(57)【要約】  ｉｎ  ｖｉｖｏで病原微生物に対して共に働く抗体と他の治療剤との組合せ。組合せは、抗体と抗生物質及び／又は疾患に対する治療剤とを含み得る。組合せは、いずれかの成分単独よりも高い効率、相乗効果、又は抗体若しくは治療剤のいずれか単独の投与では存在しない１つ以上の作用様式によって調節される効果を伴って病原微生物を攻撃することができる。【選択図】          図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドと、
カルバペネム、ポリミキシン、ペニシリン、カルボキシペニシリン、ウレイドペニシリン、フルオロキノロン、セファロスポリン、モノバクタム及びアミノグリコシドからなる群から選択される抗生物質と、
を含む組成物であって、
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せがいずれか単独よりも大きな殺菌効果をもたらす、組成物。
【請求項２】
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せが相加的な殺菌効果をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せが相加的な殺菌効果よりも大きな相乗効果をもたらす、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せが相加効果と同じか又は相加効果よりも小さい効果をもたらすが、全体的効果が抗体と抗生物質との間の１つ以上の相互作用によって増強され、該増強が前記抗体又は抗生物質のいずれか単独では存在しない作用様式によって引き起こされる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリペプチドが配列番号５及び配列番号７、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記抗生物質がトブラマイシン、メロペネム、シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、及びアズトレオナムからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物を投与する方法であって、該投与が吸入、静脈注射又は腹腔内注射による溶液中のポリペプチド及び抗生物質の組合せの投与を含む、方法。
【請求項７】
肺炎、血流感染、角膜炎、皮膚感染、軟部組織感染、及び髄膜炎からなる群から選択される感染症の治療又は予防の方法である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
シュードモナス種の成長を妨げる方法であって、
緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドを準備することと、
カルバペネム、ポリミキシン、ペニシリン、カルボキシペニシリン、ウレイドペニシリン、モノバクタム、フルオロキノロン、セファロスポリン及びアミノグリコシドからなる群から選択される抗生物質を準備することと、
体液の存在下で前記シュードモナス種と前記ポリペプチド及び抗生物質とを接触させることと、
を含み、前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せがいずれか単独よりも大きな殺菌効果をもたらす、方法。
【請求項９】
前記ポリペプチドが配列番号５及び配列番号７、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記体液が血漿、呼吸器系粘液、滑液、脳脊髄液及び胃腸粘液からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
肺炎、血流感染、角膜炎、皮膚感染、軟部組織感染、及び髄膜炎からなる群から選択される感染症の治療又は予防の方法である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗生物質が、トブラマイシン、メロペネム、シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、及びアズトレオナムからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドと、
グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質と、
を含む組成物。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが配列番号５及び配列番号７、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記静菌性抗生物質が、マクロライド、ミノサイクリン、アミカシン、シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、メロペネム、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンからなる群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリペプチドが全固形物乾燥重量で少なくとも１％の濃度で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
緑膿菌感染を予防又は治療する方法であって、感染を有するか又は感染を起こすリスクがある被験体に、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドを、グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質と組み合わせて投与することを含む、方法。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが配列番号５及び配列番号７、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗生物質が、マクロライド、ミノサイクリン、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、メロペネム、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与が吸入、静脈注射又は腹腔内注射による溶液中のポリペプチド及び抗生物質の組合せの投与を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記組合せの用量が患者体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）〜８０ｍｇ／ｋｇのポリペプチドを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記感染が嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、気管支拡張症、肺炎及び敗血症からなる群から選択される病気にかかっている患者における感染である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリペプチドが補体の非存在下で緑膿菌を死滅させるように構成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せが相加効果よりも小さい効果をもたらすように適合されるが、全体的効果が抗体と抗生物質との間の１つ以上の相互作用によって増強され、該増強が前記抗体又は抗生物質のいずれか単独では存在しない作用様式によって引き起こされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドを含む組成物であって、該ポリペプチドがヒト補体の存在なしにムコイド型緑膿菌株を死滅させるように構成される、組成物。
【請求項２６】
前記ムコイド株が２１９２、Ｍ５８１、２１９２、ＦＲＤＩ、２４１０、２７８５３、ＰＧＯ２３３８及び３２４からなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質を更に含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２８】
緑膿菌の２１９２、Ｍ５８１、２１９２、ＦＲＤＩ、２４１０、２７８５３、ＰＧＯ２３３８又は３２４株による感染を有するか又は感染を起こすリスクがある被験体を治療する方法であって、かかる治療を必要とする被験体に、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合し、補体の存在なしに緑膿菌株を死滅させるように構成される単離ポリペプチドを投与することを含む、方法。
【請求項２９】
グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質を投与することを更に含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗生物質が、マクロライド、ミノサイクリン、アミカシン、シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、メロペネム、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記投与が吸入、静脈注射又は腹腔内注射による溶液中のポリペプチド及び抗生物質の組合せの投与を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記ポリペプチド及び抗生物質の組合せが相加効果よりも小さい効果をもたらすように適合されるが、全体的効果が抗体と抗生物質との間の１つ以上の相互作用によって増強され、該増強が前記抗体又は抗生物質のいずれか単独では存在しない作用様式によって引き起こされる、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、微生物に（例えば、緑膿菌のムコイドエキソ多糖類で）結合するヒトモノクローナル抗体を含む親和性ポリペプチドを抗生物質と組み合わせて用いた、微生物感染（緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）感染等）及び関連障害（例えば、嚢胞性線維症）の予防及び治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
病原微生物は、多くの疾患状態において最終的に死亡を引き起こす原因であることが多い。抗生物質に対する耐性は、特にシュードモナス種において着実に増加している。抗体は代替手段であるが、二次液性免疫応答及び細胞応答が成熟してからかなり後であっても慢性細菌感染を阻止することができないことが示されている。
【０００３】
例えば、緑膿菌は、様々な重度の急性感染及び慢性感染を引き起こす重要な院内病原体である。緑膿菌による感染は、免疫不全の患者、及び肺炎、菌血症等の重症感染を有する個体、熱傷患者、及び嚢胞性線維症（ＣＦ）を有する個体にとって重大な健康問題である。実際に、この微生物の遍在的存在を考えると、ほとんどの健康な免疫系は、かかる感染を制御する能力が十分にあるようである。しかしながら、感染しやすい個体、特にＨＩＶ感染の影響を受ける個体、移植臓器のレシピエント、細胞毒性薬の常用者、又は局部的な食作用を妨げる血管損傷を有する熱傷患者は、この病原体に起因する感染を起こすことが多い。呼吸器の排除機構の障害が、緑膿菌の定着及び感染を起こしやすい病態である気管支拡張症を有する患者において見られる。気道の慢性感染は、ＣＦを有する個体の罹患率及び死亡率の上昇の主な原因である。緑膿菌感染の有病率は、ＣＦセンター間で大きく異なる。
【０００４】
様々な物理的条件で生き延びることができる緑膿菌は、医療機器によって決定され、病院環境に関連する感染に関与し得る。この微生物は、特に現在の抗生物質備蓄に耐性を示す。実際に、緑膿菌は潜在的多剤耐性（ＭＤＲ）を示し、更なる耐性機構を獲得する驚異的な能力を有する。近年、広範な超多剤耐性緑膿菌クローンが報告されている。さらに、慢性感染中に、この生物が時としてムコイド表現型及び／又はバイオフィルム様の成長様式を身に付け、宿主の免疫及び抗生物質の攻撃からの防御を生じる可能性がある。
【０００５】
緑膿菌は皮膚、耳、肺及び腸に定着することが可能な日和見菌である。健常個体では、かかる定着は、通常は問題を生じない。しかしながら、個体が個体の免疫を損なう基礎障害又は病態も有している場合、感染が重症となる場合がある。かかる障害又は病態の例としては、化学療法による免疫抑制、糖尿病、癌、ＡＩＤＳ及び嚢胞性線維症が挙げられる。嚢胞性線維症を有する患者の７０％超が緑膿菌に感染することが推定されている。これらの患者では、緑膿菌感染は慢性閉塞性気管支炎を伴う。
【０００６】
緑膿菌による定着は、上皮組織（例えば、肺上皮）への細菌の付着によって始まる。緑膿菌のムコイド株は、感染中に細菌により用いられるムコイドエキソ多糖類（すなわち、ＭＥＰ又はアルギネート）を産生する。ＭＥＰは、ウロン酸の重合体である。
【０００７】
この細菌は、二重膜層のために抗生物質療法に比較的耐性がある場合があり、抗体及び補体媒介経路を含む自然免疫機構及び適応免疫機構を回避することが多い。ＭＥＰは、微生物の免疫耐性の要因であると考えられている。
【０００８】
DiGiandomenico et al（非特許文献１）は、哺乳動物細胞への緑膿菌の付着、並びに非ムコイド型及びムコイド型緑膿菌分離株によって産生されるバイオフィルムの形成及び維持に重要な緑膿菌エキソ多糖類ＰｓＩの３つの異なるエピトープに結合するＭＡｂを特定した。２０１４年に、この著者らは、潜在的治療及び／又は予防戦略としての緑膿菌に対する多機能二重特異性抗体の開発を報告している。この二重特異性抗体構築物は、ＰｓＩ及びＰｃｒＶの両方を標的とする。
【０００９】
Secher et alは、メロペネム感受性及びメロペネム耐性緑膿菌による肺炎と組み合わせた、シクロフォスファミドによって誘導される好中球減少症の臨床的に関連するマウスモデルにおける抗緑膿菌血清型Ｏ１１リポ多糖モノクローナル抗体であるパノバクマブ（Panobacumab）の有効性を調査した。パノバクマブは、肺炎症を顕著に低減し、好中球減少宿主の肺からの細菌排除を増強した。パノバクマブ及びメロペネムの更なる組合せは、相加効果を有し、パノバクマブは、メロペネム耐性緑膿菌株に対する活性を保持した（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】J. Exp. Med. 2012 Vol. 209 No. 7
【非特許文献２】Secher T et al., PLoS ONE 8(9): e73396. doi:10.1371/journal.pone.0073396
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上記の点を考慮すると、病原微生物、特に保護莢膜を呈する病原微生物を攻撃するための、より治療的な選択肢が必要とされている。代替的な治療用組成物、例えば微生物の防御の変化に応答して種々の作用様式を示す代替的な治療用組成物を有することが望ましい。本発明は、以下を検討することで明らかとなる、これら及び他の特徴を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の組成物は、例えば組み合わせて標的細菌を死滅させる、親和性ポリペプチドと治療剤とを含み得る。組成物は、緑膿菌等のグラム陰性細菌に外部標的（例えば、ムコイドエキソ多糖類）で選択的に結合する単離ポリペプチドと、細菌に対して幾らかの阻害効果を有する抗生物質とを含み得る。
【００１３】
組成物は例えば、単離ポリペプチド及び抗生物質から選択される少なくとも２つの化合物の定性的及び定量的な組合せであり得るが、化合物は、必ずしも同じ配合物中であるわけではなく、併用して投与してもよい。
【００１４】
組合せ組成物は、いずれかの要素単独よりも大きなｉｎ  ｖｉｖｏ殺菌効果をもたらすことができる。多くの場合、特定の組合せが増強された殺菌効果、又は相加的な殺菌効果よりも大きな相乗効果をもたらす。特定の実施の形態では、組成物は、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドと、グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性又は殺菌性抗生物質とを含み得る。
【００１５】
本発明の方法は、例えば細菌に感染した体液への本発明の組成物の投与を含み得る。例えば、組成物は、ポリペプチド及び抗生物質の粉末又は溶液として吸入、静脈注射、腹腔内注射等（and／or the like）により投与することができる。かかる方法は、例えば肺炎、血流感染、角膜炎、皮膚感染、軟部組織感染、髄膜炎等の感染に対する治療又は予防法を提供することができる。
【００１６】
本発明の組成物は、例えば、抗生物質、別の抗体、及び／又は感染患者の局所環境若しくは病状（disease state conditions）に影響を与える治療剤等の別の治療剤と組み合わせて、病原微生物に対する抗体（例えば、標的結合ポリペプチド）を含み得る。
【００１７】
特定の場合では、組成物は、緑膿菌ムコイドエキソ多糖に選択的に結合する単離ポリペプチドを含み得るが、ポリペプチドは、ヒト補体の存在なしにムコイド型緑膿菌株を死滅させるように構成される。例えば、ムコイド株は株２１９２、Ｍ５８１、２１９２、ＦＲＤＩ、ＰＡ０１、ＰＡ１０１、ＰＡ２４１０、ＰＡ２７８５３、ＰＡ  ＰＧＯ２３３８及び３２４から選択される。通常、組成物は、グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質を更に含む。
【００１８】
ポリペプチドは、例えば抗体の重鎖及び／又は軽鎖を含む親和性分子であり得る。特定の例では、ポリペプチドは、配列番号５の重鎖及び／又は配列番号７の軽鎖、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。ポリペプチドは、組成物中に約０．０１％未満〜７０％超、０．０５％〜５０％、０．１％〜２０％、０．１％〜５％の範囲の重量パーセントで存在するか、又は全固形物乾燥重量で少なくとも０．１％の濃度で存在し得る。ポリペプチドは多くの場合、補体の非存在下であっても緑膿菌を死滅させることができる。
【００１９】
