(57)【要約】本発明は、患者からの尿試料が提供される工程及びＴ細胞、ポドサイト及び近位尿細管上皮細胞の濃度を測定する工程を含む、腎疾患を有する可能性、又は腎移植拒絶を受けている可能性を患者に割り当てる方法を提供する。これらの細胞型の比率は、腎疾患又は移植拒絶のリスクを測定するために使用される。【選択図】図１
2020515832.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腎疾患、特に腎移植拒絶、急性腎不全、自己免疫疾患による急性腎不全、ループス腎炎、ＡＮＣＡ関連糸球体腎炎及び糖尿病性腎疾患を含む群から選択される腎疾患を有する可能性、若しくは腎移植拒絶を受けている可能性を患者に割り当てる方法であって、
ａ．前記患者から得られる尿試料を提供する工程；
ｂ．前記尿試料中のＴ細胞の濃度、ポドサイトの濃度及び近位尿細管上皮細胞の濃度、並びに任意に遠位尿細管上皮細胞の濃度を測定する工程
を含む、前記方法。
【請求項２】
−前記Ｔ細胞は、ＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８の少なくとも１つの発現を特徴とする、
−前記ポドサイトは、ポドカリキシン、ポドシン、ネフリン及びＷＴ１の少なくとも１つの発現を特徴とする、
−前記近位尿細管上皮細胞は、ＣＤ１０の発現を特徴とする、
−前記遠位尿細管上皮細胞は、ＥＰＣＡＭの発現を特徴とする、
並びに、工程ｂは前記細胞をリガンドのセットと接触させることにより達成され、前記セットは、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ１０のいずれか、ポドカリキシン、ポドシン、ネフリン及びＷＴ１のうちの１つ、かつ任意にサイトケラチン、ＣＤ３及び／又はＥＰＣＡＭへ結合することが可能な構成要素を含み、前記構成要素のいずれかは、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ポドカリキシン、ポドシン、ネフリン、ＷＴ１、ＣＤ１０、サイトケラチン及びＥＰＣＡＭのうちの１つに特異的に結合することが可能である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｔ細胞の濃度、前記ポドサイトの濃度、前記近位尿細管上皮細胞の濃度、及び任意に前記遠位尿細管上皮細胞の濃度は、フローサイトメトリーによってそれぞれ測定される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ｃ．工程ｂで測定される前記Ｔ細胞の濃度、前記ポドサイトの濃度、前記近位尿細管上皮細胞の濃度及び前記遠位尿細管上皮細胞の濃度から、ポドサイト／Ｔ細胞の比率、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率、ポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の比率、Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の比率、及び／又はＴ細胞／遠位尿細管上皮細胞の比率を測定する工程；
ｄ．工程ｃで測定される、前記ポドサイト／Ｔ細胞の比率、前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率、前記Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の比率、及び／又は前記Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の比率を閾値と比較する工程；
ｅ．
ｉ．前記ポドサイト／Ｔ細胞の比率が、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、及び／又は
ｉｉ．前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率が、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、及び／又は
ｉｉｉ．前記ポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の比率が、ポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、及び／又は
ｉｖ．前記Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の比率が、Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、及び／又は
ｖ．前記Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の比率が、Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、
腎疾患を有する高い可能性、又は腎移植拒絶を受けている高い可能性を前記患者に割り当てる工程
をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
さらに前記Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回る事例において、腎移植拒絶を受けている高い可能性を前記患者に割り当てる、
特に、
−前記Ｔ細胞の閾値が、２０００〜５００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、特に１５００〜５５０個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、さらに特に１０００〜６００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、なおさらに特に約６００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿である；
−前記ポドサイト／Ｔ細胞の閾値が、０．０１〜０．３、特に０．０２〜０．２、さらに特に０．１〜０．２、なおさらに特に約０．２である；
−前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値が、１〜１３、特に１．５〜１０、さらに特に２〜５、なおさらに特に約３である；
−前記Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値が、約０．２である；及び／又は
−前記Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値が、約０．０２である、
請求項４に記載の方法。
【請求項６】
さらに前記Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回る事例において、腎疾患を有する高い可能性を前記患者に割り当てる、
特に、
−前記Ｔ細胞の閾値が、１５００〜２００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、特に１０００〜２５０個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、さらに特に８００〜３００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿、なおさらに特に約４００個のＴ細胞／１００ｍｌの尿である；
−前記ポドサイト／Ｔ細胞の閾値が、１０〜２、特に８〜３、さらに特に６〜４、なおさらに特に約５である；
−前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値が、０．５〜５、特に０．８〜４、さらに特に１〜３、なおさらに特に約１．５である；
−前記ポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値が、０．５〜５、特に０．８〜４、さらに特に１〜３、なおさらに特に約１．５である；
−前記Ｔ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値が、０．０５〜１．０、特に０．１〜０．８、さらに特に０．１５〜０．５、なおさらに特に約０．２である；及び／又は
−前記Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値が、０．０５〜１．０、特に０．１〜０．８、さらに特に０．１５〜０．５、なおさらに特に約０．２である、
請求項４に記載の方法。
【請求項７】
０．０２を上回る、特に０．０３を上回る、Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の比率が、ループス腎炎の指標である、請求項４又は６に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｔ細胞の濃度が、前記Ｔ細胞の閾値を上回り、かつ前記ポドサイト／Ｔ細胞の比率が前記ポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、急性細胞性移植拒絶の高い可能性を前記患者に割り当てる、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｔ細胞の濃度が、前記Ｔ細胞の閾値を上回り、かつ前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率が、前記ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、急性体液性移植拒絶の高い可能性を前記患者に割り当てる、請求項５〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
