(57)【要約】  一部の実施形態では、本開示は、例えば癌、アルツハイマー病およびパーキンソン病、多発性硬化症、パジェット病、または例えばアテローム性動脈硬化症もしくは２型糖尿病などの加齢の他の態様などの、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の治療および／または予防に有用であり得る特定の組成物および方法を提供する。そうした一部の実施形態では、例えばアルファ−シクロデキストリン、またはそのアナログもしくは誘導体などの少なくとも１つのシクロデキストリン活性剤を含有する組成物が提供される。一部の実施形態では、組成物は、ヒドロキシプロピル−アルファ−シクロデキストリンとカプリン酸ナトリウムのクラスレートである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載されるシクロデキストリン分子、またはその塩、および／もしくはそのクラスレートのいずれか１つまたは複数を含む組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物、および薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項３】
悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の治療のための治療用化合物をさらに含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記シクロデキストリン分子が、前記シクロデキストリン分子、その塩もしくはクラスレートに融合された、または共有結合された化学部分を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を治療または予防する方法であって、その必要のある対象に、請求項１〜４に記載の組成物のうちの１つまたは複数の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記心血管疾患が、アテローム性動脈硬化症である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記自己免疫性疾患が、喘息、多発性硬化症、全身性エリテマトーデスのうちの１つまたは複数である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記代謝性疾患が、脂肪肝疾患、ＮＡＳＨ、嚢胞性線維症、ＩＩ型糖尿病のうちの１つまたは複数から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
リン脂質を減少させる必要のある対象において血清リン脂質レベルを低下させる方法であって、その必要のある対象に、請求項１〜４に記載の組成物のうちの１つまたは複数の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
その必要のある対象の腸管において治療用化合物の吸収を増加させる方法であって、前記対象に、前記治療用化合物の前、後、または同時に、請求項１〜４に記載の組成物のうちの１つまたは複数の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１１】
機能障害状態のリソソームまたはＰＩサイクルを呈する細胞により特徴づけられる癌、心血管疾患、代謝性疾患もしくはウイルス感染を治療および／または予防する方法であって、前記その必要のある対象に、請求項１〜４に記載の組成物のうちの１つまたは複数の治療有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１２】
前記その必要のある対象に、請求項１〜４に記載の組成物のうちの１つまたは複数の治療有効量を投与する工程が、前記治療用化合物の前、後、または同時に発生する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
その必要のある対象に、リソソームの疾患もしくは障害を予防または治療する方法であって、前記対象に、シクロデキストリンの有効量を投与することを含む、方法。
【請求項１４】
前記シクロデキストリンが、２−ヒドロキシプロピル（ＨＰ）−シクロデキストリンを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記シクロデキストリンが、ＨＰ−α−シクロデキストリンおよびＨＰ−β−シクロデキストリンのうち少なくとも１つを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＨＰ−シクロデキストリンが、直接的に、または架橋剤を使用して第一の活性剤に結合される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記リソソーム疾患が、多発性硬化症であり、前記第一の活性剤が、インターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンベータ−１ｂ、酢酸ガラティラメル、インターフェロンベータ−１ｂ、ペグインターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンベータ−１ａ、およびダクリズマブからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記リソソーム疾患が、多発性硬化症であり、前記第一の活性剤が、テリフルノミド、フィンゴリモド、およびフマル酸ジメチルからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記リソソーム疾患が、多発性硬化症であり、前記第一の活性剤が、アレムツズマブ、ミトキサントロン、オクレリズマブおよびナタリズマブからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＰ−シクロデキストリンが、第二のシクロデキストリンおよび第二の活性剤のうち少なくとも１つをさらに含む、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記第二の活性剤が、前記第一の活性剤とは異なる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記リソソーム疾患が、パジェット病であり、前記活性剤が、アレンドロン酸塩、イバンドロン酸塩、パミドロン酸塩、リセドロン酸塩、およびゾレドロン酸のうち少なくとも１つを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＨＰ−シクロデキストリンが、担体と連結される、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記担体が、金ナノ粒子である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記担体が、炭水化物である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
その必要のある対象においてアラキドン酸を下方制御する方法であって、前記対象に、α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量が、リン脂質を優先的に排除し、前記リン脂質が、少なくともＰＣを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量は、リゾリン脂質も排除する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量は、リゾリン脂質を優先的に排除する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量は、前記α−シクロデキストリン誘導体を含み、前記α−シクロデキストリン誘導体は、ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリンである、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
その必要のある対象においてアラキドン酸分泌の障害を治療および／または予防する方法であって、前記対象に、α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体の有効量を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３２】
その必要のある対象においてアラキドン酸を下方制御する方法であって、前記対象に、その塩のα−シクロデキストリン誘導体の有効量を投与する工程を含む、方法。
【請求項３３】
前記α−シクロデキストリン誘導体は、中鎖脂肪酸、およびα−シクロデキストリン、ＨＰ−α−シクロデキストリンまたはその塩を含むα−シクロデキストリン誘導体のクラスレートである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
その必要のある対象においてＡＬＳ、ＭＳ、アルツハイマー病、ハンチントン病またはパーキンソン病を治療および／または予防する方法であって、前記対象に、α−シクロデキストリンまたはそのα−シクロデキストリン誘導体もしくは塩を含む医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３５】
前記医薬組成物が、脂肪酸をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記医薬組成物が、中鎖脂肪酸をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記医薬組成物が、中鎖脂肪酸、およびα−シクロデキストリン、ＨＰ−α−シクロデキストリンまたはその塩のクラスレートをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
その必要のある対象においてリン脂質レベルを低下させる方法であって、前記対象に、（ｉ）α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体またはその塩；（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体；および脂肪酸を含む医薬組成物の有効量を投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３９】
前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体またはその塩；および脂肪酸は、前記α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン誘導体またはその塩、および脂肪酸がクラスレートを形成する濃度である、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年６月３日に出願された米国仮特許出願第６２／６７９，９１２号明細書、２０１８年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／６４３，６９４号明細書、２０１７年１１月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／５８６，８２６号明細書、２０１７年１０月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／５７３，６５８号明細書、および２０１７年９月２８日に出願された米国仮特許出願第６２／５６５，０５３号明細書に対する優先権の利益を主張する。前述の出願の全内容が、その全体で参照により組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの集団は年を重ねるにつれ、限定されないが、癌および神経変性疾患をはじめとする加齢に伴う状態の有病率が増加する。しかしこれら状態の予防または治療するための介入は存在しないか、または望ましくない副作用がある。現在、約５００万人の米国人がアルツハイマー病を有し、約１００万人がパーキンソン病を有する。平均余命が長くなるにつれ、神経変性疾患または神経変性障害の有病率も増加する。６５歳以上の１０％、および７５歳以上の１５％がアルツハイマー病を有する。アルツハイマー病は女性が多く罹患し、アルツハイマー病に罹患するアメリカ人の３分の２を構成する。またアルツハイマー病は白人よりもアフリカ系米国人およびヒスパニック系が罹患する可能性が高い。アルツハイマー病の患者に治療の選択肢はほとんどない。最近、ＢＡＣＥ１阻害剤のいくつかの第ＩＩＩ相試験が失敗に終わっている。同様にパーキンソン病の患者も、初期には運動症状の治療で利益を得られるが（レボドパ）、時間が経つにつれて非反応性となる。
乳癌（ＢＣａ）は、女性において最も多くみられる非皮膚悪性腫瘍である。２０１６年には、２４６，６６０人の米国人女性が新たに診断され、３，１００，０００人の米国人女性が乳癌と共生している。１９９０年から肺癌が３０％減少した後、乳癌は２番目に死亡者の多い癌であり、２０１５年には４０，２９０人が死亡し、そのうち１７，０１０人が６５歳未満であった（ほとんどが骨、肺および脳への転移が原因である）。乳癌の家族歴がある女性は、乳癌を発症するリスクが２倍であるため、（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（２０１５））乳癌リスクのかなりの部分が遺伝性であると予測されている。しかし「癌成長遺伝子」であるＰＩＫ３ＣＡ／ＰＴＥＮならびにＤＮＡ損傷修復遺伝子のＢＲＣＡ１／ＢＲＣＡ２／ＰＡＬＢ２およびＭＲＥ１１Ａ／ＲＡＤ５０／ＮＢＮ／ＲＩＮＴ１の公知の複合体は、発生率のたった１０％にしか寄与しない。
【０００３】
悪性の疾患または障害の治療も限定的であり、多くの欠点がある。一般的に治療には局所療法（例えば乳癌の放射線治療を伴う、または伴わない外科手術、前立腺癌の外科手術または放射線治療）、および拡散する可能性のある癌細胞に対する補助的全身療法（ホルモン療法、化学療法および生物作用剤）が含まれる。放射線治療と化学療法はしばしば限定されないが悪心および脱毛をはじめとする深刻な副作用を生じさせる。前立腺癌のホルモン療法には、抗アンドロゲン剤が含まれる。乳癌のいくつかのホルモン受容体陽性型に対しては、例えばタモキシフェンおよびラロキシフェンなどの選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ：ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）、ならびに例えばエキセメスタンおよびアナストロゾールなどのアロマターゼ阻害剤が、疾患進行に干渉し得る。例えばトラスツズマブおよびペルツズマブなどのモノクローナル抗体は、ＨＥＲ２陽性癌の治療に承認されている。トリプルネガティブの乳癌患者に対しては（エストロゲン、プロゲステロンおよびＨｅｒ２／ｎｅｕ受容体が無い）、治療選択肢は限定的である。
【０００４】
神経変性障害および悪性腫瘍の間で共通する特徴は、リソソーム機能障害である。リソソーム機能障害は、遺伝性疾患を含む広範な障害および疾患に関与している。一部の例では、悪性腫瘍および神経変性プロセスの根底にある病因の多面的因子として高レベルのエンドサイトーシスが示されており、限定されないが、癌におけるエンドサイトーシスの役割、およびアルツハイマー病における「混乱した」エンドサイトーシスなどが挙げられている。アルツハイマー病ではエンドサイトーシス経路の異常がＡβ沈着に先行しており、エンドサイトーシスの阻害によって、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の内部移行が減少し、すぐさまインビボでのＡβレベルが低下する。
【０００５】
若年期では充分なレベルのエンドサイトーシスが必要である一方で、加齢に伴い高レベルのエンドサイトーシスは有害となる場合がある。アテローム性動脈硬化症、脂肪性肝炎および嚢胞性線維症においてマクロファージの拡張が特定されており、高レベルのエンドサイトーシスは、マクロファージ中の脂質蓄積を増加させ得る。早期エンドサイトーシス経路の活性化は、自己免疫性疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ：ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、炎症性大腸炎（ＩＢＤ：ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）および関節炎において観察されている。ホスホイノシチド（ＰＩＰ：ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ）はエンドサイトーシス経路を制御しており、これが減衰することで、自己免疫性疾患が抑えられる。ホスホイノシチドはさらに、いくつかの遺伝性疾患とも関連づけられている。リン脂質（ＰＬ：ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）排出が正常に機能しないと、マクロファージ（ＭΦ）中の脂質蓄積が増加する。アテローム性動脈硬化症、脂肪性肝炎および嚢胞性線維症（ＣＦ：ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）において拡張したマクロファージが特定されている。ホスホイノシチド−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ：ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−３  ｋｉｎａｓｅ）のシグナル伝達阻害は、炎症および自己免疫性疾患ならびに悪性血液疾患にとって有益であることが示されている。特定のホスファターゼまたはキナーゼを調節する試みがいくつか行われているが、治療成功には結びついていない。ゆえに、これらすべての疾患においてエンドサイトーシス／ピノサイトーシスの関与、およびホスホイノシチドの関与に関する強力な証拠があるにもかかわらず、エンドサイトーシスの有効な調節物質はない。
【０００６】
早期エンドサイトーシス経路の活性化はマクロファージ中の脂質蓄積を生じさせる場合があり、アテローム性動脈硬化症、脂肪性肝炎および嚢胞性線維症において拡張されたマクロファージが特定されている。早期エンドサイトーシス経路の活性化は、自己免疫性疾患、例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、炎症性大腸炎および関節炎において観察されている。ホスホイノシチドの減衰は、自己免疫性疾患を抑える。広範に作用する［サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ：ｃｙｃｌｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ）］阻害物質の多くは期待外れの結果に終わり、少数の患者が、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害物質から利益を得るのみである。全体として、リン脂質の制御異常は、加齢に伴う生活の質の低下と関連づけられている。
【０００７】
エンドサイトーシスの過活動状態は癌、神経変性疾患および他の病的状態と関連づけられており、癌において転移を防ぐ治療法と同じ治療法が、アテローム性動脈硬化症におけるマクロピノサイトーシスを介した泡沫細胞の形成を含む、神経変性疾患および多くの他の加齢関連状態における非分解性高分子の蓄積も予防する可能性がある。しかしエンドサイトーシスを制御する有効な治療法はない。ゆえに、エンドサイトーシス、ファゴサイトーシス、ピノサイトーシスおよびリソソーム経路を含む機能障害が関与する障害および疾患の症状に対する有効な治療法に対するニーズが存在する。
【０００８】
脂質担体分子のβ−シクロデキストリン（β−ＣＤ）は、食品添加物として「一般的に安全とみなされている」（ＧＲＡＳ：ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ）。より水溶性が高い誘導体の２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰ−β−ＣＤ、ＨＰβＣＤ）は頻繁に賦形剤として使用されており、脂溶性薬剤に水溶性化合物を形成させる。インビトロおよび動物モデルにおいて、ＨＰ−β−ＣＤは、リソソームの機能障害を減少させる（ＬＹＤ：ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）こと、および加齢関連状態の病因において別の共通因子であるオートファジー（ＡΦ）を改善することによりその効果の一部を発揮することが示されている。ヒトにおいては、ＨＰ−β−ＣＤは、ニーマンピック病Ｃ型（ＮＰＣ：Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｔｙｐｅ  Ｃ）の治療に使用されており、その機能は、リソソーム中の脂質分子、コレステロールの凝集を減少させることである（ＬＹ）。この場合もその作用機序は不明である。しかしＨＰ−β−ＣＤの臨床応用は限定されており、その理由は耳の外有毛細胞からコレステロールを奪うため、永続的な難聴を引き起こす可能性があるためである。
【０００９】
より低分子のα−シクロデキストリン（α−ＣＤ、αＣＤ）の誘導体、およびその誘導体、例えばヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン（ＨＰ−α−ＣＤ、ＨＰαＣＤ）は、小さすぎてコレステロールには適合しないため、例えばベータ−シクロデキストリンにより引き起こされる難聴といった望ましくない副作用を伴うことなく悪性腫瘍および神経変性障害を効果的に治療する可能性があるとは未だ認識されていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
全ゲノム関連解析（ＧＷＡＳ：ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ）のデータに対する、コンピューターによる生物統計学的手法および決定戦略を通して、本発明者らは、機能的に関連のある遺伝子コレクションを特定し、ＰＩサイクルにより生成されるものを含むホスホイノシチド（ＰＩＰ：ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ）により制御されるエンドサイトーシスが、例えば乳癌または前立腺癌などの特定のタイプの癌の転移プロセスに関与していることを決定付けた。これについて、本発明者らは、乳癌リスクは、ＤＮＡ損傷修復遺伝子、例えばＢＲＣＡ１／２などの（稀な）変動だけでなく、より多くはＰＩサイクルの全般的な調節異常に起因すること、そしてＰＩサイクルにより制御されることが知られているエンドサイトーシスが、癌細胞の局所的な拡がり、移動および浸潤の重要な要素であることを見出した。例えば、実施例１を参照のこと。ゆえに１つの態様において、本明細書は、対象においてリソソーム経路の機能障害および／またはエンドサイトーシス、ファゴサイトーシスもしくはピノサイトーシスの上昇を引き起こす疾患または状態を治療する手段として、ＰＩサイクルを標的とする方法を提供するものであり、当該疾患または状態は、例えば本明細書に記載される新規ＧＷＡＳ法により特定される遺伝子または遺伝子の組み合わせの異常な発現により生じ得る（例えば実施例１を参照のこと）。そうした疾患または状態としては、例えば、乳癌（ＢＣａ：ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、アルツハイマー病（ＡＤ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（ＰＤ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ハンチントン病（ＨＤ：Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症（ＭＳ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ：ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、冠動脈疾患（ＣＡＤ：ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）およびニーマンピック病Ｃ型（ＮＰＣ：Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  ｔｙｐｅ  Ｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）が挙げられる。例えば、実施例２、３、６および７を参照のこと。
【００１１】
癌、神経変性疾患、および他のいくつかの加齢関連疾患の動物モデルに対し効果を有することが知られている治療剤は、ベータ−シクロデキストリンである。ベータ−シクロデキストリンとしては、例えばメチル−β−シクロデキストリン（Ｍ−β−ＣＤ）およびＨＰ−β−ＣＤが挙げられる。例えば、Ｊ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．２０１１  Ｍａｙ，２４１（１）：１−１０；Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０９（１３），２５０１−１３、および実施例５に記載される検討を参照のこと。従来、ベータ−シクロデキストリンは、細胞膜および／または細胞小器官からコレステロール（Ｃｈｏｌ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）を除去および抽出すると考えられていた。例えばコレステロールの排除および／またはＡβもしくはα−シヌクレインへの直接的な結合が、ＡＤおよびＰＤにおけるβ−ＣＤの作用機序であると考えられていた。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０９（１３），２５０１−１３を参照のこと。β−ＣＤは、治療剤としての可能性を有しているが、耳毒性がある。すなわち、永続的な難聴を生じさせ得る耳への損傷をもたらす。Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ，１６（５），５９９−６１１を参照のこと。
【００１２】
本明細書において、リソソーム機能に関して、ＰＩサイクルへのリン脂質供給が関与することを初めて特定したことで（実施例１を参照のこと）、もはやコレステロールの排除は、例えばβ−ＣＤなどのシクロデキストリンが機能する主要メカニズムとはみなされ得ない。例えば、実施例１を参照のこと。むしろ本発明者らのデータからは、シクロデキストリンは、リン脂質の排除に作用し、それによってエンドサイトーシスを制御し、リソソームストレスを低下させ、オートファジーを改善することが示される。例えば本発明者らは、α−ＣＤが、乳癌において「脱線した」と言われるエンドサイトーシス、ＡＤにおいて「錯乱した」と言われるエンドサイトーシス、そしてＰＤにおいて「欠陥のある」エンドサイトーシスを修復することも見出した。例えば、実施例４を参照のこと。本発明者らはまた、リン脂質の可溶化においてα−ＣＤがβ−ＣＤよりも効果的であることを記載する（実施例８を参照）。ゆえに１つの態様において、本明細書は、リソソーム機能障害が関与する疾患、障害または状態を有する対象を治療するためのα−シクロデキストリン（例えばα−ＣＤ、またはＨＰ−α−ＣＤ）の使用方法を提供する。そうした疾患および障害が本明細書に記載されており、例えば、乳癌（ＢＣａ：ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、アルツハイマー病（ＡＤ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（ＰＤ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ハンチントン病（ＨＤ：Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症（ＭＳ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ：ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、冠動脈疾患（ＣＡＤ：ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）およびニーマンピック病Ｃ型（ＮＰＣ：Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  ｔｙｐｅ  Ｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）が挙げられる。
【００１３】
上記の研究結果に加えて、本発明者らはさらに、腸管からのアルファ−シクロデキストリン（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の吸収が、脂肪酸との錯体形成により改善され得ることを見出した。例えば本発明者らは、ＨＰ−α−ＣＤおよび中鎖脂肪酸のクラスレートを含む組成物が、吸収を著しく改善したことを示す。したがって１つの態様において、本明細書は、アルファ−シクロデキストリン（例えばＨＰ−α−ＣＤ）および中鎖脂肪酸（例えばカプリン酸）を含む医薬組成物、ならびにリソソーム機能障害およびオートファジーが関与する疾患または障害を治療するためのその使用を提供する。そうした疾患および障害が本明細書に記載されており、例えば、乳癌（ＢＣａ：ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ）、アルツハイマー病（ＡＤ：Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、パーキンソン病（ＰＤ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ハンチントン病（ＨＤ：Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症（ＭＳ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ：ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、冠動脈疾患（ＣＡＤ：ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）およびニーマンピック病Ｃ型（ＮＰＣ：Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  ｔｙｐｅ  Ｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）が挙げられる。
【００１４】
さらに別の態様において、本発明者らは、アルファ−シクロデキストリン（例えばＨＰ−α−ＣＤ）および中鎖脂肪酸（例えばカプリン酸）を含む医薬組成物が、炎症が関与する疾患の治療に使用され得ることを見出した。例えば、実施例１６を参照のこと。ゆえに１つの態様において、本明細書は、炎症性疾患の治療における使用のための、アルファ−シクロデキストリン（例えばＨＰ−α−ＣＤ）および中鎖脂肪酸（例えばカプリン酸）を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
追加の態様は、以下に、および本出願の詳細な説明と実施例においてさらに記載される。本特許出願の各セクションにおける記載は、他のセクションと併せて読まれることを意図している。さらに本特許出願の各セクションに記載される様々な実施形態は、様々な別の方法で組み合わせることができ、そしてそうした組み合わせのすべてが、本開示の範囲内にあることが意図される。
【００１６】
１つの態様において、本開示は、対象において、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を治療する方法を提供するものであり、当該方法は、当該対象に、環状オリゴ糖（例えばα−シクロデキストリン（α−ＣＤ））またはそのアナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。別の態様では、本開示は、上皮性癌（癌腫）の治療またはパーキンソン病、アルツハイマー病もしくはハンチントン病の治療における使用のための、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体（例えば、ＨＰ−α−ＣＤ）を含む組成物を提供する。１つの態様では、ＨＰ−α−ＣＤを含む組成物はさらに、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ：ｍｅｄｉｕｍ−ｌｅｎｇｔｈ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）、例えば６〜１２個の炭素原子の脂肪族末端を有する脂肪酸などを含む。１つの態様では、組成物中でＨＰ−α−ＣＤおよび中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、クラスレートを形成する。そうしたクラスレートにおいて、ＭＣＦＡは、ＨＰ−α−ＣＤのゲストである。組成物中のＭＣＦＡの１つは、カプリン酸塩またはカプリル酸塩であり、または例えばカプリン酸ナトリウムなどのその塩である。
【００１７】
１つの態様では、本開示は、対象における悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の１つまたは複数の指標または症状を改善する方法を提供するものであり、当該方法は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の１つまたは複数の指標または症状を呈する対象に、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。適切な指標としては、限定されないが、血液検査の結果（限定されないが、循環腫瘍ＤＮＡおよび／または前立腺特異抗原を含む）、Ｘ線評価、身体検査の結果（限定されないが、触知可能な腫瘍を含む）、精神鑑定、または組織生検による組織学的評価および／もしくはホルモン受容体状態の決定が挙げられる。１つの態様では、症状または指標は、生存期間、無病生存期間、無遠隔転移期間、血液検査の結果（限定されないが、循環腫瘍ＤＮＡおよび前立腺特異抗原を含む）、Ｘ線評価、身体検査の結果（限定されないが、触知可能な腫瘍を含む）、または組織生検による組織学的評価からなる群から選択される。１つの実施形態では、「改善すること」は、１つもしくは複数の指標または症状の測定値における少なくとも１％の増加を含む。別の態様では、本開示は、上皮性癌（癌腫）の治療、またはパーキンソン病、アルツハイマー病もしくはハンチントン病の治療における使用のための、α−ＣＤ、またはそのアナログもしくは誘導体（例えば、ＨＰ−α−ＣＤ）を含む組成物を提供する。１つの態様では、ＨＰ−α−ＣＤを含む組成物はさらに、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ：ｍｅｄｉｕｍ−ｌｅｎｇｔｈ  ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）、例えば６〜１２個の炭素原子の脂肪族末端を有する脂肪酸などを含む。１つの態様では、組成物中でＨＰ−α−ＣＤおよび中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、クラスレートを形成する。そうしたクラスレートにおいて、ＭＣＦＡは、ＨＰ−α−ＣＤのゲストである。組成物中のＭＣＦＡの１つは、カプリン酸塩またはカプリン酸ナトリウムなどのその塩である。
【００１８】
一部の実施形態では、本開示は、その必要のある対象においてスフィンゴミエリンの合成を修復する方法に関するものであり、当該方法は、シクロデキストリン（例えばα−ＣＤ）、またはそのアナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。１つの態様では、本開示は、その必要のある対象における悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の１つまたは複数の指標または症状を改善する方法を提供するものであり、当該方法は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の１つまたは複数の指標または症状を呈する対象に、α−ＣＤまたはその塩、アナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。適切な指標としては、限定されないが、血液検査の結果（限定されないが、循環腫瘍ＤＮＡおよび／または前立腺特異抗原を含む）、Ｘ線評価、身体検査の結果（限定されないが、触知可能な腫瘍を含む）、精神鑑定、または組織生検による組織学的評価および／もしくはホルモン受容体状態の決定が挙げられる。１つの態様では、症状または指標は、生存期間、無病生存期間、無遠隔転移期間、血液検査の結果（限定されないが、循環腫瘍ＤＮＡおよび前立腺特異抗原を含む）、Ｘ線評価、身体検査の結果（限定されないが、触知可能な腫瘍を含む）、または組織生検による組織学的評価からなる群から選択される。１つの実施形態では、「改善すること」には、１つもしくは複数の指標または症状の測定値における少なくとも１％の増加が含まれる。
【００１９】
１つの態様では、本開示は、その必要のある対象において巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ：ｆｏｃａｌ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）およびネフローゼ腫脹を治療および／または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、対象に、α−ＣＤまたはその塩、アナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。一部の実施形態では、本開示は、その必要のある対象において過剰な、または機能障害性のスフィンゴ脂質異化により引き起こされる腎障害を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−ＣＤまたはその塩、アナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。一部の実施形態では、本開示は、その必要のある対象においてスフィンゴミエリンの合成を修復する方法に関するものであり、当該方法は、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤまたはその塩）を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。
【００２０】
他の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、当分野に公知の吸収強化剤を含み、当該剤としては、限定されないが、胆汁塩（グリココール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、フシジン酸ナトリウム、グリコデオキシコール酸ナトリウム、タウロジヒドロフシジン酸ナトリウム）、界面活性剤（ラウリル硫酸ナトリウム、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、ｌａｕｒｅｎｔｈ−９、ポリソルベート、ポリエチレングリコール−８−ラウリン酸塩、モノラウリン酸グリセリル、モノカプリル酸／カプリン酸グリセリル、ジカプリル酸／カプリン酸グリセリル、サポニン）、脂肪酸および誘導体（ラウリン酸ソルビタン、カプリン酸ナトリウム、パルミチン酸スクロース、ラウロイルコリン、ミリスチン酸ナトリウム、パルミトイルカルニチン）、グリセリド（リン脂質、モノヘキサノイン、中鎖グリセリド）、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、二ナトリウムＥＤＴＡ）、サリチル酸塩（サリチル酸、メトキシサリチル酸ナトリウム、アセチルサリチル酸）、ポリマーまたは多糖類（キトサンおよびキトサン誘導体、デキストラン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリカーボフィル、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびその誘導体、イヌリン、ペクチン、硫酸コンドロイチン）、その他物質（アゾン、塩化ベンズアルコニウム、フェノチアジン、硝酸ドナー、メントール）、新規物質（閉鎖帯毒素（ｚｏｎｕｌａ  ｏｃｃｌｕｄｅｎ  ｔｏｘｉｎ）、ポリ−ｌ−アルギニン、大豆誘導体グルコシド、シチコリン（ｃｉｔｉｃｈｏｌｉｎｅ）、アミノ酸ペプチド）が挙げられる。（Ｄｅｌｉ  ＭＡ（２００９）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（ＢＢＡ）−Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ  １７８８：８９２−９１０；Ｒｅｎｕｋｕｎｔｌａ  Ｊ，Ｖａｄｌａｐｕｄｉ  ＡＤ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ４４７：７５−９３；Ｓｈａｉｋｈ  Ｉ，Ｄｅｒｌｅ  ＮＤ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  ２：３４−９）を参照のこと。
一部の実施形態では、シクロデキストリンは、約２５００ｍｇ／ｋｇ  α−ＣＤの投与量で１週間に２回、対象に投与される（約７００ｍｇ／ｋｇ／日）。同じ投与量がＨＰ−β−シクロデキストリンに対して２名のＮＰＣの小児に使用され、「０．１〜１．０ｍＭの標的濃度」に対し、「１年にわたり、識別可能な副作用はなかった」。（ＩＮＤｓ  １０４，１１４および１０４，１１６、承認日：２００９−０４−１３）。他の実施形態では、投与量は、患者において腎臓の有害事象または溶血を生じさせない最も高い投与量まで経時的に調整される。一部の実施形態では、例えばα−ＣＤなどのシクロデキストリンは、少なくとも約１００ｍｇ、少なくとも約２００ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇ、少なくとも約１０００ｍｇ、少なくとも約２０００ｍｇ、少なくとも約５０００ｍｇまたは少なくとも約１０，０００ｍｇの投与量で対象に投与される。一部の実施形態では、例えばα−ＣＤなどのシクロデキストリンは、１日当たり約１〜約１０，０００ｍｇ、約１〜約７，５００ｍｇ、約１〜約５，０００ｍｇ、約１〜約２，５００ｍｇ、約１〜約１，０００ｍｇ、約１〜約５００ｍｇ、約１〜約２００ｍｇ、約２００〜約１０，０００ｍｇ、約２００〜約４，０００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約２，０００ｍｇ、約２００〜約１，０００ｍｇ、または約２００〜約５００ｍｇの範囲の投与量で対象に投与される。そうした一部の実施形態では、上述の各用量は、ｍｇ／ｋｇ／日である。使用され得る追加の用量は、本特許出願の詳細な説明のセクションにおいて提示される。
【００２１】
一部の実施形態では、本開示は、その必要のある対象において、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症を治療および／または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、当該対象に、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体（例えばＨＰ−α−ＣＤ）の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。一部の実施形態では、本開示は、リスクのある亜群に属する対象の指標を除き、疾患特異的な指標または症状を呈していない対象において、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を治療および／または予防する方法を提供する。一部の実施形態では、指標は、年齢である。一部の実施形態では、指標は、３０、４０、５０または６０歳よりも高い年齢である。
【００２２】
一部の実施形態では、本開示は、その必要のある対象において、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を治療または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、当該対象に、細胞外リン脂質を減少させる薬剤の有効量を投与する工程を含む。一部の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、上皮性癌（癌腫）である。一部の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、乳癌である。別の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、アルツハイマー病である。一部の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、パーキンソン病である。一部の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、ハンチントン病である。一部の実施形態では、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ：ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）である。
【００２３】
一部の実施形態では、本開示は、医薬組成物を含む様々な治療の組み合わせを提供する。一部の実施形態では、シクロデキストリンは、細胞障害剤介入、受容体アンタゴニスト、モノクローナル抗体、放射線治療、腫瘍組織除去などを含む、確立された薬学的、放射線学的、または外科的介入と組み合わされて使用される。
【００２４】
１つの実施形態では、対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象は、成人のヒトである。一部の実施形態では、対象は、リソソーム機能障害に起因する１つまたは複数の細胞的欠陥から生じる疾患または障害の治療の必要がある、および／または当該疾患または障害を発現するリスクを有するとして特定されている。一部の実施形態では、本開示は、ＨＰ−α−ＣＤと例えばカプリン酸ナトリウムなどの塩のクラスレートの有効量を含む組成物に関する。一部の実施形態では、ＨＰ−α−ＣＤと脂肪酸のモル比は、約０．５〜約５である。一部の実施形態では、ＨＰ−α−ＣＤと脂肪酸のモル比は、約２．０〜約１．０である。一部の実施形態では、ＨＰ−α−ＣＤと脂肪酸のモル比は、約１．５〜約１．０である。一部の実施形態では、ＨＰ−α−ＣＤと脂肪酸のモル比は、約１．０〜約１．０である。
【００２５】
一部の実施形態では、本開示は、ＨＰ−α−ＣＤと例えばカプリン酸ナトリウムなどの塩のクラスレートの有効量を含む医薬組成物に関し、当該組成物は、ベータ−シクロデキストリンおよび／またはα−ＣＤを含まない、または実質的に含まない。一部の実施形態では、本開示は、（ｉ）α−シクロデキストリン、その誘導体もしくはその塩のうちの１つまたは複数、および（ｉｉ）脂肪酸分子、を含む医薬組成物の有効量を投与することにより、本明細書に開示される任意の障害を治療する方法に関し、（ｉ）および（ｉｉ）のそれぞれは、α−シクロデキストリン、その誘導体もしくはその塩のうちの１つまたは複数のクラスレートを形成する重量である。一部の実施形態では、クラスレートは、約８０〜９０重量％のα−シクロデキストリン、その誘導体もしくはその塩のうちの１つまたは複数、および約１０〜２０重量％の脂肪酸である。一部の実施形態では、クラスレートは、約８５重量％のα−シクロデキストリン、その誘導体もしくはその塩のうちの１つまたは複数、および約１５重量％の脂肪酸である。一部の実施形態では、脂肪酸は、カプリン酸またはその塩である。
【００２６】
本開示は、その必要のある対象において、アルツハイマー病を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示は、その必要のある対象において、パーキンソン病を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示は、その必要のある対象において、ハンチントン病を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示は、その必要のある対象において、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示は、その必要のある対象において、多発性硬化症（ＭＳ）を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示方法のいずれか、一部の実施形態では、医薬組成物は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩のうちの１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせのクラスレートの有効量を含み、当該クラスレートは、中鎖脂肪酸またはその塩、およびα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩のうちの１つまたは複数、またはそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩のうちの１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせ、および脂肪酸は、クラスレートにおいて、約１５重量％の脂肪酸、および約８５重量％のα−シクロデキストリン、その誘導体、もしくは塩のうちの１つまたは複数、またはそれらの組み合わせの重量／重量比である。一部の実施形態では、脂肪酸とα−シクロデキストリンの重量：重量比は、血中への吸収に充分である。
【００２７】
本開示は、その必要のある対象において、炎症を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。本開示はまた、エンドサイトーシスと関連していると本開示において特定される任意の遺伝子の機能障害または欠陥性により生じるエンドサイトーシスの機能障害または欠陥を特徴とする乳癌または前立腺癌の局所転移を治療および／または予防する方法に関する。本開示はまたその必要のある対象において、リソソーム機能と関連していると本開示において特定される任意の遺伝子の機能障害または欠陥性により生じるリソソーム機能の機能障害または欠陥を特徴とする乳癌または前立腺癌の局所転移を治療および／または予防する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、本開示は、対象の血中のリン脂質レベルを低下させる方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。一部の実施形態では、血中のリン脂質を低下させる方法は、リゾリン脂質を排除することなく遂行される。本開示はまた、オートファジーを活性化する方法に関するものであり、当該方法は、α−シクロデキストリン、その誘導体、塩の内の１つもしくは複数、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物の有効量を、当該対象に投与する工程を含む。一部の実施形態では、オートファジーを改善または活性化する方法は、リソソームの機能障害を生じさせることなく遂行される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】ヒドロキシプロピルシクロデキストリンを含む、シクロデキストリン  最大でｎｘ３次の置換が認識されており、数多くの位置異性体および部位異性体が可能である。Ｒに対する置換としては、限定されないが、Ｈ（親）、メチル（ランダムなメチル化を含む）、ブチル、２−ヒドロキシプロピル（ＨＰ）（示される）、アセチル、スクシニル、グルコシル、マルトースイル、カルボキシメチルエーテル、リン酸エステル、単純ポリマー、またはカルボキシメチルが挙げられる。典型的なシクロデキストリンは、６（α−ＣＤ）、７（β−ＣＤ）または８（γ−ＣＤ）個のＤ−グルコース単量体を環中に含有し、ゲスト分子を自身の疎水性空洞に収容することができる円錐形を生成する。
【００３０】
【図２】α−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤとのコレステロール相互作用に関するクラスター解析。軌道の最後の２５ｎｓを提示する。ＣＤ分子は、固体表面提示法（ｓｏｌｉｄ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）を使用して表されており、プローブ半径は０．４Å、密度等位置（ｄｅｎｓｉｔｙ  ｉｓｏｖａｌｕｅ）は０．７、および格子間隔は０．５を用いて、結合空洞を可視化する。水素原子は、明白性のために省いた。（Ｓｈｉｔｙａｋｏｖ  Ｓ，Ｓａｌｍａｓ  ＲＥ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｓｃｉ  ４１：１７５−８４）からの改変である。
【００３１】
【図３】脂質放出の特異性  Ｉ。元の赤血球（３Ｂ）、またはシクロデキストリンで処理されたゴースト赤血球（３Ａおよび３Ｃ）からのリン脂質（３Ａ）、コレステロール（３Ｂ）およびタンパク質（３Ｃ）の放出。白丸：α−ＣＤ；黒丸：β−ＣＤ；白三角：γ−ＣＤ。（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２）からの改変である。
【００３２】
【図４】脂質放出の特異性  ＩＩ。４Ａ）様々な濃度のαおよびβ−ＣＤの存在下で２時間インキュベーションを行った後、脳毛細血管内皮細胞（ＢＣＥＣ：ｂｒａｉｎ  ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ）からコレステロールが放出された。結果は、ＢＣＥＣから放出されたコレステロールの百分率として、対照との比較で表されている。各百分率は、３個の別のフィルターの平均であり、２回の一連の独立した実験を表す。（４Ｂ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）（明円柱）およびスフィンゴミエリン（ＳＭ、暗円柱）は、それぞれ０．５、５および５０ｍＭのαならびにβ−ＣＤの存在下で２時間インキュベーションされた後にＢＣＥＣから放出された。結果は、ＢＣＥＣから放出されたリン脂質の百分率として、対照との比較で表されている。各百分率は、３個の別のフィルターの平均であり、２回の一連の独立した実験を表す。（Ｍｏｎｎａｅｒｔ  Ｖ，Ｔｉｌｌｏｙ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３１０：７４５−５１）からの改変である。
【００３３】
