(57)【要約】  それを必要とする対象における炎症に関連するドライアイまたは眼疾患を治療するための組成物および方法を本明細書では提供する。治療用組成物は、アディポネクチンペプチド模倣化合物、および薬学的に許容される担体を含み、治療薬を投与する。ドライアイまたはそれを必要とする対象における炎症に関連する眼疾患の１つまたは複数の症状または臨床徴候を緩和するための方法も提供される。
2020535117.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象のドライアイを治療する方法であって、前記方法はアディポネクチンペプチド模倣化合物およびリフィティグラスと薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与して、対象のドライアイを治療することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記組成物および治療剤は、硝子体内注射、結膜下注射、結膜内注射、筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、前房内注射、または対象の眼への移植によって局所投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ドライアイは涙液分泌低下、涙液欠乏症、眼球乾燥症、シェーグレン症候群ドライアイ、非シェーグレン症候群ドライアイ、乾性角結膜炎、水性涙液欠乏ドライアイ（ADDE）、蒸発性ドライアイ（EDE）、からなる群から選択され、環境ドライアイ、スティーブンス・ジョンソン症候群、限界性眼性類天疱瘡眼瞼炎、まぶた閉鎖不全、感覚神経麻痺、アレルギー性結膜炎関連ドライアイ、ウイルス感染後結膜炎ドライアイ、白内障手術後ドライアイ、VDT手術関連ドライアイ、およびコンタクトレンズ装用に関連するドライアイであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回またはそれ以上の頻度で対象に投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記治療剤は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回またはそれ以上の頻度で対象に投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が隔日またはより少ない頻度で投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記治療薬が一日おきにまたはそれより少ない頻度で投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記アディポネクチンペプチド模倣化合物は、最終組成物の約0.0001％(wt)〜約90％(wt)の量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記治療剤が、最終組成物の約0.1％(wt)から約20％(wt)の間の量で投与されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物は、溶液、懸濁液、シロップ、液体、ゲル、ヒドロゲル、乳濁液、リポソーム、エアロゾル、ミスト、フィルム、懸濁液、プラグ、ポリマー、インプラント、コンタクトレンズ、接眼インサートからなる群から選択される製剤であり、ナノ粒子、マイクロ粒子、徐放性製剤、および眼科医療機器に適した製剤であることを特徴として請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
シクロスポリン、人工涙液、コルチコステロイド、抗炎症剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を投与することをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記アディポネクチンペプチド模倣化合物が式IIによって表され：
Xaai-Ile-Pro-Xaa2-Leu-Tyr-Xaa3-Phe-Ala-Xaa4-Xaa5(配列番号２)（II）
ここで、前記Ｃ末端アミノ酸は任意にアミド化され、その変異体、その誘導体、またはその薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記アディポネクチンペプチド模倣化合物は、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe- Ala-D-Ser(配列番号３)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala(配列番号４)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala-NH2(配列番号５)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-NH2(配列番号６)、(D-Asn-Ile-Pro- Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-His-Pro)2-Dab-NH2(配列番号７)、その変異体、その誘導体、およびその薬学的に許容される塩を含む群から選択されることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記アディポネクチンペプチド模倣化合物は配列番号６であることを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記治療剤は、リフィティグラスおよびレスタシス（登録商標）またはその薬学的に許容される塩から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記治療薬が、約3.5％〜約6.5％のリフィティグラスまたはその薬学的に許容される塩を含むことを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
それを必要とする対象の炎症に関連する眼疾患を治療する方法であって、請求項１４に記載のアディポネクチンペプチド模倣化合物またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体を含む組成物の治療有効量を対象に投与すること、および対象の炎症に関連する眼疾患を治療する治療薬を投与することを含む方法。
【請求項１８】
それを必要とする対象におけるドライアイの少なくとも１つの症状または臨床徴候を緩和するための方法であって、
ａ）請求項１４に記載の治療有効量のアディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与すること、および
ｂ）薬学的に許容される担体、および
ｃ）治療薬の投与すること
でドライアイの少なくとも１つの症状または臨床徴候を緩和する方法。
【請求項１９】
それを必要とする対象における眼の疾患または障害を治療するための方法であって、
ａ）請求項１４に記載の治療有効量のアディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与すること、および
ｂ）薬学的に許容される担体、および
ｃ）治療薬の投与すること
で対象の炎症に関連する眼疾患を治療する方法。
【請求項２０】
前記対象は、涙液分泌の変化、涙液クリアランスの変化、眼球表面の損傷、角膜上皮欠損、眼球表面細胞の変化、涙液膜の安定性の変化、涙液量の変化、涙液膜組成の変化、変化涙浸透圧、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるドライアイの少なくとも１つの症状または臨床徴候を示すことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、眼疾患を治療するためのアディポネクチンペプチド模倣薬という発明の名称の米国非仮出願第15/676,968号の優先権を主張し、2017年８月１４日に出願されたHenry Hsuを発明者とし、前述の出願の内容はその全体が参照として本明細書に組み込む。
［コンパクトディスクで提出された「シーケンスリスト」、表、またはコンピュータープログラムリスト付録の参照］
【０００２】
本出願は、ここに同時に提出された電子配列表の資料を参照により組み込む。その電子配列表の素材は、2018年８月７日に作成された「ALLY002.CIPPCT_ST25.txt」という名前のテキスト（.txt）ファイルとして提出される。ファイルサイズは６KBであり、その全体を参照として本明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００３】
眼表面システムは、角膜、結膜、涙腺、マイボーム腺、鼻涙管、およびそれらに関連する涙液および結合組織マトリックス、ならびにまぶたおよびまつげで構成され、すべて連続上皮によって統合され、神経、内分泌、免疫、および血管系は相互に繋がっている。涙腺は人間の涙を生成する。涙はまばたきによって供給され、眼表面から蒸発し、鼻涙管から排出される。涙は、以下の３つの層、親水性ムチンの最内層であり杯表面の上皮を覆う杯細胞によって生成されるぬるぬるした物質の層、ムチン層の上に浮かび、約0.9％生理食塩水である涙腺によって生成される水性涙層、および、マイボーム腺によって生成される表面の薄い脂質層は、均一な涙液の広がりを助け、涙液の蒸発を遅くする層で構成される。これらの３層構造により、涙液膜が安定し、涙液膜が目の保湿を維持し、光が目の中を通過するための滑らかな表面を作成し、目の前に栄養を与え、怪我や感染から保護する。眼表面システムの繊細な恒常性バランスを乱す要因は、涙液層の安定性と浸透圧に悪影響を及ぼし、浸透圧、機械的、および炎症性の損傷をもたらす可能性がある。眼表面上皮細胞の涙液浸透圧上昇への曝露は、炎症誘発性サイトカインの放出を含む炎症経路を活性化する。これは、眼表面への免疫細胞、特に抗原提示細胞とＴ細胞の補充と浸潤につながる。
【０００４】
乾性角結膜炎としても知られるドライアイ疾患（DEDまたはドライアイ）は、涙と眼表面の多因子障害である。それらの特徴は、乾燥により炎症を起こした目、過度の涙目、熱感および刺痛、光過敏症、異物感、痛みおよび赤み、目の疲労、および/または視力障害である。ドライアイでは、眼表面上皮は扁平上皮化生を受け、杯細胞の損失、ムチン欠乏および角質化によって現れ、涙液層が不安定になる。涙液層の安定性と浸透圧に悪影響を与える要因は、眼表面の損傷を誘発し、先天性および適応性の免疫応答を生成する炎症カスケードを開始する可能性がある。これらの免疫炎症反応は、さらなる眼表面損傷と自己持続性炎症サイクルの発生につながる（スティーベンソン等、眼科学アーカイブ（Arch. Ophthalmol）2012、130（i）：90-100）。
【０００５】
ドライアイの主なクラスは、涙液欠乏性ドライアイ（ADDE）および蒸発性ドライアイ（EDE）である。ADDEは涙液分泌の不足によるものであり、このクラスはシェーグレン症候群のドライアイ（涙腺と唾液腺は自己免疫プロセス、例えばリウマチ性関節炎の標的となる）および非シェーグレン症候群のドライアイ（涙液機能障害、しかし、シェーグレン症候群の全身性自己免疫機能は除外される（例、加齢に伴うドライアイがある）。EDEは、通常の涙液分泌機能の存在下で露出した眼表面からの過剰な水分損失が原因である。その原因は、内因性（瞼の構造またはダイナミクスに影響を与える内因性疾患、例えばマイボーム腺機能不全）または外因性（外因性曝露、例えばビタミンＡ欠乏により眼表面疾患が発生する場合）である可能性がある。マイボーム腺機能不全では、涙の脂質層が変化し、涙液の蒸発が増加する。例えば、「ドライアイ疾患の定義と分類：2007年国際ドライアイワークショップのガイドライン」、願表面（Ocul Surf）、2007、5（2）：75-92を参照のこと）。ドライアイの両方のクラスで、最終的な結果は、刺激と炎症の自己永続的なサイクルである。
【０００６】
50歳以上の凡そ500万人のアメリカ人がDEDであり、数百万人がドライアイの突発的な症状を経験していると推定され、これらのうち、約３分の２は女性である。DEDの有病率は、年齢の増加とともに劇的に上昇する。ドライアイ疾患は、日常生活の活動のパフォーマンスを妨げる可能性があり、DEDは生活の質の全体的な低下と関連する。
【０００７】
眼の表面疾患指数（OSDI）アンケート、ドライアイの症状評価（SADE）、涙の分解時間（TBUT）、眼表面の生体色素染色、涙液メニスカス高さ分析、涙液膜浸透圧分析、シルマーテストなど、眼疾患患者の状況を診断および検査に用いるいくつかの技術もしくは臨床措置がすでに存在しています。TBUTテストは、３層の涙液層が崩壊するのに必要な時間を測定します。TBUTテスト時間の短縮は、涙の質の低下を示し、ドライアイであることを示す。シルマーのテストでは、生成された涙の量を測定し、各眼の下瞼（結膜嚢）内に数分にわたって、ろ紙の小さな紙片を配置し、毛細管現象によって涙液をろ紙に引き込むことによって実行される。その後、紙を取り除き、水分量をミリメートル単位で測定する。通常、５mm未満の測定値はドライアイを示す。
【０００８】
慢性DED患者を治療する眼科医は、眼表面の炎症の症状を管理する必要がある。視力の低下とは別に、そのような炎症の症状には、結膜や瞼の赤み、痛み、腫れ、浮腫（結膜浮腫）も含まれうる。DEDでは、刺激性の症状は、炎症性サイトカインの放出と眼表面への炎症細胞の浸潤（ラム等、アメリカ眼科ジャーナル（Am J Ophthalmol）、2009、147：198-205、アルバースマイヤー等、Exp Eye Res、2010、90（3）：444-451）、ならびに眼表面に分布する神経線維の刺激によるものであり（クネール等、眼科学アーカイブ（Arch. Ophthalmol）2000、118-（11）：1489-96）、眼表面組織の損傷を引き起こす。炎症は、DEDで特定される重要な臨床的な徴候である上皮障害にもつながる。
【０００９】
ドライアイの現在の治療法は、症状を軽減するための涙液の補充に焦点を合わせた緩和的治療である。ドライアイの軽度および中程度の症例の従来の治療には、補助潤滑が含まれる。数時間ごとに治療用の点眼薬や人工涙液などの眼科用製剤を塗布すると、眼の表面の涙液膜を維持および強化し、一時的に緩和することができる。潤滑性の軟膏も使用される。涙軟膏は、白色ワセリン、鉱油、および同様の潤滑剤を含み、潤滑剤および皮膚軟化剤として機能する。これらの緩和療法は短期的には利点があるが、ドライアイの長期制御療法にはあまり有用性がない。
【００１０】
RESTASIS（登録商標）（シクロスポリンＡ）は、ドライアイ治療用の最初の処方製品である。シクロスポリンＡは、いくつかの経路を介して免疫抑制活性を発揮し、シクロスポリンＡの免疫調節活性は、移植拒絶、乾癬、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、DEDなどの免疫に基づく障害の治療に使用される。シクロスポリンＡの局所投与は、おそらく副交感神経系関連神経伝達物質の局所放出を促進することにより、涙液分泌を増加させることが示される。DEDにおけるシクロスポリンＡ治療の有益な効果は十分に確立されている。しかし、多くのDED患者が局所シクロスポリンＡに対して一貫した治療反応を示さないことは明らかである。
【００１１】
したがって、現在、炎症に関連するドライアイおよび眼疾患の患者の大多数に対する有効な治療選択肢は殆どない。驚くべきことに、開示された変性ペプチドは、眼疾患における炎症に応答したＴ細胞の移動を阻害することが示され得る。そのため、効果的で安全な治療法に対して高く満たされていないニーズがある。本発明はこの必要性を満たし、他の利点も提供する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本願発明の一態様を、それを必要とする対象において炎症に関連するドライアイおよび眼疾患を治療するための組成物および方法が本明細書で提供する。この方法は、アディポネクチンペプチド模倣化合物およびリフィティグラスおよび薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与して、対象のドライアイを治療することを含む。
【００１３】
いくつかの実施態様では、組成物および治療剤は、硝子体内注射、結膜下注射、結膜内注射、筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、前房内注射、または対象の眼への移植によって局所投与される。いくつかの実施態様では、ドライアイは、催涙、涙液不足、眼乾燥症（xerophthalmia）、シェーグレン症候群ドライアイ（Sjogren's syndrome dry eye）、非シェーグレン症候群ドライアイ、乾性角結膜炎（keratoconjunctivitis sicca）、涙液欠乏性ドライアイ（ADDE：aqueous tear-deficiency dry eye）、蒸発性ドライアイ（EDE）、環境ドライアイ、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼性類天疱瘡（ocular pemphigoid）、眼瞼縁炎（blepharitis marginal）、まぶた閉鎖不全、感覚神経麻痺、アレルギー性結膜炎関連ドライアイ、ポストウイルス性結膜炎ドライアイ、白内障手術後のドライアイ、VDT操作関連ドライアイ、および、コンタクトレンズ装用に関連したドライアイから成る群から選択される。
【００１４】
場合によっては、組成物および治療薬はそれぞれ、対象に１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、またはより頻繁に（より頻繁に）投与される。他の例では、組成物および治療薬は、それぞれ隔日またはより少ない頻度（より少ない頻度）で投与される。いくつかの実施態様では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、最終組成物の約0.0001％(wt)〜約90％(wt)の量で存在する。いくつかの実施態様では、治療剤は、約0.1％〜約20％の量で存在する。一部の実施態様では、組成物および治療剤は、それぞれ溶液、懸濁液、シロップ、液体、ゲル、ヒドロゲル、エマルジョン、リポソーム、エアロゾル、ミスト、フィルム、懸濁液、プラグ、ポリマー、インプラント、コンタクトレンズ、眼内挿入物、ナノ粒子、微粒子、徐放性製剤、および眼科医療機器用に適切な製剤から成る群から選択される。いくつかの実施態様では、方法は、シクロスポリン、人工涙液、コルチコステロイド、抗炎症剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む組成物を投与することをさらに含む。
【００１５】