工程ｂで測定される、前記Ｔ細胞の濃度、前記ポドサイトの濃度、前記近位尿細管上皮細胞の濃度及び／又は前記遠位尿細管上皮細胞の濃度を、それぞれの所定の細胞型の閾値とそれぞれ比較し、かつ少なくとも２つの前記濃度、特に少なくとも３つの前記濃度、さらに特に少なくとも４つの前記濃度、なおさらに特に全ての前記濃度が、前記それぞれの所定の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性、又は腎移植拒絶を受けている高い可能性を前記患者に割り当てる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度を測定し、かつ前記総濃度が集団的細胞の濃度の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性又は腎移植拒絶を受けている高い可能性を前記患者に割り当てる、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記試料が、腎移植後４日目以降、特に腎移植後５日目以降に提供される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
免疫抑制療法の増加へ腎移植患者を割り当てる方法であって、
−請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法によって、前記患者において移植拒絶の可能性を測定する工程；
−移植拒絶の高い可能性が測定される場合、免疫抑制療法の増加へ前記患者を割り当てる工程；
を含み、
特に、
ａ．  急性細胞性移植拒絶の高い可能性が測定される場合、急性細胞性移植拒絶に適した療法、特に高用量コルチゾンでの治療、免疫抑制薬の用量を増加した免疫抑制療法、Ｔ細胞に対する治療用抗体での治療、抗胸腺細胞グロブリンでの治療及び抗ＴＮＦを含む他の治療用抗体での治療を含む群から選択される療法に、患者を割り当てる；
ｂ．  急性体液性移植拒絶の高い可能性が測定される場合、急性体液性移植拒絶に適した療法、特に高用量コルチゾンでの治療、血漿交換及びリツキシマブを含むＢ細胞に対する治療用抗体での治療を含む群から選択される療法に、患者を割り当てる、
前記方法。
【請求項１４】
腎生検に腎移植患者を割り当てる方法であって、
−請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法によって、前記患者において移植拒絶の可能性を測定する工程；
−移植拒絶の高い可能性が測定される場合、腎生検に前記患者を割り当てる工程、
を含む、前記方法。
【請求項１５】
腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するキットであって、
抗ポドカリキシン抗体、抗ポドシン抗体、抗ネフリン抗体及び抗ＷＴ１抗体から選択される抗体、抗ＣＤ８抗体及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１０抗体、並びに任意に、抗ＥＰＣＡＭ抗体及び／又は抗サイトケラチン抗体を含み、前記抗体は、蛍光によるフローサイトメトリーに適する、前記キット。
【請求項１６】
腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するための抗体の組み合わせの使用であって、前記抗体の組み合わせは、抗ポドカリキシン抗体、抗ポドシン抗体、抗ネフリン抗体及び抗ＷＴ１抗体から選択される抗体、抗ＣＤ８抗体及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１０抗体、並びに任意に、抗ＥＰＣＡＭ抗体及び／又は抗サイトケラチン抗体を含む、前記使用。
【請求項１７】
腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するためのシステムであって、
ａ．被検体から得られる試料における細胞集団の頻度を測定するためのデバイス、及び
ｂ．プログラムされたマイクロプロセッサであって、前記プログラムされたマイクロプロセッサは、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法を実行するように構成される、前記マイクロプロセッサ、
を含む、前記システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は尿試料におけるＴ細胞、ポドサイト（ｐｏｄｏｃｙｔｅ）、尿細管上皮細胞の濃度及びそれらの比率の解析による腎疾患及び腎移植拒絶の検出に関する。
【背景技術】
【０００２】
説明
腎疾患は現在、糸球体濾過率の評価（クレアチニンクリアランス）、血液尿関門の透過性の分析（タンパク尿）、及び尿中に存在する細胞の顕微鏡分析に基づいて主に診断されている。顕微鏡分析は、通常は染色されていない細胞の半定量的検出であり、検査官に大きく依存する。現在の非侵襲的方法は、高い感度と特異性を保証しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
腎臓移植は、末期腎不全の患者に最適な治療である。ただし、すべての移植には移植拒絶、基礎疾患の再発、又は慢性移植損傷のリスクがある。上記の方法のいずれかによって患者の移植機能の障害又は悪化が検出される場合、患者は通常、腎機能障害の基礎となる原因を明らかにするために腎生検を受ける必要がある。移植拒絶の場合、急性細胞性、急性体液性及び慢性体液性の移植拒絶に区別することができる。腎機能障害の基礎となる原因に応じて、適切な治療を決定することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
上記の最新技術に基づいて、本発明の目的は、腎疾患を有する、又は移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するための非侵襲的な方法を提供する。この目的は、本明細書の請求項によって達成される。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】図１はドットプロットにおける細胞型の定量のためのゲーティング戦略を示す。（Ａ）リンパ球ゲート、（Ｂ）ＤＡＰＩ−ＣＤ３＋ゲート、（Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞ゲート及びＣＤ８＋Ｔ細胞ゲート（Ｄ）サイトケラチン＋ゲート、（Ｅ）ＥＰＣＡＭ＋尿細管上皮細胞ゲート及びＣＤ１０＋尿細管上皮細胞ゲード、（Ｆ）ポドサイトゲート。Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦのデータは対数目盛（値の範囲は１００〜１０５）で表されるが、ＡのＦＳＣ軸は線形（値の範囲は５００００〜２５００００）である。
【図２】図２は、腎移植患者から得られた尿試料における、Ｔ細胞の濃度（ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞）（Ａ）、ポドサイト対Ｔ細胞の比率（Ｂ）及びポドサイト対ＣＤ１０＋近位尿細管上皮細胞の比率（Ｃ）を示す。急性細胞性拒絶の群、急性体液性拒絶の群、慢性体液性拒絶の群及び拒絶なしの群は、腎生検により測定された。対照群は、移植後に安定した腎機能を有する患者である。
【図３ＡＢＣ】図３は、直近の移植後、腎移植患者から得られた尿試料における、ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度（Ａ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度（Ｂ）、ポドサイトの濃度（Ｃ）、遠位尿細管上皮細胞の濃度（Ｄ）及び近位尿細管上皮細胞の濃度（Ｅ）を示す。Ｘ軸は腎移植された日を０日として、手術後の日数を示す。
【図３ＤＥ】図３は、直近の移植後、腎移植患者から得られた尿試料における、ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度（Ａ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度（Ｂ）、ポドサイトの濃度（Ｃ）、遠位尿細管上皮細胞の濃度（Ｄ）及び近位尿細管上皮細胞の濃度（Ｅ）を示す。Ｘ軸は腎移植された日を０日として、手術後の日数を示す。
【図４】図４は、活動性腎炎を伴う、又は伴わないＳＬＥ患者の尿における、１００ｍＬの尿当たりのＴ細胞数、並びにポドサイト、Ｔ細胞、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞（ＴＥＣ）の比率を示す；有意性は、ｐ＜０．０５の場合＊、及びｐ＜０．０１の場合＊＊であり、スチューデントＴ検定で与えられる。
【図５】図５は、活動性腎炎を伴う、又は伴わないＡＮＣＡ血管炎患者の尿における、１００ｍＬの尿当たりのＴ細胞数、並びにポドサイト、Ｔ細胞、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞（ＴＥＣ）の比率を示す；有意性は、ｐ＜０．０５の場合＊、及びｐ＜０．０１の場合＊＊であり、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）検定で与えられる。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
用語と定義
本明細書の文脈における「急性拒絶」という用語は、手術後、早ければ５日で開始し得る拒絶の一形態に関する。該リスクは、移植後の最初の数ヵ月間で最も高いが、しかし急性拒絶は数年後にも発生することがある。
【０００７】
本明細書の文脈における「急性細胞性拒絶」という用語は、移植片に侵入するＴ細胞によって主に媒介される急性拒絶の一形態に関する。
【０００８】
本明細書の文脈における「急性体液性拒絶」という用語は、移植片と交差反応する抗体により主に媒介される急性拒絶の一形態に関する。
【０００９】
本明細書の文脈における「慢性拒絶」という用語は、急性拒絶より遅く発症する拒絶の一形態に関する。慢性拒絶は、急性拒絶の再発性の治療エピソードから発症することがある。慢性拒絶は治療に適しにくいと一般的に考えられている。
【００１０】
本明細書の文脈における「慢性体液性拒絶」という用語は、移植片と交差反応する抗体によって媒介される慢性拒絶の一形態に関する。
【００１１】