【図５】αＣＤではなく、ＭβＣＤが、酸化からＡ２Ｅを防御する。ビスレチノイド（ｂｉｓｒｅｔｉｎｏｉｄ）Ａ２Ｅは、目のリポフスチンの抽出物中で特定された最初の化合物である。酸化からのＡ２Ｅの防御は、５μＭ  Ａ２Ｅ溶液のＵＶ可視吸収スペクトルにおける変化でモニタリングされた。（５Ａ）指定されるシクロデキストリン（１２ｍＭ）の存在下での青色光照射の前（黒丸）および後（白丸）のＡ２Ｅの酸化状態。（５Ｂ）シクロデキストリンの存在下での、暗室、室温でインキュベーションした０時点（黒丸）および１日後（白丸）のＡ２Ｅの酸化状態。（Ｎｏｃｉａｒｉ  ＭＭ，Ｌｅｈｍａｎｎ  ＧＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１１：Ｅ１４０２−Ｅ８）の改変である。
【００３４】
【図６】ＣＧＥＭに対するｓｓＧＷＡＳ結果のＱＲプロット。個々の染色体に対する、凸射影のエンドポイント間のメジアンでの「ヌル」射影（水平）端。垂直線の右の遺伝子は、試験特異的な全ゲノム有意性に対するカットオフを上回る。カットオフより下の領域（左側）は、説明目的のためのみに提示している。
【００３５】
【図７】ＣＧＥＭに対するｍｕＧＷＡＳ結果のＱＲプロット（説明に関しては図６を参照）。
【００３６】
【図８】ＥＰＩＣに対するｓｓＧＷＡＳ結果のＱＲプロット（説明に関しては図６を参照）。
【００３７】
【図９】ＥＰＩＣに対するｍｕＧＷＡＳ結果のＱＲプロット（説明に関しては図６を参照）。
【００３８】
【図１０】ＰＢＣＳに対するｓｓＧＷＡＳ結果のＱＲプロット（説明に関しては図６を参照）。
【００３９】
【図１１】ＰＢＣＳに対するｍｕＧＷＡＳ結果のＱＲプロット（説明に関しては図６を参照）。
【００４０】
【図１２】ホスファチジル−イノシトール（ＰＩ）サイクル。ホスファチジル−イノシトール（ＰＩ）は、ｍｙｏ−イノシトール（ＨＭＩＴより輸入）と、ホスファチジン酸（ＰＡ）（ＣＤＰ−ＤＡＧを介して）から合成される。ＰＡはリゾホスファチジン酸（ｌｙｓｏ−ＰＡ（ＬＰＡ）、ＰＣ、または（細胞質）ホスファチジル−セリンＰＳ）から合成されることができ、またはＩＰ３およびＤＡＧからサルベージされることができる。また１−アシルＧＰＩからも合成されることができる。矢印：ＰＩサイクル内において、ホスホイノシチドは、ＰＩ−キナーゼにより３位、４位または５位でリン酸化され（左から右）、そして多量のホスファターゼにより加水分解される（右から左）。このＧＷＡＳにおいて乳癌と関連する遺伝子は、白黒逆転で強調されている（太字：ａＧＷＳ）。中心の幅のある矢印は、ＥＥＣに関与するホスホイノシチド（六角形として示される）の配列を示す。六角形：ＰＩ／ホスホイノシチド、ＰＭ：細胞膜、ＣＣＶ：クラスリン被覆小胞、ＵＣＶ：脱被覆小胞、ＥＥ：早期エンドソーム、ＬＥ：後期エンドソーム、ＬＹ：リソソーム。白黒逆転の遺伝子名は、ホスファチジルイノシトールシグナル伝達および／またはエンドサイトーシスに関連する遺伝子を示す。太い矢印は、エンドサイトーシスと関連するホスホイノシチドを示す。
【００４１】
【図１３Ａ】エンドサイトーシス機能（１３Ａ）およびエキソサイトーシス／リソソーム機能（１３Ｂ）のプロセス中のステージと、ｍｕＧＷＡＳに連座する遺伝子の公知の関連性。ボックス：エンドサイトーシス／エキソサイトーシスのステージにより本開示において特定された遺伝子。クラスリン被覆小胞（ＣＣＶ：ｃｌａｔｈｒｉｎ−ｃｏａｔｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）の形成およびＥ３ユビキチン化、活性インテグリン（緩慢リサイクル）からの不活性インテグリン（迅速リサイクル）の分離、分泌経路およびリソソーム経路および（緩慢）リサイクル経路間のソーティング、ならびにリソソーム分解。下線の遺伝子はそれぞれ、公知の乳癌プロモーターおよびサプレッサーである。クラスリン介在エンドサイトーシス（ＣＭＥ：ｃｌａｔｈｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）は、ヘテロ四量体クラスリンアダプター複合体ＡＰ−２と、ＰＩ（４，５）Ｐ２−リッチな細胞膜（ＰＭ：ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ）部位のクラスリンの共アセンブリから始まる。オープン構造のＡＰ−２は、クラスリンと、追加的なエンドサイトーシスタンパク質をリクルートする。それらの大部分も、ＰＩ（４，５）Ｐ２に結合する。クラスリン被覆凹部分（ＣＣＰ：ｃｌａｔｈｒｉｎ−ｃｏａｔｅｄ  ｐｉｔ）の成熟は、ＳＨＩＰ−２−介在性のＰＩ（４，５）Ｐ２のＰＩ（４）Ｐへの脱リン酸化が付随し得る。ＰＩ（３，４）Ｐ２の合成には、収縮したＣＣＰでのＰＸ−ＢＡＲドメインタンパク質ＳＮＸ９のアセンブリが必要であり、シナプトジャニンを介したＰＩ（４）ＰへのＰＩ（４，５）Ｐ２加水分解と並行して発生し得る。それにより、クラスＩＩ  ＰＩ３−キナーゼであるＰＩ３ＫＣ２αのクラスリン依存性のリクルートと活性化による、オーキシリン依存性小胞脱被覆が促進される。ＰＩ（３，４）Ｐ２は最終的に、ＰＩ（３）Ｐへと転換され、エンドソームＧＴＰａｓｅ  Ｒａｂ５のエフェクターである４−ホスファターゼＩＮＰＰ４Ａ／Ｂによりエンドソームへと配送される。（Ｐｏｓｏｒ  Ｙ，Ｅｉｃｈｈｏｒｎ−Ｇｒｕｎｉｇ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：７９４−８０４）から適用。早期エンドソーム（ＥＥ）において、β１インテグリンがソーティングされる。不活性インテグリンは、迅速「短ループ」リサイクルを経る。活性インテグリンは後期エンドソーム（ＬＥ：ｌａｔｅ  ｅｎｄｏｓｏｍｅ）／多小胞体（ＭＶＢ：ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｂｏｄｙ）へ向かい、緩慢「長ループ」リサイクル（ＲＡＢ１１）され、リソソーム分解（ＲＡＢ２５／ＣＬＩＣ３によりレスキューされない限り）され、またはＲＡＢ９に介在されるトランス−ゴルジ−ネットワーク（ＴＧＮ：ｔｒａｎｓ−Ｇｏｌｇｉ−ｎｅｔｗｏｒｋ）を介して分泌される。上皮成長因子受容体の迅速リサイクルは増殖を促進する。ゆえに１３Ａにおいて変異が特定されると、ＰＩサイクルへのリン脂質の流入が増加することが予測される。リソソーム小胞およびシナプス小胞のエキソサイトーシスは、多くの類似性を共有している。エンドリソソーム局在ホスホイノシチドは、リソソーム輸送を制御する可能性がある（Ｓａｍｉｅ  ＭＡ，Ｘｕ  Ｈ（２０１４）Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ  ５５：９９５−１００９）（一部はＫｅｇｇ経路のｈｓａ０４１４４およびｈｓａ０４７２１に由来する）。（Ｓｃｈｍｉｄ  ＳＬ，Ｍｅｔｔｌｅｎ  Ｍ（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ  ４９９：１６１−２；Ｂｏｈｄａｎｏｗｉｃｚ  Ｍ，Ｇｒｉｎｓｔｅｉｎ  Ｓ（２０１３）Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ  ９３：６９−１０６；Ｈｅｓｋｅｔｈ  ＧＧ，Ｐｅｒｅｚ−Ｄｏｒａｄｏ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｄｅｖ  Ｃｅｌｌ  ２９：５９１−６０６；Ｍｏｓｅｓｓｏｎ  Ｙ，Ｍｉｌｌｓ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８：８３５−５０）から適用。
【図１３Ｂ】同上。
【００４２】
【図１４】腫瘍細胞の移動および組織バリアを通過する浸潤の根底にあるエンドサイトーシス機序。図は、運動性細胞を示しており、その高度な葉状仮足は指向的に移動する（矢印）。接着斑（ＦＡ：ｆｏｃａｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ）が図示されており、インテグリンヘテロ二量体がこれらに存在している。細胞移動は、分極したエンドサイトーシス、およびＦＡ複合体の輸送を必要とする。インテグリンの内部移行は、ダイナミン（ｄｙｎａｍｉｎ）により制御される。ダイナミンは微小管（示さず）、ならびに例えばＦＡＫおよびタンパク質キナーゼＣα（ＰＫＣα）などのタンパク質キナーゼにより活性化される。細胞膜のクラスリン−およびカベオリン１（ＣＡＶ−１：ｃａｖｅｏｌｉｎ  １）被覆ドメインの両方ともが、インテグリンの内部移行に関与する。早期エンドソーム（ＥＥ：ｅａｒｌｙ  ｅｎｄｏｓｏｍｅ）内に入った時点で、インテグリンはリソソーム（ＬＹ：ｌｙｓｏｓｏｍｅ）での分解にソーティングされるか、ＲＡＢ４−依存性経路を介して細胞膜へリサイクルされるか、または核周囲のリサイクルコンパートメント（ＰＮＲＣ：ｐｅｒｉｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）へと輸送される。ＰＮＲＣからのリサイクルには、例えばＲＡＢ２５などのＲａｂ１１ファミリーを必要とし、一部のインテグリンヘテロ二量体に関しては、タンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ：ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｂ）−ＧＳＫ３β（グリコーゲン合成キナーゼ−β）軸、ＡＲＦ６または特定のＰＫＣ異性体も必要とする。ヒトの腫瘍はＲＡＢ２５を異常発現することが多く、成長因子誘導性のインテグリンヘテロ二量体の固有レパートリーを呈するか、または異常に安定化した微小管を提示し、これによりインテグリンの輸送が促進される。ＦＡＫ、インテグリン、ＲＡＢ２５およびＰＫＢは、腫瘍形成と関連する機能を有しており、および／またはヒト腫瘍において異常発現を呈する（Ｍｏｓｅｓｓｏｎ  Ｙ，Ｍｉｌｌｓ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８：８３５−５０から改変）。
【００４３】
【図１５】アルツハイマー病（ＡＤ）におけるＥＥＣ。ＡＰＰは、小胞体（ＥＲ：ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ）で合成され、ＴＧＮへと輸送されて、分泌小胞を介して細胞膜内に挿入される。細胞表面ＡＰＰは、エンドソームに内部移行することができ、そこから細胞表面へと戻しリサイクルされるか、またはリソソームに送達されて分解されることができる。ＥＥ内では、酸性環境がアミロイドベータの産生に有利に働くが、これはカテプシンによりリソソーム中で分解されるか、ＥＥ中に蓄積されるか、またはエキソサイトーシスを介して細胞外空間へと放出されることができる（Ｃｈｅｎ  Ｘ，Ｈｕｉ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓ  Ｄｉｓ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ  １から改変）。
【００４４】
【図１６】パーキンソン病（ＰＤ）におけるＥＥＣ。エンドサイトーシスに入った後、カーゴは、早期エンドソームへと輸送される。ここからカーゴは直接、またはリサイクルエンドソームを介して細胞膜へと戻しリサイクルされることができる。あるいはカーゴは、ＥＥ中に保持されることもでき、これがＬＥ／ＭＶＢを形成し、リソソームと融合して分解される。並行してカーゴは、ＥＥとトランス−ゴルジネットワーク（ＴＧＮ）の間を輸送される。これらプロセスの変化により、リソソーム機能障害と、細胞に毒性のある未分解高分子の蓄積が生じる（（Ｓｃｈｒｅｉｊ  ＡＭ，Ｆｏｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ）から適用）。
【００４５】
【図１７】アテローム性動脈硬化症（ＣＡＤ）におけるマクロピノサイトーシス。エンドサイトーシスにエントリー後、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）はリソソームに輸送され、分解される。リソソームプロセスに欠損があるとＬＤＬの蓄積が生じ、マクロファージが泡沫細胞へと変化して蓄積し、アテローム斑を形成する。
【００４６】
【図１８Ａ】癌（１８Ａ）、ＡＤ／ＰＤ（１８Ｂ）およびＣＡＤ（１８Ｃ）におけるリソソーム機能障害。公表されている結果から、様々な疾患にわたり、リソソームクリアランスの低下につながる（横向に向かい合う黒三角）、および癌ではリソソームからのインテグリン回収の増加につながる（下向き矢印）、リソソーム機能障害の重複遺伝子リスク因子が示されている。
【図１８Ｂ】同上。
【図１８Ｃ】同上。
【００４７】
【図１９】エンドサイトーシスを「ハイジャック」するウイルス。ウイルス粒子は、細胞内への侵入をクラスリン介在性エンドサイトーシスに依存している。ＣＣＶ：クラスリン被覆小胞。（Ｂｌａｉｓｉｎｇ  Ｊ，Ｐｏｌｙａｋ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０７：８４−９４）の図２から改変。
【００４８】
【図２０】ＡＤマウス細胞におけるＭβＣＤ。ＭβＣＤ（Ｍ−β−ＣＤ）は、αセクレターゼ切断産物Ｃ８３のレベル上昇をもたらし（Ａ）、そして細胞内ＡＰＰｓβレベルの低下をもたらす（ＡおよびＢ）。ＡＰＰｓαレベルは、Ｍ−β−ＣＤ処置細胞からの培地中で増加しており、一方でＡＰＰｓβレベルは変化しなかった（ＣおよびＤ）（（Ｃｏｌｅ  ＳＬ，Ｇｒｕｄｚｉｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０：１８７５５−７０）から適用）。
【００４９】
【図２１】ａ−ＳｙｎのＨＰ−β−ＣＤクリアランス。ＨＰ−β−ＣＤ介在性のａ−sｙｎ凝集体のクリアランスは、ＨＰ−β−ＣＤのコレステロールレベルを変える能力には依存しない。ＨＰ  −β−ＣＤ（１ｍＭ）またはＨＰ−β−ＣＤ−コレステロール複合体（１ｍＭ）で２４時間処理された、または処理されていないＨ４／ａ−ｓｙｎ−ＧＦＰ細胞。代表的な画像を示す。２１Ａ）ＦＬＡＧ特異抗体を使用したＴＦＥＢ細胞内局在性の免疫蛍光顕微鏡分析。スケールバーは、１０μｍを示す。２１Ｂ）ａ−ｓｙｎ−ＧＦＰの蛍光顕微鏡分析。スケールバーは、２０μｍを示す。（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）の図６を改変。
【００５０】
【図２２】マウス脳におけるコレステロールの蓄積。様々なＣＤで処理された３週齢のマウスの脳細胞における非エステル化コレステロール（ＵＣ：ｕｎｅｓｔｅｒｉｆｉｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）蓄積。ＵＣを検出するフィリピンで染色された未処置マウスの背部新皮質の蛍光サンプル顕微鏡写真。皮層は、ローマ数字で印をつけている。事実上、未処置Ｎｐｃ１−／−マウスのすべてのニューロンがＵＣの細胞質染色に陽性を示しており（白いスポット）、Ｗｔマウスでは陰性であった。ＨＰ−β−ＣＤは、ＵＣ蓄積において非常に効果的な減少を示している。ＨＰ−α−ＣＤのＵＣ蓄積は、明白に減少しているが、著者らによると「肉眼観察では未処置マウスと同等」と報告されている。（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＣＤ，Ｆｉｓｈｍａｎ  ＹＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｎｅｕｒｏｌ  ３：３６６−８０）の図１から改変。
【００５１】
【図２３】リソソーム蓄積疾患におけるＣＤ。ＭＬ１１１線維芽細胞中の拡張されたリソソームを示すｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ赤色染色を使用したシクロデキストリンの効果。ウォルマン（ＬＡＬ）、ＴＳＤ、ファブリー（ＧＬＡ）、ファーバー（ＡＣ）、ＭＰＳＩＩＩＢ：ムコ多糖症ＩＩ型Ｂ（ＮＡＧＬＵ）、ＮＰＡ：ニーマンピックＡ型（ＡＳＭ）、ＨＢＣＤ：ＨＰ−β−ＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ）。本発明者らによると、「他のシクロデキストリンは、強い効果を有していなかった」（ＭｃＫｅｗ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  ＷＥＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４））。しかしながら６ｍＭのα−ＣＤ（Ｍ−β−ＣＤ投与量の１／５）の効果は、８ｍＭのＨＰ−β−ＣＤの効果よりも強かったことが見落とされていた。（ＭｃＫｅｗ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  ＷＥＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４））から改変。
【００５２】
【図２４】ピノサイトーシス／ファゴサイトーシス／エンドサイトーシス：マクロピノサイトーシス、ファゴサイトーシスおよびエンドサイトーシスは、ＰＩサイクルにより同じように制御されており、３つすべてのプロセス経路においてリソソームの機能障害は、排出されるべき望ましくない機能を有した基質を生じさせる（（Ｓｏｌｅ−Ｄｏｍｅｎｅｃｈ  Ｓ，Ｃｒｕｚ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ３２：８９−１０３）の図１から改変）。
【００５３】
【図２５】ＨＰβＣＤはオートファジーを活性化する。ＨＰ−β−ＣＤの投与により、転写因子のＥＢ  ＴＦＥＢの活性化が生じる。細胞質から核へとその位置が変わると、ＴＦＥＢは、リソソームとオートファゴソームの生合成および融合に関与する遺伝子の発現を制御する。結果として、ＨＰ−β−ＣＤの投与により、オートファジーの基質であるセロイド脂肪色素のクリアランスが増強される。しかしＨＰ−β−ＣＤがＴＦＥＢの活性化を改善するメカニズムは判明していない（（Ｓｏｎｇ  Ｗ，Ｗａｎｇ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：１０２１１−２２）から適用）。
【００５４】
【図２６】ＨＰｂＣＤによるＴＦＥＢの活性化：ＨＰ−β−ＣＤは、転写因子ＥＢ（ＴＦＥＢ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＥＢ）を活性化することが示されているが、その作用機序は不明である（図２５）。尿検査結果（実施例１６）から確認される予想外の遺伝的結果（実施例２）からは、ＨＰ−β−ＣＤの作用機序は、（ａ）血清リン脂質の低下、（ｂ）ＰＩ−サイクル活性の低下、（ｃ）エンドサイトーシスの低下、（ｄ）リソソームストレスの予防、（ｅ）ＭＴＯＲＣ１活性化の予防、（ｆ）継続的なＴＦＥＢの脱リン酸化および移動、（ｇ）継続的なオートファジーの活性化であることが示された。（Ｋｉｍ  Ｓ，Ｃｈｏｉ  ＫＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：２４９３３；Ｍｅｄｉｎａ  ＤＬ，Ｂａｌｌａｂｉｏ  Ａ（２０１５）Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  １１：９７０−１）から適用。
【００５５】
【図２７】図  ２７：多発性硬化症（ＭＳ）におけるファゴサイトーシス／エンドサイトーシス。ＭＳの病因において、悪質なサイクルは、健康なミエリン鞘からのミエリンプローブをミクログリアがファゴサイトーシスすることから始まる。リソソーム（ＬＹ）が、これらプローブのすべてを破棄させる能力を失った場合、それらの一部は抗原としてＴ細胞とＢ細胞に提示される。その後、それらは脳血液関門（ＢＢＢ：ｂｌｏｏｄ  ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ）を通過し、末梢マクロファージを活性化する。その後、それらマクロファージはＣＮＳに浸潤し、ミエリンをエンドサイトーシスして、破壊する。（Ｓａｌｔｅｒ  ＭＷ，Ｓｔｅｖｅｎｓ  Ｂ（２０１７）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１０１８−２７；Ｌｕｏ  Ｃ，Ｊｉａｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒ  Ｄｉｓ  Ｔｒｅａｔ  １３：１６６１−７）から改変。同じ機序が、アルツハイマー病およびレット症候群においても関与している（Ｐｒｉｎｚ  Ｍ，Ｐｒｉｌｌｅｒ  Ｊ（２０１４）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １５：３００−１２）。
【００５６】
【図２８】ＭβＣＤは表面張力を修復する。「［ウシ脂質抽出物サーファクタント］ＢＬＥＳ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｌｉｐｉｄ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）を用いた動的循環２０回の間の最小表面張力。２７ｍｇ／ｍｌＢＬＥＳの対照ＣＢＳ緩衝溶液（チェックのバー）、５０％  ｗ／ｗ  ＦＦＡ（オレイン酸［，ＯＡ］）もしくはＬＰＣ（水平バー）の対照ＣＢＳ緩衝溶液、または４０ｍｇ／ｍｌ  Ｍ−β−ＣＤを含有する緩衝液（黒色のバー）を含む（＊＊  ｐ≦０．０１、＊＊＊  ｐ≦０．００１）。ＦＦＡまたはＬＰＣを含むＢＬＥＳは、著しい機能障害を示したが、Ｍ−β−ＣＤの存在下で正常な機能性にまで回復した。コレステロールはこれらの実験において非常に低い濃度（約２．１％）で存在した。」（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａ  Ｌ，Ａｌ−Ｓａｉｅｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）の補足図Ｓ６から改変。
【００５７】
【図２９】ＨａＣａＴ増幅。自然発生的に不死化された異数性ヒト（ＨａＣａＴ）角化細胞の増殖に対するシクロデキストリンの影響。４８時間のインキュベーション後の少なくとも６回の独立した測定値の平均値は、対照に対して正規化された。上：ＡＴＰ−アッセイ、下：ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ−アッセイ）。Ｗ６：α−ＣＤ、Ｗ７：β−ＣＤ、Ｗ７  ＨＰ：ＨＰ−β−ＣＤ。（Ｈｉｐｌｅｒ  ＵＣ，Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄｅｒ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  Ａ  ８３：７０−９）から改変。
【００５８】
【図３０】ＨａＣａＴカスパーゼ３／７活性。ＨａＣａＴ角化細胞のカスパーゼ３／７活性に対するシクロデキストリンの影響。インキュベーション（２４時間）後の少なくとも６回の独立した測定値の平均値は、対照およびタンパク質含有量に対して正規化された。Ｗ６：α−ＣＤ、Ｗ６：β−ＣＤ、Ｗ７  ＨＰ：ＨＰ−β−ＣＤ。（Ｈｉｐｌｅｒ  ＵＣ，Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄｅｒ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  Ａ  ８３：７０−９）から改変。
【００５９】
【図３１】ＨａＣａＴラクトースデヒドロゲナーゼ。ＨａＣａＴ角化細胞のラクトース−デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）に対するシクロデキストリンの影響。インキュベーション（４８時間）後の少なくとも６回の独立した測定値の平均値は、対照およびタンパク質含有量に対して正規化された。Ｗ６：α−ＣＤ、Ｗ６：β−ＣＤ、Ｗ７  ＨＰ：ＨＰ−β−ＣＤ。（Ｈｉｐｌｅｒ  ＵＣ，Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄｅｒ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  Ａ  ８３：７０−９）から改変。
【００６０】
【図３２】ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン（ＨＰ−ＣＤ）による可溶性の強化。ＨＰ−シクロデキストリンによる脂質の見掛け可溶度の強化。「０」と示されるバーは、等張リン酸緩衝生理食塩水における見掛け可溶度を表す。α、βおよびγと示されているバーは、同じ生理食塩水であるが、５％（ｗ／ｗ）濃度の各ＨＰ−シクロデキストリンが補充されている場合の可溶度を表す。ＭＷ：分子量。（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｆｕｋｕｎａｇａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８１：５２４−８）、図１から改変。
【００６１】
【図３３】α−ＣＤおよびβ−ＣＤの腎毒性。ラットにおけるα−ＣＤおよびβ−ＣＤの非経口投与と関連した同様のリスクに関するＥＭＡ（および数人の他の著者ら）による２０１７年の評価は、単一の研究（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）に基づいている。
【００６２】
【図３４】ＣＤの耳毒性。１２週齢での聴性脳幹反応（ＡＢＲ：ａｕｄｉｔｏｒｙ  ｂｒａｉｎｓｔｅｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）の記録により評価された様々なＣＤの耳毒性。個々のマウスに対する聴覚閾値のプロットから、特定のＣＤで処理されたマウス全体で微小な変動が明らかとなった。ただし聴覚閾値の変動がより高かったＨＰγＣＤは除く。（Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＣＤ，Ｆｉｓｈｍａｎ  ＹＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｎｅｕｒｏｌ  ３：３６６−８０）の図５Ｂから改変。
【００６３】
【図３５】乳癌細胞株におけるシクロデキストリンによる創傷治癒。破線の水平線は、それぞれ１ｍＭおよび４ｍＭのＨＰαＣＤにおける創傷治癒阻害を示す。（固定された）ブロックとして、ＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１を用いた、ＨＰαＣＤとＨＰβＣＤを比較したＡＮＯＶＡのＰ値が示されている。１ｍＭ  ＨＰαＣＤと１ｍＭ  ＨＰβＣＤの比較。ｐ＝．０００１１ｍＭ  ＨＰαＣＤと２ｍＭ  ＨＰβＣＤの比較。ｐ＝．０２５２４ｍＭ  ＨＰαＣＤと４ｍＭ  ＨＰβＣＤの比較。ｐ＝．０４４２（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｄａｄｕｒｉａｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １３：ｅ０１９９０１２）から改変された。
【００６４】
【図３６】創傷治癒アッセイ：Ｃｅｌｌ  ＢｉｏＬａｂｓ社のＡｓｓａｙ  ＣＢＡ−１２０から改変された。
【００６５】
【図３７】ＰＬ選択性の影響：（図１２の上部左側の角、解説については図１２を参照）ＨＰ−α−ＣＤは、ＰＣ（および潜在的にＰＩ）のみを排除し、限定されないが、ｓＰＬＡ２の上流であるＬＰＣおよびＬＰＡを含むリゾリン脂質は排除しなかった。これによりＰＣはＬＰＣとアラキドン酸（ＡＡ：ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）へと分割される。
【００６６】
【図３８Ａ】処置によるＢＣａの体重（Ａ）および腫瘍体積（Ｂ）。個々の曲線とメジアンを示す。Ａ：底部の「†」および曲線中の「＋」は、未確認の理由による死亡を示す。Ｂ：ＨＰ−α−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤの両方ともが効果的である（全体的な治療効果  日＊治療（Ｄ＊Ｔ）＜．００１、無作為因子としてマウスを用いたＡＮＯＣＡ）。ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高い（ペアワイズ治療効果  日＊治療（Ｄ＊Ｔ｜ａ：ｂ）＝０．０２５８、無作為因子としてマウスを用いたＡＮＯＣＡ）。
【図３８Ｂ】同上。
【００６７】
【図３９】ＢＣａの肺および肝臓転移。多変量データに対する、ｕ−統計量を介した二変数（肺／肝臓）データのペアワイズ比較からのＰ値（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｌｅｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｔａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１５７９−９２）。
【００６８】
【図４０】ＢＣａ血漿サイトカイン。個々のＰ値は、２サンプルのｔ検定ｐ（ｂ）から導かれている：ＨＰ−β−ＣＤとビヒクルの比較、ｐ（ａ）：ＨＰ−α−ＣＤとビヒクルの比較、ｐ（ａ：ｂ）：ＨＰ−α−ＣＤとＨＰ−β−ＣＤの比較。６種すべてのサイトカインに対する全体的なＰ値は、多変量データに対するｕ−統計量を介して算出される（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｌｅｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｔａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１５７９−９２）。
【００６９】
【図４１】ＨＴＴマウス：体重。推定値は、平均±ＳＤであり、全体的な治療＊日相互作用に対する（Ｐ（Ｔ＊Ｄ））、性別によるＰ値（Ｆ：メス、Ｍ：オス）は、無作為因子としてマウスを用いた混合モデルＡＮＯＶＡから導かれている。
【００７０】
【図４２】ＳＯＤ１マウス：体重。推定値は、平均±ＳＤであり、全体的な治療＊日相互作用に対する（Ｐ（Ｔ＊Ｄ））、性別によるＰ値（Ｆ：メス、Ｍ：オス）は、無作為因子としてマウスを用いた混合効果ＡＮＯＶＡから導かれている。
【００７１】
【図４３】使用されるＦＰＬＣカラムのタイプに対するＦＰＬＣ標準曲線。４３Ａ）ＨＰ−α−ＣＤ（ＨＰａＣＤ、１１８０Ｄａ）は、大部分が分画２（名目上の１０６０−１２６７Ｄａ）で測定されることが確認される。４３Ｂ）ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、殆どが分画５（名目上の７３４−７９５Ｄａ）で測定されることが確認される。
【００７２】
【図４４】ＨＰａＣＤ、ＦＡ混合物（＆）とクラスレートの比較。活性物質としてそれぞれ１５ｇのＨＰ−α−ＣＤ、ならびに様々な型の浸透強化剤を含有する様々なＨＰ−α−ＣＤ調製物を摂取した８時間後の朝の尿のＦＰＬＣ。ＨＰａＣＤ：ＨＰ−α−ＣＤのみ（ｎ＝５）。ＨＰａＣＤ＆ＦＡ：（Ｔｕｖｉａ  Ｓ，Ｐｅｌｌｅｄ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：２０１０−２１）において提唱されるＨＰａＣＤと１０％ｗ／ｗのカプリン酸ナトリウム、ならびに浸透強化油性懸濁液（ＰＥ）の混合物（ｎ＝５）。ＨＰａＣＤ／ＦＡ：ＨＰ−α−ＣＤ／ＦＡクラスレート（ｎ＝５）。ＨＰａＣＤ／ＦＡ＆ＰＥ（ｎ＝４）：クラスレートは、上述の浸透強化剤と混合された。軸：図４３にあるとおり。Ｙ軸は以下の添加されたラベルを含む：ａＣＤ、ＰＣおよびＬＰＣは、ＨＰ−α−ＣＤ  分画２（１０６０−１２６７  Ｄａ）、ホスファチジルコリン分画５（７２４−７９５  Ｄａ）、およびリゾ−ホスファチジルコリン分画９と１０（４５０−５３４  Ｄａ）において特定された基質のメジアン量を示す。ｙ軸で言及されている分画は、ｘ軸上で同じラベルにより示される。上向きの白抜きの矢印はそれぞれ、ＨＰ−α−ＣＤに対応するメジアン（水平線）と、４つの混合物および／またはクラスレートの各々に対するメジアン（短い水平の点線）の間の差異を示す。
【００７３】
【図４５】βＣＤの臨床有効性に関するインビボでの証拠。乳癌、パーキンソン病、アルツハイマー病、ＣＡＤ、全身性エリテマトーデス／ＡＬＳ／ＭＳ、嚢胞性線維症／ＩＰＦ、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨ、およびＴ２ＤＭの動物モデルにおけるβ−ＣＤの有効性は一貫して、コレステロールを排除するβ−ＣＤの能力に起因していた（Ｃｈｏｌ、破線の矢印）。これが現在よく知られているコレステロール介在性の耳毒性のリスクを担っている。しかしコレステロールの枯渇が様々な表現型を改善し得るメカニズムは殆ど説明されていない。臨床結果からは、これら疾患のうちのいくつかにおけるリン脂質の上方制御も示されている。しかしながらβ−ＣＤも、リン脂質（リン脂質）を排除し、ＰＩサイクル（真ん中）を下方制御する。このことが直接、様々な疾患の表現型に利益をもたらす（黒い矢印）。
【００７４】
【図４６】ＨＰ−α−ＣＤが、ＬＹ機能を修復する：（図２６の更新）。ＨＰ−β−ＣＤは、転写因子ＥＢ（ＴＦＥＢ）を活性化することが示されているが、その作用機序は不明である（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９；Ｓｏｎｇ  Ｗ，Ｗａｎｇ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：１０２１１−２２；Ｓａｒｄｉｅｌｌｏ  Ｍ（２０１６）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １３７１：３−１４；Ｍｏｏｒｓ  ＴＥ，Ｈｏｏｚｅｍａｎｓ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  １２：１１）。尿分析結果（実施例１６）により確認された予想外の遺伝的結果（実施例２）が、その機序を特定した。ＴＦＥＢの核への移動活性化は直接的な活性化ではなく、リン脂質の排除がオートファジーを減少させ、過充填リソソームが、抗加齢薬剤であるレスベラトロールとラパマイシンの標的であるＭＴＯＲＣ１を活性化してしまうことを予防し、それによってＴＦＥＢの移動の阻害を予防している。結果として、アルツハイマー病ではアミロイドベータおよびタウ、パーキンソン病ではα−シヌクレイン、ＣＡＤではＬＤＬ、脊髄小脳失調（ＳＣＡ：ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ａｔａｘｉａ）ではアタキシン（Ａｔａｘｉｎｓ）、ＭＳではミエリン、ＡＬＳではＳＯＤ１における様々なタンパク質の凝集が予防される。（Ｋｉｍ  Ｓ，Ｃｈｏｉ  ＫＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：２４９３３；Ｍｅｄｉｎａ  ＤＬ，Ｂａｌｌａｂｉｏ  Ａ（２０１５）Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  １１：９７０−１；Ｓａｒｄｉｅｌｌｏ  Ｍ（２０１６）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １３７１：３−１４；Ｍｏｏｒｓ  ＴＥ，Ｈｏｏｚｅｍａｎｓ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  １２：１１；Ｍａｒｔｉｎｉ−Ｓｔｏｉｃａ  Ｈ，Ｘｕ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３９：２２１−３４）から適用。
【００７５】
【図４７】ＨＰ−α−ＣＤが炎症を減少させる：アラキドン酸（ＡＡ）に対する、およびアラキドン酸の下流の類似効果を有する公知の薬剤に対するα−ＣＤの作用。α−ＣＤの作用は、ｓＰＬＡ２の阻害ではなくＰＣを拘束することであり、コルチコステロイドの作用よりも忍容性良好である。イブプロフェンとクロモリンの併用は、乾燥粉末吸入剤ＡＬＺＴ−ＯＰ１（Ｅｌｍａｌｅｈ  Ｄ（２０１７））として検証されている。これとは対照的にα−ＣＤは３つすべての経路を下方制御するものであり、ＡＳＡ、ＮＳＡＩＤＳまたはＬＯＸ阻害剤の標的ではない経路で認められる代償性活性化を予防する。さらにα−ＣＤとは対照的に、エンドサイトーシスに対する作用は予測されていない。ゆえにオートファジーの改善をしても相乗的な抗炎症作用もないと予測される（ｈｔｔｐ：／／ｔｍｅｄｗｅｂ．ｔｕｌａｎｅ．ｅｄｕ／ｐｈａｒｍｗｉｋｉ／ｄｏｋｕ．ｐｈｐ／ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ＿ｔｏ＿ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｓから改変）。
【００７６】
【図４８】α−ＣＤ／ペメトレキセド化合物：化合物を、葉酸受容体を有する癌細胞近傍に標的化するために、α−ＣＤ（または例えばヒドロキシプロピルを伴うＨＰ−α−ＣＤの誘導体）は、非限定的な例として、ジスルフィドリンカーを用いてペメトレキセドに結合されることができる。このリンカーは、、エステルを介してα−ＣＤとペメトレキセドの両方に結合される。ジスルフィドリンカーは、システインまたは３−メルカプトプロピオン酸のいずれかと、２−メルカプト−エタノールにより形成され得る。エステルまたはジスルフィド結合（破線のボックス）は、すでに確立されている方法により形成することができ、例えば（Ｍｉｃｈｅｌ  Ｄ，Ｃｈｉｔａｎｄａ  ＪＭ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｐｈａｒｍ  ８１：５４８−５６）および（Ｈｕｎｔｅｒ  Ｒ，Ｓｔｅｌｌｅｎｂｏｏｍ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｙｎｌｅｔｔ  ２５２−４）（１つのＨ２Ｏを除去し、各々が、２個のＯＨからＯを形成する）、ならびに（Ｂｕｔｔ  ＡＭ，Ｍｏｈｄ  Ａｍｉｎ  ＭＣ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  １０：１３２１−３４）（Ｈ２を除去し、２つのＳＨからＳ−Ｓを形成する）に記載される方法が挙げられる。
【００７７】
【図４９Ａ】遺伝的解析：表４（図４９Ａ〜４９Ｃ）は、ｍｕＧＷＡＳ／ｓｓＧＷＡＳにおいて、ＩＰＶ６／ＩＰＶ１：−ｌｏｇ１０（ｐ値）を介して実施された遺伝的解析を示す。
【図４９Ｂ】同上。
【図４９Ｃ】同上。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
本開示は、乳癌遺伝子データの３つの独立したセットの再解析に基づいた、特定の疾患関連コレクションの研究結果に部分的に基づいている。乳癌遺伝子データは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ’ｓ  ｄｂＧａＰ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから分析用に利用可能である。この再解析は初期の解析とは異なっており、新規のコンピューター生物統計学的手法を使用している。この手法は、遺伝学に関する知識を、方法自体に取り込んでいる。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）実施例に詳述されるように、本方法は、同じデータで従来的なバイオインフォマティクス法を使用した過去の解析では検討し損ねた以下の４点に対処するものである：（ｉ）リスクアレルと発生率の間の非加算的関連性、（ｉｉ）シス−エピスタシス相互作用、（ｉｉｉ）有意性と、マイナーアレル頻度または「ＭＡＦ」の間の相関、および（ｉｖ）非無作為化バイアス。さらに、ディプロタイプ長、つまり広域座位を使用する方法から生じる問題に対する多重度の調整にも対処する。これらの点に対処することにより、過去に２つの新規な自閉症特異的な遺伝子コレクションを特定した同じ戦略で、今度はエンドサイトーシスとリソソーム機能に関連した別の新規の遺伝子コレクションが特定された。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【００７９】
本明細書において提示される１つの遺伝子コレクション（図１２、上部左側の角）は、８個の遺伝子（ＡＧＰＡＴ３／４  ＡＴＰ８Ａ１／Ｂ１、ＡＢＣＡ１、ＡＮＯ４、ＬＰＰＲ１、ＤＧＫＱ）を含み、その役割には、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）サイクルにその基質であるＰＩを提供することが含まれる。アルツハイマー病では、「ＰＩは、症例の９０％もの多くにおいて、認知症の症状が発生する２年前に記憶障害を正確に予想し得るたった１０個の血清脂質のうちの１つである」（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）。２つ目の遺伝子クラスターは、ホスホイノシチドにより制御されるプロセスであるエンドサイトーシスと直接関連する遺伝子を含む（表４、ＰＩ／ＥＣカラム）。その段階としては、限定されないが、ＣＣＶおよびＥＥの陥入と形成が含まれる（図１３）。この発見に基づき、本開示は部分的には、癌治療の焦点を、高齢の対象であっても多くの生命機能に関与するプロセスである細胞増殖の制御から、出生前および出生後早期の発育の間に主に関連するプロセスである細胞の拡散、移動および浸潤の制御へとシフトさせることを提示するものである。これらの研究結果に基づき、本明細書において詳述されるように、本開示は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を、ＰＩサイクルとその活性を調節することにより治療するための組成物および方法を提供する。本開示において驚くべき結果のうちの１つは、同じ介入によって、加齢に関連した慢性的炎症（炎症性老化）も減少させたことである。さらに一部の実施形態では、本開示は、神経細胞の成長をはじめとする細胞の移動はほとんど停止している一方で、例えば毛髪、皮膚などの増殖といった細胞の増殖は継続し、他の細胞メカニズムは加齢に伴い減少し得る、例えば成人期などの期間に、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の治療に有用であり得る組成物および方法を提供する。
【００８０】
別の部分では、本開示は、腎毒性は主にβ−ＣＤに対して示されているにも関わらず、α−ＣＤもβ−ＣＤと同様に腎毒性があると普遍的に考えられている、公開されている研究結果の解釈の再評価に基づいている。β−ＣＤは、α−ＣＤよりも水溶性がかなり低く、ゆえにラットの腎臓で認められている長期的な細胞質の結晶形成のリスクが高くなる（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）。例えばＨａＣａＴ細胞増殖（図２９）、カスパーゼ活性（図３０）およびラクトースデヒドロゲナーゼ（図３１）において、通常は安全なＨＰ−β−ＣＤレベルで、β−ＣＤと比較したα−ＣＤの毒性の低さが示されている。
【００８１】
要約すると、「［Ｊｏｉｎｔ  Ｅｘｐｅｒｔ］  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ［ｏｎ  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ（ＪＥＣＦＡ）］（ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品添加物専門家会議）は、動物における当該化合物の相対的な毒性の低さと、ベータ−シクロデキストリンよりも毒性が低かったという事実により、ヒトの忍容性試験は可能であったと再確認した。」（Ｐｒａｋａｓｈ  ＡＳ，Ａｂｂｏｔｔ  ＰＪ（２００１）ＷＨＯ／ＪＥＣＦＡ  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｉｔｉｖｅ  Ｓｅｒｉｅｓ  ４８：１０３０）
【００８２】
２０１４年に、ＣＨＭＰは、１日最大摂取許容量（ＰＤＥ：Ｐｅｒｍｉｔｔｅｄ  Ｄａｉｌｙ  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ）の閾値を提唱しており、これを超えると有害事象が発生し得る。α−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤの非経口投与は、０．０２および１０ｍｇ／ｋｇ／日である（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＣＨＭＰ）（２０１７）Ｅｕｒｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／３３３８９２／２０１３）。２０１７年１０月９日に、これらの閾値が見直され、それぞれ２００ｍｇ／ｋｇ／日となった（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＣＨＭＰ）（２０１７）Ｅｕｒｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／３３３８９２／２０１３）。そしてシクロデキストリンが、応用処置に関するガイドライン（ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｄｉｅｎｔ）に含められた（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ（２０１７）ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／３０２６２０／２０１７／ＥＮ）（表１）。
表１：賦形剤および添付文書の情報。
【表１】
2020535235.tif 000002
【００８３】
別の実施形態では、送達率を減少させることにより腎毒性はさらに低下する。当該方法は、１日当たりの反復投与を含む工程、蠕動ポンプを介して数時間にわたり薬剤を投与する工程、または移植薬剤送達システムを介して継続的に薬剤を投与する工程を含む。
【００８４】
本開示の主な実施形態の一部は、本明細書の上述の要約、ならびに実施例、図面および請求の範囲に記載されている。発明を実施するための形態のセクションは、本開示の組成物および方法に関する追加の説明を提供するものであり、本特許出願の要約、実施例、図面および請求の範囲を含む、本特許出願の他のすべてのセクションと併せて読み取られることが意図されている。
Ｉ．略語と定義
【００８５】
「Ａβ」および「Ａｂ」という略語は、アミロイドベータを指す。
【００８６】
「ａＣＤ」、「αＣＤ」および「α−ＣＤ」という略語は、アルファ−シクロデキストリンを指す。
【００８７】
「ＡＤ」という略語は、アルツハイマー病を指す。
【００８８】
「ＡＫＴ」という略語は、タンパク質キナーゼＢを指す。
【００８９】
「ＡＬＳ」という略語は、筋萎縮性側索硬化症を指す。
【００９０】
「ＡΦ」という略語は、オートファジーを指す。
【００９１】
「ＡＰＰ」という略語は、アミロイド前駆体タンパク質を指す。
【００９２】
「α−ｓｙｎ」および「ａｓｙｎ」という略語は、アルファ−シヌクレインを指す。
【００９３】
「ＢＣａ」という略語は、乳癌を指す。
【００９４】
「ｂＣＤ」、「βＣＤ」および「β−ＣＤ」という略語は、ベータ−シクロデキストリンを指す。
【００９５】
「Ｃａ」という略語は、カルシウムを指す。
【００９６】
「ＣＡＤ」という略語は、冠動脈疾患を指す。
【００９７】
「ＣＤ」という略語は、シクロデキストリンを指す。
【００９８】
「ＣＤＫ」という略語は、サイクリン依存性キナーゼを指す。
【００９９】
「ＣＦ」という略語は、嚢胞性線維症を指す。
【０１００】
「ＣＧＥＭ」という略語は、感受性に関する癌遺伝子マーカー（Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ）を指す。
【０１０１】
「Ｃｈｒ」という略語は、染色体を指す。
【０１０２】
「ｄｂＧａＰ」という略語は、遺伝子型および表現型のデータベースを指す。
【０１０３】
「ＤＮＡ」という略語は、デオキシリボ核酸を指す。
【０１０４】
「ＥＣ」という略語は、エンドサイトーシスを指す。
【０１０５】
「ＥＥ」という略語は、早期エンドソームを指す。
【０１０６】
「ｅ．ｇ．」という略語は、ラテン語での例示（例えば）を指す。
【０１０７】
「ＥＰＩＣ」という略語は、癌に関する欧州前向きコホート研究（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ）を指す。
【０１０８】
「ＥＲ」という略語は、小胞体を指す。
【０１０９】
「ＦＡＫ」という略語は、焦点接着キナーゼを指す。
【０１１０】
「Ｆｃ」という略語は、結晶化可能な断片を指す。
【０１１１】
「ＦＤＡ」という略語は、米国食品医薬品局を指す。
【０１１２】
「ＦＳＧＳ」という略語は、巣状分節状糸球体硬化症を指す。
【０１１３】
「ｇＣＤ」および「γＣＤ」という略語は、ガンマ−シクロデキストリンを指す。
【０１１４】
「ＧＰＣＲ」という略語は、Ｇ−タンパク質共益受容体を指す。
【０１１５】
「ＧＲＡＳ」という略語は、一般的に安全とみなされる（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ）、を指す。
【０１１６】
「ＧＷＡＳ」という略語は、全ゲノム関連解析を指す。
【０１１７】
「ＧＲＡＳ」という略語は、一般的に安全とみなされる（ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ）、を指す。
【０１１８】
「ＨＡ」という略語は、ヒアルロン酸を指す。
【０１１９】
「ＨＥＲ２／ｎｅｕ」という略語は、受容体チロシン−タンパク質キナーゼｅｒｂＢ−２を指す。
【０１２０】
「ＨＬＡ」という略語は、ヒト白血球抗原を指す。
【０１２１】
「ＨＰ」という略語は、ヒドロキシプロピルを指す。
【０１２２】
「ＨＰａＣＤ」、「ＨＰ−α−ＣＤ」および「ＨＰαＣＤ」という略語は、２−ヒドロキシプロピル−アルファ−シクロデキストリンを指す。
【０１２３】
「ＨＰｂＣＤ」、「ＨＰ−β−ＣＤ」および「ＨＰβＣＤ」という略語は、ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンを指す。
【０１２４】
「ＩＮＤ」という略語は、治験薬を指す。
【０１２５】
「ＩＰＶ」という略語は、逆Ｐ値（ｉｎｖｅｒｓｅ  ｐ−ｖａｌｕｅ）を指す。
【０１２６】
「ｉ．ｖ．」という略語は、静脈内を指す。
【０１２７】
「ＬＤ」という略語は、連鎖不均衡を指す。
【０１２８】
「ＬＤ５０」という略語は、半数致死量を指す。
【０１２９】
「ＬＥ」という略語は、後期エンドソームを指す。
【０１３０】
「ＬＰＣ」という略語は、リゾホスファチジルコリンを指す。
【０１３１】
「ＬＹ」という略語は、リソソームを指す。
【０１３２】
「ＬＹＤ」という略語は、リソソーム機能障害を指す。
【０１３３】
「ＭＡＦ」という略語は、マイナーアレル頻度を指す。
【０１３４】
「ＭＡＰ」という略語は、マイトジェン活性化タンパク質を指す。
【０１３５】
「Ｍ−β−ＣＤ」、「ＭβＣＤ」および「ＭｂＣＤ」という略語は、メチル−β−シクロデキストリンを指す。
【０１３６】
「ＭΦ」という略語は、マクロファージを指す。
【０１３７】
「ＭＳ」という略語は、多発性硬化症を指す。
【０１３８】
「ｍＴＯＲ」という略語は、ラパマイシンの機構的標的を指す。
【０１３９】
「ｍｕＧＷＡＳ」という略語は、多変量Ｕ−統計量ＧＷＡＳを指す。
【０１４０】
「ＭＶＢ」という略語は、多小胞体を指す。
【０１４１】
「Ｎｏ．」という略語は、数値を指す。
【０１４２】
「ＮＩＨ」という略語は、国立衛生研究所を指す。
【０１４３】
「ＮＰＣ」という略語は、ニーマンピック病Ｃ型を指す。
【０１４４】
「ＰＢＣＳ」という略語は、ポーランド人の乳癌症例対照研究（Ｐｏｌｉｓｈ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃａｓｅ−Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｓｔｕｄｙ）を指す。
【０１４５】
「ＰＣ」とは、ホスファチジルコリンを指す。
【０１４６】
「ＰＣａ」という略語は、前立腺癌を指す。
【０１４７】
「ＰＤ」という略語は、パーキンソン病を指す。
【０１４８】
「ＰＩ」という略語は、ホスファチジルイノシトールを指す。
【０１４９】
「ＰＩ３Ｒ」という略語は、ホスホイノシチド−３キナーゼを指す。
【０１５０】
「ＰＩＰ」という略語は、ホスホイノシチドを指す。
【０１５１】
「ＰＩＰ１」という略語は、ＰＩ（４）Ｐを指す。
【０１５２】
「ＰＩＰ２」という略語は、ＰＩ（４，５）Ｐ２を指す。
【０１５３】
「ＰＩＰ３」という略語は、ＰＩ（３，４，５）Ｐ３を指す。
【０１５４】
「ＰＭ」という略語は、細胞膜を指す。
【０１５５】
「ＰＫＢ」という略語は、タンパク質キナーゼＢを指す。
【０１５６】
「ＰＫＣ」という略語は、タンパク質キナーゼＣを指す。
【０１５７】
「ＰＬ」という略語は、リン脂質を指す。
【０１５８】
「ＱＱ」という略語は、「分位数−分位数」（ｑｕａｎｔｉｌｅ−ｑｕａｎｔｉｌｅ）を指す。
【０１５９】
「ＱＲ」という略語は、「分位数−順位」（ｑｕａｎｔｉｌｅ−ｒａｎｋ）を指す。
【０１６０】
「ＲＴＫ」という略語は、受容体チロシンキナーゼを指す。
【０１６１】
「ｓ．ｃ．」という略語は、皮下を指す。
【０１６２】
「ＳＬＥ」という略語は、全身性エリテマトーデスを指す。
【０１６３】
「ＳＮＰ」という略語は、一塩基多形を指す。
【０１６４】
「ｓｓＧＷＡＳ」という略語は、単一−ＳＮＰ（ｓｉｎｇｌｅ−ＳＮＰ）全ゲノム関連解析を指す。
【０１６５】
「ＴＦＥＢ」という略語は、転写因子ＥＢを指す。
【０１６６】
「ＴＳＣ」という略語は、結節性硬化症を指す。
【０１６７】
「Ｕ．Ｓ．」という略語は、米国を指す。
【０１６８】
本明細書および請求の範囲において使用される場合、「ａ」および「ａｎ」という不定冠詞は、逆であることが明白に示唆されない限り、「少なくとも１つ」を意味するものと理解されたい。
【０１６９】
本明細書および請求の範囲において使用される場合、「および／または」という文言は、そう併せられる要素の「いずれか、または両方」を意味するものと理解されたい。すなわち、要素は、一部の例では、接続して存在し、別の例では分離して存在する。「および／または」の文言で具体的に特定される要素以外の他の要素も、逆であることが明白に示唆されない限り、具体的に特定される要素に関連、または非関連であろうと、任意で存在し得る。ゆえに非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」という言及は、例えば「含む」といったオープンエンドな言語と併せて使用される場合、１つの実施形態では、Ｂを伴わないＡを指し（任意でＢ以外の要素を含む）、別の実施形態では、Ａを伴わないＢを指し（任意でＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、ＡとＢの両方を指す（任意で他の要素を含む）。
【０１７０】
明細書および請求の範囲において使用される場合、「または」は、上記に規定される「および／または」と同じ意味を有すると理解されたい。例えばリストにおいて項目を分けるとき、「または」または「および／または」は、包含であると解釈されるべきである。すなわち、要素の数またはリストのうちの少なくとも１つの包含であるが、複数も含み、そして任意で追加のリストにない項目も含む。例えば「ただ１つの０１」または「〜のうちの厳密に１つ」、または請求の範囲において使用されるときの「〜からなる」は、要素の数またはリストのうちの、厳密に１つの要素の包含を指す。概して、本明細書において使用される場合、「または」という用語は、排他性の条件が先行する場合、排他的な代替物（すなわち「１つまたは他方であるが、両方ではない」）を示すものとして解釈される。「いずれか」、「〜のうちの１つ」、「〜のうちの１つのみ」、または「〜のうちの厳密に１つ」、「〜から本質的になる」は、請求の範囲において使用される場合、特許法の分野において使用される通常の意味を有するものとする。
