(57)【要約】  本発明は、ステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はカンナビノイドのような１種以上の抗炎症剤を、１種以上の硫酸化多糖と組み合わせて含む、相乗的抗炎症組成物を提供する。本発明はさらに、この相乗的組成物を用いて炎症及び炎症性疾患を治療する方法に関する。
2020500945.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の抗炎症剤、及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む組成物。
【請求項２】
一又は複数の抗炎症剤及び一又は複数の硫酸化多糖が、前記一又は複数の抗炎症剤と前記一又は複数の硫酸化多糖との間に相乗的相互作用があるような相対量で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
一又は複数の抗炎症剤対一又は複数の硫酸化多糖の重量比が、１：０．０００１〜１：１００の範囲内にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
一又は複数の抗炎症剤対一又は複数の硫酸化多糖の重量比が、１：０．０１〜１：１０の範囲内にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
抗炎症剤が、ステロイド薬、非ステロイド系抗炎症薬、カンナビノイド及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
抗炎症剤がステロイド薬である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
抗炎症ステロイド薬が、デキサメタゾン、プレドニゾロン、モメタゾン、ハロメタゾン、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレレート又はベタメタゾンサクシネート、フルオロシノロン、トリアムシノロン、クロベタゾール、ジフロラゾン、ロテプレドノールエタボネート、及びヒドロコルチゾン並びにこれらの混合物からなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
抗炎症剤が非ステロイド系抗炎症薬である、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
非ステロイド系抗炎症剤が、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ジクロフェナク、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、トルメチン、スリンダク、メクロフェナメート、ケトプロフェン、ピロキシカム、トラマドール、セレコキシブ及びフルルビプロフェン、又はこれらの塩及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
抗炎症剤がカンナビノイドである、請求項５に記載の組成物。
【請求項１１】
硫酸化多糖が、藻類硫酸化多糖、ハーブ由来の硫酸化多糖、細菌性硫酸化多糖、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
硫酸化多糖が、単細胞藻類及び多細胞藻類からなる群から選択される海洋由来のものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
硫酸化多糖が、細胞外由来のものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
硫酸化多糖が、分岐鎖多糖である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
硫酸化多糖が、直鎖多糖である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
充填剤、溶媒、安定化剤、懸濁化剤、乳化剤、放出メディエータ、増粘剤、抗菌剤及び防腐剤、並びにこれらの組合せからなる群から選択される１種以上の賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
液剤、懸濁剤、乳剤、フォーム剤、スプレー剤、リポソーム、半固体剤、クリーム剤、軟膏剤、パッチ剤、微粒子製剤、顆粒剤、マイクロ微粒子製剤、ナノ微粒子製剤、固体剤形、錠剤、カプセル剤、口腔内崩壊性カプセル剤、マウスウォッシュ及び粘着性バッカル錠からなる群から選択される剤形として処方される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
組成物の放出プロファイルが、即時型、遅延型、制御型、持続型及び持効型からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物を、ヒト対象又は哺乳動物対象に投与することを含む、炎症を治療する方法。
【請求項２０】
炎症が、細菌、ウイルス又は真菌による感染、アレルゲン、がん、及びに身体的、化学的、自己免疫疾患又は熱的外傷からなる群から選択される１種以上の状態に関連する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
炎症が、眼疾患、ドライアイ、角結膜炎、創傷、潰瘍性及び糖尿病性創傷、口腔粘膜炎、化学療法、放射線誘発炎症、炎症性腸疾患、肝疾患、皮膚感染症、皮膚アレルギー、乾癬、粘膜炎症、及び胃腸感染症及び炎症、耳の疾患又は感染症、咽頭又は歯茎の炎症、膣の炎症、肛門の炎症からなる群から選択される疾患、障害又は状態のうちの１種以上から選択される疾患に関連する、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然に存在する物質を含む組成物及びこれらの使用方法に関する。より具体的には、本発明の組成物は、硫酸化多糖を、追加の抗炎症剤と組み合わせて含む。
【背景技術】
【０００２】
硫酸化多糖（ＳＰＳ）は、植物、細菌及び藻類から抽出された天然化合物であり、抗酸化、抗凝固、抗がん、抗ウイルス、抗アレルギー、抗炎症、抗菌、及び抗バイオフィルムのような広範な重要な生物活性を有する巨大分子の複雑な群を含む。ＳＰＳは植物と動物の両方の構造要素に存在するが、植物ではそれらの分布は藻類に限定されており、いくつかの紅藻の乾燥物質の最大７０％を構成しうる。従来技術から知られているＳＰＳの生物学的特徴は、次の特性、すなわち、抗酸化、抗腫瘍、免疫調節、炎症、抗凝固、抗ウイルス、抗原虫、抗菌、抗高脂血症特性を含む。さらに、ＳＰＳは食物繊維として使用され、腸内細菌叢によってのみ分解されるため、ヒトの血流へは最小限しか吸収されない。
【０００３】
粘膜炎症は、通常、マルチモーダルな疾患であり、多くの場合、種々の細菌感染症及び／又はウイルス感染症及び／又は真菌感染症に関連し得る。典型的には、罹患臓器（並びに他の臓器及び組織）は、発赤、浮腫、分泌、刺激、掻痒、疼痛、及びアレルギー型身体反応によって現れる炎症反応によって、感染因子の存在に反応する。多くの場合、細菌由来、ウイルス由来、アレルゲン由来又は真菌由来であるかどうかに関わらず、医師が炎症又は感染の原因を診断することは困難であり不可能である。
【０００４】
例えば、「赤目」又は「ピンク色の目」として一般に知られている結膜炎は、眼科救急部門で観察される最も頻繁な眼の障害の１つである。考えられる原因としては、アレルギー反応若しくはウイルス由来又は細菌由来の感染が挙げられる。徴候と症状だけを用いて結膜炎を診断することは誤解を招く可能性があり、臨床医は、臨床検査に基づいてウイルス性と細菌性の結膜炎とを区別することが困難になる。したがって、不必要な医薬（例えば疼痛や不快感を軽減するための抗生物質又はステロイド）が処方される。
【０００５】
別の多要因疾患は口腔粘膜炎である。口腔粘膜炎は、がん治療、特に化学療法及び放射線療法のおそらく最も一般的で消耗性の合併症である。疼痛、摂食不能の結果としての栄養上の問題、及び粘膜の開放創による感染のリスクの増加を含む、いくつかの問題をもたらし得る。口腔粘膜炎感染症はマルチモーダルであり、多くの場合、細菌性、ウイルス性及び真菌感染症と関連しており、多くの場合、医師が感染源を診断することは困難である。さらに、多くの場合、細菌、ウイルス、真菌によってもたらされる共感染がある。
【０００６】
