラスコが水素バルーン(約1 L)を具備していることを意味する。
【００８４】
加圧水素化反応は、Parr 3916EKX水素化機器およびQinglan QL-500水素発生器またはHC2-SS水素化機器で実施した。
【００８５】
水素化反応では、全般的に、反応系を真空にし、水素を充填し、上記の操作を3回繰り返した。
【００８６】
CEM Discover-S 908860タイプのマイクロ波反応器をマイクロ波反応に使用した。
【００８７】
他に 明記しない限り、溶液は、水溶液を示す。
【００８８】
特に明記しない限り、反応温度は、20℃〜30℃の室温である。
【００８９】
実施例における反応プロセスを、薄層クロマトグラフィー(TLC)によってモニターした。反応に使用した展開溶媒、カラムクロマトグラフィーの溶離液系、および化合物の精製のための薄層クロマトグラフィーの展開溶媒系は、A：ジクロロメタン/メタノール系、およびB：n-ヘキサン/酢酸エチル系を含む。溶媒の体積比を、化合物の極性に応じて調整し、少量のトリエチルアミンなどのアルカリ性試薬または酢酸などの酸性試薬を調整のために追加することができる。
【００９０】
実施例1
N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-イソプロピル-2-(2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 1
【化２０】
2020525419.tif 000029
【化２１】
2020525419.tif 000030
【００９１】
ステップ1
メチル 2-(2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 1c
メチル 1H-インドール-5-カルボキシレート 1b(400 mg、2.29 mmol)、1-(ブロモメチル)-2-(トリフルオロメチル)ベンゼン 1a(574 mg、2.4 mmol)、ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)クロリド(118 mg、0.46 mmol)、ビシクロ[2.2.1]-2-ヘプテン(429 mg、4.6 mmol)および重炭酸ナトリウム(384 mg、4.6 mmol)を、10 mLのN,N-ジメチルアセトアミドに添加した。反応溶液を70℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で16時間撹拌した。反応完了後、反応溶液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、水および飽和塩化ナトリウム溶液で連続的に洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物1cを得た(570 mg、収率：74.9%)。
【００９２】
ステップ2
メチル 1-イソプロピル-2-(2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 1d
化合物1c(500 mg、1.5 mmol)を、15 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、60%水素化ナトリウム(120 mg、3.0 mmol)を添加し、室温にて30分間撹拌した。次いで、反応溶液に、2-ヨードプロパン(1.02 g、6.0 mmol)を添加し、密封した反応管で70℃にて16時間反応させた。反応溶液を室温に冷却し、水を注ぎ入れ、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、水で1回洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、展開溶媒系Bを用いる薄層クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物1dを得た(80 mg、収率：14.2%)。
【００９３】
ステップ3
1-イソプロピル-2-(2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボン酸 1e
化合物1d(80 mg、0.21 mmol)を、5 mLのメタノールおよび2 mLのテトラヒドロフランの混合溶媒に溶解した。溶液に、3 mLの4N水酸化ナトリウム溶液を添加し、60℃にて1時間撹拌した。反応溶液を濃塩酸で中和し、水を添加し、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物1eを得(70 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
【００９４】
ステップ4
N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-イソプロピル-2-(2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 1
2-アミノ-2-(4-エチルスルホニルフェニル)エタノール 1f(67 mg、0.29 mmol、特許出願「WO2016061160」に開示の方法にしたがって調製)、粗化合物1e(70 mg、0.193 mmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボニルジイミド塩酸塩(56 mg、0.29 mmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(40 mg、0.29 mmol)およびトリエチルアミン(101 mg、1 mmol)を、10 mLのジクロロメタンに添加した。反応溶液を室温にて16時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Aを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して標記化合物1を得た(40 mg、収率：36.0%)。
【００９５】
MS m/z(ESI)：573.5 [M+1]。
1H NMR(400HMz、CDCl3)δ 8.12(d、1H)、7.92(d、2H)、7.76(d、1H)、7.69(dd、1H)、7.64(d、2H)、7.59(d、1H)、7.47-7.38(m、2H)、7.14-7.09(m、2H)、6.35(s、1H)、5.41-5.37(m、1H)、4.49-4.42(m、1H)、4.35(s、2H)、4.12-4.08(m、2H)、3.14(q、2H)、2.37(brs、1H)、1.52(d、6H)、1.32(t、3H)。
【００９６】
実施例2
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 2
【化２２】
2020525419.tif 000031
【化２３】
2020525419.tif 000032
【００９７】
ステップ1
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 2b
化合物1b(7 g、39.96 mmol)および1-(ブロモメチル)-4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンゼン 2a(13.11 g、47.95 mmol)を、200 mLのN,N-ジメチルアセトアミドに溶解した。次いで、ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)クロリド(2.07 g、7.99 mmol)、ビシクロ[2.2.1]-2-ヘプテン(3.76 g、39.96 mmol)および炭酸ナトリウム(8.47 g、79.92 mmol)を添加した。反応溶液を80℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で17時間撹拌した。反応溶液を冷却し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物2bを得た(13 g、収率：88.47%)。
MS m/z(ESI)：368.1 [M+1]。
【００９８】
ステップ2
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 2c
化合物2b(0.3 g、815.77 μmol)、1-ブロモ-2-フルオロエタン(310.7 mg、2.45 mmol)を、10 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。反応溶液に、炭酸セシウム(797.38 mg、2.45 mmol)を添加し、マイクロ波下で100℃にて1時間反応させた。反応溶液を冷却し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物2cを得た(0.25 g、収率：74.06%)。
MS m/z(ESI)：414.1 [M+1]。
【００９９】
ステップ3
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 2d
化合物2c(0.25 g、604.17 μmol)を、20 mLのメタノールに溶解した。溶液に、1.5 mLの4N水酸化ナトリウム溶液を添加し、1時間還流撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、1M塩酸を滴下して、pHを3〜4に調節した。反応溶液に、20 mLの水および20 mLの酢酸エチルを添加し、酢酸エチル(20mL×2)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Aを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物2dを得た(0.24 g、収率：99.4%)。
MS m/z(ESI)：400.1 [M+1]。
【０１００】
ステップ4
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 2
化合物2d(10 mg、25.01 μmol)を、2 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。化合物1f(8.67 mg、37.83 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(6.47 mg、50.03 μmol)、次いで、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(11.77 mg、50.03 μmol)を添加した。反応溶液を室温にて2時間撹拌し、減圧濃縮し、得られる残渣を、を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物2を得た(7.9 mg、収率：51.7%)。
【０１０１】
