(57)【要約】  本発明は、（ＳＳ）−アデノシルメチオニンとミオイノシトール１，２，３，４，５，６ヘキサキスリン酸との塩、及びそれを含有する医薬製剤、栄養補給製剤又は獣医用製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＡＭｅのイノシトール六リン酸に対するモル比が、０．７５〜１．０の範囲である、（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項２】
ＳＡＭｅのイノシトール六リン酸に対する比が、等モルである、請求項１記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項３】
３０重量％を超えるＳＡＭｅイオン含量を有する、請求項１又は２記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項４】
３０重量％〜４０重量％の範囲のＳＡＭｅイオン含量を有する、請求項３記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項５】
３４％〜３９％の範囲のＳＡＭｅイオン含量を有する、請求項４記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項６】
７０％を超える異性体純度を有する、請求項１〜５の一項以上記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項７】
９５％を超える異性体純度を有する、請求項１〜５の一項以上記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項８】
無機カチオンと有機又は無機のアニオンとを実質的に含まないことを特徴とする、請求項１〜７の一項以上記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項９】
アルカリ及びアルカリ土類の金属、鉄、硫酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、リン酸塩、塩化物、並びに１，４−ブタン二硫酸塩を実質的に含まないことを特徴とする、請求項８記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項１０】
請求項１〜９の一項以上記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸であって、イノシトール五リン酸又は他のイノシトールリン酸（一〜四リン酸）の含量が、包括的に、該化合物の５重量％未満である、（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸。
【請求項１１】
請求項１〜１０記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸塩を調製するためのプロセスであって、以下：
ａ）微生物バイオマス、好ましくは酵母からＳＡＭｅを生成することと、
ｂ）酸性条件下で該バイオマスを溶解させることと、
ｃ）ＳＡＭｅを含有する水溶液から該バイオマス及びその断片を分離することと、
ｄ）イノシトール六リン酸水溶液を使用して、１以上の工程で、樹脂クロマトグラフィーによってＳＡＭｅ水溶液を精製することと、
ｅ）任意で、該ＳＡＭｅ水溶液を炭、珪藻土又は他の脱色剤で脱色することと、
ｆ）凍結乾燥若しくは噴霧乾燥によって、精製されたＳＡＭｅ溶液を乾燥させること、又は
ｇ）工程ｆ）の代わりに、有機溶媒、特に、水混和性有機溶媒（好ましくは、メタノール、エタノール、イソプロパノール若しくはアセトン）を使用して、（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸塩を沈殿させることと、
を含む、プロセス。
【請求項１２】
活性成分として請求項１〜１０記載の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸を含む、医薬製剤、栄養補給製剤又は獣医用製剤。
【請求項１３】
医薬製剤、栄養補給製剤又は獣医用製剤において使用するための、（ＳＳ）ジアステレオマーで濃縮された薬理学的に許容し得るＳＡＭｅ塩と、イノシトール六リン酸又はそれらの薬理学的に許容し得る塩との混合物であって、ＳＡＭｅのイノシトール六リン酸に対するモル比が、１未満である、混合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（ＳＳ）−アデノシルメチオニンのミオイノシトール１，２，３，４，５，６ヘキサキスリン酸との塩、及びそれを含有する医薬製剤、栄養補給製剤又は獣医用製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭｅ又はアデメチオニン）は、全ての生物に存在する天然物であり、細胞代謝において重要なメチル化剤として作用する。そのユビキタスな役割に鑑みて、人体においてこの重要な物質が欠損すると、多数の障害の発症の原因となり；例えば、変形性関節炎、肝硬変、嚢胞性線維症、幾つかの抑うつ状態、並びにアルツハイマー病及びパーキンソン病等の加齢関連疾患の発現に関連している。更に、低レベルのＳＡＭｅは、心血管障害の発現に関連している。注射可能な形態のＳＡＭｅは、多くの欧州諸国で承認されている医薬であり、一方、経口形態はダイエット用サプリメントとしても使用されている。