糖尿病性足部潰瘍及び潰瘍性難治性創傷もまた、病変内に形成する細菌及び真菌のバイオフィルムが創傷治癒を遅らせる場合がある多重感染疾患である。これらの創傷は、多重感染及び多くの抗生物質に耐性があることが多いバイオフィルム形成のために治療が困難である。他のマルチモーダル疾患としては、例えば、種々のタイプの皮膚炎症及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が挙げられる。
【０００７】
ステロイドは、広範囲な局所疾患及び内科疾患における抗炎症医薬を代表するものである。しかし、ステロイド医薬は重度な副作用と関連づけられ、多くの場合、副作用により、使用が制限されている。ステロイドの用量及び使用期間は副作用のために制限されており、したがって、望まれない有害作用により有効性が妨げられている。
【０００８】
米国特許出願第２０１３０２７３０９６号は、硫酸化多糖を含む組成物を開示しており、これらの組成物は、そのような治療を必要とする対象のグリコカリックスに影響を与えることによって、対象における種々の障害を治療するために使用することができる。
【０００９】
米国特許出願第２０１６０２２０６０１号は、「有効量の硫酸化多糖、１種以上の天然４級ポリマー、４級分子化合物、メタロプロテイナーゼ阻害剤、１種以上の抗炎症剤、酸性ｐＨ制御緩衝系又はこれらの任意の組み合わせ、及び薬学的に許容される担体を含む、膣内及び／又は内部粘膜適用のための組成物」を特許請求している。
【００１０】
米国特許出願第２００８０００４２３６号は、硫酸化多糖を用いて哺乳動物において、短期間間隔にわたり、急性又は慢性のウイルス感染を治療又は予防するための方法及び組成物を記載している。
【００１１】
米国特許第４，４６５，６６６号は、ヘルペスウイルスによってもたらされる感染症の局所治療のための医薬製剤を開示しており、前記製剤は抗ウイルス剤として酸性硫酸化多糖又は酸性硫酸化ポリマーの相乗的組合せを含む。
【００１２】
米国特許第５，６６８，１１６号は、二価金属イオンがキレートした、グリコシド結合したＤ−グルクロニル側鎖を有するキシランのポリサルフェートの実質的に純粋な二価金属イオンキレートの有効量とウイルスとを接触させる工程を含むウイルスの不活性化方法を開示及び教示している。
【００１３】
米国特許第５５４１１６６号は、有効量の少なくとも１種の硫酸化多糖を患者に投与することを含む、動物又はヒト患者の抗転移治療及び／又は抗炎症治療の方法を開示及び教示している
マルチモーダル感染症の治癒を提供し、細菌性及びウイルス性感染症を治療し、バイオフィルム形成を回避し、同時に疼痛、発赤、浮腫、掻痒、刺激、及び分泌のような炎症症状を軽減する包括的な医薬が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１３／０２７３０９６号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１６／０２２０６０１号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００８／０００４２３６号明細書
【特許文献４】米国特許第４，４６５，６６６号明細書
【特許文献５】米国特許第５，６６８，１１６号明細書
【特許文献６】米国特許第５，５４１，１６６号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、抗微生物活性及び／又は抗ウイルス活性及び抗バイオフィルム活性及び抗感染活性もまた提供する有効な抗炎症組成物を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、より低濃度の抗炎症薬をこれらの効力又は有効性を低下させることなく使用することができ、有害作用や望ましくない副作用が低減した、活性成分の１つとして抗炎症薬を含む有効な相乗的抗炎症組成物及び医薬を提供することである。本発明のさらなる目的は、粘膜及び皮膚の炎症状態に起因する掻痒、浮腫、疼痛及び発赤のような炎症の症状を軽減するための医薬を提供することである。
【００１７】
本発明の他の目的及び利点は、説明を進めるにつれて明らかになる。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（発明の要旨）
本発明者は、ステロイド薬又は非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）のような抗炎症剤と硫酸化多糖との組合せを含む組成物が、非常に強力で相乗的な抗炎症効果を送達できることを予想外に発見した。
【００１９】
したがって、本発明は主に、少なくとも１種の抗炎症剤を少なくとも１種の硫酸化多糖と組み合わせて含む組成物を対象とする。好ましくは、本発明の組成物はまた、外部粘膜及び内部粘膜又は皮膚の感染症並びに炎症性疾患を治療するための１種以上の医薬担体を含む。
【００２０】
好ましくは、抗炎症剤（複数可）及び硫酸化多糖（複数可）は、前記抗炎症剤と前記硫酸化多糖（複数可）との間に相乗的相互作用があるような相対量で存在する。「相乗的相互作用」という用語は、本明細書では、２種の異なる薬剤（すなわち、抗炎症薬又はハーブ抽出物及び硫酸化多糖）の組合せの抗炎症効果が、別々に試験した場合に２種の薬剤によって生じる効果の合計よりも数値的に大きい（すなわち、相加効果よりも大きい）ことを示すために使用される。
【００２１】
別の態様において、本発明は、粘膜、皮膚及び体の器官の炎症及び炎症性疾患を治療するための方法を提供し、この方法は、少なくとも１種の抗炎症剤又はステロイド系薬物、カンナビノイド化合物若しくは非ステロイド系薬物（ＮＳＡＩＤ）のような薬物と、少なくとも１種の硫酸化多糖との組合せを、そのような治療を必要とするヒト対象又は動物対象に投与することを含む。好ましくは、これらの成分（すなわち、抗炎症剤（複数可）及び硫酸化多糖（複数可））の組合せは相乗的組合せであり、その抗炎症効果は単独使用時の前記成分による相加的結果よりも大きい。
【００２２】
本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、上記に開示された方法は、ヒト対象又は哺乳動物対象に、上で定義され以下に詳細に記載されている本発明の組成物の任意の実施形態を投与することを含む。
【００２３】
この方法の好ましい一実施形態では、炎症は、細菌、ウイルス又は真菌による感染、アレルゲン、がん、及びに身体的、化学的、自己免疫疾患又は熱的外傷からなる群から選択される１種以上の状態に関連する。
【００２４】
この方法の好ましい一実施形態では、炎症は、眼疾患、ドライアイ、角結膜炎、創傷、潰瘍性及び糖尿病性創傷、口腔粘膜炎、化学療法、放射線誘発炎症、炎症性腸疾患、肝疾患、皮膚感染症、皮膚アレルギー、乾癬、粘膜炎症、並びに胃腸感染症及び炎症、耳の疾患若しくは感染症、咽頭若しくは歯茎の炎症、膣の炎症、肛門の炎症からなる群から選択される疾患、障害又は状態のうちの１種以上から選択される疾患に関連する。
【００２５】
別の態様において、本発明は、粘膜、皮膚及び体の器官の炎症及び炎症性疾患を治療するのに使用するための、少なくとも１種の抗炎症剤又はステロイド系薬物、カンナビノイド化合物又は非ステロイド系薬物（ＮＳＡＩＤ）のような薬物と、少なくとも１種の硫酸化多糖との組合せを提供する。上記で定義された組合せが使用され得る典型的な炎症状態の例は、上記に示されている。
【００２６】
２つの群の化合物の組合せ、すなわち抗炎症剤（複数可）と硫酸化多糖（複数可）との組合せは、相乗的組合せであり、それによって予期しない強い抗炎症効果を提供することが意外にも見出された。ステロイド及びＮＳＡＩＤは、炎症及び炎症性疾患を治療するために使用される主な薬物であり、これら２つのクラスの薬剤は、本発明の組成物を調製するために使用される好ましいタイプの抗炎症剤である。
【００２７】
多くの抗炎症剤、特にステロイドは、重度な有害作用を引き起こす可能性があり、使用され得る最大用量又は治療期間に関して制限があることは、当技術分野において周知である。しかし、本発明の組成物中の抗炎症剤（複数可）と硫酸化多糖との間の相乗的相互作用により、この組成物中のステロイド及び／又はＮＳＡＩＤ薬の濃度を有意に低下させること、又は、副作用がより重度ではないより効力の弱いステロイドを使用することが、可能である。これは、所望の抗炎症作用を喪失することなく、副作用を軽減するという効果を有する。
【００２８】
本発明の新規組成物により、細菌、ウイルス及び／又は真菌による感染から生じる又はアレルゲンにより生じうる「無菌」炎症又は組織若しくは臓器の化学的損傷若しくは熱的損傷若しくは物理的損傷から生じる炎症である、治療が困難である炎症状態の治療が、可能になる。新規組成物は、組成物の相乗的性質により強力な抗炎症効果を提供しながら、より低濃度の抗炎症薬又はより効力の低い薬物の使用を可能にし、したがって、感染した場合に、硫酸化多糖の同程度の抗ウイルス活性、抗菌活性、抗バイオフィルム活性を提供しながら、生じる有害作用はより少ない。