いくつかの実施態様では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、式IIで表される：Xaai-Ile-Pro-Xaa2-Leu-Tyr-Xaa3-Phe-Ala-Xaa4-Xaa5(配列番号２)(II)、ここで、Ｃ末端アミノ酸は任意にアミド化されている、その変形、その誘導体、またはその薬学的に許容される塩である。場合によっては、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu- Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser(配列番号３)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala(配列番号４)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala-NH2(配列番号５)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-NH2(配列番号６)、(D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-His-Pro)2-Dab-NH2(配列番号７)、その変形、その派生物、およびその薬学的に許容される塩、（ここで、Dabは2,3-ジアミノ酪酸を表す）からなる群から選択される。いくつかの実施態様では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、ADP355（配列番号６）、またはその薬学的に許容される塩である。
【００１６】
一実施態様では、治療薬は、リフィティグラスとRestasis（登録商標）またはその薬学的に許容される塩から選択される。いくつかの実施態様では、治療薬は、約3.5％〜約6.5％のリフィティグラスを含む。
【００１７】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、それを必要とする対象における炎症に関連する眼疾患を治療する方法である。この方法は、アディポネクチンペプチド模倣化合物（配列番号６）またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与すること、および対象の炎症を伴う関連の眼疾患を治療するための治療薬を投与することを含む。
【００１８】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、それを必要とする対象におけるドライアイの少なくとも１つの症状または臨床徴候を緩和する方法である。この方法は、治療有効量のアディポネクチンペプチド模倣化合物（配列番号６）またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、および薬学的に許容される担体、および治療剤を投与して、対象のドライアイの少なくとも１つの症状または臨床的兆候を軽減することが含まれる。
【００１９】
さらに別の態様では、本明細書で提供されるのは、それを必要とする対象における眼の疾患または障害を治療する方法である。この方法は、治療有効量のアディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩を対象に投与することを含み、および薬学的に許容される担体、および、対象の炎症に関連する眼疾患を治療するための治療薬の投与を含む。
【００２０】
別の態様では、被験者は、ドライアイの少なくとも１つの症状または臨床症状を呈することができ、涙液分泌の変化、涙液クリアランスの変化、眼球表面の損傷、角膜上皮欠損、眼球表面の細胞の変化、涙液膜の安定性の変化、涙液量の変化、涙液膜組成の変化、変化 涙浸透圧、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【００２１】
本発明の他の目的、特徴、および利点は、以下の詳細な説明および図から当業者には明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
図１は、実験的ドライアイ（EDE）のマウスモデルへのアディポネクチンペプチドミメティックの投与が、対照の未処理のEDEマウスと比較して涙量を増加させたことを示す。涙液量は、治療開始後５日目と10日目に測定された。アディポネクチンペプチド模倣薬で処理された動物の涙量は、未処理の正常マウスの涙量と同様である。また、涙液量は、対照の未処理のEDEマウスと比較して、処理済みのEDEマウスで大幅に改善された。「UT」は未処理（正常）マウスを表し、「EDE」は、未処理の実験用ドライアイコントロールマウスを表し、「BSSのみ」は、バランスのとれた塩溶液のみで処理された実験的なドライアイマウスを表し、「ADP355」は、アディポネクチンペプチドミメティックで処理された実験的なドライアイマウスを表し、「ADP399」は、アディポネクチンペプチドミメティック（線状分岐ダイマー）で処理された実験的なドライアイマウスを表し、および 「gAdipo」は、組み換えマウスの全長球状アディポネクチンで処理された実験的なドライアイマウスを表す。
【００２３】
図２は、アディポネクチンペプチド模倣治療が、対照の未治療のEDEマウスと比較して、実験的ドライアイのマウスモデルにおける角膜表面の不規則性を最小化または減少させたことを示す。フルオレセイン染色を使用して、角膜表面の滑らかさを評価された。 角膜表面は、EDE開始後５日目と10日目に評価された。「UT」は未処理の（通常の）眼のマウスを表し、「EDE」は、未処理の実験用ドライアイコントロールマウスを表し、「BSSのみ」は、バランスのとれた塩溶液のみで処理された実験的なドライアイマウスを表し、「ADP355」は、アディポネクチンペプチドミメティックで処理された実験的なドライアイマウスを表し、「ADP399」は、アディポネクチンペプチドミメティック（線状分岐ダイマー）で処理された実験的なドライアイマウスを表し、および「gAdipo」は、組み換えマウスの全長球状アディポネクチンで処理された実験的なドライアイマウスを表す。
【００２４】
図３Ａおよび３Ｂは、ドライアイが未処理、正常（UT）および、0.1％ADP355で処理、５％リフィティグラスで処理、および0.1％ADP 35+５％リフィティグラスの両方で処理された場合の涙液膜崩壊時間の変化を示す棒グラフを示す。図３Ａは、５日間処理した後を示す。図３Ｂは、10日間の治療後を示す。
【００２５】
図４Ａおよび４Ｂは、ドライアイが未処理、正常（UT）および、0.1％ADP355、５％リフィティグラスで処理、および0.1％ADP 355+リフィティグラス５％で処理された場合の角膜染色の変化を示す棒グラフを示す。図４Ａは、５日間処理した後を示す。図３Ｂは、10日間の治療後を示す。
【００２６】
図５Ｂは、ドライアイが結膜として存在する場合の活性化Ｔ細胞レベルの変化を示す散布図である。図５Ａは、正常な（UT）眼の活性化Ｔ細胞レベルの散布図を表す。治療後、活性化されたＴ細胞レベルの変化を図２の散布図に示す。図５Ｃ（0.1％ADP355の投与後）、図５Ｄ（５％リフィティグラスの投与後）、および図５Ｅは（0.1％ADP355+リフィティグラス５％の両方の投与後）を示す。
【００２７】
図６Ｂは、ドライアイが涙腺に存在するときの活性化Ｔ細胞レベルの変化を散布図として示す。図６Ａは、正常な(UT)眼の活性化Ｔ細胞レベルの散布図を表す。治療後、活性化されたＴ細胞レベルの変化を図６Ｃ（0.1％ADP355投与後）に散布図として示し、図６Ｄは（５％リフィティグラス投与後）、そして図６Ｅは（0.1％ADP355+リフィティグラス５％の両方の投与後）を示す。
【００２８】
図７は、治療の有無にかかわらず、正常（UT）およびドライアイの結膜および涙腺の両方で同定されたサイトカインレベルの表である。
詳細な説明
I．序論
【００２９】
本明細書で提供されるのは、ドライアイまたはそれを必要とする対象における炎症に関連する眼疾患を治療するための組成物、方法およびキットである。この方法は、アディポネクチンペプチド模倣化合物またはその医薬上許容される塩および医薬上許容される担体を含む治療上有効な組成物を前記対象に投与すること、および治療剤を投与することを含む。また、本明細書では、対象におけるドライアイの少なくとも１つの症状または臨床徴候を緩和する方法が提供される。いくつかの実施態様では、治療上有効な組成物は、少なくとも２つの異なるアディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、治療薬を投与する。本発明は、部分的には、アディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩の眼への投与および治療剤の投与が涙目を増加させ、ドライアイを有する対象の角膜表面の不規則性を減少させるという発見に基づく。
II．定義
【００３０】
本明細書で使用される場合、以下の用語は、特に明記しない限り、それらに帰する意味を有する。
【００３１】
本明細書で使用される「a」、「an」、または「the」という用語は、１つの要素の態様を含むだけでなく、２つ以上の要素の態様も含む。例えば、単数形「a」、「an」、および「the」には、文脈からそうでないことが明確に示されていない限り、複数の指示対象が含まれる。したがって、例えば、「細胞」への言及には複数のそのような細胞が含まれ、「薬剤」への言及には当業者に知られている１つまたは複数の薬剤への言及などが含まれる。
【００３２】
「ドライアイ」という用語は、「ドライアイ疾患の定義と分類：2007国際ドライアイワークショップのガイドライン」、Ocul Surf，2007，5（2）：75-92）に定義されているように、涙と眼表面（角膜、結膜、まぶたを含む）の多因子性疾患を意味し、不快感、視覚障害、涙液膜不安定性の症状を引き起こす。ドライアイには、涙液層の浸透圧の増加と眼表面の炎症が伴う場合がある。ドライアイには、ドライアイ症候群、乾性角結膜炎(KCS)、機能不全涙症候群、涙液角結膜炎、蒸発性涙液欠乏症、涙液欠乏症、およびレーシック誘発神経栄養性上皮障害（LE）が含まれる。
【００３３】
「炎症に関連する眼疾患」という用語は、炎症が眼表面系に損傷を引き起こす眼の疾患または障害を指す。本明細書で使用される場合、「眼表面系」には、角膜、結膜、涙腺、マイボーム腺、鼻涙管、およびそれらに関連する涙および結合組織マトリックス、ならびにまぶたおよびまつげが含まれ、すべて連続上皮および相互に接続された神経によって統合される、内分泌系、免疫系、血管系を含む。
【００３４】
「症状」という用語は、患者が経験または知覚する障害または疾患の主観的な兆候または観察を指す。
【００３５】
「臨床的兆候」という用語は、臨床医によって検出または解釈され得る障害または疾患の客観的な兆候、観察または証拠を指す。
【００３６】
「アディポネクチン」という用語は、主に脂肪細胞に由来するポリペプチドを指す。アディポネクチンポリペプチドは、短い非コラーゲンＮ末端セグメント（約130アミノ酸）を含む244アミノ酸残基と、それに続くコラーゲン様配列（Maeda et al., BBRC、1996、221：286-289）で構成される。ヒトアディポネクチンポリペプチドのアミノ酸配列は、例えば、NCBI Ref.のシーケンス番号NP004788.1またはUniPro Ref.のNO.Q15848である。 アディポネクチンは、Ｃ末端球状ドメインでClqと特に高い相同性（約65〜70％の相同性）を備えた、タンパク質Clqを補完するサイズと全体構造が類似したホモ三量体を形成できる。この球状ドメイン（約130アミノ酸）は、天然（天然）アディポネクチンの生物活性に不可欠であると考えられている。アディポネクチンの結晶構造は、この同じ球状ドメインとTNFaの間にさらに高い構造的類似性を示す（約60％の相同性）。
【００３７】
「アディポネクチンペプチド模倣体」という用語は、アディポネクチンタンパク質の活性または機能を模倣するペプチド化合物を指す。アディポネクチンペプチド模倣物は、１つまたは複数のアディポネクチン受容体（AdipoR1およびAdipoR2）またはその変異体に結合または相互作用する能力を有し得る。ペプチド模倣物は、骨格修飾ペプチド、任意のポリアミドまたはペプチドに似た他のポリマー構造、非天然アミノ酸残基を含むペプチドまたはペプチド誘導体であっても良い。
【００３８】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって共有結合された２つ以上のアミノ酸の鎖を含む有機化合物を指す。ペプチドは、構成アミノ酸の数に関して言及される場合があります。つまり、ジペプチドには２つのアミノ酸残基が含まれ、トリペプチドには３つのアミノ酸残基が含まれる、などである。
【００３９】
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、塩基性アミノ基と酸性カルボキシル基の両方を含む有機化合物を意味する。この用語に含まれるのは、天然アミノ酸（L-アミノ酸など）、変性アミノ酸および異常アミノ酸（D-アミノ酸など）、および遊離または結合態様で生物学的に発生することが知られているが通常は存在するアミノ酸であり、タンパク質には発生しない。この用語には、例えば、Roberts and Vellaccio(1983)The Peptides,5：342-429に開示されているような変性された異常なアミノ酸が含まれ、その教示は参照により本明細書に組み込まれる。天然タンパク質のアミノ酸には、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、スレオニン、チロシン、チロシン、トリプトファン、プロリン、およびバリンが含まれますが、これらに限定されない。天然の非タンパク質アミノ酸には、アルギニノコハク酸、シトルリン、システインスルフィン酸、３,４-ジヒドロキシフェニルアラニン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン、３-モノヨードチロシン、３,５-ジヨードトリオシン、３,５,５’-トリヨードサイロニン、および３,３’、５,５’-テトラヨードチロニンが含まれるが、これらに限定されない。本発明を実施するために使用することができる変性または異常なアミノ酸には、Ｄ-アミノ酸、ヒドロキシリジン、４-ヒドロキシプロリン、Ｎ-Cbz保護アミノ酸、２,４-ジアミノ酪酸、ホモアルギニン、Ｎ-メチル-アルギニン、ノルロイシン、Ｎ-メチルアミノ酪酸、ナフチルアラニン、フェニルグリシン、ベータ-フェニルプロリン、tert-ロイシン、４-アミノシクロヘキシルアラニン、Ｎ-メチル-ノルロイシン、ノルバリン、３,４-デヒドロプロリン、Ν、Ν-ジメチルアミノグリシン、Ｎ -メチルアミノグリシン、４-アミノピペリジン-4-カルボン酸、６-アミノカプロン酸、trans-４-（アミノメチル）-シクロヘキサンカルボン酸、２-、３-、および４-（アミノメチル）-安息香酸、１-アミノシクロペンタンカルボン酸、１-アミノシクロプロパンカルボン酸、および２-ベンジル-５-アミノペンタン酸を含むが、これらに限定されるものではない。
【００４０】
「疎水性残基」という用語は、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、およびそれらの機能的同等物を含む。
【００４１】
「極性残基」という用語は、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、セリン、およびそれらの機能的同等物を含む。
【００４２】
「ペプチド結合」という用語は、１つのアミノ酸のカルボキシル基と第２のアミノ酸のアミノ基との間の水の分子の喪失によって形成される共有アミド結合を意味する。
【００４３】
「ペプチド主鎖」という用語は、アミノ酸のカルボキシル基およびアミノ基を連結するアミノ酸の原子と一緒にペプチド結合であるカルボキサミド基を含むペプチドの原子の鎖を意味する（通常、アミノ酸の炭素α-アミノ酸）。
【００４４】
「側鎖」という用語は、ペプチド骨格に結合する基を意味し、典型的には、α-アミノ酸のα炭素に結合する基を指す。例えば、タンパク新生アミノ酸の側鎖には、メチル（アラニン）、ヒドロキシメチル（ブタ）、ベンジル（フェニルアラニン）、メルカプトメチル（システイン）、およびカルボキシメチル（アスパラギン酸）が含まれる。
【００４５】
ペプチド鎖を含む化合物に適用される用語「誘導体」は、化合物を意味し、ペプチドの側鎖のアミノ基、ヒドロキシル基、またはカルボキシル基、または末端アミノ基またはカルボキシル基の１つまたは複数の誘導体官能基に修飾される。アミノ基は、アミド（アルキルカルボキサミド、アセトアミドなど）、カルバメート（アルキルカルバメート、たとえばメチルカルバメートまたはt-ブチルカルバメートなど）、または尿素として誘導体化することができる。ヒドロキシル基は、エステル（アルカノエート、例えば、アセテート、プロピオネート、またはアレーンカルボキシレート、例えば、ベンゾエート）、カルバメート（アルキルカルバメート、例えばメチルカルバメートなど）、炭酸塩（炭酸アルキルなどの炭酸エチルなど）として誘導体化されてもよい。カルボキシル基は、エステル（例えば、アルキルエステル、例えば、エチルエステル）またはアミド（例えば、第一カルボキサミド、Ｎ-アルキル第二カルボキサミド、またはＮ,Ｎ-ジアルキルカルボキサミド）として誘導体化され得る。当業者は、ペプチドの誘導体が親ペプチドの特性の保持をもたらすと予想されることを理解されたい。これは、誘導体基の組み込みがペプチドの特性を変化させないか、または誘導体化基が生体内で（例えば代謝を介して）除去される。本発明の好ましい実施態様は、アミノ基、カルボキシル基、およびヒドロキシル基の３つ以下、好ましくは２つ以下または１つまたはなしが、誘導体官能基に修飾されるものである。「誘導体」という用語には、誘導体の塩も含む。
【００４６】
「非天然アミノ酸」という用語は、自然にそれ自体では存在しないが、人間によって合成または作成されたアミノ酸を指すために使用できる。非天然アミノ酸の例には、ヨウ素化チロシン、メチル化チロシン、グリコシル化セリン、グリコシル化トレオニン、アゼチジン-２-カルボン酸、３,４-デヒドロプロリン、ペルチアプロリン、カナバニン、エチオニン、ノルロイシン、セレノメチオニン、アニモヘキサン酸、テルロメチオニン、ホモアリル そしてホモプロパルギルグリシンが含まれるが、これらに限定されない。Ｄ-アミノ酸も非天然アミノ酸の例である。
【００４７】
「Nva」は、２(L)-アミノペンタン酸としても知られる非天然アミノ酸ノルバリンに対応する。「NvaNH2」は２(L)-アミノペンタンアミドに相当する。「Acp」は、６-アミノ-ヘキサン酸としても知られる非天然アミノ酸６-アミノカプロン酸に対応する。