MS m/z(ESI)：611.5 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.13(s、1H)、7.93-7.90(m、2H)、7.77-7.75(m、2H)、7.64-7.62(m、2H)、7.47-7.45(m、1H)、7.37-7.35(m、1H)、7.16-7.14(m、1H)、7.13-7.11(m、1H)、6.33(s、1H)、5.40-5.38(m、1H)、4.70-4.68(m、1H)、4.57-4.56(m、1H)、4.37-4.35(m、1H)、4.35(s、2H)、 4.30-4.31(m、1H)、4.11-4.06(m、2H)、3.16-3.11(m、2H)、1.33-1.29(m、3H)。
【０１０２】
実施例3、4
(S)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 3
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 4
【化２４】
2020525419.tif 000033
化合物2(120 mg、0.197 mmol)をキラル分離した(分離条件：スーパーキラルS-AD(Chiralway)、2cm I.D. × 25 cm 長、5 μm、移動相：二酸化炭素/エタノール/ジエチルアミン＝60/40/0.05(v/v/v)、流速：50 g/分)。対応する画分を集め、減圧濃縮して、標記化合物3(52 mg)および標記化合物4(52 mg)を得た。
【０１０３】
化合物3：
MS m/z(ESI)：610.9 [M+1]。
キラルHPLC分析：保持時間7.882分間、キラル純度：100%(クロマトグラフィーカラム：Lux Amylose-1(AD)4.6×150mm 5 μm(ガードカラムを具備)；移動相：n-ヘキサン/エタノール(0.1%のジエチルアミンを含む)= 60/40(v/v))。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.13(s、1H)、7.93-7.90(m、2H)、7.77-7.75(m、2H)、7.64-7.62(m、2H)、7.47-7.45(m、1H)、7.37-7.35(m、1H)、7.16-7.14(m、1H)、7.13-7.11(m、1H)、6.33(s、1H)、5.40-5.38(m、1H)、4.70-4.68(m、1H)、4.57-4.56(m、1H)、4.37-4.35(m、1H)、4.35(s、2H)、 4.31-4.30(m、1H)、4.11-4.06(m、2H)、3.16-3.11(m、2H)、1.33-1.29(m、3H)。
【０１０４】
化合物4：
MS m/z(ESI)：611.0 [M+1]。
キラルHPLC分析：保持時間11.747分間、キラル純度：100%(クロマトグラフィーカラム：Lux Amylose-1(AD)4.6×150mm 5 μm(ガードカラムを具備)；移動相：n-ヘキサン/エタノール(0.1%のジエチルアミンを含む)= 60/40(v/v))。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.12(s、1H)、7.93-7.91(m、2H)、7.76-7.74(m、2H)、7.65-7.63(m、2H)、7.47-7.45(m、1H)、7.37-7.35(m、1H)、7.15-7.11(m、2H)、6.33(s、1H)、5.39-5.38(m、1H)、4.70-4.69(m、1H)、4.59-4.56(m、1H)、4.37-4.36(m、1H)、4.35(s、2H)、 4.31-4.30(m、1H)、4.11-4.06(m、2H)、3.17-3.11(m、2H)、2.33(brs、1H)、1.34-1.30(m、3H)。
【０１０５】
実施例5
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 5
【化２５】
2020525419.tif 000034
【化２６】
2020525419.tif 000035
【０１０６】
ステップ1
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキシレート 5b
メチル 6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキシレート 5a(500 mg、2.59 mmol)、化合物2a(1.06 g、88 mmol)、ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)クロリド(67.15 mg、258.83 μmol)、ビシクロ[2.2.1]-2-ヘプテン(487.40 mg、5.18 mmol)および炭酸カリウム(714.38 mg、5.18 mmol)を、20 mLのN,N-ジメチルアセトアミドに添加した。反応溶液を80℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で16時間撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、ろ過した。ろ液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物5bを得た(600 mg、収率：60.1%)。
MS m/z(ESI)：386.1 [M+1]。
【０１０７】
ステップ2
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 5c
化合物5b(100 mg、259.24 μmol)、1-フルオロ-2-ヨード-エタン(67.64 mg、388.86 μmol)および炭酸セシウム(254.32 mg、777.72 μmol)を、5 mLのアセトニトリルに添加した。反応溶液を、マイクロ波条件下で100℃にて1時間反応させた。反応溶液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物5cを得た(80 mg、収率：71.5%)。
MS m/z(ESI)：432.1 [M+1]。
【０１０８】
ステップ3
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 5d
化合物5c(80 mg、185.28 μmol)および水酸化ナトリウム(37.05 mg、926.39 μmol)を、6 mLのメタノールおよび0.5 mLの水の混合溶媒に添加した。反応溶液を60℃にて2時間時間撹拌した。メタノールを減圧除去し、得られる残渣に、1M希塩酸を滴下してpHを〜3に調節した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物5dを得(50 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：418.0 [M+1]。
【０１０９】
ステップ4
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 5
(R)-2-アミノ-2-(4-(エチルスルホニル)フェニル)エタノール 5e(16.47 mg、71.81 μmol、特許出願「WO2016061160」に開示の方法にしたがって調製)、粗化合物5d(30 mg、71.81 μmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボニルジイミド塩酸塩(20.57 mg、107.72 μmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(16.39 mg、107.72 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(27.84 mg、215.43 μmol)を、3 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに添加した。反応溶液を室温にて16時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物5を得た(19 mg、収率：42.1%)。
【０１１０】
MS m/z(ESI)：629.5 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.26(d、1H)、7.89(d、2H)、7.72-7.60(m、4H)、7.42(d、1H)、7.11-7.03(m、2H)、6.27(s、1H)、5.41-5.39(m、1H)、4.63-4.51(m、2H)、4.27-4.19(m、4H)、4.06-4.01(m、2H)、3.12-3.07(m、2H)、2.35(brs、1H)、1.30-1.27(m、3H)。
【０１１１】
実施例6
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-シクロプロピル-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキサミド 6
【化２７】
2020525419.tif 000036
【化２８】
2020525419.tif 000037
【０１１２】
ステップ1
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-シクロプロピル-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキシレート 6b
化合物5b(100 mg、259.24 μmol)、シクロプロピルボロン酸6a(44.54 mg、518.48 μmol)、2,2'-ビピリジン(48.59 mg、311.09 μmol)、酢酸銅(56.50 mg、311.09 μmol)および炭酸ナトリウム(54.95 mg、518.48 μmol)を、20 mLのテトラヒドロフランに添加した。反応溶液を、アルゴン雰囲気下60℃にて16時間撹拌し。反応溶液をろ過し、ろ液を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物6bを得た(80 mg、収率：72.47%)。
MS m/z(ESI)：426.1 [M+1]。
【０１１３】
ステップ2
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-シクロプロピル-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボン酸 6c
化合物6b(90 mg、211.37 μmol)および水酸化ナトリウム(42.27 mg、1.06 mmol)を、6 mLのメタノールおよび0.5 mLの水の混合溶媒に添加した。溶液を60℃にて2時間撹拌した。メタノールを減圧除去し、得られる残渣に、1M塩酸を滴下して、pHを〜3に調節した。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物6cを得(60 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：412.0 [M+1]。
