(57)【要約】  本発明は、二機能性であり、免疫応答を特異的に増強することができる免疫療法剤に連結された新規改変抗ＳＩＲＰａ抗体及びその使用を提供する。【選択図】図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及び
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン
を含み、
−  前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１５または配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、または配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記重鎖定常ドメインまたはその断片が、免疫療法剤に連結されており、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、及びその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかまたはそれからなる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
抗ＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体であり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害する、請求項１に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させる、請求項１または２に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ヒトＴ細胞の活性化を阻害せず、好ましくは増加させる、請求項１から３のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３１、配列番号３２、ならびに配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメインを含み、
特に、
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０、特に配列番号２９、配列番号３０、より詳しくは配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン
を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
−  配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
前記免疫療法剤が、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、及び配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、請求項１から６のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
重鎖が、好ましくは配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、ＧＧＧ、ＧＧＳ、及び配列番号９３からなる群から選択されるリンカー配列によって免疫療法剤に連結されている、請求項１から７のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
前記免疫療法剤が、前記二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片の前記重鎖定常ドメインまたはその断片のＣ末端に連結されている、請求項１から８のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
前記二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体がヒト化モノクローナル抗体であり、特に抗体軽鎖定常ドメインが、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来し、より詳しくは前記抗体軽鎖定常ドメインが配列番号３５の配列からなり、及び／または抗体重鎖定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４重鎖定常ドメイン、特にヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインに由来し、より詳しくは前記抗体重鎖定常ドメインが配列番号３４の配列からなる、請求項１から９のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
−  配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９８、ならびに配列番号１７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、ならびに配列番号１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１２、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１２、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１９、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１９、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２６、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２６、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３３、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３３、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１４０、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１４０、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
または
−  配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、及び４−１ＢＢＬバリアントからなる群から選択される前記免疫療法剤バリアントが、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、及び配列番号８８からなる群から選択される１つのアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性を共有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記免疫療法剤断片が、５０〜３００アミノ酸残基からなる、請求項１から１２のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
医薬として使用するための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片、または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
がん、特に炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有するがん、特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患、特にシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ならびにＣＭＶ、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、及び移植機能障害からなる群から選択される疾患の予防もしくは処置における請求項１５に記載の使用、またはワクチン接種での使用のための、
請求項１から１４のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片、または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
がん、特に炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有するがん、特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがんの予防もしくは処置における請求項１６に記載のその使用のための、
請求項１から１４のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片、または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくは前記ヒトＣＤ４７の前記ヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
前記二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片が、ＳＩＲＰａ陽性腫瘍を提示する患者に投与される、請求項１７に記載のその使用のための、
請求項１から１４のいずれか一項に記載の二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片、または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくは前記ヒトＣＤ４７の前記ヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の二機能性抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子または単離された核酸分子の群。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸分子または単離された核酸分子の群、及び／または請求項２０に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
【請求項２２】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の少なくとも１つの二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片；及び／または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＣＤ４７の前記ヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ならびに／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、ならびに／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片；及び／または
請求項１９に記載の単離された核酸分子または単離された核酸分子の群；及び／または
請求項２０に記載のベクター；及び／または
請求項２１に記載の細胞；及び
薬学的に許容される担体
を含む医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の少なくとも１つの二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片；及び／または
免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含む、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、特にヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＣＤ４７の前記ヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ならびに／もしくはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、ならびに／もしくはヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ならびに／もしくは前記ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片；及び／または
請求項１９に記載の単離された核酸分子または単離された核酸分子の群；及び／または
請求項２０に記載のベクター；及び／または
請求項２１に記載の細胞；及び
化学療法剤、放射線療法剤、細胞療法剤、免疫療法剤、抗生物質、プロバイオティクス、治療ワクチン、特に適応免疫細胞、特にＴならびにＢリンパ球の免疫チェックポイント遮断剤もしくは活性化剤、ならびに抗体−薬物コンジュゲートからなる群から選択される第２の治療剤
を含む組合せ産物。
【請求項２４】
前記二機能性抗ヒトＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合性断片、または前記単離された核酸分子または単離された核酸分子の群、または前記ベクター、または前記細胞、及び前記第２の治療剤が、個別、連続的、または組合せ治療のために、特に組合せまたは連続的使用のために製剤化される、請求項２３に記載の組合せ産物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫療法の分野に関する。本発明は、二機能性であり、免疫応答を特異的に増強することができる免疫療法剤に連結された新規改変抗ＳＩＲＰａ抗体及びその使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
適応免疫の免疫チェックポイントの標的化は、多数の疾患、特にがんと闘うために大きい治療有効性を示しているが、患者集団は限定される。自然骨髄系細胞（マクロファージ、樹状細胞、ＭＤＳＣ、ＰＭＮ）に対する免疫チェックポイントは、あまり研究されていないが、これらの細胞は、多くの固形腫瘍における最も数が多い免疫細胞型を表し、しばしば、予後不良に関連している。自然免疫応答（骨髄系細胞によって媒介される）ならびに適応免疫応答（Ｔ細胞によって媒介される）の両方を標的とする免疫チェックポイント治療を組み合わせることは、前臨床モデルでは高い有効性を証明したが、臨床ではなおも課題である。
【０００３】
本発明は、免疫療法剤を抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片の重鎖にグラフトした場合に有効性の増強を示すが、抗ＳＩＲＰａ抗体の軽鎖にグラフトした場合には有効性の増強を示さない独自の構造を有する二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片を開示する。本明細書において、本発明者らは、ｉ）ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用に拮抗するが（骨髄系細胞に対するブレーキを放出する）、ＳＩＲＰｇには特異的に結合せず（有効なＴ細胞活性化ならびに接着にとって必要なＳＩＲＰｇ−ＣＤ４７相互作用に影響を及ぼさない）、同時にｉｉ）ＰＤ１／ＰＤＬ１またはＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０またはＣＤ８０／ＰＤＬ１軸の阻害を通してＴ細胞の活性化ならびに／または増殖を誘導する、及び４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬまたはＣＤ８０／ＣＤ２８シグナルを強化する（強力な適応免疫応答、特に抗腫瘍応答を誘導する、ならびに／または長寿命のメモリーＴ細胞を誘導する）ことが可能である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体、特にヒト化抗体を提供する。
【０００４】
他の抗体または個別にもたらされる抗体の組合せと比較すると、本発明に従う化合物の効果は、骨髄系細胞に関して、及びＴ細胞の活性化ならびに／または増殖に関して増強される。
【０００５】
特定の構造が、分子にその標的に対する予想外の効率を与え、より大きい臨床有効性ならびにより低い治療コストに関する興味深い潜在性を示唆している。
【０００６】
シグナル制御性タンパク質アルファ、またはＳＩＲＰａ（ＳＩＲＰα、ＣＤ１７２ａ、またはＳＨＰＳ−１とも呼ばれる）は、単球、組織マクロファージのほとんどの亜集団、顆粒球、リンパ系組織における樹状細胞のサブセット、一部の骨髄前駆細胞、ならびに様々なレベルでニューロンにおいて発現されるが、特に脳のシナプスに富む領域において高度に発現される。骨髄系細胞によって発現されるＳＩＲＰａと、ほとんどの健康な細胞によって低レベルで広く発現されるが一部のがん細胞では過剰発現される、遍在する受容体ＣＤ４７との相互作用は、骨髄系機能の調節に関係する自然応答の重要な免疫チェックポイントである。ＣＤ４７はＳＩＲＰａと相互作用して、食作用を有するマクロファージに対して「食べないで」というシグナルを伝達し、それによって標的細胞は影響を受けないままとなる。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路は、今日ではマクロファージの食作用を増強するための異なる医薬品開発の対象である。ＣＤ４７を標的とする作用剤を介したＣＤ４７／ＳＩＲＰａ経路の遮断は、マクロファージによる抗体依存性食作用を増強することによって、トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２）、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、ならびにアレムツズマブ（抗ＣＤ５２）などの枯渇性治療的抗がん抗体と相乗効果を示すことが記載されている。
【０００７】
しかし、最近では、ＣＤ４７を標的とする作用剤（抗ＣＤ４７またはＳＩＲＰａ−Ｆｃ）が、ＣＤ４７の生理的役割に関連する血液毒性（貧血または血小板減少症）を呈することが示されている。その上、ＣＤ４７はまた、ＳＩＲＰファミリーの別のメンバー、すなわちヒトＴ細胞の表面に存在するが、ヒト骨髄系細胞には存在しないＳＩＲＰ−ガンマ（ＳＩＲＰｇ、ＳＩＲＰγ、ＣＤ１７２ｇ、またはＳＩＲＰベータ２とも呼ばれる）とも結合する。ＳＩＲＰｇは、ほぼ３５００万年前に旧世界霊長類においてＳＩＲＰｂ遺伝子が複製された結果であり、ＳＩＲＰａが骨髄系細胞において発現されるのに対し、ＳＩＲＰｇは、Ｔリンパ球において限定的に発現される。ＳＩＲＰｇは、マウスには存在しない。ＳＩＲＰｇ−ＣＤ４７相互作用は、細胞−細胞接着を媒介し、スーパー抗原依存的Ｔ細胞媒介性増殖を増強し、Ｔ細胞活性化を同時刺激することが示されている（Ｐｉｃｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：６，２００５）。ＳＩＲＰａとＳＩＲＰｇとの間の、特にＣＤ４７と相互作用する領域における配列の高い類似性により、先行技術において開示された抗ＳＩＲＰａ抗体もまたＳＩＲＰｇに結合し、ヒトにおいて不適当な作用、例えばＴ細胞増殖の阻害ならびに免疫応答の減少を有する。抗ＣＤ４７または非選択的抗ＳＩＲＰａ抗体のそのような副作用は、公知の抗体の試験が、ＳＩＲＰｇ遺伝子を有しないマウスモデルにおいて実施されており、そのためそのような副作用が存在しないことから予想できなかった。
【０００８】
免疫細胞の活性化は、同時刺激シグナルならびに同時阻害シグナルのバランスの統合によって支配される。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）媒介性Ｔ細胞活性化は、同時刺激シグナルならびに同時阻害シグナルの両方によって調節される。抗原非依存性の二次シグナルは、抗原性ペプチド−ＭＨＣ複合体とＴＣＲとの相互作用によって提供される一次シグナルを改変し、これは応答に対して特異性を与える。Ｔ細胞の同時刺激ならびに同時阻害経路は、エフェクター、メモリー、ならびに制御性Ｔ細胞、及びナイーブＴ細胞を制御する広い免疫制御機能を有する。それらの経路の治療的調節は、がんを処置するための有効な新規戦略となる（総説に関しては、Ｓｃｈｉｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，４４（５），Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１６を参照されたい）。この二次シグナルは、２つのタイプの分子、すなわちＩｇスーパーファミリー（例えば、ＬＡＧ３、ＣＤ２２６−ＴＩＧＩＴ−ＣＤ９６）ならびにＴＮＦ−ＴＮＦ受容体スーパーファミリーによって媒介される。Ｔ細胞活性化は、ＴＣＲによる抗原の認識（一次シグナル）、次に抗原提示細胞によって発現されるＣＤ８０ならびにＣＤ８６分子に結合するＴ細胞によって発現されるＣＤ２８同時刺激分子によって主に媒介される同時刺激シグナル（二次シグナル）によって開始される。
【０００９】
これらの２つのシグナルはＴ細胞活性化を誘導すると同時に、誘導性の同時刺激ならびに同時阻害分子の発現を誘導し、これは既に抗原を経験しているならびに／またはメモリーＴリンパ球の活性化の閾値を決定する。ＯＸ４０のＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）との相互作用、ＩＣＯＳのＩＣＯＳリガンド（ＩＣＯＳＬ）との相互作用、ならびに４−１ＢＢの４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）との結合は、誘導型の同時刺激分子の主要な起源である。同時に、誘導型ＣＴＬＡ−４とＣＤ８０ならびにＣＤ８６（ＣＤ２８である同じリガンド）との結合、及び誘導型ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との結合は、過剰な活性化に対抗するための免疫細胞阻害の主要な起源である。今日まで、ＣＤ８０とＰＤＬ−１の間の相互作用ならびにＩＣＯＳＬとＣＤ２８またはＣＴＬＡ−４との間の相互作用はヒトにおいて記載されてきたことから、この経路間の相互接続は、所定の分子の解釈を複雑にする。
【００１０】
ＰＤ１は、活性化Ｔ細胞に限って発現され、ＰＤＬ１は、免疫系、上皮細胞ならびに内皮細胞を含む多くの細胞タイプにおいて発現され得る。ＰＤ１は、２つのリガンド、すなわちＰＤＬ１ならびにＰＤＬ２を有し、ＰＤＬ２に対する親和性がより良好である。ＰＤ１は、ヒトＰＢＭＣにおいて発現される４つのスプライスバリアントを有する。これらのスプライスバリアントの多くの機能はなおも不明であるが、膜貫通部分を欠損している可溶性バリアントは、自己免疫疾患に関係し、炎症性疾患において検出される（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５，２３５：１０９〜１１６頁；Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００３  ４２３：５０６〜５１１頁；Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６，１７７：８８４４〜８８５０頁）。可溶性ＰＤ１をワクチンベクターに含めると、おそらくそのリガンドに結合してＰＤ１シグナル活性化を阻害することによってワクチンの有効性を改善する。ＰＤ１のライゲーションは、Ｔ細胞におけるＴＣＲ刺激の下流のシグナルを低減させ、Ｔ細胞応答を阻害し、活性化の減少ならびにサイトカイン産生の減少をもたらす。抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１を使用して相互作用を破壊する戦略はいずれも、がん治療において成功した（Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６（２６），２０１２；Ｐｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５１５（７５２８），２０１４；Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６（２６），２０１２；Ａｎｓｅｌｌ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ，２２（４），２０１５）。
【００１１】
ＰＤＬ１は、他のＰＤ１リガンドであるＰＤＬ２より広く発現される。ＰＤＬ１は、多様な造血ならびに非造血細胞によって発現される。組織におけるその発現は、Ｔ細胞応答の局所的な制御を可能にする。炎症促進性の刺激は、ＰＤＬ１発現を誘導して、組織におけるＴ細胞応答を下流で調節し、免疫の攻撃による腫瘍の免疫媒介性の損傷から組織を保護する。腫瘍ならびに慢性感染症を引き起こす微生物は、免疫防御を回避するために同時阻害経路を利用している。
【００１２】
免疫応答の制御に関する進行中の試験によって、がん治療の開発の標的となり得る複数の他の免疫経路が同定された。それらの分子を本明細書において、免疫チェックポイント同時活性化剤または同時阻害剤と呼び、例えばＣＴＬＡ４、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ならびに４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ（総説に関しては、Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１６１（２），２０１５ならびにＰａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，１２（４），２０１２を参照されたい）である。
【００１３】
Ｔ細胞におけるＣＤ８０（Ｂ７−１）ならびにＣＤ８６（Ｂ７−２）の役割もまた、免疫応答のダウンレギュレーションに寄与し得る。抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ８０ならびにＣＤ８６は、Ｔ細胞同時刺激分子として良好に認識された役割を有するが、Ｔ細胞におけるＣＤ８０ならびにＣＤ８６発現の機能的重要性は、十分に理解されていない。ＣＤ８６は、一部の休止Ｔ細胞において構成的に発現されるが、ＣＤ８０は、休止Ｔ細胞には存在しない。いずれの分子もＴ細胞においてアップレギュレートされ得る。腫瘍はＢ７分子を発現せず、免疫系の制御を回避することができる。ＣＤ８０ならびにＣＤ８６は、ＣＤ２８より良好なアビディティでＣＴＬＡ４に結合し、これは最終的に競合ならびに負のシグナル伝達によってＣＤ２８の同時刺激を減弱させるかまたは防止する。ＣＤ２８の同時刺激は、Ｔ細胞活性化にとって極めて重要であることから、ＣＤ２８／ＣＤ８０／ＣＤ８６の遮断を介した免疫制御は、移植の状況において不適切なＴ細胞活性化を防止するために、ならびにＴ細胞媒介性自己免疫疾患をおそらく処置するためにも有望なアプローチである（Ｃｒｅｐｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；１７（８）：１００１〜１０１２頁）。
【００１４】
ＩＣＯＳＬ、ＯＸ４０Ｌ、ならびに４−１ＢＢＬはそれぞれ、同時刺激分子ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ならびに４−１ＢＢのリガンドであり、前臨床腫瘍モデルにおいて評価され、臨床ではがん患者において評価されている新規免疫チェックポイント剤である。ＩＣＯＳＬは、Ｔ細胞増殖ならびにサイトカイン産生の同時刺激シグナルとして作用し、Ｂ細胞の増殖ならびに形質細胞への分化を誘導し、炎症状態に対する局所組織応答の媒介において、ならびにメモリーＴ細胞機能の同時刺激による二次免疫応答の調節において重要な役割を果たし得る。ＯＸ４０のそのリガンドＯＸ４０Ｌへの結合は、抗原特異的Ｔ細胞の増大ならびに生存において重要な役割を果たす。ＯＸ４０は、抗原活性化後の早期にＴリンパ球において主に発現されるが、ＯＸ４０Ｌは、急性炎症環境内の活性化抗原提示細胞ならびに内皮細胞において発現される。ＯＸ４０シグナル伝達の調節ならびに／または異なるＴ細胞サブセットの欠失は、自己免疫のための免疫抑制ならびに抗がん治療のための免疫刺激の両方を媒介する可能性を有する（Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１７  Ｍａｒ；８３：１３〜２２頁）。
【００１５】
ＯＸ４０Ｌならびに４−１ＢＢＬは、ＴＮＦリガンドスーパーファミリーのメンバーであり、公知の可溶性型を有しない膜リガンドである。４−１ＢＢＬは、骨髄系、リンパ系、ならびに間質細胞において発現され、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーである４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に結合する。４−１ＢＢまたは４−１ＢＢＬの標的化は、自己免疫疾患またはウイルス感染症などの、同様にがんを含む多くの臨床状態において重要な意味を有する（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，２００９：２２９（１）：１９２〜２１５頁）（総論に関しては、Ｖｉｎａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１６；２０（３）：３６１〜７３頁を参照されたい）。４−１ＢＢ媒介性の抗がん作用は、それが細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化を誘導する能力、中でも多量のＩＦＮ−γを誘導する能力に基づいている。４−１ＢＢ受容体は、Ｆｏｘｐ３＋  Ｔｒｅｇならびに樹状細胞を含む複数の細胞において、低レベルではあるが構成的に発現されている。ＣＤ４＋ならびにＣＤ８＋Ｔ細胞は、同等のレベルで４−１ＢＢを発現するが、活性化されると、４−１ＢＢを通してのシグナルは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏならびにｉｎ  ｖｉｖｏの両方でＣＤ８＋Ｔ細胞へと偏向する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｐｉｃｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０５：６，２００５
【非特許文献２】Ｓｃｈｉｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，４４（５），Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２０１６
【非特許文献３】Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５，２３５：１０９〜１１６頁
【非特許文献４】Ｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００３  ４２３：５０６〜５１１頁
【非特許文献５】Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６，１７７：８８４４〜８８５０頁
【非特許文献６】Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６（２６），２０１２
【非特許文献７】Ｐｏｗｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５１５（７５２８），２０１４
【非特許文献８】Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ，３６６（２６），２０１２
【非特許文献９】Ａｎｓｅｌｌ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ，２２（４），２０１５
【非特許文献１０】Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１６１（２），２０１５
【非特許文献１１】Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，１２（４），２０１２）
【非特許文献１２】Ｃｒｅｐｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；１７（８）：１００１〜１０１２頁
【非特許文献１３】Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１７  Ｍａｒ；８３：１３〜２２頁
【非特許文献１４】Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，２００９：２２９（１）：１９２〜２１５頁
【非特許文献１５】Ｖｉｎａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１６；２０（３）：３６１〜７３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
腫瘍微小環境内での免疫抑制性ならびに低刺激性骨髄系細胞の蓄積は、Ｔ細胞応答の効率を制限し、免疫療法、特にＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１などの免疫チェックポイントを標的とする療法の有効性を制限する。しかし、同時に、主に腫瘍の微小環境内では同時刺激が存在しないこと、ならびに／または腫瘍細胞もしくは抗原提示細胞によって発現されるリガンドと同時刺激分子との結合が存在しないことにより、Ｔ細胞応答が主に遮断されたままであることから、自然免疫チェックポイントを標的とする免疫療法は単独では限定的な有効性を示す。適応性（Ｔ細胞）ならびに自然（骨髄系細胞）細胞の両方の免疫チェックポイントを標的とする免疫療法の組合せは、前臨床レベルで強力な有効性を証明した。しかし、組合せ免疫療法の検証ならびに開発は、生物学的療法の費用ならびにそのような免疫療法に対する利用の制限によって強く制限されている。したがって、適応免疫応答、特にＴ細胞免疫応答に対して有効な正の影響を有する自然骨髄系免疫細胞を標的とする、特にがんに対する安全な免疫療法のための新規の改善された作用剤が当技術分野において有意に必要である。本発明者らは、本明細書に開示される本発明によって有意な一歩を踏み出した。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本明細書において、本発明者らは、ｉ）ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用に拮抗する（骨髄系細胞に対してブレーキを放出する）が、ＳＩＲＰｇには特異的に結合せず（有効なＴ細胞活性化ならびに接着にとって必要なＳＩＲＰｇ−ＣＤ４７相互作用に影響を及ぼさない）、同時にｉｉ）ＰＤ１／ＰＤＬ１またはＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０またはＣＤ８０／ＰＤＬ１軸の阻害、及び４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬまたはＣＤ８０／ＣＤ２８シグナル（強力な適応免疫応答、特に抗腫瘍応答を誘導する、ならびに／または長寿命のメモリーＴ細胞を誘導する）の強化を通して、Ｔ細胞の活性化ならびに／または増殖を誘導することが可能である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体、特にヒト化抗体を提供する。
【００１９】
本発明の改変抗体は、それらが特異的抗ＳＩＲＰａ作用と、抗体にグラフトされた免疫療法剤の作用とを組み合わせることから、二機能性である。
【００２０】
本発明の改変抗体は、特に以下の利点を有する：
−  それらは、チェックポイント阻害剤ならびに同時刺激剤の相乗効果によって自然ならびに適応免疫応答を活性化する；
−  それらは、ＣＤ４７標的化剤（抗ＣＤ４７  ｍＡｂまたはＳＩＲＰａ−ｆｃ組換えタンパク質）とは対照的に、ＳＩＲＰａの発現が制限されている（ヒト赤血球（ＲＢＣ）ならびに血小板に結合しない）ことにより血液毒性を回避する；
−  それらは単剤療法において、腫瘍の成長を低減させ、腫瘍の微小環境を改変する；それらは免疫の微小環境を改変し、免疫抑制を除去することによって適応免疫応答を刺激し、がん、ワクチン戦略、感染性疾患、または外傷後において持続的で強力なメモリーＴ細胞応答をもたらす；
−  それらは持続的で強力な抗腫瘍メモリーＴリンパ球応答を誘導する；
−  それらは、ヒトＴ細胞免疫応答を可能にし、ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用の選択的アンタゴニストであり、ＣＤ４７／ＳＩＲＰｇ相互作用を妨害しない。
【００２１】
意外にも、本発明者らは、ＳＩＲＰａ配列とＳＩＲＰｇ配列との間の高い配列同一性にもかかわらず、及び抗体にグラフトされた一部の免疫療法剤がその機能的特性を失い得るという事実にもかかわらず、そのような選択的ならびに機能的抗体を提供する。
【００２２】