【０１７１】
例えば量、時間的な期間などの計測可能な値に言及する場合、本明細書において、「約」という用語は、特定される値から±２０％、±１０％、±５％、±１％、±０．９％、±０．８％、±０．７％、±０．６％、±０．５％、±０．４％、±０．３％、±０．２％または±０．１％の変動を、そうした変動が本開示方法の実施に適しているときに、包含することを意味する。
【０１７２】
本明細書において使用される場合、「担体」という用語は、化合物とともに投与される希釈剤、アジュバント、または賦形剤を意味する。薬学的な担体は、例えば水および油などの液体であってもよく、石油、動物、植物または合成を起源とするものが挙げられ、例えばピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油などがある。薬学的な担体は、生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってもよい。さらに補助剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤、および着色剤が使用されてもよい。
【０１７３】
本明細書において使用される場合、「含むこと」（および例えば「含む」および「含まれる」などの含むことの任意の形態）、「有すること」（および例えば「有する」などの有することの任意の形態）、「含有すること」（および例えば「含有する」などの含有することの任意の形態）または「包含すること」（および例えば「包含する」などの包含することの任意の形態）という文言は、包括的またはオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素または方法の工程を除外しない。
【０１７４】
本明細書において使用される場合、「その必要のある」という文言は、動物または哺乳動物が、特定の方法または治療の必要を有していると識別されたことを意味する。一部の実施形態では、当該識別は、任意の診断手段によるものであってもよい。本明細書に開示される方法および治療のいずれかにおいて、動物または哺乳動物は、その必要があってもよい。一部の実施形態では、動物または哺乳動物は、特定の疾患、障害または状態が流行している環境中にいる、またはそうした環境に旅行するものであってもよい。
【０１７５】
本明細書において使用される場合、「治療する」、「治療すること」および「治療」という用語は、臨床転帰における望ましい変化を目的とする様々な活動を包含する。例えば本明細書において使用される場合、「治療する」という用語は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態、例えば限定されないが、乳癌および前立腺癌などの癌腫、または例えば限定されないがパーキンソン病およびアルツハイマー病などの神経変性疾患、または例えば限定されないがアテローム性動脈硬化症、ＣＡＤおよび脳卒中などの冠動脈疾患、または例えば限定されないがＴ２ＤＭなどの消化器系障害の１つもしくは複数の臨床指標または症状における任意の検出可能な改善を包含する。例えばそうした用語は、少なくとも１つの臨床指標もしくは症状を軽減、減弱、改善、緩和、低下、阻害または減速させること、または追加的な臨床指標もしくは症状を予防すること、１つもしくは複数の臨床指標または症状の進行を減少または減速させること、１つもしくは複数の臨床指標または症状の退行を生じさせること、疾患もしくは障害を原因とする状態を緩和すること、を包含する。治療的処置の場合において、本明細書に提示される方法および組成物は、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標または症状を１つまたは複数、すでに呈している対象において使用されてもよい。悪性もしくは神経変性の疾患または障害の場合において、様々な臨床指標または症状が医師および当業者に公知である。
【０１７６】
本明細書において使用される場合、「予防する」または「予防すること」という用語は、疾患、障害もしくは症状の始まりを止めること、ならびに疾患もしくは障害の進行または悪化を減少または減速させること、を包含する。例えば、乳癌または前立腺癌を「予防すること」は、限定されないが、癌性細胞の形成、腫瘍増殖、癌の局所的播種の阻害、または悪性増殖物転移の阻害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、ＡＬＳおよび／またはＭＳの症状発生の予防が挙げられる。予防的処置の場合には、本明細書に提示される方法および組成物は、疾患もしくは障害の任意の明白な、または検出可能な臨床指標または症状をまだ呈していないが、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害を発症するリスクがあると考えられる対象において、症状進行を予防するために、または臨床症状を呈することを予防するために使用されてもよい。
【０１７７】
「悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態」という用語は、本明細書において当分野の通常の使用法に従い使用され、限定されないが、例えば癌腫、乳癌、前立腺癌などの悪性障害、胸部悪性腫瘍および前立腺悪性腫瘍、ならびに例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、および脳の過成長症候群［および］シャルコー・マリー・トゥース病を含む広範な障害などの神経変性疾患が挙げられる（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）。
【０１７８】
本明細書において使用される場合、「癌」または「過増殖性疾患」という用語は、細胞の過増殖を特徴とする疾患および障害を指すことが意図される。過増殖性疾患の例としては、癌、乾癬、新生物および過形成のすべての形態が挙げられる。
【０１７９】
「対象」、「個体」および「患者」という用語は本明細書において相互交換可能に使用され、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。哺乳動物としては、限定されないが、マウス科、サル、ヒト、家畜、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、イヌ、スポーツ動物およびペットが挙げられる。インビボで取得された、またはインビトロで培養された組織、細胞およびその子孫物も、対象という用語の定義に包含される。「対象」という用語はさらに、本明細書全体を通じて使用され、一部の実施形態では、細胞サンプルが採取された動物、または開示される細胞もしくは核酸配列が投与された動物を記載するためにも使用される。一部の実施形態では、動物は、ヒトである。特定の対象、例えばヒトに特異的な状態の治療に関しては、「患者」という用語が、相互交換可能に使用され得る。本開示の記載内容の一部の例において、「患者」という用語は、特定の疾患または障害に罹患するヒト患者を指す。一部の実施形態では、対象は、内皮細胞サンプルが単離される、または提供される非ヒト動物であってもよい。「哺乳動物」という用語は、ヒトと非ヒトの両方を包含し、限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ科、ネコ科、マウス科、ウシ属、ウマ科、ヤギおよびブタを含む。
【０１８０】
本明細書において使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、例えば上述の「治療」において記載される望ましい臨床転帰の１つまたは複数を実現する、または実現に寄与するために充分である本明細書に記載の活性剤の量を指す。任意の個体症例における適切な「有効」量は、例えば用量漸増試験などの当分野に公知の標準的な方法を使用して決定されてもよい。一部の実施形態では、本明細書において使用される場合、「治療有効量」という用語は、症状を改善する、遅延させる、もしくは予防する、腫瘍サイズを縮小させる、非転移性癌から転移性癌へと癌が進行するのを予防する、または癌もしくは神経変性疾患の治療を受けている患者の生存期間を延長させるために有効な活性剤、または剤の組み合わせの量を指すことが意図される。治療有効量の決定は、特に本明細書に詳細に開示される内容を考慮することで、当業者の能力の範囲内にある。
【０１８１】
一部の実施形態では、シクロデキストリンまたはその誘導体またはその薬学的に許容可能な塩は、他の治療剤と共投与されてもよく、および／または放射線治療を含む治療レジメンの一部と共投与されてもよい。
【０１８２】
治療剤の共投与は、いずれか順序で連続的であってもよく、または同時であってもよい。一部の実施形態では、シクロデキストリンまたはその誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩は、複数の追加の治療剤と共投与される。化学療法剤の例としては、普遍的な細胞障害剤または細胞増殖抑制剤が挙げられ、例えばメトトレキサート（アメトプテリン）、ドキソルビシン（アドリマイシン）、ダウノルビシン、シトシンアラビノシド、エトポシド、５−４フルオロウラシル、メルファラン、クロラムブシルおよび他のナイトロジェンマスタード（例えばシクロホスファミド）、シスプラチン、ビンデシン（および他のビンカアルカロイド）、マイトマイシン、ならびにブレオマイシンが挙げられる。他の化学療法剤としては、プロチオニン（大麦粉オリゴペプチド）、マクロモマイシン、１，４−ベンゾキノン誘導体およびトレニモンが挙げられる。抗癌抗体、例えばハーセプチン、および毒素も、他の追加的治療剤の例である。
【０１８３】
治療レジメンには、シクロデキストリンまたはその誘導体またはその薬学的に許容可能な塩の連続的投与と、いずれか順序または同時の放射線照射治療の開始が含まれてもよい。当業者であれば、適切な放射線治療レジメンを容易に考案することができる。Ｃａｒｌｏｓ  Ａ  Ｐｅｒｅｚ  ＆  Ｌｕｔｈｅｒ  Ｗ  Ｂｒａｄｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．ＪＢ  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ，Ｐｈｉｌａ，１９９２。当該文献は、その全体で参照により本明細書に組み込まれ、本開示に使用され得る放射線治療プロトコールおよびパラメーターを記載する。
【０１８４】
併用療法の一部として使用される場合、阻害剤の治療有効量は、他の治療手段を伴わずに使用される場合に有効であるために必要とされる用量よりも当該量が少なくなるように調整されてもよい。
【０１８５】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物を用いた治療に、外科的介入が先行する。
【０１８６】
本開示はさらに、癌細胞中のエキソーム数を、当該癌細胞とシクロデキストリンの治療有効量を接触させることにより減少させる方法に関する。
【０１８７】
本明細書において使用される場合、「医薬組成物」という用語は、本明細書に記載の活性剤（例えばα−ＣＤ）を少なくとも１つ、および例えば担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、賦形剤などの薬物送達における使用に適した他の構成要素を１つまたは複数、含有する組成物を指す。本開示は、本明細書に開示される任意のアルファ−デキストリンまたはその誘導体もしくは塩と、薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物に関する。一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示されるいずれか１つもしくは複数の脂肪酸分子またはその塩を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ベータシクロデキストリンまたはガンマシクロデキストリンを含まない。
【０１８８】
本明細書において使用される場合、「活性剤」という用語は、本明細書に記載の組成物および方法において使用されることが意図される分子、および例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を治療する目的に対し、生物学的に活性であることが意図される分子を指す。「活性剤」という用語は、生物学的に活性な形態であるか、またはそうした形態へと転換され得る分子を含むことが意図される。例えば「活性剤」という用語は、プロドラッグ、および／または不活性もしくは意図される生物活性がないが、活性な形態もしくは意図される生物活性を有する形態へと転換され得る分子を含む。
【０１８９】
本明細書において使用される場合、「サンプル」という用語は概して、限定された量の何らかの物質を指し、より大量の当該物質と類似している、またはより大量の当該物質を表すものであることが意図される。本開示において、サンプルは、コレクション、スワブ、擦過物、剥離物、生検、採取組織または外科的切除物であり、疾患または障害の臨床指標に対して検査される。一部の実施形態では、サンプルは、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を有すると考えられる患者または対象から採取される。一部の実施形態では、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標を含有すると考えられるサンプルは、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標のうちの１つまたは複数を含有しないことが知られている対照サンプルに対して比較される。一部の実施形態では、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標を含有すると考えられるサンプルは、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標を含有しないことが知られている対照サンプルに対して比較される。一部の実施形態では、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の臨床指標を含有すると考えられるサンプルは、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態などの疾患または障害の同じ臨床指標を含有する対照サンプルに対して比較される。
【０１９０】
本明細書において使用される場合、「排除する」という用語は、取り込み、または化学的に混合され、限定されないが、排出のために腎臓に輸送されることを意味する。
【０１９１】
「塩」という用語は、無機酸および／または有機酸で形成される酸性塩、ならびに無機塩基および／または有機塩基で形成される塩基性塩を指す。これらの酸および塩基の例は、当業者に公知である。そうした酸付加塩は通常、薬学的に許容可能であるが、非薬学的に許容可能な酸の塩も、対象の化合物の調製および精製において有用である場合がある。本実施形態の塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸から形成されるものが含まれる。
【０１９２】
一部の実施形態では、１つまたは複数を含む組成物の塩は、遊離塩基またはその塩、エナンチオマーもしくはラセミ体と、適切な酸の１もしくは複数当量を反応させることにより形成されてもよい。一部の実施形態では、本開示の薬学的に許容可能な塩とは、少なくとも１つの塩基性基または少なくとも１つの塩基性ラジカルを有するアミノ酸を指す。一部の実施形態では、本開示の薬学的に許容可能な塩は、酸付加塩を形成する遊離アミノ基、遊離グアニジノ基、ピラジニルラジカル、またはピリジルラジカルを含む。一部の実施形態では、本開示の薬学的に許容可能な塩とは、対象化合物と（例えば）塩酸、硫酸またはリン酸などの無機酸との酸付加塩、または適切な有機カルボン酸もしくはスルホン酸、例えば脂肪属モノカルボン酸もしくはジカルボン酸、例えばトリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸もしくはシュウ酸との酸付加塩であるアミノ酸、または例えばアルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸、芳香族カルボン酸、例えば安息香酸、２−フェノキシ−安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、芳香脂肪族（ａｒｏｍａｔｉｃａｌｉｐｈａｔｉｃ）カルボン酸、例えばマンデル酸もしくは桂皮酸、ヘテロ芳香族カルボン酸、例えばニコチン酸もしくはイソニコチン酸、脂肪族スルホン酸、例えばメタンスルホン酸、エタンスルホン酸もしくは２−ヒドロキシエタンスルホン酸、または芳香族スルホン酸、例えばベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエン酸、ナフタレンスルホン酸との酸付加塩であるアミノ酸を指す。いくつかの塩基性基が存在する場合、モノ酸付加塩またはポリ酸付加塩が形成されてもよい。反応は、塩が不溶性である溶媒または培地中で実施されてもよく、または塩が可溶性である溶媒中で実施されてもよく、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフランまたはジエチルエーテル、または溶媒混合物などがあり、それらは真空除去もしくは凍結乾燥により除去され得る。反応は、複分解プロセスであってもよく、またはイオン交換樹脂で実施されてもよい。一部の実施形態では、塩は、患者にとって生理学的に忍容なものであってもよい。本開示による塩は、無水形態で存在してもよく、または水和結晶形態（すなわち、１つまたは複数分子の水とともに錯体化または結晶化）として存在してもよい。
【０１９３】
「可溶」または「水溶」という用語は、１／１００，０００（ｍｇ／ｍｌ）よりも高い溶解度を指す。物質または溶質の溶解度は、例えば水などの特定の溶媒質量に完全に溶解され得る物質の最大質量である。他方で「事実上の不溶」または「不溶」とは、１／１０，０００（ｍｇ／ｍｌ）以下の水溶解度を指す。水溶物質または可溶物質としては、例えばポリエチレングリコールが挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、ポリエチレングリコールに結合されて、当該ペプチドを含有する組成物をさらに可溶化させてもよい。
【０１９４】
本明細書において使用される場合、「相同性」または「配列同一性」の百分率は、独立型で実行可能なＢＬＡＳＴエンジンプログラムを使用して２配列をブラスト（ｂｌａｓｔ）することにより決定される（ｂｌＺｓｅｑ）。このプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のｆｔｐサイトからデフォルトパラメーターを使用して検索可能である（Ｔａｔｕｓｏｖａ  ＴＡ，Ｍａｄｄｅｎ  ＴＬ（１９９９）ＦＥＭＳ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｌｅｔｔｅｒｓ  １７４：２４７−５０。当該論文はその全体で参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１９５】
一リン酸、二リン酸もしくは三リン酸の基または部分を含有するリン酸塩に適用される場合の「誘導体」という用語は、当該基の化学的改変を指し、この場合において当該改変は、一リン酸、二リン酸もしくは三リン酸の基または部分を含有するリン酸塩の１つまたは複数の原子の付加、除去または置換を含んでもよい。複数の実施形態において、そうした誘導体は、一リン酸、二リン酸もしくは三リン酸の基または部分を含有するリン酸塩のプロドラッグであり、それらは対象、患者、細胞、生物サンプルへの投与後、または対象、患者、細胞、生物サンプルもしくはタンパク質（例えば酵素）との接触後に、当該誘導体から、一リン酸、二リン酸もしくは三リン酸の基または部分を含有するリン酸塩へと転換される。ある実施形態では、三リン酸塩誘導体は、ガンマ−チオ三リン酸塩である。ある実施形態では、誘導体は、ホスホロアミデートである。複数の実施形態では、一リン酸、二リン酸もしくは三リン酸の基または部分を含有するリン酸塩の誘導体は、Ｍｕｒａｋａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．，２０１１，５４，５９０２；Ｓｏｆｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２０１０，５３，７２０２；Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．ＡＣＣ，２０１０，５４，３１８７；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．，２０１１，２，１３０；Ｆｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，２０１１，９１，１２０；Ｖｅｒｎａｃｈｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＣ，２０１１，５５，１８４３；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ，ＡＡＣ，２０１１，４４，７６；Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣＬ，２０１０，２０，７３７６；Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，２０１１，８５，１２３３４；Ｓｏｆｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，５５，２４８１，Ｈｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００８，５１，２３２８；またはＲａｕｔｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．，２００８，７，２５５に記載されている誘導体である。これら全文献が、すべての目的に対し、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。
【０１９６】
追加の定義および略語は、本特許明細書において別段で提示されるか、または当分野に公知である。
追加説明
【０１９７】
悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、ウイルス性もしくは加齢関連の疾患、障害または他の状態は、それらが共通経路にそって多くの遺伝子が関与するという意味で複雑な状態である。例えば、限定されないがアテローム性動脈硬化症、ＣＡＤおよび脳卒中をはじめとする心血管疾患（ＣＶＤ）と神経変性疾患は、Ｔ２ＤＭの併存疾患であることが知られている。ホスホイノシチドのＰＩ（３，４，５）Ｐ３およびＰＩ（３，４）Ｐ２が悪性腫瘍と神経変性疾患において上方制御されていること（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）、およびＡｋｔシグナル伝達を活性化すること（Ｏｏｍｓ  Ｌｉｓａ  Ｍ，Ｂｉｎｇｅ  Ｌａｕｒｅｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ２８：１５５−６９；Ｍａ  Ｋ，Ｃｈｅｕｎｇ  ＳＭ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ  ２０：６８４−９４；Ｍａｊｅｒｕｓ  ＰＷ，Ｙｏｒｋ  ＪＤ（２００９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：Ｓ２４９−Ｓ５４；Ｂｒｉｄｇｅｓ  Ｄ，Ｓａｌｔｉｅｌ  ＡＲ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：８５７−６６）という研究結果に部分的に基づくと、ＰＩシグナル伝達は、広範な加齢関連疾患に関与していると広く考えられている。ＩＮＰＰ４Ｂは、一部の癌のサプレッサーとして知られているが、限定されないが、乳癌または前立腺癌を含む他の癌に対してはリスク因子としても知られている（Ｗｏｏｌｌｅｙ  ＪＦ，Ｄｚｎｅｌａｄｚｅ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ２１：５３０−２；Ｃｈｅｗ  ＣＬ，Ｃｈｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５−６）。ＰＩ３Ｋシグナル伝達も、加齢、認知低下およびアルツハイマー病において示唆されている（Ｏ’Ｎｅｉｌｌ  Ｃ（２０１３）Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ  ４８：６４７−５３）。さらに「単剤のＰＩ３Ｋ阻害剤を用いた臨床結果は、今までのところわずかなものであった」（Ｍａｙｅｒ  ＩＡ，Ａｒｔｅａｇａ  ＣＬ（２０１６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  ６７：１１−２８）。これは部分的には、従来のＧＷＡＳでは、ＰＩシグナル伝達が癌および神経変性疾患などの複雑な状態に寄与する正確なメカニズムを解明することがほとんどできなかったことが原因である。
【０１９８】
本明細書において提示される結果からは、限定されないが乳癌および前立腺癌ならびにアルツハイマー病およびパーキンソン病、アテローム性動脈硬化症、ならびに２型糖尿病をはじめとするこれらすべての状態が、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）サイクルの過活性により特徴づけられる。一部の態様において、本開示は、乳癌および前立腺癌、心血管疾患、代謝疾患、ならびにパーキンソン病またはアルツハイマー病の治療方法を提供するものであり、当該方法は、対象に、ＰＩサイクルを下方制御してエンドサイトーシス／エキソサイトーシスの変化を惹起させ、細胞の移動および浸潤を減衰もしくは低下させ、または限定されないがＬＤＬ、ＡＰＰ、タウ、ミエリン、ＳＯＤ１、ＨＴＴおよびα−シヌクレインをはじめとするタンパク質の処理をもたらす１つまたは複数の活性剤の治療有効量を投与する工程を含む。さらにそうした活性剤は、例えば他の適応症に対してヒトにおいてすでに安全に使用されており、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の治療における使用のために別用途に使用され得る薬剤または薬剤化合物であり得る。
【０１９９】
他の提唱される用途は、上述の加齢関連疾患と同じメカニズムが関与する広範な疾患における用途であり、限定されないが、神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）（Ｓｏｎｇ  Ｗ，Ｗａｎｇ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：１０２１１−２２）、パーキンソン病、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）およびハンチントン病（ＨＤ）、脳卒中（Ｖｅｃｓｅｒｎｙｅｓ  Ｍ，Ｆｅｎｙｖｅｓｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｒｃｈ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  ４５：７１１−２９；Ｒｉｖｅｒｓ  ＪＲ，Ｍａｇｇｏ  ＳＤ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ２３：１３４−８）、アテローム性動脈硬化症（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｆｕｋｕｎａｇａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８１：５２４−８；Ｚｉｍｍｅｒ  Ｓ，Ｇｒｅｂｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ８：３３３ｒａ５０）、非アルコール性脂肪肝症（ＮＡＦＬＤ）（Ｗａｌｅｎｂｅｒｇｈ  ＳＭ，Ｈｏｕｂｅｎ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ  １６：２１０５６−６９）、限定されないが嚢胞性線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む呼吸器および肺の疾患（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａ  Ｌ，Ａｌ−Ｓａｉｅｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ；Ｄｏｓ  Ｓａｎｔｏｓ  ＡＧ，Ｂａｙｉｈａ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５９：１９３０−４０；Ｃａｔａｌｄｏ  Ｄ，Ｅｖｒａｒｄ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＵＳ  ９０３４８４６  Ｂ２）、２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）およびインスリン抵抗性（Ｌｌａｎｏｓ  Ｐ，Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ−Ｆｅｒｒａｔ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ３０８：Ｅ２９４−３０５）、プリオン病（Ｐｒｉｏｒ  Ｍ，Ｌｅｈｍａｎｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ８１：１１１９５−２０７）、ならびに限定されないがウイルス（インフルエンザ、ＨＩＶ−１、ポリオ、ＨＴＬＶ−１、ニューカッスル、水痘帯状ヘルペス、Ｂ型肝炎、ブルータングおよびＨＳＶ）の細胞侵入をはじめとするウイルス、真菌または細菌感染からの防御（Ｄａｎｔｈｉ  Ｐ，Ｃｈｏｗ  Ｍ（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７８：３３−４１；Ｂａｌｌａ  Ｔ（２０１３）Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９３：１０１９−１３７；Ｓｈｉｓｈｉｄｏ  ＴＫ，Ｊｏｋｅｌａ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １１２：１３６６９−７４）が挙げられる。
【０２００】
スフィンゴ脂質とセラミドも、糸球体上皮細胞の機能障害（限定されないが、ファブリー病、テイ・サックス病、アルポート症候群、微小変化型疾患、糖尿病性腎疾患、巣状分節状糸球体硬化症、末期腎疾患、腎不全、糸球体上皮細胞減少症（ｐｏｄｏｃｙｔｏｐｅｎｉａ）、高ホモシステイン血症、ステロイド抵抗性ネフローゼ症候群を含む）ならびに癌、血管新生、アテローム性動脈硬化症、炎症およびインスリン抵抗性に関与している（Ａｂｏｕ  Ｄａｈｅｒ  Ａ，Ｅｌ  Ｊａｌｋｈ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ  １８）。
【０２０１】
ホスホイノシチドは、エンドサイトーシスを制御しており（Ｐｏｓｏｒ  Ｙ，Ｅｉｃｈｈｏｒｎ−Ｇｒｕｎｉｇ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：７９４−８０４）、限定されないが、筋肉および角膜のジストロフィーまたは筋細管ニューロパチーを含む遺伝性疾患、限定されないが白血病（ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＣＭＬ）およびリンパ腫（ＮＨＬ）を含む癌、てんかんならびに血栓症における薬剤標的として挙げられている（Ｖｉａｕｄ  Ｊ，Ｍａｎｓｏｕｒ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  １２５：２５０−８）。ホスホイノシチドの制御異常に関連した神経疾患としては、限定されないが、フリードライヒ失調症、シャルコー・マリー・トゥース（ＣＭＴ）変性性ニューロパチー、腎尿細管障害（レーベの眼脳腎症候群、デント病）、アンデルセン・タウィル症候群、ムコリピドーシス、多発性硬化症（ＭＳ）、ユニス−バロン（Ｙｕｎｉｓ−Ｖａｒｏｎ）症候群、ＡＬＳ、ＦＴＬＤおよび繊毛病が挙げられる（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）。ホスホイノシチドの制御異常に関連した追加疾患は、骨粗しょう症、癌（限定されないが、子宮頸癌、平滑筋肉腫、胃癌、腺癌、肺癌を含む）、心臓肥大および自己免疫性疾患（限定されないが、リウマチ性関節炎（ＲＡ）および全身性エリテマトーデスを含む）、ならびに限定されないが双極性障害および統合失調症を含む神経疾患である（Ｆａｌａｓｃａ  Ｍ（２０１２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）。
【０２０２】
多くの他の疾患も、リソソームに影響を与える機能喪失型変異に関連することが知られている。リソソームにおいて、ピノエンドサイトーシス／エンドサイトーシスされた細胞外物質およびオートファゴサイトーシスされた細胞内物質の多くが分解されなければならない（Ｗａｎｇ  Ｃ，Ｔｅｌｐｏｕｋｈｏｖｓｋａｉａ  ＭＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ４８：５２−８）。すべての症例において、疾患表現型は、分解されなければならないピノサイトーシス／エンドサイトーシスされた物質の量を減少させることにより改善されるであろう（ＭＰＳ：ムコ多糖、ＭＬＤ：異染性白質ジストロフィー）：
【０２０３】
ＡＢＣＡ１：腎疾患；ＡＢＣＡ２：聴神経腫；ＡＢＣＢ９：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；ＡＣＰ２：酸ホスファターゼ欠損症、円すい角膜、筋萎縮性側索硬化症、無毛症、アメーバ症；ＡＣＰ５：脊椎内軟骨異形成（ｓｐｏｎｄｙｌｏｅｎｃｈｏｎｄｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａ）、骨巨細胞腫、ヘアリー細胞白血病、歯吸収；ＡＧＡ：アルパルチルグルコサミン尿症、フコシドーシス；ＡＰ３Ｂ１：ハーマンスキー・パドラック症候群（ＨＰＳ）、眼皮膚白皮症、血小板プール症；ＡＰ３Ｂ２：神経学的腫瘍随伴障害；ＡＲＳＡ：ＭＬＤ、アリールスルファターゼａ欠損症、多重スルファターゼ欠損症、ムコスルファチドーシス；ＡＲＳＢ：ＭＰＳ  ＶＩ、アリールスルファターゼｂ欠損症、ムコスルファチドーシス；ＡＳＡＨ１：ファーバー脂肪肉芽腫症、（クーゲルベルグ・ウェランダー）脊髄性筋萎縮症、（エルドハイム−チェスター病）脂肪肉芽腫症；ＡＴＰ１３Ａ２／ＰＡＲＫ９：ＮＣＬ  １２，クフォー・ラケブ症候群、痙性対麻痺７８、若年発症パーキンソン病；ＡＴＰ６ＡＰ２（Ｐｅｒｒｅｔｔ  ２０１５）：精神遅滞、痙縮を伴うパーキンソン病、リンパ球性脈絡髄膜炎；ＡＴＰ６Ｖ０Ａ１：下壁心筋梗塞；ＡＴＰ６Ｖ０Ａ２：老人皮膚症候群（ｗｒｉｎｋｌｙ  ｓｋｉｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、皮膚弛緩症、骨髄障害性貧血；ＡＴＰ６Ｖ０Ａ４：尿細管性アシドーシス、海綿腎；ＣＤ１６４：常染色体優性難聴、花粉アレルギー、前立腺癌；ＣＬＣ７：大理石骨病；ＣＬＮ１／ＰＰＴ１：ＮＣＬ、バッテン病、乳児型神経セロイドリポフスチン症（Ｓａｎｔａｖｕｏｒｉ−Ｈａｌｔｉａ）；ＣＬＮ１１／ＧＲＮ：ＮＣＬ、前頭側頭型認知症、原発性進行性失語症；ＣＬＮ３：ＮＣＬ、二次性角膜浮腫、シュピールマイヤー・フォークト・シェーグレン・バッテン病（Ｓｐｉｅｌｍｅｙｅｒ−Ｖｏｇｔ−Ｓｊｏｇｒｅｎ−Ｂａｔｔｅｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）；ＣＬＮ４／ＤＮＡＪＣ５：ＮＣＬ、ＣＬＮ４病；ＣＬＮ５：ＮＣＬ；ＣＬＮ５：ＮＣＬ、フィンランド人後期乳児期；ＣＬＮ６：ＮＣＬ、クッフス病、ＣＬＮ７：ＮＣＬ、黄斑変性、神経症性障害、抑鬱神経症；ＣＬＮ８：北風てんかん（Ｎｏｒｔｈｅｒ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、精神遅滞を伴う進行性／トルコ人後期乳児期；ＣＴＮＳ：腎性シスチン蓄積症（ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｉｃ  ｃｙｓｔｉｎｏｓｉｓ）、ファンコーニ症候群；ＣＴＳＡ：ガラクトシアリドーシス、糖タンパク代謝異常症（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｏｓｉｓ）、淋菌性卵管炎、トリオースリン酸イソメラーゼ欠損症、アルパルチルグルコサミン尿症；ＣＴＳＢ：胆嚢閉鎖、回腸癌、膵炎、角質溶解性冬季紅斑（ｋｅｒａｔｏｌｙｔｉｃ  ｗｉｎｔｅｒ  ｅｒｙｔｈｅｍａ）、乳癌、アルツハイマー病；ＣＴＳＣ：パピヨン・ルフェブル症候群、ハイム・ムンク症候群、歯周炎、掌蹠角化症、光線性角化症；ＣＴＳＤ：ＮＣＬ、骨軟骨肉腫、子宮内膜明細胞腺癌、乳癌、パーキンソン病、（Ｐａｒｎｅｔｔｉ  ２０１７）；ＣＴＳＥ：胃腺癌、ロサイ・ドルフマン病、組織球増殖症；ＣＴＳＦ：ＮＣＬ、クッフス病、無動無言症、覚醒昏睡、肝吸虫症、東洋肝吸虫症；ＣＴＳＧ：パピヨン・ルフェブル症候群、皮膚肥満細胞症、化膿性根尖性歯周炎、血管炎、ウェゲナー肉芽腫症；ＣＴＳＨ��甲状腺クリーゼ、間欠性爆発性障害、ナルコレプシー、線維性髄膜腫、筋萎縮性側索硬化症；ＣＴＳＫ：濃化異骨症、過敏性肺炎、骨硬化症、骨髄炎、骨巨細胞腫瘍；ＣＴＳＬ：外陰部基底細胞癌、エクリン先端汗腺腫、肥大吸虫症、気管癌、直腸Ｓ状結腸移行部新生物；ＣＴＳＯ：乳癌；ＣＴＳＳ：下顎癌、非化膿性中耳炎、セルカリア皮膚炎、上皮下粘液性角膜ジストロフィー、顎癌；ＣＴＳＷ：自己免疫性委縮性胃炎；ＣＴＳＺ：涙腺炎；ＤＮＡＳＥ２：石灰沈着性腱炎、リウマチ性関節炎；ＦＵＣＡ１：フコシドーシス、角化血管腫、ムコリピドーシスＩＩＩ、喉頭気管炎；ＧＡＡ：ＩＩ型糖原病（ポンぺ病）、酸性マルターゼ欠損症、ダノン病、α−１，４−グルコシダーゼ欠損症；ＧＡＬＣ：クラッベ病、大脳白質萎縮症；ＧＡＬＮＳ：ＭＰＳ  ＩＶ、軟骨−骨形成異常症、シャイエ症候群、クナイスト異形成症；ＧＢＡ：ゴーシェ病（ＧＤ）、偽ゴーシェ病、ＧＢＡ−関連パーキンソン病；ＧＬＡ：ファブリー病、線維束性収縮症候群、角化血管腫、ＭＰＳ  ＶＩＩ；ＧＬＢ１：ｇｍ１−ガングリオシドーシス、ＭＰＳ  ＩＶｂ；ＧＭ２Ａ：ＧＭ２−ガングリオシドーシス、テイ・サックス病（ＴＳＤ）、サンドホフ病、ムコリピドーシスＩＩ  α／β、Ｉ−細胞病；ＧＮＰＴＡＢ：ムコリピドーシス２、ムコリピドーシス３、ＭＰＳ  ３ａ；ＧＮＰＴＧ：ムコリピドーシスＩＩＩ、偽ハーラー多発性ジストロフィー、構音障害；ＧＮＳ：ＭＰＳ  ＩＩＩ、多重スルファターゼ欠損症、ムコスルファチドーシス；ＧＵＳＢ：ＭＰＳ  ＶＩＩ、胎児水腫、壊死性潰瘍性歯肉炎、総胆管結石症；ＧＵＳＢ：スライ症候群、ＭＳＰ  ＶＩＩ、胎児水腫、壊死性潰瘍性歯肉炎、総胆管結石症；ＨＥＸＡ：テイ・サックス病、ｇｍ２ガングリオシドーシス；ＨＥＸＢ：サンドホフ病、ムコリピドーシスＩＶ、スフィンゴリピドーシス；ＨＧＳＮＡＴ：ＭＰＳ  ＩＩＩｃ、ＭＰＳ  ＩＩＩｂ、網膜色素変性症、クリューバー・ビューシー症候群；ＨＹＡＬ１：ＭＰＳ  ＩＸ、膀胱癌、前立腺癌；ＩＤＳ：ＭＰＳ  ＩＩ、ハンター症候群；ＩＤＵＡ：ＭＰＳ  Ｉ、シャイエ症候群、フルラー症候群；ＩＧＦ２Ｒ：肝細胞癌、ムコリピドーシスＩＩ、アイセル（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ−ｃｅｌｌ）病、結腸直腸癌；ＬＡＡＴ１／ＰＱＬＣ２：シスチン蓄積症；ＬＡＭＰ１：サラ病、ヘルマンスキー・パドラック症候群、リソソーム酸ホスファターゼ欠損症、血球貪食症候群；ＬＡＭＰ２：ダノン病、心筋ミオパチー、心房停止、ＩＩ型糖原病、リソソーム酸ホスファターゼ欠損症；ＬＡＭＰ３／ＣＤ６３：ハーマンスキー・パドラック症候群、メラノーマ、ケベック血小板障害、肥満細胞病、シュワルツマン現象；ＬＡＭＰ４／ＣＤ６８／ＳＣＡＲＤ１：（胸部）顆粒細胞腫瘍、濾胞樹状細胞肉腫、細菌性食道炎、腋窩脂肪腫；ＬＡＰＴＭ４Ａ：疼痛障害；ＬＡＰＴＭ４Ｂ：肝細胞癌；ＬＧＭＮ：住血吸虫症；ＬＩＭＰ２／ＳＣＡＲＢ２：進行性ミオクローヌスてんかん、ウンフェルリヒト・ルントボルグ病、手足口病、ミオクローヌス；ＬＩＰＡ：ウォルマン病、コレステロールエステル蓄積症、脾膿瘍、家族性高コレステロール血症；ＬＩＴＡＦ：シャルコー・マリー・トゥース遺伝性ニューロパチー；ＬＭＢＲＤ１：メチルマロン酸性尿症およびホモシスチン尿症、ｃｂｌｆ型、肝炎、トランスコバラミンＩＩ欠損症；ＬＹＰＬＡ３／ＰＬＡ２Ｇ１５：；ＬＹＳＴ：チェディアック・東症候群、落屑症候群、ハーマンスキー・パドラック症候群、色素沈着不全対側性；Ｍ６ＰＲ：ＭＰＳ  ＩＩＩａ、ムコリピドーシスＩＩ、ＮＣＬ、ニーマンピック病；ＭＡＮＢ：マンノシドーシス（α／β）；ＭＣＯＬＮ１：ムコリピドーシスＩＶ、運動失調性脳性麻痺、スフィンゴリピドーシス、斜視、ムコリピン−１欠損症；ＮＡＧＡ：神崎病、シンドラー病、神経軸索ジストロフィー、角化血管腫；ＮＡＧＬＵ：ＭＰＳ  ＩＩＩ、シャルコー・マリー・トゥース病、急性腎盂腎炎；ＮＡＧＰＡ：家族性持続性吃音、構音障害、ＭＰＳ  ＩＩＩｂ、スピーチ障害、糖尿病性腎症；ＮＡＰＳＡ：卵巣明細胞腺線維腫、クルーケンベルグ／肺アデノ（Ｂｉｓｈｏｐ  ＤＶ（２０１０）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ１５１１２）／卵巣明細胞／癌、悪性線維性中皮腫；ＮＥＵ１：シアリドーシス、胎児水腫、パラインフルエンザウイルス３型；ＮＰＣ１／２：ニーマンピック病Ｃ１／２；ＰＳＡＰ：非定型ゴーシェ病、混合型サポシン欠損症、ＭＬＤ、クラッベ病；ＰＳＥＮ１（Ｌｅｅ  ２０１５，Ｓａｔｏ  ２０１７）：前頭側頭型認知症、アルツハイマー病３、家族性反対型ざ瘡、拡張型心筋症；ＲＡＢ２７Ａ：グリセリ症候群、血球貪食性リンパ組織症、チェディアック・東症候群；ＲＡＢ７（Ｐｅｒｒｅｔｔ  ２０１５）：シャルコー・マリー・トゥース病２ｂ、先天性脈絡膜欠如、脊髄癆、ＮＣＬ；ＳＧＳＨ：ＭＰＳ  ＩＩＩ、クリューヴァ・ビュシィ症候群、サンフィリポ症候群；ＳＬＣ１１Ａ１：ブルーリ潰瘍、結核、腸チフス；ＳＬＣ１１Ａ２：小球性貧血、ヘモジデリン沈着症、貧血；ＳＬＣ１７Ａ５／ＳＩＡＬＩＮ：サラ病、シアル酸蓄積障害、シアル酸尿症、肝臓ジストマ症；ＳＭＰＤ１：ニーマンピック病、酸スフィンゴミエリナーゼ欠損症、自己愛性パーソナリティ障害；ＳＯＲＴ１：アイセル病（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ−ｃｅｌｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）、Ｉ−セル病、心筋梗塞；ＳＱＳＴＭ１：ＡＬＳ；ＳＵＭＦ１：多重スルファターゼ欠損症、ＭＬＤ、脊髄小脳失調、ＭＰＳ  ＶＩ；ＴＭＥＭ１０６Ｂ：筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）／前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）。（Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＰＭ，Ｚｈｏｕ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｌｙｓｏｓｏｍｅｓ  −  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  Ｓｔｕｄｙ  Ｔｈｅｉｒ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ６３−９１）ＴＰＰ１：ＮＣＬ、脊髄小脳失調、ビールショスキー・ヤンスキー病。
【０２０４】
加齢に関連した不充分なリソソーム機能が関与する他の状態は、心臓疾患および脳血管疾患であり、限定されないが、動脈硬化症、冠動脈性心疾患、不整脈、心不全、高血圧、起立性低血圧症、心筋梗塞、狭心症、心不全、アテローム性動脈硬化症、脳卒中、腎動脈疾患または狭窄症、末梢血管疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、腎不全を伴う慢性腎疾患、および心疾患が挙げられる。炎症性の疾患および状態の例としては、例えばリウマチ性関節炎などの関節炎が挙げられる。加齢に関連した疾患および障害の追加例は、潰瘍、大理石骨病、プロジェリア、衰弱、難聴および２型糖尿病である。「加齢に関連した」とは、加齢と頻繁に関連する疾患を指すが、所与の患者は必ずしも高齢ではなく、むしろ本発明方法および組成物は、患者の年齢にかかわらず使用され得る。
Ａ）活性剤
【０２０５】
本明細書の実施例および他のセクションにおいて詳述されるように、本発明方法で使用され得る剤は、限定されないが、神経細胞、マクロファージ、ミクログリアおよび腫瘍細胞を含む細胞が利用可能なリン脂質の濃度を低下させ得る。一部の実施形態では、剤は、環状オリゴ糖である。一部の実施形態では、環状オリゴ糖は、約１〜約２０個以上の炭素長のアルキル基により任意で改変されるα−ＣＤである。一部の実施形態では、シクロデキストリンは、約１〜約２０個以上の炭素長のヒドロキシル−アルキル基により任意で改変されるα−ＣＤである。さらに別の実施形態では、剤は、ヒドロキシプロピル−（ＨＰ−）α−ＣＤである。一部の実施形態では、剤は、α−ＣＤのクラスレートである。一部の実施形態では、剤は、α−ＣＤと脂肪酸のクラスレートである。本明細書において使用される場合、「脂肪酸」とは、飽和または不飽和いずれかの脂肪族長鎖を有するカルボン酸を意味する。一部の実施形態では、脂肪族鎖は、約３〜約７０炭素長である。一部の実施形態では、脂肪族鎖は、８〜約３０炭素長である。一部の実施形態では、脂肪酸は、１つもしくは複数の置換基を伴う分枝または非分枝の１つまたは複数の脂肪族鎖を有する。一部の実施形態では、脂肪酸は、約６〜約２２個の炭素原子をその脂肪族鎖中に含む。一部の実施形態では、各炭素原子の間の結合のうちの任意の１つは、シス構造またはトランス構造であってもよい。
【０２０６】
シクロデキストリンは、セルロースのバクテリア消化の間に形成される天然化合物である。シクロデキストリンは、普遍的な哺乳動物のアミラーゼにより加水分解されないが、腸管微生物叢により発酵され得る。通常の状況ではほとんど再吸収されず、細胞または組織と相互作用しない。２００４年１２月２２日に、α−ＣＤはＦＤＡにより、「食肉を除く選択的な食物における、線維質補充、香味用の担体または安定剤（香味アジュバント）、着色、ビタミンおよび脂肪酸用の担体または安定剤、ならびに飲料の口当たりの改善を目的とした使用」に関して、ＧＲＡＳと宣言された（ＧＲＮ  Ｎｏ．１５５。ＧＲＮ６７８として２０１６年１１月に更新され、４２０ｍｇ／ｋｇまたは７０ｋｇで約３０ｇ／日の摂取に対して予測９０パーセンタイルを反映）。α−ＣＤのモノグラフはＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ（ＵＳＰ／ＮＦ２５）、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（ＥＰ  ６．０）、およびＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓに掲載されている。シクロデキストリンは、様々な食物商品で使用される際の連邦規則第４０号１８０．９５０の許容範囲の要件から免除されている。（ＦＲ  ７０  １２８  ２８７８０  ２００５−０７−０６）。２０１７年１０月９日に、シクロデキストリンは、「ヒトの使用に対する医薬品のラベルおよび添付文書における措置」に対するＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎガイドラインに対する添付書類に掲載された。
【０２０７】
普遍的なシクロデキストリンは、脂溶性の内部および親水性の外表面を含む環状体（円すい体）で、共に結合される６（α−ＣＤ）、７（β−ＣＤ）または８（γ−ＣＤ）個のＤ−グルコース分子から構成されている（図１）。この特性の組み合わせにより、シクロデキストリンは、脂溶性薬剤を可溶化する手段として適している。「化学的改変を［シクロデキストリン］に行い、その親水性活性を増加させた。これにより可溶度が改善され、［ラットにおいて］腎毒性がなくなることが期待される」（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）。ヒドロキシル基のいずれかの置換は、例えば疎水性部分による置換であっても、水可溶度の劇的な上昇をもたらす。この可溶度強化の主な理由は、化学的操作によりシクロデキストリン結晶はしばしば異性誘導体の非晶質混合物へと転換されるためである。例えばβ−シクロデキストリンの水可溶度は、メチル化度の増加で上昇する。最も高い可溶度は、約３分の２のヒドロキシル基（すなわち２１個中、１４個）がメチル化されたときに得られる。ＨＰ−β−ＣＤは、β−ＣＤよりもかなり水可溶度が改善されている（表２、さらに表８も参照）。
表２：選択されたシクロデキストリンの物理化学的性質
【表２】
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【０２０８】
環状体の縁（へり）のＲ基の置換により取得される普遍的なシクロデキストリン（図１、（Ｂｒｅｗｓｔｅｒ  ＭＥ，Ｌｏｆｔｓｓｏｎ  Ｔ（２００７）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５９：６４５−６６））としては、限定されないが、メチル（無作為メチル化を含む）ＣＨ３、２−ヒドロキシプロピル（ＨＰ）：ＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ３、スルホブチルエーテル（ＣＨ２）４ＳＯ３Ｎａ＋、アセチル、スクシニル、グルコシル、マルトシル、カルボキシメチルエーテル、リン酸エステル、単一ポリマーまたはカルボキシメチルが挙げられる。置換数およびその位置の両方ともがシクロデキストリン分子の物理化学的性質、例えば水可溶度および錯化能に影響を与えるため、列記される各誘導体は、近縁なシクロデキストリン誘導体の一群とみなされるものとする。
【０２０９】
特にβ−ＣＤのように溶解度が低いと、多くの場合、固体シクロデキストリン錯体の沈殿が生じる。例えばβ−ＣＤは、二級ＯＨ基の間に分子内水素結合を形成し、これが周囲の水分子との水素結合形成を減少させ、水溶解度が低くなる（Ｌｏｆｔｓｓｏｎ  Ｔ，Ｂｒｅｗｓｔｅｒ  ＭＥ（１９９６）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８５：１０１７−２５）。
Ｂ）細胞毒性／溶血
【０２１０】
非経口送達では、「ラット、ウサギ、イヌおよびヒトにおけるβ−ＣＤの定常状態分配量は、各種の細胞外液量と良く対応している。このことから、深部コンパートメントまたはプール蓄積は関与していないことが示唆される。［．．．］αおよびβ−［シクロデキストリン］は、ほぼ完全にそのままの状態で尿中に排泄される」（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）。それでもシクロデキストリンは、非経口送達で２つのタイプの有害事象を生じさせる可能性がある。１つ目は、腎細胞に蓄積し、腎毒性を生じさせ得ること。２つ目は、脂溶性薬剤が送達された後、「新たな脂質含有コンパートメント（またはプール）が水相に形成され、その中に［細胞脂質］化合物が抽出される」ことである（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）。これにより溶血が生じる可能性がある。
【０２１１】
リン脂質とコレステロールは細胞膜の主要構成要素であり、すべて脂質である。ゆえにシクロデキストリンが、その親油性の空洞を満たされることなく非経口で投与されたとき（または脂溶性薬剤が送達された後）、潜在的に細胞膜から脂質（シクロデキストリンのタイプに応じてリン脂質およびコレステロール）を抽出する可能性がある。「いくつかのシクロデキストリンは、様々な細胞型において細胞溶解を引き起こすことが示されている。このことから、その効果は細胞型特異的ではないことが示唆される［（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）］”（Ｓｔｅｌｌａ  ＶＪ，Ｈｅ  Ｑ（２００８）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ３６：３０−４２）。特にシクロデキストリンは、赤血球上の細胞膜陥入の形状変化を誘導し、高濃度では、β−ＣＤ＞α−ＣＤ＞γ−シクロデキストリンの順序で赤血球溶血を誘導することが知られている（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｏｔａｇｉｒｉ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏｄｙｎ  ５：７４１−４）。すなわちα−ＣＤの溶血活性は、β−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤの両方よりも低い（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２，Ｆｉｇｕｒｅ  ６）。それに加えて、α−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤではなく、β−ＣＤが、細胞膜コレステロールを枯渇させることで角化細胞にカスパーゼ依存性のアポトーシス細胞死を誘導する（Ｓｔｅｌｌａ  ＶＪ，Ｈｅ  Ｑ（２００８）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ３６：３０−４２）。ＨＰ−α−ＣＤは、異種ヒト上皮結腸直腸腺癌（Ｃａｃｏ−２）細胞に対し、α−ＣＤよりも細胞毒性が低いことが判明している（Ｒｏｋａ  Ｅ，Ｕｊｈｅｌｙｉ  Ｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２０：２０２６９−８５；Ｏｎｏ  Ｎ，Ａｒｉｍａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ  ２４：３９５−４０２）。これらの結果から、ＨＰ−シクロデキストリンは腎毒性が低いだけではなく、細胞毒性および溶血毒性も低い。
【０２１２】
ＨＰ−β−ＣＤは、神経ステロイドのアロプレグナノロール（ａｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｌ）をはじめとする多くの脂溶性薬剤の賦形剤／溶媒として使用されている。α−ＣＤは、勃起不全の治療において海綿体内注射用のアルプロスタジル（プロスタグランジン）の賦形剤として承認され、使用されている。
【０２１３】