「Acp H2」は６-アミノヘキサンアミドとしても知られる６-アミノカプラミドに対応する。「Dpr（Ac）」は、Ｎ２(３)-アセチル-ジアミノプロピオン酸に相当する。「Dbu」は、２,４-ジアミノ酪酸に対応する。「Glc」はグルコースに対応する。「PGlc」はベータグルコースに対応する。「SerP（Glc）」は、アルコール水酸基のベータグルコシル残基でグリコシル化されたセリンに対応する。「Thr（NAcGal）」は、アルコール水酸基のＮ-アセチルガラクトサミニル残基でグリコシル化されたスレオニンに対応する。「Tyr（I2）」は、３,５-ジヨードチロシンに相当する。「N-MeArg」は、Ｎ-メチル-アルギニンに対応する。「PAla」は、３-アミノプロパン酸としても知られるベータアラニンに対応する。「PAla-H2」は、３-アミノプロパンアミドとしても知られる、ベータアラニンのアミド誘導体に対応する。「(Ｄ)-Ser」はＤ-セリンに対応する。「Apa」はアミノペンタン酸に対応する。「AlloThr」は、（２Ｓ、３Ｓ）-２-アミノ-３-ヒドロキシブタン酸としても知られるアロ-スレオニンに対応する。「3Hyp」は３-ヒドロキシプロリンに相当する。「4Hyp」は４-ヒドロキシプロリンに相当する。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「ヒドロキシル化非環式アミノ酸」という用語は、その構造内に少なくとも１つのアルコールヒドロキシル基を含む非環式アミノ酸を指す。好ましくは、非限定的であるが、ヒドロキシル化非環状アミノ酸の例は、セリン、(Ｄ)-セリン、スレオニン、(Ｄ)-スレオニン、(Ｌ)-アロ-スレオニン、(Ｄ)-アロ-スレオニン、(Ｌ)-イソセリン、(Ｄ)-イソセリン 、(ｉ)-β-ホモセリン、(Ｄ)-Ｐ-ホモセリン、(Ｌ)-ホモセリン、および(Ｄ)-ホモセリンである。
【００４９】
本明細書で使用する場合、「脂肪族アミノ酸」という用語は、炭素鎖が本来脂肪族であるアミノ酸を指す。脂肪族アミノ酸の非限定的な例は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、プロリン、セリン、スレオニン、バリン、Nva、Nva-NH2、Acp、Acp-NH2、Dpr（Ac）、Dbu、N-MeArg、pAla、pAla-NH2、ApaおよびAlloThrである。本出願内の好ましい脂肪族アミノ酸は、pAla、pAla-NH2、AcpおよびAcp-NH2である。
【００５０】
「ペプチド形質導入ドメイン」という用語は、ペプチドまたはその誘導体を表す、それは細胞膜を通過し、細胞の外側から細胞の細胞質膜を介して細胞の細胞質へとタンパク質伝達ドメインに関連するペプチド、タンパク質、または分子の輸送を指示することができるものである。
【００５１】
２つのペプチドの結合を指す「共役」という用語は、２つのペプチドが互いに共有結合されることを意味する。結合は、一方のペプチドのカルボキシル基と他方のペプチドのアミノ基との間のアミド結合の形成を介して、または結合基が各ペプチドへの共有結合を有する結合基によって、直接達成され得る。例えば、連結基は、ペプチド鎖、アミノ酸、または少なくとも２つの官能基を有し、２つのペプチド鎖のそれぞれに共有結合を形成することができる任意の基であってもよい。
【００５２】
本明細書で使用される「アセチル化アミノ酸」は、その側鎖にアセチル部分を有するアミノ酸を指す。
【００５３】
本明細書で使用される「薬学的に許容される」とは、以下の化合物、材料、組成物、および/または剤形を指し、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または合理的な利益/リスク比に見合った他の問題の合併症のない人間や動物の組織との接触に適している。
【００５４】
「薬学的に許容される塩」という用語は、酸付加塩および塩基付加塩を含むその酸または塩基塩を作ることにより親化合物が修飾されている開示化合物の誘導体を指す。 薬学的に許容される塩の例には、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸塩が含まれるが、これらに限定されない。カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などである。「酸付加塩」という用語は、酸の添加により調製された親化合物の対応する塩誘導体を指す。薬学的に許容される塩には、例えば無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の塩または四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、そのような従来の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導されるもの、及び、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２-アセトキシ安息香酸、フマル酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、２-ナフタレンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、ヘミスルファン酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、２-ヒドロキシエタンスルホン酸、２-ナフタレンスルホン酸、ペクチン酸、リン酸、硫酸、３-フェニルプロピオン、ピクリン酸、ピバリン酸、チオシアン酸、ｐ-トルエンスルホン酸、酪酸、樟脳、樟脳スルホン酸、ジグルコン酸、シクロペンタンプロピオン酸、重硫酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、およびウンデカン酸などの有機酸から調製された塩が含まれるが、これらに限定されない。したがって、用語「塩基付加塩」は、塩基の添加により調製された親化合物の対応する塩誘導体を指す。また、塩基性窒素含有基は、塩化メチル、エチル、プロピル、ブチルなどのハロゲン化低級アルキル、臭化物、ヨウ化物などの試薬で四級化することができる。硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、ジアミルなどの硫酸ジアルキル、塩化デシル、ラウリル、ミリスチル、ステアリルなどの長鎖ハロゲン化物、臭化物、ヨウ化物、臭化ベンジル、フェネチルなどのハロゲン化アラルキルなどが含まれる。薬学的に許容される塩には、例えば無機または有機塩基から形成される親化合物の従来の塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、そのような従来の塩には、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウムおよび水酸化アンモニウムなどの無機塩基から誘導されるもの、およびメチルアミンなどの有機アミン、エチルアミン、イソプロピルアミン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、エタノールアミン、モルホリン、ジアゼピン、エチレンジアミン、ピリジン、キノリン、キヌクリジンなどから調製される塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００５５】
「治療有効量」、「有効量」または「治療有効投与量」という用語は、上記のように、障害を改善するのに十分な治療薬の量を指す。例えば、所定のパラメーターの場合、治療有効量は、少なくとも５％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％、または少なくとも100％の治療効果の増加または減少を示す。治療効果は「倍」の増加または減少として表すこともできる。例えば、治療有効量は、対照に対して少なくとも1.2倍、1.5倍、２倍、５倍、またはそれ以上の効果を有することができる。本発明の文脈において、アディポネクチンペプチド模倣化合物の有効量は、（他の要因、例えば年齢、疾患の重症度などの他の要因の中で）他の治療薬または個体の疾患プロファイルの同時投与に応じて変わり得る。
【００５６】
「療法」、「治療」、および「改善」という用語は、症状の重症度の軽減を意味する。眼障害、例えばドライアイを治療する場合、この用語は、人工涙液の追加、涙液の節約、涙液の蒸発の減少、涙液生成の増加、まぶたまたは目の表面の炎症の減少、ドライアイへの眼の兆候の減少などを指す場合がある。本明細書で使用される場合、「治療する」および「防止する」という用語は、絶対的な用語であることを意図しない。治療とは、発症の遅延、症状の改善、患者の生活の質の改善などを指す。治療の効果は、治療を受けていない個人または個人の集積、または治療前または治療中の異なる時間に同じ患者と比較することができる。いくつかの態様では、疾患の重症度は、例えば、投与前の個体または治療を受けていない対照個体と比較して、少なくとも10％低下する。いくつかの局面において、疾患の重症度は、少なくとも25％、50％、75％）、80％）、または90％減少し、またはいくつかの場合では、標準的な診断技術を使用してもはや検出できなくなる。
【００５７】
「治療する」または「治療」という用語は、哺乳動物（特にヒトまたは動物）などの患者における疾患または医学的状態（ドライアイまたは炎症に関連する眼疾患など）の治療または治療を指し、これには、疾患または病状を改善すること、すなわち、患者の疾患または病状を解消または後退させることを含み、疾患または病状を抑制すること、すなわち、患者の疾患または病状の進行を遅らせるかまたは阻止すること、または患者の疾患または病状の１つまたは複数の症状を緩和することを含む。この用語は、特定の疾患または状態を獲得または発症するリスクを防止または低減するため、または再発のリスクを防止または低減するための、疾患または状態の予防的治療を包含する。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「投薬単位」は、処置されるべき特定の患者のための単一の投薬量として適切な物理的に別個の単位をいう。各ユニットは、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含み得る。本発明の投薬単位態様の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成されるべき特定の治療効果による決定、および、(ｂ)そのような活性化合物を配合する技術に固有の制限を要求しても良い。
【００５９】
「対象」、「個体」または「患者」という用語は、典型的にはヒトを含むが、例えば他の霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ブタなどのような他の動物も含むことができる。
III.実施例の詳細な説明
【００６０】
Ａ．アディポネクチンペプチド模倣化合物
アディポネクチンは、主に脂肪組織から分泌される244アミノ酸長のポリペプチドタンパク質である。この比較的大きな30kDaのタンパク質は、腫瘍壊死因子アルファ（TNFα）と構造的に類似する。
【００６１】
フルサイズのアディポネクチンタンパク質を実行可能な全身レギュレーターに変換することが困難なため、アディポネクチンタンパク質ベースの生物学的モジュレーターはまだ利用できない。アディポネクチンタンパク質の非薬物能力の主な理由は、Ｃ末端ドメインとそのより大きなペプチド断片の極端な不溶性である。さらに、その比較的大きなサイズ、およびその受容体結合親和性を変更する高次の複合体を形成する傾向は、医薬品製造に大きな課題をもたらす。
【００６２】
本発明の一態様では、本明細書で提供されるのは、アディポネクチンペプチド模倣化合物である。いくつかの実施態様では、化合物は、式Ｉ：X-M1-配列番号１-M2-Zによって表される化合物でありここで、配列番号１はXaai-Ile-Pro-Xaa2-Leu-Tyr-Xaa3- Phe-Ala-Xaa4-Xaa5である。いくつかの実施態様では、XaaiはAsnまたは非天然アミノ酸であり、Xaa2はGlyまたは非天然アミノ酸であり、Xaa3はTyrまたは非天然アミノ酸であり、Xaa4はTyrまたは非天然アミノ酸であり、および、Xaa5はアミノ酸ではなく、β-AlaまたはP-Ala-NH2である。いくつかの例において、Xaai、Xaa2、Xaa3またはXaa4の少なくとも１つは非天然アミノ酸である。例えば、Xaai、Xaa2、Xaa3またはXaa4は非天然アミノ酸である。いくつかの実施態様では、XaaiとXaa2、XaaiとXaa3、XaaiとXaa4、Xaa2とXaa3、Xaa2とXaa4、およびXaa3とXaa4は同じまたは異なる非天然アミノ酸である。他の実施態様では、XaaiおよびXaa2およびXaa3、XaaiおよびXaa2およびXaa4、XaaiおよびXaa3およびXaa4、ならびにXaa2およびXaa3およびXaa4は、同じまたは異なる非天然アミノ酸である。さらに他の実施態様では、XaaiおよびXaa2ならびにXaa3およびXaa4は、同じまたは異なる非天然アミノ酸である。いくつかの実施態様では、Ｘは、任意に存在する１〜10アミノ酸ペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸ペプチド）、ポリマー分子、親油性化合物またはペプチド形質導入領域である。いくつかの実施態様において、Ｚは、任意に存在する１〜１０アミノ酸ペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸ペプチド）、ポリマー分子、親油性化合物またはペプチド形質導入領域である。一部の実施態様において、Ｍ１は、任意に存在する単結合または連結基である。一部の実施態様では、Ｍ２は、任意選択で存在する単結合または連結基である。場合によっては、Ｃ末端アミノ酸を含む式Ｉの化合物、およびＣ末端アミノ酸は、任意選択でアミド化しても良い。いくつかの実施態様では、式Ｉで表される化合物のいずれかは、その薬学的に許容される塩である。
【００６３】
いくつかの態様では、XaaはD-Asnであり、Xaa4はD-Serである。いくつかの態様では、Xaa2はNvaである。いくつかの態様では、Xaa3はD-Serである。いくつかの態様では、Xaa2はNvaであり、Xaa3はD-Serである。一部の実施態様では、XaaiはD-Asn、Xaa2はNva、Xaa3はD-Ser、そしてXaa4はD-Serである。
【００６４】
いくつかの実施態様では、Ｘおよび/またはＺは、１〜10アミノ酸ペプチド、例えば、１アミノ酸ペプチド、２アミノ酸ペプチド、３アミノ酸ペプチド、４アミノ酸ペプチド、５アミノ酸ペプチド、６アミノ酸ペプチド、７アミノ酸ペプチド、８アミノ酸ペプチド、９アミノ酸ペプチド、または10アミノ酸ペプチドである。いくつかの例では、ペプチドの長さおよびＸおよびＺペプチドを含む置換アミノ酸の同一性は、独立して選択される。
【００６５】
いくつかの態様では、Xaa5は、β-AlaまたはP-Ala-NH2である。いくつかの局面において、式Ｉの化合物は、ADP355、ADP355-PAla、ADP355-pAla-NH2、ADP355-NH2、ADP399、それらの変異体からなる群から選択され、その誘導体、およびその薬学的に許容される塩である。ADP355、ADP399、および他の有用なアディポネクチンペプチド模倣薬の詳細な説明は、例えば、米国特許第9,073,965号およびOtvos等、Frontiers in Chemistry、2014,2(93)：1-15、doi：10.3386/fchem.2014.00093に見られ、この開示は、すべての目的のためにその全体を参照として本明細書に組み込む。
【００６６】
一部の実施態様では、ＸまたはＺは、ポリマー分子、親油性化合物またはペプチド形質導入ドメインである。いくつかの実施態様では、ポリマーは、直鎖または分岐ポリエチレングリコールである。他の実施態様では、ポリマーは、１kDaから200kDaの分子量を有し、１kDaから200kDa 、50kDaから200kDa、100kDaから200kDa、１kDaから100kDa、１kDaから50kDa、50kDaから100kDa、または１kDa、50kDa、100kDa、150kDaまたは200kDa などの値を取り得る。さらに他の実施態様では、ポリマーは、２kDaから95kDaの分子量を有し、２kDaから95kDa、10kDaから95kDa、20kDaから95kDa、30kDaから95kDa、40kDaから95kDa、50kDaから95kDa、60kDaから95kDa、70kDaから95kDa、80kDaから95kDa、２kDaから90kDa、２kDaから80kDa、２kDaから70kDa、２kDaから60 kDa、２kDaから50kDa、２kDaから40kDa、２kDaから30kDa、２kDaから20kDa、２kDaから15kDa、２kDaから10kDa、２kDa、５kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60kDa、65kDa、70kDa、75kDa、80kDa、85kDaまたは90kDaなどの値を取り得る。いくつかの実施態様において、ポリマーは、５kDaから80kDaの分子量を有し、５kDaから80kDa、５kDaから70kDa、５kDaから60kDa、５kDaから50kDa、５kDaから40kDa、５kDaから30kDa、５kDaから20kDa、５kDaから10kDa、70kDaから80kDa、60kDaから80kDa、50kDaから80 kDa、40kDaから80kDa、30kDaから80kDa、20kDaから80kDaまたは、10kDaから80kDa、5kDa、10kDa、15kDa、20kDa、25kDa、30kDa、35kDa、40kDa、45kDa、50kDa、55kDa、60 kDa、65kDa、70kDa、75kDaまたは80kDaなどの値を取り得る。他の実施態様において、ポリマーは、12kDaから60kDaの分子量を有し、12kDaから40kDa、20kDaから40kDa、12kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDaまたは60kDaの値を取り得る。ＸおよびＺポリマー分子は独立して選択され、同じでも異なっても良い。
【００６７】
いくつかの実施態様では、ポリマー分子は、メトキシルPEGマレイミド（mPEG（MAL））、メトキシルPEGフォーク型マレイミド（mPEG2（MAL））、メトキシルPEGオルト-ピリジルジスルフィド（mPEG-OPSS）、PEG-ビニルスルホン、またはオルト-ピリジルジスルフィド-PEG-ヒドラジド（OPSS-PEG-ヒドラジド）とメトキシルPEGアルデヒド（mPEG-ALD）との組み合わせである。他の実施態様では、ポリマー分子は、５k-mPEG（MAL）、20k-mPEG（MAL）、40k-mPEG2（MAL）、５k-mPEG-OPSS、10k-mPEG-OPSS、20k-mPEGまたは、OPSS-PEG2k-ヒドラジドからなる群から選択物とmPEG30 kD-ALDとの組み合わせによるものである。
【００６８】
当業者には、Ｘが存在しない場合、Ｍ１も存在しないことを理解されたい。当業者には、Ｚが存在しない場合、Ｍ２も存在しないことを理解されたい。当業者には、式Ｉの化合物がアミノ酸を含むＣ末端を有する場合、例えば、Ｃ末端がＺ（存在する場合、ペプチドまたは形質導入ドメインを含む）を含む場合、Xaa5（存在する場合）またはXaa4、そのアミノ酸は任意でアミド化されていることを理解されたい。当業者には、ペプチド（例えば、２つのアミノ酸XaaiおよびXaa2を有するジペプチド）は、H-Xaai-Xaa2-OHとして表すことができることを理解されたく、ここで、Ｈはペプチドの遊離アミノ末端の一部であり、OHはペプチドの遊離カルボキシル末端の一部であり、または、ペプチドはXaai-Xaa2として表すことができ、Ｈはペプチドの遊離アミノ末端の一部であり、OHはペプチドの遊離カルボキシル末端の一部であるが、ペプチドの式には示されないが、存在することを理解されたい。