【００２９】
上述したように、硫酸化多糖を、時には他の薬剤と組み合わせて含む組成物を開示する、いくつかの従来技術刊行物がある。しかし、これらの刊行物のいずれも、抗炎症薬と硫酸化多糖との相乗的組合せは教示していない。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】ＬＰＳ誘発ＴＮＦα分泌の阻害におけるＳＰＳとデキサメタゾンとの間の相乗的相互作用をグラフで示す。
【図２】ＬＰＳ誘発ＩＬ−６分泌の阻害におけるＳＰＳとデキサメタゾンとの間の相乗的相互作用をグラフで示す。
【図３】ＬＰＳ誘発プロスタグランジンＰＧＥ２分泌の阻害におけるＳＰＳとインドメタシンとの間の相乗的相互作用をグラフで示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
本発明は、一態様において、少なくとも１種の抗炎症剤を、少なくとも１種の硫酸化多糖と組み合わせて含む組成物を提供し、前記抗炎症剤（複数可）と前記硫酸化多糖（複数可）との間には、これらの抗炎症薬理活性に関して相乗的相互作用がある。
【００３２】
別の態様では、本発明は、そのような治療を必要とするヒト対象又は動物対象において炎症を治療する方法であって、１種以上の抗炎症剤と１種以上の硫酸化多糖との相乗的組合せをこの対象に投与することを含む方法を提供する。
【００３３】
本発明の好ましい実施形態では、１種以上の抗炎症剤対１種以上の硫酸化多糖の重量：重量比は、約１：０．０００１〜１：１００の範囲内にある。別の好ましい実施形態では、この比は約１：０．００１〜１：５０の範囲内にある。更なる好ましい実施形態では、この比は約１：０．０１〜１：２０の範囲内にある。一層更なる好ましい実施形態では、この比は約１：０．１〜１：１０の範囲内にある。
【００３４】
本発明の組成物の別の実施形態では、抗炎症剤と硫酸化多糖との重量比は、約１：０．０１である。別の実施形態では、この比は、約１：０．１２である。別の実施形態では、この比は、約１：２．７８である。別の実施形態では、この比は、約１：０．０１である。別の実施形態では、この比は、約１：０．０５である。別の実施形態では、この比は、約１：０．６９である。別の実施形態では、この比は、約１：１である。同様に、他の好ましい実施形態では、この比は１：０．５、１：０．０５、１：２、１：０．２及び１：０．０２であり得る。
【００３５】
抗炎症薬物
本発明の組成物中に存在する１種以上の抗炎症薬は、好ましくはステロイド系抗炎症剤、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）及び抗炎症カンナビノイド、並びにこれらの組合せから選択される。ステロイドの場合、デキサメタゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、モメタゾン、ハロメタゾン、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレレート又はベタメタゾンサクシネート、フルオロシノロン、トリアムシノロン、クロベタゾール、ジフロラゾン、ロテプレドノールエタボネート、及びヒドロコルチゾン並びにこれらの混合物を含む（しかしこれらに限定されない）、多くの異なるそのような薬物が、本発明を実施するために使用され得る。ＮＳＡＩＤの非限定的な例としては、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ジクロフェナク、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、トルメチン、スリンダク、メクロフェナメート、ケトプロフェン、ピロキシカム、トラマドール、セレコキシブ及びフルルビプロフェン、又はこれらの塩及びこれらの混合物が挙げられる。
【００３６】
抗炎症薬は、多くの慢性炎症状態に対して最も効果的な抗炎症療法であるコルチコステロイドから選択され得る。コルチコステロイド（グルココルチコステロイド、グルココルチコイド又は単にステロイドとしても知られている）は、世界で最も広く使用されている薬物中のものであり、多くの炎症性疾患及び免疫疾患において有効である。
【００３７】
ほとんどのＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）及び／又はシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の活性を阻害し、これによってプロスタグランジン及びトロンボキサンの合成を阻害する。本発明で使用される抗炎症剤は、承認薬、又はハーブ薬品及びサリチル酸若しくはデビルズクロー（ハルパゴフィタム）、リコリス及びその抽出物、グリチルレチン酸、カモミール及びその抽出物、アロエベラ、パンテノール、ビサボロール、アキレア・ミレフォリウム（Ａｃｈｉｌｌｅａ  ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ）抽出物、メリッサ・オフィシナリス（Ｍｅｌｉｓｓａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）葉抽出物、カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  Ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ウィンターグリーン葉抽出物、カレンデューラ・オフィシナリス（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）抽出物、エキナセア・プルプレア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  Ｐｕｒｐｕｒｅａ）抽出物、カンナビス若しくはヘンプ抽出物などのハーブ単離抽出物、並びに抗炎症作用を有する他の多くの生薬材料のいずれかであり得る。
【００３８】
本発明のさらに好ましい実施形態では、組成物中に（硫酸化多糖と共に）存在する抗炎症剤は、カンナビノイドである。特に好ましい実施形態では、カンナビノイドは、強力な抗炎症作用並びに他の広範な異なる生物活性を有することが見出されている化合物である、カンナビジオール（ＣＢＤ）、カンナビジオール酸（ＣＢＤＡ）、テトラヒドロカンナビノール又はテトラヒドロカンナビノール酸（ＴＨＣ）若しくは（ＴＨＣＡ）のうちの１種以上である。
【００３９】
抗炎症薬の副作用
ステロイド並びに多くのＮＳＡＩＤＳは、重度な副作用をもたらす場合がある。したがって、例えば、より新規な選択的ＣＯＸ−２阻害剤及び従来の抗炎症剤の両方を含むＮＳＡＩＤ（アスピリンを除く）は、心筋梗塞及び脳卒中のリスクを増大させる場合がある。したがって、これらは死亡及び／又は再発性ＭＩのリスクを高めるので、以前に心臓発作を起こしたことのある人には推奨されない。ＮＳＡＩＤの使用に関連する主な有害薬物反応（ＡＤＲ）は、胃腸（ＧＩ）管の直接的及び間接的な刺激に関連している。これに関して、ＮＳＡＩＤはＧＩ管に対して二重の攻撃をもたらす、すなわち、酸性分子が胃粘膜を直接刺激し、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害は保護プロスタグランジンのレベルを低下させる。ＧＩ管におけるプロスタグランジン合成の阻害は、胃酸分泌の増加、重炭酸塩分泌の減少、粘液分泌の減少、及び上皮粘膜に対する栄養効果の減少をもたらす。
【００４０】
コルチコステロイドは、神経機能の改善における迅速な開始及び有効性によって、１９５０年代以来、脳腫瘍患者における腫瘍周囲浮腫治療の選択薬である。しかし、コルチコステロイドの長期使用は、消費期間と共に増加する無数の有害作用を伴うことが知られている。
【００４１】
ステロイド摂取による潜在的な長期的副作用としては、とりわけ、骨の衰弱（骨粗鬆症）、挫傷しやすい薄皮、筋力低下、創傷治癒の遅延、クッシング症候群、糖尿病、脂肪肝疾患、及び高血圧などが挙げられる。
【００４２】
ステロイドによる局所治療中には、萎縮、線条、酒さ、口囲皮膚炎、ニキビ、紫斑病を含む、いくつかの副作用も見られる。多毛症、色素変化、創傷治癒の遅延、及び皮膚感染症の悪化はそれほど頻繁ではない。胃腸ステロイドの副作用は、重度な副作用による炎症性腸疾患における治療用量の制限である。
【００４３】
