(57)【要約】  免疫チェックポイント調節剤と、アルボウイルスの株またはアルファウイルスの株を用いて、疾患、特に癌を処置するための組成物と方法が本明細書に記載される。さらに、免疫チェックポイント調節剤、腫瘍抗原で刺激された樹状細胞、およびアルファウイルスまたはアルボウイルスの投与を含む併用療法のための方法も提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置するまたは減少させるための方法であって、
ａ）アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株、および、
ｂ）免疫チェックポイント調節剤を被験体に投与する工程、を含み、
投与する工程は癌の処置または減少をもたらす、方法。
【請求項２】
アルボウイルスがデングウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
デングウイルスが約１０２〜約１０８のプラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの量で存在する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
デングウイルスは約１０５ＰＦＵ／ｍＬで投与される、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
デングウイルスは約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、あるいは０．１ｍＬの容量である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
デングウイルスは０．０１〜０．１ｍＬの容量である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
デングウイルスは、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
デングウイルスはＤＥＮＶ−２株＃１７１０である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
デングウイルスは、４５ＡＺ５、１７１０、Ｓ１６８０３、ＨＯＮ  １９９１  Ｃ、ＨＯＮ  １９９１  Ｄ、ＨＯＮ  １９９１  Ｂ、ＨＯＮ  １９９１  Ａ、ＳＡＬ  １９８７、ＴＲＩ  １９８１、ＰＲ  １９６９、ＩＮＤ  １９５７、ＴＲＩ  １９５３、ＴＳＶ０１、ＤＳ０９−２８０１０６、ＤＳ３１−２９１００５、１３４９、ＧＤ０１／０３、４４、４３、Ｃｈｉｎａ  ０４、ＦＪ１１／９９、ＦＪ−１０、ＱＨＤ１３ＣＡＩＱ、ＣＯ／ＢＩＤ−Ｖ３３５８、ＦＪ／ＵＨ２１／１９７１、ＧＵ／ＢＩＤ−Ｖ２９５０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｉａｎ、ＧＷＬ１８、ＩＮ／ＢＩＤ−Ｖ２９６１、Ｏｄ２１１２、ＲＲ４４、１３９２、１０１６ＤＮ、１０１７ＤＮ、１０７０ＤＮ、９８９００６６３ＤＨＦ、ＢＡ０５ｉ、１０２２ＤＮ、ＮＧＣ、Ｐａｋ−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｋ−２００９、Ｐａｋ−Ｍ−２０１１、ＰａｋＬ−２０１３、Ｐａｋ−−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｌ−２０１０、Ｐａｋ−Ｌ−２００８、ＰＥ／ＮＦＩ１１５９、ＰＥ／ＩＱＡ  ２０８０、ＳＧ／Ｄ２Ｙ９８Ｐ−ＰＰ１、ＳＧ／０５Ｋ３２９５ＤＫ１、ＬＫ／ＢＩＤ／Ｖ２４２１、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４２２、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４１６、１２２２−ＤＦ−０６、ＴＷ／ＢＩＤ−Ｖ５０５６、ＴＨ／ＢＩＤ−Ｖ３３５７、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５４１２、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５０５５、ＩＱＴ１７９７、ＶＮ／ＢＩＤ−Ｖ７３５、ＵＳ／Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＣＨ５３４８９、または３４１７５０である、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
アルファウイルスはチクングニヤウイルスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
免疫チェックポイント調節剤は、ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ブチロフィリン、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの発現または活性を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
免疫チェックポイント調節剤は、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの発現または活性を調節する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
免疫チェックポイント調節剤は、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ（Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌの少なくとも１つの発現または活性を増加させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
免疫チェックポイント調節剤は、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ＲＮＡ干渉剤は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
免疫チェックポイント調節剤は、薬学的に許容可能な製剤で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
被験体の癌を処置するまたは減少させるための方法であって、
ａ）アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株、
ｂ）免疫チェックポイント調節剤、および、
ｃ）腫瘍抗原で刺激された樹状細胞、
を投与する工程を含む、方法。
【請求項１８】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は癌細胞を標的とする、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は、硬い表面上で培養される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は自己由来であるか、または同種異系である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は、約６．５ｎｇ／ｍＬ〜約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を生成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
被験体から樹状細胞を得る工程をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は、被験体から腫瘍の一部を得ること、腫瘍溶解物を生成するために腫瘍の一部を溶解すること、腫瘍抗原で刺激された樹状細胞を生成するために樹状細胞を腫瘍細胞溶解物に接触させることにより生成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は、腫瘍細胞を、腫瘍抗原を発現するペプチドに接触させることにより生成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
アルボウイルスがデングウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
デングウイルスが約１０２〜約１０８のプラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの量で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
デングウイルスは約１０５ＰＦＵ／ｍＬで投与される、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
デングウイルスは約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、あるいは０．１ｍＬの容量である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
デングウイルスは０．０１〜０．１ｍＬの容量である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
デングウイルスは、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
デングウイルスはＤＥＮＶ−２株＃１７１０である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
デングウイルスは、４５ＡＺ５、１７１０、Ｓ１６８０３、ＨＯＮ  １９９１  Ｃ、ＨＯＮ  １９９１  Ｄ、ＨＯＮ  １９９１  Ｂ、ＨＯＮ  １９９１  Ａ、ＳＡＬ  １９８７、ＴＲＩ  １９８１、ＰＲ  １９６９、ＩＮＤ  １９５７、ＴＲＩ  １９５３、ＴＳＶ０１、ＤＳ０９−２８０１０６、ＤＳ３１−２９１００５、１３４９、ＧＤ０１／０３、４４、４３、Ｃｈｉｎａ  ０４、ＦＪ１１／９９、ＦＪ−１０、ＱＨＤ１３ＣＡＩＱ、ＣＯ／ＢＩＤ−Ｖ３３５８、ＦＪ／ＵＨ２１／１９７１、ＧＵ／ＢＩＤ−Ｖ２９５０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｉａｎ、ＧＷＬ１８、ＩＮ／ＢＩＤ−Ｖ２９６１、Ｏｄ２１１２、ＲＲ４４、１３９２、１０１６ＤＮ、１０１７ＤＮ、１０７０ＤＮ、９８９００６６３ＤＨＦ、ＢＡ０５ｉ、１０２２ＤＮ、ＮＧＣ、Ｐａｋ−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｋ−２００９、Ｐａｋ−Ｍ−２０１１、ＰａｋＬ−２０１３、Ｐａｋ−−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｌ−２０１０、Ｐａｋ−Ｌ−２００８、ＰＥ／ＮＦＩ１１５９、ＰＥ／ＩＱＡ  ２０８０、ＳＧ／Ｄ２Ｙ９８Ｐ−ＰＰ１、ＳＧ／０５Ｋ３２９５ＤＫ１、ＬＫ／ＢＩＤ／Ｖ２４２１、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４２２、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４１６、１２２２−ＤＦ−０６、ＴＷ／ＢＩＤ−Ｖ５０５６、ＴＨ／ＢＩＤ−Ｖ３３５７、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５４１２、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５０５５、ＩＱＴ１７９７、ＶＮ／ＢＩＤ−Ｖ７３５、ＵＳ／Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＣＨ５３４８９、または３４１７５０である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
アルファウイルスはチクングニヤウイルスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項３４】
腫瘍抗原で刺激された樹状細胞は、少なくとも約６．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を生成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３５】
免疫チェックポイント調節剤は、ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ブチロフィリン、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２、ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの発現または活性を調節する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３６】
免疫チェックポイント調節剤は、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの発現または活性を調節する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
免疫チェックポイント調節剤は、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ−４０、あるいはＯＸ−４０Ｌの少なくとも１つの発現または活性を増加させる、請求項１７に記載の方法。
【請求項３８】
免疫チェックポイント調節剤は、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである、請求項１７に記載の方法。
【請求項３９】
ＲＮＡ干渉剤は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
免疫チェックポイント調節剤は、薬学的に許容可能な製剤で投与される、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１６年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／４２３，１１９号の利益を主張するものであり、これは全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を包含しており、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、その全体を引用することで本明細書に組み込まれる。２０１７年１１月１３日に作成された上記ＡＳＣＩＩのコピーは、４８２５３−７０５＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、７９，３１７バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００３】
免疫療法は、細胞障害性薬物、放射線、および手術とは異なり、腫瘍細胞を認識かつ死滅させるために免疫系を刺激するものである。腫瘍細胞を認識かつ破壊するために免疫系を刺激する際に、多数の試みが行われてきた。これらは、免疫療法、免疫活性化の欠如、有害事象、および／または腫瘍の免疫回避メカニズムの標的として選択されるペプチドの同一性が原因で、成功が制限されてきた。
【発明の概要】
【０００４】
癌の処置または減少のための方法が本明細書で提供され、該方法は、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を、それを必要としている被験体に投与する工程と、および、免疫チェックポイント調節剤を被験体に投与する工程を含み、ここで、投与の組み合わせが癌の処置または減少をもたらす。さらに、デングウイルスであるアルボウイルスが提供される。さらに、デングウイルスが約１０２〜約１０８のプラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約１０５ＰＦＵ／ｍＬの投与可能な量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約１０，０００〜９０，０００ＰＦＵ／ｍＬの量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスの量が約３０，０００ＰＦＵ／ｍＬであり得る、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、あるいは０．１ｍＬの容量である、デングウイルスが本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが０．０１ｍＬ〜０．０１ｍＬの容量である、デングウイルスが本明細書で提供される。さらに、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型であるデングウイルスが本明細書で提供される。さらに、ＤＥＮＶ−２株＃１７１０であるデングウイルスが提供される。さらに、４５ＡＺ５、１７１０、Ｓ１６８０３、ＨＯＮ  １９９１  Ｃ、ＨＯＮ  １９９１  Ｄ、ＨＯＮ  １９９１  Ｂ、ＨＯＮ  １９９１  Ａ、ＳＡＬ  １９８７、ＴＲＩ  １９８１、ＰＲ  １９６９、ＩＮＤ  １９５７、ＴＲＩ  １９５３、ＴＳＶ０１、ＤＳ０９−２８０１０６、ＤＳ３１−２９１００５、１３４９、ＧＤ０１／０３、４４、４３、Ｃｈｉｎａ  ０４、ＦＪ１１／９９、ＦＪ−１０、ＱＨＤ１３ＣＡＩＱ、ＣＯ／ＢＩＤ−Ｖ３３５８、ＦＪ／ＵＨ２１／１９７１、ＧＵ／ＢＩＤ−Ｖ２９５０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｉａｎ、ＧＷＬ１８、ＩＮ／ＢＩＤ−Ｖ２９６１、Ｏｄ２１１２、ＲＲ４４、１３９２、１０１６ＤＮ、１０１７ＤＮ、１０７０ＤＮ、９８９００６６３ＤＨＦ、ＢＡ０５ｉ、１０２２ＤＮ、ＮＧＣ、Ｐａｋ−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｋ−２００９、Ｐａｋ−Ｍ−２０１１、ＰａｋＬ−２０１３、Ｐａｋ−−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｌ−２０１０、Ｐａｋ−Ｌ−２００８、ＰＥ／ＮＦＩ１１５９、ＰＥ／ＩＱＡ  ２０８０、ＳＧ／Ｄ２Ｙ９８Ｐ−ＰＰ１、ＳＧ／０５Ｋ３２９５ＤＫ１、ＬＫ／ＢＩＤ／Ｖ２４２１、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４２２、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４１６、１２２２−ＤＦ−０６、ＴＷ／ＢＩＤ−Ｖ５０５６、ＴＨ／ＢＩＤ−Ｖ３３５７、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５４１２、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５０５５、ＩＱＴ１７９７、ＶＮ／ＢＩＤ−Ｖ７３５、ＵＳ／Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＣＨ５３４８９、または３４１７５０であるデングウイルスが提供される。さらに、チクングニヤウイルスであるアルファウイルスが提供される。さらに、被験体由来のものである癌が本明細書で提供される。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する免疫チェックポイント調節剤が提供される：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、���７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する免疫チェックポイント調節剤が提供される：Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を増加させる免疫チェックポイント調節剤が提供される：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０  （Ｂ７．１）、ＣＤ８６  （Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ  （Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌ。さらに、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである免疫チェックポイント調節剤が提供される。さらに、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）であるＲＮＡ干渉剤が本明細書で提供される。さらに、薬学的に許容可能な製剤で投与される免疫チェックポイント調節剤が提供される。
【０００５】
本明細書には、被験体の癌を処置または減少させるための方法が提供され、該方法は、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を、それを必要としている被験体に投与する工程と、免疫チェックポイント調節剤を投与する工程と、腫瘍抗原で刺激された樹状細胞を投与する工程を含む。さらに、癌細胞を標的とする腫瘍抗原で刺激された樹状細胞が本明細書で提供される。さらに、硬い表面上で培養される腫瘍抗原で刺激された樹状細胞が本明細書で提供される。さらに、自己由来または同種由来の腫瘍抗原で刺激された樹状細胞が本明細書で提供される。さらに、約６．５ｎｇ／ｍＬ〜約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を生成する刺激された樹状細胞が提供される。さらに、被験体から樹状細胞を得ることが本明細書で提供される。さらに、腫瘍細胞溶解物に接触させられる樹状細胞が本明細書で提供され、ここで、腫瘍細胞溶解物は被験体由来のものであり、それによって、腫瘍抗原で刺激された樹状細胞を生成する。さらに、デングウイルスであるアルボウイルスが本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約１０２〜約１０８のプラーク形成単位（ＰＦＵ）／ｍＬの量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約１０５ＰＦＵ／ｍＬの投与可能な量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約１０，０００〜９０，０００ＰＦＵ／ｍＬの量で存在する、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスの量が約３０，０００ＰＦＵ／ｍＬであり得る、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、あるいは０．１ｍＬの容量である、デングウイルスが本明細書で提供される。さらに、デングウイルスが０．０１ｍＬ〜０．０１ｍＬの容量である、デングウイルスが本明細書で提供される。さらに、ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型であるデングウイルスが提供される。さらに、ＤＥＮＶ−２株＃１７１０であるデングウイルスが提供される。さらに、４５ＡＺ５、１７１０、Ｓ１６８０３、ＨＯＮ  １９９１  Ｃ、ＨＯＮ  １９９１  Ｄ、ＨＯＮ  １９９１  Ｂ、ＨＯＮ  １９９１  Ａ、ＳＡＬ  １９８７、ＴＲＩ  １９８１、ＰＲ  １９６９、ＩＮＤ  １９５７、ＴＲＩ  １９５３、ＴＳＶ０１、ＤＳ０９−２８０１０６、ＤＳ３１−２９１００５、１３４９、ＧＤ０１／０３、４４、４３、Ｃｈｉｎａ  ０４、ＦＪ１１／９９、ＦＪ−１０、ＱＨＤ１３ＣＡＩＱ、ＣＯ／ＢＩＤ−Ｖ３３５８、ＦＪ／ＵＨ２１／１９７１、ＧＵ／ＢＩＤ−Ｖ２９５０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｉａｎ、ＧＷＬ１８、ＩＮ／ＢＩＤ−Ｖ２９６１、Ｏｄ２１１２、ＲＲ４４、１３９２、１０１６ＤＮ、１０１７ＤＮ、１０７０ＤＮ、９８９００６６３ＤＨＦ、ＢＡ０５ｉ、１０２２ＤＮ、ＮＧＣ、Ｐａｋ−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｋ−２００９、Ｐａｋ−Ｍ−２０１１、ＰａｋＬ−２０１３、Ｐａｋ−−Ｌ−２０１１、Ｐａｋ−Ｌ−２０１０、Ｐａｋ−Ｌ−２００８、ＰＥ／ＮＦＩ１１５９、ＰＥ／ＩＱＡ  ２０８０、ＳＧ／Ｄ２Ｙ９８Ｐ−ＰＰ１、ＳＧ／０５Ｋ３２９５ＤＫ１、ＬＫ／ＢＩＤ／Ｖ２４２１、ＬＫ／Ｂ���Ｄ−Ｖ２４２２、ＬＫ／ＢＩＤ−Ｖ２４１６、１２２２−ＤＦ−０６、ＴＷ／ＢＩＤ−Ｖ５０５６、ＴＨ／ＢＩＤ−Ｖ３３５７、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５４１２、ＵＳ／ＢＩＤ−Ｖ５０５５、ＩＱＴ１７９７、ＶＮ／ＢＩＤ−Ｖ７３５、ＵＳ／Ｈａｗａｉｉ／１９４４、ＣＨ５３４８９、または３４１７５０であるデングウイルスが提供される。さらに、チクングニヤウイルスであるアルファウイルスが提供される。さらに、少なくとも約６．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を生成する腫瘍抗原で刺激された樹状細胞が提供される。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する免疫チェックポイント調節剤が提供される：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する免疫チェックポイント調節剤が提供される：Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。さらに、以下の少なくとも１つの発現または活性を増加させる免疫チェックポイント調節剤が提供される：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０  （Ｂ７．１）、ＣＤ８６  （Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ  （Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌ。さらに、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである免疫チェックポイント調節剤が提供される。さらに、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）であるＲＮＡ干渉剤が提供される。さらに、薬学的に許容可能な製剤で投与される免疫チェックポイント調節剤が提供される。
【０００６】
本明細書には、被験体の癌を処置するまたは減少させるための方法が提供され、該方法は、癌細胞を標的とする刺激された樹状細胞に投与する工程と、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を、被験体に投与する工程と、免疫チェックポイント調節剤を被験体に投与する工程を含む。さらに、樹状細胞が硬い表面上で培養される、方法が本明細書で提供される。さらに、アルボウイルスがデングウイルスである方法が提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型である、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−２株＃１７１０である方法が本明細書で提供される。さらに、アルファウイルスがチクングニヤウイルスである方法が提供される。さらに、樹状細胞が被験体に対して自己由来または同種由来である方法が本明細書で提供される。さらに、癌細胞が被験体由来である方法が本明細書で提供される。さらに、刺激された樹状細胞が少なくとも約６．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する方法が本明細書で提供される。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する方法が本明細書で提供される：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを標的とする方法が本明細書で提供される：Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを活性化する方法が本明細書で提供される：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０  （Ｂ７．１）、ＣＤ８６  （Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ  （Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである方法が本明細書で提供される。さらに、上記ＲＮＡ干渉剤が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍ��ＲＮＡ）である方法が本明細書で提供される。さらに、上記免疫チェックポイント調節剤が薬学的に許容可能な製剤で投与される方法が本明細書で提供される。
【０００７】
本明細書には、被験体の癌を処置するまたは減少させるための方法が提供され、該方法は、被験体から樹状細胞を得る工程；樹状細胞を溶解物と接触させる工程であって、それにより刺激された樹状細胞を産生する、工程；刺激されたＤＣを被験体に投与する工程；アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を、それを必要としている被験体に投与する工程と、免疫チェックポイント調節剤を投与する工程を含む。本明細書にはさらに、硬い表面が硬プラスチック表面である方法が提供される。本明細書にはさらに、硬プラスチック表面がポリスチレン表面である方法が提供される。さらに、アルボウイルスがデングウイルスである方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型である、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−２株＃１７１０である方法が本明細書で提供される。さらに、アルファウイルスがチクングニヤウイルスである方法が提供される。さらに、癌細胞が被験体由来である方法が本明細書で提供される。さらに、刺激された樹状細胞が少なくとも約６．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する方法が本明細書で提供される。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つの発現または活性を調節する方法が本明細書で提供される：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを標的とする方法が本明細書で提供される：Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを活性化する方法が本明細書で提供される：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０  （Ｂ７．１）、ＣＤ８６  （Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ  （Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである方法が本明細書で提供される。さら��、上記ＲＮＡ干渉剤が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である方法が本明細書で提供される。さらに、上記免疫チェックポイント調節剤が薬学的に許容可能な製剤で投与される方法が本明細書で提供される。
【０００８】