【００６９】
他の実施態様では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、式IIで表される化合物であり：Xaai-Ile-Pro-Xaa2-Leu-Tyr-Xaa3-Phe-Ala-Xaa4-Xaa5（配列番号２）（II）、ここで、Ｃ末端アミノ酸は任意にアミド化され、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施態様では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser（配列番号３）、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala(配列番号４)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-p-Ala-H2(配列番号５)、D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-NH2(配列番号６)、(D-Asn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-D-Ser-Phe-Ala-D-Ser-His-Pro)2-Dab-NH2(配列番号７、ここで、Dabは、２,３-ジアミノ酪酸）、その変異体、その誘導体、およびその薬学的に許容される塩を表す、からなる群から選択される。
【００７０】
有用なアディポネクチンペプチド模倣化合物は、米国特許第9,073,965号およびOtvos等、Frontiers in Chemistry、2014、2（93）：1-15、doi：10.3389/fchem.2014.00093に記載されており、その内容は参照として本明細書に全ての目的のため組み込む。
【００７１】
本明細書に記載のアディポネクチンペプチド模倣化合物の１つまたは複数を、眼科用組成物などの治療上有効な組成物に含んでも良い。いくつかの実施態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、10またはそれ以上の異なるアディポネクチンペプチド模倣化合物を組成物に含んでも良い。各アディポネクチンペプチド模倣化合物の量は、同じ（または等しい）または異なり得る。各アディポネクチンペプチド模倣化合物の活性は、同じでも異なっていても良い。
１．基の連結（Ｍ1およびＭ2）
【００７２】
式Ｉの化合物でＸまたはＺをカップリングするための連結基（Ｍ1またはＭ2）は、ＸまたはＺとＮ末端またはＣ末端アミノ酸または非天然アミノ酸であり、安定している。適切な連結基には、二官能性および多官能性のアルキル、アリール、アラルキルまたはペプチド部分、アルキル、アリールまたはアラルキルアルデヒド酸エステルおよび無水物、スルフヒドリルまたはカルボキシル基、マレイミド安息香酸誘導体、マレイミドプロピオン酸誘導体およびスクシンイミド誘導体など、または臭化シアヌルまたは塩化物、カルボニルジイミダゾール、スクシンイミジルエステルまたはハロゲン化スルホン酸などから誘導することができる（Fischer等、米国特許第6,472,507号、全てを参照として本明細書に組み込む）。リンカー部分の官能基は、アミノ、ヒドラジノ、ヒドロキシル、チオール、マレイミド、カルボニル、およびカルボキシル基を含み得る。
【００７３】
必要に応じて、リンカー基は、本発明のペプチドの輸送後に切断され、それによりペプチドを放出するように、十分に不安定であるように（例えば、標的組織に存在する酵素による酵素的切断に対して）選択される。例示的な不安定な連結は、Low等、米国特許第5,108,921号、全てを参照として本明細書に組み込む）。ペプチド活性剤送達システムもまた活性剤と本発明のペプチドとの間の化学的開裂によって解離し得る。リンカー部分がアミノ酸残基を含む実施態様では、そのような切断はリンカー部分自体の中で起こり得る。
【００７４】
連結基Ｍ1によって形成されるリンクがXaaiとＸのカルボキシル基の間にある場合（たとえば、Ｘがタグ要素である場合、ペプチドタグ要素の末端カルボキシル基または分子の末端カルボキシル基）、任意のアミノ酸（α-アミノ酸を含むがこれに限定されない）またはタンパク質鎖アミノ酸を含むがこれらに限定されない）またはペプチド鎖は、XaaiとＸの間のリンクを形成することができる。
【００７５】
一部の実施態様では、Ｍ1またはＭ2グループとペプチド間の結合がアミド結合である場合、リンクは、結合を形成できる任意の官能基によって形成され、XaaiまたはXaa5と
末端（または他の）カルボキシル基の-C（=0）-基（または末端、または他の-NH-基、またはＸまたはＺの他の官能基）とで形成される。他の実施態様では、連結基Ｍ1によって形成される連結がXaaiとＸのアミノ基またはカルボキシル基との間にある場合、任意のアミノ酸またはペプチド鎖がXaaiとＸとの間の連結を形成し得る。他の実施態様では、連結基Ｍ2によって形成される連結がXaa5とＺのアミノ基またはカルボキシル基との間にある場合、任意のアミノ酸またはペプチド鎖がXaa5とＺとの間の連結を形成し得る。例えば、XaaiおよびＸのカルボキシル基、XaaiおよびＸのアミノ基、Xaa5およびＺのカルボキシル基、ならびにXaa5およびＺのアミノ基を接続するための適切な連結基Ｍ1およびＭ2の例は、米国特許公開第2014/0057833号に記載され、その開示はあらゆる目的のためにその全体を本明細書に組み込む。
２．ペプチド導入領域
【００７６】
いくつかの実施態様では、Ｘおよび／またはＺは、タンパク質形質導入ドメインを含み得る。タンパク質導入領域には、細胞膜を通過し、タンパク質導入領域に関連するペプチド、タンパク質、または分子の輸送を指示することができるペプチド、細胞の外側から細胞の細胞質膜を通って細胞の細胞質へ、が含まれる。いくつかの例において、タンパク質形質導入領域は、HIVのTATタンパク質、ショウジョウバエからのアンテナペディアタンパク質、および単純ヘルペスウイルスからのVP22タンパク質などの天然に存在するタンパク質に由来する比較的短い配列を含む。適切なタンパク質形質導入領域の非限定的な例は、例えば、Ulo Langele（編集者）による細胞透過性ペプチドのハンドブック（CRCプレス、第2版、2006）に記載される。細胞透過性ペプチド：プロセスとアプリケーション、Ulo Langel（編集者）（CRC Press、第一版、2002）、E.L.スナイダー等、Pharm. Res.、2004、21（3）、389-93。Beerens等、Current Gene Therapy、2003、3（5）、486-94、Hudec等、Med. Res. Rev.、2005、25（6）、679-736。有用なタンパク質形質導入領域の詳細な説明は、例えば、米国特許公開第2014/0057833号にあり、その開示は、あらゆる目的のためにその全てを本明細書に組み込む。
３．アディポネクチンペプチド模倣化合物の調製
【００７７】
本発明のペプチド模倣化合物は、天然ペプチド、組換えペプチドまたは合成ペプチドであり得る。それらは、例えば、固相合成法を使用して化学的に合成することもできる。更に、本発明のペプチドに付加されたペプチド形質導入領域は、天然または合成ペプチドであり得、そして天然供給源からの単離により調製され得るか、または合成され得る。
【００７８】
本発明のペプチドは、ペプチド合成法を使用して新規に合成することができる。そのような方法では、ペプチド鎖は、構成アミノ酸が所望の配列で成長するペプチド鎖に付加される一連のカップリング反応によって調製される。例えば、カルボベンジルオキシ基またはt-ブチルオキシカルボニル基などの様々なN-保護基、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはカルボニルジイミダゾールなどの様々なカップリング試薬、例えば、Ｎ-ヒドロキシフタルイミドまたはＮ-ヒドロキシ-スクシンイミドのエステルなどの様々な活性エステル、そして、例えば、トリフルオロ酢酸（TFA）、ジオキサン中のHCl、トリスホウ素（トリフルオロ酢酸）および臭化シアンなどの様々な開裂試薬の使用、および、中間体の単離および精製を伴う溶液中での反応は、当業者に周知の方法である。反応は、溶液中の、または固相支持体に付着したペプチドのいずれかを用いて行うことができる。固相法では、ペプチドは合成の完了後に固相支持体から放出される。
【００７９】
いくつかの実施態様では、ペプチド合成方法は、メリフィールド固相手順に従い得る。
例えば、Merrifield、J.Am. Chem. Soc、1963、85、2149-54を参照されたい。固相合成手順に関する更なる情報は、例えば、固相ペプチド合成：E.AthertonおよびRC Sheppardによる実用的なアプローチ（Oxford University Press、1989年、固相ペプチド合成、JM StewartおよびJD Young、（第2版、Pierce Chemical Company、Rockford、1984）、およびFF Nold（Interscience Publishers、ニューヨーク、1969年）によって編集されたR. MerrifieldによるAdvances in Enzymology 32：221-296、およびBW EricksonとR. Merrifieldによるレビューの章、R. Merrifield in The Proteins Vol.2、pp.255以降、Neurath and Hill著（Academic Press、ニューヨーク、1976）から得られる。ペプチド合成は、Fields等、Introduction to Peptide Synthesis、Current Protocols in Molecular Biology（Chapter11、Unit11.15、John Wiley and Sons、2008）およびAmblard等 （2006、Molecular Biotechnology、33：239-254）などに従う。
【００８０】
溶液法によるペプチドの合成は、例えば、The Proteins、Vol.11、Neurathらによって編集された（第3版、Academic Press1976）。ペプチドの合成に関するその他の一般的な参照には、M.W.PenningtonおよびBen M. Dunnによって編集されたペプチド合成プロトコル（Humana Press 1994）、ペプチド合成の原則、Miklos Bodanszky（第2版、Springer-Verlag、1993）、そして、Paul Lloyd-Williamsによるペプチドとタンパク質の合成への化学的アプローチ、F.Albericio、E. Giralt（CRC Press 1997）、および合成ペプチド：G.グラント（Oxford University Press、2002年）が編集したユーザーズガイドに記されている。
【００８１】
あるいは、ペプチドは、式ＩまたはIIのペプチドをコードする核酸を適切なベクターに組み合わせ、得られたベクターを適切な宿主細胞に挿入し、その後宿主細胞によって産生されるペプチドを回収することを含む組換えDNA技術を利用して調製することができ、回収されたポリペプチドを精製する。組換えDNAおよびタンパク質技術に必要な技術は、当業者に知られる。組換え分子のクローニングおよび発現のための一般的な方法は、Sambrook等によるMolecular Cloning（コールドスプリングハーバーラボラトリーズ、第2版、1989）およびAusubelによる分子生物学の現在のプロトコル（Wiley and Sons、1987）に記載される。
【００８２】
所望のペプチドをコードする核酸は、１つ以上の調節領域に作動可能に連結され得る。調節領域には、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、翻訳開始シグナル（コザック領域）、終止コドン、ペプチド切断部位、およびエンハンサーが含まれる。使用される調節配列は、それらが投与される脊椎動物の細胞内で機能的でなければならない。適切な１つまたは複数の調節領域の選択は、当業者のレベルの範囲内で、日常的な問題である。
【００８３】
本発明の化合物は、化学合成または組換えDNA技術のいずれによって調製されても、既知の技術、例えば、分取HPLC、FPLC、アフィニティークロマトグラフィー、ならびに他のクロマトグラフィー法を使用して精製され得る。次に、単離された化合物は、本明細書に記載される方法に従って、ならびに当業者に知られる任意の方法によって、生物活性について評価され得る。
【００８４】
合成技術の場合、ペプチドは固相ペプチド合成の確立された手順によって生成することができる。簡単には、この手順は、成長するペプチドの末端が不溶性支持体に連結される間に、適切なアミノ酸を所望の配列のペプチドに順次組み立てることを伴う。通常、ペプチドのカルボキシル末端は、開裂試薬での処理時に遊離することができるポリマーに連結される。
【００８５】
Xaa5がゼロである場合、アミノ酸Xaai、Xaa5またはXaa4は、直接またはリンカーを使用することにより、ＸまたはZを含む親油性化合物に結合させることができる。親油性化合物は天然化合物であってもよく、飽和または不飽和脂肪酸、脂肪酸ジケトン、テルペン、プロスタグランジン、ビタミン、カロテノイドまたはステロイドなどの合成化合物、アルコール、アミン、スルホン酸などの合成化合物または１つ以上のアルキル-、アリール-、アルケニル-、または他の複数の不飽和化合物を含む炭素酸などである。必要に応じてリンカーを介した、アミノ酸と親油性化合物との間の結合は、当技術分野で知られる方法、例えば、Bodanszkyによるペプチド合成、John Wiley、ニューヨーク、1976年およびWO 96/12505に記載される。
【００８６】
ここに、化合物のアミノ酸にポリマー分子を共有結合させることが記載されるが、ポリマー分子のヒドロキシル末端基は活性化された態様、すなわち、反応性官能基（例えば、一級アミノ基、ヒドラジド（HZ）、チオール、コハク酸（SUC）、スクシンイミジルコハク酸（SS）、スクシンイミジルコハク酸アミド（SSA）、プロピオン酸スクシンイミジル（SPA）、炭酸スクシンイミジル（SCM）、炭酸ベンゾトリアゾール（BTC）、Ｎ-ヒドロキシ、アルデヒド、炭酸ニトロフェニル（NPC）、トレシレート（TRES）で、提供されなければならない。活性化PEGポリマーの具体的な例には、以下の線状PEGが含まれ、NETS-PEG（例：SPA-PEG、コハク酸スクシンイミジルプロピオン酸-PEG（S SPA-PEG）、SBA-PEG、SS-PEG、SSA-PEG、炭酸スクシンイミジル-PEG（SC-PEG）、スクシンイミジルグルタル酸-PEG（SG-PEG）、およびSCM-PEGおよびNOR-PEG）、BTC-PEG、エポキシド-PEG（EPDX-PEG）、イソシアネート-PEG（NCO-PEG）、NPC-PEG、カルボニルイミダゾール-PEG（CDI-PEG）、アルデヒド-PEG（ALD-PEG）、TRES-PEG、VS-PEG、ヨード-PEG、マレイミド-PEG（MAL-PEG）、およびPEG2-NHSなどの分岐PEGが含まれ、米国特許第5,932,462号および米国特許第5,693,047号の参考文献は共に、その全体を参照として本明細書に組み込む。PEG化は、特定の結合基、例えば、Ｎ末端アミノ基に向けられ得る（米国特許第5,985,265号）。さらに、結合は、一段階で、または段階的に（例えば、WO 99/55377に記載されているように）達成され得る。
Ｂ．アディポネクチンペプチド模倣化合物による治療が可能な眼疾患
【００８７】
本明細書に記載されるアディポネクチンペプチド模倣化合物は、ドライアイまたは炎症に関連する眼疾患を含む眼疾患または障害を治療するために使用することができる。
【００８８】
ドライアイ疾患または乾性角結膜炎（KCS）は、以下によりまたは多様な状態を含んで引き起こされ、具体的にはシェーグレン症候群、瘢痕性類天疱瘡、先天性涙腺炎、眼瞼炎、涙腺アブレーション、加齢性涙腺欠損症、涙腺炎（例えば、トリプルＡまたはオールグローブ症候群、およびライリー・デイ症候群）、涙腺浸潤（例えば、サルコイドーシス、リンパ腫、およびAIDS）、涙腺管閉塞、マイボーム腺障害、翼状片、結膜の慢性炎症、反射ブロック、帯状疱疹、眼アレルギー、自己免疫疾患、慢性移植片対宿主病、自然老化プロセス、糖尿病、長期のコンタクトレンズ装用、乾燥した環境、過剰なコンピューター画面の使用、角膜切開を伴う手術、または角膜神経の切除（例、白内障）手術、屈折矯正手術、網膜手術、眼腫瘍治療、薬物療法、まばたきの減少（まばたき率の低下）、眼瞼の開口部の障害または眼瞼/グローブのダイナミクス、妊娠、多嚢胞性卵巣症候群、酒さ性ざ瘡、狼瘡、強皮症、サルコイドーシス、スティーブンス・ジョンソン症候群、パーキンソン病、甲状腺疾患、美容外科、喫煙、放射線療法、ビタミンＡ欠乏症および閉経などである。
【００８９】
ドライアイは栄養障害、欠乏症、薬理学的副作用、まぶたの周りの皮膚疾患、眼のストレスと腺や組織の破壊、スモッグ、煙、過度に乾燥した空気、空気中の微粒子、自己免疫疾患、その他の免疫不全疾患への環境暴露によっても引き起こされる。ドライアイでは、眼の表面の上皮が扁平上皮化生を起こし、杯細胞の喪失、ムチン欠乏、および角質化が現れる。これらの変化は涙液膜の不安定性をもたらし、ドライアイ症候群の臨床症状につながる。
【００９０】
ドライアイの症状には、眼の中に刺すような痛み、灼熱感、ひっかき感、眼の乾燥またはざらつき、目の中または周りの糸状粘液、目の刺激を高める、目の疲労、光に対する感受性（photophobia）、目の発赤、過度の引き裂き、かすみ目エピソード、目の異物感、目の周りや目の痛みや痛み、感情的にストレスを受けたときに泣くことができない、持続的な視覚的注意を必要とする活動の許容度の低下、およびそれらの任意の組み合わせが含まれる。ドライアイの症状は、例えば、眼表面疾患指数（OSDI）アンケートを使用して定量化できる。OSDIアンケートでは、12の症状とグレードがそれぞれ１〜４のスケールでリストされる。ドライアイの臨床徴候は、例えば、印象細胞診（眼の表面染色など）、涙液分解時間（TBUT）の測定、シルマー検定、フェノール赤糸涙液検査の実施、および涙液の成分（例えば、涙液タンパク質または涙液膜浸透圧の分析）などで評価され得る。浸透圧の上昇（浸透圧亢進）は、涙液膜の調節の低下、眼表面への損傷の増加、場合によっては眼の炎症の増加を引き起こす可能性がある。
【００９１】
