(57)【要約】  本開示は、式（Ｉ）【化１】2020535134.tif 000102の化合物並びにその薬学的に許容される塩及び組成物に関し、ここで、置換基は、本明細書において定義される通りである。式（Ｉ）の化合物を作製する方法並びに本明細書において記載される障害及び疾患を治療するための化合物又は組成物を伴う方法も提供される。
2020535134.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2020535134.tif 000087
（式中、
Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化２】
2020535134.tif 000088
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化３】
2020535134.tif 000089
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である）
の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化４】
2020535134.tif 000090
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化５】
2020535134.tif 000091
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１は、ヒドロキシである、請求項１若しくは２に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ２は、
【化６】
2020535134.tif 000092
であり、及びｎは、１、２又は３である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒ２は、
【化７】
2020535134.tif 000093
である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
【表１】
2020535134.tif 000094
【表２】
2020535134.tif 000095
【表３】
2020535134.tif 000096
【表４】
2020535134.tif 000097
【表５】
2020535134.tif 000098
から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
【化８】
2020535134.tif 000099
Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシンである、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項８】
【化９】
2020535134.tif 000100
（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシンである、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項９】
【化１０】
2020535134.tif 000101
（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容されるキャリヤとを含む医薬組成物。
【請求項１１】
治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の治療上活性な作用物質とを含む医薬の組み合わせ。
【請求項１２】
ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項１３】
対象における疾患又は障害を治療する方法であって、前記疾患又は障害の病態に関連する標的組織、細胞又は器官は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有し、前記方法は、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを、それを必要とする前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有するか又はそれを有するとしてあらかじめ決定された対象における疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを、それを必要とする前記対象に投与することを含む方法。
【請求項１５】
前記疾患又は障害は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記障害は、肝線維症である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを前記対象に投与することを含み、前記障害又は疾患は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、及び
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス
から選択される、方法。
【請求項１８】
前記障害は、線維症及び／又は炎症のプロセスを含む障害である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記障害は、肝障害及び腎障害から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記腎障害は、腎線維症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記腎線維症は、急性腎障害の結果として生じる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記腎障害は、慢性腎障害である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記腎障害は、糖尿病性腎症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
加齢性障害又は加齢随伴病の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを前記対象に投与することを含み、前記障害又は疾患は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される、方法。
【請求項２６】
対象における癌を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項２７】
ＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記癌は、腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫及び頚部癌から選択される、請求項２６又は２７に記載の方法。
【請求項２９】
医薬として使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項３０】
ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項３１】
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、及び
−  老化誘発性サイトカインの増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態
から選択される障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項３２】
線維症又は炎症のプロセスを含む障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項３３】
前記障害は、肝障害及び腎障害から選択される、請求項３２に記載の使用のための化合物。
【請求項３４】
前記肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される、請求項３３に記載の使用のための化合物。
【請求項３５】
前記腎障害は、急性腎障害の結果として生じる腎線維症である、請求項３３に記載の使用のための化合物。
【請求項３６】
前記腎障害は、慢性腎障害である、請求項３３に記載の使用のための化合物。
【請求項３７】
前記腎障害は、糖尿病性腎症である、請求項３３に記載の使用のための化合物。
【請求項３８】
サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される加齢性障害又は加齢随伴病の予防又は治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項３９】
癌の予防又は治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項４０】
腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫又は頚部癌の治療において使用するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせ。
【請求項４１】
医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項４２】
ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項４３】
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、及び
−  老化誘発性サイトカインの増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態
から選択される障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項４４】
線維症又は炎症のプロセスを含む障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項４５】
前記障害は、肝障害及び腎障害から選択される、請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記腎障害は、急性腎障害の結果として生じる腎線維症である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４８】
前記腎障害は、慢性腎障害である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４９】
前記腎障害は、糖尿病性腎症である、請求項４５に記載の使用。
【請求項５０】
サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される加齢性障害又は加齢随伴病の予防又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項５１】
癌の予防又は治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【請求項５２】
腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫又は頚部癌の治療のための医薬の製造のための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物、又は請求項１１に記載の医薬の組み合わせの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１７年９月２６日に提出された米国特許出願第６２／５６３，３１２号明細書からの優先権を主張し、その全体が参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、３２−デオキソ−ラパマイシン誘導体を提供し、且つそれらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
哺乳動物細胞において、ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）キナーゼは、ｍＴＯＲＣ１複合体及びｍＴＯＲＣ２複合体と呼ばれる２つの別個の多タンパク質複合体で存在し、両方とも栄養素及びエネルギーの利用可能性を検知し、成長因子及びストレスシグナル伝達からの入力を統合する。ｍＴＯＲＣ１は、成長因子及び栄養素からのシグナルを統合し、細胞成長及び代謝をコントロールする。Ｌａｐｌａｎｔｅ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ．（２０１２）１４９（２）：２７４−９３。ｍＴＯＲＣ１は、タンパク質翻訳及び自食作用の主要制御因子である。ｍＴＯＲＣ１複合体は、ラパマイシン及びラパマイシンアナログ（いわゆる「ラパログ」）などのアロステリックｍＴＯＲ阻害剤に対して感受性である。ラパマイシン及び以前に産生されたラパログの作用様式は、ＦＫ５０６結合タンパク質、ＦＫＢＰ１２、ＦＫＢＰ５１又はＦＫＢＰ５２との細胞内複合体の形成（これらの３つのＦＫＢＰは、本明細書で「ＦＫＢＰ」又は「ＦＫＢＰｓ」として参照されるであろう）、その後に続く、ｍＴＯＲのＦＲＢ（ＦＫ５０６−ラパマイシン結合）ドメインへのＦＫＢＰ−ラパログ複合体の結合を含む。Ｍａｒｚ  Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２０１３）３３（７）：１３５７−１３６７．Ｌａｒｇｅ  ＦＫ５０６−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｈａｐｅ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ。ＴＯＲＣ１とのＦＫＢＰ−ラパログ複合体のそのような相互作用は、複合体によるアロステリック阻害をもたらす。ラパマイシン及びＲＡＤ００１（エベロリムス；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））などのラパログは、ｍＴＯＲＣ１の活性を阻害することにより、臨床的な重要性が増しており、これは、良性及び悪性増殖疾患の両方に関連する。Ｒｏｙｃｅ  Ｍ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ（Ａｕｃｋｌ）．（２０１５）９：７３−７９；Ｐｌｅｎｉｃｅａｎｕ  Ｏ．ｅｔ  ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  Ｒｅｐ．（２０１８）３（１）：１５５−１５９。
【０００４】
ラパマイシンは、ストレプトミセス・ヒゴスコピウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｏｓｃｏｐｉｕｓ）によって産生される既知のマクロライド抗生物質であり、例えばＭｃＡｌｐｉｎｅ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（１９９１）４４：６８８；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．；ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９１）１１３：７４３３；米国特許第３，９２９，９９２号明細書を参照されたい。本明細書において使用されるラパマイシン及びその誘導体についての以下の番号付けの規則を下記に示す。
【化１】
2020535134.tif 000003
【０００５】
ラパマイシンは、強力な免疫抑制薬であり、抗腫瘍活性及び抗真菌活性を有することも示された。ラパマイシンは、全身性エリテマトーデス、肺炎症、インスリン依存性糖尿病、乾癬などの皮膚障害、血管傷害後の平滑筋細胞増殖及び内膜肥厚、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、悪性癌腫、心臓の炎症性疾患、貧血症並びに神経突起伸長の増加を予防又は治療するのに有用であることが示された。しかしながら、医薬としてのその実用性は、その非常に低い変化しやすいバイオアベイラビリティによって制限される。そのうえ、ラパマイシンは、製剤が難しく、安定したガレン組成物を得ることを困難にする。
【０００６】
これらの問題を克服するために、多数のラパログが（半）合成されてきた。水溶性プロドラッグは、Ｃ２８及び４０でラパマイシンを誘導体化し、グリシナート、プロピオナート及びピロリジノブチラートプロドラッグを形成することによって調製された（米国特許第４，６５０，８０３号明細書）。ラパマイシンの他のアナログは、モノアシル及びジアシルアナログ（米国特許第４，３１６，８８５号明細書）、アセタールアナログ（米国特許第５，１５１，４１３号明細書）、シリルエーテル（米国特許第５，１２０，８４２号明細書）、ヒドロキシエステル（米国特許第５，３６２，７１８号明細書）並びにアリール、アルキル、アルケニル及びアルキニルアナログ（米国特許第５，６６５，７７２号明細書；米国特許第５，２５８，３８９号明細書；米国特許第６，３８４，０４６号明細書；国際公開第９７／３５５７５号パンフレット）を含む。ラパマイシンに対する修飾は、メトキシ基の１つ又は複数の脱メチル化、脱離又は置き換え；ヒドロキシ部分の１つ又は複数の脱離、誘導体化又は置き換え；ケトン部分の１つ又は複数の還元、脱離又は誘導体化；５員プロリル環による６員ピペコラート環の置き換え；置換シクロペンチル環によるシクロヘキシル環の代替の置換を含む。この分野における特許文献の実例は、ラパマイシンの免疫抑制性の副作用を回避する目的で様々なラパログを記載する米国特許第５，５２７，９０７号明細書、国際公開第９６／４１８６５号パンフレット及び国際公開第９９／３６５５３号パンフレットである。米国特許第５，９８５，８９０号明細書は、３２−デオキソ−ラパマイシン自体を含む３２デオキソ−ラパマイシンアナログの例を開示する。これらの化合物は、ラパマイシンを上回る改善された薬理的プロファイル及びより優れた安定性を有することが報告されたことが記載されている。
【０００７】
上記の文献において記載されるラパログは、ラパマイシンと同じ障害の治療に有用であることが開示された。米国特許第８，９０６，３７４号明細書及び米国特許第９，６６９，０３２号明細書は、癌における使用を開示する。米国特許第９，３５８，２３６号明細書は、神経変性障害における使用を開示する。
【０００８】
動物モデルにおいて、ラパログは、寿命を延ばし、加齢随伴病の発症を遅延させる。老化は、他の生物学的プロセスと同様に、ＴＯＲ経路（この場合、酵母及び線虫（Ｃ  ｅｌｅｇａｎｓ）系を含むように「ＴＯＲ」と称され、哺乳動物均等物［ｍＴＯＲ］は、単純に「ＴＯＲ」］と呼ばれる）及び哺乳動物ではｍＴＯＲＣ１経路などのシグナル伝達経路によって調節される。ＴＯＲ及びｍＴＯＲＣ１シグナル伝達の調整は、寿命を延長し、ハエから哺乳動物までの幅広い生物において加齢随伴病の発症を遅延させる。例えば、遺伝子突然変異によるＴＯＲ経路の阻害は、酵母、線虫（Ｃ  ｅｌｅｇａｎｓ）及びショウジョウバエにおいて寿命を延ばし、ｍＴＯＲＣ１経路の阻害は、マウスにおいて寿命を延ばした（Ｋａｅｂｅｒｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００５）３１０：１１９３−１１９６；Ｋａｐａｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ（２００４）１４：８８５−８９０；Ｓｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００９）３２６：１４０−１４４；Ｖｅｌｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２００３）４２６：６２０）。加えて、ｍＴＯＲＣ１阻害剤ラパマイシンは、晩年に与えられた場合でも、マウスの寿命を延ばした（Ｈａｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（２００９）４６０（７２５３）：３９２−３９５）。これらのデータは、哺乳動物ＴＯＲ（ｍＴＯＲ）経路を標的にする薬剤がヒトにおける老化及び加齢随伴病において治療効果を有する可能性を高める。例えば、国際公開第２００８／０２２２５６号パンフレットは、加齢随伴病を治療又は予防する方法及びｍＴＯＲ阻害剤を含む局所製剤を記載している。高齢者においてラパマイシンを使用する臨床試験の報告は、Ｍ．Ｌｅｓｌｉｅ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４２によって記載された。Ｊ．Ｍａｎｎｉｃｋらは、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．（２０１４）６（２６８）：２６８ｒａ１７９において、ｍＴＯＲ阻害が老齢者における免疫機能を改善することを記載している。しかしながら、治験責任医師は、それらの副作用（免疫抑制、血球減少、口内炎、胃腸障害及び間質性肺炎を含む）により、ヒトの老化についての治験において現在利用可能なｍＴＯＲ阻害剤を使用することに慎重であった。
【０００９】
限局性皮質形成異常（ＦＣＤ）及び結節性硬化症（ＴＳＣ）の動物及びヒトの研究では、ｍＴＯＲ経路は、皮質奇形の形成及びてんかんの発現を引き起こす細胞の変化及び分子的変化の媒介に関係している（Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（２０１３）２４４：２２−２６）。限局性皮質形成異常（ＦＣＤ）は、皮質の発生についての形成異常であり、これは、小児集団における難治性てんかんの最もよくある原因であり、成人における医学的に治りにくい発作の第２／第３番目によくある病因である（Ｋａｂａｔ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｏｌ  Ｊ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ（２０１２）７７（２）３５−４３）。結節性硬化症遺伝子１（ＴＳＣ１）及び結節性硬化症遺伝子２（ＴＳＣ２）を含む、結節性硬化症（ＴＳＣ）における突然変異は、ｍＴＯＲ経路の上流で作用し、良性腫瘍の広範囲の発生、精神遅滞及び発生率の高いてんかんを引き起こす（Ｍａｎｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ−２  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｔｕｂｅｒｉｎ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ／ａｋｔ  ｐａｔｈｗａｙ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，（２００２）１０：１５１−１６２；Ｉｎｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＳＣ−ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ，（２００５），３７：１９−２４；及びＨｏｌｍｅｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｆｓｔｒｏｍ，Ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｄ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ：ｒｅｃｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ，（２００７）４８：６１７−６３０）。
【００１０】
異常なｍＴＯＲ活性化は、正常な脳の発生に干渉し、てんかんを引き起こす。ｍＴＯＲＣ１経路を阻害するラパマイシンによる治療は、構造的異常を弱め、ＴＳＣ及びＰＴＥＮマウスモデルにおける発作を低下させることが示されている（Ｅｈｎｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎ  ａ  Ｔｓｃ２＋／−  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，（２００８），８４３−８４８；Ｍｅｉｋｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ａ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｔｏ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｍＴＯＲＣ１  ａｎｄ  Ａｋｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｌｅａｄ  ｔｏ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．，（２００８）２８：５４２２−５４３２；Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｃｏｍｐｌｅｘ；Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，（２００８）６３：４４４−４５３；Ｌｊｕｎｇｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｓｅｉｚｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ；（２００９）ｐｐ．３８９−３９８；及びＺｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍＴＯＲＣ１  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ａｎａｔｏｍｉｃａｌ，ｃｅｌｌｕｌａｒ，ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｐｔｅｎ  ｋｎｏｃｋ−ｏｕｔ  ｍｉｃｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，（２００９），２９：１７７３−１７８３）。さらに、神経傷害前の又はその直後のｍＴＯＲ経路の薬理学的阻害は、後天性てんかんモデルにおいて、動物の脳における病理学的な変化及び特発性の反復性発作の発生を予防することができる（Ｚｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｅｐｉｌｅｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｌｏｂｅ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ；Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，（２００９）ｐｐ．６９６４−６９７２）。そのため、ラパマイシン及びラパログもそのような徴候において潜在的価値があると考えられる。
【００１１】
ミトコンドリアミオパシー（ＭＭ）は、成人発症ミトコンドリア病の最もよくある症状発現であり、多面的な組織特異的ストレス応答を示す：（１）代謝性サイトカインＦＧＦ２１及びＧＤＦ１５を含む転写応答、（２）一炭素代謝のリモデリング、及び（３）ミトコンドリアストレス応答。Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２６，４１９−４２８，Ａｕｇｕｓｔ  １，２０１７では、これらのプロセスは、１つの統合的ミトコンドリアストレス応答（ＩＳＲｍｔ）の一部であり、これは、骨格筋におけるｍＴＯＲＣ１によってコントロールされるとＫｈａｎらによって記載されている。ｍｔＤＮＡ複製欠損は、ｍＴＯＲＣ１を活性化し、これは、ＡＴＦ４活性化を通して統合的ミトコンドリアストレス応答を促進し、新規のヌクレオチド及びセリンの合成、１Ｃサイクル並びにＦＧＦ２１及びＧＤＦ１５の産生を誘発する。ラパマイシンによるｍＴＯＲＣ１阻害は、ＩＳＲｍｔ（統合的ミトコンドリアストレス応答）の構成要素をすべてダウンレギュレートし、ＭＭの特質をすべて改善し、末期のＭＭの進行さえも逆転させ、ミトコンドリア新生の誘発を伴わなかった。そのため、ラパマイシン及びラパログもそのような徴候において潜在的価値があると考えられる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
好適な薬剤候補となる新たなｍＴＯＲ阻害剤を提供する必要性が残っている。特に、好ましい化合物は、少なくともｍＴＯＲＣ１阻害能力を有し、胃腸管からよく吸収され、代謝的に十分に安定しており、且つ好都合な薬物動態学的特性を有するべきである。さらに、理想的な薬剤候補は、安定しており、非吸湿性であり、製剤に適切である物理的形態で存在することができるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
構造式（Ｉ）の化合物は、ｍＴＯＲＣ１阻害剤であり、そのため、可能性として、広範囲の障害、特に加齢性障害又はラパログを使用する治療について現在承認されている疾患及び障害の治療に有用である。Ｃ３２のケトンの完全な還元及び環状アミン、アミド又はスルタムなどの環状Ｎ含有脂肪族環系によるＣ１６メトキシ基の置き換えは、前述の所望の利点を有し、好適な効力、安定性及びバイオアベイラビリティの均衡を見せる化合物を提供する。
【００１４】
一態様では、本開示は、構造式（Ｉ）：
【化２】
2020535134.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化３】
2020535134.tif 000005
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化４】
2020535134.tif 000006
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１５】
一実施形態では、本開示は、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容されるキャリヤとを含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
一実施形態では、本開示は、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の治療上活性な作用物質とを含む医薬の組み合わせを提供する。
【００１７】
別の態様では、本開示は、ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物又はその医薬組成物若しくは医薬の組み合わせを対象に投与することを含む方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象における疾患又は障害を治療する方法であって、疾患又は障害の病態に関連する標的組織又は器官は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有し、方法は、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物若しくは医薬の組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１８】