それでも、全体としての細胞毒性の低さがすなわちヒトの使用に対する安全性を意味するものではない。２０１０年の研究で、ＨＰ−β−ＣＤが４〜８ｇ／ｋｇの投与量でネコに永続的な難聴を引き起こすことが示された（Ｗａｒｄ  Ｓ，Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ６８：５２−６）。１４名のＮＰＣ１患者に関する最近の研究では、中頻度〜高頻度の治療用補聴器を必要とする難聴がある（Ｏｒｙ  ＤＳ，Ｏｔｔｉｎｇｅｒ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｌａｎｃｅｔ  ３９０：１７５８−６８）。これらの結果から、賦形剤（少投与量）ではなく、活性成分（高投与量）としてのβ−シクロデキストリンの使用に関する懸念が生じた。
【０２１４】
２０１４年に、ニーマンピック病Ｃ型（ＮＰＣ）疾患における、神経ステロイドのアロプレグナノロールの報告されている利益が、実際には賦形剤であるＨＰ−β−ＣＤによるものであったことが判明した。（Ｖａｎｃｅ  ＪＥ，Ｋａｒｔｅｎ  Ｂ（２０１４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：１６０９−２１；Ｌｉｕ  Ｂ，Ｔｕｒｌｅｙ  ＳＤ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０６：２３７７−８２）。治療投与量でのβ−シクロデキストリンは、過去に考えられていたような細胞膜からのコレステロールの抽出ではなく、細胞成分中のコレステロールを低下させることが示されている。２０１５年の９月には、ＨＰ−β−ＣＤに関する第ＩＩｂ／ＩＩＩ相試験がＮＰＣ１疾患の神経兆候を有する患者で開始された。（ＮＩＨ（２０１５）ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓｇｏｖ  ＮＣＴ０２５３４８４４）。疑問点は、ＮＰＣ治療の利益を保持しつつ、耳毒性のリスクを回避できるかどうか、であった（死か聴覚障害か？）。
【０２１５】
いくつかのシクロデキストリンの溶血活性と、コレステロールを可溶化するその能力の間には正の相関があった（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）。このことから、耳毒性は、外有毛細胞からのコレステロールの抽出と直接関連している可能性が示唆される。
【０２１６】
本明細書に報告される遺伝的研究の結果から、転移を含む乳癌の進行は、部分的には、血清グリセロ−リン脂質（ＬＰＣ、ＰＣ）がＰＩへ過剰転換されることにより生じることが示される。ＰＩはＰＩサイクルの基質であり、ホスホイノシチドを介してエンドサイトーシスを制御する。注目すべきは、ＬＰＣも嚢胞性線維症においてサーファクタント阻害に関与していることである。「ＬＰＣまたはＦＦＡが介在するサーファクタント阻害は、コレステロールが相対的に存在していなくてもＭ−β−ＣＤにより逆転される。［これはおそらく］Ｍ−β−ＣＤがコレステロールに加えて非ステロイド性の脂質も隔離する能力を反映している。」（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａ  Ｌ，Ａｌ−Ｓａｉｅｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）
【０２１７】
すべてのシクロデキストリンが、リン脂質を排除する能力を有している。β−ＣＤ（７糖）は、α−ＣＤ（６糖、図１）よりも多く選択されている。これはより多く（より大きな）薬剤の賦形剤として使用され得るためである。小さなα−ＣＤは、小さなリン脂質に高い特異性を有していることが知られている（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２；Ｖａｎｃｅ  ＪＥ，Ｋａｒｔｅｎ  Ｂ（２０１４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：１６０９−２１）。ステロイド、および限定されないがコレステロールを含むステロール（Ｚａｒｚｙｃｋｉ  ＰＫ，Ｏｈｔａ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎａｌ  Ｂｉｏａｎａｌ  Ｃｈｅｍ  ３９１：２７９３−８０１）は、その小さな空洞に適合しない（図２）。リン脂質、コレステロールおよびタンパク質の抽出特異性を、図  ３に示す。（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２）。リン脂質の中で、α−ＣＤは、β−ＣＤよりもさらに特異的に例えばＰＣなどのグリセロ脂質、そしてスフィンゴ脂質を排除することが知られている（図４）。特にα−ＣＤは、ＰＩのイノシトール頭部またはｓｎ−２鎖の両方の周囲で錯体を形成することが知られている。（Ｆａｕｖｅｌｌｅ  Ｆ，Ｄｅｂｏｕｚｙ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：９３５−４３）。ゆえにα−ＣＤは、ＰＩサイクルの基質を下方制御し、それによりβ−ＣＤよりも高い特異性でエンドサイトーシスを下方制御することが予測される（Ｃａｉ  Ｗ，Ｄｕ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９１：６０９３−１００）。ＨＰ−α−ＣＤは、コレステロールよりもリン脂質を優先するα−ＣＤの優先性を保持している（Ｈｕａｎｇ  Ｚ，Ｌｏｎｄｏｎ  Ｅ（２０１３）Ｌａｎｇｍｕｉｒ  ２９：１４６３１−８）。本開示における驚くべき結果の１つ（実施例１６を参照）は、血清中のＨＰ−α−ＣＤは、予測よりもさらに高い特異性で、ＰＣを排除するが、リゾリン脂質もＰＳも排除しなかったことである。
【０２１８】
β−シクロデキストリンの耳毒性は、β−シクロデキストリンが、プレスチン（ｐｒｅｓｔｉｎ）から、外有毛細胞で機能するために必要なコレステロールを奪うことにより生じることが示されている（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｓ，Ｈｏｍｍａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：２１９７３；Ｋａｍａｒ  ＲＩ，Ｏｒｇａｎ−Ｄａｒｌｉｎｇ  ＬＥ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １０３：１６２７−３６）。α−ＣＤの空洞がコレステロールには小さすぎるという事実が、α−ＣＤおよび限定されないがＨＰ−α−ＣＤをはじめとするその誘導体に耳毒性がないことを説明する。
【０２１９】
ＨＰ−β−ＣＤの長期的な非経口投与（２００ｍｇ／ｋｇ）は、骨ミネラル濃度（ＢＭＤ）を減少させることが報告されており、これは骨吸収の増加と関連している（Ｋａｎｔｎｅｒ  Ｉ，Ｅｒｂｅｎ  ＲＧ（２０１２）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ４０：７４２−５０）。一方でＣＤ−ビスホスホン酸結合体のアレンドロン酸−β−ＣＤ（ＡＬＮ−β−ＣＤ）は、骨同化作用的であることが示されている（Ｌｉｕ  Ｘ−Ｍ，Ｗｉｓｗａｌｌ  ＡＴ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２９：１６８６−９２）。
Ｃ）シクロデキストリン特異的な活性
【０２２０】
表２の様々な物理化学的性質に関連する部分のみで、α−ＣＤ、β−ＣＤおよびγ−ＣＤのシクロデキストリンは、劇的に異なる生化学的機能を有しており、それゆえに異なる用途を有する。
●  γ−ＣＤのみが、膵アミラーゼと唾液による加水分解を受けることができ、急速に代謝されて小腸で吸収される。
●  β−ＣＤおよびγ−ＣＤは、ほぼ１：１のモル比で脂質に結合することができるが、α−ＣＤは、その重量の９倍の脂肪に結合することができる。
●  分子に対する空洞のサイズは、シクロデキストリンの用途に対する重要な決定因子である。β−ＣＤ（およびγ−ＣＤ、比較的程度は小さい）がステロール（コレステロールを含む）およびステロイドに結合できるが、α−ＣＤは結合できない。その理由は、これら分子は、α−ＣＤの小さな空洞に適合するには大きすぎるからである。
●  メチル化β−ＣＤは、細胞膜の普遍的な構成物質に対して高いアフィニティを有し、それゆえに極度の溶血作用も有する。一方でα−ＣＤは、ヒト赤血球に対して非常に弱い作用を有している。
●  神経筋遮断薬のロクロニウムの効果は、特有の設計をされたγ−ＣＤ誘導体のスガマデクス（オクタキス−（６−デオキシ−６−Ｓ−メルカプトプロピオニル−γ−シクロデキストリンナトリウム塩）により無効化され、後遺症の麻痺が予防される（Ｂｏｏｉｊ  ＬＨ（２００９）Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  ６４  Ｓｕｐｐｌ  １：３１−７）。
●  シクロスポリンＡについては、α−ＣＤとγ−ＣＤの混合物を使用して、眼刺激性を生じさせることなく薬剤の可溶度が強化される。
●  鼻内インスリンについては、ＤＭβＣＤおよびα−ＣＤは強力なエンハンサーであるが、γ−ＣＤ、β−ＣＤおよびＨＰβＣＤは違う（Ｍｅｒｋｕｓ  ＦＷ，Ｖｅｒｈｏｅｆ  ＪＣ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ８：５８８−９２；Ｓｈａｏ  Ｚ，Ｋｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ９：１１５７−６３）。
●  β−ＣＤではなく、α−ＣＤの補充が、ａｐｏＥ−ＫＯマウスの大動脈においてアテローム性動脈硬化病変を減少させた。一方で、消化管脂質吸収は、α−ＣＤではなくβ−ＣＤの補充が減少させる（Ｓａｋｕｒａｉ  Ｔ，Ｓａｋｕｒａｉ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ  Ｎｕｔｒ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ  ６１）。
α−ＣＤのみが、環境的に優しい共沈殿法を介した金抽出を使用することができる（Ｌｉｕ  ＺＣ，Ｓａｍａｎｔａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １３８：１１６４３−５３）。
【０２２１】
シクロデキストリン間の差異に関するこの「不完全な」リストからは、あるシクロデキストリンにみられる効果が、他のシクロデキストリンには当てはまらないことが示される。実際に、複数のシクロデキストリンを同じアプリケーションに使用できるのは、ほんの数例である。
【０２２２】
ＨＰ−β−ＣＤは、例えば、以下に使用される。
●  Ｆｅｂｒｅｚｅ（登録商標）の活性成分として；小さなα−ＣＤでは悪臭成分を少ししか捉えられない。
●  全卵、ミルクからコレステロールを除去するには、小さなα−ＣＤは、コレステロールに適合しない。
【０２２３】
α−ＣＤは、以下に使用される。
●  カゼイン酸ナトリウムの置き換えとして、ビーガンココナツミルク粉末（ＵＫ）をベースとした食物中。
●  粉末化アルコール中。
●  必須アルファリノール酸との複合体を形成するために、コエンザイムＱ１０／Ｌ−カルニチンサプリメント中。
【０２２４】
治療用途も高度に特異的である。１つの加齢関連アプリケーションにおいて（Ｎｏｃｉａｒｉ  ＭＭ，Ｌｅｈｍａｎｎ  ＧＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１１：Ｅ１４０２−Ｅ８）、ＨＰ−β−ＣＤはリポフスチン構成要素であるＡ２Ｅに結合することができたが、α−ＣＤはできなかったことが示されている（図５）。
【０２２５】
同じタイプの基質と使用される数種のシクロデキストリンは仮にあったとしても稀で、糖の環を含むにもかかわらず、それらの機能は高度に特異的であるという事実が真である。最も重要な差異の１つは、これら糖の数である：「シクロデキストリン−脂質複合体：サイズは重要である」（Ｓｚｅｎｔｅ  Ｌ，Ｆｅｎｙｖｅｓｉ  Ｅ（２０１７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８：４７９−９２）。一部の実施形態では、α−ＣＤは、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシメチル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル−α−ＣＤ、またはその塩もしくは誘導体である。一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシメチル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル−α−ＣＤ、またはその塩もしくは誘導体を含むが、アルファ−シクロデキストリンまたはベータ−シクロデキストリンは含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、ベータもしくはガンマシクロデキストリン、および、またはその塩の誘導体を含まない。
Ｄ）α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩を用いた癌患者の治療
【０２２６】
本開示のいくつかの実施形態は、α−ＣＤおよび／またはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩を含む。
【０２２７】
本開示の実施形態は、異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では、ＰＩサイクルまたはリソソームの機能障害を有する、１つまたは複数の細胞を有すると特定された癌を有する個体の治療に特に有用である。一部の実施形態では、癌を有する対象を治療する方法は、最初に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では異常制御状態のＰＩサイクルを有する癌を特定する工程、次いでそうした対象にα−ＣＤの治療有効量を投与する工程を含む。一部の好ましい実施形態では、高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では機能障害状態のＰＩサイクルを有する癌の特定は、ＰＥＴ画像解析により、好ましくは表５ｂのアミノ酸配列または表５ｂのアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％相同なアミノ酸配列中の変異を特定する蛍光タグ、抗体、または他の剤を使用して行われる。一部の実施形態では、α−ＣＤ、またはその誘導体もしくは塩は、４ｍＭ、３ｍＭ、２ｍＭまたは１ｍＭ未満の濃度で、インビトロ移動アッセイにおいて、約５０％超の細胞におけるリン脂質の排除に有効である。一部の実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、約１ｍＭの濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、約５０％超の細胞における細胞移動の阻害に効果的である。一部の実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩もしくはクラスレートは、約０．５ｍＭ〜約１．５ｍＭの濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の低下に効果的である。
【０２２８】
本開示の一部の実施形態では、癌を有すると特定された個体を治療する方法は、そうした個体に、１ｍＭ未満の濃度で、インビトロ移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の阻害に効果的であることが知られているα−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩の治療有効量を投与する工程を含む。一部の好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、約１．５ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の阻害に効果的である。一部の好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、約１ｍＭの濃度で、インビトロ移動アッセイにおいて、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の細胞における細胞移動の阻害に効果的である。一部の好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩の投与の前に、癌は、異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスにより特徴づけられる、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルまたはリソソームにより特徴づけられる１つまたは複数の細胞を含む癌であると確認される。その確認の好ましい方法は、ＰＥＴ画像解析、例えば生検などのサンプルのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。
【０２２９】
たとえ部分的であっても、癌細胞の転移を阻害する方法が提供される。当該方法は、細胞の細胞移動を阻害するのに効果的な量の、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩を、癌細胞に送達する工程を含む。使用されるα−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、約２ｍＭまたは約１．５ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における癌細胞移動の減速に効果的である。一部の実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、１．５ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の阻害に効果的である。一部の好ましい実施形態では、シクロデキストリンまたはその誘導体もしくは塩は、約１．０ｍＭ以下の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の阻害に効果的である。一部の実施形態では、当該治療は同時に、治療に関する耳毒性を低下させる。
【０２３０】
本開示の実施形態は、異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルを有する癌細胞を含む癌を有する患者の治療に特に有用である。そうした癌には、大部分の癌が含まれ、一般的には例えば肝癌、および脂肪細胞を含む癌などの脂質産生と関連した組織から生じる癌を除外する。異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する癌細胞、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルを有する癌細胞は、一般的に上皮細胞由来の癌細胞に限定される。一部の実施形態では、癌は、胸部、結腸、肺または前立腺の上皮細胞由来である。ゆえに本発明の一部の方法は、異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルを有する癌を有する癌患者を治療する方法に関し、この場合において当該方法は、そうした患者または対象に、シクロデキストリンの治療有効量を投与する工程を含む。好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、２ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、５０％超の細胞における細胞移動の減速に効果的であることが知られている。一部の好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは塩は、１．５ｍＭ未満の濃度で、インビトロ移動アッセイにおいて、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％超の細胞におけるアポトーシスの誘導に効果的である。異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシスを有する、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルを有する癌細胞は、概して、表５ｂの酵素の機能障害を有し、ならびに／またはその微小環境周囲で高レベルのリン脂質を代謝し、および／もしくは取り込む。一部の好ましい実施形態では、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩の投与の前に、癌は、異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシス、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルにより特徴づけられる癌であると確認される。その確認の好ましい方法は、ＰＥＴ画像解析、ＰＣＲ、またはサンプルの免疫組織化学法である。
【０２３１】
異常に高率のエンドサイトーシスまたはエキソサイトーシス、または一部の実施形態では、機能障害状態のＰＩサイクルにより特徴づけられる癌細胞の転移率を予防または阻害する方法が提供される。当該方法は、α−ＣＤまたはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩の、当該細胞の細胞移動を低下させるのに有効な量を当該癌細胞に送達する工程を含む。使用されるα−ＣＤまたはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩は、１．５ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％超の細胞における細胞移動の阻害または速度の低下に効果的である。一部の好ましい実施形態では、本明細書に開示される治療は、１．１ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％超の細胞における細胞移動の阻害または速度の低下に効果的である。一部の好ましい実施形態では、本明細書に開示される治療は、約１．０ｍＭ未満の濃度で、インビトロ細胞移動アッセイにおいて、約５０％、６０％、７０％、８０％または９０％超の細胞における細胞移動の阻害または速度の低下に効果的である。
【０２３２】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかは、対象への投与時にコレステロールを排除するシクロデキストリンの投与工程を含まない。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法のいずれかは、ベータ−シクロデキストリン（β−ＣＤ、βＣＤ）またはヒドロキシ−アルキルベータシクロデキストリンの投与工程を含まない。
【０２３３】
α−ＣＤの作製は比較的シンプルであり、容易に入手可能な酵素のセットを用いた通常のデンプン処置を含む。普遍的に、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）は、α−アミラーゼとともに採用される。加熱処置またはα−アミラーゼ使用のいずれかにより最初にデンプンは液化され、その後ＣＧＴａｓｅを加えて酵素転換される。ＣＧＴａｓｅは、すべての形態のシクロデキストリンを合成することができる。ゆえに転換産物は、３つの主要タイプの環状分子の混合物を生じさせ、その比率は、使用される酵素に厳密に依存する：各ＣＧＴａｓｅは、自身の特性であるα：β：γ合成比率を有する。３タイプのシクロデキストリンの精製は、分子の水溶解度の違いを活用する：β−ＣＤは水溶性が非常に乏しい（１８．５ｇ／ｌまたは１６．３ｍＭ）（２５℃）。より溶解性が高いα−ＣＤおよびγ−ＣＤ（それぞれ１４５および２３２ｇ／ｌ）は通常、クロマトグラフィー法により精製され、一方でβ−ＣＤは結晶化を介して容易に回収され得る。代替的な「錯化剤」を酵素転換工程の間に添加することもできる。かかる剤（通常、トルエン、アセトンまたはエタノールといった有機溶媒）は、所望のシクロデキストリンと錯体を形成し、その後沈殿する。錯体形成は、デンプン転換を沈殿シクロデキストリンの合成へと向かわせ、最終混合産物中でのその含有量を富化させる。Ｗａｃｋｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧは、α−、β−またはγ−シクロデキストリンを特異的に作製し得る専用酵素を使用する。α−シクロデキストリンおよびγ−シクロデキストリンのみが日常摂取制限なく消費され得るため、食品業界に対しては特に非常に価値が高い。
Ｅ）医薬組成物および投与経路
【０２３４】
一部の実施形態では、本開示は、例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の治療における使用のための、本明細書に記載される１つまたは複数の活性物を、単独または組み合わせのいずれかで含む組成物を提供する。例えば一部の実施形態では、本開示は、例えば乳癌または前立腺癌の治療における使用のための、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本開示は、例えば乳癌または前立腺癌の治療における使用のための、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体を含む組成物を提供する。
【０２３５】
本開示に提供される医薬組成物は、活性成分（例えば実施形態または実施例を含む本明細書に記載の化合物）は、治療有効量、すなわち意図される目的の実現に有効な量で含有される。特定のアプリケーションに有効な実際の量は特に、治療される状態に依存する。疾患の治療方法において投与される場合、当該組成物は、所望の結果、例えば標的分子（例えばＰＩＰ１、ＰＩＰ２、ＰＩＰ３）の活性調節、および／または疾患症状（例えば悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態、例えばアルツハイマー病またはパーキンソン病などの症状）の進行の低下、停止、または減速の実現に有効な活性成分の量を含有する。本開示化合物の治療有効量の決定は、特に本明細書に詳述される内容を考慮することで、当業者の能力の範囲内にある。
【０２３６】
医薬組成物は、選択される投与様式に応じて、選択される組成物で、当分野の通常の技能を有する者により製剤化されてもよい。適切な薬学的担体は、当該分野の標準的な参照文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．０５０１の最新版に記載される。
【０２３７】
医薬組成物の投与は、当業者に公知の様々な方法のいずれかを使用して実行または実施され得る。全身用製剤としては、注射、例えば皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、髄腔内注射または腹腔内注射による投与用に設計された製剤、ならびに経皮投与、経粘膜投与、経口投与または肺投与用に設計された製剤が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬組成物の有効量の投与は、任意の特定の送達システムに限定されず、限定されないが、非経口（皮下、静脈内（注射または点滴を介する）、髄内、関節内、筋肉内または腹腔内注射を含む）、直腸、局所、経皮、粘膜または経口（例えばカプセル、懸濁液または錠剤中）の投与が含まれる。一部の実施形態では、その必要のある対象への投与は、単回投与または反復投与で行われ、および様々な生理学的に許容可能な塩の形態のいずれかで、または医薬組成物の一部としての許容可能な薬学的担体もしくは添加剤とともに行われる。一部の実施形態では、任意の適切な、および生理学的に許容可能な塩の形態、または標準的な薬学的製剤法、用量および賦形剤が利用される。一部の実施形態では、投与工程は、組成物または医薬組成物を、静脈内、筋肉内、局所、皮内、粘膜内、皮下、舌下、経口、膣内、海綿体内、眼内、鼻内、直腸内、消化管内、導管内、髄腔内、硬膜下、硬膜外、脳室内、肺内、膿瘍内、関節内、滑液包内、心膜下、腋窩、子宮内、胸膜腔内、腹腔内、経粘膜または経皮で投与する工程を含む。
【０２３８】
本発明の医薬組成物は、口、頬側、舌下、直腸、経皮、皮下、静脈内注射、静脈内点滴、筋肉内、髄腔内、腹腔内および鼻内を含む様々な経路により投与されてもよい。目的の送達経路が経口か非経口かに応じて、活性剤は、例えば注射用、局所用または経口用の組成物として製剤化され得る。液状の組成物は、緩衝剤、懸濁剤および分散剤、着色料、香味料ならびに他の当分野に公知の適切な成分とともに、適切な水性または非水性のビヒクルを含んでもよい。固体の組成物は、例えば結合剤、賦形剤、潤滑剤、着色剤、香味剤、および当分野に公知の他の適切な成分を含んでもよい。本明細書に記載の活性剤および医薬組成物は、徐放形態で投与されてもよく、または当分野に公知の持続的放出型の薬剤送達システムから投与されてもよい。
【０２３９】
医薬組成物は、疾患または状態に依存し、そして投与が、その疾患もしくは状態の予防目的か、または治療目的かに依存する。例えば限定されないが癌をはじめとするいくつかの疾患または状態の予防のための投与は、浸透強化剤を伴わずに経口で、および低用量であってもよい。例えばトリプルネガティブのリンパ節陽性乳癌などの癌の症状を示す対象に対する投与は、非経口、位置選択的、および高用量であってもよい。標的化の方法としては限定されないが、葉酸または抗葉酸物質（メトトレキサート、ペメトレキセド）との併用が挙げられる。組み合わせとしては、限定されないが、リンカーを伴う、または伴わないエステル化が挙げられる。好ましい実施形態では、リンカーは、エステルを介してα−ＣＤとペメトレキセドを結合させるジスルフィドリンカー（限定されないが、システイン、３−メルカプトプロピオン酸、または２−メルカプトエタノールを含むリンカーが挙げられる）である。別の好ましい実施形態では、α−ＣＤ／ペメトレキセド化合物は、葉酸と共投与される。神経変性疾患の症状を示す対象への投与は、浸透強化剤と、標的化用の改変を伴わない髄腔内投与であってもよい。
【０２４０】
一部の実施形態では、本開示の組成物は、本明細書に記載の１つまたは複数の活性剤を、例えば担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、賦形剤などの薬学送達における使用に適した、従来的に採用される１つまたは複数の成分とともに含む医薬組成物であり、医薬製剤の形態へと変えられてもよい。そうした製剤の非限定的な例としては、溶液、クリーム、ゲル、ゲルエマルション、ゼリー、ペースト、ローション、軟膏（ｓａｌｖｅ）、スプレー、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、粉末、固体混和物、エアロゾル、エマルション（例えば油中水または水中油）、ゲル水溶液、水溶液、懸濁液、塗布薬、チンキ剤、および局所投与に適したパッチが挙げられる。本明細書に記載の医薬組成物および製剤は、適切な場合には、個別の単位剤型で簡便にあってもよく、および調剤分野で公知の任意の方法により調製されてもよい。そうした方法には、活性剤と、液状担体、固形マトリクス、半固形担体、微紛化固形担体またはそれらの組み合わせを会合させる工程、次いで必要な場合には製品を所望の送達システムへと成形する工程を含む。医薬組成物または製剤の単位剤型は、所望の治療効果を生じさせるよう算出された活性剤および他の成分の規定量、例えば治療有効量の有効量などを含有することが好ましい。典型的な単位剤型としては、例えば前充填され、前もって測定された液状組成物のアンプルもしくはシリンジ、または固形組成物に対しては丸薬、錠剤、カプセルなどが挙げられる。
【０２４１】
非経口投与に関しては、シクロデキストリンまたはその誘導体は、例えば溶液、懸濁液、エマルションまたは薬学的許容可能な非経口ビヒクルもしくは薬学的に許容可能な担体と関連付けられた凍結乾燥粉末として製剤化され得る。そうしたビヒクルまたは担体の例は、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、５％ヒト血清アルブミン、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、および固定油、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン（グリセロリン脂質）、落花生油、またはゴマ油である。リポソーム、および例えば固定油などの非水性ビヒクルを使用してもよい。ビヒクル、または凍結乾燥粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学安定性（例えば、緩衝剤および保存剤）を維持する添加剤を含んでもよい。製剤は、普遍的に使用されている技術により滅菌される。非経口剤型は、水または別の滅菌担体を使用して調製されてもよい。例えば注射による投与に適した非経口組成物は、１．５重量％の活性成分を、０．９％塩化ナトリウム溶液中に溶解させることにより調製される。あるいは溶液は凍結乾燥され、その後、投与直前に適切な溶媒で再構成されてもよい。
【０２４２】
薬学的に許容可能な担体は当業者に公知であり、限定されないが、約０．０１〜約０．１Ｍ、または約０．０５Ｍのリン酸緩衝液、または約０．８％生理食塩水が挙げられる。静脈内担体としては、液体および栄養の補給物質、電解質補給物質、例えばリンゲルデキストロースに基づくものなどが挙げられる。さらにそうした薬学的に許容可能な担体は、水性または非水性の溶液、懸濁液およびエマルションであってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、例えばオリーブオイルなどの植物油、および例えばオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体としては、水、エタノール、アルコール／水性溶液、グリセロール、エマルションまたは懸濁液が挙げられ、生理食塩水および緩衝培地が挙げられる。
【０２４３】
医薬組成物は、従来の薬学的賦形剤、および配合技術を使用して調製されてもよい。経口剤型は、治療される患者による経口摂取用のエリキシル、シロップ、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などであってもよい。典型的な固形担体は、例えばラクトース、デンプン、グルコース、セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；造粒剤；結合剤、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、マンニトールなどであってもよい。カプセルの形態の組成物は、日常的なカプセル化方法を使用して調製され得る。例えば活性成分を含有するペレットは、標準的な担体を使用して調製され、次いで硬ゼラチンカプセルへと充填される。あるいは分散液または懸濁液が、任意の適切な薬学的担体、例えば水性ガム、セルロース、ケイ酸塩または油などを使用して調製され、その後、柔ゼラチンカプセルへと分散液または懸濁液が充填される。典型的な液状経口賦形剤としては、エタノール、グリセロール、グリセリン、非水性溶媒、例えば懸濁剤、保存剤、香味剤もしくは着色剤等を含むポリエチレングリコール、油、または水が挙げられる。すべての賦形剤は必要に応じて調剤分野の当業者に公知の従来的な技術を使用して崩壊剤、希釈剤、潤滑剤などと混合されてもよい。所望の場合には、例えば架橋ポリビニルピロリドン、アガーもしくはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤が加えられてもよい。所望の場合には、固形剤型は、糖衣錠であってもよく、または限定されないが、キトサンの使用を含む標準的な技術を使用してコーティングされ、消化管の特定領域を標的としてもよい。例えば、懸濁液、エリキシルおよび溶液などの経口液状調製物に関しては、適切な担体、賦形剤または希釈剤としては、水、グリコール、油、アルコールが挙げられる。さらに香味剤、保存剤、着色剤などが添加されてもよい。
【０２４４】
口腔投与に関しては、本開示組成物は、従来の方法で製剤化される錠剤、トローチ剤などの形態をとってもよい。さらに化合物は、例えば座薬または浣腸などの直腸または膣用組成物で製剤化されてもよい。典型的な座薬製剤は、例えば重合グリコール、グリセリド、ゼラチンもしくはココアバターなどの結合剤および／または潤滑剤、または他の低融点の植物性もしくは合成のワックスまたは脂肪を含む。吸入投与に関しては、本開示に従う用途のための化合物は、適切な推進剤、例えばジ−またはトリ−クロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスなどを使用した加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレーの形態で簡便に送達される。加圧エアロゾルの場合、用量単位は、定量を送達するバルブを提供することにより決定されてもよい。例えば吸入または吸入器における使用のためのゼラチンなどのカプセルおよびカートリッジは、化合物と、例えばラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末ベースの粉末混合物を含有して製剤化されてもよい。大きなβＣＤでさえ、吸入に適していると認識されている（Ｖｅｃｓｅｒｎｙｅｓ  Ｍ，Ｆｅｎｙｖｅｓｉ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｒｃｈ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  ４５：７１１−２９）。
【０２４５】
製剤はまた、デポ製剤であってもよく、移植（例えば皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与され得る。そうした実施形態では、化合物は、適切な重合物質または疎水性物質（例えば適切な油中のエマルションとして）またはイオン交換樹脂を用いて、または例えば難溶性塩などの難溶性誘導体として製剤化されてもよい。
【０２４６】
あるいは他の薬剤送達システムを採用してもよい。リポソームおよびエマルションは、使用され得る、公知の送達ビヒクルの例である。例えばジメチルスルホキシドなどの特定の有機溶媒を採用してもよいが、通常、毒性が高いという代償がある。さらに化合物は、徐放システム、例えば治療剤を含有する固形ポリマーの半透過性マトリクスなどを使用して送達されてもよい。様々な徐放物質が確立されており、当業者に公知である。徐放カプセルは、その化学的性質に応じて、数週間から最大で１００日以上にわたり化合物を放出し得る。治療薬の化学的性質および生物安定性に応じて、タンパク質安定化の追加戦略が採用されてもよい。
【０２４７】
本明細書に記載の化合物は、ボーラス注射または連続点滴による非経口投与用に製剤化されてもよく、および例えばアンプル、バイアル、少量点滴もしくは前充填シリンジ、または保存剤添加された複数用量容器などの単位投与形態であってもよい。
【０２４８】
例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどの保存剤および他の添加剤が存在してもよい。すべての担体は、必要に応じて崩壊剤、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤などと、当分野に公知の従来的な技術を使用して混合され得る。
Ｆ）用量
【０２４９】
本明細書に記載の活性剤の投与量は、ヒトまたは他の哺乳動物において、当該活性剤の有効性および／または有効量を決定するために実施された試験に基づき算出されてもよい（セクションＥ、以下の臨床転帰を参照）。投与量、および投与頻度または投与のタイミングは、当分野に公知の方法により決定されてもよく、および例えば活性剤の剤型、投与経路、年齢、体重または薬剤代謝に影響を与える任意の医学的状態の存在を含む患者の特性などの因子に依存してもよい。
【０２５０】
１つの実施形態では、投与量は、単回投与で投与されてもよい。別の実施形態では、投与量は、ある期間にわたる複数回投与として、例えば毎日、週２回、毎週、毎月など、特定の間隔で投与されてもよい。別の実施形態では、投与量は、７００ｍｇ／ｋｇ／日である（表３、２０１０−０４−１５）。別の実施形態では、投与量は、腎毒性または細胞毒性の早期兆候が観察されるまで、経時的に増加される。観察された場合、投与レベルは、過去の忍容性良好のレベルにまで減少される。
【０２５１】
一部の実施形態では、活性剤の投与量は、およそ少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも１２５ｍｇ、少なくとも１５０ｍｇ、少なくとも１７５ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも２２５ｍｇ、少なくとも２５０ｍｇ、少なくとも２７５ｍｇ、少なくとも３００ｍｇ、少なくとも３２５ｍｇ、少なくとも３５０ｍｇ、少なくとも３７５ｍｇ、少なくとも４００ｍｇ、少なくとも４２５ｍｇ、少なくとも４５０ｍｇ、少なくとも４７５ｍｇ、少なくとも５００ｍｇ、少なくとも５５０ｍｇ、少なくとも６００ｍｇ、少なくとも６５０ｍｇ、少なくとも７００ｍｇ、少なくとも７５０ｍｇ、少なくとも８００ｍｇ、少なくとも８５０ｍｇ、少なくとも９００ｍｇ、少なくとも９５０ｍｇ、少なくとも１０００ｍｇ、少なくとも１２００ｍｇ、少なくとも１５００ｍｇ、少なくとも２０００ｍｇ、少なくとも２５００ｍｇ、少なくとも３０００ｍｇ、少なくとも４０００ｍｇ、少なくとも５０００ｍｇ、少なくとも７５００ｍｇ、少なくとも１０，０００ｍｇ、少なくとも１５，０００ｍｇ、少なくとも２０，０００ｍｇ、または少なくとも２５，０００ｍｇである。そうした一部の実施形態では、上記の用量は、ｍｇ／日またはｍｇ／ｋｇ／日である。別の実施形態では、活性剤の投与量は、１〜１００００ｍｇ、１〜７５００ｍｇ、１〜５０００ｍｇ、１〜２５００ｍｇ、１〜１０００ｍｇ、１〜５００ｍｇ、１〜２５０ｍｇ、２５０〜１００００ｍｇ、２５０〜５０００ｍｇ、２５０〜１０００ｍｇ、２５０〜５００ｍｇ、５００〜１００００ｍｇ、５００〜５０００ｍｇ、５００〜１０００ｍｇの範囲である。一部の実施形態では、上記の用量は、ｍｇ／日またはｍｇ／ｋｇ／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１〜約２０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１０〜約２０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約２０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約２５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約３０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約３５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約４０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与���は、約４５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約５０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約５５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１０グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約１５グラム／日である。一部の実施形態では、クラスレート、またはα−シクロデキストリン、その誘導体もしくは塩の投与量は、約６０グラム／日である。一部の実施形態では、投与量は、１日当たり、約５グラムを３回である。
【０２５２】
一部の実施形態では、単回投与量が投与されてもよい。別の実施形態では、複数投与量がある期間にわたり、例えば１日当たり４回、１日当たり３回、１日当たり２回、１日当たり１回、毎週、毎月、１４日に４回、２１日に２回、月に２回、２１日に４回、月に４回、または月に、２１日に、１４日に、もしくは週に５、６、７、８、９、１０、１１、１２回以上などの特定の間隔で投与されてもよい。
【０２５３】
１つの実施形態では、静脈内または髄腔内投与される投与量は、週に５６００ｍｇ／ｋｇ、または週に４００ｍｇであってもよい（表３）。
表３  Ｈｅｍｐｅｌの双子の投与量調整
【表３】
2020535235.tif 000004
Ｇ）対象
【０２５４】
本明細書に記載の方法および組成物は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を、かかる治療の必要のある任意の対象において治療または予防するために使用されてもよい。１つの実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、治療される対象は、閉経後の女性であり、他の実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、そうした対象に限定することは意図していないことを留意されたい。むしろ一部の実施形態では、対象は、新生児から高齢者にわたる任意の年齢の対象であり得る。一部の実施形態では、若い対象、例えば特に、家族歴または遺伝子検査から、当該対象が悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を発症するリスクがあることが示唆されている年少乳児を治療することが望ましい場合がある。同様に一部の実施形態では、特に、かかる対象が、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の指標または症状を呈し始めている高齢の対象を治療することが望ましい場合がある。
【０２５５】
本明細書に記載の方法および組成物は、予防的処置または治療的処置として採用されてもよい。予防的処置に関しては、本明細書に提供される方法および組成物は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の明白な、または検出可能な任意の臨床指標または症状をまだ呈していないが、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態、例えばＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患を発症するリスクがあると考えられる対象において予防的に使用されてもよい。α−ＣＤの予防的処置を受ける対象は、例えばＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患の任意の臨床指標または症状を呈していなくてもよい。治療的処置の場合、本明細書に提供される方法および組成物は、例えばＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患などの疾患または障害の１つもしくは複数の臨床指標または症状をすでに呈している対象において使用され得る。ＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患に対する治療的処置を受ける対象は、例えば、ＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患の臨床診断を受けていてもよく、または別段により、ＭＳ、前立腺癌もしくは乳癌、または機能障害状態のリソソームにより特徴づけられる疾患の１つもしくは複数の臨床指標または症状を呈していてもよい。一部の実施形態では、本開示は、図面または明細書において特定される遺伝子のいずれかにおいて、欠損または実質的に欠損し、それによりそれら遺伝子は限定的に発現し、または発現が欠落し、リソソーム機能障害が生じている細胞を含む癌を治療する方法に関する。
【０２５６】
１つの実施形態では、対象は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態を発症するリスクがあると特定されてもよい。１つの実施形態では、対象は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態の家族歴を有する。１つの実施形態では、対象は、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態と関連する遺伝的リスク因子、例えばＰＩサイクル機能と関連した遺伝子における遺伝子変異などを１つまたは複数、有する。
Ｈ）臨床転帰
【０２５７】
一部の実施形態では、本明細書に提供される治療方法（例えば本開示に従う組成物の有効量を対象に投与する工程を含む方法）は、加齢関連疾患の１つまたは複数の臨床指標または症状における検出可能な改善を生じさせる、または改善の実現を目的とする。
【０２５８】
癌を背景とする場合、例えば臨床指標または症状としては、限定されないが、増殖、移動または浸潤の変化が挙げられる。本開示の一部の実施形態では、症状または指標の改善は、生存期間、無病生存期間、無遠隔転移期間、血液検査の結果（限定されないが、循環腫瘍ＤＮＡおよび前立腺特異抗原、β−ガラクトシダーゼ／β−ヘキソサミニダーゼ（Ｔｉｒｉｂｕｚｉ  Ｒ，Ｏｒｌａｃｃｈｉｏ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ  ２４：７８５−９７）、ならびにリゾチームおよび／またはカテプシンＳ（Ｈａｌｄａｒ  Ｋ，Ａｌａｍ  Ｓ（２０１７））、Ｘ線評価、身体検査の結果（限定されないが、触知可能な腫瘍を含む）、または組織生検による組織学的評価を含む群から選択される。
【０２５９】
個体における最も高い耐用用量を決定するために、全血球計算および血清化学検査を集め、分析する。血清化学検査には、限定されないが、電解質、重炭酸塩、グルコース、ＢＵＮ、クレアチニン、マグネシウム、リン酸塩、肝酵素（ＡＳＴおよびＡＬＴ）、総タンパク質、アルブミン、ビリルビンおよびアルカリホスファターゼの評価を含んでもよい。さらに完全脂質パネルを取得してもよく、赤血球の形状を顕微鏡で評価してもよい。骨密度を測定して、骨粗しょう症の早期兆候を特定してもよい。
【０２６０】
本明細書に記載の組成物および方法は、解説のためのみであり、限定する意図はない。当業者であれば、上述の具体的な組成物および方法の様々な組み合わせおよび改変を行うことができ、本明細書に記載の組成物および方法のそうした組み合わせならびに改変のすべてが、本開示の実施に使用され得ることを認識するであろう。さらに本開示の特定の実施形態を、以下の非限定的な実施例において、さらには以下の請求の範囲において詳述する。
【０２６１】
特許出願、雑誌記事を含むすべての公表文献は、その全体で参照により組み込まれる。
【実施例】
【０２６２】
実施例１：ＰＩ−サイクルは、乳癌の転移に対する薬剤標的である
実施例１に提示される結果を取得するために使用された方法は、（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ（２０１４）ＵＳ２０１６／０２０６５８１Ａ１）に詳述されている。当該文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。
【０２６３】
ヒトゲノムプロジェクトの完了からほぼ１０年、全ゲノム関連解析（ＧＷＡＳ）から期待された科学および医学の進展はいまだ実現されていない。サンプルサイズを何万人もの対象へと拡げることでデータ収集の期間とコストが大幅に上がり、そして非無作為試験では、幾分逆説的であるが偽陽性のリスクが増大する可能性がある。本実施例は、新規のコンピューター生物統計法と、ＧＷＡＳの探索的性質に適合させた決定戦略を組み合わせることについて記載する。これら方法論が進展するにつれ、数百の狭義の症例のみの研究から、疾患と関連する機能性遺伝子クラスターが提唱され得るようになった。
【０２６４】
乳癌および前立腺癌のリスク因子として知られている家族性乳癌の既往は、遺伝可能性を高度に裏付けるものであるが、一般集団における乳癌および前立腺癌の遺伝リスク因子はいまだほとんど判明していない。２５０，０００人の女性のデータを含む、乳癌の単一ＳＮＰ  ＧＷＡＳ（ｓｓＧＷＡＳ）は、検証可能な仮説を生み出さなかった（Ｍｉｃｈａｉｌｉｄｏｕ  Ｋ，Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ  ５５１：９２−４）。本明細書に記載されるように、本試験の３つの独立した亜群のデータ（ＮＩＨのｄｂＧａＰから入手可能）を、遺伝的に構造化された広域座位データに対するＵ−統計量を使用して分析し（ｍｕＧＷＡＳ）、エピスタシスを調査した。（非無作為化）ＧＷＡＳにおける、系統的な、しかし疾患に非関連の差異を考慮するために、および重複遺伝子領域において複数の検定を実施するために、新規の試験特異的な「適応全ゲノム有意性（ａＧＷＳ）」基準を適用した（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）。ＰＩサイクルへのリン脂質の流入およびリソソーム機能に関連した遺伝子を用いた、３つすべての試験の結果のエンリッチメントにより、高レベルのエンドサイトーシスと、加齢依存性のリソソーム機能衰退の間の不均衡が、乳癌の転移誘導に関与しているという仮説が確認される。
対象
【０２６５】
本試験は、適切であると承認された。非ヒトの被験者が、本調査に含められた。本明細書に記載される結果は、米国および欧州の乳癌に関する３つの試験に基づいている。これらの試験には、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ（ＣＧＥＭ）乳癌ＧＷＡＳのデータが含められ、当該データには１１４５の症例／１１４２の対照が含まれた（Ｈｕｎｔｅｒ  ＤＪ，Ｋｒａｆｔ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ３９：８７０−４）（ｄｂＧａＰ：ｐｈｓ０００１４７．ｖ３．ｐ１）。また、Ｂｒｅａｓｔ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｈｏｒｔ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ内のエストロゲン受容体ネガティブ（ＥＲ−）乳癌に関する、入れ子構造の症例対照試験および１つの症例対照試験の２つの副次試験のデータが含まれ、当該両データは、（Ｇａｒｃｉａ−Ｃｌｏｓａｓ  Ｍ，Ｃｏｕｃｈ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ４５：３９２−８，８ｅ１−２）に含まれ：Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎｔｏ  Ｃａｎｃｅｒ（ＥＰＩＣ）の５１１のＥＲ−症例と５００の対照、およびＰｏｌｉｓｈ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃａｓｅ−Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｓｔｕｄｙ（ＰＢＣＳ）の５４３のＥＲ−症例（２２９のトリプルネガティブ）と５１１の対照が含まれた（ｄｂＧａＰ：ｐｈｓ０００８１２．ｖ１．ｐ１）。
方法
【０２６６】