本明細書には、被験体の癌細胞を取り除く方法が提供され、該方法は、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を、それを必要としている被験体に投与する工程と、免疫チェックポイント調節剤を投与する工程と、樹状細胞を刺激する工程であって、刺激する工程は、刺激された樹状細胞を産生するために樹状細胞を溶解物に晒すことを含み、溶解物は複数の癌細胞を含み、各癌細胞は癌細胞の表面上に存在する抗原を含む、工程；および被験体に刺激された樹状細胞を投与する工程を含み、ここで、投与は、被験体の癌細胞集団の３３％以上の除去をもたらす。本明細書にはさらに、投与が被験体の癌細胞集団の３３％の除去をもたらす方法が提供される。さらに、アルボウイルスがデングウイルスである方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、あるいはＤＥＮＶ−５の少なくとも１つの血清型である、方法が本明細書で提供される。さらに、デングウイルスがＤＥＮＶ−２株＃１７１０である方法が本明細書で提供される。さらに、アルファウイルスがチクングニヤウイルスである方法が提供される。本明細書にはさらに、デングウイルス２型血清型を静脈内投与する工程、および刺激された樹状細胞の集団を静脈内投与する工程をさらに含む方法が提供される。本明細書にはさらに、複数の癌細胞が被験体由来である方法が提供される。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つである方法が本明細書で提供される：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを標的とする方法が本明細書で提供される：Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が以下の少なくとも１つを活性化する方法が本明細書で提供される：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７  （４−１ＢＢ）、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０  （Ｂ７．１）、ＣＤ８６  （Ｂ７．２）、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ  （Ｂ７Ｈ２）、ＯＸ−４０、またはＯＸ−４０Ｌ。さらに、免疫チェックポイント調節剤が、抗体、抗体をコードする核酸、抗原結合フラグメント、ＲＮＡ干渉剤、ペプチド、ペプ��ド模倣薬、小分子、あるいはアプタマーの少なくとも１つである方法が本明細書で提供される。さらに、上記ＲＮＡ干渉剤が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である方法が本明細書で提供される。さらに、上記免疫チェックポイント調節剤が薬学的に許容可能な製剤で投与される方法が本明細書で提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】デングウイルス、免疫チェックポイント調節剤、および刺激された樹状細胞を用いる例示的な治療方法を描く。
【図２】デングウイルスと刺激された樹状細胞を用いる例示的な処置スケジュールを描く。
【図３Ａ】デングウイルス上清を用いる場合と用いない場合のＡ５４９肺癌細胞でのＩＣＡＭ−１発現のヒストグラムを描く。薄いオレンジ色はデングウイルス上清の追加を表す。赤色はデングウイルス上清モック（ウイルスを含まないが、単球細胞の接触による活性化を用いるＰＢＭＣ）を表す。青は対照を表わす。
【図３Ｂ】デングウイルス上清を用いる場合と用いない場合のＡ５４９肺癌細胞でのＩＣＡＭ−１発現のヒストグラムの２回目の実行を描く。薄いオレンジ色はデングウイルス上清の追加を表す。赤色はデングウイルス上清モック（ウイルスを含まないが、単球細胞の接触による活性化を用いるＰＢＭＣ）を表す。青は対照を表わす。
【図４Ａ】６２４．２８のみでの（Ｅ１）、または、２のＭＯＩでデングウイルス上清（Ｅ３）により処置された６２４．２８での、ＭＨＣ−１の表面の発現を描く。６２４．２８のメラノーマ細胞に対するデングウイルス上清の適用後のＨＬＡ  Ａ／Ｂ／Ｃ発現のヒストグラムは、ＸおよびＹ軸の両方に沿ったクラスＩ  ＭＨＣのアップレギュレーションを示す。青いヒストグラムのアップレギュレーションは３０  ｕＬでのデングウイルス上清を表す。赤いヒストグラムのアップレギュレーションは対照を表す。
【図４Ｂ】高いＨＬＡ発現腫瘍細胞株（ＦＥＭＸ）を対照群として描いている。予想される通り、ＦＥＭＸ対照細胞は既に高いＨＬＡ発現を示した；デングウイルス上清はＨＬＡ発現レベルを対照の１．３２倍上げた。青い流れ領域は３０ｕＬでのデングウイルス上清を表す。赤い流れ領域は対照を表す。
【図５Ａ】ＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｂ】ＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｃ】２のＭＯＩでデングウイルスが追加されたＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｄ】２のＭＯＩでデングウイルスが追加されたＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｅ】デングウイルスが追加されていない（モック）ＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｆ】デングウイルスが追加されていない（モック）ＦＥＭＸでのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｇ】６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｈ】６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｉ】２のＭＯＩでデングウイルスが追加された６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｊ】２のＭＯＩでデングウイルスが追加された６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｋ】デングウイルスが追加されていない（モック）６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現のＦＡＣプロットを示す。
【図５Ｌ】デングウイルスが追加されていない（モック）６２４．２８でのＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの発現の重複ＦＡＣプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
癌を処置するための併用療法のための方法および組成物が本明細書で提供され、該方法は、免疫チェックポイント調節剤、アルボウイルスの株、あるいはアルファウイルスの株を被験体に投与する工程を含む。方法は、癌抗原を標的とするために樹状細胞（ＤＣ）を刺激する工程も含むことができる。さらに、癌を処置するための併用療法が本明細書で提供され、該併用療法は、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株を投与する工程を含む。併用療法は、腫瘍の免疫回避メカニズムを克服し、かつ被験体の腫瘍細胞を除去するために使用されてもよい。
【００１１】
本明細書には、刺激された樹状細胞（ＤＣ）を調製する方法が提供される。本明細書にはさらに、病状に関連した抗原、例えば、腫瘍抗原に刺激された樹状細胞を晒すための方法であって、その結果、刺激された樹状細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）から癌細胞への特異的かつ強固な応答を誘発することができる、方法が提供される。本明細書にはさらに、病状に関連した障害の処置のために被験体にそのようなＤＣを投与するための方法が提供される。いくつかの例において、障害は癌である。いくつかの例において、障害は自己免疫疾患、例えば、関節リウマチおよび多発性硬化症である。いくつかの例において、障害は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症または後天性免疫不全症候群である。いくつかの例では、アルボウイルスの株あるいはアルファウイルスの株は、デングウイルスまたはチクングニヤウイルスである。いくつかの例において、被験体は、刺激されたＤＣの投与の前に、デングウイルスを投与される。いくつかの例において、被験体は、刺激されたＤＣの投与の前に、チクングニヤウイルスを投与される。場合によっては、免疫調節剤は、デングウイルスの投与前、投与中、または投与後に、投与される。場合によっては、免疫調節剤は、チクングニヤウイルスの投与前、投与中、または投与後に、投与される。
【００１２】
樹状細胞を刺激することは通常、標的癌細胞上に存在する１つ以上の腫瘍抗原に樹状細胞を接触させることを含む。場合によっては、樹状細胞は、腫瘍抗原単独で刺激され、該腫瘍抗原は、合成、単離、または精製されている。代替的にまたは付加的に、樹状細胞は腫瘍細胞溶解物で刺激され、腫瘍細胞溶解物は腫瘍抗原を含む。場合によっては、樹状細胞は、腫瘍抗原を発現する癌細胞全体で刺激される。その後、樹状細胞は被験体に投与され、樹状細胞はＣＴＬに腫瘍抗原を提示し、従って、標的癌細胞の認識および破壊のためにＣＴＬを調整する。
【００１３】
本明細書には、プラスチック容器材料に含まれるポリマーへの樹状細胞の曝露を制限する方法が提供される。例えば、軟質プラスチックバッグの場合、ポリマーは、媒体溶液（ｍｅｄｉａ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）に浸出し、ＤＣの活性に影響を及ぼすこともある。その代わりに、樹状細胞は、ポリスチレン組織培養プレートなどの硬い容器の中、およびその上で培養、保管、および配送され得る。これにより、軟質プラスチックバッグに含まれるポリマーへの曝露により引き起こされ得る、樹状細胞の免疫賦活作用の減少が回避される。例えば、これらポリマーは、樹状細胞により産生されたＩＬ−１２の量を減らし、それにより、強固なＣＴＬ応答を誘発するそれらの能力を低下させることができる。本明細書で提供される例は、本明細書に開示された方法により生成される刺激された樹状細胞が、少なくとも約６．５ｐｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を分泌することができる一方で、標準的な方法により生成された樹状細胞は典型的には４−６ｐｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０しか産生しないことを実証する。
【００１４】
場合によっては、腫瘍溶解物で樹状細胞を刺激することが望ましいか、都合が良い。特に、本明細書に開示される方法は、腫瘍抗原の保全性を維持する、緩やかな細胞溶解プロトコルを利用する。この緩やかな溶解は、多くとも約３０−６０分間、カルシウムまたは次亜塩素酸ナトリウム溶液に腫瘍または癌細胞を晒すことにより達成され得る。同様に、樹状細胞を刺激するために使用される任意の腫瘍細胞は、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳのシステムなどにより、緩やかに切り離される。
【００１５】
本明細書に開示される方法により調製される刺激された樹状細胞は、被験体の免疫系を高める薬剤と共に被験体に投与されてもよい。例えば、刺激された樹状細胞は、被験体をウイルスに感染させた後に被験体に投与されてもよい。一例として、本明細書に開示される方法および例は、デングウイルス、特に、比較的安全である（例えば、致死性または重篤有害事象の既知の発生がない）デングウイルス２型血清型株＃１７１０を使用する。このウイルスは、（例えば、ＴＨ１の極性の推移を生じさせることにより）抑えられた免疫系の活性化をもたらし、および、標的化の特異性を改善し、それにより現行の細胞療法に比べてより高い効能および安全性をもたらす。刺激された樹状細胞とウイルス感染の組み合わせは、治療に対する被験体のアドヒアランスの負担を回避する恐らくわずか１回の最小限の投与による有効な処置を提供する。刺激された樹状細胞は、被験体自身の細胞に由来することを意味する自己由来であり、あるいは、同様の組織型を持つ別の被験体に由来する同種異系であり得る。
【００１６】
免疫チェックポイント
併用療法のための方法が本明細書で提供される。いくつかの例では、併用療法は、アルボウイルスを用いる免疫チェックポイント調節剤の投与を含む。場合によっては、併用療法は、アルファウイルスを用いる免疫チェックポイント調節剤の投与を含む。場合によっては、アルボウイルスはデングウイルス（ＤＶ）である。いくつかの例では、アルファウイルスはチクングニヤウイルス（ＣＶ）である。
【００１７】
いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＤＶの投与前に投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＤＶと同時投与される。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＤＶの投与後に投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つである：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。免疫チェックポイント調節剤は以下の少なくとも１つであり得る：Ｂ７Ｈ３、ＣＤ１３７  （４１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ４、ＧＩＴＲ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１  （Ｂ７Ｈ１、ＣＤ２７４）、またはＰＳ。免疫チェックポイント調節剤のための例示的なアミノ酸配列は、限定されないが、表１で提供される。免疫チェックポイント調節剤ためのアミノ酸配列は、表１の配列に対して少なくとも約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％、相同性が類似し得る。
【００１８】
いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＶの投与前に投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＶと同時投与される。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＶの投与後に投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つである：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。免疫チェックポイント調節剤は以下の少なくとも１つであり得る：Ｂ７Ｈ３、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＴＬＡ４、ＧＩＴＲ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、またはＰＳ。免疫チェックポイント調節剤のための例示的なアミノ酸配列は、限定されないが、表１で提供される。場合によっては、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１からＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９のいずれか１つに対する約５０％、６０％  ７０％  ８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは最大で約１００％の相同性が本明細書で利用可能である。
【００１９】
【表１−１】
2020500847.tif 000003
【００２０】
【表１−２】
2020500847.tif 000004
【００２１】
免疫調節剤阻害剤
いくつかの例では、本明細書に記載される方法で投与される免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つを標的とする阻害剤である：Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。場合によっては、阻害剤はＡ２ａＲを標的とする。場合によっては、阻害剤はＢ７Ｈ３を標的とする。場合によっては、阻害剤はＢ７Ｈ４を標的とする。場合によっては、阻害剤はＢＴＬＡを標的とする。いくつかの例では、阻害剤はＣＴＬＡ４を標的とする。場合によっては、阻害剤はＩＤＯ１を標的とする。場合によっては、阻害剤はＩＤＯ２を標的とする。いくつかの例では、阻害剤はＫＩＲを対象とする。いくつかの例では、阻害剤はＬＡＧ３を対象とする。いくつかの例では、阻害剤はＰＤ−１を対象とする。場合によっては、阻害剤はＰＤＬ−１を対象とする。場合によっては、阻害剤はＰＤＬ−２を標的とする。場合によっては、阻害剤はＰＳを対象とする。いくつかの例では、阻害剤はＴＩＭＳ３を標的とする。場合によっては、阻害剤はＶＩＳＴＡを標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤は、本明細書に記載される標的に直接結合する。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤は、本明細書に記載される標的に間接的に結合する。
【００２２】
場合によっては、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７Ｈ３、ＣＴＬＡ４、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１あるいはＰＳの少なくとも１つに対する抗体である。いくつかの例では、抗体は、限定されないが、モノクローナル抗体、合成抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（二重特異性ｓｃＦｖｓを含む）、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、およびこれらのエピトープ結合フラグメントの少なくとも１つである。場合によっては、抗体が免疫グロブリン分子であるか、あるいは免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの例では、抗体はトリと哺乳動物を含む動物起源である。場合によっては、抗体は、ヒトまたはヒト化のモノクローナル抗体である。
【００２３】
場合によっては、Ｂ７Ｈ３に対する抗体はエノブリツズマブ（エノブリツズマブ）（例えば、ＭＧＡ２７１）である。いくつかの例では、ＣＴＬＡ−４に対する抗体は、イピリムマブ（例えば、ＢＭＳ−７３４０１６、ＭＤＸ−０１０）およびトレメリムマブ（例えば、ＣＰ−６７５、ＣＰ−６７５，２０６）から選択される。場合によっては、ＫＩＲ抗体はリリルマブ（例えば、ＢＭＳ−９８６０１５、ＩＰＨ２１０２）である。場合によっては、ＬＡＧ３に対する抗体はＢＭＳ９８６０１６である。いくつかの例では、ＰＤ−１に対する抗体は、ペンブロリズマブ（例えば、ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ  ９００４７５）、ニボルマブ（例えば、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８）、およびピディリズマブ（例えば、ＣＴ−０１１、ＭＤＶ９３００）から選択される。場合によっては、ＰＤＬ１に対する抗体は、抗ＰＤＬ１モノクローナル抗体ＭＤＸ−１１０５、アテゾリズマブ（例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７）、およびＢＭＳ−９３６５５９（例えば、ＭＤＸ−１１０５）から選択される。いくつかの例では、ＰＳに対する抗体はバビツキシマブである。場合によっては、阻害剤はＩｇＧ融合タンパク質である。場合によっては、ＰＤ−１に向けられた融合タンパク質はＡＭＰ−２２４である。いくつかの例では、ＬＡＧ３に対して向けられたＩｇＧタンパク質はＩＭＰ３２１である。いくつかの例では、複数の免疫チェックポイント阻害剤に対する抗体の組み合わせは、本明細書に記載される方法で投与される。
【００２４】
いくつかの例では、本明細書に記載される免疫チェックポイント阻害剤はＲＮＡ干渉剤を含む。場合によっては、ＲＮＡ干渉剤は、以下の少なくとも１つの発現を阻害する：Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。いくつかの例では、ＲＮＡ干渉剤は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、あるいはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の少なくとも１つである。場合によっては、オリゴヌクレオチドは以下の少なくとも１つに相補的である：使用されるＡ２ａＲ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＴＩＭ３、またはＶＩＳＴＡ。いくつかの例では、免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、ペプチド、ペプチド模倣薬、あるいは免疫チェックポイントの溶解可能なバージョンの少なくとも１つである。
【００２５】
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント標的の発現を減少させる。免疫チェックポイントの発現は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％減少することがある。発現は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％減少することがある。発現は少なくとも５％減少することがある。発現は少なくとも１０％減少することがある。発現は少なくとも３０％減少することがある。発現は少なくとも５０％減少することがある。発現は少なくとも７０％減少することがある。発現は少なくとも９０％減少することがある。
【００２６】
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント標的の活性を減少させる。免疫チェックポイントの活性は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％減少することがある。活性は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％減少することがある。活性は少なくとも５％減少することがある。活性は少なくとも１０％減少することがある。活性は少なくとも３０％減少することがある。活性は少なくとも５０％減少することがある。活性は少なくとも７０％減少することがある。活性は少なくとも９０％減少することがある。例示的な活性は、限定されないが、結合活性、リン酸化、脱リン酸化、細胞成長、細胞の分化、細胞移動、および代謝活性を含む。
【００２７】
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、ＰＤ−１と、そのリガンドＰＤＬ−１またはＰＤＬ−２との間の相互作用を低下させる。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤は、ＫＩＲとそのリガンドとの間の相互作用を低下させる。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は活性化を阻害する。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は下流シグナル伝達を阻害する。
【００２８】
免疫調節剤アクチベーター
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント標的を活性化させる。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つを標的とする：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ−４０、あるいはＯＸ−４０Ｌ。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ１２２を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ１３７を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ１３７Ｌを標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ２７を標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ２８を標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ４０を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ４０を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ７０を標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ８０を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＣＤ８６を標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＧＩＴＲを標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＧＩＴＲＬを標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＩＣＯＳを標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＩＣＯＳＬを標的とする。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＯＸ−４０を標的とする。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＯＸ−４０Ｌを標的とする。
【００２９】
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、およびＧＩＴＲの少なくとも１つに向けられた抗体である。いくつかの例では、抗体は、限定されないが、モノクローナル抗体、合成抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（二重特異性ｓｃＦｖｓを含む）、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ジスルフィド結合したＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、およびこれらのエピトープ結合フラグメントの少なくとも１つである。場合によっては、抗体が免疫グロブリン分子であるか、あるいは免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの例では、抗体はトリと哺乳動物を含む動物起源である。場合によっては、抗体は、ヒトまたはヒト化のモノクローナル抗体である。いくつかの例では、ＣＤ１３７に向けられた抗体はウレルマブ（例えば、ＢＭＳ−６６３５１３）である。場合によっては、ＣＤ２７に向けられた抗体はバリリルマブ（例えば、ＣＤＸ−１１２７）である。いくつかの例では、ＧＩＴＲに向けられた抗体はＴＲＸ５１８である。
【００３０】
いくつかの例では、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイントを活性化する。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つを標的とする：ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＯＸ−４０、あるいはＯＸ−４０Ｌ。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤は、小分子、ペプチド、ペプチド模倣薬、あるいは免疫チェックポイント調節剤の溶解可能なバージョンの少なくとも１つである。
【００３１】
場合によっては、本明細書に記載された免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント経路成分の発現を増加させる。免疫チェックポイント経路成分の発現は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％減少することがある。発現は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％増加することがある。発現は少なくとも５％増加することがある。発現は少なくとも１０％増加することがある。発現は少なくとも３０％増加することがある。発現は少なくとも５０％増加することがある。発現は少なくとも７０％増加することがある。発現は少なくとも９０％増加することがある。
【００３２】
場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント標的の活性を増加させる。免疫チェックポイントの活性は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％増加することがある。活性は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％増加することがある。活性は少なくとも５％増加することがある。活性は少なくとも１０％増加することがある。活性は少なくとも３０％増加することがある。活性は少なくとも５０％増加することがある。活性は少なくとも７０％増加することがある。活性は少なくとも９０％増加することがある。
【００３３】
樹状細胞（ＤＣ）を単離および刺激する方法
本明細書には、ＤＣを刺激し、必要とする被験体に刺激されたＤＣを投与するための方法が提供され、ＤＣは、標的細胞の細胞傷害性をもたらす細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）からの応答を誘発する。ＤＣは、同種異系の樹状細胞または自己由来の樹状細胞を含み得る。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、同種異系の刺激された樹状細胞を被験体に投与する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、自己由来の刺激された樹状細胞を被験体に投与する工程を含む。刺激されたＤＣを被験体に投与する工程を含む本明細書に開示される方法は、本明細書では「樹状細胞ワクチン投与」と呼ばれることもある。
【００３４】
いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、骨髄中のＣＤ３４＋前駆細胞から樹状細胞を得る工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、末梢血中のＣＤ１＋ＣＤ１４＋未成熟単球から樹状細胞を得る工程を含む。いくつかの例において、樹状細胞を得る工程は白血球除去を含む。白血球除去は、被験体またはドナーから１ユニットの血液（ａ  ｕｎｉｔ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ）を引き抜くこと、一連の血液成分：赤血球、血小板、および血漿因子の大部分を分離することを含み、一連の血液成分は、白血球が残った状態で被験体に戻される。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、無菌に関して白血球を評価する工程、白血球を冷たい状態（４°Ｃ）で運ぶまたは保管する工程、またはアフェレーシス産物からＤＣを処理する工程を含む。