一実施形態では、構造式（Ｉ）の化合物で治療される疾患又は障害の病態に関連する標的組織又は器官は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有し、例えばＦＫＢＰ１２特異的阻害剤を使用し、ラパマイシン又はＲＡＤ００１と比較して経験的に決定される。
【００１９】
別の態様では、本開示は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有するか又はそれを有するとしてあらかじめ決定された対象における疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物若しくはその医薬の組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
一実施形態では、対象は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分な標的組織、器官又は細胞におけるＦＫＢＰ１２レベルを有するか又はそれを有することがあらかじめ決定される。
【００２１】
別の態様では、本開示は、加齢随伴病又は加齢性障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物若しくは組み合わせを対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
一実施形態では、疾患又は障害は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害（例えば、虚弱）、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される。
【００２３】
別の態様では、本開示は、疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物若しくは医薬の組み合わせを対象に投与することを含み、障害又は疾患は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、及び
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス
から選択される、方法を提供する。
【００２４】
別の態様では、本開示は、癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の構造式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又はその医薬組成物若しくは医薬の組み合わせを対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
一実施形態では、方法は、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤をさらに含む。
【００２６】
一実施形態では、癌は、腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫及び頚部癌から選択される。
【００２７】
一実施形態では、障害は、線維症及び／又は炎症のプロセスを含む肝障害、例えば最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症である。
【００２８】
一実施形態では、障害は、腎臓における線維症又は炎症のプロセスを含む腎障害、例えば慢性腎疾患を引き起こす急性腎障害及び糖尿病性腎症の結果として生じる腎線維症である。
【００２９】
一実施形態では、障害は、心機能障害、例えば心筋梗塞又は心肥大である。一実施形態では、心機能障害は、収縮及び／又は拡張機能障害である。一実施形態では、心機能障害は、高血圧症である。一実施形態では、心機能障害は、駆出率の減退をもたらす。
【００３０】
一実施形態では、障害は、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化である。
【００３１】
一実施形態では、障害は、免疫療法によって治療される腫瘍及びラパマイシン又はエベロリムス若しくは別のラパログのいずれかによって以前に治療された腫瘍を含む癌である。一実施形態では、癌は、Ｔｓｃ１遺伝子において突然変異があるか、又は腫瘍微小環境がラパログによって適切に治療される状況を含む、ｍＴＯＲ経路が活性化されていることが示される腫瘍を含む。
【００３２】
本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、本明細書において記載される。本開示の他の特徴、目的及び利点は、図、詳細な説明、実施例及び請求項から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１−１】図１：図１Ａは、ＦＫＢＰ１２との実施例１の共結晶構造の画像である。Ｃ１６の絶対配置は、（Ｓ）である。図１Ｂは、ＦＫＢＰ１２タンパク質を除いた実施例１の構造を示す。
【図１−２】（上記の通り。）
【図２−１】図２：図２Ａは、ＦＫＢＰ１２との実施例２の共結晶構造の画像である。Ｃ１６の絶対配置は、（Ｒ）である。図２Ｂは、ＦＫＢＰ１２タンパク質を除いた実施例２の構造を示す。
【図２−２】（上記の通り。）
【図３】図３は、３ｍｇ／ｋｇの１回のｐ．ｏ．用量後のラットにおける実施例２の薬物動態プロファイルを示す線グラフである。Ｙ軸  −  実施例２の血中濃度（ｎＭ）。Ｘ軸  −  実施例２の投与後の血液採取の時間（ｈ）。データは、３匹のラット由来の平均±標準偏差である。
【図４−１】図４：図４Ａは、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物のいずれかの１回の用量を経口的に与えたラットにおけるＲＡＤ００１（白抜きのバー）及び実施例２（塗りつぶしたバー）の相対的な血中濃度を示す棒グラフである。化合物濃度は、投薬の３及び２４時間（ｈ）後に測定した。データは、それぞれの群における５〜６匹のラット由来の平均±標準偏差である。化合物が定量下限値未満であったラットは、データ解析から除外した。これは、ＲＡＤ００１治療群に適用される。アスタリスク（＊）は、それぞれのＲＡＤ００１治療群及び実施例２治療群間の有意差を示す。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｔ検定。ＢＱＬ  −  定量下限値未満。Ｙ軸  −  血液中の化合物濃度（ｎＭ）。Ｘ軸  −  経口投薬後の時間（３及び２４時間）並びに経口的に与えた用量（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）。図４Ｂは、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの化合物のいずれかを１回の用量として経口的に与えたラットにおけるＲＡＤ００１（白抜きのバー）及び実施例２（塗りつぶしたバー）の相対的な脳内濃度を示す棒グラフである。化合物濃度は、投薬の３及び２４時間（ｈ）後に測定した。データは、平均±標準偏差である。５〜６匹のラットを各群において使用した。化合物が定量下限値未満であったラットは、データ解析から除外した。これは、ＲＡＤ００１治療群に適用される。アスタリスク（＊）は、それぞれのＲＡＤ００１治療群及び実施例２治療群間の有意差を示す。＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｔ検定。ＢＱＬ  −  定量下限値未満。Ｙ軸  −  脳中の化合物濃度（ｎＭ）。Ｘ軸  −  投薬後の時間（３及び２４時間）並びに経口的に与えた用量（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）。図４Ｃは、静脈内（ｉ．ｖ．）及び経口（ｐ．ｏ．）投薬後のラットにおける実施例２の血中濃度を示す。Ｙ軸  −  実施例２の血中濃度（ｎＭ）。Ｘ軸  −  実施例２の投与後の血液採取の時間（ｈ）。データは、３匹のラット由来の平均±標準偏差である。図４Ｄは、静脈内（ｉ．ｖ．）及び経口（ｐ．ｏ）投薬後のラットにおけるＲＡＤ００１の血中濃度を示す。Ｙ軸  −  ＲＡＤ００１の血中濃度（ｎＭ）。Ｘ軸  −  ＲＡＤ００１の投与後の血液採取の時間（ｈ）。データは、３匹のラット由来の平均±標準偏差である。
【図４−２】（上記の通り。）
【図４−３】（上記の通り。）
【図４−４】（上記の通り。）
【図５−１】図５：図５Ａ〜５Ｄは、実施例２がラット肝臓におけるｍＴＯＲＣ１経路を阻害することを示す。ラットに３、又は１０、又は３０ｍｇ／ｋｇの実施例２の１回の経口用量を与え、肝臓サンプルを投薬の３時間（ｈ）及び２４ｈ後に収集した。ビヒクル（Ｖｅｈ）により治療したラットは、コントロールとして使用した。（５Ａ）及び（５Ｃ）は、ビヒクル又は３、若しくは１０、若しくは３０ｍｇ／ｋｇの実施例２で治療し、治療の３ｈ（５Ａ）及び２４ｈ（５Ｃ）後に解析したラット肝臓におけるリン酸化（ｐ−）及び全（ｔ−）Ｓ６タンパク質の免疫ブロット像を示す。（５Ｂ）及び（５Ｄ）におけるヒストグラムは、治療の３ｈ（５Ｂ）及び２４ｈ（５Ｄ）後のｐ−Ｓ６対ｔ−Ｓ６の濃度計による定量化を示す。ヒストグラム（５Ｂ及び５Ｄ）において、ｐ−Ｓ６／ｔ−Ｓ６比を示す平均の任意の値を各バーの上に示す。Ｘ軸は、経口的に与えた用量（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）を表す。Ｙ軸は、任意の単位を表す。６匹のラットを各実験群において使用した。データは、平均±標準偏差である。データは、一元配置ＡＮＯＶＡで解析し、その後、ダネットの多重比較検定を続け、すべての群由来の平均をビヒクル治療群と比較した。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．００１、ｎｓ  −  有意でない。
【図５−２】（上記の通り。）
【図５−３】（上記の通り。）
【図５−４】（上記の通り。）
【図６−１】図６：図６Ａ〜６Ｃは、ＲＡＤ００１（点線）及び実施例２（実線）による治療後の野生型（６Ａ）、ＦＫＢＰ１２ノックダウン（６Ｂ）及びＦＫＢＰ１２ノックアウト（６Ｃ）２９３Ｔ細胞におけるＳ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）の阻害を示す。細胞は、３回同じ方法で治療した。Ｙ軸は、培地とＤＭＳＯで治療した細胞のＳ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）レベルと比べた阻害パーセントを表す。Ｘ軸は、ＲＡＤ００１及び実施例２についての濃度を表す。
【図６−２】（上記の通り。）
【図６−３】（上記の通り。）
【発明を実施するための形態】
【００３４】
第１の態様では、本開示は、式（Ｉ）
【化５】
2020535134.tif 000007
（式中、
Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化６】
2020535134.tif 000008
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化７】
2020535134.tif 000009
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する、。
【００３５】
一実施形態では、本開示は、式（Ｉ）
【化８】
2020535134.tif 000010
（式中、
Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化９】
2020535134.tif 000011
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化１０】
2020535134.tif 000012
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である）
の化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３６】
定義
他に指定のない限り、用語「本開示の化合物」は、式（Ｉ）の化合物及び例示される化合物及びその塩、並びにすべての立体異性体（ジアステレオ異性体及び鏡像異性体を含む）、回転異性体、互変異性体及び同位体標識化合物（重水素置換を含む）並びに固有に形成される部分を指す。
【００３７】
本明細書において使用されるように、
【化１１】
2020535134.tif 000013
は、ベースとなる分子への可変的な結合の部分を表し、（Ｒ）−及び（Ｓ）−立体配置の両方を含む。例えば、Ｒ２が、
【化１２】
2020535134.tif 000014
である場合、
【化１３】
2020535134.tif 000015
は、Ｃ１６へのＲ２の結合の部分を表し、（Ｒ）−及び（Ｓ）−立体配置の両方を含む。
【００３８】
本明細書において使用されるように、用語「Ｃ１〜６アルキル」は、専ら炭素及び水素原子からなり、不飽和を含有せず、１〜６個の炭素原子を有し、単結合によって残りの分子に付く直鎖又は分岐炭化水素鎖ラジカルを指す。用語「Ｃ１〜４アルキル」は、これに準じて解釈されたい。Ｃ１〜６アルキルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル及び１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）を含むが、これらに限定されない。
【００３９】
本明細書において使用されるように、用語「ヒドロキシＣ１〜６アルキル」は、１つ以上の−ＯＨ基により置換されたアルキル基を指す。ヒドロキシＣ１〜６アルキル基の例は、ＨＯ−ＣＨ２−、ＨＯ−ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−を含む。
【００４０】
本明細書において使用されるように、用語「Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル」は、専ら炭素及び水素原子からなり、３〜８個の炭素原子を有し、単結合によって又は上記に定義されるＣ１〜６アルキルラジカルによって残りの分子に付く安定した単環式飽和炭化水素ラジカルを指す。Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキルの例は、シクロプロピル、シクロプロピル−メチル、シクロブチル、シクロブチル−エチル、シクロペンチル、シクロペンチル−プロピル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルを含むが、これらに限定されない。
【００４１】
本明細書において使用されるように、用語「フェニルＣ０〜６アルキル」は、単結合又は上記に定義されるＣ１〜６アルキルラジカルによって残りの分子に付くフェニル環を指す。フェニルＣ０〜６アルキルの例は、フェニル及びベンジルを含むが、これらに限定されない。
【００４２】
本明細書において使用されるように、「ヒドロキシ」又は「ヒドロキシル」は、−ＯＨを指す。
【００４３】
本開示の様々な（列挙される）実施形態は、本明細書において記載される。各実施形態において特定される特徴は、本開示のさらなる実施形態を提供するために他の特定の特徴と組み合わされ得ることが認識されるであろう。
【００４４】
実施形態１．上記に記載される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００４５】
実施形態２．Ｒ１は、ヒドロキシである、実施形態１による化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００４６】
実施形態３．Ｒ２は、
【化１４】
2020535134.tif 000016
、特に
【化１５】
2020535134.tif 000017
から選択され、ここで、ｍ、ｎ、Ｘ及びＲ３は、上記に定義される通りである、実施形態１若しくは２による化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００４７】
実施形態４．Ｒ２は、
【化１６】
2020535134.tif 000018
であり、及びｎは、１、２又は３である、実施形態１〜３のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。一実施形態では、Ｒ２は、
【化１７】
2020535134.tif 000019
である。
【００４８】
実施形態５．Ｒ２は、
【化１８】
2020535134.tif 000020
である、実施形態１〜４のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００４９】
実施形態６．Ｒ２は、
【化１９】
2020535134.tif 000021
である、実施形態１〜４のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５０】
実施形態７．Ｒ２は、
【化２０】
2020535134.tif 000022
である、実施形態１〜４のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。一実施形態では、Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル又はヒドロキシＣ１〜６アルキルである。
【００５１】
実施形態８．式（Ｉ）−Ａ：
【化２１】
2020535134.tif 000023
（式中、Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化２２】
2020535134.tif 000024
からなる群から選択される）
の、実施形態１〜５のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。一実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルである。一実施形態では、Ｒ２は、式（Ｉ）において定義される通りである。一実施形態では、Ｃ１６位は、（Ｒ）立体配置を有する。一実施形態では、Ｃ１６位は、（Ｓ）立体配置を有する。
【００５２】
実施形態９．Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（化合物１）：
【化２３】
2020535134.tif 000025
である、実施形態１〜８のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５３】
実施形態１０．Ｃ１６で単一のジアステレオ異性体として存在する、実施形態１〜９のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。一実施形態では、Ｃ１６位は、（Ｒ）立体配置を有する。一実施形態では、Ｃ１６位は、（Ｓ）立体配置を有する。
【００５４】
実施形態１１．Ｃ１６でジアステレオマーの混合物として存在する、実施形態１〜９のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５５】
実施形態１２．式（Ｉ）−Ｂ
【化２４】
2020535134.tif 000026
（式中、Ｒ１及びＲ２は、式（Ｉ）について定義される通りである）
の、実施形態１〜１０のいずれか１つによる化合物又はその薬学的に許容される塩。一実施形態では、Ｒ２は、
【化２５】
2020535134.tif 000027
である。
【００５６】
実施形態１３．（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）：
【化２６】
2020535134.tif 000028
である、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５７】
実施形態１４．（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）：
【化２７】
2020535134.tif 000029
である、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５８】
実施形態１５：以下から選択される、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【００５９】
【表１】
2020535134.tif 000030
【００６０】
【表２】
2020535134.tif 000031
【００６１】
【表３】
2020535134.tif 000032
【００６２】
【表４】
2020535134.tif 000033
【００６３】
【表５】
2020535134.tif 000034
【００６４】
特定の官能基及び化学用語の定義を下記により詳細に記載する。化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＣＡＳ  ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  Ｅｄ．、表紙裏に従って確認でき、特定の官能基は、そこに記載されるようにおおまかに定義される。そのうえ、有機化学の一般的な原理並びに特定の官能部分及び反応性は、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；及びＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７において記載されている。
【００６５】
出発物質及び手順の選択に依存して、本開示の化合物は、考え得る立体異性体の１つの形態において、又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂによって固定されない、立体中心についてのその混合物として、例えば純粋な光学異性体として又は不斉炭素原子の数に依存してラセミ体及びジアステレオ異性体混合物などの立体異性体混合物として存在することができる。本開示は、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物及び光学的に純粋な形態を含む、そのような考え得る立体異性体をすべて含むことが意図される。光学活性（Ｒ）−及び（Ｓ）−立体異性体は、キラルシントン若しくはキラル試薬を使用して調製され得るか又は従来の技術を使用して分割され得る。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ配置又はＺ配置であり得る。化合物が二置換型シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基は、ｃｉｓ配置又はｔｒａｎｓ配置を有し得る。すべての互変異性型も含まれることが意図される。
【００６６】
用語「互変異性体」は、特定の化合物構造の交換可能な形態であり、水素原子及び電子の移動で変化する化合物を指す。したがって、２つの構造は、π電子及び原子（一般にＨ）の移動を通して平衡状態であり得る。例えば、エノール及びケトンは、酸又は塩基のいずれかによる処理によって速やかに相互変換されるため、互変異性体である。互変異性の別の例は、同様に酸又は塩基による処理によって形成されるフェニルニトロメタンのａｃｉ−及びニトロ−形態である。互変異性型は、関心のある化合物の最適な化学反応性及び生物学的活性の実現に関係があり得る。
【００６７】
本明細書において使用されるように、用語「塩」は、本開示の化合物の酸付加塩又は塩基付加塩を指す。「塩」は、特に「医薬として許容される塩」を含む。用語「薬学的に許容される塩」は、本開示の化合物の生物学的な有効性及び特性を保持し、通常、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない塩を指す。多くの場合、本開示の化合物は、アミノ基及び／若しくはカルボキシル基又はそれに類似する基の存在により、酸及び／又は塩基の塩を形成することができる。薬学的に許容される塩は、当技術分野においてよく知られている。例えば、Ｂｅｒｇｅらは、参照によって本明細書に援用されるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１−１９において薬学的に許容される塩を詳細に記載している。
【００６８】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸及び有機酸により形成することができる。
【００６９】
塩を誘導することができる無機酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸及び同種のものを含む。
【００７０】
塩を誘導することができる有機酸は、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸及び同種のものを含む。
【００７１】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機及び有機塩基により形成することができる。
【００７２】
塩を誘導することができる無機塩基は、例えば、アンモニウム塩及び周期表のＩ〜ＸＩＩ列の金属を含む。ある実施形態では、塩は、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銀、亜鉛及び銅から誘導され、特に適した塩は、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム及びマグネシウム塩を含む。
【００７３】
塩を誘導することができる有機塩基は、例えば、第１級、第２級及び第３級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、塩基性イオン交換樹脂並びに同種のものを含む。特定の有機アミンには、イソプロピルアミン、ベンザチン、コリネート、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、リシン、メグルミン、ピペラジン及びトロメタミンが含まれる。
【００７４】
別の態様では、本開示は、酢酸塩、アスコビル酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、臭化物塩／臭化水素酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、カンファースルホン酸塩、カプリン酸塩、塩化物塩／塩酸塩、クロルテオフィロネート（ｃｈｌｏｒｔｈｅｏｐｈｙｌｌｏｎａｔｅ）、クエン酸塩、エタンジスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、グルタル酸塩、グリコール酸塩、馬尿酸塩、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナフトエ酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オクタデカン酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／水素リン酸塩／二水素リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、プロピオン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、スルホサリチル酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩又はキシナホ酸塩の形態の化合物を提供する。
【００７５】
本明細書において示される任意の式は、化合物の非標識形態及び同位体標識形態を表すようにも意図される。同位体標識化合物は、１つ又は複数の原子が、選択された原子質量又は質量数を有する原子と交換される点を除いて、本明細書において示される式によって表される構造を有する。本開示の化合物中に組み込むことができる同位体は、例えば、水素の同位体を含む。
【００７６】
さらに、ある同位体、特に重水素（すなわち２Ｈ又はＤ）の組み込みは、より優れた代謝的安定性、例えばインビボにおける半減期の増加又は必要投薬量の低下又は治療指数若しくは忍容性における改善に起因する、ある治療上の利点をもたらし得る。これに関連して、重水素は、本開示の化合物の置換基と見なされることが理解される。重水素の濃度は、同位体濃縮係数によって定められ得る。本明細書において使用される用語「同位体濃縮係数」は、特定の同位体についての同位体存在度及び天然存在度間の比を意味する。本開示の化合物における置換基が重水素であると示される場合、そのような化合物は、少なくとも３５００（各指定された重水素で５２．５％の重水素の組み込み）、少なくとも４０００（６０％の重水素の組み込み）、少なくとも４５００（６７．５％の重水素の組み込み）、少なくとも５０００（７５％の重水素の組み込み）、少なくとも５５００（８２．５％の重水素の組み込み）、少なくとも６０００（９０％の重水素の組み込み）、少なくとも６３３３．３（９５％の重水素の組み込み）、少なくとも６４６６．７（９７％の重水素の組み込み）、少なくとも６６００（９９％の重水素の組み込み）又は少なくとも６６３３．３（９９．５％の重水素の組み込み）のそれぞれの指定された重水素についての同位体濃縮係数を有する。用語「同位体濃縮係数」は、重水素について記載されるのと同様に任意の同位体に適用することができることが理解されるべきである。
【００７７】
本開示の化合物中に組み込むことができる同位体の他の例は、それぞれ３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ  ３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体を含む。したがって、本開示は、例えば、３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位体を含む１つ以上のいずれかの前述の同位体を組み込む化合物又は２Ｈ及び１３Ｃなどの非放射性同位体が存在する化合物を含むことが理解されるべきである。そのような同位体標識化合物は、代謝の研究（１４Ｃにより）、反応速度の研究（例えば、２Ｈ若しくは３Ｈにより）、薬剤若しくは基質組織分布アッセイを含む、ポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）若しくは単光子射出コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）などの検出技術若しくは画像処理技術又は患者の放射線治療において有用である。特に、１８Ｆ又は標識化合物は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴ研究に特に望ましいことがあり得る。本開示の同位体標識化合物は、全般的に、当業者に知られている従来の技術により、又は以前に用いられた標識されていない試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用する、本明細書に示される実施例及び調製において記載されるものと類似したプロセスにより調製することができる。
