(57)【要約】本発明は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（以下、「ＰＧＧ」という）を含有する皮膚外用剤組成物に関し、より詳細には、ＰＧＧを含有することにより、角質形成細胞においてフィラグリンの生成を促進し、ロリクリン（ｌｏｒｉｃｒｉｎ）およびインボルクリン（ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ）の発現を増加させて正常な角質層の形成を促進し、これにより、皮膚バリア機能を強化させることによって、優れた皮膚の保湿力改善効果を提供することができる皮膚外用剤組成物、その用途およびそれを用いた皮膚の保湿方法に関する。【選択図】図３
2020535135.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１で表される１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を有効成分として含有する皮膚保湿用化粧料組成物。
［化学式１］
【化１】
2020535135.tif 000006
【請求項２】
前記植物性硬化油は、パーム硬化油、菜種硬化油、キャノーラ硬化油、オリーブ硬化油、およびこれらの混合物からなる群から選択される１種以上であることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項３】
前記１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースの含有量は、組成物の総重量に対して、０．０１〜１．０重量％であり、前記植物性硬化油の含有量は、組成物の総重量に対して、０．００１〜２．０重量％であることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項４】
前記組成物は、フィラグリンの遺伝子発現を増加させることを特徴とする、請求項１に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（以下、「ＰＧＧ」という）を含有する皮膚外用剤組成物に関し、より詳細には、ＰＧＧを含有することにより、角質形成細胞においてフィラグリンの生成を促進し、ロリクリン（ｌｏｒｉｃｒｉｎ）およびインボルクリン（ｉｎｖｏｌｕｃｒｉｎ）の発現を増加させて正常な角質層の形成を促進し、これにより、皮膚バリア機能を強化させることによって、優れた皮膚の保湿力改善効果を提供することができる皮膚外用剤組成物、その用途およびそれを用いた皮膚の保湿方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
角質層の主要機能は、皮膚の水分の蒸発を防ぐか、外部からの有害物質の侵入を防いで皮膚を保護してくれる機能を担当する。特に、角質層には、乾燥重量対比３０％の水が存在するが、このうち、２０％は角質細胞（ｃｏｒｎｅｏｃｙｔｅ）内に存在し、１０％は細胞間脂質に存在する。角質細胞内の水は、フィラグリンが分解された天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ  ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒｓ；ＮＭＦｓ）と結合して存在する。
【０００３】
フィラグリンは、表皮の分化過程中、最終分化と関連して発現され、フィラグリンの外にインボルクリンとロリクリンも保湿と関連した重要なマーカーである。ロリクリンは、最終分化を経る間に発現されるタンパク質であって、角質形成細胞が分化して安定的な角質を形成するのに必要であり、角質質量の７０〜８５％を占める物質であるが、これは、トランスグルタミナーゼが触媒するペプチド間の交差結合に参与できるグルタミンとリシンが豊かなドメインを有しており、角質形成タンパク質間の架橋結合を助けることにより、角質の形成に重要な役割を果たす。このようなロリクリンは、上部顆粒層において細胞膜と互いに結合してタンパク質として完成するので、角質形成細胞の最終分化過程を追跡する上で標識として使用される。
【０００４】
フィラグリン、インボルクリン、ロリクリンのようなマーカーの増加は、正常な角質層の形成を通じて角質細胞内にＮＭＦの前駆体であるフィラグリンと細胞間脂質が正常化したことを意味する。したがって、皮膚の老化を防止し、外部環境変化である大気乾燥、紫外線および各種の公害物質から皮膚の健康を維持できるように、皮膚組織の水分維持を促進しつつ、皮膚組織の水分の損失を防止する皮膚バリアを強化するように、角質層を形成させるために、フィラグリン、インボルクリン、ロリクリンなどのようなマーカーの発現を促進する皮膚保湿用物質の開発が要求される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】大韓民国登録特許第１０−１７０９７３４号（公告日：２０１７年２月２３日）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明者らは、大豆、緑茶、高麗人参など様々な天然物などの指標物質として報告されている様々な物質を表皮細胞に処理し、フィラグリンの遺伝子発現を増加させる物質をスクリーニングした後、ロリクリン、インボルクリンなどの発現を介して保湿マーカーが増加するかを確認し、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースがフィラグリンの遺伝子発現だけでなく、ロリクリンおよびインボルクリンの発現を増加させる結果を示すことを確認した。