本明細書の文脈における「健康な被検体」という用語は、腎疾患と診断されていないヒトに関する。
【００１２】
本明細書の文脈における「高用量コルチゾン」という用語は、体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇの一日当たりの成人コルチゾン用量、又は代替グルココルチコイドのそれぞれに対応する用量に関する。
【００１３】
本明細書の文脈における「免疫療法の増加」という用語は、通常、高用量コルチゾン及び免疫細胞除去抗体（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）又はサイトカイン阻害抗体からなる、付加的な免疫抑制療法の投与に関する。
【００１４】
本明細書の文脈における「分子に特異的に結合するリガンド」という用語は、抗体及び抗体様分子に関する。
【００１５】
本明細書の文脈における「抗体様分子」という用語は、他の分子又は標的に高親和性／Ｋｄ≦１０Ｅ−８ｍｏｌ／Ｌで特異的に結合することができる分子を指す。抗体の特異的な結合と同様に、抗体様分子はその標的に結合する。抗体様分子という用語は、設計されたアンキリンリピートタンパク質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、チューリッヒ）などのリピートタンパク質、アルマジロリピートタンパク質に由来するポリペプチド、ロイシンリッチリピートタンパク質に由来するポリペプチド、及びテトラトリコペプチドリピートタンパク質に由来するポリペプチドを包含する。
【００１６】
「抗体様分子」という用語は、蛋白質Ａドメインに由来するポリペプチド、フィブロネクチンドメインＦＮ３に由来するポリペプチド、コンセンサスフィブロネクチンドメインに由来するポリペプチド、リポカリンに由来するポリペプチド、ジンクフィンガーに由来するポリペプチド、Ｓｒｃホモロジードメイン２（ＳＨ２）に由来するポリペプチド、Ｓｒｃホモロジードメイン３（ＳＨ３）に由来するポリペプチド、ＰＤＺドメインに由来するポリペプチド、ガンマ−クリスタリンに由来するポリペプチド、ユビキチンに由来するポリペプチド、システインノットポリペプチドに由来するポリペプチド、ノッチン、核酸アプタマー及びペプチドアプタマーに由来するポリペプチドを、さらに包含する。
【００１７】
本明細書の文脈における「特異的に結合する」という用語は、ある分子が他の分子に解離定数Ｋｄ≦１０Ｅ−８ｍｏｌ／Ｌで結合することに関する。
【００１８】
本明細書において「陽性」という用語は、マーカーの発現という文脈で使用される場合、蛍光ラベル抗体によりアッセイされる抗原の発現を指し、同じ標的に特異的に結合しないアイソタイプが一致する抗体を用いて染色することとの比較における蛍光強度の中央値では、蛍光が少なくとも３０％高い（≧３０％）、特に≧５０％又は≧８０％である。そのようなマーカー発現は、マーカーの名前に続いて上付の文字「プラス」（＋）、例えばＣＤ４＋により示される。
【００１９】
本明細書では、「陰性」という用語は、マーカーの発現という文脈で使用される場合、蛍光ラベル抗体によりアッセイされる抗原の発現を指し、蛍光強度の中央値が、同じ標的に特異的に結合しないアイソタイプが一致する抗体の蛍光強度の中央値より、３０％未満、特に１５％未満である。そのようなマーカー発現は、マーカーの名前に続いて上付の文字「プラス」（−）、例えばＣＤ１２７−により示される。
【００２０】
発明の概要
本発明の第１の態様によれば、腎疾患を有する、又は腎臓移植の拒絶を受けている可能性を有する患者を割り当てる方法が提供される。この方法は、
ａ．患者の尿試料を提供する工程；
ｂ．尿試料中のＴ細胞の濃度、ポドサイトの濃度及び近位尿細管上皮細胞の濃度、並びに任意に遠位尿細管上皮細胞の濃度の測定する工程
を含む。
【００２１】
当業者であれば、工程ａの後及び工程ｂの前に、細胞を尿試料から分離することを理解する。
【００２２】
特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３及びＣＤ４の発現を特徴とする。特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３及びＣＤ８の発現を特徴とする。特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８の発現を特徴とする。特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３の発現を特徴とする。特定の実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ４及びＣＤ８の発現を特徴とする。
【００２３】
特定の実施形態では、ポドサイトはポドカリキシンの発現を特徴とする。特定の実施形態では、ポドサイトはポドシンの発現を特徴とする。特定の実施形態では、ポドサイトはネフリンの発現を特徴とする。特定の実施形態では、ポドサイトはＷＴ１の発現を特徴とする（ウィルムス腫瘍タンパク質１（Ｗｉｌｍｓ−Ｔｕｍｏｒ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  １）。
【００２４】
特定の実施形態では、近位尿細管上皮細胞は、ＣＤ１０の発現を特徴とする。特定の実施形態では、近位尿細管上皮細胞は、ＣＤ１０及びサイトケラチンの発現を特徴とする。特定の実施形態では、遠位尿細管上皮細胞は、ＥＰＣＡＭの発現を特徴とする。特定の実施形態では、遠位尿細管上皮細胞は、ＥＰＣＡＭ及びサイトケラチンの発現を特徴とする。
【００２５】
工程ｂは、尿試料から分離される細胞を検出可能なリガンドのセットと接触させることにより行われる。該セットはＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０のいずれか、ポドカリキシン、ポドシン、ネフリン及びＷＴ１の少なくとも１つ、並びに任意にサイトケラチン、ＣＤ３及び／又はＥＰＣＡＭに結合可能な構成要素を含む。いずれかの前記構成要素はＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ポドカリキシン、ポドシン、ネフリン、ＷＴ１、ＣＤ１０、サイトケラチン及びＥＰＣＡＭのうち１つに特異的に結合することができる。
【００２６】
本明細書の文脈において、ＣＤ４はＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ  ０１７３０を有するヒトタンパク質を指す。
【００２７】
本明細書の文脈において、ＣＤ８はＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ  ０１７３２を有するヒトタンパク質を指す。
【００２８】
本明細書の文脈において、ポドシンはＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｑ９ＮＰ８５を有するヒトタンパク質を指す。
【００２９】
本明細書の文脈において、ＷＴ１はＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｐ１９５４４を有するヒトタンパク質を指す。
【００３０】
本明細書の文脈において、ネフリンはＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｏ６０５００を有するヒトタンパク質を指す。
【００３１】
本明細書の文脈において、ポドカリキシンはＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ  Ｏ００５９２を有するヒトタンパク質を指す。
【００３２】
特定の実施形態では、リガンドは抗体である。
【００３３】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、ポドサイトの濃度、近位尿細管上皮細胞の濃度、及び任意に遠位尿細管上皮細胞の濃度は、それぞれフローサイトメトリーによって測定される。
【００３４】
特定の実施形態では、腎疾患は、（腎）移植拒絶、急性腎不全、自己免疫疾患による急性腎不全、ループス腎炎、ＡＮＣＡ関連糸球体腎炎及び糖尿病性腎疾患を含む群から選択される。
【００３５】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶である。
【００３６】
特定の実施形態では、腎疾患は急性細胞性移植拒絶である。
【００３７】
特定の実施形態では、腎疾患は急性体液性移植拒絶である。
【００３８】
特定の実施形態では、腎疾患は慢性体液性移植拒絶である。
【００３９】
特定の実施形態では、腎疾患は急性細胞性移植拒絶又は急性体液性移植拒絶である。
【００４０】
特定の実施形態では、患者は尿試料の回収の前に腎機能障害の兆候を示した。特定の実施形態では、患者は蛋白尿又はクレアチニンクリアランスの減少／クレアチニンのレベルの増加を示した。
【００４１】
特定の実施形態では、患者は尿試料の回収の前に、移植機能障害の兆候を示した。特定の実施形態では、患者は蛋白尿又はクレアチニンクリアランスの減少／クレアチニンのレベルの増加を示した。
【００４２】
腎（又は腎移植）の機能障害の兆候が見られる患者は腎機能障害の基礎となる原因の解明のために腎生検に割り当てられることが多い。本発明の方法は不必要な腎生検の数を減らすことを可能にし、かつ腎生検を受ける必要がある患者の早期識別を容易にする。
【００４３】
特定の実施形態では、該方法は
ｃ．工程ｂで測定される細胞の濃度から、ポドサイト／Ｔ細胞の比率とポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率を測定する工程；
ｄ．工程ｃで測定されるポドサイト／Ｔ細胞の比率及びポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率を各閾値と比較する工程；
ｅ．ｉ．ポドサイト／Ｔ細胞の比率が、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、若しくは