【００７８】
本明細書において使用されるように、用語「医薬組成物」は、経口又は非経口投与に適した形態における、少なくとも１つの薬学的に許容されるキャリヤを含む本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩を指す。
【００７９】
本明細書において使用されるように、用語「薬学的に許容されるキャリヤ」は、医薬組成物の調製又は使用に有用な物質を指し、例えば当業者に知られているであろう適した希釈剤、溶媒、分散媒、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、等張剤、緩衝剤、乳化剤、吸収遅延剤、塩、薬剤安定剤、バインダー、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、湿潤剤、甘味料、調味料、色素及びその組み合わせを含む（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１３，ｐｐ．１０４９−１０７０を参照されたい）。
【００８０】
本開示の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的若しくは医学的応答、例えば酵素若しくはタンパク質の活性の低下若しくは阻害を誘起するか又は症状を寛解させるか、状態を軽減するか、疾患進行を遅らせるか若しくは遅延させるか、又は疾患を予防するであろうなどの本開示の化合物の量を指す。一実施形態では、用語「治療有効量」は、対象に投与された場合、（１）（ｉ）ｍＴＯＲ経路によって媒介されるか、又は（ｉｉ）ｍＴＯＲ活性に関連するか、又は（ｉｉｉ）ｍＴＯＲの活性（正常な若しくは異常な）によって特徴付けられる状態又は障害若しくは疾患を少なくとも部分的に軽減し、予防し且つ／又は寛解させるか、又は（２）ｍＴＯＲの活性を低下させるか若しくは阻害するか、又は（３）ｍＴＯＲの発現を低下させるか若しくは阻害するのに有効である本開示の化合物の量を指す。一実施形態では、用語「治療有効量」は、細胞又は組織又は非細胞性生体物質又は培地に投与された場合、ｍＴＯＲの活性を少なくとも部分的に低下させるか若しくは阻害するか、又はｍＴＯＲの発現を少なくとも部分的に低下させるか若しくは阻害するのに有効である本開示の化合物の量を指す。
【００８１】
本明細書において使用されるように、用語「対象」は、霊長動物（例えば、ヒト、男性又は女性）、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ブタ、ラット及びマウスを指す。ある実施形態では、対象は、霊長動物である。他の実施形態では、対象は、ヒトである。
【００８２】
本明細書において使用される用語「投与する」、「投与すること」又は「投与」は、本発明の化合物又はその医薬組成物を移植するか、吸収するか、摂取するか、注射するか、吸入するか又はそうでなければ導入することを指す。
【００８３】
本明細書において使用されるように、用語「阻害する」、「阻害」又は「阻害すること」は、所定の状態、症状若しくは障害又は疾患の低下又は抑制又は生物学的活性若しくはプロセスについてのベースラインの活性の有意な減少を指す。
【００８４】
本明細書において使用されるように、任意の疾患又は障害についての用語「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、疾患若しくは障害を軽減すること、その発症を遅延させること、寛解させること（すなわち疾患若しくはその臨床症状の少なくとも１つの発生を遅らせること若しくは抑えること）、又は患者に識別可能でないことがあり得るものを含めて、疾患若しくは障害に関連する少なくとも１つの身体的パラメーター若しくはバイオマーカーを軽減すること若しくは寛解させることを指す。いくつかの実施形態では、「治療」、「治療する」及び「治療すること」は、疾患、障害又は状態の兆候又は症状が発生したか又は観察されたことを必要とする。他の実施形態では、治療は、疾患又は状態の兆候又は症状がない状態で投与され得る。例えば、治療は、症状の発症前に、かかりやすい個人に投与され得る（例えば、症状の病歴に照らして及び／又は遺伝的若しくは他の罹病性の要因に照らして）。治療は、例えば、再発を遅延させるか又は予防するために、症状が回復した後にさらに継続され得る。
【００８５】
本明細書において使用されるように、任意の疾患又は障害についての用語「予防する」、「予防すること」又は「予防」は、疾患若しくは障害の予防的治療又は疾患若しくは障害の発症若しくは進行を遅延させることを指す。
【００８６】
本明細書において使用されるように、「加齢随伴病又は加齢性障害」は、集団における発生率又は個人における重症度が年齢の進行と相関する任意の疾患又は障害を指す。より詳細には、加齢随伴病又は加齢性障害は、発生率が、２５〜３５歳のヒト個人と比べて、６５歳を超えるヒト個人間で少なくとも１．５倍高い疾患又は障害である。加齢性障害の例は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害（例えば、虚弱）、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病を含むが、これらに限定されない。
【００８７】
本明細書において使用されるように、対象は、そのような対象がそのような治療から生物学的に、医学的に又は生活の質において利益を得る場合、治療を「必要としている」。
【００８８】
本明細書において記載されるすべての方法は、本明細書において別段の指示がない限り又は文脈と明らかに矛盾するものでない限り、任意の適した順序で実行することができる。本明細書において提供される任意の及びすべての例又は例示的な表現（例えば、「など」）の使用は、単に本開示をより明らかにすることを意図しており、別段の主張がない限り、本開示の範囲に対する限定を生じさせるものではない。
【００８９】
本開示の化合物の任意の不斉原子（例えば、炭素又は同種のもの）は、ラセミ体の又は鏡像異性的に豊富な、例えば（Ｒ）−、（Ｓ）−又は（Ｒ，Ｓ）−配置で存在することができる。ある実施形態では、各不斉原子は、（Ｒ）−又は（Ｓ）−配置において、少なくとも５０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも６０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも７０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも８０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９５％の鏡像異性体過剰率又は少なくとも９９％の鏡像異性体過剰率を有する。不飽和二重結合を有する原子の置換基は、可能な場合、ｃｉｓ−（Ｚ）−又はｔｒａｎｓ−（Ｅ）−形態で存在し得る。
【００９０】
したがって、本明細書において使用されるように、本開示の化合物は、考え得る立体異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体又はその混合物の１つの形態をとることができる、例えば実質的に純粋な幾何学的（ｃｉｓ若しくはｔｒａｎｓ）立体異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ体又はその混合物として存在することができる。
【００９１】
立体異性体の任意の結果として生じる混合物は、構成要素の物理化学的な差に基づいて、純粋な又は実質的に純粋な幾何学的又は光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体に、例えばクロマトグラフィー及び／又は分別晶出によって分離することができる。
【００９２】
本開示の化合物の又は中間体の任意の結果として生じるラセミ体は、既知の方法により、例えば光学活性な酸又は塩基により得られるそのジアステレオマー塩の分離及び光学活性酸性又は塩基性化合物の遊離により、光学的対掌体に分割することができる。特に、塩基性部分は、したがって、例えば光学活性な酸、例えば酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸又はショウノウ−１０−スルホン酸により形成される塩の分別晶出により、本開示の化合物をそれらの光学的対掌体に分割するために用いられ得る。本開示のラセミ化合物又はラセミ中間体は、キラルクロマトグラフィー、例えばキラル吸着剤を使用する高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分割することもできる。
【００９３】
式（Ｉ）の化合物を作製する方法
別の態様では、本開示は、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物の産生のためのプロセスを提供する。式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物は、スキーム１、２及び３において記載されるように、以下のプロセスに従って作製することができる。
【化２８】
2020535134.tif 000035
【００９４】
Ｒ２が式（Ｉ）の下で定義される通りである式（Ｉ）の化合物は、Ｃ３２−デオキシラパマイシン（中間体１）を、Ｒ２が式（Ｉ）の下で定義される通りであるＲ２−Ｈと、置換反応に適した試薬、例えばｐ−トルエンスルホン酸の存在下において、適した溶媒、例えばジクロロメタンの存在下で反応させることによって得ることができる。適した条件は、以下の通りである：
１）Ｒ２−Ｈ、ｐ−トルエンスルホン酸−Ｈ２Ｏ、ジクロロメタン、室温
２）Ｒ２−Ｈ、トリフルオロ酢酸、−４０℃、ジクロロメタン（欧州特許第１２１２３３１Ｂ１号明細書を参照されたい）
３）Ｒ２−Ｈ、５Ｍ  ＬｉＣｌＯ４、Ｅｔ２Ｏ（０．１Ｍ）、室温（ＴＬ，１９９５，４３，７８２３を参照されたい）
４）Ｒ２−Ｈ、Ｃｐ２ＨｆＣｌ２−ＡｇＣｌＯ４（鈴木の触媒）、４Ａ  ＭＳ、ジクロロメタン、室温（ＴＬ，１９９５，４３，７８２３を参照されたい）
５）Ｒ２−Ｈ、ＢＦ３−ＯＥｔ２又はＺｎ（ＯＴｆ）２、ＴＨＦ、０℃（ＴＬ，１９９４，３７，６８３５を参照されたい）
６）Ｒ２−Ｈ、ＺｎＣｌ２、ジクロロメタン、０℃（ＪＯＣ，１９９４，５９，６５１２を参照されたい）。
【００９５】
出発物質として使用されるＣ３２−デオキシラパマイシンは、例えば、米国特許出願公開第００５９８５８９０号明細書又は国際公開第２００７０８５４００号パンフレットにおいて記載されるように、当技術分野において知られている方法によって調製することができる。
【化２９】
2020535134.tif 000036
【００９６】
Ｒ１が、
【化３０】
2020535134.tif 000037
から選択され、及びＲ２が式（Ｉ）の下で定義される通りである式（Ｉ）−Ａの化合物は、中間体１をＲ１−Ｈ又はＲ１−Ｘと反応させ、その後、Ｒ２−Ｈと反応させることによって得ることができる。一実施形態では、中間体１は、中間体１−Ａを提供するために、Ｒ１−Ｈ又はＲ１−Ｘとアルキル化、ホスフィン化又はエステル化条件下で反応させる。一実施形態では、中間体１−Ａは、式（Ｉ）−Ａの化合物を得るために、例えば本明細書において提供されるように、置換反応条件下でＲ２−Ｈと反応させる。
【化３１】
2020535134.tif 000038
【００９７】
Ｒ１が、
【化３２】
2020535134.tif 000039
であり、及びＲ２が式（Ｉ）の下で定義される通りである式（Ｉ）−Ｃの化合物は、中間体１をＲ１−Ｈと反応させ、その後、Ｒ２−Ｈと反応させることによって得ることができる。一実施形態では、中間体１は、中間体１−Ａを提供するために、求核条件下で活性化及び反応させる。一実施形態では、中間体１−Ａは、式（Ｉ）−Ｃの化合物を得るために、例えば本明細書において提供されるように、置換反応条件下でＲ２−Ｈと反応させる。
【００９８】
反応は、例えば、実施例において記載されるように、従来の方法に従って達成することができる。
【００９９】
反応混合物の後処理及びそれに伴って得られる化合物の精製は、既知の手順に従って実行され得る。
【０１００】
酸付加塩は、既知の方式において遊離塩基から産生され得、逆も同様である。
【０１０１】
出発物質は、知られているものであり得るか、又は例えば実施例において記載されるように既知の化合物から出発し、従来の手順に従って調製され得る。
【０１０２】
別の態様では、本開示は、本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容されるキャリヤとを含む医薬組成物を提供する。さらなる実施形態では、組成物は、本明細書において記載されるキャリヤなど、少なくとも２つの薬学的に許容されるキャリヤを含む。医薬組成物は、経口投与、非経口投与（例えば、注射、注入、経皮又は局所投与による）及び直腸内投与などの特定の投与ルートのために製剤することができる。局所投与は、吸入又は鼻内適用に関するものでもあり得る。本開示の医薬組成物は、固体形態（限定を伴うことなく、カプセル、錠剤、丸剤、顆粒剤、粉剤若しくは坐剤を含む）又は液体形態（限定を伴うことなく、液剤、懸濁剤若しくはエマルションを含む）で作ることができる。錠剤は、当技術分野において知られている方法に従ってフィルムコーティング又は腸コーティングされ得る。通常、医薬組成物は、
ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及び／又はグリシン；
ｂ）潤滑剤、例えばシリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウム塩若しくはカルシウム塩及び／又はポリエチレングリコール；錠剤について、さらに、
ｃ）バインダー、例えばケイ酸アルミウニムマグネシウム、デンプンのり、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン；必要に応じて、
ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸若しくはそのナトリウム塩又は発泡性混合物；及び
ｅ）吸収剤、着色剤、香味及び甘味剤
の１つ以上と一緒に活性成分を含む錠剤又はゼラチンカプセルである。
【０１０３】
本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩は、薬剤溶出ステント、すなわち本開示の化合物又はその薬学的に許容される塩によりコーティングされたステントの形態でもあり得る。
【０１０４】
遊離形態又は薬学的に許容される塩形態の本開示の化合物は、例えば、次のセクションにおいて提供されるように、インビトロ及びインビボにおける試験において示されるように、有益な薬理学的特性、例えばｍＴＯＲ経路を調整する特性を見せ、そのため、療法に又は研究化学薬品、例えばツール化合物としての使用に望ましい。
【０１０５】
ｍＴＯＲＣ１阻害剤の効力を測定する方法は、当技術分野においてよく知られている。一般に、効力は、ＩＣ５０値によって決定され、ｍＴＯＲＣ１シグナル伝達経路中にあるＳ６のリン酸化の阻害を決定することによって評価される。ｍＴＯＲＣ１阻害剤のＩＣ５０値は、同じアッセイにおけるラパマイシンのＩＣ５０値と比較される。同じアッセイにおけるラパマイシンのＩＣ５０の１００倍以内のＩＣ５０値を有するｍＴＯＲＣ１阻害剤は、本開示における使用に適しており、それほど強力でないラパログは、依然として、特定の状況においてｍＴＯＲＣ１活性の部分的な阻害のみをより容易に実現し、且つ血流中の分子を測定する能力を改善するのに（それほど強力でない分子にはより高い濃度が必要であるため）望ましいことがあり得ることを意味する  −  これは、血中濃度／効能の関係の微調整に役立つであろう。
【０１０６】
ｍＴＯＲ阻害剤の効力を測定するための適したアッセイは、ＭＬＲ（混合リンパ球反応）アッセイ及び／又はＩＬ−６（インターロイキン６）依存性媒介性増殖アッセイにおいてＩＣ５０値によって測定されるように、例えば米国特許第５，６６５，７７２号明細書において記載されている。
【０１０７】
ＭＬＲアッセイは、通常、以下のように実行される：Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、８〜１０週）由来の脾臓細胞（０．５×１０６）をＣＢＡマウス（雌、８〜１０週）由来の０．５×１０６の照射（２０００ｒａｄ）又はマイトマイシンＣ処理脾臓細胞とともに５日間コインキュベートする。照射同種異系細胞は、Ｂａｌｂ／ｃ脾臓細胞の増殖応答を誘発し、これは、ＤＮＡ中への標識前駆体の組み込みによって測定することができる。刺激細胞は、照射されている（又はマイトマイシンＣ処理されている）ため、それらは、増殖に伴ってＢａｌｂ／ｃ細胞に応答することはないが、それらの抗原性を保持している。Ｂａｌｂ／ｃ細胞に対して試験する化合物の抗増殖性の効果を様々な希釈度で測定し、細胞増殖の５０％の阻害（ＩＣ５０）をもたらす濃度を計算する。試験サンプルの阻害能力は、ラパマイシンと比較され得、相対的なＩＣ５０として表現され得る（すなわちＩＣ５０試験サンプル／ＩＣ５０ラパマイシン）。
【０１０８】
ＩＬ−６媒介性増殖アッセイは、通常、以下のように進められる：アッセイは、インターロイキン−６（ＩＬ−６）依存性マウスハイブリドーマ細胞系を使用し、９６ウェルマイクロタイタープレート中で実行する。５０００細胞／ウェルを、１ｎｇ組換えＩＬ−６／ｍｌを補足した無血清培地中で培養する（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｉ．Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ  ａｎｄ  Ｂ．Ｐｅｒｎｉｓ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８１．Ｖｏｌ．ＩＩ，ｐｐ．２６３−２７５においてＭ．Ｈ．Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｒ．Ｔｅｅｓによって記載される通り）。試験サンプルの非存在下又は存在下における６６時間のインキュベーション後、細胞は、さらに６時間、１μＣｉ  （３−Ｈ）−チミジン／ウェルによりパルス標識し、回収し、液体シンチレーションによって数える。ＤＮＡ中への（３−Ｈ）−チミジンの組み込みは、細胞数の増加と相関し、したがって細胞増殖の基準となる。試験サンプルの希釈系列は、細胞増殖の５０％の阻害（ＩＣ５０）をもたらす濃度の計算を可能にする。試験サンプルの阻害能力は、ラパマイシンと比較され得、相対的なＩＣ５０として表現され得る（すなわちＩＣ５０試験サンプル／ＩＣ５０ラパマイシン）。
【０１０９】
ｍＴＯＲ阻害剤の効力は、ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞ベースのアッセイを使用しても決定され得る。ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞は、ｍＴＯＲＣ１シグナル伝達を負に調節する結節性硬化症タンパク質、ＴＳＣ１が欠損しているマウス胚線維芽細胞である。したがって、ＴＳＣ１の欠損は、恒常的なｍＴＯＲＣ１活性化を誘発し、ｍＴＯＲＣ１シグナル伝達経路における下流タンパク質のリン酸化（活性化）をもたらす。この細胞ベースのアッセイは、ラパログ又は他のｍＴＯＲ阻害剤による、ｍＴＯＲＣ１のシグナル伝達の構成要素Ｓ６及び４ＥＢＰ１の阻害（脱リン酸化）を測定するために使用される。
【０１１０】
アッセイは、通常、以下のように実行される：ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞をポリ−Ｄ−リシンコーティング３８４ウェルＧｒｉｅｎｅｒクリアボトムプレート上で平板培養し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートする。翌日、細胞を、「Ｈａｒｄ  ｓｔａｒｖｅ」溶液（１Ｌ  ＤＰＢＳ＋１ｇ  Ｄ−（＋）グルコース＋１０ｍｌの７．５％重炭酸ナトリウム＋２０ｍｌの１Ｍ  ＨＥＰＥＳ）で８回洗浄し、同じ溶液でさらに２時間インキュベートする。細胞は、次に、化合物により、濃度を減少させながら（３．１６倍希釈で８段階）処理し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。細胞を、３０分間、４％パラホルムアルデヒドで固定し、ＴＢＳ−ＥＤＴＡで５回洗浄し、その後、ｐＳ６及びｐ４ＥＢＰ１に対する蛍光タグ標識抗体により免疫染色する。核は、ヘキスト染色により視覚化する。細胞は、それぞれの蛍光チャネルを使用して画像化し、ｍＴＯＲ阻害剤の効力を、ｐＳ６  ＩＣ５０（ｎＭ）によって定義する。
【０１１１】
疾患及び障害
本開示の化合物は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、
−  老化誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ６）の増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態、
−  線維症及び／又は炎症のプロセスを含む障害、例えば肝障害及び腎障害
から選択される徴候又は前駆状態の予防又は治療に有用であり得る。例として、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症が含まれる。別の例は、腎線維症であり、これは、急性腎障害の結果として生じ、慢性腎疾患を引き起こす。さらに、糖尿病性腎症は、腎線維症及び炎症を誘発することがある。多くの場合、腎疾患は、血圧の増加の結果として心不全を引き起こす。これは、心線維症にも関連することがある。ラパログは、心機能不全のモデルを治療する際に初期段階での効能があり、肝臓移植を受けた患者における肝線維症を低下させるのに有効である（Ｂｕｓｓ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｎ  ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．（２００９）５４（２５）：２４３５−４６；Ｂｕｓｓ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ｂｙ  ｍＴＯＲ−ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ：Ｗｈｅｎ  ｓｉｚｅ  ｍａｔｔｅｒｓ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙ．（２０１０）６（２）：３０４−６；Ｖｉｌｌａｍｉｌ，Ｆ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｌｉｖｅｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ  ｖｓ．ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．（２０１４）３４（１０）：１５１３−２１）。
【０１１２】
急性又は慢性器官又は組織移植拒絶の治療は、例えば、心臓、肺、心肺同時、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚又は角膜移植のレシピエントの治療を含む。本開示の化合物は、骨髄移植後などの移植片対宿主病の予防についても示される。
【０１１３】
移植血管症は、アテローム性動脈硬化症を含む。
【０１１４】
自己免疫疾患及び炎症性状態は、特に、関節炎（例えば、関節リウマチ、進行性慢性関節炎及び変形性関節炎）並びにリウマチ性疾患など、自己免疫性の要素を含む病因による炎症性状態を含む。式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物が用いられ得る特定の自己免疫疾患は、自己免疫性血液疾患（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球ろう及び特発性血小板減少性紫斑病を含む）、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブンス−ジョンソン症候群、原因不明のスプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む）、内分泌性眼障害、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型真性糖尿病）、ブドウ膜炎（前部及び後部）、乾性角結膜炎及び春季角結膜炎、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、糸球体腎炎（例えば、特発性ネフローゼ症候群又は微小変化型ネフローゼを含むネフローゼ症候群を伴う及び伴わない）並びに若年性皮膚筋炎を含む。
【０１１５】
多剤耐性（ＭＤＲ）の治療は、多剤耐性癌又は多剤耐性ＡＩＤＳなどの多剤耐性状態の治療及びコントロールにおいて他の化学療法剤の効能を増強することを含む。ＭＤＲは、医薬品がＰｇｐによって細胞から排出されるために、従来の化学療法に対して応答しないであろう癌患者及びＡＤＳ患者において特に問題である。
【０１１６】
感染症は、Ｍｉｐ又はＭｉｐ様因子を有する病原体による感染症を含む。
【０１１７】
加齢随伴病は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害（例えば、虚弱）、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病を含む。
【０１１８】
神経変性疾患は、ハンチントン病、パーキンソン病、脊髄小脳失調３型、アルツハイマー病、運動ニューロン疾患及び末梢性ニューロパシーを含む。
【０１１９】
増殖障害は、癌を含む。そのような状態は、米国特許第９，６６９，０３２号明細書において掲載されるもの、特に腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫又は頚部癌を含む。
【０１２０】
発作及び発作性障害は、ウエスト症候群、限局性皮質形成異常（ＦＣＤ）、結節性硬化症（ＴＳＣ）、小児欠神てんかん、小児期の良性焦点てんかん、若年性ミオクローヌスてんかん（ＪＭＥ）、側頭葉てんかん、前頭葉てんかん、難治性てんかん、レンノックス−ガストー症候群、後頭葉てんかん、プロテウス症候群、片側巨脳症（ＨＭＥＧ）、巨脳症（ＭＥＧ）、毛細血管奇形症候群（ＭＣＡＰ）及び巨脳症−多小脳回症−多指症−水頭症症候群（ＭＰＰＨ）を含む。
【０１２１】
ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレスは、Ｃｈｉｎｎｅｒｙ，Ｐ．Ｆ．（２０１５）；ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７，１５０３−１５１２；Ｋｏｏｐｍａｎ，Ｗ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，（２０１６）；ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８，３１１−３２７及びＹｏｕｎｇ，Ｍ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｙｏｕｎｄ  ａｎｄ  Ｃｏｐｅｌａｎｄ，Ｗ．Ｃ．（２０１６）；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．３８，５２−６２において記載されるミトコンドリア病である。
【０１２２】
加齢随伴病をより将来性のあるものにすることが示された治療可能な状態は、老化、例えば免疫老化を含む。これは、（ｉ）ＩＬ−６などの循環サイトカインの増加によって診断されるが、さらに（ｉｉ）筋肉、腎臓、肝臓、脳、神経細胞、肝臓、膵臓又は心臓において見つけられる老化細胞により、又はさらに（ｉｉｉ）トランスポゾンコード遺伝子を含む反復要素の転写の増加によって示すことができるＤＮＡ修復の効率の減退により診断される。背景については、Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２０１６；５３０（７５８９）：１８４−９．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１６９３２．Ｅｐｕｂ  ２０１６  Ｆｅｂ  ３を参照されたい。
【０１２３】
治療の方法及び使用
本開示は、療法において使用するための本開示の化合物の使用を提供する。さらなる実施形態では、療法は、ｍＴＯＲ経路の調整によって治療され得る疾患又は障害又は併存症から選択される。一実施形態では、疾患は、前述のリストから選択され、一実施形態では老齢者における気道感染症に関係する病的状態などの加齢随伴病である。
【０１２４】
本開示は、療法において使用するための本開示の化合物を提供する。さらなる実施形態では、療法は、ｍＴＯＲ経路の調整によって治療され得る疾患から選択される。一実施形態では、疾患は、前述のリストから選択され、一実施形態では老齢者における気道感染症に関係する病的状態などの加齢随伴病である。
【０１２５】
本開示は、医薬の製造のための本開示の化合物の使用を提供する。さらなる実施形態では、医薬は、ｍＴＯＲ経路の調整によって治療され得る疾患の予防又は治療のためのものである。一実施形態では、疾患は、前述のリストから選択され、一実施形態では老齢者における気道感染症に関係する病的状態などの加齢随伴病である。
【０１２６】
一態様では、本開示は、ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１２７】
一態様では、本開示は、対象における疾患又は障害を治療する方法であって、疾患又は障害の病態に関連する標的組織又は器官は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有し、方法は、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。
【０１２８】
一態様では、本開示は、ｍＴＯＲＣ１を阻害するのに十分なＦＫＢＰ１２レベルを有するか又はそれを有するとしてあらかじめ決定された対象における疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１２９】
一実施形態では、疾患又は障害は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される。
【０１３０】
一実施形態では、障害は、肝線維症である。
【０１３１】
一態様では、本開示は、疾患又は障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを対象に投与することを含み、障害又は疾患は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、及び
