(57)【要約】  本開示は、ＩＬ−２−ＣＤ２５相互作用を阻害せず、活性化ＦｃγＲへの結合の増強を伴い、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の効果的な枯渇及び定着腫瘍の制御の改善をもたらすＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体の使用に関する。該抗体は癌の治療、例えば固形腫瘍及び血液癌の治療に使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩｇＧ２抗体であり、ＣＤ２５＋細胞を枯渇させる、抗ＣＤ２５抗体。
【請求項２】
腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる、請求項１に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項３】
（ａ）１を上回る活性化型対抑制型比（Ａ／Ｉ）でＦｃγ受容体に結合し、及び／又は、
（ｂ）ＦｃγＲＩＩｂに結合するよりも高い親和性でＦｃγＲＩＩａに結合する、
請求項１又は２に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項４】
ＣＤ２５に対して１０−８Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項５】
ＣＤ２５へのインターロイキン−２（ＩＬ−２）の結合を阻害しない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項７】
ヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項８】
ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答、好ましくはＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答を誘発する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項９】
ＡＤＣＰ活性を有するモノクローナル抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体。
【請求項１０】
ヒト被験体における癌の治療に使用される請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体。
【請求項１１】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項１０に記載の使用のための抗ＣＤ２５抗体。
【請求項１２】
ヒト被験体における癌の治療のための薬剤の製造への請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体の使用。
【請求項１３】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項１２に記載の抗ＣＤ２５抗体の使用。
【請求項１４】
前記抗体が更なる治療剤と組み合わせた投与のためのものである、請求項１０若しくは１１に記載の使用のための抗ＣＤ２５抗体、又は請求項１２若しくは１３に記載の抗ＣＤ２５抗体の使用。
【請求項１５】
前記更なる治療剤が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項１４に記載の使用のための抗ＣＤ２５抗体又は請求項１４に記載の抗ＣＤ２５抗体の使用。
【請求項１６】
前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ−１アンタゴニストである、請求項１５に記載の使用のための抗ＣＤ２５抗体又は請求項１５に記載の抗ＣＤ２５抗体の使用。
【請求項１７】
癌を有するヒト被験体を治療する方法であって、請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１８】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ２５抗体を、定着腫瘍を有する被験体に投与する、請求項１７又は請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する被験体を特定する工程を更に含む、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
更なる治療剤を投与することを更に含む、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記更なる治療剤が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ヒト被験体における癌の治療に使用される請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体と免疫チェックポイント阻害剤との組合せであって、該抗ＣＤ２５抗体及び該免疫チェックポイント阻害剤が同時、別個又は順次に投与される、組合せ。
【請求項２４】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項２３に記載の使用のための抗ＣＤ２５抗体と免疫チェックポイント阻害剤との組合せ。
【請求項２５】
請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体と免疫チェックポイント阻害剤とを含む、癌の治療のためのキット。
【請求項２６】
前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ−１アンタゴニストである、請求項２２に記載の方法、請求項２３若しくは２４に記載の使用のための組合せ、又は請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記ＰＤ−１アンタゴニストが抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２６に記載の方法、使用のための組合せ又はキット。
【請求項２８】
薬学的に許容可能な媒体中の請求項１〜９のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体を含む医薬組成物。
【請求項２９】
更なる治療剤を更に含む、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記更なる治療剤が免疫チェックポイント阻害剤であり、任意に該免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ−１アンタゴニスト、例えば抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
（ａ）ＣＤ２５に結合する第１の抗原結合部分と、
（ｂ）免疫チェックポイントタンパク質、腫瘍関連抗原、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩから選択される抗ヒト活性化型Ｆｃ受容体抗体、又はアンタゴニスト抗ヒトＦｃγＲＩＩｂ抗体に結合する第２の抗原結合部分と、
を含む二重特異性抗体であって、ヒトＩｇＧ２抗体であり、ＣＤ２５＋細胞を枯渇させる、二重特異性抗体。
【請求項３２】
ＣＤ２５＋細胞、腫瘍浸潤Ｔ細胞を枯渇させる、請求項３１に記載の二重特異性抗体。
【請求項３３】
前記免疫チェックポイントタンパク質がＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、１０  ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＶＥＭ、ＬＬＴ１、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ１３７及びＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項３１又は３２に記載の二重特異性抗体。
【請求項３４】
前記免疫チェックポイントタンパク質が腫瘍細胞上で発現される、請求項３３に記載の二重特異性抗体。
【請求項３５】
前記免疫チェックポイントタンパク質がＰＤ−Ｌ１である、請求項３３又は３４に記載の二重特異性抗体。
【請求項３６】
ＰＤ−Ｌ１に結合する前記第２の抗原結合部分がアテゾリズマブに含まれる、請求項３５に記載の二重特異性抗体。
【請求項３７】
癌を治療する方法であって、請求項３１〜３６のいずれか一項に規定される二重特異性抗体を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項３８】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
被験体における癌の治療に使用される請求項３１〜３６のいずれか一項に規定される二重特異性抗体。
【請求項４０】
前記被験体が固形腫瘍及び／又は液性腫瘍を有する、請求項３９に記載の使用のための二重特異性抗体。
【請求項４１】
癌を有する被験体において制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、抗ＣＤ２５抗体を前記被験体に投与する工程を含み、前記抗体が請求項１〜９のいずれか一項に規定される、方法。