これらの改変抗体は、多数の治療応用にとって、特に炎症性のがんならびに浸潤性の骨髄系細胞を有する（特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有する）がんを含む、がんの処置にとって特に有望である。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１Ａ】ＥＬＩＳＡアッセイによる抗ＳＩＲＰ抗体の結合分析（ヒトＳＩＲＰａ−Ｈｉｓコーティング及び抗ヒトカッパ検出）。図１Ａは、キメラ（◆）、ＨＡＬＡ（□）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（〇）の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価を示す図である。顕色はロバ抗ヒト抗体によって実施され、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。ＥＤ５０は、このアッセイにおいてシグナルの５０％に達する示した抗体の濃度である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＨＣＬＡ（●）、ＨＣＬＢ（×）、ＨＥＬＡ（◇）、ＨＥＬＢ（−）の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価を示す図である。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＨＡＬＢ（−）、ＨＢＬＡ（＿）、ＨＢＬＢ（■）の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価を示す図である。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝４）、ＳＥ５Ａ５市販クローン（▲）（ｎ＝７）、６Ｇ１０クローン（▽）（ｎ＝３）及び１２Ｄ７クローン（□）（ｎ＝４）の結合を示す図である。
【図２】図２は、ヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質での抗ＳＩＲＰ抗体のＢｉａｃｏｒｅによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、５μｇ／ｍｌ（５００ＲＵ）でＣＭ５チップ上に固定化され、示した抗体が異なる濃度で添加された。値は、３分間の会合期間（ｋａ）に続く１０分間の解離期間（ｋｄ）後に測定され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図３Ａ】ヒト単球での抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析（ＳＩＲＰａバリアント１のホモ接合体（ｖ１／ｖ１））。キメラ（◆）、ＨＡＬＡ（□）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（〇）のヒト単球ｖ１／ｖ１（ヒトＦｃ受容体結合阻害剤抗体によって事前に染色した）での細胞蛍光測定による評価。顕色はＣａｎｔｏＩＩサイトメーターでＰＥ標識マウス抗ヒトＦｃ  ｍＡｂによって実施され、値は染色された単球のパーセンテージに対応する。ＥＤ５０は、このアッセイにおいてシグナルの５０％に達する示した抗体の濃度である。図３Ａは、染色された単球ｖ１／ｖ１のパーセンテージに対応する。
【図３Ｂ】図３Ｂは、単球ｖ１／ｖ１の蛍光強度の平均（ＭＦＩ）に対応する。
【図３Ｃ】フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によるヒト単球でのＳＩＲＰ抗体の結合試験：異なる抗ＳＩＲＰａ抗体が試験された：ｍ１８Ｄ５（■）（ｎ＝１）、ＳＥ７Ｃ２（▲）（ｎ＝２）、１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）、６Ｇ１０（◆）（ｎ＝４）。図３Ｃは、異なる抗体の用量応答の平均蛍光強度を表す図である。
【図３Ｄ】図３Ｄは、抗体用量応答の染色された単球のパーセンテージを表す図である。可能な場合、統計分析が実施された。
【図３Ｅ】抗ｈＳＩＲＰａ抗体による、集団におけるＳＩＲＰａバリアント結合：３２人のボランティアにおいて異なる抗ｈＳＩＲＰａ抗体のＳＩＲＰａバリアントに結合する能力が、ＰＥ−抗マウスＩｇＧによるＦＡＣＳによって測定された。全てのクローンは、１０μｇ／ｍｌで試験された：ｍ１８Ｄ５（■）、１２Ｄ７（▼）、６Ｇ１０（◆）、及び市販の抗体ＳＥ５Ａ５（□）、ＳＥ７Ｃ２（△）。図３Ｅは、ホモ接合体バリアント１ボランティアを表す図である（ｎ＝１６）。
【図３Ｆ】図３Ｆは、ホモ接合体バリアント２ボランティアを表す図である（ｎ＝８）。
【図３Ｇ】図３Ｇは、ホモ接合体Ｖ１／Ｖ２ボランティアを表す図である（ｎ＝８）。
【図４Ａ】ＳＩＲＰａでの抗ＳＩＲＰａ抗体のＣＤ４７との競合。  図４Ａは、一定濃度のビオチン化ＣＤ４７−Ｆｃ（６μｇ／ｍｌ）とインキュベートした異なる濃度のキメラ（◆）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（〇）の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価を示す図である。顕色はストレプトアビジンペルオキシダーゼにより実施され、ＣＤ４７分子を検出し、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。第２の実験の結果は、ＩＣ５０値によって与えられる。ＩＣ５０は、このアッセイにおいてシグナルの５０％を阻害する示した抗体の濃度である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用への抗ＳＩＲＰａ抗体のアンタゴニスト活性試験を示す図である：異なる抗ＳＩＲＰ抗体は用量応答を試験された：ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝１）、市販の抗体ＳＥ５Ａ５（▲）（ｎ＝２）及びｍ１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）。図は、抗ｈＳＩＲＰａ抗体の用量応答中にＥＬＩＳＡによって測定されたＣＤ４７陽性ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用のパーセンテージを表す。
【図５Ａ】ヒト単球での抗ＳＩＲＰａ抗体のＣＤ４７との競合。  一定濃度のビオチン化ＣＤ４７−Ｆｃ（１０μｇ／ｍｌ）とインキュベートした異なる濃度のキメラ（◆）、ＨＦＬＡ（＊）、ＨＦＬＢ（＋）、ＨＥＦＬＡ（▲）、ＨＥＦＬＢ（■）のヒト単球（ｖ１／ｖ１）でのサイトメトリーによる評価。顕色はフィコエリトリンストレプトアビジンにより実施され、ＣＤ４７分子を検出し、ＣａｎｔｏＩＩサイトメーターによって曝露された。ＩＣ５０は、このアッセイにおいてシグナルの５０％を阻害する示した抗体の濃度である。図５Ａは、陽性細胞のパーセンテージに対応する。
【図５Ｂ】図５Ｂは蛍光強度の平均に対応する。
【図５Ｃ】ＦＡＣＳによるＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用への抗ＳＩＲＰａ抗体のアンタゴニスト活性試験：異なる抗ＳＩＲＰａ抗体は用量応答を試験された：ｍ１８Ｄ５クローン（■）（ｎ＝１）、市販の抗体ＳＥ７Ｃ２（▲）（ｎ＝２）及びｍ１２Ｄ７（□）（ｎ＝２）。図５Ｃは、抗ｈＳＩＲＰａ抗体による競合後のＦＡＣＳによって測定されたＣＤ４７陽性細胞のパーセンテージを表す図である。
【図６Ａ】図６Ａは、ＳＰ−ＤリガンドとプレインキュベートされたまたはされなかったヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質への抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、１０μｇ／ｍｌでＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に固定化され、ＳＰ−Ｄリガンドは１００μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加された。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体は２０μｇ／ｍｌで添加され、親和性値は、１２０秒の会合期間（ｋａ）に続く１２０秒の解離期間（ｋｄ）後に推測され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図６Ｂ】図６Ｂは、マウス１８Ｄ５抗体とプレインキュベートされたヒトＳＩＲＰａ組換えタンパク質への抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰａ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、１０μｇ／ｍｌでＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に固定化され、抗ＳＩＲＰａ抗体は２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加された。次いで、ＳＰ−Ｄリガンドは１００μｇ／ｍｌで添加され、親和性値は、１２０秒の会合期間（ｋａ）に続く１２０秒の解離期間（ｋｄ）後に推測され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図７Ａ】図７Ａは、ヒトＳＩＲＰｂ組換えタンパク質への抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｂ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に固定化され、示した抗体は２０μｇ／ｍｌで添加された。値は、１２０秒の会合期間（ｋａ）に続く１２０秒の解離期間（ｋｄ）後に推測され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図７Ｂ】図７Ｂは、抗ＳＩＲＰ抗体の結合分析を示す図である（ヒトＳＩＲＰｂ−Ｈｉｓコーティング及び抗ヒトカッパ検出）。ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（〇）、Ｂ４Ｂ６（◆）及びＩｇＧ４  Ａｂ対照（■）の固定化ＳＩＲＰｂ−ＨｉｓのＥＬＩＳＡによる評価。顕色は、マウス抗体によって曝露されたＢ４Ｂ６を除いて、ロバ抗ヒト抗体により実施され、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。
【図８Ａ】図８Ａは、ヒトＳＩＲＰｇ組換えタンパク質への抗ＳＩＲＰ抗体のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に固定化され、示した抗体は１０μｇ／ｍｌで添加された。値は、１２０秒の会合期間（ｋａ）に続く１２０秒の解離期間（ｋｄ）後に推測され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ＳＩＲＰｇへの抗ＳＩＲＰ抗体のＥＬＩＳＡアッセイによる結合分析を示す図である（ヒトＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓコーティング及び抗ヒトカッパ検出）。ＨＥＦＬＢ（■）、ＳＩＲＰ２９（△）、Ｋｗａｒ２３（〇）、ＬＳＢ２−２０（●）及びＩｇＧ４  Ａｂ対照（■）の固定化ＳＩＲＰｇ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。顕色は、ロバ抗ヒト抗体により実施され、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。
【図９】図９は、抗ＳＩＲＰ抗体とプレインキュベートされたヒトＳＩＲＰｇ組換えタンパク質へのＣＤ４７のＢｌｉｔｚによる親和性分析を示す図である。ＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ組換えタンパク質は、１０μｇ／ｍｌでＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に固定化され、示した抗体は２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加された。次いで、ＣＤ４７Ｆｃは１００μｇ／ｍｌで添加され、親和性値は、１２０秒の会合期間（ｋａ）に続く１２０秒の解離期間（ｋｄ）後に推測され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
【図１０Ａ】図１０Ａは、異なるモノクローナル抗体による染色及び二次抗ＩｇＧ蛍光抗体による曝露後の末梢ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞のフローサイトメトリーによって測定された幾何平均蛍光強度を示す図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、異なるモノクローナル抗体による染色及び二次抗ＩｇＧ蛍光抗体による曝露後の赤血球のフローサイトメトリーによって測定された幾何平均蛍光強度を示す図である。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、異なるモノクローナル抗体による染色及び二次抗ＩｇＧ蛍光抗体による曝露後の血小板のフローサイトメトリーによって測定された幾何平均蛍光強度を示す図である。
【図１１】図１１は、異なるモノクローナル抗体による染色後の、陽性末梢ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す図である。表は、２回の実験における陽性細胞の％の値を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、３日間、１：１の比で抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズによって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、５日間、５  Ｔ細胞：１  ＤＣの比で異なる濃度の同種樹状細胞（ＤＣ）によって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、３日間、１：１の比で抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズによって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、５日間、５  Ｔ細胞：１  ＤＣの比で異なる濃度の同種樹状細胞（ＤＣ）によって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、５日間、異なる濃度のツベルクリン未精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）によって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１３】マウスＣＤ８＋Ｔ細胞は、ネイティブマウスの脾細胞から単離された。図１３は、ＣＤ８Ｔ細胞が、３日間、１：１の比で抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズによって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１４】図１４は、健康なボランティア由来の末梢血単核細胞から単離されたヒトＴ細胞が、５日間、５  Ｔ細胞：１  ＤＣの比で同種樹状細胞（ＤＣ）によって刺激された図である。抗体は、培養０日目に添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
【図１５Ａ】図１５Ａは、マウス肝細胞腫の直交異方性モデル（２．５×１０６個のＨｅｐａ１．６細胞が０日目に門脈を通して注射された）における、抗４−１−ＢＢ  ｍＡｂ（３Ｈ３クローン、１００μｇ／注射）の２回の注射（４日目＆８日目）または抗ＰＤＬ−１（１０Ｆ．９Ｇ２クローン、２００μｇ／注射、４週間の処置）の注射（週に２回）と組み合わせるまたは組み合わせない、４週間、週に３回の抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）ｉ．ｐ．投与（３００μｇ／注射）の抗腫瘍効果を示す図である。マウスは、全ての対照マウスが死滅するのに必要な時間よりも３倍長く生存した場合に、治癒したと考えられた。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、腫瘍浸潤細胞が、腫瘍接種後１３日で分析された図である。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、腫瘍浸潤細胞及び脾臓細胞が、腫瘍接種後１３日で分析された図である。
【図１５Ｄ】図１５Ｄは、抗ＳＩＲＰａ＋抗４−１ＢＢ注射により肝細胞腫モデルの事前に治癒したマウスまたは抗４−１ＢＢによって処置されたＳＩＲＰａ変異マウスが、脾臓へのＨｅｐａ１．６細胞注射によって再負荷された（２．５×１０６個の細胞／マウス）図である。再負荷マウスと腫瘍発生を比較するため、ナイーブマウスは並行して同じ経路で注射された。マウスは次いで未処置のままにされた。
【図１５Ｅ】図１５Ｅは、抗ＳＩＲＰａ＋抗４−１ＢＢ注射により肝細胞腫モデルの事前に治癒したマウスが、脾臓へのＨｅｐａ１．６細胞注射によって再負荷され（２．５×１０６個の細胞／マウス）、それらの脾臓が再負荷の３０日後に採取された図である。脾細胞及びＴ細胞脾細胞が単離された。ナイーブマウスは、ビヒクル、全脾細胞（１０×１０６個の細胞／マウス）または脾細胞から精製されたＴ細胞（２．５×１０６個の細胞／マウス）を静脈内に注射され、全ては脾臓にＨｅｐａ１．６細胞注射を受けた（２．５×１０６個の細胞／マウス）。マウスは次いで未処置のままにされ、全ての対照マウスが死滅するのに必要な時間よりも３倍長く生存した場合に、治癒したと考えられた。
【図１６】図１６は、抗ＳＩＲＰａ＋抗ＰＤＬ１注射による肝細胞腫モデルの事前に治癒したマウスが、脾臓へのＨｅｐａ１．６細胞注射によって再負荷された（２．５×１０６個の細胞／マウス）図である。再負荷マウスと腫瘍発生を比較するため、ナイーブマウスは並行して同じ経路で注射された。マウスは次いで未処置のままにされた。
【図１７】図１７は、マウス乳癌の直交異方性モデル（０．２５×１０６個の４Ｔ１細胞が乳腺に注射された）における、４週間、週に３回の抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）ｉ．ｐ．投与（２００μｇ／注射）の抗腫瘍効果を示す図である。腫瘍発生は、腫瘍の直径を測定することによって評価され、式：＝（０．５２＊（ｄ２））１．５によって算出された。マウスは、倫理指針に従って、腫瘍発生がほぼ１０００ｍｍ３であった場合、安楽死させた。
【図１８】図１８は、マウス乳癌の直交異方性モデル（０．２５×１０６個の４Ｔ１細胞が乳腺に注射された）における、２週間、週に３回の抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）またはｃｔｒｌ  ｍＡｂ  ｉ．ｐ．（２００μｇ／注射）によって処置されたマウスの脾臓、腫瘍、及びリンパ節の免疫細胞表現型分析を示す図である。免疫細胞分析は、腫瘍接種の２週間後に実施された。
【図１９】図１９は、抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）、抗ＣＤ４７（ＭＩＡＰ４１０クローン）及び無関係なアイソタイプ対照が、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに１２ｍｇ／ｋｇで０日目と２日目に腹腔内に投与された図である。血液試料は、ＥＤＴＡ含有チューブに０日目と３日目に採取され、血球計算はＸＳ−８００ｉ血液分析機（Ｓｙｓｍｅｘ）によって実施された。ヘモグロビンのレベル（左）及びヘマトクリットのパーセンテージ（右）は３日目に評価された。点線は、各パラメータのＣ５７Ｂｌ／６マウスの正常範囲値を表す。
【図２０】図２０（上）は、健康なドナーの血液から新しく単離されたヒト血小板における対照ｍＡｂ（点線）と比較した、抗ＳＩＲＰａ（ＨＥＦＬＢ，グレー）及び抗ＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１２、黒）ｍＡｂのフローサイトメトリー分析を示す図である。図２０（下）は、５０μｇ／ｍｌの対照ｍＡｂ、抗ＳＩＲＰａ（ＨＥＦＬＢ）、抗ＣＤ４７（Ｂ６Ｈ１２）または凝集の阻害剤の陽性対照として抗インテグリンαＩＩｂの存在下での、光学血小板凝集計を使用するヒト血小板凝集測定を示す図である。抗体は、非活性化及びＡＤＰ活性化血小板で評価された。
【図２１Ａ】図２１Ａは、同種ＣＤ４＋Ｔ細胞が、新しい卵巣がん性腹水から抽出されたＣＤ１４＋骨髄性細胞と１：１の比で、１０μｇ／ｍｌの対照抗体（白）、抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ（黒）、または抗ＣＤ４７ｍＡｂ（グレー）と培養された図である。増殖は、３Ｈ−チミジンの取り込みによって５日目に測定された。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは、同種ＣＤ４＋Ｔ細胞が、凍結した卵巣がん性腹水から抽出されたＣＤ１４＋骨髄性細胞と１：１の比で、１０μｇ／ｍｌの対照抗体（白）、抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ（黒）、または抗ＣＤ４７ｍＡｂ（グレー）と培養された図である。増殖は、３Ｈ−チミジンの取り込みによって５日目に測定された。
【図２１Ｃ】図２１Ｃは、代わりに、同種Ｔ細胞が、同種樹状細胞と５：１の比で、及び図２１Ａのように１０μｇ／ｍｌの抗体の存在下で卵巣がん性腹水から抽出された異なる比のＣＤ１４＋骨髄性細胞と培養された図である。
【図２２】図２２は、改変抗体のＳＩＲＰａ  ＥＬＩＳＡ結合アッセイを示す図である。未改変抗ＳＩＲＰａ抗体（ＨＥＦＬＢ）及び重鎖に連結した（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖に連結した（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））ポリペプチドを有する異なる改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）にコンジュゲートした改変抗ＳＩＲＰａ抗体によって得られた。
【図２３】図２３は、ＥＬＩＳＡによる改変抗ＳＩＲＰａ抗体での融合タンパク質のＥＣＤの検出を示す図である。抗ＳＩＲＰａ抗体（ＨＥＦＬＢ）及び重鎖に連結した（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖に連結した（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））融合タンパク質を有する異なる改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）にコンジュゲートした改変抗ＳＩＲＰａ抗体によって得られた。
【図２４】図２４は、ＥＬＩＳＡによる異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体でのリガンド結合アッセイを示す図である。重鎖に連結した（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖に連結した（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））融合タンパク質を有する異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。検出は、異なる融合コンジュゲートの特異的リガンド：ＰＤＬ１Ｆｃ（ＰＤ１のため）、ＰＤ１Ｈｉｓ（ＰＤＬ１のため）、ＣＴＬＡ４−Ｆｃ（ＣＤ８０及びＣＤ８６のため）、ＯＸ４０Ｆｃ（ＯＸ４０Ｌのため）、４−１ＢＢＦｃＨｉｓ（４−１ＢＢＬのため）、ＣＤ２８Ｆｃ（ＩＣＯＳＬのため）で実施され、それぞれマウス抗ヒトＰＤＬ１、マウス抗Ｈｉｓ、マウス抗ヒトＣＴＬＡ４Ｆｃ、マウス抗ヒトＯＸ４０、マウス抗ヒトＨｉｓ、マウス抗ヒトＣＤ２８、次いでペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ、次いでＴＭＢ基質を使用する４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。
【図２５】図２５は、ＥＬＩＳＡによる異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体でのＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用の競合アッセイを示す図である。異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体のアンタゴニスト活性測定。一定濃度のビオチン化ＣＤ４７−Ｆｃ（６μｇ／ｍｌ）とインキュベートされた、異なる濃度の抗ＳＩＲＰａ単独（ＨＥＦＬＢ（Ｘ））、重鎖に連結した（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖に連結した（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））融合タンパク質を有する異なる改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体のコートしたＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）にコンジュゲートした改変抗ＳＩＲＰａ抗体によって得られた。
【図２６】図２６は、可溶性改変抗ＳＩＲＰａ抗体によるＰＢＭＣでのＴＮＦａ分泌アッセイを示す図である。ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）及び１０μｇ／ｍｌの可溶性抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１（Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ）、ＨＥＦＬＢ＋組換えタンパク質（融合していない）、抗体の重鎖（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））に融合タンパク質を有する改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌによって、３７℃、５％ＣＯ２で２日間活性化されたＰＢＭＣによるＴＮＦａ分泌のＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬに融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体によって得られた。結果は３人の異なるドナーの代表例である。
【図２７】図２７は、可溶性改変抗ＳＩＲＰａ抗体でのＰＢＭＣ（ｎ＝３）によるＩＦＮｇ分泌アッセイを示す図である。ＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）及び１０μｇ／ｍｌの可溶性抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１（Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ）、ＨＥＦＬＢ＋組換えタンパク質（融合していない）、抗体の重鎖ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬまたは軽鎖ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔに融合タンパク質を有する改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌによって、３７℃、５％ＣＯ２で２日間活性化されたＰＢＭＣによるＩＦＮｇ分泌のＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬに融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体によって得られた。
【図２８】図２８は、可溶性改変抗ＳＩＲＰａ抗体によるヒトの単離されたＴリンパ球の増殖アッセイを示す図である。可溶性の異なるタンパク質：１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、組換えタンパク質、ＨＥＦＬＢ＋組換えタンパク質、または重鎖ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬもしくは軽鎖ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔのタンパク質に融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、またはＰｈａ−Ｌ陽性対照による、３７℃、５％ＣＯ２で３日間の、コートしたＯＫＴ３（１μｇ／ｍｌ）での、Ｔ細胞増殖の評価。３Ｈチミジンは、測定の前に８時間取り込まれ、結果はｃｐｍで表され、増殖のレベルが決定された。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬに融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体によって得られた。
【図２９】図２９は、可溶性改変抗ＳＩＲＰａ抗体によるヒトの単離されたＴリンパ球によるＴＮＦａ分泌アッセイを示す図である。可溶性の異なるタンパク質：１０μｇ／ｍｌの抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、組換えタンパク質、ＨＥＦＬＢ抗体＋組換えタンパク質（融合していない）、または重鎖ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬもしくは軽鎖ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔのタンパク質に融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、３７℃、５％ＣＯ２で２日間の、ＯＫＴ３コートしたＴ細胞（１μｇ／ｍｌ）によるＴＮＦａ分泌のＥＬＩＳＡによる評価。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬに融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体によって得られた。
【図３０】図３０は、未熟ヒトマクロファージでのＥＬＩＳＡによるＭＩＰ１ａ（ＣＣＬ３）分泌アッセイを示す図である。未熟マクロファージは、ＣＤ４７Ｆｃと培養され、次いで３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、１０μｇ／ｍｌの可溶性タンパク質が添加された：抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、または重鎖ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬの改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体（ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０または４−１ＢＢＬに融合した）。上清が回収され、ＭＩＰ１ａ分泌がＥＬＩＳＡによって測定された。結果は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬに融合した改変抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体によって得られた。
【図３１】図３１は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体及び抗ＳＩＲＰｇ結合ＥＬＩＳＡアッセイを示す図である。ＨＥＦＬＢ抗体、ＶＨ鎖でＰＤＬ１、ＣＤ８０、もしくはＣＤ８６に融合した改変抗ＳＩＲＰａ抗体、またはＫｗａｒ２３抗体の固定化ヒトＳＩＲＰｇ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。顕色は、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃによって実施され、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。
【図３２】図３２は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体が、マクロファージ及びＴ細胞バイオアッセイでのＭＩＰ１ａ、ＴＮＦａ及びＩＦＮｇ分泌に作用する図である。ＣＤ４７コートした（１μｇ／ｍｌ）未熟マクロファージ（２日間１０ｎｇ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦによるヒト単球）の培養、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、１０μｇ／ｍｌの以下に記載の異なる抗体の添加、及びＯＫＴプレ活性化Ｔ細胞の添加。  可溶性ＨＥＦＬＢ抗体単独または組換えタンパク質（ＰＤＬ１Ｆｃ、４−１ＢＢＬ１Ｆｃ、ＣＤ８０ＨｉｓまたはＤ８６Ｈｉｓ）との組合せ、二機能性アイソタイプ対照抗体としてＰＤＬ１または４−１ＢＢＬ１またはＣＤ８０またはＣＤ８６に融合した抗Ｂ１２−４、または重鎖（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ）上のＰＤＬ１、４−１ＢＢＬ、ＣＤ８０、またはＣＤ８６に融合した改変抗ＳＩＲＰａ抗体が試験された。Ａ．可溶性改変抗ＳＩＲＰａ抗体での未熟マクロファージによるＭＩＰ１ａ（ＣＣＬ３）分泌アッセイ。上清が回収され、ＭＩＰ１ａ分泌がＥＬＩＳＡによって測定された。Ｂ．３７℃、５％ＣＯ２で、１０μｇ／ｍｌの上記の異なる可溶性タンパク質の存在下でのＴＮＦａ分泌のＥＬＩＳＡによる評価。Ｃ．３７℃、５％ＣＯ２で、１０μｇ／ｍｌの上記の異なる可溶性タンパク質の存在下でのＩＦＮｇ分泌のＥＬＩＳＡによる評価。
【図３３】図３３は、細胞内カルシウムタイムラプスアッセイを使用するＴ細胞活性化測定を示す図である。２４時間ＣＤ４７プレコートした未熟マクロファージは、ＶＨ鎖に融合したＰＤＬ１を有する改変抗ＳＩＲＰａ抗体の存在下でのＦｕｒａ−ＯＫＴ３染色Ｔ細胞と共培養された。カルシウム活性は、Ｔ細胞の添加後、Ｔ０及びＴ３８分で測定された。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
改変ＳＩＲＰａ抗体（エピトープを有する）
一態様では、本発明は、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤を含み、特に免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００２５】
本発明の改変抗ＳＩＲＰａ抗体は、免疫療法剤にカップリングされている、特許出願ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１７／０５９０７１号明細書に記載されている抗ＳＩＲＰａ抗体に対応する。
【００２６】
本発明の改変抗体の機能的特性は、いくつかの理由から予想外である。特に、本出願において、抗体にグラフトされた免疫療法剤は、それがなおもそのリガンドに結合することができるという事実にもかかわらず、その機能的特性を失い得ることが示されている。同様に、同じリガンドに結合する２つの免疫療法剤は、抗体にグラフトした場合に効率が異なり得る（実施例におけるＣＤ８０ならびにＣＤ８６を参照されたい）。意外にも、本出願は、抗ＳＩＲＰａならびに免疫療法剤を、本発明に従う１つの二機能性抗体に組み合わせることによって相乗効果を示す（特に、実施例におけるＰＢＭＣによるＴＮＦａの分泌に関して）。
【００２７】
特に定義していない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、関連する技術分野の当業者に一般的に理解される意味と同じ意味を有する。便宜上、本明細書、実施例、ならびに特許請求の範囲で使用されるある特定の用語ならびに語句の意味を提供する。
【００２８】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、任意の種類の抗体、例えばモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、キメラ抗体、ならびにヒト化抗体を指す。
【００２９】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体ならびにポリクローナル抗体を含む。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、異なるアミノ酸配列の抗体の混合物を含有する「ポリクローナル」抗体調製物とは対照的に、共通の重鎖ならびに共通の軽鎖アミノ酸配列を共有する抗体の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、ファージ、細菌、酵母、またはリボソームディスプレイなどのいくつかの公知の技術、及びハイブリドーマ由来抗体によって例証される古典的な方法によって生成することができる。このように、用語「モノクローナル」は、１つの核酸クローンに由来する全ての抗体を指すために使用される。
【００３０】
本発明の抗体は、組換え抗体を含む。本明細書で使用される場合、用語「組換え抗体」は、組換え手段によって産生、発現、生成、もしくは単離された抗体、例えば宿主細胞にトランスフェクトさせた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体；組換えコンビナトリアル抗体ライブラリから単離された抗体；ヒト免疫グロブリン遺伝子によりトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体；または特定の免疫グロブリン遺伝子配列（例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列）が他のＤＮＡ配列と共にアセンブルされている、他の任意の方法で産生、発現、生成、もしくは単離された抗体を指す。組換え抗体は、例えばキメラならびにヒト化抗体を含む。