ｓｓＧＷＡＳ：参考にならない、または低クオリティのＳＮＰを除いた後、一変量データに対するｕ−統計量を使用した従来のｓｓＧＷＡＳを実施した（マン・ホイットニー検定（Ｍａｎｎ  ＨＢ，Ｗｈｉｔｎｅｙ  ＤＲ（１９４７）Ａｎｎ  Ｍａｔｈ  Ｓｔａｔ  １８：５０−６０）としても知られる。この検定は、ウイルコクソンの順位和検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ  Ｆ（１９５４）Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  １：８０−３）と同等である）。構成により、本解析の結果は、従来のコクラン・アーミテッジの傾向検定（Ａｒｍｉｔａｇｅ  Ｐ（１９５５）Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ  １１：３７５−８６）で取得される結果と非常に近くなる。
【０２６７】
アノテーション：入手可能なアノテーションファイルは、関与するＳＮＰまたは領域に関連している可能性があるには離れすぎている、または充分に近い遺伝子（または遺伝子のスプライスバリアント）を適切に識別するには不十分であることが証明されている。他方で、ディプロタイプは、遺伝子またはその制御領域の外側の連鎖不均衡（ＬＤ）ブロックに及んでいる場合があり、この場合、変動の機能的関連性が特定できる可能性は低い。また遺伝子機能を決定するために利用可能な充分な情報が存在しない場合があり、その場合、そのファンディング（ｆｕｎｄｉｎｇ）は、機能的に関連する遺伝子コレクションの特定には有用ではないだろう。ゆえにグリッド／クラウド基盤から戻された結果はいまだ手動でレビューし、アノテーションに関する不明確性を解消させる必要がある。
【０２６８】
広域座位アプローチ。共通疾患に適用された際に過去のｓｓＧＷＡＳのアプリケーションで見られた欠点のいくつかを克服するために、分析プロセスの様々な段階でいくつかの戦略を組み合わせた。最大で６個の隣接ＳＮＰがある広域座位が一次結果として対象とされた。過去の小児期欠神てんかん（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  １４：３９１−４０１）、および自閉症の試験（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）のように、遺伝子型構造（ｍｕＧＷＡＳ）を用いた構造化多変量データに対するｕ−統計量に基づき、同じ非パラメトリックＧＷＡＳ法が適用された（Ｈｏｅｆｆｄｉｎｇ  Ｗ（１９４８）Ａｎｎ  Ｍａｔｈ  Ｓｔａｔ  １９：２９３−３２５）。誤った結果を避けるために、公知の機能を有する遺伝子を含むＬＤブロックの外側の座位、またはその５’末端に隣接する座位は除外された。単一ＳＮＰにのみ強く影響を受けた座位も除外された。ただし当該ＳＮＰが複数の試験に関与している場合、または過去の試験に関与していた場合を除く。
【０２６９】
情報量：従来の回帰法とは対照的に、ｍｕＧＷＡＳは、「情報量」の固有評価基準を提供する。これを使用して、有意性は高いが情報量が低い領域は、アーチファクトの可能性があるとして強調され得る。以下のマンハッタンプロットにおいて、低情報量で有意性が高い結果は赤で強調され、除外される（白色で取り消される）。ただし例えば過去に乳癌または別の癌と関連すると報告された隣接ＳＮＰなど、他の裏付けとなる証拠がある場合を除く。低情報量の一部の領域は、単一ＳＮＰが多数を占め、または遺伝子もしくはその制御領域の内ではないＬＤブロックに及ぶディプロタイプを含む。１つのＳＮＰによるウィンドウの移動が、有意性に大きな（１００倍超）変化をもたらす場合にも、ディプロタイプは除外され得る。注目すべきは、これらの手動の介入が、偽陽性結果をもたらし得ないことである。この調査は、これらの規則をより方式化させ、解釈を容易にして、偽陰性結果を回避することを目的としている。
【０２７０】
ＭＡＦ−有意性相関：何らかの有限なサンプルサイズでは、ｕ−検定または順位検定の有意性は限定的である。ゆえに有意性の高い結果は、充分に高いＭＡＦを有するＳＮＰに対してのみ取得され得る。２，５００，０００個の置き換え済み表現型を用いてｓｓＧＷＡＳシミュレーションを実施し、様々なＭＡＦに対して等しいサイズの２つの群を比較する。１−１０−５分位の順列分布は、規定通りにＭＡＦ＞．３３を満たす、予測されたｓ＝−ｌｏｇ１０  ｐ  ＝５．２６カットオフから、０．０５のＭＡＦに対する４．９（ｎ＝１０００対象）、４．７（ｎ＝５００）および４．５（ｎ＝３００）にまで低下する。７．５のレベルに対しては、バイアスはさらに大きくなると予測される。このＭＡＦ−有意性相関により、「ＳＮＰなしは、形質と関連する」（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡ，Ｍａｎｏｌｉｏ  ＴＡ（２００８）ＪＡＭＡ  ２９９：１３３５−４４）というヌル仮説の下でのｓｓＧＷＡＳ  ＱＱプロットで予測される対角線（ｄｉａｇｏｎａｌ）は、末端に向かって対角線より下がると予測される曲線へと変わる。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７１】
＞１０８  の順列から予測されるｓ値（−ｌｏｇ１０（ｐ））の分布を推定して、１−１０−７．５  分位数の安定的な推定値を取得することは実用的ではなく、そして限られた検証に対してバイアスのかかったＳＮＰ選択を回避するにも充分ではない。このＭＡＦ−有意性相関があるために、観察された表現型を比較したときに「有意」な任意のＳＮＰが、無作為な表現型順列でも「有意」となる可能性も高い。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７２】
非無作為化バイアス：この屈曲がしばしば認識されない理由は、ＧＷＡＳの対象が（臨床試験のように）無作為に介入に割り当てられるのではなく、その結果（非言語と言語の比較など）に基づいて決定論的に分類されるためである。しかし決定論的に分類された母集団は、対象の状態や共通の祖先因子にも関連しない態様においては、系統的に異なることが予測される（階層化を介して説明され得る可能性もある）。限定的な検証を使用することによる下降傾向と、確定的選択による上昇バイアスが類似している場合、「真の関連性」を示唆する座位を除き、Ｓ値は対角線に沿っていると見える場合がある（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡ，Ｍａｎｏｌｉｏ  ＴＡ（２００８）ＪＡＭＡ  ２９９：１３３５−４４）。
【０２７３】
ディプロタイプ長に対する多重度調整：重複するディプロタイプの多変量検定に関し、推定される分位数順位（ＱＲ）曲線は、同じＳＮＰに関して実施される複数の検定を考慮するために対角線全体より上に上昇する必要がある。これら検定のほとんどは依存度が高く、そのため推定ＱＱ曲線（図６〜図１１）と比較して推定ＱＲ曲線の上昇は限られている。しかし距離は疾患や集団によって変化する可能性がある。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７４】
投影されるＱＲ曲線：従来のＱＱプロットの対角線は、最も「有意な」データを含むいずれのデータにも依存しない。ＳＮＰの大部分は疾患に関連しないことが予測されるため、ｓ値はほとんどの部分で対角線に適合することが予想される（最も有意な結果を除く）（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡ，Ｍａｎｏｌｉｏ  ＴＡ（２００８）ＪＡＭＡ  ２９９：１３３５−４４）。直接的な類似性では、多変量検定のＱＲ曲線は「滑らか」でなければならず、疾患関連か否かに関係なく上向きの偏差は「真の関連性」を示す。上記の理論的根拠と上述のシミュレーション結果に基づいて、各染色体に関して投影されるＱＲ曲線の最高点（頂点）は、投影が単調増加するのに必要なだけ多くの最高値を、限定的な検定である非ポジティブの二次導関数については控えめに最高値を切り捨てた後、ｓ値の滑らかな投影から推定され得る。データに適合させることで、集団階層化の影響も減少する（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡ，Ｍａｎｏｌｉｏ  ＴＡ（２００８）ＪＡＭＡ  ２９９：１３３５−４４）。（コンピューター計算での便宜のために、局所的に重み付けされた多項式回帰（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  ＷＳ，Ｄｅｖｌｉｎ  ＳＪ（１９８８）Ｊ  Ａｍ  Ｓｔａｔｉｓｔ  Ａｓｓｏｃ  ８３：５９６−６１０）が、「ロエス．滑らか（ｓｍｏｏｔｈ）（．．．度合＝２、ファミリー＝「ガウス分布」）としてＳ＋（ＴＩＢＣＯ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．）に実装されるように選択された。）
【０２７５】
推定全ゲノムＱＲ頂点：関連および非関連リスク因子の内容に関して染色体で異なっている場合があるが（例えば、自己免疫性疾患のＨＬＡ領域を参照）、確率的誤差は、全染色体にわたり同じ分布を有すると予測される。ゆえに予測ＷＧ頂点は、染色体間の（ウインザライズされた）投影頂点のメジアンとして推定され得、投影からのｓ値の最も小さい偏差を伴う。（本明細書において、１０個の染色体が、最大ノルム、およびロバスト性に関するメジアンに基づき選択された。しかし「最適性」に対する基準を含む、最適数を決定するための戦略は未定である）（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７６】
推定ＱＲ曲線：次に各染色体に対する推定曲線を、当該染色体のｓ値のロエス（ｌｏｅｓｓ）投影として算出する（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  ＷＳ，Ｄｅｖｌｉｎ  ＳＪ（１９８８）Ｊ  Ａｍ  Ｓｔａｔｉｓｔ  Ａｓｓｏｃ  ８３：５９６−６１０）。曲線の頂点がそのレベル以下になるまで、最高値の多くが推定ＷＧ頂点に置き換えられる。ＷＧ投影（ＱＲプロット、下部の右側）に適用することで、この手順により推定ＷＧ曲線が得られる。シミュレーション結果は、表現型順列からの推定値の分散の低さ、およびそれらのメジアン頂点と、観測されたｓ値から推定されたウインザライズ化メジアン頂点の類似性を示す。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７７】
試験特異的な全ゲノム有意性：表現型と関連した個々のＳＮＰの確認を目的とした試験に関し、「確認」パラダイム（Ｔｕｋｅｙ  ＪＷ（１９８０）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｉａｎ  ３４：２３−５）は多重度の調製を必要とする。ＧＷＡＳに適用される場合、そうした調整は典型的には、試験サイズ、またはＩＩ型エラーに対するＩ型エラーの相対リスクに関わらず「慣習的に」固定された０．０５レベル（（Ｆｉｓｈｅｒ  ＲＡ（１９５６），ｐ．３５８）を参照のこと。考察については（Ｇｉｇｅｒｅｎｚｅｒ  Ｇ（２００４）Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｓｃｉ  １５：２８６−７）を参照のこと）、およびチップ密度に関係なく１，０００，０００個の独立したＳＮＰという仮定（Ｐｅａｒｓｏｎ  ＴＡ，Ｍａｎｏｌｉｏ  ＴＡ（２００８）ＪＡＭＡ  ２９９：１３３５−４４）に基づいている。個々のＳＮＰから重複ディプロタイプに移動すると、生物学的妥当性が疑わしい仮定に対する何らかの正当な多重度調整の依存性が増加する（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）。
【０２７８】
ただしほとんどのＧＷＡＳと同様に、本実施例に記載される試験は、特定のＳＮＰに関する仮説の確認を目的とはしていない。その代わりに本明細書に記載の試験は、その相対的重要度とエピスタシス相互作用が不明な４０，０００個を超える（偽）遺伝子から可能性のある候補を取り上げることを目的としている。画像的な手順はこうした「探索的」試験に特に有用であるため（Ｔｕｋｅｙ  ＪＷ（１９７７））、ＱＲプロットが選択され、解釈を導き出した。推定曲線からのｓ値の偏差に対する正確なカットオフは不明である。「知識［が］最良近似である」とき［、］的確な質問に対するおおよその回答は多くの場合曖昧であるが、悪い質問に対する正確な回答よりは［ずっとまし］であり、いつでも正確にすることができる」（Ｔｕｋｅｙ  ＪＷ（１９６２）Ａｎｎ  Ｍａｔｈ  Ｓｔａｔ  ３３：１−６７）。ゆえに特定のエラー率を定量化するための典型的な試行ではなく、より少ない非現実的な仮定に依存するヒューリスティックな方法が提示される。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２７９】
予測されるＷＧ曲線を推定する必要があり、ｓ値は複雑な依存構造を有する。そして所与のサンプルサイズに対する適切な有意水準（α）は不明である。ゆえに、脆弱な仮定のみに基づく、ヒューリスティックな決定規則が提唱される。長期的には、頂点を超えるほとんどのｓ値は、任意のα＞  ０（無矛盾性）で有意であり、最も強い関連性を持つ領域が含まれる確率が最も高い（不偏性）と予測される。特定のαに関し、カットオフを下げることはできるが、頂点推定における分散を考慮するためには上げなければならないだろう。妥協として、推定ＷＧ頂点は、試験特異的ＧＷＳのカットオフとして提唱される（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）。
【０２８０】
分位順序（Ｑｕａｎｔｉｌｅ−ｒａｎｋ（ＱＲ））プロット：選択手順での慣例として、ｐ値は主に座位の順位付けの目的で使用された。特定の座位に関する特定の仮説が確認されなかったため、決定基準としての「ＱＱプロット」の特性を探索する従来法が改変され、形式化された。重複ディプロタイプの多変量検定の場合、１つのＳＮＰに対し多くの検定が行われるため、単変量ＷＧ順列仮説の下で従来の「ＱＱプロット」で予想される直線は、曲線になる。実施される検定数は大幅に増加するが、ＱＱ線と比較してＱＲ曲線中に示されるｓ値の増加（図７と図６、図９と図８、図１１と図１０）は限定的である。その理由は、ほとんどの検定が高度に依存性であるためである（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）。
【０２８１】
全ゲノム順列バイアス：ｓ値の予測分布を推定するために、無作為表現型順列を用いた反復試験の結果の平均値を求めてもよい。各μＧＷＡＳ分析は、ＧＰＵ起動ノードでグリッド／クラウドに対し＞１００，０００時間を必要とする場合があるため、１〜１０−７．５  分位の推定に＞１０８回の反復を必要とするシミュレーションは実用的ではない。ＷＧ順列（計算効率の良い近似値を含む）からの推定は、介入（臨床試験の場合）に無作為に割り当てられることよりも、対象がその転帰に基づき分類されていることによるバイアス（例えば非言語に対する言語）に影響を受ける。そのため、その集団は、対象の状態や共通の祖先要因のいずれにも関連しない態様において、系統的に異なることが予測される。バイナリな結果の場合、少数の「外れ値」だけで有意な結果が引き出されることもないため、有意性は高いＭＡＦ（ｓｓＧＷＡＳ）、または低い歪度スコア（μＧＷＡＳ）と相関する。ゆえに観察された表現型の間で有意な対立形質の差異を有する領域は、無作為な表現型順列間で有意となる機会も多くなる。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２８２】
選択的染色体順列：選択される染色体順列法を提唱されるように使用することで、このバイアスが減少する。疾患に関連する、および非関連のリスク因子の内容に関して染色体は異なっている場合があるが、確率的誤差は、全染色体にわたり同じ分布を有すると予測される。ゆえに上述のバイアスは、順列分布を決定したときに高い有意性の領域を含む染色体を除外することで減少される。特に各染色体に対する予測分布のエンドポイントは、単調増加と非ポジティブの二次導関数を確実にするための切り捨てを行った後のｐ値に対するロエス投影から推定され得る。同様に予測分布のエンドポイントは、例えばロエス投影から最も低い最大偏差のｓ値分布を有する１０個の染色体などの限定されたセットのメジアンから推定される。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）
【０２８３】
偏差に対する形式的ＱＲカットオフ：次に、初期ロエス適合がすでに当該標的レベル未満に維持されている場合を除き、曲線が当該レベルに削減されるまで予測エンドポイントと置き換えられた、充分な数の高エンドの結果を有する個々の染色体データのロエス適合として、各染色体に対する予測分布の推定を算出する。ＷＧデータに適用されるときも同じ手順で、ＷＧ分布の推定が得られる。シミュレーション結果は、表現型の無作為順列に基づく低分散の推定値を示し、そのメジアンが、観察されたデータから取得された分布の推定値と非常に類似していることを示す。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）。
結果
【０２８４】
過去に判明したＣＧＥＭの結果：従来、ＧＷＡＳは１試験当たり少数のＳＮＰのみを特定することが多かった。ＣＧＥＭＳデータの過去のｓｓＧＷＡＳ解析（Ｈｕｎｔｅｒ  ＤＪ，Ｋｒａｆｔ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ３９：８７０−４）は、傾向分析において２つの座位を暗示している：
chr10:124,992,475      rs10510126:    6.15      BUB3、（特定された長ＥＳＴ  ｎｏｔ５）
chr10:123336180          rs1219648:      5.49      FGFR2  
123341314          rs2420946        5.46      FGFR2
【０２８５】
ｓｓＧＷＡＳ結果：単一ＳＮＰ  ＧＷＡＳは、それぞれ６．２０および５．５７という本質的に同等のレベルでこれらの研究結果を確認した。他の多くの結果は、過去の公開されている解析において排除されていた。その理由は、ｐ値が、従来の「固定全ゲノム有意性」水準（典型的には７．５）に届かなかったためである。ｓｓＧＷＡＳ  ＱＲプロットから（ＣＧＥＭ：図６、ＥＰＩＣ：図８、およびＰＢＣＳ：図１０）、試験特異的全ゲノム有意性に対するカットオフを上回る遺伝子の多くが、膜でのシグナル伝達（ＧＰＣＲ、Ｆｃ受容体、成長因子受容体、イオンチャンネル）、または核でのプロセス（細胞サイクル制御、転写、スプライシング）に関与するというパラダイムに適合した（表４、ＭｂｒｎとＮｃｌｓの列を参照）。
【０２８６】
ｍｕＧＷＡＳ結果：ｍｕＧＷＡＳにおいて（ＣＧＥＭ：図７、ＥＰＩＣ：図９、およびＰＢＣＳ：図１１）、膜シグナル伝達および核プロセスに関連する遺伝子の割合は、ｓｓＧＷＡＳよりもさらに高い。さらにＰＩサイクル（図１２）またはエンドサイトーシス（図８Ａ）のいずれかで役割を果たすことが知られている遺伝子集団が突出している。
表４：試験により特定された遺伝子。試験；ｍｕＧＷＡＳ／ｓｓＧＷＡＳにおける、ＩＰＶ６／ＩＰＶ１：−ｌｏｇ１０（ｐ−値）；Ｍｂｒｎ：膜関連遺伝子（ＧＰＣＲ、Ｆｃ−受容体、ＨＡ、ＲＴＫ、イオンチャンネル）、ＰＩ／ＥＣ：ＰＩシグナル伝達／エンドサイトーシス、ＭＰＫ：ＭＡＰキナーゼ、Ｎｃｌｓ：核（細胞サイクル制御、転写、スプライシング）。各試験内の列の上端のブロック：ｍｕＧＷＡＳにおいてａＧＷＳを上回るディプロタイプを有する遺伝子（ＣＧＥＭ：５．２９、図７；ＥＰＩＣ：５．７１、図９；ＰＢＣＳ：５．１３、図１１）；各試験内の列の中心のブロック：ｍｕＧＷＡＳにおいて上位４１個のディプロタイプを有する他の遺伝子；各試験内の列の下端のブロック：ｓｓＧＷＡＳにおいて、試験特異的全ゲノム有意水準を上回るＳＮＰを有する遺伝子（ＣＧＥＭ：４．０３、図６；ＥＰＩＣ：４．００、図８；ＰＢＣＳ：３．８４、図１０）；ｍｕＧＷＡＳにおいても関与していた遺伝子のｓｓＧＷＡＳの結果を、ｍｕＧＷＡＳの結果の横に示す）；黒四角：公知の乳癌遺伝子（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ）；ボックス内の遺伝子名は、同じ遺伝子の複製（太字、ＰＲＫＣＱ、ＭＥＧＦ１１）または同じファミリーに属する近縁遺伝子の複製（ＡＴＰ８Ａ１／ＡＴＰ８Ｂ１，ＡＧＰＡＴ３／ＡＧＰＡＴ４，ＢＭＰ７／ＢＭＰＲ１Ｂ）を示す（図４９Ａ〜４９Ｃを参照）。
【０２８７】
バリデーション（同じ遺伝子内領域）：ＰＲＫＣＱ（ｃｈｒ１０）は、ＣＧＥＭにおいてｍｕＧＷＡＳにより（ｍｕ：６．７０、ｓｓ：３．４７、”は試験特異的な全ゲノム有意性を示す）およびＥＰＩＣにおいてｓｓＧＷＡＳにより（ｍｕ：５．２６、ｓｓ：３．８７＊）、有意であった。両集団で同じ領域（ｃｈｒ１０：６，５４０，７２４−６，５７３，８８３）が関与していた。ＰＢＣＳにおいては対照的に、この領域における関連性はなく（＜２．００）、乳癌に関し、異なる集団では、異なるリスク因子という概念と一致する。
【０２８８】
バリデーション（同じ遺伝子）：ＭＥＧＦ１１は、ＣＧＥＭとＰＢＣＳの両方で関与していた。ＭＥＧＦ１１は、ＥＰＩＣにおいてさらに上昇していた（３．３１）。単一ＳＮＰは、いずれの集団でも影響力が高かったが、同じＳＮＰではなかった（ＣＧＥＭ：ｒｓ１８９１５５、ＰＢＣＳ：ｒｓ１２９０３８８０、ＥＰＩＣ：ｒｓ３３３５５４）。３つすべてのＳＮＰがコード領域に位置しているが、ＬＤではない。ＭＥＧＦ１１（ｒｓ１４７７７９８）において、他の１つのＳＮＰが、結腸直腸癌に関与していた（Ｃｉｃｅｋ  ＭＳ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＪＭ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７：ｅ３８１７５）。
【０２８９】
バリデーション（類似機能）：複合的な疾患では、集団は、各集団に存在するリスク因子に関し異なっている場合がある。特に、類似機能を有する別の遺伝子により与えられるリスク割合が異なっている場合があり、さらにはたとえ同じ遺伝子が関与していても、リスクは別のＳＮＰと関連している場合がある。
【０２９０】
ｓｓＧＷＡＳでは、機能的に関連する１組の遺伝子のみが、突出している（表４）：
ＢＭＰＲ１Ｂ（ＣＧＥＭ）−ＢＭＰ７（ＥＰＩＣ）
【０２９１】
ｍｕＧＷＡＳの結果の中では（表４）、機能的に関連する遺伝子はさらに３組ある：
ＡＴＰ８Ｂ１（ＣＧＥＭ）−ＡＴＰ８Ａ１（ＥＰＩＣ）
ＭＥＧＦ１１（ＣＧＥＭ、ＰＢＣＳ）
ＡＧＰＡＴ４（ＣＧＥＭ）−ＡＧＰＡＴ３（ＥＰＩＣ）
【０２９２】
ＰＩ３Ｋ、ＰＴＥＮおよびＳＹＮＪ２における変異は、乳癌と関連することが知られている。
【０２９３】
関与すると普遍的に考えられているメカニズムは、ＰＩ（３，４，５）Ｐ３およびＰＩ（３，４）Ｐ２の下流のＡＫＴ／ＴＳＣ／ｍＴＯＲ増殖経路の制御異常である。この分析の結果は、ＰＩサイクルが関与する追加的な３つのポイントを指摘している（図１２）：
１．ＰＩ（４，５）Ｐ２（ＳＣＡＲＢ２，ＵＮＣ１３Ｃ，ＳＴＸＢＰ１，ＳＤＣＢＰ２，ＭＥＧＦ１１，ＳＹＴ１７，Ｎ４ＢＰ３，ＶＡＶ３）および
２．ＰＩ（３）Ｐ（ＮＬＲＰ４，ＥＥＡ１，ＲＡＢ３２）ならびに
３．ＰＩ（ＡＴＰ８Ａ１，ＡＴＰ８Ｂ１，ＳＬＣ５Ａ３，ＡＧＰＡＴ３，ＡＧＰＡＴ４，ＡＮＸＡ４）の全体的な活性化
【０２９４】
ＣＨＭＰ７、ＲＡＰＧＥＦ４およびＥＥＡ１を除き、これらすべての遺伝子が、過去に乳癌と関連していることが示されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ）。
【０２９５】
新たな研究結果は、乳癌リスクは、
【０２９６】
癌に感受性をもたらす核プロセスに関与する遺伝子、および
【０２９７】
増殖シグナルを出す膜プロセスに関与する遺伝子における様々な変動
【０２９８】
ならびに
【０２９９】
ＰＩ（３，４，５）Ｐ３（ＰＴＥＮにおける機能消失、ＰＩ３Ｋにおける機能獲得）、
【０３００】
ＰＩ（３，４）Ｐ２（ＳＹＮＪ１／２またはＩＮＰＰＬ１における機能獲得）、または
【０３０１】
ＰＩ（３）Ｐ（ＩＮＰＰ４Ｂにおける機能獲得）を増加させることにより当該２つを結び付ける少数の特定の変動、によりもたらされるだけでなく、
【０３０２】
ＰＩサイクルの全般的な制御異常であって、
【０３０３】
ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）（ＡＧＰＡＴ３，ＡＧＰＡＴ４およびＳＬＣ５Ａ３を含む）のエントリー、および
【０３０４】
ホスファチジルセリン／ホスファチジルコリン（ＰＳ／ＰＣ）（ＡＴＰ８Ａ１，ＡＴＰ８Ｂ１およびＡＮＸＡ４を含む）のエントリー、
【０３０５】
ならびに移動および浸潤の重要な構成要素としてのエンドサイトーシスをはじめとする、ＰＩサイクルの全般的な制御異常によってももたらされること、である。エンドサイトーシスは、ＰＩシグナル伝達により制御されることが知られており、以下で提示される結果において特定された遺伝子とも一致している：
【０３０６】
細胞膜ステージ（ＰＭ、８個の遺伝子）、
【０３０７】
早期エンドソームステージ（ＥＥ、４個の遺伝子）、および
【０３０８】
後期エンドソームステージ（ＬＥ、２個の遺伝子）。
【０３０９】
一部の実施形態では、対象は、上記に開示される遺伝子のいずれか１つまたは組み合わせの不完全な発現による機能障害状態のリソソーム経路により特徴づけられる疾患または障害を有する。
考察
【０３１０】
本明細書において使用された方法は、使用された統計法および決定戦略の両方において、従来のＧＷＡＳとは異なっている。ＧＷＡＳ固有の統計的手法の課題に対処するために、新規の方法は、（ａ）特定の優先度に関する仮定の設定を回避する、（ｂ）疾患座位に隣接するＳＮＰの両方が、組み換えホットスポットにより分離されている場合を除いて、ＬＤ中にあるはずであるという事実を選択する、（ｃ）同じタグセットに属するＳＮＰを識別することができるが、染色体でのその順序は異なり得る、（ｄ）類似した効果を有する同じ領域内の様々な疾患座位を考慮し、および（高い有意性を有する領域内でいくつかのＳＮＰを探索する目視検査を介してではなく）統計的方法内で複合的なヘテロ接合性を考慮する、および（ｅ）結果の優先順位付けに使用できる追加情報（情報量）を提供する。
【０３１１】
（ａ）非無作為化されたＧＷＡＳ、（ｂ）遺伝子は全く影響しないという仮説を検定するのではなく、いくつかは影響するはずと認識して、遺伝子セットを選択することを目的とする、（ｃ）ｐ値の予測分布推定においてＭＡＦの差異を考慮する、および（ｄ）関連する重複ディプロタイプの検定に対する調整、を考慮する決定規則の使用。
【０３１２】
小児期欠神てんかんにおけるμＧＷＡＳのバリデーション（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  １４：３９１−４０１）は、公知の疾患経路を調節する遺伝子を特定するμＧＷＡＳの能力を示している。従来のｓｓＧＷＡＳは、単一ＳＮＰ（偽遺伝子における）のみを特定していた。自閉症の無言症に対する、その後の応用（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｓｏｎａｋｙａ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４：ｅ３５４）から、２つの独立した集団において同じ生物機能に関連する遺伝子クラスターを特定するμＧＷＡＳの能力が確認された。
【０３１３】
従来の単一ＳＮＰ  ＧＷＡＳとともに、この新規決定規則を単独で使用することにより、本明細書で検討される３つの試験のそれぞれに対し、「有意な」遺伝子数がゼロから２０超に上昇した。新規決定規則を使用したｓｓＧＷＡＳにおいて確認された遺伝子セットには、新規ＰＩＰサイクル経路と関連する遺伝子の半分が含まれた。次いで、新規のノンパラメトリック広域座位法により、ＰＩサイクルの制御および機能に関与する遺伝子の残り半分が加えられた。
【０３１４】
ＰＩサイクルは真核細胞の多くの細胞機能にとって重要であり、例えば卵成熟、受精、胚発生などの発生機能だけでなく、細胞増殖、細胞骨格動態、膜輸送および核事象も含まれる（Ｓｈｕｌｇａ  ＹＶ，Ｍｙｅｒｓ  ＤＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４９：３１２−７；Ｂｕｓａ  ＷＢ（１９８８）Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ  ３２０：４１５−２６）。ゆえにＰＩサイクルが強固に制御されていることは何ら驚くべきことではない。特にＰＩ（４．５）Ｐ２、ＰＩ（４）Ｐ、ＰＩ（３，４）Ｐ２およびＰＩ（３）Ｐは、３つのキナーゼと３群のホスファターゼの両方により強固に制御されている（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）。ホスファターゼの様々なサブセット（図１２、ボックス）がキナーゼの作用に対抗するため、特定のホスファターゼ中の何らかの変動が全体としてシステムに与える影響はさらに低下する。ゆえにこの強固に制御されたシステムの状態を特定の介入が改変しても、持続的な影響を与えるには不充分となるであろう。
【０３１５】
「ＰｔｄＩｎｓ（３，４，５）Ｐ３およびＰｔｄＩｎｓ（３，４）Ｐ２の両方が、細胞が悪性状態となること、およびその持続に必要である可能性がある」ということが、「２ＰＩＰ仮説」（Ｋｅｒｒ  ＷＧ（２０１１）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １２１７：１−１７）として定式化されている。本明細書に提示される結果は、ＰＩ（３）Ｐだけではなく、全体としてＰＩサイクルにさらに焦点を移すことが必要であることを示唆している。この新たな焦点は、薬剤開発に直接的な影響を及ぼす。
【０３１６】
線形（ＰＩ−ＰＩＰ１−ＰＩＰ２−ＰＩＰ３）ＰＩシステムのモデルは、ＡＫＴ／ＴＳＣ／ｍＴＯＲの増殖経路に沿った活性を減少させる戦略としてのＰＩ３Ｋの阻害を提唱していた。しかしごく一部の患者のみが、ＰＩ３Ｋを阻害することでこの線形経路を中断し、利益を得られる（Ｂｏｓｃｈ  Ａ，Ｌｉ  Ｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ７：２８３ｒａ５１−ｒａ５１）。ウォルトマンニンおよび他のＰＩ３Ｋ阻害剤の限定的な成果は、本来ある状態だけではなく、特定のポイントでの薬剤による攪乱状態に対してもＰＩサイクルが代償してしまう能力と一致している。
【０３１７】
高レベルのＰＩ（３，４，５）Ｐ３、ＰＩ（３，４）Ｐ２およびＰＩ（３）Ｐはすべて、癌の負の転帰と相関していることが知られている。「ホスファチジルイノシチド（ＰＩＰ）量の変化が癌の特徴である。様々なＰＩＰが、正常細胞および悪性細胞における多様な膜のアイデンティティのマークとなる」（Ｓｅｎｇｅｌａｕｂ  ＣＡ，Ｎａｖｒａｚｈｉｎａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ）。ＰＩ（４，５）Ｐ２−ＰＩ（４）Ｐ−ＰＩ（３，４）Ｐ２−ＰＩ（３）Ｐ経路周辺の強固に制御されたＰＩサイクルモデルにより、キナーゼまたはホスファターゼを個々に、またはペアで阻害するよりも成功率の高い戦略としてＰＩサイクル活性を全体的に下方制御し、ＰＩサイクルを含む過度な活性化を正すことが提唱されている。
【０３１８】
乳癌も前立腺癌もそれ自体は致死的ではない。他の臓器へと拡がる転移が、癌関連死をもたらすのである。細胞障害剤を含む治療で見られるように、細胞増殖の抑制は概して副作用（悪心、脱毛など）を生じさせ、転移リスクは必ずしも下がるとは限らない。その理由は、増殖と転移は、別の経路で制御され得るからである。
【０３１９】
腫瘍細胞は、転移するために「運動性と浸潤性の表現型を発現させなければならず」、細胞移動にはエンドサイトーシスが必要であることが知られている（Ｍｅｌｌｍａｎ  Ｉ，Ｙａｒｄｅｎ  Ｙ（２０１３）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ５）。「増殖因子受容体の欠陥のある小胞輸送、ならびにインテグリンおよびカドヘリンをベースとした接着複合体の不均衡なリサイクルが、過去５年間で癌の多面的な特徴として浮上した」ため、「脱線したエンドサイトーシス」を是正することが、癌転移の予防戦略として提唱されている（Ｍｏｓｅｓｓｏｎ  Ｙ，Ｍｉｌｌｓ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８：８３５−５０）。「エンドサイトーシス輸送に関連するシグナル伝達経路の活性化（図１４）は、腫瘍細胞の移動に重要である。ゆえに、エンドサイトーシス輸送とシグナル伝達の選択的標的化により、転移を予防する新規癌治療剤の開発が可能となり得る」（Ｃｈｅｗ  ＣＬ，Ｃｈｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５−６）。
実施例２：ＰＩサイクル、およびエンドサイトーシス経路からの遺伝的リスク因子は、乳癌における「脱線したエンドサイトーシス」、およびパーキンソン病／アルツハイマー病における「欠陥／錯乱したエンドサイトーシス」の共通したリスク因子として知られている。
【０３２０】
アルツハイマー病およびパーキンソン病は、以下のリスク因子を共有することが知られている：Ａβおよびα−シヌクレインは相互作用すると仮定されており（Ｃｒｅｗｓ  Ｌ，Ｔｓｉｇｅｌｎｙ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎｅｕｒｏｔｏｘ  Ｒｅｓ  １６：３０６−１７；Ｔｓｉｇｅｌｎｙ  ＩＦ，Ｃｒｅｗｓ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ３：ｅ３１３５）、およびＡＤとＰＤの「中程度の関連性」が、１９８６〜２０１０年に実施された１４の試験のメタ解析において見出されている（Ｆｅｌｄｍａｎ  ＡＬ，Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ＡＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｎｅｕｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ４２：６９−８０）。しかし各々７，８１５ＫのＳＮＰが割り振られた２セットのＡＤおよびＰＤ  ＧＷＡＳからの単一ＳＮＰの要約統計量のメタ解析では、「ＰＤおよびＡＤの両方のリスクを上昇させる［ＳＮＰ］座位に関する有意な証拠はなかった」（Ｍｏｓｋｖｉｎａ  Ｖ，Ｈａｒｏｌｄ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７０：１２６８−７６）。近年、これらの試験においてパーキンソン病またはアルツハイマー病のいずれかとして診断されるルイス体（ＤＬＢ）を伴う疾患は、潜在的な交絡因子として特定された（Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  Ｒ，Ｅｓｃｏｔｔ−Ｐｒｉｃｅ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ３８：２１４  ｅ７−１０；Ｂｒａｓ  Ｊ，Ｇｕｅｒｒｅｉｒｏ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４ａ）Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ２３：６１３９−４６）。そして上述の結果から、上記の「有意な証拠」の欠落の理由は、シス−エピスタシスな効果に関して、ｍｕＧＷＡＳよりもｓｓＧＷＡＳのパワーが低いためである可能性が示唆される。
【０３２１】
乳癌およびアルツハイマー病／パーキンソン病の疫学および病因の重複：乳癌は、パーキンソン病と高い共起性を有する（Ｄｉｓｓｅ  Ｍ，Ｒｅｉｃｈ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｕｒｇ  ４２：１４１−６）。癌がアルツハイマー病のリスクを低下させるという早期の報告では、競合リスク（Ｈａｎｓｏｎ  ＨＡ，Ｈｏｒｎ  ＫＰ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ  Ｂ  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｓｃｉ  Ｓｏｃ  Ｓｃｉ）および／または癌治療剤の治療効果（Ｍａｌｋｋｉ  Ｈ（２０１６）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ  １２：１２６−）を考慮しない統計モデルに関連付けられていた。乳癌とアルツハイマー病の限定的な関連性に対する別の理由は、変異が逆の作用を有している可能性、例えば乳癌（およびパーキンソン病）では機能獲得、アルツハイマー病では機能喪失という可能性がある。遺伝的リスク因子の重複が既に報告されていた。パーキンソン病遺伝子のＰＳＥＮ２の変異が、乳癌およびパーキンソン病でも発見された（Ｃａｉ  Ｒ，Ｈａｏ  Ｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ３１：１７０１−７）。パーキンソン病の微小管関連タンパク質であるタウ（ｔａｕ）をコードするＭＡＰＴにおける変異は、乳癌（Ｒｏｕｚｉｅｒ  Ｒ，Ｒａｊａｎ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０２：８３１５−２０）およびパーキンソン病（Ｌｏｐｅｚ  Ｇｏｎｚａｌｅｚ  Ｉ，Ｇａｒｃｉａ−Ｅｓｐａｒｃｉａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ  １７：２０６）でも存在していた。ＤＪ−１は、上昇しているとみられ（Ｋａｗａｔｅ  Ｔ，Ｉｗａｙａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ  １０６：９３８−４３）、エンドソームＬＲＲＫ２のＧ２０１９Ｓ変異（Ｒｉｖｅｒｏ−Ｒｉｏｓ  Ｐ，Ｇｏｍｅｚ−Ｓｕａｇａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：３９０−５）はリスクを上昇させる（Ａｇａｌｌｉｕ  Ｉ，Ｓａｎ  Ｌｕｃｉａｎｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ  ７２：５８−６５）。さらに、「このリンクの病因は、理解し難いままである」（Ｄｉｓｓｅ  Ｍ，Ｒｅｉｃｈ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｕｒｇ  ４２：１４１−６）。
【０３２２】
乳癌（上記および公表されている結果）とアルツハイマー病／パーキンソン病（公表されている結果）に対する遺伝的リスク因子の重複：乳癌のｍｕＧＷＡＳで特定されたＰＩサイクルに関連する遺伝子とＥＥＣ遺伝子の大部分（表４、ＰＩ／ＥＣ列）はすでに、過去の機能性研究と、乳癌およびアルツハイマー病／パーキンソン病の両方の遺伝子発現研究で特定されている（表５および表６）。
表５：乳癌、ＰＤおよびＡＤのＰＩ−サイクル重複。遺伝子：乳癌ＧＷＡＳで特定された遺伝子。ＥＥＣ機能：ＰＩサイクルおよび／またはＥＥＣにおける公知の機能。ＫＥＧＧ：ＫＥＧＧ経路（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ／ｐａｔｈｗａｙ．ｈｔｍｌ）、ＥＣ：上皮癌（癌腫）。ＮＤ：神経変性疾患。
【表５−１】
2020535235.tif 000005
【表５−２】
2020535235.tif 000006
【表５−３】
2020535235.tif 000007
【表５−４】
2020535235.tif 000008
【表５−５】
2020535235.tif 000009
【表５−６】
2020535235.tif 000010
【表５−７】
2020535235.tif 000011
【表５−８】
2020535235.tif 000012
【表５−９】
2020535235.tif 000013
【表５−１０】
2020535235.tif 000014
【表５−１１】
2020535235.tif 000015
【表５−１２】
2020535235.tif 000016
【表５−１３】
2020535235.tif 000017
表６：乳癌とＰＤ／ＡＤ間のＥＥＣ重複（解説については表５を参照）
【表６−１】
2020535235.tif 000018
【表６−２】
2020535235.tif 000019
【表６−３】
2020535235.tif 000020
【表６−４】
2020535235.tif 000021
【表６−５】
2020535235.tif 000022
【表６−６】
2020535235.tif 000023
【表６−７】
2020535235.tif 000024
【表６−８】
2020535235.tif 000025
実施例３：リソソーム機能の加齢に関連した衰退と結び付けられたエンドサイトーシスの上昇は、加齢関連疾患における共通のエピスタシスなリスク因子である。
【０３２３】
エンドサイトーシスは、多くの加齢関連疾患の病因の公知の構成要素である。癌（Ｍｏｓｅｓｓｏｎ  Ｙ，Ｍｉｌｌｓ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８：８３５−５０）、アルツハイマー病（Ｓｃｈｒｅｉｊ  ＡＭ，Ｆｏｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ；Ｗａｎｇ  Ｘ，Ｈｕａｎｇ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ９：１−９；Ｋｉｍ  Ｓ，Ｓａｔｏ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２１：７０７−１６）、およびＰＤ（Ｒｉｖｅｒｏ−Ｒｉｏｓ  Ｐ，Ｇｏｍｅｚ−Ｓｕａｇａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：３９０−５）において、それぞれβ１−インテグリン（図１４）、ＡＰＰ（図１５）およびα−シヌクレイン（ＳＮＣＡ、図１６）のエンドサイトーシスは、プラーク形成につながる病因の重要な早期ステップであることが知られている。「脱線したエンドサイトーシス」および「錯乱したエンドサイトーシス」という用語は、癌（Ｍｏｓｅｓｓｏｎ  Ｙ，Ｍｉｌｌｓ  ＧＢ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ８：８３５−５０）、アルツハイマー病（Ｖａｎ  Ｄｏｏｒｅｎ  Ｔ，Ｐｒｉｎｃｅｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ  ２０１４：１６７０２４）、および他の「病的状態」（Ｄｉ  Ｆｉｏｒｅ  ＰＰ，ｖｏｎ  Ｚａｓｔｒｏｗ  Ｍ（２０１４）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６）の病因の重要な構成要素を特徴づけるために使用されている。「エンドサイトーシスに影響を与える遺伝子は、アルツハイマー病のリスク因子として過剰に象徴されており、エンドサイトーシス関連遺伝子は、アルツハイマー病において最も早く知られた疾患特異的なニューロン反応である。それらは、ＡＰＰの余剰コピーに関連付けられる早発型アルツハイマー病の原因であるダウン症候群において早期に発現する（Ｋｉｍ  Ｓ，Ｓａｔｏ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２１：７０７−１６）。
【０３２４】
「新たな報告では、［パーキンソン病］および［アルツハイマー病］（Ｃｏｌａｃｕｒｃｉｏ  ＤＪ，Ｎｉｘｏｎ  ＲＡ（２０１６）Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ）のみならず、アテローム性動脈硬化症の形態も含む、細胞の加齢、寿命、ならびに成人発症型の神経変性疾患において、［液胞Ｈ＋］−ＡＴＰａｓｅ活性の変化とリソソームのｐＨの制御異常が示唆されている。図１５、図１６、および図１７を参照のこと。パーキンソン病において、「機能性エンドソームの加齢に関連した病的枯渇」は、同じ経路での確率論的な分子的欠陥に対する感受性を増大させる可能性があり、これが一部の個体では、悪循環を誘発し得る。［．．．］疾患を引き起こす変異は、［エンドソーム］経路内でクラスター化し、受容体リサイクルを変化させ、および／またはα−シヌクレイン分解を変化させる。次にα−シヌクレインの蓄積［．．．］は、エンドソームのソーティングまたは融合に関与する機序を損ない、エンドソームプロセスの欠陥を悪化させる。」（Ｐｅｒｒｅｔｔ  ＲＭ，Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ  Ｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ６６：２１−８）。アルツハイマー病において、「エンドサイトーシスの加速は、拡張した［ＬＥ］内にエンドサイトーシスのカーゴを蓄積させ、リソソーム機能を損なう。［．．．］病的なエンドサイトーシス［．．．］は、複数の可能性のある標的で、治療により調節され得る。」（Ｋｉｍ  Ｓ，Ｓａｔｏ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２１：７０７−１６）。「［アルツハイマー病およびパーキンソン病］の根底にある分子メカニズムは未だあまり解明されていないが、エンドサイトーシスの膜輸送の機能障害が再び脚光を浴びており、これが神経変性プロセスを説明する可能性がある」（Ｓｃｈｒｅｉｊ  ＡＭ，Ｆｏｎ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ）。
【０３２５】
過去のＧＷＡＳでは、機能的に関連した遺伝子コレクションと、共通疾患の病因に関する新たな見識を特定できていなかったことを鑑みると、新たなＧＷＡＳ法に基づく驚くべき結果（実施例１）は、乳癌のみならず、アルツハイマー病およびパーキンソン病（実施例２）における過去の結果と概して一致し、そしてとくにリソソーム機能に関与する遺伝子とも一致していた（リソソーム遺伝子リスク因子における重複について、図１８Ａおよび図１８Ｂ）。
【０３２６】
エンドサイトーシスは、ウイルス感染でも重要な役割を果たし、関与していた。例えばＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、「細胞プロセス、特にエンドサイトーシス機序をハイジャック」することが示されており（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  Ｂ，ＭｃＮｉｖｅｎ  ＭＡ（２０１４）Ｃｏｍｐｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ４：１４０３−１７）、そして「ＨＢＶ」カプシド様コア粒子は、クラスリン介在エンドサイトーシスを通して内部移行される」（Ｃｏｏｐｅｒ  Ａ，Ｓｈａｕｌ  Ｙ（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：１６５６３−９）。実際に、クラスリン介在性エンドサイトーシスを損なうウミフェノビル（Ａｒｂｉｄｏｌ）（Ｐｅｃｈｅｕｒ  ＥＩ，Ｂｏｒｉｓｅｖｉｃｈ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ９０：３０８６−９２）は、肝炎ウイルスに対する活性を含む広範なアンチウイルス活性を有している（Ｂｌａｉｓｉｎｇ  Ｊ，Ｐｏｌｙａｋ  ＳＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０７：８４−９４）（図１９）。
実施例４：βＣＤは、コレステロール依存性機序を通して、「脱線した」、「錯乱した」または「欠陥のある」エンドサイトーシスに対する効果を発揮する。
【０３２７】
本開示は、α−ＣＤまたはＨＰ−α−ＣＤ、ならびにそれらのアナログおよび誘導体を、限定されないが、神経発達疾患でも認められる「癌の特徴」（Ｍｉｔｒａ  Ｓ，Ｃｈｅｎｇ  ＫＷ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４０：１４０４−８）である、「脱線したエンドサイトーシス」が関与する状態を含む加齢に関連した状態の治療に有用であり得る化合物の非限定的な例として提供するものである。（Ｒｉｖｅｒｏ−Ｒｉｏｓ  Ｐ，Ｇｏｍｅｚ−Ｓｕａｇａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ４３：３９０−５；Ｖａｎ  Ｄｏｏｒｅｎ  Ｔ，Ｐｒｉｎｃｅｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ  ２０１４：１６７０２４）。本開示の一部の実施形態では、α−ＣＤは、例えば癌（限定されないが前立腺癌および乳癌を含む）および神経変性疾患（限定されないが、ＰＤまたはＡＤを含む）などの加齢に関連した状態の治療に使用される。ＣＤは、その分布に直接干渉することなく、利用可能なＰＩＰの量を減少させる。
【０３２８】
癌、ＡＤおよびＰＤにおいて、多くの試験が、インビトロでのβＣＤの効果を調査している。
【０３２９】
癌：Ｍ−β−ＣＤは、３種のＨ７ルイス肺癌細胞株、および多くのβ１インテグリンを有する高度に転移性の細胞株における浸潤活性を抑制した（Ｚｈａｎｇ  Ｑ，Ｆｕｒｕｋａｗａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：１８１４５−５５）。そして乳癌および前立腺癌の細胞株は、Ｍ−β−ＣＤ誘導型細胞死に対して、その正常型のカウンターパートよりも感受性が高かった（Ｌｉ  ＹＣ，Ｐａｒｋ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６８：１１０７−１８；ｑｕｉｚ  ４０４−５）。特に、Ｍ−β−ＣＤ治療は、乳癌抵抗性タンパク質（ＢＣＲＰ）の活性に大幅な減少（４０％）を誘導した（Ｓｔｏｒｃｈ  ＣＨ，Ｅｈｅｈａｌｔ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ３２３：２５７−６４）。ＢＣＲＰは、ＰＣ（私を食べてシグナル）とＰＣアナログを輸送する（Ｄａｌｅｋｅ  ＤＬ（２００７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８２：８２１−５）。その後の機能性試験において、Ｍ−β−ＣＤは、ＭＤＡ−ＭＢ−２４１およびＺＲ７５１乳癌細胞のスフェロイド移動と浸潤を阻害し（Ｒａｇｈｕ  Ｈ，Ｓｏｄａｄａｓｕ  ＰＫ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  １０：６４７）、そしてＭＣＦ７乳癌細胞のエンドサイトーシス（Ｐａｌａｎｉｙａｎｄｉ  Ｋ，Ｐｏｃｋａｊ  ＢＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  ｔｈｅｒａｐｙ  ４：２１４−２２）および移動（Ｇｕｅｒｒａ  ＦＳ，Ｓａｍｐａｉｏ  ＬｄＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  １：３）も阻害した。Ｍ−β−ＣＤは、非浸潤性よりも浸潤性の尿路上皮癌細胞に対して毒性が高く（Ｒｅｓｎｉｋ  Ｎ，Ｒｅｐｎｉｋ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１３７８７８）、ＨｅＬａ細胞においてＲＴＫ−［ＰＩＰ２］−ＰＩ３Ｋ−［ＰＩＰ３］−ＡＫＴシグナル伝達に干渉し（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｒ，Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８９：４０９７−１０５）、そして白血病細胞株において増殖を阻害した（Ｙｏｋｏｏ  Ｍ，Ｋｕｂｏｔａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１４１９４６）。
【０３３０】
ＡＤ：Ｍ−β−ＣＤは、ＡＰＰを担持する組み換えセムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）に感染したラットの海馬ニューロンからのアミロイド−ベータの分泌を阻害し（Ｓｉｍｏｎｓ  Ｍ，Ｋｅｌｌｅｒ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９５：６４６０−４）、非アミロジェニック（ａｍｙｌｏｇｅｎｉｃ）なα−セクレターゼ経路を促進し（Ｋｏｊｒｏ  Ｅ，Ｇｉｍｐｌ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９８：５８１５−２０）、そしてβ−セクレターゼの活性を低下させながら、α−セクレターゼの活性を上昇させ、細胞関連ＡＰＰｓβのレベルを低下させた（図２０）。「ＡＰＰの内部移行を損なうことで、［．．．］、ＭβＣＤによる急性コレステロール枯渇後のα−セクレターゼ開裂を増加させる」（Ｃｏｌｅ  ＳＬ，Ｇｒｕｄｚｉｅｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０：１８７５５−７０）。細胞膜コレステロールの蓄積が、Ｓｗｅｄｉｓｈ変異ＡＰＰ（ＳｗＮ２ａ）を過剰発現するＮ２ａ細胞において検出された。膜コレステロールのレベルは、ＨＰ−α−ＣＤ処置により低下した。これによりＳｗＮ２ａ細胞中のＡβ４２のレベルが劇的に低下し、その効果は使用中止後、２４時間持続した。（Ｙａｏ  Ｊ，Ｈｏ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０９：２５０１−１３）
【０３３１】
ＰＤ：α−シヌクレインをトランスフェクトされたＨｅＬａ細胞において、α−シヌクレインは、脂質ラフトと共局在することが示された。２０ｍＭのＭ−β−ＣＤと１時間インキュベートすることで、このα−シヌクレインと細胞膜の共局在が劇的に低下した。（Ｆｏｒｔｉｎ  ＤＬ，Ｔｒｏｙｅｒ  ＭＤ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２４：６７１５−２３）。
【０３３２】
上述のインビトロでの試験結果の関連性は、いくつかのインビボ試験で確認された。
【０３３３】
Ｃａ：  Ｍ−β−ＣＤは、他の細胞（腎細胞および肝細胞を除く）よりも腫瘍細胞で濃度が高く、乳癌のマウスモデルで有効であり（Ｇｒｏｓｓｅ  ＰＹ，Ｂｒｅｓｓｏｌｌｅ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７８：１１６５−９）、Ｈ７−Ｏルイス肺癌細胞を移植されたマウスにおいて肺転移数を低下させ（Ｚｈａｎｇ  Ｑ，Ｆｕｒｕｋａｗａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：１８１４５−５５）、マウスにおいて原発性浸出液リンパ腫（ＰＥＬ）の増殖を阻害した（Ｇｏｔｏｈ  Ｋ，Ｋａｒｉｙａ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ４５５：２８５−９）。（Ｍ−）β−ＣＤは、例えば肺癌マウスモデルにおいてクルクミンなどの抗腫瘍薬剤の有効性を増加させることが判明しており（Ｒｏｃｋｓ  Ｎ，Ｂｅｋａｅｒｔ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １０７：１０８３−９２）、化学的に誘導された腫瘍マウスモデルにおいてラロキシフェンの有効性を増加させることが判明している（Ａｇａｒｄａｎ  ＮＢ，Ｄｅｇｉｍ  Ｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＡＡＰＳ  ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ）。ＨＰ−β−ＣＤは、腎細胞株を移植されたマウスの腫瘍退縮に対する３剤併用治療において必須であり（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  Ｒ，Ｐｅｒｋｉｎｓ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ５８９：４０９７−１０５）、白血病マウスモデルにおいて生存期間を延長させた（Ｙｏｋｏｏ  Ｍ，Ｋｕｂｏｔａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１４１９４６）。