【０００３】
ＳＡＭｅは、強い化学不安定性を特徴とし；室温においてでさえも急速に分解し、主に、Ｓ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）、ホモセリン、メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）、アデニン、及びＳ−５’−アデノシル（５’）−３−メチルプロピルアミン（脱炭酸ＳＡＭｅ又はデカＳＡＭｅ）が生じる。生成物は、強酸の塩としてより安定になり；例えば、特許文献１に記載されているポリリン酸との塩のように、有機又は無機の強い酸（ポリ酸を含む）とＳＡＭｅとの多数の塩が知られている。しかし、市場には１，４−ブタン二硫酸、硫酸、及びｐ−トルエンスルホン酸と塩形成した製剤しか存在せず；硫酸／ｐ−スルホン酸の混合物と塩形成した形態は、ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ（ＰＴＳ）とも表される。
【０００４】
全てのＳＡＭｅ塩は、非常に乾燥している場合により安定である；しかし、これらは、全て吸湿性であり、そして、水を吸収する傾向があるので、分解プロセスのきっかけとなり、活性成分の持続期間が短くなる。したがって、ＳＡＭｅ塩を含有する製剤は、一般的に相対湿度レベルが２０％未満で、湿度の制御された建物内で調製しなければならない。
【０００５】
また、ＳＡＭｅは、２つのジアステレオ異性体の形態：（Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（式Ｉ）
【化１】
2020525535.tif 000002
及び（Ｒ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（式ＩＩ）
【化２】
2020525535.tif 000003
で存在する。
【０００６】
２つの異性体は、ＨＰＬＣ分析によって識別することができる。生物によって生成されるＳＡＭＥは、基質としてＬ−メチオニンを使用して生合成されて、（Ｓ）−Ｓ−アデノシルメチオニン又は（ＳＳ）ＳＡＭｅとも表される単一のジアステレオ異性体（Ｓ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを与え、これは、薬理学的に有用な物質である。
【０００７】
（Ｒ）−Ｓ−アデノシルメチオニン又は（ＳＲ）ＳＡＭｅとも表される（Ｒ）ジアステレオ異性体は、分解産物であり；（ＳＳ）ＳＡＭｅは、２つのジアステレオ異性体の比が１：１の平衡状態に達するまで異性化する傾向がある。（ＳＲ）異性体は、生理学的機能において不活性であるだけではなく、潜在的に有害であるとも考えられる（非特許文献１）。
【０００８】
また、ＳＡＭｅは、化学合成によって得ることもできるが、工業生産では、通常、多段階プロセスによって発酵を行う。（ＳＳ）ＳＡＭｅ含量を含む最高品質の活性成分を得るためには、製造プロセス全体を通して温度及びｐＨを制御することが重要であるが、その理由は、これらが異性化及び分解のプロセスに影響する主な要因であるためである（特許文献２、３）。
【０００９】
他の化学種への異性化及び分解はいずれも、医薬の有効期間を制限するという問題があり；異性化は、（ＳＳ）ＳＡＭｅの量を最も速く、急速に低減するが、一方、化学分解は、上述の化合物の形成を引き起こし、これによって、特許文献４に報告されているとおり、色が変化し、そして、不快な臭いが形成される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】欧州特許第０１９１１３３号明細書
【特許文献２】欧州特許第１２８３８４５号明細書
【特許文献３】欧州特許第１０７１００１号明細書
【特許文献４】欧州特許第２７４２９４３号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Borchardt and Wu, J. Med.Chem.; 19 (9), 1099, 1976
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