炎症に関連する眼の疾患には、ブドウ膜炎、ドライアイ、角膜炎、アレルギー性眼疾患、感染性角膜炎、ヘルペス性角膜炎、角膜血管新生、リンパ管新生、ブドウ膜炎、翼状片、網膜炎、脈絡膜炎、急性多巣性プラコイド色素上皮症、ベーチェット病が含まれるが、これらに限定されない疾患、術後角膜創傷治癒、レーザーによって引き起こされる状態、光線力学療法によって引き起こされる状態、湿性および乾性加齢黄斑変性症（ARMD）、後眼部に影響を与える状態、黄斑症、網膜変性、非滲出性年齢関連する黄斑変性症、滲出性加齢性黄斑変性症、脈絡膜血管新生、糖尿病性網膜症（増殖性）、未熟児網膜症（ROP）、急性黄斑神経網膜症、中枢性漿液性脈絡網膜症、嚢胞性黄斑浮腫、および糖尿病性黄斑浮腫、バードショット、網膜症ライム、結核、トキソプラズマ症）、中ブドウ膜炎（pars平面炎）、多巣性脈絡膜炎、多発性エバネッセントホワイトドット症候群（メス）、眼サルコイドーシス、後部強膜炎、脊髄性脈絡膜炎、網膜下線維症およびブドウ膜炎症候群、フォークト小柳と原田症候群、網膜動脈閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、嚢胞性黄斑、播種性血管内凝固障害、網膜静脈分枝閉塞、高血圧性眼底変化、眼虚血性症候群、網膜動脈微小動脈瘤、コート病、傍中心窩毛細血管拡張症、半網膜静脈閉塞症、乳頭状静脈炎、網膜中心動脈閉塞症、網膜動脈閉塞症、網膜動脈閉塞症CAD）、フロストブランチ血管炎、鎌状赤血球網膜症および他のヘモグロビン症、血管様筋、家族性滲出性硝子体網膜症、Eales病、交感神経性眼炎、ブドウ膜炎性網膜疾患、網膜剥離、外傷、光線力学的療法による放射線状態、光凝固、半網膜静脈閉塞症、および骨髄移植網膜症、増殖性硝子体網膜症、網膜上膜、増殖性糖尿病性網膜症、眼ヒストプラスマ症、眼球毒素症、推定眼ヒストプラスマ症（PONS）、眼内炎、トキソプラズマ症、HIV感染に関連する網膜疾患、脈絡膜疾患、HIV感染症に関連するブドウ膜炎、ウイルス性網膜炎、急性網膜壊死、進行性外網膜壊死、真菌性網膜疾患、眼梅毒、結核性眼球症、びまん性片側性亜急性神経網膜炎、筋症、網膜色素変性症、網膜静止障害の先天性を伴う全身性疾患、先天性失明、錐体ジストロフィー、スターガルト病、フラビマキュラトゥス病、ベスト病、網膜色素上皮のパターンジストロフィー、X連鎖網膜分離症、ソルスビー眼底ジストロフィー、良性同心黄斑症、ビエッティの結晶性ジストロフィー、偽黄色腫、網膜剥離、黄斑円孔、巨大網膜裂孔、腫瘍に関連する網膜疾患、網膜色素上皮の先天性肥大、後部ブドウ膜黒色腫、脈絡膜血管腫、脈絡膜骨腫、脈絡膜転移、網膜と網膜色素上皮上皮の複合過誤腫、網膜眼底の腫瘍、網膜星細胞腫、眼内リンパ様腫瘍、眼の後部に影響を与えるその他の疾患、点状の内側脈絡膜症、急性後部多発性斑状色素上皮症、近視性網膜変性症、急性網膜色素上皮炎、術後角膜炎症、角膜移植眼瞼炎、MGD、緑内障、高眼圧症、分枝閉塞、網膜疾患、ベストの硝子体黄斑変性症、網膜色素変性症、増殖性硝子体網膜症（PVR）、および視細胞または網膜色素上皮（RPE）のいずれかの他の変性疾患が含まれる。
【００９２】
炎症に関連する眼疾患の症状または臨床症状には、不安定な涙膜、慢性高浸透圧ストレス、蒸発涙損失、潤滑性の低下、目の炎症促進性応答の増加につながる他の涙欠乏症、炎症、およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。
Ｃ．医薬組成物
【００９３】
アディポネクチンペプチド模倣化合物は、多くの医薬組成物のいずれかに使用および処方することができ、米国薬局方（U.S.P.：United States Pharmacopeia）記載のグッドマンおよびギルマンのThe Pharmacological Basis of Therapeutics、第10版、McGraw Hill、2001、Katzung、Ed.、Basic and Clinical Pharmacology、McGraw-Hill/Appleton＆Lange、第８版、Sep. 21、2000、Physician's Desk Reference（Thomson Publishing、and/or The Merck Manual of Diagnosis and Therapy、第18版、2006、Beers and Berkow、Eds.、Merck Publishing Group、または、動物の場合はThe Merck Veterinary Manual、第９版、カーン編、メルク出版グループ、2005年を含む。
【００９４】
眼科用医薬組成物はまた、１つ以上の賦形剤または他の物質、保存剤、抗酸化剤、pH調整剤、緩衝剤、ゲル化剤、増粘剤、界面活性剤、溶解剤、潤滑剤、塩、共溶媒、希釈剤、担体、アジュバント、油、保湿剤、皮膚軟化剤、安定剤、乳化剤、および/または分散剤などを含み得る。他の薬剤を、様々な目的のために組成物に使用することができる。例として、注射可能な組成物は、防腐剤、抗酸化剤、pH調整剤、緩衝剤、塩、乳化剤、および/または分散剤などの様々な賦形剤または他の物質を含み得る。水溶性保存剤などの保存剤の非限定的な例には、重亜硫酸ナトリウム、重硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、エチルアルコール、メチルパラベン、ポリビニルアルコール、ベンジルアルコール、およびフェニルエチルアルコールが含まれる。眼科的に許容される抗酸化剤の例には、重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、システイン、チオグリセロール、亜硫酸ナトリウム、アセトン重亜硫酸ナトリウム、ジチオエリスリトール、ジチオスレイトール、チオ尿素、およびエリソルビン酸が含まれるが、これらに限定されない。酸、塩基および／または緩衝液などの眼科的に許容されるpH調整剤の有用な例には、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、硫酸、および塩酸などの酸が含まれるが、これらに限定されず、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トリスヒドロキシメチルアラノメタン、トリエタノールアミンなどの塩基。および／またはクエン酸塩／ブドウ糖、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムまたはアミノ酸などの緩衝液が含まれる。このような酸、塩基および／または緩衝剤は、組成物のpHを眼科的に許容される範囲に調整するのに十分な量で含み得る。
【００９５】
組成物は、局所眼科適用のために、例えば、溶液、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏の形で、そして、最も好ましくは、点眼剤またはアイジェルは、例えば、防腐剤、薬物浸透を助ける溶媒、および軟膏およびクリーム中の皮膚軟化剤を含む適切な従来の添加剤を含むよう処方することができる。眼科用ビヒクルは、限定されないが、食塩水、ポリエチレングリコールなどの水ポリエーテル、ポリビニルアルコールやポビドンなどのポリビニル、メチルセルロースやヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体、鉱油や白色ワセリンなどの石油誘導体、ラノリンなどの動物性脂肪、カルボキシポリメチレンゲルなどのアクリル酸のポリマー、落花生油などの植物性脂肪やデキストランなどの多糖類、および、ヒアルロン酸ナトリウムなどのグリコサミノグリカンおよび塩化ナトリウムおよび塩化カリウムなどの塩が含まれる。
【００９６】
遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中で調製しても良い。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中、ならびに油中で調製され得る。通常の保管および使用条件下では、これらの調製物は、微生物の成長を防ぐために防腐剤を含んでも良い。
【００９７】
本発明の化合物を含有する医薬組成物は、局所使用に適した態様であり、例えば、油性懸濁液として、水性液体または非水性液体中の溶液または懸濁液として、または水中油型または油中水型液体乳濁液が含まれる。あるいは、化合物は眼への注射用に処方することができ、硝子体内注射、結膜下注射、前眼房への注射などとして処方しても良い。他の例では、化合物は、例えば、マイクロカプセルに封入されたような、移植使用に適した態様であっても良い。有効成分はまた、調製されたマイクロカプセルに封入されても良く、例えば、コロイドドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）におけるコアセルベーション技術または界面重合、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによる。）またはマクロエマルジョン中であっても良い。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 第16版、Osol、A.Ed.（1980）に開示される。組成物は、結膜下投与などのための眼科用デポー製剤にしても良い。アディポネクチンペプチド模倣物は、生体適合性の薬学的に許容されるポリマーまたは脂質封入剤に埋め込んでも良い。デポー製剤は、長期間にわたってすべてまたは実質的にすべての活性物質を放出するように適合させても良い。存在する場合、ポリマーまたは脂質マトリックスは、すべてまたは実質的にすべての活性剤の放出後、投与部位から輸送されるのに十分に分解するように適合させても良い。デポー製剤は、薬学的に許容されるポリマーおよび溶解または分散した活性剤を含む液体製剤であっても良く、注射すると、ポリマーは、例えばゲル化または沈殿することにより、注射部位でデポーを形成する。組成物は、眼とまぶたの間または結膜嚢などの眼の適切な位置に挿入できる固体物品を含むことができ、物品は活性剤を放出する。そのような方法で眼に移植するのに適した固体物品は、一般にポリマーを含み、生体侵食性または非生体侵食性であり得る。
【００９８】
医薬組成物は、治療有効量の本発明による少なくとも１つの化合物またはその医薬上許容される塩を有効成分として従来の眼科的に許容される医薬賦形剤と組み合わせることにより、および眼球使用に適した単位投与量の調製により調製され得る。治療的に有効な量は、典型的には、液体製剤中で約0.0001％（wt）〜約90％（wt）、好ましくは約0.0001％（wt）〜約50％（wt）である。
【００９９】
あるいは、活性化合物はリポソームを介して眼に適用されてもよい。さらに、活性化合物は、ポンプカテーテルシステムを介して涙液膜に注入されてもよい。いくつかの実施態様において、活性化合物は、連続的または選択的放出デバイス、例えば、ピロカルピン（Ocusert（登録商標））システム（Alza Corp.,パロアルト、カリフォルニア）で使用されるものなどであるがこれらに限定されない膜に含まれる。いくつかの実施態様では、活性化合物は、眼の上に配置されるコンタクトレンズ内に含まれるか、それによって運ばれるか、またはそれに取り付けられる。他の実施態様では、活性化合物は、眼の表面に適用できる綿棒またはスポンジ内に含まれる。別の実施態様では、活性化合物は、眼の表面に適用することができる液体スプレー内に含まれる。別の実施態様では、活性化合物は、涙管組織または眼の表面に直接注射される。
【０１００】
ドライアイ治療用医薬組成物を点眼剤として使用する場合、それは、点眼剤、例えば、点眼剤水溶液、点眼剤水溶液、粘性点眼剤および可溶化点眼剤などの点眼剤、または非水性点眼剤に使用される非水性点眼液および非水性懸濁点眼液などの任意の剤形で提供される。これらの中でも、点眼液が好ましい。
【０１０１】
ドライアイ治療用医薬組成物を点眼剤に調製する場合、本発明の目的に悪影響を及ぼさない限り、点眼剤に通常使用される各種添加剤を含有させることが好都合である。そのような添加剤の例には、緩衝剤、等張化剤、保存剤、可溶化剤（安定剤）、pH調整剤、浸透圧調整剤、増粘剤およびキレート剤が含まれる。
【０１０２】
緩衝液は、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、酢酸緩衝液（例えば、酢酸ナトリウム）およびアミノ酸を含む群から選択され得るが、これらに限定されない。等張化剤は、ソルビトール、グルコースおよびマンニトールなどの糖、グリセリン、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムなどの塩を含む群から選択することができるが、これらに限定されない。保存剤は、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、パラオキシ安息香酸メチルおよびパラオキシ安息香酸エチルなどのパラオキシ安息香酸アルキル、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸およびその塩、チメロサールおよびクロロブタノールからなる群から選択することができるが、これらに限定されない。可溶化剤（安定剤）は、シクロデキストリンおよびその誘導体、ポリビニルピロリドンなどの水溶性ポリマー）、およびポリソルベート80（商品名：Tween 80）などの界面活性剤を含む群から選択することができるが、これらに限定されない。pH調整剤は、塩酸、酢酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび水酸化アンモニウムを含む群から選択することができるが、これらに限定されない。増粘剤は、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースならびにそれらの塩を含む群から選択することができるが、これらに限定されない。キレート剤は、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよび縮合リン酸ナトリウムを含む群から選択することができるが、これらに限定されない。
【０１０３】
眼科適用のために、好ましくは、溶液は、主要なビヒクルとして生理食塩水を使用して調製される。そのような点眼剤のpHは、好ましくは4.5〜8.0の間に維持されるべきであるが、約５〜7.5、好ましくは、適切なバッファーシステムで６から７、中性pHが望ましいが必須ではない。酸の例には、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、塩酸などが含まれ、塩基の例としては、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミン、THAM（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）などが含まれる。塩および緩衝液には、クエン酸塩/デキストロース、重炭酸ナトリウム、塩化アンモニウム、および前述の酸と塩基の混合物が含まれる。
【０１０４】
水性眼科用組成物の浸透圧は、一般に、約200〜約400ミリオスモル（mOsM）、より好ましくは260〜340mOsMである。浸透圧は、適切な量の生理学的および眼科学的に許容されるイオン性または非イオン性薬剤を使用することによって調整しても良い。塩化ナトリウムは好ましいイオン剤であり、塩化ナトリウムの量は約0.01％〜約１％（w/v）、好ましくは約0.05％〜約0.45％（w/v）の範囲である。カリウム、アンモニウムなどのカチオンと、塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、重硫酸塩、重硫酸ナトリウム、硫酸アンモニウムなどの陰イオンで構成される等量の１つ以上の塩 塩化ナトリウムに加えて、または塩化ナトリウムの代わりに使用して、上記の範囲内の浸透圧を達成できる。さらに、マンニトール、デキストロース、ソルビトール、グルコースなどの非イオン性薬剤も、浸透圧を調整するために使用しても良い。
【０１０５】
必要に応じて、または便利に、張度調整剤を追加しても良い。それらには、塩、特に塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールおよびグリセリン、または任意の他の適切な眼科的に許容される張度調整剤が含んでも良いが、これらに限定されない。得られる調製物が眼科的に許容される限り、様々な緩衝液およびpHを調整するための手段を使用しても良い。したがって、緩衝液には、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液およびホウ酸緩衝液が含まれる。本発明における使用のための眼科的に許容される抗酸化剤には、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびブチル化ヒドロキシトルエンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０６】
ドライアイを治療するための医薬組成物が眼科用軟膏に調製される場合、ベース化合物が存在しなければならない。眼科用軟膏の基剤は、精製ラノリン、VASELINE（登録商標）プラスチベース、流動パラフィンおよびポリエチレングリコールを含む群から選択しても良いが、これらに限定されない。
【０１０７】
処方物はまた、従来の薬学的に受容可能な保存剤、安定剤および界面活性剤を含み得る。本発明の医薬組成物に使用され得る好ましい保存剤には、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀および硝酸フェニル水銀が含まれるが、これらに限定されない。好ましい界面活性剤は、例えば、Tween 80である。同様に、本発明の眼科用調製物では、様々な好ましいビヒクルを使用することができる。これらのビヒクルには、ポリビニルアルコール、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポロキサマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースシクロデキストリンおよび精製水が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０８】
あるいは、本発明の組成物は、ラクトース、微結晶性セルロース、トウモロコシデンプン、ステアリン酸などを含む薬学的に許容される打錠賦形剤を使用して経口投与用に処方することができ、使用することができる。経口投与はまた、水、グリコール、油、アルコールなどで処方された液体組成物を含んでも良い。
【０１０９】
アディポネクチンペプチド模倣化合物は、脂質ベースのナノキャリア、例えば固体脂質ナノ粒子、ナノ構造脂質担体、脂質薬物複合体、コーティングされたリポソームなどに形成しても良い。
【０１１０】
本発明の製剤は、眼への適用を容易にするために、点眼器を備えた容器などの計量適用に適した態様で便利に包装される。滴下適用に適した容器は、通常、適切な不活性で無毒性のプラスチック材料でできており、一般に約0.5〜約15mlの溶液を含む。１つのパッケージは、１つ以上の単位用量を含み得る。特に防腐剤を含まない溶液は、多くの場合、最大約10、好ましくは最大約５単位用量を含む再密閉不可能な容器に製剤化され、典型的な単位用量は１〜約８滴、好ましくは１〜約３滴である。１滴の容量は通常約20-35μlである。
【０１１１】
