(57)【要約】本明細書では、骨折および／または骨治癒のための、少なくとも１つのペプチドおよびターゲティングリガンドを含む薬物送達系が開示される。一部の実施形態は、酸性ペプチドまたは非ペプチド性ポリアニオンへと連結された、少なくとも１つの、酸性ペプチド、塩基性ペプチド、親水性ペプチド、疎水性ペプチド、または中性ペプチドを含むペプチド送達系であって、接合させた前述のペプチドの、骨折表面へのターゲティングにおける使用のためのペプチド送達系を含む。一部の実施形態では、コンジュゲートペプチドは、ＰＴＨ受容体１を介して作用する同化機能を果たし、多様なフォーマットのターゲティングリガンドは、薬物を、生ヒドロキシアパタイト（ｒａｗ  ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ）へと誘導する。この系は、遊離型同化薬により引き起こされる、高血液カルシウム濃度などの一部の副作用を相殺する。
2020500871.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物
［式中、
Ｘは、副甲状腺ホルモン受容体の活性をモジュレートする、少なくとも１つの薬剤であり；
Ｚは、少なくとも１つの骨ターゲティング分子であり；
Ｙは、ＸとＺとを接続および／または連結するリンカーである］； 
または薬学的に許容されるその塩またはその代謝物
を含む化合物。
【請求項２】
Ｘが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）に対する、少なくとも８０％の配列同一性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）に対する、少なくとも８０％の配列同一性、および／または全長アバロパラチドもしくはその類似体に対する、少なくとも８０％の同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドもしくは副甲状腺ホルモンのアミノ酸残基３５〜４０、３５〜４１、３５〜４２、３５〜４３、３５〜４４、３５〜４５、３５〜４６、および／もしくは３５〜８４、ならびに／または少なくとも１つのカテプシンＫ感受性ポリペプチドに対する、少なくとも８０％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、および９に対する、少なくとも８０％の配列同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドの、アミノ酸残基３５〜４６および／または４１〜４６に対する、少なくとも８０％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、
請求項１および２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘが、全長アバロパラチドまたはその類似体に対する、８０％の同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドの、アミノ酸残基３５〜４６に対する、少なくとも８０％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、
請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｚが、６つ、７つ、８つ、９つ、および／または１０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、
請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
前記酸性アミノ酸残基が、Ｌ−アスパラギン酸もしくはＤ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸もしくはＤ−グルタミン酸、またはそれらの組合せを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
前記酸性アミノ酸残基が、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｙが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅの式［式中、Ｎｌｅは、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、および／またはこれらの同等物を含む］を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、
請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
前記式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物が、配列番号１０および／または配列番号１１に対する、少なくとも８０％、９０％、および／または９５％の配列同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物が、配列番号１０および／または配列番号１１を有する、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｘが、副甲状腺ホルモン受容体１の、少なくとも１つのアゴニストである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｘが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）の最初の１３アミノ酸に対する、少なくとも８０％の配列相同性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）の最初の１３アミノ酸に対する、少なくとも８０％の配列相同性、および／または配列番号３の、最初の１３アミノ酸に対する、少なくとも８０％の相同性を有する、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
骨関連疾患を処置する方法であって、
少なくとも１つの、治療有効用量の、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは代謝物を対象に提供するステップ
を含む方法。
【請求項１４】
前記対象が、ヒト、動物、細胞、および／または組織を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記骨関連疾患が、骨減少症、骨粗鬆症、関節リウマチ、血液疾患、自己免疫、移植片拒絶、および／または骨折を含む、請求項１３および１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物の前記有効用量が、１日当たり１ｋｇ当たり０．００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり０．０１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり０．１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり１０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり７５ナノモル、および／または１日当たり１ｋｇ当たり２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり５０ナノモルを含む、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物が、経口投与、非経口投与、直腸内投与、および／または経皮投与される、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
式Ｘ−Ｚの化合物
［式中、
Ｘが、少なくとも１つのペプチドであり；
Ｚが、少なくとも１つの骨ターゲティング分子である］；
または薬学的に許容されるその塩またはその代謝物
を含む化合物。
【請求項１９】
Ｚが、骨折した骨を、優先的に、かつ／または選択的にターゲティングする、少なくとも１つの分子である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｘが、６０、５０、４０、３０、２０、および／または１０のアミノ酸残基より少数のアミノ酸残基を有する、少なくとも１つのペプチドである、請求項１８および１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｘが、１つ、２つ、３つ、４つ、および／または５つのアミノ酸残基より多数のアミノ酸残基を有する、少なくとも１つのペプチドである、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｘが、親水性ペプチド、疎水性ペプチド、中性ペプチド、カチオン性ペプチド、および／もしくはアニオン性ペプチド、ならびに／またはこれらの任意の組合せを含む、少なくとも１つのペプチドである、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、またはそれらの類似体または代謝物に対する、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、アレンドロネート（alendronate）またはその誘導体、および／またはビスホスホネート（bisphosphonate）またはその誘導体である、
請求項１８から２２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、またはそれらの類似体または代謝物に対する、少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、および／またはビスホスホネート（bisphosphonate）またはその誘導体である、
請求項１８から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および／または配列番号１９に対する、少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１８から２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および／または配列番号１９に対する、少なくとも１００％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１８から２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｚが、負に帯電したアミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１８から２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｚが、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および／または２０の、負に帯電したアミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、請求項１８から２７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｚが、少なくとも１つのモノビスホスホネート（monobisphosphonate）、バイビスホスホネート（bibisphosphonate）、トリビスホスホネート（tribisphosphonate）、および／またはマルティプルビスホスホネート（multiple-bisphosphonate）である、請求項１８から２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｚが、Ｌ−アスパラギン酸もしくはＤ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸もしくはＤ−グルタミン酸、またはこれらの組合せを含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、請求項１８から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｚが、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖を含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、請求項１８から３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｚが、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖を含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、請求項１８から３１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３３】
前記式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはそれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１８から３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
前記式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはそれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、９５％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１８から３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
前記式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはそれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、１００％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１８から３４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
連結部分であるＹをさらに含み、Ｙが、ＸおよびＺの両方を接続および／または連結するリンカーである、請求項１８から３５のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、それらのいずれの開示も、参照により明示的に本明細書に組み込まれる、２０１６年１１月３０日に出願された米国特許仮出願第６２／４２８，４９２号明細書、および２０１７年９月１日に出願された米国特許仮出願第６２／５５３，３１３号明細書の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本明細書で開示される、多様な態様および実施形態は、一般に、骨関連疾患により誘導される疾患／症状のモデル化、処置、処置への耐性の軽減、防止、および診断に関する。実施形態は、骨関連疾患を処置する方法であって、少なくとも１つの治療有効用量の本明細書で開示される化合物を対象に提供するステップを含む方法を含む。
【背景技術】
【０００３】
背景
本節は、本開示のよりよい理解を容易とする一助となりうる態様を導入する。これらの言明は、この観点において読まれるべきであり、何が先行技術であるのか、または何が先行技術ではないのかについての容認として理解されるべきではない。
【０００４】
健常な骨は、５０〜７０％のミネラルと、２０〜４０％の有機マトリックスと、５〜１０％の水と、１〜５％の脂質とのミックスであり、健常な骨が、その剛直性および可撓性を維持する一助となるために、常時、新たな骨へとリサイクルされている。このリサイクリング過程の開始時に、単球は、それらを、破骨細胞へと分化させる、いくつかのシグナルを受け取る。次いで、骨芽細胞は、単球における表面受容体であるＲＡＮＫ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  κＢ）に対する、ＲＡＮＫＬ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  κＢ  ｌｉｇａｎｄ）を発現し、ＴＲＡＦ６カスケードを誘発し、単球を、破骨細胞形成にコミットさせる。次いで、成熟破骨細胞は、健常な異化性骨吸収を開始する。同化過程は、間葉幹細胞（ＭＳＣ）が、ＢＭＰ−２／Ｒｕｎｘ２経路およびＷｎｔ／β−カテニン経路により刺激されて、骨芽細胞となるときに始まる。次に、成熟骨芽細胞は、主に、石灰化して新たな骨となるＩ型コラーゲンから構成される骨マトリックスの成分である類骨を沈着させる。
【０００５】
米国における、年間の骨折頻度は、約６３０万件である。これだけでも、我々の医療ケアシステムにとっては、大きな負担である。先進国世界の大半では、この問題は、熟年化するベビーブーム世代と、全般的な老化集団とにより、複雑なものとなっている。ベビーブーム世代が、骨粗鬆症の頻度を増大させれば、複雑骨折および致死性骨折の頻度は、劇的に増大するであろう。股関節の骨折だけでも、２０４０年までに、１６０％増大して、１年当たり５００，０００件に達すると予測される。２１世紀の今日にあってもなお、股関節骨折を伴う６５歳以上の者のうちの４分の１は、損傷後１年以内に、仰臥と関連する合併症に起因して死亡する。これは、重大な公衆衛生上の懸念を招く。
【０００６】
現行の骨折の臨床処置は、一般に、部位特異的同化薬の使用を含まない。実際、このような骨折における臨床使用のために承認された薬物は、局所適用され、長骨の開放骨折および脊髄固定術の処置において使用される、ＢＭＰ−２（脛骨の外傷における使用に限り、承認された）およびＢＭＰ−７（承認停止）だけである。同化剤の使用のうちの８５％が、非承認薬であることを考えると、骨粗鬆性骨折などの骨病を処置する同化薬の、より広範な適用に対する必要性は明らかである（Ong, K.L. et al., Spine 35 (2010) 1794−1800）。ＦＤＡが、依然として、慎重に、局所投与される薬物の使用の承認を、既に開放され、感染の危険性がある骨折へと限定し続けている。
【０００７】