活性成分を安定化させる新規方法の研究は依然として進行中であり、ＳＡＭｅの安定性は依然として解決されていない問題であることが確認されている。例えば、米国特許第９５３４０１０号明細書には、ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ又はＳＡＭｅ １，４−ブタン二硫酸塩から得られる、３−インドリルプロピオン酸との塩の調製が報告されている；しかしながら、得られる活性成分の（ＳＳ）異性体の割合が示されておらず、そして、ジアステレオ異性体純度に関連する安定性も記載されていない。使用されたた分析方法（水溶液中のＵＶスペクトル）は、活性異性体の異性化についていかなる指標も与えない。
【００１３】
ＳＡＭｅの安定性を増大させる別の方法は、特許文献３に報告されているとおり、ＳＡＭｅ塩と混合された場合にその分解を減速させる賦形剤を使用することである。この解決策は、不快な臭いの形成を部分的になくすが、生成物の異性化、ひいては、（ＳＲ）ＳＡＭｅの形成は阻止しない（ここでも、公開されている分析方法は生成物の異性化について明らかにしていない）。一般に、賦形剤を使用すると、活性成分濃度の低い製剤になることは明らかである。
【００１４】
イノシトール六リン酸（ＩＰ６）は、多くの植物、特に、穀類及びマメ科植物の種子にみられる天然化合物であり、そして、多くの場合、分解から生じる低級同族体（ＩＰ５、ＩＰ４等とも表されるイノシトール五リン酸、イノシトール四リン酸等）の存在を伴う。様々なイノシトールリン酸の混合物は、フィチン酸と総称され、そして、水溶液で又はナトリウム塩として市場で入手可能であり；フィチン酸は、フィチンと呼ばれる、そのカルシウム及びマグネシウム混合塩の形態でも市販されている。フィチン酸は、二価及び三価の金属に対するキレート化特性を有し、そして、ヒト及び他の哺乳類の腸内フローラに通常存在する幾つかのものを含む、植物及び微生物の両方によって生成されるフィターゼと呼ばれる酵素によって分解することができる。
【００１５】
欧州特許第１８９６４８９号明細書に記載されている、ＳＡＭｅ及び金属イオン（少なくとも１つの金属）を含むフィチン酸の混合塩又は錯体は、ＳＡＭｅに加えて少なくとも１つの他のカチオン（特に、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ等のアルカリ又はアルカリ土類の金属のイオン）を含有する。六リン酸だけではなく、少なくとも１つのリン酸基を有するイノシトールの任意の化合物は、フィチン酸とも表される。他の物質が大量に存在することに鑑みて、活性成分含量は２５％（ＳＡＭｅイオン）を超えない。また、この例では、中間体である別のＳＡＭｅ塩（硫酸塩、Ｐａｔｅｓ、又は１，４−ブタン二硫酸塩）を介して調製を行うので、最終生成物は、調製プロセスから生じる他のカチオン（硫酸塩、ブタン二硫酸塩、又はトシル酸塩）、及びイノシトール六リン酸の低級同族体への分解から生じるリン酸塩も含有しうる。ここでも、得られた生成物のジアステレオ異性体純度は記載されておらず、そして、安定性試験は、生成物の分解しか考慮しておらず、その異性化は考慮していない。
【００１６】
ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓとイノシトールとの混合物は、うつ病を処置するための生成物として国際公開第２００７／０８００１０号に記載されており；その場合、イノシトールはＳＡＭｅ（約１００ｍｇ）を超える高用量（約１ｇ）で存在し、そして、そのプロドラッグであるイノシトール一リン酸によって部分的に置き換えることができる。また、製剤は、ＳＡＭｅの存在を顕著に希釈する他の賦形剤と共に、安定剤としての酸化マグネシウムの存在を必要とする。
【００１７】
国際公開第２００７／０４２４４号には、ＳＡＭｅ、フィチン酸、カルシウム、及びマグネシウムの混合物が開示されている。開示されている固体化合物は、明確な式を有していない：開示されている混合物の化学量論についての可能な想定は、他のＳＡＭｅ ｐａｔｅｓ塩及び不純物と組み合わせられた、ＳＡＭｅ３ Ｐｈｙｔａｔｅ５ Ｃａ７ Ｍｇ４又はＳＡＭｅ３Ｐｈｙｔａｔｅ４ Ｃａ６ Ｍｇ３のいずれかに対応する。用語「フィチン酸」は、国際公開第２００７／０４２４４号で使用されるとき、糖部分に結合している様々な比率のリン酸基を有するイノシトールリン酸の混合物を指す。ＳＡＭｅとフィチン酸とのモル比は、０．７５よりも低い。
【００１８】
国際公開第２０１２／０３５６８５号には、ＳＡＭｅ及びフィチン酸が濃縮された酵母が開示されている。生成物は、酵母細胞から単離されていない。該文献には、特に、以下が開示されている：
−  約３％のＳＡＭｅ含量を有する、ＳＡＭｅが濃縮され、乾燥させ、次いで、フィチン酸を添加した酵母、又は
−  フィチン酸及び他の成分を添加したＳＡＭｅ ｐａｔｅｓを含む組成物。ＳＡＭｅとフィチン酸とのモル比は、約０．６６である。
【００１９】
定義