【０１１４】
ステップ3
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-シクロプロピル-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキサミド 6
化合物5e(16.71 mg、72.86 μmol)、粗化合物6c(30 mg、72.86 μmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボニルジイミド塩酸塩(20.87 mg、109.28 μmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(16.63 mg、109.28 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(28.25 mg、218.57 μmol)を、3 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに添加した。反応溶液を室温にて16時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物6を得た(15 mg、収率：33.0%)。
【０１１５】
MS m/z(ESI)：623.5 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.23(d、1H)、7.91(d、2H)、7.71(d、2H)、7.62(d、2H)、7.42(d、1H)、7.28(d、1H)、7.03(d、1H)、6.17(s、1H)、5.40(s 、1H)、4.37(s 、2H)、4.08-4.04(m、2H)、3.14-3.10(m 、2H)、2.98-2.90(m、1H)、2.21(brs、1H),1.31-1.27(m、3H)、1.14-1.12(m、2H)、0.98-0.89(m、2H)。
【０１１６】
実施例7
N-((R)-1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-(トリフルオロメチル)モルホリノ)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 7
【化２９】
2020525419.tif 000038
【化３０】
2020525419.tif 000039
【０１１７】
ステップ1
4-((5-ブロモ-1H-インドール-2-イル)メチル)-3-(トリフルオロメチル)モルホリン 7c
5-ブロモ-1H-インドール-2-カルバルデヒド 7a(120 mg、0.54 mmol、「Journal of Medicinal Chemistry、2014、57(2)、364-377」に開示の公知の方法にしたがって調製)を、10 mLの1,2-ジクロロエタンに溶解した。溶液に、3-(トリフルオロメチル)モルホリン塩酸塩7b(120 mg、0.63 mmol)および5滴の酢酸を添加し、1.5時間撹拌した。反応溶液に、トリアセチルホウ水素化ナトリウム(240 mg、1.1 mmol)を添加し、16時間撹拌した。反応溶液に、飽和重炭酸ナトリウム 溶液を添加し、酢酸エチルで3回抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、溶離液系Bを用いるCombiFlash迅速調製器具により精製して、標記化合物7cを得た(150 mg、収率：76.5%)。
MS m/z(ESI)：363 [M+1]。
【０１１８】
ステップ2
4-((5-ブロモ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-2-イル)メチル)-3-(トリフルオロメチル)モルホリン 7d
化合物7c(80 mg、0.22 mmol)、1-フルオロ-2-ヨードエタン(60 μL)、炭酸セシウム(200 mg、0.61 mmol)および10 mLのN,N-ジメチルホルムアミドを、マイクロ波反応管に添加した。反応溶液をマイクロ波条件下で100℃にて1時間反応させた。反応溶液に、水を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるCombiFlash迅速調製器具により精製して、標記化合物7dを得た(92 mg、収率：100%)。
MS m/z(ESI)：409 [M+1]。
【０１１９】
ステップ3
1-(2-フルオロエチル)-2-((3-(トリフルオロメチル)モルホリノ)メチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 7e
化合物7d(28 mg、68 μmol)、モリブデンヘキサカルボニル(35 mg、133 μmol)、trans-ビス(アセタト)ビス[o-(ジ-o-トリホスフィノ)ベンジル]ジパラジウム(II)(14 mg、15 μmol)、トリ-tert-ブチル ホスフィンテトラフルオロボレート(14 mg、48 μmol)、1,8-ジアザビシクロウンデク-7-エン(50 μL)を、水(50 μL)および1,4-ジオキサン(0.5 mL)の混合溶媒に添加した。反応溶液をマイクロ波条件下で150℃にて15分間反応させた。反応溶液を、溶離液系Aを用いるCombiFlash迅速調製器具により精製して、標記化合物7eを得た(15 mg、収率：58%)。
MS m/z(ESI)：375 [M+1]。
【０１２０】
ステップ4
N-((R)-1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-(トリフルオロメチル)モルホリノ)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 7
化合物7e(18 mg、48 μmol)を、0.8 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解し、次いで、化合物5e(12 mg、52 μmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(40 μL)および2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(30 mg、78 μmol)を添加した。反応溶液を2時間撹拌し、次いで、高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物7を得た(6 mg、収率：21.4%)。
【０１２１】
MS m/z(ESI)：586 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.03(s、1H)、7.79(d、2H)、7.64(d、1H)、7.51(d、2H)、7.30(d、1H)、7.11(d、1H)、6.47(s、1H)、5.24(brs、1H)、4.75-4.73(m、1H)、4.62-4.37(m、3H)、4.12(d、1H)、4.05-3.81(m、4H)、3.81-3.51(m、3H)、3.08-2.87(m、4H)、2.38(d、1H)、1.20(t、3H)。
【０１２２】
実施例8
(R)-1-シクロプロピル-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 8
【化３１】
2020525419.tif 000040
【化３２】
2020525419.tif 000041
【０１２３】
ステップ1
メチル 4-アミノ-2-フルオロ-5-ヨードベンゾエート 8b
メチル 4-アミノ-2-フルオロベンゾエート(3.4 g、20.2 mmol、特許出願「WO2013068467」に開示の方法にしたがって調製)を、30 mLのジクロロメタンおよびメタノール(V：V=2：1)の混合溶媒に溶解した。溶液に、塩化ヨード(3.6 g、22.2 mmol)および炭酸カルシウム(4.03 g、40.4 mmol)を室温にて添加し、2時間撹拌した。反応溶液をろ過した。ろ液を飽和チオ硫酸ナトリウム溶液(50 mL×1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8bを得た(6.5 g、収率：100%)。
MS m/z(ESI)：296 [M+1]。
【０１２４】
ステップ2
メチル 2-フルオロ-5-ヨード-4-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)ベンゾエート 8c
化合物8b(6.5 g、20.2 mmol)を、100 mLのジクロロメタンに溶解した。溶液に、氷浴にて無水トリフルオロ酢酸(3.6 g、22.2 mmol)を添加し、1時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8cを得た(5.4 g、収率：69%)。
MS m/z(ESI)：392 [M+1]。
【０１２５】
ステップ3
メチル 2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキシレート 8e
化合物8c(2.28 g、5.8 mmol)およびtert-ブチルジメチル(2-プロピン-1-イルオキシ)シラン 8d(1.49 g、8.74 mmol、「Journal of the American Chemical Society、2016、138(24)、7532-7535」に開示の公知の方法にしたがって調製)を、10 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウムクロリド(0.61 g、0.88 mmol)、ヨウ化第一銅(0.222 g、1.17 mmol)およびトリエチルアミン(4.07 mL、29.2 mmol)を添加し、70℃にて4時間撹拌した。反応溶液に、40 mLの水を添加し、酢酸エチル(30 mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液(30 mL×1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8eを得た(1.29 g、収率：65%)。
MS m/z(ESI)：338 [M+1]。
【０１２６】
ステップ4
メチル 2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-1-シクロプロピル-6-フルオロ-1H-インドール-5-カルボキシレート 8f
化合物8e(0.633 g、1.88 mmol)およびシクロプロピルボロン酸(1.61 g、18.8 mmol)を、5 mLの1,2-ジクロロエタンに溶解した。溶液に、酢酸銅(1.43 g、7.88 mmol)、2,2-ビピリジン(1.23 g、7.88 mmol)および炭酸ナトリウム(0.84 g、7.88 mmol)を添加し、80℃にて16時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ過ケーキをジクロロメタンで洗浄した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8fを得た(350 mg、収率：50%)。