【００３１】
本発明の抗体は、キメラ抗体を含む。本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来する可変ドメインの配列が、別の哺乳動物種、例えばヒトの生殖系列に由来する定常ドメインの配列にグラフトされている抗体を指す。
【００３２】
本発明の抗体は、ヒト化抗体を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を指す。
【００３３】
本明細書で使用される場合、「抗体の抗原結合性断片」は、おそらくそのネイティブ形態のＳＩＲＰａの抗原結合能を示す抗体の一部、すなわち、本発明の抗体の構造の一部に対応する分子を意味し；そのような断片は特に、対応する４本鎖の抗体の抗原結合特異性と比較して前記抗原に対して同じまたは実質的に同じ抗原結合特異性を示す。この目的に関して、抗体の抗原結合性断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及び重鎖定常ドメインの断片を含む重鎖を含む。重鎖定常ドメインの断片とは、抗原結合性断片が、したがって完全な重鎖定常ドメインの少なくとも一部を含むと理解すべきである。例として、重鎖定常ドメインは、重鎖の少なくともＣＨ１ドメイン、または重鎖の少なくともＣＨ１ならびにＣＨ２ドメイン、または重鎖の少なくともＣＨ１、ＣＨ２、ならびにＣＨ３ドメインを含み得るかまたはそれからなり得る。重鎖定常ドメインの断片もまた、重鎖のＦｃ（結晶化可能断片）ドメインの少なくとも一部を含むとして定義され得る。したがって、抗体の抗原結合性断片は、完全な抗体のＦａｂ部分、完全な抗体のＦ（ａｂ’）２部分、完全な抗体のＦａｂ’部分を包含する。重鎖定常ドメインはまた、例えばいくつかの完全な重鎖定常ドメインが記載されている本明細書に例証される完全な重鎖定常ドメインを含み得るかまたはそれからなり得る。本発明の特定の実施形態では、ならびに抗体の抗原結合性断片が、完全な重鎖定常ドメインの一部を含むかまたはそれからなる重鎖定常ドメインの断片を含む場合、重鎖定常ドメイン断片は、少なくとも１０アミノ酸残基からなり得るか；または１０〜３００アミノ酸残基、特に２１０アミノ酸残基からなり得る。
【００３４】
有利には、抗原結合性断片は、対応する４本鎖抗体と類似の結合親和性を有する。しかし、対応する４本鎖抗体に関して低減された抗原結合親和性を有する抗原結合性断片もまた、本発明に包含される。抗原結合能は、抗体と標的断片との間の親和性を測定することによって決定することができる。これらの抗原結合性断片もまた、抗体の「機能的断片」とも呼ばれ得る。
【００３５】
抗体の抗原結合性断片は、ＣＤＲ（相補性決定領域）と呼ばれるその超可変ドメインまたは抗原の認識部位を含むその一部、すなわちＳＩＲＰａの細胞外ドメインを含み、それによって抗原認識特異性を定義する断片である。
【００３６】
４本鎖免疫グロブリンの各々の軽鎖ならびに重鎖可変ドメイン（それぞれ、ＶＬならびにＶＨ）はそれぞれ、ＶＬ−ＣＤＲ１（またはＬＣＤＲ１）、ＶＬ−ＣＤＲ２（またはＬＣＤＲ２）、ＶＬ−ＣＤＲ３（またはＬＣＤＲ３）ならびにＶＨ−ＣＤＲ１（またはＨＣＤＲ１）、ＶＨ−ＣＤＲ２（またはＨＣＤＲ２）、ＶＨ−ＣＤＲ３（またはＨＣＤＲ３）と呼ばれる３つのＣＤＲを有する。
【００３７】
当業者は、この点に関して記載した、参照ナンバリングシステムを含む標準的な定義を参照することによって、ＫＡＢＡＴのナンバリングシステムを参照することによって、またはＩＭＧＴ「ｃｏｌｌｉｅｒ  ｄｅ  ｐｅｒｌｅ」アルゴリズムの適用によって、抗体の様々な領域／ドメインの位置を決定することができる。この点において、本発明の配列の定義に関して、領域／ドメインの境界は、参照システムによって異なり得ることに注意されたい。したがって、本発明において定義される領域／ドメインは、抗体の可変ドメインの完全長の配列内の関係する配列の長さまたは位置のおよそ±１０％の変動を示す配列を包含する。
【００３８】
４本鎖免疫グロブリンの構造に基づいて、このように抗原結合性断片を、利用可能なデータベースならびに先行技術における抗体の配列との比較によって、特に、これらの配列における機能的ドメインの位置の比較によって定義することができ、フレームワークならびに定常ドメインの位置は、様々なクラスの抗体に関して、特にＩｇＧに関して、特に哺乳動物ＩｇＧに関して十分に定義されていることに注意されたい。そのような比較はまた、抗体の三次元構造に関連するデータも必要とする。
【００３９】
本発明の特定の実施形態を例証する目的に関して、前記抗体のＣＤＲを含む可変ドメインを含有する抗体の抗原結合性断片は、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２を包含する。Ｆｖ断片は、疎水性相互作用によって共に会合した抗体のＶＬならびにＶＨドメインからなり；ｄｓＦｖ断片では、ＶＨ：ＶＬヘテロ二量体がジスルフィド結合によって安定化され；ｓｃＦｖ断片では、ＶＬならびにＶＨドメインが、フレキシブルペプチドリンカーを介して互いに接続され、このように一本鎖タンパク質を形成する。Ｆａｂ断片は、抗体のパパイン消化によって得ることが可能な単量体断片であり；それらは、ジスルフィド結合を通して共に結合した完全なＬ鎖ならびにＨ鎖のＶＨ−ＣＨ１断片を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジジスルフィドより下の抗体のペプシン消化によって産生することができ；これは２つのＦａｂ’断片ならびにさらに免疫グロブリン分子のヒンジ領域の一部を含む。Ｆａｂ’断片は、ヒンジ領域におけるジスルフィド結合を切断することによってＦ（ａｂ’）２断片から得ることができる。Ｆ（ａｂ’）２断片は二価であり、すなわちそれらはネイティブ免疫グロブリン分子のように２つの抗原結合部位を含む；他方、Ｆｖ（Ｆａｂの可変部分を構成するＶＨＶＬ二量体）、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ならびにＦａｂ’断片は一価であり、すなわちそれらは、単一の抗原結合部位を含む。本発明のこれらの基本的な抗原結合性断片を共に組み合わせて、多価抗原結合性断片、例えばダイアボディ、トリボディ、またはテトラボディを得ることができる。これらの多価抗原結合性断片もまた、本発明の一部である。
【００４０】
本明細書で使用される場合、用語「二特異性」抗体は、第１の抗原に対して特異的である少なくとも１つの領域（例えば、第１の抗体の可変領域に由来する）、ならびに第２の抗原に対して特異的である少なくとも第２の領域（例えば、第２の抗体の可変領域に由来する）を有することによって２つの異なる抗原を認識する抗体を指す。二特異性抗体は、２つの標的抗原に特異的に結合し、このため１つのタイプの多特異性抗体である。２つまたはそれより多くの異なる抗原を認識する多特異性抗体は、組換えＤＮＡ法によって産生することができるか、または任意の簡便な方法によって化学的に産生された抗体を含み得るがこれらに限定されない。二特異性抗体は、全ての抗体または抗体のコンジュゲート、または２つの異なる抗原を認識することが可能な抗体の多量体形態を含む。二特異性抗体は、その二価の特徴を保持するように還元ならびにリフォームされている抗体、ならびにそれらが、ＢｉＭＥ（二特異性マクロファージ増強性抗体）、ＢｉＴＥ（二特異性Ｔ細胞誘導）、ＤＡＲＴ（二重親和性再標的化）；ＤＮＬ（ｄｏｃｋ−ａｎｄ−ｌｏｃｋ）、ＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）、ＨＡＳ（ヒト血清アルブミン）、ｋｉｈ（ｋｎｏｂｓ  ｉｎｔｏ  ｈｏｌｅｓ）などの、各々の抗原に対するいくつかの抗原認識部位を有することができるように化学的にカップリングされている抗体を含む。
【００４１】
したがって、一部の二特異性抗体はＳＩＲＰａならびに第２の抗原に対する抗体であり得る。特に前記の第２の抗原は、免疫療法剤のリガンドとは異なる。
【００４２】
一実施形態では、本発明は、二特異性である上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。例示的な改変抗体には、第１の抗原としてＳＩＲＰａを標的とする、ならびに第２の抗原として免疫制御性チェックポイント免疫細胞マーカー、例えばＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲＳＦ２５、２Ｂ４、ＣＤ４８、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ３、Ｔｉｍ４、Ｇａｌ９、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ｘ）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２、ＨＨＬＡ２（Ｂ７−Ｈ７）、ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８Ｈ）、ならびにブチロフィリン様分子２（ＢＴＮＬ２）、特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬを標的とする抗体が挙げられる。
【００４３】
治療抗体を開発するためのいくつかの研究により、Ｆｃ領域を操作して、抗体の特性を最適にし、それらにとって必要な薬理活性により適する分子の生成が可能となった。抗体のＦｃ領域は、その血清中半減期ならびにエフェクター機能、例えば補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、ならびに抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介する。ＣＨ２とＣＨ３ドメインの間の境界面に位置するいくつかの変異、例えばＴ２５０Ｑ／Ｍ４２８ＬならびにＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ＋Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆは、ＦｃＲｎに対する結合親和性ならびにｉｎ  ｖｉｖｏでのＩｇＧ１の半減期を増加させることが示されている。しかし、ＦｃＲｎ結合の増加と半減期の改善との間に必ずしも直接の関係はない。治療抗体の有効性を改善するための１つのアプローチは、その血清中での持続を増加させることであり、それによってより高い循環中レベル、より少ない投与回数、ならびに用量の低減が可能となる。Ｆｃ領域の操作は、抗体のエフェクター機能を低減または増加させるために望ましくなり得る。特に免疫細胞上の細胞表面分子を標的とする抗体の場合、エフェクター機能の除去が必要である。逆に、腫瘍学での使用が意図される抗体の場合、エフェクター機能の増加は、治療活性を改善し得る。４つのヒトＩｇＧアイソタイプは、活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ）、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ受容体、ならびに補体第１成分（Ｃ１ｑ）に異なる親和性で結合し、大きく異なるエフェクター機能を生じる。ＩｇＧのＦｃγＲまたはＣ１ｑに対する結合は、ヒンジ領域ならびにＣＨ２ドメインに位置する残基に依存する。ＣＨ２ドメインの２つの領域は、ＦｃγＲならびにＣ１ｑ結合にとって極めて重要であり、ＩｇＧ２ならびにＩｇＧ４ではユニーク配列を有する。
【００４４】
本発明はまた、抗体ならびにその断片を含み得るが、本明細書において「抗原結合性抗体模倣体」とも呼ばれる抗体を模倣する抗原結合能を有する人工的なタンパク質、ペプチド、ならびに任意の化学化合物などの高分子も含み得る。そのようなタンパク質は、アフィチンならびにアンチカリンを含む。アフィチンは、選択的抗原結合能を有する人工タンパク質である。それらは古細菌ドメインに属する微生物であるスルホルブス・アシドカルダリウス（Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ  ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）において見出されるＤＮＡ結合タンパク質Ｓａｃ７ｄに構造的に由来する。Ｓａｃ７ｄの結合表面上のアミノ酸を無作為化することによって、例えばＳａｃ７ｄの結合境界面の１１残基の無作為置換に対応するバリアントを生成することによって、アフィチンライブラリを生成してもよく、得られたタンパク質ライブラリをリボソームディスプレイラウンドに供してもよく、親和性を様々な標的、例えばペプチド、タンパク質、ウイルス、ならびに細菌に向けることができる。アフィチンは、抗体模倣体であり、生物工学におけるツールとして開発されている。それらはまた、様々な酵素の特異的阻害剤としても使用されている（Ｋｒｅｈｅｎｂｒｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３８３：５、２００８）。当業者は、当技術分野で公知の方法、特に特許出願国際公開第２００８０６８６３７号ならびに上記で引用した刊行物に開示される方法、特にファージディスプレイならびに／またはリボソームディスプレイライブラリの生成、及び本明細書に開示される抗原を使用するそのスクリーニングを使用して必要な結合特性を有するアンチカリンを容易に開発することができる。アンチカリンは、抗原、タンパク質または低分子のいずれかに結合することができる人工タンパク質である。それらは、天然に結合するタンパク質のファミリーであるヒトリポカリンに由来する抗体模倣体である。アンチカリンは、約８倍小さく、約１８０アミノ酸のサイズならびに約２０ｋＤａの質量を有する（Ｓｋｅｒｒａ，Ｆｅｂｓ  Ｊ．，２７５：１１、２００８）。アンチカリンファージディスプレイライブラリが生成されており、これは特に、特異的結合特性を有するアンチカリンのスクリーニングならびに選択を可能にする。当業者は、当技術分野で公知の方法、特に欧州特許第１２７０７２５号明細書、米国特許第８５３６３０７号明細書（Ｓｃｈｌｅｈｕｂｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ、Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，９６：２〜３頁、２００２）、ならびに上記で引用した刊行物に開示される方法、特にファージディスプレイならびに／またはリボソームディスプレイライブラリの生成、及び本明細書で開示される抗原を使用するそのスクリーニングを使用して、必要な結合特性を有するアフィチンを容易に開発することができる。アンチカリンならびにアフィチンはいずれも、細菌発現系を含む複数の発現系において産生され得る。このように、本発明は、アフィチン、アンチカリン、ならびに本明細書に記載の改変抗体の特徴、特にＳＩＲＰａに対する結合、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用の阻害、ＳＩＲＰｇに対する非結合、Ｔ細胞の増殖の非阻害、Ｔ細胞の増殖の増加、ＳＩＲＰｇとＣＤ４７との間の相互作用の非阻害、に関する特徴を有する他の類似の抗体模倣体を提供し、その全てが本発明の高分子として企図される。抗体またはその断片に関して本明細書に開示される実施形態は全て、本発明の高分子、特に抗原結合性抗体模倣体に必要な変更を加えて置き換えられる。
【００４５】
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原の部分を意味する。タンパク質抗原のエピトープは、２つのカテゴリー、すなわちコンフォメーショナルエピトープならびに線形エピトープに分類することができる。コンフォメーショナルエピトープは、抗原からのアミノ酸の不連続な配列に対応する。線形エピトープは、抗原からのアミノ酸の連続する配列に対応する。
【００４６】
本発明において、ＳＩＲＰａ内に存在し、抗ＳＩＲＰａ抗体によって結合されるペプチドは、これらの抗体によって特異的に認識されるエピトープを構成する。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「改変抗体」は、抗体またはその抗原結合性断片を含む分子に対応し、前記抗体またはその機能的断片は、機能的に異なる分子に関連する。本発明の改変抗体は、抗体または機能的断片の安定性ならびに／または半減期を改善するために、共有結合、グラフティング、化学もしくは生物基または分子、例えばＰＥＧポリマーまたはｉｎ  ｖｉｖｏでのプロテアーゼ切断に対する保護にとって適切な別の保護基もしくは分子との化学結合を含む任意の適した結合形態に起因する、融合キメラタンパク質またはコンジュゲートのいずれかであり得る。類似の技術によって、特に化学カップリングまたはグラフティングによって、毒素、特にシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素Ａ、植物毒素リシンのＡ鎖、またはサポリン毒素、特に治療活性成分、抗体もしくは機能的断片をヒトの体の特定の細胞または組織に標的化するために適したベクター（特にタンパク質ベクターを含む）から選択される生物活性分子と共に改変抗体を調製することができ、または特に抗体の断片を使用する場合、改変抗体は標識もしくはリンカーに会合され得る。抗体またはその機能的断片のＰＥＧ化は、それが、特に治療応用に関して活性物質の宿主への送達条件を改善することから、特に興味深い実施形態である。ＰＥＧ化は、抗体または機能的断片の認識部位との干渉を防止するために部位特異的であり得て、高分子量ＰＥＧによって実施され得る。ＰＥＧ化は、抗体もしくは機能的断片の配列に存在する遊離のシステイン残基を通して、または抗体もしくは機能的断片のアミノ酸配列における追加の遊離のシステイン残基を通して達成することができる。
【００４８】
本発明において、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその断片は、免疫療法剤を含み、特に免疫療法剤に連結される。そのような改変抗体もまた、「二機能性」と呼ばれ、すなわち、それらは２つの治療効果：抗ＳＩＲＰａ抗体とＳＩＲＰａとの相互作用に起因する第１の効果、ならびに免疫療法剤とそのリガンドとの相互作用に起因する第２の効果を有する。本発明の二機能性抗体は、ＳＩＲＰａならびに免疫療法剤のリガンドに結合するのみならず、ＣＤ４７−ＳＩＲＰａならびに免疫療法剤−リガンドの療法の相互作用に関連する機能的特性も維持する。
【００４９】
本明細書で使用される場合、用語「免疫療法剤」は、特に、がんワクチンを興味深い生物現象から有効な治療剤にする作用剤を指し、これは、ナイーブＴ細胞の数ならびにレパートリーを増加させるためのＴ細胞増殖因子、樹状細胞（ＤＣ）の数を増加させるための増殖因子、ＤＣならびに他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化するためのアゴニスト、がんワクチンを可能にならびに増強するためのアジュバント、Ｔ細胞を活性化ならびに刺激するためのアゴニスト、Ｔ細胞チェックポイント遮断の阻害剤、免疫Ｔ細胞の成長ならびに生存を増加させるためのＴ細胞増殖因子、がん細胞を阻害、遮断、または中和するための作用剤、ならびに免疫細胞由来免疫抑制性サイトカインを含む。
【００５０】
より詳しくは、本発明の文脈において有用な免疫療法剤は、特に適応免疫細胞（ＴまたはＢリンパ球）の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤、治療ワクチン（ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはペプチドワクチン）、または抗体薬物コンジュゲートなどの免疫コンジュゲートからなる群から選択される。
【００５１】
多数の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤が当技術分野で公知である。本発明の文脈において、有用であり得る適応免疫細胞（ＢまたはＴリンパ球）の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤の例は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲＳＦ２５、２Ｂ４、ＣＤ４８、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ３、Ｔｉｍ４、Ｇａｌ９、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ｘ）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２、ＨＨＬＡ２（Ｂ７−Ｈ７）、ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８Ｈ）、ブチロフィリン様分子２（ＢＴＮＬ２）、そのバリアントならびに断片、特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、そのバリアントならびに断片、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントならびに断片である。
【００５２】
特に、本発明の抗体は、免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤の機能的バリアントまたはその機能的断片を抗ＳＩＲＰａ抗体に付加することによって得ることができる。好ましくは、機能的断片は、免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対応する。
【００５３】
特に、本発明の二機能性抗体に含まれる免疫療法剤のバリアントならびに断片は、免疫療法剤−リガンドの相互作用に関連する機能的特性を維持する。
【００５４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも２、３、４、または５個のペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００５５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるペプチド、及びＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、ならびに配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００５７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号７（ＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号８（ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００５８】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号７（ＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号８（ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００５９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号９（ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号１０（ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号９（ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号１０（ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１１（ＧＲＥＬＩＹＮ）、ＤＶＥ、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１１（ＧＲＥＬＩＹＮ）、ＤＶＥ、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１３（ＡＲＥＬＩＹＮ）、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる少なくとも１つのペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号１３（ＡＲＥＬＩＹＮ）、配列番号１２（ＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、及び配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）のペプチドに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６５】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、ならびに配列番号１３のペプチドは線形エピトープに対応する。
【００６６】
これらの線形エピトープは、本発明者らによってアレイに基づくオリゴペプチドスキャニング（時にオーバーラップペプチドスキャンまたはｐｅｐｓｃａｎ分析と呼ばれる）によって同定されている。この技術は、標的タンパク質のオーバーラップセグメントならびに非オーバーラップセグメントからのオリゴペプチド配列のライブラリを使用し、それらが目的の抗体に結合する能力に関して試験する。標的タンパク質の異なる部分からの非隣接ペプチド配列を組み合わせて、この組み合わせたペプチドに立体構造の剛性を強化することによって（例えば、ＣＬＩＰＳ足場を使用することによって）（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７、Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．，Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；２０（５）：２８３−９９）、不連続なエピトープを、非常に高い信頼性ならびに精度でマッピングすることができる（Ｇａｓｅｉｔｓｉｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０−Ｃｌｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊａｎ；１７（１）：１６８〜１７５頁）。ＨＥＦＬＢを含む本発明の試験した抗体は全て、前記エピトープに特異的に結合する。
【００６７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、及び配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６８】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、及び配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）のペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００６９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）及び配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）及び配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）のペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）及び「ＳＩＲ」からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００７２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）に記載のアミノ酸配列のペプチド及びＳＩＲアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【００７３】
配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、ならびにＳＩＲＰのペプチドはコンフォメーショナルエピトープに対応する。これらのコンフォメーショナルエピトープは、当業者に周知であるように、目的のそのようなペプチドを検出ならびにシークエンシングするために、本発明者らによってタンパク質分解保護手順（酵素消化：アフィニティクロマトグラフィー上に固定した抗体−抗原複合体のキモトリプシン、トリプシン）の後に質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ）を使用して決定されている（Ｖａｎ  ｄｅ  Ｗａｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９７，ｖｏｌ．８５）。使用した抗原は、ヒトＳＩＲＰａ（アクセッション番号ＮＰ＿５４２９７０）であり、使用した本発明の抗体の１つはＨＥＦＬＢバリアントであった。
【００７４】
本発明に従う抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片は、ネイティブＳＩＲＰａ内でのその立体構造配置で前記ペプチドを含むかまたはそれからなる前記コンフォメーショナルエピトープに特異的に結合する。
【００７５】
配列番号７３（ＹＮＱＫ）に記載のアミノ酸配列のペプチドは、ＮＰ＿５４２９７０アクセッション番号によって参照されるヒトＳＩＲＰａアミノ酸配列における８０位〜８３位のアミノ酸からなるペプチドに対応する。
【００７６】
ＳＩＲアミノ酸配列のペプチド、ＳＩＲペプチドは、ＮＰ＿５４２９７０アクセッション番号によって参照されるヒトＳＩＲＰａアミノ酸配列における１０５位〜１０７位のアミノ酸配列からなるペプチドに対応する。
【００７７】
本明細書で使用される場合、用語「ＳＩＲＰａ」は、哺乳動物種のＳＩＲＰａタンパク質、好ましくはヒトＳＩＲＰａ（例えばアクセッション番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）ならびにＣＡＡ７１４０３）を指す。
【００７８】
本明細書で使用される場合、用語「抗ＳＩＲＰａ抗体」は、ＳＩＲＰａ、特にヒトＳＩＲＰａに特異的に結合する抗体を指す。
【００７９】
本発明の抗体またはその抗原結合性断片とエピトープ（またはエピトープを含む領域）との間の特異的結合は、抗体が特定のタンパク質または抗原（本明細書では、ＳＩＲＰａまたは抗体にカップリングされた免疫療法剤のリガンド）上のエピトープ（またはエピトープを含む領域）に関して認識可能な親和性を示すことを意味する。「認識可能な親和性」は、約１０−９Ｍ（ＫＤ）またはそれより強い親和性での結合を含む。好ましくは、結合は、結合親和性が１０−９Ｍ〜１０−１２Ｍの間、任意選択で１０−９Ｍ〜１０−１０Ｍの間、特に１０−１０Ｍである場合に特異的であると考えられる。結合ドメインが標的と特異的反応するまたは結合するかは、中でも前記結合ドメインと標的タンパク質または抗原との反応を、前記結合ドメインと標的タンパク質以外のタンパク質または抗原との反応と比較することにより、容易に試験することができる。
【００８０】
親和性は、当業者に周知の様々な方法によって決定することができる。これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、ならびにＳｃａｔｃｈａｒｄプロットが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
一実施形態では、本発明は、特にＢｉａｃｏｒｅ分析によって、ＳＩＲＰａに関して１０−９Ｍより劣る、好ましくは１０−１０Ｍより劣る、より好ましくは１．１０−１１Ｍより劣るＫＤ値を有する、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００８２】
一実施形態では、本発明は、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用を減少させる上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００８３】
一実施形態では、本発明は、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合、特にヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を部分的または完全に、特に完全に阻害する上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００８４】
本発明のそのような抗体は、ＳＩＲＰａに特異的に結合し、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用に拮抗する。
【００８５】
特に、本発明の抗ＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体は、結合アッセイにおいて陰性対照分子と比較して、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を少なくとも５０％、６０％、７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％、または最も好ましくは１００％低減または阻害することが可能である。
【００８６】
特に、本発明の抗ＳＩＲＰａアンタゴニスト抗体は、結合アッセイにおいて陰性対照分子と比較して、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を、５０％〜１００％、好ましくは６０％〜９０％、より好ましくは７０％〜８０％低減または阻害することが可能である。
【００８７】
競合的阻害によって抗体の特異性ならびに親和性を決定する方法は、当技術分野で公知であり（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９８）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．，ＮＹ（１９９２；１９９３）；Ｍｕｌｌｅｒ、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．、９２：５８９〜６０１頁（１９８３）を参照されたい）、以下の実施例に記載される。
【００８８】
これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、フローサイトメトリー、ならびにＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８９】
一実施形態では、本発明は、ＥＬＩＳＡによってＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合的ＳＩＲＰａ結合アッセイによって決定した場合に、５００ｎｇ／ｍｌより低い、特に４００ｎｇ／ｍｌより低い、３００ｎｇ／ｍｌ、より詳しくは２００ｎｇ／ｍｌより低いＩＣ５０を有する、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【００９０】
一実施形態では、本発明は、ヒト単球においてＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合的サイトメトリーアッセイによって決定した場合に、５００ｎｇ／ｍｌより低い、特に４００ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌより低い、より詳しくは２００ｎｇ／ｍｌより低い、１５０ｎｇ／ｍｌより低い、ならびにさらにより詳しくは１００ｎｇ／ｍｌより低いＩＣ５０を有する、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【００９１】
一実施形態では、本発明は、ＳＩＲＰｇ、好ましくはヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００９２】
本発明のそのような抗体は、ＳＩＲＰｇとＣＤ４７との間の相互作用に影響を及ぼさないか、または防止しない。
【００９３】
本明細書で使用される場合、用語「ＳＩＲＰｇ」は、哺乳動物種、好ましくはヒトＳＩＲＰｇからのシグナル制御性タンパク質ガンマ（ＳＩＲＰガンマ、ＣＤ１７２ｇ、またはＳＩＲＰベータ２とも呼ばれる）を指す。
【００９４】
本出願の実施例に使用されるヒトＳＩＲＰｇタンパク質の基準配列は、アクセッション番号Ｑ９Ｐ１Ｗ８に関連する配列に対応する。
【００９５】
一実施形態では、本発明は、特にＢｌｉｔｚ分析によって、ＳＩＲＰｇに関して１０−９Ｍより優れている、好ましくは１０−８Ｍより優れている、より好ましくは１０−７Ｍより優れているＫＤ値を有する上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００９６】
一実施形態では、本発明は、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を有意に阻害しない、拮抗しない、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合と有意に競合しない上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【００９７】
このアンタゴニスト作用は、本出願の実施例に定義した方法を使用して決定することができる。
【００９８】