ｉｉ．ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率が、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている高い可能性を患者に割り当てる工程
をさらに含む。
【００４４】
特定の実施形態では、該方法は
ｃ．工程ｂで測定される細胞の濃度から、ポドサイト／Ｔ細胞の比率及びポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率を測定する工程；
ｄ．工程ｂで測定されるＴ細胞の濃度及び工程ｃで測定されるポドサイト／Ｔ細胞の比率及びポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率をそれぞれの閾値と比較する工程；
ｅ．ｉ．Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／Ｔ細胞の比率がポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、又は
ｉｉ．Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率がポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、
移植拒絶の高い可能性を患者に割り当てる工程
を含む。
【００４５】
特定の実施形態では、該方法は
ｃ．工程ｂで測定される細胞の濃度から、ポドサイト／Ｔ細胞の比率及びポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率を測定する工程；
ｄ．工程ｂで測定されるＴ細胞の濃度及び工程ｃで測定されるポドサイト／Ｔ細胞の比率及びポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率をそれぞれの閾値と比較する工程；
ｅ．  ｉ．Ｔ細胞の濃度が第１のＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／Ｔ細胞の比率がポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、又は
ｉｉ．Ｔ細胞の濃度が第２のＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率がポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合（ここで、第１のＴ細胞の閾値は第２のＴ細胞の閾値よりも高い）、
移植拒絶の高い可能性を患者に割り当てる工程
を含む。
【００４６】
特定の実施形態では、上記の項（ｉ）のパラメータは、急性細胞性拒絶の指標である。
【００４７】
特定の実施形態では、上記の項（ｉｉ）のパラメータは、急性体液性拒絶の指標である。
【００４８】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度を上回る。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも１０倍高い。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも５０倍高い。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも１００倍高い。
【００４９】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも２倍高い。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも３倍高い。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも５倍高い。
【００５０】
当業者は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均的な濃度又は比率を参照して閾値を測定する事例を知っており、これは、患者からの試料が得られる時点から一致する時点で測定される平均濃度又は比率に関する。
【００５１】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、２０００〜５００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、１５００〜５５０のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、１０００〜６００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、約６００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。
【００５２】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞の閾値は、１５００〜２００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞の閾値は、１０００〜２５０のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞の閾値は、８００〜３００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞の閾値は、約４００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。
【００５３】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、２０００〜５００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、１５００〜５５０のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、１０００〜６００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、約６００のＴ細胞／１００ｍｌの尿である。
【００５４】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／Ｔ細胞の比率を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／Ｔ細胞の比率より５倍以上（≦）を上回らない。
【００５５】
特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．０１〜０．３である。特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．０２〜０．２である。特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．１〜０．２である。特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、約０．１である。特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、約０．２である。
【００５６】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．０１〜０．３である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．０２〜０．２である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、０．１〜０．２である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、約０．１である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、約０．２である。
【００５７】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、１０〜２である。特定の実施形態では、ＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、８〜３である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、６〜４である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／Ｔ細胞の閾値は、約５である。
【００５８】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率より少なくとも２倍高い。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率より少なくとも３倍高い。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率より少なくとも５倍高い。
【００５９】
特定の実施形態では、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、１〜１３である。特定の実施形態では、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、１．５〜１０である。特定の実施形態では、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、２〜５である。特定の実施形態では、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、約３である。
【００６０】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、１〜１３である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、１．５〜１０である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、２〜５である。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、約３である。