MS m/z(ESI)：378 [M+1]。
【０１２７】
ステップ5
メチル 1-シクロプロピル-6-フルオロ-2-(ヒドロキシメチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 8g
化合物8f(350 mg、0.927 mmol)を、10 mLのテトラヒドロフランに溶解した。溶液に、氷浴中、テトラヒドロフラン中のフッ化テトラブチアンモニウムの溶液(1.85 mL、1.85 mmol)を添加し、0℃にて2時間撹拌した。反応溶液に、10 mLの水を添加し、酢酸エチル(10 mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液(10 mL×1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8gを得た(230 mg、収率：68%)。
MS m/z(ESI)：264 [M+1]。
【０１２８】
ステップ6
メチル 1-シクロプロピル-6-フルオロ-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 8i
化合物8g(84 mg、0.32 mmol)および3-メチル-5-トリフルオロメチルピラゾールe 8h(192 mg、1.28 mmol、「Tetrahedron Letters、2016、57(14)、1555-1559」に開示の公知の方法にしたがって調製)を、10 mLのテトラヒドロフランに溶解した。溶液に、トリフェニルホスフィン(336 mg、1.85 mmol)およびジエチル アゾジカルボキシレート(200 μL、1.28 mmol)を室温にて添加し、16時間撹拌した。反応溶液に、30 mLの酢酸エチルを添加し、水(10 mL)および飽和塩化ナトリウム溶液(10 mL)で連続的に洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8iを得た(49 mg、収率：39%)。
MS m/z(ESI)：396 [M+1]。
【０１２９】
ステップ7
1-シクロプロピル-6-フルオロ-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 8j
化合物8i(50 mg、0.124 mmol)を、1 mLのメタノールに溶解した。溶液に、2 M 水酸化カリウム溶液(1 mL、2 mmol)を室温にて添加し、室温にて16時間撹拌した。反応溶液に、6 M塩酸を添加して、pHを1〜2に調節し、10 mLの水を添加し、酢酸エチル(10 mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液(10 mL×1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物を得8j(50 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：382 [M+1]。
【０１３０】
ステップ8
(R)-1-シクロプロピル-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 8
化合物8j(3.9 mg、0.01 mmol)および化合物5e(4 mg、0.015 mmol)を、1 mLのジクロロメタンに溶解した。溶液に、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(3.9 mg、0.02 mmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(2.7 mg、0.02 mmol)およびトリエチルアミン(7 μL、0.05 mmol)を室温にて添加し、室温にて4時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物8を得た(3 mg、収率：50%)。
MS m/z(ESI)：593 [M+1]。
【０１３１】
実施例9
(R)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 9
【化３３】
2020525419.tif 000042
【化３４】
2020525419.tif 000043
【０１３２】
ステップ1
メチル 2-(((tert-ブチルジメチルシリル)オキシ)メチル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 9a
化合物8e(0.6 g、1.78 mmol)を、5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、2-フルオロヨードエタン(0.775 g、4.45 mmol)および炭酸カリウム(0.862 g、6.24 mmol)を添加し、80℃にて4時間撹拌した。反応溶液に、40 mLの水を添加し、酢酸エチル(20 mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液(30 mL×1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物9aを得た(610 mg、収率：90%)。
MS m/z(ESI)：384 [M+1]。
【０１３３】
ステップ2
メチル 6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-2-(ヒドロキシメチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 9b
実施例8のステップ5における化合物8gの合成経路にしたがって、出発化合物8fを化合物9aに置き換え、よって、標記化合物9b(340 mg、収率：80%)を調製した。
MS m/z(ESI)：270 [M+1]。
【０１３４】
ステップ3
メチル 6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 9c
実施例8のステップ6における化合物8iの合成経路にしたがって、出発化合物8gを化合物9bに置き換え、よって、標記化合物9c(170 mg、収率：73%)を調製した。
MS m/z(ESI)：402 [M+1]。
【０１３５】
ステップ4
6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-メチル-5-(トリフルオロメチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 9d
実施例8のステップ7における化合物8jの合成経路にしたがって、出発化合物8iを化合物9cに置き換え、よって、粗標記化合物9d(150 mg、収率：90%)を調製し、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：388 [M+1]。
【０１３６】
ステップ5
(R)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-6-フルオロ-1-(2-フルオロエチル)-2-((3-メチル-5-(トリフルオロエチル)-1H-ピラゾール-1-イル)メチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 9
実施例8のステップ8における化合物8の合成経路にしたがって、出発化合物8jを化合物9dに置き換え、よって、標記化合物9(1.4 mg、収率：20%)を調製した。
MS m/z(ESI)：599 [M+1]。
【０１３７】
実施例10
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-イソプロピル-1H-インドール-5-カルボキサミド 10
【化３５】
2020525419.tif 000044
【化３６】
2020525419.tif 000045
【０１３８】
ステップ1
メチル 2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-イソプロピル-1H-インドール-5-カルボキシレート 10a
化合物2b(47.5 mg、0.13 mmol)を、1.5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、60%水素化ナトリウム(32 mg、0.774 mmol)、次いで、2-ヨードプロパン(77.4 μL、0.774 mmol)を添加し、75℃にて16時間反応させた。反応溶液を室温に冷却し、15 mLの水を添加し、酢酸エチル(10 mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液(10 mL×3)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、展開溶媒系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物10aを得た(20 mg、収率：40%)。
MS m/z(ESI)：410 [M+1]。
【０１３９】
ステップ2
2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-イソプロピル-1H-インドール-5-カルボン酸 10b
実施例9のステップ4の合成経路にしたがって、出発化合物9cを化合物10aに置き換え、よって、粗標記化合物10b(21 mg、収率：100%)を調製し、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：396 [M+1]。
【０１４０】
ステップ3
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-イソプロピル-1H-インドール-5-カルボキサミド 10
実施例9のステップ5の合成経路にしたがって、出発化合物9dを化合物10bに置き換え、よって、標記化合物10(25.2 mg)を調製した。
【０１４１】
MS m/z(ESI)：607 [M+1]。
1H NMR(300 MHz、CDCl3)δ 8.01(s、1H)、7.82(d、2H)、7.68-7.43(m、4H)、7.32(d、1H)、7.02(s、1H)、6.94(d、1H)、6.24(s、1H)、5.29(s、1H)、4.31(q、1H)、4.22(s、2H)、4.00(d、2H)、3.03(q、2H)、1.43(d、6H)、1.22(t、3H)。
【０１４２】
実施例11
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-シクロプロピル-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 11
【化３７】
2020525419.tif 000046