【０３３４】
ＡＤ：コレステロールの排除、および／またはアミロイド−ベータもしくはａ−シヌクレインへの直接的な結合も、アルツハイマー病およびパーキンソン病におけるβ−ＣＤの作用機序であると考えられていた。「コレステロールおよびＰＬの両方のプールを減少させるＨＰβＣＤ」は、クリアランス機序を強化することに［より］、トランスジェニックＡＤモデルマウス［．．．］において神経保護的作用を有していた」  。４か月間のＨＰβＣＤの皮下投与によって、Ｔｇ１９９５９マウスにおいて空間学習と記憶障害が大幅に改善され、アミロイド−ベータプラーク沈着が減少し、そしてタウ免疫反応性変性神経突起（ＤＮ：ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃ  ｎｅｕｒｉｔｅｓ）が減少した。Ｔｇ１９９５９マウスは、ヒトアルツハイマー病と関連するアミロイド前駆タンパク質（ＡＰＰ）遺伝子中に２個の変異を有するトランスジェニックマウスであり、有益な効果はコレステロールの減少によるものであった（Ｙａｏ  Ｊ，Ｈｏ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０９：２５０１−１３）。「ラットにおいて、Ａβ１−４０／４２の毒性は、海馬内への［β−ＣＤの］定位的注入を介して減少した」（Ｊａｍｅｓｏｎ  ＬＰ，Ｓｍｉｔｈ  ＮＷ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３：８０７−１９）。
【０３３５】
ＰＤ：「ＭβＣＤを用いてマウスを処置することで、神経細胞体およびシナプスにおけるα−シヌクレイン蓄積の減少がもたらされた」（Ｂａｒ−Ｏｎ  Ｐ，Ｒｏｃｋｅｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ９８：１０３２−４５）。この「ＭβＣＤの転写効果の可能性」（Ｂａｒ−Ｏｎ  Ｐ，Ｒｏｃｋｅｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ９８：１０３２−４５）は、生体外で、直接的な相互作用を介してβ−ＣＤがα−シヌクレインの凝集を阻害したことに関連していると考えられた。（Ｇａｕｔａｍ  Ｓ，Ｋａｒｍａｋａｒ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５３：４０８１−３）。本開示の結果はむしろ、シクロデキストリンは、病因の共通構成要素としてエンドサイトーシスを制御することにより作用し、同じ加齢関連機序が、癌においてもシクロデキストリンにより制御されていることを提唱する。
臨床／疫学
【０３３６】
アテローム性動脈硬化症およびＡＤは併発するが（Ｓｏｎｇ  Ｙ，Ｓｔａｍｐｆｅｒ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １４１：１３７−４７）、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍのコホート分析でも、コレステロールレベルとＡＤの間の関連性は見いだせていない（Ｔａｎ  ＺＳ，Ｓｅｓｈａｄｒｉ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １６３：１０５３−７）。ＨＰ−β−ＣＤは、動物モデルの腫瘍に対して効果があり、大部分の末梢および中心臓器系で忍容性良好である（Ｃｒｏｎｉｎ  Ｓ，Ｌｉｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  １６：５９９−６１１）。しかしマウス（Ｃｒｕｍｌｉｎｇ  ＭＡ，Ｌｉｕ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７：ｅ５３２８０）、ネコ（Ｗａｒｄ  Ｓ，Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｒｅｓ  ６８：５２−６；Ｖｉｔｅ  ＣＨ，Ｂａｇｅｌ  ＪＨ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ７：２７６ｒａ２６）およびヒト（Ｍａａｒｕｐ  ＴＪ，Ｃｈｅｎ  ＡＨ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ  １１６：７５−９）において永続的な難聴を引き起こすリスクがあることが示されている。この耳毒性は、外有毛細胞のプレスチン（ｐｒｅｓｔｉｎ）（ＳＬＣ２６Ａ５）からコレステロールを枯渇させることが原因と考えられている（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｓ，Ｈｏｍｍａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：２１９７３；Ｋａｍａｒ  ＲＩ，Ｏｒｇａｎ−Ｄａｒｌｉｎｇ  ＬＥ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １０３：１６２７−３６；Ｙａｍａｓｈｉｔａ  Ｔ，Ｈａｋｉｚｉｍａｎａ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｇｅｎｅｔ  １１：ｅ１００５５００）。
ＨＰ−β−ＣＤのメカニズムはコレステロール非依存性である
【０３３７】
シクロデキストリンの直接的な作用は、膜および血清からの脂質（コレステロールおよびリン脂質）の抽出である。非経口適用した後、脂質は尿中に排泄される。ＮＰＣにおけるβ−ＣＤのメカニズム、および乳癌を含む数種の癌で見られるコレステロールレベルの上昇から（Ｙｏｋｏｏ  Ｍ，Ｋｕｂｏｔａ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１４１９４６）、β−ＣＤは、コレステロールレベルを低下させることで癌の増殖を低下させると考えられている。アルツハイマー病において、ＨＰ−β−ＣＤは、アミロイド−ベータといった別の大型脂質の疎水性残基に作用すると考えられている。
【０３３８】
ＨＰ−β−ＣＤは、上位の大型脂質に直接結合することではその作用を発揮しないという初期の証拠は、乳癌の発生に重要な役割を果たすエキソームに関する研究から浮上した（Ｌｏｗｒｙ  ＭＣ，Ｇａｌｌａｇｈｅｒ  ＷＭ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ６１：１４５７−６５；Ｐｅｉｎａｄｏ  Ｈ，Ｌａｖｏｔｓｈｋｉｎ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  ２１：１３９−４６）。Ｍ−β−ＣＤを用いてＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞を処置することで、インテグリンを含有するエキソームの内部移行が阻害された（Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ａ，Ｃｏｓｔａ−Ｓｉｌｖａ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ  ５２７：３２９−３５）が、コレステロール非依存性に作用した（Ｋｏｕｍａｎｇｏｙｅ  ＲＢ，Ｓａｋｗｅ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６：ｅ２４２３４）。
【０３３９】
実際に、コレステロールは関与しないことの多くの証拠が提唱されている。ＣＡＤおよびアルツハイマー病は併発するが（Ｓｏｎｇ  Ｙ，Ｓｔａｍｐｆｅｒ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １４１：１３７−４７）、Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍのコホート分析は、コレステロールレベルとアルツハイマー病の間の関連性を見出せなかった（Ｔａｎ  ＺＳ，Ｓｅｓｈａｄｒｉ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １６３：１０５３−７）。パーキンソン病において、α−ｓｙｎのクリアランスに対するＨＰ−β−ＣＤの効果は、コレステロールに非依存性である（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）（図２１）。
【０３４０】
近年の研究で、Ｍ−β−ＣＤで治療された１６名の嚢胞性線維症の患者と、９名の健常対照の気管支洗浄液（ＢＬＦ）におけるサーファクタントの表面活性が比較された。リソソーム脂質の過積載の結果として、肺胞マクロファージが拡張されていた。例えばアラキドン酸、オレイン酸、ＬＰＣおよびリゾホスファチン（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ）酸（ＬＰＡ）などのＦＦＡの放出により、ＰＣ、ＬＰＣおよびＦＦＡの加水分解産物が、サーファクタント機能を阻害したと結論付けられた。この機能障害は、コレステロールが相対的に存在しない場合であっても、ＭβＣＤにより逆転された（図２８）。さらにＭ−β−ＣＤは、これら産物の炎症作用を低下させた（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａ  Ｌ，Ａｌ−Ｓａｉｅｄｙ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ；Ｓｔｒａｎｄｖｉｋ  Ｂ（２０１０）Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ，ａｎｄ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ  ８３：１２１−９）。ＡＡおよびＬＰＣの共通した関与は、公知の併存疾患である線維症およびＣＡＤと一致している（Ｓｋｏｌｎｉｋ  Ｋ，Ｌｅｖｙ  ＲＤ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １５：ｅ７０−ｅ１）。
【０３４１】
コレステロールが後期エンドソームとリソソームに蓄積することが認められるＮＰＣであっても、その作用機序は不明確であり、分子標的は不明である（Ｄａｉ  Ｓ，Ｄｕｌｃｅｙ  ＡＥ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  １３：１４３５−５１）。ただし、ＨＰ−β−ＣＤは、コレステロールに対するＮＰＣ１およびＮＰＣ２の作用の機能に非依存性の様式で、機能発揮することが示されている（Ｌｉｕ  Ｂ，Ｌｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ  ４９：６６３−９）。さらに機序に関する研究から、コレステロールに適合するには小さすぎるα−ＣＤでも、β−ＣＤの効果の一部が確認されることが示されている（Ｓｈｖａｒｔｓｍａｎ  ＤＥ，Ｇｕｔｍａｎ  Ｏ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｔｒａｆｆｉｃ  ７：９１７−２６）。Ｎｐｃ１ａマウスにおいては例えば、ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤほどではないが、コレステロール蓄積を効果的に低下させる（図２２）。
【０３４２】
ＵＳ  ２０１５／０２１６８９５  Ａ１（ＭｃＫｅｗ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  ＷＥＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４））において、Ｍ−β−ＣＤは、様々なＬＹＤ疾患に対し、最も効果的なシクロデキストリンであった（図２３）。そして１０μＭのデルタ−トキソフェロール（ビタミンＥ）との組み合わせが提唱され、これにより必要となる濃度が低下し、それに伴い耳毒性および腎毒性のリスクも低下した（リスクの消滅ではない）。α−ＣＤ（およびＨＰ−β−ＣＤ）は、Ｍ−β−ＣＤよりも効果が低い。一方でα−ＣＤ（コレステロールと適合できない）はＨＰ−β−ＣＤ（コレステロールと適合できる）と似た効果があるという事実は認識されておらず、この事実からは、当該効果がコレステロールの排除によるものではない可能性が示唆される。
【０３４３】
本発明者らの驚くべき遺伝的結果は初めて、加齢関連疾患でみられるβ−ＣＤの効果は、コレステロールに介在されるものではなく、リン脂質により介在されるものであるため、加齢関連の疾患、障害および状態の治療ならびに予防に対し、さらにはＬＹＤ疾患の治療に対しても、毒性の高いＨＰ−β−ＣＤおよびＭ−β−ＣＤよりも毒性の低いα−ＣＤが好ましいことを提唱する。
実施例５：ＨＰβＣＤは、血清リン脂質の減少が関与する機序を介してオートファゴリソソームの形成を活性化する
【０３４４】
「リソソーム遺伝子における遺伝的多様性は、散発性ＡＤの疾患経過を改変する」（Ｗｈｙｔｅ  ＬＳ，Ｌａｕ  ＡＡ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  １４０：７０３−１７）。オートファジーは、限定されないが、「根尖病変、歯周病および口腔カンジダ症」をはじめとするヒトの口腔疾患に関連付けられている。（Ｔａｎ  ＹＱ，Ｚｈａｎｇ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  １３：２２５−３６）「ＡＬＳの発症機序において［オートファジー］と他の細胞ストレスの間のクロストークが示唆されており、ＡＬＳにおける［オートファジー］を制御する治療法が示唆される。」  オートファジーの制御因子であるＡＴＧ１６Ｌ１は一貫して、炎症性大腸疾患（限定されないが、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）と関連している。（Ｐｕｇａｚｈｅｎｄｈｉ  Ｓ，Ｂａｓｋａｒａｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １２：ｅ０１７８２９１）。オートファジーは、「中枢神経系（ＣＮＳ）の加齢および神経変性のコア制御因子として浮上し、局所貧血／脳卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病ならびに多発性硬化症を含む［疾患に影響を与え］、［．．．］アポトーシス細胞、アミロイド−ベータ（Ａβ）、シナプス物質およびミエリン残渣のミクログリアファゴサイトーシスを含み、加齢に関連した神経変性疾患の進行を制御する」（Ｐｌａｚａ−Ｚａｂａｌａ  Ａ，Ｓｉｅｒｒａ−Ｔｏｒｒｅ  Ｖ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ  １８）。
【０３４５】
パーキンソン病（Ｍｏｏｒｓ  ＴＥ，Ｈｏｏｚｅｍａｎｓ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  １２：１１）、アルツハイマー病、ハンチントン病およびＡＬＳ（Ｍｏｌｏｕｄｉｚａｒｇａｒｉ  Ｍ，Ａｓｇｈａｒｉ  ＭＨ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ４０：６４−７４）において、オートファジーの活性化は望ましいものと考えられている。しかし、利用可能な有効薬剤はまだない。「ｍＴＯＲは、重要な制御因子であることが示されているが、その詳細なメカニズムは充分には解明されていない」（Ｃｈｅｎ  Ｙ，Ｙｕ  Ｌ（２０１７）Ｔｒａｆｆｉｃ  １８：３５８−６１）（図２４）。
【０３４６】
転写因子ＥＢ（ＴＦＥＢ：ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＥＢ）は、Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＣＬＥＡＲ）ネットワークに属する遺伝子の発現、およびオートファジーに関与する遺伝子の発現を制御する。ＴＦＥＢの過剰発現は、ハンチントン病のラット細胞モデルにおいてハンチンチン凝集体の蓄積を減少させることが見いだされており（Ｓｅｔｔｅｍｂｒｅ  Ｃ，Ｄｉ  Ｍａｌｔａ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３２：１４２９−３３）、さらにパーキンソン病のインビトロモデルおよびインビボモデルにおいて、リソソームレベルを回復させ、オートファジークリアランスを増加させることにより神経変性を低下させることも見いだされている（Ｄｅｃｒｅｓｓａｃ  Ｍ，Ｍａｔｔｓｓｏｎ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １１０：Ｅ１８１７−２６；Ｄｅｈａｙ  Ｂ，Ｂｏｖｅ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３０）．”（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）。
【０３４７】
ＨＰ−β−ＣＤでＨｅＬａ／ＴＦＥＢ細胞を処置することで、オートファジー小胞形成に必須である微小管関連タンパク質の１Ａ／１Ｂ−軽鎖３（ＬＣ３）、カーゴ認識に必須のＳＱＳＴＭ１／ｐ６２、およびオートファゴソームの形成に必要なＢＥＣＮ１が上方制御された。後期小児神経セロイドリポフスチン症（ＬＩＮＣＬ）の線維芽細胞はＴＰＰ１を欠いており、この細胞においてＨＰ−β−ＣＤ処置を行うことで、用量依存性および時間依存性に、セロイド脂肪色素がクリアランスされた。ＨＰ−β−ＣＤ処置によって、検証されたすべての常染色体性（ＬＣ３、ＳＱＳＴＭ１、ＢＥＣＮ１）リソソーム遺伝子（ＧＢＡ、ＨＥＸＡ、ＬＡＭＰ１）が、ＴＦＥＢの活性化を介して転写が上方制御された。ＨＰ−β−ＣＤ処置によって、リソソーム生合成およびオートファジーの協調的な上方制御が生じ、そしてオートファジー系のＴＦＥＢ誘導型活性化を介した、オートファジークリアランスが強化される。しかしオートファジーフラックスの下流工程の阻害（例えばＡＴＧ７発現の阻害）によって、セロイド脂肪色素のクリアランスが阻害される。ＨＰ−β−ＣＤは、生存促進性のオートファジー経路を活性化するが、アポトーシスは活性化しない。オートファジーの機能障害または制御異常は、神経変性疾患から癌にわたる多くのヒト疾患の発症と進行に関連付けられている。不充分なオートファジークリアランスと、貯蔵物質の蓄積を特徴とする疾患の治療にＨＰ−β−ＣＤの使用が提唱されている。しかしＨＰ−β−ＣＤの作用機序はいまだ不明である（図２５）（Ｓｏｎｇ  Ｗ，Ｗａｎｇ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：１０２１１−２２）。
【０３４８】
「ＨＰｂＣＤは、ＴＦＥＢの核転座、ＣＬＥＡＲネットワークの上方制御、およびオートファジークリアランスの増加を誘導することが示されている」（Ｓｏｎｇ  Ｗ，Ｗａｎｇ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８９：１０２１１−２２）。特にＨＰ−β−ＣＤを用いた神経グリオーマ細胞におけるＴＦＥＢの活性化は、オートファジーを介したａ−ｓｙｎ凝集体（パーキンソン病）のクリアランスを促進した（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）。Ｍ−β−ＣＤは、［インビトロおよびインビボで］α−ｓｙｎの蓄積も低下させた。（Ｂａｒ−Ｏｎ  Ｐ，Ｒｏｃｋｅｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ９８：１０３２−４５）
【０３４９】
しかしオートファジーに対するＭ−β−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤの作用の根底にある分子メカニズムはそれぞれ、「解明されていない」（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）または「いまだ解明する必要がある」（Ｓａｒｄｉｅｌｌｏ  Ｍ（２０１６）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １３７１：３−１４）。しかし、コレステロールを介した介在ではないことは判明している。「我々は、ＨＰｂＣＤ−コレステロール封入複合体で処置された細胞におけるＴＦＥＢの活性化とα−ｓｙｎ凝集体の蓄積を検証した。．．．共焦点顕微鏡．．．により、ＴＦＥＢの核転座の程度（図２１Ａ）［および］ａ−ｓｙｎ凝集体のクリアランス（図２１Ｂ）の［両方とも］［が］、ＨＰｂＣＤがコレステロールを枯渇させる能力には依存しないことが明らかとなった」（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  Ｋ，Ｚｅｎｇ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０：ｅ０１２０８１９）
【０３５０】
実施例１の驚くべき遺伝子の結果が、この回答を提示する。ＰＩサイクルの機能に干渉するＰＩ３Ｋ阻害剤（図１２）が、ＴＦＥＢの核転座を促進することが既に知られている（Ｃｈｅｎｇ  Ｊ，Ｏｈｓａｋｉ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３５１：２４６−５２）。ＨＰ−β−ＣＤは、リン脂質を排除することで、ＰＩサイクル全体の活性を低下させ、それによりＰＩ３Ｋ阻害剤（主にＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ／ＴＦＥＢ経路を介して作用する）よりも一貫した様式でＴＦＥＢの核転座を促進するが、ＰＩサイクル内の不均衡は生じさせない（図２６）。
【０３５１】
この新たな研究結果は、他の証拠でもサポートされる。ペオニフロリンは、シクロデキストリンの共通の作用機序である、血清脂質を低下させることで作用することが知られている（Ｙａｎｇ  ＨＯ，Ｋｏ  ＷＫ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ  ７５：４５−９）。ペオニフロリンは、球脊髄性筋萎縮症（ＳＢＭＡ）を有するマウスの疾患表現型を軽減させる。この疾患は、脊髄のオートファジーが減退している。ペオニフロリンは、ＬＰＣ誘導型炎症の動物モデルにおける検証で有効であり（Ｌｉ  ＪＺ，Ｗｕ  ＪＨ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ３１：４９３−７）、ＮＡＦＬＤ（Ｍａ  Ｚ，Ｃｈｕ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ７：４４８１９）、インスリン抵抗性（Ｍａ  Ｚ，Ｌｉｕ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ  ９０：３６１−７）およびアテローム性動脈硬化症（Ｌｉ  Ｈ，Ｊｉａｏ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ４０：２０４２−５１）のシクロデキストリンも同様であった。
実施例６：リソソーム機能障害と結びついたファゴサイトーシスの上昇は、多発性硬化症（ＭＳ）の病因における公知の構成要素である。
【０３５２】
１９７０年代のＭＳに関する初期の研究で、β−グリコロニダーゼ活性の上昇をはじめとする「リソソーム反応が上昇している」にもかかわらず、「リソソーム中のミエリン様物質」および「疾患グリア細胞による異常ミエリンの合成」が報告されており（Ｃｕｚｎｅｒ  ＭＬ，Ｄａｖｉｓｏｎ  ＡＮ（１９７３）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  １９：２９−３６）、「疾患の基礎メカニズムとしてのグリア細胞の早期変化が示唆される」。「ウイルス感染のようないくつかの獲得外因性因子が、疾患および免疫病理を誘発する基盤的な原因である」と仮定された。（Ｒｉｅｋｋｉｎｅｎ  ＰＪ，Ｒｉｎｎｅ  ＵＫ，ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ  ｆｕｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｅ  ２０３：９１−１０４）
【０３５３】
１９７７年に、Ｎ−アセチル−β−ｄ−グルコサミニダーゼ（ＭＧＥＡ４、ＨＥＸＣとしても知られる）、β−ガラクトシダーゼ（ＧＬＢ１）およびカテプシンＤ（ＣＴＳＤ）の３種のリソソーム酵素が上方制御されており、プラーク領域で最も高い活性があることが判明した」（ＭｃＫｅｏｗｎ  ＳＲ，Ａｌｌｅｎ  ＩＶ（１９７７）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ５：１４１６−８；（１９７９）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ５：４０５−１５）。血清およびＣＳＦにおける酵素レベルは、ＭＳでは概して上昇していなかった（Ｈｕｌｔｂｅｒｇ  Ｂ，Ｏｌｓｓｏｎ  ＪＥ（１９７８）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃａｎｄ  ５７：２０１−１５；（１９７９）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃａｎｄ  ５９：２３−３０）。
【０３５４】
１９８０年に、「［マクロファージ］が刺激され、リソソーム酵素活性が上昇し、これはＭＳ特異的抗原を原因とするＴリンパ球刺激により始まったこと」が示唆された（Ｒａｓｔｏｇｉ  ＳＣ，Ｃｌａｕｓｅｎ  Ｊ（１９８０）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：５０−６）。しかし「ミクログリアの構成要素」が関与しているらしいことを除き、そうした抗原は特定されなかった（Ａｌｌｅｎ  ＩＶ（１９８１）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ７：１６９−８２）。
【０３５５】
１９８３年に、「２ステップの脱髄」仮説が提唱された：（１）毒素がミエリン内に侵入し、その分解によって抗原が生じる。（２）抗原活性化マクロファージが定着し、ミエリンを消化する（Ｓｃｈｗｙｚｅｒ  ＲＵ，Ｈｅｎｚｉ  Ｈ（１９８３）Ｍｅｄ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ  １２：１２９−４２）。しかし毒素はいまだ捉えられていない（Ｔｕｌｐｕｌｅ  Ｋ，Ｄｒｉｎｇｅｎ  Ｒ（２０１３）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２７：７−２１）。
【０３５６】
１９９６年にもまだ「プラーク発生の早期ステージにおける［活性化］マクロファージの源に関しては殆ど分かっていない。．．．ＭＳの発症機序の理解における重要な課題は、ミエリン分解が可能で、脱髄発生時に自己抗原のＴ細胞への提示が可能な貪食細胞の信頼性のある特定である。［しかし］結果からは、脱髄の早期ステージにおいてファゴサイトーシスの主要な集団はミクログリアであることが示唆されている」（Ｌｉ  Ｈ，Ｃｕｚｎｅｒ  ＭＬ，ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ２２：２０７−１５）
【０３５７】
リスク因子としてＨＬＡ−ＤＲＢ１＊１５：０１が確認されたことは別として、近年の７１２５症例の「メタ解析」（Ｇｅｏｒｇｅ  ＭＦ，Ｂｒｉｇｇｓ  ＦＢ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２：ｅ８７）は、実行可能な見識を何も提供しなかった。
【０３５８】
ミクログリアは、マクロファージに「似たトランスクリプトームパターン」を有している。ミクログリアの機能は、「数時間にわたり、脳の全量をスキャンすること」である。ゆえに、ミクログリア機能の制御異常がＣＮＳ障害の原因であり、「制御異常状態のメカニズムを標的とすることで、ミクログリアが役割を果たしている神経発達障害および神経変性障害を停止または逆転させ得るのではないか」と提唱されている（Ｓａｌｔｅｒ  ＭＷ，Ｓｔｅｖｅｎｓ  Ｂ（２０１７）Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１０１８−２７）。脳のスキャンプロセスの間に、ミクログリアは、基質を標的としてリソソーム分解するか、または病原体の場合には抗原提示のためにそれを処理する。「エンドサイトーシス、ソーティング、輸送、コンパートメント酸性化および分解．．．は、加齢とともに変化し得る」。（Ｓｏｌｅ−Ｄｏｍｅｎｅｃｈ  Ｓ，Ｃｒｕｚ  ＤＬ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ３２：８９−１０３）
【０３５９】
本発明は、アテローム性動脈硬化症とファブリー病における２つの近年の研究結果を、ＭＳの病因に結び付けるものである。泡沫マクロファージは、ミエリン分解産物を含有しており、活性ＭＳ病変部位に豊富に存在する（Ｂｏｇｉｅ  ＪＦ，Ｊｏｒｉｓｓｅｎ  Ｗ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎ  １：４３）。ファブリー病は、リソソームアルファ−ガラクトシダーゼＡ（ＧＬＡ）の欠損症であり、しばしばＭＳと誤診される（Ｇｅｒｍａｉｎ  ＤＰ（２０１０）Ｏｒｐｈａｎｅｔ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｒａｒｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ５：３０；Ｂｏｔｔｃｈｅｒ  Ｔ，Ｒｏｌｆｓ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８：ｅ７１８９４）。そして両疾患とも、家族性の併発を呈する（Ｃａｍｍａｒａｔａ  Ｇ，Ｆａｔｕｚｚｏ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ  ２０１５：５０４７８４）。アテローム性動脈硬化症（リソソームが処理できる以上のＬＤＬ摂取、図１７）およびファブリー病（リソソームのガラクトシダーゼ活性が無い）において泡沫マクロファージを生じさせるメカニズムをさらに理解することで、「毒素」の性質が明白となる。実際に、このプロセスはミクログリアとともに開始される。（Ｒｉｅｋｋｉｎｅｎ  ＰＪ，Ｒｉｎｎｅ  ＵＫ，ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ  ｆｕｒ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｅ  ２０３：９１−１０４）。ミクログリアのリソソームが、脳全体のスキャンの間に貪食されたミエリンすべてを分解できないとき、分解されなかったミエリンは、「ＭＳ特異的抗原」として、ミクログリアから、抗原を待つＴ細胞へと偶然に提示されてしまう（Ｒａｓｔｏｇｉ  ＳＣ，Ｃｌａｕｓｅｎ  Ｊ（１９８０）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４２：５０−６）。その後、Ｔ細胞は循環系に移動し、ミエリンを攻撃するマクロファージを活性化させる。活性化したマクロファージはＣＮＳに戻り、そこで間違って、ミエリンをエンドサイトーシスし始める（図２７）。
【０３６０】
アルツハイマー病、パーキンソン病およびＣＡＤでもプロセスは同じであるため、解決法も同じである：加齢ミクログリアによりミエリンの貪食が減速することで、リソソームが「溢れる」ことが予防され、そしてミエリンが、「ＭＳ特異的抗原」としてマクロファージに提示されることが予防される。マクロファージによるミエリンのエンドサイトーシスが減速することでも、すべての「ＭＳ特異的抗原」が予防され得ない場合の、脱髄が減少する。
【０３６１】
共有リスク因子の裏付けとして、ＭＳと血管性疾患は併発する。「疾患経過のいずれかポイントで２型糖尿病、高血圧、脂質異常症または末梢血管疾患が発症することは、身体障害の大きな進行と関連し得る。．．．しかし、ＭＳにおける介入としてのスタチンに関する公表済みの臨床試験の結果は矛盾していた」（Ｔｅｔｔｅｙ  Ｐ，Ｓｉｍｐｓｏｎ  Ｓ，Ｊｒ．，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  ３４７：２３−３３）。
【０３６２】
Ｍ−β−ＣＤによるＣＤ３０脱落の強化が、例えばＭＳおよびＲＡなどのＴｈ１介在性疾患で示唆されている（ｖｏｎ  Ｔｒｅｓｃｋｏｗ  Ｂ，Ｋａｌｌｅｎ  ＫＪ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７２：４３２４−３１）。
実施例７：薬剤標的としてのリン脂質
【０３６３】
本発明は、薬剤標的としてのＰＩサイクルに入るリン脂質を提供し（実施例１）、そしてアルツハイマー病、パーキンソン病およびＣＡＤのモデル、ならびに他のリソソーム機能疾患（限定されないが、ＮＰＣを含む）のヒトにおいて有効であることが示されている薬剤（β−ＣＤ）のより安全性が高い薬剤としてのα−ＣＤを提供する。
【０３６４】
本明細書において提示される結果から、様々な患者全体でエンドサイトーシスに関与する遺伝子の組み合わせ数は多すぎて、選択されたホスファターゼもしくはキナーゼ（表５）、またはＰＩサイクルにより制御される遺伝子（表６）を標的化することによる「エンドサイトーシス標的化」の目的が実現される可能性は低いことが示される。上記で検討されるように、ＰＩサイクルは、個々のキナーゼまたはホスファターゼの制御異常を代償するように設計されている。ＤＧＫＱまたはＰＬＤを標的とするｓｉＲＮＡ、ならびに数種の阻害剤（ウォルトマンニンを含む）ならびに「ＰＩＰ１および／またはＰＩＰ２の細胞内レベル増加」を目的とした活性剤の使用による「ＰＡのレベル減少」が、線形ＰＩ−ＰＩＰ１−ＰＩＰ２−ＰＩＰ３モデルと、ＰＡおよびホスホイノシチドに対するアミロイド−ベータの作用に基づき提唱されている（Ｋｉｍ  ＴＷ，Ｄｉ  Ｐａｏｌｏ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＵＳ８２８８３７８）（米国特許第８，２８８，３７８号）。
【０３６５】
しかしＰＩサイクル全体の下方制御で、エンドサイトーシス低下の目的を実現し得る。ＰＩサイクルへのＰＩとＰＣのエントリーに関与する遺伝子の広大さから、別の戦略がより効果的であるとして提唱されている。血清リン脂質の減少は、リガンド結合（ＰＩ（４，５）Ｐ２）、凹部形成（ＰＩ（４）Ｐ，）、小胞形成（ＰＩ（３，４）Ｐ２）、早期エンドソームへの融合（ＰＩ（３）Ｐ）、およびリソソームを含む細胞小器官へのソーティング（ＰＩ（３，５）Ｐ２）の間のエンドサイトーシスを制御することが知られているホスホイノシチドの細胞内濃度を低下させる。「エンドサイトーシス輸送に関与するシグナル伝達経路の活性化は、腫瘍の移動［およびパーキンソン病／アルツハイマー病における疾患進行］に重要である」。結果として、［．．．］エンドサイトーシス輸送とシグナル伝達を標的とすることで、転移を予防する新規癌治療剤［およびパーキンソン病とアルツハイマー病を予防する抗加齢治療剤］の開発が可能となり得る（Ｃｈｅｗ  ＣＬ，Ｃｈｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ７：５−６）
【０３６６】
例えばＦＡＫ（インテグリン介在接着斑キナーゼ）が腫瘍において過剰発現および活性化されているが、変異は稀である（Ａｌａｎｋｏ  Ｊ，Ｉｖａｓｋａ  Ｊ（２０１６）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２６：３９１−８）。ＦＡＫ阻害剤は、腫瘍の増殖、転移および血管新生が低下することがマウス、ならびに限定されないが膵癌、肺癌、中皮腫および卵巣癌をはじめとする非血液癌に対する早期臨床試験において示されており、結果は混在している（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ）。インテグリンのエンドサイトーシスを制御することで、単独または免疫療法との併用で、ＦＡＫの活性を低下させる別の戦略が提供される（Ｓｙｍｅｏｎｉｄｅｓ  ＳＮ，Ａｎｄｅｒｔｏｎ  ＳＭ，ｅｔ  ａｌ．（２０１７）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ５：１７）。
実施例８：リン脂質の可溶化において、β−ＣＤよりもα−ＣＤの有効性が高い。
【０３６７】
本開示の一部の実施形態では、α−ＣＤは、例えば癌（限定されないが前立腺癌および乳癌を含む）および神経変性疾患（限定されないが、パーキンソン病またはアルツハイマー病を含む）などの加齢に関連した状態の治療に使用される。シクロデキストリンは、その分布に直接干渉することなく、利用可能なホスホイノシチドの量を減少させる。
【０３６８】
（大型のβ−ＣＤ、七糖分子）により大型コレステロール分子を排除するのではなく、エンドサイトーシスを制御するリン脂質を（α−ＣＤ、六糖分子により）さらに特異的に排除することで、コレステロール介在性の耳毒性を含む副作用を回避する。（Ｃｒｏｎｉｎ  Ｓ，Ｌｉｎ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ａｓｓｏｃ  Ｒｅｓ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  １６：５９９−６１１）。「リン脂質のアクリル鎖は、最も小さなα−ＣＤの疎水性空洞に緊密に適合し、β−ＣＤおよびγ−ＣＤの大きな内部空間には緩く適合する。一方でコレステロールの側鎖は、β−ＣＤの空洞に優先的に含有される」（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）。「シクロデキストリンは、α＞β≫γの有効性で．．．リン脂質を部分的に除去した。コレステロール．．．は、［β−ＣＤ］により最も効果的に．．．抽出された。一方で、［α−ＣＤ］の［効果］は、溶血濃度であってもごくわずかであった。（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２）。「β−ＣＤも赤血球膜からタンパク質を除去する」（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）（図３）。
【０３６９】
１０ｍＭでは、α−およびβ−シクロデキストリンは、それぞれ２０％および８０％までトランスフェリンエンドサイトーシスを低下させる。２０％までの低下は、α−シクロデキストリンは「何らかの顕著な効果」を有していないと解釈された（Ｒｏｄａｌ  ＳＫ，Ｓｋｒｅｔｔｉｎｇ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  １０：９６１−７４）。しかし本明細書において提示される結果から、これらの結果は、コレステロールの極端な９５％の減少ではなく、リン脂質のより生理的な３０％の低下と一致していることが示される（図３）（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２）。さらに、１０ｍＭを超えてα−シクロデキストリンの濃度を増加させても、重要な機能を混乱させる可能性があるリン脂質の放出は増加しない。一方で、β−シクロデキストリンの濃度増加は、大規模なタンパク質放出増加を生じさせる（図３）。ゆえに、β−シクロデキストリンが利用可能なコレステロールを限定して重要な細胞機能に干渉するレベルと同レベルで、α−シクロデキストリンは単に、制御性リン脂質を低下させてエンドサイトーシスを正常範囲にまで低下させている。（Ｏｈｔａｎｉ  Ｙ，Ｉｒｉｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １８６：１７−２２）。
【０３７０】
「ＰＩＰは、平均余命が増加するにつれて多くなった例えば［アルツハイマー病］などの普遍的な［神経変性疾患］に［も］関与する（Ｗａｕｇｈ  ＭＧ（２０１５）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １８５１：１０６６−８２）」。β−セクレターゼの膜アンカー型阻害剤は、ＡＰＰのエンドサイトーシスを予防するための戦略として仮想されている（Ｒａｊｅｎｄｒａｎ  Ｌ，Ｋｎｏｌｋｅｒ  Ｈ−Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  ９：２９−４２）。本明細書において提示される結果から、ＡＰＰよりもニューレグリンに対するアフィニティが高いβ−セクレターゼの阻害に対する代替的手段としてのα−ＣＤを介したＰＩレベルの減衰により、エンドサイトーシス全体の低下がもたらされる（図４）（Ｂｅｎ  Ｈａｌｉｍａ  Ｓ，Ｍｉｓｈｒａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  １４：２１２７−４１）。
【０３７１】
シクロデキストリンは、静脈内および髄腔内にうまく適用されるため、様々な投与経路を使用して、グリア芽腫に対する骨および肺の転移、ならびに神経変性疾患を予防することができる。
【０３７２】
材料：α−、β−、およびγ−ＨＰ−ＣＤの置換度は、それぞれ５．３、５．１および５．４であった。サンプル調製において、５％（ｗ／ｗ）ＮａＯＨを、シクロデキストリンとエポキシドの縮合反応における溶媒および触媒として使用した。放射性脂質は、ＮＥＮ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社（マサチューセッツ州ボストン）から購入し、非放射性脂質は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ミズーリ州セントルイス）から購入した。（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｆｕｋｕｎａｇａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８１：５２４−８）
【０３７３】
方法：脂質測定は、臨床診断キット（Ｓｉｇｍａ  ａｎｄ  Ｗａｋｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、テキサス州ダラス）を用いて実施された。脂質の溶解度は、（リン酸緩衝等張生理食塩水ｐＨ７．４中；アルゴン雰囲気下の密閉管において）過剰量の放射性サンプルの懸濁液の短時間ソニケーションと、振とう（コレステロールについては、振とう時間は１週間。オレイン酸コレステロール、Ｌ−α−ジパルミトイルホスファチジルコリンおよびトリオレインについては振とう時間は３日であった）による平衡化の後に測定された。その後、懸濁液を膜フィルター（Ｍｉｌｌｅｘ；ＳＬＧＳ、０．２５；ＯＳ、０．２２μｍ）を通してろ過し、ろ過物中の放射活性を液体シンチレーション計数により測定した。振とう時間が１日であった点と、リン脂質測定用の臨床キットを使用した点を除き、同じプロセスをスフィンゴミエリンに対して使用した。これらの方法は、緩衝液中の表面活性化合物の溶解度を、いくらか高い値で出す傾向がある。その理由は、空気緩衝インターフェースで形成される表面活性化合物の単層により、ろ過物が富化されているためである。しかしこれらの方法は、ＨＰ−ＣＤ溶液中の脂質の溶解度の測定に向いている。この事実は、上述のろ過方法で得られた結果と、溶解のエンドポイントが視覚的に決定される、ＨＰ−ＣＤ溶液を用いた脂質サンプルの滴定を使用する方法の結果を比較することにより確立された。同じ滴定方法を使用して、コレステロールとコテステリルメチルエーテルが、ＨＰ−β−ＣＤ溶液中におよそ同じ程度まで溶解することを確認した（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｆｕｋｕｎａｇａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８１：５２４−８）。
【０３７４】
結果：５種の代表的な純脂質に対する、α−、β−およびγ−ＨＰ−シクロデキストリンの様々な効果を図３２に示す。ＨＰ−β−ＣＤは、コレステロールを優先的に可溶化し、一方でリン脂質は、ＨＰ−α−ＣＤで最も可溶化された。
実施例９：様々なリソソーム蓄積性疾患の細胞株における、リソソーム機能障害の予防には、α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤと少なくとも同じくらい効果的である。
【０３７５】
実施例９の結果は、ＵＳ２０１５／０２１６８９５Ａ１、図５、（ＭｃＫｅｗ  Ｊ，Ｚｈｅｎｇ  ＷＥＩ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４））の結果と一致しており、「［αＣＤ、βＣＤおよびγＣＤ］は、コレステロール蓄積を低下させ得ること、およびＭＢＣＤ［ＭβＣＤ］が最も強力であったこと」を見出した。特に著者らは、３種すべてのＣＤが、「ＮＰＣ細胞においてコレステロール蓄積を低下させ得たこと、［および］これらＣＤは細胞内Ｃａ２＋を増加させ、エキソサイトーシスを強化させた」ことを記載している。
【０３７６】
コレステロール蓄積性疾患に対するα−ＣＤの効果は、α−ＣＤはコレステロールに適合せず、ゆえにコレステロール排除によるものではあり得ないことが、認識されていない。本発明者らの新たな遺伝子結果は、その効果は代わりにリン脂質により介在されること、ゆえに、リソソーム蓄積の低下において、なぜ約６ｍＭのα−ＣＤが、約８ｍＭのＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高かったのかを初めて説明するものである（図２３）。
【０３７７】
この結果はさらに、シクロデキストリンもコレステロールも、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過できないにもかかわらず、なぜ静脈内ＨＰ−β−ＣＤがＮＰＣにおいて有効であるのかも説明する。この驚くべき試験結果は、ＨＰ−β−ＣＤの髄腔内使用と静脈内使用に関する現在の「戦い」を終わらせる可能性もある（Ｗａｄｍａｎ  Ｍ（２０１６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３５４：１８−９）。リン脂質はＢＢＢを簡単に通過するため、ＨＰ−α−ＣＤの経口（腸管から吸収される）型は、髄腔内ポンプを移植する必要性、または腎臓の尿細管中に細胞質結晶が形成されるのを防ぐために、数時間かけて静脈内点滴としてＨＰ−β−ＣＤを投与する必要性のいずれも無くし得る（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）。
実施例１０：α−ＣＤは、徐放型アプリケーションにおいて、β−ＣＤよりも腎毒性が低い。
【０３７８】
インビトロでのリン脂質プロファイルの差異（実施例８）にもかかわらず、インビボの結果は一般的に、α−ＣＤが少なくともβ−ＣＤと同じくらい腎毒性があることを示すと解釈される。
１．「シクロデキストリンは、かなり毒性があることが判明し、高用量が非経口投与されると必ず腎臓にダメージが及ぶ（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）」。（Ｐｉｔｈａ  Ｊ（１９８１）Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ２９：３０７−１１）
２．「Ｆｒａｎｋらの研究  ［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］およびその他の研究［（Ｐｅｒｒｉｎ  ＪＨ，Ｆｉｅｌｄ  ＦＰ，ｅｔ  ａｌ．（１９７８）Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９：３７３−６）］は、非改変のシクロデキストリンに関する腎毒性を示しており、これにより、．．．非非経口経路に関する元のシクロデキストリンに対する詳細研究が限定されてしまった」（Ｒａｊｅｗｓｋｉ  ＲＡ，Ｓｔｅｌｌａ  ＶＪ（１９９６）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８５：１１４２−６９）。
３．「初期の研究は、元のシクロデキストリンの腎毒性を示しており［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］、投与経路が、．．．非非経口経路．．．に限定された。ｐ１４７（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）を参照のこと。
４．「毒性試験も元のα−およびβ−［シクロデキストリン］．．．が、非経口投与に適していないことを示している。．．．［（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）］”（Ｄｅｌ  Ｖａｌｌｅ  ＥＭＭ（２００４）Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：１０３３−４６）
５．非経口投与後のα−ＣＤおよびβ−ＣＤの腎毒性［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］  ．．．は、詳細に記載されている［（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  １９９７（レビューのみ）；Ｇｏｕｌｄ  ａｎｄ  Ｓｃｏｔｔ  ２００５（β−ＣＤのみ）］」  。（Ｓｔｅｌｌａ  ＶＪ，Ｈｅ  Ｑ（２００８）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ３６：３０−４２）の３１ページを参照のこと。
６．「天然シクロデキストリンの２つ［α−およびβ−シクロデキストリン］は、腎毒性作用により非経口では安全ではないことが知られている［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］」（Ｂｉｌｅｎｓｏｙ  Ｅ，Ｈｉｎｃａｌ  ＡＡ（２００９）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  ６：１１６１−７３）
７「非経口投与後のＣＤの毒性の特徴の１つは、腎毒性である．．．［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］」（Ｋａｎｔｎｅｒ  Ｉ，Ｅｒｂｅｎ  ＲＧ（２０１２）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ４０：７４２−５０）
８．「非経口投与された場合、［天然シクロデキストリン］は腎毒性を引き起こす．．．［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］」（Ｌｉｕ  Ｂ（２０１２）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ  ７：２８９−３０１）
９．「溶解度が低い元のα−およびβ−ＣＤを投与した後［、］リソソーム中に目立つ微結晶が観察される［（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）］」（Ｄｅ  Ｓｃｈａｅｐｄｒｉｊｖｅｒ  Ｌ，Ｍａｒｉｅｎ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（Ｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＮＹ）５６：８７−９６）
【０３７９】
これらの知見は、２０１７  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  ｒｅｐｏｒｔ（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＣＨＭＰ）（２０１７）Ｅｕｒｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／３３３８９２／２０１３）に要約されている：
「α−ＣＤおよびβ−ＣＤの両方が、非経口投与後に腎毒性を示した．．。２００ｍｇ／ｋｇ／日を超えるシクロデキストリンは理論上、非経口的に投与された場合に軽度の腎毒性を生じさせ得る。」
【０３８０】
シクロデキストリンの腎毒性に関する文献レビューの驚くべき結果は、図３３、α−ＣＤとβ−ＣＤに毒性に関する臨床安全性に関する２０１７年の要約を含む上述に概略があるように、すべて同じ１９７６年公開文献のデータに基づいている（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）。この文献の要約は、「．．．α−およびβ−［シクロデキストリン］の腎毒性がみられる」と記載し、考察では：「高用量の［シクロデキストリン］の反復投与は、［用量依存性の様式で］封入微結晶により歪められた多数の巨大な［近位尿細管］リソソームを生じさせ．．．［シクロデキストリン］のネフローゼは明白に不可逆的な損傷を呈し．．．［シクロデキストリン］．．．のリポソーム内の濃度は、細胞に対し毒性の損傷を与える」、と記載している。注目すべきは、要約でも考察でも、結果で報告されているシクロデキストリン間の差異については言及していないことである。
【０３８１】
薬剤は非経口的に投与され、例えば静脈内（単回注射）ボーラス（秒または分以内に）として全身濃度に到達することができ、または例えば静脈内（反復注射または点滴）、皮下もしくは腹腔内投与で数時間かけて拡散されることができる。前者のタイプの非経口適用は、高いピークレベルをもたらし、後者のタイプの適用は、低く、長期的なレベルをもたらす。投与頻度増加の効果が記載されている：「［腎臓への］過負荷．．．を回避する１つの方法は、血中のシクロデキストリン濃度のスパイクを下げることであり、非経口的に適用されたシクロデキストリンの反復投与は、単回の累積投与よりも毒性が低かった（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）。．．．蠕動ポンプを使用して、溶液をゆっくりと注射し、それにより「スパイク」は６〜８時間に広がった。この技術を使用することで、１ｇ／ｋｇの投与量では動物に死をもたらさず、対照と比較し、若い動物の成長にも影響を与えなかった。」（Ｐｉｔｈａ  Ｊ，Ｓｚｅｎｔｅ  Ｌ（１９８１）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｉｒｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ  ４５７−６６）．ニーマンピック病の治療における（Ｈａｓｔｉｎｇｓ  Ｃ（２０１０）ＦＤＡ−Ｆｉｌｉｎｇ  ２０１０）
【０３８２】