【請求項４２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ２５抗体又は請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を含む注射用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌免疫療法の分野にあり、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体、及び腫瘍を治療する方法を含む癌を治療する方法に関し、該方法は、ＣＤ２５に対するヒトＩｇＧ２抗体の使用を伴う。
【背景技術】
【０００２】
癌免疫療法は、癌を治療又は予防するために被験体自身の免疫系の使用を伴う。免疫療法は、癌細胞が表面上に免疫系によって検出され得る微妙に異なる分子を有することが多いという事実を利用する。これらの分子、すなわち癌抗原は、最も一般的にはタンパク質であるが、炭水化物等の分子も含まれる。このため、免疫療法は、これらの標的抗原を介して腫瘍細胞を攻撃するように免疫系を誘発することを含む。しかしながら、悪性腫瘍、特に固形腫瘍は、腫瘍細胞に固有であり、かつ腫瘍微小環境の構成要素によって媒介される様々な機構を用いて免疫監視を免れることができる。後者の中でも、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞又はＴｒｅｇ）による腫瘍浸潤、より具体的には、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）対Ｔｒｅｇの好ましくないバランス（すなわち、ＴｅｆｆのＴｒｅｇに対する低い比率）が決定的因子として提唱されている（非特許文献１）。
【０００３】
Ｔｒｅｇは、その発見以来、免疫恒常性を媒介し、末梢性トレランスの確立及び維持を促進するのに重要であることが見出されている。しかしながら、癌の状況下でのＴｒｅｇの役割は、より複雑である。癌細胞が自己抗原及び腫瘍関連抗原の両方を発現することから、エフェクター細胞応答を抑えようとするＴｒｅｇの存在は、腫瘍の進行に寄与し得る。したがって、定着腫瘍におけるＴｒｅｇの浸潤は、効果的な抗腫瘍応答及び癌治療の全般に対する主な障害の１つである。Ｔｒｅｇによって用いられる抑制機構は、現行の療法、特に抗腫瘍応答の誘導又は強化に依存する免疫療法の制限又は更には失敗に大きく寄与すると考えられる（非特許文献２）。
【０００４】
癌の治療のための治療アプローチとしてのＴｒｅｇの枯渇は、マウスモデルにおける腫瘍の定着及び進行に対するＴｒｅｇの寄与を示している研究によって支持されるアプローチである。さらに、Ｔｒｅｇによる腫瘍浸潤は、幾つかのヒト癌においてより悪い予後とも関連付けられている（非特許文献３）。しかしながら、腫瘍におけるＴｒｅｇの枯渇は複雑であり、この領域における研究の結果は一致していない。
【０００５】
Ｔｒｅｇ枯渇の有望な標的の中でも、ＩＬ−２／ＣＤ２５相互作用は、殆どがラット抗マウスＣＤ２５マウス抗体であるＰＣ６１の使用を伴う、マウスモデルにおける幾つかの研究の対象とされている（非特許文献４）。この抗体のＣＤ２５結合及び機能活性が、異なる著者らによって生成されたモノクローナル抗体のパネルと比較されている（非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８）。
【０００６】
ＰＣ６１等の幾つかの利用可能な抗ＣＤ２５抗体は、多くの他の抗マウスＣＤ２５抗体（及び抗ヒトＣＤ２５抗体として開示されている殆どの抗体；例えば特許文献１、特許文献２、特許文献３及び特許文献４を参照されたい）と同様、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を遮断又は阻害する。例えば、バシリキシマブ及びダクリズマブは、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を阻害し、Ｔエフェクター細胞の活性化を低減するように開発されているＩｇＧ１抗ヒトＣＤ２５抗体である。バシリキシマブは、移植片対宿主病に現在認可されているキメラマウス−ヒトＣＤ２５抗体であり、ダクリズマブは、多発性硬化症の治療に認可されているヒト化ＣＤ２５抗体である。さらに、７Ｄ４（抗マウスＣＤ２５）又はクローンＭ−Ａ２５１（抗ヒトＣＤ２５）又は７Ｇ７Ｂ６（抗ヒトＣＤ２５）等の他の抗ＣＤ２５抗体が依然としてＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を可能にする。その上、抗ＣＤ２５の結合は、ＣＤ２５翻訳後修飾に関して特徴付けることができる。例えば、マウスＣＤ２５のＡＤＰ−リボシル化は、ＰＣ６１の結合に影響を及ぼさないが、この抗原に対する７Ｄ４の結合に影響を及ぼす（非特許文献９）。
【０００７】
幾つかの文献が、癌における又はＴｒｅｇ枯渇に関連した単独又は組合せでの抗ＣＤ２５の使用に言及している（特許文献５、特許文献２、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献１、非特許文献１０）。しかしながら、癌のマウスモデルにおいて試験したところ、ラット抗マウスＣＤ２５  ＰＣ６１は、腫瘍定着後に送達した場合に抗腫瘍活性を示すことができなかった。
【０００８】
自己免疫のマウスモデルの状況下で、抗ＣＤ２５  ＰＣ６１抗体を再改変し、ＩＬ−２受容体の遮断及び末梢Ｔｒｅｇの枯渇に対する抗ＣＤ２５抗体内の高度に異なるＦｃエフェクター機能の効果を評価した（非特許文献１１）。しかしながら、腫瘍中のＴｒｅｇを枯渇させる又は抗腫瘍治療活性を媒介する能力は、全てのヒトＩｇＧアイソタイプにおいてＰＣ６１（それ自体で、改変抗体として、又はマウスＣＤ２５に対するＰＣ６１の結合特徴と同様のＣＤ２５結合特徴を有するように設計若しくは特性評価された抗ヒトＣＤ２５として）については評価されていない。さらに、ダクリズマブが抗体の半減期を延長するためにヒトＩｇＧ２Ｍ３変異体として改変された（特許文献９）。しかしながら、このＩｇＧ２Ｍ３変異体は、いかなるＦｃ受容体にも結合しないが、胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）には結合するＩｇＧ２の特異的Ｆｃ−ｓｉｌｅｎｔ変異体である。したがって、このＩｇＧ２Ｍ３変異体は、ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰによりＣＤ２５＋細胞を枯渇させるか又はＴｒｅｇ細胞を枯渇させることができない。
【０００９】
７Ｄ４は、ＰＣ６１又は同様の結合特性を有する抗体の存在下で又はそれによる処理後にＣＤ２５陽性細胞を検出する研究において広く使用されているラットＩｇＭ抗マウスＣＤ２５抗体である（非特許文献１２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２００４／０４５５１２号
【特許文献２】国際公開第２００６／１０８６７０号
【特許文献３】国際公開第１９９３／０１１２３８号
【特許文献４】国際公開第１９９０／００７８６１号
【特許文献５】国際公開第２００４／０７４４３７号
【特許文献６】国際公開第２００６／０５０１７２号
【特許文献７】国際公開第２０１１／０７７２４５号
【特許文献８】国際公開第２０１６／０２１７２０号
【特許文献９】国際公開第２００５／１２３７８０号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Smyth M et al., 2014, Immunol Cell Biol. 92, 473-4
【非特許文献２】Onishi H et al, 2012 Anticanc. Res. 32, 997-1003
【非特許文献３】Shang B et al., 2015, Sci Rep. 5:15179
【非特許文献４】Setiady Y et al., 2010. Eur J Immunol. 40:780-6
【非特許文献５】Lowenthal J.W et al., 1985. J. Immunol., 135, 3988-3994
【非特許文献６】Moreau, J.-L et al., 1987. Eur. J. Immunol. 17,929-935
【非特許文献７】Volk HD et al., 1989 Clin. exp. Immunol. 76, 121-5
【非特許文献８】Dantal J et al., 1991, Transplantation 52:110-5
【非特許文献９】Teege S et al., 2015, Sci Rep 5: 8959
【非特許文献１０】Grauer O et al., 2007 Int. J. Cancer: 121: 95-105
【非特許文献１１】Huss D et al., 2016. Immunol. 148: 276-86
【非特許文献１２】Onizuka S et al., 1999. Canc Res. 59, 3128-3133
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