本発明において、抗体（または抗原結合性断片）が、ＢｌｉｔｚによるＳＩＲＰｇ結合競合アッセイにおいてＣＤ４７のＫＤ値の増加を誘導しない、または１対数より劣る増加を誘導する場合、前記抗体（またはその抗原結合性断片）は、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合に拮抗しないと考えることができる。
【００９９】
一実施形態では、本発明は、ＳＩＲＰｇを介してＴ細胞、特にＣＤ３＋Ｔ細胞に特異的に結合しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１００】
特に、本発明の改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰｇを介して哺乳動物種のＴ細胞、特にヒトＴ細胞に結合しない。
【０１０１】
この作用は、本出願の実施例に記載される方法によって測定することができる。
【０１０２】
一実施形態では、本発明は、好ましくは哺乳動物種のＴ細胞、特にＣＤ３＋Ｔ細胞、より好ましくはヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１０３】
特に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、Ｔ細胞の増殖が、前記抗体の非存在下での陽性対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む陽性対照と比較して３０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満低減される場合、Ｔ細胞の増殖を有意に阻害しないと考えられる。
【０１０４】
好ましくは、本発明は、好ましくは哺乳動物種のＴ細胞、特にＣＤ３＋Ｔ細胞、より詳しくはヒトＴ細胞の増殖を増加させる上記の改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１０５】
抗体（またはその抗原結合性断片）は、前記抗体（またはその抗原結合性断片）が、前記抗体の非存在下での対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む対照と比較して、少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも１０倍大きいＴ細胞の増殖を誘導する場合、Ｔ細胞の増殖を増加させると考えられる。
【０１０６】
Ｔ細胞の増殖は、様々な方法によって決定することができる。例えば、Ｔ細胞の増殖は、本出願の実施例に記載の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定することができる。
【０１０７】
一実施形態では、本発明は、サーファクタントタンパク質のＳＩＲＰａに対する結合を有意に阻害しない、拮抗しない、サーファクタントタンパク質のＳＩＲＰａに対する結合と有意に競合しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「サーファクタントタンパク質」は、コラーゲン含有Ｃ型（カルシウム依存性）レクチンであり、これはサーファクタントの恒常性ならびに肺の免疫に有意に寄与する（総説に関しては、Ｋｉｓｈｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＳＰ−Ａ  ａｎｄ  ＳＰ−Ｄ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，  Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，４３（９），１２９３〜３１５頁、２００６を参照されたい）。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「サーファクタントタンパク質」は、哺乳動物種からのサーファクタントタンパク質、好ましくはヒトサーファクタントタンパク質を指す。
【０１１０】
一実施形態では、本発明は、ヒトサーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ−Ｄ）のＳＩＲＰａに対する結合を阻害しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１１１】
一実施形態では、本発明は、ヒトサーファクタントタンパク質Ａ（ＳＰ−Ａ）のＳＩＲＰａに対する結合を阻害しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１１２】
一実施形態では、本発明は、サーファクタントタンパク質とＳＩＲＰａとの間の相互作用に拮抗しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１１３】
ＳＩＲＰａとサーファクタントタンパク質との間の競合は、当業者に周知の方法を使用して競合アッセイによって決定することができる。これらの方法には、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、Ｂｌｉｔｚ分析、ならびにＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１４】
本発明において、抗体（またはその抗原結合性断片）が、ＢｌｉｔｚによるＳＩＲＰａ結合競合アッセイにおいて、サーファクタントタンパク質の増加を誘導しないか、またはＫＤ値の１対数より劣る増加を誘導する場合、前記抗体（またはその抗原結合性断片）は、サーファクタントタンパク質の前記ＳＩＲＰａに対する結合に拮抗しないと考えることができる。
【０１１５】
一実施形態では、本発明は、ＳＩＲＰｂに弱く結合するかまたは特異的に結合しない、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、用語「ＳＩＲＰｂ」は、哺乳動物種のＳＩＲＰｂタンパク質（ＳＩＲＰβ、シグナル制御性タンパク質ベータ−１、ＳＩＲＰ−ベータ−１、ＣＤ１７２抗原様ファミリーメンバーＢまたはＣＤ１７２ｂとも呼ばれる）、好ましくはヒトＳＩＲＰｂを指す。
【０１１７】
本出願の実施例で使用されるヒトＳＩＲＰｂタンパク質の基準配列は、アクセッション番号Ｑ５ＴＦＱ８−１に関連する配列に対応する。
【０１１８】
一実施形態では、本発明は、特にＢｌｉｔｚ分析において、ＳＩＲＰｂに関して１０−９Ｍより優れている、好ましくは１０−８Ｍより優れているＫＤ値を有する、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１１９】
一実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣならびに／またはＴリンパ球によるＴＮＦａの分泌を増加させる、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１２０】
ＴＮＦａの分泌は、当業者に周知の方法を使用してＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる（本発明の実施例に示すように）。
【０１２１】
本発明では、抗体（またはその抗原結合性断片）が、前記抗体の非存在下での陰性対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む陰性対照と比較して、ＴＮＦａの分泌を少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍大きく誘導する場合、前記抗体（またはその抗原結合性断片）は、ＴＮＦａの分泌を増加させると考えることができる。
【０１２２】
一実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させる、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１２３】
ＩＦＮｇの分泌は、当業者に周知の方法を使用してＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる（本発明の実施例に示すように）。
【０１２４】
本発明では、抗体（またはその抗原結合性断片）が、前記抗体の非存在下での陰性対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む陰性対照と比較して、ＩＦＮｇの分泌を少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも４倍大きく誘導する場合、前記抗体（またはその抗原結合性断片）は、ＩＦＮｇの分泌を増加させると考えることができる。
【０１２５】
一実施形態では、本発明は、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させる、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１２６】
ＭＩＰ１ａの分泌は、当業者に周知の方法を使用してＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる（本発明の実施例に示すように）。
【０１２７】
本発明では、抗体（またはその抗原結合性断片）が、前記抗体の非存在下での陰性対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む陰性対照と比較して、ＭＩＰ１ａの分泌を少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも１０倍大きく誘導する場合、前記抗体（またはその抗原結合性断片）は、ＭＩＰ１ａの分泌を増加させると考えることができる。
【０１２８】
一実施形態では、本発明は、ヒトＴ細胞、特にヒトＴリンパ球の活性化を増加させる、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。本明細書で使用される場合、Ｔ細胞ならびにＴリンパ球は同じ意味を有し、互換的に使用することができる。
【０１２９】
ヒトＴ細胞ならびにヒトＴリンパ球の活性化は、当技術分野で公知の方法、例えばＣＤマーカー、特にＣＤ２５ならびに／もしくはＣＤ６９の分析、フローサイトメトリー、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、及び／または本発明の実施例に例証されるように、ＩＦＮｇの分泌を評価することによって、または本発明の実施例に例証されるように、ヒトＴ細胞、すなわちヒトＴリンパ球によるカルシウム取り込みのタイムラプス分析などの、しかしこれらに限定されない方法によって決定することができる。
【０１３０】
本発明では、抗体またはその抗原結合性断片が、前記抗体の非存在下での陰性対照、特に前記抗体の非存在下であるが第１の活性化シグナルを産生する作用剤（例えば、抗ＣＤ３）を含む陰性対照と比較して、ヒトＴ細胞（すなわち、ヒトＴリンパ球）の活性化を少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも４倍大きく増加させる場合、前記抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＴ細胞（すなわち、ヒトＴリンパ球）の活性化を増加させると考えることができる。
【０１３１】
第１の実施形態に従って、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及び
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン
を含み、
−  ＨＣＤＲ１が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  ＨＣＤＲ２が、配列番号１５または配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  ＨＣＤＲ３が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、または配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  ＬＣＤＲ１が、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  ＬＣＤＲ２が、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
−  ＬＣＤＲ３が、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、
重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記重鎖定常ドメインまたはその断片が免疫療法剤に連結されており、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、及びその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかまたはそれからなる、二機能性抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３２】
別の実施形態に従って、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及び重鎖定常ドメインまたはその断片を含む重鎖、及び
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記重鎖定常ドメインまたはその断片が、特にそのＣ末端で免疫療法剤に連結されており、前記免疫療法剤が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ならびに４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、及びその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかまたはそれからなる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３３】
別の実施形態に従って、本発明は、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＤＣＲ３、ならびに重鎖定常ドメインの少なくとも１つの断片、特に重鎖定常ドメインの少なくともＣＨ１ドメイン；または少なくともＣＨ１ドメインならびにＣＨ３ドメイン；または少なくともＣＨ２ドメインならびにＣＨ３ドメイン、または少なくともＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ならびにＣＨ３ドメインを含む断片を、特にＦｃ領域の少なくとも断片ならびに／またはヒンジ領域と組み合わせて含む重鎖；及び
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記重鎖定常ドメインまたはその断片が、特にそのＣ末端で免疫療法剤に連結されており、前記免疫療法剤が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ならびに４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、及びその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかまたはそれからなる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３４】
以下の説明の部において、用語「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖」はまた、用語「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及び重鎖定常ドメインまたはその断片を含む重鎖」、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン」、ならびに「そのＮ末端からそのＣ末端にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＤＣＲ３、ならびに重鎖定常ドメインの少なくとも断片、特に重鎖定常ドメインの少なくともＣＨ１ドメインを含む断片を含む重鎖」も包含する。
【０１３５】
以下の説明の部において、特色「重鎖またはその断片が免疫療法剤に連結されている」と列挙されている場合、これはまた、「改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、及びその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかまたはそれからなる」ことも包含する。
【０１３６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されており、
特に、抗体またはその抗原結合性断片が、重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記重鎖定常ドメインまたは断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３７】
１８Ｄ５／バリアントＡ／バリアントＢ
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ、
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３８】
バリアントＣ
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１３９】
バリアントＥ
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１４０】
バリアントＦ
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１４１】
バリアントＥＦ
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１、
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１４２】
本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、本明細書に提供されるヒト抗体のＨＣＤＲ１ならびに／もしくはＨＣＤＲ２ならびに／もしくはＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び／または本明細書に提供されるヒト抗体のＬＣＤＲ１ならびに／もしくはＬＣＤＲ２ならびに／もしくはＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有し得る。
【０１４３】
一実施形態では、改変抗体は、そのバリアントが、ＣＤＲ残基内もしくはＣＤＲ残基に隣接した１つもしくは複数のアミノ酸挿入、ならびに／またはＣＤＲ残基内もしくはＣＤＲ残基に隣接した欠失、ならびに／またはＣＤＲ残基の置換（置換はそのようなバリアントを生成するための好ましいタイプのアミノ酸変化である）を含む、提供されるヒト抗体のＣＤＲの１つまたは複数のアミノ酸配列バリアントを含む。
【０１４４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び／または
−  配列番号３１、配列番号３２、ならびに配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン
を含み、
免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１４５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３１、配列番号３２、ならびに配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン
を含み、
免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１４６】
特定の可変ドメインの配列を以下の表１に示す。
【０１４７】
【表１】
2020536573.tif 000002
【０１４８】
本発明において例証される抗体の可変ドメインの配列は、表２に示す配列の組合せから推定することができる。
【０１４９】
【表２】
2020536573.tif 000003
【０１５０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメインを含み、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１５１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号３３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、
好ましくは
−  配列番号２９ならびに配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、
より好ましくは
−  配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン
を含み、
免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【０１５２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変ドメイン
を含み
免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片に関する。
【０１５３】
一実施形態では、改変抗体または抗原結合性断片は、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、もしくは配列番号３０に関して同定されている重鎖可変ドメインの３３位のアミノ酸Ｗ（Ｗ３３）の置換を有さず、及び／または配列番号３１、配列番号３２、もしくは配列番号３３に関して同定されている軽鎖可変ドメインの３９位のアミノ酸Ｙ（Ｙ３９）、５５位のアミノ酸Ｒ（Ｒ５５）ならびに／もしくは６０位のアミノ酸Ｆ（Ｆ６０）の置換を有さず、特に重鎖可変ドメインのＷ３３位で置換を有さず、軽鎖可変ドメインのＹ３９、Ｒ５５、ならびにＦ６０位で置換を有さない。
【０１５４】
本発明において、改変抗体は、任意の重鎖ならびに軽鎖定常ドメイン、及びその断片によって産生することができる。
【０１５５】
一実施形態では、本発明の改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であり、特に抗体軽鎖定常ドメインは、ヒトカッパ軽鎖定常ドメインに由来し、より詳しくは軽鎖定常ドメインは、配列番号３５の配列からなり、及び／または抗体重鎖定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４（野生型または変異型）重鎖定常ドメインに由来し、特にヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインに由来し、より詳しくは抗体重鎖定常ドメインは、配列番号３４を有する配列からなる。
【０１５６】
当業者に周知であるように、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプの選択は、特定の機能が必要であるか否か、ならびに適したｉｎ  ｖｉｖｏ半減期にとっての必要性に重点を置く。例えば、がん細胞の選択的撲滅のために設計された抗体は、典型的に補体の活性化ならびに抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性によるエフェクター媒介性細胞殺滅を可能にする活性なアイソタイプを必要とする。ヒトＩｇＧ１ならびにＩｇＧ３（短い半減期）アイソタイプはいずれも、これらの基準を満たし、特にヒトＩｇＧ１アイソタイプ（野生型ならびにバリアント）はこれらの基準を満たす。特に、重鎖定常ドメインのＩｇＧアイソタイプ（特に、ヒト野生型ならびにバリアントＩｇＧ１アイソタイプ）に応じて、本発明の抗ヒトＳＩＲＰａ抗体は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣならびに／またはＡＤＣＰ機構を介してＳＩＲＰａを発現する細胞に対して細胞傷害性であり得る（Ｓａｌｆｅｌｄ、ｎａｔｕｒｅ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．２５、Ｎ°１２、２００７；Ｉｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．６７、ｉｓｓｕｅ  ２、ｐａｒｔ  Ａ、２０１５）。実際に、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域は、多様なアクセサリ分子と相互作用して、間接的なエフェクター機能、例えば抗体依存性細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、ならびに補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を媒介する。
【０１５７】
【表３】
2020536573.tif 000004
【０１５８】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体であって、
−  配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含み、
免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【０１５９】
【表４】
2020536573.tif 000005
【０１６０】
【表５】
2020536573.tif 000006
【０１６１】
【表６】
2020536573.tif 000007
【０１６２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化ＭＤＳＣへの分化、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも１つのヒトマーカー、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも２つのヒトマーカーを発現する分化ＭＤＳＣへの分化、及びより詳しくはヒトマーカーＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３を発現する細胞；及び／またはＣＤ１１ｂを発現する分化ＭＤＳＣへの分化を誘導することができる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６３】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記非抑制性細胞が、ＩＬ６、ＩＬ１２、及びＴＮＦなどの炎症促進性サイトカインを分泌し、ＩＬ１０及びＴＧＦβなどの抗炎症性サイトカインレベルがないかまたは低い、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記非抑制性細胞がｉＮＯＳを発現する、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記非抑制性細胞がＭＨＣクラスＩＩマーカーを発現せず、マーカーＣＤ８０−ＣＤ８６を発現しない、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記非抑制性細胞が、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）細胞の少なくとも１つのマーカーを発現する、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、マクロファージのＭ２極性化を阻害することができ、及び／または炎症促進性Ｍ１型マクロファージに好都合である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１６８】
本発明の改変抗体は、炎症促進性の環境を誘導するために、マクロファージ極性化を修飾することができ、すなわち本発明の改変抗体は、Ｍ２型マクロファージによって提供される抗炎症性シグナルを阻害することができ、ならびに／またはＭ１型マクロファージによって提供される炎症促進性シグナルに好都合となり得る。このアプローチは、特にがん細胞の除去におけるエフェクターＴ細胞の作用に好都合である炎症性環境を再度確立することを可能にする。
【０１６９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖またはその断片、特に重鎖定常ドメインまたはその断片が、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７０】
意外にも、本発明者らは、試験した免疫療法剤が、重鎖またはその断片にグラフトした場合には機能的であるままであるが、軽鎖にグラフトした場合には、それらの全てがそのリガンドに結合することができるが機能的ではないことを観察した。
【０１７１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、前記抗体の重鎖定常ドメインまたはその断片のＣ末端に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、前記抗体の重鎖定常ドメインまたはその断片のＮ末端に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７３】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、軽鎖、特に軽鎖定常ドメインまたはその断片が、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、前記抗体の軽鎖定常ドメインのＣ末端に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、前記免疫療法剤が、前記抗体の軽鎖定常ドメインのＮ末端に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲＳＦ２５、２Ｂ４、ＣＤ４８、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ３、Ｔｉｍ４、Ｇａｌ９、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ｘ）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２、ＨＨＬＡ２（Ｂ７−Ｈ７）、ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８Ｈ）、ブチロフィリン様分子２（ＢＴＮＬ２）、そのバリアント及び断片からなる群から選択され、特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、そのバリアント及び断片からなる群から選択され、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、そのバリアント及び断片からなる群から選択される、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が哺乳動物種、特にヒトに由来する、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１７８】
ヒトＰＤ１の基準配列は、配列番号７４の配列に対応する。上記で言及したように、ＰＤ１タンパク質に関して、ＰＤ１の可溶性型を含む４つのスプライスバリアントが公知である（Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２３５：２，１０９〜１１６頁、２００５）。本発明において、用語「ＰＤ１」は、Ｎｉｅｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５に記載される４つのＰＤ１バリアントを含む。
【０１７９】
ヒトＰＤＬ１の基準配列は、配列番号７５の配列に対応する。
【０１８０】
ヒトＣＤ８０の基準配列は、配列番号７６の配列に対応する。
【０１８１】
ヒトＯＸ４０Ｌの基準配列は、配列番号７７の配列に対応する。
【０１８２】
ヒト４−１ＢＢＬの基準配列は、配列番号７８の配列に対応する。
【０１８３】
ヒトＩＣＯＳＬの基準配列は、配列番号７９の配列に対応する。
【０１８４】
ヒトＣＤ８６の基準配列は、配列番号８０の配列に対応する。
【０１８５】
【表７】
2020536573.tif 000008
【０１８６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１８７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、前記抗体の重鎖定常ドメインまたはその断片のＣ末端に連結されている、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０からなる群から選択される配列、好ましくは  配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１８８】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、前記抗体の軽鎖定常ドメインまたはその断片のＣ末端に連結されている、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、及び配列番号８０からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、及び配列番号７８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１８９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲＳＦ２５、２Ｂ４、ＣＤ４８、Ｔｉｍ１、Ｔｉｍ３、Ｔｉｍ４、Ｇａｌ９、ＬＡＧ−３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（Ｂ７ｘ）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２、ＨＨＬＡ２（Ｂ７−Ｈ７）、ＴＭＩＧＤ２（ＣＤ２８Ｈ）、ブチロフィリン様分子２（ＢＴＮＬ２）、そのバリアント及び断片、好ましくはその細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）断片からなる群から選択されるタンパク質、
特に、ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、そのバリアント及び断片、好ましくはその細胞外ドメイン、またはその細胞外ドメインからなるポリペプチドからなる群から選択されるタンパク質、
より詳しくは、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、そのバリアント及び断片、好ましくはその細胞外ドメイン、またはその細胞外ドメインからなるポリペプチドからなる群から選択されるタンパク質
を含むかまたはそれからなる、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０１９０】
特に、本発明に従う免疫療法剤の断片は、５００、４００、３００、２００、１００、もしくは５０アミノ酸より小さいもしくそれに等しいサイズを有し（または５００、４００、３００、２００、１００もしくは５０アミノ酸未満もしくはそれに等しいアミノ酸からなる）、ならびに／または好ましくは少なくともそのリガンド結合能を有する。
【０１９１】
特に、本発明に従う免疫療法剤の断片は、８０〜５００、特に１００〜５００、特に１００〜３００、特に８０〜１６０、より詳しくは１００〜２００アミノ酸のサイズを有し（または８０〜５００アミノ酸、特に１００〜５００、特に１００〜３００、特に８０〜１６０、より詳しくは１００〜２００アミノ酸からなる）、少なくともそのリガンド結合能を有する。
【０１９２】
特に、本発明に従う免疫療法剤、すなわちＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにＣＤ８６の断片はそれぞれ、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、ならびに配列番号８０に記載されるアミノ酸配列の少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、ならびに最も好ましくは少なくとも５０％の断片に対応する。
【０１９３】
特に、本発明に従う免疫療法剤の断片、すなわち細胞外ドメインＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにＣＤ８６の断片はそれぞれ、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８に記載されるアミノ酸配列の少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、ならびに最も好ましくは少なくとも７０％の断片に対応する。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、免疫療法剤ＣＤ８０、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ならびに４−１ＢＢＬの断片は、以下の表に例証される断片を含み得るかまたはそれからなり得る。
【０１９５】
【表８】
2020536573.tif 000009
【０１９６】
特に、本発明に従う免疫療法剤、すなわちＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにＣＤ８６のバリアントはそれぞれ、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、ならびに配列番号８０の置換バリアントであり、少なくともそのリガンド結合能を有する。