後者の結果と一致して、「ヒトにおいてシクロデキストリンに起因する腎損傷の症例はない」（Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＣＨＭＰ）（２０１７）Ｅｕｒｐｅａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  Ａｇｅｎｃｙ  ＥＭＡ／ＣＨＭＰ／３３３８９２／２０１３）。表３も参照のこと。
【０３８３】
公表されたデータ（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２）の再評価による驚くべき結果は、α−ＣＤおよびβ−ＣＤは、静脈内ボーラス注射でのみ、１ｇ／ｋｇという類似したＬＤ５０を有し、α−ＣＤは、毎日の皮下注射ではβ−ＣＤよりも腎毒性が低かった。最大で７回の１ｇ／ｋｇのα−ＣＤの毎日投与を受けた群では１匹のラットのみが死亡し（２日後）、一方で、低投与量の０．９００ｇ／ｋｇ／日のβ−ＣＤを投与された群では４日以内にすべてのラットが死亡した（表７を参照、ｐ＝０．０２８５）。」
表７：ラットにおけるシクロデキストリンの毒性（Ｆｒａｎｋ  ＤＷ，Ｇｒａｙ  ＪＥ，ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ８３：３６７−８２に準じる）。
【表７】
2020535235.tif 000026
【０３８４】
ＨＰ基を付加することで、天然型ＣＤの毒性が低下することが知られている（表８）。ヒトにおいて、ＨＰ−β−ＣＤは、最大１６ｇまでのボーラス静脈内注射が承認されている（イトラコナゾールの賦形剤として）（１００ｍｇ／ｋｇ）。１２ｇを１日２回、１５日間非経口投与した後、副作用は観察されなかった。ＳＢＥβ−ＣＤ（Ｖｆｅｎｄ、Ｐｆｉｚｅｒ社、１４ｇ静脈内）の薬物動態は、ＨＰ−β−ＣＤの薬物動態に非常に似ている（Ｓｔｅｌｌａ  ＶＪ，Ｈｅ  Ｑ（２００８）Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ  ３６：３０−４２）
表８：選択されたシクロデキストリンの薬理学的、および毒性学的特徴
【表８】
2020535235.tif 000027
【０３８５】
非近交系げっ歯類の４つの試験において（Ｒｉｅｂｅｃｋ  １９９０ａ／ｂ／ｃ、Ｐｒｉｎｓｅｎ  １９９１ａ、ＷＨＯのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｃｈｅｍ．ｏｒｇ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｊｅｃｆａ／ｊｅｃｍｏｎｏ／ｖ４８ｊｅ１０．ｈｔｍに引用される）、死亡動物および生存動物の顕微鏡検査では、「治療に関連した変化」（Ｒｉｅｂｅｃｋ  １９９０ａ／ｂ／ｃ）か、または単なる「淡い腎皮質」（Ｐｒｉｎｓｅｎ  １９９１ａ）なのかを明らかにされなかった。
実施例１１：α−ＣＤは、血液脳関門（ＢＢＢ）の通過において、β−ＣＤよりも効果が高い。
【０３８６】
リン脂質は容易にＢＢＢを通過することができるため、効果を発揮するためにα−ＣＤがＢＢＢを通過する必要はないが、その有効性は増大する。公開されたデータでは、α−ＣＤは、インビトロでＢＢＢの通過においてβ−ＣＤよりも一貫して２倍効率的であることが示されている。２時間のインキュベーション後、１６．５−４３．０％（対して、６．６−２６．７％）が、ＢＢＢを通過して輸送された（カフェインまたはニコチンの９６％と比較）。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，３１０（２），７４５−５１を参照のこと。これらの結果は、βＣＤの独立した試験で確認された（Ｂｉｎｋｏｗｓｋｉ−Ｍａｃｈｕｔ  Ｃ，Ｈａｐｉｏｔ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：１７８４−７）。
【０３８７】
α−ＣＤの毒性はより高かったが、ＨＰ−α−ＣＤ、β−ＣＤ、β−ＣＤおよびＨＰ−β−ＣＤは同じように安全であった（表８：選択されたシクロデキストリンの薬物動態および毒性の特徴）。（Ｍｏｎｎａｅｒｔ  Ｖ，Ｔｉｌｌｏｙ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３１０：７４５−５１）
実施例１２：α−ＣＤはβ−ＣＤよりも安全で、インビトロにおいてヒト腫瘍細胞の移動阻害に効果が高い。
イントロダクション
【０３８８】
公開された結果から、β−ＣＤは、ヒトＭＤＡ−ＭＢ  ２３１細胞の移動を阻害することが示されている（Ｇｕｅｒｒａ  ＦＳ，Ｓａｍｐａｉｏ  ＬｄＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  １：３）。この阻害は、β−ＣＤの、「コレステロールを枯渇させる」能力に起因した。しかしβ−ＣＤは、リン脂質も枯渇させる。移動阻害が、一般に推測されるようにβ−ＣＤによるコレステロール枯渇に起因するかどうか、または本開示の結果に示唆されるようにβ−ＣＤによるリン脂質枯渇に起因するかどうかを決定するために、ＭＤＡ−ＭＢ  ２３１（ＣＲＭ−ＨＴＢ−２６、ＥＲ−）およびＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２、ＥＲ＋）ヒト胸部上皮細胞株の両方において、創傷治癒実験を反復し、ＨＰ−β−ＣＤ（Ｓｉｇｍａ社、３８９１４５−５Ｇ）およびＨＰ−α−ＣＤ（Ｓｉｇｍａ社、３９０６９０−５Ｇ）の両方と、対照を比較した。
方法
【０３８９】
２４ウェルの培養プレート（Ｃｙｔｏｓｅｌｅｃｔ  ＣＢＡ−１２０、０．９ｍｍ創傷治癒／溝閉鎖移動アッセイ）において２４時間、創傷治癒インサートを適切に置いて細胞を培養した。次いで細胞を２時間、ＨＰ−β−ＣＤ、ＨＰ−α−ＣＤまたは対照で処置した。
【０３９０】
プロトコール：０．９ｍｍ  ＣｙｔｏＳｅｌｅｃｔ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ  Ｉｎｓｅｒｔｓとともに２４ウェルプレート（ＣＢＡ−１２０、Ｃｅｌｌ  ＢｉｏＬａｂｓ  Ｉｎｃ．）を室温で１０分間温める。滅菌鉗子を使用して、プレートウェル中で、所望のインサート数と、同じ方向に並べられた「創傷フィールド」の方向を合わせる。０．５〜１．０ｘ１０６細胞／ｍｌを、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する培地中に含有する細胞懸濁液を作製する。インサート上部の開放末端を通してピペットチップを注意深く挿入することで、各ウェルに５００μＬの細胞懸濁液を加える。最適な細胞分散を得るために、インサート上部の開放末端の両側に、２５０μＬの細胞懸濁液を加える。１２〜２４時間、細胞培養インキュベーター中で細胞をインキュベートする。注意深くインサートをウェルから取り出し、創傷治癒アッセイを開始する。滅菌鉗子を使用してインサートをつまみ、プレートウェルからゆっくりと持ち上げる。培地をウェルからゆっくりと吸引し、廃棄する。培地でウェルを洗浄し、死細胞と残渣を取り除く。最後に、培地をウェルに加えて、細胞を水和状態に維持する。ウェルにまだ残渣または非接着細胞がある場合には、洗浄を繰り返す。洗浄が完了したら、ＦＢＳおよび／または化合物を含む培地を加え、細胞培養と創傷治癒プロセスを継続する。細胞移動を阻害または刺激する剤をウェルに直接添加してもよい。細胞培養インキュベーター中で細胞をインキュベートし（２時間）、その後、ＰＢＳで細胞を洗浄し、次いで化合物を含まない新しい培地を加える。１２〜２４時間インキュベートし、その後洗浄して、固定する。固定溶液を取り除き、４００μＬのＣｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを各ウェルに加える。細胞とともに室温で１５分間、染色液をインキュベートする。溶液を吸引し、廃棄する。各染色ウェルを注意深く脱イオン水で３回洗浄する。洗浄液を廃棄し、細胞を室温で乾燥させる。創傷エリアに移動した細胞、または創傷境界から飛び出した細胞を可視化し、倒立顕微鏡の下で写真撮影する。規定の創傷エリアの表面積を決定する：総表面積＝０．９ｍｍｘ長さ。創傷エリア内に細胞が移動した表面積を決定する：移動細胞表面積＝細胞移動の長さ（ｍｍ）ｘ２ｘ長さ。閉鎖割合（％）＝移動細胞表面積／総表面積ｘ１００（図３６を参照）。
【０３９１】
細胞系スクラッチアッセイ。２４ウェルの培養プレート中、細胞を２４時間、９０〜１００％コンフルエンスになるまで培養した。２００μｌの黄色マイクロピペットチップにより、培養細胞の上にスクラッチされた創傷線が作製された。培養培地を取り除いた後、スクラッチされた細胞をＰＢＳで洗浄した。２ｍＭのＭβＣＤとともに２時間、細胞を培養し、培養培地を取り除いた後、細胞をさらに２、８、１２または２４時間培養した。すべての細胞系スクラッチアッセイは、１０５Ｍの最終濃度の抗有糸分裂試薬のシトシンアラビノシド（Ｓｉｇｍａ社）の存在下で実施され、細胞増殖を阻害し、細胞移動のみを分析した。創傷エリアは、Ａｘｉｏｖｅｒｔ  １００  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ社、ドイツ）を用いて取得された画像から、Ｉｍａｇｅ  Ｊ  ｐｒｏｇｒａｍ（ＮＩＨ、米国）により、各創傷エリアの溝から３つの異なる部位で測定された。３つの独立した実験が実施された。
【０３９２】
使用した他の方法は、（Ｇｕｅｒｒａ  ＦＳ，Ｓａｍｐａｉｏ  ＬｄＳ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  １：３；Ｏｋａｄａ  ＳＳ，Ｋｕｏ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ２７３：９４８−５４）に記載されており、それら各文献は参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。
結果
【０３９３】
結果を図３５に示す。シクロデキストリンの非存在下では、８０％を超える創傷が閉鎖されている。シクロデキストリンの存在下では、創傷閉鎖は、リン脂質依存性の様式で阻害されている。コレステロール抽出は、創傷閉鎖を阻害したようには見えないが、副作用が生じることが示されている（耳毒性）。結果は高度に一致している：すべての場合で、移動は、ＨＰ−α−ＣＤまたはＨＰ−β−ＣＤの濃度が高くなるにつれて減少した。ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤよりも移動に対する効果が強かった（１ｍＭのＨＰ−α−ＣＤでの阻害は、２ｍＭのＨＰ−β−ＣＤでの阻害に勝っていた）。
考察
【０３９４】
ヒトの結果において、２種のヒト腫瘍癌細胞株から、細胞移動に対するβ−ＣＤの主な効果は、コレステロール排除によるのではなく、リン脂質排除によるという仮説が確認される。本開示は、癌、神経変性疾患および他の加齢関連状態における「脱線した」、「錯乱した」、および「欠陥のある」エンドサイトーシスが、ＰＣをはじめとする糖リン脂質のＰＩサイクルへの過剰な流入を生じさせる遺伝的リスク因子に起因することを示す（図１２）。β−ＣＤを用いた過去の研究は、コレステロールに関連した耳毒性のリスクが原因で臨床試験にまで進まなかった。コレステロール除去が回避され、β−ＣＤにおいてみられたリン脂質関連の効果が増加した後では、再び進展し得る。
【０３９５】
ＨＰ−β−ＣＤの耳毒性のリスクを有さない（図３４）ことに加えて、ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤよりも毒性が低い（実施例１０）。にもかかわらず概してリン脂質排除の効果が約２倍高く、ＰＣ排除においてはさらに効果が高いＭｏｎｎａｅｒｔ  Ｖ，Ｔｉｌｌｏｙ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ３１０：７４５−５１）。ＮＰＣの小児において（表３）、最大１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＨＰ−β−ＣＤの投与量は忍容性良好であった。ＮＰＣの非経口治療において、７００ｍｇ／ｋｇ／日のＨＰ−β−ＣＤは安全と証明されたため、最大７００ｍｇ／ｋｇ／日のＨＰ−β−ＣＤの投与量を使用してヒト試験が継続されたが、β−ＣＤがコレステロール関連の耳毒性があることが示されたときに中止された。
実施例１３．ヒトＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞を移されたＮＳＧマウスにおいて、ＨＰ−α−ＣＤは、腫瘍の増殖、転移および炎症の低下においてＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高い。
イントロダクション：ＨＰ−β−ＣＤは、乳癌（実施例４）の数種の動物モデルにおいて有効であることが示されているが、ＨＰ−β−ＣＤに関するさらなる効果は、耳の外有毛細胞が必要とするコレステロールを枯渇させることで永続的な難聴を生じさせたと確認されたことで停止された。実施例１の遺伝的結果は、ＨＰ−β−ＣＤがコレステロールではなくリン脂質の排除を介して作用すること、ゆえにコレステロールに適合するには小さすぎるが、リン脂質は排除するＨＰ−α−ＣＤが安全な代替物となるという新たな仮説を導いた。実施例１２のインビトロの結果は、ＨＰ−α−ＣＤが、ＨＰ−β−ＣＤよりもインビトロで効果が高いことを示している。
方法：ＮＳＧマウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ、系統＃００５５５７（１０週齢））を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（メーン州バーハーバー）から取得し、隔離区画で飼育し、オートクレーブ滅菌された水と食物を与えた。
【０３９６】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株を取得し（ＡＴＣＣ）、液体窒素中で凍結保存した。培養開始時に細胞を溶解させ（３７℃の水に１．５分）、５％ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび０．０２ｍＭ非必須アミノ酸を補充したＤＭＥＭ／Ｆ−１２に移した。細胞は６０ｍｍディッシュ中、数百万個まで増殖させ７０〜８０％コンフルエンスとした。注射の前に、細胞をＰＢＳで２回、次いでＶｅｒｓｅｎｅ（ＥＤＴＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で簡単にリンスし、過剰量のリン酸緩衝生理食塩水およびフェノールレッドを含まないマトリゲル基底膜抽出物とともに氷上に置き、約１５ｍｇ／ｍＬのマトリゲルの濃度とした。１００μＬの細胞混合液（２０，０００個の細胞または生理食塩水のみ）を、短時間のイソフルラン麻酔の下で、３番目または４番目の乳腺の乳管内に注入した。各々１５匹のマウス群に、１週当たり８００ｍｇ／ｋｇのＨＰ−α−ＣＤ、ＨＰ−β−ＣＤ（４日にわたり、月、火、木、金）または生理食塩水（対照）を６週間、ＩＰ注射した。原発腫瘍のサイズを毎週測定した。
【０３９７】
胸部組織を触診し、１ｍｍの精密さで計る高精度分析デバイスを用いて週に２回測定した。デジタル計（０．１ｇの精密さ）で毎週マウスを体重測定した。
【０３９８】
試験期間の終了時にマウスをイソフルランで安楽死させ、１ｘリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、その後、４％ホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液を用いた。肺および肝臓から組織を採取し、顕微鏡検査用にホルマリン固定した。組織をパラフィン包埋し、免疫組織化学法および組織染色（Ｈ＆Ｅ）で切片作製することで転移を可視化し、計数して、抗ＨＬＡ抗体で免疫染色した。ＢＳＡ（５％、ｆｒａｃ  Ｖ）で１時間ブロッキングした後、抗ＨＬＡを４℃で一晩インキュベートし、ＰＢＳで１時間洗浄し、その後、ビオチニル化抗マウスＩｇＧで１時間、室温でインキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｄａｋｏ社）を使用してスライド上で転移を検出した。
【０３９９】
血液採取の後、全血サンプルを遠心（１０，０００ｍ／ｓ２で１５分間、その後１００，０００ｍ／ｓ２で１０分間）し、血漿を単離させた。分析を行うまで−８０℃でサンプルを保存した。
【０４００】
分析の前に（３０分）、サンプルおよびアッセイ試薬を室温まで平衡化させた。サンプルは１：４希釈で処理され、Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  ２００  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）でＩＬ−１β、ＩＬ−１８、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１７ＡおよびＧＭ−ＣＳＦ（Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ  ａｓｓａｙｓ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）の定量用のマルチプレックスマウスパネルを使用して二重で定量された。
結果：マウスは典型的な速度で成長し（図３８Ａ）、死亡したビヒクル群およびＨＰ−β−ＣＤ群のそれぞれ２匹、およびＨＰ−α−ＣＤ群の１匹のマウス（下部の「†」。成長曲線最後の「＋」）を除き、健康に見えた。ビヒクル群でより大きく成長した。これはより大きく腫瘍が増殖したため（図３８Ｂ）、または消化管から吸収される脂肪量を減らすシクロデキストリンの公知の作用により低成長であったためであろう。シクロデキストリン群よりもビヒクル群で腫瘍増殖は速かった（５２５ｍｍ３のメジアンまで）（図３８Ｂ）。ＨＰ−β−ＣＤ（３７８ｍｍ３、ｐ＝０．０２５８）よりもＨＰ−α−ＣＤ（３５６ｍｍ３）の効果が高かった。
【０４０１】
すべてのマウスが肺転移および／または肝臓転移を発症した（図３９）が、ビヒクル群の１匹のマウス、ＨＰ−β−ＣＤ群の３匹のマウス、およびＨＰ−α−ＣＤ群の５匹のマウスは肺転移を発症しなかった。多変量データのｕ−統計量（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｌｅｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｔａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１５７９−９２）により、両方のシクロデキストリンとも全体的な転移減少に有効であり（Ｐ  ＜  ０．００１）、データは、ＨＰ−α−ＣＤがより効果的であることと一致している（Ｐ  ＜  ０．０９８）。
すべての血漿サイトカインが、両方のシクロデキストリンでレベル低下を示したが、ＨＰ−β−ＣＤでのＩＬ１７−Ａは除く（図４０）。慣習的な．０５レベルで、ＨＰ−β−ＣＤは、４つの他のマーカー（ＩＬ−８ではない）において有意であり、一方で、ＨＰ−α−ＣＤは、ＩＬ−６のみで有意ではなかった。多変量データに対するｕ−統計量（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｌｅｅ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｓｔａｔ  Ｍｅｄ  ２３：１５７９−９２）を介した、６つすべてのマーカーの包括的解析から、ＨＰ−α−ＣＤが、ＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高いことが示される（ｐ（ａ：ｂ）＝  ０．０４１７）。
結論：インビボの結果から、ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤよりも、乳癌腫瘍の増殖（図３８、Ｐ  ＝  ０２５８）および転移（図３９、Ｐ  ＝  ０．０９８）の予防において効果が高いというインビトロの結果（実施例１２）が裏付けられる。炎症も、癌の病因の構成要素として知られている。図４０の驚くべき結果（ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ１７−Ａ、ＩＬ−４およびＩＬ１−ｂの各々に対し、Ｐ  ＜  ０．０２）から、α−ＣＤは、炎症性ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２およびＬＯＸの前駆体であるアラキドン酸をｓＰＬＡ２が産生する活性を低下させることで炎症も低下させること、およびＨＰ−α−ＣＤは、コレステロールにその脂質担持能力の一部を費やさないことで、ＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高い、という仮説が裏付けられる。
実施例１４．ＨＰ−α−ＣＤは、ＡＬＳおよびＨＤのマウスモデルにおいて、疾患表現型を減少させる。
【０４０２】
イントロダクション：アルツハイマー病およびパーキンソン病をはじめとする多くの神経変性疾患は高次認知機能に影響を与え、多くが未知の複雑な遺伝的リスク因子を含んでいる。ゆえに関連性の高い疾患病因の態様を呈することが知られている動物モデルは殆ど存在しない。アミロイド−ベータ、タウおよびアルファ−シヌクレインの凝集は、アルツハイマー病およびパーキンソン病と関連性があるが、凝集体が原因なのか、それとも単なる結果なのかは未だ不明である。例えばアルツハイマー病では、アミロイド−ベータの凝集低下を目的とした大部分の薬剤が失敗している。現在の治療は症状軽減をもたらすものであるが、疾患進行を止める、または減速させるための利用可能な治療法はない。
【０４０３】
実施例２に示される遺伝的結果は、転移および神経変性疾患における「脱線した」、「錯乱した」、および「欠陥のある」エンドサイトーシスの根底にある共通の遺伝的リスク因子に関する新たな洞察をもたらし、アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳおよびハンチントン病で過去に観察された正常に機能しないオートファジー（Ｇｕｏ  Ｆ，Ｌｉｕ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．（２０１８）Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ２８：３−１３）に関し、根底にある機序を説明する。
【０４０４】
最も普遍的な疾患型が「特発性」（遺伝的原因が未知）であり、ゆえに関連動物モデルを特定することが困難なアルツハイマー病およびパーキンソン病とは対照的に、ＡＬＳおよびハンチントン病の遺伝的リスク因子は良く解明されている。
【０４０５】
ハンチントン病は、ＨＴＴ遺伝子のエクソン１が４０超のＣＧＡ反復まで拡張することが原因である（変異型ＨＴＴ、ｍＨＴＴ）。およそ１２０個のＣＡＧリピートを有するトランスジェニックマウスは、ｍＨＴＴとユビキチンタンパク質の両方を含有する神経細胞封入体を発現する。マウスは、単一遺伝子性疾患に典型的な、ヒトハンチントン病を厳密に模倣する進行性の運動障害と体重減少をはじめとする神経的表現型を呈する。
【０４０６】
ＳＯＤ１変異は家族性ＡＬＳの１０〜２０％、散発性ＡＬＳの１〜２％を占めるため、ＳＯＤ１凝集体はこれらの患者において日常的に発見され、ＳＯＤ１−ＡＬＳ患者は、低レベルのオートファジー転写因子ＴＦＥＢを有する。ｓｏｄ１変異を有するマウスは、ヒトＡＬＳを高度に似せたマウスモデルである。ＳＯＤ１はまた、パーキンソン病、アルツハイマー病およびダウン症候群とも関連している。ＦＵＳ（ｆｕｓｅｄ  ｉｎ  ｓａｒｃｏｍａ）は、ハンチントン病において罹患したニューロン中の主要タンパク質凝集体であり、ＡＬＳとも関連している。
【０４０７】
神経変性疾患の間の併発状態、オートファジーに関連した病変および遺伝的重複を考慮し、ハンチントン病およびＡＬＳのマウスモデルを使用して、神経変性（および他のオートファジー関連）疾患に対する、ＨＰ−α−ＣＤの活性を評価する。
【０４０８】
方法：ＡＬＳマウスのＳＯＤ１  Ｇ９３Ａ系統（Ｂ６ＳＪＬ−Ｔｇ（ＳＯＤ１＊Ｇ９３Ａ）１Ｇｕｒ／Ｊ系統＃００２７２６、１０週齢、およびＨＴＴマウス（Ｂ６ＣＢＡ−Ｔｇ（ＨＤｅｘｏｎ１）６２Ｇｐｂ／３Ｊ；系統＃００６４９４ＨＴＴ：Ｒ６／２、８週齢）は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（メーン州バーハーバー）から取得し、周囲条件が制御された標準的な飼育方法で飼育され、不断給餌された。
【０４０９】
結果：８週齢のＨＴＴマウスでは、ＨＰ−α−ＣＤを用いた治療で、５週にわたり体重減少が低下した（９週齢７日目から開始、Ｐ（Ｔ＊Ｄ）＜  ．０００１）。メスマウス（Ｐ（Ｔ＊Ｄ｜Ｍ）＝  ．０３９４）よりもオスマウス（Ｐ（Ｔ＊Ｄ｜Ｍ）＜  ．０００１）で、効果は著しかった。
【０４１０】
未処置のＳＯＤ１マウスは観察から２１日目以降（１１週齢）で体重が減少し始め、一方でＨＰ−α−ＣＤで処置されたマウスは、少なくともさらに２週間成長し続けた。両方の性別で似た効果が認められた（図４２、ｐ  ＜  ．０００１）。
【０４１１】
結論：転移、神経変性および他の加齢関連の疾患ならびに状態の公知の併発状態と一致して、これらの結果から、ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−β−ＣＤよりも効果が高いことが示されている癌（実施例１３）のみならず、限定されないが、ハンチントン病およびＡＬＳ、さらにこれら疾患の延長線上で考えると、パーキンソン病およびアルツハイマー病、ならびにＨＰ−β−ＣＤが動物モデルで有効であることが示されている他の疾患を含む神経変性疾患でも有効であることの証拠が提供される。
実施例１５：経口薬剤としてのＨＰαＣＤとカプリン酸ナトリウム（Ｃ−１０）のクラスレートは、尿中にリン脂質を抽出し、そうすることで、それら成分の混合物よりも有効性が高い。
【０４１２】
経口β−ＣＤは、哺乳動物では滅多に吸収されない（約１％）。小さなα−ＣＤでは、１．６％（Ｖａｎ  Ｏｍｍｅｎ  Ｂ，Ｄｅ  Ｂｉｅ  ＡＴ，ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｒｅｇｕｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３９  Ｓｕｐｐｌ  １：５７−６６）および２．０％（Ｉｒｉｅ  Ｔ，Ｕｅｋａｍａ  Ｋ（１９９７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ８６：１４７−６２）が、経口投与後６〜８時間以内に尿中に排出される。ラットでは、経口投与されたβ−ＣＤ単独の１％の代わりに、トリグリセリドを含有する座薬（Ｗｉｔｅｐｓｏｌ  Ｈ５）中で直腸内投与されたときに、最大５％のβ−ＣＤが直腸から吸収された。直腸吸収は、β−ＣＤがより水溶性のＨＰ−β−ＣＤに置き換えられたときに、５％から２６％に増加した。（Ｄｕｃｈｅｎｅ  Ｄ，Ｗｏｕｅｓｓｉｄｊｅｗｅ  Ｄ（１９９０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｉｎｄ  Ｐｈａｒｍ  １６：２４８７−９９）。経口ＨＰ−α−ＣＤの吸収は研究されていない。
【０４１３】
背景：ＬＤＬ受容体ノックアウトマウスに「Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｄｉｅｔ（２１％乳脂肪）」を与えた公表結果において、「２．１％の「非吸収性」α−ＣＤ（食品脂肪含有量の１０％）」を加えたところ、血漿リン脂質が１７．５％まで低下したことが示されている（Ｗａｇｎｅｒ  ＥＭ，Ｊｅｎ  ＫＬ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ５７：１０４６−５１）。しかしその作用機序は特定されていない。上記の遺伝的およびインビトロの結果から、確認された血漿リン脂質の低下は、消化管における「脂肪吸収の飽和」が原因ではなく（またはこれだけが原因ではなく）、著者らにより推測されているように、乳脂肪酸の存在下で消化管から吸収されたα−ＣＤによるリン脂質の排除を介した「糞便中への排泄」も原因であった。乳脂肪酸の役割は、離乳前のラットにおけるＨＰ−β−ＣＤの高い吸収と一致している（Ｄｅ  Ｓｃｈａｅｐｄｒｉｊｖｅｒ  Ｌ，Ｍａｒｉｅｎ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（Ｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＮＹ）５６：８７−９６）。
【０４１４】
シクロデキストリンは吸収強化剤として広く使用されている（Ｓｈａｉｋｈ  Ｉ，Ｄｅｒｌｅ  ＮＤ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  ２：３４−９）。一方で、本開示は、活性成分としてシクロデキストリン、およびシクロデキストリンの吸収強化剤としてカプリン酸ナトリウムを利用した。特に、小さなα−ＣＤを利用し、β−ＣＤの吸収を強化することが過去に示されているＨＰ誘導体化を適用し、消化管送達のための効率的な吸収強化剤としてトリグリセリドの脂肪酸成分のナトリウム塩を使用する（Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ  Ｈ，Ｎｉｓｈｉｈａｔａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３９：８８７−９１）。この新たな仮説は、ヒトＰＫ／ＰＤ試験において検証された。
【０４１５】
試験デザイン：無作為化ｎ−ｏｆ−１投与量漸増試験を実施して、ＨＰ−α−ＣＤとカプリン酸ナトリウム（Ｃ−１０脂肪酸、カプリン酸、デカン酸）のクラスレートの、血清から尿中へのリン脂質の抽出における活性を評価した。カプリン酸は、Ｃａｃｏ−２単層中のタイトジャンクションの傍細胞透過性を制御すること、およびラットとヒトの腸管セグメントにおいてラウリン酸（Ｃ１２）またはカプリル酸（Ｃ８）よりも効果が高いことが知られていることから選択された。
【０４１６】
方法：尿サンプル（５〜１０ｍＬ）を培養管へとピペッティングし、その後３０分間凍結させた。次いでサンプルを４８〜７２時間、凍結乾燥させ、密封して−８０℃で保存した。リン脂質はクロロホルム（ＣＨＣｌ３）およびメタノール（３：１）で再構成した後に尿サンプルから抽出され、ガラスウールを通してろ過された。溶出物は、０．０１％のアジ化ナトリウムを含む１ＭのＫＣｌで洗浄された。洗浄液を３０００ｇで３０分間遠心分離し、ＣＨＣｌ３層を新しい管に移して、窒素雰囲気下、６０℃で蒸発させた。リン脂質抽出物と標準物を、０．１６  Ｃａ（ＮＯ３）２および３０％  Ｈ２Ｏ２を含む１０Ｍ  Ｈ２ＳＯ４中で消化させ、１８０℃で２５分間加熱した。サンプルを冷却し、Ｈ２Ｏ／（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４および０．６５％（Ｎ２Ｈ５）ＨＳＯ４を用いて平衡化させた。これらをボルテックスし、３０分間、３５℃で加熱した。すべてのサンプルは三重で分析された。
【０４１７】
リン酸塩含有量は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  Ｌａｍｂｄａ５分析器を使用し、ｌａｍｂｄａ−８２０で測定された。タンデムなＵＶ−ｖｉｓ波長検出器（２０３ｎＭ）を備えたＷａｔｅｒｓ（マサチューセッツ州ミルフォード）高速クロマトグラフィーシステムを尿分析と、対象分子の分離強化に採用した。これとＢｅｃｋｍａｎ  Ｕｌｔｒａ  ＳＩカラムを結び付け、ＲＴ、１．０ｍＬ／分の流速で、アセトニトリル−メタノール−リン酸溶媒（１００：１０：１．８）の移動相に沿った定組成溶離を使用した。凍結乾燥サンプルをヘキサン−プロパノールフェノールフタレインミックス（３：１：０．１）中に再懸濁し、注入した。
【０４１８】
テクニカル対照を製剤化し、同じ再懸濁緩衝液中、０．１２５ｍｇホスファチジルコリン（ＰＣ）および０．６ｇＨＰ−α−ＣＤの最終量で注入した。標準曲線（図４３）は、．６５〜３２μＭリン酸塩等価の範囲でＤｉＰａｌｍｉｔｏｙｌ−ＰＣを使用して作製した。単離効率の百分率は、量が判明している合成ＰＬでスパイクされた正常な尿からの総リン酸塩の抽出物回収の比較を介して決定され、並行してＰＬサンプルが消化され、抽出無しでアッセイされた。
【０４１９】
本開示は、経口投与されたＨＰ−α−ＣＤの吸収強化に対する、様々な戦略の吸収と活性に関する驚くべき結果を報告する。図４４に示される結果から、悪性、神経変性、血管性、代謝性、炎症性、自己免疫性、肺性、線維性、肝臓性、リソソーム蓄積性もしくはウイルス性の疾患、障害または状態においてエンドサイトーシスを低下させる、新規で進歩性のある薬理化合物であるＨＰ−α−ＣＤ／カプリン酸ナトリウムのクラスレートが、臨床的に意義のある量で血清ホスファチジルコリンを低下させ得る介入を提供することが裏付けられる。特に図４４に提示される結果は、以下の試験結果を示す：第一に、α−ＣＤを用いた過去の実験結果が、ＨＰ−α−ＣＤにも適用されることが裏付けられる：
【０４２０】
ヒトの成人において、経口ＨＰ−α−ＣＤは、吸収されない（治療有効量で）。検証された混合物および／またはクラスレートの中で、ＨＰ−α−ＣＤは、ＨＰ−α−ＣＤの分画２（「ａＣＤ」とラベリング）におけるメジアン値が、分画１よりも低い唯一の製剤であった。
【０４２１】
天然型ＨＰ−α−ＣＤが吸収されず、それゆえ活性でもないことが確認された後で、図４４に提示される結果は、いくつかの予想外で驚くべき試験結果を示している：
【０４２２】
提唱される経口ＨＰ−α−ＣＤ／カプリン酸のクラスレートは、ヒトの成人で吸収される最初の経口シクロデキストリンである。天然型ＨＰ−α−ＣＤ（ＨＰａＣＤ）とは対照的に、クラスレート（ＨＰａＣＤ／ＦＡ、ＨＰａＣＤ／ＦＡ＆ＰＥ）の経口投与後、８時間で、尿中に多量のＨＰ−α−ＣＤが、分子量１１８０のＨＰ−α−ＣＤに対して予測される分画で存在していた（任意の吸収単位スケールで約２まで増加）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、３９０６９０）（ＨＰａＣＤ：ＨＰａＣＤ／ＦＡ、分画２：Ｐｕ−ｔｅｓｔ＝０．００７９）。
【０４２３】
ＨＰ−α−ＣＤの吸収の増加は、ＰＣの排出の増加と相関する。天然型ＨＰ−α−ＣＤを超える尿中へのＰＣの排出増加（Ｐ＝０．０３６７）は、製剤とは独立している（Ｐ＝０．４５２３）が、しかし製剤がＨＰ−α−ＣＤ吸収で異なっているため、低吸収の製剤（ＨＰａＣＤ＆ＦＡ、ＨＰａＣＤ＆ＰＥ）に対しては低くなり、高吸収の製剤（ＨＰａＣＤ／ＦＡ，ＨＰａＣＤ／ＦＡ＆ＰＥ）に対しては高くなる。
【０４２４】
クラスレートは、混合物よりも効果が高い。血清中に非常に低濃度で存在する単量体リン脂質の治療有効量を抽出するためには、混合物（ＨＰａＣＤ＆ＦＡ）を用いるよりも、クラスレート（ＨＰａＣＤ／ＦＡ）を用いたほうが、実質的に多くのＰＣが抽出される（分（分画５｜ＨＰａＣＤ／ＦＡ）＝  ５．７８、最大（分画５｜ＨＰａＣＤ＆ＦＡ）＝５．７５、Ｐｕ−ｔｅｓｔ＝０．００７９）。
【０４２５】
過去に提唱されたＦＡ含有油性懸濁液は、ＦＡ単独よりも効果が高くない。クラスレートと、同量のＨＰ−α−ＣＤとＣ−１０および追加の浸透強化剤を含有する油性懸濁液（Ｔｕｖｉａ  Ｓ，Ｐｅｌｌｅｄ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：２０１０−２１）（ＨＰａＣＤ＆ＰＥ）の摂取の比較からは、脂肪酸とＨＰ−α−ＣＤの混合物（ＨＰａＣＤ＆ＦＡ）を超える利益は示されなかった。クラスレート（ＨＰａＣＤ／ＦＡ＆ＰＥ）の懸濁液は、クラスレート単独（ＨＰａＣＤ／ＦＡ）を超える利益を示さなかった。
【０４２６】
クラスレートは、リゾリン脂質を抽出しない。アルファ−シクロデキストリンは、リゾリン脂質を含む広範な脂質を排除すると普遍的に考えられている。ＨＰａＣＤの分画９と１０（ＬＰＣとラベリング）の平均メジアン値は、すべての他の群よりも高い。この予想外の驚くべき結果は、広範にわたる影響を与える（以下の実施例１６を参照のこと）。
実施例１６：ＰＡおよびＬＰＬを超える、選択されるＰＣに対するＨＰαＣＤ／カプリン酸ナトリウムクラスレートの選択性は、抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）と匹敵する効果を発揮する。
【０４２７】
ｓＰＬＡ２の炎症活性は、ＭＳの患者の大部分で、活性または安定、治療内容にかかわらず進行する。ラットにおいて、ＥＡＥの症状は、ｓＰＬＡ２の阻害で減弱化された。（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＴＪ，Ｙａｏ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ３：２６）。ｓＰＬＡ２活性の上昇は、アルツハイマー病患者の脳脊髄液で観察されており（Ｃｈａｌｂｏｔ  Ｓ，Ｚｅｔｔｅｒｂｅｒｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ  ２５：５０５−１５）、ＢＢＢ透過性の増加のマーカーとして役立つ可能性がある（Ｃｈａｌｂｏｔ  Ｓ，Ｚｅｔｔｅｒｂｅｒｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ  ２５：５０５−１５）。アルツハイマー病ＡＤと軽度認知障害を有する患者は、異常なＰＬＡ２活性を有していた（Ｋｌａｖｉｎｓ  Ｋ，Ｋｏａｌ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ＆  ｄｅｍｅｎｔｉａ（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）１：２９５−３０２）。
【０４２８】
（図４３Ａおよび４３Ｂ：）血清リン脂質ＰＣ（ｍＷ≒７８０Ｄａ）の排出は、予測されるように、クラスレートにより大幅に増加する。しかし予想外なことに、ＰＡ（６７５）およびＳＭ（６５０）は低下せず、リゾリン脂質（４６０〜５５０）も低下しない。
【０４２９】
クラスレートのＰＣに対する予想外の高い特異性は、このクラスレートがＰＩサイクルの活性を低下させるだけでなく、炎症も低下させることを示唆する。その理由は、ＰＣはｓＰＬＡ２によりＬＰＣ（ＡＴＸによりＬＰＡへと形質転換される）および炎症促進性アラキドン酸（ＡＡ）へと分割されるからである。図３７。「リゾＰＣは、血漿分泌型ＰＬＡ２酵素（ｓＰＬＡ２ｓ）の非競合的生成物阻害剤として作用する」ことがよく知られている」。（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＴＪ，Ｙａｏ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）５：１７）ゆえにＰＣではなく、主にリゾリン脂質（ＬＰＣ、ＬＰＡ）を排除することで、ｓＰＬＡ２が活性化され、炎症が増加するはずである（図４７）。代わりにＰＣのみを排除することでＬＰＣ／ＰＣ比率が増加し、ｓＰＬＡ２活性は低下する。そしてその基質の利用効率が低下する間はｓＰＬＡ２の阻害が維持される。
【０４３０】
ｓＰＬＡ２−ＩＩａは、ＨＥＲ２とＨＥＲ３を活性化し、肺癌、乳癌、膵癌、皮膚癌、肝臓癌および前立腺癌で過剰発現されている（Ｄｏｎｇ  Ｚ，Ｍｅｌｌｅｒ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ４５：９７８−８４）。そしてＭＣＦ７ヒトＢＣ癌細胞においてＥＧＦＲを活性化し（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ  Ｍ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎｅｕｒｏ−ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １２：１０１４−２３）、転移マーカーである。
【０４３１】
「研究者らは、ＰＬＡ２ｓが、下流酵素のシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼよりも優れた治療標的となり得るかを［いまだ］検討している」（Ｙａｒｌａ  ＮＳ，Ｂｉｓｈａｙｅｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １７：１９４０−６２）。ヒトＰＬＡ２ｓは、エイコサン合成、マクロファージによるファゴサイトーシス、気道過感受性、炎症、腫瘍形成（Ｖ）およびアレルゲン誘導性喘息、心筋虚血／再灌流障害、ＡＡ代謝、炎症性腫瘍形成、アテローム性動脈硬化症（Ｘ）に関与している。（Ｙａｒｌａ  ＮＳ，Ｂｉｓｈａｙｅｅ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  １７：１９４０−６２）
【０４３２】
炎症性アラキドン酸の予想外の低下は、コルチコステロイド（ｓＰＬＡ２阻害）、ＮＳＡＩＤｓ（ＣＯＸ阻害）および喘息薬（ＬＯＸおよびロイコトリエン阻害）と類似した効果を発揮する。図６を参照のこと。ゆえにα−ＣＤは、次の「ベビー−アスピリン」となり得るはずである。
【０４３３】
ＰＬＡ２ｓの最も良く知られた機能は、ＰＣ、ＰＥおよびＰＳをはじめとするリン脂質の加水分解である。（Ｍａｌｌａｔ  Ｚ，Ｌａｍｂｅａｕ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２２：２１８３−２００）。ｓＰＬＡ２はリン脂質に作用するのみならず、インテグリン（ａｖｂ３、ａ４ｂ１およびａ５ｂ１）も活性化し（Ｓａｅｇｕｓａ  Ｊ，Ａｋａｋｕｒａ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３：２６１０７−１５；Ｆｕｊｉｔａ  Ｍ，Ｚｈｕ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２９０：２５９−７１）、血管新生を阻害する。ゆえに、有効性の欠如と、有害可能性のために、汎ｓＰＬＡ２阻害剤であるバレスプラジブ（ｖａｒｅｓｐｌａｄｉｂ）の最初の第ＩＩＩ相試験（ＮＣＴ０１１３０２４６）が終了したこと（Ｎｉｃｈｏｌｌｓ  ＳＪ，Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ  ＪＪ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＪＡＭＡ  ３１１：２５２−６２）は、いくつかのｓＰＬＡ２を含む他の経路の混乱、または他の経路に対する未知のバレスプラジブの効果により生じたのであろう。ゆえに「飢餓模倣体」としてのα−ＣＤの利点の１つは、ヒトは、ホスファチジルコリン（卵黄または大豆レシチン）をはじめとする栄養素の欠乏に耐えるよう進化してきたという事実にある。
実施例１７：ホスファチジルコリン（ＰＣ、レシチン）を用いた治療は、アルツハイマー病を悪化させる可能性がある
【０４３４】
血中のＰＣレベルの低下は、インビボで神経変性疾患を改善するという予想外の発見は、  Ｓａｎｄｏｚ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−高齢者のスコアは、食事にＰＣが補充されていたアルツハイマー病の患者において、さらに悪化していることを示す過去の試験結果により裏付けられる。
【０４３５】
コリン摂取は、アセチルコリン（ＡＣｈ）生合成における潜在的な律速段階とみなされており、経口レシチン（９０〜９５％ＰＣ）は、治療とみなされていた。中程度の重症度のアルツハイマー病の外来患者で、レシチンの二重盲検プラセボ対照のクロスオーバー試験を完了させた。各患者は、３か月間、プラセボ１０ｇを毎日３回、投与された。血漿コリンレベルは３倍上昇し、レシチン投与期間中、そのレベルで維持された。新しいことを学習する能力の検査に対し、平均基準スコアと治療スコアの間の有意差が見いだされた。これは、これら試験における実際の効果を示している。しかし心理テスト測定のいずれに対しても平均プラセボスコアと、レシチンスコアの間の有意差は無かった（Ｅｔｉｅｎｎｅ  Ｐ，Ｄａｓｔｏｏｒ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３１：１５５２−４）。
【０４３６】
２１名のアルツハイマー病患者で、毎日のレシチン２５ｇに対する二重盲検試験を完了させた。レシチン群とプラセボ群の両方において、同等の改善が記録された。レシチンの血清レベルは、投与後１２〜１４時間で測定され、対照患者のレベルと比較して増加していなかった（Ｆｉｓｍａｎ  Ｍ，Ｍｅｒｓｋｅｙ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｃａｎａｄｉａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｖｕｅ  ｃａｎａｄｉｅｎｎｅ  ｄｅ  ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｅ  ２６：４２６−８）。
【０４３７】
６５〜８５歳の原発性変性認知症（ＤＳＭ−ＩＩＩ）の１０名の患者における無作為化二重盲検のクロスオーバー試験にて、それぞれ１週間、プラセボと３つのレシチン投与量（４、１２および２０ｇ／日）を比較した。「血漿．．．コリンレベルの増加にもかかわらず、記憶テストの成績には何も改善がなかった」（Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ＳＤ，Ｐｏｍａｒａ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２：２８１−５）。
【０４３８】
５４〜７８歳の１０名のアルツハイマー病患者における二重盲検クロスオーバー試験は、プラセボと３つのレシチン投与量（１５．０、２２．５、３０．０ｇ／日）をそれぞれ１週間比較した。「レシチンは、認知機能において何らかの臨床的に重要な改善を生じさせなかった」（Ｄｙｓｋｅｎ  ＭＷ，Ｆｏｖａｌｌ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３２：１２０３−４）。実際には、１０名の外来患者と５名の入院患者のオリジナルデータの新たな解析から、「全体的印象」（ＳＣＡＧ−Ｇ）は二分化の後に悪化しただけでなく−「３．０の統合オッズ比推定値（０．９〜９．８の９５％信頼区間（ＣＩ））を生じさせたが、これはプラセボを支持する有意ではないただの試験結果である」ことが示された（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ＪＰ，Ｆｌｉｃｋｅｒ  Ｌ（２００３）Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ  Ｒｅｖ  ＣＤ００１０１５）。しかし、ＰＣの投与量が増加するにつれて減少した（表９）。ただしこの低下は、本開示の一部として実施された再解析では「有意」ではなかった（ＰＡＮＯＣＡ＝０．２４６７）。
表９：血清ホスファチジルコリンレベルの増加は、アルツハイマー病を悪化させる。ＳＣＡＧ−Ｇ結果（高値は、様々なレベルのレシチンを２週間投与されたアルツハイマー病患者において、値が高いほど良い。一部の患者において、評価が繰り返された。値が高いほど悪化する。（Ｈａｒｒｉｓ  ＣＭ（１９８１）ＰｈＤ：１４０，Ｔａｂｌｅ  ＸＸＩ）に由来する。
【表９】
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【０４３９】
アルツハイマー病患者における長期間の無作為化二重盲検試験で、少なくとも６カ月の追跡期間を伴う６カ月間の２０〜２５ｇ／日のレシチンとプラセボ（それぞれ１８名および１７名の対象でデータ完了）が比較された。レシチン治療は、血漿コリン値を上昇させた（コンプライアンスに依存する）。「全体として、レシチン群と対照群の間に有意差はなかった。．．．［何かがあるとすれば］最善を尽くした承諾者が比較的少なかった」（Ｌｉｔｔｌｅ  Ａ，Ｌｅｖｙ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４８：７３６−４２）。
【０４４０】
全体として、レシチン（ホスファチジルコリン）補充は、アルツハイマー病患者に利益をもたらすという証拠はない。対照的に、２つの試験により、たとえ比較的短い試験期間にのみ投与されたとしても、ＰＣはアルツハイマー病を悪化させるという仮説と一致する結果が提示されている。
【０４４１】
本開示の予想外の試験結果は、食事へのＰＣ補充により認知症に何らかの改善があることを示すいくつかの試験と、その他のネガティブな効果を示す試験との矛盾する結果を説明する。全体的なＰＣの低下は、実際には有害である可能性がある。しかし「非常に低い濃度」（Ｗｉｌｔｏｎ  ＤＣ（２００５）Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０７：１９３−２０５）のみで存在する単量体ＰＣの低下は、利益をもたらす。
実施例１８：様々な動物モデルにおける、シクロデキストリンの有益な結果は、炎症およびオートファジーに対する相乗効果の結果である。
【０４４２】
ＨＰ−β−ＣＤは、多くの疾患の動物モデルにおいて有効であることが示されているが、推定される作用機序であるコレステロール排除は、永続的な難聴のリスクを有する。実施例１および実施例２の驚くべき遺伝的結果から、ＨＰ−β−ＣＤの作用機序は、コレステロール排除によるものではなく、リン脂質の排除によるものであったという仮説が導かれた（図４５）。ゆえに、ＨＰ−α−ＣＤが、より安全な（そしてより効果的な）代替物として浮上してきた。図４０で確認される実施例１６の驚くべき結果から、ＨＰ−α−ＣＤが、オートファジーの改善に加えて全身性の炎症を低下させることが示された。
【０４４３】
要約すると、α−ＣＤは、若年期の間には必須であるが、５０歳を超えるといくつか問題を引き起こし得る以下のいくつかのプロセスを減速させる：（１）出生前（組織）および出生後の早期（神経）発達の間の細胞の移動、（２）成長期間中の栄養素の細胞取り込み、ならびに（３）まだ免疫システムに認識されていない病原体に対する防御としての自然免疫（炎症）。ＨＰ−α−ＣＤは、（ａ）エンドサイトーシスを低下させ、それによりリソソームストレスを低減させる（図４６）および（ｂ）「炎症性老化」とも呼ばれる炎症の低減（図４７）によりこれを実現する。さらなる利益は、炎症を低下させることでオートファジーが改善され、翻って、改善したオートファジーが炎症を低下させることである。ゆえに上方制御された炎症および下方制御されたオートファジーが関与する加齢関連状態に対するＨＰ−α−ＣＤの効果は、高度に相乗的であることが期待される。
実施例１９：アルツハイマー病の細胞およびマウスのモデルにおける、アルファおよびベータシクロデキストリンによる神経保護に関する研究の試験デザイン
【０４４４】
要約  コレステロールと膜脂質が、アルツハイマー病（ＡＤ）の発症機序において重要な役割を果たすという数々の証拠がある。シクロデキストリン（ＣＤ）は、環状オリゴ糖化合物であり、ヒドロキシプロピル−β−ＣＤ（ＨＰ−β−ＣＤ）は、コレステロールを結合するために広く使用されている。ＣＤは、ＡＤと神経病理的な特徴を共有するニーマンピック病Ｃ型において顕著に有益な効果を発揮することから、ＨＰ−β−ＣＤの効果が、ＡＤの細胞およびマウスのモデルにおいて検証された。細胞膜コレステロールの蓄積が、Ｓｗｅｄｉｓｈ変異型ＡＰＰ（ＳｗＮ２ａ）を過剰発現するＮ２ａ細胞において検出され、膜コレステロールのレベルは、ＨＰ−β−ＣＤの処置により低下した。ＨＰ−β−ＣＤは、ＳｗＮ２ａ細胞においてＡβ４２のレベルを劇的に低下させ、その効果は使用中止後２４時間持続した。４か月間のＨＰ−β−ＣＤの皮下投与が、Ｔｇ１９９５９マウスにおいて空間学習と記憶障害を大幅に改善し、Ａβプラーク沈着を減少させ、そしてタウ免疫反応性変性神経突起（ＤＮ）を減少させた。これらは、ヒトＡＤと関連しているＡＰＰ遺伝子に２つの変異を有するトランスジェニックマウスであり、有益な効果は、コレステロールの低下が原因であった。近年、新たなＧＷＡＳ解析が使用され、転移性乳癌のリン脂質経路遺伝子と、ＡＤコホートで見られるリン脂質経路遺伝子の重複が示された。ＨＰαＣＤも、ＨＰ−β−ＣＤと同様にリン脂質に結合するが、コレステロールには結合しない。ＨＰαＣＤは、乳癌細胞の移動の減速において、ＨＰ−β−ＣＤの２倍効果的である。ゆえに、ＨＰ−β−ＣＤの有効性は、コレステロールに対する効果によるものではなく、むしろリン脂質によるものである可能性がある。これらの可能性を見分ける１つの方法が、インビトロ、およびＡＰＰ変異を有するトランスジェニックマウス（Ｔｇ１９９５９）の両方においてＨＰαＣＤの有効性を検証することである。本明細書において、本発明者らは、ＨＰαＣＤが、コレステロールレベルと膜コレステロールに対して、等しく効果的か、またはより効果的か、効果を有さないかを、フィリピン染色および質量分析を使用して決定することを目的とする。本発明者らはさらに、その効果が、Ｎ２ａ細胞、ならびにＴｇ１９９５９トランスジェニックマウスでのインビボの両方において、ベータ−アミロイド産生に用量反応性であるかを決定する。ゆえにこれらの試験は、ＡＤ患者の臨床試験でさらに本戦略を遂行するための草分け的な仕事であり、科学的論拠を提供するであろう。
【０４４５】
重要なサポートデータの要約。過去に、ＨＰ−β−ＣＤの効果が、ＡＤの細胞モデルおよびマウスモデルにおいて検証された。ＨＰ−β−ＣＤは、ＳｗＮ２ａ細胞においてＡβ４２のレベルを劇的に低下させ、その効果は使用中止後２４時間持続した。４か月間のＨＰ−β−ＣＤの皮下投与が、Ｔｇ１９９５９マウスにおいて空間学習と記憶障害を大幅に改善し、Ａβプラーク沈着を減少させ、そしてタウ免疫反応性変性神経突起（ＤＮ）を減少させた。（Ｓｉｍ  Ｉ，Ｃａｒｉｎｉ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＡＭＩＡ  Ａｎｎｕ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ２０１２：８５６−６５）を参照のこと。ＨＰ−β−ＣＤは、ＡＰＰタンパク質のβ−開裂を低下させることで部分的にＡβ４２のレベルを低下させ、さらにコレステロール輸送とＡβクリアランスに関与する遺伝子の発現も上方制御した。本試験は、ＡＤのトランスジェニックマウスモデルにおける、Ａβ産生の減少とクリアランス機序の強化の両方による、ＨＰ−β−ＣＤの神経保護的作用を初めて示したものであり、ＡＤにおける疾患改変の新規治療戦略となる可能性を提唱する。上方制御された遺伝子のなかには、コレステロールとリン脂質を輸出し、ＡＤ治療用のアゴニストペプチドの標的とみなされている膜トランスポーターであるＡＢＣＡ１があった（Ｂｉｅｌｉｃｋｉ  ＪＫ（２０１６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｌｉｐｉｄｏｌｏｇｙ  ２７：４０−６）。
【０４４６】
近年の結果（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｄａｄｕｒｉａｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １３：ｅ０１９９０１２）により、乳癌の「脱線したエンドサイトーシス」に関与するいくつかの遺伝子が特定された。それらの大部分（ＡＢＣＡ１を含む）はすでに、以下をはじめとするＡＤの機能的および遺伝子発現の研究において示唆されている
【０４４７】
ATP8A1/ATP8B1(Arch  Neurol,65(1),45-53;Internat  J  Mol  Sci,14(4),7897-922;PLOS  Genetics,8(8),e1002853.)