【００６１】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、０．５〜５である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、０．８〜４である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、１〜３である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値は、約１．５である。
【００６２】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、０．５〜５である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、０．８〜４である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、１〜３である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつポドサイト／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、約１．５である。
【００６３】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値は、０．０５〜１．０である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値は、０．１〜０．８である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値は、０．１５〜０．５である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／近位尿細管上皮細胞の閾値は、約０．２である。
【００６４】
特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、０．０５〜１．０である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、０．１〜０．８である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、０．１５〜０．５である。特定の実施形態では、腎疾患はＡＮＣＡ関連腎炎であり、かつＴ細胞／遠位尿細管上皮細胞の閾値は、約０．２である。
【００６５】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／Ｔ細胞の比率がポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、急性細胞性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００６６】
特定の実施形態では、Ｔ細胞濃度が、Ｔ細胞の濃度がＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率がポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、急性体液性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００６７】
特定の実施形態では、ポドサイト／Ｔ細胞の比率がポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、急性細胞性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００６８】
特定の実施形態では、ポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率がポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、急性体液性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００６９】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度が第１のＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／Ｔ細胞の比率がポドサイト／Ｔ細胞の閾値を下回る場合、急性細胞性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度が第２のＴ細胞の閾値を上回り、かつポドサイト／近位尿細管上皮細胞の比率がポドサイト／近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合は、急性体液性移植拒絶の高い可能性が、患者に割り当てられる。第１のＴ細胞及び第２のＴ細胞の閾値が使用される事例では、第１のＴ細胞の閾値は、第２のＴ細胞の閾値より高い。
【００７０】
特定の実施形態では、Ｔ細胞／遠位尿細管上皮細胞の比率は、０．０２を上回り、特に０．０３を上回ると、ループス腎炎であることを示す。
【００７１】
患者にもたらされる治療のために、移植拒絶の様々な形態の間の差異は重要である。急性細胞性移植拒絶に適している治療は、高用量コルチゾン、免疫抑制薬の用量を増加する免疫抑制療法、Ｔ細胞に対する治療用抗体、抗胸腺細胞グロブリン、サイモグロブリン、アトガム（Ａｔｇａｍ）（登録商標）及び抗ＴＮＦを含む他の治療用抗体を含む。急性体液性移植拒絶に適している治療は、高用量コルチゾン、血漿交換、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）を含むＢ細胞に対する治療用抗体を含む。
【００７２】
特定の実施形態では、工程ｂで測定される、Ｔ細胞の濃度、ポドサイトの濃度、近位尿細管上皮細胞の濃度及び／又は遠位尿細管上皮細胞の濃度の濃度を、それぞれの所定の細胞型の閾値と比較し、そして、少なくとも２つの濃度、特に少なくとも３つの濃度、さらに特に少なくとも４つの濃度、なおさらに特に前記全ての濃度が、前記それぞれの所定の閾値を上回る場合、腎疾患を有する又は腎移植拒絶を受けている高い可能性が、患者に割り当てられる。特定の実施形態では、総ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞濃度の代わりに、ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度及びＣＤ８＋Ｔ細胞濃度を測定し、かつ所定のＣＤ４＋Ｔ細胞の閾値又は所定のＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値とそれぞれ比較する。
【００７３】
特定の実施形態では、少なくとも２つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。特定の実施形態では、少なくとも３つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が患者に割り当てられる。特定の実施形態では、少なくとも４つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が患者に割り当てられる。特定の実施形態では、全ての濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が患者に割り当てられる。
【００７４】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００７５】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、かつ近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が患者に割り当てられる。
【００７６】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００７７】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、かつポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００７８】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００７９】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度がポドサイトの閾値を上回り、かつ近位尿細管上皮細胞の濃度が近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００８０】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度がポドサイトの閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が、患者に割り当てられる。
【００８１】
特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度が集団的細胞の濃度の閾値を上回る場合、腎疾患を有する高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８２】