製剤は、無菌の溶液または懸濁液の態様であってもよい。溶液または懸濁液は、局所的または注射可能な適用のためのものであっても良い。それは、無菌の注射可能な製剤、例えば、液体または懸濁液製剤であっても良い。いくつかの実施態様では、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、既知の方法に従って製剤化しても良い。無菌の注射可能な調製物は、無毒性の眼内または硝子体内に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であってもよい。緩衝剤、保存剤、抗酸化剤なども必要に応じて組み込んでも良い。
【０１１２】
本明細書に提供されるのは、本明細書に記載される眼科用組成物または製剤を含むキットである。一部の実施態様では、キットは、組成物または製剤を投与するための説明書も含む。場合によっては、組成物または配合物は、計量適用に適した態様で包装される。他の場合では、組成物または製剤は、単一の単位用量の使用のために包装される。
Ｄ．投与方法
【０１１３】
本明細書で提供される組成物は、眼に投与することができる。いくつかの実施態様では、組成物は眼の眼瞼部分、例えば、上眼瞼、下眼瞼の外側の部分、眼瞼の内側と外側、および/または眼の目の表面などに適用されても良い。一部の例では、組成物は、罹患した眼結膜嚢に投与することができる。いくつかの実施態様では、組成物は、硝子体内注射、結膜下注射、結膜注射、筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、房内注射、または対象の眼への移植によって局所投与される。場合によっては、投与は、硝子体内デポ移植または例えば、Edelhauser等、Invest Ophthalmol Vis Sci、2010、51（11）：5403-5420に記載されている他の眼科薬物送達方法を含む。眼は、組織、腺、血管、水晶体、筋肉、神経、または眼組織内、眼の表面、眼房、眼瞼、鼻涙管、マイボーム腺、涙腺など、眼の中または周囲の他の構造が含まれるが、これに限定するものではない。
【０１１４】
組成物は眼科用に処方することができるが、例えば、溶液、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏、最も好ましくは点眼剤または眼用ゲルの態様であり、適切な従来の添加剤を含むことができ、例えば、防腐剤、薬物の浸透を助ける溶剤、軟膏やクリームの皮膚軟化剤も含む。そのような局所製剤は、適合性のある従来の担体、例えばクリームまたは軟膏基剤、およびローション用のエタノールまたはオレイルアルコールを含んでも良い。
【０１１５】
組成物は、任意の適切な手段によって患者の眼に投与することができるが、好ましくは、液滴、スプレーまたはゲルの態様の液体またはゲル懸濁液として投与される。一実施態様では、製剤は滴剤の態様であり、眼球表面に滴下される。別の実施態様では、処方物は、眼の表面に適用され得る綿棒またはスポンジ内に含まれる。別の実施態様において、処方物は、眼の表面に適用され得る液体スプレーまたは軟膏内に含まれる。別の実施態様において、処方物は、涙組織または眼の表面などの眼に直接注射される。さらなる実施態様では、製剤は最初に指先または他のアプリケーターに適用され、次に眼瞼縁または眼窩に直接適用または擦られる。あるいは、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、ナノ粒子、ナノミセル、リポソーム、およびマイクロエマルジョンなどのコロイド剤形を介して眼に適用することができる。さらに、組成物は、ポンプカテーテルシステムを介して涙液膜に注入することができる。別の実施態様は、連続または選択放出デバイス、例えば膜内に含まれるアディポネクチンペプチド模倣化合物を含む。さらなる実施態様として、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、眼の上または眼の周りに配置されるコンタクトレンズまたは他の適合性制御放出材料内に含まれるか、それによって運ばれるか、またはそれに付着され得る。
【０１１６】
いくつかの実施態様では、組成物は、局所的、眼内、眼房内、眼窩内、眼周囲、硝子体内、結膜下、結膜内、筋肉内、皮下、静脈内、房内、または眼の中または周囲の他の経路を介して投与される。本明細書に記載される治療組成物の非限定的な送達経路は、水溶液、油性溶液、例えば軟膏、コロイド担体、例えばミセル、エマルジョン、リポソーム、ナノ粒子、固体態様、例えばコラーゲンベースのシールドおよび/または粒子、ならびに 薬物入りの定時プラグ、薬物入りの小管プラグ、コンタクトレンズ、インプラント、インサートを含む。
【０１１７】
特定の投与経路の適合性は、医薬組成物、その成分、治療される障害、および治療を必要とする対象に部分的に依存するであろう。
Ｅ．投与
【０１１８】
対象に投与される治療薬の投与量は、幅広い要因に応じて変化する。例えば、より小さな動物よりもヒトに実質的により高い用量を提供することが必要であろう。投与量は、対象のサイズ、年齢、性別、体重、病歴および状態に依存し、そして治療されているドライアイ疾患の性質、他の治療法の使用、投与される物質の効力、そして投与の頻度にも依存する。当業者は、これらおよび他の要因に応じて適切な投与量を決定することができるであろう。例えば、治療薬がそれを必要とする対象のドライアイを治療するための点眼液として使用できる場合、点眼水溶液が治療薬を約0.001％（wt）〜30％（wt）、例えば、約0.001％（wt）、約0.005％（wt）、約0.01％（wt）、約0.02％（wt）、約0.03％（wt）、約0.04％（wt）、約0.05％（wt）、約0.06％（wt）、約0.07％（wt）、約0.08％（wt）、約0.09％（wt）、約0.1％（wt）、約0.2％（wt）、約0.3％（wt）、約0.4％（wt）、約0.5％（wt）、約0.6％（wt）、約0.7％（wt）、約0.8％（wt）、約0.9％（wt）、約１％（wt）、約２％（wt）、約３％（wt）、約４％（wt）、約５％（wt）、約６％（wt）、約７％（wt）、約８％（wt）、約９％（wt）、約10％（wt）、約11％（wt）、約12％（wt）、約13％（wt）、約14％（wt）、約15％（wt）、約16％（wt）、約17％（wt）、約18％（wt）、約19％（wt）、約20％（wt）、約21％（wt）、約22％（wt）、約23％（wt）、約24％（wt）、約25％（wt）、約26％（wt）、約27％（wt）、約28％（wt）、約29％（wt）、約30％（wt）である。いくつかの実施態様では、治療薬は、約0.001％（wt）から約30％（wt）、約0.005％（wt）から約30％（wt）、約0.01％（wt）から約0.01％（wt）の範囲の量であって良く、30％（wt）、約0.1％（wt）から約30％（wt）、約１％（wt）から約30％（wt）、約10％（wt）から約30％（wt）、約20％（wt）から約30％（wt）、約10％（wt）から約20％（wt）、約0.001％（wt）から約10％（wt）、約0.001％（wt）から約１％（wt）、約0.001％（wt）から約0.1％（wt）、0.01％（wt）から約0.1％（wt）などを取り得る。投与される場合、治療剤は、１日１回、または１日２回、１日３回、および１日４回などの複数の１日量で与えても良い。いくつかの実施態様では、治療剤は、１日１回、隔日、またはより少ない頻度で投与しても良い。治療剤は、対象がドライアイまたは眼疾患の１つまたは複数の症状を有するときに投与しても良い。場合によっては、治療薬は、１〜５滴以上、例えば、１滴、２滴、３滴、４滴、５滴以上の用量で投与しても良い。投与される場合、組成物は、１日１回、または１日２回、１日３回、１日４回、１日５回またはそれ以上などの複数の１日量で与えてもよい。いくつかの実施態様では、治療薬は、１日１回よりも少ない頻度で投与しても良い。例えば、治療薬は、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、またはより少ない頻度で投与しても良い。いくつかの実施態様では、治療剤は、対象が経験する症状の重症度に従って投与しても良い。
【０１１９】
例えば点眼薬または軟膏として、または眼窩内または眼周囲注射のために局所投与される場合、リフィティグラスは、例示的な投薬量は、約0.1mg/ml〜約200mg/mlであっても良い。
【０１２０】
アディポネクチンペプチド模倣化合物の有効量は、患者の年齢、性別、および体重、患者の現在の病状、ならびに治療されるドライアイ疾患の性質に依存する。当業者は、これらおよび他の要因に応じて適切な投与量を決定しても良い。例えば、医薬組成物が、それを必要とする対象のドライアイを治療するための点眼液として使用される場合、水溶液点眼液は、アディポネクチンペプチド模倣化合物を約0.0001％（wt）から90％の量で含むことが望ましく、例えば、約0.0001％（wt）、約0.0005％（wt）、約0.001％（wt）、約0.005％（wt）、約0.01％（wt）、約0.02％（wt）、約0.03％（wt）、約0.04％（wt）、約0.05％（wt）、約0.06％（wt）、約0.07％（wt）、約0.08％（wt）、約0.09％（wt）、約0.1 ％（wt）、約0.2％（wt）、約0.3％（wt）、約0.4％（wt）、約0.5％（wt）、約0.6％（wt）、約0.7％（wt）、約0.8％ （wt）、約0.9％（wt）、約1％（wt）、約2％（wt）、約3％（wt）、約4％（wt）、約5％（wt）、約6％（ wt）、約7％（wt）、約8％（wt）、約9％（wt）、約10％（wt）、約11％（wt）、約12％（wt）、約13％（wt）、約14％（wt）、約15％（wt）、約16％（wt）、約17％（wt）、約18％（wt）、約19％（wt）、約20％（wt）、約21％（wt）、約22％（wt）、約23％（wt）、約24％（wt）、約25％（wt）、約26％（wt）、約27％（wt）、約28％（wt）、約29％（wt）、約）、約30％（wt）、約31％（wt）、約33％（wt）、約33％（wt）、約34％（wt）、約35 ％（wt）、約36％（wt）、約37％（wt）、約38％（wt）、約39％（wt）、約40％（wt）、約41％（wt）、約42％（wt）、約43％（wt）、約44％（wt）、約45％（wt）、約46％（wt）、約47％（wt）、約48％（wt）、約49％（wt）、約50％（wt）、約51％（wt）、約52％（wt）、約53％（wt）、約54％（wt）、約55％（wt）、約56％（wt）、約57％（wt）、約58％（wt）、約59％（wt）、約60％（wt）、約61％（wt）、約62％（wt）、約63％（wt） 、約64％（wt）、約66％（wt）、約66％（wt）、約67％（wt）、約68％（wt）、約69％（wt）、約70％（wt）、約71％（wt）、約72％（wt）、約73％（wt）、約74％（wt）、約75％（wt）、約76％（wt）、約77％（wt）、約78％（wt）、約79％（wt）、約80％（wt）、約81％（wt）、約82％（wt）、約83％ （wt）、約84％（wt）、約85％（wt）、約86％（wt）、約87％（wt）、約88％（wt）、約89％（wt）、約または90％（wt）の値を取り得る。いくつかの実施形態では、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、約0.0001％（wt）から約90％（wt）の範囲の量であり、例えば、約0.0001％（wt）から約90％（wt）、約0.001％（wt）から約90％（wt）、約0.005％（wt）から約90％（wt）、約0.01％（wt）から約90％（wt）、約0.1％（wt）から約90％（wt）、約１％（wt）から約90％（wt）、約10％（wt）から約90％（wt）、約20％（wt）から約90％（wt）、約30％（wt）から約90％（wt）、約40％（wt）から約90％（wt）、約50％（wt）から約90％（wt）、約60％（wt）から約90％（wt）、約70％（wt）から約90％（wt）、約80％（wt）から約90％（wt）、約10％（wt）から約50％（wt）、約10％（wt）から約40％（wt）、約10％（wt）から約30％（wt）、約10％（wt）から約20％（wt）、約0.0001％（wt）から約10％（wt）、0.0001％（wt）から約1％（wt）、0.0001％（wt）から約0.1％（wt）、0.0001％（wt）から約0.01％（wt）、0.0001％（wt）から約0.001％（wt）、約0.001％（wt）から約10％（wt）、約0.001％（wt）から約１％（wt）、約0.001％（wt）から約0.1���（wt）、0.01％（wt）から約0.1％（wt）、0.01％（wt）から約１％（wt）などを取り得る。投与される場合、組成物は、１日１回、または１日２回、１日３回、および１日４回などの複数の１日量で与えても良い。いくつかの実施形態では、組成物は、１日１回、１日おき、またはより少ない頻度で投与される。組成物は、対象がドライアイまたは眼疾患の１つまたは複数の症状を有するときに投与することができる。場合によっては、組成物は、１〜５滴以上、例えば、１滴、２滴、３滴、４滴、５滴以上の用量で与えられる。
【０１２１】
医薬組成物が眼軟膏として使用される場合、眼軟膏は、アディポネクチンペプチド模倣化合物を約0.0001％（wt）から90％（wt）の量で含むことが望ましく、例えば、約0.0001％（wt）、約0.0001％（wt）0.0005％（wt）、約0.001％（wt）、約0.005％（wt）、約0.01％（wt）、約0.02％（wt）、約0.03％（wt）、約0.04％（wt）、約0.05％（wt）、約0.06％（wt）、約0.07％（wt）、約0.08％（wt）、約0.09％（wt）、約0.1％（wt）、約0.2％（wt）、約0.3％（wt）、約0.4％（wt）、約0.5％（wt）、約0.6％（wt）、約0.7％（wt）、約0.8％（wt）、約0.9％（wt）、約１％（wt）、約２％（wt）、約３％（wt）、約４％（wt）、約５％（wt）、約６％（wt）、約７％（wt）、約８％（wt）、約９％（wt）、約10％（wt）、約11％（wt）、約12％（wt）、約13％（wt）、約14％（wt）、約15％（wt）、約16％（wt）、約17％（wt）、約18％（wt）、約19％（wt）、約20％（wt）、約21％（wt）、約22％（wt）、約23％（wt）、約24％（wt）、約25％（wt）、約26％（wt）、約27％（wt）、約28％（wt）、約29％（wt）、約30％（wt）、約31％（wt）、約33％（wt）、約33％（wt）、約34％（wt）、約35％（wt）、約36％（wt）、約37％（wt）、約38％（wt）、約39％（wt）、約40％（wt）、約41％（wt）、約42％（wt）、約43％（wt）、約44％（wt）、約45％（wt）、約46％（wt）、約47％（wt）、約48％（wt）、約49％（wt）、約50％（wt）、約51％（wt）、約52％（wt）、約53％（wt）、約54 ％（wt）、約55％（wt）、約56％（wt）、約57％（wt）、約58％（wt）、約59％（wt）、約60％（wt）、約61％ （wt）、約62％（wt）、約63％（wt）、約64％（wt）、約66％（wt）、約66％（wt）、約67％（wt）、約68％（wt）、約69％（wt）、約70％（wt）、約71％（wt）、約72％（wt）、約73％（wt）、約74％（wt）、約75％（wt）、約76％（wt）、約77％（wt）、約78％（wt）、約79％（wt）、約80％（wt）、約81％（wt）、約82％（wt）、約83％（wt）、約84％（wt）、約85％（wt）、約86％（wt）、約87％（wt）、約88％（wt）、約89％（wt）、約または90％（wt）の値を取り得る。いくつかの実施態様において、アディポネクチンペプチド模倣化合物は、0.0001％（wt）から約90％（wt）の範囲の量であり、例えば、約0.0001％（wt）から約90％（wt）、約0.001％（wt）から約0.001％（wt）90％（wt）、約0.005％（wt）から約90％（wt）、約0.01％（wt）から約90％（wt）、約0.1％（wt）から約90％（wt）、約1％（wt）から約90％（wt）、約10％（wt）から約90％（wt）、約20％（wt）から約90％（wt）、約30％（wt）から約90％（wt）、約40％（wt）から約90％（wt）、約50％（wt）から約90％（wt）、約60％（wt）から約90％（wt）、約70 ％（wt）から約90％（wt）、約80％（wt）から約90％（wt）、約10％（wt）から約50％（wt）、約10％（wt）から約40％ （wt）、約10％（wt）から約30％（wt）、約10％（wt）から約20％（wt）、約0.0001％（wt）から約10％（wt）、0.0001％（wt）から約１％（wt）、0.0001％（wt）から約0.1％（wt）、0.0001％（wt）から約0.01％（wt）、0.0001％（wt）から約0.001％（wt）、約0.001％（wt）から約10％（wt）、約0.001％（wt）から約１％（wt）、約0.001％（wt）から約0.1％（wt）、0.01％（wt）から約0.1％（wt）、0.01％（wt）から約１％（wt）などの値を取り得る。投与される場合、組成物は、１日１回、または１日２回、１日３回、１日４回、１日５回またはそれ以上などの複数の１日量で与えられてもよい。いくつかの実施形態では、組成���は、１日１回よりも少ない頻度で投与される。例えば、組成物は、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、またはより少ない頻度で投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、対象が経験する症状の重症度に従って投与される。
【０１２２】
例えば点眼薬または軟膏として局所的に投与されるアディポネクチンペプチド模倣薬について、または眼窩内または眼周囲注射について、例示的な用量は、約0.001〜約100mgの範囲、例えば約0.1〜約10mgの範囲であり、例えば、１日１回、１日２回、またはそれ以上の頻度で適用される。例えば、点眼薬または軟膏として局所投与されるADP355の場合、または眼窩内または眼周囲注射の場合、例示的な用量は、約0.01mg/ml〜約200mg/mlであっても良い。
【０１２３】
投薬に関して変動性があることを示したので、当業者は、比較的少量を投与し、治療効果について患者をモニタリングすることにより、適切な投薬を決定できると考えられたい。必要に応じて、望ましい結果が得られるまで線量を段階的に増やしても良い。一般に、治療は、治療薬の最適用量よりも少ない可能性があるより少ない用量で開始される。その後、状況下で最適な効果が得られるまで、投与量を少しずつ増やしても良い。必要に応じて、１日の総投与量を分割して、日中に少しずつ投与しても良い。
【０１２４】
医薬製剤は、単位剤形で包装または調製しても良い。そのような形態では、製剤は、例えば治療薬の用量に従って、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位剤形は、個別の量の調製物を含むパッケージされた調製物であっても良い。組成物は、必要に応じて、他の適合性のある治療薬も含んでも良い。