実施例6の合成経路にしたがって、出発化合物5bを化合物2bに置き換え、よって、標記化合物11(23.8 mg)を調製した。
【０１４３】
MS m/z(ESI)：623 [M+1]。
1H NMR(300 MHz、CDCl3)δ 7.95(s、1H)、7.81(d、2H)、7.67-7.58(m、2H)、7.53(d、3H)、7.34(d、1H)、7.04(bs、1H)、6.95(d、1H)、6.13(s、1H)、5.25(m、1H)、4.34(s、2H)、4.12-3.93(m、3H)、3.02(q、2H)、2.89(b、1H)、1.27-1.13(m、3H)、1.09-0.88(m、4H)。
【０１４４】
実施例12
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(N-シクロプロピルスルファモイル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 12
【化３８】
2020525419.tif 000047
【化３９】
2020525419.tif 000048
【０１４５】
ステップ1
N-シクロプロピル-4-ビニルベンゼンスルホンアミド 12b
p-スチレンスルホン酸ナトリウム12a を、40 mLのトルエンに溶解した。溶液に、チオニルクロリド(11.54 g、97.00 mmol)およびN,N-ジメチルホルムアミド(0.5 mL)を室温にて添加し、次いで、100℃に加熱し、2時間撹拌した。反応溶液を冷却し、減圧濃縮した。反応溶液に、ジクロロメタン(100 mL)を添加し、シクロプロピルアミン(2.22 g、38.80 mmol)を滴下した。添加完了後、反応溶液を室温にて1時間撹拌し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物12bを得た(2.0 g、収率：46.2%)。
MS m/z(ESI)：224 [M+1]。
【０１４６】
ステップ2
(R)-(1-(4-(N-シクロプロピルスルファモイル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert-ブチル 12c
水酸化ナトリウム(1.07 g、26.87 mmol)を、15 mLの水に溶解し、オスミン酸カリウム二水和物(132.00 mg、358.28 μmol)を、5 mLの得られる溶液に溶解した。カルバミン酸tert-ブチル(3.67 g、31.35 mmol)を、100 mLのn-プロパノールに室温にて溶解し、上記水酸化ナトリウム水溶液と混合した。反応溶液に、次亜塩素酸tert-ブチル(2.92 g、26.87 mmol)を室温にて滴下し、添加完了後、5分間撹拌した。反応溶液に、ヒドロキニジン1,4-フタラジンジイルエーテル(418.64 mg、537.42 μmol)を添加し、室温にて10分間撹拌した。反応溶液に、n-プロパノール中の化合物12b(2.0 g、8.96 mmol)の予め調製した溶液20 mLおよびオスミン酸カリウム二水和物の水酸化ナトリウム溶液5 mLを滴下し、添加完了後、室温にて5時間撹拌した。飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を添加して反応を停止し、反応溶液を酢酸エチル(1000 mL×2)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物12cを得た(0.3 g、収率：9.4%)。
MS m/z(ESI)：357 [M+1]。
【０１４７】
ステップ3
(R)-4-(1-アミノ-2-ヒドロキシエチル)-N-シクロプロピルベンゼンスルホンアミド 12d
化合物12c(300 mg、841.67 μmol)を、10 mLのメタノールに溶解した。溶液に、4 mLの濃塩酸を添加し、室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、標記化合物を得た12d(215 mg、収率：99.6%)。
MS m/z(ESI)：257.4 [M+1]。
【０１４８】
ステップ4
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(N-シクロプロピルスルファモイル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 12
化合物2d(100 mg、250.15 μmol)を、2 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、化合物12d(87.89 mg、300.2 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(64.66 mg、500.3 μmol)、次いで、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(190 mg、500.3 μmol)を添加し、室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物12を得た(50 mg、収率：30.3%)。
【０１４９】
MS m/z(ESI)：638 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CD3OD)δ 8.69-8.67(d、1H)、8.12(s、1H)、7.89-7.87(m、2H)、7.80(s、1H)、7.76-7.73(d、1H)、7.68-7.66(m、2H)、7.61-7.59(m、1H)、7.49-7.47(m、1H)、7.28-7.26(m、1H)、6.17(s、1H)、5.32-5.30(m、1H)、4.73(s、1H)、4.61(s、1H)、4.48(s、1H)、4.41-4.40(m、3H)、3.95-3.93(m、2H)、2.15-2.14(m、1H)、1.36-1.31(m、1H)、0.55-0.53(m、4H)。
【０１５０】
実施例13
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 13
【化４０】
2020525419.tif 000049
【化４１】
2020525419.tif 000050
【０１５１】
ステップ1
(4-ブロモフェニル)(シクロプロピルメチル)スルファン 13c
4-ブロモベンゼンチオール 13a(2.00 g、10.58 mmol)を、15 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、炭酸カリウム(1.61 g、11.64 mmol)およびブロモメチルシクロプロパン13b(1.57 g、11.64 mmol)を添加し、アルゴン雰囲気下、室温にて16時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物13cを得た(2.5 g、収率：97.2%)。
【０１５２】
ステップ2
1-ブロモ-4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)ベンゼン 13d
化合物13c(2.57 g、10.58 mmol)を、50 mLのジクロロメタンに溶解した。氷浴中で溶液を冷却し、次いで、m-クロロペルオキシ安息香酸(4.60 g、26.42 mmol)を添加し、室温にて16時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物13cを得た(2.9 g、収率：88.3%)。
MS m/z(ESI)：292 [M+18]。
【０１５３】
ステップ3
1-((シクロプロピルメチル)スルホニル)-4-ビニルベンゼン 13f
4-(シクロプロピルメチル)スルホニルブロモベンゼン 13d(2.48 g、9.01 mmol)を、80 mLの1,4-ジオキサンに溶解した。10 mLの水、ビニルボロン酸ピナコールエステル 13e(2.78 g、18.03 mmol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(520.49 mg、450.64 μmol)、次いで、炭酸セシウム(5.88 g、18.03 mmol)を添加した。反応溶液を、80℃に加熱し、アルゴン雰囲気下、2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物13fを得た(1.83 g、91.3%)。
MS m/z(ESI)：240[M+18]。
【０１５４】
ステップ4
(R)-(1-(4-(シクロプロピルメチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert-ブチル 13g
水酸化ナトリウム(1.00 g、24.70 mmol)を、15 mLの水に溶解し、オスミン酸カリウム二水和物(121.18 mg、329.28 μmol)を、5 mLの得られる溶液に溶解した。カルバミン酸tert-ブチル(3.38 g、28.81 mmol)を、100 mLのn-プロパノールに室温にて溶解し、上記水酸化ナトリウム水溶液と混合した。溶液に、次亜塩素酸tert-ブチル(2.68 g、24.70 mmol)を室温にて滴下し、添加完了後、5分間撹拌した。反応溶液に、ヒドロキニジン1,4-フタラジンジイルエーテル(384.64 mg、493.92 μmol)を添加し、室温にて10分間撹拌した。反応溶液に、n-プロパノール中の4-シクロプロピルメチルスルホニルスチレン 13f(1.83 g、8.23 mmol)の予め調製した溶液20 mLおよびオスミン酸カリウム二水和物の水酸化ナトリウム溶液5 mLを滴下し、添加完了後、室温にて5時間撹拌した。飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を添加して反応を停止し、反応溶液を酢酸エチル(1000 mL×2)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物13gを得た(1.3 g、収率：44.43%)。
MS m/z(ESI)：256 [M-100+1]。
【０１５５】
ステップ5
(R)-2-アミノ-2-(4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)フェニル)エタノール 13h
化合物13g(1.30 g、3.66 mmol)を、10 mLのメタノールに溶解した。溶液に、4 mLの濃塩酸を添加し、室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、標記化合物13hを得た(0.9 g、96.4%)。
【０１５６】
ステップ6
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 13