【００３５】
本明細書に開示されるＤＣの産生方法は、限定されないが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好酸球、および好塩基球を含む他の白血球から、１ユニットの血液中の単球を分離する工程を含み得る。これは、免疫磁気選別または付着特性により達成され得る。免疫磁気選別は、１ユニットの血液の白血球細胞を、非限定的な例としてＣＤ表面タンパク質：ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５６などの免疫細胞のための抗体で覆われたプラスチックビーズを含む滅菌プラスチックカラムと接触させることを含む。望ましくない（非単球）細胞はビーズに付着し、単球を通過させて集める。正の選別において、磁気ビーズは、単球を捕らえるためにＣＤ１および／またはＣＤ１４のための抗体で覆われ、磁石はカラムに対して配され、望ましくない細胞は緩衝生理食塩溶液または細胞が生存可能な培地を含むカラムから流し出される。その後、単球はビーズから流し出され、次の工程で集められる。付着選別において、特定の表面に付く単球の特性を利用して、傾斜させたカラムにアフェレーシス産物を流すことによりそれらを分離する。
【００３６】
ユニットの血液から数千の単球だけを集める工程を含み得る細胞採取のための方法が本明細書で提供される。効果的な免疫療法は通常５０００万の範囲のＤＣ投与を要求する。したがって、本明細書に開示される方法は、単球、同様にその任意の前駆体、およびそれから分化した任意の細胞（例えば、ＤＣ）を拡張する工程を含むことがある。細胞を拡張する工程は、細胞を、成長因子、コロニー刺激因子、サイトカイン、あるいは他の増殖または成長の誘導因子、およびこれらの組み合わせなどの因子に接触させる工程を含むことがある。非限定的な例として、組み換えヒト成長因子ｒｈｕＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４（ＩＬ−４）とｒｈｕＧｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を用いて、ＤＣ数の拡張を実行してもよい。加えて、ＩＬ−４とＧＭ−ＣＳＦは、成熟したＤＣと比較して、抗原の取り込みとＣＴＬ刺激能力が乏しい単球からの成熟したＤＣを発達させることを要求されることがある。したがって、ＩＬ−４とＧＭ−ＣＳＦは成熟したＤＣのマーカーの数と発育を拡張することがある。ＤＣマーカーは、限定されないが、ＣＤ１１、ＣＤ８０、およびＣＤ８３を含むことがあり、同様に、（ＣＤ８＋細胞への短鎖ペプチドの提示のための）クラスＩと（ＣＤ４＋ヘルパーインデューサーＴリンパ球への長ペプチドの提示のための）クラスＩＩの両方のＭＨＣ複合体の発現を増加させることがある。細胞の拡張は、約２日以内に数千万の成熟したＤ  ＤＣ（Ｃ）を産生することがある。細胞の拡張は、約３日以内に数千万の成熟したＤＣを産生することがある。細胞の拡張は、約４日以内に数千万の成熟したＤＣを産生することがある。細胞の拡張は、約５日以内に数千万の成熟したＤＣを産生することがある。細胞の拡張は、約１週間以内に数千万の成熟したＤＣを産生することがある。
【００３７】
いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、ＤＣを、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または腫瘍支持細胞溶解物に接触させるか、これらでパルス化する工程を含む。用語「パルス化」とは通常、本明細書で使用されるように、１つ以上の間隔で２回以上細胞を接触させることを指し、特段の定めのない限り、「接触させること」と交換可能に使用されてもよい。いくつかの例において、上記方法は、ＤＣを、ＭＨＣクラスＩ分子（「ＭＨＣクラスＩペプチド」）に結合するペプチドに接触させるか、これらでパルス化する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、ＤＣを、ＭＨＣクラスＩＩ分子（「ＭＨＣクラスＩＩペプチド」）に結合するペプチドに接触させるか、これらでパルス化する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、ＤＣを、ＭＨＣクラスＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩペプチドに接触させるか、これらでパルス化する工程を含む。いくつかの例において、接触させるかまたはパルス化する工程により、ＤＣがＣＴＬを刺激し、かつ腫瘍に対するＣＴＬを標的化することができるようになる。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、製造された／合成のクラスＩおよび／またはクラスＩＩのペプチドにＤＣを接触させるか、パルス化する工程を含む。いくつかの例において、クラスＩおよび／またはクラスＩＩのペプチドは、製造され、次いでＤＣ培地に添加され、随意にマイクログラム量以下である。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、持続した免疫応答のためのクラスＩＩペプチドを含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、ペプチド（すなわち、腫瘍抗原）のＤＮＡまたはＲＮＡを配列決定する工程、および／または、抗原処理を引き起こすためにＤＮＡまたはＲＮＡをＤＣに挿入するためのエレクトロポレーションを使用する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、ＨＬＡがＤＣに一致することを必要としない。いくつかの例において、ペプチドまたはその一部は、ＥＧＳＲＮＱＤＷＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）、（ＴＡＹＲＹＨＬＬ）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９）、またはそれらの組み合わせから選択されたアミノ酸配列により表される。
【００３８】
クラスＩペプチドが製造され、その後、マイクログラム量でＤＣ培地に追加されてもよい。しかしながら、ペプチドを被験体のＨＬＡタイプに一致させなければならないため、この技術は高価である。もし、腫瘍細胞がその抗原を提示しない場合、それは検出と溶解を回避することができる。ＣＤ４＋ｈｅｌｐを活性化するクラスＩＩペプチドの不足は免疫応答力の急速な衰退を引き起こす。他の方法は、一般の腫瘍抗原のＲＮＡ配列決定を含むことがあり、その後、抗原処理を引き起こすためにＤＣにＲＮＡを挿入するエレクトロポレーションを使用することがある。この方法はＨＬＡの一致を要求せず、保持された免疫応答のためのクラスＩＩペプチドを含む。しかしながら、ＲＮＡ配列決定は技術的に複雑なことがあり、数千もの潜在的な遺伝子産物の限られた数の抗原しか提示しないこともある。こうした理由から、自己由来の全腫瘍細胞あるいはその溶解物は、低コスト、生検（１−２ｇｍで十分）による利用しやすさという長所を備え、広範かつ広く深遠な免疫応答のための潜在的な抗原の十分なアレイを含む。
【００３９】
本明細書に記載された樹状細胞の刺激のための方法は、全腫瘍細胞および／またはその溶解物を得る工程を含むことがある。腫瘍細胞は、放射線あるいは他の手段によって、および、様々な方法によって溶解物を調製することにより、死滅させられてもよい。いくつかの例において、腫瘍細胞を溶解する工程は、トリプシン酵素消化と凍結融解サイクルを含まず、これらは単純かつ迅速ではあるが、中の繊細なペプチドを傷つけかねない。本明細書に開示される方法は自動細胞処理装置（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳシステム）を採用することもあり、これにより、サンプルを手動で刻み、ＰＢＳ溶液中で懸濁させることができ、その後、あらかじめ選択された組織特異的ソフトウェアにより制御されるローターシステムが腫瘍細胞を分離する。腫瘍ペプチドへの損傷を最小限にとどめて、単細胞懸濁液を膜溶解させることができる。
【００４０】
本明細書に記載された樹状細胞刺激のための方法は、樹状細胞を、自己由来の腫瘍細胞あるいはその溶解物と接触させる工程を含んでもよい。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、広範囲かつ深い免疫応答のための潜在的な抗原の完全なアレイを含有する自己由来の全腫瘍細胞（例えば、腫瘍細胞および腫瘍支持細胞）またはその溶解物に、樹状細胞を接触させる工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される樹状細胞刺激のための方法は、樹状細胞を、アポトーシス性または壊死性の小体を含む腫瘍細胞溶解物に接触させる工程を含む。さらなる例において、腫瘍細胞溶解物は、細胞外マトリックスタンパク質などの、腫瘍細胞を取り囲む微小環境からの腫瘍抗原を含む。
【００４１】
本明細書に記載される樹状細胞刺激のための方法は、ＤＣの刺激、増殖、あるいは生存率を増強する増強剤に、ＤＣを接触させる工程を含んでもよい。非限定的な例として、増強剤は、リンフォカイン、モノカイン、サイトカイン、成長因子、細胞、細胞断片、（非タンパク質）小分子、抗体、抗体フラグメント、核酸、およびこれらの組み合わせから選択されてもよい。
【００４２】
ＤＣ刺激のために細胞と抗原を調製するための方法は、標的細胞（例えば、癌細胞）を細胞分裂ができなくする工程を含んでもよい。例えば、方法は、細胞を細胞分裂ができなくするためにマイトマイシンＣあるいは放射線を用いて細胞を処置する工程を含んでもよい。これらは、増強剤として加えられる細胞、またはＤＣをパルス化するために用いられる細胞（例えば、腫瘍細胞）を含んでもよい。
【００４３】
いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、約１時間〜約２４時間ＤＣをパルス化する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、約１２時間〜約４８時間ＤＣをパルス化する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、約８時間〜約２４時間ＤＣをパルス化する工程を含む。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、約１８時間ＤＣをパルス化する工程を含む。パルス化は、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または腫瘍支持細胞溶解物にＤＣを少なくとも１回接触させる工程を含んでもよい。パルス化は、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または腫瘍支持細胞溶解物にＤＣを少なくとも２回接触させる工程を含んでもよい。パルス化は、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または腫瘍支持細胞溶解物にＤＣを少なくとも３回接触させる工程を含んでもよい。パルス化は、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または、腫瘍支持細胞溶解物に、２回未満、３回未満、４回未満、５回未満、あるいは１０回未満、ＤＣを接触させる工程を含んでもよい。パルス化は、ペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または、腫瘍支持細胞溶解物がＤＣ培地に蓄積するように、ＤＣ培地にペプチド／抗原、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、腫瘍細胞溶解物、および／または、腫瘍支持細胞溶解物を２回以上添加する工程を含んでもよい。パルス化は細胞を洗浄する工程、または、１つ以上のパルス化の間にＤＣ培地を取り除く工程を含んでもよい。
【００４４】
本明細書に記載される方法は、ＤＣの成熟を増強するか、完成させるか、終了させるために、成熟化剤にＤＣを接触させる工程を含んでもよい。いくつかの例では、成熟化剤は「危険信号」としても作用する。この危険信号がなければ、腫瘍抗原はＴｒｅｇ産生あるいは活性を誘発して、これが最終的にはＣＴＬ活性を低下させる。場合によっては、成熟化剤／危険信号は炎症性シグナルである。炎症性シグナルは炎症性メディエーターとも呼ばれることがある。炎症性メディエーターは、サイトカインや、サイトカインとして当技術分野では分類されないこともあるが、炎症に直接あるいは間接的に影響を与え得る他の因子（例えば、ケモカイン、接着分子など）を含んでもよい。いくつかの例では、炎症性メディエーターは、ケモカイン、サイトカイン、病原体、非ペプチド小分子、化合物、抗体、ペプチド、これらの断片、これらの一部、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの例では、炎症性シグナルは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）またはその経路のモジュレーターである。
【００４５】
場合によっては、炎症性シグナルは、インターフェロン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達モジュレーター、およびこれらの組み合わせから選択される。非限定的な例として、インターフェロンはインターフェロンガンマであってもよい。いくつかの例では、炎症性シグナルはｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路モジュレーターである。
【００４６】
場合によっては、炎症性シグナルはｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）シグナル経路レギュレーターである。非限定的な例として、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路制御因子は、細菌細胞壁由来のリポ多糖（ＬＰＳ）、多糖類であってもよい。
【００４７】
ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０を制御するｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達経路制御因子から選択されてもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲのリガンド、結合タンパク質、抗体、アゴニスト、あるいはアンタゴニストであってもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ペプチド、タンパク質、細胞断片、細胞壁成分、リポタンパク質、ペプチドグリカン、多糖類、単糖類、および小分子化合物から選択されてもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、動物細胞、植物細胞、細菌細胞、酵母菌、真菌細胞、およびこれらの組み合わせの一部であってもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲ２シグナル伝達経路制御因子であってもよい。非限定的な例として、ＴＬＲ２シグナル伝達経路制御因子は、リポタイコ酸、ＭＡＬＰ−２、ＭＡＬＰ−４、ＯｓｐＡ、ポーリン、ＬｃｒＶ、リポマンナン、ＧＰＩアンカー、リゾホスファチジルセリン、リポホスホグリカン、グリコホスファチジルイノシトール、チモサン、ｈｓｐ６０、およびヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｌｕｔｉｎｉｎ）であってもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲ４シグナル伝達経路制御因子であってもよい。非限定的な例として、ＴＬＲ４シグナル伝達経路制御因子は、ブプレノルフィン、カルバマゼピン、エタノール、フェンタニル、レボルファノール、ＬＰＳ、メタドン、モルヒネ、オクスカルバゼピン、オキシコドン、ペチジン、およびグルクロノキシロマンナンであってもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲ７シグナル伝達経路制御因子であってもよい。非限定的な例として、ＴＬＲ７シグナル伝達経路制御因子は一本鎖ＲＮＡあるいはイミダゾキノリン化合物であってもよい。ｔｏｌｌ様受容体受容体シグナル伝達経路制御因子は、ＴＬＲ８シグナル伝達経路制御因子であってもよい。非限定的な例として、ＴＬＲ８シグナル伝達経路制御因子は一本鎖ＲＮＡ、Ｇ−ｒｉｃｈオリゴヌクレオチド、あるいはイミダゾキノリン化合物であってもよい。イミダゾキノリン化合物はＲ８４８であってもよい。
【００４８】
炎症性シグナルへの曝露後、ＤＣは、そのＣＤ８０／ＣＤ８３＋活性化マーカーをアップレギュレートし、１型ＣＴＬ応答を誘発するためにＩＬ−１２ｐ７０の産生を増大させ、さらなる抗原の取り込みと処理に耐性を持つようになる。
【００４９】
本明細書に記載される刺激された樹状細胞を産生するための方法は、刺激された樹状細胞をインターフェロンガンマに接触させる工程を含んでもよい。いくつかの例では、上記方法は、約１００Ｕ／ｍＬから約１０，０００Ｕ／ｍＬ、約５００Ｕ／ｍＬから約５０００Ｕ／ｍＬ、および約５００Ｕ／ｍＬから約２，０００Ｕ／ｍＬから選択されたインターフェロンガンマの濃度を用いる培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約５００Ｕ／ｍＬのインターフェロンガンマの濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約１０００Ｕ／ｍＬのインターフェロンガンマの濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約２０００Ｕ／ｍＬのインターフェロンガンマの濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。
【００５０】
本明細書に記載される刺激された樹状細胞を産生するための方法は、刺激された樹状細胞をＴＬＲ８アゴニストＲ８４８に接触させる工程を含んでもよい。場合によっては、上記方法は、約０．１μｇ／ｍＬから約５０μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬから約２０μｇ／ｍＬ、および約１μｇ／ｍＬから約１０μｇ／ｍＬから選択されたＲ８４８の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約１μｇ／ｍＬのＲ８４８の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約５μｇ／ｍＬのＲ８４８の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。場合によっては、上記方法は、約１０μｇ／ｍＬのＲ８４８の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。
【００５１】
本明細書に記載される刺激された樹状細胞を産生するための方法は、刺激された樹状細胞をリポ多糖に接触させる工程を含んでもよい。いくつかの例では、上記方法は、約１ｎｇ／ｍＬから約１００ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬから約５０ｎｇ／ｍＬ、および約１ｎｇ／ｍＬから約２５ｎｇ／ｍＬから選択されたリポ多糖の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は、約５ｎｇ／ｍＬのリポ多糖の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は、約１０ｎｇ／ｍＬのリポ多糖の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は、約１５ｎｇ／ｍＬのリポ多糖の濃度の培地で刺激された樹状細胞を培養する工程を含む。
【００５２】
本明細書に記載される方法は、ＤＣの無菌性、特異性、および生存率の評価を含んでもよい。試験はＤＣの運搬または保管前に起こることもある。試験はＤＣの運搬または保管後に起こることもある。方法は、ＲＮＡまたはタンパク質のレベルのいずれかでＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルを測定する工程を含んでもよい。ＩＬ−１２ｐ７０は、最近の２０年間に多くの試みで試験された臨床反応の独立予測因子であり、その一部は約４０％の反応率である。本明細書に開示される方法によって産生された刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは、従来の方法によって産生された／保管された／送られた刺激されたＤＣよりも少なくとも約２倍以上大きいこともある。本明細書に開示される方法によって産生された刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは、従来の方法によって産生された／保管された／送られた刺激されたＤＣ（「従来の刺激されたＤＣ」）よりも少なくとも約２倍以上大きいこともある。刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは、従来の刺激されたＤＣよりも、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、あるいは少なくとも約１００％以上大きいこともある。刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは従来の刺激されたＤＣよりも少なくとも約３倍以上大きいこともある。刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは従来の刺激されたＤＣよりも少なくとも約４倍以上大きいこともある。本明細書に開示される方法によって産生された刺激されたＤＣにおけるＩＬ−１２ｐ７０の発現レベルは、従来の刺激されたＤＣよりも約２０倍以上大きいこともある。
【００５３】
６ｎｇ／ｍＬ以上のＩＬ−１２ｐ７０を産生する樹状細胞が本明細書で提供される。いくつかの例では、少なくとも約６．５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する樹状細胞が本明細書で提供される。いくつかの例では、１０ｎｇ／ｍＬ以上のＩＬ−１２ｐ７０を産生する樹状細胞が本明細書で提供される。いくつかの例では、本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣは、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、少なくとも約２２ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０、あるいは少なくとも約２４ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する。いくつかの例では、本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣは、約１０ｎｇ／ｍＬから約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する。いくつかの例では、本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣは、約１０ｎｇ／ｍＬから約２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する。いくつかの例では、本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣは、約１５ｎｇ／ｍＬから少なくとも約２３ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する。いくつかの例では、本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣは、約６．５ｎｇ／ｍＬから少なくとも約２３ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０を産生する。
【００５４】
ＣＴＬ応答
本明細書に記載されたＤＣを産生する方法は、ＤＣがＣＴＬ応答を引き起こす能力を試験する工程を含んでもよい。ＣＴＬ応答のレベルを測定することは、被験体の血液、血清、あるいは血漿中のサイトカインまたは炎症性メディエーターを測定することを含んでもよい。ＣＴＬ応答のレベルを測定することは、被験体の血液、血清、あるいは血漿中のサイトカインまたは炎症性メディエーターのレベルの変化を測定することを含んでもよい。ＣＴＬ応答のレベルを測定することは、サイトカインまたは炎症性メディエーターの産生をインビトロで測定することを含んでもよい。サイトカインと炎症性メディエーターは、インターロイキン、遊走阻止タンパク質、単球走化性タンパク質、単球化学走化性タンパク質、インターフェロン、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、マクロファージ炎症性タンパク質、モノカイン、ケモカイン、ケモカインリガンド（ＣＣＬ）とＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン（ＣＸＣＬ）、およびこれらの受容体を含んでもよい。サイトカインと炎症性メディエーターは、限定されないが、インターロイキン１β（ＩＬ−１ｂ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ−５）、インターロイキン７（ＩＬ−７）、インターロイキン８（ＩＬ−５）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン１５（ＩＬ１５）、インターロイキン（ＩＬ−１７）、ランテス、イオタキシン、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１ａ）、マクロファージ炎症性タンパク質１β（ＭＩＰ−１ｂ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、インターフェロンアルファ（ＩＦＮａ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）、インターロイキン１受容体アルファ（ＩＬ−１Ｒａ）、インターロイキン２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦａ）、インターフェロンガンマによって引き起こされたタンパク質（ＩＰ−１０）、およびガンマインターフェロン（ＭＩＧ）によって誘発されたモノカインを含む。ＣＴＬ応答は、高い癌の死滅（「冷たい」腫瘍を「熱く」する）を可能にし、非反応者または低反応者でさらなる腫瘍の収縮を生じさせる、腫瘍反応遺伝子（ＭｘＡなど）の発現によって測定されることがある。
【００５５】
硬い表面
本明細書に記載されたＤＣ調製のための方法は硬い表面上でＤＣを培養する工程を含んでもよい。「硬い表面」との用語は通常、本明細書で使用されるように、標準的なプラスチック組織培養プレートあるいはフラスコ（例えば、ポリスチレンプレート）を指す。本明細書に開示される方法は、ＤＣが付着することができる硬い表面上でＤＣを培養する工程を含む。場合によっては、硬い表面は、タンパク質、ペプチド、細胞外マトリックス分子、ポリマー、あるいはこれらの組み合わせでコーティングされる。場合によっては、硬い表面はコーティングされない（例えば、ＤＣは硬いプラスチック表面に直接付着する）。硬い表面は細胞分化バッグとしても知られている軟組織培養袋とは対照的である。軟組織培養バッグは、ＤＣの１型応答能力を低下させるポリマーあるいは化学製品（例えば、フタル酸塩）を含むバッグであってもよい。軟組織培養バッグは、ＤＣからの中性的な０型応答を誘発してＤＣを機能的に不活性にするポリマーあるいは化学製品を含むバッグであってもよい。軟組織培養バッグは、ポリエチレン、フッ素化エチレンプロピレン（ＦＥＰ）、ヘキサフルオロプロピレン、テトラフルオロエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、およびそのコポリマー、ならびにこれらの組み合わせから選択されたポリマーを含むバッグであってもよい。
【００５６】
本明細書に記載されたＤＣ調製のための方法は保管ユニットにＤＣを移す工程を含んでもよい。保管ユニットは搬送ユニットであってもよい。保管ユニットは、可撓性を有するまたは柔らかい容器または表面（例えばバッグ）、あるいは硬い容器または表面（例えばフラスコまたはプレート）から選択されてもよい。保管ユニットは硬いプラスチック表面を含むことがある。保管ユニットは硬いプラスチック表面から本質的になることがある。保管ユニットは硬いプラスチック表面からなることがある。保管ユニットは非プラスティック表面（例えば、ガラス）を含むことがある。保管ユニットは非プラスティック表面から本質的になることがある。保管ユニットは非プラスティック表面からなることがある。保管ユニットは、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを含まなくてもよい。保管ユニットは、未成熟のＤＣにおいて中性の応答または０型の応答を引き起こすポリマーを含まなくてもよく、または、実質的に含まなくてもよい。中性の応答はＩＬ−１２ｐ７０の低い発現を特徴とすることがある。保管ユニットは、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを実質的に含まなくてもよい。実質的に含まないということは、保管ユニットが、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％含まないことを意味してもよい。実質的に含まないということは、保管ユニットが、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、または少なくとも９９．９％含まないことを意味してもよい。
【００５７】
本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣを保管するための保管ユニットが本明細書で提供され、保管ユニットは内側表面を含み、内側表面は内部に保管された細胞に接している保管ユニットの表面である。内側表面は硬いプラスチック表面からなることがある。内側表面はガラスであってもよい。内側表面は、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーがなくてもよい。内側表面は、保管ユニット内に保管された未成熟のＤＣあるいは任意の細胞によっては取り込まれないポリマーから構成されてもよい。内側表面は、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを含まなくてもよい。内側表面は、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを実質的に含まなくてもよい。内側表面は、細胞と保管媒体の追加後に、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％含まないこともある。内側表面は、細胞と保管媒体の追加後に、保管ユニット内に保管された細胞によって取り込まれることになる、および／または、該細胞において反応を誘導することになる任意のポリマーを少なくとも９９．５％、少なくとも９９．６％、少なくとも９９．７％、少なくとも９９．８％、または少なくとも９９．９％含まないこともある。内側表面は、未成熟のＤＣにおいて中性の応答または０型の応答を引き起こすポリマーを含まなくてもよく、または、実質的に含まなくてもよい。中性の応答はＩＬ−１２ｐ７０の低い発現を特徴とすることがある。