このため、癌の治療のためのＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇの枯渇に関与する更なる抗ＣＤ２５抗体が当該技術分野で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、ＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇを特に腫瘍内で効率的に枯渇させる構造要素を特徴とする、新規の抗ＣＤ２５抗体及びこれらの抗ＣＤ２５抗体の新規の使用を提供する。
【００１４】
本発明者らは驚くべきことに、当該分野における一般的な考え方に反して、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体が腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の効率的な枯渇を促進し、ＣＤ４＋ｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を増大させることを見出した。
【００１５】
主な態様では、本発明は、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を提供する。本発明は、癌を有するヒト被験体を治療する方法であって、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を被験体に投与する工程を含み、該被験体が腫瘍（好ましくは固形腫瘍又は液性腫瘍）を有する、方法も提供する。抗ＣＤ２５抗体は、ＩＬ−２へのＣＤ２５の結合に関して遮断抗体又は非遮断抗体のいずれかとすることができ、好ましくは腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるヒトＩｇＧ２抗体である。本発明の及び本発明で使用される抗体は、ＦｃγＲＩＩａに結合することができる。
【００１６】
本発明の及び本発明で使用される抗体は、ＣＤ２５に対して１０−８Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）及び／又は少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に対して約１０−６Ｍ未満の解離定数を有するのが好ましい。最も好ましくは、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５は、Ｆｃγ受容体に関連した他の特徴を特徴とし、特に、
（ａ）Ｆｃγ受容体に１を上回る活性化型対抑制型比（activatory to inhibitory ratio）（Ａ／Ｉ）で結合し、及び／又は、
（ｂ）ＦｃγＲＩＩｂに結合するよりも高い親和性でＦｃγＲＩＩａに結合する。
【００１７】
本発明の抗ＣＤ２５  ＩｇＧ２抗体がＣＤ２５＋細胞を枯渇させ、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させることから、本発明の及び本発明で使用されるヒトＩｇＧ２抗体がヒトＩｇＧ２Ｍ３変異体アイソタイプのものではないことが当業者には理解される。ＩｇＧ２Ｍ３アイソタイプは、ＩｇＧ１抗体のＩｇＧ１  Ｆｃ部分を、抗体ＦｃドメインをＦｃＲに結合することができないものにし、ＦｃＲｎ結合能をそのままにするように、２３４位及び２３７位でアラニンをバリンに置き換えたＩｇＧ２ａ  Ｆｃドメインで置き換えることによって作製することができる（Zhang et al., 2014, Mult Scler., 20(2):156-164）。したがって、ＩｇＧ２Ｍ３抗体は、２３４位及び２３７位でアラニンをバリンに置き換えたＩｇＧ２ａ抗体と称することができる。
【００１８】
一態様では、ヒトＩｇＧ２抗体は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２（ＩＬ−２）の結合を阻害する（すなわち、遮断抗体）。これらの抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を遮断しながらＣＤ２５への結合を可能にする構造要素を特徴とする。代替的には、ヒトＩｇＧ２抗体は、ＣＤ２５発現細胞におけるインターロイキン−２シグナル伝達を阻害せず、好ましくは、抗体は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２（ＩＬ−２）の結合を阻害しない（すなわち、非遮断抗体）。かかる「非遮断」ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５に対するインターロイキン２のシグナル伝達（任意に結合）を遮断せずにＣＤ２５への結合を可能にする構造要素を特徴とする。
【００１９】
本明細書における「非遮断」への言及（抗ＣＤ２５抗体の存在下でのＩＬ−２のシグナル伝達又はＣＤ２５への結合の非遮断に関して）は、本発明の抗ＣＤ２５抗体が抗体の非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達と比較して、ＩＬ−２シグナル伝達を５０％未満阻害する実施の形態を含む。抗ＣＤ２５抗体は、抗体の非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達と比較して、ＩＬ−２シグナル伝達を約４０％、３５％、３０％未満、好ましくは約２５％未満阻害するのが好ましい。
【００２０】
治療方法における抗ＣＤ２５抗体の使用を考えると、抗ＣＤ２５抗体は、更なる好ましい特徴を更に呈し得る。抗ＣＤ２５抗体はモノクローナル抗体、特にヒト、キメラ又はヒト化抗体であるのが好ましい。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答、好ましくはＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答、好ましくはＡＤＣＰ応答を誘発し得る。さらに、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、その活性を発揮するための免疫細胞及び／又は免疫系の他の構成要素とのその相互作用を考慮すると、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答の増強、好ましくはＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ応答の増大、より好ましくはＡＤＣＣ応答の増大を更に誘発し得る。抗体は、親抗体と比較してＣＤＣ／ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ応答を増強するように改変することができる。
【００２１】
更なる態様では、本発明は、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を提供する。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＡＤＣＰ活性を誘発するのが好ましい。
【００２２】
本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体（概して上記で、また発明を実施するための形態に更に詳細に規定される）は、上記ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を、癌を有する被験体に投与する、ヒト被験体を治療する方法に用いることができる。一実施の形態では、被験体は、（任意に、固形腫瘍又は液性腫瘍を有する被験体を特定する工程を更に含む方法において）定着固形腫瘍又は液性腫瘍を有する。かかる方法は、更なる治療剤、特に免疫チェックポイント阻害剤を、例えば免疫チェックポイントタンパク質に結合し、これを阻害する抗体の形態で上記被験体に投与することを更に含み得る。好ましい免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体であり得るＰＤ−１アンタゴニストである。
【００２３】
概して、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、該ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を被験体に投与する工程を含む、癌を有する被験体においてＣＤ２５＋細胞を枯渇させる方法に用いることができる。より一般には、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、該ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を被験体に投与する工程を含む、癌を有する被験体において制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法に用いることができる。好ましくは、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、癌を有する被験体の固形腫瘍中の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法又は癌を有する被験体の液性腫瘍中の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法に用いることができる。