また、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースを植物性硬化油と共に使用すると、これらの効能がはるかに向上することを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を含有して、正常な角質層の形成を促進させることにより、皮膚の保湿力を向上させることができる、皮膚外用剤組成物、その用途およびそれを用いた皮膚の保湿方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記した目的を達成するために、本発明は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を有効成分として含有する皮膚保湿用皮膚外用剤組成物、その用途およびそれを用いた皮膚の保湿方法を提供する。より具体的には、本発明は、皮膚の保湿用皮膚外用剤組成物の製造において、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油の混合物の用途を提供する。また、本発明は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を有効成分として含有する皮膚外用剤組成物を用いた皮膚の保湿方法を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の組成物は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を含有して、正常な角質層の形成を促進させることによって、皮膚のバリア機能を強化し、最終的に優れた皮膚の保湿力の改善効果を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、ＰＧＧを濃度別に処理して細胞の生存力を確認した結果を示したものである。
【図２】図２は、ＰＧＧ０．２ｐｐｍまたは１ｐｐｍを角質形成細胞に処理した後、ｍＲＮＡを分離してＰＧＧによるインボルクリン（ＩＶＬ）およびロリクリン（ＬＯＲ）の遺伝子発現量を測定した結果を示したものである。
【図３】図３は、ＰＧＧ含有剤形の皮膚水分含有量の増加の程度を示したものである。
【図４】図４は、ＰＧＧ含有剤形の皮膚のしっとり程度に対する官能評価結果を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の皮膚外用剤組成物は、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油を有効成分として含有する。
【００１２】
１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコース（１，２，３，４，６−ｐｅｎｔａ−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ；ＰＧＧ）は、生物体に作用するタンニン（ｔａｎｎｉｎ）であって、多くの薬剤植物に存在し、抗炎症、抗酸化作用、抗癌作用、抗ウイルス作用のような様々な生物学的活性を有していることが知られており（参照：Ｂ.Ｍ. Ｃｈｏｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ，３２８：１８５−１８９，２００２；Ｌ.Ｌ. Ｈｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４５３：１４９−１５８，２００２；Ｄ.Ｇ. Ｋａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５２４：１１１−１１９，２００５；Ｓ.Ｊ. Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２９：２１３１−２１３４，２００６）、シャクヤクの根、ウコンの葉をはじめとする地上部、マンシュウグルミ（Ｊｕｇｌａｎｓ ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ）など様々な植物に存在し、下記化学式１の構造を有する化合物である。
［化学式１］
【化１】
2020535135.tif 000003
【００１３】
本発明において使用されるＰＧＧは、様々な植物から当業界に公知された方法で直接抽出して使用することもでき、商業的に市販されている商品を購入して使用することもできる。
【００１４】
本発明において使用される植物性硬化油は、パーム硬化油、菜種硬化油、キャノーラ硬化油、オリーブ硬化油、およびこれらの混合物からなる群から選択される１種以上である。
【００１５】
本発明による皮膚外用剤組成物は、ＰＧＧを組成物の総重量に対して、０．０１〜１．０重量％、好ましくは０．０５〜０．２重量％の量で含有することができる。ＰＧＧの含有量が０．０１重量％未満である場合、十分な皮膚保湿効果を得ることができず、１．０重量％を超える場合、安全性および剤形の安定性が低くなり得る。
【００１６】
さらに、本発明による皮膚外用剤組成物は、植物性硬化油を組成物の総重量に対して、０．００１〜２．０重量％、好ましくは１．２〜１．７重量％の量で含有することができる。上記の範囲で含む場合、本発明の意図した効果を示すのに適切だけでなく、組成物の安定性および剤形の安全性の両方を満たすことができ、費用対比効果の側面からも、上記の範囲で含むことが適切であり得る。具体的に、ＰＧＧと植物性硬化油との混合物が０．０１１重量％未満である場合、十分な皮膚保湿効果を得ることができず、３．０重量％を超える場合、安全性と剤形の安定性が低くなり得る。
【００１７】
本発明の組成物は、保湿用皮膚外用剤組成物として使用されることができ、これは、フィラグリンの遺伝子発現だけでなく、ロリクリンおよびインボルクリンの発現を向上させることにより、皮膚の角質形成細胞の分化を誘導し、正常な角質層の形成を促進して皮膚のバリア機能を強化させることができる。したがって、表皮分化の不完全さによって生じる皮膚乾燥症、アトピー皮膚炎、接触性皮膚炎または乾癬などを予防または改善する皮膚外用剤組成物として有用に使用され得る。