組合せの第２の成員は、抗生物質であり得る。例えば、抗生物質は、グラム陽性又はグラム陰性標的細菌に対して静菌性又は殺菌性であり得る。通常、細菌がグラム陰性であるとき、抗生物質はカルバペネム、ポリミキシン、カルボキシペニシリン、フルオロキノロン、アミノグリコシド等から選択されることが好ましい場合がある。多くの場合、抗生物質はマクロライド、ミノサイクリン、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、テトラサイクリン等である。任意に、抗生物質は静菌性であり、例えばマクロライド、ミノサイクリン、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、テトラサイクリン等からなる群から選択される。例えば、抗体との組合せのための幅広い抗生物質ファミリーの中でも、好ましい抗生物質としてシプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、トブラマイシン、メロペネム、アズトレオナム等が挙げられ得る。
【００２０】
病原微生物の成長を妨げる方法は、病原体を対象とする親和性ポリペプチドの組成物、及び病原体に対して少なくとも幾らかの阻害効果を有する抗生物質を準備することを含み得る。ポリペプチド及び抗生物質の組合せを、例えば体液中の病原体と接触するように投与する。例えば、シュードモナス種は、シュードモナスムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドを準備し、カルバペネム、ポリミキシン、カルボキシペニシリン、フルオロキノロン及びアミノグリコシドからなる群から選択される抗生物質を準備し、体液の存在下でシュードモナス種とポリペプチド及び抗生物質とを接触させることによって阻害するか又は死滅させることができる。ポリペプチド及び抗生物質の組合せは、増強された効果、相加効果、又はいずれか単独よりも大きな殺菌効果をもたらすことができる。
【００２１】
本発明の多くの組成物又は方法では、ポリペプチド及び抗生物質の組合せは、抗体又は抗生物質のいずれか単独では存在しない作用様式によって引き起こされる増強をもたらす。効果が相加効果よりも小さい場合であっても、全体的効果を、緑膿菌に対する抗体と抗生物質との間の１つ以上の相互作用によって増強することができる。増強された効果は、組合せでのみ存在する抗体と抗生物質との間の作用様式を反映する相互作用の結果であり得る。例えば、特定の抗生物質は、抗体が緑膿菌の補体沈着及び免疫細胞媒介性食作用を駆動するのを可能にするのに十分に細菌増殖を予防し得る。
【００２２】
緑膿菌感染を予防又は治療する方法は、感染を有するか又は感染を起こすリスクがある被験体に、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合する単離ポリペプチドを、グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質と組み合わせて投与することを含むことができる。
【００２３】
ＰＡ０１、ＰＡ１０１、２１９２、Ｍ５８１、２１９２、ＦＲＤＩ、ＰＡ２４１０、ＰＡ２７８５３、ＰａＰＧＯ２３３８又は３２４等の株を含む緑膿菌による感染を有するか又は感染を起こすリスクがある被験体を治療する方法は、かかる治療を必要とする被験体に、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類に選択的に結合し、補体の存在なしに緑膿菌株を死滅させるように構成される単離ポリペプチドを投与することを含み得る。多くの場合、グラム陰性細菌に対して効果的な静菌性抗生物質は、ポリペプチドと同時投与される。投与は、例えば静脈内、皮下若しくは筋肉内に溶液で、又は吸入若しくはジェット式注射器若しくはマイクロニードルパッチを用いた皮内投与のいずれかにより粉末で、ポリペプチド及び抗生物質の組合せを投与するものであり得る。
【００２４】
化合物の成分と病原体との相互作用のための体液は、例えば血漿、呼吸器系粘液、滑液、脳脊髄液、胃腸粘液等であり得る。
【００２５】
方法により、例えば肺炎、血流感染、角膜炎、皮膚感染、軟部組織感染及び髄膜炎等の感染を治療又は予防することができる。感染は嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、気管支拡張症、肺炎及び敗血症等の病気にかかっている患者に影響を及ぼし得る。ポリペプチド及び抗生物質の組合せは、粉末又は溶液中で、例えば吸入、静脈注射又は腹腔内注射により投与することができる。組合せの用量は、例えば患者体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）未満のペプチド〜８０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ又は約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【００２６】
前記ポリペプチドが配列番号５及び配列番号７、又は配列番号５若しくは配列番号７に対して少なくとも８５％、９０％若しくは９５％の同一性を有する変異体からなる群から選択されるアミノ酸配列を有することができる。
【００２７】
本発明の方法は、シュードモナス感染患者への抗ＭＥＰ抗体Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）（Ｆ４２９又はａｅｒｕｂｕｍａｂとも呼ばれる）とメロペネム、コリスチン、トブラマイシン、シプロフロキサシン（正：ciprofloxacin）、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム及び他の抗生物質のいずれかとの組成物の投与を含み得る。組成物中の組合せは、（例えば、体液中での）感染の治療又はシュードモナスの阻害において、Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）又は第２の成分単独よりも大きな利益を有し得る（例えば、下記実施例１及び３を参照されたい）。組合せは、相加効果又は相乗効果を有し得る。抗体及び第２の成分は、互いに相互作用するか、又はいずれかの成分を単独で投与する場合に存在しない作用様式に従って、緑膿菌細菌に対して、及び／又は患者の局所環境と協調して作用することができる。
【００２８】
定義
本発明を詳細に説明する前に、本発明が特定のデバイス又は生物系に限定されず、これらが当然ながら異なり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される専門用語が、単に特定の実施の形態を説明することを目的とし、限定を意図しないことを理解されたい。本明細書で使用される場合、文脈上他に明らかに指示されない限り、数量を特定していない単数形（the singular forms "a", "an" and "the"）は、複数の指示対象を含む。このため、例えば、「表面（a surface）」への言及は、２つ以上の表面の組合せを含む場合があり、「細菌（bacteria）」への言及は、細菌の混合物を含む場合がある等となる。
【００２９】
他に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の任意の方法及び材料を本開示に基づいて過度の実験なしに実施することができるが、好ましい材料及び方法を本明細書に記載する。本発明の説明及び特許請求に際しては、以下の専門用語が下記の定義に従って使用される。
【００３０】
範囲を含む数字表示、例えば温度、時間、量、濃度等の前に用いられる「約」という用語は、＋又は−１０％、５％又は１％変動し得る近似値を示す。
【００３１】
「含む」（"Comprising" or "comprises"）は、組成物及び方法が列挙された要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味することを意図したものである。「から本質的になる（Consisting essentially of）」は、組成物及び方法の定義に使用される場合、所定の目的のための組合せに対して任意の本質的な意義を有する他の要素を除外することを意味するものとする。このため、本明細書で規定される要素から本質的になる組成物は、特許請求される発明の基本的な及び新規の特性（複数の場合もある）に実質的に影響を及ぼさない他の材料又は工程を除外しない。
【００３２】
「からなる」は、他の成分の微量より多い要素及び実質的な方法工程を除外することを意味するものとする。これらの移行句の各々によって規定される実施の形態は、本発明の範囲内である。
【００３３】
「薬学的に許容可能な組成物」は、ヒトへの投与に適切な組成物を指す。かかる組成物は、様々な添加剤、希釈剤、担体、及び当業者に既知のかかる他の不活性な作用物質を含む。
【００３４】
「治療有効量」又は「治療量」は、病態を患っている患者に投与した場合に、患者において意図される治療効果、例えば病態の１つ以上の症状の軽減、改善、緩和又は解消を有する薬物又は作用物質の量を指す。治療有効量は、治療される患者及び病態、被験体の体重及び年齢、病態の重症度、選ばれる活性薬物部分の塩、溶媒和物又は誘導体、選ばれる特定の組成物又は添加剤、従うべき投与計画、投与時期、投与方法等によって異なり、これらは全て、当業者によって容易に決定され得る。最大限の治療効果は、必ずしも１回の用量の投与によって生じるわけではなく、一連の用量の投与後にのみ生じる場合もある。このため、治療有効量は、１回以上の投与で投与することができる。
【００３５】