【００２４】
更なる態様では、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ヒト被験体における癌の治療のための薬剤の製造に用いることができるが、好ましくは、上記被験体は固形腫瘍又は液性腫瘍を有する。この範囲で、上記抗体は更なる治療剤、例えば免疫チェックポイント阻害剤、好ましくはＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせた投与のためのものである。
【００２５】
更なる態様では、本発明は、ヒト被験体における癌の治療に使用される、上記で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と別の抗癌化合物（好ましくは、免疫チェックポイント阻害剤又は発明を実施するための形態において指定される他の化合物）との組合せを提供するが、好ましくは、上記被験体は固形腫瘍又は液性腫瘍を有する。抗癌化合物（例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト等の免疫チェックポイント阻害剤又はインターロイキン２等のサイトカイン）を同時、別個又は順次に投与することができる。この範囲で、本発明は、上記で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、抗癌化合物（例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト等の免疫チェックポイント阻害剤）とを含む、癌の治療に用いられるキットも提供する。
【００２６】
更なる態様では、本発明は、薬学的に許容可能な媒体中の上記で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を含む医薬組成物も提供する。かかる組成物は、抗癌化合物（例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト等の免疫チェックポイント阻害剤）を含んでいてもよい。
【００２７】
本発明の抗体は、注射用医薬組成物として提供することができる。一態様では、本発明は、上記で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と薬学的に許容可能な担体とを含む注射用医薬組成物を提供する。本発明の更なる態様は、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる本発明のモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を含む注射用医薬組成物を提供する。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、好ましくはＡＤＣＰ応答を誘発することができる。抗ＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ヒト化されていてもよい。
【００２８】
一実施の形態では、癌の治療に使用される、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる本発明のモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む注射用医薬組成物が提供される。ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる本発明のモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む注射用医薬組成物を投与することを含む、癌を治療する方法も提供される。抗ＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ヒト化されていてもよい。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＡＤＣＰ応答を誘発するのが好ましい。抗体は、１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用医薬配合物中に存在させることができる。好ましくは、抗体は、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用医薬配合物中に存在させることができる。
【００２９】
更なる実施の形態では、固形腫瘍の治療に使用される、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる本発明のモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む注射用医薬組成物が提供される。腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる本発明のモノクローナルヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む注射用医薬組成物を投与することを含む、固形腫瘍を治療する方法も提供される。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ヒト化されていてもよい。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＡＤＣＰ応答を誘発するのが好ましい。抗体は、１ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用医薬配合物中に存在させることができる。抗体は、少なくとも２０ｍｇ／ｍｌの濃度で注射用医薬配合物中に存在させることができる。
【００３０】
また更なる態様では、本発明は、
（ａ）ＣＤ２５に結合する第１の抗原結合部分と、
（ｂ）免疫チェックポイントタンパク質、腫瘍関連抗原、抗ヒト活性化型Ｆｃ受容体抗体（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩ）又はアンタゴニスト抗ヒトＦｃγＲＩＩｂ抗体に結合する第２の抗原結合部分と、
を含む二重特異性抗体であって、ＣＤ２５＋細胞を枯渇させ、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるヒトＩｇＧ２抗体である、二重特異性抗体も提供する。二重特異性抗体は、例えば上記のような注射用医薬組成物中で提供することができる。
【００３１】
二重特異性抗体は、腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるヒトＩｇＧ２抗体であるのが好ましい。好ましくは、ヒトＩｇＧ２抗体は、活性化型Ｆｃγ受容体ＦｃγＲＩＩａに結合することができる。
【００３２】
一態様では、ＣＤ２５結合部分は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害する。代替的には、ＣＤ２５結合部分は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害しない。
【００３３】
好ましくは、かかる二重特異性抗体は、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＶＥＭ、ＬＬＴ１、ＧＡＬ９、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ１３７及びＩＣＯＳからなる群から選択される免疫チェックポイントタンパク質に結合する第２の抗原結合部分を含む。かかる免疫チェックポイントタンパク質は、腫瘍細胞上で発現されるのが好ましく、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及びＣＴＬＡ−４から選択されるのが最も好ましい。免疫チェックポイントタンパク質に結合する第２の抗原結合部分は、免疫チェックポイント阻害剤として作用する市販の抗体に含まれ得る。例えば、
（ａ）ＰＤ−１の場合、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ又はペムブロリズマブであり得る。
（ｂ）ＰＤ−Ｌ１の場合、抗ＰＤ−Ｌ１は、アテゾリズマブであり得る。
（ｃ）ＣＴＬＡ−４の場合、抗ＣＴＬＡ−４は、イピリムマブであり得る。
【００３４】
かかる二重特異性抗体は、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＢｉＴＥ  ＤＡＲＴ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ノブインホール（Knobs-in-holes）、Ｔｒｉｏｍａｂを含む任意の市販のフォーマット、又は二重特異性抗体及びそのフラグメントの他の適切な分子フォーマットで提供することができる。
【００３５】
代替的には、かかる二重特異性抗体は、腫瘍関連抗原に結合する第２の抗原結合部分を含む。この代替的な実施の形態では、かかる抗原及び対応する抗体としては、限定されるものではないが、ＣＤ２２（ブリナツモマブ）、ＣＤ２０（リツキシマブ、トシツモマブ）、ＣＤ５６（ロルボツズマブ（Lorvotuzumab））、ＣＤ６６ｅ／ＣＥＡ（ラベツズマブ）、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ）、ＣＤ２２１／ＩＧＦ１Ｒ（ＭＫ−０６４６）、ＣＤ３２６／Ｅｐｃａｍ（エドレコロマブ）、ＣＤ３４０／ＨＥＲ２（トラスツズマブ、ペルツズマブ）及びＥＧＦＲ（セツキシマブ、パニツムマブ）が挙げられる。