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス
から選択される、方法を提供する。
【０１３２】
一実施形態では、障害は、線維症及び／又は炎症のプロセスを含む障害である。
【０１３３】
一実施形態では、障害は、肝障害及び腎障害から選択される。
【０１３４】
一実施形態では、肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される。
【０１３５】
一実施形態では、腎障害は、腎線維症である。
【０１３６】
一実施形態では、腎線維症は、急性腎障害の結果として生じる。
【０１３７】
一実施形態では、腎障害は、慢性腎障害である。
【０１３８】
一実施形態では、腎障害は、糖尿病性腎症である。
【０１３９】
一態様では、本開示は、加齢性障害又は加齢随伴病の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを対象に投与することを含み、障害又は疾患は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される、方法を提供する。
【０１４０】
一態様では、本開示は、対象における癌を治療する方法であって、治療有効量の式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを対象に投与することを含む方法を提供する。
【０１４１】
一実施形態では、方法は、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤をさらに含む。
【０１４２】
一実施形態では、癌は、腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫及び頚部癌から選択される。
【０１４３】
一態様では、本開示は、医薬として使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１４４】
一態様では、本開示は、ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１４５】
一態様では、本開示は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、及び
−  老化誘発性サイトカインの増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態
から選択される障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１４６】
一態様では、本開示は、線維症及び／又は炎症のプロセスを含む障害又は疾患の予防又は治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１４７】
一実施形態では、障害は、肝障害及び腎障害から選択される。
【０１４８】
一実施形態では、肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される。
【０１４９】
一実施形態では、腎障害は、急性腎障害の結果として生じる腎線維症である。
【０１５０】
一実施形態では、腎障害は、慢性腎障害である。
【０１５１】
一実施形態では、腎障害は、糖尿病性腎症である。
【０１５２】
一態様では、本開示は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害（例えば、虚弱）、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される加齢性障害又は加齢随伴病の予防又は治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１５３】
一態様では、本開示は、癌の予防又は治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１５４】
一態様では、本開示は、腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫又は頚部癌の治療において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物又は式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ、式（Ｉ）−Ｂ及び式（Ｉ）−Ｃの化合物若しくはその薬学的に許容される塩を含む医薬の組み合わせを提供する。
【０１５５】
一実施形態では、本開示は、老齢者における気道感染症に関係する病的状態などの加齢随伴病の治療において使用するための化合物
【化３３】
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又はその薬学的に許容される塩を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１５６】
一実施形態では、障害又は疾患は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、及び
−  老化誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ６）の増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態
から選択される。
【０１５７】
一実施形態では、障害又は疾患は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害（例えば、虚弱）、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される加齢性障害又は加齢随伴病である。
【０１５８】
一実施形態では、障害又は疾患は、線維症及び／又は炎症のプロセスを含む例えば肝障害及び腎障害である。一実施形態では、障害は、腎障害である。一実施形態では、障害は、肝障害である。例として、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症を含む。別の例は、腎線維症であり、これは、急性腎障害の結果として生じ、慢性腎疾患を引き起こす。さらに、糖尿病性腎症は、腎線維症及び炎症を誘発することがある。多くの場合、腎疾患は、血圧の増加の結果として心不全を引き起こす。これは、心線維症にも関連することがある。ラパログは、心機能不全のモデルを治療する際に初期段階での効能があり、肝臓移植を受けた患者における肝線維症を低下させるのに有効である。
【０１５９】
化合物、医薬組成物又はその組み合わせの治療有効投薬量は、対象の種、体重、年齢及び個人の状態、治療されている障害若しくは疾患又はその重症度に依存する。通常の技能を有する医師、臨床医又は獣医は、障害又は疾患を予防するか、治療するか又はその進行を阻害するのに必要である活性成分のそれぞれの有効量を容易に決定することができる。
【０１６０】
上記に挙げられる投薬量についての特性は、哺乳動物、例えばマウス、ラット、イヌ、サル又は摘出された器官、組織及びその調製物を好都合に使用して、インビトロ及びインビボ試験において証明可能である。本開示の化合物は、インビトロにおいて液剤、例えば水性液剤の形態において、インビボで経腸的に、非経口的に、好都合には静脈内に、例えば懸濁剤として又は水性液剤で適用され得る。投薬量は、インビトロにおいて約１０−３モル〜１０−９モル濃度の範囲にわたり得る。インビボにおける治療有効量は、投与ルートに依存して、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ又は１対象当たり約０．１〜５００ｍｇの範囲にわたり得る。
【０１６１】
本開示の化合物は、１つ以上の他の治療剤と同時に又はその前に若しくはその後に投与され得る。本開示の化合物は、別々に、他の作用物質と同じ若しくは異なる投与ルートにより、又は同じ医薬組成物中で一緒に投与され得る。治療剤は、例えば、化学化合物、ペプチド、抗体、抗体断片又は核酸であり、これは、治療的に活性であるか、又は本開示の化合物と組み合わせて患者に投与された場合に治療活性を増強する。
【０１６２】
一実施形態では、本開示は、療法において同時に、別々に又は連続して使用するための組み合わされた調製物として、本開示の化合物及び少なくとも１つの他の治療剤を含む製品を提供する。一実施形態では、療法は、ｍＴＯＲの部分的な又は完全な阻害を介しての疾患又は状態の治療である。組み合わされた調製物として提供される製品は、同じ医薬組成物中に本開示の化合物及び他の治療剤をともに含む組成物又は別々の形態、例えばキットの形態の本開示の化合物及び他の治療剤を含む。
【０１６３】
一実施形態では、本開示は、本開示の化合物及び別の治療剤を含む医薬組成物を提供する。任意選択で、医薬組成物は、上記に記載されるように、薬学的に許容されるキャリヤを含み得る。
【０１６４】
一実施形態では、本開示は、２つ以上の別々の医薬組成物を含むキットを提供し、その少なくとも１つは、本開示の化合物を含有する。一実施形態では、キットは、容器、小分けの瓶、小分けのフォイル包装など、前記組成物を別々に保持するための手段を含む。そのようなキットの一例は、錠剤、カプセル及び同種のもののパッケージに通常使用されるブリスターパックである。
【０１６５】
本開示のキットは、例えば、経口及び非経口の異なる投薬形態を投与するために、異なる投薬間隔で別々の組成物を投与するために、又は互いに別々の組成物を用量設定するために使用され得る。遵守を促進するために、本開示のキットは、通常、投与についての説明書を含む。
【０１６６】
本開示の併用療法において、本開示の化合物及び他の治療剤は、同じ又は異なるメーカーによって製造及び／又は製剤され得る。そのうえ、本開示の化合物及び他の治療薬は、（ｉ）医師への配合剤の発売前に（例えば、本開示の化合物及び他の治療剤を含むキットの場合）、（ｉｉ）投与直前に医師自身により（又は医師の指導の下で）、（ｉｉｉ）例えば本開示の化合物及び他の治療剤の連続投与間に患者自身でともに併用療法に組み入れられ得る。
【０１６７】
したがって、本開示は、ｍＴＯＲの部分的な又は完全な阻害を介して疾患又は状態を予防又は治療するための本開示の化合物の使用を提供し、医薬は、別の治療剤とともに投与するために調製される。本開示は、ｍＴＯＲ阻害によって媒介される疾患又は状態を予防又は治療するための別の治療剤の使用も提供し、医薬は、本開示の化合物とともに投与される。
【０１６８】
本開示は、ｍＴＯＲ阻害によって媒介される疾患又は状態を予防又は治療する方法において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩も提供し、本開示の化合物は、別の治療剤とともに投与するために調製される。本開示は、ｍＴＯＲ阻害によって媒介される疾患又は状態を予防又は治療する方法において使用するための別の治療剤も提供し、他の治療剤は、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩とともに投与するために調製される。本開示は、ｍＴＯＲ阻害によって媒介される疾患又は状態を予防又は治療する方法において使用するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩も提供し、化合物は、別の治療剤とともに投与される。本開示は、ｍＴＯＲ阻害によって媒介される疾患又は状態を予防又は治療する方法において使用するための別の治療剤も提供し、他の治療剤は、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩とともに投与される。
【０１６９】
本開示は、ｍＴＯＲによって媒介される疾患又は状態を予防又は治療するための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用も提供し、患者は、以前に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤により治療されている。本開示は、ｍＴＯＲによって媒介される疾患又は状態を予防又は治療するための別の治療剤の使用も提供し、患者は、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩により、以前に（例えば、２４時間以内に）治療されている。
【０１７０】
別の態様では、本開示は、医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１７１】
別の態様では、本開示は、ｍＴＯＲ経路によって媒介される障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１７２】
別の態様では、本開示は、
−  急性又は慢性器官又は組織移植拒絶、
−  移植血管症、
−  血管内膜肥厚、血管閉塞、閉塞性冠動脈硬化、再狭窄を引き起こす平滑筋細胞の増殖及び遊走、
−  自己免疫疾患及び炎症性状態、
−  喘息の治療及び予防、
−  多剤耐性（ＭＤＲ）、
−  真菌感染症、
−  炎症、
−  感染症、
−  加齢随伴病、
−  神経変性疾患、
−  増殖障害、特に癌、
−  発作及び発作性障害、
−  ミトコンドリアミオパシー及びミトコンドリアストレス、及び
−  老化誘発性サイトカインの増加がある状況など、加齢随伴病の可能性を高くすることが示されている治療可能な状態
から選択される障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１７３】
別の態様では、本開示は、線維症又は炎症のプロセスを含む障害又は疾患の予防又は治療のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１７４】
一実施形態では、障害は、肝障害及び腎障害から選択される。
【０１７５】
一実施形態では、肝障害は、最終段階の肝臓疾患で生じる肝線維症、肝硬変、毒性による肝不全、アルコールに関連しない肝臓脂肪症又はＮＡＳＨ及びアルコールに関連する脂肪症から選択される。
【０１７６】
一実施形態では、腎障害は、急性腎障害の結果として生じる腎線維症である。
【０１７７】
一実施形態では、腎障害は、慢性腎障害である。
【０１７８】
一実施形態では、腎障害は、糖尿病性腎症である。
【０１７９】
別の態様では、本開示は、サルコペニア、皮膚萎縮症、サクランボ色血管腫、脂漏性角化症、脳萎縮  −  認知症とも呼ばれる、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、肺気腫、骨粗鬆症、変形性関節症、高血圧、勃起障害、白内障、黄斑変性症、緑内障、脳卒中、脳血管疾患（脳卒中）、慢性腎疾患、糖尿病関連腎疾患、肝機能障害、肝線維症、自己免疫性肝炎、子宮内膜増殖症、代謝機能不全、腎脈管疾患、難聴、移動機能障害、認知低下、腱硬直、心肥大、並びに／又は収縮及び／若しくは拡張機能障害、並びに／又は高血圧症などの心機能障害、駆出率の減退をもたらす心機能障害、免疫老化、パーキンソン病、アルツハイマー病、癌、免疫監視の減少によって癌を引き起こす免疫老化、免疫機能の減退による感染症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肥満、味覚消失、嗅覚消失、関節炎並びに腎不全、失明及びニューロパシーなどの糖尿病から生じる合併症を含むＩＩ型糖尿病から選択される加齢性障害又は加齢随伴病の予防又は治療のための医薬の製造のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１８０】
別の態様では、本開示は、癌の予防又は治療のための医薬の製造のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１８１】
別の態様では、本開示は、腎臓癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、子宮肉腫、子宮体癌、子宮内膜癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、胃癌、線維肉腫、膵癌、肝臓癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、前立腺癌、肺癌、膠芽腫、膀胱癌、中皮腫、頭部癌、横紋筋肉腫、肉腫、リンパ腫又は頚部癌の治療のための医薬の製造のための医薬の製造のための、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１８２】
特定の治療の有益性をもたらし得る特定の個々の組み合わせは、化合物
【化３４】
2020535134.tif 000041
又はその薬学的に許容される塩及び触媒ｍＴＯＲ阻害剤、特に上記に述べられるものの組み合わせを含む。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８３】
一実施形態では、本開示は、療法において同時に、別々に又は連続して使用するための組み合わされた調製物として、化合物
【化３５】
2020535134.tif 000042
又はその薬学的に許容される塩及び触媒ｍＴＯＲ阻害剤、特に上記に述べられるようなものを含む製品を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８４】
一実施形態では、本開示は、化合物
【化３６】
2020535134.tif 000043
又はその薬学的に許容される塩及び触媒ｍＴＯＲ阻害剤、特に上記に述べられるようなもの及び薬学的に許容されるキャリヤを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８５】
一実施形態では、他の治療剤は、ヒト化抗ＣＤ４抗体、例えばザノリムマブなどの抗ＣＤ４抗体又はその抗原結合断片などのＣＤ４リンパ球除去剤から選択される。そのような治療剤は、特に、増殖障害、特に癌の治療に使用され得る。そのような併用療法については、米国特許第８，９０６，３７４号明細書及び米国特許第９，４２７，４６３号明細書を参照されたい。
【０１８６】
特定の治療の有益性をもたらし得る特定の個々の組み合わせは、化合物
【化３７】
2020535134.tif 000044
又はその薬学的に許容される塩及びＣＤ４リンパ球除去剤、特に上記に述べられるものの組み合わせを含む。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８７】
一実施形態では、本開示は、療法において同時に、別々に又は連続して使用するための組み合わされた調製物として、化合物
【化３８】
2020535134.tif 000045
又はその薬学的に許容される塩及びＣＤ４リンパ球除去剤、特に上記に述べられるようなものを含む製品を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８８】
一実施形態では、本開示は、化合物
【化３９】
2020535134.tif 000046
又はその薬学的に許容される塩、ＣＤ４リンパ球除去剤、特に上記に述べられるようなもの及び薬学的に許容されるキャリヤを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１８９】
一実施形態では、他の治療剤は、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤＬ−１抗体など、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１などの免疫阻害タンパク質の活性を調整する作用物質から選択される。そのような治療剤として有用な抗ＰＤ−１抗体は、米国特許第９，６８３，０４８号明細書において開示される通りである。そのような治療剤は、癌の治療において、特に癌免疫療法に使用され得る。
【０１９０】
特定の治療の有益性をもたらし得る特定の個々の組み合わせは、化合物
【化４０】
2020535134.tif 000047
又はその薬学的に許容される塩及びＰＤ−１などの免疫阻害タンパク質の活性を調整する作用物質、特に上記に述べられるものの組み合わせを含む。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１９１】
一実施形態では、本開示は、療法において同時に、別々に又は連続して使用するための組み合わされた調製物として、化合物
【化４１】
2020535134.tif 000048
又はその薬学的に許容される塩及びＰＤ−１などの免疫阻害タンパク質の活性を調整する作用物質、特に上記に述べられるようなものを含む製品を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【０１９２】
一実施形態では、本開示は、
【化４２】
2020535134.tif 000049
又はその薬学的に許容される塩、ＰＤ−１などの免疫阻害タンパク質の活性を調整する作用物質、特に上記に述べられるようなもの及び薬学的に許容されるキャリヤを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、化合物は、（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例１）又はその薬学的に許容される塩である。一実施形態では、化合物は、（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（実施例２）又はその薬学的に許容される塩である。
【実施例】
【０１９３】
本開示は、以下の実施例を提供する。本出願において記載される合成の及び生物学的な例は、本明細書において提供される化合物、医薬組成物及び方法を例証するために提示され、それらの範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。
【０１９４】
本明細書において提供される化合物は、当業者によく知られているであろう下記に記載される特定の合成プロトコールの改良法を使用して、容易に入手可能な出発物質から調製することができる。典型的な又は好ましいプロセス条件（すなわち反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が与えられる場合、他のプロセス条件も、特に指定のない限り使用することができることが理解されるであろう。最適な反応条件は、使用される特定の反応物又は溶媒に応じて変動し得るが、そのような条件は、当業者により、ごく通常の最適化手順によって決定することができる。
【０１９５】
そのうえ、当業者に明らかなように、従来の保護基は、ある官能基が望まれない反応を受けるのを予防するのに必要であり得る。特定の官能基に適した保護基の選択並びに保護及び脱保護に適した条件は、当技術分野においてよく知られている。例えば、多数の保護基並びにそれらの導入及び除去は、Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１及びその中で引用される参考文献において記載されている。
【０１９６】
ラパマイシン並びにその誘導体、例えば式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物は、Ｅ及びＦとして下記に示される６員及び７員ヘミケタール形態の溶媒及びｐＨ依存性の平衡状態で存在する（スキーム４及び５）。Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（Ｔｏｋｙｏ）（１９９１）４４（６）：６８８−９０及びＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９２）３３（３３）：４１３９−４１４２を参照されたい。ラパマイシン及びその誘導体は、Ｅ、Ｈ、Ｊ及びＫとして下記に示されるｃｉｓ−及びｔｒａｎｓ−アミドの混合物でも存在する（スキーム４及び５）。［Ｍｉｅｒｋｅ，Ｄ．Ｆ．，Ｓｃｈｍｉｅｄｅｒ，Ｐ．，Ｋａｒｕｓｏ，Ｐ．ａｎｄ  Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ｈ．（１９９１），Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｉｓ−  ａｎｄ  ｔｒａｎｓ−Ｉｓｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ＦＫ５０６  ｂｙ  ＮＭＲ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，７４：１０２７−１０４７を参照されたい］。実施例において示されるＮＭＲキャラクタリゼーションデータは、報告する重水素溶媒条件下で観察される主な平衡状態の形態にのみ対応する。
【化４３】
2020535134.tif 000050
式中、Ｒ１は、ヒドロキシ、
【化４４】
2020535134.tif 000051
からなる群から選択され、及び
Ｒ２は、
【化４５】
2020535134.tif 000052
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、及びＲ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である。
【０１９７】
一実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシである。
【０１９８】
一実施形態では、Ｒ２は、
【化４６】
2020535134.tif 000053
であり、及びｎは、１、２又は３である。一実施形態では、Ｒ２は、
【化４７】
2020535134.tif 000054
である。
【化４８】
2020535134.tif 000055
式中、Ｒ１は、
【化４９】
2020535134.tif 000056
であり、及び
Ｒ２は、
【化５０】
2020535134.tif 000057
からなる群から選択され、ここで、
ｍは、０、１、２又は３であり、
ｎは、１、２又は３であり、
ｏは、１、２、３、４、５又は６であり、
ｐは、１、２、３、４又は５であり、
ｑは、１、２、３、４又は５であり、ｐ及びｑの和は、２、３、４、５又は６であり、
ｒは、２、３又は４であり、
ｓは、２、３又は４であり、ｒ及びｓの和は、４、５又は６であり、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ６又はＳＯ２であり、
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル又はフェニルＣ０〜６アルキルであり、
Ｒ４は、水素であり、及びＲ５は、水素、ヒドロキシ若しくはシアノであるか、又はＲ４及びＲ５は、ともに＝Ｏを形成し、及び
Ｒ６は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル、フェニルＣ０〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＣＯ−、Ｃ１〜６アルキル−ＳＯ２−又はＣ３〜８シクロアルキルＣ０〜６アルキル−ＳＯ２−である。
【０１９９】
一実施形態では、Ｒ２は、
【化５１】
2020535134.tif 000058
であり、及びｎは、１、２又は３である。一実施形態では、Ｒ２は、
【化５２】
2020535134.tif 000059
である。
【０２００】
一実施形態では、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物は、Ｅ−１及びＦ−１として下記に示される６員及び７員ヘミケタール形態の溶媒及びｐＨ依存性の平衡状態で存在する（スキーム６）。一実施形態では、式（Ｉ）、式（Ｉ）−Ａ及び式（Ｉ）−Ｂの化合物は、ｃｉｓ−及びｔｒａｎｓ−アミドＥ−１及びＨ−１の混合物で存在する。
【化５３】
2020535134.tif 000060
【０２０１】
化合物の調製
本開示の化合物は、以下の実施例において記載されるように調製することができる。
【０２０２】
略語：
４−ＥＰ  ４−エチルピリジン
ＡｃＯＨ  酢酸
ＡＣＮ  アセトニトリル
Ａｑ  水溶液
Ｃ  摂氏
ｄ  二重線
ｄｄ  二重の二重線
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ  エチレンジアミン四酢酸
ＥＳＩＭＳ  エレクトロスプレーイオン化質量分析
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ＦＡ  ギ酸
ｇ  グラム
ｈ  時間
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ  高分解能質量分析
ｉＰｒＯＨ  ２−プロパノール又はイソプロパノール
Ｌ  リットル
ＬＣ  液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＯＨ  メタノール
ＭＳ  質量分析
Ｍ  モル
ｍ  多重線
ｍｉｎ  分
ｍＬ  ミリリットル
μＭ  マイクロモル
ｍ／ｚ  質量電荷比
Ｎ２  窒素ガス
ｎＭ  ナノモル
ＮＭＲ  核磁気共鳴
１ＨＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴分光法
ＰＥＩ  ポリエチレンイミン
ＰＰＵ  プロピル−ピリジル−尿素
ｐＴｓＯＨ  ｐ−トルエンスルホン酸
ｐｒｅｐ  分取
ｒａｃ  ラセミ体
ｒｐｍ  毎分回転数
ｒ．ｔ．  室温
ｓ  一重線
ｓａｔ．  飽和
ＳＦＣ  超臨界流体クロマトグラフィー
ｔ  三重線
ＴＣＥＰ  トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＴＬＣ  薄層クロマトグラフィー
ｖｏｌ．  体積
【０２０３】
実施例の精製において用いられる方法
中間体及び最終産物の精製は、順相又は逆相クロマトグラフィーのいずれかを介して実行した。
【０２０４】
順相クロマトグラフィーは、プレパックＳｉＯ２カートリッジ（例えば、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ，Ｉｎｃ．のＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）Ｒｆカラム）を使用し、適切な溶媒系（例えば、ヘキサン及び酢酸エチル；ＤＣＭ及びＭｅＯＨ；すなわち別段の指示がない限り）の勾配で溶離し、実行した。
【０２０５】
ＳＦＣは、下記に記載される方法を使用して実行した：
方法１：Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ＰＰＵ  ５μｍ（１００Ａ）カラム（３０×２５０ｍｍ）；ＣＯ２／ＭｅＯＨ
方法２：Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  ４−ＥＰ  ５μｍ（６０Ａ）カラム（３０×２５０ｍｍ）；ＣＯ２／ＭｅＯＨ
方法３：Ｒｅｐｒｏｓｐｈｅｒ  ＰＥＩ  ５μｍ（１００Ａ）カラム（３０×２５０ｍｍ）；ＣＯ２／ＭｅＯＨ
勾配は、分析用分離に基づいて選択した。
【０２０６】
逆相分取ＨＰＬＣは、下記に記載される方法を使用して実行した：