ステロイドの望ましくない副作用は、ループス又は関節リウマチ（ＲＡ）患者のような自己免疫疾患の治療において特に重度であり、その治療においては、炎症症状を抑制するために大用量が多くの場合必要とされ、血中の薬物の持続時間が短いために反復注射が必要とされる。短期使用において、ＧＣは非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）よりも効果的な抗炎症剤である。しかし、ＧＣによる長期の全身治療は、多くの場合実質的な副作用を伴う。これらの副作用は多くの場合用量依存的であり、高用量で顕著な症状が観察され、低用量では顕著な症状が少なく、薬物の使用を制限している。
【００４４】
ステロイドの眼の副作用としては、とりわけ、眼内圧の上昇、緑内障、並びに創傷治癒の阻害及び感染症のリスクが挙げられる。
【００４５】
天然物又はハーブ系抗炎症剤は非常に一般的であり、例えば、いくつか例を挙げれば、ビサボロール、カマズレン（ｃｈａｍｍａｚｕｌｅｎｅ）、アラントイン、カンゾウ抽出物、クルクミン、レスベラトロール、ハルパゴフィタム、カフェイン酸、ブロメライン、グレープシード抽出物、オリーブ葉抽出物及びケルセチンである。抗炎症活性を有するハーブ抽出物の広範なリストは、この分野の当業者にはよく知られている多くの異なる刊行物に見出すことができる。
【００４６】
硫酸化多糖
多糖は、グリコシド結合によって単糖（ｓｉｍｐｌｅ  ｓｕｇａｒｓ）（単糖（ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ））が結合したポリマーであり、これらは、安定化剤、増粘剤、乳化剤、食品、飼料、飲料などのような製品において多数の商業的用途を有する。
【００４７】
硫酸化多糖（ＳＰＳ）の一般的な供給源の１つは海藻であり、その存在量は海藻の３つの主な区分、すなわち緑藻綱（緑藻）、紅藻綱（紅藻）及び褐藻綱（褐藻）によって異なることが見出されている。海藻に見られる主なＳＰＳとしては、褐藻のフコイダン及びラミナラン、紅藻のカラギーナン、及び緑藻のウルバンが挙げられる。海洋由来の硫酸化多糖（ＳＰＳ）の包括的なリストは、Ｒａｐｏｓｏ  Ｍ．Ｆ．ら、（２０１５）［Ｍａｒ．  Ｄｒｕｇｓ，１３（５），２９６７−３０２８；  Ｍａｒｉｎｅ  Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ａｌｇａｅ  ｗｉｔｈ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ］によって刊行されている。ＳＰは、大型藻類、微細藻類、シアノ細菌、ラビリンチュラ菌綱、及び他の海洋源に由来する場合がある。
【００４８】
ＳＰＳは、例えば、ポルフィリジウム属種、Ｐ．アエルギネウム（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｅｕｍ）、ポルフィリジウム・クルエンタム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  Ｃｒｕｅｎｔｕｍ）、ポルフィリジウム・プルプレウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｍ）、Ｒ．レチクラタ（Ｒ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）、シアニディオシゾン・メロラエ（Ｃｙａｎｉｄｉｏｓｃｈｙｚｏｎ  ｍｅｒｏｌａｅ）、アトラクトフォラ・ヒプノイド（Ａｔｒａｃｔｏｐｈｏｒａ  ｈｙｐｎｏｉｄｅｓ）、ゲリディエラ・カルシコラ（Ｇｅｌｉｄｉｅｌｌａ  ｃａｌｃｉｃｏｌａ）、レマネア（Ｌｅｍａｎｅａ）、パルマリア・パルマタ（Ｐａｌｍａｒｉａ  ｐａｌｍａｔａ）、シュミツィア・ヒスコキアナ（Ｓｃｈｍｉｔｚｉａ  ｈｉｓｃｏｃｋｉａｎａ）、コンドルス・クリスプス（Ｃｈｏｎｄｒｕｓ  ｃｒｉｓｐｕｓ）、マストカルプス・ステラタス（Ｍａｓｔｏｃａｒｐｕｓ  ｓｔｅｌｌａｔｕｓ）又はアクロカエティウム・エフロレッセンス（Ａｃｒｏｃｈａｅｔｉｕｍ  ｅｆｆｌｏｒｅｓｃｅｎｓ）のような紅色微細藻類；ウンダリア・ピンナティフィダ（Ｕｎｄａｒｉａ  ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）、ラミナリア・サッカリナ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ  ｓａｃｃｈａｒｉｎａ）、Ｌ．ディジタータ（Ｌ．ｄｉｇｉｔａｔａ）、フカス・エバネセス（Ｆｕｃｕｓ  ｅｖａｎｅｓｃｅｎｓ）、Ｆ．セラタス（Ｆ．ｓｅｒｒａｔｕｓ）、Ｆ．ディスティカス（Ｆ．ｄｉｓｔｉｃｈｕｓ）、Ｆ．スピラリス（Ｆ．ｓｐｉｒａｌｉｓ）、アスコフィルム・ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｏｓｕｍ）及び／又はフカス・ベシクロサス（Ｆｕｃｕｓ  ｖｅｓｉｃｕｌｏｓｕｓ）のような褐藻；及びプラシノコッカス・カプスラタス・スピルリナ（Ｐｒａｓｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ  Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ）、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）及び／又はドナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）のような緑色藻類シアノ細菌から得ることができる。
【００４９】
硫酸化多糖の単離方法は、当技術分野において周知である。例えば、ポルフィリジウムＣの培養及びポルフィリジウムＣからの細胞外多糖の単離は、Ａｒａｄ，  Ｓ．ら、（１９８５）；  Ｐｌａｎｔ  ａｎｄ  Ｓｏｉｌ  ８９：  １１７−１２７；「Ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｌｆａｔｅｄ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ」に記載されている。同様に、紅藻由来の硫酸化多糖の特性の詳細な説明は、Ｇｅｒｅｓｈ，  Ｓ．  ＆  Ａｒａｄ，  Ｓ．（１９９１）  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３８：  １９５−２０１；  「Ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｄ  ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ：  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｒｈｅｏｌｏｇｙ」見出され得る。
【００５０】
本発明を実施するために使用されるＳＰＳは、細胞外由来多糖（ＥＰＳ）、細胞由来又は細胞壁多糖（ＷＰＳ）、及び合成起源又は海洋由来又は細菌由来のいずれかであってもよい。本発明を実施するために使用することができるＳＰＳの非限定的な例としては、カラギーナン、ヘパリン、デキストランサルフェート、ペントサンポリサルフェート、マンナンサルフェート、デルマタンサルフェート、過硫酸化ヘパリン、過硫酸化デルマタン、及び紅藻綱に属する海藻によって産生されるアガロース型硫酸化多糖（ＡＳＰ）が挙げられる。生物学的（又は合成）供給源にかかわらず、本発明で使用されるＳＰＳは、乾燥粉末、明澄透明ゲル製品、又は乳白色粘性ヒドロゲルの形態で提供されてもよい。
【００５１】
好ましい一実施形態では、本発明の組成物中に存在するＳＰＳは、藻類硫酸化多糖、ハーブ由来の硫酸化多糖、細菌性硫酸化多糖、及びこれらの組合せからなる群から選択される。
【００５２】
一実施形態では、本発明の組成物中に存在するＳＰＳは、単細胞及び多細胞藻類からなる群から選択される。
【００５３】
好ましい一実施形態では、本発明の組成物中に存在するＳＰＳは分枝鎖多糖である。別の好ましい実施形態では、ＳＰＳは直鎖多糖である。
【００５４】
別の好ましい実施形態では、ＳＰＳは細胞外由来のものである。
【００５５】
本発明の一実施形態では、多糖又は硫酸化多糖は、最適な薬理学的効果を達成するために、化学的に硫酸化して硫酸化度を高めてもよく、又は所望の分子サイズ及び／又は所望の硫酸化比を得るために、化学的、酵素的又は物理的に処理してもよい。
【００５６】
本発明において使用されるＳＰＳは、直鎖又は分岐鎖のいずれかである多糖をベースとしてもよく、種々の異なる糖を含んでもよく、異なる特定の硫酸化度を有してもよい。本発明のＳＰＳは、通常、主としてキシロース、ガラクトース、及びグルコースを異なる割合で含むヘテロポリマーである。しかし、フコース、ラムノース、及びフルクトースのような他の糖もまた、本発明の組成物中に存在し得る。