【００３６】
本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と別の抗癌化合物との組合せ、及び上記で規定される二重特異性抗体は、特に被験体が固形腫瘍又は液性腫瘍を有する場合の上記組合せ又は上記二重特異性抗体を被験体に投与する工程を含む、癌を治療する方法、また被験体における癌の治療への使用に用いることができる。
【００３７】
本発明の抗ヒトＣＤ２５抗体、及び癌を治療する方法、医薬組成物、他の抗癌化合物との組合せ、二重特異性抗体におけるそれらの使用の更なる定義を含む本発明の更なる目的は、発明を実施するための形態及び実施例において提示される。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ｈＩｇＧ１アイソタイプの抗ＣＤ２５  ｍＡｂが腫瘍及びＬＮ中のＴｒｅｇ細胞を効率的に枯渇させ、ＣＤ４＋ｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比の増大をもたらすことを示す図である。データから、ｈＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体が腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の効率的な枯渇を促進し、ＣＤ４＋ｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を増大することも示される。
【図２】Ｆｃγ受容体への抗ＣＤ２５非遮断抗体の結合を示す図である。抗ＣＤ２５非遮断抗体のヒトＩｇＧ１（抗体１）、ヒトＩｇＧ２（抗体２）及びｓｉｌｅｎｔヒトＩｇＧ１（抗体３）の３つの型をＦｃγ受容体（Ａ）ＣＤ３２ａ及び（Ｂ）ＣＤ３２ｂへの結合について試験した。
【図３】Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６でのバイオレイヤー干渉法（Biolayer interferometry）によって行われる、ｒｈＣＤ２５−ｈｉｓタグに対するＡ）ヒトＩｇＧ１（抗体１）、Ｂ）ヒトＩｇＧ２（抗体２）及びＣ）ｓｉｌｅｎｔヒトＩｇＧ１（抗体３）としての３つの型の抗ＣＤ２５非遮断抗体のＫＤの決定を示す図である。
【図４】ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ｂｉｏａｓｓａｙにおけるＡＤＣＰの誘導に関するヒトＩｇＧ１（抗体１）、ヒトＩｇＧ２（抗体２）及びｓｉｌｅｎｔヒトＩｇＧ１（抗体３）の特性評価を示す図である。ＣＤ２５発現ＫＡＲＰＡＳ  ２９９細胞を、様々な濃度の抗体（図中に示される）の存在下で、ＦｃγＲＩＩＡ＋／−ＦｃγＲＩＩＢ及びルシフェラーゼ発現を駆動するＮＦＡＴ応答要素（ＮＦＡＴ−ＲＥ−ｌｕｃ２）を発現するように遺伝子操作したＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と同時培養した。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本発明は、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を提供する。本発明は、被験体における癌、特に固形腫瘍又は液性腫瘍を治療又は予防する方法であって、ＣＤ２５に結合するヒトＩｇＧ２抗体を上記被験体に投与する工程を含み、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体が、ＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇを特に腫瘍内で効率的に枯渇させる構造要素を特徴とする、方法も提供する。本発明において規定されるＣＤ２５に結合するヒトＩｇＧ２抗体は、癌、特に固形腫瘍又は液性腫瘍の治療又は予防に使用することができる。代替的には、本発明は、癌、特に固形腫瘍又は液性腫瘍の治療又は予防のための薬剤の製造への、ＣＤ２５に結合し、ＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇの効率的な枯渇を可能にするヒトＩｇＧ２抗体の使用を提供する。本発明は、癌、特に固形腫瘍又は液性腫瘍の治療又は予防における、ＣＤ２５に結合し、ＣＤ２５＋細胞の枯渇、特にＴｒｅｇの枯渇を可能にするヒトＩｇＧ２抗体の使用も提供する。
【００４０】
一態様では、抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５に結合し、ＣＤ２５へのインターロイキン２結合を可能にし、かつＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇの効率的な枯渇を可能にするヒトＩｇＧ２であり得る。代替的には、抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５へのインターロイキン２結合を妨げないＣＤ２５への結合を可能にし、かつＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇの効率的な枯渇を可能にするヒトＩｇＧ２であり得る。
【００４１】
本発明は、抗ＣＤ２５抗体のアイソタイプ（ラット抗マウスＣＤ２５抗体ＰＣ６１で例示される）を、枯渇アイソタイプであると知られていないヒトＩｇＧ２アイソタイプに切り替える方法を開示し、驚くべきことに制御性Ｔ細胞の枯渇をもたらす。
【００４２】
さらに、本発明者らは、治療状況、例えば定着固形腫瘍又は液性腫瘍におけるＣＤ２５＋細胞、特に制御性Ｔ細胞の枯渇のためにヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を用いてＣＤ２５を標的化し得ることを見出した。本発明者らは、ヒトＩｇＧ２アイソタイプに改変した抗ＣＤ２５抗体が、腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞の効果的な枯渇をもたらし、これが例えば免疫チェックポイントタンパク質、腫瘍関連抗原又は抑制型Ｆｃγ受容体を標的とする化合物等の他の癌標的化合物と（二重特異性抗体と組み合わせて又は二重特異性抗体内で）組み合わせることができる治療アプローチであることを見出した。
【００４３】
ＣＤ２５は、ＩＬ−２受容体のα鎖であり、活性化Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、一部の胸腺細胞、骨髄系前駆細胞及び希突起膠細胞上に見られる。ＣＤ２５はＣＤ１２２及びＣＤ１３２と会合し、ＩＬ−２の高親和性受容体として作用するヘテロ三量体複合体を形成する。ヒトＣＤ２５のコンセンサス配列を下記の配列番号１に示す（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１５８９；アミノ酸２２〜２４０に対応する成熟ヒトＣＤ２５の細胞外ドメインに下線を付け、配列番号２として提示する）：
2020525517.tif 000002
【００４４】
本明細書で使用される場合、「ＣＤ２５に結合する抗体」は、ＩＬ−２受容体のＣＤ２５サブユニットに結合することが可能な抗体を指す。このサブユニットは、ＩＬ−２受容体のαサブユニットとしても知られる。かかる抗体は、本明細書で「抗ＣＤ２５抗体」とも称される。
【００４５】
抗ＣＤ２５抗体は、ＩＬ−２受容体のＣＤ２５サブユニット（抗原）への特異的結合が可能な抗体である。「特異的結合」、「特異的に結合する」（"bind specifically", and "specifically bind"）は、抗体が対象の抗原に対して約１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、又は１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）を有することを意味するものとして理解される。好ましい実施形態では、解離定数は１０−８Ｍ未満、例えば１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、又は１０−１２Ｍ未満である。
【００４６】
ＣＤ２５に対するヒトＩｇＧ２抗体の結合親和性を評価するためのＫｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、例えばＢｉａｃｏｒｅ分析、又はＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔシステムを用いる分析を含む標準的な方法論によって、実施例に記載されるように得ることができる。
【００４７】