特定の実施形態では、少なくとも２つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。特定の実施形態では、少なくとも３つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。特定の実施形態では、少なくとも４つの濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。特定の実施形態では、全ての濃度がそれぞれの細胞型の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８３】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８４】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、かつ近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８５】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８６】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の濃度、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度が、それぞれの細胞型の閾値（それぞれのＴ細胞の閾値又はＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値）を上回り、かつポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８７】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度が、ポドサイトの閾値を上回り、近位尿細管上皮細胞の濃度が、近位尿細管上皮細胞の閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が、遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８８】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度がポドサイトの閾値を上回り、かつ近位尿細管上皮細胞の濃度が近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００８９】
特定の実施形態では、ポドサイトの濃度がポドサイトの閾値を上回り、かつ遠位尿細管上皮細胞の濃度が遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【００９０】
特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度が測定され、かつ総濃度が集団的細胞の濃度の閾値を上回る場合、腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている高い可能性が患者に割り当てられる。
【００９１】
特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度を上回る。特定の実施形態では、Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも１００倍高い。
【００９２】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＴ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均Ｔ細胞濃度より少なくとも３倍高い。
【００９３】
特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度を上回る。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度より少なくとも５０倍高い。
【００９４】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＣＤ４＋Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＣＤ４＋Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度より少なくとも３倍高い。
【００９５】
特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度を上回る。特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値は、健康な被験体の平均ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度より少なくとも５０倍高い。
【００９６】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ＣＤ８＋Ｔ細胞濃度を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつＣＤ８＋Ｔ細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ＣＤ８＋Ｔ細胞の濃度より少なくとも３倍高い。
【００９７】
特定の実施形態では、ポドサイトの閾値は、健康な被験体の平均ポドサイトの濃度を上回る。特定の実施形態では、ポドサイトの閾値は、健康な被験体の平均ポドサイトの濃度より少なくとも５倍高い。
【００９８】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイトの閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイトの濃度を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつポドサイトの閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均ポドサイトの濃度より少なくとも５倍高い。
【００９９】
特定の実施形態では、近位尿細管上皮細胞の閾値は、健康な被験体の平均近位尿細管上皮細胞の濃度を上回る。特定の実施形態では、近位尿細管上皮細胞の閾値は、健康な被験体の平均近位尿細管上皮細胞の濃度より少なくとも５倍高い。
【０１００】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつ近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均近位尿細管上皮細胞の閾値を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつ近位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均近位尿細管上皮細胞の濃度より少なくとも５倍高い。
【０１０１】
特定の実施形態では、遠位尿細管上皮細胞の閾値は、健康な被験体の平均遠位尿細管上皮細胞の濃度を上回る。特定の実施形態では、遠位尿細管上皮細胞の閾値は、健康な被験体の平均遠位尿細管上皮細胞の濃度より少なくとも５倍高い。
【０１０２】
特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつ遠位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均遠位尿細管上皮細胞の閾値を上回る。特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶であり、かつ遠位尿細管上皮細胞の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者の平均遠位尿細管上皮細胞の濃度より少なくとも５倍高い。
【０１０３】
特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、健康な被検体における、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の平均総濃度を上回る。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、健康な被検体における、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の平均総濃度より少なくとも５倍高い。
【０１０４】
特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者における、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の平均総濃度を上回る。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、腎移植後に合併症を示さない患者における、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の平均総濃度より少なくとも５倍高い。
【０１０５】
特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、２０．０００〜２００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、２２．０００〜１００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、２３．０００〜５０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、２４．０００〜３０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、集合的細胞の濃度の閾値は、約４５．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。
【０１０６】
特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ集合的細胞の濃度の閾値は、２０．０００〜２００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ集合的細胞の濃度の閾値は、２２．０００〜１００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ集合的細胞の濃度の閾値は、２３．０００〜５０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ集合的細胞の濃度の閾値は、２４．０００〜３０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ集合的細胞の濃度の閾値は、約４５．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。