ＳＡＭｅ＝Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン又はアデメチオニン又はＳＡＭ−ｅ（立体化学は指定されない）。
（ＳＳ）ＳＡＭｅ＝Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンジアステレオ異性体（ＳＳ）、式Ｉ
（ＳＲ）ＳＡＭｅ＝Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンジアステレオ異性体（ＳＳ）、式ＩＩ
異性体純度＝（ＳＳ）ＳＡＭｅと［（ＳＳ）ＳＡＭｅ＋（ＳＲ）ＳＡＭｅ］の合計との間の比％
ＳＡＭｅイオン＝塩形成対イオンとは無関係に、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（立体化学は指定されない）と表される固形物又は溶液の分析値
イノシトール六リン酸＝イノシトールヘキサキスリン酸、又はミオイノシトール（１，２，３，４，５，６）六リン酸、又はＩＰ６、式ＩＩＩ。
【化３】
2020525535.tif 000004
【課題を解決するための手段】
【００２０】
発明の説明
イノシトール六リン酸（フィチン酸）の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシルメチオニンとの塩が特に安定であり、そして、経口投与後に良好に吸収され、そして、高いジアステレオ異性体純度を特徴とすることがここに見出された。本発明の塩は、驚くべきことに、異性化による分解に対して耐性であるので、長期間にわたってそれらの生物学的効果を維持する調製物を処方化することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図が明らかに示すとおり、イノシトール六リン酸との塩形成（ＳＡＭｅ ＩＰ６）は、現在市場にある製品（ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ）よりも、活性成分の吸収が良好でありかつ血漿濃度がより高くなる。
【図２】図が明らかに示すとおり、イノシトール六リン酸との塩形成（ＳＡＭｅ ＩＰ６）は、現在市場にある製品（ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ）よりも、活性成分の吸収が良好でありかつ血漿濃度がより高くなる。
【図３】ＳＡＭｅイオン含量のみを観察した場合、全てのサンプルは安定である（図３）。
【図４】図４に明らかに示されているとおり、活性成分（ＳＳ）ＳＡＭｅ異性体の含量は、イノシトール六リン酸塩（サンプルＡＴ１００３及びＡＴ１００５）及び市販の１，４−ブタン二硫酸塩（サンプルＳＤ４試験１）の場合により長期間安定である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
更に、経口投与した場合、驚くべきことに、本明細書中に記載される新規塩の腸吸収は、現在市場で入手可能な他のＳＡＭｅ化合物と比べて高いことが証明されている。
【００２３】
本発明の（ＳＳ）ＳＡＭｅ塩は、中間体生成物を単離する必要なく、酵母から直接得ることができるので、経済的利点、及び品質（特に、その鏡像異性体純度）がより良好な生成物につながる。
【００２４】
したがって、本発明の対象は、ＳＡＭｅのフィチン酸に対する比が、等モル（即ち、（ＳＳ）ＳＡＭｅ １モルに対してイノシトール六リン酸 約１モルからなる）であり、そして、典型的には、０．７５〜１．０（モル／モル）、好ましくは０．８〜１．０の範囲である、イノシトール六リン酸との（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシルメチオニン塩である。
【００２５】
特に、本発明の塩のジアステレオ異性体純度は、薬理学的に活性のある（ＳＳ）ＳＡＭｅ鏡像異性体含量の観点で７０％超であり、（Ｒ，Ｓ）−Ｓ−アデノシルメチオニン含量は、全ＳＡＭｅの３０％を超えず、好ましくは１５％未満、そして、より好ましくは５％未満である。
【００２６】
イオンとして表されるＳＡＭｅ含量は、３０重量％〜４０重量％、好ましくは３４重量％〜３９重量％の範囲である。したがって、当該生成物中の薬理学的に不活性な（Ｒ，Ｓ）−ＳＡＭｅ鏡像異性体含量は、全重量の１０％未満、好ましくは５％未満、そして、更により好ましくは１％未満である。
【００２７】
塩は、イノシトール六リン酸以外の、カチオン又はアニオン（例えば、Ｎａ＋、Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋）、鉄、及び他のアルカリ又はアルカリ土類の金属、硫酸塩、塩化物、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ブタン二硫酸塩、リン酸塩、及び強い有機又は無機の酸の他のアニオンを含まないか又は実質的に含まない。