【０４４８】
ANO4(Alzheimers  Dement,10(1),45-52.)
【０４４９】
ABCA1(PLoS  One,11(11),e0166195;Neurobiol  Dis,72  Pt  A,13-21;Alzheimers  &  Dementia,11(12),1430-38;Neurobiol  Dis,72  Pt  A,54-60.)
【０４５０】
AGPAT3/AGPAT4(J  Alzheimers  Dis,23(2),349-59.)(Sherva  R,Baldwin  CT,et  al.(2011)J  Alzheimers  Dis  23:349-59)
【０４５１】
DGKQ(Zhu,X.C.,et  al.(2016),  Association  of  Parkinson’s  Disease  GWAS-Linked  Loci  with  Alzheimer’s  Disease  in  Han  Chinese,Mol  Neurobiol)
【０４５２】
これら遺伝子はすべて、リン脂質の輸送と代謝に関与している。一方で、コレステロール輸送に関与しているのはごく少数であることから、上記のＡＤ動物モデルにおいて認められた効果は、コレステロールではなくリン脂質の低下の結果であろうことが示唆される。
【０４５３】
この仮説は、２種のヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（トリプルネガティブ）およびＭＣＦ−７（エストロゲン受容体ポジティブ）におけるインビトロ実験によりサポートされ、ＥＲ−およびＥＲ＋の両方の腫瘍細胞の移動に対し、２ｍＭのＨＰβＣＤよりも、１ｍＭのＨＰαＣＤのほうが効果が高かったことが示された（ｐ  ＝  ．０２５２）。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｄａｄｕｒｉａｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １３：ｅ０１９９０１２）を参照のこと。
ＩＩ．目的１（主要）：ヒト変異型ＡＰＰを過剰発現するＴｇ１９９５９マウスにおける空間学習と記憶障害に対する、等モルのＨＰαＣＤとＨＰβＣＤ（２，０００および４，０００ｍｇ／ｋｇ）および対照の有効性を検証すること。
【０４５４】
イノベーション：ＨＰβＣＤは、コレステロールを排除することで、ＡＤのマウスモデルにおける活性をはじめとする、その活性を発揮すると広く考えられている。（Ｙａｏ  Ｊ，Ｈｏ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０９：２５０１−１３）を参照のこと。インビトロ試験で確認された本発明者らのＧＷＡＳの結果（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ，Ｄａｄｕｒｉａｎ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．（２０１８）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １３：ｅ０１９９０１２）から、ＢＣ（Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ，８（１１），８３５−５０）において脱線したエンドサイトーシスに関与するとして、ならびに散発性および家族性［ＡＤ］で発症機序を誘導するとして、機能性および発現研究において既に認められた遺伝子との関連性が示された。Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ，２０１４，１６７０２４。ゆえに過去のインビトロ研究（Ｒａｇｈｕ  Ｈ，Ｓｏｄａｄａｓｕ  ＰＫ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  １０：６４７）で認められているＨＰβＣＤの効果は、コレステロールではなくＰＬの排除が正しい可能性があった。ＡＤにおける「脱線した／錯乱したシグナル伝達と、関連のエンドサイトーシス」。（Ｖａｎ  Ｄｏｏｒｅｎ  Ｔ，Ｐｒｉｎｃｅｎ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｂｉｏｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｉｎｔ  ２０１４：１６７０２４）。ＡＤのインビトロモデルにおいて類似した結果が認められた場合、コレステロールではなくＰＬを標的とした新規の治療法が探索され得るだろう。
【０４５５】
有意性：マウスにおけるＡＤに対する初期のポジティブなインビボ結果は、臨床試験では継続されなかった。これは主に、ＨＰβＣＤが、外有毛細胞からコレステロールを枯渇させることで永続的な難聴を生じさせるリスクを有することが示されたためである。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０９（１３），２５０１−１３；（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｓ，Ｈｏｍｍａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｓｃｉ  Ｒｅｐ  ６：２１９７３）を参照のこと。近年のＧＷＡＳの結果は、コレステロールからＰＬへと焦点を移させるものである。次に、これはＡＤに対し、ＨＰβＣＤよりも効果が高く、一方でコレステロール排除に由来する永続的な難聴のリスクを回避し得るＨＰαＣＤをはじめとする新たな治療選択を開くものである。ＨＰαＣＤは、インビトロにおいてＨＰβＣＤよりも毒性も低い。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１０１（１−２），９７−１０３を参照のこと。
【０４５６】
アプローチ：本発明者らは、ＡＰＰの開裂、コレステロールと脂質の輸送遺伝子の発現、およびＡβクリアランス、ならびにコレステロールとリン脂質のレベルに対する効果を検証する。本発明者らは、ＨＰαＣＤとＨＰβＣＤの両方について、２つの濃度を検証することにより、効果が用量反応性であるか、そしてカテプシンＤ免疫染色によりリポソームに対する効果を決定する。本発明者らは、これらの検証を、各々２０匹のマウスの５つの群（対照、ＨＰβＣＤ  ２ｇ、ＨＰβＣＤ  ４ｇ、ＨＰαＣＤ  ２ｇ、ＨＰαＣＤ  ４ｇ）において実施する。
【０４５７】
潜在的な危険性と代替：ＨＰβＣＤで過去に認められたすべての効果がＨＰαＣＤで再現されるのではなく、異なる効果によって、病因に関する新たな知見がもたらされるであろう。しかしＨＰαＣＤで再現され得るＨＰβＣＤの効果が少なすぎる場合、ＨＰαＣＤがＡＤに対するより安全な治療法となり得るという仮説はこれ以上追及されないだろう。それでも目的２の結果は、可能性のある代替物につながる新たな知見をもたらし得る。
ＩＩＩ．目的２：ＡＤ病変に対する、ＰＬとコレステロールの両方の排除（ＨＰβＣＤ）と、ＰＬのみ（ＨＰαＣＤ）を排除する相対的な活性を調査すること  ．．．目的２ａ：．．．ＳｗｅｄｉｓｈＡＰＰ変異を発現するＮ２ａ細胞において（膜コレステロール、Ａβ産生）目的２ｂ：．．．ヒト変異型ＡＰＰを過剰発現するＴｇ１９９５９マウスにおいて（Ａβ沈着、ミクログリオーシス（ｍｉｃｒｏｇｌｉｏｓｉｓ）、アミロジェネシス（ａｍｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）、タウおよびリソソームの異常、遺伝子発現）
【０４５８】
イノベーション：Ａβおよびタウの病変を改善することにより、ＨＰαＣＤ  空間学習および記憶があったとしても、ＡＤの病因におけるコレステロールに対するＰＬの役割はまだ解明されていない。
【０４５９】
有意性：単剤が、ＡＤの万能薬となる可能性はない。メカニズム研究は、コレステロールをより特異的に標的とする薬剤を導き得る試験を設計するための知見を提供する。
【０４６０】
アプローチ：本発明者らは、ＳｗｅｄｉｓｈＡＰＰ変異を発現するＮ２ａ細胞において、Ａβ産生を低下させることに成功したＨＰβＣＤのインビトロ研究を、今回は、ＨＰβＣＤの代わりにＨＰαＣＤを使用して再現することを目的とする。作用機序をさらに解明するために、本発明者らはフィリピン染色を使用して、膜コレステロールに対するＰＬ排除の作用を評価する。
【０４６１】
潜在的な危険性と代替：ＡＤにおけるコレステロールの役割が推定されているが、不明である。ゆえに膜コレステロールとＡβ産生に対するＨＰαＣＤの効果に関するポジティブおよびネガティブの両方の結果は、ＡＤにおけるＣＤの役割の理解の改善の助けとなり、さらなる薬剤開発に有益な知見をもたらす。
【０４６２】
実験デザインおよび方法
【０４６３】
４，０００ｍｇ／ｋｇのＨＰβＣＤが、インビトロで有効であることを示す過去の結果、およびＥＥＣの制御においてＨＰαＣＤが、ＨＰαＣＤの少なくとも２倍有効であることを示すインビトロ結果に基づき、本発明者らは、ＨＰαＣＤ＿２ｇとＨＰβＣＤ＿４ｇを比較し、さらにＨＰαＣＤ＿２ｇとＨＰβＣＤ＿２ｇ、ＨＰαＣＤ＿４ｇとＨＰβＣＤ＿４ｇ、ＨＰαＣＤ＿４ｇとＨＰαＣＤ＿２ｇ、およびＨＰαＣＤ＿４ｇとＨＰαＣＤ＿２ｇも比較する。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０９（１３），２５０１−１３を参照のこと。陽性対照として、本発明者らは、対照とＨＰβＣＤ＿４ｇを比較する過去の結果も再現する。
【０４６４】
目的１において、平均への回帰（勝者の呪い）を防ぎ、多重度を考慮する（５つの独立した比較）ために、そして探索的目的２の否定的な結果を意味のある形で解釈できるようにするために、本発明者らは、サンプルサイズを過去の２群試験での１群当たり１０（α＝０．０５、パワー＝０．８０、δ＝１．３）から、今回の５群試験での１群あたり２０へと増加させる（α＝０．０１、パワー＝０．９０）。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０９（１３），２５０１−１３を参照のこと。
【０４６５】
実験動物。Ｔｇ１９９５９マウスは、Ｄｒ．Ｇｅｏｒｇｅ  Ｃａｒｌｓｏｎ（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、モンタナ州グレートフォールズ）から取得した。Ｔｇ１９９５９マウスは、ＦＶＢ×１２９Ｓ６  Ｆ１胚に、ハムスターＰｒＰプロモーターの制御下にある２つの家族性ＡＤ変異（ＫＭ６７０／６７１ＮＬとＶ７１７Ｆ）を含むヒトＡＰＰ６９５を含有するコスミドインサートを注入することにより構築された。すべての実験は、Ｗｅｉｌｌ−Ｃｏｒｎｅｌｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｏｌｌｅｇｅのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅにより承認される。
【０４６６】
細胞株：マウスＮ２ａ神経芽腫細胞は、６７０／６７１  Ｓｗｅｄｉｓｈ変異（ＳｗＮ２ａ）を担持するヒトＡＰＰ６９５を安定的にトランスフェクトされており、過去に記載されるように増殖される（Ｙａｏ  Ｊ，Ｈｅｎｎｅｓｓｅｙ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ５：ｅ１５５４６）。
【０４６７】
細胞におけるＨＰ−α−ＣＤ／ＨＰ−β−ＣＤ（ＨＰ−ＣＤ）処置。１０ｍＭのＨＰ−ＣＤストック溶液を、１ｘＰＢＳ中で作製する。ＳｗＮ２ａ細胞とＮ２ａ細胞を、様々なインキュベーション時間で、無血清培地中でＨＰ−ＣＤ（５ｍＭ）で処置する。Ａβレベルを測定するために、ＳｗＮ２ａ細胞を、ＨＰ−ＣＤ処置の５時間後または２４時間後に無血清培地中に回収する。
【０４６８】
フィリピン染色および解析。フィリピンをＤＭＳＯ（５０ｍｇ／ｍｌ）中で調製し、−２０℃で保存する。細胞を３０分間、４％ＰＦＡ中で固定する。フィリピン染色のために別に細胞を透過処理することは必要なく、フィリピン自身が細胞に透過する。ストック溶液をＰＢＳ中で希釈する（１：１００〜１：５００）。細胞を室温で１５分間インキュベートし、次いでＰＢＳで３回、５分間洗浄する。抗減衰試薬（Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇ、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ社）を包埋培地で使用する。フィリピンは、λｅｘ＝３６０ｎｍおよびλｅｍ＝４６０ｎｍを使用して検出される。ＣＣＤカメラに繋がれた蛍光顕微鏡を使用して、Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社）を使用して画像撮影する。画像解析のために、本発明者らは、Ｉｍａｇｅ  Ｊ（ＮＩＨ）を使用して、画像上に７０％閾値を適用し、ＣＤ処置の有無でのＳｗＮ２ａ細胞のフィリピン強度の変化を定量する。Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，９（１０），１２６５−７３を参照のこと。
【０４６９】
ＳｗＮ２ａ細胞からのコレステロール抽出。６ウェルプレートのＳｗＮ２ａ細胞に、１５分間、ＣＤを用いて、またはＣＤを用いずに処置する。細胞を３回、ハンクス緩衝液で洗浄し、その後、β−シトステロール（国際標準、１ウェル当たり５ｕｇのβ−シトステロール）を含有する８００ｕｌのヘキサン／イソプロパノール（３／２  ｖ／ｖ）を加える。室温でゆっくりと振とうしながら３０分間、脂質を抽出する。脂質抽出物を１２ｘ７５ｍｍのホウケイ酸ガラス培養管にうつし、アルゴン雰囲気下で乾燥させる。抽出を再度繰り返し、チューブ１本あたり５０ｕｌのヘキサンを加え、ボルテックスし、その後、分離用のガラスバイアルに移し、ＧＣ−Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃで解析する。コレステロール／タンパク質ｍｇのレベルを算出し、プロットする。
【０４７０】
マウスへのシクロデキストリン投与。週に２回の皮下注射で、ＨＰ−α−ＣＤまたはＨＰ−β−ＣＤ（ＨＰ−ＣＤ、２０００または４０００ｍｇ／ｋｇ）によりマウスを処置した。ＨＰ−ＣＤは、等張生理食塩水中、２０％（ｗ／ｖ）溶液として投与され、対照として等張生理食塩水単独を用いた。マウスでのＨＰ−ＣＤの注射は、Ｐ７で開始され、処置期間は４カ月である。２０匹のマウスを各群で試験する。
【０４７１】
モリス水迷路。空間学習と記憶は、モリス水迷路を使用して分析される。Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍｏｔｉｖａｔｉｏｎ，１２（２），２３９−６０を参照のこと。馴らすために、行動検査の１種間前に開始して毎日マウスに触れる。取得期間中、視覚刺激物を室内に配置する。北西（ＮＷ）の四半部の真ん中に、隠しプラットフォームを配置する。毎日、マウスを４つのスタート位置：北、東、南および西で、盥の壁の隣に置き、壁に向い合せる。それら４点が、１日当たり４回の連続的な試験に相当する。試験時間は６０秒であり、試験の間の間隔は６０分である。マウスが６０秒以内にプラットフォームに到達しなかったときは、実験者により１０秒間、プラットフォーム上にマウスを置く。プラットフォームに到達するまでの時間を５日間記録し、分析する。
【０４７２】
プローブ試験は、取得期間の最後の試験の２４時間後、プールからプラットフォームを取り出して、評価する。マウスは１回の試験での６０秒間、北側にリリースされ、その間にプラットフォームのエリアで過ごした時間が測定される。速度も測定される。
【０４７３】
可視プラットフォームの試験は、１日当たり４回の試験で、２日にわたり実施される。この刺激検査では、プラットフォーム上にポールが足され、その位置は各試験間で変えた。試験期間は６０秒であり、試験の間の間隔は６０分である。プラットフォームに到達するまでの時間を記録し、平均化する。
【０４７４】
脳および細胞からのサンプル調製。マウスは、腹腔内ペントバルビタールナトリウムで深麻酔され、氷冷生理食塩水で経心臓でかん流される。脳を取り出し、氷上で解剖する。１つの半球を組織学的解析に使用し、他方の半球をその後のタンパク質抽出またはＴｒｉｚｏｌ  ＲＮＡ抽出（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）に使用する。脳組織は、１％  ＳＤＳ  ＋  ０．５％  ＮＰ−４０と、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ社）を含む溶解緩衝液中でホモジナイズし、ウェスタンブロッティング解析を行う。細胞は、ＲＮＡ抽出用にはＴｒｉｚｏｌ中でホモジナイズと調製を行い、タンパク質抽出用にはＲＩＰＡ緩衝液または１％  ＴｒｉｔｏｎのＰＢＳ溶液中でホモジナイズと調製を行う。タンパク質濃度は、ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）により決定される。
【０４７５】
ウェスタンブロッティング解析。等量のタンパク質を含むサンプルを、Ｔｒｉｃｉｎｅ−ＳＤＳゲル電気泳動により分離させ、ｉＢｌｏｔドライブロッティングシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用してＰＶＤＦ膜にトランスファーする。膜を、５％ミルク／０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０のＴＢＳ溶液で１時間、室温でブロッキングし、その後、一次抗体とともに４℃で一晩インキュベートする。シグナルは、ＨＲＰ結合二次抗体を使用して検出され、化学発光を強化する（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）。ブロットは、６００ｄｐｉでスキャンされ、濃度測定は、ＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ）を使用して実施される。本発明者らは、以下の抗体を使用する：マウスモノクローナル抗チューブリン（Ｓｉｇｍａ社、１：１００００）、マウス抗Ａβ１−１６（６Ｅ１０）モノクローナル抗体（Ｃｏｖａｎｃｅ社、１：１０００）、ウサギ抗ＡＰＰ  Ｃ−末端抗体（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社）、ＨＲＰ−結合ヤギ抗マウスＩｇＧ（１：２０００）およびヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：３０００）（ＫＰＬ社）。
【０４７６】
酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）。Ａβ４２のレベルは、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、ＫＨＢ３４４１）を使用して定量される。メーカーのプロトコールに従い、細胞抽出物、ＳｗＮ２ａ細胞からの培地およびマウスからの脳抽出物中のＡβレベルを測定する。ＳｗＮ２ａ細胞からの培地は、希釈液中、１：１に希釈され、脳抽出物は、希釈液中、１：１０に希釈され、その後、解析用のプレートにロードされる。各サンプルは二重で検討され、実験は少なくとも２回反復される。
【０４７７】
免疫組織法。行動評価されるマウスは、腹腔内ペントバルビタールナトリウムで深麻酔され、氷冷生理食塩水で経心臓でかん流される。脳は４％パラホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液中で少なくとも２４時間、後固定（ｐｏｓｔ−ｆｉｘｅｄ）される。脳組織は３５ｕｍの切片に切り出され、アビジン−ビオチン複合ペルオキシダーゼ法を使用して免疫染色され、５分間のＤＡＢ（ジアミノベンジジン）インキュベーションの後に可視化される（Ｖｅｃｔｏｒ社、米国カリフォルニア州バーリンゲーム）。各動物に対し、５枚の切片を分析する。アミロイド沈着については、脳切片を抗Ａβ４２ウサギポリクローナル抗体ＡＢ５０７８Ｐ（１：１０００、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社）で標識する。ミクログリア活性化については、隣接切片を、抗ＣＤ−１１ｂラットモノクローナル抗体（１：１００、Ｓｅｒｏｔｅｃ社）でさらに標識する。リン酸化タウについては、ＡＴ８抗体（１：５００、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で切片を標識する。カテプシンＤについては、ＲＵ４抗体（Ｄｒ．Ｒａｌｐｈ  Ｎｉｘｏｎ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ／Ｎａｔｈａｎ  Ｋｌｉｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから授受）で標識する。ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ１．６３ソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、米国メリーランド州ベセスダ）を使用して、０．７５  ｍｍ２当たりのＡＢ５０７８Ｐ免疫反応性アミロイドプラークにより占められる面積割合と、ＣＤ−１１ｂ免疫反応性ミクログリアにより占められる割合を算出する。
【０４７８】
チオフラビン−Ｓ染色。Ｔｇ１９９５９からのフローティング切片を洗浄し、１５分間、１％  Ｔｒｉｔｏｎ−ＰＢＳ中でインキュベートする。ＰＢＳで洗浄し、０．０５％チオフラビンＳ（ＴｈＳ）の５０％エタノール溶液で５分間染色する。最後に切片を５０％エタノールで洗浄し、その後は水中で洗浄する。ＴｈＳの蛍光は、蛍光顕微鏡でλｅｘ＝４８８ｎｍを使用して検出する。ＴｈＳ蛍光面積は、Ｉｍａｇｅ  Ｊを使用して決定され、総面積の割合として表される。
【０４７９】
ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子の定量。ＲＮＡは、４カ月齢のマウスの脳から、Ｔｒｉｚｏｌプロトコール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を使用して抽出される。次いでＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、米国）を使用し、ヌクレアーゼフリーの脱イオン水を加えて、総ＲＮＡ（１μｇ）をｃＤＮＡへ逆転写する。逆転写は、メーカーのプロトコールに従い実施される。トータルで３０ｎｇのｃＤＮＡを、ＰＣＲプレートの各ウェルにロードする。ｃＤＮＡは、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７０００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、米国）を使用したリアルタイム定量ＰＣＲにより二重で分析され、Ｐｏｗｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、米国）で検出される。プライマー配列は、過去の公表文献から取得される。Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８０１（８），８３１−８；Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１０６（７），２３７７−８２を参照のこと。
ＡＢＣＡ１（Ｆｗｄ：５’−ＣＧＴＴＴＣＣＧＧＧＡＡＧＴＧＴＣＣＴＡ−３’；Ｒｅｖ：５’−ＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＣＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＧＡ−３’）、
ＡＢＣＡ２（Ｆｗｄ：５’−ＡＧＴＧＣＴＣＡＧＣＣＴＴＣＧＴＡＣＡＧ−３’，Ｒｅｖ：５’−ＡＧＧＣＧＣＧＴＡＣＡＧＧＡＴＴＴＴＧＧ−３’）、
ＡＢＣＧ１（Ｆｗｄ：５’−ＴＴＴＧＡＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＴＣＴＧＡＡＣ−３’，Ｒｅｖ：５’−ＣＣＣＣＴＴＴＡＡＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＴＧＣＴ−３’）、
ＮＰＣ１（Ｆｗｄ：５’−ＧＧＧＡＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＴＧＣＡＡＴ−３’；Ｒｅｖ：５’−ＣＴＧＧＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＧＣＣＣＣＧ−３’）。
【０４８０】
各サンプルに対し、蛍光閾値に達するサイクル数Ｃｔは、各ｍＲＮＡおよびアクチンに対して二重で決定される。Ｔｇ１９９５９マウスと野生型マウスのｍＲＮＡの相対量を決定するために、データは、２−ＡＡＣｔ法（Ｌｉｖａｋ  ＫＪ，Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ  ＴＤ（２００１）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：４０２−８）を使用して表される。
【０４８１】
統計法。群間の独立２群比較は、シェッフェの多重比較検定を含む一般化フリードマン／クルスカル−ウォリスの順位検定を使用し実施される。（Ｗｉｔｔｋｏｗｓｋｉ  ＫＭ（１９８８）Ｊ  Ａｍ  Ｓｔａｔｉｓｔ  Ａｓｓｏｃ  ８３：１１６３−７０，８７：２５８）。算出は、Ｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒａｎ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）およびｍｕＳｔａｔパッケージ（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｒａｎ．ｒ−ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／ｐａｃｋａｇｅ＝ｍｕＳｔａｔ）を使用して実施される。
【０４８２】
目的１の主要結果は、以下を含む集成ｕ−スコアである。
●  ５日目に隠しプラットフォームに到達するまでに過ごした総時間、および
●  プラットフォームエリアで過ごした総時間。
【０４８３】
解釈においてアーチファクト（外れ値、傾斜分布）を抑えるために（目的２を含む）、本発明者らは、結果を、箱髭図としてプロットする。（Ｔｕｋｅｙ  ＪＷ（１９７７）Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｒｅａｄｉｎｇ，Ｍａｓｓ．：Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ）を参照のこと。
実施例２０：パーキンソン病の細胞およびマウスのモデルにおける、アルファおよびベータシクロデキストリンによる神経保護に関する研究の試験デザイン
【０４８４】
α−シヌクレイン（ａ−ｓｙｎ）の凝集は、例えばレビー小体認知症およびパーキンソン病などの障害の発症機序において重要な役割を果たすと考えられている。過去の研究（Ｂａｒ−Ｏｎ  Ｐ，Ｒｏｃｋｅｎｓｔｅｉｎ  Ｅ，ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ９８：１０３２−４５）の主要な目的は、メチル−ｂ−シクロデキストリン（Ｍ−β−ＣＤ）が、シヌクレイン症のモデルにおいてａ−ｓｙｎの蓄積に干渉するかを決定することであった。Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，９８（４），１０３２−４５を参照のこと。著者らは、トランスフェクトされた神経細胞株およびトランスジェニックマウスにおけるａ−ｓｙｎの蓄積に対するＭ−β−ＣＤの効果を研究した。イムノブロット解析は、Ｍ−β−ＣＤが、トランスフェクト細胞の膜分画および界面活性剤不溶性分画においてａ−ｓｙｎのレベルを低下させたことを示している。インビトロ研究と同じく、Ｍ−β−ＣＤを用いたマウス処置により、膜分画におけるａ−ｓｙｎのレベル低下と、神経細胞体およびシナプスにおけるａ−ｓｙｎの蓄積低下がもたらされた。まとめると、これらの結果は、Ｍ−β−ＣＤを使用したコレステロールおよび脂質組成の変化は、シヌクレイン症の治療となり得ることを示唆していると解釈された。しかし上記の実施例の結果からは、主に「コレステロール低下剤」として確認されたＭ−β−ＣＤによる効果は、実際には主にＭ−β−ＣＤのリン脂質排除によるものであったことが示唆される。本実施例において、本試験は、Ｍ−β−ＣＤではなく今回はＨＰ−α−ＣＤを使用して反復される。
【０４８５】
非トランスジェニックマウスおよびα−ｓｙｎトランスジェニックマウスの脳における、ａ−ｓｙｎレベルに対するＭ−β−ＣＤの効果。非トランスジェニック（ｔｇ）マウスと、ｈａ−ｓｙｎトランスジェニックマウスを、１週間、Ｍ−β−ＣＤ（１０ｍＭ）で処置して、ウェスタンブロッティングおよび免疫細胞化学法により解析する。
実施例２１：乳癌におけるシクロデキストリンの有効性検証のための試験デザイン
【０４８６】
乳癌切除後の女性は確定診断を受けているため、「脱線したエンドサイトーシス」に対するＨＰ−α−ＣＤの臨床試験をこの集団において開始することとする。非限定的な例として、乳癌の転移予防に関するＨＰ−α−ＣＤのシームレスな第２ｂ／３相臨床試験が、
●  トリプルネガティブ乳癌（タモキシフェンおよびハーセプチンがこの集団ではあまり作用しない）および
●  腋窩リンパ節転移（転移発生の傾向が確立された患者）の女性集団において実施され得た。
【０４８７】
シームレス設計の第２ｂ相部分は、転帰として遠隔転移するまでの時間である主要エンドポイントに貢献し得るよう、最初の８０名の患者が少なくとも２年間観察され、非盲検とすることなく治療が継続された後の転帰としては無益となるであろう。再発率は最初の３年間のみ高いため、データは最大５年間集められる。Ｊ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，１８（４），３７１−７を参照のこと。後にリクルートされた患者の一部は、最後の患者が２年間観察されたときに管理者によって打ち切られる。ゲーハン検定を使用して、治療患者とプラセボ患者を比較する。Ｂｉｏｍｅｔｒｉｋａ，５２，２０３−２３を参照のこと。
【０４８８】
１群当たり１２５名の患者で、３年間の有効メジアン観察時間で女性の３０％が遠隔再発を有すると予測され、５％レベルでの標準的な８０％の検出力で、５０％（〜１５％）までの発生率の低下が検出され得た。プラセボ対照治療は、標準治療（化学療法、放射線、．．．）に加えて投与された。
長期間のＨＰ−β−ＣＤ（２００ｍｇ／ｋｇ）の非経口投与により、ラットにおいて骨ミネラル密度（ＢＭＤ）の低下が報告されたため（Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ，４０（５），７４２−５０）、本試験は注意深く監視するものとする。
●  骨密度。
【０４８９】
ヒト赤血球は、β−ＣＤよりもα−ＣＤのほうが忍容性良好である。ＷＨＯ／ＪＥＣＦＡ  Ｆｏｏｄ  Ａｄｄｉｔｉｖｅ  Ｓｅｒｉｅｓ，４８，１０３０を参照のこと。ヒトよりもシクロデキストリンに対する忍容性が低い動物試験から、投与量規制因子はおそらく以下である。
●  腎毒性および
●  溶血。
【０４９０】
動物試験において、α−ＣＤは耳毒性を示さなかった（Ａｎｎ  Ｃｌｉｎ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｎｅｕｒｏｌ，３（５），３６６−８０）が、投与量設定試験は注意深く
●  耳毒性をスクリーニングするものとする。
実施例２２：ＦＳＧＳにおけるシクロデキストリンの有効性検証のための試験デザイン
【０４９１】
１つの態様では、本開示は、その必要のある対象において巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ：ｆｏｃａｌ  ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）および／またはネフローゼ腫脹を治療および／または予防する方法を提供するものであり、当該方法は、対象に、α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体の有効量を、単独で、または１つもしくは複数の追加の活性剤と組み合わせて投与する工程を含む。一部の実施形態では、組成物は、ＨＰ−α−ＣＤとカプリン酸ナトリウムまたはカプリル酸塩のクラスレートである。
【０４９２】
クラスレートを伴う、および伴わないＨＰ−α−ＣＤが、Ｆｏｇｏ，Ｓｅｍｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．２００３  Ｍａｒ；２３（２）：１６１−７１に記載されるモデルを使用してラットに経口投与される試験が実施される。当該文献は、その全体で参照により組み込まれる。ＨＰ−α−ＣＤを含む、および含まない他の経口製剤が、ＨＰ−α−ＣＤとともに検証され、有効性を測定される。
【０４９３】
他の経口製剤としては、ＷＯ２０１６１０５４６５，ＯＲＡＬ  ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＦＯＲ  ＩＮＳＯＬＵＢＬＥ  ＣＯＭＰＯＵＮＤＳに記載される製剤が挙げられる。当該文献は、その全体で参照により組み込まれる。
本発明者らは、ＨＰ−α−ＣＤまたはそのアナログもしくは誘導体が、哺乳動物においてＦＳＧＳを効果的に治療し、および／または発症を予防し、ならびにベータ−シクロデキストリンの公知の副作用を伴わずに他の実験化合物と同様に良好またはより良好に、治療および／または発症を予防することを予期する。
引用参照文献
米国特許出願
ＵＳ  ６８９０５４９  Ｂ２  ２００３／０７／２９  Ａｒｔｉｓｓ  ＪＤ，Ｊｅｎ  Ｃ（優先権：ＵＳ  ４０４３６６０２  Ｐ  ２００２−０８−１９）Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  Ｄｉｅｔａｒｙ  Ｆａｔ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｒ  Ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ．
消費可能な脂肪含有食品中の脂肪の生体利用効率を低下させる方法であって、消費可能な脂肪含有食品中の脂肪量を決定する工程、およびα−シクロデキストリンと、当該消費可能な脂肪含有食品を混合させ、当該消費可能な脂肪含有食品に、約１：２０〜約１：３ｗ／ｗのα−シクロデキストリンと脂肪の比率を含ませる工程を含み、当該α−シクロデキストリンまたはα−シクロデキストリン複合体が、消費前に当該食品から除去されない、方法。
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本発明はさらに、以下の請求の範囲により記載される。
【図１】
2020535235.tif 000029
【図２】
2020535235.tif 000030
【図３】
2020535235.tif 000031
【図４】
2020535235.tif 000032
【図５】
2020535235.tif 000033
【図６】
2020535235.tif 000034
【図７】
2020535235.tif 000035
【図８】
2020535235.tif 000036
【図９】
2020535235.tif 000037
【図１０】
2020535235.tif 000038
【図１１】
2020535235.tif 000039
【図１２】
2020535235.tif 000040
【図１３Ａ】
2020535235.tif 000041
【図１３Ｂ】
2020535235.tif 000042
【図１４】
2020535235.tif 000043
【図１５】
2020535235.tif 000044
【図１６】
2020535235.tif 000045
【図１７】
2020535235.tif 000046
【図１８Ａ】
2020535235.tif 000047
【図１８Ｂ】
2020535235.tif 000048
【図１８Ｃ】
2020535235.tif 000049
【図１９】
2020535235.tif 000050
【図２０】
2020535235.tif 000051
【図２１】
2020535235.tif 000052
【図２２】
2020535235.tif 000053
【図２３】
2020535235.tif 000054
【図２４】
2020535235.tif 000055
【図２５】
2020535235.tif 000056
【図２６】
2020535235.tif 000057
【図２７】
2020535235.tif 000058
【図２８】
2020535235.tif 000059
【図２９】
2020535235.tif 000060
【図３０】
2020535235.tif 000061
【図３１】
2020535235.tif 000062
【図３２】
2020535235.tif 000063
【図３３】
2020535235.tif 000064
【図３４】
2020535235.tif 000065
【図３５】
2020535235.tif 000066
【図３６】
2020535235.tif 000067
【図３７】
2020535235.tif 000068
【図３８Ａ】
2020535235.tif 000069
【図３８Ｂ】
2020535235.tif 000070
【図３９】
2020535235.tif 000071
【図４０】
2020535235.tif 000072
【図４１】
2020535235.tif 000073
【図４２】
2020535235.tif 000074
【図４３】
2020535235.tif 000075
【図４４】
2020535235.tif 000076
【図４５】
2020535235.tif 000077
【図４６】
2020535235.tif 000078
【図４７】
2020535235.tif 000079
【図４８】
2020535235.tif 000080
【図４９Ａ】
2020535235.tif 000081
【図４９Ｂ】
2020535235.tif 000082
【図４９Ｃ】
2020535235.tif 000083
【配列表】
2020535235000001.app
【国際調査報告】
2020535235.tif 000084
2020535235.tif 000085
2020535235.tif 000086
2020535235.tif 000087