【０１２５】
本発明は、ドライアイまたはそれを必要とする対象における炎症に関連する眼疾患を治療および／または改善する方法を提供する。治療のコースは、被験者の特定の特性に応じて、個別に決定するのが最適である。治療は、毎日、１日２回、１日３回、１日おき、隔週、毎週、毎月、または治療上有効である任意の適用可能な基準で対象に投与しても良い。治療は、単独で、または例えば、同じ眼障害または関連する症状を標的とする少なくとも１つの他の治療薬と組み合わせて投与しても良い。追加の薬剤は、アディポネクチンペプチド模倣化合物と同時に、異なる時間に、または完全に異なる治療スケジュールで投与しても良い（例えば、追加の薬剤が毎週である間に、アディポネクチンペプチド模倣化合物を毎日投与しても良い）。
Ｆ．治療剤との同時投与
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、アディポネクチンペプチド模倣化合物と１つまたは複数の追加の治療薬との同時投与を含む。「共投与」という用語は、アディポネクチンペプチド模倣化合物またはその薬学的に許容される塩の第一の量の投与を指し、第二の量の少なくとも一つの他の治療薬、例えば、眼疾患を治療するための別の治療薬、または関連する症状、例えば炎症に対処するための治療薬である。いくつかの例において、アディポネクチンペプチド模倣化合物および他の治療剤は、同時にまたは本質的に同時に投与される。アディポネクチンペプチド模倣化合物および他の治療剤は、単一の医薬組成物中に、または複数の医薬組成物中にあり得る。他の例では、アディポネクチンペプチド模倣化合物および他の治療薬は連続して投与される。逐次投与では、アディポネクチンペプチド模倣化合物および他の治療薬は、所望の治療効果を得るのに十分な時間内に投与される。例えば、所望の治療効果をもたらし得る各投与間の期間は、数分から数時間の範囲であり得、効力、溶解度、バイオアベイラビリティ、血漿半減期および動態プロファイルなどの各化合物の特性を考慮して決定され得る。併用投与は、別々の製剤または単一の医薬製剤を使用する同時投与、およびいずれかの順序での連続投与を含み、好ましくは、両方（またはすべて）の活性薬剤が同時にそれらの生物活性を発揮する期間がある。
【０１２７】
いくつかの実施態様では、１つまたは複数の追加の治療薬には、時間厳守プラグ、局所ステロイド局所テトラサイクリン、局所非ステロイド抗炎症薬（局所ジクロフェナクおよび局所ケトロラクなどのNSAIDS）、IL-1アンタゴニスト、他の炎症経路アンタゴニストが含まれ、または阻害剤、血管新生抑制ペプチド、血管新生抑制ステロイド、VEGFまたはFGFのモジュレーター/インヒビター、グルココルチコステロイド、ロイコトリエンモジュレーター、抗ヒスタミン剤、サイトカインモジュレーター/インヒビター、成長因子モジュレーター/インヒビター、Ｔ細胞インヒビター、経口または局所ピロカルピン、ビタミンＡ、トレチノイン（例えば、すべてのトランスレチノイン酸）、ドキシサイクリン、シクロスポリンＡ（例えば、RESTASIS（登録商標）（Allergan）、アジスロマイシン、ムチン刺激剤（例えば、Diquafasol（Inspire Pharmaceuticals））15-(Ｓ)-HETE（Alcon）、レバミピド（大塚）およびエカベト（ISTA））、ホルモン剤および涙腺刺激剤（例えば、アンドロゲン涙（アラガン））および代用涙（例えば、人工涙）が含まれる。いくつかの場合において、本明細書に記載の組成物は、プロゲステロン、合成プロゲストゲン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ノルエチンドロン、酢酸ノルエチンドロン、酢酸メゲストロール、17-α-ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、ノルゲストレル、およびそれらの誘導体と組み合わせて投与される。追加の治療薬には、リフィティグラス、EBI-005（Eleven Biotherapeutics）、anakinra（Amgen）、MIM-D3（Mimitogen Pharmaceuticals）、レバミピド（Otsuka Pharmaceuticals）、トファシチニブ（Pfizer）、リン酸デキサメタゾン（EyeGate Pharmaceuticals）、RGN-259（RegeneRx）、KPI-121（loteprednol etabonate、Kala Pharmaceuticals）、ブロムフェナク（ISTA Pharmaceuticals）、ジクアホソル四ナトリウム（Merck and Co.、Inc.）、ヒドロキシクロロキン（Sanofi-Aventis）、レバミピド（Acucela Inc.）、CF101（Can-Fite BioPharma）、リフィティグラス（Shire）、EBI -005（Eleven Biotherapeutics）、シクロスポリン（haporine-S、DH Bio Co.,Ltd.）、rimexolone（Alcon Research）、ecabetナトリウム（Bausch＆Lomb Incorporated）、リツキシマブ（IDEC Pharmaceuticals）、トシリズマブ（Hoffman-La Roche Ltd.））、skQI（Mitotech、SA）、cis-UCA（Herantis Pharma PLC）、LME636（Alcon Research）、AGN-223575（Allergan）、ISV-101（InSite Vision）、OTX-DP（Ocular Therapeutix,Inc.）、rivoglitazone（Santen Pharmaceutical Co.）、mapracorat（Bausch＆Lomb Incorporated）、resolvin（Resolvyx）、tasocitinib / tofacitinib（Pfizer）、RU-101（R-Tech Ueno,Ltd.）、DNase（Genentech,Inc.）、ボクロスポリン（Lux Biosciences）、P-321（Pari on Sciences）、ACCS（Stemnion,Inc.）、AGN-23241 1（Allergan）、そして、Ridder and Karsolia、Clinical Optometry、2015、2015（7）：91-102などに記載されているものである。
【０１２８】
リフィティグラスは、白血球に見られる細胞表面タンパク質であるインテグリン、リンパ球機能関連抗原１（LFA-1）を阻害する小分子である。リフィティグラスは、LFA-1に結合して、LFA-1が同族のリガンドである細胞間接着分子１（ICAM-1）と相互作用するのをブロックできる。このメカニズムは、Ｔリンパ球によって媒介される炎症を下方制御する。
【０１２９】
米国特許第8,815,795号は、眼疾患の予防または治療のために提案されている247アミノ酸の配列であるアディポネクチンに関する。アディポネクチンは炎症性サイトカインを減少させることができ、ドライアイ（症候群）、コンタクトレンズの使用による眼の合併症、眼表面の不規則性の緩和、炎症性サイトカインの減少、結膜杯細胞密度の増加、ならびにアイクリーナー用組成物またはコンタクトレンズ装用者用潤滑剤の提供をする。
【０１３０】
アディポネクチンペプチド模倣化合物と別の治療薬との組み合わせは、眼疾患の治療における効力の増強をもたらし得る。個別に、連続して、同時に、組み合わせて、またはいずれかの有効薬剤の個別の投与と比較して完全に異なるスケジュールでの有効薬剤の投与は、より大きな抗炎症活性および改善された臨床効果をもたらし得る。動物モデルでの臨床研究は、有効性の改善と抗炎症活性の向上の両方を示す（データは示さず）。相乗効果も観察できる。相乗効果により、個々に、連続して、同時に、組み合わせて、またはいずれかの活性剤の投与量と比較して完全に異なるスケジュールで投与した場合、活性剤の投与量を減らすことができる。減らされた投薬量は現れるかもしれないあらゆる副作用を減らすのを助けることができる。したがって、併用療法において、追加の（第２の）治療薬の有効量およびアディポネクチンペプチド模倣化合物の有効量は、眼疾患の症状／影響を低減するために有効である。
【０１３１】
医学の当業者は、患者の状態、推奨用量、疾患の重症度、およびアディポネクチンペプチド模倣化合物と治療薬との組み合わせの投与の有効性を考慮することにより、追加の治療薬の適切な用量を最もよく決定できる。アディポネクチンペプチド模倣化合物と治療薬との組み合わせの投与から生じる相乗効果も生じ得る。
Ｇ．治療効果を決定する方法
【０１３２】
本明細書で提供される組成物に対する対象の治療応答を評価する様々な方法を実施することができる。いくつかの例では、本明細書に記載の方法が、ドライアイまたは炎症に関連する眼疾患の少なくとも１つの症状または臨床徴候を緩和したかどうかを決定するために、アッセイ、試験または測定を行うことができる。本明細書で提供されるドライアイまたは眼疾患の症状または臨床徴候を測定または評価する方法の詳細な説明は、例えば、Pult等、Eye（Lond）、2011、25（4）：502-510、Bhatnagar等、Int J Opthalmol、2015、8（1）：174-81、Messmer、Dtsch Arztebl Int、2015、112（5）：71-82に記載される。
【０１３３】
涙液分泌の変化は、シルマーテスト、フェノールレッドスレッド涙液テスト（PRTT）、および涙液産生の速度と量を決定するその他の方法によって評価できる。涙のクリアランスの変化は、フルオレセインのクリアランステストと蛍光光度法で評価できる。眼球表面の損傷と角膜上皮の欠損は、フルオレセイン、ローズベンガル、リサミングリーンなどの生体染色染色で評価できる。眼球表面の細胞学は、印象細胞学、刷毛細胞学、フローサイトメトリー、および共焦点顕微鏡によって分析することができる。涙液膜の安定性は、涙液膜安定時間分析システム（TSAS）、波面収差測定、レーザー走査顕微鏡、機能的視力、涙液膜干渉法を使用して、涙液分解時間を分析することで確認できる。涙液量の変化は涙液メニスカス測定で評価できる。涙液層への脂質層の変化は、涙液膜干渉法、マイボメトリー、およびマイボグラフィーによって評価できる。涙液蒸発の評価は、蒸発計、密閉チャンバー、換気チャンバーで行うことができる。涙液膜の化学的性質の改善は、涙液浸透圧、凝固点の低下、蒸気圧浸透圧測定、および導電率（Ocusense）によって評価できる。涙液組成の生化学的分析には、ムチンおよび脂質分析が含まれる場合がある。眼球表面の改善は、色素（フルオレセイン、リサミングリーン、ローズベンガルなど）を使用して、ベースラインと比較して不規則な形態や角膜または結膜上皮の染色を観察することで視覚化できる。
【０１３４】
ドライアイおよび炎症を伴う眼疾患などの眼疾患の少なくとも１つの症状または臨床徴候の緩和は、治療後の症状または臨床徴候の程度を治療前の同じ症状または臨床サンプルの程度と比較することにより決定できる。症状または臨床徴候の程度が治療後に減少した場合は、改善または緩和が示される。
IV．例
【０１３５】
以下の実施例は、クレームされた発明を説明するために提供され、限定する訳ではない。
［実施例１］ドライアイの動物モデルを治療するためのアディポネクチンペプチド模倣化合物
【０１３６】
この研究の目的は、ドライアイのスコポラミンモデルを使用して、ここで説明するアディポネクチンペプチド模倣化合物の有効性を研究することである。
Ａ.治療プロトコル
【０１３７】
体重300gから350gのオスのSprague-DawleyラットをCharles River（Wilmington、MA）から入手する。動物は、一定の室温（22±1℃）、光の条件（12時間の明/12時間の暗のサイクル）、および湿度（40〜60％）で動物の部屋に収容される。動物は、外科的実験およびイソフルランによる臨床検査の前に麻酔をかける。
【０１３８】
ドライアイはスコポラミン（Sigma-Aldrich、セントルイス、ミズーリ州）を使用して誘発され、スコポラミンで満たされた浸透圧ポンプ（2ML4 Alzet（登録商標）、CedarLane、バーリントン、オンタリオ）を介して、継続的かつ全身的に動物に送達され、肩甲骨の間の背側中央部に皮下移植される。傷は２-３の傷クリップで閉じられる。手術後と翌日、動物には非ステロイド性抗炎症薬であるカルプロフェン（0.5mg/100g）とげっ歯類の強力な長時間作用型鎮痛薬が皮下注射される。動物は、外科用ポンプの埋め込み前とイソフルオラン99.9％USP（Abraxis Bioscience、リッチモンドヒル、オンタリオ）チャンバーでのすべての臨床エンドポイントテストの前に麻酔する。スコポラミンは12.5mg/日で投与され、技術的な理由により、データは14日目に評価される。
【０１３９】
0.175g/mLの臭化水素酸スコポラミン(Sigma-Aldrich, St. Louis Mo.)の滅菌溶液を生理食塩水(0.9%)で調製し、0.22umシリンジエンドフィルター(Millex-GC, Millipore Corp., Bedford, Mass.)でろ過する。2ML4Alzet（登録商標）ポンプには、メーカーの指示に従って、0.175g/mLスコポラミン溶液２mLが充填される。
Ｂ．ドライアイの臨床エンドポイントと結果
【０１４０】
角膜染色：角膜乾燥の臨床症状は、角膜のフルオレセイン含浸により評価される。滅菌生理食塩水で構成された１％フルオレセインナトリウム(Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.)溶液を、麻酔した動物の結膜嚢に滴下する。その後、フルオレセイン注入の３分後に、青色コバルトフィルター付きのポータブルスリットランプ検眼鏡（Reichert Ophthalmic Instruments、Dewew、NY）を使用して、青色光の下で角膜を観察する。各動物について、眼球表面の点状の蛍光陽性領域を盲検様式で記録する。このテストのスコアは０から４に等級付けされ、０=染色なし、１=<25％表面染色、２=25-50％表面染色、３=50-75％）表面染色、４=>75％>表面染色を表す。
【０１４１】
シルマーのテスト：涙の生成は、Zone-Quickの標準化されたフェノールレッド糸（FCI Ophthalmics、Marshfield Hills、MA）で測定される。動物はイソフルランで軽く鎮静される。糸を外側下眼角に挿入し、30秒間そのままにする。糸の汚れた湿った部分の長さは、糸に付属の目盛りを使用して１mmの精度で、ミリメートル単位で測定される。
【０１４２】
平均と標準偏差（SD）は、各研究グループのデータを特徴付けるために使用される。GraphPad Prism 4.0C（GraphPad Software Inc.,La Jolla、CA）を使用して、観察ごとに体重と治療グループの眼の兆候について一方向分散分析（ANOVA）を実行する。試験日ごとに層別化した場合、治療群が統計的に有意である場合（p<0.05、両側）、ペアワイズ比較を実行する。未処理の対照（グループ１またはＡ）との比較には、ダネット検定による調整を使用する。複数の比較に対して修正は行われない。グループ間のＰ値が計算され、平均のペアのそれぞれの間の差（>0.05、<0.05、<0.01またはO.001として報告されたＰ値）が報告される。
［実施例２］乾燥環境と組み合わせたスコポラミンを使用してドライアイのマウスモデルを治療するためのアディポネクチンペプチド模倣化合物
【０１４３】
６〜８週齢の雌C57BL/6マウスをこれらの実験で使用する。実験的ドライアイ（EDE）は、0.5mg/0.2mL臭化水素臭化スコポラミン（Sigma-Aldrich、ミズーリ州セントルイス）を１日４回（午前８時、午前11時、午後２時、および午後５時）皮下に注射して誘発される。前述のように、通風と30％の周囲湿度。これらの実験の間、動物の行動、食物、および水の摂取は制限されない。マウスは、次のように投与される局所治療に従って６つのグループにランダムに割り当てられる。(１)乾燥ストレスに曝されていない、または局所的に治療されていない未治療（UT）の対照マウス。(２)点眼薬を受け取らないEDE対照マウス。(３)平衡塩類溶液（BSS、Alcon、フォートワース、テキサス州）で処理されたEDEマウス、(４)0.001％で処理されたEDEマウス）アディポネクチンペプチド模倣体。(５)0.01％アディポネクチンペプチドミメティックで処理されたEDEマウス。(６)0.1％アディポネクチンペプチドミメティックで処理したEDEマウス。すべての治療グループは２マイクロリットルの点眼薬を１日４回受ける。涙液量と角膜平滑度は、治療後５日と10日で測定される。処置の10日後、マウスを安楽死させ、多重免疫ビーズアッセイ、組織学、免疫組織化学、およびフローサイトメトリーを行った。各グループは５匹の動物で構成され、実験は４つの独立したマウスのセットで実行される。
【０１４４】
涙液量は、前述のように、フェノールレッドを含浸させた綿糸（Zone-Quick、Oasis、Glendora、CA）を使用して測定される。糸は20秒間外側眼角に配置される。涙で濡れた糸の距離は、SMZ1500顕微鏡（Nikon、東京、日本）を使用して測定される。距離を体積に変換する標準曲線が導き出される。
【０１４５】
角膜表面の不規則性の重症度は、立体ズーム顕微鏡（SMZ1500、Nikon）の光ファイバーリングイルミネーターからの白いリングの歪みを２人のマスクされた観察者が測定することで段階的に評価される。角膜不規則性の重症度スコアは、次のように、反射された輪の歪んだ４分の１の数に基づいて以下の６ポイントスケール(0-5)を使用して計算される。
０は歪みなし、１はリングの４分の１の歪み、２は４分の２の歪み、３は４分の３の歪み、４は４つの象限すべての歪み、５はひどい歪み、リングは認識できず。
【０１４６】
フローサイトメトリーは、結膜および涙腺からのCD4+CXCR3+T細胞の定量のために実行される。組織を毛羽立て、0.5mg/mLコラゲナーゼタイプＤとともに37℃で60分間振動させる。シリンジの略奪で粉砕し、セルストレーナーを通過させた後、細胞を得て、遠心分離し、１％ウシ血清アルブミンを含むPBSに再懸濁する。洗浄後、サンプルをフルオレセイン標識抗CD4抗体(BD Biosciences, San Jose, CA)、フィコエリスリン標識抗CXCR3抗体（BD Biosciences）、アイソタイプコントロール抗体と37℃で30分間インキュベートする。CD4+CXCR3+T細胞の数は、CellQuestソフトウェア（BD Biosciences）を備えたFACSCaliburサイトメーターでカウントされる。
【０１４７】
涙液量および角膜不規則性スコアの結果の統計的差異は、事後分析を伴う一元配置分散分析によって評価される。クラスカル・ウォリスおよびマン・ホイットニー検定を使用して、サイトカインレベル、杯細胞密度およびフローサイトメトリーについてグループ間の比較をする。p値<0.05は、統計的に有意であると見なされる。
【０１４８】