【００２８】
「含まないか又は実質的に含まない」とは、１重量％未満、好ましくは０．１重量％未満、そして、更により好ましくは０．０１重量％未満のイオン含量を意味する。少なくとも一般に使用される分析技術の検出限界において、他のカチオン及びアニオンが全く存在しない純粋な塩が、特に好ましい。
【００２９】
好ましくは、生成物は、イノシトール五リン酸及び他の低級同族体をほとんど含まず、他のイノシトールリン酸（一〜五リン酸）の総量は、前記化合物の５重量％未満、そして、より好ましくは１重量％未満である。
【００３０】
また、本発明は、他の中間体生成物を単離することなく、バイオマスから直接該（Ｓ，Ｓ）−Ｓ−アデノシルメチオニン塩を調製するためのプロセスに関する。該プロセスは、噴霧乾燥、凍結乾燥又は溶媒を用いた沈殿によって本発明の生成物がそれから単離される精製水溶液を得るために、クロマトグラフィー精製技術及びタンジェンシャル濾過技術を使用する。更に、該プロセスは、化学分解反応（特に、（ＳＳ）ＳＡＭｅの異性化）を制限する条件下で行われるので、最終生成物の品質が優れている：高い全体純度、金属並びに有機及び無機の塩を含まない、並びに高いジアステレオ異性体純度。
【００３１】
本発明のプロセスは、以下：
ａ）微生物バイオマス、好ましくは酵母からＳＡＭｅを生成することと、
ｂ）酸性条件下で該バイオマスを溶解させることと、
ｃ）ＳＡＭｅを含有する水溶液から該バイオマス及びその断片を分離することと、
ｄ）イノシトール六リン酸水溶液を使用して、１以上の工程で、樹脂クロマトグラフィーによってＳＡＭｅ水溶液を精製することと、
ｅ）任意で、該ＳＡＭｅ水溶液を炭、珪藻土又は他の脱色剤で脱色することと、
ｆ）凍結乾燥若しくは噴霧乾燥によって、精製されたＳＡＭｅ溶液を乾燥させること、又は
ｇ）工程ｆ）の代わりに、有機溶媒、特に、水混和性有機溶媒（好ましくは、メタノール、エタノール、イソプロパノール若しくはアセトン）を使用して、（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン イノシトール六リン酸塩を沈殿させることと、
を含む。
【００３２】
出発ＳＡＭｅは、特許文献２に記載されている手順に従って、酵母等の生物学的起源から得ることができる。様々な製造工程で指定された温度及びｐＨの値を遵守することは、（ＳＳ）ＳＡＭｅ異性体の分解及び異性化を制限するために重要である。
【００３３】
官能化されている（例えば、イオン交換樹脂）か又は官能化されていない（例えば、吸着樹脂）、天然又は合成のポリマーを原料とする樹脂を使用して、樹脂を通したクロマトグラフィープロセスにその水溶液を供することによって、生成物を精製することができる。ポリスチレン及びポリアクリル酸のマトリクスを備える樹脂、例えば、以下の実施例に記載されるものが、工業的処理に特に好ましい。
【００３４】
溶媒を用いた沈殿、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって、生成物を単離することができる。有機溶媒を使用しないので、後者の２つの技術が好ましい；しかしながら、得られる生成物の品質は、いずれの場合も優れており、そして、使用する技術には依存しない。良好な安定性を保証するために、生成物が十分に乾燥していることを確実にすることが重要であり；カールフィッシャー滴定によって求められる残留水分は、１０％の水を超えてはならず、好ましくは、残留水は５％未満である。指定の技術によって直接、又は二次乾燥（例えば、真空下で固体生成物を乾燥機に入れること）によって、１％未満の残留水分値を得ることさえできる。
【００３５】
本発明の（ＳＳ）−Ｓ−アデノシルメチオニン イノシトール六リン酸が噴霧乾燥によって得られる場合、それは、球状の粒形及び１００ミクロン未満の粒径を特徴とし；操作条件を好適に調整することによって、必要に応じて１０ミクロン未満のより小さな粒径を得ることもできる。生成物は、吸湿性であるが、良好な流動性を特徴とする、白色粉状物として存在する。
【００３６】
噴霧乾燥プロセスは、通常、１３０〜１７０℃（好ましくは、１４０〜１６０℃）の範囲の入力空気温度の熱風中で行われる。出力空気温度は、操作条件を好適に変化させることによって、７５〜１１０℃（好ましくは、８５〜９５℃）の範囲で制御される。
【００３７】
指定の条件から、異性化を含む生成物の分解を制限する、十分に乾燥した固体形態の（ＳＳ）ＳＡＭｅイノシトール六リン酸塩が生じて、凍結乾燥によって得られるものと等価な品質の生成物が得られる。
【００３８】
また、得られる生成物は、球状、粒径、及び他の物性の最良の特徴を併せ持つので、良好な流動性と同時に良好な充填度を有する生成物を提供する。これによって、打錠機、並びにバイアル、サシェ、カプセル及び他の投与形態の充填機において、該生成物を使用することが可能になる。