この限定があるため、これらの種類の骨折の処置のための、臨床的に意味がある手法が必要とされる。したがって、全身投与されるが、なお、骨折部位をターゲティングする骨折処置薬を有することが所望されるであろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の要旨
第１の実施形態は、式Ｘ−Ｙ−Ｚの少なくとも１つの化合物［式中、Ｘは、副甲状腺ホルモン受容体のうちの少なくとも１つの活性をモジュレートする、少なくとも１つの薬剤であり；Ｚは、少なくとも１つの骨ターゲティング分子（bone-targeting molecule）であり；Ｙは、ＸとＺとを接続（joint）および／または連結する（link）リンカーである］；または薬学的に許容されるその塩またはその代謝物を含む。一部の実施形態では、Ｘは、副甲状腺ホルモン受容体のうちの少なくとも１つの活性を増強する、少なくとも１つの薬剤である。Ｚが、ヒドロキシアパタイトおよび／または生骨（raw bone）に結合する、少なくとも１つの、負に帯電したオリゴペプチドまたはこれらの同等物であることは、これらの実施形態と符合する。
【０００９】
第２の実施形態は、Ｘが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列同一性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列同一性、ならびに／または全長アバロパラチドもしくはその類似体に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドもしくは副甲状腺ホルモンのアミノ酸残基３５〜４０、３５〜４１、３５〜４２、３５〜４３、３５〜４４、３５〜４５、３５〜４６、３５〜４７、３５〜４８、３５〜４９、３５〜５０、３５〜５１、３５〜５２、３５〜５５、３５〜８４、４１〜４４、４１〜４５、４１〜４６、４１〜４７、４１〜４８、４１〜４９、４１〜５０、および／もしくは４１〜８４、ならびに／または少なくとも１つのカテプシンＫ感受性ポリペプチドに対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；
Ｚが、約４つもしくはこれを超える、約４つ〜約１００、約４つ〜約５０、４つ〜約２０、約４つ〜約１５、約４つ〜約１０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、２−アミノヘキサン二酸（２−アミノアジピン酸）またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、第１の実施形態に従う化合物を含む。一部の実施形態では、Ｚは、約４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、２−アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。他の実施形態では、Ｚは、ヒドロキシアパタイトおよび／または生骨に結合する、少なくとも１つの、負に帯電したオリゴペプチドまたはその同等物である。
【００１０】
一部の実施形態では、Ｘは、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列同一性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列同一性、ならびに／または全長アバロパラチドもしくはその類似体に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の同一性を有するポリペプチドを含む少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｙは、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドもしくは副甲状腺ホルモンのアミノ酸残基３５〜４０、３５〜４１、３５〜４２、３５〜４３、３５〜４４、３５〜４５、３５〜４６、３５〜４７、３５〜４８、３５〜４９、３５〜５０、３５〜５１、３５〜５２、３５〜５５、３５〜８４、４１〜４４、４１〜４５、４１〜４６、４１〜４７、４１〜４８、４１〜４９、４１〜５０、および／もしくは４１〜８４、ならびに／または少なくとも１つのカテプシンＫ感受性ポリペプチドに対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の配列同一性を含むポリペプチドを含む少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｚは、約４つもしくはこれを超える、約４つ〜約１００、約４つ〜約５０、４〜約２０、約４つ〜約１５、約４つ〜約１０の酸性アミノ酸残基を含むポリペプチドを含む少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。一部の実施形態では、Ｚは、約４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０の酸性アミノ酸残基を含むポリペプチドを含む少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。
【００１１】
第３の実施形態は、Ｘが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、および／または９のうちのいずれか１つに対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の配列同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドの、アミノ酸残基３５〜４６および／または４１〜４６に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｚが、約４つもしくはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、前述の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。一部の実施形態では、Ｚは、約４つ〜約１００、約４つ〜約５０、４つ〜約２０、約４つ〜約１５、約４つ〜約１０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。他の実施形態では、Ｚは、約４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。
【００１２】
第４の実施形態は、Ｘが、全長アバロパラチドまたはその類似体に対する、約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の同一性を有する、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｙが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチドの、アミノ酸残基３５〜４６に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／または１００％の配列同一性を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｚが、約４つもしくはこれを超える、約４つ〜約１００、約４つ〜約５０、４つ〜約２０、約４つ〜約１５、約４つ〜約１０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、２−アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である、第１〜第３の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。一部の実施形態では、Ｚは、約４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、２−アミノヘキサン二酸またはその誘導体、および／またはアレンドロネート（alendronate）またはその誘導体である。
【００１３】
第５の実施形態は、Ｚが、約６つ、７つ、８つ、９つ、および／または１０の酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１〜第４の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００１４】
第６の実施形態は、酸性アミノ酸残基が、Ｌ−アスパラギン酸もしくはＤ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸もしくはＤ−グルタミン酸、またはこれらの組合せを含む、第１〜第５の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００１５】
第７の実施形態は、酸性アミノ酸残基が、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖をさらに含む、第１〜第６の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００１６】
第８の実施形態は、Ｙが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅの式［式中、Ｎｌｅは、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、および／またはこれらの同等物を含む］を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１〜第７の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００１７】
第９の実施形態は、式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物が、配列番号１０および／または配列番号１１のうちのいずれか１つに対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および／または９９％の配列同一性を有する少なくとも１つのポリペプチドである、第１〜第８の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。一部の実施形態では、式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物は、配列番号１０および／または配列番号１１のうちのいずれか１つに対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および／または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、少なくとも１つのポリペプチドである。
【００１８】
第１０の実施形態は、式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物が、配列番号１０および／または配列番号１１を有する少なくとも１つのポリペプチドである、第１〜第９の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。一部の実施形態では、式Ｘ−Ｙ−Ｚの化合物は、配列番号１０および／または配列番号１１を有するポリペプチドを含む、少なくとも１つのポリペプチドである。
【００１９】
第１１の実施形態は、Ｘが、副甲状腺ホルモン受容体１の、少なくとも１つのアゴニストである、第１〜第１０の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００２０】
第１２の実施形態は、Ｘが、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）の最初の１３アミノ酸残基に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列相同性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）の最初の１３アミノ酸残基に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列相同性、ならびに／または配列番号３の、最初の１３アミノ酸残基に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の相同性を有する、少なくとも１つのポリペプチドである、第１〜第１１の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００２１】
一部の実施形態では、Ｘは、全長副甲状腺ホルモン関連ペプチド（配列番号１２）のアミノ酸残基２、３、４、６、７、９、１２、および／もしくは１３に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列相同性、全長副甲状腺ホルモン（配列番号１３）のアミノ酸残基２、３、４、６、７、９、１２、および／もしくは１３に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の配列相同性、ならびに／または配列番号３の、アミノ酸残基２、３、４、６、７、９、１２、および／もしくは１３に対する、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および／もしくは１００％の相同性を有する、少なくとも１つのポリペプチドである。
【００２２】
第１３の実施形態は、骨関連疾患を処置する方法であって、少なくとも１つの、治療有効用量の、第１〜第１２の実施形態のうちのいずれか１つによる化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは代謝物を対象に提供するステップを含む方法を含む。
【００２３】
第１４の実施形態は、対象が、ヒト、動物、細胞、および／または組織を含む、第１３の実施形態に従う方法を含む。
【００２４】
第１５の実施形態は、骨関連疾患が、骨減少症、骨粗鬆症、関節リウマチ、血液疾患（hematologic）、自己免疫（autoimmunity）、移植片拒絶、骨髄炎、および／または骨折を含む、第１３および／または第１４の実施形態に従う方法を含む。
【００２５】
第１６の実施形態は、第１〜第１２の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物の有効用量が、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１０００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．００１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約０．０１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約７５ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約７５ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約１０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約７５ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約１００ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約２５０ナノモル、１日当たり１ｋｇ当たり約２０ナノモル〜１日当たり１ｋｇ当たり約５００ナノモル、および／または１日当たり１ｋｇ当たり約０．０７４ナノモルを含む、第１３〜第１５の実施形態に従う方法を含む。
【００２６】
一部の実施形態では、第１〜第１２の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物の有効用量は、１日当たり１ｋｇ当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、および／または２００ナノモルを含む。他の実施形態では、第１〜第１２の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物の有効用量は、１日当たり１ｋｇ当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、および／または２００ピコモルを含む。
【００２７】
第１７の実施形態は、第１〜第１２の実施形態のうちのいずれか１つによる化合物が、経口投与、非経口投与、直腸内投与、経皮投与、舌下投与、および／または鼻腔内投与される、第１３〜第１５の実施形態に従う方法を含む。
【００２８】
第１８の実施形態は、式Ｘ−Ｚの化合物［式中、Ｘが、少なくとも１つのペプチドであり；Ｚが、少なくとも１つの骨ターゲティング分子である］；または薬学的に許容されるその塩またはその代謝物を含む化合物を含む。
【００２９】
第１９の実施形態は、Ｚが、骨折した骨を、優先的に、かつ／または選択的にターゲティングする、少なくとも１つの分子である、第１８の実施形態に従う化合物を含む。
【００３０】
第２０の実施形態は、Ｘが、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、および／または１０のアミノ酸残基より少数のアミノ酸残基を有する、少なくとも１つのペプチドである、第１８および第１９の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３１】
第２１の実施形態は、Ｘが、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、および／または１０のアミノ酸残基より多数のアミノ酸残基を有する、少なくとも１つのペプチドである、第１８〜第２０の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３２】
第２２の実施形態は、Ｘが、親水性ペプチド、疎水性ペプチド、中性ペプチド、カチオン性ペプチド、および／もしくはアニオン性ペプチド、ならびに／またはこれらの任意の組合せを含む、少なくとも１つのペプチドである、第１８〜第２１の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３３】