本明細書に記載されるアディポネクチンペプチド模倣薬の投与は、涙液量を増加させ、角膜表面の不規則性の重症度を減少させ、および/またはドライアイのマウスモデルにおける眼の中および周囲の炎症反応細胞の数を減少させる。
［実施例３］アディポネクチンペプチド模倣薬の局所投与は、ドライアイによって引き起こされる涙液産生および角膜表面の不規則性を改善する
【０１４９】
この実施例は、それを必要とする対象のドライアイを治療するための、ADP355およびADP399などのアディポネクチンペプチド模倣薬の使用を示す。ADP355のシーケンスは、DAsn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-DSer-Phe-Ala-DSer-NH2(配列番号：６)である。ADP399はADP355の線状分岐二量体で、次のシーケンスを持つ：(DAsn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-DSer-Phe- Ala-DSer-His-Pro)2-Dab-NH2(配列番号：７)。Nvaはノルバリンを指し、Dabは2,3-ジアミノ酪酸を指す。ADP355とADP399の詳細な説明は、例えば、米国特許第9,073,965号Otvos等、Frontiers in Chemistry、2014、2（93）：1-15、doi：10.3386/fchem.2014.00093にあり、あらゆる目的のためにそれらの全てを参照として組み込む。
【０１５０】
実験的ドライアイ（EDE）は、８週齢の雌C57BL/6マウスに0.5mg/0.2mL臭化水素酸スコポラミン(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)を１日３回（午前９時、午後１時半と午後６時）、0.3mLの用量の臭化水素酸スコポラミンを各注射で投与した。マウスはまた、通風および30％の周囲湿度に曝した。この研究で使用された６つの実験グループには、(１)未処理の対照マウス（UT、ドライアイ治療なし、局所治療なし）、(２)未処理のEDE対照マウス（EDE、局所投与を受けなかった）、(３)EDE対照マウスは、平衡塩類溶液（BSS）を受けた、(４)EDEマウスは、BSSに0.01％の単鎖アディポネクチンペプチド模倣薬（ADP355）が投与された、(５)ESSマウスにBSSで0.01％ペプチドダイマーアディポネクチンペプチドミメティック（ADP399）を投与、そして、(６)ESSマウスにBSSで0.01％の組換え球状アディポネクチン（gAdipo）を投与。各グループには５匹のマウスが含まれる。BSSで処理されたEDEマウスは、１日３回、２μl/眼の局所両側投与を受けた。ADP355で処理されたEDEマウスは、１日３回、２μl/眼の局所両側投与を受けた。ADP-399で処理されたEDEマウスは、１日３回、２μl/眼の局所両側投与を受けた。gAdipoで処理されたマウスは、ポジティブな処理コントロールとして機能した。マウスは、治療開始後のベースライン、５日目および10日目に評価された。一部の実験では、ADP355、ADP-399、およびgAdipoを0.01％BSAに再懸濁した。
【０１５１】
涙液量は、フェノール赤糸引裂試験を使用して測定した。簡単に言えば、先端をフェノールレッドで処理した綿糸（Zone-Quick、Oasis、Glendora、CA）を宝石商の鉗子で保持し、外側眼窩の涙液メニスカスに20秒間置いて涙液に触れさせた。顕微鏡を使用して、糸の赤い部分（湿った部分）の長さをミリメートル単位で測定した。距離測定値を涙液量に変換するために標準曲線が導き出された。
【０１５２】
図１は、涙液量によって測定される涙液産生が、アディポネクチンペプチド模倣薬で処理されたEDEマウスで、未処理またはBSS処理されたEDEマウスと比較して高かったことを示す（ADP355とEDEのp値<0.05、ADP399とEDEのp値<0.05）。涙液量の統計的に有意な差が、処理されたEDEマウスと未処理のEDEマウスの間で観察された。ADP355、ADP399、および球状アディポネクチンで治療した人の間で涙液量に有意差はなかった。治療開始後10日目の全てのグループの涙液量は、５日目の涙液量と同様であった。
【０１５３】
角膜上皮損傷の重症度は、角膜フルオレセイン染色によって評価された。簡単に言えば、１％フルオレセイン色素（1μM）を眼に注入し、次に眼を生理食塩水で洗浄した。染料の塗布から10分後、コバルトブルーライトを使用してスリップランプ顕微鏡で目を撮影した。染色された領域は、２人の盲目の観察者による採点システムを使用して等級付けされた。角膜の５つの異なる領域（中央、上、下、鼻、側頭領域）を、各領域の０〜４のスコアに従って評価し、スコア０は染色がないか染色がないことを表し、スコア１は30スポット未満の点状染色を表し、スコア２は斑点が30を超える斑点状染色を表すがびまん性ではない、スコア３は重度のびまん性染色を表すが陽性プラークがないかまたはないことを表わし、そして、スコア４は陽性のプラークを伴う重度のびまん性染色を表す。５つの地域の平均スコアが記録された。図２は、ADP355やADP-399などのアディポネクチンペプチド模倣薬で処理されたEDEマウスが、未処理のEDEマウスと比較して角膜染色が少ない（角膜の不規則性が少ない）ことを示す(p-value<0.05 for ADP355 vs. EDE, p-value<0.05 for ADP-399 vs.EDE)。角膜蛍光染色スコアの統計的に有意な改善が、アディポネクチンペプチド模倣薬で治療されたグループで、未治療グループと比較して観察された。更に、アディポネクチンペプチドミメティック処理マウス（ADP355およびADP-399）には、未処理の通常のマウス（UT）および陽性対照の球状アディポネクチン処理マウス（gAdipo）と同様の角膜表面があった。10日目のすべてのグループの角膜表面スコアは、治療開始後５日目のスコアと同様であった。
【０１５４】
この研究は、アディポネクチンペプチドミメティックの局所投与が涙液産生や眼球表面の不規則性などのドライアイの臨床症状を軽減または排除したことを示す。一本鎖アディポネクチンペプチドミメティックス（例、ADP355）とペプチドダイマーアディポネクチンペプチドミメティックス（例、ADP399）を含むアディポネクチンペプチドミメティックスを含む点眼薬の投与は、EDEの涙液産生と眼球表面に有益な効果をもたらした。したがって、眼へのアディポネクチンペプチド模倣物の局所適用は、それを必要とする対象におけるドライアイの治療に有用であり得る。
［実施例４］５％リフィティグラスと組み合わせたアディポネクチンペプチドミメティックの局所投与は、ドライアイにより引き起こされる涙液膜の安定性および角膜表面の不規則性を改善する
【０１５５】
この例は、ADP355などのアディポネクチンペプチド模倣薬を５％リフィティグラスと組み合わせて使用して、それを必要とする対象のドライアイを治療する方法を示す。ADP355のシーケンスは、DAsn-Ile-Pro-Nva-Leu-Tyr-DSer-Phe-Ala-DSer-NH2(配列番号：６)である。リフィティグラスは、Xiidra(Shire US Inc., Lexington, MA)の商品名で、点眼薬の局所用５％点眼液として販売されている処方点眼薬である。ADP355の詳細な説明は、例えば、米国特許第9.073,965号(ADP355)に見出され、開示は、すべての目的のためにその全てを参照として本明細書に組み込む。
【０１５６】
実験的ドライアイ（EDE）は、８週齢の雌C57BL/6マウスに0.5mg/0.2mL臭化水素酸スコポラミン(Sigma- Aldrich, St. Louis, MO)を１日３回（午前９時 0.3mL、午後１時半に0.3mL、および午後６時に0.3mL）皮下注射することにより誘発された。マウスはまた、通風および30％の周囲湿度に曝した。この研究で使用された５つの実験グループには、（１）未処理の対照マウス（UT、ドライアイ治療なし、局所治療なし）、(２)EDE対照マウスは、平衡塩類溶液（BSS）を受け、(３)EDEマウスはADP355 0.1％（BSS中の単鎖アディポネクチンペプチド模倣薬（ADP355））を受け、(４)EDEマウスは５％のリフィティグラスを受け、そして、(５)EDEマウスは、BSS+リフィティグラス５％で0.1％ペプチドアディポネクチンペプチド模倣薬（ADP355）を受けた。各グループには５匹のマウスが含まれる。ESSマウスは、BSS、または0.1％アディポネクチン355単独またはリフィティグラス５％と組み合わせて、BSS、または0.1％アディポネクチン355、2μL/眼、１日３回の局所投与を受けた。リフィティグラス５％を単独で、または0.1％アディポネクチン355と組み合わせて処理したEDEマウスに、リフィティグラス5％、2μl/眼、1日２回の局所両側投与を行った。マウスは、治療開始後のベースライン、５日目および10日目に評価された。
【０１５７】
実験１-涙液膜崩壊（BUT）：この実験では、ADP355 0.1％の抗炎症活性と有効性を、単独で、またはリフィティグラス５％と組み合わせて、乾燥によるドライアイ（DED）の改善を評価した。まばたき後の角膜表面にドライスポットが現れるまでの時間を眼で評価した。このアッセイは、涙液膜の安定性を評価する方法と、回避型ドライアイが存在するかどうかを決定する方法を提供する。涙液膜が崩壊するまでの時間が長いほど、涙液膜がより安定していることを示す。涙液量は正常だが涙液膜が不安定な被験者は、ドライアイの症状として説明できる。涙の不安定性は、涙の組成の不均衡を示し、涙が急速に蒸発するか、眼の表面への付着が不適切になる可能性がある。あるいは、メルボミア腺機能不全に起因するメルボミア腺による不十分な脂質分泌も、涙液膜の不安定性を引き起こし得る。
評価は５日と10日の時点で行われ、通常の時間は約３〜５秒であり、2.2〜3.0秒未満の限界および2.2秒未満の低およびドライアイ症状の可能性が高く、有効性の識別可能な改善はない。
【０１５８】
図３Ａおよび３Ｂは、涙液膜破壊時間（BUT）によって測定される涙液生成を示す。 BUT（安定性）は、アディポネクチンペプチド模倣ADP 355+リフィティグラス５％処理EDEマウスの方が、BSS処理EDEマウスと比較して長かった（グループ３〜６のp値<0.05）。グループ５（ADP355+リフィティグラス５％で処理されたグループ）では、両方のエンドポイントで涙液膜時間が0.1％アディポネクチン355またはリフィティグラス５％単独で処理されたグループ３および４とそれぞれ比較して、著しく改善された（D5で約4.8秒、D10で4.2秒）。明らかに、ADP355 0.1％+リフィティグラス５％の両方で処理することにより、相加効果があるように見えた。
【０１５９】
実験２-角膜染色：角膜染色アッセイの目的は、ドライアイの誘発の結果として、または0.1％ADP355またはリフィティグラス５％単独または0.1％のADP355+リフィティグラス５％の組み合わせによる治療による、マウスEDE被験者の角膜上皮の損傷を評価することであった。フルオレセイン染色は、角膜の上皮表面細胞の破壊、構成の変化、および検出可能な損傷を検出する。染色グレードが低いほど、角膜の損傷の程度は小さくなる。角膜染色は４象限で４ポイントスケールを使用して評価され、16が最大スコアであった。
【０１６０】
簡単に言えば、１％フルオレセイン色素（1μM）を眼に注入し、次に眼を生理食塩水で洗浄した。染料の塗布から10分後、コバルトブルーライトを使用してスリップランプ顕微鏡で目を撮影した。染色された領域は、２人の盲目の観察者による採点システムを使用して等級付けされた。角膜の５つの異なる領域（中央、上、下、鼻、側頭領域）を、各領域の０〜４のスコアに従って評価し、
スコア０は染色がないか染色がないことを表わし、スコア１は30未満のスポットのわずかに点状の染色を表わし、スコア２は斑点が30を超える斑点状染色を表すが、びまん性ではないことを表わし、スコア３は重度のびまん性染色を示しますが、陽性プラークがないか、またはないことを表わし、そして、スコア４は、フルオレセインプラーク陽性の重度のびまん性染色を表す。５つの地域の平均スコアが記録された。図４Ａおよび４Ｂは、それぞれD5およびD10での染色結果の格付けを示す。繰り返しになるが、涙液膜崩壊研究と同様に、治療された眼は未治療の眼よりもグレードが低かった（グループ２、BSS）。ADP355 0.1％、またはリフィティグラス５％のいずれかによる治療は、誘導されたドライアイに起因する角膜破壊を改善した。しかしながら、0.1％のADP355+リフィティグラス５％の両方でのEDE眼科治療におけるD5（図４Ａ）で、より大きな改善が最も顕著であった。Ｄ10（図４Ｂ）では、組み合わせは、単一の治療単独のいずれよりもほんのわずかに良好であり、各治療は、未治療のドライアイよりもグレードが低かった。
【０１６１】
実験３-フローサイトメトリー：このテストの目的は、前述のように結膜および涙腺からのCD4+およびCCR5+T細胞の存在を定量化することである（Yoon KC、Heo H、Kang IS、等、Cornea（2008）27：454-460）。高レベルの炎症細胞は眼の炎症を示す。組織を毛羽立て、0.5mg/mLコラゲナーゼタイプDと共に37℃で60分間振動させる。
【０１６２】
シリンジ・プランダーで粉砕し、セルストレーナーを通過させた後、細胞を得て、遠心分離し、１％ウシ血清アルブミンを含むPBSに再懸濁する。洗浄後、サンプルをフルオレセイン標識抗CD4抗体(BD Biosciences, San Jose, CA)、フィコエリスリン標識抗CC5+R抗体(BD Biosciences)、およびアイソタイプコントロール抗体と共に37°Cで30分間インキュベートします。CD4+およびCCR5+T細胞の数は、CellQuestソフトウェア(BD Biosciences)を備えたFACSCaliburサイトメーターによってカウントされる。各治療群の結果を図５Ａ〜５Ｅおよび６Ａ〜６Ｅに示す。結果は、10日後に、0.1％のADP355+リフィティグラス５％のみが正常範囲内の活性化Ｔ細胞レベルを再確立したことを示す。これは、割合が20.06％であり、結膜でコントロールが28.86％であり（それぞれ図５Ｅおよび５Ａ）、涙腺でコントロールが11.09％あったことを示す（それぞれ、図６Ｅおよび６Ａ）。
実験４-サイトカインの評価
この実験の目的は、EDEがある場合とない場合のマウスの結膜腺と涙腺におけるサイトカインの存在を特定して評価することである。
【０１６３】
マルチプレックスイムノビーズアッセイ(Luminex 200、Luminex Corp., Austin, TX)を使用して、IFN-γ、IL-1B、MIP1B、TNF-α、IL-6、IFN-c、および、結膜と涙腺でインターフェロン-c（MIG）によって誘発されるモノカインの濃度を測定する。組織を収集し、プロテアーゼ阻害剤を含む溶解バッファーに30分間プールする。細胞抽出物を48℃の温度で14,000gで15分間遠心分離し、上澄みを使用するまで-70℃で保存する。上澄みを、IFN-γ、IL-1B、MIP1B、TNF-α、IL-6、IFN-c、およびMIGに特異的なマウスモノクローナル抗体を含む適切なサイトカインビーズ混合物を含むウェルに60分間加える。アッセイバッファーで３回洗浄した後、ビオチン化二次サイトカイン抗体混合物を室温で暗所で30分間適用する。反応は、ストレプトアビジン-フィコエリトリンを分析システム（xPONENT、Austin、TX）で添加した後に検出される。組織内のこれらの因子の濃度は、既知の濃度の組換えマウスサイトカインの標準曲線から計算される。
【０１６４】
眼および付属器を外科的に切除し、４％パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに埋め込む。６マイクロメートルの切片を、過ヨウ素酸-シッフ（PAS）試薬で染色する。切片を検査し、デジタルカメラ（F2、Foculus、ドイツ、Finulus）を装備した顕微鏡（BX53、オリンパス、東京、日本）で撮影する。上および下結膜の杯細胞密度は、画像分析ソフトウェア（Media Cybernetics、Silver Spring、MD）を使用して各眼から３つのセクションで測定され、固定領域あたりの杯細胞の数として表される。免疫組織化学を実施して、正常眼の結膜におけるアディポネクチン受容体、AdipoR1およびAdipoR2の発現、ならびに実験的ドライアイの結膜および涙腺におけるTNF-aの発現を検出する。リン酸緩衝生理食塩水（PBS）中の過酸化水素（H202、0.3％）とPBS中の20％血清をセクションに順次適用する。UTコントロールマウスの結膜切片を、ヤギ抗アディポネクチン受容体AdipoR1およびAdipoR2抗体（Vector Laboratories、カリフォルニア州バーリンゲーム）とインキュベートします。EDEを有するマウスの結膜および涙腺切片を、ヤギモノクローナル抗マウスTNF-a抗体(Vector Laboratories, Burlingame, CA)と共にインキュベートする。洗浄後、適切な二次抗体が適用される。サンプルをアビジン-ペルオキシダーゼとインキュベートし、次に３,３０-ジアミノベンジジンペルオキシダーゼ基質とインキュベートし、メイヤーのヘマトキシリンで対比染色する。
【０１６５】
図７は、BSS、0.1％ADP355、リフィティグラス５％または0.1％ADP355+リフィティグラス５％の投与による治療後の結膜および涙腺におけるサイトカインレベルを示す。 0.1％ADP355+リフィティグラス５％の両方の投与による治療の結果として生じるサイトカインのレベルの低下が容易に明らかであり、併用治療の有効性が向上する。
【０１６６】
涙の崩壊時間、角膜染色、正常スコアの結果の統計的差異は、事後分析を伴う一元配置分散分析によって評価された。Kruskal-WallisおよびMann-Whitney検定を使用して、グループ間のフローサイトメトリーを比較した。P値<0.05は、統計的に有意であると見なされた。
【０１６７】
この研究は、アディポネクチンペプチド模倣薬の局所投与が、0.1％ADP355+リフィティグラス５％の投与により涙液膜の安定性を改善し、眼の表面の凹凸などのドライアイの臨床的兆候を排除し、0.1％ADP 355またはリフィティグラス５％単独の局所投与と比較した場合、ドライアイのマウスのモデルにおける眼の中および周辺における炎症反応細胞の数を減少させたことを示す。このように、アディポネクチンペプチドミメティック+リフィティグラス５％の眼への局所適用は、改善された効能を有するようであり、それを必要とする対象におけるドライアイの治療に有用であり得る。
【０１６８】
上述の発明は、理解を明確にする目的で、例証および例としていくらか詳細に説明されたが、当業者は、添付の特許請求の範囲内で特定の変更および修正を実施できることを理解されたい。更に、本明細書で提供される各参考文献は、あたかも各参考文献が個別に参照により組み込まれたかのように、その全体を同程度に参照として組み込む。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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