方法１（Ａｇｉｌｅｎｔ）：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８；５μｍカラム（３０×２５０ｍｍ）；アセトニトリル中０．１％ギ酸及び５％水；水中０．１％ギ酸及び５％アセトニトリル。勾配は、分析用分離に基づいて選択した。
方法２：（ＥＺｐｒｅｐ）ＹＭＣ  Ａｃｔｕｓ  Ｔｒｉａｒｔ  Ｃ１８；５μｍカラム（２０×１５０ｍｍ）；アセトニトリル／水。
勾配は、分析用分離に基づいて選択した。
【０２０７】
キラル分取ＨＰＬＣは、下記に記載される方法を使用して実行した：
方法１：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ；５μｍカラム（２０×２５０ｍｍ）；ｎ−ヘプタン／ＤＣＭ／ＥｔＯＨ
方法２：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＤ；５μｍカラム（２０×２５０ｍｍ）；ｎ−ヘプタン／ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ
勾配は、分析用分離に基づいて選択した。
【０２０８】
ＬＣ／ＭＳ法：
カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１３０オングストローム、１．７ｕＭ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ
温度：５０℃
インジェクション：１ｕＬ
溶媒Ａ：水＋５ｍＭ水酸化アンモニウム
溶媒Ｂ：アセトニトリル＋５ｍＭ水酸化アンモニウム
勾配：
【０２０９】
【表６】
2020535134.tif 000061
【０２１０】
１Ｈ  ＮＭＲ機器：
ｃｒｙｏ−ＤＣＩプローブを備えたＢｒｕｋｅｒ  ＵｌｔｒａＳｈｉｅｌｄ（商標）Ａｄｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ＨＤ  ４００ＭＨｚ。データは、ＭｅｓｔＲｅＮｏｖａ  １１．０ソフトウェアでプロセシングした。
【０２１１】
中間体１〜７の調製
中間体１：Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
【化５４】
2020535134.tif 000062
中間体１は、それぞれその全体が本明細書において参照によって援用される米国特許出願公開第００５９８５８９０号明細書及び国際公開第２００７／０８５４００  Ａ１号パンフレットにおいて開示されるものを含め、文献において知られている手順に従って調製した。
【０２１２】
中間体２：ＲＡＤ００１（エベロリムス；Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標））
【化５５】
2020535134.tif 000063
中間体２は、その全体が本明細書において参照によって本明細書に援用される国際公開第２０１２１０３９５９号パンフレットにおいて開示されるものを含め、文献において知られている手順に従って調製した。
【０２１３】
中間体３：
【化５６】
2020535134.tif 000064
中間体３は、下記に示されるように中間体Ａを通して２ステップで調製した。
【化５７】
2020535134.tif 000065
ステップ１．中間体Ａの合成
２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エタノール（０．４７１ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）を反応バイアルにおいて無水トルエン（０．９５ｍＬ）中で溶解した。バイアルをキャップし、次いで窒素で真空パージした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（０．４９０ｍｌ、２．８１ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。混合物を氷水浴槽中で０℃まで冷やした。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ２Ｏ）（０．４３８ｍｌ、２．５９ｍｍｏｌ）を約２分間にわたって０℃で滴加した。反応混合物を３０分間０℃で撹拌した。
【０２１４】
バイアルを冷浴から引き上げた。ＤＩＰＥＡ（０．４９０ｍｌ、２．８１ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。バイアルを開け、固体の中間体１（０．６００ｇ、０．６６７ｍｍｏｌ）を一度に迅速に追加した。バイアルを迅速に再びキャップし、混合物を窒素で真空パージした。トルエン（０．５ｍＬ）を追加した。
【０２１５】
反応物を一晩窒素下において４０℃で撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水で希釈した。クエンチした混合物をＥｔＯＡｃで５回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、セライトを通して真空濾過し、濃縮し、蝋のような白色固体粗生成物を得た。
【０２１６】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜３５％アセトン−ヘプタン、勾配溶離、４０ｇシリカカラム、３５％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、ガラスとして所望の中間体Ａ（０．２４５ｇ、０．２３１ｍｍｏｌ、３４．７％の収率）を得、以下のステップで「そのまま」直ちに使用した。
中間体Ａ：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０７６．１，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］１０５６．０．
【０２１７】
ステップ２．中間体３の合成
中間体Ａ（０．１３５ｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）をガラス反応バイアルにおいて無水ＴＨＦ（１．２ｍＬ）中で溶解した。バイアルをキャップし、混合物を窒素で２回真空パージした。混合物を氷水浴槽中で０℃まで冷やした。ＨＦ−ピリジン（０．１２ｍＬ、１．３３２ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して３０秒間にわたって滴加した。反応物を６０分間０℃で撹拌した。
【０２１８】
反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に滴加した。クエンチした混合物をＥｔＯＡｃで５回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、セライトを通して真空濾過し、濃縮し、白色固体粗生成物を得た。
【０２１９】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜５０％アセトン−ヘプタン勾配溶離、４０ｇシリカカラム、５０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、白色固体として中間体３（０．０８７ｇ、０．０９２ｍｍｏｌ、７２．２％の収率）を得た。
【０２２０】
中間体３：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］９６２．０，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９４３．０
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４６−６．２５（ｍ，２Ｈ），６．１９−６．０９（ｍ，１Ｈ），５．９１（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｍ，１Ｈ），５．３４−５．２６（ｍ，１Ｈ），５．２６−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．８８−４．６４（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｍ，１Ｈ），３．９４−３．８２（ｍ，１Ｈ），３．７９（ｍ，１Ｈ），３．７３−３．６３（ｍ，３Ｈ），３．６３−３．４７（ｍ，４Ｈ），３．４５（ｍ，４Ｈ），３．３３（ｍ，３Ｈ），３．２８−３．１５（ｍ，２Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），３．０８（ｍ，１Ｈ），２．８０（ｍ，１Ｈ），２．３２（ｍ，３Ｈ），２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９４−１．７２（ｍ，５Ｈ），１．７２−１．５６（ｍ，８Ｈ），１．５６−１．４０（ｍ，３Ｈ），１．３９−１．２１（ｍ，７Ｈ），１．２１−１．０９（ｍ，１Ｈ），１．０８−０．９９（ｍ，８Ｈ），０．９８−０．８３（ｍ，９Ｈ），０．７３（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２２１】
中間体４：
【化５８】
2020535134.tif 000066
中間体１（０．２３３ｇ、０．２５９ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２．６ｍＬ）中２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（０．４２５ｇ、２．０７１ｍｍｏｌ）と組み合わせた。反応混合物を窒素で１回真空パージした。反応混合物を氷水浴槽中で０℃まで冷やした。固体ジメチルホスフィン酸クロリド（０．１４６ｇ、１．２９４ｍｍｏｌ）を一度に追加した。反応混合物を８０分間０℃で撹拌した。
【０２２２】
反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水で希釈し、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、無色タール粗生成物（０．７６８ｇ）を得た。
【０２２３】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した（０〜８０％アセトン−ヘプタン勾配溶離、２４ｇシリカカラム、８０％ＥｔＯＡｃ−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）。産物含有画分をプールし、濃縮し、白色固体として中間体４（０．０８７ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ、３４．４％の収率）を得た。
【０２２４】
中間体４：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］９９３．７，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９７４．７．
ＨＲＭＳ：計算値：９９９．５８１２（ナトリウム付加物として）．測定値：９９９．５８０７．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４７−６．２６（ｍ，２Ｈ），６．２２−６．０８（ｍ，１Ｈ），６．０２−５．８３（ｍ，１Ｈ），５．５４（ｍ，１Ｈ），５．３５−５．２６（ｍ，１Ｈ），５．２１（ｍ，１Ｈ），４．８５−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｍ，２Ｈ），３．９３−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６０−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．５３−３．４４（ｍ，１Ｈ），３．４２−３．３６（ｍ，３Ｈ），３．３２（ｍ，３Ｈ），３．２８−３．１８（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，３Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），２．８２（ｍ，１Ｈ），２．４２−２．２１（ｍ，３Ｈ），２．１６−２．０８（ｍ，３Ｈ），１．９９（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．７２（ｍ，４Ｈ），１．７１−１．５７（ｍ，９Ｈ），１．５７−１．４３（ｍ，１２Ｈ），１．３９（ｍ，１Ｈ），１．３４−１．２０（ｍ，４Ｈ），１．２０−１．１０（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｍ，４Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．９５（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．１Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９１−０．８４（ｍ，４Ｈ），０．７７（ｑ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２２５】
中間体５：
【化５９】
2020535134.tif 000067
中間体１（４．３７２ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中で溶解した。無水トルエンを追加した（２０ｍＬ）。反応混合物をロータリーエバポレーター上で蒸発させて乾固させた。この共沸乾燥プロセスをさらに２回繰り返した。
【０２２６】
乾燥させた出発物質を無水ジクロロメタン（５８ｍＬ）中の２，６−ルチジン（１．３８８ｍｌ、１１．９１ｍｍｏｌ）と組み合わせた。フラスコをキャップし、混合物を窒素で２回真空パージした。混合物をアセトニトリル／ドライアイス浴槽中で−３０Ｃまで冷やした。
【０２２７】
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１．２０９ｍｌ、７．１６ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して４分間にわたって滴加した。反応混合物を３０分間−３０℃で撹拌した。反応混合物を０℃氷水浴槽に移し、０℃で２０分間撹拌した。
【０２２８】
反応混合物をロータリーエバポレーター上に置き、加熱せずに濃縮した。酢酸イソプロピル（２２ｍＬ）を追加した。テトラゾール（１．１７０ｇ、１６．７１ｍｍｏｌ）を一度に追加した。フラスコを迅速にキャップし、窒素で２回真空パージした。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．１８ｍｌ、２３．９４ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して１分間にわたって追加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。
【０２２９】
反応混合物をロータリーエバポレーター上で濃縮した。濃縮物は、順相シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した（０〜４０％アセトン−ヘプタン勾配溶離、８０ｇシリカカラム、４０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）。
【０２３０】
第２の溶離ピーク画分（２７９ｎｍでのＵＶ吸光度によって決定）をプールし、濃縮し、白色固体として中間体５（２．１９４ｇ、２．３０４ｍｍｏｌ、４７．４％の収率）を得た。
【０２３１】
中間体５：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］９６９．８，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９５０．８．
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ９．３３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５８−６．４１（ｍ，２Ｈ），６．３５−６．１４（ｍ，２Ｈ），６．０９−５．９８（ｍ，１Ｈ），５．５５−５．４３（ｍ，１Ｈ），５．１９（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｍ，１Ｈ），５．００−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．８７−４．７９（ｍ，１Ｈ），４．６７−４．５６（ｍ，１Ｈ），３．９８−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，１．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４９−３．３８（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．１７（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｍ，４Ｈ），３．０４（ｓ，３Ｈ），２．８８−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．０９（ｍ，３Ｈ），２．０７−１．８６（ｍ，３Ｈ），１．８８−１．６０（ｍ，９Ｈ），１．５９−１．４４（ｍ，７Ｈ），１．４３−１．０１（ｍ，１１Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，５Ｈ），０．９５−０．７７（ｍ，７Ｈ），０．７２（ｍ，４Ｈ）．
【０２３２】
中間体６：
【化６０】
2020535134.tif 000068
２−エトキシエタノール（０．５３８ｍｌ、５．５５ｍｍｏｌ）を無水トルエン（２．０ｍＬ）及び無水ジオキサン（０．２２ｍＬ）中で組み合わせた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．０６７ｍｌ、６．１１ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。反応混合物を窒素で２回真空パージした。混合物を氷水浴槽中で０℃まで冷やした。
【０２３３】
トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．９０１ｍｌ、５．３３ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して２分間にわたって滴加した。反応物を１５分間０℃で撹拌した。冷浴槽を取り外し、反応物を１５分間室温と平衡化させた。
【０２３４】
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．０６７ｍｌ、６．１１ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して３０秒間にわたって滴加した。中間体１（１．００ｇ、１．１１１ｍｍｏｌ）を一度に追加した。
【０２３５】
反応混合物を迅速にキャップし、窒素で真空パージした。無水トルエン（２．０ｍＬ）及び無水ジオキサン（０．２２ｍＬ）を、シリンジを介して追加した。反応混合物を２４時間５５℃で撹拌した。
【０２３６】
反応混合物を鹹水で希釈し、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、無色タール粗生成物（４．２５ｇ）を得た。
【０２３７】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した（０〜５０％アセトン−ヘプタン勾配溶離、８０ｇシリカカラム、４０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）。産物含有画分をプールし、濃縮し、無色ガラスとして中間体６（０．４４３ｇ、０．４５６ｍｍｏｌ、４１．０％の収率）を得た。
【０２３８】
中間体６：ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９７０．９．
ＨＲＭＳ：計算値  −  ９８９．６６７８（アンモニウム付加物として）；測定値  −  ９８９．６６５５
計算値  −  ９９４．６２３２（ナトリウム付加物として）；測定値  −  ９９４．６２１５．
【０２３９】
中間体７：
【化６１】
2020535134.tif 000069
中間体７は、下記に示されるように中間体Ｂを通して２ステップで調製した。
【化６２】
2020535134.tif 000070
ステップ１．中間体Ｂの合成
２，２，５−トリメチル−１，３−ジオキサン−５−カルボン酸（０．４００ｇ、２．２９６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．３２０ｍｌ、２．２９６ｍｍｏｌ）を組み合わせ、無水ＴＨＦ（７．６ｍＬ）中で溶解した。反応混合物を０℃まで冷やし、２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（０．３５９ｍｌ、２．２９６ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。反応物を１０分間０℃で撹拌した。冷浴槽を取り外し、反応物を２．５時間、室温で撹拌した。白色固体を沈殿させた。
【０２４０】
反応混合物を、シリンジフィルターを通して濾過した。フィルターをＴＨＦ（２ｍＬ）ですすいだ。濾液を組み合わせ、ロータリーエバポレーター上で濃縮し、無色タールが残った。
【０２４１】
濃縮物にトルエン（７．６ｍＬ）を追加した。中間体１（１．４４７ｇ、１．６０７ｍｍｏｌ）を一度に追加し、その後、４−ジメチルアミノピリジン（０．２８１ｇ、２．２９６ｍｍｏｌ）を追加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。
【０２４２】
混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで４回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、黄色タール粗生成物（２．１５ｇ）を得た。
【０２４３】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した（０〜４０％アセトン−ヘプタン勾配溶離、４０ｇシリカカラム、４０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）。産物含有画分をプールし、濃縮し、白色の気泡として中間体Ｂ（０．４３８ｇ、０．４１５ｍｍｏｌ、１８．１％の収率）を得た。
【０２４４】
中間体Ｂ：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０７４．０，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］１０５５．１．
【０２４５】
ステップ２．中間体７の合成
中間体Ｂ（０．４３１ｇ、０．４０８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）中で溶解した。ＨＣｌ（１Ｍ、ａｑ．）（２．０ｍｌ、２．００ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。反応物を３６時間、室温で撹拌した。
【０２４６】
反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで４回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、薄黄色のタールを得た。タールをジクロロメタン中で溶解し、ヘプタンで希釈した。混合物を濃縮し、高真空で乾燥させ、白色固体として中間体７（０．４０７ｇ、０．４００ｍｍｏｌ、９８％の収率）を得た。
【０２４７】
中間体７：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０３４．０，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］１０１５．０．
ＨＲＭＳ  計算値  −  １０３３．６５７６（アンモニウム付加物として）；測定値  −  １０３３．６５８８
計算値  −  １０３８．６１３０（ナトリウム付加物として）；測定値  −  １０３８．６１３８．
【０２４８】
実施例１：（Ｓ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
実施例２：（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
【化６３】
2020535134.tif 000071
無水ジクロロメタン（５．６ｍＬ）中の中間体１（２．０ｇ、２．２２２ｍｍｏｌ）及びイソチアゾリジン１，１−ジオキシド（４．０４ｇ、３３．３ｍｍｏｌ、１５当量）の撹拌溶液にｐ−トルエンスルホン酸・Ｈ２Ｏ（０．０４２ｇ、０．２２２ｍｍｏｌ、０．１当量）を一度に追加した。反応物を３４分間、窒素雰囲気下において外界温度で撹拌した。全反応混合物を、直接、シリカでのクロマトグラフィーによって分離し（１００％ヘプタン〜４０％アセトン−ヘプタンの勾配溶離）、ＬＣ／ＭＳ分析で２７９ｎｍでのＵＶ吸光度によって約３：１の比で両方のジアステレオマーの生成混合物を得た。
【０２４９】
ジアステレオマー混合物は、シリカで順相クロマトグラフィーによって分離した（１００％ジクロロメタン〜４０％アセトニトリル−ジクロロメタンの勾配溶離）。
【０２５０】
第１の溶離ジアステレオマー（３０％アセトニトリル−ジクロロメタン中で展開したシリカＴＬＣでＲｆ約０．２３）として実施例１（Ｓ）−ジアステレオマーが白色固体として得られる。
【０２５１】
実施例１：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１００６．７，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９８７．８．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４３（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），６．０６−６．０１（ｍ，１Ｈ），５．６７（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｔｄ，Ｊ＝６．６，４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８４−３．７７（ｍ，１Ｈ），３．６３−３．６０（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．４２（ｍ，３Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ），３．２９−３．１４（ｍ，３Ｈ），３．０６−２．９６（ｍ，２Ｈ），２．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．４，６．４，１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４４（ｔｔ，Ｊ＝８．６，６．２Ｈｚ，１Ｈ），２．３７−２．２３（ｍ，４Ｈ），２．２２−２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｄｔ，Ｊ＝１２．３，３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｐｄ，Ｊ＝６．４，５．７，３．５Ｈｚ，２Ｈ），１．９２−１．８２（ｍ，３Ｈ），１．８０−１．７６（ｍ，２Ｈ），１．７５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，４Ｈ），１．７２（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，３Ｈ），１．６５−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．４８−１．１７（ｍ，９Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），１．０６（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９９（ｄｄ，Ｊ＝６．７，２．３Ｈｚ，３Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．７４（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２５２】
第２の溶離ジアステレオマー（３０％アセトニトリル−ジクロロメタン中で展開したシリカＴＬＣでＲｆ約０．１６）として実施例２（Ｒ）−ジアステレオマーが白色固体として得られる。
【０２５３】
実施例２：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１００６．９，ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９８８．１．
１Ｈ  ＮＭＲ（クロロホルム−ｄ）δ  ６．４８（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２４（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄｄ，Ｊ＝６．２，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｔ，Ｊ＝８．３，３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｑｄ，Ｊ＝１３．９，１２．７，５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２，７．５，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｔｄ，Ｊ＝８．２，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０８（ｓ，１Ｈ），３．０２−２．９７（ｍ，１Ｈ），２．９７−２．９２（ｍ，１Ｈ），２．８３−２．７１（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．１，９．５，６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｓ，１Ｈ），２．２８−２．２３（ｍ，１Ｈ），２．２２−２．１９（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｓ，２Ｈ），２．１２−２．０８（ｍ，２Ｈ），２．０３−１．９９（ｍ，１Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．８８（ｓ，１Ｈ），１．７９（ｓ，１Ｈ），１．７７（ｓ，１Ｈ），１．７６（ｓ，１Ｈ），１．７２−１．６８（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｓ，１Ｈ），１．４６（ｓ，１Ｈ），１．４０（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，１Ｈ），１．６６（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，２Ｈ），１．６４（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．６２（ｓ，２Ｈ），１．６２（ｓ，２Ｈ），１．５８−１．５３（ｍ，１Ｈ），１．３７（ｓ，１Ｈ），１．３６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．３０（ｄｄ，Ｊ＝６．７，１．８Ｈｚ，１Ｈ），１．２８（ｓ，２Ｈ），１．２８（ｓ，２Ｈ），１．２４（ｓ，１Ｈ），１．０９（ｓ，１Ｈ），１．０７（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｓ，１Ｈ），０．９２−０．９０（ｍ，３Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），０．６６（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）