【００５８】
本明細書に記載された方法によって産生されたＤＣを保管するための保管ユニットが本明細書で提供され、保管ユニットは、液体Ｎ２中で−７０°Ｃで冷凍させ、最大で１年間保管し、および、病院へ運んで使用するのに適している。方法は、成熟ＤＣ、未成熟ＤＣ、単球、あるいは血液を保管ユニット内で保管および／または搬送する工程を含む。方法は夜通し細胞を冷たいまた搬送する工程を含んでもよい。方法は（例えば、暖水浴内で）細胞を解凍するか、あるいは、３７°Ｃへ暖める工程を含んでもよい。
【００５９】
腫瘍細胞を単離および溶解する方法
腫瘍細胞を標的とするために本明細書に開示されるＤＣを投与する工程を含む、被験体を処置する方法が本明細書で開示される。いくつかの例において、ＤＣは、被験体由来の腫瘍細胞で刺激される。いくつかの例において、腫瘍細胞は、本明細書において腫瘍支持細胞と称される、被験体の腫瘍微小環境から単離された細胞である。いくつかの例において、樹状細胞は、腫瘍細胞、および／または、腫瘍の増殖と転移を支持する腫瘍支持細胞（例えば、内皮細胞、血管細胞、免疫細胞など）を標的とするように、腫瘍細胞、腫瘍支持細胞、および／またはそれらのペプチドに晒され／腫瘍細胞、腫瘍支持細胞および／またはそのペプチドでパルス化される。いくつかの例において、腫瘍細胞および腫瘍支持細胞由来のペプチド／抗原は、腫瘍細胞と腫瘍支持細胞両方の上でペプチド／抗原に対する受容体を持つ樹状細胞または細胞障害性リンパ球を誘発し、その結果、腫瘍細胞のみではなく腫瘍微小環境への樹状細胞または細胞障害性リンパ球を標的とするようになる。いくつかの例において、腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞は腫瘍組織の生検から得られる。いくつかの例において、生検は、腫瘍細胞、脂肪細胞、繊維芽細胞、内皮細胞、浸潤性免疫細胞、およびそれらの組み合わせから選択された細胞を含む。場合によっては、方法は、ＤＣを効果的かつ最適に刺激／パルス化するべく、十分な数の腫瘍細胞、腫瘍細胞溶解物、あるいは腫瘍細胞抗原を有するために、腫瘍細胞を拡張する工程を含む。拡張する工程は腫瘍細胞をインビトロで増殖する工程を含んでもよい。
【００６０】
本明細書には、腫瘍細胞を標的とするために本明細書で開示されるＤＣを活性化するための方法が提供され、ＤＣは溶解された腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞、ならびに、周囲の細胞外マトリックスで活性化される。いくつかの例において、溶解は、赤血球を除去するために腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞をＮＨ４Ｃｌ酵素溶液と接触させることを含む。いくつかの例において、溶解は、免疫原性細胞死を誘発するために腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞を次亜塩素酸溶液と接触させることを含む。いくつかの例において、細胞は、ペプチドを破壊しないよう十分に優しく溶解される。いくつかの例において、細胞は、アポトーシス性または壊死性の小体を生成するために溶解される。いくつかの例において、前記方法は、酵素溶液により腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞を溶解する工程を含む。いくつかの例において、前記方法は、過酸化物を含まない溶液または低過酸化物含有溶液により腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞を溶解する工程を含む。
【００６１】
次亜塩素酸塩溶液（ＨＯＣＬ）を用いて腫瘍細胞を溶解する工程を含む、本明細書に開示されたＤＣを活性化するための方法が本明細書で提供される。いくつかの例では、次亜塩素酸塩溶液は亜塩素酸ナトリウムを含む。いくつかの例では、次亜塩素酸塩溶液は亜塩素酸カルシウムを含む。いくつかの例では、腫瘍細胞を懸濁する培地中の次亜塩素酸塩の濃度は、約１０μＭ、約２０μＭ、約３０μＭ、約４０μＭ、約５０μＭ、約６０μＭ、約７０μＭ、約８０μＭ、約９０μＭ、あるいは１００μＭである。
【００６２】
ＤＣに接触させる前に、腫瘍細胞および／または腫瘍支持細胞を清浄液で溶解させる工程を含む、ＤＣを活性化するための方法が本明細書で提供される。いくつかの例において、洗浄剤は、限定されないが、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１１４、ＮＰ−４０、Ｂｒｉｊ−３５、Ｂｒｉｊ−５８、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、オクチルグルコシド、オクチルチオグルコシド、ＳＤＳ、ＣＨＡＰＳ  ２０、およびＣＨＡＰＳＯから選択される。いくつかの例において、洗浄液は、過酸化物および他の不純物を浄化される。いくつかの例において、洗浄剤は、洗浄液の約０．１％〜約１０％  ｖ／ｖである。いくつかの例において、洗浄剤は、洗浄液の約０．１％〜約５％  ｖ／ｖである。いくつかの例において、洗浄剤は、洗浄液の約０．５％〜約５％  ｖ／ｖである。いくつかの例において、洗浄剤は、洗浄液の約１％〜約１０％  ｖ／ｖである。いくつかの例において、洗浄剤は、洗浄液の約１％〜約５％  ｖ／ｖである。いくつかの例において、前記方法は、細胞の振盪、ボルテックス（ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ）、冷凍、解凍、剪断圧力、超音波処理、および／または加熱を行うことなく、細胞を溶解する工程を含む。
【００６３】
いくつかの例では、本明細書に記載された細胞溶解のための方法は溶解をやめるか中和する工程を含む。例えば、細胞は、溶解を中和するために緩衝生理食塩水（ホスホ緩衝生理食塩水溶液あるいはハンクス液）で洗浄されてもよい。
【００６４】
併用療法
最適な結果を達成するために他の種類の治療を用いる本明細書に開示される治療剤を含む併用療法が本明細書で提供される。例えば、いくつかの例では、癌免疫療法に対する組み合わせアプローチは、腫瘍が変化して回避することができる単軸攻撃よりも成功することがある。場合によっては、治療は癌治療である。癌治療は、限定されないが、化学療法、放射線、小分子阻害剤、およびモノクローナル抗体を含む。
【００６５】
樹状細胞ワクチン投与が、腫瘍の免疫回避メカニズムを克服し、かつ腫瘍細胞を除去するウイルスのアジュバント効果と、有効な量の免疫チェックポイント調節剤との同時投与と組み合わされる、組成物および方法が本明細書で提供される。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はアルボウイルスとともに投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はＤＶとともに投与される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤はアルファウイルスとともに投与される。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤はＣＶとともに投与される。本明細書に開示される併用療法の略図が図１に描かれる。本明細書に記載される方法は、被験体から樹状細胞と腫瘍細胞を得ること、腫瘍細胞または腫瘍細胞溶解物に樹状細胞を晒すこと、樹状細胞を刺激（または「活性化」）するために樹状細胞を「パルス化する」とも称される）、被験体の免疫系がウイルスで刺激された後に結果として生じる刺激され且つ腫瘍を標的とする樹状細胞を被験体に送達することにより、癌を患う被験体を処置するために使用されてもよい（例えば、図１を参照）。治療用有効な量の免疫チェックポイント調節剤はウイルスとともに投与される。随意に、被験体由来ではない腫瘍抗原が、樹状細胞のパルス化のために使用され得る。
【００６６】
樹状細胞ワクチン投与が、腫瘍の免疫回避メカニズムを克服し、かつ腫瘍細胞を除去するウイルスのアジュバント効果と、有効な量の免疫チェックポイント調節剤との同時投与と組み合わされる、組成物および方法が本明細書で提供される。デングウイルス治療が免疫チェックポイント阻害と共にアジュバントとして利用される、組成物が本明細書で提供される。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つである：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。
【００６７】
腫瘍の免疫回避メカニズムは、大半の免疫療法プラットフォームに見られる効果の不足の原因となる。本明細書に記載される組成物と方法は、腫瘍細胞を破壊するために、生理学的（腫瘍灌流の温熱減少（ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉｃ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ））経路、免疫学的（適応性かつ先天性の免疫系のエフェクター細胞の活性化）経路、およびアポトーシス誘発経路（ｓＴＲＡＩＬ）を組み合わせる、多角的な手法を提供する。相乗効果で作用する多くの経路を活性化するためにアジュバントとしてデングウイルス（ＤＶ）のようなウイルスを使用することで、突然変異した腫瘍細胞の撲滅を助け、癌免疫療法の臨床効果を改善することができる。本明細書に記載される方法は、同時に作用の複数の機構に基づいた癌免疫療法を提供し、結果として、１つの方法のみの送達と比べて、腫瘍細胞が抵抗法を利用する能力の低下をもたらす。デングウイルス治療が免疫チェックポイント阻害と共にアジュバントとして利用される、組成物が本明細書で提供される。
【００６８】
疾患または疾病を抱える被験体を処置するための方法が本明細書で提供され、上記方法は以下の工程を含む：樹状細胞（ＤＣ）を得る工程；少なくとも１つの腫瘍細胞抗原でＤＣをインキュベートする工程；被験体に、ウイルスおよび治療上有効な量の免疫チェックポイント調節剤を同時投与する工程、およびＤＣを被験体に投与する工程。いくつかの例において、樹状細胞は自己樹状細胞である。いくつかの例において、樹状細胞は同種樹状細胞である。いくつかの例において、少なくとも１つの腫瘍抗原でＤＣをインキュベートする工程は、腫瘍細胞でＤＣをインキュベートすることを含む。いくつかの例において、少なくとも１つの腫瘍抗原でＤＣをインキュベートする工程は、腫瘍細胞溶解物でＤＣをインキュベートすることを含む。いくつかの例において、少なくとも１つの腫瘍抗原でＤＣをインキュベートする工程は、腫瘍細胞によって発現されるペプチドでＤＣをインキュベートする工程を含む。場合によっては、疾病または疾患は癌である。場合によっては、ウイルスはアルボウイルスである。場合によっては、ウイルスはデングウイルスである。場合によっては、ウイルスはアルファウイルスである。いくつかの例では、ウイルスはチクングニヤウイルスである。場合によっては、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つである：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。
【００６９】
本明細書には、被験体の癌を処置するための方法が開示され、該方法は以下を含む：樹状細胞（ＤＣ）を得る工程；少なくとも１つの腫瘍細胞抗原でＤＣをインキュベートする工程；２型デングウイルスの血清型株と治療上有効な量の免疫チェックポイント調節剤を被験体に同時投与する工程、およびＤＣを被験体に投与する工程。いくつかの例において、２型デングウイルスの血清型株はＤＥＮＶ−２＃１７１０である。いくつかの例において、樹状細胞は自己樹状細胞である。いくつかの例において、樹状細胞は同種樹状細胞である。いくつかの例において、少なくとも１つの腫瘍抗原でＤＣをインキュベートする工程は、腫瘍細胞でＤＣをインキュベートすることを含む。いくつかの例において、少なくとも１つの腫瘍抗原でＤＣをインキュベートする工程は、腫瘍細胞溶解物でＤＣをインキュベートすることを含む。いくつかの例では、免疫チェックポイント調節剤は、以下の少なくとも１つである：ＣＤ２４４、Ａ２ａＲ、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、Ｂ７Ｈ６、Ｂ７ＲＰ１、ＢＴＬＡ、ｂｕｔｙｒｏｐｈｉｌｉｎ、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＣＤ１３７Ｌ、ＣＤ１６０、ＣＤ２、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２６、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＧＥＮ−１５０４９、ＣＴＬＡ−４、ＤＲ３、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＩＬＴ−２，  ＩＬＴ−４、ＫＩＲ、ＫＬＲＧ１、ＬＡＧ３、ＬＡＩＲ１、ＴＮＦＳＦ１４、ＭＡＲＣＯ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＰＤＬ−２、ＰＳ、ＳＩＲＰａｌｐｈａ、ＳＬＡＭ、ＴＧＦＲ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、またはＶＩＳＴＡ。
【００７０】
刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣとウイルスによって誘発されるよりも多くの癌細胞死または癌細胞溶解を増加させることがある。癌細胞死は、少なくとも約１０％〜２５％、少なくとも約１０％から約５０％、少なくとも約２０％から約１００％、少なくとも約２０％から少なくとも約２００％増加することもある。癌細胞死は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％増加することもある。刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣとウイルスによって減らされるよりも腫瘍病変のサイズを減少させることがある。腫瘍病変サイズは、少なくとも約１０％〜約５０％、少なくとも約１０％〜約３０％、少なくとも約１５％〜約８０％減少することもある。腫瘍病変サイズは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減少することがある。刺激されたＤＣ、ウイルスと免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣおよびウイルスによって減らされるよりも腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を減少させることがある。刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも約１０％〜約６５％、少なくとも約１０％〜約８５％、少なくとも約１０％〜約１００％、あるいは少なくとも約１０％〜約２００％減らすことがある。
【００７１】
刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣとウイルスによって誘発されるのと同様に癌細胞死または癌細胞溶解を増加させることがある。癌細胞死は、少なくとも約１０％〜２５％、少なくとも約１０％から約５０％、少なくとも約２０％から約１００％、少なくとも約２０％から少なくとも約２００％増加することもある。癌細胞死は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％増加することもある。刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣとウイルスによって減らされるのと同様に腫瘍病変のサイズを減少させることがある。腫瘍病変サイズは、少なくとも約１０％〜約５０％、少なくとも約１０％〜約３０％、少なくとも約１５％〜約８０％減少することもある。腫瘍病変サイズは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減少することがある。刺激されたＤＣ、ウイルスと免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣおよびウイルスによって減らされるのと同様に腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を減少させることがある。刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも約１０％〜約６５％、少なくとも約１０％〜約８５％、少なくとも約１０％〜約１００％、あるいは少なくとも約１０％〜約２００％減らすことがある。刺激されたＤＣ、ウイルス、および免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減らすことがある。
【００７２】
ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって誘発されるよりも多くの癌細胞死または癌細胞溶解を増加させることがある。癌細胞死は、少なくとも約１０％〜２５％、少なくとも約１０％から約５０％、少なくとも約２０％から約１００％、少なくとも約２０％から少なくとも約２００％増加することもある。癌細胞死は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％増加することもある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって減らされるよりも腫瘍病変のサイズを減少させることがある。腫瘍病変サイズは、少なくとも約１０％〜約５０％、少なくとも約１０％〜約３０％、少なくとも約１５％〜約８０％減少することもある。腫瘍病変サイズは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減少することがある。ウイルスと免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって減らされるよりも腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を減少させることがある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも約１０％〜約６５％、少なくとも約１０％〜約８５％、少なくとも約１０％〜約１００％、あるいは少なくとも約１０％〜約２００％減らすことがある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減らすことがある。
【００７３】
ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって誘発されるのと同様に癌細胞死または癌細胞溶解を増加させることがある。癌細胞死は、少なくとも約１０％〜２５％、少なくとも約１０％から約５０％、少なくとも約２０％から約１００％、少なくとも約２０％から少なくとも約２００％増加することもある。癌細胞死は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％増加することもある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって減らされるのと同様に腫瘍病変のサイズを減少させることがある。腫瘍病変サイズは、少なくとも約１０％〜約５０％、少なくとも約１０％〜約３０％、少なくとも約１５％〜約８０％減少することもある。腫瘍病変サイズは、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減少することがある。ウイルスと免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、ＤＣのみによって減らされるのと同様に腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を減少させることがある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも約１０％〜約６５％、少なくとも約１０％〜約８５％、少なくとも約１０％〜約１００％、あるいは少なくとも約１０％〜約２００％減らすことがある。ウイルスおよび免疫チェックポイント調節剤を同時投与することは、腫瘍微小環境中の骨髄由来の抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数を少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、あるいは少なくとも９５％減らすことがある。
【００７４】
癌の減少は腫瘍サイズの減少であってもよい。腫瘍サイズは、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％減少することがある。腫瘍サイズの減少は、少なくとも２、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、あるいは１００％であってもよい。腫瘍サイズの減少は少なくとも２％であってもよい。腫瘍サイズの減少は少なくとも５％であってもよい。腫瘍サイズの減少は少なくとも１０％であってもよい。腫瘍サイズの減少は少なくとも３０％であってもよい。腫瘍サイズの減少は少なくとも５０％であってもよい。
【００７５】
癌の減少は、免疫チェックポイント阻害剤だけでは処置されない患者あるいはＤＶを伴う患者と比較して、長期生存率が増加することもある。長期生存率は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％増加することがある。長期生存率は、少なくとも２、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％増加することがある。長期生存率は少なくとも２％増加することがある。長期生存率は少なくとも５％増加することがある。長期生存率は少なくとも１０％増加することがある。長期生存率は少なくとも３０％増加することがある。長期生存率は少なくとも５０％増加することがある。
【００７６】
いくつかの例では、癌の減少は癌転移の減少であってもよい。癌転移は、約５−１００、１０−９０、２０−８０、３０−７０、４０−６０、５０−９５、６５−８５、あるいは７５−９５％減少することがある。癌転移の減少は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７６、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％であってもよい。癌転移の減少は少なくとも２％であってもよい。癌転移の減少は少なくとも５％であってもよい。癌転移の減少は少なくとも１０％であってもよい。癌転移の減少は少なくとも３０％であってもよい。癌転移の減少は少なくとも５０％であってもよい。
【００７７】
デングウイルス
癌の処置のための組成物が本明細書で提供され、組成物は、必要としている被験体の癌の枯渇あるいは減少のための有効な量のデングウイルスを含む。さらに、癌の処置のための方法が本明細書で提供され、該方法は、癌の枯渇あるいは減少のための有効な量のデングウイルスを、それを必要としている被験体に投与する工程を含む。さらに、癌の安定化のための方法が本明細書で提供され、該方法は、癌の安定化あるいは制御された成長のための有効な量のデングウイルスを、それを必要としている被験体に投与する工程を含む。デングウイルスはアルボウイルスであり、ネッタイシマカ腫およびヒトスジシマカ種の蚊により排他的に伝搬される。ウイルスは、未確認の森林に生息する哺乳動物リザーバー（ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）（恐らく霊長類）およびヒト宿主に関する、複雑な生活環を持つ。メスの蚊は感染した人から血液食料を得て、ウイルスは腸管の上皮細胞において高感染力価（１０５／ｍｌ）にまで複製し、その後、蚊が別の血液食料の後に逆圧を使用して自身の口針を引っ込める時に、別の人に伝達される。デング熱伝染病は毎年５０００万人に感染し、うち数千人が死亡し、感染者は通常、二次感染に関連するショックの処置が不適切な子供である。
【００７８】
本明細書には、腫瘍細胞を標的とするためにデングウイルス（ＤＶ）と本明細書で開示される活性化ＤＣを含む併用療法のための方法が提供され、ＤＶは被験体に投与される。本明細書で使用されるように、用語「デングウイルス」は、デングウイルスの血清型１、２、３、４、または５のいずれかの血清型を含む。デングウイルスとの用語はさらに、遺伝子組み換えＤＶ、インビトロの突然変異ＤＶ、そのＤＶあるいはタンパク質／ペプチドの組み合わせを包含することがある。ＤＶは、アライブ、死、組み換え体あるいはそれのタンパク質／ペプチドであることがある。
【００７９】
初期感染において、ＤＶ由来の死亡率は非常に低い（マンソン熱帯病（Ｍａｎｓｏｎ’ｓ  Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ）当たり６１，０００分の１）。ウイルスは、単球マクロファージと樹状細胞系列のＡＰＣを感染させるが、殺さない。その後、このような感染したＡＰＣは、炎症性促進性（ＴＮＦ−アルファとＩＬ−１ベータ）、およびＴＨ１（ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ１５、およびＩＬ−２１）タイプのサイトカインカスケードを発生させる（ｂｅｇｉｎ）。このようなサイトカインは結果的に、適応性（ＣＴＬ）および先天性（ＮＫ）の両方の免疫系の強力な活性化を引き起こす。３−５日の潜伏期の後、発熱が３９．５−４０．５°Ｃで生じ、４−５日間にわたり上昇し続ける。被験体は、激しい頭痛、関節痛、倦怠感、および光に対する敏感性を経験する。胸部と背部、時には脚と腕を覆う発疹が、発熱の３日目まで発生する。臨床的には、デング熱感染の結果として血小板数の低下と、それによる出血が引き起こされ、これはショック症候群の場合に軽微なものから生命の危険があるものにまで及ぶ。賢明な流体管理に基づく適切な支援的ケアにより、症例の９９％において回復は完了する。
【００８０】
デングウイルスはアルボウイルスであり、ネッタイシマカ腫およびヒトスジシマカ種の蚊により排他的に伝搬される。ウイルスは、未確認の森林に生息する哺乳動物リザーバー（ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）（恐らく霊長類）およびヒト宿主に関する、複雑な生活環を持つ。メスの蚊は感染した人から血液食料（血液食事）を得て、ウイルスは腸管の上皮細胞において高感染力価（１０５／ｍｌ）にまで複製し、その後、蚊が別の血液食料の後に逆圧を使用して自身の口針を引っ込める時に、別の人に伝達される。デング熱伝染病は毎年５０００万人に感染し、うち数千人が死亡し、感染者は通常、二次感染に関連するショックの処置が不適切な子供である。
【００８１】
デングウイルスゲノムは、構造タンパク質、カプシドタンパク質Ｃ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ、および非構造タンパク質、ＮＳ１、ＮＳ２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５をコードする。いくつかの例において、デングウイルスは、デングウイルスの生きている株である。いくつかの例において、デングウイルスは、デングウイルスの非弱毒化株である。いくつかの例において、デングウイルスは、デングウイルスの弱毒化株である。いくつかの例において、デングウイルスは、デングウイルスの弱められた株である。いくつかの例において、デングウイルスは、デングウイルスの以下の血清型から選択される：ＤＥＮＶ−１、ＤＥＮＶ−２、ＤＥＮＶ−３、ＤＥＮＶ−４、およびＤＥＮＶ−５、並びにそれらの組み合わせ。
【００８２】
デングウイルスは、トガウイルスファミリー（フラビウイルス科のサブファミリー）（群Ｂ）のプラス鎖ＲＮＡウイルスである．ウイルスは、２０面体（ｉｃｏａｓｈｅｄｅｒａｌ）の幾何構造を有しており、直径およそ４０−４５ナノメートルである。１１，０００の塩基ゲノムは、ヌクレオカプシド（ＮＣ）、タンパク質、ｐｒＭ膜融合タンパク質、エンベロープ糖タンパク質（Ｅ）、および５つの非構造タンパク質ＮＳ１−ＮＳ５をコードする。ＮＣタンパク質は、ｐｒＭ複合体を介して取り付けられたエンベロープスパイクを持つ、ウイルスコアを形成する。Ｅ糖タンパク質は中和抗体の主要標的であり、ＮＳ−３とＮＳ−４のタンパク質は、ＣＤ４＋とＣＤ８＋ＣＴＬの主要な標的を構築する。
【００８３】
デングウイルスは、５つの別個の血清型である、ＤＥＮＶ−１からＤＥＮＶ−５を構成する。血清型２と４は、ＩｇＧに対して交差中和性（ｃｒｏｓｓ−ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）であり、１と３も交差中和性である。免疫性は完全ではないが、デング熱は、非交差中和性の血清型による後の感染が、免疫の過剰活性化からのショック症候群に起因した死亡率の危険性の増大をもたらすという点で、ウイルス感染の中でも特有のものである。場合によっては、デングウイルスの致命的でない形態を利用することができる。例示的な致命的でないデングウイルスは血清型１、２、３、４、あるいは５であり得る。例えば、致命的でないデングウイルスは表２から選択され得る。場合によっては、致命的でないデングウイルスは、表２の任意の株に実質的に似ていることがある。例えば、デングウイルスは、表２の任意の株に対する配列相同性または構造的な相同性で約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは最大で約１００％同一であり得る。
【００８４】
【表２−１】
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【００８５】
【表２−２】
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【００８６】
本明細書には、デングウイルスの血清型１、２、３、４、または５を含む組成物、およびそのような組成物の使用方法が提供される。いくつかの例において、ＤＶは２型血清型である。いくつかの例において、ＤＶ２型血清型は、ＤＥＮＶ−２株＃１７１０である。ＤＥＮＶ−２株＃１７１０は、被験体を感染させる際はより軽度なので、他のＤＶ株よりも効果的である可能性があり、したがってより安全である。他のより激毒性の株はより強い抗腫瘍効果を有するこもとあり、それらは安全性への懸念から適切ではない可能性がある。より激毒性の株は、非限定的な例としてＤＥＮＶ−２株＃１５８４である。このＤＥＮＶ−２株＃１７１０は、１９８５年にプエルトリコで採取されたサンプルに由来するものであり、エンベロープ遺伝子領域に特異的な４つのプライマー（表３を参照）を使用した制限部位に特異的なＲＴ−ＰＣＲ分析からＡ型であると特徴付けられている。このようなプライマーを持つ制限部位に特異的なＲＴ−ＰＣＲは、５８２の塩基対、７５４の塩基対、および恐らく６７６の塩基対の増幅産物を生成する。ＤＥＮＶ−２株＃１７１０は、エントリーナンバー５５５としてＣＤＣのデータベースに記録されている。ＤＥＮＶ−２株＃１７１０は、プエルトリコ伝染病の間に単離された。この大流行により、感染の疑いはあるがウイルスによる死亡が確認されない、ＤＶと疑われた９，５４０の症例が存在し、このことは、ＤＥＮ−２株＃１７１０の毒性が非常に低く、それ故本明細書に開示される方法に適していることを示している。
【００８７】
【表３】