化合物2d(200 mg、500.29 μmol)を、5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。化合物13h(218.97 mg、750.44 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(129.32 mg、1.00 mmol)、次いで、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(235.41 mg、1.00 mmol)を添加した。反応溶液を室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物13を得た(41 mg、12.8%)。
【０１５７】
MS m/z(ESI)：637 [M+1]。
1H NMR(400 MHz、CDCl3)δ 8.13-8.12(d、1H)、7.97-7.95(m、2H)、7.76-7.75(m、1H)、7.65-7.63(m、2H)、7.47-7.45(m、1H)、7.39-7.38(d、1H)、7.20-7.16(m、1H)、7.13-7.11(m、1H)、6.30(s、1H)、5.39-5.35(m、1H)、4.70-4.68(t、1H)、4.59-4.56(t、1H)、4.38-4.35(m、3H)、4.31-4.29(m、1H)、4.15-4.11(dd、1H)、4.08-4.04(dd、1H)、3.05-3.04(d、2H)、1.09-1.05(m、1H)、0.64-0.59(m、2H)、0.24-0.20(m、2H)。
【０１５８】
実施例14
(R)-N-(1-(4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-2-(4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 14
【化４２】
2020525419.tif 000051
【化４３】
2020525419.tif 000052
【０１５９】
ステップ1
メチル 2-(4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 14b
4-フルオロ-2-トリフルオロメチルベンジルブロミド 14a(2.29 g、8.90 mmol)、化合物1b(1.30 g、7.42 mmol)、ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)クロリド(385.05 mg、1.48 mmol)、ビシクロ[2.2.1]-2-ヘプテン(698.67 mg、7.42 mmol)および炭酸カリウム(1.57 g、14.84 mmol)を、20 mLのN,N-ジメチルアセトアミドに添加した。反応溶液を80℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で16時間撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、ろ過した。ろ液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物14bを得た(2.0 g、収率：76.7%)。
MS m/z(ESI)：350 [M-1]。
【０１６０】
ステップ2
メチル 2-(4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 14c
化合物14b(140 mg、398.53 μmol)、1-フルオロ-2-ヨード-エタン(151.2 mg、1.20 mmol)および炭酸セシウム(389.54 mg、1.20 mmol)を、15 mLのアセトニトリルに添加した。反応溶液をマイクロ波条件下で、100℃にて1時間反応させた。反応溶液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物14cを得た(135 mg、収率：85.25%)。
MS m/z(ESI)：396 [M-1]。
【０１６１】
ステップ3
2-(4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 14d
化合物14c(135 mg、339.76 μmol)および水酸化ナトリウム(37.05 mg、926.39 μmol)を、6 mLのメタノールおよび0.5 mLの水の混合溶媒に添加した。反応溶液を60℃にて2時間撹拌した。メタノールを減圧除去し、得られる残渣に、1M希塩酸を滴下して、pHを〜3に調節した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物を得14d(130 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：382 [M-1]。
【０１６２】
ステップ4
(R)-N-(1-(4-((シクロプロピルメチル)スルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-2-(4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 14
化合物14d(300 mg、782.65 μmol)を、5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。化合物13h(342.56 mg、1.17 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(202.3 mg、1.57 mmol)、次いで、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(594.82 mg、1.57 mmol)を添加した。反応溶液を室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物14を得た(200 mg、41.2%)。
【０１６３】
MS m/z(ESI)：621 [M+1]。
1H NMR(400 MHz、CDCl3)δ 8.13-8.12(d、1H)、7.94-7.92(m、2H)、7.77-7.74(m、1H)、7.63-7.61(m、2H)、7.50-7.47(m、1H)、7.36-7.34(d、1H)、7.25-7.23(m、1H)、7.20-7.14(m、1H)、6.30(s、1H)、5.39-5.35(m、1H)、4.69-4.67(t、1H)、4.58-4.55(t、1H)、4.38-4.35(m、3H)、4.32-4.29(m、1H)、4.12-4.08(dd、1H)、4.05-4.01(dd、1H)、3.05-3.02(d、2H)、1.05-0.98(m、1H)、0.64-0.59(m、2H)、0.24-0.20(m、2H)。
【０１６４】
実施例15
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(シクロプロピルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 15
【化４４】
2020525419.tif 000053
【化４５】
2020525419.tif 000054
【０１６５】
ステップ1
1-((シクロプロピル)スルホニル)-4-ビニルベンゼン 15b
4-シクロプロピルスルホニルブロモベンゼン 15a(315 mg、1.21 mmol)を、20 mLの1,4-ジオキサンに溶解した。5 mLの水、化合物13e(223 mg、1.45 mmol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(55.8 mg、48.25 μmol)、次いで、炭酸セシウム(786.5 mg、2.41 mmol)を添加した。反応溶液をアルゴン雰囲気下、80℃に加熱し、2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物15bを得た(210 mg、83.6%)。
MS m/z(ESI)：226 [M+18]。
【０１６６】
ステップ2
(R)-(1-(4-(シクロプロピルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert-ブチル 15c
水酸化ナトリウム(121 mg、3.02 mmol)を、15 mLの水に溶解し、オスミン酸カリウム二水和物(14.84 mg、40.33 μmol)を、5 mLの得られる溶液に溶解した。カルバミン酸tert-ブチル(413.3 mg、3.53 mmol)を、100 mLのn-プロパノールに室温にて溶解し、上記水酸化ナトリウム水溶液と混合した。反応溶液に、次亜塩素酸tert-ブチル(328.4 mg、3.02 mmol)を室温にて滴下し、添加完了後、5分間撹拌した。反応溶液に、ヒドロキニジン1,4-フタラジンジイルエーテル(47.13 mg、60.5 μmol)を添加し、室温にて10分間撹拌した。反応溶液に、n-プロパノール中の化合物15b(0.21 g、1.01 mmol)の10 mLおよびオスミン酸カリウム二水和物の水酸化ナトリウム溶液5 mLを滴下し、添加完了後、室温にて5時間撹拌した。飽和チオ硫酸ナトリウム溶液を添加して反応を停止し、反応溶液を酢酸エチル(50 mL×2)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物15cを得た(133 mg、収率：38.6%)。
MS m/z(ESI)：242 [M-100+1]。
【０１６７】
ステップ3
(R)-2-アミノ-2-(4-((シクロプロピル)スルホニル)フェニル)エタノール 15d
化合物15c(133 mg、389.56 μmol)を、10 mLのメタノールに溶解した。溶液に、4 mLの濃塩酸を添加し、室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、標記化合物15dを得た(90 mg、96.4%)。
【０１６８】
ステップ4
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(シクロプロピルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 15
化合物2d(150 mg、375.22 μmol)を、5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。化合物15d(90.54 mg、375.22 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(97.00 mg、750.44 μmol)、次いで、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(285.41 mg、750.44 μmol)を添加した。反応溶液を室温にて2時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られる残渣を高性能液体クロマトグラフィーにより精製して、標記化合物15を得た(100 mg、42.8%)。
【０１６９】
MS m/z(ESI)：621 [M-1]。