第２３の実施形態は、Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、またはこれらの類似体もしくは代謝物のうちのいずれか１つに対する、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、および／または９０％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、アミノヘキサン二酸またはその誘導体、アレンドロネート（alendronate）またはその誘導体、および／またはビスホスホネート（bisphosphonate）またはその誘導体である、第１８〜第２２の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３４】
第２４の実施形態は、Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、またはこれらの類似体もしくは代謝物のうちのいずれか１つに対する、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および／または９９％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドであり；Ｚが、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチド、ポリホスフェート（polyphosphate）、および／またはビスホスホネート（bisphosphonate）またはその誘導体である、第１８〜第２３の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３５】
第２５の実施形態は、Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および／または配列番号１９のうちのいずれか１つに対する、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、および／または９９％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１８〜第２４の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３６】
第２６の実施形態は、Ｘが、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、および／または配列番号１９のうちのいずれか１つに対する、少なくとも１００％の配列同一性を有する配列を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１８〜第２５の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３７】
第２７の実施形態は、Ｚが、負に帯電したアミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１８〜第２６の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３８】
第２８の実施形態は、Ｚが、２つ、３つ、４つ、５つ、、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、および／または１００の、負に帯電したアミノ酸残基を含む、少なくとも１つのポリペプチドである、第１８〜第２７の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００３９】
第２９の実施形態は、Ｚが、少なくとも１つのモノビスホスホネート（monobisphosphonate）、バイビスホスホネート（bibisphosphonate）、トリビスホスホネート（tribisphosphonate）、テトラビスホスホネート（tetrabisphosphonate）、ペンタビスホスホネート（pentabisphosphonate）、ヘキサビスホスホネート（hexabisphosphonate）、および／またはマルティプルビスホスホネート（multiple-bisphosphonate）である、第１８〜第２８の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４０】
第３０の実施形態は、Ｚが、Ｌ−アスパラギン酸もしくはＤ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸もしくはＤ−グルタミン酸、またはこれらの組合せを含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、第１８〜第２９の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４１】
第３１の実施形態は、Ｚが、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖、またはこれらの組合せを含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、第１８〜第３０の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４２】
第３２の実施形態は、Ｚが、分枝状のアミノ酸および／またはアミノ酸の分枝鎖、またはこれらの組合せを含む、少なくとも１つの酸性アミノ酸残基である、第１８〜第３１の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４３】
第３３の実施形態は、式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはこれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、少なくとも６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、および／または９０％の配列同一性を有する配列を含む、第１８〜第３２の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４４】
第３４の実施形態は、式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはこれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および／または９９％の配列同一性を有する配列を含む、第１８〜第３３の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４５】
第３５の実施形態は、式Ｘ−Ｚの化合物が、配列番号２３〜８１、またはこれらの類似体または代謝物のうちのいずれか１つに対する、１００％の配列同一性を有する配列を含む、第１８〜第３４の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４６】
第３６の実施形態は、連結部分であるＹをさらに含み、Ｙが、ＸおよびＺの両方を接続および／または連結するリンカーである、第１８〜第３５の実施形態のうちのいずれか１つに従う化合物を含む。
【００４７】
本開示は、骨折のターゲティングされた処置（targeted treatment bone fractures）のための化合物であって、Ｘ−Ｙ−Ｚの式［式中、Ｘは、副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨＲ１）のアゴニストである、活性同化ペプチドまたはその有効断片であり；Ｙは、リンカーであり；Ｚは、ヒドロキシアパタイトおよび／または生骨に結合する、負に帯電したオリゴペプチドまたはこれらの同等物である］を含む化合物を含む。考え得る限りにおいて、ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの多くの変異体も、ＰＴＨＲ１のアゴニスト活性を有することが可能であり、ＰＴＨＲ１に対するそれらのアフィニティーが、治療的値の範囲内にある限りにおいて、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰの代わりに使用されうるであろう。
【００４８】
本開示はまた、骨折を処置するための、残基２９において、２−メチルアラニルを伴い、残基３４において、アミン化された、配列番号３のペプチドも提示する。
【００４９】
一実施形態では、前述の活性同化ペプチドまたはその有効断片は、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、アバロパラチド、およびこれらのアゴニストからなる群から選択される。
【００５０】
一部の実施形態では、活性同化ペプチドまたはその有効断片は、残基２９において、２−メチルアラニルを有し、残基３４において、アミン化された、配列番号３を伴う、配列番号１〜９を有する。
【００５１】
一実施形態では、前述の化合物は、配列番号１０の配列を有する。
【００５２】
一部の実施形態では、活性同化ペプチドまたはその有効断片は、配列番号１〜３の変異体であり、この場合、配列番号１〜３の、少なくとも残基２、３、４、６、７、９、１２、１３は、保存されている。
【００５３】
一部の実施形態では、活性同化ペプチドまたはその有効断片は、配列番号１〜３の変異体であり、この場合、１、５、１０、１１、または１４〜３４は、保存的アミノ酸で置換されうる。
【００５４】
一部の実施形態では、ＰＴＨＲ１のアゴニストである、前述の活性同化ペプチドまたはその有効断片は、ＰＴＨＲ１に対して、約０．４６ｎＭのＩＣ５０〜約１３５ｎＭのＩＣ５０の間の治療的アフィニティーの範囲を有する。
【００５５】
一部の実施形態では、前述のリンカーであるＹは、任意の活性同化ペプチドまたはその有効断片の、少なくともある程度の伸長（some extension）である。例えば、リンカーであるＹは、多様な長さの、天然ＰＴＨｒＰの残基３５〜１７３、またはこれらの組合せから選択される、少なくとも１つの、放出不可能な断片（non-releasable fragment）でありうる。
【００５６】
代替的に、リンカーであるＹは、多様な長さの、天然ＰＴＨの残基３５〜８４、またはこれらの組合せから選択される、少なくとも１つの、放出不可能な断片でありうる。
【００５７】
一部の実施形態では、前述のリンカーであるＹは、多様な長さの、天然ＰＴＨｒＰの残基３５〜１７３、またはこれらの組合せと、多様な長さの、天然ＰＴＨの残基３５〜８４、またはこれらの組合せとからなる群から選択される。
【００５８】
一部の実施形態では、前述のリンカーであるＹは、骨リモデリング時に、破骨細胞内で産生される、少なくとも１つの夥多部分（abundant moiety）に感受性の、加水分解性基質である。例えば、夥多部分は、カテプシンＫでありうる。
【００５９】
一部の実施形態では、前述のリンカーであるＹは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅの配列［配列中、Ｎｌｅは、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、またはこれらの任意の同等な疎水性修飾である］を含む加水分解性基質である。
【００６０】
一部の実施形態では、前述の加水分解性基質は、グルタチオンに感受性のジスルフィド結合を含む。
【００６１】
一部の実施形態では、前述のリンカーであるＹは、放出可能なエステルである。
【００６２】
一部の実施形態では、前述の化合物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、少なくとも１つのスペーサーをさらに含む。
【００６３】
一部の実施形態では、前述の負に帯電したオリゴペプチドは、少なくとも４つの酸性アミノ酸残基を含み、かつ、２０を超えない酸性アミノ酸残基を含む。
【００６４】
一部の実施形態では、前述の負に帯電したオリゴペプチドは、アスパラギン酸、グルタミン酸、Ｄ−アスパラギン酸（D-aspartic）、Ｄ−グルタミン酸、およびこれらの組合せからなる群から選択される酸性アミノ酸残基を含む。
【００６５】
一部の実施形態では、負に帯電したオリゴペプチドは、直鎖状の酸性アミノ酸鎖である。
【００６６】
一部の実施形態では、負に帯電したオリゴペプチドは、少なくとも２つの分枝状酸性アミノ酸鎖を含み、この場合、分枝状酸性アミノ酸鎖は、少なくとも１つのリシンでつながれている。
【００６７】
一部の実施形態では、Ｚは、少なくとも１つのビスホスホネート（bisphosphonate）である。他の実施形態では、Ｚは、ポリホスフェート（polyphosphate）である。
【００６８】
一部の実施形態では、Ｚは、骨折部位において、不完全なコラーゲン原線維の間に挿入される、コラーゲン模倣性ペプチドである。例えば、コラーゲン模倣性ペプチドは、［Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ］９−ＯＨの構造を有しうる。
【００６９】
一部の実施形態では、Ｚは、骨格と酸との間に、１つを超える炭素を伴う、アミノヘキサン二酸（アルファ−アミノアジピン酸）またはその誘導体である。例えば、Ｚは、２−アミノマロン酸でありうる。
【００７０】
本開示は、治療量の、任意の前述の化合物を、骨折を患う患者へと投与することにより、骨折を処置する方法をさらに提示する。
【００７１】
これらの本発明の特色、態様、および利点、ならびに他の本発明の特色、態様、および利点は、以下の図面、関連する記載、および特許請求の範囲を参照することにより、よりよく理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】ｍｉｃｒｏＣＴにより収集された骨密度（bone density）データを例示するグラフである。各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。
【図２】ｍｉｃｒｏＣＴにより収集された骨梁中心距離データ（trabecular spacingdata）を例示するグラフである。中心距離の縮小は、骨密度の増大と関連し、治癒の進行を示しうる。各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。
【図３】ｍｉｃｒｏＣＴにより収集された骨密度データを例示するグラフである。各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。
【図４】ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内の、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の発現比を例示するグラフである。ＡＬＰ比は、（処置された場合のＡＬＰ発現／媒体対照によるＡＬＰ発現）により計算する。発現は、ＧＡＰＤＨに照らして標準化した。
【図５】ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内の、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、オステオポンチン（ＯＰＮ）の発現比を例示するグラフである。ＯＰＮ比は、（処置された場合のＯＰＮ発現／媒体対照によるＯＰＮ発現）により計算する。
【図６】ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内の、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、いくつかの鍵となる骨マーカーの遺伝子発現比を例示するグラフである。活性マーカーは、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、Ｉ型コラーゲンアルファ（Ｃｏｌ１アルファ）、オステオカルシン（ＯＣ）、オステオプロテグリン（ＯＰＧ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、およびオステリクス（ＯＳＸ）を含む。遺伝子発現比は、（処置された場合の遺伝子発現／媒体対照による遺伝子発現）により計算する。
【図７】処置後における、ＰＴＨｒＰＤ１０（ターゲティング型）またはＰＴＨｒＰ（遊離型）の、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【図８】処置後における、アバロパラチドＤ１０（ターゲティング型）、アバロパラチド（非ターゲティング型）および生理食塩液の、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【図９】処置後における、ポリホスフェート（polyphosphate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰまたは生理食塩液の、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【図１０】処置後における、単一のアレンドロネート（alendronate）、分枝状トリアレンドロネート（alendronate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰ、または遊離型ＰＴＨｒＰの、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【図１１】炭素鎖長を変動させる、酸性アミノ酸の直鎖状ポリマーを例示する化学式である。
【図１２】炭素鎖長を変動させる、酸性アミノ酸の分枝状ポリマーを例示する化学式である。
【図１３】非アミノ酸ベースの骨ターゲティングリガンドを例示する化学式である。上図は、ビスホスホネート（bisphosphonate）を表す。下図は、ポリホスフェート（polyphosphate）ターゲティングリガンドを表す。
【図１４】図１４Ａ：１２５Ｉで放射性標識化された、多様なターゲティングリガンドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。  図１４Ｂ：１２５Ｉで放射性標識化された、多様なターゲティングリガンドを使用して、骨折した大腿骨の、健常な大腿骨と比較した、１分間当たりのカウントを例示する棒グラフである。
【図１５】右大腿骨における骨切り術の１０日後における、１０Ｌ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマーへとコンジュゲートさせたＬＳ２８８によるターゲティングを例示する近赤外画像である。注射部位に起因して、ある程度のオフ標的シグナルが、背部に見られる。