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【００８８】
ＤＶとＤＶ感染症の特定の特徴のおかげで、このウイルスは本明細書において開示される方法にとりわけ有用となり得る。例えば、ＤＶの固有の特徴は、主要な感染症が、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋のヘルパーインデューサー、ならびに細胞傷害性エフェクターのＴＨ１タイプの応答の活性化を結果として引き起こすことである。抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞）に感染させるが、死滅させないことによって、ＤＶは、ＡＰＣにおけるＣＤ８０とＣＤ８３の発現をアップレギュレートし、炎症促進性のＴＨ１サイトカインプロファイルを結果としてもたらす。主要なＤＶ感染症は、リンホカイン活性化キラー細胞と同様に活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターＴ細胞とともにＴＨ１タイプの応答を誘発する。これは、本明細書において開示される刺激された樹状細胞を活用する処置法などの、癌免疫療法に対する完全寛解の可能性を増加させることもある。
【００８９】
場合によっては、デングウイルスは、腫瘍の免疫回避メカニズムへの対抗手段を提供することができる。腫瘍の免疫回避メカニズムは、非限定的な例として、ＣＴＬの認識を妨げる腫瘍細胞上の低レベルのＭＨＣであることもあり、その対抗手段は、ＭＨＣ遺伝子発現をアップレギュレートすることによりＭＨＣレベルを上げる、高インターフェロン−γであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、非限定的な例としても、ＴＣＲの結合を妨げるために腫瘍ペプチドにおける１つ以上の点変異であってもよく、その対抗手段は、異常なペプチドまたはＭＨＣを発現させる「回避した（ｅｓｃａｐｅｄ）」腫瘍細胞を標的とするために、リンホカイン活性化キラー細胞、またはサイトカインに誘発されたキラー細胞を刺激していることもある。いくつかの例では、腫瘍の免疫回避メカニズムは、腫瘍血管がＣＴＬの結合と輸送のための因子を欠くことであり、その対抗手段は、高いＴＮＦ−αが、ＰＥＣＡＭ−１を変質させることによりギャップを修復し、ＩＣＡＭ−１／ＶＣＡＭ−１の発現ならびにＰおよびＥ−セレクチンを修復することである。いくつかの例では、腫瘍の免疫回避メカニズムは、ＦａｓＬがアポトーシスを引き起こすことによりＦａｓ＋ＣＴＬを死滅させることであり、その対抗手段は、高いＩＬ−６および／またはＩＬ１５が、ＦＬＩＰリガンドをアップレギュレートすることによってＦａｓ＋ＣＴＬを保護することである。いくつかの例では、腫瘍の免疫回避メカニズムは、ＨＬＡ−ＧがＮＫ細胞から保護することであり、その対抗手段は、高いＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、および／またはＩＬ１５がＮＫの活性化を高めることであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、間質性のバリアがＣＴＬを阻害することであってもよく、その対抗手段は、高いＩＦＮ−γがＭ１に対してマクロファージを活性化することであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）であってもよく、その対抗手段は、ｉＮＫＴ細胞がＭＤＳＣを減少させることであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、ＣＴＬがＴＧＦ―βによって不活性化されることであってもよく、その対抗手段は、ＴＨ１サイトカインが耐性を有するＣＴＬを再活性化することであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、腫瘍ＰＩ−９がＣＴＬの死滅を遮ることであってもよく、その対抗手段は、高いＣＤ８＆ＩＣＡＭ１の発現が、ＴＣＲとＭＨＣ＋自己−ペプチド（ＭＨＣ＋ｓｅｌｆ−ｐｅｐｔｉｄｅ）との間の弱い相互作用を安定させることによって、低い結合活性のＣＴＬの認識および溶解を修復することであってもよい。腫瘍の免疫回避メカニズムは、制御性Ｔ細胞がＣＴＬを遮ることであってもよく、その対抗手段は、高いＣＤ４ヘルパー細胞がＣＤ４４Ｔｒｅｇ細胞を克服することであってもよい。
【００９０】
いくつかの例では、方法は、被験体へデングウイルスを投与することにより、被験体の免疫応答を活性化または増強する工程を含む。活発化または増強する工程は、サイトカインおよび炎症性メディエーターの発現を誘発すること、または増加させることを含んでもよい。ＤＶ感染によって増加することもある被験体の細胞中の遺伝子の発現は、限定されないが、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＣＡＭ−１、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ−ベータ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ８抗原、ＩＣＯＳＬＧ、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＴＲＡＩＬ、ＩＰ１０、ＧＮＬＹ、ＭＨＣ、ＨＬＡ、ＧＺＭＡ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＰアルファ１、ＨＬＡ−ＤＰベータ１、およびＺＡＰ７０を含む。いくつかの例では、ＩＣＡＭ−１アップレギュレーションはＴＮＦαによって媒介され、細胞間接触（つまり、ＣＴＬと腫瘍細胞間）のために利用することができる。密接なＣＴＬと腫瘍間の接触および溶解にＩＣＡＭ−１を利用することができるので、この変化は有意である。ＩＣＡＭ−１は腫瘍細胞の「粘着性」を増大させることで、ＣＴＬをそれらに付着させて死滅させることが得きる。例えば、腫瘍細胞がデングウイルス上清またはデングウイルスにさらされると、腫瘍細胞はそのＩＣＡＭ−１発現をアップレギュレートすることができる。免疫抑制腫瘍中でのＩＣＡＭ−１の不足あるいは低発現は、イピリムマブとニボルマブなどのＣＴＬベースのチェックポイント阻害剤中の課題の１つである。したがって、免疫抑制腫瘍を有する被験体のデングウイルスを利用する併用療法は治療有効性を改善することができる。場合によっては、デングウイルスの使用は、腫瘍でのＩＣＡＭ−１発現を約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、あるいは最大で約１００％増加させることができる。場合によっては、デングウイルスの使用は、腫瘍でのＩＣＡＭ−１発現を約５％〜２０％、２５％〜３５％、３０％〜５５％、４０％〜６５％、５０％〜７５％、６０％〜８５％、あるいは７０％〜９５％増加させることができる。
【００９１】
いくつかの例では、方法は、被験体へデングウイルスを投与することにより、被験体の免疫応答を活性化または増強する工程を含む。デングウイルスまたはデングウイルス上清は、腫瘍上のＭＨＣあるいはＨＬＡ発現を増加させることができる。ＭＨＣ発現は、ＣＴＬと腫瘍巻の接触を確立するためにイピリムマブやニボルマブなどのＣＴＬベースのチェックポイント阻害剤にとって重要である。例えば、デングウイルス感染は、ＣＴＬ免疫療法を可能にして、抵抗性の腫瘍細胞に関するクラスＩ発現を増大させることができる。チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬでのＣＴＬＡ−４あるいはＰＤ−１のような「オフにする」または「死ぬ」シグナルを遅らせることにより作用することができる。ＣＴＬは腫瘍細胞を同定および破壊するためにクラスＩ  ＭＨＣ発現を利用することができる。腫瘍標的上でＭＨＣ発現を上げることは、ＣＴＬがより有効に殺すことを可能にする。これはアネルギーＣＴＬクローンの活性化にとって特に重要である。なぜなら、ＣＴＬ活性化の増加とクラスＩ  ＭＨＣ発現の回復の組み合わせは臨床の応答可能性には有望であるからである。場合によっては、デングウイルスの使用は、腫瘍でのＭＨＣまたはＨＬＡの発現を約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、あるいは最大で約１００％増大させることができる。場合によっては、デングウイルスの使用は、腫瘍でのＭＨＣまたはＨＬＡの発現を約５％〜２０％、２５％〜３５％、３０％〜５５％、４０％〜６５％、５０％〜７５％、６０％〜８５％、あるいは７０％〜９５％増加させることができる。
【００９２】
癌免疫療法における有力な免疫刺激薬として使用される有利なＤＶ特性が本明細書に記載されている。ＤＶは、未成熟のＢリンパ球と、単球／マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）の系列の抗原提示細胞（ＡＰＣ）とに対して親和性を持つ。ＤＶの特有の機能は、初期感染が、ＣＤ４＋とＣＤ８＋ヘルパーインデューサーおよび細胞傷害性エフェクターＣＴＬのＴＨ１型応答の活性化を引き起こすということである。感染により（但し、ＡＰＣを死滅させない）、ＤＶは、そのＣＤ８０とＣＤ８３の発現をアップレギュレートし、その結果、炎症促進性ＴＨ１サイトカインのプロファイルをもたらす。初期のＤＶ感染は、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋エフェクターＴ細胞と同様にＬＡＫ細胞とのＴＨ１型応答を誘発する。この種の応答は、癌免疫療法に対する完全寛解を有する患者で見られる（表４を参照）。
【００９３】
【表４】
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【００９４】
いくつかの例において、本明細書で開示される方法は、被験体へＤＶを投与する工程を含み、投与する工程は、免疫系によるＴＮＦ−αの放出を結果としてもたらす。ＴＮＦαは、ＴＲＡＩＬ（ＴＮＦアポトーシス誘導リガンド）を介した腫瘍細胞の直接的な死滅を含む、多面的効果を持つ炎症性サイトカインである。これらの遺伝子に対応するタンパク質の増大したレベルは、組織内で観察されることもあれば、同様に被験体の体液で循環していることもある。レベルは少なくとも２倍増大する場合がある。レベルは２倍−１０００倍増大する場合がある。レベルは、２倍、１０倍、４０倍、８０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、および１０００倍の間で増大することもある。レベルは２倍−１０倍増大する場合がある。
【００９５】
いくつかの例において、ＤＶを投与することは、γδＣＴＬ、活性化Ｍ１マクロファージ、および形質細胞性ＤＣ（ｐＤＣ）を含む様々な細胞から、高レベルの可溶性ＴＲＡＩＬ（ｓＴＲＡＩＬ）を誘発する。いくつかの例において、ＤＶは、ＩＦＮβ、すなわち、ＩＦＮαと同じ受容体に対して１０倍高い親和性を持つ多機能性サイトカインを活性化する。ＩＦＮβは、ウイルスＲＮＡの転写を抑止する際に同様の抗ウイルス特性を有しているが、腫瘍細胞におけるアポトーシスの誘発においてはＩＦＮαよりもはるかに強力である。窒素酸化物とＩＦＮβは、デング熱感染中に相乗的な様式で作用することができる。このような分子は、Ｍ１マクロファージ、ｐＤＣ、およびδγＣＴＬにより誘発された高レベルのｓＴＲＡＩＬにより媒介されるアポトーシスに対する耐性を克服するために、タンデムで作用することがある。
【００９６】
被験体の免疫系を活性化または増強する工程は、被験体内に存在する細胞型を誘発するまたは増加させることを含み得る。これらの細胞型は、限定されないが、ＣＤ８＋ＣＤ４４＋６２Ｌ−細胞、ＣＤ４＋ＣＤ４４＋ＣＤ６２Ｌｌｏ細胞、ＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ８＋細胞、Ｔｉａ−１  ＣＤ８＋細胞、ＶＬＡ−４  ＣＤ８＋細胞、ＩＣＡＭ−１  ＣＤ８＋細胞、およびＬＦＡ−１  ＣＤ８＋細胞を含む。
【００９７】
チクングニヤウイルス
被験体へチクングニヤウイルスを投与する工程を含む、被験体の疾病または疾患を処置するための方法が本明細書で提供される。チクングニヤウイルスは、「ＣＨＫ」あるいは「ＣＶ」と本明細書では短縮されることがあり、チクングニヤウイルスはアルファウイルス属およびドガウイルス科に属する。これはＲＮＡウイルスである。チクングニヤウイルスは、ロスリバーウイルス、オニョンニョンウイルス、およびセムリキ森林ウイルスに関連することがあり、これは本明細書で提供される方法で使用される代替ウイルスを提供することがある。チクングニヤウイルスは死亡率が非常に低く、１：１０００であり、高齢者ほど重度の合併症に罹る可能性が高い。さらに、成功に終わった投与の症状（例えば、感染）について被験体を観察する工程を含む、被験体を処置する方法が本明細書で提供される。症状としては、曝露の２〜４日後の発熱、頭痛、疲労、消化不良、結膜炎、関節痛、腹痛症、悪心、嘔吐、下痢、およびこれらの組み合わせが挙げられることがある。さらに、ＣＶが３９°Ｃ（１０２°Ｆ）と４０°Ｃ（１０４°Ｆ）の間の発熱を引き起こす方法が本明細書で提供される。症状は発疹を含み得る。場合によっては、発疹は斑点状丘疹の場合もある。さらに、ＤＣ投与によってアジュバント効果を有するの十分な感染を確認するために、ＣＶ特異的な核酸配列のＲＴ−ＰＣＲ、あるいは被験体の血清（例えばＥＬＩＳＡを介して）中のＩｇＭレベルの測定を含む、方法が本明細書で提供される。
【００９８】
さらに、被験体の疾病または疾患を処置するための方法が本明細書で提供され、チクングニヤウイルスが弱毒化したチクングニヤウイルスである。上記方法はチクングニヤウイルスを弱毒化する工程を含むことがある。もとのウイルス株の弱毒化は望ましいこともあれば、必要なこともある。なぜなら、野生型のＣＨＫ株は許容できない毒性：熱、肝臓と脾臓の病変、内出血、および、最も重大なことに：ＣＶ感染事例の最大３０％において数ヶ月または数年続く壊滅的なダメージを与える関節痛を引き起こすことがあるからである。弱毒化とはもとのウイルス株が様々な細胞株で継代されるプロセスであり、その後、後代は、マウスなどにおいて弱毒化の兆候：低い成長特性、重篤度の低い病徴について分析される。
【００９９】
さらに、チクングニヤウイルス（ＣＶ）が重度の症状を伴うことなく全身免疫応答を誘導することができる強度にまで弱毒化される、方法が本明細書で提供される。重度の症状は熱、肝臓と脾臓の病変、内出血、および壊滅的なダメージを与える関節痛を含み得る。弱毒化は許容細胞株において上記ウイルスの連続継代によって実行されることがある。弱毒化はさらに生いてきる動物における選択的な継代によって実行されることがある。弱毒化は、明白なチクングンヤ熱の症状のない全身感染についての所望の特性を備えるウイルス株をもたらすことがある。全身感染は癌患者へウイルスを注入することによって引き起こされることがある。全身感染は免疫の活性化をもたらすために十分な上記ウイルスを患者へ注入することによって誘発されることがある。腫瘍免疫回避を克服し、かつ腫瘍細胞を殺すために前述の樹状細胞によって引き起こされたＣＴＬを活性化するの十分な力の免疫活性化が必要となることもある。
【０１００】
併用療法の一部としてＣＶを投与するための方法が本明細書で提供され、ＣＶ株は、アジア株、西アフリカ株あるいは東／中央／南アフリカ（ＥＣＳＡ）株である。ＣＶ株はインド洋血統（ＩＯＬ）であってもよい。ＣＶ株はブラジルで見つかるか、あるいはブラジルに由来することがある。アジア株は、インドネシア、マレーシア、フィリピン、インド、あるいはタイの流行病の患者血清で見つかった株であってもよい。西アフリカ株は、ナイジェリア、セネガル、あるいはコートジボワールの流行病の患者血清で見つかった株であってもよい。ＥＣＳＡ株は、南アフリカ、タンザニア、コンゴ、アンゴラ、レユニオン島、スリランカ、中央アフリカ、あるいはウガンダの流行病の患者血清で見つかった株であってもよい。ＣＶ株はＣＨＫ／ＳＢＹ８／１０（受入番号ＡＢ６７８６７７）であってもよい。ＣＶ株はＴＳＩ−ＧＳＤ−２１８（１８１／クローン２５Ｖ−１８１、および受入番号Ｌ３７６６１）であってもよい。ＣＶ株はＡＦ１５５６１（受入番号ＥＦ４５２４９３）であってもよい。ＣＶ株は、プラークアッセイによって測定されるように、ＣＨＫ／ＳＢＹ８／１０、ＴＳＩ−ＧＳＤ−２１８、およびＡＦ１５５６１から選択された株よりも約１０％〜約９０％毒性が少なくてもよい。ＣＶ株は、プラークアッセイによって測定されるように、ＣＨＫ／ＳＢＹ８／１０、ＴＳＩ−ＧＳＤ−２１８、およびＡＦ１５５６１から選択された株よりも約１０％〜約９０％毒性が多くてもよい。いくつかのＣＶ株が単離され配列決定された。既知のＣＶ株のゲノムのＧｅｎＢａｎｋ配列受入番号は、ＨＭ０４５７９２、ＨＭ０４５７９５、ＨＭ０４５８０５、ＡＦ４９０２５９、ＨＭ０４５８２１、ＨＭ０４５８０６、ＨＭ０４５８０９、ＨＭ０４５８２２、ＪＱ０６７６２４、ＨＭ０４５８１２、ＨＭ０４５７８４、およびＨＭ０４５８２３である。既知のアジア株のゲノムのＧｅｎＢａｎｋ配列受入番号は、ＨＭ０４５８０３、ＥＦ０２７１４０、ＨＭ０４５８１３、ＨＭ０４５７８８、ＥＦ０２７１４１、ＨＭ０４５８１０、ＨＭ０４５８１４、ＨＭ０４５８０８、ＨＭ０４５７８９、ＨＭ０４５８０２、ＨＭ０４５７９６、ＨＭ０４５７８７、ＨＭ０４５７９７、ＨＭ０４５７９１、ＨＭ０４５８００、ＨＭ０４５７９０、ＨＥ８０６４６１、ＦＮ２９５４８３、ＦＮ２９５４８４、ＥＵ７０３７６２、ＥＵ７０３７５９、ＥＵ７０３７６０、ＥＵ７０３７６１、ＦＪ８０７８９７、ＫＦ３１８７２９、ＫＪ４５１６２３、ＫＪ４５１６２２、ＣＮＲ２０２３６、ＣＮＲ２０２３５，および、ＫＪ４５１６２４である。既知のＩＯＬ株のゲノムのＧｅｎＢａｎｋ配列受け入れ番号は以下を含む：ＪＦ２７４０８２、ＥＵ３７２００６、ＧＵ９０８２２３、ＦＲ７１７３３６、ＧＱ４２８２１３、ＫＪ７９６８５２、ＫＪ７９６８５１、ＫＪ７９６８４５、ＫＣ８６２３２９、ＦＮ２９５４８５、ＦＮ２９５４８７、ＧＵ１８９０６１、ＨＱ４５６２５５、ＨＱ４５６２５４、ＨＱ４５６２５３、ＨＱ４５６２５２、ＨＱ４５６２５１西アフリカの遺伝子型：ＨＭ０４５８１６、ＨＭ０４５８１５、ＨＭ０４５７９８、ＨＭ０４５７８５、ＨＭ０４５７８６、ＨＭ０４５８０７、ＡＹ７２６７３２、ＨＭ０４５８１７、ＨＭ０４５８２０、ＨＭ０４５８１９、およびＨＭ０４５８１８。本明細書に記載されたＣＶ株は、細胞変性効果について分析されることがあり、本明細書に記載された併用療法のために選択の前に非致死性を確認するべくさらにスクリーニングされることがある。いくつかの例では、本明細書に記載されたＣＶ株は、重度の症状を伴うことなく全身免疫応答を誘発することができる強度まで弱毒化される。
【０１０１】
癌
本明細書に開示される処置薬の投与を含む癌治療のための方法が本明細書において提供される。本明細書に記載される方法は癌細胞の除去も提供する。いくつかの例において、被験体へのＤＶの投与は免疫応答を誘発する。いくつかの例において、免疫応答は、風邪ウイルスなど一般のウイルスと比較して強力である。いくつかの例において、免疫応答は腫瘍の退縮を引き起こす。本明細書に開示される方法は、被験体の身体内の全ての腫瘍細胞の除去を結果としてもたらす免疫応答を誘発することができるＤＣを発現させる工程を含んでもよい。
【０１０２】
ＤＮＡマイクロアレイ分析は、数百もの遺伝的に異なる腫瘍クローンが、進行した腫瘍を有する一人の被験体に存在し得ることを明らかにした。Ｏ２供給量と遺伝子突然変異速度との間に、負相関のパターンが存在する。細胞障害性薬物、抗体、および小分子などの薬剤のほとんどは、ほぼ常に血液感染性であり、治療機構を回避する腫瘍クローンにＤａｒｗｉｎｉａｎの選択圧を加える。最低の灌流量のクローンは、薬物曝露が低く、かつ免疫系検出を回避する能力が高いため、それらに従来の治療に対する耐性を持たせる。本明細書には、癌細胞の標的化の方法が提供され、該方法は、癌を患う被験体にＤＶを投与することにより高熱を誘発する工程、突然変異した表現型を持つ低流動性の耐性クローンを飢えさせる工程、活性化リンパ球および免疫系の他の群による排除のためにより遺伝的に安定したクローンを残す工程を含む。いくつかの例において、前記方法は、パルス化したＤＣを投与することにより、ＣＴＬおよびリンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）の活性化と発熱を組み合わせる工程を含み、これにより、従来の癌治療薬（例えば、抗体薬物抱合体、キナーゼ阻害剤、小分子など）またはＣＴＬ単独の場合よりも、高い反応速度を引き起こす。進行癌の被験体内で見られる免疫抑制は、複合的かつ動的なプロセスである。これは、通常はＣＴＬにより「自己」と認識される、腫瘍抗原自体に対する耐性に関係している。いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、この耐性を壊す工程、および、ＤＶ感染が誘発する高レベルのＴＨ１サイトカインを達成する工程を含む。
【０１０３】
本明細書で標的とされる癌は、再発性および／または難治性の癌であってもよい。いくつかの例において、癌は急性癌または慢性癌である。いくつかの実施形態において、癌は急速進行型の難治性癌である。いくつかの例において、癌は寛解状態にある。いくつかの例において、癌は、第１期、第２期、第３期、または第４期の癌である。いくつかの例において、癌は若年性癌または成人癌である。癌の例は、限定されないが、肉腫、癌腫、リンパ腫、または白血病を含む。いくつかの例において、癌は固形腫瘍または脂肪肉腫である。
【０１０４】
いくつかの実施形態において、癌は肉腫である。肉腫は、骨、軟骨、脂肪、筋肉、血管、または他の結合組織あるいは支持組織の癌の場合がある。いくつかの例において、肉腫は、骨癌、線維肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、両側性前庭シュワン腫（ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ  ｓｃｈｗａｎｎｏｍａ）、骨肉腫、軟部組織肉腫（例えば胞状軟部肉種、血管肉腫、葉状肉腫、皮幹線維肉腫、類腱腫、類上皮肉腫、骨外性骨肉腫、繊維肉腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性線維性組織球腫、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、および滑膜肉腫）を含んでいるが、これらに限定されない。肉腫はユーイング肉腫を含む場合がある。
【０１０５】
いくつかの例において、癌は癌腫である。癌腫は、身体の表面を覆い、ホルモンを生成し、かつ腺を構築する細胞である上皮細胞に発生する癌である。非限定的な例として、癌腫は乳癌、膵癌、肺癌、結腸癌、大腸癌、直腸癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、肝臓癌、卵巣癌、脳癌、膣癌、外陰癌、子宮癌、口腔癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、皮膚癌、ファロピウス管の癌、頭頚部癌、胃腸間質性癌、腺癌、皮膚黒色腫もしくは眼球内黒色腫、肛門部の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、尿道の癌、腎盂の癌、尿管の癌、子宮内膜の癌、頚部の癌、下垂体の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、主要なＣＮＳのリンパ腫、脳幹神経膠腫、および脊椎軸の腫瘍を含む。いくつかの例において、癌は、基底細胞癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ）、黒色腫、非黒色腫、または光線（日光）角化症などの皮膚癌である。  いくつかの事例では、癌は膀胱癌である。
【０１０６】
いくつかの例において、癌は神経内分泌癌である。いくつかの例において、癌は膵癌である。いくつかの例において、癌は甲状腺癌である。いくつかの例において、癌は、上皮癌、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、間質卵巣癌、または子宮頚癌である。いくつかの例において、癌は前立腺癌である。いくつかの例において、癌は皮膚癌である。いくつかの例において、癌は血管新生（ｎｅｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）皮膚癌である。いくつかの例において、癌は黒色腫である。いくつかの例において、癌は腎臓癌、肺癌である。典型的な肺癌は、限定されないが、小細胞肺癌または非小細胞肺癌を含む。いくつかの例において、癌は大腸癌（例えば胃癌または結腸癌）である。いくつかの例において、癌は脳癌である。いくつかの例において、癌は脳腫瘍である。いくつかの例において、癌は神経膠芽腫または星状細胞腫である。
【０１０７】
いくつかの例において、癌は乳癌である。場合によっては、乳癌は、三種陰性乳癌（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、およびＨｅｒ２に対して陰性）である。場合によっては、乳癌はエストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）である。
【０１０８】
いくつかの例において、癌は肺癌である。いくつかの例において、肺癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、または中皮腫（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍｉａ）である。ＮＳＣＬＣの例は、扁平上皮癌、腺癌、および大細胞癌を含む。いくつかの例において、中皮腫は、肺と胸腔の内膜（胸膜）、または腹部の内膜（腹膜）の癌腫瘍である。いくつかの例において、中皮腫はアスベスト曝露に起因する。
【０１０９】
いくつかの例において、癌は中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍である。いくつかの例において、ＣＮＳ腫瘍は、神経膠腫または非神経膠腫として分類される。いくつかの例において、神経膠腫は、悪性神経膠腫、高悪性度神経膠腫、びまん性内在性橋膠腫である。神経膠腫の例は、星状細胞腫、乏突起神経膠腫（または乏突起神経膠腫と星状細胞腫の要素の混合物）、および上衣腫を含む。星状細胞腫は、限定されないが、低悪性度星状細胞腫、未分化星状細胞腫、多形性神経膠芽腫、毛様細胞性星状細胞腫、多形性黄色星状細胞腫、および上衣下巨細胞神経膠星状細胞腫を含む。乏突起神経膠腫は、低悪性度乏突起神経膠腫（または乏突起星状細胞腫）および未分化乏突起神経膠腫を含む。非神経膠腫は、髄膜腫、脳下垂体の腺腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、および髄芽腫を含む。いくつかの例において、癌は脳膜腫である。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、癌は血液癌である。いくつかの例において、癌は白血病である。いくつかの例において、癌は骨髄性白血病である。いくつかの例において、癌はリンパ腫である。いくつかの例において、癌は非ホジキンリンパ腫である。いくつかの例において、癌は、骨肉腫性白血病、リンパ芽球性白血病、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、好中球性白血病、骨髄異形成症候群、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、大細胞型リンパ腫、混合細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、再発性小リンパ球性リンパ腫、有毛細胞白血病、多発性骨髄腫、好塩基球性白血病、好酸球性白血病、巨核芽球性白血病、単芽球性白血病、単球性白血病、赤白血病、赤白血病（ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、および肝細胞癌から選択される。いくつかの例において、癌は血液悪性腫瘍である。いくつかの例において、血液悪性腫瘍はＢ細胞悪性腫瘍である。いくつかの例において、癌は慢性リンパ性白血病である。いくつかの例において、癌は急性リンパ芽球性白血病である。いくつかの例において、癌はＣＤ１９−陽性バーキットリンパ腫である。いくつかの例において、白血病は、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、慢性リンパ性白血病、または慢性骨髄性白血病である。白血病の更なるタイプは、限定されないが、有毛細胞白血病、慢性骨髄単球性白血病、および若年性骨髄単球性白血病を含む。
【０１１１】
いくつかの例において、リンパ腫はＢリンパ球またはＴリンパ球から進行する。リンパ腫の２つの主なタイプは、以前はホジキン病として知られていたホジキンリンパ腫、および非ホジキンリンパ腫である。いくつかの例において、非ホジキンリンパ腫は無痛性である。いくつかの例において、非ホジキンリンパ腫は活動的である。非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＭＺＬ）、脾臓周辺帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、およびリンパ腫様肉芽腫症を含むが、これらに限定されない。
【０１１２】
投与方法
本明細書に開示される細胞を投与する工程を含む、被験体の疾患を処置するための方法が本明細書で提供される。上記方法はＤＣを投与する工程を含んでもよい。上記方法は、ＤＣを保管または運ぶことなく、ＤＣをパルス化した後にＤＣを投与することを含んでもよい。上記方法は、ＤＣを保管後または運んだ後にＤＣを投与する工程を含んでもよい。上記方法は、ＤＣをパルス化した後の約１時間から約２４時間後の間から選択された時点で、ＤＣを投与する工程を含んでもよい。上記方法は、ＤＣをパルス化した後の約１日から約３０日後の間から選択された時点で、そのＤＣを投与する工程を含んでもよい。上記方法は、ＤＣをパルス化した後の約１週間から約１２週間後の間から選択された時点で、そのＤＣを投与する工程を含んでもよい。
【０１１３】
ＤＣを必要とする被験体へＤＣを投与する工程を含む、被験体の疾患を処置するための方法が本明細書で提供される。いくつかの例において、ＤＣは溶液中に提供される。いくつかの例において、ＤＣは、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射、経皮投与、静脈内（「ｉ．ｖ．」）投与、鼻腔内投与、リンパ内注射、および経口投与から選択された経路によって投与される。場合によっては、他の形態の投与（例えば皮下注射）よりも望ましい応答を引き出す静脈内投与が望ましい。いくつかの例では、リンパ管内へのマイクロカテーテル（ｉｎｔｒａｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｍｉｃｒｏｃａｔｈｅｔｅｒ）によってＤＣが被験体に注入される。
【０１１４】
本明細書に記載された方法は、静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための溶液（例えば、０．９％ＮａＣＬ溶液）中で細胞を懸濁または混合する工程を含んでも良い。ｉ．ｖ．ＤＣは肺に出入りし、そのいくつかが捕らえられることもあれば、その大部分が、肝臓および脾臓の白脾髄（ｓｐｌｅｅｎ  ｗｈｉｔｅ  ｐｕｌｐｓ）のＴ細胞領域などの第２のリンパ器官まで通過し、ＣＴＬを刺激することもある。
【０１１５】