「治療」、「治療する」（"treating," and "treat"）は、作用物質により疾患、障害又は病態に影響を与え、疾患、障害若しくは病態、及び／又はその症状の有害な又は任意の他の望ましくない影響を低減又は改善することと定義される。「治療」は、本明細書で使用される場合、患者の治療を包含し、（ａ）病態にかかりやすいことが決定されたが、未だ病態を有すると診断されていない患者における病態の発症リスクを低減すること、（ｂ）病態の進行を妨げること、及び／又は（ｃ）病態を緩和すること、すなわち病態の退行を引き起こし、及び／又は病態の１つ以上の症状を緩和することを含む。病態若しくは患者を「治療すること」又はその「治療」は、症状の軽減等の臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るために手段を講じることを指す。本発明の目的上、有益な又は所望の臨床結果としては、微生物（例えば、緑膿菌）感染のリスクがある患者の感染の予防、又は例えば１つ以上の症状を軽減し、感染期間を短縮することによる微生物感染の重症度の軽減等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、哺乳動物を指す。好ましい実施の形態では、患者はヒトである。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「株」又は「シュードモナス株」という用語は、任意の緑膿菌株を指し、臨床分離株、変異体、突然変異体等を含むが、これらに限定されない。株は、抗生物質に耐性を示すか又は抗生物質感受性であり得る。株は、ムコイド表現型又は非ムコイド表現型であり得る。概して、株は、ムコイド表現型、又は１つ以上の遺伝子突然変異（かかる突然変異が異なる特性を細菌に与えなくても）により、区別可能である。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「抗体構築物」という用語は、抗体の少なくとも一部分が、関心の抗原に曝露された（例えば、ヒト）患者の抗体に由来する抗体を指す。抗体構築物は抗体、フラグメント又は部分が、例えば標的微生物抗原に対して記載の親和性を有する限りにおいて抗体全体、又はそのフラグメント若しくは部分であり得る。抗体構築物は、以前に自然界に存在していない重鎖及び軽鎖の組合せを含む場合がある。抗体構築物は完全ヒト、ヒト化又はキメラであってもよい。抗体構築物は単一の患者、複数の患者に由来するアミノ酸配列、及び／又は既知の抗体配列（例えば、コンセンサス定常領域配列）を含み得る。
【００３９】
本明細書で使用される場合、「抗体フラグメント」という用語は、エピトープを認識する抗体の任意の部分を指す。抗体フラグメントは、グリコシル化されていてもよい。非限定的な例としては、抗体フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｒＩｇＧフラグメント、機能的抗体フラグメント、上記の一本鎖組換え形態等であり得る。Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦｖは、ＩｇＧ及びＩｇＭの可変領域から生成することができる抗原結合フラグメントである。これらは大きさ、結合価及びＦｃ含量の点で異なる。フラグメントは、細胞若しくは細胞株、又は複数の細胞若しくは細胞株による構成要素（例えば、重鎖部分及び軽鎖部分）の発現を含む任意の方法によって生成することができる。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「完全ヒト抗体」という用語は、完全にヒトアミノ酸配列からなる抗体、抗体構築物又は抗体フラグメントを指す。すなわち、ヒトモノクローナル抗体構築物のアミノ酸配列は、１つ以上のヒト細胞に由来する。かかる抗体は、様々な方法で得ることができる。例えば、ヒトアミノ酸配列からなるヒトモノクローナル抗体構築物は、ヒト患者（例えば、緑膿菌ＭＥＰで免疫化された患者）に由来する抗体の可変領域重鎖及び軽鎖、及び／又はＣＤＲを発現するように操作された細胞から得ることができる。代替的には、ヒトモノクローナル抗体構築物は、例えばＢ細胞がヒトＢ細胞である１つ以上のハイブリドーマから得ることができる。代替的には、ヒトモノクローナル抗体構築物は、利用可能なヒトモノクローナル抗体へのＣＤＲ領域のＣＤＲ移植（CDR grafting）により、ヒトモノクローナル抗体を作製することによって得ることができる。ヒトモノクローナル抗体構築物の完全ヒトアミノ酸配列は、急速な排除、拒絶反応又はアナフィラキシーショック等の望ましくない有害作用の発生を防ぐ。
【００４１】
核酸に関して本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、（ｉ）例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで増幅された、（ｉｉ）クローニングにより組換えで作製された、（ｉｉｉ）切断及びゲル分離のように精製された、又は（ｉｖ）例えば化学合成によって合成されたことを意味する。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「単離ポリペプチド」という用語は、ポリペプチドが、それらの意図される用途に実際的及び適切な程度まで実質的に純粋であり、それらが自然界又はｉｎ  ｖｉｖｏ系において共に見られ得る他の物質を本質的に含まないことを意味する。特に、ポリペプチドは、例えば医薬調製物の製造又はシークエンシングに有用となるよう、十分に純粋であり、それらの宿主細胞の他の生物学的構成要素を十分に含まない。本発明の単離ポリペプチドは、医薬調製物中で薬学的に許容可能な担体と混ぜられ得ることから、ポリペプチドが調製物の数重量パーセントしか占めない場合もある。それにもかかわらず、ポリペプチドは、それが生物系において伴い得る物質から実質的に分離されているという点で実質的に純粋である。単離ポリペプチドは、例えば緑膿菌等のグラム陰性細菌の外部標的等に対して特異親和性を有する、例えば完全ヒトモノクローナル抗体又は抗体フラグメントである。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「相乗効果」は、最終結果が別個にされた組合せの各部分の総和により得られる効果よりも大きい、組合せでの効果を指す。「補完性」又は「増強」は例えば、いずれかの要素単独よりも大きい効果をもたらす２つの要素の組合せを指す。
【００４４】
抗生物質、抗体及び他の治療剤は、当該技術分野で認められる作用様式又は作用機構を有する。本明細書で使用される場合、「作用様式」は、治療剤が所望の結果をもたらす機構を指す。一次的な作用様式は、治療剤が、例えば患者において単独で働く作用様式である。これらは、例えば抗体によるオプソニン化又は抗生物質によるペプチド翻訳の阻害として当該技術分野で一般に認められている。ここでの二次的な作用様式は、例えば治療剤間の相互作用によって生じる、及び／又は治療剤の組合せの存在に起因する患者（例えば、局所投与環境）における変化を伴う、一次的な作用様式以外の作用様式を指す。
【００４５】
「菌血症」又は「敗血症」は、血流中の生細菌の存在を指す。通例、菌血症又は敗血症では、細菌を患者の血液サンプルから培養し得るように十分数が存在する。
【００４６】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、軽鎖及び重鎖可変領域によって確立される４つの「フレームワーク」領域に割り込んでいる、各抗体の重鎖又は軽鎖の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは主に、抗原のエピトープへの結合に関与している。各鎖のＣＤＲは通例、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称され（Ｎ末端から順に番号付けされる）、通例、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別される。このため、例えば、ＶＨ  ＣＤＲ３は、それが見られる抗体の重鎖の可変ドメインに位置し、ＶＬ  ＣＤＲ１は、それが見られる抗体の軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ１である。
【００４７】
補体系は、自然免疫系の一部である。「補体」は、微生物及び損傷細胞を生物から排除し、炎症を促進し、病原体の細胞膜を攻撃する抗体及び食細胞の能力を増強する（補完する）免疫系の一部である。補体系は、概して肝臓によって合成され、通常は不活性前駆体（前駆タンパク質）として循環する、血液中に見られる多数の低分子タンパク質からなる。幾つかの誘因の１つによって刺激されると、系内のプロテアーゼが特定のタンパク質を切断して、サイトカインを放出し、更なる切断の増幅カスケードを開始する。これらは、血清のグロブリン画分の約１０％を占め、オプソニンとして働くことができる。
【００４８】
静菌性という用語は、本明細書で使用される場合、標的細菌の成長を停止させる抗生物質を指す。静菌性抗生物質は通例、標的細菌の成長及び増殖を阻害する。例えば、静菌性抗生物質は、細菌リボソームを標的とすることでタンパク質の翻訳を阻止し、成長を停止させることができる。静菌性抗生物質としては、例えばスルホンアミド、マクロライド、エタンブトール、リネゾリド、テトラサイクリン、リンコサミド、スルファメトキサゾール、クロラムフェニコール、フシジン酸、トリメトプリム、クリンダマイシン、エリスロマイシン、これらの抗生物質を含む抗生物質ファミリーの他の成員等を挙げることができる。或る特定の実施の形態では、最小阻止濃度（ＭＩＣ）で用いられる殺菌性抗生物質は、本明細書に記載される抗体の組合せとの関連で静菌性抗生物質としても機能することができる。好ましい実施の形態では、本発明の抗体／抗生物質の組合せは、静菌性の及び／又はＭＩＣレベルのトブラマイシン、メロペネム、シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム（正：cefepime）、アズトレオナム等を含み得る。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】全ての群について接種の１８時間後に測定した肺におけるＣＦＵの個別数、群平均及び標準偏差を示す図である。トブラマイシン及びＡｅｒｕｃｉｎの同時投与は、肺における細菌濃度を単独で投与した薬物と比較してより効率的に低減した。これにより、この緑膿菌ＰＡＯ１肺炎のマウスモデルにおけるトブラマイシン及びＡｅｒｕｃｉｎの相加効果が示される。