【図１６】右大腿骨における骨切り術の３（下列）、６（中列）、および１０（上列）日後における、１０Ｌ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマーへとコンジュゲートさせたＬＳ２８８によるターゲティングを例示する近赤外画像である。大腿骨の各対において、左側の大腿骨が、骨折した大腿骨を表すのに対し、右側の大腿骨は、健常な大腿骨を表す。
【図１７】図１７Ａ：放射性標識化されたコンジュゲートペプチドである、プレプチンＤ１０の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図１７Ｂ：放射性標識化１２５ＩプレプチンＤ１０を使用して、骨折した大腿骨と、健常な大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。
【図１８】図１８Ａ：Ｌ−Ａｓｐ１０、Ｄ−Ａｓｐ１０、Ｌ−Ｇｌｕ１０、またはＤ−Ｇｌｕ１０と共にコンジュゲートさせた、多様な放射性標識化１２５Ｉペプチドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。  図１８Ｂ：Ｌ−Ａｓｐ２０、Ｌ−Ｇｌｕ２０、またはＤ−Ｇｌｕ２０と共にコンジュゲートさせた、多様な放射性標識化１２５Ｉペプチドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。  図１８Ｃ：分枝状Ｌ−Ａｓｐ１０、分枝状Ｄ−Ａｓｐ１０、分枝状Ｌ−Ａｓｐ４、または分枝状Ｌ−Ａｓｐ８と共にコンジュゲートさせた、多様な放射性標識化１２５Ｉペプチドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。
【図１９】図１９Ａ：１２５Ｉで放射性標識化された、多様なコンジュゲートペプチドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。  図１９Ｂ：１２５Ｉで放射性標識化された、多様なコンジュゲートペプチドを使用して、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を例示する棒グラフである。
【図２０】図２０Ａ：Ｌ−Ａｓｐ１０（すなわち、１０のＬ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、Ｃｋ２．３ＣおよびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。  図２０Ｂ：Ｄ−Ａｓｐ１０（すなわち、１０のＤ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。  図２０Ｃ：Ｌ−Ａｓｐ２０（すなわち、２０のＬ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、およびＦ１０９Ｃ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２１】図２１Ａ：Ｌ−Ｇｌｕ１０（すなわち、１０のＬ−グルタミン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、およびＣＴＣＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２１Ｂ：Ｄ−Ｇｌｕ１０（すなわち、１０のＤ−グルタミン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、およびＦ１０９Ｃ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２２】図２２Ａ：Ｌ−Ｇｌｕ２０（すなわち、２０のＬ−グルタミン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２２Ｂ：Ｄ−Ｇｌｕ２０（すなわち、２０のＤ−グルタミン酸の直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、およびＦ１０９Ｃ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２３】図２３Ａ：分枝状Ｌ−Ａｓｐ１０（すなわち、１０のＬ−アスパラギン酸の分枝状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２３Ｂ：分枝状Ｄ−Ａｓｐ１０（すなわち、１０のＤ−アスパラギン酸の分枝状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、およびＣＴＣＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２４】図２４Ａ：Ｌ−ＡＡＤ１０（すなわち、１０のＬ−アミノアジピン酸による直鎖状ポリマー）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２４Ｂ：Ｌ−ＳＤＳＤＤ（すなわち、Ｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ａｓｐを有する直鎖状ポリマー；配列番号２１）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２４Ｃ：（ＤＳＳ）６（すなわち、ＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ；配列番号２２）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）の相対分布を、個別の臓器の各々において見出された全カウントに対するパーセントとして例示する棒グラフである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２５】図２５Ａ：モノビスホスホネート（monobisphosphonate）、トリビスホスホネート（tribisphosphonate）、またはポリホスフェート（polyphosphate）とコンジュゲートさせた放射性標識化１２５Ｉ  ＰＴＨｒＰ１−３９Ｃ、Ｅ１０とコンジュゲートさせた放射性標識化１２５Ｉ  ＰＴＨ１−３４、およびＥ２０とコンジュゲートさせた放射性標識化１２５Ｉ  ＰＴＨｒＰ１−３９の相対分布を例示する棒グラフである。ＰＴＨｒＰ１−３９Ｃとは、異なるターゲティングリガンドをコンジュゲートさせた、４０位におけるシステイン（Ｃ）を伴うＰＴＨｒＰ１−３９である。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。  図２５Ｂ：モノビスホスホネート（monobisphosphonate）、分枝状Ｌ−Ａｓｐ４（すなわち、ＹＰｅｇＫ［ＤＤＤＤ］２；配列番号６８もまた参照されたい）、または分枝状Ｌ−Ａｓｐ８（すなわち、ＹＰｅｇＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤ］２；配列番号６９もまた参照されたい）とコンジュゲートさせた、放射性標識化１２５Ｉ  チロシンの相対分布を例示する棒グラフである。「モノビスホスホネート（monobisphosphonate）ＹＣ」とは、モノビスホスホネート（monobisphosphonate）とコンジュゲートさせた、チロシンおよびシステインを有するペプチドである。カウントは、組織重量１グラム当たりで標準化する。
【図２６】処置後における、ＰＴＨ１−３４Ｅ１０および生理食塩液の、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【図２７】処置後における、ＰＴＨｒＰＤ１０の、骨体積に対する効果を例示するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
配列表の簡単な説明
配列番号１．  ＰＴＨｒＰ  １−３４  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡ）
配列番号２．  ＰＴＨ  １−３４  （ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦ）
配列番号３：残基２９において、２−メチルアラニルを伴い、残基３４において、アミン化された、アバロパラチド１−３４（ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＥＬＬＥＫＬＬＡＫＬＨＴＡ）
配列番号４．  ＰＴＨｒＰ  １−３５  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧ）
配列番号５．  ＰＴＨｒＰ  １−３６  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩ）
配列番号６．  ＰＴＨｒＰ  １−３７  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲ）
配列番号７．  ＰＴＨｒＰ  １−３８  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲＡ）
配列番号８．  ＰＴＨｒＰ  １−３９  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲＡＴ）
配列番号９．  ＰＴＨｒＰ  １−４０  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲＡＴＳ）
配列番号１０．  ＰＴＨｒＰ１−４６Ｄ１０  （ＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲＡＴＳＥＶＳＰＮＳＤＤＤＤ  ＤＤＤＤＤＤ）
配列番号１１．  ＰＴＨ  １−４６Ｄ１０  （ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＶＡＬＧＡＰ  ＬＡＰＲＤＡＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）
配列番号１２．  ＰＴＨｒＰ  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＥＩＲＡＴＳＥＶＳＰＮＳＫＰＳＰＮＴＫＮＨＰＶＲＦＧＳＤＤＥＧＲＹＬＴＱＥＴＮＫＶＥＴＹＫＥＱＰＬＫＴＰＧＫＫＫＫＧＫＰＧＫＲＫＥＱＥＫＫＫＲＲＴＲＳＡＷＬＤＳＧＶＴＧＳＧＬＥＧＤＨＬＳＤＴＳＴＴＳＬＥＬＤＳＲＲＨ）
配列番号１３．  ＰＴＨ  （ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＶＡＬＧＡＰＬＡＰＲＤＡＧＳＱＲＰＲＫＫＥＤＮＶＬＶＥＳＨＥＫＳＬＧＥＡＤＫＡＤＶＮＶＬＴＫＡＫＳＱ）
配列番号１４：ＦＧＦ２のヘパリン結合性ドメイン（「Ｆ１０９Ｃ」）（ＹＫＲＳＲＹＴＣ）
配列番号１５：下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（「ＰＡＣＡＰＣ」）（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣ）
配列番号１６：ＩＩＩ型コラーゲンＣＴＸ領域由来の走化性クリプティックペプチド（「ＣＴＣＣ」）（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣ）
配列番号１７：カゼインキナーゼ２ベータ鎖（「Ｃｋ２．３Ｃ」）（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣ）
配列番号１８：オステオポンチン由来ペプチド（「ＯＤＰＣ」）（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣ）
配列番号１９：Ｐ４−ＢＭＰ２（「Ｐ４Ｃ」）（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣ）
配列番号２０：プレプチンＤ１０（ＤＶＳＴＳＱＡＶＬＰＤＤＦＰＲＹＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）
配列番号２１．  ＳＤＳＤＤ
配列番号２２．  ＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ
配列番号２３．  ＰＴＨ１−３４Ｅ１０  （ＳＶＳＥＩＱＬＭＨＮＬＧＫＨＬＮＳＭＥＲＶＥＷＬＲＫＫＬＱＤＶＨＮＦＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）
配列番号２４．  ＰＴＨｒＰ１−３６Ｅ１０  （ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）
配列番号２５：ＰＴＨｒＰ１−３９Ｅ２０（ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＦＦＬＨＨＬＩＡＥＩＨＴＡＧＩＲＡＴＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）［配列中、Ｍａｌは、本明細書で提示される全ての配列において、マレイミドである］
配列番号２６：Ｄ１０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号２７：Ｄ２０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号２８：Ｅ１０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号２９：Ｅ２０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号３０：ＡＡＤ１０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号３１：ＳＤＳＤＤ（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号３２：（ＤＳＳ）６（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号３３：Ｄ１０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３４：Ｄ２０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３５：Ｅ１０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３６：Ｅ２０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３７：ＡＡＤ１０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３８：ＳＤＳＤＤ（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号３９：（ＤＳＳ）６（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号４０：Ｄ１０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４１：Ｄ２０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４２：Ｅ１０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４３：Ｅ２０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４４：ＡＡＤ１０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４５：ＳＤＳＤＤ（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４６：（ＤＳＳ）６（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号４７：Ｄ１０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号４８：Ｄ２０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号４９：Ｅ１０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号５０：Ｅ２０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号５１：ＡＡＤ１０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号５２：ＳＤＳＤＤ（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号５３：（ＤＳＳ）６（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号５４：Ｄ１０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号５５：Ｄ２０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号５６：Ｅ１０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号５７：Ｅ２０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号５８：ＡＡＤ１０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号５９：ＳＤＳＤＤ（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号６０：（ＤＳＳ）６（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号６１：Ｄ１０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６２：Ｄ２０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６３：Ｅ１０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６４：Ｅ２０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６５：ＡＡＤ１０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ［配列中、Ｘは、アジピン酸である］）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６６：ＳＤＳＤＤ（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＳＤＳＤＤ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６７：（ＤＳＳ）６（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳＤＳＳ）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号６８：分枝状Ｄ４  Ｙ（ＹＰｅｇＫＤＤＤＤＤＤＤＤ［配列中、Ｐｅｇは、ポリエチレングリコールである］）