いくつかの例において、デングウイルスは、樹状細胞を投与する少なくとも２４時間前に最初に投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、樹状細胞を投与する約１２時間前〜約９６時間前に最初に投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、刺激された樹状細胞を投与する約２４時間前〜約７２時間前に最初に投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、刺激された樹状細胞を投与する１日前〜４日前に最初に投与される。いくつかの例において、デングウイルスは１回だけ投与される。いくつかの例において、デングウイルスは１回より多く投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、樹状細胞を受ける前にのみ投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、刺激された樹状細胞を受けた後に投与される。いくつかの例において、デングウイルスは、刺激された樹状細胞を受ける前後に投与される。
【０１１６】
上記方法は、全処置が１週間以内に実施されるように、０日目に刺激されたＤＣを投与し、その後、ウイルスを２回注射する工程を含んでもよい。いくつかの例において、被験体は全処置を一度だけしか受けない。いくつかの例では、全処置は一回を超えて繰り返されることはない。場合によっては、全処置は二回を超えて繰り返されることはない。いくつかの例では、全処置は三回を超えて繰り返されることはない。場合によっては、全処置は十回を超えて繰り返されることはない。
【０１１７】
場合によっては、上記方法は、１０６ｐｆｕ／ｍｌの約０．５ｍｌの投与量でデングウイルスを投与する工程を含む。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌである。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌである。いくつかの例では、投与量は、約１０３ｐｆｕ／ｍｌから約１０４ｐｆｕ／ｍｌの間、約１０４ｐｆｕ／ｍｌから約１０６ｐｆｕ／ｍｌの間、約１０６ｐｆｕ／ｍｌから約１０８ｐｆｕ／ｍｌの間、あるいは約１０８ｐｆｕ／ｍｌから約１０１０ｐｆｕ／ｍｌの間である。いくつかの例では、投与量は、約１０１ｐｆｕ／ｍｌ、１０２ｐｆｕ／ｍｌ、１０３ｐｆｕ／ｍｌ、１０４ｐｆｕ／ｍｌ、１０５ｐｆｕ／ｍｌ、１０６ｐｆｕ／ｍｌ、１０７ｐｆｕ／ｍｌ、１０８ｐｆｕ／ｍｌ、あるいは最大で約１０９ｐｆｕ／ｍｌである。いくつかの例では、本明細書に記載される投与量は、約０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．１、０．２ｍｌ、あるいは０．３ｍｌの容量である。いくつかの例では、投与量は、約０．０１ｍｌから約０．０３ｍｌ、０．０３ｍｌ〜約０．０５ｍｌ、０．０５ｍｌ〜約０．０７ｍｌ、０．０７ｍｌ〜約０．０９ｍｌ、０．１ｍｌ〜約０．２ｍｌ、０．２ｍｌ〜約０．４ｍｌ、０．４ｍｌ〜約０．６ｍｌの容量である。
【０１１８】
いくつかの例において、本明細書で開示される上記方法は、１日あたり１０６ｐｆｕ／ｍｌの約０．５ｍｌの投与量でデングウイルスを投与する工程を含む。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ／日〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌ／日である。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ／日〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌ／日である。いくつかの例において、上記方法は、１日あたり１０６ｐｆｕ／ｍｌの約０．５ｍｌの１回を超える投与量でデングウイルスを投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回を超えて、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回を超えて、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜５回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜５回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜３回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜３回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。
【０１１９】
いくつかの例において、本明細書で開示される上記方法は、１日あたり１０６ｐｆｕ／ｍｌの約０．５ｍｌの投与量でデングウイルスを投与する工程を含む。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ／日〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌ／日である。いくつかの例において、投与量は約１０３ｐｆｕ／ｍｌ／日〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌ／日である。いくつかの例において、上記方法は、１日あたり１０６ｐｆｕ／ｍｌの約０．５ｍｌの１回を超える投与量でデングウイルスを投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回を超えて、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回を超えて、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜５回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜５回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜３回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０８ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。いくつかの例では、上記方法は１日当たり１回〜３回、約１０３ｐｆｕ／ｍｌ〜約１０６ｐｆｕ／ｍｌの投与量を投与する工程を含む。
【０１２０】
本明細書には、デングウイルスを含む組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、組成物は砂糖を含む。いくつかの例では、組成物は界面活性剤を含む。いくつかの例では、組成物はタンパク質を含む。いくつかの例では、組成物は塩を含む。いくつかの例では、組成物は非イオン性の界面活性剤、非還元糖、塩、担体タンパク質、あるいはこれらの組み合わせを含む。いくつかの例では、組成物は非イオン性界面活性剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は非イオン性洗浄剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は疎水性の鎖を含む薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤はポリオキシエチレンを含む薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤はポリオキシプロピレンを含む薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマーを含む薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は細胞膜の安定化剤として作用する薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は細胞膜剪断から保護する薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は消泡剤として作用する薬剤である。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤はプルロニックＦ−６８を含む。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は、プルロニックＦ−６８から本質的になる。本明細書に開示される組成物で使用するために企図された非イオン性の界面活性剤のさらなる非限定的な例は、アルキルポリグリコシド、セトマクロゴール１０００、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、コカミドＤＥＡ、コカミドＭＥＡ、デシルグルコシド、デシルポリグルコース、グリセロールモノステアレート、ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０、イソセテス−２０、ラウリルグルコシド、マルトシド、モノラウリン、マイコスブチリン、狭い範囲のエトキシレート、ノニデット  Ｐ−４０、ノノキシノール−９、ノノキシノール、ＮＰ−４０、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−オクチルβ−ｄ−チオグルコピラノシド、オクチルグルコシド、オレイルアルコール、ＰＥＧ−１０ヒマワリグリセリド、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ポリドカノール、ポロクサマー、ポロクサマー４０７、ポリエトキシル化牛脂アミン、ポリリシノール酸ポリングリセリン、ポリソルベート、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ソルビタン、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、ステアリルアルコール、サーファクチン、トリトンＸ−１００、およびＴｗｅｅｎ  ８０、ならびにこれらの組み合わせを含む。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は、約０．０１％  ｗ／ｖから約１０％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は、約０．１％  ｗ／ｖから約５％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は、約１％  ｗ／ｖから約５％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非イオン性の界面活性剤は、約２  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。
【０１２１】
本明細書には、デングウイルスを含む組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、組成物は非還元糖である。いくつかの例では、非還元糖は水分子を捉えることができる砂糖である。いくつかの例では、非還元糖は凍結防止剤として作用し、凍結融解中にデングウイルスの生存度を保護する。いくつかの例では、非還元糖は二糖類を含む。いくつかの例では、非還元糖は２つのαグルコース単位間にα，α−１，１−グルコシド結合を含む。いくつかの例では、非還元糖は、二糖類から本質的になる。いくつかの例では、非還元糖はトレハロースを含む。トレハロースは、α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−α−Ｄ−グルコピラノシド、ミコース、およびトレマロースとしても知られている。いくつかの実施形態では、非還元糖はトレハロースから本質的になる。いくつかの例では、トレハロースはα−トレハロースである。いくつかの例では、トレハロースはＤ−（＋）−トレハロース無水物である。いくつかの例では、トレハロースはＣ１２Ｈ２２Ｏ１１・２Ｈ２Ｏの化学式を有する。いくつかの例では、非還元糖は、約５％  ｗ／ｖから約２５％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非還元糖は、約１％  ｗ／ｖから約１０％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非還元糖は、約１０％  ｗ／ｖから約２０％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、非還元糖は、約１５％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。
【０１２２】
本明細書には、デングウイルスを含む組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、組成物は担体タンパク質を含む。担体タンパク質は、ステロイド、脂肪酸、あるいはホルモンの担体または安定化剤として機能することがある。いくつかの例では、担体タンパク質は、貯蔵条件（例えば、室温より下）でウイルスの膜を安定させることができるタンパク質である。いくつかの例では、担体タンパク質は溶解可能なモノマータンパク質である。いくつかの例では、担体タンパク質はアルブミンである。いくつかの例では、担体タンパク質は、本明細書に開示される組成物が良好な製造プロトコル（ＧＭＰ）標準に準拠であることを保証するヒトタンパク質である。いくつかの例では、担体タンパク質はヒトアルブミンである。いくつかの例では、担体タンパク質は、約０．１％  ｗ／ｖから約１０％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、担体タンパク質は、約１％  ｗ／ｖから約５％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、担体タンパク質は、約２％  ｗ／ｖの濃度の組成物中に存在する。
【０１２３】
本明細書には、デングウイルスを含む組成物を、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、塩はカルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、ホウ素を含む。いくつかの例では、塩は、リン酸塩、塩化物塩、硫酸塩、あるいは重クロム酸塩である。いくつかの例では、塩は塩化カルシウムである。いくつかの例では、塩は塩化マグネシウムである。いくつかの例では、組成物は塩化カルシウムと塩化マグネシウムを含む。いくつかの例では、塩は、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、塩は、約０．１ｍＭ〜約５ｍＭの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、塩は、約０．１ｍＭ〜約２ｍＭの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、塩は、約１ｍＭの濃度の組成物中に存在する。いくつかの例では、組成物は塩化カルシウムと塩化マグネシウムを含み、塩化カルシウムは、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの組成物中に存在し、塩化マグネシウムは、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭの組成物中に存在する。いくつかの例では、組成物は塩化カルシウムと塩化マグネシウムを含み、塩化カルシウムは、約１ｍＭの組成物中に存在し、塩化マグネシウムは、約１ｍＭの組成物中に存在する。
【０１２４】
本明細書には、有効な量の本明細書に記載されるデングウイルスを、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、有効な量は、被験体において少なくとも１つのサイトカインのレベルを増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、被験体において血液中の少なくとも１つのサイトカインのレベルを増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、被験体において血清サンプル中の少なくとも１つのサイトカインのレベルを増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを著しく増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約２％〜約２０，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約５０％〜約２０，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約１００％〜約２０，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約１００％〜約１５，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約１００％〜約１４，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約５０％〜約１５，０００％増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、有効な量は、少なくとも１つのサイトカインのレベルを約５０％〜約１４，０００％増加させるのに十分な量である。
【０１２５】
本明細書には、有効な量の本明細書に記載されるデングウイルスを、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、有効な量は、被験体において少なくとも１つのサイトカインのレベルを増加させるのに十分な量である。いくつかの例では、少なくとも１つのサイトカインはインターロイキン（ＩＬ）である。いくつかの例では、少なくとも１つのサイトカインはインターフェロン（ＩＦＮ）である。いくつかの例では、少なくとも１つのサイトカインはインターロイキンである。いくつかの例では、少なくとも１つのサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮ−γ、インターフェロンγによって誘導されたタンパク質１０（ＩＰ−１０）、ＩＬ−１２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−７、ＩＬ１５、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、およびこれらの組み合わせから選択される。いくつかの例では、ＴＮＦαのレベルは約５０％から約５００％に増加する。いくつかの例では、ＴＮＦαのレベルは約５０％から約３００％に増加する。いくつかの例では、ＴＮＦαのレベルは約５０％から約２４０％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮαのレベルは約５０％から約８００％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮαのレベルは約５０％から約５００％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮαのレベルは約５０％から約４２０％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮβのレベルは約５０％から約２００００％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮβのレベルは約５０％から約１４０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮ−ガンマのレベルは約５０％から約２００％に増加する。いくつかの例では、ＩＦＮ−ガンマのレベルは約５０％から約１００％に増加する。いくつかの例では、ＩＰ−１０のレベルは約５０％から約８０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＰ−１０のレベルは約５０％から約５０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＰ−１０のレベルは約５０％から約４０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１２のレベルは約２０％から約２００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１２のレベルは約２０％から約１００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１２のレベルは約２０％から約８０％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１５のレベルは約２０％から約２００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１５のレベルは約２０％から約２００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１５のレベルは約２０％から約１００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−７のレベルは約５０％から約１０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−７のレベルは約５０％から約１０００％に増加する。いくつかの例では、ＩＬ−７のレベルは約５０％から約５００％に増加する。いくつかの例では、ＧＭ−ＣＳＦのレベルは約５０％から約１０００％に増加する。いくつかの例では、ＧＭ−ＣＳＦのレベルは約５０％から約４００％に増加する。いくつかの例では、ＧＭ−ＣＳＦのレベルは、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２１０％、２２０％、２３０％、２４���％、２５０％、２６０％、２７０％、２８０％、２９０％、３００％、３１０％、３２０％、３３０％、３４０％、から約３５０％まで増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１２Ｒのレベルは、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、から約２００％まで増加する。いくつかの例では、ＩＬ−１２Ｒのレベルは、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、最大で約２００％まで増加する。本明細書には、有効な量の本明細書で開示されるデングウイルスを、必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。いくつかの例では、有効な量は、被験体において少なくとも１つのサイトカインのレベルを増加させるのに十分な量である。
【０１２６】
いくつかの例において、デングウイルスによる被験体の感染または接種の成功は、高熱または発熱の進行により確認される。いくつかの例において、デングウイルスによる被験体の感染または接種の成功は、被験体の血液／血漿中を循環するサイトカインの存在または増加により確認される。サイトカインは、限定されないが、インターロイキン２およびインターフェロンガンマを含んでもよい。
【０１２７】
いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、刺激された樹状細胞を、必要とする被験体に投与する工程を含む。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は１回より多く投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、第１の時間と第２の時間に投与され、第１の時間と第２の時間は、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、または約６日、約８日、約１０日、約１２日、または約１８日で区切られる。いくつかの例において、第１の時間と第２の時間は、約１週、約２週、約３週、または約１か月で区切られる。いくつかの例において、第１の時間と第２の時間は、１か月以上で区切られる。いくつかの例において、第１の時間と第２の時間は、１２か月未満で区切られる。いくつかの例において、第１の時間と第２の時間は、１２か月以上で区切られる。
【０１２８】
いくつかの例において、本明細書に記載される方法は、被験体の体温上昇時に、刺激された樹状細胞を被験体に投与する工程を提供する。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体が発熱した後に投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体の体温が約３７．５°Ｃ〜約４２°Ｃに上昇した後に投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体の体温が約３８°Ｃ〜約４２°Ｃに上昇した後に投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体の体温が少なくとも約３８．５°Ｃに上昇した後に投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体の体温が３８．５°Ｃに上昇した後に投与される。いくつかの例において、刺激された樹状細胞は、被験体の体温が摂氏３８度以上に達した後に被験体に投与される。いくつかの例において、被験体の体温は、鼓膜または経口の方法により測定される。
【０１２９】
本明細書に記載された刺激されたＤＣを生成するための方法は、本明細書に開示される方法によって生成されるＤＣを用いて、インビトロでＴ細胞を活性化する工程を含んでもよい。いくつかの例において、被験体は効果的な免疫応答を開始することができない。例えば、被験体は免疫無防備状態であることもある。被験体は、免疫無防備状態になる処置法を受けていることもある。被験体は、免疫無防備状態になる疾患を有することもある。この場合、上記方法は、ＨＬＡ適合の被験体からのＴ細胞を、ＤＣと接触させる工程を含んでもよい。Ｔ細胞をＤＣとインビトロで接触させる工程は、ＣＴＬ応答を誘発することもある。Ｔ細胞をＤＣとインビトロで接触させる工程は、Ｔ細胞の増殖も誘発することもある。
【０１３０】
デングウイルスの１つを超える株を含む医薬組成物が本明細書で提供される。いくつかの例では、医薬組成物はデングウイルスの少なくとも一部を含む。デングウイルスの一部は、医薬組成物を受け入れる被験体の免疫応答を生成するのに十分な部分であってもよい。上記組成物はさらに、１以上の薬学的に許容可能な塩、賦形剤、またはビヒクルを含んでもよい。本医薬組成物で使用される薬学的に許容可能な塩、賦形剤、またはビヒクルは、担体、賦形剤、希釈剤、抗酸化剤、保存剤、着色剤、調味料およびと稀釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、充填剤、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤、抗菌剤、および界面活性剤を含んでいる。
【０１３１】
いくつかの例では、本明細書に開示される担体は中性の緩衝生理食塩水を含む。医薬組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンのようなアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール；ナトリウムのような塩形成対イオン；および／または、ツイーン、プルロニック、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン界面活性剤を含むこともある。さらに、一例として、適切な等張促進剤は、アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくはナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどを含んでいる。適切な保存剤は塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などを含んでいる。過酸化水素は保存剤としても使用されることがある。適切な共溶媒はグリセリン、プロピレングリコール、およびＰＥＧを含んでいる。適切な錯化剤はカフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン、またはヒドロキシ−プロピル−ベータ−シクロデキストリンを含んでいる。適切な界面活性剤または湿潤剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベート８０のようなポリソルベート、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなどを含んでいる。緩衝剤は、酢酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、またはトリス−ＨＣｌのような従来の緩衝剤であり得る。緩衝酢酸溶液は、約ｐＨ４−５．５であり得、Ｔｒｉｓバッファーは、約ｐＨ７−８．５であり得る。
【０１３２】
デングウイルスを含む組成物が本明細書で提供され、組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、あるいは冷凍乾燥形態であり、１つ以上の凍結防止剤、賦形剤、界面活性剤、高分子量の構造的な添加剤および／または充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を含み得る。いくつかの例において、スクロース、ラクトース、またはトレハロースのような非還元糖であるリオプロテクタントが含まれている。一般に含まれるリオプロテクタントの量は、再構成時に、高張性またはわずかに低張性の製剤も適切ではあるが、結果として生じる製剤が等張性になるような量である。加えて、リオプロテクタントの量は、凍結乾燥時のウイルスの許容しがたい量の分解および／または凝集を防ぐのに十分でなければならない。あらかじめ凍結乾燥された製剤中の砂糖（例えばスクロース、ラクトース、トレハロース）の典型的なリオプロテクタント濃度は、約１０ｍＭから約４００ｍＭまでである。
【０１３３】
本明細書で開示されるデングウイルスを含む組成物が本明細書で提供され、組成物は注射または注入に適している。典型的な組成物は、熟練の作業員に利用可能な任意の経路、例えば、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、または損傷内の経路による動物への注射または注入に適している。非経口製剤は、典型的には、随意に薬学的に許容可能な防腐剤を含有している、無菌の、パイロジェンを含まない、等張性水溶液である。
【０１３４】
本明細書に記載されたデングウイルスの注射用デバイスは皮下注射のために構成されてもよい。いくつかの例では、デバイスは皮内注射向けには構成されない。デバイスは、ＩＳＯスケールで３０〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、ＩＳＯスケールで２７〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、ＩＳＯスケールで２４〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、ＩＳＯスケールで２３〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、ＩＳＯスケールで２２〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、ＩＳＯスケールで２１〜１９Ｇの針ゲージサイズを有してもよい。デバイスは、３／８インチから３／４インチの針の長さを有してもよい。デバイスは、１／２インチから５／８インチの針の長さを有してもよい。針は皮下注射のために４５度から９０度の角度で注入されてもよい。注入箇所は、腕の三角筋、あるいはももの外側股筋であってもよい。