【０１９７】
特に、本発明に従う免疫療法剤、すなわちＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにＣＤ８６のバリアントはそれぞれ、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、ならびに配列番号８０と、その全長にわたって少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、なおより好ましくは少なくとも９０％、ならびに最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する。
【０１９８】
特に、本発明に従う免疫療法剤のバリアント、すなわちＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにＣＤ８６の細胞外ドメインのバリアントはそれぞれ、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８と、その全長にわたって少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、なおより好ましくは少なくとも９０％、ならびに最も好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する。
【０１９９】
特に、本発明の免疫療法剤のバリアントは、ネイティブ免疫療法剤の配列と、その全長にわたって少なくとも８０％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる配列を有し、ならびにネイティブ免疫療法剤の少なくとも１つの生物活性を有し、ネイティブ免疫療法剤の配列は、特に配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、ならびに配列番号８０のアミノ酸配列である。代替の実施形態では、ネイティブ免疫療法剤の配列は、免疫療法剤の公知の様々な形態のアライメントによって得られたコンセンサス配列であり得る。
【０２００】
特に、本発明の免疫療法剤のバリアントは、ネイティブ免疫療法剤の配列とその全長にわたって少なくとも８０％、より詳しくは少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、ならびにさらにより詳しくは少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むかまたはそれからなる配列を有する。
【０２０１】
本発明の説明において参照される同一性のパーセンテージは、例えばＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ  １９７０のアルゴリズムを使用して、比較される配列のグローバルアライメントに基づいて、すなわちその全長にわたる配列のアライメントに基づいて決定される。この配列比較は、例えばｎｅｅｄｌｅのソフトウェアを使用して、パラメータ「ギャップ開始」＝１０．０、パラメータ「ギャップ伸長」＝０．５、ならびに「ＢＬＯＳＵＭ  ６２」行列を使用して行うことができる。ｎｅｅｄｌｅなどのソフトウェアは、ワールドワイドウェブサイトｅｂｉ．ａｃ．ｕｋで「ｎｅｅｄｌｅ」の名称で入手可能である。
【０２０２】
本出願の実施例で使用するヒトＰＤ１の細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８１に関連する配列に対応する。
【０２０３】
本出願の実施例で使用するヒトＰＤＬ１の細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８２に関連する配列に対応する。
【０２０４】
本出願の実施例で使用するヒトＣＤ８０の細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８３に関連する配列に対応する。
【０２０５】
本出願の実施例で使用するヒトＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８４に関連する配列に対応する。
【０２０６】
本出願の実施例で使用するヒト４−１ＢＢＬの細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８５に関連する配列に対応する。
【０２０７】
本出願の実施例で使用するヒトＩＣＯＳＬの細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８６に関連する配列に対応する。
【０２０８】
本出願の実施例で使用するヒトＣＤ８６の細胞外ドメインの基準配列は、配列番号８７に関連する配列に対応する。
【０２０９】
【表９】
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【０２１０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、ならびに配列番号８７からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８５からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２１１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２１２】
【表１０】
2020536573.tif 000011
【０２１３】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、前記抗体の重鎖定常ドメインまたはその断片のＣ末端に連結されている、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、及び配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、及び配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２１４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤が、前記抗体の軽鎖定常ドメインのＣ末端に連結されている、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、及び配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、及び配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかまたはそれからなるタンパク質である、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２１５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、ならびに配列番号３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、及び
−  配列番号３１、配列番号３２、ならびに配列番号３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
特に
−  配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン、
または
−  配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる重鎖可変ドメイン、ならびに
−  配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる軽鎖可変ドメイン
を含み、
重鎖定常ドメインまたはその断片が、ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、そのバリアントならびに断片、好ましくはその細胞外ドメイン（ＥＣＤ）からなる群から選択されるタンパク質、
より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、そのバリアントならびに断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質、を含むかまたはそれからなる免疫療法剤にそのＣ末端で連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２１６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体であって、
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  ＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントからなる群から選択される、免疫療法剤の断片、好ましくは細胞外ドメイン（またはＥＣＤ）を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【０２１７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体であって、
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、ならびに配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列、好ましくは配列番号８１、配列番号８２、配列番号８５、配列番号８５、ならびに配列番号８８からなる群から選択される配列を含むかもしくはそれからなるタンパク質にそのＣ末端で連結されている、配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖
を含む、可変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【０２１８】
特に本発明において、改変抗体は、リンカーによって免疫療法剤に連結されている。言い換えれば、本発明は、その鎖またはその断片、好ましくはその重鎖またはその断片、より好ましくはその重鎖定常ドメインまたはその断片が、特にリンカーによって免疫療法剤に連結されている改変抗体に関する。本明細書で使用される場合、用語「リンカー」は、免疫療法剤と抗ＳＩＲＰａ免疫グロブリン配列部分とを連結する少なくとも１つのアミノ酸の配列を指す。そのようなリンカーは、立体妨害を防止するために有用であり得る。一部の実施形態では、リンカーは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０アミノ酸残基を有する。しかし、上限は重要ではなく、例えばそのようなポリペプチドの生物薬剤の産生に関する利便性の理由から選択される。リンカー配列は、天然に存在する配列または天然に存在しない配列であり得る。治療目的のために使用する場合、リンカーは、好ましくはイムノアドヘシンが投与される対象に対して非免疫原性である。１つの有用な群のリンカー配列は、国際公開第９６／３４１０３号、ならびに国際公開第９４／０４６７８号に記載される重鎖抗体のヒンジ領域に由来するリンカーである。他の例は、ポリアラニンリンカー配列である。リンカー配列のさらに好ましい例は、（ｇｌｙ４ｓｅｒ）３（配列番号８９、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ）、（ｇｌｙ４ｓｅｒ）４（配列番号９０、ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ  ＧＧＧＧＳ）、（ｇｌｙ４ｓｅｒ）（配列番号９１、ＧＧＧＧＳ）、（ｇｌｙ３ｓｅｒ）（配列番号９２、ＧＧＧＳ）、（ｇｌｙ３）（ＧＧＧ）、（ｇｌｙ２ｓｅｒ）（ＧＧＳ）、ならびに（ｇｌｙ３ｓｅｒ２）３（配列番号９３、ＧＧＧＳＳ  ＧＧＧＳＳ  ＧＧＧＳＳ）、特に（ｇｌｙ４ｓｅｒ）３を含む、異なる長さのＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。
【０２１９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体（またはその断片）であって、好ましくは配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、ＧＧＧ、ＧＧＳ、ならびに配列番号９３、特に配列番号８９からなる群から選択されるリンカー配列によって免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体（またはその断片）に関する。
【０２２０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその断片であって、抗体（またはその断片）の重鎖、特に重鎖定常ドメインまたはその断片が、好ましくは配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、ＧＧＧ、ＧＧＳ、ならびに配列番号９３、特に配列番号８９からなる群から選択されるリンカー配列によって免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその断片に関する。
【０２２１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその断片であって、抗体（またはその断片）の軽鎖が、好ましくは配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、ＧＧＧ、ＧＧＳ、ならびに配列番号９３、特に配列番号８９からなる群から選択されるリンカー配列によって免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその断片に関する。
【０２２２】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体であって、
−  配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、ならびに配列番号１７８からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９８、ならびに配列番号１７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号５７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、ならびに配列番号１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０５、ならびに配列番号１７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１２、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１２、ならびに配列番号１８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１９、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１９、ならびに配列番号１８１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２６、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２６、ならびに配列番号１８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３３、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３３、ならびに配列番号１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１４０、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１４０、ならびに配列番号１８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４７、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
を含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【０２２３】
【表１１】
2020536573.tif 000012
【０２２４】
【表１２】
2020536573.tif 000013
【０２２５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体であって、
−  配列番号５６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、ならびに配列番号１５６からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、ならびに配列番号１５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、ならびに配列番号１６３からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、ならびに配列番号１６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３８のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号３９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４０のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、ならびに配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、ならびに配列番号１６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列、好ましくは配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、ならびに配列番号１７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
を含む、改変抗ＳＩＲＰａ抗体に関する。
【０２２６】
【表１３】
2020536573.tif 000014
【０２２７】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
−  配列番号１４３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４４に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４８に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１４９に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号１８５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７１に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７３に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７４に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７５に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７６に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
または
−  配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる重鎖、及び
−  配列番号１７７に記載のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる軽鎖、
を含む、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２２８】
【表１４】
2020536573.tif 000015
【０２２９】
【表１５】
2020536573.tif 000016
【０２３０】
【表１６】
2020536573.tif 000017
【０２３１】
【表１７】
2020536573.tif 000018
【０２３２】
改変ＳＩＲＰａ抗体
上記で定義した改変抗体に関して列挙した実施形態は、本発明の他の態様において列挙された改変抗体に、必要な変更を加えて繰り返される。
【０２３３】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、及び配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３４】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）、配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）、及び配列番号７２（ＳＰＲＤＩＴＬＫＷ）のペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３５】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）及び配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３６】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７０（ＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲ）及び配列番号７１（ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ）のペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３７】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号７３（ＹＮＱＫ）及びＳＩＲからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含むコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３８】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ内の配列番号７３（ＹＮＱＫ）及びＳＩＲのペプチドを含むかまたはそれからなるコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合し、免疫療法剤に連結されている、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２３９】
別の態様では、本発明は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、
ａ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ならびにＨＣＤＲ３を含む重鎖、及び／または
ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ならびにＬＣＤＲ３を含む軽鎖
を含み、
前記ＣＤＲが、
−  配列番号１４（ＳＹＷＶＨ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ１、
−  配列番号１５（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＮＱＫＦＫＤ）または配列番号１６（ＮＩＤＰＳＤＳＤＴＨＹＳＰＳＦＱＧ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ２、
−  配列番号１７（ＧＧＴＧＴＭＡＷＦＡＹ）、配列番号１８（ＧＧＴＧＴＬＡＷＦＡＹ）、配列番号１９（ＧＧＴＧＴＭＡＹＦＡＹ）または配列番号２０（ＧＧＴＧＴＬＡＹＦＡＹ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＨＣＤＲ３、
−  配列番号２１（ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＹＧＮＴＹＬＹ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ１，
−  配列番号２２（ＲＶＳＮＲＦＳ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ２、及び
−  配列番号２３（ＦＱＧＴＨＶＰＹＴ）のアミノ酸配列のペプチドを含むかまたはそれからなるＬＣＤＲ３
として定義され、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記重鎖定常ドメインまたはその断片が、免疫療法剤に連結されている、
改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２４０】
本発明はまた、
−  ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、及び／または
−  ヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／または
−  ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／または
−  ヒトＰＢＭＣならびに／もしくはＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／または
−  ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／または
−  ヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／または
−  ヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及びヒトＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ヒトＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、ヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が、免疫療法剤に連結されており、特に前記改変抗ＳＩＲＰａ抗体または抗原結合性断片が、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインまたはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片に関する。
【０２４１】
応用
上記で定義した本発明の改変抗体に関して列挙された応用は、本発明の単離された核酸分子ならびに単離された核酸分子の群、本発明のベクター、本発明の宿主細胞、本発明の医薬組成物、及び本発明に従う産物の組合せに関して必要な変更を加えて繰り返される。
【０２４２】
別の態様では、本発明は、医薬として使用するための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及びヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
に関する。
【０２４３】
本発明はまた、それを必要とする対象における処置の方法であって、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片であって、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法にも関する。
【０２４４】
本発明はまた、医薬の製造における
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用にも関する。
【０２４５】
別の態様では、本発明は、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の分化ＭＤＳＣへの分化、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも１つのヒトマーカー、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも２つのヒトマーカーを発現する分化ＭＤＳＣへの分化、及びより詳しくはヒトマーカーＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３を発現する細胞；及び／またはＣＤ１１ｂを発現する分化ＭＤＳＣへの分化によって改善または防止することができる任意の状態の処置における使用のための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
に関する。
【０２４６】
本明細書で定義される場合、「骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を分化ＭＤＳＣに分化させることによって改善または防止することができる状態」は、炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有するがん（特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがん）を含むがん、感染性疾患、外傷、自己免疫疾患（例えば、リウマチ性関節炎、１型糖尿病、狼瘡、乾癬）、ワクチン接種、慢性炎症性疾患（例えば、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患）、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、または移植機能障害に対応する。
【０２４７】
本発明はまた、それを必要とする対象における骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を分化ＭＤＳＣに分化させることによって改善または防止することができる任意の状態を処置する方法であって
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法にも関する。
【０２４８】
本発明はまた、単球性骨髄系由来サプレッサー細胞（Ｍｏ−ＭＤＳＣ）を非抑制性細胞に分化させることによって改善または防止することができる任意の状態を処置するための医薬の製造における
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用にも関する。
【０２４９】
一実施形態では、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態の処置における使用のための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
に関する。
【０２５０】
実際に、ＳＩＲＰａは、チェックポイント阻害剤として作用し、ならびにマクロファージの極性化に関与する。特に、マクロファージの炎症促進性プロファイルは、２型マクロファージ（Ｍ２型の高い食作用活性＝Ｍ（ＩＬ４））を犠牲にして得られることから、ＳＩＲＰａの遮断は、１型マクロファージ（Ｍ１炎症促進性＝Ｍ（ＩＦＮｇ））に関連するマクロファージの炎症促進性の機能を誘導し、ならびに腫瘍におけるマクロファージの抑制活性を阻害する。このように、ＳＩＲＰａのアンタゴニストは、マクロファージのＭ２表現型の極性化を阻害することができ、ならびに／または炎症促進性Ｍ１型マクロファージ機能にとって好都合であり、治療薬において使用することができる。
【０２５１】
本明細書で定義される場合、「炎症促進性マクロファージに好都合となるようにマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる状態」は、例えば、固形がん、血液のがん、感染性疾患、外傷、自己免疫疾患、ワクチン接種、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、または慢性炎症性疾患に対応する。
【０２５２】
本発明はまた、それを必要とする対象における炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態を処置する方法であって、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０２５３】
一実施形態では、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態を処置するための医薬の製造における、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用にも関する。
【０２５４】
炎症促進性細胞に好都合となるようにマクロファージの極性化を改変することは、複数の病態または状況において有用であり得る。上記で記載したように、この改変は、がんの状況において、マクロファージの抗腫瘍活性を回復するために、ならびに／またはＭ２型マクロファージの腫瘍促進活性を防止するために特に有用である。過剰なＭ２型マクロファージの極性化による不適切な免疫応答もまた、感染性疾患、線維症、ワクチン接種、外傷、ならびに慢性炎症性疾患において起こる。
【０２５５】
このように、特定の実施形態に従って、本発明の改変抗ＳＩＲＰａ抗体は、肺がん、中皮腫がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、肉腫、膵臓がん、頭頸部がん、腎臓がん、胸腺腫、神経膠腫、黒色腫、ならびに血液のがん、例えばリンパ腫（ホジキンリンパ腫ならびに非ホジキンリンパ腫）、白血病、例えばＴ細胞ならびにＢ細胞の急性もしくは慢性のリンパ芽球性白血病（ＡＬＬまたはＣＬＬ）または急性もしくは慢性の骨髄性白血病（ＡＭＬまたはＣＭＬ）、ならびに骨髄腫からなる群から選択されるがんを有する個体を処置するために使用することができる。
【０２５６】
一実施形態では、本発明は、がん（特に炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有する、特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、及び移植機能障害からなる群から選択される病態の処置に使用するための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
に関する。
【０２５７】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象におけるがん（特に炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有するがん、特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、及び移植機能障害からなる群から選択される病態を処置する方法であって、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の有効量を前記対象に投与するステップを含む方法に関する。
【０２５８】
一実施形態では、本発明は、がん（特に炎症性のがん、ならびに浸潤性の骨髄系細胞を有するがん、特に浸潤性のＭＤＳＣならびに／またはＴＡＭ細胞を有するがん）、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、及び移植機能障害からなる群から選択される病態を処置するための医薬の製造における、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用に関する。
【０２５９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義したその使用のための、上記で定義した改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、ＳＩＲＰａ陽性腫瘍を呈する患者に投与される、改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２６０】
一実施形態では、本発明は、ワクチン接種に使用するための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
に関する。
【０２６１】
一実施形態では、本発明は、対象のワクチン接種の方法であって、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の有効量を前記対象に投与するステップを含む、方法に関する。
【０２６２】
一実施形態では、本発明はワクチンの製造における、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用に関する。
【０２６３】
抑制性骨髄系細胞は、特に幼い子供におけるワクチン接種の有効性を制限する。このため、抗ＳＩＲＰａ／ｇは、ワクチン応答において抗ＳＩＲＰａによって提供される利益を制限し、Ｔリンパ球がワクチン接種に応答するのを防止する。
【０２６４】
本発明の改変抗体またはその抗原結合性断片は、対象に、多様な適した経路で、例えば静脈内（ＩＶ）、皮下（ＳＣ）、または筋肉内（ＩＭ）に投与することができる。
【０２６５】