【図２】全ての群について接種の１８時間後に測定した肺におけるＣＦＵの個別数、群平均及び標準偏差を示す図である。メロペネム及びＡｅｒｕｃｉｎの同時投与は、肺における細菌濃度を有意に低減した。これにより、この緑膿菌ＰＡＯ１肺炎のマウスモデルにおけるメロペネム及びＡｅｒｕｃｉｎの相乗効果が示される。
【図３】ＯＰＡアッセイを用いた補体の非存在下での緑膿菌細菌のＡｅｒｕｃｉｎによって媒介される死滅の証拠を示す図である。オプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）では、抗体の効力を、好中球によるそれらの特定の標的の破壊を開始及び媒介する能力に基づいて測定する。アッセイはヤギ、ウサギ、モルモット又はヒトの血清に由来する精製補体、及び全血から単離されるか又は親細胞株の分化による好中球を用いる。様々な濃度の関心の抗体を、対照と共に抗原と混合する。次いで、補体血清及び好中球を或る特定の比率で添加する。次いで、食作用を生じさせるためのインキュベーション後に、残存抗原の画分を、（細菌を）寒天プレート上にプレーティングし、アッセイ反応の開始時に使用した力価から残存する細菌コロニーを計数することによって定量化する。
【図４】種々の抗生物質と組み合わせたＡｅｒｕｃｉｎの効果を示す図である。Ａｅｒｕｃｉｎ及び５つの抗生物質をｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ（ＯＰＡ）において試験した。３回の独立実験の平均の結果を与える。エラーバーは標準偏差を表す。データは、多様な抗生物質にわたる組合せの相加的及び／又は相乗的な効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明は概して、緑膿菌による感染の治療のための、例えばモノクローナル抗体を静菌性及び／又は殺菌性抗生物質と組み合わせて投与する補助療法に関する。本明細書に提供される同じ又は別個の溶液及び方法で投与される組成物の或る特定の実施形態では、単離親和性ポリペプチドは、別の治療剤と同時投与される。治療剤は、例えば緑膿菌を標的とする抗生物質又は抗体等の予防的又は治療的に使用される治療剤であり得る。抗生物質と共に投与される場合、単離ポリペプチドは、例えば緑膿菌コロニーへの抗生物質の侵入を容易にすることによって抗生物質の殺細胞効果を増強することができる。このことは、特にペプチドがオプソニン食作用を増強する抗体又は抗体フラグメントである場合に当てはまる。代替的には、組み合わせられる治療剤は、例えば緑膿菌関連障害の治療に使用される作用物質、例えば嚢胞性線維症の治療に使用されるＮ−アセチルシステイン又はＤＮアーゼであり得る。幾つかの実施形態では、治療方法は、相乗的な量の単離ポリペプチド及び他の治療剤を投与することを含む。
【００５１】
多数の方法及び組成物が発明の概要において論考され、更なる詳細が本明細書及び実施例の項に提示される。当業者には容易に認識されるように、本開示は併せて読むことができる。
【００５２】
本発明の組成物は、概して親和性分子と治療剤との組合せ（例えば、共に又は別個に投与される）、例えば細菌に対して効果的な抗生物質又はオプソニンと組み合わせた、グラム陰性細菌上の標的リガンド又は抗原に対する特異親和性を有するポリペプチドである。より具体的な実施形態としては、例えばシュードモナスに対するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）とシュードモナスに対して幾らかの活性を有する抗生物質との組合せを挙げることができる。特定の場合では、ポリペプチドは、ポリミキシン又はアミノグリコシド抗生物質と組み合わせた、緑膿菌ムコイドエキソ多糖類（ＭＥＰ）に対する抗体であり得る。
【００５３】
方法は概して、親和性ポリペプチドと治療剤との組合せにより細菌を阻害するか又は死滅させる方法に関する。組合せは、組合せの作用物質のいずれか個別よりも大きな細菌の阻害を有し得る。さらに、組合せは、相加又は相乗効果をもたらし得る。組合せは、抗体及び抗生物質の両方について既知の作用様式に従い、また細菌の環境における抗体及び抗生物質の両方の存在から生じる異なる作用様式に従って細菌を攻撃することができる。好ましい方法では、作用物質の組合せは、細菌を含有する患者の体液に投与される。
【００５４】
細菌感染を治療するための組成物
上記で論考されるように、本組成物は、複合利益を高めるための病原性細菌に対する抗体と二次治療剤との組合せを含む。二次治療剤は、例えば病原体に対する抗生物質、及び／又は細菌の病理を容易にする疾患パラメーターに対する治療剤であり得る。
【００５５】
一次抗体と二次治療剤との組合せは、いずれか単独に勝る利益をもたらす。実際に、利益は、例えば２つの要素が直交的な作用様式に基づいて病原体を攻撃する相加的なものであり得る。さらに、病原体の阻害又は死滅における利益は、例えば一方の要素が他方の要素によるより強い攻撃に対して病原体を更に感作する、要素単独の総和よりも大きな利益をもたらす相乗的なものであり得る。例えば、一次抗体が病原体の保護莢膜の分解を増強する場合、これは、病原体内の（又は病原体上の）二次標的への第２の要素の浸透を加速するという付加的な利益も有し得る。別の例では、相乗効果は、二次要素（例えば、静菌性抗生物質）が病原体をより感受性が高い状態（例えば、細胞周期又は侵入位置）に保持するか、又は一次抗体により有利な動態をもたらすという結果となる場合がある。
【００５６】
組合せの別の効果は、新たな様式の効果であり得る。すなわち、組合せは、予想される様式で働く２つの要素の単なる相加効果ではない利益をもたらすことができる。例えば、二次治療剤は、第１の作用様式にて単独で働く治療剤の予想される標準的な利益をもたらす一方で、第１の要素、例えば抗体要素との第２の異なる様式の相互作用による有益な二次効果をもたらすこともできる。さらに、様式の複合利益は、２つの要素が標準的な様式により単独で働く場合のそれらの数学的な和よりも大きい、それと等しい又はそれよりも小さい場合があるが、通例はいずれか単独よりも大きい利益を有する。
【００５７】
Ｉ．  抗体
本組合せ中の一次要素は、細菌性病原体に対する抗体である。抗体は、病原体内又は病原体上の任意の接近可能な抗原又はエピトープに対するものであり得る。抗体の標的は莢膜、受容体、鞭毛、酵素又は内毒素等の既知の病原因子であり得る。抗体標的は任意に、病理とは直接関連しないが、二次治療剤要素の有効性に対して影響を有する病原体エピトープであってもよい。
【００５８】
好ましい実施形態では、抗体は、シュードモナス種のムコイドエキソ多糖類（ＭＥＰ）、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＬＰＳのＯ−特異的多糖、Ｈ−抗原（鞭毛抗原）、フェリピオケリン（ferripyochelin）受容体タンパク質等の中又は上の抗原又はエピトープに対するものである。好ましい一次抗体標的はＭＥＰ、好ましくは緑膿菌のＭＥＰである。
【００５９】
緑膿菌に対する効果的な例示的な抗体は、少なくとも１つの緑膿菌ＭＥＰ結合相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有するのが好ましい。緑膿菌ＭＥＰ結合ＣＤＲは、本明細書で列挙された抗体、すなわちＦ４２８、Ｆ４２９、Ｆ４３１又はＣＯＭＢの１つに由来するＣＤＲである。例えば、米国特許第７，１１９，１７２号を参照されたい。重要なことには、緑膿菌細菌の周りを覆うＭＥＰの存在は、抗生物質療法を妨げる可能性がある。抗体は、ポリクローナル血清中に存在していても、又は精製ＭＥＰで免疫化されたヒト被験体から採取されたＢ細胞に由来する抗体をコードする遺伝子を分子操作することによって作製してもよい。これらのＢ細胞に由来する組換え免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子、特に可変領域遺伝子は、採取されたＢ細胞から単離し、重鎖及び軽鎖の両方のヒトＩｇ定常領域遺伝子をコードするＩｇ組換えベクターにクローニングすることができる。この手法を用いることで、緑膿菌ＭＥＰに結合し、緑膿菌のオプソニン食作用を増強する４つの新規の抗体を特定し、合成した。全ての抗体クローンがＩｇＧアイソタイプであり、Ｆ４２９、Ｆ４３０、Ｆ４３１及びＣＯＭＢと指定される。
【００６０】
細菌莢膜に対する抗体は、単独で疾患の進行又はその欠如に対して大きな影響を有し得る。莢膜は通例、比較的弱い抗体応答を引き起こし、細胞性免疫を妨げる表面を呈する（微生物への抗生物質の接近への干渉にも留意する）。莢膜多糖上での抗体の結合は、オプソニン化をもたらすとともに、受動及び能動細胞性免疫を刺激するサイトカインの放出を引き起こすことができる。緑膿菌感染部位にオプソニン抗体を与える能力は、例えば慢性的に定着した嚢胞性線維症患者の肺からのムコイド型緑膿菌の根絶に寄与し得る。本明細書で使用される場合、「オプソニンの（opsonic）」及び「オプソニン食作用の（opsonophagocytic）」という用語は、細菌等の抗原のＦｃ媒介性食作用を誘導することが可能な抗体を指すために区別なく使用される。