【００５７】
例として、本発明において使用されるＳＰＳは、好ましくは約１０×３ダルトン〜約１０×７ダルトン、より好ましくは１０×４ダルトン〜１０×６ダルトンの範囲の分子量を有し得る。しかし、他のサイズのＳＰＳもまた可能であり、特許請求の範囲に記載の本発明の一部を形成する。本発明で使用されるＳＰＳは、生理食塩水中の１％ゲルとして調製された場合、少なくとも５００Ｃｐｓ〜１０，０００Ｃｐｓ（センチポアズ）の粘度を有し得る。ＳＰＳの粘度は、ニュートン又は非ニュートン特性、偽塑性特性、及び／又はチキソトロピー特性のいずれかを有し得る。
【００５８】
本発明で使用されるＳＰＳは、（乾燥物質として計算して）約２〜２５％、より好ましくは５〜１５％の範囲の硫酸化率を有することができる。水中のＳＰＳのｐＨ値は、一般に４〜９の範囲、より好ましくは６〜８の範囲にある。
【００５９】
本発明の一実施形態では、硫酸化多糖は水溶液であり、この溶液の濃度は０．０２〜２％ｗ／ｗであり、粘度は室温で５０〜２０，０００ｃＰである。別の実施形態では、硫酸化多糖は、ヒアルロニダーゼに対して耐性であり、これらを生分解に対して耐性にし、より長い生物学的消失半減期を有する。
【００６０】
炎症性疾患とその適応症
炎症性の疾患及び状態は、例えば、（ウイルス性、細菌性及びアレルギー性を含む）任意の由来のドライアイ、結膜炎、ブドウ膜炎、ピンク色の眼、角結膜炎を含む（ただしこれらに限定されない）眼疾患；化学療法及び放射線誘発粘膜炎又は胃腸炎のような粘膜炎；炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎及びクローン病、炎症性の胃及び腸の潰瘍、皮膚の炎症及び乾燥肌、アトピー性皮膚炎、乾癬及び同様の皮膚疾患に関連した皮膚の炎症；耳、鼻、咽頭の感染症及び非感染性の炎症状態；膣感染症及び他の膣の炎症状態；肛門又は直腸の炎症；物理的又は化学的な傷害、熱、照射、自己免疫疾患又は化学療法に起因する組織又は臓器の炎症のような、炎症に関連するあらゆる疾患である。
【００６１】
ビヒクル形態
好ましい剤形としては、任意の液体又は半固体又は固体剤形が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、局所又は粘膜又は経口送達システムを調製することによって医薬品に製剤化することができる。局所送達システムは、点眼剤、懸濁剤、軟膏剤、クリーム剤、フォーム剤、スプレー剤、局所パッチ剤の形態であり得る。経口送達システムは、錠剤又はカプセル剤又はソフトカプセル剤又はサシェ剤又は顆粒剤又はシロップ剤であり得る。粘膜送達システムは、即時放出用又は徐放若しくは制御放出用のゲル、ペッサリー、浣腸剤、灌水器、ウォッシュフォーム剤、粘膜付着性ゲル又は錠剤であり得る。ビヒクルは、任意の許容される溶媒及び不活性成分、並びに防腐剤、抗酸化剤及び着色剤を含み得る。送達形態は、薬学、化粧品、獣医学の技術分野及び製剤の技術分野で知られているように、単回投与又は複数回投与、並びにマイクロ微粒子、顆粒、ナノ粒子、マイクロカプセル、リポソーム、ミセルなどであり得る。好適な剤形のさらなる詳細は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ、ＵＳＡ  （１９８０）を含む、この分野における任意の標準的な参考文献から得ることができる。
【００６２】
したがって、本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、溶媒、安定化剤、懸濁化剤、乳化剤、増粘剤及びこれらの組合せからなる群から選択される１種以上の賦形剤をさらに含む。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、フォーム剤、スプレー剤、リポソーム、半固体剤、クリーム剤、軟膏剤、パッチ剤、微粒子製剤、顆粒剤、マイクロ微粒子製剤、ナノ微粒子製剤、固体剤形、錠剤、カプセル剤、口腔内崩壊性カプセル剤、マウスウォッシュ及び粘着性バッカル錠からなる群から選択される剤形として処方される。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、組成物の放出プロファイルが、即時型、遅延型、制御型、持続型及び持効型からなる群から選択されるように処方される。
【００６５】
本発明の利点及び用途
硫酸化多糖と共にステロイド又はＮＳＡＩＤ薬を含む抗炎症相乗的組成物は、薬理学的効力の増大、より低いステロイド又はＮＳＡＩＤ濃度の使用による副作用の低減を伴う必要とされる効果、より少ない用量又は期間制限又は有害作用による禁忌症での長期使用のような多くの利益をもたらす。さらに、付随する抗ウイルス活性、抗細菌活性及び抗バイオフィルム活性は、感染由来の状態又は感染しやすい対象において炎症症状を治療するのに大きな有用性を提供する。組成物は、感染由来及び非感染由来の両方の炎症を治療及び予防するために使用することができる。
【００６６】
一般に、相乗的組合せの２種の主要な活性成分（すなわち抗炎症剤及び硫酸化多糖）は、単一の組成物において一緒に投与される。しかし、いくつかの場合において、これら２種の成分は、別々の組成物において同時に（例えば、患者は２種の活性成分のうちの１種をそれぞれ含む２つの異なる経口剤形を飲み込むか；又は２つの異なる局所製剤を適用する）、又はどちらかの順序で連続して投与される。
【００６７】
経口投与の場合、抗炎症剤がステロイドである場合、毎日投与されるべき各活性成分の量は一般に以下の通りである：
ステロイド抗炎症剤：２〜２０ｍｇ／日
硫酸化多糖：１００〜４０００ｍｇ／日、より好ましくは２００〜１０００ｍｇ／日
【００６８】
経口投与の場合、抗炎症剤が非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である場合、毎日投与されるべき各活性成分の量は一般に以下の通りである：
ＮＳＡＩＤ：４０〜４００ｍｇ／日
硫酸化多糖：１００〜４０００ｍｇ／日、より好ましくは２００〜１０００ｍｇ／日
【００６９】
眼への局所投与（例えば点眼剤による）の場合、抗炎症剤がステロイドであるときには、局所剤形内の各活性成分の濃度は以下の通りである：
ステロイド抗炎症剤：０．１〜１．０％（ｗ／ｗ）
硫酸化多糖：０．０１〜１．０％、より好ましくは０．０５〜０．５％（ｗ／ｗ）
【００７０】
眼への局所投与（例えば点眼剤による）の場合、抗炎症剤がＮＳＡＩＤであるときには、局所剤形内の各活性成分の濃度は以下の通りである：
ＮＳＡＩＤ：０．１〜２．０％（ｗ／ｗ）
硫酸化多糖：０．０１〜１．０％、より好ましくは０．０５〜０．５％（ｗ／ｗ）
【００７１】
皮膚への局所投与の場合（例えばクリーム剤、軟膏剤又はローションで）、抗炎症剤がステロイド系抗炎症剤であるときには、局所剤形内の各活性成分の濃度は以下の通りである：
ステロイド抗炎症剤：０．０５〜１．０％（ｗ／ｗ）
硫酸化多糖：０．０１〜２．０％、より好ましくは０．０５〜１．０％（ｗ／ｗ）
【００７２】
皮膚への局所投与の場合（例えばクリーム剤、軟膏剤又はローションで）、抗炎症剤がＮＳＡＩＤであるときには、局所剤形内の各活性成分の濃度は以下の通りである：
ＮＳＡＩＤ：０．５〜２．０％（ｗ／ｗ）
硫酸化多糖：０．０１〜２．０％、より好ましくは０．０５〜１．０％（ｗ／ｗ）
【００７３】
本発明は、その態様がより十分に理解されかつ認識されるように、以下の実施例において特定の好ましい実施形態に関連して説明されるが、本発明をこれらの特定の実施形態に限定することは意図されていない。それどころか、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得るすべての代替物、修正物及び均等物を網羅することが意図される。したがって、好ましい実施形態を含む以下の実施例は、本発明の実施を説明するのに役立ち、示された詳細は例示であり、本発明の好ましい実施形態の例示的な説明のみを目的とするものであり、処方手順並びに本発明の原理及び概念的態様の最も有用で容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために存在するということが、理解される。
【実施例】
【００７４】
インビトロでの実施例