改変抗体またはその抗原結合性断片は、単独または別の治療剤、例えば第２のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片と組み合わせて投与することができる。別の例では、抗体は、治療的細胞組成物等と組み合わせて、別の作用剤、例えば免疫抑制剤、赤血球生成刺激剤（ＥＳＡ）と共に投与される。
【０２６６】
一実施形態では、本発明は、上記で定義したその使用のための改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片であって、第２の治療剤と組み合わせられる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片に関する。
【０２６７】
特に、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、臨床開発中のまたは既に販売されている作用剤による、腫瘍の免疫回避機構を克服するための一部の他の潜在的戦略と組み合わせることができる（Ａｎｔｏｎｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０、６２５８〜６２６８頁、２０１４の表１を参照されたい）：
１−例えば抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１、または抗ＰＤ−Ｌ１分子を使用することによって、適応免疫の阻害を逆転させる（Ｔ細胞チェックポイント経路を遮断する）；
２−例えばアゴニスト抗ＣＤ１３７（抗４−１ＢＢ）抗体またはＣＤ１３７（４−１ＢＢ）リガンドを含むアゴニスト分子を使用してＣＤ１３７（４−１ＢＢ）を標的化することによって、適応免疫を切り替える（アゴニスト分子、特に抗体を使用してＴ細胞同時刺激受容体シグナル伝達を促進する）；
３−自然免疫細胞の機能を改善する；
４−例えばワクチンに基づく戦略を通して免疫系を活性化する（免疫細胞エフェクター機能を強化する）。
【０２６８】
第２の治療剤の投与は、抗ＳＩＲＰａ抗体の投与と同時であり得るか、または同時でなくてもよい。第２の作用剤の性質に応じて、同時投与を、「コンボ」としても知られる組合せ薬（産物）の形態で調製することができる。コンボは、固定用量で製造ならびに供給される単一の投与剤形で組み合わせた２つまたはそれより多くの活性な医薬成分を含む固定用量の組合せである。しかし、投与レジメンならびに／または投与経路は異なり得る。
【０２６９】
好ましい実施形態では、この第２の治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、免疫療法剤、細胞治療剤（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）、抗生物質、ならびにプロバイオティクスからなる群から選択される。前記免疫療法剤はまた、腫瘍抗原を標的とする抗体、特に抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ５２からなる群から選択される抗体であり得る。
【０２７０】
改変抗体は、約１ｎｇ／ｋｇ体重から約３０ｍｇ／ｋｇ体重またはそれより多くまでの有効用量として提供され得る。特定の実施形態では、投薬量は、１μｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１０μｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまで、または１００μｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇまでの範囲であり得る。
【０２７１】
用語「有効用量」または「有効投薬量」または「有効量」は、所望の効果を達成するかまたは少なくとも部分的に達成するために十分な量として定義される。用語「有効用量」は、既に疾患に罹患している患者における疾患ならびにその合併症を治癒するかまたは少なくとも部分的に停止させるために十分な量を包含することを意味する。この使用のために有効な量または用量は、処置される状態、送達される抗体構築物、治療状況ならびに目的、疾患の重症度、以前の治療、患者の病歴ならびに治療剤に対する応答、投与経路、体格（体重、体表面または臓器サイズ）、ならびに／または患者の状態（年齢ならびに全身健康）、及び患者自身の免疫系の全般的状態に依存する。患者に１回または一連の投与によって投与することができるように、最適な治療効果を得るために適切な用量を調節することができる。
【０２７２】
そのような目的のための投与は、必要に応じて、例えば、毎日、週に２回、毎週、月に２回、毎月、または再発時に必要に応じて繰り返され得る。
【０２７３】
一態様では、本発明はまた、特に個別化医療、より詳しくはコンパニオン診断試験における診断試験において使用するための、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
にも関する。
【０２７４】
一実施形態では、本発明は、特に個別化医療、より詳しくはコンパニオン診断試験における診断方法であって、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
を使用する方法に関する。
【０２７５】
一実施形態では、本発明は、特に個別化医療、より詳しくはコンパニオン診断試験における診断試験のための医薬の製造における、
−  上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片、または
−  免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、及び／もしくはＴ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、及び／もしくはＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、及び／もしくはＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、及び／もしくはＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、及び／もしくはマクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、及び／もしくはヒトＴ細胞の活性化を増加させ、
特に、免疫療法剤に連結された重鎖定常ドメインもしくはその断片を含み、前記免疫療法剤が、ヒトＰＤ１、ヒトＰＤＬ１、ヒトＣＤ８０、ヒト４−１ＢＢＬ、その免疫療法剤バリアント、ならびにその免疫療法剤断片、好ましくはその細胞外ドメインからなる群から選択されるタンパク質を含むかもしくはそれからなり、ＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を阻害し、ＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、Ｔ細胞の増殖を阻害せず、好ましくは増加させ、ＣＤ４７のＳＩＲＰｇに対する結合を阻害せず、ＰＢＭＣならびにＴ細胞によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、マクロファージによるＭＩＰ１ａの分泌を増加させ、ヒトＴ細胞の活性化を増加させる、改変抗ＳＩＲＰａ抗体もしくはその抗原結合性断片
の使用に関する。
【０２７６】
一態様では、本発明はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ診断方法、特に個別化医療、より詳しくはコンパニオン診断において使用するために適した診断方法であって、本発明の改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片が、対象から以前に得た試料においてＳＩＲＰａ＋細胞を検出するために、ならびに任意選択でＳＩＲＰａの発現を定量するために使用される、診断方法にも関する。
【０２７７】
一態様では、本発明はまた、診断試験、特に個別化医療またはコンパニオン診断試験において使用するために適した医薬の製造における本発明の改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片の使用にも関する。
【０２７８】
一態様では、本発明はまた、個体から以前に得た生物試料中のＳＩＲＰａの発現ならびに／または発現レベルを決定する手段としての、本発明の少なくとも１つの改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片の使用にも関する。
【０２７９】
一態様では、本発明はまた、対象におけるＳＩＲＰａ陽性細胞を前記対象から以前に得た生物試料から決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ方法であって、
ｉ）本発明の改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片を使用して、前記対象から以前に得た生物試料中のＳＩＲＰａの発現ならびに／または発現レベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するステップ
を含む方法にも関する。
【０２８０】
一態様では、本発明はまた、ＳＩＲＰａが対象、特にがんの対象における処置に対する応答を予測するバイオマーカーとして使用される方法における、本発明の少なくとも１つの改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片の使用、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの使用にも関する。
【０２８１】
一態様では、本発明はまた、特に本発明の改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片による処置に対するがんの対象の応答を予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの方法であって、
−  対象から以前に得た腫瘍試料中のＳＩＲＰａの発現レベルを、特に本発明の改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片によって決定するステップ、及び
−  ＳＩＲＰａの発現レベルを、非応答対象集団におけるＳＩＲＰａの発現レベルを代表する値と比較するステップ
を含み、
対象の腫瘍試料中のＳＩＲＰａの発現レベルが高ければ、対象が処置に応答することを示している
方法にも関する。
【０２８２】
一態様では、本発明はまた、処置に対する対象の応答、特にがんと診断された対象の応答を予測するバイオマーカーとしてのＳＩＲＰａの存在を決定するステップを含む、対象から以前に得た試料におけるＳＩＲＰ＋細胞の存在をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで決定する方法であって、
−  対象から以前に得た腫瘍試料中のＳＩＲＰａの発現レベルを、特に上記で定義した任意の改変抗ヒトＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片によって決定するステップ、及び
−  ＳＩＲＰａの発現レベルを、非応答対象集団におけるＳＩＲＰａの発現レベルを代表する値と比較するステップ
を含み、
対象の腫瘍試料中のＳＩＲＰａの発現レベルが高ければ、対象が処置に応答することを示している、方法にも関する。
【０２８３】
組成物
別の態様では、本発明は、上記の改変抗体またはその抗原結合性断片、ならびに／または本発明の単離された核酸分子または本発明の単離された核酸分子の群、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【０２８４】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、対象または患者、例えば哺乳動物、特にヒトに投与するために適した組成物を包含することを意味する。一般的に、「医薬組成物」は無菌的であり、通常、対象内で不適当な応答を誘発することが可能である混入物質を含まない（例えば、医薬組成物中の化合物は薬学等級である）。医薬組成物は、経口、口腔内、直腸、非経口、腹腔内、皮内、気管内等を含む複数の異なる投与経路を介して、それを必要とする対象または患者に投与するために設計することができる。
【０２８５】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、一般的に安全で、非毒性であり、生物学的にもその他でも不適当でない、医薬組成物を調製するために有用である賦形剤、希釈剤、担体、ならびに補助剤を包含することを意味し、獣医学での使用ならびにヒトの医薬での使用のために許容される賦形剤、希釈剤、担体、ならびに補助剤を含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、そのような賦形剤、希釈剤、担体、及び補助剤の１つならびに１つより多くの両方を含む。
【０２８６】
特に、本発明は、活性成分として上記で定義した改変抗体またはその抗原結合性断片ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【０２８７】
組合せ産物
別の態様では、本発明は、活性成分として上記の改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片ならびに／または本発明の単離された核酸分子もしくは単離された核酸分子の群、及び第２の治療剤を含む治療手段、特に組合せ産物手段であって、前記活性成分が、個別、連続的、または組合せ治療のために、特に組み合わせたまたは連続的使用のために製剤化される治療手段に関する。
【０２８８】
特に、本発明は、医薬の同時、個別、または連続的使用のための、上記で定義した改変抗ＳＩＲＰａ抗体またはその抗原結合性断片ならびに／または本発明の単離された核酸分子もしくは単離された核酸分子の群及び第２の治療剤を含む組合せ産物に関する。
【０２８９】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した組合せ産物であって、第２の治療剤が、化学療法剤、放射線療法剤、細胞療法剤、免疫療法剤、抗生物質、ならびにプロバイオティクスからなる群から選択される組合せ産物に関する。
【０２９０】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した組合せ産物であって、前記免疫療法剤が、治療ワクチン、特に適応免疫細胞（ＴならびにＢリンパ球）の免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤、ならびに抗体−薬物コンジュゲートからなる群から選択される、組合せ産物に関する。
【０２９１】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した組合せ産物であって、適応免疫細胞（ＴならびにＢリンパ球）の前記免疫チェックポイント遮断剤または活性化剤が、抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ１３７、抗ＣＤ２、抗ＣＤ２８、抗ＣＤ４０、抗ＨＶＥＭ、抗ＢＴＬＡ、抗ＣＤ１６０、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＴＩＭ−１／３、抗ＬＡＧ−３、抗２Ｂ４ならびに抗ＯＸ４０、抗ＣＤ４０アゴニスト、ＣＤ４０−Ｌ、ＴＬＲアゴニスト、抗ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ならびにＢ細胞受容体アゴニストからなる群から選択され、特に抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ１、ならびに抗ＣＤ１３７からなる群から選択される、組合せ産物に関する。
【０２９２】
一実施形態では、前記免疫療法剤は、腫瘍抗原を標的とする抗体、特に抗Ｈｅｒ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ５２からなる群から選択される抗体である。
【０２９３】
一態様では、本発明は、上記で定義した組合せ産物であって、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を分化ＭＤＳＣに、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも１つのヒトマーカー、特にＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３からなる群から選択される少なくとも２つのヒトマーカーを発現する分化ＭＤＳＣに、及びより詳しくはヒトマーカーＣＤ８０、ＣＤ８６、ならびにＣＤ１０３を発現する細胞に、及び／またはＣＤ１１ｂを発現する分化ＭＤＳＣに分化させることによって改善または防止することができる任意の状態の処置において同時、個別、または連続的に使用するための上記で定義した組合せ産物に関する。
【０２９４】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を分化ＭＤＳＣに分化させることによって改善または防止することができる任意の状態を処置する方法であって、上記で定義した組合せ産物の有効量を前記対象に同時、個別、または連続的に投与するステップを含む方法に関する。
【０２９５】
一実施形態では、本発明は、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を分化ＭＤＳＣに分化させることによって改善または防止することができる任意の状態を処置するための医薬の製造における上記で定義した組合せ産物の使用に関する。
【０２９６】
一態様では、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態の処置において同時、個別、または連続的に使用するための上記で定義した組合せ産物に関する。
【０２９７】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象における炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態を処置する方法であって、上記で定義した組合せ産物の有効量を前記対象に同時、個別、または連続的に投与するステップを含む方法に関する。
【０２９８】
一実施形態では、本発明は、炎症促進性マクロファージへのマクロファージの極性化を改変することによって改善または防止することができる任意の状態を処置するための医薬の製造における上記で定義した組合せ産物の使用に関する。
【０２９９】
一態様では、本発明は、がん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植機能障害からなる群から選択される病態の処置において、またはワクチン接種において同時、個別、もしくは連続的に使用するための上記で定義した組合せ産物に関する。
【０３００】
一実施形態では、本発明は、それを必要とする対象のがん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植機能障害からなる群から選択される病態を処置する方法であって、上記で定義した組合せ産物の有効量を前記対象に同時、個別、または連続的に投与するステップを含む方法に関する。
【０３０１】
一実施形態では、本発明は、がん、感染性疾患、慢性炎症性疾患、自己免疫疾患、神経疾患、脳の損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症ショック、慢性感染性疾患（例えば、シュードモナスまたはＣＭＶによる）、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、ならびに移植機能障害からなる群から選択される病態を処置するための、またはワクチン接種において使用するための医薬の製造における上記で定義された組合せ産物の使用に関する。
【０３０２】
核酸
別の態様では、本発明は、上記で定義された改変抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子または単離された核酸分子の群に関する。
【０３０３】
本明細書で使用される場合、核酸分子は、二本鎖ならびに一本鎖、直線状ならびに環状であり得る。好ましくは、核酸分子は、好ましくは宿主細胞に含まれるベクターに含まれる。
【０３０４】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した改変抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子または単離された核酸分子の群であって、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、ならびに配列番号６９から選択される少なくとも１つの配列、及び免疫療法剤、特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアントならびにその断片、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントならびにその断片をコードする少なくとも１つの配列を含むかまたはそれからなる、単離された核酸分子または単離された核酸分子の群に関する。
【０３０５】
一実施形態では、本発明は、上記で定義した抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子または単離された核酸分子の群であって、
−  前記抗体の重鎖可変ドメインをコードする配列であって、好ましくは、
−  配列番号５８、配列番号５９、もしくは配列番号６０、
−  配列番号６１もしくは配列番号６２、ならびに
−  配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、もしくは配列番号６６
を含む配列、及び／または
−  前記抗体の軽鎖可変ドメインをコードする配列であって、好ましくは、
−  配列番号６７、
−  配列番号６８、ならびに
−  配列番号６９
を含む配列、及び
免疫療法剤、特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、ならびにそのバリアント、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、ならびにそのバリアントをコードする少なくとも１つの配列
を含む、前記核酸分子に関する。
【０３０６】
【表１８】
2020536573.tif 000019
【０３０７】
特に、本発明は、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、ならびに配列番号５５から選択される配列、及び特にＰＤＬ１、ＰＤ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬ、そのバリアントならびにその断片、より詳しくはＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、４−１ＢＢＬ、そのバリアントならびにその断片から選択される免疫療法剤をコードする少なくとも１つの配列を含むかまたはそれからなる核酸分子に関する。
【０３０８】
【表１９】
2020536573.tif 000020
【０３０９】
【表２０】
2020536573.tif 000021
【０３１０】
特に、本発明は，以下の配列番号：配列番号９４、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする配列を含むかまたはそれからなる核酸分子に関する。
【０３１１】
特に、本発明は、
−  配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、ならびに配列番号１８５からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする配列、及び
−  配列番号５５の配列
を含むかまたはそれからなる核酸分子に関する。
【０３１２】
特に、本発明は、
−  配列番号５２の配列、及び
−  配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、ならびに配列番号１７７からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする配列
を含むかまたはそれからなる核酸分子に関する。
【０３１３】
ベクター
別の態様では、本発明は、上記で定義した核酸分子を含むベクターに関する。
【０３１４】
本明細書で使用される場合、「ベクター」は、遺伝子材料を細胞に移入するための媒体として使用される核酸分子である。用語「ベクター」は、プラスミド、ウイルス、コスミド、ならびに人工染色体を包含する。一般的に、操作されたベクターは、複製開始点、マルチクローニングサイト、ならびに選択可能マーカーを含む。ベクターそのものは、一般的に、挿入物（導入遺伝子）ならびにベクターの「骨格」として作用するより大きい配列を含むヌクレオチド配列、一般的にＤＮＡ配列である。現代のベクターは、導入遺伝子挿入物及び骨格の他にさらなる特色：プロモーター、遺伝子マーカー、抗生物質抵抗性、レポーター遺伝子、標的化配列、タンパク質精製タグを包含し得る。発現ベクター（発現構築物）と呼ばれるベクターは、詳しくは、標的細胞において導入遺伝子を発現させるためのベクターであり、一般的に制御配列を有する。
【０３１５】
宿主細胞
別の態様では、本発明は、上記で定義したベクターならびに／または本発明の単離された核酸分子もしくは単離された核酸分子群を含む単離された宿主細胞に関する。
【０３１６】
本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、ベクター、外因性の核酸分子、ならびに本発明の抗体構築物をコードするポリヌクレオチドの受容物、及び／または抗体構築物そのものの受容物であり得るか、または受容物である任意の個々の細胞または細胞培養物を含むと意図される。それぞれの材料の細胞への導入は、形質転換、トランスフェクション等によって実行することができる。用語「宿主細胞」はまた、単一の細胞の子孫または可能性がある子孫を含むと意図される。適した宿主細胞は、原核細胞または真核細胞を含み、同様に細菌、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、ならびに動物細胞、例えば昆虫細胞ならびに哺乳動物細胞、例えばマウス、ラット、ウサギ、マカク、またはヒトの細胞を含むがこれらに限定されない。
【０３１７】
キット
別の態様では、本発明は、
−  上記で定義した改変抗体またはその抗原結合性断片、
−  前記改変抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子
−  前記核酸分子を含むベクター、及び／または
−  前記ベクターを含む細胞
を含むキットに関する。
【０３１８】
便宜上、本発明の改変抗体は、キットで、すなわち包装された試薬の組合せで提供され得る。
【０３１９】
本発明の文脈において、用語「キット」は、容器、受容物、またはその他において共に包装された２つまたはそれより多くの構成要素（そのうち１つは、本発明の抗体またはその抗原結合性断片、核酸分子、ベクターまたは細胞に対応する）を意味する。したがって、キットは、単一の単位として販売することができる、ある特定の目標を達成するために十分である産物ならびに／または器具の組として記述することができる。
【０３２０】
キットは、投与のための適した投薬量で本発明の改変抗体構築物を含有する、任意の適切な形状、サイズ、ならびに材料の１つまたは複数の受容物（例えば、バイアル、アンプル、容器、シリンジ、ボトル、バッグ）を含み得る。キットはさらに、使用説明書（例えば、リーフレットまたは説明マニュアルの形態）、本発明の改変抗体構築物を投与する手段、例えばシリンジ、ポンプ、注入器等、本発明の抗体構築物を再構成する手段、ならびに／または本発明の抗体構築物を希釈する手段を含有し得る。
【０３２１】
一実施形態では、本発明は、単一用量の投与単位のための上記で定義したキットに関する。本発明のキットはまた、乾燥／凍結乾燥改変抗体構築物を含む第１の受容物ならびに水性製剤を含む第２の受容物を含有し得る。本発明のある特定の実施形態では、シングルチャンバーならびにマルチチャンバーの充填済シリンジ（例えば、液体シリンジならびにリソシリンジ）を含有するキットが提供される。
【０３２２】
抗体を製造する方法
ある態様では、本発明は、抗体、特に本発明の抗体を製造する方法であって、非ヒト動物、特に非ヒト哺乳動物を、上記で定義した少なくとも１つの抗原に対して免疫するステップ、及び特に前記免疫した非ヒト動物から得られた血清を収集して、前記抗原に対する抗体を得るステップを含む方法にも関する。
【０３２３】
特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して非ヒト動物を免疫するステップ、及び特に前記免疫した非ヒト動物から得られた血清を収集して、前記抗原に対する抗体を得るステップを含む方法にも関する。
【０３２４】
特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列、ならびに配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）または配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなる群から選択されるヒトＳＩＲＰａの少なくとも１つのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して非ヒト動物を免疫するステップ、及び特に前記免疫した非ヒト動物から得られた血清を収集して、前記抗原に対する抗体を得るステップを含む方法にも関する。
【０３２５】
特に、本発明はまた、抗体を製造する方法であって、配列番号１（ＳＬＩＰＶＧＰ）、配列番号２（Ｇ／ＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨ）、配列番号３（ＫＦＲＫＧＳＰＤ［ＤＶ］／［Ｔ］Ｅ）、配列番号４（ＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦ）、配列番号５（ＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧ）、ならびに配列番号６（ＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥ）からなるヒトＳＩＲＰａのエピトープ配列を含むかまたはそれからなる抗原に対して非ヒト動物を免疫するステップ、及び特に前記免疫した非ヒト動物から得られた血清を収集して、前記抗原に対する抗体を得るステップを含む方法にも関する。
【０３２６】
特に、本発明はまた、上記で定義した抗体を製造する方法であって、抗体を既に定義した免疫療法剤に連結させるステップを含む方法にも関する。
【０３２７】
改変抗体を選択する方法
一態様では、本発明は、本発明の改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片を選択する方法であって、以下のステップ：
ａ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がＳＩＲＰａ、特に上記で定義した抗原に結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例１、２、ならびに３に記載する方法に従って）、
ｂ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がＳＩＲＰｂに結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例７ならびに８に記載する方法に従って）、
ｃ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がＳＩＲＰｇに結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例９ならびに１０に記載する方法に従って）、
ｄ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰａに対する結合を阻害する能力を試験するステップ（例えば、実施例４ならびに５に記載する方法に従って）；
ｅ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がＴ細胞に結合する能力を試験するステップ（例えば、実施例１２に記載する方法に従って）；
ｆ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がＴ細胞の増殖を阻害しない能力、好ましくはＴ細胞の増殖を増加させる能力を試験するステップ（例えば、実施例１３に記載する方法に従って）；
ｇ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を阻害する能力を試験するステップ（例えば、実施例１１に記載する方法に従って）；
ｈ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がヒトＰＢＭＣならびに／またはヒトＴリンパ球によるＴＮＦａの分泌を増加させる能力を試験するステップ（例えば、実施例２８または３１に記載する方法に従って）；
ｉ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させる能力を試験するステップ（例えば、実施例２９に記載する方法に従って）；
ｊ．改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片がヒトＴ細胞の活性化を増加させる能力を試験するステップ（例えば、実施例３５に記載する方法に従って）
の少なくとも１つ；
及び任意選択で以下のステップ：
−  ＳＩＲＰａ、特に上記で定義した抗原に特異的に結合し、ならびにＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を有意に阻害し、ならびにヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、ならびに／またはヒトＴ細胞に特異的に結合せず、ならびに／またはヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害せず、好ましくは増加させ、ならびに／またはヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を有意に阻害せず、ならびに／またはヒトＰＢＭＣならびに／もしくはヒトＴリンパ球によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ならびに／またはヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、ならびに／またはヒトＴ細胞の活性化を増加させる、
より詳しくは、ＳＩＲＰａ、特に上記で定義した抗原に特異的に結合し、ならびにＣＤ４７のＳＩＲＰａに対する結合を有意に阻害し、ならびにヒトＳＩＲＰｇに特異的に結合せず、ならびにヒトＴ細胞に特異的に結合せず、ならびにヒトＴ細胞の増殖を有意に阻害せず、好ましくは増加させ、ならびにヒトＣＤ４７のヒトＳＩＲＰｇに対する結合を有意に阻害せず、ならびにヒトＰＢＭＣならびに／またはヒトＴリンパ球によるＴＮＦａの分泌を増加させ、ならびにヒトＰＢＭＣによるＩＦＮｇの分泌を増加させ、ならびにヒトＴ細胞、特にヒトＴリンパ球の活性化を増加させる、改変抗体またはそのような抗体の抗原結合性断片を選択するステップ
を含むかまたはそれからなる方法に関する。
【０３２８】
本発明の改変抗体を選択する方法は、有利には、本発明に従う抗体を製造する方法においてさらに実施することができる。
【０３２９】
以下の図面及び実施例は、当業者に、本発明を作製及び使用する方法に関する完全な開示及び説明を提供するために述べられ、本発明者らが本発明として見なす範囲を制限することを意図せず、以下の実験が、実施された全てまたは唯一の実験であることを表すと意図しない。本発明は、その特定の実施形態を参照して記載されているが、様々な変更を行ってもよく、本発明の真の精神及び範囲から逸脱することなく均等物を置換してもよいことは当業者によって理解されるはずである。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスのステップまたは複数のステップ、本発明の目的、精神、ならびに範囲に適合するように多くの修飾が行われ得る。そのような改変は全て、添付の特許請求の範囲内であると意図される。
【０３３０】
実施例
以下の実施例では、抗体「１８Ｄ５」（または「ｍ１８Ｄ５」）はマウス抗体１８Ｄ５に対応し、「キメラ」抗体はキメラマウス／ヒト１８Ｄ５抗体に対応し、抗体「ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、ＨＥＬＡ、ＨＥＬＢ、ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ及びＨＥＦＬＢ」は特異的ヒト化１８Ｄ５バリアントに対応する。抗体６Ｇ１０及び１２Ｄ７は出願人に帰属する；これらの抗体はｍ１８Ｄ５と同じ方法によって得られ、対照として使用される。これらの対照抗体はＩｇＧ２ａマウスモノクローナル抗ヒトＳＩＲＰａ抗体である。
さらに、市販の抗体が比較のために使用された。第１のものは、ＳＥ７Ｃ２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ｓｃ−２３８６３）と名付けられた抗ＳＩＲＰａ抗体；第２の抗体は、ＳＩＲＰα／β両方を認識することができ、ＳＥ５Ａ５（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＢＬＥ３２３８０２）と名付けられた抗体；及び第３のものは、Ｋｗａｒ２３（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｌａｂｓ）と名付けられた抗ヒトＳＩＲＰａ抗体である。ＰＣＴ出願国際公開第２０１３０５６３５２号に記載のトロント大学からのＳＩＲＰ２９と名付けられた抗ヒトＳＩＲＰａ抗体も、比較のために使用された。