【０１０７】
特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ移植後５日目における集合的細胞の濃度の閾値は、２０．０００〜２００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ移植後５日目における集合的細胞の濃度の閾値は、２２．０００〜１００．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ移植後５日目における集合的細胞の濃度の閾値は、２３．０００〜５０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ移植後５日目における集合的細胞の濃度の閾値は、２４．０００〜３０．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。特定の実施形態では、疾患は移植拒絶であり、かつ移植後５日目における集合的細胞の濃度の閾値は、約４５．０００の細胞／１００ｍｌの尿である。
【０１０８】
本発明の方法は、移植拒絶の高い可能性を有する患者の識別を可能にする。本発明の方法に記載の移植拒絶の高い可能性を示す患者は、特別な検査に割り当てられる必要がある。この検査から示される結果によって、各閾値を上回る細胞濃度を示す患者は、腎生検に割り当てられる必要がある。本発明の方法は不必要な腎生検の数を減らすことを可能にし、かつ腎生検を受ける必要がある患者の早期識別を容易にする。
【０１０９】
特定の実施形態では、移植の後４日目以降に試料が提供される。特定の実施形態では、移植の後５日目以降に試料が提供される。特定の実施形態では、移植の後５日目〜数年間目に試料が提供される。特定の実施形態では、移植の後５日目〜１０日目に試料が提供される。特定の実施形態では、移植の後５日目〜７日目に試料が提供される。特定の実施形態では、移植の後５日目に試料が提供される。
【０１１０】
特定の実施形態では、２つ（又はそれ以上）の試料が提供され、
−第１の試料は移植後５日目以前に提供され、かつ第２の試料は移植後５日目以降に提供され、並びに
−ｉ．第１の試料において少なくとも２つの前記濃度、特に少なくとも３つの前記濃度、さらに特に少なくとも４つの前記濃度、なおさらに特に全ての前記濃度が、第１の各細胞型の閾値を下回り、かつ
ｉｉ．第２の試料において少なくとも２つの前記濃度、特に少なくとも３つの前記濃度、さらに特に少なくとも４つの前記濃度、なおさらに特に全ての前記濃度が、第２の各細胞型の閾値を上回る場合、
移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【０１１１】
特定の実施形態では、５つの関連する細胞型のサブセット（ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞、遠位尿細管上皮細胞）のみ比較される事例において、同じ細胞型は、第１の試料及び第２の試料において比較される。
【０１１２】
特定の実施形態では、第１の試料においてＴ細胞の濃度、特にＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度が所定のＴ細胞の閾値を下回り、かつ第２の試料において、少なくとも２つの前記濃度、特に少なくとも３つの前記濃度、さらに特に少なくとも４つの前記濃度、なおさらに特に全ての前記濃度が各細胞型の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【０１１３】
特定の実施形態では、第１の試料においてＴ細胞の濃度、特にＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度が所定のＴ細胞の閾値を下回り、かつ第２の試料において、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度が集合的細胞の濃度の閾値を上回る場合、移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【０１１４】
特定の実施形態では、２つ（又はそれ以上）の試料が提供され、
−第１の試料は移植後５日目以前に提供され、かつ第２の試料は移植後５日目以降に提供され、並びに
−ｉ．第１の試料において、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度が集合的細胞の濃度の閾値を上回り、かつ
ｉｉ．第２の試料において、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ポドサイト、近位尿細管上皮細胞及び遠位尿細管上皮細胞の総濃度が集合的細胞の濃度の閾値を上回る場合、
移植拒絶の高い可能性が患者に割り当てられる。
【０１１５】
あるいは、本発明の第１の態様は、移植拒絶を現在受けている可能性を腎臓移植患者に割り当てる方法として記載することができる。
【０１１６】
あるいは、本発明の第１の態様は、移植拒絶のリスクにある可能性を腎臓移植患者に割り当てる方法として記載することができる。この本発明の第１の態様の代替的記述において、尿試料は移植後の拒絶の可能性を予測するために、手術前に採取されてもよい。
【０１１７】
本発明の第２の態様によれば、免疫抑制療法の増加へ腎臓移植患者を割り当てるための方法が提供される。該方法は、
−上記の請求項のいずれか一項に記載の方法によって、前記患者において移植拒絶の可能性を測定する工程；
−移植拒絶の高い可能性が測定される場合、免疫抑制療法の増加へ前記患者を割り当てる工程
を含む。
【０１１８】
本発明のこの態様の特定の実施形態では、本発明の第１の態様の各実施形態により、急性細胞性移植拒絶の高い可能性が患者へ割り当てられる場合、患者は急性細胞性移植拒絶に適切な治療へ割り当てられる。本発明のこの態様の特定の実施形態では、患者は、高用量コルチゾンでの治療、免疫抑制薬の用量を増加した免疫抑制療法、Ｔ細胞に対する治療抗体での治療、抗胸腺細胞グロブリンでの治療及び抗ＴＮＦを含む他の治療用抗体での治療を含む群から選択される療法に割り当てられる。
【０１１９】
本発明のこの態様の特定の実施形態では、本発明の第１の態様の各実施形態により、急性体液性移植拒絶の高い可能性が患者へ割り当てられた場合、患者は急性体液性移植拒絶に適切な治療へ割り当てられる。本発明のこの態様の特定の実施形態では、患者は、高用量コルチゾンでの治療、血漿交換及びリツキシマブを含むＢ細胞に対する治療用抗体による治療を含む群から選択される療法に割り当てられる。
【０１２０】
本発明の別の態様によれば、腎臓移植患者を腎生検に割り当てる方法が提供される。該方法は、
−上記の請求項のいずれか一項に記載の方法によって、前記患者において移植拒絶の可能性を測定する工程、
−移植拒絶の高い可能性が測定される場合、前記患者を腎生検に割り当てる工程
を含む。
【０１２１】
本発明の別の態様によれば、腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するためのパーツのキットが提供される。言い換えれば、腎疾患又は移植拒絶を診断するためのキットが提供される。このキットは、抗ポドカリキシン抗体、抗ポドシン抗体、抗ネフリン抗体及び抗ＷＴ１抗体から選択される抗体、抗ＣＤ８抗体及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１０抗体、及び任意に、抗ＥＰＣＡＭ抗体及び／又は抗サイトケラチン抗体を含む。該抗体は蛍光によるフローサイトメトリーに適している。
【０１２２】
本発明のこの態様の特定の実施形態では、キットは抗ＣＤ８抗体及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ポドカリキシン抗体及び抗ＣＤ１０抗体を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態では、キットは抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ポドカリキシン抗体及び抗ＣＤ１０抗体を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態では、キットは抗ＣＤ８及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ポドカリキシン抗体、抗ＣＤ１０抗体及び抗ＥＰＣＡＭ及び／又は抗サイトケラチン抗体を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態では、キットは抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ポドカリキシン抗体、抗ＣＤ１０抗体及び抗ＥＰＣＡＭ及び／又は抗サイトケラチン抗体を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態では、キットは抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ポドカリキシン抗体、抗ＣＤ１０抗体、抗ＥＰＣＡＭ及び抗サイトケラチン抗体を含む。
【０１２３】
本発明のさらに別の態様によれば、腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するための抗体の組み合わせの使用が提供される。抗体の組み合わせは、抗ポドカリキシン抗体、抗ポドシン抗体、抗ネフリン抗体及び抗ＷＴ１抗体から選択される抗体、抗ＣＤ８抗体及び／又は抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１０抗体、及び任意に、抗ＥＰＣＡＭ抗体及び／又は抗サイトケラチン抗体を含む。
【０１２４】