以下のインビトロ実験の目的は、ポルフィリジウムＣ．藻類排出硫酸化多糖（ＳＰＳ）、褐藻ＳＰＳ又は緑藻ＳＰＳ及び以下の抗炎症剤、すなわちデキサメタゾン、インドメタシン、ヒドロコルチゾン、モメタゾンフロエート及びジクロフェナクのうちの１種との間の相容性及び起こり得る相互作用を調べることであった。相乗的相互作用の可能性は、リポ多糖（ＬＰＳ）で刺激した後に、マクロファージ細胞株（ＲＡＷ  ２６４．７）による炎症性メディエータ分泌をアッセイすることによって試験した。アッセイした炎症メディエータは、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン６（ＩＬ−６）及びプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）であった。
【００７５】
細胞によって許容される化合物の最大濃度を確認するために、予備的細胞生存率用量反応分析によって試験を開始した。以下の試験では無毒性濃度のみを使用した。
【００７６】
一般的方法
本発明の開発に使用される種々のタイプの藻類多糖の商業的供給源は以下の通りである：ポルフィリジウムＣ．細胞外硫酸化多糖は、例えば、Ｆｒｕｔａｒｏｍ  Ｌｔｄ  Ｉｓｒａｅｌ，  ＡＬＧＵＡＲＤ（商標）又はＧｒｅｅｎｓｅａ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ  Ｆｒａｎｃｅ、又はＮａｔｕｒｚｅｌｌ  Ｌｔｄ  Ｓｐａｉｎ  Ａｑｕａｌｉｆｔ（商標）などから得ることができる。褐藻由来の硫酸化多糖のウンダリア・ピンナフィフィダ抽出物は、Ｍａｒｉｎｏｖａ  Ｌｔｄ，  Ｍａｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ａｕｓｔｒａｌｉａから入手可能である。フカンリッチであるフカス・ベシクロサス抽出物は、Ａｋｏｔｔ  Ｌｔｄ，  Ａｋｏｍａｒｉｎｅ（商標）から入手可能であり、又はＦ．ベシクロサス由来フコイダン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）。ラミナリア・ディジタータ由来のラミナラン硫酸化多糖及び緑藻の細胞壁（ウルバ（Ｕｌｖａ）及びエンテロモルファ（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ））は、Ｅｌｉｃｉｔｙｌ  Ｌｔｄ  Ｏｌｙｇｏｔｅｃｈ、Ｆｒａｎｃｅから入手可能である。ウルバン及びフコダインはＣａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｔｄ、ＵＫから入手可能である。Ｈｉ−Ｑ  Ｌｔｄ、Ｔａｉｗａｎ製Ｏｌｉｇｏ  Ｆｕｃｏｉｄａｎ（低分子量（５００Ｄａ）フコイダン、硫酸化多糖−は、主に（フコース）を含み、天然の海洋褐藻から抽出された。Ｐｒａｓｉｎｏｔｅｃｈ  Ｌｔｄ，  ＵＫ、Ｇｌｙｃｏｍａｒ  Ｌｔｄ，  ＥＵ、ＭｉｃｒＡ  Ｌｔｄ、Ｎｏｒｗａｙは、海洋緑色微細藻類硫酸化多糖の供給源である。
【００７７】
本試験のために選択された試験薬剤の濃度（ｗ／ｗベースで計算された）は、すなわち、ＳＰＳ：１：４０００（０．０００５％）、１：２０００（０．００１％）、１：１０００（０．００２％）、１：５００（０．００４％）、デキサメタゾン：０．１μＭ（０．００３９％）、１μＭ（０．０３９％）、２．５μＭ（０．０９７％）、５０μＭ（１．９５％）、インドメタシン：１０ｎＭ（０．０００３６％）、０．１μＭ（０．００３６％）、１μＭ（０．０３６％）、２．５μＭ（０．０８９％）、５０μＭ（１．７８５％）、ヒドロコルチゾン：５．０μＭ（０．１８％）、モメタゾンフロエート：０．５μＭ（０．０２６％）、ジクロフェナク：０．１μＭ（０．００３９％）であった。
【００７８】
ＲＡＷ２６４．７単球マクロファージ細胞（約４ｘ１０５／ｍＬ）を、８００マイクロリットル／ウェルの完全増殖培地（２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ）を含む２４ウェルプレートに播種した。次いで、細胞を、３７℃、５％二酸化炭素で２４時間インキュベートした。この期間の終わりに、１μｇ／ｍＬのリポ多糖（ＬＰＳ）を補充した増殖培地を、試験物質（ＳＰＳ、抗炎症薬及びこれらの組合せ）並びに種々の対照と共に細胞に添加し、次いで、以前と同じ条件下でさらに２４時間の期間インキュベートした。このインキュベーション期間の後、馴化培地を種々の試験ウェル及び対照ウェルから吸引し、１４，０００ｇで５分間遠心分離して粒子状物質を除去した。次いで、透明上清を−７０℃で保存し、その後、その中の炎症メディエータ含有量をアッセイした。
【００７９】
解凍した上清中のサイトカイン／メディエータ含有量を、ＴＮＦα、ＩＬ−６及びＰＧＥ２用の標準的なＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用してアッセイした。
【００８０】
実施例１
ＴＮＦα分泌阻害における硫酸化多糖とデキサメタゾンとの相乗的相互作用
方法：Ｒａｗ  ２６４．７マクロファージ細胞をＬＰＳの非存在下又は存在下で（上記の通り）インキュベートし、ＳＰＳ（ポルフィリジウムＣ．ＳＰＳ）、デキサメタゾン又はこれらの組合せを用いずに又は用いて２４時間処理した。次いで、消費培地中のＴＮＦαレベルを、上で説明したようにＥＬＩＳＡによって定量した。ＤＭＳＯをビヒクルとして使用した。
【００８１】
結果：この試験の結果を図１に示す。種々の処理は、以下の注釈によって図１に示されている。ＳＰＳ［Ｔ．Ｉ．］  １：１０００、デキサメタゾン［Ｄｅｘ］２．５μＭ。予想通り、ＬＰＳの投与による炎症の誘発によって、サイトカインの分泌レベルが増加した。高濃度では、市販のステロイド薬デキサメタゾン及びＳＰＳの両方とも、単独で使用された場合、ＴＮＦαの過剰分泌を阻害することができたが、図１に示された結果は、両方の薬剤を組み合わせて使用した場合に、抗炎症作用の相乗効果があることを明確に示している。この図に要約された結果は、三連の試料の平均＋／−ＳＥＭとして示されている。図に示された統計的有意水準は以下の通りである：相乗効果の＄ナイーブ対照との差について＊ｐ＜０．０５。
【００８２】
実施例２
ＩＬ−６分泌阻害における硫酸化多糖とデキサメタゾンとの相乗的相互作用
方法：Ｒａｗ  ２６４．７マクロファージ細胞をＬＰＳの非存在下又は存在下で（上記の通り）インキュベートし、ＳＰＳ（ポルフィリジウムＣ．ＳＰＳ）、デキサメタゾン又はこれらの組合せを用いずに又は用いて２４時間処理した。次いで、上清培地中のＩＬ−６レベルを、上で説明したようにＥＬＩＳＡによって定量した。ＤＭＳＯをビヒクルとして使用した。
【００８３】
結果：この試験の結果を図２に示し、ここでは種々の処理が以下のように示されている：ＴＩ（ＳＰＳ  １：４０００）、Ｄｅｘ（デキサメタゾン；０．１μＭ）。ＳＰＳ単独もデキサメタゾン単独も、ＩＬ−６分泌の有意な低下をもたらさなかった。しかし、これらの処理の両方を共に組み合わせることによって相加的阻害効果よりもはるかに大きい結果がもたらされ、これらの間の相乗的相互作用を示している。この図に要約された結果は、三連の試料の平均＋／−ＳＥＭとして示されている。図に示された統計的有意水準は以下の通りである：相乗効果の＄ナイーブ対照との差について＊ｐ＜０．０５。
【００８４】
実施例３
プロスタグランジンＥ２分泌阻害における硫酸化多糖とインドメタシンとの相乗的相互作用
方法：ポルフィリジウムＣ．ＳＰＳの効果を、アラキドン酸代謝に由来する独立した炎症マーカーとしてのプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）分泌についても調べた。Ｒａｗ  ２６４．７マクロファージ細胞をＬＰＳの非存在下又は存在下で（上記の通り）インキュベートし、ＳＰＳ（ポルフィリジウムＣ．ＳＰＳ）、インドメタシン又はこれらの組合せを用いずに又は用いて２４時間処理した。次いで、上清培地中のＰＧＥ２レベルを、上記で説明したようにＥＬＩＳＡによって定量した。ＤＭＳＯをビヒクルとして使用した。
【００８５】
結果：図３に見られるように、ＳＰＳ及びインドメタシン（ＮＳＡＩＤ）の両方とも、ある程度ＬＰＳ刺激プロスタグランジンＥ２分泌を阻害したが、この効果は統計的に有意ではなかった。より低い濃度で試験した場合に相乗効果が観察された（図３）。種々の処理が以下のように示されている：ＴＩ（ＳＰＳ  １：２０００）、Ｉｎｄｏ（インドメタシン  １０ｎＭ）。この図に要約された結果は、三連の試料の平均＋／−ＳＥＭとして示されている。図に示された統計的有意水準は以下の通りである：相乗効果の＄ナイーブ対照との差について＊ｐ＜０．０５。
【００８６】
実施例４
ＴＮＦα分泌阻害における硫酸化多糖とヒドロコルチゾン又はモメタゾンフロエートとの相乗的相互作用