【００３９】
流動性が乏しい及び／又は形状が不規則な粉末は、容器を完全に満たすことができない場合がある、用量が不正確になる場合があるため、粉末の流動性及び粒径の特徴は、正確な用量を保証するために非常に重要である。
【００４０】
特定のＳＡＭｅ塩の場合、調合機（formulation machines）を洗浄するためにダウンタイムが必要になり、工場の生産性が低下するという、更なる吸湿性の問題がある。この問題は、分画及び計量操作のための相対湿度（ＲＨ）が２０％未満の除湿された施設を必要とする、今日までに知られている全てのＳＡＭｅ塩に影響し；このような乾燥レベルは、追加のコストを伴うＭｕｎｔｅｒｓ乾燥機等の特定の技術でしか得ることができない。イノシトール六リン酸との塩の場合、問題の重大さは低いが、その理由は、吸湿性にもかかわらず生成物がベタベタにならず、流動可能のままであるためである。したがって、特に乾燥しておらず、通常のエアコンディショニング設備によって到達可能な相対湿度値（例えば、ＲＨ＞４０％）を有する施設で製造することができ、機械の生産性がより高くかつ工場のコストがより低いことから、製造コストが低くなる。
【００４１】
また、本発明の別の態様は、医薬製剤、栄養補給製剤又は獣医用製剤で使用するための、（ＳＳ）ジアステレオ異性体リッチな薬理学的に許容し得るＳＡＭｅ塩と、イノシトール六リン酸又はそれらの薬理学的に許容し得る塩との混合物であって、ＳＡＭｅのイノシトール六リン酸に対するモル比が、１未満である、混合物に関する。
【００４２】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明する。
【実施例】
【００４３】
実施例１
水に溶解している市販のイノシトール六リン酸ナトリウム塩（純粋なＮａ１２イノシトール六リン酸）から純粋なフィチン酸（ＩＰ６）の溶液を調製する；次いで、該溶液を、酸形態で予め活性化されたＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ１２００Ｈイオン交換樹脂カラムにロードし、そして、該樹脂を脱塩水で洗浄する。２未満のｐＨを有する、該カラムから出ていく画分を全て回収して、９０％を超えるイノシトール六リン酸及び最低限の割合のイノシトール五リン酸からなる溶液を得る；イノシトール四リン酸及び他の低級同族体は、ほとんど存在していない。該溶液をプラスチック容器内で冷温保管する。
【００４４】
酵母クリーム １００kg、水 １００リットル、Ｄ，Ｌ−メチオニン ２kg、グルコース一水和物 １２kg、及びクエン酸 １．５kgを添加することによって、ビール酵母（Saccharomyces carlsbergensis）の酵母バイオマス １０００kgは、ＳＡＭｅ含量において濃縮され、次いで、これを、滅菌空気を吹き付けながら、＋２７℃で２時間の発酵下で維持する。発酵の最後に、該バイオマスを＋１２℃まで冷却し、そして、ｐＨ１．２に達するまで硫酸を添加する。次いで、該バイオマスを、＋２℃〜＋１２℃で制御された温度を維持しながら、Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Constant System Ltd.）を用いて機械的細胞破壊に供する。細胞溶解物を精密濾過に供して粒子状物質を分離し、一方、上清は、制御された温度を維持しながらＩＲＣ８６樹脂カラム（Rhom&Haas）にロードする。該樹脂を脱塩水及び酢酸で洗浄し、次いで、上記のとおり調製したイノシトール六リン酸溶液を使用して該樹脂から生成物を溶出させる。
【００４５】
次いで、ＳＡＭｅ−イノシトール六リン酸の水性酸溶液をＲｅｓｉｎｄｉｏｎ ８２５Ｌ樹脂にロードし、そして、純度が９６％を超える（ＳＳ）ＳＡＭｅイノシトール六リン酸の澄明な溶液を得る。
【００４６】
次いで、限外濾過によって該水溶液を濃縮し、その後、真空下で蒸留し、約１００ｇ／Ｌに達した；ＳＡＭｅ（イオン）及びイノシトール六リン酸の正確な濃度を求め、そして、等モル比に調整する。次いで、＋１６０℃の熱風を噴霧することによって噴霧乾燥ユニット内で濃縮物を乾燥させ、そして、湿度レベルが４％未満（カールフィッシャー滴定によって決定）の生成物を回収する。
【００４７】
ＳＡＭｅイオン含量が３９％である白色の粉状物が得られ、そのうちの９５％は（ＳＳ）異性体からなり、そして、５％は（ＳＲ）異性体である。存在する総不純物は、５％未満である（ＨＰＬＣ面積）。
【００４８】
実施例２
実施例１に記載のとおり、酵母による生体内変換によって（ＳＳ）Ｓ−アデノシルメチオニンを生成する。ｐＨ２．０になるまでイノシトール六リン酸を添加し、そして、数秒間＋８０℃で加熱することによって、（ＳＳ）ＳＡＭｅが濃縮された酵母を熱酸分解に供し、続いて、＋１２℃未満の温度まで急速冷却する。このようにして得られた懸濁液を精密濾過に供し、次いで、ＩＰ６とＳＡＭｅとがおよそ等モル比である、濃度約１００ｇ／Ｌの（ＳＳ）ＳＡＭｅイノシトール六リン酸の濃縮溶液が得られるまで、得られた透過物を、実施例１に記載のとおり、制御された温度でクロマトグラフィー精製に供する。