配列番号６９：分枝状Ｄ８  Ｙ（ＹＰｅｇＫＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ［配列中、Ｐｅｇは、ポリエチレングリコールである］）
配列番号７０：分枝状Ｄ１０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号７１：分枝状Ｄ１０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号７２：分枝状Ｄ１０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号７３：分枝状Ｄ１０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号７４：分枝状Ｄ１０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号７５：分枝状Ｄ１０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
配列番号７６：分枝状Ｅ１０（ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃ
配列番号７７：分枝状Ｅ１０（ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣ
配列番号７８：分枝状Ｅ１０（ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＣＴＣＣ
配列番号７９：分枝状Ｅ１０（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃ
配列番号８０：分枝状Ｅ１０（ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＯＤＰＣ
配列番号８１：分枝状Ｅ１０（ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２）とコンジュゲートさせたＰ４Ｃ
【００７４】
詳細な説明
本開示の概念について、本明細書の図面および記載に、詳細に例示および記載してきたが、図面およびそれらの記載における結果は、例示的な性格のものであり、制限的な性格のものではないと考えられるべきであり、例示的な実施形態だけが示され、記載され、本開示の趣旨の中に収まる、全ての変化および改変は、保護されるように所望されることが理解される。
【００７５】
そうでないことが規定されない限りにおいて、科学用語および技術用語は、本開示に関する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。
【００７６】
そうでないことが明示的に言明されるか、またはそうでないことが明確に含意されるのでない限り、本明細書で使用される「約」という用語は、値±１０パーセントの範囲を指し、例えば、約１．０は、０．９〜１．１の値を包含する。
【００７７】
そうでないことが言明されるか、またはそうでないことが含意されるのでない限り、本明細書で使用される「〜を処置すること（treating）」という用語は、ヒト患者または動物患者へと、少なくとも１つの用量の化合物を投与することを含み、処置することは、少なくとも１つの疾患の可能性および／または重症度を、防止または低下させることの他、疾病の持続期間または疾病の重症度を制限することを含み、処置する結果として、疾患の治癒がもたらされる場合もあり、もたらされない場合もある。
【００７８】
そうでないことが明示的に言明されるか、またはそうでないことが明確に含意されるのでない限り、本明細書で使用される「治療有効用量」、「治療有効量」などの用語は、ヒトまたは他の動物の健康およびウェルビーイング（well being）に対して、正味の肯定的な効果を及ぼす、化合物の部分を指す。治療効果は、寿命、生活の質などの改善を含むことが可能であり、これらの効果はまた、疾患の発症しやすさ、または健康もしくはウェルビーイングの悪化させやすさの低減も含みうる。効果は、単回の投与および／または処置の後で、速やかに達せられる場合もあり、一連の投与および／または処置の後で、累積的に達せられる場合もある。「治療有効量」とは、一般に、対象または動物へと、疾患を処置するために投与した場合に、疾患に対しる所望される程度の処置に影響を及ぼすのに十分な量を意味する。
【００７９】
本明細書で使用される「阻害」または「阻害活性」は、各々、酵素、あるいは阻害剤により直接的もしくは間接的に生じる酵素を含む経路、または阻害剤により直接的もしくは間接的に生じる酵素の活性により直接的もしくは間接的に生じる経路の全部および／または一部の、活性あるいは効果の全体的あるいは部分的な低減を包含する。
【００８０】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、阻害剤の、所望される生物学的活性を維持し、所望されない毒性作用の呈示が最小限である塩として規定される。このような塩の非限定例は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）により形成される酸付加塩、および有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸など）により形成される塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどの金属カチオン、またはアンモニア、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、Ｄ−グルコサミン、テトラエチルアンモニウム、もしくはエチレンジアミンから形成されるカチオンにより形成される塩基付加塩；あるいは（ｃ）（ａ）と（ｂ）との組合せ；例えば、タンニン酸亜鉛などである。
【００８１】
薬学的に許容される塩は、哺乳動物における使用に安全かつ有効であり、所望される治療活性を有する、本発明の化合物の塩を含む。薬学的に許容される塩は、本発明の化合物中に存在する、酸性基または塩基性基の塩を含む。薬学的に許容される酸付加塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩（ａｃｉｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩（glucaronate）、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））を含むがこれらに限定されない。ある特定の、本発明の化合物は、多様なアミノ酸と共に、薬学的に許容される塩を形成しうる。適切な塩基塩（base salt）は、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、およびジエタノールアミン塩を含むがこれらに限定されない。本発明を実施するのに使用されうる、一部の薬学的に許容される塩のさらなる情報については、Berge, et al., 66 J. PHARM. SCI. 1-19 (1977), Haynes, et al., J. Pharma. Sci., Vol. 94, No. 10, Oct. 2005, pgs. 2111-2120などを検討し、例えば P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002); S.M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts,” Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977を参照されたい。
【００８２】
医薬製剤：本発明の化合物およびその塩は、投与のための医薬組成物として製剤化することができる。当技術分野では、このような医薬組成物と、これらを作るプロセスが、ヒトおよび非ヒト哺乳動物のいずれについても公知である。例えば、remington: The Science and practice of pharmacy  (A. Gennaro, et al., eds., 19thed., Mack Publishing Co., 1995)を参照されたい。製剤は、経口投与、注射（筋内、皮下、静脈内、腹腔内）などの非経口投与；ディッピング、スプレー、ベージング、ウォッシング、プアオンおよびスポッティングオン、ならびにダスティングなどの経皮投与を含む、多様な手段を介して投与することができる。さらなる有効成分も、本発明の化合物またはその塩を含有する製剤中に含まれうる。
【００８３】
本発明の医薬製剤は、経口投与、非経口（皮下、皮内、筋内、および静脈内を含む）投与、および直腸内投与に適する医薬製剤を含む。製剤は、単位剤形で提示することができ、薬学技術分野で周知の方法のうちのいずれかにより調製することができる。全ての方法は、有効成分、すなわち、本発明の化合物または塩を、担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体、もしくは微粉化した固体担体、またはこれらの両方と均一に、かつ、緊密に会合させ、次いで、必要な場合、会合させた混合物を、所望の製剤へと形成することにより調製される。
【００８４】
経口投与に適する、本発明の医薬製剤は、各々が、所定量の有効成分を含有する、カプセル、小袋、錠剤、もしくはトローチなど、個別の単位として；粉末もしくは顆粒として；シロップ、エリキシル、もしくはドラフトなど、水性液体中もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液；または液体の水中油エマルジョンもしくは液体の油中水エマルジョンとして提示することができる。製剤はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストでもありうる。
【００８５】
非経口投与に適する、本発明の医薬製剤は、水性滅菌注射溶液および非水性滅菌注射溶液を含むが、また、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および組成物を、レシピエントの血液と等張性とする溶液、ならびに、例えば、懸濁剤および増粘剤を含有しうる、水性滅菌懸濁液および非水性滅菌懸濁液も含みうる。製剤は、単回の単位用量容器により提示することもでき、複数回投与用量の容器により提示することもできるが、使用の前に、滅菌液体担体の添加を要求する、凍結乾燥状態で保存することもできる。
【００８６】
薬学的に許容される担体：本明細書では、そうでないことが言明されるか、またはそうでないことが含意されるのでない限り、薬学的に許容される担体は、製剤中に含めることができる、活性成分（component）以外の任意の成分（ingredient）について記載するのに使用される。担体の選択は、大部分、特定の投与方式、可溶性および安定性に対する担体の効果、ならびに剤形の性質などの因子に依存する。
【００８７】
錠剤は、有効成分を、薬学的に許容される担体と共に、圧縮または成形することにより作ることができる。圧縮された錠剤は、粉末または顆粒など、流動形態の有効成分を、適切な機械内で、例えば、結合剤、不活性の希釈剤、滑沢剤、崩壊剤、および／または界面活性剤と混合して圧縮することにより調製することができる。成形された錠剤は、適切な機械内で、粉末化され、不活性の液体希釈剤により湿潤化された有効成分の混合物を成形することにより調製することができる。錠剤は、任意選択で、コーティングすることも、分割線を施すこともできるが、有効成分の徐放または制御放出をもたらすように、製剤化することもできる。
【００８８】
本明細書で使用される「骨関連疾患」は、骨減少症、骨粗鬆症、関節リウマチ、血液疾患、自己免疫、移植片拒絶、骨がん、および／または骨折を含むがこれらに限定されない。
【００８９】
本明細書で記載される「治療的アフィニティー指数」とは、通例、治療用リガンドまたはこのアゴニストのＩＣ５０により表される、治療用リガンドのアフィニティー範囲であって、所望の治療効果を達成するように、受容体媒介性シグナル伝達カスケード（イベント）に関わるためのアフィニティー範囲である。例えば、リガンドが、リガンドの治療効果を達成する、Ｇタンパク質共役受容体媒介性応答を誘発するのに、４ｎＭ〜１５ｎＭのＩＣ５０を有する場合、リガンドは、４ｎＭ〜１５ｎＭのＩＣ５０である、治療的アフィニティー指数を有する。治療用リガンドが、その異なる治療効果を達成するのに、異なる作用方式を有する場合、治療的アフィニティー指数は、錯綜する場合がある。例えば、治療用リガンドの受容体が、２つの異なるコンフォメーションを有する場合、各コンフォメーションは、顕著に異なる治療的アフィニティー指数を有しうる。
【００９０】
そうでないことが明示的に言明されるか、またはそうでないことが明確に含意されるのでない限り、本明細書で使用される「ＰＴＨｒＰ１−４６Ｄ１０」、「ＰＴＨｒＰ  Ｄ１０」、および「ターゲティング型ＰＴＨｒＰ」という用語は、同じ化合物を規定するように、互換的に使用されうる。
【００９１】
そうでないことが明示的に言明されるか、またはそうでないことが明確に含意されるのでない限り、本明細書で使用される「ＰＴＨｒＰ１−３４」、「ＰＴＨｒＰ」、「遊離型ＰＴＨｒＰ」、および「非ターゲティング型ＰＴＨｒＰ」という用語は、同じ化合物を規定するように、互換的に使用されうる。
【００９２】
骨粗鬆症は、骨折の危険性の増大と関連する、骨密度（bone mineral density）の低下および／または骨微細構造の劣化と規定される。この慢性疾患は主に、閉経後女性に影響するが、また、老齢男性にも影響しうる。この疾患は、ますます、加齢関連病的状態（age-related morbidity）と考えられている。骨粗鬆症を伴う患者において観察される骨格の変性は、骨形成の、骨吸収と比べた相対的不足の帰結である。骨粗鬆症治療は、大半が、抗吸収薬に依拠している。骨粗鬆症を処置するための、１つの、最新の代替療法は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の間欠的投与に基づく。ＰＴＨは、主に、副甲状腺の細胞により、８４のアミノ酸を含むプロホルモンポリペプチドとして分泌される。有効なホルモン−受容体間相互作用は、Ｎ末端の３４のアミノ酸だけを要求する。ＰＴＨは、血中のカルシウムイオン（Ｃａ２＋）濃度を増大させるように作用する。ＰＴＨは、骨および腎臓において高レベルで存在する、副甲状腺ホルモン１受容体に対して作用することにより、血中のカルシウム濃度を増大させるように本質的に作用する。タンパク質であるｈＰＴＨ（１−３４）は、わずかに屈曲した、長鎖螺旋状二量体として結晶化する。解析は、ｈＰＴＨ（１−３４）の、伸長螺旋状コンフォメーションは、生体活性コンフォメーションである可能性が高いことを明らかにする。Ｎ末端断片（副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の１〜３４）を結晶化させ、構造を、０．９Åの解像度まで精緻化した。
【００９３】
ＰＴＨ療法により引き起こされる骨同化は、主に、骨芽細胞形成および骨芽細胞の生存を増大させるＰＴＨの能力により説明される。ＰＴＨおよびＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）（骨において夥多である局所因子）は、骨芽細胞内では、一般的なＰＴＨ１型受容体と、同様のアフィニティーで相互作用する。主に、骨粗鬆症齧歯動物モデルにおける研究と、閉経後女性における限定的なデータは、Ｎ末端ＰＴＨｒＰペプチドが、有望な骨同化療法と考えられうることを示唆する。
【００９４】
副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨＲ１）としてもまた公知の、副甲状腺ホルモン／副甲状腺ホルモン関連ペプチド受容体とは、ヒトにおいて、ＰＴＨＲ１遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＰＴＨＲ１は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）および副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）に対する受容体として機能する。
【００９５】
ＰＴＨＲ１は、主に、骨、腎臓、および軟骨において発現するが、また、血管系およびある特定の発生中の臓器を含む、他の組織においても発現する、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）のＢ型ファミリーに属する。
【００９６】
ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの最初の３４残基からなるＮ末端断片は、一般に、それぞれ、８４および１４１のアミノ酸残基もまた含む、対応する全長成熟ポリペプチド鎖内に存在する、受容体の相互作用の、鍵となる機能的決定基を含有すると考えられる。ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰは、伸長Ｃ末端セグメントを含むという点において、Ｂ型ファミリーペプチドリガンドの間で顕著に異なる。これらのセグメントの生物学的役割は、ＰＴＨのＣ末端部分に対応する断片が、骨細胞１７において、アポトーシス促進効果を誘導する能力、およびＰＴＨｒＰの中央領域を包含する断片の能力など、一部の機能的な応答が同定されているが、不明確なままである。
【００９７】