方法：ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα分泌に対するこれらの種々の処理の効果を評価するために、ヒドロコルチゾン、モメタゾンフロエート及びポルフィリジウムＳＰＳを上記の方法に従って単独で又は組み合わせて試験した。
【００８７】
結果：これらの調査の結果が以下の表１に要約されている。
【００８８】
【表１】
2020500945.tif 000003
【００８９】
この表に示されるように、試験された両方の組合せは、ＴＮＦα分泌の阻害について、相加的結果よりはるかに大きい結果（すなわち相乗的）結果を示した。
【００９０】
実施例５
ＴＮＦα分泌阻害における緑藻及び褐藻から得られた硫酸化多糖とデキサメタゾンとの相乗的相互作用
方法：ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦα分泌に対するこれらの種々の処理の効果を評価するために、上記のように、デキサメタゾン単独、褐藻及び緑藻から得られたＳＰＳ単独、並びにＳＰＳとデキサメタゾンの組合せを試験した。
【００９１】
結果：これらの調査の結果が以下の表２に要約されている。
【００９２】
【表２】
2020500945.tif 000004
【００９３】
この表に示されるように、試験された両方の組合せは、ＴＮＦα分泌の阻害について、相加的結果よりはるかに大きい結果（すなわち相乗的）結果を示し、このことは、本発明の組成物を調製するために、種々の異なる硫酸化多糖を抗炎症剤と組み合わせて使用できることを示す。
【００９４】
実施例６
ＴＮＦα分泌阻害における硫酸化多糖とジクロフェナクとの相乗的相互作用
方法：ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２分泌に対するこれらの種々の処理の効果を評価するために、上記のように、ジクロフェナク単独、ポルフィリジウムＳＰＳから得られたＳＰＳ単独、並びにジクロフェナクとＳＰＳとの組合せを試験した。
【００９５】
結果：これらの試験の結果が以下の表３に要約されている。
【００９６】
【表３】
2020500945.tif 000005
【００９７】
これらの結果から、ジクロフェナクと硫酸化多糖との組合せは、相加的阻害よりはるかに大きい、すなわち相乗的阻害をもたらしたことが見られ、試験された両方の組合せは、ＰＧＥ２分泌阻害について、相加的結果よりはるかに大きい（すなわち相乗的）結果を示した。
【００９８】
インビボ実施例
実施例７
ＳＰＳと抗炎症ステロイドとの組合せによる相乗的インビボ抗炎症効果
方法：この試験では、ＢＡＬＢ／Ｃマウス（各群６匹の動物）について右耳をクロトン油で処置した。左耳を非処置対照として使用した。クロトン油を塗布してから１時間後に、以下の組成物を各マウスの右耳に、これらを種々の処置群に割り当てたとおりに塗布した。
【００９９】
第１群−  非処置（対照、クロトン油のみで処置）
第２群−  ２０マイクロリットルのモメタゾンフロエート０．１％クリーム剤
第３群−  ２０マイクロリットルのヒドロコルチゾン１．０％クリーム剤
第４群−  １０マイクロリットルのポルフィリジウムＳＰＳ１．０％
第５群−  １０マイクロリットルのヒドロコルチゾン１．０％クリーム剤、１０マイクロリットルのポルフィリジウムＳＰＳ  １．０％ゲル
【０１００】
結果：種々の処置組成物の塗布３時間後の耳の厚さを測定し、第１群（非処置対照）と比較した。次いで、各処置法によってもたらされる耳の皮膚の厚さの減少率を計算した。結果を以下に示す：
第２群−  ６５％＋／−６％
第３群−  ３８％＋／−７％
第４群−  ２０％＋／−４％
第５群−  ７８％．＋／−４％
【０１０１】
これらの結果は、ヒドロコルチゾンとＳＰＳとの組合せ（第５群）が、ヒドロコルチゾンとＳＰＳを単独で使用した場合の結果の合計（第３群と第４群）から予想される阻害より、炎症性浮腫（皮膚の厚さで測定して）をより大きく阻害することを示している。このことは、炎症のインビボモデルで試験した場合に、ステロイド系抗炎症剤ヒドロコルチゾンがＳＰＳと相乗的に相互作用することを示している。
【０１０２】
上記で報告されたインビトロ試験（実施例１〜６）において使用される場合、比較的低濃度のＳＰＳが必要であることに留意することが重要である。この理由は、約０．００１％を超える濃度では、細胞生存率（ＭＴＴアッセイにより測定される）が低下するからである。結果として、これらの細胞培養試験では低濃度のＳＰＳしか使用することができなかった。
【０１０３】
しかし、このインビボ試験の結果から、本開示の組成物の相乗的抗炎症効果は、有意により高い濃度のＳＰＳが使用される場合にも見られることが明らかである。
【０１０４】
製剤実施例
以下のセクションは、本発明の組成物を含有するいくつかの可能な製剤の詳細を提供する。これらの製剤は例示目的のみのためにもたらされ、決して本発明の範囲を限定しない。
【０１０５】
実施例８
ヒドロコルチゾン及びポルフィリジウムＳＰＳを含有する局所用クリーム
【０１０６】
【表４】
2020500945.tif 000006
【０１０７】
実施例９
ウンダリアＳＰＳとベタメタゾンバレレート又はモメタゾンフロエートのいずれかを含有する局所用クリーム剤
【０１０８】
【表５】
2020500945.tif 000007
【０１０９】
実施例１０
ヒドロコルチゾン及びプラシノコッカスＳＰＳを含有する局所用クリーム剤
ヒドロコルチゾン及びプラシノコッカス（Ｐｒａｓｎｉｃｏｃｃｕｓ）ＳＰＳを含有する局所用クリーム剤は、以下の成分を使用して調製することができる：
ヒドロコルチゾン１％及びアロエ・バルバデンシス葉ジュース中のプラシノコッカスＳＰＳ  ０．２％、アベナ・サティバ（ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）（エンバク）核抽出物、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシトルエン、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、カモミラ・レクティタ（マトリカリア）（ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ  ｒｅｃｕｔｉｔａ（ｍａｔｒｉｃａｒｉａ））花抽出物、ジアゾリジニル尿素、ジメチコン、ジステアリルジモニウムクロリド、エデト酸二ナトリウム、グリセリン、グリセリルモノステアレート、加水分解コラーゲン、加水分解エラスチン、加水分解ホホバエステル、ホホバエステル、マグネシウムアスコルビルホスフェート、メンチルラクテート、メチルグルセス−２０、メチルパラベン、ワセリン、ポリソルベート６０、水酸化カリウム、ＰＰＧ−１２／ＳＭＤＩコポリマー、プロピルパラベン、精製水、レチニルパルミテート、ステアラミドプロピルＰＧ−ジモニウムクロリドホスフェート、ステアレス−２、ステアレス−２１、ステアリルアルコール、トコフェリルアセテート。
【０１１０】
実施例１１
グリチルリチン及びフカスＳＰＳを含有する局所用クリーム剤
グリチルリチン及びフカスＳＰＳを含有する局所用クリーム剤は、以下の成分を使用して調製することができる：
Ｅｕｃｅｒｉｎ（商標）ウォーターベース中グリチルリチン１％及びフカス（フコイダン）ＳＰＳ  ０．５％、ペトロラタム、鉱油、セレシン、ラノリンアルコール、フェノキシエタノール、ピロクトンオラミン。
【０１１１】
実施例１２
カンナビジオール及びウルバＳＰＳを含有する局所用クリーム剤
カンナビジオール及びウルバＳＰＳを含有する局所用クリーム剤は、以下の成分を使用して調製することができる：
カンナビジオール１．０％、ウルバ（ウルバン）ＳＰＳ  ０．２％、セテアリルオクタノエート６．０％、ホホバオイル６．０％、Ｍｏｎｔａｎｏｖ−６８（商標）４．０％、セトステアリルアルコール２．０％、グリセリルモノステアレート２．０％、ソルビタンオレエート１．０％、グリセリン２０％、微生物防腐剤（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ）ＱＳ、精製水最大１００。
【０１１２】
実施例１３
ラミナリアＳＰＳ及びデキサメタゾン又はベタメタゾンのいずれかを含有する局所軟膏剤
【０１１３】
【表６】
2020500945.tif 000008
【０１１４】
実施例１４
ポルフィリジウムＳＰＳ及びデキサメタゾンを含有する点眼剤
デキサメタゾン及びポルフィリジウムＳＰＳを含有する点眼剤は、以下の成分を使用して調製することができる：
デキサメタゾンホスフェート  １ｍｇ／ｍＬ及びポルフィリジウムＳＰＳ  ０．５ｍｇ／ｍＬ点眼剤、溶液、防腐剤非含有、また塩化ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、リン酸二ナトリウム十二水和物（Ｅ３３９）及び精製水も含有。