【００４９】
次いで、出ていく生成物の温度が約９０℃になるような流動条件下で、＋１４０℃まで加熱したチャンバ内で噴霧することによって、該溶液を噴霧乾燥する。
【００５０】
ＳＡＭｅイオン含量が３４％、残留水分が４％、そして、（ＳＳ）ＳＡＭｅとしての鏡像異性体純度が８５％の白色の粉状物が得られる。
【００５１】
生成物のＮａ、Ｆｅ、Ｃａ、及びＭｇのイオン含量は各元素につき０．１％未満であるが、総重金属（Ph. Eur. 2.4.8、方法Ａに特定されるとおりに滴定）は１０ppm未満である。硫酸塩、塩化物、及びリン酸塩の含量は、アニオンあたり０．１％未満である。生成物中に存在するフィチン酸の９０％超は、イノシトール六リン酸からなる。
【００５２】
実施例３
酵母の熱酸分解に硫酸を使用することを除いて、実施例２に記載のとおりプロセスを行う。ＩＲＣ８６樹脂からの生成物の溶出及び低温で行われるその後の全製造工程にイノシトール六リン酸の水溶液を使用することを除いて、実施例１に記載のとおり（ＳＳ）ＳＡＭｅ溶液の精製を進める。
【００５３】
得られた溶液をＳＡＭｅイオン含量について試験し、そして、フィチン酸溶液を１．０２のモル比（ＳＡＭｅイオンのモル／イノシトール六リン酸のモル）に調整する。
【００５４】
噴霧乾燥によって生成物を単離し、そして、ＳＡＭｅイオン含量が３９．５％、残留水分が３．３％、そして、鏡像異性体純度が７８．４％の白色の粉状物が得られる。
【００５５】
硫酸塩を含む、無機のアニオン及びカチオンの含量は、実施例２に記載のものと非常に類似しており；ＳＡＭｅ対イオンの９０％超が、イノシトール六リン酸からなる。
【００５６】
実施例４
酵母の熱酸分解に塩酸を使用することを除いて、実施例２に記載のとおりプロセスを行う。低温で行われるその後の全製造工程にフィチン酸を使用して、実施例３に記載のとおり（ＳＳ）ＳＡＭｅ溶液の精製を進める。
【００５７】
ＨＰＬＣ分析によってＳＡＭｅ含量を求め、そして、ＳＡＭｅイオンのイノシトール六リン酸に対するモル比が０．９モル／モルに達するまでＩＰ６を添加する。
【００５８】
噴霧乾燥によって生成物を単離し、そして、ＳＡＭｅイオン含量が３４％、残留水分が２．５％、そして、鏡像異性体純度が９０％の白色の粉状物が得られる。
【００５９】
塩化物を含む、無機のアニオン及びカチオンの含量は、実施例２に記載のものと非常に類似しており；ＳＡＭｅ対イオンの９０％超が、イノシトール六リン酸からなる。
【００６０】
実施例５
Ｎａ１２イノシトール六リン酸の７％水中溶液を調製し、そして、電気透析処理に供して、対応するイノシトール六リン酸（ＩＰ６）溶液を得る。
【００６１】
酵母の熱酸分解に硫酸を使用することを除いて、実施例４に記載のとおりプロセスを行う。低温で行われるその後の全製造工程にＩＰ６酸溶液を使用して、実施例２に記載のとおり（ＳＳ）ＳＡＭｅ溶液の精製を進める。
【００６２】
該溶液を活性炭で脱色し、その後、ＳＡＭｅイオン含量をＨＰＬＣ分析によって求め、そして、ＩＰ６を添加して０．７６のモル比（ＳＡＭＥイオン／イノシトール六リン酸）を得る。
【００６３】
噴霧乾燥によって生成物を単離し、そして、ＳＡＭｅイオン含量が３１．２％、残留水分が２．５％、そして、鏡像異性体純度が９８％の白色の粉状物が得られる。
【００６４】
実施例６
比較例
ＳＡＭｅフィチン酸塩のサンプルを調製するために、欧州特許第１８９６４８９号明細書に記載のとおりプロセスを行う。粉末状の市販されているＳＡＭｅ １，４−ブタン二硫酸塩を使用し、そして、欧州特許第１８９６４８９号明細書の実施例３に記載のとおり進める：水中に溶解させ、フィチン酸を添加し、氷中でインキュベートし、エタノールを添加し、そして、真空下で濾過する。
【００６５】
得られた白色の沈殿物を濾過し、そして、真空下で乾燥させる。得られた生成物は、１．４５％残留水分、２５．６％ＳＡＭｅイオン含量、及び９８．４５％純度を有する。その鏡像異性体純度は、（ＳＳ）ＳＡＭｅ異性体として７６．９６％である。生成物を０４Ｂ１７ＤＳと呼ぶ。
【００６６】
実施例７
比較例
実施例６に記載のとおり得られた生成物（ＳＡＭｅ及びフィチン酸を含む）及び実施例５に記載のとおり得られたＳＡＭｅイノシトール六リン酸のサンプルを加速安定性試験（＋５５℃の恒温ストーブ内でインキュベート）に供し、そして、５日間後に分析を繰り返す。
【００６７】
以下の値についてサンプルを分析する：
−  ＨＰＬＣによって決定され、そして、重量％として表されるＳＡＭｅイオン含量（全ての鏡像異性体の合計）
−  ＨＰＬＣによって決定され、そして、（ＳＳ）異性体の％として表される鏡像異性体純度