【０２５４】
実施例１及び実施例２におけるＣ１６置換基の絶対配置は、ＦＫＢＰ１２との共結晶化のＸ線結晶解析によって決定した［Ｓｔｕａｒｔ  Ｌ．Ｓｃｈｒｉｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｊｏｎ  Ｃｌａｒｄｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｔｏｍｉｃ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  Ｈｕｍａｎｏ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ＦＫＢＰ−１２  Ｃｏｍｐｌｅｘ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９１，１１３，７４３３−７４３４を参照されたい］。結晶構造は、図１Ａ及び１Ｂ並びに図２Ａ及び２Ｂに表す。
【０２５５】
純粋なＦＫＢＰ１２（１〜１０８）タンパク質を５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＴＣＥＰ中で９ｍｇ／ｍＬに濃縮した。共結晶化のための複合体を、３ｍＭの化合物（９０％ｄＤＭＳＯ、１０％Ｄ２Ｏにおいて調製した５０ｍＭストックからの）とタンパク質とを混合することによって調製した。複合体を４℃で２時間インキュベートし、次いで２分間１００００ｒｐｍで遠心分離し、結晶化前にあらゆる可能性のある沈殿物を除去した。共結晶は、マイクロシードマトリックススクリーニングを使用し、シッティングドロップ蒸気拡散法によって２０℃で得た。［Ａｌｌａｎ  Ｄ’Ａｒｃｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｍｉｃｒｏｓｅｅｄ  ｍａｔｒｉｘ−ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．，（２００７）Ｄ６３，５５０−５５４］。液滴は、２００ｎＬのタンパク質溶液、１６０ｎＬのウェル溶液及び４０ｎＬシードストックから構成された。結晶は、Ｑｉａｇｅｎから市販で入手可能な「硫酸アンモニウム」スクリーニングのＡ１条件で数日内に現われた。リザーバ溶液は、２．２Ｍ硫酸アンモニウムからなった。結晶は、２０％エチレングリコールを補足したリザーバ溶液中で低温保護し、急速冷凍し、液体窒素中に入れた。データは、ｂｅａｍｌｉｎｅ  Ｘ１０ＳＡでＳｗｉｓｓ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｏｕｒｃｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ（ＳＬＳ，Ｖｉｌｌｉｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）において収集した。
【０２５６】
データは、ＸＤＳでプロセシングした（Ｋａｂｓｃｈ，Ｗ．（２０１０），ＸＤＳ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ，６６：１２５−１３２）。構造は、探索モデルとして以前のＦＫＢＰ１２Ｘ線構造を使用し、分子置換（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ  ４（１９９４）．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０−７６３）によって決定した。プログラムＲＥＦＭＡＣ（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ  ＧＮ，Ｓｋｕｂａｋ  Ｐ，Ｌｅｂｅｄｅｖ  ＡＡ，ｅｔ  ａｌ．，ＲＥＦＭＡＣ５  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．２０１１；６７（Ｐｔ  ４）：３５５−３６７）及びＣＯＯＴ（Ｅｍｓｌｅｙ  Ｐ，Ｌｏｈｋａｍｐ  Ｂ，Ｓｃｏｔｔ  ＷＧ，Ｃｏｗｔａｎ  Ｋ．Ｆｅａｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｏｏｔ，Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ．２０１０；６６（Ｐｔ  ４）：４８６−５０１）を構造精密化及びモデル（リ）ビルディングに使用した。
【０２５７】
以下の実施例では、Ｃ１６置換基の絶対立体配置は、Ｘ線共結晶化によって決定しなかったために不明である。いくつかの実施例では、反応由来の主なジアステレオマー産物のみを単離し、特徴付けた。他の実施例では、各ジアステレオマーを単離し、特徴付けたが、絶対立体配置は、割り当てられなかった。
【０２５８】
実施例３：Ｃ１６−（４−オキソアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
【化６４】
2020535134.tif 000072
アセトニトリル（３ｍＬ）中の中間体１（１３０ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及びアゼチジン−２−オン（２０５ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ、２０ｅｑ）の溶液にパラ−トルエンスルホン酸一水和物（８２ｍｇ、０．４３３ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を追加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次いでＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣクロマトグラフィー（方法１）によって精製し、その後、ＳＦＣ精製（方法１）によって精製し、白色固体として実施例３（２．５ｍｇ、１．７％の収率）を得た。
【０２５９】
実施例３：ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９３８．０
精密質量：９３８．５９
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２８−６．１１（ｍ，２Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９５−５．８５（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０２−４．９７（ｍ，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６３−４．５３（ｍ，２Ｈ），４．３４−４．２２（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．８４−３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．４９（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４６−３．３９（ｍ，１Ｈ），３．３７−３．２５（ｍ，３Ｈ），３．２２−３．１２（ｍ，４Ｈ），３．１０−３．０４（ｍ，１Ｈ），３．０４−２．９５（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．６５（ｍ，４Ｈ），２．２７−２．１１（ｍ，２Ｈ），２．１０−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．９６−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．８４−１．７０（ｍ，５Ｈ），１．６９−１．３７（ｍ，１５Ｈ），１．３７−１．０５（ｍ，８Ｈ），１．０３−０．９３（ｍ，４Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８８−０．８３（ｍ，５Ｈ），０．７９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．５９（ｑ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２６０】
実施例４：Ｃ１６−（３−メチルイミダゾリジン−２−オン−１−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
【化６５】
2020535134.tif 000073
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の中間体１（１００ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１−メチルイミダゾリジン−２−オン（１６７ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）の溶液にパラ−トルエンスルホン酸一水和物（６３ｍｇ、０．３３３ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を追加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣクロマトグラフィー（方法１）によって精製し、白色固体として実施例４（９．０ｍｇ、８％の収率）を得た。
【０２６１】
実施例４：ＥＳＩＭＳ［Ｍ−Ｈ］９６６．５
精密質量：９６７．６１
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ０．５９（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ），０．７４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７９（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．８０−０．９０（ｍ，８Ｈ），０．９２−１．００（ｍ，４Ｈ），１．０４−１．１０（ｍ，１Ｈ），１．１２−１．３４（ｍ，７Ｈ），１．３４−１．６７（ｍ，１４Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ），１．７１−１．７８（ｍ，２Ｈ），１．８８−１．９４（ｍ，１Ｈ），１．９６−２．０８（ｍ，３Ｈ），２．１０−２．２５（ｍ，２Ｈ），２．６０−２．６９（ｍ，４Ｈ），２．８０−２．９４（ｍ，２Ｈ），３．０７−３．２０（ｍ，５Ｈ），３．２１−３．２６（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｓ，３Ｈ），３．４１−３．４８（ｍ，１Ｈ），３．５６−３．６６（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｄｄ，Ｊ＝６．５，３．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５３−４．６３（ｍ，３Ｈ），４．９５−５．００（ｍ，２Ｈ），５．０７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｓ，１Ｈ），５．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２６２】
実施例５：Ｃ１６−（２−ヒドロキシエチル）−２−オキソイミダゾリジン−１−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン
【化６６】
2020535134.tif 000074
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の中間体１（１００ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１−（２−ヒドロキシエチル）イミダゾリジン−２−オン（２８９ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、１５ｅｑ）の溶液に４−メチルベンゼンスルホン酸一水和物（１１９ｍｇ、０．６２６ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を追加した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。粗生成物を分取ＨＰＬＣクロマトグラフィー（方法１）によって精製し、その後、キラル分取ＨＰＬＣ（方法２）によって精製し、白色固体として実施例５（１３．７ｍｇ、１２％の収率）を得た。
【０２６３】
実施例５：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９９８．５
精密質量：９９７．６２
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２３（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｓ，１Ｈ），５．０７（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０２−４．９６（ｍ，２Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６４−４．５３（ｍ，３Ｈ），４．０３−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．７１−３．５７（ｍ，３Ｈ），３．５２−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．２９（ｍ，６Ｈ），３．２２−３．０７（ｍ，７Ｈ），２．９５−２．７９（ｍ，２Ｈ），２．７１−２．５６（ｍ，１Ｈ），２．２７−１．８７（ｍ，６Ｈ），１．８０−１．３６（ｍ，２０Ｈ），１．３６−１．１２（ｍ，６Ｈ），１．１１−１．０２（ｍ，１Ｈ），１．００−０．９１（ｍ，４Ｈ），０．９１−０．７６（ｍ，１１Ｈ），０．７４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．５９（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２６４】
実施例６：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（ジアステレオマー１）
実施例７：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−ラパマイシン（ジアステレオマー２）
【化６７】
2020535134.tif 000075
ジアステレオマー１：ＤＣＭ（３ｍＬ）中の中間体１（１５０ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１，２−チアゼチジン１，１−ジオキシド（８９ｍｇ、０．８３３ｍｍｏｌ、５ｅｑ）の溶液に０℃で塩化亜鉛（ＩＩ）（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液、０．５ｍＬ、０．５００ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を追加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。ジアステレオマー混合物の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって分離した（シリカ；ＭｅＣＮ／ＤＣＭ  ０：１００〜１００：０）。
【０２６５】
分取ＨＰＬＣ（方法２）による第１の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例６（１８ｍｇ、１０．７％の収率）を得た。
【０２６６】
実施例６：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］９９２．６，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０１９．６．
精密質量：９７４．５５
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．１８−６．１０（ｍ，１Ｈ），６．０２（ｄ，Ｊ＝１０．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｓ，１Ｈ），５．３２（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８７−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．１２−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．９９（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．２，６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９２−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６３−３．５９（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．４０−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），３．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，５．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．００−２．９４（ｍ，１Ｈ），２．９４−２．８９（ｍ，１Ｈ），２．８８−２．８４（ｍ，１Ｈ），２．６４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４７−２．３８（ｍ，１Ｈ），２．３６−２．２７（ｍ，２Ｈ），２．２１−２．１２（ｍ，１Ｈ），２．０３−１．９７（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．７７（ｍ，７Ｈ），１．７６−１．６７（ｍ，５Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ），１．６０−１．５０（ｍ，６Ｈ），１．４７−１．３９（ｍ，２Ｈ），１．３８−１．２７（ｍ，４Ｈ），１．２５−１．１０（ｍ，３Ｈ），１．０８−１．０４（ｍ，１Ｈ），１．０３−１．０１（ｍ，３Ｈ），１．００（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９９−０．９７（ｍ，３Ｈ），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．７５−０．６６（ｍ，１Ｈ）．
【０２６７】
ＳＦＣクロマトグラフィー（方法２）を使用する第２の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例７（１５．８ｍｇ、９．２％の収率）を得た。
【０２６８】
実施例７：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］９９２．７，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０１９．６
精密質量：９７４．５５
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４６（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２７−５．１９（ｍ，１Ｈ），５．１２−５．０５（ｍ，１Ｈ），４．６６−４．５９（ｍ，１Ｈ），４．５９−４．５３（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１７−４．０６（ｍ，３Ｈ），４．０２（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，８．０，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６０−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．３４（ｍ，４Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．１７−３．０７（ｍ，１Ｈ），３．０３−２．９５（ｍ，１Ｈ），２．９５−２．８９（ｍ，１Ｈ），２．８４−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．６５−２．６２（ｍ，１Ｈ），２．３５−２．２６（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２１−２．１２（ｍ，３Ｈ），２．１２−２．０５（ｍ，１Ｈ），２．０２−１．９８（ｍ，１Ｈ），１．９７−１．９５（ｍ，３Ｈ），１．９１−１．８３（ｍ，１Ｈ），１．８２−１．７０（ｍ，３Ｈ），１．７０−１．５１（ｍ，１０Ｈ），１．５０−１．１７（ｍ，１０Ｈ），１．１１−１．０６（ｍ，１Ｈ），１．０６−１．０２（ｍ，６Ｈ），１．０１−０．９６（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，４Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．６４（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２６９】
実施例８：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（２−ヒドロキシエトキシ）−ラパマイシン（ジアステレオマー１）
実施例９：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（２−ヒドロキシエトキシ）−ラパマイシン（ジアステレオマー２）
【化６８】
2020535134.tif 000076
ＤＣＭ（１ｍＬ）中の中間体３（５０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１，２−チアゼチジン１，１−ジオキシド（５６．７ｍｇ、０．５３０ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）の溶液に塩化亜鉛（ＩＩ）（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液、０．２６５ｍＬ、０．２６５ｍｍｏｌ、５ｅｑ）を追加した。反応混合物を１．５時間、室温で撹拌した。反応物をＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。ジアステレオマー混合物の粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって分離した（シリカ；ＭｅＣＮ／ＤＣＭ  ０：１００〜１００：０）。
【０２７０】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第１の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例８（３．１ｍｇ、５．５％の収率）を得た。
【０２７１】
実施例８：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０３７．０，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０６４．１
精密質量：１０１８．５８
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：６．５３−６．４４（ｍ，１Ｈ），６．４１（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．６Ｈｚ，１Ｈ），６．２９−６．１４（ｍ，２Ｈ），６．０７（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１．５Ｈｚ，１Ｈ），５．５４（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，９．１Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．９９−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．９２−４．８３（ｍ，１Ｈ），４．７０−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．４９−４．４２（ｍ，１Ｈ），４．１３−４．０２（ｍ，３Ｈ），３．９２−３．８６（ｍ，１Ｈ），３．６９−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．５４（ｍ，１Ｈ），３．５２−３．４２（ｍ，５Ｈ），３．３３（ｓ，３Ｈ），３．３０−３．２７（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），３．１０−３．０２（ｍ，２Ｈ），３．０２−２．９４（ｍ，２Ｈ），２．９０−２．８０（ｍ，１Ｈ），２．３０−２．２１（ｍ，１Ｈ），２．２１−２．１０（ｍ，１Ｈ），２．１０−２．００（ｍ，２Ｈ），２．００−１．８７（ｍ，３Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．８１−１．６２（ｍ，６Ｈ），１．５８−１．５４（ｍ，１Ｈ），１．５３−１．４７（ｍ，５Ｈ），１．４７−１．３５（ｍ，５Ｈ），１．３６−１．２３（ｍ，２Ｈ），１．２３−１．０９（ｍ，４Ｈ），１．０６−１．０１（ｍ，１Ｈ），１．０１−０．９５（ｍ，６Ｈ），０．９０−０．８７（ｍ，１Ｈ），０．８７−０．８３（ｍ，３Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７６−０．７０（ｍ，４Ｈ），０．６８−０．６０（ｍ，１Ｈ）．
【０２７２】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第２の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例９（２．８ｍｇ、４．９％の収率）を得た。
【０２７３】
実施例９：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０３７．２，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０６４．３
精密質量：１０１８．５８
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：６．４８−６．４０（ｍ，１Ｈ），６．２７−６．１９（ｍ，１Ｈ），６．１９−６．１３（ｍ，１Ｈ），６．１０−６．０５（ｍ，１Ｈ），５．５２（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，９．３Ｈｚ，１Ｈ），５．１３−５．００（ｍ，２Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６７−４．５７（ｍ，１Ｈ），４．４８−４．４０（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．１０（ｍ，２Ｈ），４．１０−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９８−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．５６−３．４９（ｍ，２Ｈ），３．５０−３．４３（ｍ，４Ｈ），３．３７（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３３（ｓ，３Ｈ），３．２３−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．１０（ｍ，４Ｈ），３．０７−２．９５（ｍ，２Ｈ），２．７５−２．６４（ｍ，１Ｈ），２．２７−２．１４（ｍ，２Ｈ），２．１１−２．００（ｍ，２Ｈ），２．００−１．８９（ｍ，３Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．７６−１．６５（ｍ，２Ｈ），１．６５−１．５６（ｍ，３Ｈ），１．５６−１．４９（ｍ，７Ｈ），１．４８−１．３６（ｍ，３Ｈ），１．３４−１．２３（ｍ，３Ｈ），１．２３−１．０４（ｍ，５Ｈ），１．０１−０．９４（ｍ，４Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８８−０．８３（ｍ，５Ｈ），０．８０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．６２（ｑ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２７４】
実施例１０：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−ジメチルホスフィニル−ラパマイシン（ジアステレオマー１）
実施例１１：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−ジメチルホスフィニル−ラパマイシン（ジアステレオマー２）