【０１３５】
ＤＶを製造および保存する方法が本明細書で開示される。いくつかの例では、ＤＶは０．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは１．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは１．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは２．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは２．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは３．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは３．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは４．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは４．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは５．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは５．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは６．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは６．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは７．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは７．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは８．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは８．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは９．０ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは９．５ｍｌの容器に保管される。いくつかの例では、ＤＶは１０ｍｌの容器に保管される。例示的な容器は、限定されないが、瓶、バイアル、缶、あるいはシリンジを含む。
【０１３６】
本明細書で開示されるデングウイルス、および非水溶媒を含む医薬組成物が本明細書で提供される。非水溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機酸エステルである。水性担体は水、アルコール／水溶液、塩性媒体および緩衝媒体を含むエマルジョンまたは懸濁液を含んでいる。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは固定油を含んでいる。静脈内ビヒクルは、流体と栄養素の補給物、リンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充薬を含んでいる。保存剤と他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在することがある。
【０１３７】
本明細書で開示されるデングウイルスを含む医薬組成物が本明細書で提供され、医薬組成物は例えば、乾燥粉末など、吸入のために製剤される。適切なおよび／または好ましい医薬製剤は、意図した投与経路、送達フォーマット、および望ましい投与量に依存して、本開示と製剤技術の一般的な知識を考慮して決定されてもよい。投与の方法にかかわらず、有効量は患者の体重、体表面積、または臓器のサイズによって計算されることがある。本明細書に記載される製剤の各々を含む処置に適切な投与量を決定するための計算のさらなる改良は、当該技術分野で日常的になされ、当該技術分野で日常的に行なわれる作業の範囲内である。適切な投与量は適切な用量反応データを使用して確認されてもよい。
【０１３８】
キット
デングウイルス組成物を含むキットが本明細書で開示される。さらに癌、病原体感染、あるいは免疫不全の処置または予防のためのキットが本明細書で開示される。場合によっては、キットは、単位剤形での有効な量のデングウイルスの組成物および／または有効な量のチェックポイント阻害剤を含む、治療用または予防用の組成物を含むことができる。場合によっては、キットは、デングウイルスの治療用組成物を含むことができる滅菌容器を含み、そのような容器は、箱、アンプル、瓶、バイアル、管、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、あるいは当該技術分野で既知の他の適切な容器形態であり得る。そのような容器はプラスチック、ガラス、ラミネート加工された紙、金属箔、あるいは薬物を保持するのに適切な他の材料で作ることができる。場合によっては、キットは、約１×１０４細胞〜約１×１０１２細胞の樹状細胞などの細胞を含むことができる。場合によっては、キットは、少なくとも約１ｘ１０５細胞、少なくとも約１ｘ１０６細胞、少なくとも約１ｘ１０７細胞、少なくとも約４ｘ１０７細胞、少なくとも約５ｘ１０７細胞、少なくとも約６ｘ１０７細胞、少なくとも約６ｘ１０７細胞、少なくとも約８ｘ１０７細胞、少なくとも約９ｘ１０７細胞、少なくとも約１ｘ１０８細胞、少なくとも約２ｘ１０８細胞、少なくとも約３ｘ１０８細胞、少なくとも約４ｘ１０８細胞、少なくとも約５ｘ１０８細胞、少なくとも約６ｘ１０８細胞、少なくとも約６ｘ１０８細胞、少なくとも約８ｘ１０８細胞、少なくとも約９ｘ１０８細胞、少なくとも約１ｘ１０９細胞、少なくとも約２ｘ１０９細胞、少なくとも約３ｘ１０９細胞、少なくとも約４ｘ１０９細胞、少なくとも約５ｘ１０９細胞、少なくとも約６ｘ１０９細胞、少なくとも約６ｘ１０９細胞、少なくとも約８ｘ１０９細胞、少なくとも約９ｘ１０９細胞、少なくとも約１ｘ１０１０細胞、少なくとも約２ｘ１０１０細胞、少なくとも約３ｘ１０１０細胞、少なくとも約４ｘ１０１０細胞、少なくとも約５ｘ１０１０細胞、少なくとも約６ｘ１０１０細胞、少なくとも約６ｘ１０１０細胞、少なくとも約８ｘ１０１０細胞、少なくとも約９ｘ１０１０細胞、少なくとも約１ｘ１０１１細胞、少なくとも約２ｘ１０１１細胞、少なくとも約３ｘ１０１１細胞、少なくとも約４ｘ１０１１細胞、少なくとも約５ｘ１０１１細胞、少なくとも約６ｘ１０１１細胞、少なくとも約６ｘ１０１１細胞、少なくとも約８ｘ１０１１細胞、少なくとも約９ｘ１０１１細胞、または少なくとも約１ｘ１０１２細胞を含むことができる。例えば、約５ｘ１０１０細胞はキットに含まれ得る。別の例では、キットは３ｘ１０６細胞を含むことができ、細胞は約５ｘ１０１０細胞へ拡張し、被験体に投与され得る。こうしたキットはさらに、その使用に関する説明書を含むことができる。
【０１３９】
定義
本明細書で使用されるように、用語「有効な量」または「治療上有効な量」とは、限定されないが、以下に定義されるような疾患の処置を含む、意図される用途に影響を及ぼすのに十分な本明細書に記載される化合物の量を指す。治療上有効な量とは、意図した適用（インビトロまたはインビボ）、または処置されている被験体、例えば、被験体の体重と年齢、疾患状態の重症度、投与の方法などによって変動することがあり、これらは当業者により容易に決定され得る。特定の投与量は、選択される特別の化合物、その後に続く投薬レジメン、それがデングウイルスと組み合わせて投与されるか否か、投与のタイミング、あるいはそれが運ばれる物理的な送達系に依存して変わる。
【０１４０】
本明細書で使用されるように、「処置」または「処置すること」は本明細書で互換的に使用される。こうした用語は、限定されないが、治療の有用性および／または予防的な利益を含む、有益な結果または望ましい結果を得るための手法を指す。治療的な有益性とは、処置されている根本的な疾病の減少、根絶、または改善を意味する。同様に、治療効果は、患者が依然として基礎疾患に罹患しているかもしれないにもかかわらず、患者の改善が観察されるように、基礎疾患に関連する生理学的症状の１つ以上の減少、根絶、または寛解により達成される。予防効果に関して、組成物は、疾患の診断が行われなくとも、特定の疾患を進行させる危険のある患者に、または疾患の生理学的な症状の１つ以上を報告する患者に投与され得る。
【０１４１】
本明細書で使用されるように、用語「同時投与」、「〜と組み合わせて投与される」、およびこれらの文法上の同等物は、２以上の薬剤が両方とも同時に動物に存在するような２以上の薬剤の動物への投与を包含している。共投与は、別々の組成物における同時投与、別々の組成物における異なる時間での投与、または両方の薬剤が中に存在する組成物における投与を含む。
【０１４２】
用語「阻害剤」は、本明細書で使用されるように、標的タンパク質の活性または発現の阻害によってもそうでなくとも、標的タンパク質の生体機能を阻害する能力を有する化合物を指す。従って、用語「阻害剤」は、標的タンパク質の生物学的な役割との関連において定義されている。
【０１４３】
本明細書で使用されるように、「薬剤」または「治療薬」とは、生物学的、薬学的、または化学的な化合物または他の部分を指す。非限定的な例としては、単純または複雑な有機または無機の分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、または化学療法化合物が挙げられる。様々な化合物、例えば、小分子とオリゴマー（例えば、オリゴペプチドとオリゴヌクレオチド）と様々なコア構造に基づいた合成有機化合物を合成することができる。加えて、様々な天然源は、植物または動物の抽出物などの検査のための化合物を提供することができる。当業者は本発明の薬剤の構造の性質に関して制限がないことを容易に認識することができる。
【０１４４】
本明細書で使用されるように、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する、少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、およびポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用されるように、この用語は、無傷のポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、それらのフラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体部分（ドメイン抗体など）を含む融合タンパク質、合成抗体、多特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、および、抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の修飾された構成も包含する。抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスのタイプの抗体を含み、抗体は任意の特定のクラスである必要はない。抗体は任意の動物由来のものであり得る。
【０１４５】
本明細書で使用されるような用語「被験体」は、哺乳動物を含む。哺乳動物は、ラット、マウス、非ヒト霊長類、およびヒトを含む霊長類を含む。
【０１４６】
本開示の全体にわたって、様々な実施形態が範囲フォーマット（ｒａｎｇｅ  ｆｏｒｍａｔ）で提示される。範囲フォーマットでの記載は単に利便性と簡潔さのためのものであり、実施形態の範囲に対する確固たる制限として解釈されるべきでないことを、理解されたい。したがって、範囲の記載は、文脈が明らかに他に指示しない限り、下限の単位の少数第１位までのその範囲内で個々の数値と同様にすべての考えられ得る部分範囲を具体的に開示したと考えられるべきである。例えば、１乃至６などの範囲の記載は、１乃至３、１乃至４、１乃至５、２乃至４、２乃至６、３〜６乃至などの他に、例えば、１．１、２、２．３、５、および５．９などの、その範囲内の個々の値などの部分範囲を具体的に開示したと考えられるべきである。これは、範囲の広さにかかわらず適用される。これらの介入する範囲の上限および下限は、より小さな範囲内に独立して含まれてもよく、また、定められた範囲内のあらゆる具体的に除外された限度に従って、本発明内に包含される。定められた範囲が上限および下限の１つまたはその両方を含む場合、これらの含まれた上限および下限のいずれかまたは両方を除く範囲もまた、文脈が明らかに他に指示しない限り、本発明内に包含される。
【０１４７】
本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであり、実施形態を制限するようには意図されていない。本明細書で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が他に明白に示していない限り、同様に複数形を含むように意図される。用語「含む」および／または「含むこと」は、本明細書での使用時に、明示された特徴、整数、工程、操作、要素、および／または構成要素の存在を特定するが、１以上の他の特徴、整数、工程、操作、要素、構成要素、および／またはそれらの群の存在または追加を妨げないことが、さらに理解される。本明細書で使用されるように、用語「および／または」は、関連する列挙された品目の１以上の、いずれかおよび全ての組み合わせを含む。
【０１４８】
具体的に明示されていないか、文脈から明白ではない限り、本明細書で使用されるように、数またはその範囲に関する用語「約」とは、数字または数字の範囲に関して、明示された数およびその＋／−１０％の数を意味し、あるいは、範囲について列挙された値に対する下限より１０％低いかつ上限より１０％高い数を意味する。
【実施例】
【０１４９】
実施例１．マウス樹状細胞（ＤＣ）の生成およびパルス化
【０１５０】
Ｌｕｔｚ  Ｍ．，ｅｔ．  ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２２３：７７−９２，  １９９９）によ  って記載されているような方法を採用して、成熟したＤＣ形状のマウス骨髄を生成した。骨髄懸濁液を１０日間、組換えマウスＧＭ−ＣＳＦで補足された培地中のペトリ皿においてインキュベートした。非付着性細胞を、ＧＭ−ＣＳＦおよびリポポリサッカリドを含有する培地の中に集め、遠心分離し、再懸濁した。２日後、ＤＣを採取し、トリパンブルー色素排除によりそれらの生存率を判定した。ＤＣの純度をフローサイトメトリー分析によって測定した。ＤＣを１８時間、１０μｇ／ｍｌで合成ペプチドによりパルス化した。１８時間のインキュベーション後、ＤＣを採取し、ＨＢＳＳ中で２回洗浄し、更なる研究のためにＨＥＳＳ中で再懸濁した（実施例２と３を参照）。
【０１５１】
実施例２．第１のマウスモデルの黒色腫の処置のためのデングウイルスと樹状細胞
【０１５２】
マウスモデルのアッセイを行い、デングウイルス（ＤＶ）株と、腫瘍抗原で刺激した樹状細胞（ＤＣ）とを使用して、癌細胞の標的化の組み合わせから生じた結果を観察した。ＤＶ  Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾部の基部に、注射により１×１０６または１×１０７ｐｆｕ／ｍ１で０．０５ｍｌのデングウイルス（ＤＥＮ−２株＃１７１０）を接種させた。組換えマウスＩＬ−２（Ｇｅｎｚｙｍｅ）とＩＦＮ−ガンマ（Ｓｉｇｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、デングウイルス（Ｄｒ．  Ｄｕａｎｅ  Ｇｕｂｌｅｒにより提供されるＤＥＮ−２株＃１７１０（ＣＤＣデータベースのエントリー番号５５５））の投与後５、１０、１５、および２０日目に、２，０００（ｒＩＬ−２）および５００  １Ｕ（ｒＩＦＮ−ガンマ）での静脈注射により投与した。デングウイルスを投与した７日後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、２つのペプチドとともに別々にインキュベートしたマウスＤＣで免疫を与え、それを静脈内に注射した。ペプチドを合成した。オボアルブミン（ＯＶＡ−８）からのＨ−２ｂ制限ペプチド、ＳＩＩＮＦＥＫＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３０）を対照として使用した。マウスＤＣをパルス化するために、抗原ｇｐ１００／ｐｍｅ１１７（ＥＧＳＲＮＱＤＷＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８））とＴＲＰ−１／７５（ＴＡＹＲＹＨＬＬ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９））に由来するＢ１６黒色腫関連Ｈ−２ｂ−制限ペプチドを使用した（詳細に関しては実施例１を参照）。ＤＣを用いる２回のさらなる免疫化を、１４日の間隔で実施した。最後のＤＣの注入の３日後、マウスの外側尾静脈に５×１０４の生存可能なＢ１６黒色腫細胞を静脈内で負荷し、その後生存させ、これを腫瘍注射後、経時的（数日）に生存する動物のパーセンテージとして記録した。５匹以上のマウス／群からのデータを記録した（表５を参照）。
【０１５３】
【表５】
2020500847.tif 000009
【０１５４】
群２（デングウイルス血清型２型株＃１７１０と腫瘍ペプチドで刺激されたＤＣ）中の投与されたマウスで観察された肺転移の数は、デングウイルスのない腫瘍ペプチドで刺激されたＤＣを投与した群１の対照マウスよりも７．５％少なかった。
【０１５５】
実施例３．第２のマウスモデルの黒色腫の処置のためのデングウイルスと樹状細胞
【０１５６】
マウスモデルアッセイを行い、デングウイルス（ＤＶ）株と腫瘍抗原で刺激した樹状細胞（ＤＣ）とを使用して、癌細胞の標的化の組み合わせから生じた結果を観察した。マウスにサイトカインを投与し、ヒトで観察されたＤＶに対する応答と平行させた。
【０１５７】
Ｈ−２ｂ制限Ｂ１６マウス黒色腫細胞株（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−６３２２）を使用して、腫瘍をマウスに確立させた。樹状細胞のパルス化のために使用されるペプチド（抗原ｇｐ１００／ｐｍｅ１１７およびＴＲＰ−１／ｇｐ７５に由来する、Ｂ１６黒色腫に関連したＨ−２ｂを制限されたペプチド）を合成した。Ｌｕｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２２３：７７−９２，１９９９）に記載されるような方法に従ってマウス骨髄から樹状細胞を生成した。
【０１５８】
０日目に、マウスの外部尾静脈に５×１０４の生存可能なＢ１６黒色腫細胞を静脈内に受けさせ、転移性肺腫瘍を確立させた。７日目、マウスの尾部の基部に、注射により１×１０６または１×１０７ｐｆｕ／ｍｌで０．０５ｍｌのデングウイルス（ＤＥＮ−２株＃１７１０（ＣＤＣデータベースのエントリー番号５５５））を接種させた。組換えマウスＩＬ−２（Ｇｅｎｚｙｍｅ）とＩＦＮ−ガンマ（Ｓｉｇｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、デングウイルス（ＤＥＮ−２株＃１７１０）の投与後、５日間の間隔をおいて２，０００の１Ｕ（ｒＩＬ−２）および５００の１Ｕ（ｒＩＦＮ−ガンマ）の静脈注射により投与した。２１、３５、および４９日目に、マウスのＤＣを、２つのペプチドで別個にインキュベートし、同日に２回の連続投与で静脈内に注入して、被験体における投与の経路とスケジュールを一致させた（さらなる詳細に関しては実施例２を参照）。マウスの対照群は、デングウイルスも、オボアルブミン（ＯＶＡ−８）からのＨ−２ｂ制限ペプチド、ＳＩＩＮＦＥＫＬでパルス化された樹状細胞も受けなかった。処置群と対照群を表６に示す。
【０１５９】
【表６】
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【０１６０】
【表７】
2020500847.tif 000011
【０１６１】
９０日目に動物を殺処分し、肺腫瘍のコロニーの数を数えた。Ｆｅｋｅｔｔｅ溶液での肺の吸入と固定の後、盲検のコード化様式で、転移性肺腫瘍を数えた。データは転移の平均の数として報告された；４匹のマウス／群（表８を参照）。以下の主要な臓器系：脳、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、および生殖腺の病理組織診断が行われた（図示せず）。
【０１６２】
【表８】
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【０１６３】
群Ｃのマウス（腫瘍抗原で刺激されたＤＣを投与したが、ウイルスは投与しなかった）で観察された肺転移の数は、対照群Ｄ（対照ペプチドに晒されたＤＥＮＶ−２＃１７１０とＤＣを投与）よりも４７％少なかった。群Ａのマウス（ＤＥＮＶ−２＃１７１０、および腫瘍抗原で刺激されたＤＣを投与）に観察された肺転移の数は、対照群Ｄ（対照ペプチドに晒されたＤＥＮＶ−２＃１７１０とＤＣを投与）よりも５４％少なかった。群Ｂのマウス（ＤＥＮＶ−２＃１７１０、および腫瘍抗原で刺激されたＤＣを投与）に観察された肺転移の数は、対照群Ｄ（対照ペプチドに晒されたＤＥＮＶ−２＃１７１０とＤＣを投与）よりも５１％少なかった。群ＡとＢにおける平均減少は、群Ｄと比べて５２．８％であった。
【０１６４】
実施例４．低病原性のデングウイルスの製造およびスクリーニング
【０１６５】
Ｖｅｒｏ（アフリカミドリザル腎臓細胞）由来の検証かつ認証された細胞株を持つＭａｓｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋを生成し、汚染物質と外来性の生体の不在について試験した。Ｖｅｒｏ株は、様々なウイルス性ワクチンを生成するために世界保健機関により使用されている。ＦＤＡ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（ＣＢＥＲ）により確立されたガイドラインに従い、デングウイルスを、Ｍａｓｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ由来の検証されたＶｅｒｏ株において継代させ、ワーキングセルバンク（Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ）として確立させた。最初の原種からの２つのデング２型ウイルス株（ＤＮＶ−２  ＃１５８４およびＤＥＮＶ−２  ＃１７１０）を、１０−５のＭＯＩでＷＣＢのＶｅｒｏ細胞に加えた。
【０１６６】
（１リットル当たり、栄養培地（０．１６５％のラクトアルブミン加水分解物［Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，Ｍｉｃｈ．］）中の１％のＳｅａＫｅｍ  ＬＥアガロース（ＦＭＣ  ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔｓ，  Ｒｏｃｋｌａｎｄ，  Ｍａｉｎｅ）、０．０３３％の酵母抽出物［Ｄｉｆｃｏ］、アール平衡塩類溶液、２５ｍｇの硫酸ゲンタマイシン［ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．］および１．０ｍｇのアムホテリシンＢ［Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ；Ｅ．Ｒ．Ｓｑｕｉｂｂ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．］、および２％のＦＢＳ）を含有している第１の４ｍｌの重層培地を、３７°Ｃで１．５時間、２００ｍｌのウイルス接種材料の吸着後に加えた。７日間３７°Ｃでのインキュベーション後、１ｍｌ当たり追加の８０ｍｇのニュートラルレッド生体染色（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  Ｍｄ．）を含有している第２の２ｍｌの重層培地を加えた。プラークを感染の８〜１１日後に数えた。
【０１６７】
最終的なウイルス培養物に関するプラークアッセイを行った。プラークアッセイから推定されるように、ＤＮＶ−２  ＃１５８４の力価は、約５Ｅ＋０６  ＰＦＵ／ｍｌであり、ＤＥＮＶ−２  ＃１７１０の力価は、３．５Ｅ＋０６  ｐｆｕ／ｍＬであった。ＡＴＣＣからのデング２型ウイルス（ＤＮＶ−２；＃１５８４）は、感染の５日後にＶｅｒｏ細胞において明らかな細胞変性効果を示したが、Ｖｅｒｏ細胞は、盲継代＃２（＃１７１０ウイルス）の感染の１１日後に形態変化を有するように見える。（データは示されず）。結果は、ＤＥＮＶ−２  ＃１７１０ウイルスが、ＤＮＶ−２  ＃１５８４株よりはるかに細胞変性が少ないことを示した。
【０１６８】
実施例５．ＤＶを用いるおよび用いないパルス化ＤＣによる癌細胞死滅アッセイ
【０１６９】
対照群において、正常なヒト腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を、ヒト黒色腫ＦＥＭＸ細胞に直接適用した。Ｔ細胞受容体を、ＨＬＡ  Ａ２．１＋を介してＦＥＭＸ黒色腫細胞株に一致させた。処置群において、ヒトＴＩＬを、インターフェロン担体およびインターロイキンを含有しているＤＶの上清に暴露した。暴露したＴＩＬ＋ＤＶの上清を、ＦＥＭＸ腫瘍細胞を用いて培養液に入れた。両方の群を、５対１のＴ細胞対腫瘍細胞（１００，０００対２０，０００の細胞）の比率で４時間癌細胞を死滅させたままにした。その後、残存した腫瘍細胞を、フローサイトメトリーによって開始細胞の％として数えた。表９に示される結果は、ＤＶがパルスＤＣ抗癌反応を超えて３５％の追加の癌細胞死滅を誘発することを実証している。
【０１７０】
【表９】
2020500847.tif 000013
【０１７１】
実施例６．黒色腫溶解物抗原を用いるヒト樹状細胞の単離およびパルス化
【０１７２】
以下の例は、純粋な単離されたＣＤ１４＋単球からの高レベルのヒトＩＬ−１２ｐ７０を発現する高純度のＣＤ１１ａ＋成熟ＤＣ集団の生成と、黒色腫細胞溶解物でのＤＣの刺激も実証しており、その全プロセスは１週間未満で完了する。細胞を、硬質プラスチックプレート上で培養し、軟質プラスチックバッグには暴露しなかった。
【０１７３】
ＣＤ１４＋単球を単離し、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ４５、および７ＡＡＤの発現について分析した。プロディジー（ｐｒｏｄｉｇｙ）実行後、入力細胞の９０．２５％はＣＤ１４＋であった。ＣＤ１４＋細胞を、プレーティングの２４時間後にＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４で処理して、未熟な樹状細胞を生成した。
【０１７４】
ＡＴＣＣからのＲＰＭＩ−７９５１黒色腫細胞は、プロディジーにかけた日に到着し、この細胞を再懸濁し、数を数えて、蒔いた。黒色腫細胞を、その後、次亜塩素酸カルシウム溶液で処理した。代替的に、細胞を亜塩素酸ナトリウム溶液で処理した。黒色腫細胞溶解物を未熟なＤＣに加え、成熟化剤ＩＦＮガンマ（１０００Ｕ／ｍＬ）、Ｒ８４８（５μｇ／ｍＬ）およびＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍＬ）を加えた。
【０１７５】
黒色腫細胞溶解物でパルス化した２２時間後と成熟化剤の追加の１８時間後に、成熟ＤＣからの上清を集めて、マイコプラズマおよびエンドトキシンについて検査した。病原菌は観察されなかった。ＤＣ培地からの上清を使用して、ＩＬ−１２ｐ７０レベルを測定するために、ＥＬＩＳＡアッセイを実行した。ＩＬ−１２ｐ７０の濃度は、４−６ｎｇ／ｍＬの業界基準とは対照的に、細胞の第１のバッチにおいて１９＋／−４ｎｇ／ｍＬであった。同じプロトコルによって産生された細胞の様々なバッチは、１５−２３ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１２ｐ７０の濃度を示した。生存率アッセイを実行し、（７０％を示した対照薬と比較して）細胞が凍結され、融解され、および培養された後に平均生存度が７９．２％で記録された。複数の対照薬に比例するＤＣ  ＩＬ−１２ｐ７０の産生が判定された。これらの対照薬方法は、細胞を軟質プラスチックバッグに暴露する工程、亜塩素酸塩溶液以外の溶液で細胞を溶解する工程を含み、成熟細胞に対してＬＰＳ、ＩＦＮガンマおよびＲ８４８の組み合わせを使用しない。
【０１７６】
細胞をさらに凍結させ、その後、４°Ｃで融解して、凍結融解後の細胞数と生存度を試験した。これらを、融解開始後およそ１６時間  １８時間  ２０時間および２２時間で測定した。結果については表１０を参照すること。非パルスＤＣの追加の産物を、凍結保存研究において試験し、７０％を超える生存度を示した。凍結保存前の生存度は８５−８９％で変動した。
【０１７７】
【表１０】
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【０１７８】
これらの遅い融解（表１０に示される１６時間〜２２時間）から急速な融解（約３０秒から約５分の間の３７°Ｃの水浴）への切り換えは、７１−７９％の生存度を結果としてもたらした。パルスされていない細胞を、凍結保存研究に使用した。生存度は７１．４％から７９．２％までで変動した。
【０１７９】
実施例７．デングウイルスを用いるヒト白血球におけるサイトカインの誘発
【０１８０】
単球、樹状細胞、およびＴリンパ球を含むヒト白血球（ＷＢＣ）を、時間＝０での３つの異なる感染多重度（ＭＯＩ）、０．１のＭＯＩ、０．５のＭＯＩ、および２のＭＯＩで、モックウイルスまたはデングウイルスのいずれかに感染させた。様々なサイトカインのレベル（ｐｇ／ｍＬ）を、感染の４８時間、７２時間および９６時間後に測定した。処理を３回繰り返した。結果は、表１１−１４の各時点について示されている。（Ｍ＝モック。０．１、０．５および２はＭＯＩである）。評価されたＭＯＩでのモックウイルスとデングウイルスとの間の変化の３回の平均を計算し、表１１においてパーセンテージとして示す。
【０１８１】
【表１１−１】
2020500847.tif 000015
【０１８２】
【表１１−２】
2020500847.tif 000016
【０１８３】
【表１２−１】
2020500847.tif 000017
【０１８４】
【表１２−２】
2020500847.tif 000018
【０１８５】
【表１３−１】
2020500847.tif 000019
【０１８６】
【表１３−２】
2020500847.tif 000020
【０１８７】
【表１４−１】
2020500847.tif 000021
【０１８８】
【表１４−２】
2020500847.tif 000022
【０１８９】
実施例８．さらなるウイルス製造プロトコル
【０１９０】
実施例４の方法に加えて、ＶｅｒｏおよびＦＲｈＬの細胞の両方を、それぞれ、盲継代  ＃２、ＤＥＮＶ−２  ＃１７１０、およびＤＮＶ−２  ＃１５８４からの上清の希釈液を使用して感染させる。検出感度を増大させるために、蛍光免疫染色を、盲継代＃２からの上清で感染させられた細胞においてウイルスを検出するように開発する。
【０１９１】
必要な場合に、超遠心分離を使用して、ウイルスを濃縮する。ウイルス力価の確認後、最終生成物を、濾過して細胞残屑を取り除き、外来性の生体の不在について評価し、最終ロット（ｌｏｔ）が放出されると、５ｍｌのボトルに詰め、配送および投与の準備ができるまで４°Ｃで保管する。実施例８：デングウイルス上清は、腫瘍細胞でのＩＣＡＭ−１発現を増大させる。
【０１９２】