1H NMR(400 MHz、CDCl3)δ 8.13(s、1H)、7.94-7.92(m、2H)、7.77-7.75(m、2H)、7.64-7.62(m、2H)、7.48-7.45(m、1H)、7.38-7.36(m、1H)、7.15-7.12(m、2H)、6.34(s、1H)、5.41-5.38(m、1H)、4.70-4.68(t、1H)、4.60-4.56(t、1H)、4.38-4.36(m、3H)、4.31-4.29(m、1H)、4.16-4.12(dd、1H)、4.09-4.05(dd、1H)、2.51-2.46(m、1H)、1.41-1.37(m、2H)、1.09-1.05(m、2H)。
【０１７０】
実施例16
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-メトキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 16
【化４６】
2020525419.tif 000055
【化４７】
2020525419.tif 000056
【０１７１】
ステップ1
(R)-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)カルバミン酸tert-ブチル 16a
化合物5e(50 mg、218.06 μmol)を、6 mLのジクロロメタンに溶解した。溶液に、トリエチルアミン(44.63 mg、436.12 μmol)およびジ-tert-ブチル ジカーボネート(95.07 mg、436.12 μmol)を0℃にて添加し、1時間撹拌した。氷水を添加して反応を停止した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、粗生成物を、溶離液系Bを用いる薄層クロマトグラフィーにより精製して、化合物16bを得た(45 mg、収率：62.6%)。
MS m/z(ESI)：230.2 [M-100+1]。
【０１７２】
ステップ2
(R)-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-メトキシエチル)カルバミン酸tert-ブチル 16b
化合物16a(50 mg、151.79 μmol)を、6 mLのテトラヒドロフランに溶解した。溶液に、水素化ナトリウム(11.63 mg、303.57 μmol)を0℃にて添加し、10分間撹拌した。反応溶液に、ヨウ化メチル(23.70 mg、166.96 μmol)を添加し、2時間撹拌した。氷水を添加して反応を停止した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、粗生成物を、溶離液系Bを用いる薄層クロマトグラフィーにより精製して、化合物16bを得た(45 mg、収率：86.32%)。
【０１７３】
ステップ3
(R)-1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-メトキシエチルアミン 16c
化合物16b(45 mg、131.03 μmol)を、10 mLのジクロロメタンに溶解した。溶液に、トリフルオロ酢酸(298.80 mg、2.62 mmol)を添加し、室温にて16時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮して、粗標記化合物16c(40 mg)を得、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
【０１７４】
ステップ4
(R)-2-(4-クロロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-メトキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 16
化合物2d(44.75 mg、111.94 μmol)および粗化合物16c(40.00 mg、111.94 μmol)を、20 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液に、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(31.60 mg、134.32 μmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(43.40 mg、335.81 μmol)を添加し、室温にて16時間撹拌した。反応溶液に、水を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物16を得た(25 mg、収率：35.73%)。
【０１７５】
MS m/z(ESI)：625.6 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 8.07(s、1H)、7.87-7.85(d、2H)、7.73-7.71(m、2H)、7.62-7.60(m、2H)、7.43-7.41(m、1H)、7.34-7.31(m、1H)、7.15-7.08(m、2H)、6.28(s、1H)、5.44-5.40(m、1H)、4.66-4.64(m、1H)、4.55-4.52(m、1H)、4.34-4.29(m、3H)、4.28-4.25(m、1H)、3.83-3.74(m、2H)、3.39(s、3H)、3.12-3.06(m、2H)、1.29-1.26(m、3H)。
【０１７６】
実施例17(比較例)
(R)-2-(4-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 17
【化４８】
2020525419.tif 000057
【化４９】
2020525419.tif 000058
【０１７７】
ステップ1
メチル 2-(4-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 17b
化合物1b(1.00 g、5.71 mmol)および4-(トリフルオロメチル)ベンジルブロミド 17a(16.40 g、6.86 mmol)を、15 mLのN,N-ジメチルアセトアミドに溶解した。ビス(アセトニトリル)パラジウム(II)クロリド(296.17 mg、1.14 mmol)、ビシクロ[2.2.1]-2-ヘプテン(1.1 g、11.68 mmol)および炭酸ナトリウム(1.22 g、11.51 mmol)を添加した。反応溶液を80℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で17時間撹拌した。反応溶液を冷却し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物17bを得た(1.60 g、収率：84.10%)。
MS m/z(ESI)：334.1 [M+1]。
【０１７８】
ステップ2
メチル 2-(4-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキシレート 17c
化合物17b(500 mg、1.50 mmol)、1-フルオロ-2-ヨード-エタン(381.0 mg、3.0 mmol)および炭酸セシウム(976 mg、2.0 mmol)を、10 mLのアセトニトリルに添加した。反応溶液をマイクロ波条件下で、100℃にて1時間反応させた。反応溶液に水を注ぎ入れ、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物17cを得た(500 mg、収率：87.86%)。
MS m/z(ESI)：380.1 [M+1]。
【０１７９】
ステップ3
2-(4-(トリフルオロメチル)ベンジル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボン酸 17d
化合物17c(500 mg、1.32 mmol)および水酸化ナトリウム(527.2 mg、13.18 mmol)を、10 mLのメタノールおよび2 mLの水の混合溶媒に添加した。溶液を60℃にて2時間撹拌した。メタノールを減圧除去し、得られる残渣に、1M希塩酸を滴下して、pHを〜3に調節した。溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮して、粗標記化合物17dを得(500 mg)、これを精製せずに次のステップに直接用いた。
MS m/z(ESI)：366.1 [M+1]。
【０１８０】
ステップ4
(R)-2-(4-(トリフルオロメチル)ベンジル)-N-(1-(4-(エチルスルホニル)フェニル)-2-ヒドロキシエチル)-1-(2-フルオロエチル)-1H-インドール-5-カルボキサミド 17
(R)-2-アミノ-2-(4-(エチルスルホニル)フェニル)エタノール 5e(76 mg、0.33mmol)、粗化合物17d(100 mg、0.27 mmol)、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸塩(125 mg、0.33 mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(54 mg、0.42 mmol)を、5 mLのN,N-ジメチルホルムアミドに添加した。反応溶液を室温にて16時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られる残渣を、溶離液系Bを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物17を得た(46 mg、収率：29.14%)。
【０１８１】
MS m/z(ESI)：577.1 [M+1]。
1H NMR(400MHz、CD3OD)δ 8.65(d、1H)、8.12(s、1H)、7.88(d、2H)、7.86(d、3H)、7.63(d、2H)、7.46 -7.43(m 3H)、6.3(s、1H)、5.3(d、1H)、4.64-4.62(t、1H)、4.52-4.5(t、1H)、4.47-4.45(t、1H)、4.41-4.38(t、1H)、4.10(d、2H)、3.92(d、2H)、3.22-3.16(m 2H)、1.26-1.19(m、3H)。
【０１８２】
生物学的アッセイ
以下の試験例を参照して本発明をさらに説明するが、これらの例は本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではない。
【０１８３】
試験例1
RORγのインビトロ活性に対する本発明の化合物の効果の測定
I．実験材料および器具
1．LanthaScreen(登録商標) TR-FRET RORγ共活性化システム(Life Technologies)
2．RORγ LBD(ABベクター)
3．DMSO(SigmaAldrich)
4．マイクロプレートリーダー(Tecan)
【０１８４】
II．実験手順
RORγ活性に対する本発明化合物の調節を、LanthaScreen TR-FRET(時間分解蛍光共鳴エネルギー移動)RORγ共活性化システムでスクリーニングした。
【０１８５】