【００１８】
本発明による組成物は、これに限定されるものではないが、化粧料組成物または医薬組成物として剤形化され得る。
【００１９】
本発明による組成物は、化粧品学または皮膚科学的に許容可能な媒質または基剤を含有して剤形化され得る。これは、局所適用に適したすべての剤形であって、例えば、溶液、ゲル化、固体、練りこねた無水生成物、水相に油相を分散させて得られたエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球またはイオン型（リポソーム）および非イオン型の小嚢分散剤の形で、またはクリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレーもしくはスティックコンシーラ−の形で提供され得る。また、フォーム（ｆｏａｍ）の形で、または圧縮された推進剤をさらに含有したエアロゾール組成物の形としても使用され得る。これらの組成物は、当該分野における通常の方法によって製造され得る。
【００２０】
さらに、本発明による組成物は、脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤、ゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（ｆｏａｍｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型もしくは非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性もしくは親油性活性剤、脂質小嚢または化粧品に通常使用される任意の他の成分などの化粧品学もしくは皮膚科学分野において通常使用される補助剤を含有することができる。上記補助剤は、化粧品学または皮膚科学分野において一般に使用される量で取り込まれる。
【００２１】
また、本発明の組成物は、皮膚保湿改善効果を増加させるために、皮膚への吸収促進物質を含有することができる。
【００２２】
また、本発明は、皮膚保湿改善効果のための本発明による皮膚外用剤組成物の用途を提供することができる。具体的に、本発明は、皮膚保湿用皮膚外用剤組成物、好ましくは化粧料組成物の製造において、１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油の混合物を有効保湿成分として使用することができる。
【００２３】
また、本発明は、皮膚の保湿が必要な被検体に、本発明の１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−グルコースおよび植物性硬化油の混合物を有効保湿成分として含有する皮膚外用剤組成物を局所的に適用し、皮膚の保湿力を維持または改善する方法を提供することができる。
【実施例】
【００２４】
以下、試験例および剤形例を挙げ、本発明の構成および効果をより具体的に説明する。しかしながら、これらの試験例および剤形例は、本発明に対する理解を助けるために例示の目的にのみ提供されたものだけであり、本発明のカテゴリおよび範囲が下記の例によって制限されるものではない。
【００２５】
［参考例１］ＰＧＧの準備
下記において使用したＰＧＧは、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨから入手した。
【００２６】
［参考例２］植物性硬化油の準備
下記において植物性硬化油としては、ＡＡＫ  Ｓｗｅｄｅｎ  ＡＢから入手したＡｋｏｇｅｌ  Ｐｌｕｓを使用した。
【００２７】
［試験例１］ＰＧＧの細胞毒性評価
新生児の角質形成細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）（Ｌｏｎｚａから入手）を、ＫＧＭ培地を使用して６０ｍｍ細胞培養ディッシュ（ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｉｓｈ）に１．２５×１０６細胞／ディッシュの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで８０％程度のコンフルエンシーまで培養した。その後、ＰＧＧを０ｐｐｍ、１ｐｐｍ、２ｐｐｍおよび４ｐｐｍの濃度で細胞を処理して４日間培養した後、細胞の生存力を確認した。確認の結果は、図１に示した。
【００２８】
図１を見ると、ＰＧＧの濃度差による細胞生存力に有意な差がなく、ＰＧＧは細胞毒性がない物質であることを確認できる。
【００２９】
［試験例２］フィラグリン遺伝子発現量の測定（ＲＮＡ分離およびＲＴ−ＰＣＲ）
新生児の角質形成細胞（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ）（Ｌｏｎｚａから入手）を、ＫＧＭ培地を使用して６０ｍｍ細胞培養ディッシュ（ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｉｓｈ）に１．２５×１０６細胞／ディッシュの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで８０％程度のコンフルエンシーまで培養した。その後、大豆、緑茶、高麗人参、その他の天然物からＰＧＧを含む８つの化合物を試験対象物質として選択し（表１）、これらの化合物をそれぞれ１ｐｐｍで細胞を処理して２日間培養した。培養後、培地を除去し、トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ）〔インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）〕１ｍｌを添加して、インビトロジェン社のＲＮＡ分離法によってｍＲＮＡを分離した。紫外線検出器〔ヒューレット・パッカード（ＨＥＷＬＥＴＴ  ＰＡＣＫＡＲＤ）〕を用いて、２６０ｎｍでｍＲＮＡを定量した後、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）を実施した。それぞれのサンプルに対する遺伝子分析のために、相補的な遺伝子であるＲＰＬ１３Ａを基準として補正し、それぞれのサンプルに対するフィラグリン発現量は、下記表１に示した。