【００６１】
オプソニン化アッセイは、当該技術分野で標準である。概して、かかるアッセイでは、抗体、抗原（標的細菌細胞上に発現される）、補体及び食細胞の存在下で細菌死滅の量が測定される。血清が一般に補体の供給源として使用され、多形核細胞が一般に食細胞の供給源として使用される。標的細胞源は、抗原を発現する細胞型に応じて原核であっても（本発明と同様）、又は真核であってもよい。細胞死滅は、反応成分のインキュベーションの前後の生細胞数によって測定することができる。代替的には、細胞死滅は、反応混合物の上清中の標識細胞含有物（すなわち、クロム放出）を測定することによって定量化することができる。緑膿菌ＭＥＰに結合する抗体又は抗体フラグメントがオプソニン化及び食作用も刺激するかを決定するのに有用な他のアッセイが、本明細書を読むことで当業者に明らかである。
【００６２】
緑膿菌ＭＥＰに結合するポリペプチド、例えば抗体又は抗体フラグメントは、好ましくは緑膿菌のオプソニン化及び食作用（すなわち、オプソニン食作用）を増強し、結果として被験体における緑膿菌感染の予防及び療法に或る程度有用である。オプソニン化は、食作用が抗原へのオプソニン（例えば、抗体又は補体因子Ｃ３ｂ）の沈着によって促進されるプロセスを指す。食作用は、食細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞及び多形核白血球（ＰＭＮＬ））が物質を飲み込み、それらの細胞質中の空胞（例えば、食胞）内に物質を入れるプロセスを指す。このため、オプソニン化及び食作用を増強する抗体又は抗体フラグメントは、抗原を認識して抗原に沈着し、そうすることで食細胞による抗原（及び抗原を有する物質、例えば緑膿菌細菌）の取込み及び貪食（engulfinent）を容易にする抗体又は抗体フラグメントである。概して、食作用及びオプソニン化を増強するために、抗体はＦｃドメイン又は領域を含む。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体を有する細胞（例えば、マクロファージ又はＰＭＮＬ等の抗原提示細胞）によって認識される。本明細書で使用される場合、「オプソニン食作用を増強する」とは、抗体沈着により抗原又は抗原を有する基質が食細胞によって認識され、飲み込まれる可能性を高めることを意味する。この増強は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの細菌量の低下、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細菌細胞の死滅によって測定することができる。
【００６３】
抗体は、ムコイド型緑膿菌株及び幾つかの非ムコイド型緑膿菌株に結合することが可能である。「非ムコイド型」と特徴付けられる株が依然としてペプチドによる検出に十分な低レベルのＭＥＰを分泌すると考えられる。抗体は、感染した哺乳動物被験体に由来する緑膿菌分離株のオプソニン死滅を媒介することが可能である。緑膿菌感染のマウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで使用した場合、抗体は、緑膿菌チャレンジからの或る程度の保護を与えることができる。
【００６４】
一次親和性ポリペプチド要素は、ＭＥＰに結合する領域を含み得る。例えば、緑膿菌ＭＥＰ結合領域は、抗体のＭＥＰ結合領域又は代替的には、かかる領域の機能的に同等の変異体に由来し得る。２つの特定のクラスの抗体に由来する緑膿菌ＭＥＰ結合領域は、可変領域及び相補性決定領域（ＣＤＲ）である。
【００６５】
抗体は、当該技術分野で既知のように、ジスルフィド架橋によって連結されたポリペプチド鎖の集合体である。軽鎖及び重鎖と称される２つの原則的なポリペプチド鎖が抗体の全ての主要な構造クラス（アイソタイプ）を構成する。重鎖及び軽鎖はどちらも、可変領域及び定常領域と称される小領域に更に分けられる。場合によっては、ポリペプチドは、上述の抗体の抗体重可変鎖及び軽可変鎖を含む。重鎖可変領域は、一般に１００アミノ酸長〜１５０アミノ酸長の範囲のポリペプチドである。軽鎖可変領域は、一般に８０アミノ酸長〜１３０アミノ酸長の範囲のポリペプチドである。例えば４つの異なる可変領域がここで特定され、そのうち２つが重鎖可変領域であり、２つが軽鎖可変領域である。配列番号１及び配列番号５は、抗体クローンＦ４２８及びＦ４２９に由来する重鎖可変領域のヌクレオチド及びアミノ酸配列に相当する。配列番号２及び配列番号６は、抗体クローンＦ４２８及びＦ４３１に由来する軽鎖可変領域のヌクレオチド及びアミノ酸配列に相当する。配列番号３及び配列番号７は、抗体クローンＦ４２９及びＣＯＭＢに由来する軽鎖可変領域のヌクレオチド及びアミノ酸配列に相当する。配列番号４及び配列番号８は、抗体クローンＦ４３１及びＣＯＭＢに由来する重鎖可変領域のヌクレオチド及びアミノ酸配列に相当する。
【００６６】
治療剤の組合せの「一次抗体」として作用する親和性ポリペプチドは、上述の可変領域の相補性決定領域（すなわち、ＣＤＲ）だけであっても機能的であり得る。抗体のＣＤＲは、抗体特異性に大きく関与している抗体の部分である。ＣＤＲは、抗原のエピトープと直接相互作用する。ＩｇＧ免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖可変領域の両方に、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）でそれぞれ隔てられた４つのフレームワーク領域（ＦＲ１〜ＦＲ４）が存在する。フレームワーク領域（ＦＲ）は、抗原との相互作用に関与する抗体の部分であるパラトープの三次構造を維持する。ＣＤＲ、特にＣＤＲ３、より詳細には重鎖ＣＤＲ３が抗体特異性に寄与する。ＣＤＲ、特にＣＤＲ３が抗体に抗原特異性を与えることから、これらの領域を他の抗体又はペプチドに組み込むことで、その抗体又はペプチドに同一の抗原特異性を与えることができる。
【００６７】
親和性ポリペプチドの緑膿菌ＭＥＰ結合領域は、緑膿菌ＭＥＰ結合ＣＤＲ１、緑膿菌ＭＥＰ結合ＣＤＲ２及び／又は緑膿菌ＭＥＰ結合ＣＤＲ３であってもよく、これらは全て本明細書で開示される抗体及び抗体可変鎖に由来し得る。治療剤の組合せの一次親和性ポリペプチドは配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７及び配列番号３０からなる群から選択されるＣＤＲ１アミノ酸配列を有し得る。ＣＤＲ２アミノ酸配列は、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８及び配列番号３１からなる群から選択することができる。「緑膿菌ＭＥＰ結合ＣＤＲ３」は、緑膿菌ＭＥＰに、好ましくは特異的に結合し、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖の可変領域のいずれかに由来するＣＤＲ３である。これは配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９及び配列番号３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するのが好ましい。さらに、緑膿菌ＭＥＰに関与するＣＤＲは、下記により詳細に記載されるように、保存的置換変異体を含む配列等の当業者に理解される機能的に同等の変異体を含み得る。加えて、本発明が本明細書に提供される可変領域間のＣＤＲの交換も包含することを理解されたい。好ましくは、重鎖ＣＤＲを別の重鎖可変領域ＣＤＲと交換することができ、同様に軽鎖ＣＤＲが別の軽鎖可変領域ＣＤＲと交換される。
【００６８】
上記で論考される抗体は、高度に免疫化されたヒト被験体のＢ細胞のスクリーニングにより発見され、補体に結合し、補体依存性の緑膿菌死滅をもたらすその能力に基づいて選択された。驚くべきことに、多数の緑膿菌株、例えばヒト緑膿菌臨床分離株Ｐａ  ２４１０、Ｐａ  ２７８５３及びＰａ  ＰＧＯ２３３８について、補体の非存在下で死滅が観察されることが発見された。
【００６９】
ＩＩ．  組成物の抗生物質
組合せ組成物の二次治療剤は抗生物質であり得る。本発明者らは、或る特定の抗生物質が病原性細菌の阻害及び死滅において驚くべき方法で抗体を補完することを見出した。特定の理論に傾倒するわけではないが、抗体の結合及び補体沈着の刺激が補体攻撃複合体の形成をもたらすことができ、これがトブラマイシンではなくメロペネム等の特定の抗生物質の侵入を容易にすると考える。これにより、相乗作用が例えばＡｅｒｕｃｉｎ／メロペネムで観察されたが、例えばＡｅｒｕｃｉｎ／トブラマイシンの組合せでは観察されなかった理由が説明され得る。これらの効果は、単独で作用する抗体又は抗生物質について既知の標準的な作用様式以上の何かである。さらに、Ａｅｒｕｃｉｎ＋シプロフロキサシンの組合せも明らかな実質的相乗効果を示すようである。
【００７０】
抗体の免疫調節作用様式が細菌の破壊をもたらすことから、抗体が静菌性抗生物質を良好に補完すると仮定した。本発明の一態様は、例えば緑膿菌（例えばＭＥＰ）に対する抗体と静菌性抗生物質、例えば、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、及びマクロライド（アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン）、ミノサイクリン、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、メロペネム、パロモマイシン、リファキシミン、セファロスポリン、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム、バシトラシン、スルホンアミド、テトラサイクリン等との組合せである。