デングウイルス上清が腫瘍細胞でのＩＣＡＭ−１発現を増大させるかどうかを判定するために、３０μｌのデングウイルス上清を含む９６ウェルプレートでフローサイトメトリー分析を行った。３０ｕＬのデングウイルス上清は、１ｍＬ当たり１０６のプラーク形成単位で感染させたヒトＰＢＭＣ由来のものであった。これらの上清を６時間Ａ５４９細胞に晒して、その後、ＩＣＡＭ−１に対するマウスのモノクローナルＧ−クラス抗体（ＩｇＧ）を１ウェル当たり１００，０００のＡ５４９細胞で適用した。ヒトＰＢＭＣのデングウイルス上清を、２（ＭＯＩ：２）の感染多重度（ＭＯＩ）でインキュベーションの７２時間目に集め、インキュベーションの６時間後にモックウイルス（ウイルスはない）を集めた。すべてのＭＯＩ：２およびモックウイルスのウェル条件はＡ５４９細胞を利用した。すべての条件を繰り返して行った。ＩＣＡＭ−１発現の変化は、ヒト肺腺癌Ａ５４９細胞を標識するために、ＩＣＡＭ−１に対するＩｇＧを使用してフローサイトメトリーによって測定された（表１５）。
【０１９３】
【表１５】
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【０１９４】
デング熱誘導されたＴＮＦαは、２倍増または３倍増の肺癌（Ａ５４９）細胞株のＩＣＡＭ−１増大を引き起こした。この実験の目的は、デングウイルス上清がない状態とある状態での、Ａ５４９肺癌でのＭＨＣ  Ｉ発現、免疫耐性、および死滅させることが困難な腫瘍細胞株をテストすることであった。これは７２時間のインビトロアッセイによって完了した。
【０１９５】
すべての結果は、幾何平均によって定義されるようなフローサイトメトリーによってグラフ式に測定された。図３Ａと図３Ｂで示されるように、デングウイルス上清のウェル状態の幾何平均（セット１とセット２でそぞれ、Ｂ０５  Ｂ５．２．ｆｃｓ、およびＢ０６  Ｂ６．２．ｆｃｓ）は、上清のない対照Ａ５４９細胞と比較して、ＩＣＡＭ−１アップレギュレーションのほぼ２倍増または３倍増を示した。デング熱に感染したＰＢＭＣは、ＣＴＬと腫瘍間の相互作用に関与数「粘着性」因子をＢ０１からＢ０５に増加させた。１８５７の幾何平均は、ＩＣＡＭ−１の蛍光尺度で３６７０まで増大する（表１６）。
【０１９６】
【表１６】
2020500847.tif 000024
【０１９７】
実施例９：デングウイルス上清は、黒色腫性の腫瘍細胞でのヒト白血球抗原（ＨＬＡ）発現を増大させる
【０１９８】
デングウイルス上清が黒色腫性の腫瘍細胞株ＦＥＭＸ（ＨＬＡ−Ａ２．１＋細胞の混合物）と６２４．２８（遺伝子レベルでＨＬＡ  Ａ２．１がない細胞株）でのＭＨＣ発現を増大させるかどうかを判定するために、腫瘍細胞株を、表１７のように１ｍＬ当たり１０６のプラーク形成単位に感染させたヒトＰＢＭＣの３０ｕＬのデングウイルス上清を用いてインキュベートした。ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃ発現はＷ６／Ａ３２汎ＨＬＡ抗体を使用してフローサイトメトリーによって測定され、これはすべてのＨＬＡ遺伝子生成物に反応する。
【０１９９】
【表１７】
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【０２００】
６２４．２８の腫瘍細胞株でＭＨＣ−Ｉを検出した際、蛍光で７２３８３〜１１７３４３のＭＦＩ（平均蛍光強度あるいは幾何平均）における１．６倍の増加がＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ）から検出された（図４Ａ、表１８）。この効果はＨＬＡ−Ａ２のアップレギュレーションを示している。すべての条件を繰り返して行った。６２４．２８の細胞をデング熱上清に晒す際に、ＭＨＣ発現はアップレギュレートされた。同様に、デングウイルス上清が高ＨＬＡ発現腫瘍細胞株（ＦＥＭＸ）でインキュベートされたとき、ＨＬＡ発現は対照を上回って１．３２まで増大した（図４Ｂ）。
【０２０１】
【表１８】
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【０２０２】
デングウイルス上清を、黒色腫性の腫瘍細胞株ＦＥＭＸ（ＨＬＡ−Ａ２．１＋細胞の混合物）と６２４．２８の（遺伝子レベルでＨＬＡ  Ａ２．１がない細胞株）腫瘍細胞株を用いてインキュベートした。細胞株は、表１９のように、１ｍＬ当たり１０６のプラーク形成単位で感染させたヒトＰＢＭＣからのデングウイルス上清３０ｕＬを用いてインキュベートされた。
【０２０３】
【表１９】
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【０２０４】
ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃ発現はＷ６／Ａ３２汎ＨＬＡ抗体を使用してフローサイトメトリーによって測定され、これはすべてのＨＬＡ遺伝子生成物に反応する（図５Ａ−５Ｌ）。
【０２０５】
実施例１０：チェックポイント阻害剤に対するサイトカイン誘導されたデングウイルスの影響
【０２０６】
どのサイトカインがデングウイルスによって誘導されたかどうかを判定するために、末梢血単核球（ＰＢＭＣ；ヒト白血球）をデングウイルスに感染させた。ＰＢＭＣを単離するために、アフェレーシスに由来するＬｅｕｋｏｐａｋｓを利用した。単球、ＤＣ、ＮＫ、ＴおよびＢ細胞を含むＰＢＭＣは、３７０Ｃおよび５％のＦＢＳの完全な細胞培地に置かれた。デングウイルスはＶｅｒｏ（アフリカミドリザル）腎臓細胞中で１０６ｐｆｕ／ｍｌまで拡張された。ウイルス力価は、標準増殖条件を使用して、ベロ細胞中で３．５×１０６ｐｆｕ／ｍＬに計算された。ＰＢＭＣを漸増の感染多重度（ＭＯＩ）で感染させた。以下のＭＯＩを使用した：モック（ウイルスのないＰＢＭＣ）、０．１（１０のＰＢＭＣ細胞に対する１つのウイルス粒子の比率）、０．５（１０のＰＢＭＣ細胞に対する５つのウイルス粒子の比率）、および２．０（１０のＰＢＭＣ細胞に対する２０のウイルス粒子の比率）。上清を集めて−８００Ｃで凍らせた。結果として生じた上清を用いて、マルチプレックスＥＬＩＳＡパネルを使用してサイトカインを測定し、感染前に採取された上清と比較した。ＭＯＩ  ０．１、０．５、および２．０での変化とモック感染との比較により、活性化のウイルスの濃度と時間依存性が確認された。元々の処置はｐｇ／ｍＬで３通り行われ、表２０に示されるようなデングウイルスによってベースラインの感染前および感染後の％として表された。一部の値は機器測定値を超えることがあり、そのようなデータポイントは％が増大を計算する手段として測定値の最大値に設定された。
【０２０７】
結果は、ＰＢＭＣのデングウイルス感染が、ＣＴＬにその標的（ＩＦＮγ、ＩＦＮα）を認識させることを可能にするクラスＩ  ＭＨＣのアップレギュレーションと、ＣＴＬ増殖の増大と細胞毒性の能力（ＩＬ−２）の増加とを引き起こし、活性化されたＣＴＬ（ＩＬ−７、ＩＬ１５）のアポトーシスを防ぐことを示している。強調すべきことは、ＰＢＭＣがインビボの条件を完全には表現しないということである。溶解可能な受容体あるいは体細胞性の受容体の不足はサイトカインレベルに影響を及ぼすことがある。例えば、デングウイルスすら伴わない接触の活性化は、検出限界を超えるＩＬ−８のレベルを誘発した。ＩＬ−６も非常に高く、および、ＰＢＭＣ中の濃縮された樹状細胞（ＤＣ）の不足により、ウイルス媒介性のＩＬ−２の遮断がそのままであったため、ＩＬ−２は減少した／なかった。インビボにおいて、リンパ管中で感染して活性化されたＤＣのクラスター化は、ウイルスのＩＬ−２遮断を克服して、ＣＴＬの増殖を支持した。
【０２０８】
サイトカインとその抗腫瘍利点の一部の概要は以下の通りである：先天性および適応的の両方の免疫応答を開始する、クラスＩ  ＭＨＣ発現を促すＩＦＮ−α−炎症誘発性サイトカイン。データは、ベースラインを４１５％超える増加を示す。ＩＦＮ−γは一般的に、活性化されたＮＫとＣＴＬによって活性化されることによって生成され、ＩＦＮ−γはクラスＩ  ＭＨＣをアップレギュレートし、タイプ１極性に対するマクロファージを活性化する。データは、ベースラインを９３％超える増加を示す。ＩＰ−１０はマクロファージ支持ケモカインであり、ＩＰ−１０は腎細胞癌中の臨床反応の独立予測因子である。データは、ベースラインを４００８％超える増加を示す。ＩＬ−６はデング熱感染の期待された初期のサイトカインの１つであり、その増加は炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインの両方として作用する。それは、免疫細胞に適用されると炎症性の特性を有するが、体細胞はすべて親和性の低い受容体、ｇｐ１３０を運ぶ。ｇｐ１３０との結合は抗炎症性遺伝子を活性化し、免疫媒介性の損傷から守る。データは、＞１２００００％の増加を示すが、この実験は恒常性制御下ではなかった。ＩＬ−６受容体活性でのデング熱の場合、レベルはさらに低く、３．１−８０．１ｐｇ／ｍＬの間であり、疾患重症度とは決定的に相関していない。これらのレベルは、ＣＡＲＴ治療を用いるなどのサイトカイン放出症候群で見られる１０，０００倍のＩＬ−６の上昇よりもかなり下にある。ＩＬ−１２は、エフェクターに対応可能になるために、ＣＴＬをライセンス化するべく「シグナル３」として機能する。ＩＬ−１２がない状態での自己ペプチドでパルス化されたＤＣは、ＴＲｅｇ  ＣＤ４＋  ＣＤ２５＋細胞を誘導し、免疫応答を低下させる。データは、ベースラインを７７％超える増加を示す。ＩＬ−８は腫瘍上皮細胞に沿って重大な癒着ポイントを回復する炎症誘発性サイトカインであり、ＣＴＬによるさらなる腫瘍微小環境浸潤を引き起こす。データは、データ尺度をはるかに越える絶え間ない高い刺激を示す。ＩＬ−８は腫瘍血管中の細隙結合を開きやすくするために重要である。デング熱患者におけるＩＬ−８のレベルは中程度であり、増加は高い毒性には関連しない。ＩＬ−１５はＩＬ−２ファミリーの適応性のあるサイトカインであり、ＩＬ１５は、ＣＴＬとＮＫ細胞の細胞崩壊機能を増大させ、ＣＴＬアポトーシスを遅らせる。データは、ベースラインを９３％超える増加を示す。ＩＬ−７は、ＩＬ−２ファミリーの適応性のあるサイトカインであり、ＩＬ−７はＣＴＬとＮＫ細胞を刺激してエフェクター状態にして、標的を手際よく殺させる。それはさらに、解糖から脂肪酸代謝への切り替えを誘発して、ＣＴＬの中枢メモリー細胞およびメモリー／エフェクターＴ細胞への移行を可能にする。データは、ベースラインを３６３％超える増加を示す。ＩＬ−２は原型のＴＨ１サイトカインであり、ＩＬ−２はＣＴＬ増殖を引き起こすデータはＩＬ−２受容体の１５２％の増加を示すが、ＩＬ−２は検出されなかった。デング熱専門家との調査により、可能性の高い原因はＴ細胞におけるＩＬ−２産生のウイルス接触媒介性の遮断であることがわかった。ヒトの感染において、同時刺激マーカーＣＤ���０／８３／８６の高い発現を備える感染した活性化ＤＣは、リンパ節でクラスター化した。このクラスター化の効果は一時的な遮断を克服して、増加したＩＬ−２によって媒介された高ＣＴＬ増殖可能にする。これはＤＣとＣＴＬの富化と、その後の３Ｄ組織足場システムの構築を必要とするので、この効果はインビトロで複製するのが困難である。
【０２０９】
【表２０−１】
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【０２１０】
【表２０−２】
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【０２１１】
実施例１１．ドナーからのＰＢＭＣの収集
【０２１２】
ドナー（自己由来またはＨＬＡ適合の同種異系のいずれか）は、訓練された人員および適切な設備を備えた施設で実行される白血球除去の処置を受ける。白血球除去が完了した後、赤血球、血小板、および血漿タンパク質をドナーに戻す。アフェレーシス産物を、細菌汚染の有無を確認するために現場で評価する（グラム染色試験およびＬｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂａ  Ｌｙｓｉｓ［ＬＡＬ］）。継代後、（小さな試験サンプル容器が付けられた）回収容器に、ドナー特異的な情報とともにバーコードを付け、それを、非感染性の生体物質の保管および配送のためのＦＤＡおよびＤＯＴ両方の規制に準拠する承認された配送用容器に入れる。配送用容器を、冷却要素（例えば、固体のＣＯ２、液体のＮ２）とともにパッケージ化し、温度をモニタリングする。配送用容器は硬質プラスチックフラスコである。配達人が、２４時間以内に容器をＧＭＰ製造設備へと運ぶ。
【０２１３】
実施例１２．腫瘍抗原でパルス化された樹状細胞の製造および使用
【０２１４】
単球を、他の収集した白血球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好酸球、および好塩基球）から分離する。これは、免疫磁気選別、または代替的に付着特性によって達成される。免疫磁気選別は、免疫細胞のＣＤ表面タンパク質（ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ５６など）について抗体で覆われたプラスチックビーズを含む滅菌プラスチックカラムに白血球を注ぐことを含む。
【０２１５】
免疫磁気選別の一例は、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  （Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，  Ｂ．Ｃ，  Ｃａｎａｄａ，  ｗｗｗ．ｓｔｅｍｃｅｌｌ．ｃｏｍ）から入手可能なＥａｓｙＳｅｐ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔキットである。ＥａｓｙＳｅｐキットを使用するために、アフェレーシス産物を、滅菌したＰＢＳ中に懸濁し、ヒトＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、およびグリコホリンＡに対するマウス抗体との四量体抗体の複合体を含むＥａｓｙＳｅｐプラスチックカラムに注ぐ。１０分間のインキュベーション後、ＥａｓｙＳｅｐ磁性粒子を加える。ビーズに付着する細胞を電磁石選別から除外した。磁石を反転させ、望ましい細胞画分（単球）を、追加の処理のために滅菌したポリスチレンフラスコに注ぐ。代替的に、陽性の付着選別アッセイにおいて、ＣＤ１＋／ＣＤ１４＋抗体でコーティングされた磁気ビーズを単球と混合し、磁石をカラムに置き、非結合細胞をＰＢＳ溶液でカラムから流し出す。単球を、その後、ビーズから洗い流す。陽性の付着選別において、特定の表面に付く単球の特性を使用して、傾斜させたカラムの下にアフェレーシス産物を流すことによって単球を分離する。
【０２１６】
代替的に、ＣＤ３、ＣＤ４、およびＣＤ８に対するモノクローナル抗体での蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって、リンパ球およびＭＨＣクラス陽性細胞のために骨髄細胞を枯渇させる。残りの細胞を、ヒトＡＢ血清を補足した基底細胞培地で５％のＣＯ２雰囲気下において３７°Ｃで一晩培養する。他の血清型より速い速度で細胞を成長させることからヒトＡＢ血清が選択され、無血清培地はかなり低いＴ細胞刺激能を有するＤＣを産生する。２４時間後、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、および９００Ｕ／ｍｌでの組換え型ＩＬ−４の存在下で、細胞を再播種して培養する。３〜４日後、培地を新鮮なサイトカイン培地に交換する。
【０２１７】
代替的に、真皮樹状細胞（ＤＤＣ）を、以下の方法を使用して調製する：健康なヒトのボランティアからの角膜片（Ｋｅｒａｔｏｍｅｓ）を、３７°Ｃで１時間の間、ＲＰＭＩ１６４０において１．２Ｕ／ｍｌの終末濃度の細菌プロテアーゼであるディスパーゼ（Ｄｉｓｐａｓｅ）２型の溶液中でインキュベートする。インキュベーション期間後、上皮と真皮は簡単に分離する。上皮と真皮のシートを、その後、ＰＢＳで数回洗浄した後に小片（１−１０ｍｍ）に切り、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足したＲＰＭＩ１６４０に入れ、１０ｃｍの組織培養プレートに置く。２−３日後、組織片を取り除き、培地を収集する。組織切片から培地へと遊走する細胞を遠心沈殿させて、１−２ｍｌの新鮮な培地中で再懸濁し、トリパンブルーで染色する。メトリザミド勾配での分離によってさらなる富化（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）を達成する。細胞を、高張性の１４．５％のメトリザミドの３ｍｌのカラムへ層状にして、室温において１０分間６５０ｇで沈降させる。低密度の間期細胞を集め、あまり高浸透圧性でない洗浄剤（１０％のＦＢＳと４０ｍＭのＮａＣｌを含むＲＰＭＩ１６４０）で連続して２回洗浄し、細胞を等張性に戻す。
【０２１８】
単球を集めるとき、その数は数千しかないときもある。組換え型ヒト成長因子ｒｈｕインターロイキン−４（ＩＬ−４）、およびｒｈｕ顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を、ＤＣの数を５０００万の範囲まで拡大するための複数工程のプロトコルで使用する。ＩＬ−４およびＧＭ−ＣＳＦの追加後、細胞を、成熟ＤＣマーカー：（ＣＤ１１＋、ＣＤ８０＋、ＣＤ８３＋）の数の拡大および発達について評価し、さらに、（ＣＤ８＋に対する短鎖ペプチドの提示のための）クラスＩ、および（ＣＤ４＋ヘルパーインデューサーＴリンパ球に対するより長鎖ペプチドの提示のための）クラスＩＩのＭＨＣ複合体両方の発現の増加に関しても評価する。およそ３−４日後、成熟ＤＣの数を測定する。例えば、単球に富んだ画分を、ＧＭＰ−２％のヒトＡＢ血清、５００ＩＵ／ｍｌ（約５０ｎｇ／ｍｌ）のｒｈｕＩＬ−４（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を補足した無血清ＤＣの培地（ＣｅｌｌＧｒｏ，Ｉｎｃ．）を含むＮｕｃｌｏｎでコーティングしたＣｅｌｌ  Ｆａｃｔｏｒｙ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に入れ、最初の２４時間後に、５００ＩＵ／ｍｌ（約５０ｎｇ／ｍｌ）のｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ）を加える。最終生成物は総培地量のおよそ約１Ｌである。約７２時間の培養後に、未熟ＤＣの集団を、以下のマーカー：ＣＤ１＋ＣＤ１１＋ＣＤ１４＋に関して評価する。
【０２１９】
実施例１３．樹状細胞のパルス化
【０２２０】
様々な腫瘍抗原源を以下の高品質のＤＣに使用する：ペプチド、自己腫瘍からの溶解物、腫瘍細胞全体、および特定の腫瘍抗原をコードするＲＮＡ。白血病細胞またはリンパ腫細胞を含有している切除生検または血液サンプルを、手術または採血によって得て、その後、磁気選別により白血病細胞／リンパ腫細胞を得る。腫瘍細胞は、一旦得られると、バーコードを付けられ、前にアフェレーシスに関して記載された容器に類似する承認された容器でＧＭＰ設備に送られる。サンプルは、細菌汚染試験に通った後に−７０°Ｃで凍結されてもよい。
【０２２１】
全自己腫瘍細胞溶解物を複数の方法によって調製する。溶解物を調製するために、腫瘍サンプルは、水浴または他の手順を使用して、およそ３５°Ｃに再び温められてもよい。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳシステムのような自動細胞処理装置の開発によって、サンプルを手動で刻み、ＰＢＳ溶液中で懸濁させることが可能となり、その後、あらかじめ選択された組織特異的なソフトウェアにより制御されるローターシステムが腫瘍細胞を分離する。細胞を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ解離装置（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ）に移す前に酵素混合物に加える。単細胞浮遊液は、次亜塩素酸塩溶液を使用して、腫瘍ペプチドに対する損傷を最小限に抑えて膜溶解され得、これによって、あらゆる残存する腫瘍細胞を死滅させ、ｄＴＨ２サイトカインを中和し、優れたＣＴＬ親和性、結合活性および活性化のために免疫原性を増大させる。次亜塩素酸塩を加えた後に、培養プレートを１時間摂氏３７度、５％のＣＯ２でインキュベートし、３０分で軽く手で撹拌して、次亜塩素酸塩を分散させる。細胞を２回洗浄して（例えばＨＢＳＳで）溶解反応物を中和する。次亜塩素酸塩で処理した細胞は、続く凍結融解サイクルにさらされてもよい。代替的に、サンプルは腫瘍細胞を分離しない。代わりに、サンプルを腫瘍細胞および支持細胞（例えば、腫瘍微小環境からの細胞）を含んだままにしておく。細胞を次亜塩素酸カルシウムで溶解することで、ＣＴＬ誘発に必要とされるペプチドを破壊することなく、赤血球を除去し、アポトーシス小体および壊死体を産生する。
【０２２２】
ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳからの溶解物を、未熟ＤＣの産生の３日目に加える。未熟ＤＣを、約１６時間腫瘍溶解物とともに共培養する。最終工程は炎症シグナルによる成熟である。臨床グレードＬＰＳ（６０ＥＵ／ｍｌ）（Ｒ＆Ｄ  Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）、およびインターフェロン−ガンマ（２０００ＩＵ／ｍｌ、約１００ｎｇ／ｍｌ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）をフラスコに加え、約１２時間インキュベートして、パルス化ＤＣを成熟させる。ＬＰＳへの暴露後、ＣＤ８０／ＣＤ８３＋活性化マーカーのアップレギュレーション、およびＩＬ−１２ｐ７０の産生の増加に関してＤＣを評価する。プロセスにおいて、この段階での試験には、無菌性（前に記載された通り）、生存度（トリパンブルー色素排除による％生細胞）、および特異性（ＣＤ１１ｃフローサイトメトリーにより測定された％ＤＣ）が含まれる。
【０２２３】
最終的な無菌性、特異性、および生存度の評価の後、液体Ｎ２中の−７０°Ｃでの凍結、最大１年の保管、および使用のために診療所への配送に適した、硬質プラスチック容器にＤＣを移す。この容器を冷たい状態で一晩配送し、その後、温水槽中で３７°Ｃに再び温め、その後、３０分かけて同時に０．９％のＮａＣＬ溶液での静脈内投与を行う。ＤＣを静脈内に投与する。
【０２２４】
実施例１４．癌の処置のための併用送達
【０２２５】
デングウイルスの投与は、他のウイルス性ワクチン注射の投与に類似している。被験体の肩（三角筋）領域における皮膚の領域を、アルコールで清潔にし、その後、０．５ｍｌのウイルスを皮膚下に注入して、蚊咬傷を模倣する。ＤＶ注入の２−５日後に、被験体の熱が３８．５°Ｃに達すると、リンパ内線によってパルス化（刺激された）樹状細胞と０．９％のＮａＣＬ溶液を同時に静脈路に注入する。被験体が疾患に対して陰性になるまで、注入を繰り返す。ＤＣ注入には、実施例６で製造された細胞を使用する。
【０２２６】
実施例１５：マウスモデルにおける癌の処置のためのデングウイルスと免疫チェックポイント阻害剤の併用投与
【０２２７】
１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は癌のためのマウスモデルのマウスに投与される。０日目に、マウスは、外側尾静脈へ５ｘ１０４の培養された腫瘍細胞を静脈内で受ける。７日目に、マウスは、尾の付け根に１ｘ１０６または１ｘ１０７ｐｆｕ／ｍＬのデングウイルス０．０５ｍＬを注射によって接種される。組換えマウスＩＬ−２（Ｇｅｎｚｙｍｅ）およびＩＦＮ−ガンマ（Ｓｉｇｍａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、デングウイルスと、ペンブロリズマブ、イピリムマブ（例えば、ＢＭＳ−７３４０１６、ＭＤＸ−０１０）、エノブリツズマブ（例えば、ＭＧＡ２７１）、リリルマブ（例えば、ＢＭＳ−９８６０１５、ＩＰＨ２１０２）、ＢＭＳ９８６０１６、アテゾリズマブ（例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７）、あるいはバビツキシマブの少なくとも１つの有効な量とを投与後、５日間の間隔をおいて２，０００の１Ｕ（ｒＩＬ−２）と５００の１Ｕ（ｒＩＦＮ−ガンマ）で静脈注射によって投与される。免疫チェックポイント調節剤のための例示的なアミノ酸配列は、限定されないが、表２１で提供される。２１、３５、および４９日目には、マウスＤＣをペプチドでインキュベートし、静脈内注入した。対照のマウスの２つの群が使用される。マウスの１つの群はデングウイルスも樹状細胞も受けない。対照のマウスの群はデングウイルスと樹状細胞を受けるが、免疫チェックポイント阻害剤を受けない。脳、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、および生殖腺を含む臓器の組織病理学的および生化学的な質量スペクトル分析が実施される。
【０２２８】
ペンブロリズマブ、イピリムマブ（例えば、ＢＭＳ−７３４０１６、ＭＤＸ−０１０）、エノブリツズマブ（例えばＭＧＡ２７１）、リリルマブ（例えば、ＢＭＳ−９８６０１５、ＩＰＨ２１０２）、ＢＭＳ９８６０１６、アテゾリズマブ（例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６、ＲＯ５５４１２６７）、バビツキシマブ、あるいはこれらの組み合わせのいずれかで処置されるマウスを、免疫チェックポイント阻害剤で処置されないマウスと比較する。腫瘍サイズ、移動、癌のための生化学的マーカー、および長期生存の増加について記録する。
【０２２９】
【表２１−１】
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【０２３０】
【表２１−２】
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【０２３１】
【表２１−３】
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【０２３２】
【表２１−４】
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【０２３３】
実施例１６：マウスモデルにおける癌の処置のためのデングウイルスと免疫チェックポイントを活性化する免疫調節剤の同時投与
【０２３４】
１つ以上の免疫チェックポイント活性化剤は癌のためのマウスモデルのマウスに投与される。０日目に、マウスは、外側尾静脈へ５ｘ１０４の培養された腫瘍細胞を静脈内で受ける。７日目に、マウスは、尾の付け根に１ｘ１０６または１ｘ１０７ｐｆｕ／ｍＬのデングウイルス０．０５ｍＬを注射によって接種される。組換えマウスＩＬ−２（Ｇｅｎｚｙｍｅ）およびＩＦＮ−ガンマ（シグマ・ファーマシューティカルズ）は、デングウイルスと、ウレルマブ（例えば、ＢＭＳ−６６３５１３）、バリリルマブ（例えば、ＣＤＸ−１１２７）、あるいはＴＲＸ５１８の少なくとも１つの有効な量とを投与後、５日間の間隔をおいて２，０００の１Ｕ（ｒＩＬ−２）および５００の１Ｕ（ｒＩＦＮ−ガンマ）で静脈注射によって投与される。免疫チェックポイント調節剤のための例示的なアミノ酸配列は、限定されないが、表１５で見られる。２１、３５、および４９日目には、マウスＤＣをペプチドでインキュベートし、静脈内注入した。対照のマウスの２つの群が使用される。マウスの１つの群はデングウイルスも樹状細胞も受けない。対照のマウスの別の群はデングウイルスと樹状細胞を受けるが、免疫チェックポイント調節剤は受けない。脳、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、および生殖腺を含む臓器の組織病理学的および生化学的な質量スペクトル分析が実施される。１つの例となるアッセイでは、免疫チェックポイント活性化剤は、ウレルマブ（例えば、ＢＭＳ−６６３５１３）、バリリルマブ（例えばＣＤＸ−１１２７）、ＴＲＸ５１８、あるいはこれらの組み合わせである。
【０２３５】
実施例１７：他の樹状細胞とペアになったデングウイルスとＤＣ
【０２３６】
癌患者は、患者の癌細胞で発現される抗原を含む腫瘍細胞溶解物を用いてパルス化される自己由来の樹状細胞で処置される。場合によっては、癌は転移性の黒色腫である。自己由来の樹状細胞は、標準的な産業プロトコルに従って培養され、軟質プラスチックバッグで保管される。その後の患者の血流中の癌マーカーのＣＡＴ−ＳＣＡＮまたは測定により、樹状細胞が腫瘍サイズまたは癌成長に対してほとんど効果がないか、まったく効果がないことが明らかになる。自己由来の樹状細胞は培養され、硬い表面上で培養および保管され、同じ腫瘍溶解物を用いてパルス化されたデングウイルスと樹状細胞とともに、再度投与される。
【０２３７】
実施例１８：腫瘍崩壊ウイルスとペアになったデングウイルスとＤＣ
【０２３８】
癌患者は、デングウイルスと刺激された樹状細胞とともに、腫瘍崩壊ウイルス（癌細胞を標的として溶解するウイルス）で処置される。樹状細胞は硬い表面上で培養および保管され、患者の癌細胞上で発現された抗原を含む腫瘍溶解物でパルス化される。
【０２３９】
実施例１９：ＣＴＬＡ４／ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１治療とペアになったデングウイルスとＤＣ
【０２４０】
転移性の黒色腫を抱える患者はチェックポイント阻害剤で処置される。チェックポイント阻害剤は、細胞毒性Ｔリンパ球に関連する抗原４（ＣＴＬＡ−４）のモノクローナル抗体阻害剤である、イピリムマブである。代替的に、チェックポイント阻害剤は、プログラム死１（ＰＤ−１）のモノクローナル抗体阻害剤である、ニボルマブである。患者はさらにデングウイルスと刺激された樹状細胞も受ける。樹状細胞は硬い表面上で培養および保管され、患者の癌細胞上で発現された抗原を含む腫瘍溶解物でパルス化される。チェックポイント阻害剤とペアになったデングウイルスおよび樹状細胞は患者の免疫系を刺激する。処置は、完全寛解あるいはほぼ完全な寛解を達成するためにチェックポイント阻害剤を用いて継続される。
【０２４１】
実施例２０：ＣＡＲ−Ｔ細胞とペアになったデングウイルスとＤＣ
【０２４２】
癌患者は、デングウイルスと刺激された樹状細胞に加えて、患者の癌細胞上の抗原を標的とするようにプログラムされたキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）で処置される。樹状細胞は硬い表面上で培養および保管され、患者の癌細胞上で発現された抗原を含む腫瘍溶解物でパルス化される。チェックポイント阻害剤とペアになったデングウイルスおよび樹状細胞は患者の免疫系を刺激する。
【０２４３】
実施例２１：ＩＬ−２治療とペアになったデングウイルスとＤＣ
【０２４４】
癌患者は、デングウイルスと刺激された樹状細胞に加えて、高用量のインターロイキン２（ＩＬ−２、プロロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ））で処置される。樹状細胞は硬い表面上で培養および保管され、患者の癌細胞上で発現された抗原を含む腫瘍溶解物でパルス化される。ＩＬ２とペアになったデングウイルスおよび樹状細胞は患者の免疫系を刺激する。
【０２４５】
本発明の好ましい実施形態が本明細書で示され記載されてきたが、こうした実施形態がほんの一例として提供されているに過ぎないということは当業者にとって明白である。多くの変更、変化、および置換が、本発明から逸脱することなく、当業者の心に思い浮かぶであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代案が、本発明の実施において利用されるかもしれないことを理解されたい。以下の請求項は本発明の範囲を定義するものであり、この請求項とその均等物の範囲内の方法、および構造体がそれによって包含されるものであるということが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
2020500847.tif 000046
【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【図５Ｋ】
2020500847.tif 000050
【図５Ｌ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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