リガンドの、ヘテロ三量体のＧタンパク質へと共役したときに形成されるコンフォメーション（ＲＧコンフォメーション）、またはＰＴＨＲ１が、Ｇタンパク質へと共役していないときのコンフォメーション（Ｒ０コンフォメーション）にあるＰＴＨＲ１に対するアフィニティーについて査定するために開発された膜結合アッセイは、構造的に顕著に異なるＰＴＨ類似体と、ＰＴＨｒＰ類似体とが、変更されたアフィニティーで、受容体の、異なるコンフォメーション状態に結合しうることについての最初の手がかりをもたらした。ＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨｒＰ（１−３６）についての、直接的比較研究は、これらの２つのペプチドは、ＲＧ状態に対しては、同様のアフィニティーを維持するが、Ｒ０状態に対しては、同じアフィニティーを有さず、ＰＴＨ（１−３４）は、Ｒ０に対して、ＰＴＨｒＰ（１−３６）よりはるかに大きなアフィニティーを提示することを裏付けた。
【００９８】
アバロパラチド、ＰＴＨｒＰ、およびＰＴＨは、各タンパク質の最初の１３アミノ酸において、高相同性を共有する。各活性同化薬が、副甲状腺ホルモンによるシグナル伝達を誘発し、残基２、３、４、６、７、９、１２、および１３において、最小限の相同性を含むか、または含有するペプチドを含む限りにおいて、同化ペプチド変異体を、本開示で記載される、多様なリンカー、任意選択で、スペーサー、およびターゲティングリガンドと組み合わせて、骨折治癒剤の、ターゲティングされた送達をもたらすことができる。
【００９９】
この選択性の変更の機能的な帰結は、ｃＡＭＰアッセイにおいて、典型的に明らかにされた。ＰＴＨ（１−３４）と、ＰＴＨｒＰ（１−３６）とは、従来のｃＡＭＰ用量反応アッセイにおいて、同様の効力を有した（ＲＧ状態についてのそれらの同様のアフィニティー、および細胞内ｃＡＭＰ産生のＧαＳ媒介性機構に従い）。しかし、２つのリガンドにより誘導される応答の持続期間（経時的ウォッシュアウトアッセイを使用して評価した）は、異なり、ＰＴＨ（１−３４）は、ＰＴＨｒＰ（１−３６）より持続的な応答を示す。一般に、細胞ベースの研究において観察されるｃＡＭＰ応答の持続期間は、膜アッセイにおいて評価された、ＲＧ状態に対するそれらのアフィニティーではなく、ＰＴＨ（１−３４）と、ＰＴＨｒＰ（１−３６）とが、Ｒ０状態に対して呈する、異なるアフィニティーと相関する。Ｒ０状態は、Ｇタンパク質と共役していない状態であり、このため、ｃＡＭＰシグナル伝達に関して不活性であるので、Ｒ０複合体は、時間経過にわたり、極めて安定であるが、機能的なＧタンパク質共役状態へと、異性体化しうる可能性がある。
【０１００】
ＰＴＨリガンドと、ＰＴＨｒＰリガンドとの間で異なる、ＲＧにおけるアフィニティーと対比した、Ｒ０におけるアフィニティーに対する、１つの鍵となる構造的決定基は、５位における残基の識別へと追跡することができるので、ＰＴＨｒＰ（１−３６）におけるＨｉｓ５を、ＰＴＨの、対応するイソロイシンで置きかえることにより、Ｒ０に対するアフィニティーが、顕著に増強され、標的細胞内で誘導される、ｃＡＭＰシグナル伝達応答の持続期間が延長される。
【０１０１】
現在、任意の骨折を治癒させる同化剤を提供しようと、ＰＴＨ、ＰＴＨｒＰ、またはそれらのアゴニストが、局所投与または全身投与（systematic administration）について調べられている。しかし、これらの試験は、これらのタンパク質の使用に対する副作用が見られることを明らかにした。例えば、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰの局所適用は、骨の露出を要求し、この結果として、治癒時間の増大、疼痛、および不快感をもたらし、感染の可能性さえももたらした。これに代わって、ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰの全身適用は、血中カルシウムレベルの上昇を含む、オフ標的作用を及ぼす傾向がある。したがって、上記で言及した副作用を軽減しうる骨同化剤送達系の開発が望ましい。
【０１０２】
本明細書では、薬物、リンカー、およびターゲティングリガンドを含む、薬物送達系が開示される。本開示の一部の態様は、骨折のターゲティングおよび治癒のための化合物を提示する。これらの化合物は、少なくとも３つの、顕著に異なる構造的／機能的な領域：副甲状腺ホルモン受容体１（ＰＴＨＲ１）、および治癒をもたらす、後続のシグナル伝達カスケードに関わる、有効な同化ペプチドまたは任意のアゴニスト；同化ペプチドが、骨折部位に到達するための、可変的なアーム長をもたらす、スペーサーを伴うかまたは伴わないリンカー；ならびに化合物を、骨折部位へと誘導し、ヒドロキシアパタイトおよび／または生骨に特異的に結合する、負に帯電したオリゴペプチドまたはその同等物を典型的に含むターゲティングリガンドを含みうる。特定の一態様では、薬物は、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）内の、最初の３４アミノ酸でありうる。リンカーは、薬物を、ターゲティングリガンドから隔て、また、一部では、アミノ酸３５〜４０が、受容体の結合を増大させると考えられるので、薬物の長さに余裕も与える、ＰＴＨｒＰのアミノ酸３５〜４６を含みうる。最後に、ターゲティングリガンドは、アスパラギン酸デカペプチドを含みうるが、カルボン酸により官能化された他のポリマーも、同様の形で結合する可能性が高い（例えば、多様な組合せおよび配置における、Ｄグルタミン酸またはＬグルタミン酸、Ｄアスパラギン酸またはＬアスパラギン酸、およびアミノヘキサン二酸）。
【０１０３】
残基２９において、メチルＡｌａを伴い、残基３４において、アミン化された配列番号３を含むペプチド（アバロパラチド１−３４）は、さらなるリンカーまたはターゲティングリガンドを伴わずに、強力な活性同化剤として、骨折を処置するのに用いられうる。
【０１０４】
ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰは、ＰＴＨＲ１に対するアゴニスト活性を保有する変異体を有することが可能であり、骨折治癒に関わり、骨折治癒の治療効果を達成するように、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰの代わりに使用されうることが想定される。各活性同化薬が、副甲状腺ホルモンによるシグナル伝達を誘発し、残基２、３、４、６、７、９、１２、および１３において、最小限の相同性を含むか、または含有するペプチドを含む限りにおいて、提起された同化ペプチド変異体を、本開示で記載される、多様なリンカー、任意選択で、スペーサー、およびターゲティングリガンドと組み合わせて、骨折治癒剤の、ターゲティングされた送達をもたらすことができる。例えば、本明細書で記載されるリンカー配列およびターゲティングリガンドの任意の組合せと共に、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰの、残基１、５、１０、１１、または１４〜３４における保存的な置換または改変も、本開示における保護について想定される。
【０１０５】
本開示の一態様では、ターゲティングリガンドは、複数のアスパラギン酸残基を含む酸性オリゴペプチドを含む。Ｄアスパラギン酸残基またはＬアスパラギン酸残基の数は、約４つ〜約１０または約１０〜約２０の残基でありうる。オリゴペプチドは、直鎖状の場合もあり、分枝状の場合もある。例示的な一実施形態では、リシン残基は、分枝点として使用される。本発明の別の態様では、アスパラギン酸は、Ｌ−アスパラギン酸の場合もあり、Ｄ−アスパラギン酸の場合もあり、両方の光学異性体の混合物の場合もある。Ｄ−アスパラギン酸を、オリゴペプチド内に含む利点は、天然におけるＬ−アスパラギン酸だけを含むオリゴペプチドと比較して、タンパク質分解を受けにくくなりうることである。
【０１０６】
本開示の他の態様では、酸性オリゴペプチドは、２０を超えないＬ−グルタミン酸またはＤ−グルタミン酸でありうる。本開示のさらに別の態様では、酸性オリゴペプチドは、２０を超えないＬもしくはＤ−アスパラギン酸、またはＬ−グルタミン酸もしくはＤ−グルタミン酸の組合せでありうる。
【０１０７】
本開示の一部の態様では、ターゲティングリガンドは、ポリホスフェート（polyphosphate）または少なくとも１つのビスホスフェート（bisphosphate）でありうる。本開示のさらに他の態様では、ターゲティングリガンドは、コラーゲン模倣性ペプチドでありうる。このようなコラーゲン模倣性ペプチドは、骨折部位において、不完全なコラーゲン原線維の間に挿入される。本開示の一態様では、コラーゲン模倣性ペプチドは、［Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ］９−ＯＨの構造を有しうる。
【０１０８】
本開示の一部の態様では、ターゲティングリガンドは、骨格と酸との間に、１つを超える炭素を伴う、アミノヘキサン二酸（アルファ−アミノアジピン酸）またはその誘導体でありうる。例えば、ターゲティングリガンドは、２−アミノマロン酸でありうる。 
【０１０９】
本開示の一部の態様では、ターゲティング送達用化合物は、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を含む、少なくとも１つのスペーサーをさらに含む。
【０１１０】
ＰＴＨもしくはＰＴＨｒＰなどの活性同化化合物、またはそれらのそれぞれのアゴニストおよびターゲティングリガンドの間には、可変的な長さのリンカー配列が存在しうる。本開示の一部の態様では、リンカーは、ＰＴＨまたはＰＴＨｒＰの活性断片の伸長部の任意の部分、すなわち、ＰＴＨの残基３５〜８４またはＰＴＨｒＰの残基３５〜１７３でありうる。このような活性断片の伸長部は、通例、放出可能ではなく、リンカー配列は、伸長部の任意の部分、または伸長部の異なる部分の組合せでありうる。
【０１１１】
本開示の他の一部の態様では、リンカーは、骨リモデリング時に、破骨細胞内で産生される、少なくとも１つの夥多部分に感受性の、加水分解性基質でありうる。例えば、カテプシンＫは、骨リモデリング時に、破骨細胞内で産生される部分である。Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅ（配列中、Ｎｌｅは、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、または疎水性修飾を伴う、他の任意の同等物である）を含むリンカー配列は、カテプシンＫの基質として用いられうる。ターゲティング型化合物が、破骨細胞部位へと送達されると、カテプシンＫは、リンカーを加水分解し、骨の治癒に作用するように、活性同化化合物を放出しうる。
【０１１２】
さらに別の加水分解性リンカーは、ジスルフィド結合を含むことが可能であり、破骨細胞において、グルタチオンにより放出されうる。
【０１１３】
さらに別の加水分解性リンカーは、放出可能なエステルでありうる。
【０１１４】
本開示のこれらの特色は、以下の実施例により、さらに裏付けられる。
【実施例】
【０１１５】
材料および方法
合成
ペプチドは、固相ペプチド合成または組換え発現により合成した。
【０１１６】
固相ペプチド合成
略述すると、窒素の気泡をもたらすことが可能な固相ペプチド合成バイアル内に、２−クロロトリチル樹脂（１ｇ当たり１．１１ミリモル）を、第１のアミノ酸と共に、１ｇ当たり０．４ミリモルで、ＤＣＭおよびＤＩＰＥＡ中に、一晩にわたりロードした。次いで、樹脂を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ（１７：２：１）による、５ｍＬずつ４回の洗浄に続く、ＤＣＭおよびＤＭＦ、それぞれによる、３回ずつの洗浄でキャッピングした。各アミノ酸カップリング反応の後、ＤＭＦ中に２０％（ｖ／ｖ）のピペリジンを伴う、１０分間ずつ、３回にわたるインキュベーションにより、Ｆｍｏｃ基を除去した。次いで、樹脂を、ＤＭＦで、３回にわたり洗浄してから、次に、アミノ酸を添加した。各アミノ酸は、ＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡと共に、５倍過剰量で添加した。合成が完了したら、９５：２．５：２．５のトリフルオロ酢酸：水：トリイソプロピルシランを使用して、ペプチドを切断した。９５：２．５：２．５のトリフルオロ酢酸：トリイソプロピルシラン：水および１０倍過剰量のＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）を使用して、システインを含有するペプチドを切断した。
【０１１７】
組換えタンパク質の発現
Ｔ７プロモーター、チオレドキシンコード配列、ＨｉｓＴａｇ配列、トリプトファン残基、およびペプチドコード配列を含有する、アンピシリン耐性プラスミドを作出した。コンピテント細胞を、プラスミドで形質転換し、アンピシリンを含有する寒天プレート上に播種した。単独のコロニーを選択し、アンピシリン（１００ｕｇ／ｍｌ）ＬＢ培地中、３７℃で、一晩にわたり拡大した。次いで、コンピテント細胞を、１ｌのアンピシリン（１００ｕｇ／ｍｌ）ＬＢ培地中、１５時間にわたり、さらに拡大した。１５時間後、１ｍＭの最終濃度に到達するように、ＩＰＴＧを添加し、培地を、３７℃、１８０ｒｐｍで、５時間にわたり攪拌した。次いで、細胞を、ペレット化させ、６ＭのグアニジンＨＣｌを含有する、ｐＨ８、２０ｍＭのトリス−ＨＣＬ中の超音波処理により溶解させた。次いで、イミダゾールを使用する、ＨｉｓＴａｇからの溶離により、融合タンパク質を単離した。融合タンパク質含有画分を透析し、凍結乾燥させた。ヨードソ安息香酸法を使用して、タンパク質分解性切断を実施した。アニオン交換カラムを使用して、最終的なペプチドを精製し、透析し、さらなる使用のために凍結乾燥させた。
【０１１８】
特徴付け
ペプチドの分子量は、ＨＰＬＣ／ＭＳを使用して確認した。
【０１１９】
マウスにおける骨折の誘導
全ての動物研究は、Ｐｕｒｄｕｅ’ｓ  ａｎｉｍａｌ  ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによるプロトコールに従い行い、文献に記載される通りに実施した。Ｈａｒｌａｎ研究所から得られたＣＤ４  Ｓｗｉｓｓマウス（３０〜３５ｇ）を、これらの実験のために使用した。イソフルラン麻酔を伴う無菌条件下で、固定型大腿骨骨折を施した。膝部周囲の皮膚を剃毛し、まず、アルコールパッドで、次いで、Ｂｅｔａｄｉｎｅ溶液で清浄化した。皮膚切開は、内側傍膝蓋骨法により行った。次いで、膝蓋骨を外し、膝蓋骨下で、切開を行った。２５ゲージ針を使用して、髄内管を、リーマーで広げた。次いで、２２ゲージロッキングネイル（回転方向の安定性をもたらすように、両端を平板化した）を挿入した。創傷を結紮し、次いで、過剰損傷を防止するように、内蔵の停止装置を有する、３点曲げデバイスを使用して、骨折させた。皮下ブプレノルフィン（０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇ）を、手術（surgery）時に投与するのに続き、手術（operation）後３〜７日間にわたり、１２時間ごとに投与した。
【０１２０】
投与：
マウスに、１ｋｇ当たり３１ナノモルのペプチドまたは生理食塩液対照を、毎日皮下投与した。初回投与は、骨折の６時間後に行い、研究を通じて持続し、最終回投与は、安楽死の前日に行った。
【０１２１】
骨密度の解析
Ｓｃａｎｃｏ  μＣＴ  ４０を使用して、ＣＴ画像および骨についてのデータを収集した。骨は、脱水を防止するために、ＰＢＳ中に浸漬しながら走査した。ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して、骨密度、全骨組織体積（total volume）（ＴＶ）、相対骨体積（relative bone volume）（ＢＶ／ＴＶ）、骨梁幅（Ｔｂ．Ｔｈ）、および骨梁中心距離（Ｔｂ．Ｓｐ）について、画像を解析した。目的の体積は、骨折部位における、皮質骨上の地点間に、骨折の化骨、ならびに皮質骨および骨梁骨の両方を含んだ。
【０１２２】
統計学的解析は、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して行った。データは、結果において、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示する。対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、統計学的有意性を決定し、０．０５未満のＰ値を、統計学的に有意であると考えた。
【０１２３】
実施例１  ターゲティングされた骨折治癒のためのＰＴＨｒＰ送達系
本実施例では、薬物、リンカー、およびターゲティングリガンドを含む、骨折ターゲティング医薬を合成した。
【０１２４】
ＰＴＨｒＰのアミノ酸残基１〜４６に続き、１０のアスパラギン酸を含む医薬配列を、配列番号１０で一覧する。上記で記載した通り、残基１〜３４は、ＰＴＨｒＰの活性部分であり、残基３５〜４６は、骨折を治癒させるために提起された医薬のリンカー部分であり、１０のアスパラギン酸は、ターゲティングリガンドである。
【０１２５】
３群のマウスにおいて、大腿骨の閉鎖骨折をもたらした。マウスに、毎日、４週間にわたり、ターゲティング型ＰＴＨｒＰ（１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモル）、ＰＴＨｒＰ  １−３４（１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモル）、または生理食塩液を投与した。研究の終了時に、マウスを、ＣＯ２により安楽死させ、大腿骨を採取し、骨密度を、ＭｉｃｒｏＣＴにより決定した。
【０１２６】
図１において示される通り、ＰＴＨｒＰのターゲティング形は、骨折周囲の骨密度を、遊離型ＰＴＨｒＰおよび生理食塩液より著明に大きく増大させた。これは、ターゲティングリガンド配列へと連結された有効な同化剤を使用する戦略が、骨折の治癒のために働きうることを指し示す。
【０１２７】
骨治癒の進展を指し示す別の方途は、ｍｉｃｒｏＣＴにより収集される、骨梁中心距離データを測定することである。図２において示される通り、各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。左から右へと、ターゲティング型ＰＴＨｒＰ（ＰＴＨｒＰ１−４６に続く、１０のアスパラギン酸）および生理食塩液対照である。ターゲティング型ＰＴＨｒＰは、中心距離の、生理食塩液対照より統計学的に有意な縮小を示す。
【０１２８】