最終濃度の5 mM DTTを含む完全なバッファーD(完全なTR-FRETコレギュレーター)(Life Technologies)が最初に構築された。DMSOの最終濃度は2％であった。試験化合物は、2％のDMSOを含む完全なバッファーDで最終濃度の2倍に連続希釈され、最大用量は60μmであった。試験化合物を384ウェルプレート(PerkinElmer)の試験ウェルに10μl/ウェルで加えた。同じ濃度の各試験化合物に対して、2つの並行コントロールウェルを設定した。4XRORγLBD(AB Vector)を構築した。RORγLBDを完全なバッファーDで1ng/μLの濃度に希釈し、384ウェルプレートの試験ウェルに5μl/ウェルで加えた。ネガティブコントロールウェルは、RORγLBDを含まない5μLの完全なバッファーDであった。0.6μMのフルオレセイン-D22(4X)および8 nMのテルビウム(Tb)標識抗GST抗体(4X)(Life Technologies)を含む混合溶液を、完全なバッファーDとともに作成し、および5μLの混合溶液を384ウェルプレートに追加した。全反応系は20μLであった。384ウェルプレートをシェーカーで静かに振とうし、室温にて暗所で2〜4時間インキュベートした。
【０１８６】
Tecan Infinite M1000を使用して、蛍光測定値を決定した。520 nm/495 nmの発光波長と化合物の濃度の比の対数曲線を、GraphPad Prism 6.0ソフトウェアによってプロットした。試験化合物のEC50/IC50値を計算した。
【０１８７】
RORγのインビトロ活性に対する本発明化合物の効果を、上記試験によって測定し、得られる値を第1表に示す。
【０１８８】
第1表：RORγのインビトロ活性に対する本発明の化合物のEC50値および比較例のIC50値
【表２】
2020525419.tif 000059
a：アゴニストの場合、値はEC50を示す；逆アゴニストの場合、値はIC50を示す；
b：アゴニストの場合、値はEmax(%)を示す；逆アゴニストの場合、値は最大阻害率を示す。
【０１８９】
結論：
本発明化合物は、RORγのインビトロ活性に対して有意なアゴニスト効果を有する。一方、出願人は、環Aのオルト基の変化がその調節効果を変える可能性があること、および環Aのオルト基が小さな立体障害(Hなど)を有する実施例17の化合物が、逆アゴニストであることを見出した。
【０１９０】
試験例2
酵素結合免疫定量法による、IL-17Aに対する本発明化合物の活性の測定
I．実験材料および器具
1．ヒト末梢血単核細胞(PBMC)(Zenbio)
2．リンパ球培養培地(Zenbio)
3．TexMACS(Miltenyi Biotec)
4．ヒトサイトスティム(Human cytostim)(Miltenyi Biotec)
5．ヒトIL-17酵素結合免疫吸着キット(R&D System)
6．CO2インキュベーター(Fisher Scientific)
7．遠心分離機(Fisher Scientific)
8．96ウェル細胞培養プレート(Fisher Scientific)
9．マイクロプレートリーダー(Tecan)
【０１９１】
II．実験手順
凍結したヒト末梢血単核細胞(PBMC)を、予熱したリンパ球培地で急速に蘇生させ、1000 rpmで10分間遠心分離した。細胞培養上清を除去した。細胞をTexMACS培地に穏やかに懸濁し、カウントした。T細胞活性化試薬サイトスティム(10μl/ml)を細胞懸濁液に比例して添加した。次に、細胞を96ウェル細胞培養プレートに1×105個の末梢血単核細胞/ウェルの密度で播種した。試験化合物をTexMACS培地で勾配希釈し、各グループあたり2〜3個の並列ウェルを使用して、試験ウェルにそれぞれ加えた。バックグラウンド測定値を得るために、サイトスティムを含まない細胞のみを含むネガティブコントロールウェルを提供した。細胞培養プレートを5％二酸化炭素、37℃のインキュベーターに入れて3日間インキュベートした。薬物処理の3日後に細胞培養上清を回収し、遠心分離して懸濁液を除去した。次に、上清中のIL-17AをIL-17A酵素結合免疫吸着キットで定量した。試験化合物のEC50値をGraphPad Prism 6.0で計算した。
【０１９２】
酵素結合免疫定量法による、IL-17Aに対する本発明化合物の効果を上記試験によって測定し、得られるEC50値を第2表に示す。
【０１９３】
第2表：酵素結合免疫定量法による、IL-17Aに対する本発明化合物のEC50値
【表３】
2020525419.tif 000060
【０１９４】
結論：
本発明の化合物は、酵素結合免疫定量法によりIL-17Aに対する有意な調節効果を有する。
【０１９５】
薬物動態評価
試験例3
マウスにおける本発明化合物の薬物動態アッセイ
1．要約
マウスを試験動物として使用した。実施例4の化合物をマウスに胃内投与した後、異なる時点での血漿中の薬物濃度をLC/MS/MS法により測定した。本発明の化合物の薬物動態学的挙動をマウスで研究および評価した。
2．試験プロトコル
2.1 試験化合物
実施例4の化合物
2.2 試験動物
証明番号：SCXK(Shanghai)2013-0006をもつ9匹のC57マウス(雌性)を、Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTDから購入した。
2.3 試験化合物の調製
一定量の試験化合物を秤量し、5体積％のDMSO、5体積％のtween 80および90体積％の生理食塩水を加えて、0.1 mg/mLの無色透明な溶液を調製した。
2.4 投与
一晩絶食した後、C57マウスに、試験化合物を2.0 mg/kgの投与量および0.2 mL/10 gの投与量で胃内投与した。
【０１９６】
3．工程
マウスに実施例4の化合物を胃内投与した。投与前および投与後0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、11.0および24.0時間の時点で0.1 mlの血液を採取した(各時点で3匹の動物から)。サンプルをヘパリン処理したチューブに保管し、3500 rpmで10分間遠心分離して血漿を分離した。血漿サンプルを-20℃で保管した。
【０１９７】
異なる濃度での試験化合物の胃内投与後のマウスの血漿中の試験化合物の含量を測定した：投与後の各時点でマウス血漿25 μLを採取し、80 μLのカンプトテシンの内部標準溶液(100 ng/mL)および200 μLのアセトニトリルを加え、5分間ボルテックス混合し、10分間(3600 rpm)遠心分離した。LC/MS/MS分析のために血漿サンプルから1μLの上清を採取した。
【０１９８】
4．薬物動態パラメーターの結果
本発明化合物の薬物動態パラメーターを以下に示す：
【表４】
2020525419.tif 000061
【０１９９】
結論：
本発明化合物は、よく吸収され、薬物動態的利点を有する。
【０２００】
薬物動態評価
試験例4
アイソタイプMC38大腸腫瘍マウスモデルにおけるRORγアゴニストの効能
1．実験の目的
MC38マウスモデルにおいてMC38腫瘍増殖に対する実施例4の化合物の阻害効果を評価した。
【０２０１】
2．実験方法および実験材料
2.1．試験動物および給餌条件
実験用雌性C57BL/6マウスを Charles River Lab(米国)から購入した。マウスの体重は20〜25グラムであり、購入時で7〜9週齢であった。マウス(ケージ当たり10匹のマウス)を、23±1℃の一定温度、50〜60％の湿度、および食物と水への自由なアクセスに維持した。マウスは、施設内動物管理使用委員会(IACUC承認ガイドライン)に従って治療および使用された。動物を購入した後、7日間の適応給餌後に試験を開始した。
【０２０２】
2.2．実験薬物
実施例4の化合物；
BioXcellから購入した抗マウスPD-1(CD279)抗体(クローンRMP1-14；カタログ番号BP0146)；
BioXcellから購入したIgG2aアイソタイプコントロール抗体(クローン2A3； カタログ番号BE0089)。
【０２０３】
2.3．実験設計および実験方法
2.3.1．動物のグループ分け：
適応給餌後、マウスを以下の通りグループ分けした：
【表５】
2020525419.tif 000062
注：1．Q3dx4は、3日ごとに合計4回の投与であり、投与は、5、8、11、14日目に固定されることを示す；
2．BIDx21は、連続21日間にわたる1日2回の投与を示す。
【０２０４】
2.3.2．実験方法
実験には、雌性C57BL/6マウス(20-25グラム、7-9週齢)を使用した。単独で投与された実施例4の化合物、または抗マウスPD-1抗体と組み合わせて投与された実施例4の化合物のインビボ抗腫瘍活性を、近交系C57BL/6マウスにおいてアイソタイプMC38結腸直腸腫瘍(Synta Pharmaceuticals)の増殖を検出することによって評価した。500,000(5×105)個のMC38細胞を各マウスの右腹部に皮下移植した。5日後、腫瘍が40-80 mm3に成長したときに、マウスをランダムにグループ分けした。実施例4の化合物(30 mg/kg)を、21日間連続して1日2回投与した。抗体を単独で、または実施例4の化合物と組み合わせて投与する処置実験中に、抗マウスPD-1(CD279)抗体(BioXcell)(5 mg/kg)を、5日目、8日目、11日目、および14日目に固定して、MC38腫瘍を有するマウスに腹腔内注射(ip)した。コントロールグループには、ビヒクルCMC-Na薬物製剤およびIgG2aアイソタイプコントロール抗体を投与した。
【０２０５】
2.4．データ表示：
キャリパーを使用して3次元で腫瘍体積を測定し、次の式に従って計算した：
腫瘍体積(mm3)= l × w × h × 0.5236
ここで、lは、腫瘍の長さを表し、wは、腫瘍の幅を表し、hは、腫瘍の高さを表し、ミリメートル単位である。
腫瘍増殖阻害率 TGI%＝100 ×(TVコントロール−TV腫瘍)/(TVコントロール−TV開始時)
ここで、TVコントロール＝コントロールグループの腫瘍体積；TV腫瘍 =処置グループの腫瘍体積；およびTV初期＝5日目における初期腫瘍体積。
【０２０６】
3．結果と考察：
図1に示すように、実施例4の化合物30 mg/kgを単独で投与した場合、TGIは40％であった。抗マウスPD-1(CD279)抗体(5 mg/kg)を単独で注射した場合、TGIは51％であった。抗マウスPD-1モノクローナル抗体(5 mg/kg)と組み合わせて投与する場合、実施例4の化合物(30 mg/kg)は相乗効果を示した(TGIは63％であった)。これらのデータは、同系MC38結腸直腸腫瘍モデルにおいて、実施例4の化合物の単独投与が抗腫瘍活性を示し、実施例4の化合物とPD-1抗体の併用投与が相乗効果を示すことを示す。これらのデータは、実施例4の化合物がRORγ活性化(阻害ではなく)と一致する生物学的活性を有し、免疫療法の有効性を改善する新しい道を開くことも示している。
【図１】
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【国際調査報告】
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