−  上記２つの値を乗じることによって計算され、そして、（ＳＳ）ＳＡＭｅの重量％として表される活性成分含量
−  クロマトグラムのＳＡＭｅ面積／総面積としてＨＰＬＣによって求められ、面積％として表される全体純度。図は、全ての既知の分解不純物の値を含む。
【００６８】
表に示す結果が得られる。
【表１】
2020525535.tif 000005
【００６９】
表中のデータは、等しい条件で、サンプルＡＴ１００３が苛酷試験後により高い含量の活性成分（ＳＳ）ＳＡＭｅを維持していることを明らかに示す。純度データ（面積％）によって包括的に表される、ＭＴＡ、ＳＡＨ、及び他の既知の不純物を与える分解反応は、２つのサンプルについて同等である。しかし、異性化による分解の反応は、驚くべきことに、過剰の（ＳＳ）ＳＡＭｅ形態を維持しているサンプルＡＴ１００３について低く、一方、サンプル０４Ｂ１７ＤＳは完全に異性化される。
【００７０】
したがって、ＡＴ１００３中の活性成分の安定性がより高いのは、他の分解反応よりもむしろ、主に異性化に対する耐性がより高いことに起因している。
【００７１】
実施例８
ラットにおける薬物動態プロファイル
処置開始前に、７〜９週齢、体重１７６〜２００ｇの７０頭のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（３５頭の雄及び３５頭の雌）を２週間ケージ内（＋２２℃及び相対湿度５５％で維持）で馴化させた。ラットに４ＲＦ ２１（Ｍｕｃｅｄｏｌａ）飼料を与え、そして、試験の開始前及び終了時に計量した。処置時に、最も類似している体重を有するものから１群あたり３２頭の動物（１６頭の雄及び１６頭の雌）を選択し、そして、２つの処置に割り付けた。
【００７２】
同用量（ＳＡＭｅイオンとして表される）のＳＡＭｅイノシトール六リン酸（バッチ１５００２８２：ＳＡＭｅイオン含量３７．４８％、（ＳＳ）ＳＡＭｅとしての異性体純度：７７．２％）とＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ（硫酸塩／ｐ−トルエンスルホン酸塩が混合された）の市販サンプルとを比較した。
【００７３】
２つの用量レベル（即ち、１３４ｍｇ／ｋｇ及び９５ｍｇ／ｋｇ）において、水中に溶解させた生成物をカニューレによって投与した。投与前一晩及び投与後更に２時間、ラットを絶食させた。２つの等モル用量によって、ＳＡＭｅイオンの等量摂取が保証された。
【００７４】
固定された間隔（投与後０（投与前）、０．５、１、１．５、２、４、８、及び２４時間時点）で尾静脈からサンプルを採取することによって、ＳＡＭｅの血中レベルを評価した。ＥＤＴＡの添加後に血液サンプルを遠心分離して、細胞画分から血漿を分離した。次いで、Wise, Fullerton J. Liq. Chromatogr. 18 (1995) 2005-17に報告されている方法に従ってＨＰＬＣによって血漿を分析し、そして、図１のグラフに示すデータ（全てのサンプルの平均）を得た。
【００７５】
曲線下面積（ＡＵＣ）の計算に従って吸収された活性成分の総量を求めるために、ＳＡＭｅ血漿濃度値をも使用し、図２に記載の値を得た。
【００７６】
図が明らかに示すとおり、イノシトール六リン酸との塩形成（ＳＡＭｅ ＩＰ６）は、現在市場にある製品（ＳＡＭｅ Ｐａｔｅｓ）よりも、活性成分の吸収が良好でありかつ血漿濃度がより高くなる。
【００７７】
実施例９
比較例
上記実施例に記載のとおり得られた生成物の幾つかのサンプルを安定性試験（恒温ストーブ内で＋２５℃にて保管）に供した。
【００７８】
ＳＡＭｅイオン含量分析（図３）及び（ＳＳ）異性体に対するジアステレオ異性体純度（図４）を定期的に繰り返し、そして、結果を、同サンプルの開始値と比較し、報告する値を得た。
【００７９】
欧州特許第１８９６４８９号明細書に従って得られた生成物、並びにＳＡＭｅの２つの市販サンプル（１，４−ブタン二硫酸塩（ＳＤ４試験１）及びＰａｔｅｓ塩（バッチＳ１Ｓ１０５７Ｂ））で得られたデータを比較する。
【００８０】
ＳＡＭｅイオン含量のみを観察した場合、全てのサンプルは安定である（図３）。
【００８１】
図４に明らかに示されているとおり、活性成分（ＳＳ）ＳＡＭｅ異性体の含量は、イノシトール六リン酸塩（サンプルＡＴ１００３及びＡＴ１００５）及び市販の１，４−ブタン二硫酸塩（サンプルＳＤ４試験１）の場合により長期間安定である。市販のＰａｔｅｓ塩（Ｓ１Ｓ１０５７Ｂ）及び欧州特許第１８９６４８９号明細書に従って得られたＳＡＭｅ−金属−フィチン酸塩錯体（サンプル０４Ｂ１７ＤＳ）は、（ＳＳ）ＳＡＭｅジアステレオ異性体をより急速に失うため、活性成分の量が減少する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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