本発明のさらに別の態様によれば、腎疾患を有する、又は腎移植拒絶を受けている患者の可能性を測定するためのシステムが提供される。システムは、被験体から得られる試料中の細胞集団の頻度を測定するためのデバイス及びプログラムされたマイクロプロセッサを含む。プログラムされたマイクロプロセッサは、上記の請求項のいずれか一項に記載の方法を実行するように構成される。
【０１２５】
本発明のいずれかの態様の特定の実施形態では、腎疾患は移植拒絶である。本発明のいずれかの態様の特定の実施形態では、腎疾患は急性細胞性拒絶又は急性体液性拒絶である。本発明のいずれかの態様の特定の実施形態では、腎疾患は急性細胞性拒絶である。本発明のいずれかの態様の特定の実施形態では、腎疾患は急性体液性拒絶である。
【０１２６】
本発明は、以下の実施例及び図によってさらに説明され、そこからさらなる実施形態及び利点を引き出すことができる。これらの実施例は、本発明を説明することを意図しているが、その範囲を限定することは意図していない。
【実施例】
【０１２７】
１．方法
試料の回収
腎移植患を受けた患者からの尿試料をカテーテルにより、又は自身で回収した。試料は、回収の６時間以内に分析するために、滅菌ビーカー内に保持し調整した。
【０１２８】
細胞の分離
試料を５０ｍｌチューブに分注し、４℃、１３００ｇで８分間遠心分離した。上清を捨て、沈殿物を再懸濁し、そしてＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液に混合し、試料につき４０ｍｌを得た。非固定細胞（Ｔ細胞）の分析は、試料の回収日に実施した。固定細胞の分析は、試料の回収から７日以内に実施した。
【０１２９】
固定細胞：細胞内マーカーを染色するために、１０ｍｌの分離された細胞を１５ｍｌのチューブに移し、４℃、１３００ｇで８分間遠心分離した。上清を捨て、そして沈殿物をＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液に再懸濁した。溶液を１．５ｍｌのチューブに移し、４℃、２３００ｇで８分間遠心分離した。上清を捨てた。沈殿物を１００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液及び１００μｌの４％ＰＦＡに再懸濁し、室温で１５分間インキュベートした。次に、１ｍｌのＰＢＳを加え、そして試料を４℃、２３００ｇで８分間遠心分離した。上清を捨て、そして沈殿物を２０μｌのＰＢＳＡ−ＢＳＡ−酸性溶液に再懸濁し一晩保存するか、又は細胞内染色のため穿孔に供するかした。
【０１３０】
非固定細胞：残りの３０ｍｌの分離細胞を１５ｍｌのサッカロース−エピクロルヒドリン−コポリマー（ｓａｃｃｈａｒｏｓｅ−ｅｐｉｃｈｌｏｒｈｙｄｒｉｎ−ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）にゆっくりとピペッティングし、遠心分離（２０℃、２０００ｇで２０分間）により単核細胞を分離した。単核細胞は白い細胞層として見ることができ、そしてピペットを使用して１５ｍｌチューブに移すことができる。次に、細胞を４℃、１３００ｇで８分間遠心分離した。沈殿物を１８００μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液に再懸濁し、２つの１．５ｍｌチューブに分注し、４℃、１３００ｇで８分間遠心分離した。次に細胞に染色を施した。
【０１３１】
染色
次の細胞外マーカーを使用した：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＥＰＣＡＭ及びポドカリキシン。Ｔ細胞を識別するためにＣＤ３、ＣＤ４及びＣＤ８を使用した。上皮細胞を識別するために、固定細胞の細胞内サイトケラチン染色を使用した。近位尿細管上皮細胞を識別するためにサイトケラチン及びＣＤ１０を使用した。遠位尿細管上皮細胞を識別するために、サイトケラチン及びＥＰＣＡＭを使用した。ポドサイトを識別するために、ポドカリキシンを使用した。ポドカリキシンはシアロ糖タンパク質であり、かつポドサイトのグリコカリックス（タンパク質又は脂質に結合した細胞外炭水化物）の主成分である。非固定細胞内の生細胞と死細胞を区別するために、４‘，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を使用した。フローサイトメトリーの前に、それを直ちに試料に加えた。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＥＰＣＡＭ、ポドカリキシン及びサイトケラチンに対する抗体は、蛍光色素Ｖｉｏ  Ｇｒｅｅｎ、ＦＩＴＣ、ＰＥ、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−Ｖｉｏ７７０、Ｃｙ５及びＡＰＣ−Ｖｉｏ７７０へ対にして結合された。色素の発光スペクトルを明確に区別することができ、マーカーの分離が可能となる。ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒ１０フローサイトメーターの３つのレーザーによって、すべての色素を励起できる。
【０１３２】
染色する前に、すべての試料を９０μｌのＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液（細胞外染色）又は９０μｌのサポニン（細胞内染色）及び１０μｌのフレボガンマに再懸濁した。フレボガンマは、非特異的なＦｃ受容体を阻害する。続いて抗体を加えた。試料を４℃で１５分間、暗所でインキュベートした。試料を１ｍｌのＰＢＳ／ＢＳＡ緩衝液（細胞外染色）又はサポニン（細胞内染色）を使用して洗浄し、そして４℃、２３００ｇで８分遠心分離した。沈殿物は１８０μｌ（パネル１）又は１２０μｌ（パネル２及び３）に再懸濁した。パネル２及び３における抗体で染色された試料は、フローサイトメトリーの前に「セルストレーナ  ７０μｍ  ナイロン」（コーニング社）を使用して濾過した。表１は、本実験で使用した抗体を一覧にする。
【０１３３】
【表１】
2020515832.tif 000003
【０１３４】
フローサイトメトリー
試料をフローサイトメトリーにより分析し定量した。ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０  フローサイトメーターを使用した。図１は、試料のフローサイトメトリー分析の典型的な例を示す。
【０１３５】
２．患者コホート
腎移植患者の縦断コホート及び横断コホートを分析した。
【０１３６】
横断コホート
横断コホートは、腎機能障害（クレアチニンレベル及び／又はタンパク尿の増加）の兆候を示した後に移植物の生検を受けた１９人の患者で構成される。生検の結果に応じて、患者は、急性細胞性拒絶の群、急性体液性拒絶の群、慢性液性拒絶の群又は拒絶なしの群に割り当てられた。群は、腎移植後の時間に関して不均一（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ）である。生検の３日以内に患者を分析した。除外基準は、免疫抑制療法の増加と肉眼的血尿であった。対照群は、腎生検を受けていない安定した移植機能を有する９人の患者で構成される。表２は、横断コホートにおける患者の特性を一覧にする。年齢は中央値として与えられる；年齢の範囲を括弧内に示す。
【０１３７】
【表２】
2020515832.tif 000004
【０１３８】
縦断コホート
縦断コホートは、腎移植直後の２３人の患者で構成される。患者を「合併症あり」と「合併症なし」の群に分けた。「合併症あり」の群は、移植片機能の遅延、拒絶及び外科的合併症を含むいくつかの合併症を含む。表３は、縦断コホートにおける患者の特性を一覧にする。年齢は中央値として与えられる；年齢の範囲を括弧内に示す。
【０１３９】
【表３Ａ】
2020515832.tif 000005
ＳＬＥコホート
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者のコホートを分析した。活動性増殖性腎炎を有する、又は有さない患者を比較した。
【表３Ｂ】
2020515832.tif 000006
【０１４０】
ＡＮＣＡコホート
ＡＮＣＡ血管炎と診断された患者のコホートを分析した。活動性増殖性腎炎を有する、又は有さない患者を比較した。
【０１４１】
【表４】
2020515832.tif 000007
ＧＰＡ＝多発血管炎を伴う肉芽腫症、ＧＮ＝糸球体腎炎、ＭＰＡ＝顕微鏡的多発血管炎
【０１４２】
３．結果
横断コホート
Ｔ細胞の濃度（図２Ａ）、ポドサイトとＴ細胞の比率（図２Ｂ）、及びポドサイトと近位尿細管上皮細胞の比率（図２Ｃ）のパラメータの組み合わせにより、異なる群へ患者をマッピングすることが可能となった。ポドサイトとＴ細胞の比率は、急性細胞性拒絶を受けている患者の識別を可能にした。ポドサイトとＴ細胞の比率及びＴ細胞の濃度の組み合わせは、１００％の感度及び１００％の特異性を有する急性細胞性拒絶を受けている患者の識別を可能にした。ポドサイトと近位尿細管上皮細胞の比率は急性体液性拒絶を受けている患者の識別を可能にした。ポドサイトと近位尿細管上皮細胞の比率及びＴ細胞の濃度の組み合わせは、１００％の感度及び９６，２％の特異性を有する急性体液性拒絶を受けている患者の識別を可能にした。
【０１４３】
縦断コホート
最初は、より多くの免疫系及び上皮細胞が、「合併症なし」の群の試料において検出された。時間とともに、関係が変化し、より多くのＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞、マクロファージ、ポドサイト、近位及び遠位尿細管上皮細胞が、「合併症あり」の群の試料において検出された（すべてｐ＜０．０５）。
【図１】
2020515832.tif 000008
【図２】
2020515832.tif 000009
【図３ＡＢＣ】
2020515832.tif 000010
【図３ＤＥ】
2020515832.tif 000011
【図４】
2020515832.tif 000012
【図５】
2020515832.tif 000013
【国際調査報告】
2020515832.tif 000014
2020515832.tif 000015