【００３０】
【表１】
2020535135.tif 000004
【００３１】
上記表１に示した結果を見ると、他の化合物を処理したサンプルの場合には、フィラグリンの発現増加率が大きくなかったが、ＰＧＧを処理したサンプルの場合には、対照群対比２倍以上のフィラグリン発現増加率を示すことを確認できる。
【００３２】
［試験例３］インボルクリン（ＩＶＬ）、ロリクリン（ＬＯＲ）の遺伝子増加実験（ＲＮＡ分離およびＲＴ−ＰＣＲ）
新生児の角質形成細胞を、ＫＧＭ培地を使用して６０ｍｍ細胞培養ディッシュ（ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｄｉｓｈ）に１．２５×１０６細胞／ディッシュの密度で分注した後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで８０％程度のコンフルエンシーまで培養した。その後、ＰＧＧを０．２ｐｐｍまたは１ｐｐｍで上記角質形成細胞を処理して４日間培養した。培養後、培地を除去し、トリゾール（Ｔｒｉｚｏｌ）（インビトロジェン）１ｍｌを添加して、インビトロジェン社のＲＮＡ分離法によってｍＲＮＡを分離した。紫外線検出器（ヒューレット・パッカード）を用いて、２６０ｎｍでｍＲＮＡを定量した後、ＬＯＲとＩＶＬのプライマー〔それぞれＬＯＲ−Ｈｓ０１８９４９６２＿ｓ１、ＩＶＬ−Ｈｓ００８４６３０７＿ｓ１；これらのいずれもライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から入手〕を使用して、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）を実施した。それぞれのサンプルに対する遺伝子分析のために、相補的な遺伝子であるＲＰＬＰ０を基準として補正し、結果は図２に示した。
【００３３】
図２を見ると、ＰＧＧを０．２ｐｐｍの濃度で処理した場合には、ロリクリン遺伝子の発現量は、対照群と比較してほとんど差がないが、インボルクリン遺伝子は、対照群対比３倍以上の発現量の増加を示すことが分かる。
【００３４】
また、ＰＧＧを１ｐｐｍの濃度で処理した場合には、対照群対比インボルクリン遺伝子は５倍、ロリクリン遺伝子は２倍以上増加したことを確認できる。
【００３５】
［参考例３］実施例および比較例の製造
下記表２の組成に応じて、通常の方法で柔軟化粧水を製造した（単位：重量％）。
【００３６】
【表２】
2020535135.tif 000005
【００３７】
［試験例４］皮膚水分量および皮膚のしっとり評価
上記参考例３の比較例１〜５および実施例１〜３の皮膚保湿力を調べるために、次のように評価した。
【００３８】
３０〜４０代の女性８０人をそれぞれ１０人ずつ８組に分け、それぞれ比較例１〜５または実施例１〜３の柔軟化粧水を朝晩、毎日２回ずつ８週間顔面に塗布するようにした。塗布開始前と、塗布後４週、８週経過した時点で恒温、恒湿条件（２４℃、相対湿度４０％）で、皮膚水分量測定器〔コルネオメーター（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ）  ＣＭ８２５は、Ｃ＋Ｋ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｃｏ．、ドイツ〕を用いて皮膚の水分含有量を測定し、その結果を図３に示した。図３の結果値は、皮膚の水分含有量を意味する。
【００３９】
図３を見ると、ＰＧＧと植物性硬化油の両方を含有していない比較例１および植物性硬化油のみを含有する比較例２の場合には、皮膚水分含有量がほとんど増加しなかったが、ＰＧＧを単独で含有する比較例３〜５の場合には、比較例１に比べて４週と８週で皮膚水分含有量が濃度依存的に増加したことが分かる。
【００４０】
また、ＰＧＧと植物性硬化油を共に含有した実施例１〜３の場合、比較例３〜５に比べて皮膚水分含有量がさらに増加したことを確認できる。
【００４１】
また、官能評価のために、上記比較例１〜５または実施例１〜３の柔軟化粧水を使用したユーザーからの使用前と使用後（塗布後４週目）、皮膚のしっとり程度を１点から５点に点数化して示すようにして（１点：非常に悪い、５点：非常に良い）、その結果を図４に示した。
【００４２】
図４を見ると、ＰＧＧと植物性硬化油の両方を含有していない比較例１および植物性硬化油のみを含有する比較例２の場合には、皮膚のしっとり程度がほとんど変化しなかったが、ＰＧＧを単独で含有する比較例３〜５の場合には、比較例１に比べて塗布した後、４週目に皮膚のしっとりが増加し、また、ＰＧＧと植物性硬化油を共に含有した実施例１〜３の場合、比較例３〜５に比べて皮膚のしっとりがさらに増加したことを確認できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2020535135.tif 000009
【図４】
2020535135.tif 000010
【国際調査報告】
2020535135.tif 000011
2020535135.tif 000012
2020535135.tif 000013
2020535135.tif 000014