【０３３１】
改変抗ＳＩＲＰａ抗体を作出するため、ヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体ＩｇＧ４ｍ（ＨＥＦＬＢ）、重鎖または軽鎖の配列が抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端に共刺激または共阻害免疫チェックポイントタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合された。ＨＥＦＬＢ重鎖上の各異なるタンパク質の融合のため、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬの細胞外ドメインが合成され、ＨＥＦＬＢのヒト化重鎖及びヒンジ領域を安定化する変異したヒトＩｇＧ４のＦｃ（Ｓ２２８Ｐ）を含有するＶＨ−ｐＦｕｓｅＣＨＩｇ−ｈＧ４ｍ発現プラスミドにＮｓｉＩによってクローニングされた（ＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｐＦｕｓｅＣＨＩｇ−ｈＧ４ｍベクター、Ｔｏｕｌｏｕｓｅ）。ＨＥＦＬＢの軽鎖上の各異なるタンパク質の融合のため、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬまたはＩＣＯＳＬの細胞外ドメインが合成され、ＨＥＦＬＢのヒト化軽鎖及びヒトＣＬカッパを含有するＶＬ−ｐＦｕｓｅ２ＣＬＩｇ−ｈｋ発現プラスミドにＡｃｃＩ／ＮｈｅＩによってクローニングされた（ＩｎｖｉｖｏｇｅｎのｐＦｕｓｅ２ＣＬＩｇ−ｈｋ、Ｔｏｕｌｏｕｓｅ）。
【０３３２】
ＨＥＫ２９３Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ細胞において、野生型またはタンパク質と融合したＶＨｈＦｃＧ４を含有するプラスミドは、リポフェクタミン法により、ＶＬ−ＣＬｋ  ｗｔを含有するプラスミドとコトランスフェクトされ（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ）；野生型ＶＨｈＦｃＧ４は、野生型またはタンパク質の１つと融合したＶＬ−ＣＬｋを含有するプラスミドとコトランスフェクトされた（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ）。４８〜７２時間のインキュベーション後、上清が回収され、クエン酸０．１Ｍ  ｐＨ３溶出緩衝液によるプロテインＡクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐ、ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）での親和性によって精製された。精製された抗体は、ＰＢＳ中で透析され、濃縮された。各抗体は、サンドウィッチＥＬＩＳＡによって定量され、ＳＩＲＰａまたはリガンド様抗原に対する活性アッセイで試験された。
【０３３３】
実施例１〜２３は、未改変抗ＳＩＲＰａ  １８Ｄ５バリアントによって得られた実験結果を示す（図１〜２１）。
【０３３４】
実施例２４〜３２は、異なる免疫療法剤に、その重鎖またはその軽鎖上で、Ｃ末端に連結した改変ＨＥＦＬＢバリアントによって得られた実験結果を示す（図２２〜３０）。
【実施例１】
【０３３５】
ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａへの抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析
方法：抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性は、ＥＬＩＳＡによって評価された。キメラ抗体、ヒト化抗体、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３によるＥＬＩＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、精製された抗体が添加され、結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、従来の方法によって曝露された。
【０３３６】
マウス抗体によるＥＬＩＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１０９７５−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、精製された抗体が添加され、結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＦｃ鎖（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１５−０３６−０７１）が添加され、従来の方法によって曝露された。
【０３３７】
結果：図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃに示すように、ＥＬＩＳＡによって測定されたＳＩＲＰａへの異なる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性は、第１の実験において、キメラ抗体では２．９ｎｇ／ｍｌ、ＨＡＬＡでは３．９ｎｇ／ｍｌ、ＨＦＬＡでは５．１ｎｇ／ｍｌ、ＨＦＬＢでは４．０ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＦＬＡでは７．１ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＦＬＢでは４．４ｎｇ／ｍｌ、第２の実験において、キメラ抗体では４．０６ｎｇ／ｍｌ、ＨＣＬＡでは５．６０ｎｇ／ｍｌ、ＨＣＬＢでは５．５９ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＬＡでは４．６１ｎｇ／ｍｌ、ＨＥＬＢでは４．１３ｎｇ／ｍｌ、及び第３の実験において、キメラ抗体では２．７４ｎｇ／ｍｌ、ＨＡＬＢでは２．５３ｎｇ／ｍｌ、ＨＢＬＡでは２．６８ｎｇ／ｍｌ、ＨＢＬＢでは２．９５ｎｇ／ｍｌの有効濃度（ＥＣ５０）を示した。これらの結果は、試験した本発明の抗体が、他の公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９（３．７ｎｇ／ｍｌ）及びＫｗａｒ２３（３．３ｎｇ／ｍｌ）と比較してＥＬＩＳＡによって良好なＳＩＲＰａ結合剤であることを示す。これらの結果は、本発明の全ての抗体によって認識されるエピトープは、ＳＩＲＰａがプラスチックウェル上にコートされる場合に接触できることを示す。
【０３３８】
図１Ｄに示すように、ＥＬＩＳＡによって測定されたＳＩＲＰａへの異なる抗ＳＩＲＰａ抗体の結合活性は、ＳＥ５Ａ５では０．１６ｎＭ（２４ｎｇ／ｍｌ）及びクローンｍ１８Ｄ５では０．０６ｎＭ（９ｎｇ／ｍｌ）の有効用量（ＥＤ５０）を示した。クローン６Ｇ１０及び１２Ｄ７は、ＥＬＩＳＡアッセイによってＳＩＲＰａを結合しないようであった。これらの結果は、クローンｍ１８Ｄ５が、ＥＬＩＳＡにより市販の抗体と比較して良好なＳＩＲＰａ結合剤であることを示し、このクローンによって認識されるエピトープは、クローン６Ｇ１０及び１２Ｄ７と比較してＳＩＲＰａがプラスチックウェル上にコートされる場合に接触できることを示す。
【実施例２】
【０３３９】
ＳＩＲＰａへの抗ＳＩＲＰａ抗体のバイオセンサー親和性測定
方法：組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、５μｇ／ｍｌ（５００ＲＵ）でＣＭ５センサーチップ（ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ；Ｆｒａｎｃｅ）に固定化され、流速４０μｌ／分で異なる濃度で適用された。分析は、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧｅＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって実施された。値は、３分間の会合期間（ｋａ）に続く１０分間の解離期間（ｋｄ）後に測定され、親和定数（ＫＤ）が決定された。
結果：図２に示すように、本発明の抗体はＳＩＲＰａに強い親和性（ＫＤ）を有し（１．９３×１０−１０Ｍ〜３．６７×１０−１０Ｍ）、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３の親和性と同等であり、市販の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＥ７Ｃ２及びＳＥ５Ａ５の親和性よりも良い。
【実施例３】
【０３４０】
細胞蛍光測定によるヒト単球でのＳＩＲＰａ結合アッセイ
方法：ヒト単球での抗ＳＩＲＰａ抗体の結合を測定するため、ヒトＦｃ受容体結合阻害剤（ＢＤ  ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５６４２２０）がまず、室温で３０分間添加され、ヒト単球のヒトＦｃ受容体を遮断し、バックグラウンドを低減した。次いで、抗体は４℃で３０分間インキュベートされ、ＰＥ−標識抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ４０９３０３）によって４℃で３０分間染色される前に洗浄された。マウス抗体では、ＰＥ標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７１５−１１６−１５１）が使用された。試料は、ＢＤ  ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ  ＩＩ細胞蛍光測定器で分析された。
結果：図３に示すように、結果は、ヒト単球での本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体の強い結合及び結合剤の公知の抗ＳＩＲＰａ抗体Ｋｗａｒ２３、ＳＥ７Ｃ２、及びＳＥ５Ａ５結合（ＭＦＩ（平均蛍光強度）によって測定された）を示す。
【実施例４】
【０３４１】
アンタゴニストＥＬＩＳＡアッセイによるＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合分析
方法：競合ＥＬＩＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化された。キメラ抗体、ヒト化抗体、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３のため、精製された抗体（異なる濃度）は最終６μｇ／ｍｌ（固定濃度）のビオチン化ヒトＣＤ４７Ｆｃ（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ；Ｆｒａｎｃｅ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：＃ＣＤ７−Ｈ８２Ｆ６）と混合され、３７℃で２時間競合結合を測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｎｇ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＳＡ−５００４）が添加され、ビオチン−ＣＤ４７Ｆｃ結合が検出され、従来の方法によって曝露された。マウス抗体では、精製された抗体（異なる濃度）は０．０４μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）と混合され、３７℃で２時間競合結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＦｃ鎖（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、ＣＤ４７Ｆｃ結合が検出され、従来の方法によって曝露された。
結果：図４に示すように、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用へのアンタゴニスト活性を有する。特に、キメラ抗体、ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ及びＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰ２９及び市販の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＥ５Ａ５のアンタゴニスト活性と比較してよりアンタゴニスト活性を有することが観察される。
【実施例５】
【０３４２】
アンタゴニスト細胞蛍光測定アッセイによるヒト単球でのＣＤ４７とヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合分析
方法：ヒト単球でのＣＤ４７とヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体との間の競合を測定するため、精製された抗体が４℃で１５分間単球に添加され、次いで最終５μｇ／ｍｌのビオチン化ヒトＣＤ４７Ｆｃ（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ；Ｆｒａｎｃｅ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：＃ＣＤ７−Ｈ８２Ｆ６）と混合され、４℃で３０分間インキュベートされ、競合結合抗体が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ＰＥ標識ストレプトアビジン（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５４０６１）が４℃で１５分間添加され、ビオチン−ＣＤ４７Ｆｃ結合が検出され、ＢＤ  ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ  ＩＩ細胞蛍光測定器で分析された。
ヒト単球でのＣＤ４７とマウス抗ｈＳＩＲＰａ抗体との間の競合を測定するため、精製された抗体が４℃で１５分間単球に添加され、次いで最終５μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）と混合され、４℃で１５分間インキュベートされ、競合結合抗体が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ＦＩＴＣ標識抗ヒトＦｃ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＩＭ１６２７）が４℃で１５分間添加され、ＣＤ４７Ｆｃ結合が検出され、ＢＤ  ＬＳＲＩＩまたはＣａｎｔｏ  ＩＩ細胞蛍光測定器で分析された。
結果：図５に示すように、本発明の抗体は、ヒト単球でのＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用へのアンタゴニスト活性を有する。
【実施例６】
【０３４３】
ＳＰ−ＤとのＢｌｉｔｚ法競合
方法：この方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃ２２−２  Ｎｏ６１０１０−１）によって実施された。
状態Ａ：ＳＩＲＰａ＋抗ＳＩＲＰａ抗体＋界面活性剤タンパク質Ｄ（ＳＰ−Ｄ）。第１のステップでは、ＳＩＲＰａ（Ｈｉｓ）組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、ヒスチジンテイルによって３０秒間Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １８−００２９）に１０μｇ／ｍｌで固定化された。第２のステップでは、抗ＳＩＲＰａ抗体は１２０秒間２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加された。次いで、ヒトＳＰ−Ｄ（Ｒ  ｅｔ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １９２０−ＳＰ−０５０）は、１２０秒間抗ＳＩＲＰａ抗体と競合して１００μｇ／ｍｌで会合された。ＳＰ−Ｄの解離は、１２０秒間動態緩衝液中で行われた。データの分析は、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ  １．２ソフトウェアによって行われ、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を算出し、親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。
状態Ｂ：ＳＩＲＰａ＋界面活性剤タンパク質Ｄ（ＳＰ−Ｄ）＋抗ＳＩＲＰａ抗体。第１のステップでは、Ｓｉｒｐ−ａ（Ｈｉｓ）組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、ヒスチジンテイルによって３０秒間Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １８−００２９）に１０μｇ／ｍｌで固定化された。第２のステップでは、ヒトＳＰ−Ｄ（Ｒ  ｅｔ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １９２０−ＳＰ−０５０）は、１２０秒間１００μｇ／ｍＬで添加された。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体は１２０秒間２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で会合された。抗ＳＩＲＰａ抗体の解離は、１２０秒間動態緩衝液中で行われた。分析データは、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ  １．２ソフトウェアによって作成され、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を算出し、親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。
結果：図６に示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体１８Ｄ５の結合は、ＳＰ−ＤのＳＩＲＰａへの結合を遮断せず、ＳＰ−Ｄの結合は、１８Ｄ５のＳＩＲＰａへの結合を遮断しない。したがって、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａとＳＰ−Ｄとの間の相互作用を阻害しない。
【実施例７】
【０３４４】
Ｂｌｉｔｚ法によるＳＩＲＰｂへの抗ＳＩＲＰａ抗体の親和性
方法：この方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃ２２−２  Ｎｏ６１０１０−１）によって実施された。組換えｈＳＩＲＰｂ−Ｈｉｓ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＡＢＩＮ３０７７２３１）は、ヒスチジンテイルによって３０秒間Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １８−００２９）に１０μｇ／ｍｌで固定化された。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体は１２０秒間２０μｇ／ｍｌで会合された。抗ＳＩＲＰａの解離は、１２０秒間動態緩衝液中で行われた。データの分析は、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ  １．２ソフトウェアによって行われ、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を算出し、親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。
結果：図７Ａに示すように、本発明の抗体は、ＳＩＲＰａと比較してＳＩＲＰｂに低い親和性を有する。特に、キメラ抗体、ＨＦＬＡ、ＨＦＬＢ、ＨＥＦＬＡ、ＨＥＦＬＢは、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３と比較してＳＩＲＰｂに低減した親和性を有する。
【実施例８】
【０３４５】
ＳＩＲＰｂでの抗ＳＩＲＰ抗体のＥＬＩＳＡ結合
方法：活性ＥＩｌＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰｂ−Ｈｉｓ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＡＢＩＮ１４６６５５７）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、１μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、精製された抗体が添加され、結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、従来の方法によって曝露された。
結果：図７Ｂに示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体はＳＩＲＰｂに低い親和性を有する。顕色は、（マウス抗体によって曝露された）Ｂ４Ｂ６を除く全ての抗体に対してロバ抗ヒト抗体により実施されたことを示し、抗ＳＩＲＰｂ抗体Ｂ４Ｂ６で得られたシグナルが抗ＳＩＲＰａ抗体で得られたシグナルより低いことを説明し得る。
【実施例９】
【０３４６】
Ｂｌｉｔｚ法によるＳＩＲＰｇへの抗ＳＩＲＰａ抗体の親和性分析
方法：この方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃ２２−２  Ｎｏ６１０１０−１）によって実施された。組換えｈＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１８２８−Ｈ０８Ｈ）は、ヒスチジンテイルによって３０秒間Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １８−００２９）に１０μｇ／ｍｌで固定化された。次いで、抗ＳＩＲＰａ抗体は１２０秒間２０μｇ／ｍｌで会合された。抗ＳＩＲＰａ抗体の解離は、１２０秒間動態緩衝液中で行われた。データの分析は、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ  １．２ソフトウェアによって行われ、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を算出し、親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。
結果：図８Ａに示すように、本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰｇに低い親和性を有する。この親和性は、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３の親和性よりもわずかに弱い。しかしながら、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３と比較して抗ＳＩＲＰａ抗体の高い解離速度定数（Ｋｄ）により、動的特性は抗ＳＩＲＰａ抗体、ＳＩＲＰ２９とＫｗａｒ２３との間で異なる。特に、ＨＦＬＢは、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３のＫＤ値と比較して２ｌｏｇ差に等しい１．０３６×１０−７ＭのＫＤ値によりＳＩＲＰｇに最も低い親和性を有する。
【実施例１０】
【０３４７】
ＳＩＲＰｇへの抗ＳＩＲＰ抗体のＥＬＩＳＡ結合
方法：活性ＥＬＩＳＡアッセイのため、ｈＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１８２８−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、１μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、精製された抗体が添加され、結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、従来の方法によって曝露された。
結果：図８Ｂに示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体ＨＥＦＬＢはＳＩＲＰｇに結合しないが、公知の抗ＳＩＲＰａ抗体ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３はＳＩＲＰｇに顕著な結合を示す。
【実施例１１】
【０３４８】
ＳＩＲＰｇ：ＳＩＲＰｇ＋抗ＳＩＲＰａ抗体＋ＣＤ４７に対するＣＤ４７によるＢｌｉｔｚ法競合
方法：この方法は、Ｂｌｉｔｚ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃ２２−２  Ｎｏ６１０１０−１）によって実施された。第１のステップでは、ｈＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１８２８−Ｈ０８Ｈ）は、ヒスチジンテイルによって３０秒間Ｎｉ−ＮＴＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １８−００２９）に１０μｇ／ｍｌで固定化された。第２のステップでは、抗ＳＩＲＰａ抗体は１２０秒間２０μｇ／ｍｌ（飽和濃度）で添加された。次いで、ヒトＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）は、１２０秒間抗ＳＩＲＰａ抗体と競合して１００μｇ／ｍｌで会合された。ＣＤ４７Ｆｃの解離は、１２０秒間動態緩衝液中で行われた。分析データは、Ｂｌｉｔｚ  ｐｒｏ  １．２ソフトウェアによって行われ、これは会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）を算出し、親和定数ＫＤ（ｋａ／ｋｄ）を決定した。
結果：図９に示すように、本発明の抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢはＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合と競合しない。反対に、他の公知の抗体ＳＩＲＰ２９、特にｋｗａｒ２３はＣＤ４７のＳＩＲＰｇへの結合と競合する。
【実施例１２】
【０３４９】
フローサイトメトリーによる血液細胞への結合
方法：実験は、ヒト血液細胞での抗ＳＩＲＰａ抗体の結合を分析するために曝露された。ＣＤ３陽性Ｔリンパ球、赤血球及び血小板は、健康なボランティアからの精製された血液から抽出された。細胞は、次いで１０μｇ／ｍｌの各試験抗体によって４℃で３０分間染色され、洗浄され、次いで二次蛍光抗ＩｇＧ抗体によって４℃でさらに３０分間染色された。洗浄後、細胞はＣＡＮＴＯ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）フローサイトメーターで分析された。
結果：図１０に示すように、Ｔ細胞、赤血球及び血小板はＣＤ４７陽性であり、偏在的に発現され、それらはＢ６Ｈ１２抗体によって染色された。ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３抗体は、ＬＳＢ２．２０（特異的抗ＳＩＲＰγ抗体）のように、ＳＩＲＰγを発現することが公知のＴ細胞に結合する。しかしながら、抗ＳＩＲＰａヒト化１８Ｄ５抗体は、Ｔ細胞に結合しない（同じ結果が試験した４つの異なる１８Ｄ５ヒト化バリアントによって得られた）。赤血球及び血小板はＳＩＲＰａを発現せず、したがって、それらはヒト化１８Ｄ５抗体及び他の抗ＳＩＲＰａ抗体によって曝露されなかった。この結果は、公知のＳＩＲＰａ抗体と比較して、生細胞上のＳＩＲＰａに対するヒト化１８Ｄ５抗体の特異性を示す。
図１１に示すように、Ｔ細胞は、ヒト化１８Ｄ５抗体（同じ結果が試験した５つの異なる１８Ｄ５ヒト化バリアントによって得られた）及びキメラ１８Ｄ５（データは示さない）によって染色されないが、ＳＩＲＰ２９及びＫｗａｒ２３によって７０％より多くのＴ細胞が染色される。
【実施例１３】
【０３５０】
ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞増殖
方法：ｈＰＢＭＣは、健康なボランティアのバフィーコートから単離された。ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞は、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用する陽性選択によって選択され、９６丸底ウェルプレートに播種された（５００００個の細胞／ウェル）。増殖シグナルは、３日間１  Ｔ細胞に対して１ビーズの比で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コートしたマイクロビーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、または５日間１  ｍＤＣに対して５  Ｔ細胞でｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された同種成熟樹状細胞のいずれかによって、または５日間異なる濃度のツベルクリン未精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）によって提供された。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的化する抗体は、飽和濃度（１０μｇ／ｍＬ）で、増殖試験の開始時から添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
結果：図１２に示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体ＨＡＬＡ及びＨＥＦＬＢバリアントは、Ｔ細胞が抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８ビーズによって（Ａ）（Ｃ）、または同種樹状細胞によって（Ｂ）（Ｄ）、またはＰＰＤ（Ｅ）によって刺激される場合、Ｔ細胞増殖を阻害しないが、抗ＳＩＲＰａ  Ｋｗａｒ２３は、Ｔ細胞が同種樹状細胞によって刺激される場合、Ｔ細胞増殖を阻害する。予想した通り、抗ＣＤ４７抗体及び抗ＳＩＲＰｇ抗体は、Ｔ細胞増殖の阻害剤である。
【実施例１４】
【０３５１】
マウスＣＤ８＋Ｔ細胞増殖
方法：脾細胞は、ナイーブマウスから単離された。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用する陽性選択によって選択され、９６丸底ウェルプレートに播種された（５００００個の細胞／ウェル）。増殖シグナルは、３日間、１  Ｔ細胞に対して１ビーズの比で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コートしたマイクロビーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって提供された。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的化するマウス抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）及び抗ＣＤ４７抗体（ＭＩＡＰ３１０）は、飽和濃度（１０μｇ／ｍｌ）で、増殖試験の開始時から添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
結果：図１３に示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体または抗ＣＤ４７抗体の、マウスＴ細胞の増殖への阻害はない。この結果は、マウスがＳＩＲＰｇ遺伝子を発現しないという事実によって説明される。したがって、マウスは、ＳＩＲＰｇに結合しない特異的な抗ＳＩＲＰａ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏでの効果を予測するモデルとして使用され得る。対照的に、抗ＣＤ４７または非選択的抗ＳＩＲＰａ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏでの前臨床の有効性は、特に獲得免疫及びメモリーＴリンパ球の生成に関して、ヒトの場合を予測できない。
【実施例１５】
【０３５２】
ヒトＴ細胞増殖
方法：ｈＰＢＭＣは、健康なボランティアのバフィーコートから単離された。ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞は、ＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用する陽性選択によって選択され、９６丸底ウェルプレートに播種された（５００００個の細胞／ウェル）。増殖シグナルは、３日間、１  Ｔ細胞に対して１ビーズの比で抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８コートしたマイクロビーズ、または５日間、１  ｍＤＣに対して５  Ｔ細胞でｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された同種成熟樹状細胞のいずれかによって提供された。抗体は、飽和濃度（抗ＣＤ４７と抗ＳＩＲＰａ抗体では５μｇ／ｍｌ、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体、及び組換え４−１ＢＢＬでは２．５μｇ／ｍｌ）で、増殖試験の開始時から添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
結果：図１４に示すように、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１抗体、及び組換え４−１ＢＢＬは、ヒトＴ細胞の増殖にブースト効果を有するが、抗ＣＤ４７は、ヒトＴ細胞の増殖に負の効果を有する。特に、抗ＣＤ４７抗体は、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、または４−１ＢＢアゴニスト剤のヒトＴ細胞免疫刺激の有効性を防止する。抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢは、Ｔ細胞の増殖に顕著な効果を持たない。
【実施例１６】
【０３５３】
マウスにおける抗腫瘍効果
方法：マウスは、キシラジン／ケタミンのカクテルで麻酔された。開腹後、腫瘍性Ｈｅｐａ１．６細胞がＰＢＳ中（２．５×１０６個の細胞／１００μｌ）で門脈から注射された。処置は、腫瘍注射の４日後に開始された。アゴニスト抗４−１ＢＢモノクローナル抗体（３Ｈ３）は、ＰＢＳ中（１００μｇ／注射）で腹腔内にＨｅｐａ１．６細胞（肝臓癌細胞、ＨＣＣ）注射後ｄ４及びｄ８で２回注射された。抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体は、ＰＢＳ中（２００μｇ／注射）で腹腔内に４週間の間、週２回注射された。アンタゴニスト抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）は、ＰＢＳ中（３００μｇ／注射）で腹腔内に４週間の間、週３回注射された。
抗腫瘍応答は、腫瘍接種の１３日後に、ＨＣＣの同所性モデルで評価された。この時、腫瘍及び脾臓は、腫瘍または全身に浸潤する免疫細胞を表現型決定するために採取された。免疫細胞が浸潤する脾細胞及び肝臓の非実質細胞（ＮＰＣ）は、フローサイトメトリー取得のため、４つの異なるミックスによって染色された。
結果：図１５Ａに示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体単独は、マウスの画分の生存を著しく延長した（２８％）。抗４−１ＢＢまたはＰＤＬ−１抗体との組合せでは、抗ＳＩＲＰａ抗体は、処置の中止後でさえもマウス生存の非常に高い応答率を可能にした。
図１５Ｂに示すように、共刺激剤（例えば、抗４−１ＢＢ）またはＴ細胞チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１）との抗ＳＩＲＰａの組合せは、調節性及び免疫抑制免疫細胞（Ｔｒｅｇ、Ｍｏ−ＭＤＳＣ）を減少させるが、抗４−１ＢＢと組み合わせてエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積を増加することによって、腫瘍微小環境を改変する。Ｍｏ−ＭＤＳＣは、ＣＤ１１ｂ陽性及びＭＨＣ  ｃｌａｓｓＩＩ陰性集団の中でＬｙ６Ｃの高発現またはＬｙ６Ｇの発現無しによって特徴付けられる。
図１５Ｃに示すように、共刺激剤（例えば、抗４−１ＢＢ）またはＴ細胞チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１）との抗ＳＩＲＰａの組合せは、未熟及びナイーブＢ細胞の頻度を減少させるが、メモリー及び形質芽細胞の蓄積を増加することによって、腫瘍微小環境及び脾臓の周辺部の細胞組成を改変する。同様に、細胞溶解性（ＣＤ２７陰性）ＮＫ細胞の蓄積は、抗４−１ＢＢまたは抗ＰＤＬ１との抗ＳＩＲＰａの組合せによって腫瘍及び末梢に誘導される。
合わせると、抗ＳＩＲＰａは、腫瘍除去及び長期保護に貢献する、特定の獲得（Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、Ｂ細胞）及び自然（ＭＤＳＣ、マクロファージ、ＮＫ細胞）免疫細胞において腫瘍及び末梢免疫を改変する。
【実施例１７】
【０３５４】
事前に治癒したマウスでの抗腫瘍効果