【化６９】
2020535134.tif 000077
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の中間体４（１００ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１，２−チアゼチジン１，１−ジオキシド（５４．９ｍｇ、０．５１２ｍｍｏｌ、５ｅｑ）の溶液に塩化亜鉛（ＩＩ）（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液、０．５１２ｍＬ、０．５１２ｍｍｏｌ、５ｅｑ）を追加した。反応混合物を１５分間、室温で撹拌した。反応物をＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。ジアステレオマー混合物の粗生成物をＳＦＣクロマトグラフィー（方法３）によって分離した。
【０２７５】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第１の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例１０（２０．７ｍｇ、１８．８％の収率）を得た。
【０２７６】
実施例１０：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０５１．９，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０９６．０
精密質量：１０５０．５６
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ６．４９−６．３９（ｍ，２Ｈ），６．３０−６．１４（ｍ，２Ｈ），６．１１−６．０１（ｍ，１Ｈ），５．６０−５．５０（ｍ，１Ｈ），５．０６−５．００（ｍ，１Ｈ），４．９８−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６７−４．５８（ｍ，１Ｈ），４．１７−４．０１（ｍ，３Ｈ），４．０１−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．９２−３．８５（ｍ，１Ｈ），３．７３−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．６０−３．５２（ｍ，１Ｈ），３．５０−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．３５−３．２６（ｍ，４Ｈ），３．１５−３．１２（ｍ，３Ｈ），３．１１−３．０１（ｍ，２Ｈ），３．０１−２．９５（ｍ，１Ｈ），２．８８−２．７９（ｍ，１Ｈ），２．２９−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．１２（ｍ，１Ｈ），２．１０−１．９９（ｍ，２Ｈ），１．９９−１．８７（ｍ，３Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．８０−１．７１（ｍ，１Ｈ），１．７１−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．５８−１．５４（ｍ，１Ｈ），１．５２−１．４８（ｍ，５Ｈ），１．４７−１．３１（ｍ，１３Ｈ），１．２８−１．１１（ｍ，４Ｈ），１．０７−１．０２（ｍ，１Ｈ），１．０１−０．９５（ｍ，８Ｈ），０．８７−０．８４（ｍ，３Ｈ），０．８２（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７９−０．７６（ｍ，１Ｈ），０．７４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７２−０．６６（ｍ，１Ｈ）．
【０２７７】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第２の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例１１（１３．４ｍｇ、１２．２％の収率）を得た。
【０２７８】
実施例１１：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０５１．８，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０９５．８
精密質量：１０５０．５６
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ６．５１−６．３９（ｍ，１Ｈ），６．２８−６．１３（ｍ，２Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），６．０４−５．８８（ｍ，１Ｈ），５．５７−５．４６（ｍ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），５．０３（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．６７−４．５６（ｍ，１Ｈ），４．１８−４．１１（ｍ，２Ｈ），４．０９−４．０２（ｍ，２Ｈ），３．９９−３．８９（ｍ，２Ｈ），３．６０−３．４９（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｄｔ，Ｊ＝７．７，５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１５−３．１１（ｍ，４Ｈ），３．０７−３．００（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．６３（ｍ，１Ｈ），２．２８−２．１３（ｍ，２Ｈ），２．１３−２．０５（ｍ，２Ｈ），２．０５−１．９７（ｍ，２Ｈ），１．９７−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８３（ｓ，３Ｈ），１．８０−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６８−１．５８（ｍ，４Ｈ），１．５８−１．４８（ｍ，７Ｈ），１．４８−１．４３（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．３４（ｍ，１０Ｈ），１．３４−１．２８（ｍ，１Ｈ），１．２８−１．２２（ｍ，２Ｈ），１．２２−１．１３（ｍ，２Ｈ），１．１３−１．０３（ｍ，１Ｈ），１．０３−０．９４（ｍ，５Ｈ），０．９４−０．８８（ｍ，４Ｈ），０．８６（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．６６（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２７９】
実施例１２：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（Ｓ）−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−ラパマイシン（ジアステレオマー１）
実施例１３：Ｃ１６−（１，１−ジオキシド−１，２−チアゼチジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（Ｓ）−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−ラパマイシン（ジアステレオマー２）
【化７０】
2020535134.tif 000078
ＤＣＭ（６ｍＬ）中の中間体５（１１８ｍｇ、０．１２４ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ）及び１，２−チアゼチジン１，１−ジオキシド（６６．４ｍｇ、０．６２０ｍｍｏｌ、５ｅｑ）の溶液に塩化亜鉛（ＩＩ）（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液、０．６２０ｍＬ、０．６２０ｍｍｏｌ、５ｅｑ）を追加した。反応混合物を３時間、室温で撹拌した。反応物をＨ２Ｏで希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を減圧下で蒸発させた。ジアステレオマー混合物の粗生成物をＳＦＣクロマトグラフィー（方法３）によって分離した。
【０２８０】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第１の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例１２（１４．８ｍｇ、１１．３％の収率）を得た。
【０２８１】
実施例１２：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０５０．０，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０７２．１
精密質量：１０２６．５７
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ９．３２（ｓ，１Ｈ），６．５２（ｓ，１Ｈ），６．４５−６．３７（ｍ，１Ｈ），６．３１−６．１４（ｍ，２Ｈ），６．１０−６．０４（ｍ，１Ｈ），５．６０−５．４９（ｍ，１Ｈ），５．２３−５．１２（ｍ，１Ｈ），５．０７−５．０１（ｍ，１Ｈ），４．９９−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．８７（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６９−４．５９（ｍ，１Ｈ），４．１５−４．０２（ｍ，３Ｈ），３．９４−３．８４（ｍ，１Ｈ），３．７２−３．５４（ｍ，３Ｈ），３．５１−３．４２（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｓ，４Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），３．０７（ｄｄ，Ｊ＝７．３，５．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０１−２．９１（ｍ，１Ｈ），２．８５（ｔｄ，Ｊ＝１０．６，９．５，４．７Ｈｚ，１Ｈ），２．２８−２．１３（ｍ，３Ｈ），２．１０−２．００（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．８８（ｍ，３Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．８０−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．７３−１．６７（ｍ，４Ｈ），１．５９−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．５３−１．４５（ｍ，６Ｈ），１．４５−１．３４（ｍ，３Ｈ），１．３３−１．２０（ｍ，３Ｈ），１．２０−１．０７（ｍ，３Ｈ），１．０５−１．０１（ｍ，１Ｈ），１．００−０．９４（ｍ，６Ｈ），０．８８−０．８２（ｍ，６Ｈ），０．８０−０．７５（ｍ，１Ｈ），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）．
【０２８２】
分取ＨＰＬＣ（方法２）を使用する第２の溶離ジアステレオマーの最終精製により、白色固体として実施例１３（１２．３ｍｇ、９．４％の収率）を得た。
【０２８３】
実施例１３：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０２７．７，［Ｍ−Ｈ］１０２５．６，［Ｍ＋ＦＡ−Ｈ］１０７１．６
精密質量：１０２６．５７
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６  δ  ９．３０（ｓ，１Ｈ），６．５２−６．３８（ｍ，１Ｈ），６．２８−６．１４（ｍ，２Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．５８−５．４２（ｍ，１Ｈ），５．２１−５．１４（ｍ，１Ｈ），５．１０−５．００（ｍ，２Ｈ），５．００−４．９２（ｍ，１Ｈ），４．６９−４．５７（ｍ，１Ｈ），４．１６−４．１０（ｍ，３Ｈ），４．０８−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．９７−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．６１（ｄｔ，Ｊ＝１０．６，４．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５７−３．５１（ｍ，１Ｈ），３．５１−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．４６−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．１９−３．１５（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｓ，３Ｈ），３．１１−３．０８（ｍ，１Ｈ），２．８０−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１５（ｍ，３Ｈ），２．１０−２．０１（ｍ，２Ｈ），２．０１−１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８３（ｓ，３Ｈ），１．７９−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．６４−１．５８（ｍ，２Ｈ），１．５７−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．５４−１．４７（ｍ，７Ｈ），１．４６−１．３５（ｍ，３Ｈ），１．３２−１．１８（ｍ，５Ｈ），１．１４−１．０４（ｍ，３Ｈ），０．９８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．９１−０．８５（ｍ，７Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７２（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）．
【０２８４】
実施例１４：Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−ジメチルホスフィニル−ラパマイシン（ジアステレオマー１）
実施例１５：Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−ジメチルホスフィニル−ラパマイシン（ジアステレオマー２）
【化７１】
2020535134.tif 000079
中間体４（０．１４６ｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）及びイソチアゾリジン１，１−ジオキシド（０．１８１ｇ、１．４９６ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１．５ｍＬ）中に溶解した。パラ−トルエンスルホン酸一水和物（２．８４ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を一度に追加した。反応混合物を２時間、室温で撹拌した。
【０２８５】
ＮａＨＣＯ３飽和水を追加した。混合物を酢酸エチルで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、無色タール粗生成物を得た。
【０２８６】
粗生成物をＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中で溶解し、分取スケール逆相クロマトグラフィーを介して１回のインジェクションで精製した（１００ｇ  Ｃ１８  ＩＳＣＯカラム上４０〜９０％アセトニトリル−水と０．１％  ＴＦＡモディファイヤー）。
【０２８７】
第１の溶離ピーク画分をプールし、ロータリーエバポレーター上で約１／３の体積まで低下させた。残りの溶液は、飽和ＮａＨＣＯ４水で塩基性にし、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、白色固体として実施例１４（０．０５５ｇ、０．０４４ｍｍｏｌ、２９．３％の収率）を得た。
【０２８８】
実施例１４：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０８２．８，［Ｍ−Ｈ］１０６３．７．
ＨＲＭＳ：ナトリウム付加物としてのＣ５５Ｈ８９Ｎ２Ｏ１４ＰＳＮａについての計算値  −  １０８７．５６７０．測定値  −  １０８７．５７２５．
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２３−５．１７（ｍ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１８−４．０４（ｍ，２Ｈ），４．０３−３．９１（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６８−３．４８（ｍ，２Ｈ），３．３８（ｍ，４Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．２６−３．１２（ｍ，２Ｈ），３．１２−２．９１（ｍ，４Ｈ），２．７４（ｍ，１Ｈ），２．４８−２．２６（ｍ，３Ｈ），２．２６−２．１２（ｍ，３Ｈ），２．１２−２．０４（ｍ，２Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．８５−１．７２（ｍ，４Ｈ），１．７２−１．５４（ｍ，１２Ｈ），１．５４−１．４３（ｍ，６Ｈ），１．４３−１．３３（ｍ，３Ｈ），１．３３−１．２１（ｍ，２Ｈ），１．２１−１．０９（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｍ，７Ｈ），１．００−０．７８（ｍ，９Ｈ），０．７２（ｑ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０２８９】
第２の溶離ピーク画分をプールし、ロータリーエバポレーター上で約１／３の体積まで低下させた。残りの溶液は、飽和ＮａＨＣＯ３水で塩基性にした。混合物を酢酸エチルで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、白色固体として実施例１５（０．０１０ｇ、７．５１μｍｏｌ、５．０２％の収率）を得た。
【０２９０】
実施例１５：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０８２．８，［Ｍ−Ｈ］１０６３．８．
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．３６（ｄｄ，Ｊ＝１９．２，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｍ，１Ｈ），６．０４−５．８４（ｍ，１Ｈ），５．６５（ｍ，１Ｈ），５．３２（ｍ，１Ｈ），６．２１（ｍ，１Ｈ），５．１１（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｑ，Ｊ＝１０．９，６．８，５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４６−３．３３（ｍ，７Ｈ），３．３０（ｍ，３Ｈ），３．１８（ｍ，３Ｈ），３．１０−２．８２（ｍ，３Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．２８（ｍ，３Ｈ），２．１４（ｍ，３Ｈ），１．９０−１．７７（ｍ，４Ｈ），１．７４（ｍ，４Ｈ），１．６６（ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，３Ｈ），１．６１−１．４１（ｍ，１２Ｈ），１．３４−１．１９（ｍ，５Ｈ），１．１８−１．１１（ｍ，１Ｈ），１．１１−０．７９（ｍ，１９Ｈ），０．７８−０．６８（ｍ，１Ｈ）．
【０２９１】
実施例１６：（Ｒ）−Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（２−ヒドロキシエトキシ）−ラパマイシン
【化７２】
2020535134.tif 000080
Ｃ１６の絶対立体配置は、出発物質としての実施例２の使用に基づき、（Ｒ）であることがわかっている。
【０２９２】
実施例１６は、２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エタノール及び実施例２から２ステップの手順で調製した。
【化７３】
2020535134.tif 000081
ステップ１．中間体Ｃの調製
２−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）エタノール（０．１４２ｇ、０．８０３ｍｍｏｌ）を無水トルエン（０．４ｍＬ）中で溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１４７ｍｌ、０．８４３ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して追加した。混合物を窒素で真空パージし、次いで氷水浴槽中で０Ｃまで冷やした。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．１３２ｍｌ、０．７７９ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して６０秒間にわたって滴加した。反応物を３０分間０Ｃで撹拌した。
【０２９３】
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１４７ｍｌ、０．８４３ｍｍｏｌ）、トルエン（０．５ｍＬ）及び実施例２（０．１９８ｇ、０．２００ｍｍｏｌ）を追加した。氷浴槽を取り外し、反応物を４０Ｃで一晩、次いで５５Ｃで１時間撹拌した。
【０２９４】
反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水で希釈し、ＥｔＯＡｃで４回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、セライトを通して真空濾過し、濃縮し、粗生成物の無色の油を得た。
【０２９５】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜４０％アセトン−ヘプタン、勾配溶離、１２ｇシリカカラム、３０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、白色固体として中間体Ｃ（０．０７７ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、３３．５％の収率）を得た。
【０２９６】
中間体Ｃ：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１１６４．７，［Ｍ−Ｈ］１１４７．０．
【０２９７】
ステップ２．実施例１６の調製
中間体Ｃ（０．０７７ｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（０．７ｍＬ）中のピリジン（５．４３μｌ、０．０６７ｍｍｏｌ）と組み合わせた。混合物を窒素で２回真空パージし、次いで氷水浴槽中で０Ｃまで冷やした。ＨＦ−ピリジン（０．０８６ｍｌ、０．６７１ｍｍｏｌ）を、シリンジを介して１５秒間にわたって滴加した。反応物を７０分間０Ｃで撹拌した。
【０２９８】
反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、セライトを通して真空濾過し、濃縮し、白色固体粗生成物が得られた。
【０２９９】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜４０％アセトン−ヘプタン、勾配溶離、１２ｇシリカカラム、４０％ＥｔＯＡｃ−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、白色固体として実施例１６（０．０４９ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、６９．０％の収率）を得た。
【０３００】
実施例１６：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０５０．９，［Ｍ−Ｈ］１０３１．９．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｍ，１Ｈ），３．７０（ｍ，３Ｈ），３．６３−３．５５（ｍ，３Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．２４−３．１５（ｍ，２Ｈ），３．１２−３．０４（ｍ，２Ｈ），３．０７−２．９８（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｍ，１Ｈ），２．４４−２．３３（ｍ，１Ｈ），２．３０（Ｍ，２Ｈ），２．２３（ｍ，１Ｈ），２．１６（ｍ，２Ｈ），２．０９（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，１Ｈ），２．０１（ｍ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．８４（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．７８−１．７０（ｍ，３Ｈ），１．７０−１．６２（ｍ，４Ｈ），１．５２（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，７．７Ｈｚ，１Ｈ），１．５０−１．４１（ｍ，２Ｈ），１．４３−１．３２（ｍ，１Ｈ），１．３４−１．２７（ｍ，１Ｈ），１．３０−１．１７（ｍ，８Ｈ），１．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．５，６．６Ｈｚ，７Ｈ），１．０２−０．８５（ｍ，１０Ｈ），０．８５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．６９（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０３０１】
実施例１７：Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（Ｓ）−（１Ｈ−テトラゾール−１−イル）−ラパマイシン
【化７４】
2020535134.tif 000082
中間体５（０．１０９ｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１．１ｍＬ）中のイソチアゾリジン１，１−ジオキシド（０．１３９ｇ、１．１４５ｍｍｏｌ）と組み合わせた。パラ−トルエンスルホン酸一水和物（０．００２２ｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を追加した。反応物を２時間、室温で撹拌した。
【０３０２】
反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機抽出物を組み合わせ、Ｎａ２ＳＯ上で乾燥させ、デカントし、濃縮し、黄色タール粗生成物を得た。
【０３０３】
粗生成物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜４０％アセトン−ヘプタン、勾配溶離、２４ｇシリカカラム、４０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、白色固体として実施例１７（０．０５３ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ、４０．０％の収率）を得た。
【０３０４】
実施例１７：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０４１．８，［Ｍ−Ｈ］１０３９．８．
ＨＲＭＳ：Ｃ５４Ｈ８４Ｎ６Ｏ１２ＳＮａについての計算値  −  １０６３．５７６５．測定値  −  １０６３．５７５９．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ８．８６（ｓ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｄｄ，Ｊ＝１５．０，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８７（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｍ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６９−３．６２（ｍ，１Ｈ），３．５５（ｄｔ，Ｊ＝１１．２，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５０−３．３９（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），３．３８−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｓ，３Ｈ），３．２５−３．１３（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｔｄ，Ｊ＝８．４，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｍ，１Ｈ），２．９６（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），２．７０−２．６３（ｍ，２Ｈ），２．３９（ｍ，１Ｈ），２．３５−２．２１（ｍ，３Ｈ），２．１８（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．１６−２．０９（ｍ，１Ｈ），１．９５−１．８１（ｍ，３Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｍ，３Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ），１．６０（ｍ，６Ｈ），１．５８−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．５３−１．３４（ｍ，２Ｈ），１．３２（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｍ，１Ｈ），１．２５（ｍ，６Ｈ），１．１２（ｍ，１Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ），１．０５−０．７８（ｍ，１２Ｈ）．
【０３０５】
実施例１８：Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（２−エトキシエトキシ）−ラパマイシン
【化７５】
2020535134.tif 000083