血中の高カルシウム濃度を引き起こすことが典型的な、従来の単独の同化剤投与と比較して、本出願は、代替法を提供するが、これは、骨折治癒剤を局所適用することが必要とされる場合よりも優れている。これは、高血中カルシウムレベル、または感染症と関連する骨の露出などの危険性を抑制する。
【０１２９】
最初の３４アミノ酸への、多様な保存的置換は、骨折したマウスにおける、同じ、またはより良好な骨密度の回復をもたらすことが想定される。
【０１３０】
また、１〜３４を越える、ＰＴＨｒＰの伸長配列の他の部分を使用することにより、１０のアスパラギン酸によるターゲティングリガンドへの、同等以上の接続をもたらしうることも想定される。
【０１３１】
本開示で記載される任意のリンカーおよびターゲティングリガンドを使用することもさらに想定される。例えば、リンカーは、ＰＴＨ配列の天然ペプチドの変化形の場合もあり、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｎｌｅ［配列中、Ｎｌｅは、ノルロイシン、またはロイシンもしくはイソロイシンなど、別の疎水性アミノ酸である］など、任意のカテプシンＫ感受性リンカーの場合もある。リンカーは、還元性環境に放出されうる、ジスルフィドリンカーでありうる。グルタチオンは通例、ある特定の種類の損傷において放出され、ジスルフィド結合を還元しうる。ジスルフィドリンカーは、同化剤の効力を増大させうることが想定される。リンカーはまた、加水分解され、放出されて、治癒効率を増大させるエステルでもありうる。ターゲティングリガンドは、通例、４つまたはこれを超える酸性アミノ酸残基を含有する酸性オリゴペプチド鎖であり、ヒドロキシアパタイトおよび／または生骨に結合する。これらの酸性アミノ酸残基は、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸またはこれらの組合せのうちのいずれかでありうる。場合によって、酸性オリゴペプチドは、骨折部位における薬物の蓄積を増大させるように、少なくとも１つのリシンを伴う分枝状の酸性オリゴペプチドでありうる。分枝鎖は、２つ、３つ、または４つなど、複数の分枝でありうる。
【０１３２】
ターゲティングリガンドの別の選択肢は、１または複数のビスホスホネート（bisphosphonate）、すなわち、ポリビスホスホネート（polybisphosphonate）である。コラーゲン模倣性ペプチドは、［Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ］９−ＯＨの配列を有する。
【０１３３】
ターゲティングリガンドのさらに別の選択肢は、骨格と酸との間に、１つを超える炭素を伴う、アミノヘキサン二酸（アルファ−アミノアジピン酸）またはその誘導体である。例えば、２−アミノマロン酸を、ＰＴＨｒＰまたはその変異体のためのターゲティングリガンドとして使用することができる。
【０１３４】
ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）などのスペーサーを、合成されたターゲティング薬物送達系へと付加して、ターゲティングリガンドが、同化効率に干渉する可能性を低減することができる。
【０１３５】
ＰＴＨｒＰ変異体−リンカー−ターゲティングリガンド選択肢の、異なる多様な組合せについて、骨密度回復についての試験を、本実施例で記載されたのと同様に実施することができる。具体的には、合成された薬物−リンカー−ターゲティングリガンドを、ＰＴＨｒＰ変異体自体および生理食塩液と、骨折周囲の骨密度に対するそれらの効果について比較する。ＰＴＨｒＰ変異体のターゲティング形は、骨折周囲の骨密度を、遊離型ＰＴＨｒＰ変異体および生理食塩液より著明に大きく増大させることが予測される。
【０１３６】
実施例２  治癒のために、骨折への、薬物のターゲティングされた送達をもたらすための、同化薬の、リンカー選択肢およびターゲティングリガンドとの、多様な異なる組合せ
本実施例では、ＰＴＨの、最初の３４アミノ酸を、本明細書で記載される適切なリンカー、および適切なターゲティングリガンドと共に合成する。実施例１と同様に、リンカーは、残基３５〜８４を含む、活性ＰＴＨの伸長部の任意のセグメント、または実施例１に記載された他のリンカーでありうる。ターゲティングリガンドは、実施例１に記載されたターゲティングリガンドのうちのいずれかでありうる。図３において示される通り、リンカーは、アミノ酸残基３６〜４６であり、ターゲティングリガンドは、１０のアスパラギン酸である。合成された薬物−リンカー−ターゲティングリガンド（ＰＴＨ  １−４６Ｄ１０、配列番号１１）は、骨折周囲の骨密度に対するそれらの効果について、ＰＴＨ変異体自体および生理食塩液と比較することができる。ＰＴＨ変異体のターゲティング形は、骨折周囲の骨密度を、遊離型ＰＴＨ変異体および生理食塩液より、著明に大きく増大させることが予測される。図３は、ターゲティングされたＰＴＨ  １−４６Ｄ１０が、骨密度の、生理食塩液対照と比較して、統計学的に有意な増大をもたらすことを示した。
【０１３７】
他の一部の有効な同化薬を使用して、本実施例におけるＰＴＨ（１−３４）を置きかえ、骨折の治癒を達成しうると考えられる。
【０１３８】
実施例３  フリースタンディングの骨折治癒剤としてのアバロパラチド１−３４
本実施例では、２９において、メチルＡｌａとしての修飾残基を伴い、３４において、アミン化Ａｌａとして修飾残基を伴う、アバロパラチド１−３４（配列番号３）について調べた。アバロパラチドについては、骨折を防止するために骨粗鬆症を処置することで、調べられている。異なる過程である、実際の骨折を治癒させるその能力についても調べているところである。当然ながら、アバロパラチド１−３４を、前出の実施例で記載されたリンカーおよびターゲティングリガンドへと連結することは、ターゲティング送達のために、骨折部位における骨密度を増大させる可能性が高いであろう。
【０１３９】
ここで、図１を参照しながら述べると、各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。ＣＴフレームは、４週間後に撮影した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。左から右へと、ターゲティング型ＰＴＨｒＰ（ＰＴＨｒＰ１−４６に続く、１０のアスパラギン酸）、遊離型の非コンジュゲートＰＴＨｒＰ（ＰＴＨｒＰ１−３４）、および生理食塩液対照である。ＰＴＨｒＰのターゲティング形は、骨折周囲の骨密度を、遊離型ＰＴＨｒＰおよび生理食塩液による骨密度より、有意に大きく増大させた。
【０１４０】
ここで、図２を参照しながら述べると、中心距離の縮小は、骨密度の増大と関連し、治癒の進展を示しうる。ＣＴフレームは、４週間後に撮影した。各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。左から右へと、ターゲティング型ＰＴＨｒＰ（ＰＴＨｒＰ１−４６に続く、１０のアスパラギン酸）および生理食塩液対照である。ターゲティング型ＰＴＨｒＰは、中心距離の、生理食塩液対照と比較して、統計学的に有意な低減を示す。
【０１４１】
ここで、図３を参照しながら述べると、各骨折の化骨から選んだ１００のＣＴフレーム（スライス）について解析した。ＣＴフレームは、２週間後に撮影した。フレームのスタックは、化骨が最大である骨折領域から選択した。左から右へと、ターゲティング型ＰＴＨ（ＰＴＨ１−４６に続く、１０のアスパラギン酸）および生理食塩液対照である。ターゲティング型ＰＴＨは、骨密度の、生理食塩液対照と比較して、統計学的に有意な増大をもたらす。
【０１４２】
ここで、図４を参照しながら述べると、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の発現比を、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内で解析した。ＡＬＰ比は、（処置された場合のＡＬＰ発現／媒体対照によるＡＬＰ発現）により計算する。発現レベルの上昇は、骨芽細胞活性の増大と関連し、骨の石灰化に関与する、鍵となるタンパク質である。ターゲティングリガンドの付加は、薬物の有効性を低減しない。
【０１４３】
ここで、図５を参照しながら述べると、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、オステオポンチン（ＯＰＮ）の発現比を、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内で解析した。ＯＰＮ比は、（処置された場合のＯＰＮ発現／媒体対照によるＯＰＮ発現）により計算する。発現レベルの上昇は、骨芽細胞活性の増大と関連し、骨の石灰化に関与する、鍵となるタンパク質である。ターゲティングリガンドの付加は、薬物の有効性を低減しない。
【０１４４】
ここで、図６を参照しながら述べると、ターゲティング型ＰＴＨｒＰおよび非ターゲティング型ＰＴＨｒＰの両方についての、いくつかの鍵となる骨マーカーの遺伝子発現比を、ＭＣ３Ｔ３Ｅ１細胞内で解析した。活性マーカーは、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、Ｉ型コラーゲンアルファ（Ｃｏｌ１アルファ）、オステオカルシン（ＯＣ）、オステオプロテグリン（ＯＰＧ）、オステオポンチン（ＯＰＮ）、およびオステリクス（ＯＳＸ）を含む。遺伝子発現比は、（処置された場合の遺伝子発現／媒体対照による遺伝子発現）により計算する。ＰＴＨｒＰをターゲティングした場合の活性は、１ｐＭという低度である。
【０１４５】
【表１】
2020500871.tif 000003
【０１４６】
ここで、表１を参照しながら述べると、マウスを、１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモルの、ＰＴＨｒＰＤ１０（「ターゲティングされた薬物」）または生理食塩液の皮下注射により処置した。Ｓｗｉｓｓ  ＮＤ４マウスを、２８日間にわたり処置した。マウスを、研究の終了時に屠殺し、肝臓および腎臓を切り出した。臓器を、ホルマリン中で固定し、各々から、パラフィン切片を作製した。獣医科の病理医が、臓器についての、無作為化された盲検解析を実施した。検出可能な毒性は、観察されなかった。記録された病変は、重要性が僅少であり、明白な組織損傷（壊死）と関連しない。この種の病変が、臨床徴候または疾病を引き起こす可能性は小さいと考えられる。これらの病変は、これらの動物にとって、正常な限界内にある可能性が高い。
【０１４７】
ここで、図７を参照しながら述べると、マウスを、１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモルの、ＰＴＨｒＰＤ１０（ターゲティング型）またはＰＴＨｒＰ（遊離型）の皮下注射により処置した。Ｓｗｉｓｓ  ＮＤ４マウスを、１４、２８、または５６日間にわたり処置した。マウスを、各研究について、投与期間の終了時に屠殺し、大腿骨を切り出した。骨折の化骨密度は、Ｓｃａｎｃｏ製のｍｉｃｒｏＣＴを使用して測定した。各骨折の化骨の直径が最大となる、１００スライスの切片を、測定のために選択した。「ターゲティング型２」は、ターゲティング型ＰＴＨｒＰを、２週間（１４日間）にわたり投与されたマウスを表す。「遊離型２」は、非修飾ＰＴＨｒＰを、２週間（１４日間）にわたり投与されたマウスを表す。「ターゲティング型４」は、ターゲティング型ＰＴＨｒＰを、４週間（２８日間）にわたり投与されたマウスを表す。「遊離型４」は、非修飾ＰＴＨｒＰを、４週間（２８日間）にわたり投与されたマウスを表す。「ターゲティング型８」は、ターゲティング型ＰＴＨｒＰを、８週間（５６日間）にわたり投与されたマウスを表す。「遊離型８」は、非修飾ＰＴＨｒＰを、８週間（５６日間）にわたり投与されたマウスを表す。ターゲティング型ＰＴＨｒＰでは、あらゆる時点において、遊離型ＰＴＨｒｐより大きな密度を観察することができる。ターゲティング型ＰＴＨｒＰと、遊離型ＰＴＨｒＰとの最大の差違は、２週間における差違である。これらの結果は、ターゲティングされた薬物が、骨折の治癒を改善するだけでなく、また、骨折の治癒を加速化させることも指し示す。
【０１４８】
ここで、図８を参照しながら述べると、マウスを、１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモルの、アバロパラチドＤ１０（ターゲティング型）、アバロパラチド（ターゲティングなし）および生理食塩液の皮下注射により処置した。Ｓｗｉｓｓ  ＮＤ４マウスを、２８日間にわたり処置した。マウスを、研究の終了時に屠殺し、大腿骨を切り出した。骨折の化骨密度は、Ｓｃａｎｃｏ製のｍｉｃｒｏＣＴを使用して測定した。各骨折の化骨の直径が最大となる、１００スライスの切片を、測定のために選択した。アバロパラチドは、既に、骨粗鬆症の処置のために使用されている。これらの結果は、アバロパラチドはまた、骨折を処置するためにも使用されうることを指し示す。これらの結果は、ターゲティングされたアバロパラチドが、遊離型アバロパラチドよりよく効くことを指し示す。
【０１４９】
ここで、図９を参照しながら述べると、マウスを、１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモルの、ポリホスフェート（polyphosphate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰまたは生理食塩液の皮下注射により処置した。Ｓｗｉｓｓ  ＮＤ４マウスを、２８日間にわたり処置した。マウスを、研究の終了時に屠殺し、大腿骨を切り出した。骨折の化骨密度は、Ｓｃａｎｃｏ製のｍｉｃｒｏＣＴを使用して測定した。各骨折の化骨の直径が最大となる、１００スライスの切片を、測定のために選択した。ポリホスフェート（polyphosphate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰは、骨折の治癒を、生理食塩液と比較して増進した。
【０１５０】
ここで、図１０を参照しながら述べると、マウスを、１日当たり１ｋｇ当たり３１ナノモルの、単一のアレンドロネート（alendronate）、分枝状トリアレンドロネート（alendronate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰ、または遊離型ＰＴＨｒＰの皮下注射により処置した。Ｓｗｉｓｓ  ＮＤ４マウスを、２８日間にわたり処置した。マウスを、研究の終了時に屠殺し、大腿骨を切り出した。骨折の化骨密度は、Ｓｃａｎｃｏ製のｍｉｃｒｏＣＴを使用して測定した。各骨折の化骨の直径が最大となる、１００スライスの切片を、測定のために選択した。単一のアレンドロネート（alendronate）または分枝状のトリアレンドロネート（alendronate）でターゲティングされたＰＴＨｒＰは、骨折の治癒を、遊離型ＰＴＨｒＰと比較して増進した。
【０１５１】
実施例４
ターゲティングリガンドは、オリゴ酸性アミノ酸を含みうるがこれらに限定されない。例示的なオリゴ酸性アミノ酸は、Ｌアミノ酸および／もしくはＤアミノ酸を含む、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０のアスパラギン酸の直鎖状ポリマー、Ｌアミノ酸および／もしくはＤアミノ酸を含む、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、および／もしくは３０のグルタミン酸の直鎖状ポリマー、Ｌ酸性アミノ酸および／もしくはＤ酸性アミノ酸を含む、１０の酸性アミノ酸の直鎖状ポリマー、Ｌアミノ酸および／もしくはＤアミノ酸を含む各分枝上に、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および／もしくは２０の残基を伴う、アスパラギン酸の分枝状ポリマー、Ｌアミノ酸および／もしくはＤアミノ酸を含む各分枝上に、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および／もしくは２０の残基を伴う、グルタミン酸の分枝状ポリマー、ならびに／またはＬ酸性アミノ酸および／もしくはＤ酸性アミノ酸を含む各分枝上に、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および／もしくは２０の残基を伴う、酸性アミノ酸の分枝状ポリマーを含むがこれらに限定されない。ここで、図１１〜１２を参照すると、酸性アミノ酸の、例示的な直鎖状ポリマーおよび分枝状ポリマーが示されている。図１３は、アミノ酸に由来しない、例示的なターゲティングリガンドを提示する。
【０１５２】
ターゲティングリガンドを、マレイミド含有リンカーとカップリングさせる。マレイミド含有リンカーを有するターゲティングリガンドを、システインマレイミドカップリングプロセスを介して、顕著に異なる化学的特性を有する多様なペプチドとさらにコンジュゲートさせる。これらのペプチドは、ＦＧＦ２のヘパリン結合性ドメイン（配列番号１４）を表す配列、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（配列番号１５）を表す配列、ＩＩＩ型コラーゲンＣＴＸ領域由来の走化性クリプティックペプチド（配列番号１６）を表す配列、カゼインキナーゼ２ベータ鎖（配列番号１７）を表す配列、オステオポンチン由来ペプチド（配列番号１８）を表す配列、および／またはＰ４−ＢＭＰ２（配列番号１９）を表す配列を含みうるがこれらに限定されない。１２５Ｉを、コンジュゲートペプチドのヒスチジン残基、チロシン残基、および／またはトリプトファン残基へと共有結合的に結合させた、Ｐｉｅｒｃｅ製のヨード化試薬を介して、コンジュゲートペプチドをヨード化する。
【０１５３】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃは、式：ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号７０もまた参照されたい）。
【０１５４】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣは、式：ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号７１もまた参照されたい）。
【０１５５】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＣＴＣＣは、式：ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号７２もまた参照されたい）。