方法：抗ＳＩＲＰａ＋抗４−１ＢＢ注射によって肝細胞癌モデルの事前に治癒したマウスまたは抗４−１ＢＢによって処置されたＳＩＲＰａ変異マウスは、脾臓へのＨｅｐａ１．６細胞注射（２．５×１０６個の細胞／マウス）によって再負荷された。マウスは空気中３％のイソフルランによって麻酔された。マウスの脇腹の切開及び脾臓の単離後、腫瘍性Ｈｅｐａ１．６細胞はＰＢＳ中で脾臓に注射された（２．５×１０６個の細胞／５０μＬ）。ナイーブマウスは、再負荷したマウスと腫瘍発生を比較するため、同じ経路で並行して注射された。
結果：図１５Ｄに示すように、再負荷された場合、全ての治癒したマウスは生存し、反対に全てのナイーブマウスは死滅した。この結果は、抗ＳＩＲＰａ治療下またはＳＩＲＰａシグナルの不在下（ＳＩＲＰａ変異マウス）でメモリーＴ細胞が誘導され、治癒したマウスでもなお長期間持続することを実証する。
【実施例１８】
【０３５５】
事前に治癒したマウスから採取されたＴ細胞脾細胞または全脾細胞の抗腫瘍効果
方法：治癒した抗ＳＩＲＰａ＋抗４−１ＢＢ再負荷マウスは安楽死させ、脾臓が採取された。赤血球溶解後、脾細胞が抽出され、ＡｕｔｏＭＡＣＳによって脾細胞の一部からＣＤ３陽性Ｔ細胞が単離された。麻酔後、マウスはＴ細胞脾細胞（２．５×１０６個の細胞／１００μＬ）または全脾細胞（１０×１０６個の細胞／１００μＬ）または賦形剤単独（ＰＢＳ）のいずれかを静脈内に注射された。全てのマウスは、先に記載したように門脈によってＨｅｐａ１．６細胞を受けた（２．５×１０６個の細胞／１００μＬ）。
結果：図１５Ｅに示すように、治癒したマウスから採取された脾細胞及び単離されたＴリンパ球は、マウスの生存に高い正の効果を有する。この結果は、肝細胞癌の処置後に治癒したマウスの脾細胞にメモリーＴ細胞が存在し、長期の獲得免疫記憶を担うことを示す。
【実施例１９】
【０３５６】
事前に治癒したマウスでの抗腫瘍効果
方法：抗ＳＩＲＰａ＋抗ＰＤＬ−１注射によって肝細胞癌モデルの事前に治癒したマウスは、脾臓へのＨｅｐａ１．６細胞注射（２．５×１０６個の細胞／マウス）によって再負荷された。マウスは空気中３％のイソフルランによって麻酔された。マウスの脇腹の切開及び脾臓の単離後、腫瘍性Ｈｅｐａ１．６細胞はＰＢＳ中で脾臓に注射された（２．５×１０６個の細胞／５０μＬ）。ナイーブマウスは、再負荷したマウスと腫瘍発生を比較するため、同じ経路で並行して注射された。
結果：図１６に示すように、再負荷された場合、全ての治癒したマウスは生存し、反対に全てのナイーブマウスは死滅した。この結果は、治癒したマウスにメモリーＴ細胞がまだ存在することを示す。この結果は、抗ＳＩＲＰａ治療下でメモリーＴ細胞が誘導され、治癒したマウスでもなお長期間持続することを実証する。
【実施例２０】
【０３５７】
乳癌モデルにおける腫瘍の増殖の効果
方法：マウスは、空気中３％のイソフルランによって麻酔された。マウスは腹部の毛を剃られ、４Ｔ１細胞が５０μＬのＰＢＳ中、インシュリン用シリンジ（３０ゲージ）によって乳腺に注射された。アンタゴニスト抗ＳＩＲＰａ抗体（Ｐ８４）または対照抗体は、ＰＢＳ中で腹腔内に４週間の間、週３回注射された（２００μｇ／注射）。
結果：図１７に示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体は、対照抗体と比較して乳癌モデルの腫瘍の増殖を著しく低減した（ｐ＜０．０１）。
図１８は、接種後２週間の免疫細胞分析を示す。抗ＳＩＲＰａは、Ｔｒｅｇが劇的に減少し、メモリーＴ細胞が蓄積した腫瘍及び末梢（脾臓）の両方において骨髄性及び非骨髄性細胞（Ｔ及びＮＫ細胞）に正の効果を有する。
【実施例２１】
【０３５８】
ヘモグロビン及びヘマトクリットの濃度へのＳＩＲＰａ抗体の効果
方法：抗ＳＩＲＰａ（Ｐ８４クローン）、抗ＣＤ４７（ＭＩＡＰ４１０クローン）及び関連アイソタイプ対照は、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに１２ｍｇ／ｋｇで０日目と２日目に腹腔内に投与された。血液試料は、０日目と３日目にＥＤＴＡ含有チューブに採取され、血球数はＸＳ−８００ｉ血液分析機（Ｓｙｓｍｅｘ）によって実施された。ヘモグロビンのレベル（左）及びヘマトクリットのパーセンテージ（右）は３日目に評価された。
結果：図１９に示すように、抗ＳＩＲＰａ抗体はヘモグロビンの濃度及びヘマトクリットに毒性効果を示さない。反対に、ヒトのフェーズ１で観察された貧血症により、抗ＣＤ４７抗体は、ヘモグロビン及びヘマトクリットの濃度の減少を誘導する。
【実施例２２】
【０３５９】
血小板凝集
方法：血液は健康なドナーボランティアから、クエン酸ナトリウムによって緩衝されたＶａｃｕｅｔｔｅ採取チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ）に採取された。多血小板血漿（ＰＲＰ）及び乏血小板血漿（ＰＰＰ）は、それぞれ２００ｇで１０分間、及び３５００ｇで１５分間の遠心分離によって得られた。使用するＰＲＰは、３×１０８個の血小板／Ｌに合わせた。阻害アッセイ：ｍＡｂは、ＰＲＰと最終濃度４０または５０μｇ／ｍＬの試験抗体でプレインキュベートされた。攪拌せずに３分後、血小板凝集はＡＤＰ  ５μＭ添加によって開始された。凝集は、標準的な光学血小板凝集計（ＴＡ−８Ｖ  Ｔｈｒｏｍｂｏ−Ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒ，ＳＤ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ  ＳＡＳ，Ｆｒｏｕａｒｄ，Ｆｒａｎｃｅ）を使用して連続的に攪拌しながら３７℃で試料を通る光の伝達を測定することによって決定された。ＰＰＰの伝達は１００％に設定された。凝集は、全部で５分間、攪拌下で記録された。誘導アッセイ：血小板凝集は、ｍＡｂ添加（５０μｇ／ｍＬ）によって直接開始された。凝集は、全部で最大１０分間攪拌下で記録された。
結果：図２０に示すように、抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体はヒト赤血球または血小板に結合しない。その結果、抗ＣＤ４７は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでヒト血小板凝集を誘導するが、抗ＳＩＲＰａ抗体はしない。同様に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、可逆的なＡＤＰ誘導ヒト血小板凝集を妨げないが、抗インテグリンアルファ２ｂは完全にそれを抑制する。
【実施例２３】
【０３６０】
卵巣がん性腹水由来のＳＩＲＰａ遮断ＣＤ１４＋細胞による同種Ｔ細胞の増殖
方法：同種ＣＤ４  Ｔ細胞は、健康なボランティアのバフィーコートのｈＰＢＭＣからＡｕｔｏＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用する陽性選択によって単離された。ＣＤ４は、９６丸底ウェルプレートに播種された（５００００個の細胞／ウェル）。ＣＤ１４＋細胞は、卵巣がん患者の腹水から同じ方法によって単離された。ＣＤ１４＋細胞は、５日間、１：１比で同種ＣＤ４  Ｔ細胞と播種された。いくつかの条件で、ヒトＬＰＳ変異同種単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）が、１：５比で添加され、Ｔ細胞を刺激し、腹水から精製された異なる比のＣＤ１４＋ＭＤＳＣの免疫抑制作用を分析した。ＳＩＲＰａ／ＣＤ４７経路を標的化する抗体は、飽和濃度（１０μｇ／ｍｌ）で、増殖試験の開始時から添加された。増殖は、培養の最後１２時間の３Ｈ−チミジンの取り込みによって測定された。
結果：図２１Ａ及び図２１Ｂに示すように、卵巣がん性腹水から精製された新しいまたは凍結ヒト骨髄性細胞（ＴＡＭ）は、低刺激同種ヒトＴリンパ球である。抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、骨髄性細胞特性を改変し、ヒトＴ細胞活性化及び増殖を可能にする。
図２１Ｃに示すように、卵巣がん性腹水から精製されたヒト骨髄性細胞（ＭＤＳＣ）は、１：１及び２：１の骨髄性細胞対Ｔ細胞比で同種ｍｏＤＣによって誘導されるヒトＴ細胞増殖を抑制できる。抗ＣＤ４７抗体とは対照的に、抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヒトＭＤＳＣによって誘導される免疫抑制を増強しない。
【実施例２４】
【０３６１】
ＥＬＩＳＡによる改変抗体でのＳＩＲＰａ  ＥＬＩＳＡ結合アッセイ
方法：ＥＬＩＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体が添加され、ＳＩＲＰａへの結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、従来の方法によって曝露された。顕色はペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃによって実施され、ＴＭＢ基質を使用して４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。ＥＤ５０は、次いで、このアッセイにおいてシグナルの５０％に達する示した抗体の濃度として測定された。
結果：図２２は、免疫療法剤を含む全ての改変抗ＳＩＲＰａ抗体が、陽性対照として使用した親抗体（ＨＥＦＬＢ）と比較して良好な濃度でＳＩＲＰａに機能的に結合することを示す。
【実施例２５】
【０３６２】
ＥＬＩＳＡによる改変抗体上の融合タンパク質のＥＣＤの検出
方法：組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１６１２−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、改変抗体が添加された。改変抗ＳＩＲＰａ抗体上の融合タンパク質の検出は、マウス抗ヒトＰＤ１（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２−２７９９−４１）、マウス抗ヒトＰＤＬ１（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５８０６５）、マウス抗ヒトＣＤ８０（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５７２２６）、マウス抗ヒトＣＤ８６（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５６５８）、マウス抗ヒトＯＸ４０Ｌ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＭＡＢ１０５４１）、マウス抗ヒト４−１ＢＢＬ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５９４４６）、またはマウス抗ヒトＩＣＯＳＬ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５２５０２）によって実施された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７１５−０３６−１５１）が添加され、従来の方法によって曝露された。
結果：図２３は、改変抗ＳＩＲＰａ抗体の融合タンパク質の全てのＥＣＤが、重鎖または軽鎖に連結した場合、特異的なモノクローナル抗体によってよく認識されることを示す。
【実施例２６】
【０３６３】
異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体でのリガンド結合アッセイ
方法：重鎖に連結した（ＶＨｐｒｏｔ＋ＶＬ（■））または軽鎖に連結した（ＶＨ＋ＶＬｐｒｏｔ（△））融合タンパク質を有する異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体の固定化ＳＩＲＰａ−ＨｉｓでのＥＬＩＳＡによる評価。検出は、異なる融合コンジュゲートの特異的リガンド：ＰＤＬ１Ｆｃ（ＰＤ１のため）、ＰＤ１Ｈｉｓ（ＰＤＬ１のため）、ＣＴＬＡ４−Ｆｃ（ＣＤ８０及びＣＤ８６のため）、図Ｂ−ＯＸ４０Ｆｃ（ＯＸ４０Ｌのため）、４−１ＢＢＦｃＨｉｓ（４−１ＢＢＬのため）、ＣＤ２８Ｆｃ（ＩＣＯＳＬのため）で実施され、それぞれマウス抗ヒトＰＤＬ１、マウス抗Ｈｉｓ、マウス抗ヒトＣＴＬＡ４Ｆｃ、マウス抗ヒトＯＸ４０、マウス抗ヒトＨｉｓ、マウス抗ヒトＣＤ２８、次いでペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ、次いでＴＭＢ基質を使用する４５０ｎｍでの比色分析により曝露された。
結果：図２４は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、及びＩＣＯＳＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体が、抗体の重鎖または軽鎖に連結される融合タンパク質の特異的リガンドに独立して結合できることを示す。
【実施例２７】
【０３６４】
ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰａ−ＣＤ４７の異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体との相互作用の競合アッセイ
方法：競合ＥＬＩＳＡアッセイのため、組換えｈＳＩＲＰａ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ１  １６１２−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、０．５μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化された。各精製された抗体（異なる濃度）は最終６μｇ／ｍｌ（固定濃度）のビオチン化ヒトＣＤ４７Ｆｃ（ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ；Ｆｒａｎｃｅ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：＃ＣＤ７−Ｈ８２Ｆ６）と混合され、３７℃で２時間競合結合を測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｎｇ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＳＡ−５００４）が添加され、ビオチン−ＣＤ４７Ｆｃ結合が検出され、従来の方法によって曝露された。
結果：図２５は、免疫療法剤を含む全ての改変抗ＳＩＲＰａ抗体が、ＳＩＲＰａへの結合をＣＤ４７と競合することができることを示す。重鎖または軽鎖に融合したタンパク質を含む改変抗体と親抗ＳＩＲＰａ抗体単独（ＨＥＦＬＢ）との間で顕著な差は観察されない。全ての構築物は、陽性対照として使用した抗ＳＩＲＰａ単独（ＨＥＦＬＢ）と比較して、ＣＤ４７−ＳＩＲＰａ相互作用に対するそれらのアンタゴニスト活性を保存した。
【実施例２８】
【０３６５】
ヒトＰＢＭＣでのＥＬＩＳＡによるＴＮＦａ分泌アッセイ
方法：ポリプロピレンＰ９６プレートは、１μｇ／ｍｌのＯＫＴ３でコートされた（抗ＣＤ３抗体）。ＰＢＳによる洗浄後、ヒトＰＢＭＣ（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で３日間、完全培地（２％ヒトＳＡＢを含む）中、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、組換えタンパク質、各融合タンパク質（比１：１）の対照としてＯＳＥ１７２＋組換えタンパク質（ＰＤ１−Ｈｉｓ；ＰＤＬ１−Ｆｃ；ＣＤ８０−Ｆｃ；ＣＤ８６−Ｆｃ；４−１ＢＢＬ−ＦｃまたはＩＣＯＳＬ−ｈｉｓ）、改変抗ＳＩＲＰａ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌが添加された。３Ｈチミジンは、測定の８時間前に取り込まれ、結果はｃｐｍで表され、増殖のレベルが決定された。刺激の４８時間後（３Ｈ取り込みの２４時間前）、２５μｌ／ウェルの上清が回収され、サイトカイン分泌の濃度が測定された。ＴＮＦａは、ヒトＴＮＦａキット（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５２１２）によりＥＬＩＳＡによって測定された。結果は、上清中のサイトカインのｐｇ／ｍｌで表された。
結果：図２６は、ＴＮＦａの過剰な分泌を誘導するＰＤ１ＨｉｓまたはＣＤ８６−Ｆｃ単独を除き、細胞が抗ＳＩＲＰａ抗体（ＨＥＦＬＢ）または抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａまたは非融合免疫療法剤とインキュベートされる場合、ＴＮＦａ分泌の差を示さない。これらの過剰発現は、細胞が抗ＳＩＲＰａ（ＨＥＦＬＢ）及び組換えタンパク質ＰＤ１ＨｉｓまたはＣＤ８６−Ｆｃと組み合わせてインキュベートされた場合、改変されなかった。同様に、抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢと非融合組換えタンパク質の他の組合せは、ＴＮＦａ分泌を増加しない。
興味深いことに、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体は、免疫療法剤が重鎖のＣ末端ドメイン上にある場合、ＴＮＦａの重要な分泌を誘導する。合わせると、これらの結果は、重鎖にＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体の炎症促進性サイトカインＴＮＦａ分泌への可能な正の効果を示す。
【実施例２９】
【０３６６】
ヒトＰＢＭＣでのＥＬＩＳＡによるＩＦＮｇ分泌アッセイ
方法：ポリプロピレンＰ９６プレートは、１μｇ／ｍｌのＯＫＴ３でコートされた（抗ＣＤ３抗体）。ＰＢＳによる洗浄後、ヒトＰＢＭＣ（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で３日間、完全培地（２％ヒトＳＡＢを含む）中、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、組換えタンパク質、各融合タンパク質（比１：１）の対照としてＯＳＥ１７２＋組換えタンパク質（ＰＤ１−Ｈｉｓ；ＰＤＬ１−Ｆｃ；ＣＤ８０−Ｆｃ；ＣＤ８６−Ｆｃ；４−１ＢＢＬ−ＦｃまたはＩＣＯＳＬ−ｈｉｓ）、改変抗ＳＩＲＰａ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌが添加された。３Ｈチミジンは、測定の８時間前に取り込まれ、結果はｃｐｍで表され、増殖のレベルが決定された。刺激の４８時間後（３Ｈ取り込みの２４時間前）、２５μｌ／ウェルの上清が回収され、サイトカイン分泌の濃度が測定された。ＩＦＮｇは、ヒトＩＦＮｇキット（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５１４２）によりＥＬＩＳＡによって測定された。結果は、上清中のサイトカインのｐｇ／ｍｌで表された。
結果：図２７は、炎症促進性ＩＦＮｇサイトカイン分泌（Ｔ細胞特異的サイトカイン）が、重鎖のＣ末端ドメイン上のＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬを含む抗ＳＩＲＰａ抗体によって強く増加されるため、ＴＮＦａ分泌で観察された上記の結果を確認する。
【実施例３０】
【０３６７】
ヒトＴリンパ球による増殖アッセイ
方法：ヒトＴリンパ球（ＬＴ）は、ヒトＰＢＭＣからＰａｎ  Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １３０−０９６−５３５）によってソートされ、ＴｅｘＭａＣＳ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １３０−０９７−１９６）中、３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートされた。次の日、ポリプロピレンＰ９６プレートは、１μｇ／ｍｌのＯＫＴ３でコートされた（プレ活性化シグナル）。ＰＢＳによる洗浄後、ヒトＬＴ（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で３日間、完全培地（２％ヒトＳＡＢを含む）中、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、各融合タンパク質の対照として組換えタンパク質（ＰＤ１−Ｈｉｓ；ＰＤＬ１−Ｆｃ；ＣＤ８０−Ｆｃ；ＣＤ８６−Ｆｃ；４−１ＢＢＬ−ＦｃまたはＩＣＯＳＬ−ｈｉｓ）、ＨＥＦＬＢ＋組換えタンパク質（比１：１）、各異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌが添加された。３Ｈチミジンは、測定の８時間前に取り込まれ、結果はｃｐｍで表され、増殖のレベルを決定した。
結果：図２８は、抗ＣＤ３によって誘導されたヒトＴ細胞増殖は、抗ＳＩＲＰａ抗体単独（ＨＥＦＬＢ）によって著しく改変されないことを示す。重鎖上にＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６または４−１ＢＢＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体は、ヒトの単離されたＴ細胞の増殖を増加する。タンパク質が軽鎖に融合される場合、またはＯＸ４０ＬまたはＩＣＯＳＬ（重鎖または軽鎖）に融合される場合、同じ二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体による効果が観察されない。
【実施例３１】
【０３６８】
ヒトの単離されたＴリンパ球でのＥＬＩＳＡによるＴＮＦａ分泌アッセイ
方法：ヒトＴリンパ球（ＬＴ）は、ヒトＰＢＭＣからＰａｎ  Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １３０−０９６−５３５）によってソートされ、ＴｅｘＭａＣＳ培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １３０−０９７−１９６）中、３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートされた。次の日、ポリプロピレンＰ９６プレートは、１μｇ／ｍｌのＯＫＴ３でコートされた（プレ活性化シグナル）。ＰＢＳによる洗浄後、ヒトＬＴ（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で３日間、完全培地（２％ヒトＳＡＢを含む）中、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、各融合タンパク質の対照として組換えタンパク質（ＰＤ１−Ｈｉｓ；ＰＤＬ１−Ｆｃ；ＣＤ８０−Ｆｃ；ＣＤ８６−Ｆｃ；４−１ＢＢＬ−ＦｃまたはＩＣＯＳＬ−ｈｉｓ）、ＨＥＦＬＢ＋組換えタンパク質（比１：１）、各異なる改変抗ＳＩＲＰａ抗体、または陽性対照としてＰｈａ−Ｌが添加された。３Ｈチミジンは、測定の８時間前に取り込まれ、結果はｃｐｍで表され、増殖のレベルが決定された。刺激の４８時間後（３Ｈ取り込みの２４時間前）、２５μｌ／ウェルの上清が回収され、サイトカイン分泌の濃度が測定された。ＴＮＦａは、ヒトＴＮＦａキット（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５２１２）によりＥＬＩＳＡによって測定され、ＩＦＮｇは、ヒトＩＦＮｇキット（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５１４２）によりＥＬＩＳＡによって測定された。結果は、上清中のサイトカインのｐｇ／ｍｌで表された。
結果：Ｔ細胞増殖試験と同様に、図２９に記載のＴＮＦａ分泌は、Ｔ細胞が、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）によって刺激された場合、抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ  ｍＡｂを添加する場合でさえも、顕著な量のＴＮＦａを分泌しないことを示す。対照的に、ＴＮＦａ分泌は、重鎖にＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体によって誘導される。これらの結果は、ＰＢＭＣによって分泌されたＴＮＦａで表された結果に匹敵し（実施例２８参照）、それらの特異的Ｔ細胞経路への融合タンパク質の機能活性を確認した。
【実施例３２】
【０３６９】
ヒトマクロファージでのＥＬＩＳＡによるＭＩＰ１ａ分泌アッセイ
方法：ヒト未熟マクロファージは、ＰＢＭＣから分離されたヒト単球を使用して生成され（ＵＴＣＧ  ｐｌａｔｅｆｏｒｍ、Ｎａｎｔｅｓ）、３７℃、５％ＣＯ２で、完全培地（１０％  ＳＶＦを含む）中１０ｎｇ／ｍｌでＧＭ−ＣＳＦ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １４１２−０５０）と２日間インキュベートされた。ポリプロピレンＰ９６プレートは、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）でコートされた。ＰＢＳによる洗浄後、ヒト未熟マクロファージ（掻爬及び洗浄した）（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ抗体、抗ＰＤ１  Ｋｅｙｔｒｕｄａ  ｍＡｂ、または改変抗ＳＩＲＰａ抗体が添加された。上清が回収され、ＭＩＰ１ａ（ＣＣＬ３）分泌の濃度が測定された。ＭＩＰ１ａは、ヒトＭＩＰ１ａ／ＣＣＬ３キット（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＤＹ２７０）によりＥＬＩＳＡによって測定された。結果は、上清中のサイトカインのｐｇ／ｍｌで表された。
結果：免疫療法剤を含む異なる改変抗体の機能性ＳＩＲＰａアンタゴニスト活性を確認するため、ＭＩＰ１ａ、ＣＤ４７−Ｓｉｒｐａ相互作用によって阻害される可能性のある標的でのテストが実施された。図３０に示すように、マクロファージは基底状態（ＣＤ４７なし）でＭＩＰ１ａを分泌する。マクロファージがＣＤ４７Ｆｃとインキュベートされる場合、分泌は強く阻害され、ＣＤ４７によるＳＩＲＰａ阻害シグナルの活性化が免疫抑制を誘導し、ＭＩＰ１ａ分泌を阻害することを実証する。抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体による相互作用の遮断は、この分泌を基底のＭＩＰ１ａ分泌レベルに回復する。これは、ＣＤ４７−ＳＩＲＰａ相互作用への抗ＳＩＲＰａ抗体の良好なアンタゴニスト活性を確認する。図３０に示すように、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０または４−１ＢＢＬを含む改変抗ＳＩＲＰａ抗体は、抗ＳＩＲＰａ抗体単独よりもヒトマクロファージによるＭＩＰ１ａの高い分泌を誘導する。これらの結果は、改変抗体が、タンパク質に融合していない抗ＳＩＲＰａ  ＨＥＦＬＢ抗体よりも高いレベルのＭＩＰ１ａ分泌を生成することができるため、増加したＳＩＲＰａアンタゴニスト特性を有することを示す。また、ＣＤ８６を含む改変抗体は、抗ＳＩＲＰａ抗体単独と同じ結果を示す。
本発明者らは、改変抗ＳＩＲＰａ抗体として実施例に記載された二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＳＩＲＰａと融合タンパク質として記載された免疫療法剤のリガンド（融合タンパク質のリガンドは、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、４−１ＢＢ、ＩＣＯＳまたはＯＸ４０）の両方に結合することができたことを示す。二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体上の免疫療法剤は特異的な抗体によってよく認識され、二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体の各免疫療法剤のＥＣＤの良好な発現を示す。
驚くべき方法により、重鎖上に免疫療法剤としてＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬのＥＣＤを含む二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＭＩＰ１ａの過剰な分泌を誘導するＣＤ４７に対するＳＩＲＰａの相互作用を阻害するそれらの能力に関して機能的であり、Ｔ細胞活性化及び増殖を誘導するまたは阻害しないそれらの能力に関して機能的であった。重鎖上にＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、または４−１ＢＢＬのＥＣＤを含む二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体は、ＰＢＭＣによるＴＮＦａ及びＩＦＮｇ分泌（炎症促進性サイトカイン）への相乗的な有効性を示し、単独または抗ＳＩＲＰａ抗体と組み合わされた免疫療法剤と比較して、炎症促進性腫瘍環境を誘導する能力がある。
【実施例３３】
【０３７０】
ＥＬＩＳＡによるＳＩＲＰｇへの改変抗ＳＩＲＰａ抗体の結合分析
方法：活性ＥＬＩＳＡアッセイのため、ｈＳＩＲＰｇ−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １１８２８−Ｈ０８Ｈ）は、炭酸緩衝液（ｐＨ９．２）中、１μｇ／ｍｌでプラスチック上に固定化され、精製された抗体が添加され、ヒト化抗ＳＩＲＰａ抗体ＨＥＦＬＢ、抗ＳＩＲＰａ  Ｋｗａｒ抗体、及びＰＤＬ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６または４−１ＢＢＬのＥＣＤに融合した改変抗ＳＩＲＰａ抗体の結合が測定された。インキュベーション及び洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ロバ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ；ＵＳＡ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ７０９−０３５−１４９）が添加され、従来の方法によって曝露された。
結果：図３１に示すように、Ｋｗａｒ抗体はＳＩＲＰｇに結合できる。しかしながら、任意の免疫療法剤と融合した本発明の抗ＳＩＲＰａ抗体の二機能性形態は、ＨＥＦＬＢ親抗体のようなＳＩＲＰｇに結合せず、ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用に対する二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体の特異性がある。
【実施例３４】
【０３７１】
ヒトＴリンパ球とのヒトマクロファージの共培養でのＥＬＩＳＡによるＭＩＰ１ａ、ＴＮＦａ、及びＩＦＮｇ分泌アッセイ
方法：ヒト未熟マクロファージは、ＰＢＭＣから分離されたヒト単球を使用して生成され（ＵＴＣＧ  ｐｌａｔｅｆｏｒｍ、Ｎａｎｔｅｓ）、３７℃、５％ＣＯ２で、完全培地（１０％  ＳＶＦを含む）中１０ｎｇ／ｍｌでＧＭ−ＣＳＦ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １４１２−０５０）と２日間インキュベートされた。ポリプロピレンＰ９６プレートは、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）でコートされた。ＰＢＳによる洗浄後、ヒト未熟マクロファージ（掻爬及び洗浄した）（１０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ抗体または改変抗ＳＩＲＰａ抗体（ＶＨ−ＰＤＬ１、ＶＨ−４−１ＢＢＬ、ＶＨ−ＣＤ８０、またはＶＨ−ＣＤ８６）が添加された。次いで、本発明者らは、ＯＫＴ３によってプレ活性化されたヒトＴリンパ球を添加した（Ｔリンパ球は、実施例３１に記載の方法に従って単離された）。上清が回収され、ＭＩＰ１ａ（ＣＣＬ３）（キットＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＤＹ２７０）、ＴＮＦａ（キットＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５２１２）、またはＩＦＮｇ分泌（キットＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５５５１４２）が測定された。
結果：同じアッセイでＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用及びＴ細胞活性化の阻害の測定を可能にする共培養系において、本発明者らは、ＰＤＬ１、ＣＤ８０または４−１ＢＢＬに融合した二機能性抗ＳＩＲＰａ抗体が、単独または組換えＰＤＬ１またはＣＤ８０または４−１ＢＢＬと別々に組み合わせた抗ＳＩＲＰａ抗体と比較して、ＭＩＰ１ａ（Ａ）、ＴＮＦａ（Ｂ）及びＩＦＮｇ（Ｃ）の高い分泌を誘導できる興味深いが、予期しない方法を観察した（図３２）。さらに、二機能性抗ＳＩＲＰａの機能的有効性は、免疫療法剤が抗ＳＩＲＰａ抗体のＶＨ鎖のＣ末端部分に融合される場合に観察される（図２６及び２７に示す）。この機能的効果は、軽鎖に融合された場合、または免疫療法剤がＣＤ８６、ＩＣＯＳ−ＬまたはＯＸ４０Ｌである場合、二機能性抗ＳＩＲＰａに観察されない（データは示さない）。これらの結果は、ＰＤＬ１、ＣＤ８０、及び４−１ＢＢＬと結合した改変抗ＳＩＲＰａ抗体が、抗ＳＩＲＰａ抗体単独または組換え免疫療法剤との別々の組合せより、またはＢ１２−ＰＤＬ１、またはＢ１２−ＣＤ８０、またはＢ１２−４−１ＢＢＬのような関連二機能性抗体よりも、ＳＩＲＰａ−ＣＤ４７相互作用により強い阻害効果を有し、Ｔ細胞活性化により有効性を有することを示す。本明細書に示した二機能性分子は、ＰＤ１／ＰＤＬ１またはＣＴＬＡ−４／８０またはＣＤ８０／ＰＤＬ１軸の阻害、ならびに４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬまたはＣＤ８０／ＣＤ２８シグナルの強化を通してＴ細胞活性化を誘導することができる（可能な獲得免疫応答、特に抗腫瘍応答及び／または長命メモリーＴ細胞の誘導を誘導する）。
【実施例３５】
【０３７２】
タイムラプスＴ細胞活性化
方法：ヒト未熟マクロファージは、ＰＢＭＣから分離されたヒト単球を使用して生成され（ＵＴＣＧ  ｐｌａｔｅｆｏｒｍ、Ｎａｎｔｅｓ）、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、完全培地（１０％  ＳＶＦを含む）中１０ｎｇ／ｍｌでＧＭ−ＣＳＦ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １４１２−０５０）とインキュベートされた。ＩＢＩＤＩチャンバー８ウェル（ＩＢＩＤＩ；Ｇｅｒｍａｎｙ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ８０８２６）は、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのＣＤ４７Ｆｃ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １２２８３−Ｈ０２Ｈ）でコートされた。ＰＢＳによる洗浄後、ヒト未熟マクロファージ（掻爬及び洗浄した）（３０００００個の細胞／ｗ）は、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間、ＩＢＩＤＩチャンバー中、１０μｇ／ｍｌの可溶性ＨＥＦＬＢ及び二機能性抗Ｓｉｒｐａ−ＰＤＬ１が添加された。上清が回収され、ＭＩＰ１ａ（ＣＣＬ３）分泌の濃度が測定された。次いで、別の健康なドナーからのＴリンパ球は、Ｐａｎ  Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  １３０−０９６−５３５）によるＦｉｃｏｌｌ後に分離され、ＦＵＲＡ−２カルシウム指示薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｆ１２２１）によって染色された。Ｆｕｒａ−２標識Ｔ細胞（３０００００個の細胞／ウェル）が未熟マクロファージ及び抗体を含有するウェルに添加され、最終３μｇ／ｍｌでアゴニスト抗ＣＤ３の添加によって刺激された（Ｉｎｓｅｒｍ  Ｕ１０６４；Ｎａｎｔｅｓ，ｃｌｏｎｅ  ＯＫＴ３）。各ウェルのタイムラプスがＮｉｋｏｎ顕微鏡によって実施された。Ｆｕｒａ−２指示薬は、未刺激Ｔ細胞では青を示し、Ｔ細胞活性化により、より赤くなった。
結果：図３３に示すように、二機能性抗ＳＩＲＰａ−ＰＤＬ１抗体は、ＳＩＲＰａとＣＤ４７との間の相互作用の阻害及び共培養アッセイでの内在性ＰＤＬ１−ＰＤ１相互作用の阻害により、強いＴ細胞活性化を誘発した。そのような内在性ＰＤ１／ＰＤＬ１相互作用の遮断は、図３３の右側の対照と比較してより多量のカルシウムの細胞での存在によって反映される（オレンジ／赤い細胞）。このアッセイは、二機能性抗ＳＩＲＰａ−ＰＤＬ１がＴ細胞を活性化できることを確認する。
【図１】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｅ】
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【図１３】
2020536573.tif 000041
【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｃ】
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【図３３】
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【国際調査報告】
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2020536573.tif 000070
2020536573.tif 000071