例えば、バイオレイヤー干渉法によるＫＤの測定は、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６システム（Pall Forte Bio Corp.，USA）の使用を伴い得る。センサーを動態バッファー中で１０分間、オフラインで平衡化した後、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニタリングする。０．６２５μｇ／ｍｌのｈｉｓタグ付き組換えヒトＣＤ２５をＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に３００秒間ロードする。１５秒間の洗浄及び動態バッファーに対する４５秒間のベースライン工程の後に、センサーを一連の抗体濃度（３３．３ｎＭ、８．３ｎＭ、２．２ｎＭ及び０．５ｎＭ）の抗体に１８００秒間曝露し、続いて動態バッファー中で１２００秒間解離させる。データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ９．０を用いて参照サブトラクションにより処理する。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の免疫グロブリン分子及び抗原結合部位を含むそのフラグメントの両方を指し、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロコンジュゲート（heteroconjugate）及び／又は多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ（diabodies）、トリボディ（tribodies）及びテトラボディ（tetrabodies））、並びにＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧ、ポリペプチド−Ｆｃ融合体、一本鎖変異体（ｓｃＦｖフラグメント、ＶＨＨ、Ｔｒａｎｓ−ｂｏｄｙ（商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）、サメ単一ドメイン抗体、一本鎖又はタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）、ミニボディ（minibodies）、ＢｉＴＥ（商標）、二環式ペプチド及び他の代替的な免疫グロブリンタンパク質スキャフォールド）等を含む抗体の抗原結合フラグメントを含むが、これらに限定されない、抗体のポリクローナル形態、モノクローナル形態、遺伝子操作した形態及び別の形で修飾した形態を含む。幾つかの実施形態では、抗体は、自然に産生された場合にそれが有し得る共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）を欠いていてもよい。幾つかの実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、検出可能な部分、治療部分、触媒部分、又はポリエチレングリコール等の抗体の安定性若しくは投与の改善をもたらす他の化学基の付着）を有していてもよい。幾つかの実施形態では、抗体は、マスク（masked）抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ（商標））の形態であってもよい。マスク抗体は、抗体の抗原結合表面に特異的に結合し、抗体の抗原結合を妨げる遮断又は「マスク」ペプチドを含み得る。マスクペプチドは、切断可能なリンカーによって（例えば、プロテアーゼによって）抗体に連結する。所望の環境、すなわち腫瘍環境におけるリンカーの選択的切断は、マスキング／遮断ペプチドを解離させ、腫瘍において抗原結合が生じるのを可能にすることで、潜在毒性の問題を制限する。
【００４９】
「抗体」は、ラクダ科抗体（重鎖のみの抗体）及びアンチカリン（Skerra (2008) FEBS J 275, 2677-83）等の抗体様分子を指す場合もある。幾つかの実施形態では、抗体は、各々が単一の抗体配列に会合し、抗原内の幾らか異なるエピトープ（異なる参照抗ヒトＣＤ２５抗体に会合するヒトＣＤ２５細胞外ドメイン内の異なるエピトープ等）に結合する抗体のパネルとして生成するポリクローナル又はオリゴクローナルである。ポリクローナル又はオリゴクローナル抗体は、文献中に記載される医学的用途のための単一の調製物中で提供することができる（Kearns JD et al., 2015. Mol Cancer Ther. 14:1625-36）。
【００５０】
本発明の一態様では、抗体はモノクローナルである。抗体は、付加的又は代替的にはヒト化又はヒトであってもよい。更なる態様では、抗体はヒト、又はいずれにせよヒト被験体におけるその使用及び投与を可能にするフォーマット及び特徴を有する抗体である。
【００５１】
抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ又はＩｇＭ等の任意のクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４等の任意のサブクラスであり得る。本発明では、抗ＣＤ２５抗体は、ヒトＩｇＧ２サブクラスのものである。
【００５２】
ＩｇＧ抗体のＦｃ領域は、幾つかの細胞Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）と相互作用し、下流のエフェクター機構を刺激及び調節する。５つの活性化受容体、すなわちＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃγＲＩＩｃ（ＣＤ３２ｃ）、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（ＣＤ１６ｂ）、並びに１つの抑制型受容体ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）が存在する。ＩｇＧ抗体と免疫系との連絡は、抗体によって検知及び収集される情報を免疫系に取り次ぎ、特に生物学的製剤の状況下で先天免疫系と適応免疫系とを結びつけるＦｃγＲによって制御及び媒介される（Hayes J et al., 2016. J Inflamm Res 9: 209-219）。
【００５３】
ＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲに結合する能力が異なり、この相違する結合により、様々な機能的応答を誘発するそれらの能力が決まる。例えば、ヒトでは、ＦｃγＲＩＩＩａは、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の活性化に関与する主要な受容体であり、ＩｇＧ３、それにすぐ続いてＩｇＧ１が、この受容体に対して最も高い親和性を示し、ＡＤＣＣを強く誘導するそれらの能力が反映される。一方で、ＩｇＧ２が、この受容体に対して弱い結合を有することが示されている。本発明者らは、この弱い結合にもかかわらず、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有する抗ＣＤ２５がＴｒｅｇを効率的に枯渇させることを発見した。
【００５４】
本発明の特定の実施形態では、抗体は、活性化受容体ＦｃγＲＩＩａに結合する。特定の実施形態では、抗体は、活性化型ＦｃγＩＩａ受容体に約１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ又は１０−１０Ｍ未満の解離定数で結合する。特定の実施形態では、抗体は、少なくとも１つの活性化型Ｆｃγ受容体に約１０−６Ｍ未満の解離定数で結合する。
【００５５】
一態様では、抗体は、抑制型受容体ＦｃγＲＩＩｂに低い親和性で結合する。一態様では、抗体は、ＦｃγＲＩＩｂに約１０−７Ｍ超、約１０−６Ｍ超又は約１０−５Ｍ超の解離定数で結合する。特定の実施形態では、抗体は、ＦｃγＲＩＩｂに約１０−７Ｍ超の解離定数で結合する。特定の実施形態では、抗体は、抑制型Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩｂに結合しない。
【００５６】
Ｆｃγ受容体に対するヒトＩｇＧ２抗体の結合親和性を評価するためのＫｄは、標準的な方法論、例えばＢｉａｃｏｒｅ分析、又はＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔシステムを用いる分析を含む方法論によって、実施例に記載されるように得ることができる。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態では、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、本明細書で論考されるように、特にヒト起源の細胞に対してＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ活性を有する。以前に記載されているように（Nimmerjahn F et al., 2005. Science, 310:1510-2）、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ（ヒトＩｇＧ１アイソタイプに対応する）は、少なくとも１を上回る高い活性化型対抑制型比（Ａ／Ｉ）で全てのＦｃγＲサブタイプに結合する。対照的に、他のアイソタイプ（ｒＩｇＧ１アイソタイプ等）は、単一の活性化型ＦｃγＲのみ（ＦｃγＲＩＩＩ）及び抑制型ＦｃγＲＩＩｂに同様の親和性で結合し、低いＡ／Ｉ比（１未満）をもたらす。このより低いＡ／Ｉ比は、このアイソタイプのより低い腫瘍内Ｔｒｅｇ枯渇及びより低い抗腫瘍治療活性と相関し得る。しかしながら、本発明者らは驚くべきことに、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗体について既知のＦｃγＲ結合プロファイルにも関わらず、顕著なＴｒｅｇ枯渇は、抗ＣＤ２５抗体のヒトＩｇＧ２アイソタイプでも達成することができることを発見した。