【０１５６】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃは、式：ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号３もまた参照されたい）。
【０１５７】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＯＤＰＣは、式：ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号７４もまた参照されたい）。
【０１５８】
分枝状Ｄ１０とコンジュゲートさせたＰ４Ｃは、式：ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＫ［ＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ］２を有する（配列番号７５もまた参照されたい）。
【０１５９】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＦ１０９Ｃは、式：ＹＫＲＳＲＹＴＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号７６もまた参照されたい）。
【０１６０】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＰＡＣＡＰＣは、式：ＨＳＤＧＩＦＴＤＳＹＳＲＹＲＫＱＭＡＶＫＫＹＬＡＡＶＬＧＫＲＹＫＱＲＶＫＮＫＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号７７もまた参照されたい）。
【０１６１】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＣＴＣＣは、式：ＹＩＡＧＶＧＧＥＫＳＧＧＦＹＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号７８もまた参照されたい）。
【０１６２】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＣｋ２．３Ｃは、式：ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＩＰＶＧＥＳＬＫＤＬＩＤＱＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号７９もまた参照されたい）。
【０１６３】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＯＤＰＣは、式：ＤＶＤＶＰＤＧＲＧＤＳＬＡＹＧＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号８０もまた参照されたい）。
【０１６４】
分枝状Ｅ１０とコンジュゲートさせたＰ４Ｃは、式：ＫＩＰＫＡＳＳＶＰＴＥＬＳＡＩＳＴＬＹＬＣＭａｌＫ［ＥＥＥＥＥＥＥＥＥＥ］２を有する（配列番号８１もまた参照されたい）。
【０１６５】
ここで、図１４Ａおよび１４Ｂを参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウスに、１ｍＣｉの１２５Ｉ標識化コンジュゲートを注射した。システインチロシンジペプチドを、マレイミドリンカーへとカップリングさせる。マレイミドリンカーを有するシステインチロシンジペプチドを、表示のターゲティングリガンドの各々へとコンジュゲートさせる。ＰＴＨｒＰ＿ＡＳＰ１０は、１０のアスパラギン酸による直鎖状ポリマーを伴う、ＰＴＨｒＰの１〜４６を有するコンジュゲートペプチドを表す。プレプチン＿Ａｓｐ１０は、１０のアスパラギン酸による直鎖状ポリマーを伴う、プレプチンの１〜１６を有するコンジュゲートペプチドを表す。注射の２４時間後に、剖検を実施し、組織を切り出した。次いで、ガンマカウンターを介して、組織をカウントした。ここでは、骨折した大腿骨の、健常な大腿骨に対する相対カウントを、比として表示する。
【０１６６】
ここで、図１５を参照しながら述べると、右大腿骨における骨切り術の１０日後において、成体雌Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウスに、１０Ｌ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマーへとコンジュゲートさせたＬＳ２８８を、皮下注射した。１秒間にわたる、７８０ｎｍの励起ビームを介して、マウスをイメージングした。発光蛍光は、８１０ｎｍで、１秒間にわたり収集した。注射部位が、マウスの背部の近傍であったので、マウスは、背部における高蛍光を呈する。
【０１６７】
ここで、図１６を参照しながら述べると、右大腿骨における骨切り術の３、６、および１０日後において、成体雌Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウスに、１０Ｌ−アスパラギン酸の直鎖状ポリマーへとコンジュゲートさせたＬＳ２８８を、皮下注射した。１秒間にわたる、７８０ｎｍの励起ビームを介して、マウスをイメージングした。発光蛍光は、８１０ｎｍで、１秒間にわたり収集した。上列は、骨折の１０日後を表し、中列は、骨折の６日後を表し、下列は、骨折の３日後を表す。あらゆる群内の左側の大腿骨は、骨折した大腿骨であり、右側の健常な大腿骨と比較される。これは、骨折のターゲティングが、治癒過程を改善することを裏付ける。
【０１６８】
ここで、図１７を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウスに、０．２５ｍＣｉの放射性標識化１２５ＩプレプチンＤ１０コンジュゲートを注射し、異なる時点において屠殺した。各組織を回収し、次いで、ガンマカウンターで定量化した（図１７Ａ）。放射性標識化１２５ＩプレプチンＤ１０を使用して、骨折した大腿骨と、健常な大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を計算した（図１７Ｂ）。
【０１６９】
ここで、図１８および１９を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉコンジュゲートペプチドを注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。各コンジュゲートペプチドでの、骨折した大腿骨と、健常な（骨折していない）大腿骨との間の、相対カウントの倍数差を計算した。
【０１７０】
ここで、図２０を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、Ｌ−Ａｓｐ１０（図２０Ａ）、Ｄ−Ａｓｐ１０（図２０Ｂ）、またはＬ−Ａｓｐ２０（図２０Ｃ）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）を注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。被験コンジュゲートペプチドの全ては、骨折した骨に対する、他の臓器を上回る、優先的ターゲティングおよび／または選択的ターゲティングを呈した。
【０１７１】
ここで、図２１を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、Ｌ−Ｇｌｕ１０（図２１Ａ）またはＤ−Ｇｌｕ１０（図２１Ｂ）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、およびＦ１０９Ｃ）を注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。被験コンジュゲートペプチドの全ては、骨折した骨に対する、他の臓器を上回る、優先的ターゲティングおよび／または選択的ターゲティングを呈した。腎臓で観察された高シグナルは、腎臓における、高存在度のグルタミン酸輸送体に起因しうる。これらの輸送体は、グルタミン酸の、細胞への実際の取込みではなく、循環への再吸収の一因となる。これは、負に帯電した分子が、骨に強く接着する、骨折した大腿骨において観察される取込みに反して、シグナルが、時間経過にわたり減衰する可能性が高いことを意味する（例えば、図１７を参照されたい）。グルタミン酸の吸収に関する、さらなる詳細については、Hediger, M. A. Glutamate transporters in kidney and brain. Am. J. Physiol. - Ren. Physiol. 277, F487−F492 (1999); Kanai, Y. & Hediger, M. A. Primary structure and functional characterization of a high-affinity glutamate transporter. Nature 360, 467−471 (1992); and Kanai, Y. & Hediger, M. A. The glutamate and neutral amino acid transporter family: physiological and pharmacological implications. Eur. J. Pharmacol. 479, 237−247 (2003)を参照されたい。
【０１７２】
ここで、図２２を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、Ｌ−Ｇｌｕ２０（図２２Ａ）またはＤ−Ｇｌｕ２０（図２２Ｂ）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）を注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。被験コンジュゲートペプチドの大半は、骨折した骨または腎臓に対する、他の臓器を上回る、優先的ターゲティングおよび／または選択的ターゲティングを呈した。グルタミン酸ポリマーを、２０へと伸長させることにより、骨折した骨への選択性が、わずかに改善されると考えられたが、腎臓への取込みも、やはり維持される。
【０１７３】
ここで、図２３を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、分枝状Ｌ−Ａｓｐ１０（図２３Ａ）または分枝状Ｄ−Ａｓｐ１０（図２３Ｂ）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）を注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。被験コンジュゲートペプチドの全ては、骨折した骨に対する、他の臓器を上回る、優先的ターゲティングおよび／または選択的ターゲティングを呈した。一部は、腎臓への高度な取込みを示すと考えられた。
【０１７４】
ここで、図２４を参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、Ｌ−ＡＡＤ１０（図２４Ａ）、Ｌ−ＳＤＳＤＤ（図２４Ｂ）、または（ＤＳＳ）６（図２４Ｃ）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＯＤＰＣ、Ｐ４Ｃ、Ｃｋ２．３Ｃ、ＣＴＣＣ、Ｆ１０９Ｃ、およびＰＡＣＡＰＣ）を注射した。注射の１４時間後各マウスを屠殺し、列挙された臓器の各々を回収し、定量化した。カウントは、試料の重量に照らして標準化した。Ｌ−ＡＡＤ１０とコンジュゲートさせたペプチドは、骨折した骨に対する、ある程度のターゲティング能を有すると考えられる。Ｌ−ＳＤＳＤＤとコンジュゲートさせたペプチドは、骨折した骨に対する、中程度のターゲティング能を呈し、腎臓への取込みの増大もまた、観察された。（ＤＳＳ）６とコンジュゲートさせたペプチドは、骨折した骨に対するターゲティング能を有さないと考えられる。
【０１７５】
ここで、図２５Ａを参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、モノビスホスホネート（monobisphosphonate）、トリビスホスホネート（tribisphosphonate）、ポリホスフェート（polyphosphate）、Ｅ１０、またはＥ２０とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉペプチド（例えば、ＰＴＨｒＰ１−３６およびＰＴＨ１−３４およびＰＴＨｒＰ１−３９）を注射した。ここで、図２５Ｂを参照しながら述べると、骨切り術の１０日後において、成体Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｅｒマウス（１２週齢）に、モノビスホスホネート（monobisphosphonate）（「モノビスホスホネート（monobisphosphonate）ＹＣ」）、分枝状Ｌ−Ａｓｐ４（「分枝状（Ｌ）Ｄ４  Ｙ」）、または分枝状Ｌ−Ａｓｐ８（「分枝状（Ｌ）Ｄ８  Ｙ」）とコンジュゲートさせた、０．２２ｍＣｉの放射性標識化１２５Ｉ チロシンを注射した。
【０１７６】
ここで、図２６を参照しながら述べると、処置後における、ＰＴＨ１−３４Ｅ１０および生理食塩液の、骨体積に対する効果が示される。マウスを、ＰＴＨ１−３４Ｅ１０で、毎日、２週間にわたり処置した。２週間後、マウスを屠殺し、大腿骨を、ｍｉｃｒｏＣＴ解析のために切り出した。
【０１７７】
ここで、図２７を参照しながら述べると、表示の用量を使用する処置後における、ＰＴＨｒＰＤ１０および生理食塩液の、正規化された骨体積に対する効果が示される。マウスを、ＰＴＨｒＰＤ１０で、毎日、４週間にわたり処置した。４週間後、マウスを屠殺し、大腿骨を、ｍｉｃｒｏＣＴ解析のために切り出した。
【０１７８】
グルタミン酸を含有するターゲティングリガンドは、他の被験ターゲティングリガンドより、腎臓内の取込みが大きく、取込みは、１グラム当たりの測定用量の２０〜５０％の範囲であった。この取込みは、腎臓において発現する、グルタミン酸再取込み受容体に起因する可能性が高い。グルタミン酸によるターゲティングリガンドでは、骨折した骨への送達の、骨折していない骨への送達に対する比が、７〜１２の範囲であることにより指し示される通り、グルタミン酸を含有するターゲティングリガンドは、他の骨に対する、骨折した骨への選択性が、他のターゲティングリガンドより大きい。グルタミン酸ポリマーを、２０へと伸長させることにより、１０マーについての、１グラム当たりの測定用量の２０〜５０％から、２０マーについての、１グラム当たりの測定用量の４０〜７０％への、送達のわずかな改善がもたらされた。この改善は、骨折部位において露出されたヒドロキシアパタイトに、さらなるグルタミン酸がもたらすアフィニティーの増大に起因する可能性が高い。伸長させた２０マーのグルタミン酸によるターゲティングリガンドも、やはり、より短い１０マーと同様の、腎臓取込み問題を抱えた。Ｌ光学異性体から、Ｄ光学異性体への変化は、グルタミン酸によるターゲティングリガンドに対して、一貫した効果をもたらさないと考えられる。
【０１７９】
アスパラギン酸によるターゲティングリガンドは、ターゲティングリガンドのうちで、最大の送達をもたらすと考えられ、送達蓄積量は、１グラム当たりの測定用量の４０〜７０％の範囲である。しかし、アスパラギン酸によるターゲティングリガンドは、骨折した骨と、骨折していない骨との選択性が、やや小さいと考えられ、骨折した骨への蓄積の、骨折していない骨への蓄積に対する比は、Ｌアミノ酸であるアスパラギン酸によるターゲティングでは、４〜６であり、Ｄアミノ酸であるアスパラギン酸によるターゲティングリガンドでは、６〜９である。しかし、アスパラギン酸によるターゲティングリガンドは、グルタミン酸によるターゲティングリガンドほど、腎臓における高度な蓄積を被らず、１グラム当たりの測定用量に対して、典型的に、１５％を下回る蓄積を維持する。分枝形は、骨折部位へと、より多くを送達するその能力において、直鎖形を上回らないと考えられる。
【０１８０】
長さを、１０から、２０へと伸長させることにより、Ｌ−Ｇｌｕ２０とコンジュゲートさせる（「（Ｌ）Ｄ２０」と表示される）、異なる種類のペプチドにわたり、ターゲティングリガンドの一貫性の改善がなされ、全てのペプチドが、１グラム当たりの測定用量の５０〜７０％で送達された。Ｌ光学異性体から、Ｄ光学異性体への変化は、アスパラギン酸によるターゲティングリガンドについて、その安定性を改善すると考えられ、高度な送達率および良好な選択性比により証拠立てられた通り、ターゲティングを増大させる。
【０１８１】
ＡＡＤ１０とコンジュゲートさせたペプチドは、中程度のターゲティング能を有するに過ぎないと考えられる。ＡＡＤ１０とコンジュゲートさせたペプチドは、依然として、より全身性の分布を維持する。それでもなお、骨折した骨へと、骨折していない骨への、２〜５倍の標識化された化合物を送達するその能力の改善を維持することが可能であった。ＳＤＳＤＤとコンジュゲートさせたペプチドも、中程度のターゲティング能を有するに過ぎず、送達は、２０〜４０％の範囲であった。ＳＤＳＤＤとコンジュゲートさせたペプチドも、依然として、より全身性の分布を維持する。ＳＤＳＤＤとコンジュゲートさせたペプチドは、それでもなお、骨折した骨へと、骨折していない骨への、３〜５倍の標識化された化合物を送達するその能力の改善を維持することが可能であった。（ＤＳＳ）６とコンジュゲートさせたペプチドも、骨折した骨への、中程度のターゲティング能を有するに過ぎないと考えられる。（ＤＳＳ）６も、依然として、より全身性の分布を維持する。（ＤＳＳ）６とコンジュゲートさせたペプチドは、それでもなお、骨折した骨へと、骨折していない骨への、２〜３倍の標識化された化合物を送達するその能力の改善を維持することが可能であった。
【０１８２】
新規の技術について、図面および前述の記載に、詳細に例示および記載してきたが、これらは、例示的な性格のものであり、制限的な性格のものではないと考えられるべきであり、好ましい実施形態だけが示され、記載され、新規の技術の趣旨の中に収まる、全ての変化および改変は、保護されるように所望されることが理解される。同様に、具体例、理論的推論、説明、および例示を使用して、新規の技術について例示したが、考察を伴うこれらの例示は、技術を限定するものと解釈されるべきではない。全ての特許、特許出願、および本出願で参照される教科書、科学的論考、刊行物などへの言及は、本明細書の明示的な教示と矛盾しない範囲において、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれる。
【図１】
2020500871.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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