【００７１】
抗生物質は、殺菌性又は静菌性と記載されることが多いが、必ずしもこれらの効果の間に細かい境界線が存在するわけではない。静菌性抗生物質は、細菌の代謝又は増殖を本質的に止める（例えば、ペプチドの転写を阻止する）とされている。当然ながら、これは最終的に細菌の死滅をもたらす可能性がある。静菌性抗生物質は通例、タンパク質翻訳のＤＮＡ複製を妨げる。殺菌性抗生物質は通例、細胞壁等の細胞特徴の構築を妨げ、細胞の生存能力を損なう。
【００７２】
細菌に対する抗体との組合せで有用な抗生物質には、例えば殺菌性又は静菌性抗生物質が含まれ得る。例えば、抗生物質はアミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン、アミカシン、トブラマイシン）、キノロン（例えば、シプロフロキサシン、レボフロキサシン）、セファロスポリン（例えば、セフタジジム、セフェピム、セフォペラゾン、セフピロム、セフトビプロール）、抗緑膿菌ペニシリン、カルボキシペニシリン（例えば、カルベニシリン及びチカルシリン）、ウレイドペニシリン（例えば、メズロリシン、アズロリシン、及びピペラシリン）、カルバペネム（例えば、メロペネム、イミペネム、ドリペネム）、ポリミキシン（例えば、ポリミキシンＢ及びコリスチン）、及びモノバクタム（例えば、アズトレオナム）でもよい。
【００７３】
或る特定の細菌の特別な場合では、様々なレベルの抗生物質に対する耐性が存在し得る。しかしながら、完全又は部分的な耐性（例えば、抗生物質感受性試験標準化ディスク法であるカービー−バウアーディスク感受性アッセイで測定される；Amer. J. Clin. Path. 45:493-496, 1966）は、特定の細菌性病原体に対する抗体と組み合わせた抗生物質の有用性と対応しない場合がある。例えば、抗生物質ディスクについての阻止帯が特定の抗体／抗生物質の組合せの有効性と相関しない場合がある。部分阻害では、抗体に対抗するのに必要とされる代謝資源を消費するか、又は抗体攻撃に対抗する能力がより低い細菌を選択することができる。例えば、シュードモナスは、或る特定の抗生物質（例えば、カナマイシン、モキシフロキサシン、セフロキシム、セフォタキシム、セフトリアキソン、エルタペネム及び多くのペニシリン等）による排除に耐性を示すことが多いが、これらの抗生物質は驚くべきことに、依然として細菌に対する抗体を補完し得る。
【００７４】
ＩＩＩ．  治療用組合せを使用する方法
上記の組成物は、病原体を阻害するか又は死滅させるために使用することができる。治療剤と抗体との組合せは、組合せの各要素についての作用様式に従って病原体を攻撃することができる。さらに、組成物は、例えば各要素が組成物中の他の要素の有効性に対して有する効果と関連する新たな機能（作用様式）を含む。
【００７５】
組成物は通例、哺乳動物患者の複雑なｉｎ  ｖｉｖｏ環境で使用される。方法は、微生物病原体によって引き起こされる又は悪化する疾患状態の予防又は治療を含み得る。方法は概して、本発明の組合せ組成物（例えば、病原体に対する抗体と補完的な治療剤とを含む）を準備することと、組成物の組合せが病原体を多方向から攻撃することができるように組成物を体液又は体表に投与することとを含む。通例、多方向からの（prongs of）攻撃は、別個の組成物の要素からもたらされるよりも多くの作用様式を含む。
【００７６】
組成物は、例えば真菌及び細菌を含む任意の様々な微生物によって引き起こされる感染と闘うために使用することができる。例えば、細菌はグラム陽性又はグラム陰性細菌、例えばバシラス、バルトネラ、ボルデテラ、ボレリア、ブルセラ、カンピロバクター、クラミジア、クラミドフィラ、クロストリジウム、コリネバクテリウム、エンテロコッカス、エシェリキア、フランシセラ、ヘモフィラス、ヘリコバクター、レジオネラ、レプトスピラ、リステリア、マイコバクテリウム、マイコプラズマ、ナイセリア、シュードモナス、リケッチア、サルモネラ、シゲラ、スタフィロコッカス、ストレプトコッカス、トレポネーマ、ウレアプラズマ、ビブリオ及び／又はエルニシア種であり得る。
【００７７】
方法は、微生物によって引き起こされる様々な疾患状態、例えば、肺炎（ＨＡＰ／ＣＡＰ／ＶＡＰ）等の感染性疾患、嚢胞性線維症、ＣＯＰＤ、気管支拡張症、血流感染、角膜炎（正：keratitis）、皮膚及び軟部組織感染等と関連する感染のいずれかを有する患者に適用することができる。
【００７８】
組成物は、特定の感染に適切な経路、例えば経口投与、消化管／腸内投与、注射による中枢神経系への投与、局所投与、腸内投与、非経口投与、経口投与、腹膜（peritoneal）投与、舌下投与、吸入、注射等によって投与することができる。
【００７９】
通例、組成物は体液に注入又は溶解される。抗体が組成物の第１の治療剤要素であってもよく、通例、病原体上の接近可能な抗原に結合する。抗体は、例えば病原体をオプソニン化し、能動及び受動免疫系細胞が病原体を標的化し、貪食する助けとなることができる。病原体に結合した抗体の存在は、基質の補体カスケードの開始ももたらし、例えば微生物の細胞壁の破壊及びその部位への付加的な免疫細胞の動員をもたらすこともできる。二次治療剤が抗生物質である場合、病原体の代謝が、成長を遅らせるか若しくは停止させ（静菌性）、及び／又は細胞を損傷し、病原体を死滅させるように妨げられる。
【００８０】
単一の溶液中の組合せ組成物として又は別個の治療として順次行われる補助治療の一次作用が、単独の要素では存在しない二次作用様式（新たな攻撃経路）ももたらし得ることに注目する。例えば、第１の要素の一次作用が局所環境、病原体の表面及び／又は病原体の代謝に変化を生じることができ、これが二次組成物要素の新たな異なる作用様式に新たな道を開く。病原体の莢膜構造、病原体の透過性、病原体の防御、局所免疫系細胞、局所的な受容体及びサイトカイン、並びに局所組織構造を変化させることができる。これらの変化は、二次組成物要素の意図される作用様式を変更し、細菌の病理に影響を与える予期せぬ新たな相互作用も生じることができる。
【００８１】
特定の実施形態では、局所環境は嚢胞性線維症患者の肺であり、病原体は緑膿菌（正：P. aeruginosa）である。組成物の一次治療剤要素は、緑膿菌莢膜又は細胞膜に対する抗体とすることができる。この抗体は単独で細菌をオプソニン化すると予想され得る。二次治療剤が抗生物質である場合、細菌の成長を停止させるか又は細菌を死滅させると予想され得る。しかしながら、両方の要素の存在が相互作用の新たな作用様式を開く可能性がある。莢膜又は膜への抗体の結合は、抗生物質に対する細菌の接近可能性及び透過性を変化させ、予想外に有効性を高めることができる。抗生物質の存在は、例えば限られた抗体がより少ない標的に対して作用し得るように、標的の数を減らすことができる。抗生物質は、抗体が、入ってくるＢ細胞、Ｔ細胞及びマクロファージに対してより多様な抗原を提示し得るように、細菌構造を破壊することができる。治療剤要素の組合せは、個々の要素単独とは異なる相互作用のネットワークを構築する。
【００８２】
相互作用のネットワークは、必ずしも個々の治療剤要素単独の典型的な結果の総和よりも大きな効果をもたらすわけではない。相加効果が当該技術分野で予想され得る。しかしながら、結果は、同じパラメーター（例えば、細菌の阻害）に対処する治療剤の組合せが相加的でないことが見出されているという点で驚くべきものである。さらに、当該技術分野では、治療剤がそれらの予想される作用様式の和である驚くべき効果を有するだけではなく、所望のパラメーター（例えば、病原微生物の死滅）に対して正又は負の効果を有する二次作用様式を示すように相互作用するとは考えられていない。
【実施例】
【００８３】
以下の実施例は、特許請求される発明を説明するために提示されるが、これを限定するものではない。
【００８４】
実施例１  −  肺炎における抗細菌性ＭＡｂ／抗生物質の組合せ
抗緑膿菌ＭＥＰ結合抗体（Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）又はＦ４２９又はａｅｒｕｂｕｍａｂと呼ばれる）は、好中球減少マウスにおける急性肺炎に対して有効である可能性があり、抗生物質と累積的（又は補完的）効果を有し得る。Ａｅｒｕｃｉｎは、高度に免疫化されたヒト被験体のＢ細胞のスクリーニングにより発見され、補体に結合し、補体依存性の緑膿菌死滅をもたらすその能力に基づいて選択された。しかし、本発明者らは、多数のＰａ株について補体の非存在下で死滅が観察されることを発見した。
【００８５】
配合物：
１．  Ａｅｒｕｃｉｎストック配合物：１０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０２％ＰＳ２０（ｐＨ６）中で２９ｍｇ／ｍｌ
２．  対照ＩｇＧストック：骨髄腫血漿に由来するヒトＩｇＧ１λ（Sigma  １５０２９）。保存料を含まないトリス緩衝生理食塩水中で１ｍｇ／ｍＬ。
３．  トブラマイシンストック：硫酸トブラマイシン（Sigma  Ｔ１７８３）
４．  メロペネムストック：注射用水を用いて調製されたリン酸緩衝生理食塩水中のメロペネム（Sigma  Ｍ２５７４）
５．  ビヒクル：注射用水を用いて調製されたリン酸緩衝生理食塩水