【００５８】
好ましい実施形態では、本明細書に記載されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ヒトＣＤ２５に、好ましくは高い親和性で結合する。更に好ましくは、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、上記に示されるようにヒトＣＤ２５の細胞外領域に結合する。一態様では、本発明は、本明細書に記載される抗ＣＤ２５抗体を提供する。特に、実施例では、ＰＣ−６１．５．３ハイブリドーマによって分泌され、概してＰＣ６１又はＰＣ−６１のいずれかとして特定される抗体に基づくヒトＩｇＧ２抗体を用いて生成された実験データを提供する。文献（例えば、非特許文献４、McNeill A et al., 2007. Scand J Immunol. 65:63-9、非特許文献９）中のＰＣ−６１及びマウスＣＤ２５に関わるアッセイは、ＣＤ２５（特に、ＩＬ−２結合を遮断することにより）及びＦｃγ受容体（特に、好ましくはヒト活性化Ｆｃγ受容体に結合し、効率的にＴｒｅｇを枯渇させることにより）の両方との相互作用のレベルでＰＣ６１の同じ機能的特徴を有するヒトＣＤ２５を認識するヒト抗体を特徴付けるために適合させることができる。本明細書に記載される抗体の必要とされる機能的特徴を達成するのに適切な方法は、当業者に既知である。
【００５９】
ヒトＩｇＧ２抗体は、７Ｄ４ハイブリドーマによって分泌される抗体、又はＭ−Ａ２５１と称する非ＩＬ−２遮断抗ヒトＣＤ２５抗体に基づいて開発することもできる。本発明の背景技術において示されるように、７Ｄ４はマウスＣＤ２５に特異的であり、ＩＬ−２結合部位とは異なるマウスＣＤ２５内の１つのエピトープに結合し、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を遮断しない。文献（例えば、非特許文献４、McNeill A et al., 2007. Scand J Immunol. 65:63-9、非特許文献９）中の７Ｄ４及びマウスＣＤ２５に関わるアッセイは、ＣＤ２５（特に、ＩＬ−２結合を遮断しないことにより）及びＦｃγ受容体（特に、好ましくはヒト活性化Ｆｃγ受容体の１つ以上に結合し、効率的にＣＤ２５＋細胞を枯渇させる、好ましくはＴｒｅｇを枯渇させることにより）の両方との相互作用のレベルで７Ｄ４の同じ機能的特徴を有するヒトＣＤ２５を認識するヒト抗体を特徴付けるために適合させることができる。
【００６０】
好ましい実施形態では、癌を有するヒト被験体を治療する方法は、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を被験体に投与する工程を含み、該被験体は、固形腫瘍又は液性腫瘍を有するのが好ましく、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体はＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる。特定の一実施形態では、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、活性化Ｆｃγ受容体ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２ａ）に結合する。抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５に対して１０−８Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）を有するのが好ましい。より好ましくは、抗ＣＤ２５抗体は、ヒトＣＤ２５に結合し、マウスＣＤ２５に対する効果と同様のＩＬ−２結合及びＴｒｅｇ枯渇に対する効果をもたらす。更なる実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、１を上回る活性化型対抑制型比（Ａ／Ｉ）でＦｃγ受容体に結合し、及び／又はＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に結合するよりも高い親和性でＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２ａ）に結合する。
【００６１】
ＰＣ−６１抗体のＣＤ２５結合ドメインは、適切な定常領域と融合した組換えタンパク質としてクローニングされ、発現されている。ＰＣ−６１抗体のＣＤ２５結合ドメインの配列、加えてＣＤ２５の細胞外ドメイン内の異なるエピトープに対するその特異性及び／又はその他の機能活性を、任意の適切な技法によって（例えば、ＣＤ２５で免疫化した齧歯動物からハイブリドーマのパネルを産生させるか、又は組換え抗体のライブラリーを生成した後、本明細書に記載される機能的特性評価のためＣＤ２５フラグメントを有する抗体レパートリーをスクリーニングすることによって）生成及びスクリーニングされる候補抗ＣＤ２５抗体の比較に用いることができる。その結果として特定される抗ＣＤ２５抗体は、組換え抗体、特に完全抗体、又は本明細書に記載されるフラグメント若しくは変異体としても作製することができる。
【００６２】
自然抗体及び免疫グロブリンは通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、アミノ末端の可変ドメイン（ＶＨ）に続く幾つかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、アミノ末端の可変ドメイン（ＶＬ）及びカルボキシ末端の定常ドメインを有する。
【００６３】
可変領域は、構造的に相補的な抗原性標的と相互作用することが可能であり、異なる抗原特異性の抗体とは異なるアミノ酸配列を特徴とする。Ｈ鎖又はＬ鎖のいずれかの可変領域は、抗原性標的に特異的に結合することが可能なアミノ酸配列を含有する。これらの配列内には、異なる特異性の抗体間での極端な可変性から「超可変」と名付けられたより小さな配列が存在する。かかる超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」領域とも称される。
【００６４】
これらのＣＤＲ領域により、特定の抗原決定基構造に対する抗体の基本的な特異性が説明される。ＣＤＲは、可変領域内のアミノ酸の非連続ストレッチであるが、種に関わらず、可変重鎖及び軽鎖領域内のこれらの重要なアミノ酸配列の配置位置が、可変鎖のアミノ酸配列内で同様の位置を有することが見出されている。全ての抗体の可変重鎖及び軽鎖は各々、それぞれの軽（Ｌ）鎖及び重（Ｈ）鎖について各々が互いに非連続である３つのＣＤＲ領域を有する（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３と称される）。認められているＣＤＲ領域は、以前に記載されている（Kabat et al., 1977. J Biol Chem 252, 6609-6616）。
【００６５】
本発明の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）、並びにＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇ細胞の標的化、増殖の遮断及び／又は枯渇を可能にする任意の他の機構によって機能することができる。
【００６６】
「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下での本発明の抗体による抗原発現細胞の溶解を指す。
【００６７】
「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、それにより標的細胞の溶解をもたらす細胞媒介反応を指す。
【００６８】
「抗体依存性細胞介在性食作用」（ＡＤＣＰ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する食細胞（マクロファージ等）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、それにより標的細胞の食作用をもたらす細胞媒介反応を指す。
【００６９】
ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰは、当該技術分野で既知であり、利用可能なアッセイを用い（Clynes et al. (1998) Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-6）、実施例において論考されるように測定することができる。抗体の定常領域は、補体を固定し、細胞依存性細胞毒性及び食作用を媒介する抗体の能力に重要である。このため、本明細書で論考されるように、抗体のアイソタイプは、抗体が細胞毒性／食作用を媒介するのに望ましいかどうかに基づいて選択することができる。
【００７０】