中間体６（０．０９０ｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（０．９３ｍＬ）中のイソチアゾリジン１，１−ジオキシド（０．１１２ｇ、０．９２６ｍｍｏｌ）と組み合わせた。パラ−トルエンスルホン酸一水和物（１．７６１ｍｇ、９．２６μｍｏｌ）を一度に追加した。反応物を１００分間、室温で撹拌した。
【０３０６】
全反応混合物は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し（０〜４０％アセトン−ヘプタン、勾配溶離、２４ｇシリカカラム、４０％アセトン−ヘプタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、実施例１８及び残存している未反応のイソチアゾリジン１，１−ジオキシドの混合物を得た。
【０３０７】
混合材料は、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによってもう一度精製し（０〜５０％アセトニトリル−ジクロロメタン、勾配溶離、２４ｇカラム、３０％アセトニトリル−ジクロロメタンにおいてＴＬＣ、ＵＶ下で視覚化）、白色固体として実施例１８（０．０２１ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、２０．４％の収率）を得た。
【０３０８】
実施例１８：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１０７８．９，［Ｍ−Ｈ］１０５９．９．
ＨＲＭＳ：Ｃ５７Ｈ９２Ｎ２Ｏ１４ＳＮａナトリウム付加物についての計算値  −  １０８３．６１６７．測定値  １０８３．６１５１．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．５，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４．６，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１４（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｓ，１Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，１Ｈ），＊＊３．７３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｍ，４Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｍ，２Ｈ），３．０５−２．９９（ｍ，１Ｈ），２．９７（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｄｑ，Ｊ＝１４．４，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４４−２．３３（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２７−２．１９（ｍ，１Ｈ），２．１９−２．１２（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９４（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．８３（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７４（ｍ，３Ｈ），１．６６（ｍ，７Ｈ），１．５６−１．４４（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．１５（ｍ，１２Ｈ），１．０４（ｍ，７Ｈ），０．９１（ｍ，８Ｈ），０．８４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．７０（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０３０９】
実施例１９：Ｃ１６−（１，１−ジオキシドイソチアゾリジン−２−イル）−Ｃ３２−デオキソ−Ｃ４０−（（３−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノイル）オキシ）−ラパマイシン
【化７６】
2020535134.tif 000084
中間体７（０．０８８ｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（０．８７ｍＬ）中のイソチアゾリジン１，１−ジオキシド（０．１０５ｇ、０．８６６ｍｍｏｌ）と組み合わせた。パラ−トルエンスルホン酸一水和物（１．６４７ｍｇ、８．６６μｍｏｌ）を追加した。反応物を３０分間、室温で撹拌した。
【０３１０】
全反応混合物は、順相フラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜６０％アセトニトリル−ジクロロメタン、勾配溶離、１２ｇシリカカラム、３０％アセトニトリル−ジクロロメタンにおいてＴＬＣ）によって精製し、白色固体として実施例１９（０．０２０ｇ、０．０１７ｍｍｏｌ、１９．９％の収率）を得た。
【０３１１】
実施例１９：ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋ＮＨ４］１１２３．０，［Ｍ−Ｈ］１１０４．０．
ＨＲＭＳ：アンモニウム付加物Ｃ５８Ｈ９２Ｎ２Ｏ１６ＳＮＨ４についての計算値  −  １１２２．６５１１；測定値  １１２２．６５２．
１Ｈ  ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄｄ，Ｊ＝１４．７，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．０，９．２，４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｓ，１Ｈ），４．１３（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｄｄ，Ｊ＝１８．５，１１．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７８−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｔｄ，Ｊ＝１３．５，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．３１（ｍ，４Ｈ），３．２８（ｍ，３Ｈ），３．２６−３．１７（ｍ，２Ｈ），３．１２−２．９２（ｍ，３Ｈ），２．７６−２．６８（ｍ，１Ｈ），２．４５−２．３４（ｍ，１Ｈ），２．３１−２．２１（ｍ，３Ｈ），２．２０−２．１０（ｍ，３Ｈ），２．０６（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｍ，４Ｈ），１．７５（ｍ，３Ｈ），１．７１−１．５９（ｍ，３Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），１．６０−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．４８−１．３９（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．３１（ｍ，２Ｈ），１．３３−１．２０（ｍ，８Ｈ），１．１１（ｓ，３Ｈ），１．１１−１．０５（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｄｄ，Ｊ＝１８．２，６．６Ｈｚ，６Ｈ），０．９９−０．８２（ｍ，１０Ｈ），０．７９（ｑ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）．
【０３１２】
実施例２０：バイオアッセイ及びデータ
本開示による化合物の活性を以下のインビトロ及びインビボにおける方法によって評価した。
【０３１３】
薬理学的特徴
材料及び方法
ラパログ効力決定のための細胞ベースのアッセイ。ラパログの効力を、ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞ベースのアッセイを使用して決定した。ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞は、ｍＴＯＲＣ１シグナル伝達を負に調節する結節性硬化症タンパク質−ＴＳＣ１が欠損しているマウス胚線維芽細胞であり、したがって恒常的なｍＴＯＲＣ１活性化を呈し、下流の分子のリン酸化（活性化）をもたらす。この細胞ベースのアッセイは、ラパログ又は他のｍＴＯＲ阻害剤によるＳ６及び４ＥＢＰ１の阻害（脱リン酸化）を測定するために使用する。
【０３１４】
ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞をポリ−Ｄ−リシンコーティング３８４ウェルＧｒｉｅｎｅｒクリアボトムプレート上で平板培養し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。翌日、細胞を「Ｈａｒｄ  ｓｔａｒｖｅ」溶液（１Ｌ  ＤＰＢＳ＋１ｇ  Ｄ−（＋）グルコース＋１０ｍｌの７．５％重炭酸ナトリウム＋２０ｍｌの１Ｍ  ＨＥＰＥＳ）で８回洗浄し、同じ溶液でさらに２時間インキュベートする。細胞は、次に、化合物により、濃度を減少させながら（３．１６倍希釈で８段階）処理し、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートする。細胞を、３０分間、４％パラホルムアルデヒドで固定し、ＴＢＳ−ＥＤＴＡで５回洗浄し、その後、ｐＳ６（Ｓｅｒ２４０／２４４）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ＃９４６８）及びｐ４ＥＢＰ１（Ｔｈｒ３７／４６）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ＃５１２３）について蛍光タグ標識抗体により免疫染色した。核は、ヘキスト（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃Ｈ３５７０）染色により視覚化した。細胞は、それぞれの蛍光チャネルを使用して画像化し（ＩｎＣｅｌｌ  ６００）、ｍＴＯＲ阻害剤の効力をｐＳ６  ＩＣ５０（ｎＭ）によって定義した。
【０３１５】
動物の飼育、化合物による治療及び組織収集。動物に関するすべての手順は、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ、ＵＳＡによって承認された。成体Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）雄ラットは、Ｅｎｖｉｇｏ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）又はＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ（ＵＳＡ）から購入した。輸入したら、ラットは、温度及び照明をコントロールし（２２℃、１２ｈ明／１２ｈ暗サイクル：０６００ｈに点灯／１８００ｈに消灯）、飼料及び水を自由に摂取できる特定病原体除去設備で飼育した。ラットは、実験を開始する前に少なくとも３日間順応させた。
【０３１６】
実施例２及びＲＡＤ００１は、経口投薬のために製剤した。ブランク製剤（実施例２又はＲＡＤ００１がない）は、ビヒクルコントロールとしての役割を果たした。ラットは、１回の用量の実施例２、ＲＡＤ００１又はそれぞれのビヒクルをｐ．ｏ．で受けた。治療後の所定の時間に、ラットは、３．５％イソフルランにより麻酔をかけ、安楽死させた。様々な器官を収集し、液体窒素中で冷凍した。血液は、尾静脈又は心臓穿刺（致命的）を介して収集し、さらなる薬物動態学的分析のために冷凍した。組織は、すべて分析するまで−８０℃で保存した。
【０３１７】
血液及び組織中の実施例２及びＲＡＤ００１の濃度の決定。濃度は、ＨＰＬＣ／質量分析を使用して決定した。
【０３１８】
タンパク質抽出及びイムノブロッティング。タンパク質抽出のために、スナップ凍結組織を、完全ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤及びＰｈｏｓＳＴＯＰホスファターゼ阻害剤錠（Ｒｏｃｈｅ、Ｍａｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を補足したＭＳＤ溶解バッファー（ＭＳＤ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）中で溶解し、４℃において２０分間１３，０００ｇで遠心分離した。結果として生じた上清をイムノブロッティングに使用した。タンパク質は、ＢＣＡプロテインアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ）により定量した。サンプルは、４〜２０％Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ（商標）ＴＧＸ（商標）Ｐｒｅｃａｓｔ  Ｍｉｄｉ  Ｐｒｏｔｅｉｎゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ）上で分離し、Ｔｒａｎｓ  Ｔｕｒｂｏ  Ｂｌｏｔシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ）を使用してニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＣＡ）上に転写した。イムノブロッティングは、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのｐ−Ｓ６及びｔ−Ｓ６に対する抗体により実行した（すべて５％ＢＳＡを有するＴＢＳ−Ｔ中１：１０００）。「ｐ」及び「ｔ」識別コードは、それぞれ「リン酸化」及び「全」形態を示す。ウサギに対するＨＲＰ抱合二次抗体（＃７０７４）は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＭＡのものとした。化学発光シグナルは、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ（商標）Ｗｅｓｔ  Ｆｅｍｔｏ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（＃３４０９５、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ）又はＷｅｓｔｅｒｎ  Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ（登録商標）Ｐｌｕｓ−ＥＣＬ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＮＥＬ１０３００１ＥＡ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ＭＡ）を使用して生成し、ＣｈｅｍｉＤｏｃ  ＭＰ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して捕捉した。結果として生じたデジタル画像は、ＴＩＦＦ形式に変換し、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量した。
【０３１９】
ＦＫＰＢ１２ノックダウン細胞の生成。ＦＫＢＰ１２  Ｃ−末端（ＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＧＡＣ）を標的にするｇＲＮＡ配列を含有するＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳ９ベクターを２９３Ｔ細胞中にトランスフェクトした。選択は、４８時間ピューロマイシンにより実行し、細胞は、コロニー形成のために平板培養した。ＦＫＢＰ１２ノックダウンクローンは、抗ＦＫＢＰ１２抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｉｅｒｃｅ＃ＰＡ１−０２６Ａ）により免疫ブロットすることによってスクリーニングした。ＦＫＢＰ１２が有意に低下しているクローン（外部から操作されていない２９３Ｔ細胞におけるレベルと比べておよそ８０％の低下）を選択した。
【０３２０】
ＦＫＰＢ１２ノックアウト細胞の生成。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系は、Ａｍａｘａ（登録商標）４Ｄ−Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）Ｘ  Ｋｉｔ（Ｌｏｎｚａ、Ｖ４ＸＣ−２０３２）を使用し、ＦＫＢＰ１２（ＧＣＣＡＣＴＡＣＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴ）を標的にするガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）配列を含有するリボ核タンパク質複合体を２９３Ｔ細胞中に送達するために使用した。細胞クローンは、抗ＦＫＢＰ１２抗体（Ｎｏｖｕｓ、ＮＢ３００−５０８）により免疫ブロットすることによってスクリーニングし、完全なＦＫＢＰ１２ノックアウト（測定することができるＦＫＢＰ１２がない）を示す単一のクローンを選択した。
【０３２１】
ＲＡＤ００１及び実施例２による野生型（ＷＴ）、ＦＫＢＰ１２ノックダウン及びＦＫＢＰ１２ノックアウト２９３Ｔ細胞の治療。ＷＴ、ＦＫＢＰ１２ノックダウン及びＦＫＢＰ１２ノックアウト２９３Ｔ細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃１６１４０−０７１）を補足したダルベッコ修飾イーグル培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃１１９９５−０６５）中、ポリ−Ｄ−リシンコーティング９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５４４６１）において１ウェル当たり３０，０００細胞の密度で平板培養した。細胞は、約８０％のコンフルエンスに達するまで３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした。細胞は、二通り、３７℃で２時間、１０００ｎＭ〜０．００３３ｎＭまでの１２段階の用量範囲を使用してＲＡＤ００１及び実施例２により治療した。ブランクのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を補足した培地は、両方の化合物のコントロールとして使用した。Ｓ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）のリン酸化量は、メーカーのプロトコールに従い、サンドイッチＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃７０６３Ｃ）によって検出した。
【０３２２】
ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）に対する結合親和性を決定するためのＳＰＲアッセイ。ＦＫＢＰ１２、ＦＫＢＰ５１及びＦＫＢＰ５２に対するＮ末端ａｖｉ−ｈｉｓ６タグ付きＦＫＢＰ融合物を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現させ、標準的なクロマトグラフィーを使用して精製した。それぞれのタンパク質をＢｉａｃｏｒｅ  ８Ｋ  ＳＰＲ機器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のストレプトアビジンチップ上に続いて固定した。シングルサイクルカイネティクスを使用し、滴定化合物を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ  ７．５／１５０ｍＭ  ＮａＣｌ／０．０１％  Ｔｗｅｅｎ２０／１ｍＭ  ＤＴＴ／２％  ＤＭＳＯを含有するバッファーにおいて、２分間の会合フェーズ及び３０分間の解離フェーズを使用し、それぞれの表面に４５ｕＬ／分で流した。データは、低分子量（ＬＭＷ）シングルサイクルカイネティクスを使用してフィットさせた。平衡解離定数（ＫＤ）を報告する。
【０３２３】
ラパログの特異な薬理は、１）これらの細胞／組織におけるＦＫＢＰ相同体の相対的存在量、及び２）これらの様々なＦＫＢＰ相同体に対する結合の特異性に依存して、様々な細胞型又は組織型において実現され得る（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２０１３）３３：１３５７−１３６７）。
【０３２４】
結果
ｍＴＯＲ阻害剤のインビトロにおける効力は、ＭＥＦ  ＴＳＣ１−／−細胞においてｐＳ６  ＩＣ５０（ｎＭ）によって定義した。
【０３２５】
【表７】
2020535134.tif 000085
【０３２６】
ＩＣ５０値は、複数のアッセイからの平均として計算する。
【０３２７】
【表８】
2020535134.tif 000086
【０３２８】
ラットにおける実施例２の薬物動態プロファイル。４月齢のラットを３ｍｇ／ｋｇで実施例２の１回のｐ．ｏ．用量により治療し、血液は、投薬の０．２５、０．５、１、２、４及び７ｈ後に収集した。この実験では、実施例２は、ＭｉｌｌｉＱ水中１５％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００、７．５％Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、７．５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬにおいて製剤した。実施例２の濃度は、ＨＰＬＣ−ＭＳによって測定した（図３）。
【０３２９】
ラットにおける実施例２及びＲＡＤ００１の相対的な血液濃度及び脳内濃度。
４月齢のラットを３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇで実施例２（ＭｉｌｌｉＱ水中１５％ＰＥＧ３００、７．５％Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、７．５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬにおいて製剤）によりｐ．ｏ．治療した。別の実験では、８週齢のラットを３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇでＲＡＤ００１（２％（ｗ／ｗ）のマイクロエマルションとして製剤し、ＭｉｌｌｉＱ水において最終濃度まで希釈）によりｐ．ｏ．治療した。血液及び脳組織は、化合物の濃度を決定するために治療の３時間（ｈ）及び２４ｈ後に収集した。同じ用量（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）で投与した場合、実施例２についての血液濃度及び脳内濃度は、ＲＡＤ００１についての濃度と比較して高かった（図４Ａ及び４Ｂ）。
【０３３０】
ラットにおける実施例２対ＲＡＤ００１のバイオアベイラビリティを比較するために、化合物は、溶液製剤として製剤した。実施例１は、ＰＢＳ中１５％ＰＥＧ３００、７．５％Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、７．５％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬにおいて製剤し、ＲＡＤ００１は、ＰＢＳ中１０％ＰＥＧ３００、１０％Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ１５、１０％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬにおいて製剤した。化合物を７〜９週齢のラットに３ｍｇ／ｋｇでｐ．ｏ．及び１ｍｇ／ｋｇで静脈内（ｉ．ｖ．）投与した（１群当たりＮ＝３）（図４Ｃ及び４Ｄ）。実施例２及びＲＡＤ００１それぞれについて、バイオアベイラビリティは、１８％及び１９％、ｉ．ｖ．終末相半減期９．９ｈ及び９．５ｈ、クリアランス９ｍＬ／分／ｋｇ及び３２ｍＬ／分／ｋｇ並びにＶｄｓｓ（定常状態での分布容積）４．４Ｌ／ｋｇ及び１８．８Ｌ／ｋｇであった。
【０３３１】
実施例２は、ラット肝臓においてｍＴＯＲＣ１経路を阻害する。実施例２がインビボにおいてｍＴＯＲＣ１経路を阻害する能力を４月齢のラットにおいて決定した（図５Ａ〜５Ｄ）。３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの実施例２の１回の用量は、投薬の３時間後、ラット肝臓におけるＳ６の有意な脱リン酸化（不活性化）をもたらした（ビヒクルコントロールと比較して）（図５Ａ及び５Ｂ）。Ｓ６は、１０（傾向ｐ＝０．０６）及び３０ｍｇ／ｋｇによる投薬の２４ｈ後も不活性化されたままであった（図５Ｃ及び５Ｄ）。
【０３３２】
ＦＫＢＰ１２は、ＲＡＤ００１ではなく実施例２の阻害効果に必要とされる。Ｓ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）のリン酸化量は、ＲＡＤ００１又は実施例２により治療したＷＴ、ＦＫＢＰ１２ノックダウン及びＦＫＢＰ１２ノックアウト２９３Ｔ細胞において測定した。Ｓ６Ｋ１は、ｍＴＯＲＣ１の下流の標的であり、そのラパログ感受性Ｔｈｒ３８９部位のリン酸化は、ｍＴＯＲＣ１活性の測定値の関数として使用される。Ｌｅｅ，Ｃ．Ｈ．，Ｉｎｏｋｉ，Ｋ．ａｎｄ  Ｇｕａｎ，Ｋ．Ｌ．（２００７）．ｍＴＯＲ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４７，４４３−４６７。ＷＴ  ２９３Ｔ細胞では、ＲＡＤ００１及び実施例２の両方が約８０％までＳ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）を阻害するのに有効であった（図６Ａ）。ＦＫＢＰ１２ノックダウン細胞では、実施例２は、ＲＡＤ００１と同じレベルまでＳ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）リン酸化を阻害しなかった。ＲＡＤ００１によるＳ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）の最大の阻害は、約７０％であったが、実施例２によって実現された阻害は、約４０％であった（図６Ｂ）。ＦＫＢＰ１２ノックアウト細胞では、実施例２は、Ｓ６Ｋ１（Ｔｈｒ３８９）リン酸化を阻害しなかったが、＞６０％の阻害がＲＡＤ００１によってなお実現された（図６Ｃ）。これらの結果は、実施例２の薬理学的効果がＦＫＢＰ１２に制限されることを示す。ＦＫＢＰ１２に対する実施例２のそのような特異性は、ＦＫＢＰ１２の発現が弱い組織における副作用を回避しながら（又は最小限にしながら）、比較的高いレベルのＦＫＢＰ１２発現を有する細胞及び組織を標的にすることを容易にし得る。
【０３３３】
均等物及び範囲
請求項では、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」などの冠詞は、反対の指示がない限り又はそうでなければ文脈から明白でない限り、１つ又は２つ以上を意味し得る。群の１つ以上のメンバー間に「又は」を含む請求項又は説明は、反対の指示がない限り又はそうでなければ文脈から明白でない限り、１つ、２つ以上又はすべての群メンバーが所定の製品又はプロセスに存在するか、用いられるか、又はそうでなければ関係がある場合、条件を満たすと見なされる。本開示は、群のまさに１つのメンバーが所定の製品又はプロセスに存在するか、用いられるか、又はそうでなければ関係がある実施形態を含む。本開示は、２つ以上又はすべての群メンバーが所定の製品又はプロセスに存在するか、用いられるか、又はそうでなければ関係がある実施形態を含む。
【０３３４】
さらに、本開示は、１つ以上の掲載される請求項の１つ以上の限定、要素、節及び記述用語が別の請求項に導入される変形形態、組み合わせ及び並べ換えをすべて包含する。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、同じ基礎となる請求項に従属する任意の他の請求項において見つけられる１つ以上の限定を含むように変更することができる。要素が例えばマーカッシュ形式でリストとして提供される場合、要素のそれぞれのサブグループも開示されており、任意の要素を群から除くことができる。概して、本開示又は本開示の態様が特定の要素及び／又は特徴を含むとして言及される場合、本開示又は本開示の態様のある実施形態は、そのような要素及び／又は特徴からなるか又は本質的にそれからなると理解されるべきである。用語「含むこと」及び「含有すること」は、オープンであることが意図され、さらなる要素又はステップの組み入れを可能にすることも注意される。範囲が与えられる場合、終点が含まれる。さらに、別段の指示がない限り又はそうでなければ文脈及び当業者の理解から明白でない限り、範囲として表現される値は、文脈に明らかな指示がない限り、本開示の様々な実施形態における一定の範囲内の任意の特定の値又は部分範囲を範囲の下限の単位の１０分の１まで想定することができる。
【０３３５】
本出願は、様々な発行済みの特許、公開特許出願、雑誌記事及び他の刊行物に言及し、これらのすべては、参照によって本明細書に援用される。援用される参考文献のいずれか及び本発明の明細書間に矛盾がある場合、本明細書が優先される。加えて、先行技術の範囲内にある本開示のいかなる特定の実施形態も任意の１つ以上の請求項から明示的に除外され得る。そのような実施形態が当業者に知られていると見なされるため、それらは、除外について明示的に本明細書において記載されていなくても除外され得る。本開示の任意の特定の実施形態は、先行技術の存在に関係するかどうかにかかわらず、あらゆる理由のために任意の請求項から除外することができる。
【０３３６】
当業者は、ルーチン的な実験のみを使用して、本明細書において記載される特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか又は確認することができるであろう。本明細書において記載される本発明の実施形態の範囲は、上記の説明に限定されるように意図されず、添付の請求項において記載される通りである。本明細書に対する様々な変更形態及び修飾形態は、以下の請求項において定義されるように、本開示の趣旨又は範囲から逸脱することなくなされ得ることを当業者は理解するであろう。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図４−３】
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【図４−４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【国際調査報告】
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