【００８６】
動物：８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（Jackson Laboratories、サクラメント）、１群当たり５匹のマウス。マウスに２００μＬのＰＢＳ中の３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ又は３００ｍｇ／ｋｇを感染の２時間後に腹腔内注射する。対照動物にはＰＢＳを与える。
【００８７】
細菌：緑膿菌株をＡＴＣＣから入手した。
【００８８】
手順：緑膿菌の実験的マウスモデル
ＰＡＯ１肺炎を用いた。１群当たり５匹のほぼ同じ体重のマウスを試験した。実験に用いた接種量はそれぞれ、トブラマイシン研究では９．６×１０６ｃｆｕ／マウス、メロペネム研究では１．０×１０７ｃｆｕ／マウスとした。
【００８９】
マウスを２００μＬの低用量ケタミン／キシラジン（１．２５ｍｇ／ｍＬ；０．５ｍｇ／ｍＬ）で静脈麻酔する。４０μＬの細菌溶液又は対応するビヒクル溶液（等張生理食塩水）を、超微細ピペットチップを用いて鼻腔内に適用する。
【００９０】
抗体Ａｅｒｕｃｉｎ又はビヒクルは、２回の１２μｌ容量（合計２４μｌ）でケタミン／キシラジン麻酔マウスに鼻腔内（ＩＮ）投与した。
【００９１】
トブラマイシン又はビヒクルは、２００μｌ容量で無麻酔マウスに腹腔内（ＩＰ）投与した。
【００９２】
メロペネム及びビヒクルは、２００μｌ容量で無麻酔マウスに皮下（ＳＣ）投与した。
【００９３】
接種の１８時間後にマウスを屠殺し、肺及び脾臓を細菌濃度について分析した。
【００９４】
実験群間の差の統計的評価は、一元配置ＡＮＯＶＡに続くテューキーの事後検定を用いて決定することができる。
【００９５】
Ａｅｒｕｃｉｎ及びトブラマイシンの組合せは相加効果をもたらし、Ａｅｒｕｃｉｎ及びメロペネムの組合せは相乗効果をもたらす（図１及び図２）。
【００９６】
実施例２  −  オプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）における抗細菌性ｍＡｂ
ＯＰＡを用いて、Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）によって誘導されるヒト好中球による緑膿菌の死滅を実証する。アッセイは、Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）によってｉｎ  ｖｉｖｏで開始される免疫応答である、好中球によるＡｅｒｕｃｉｎ（商標）に結合したシュードモナスの補体媒介性オプソニン食作用を厳密にシミュレートするように設計される。
【００９７】
アッセイは、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいてＭＥＭ中の１％ＢＳＡをアッセイ希釈剤として用いて行う。白血病由来ヒト細胞株ＨＬ−６０を好中球源として使用する。ＨＬ−６０細胞の好中球への分化を１００ｍＭジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の添加によって誘導する。好中球形態は、ＦＡＣＳを用いてＣＤ１１ｂ／Ｍａｃ−１マーカーの発現によって確認される。好中球を洗浄し、アッセイ希釈剤に再懸濁し、計数し、２．５×１０７細胞／ｍｌの密度まで希釈する。オプソニン化は、６０倍の最終希釈率にてアッセイ希釈剤で希釈したウサギ血清補体によって媒介される。新たに成長させた対数期シュードモナス株をアッセイ希釈剤に再懸濁し、希釈して、２０：１〜４０：１の好中球と細菌との最終比を達成する。５μｇ／ｍｌから１００ｎｇ／ｍｌまでのＡｅｒｕｃｉｎ（商標）の希釈物を、陰性対照としての５μｇ／ｍｌの市販のヒトＩｇＧ１と共にアッセイ希釈剤中で調製する。他の陰性対照には或る特定の成分（補体、好中球、抗体）を欠くアッセイ混合物が含まれる。
【００９８】
同量（５０μｌ）の各成分を抗体、補体、好中球、続いて細菌の順でアッセイウェルに添加する。成分を、マルチチャンネルピペットを用いて混合する。０時点のサンプルを採取し、希釈し、力価決定のために寒天プレート上にプレーティングする。次いで、アッセイプレートを３７℃で振盪しながら９０分間インキュベートする。サンプルを再び採取し、希釈し、寒天プレート上にプレーティングする。
【００９９】
細菌力価（ＣＦＵ／ｍｌ）を、３７℃で一晩のインキュベーション後の寒天プレート上のコロニー数から０時点及び９０分のサンプルについて決定する。死滅率を、９０分と０時点との力価の差を０時点での力価で除算したものとして算出する：１００×（力価Ｔ９０−力価Ｔ０）／力価Ｔ０。Ａｅｒｕｃｉｎ（商標）によるオプソニン食作用は、陰性対照に対する用量依存的な死滅の有意な増大によって示される（図３）。
【０１００】
実施例３  −  オプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）における様々な抗細菌性ｍＡｂ／抗生物質の組合せの試験
Ａｅｒｕｃｉｎを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにおいて５つの抗生物質（シプロフロキサシン、コリスチン、ピペラシリン、セフェピム、アズトレオナム）との相乗効果について試験した。アッセイを、同量（５０μｌ）の各成分を抗体、抗生物質、補体、好中球、続いて細菌の順でアッセイウェルに添加する以外は上記のように行う。細菌力価（ＣＦＵ／ｍｌ）を、全ての成分を混合した直後及び９０分間のインキュベーション後に測定する。アッセイの読取り（死滅（％））は、薬物又は薬物の組合せがこの９０分の間にどの程度細菌を死滅させることができるかである。
【０１０１】
Ａｅｒｕｃｉｎ及び抗生物質の試験濃度は、各成分単独がＯＰＡアッセイにおいて殆ど死滅活性を示さないように選択した。３回の独立実験による平均を提示する。
【０１０２】
無薬物対照（Ａｅｒｕｃｉｎも抗生物質も含まない）では、およそ２０％の細菌が９０分のインキュベーション時間の間に死滅する。これは、結果が通例は９０分の間に僅かな程度の成長又は死滅を示す、無薬物対照について予想される値の範囲内である。５０ｎｇ／ｍｌ  Ａｅｒｕｃｉｎを用いた場合、およそ５％の細菌が死滅する。この値も無影響量（no observed effect）について予想される範囲内である。２本のバーの更なるブロックは各々、抗生物質単独又は５０ｎｇ／ｍｌ  Ａｅｒｕｃｉｎと組み合わせた抗生物質を用いて観察された死滅率（％）を表す。
【０１０３】
シプロフロキサシン：０．５μｇ／ｍｌシプロフロキサシンは、細菌の死滅を示さない。９０分のインキュベーション時間の間の僅かな成長を示す、シプロフロキサシンによるこの「負の死滅率（％）」は、無薬物対照についての本アッセイの正常変動の範囲内である。Ａｅｒｕｃｉｎ及びシプロフロキサシン単独は試験濃度で細菌の死滅を示さないが、両方の組合せが約６０％の細菌の死滅をもたらす。Ａｅｒｕｃｉｎ及びシプロフロキサシンは、明らかな相乗効果を有する。
【０１０４】
２μｇ／ｍｌのコリスチンは、２０％の範囲の平均死滅を示す。Ａｅｒｕｃｉｎの添加は、死滅を平均６０％近くまで増大する。Ａｅｒｕｃｉｎ及びコリスチンは、相乗効果を有する可能性がある。
【０１０５】
８μｇ／ｍｌのピペラシリンは、約４０％の死滅を示す。Ａｅｒｕｃｉｎの添加は、死滅を僅かではあるが一貫して改善する。
【０１０６】
４μｇ／ｍｌセフェピム及びアズトレオナムは、それぞれ４０％及び６０％の死滅を示す。Ａｅｒｕｃｉｎの添加は、死滅効率を改善しない（図４）。
【０１０７】
ＯＰＡアッセイに使用した抗生物質の最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、予め決定した（データは示さない）。実施例３に報告したデータは、シプロフロキサシン及びコリスチンの２倍ＭＩＣを用いて生成した。２倍ＭＩＣの抗生物質単独は、明らかな殺菌効果を有しない（「無薬物対照」と同様に死滅又は成長なし）。殺菌性抗生物質であるセフェピム及びピペラシリンについてのデータは１倍ＭＩＣで生成し、アズトレオナム（殺菌性）については１／２  ＭＩＣで生成した。
【０１０８】
本発明者らは、これらのデータから、広範な抗生物質タイプにわたって、静菌性又はＭＩＣのレベルで、抗体との組合せにおける明らかな相乗的又は補完的な効果が実証されると考える。
【０１０９】
本明細書中に記載される実施例及び実施形態は例示のみを目的とし、それを踏まえた様々な修正又は変更が当業者に提案され、それらが本願の趣旨及び範囲並びに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。
【０１１０】
上記の発明は明確さ及び理解のために多少詳しく説明したが、本開示を読むことで、本発明の真の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細の様々な変更を加えることができることが当業者には明らかである。例えば、上記の全ての手法及び装置は、様々な組合せで用いることができる。本願に引用した全ての刊行物、特許、特許出願及び／又は他の文献は、その全体が全ての目的で、個々の刊行物、特許、特許出願及び／又は他の文献が各々、引用することにより本明細書の一部をなすことが個別に示されている場合と同じ程度まで引用することにより本明細書の一部をなす。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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