【０１１５】
実施例１５
サルガッサム（ｓａｒｇａｓｓｕｍ）ＳＰＳ及びプレドニゾロンを含有する口腔内崩壊錠
サルガッサムＳＰＳ及びプレドニゾロンを含有する口腔内崩壊錠は、以下の成分を使用して調製することができる：
口腔内崩壊錠は、１３．４ｍｇ、２０．２ｍｇ、及び４０．３ｍｇのプレドニゾロンリン酸ナトリウム（それぞれ１０ｍｇ、１５ｍｇ、又は３０ｍｇのプレドニゾロン塩基に相当）及びサルガッサムＳＰＳ５０ｍｇを含有する強度で調製される。各口腔内崩壊錠はまた、以下の不活性成分を含む：クエン酸、コロイド状二酸化ケイ素、クロスポビドン、グレープフレーバー、ヒプロメロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、メタクリレートコポリマー、微結晶セルロース、重炭酸ナトリウム、スクラロース、及びスクロース
【０１１６】
実施例１６
メサラミン及びポルフィリジウムＳＰＳを含有する放出制御型カプセル剤
経口投与用の結腸標的顆粒形態におけるポルフィリジウムＳＰＳを伴うメサラミンの遅延放出及び徐放放出剤形は、以下の成分から調製することができる：
ｐＨ６以上で溶解する腸溶性コーティングを用いたポリマーマトリックス中に、メサラミン  ４００ｍｇ及びＳＰＳ  ４００ｍｇからなる顆粒を含有するカプセル剤。
【０１１７】
カプセル剤の不活性成分は、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、微結晶セルロース、シメチコンエマルジョン、エチルアクリレート／メチルメタクリレートコポリマー、ノノキシノール１００分散液、ヒプロメロース、メタクリル酸コポリマー、タルク、二酸化チタン、クエン酸トリエチル、アスパルテーム、無水クエン酸、ポビドン、バニラフレーバー、及び食用の黒インクである。
【０１１８】
メサラミンをクルクミン又はカンナビジオールのいずれかで置換して、同じ剤形を調製することもできる。
【０１１９】
実施例１７
ヒドロコルチゾン及びフコイダンＳＰＳを含有する直腸用フォーム剤
アプリケーター付き加圧キャニスターにおいて使用するためのエアロゾルフォーム剤は、以下の成分から調製される：
セチルアルコール中、ヒドロコルチゾン酢酸エステル１０％及びフコイダンＳＰＳ  １．０％、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、ポリオキシエチレン−１０−ステアリルエーテル、プロピレングリコール、トリエタノールアミン、精製水、噴射剤ＨＰ  ７０及び乳化ワックス。
【０１２０】
実施例１８
ポルフィリジウムＳＰＳ及びデキサメタゾン、カンナビジオール又はグリチルリチンのいずれかを含有する口腔洗浄液
口腔粘膜炎のような状態の管理においてマウスウォッシュとして使用するための滅菌溶液は、以下の表に列挙した成分を使用して調製することができる。クエン酸及び／又は水酸化ナトリウムを使用して最終溶液のｐＨを７．０〜８．５の範囲の値に調整することができる。
【０１２１】
【表７】
2020500945.tif 000009
【０１２２】
本発明が前述の例示的な実施例の詳細に限定されず、本発明がその本質的な属性から逸脱することなく他の特定の形態で具体化され得ることは、当業者には明らかであり、したがって、本実施形態及び実施例はあらゆる点で例示的であり限定的ではないと見なされることが望ましく、前述の説明ではなく添付の特許請求の範囲を参照して、特許請求の範囲の意味及び均等物の範囲内にあるすべての変更が、その中に包含されることが意図されている。
【図１】
2020500945.tif 000010
【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年8月14日(2019.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の抗炎症剤、及び少なくとも１種の硫酸化多糖を含む組成物であって、前記抗炎症剤は、ステロイド薬、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、およびカンナビノイド、及びその組み合わせからなる群から選択される、組成物。
【請求項２】
一又は複数の抗炎症剤対一又は複数の硫酸化多糖の重量比が、１：０．０００１〜１：１００の範囲内にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
一又は複数の抗炎症剤対一又は複数の硫酸化多糖の重量比が、１：０．０１〜１：１０の範囲内にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
抗炎症ステロイド薬が、デキサメタゾン、プレドニゾロン、モメタゾンフロエート、ハロメタゾン、ベタメタゾン、ベタメタゾンバレレート、ベタメタゾンサクシネート、フルオロシノロン、トリアムシノロン、クロベタゾール、ジフロラゾン、ロテプレドノールエタボネート、及びヒドロコルチゾン並びにこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
非ステロイド系抗炎症剤が、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ジクロフェナク、アスピリン、インドメタシン、ナプロキセン、フェノプロフェン、トルメチン、スリンダク、メクロフェナメート、ケトプロフェン、ピロキシカム、トラマドール、セレコキシブ及びフルルビプロフェン、又はこれらの塩及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
抗炎症剤がカンナビノイドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
硫酸化多糖が、藻類硫酸化多糖、ハーブ由来の硫酸化多糖、細菌性硫酸化多糖、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
硫酸化多糖が、単細胞藻類及び多細胞藻類からなる群から選択される海洋由来のものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
硫酸化多糖が、藻類、植物、若しくは微生物の細胞内由来のもの、又は藻類、植物、若しくは微生物の細胞外由来のものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
硫酸化多糖が、分岐鎖多糖又は直鎖多糖である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
充填剤、溶媒、安定化剤、懸濁化剤、乳化剤、放出メディエータ、増粘剤、抗菌剤及び防腐剤、並びにこれらの組合せからなる群から選択される一又は複数の賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
液剤、懸濁剤、乳剤、フォーム剤、スプレー剤、リポソーム、半固体剤、クリーム剤、軟膏剤、パッチ剤、微粒子製剤、顆粒剤、マイクロ微粒子製剤、ナノ微粒子製剤、固体剤形、錠剤、カプセル剤、口腔内崩壊性カプセル剤、マウスウォッシュ及び粘着性バッカル錠からなる群から選択される剤形として処方される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
組成物の放出プロファイルが、即時型、遅延型、制御型、持続型及び持効型からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物を、ヒト対象又は哺乳動物対象に投与することを含む、炎症を治療する方法。
【請求項１５】
炎症が、細菌、ウイルス又は真菌による感染、アレルゲン、がん、身体的疾患、化学的疾患、自己免疫疾患又は熱的外傷からなる群から選択される一又は複数の状態に関連する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
炎症が、眼疾患、ドライアイ、角結膜炎、創傷、潰瘍性及び糖尿病性創傷、口腔粘膜炎、化学療法、放射線誘発炎症、炎症性腸疾患、肝疾患、皮膚感染症、皮膚アレルギー、乾癬、粘膜炎症、及び胃腸感染症及び炎症、耳の疾患又は感染症、咽頭又は歯茎の炎症、膣の炎症、肛門の炎症からなる群から選択される疾患、障害又は状態のうちの１種以上から選択される疾患に関連する、請求項１４に記載の方法。
【国際調査報告】
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