本明細書で論考されるように、本発明の一実施形態では、Ｔｒｅｇ細胞の枯渇をもたらすヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を使用することができる。例えば、強いＣＤＣ応答及び／又は強いＡＤＣＣ及び／又は強いＡＤＣＰ応答を誘発するヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を使用することができる。ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰを増大する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、ＣＤＣ応答は、Ｃ１ｑ結合の親和性を増大する抗体の突然変異により増大することができる（ldusogie et al. (2001) J lmmunol 166, 2571-5）。
【００７１】
ＡＤＣＣは、フコース部分を抗体グリカンから除去する方法、例えばＹＢ２／０細胞株における抗体の産生、細胞フコース代謝若しくは抗体グリコシル化プロセスの操作、又はヒトＩｇＧ２のＦｃ部分に対する特異的突然変異の導入によって増大することができる。ＡＤＣＰもヒトＩｇＧ２のＦｃ部分に対する特異的突然変異の導入によって増大することができる。
【００７２】
本発明の特定の実施形態では、ＡＤＣＣ応答を誘発するように抗体を最適化する。すなわち、ＡＤＣＣ応答を、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合を阻害しない抗体、例えば非修飾抗ＣＤ２５モノクローナル抗体を含む他の抗ＣＤ２５抗体に対して増強、増大又は改善する。
【００７３】
本明細書における「ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害しない」への言及は、代替的には、抗ＣＤ２５抗体が非ＩＬ−２遮断抗体又は「非遮断」抗体である（抗ＣＤ２５抗体の存在下でのＣＤ２５へのＩＬ−２結合の非遮断に関して）、すなわち、抗体がＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を遮断せず、特にＣＤ２５発現細胞におけるインターロイキン−２シグナル伝達を阻害しないと表現することができる。
【００７４】
「遮断しない」、「遮断せずに」、「非遮断」、「非ＩＬ２遮断」等への言及（抗ＣＤ２５抗体の存在下でのＣＤ２５へのＩＬ−２結合の非遮断に関して）は、本発明のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体がＣＤ２５を介したＩＬ−２のシグナル伝達を遮断しない実施形態を含む。すなわち、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、抗体の非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達と比較してＣＤ２５を介したＩＬ−２シグナル伝達を５０％未満阻害する。好ましくは、抗ＣＤ２５抗体は、抗体の非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達と比較して、ＩＬ−２シグナル伝達を約４０％、３５％、３０％未満、好ましくは約２５％未満阻害する。抗ＣＤ２５非ＩＬ−２遮断抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ−２結合を妨げずに又はＣＤ２５へのＩＬ−２結合を実質的に妨げずに、ＣＤ２５への結合を可能にする。本明細書における非ＩＬ−２遮断抗体への言及は、代替的には、「ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害しない」抗ＣＤ２５抗体又は「ＩＬ−２のシグナル伝達を阻害しない」抗ＣＤ２５抗体と表現することができる。
【００７５】
幾つかの抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を可能にし得るが、依然としてＣＤ２５受容体を介したシグナル伝達を遮断する。かかる抗ＣＤ２５抗体は、本発明の範囲内ではない。代わりに、非ＩＬ−２遮断抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を可能にし、抗ＣＤ２５抗体の非存在下でのシグナル伝達と比較して、ＣＤ２５受容体を介したシグナル伝達のレベルを少なくとも５０％助長する。非ＩＬ−２遮断抗ＣＤ２５抗体は、抗ＣＤ２５抗体の非存在下でのシグナル伝達と比較して、ＣＤ２５受容体を介したシグナル伝達のレベルを少なくとも６０％、６５％、７０％、好ましくは少なくとも７５％助長するのが好ましい。抗ＣＤ２５抗体剤の存在下及び非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達の比較は、同じ又は実質的に同じ条件下で行うことができる。
【００７６】
幾つかの実施形態では、ＩＬ−２シグナル伝達は、標準Ｓｔａｔ−５リン酸化アッセイを用いて、細胞におけるリン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質のレベルを測定することによって決定することができる。例えば、ＩＬ−２シグナル伝達を測定するＳｔａｔ−５リン酸化アッセイは、ＰＢＭＣ細胞を１０μｇ／ｍｌ濃度の抗ＣＤ２５抗体の存在下で３０分間培養することと、その後様々な濃度のＩＬ−２（例えば１０Ｕ／ｍｌ、又は０．２５Ｕ／ｍｌ、０．７４Ｕ／ｍｌ、２．２２Ｕ／ｍｌ、６．６６Ｕ／ｍｌ若しくは２０Ｕ／ｍｌと濃度を変化させる）を１０分間添加することとを含み得る。次いで、細胞を透過処理することができ、続いてＳＴＡＴ５タンパク質のレベルをフローサイトメトリーによって分析されるリン酸化ＳＴＡＴ５ペプチドに対する蛍光標識抗体により測定することができる。ＩＬ−２シグナル伝達の遮断率は、以下のように算出することができる：遮断％＝１００×［（Ｓｔａｔ５＋細胞無抗体群（％）−Ｓｔａｔ５＋細胞１０μｇ／ｍｌ抗体群（％））／（Ｓｔａｔ５＋細胞無Ａｂ群（％））］。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、ラット又はマウスの抗体等の或る種からの免疫グロブリンに由来する可変配列と、ヒト抗体等の別の種からの免疫グロブリン定常領域とを有する抗体を指す。幾つかの実施形態では、キメラ抗体は、ＡＤＣＣの誘導について増強した定常領域を有し得る。
【００７８】
本発明による抗体は、部分的又は完全に合成のものであってもよく、抗体のポリペプチド鎖の少なくとも一部が合成され、場合によっては、同種抗原への結合について最適化される。かかる抗体は、キメラ又はヒト化抗体であってもよく、完全に四量体の構造であっても、又は二量体であり、単一の重鎖及び単一の軽鎖のみを含んでいてもよい。
【００７９】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって作製される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物又はファージのクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指すものであり、それを作製する方法を指すものではない。
【００８０】
本発明の抗体は、ヒト抗体であってもよい。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含んでいてもよい（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダム若しくは部位特異的突然変異誘発、又はｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導入される突然変異）。
【００８１】
更なる実施形態では、本発明は、本明細書で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体をコードする核酸分子を提供する。本発明は、本明細書で規定されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体の一部をコードする核酸分子、例えば抗ＣＤ２５抗体の重鎖又は軽鎖可変領域をコードする核酸分子も提供する。幾つかの実施形態では、このような提供される核酸分子は、コドン最適化核酸配列を含有してもよく、及び／又は例えば細菌、酵母、昆虫、魚、マウス、サル又はヒトの細胞等の宿主細胞における発現のための適切な核酸ベクター内の発現カセットに含まれていてもよい。幾つかの実施形態では、本発明は、所望の抗体を発現する異種核酸分子（例えば、ＤＮＡベクター）を含む宿主細胞を提供する。
【００８２】
幾つかの実施形態では、本発明は、上記で規定される単離ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を作製する方法を提供する。幾つかの実施形態では、かかる方法は、核酸（例えば、宿主細胞を構成し得る及び／又はベクターによって宿主細胞に送達され得る異種核酸）を含む宿主細胞を培養することを含み得る。宿主細胞（及び／又は異種核酸配列）は、抗体、又はその抗原結合フラグメントが宿主細胞から分泌され、細胞培養上清から単離されるように配置及び構築するのが好ましい。
【００８３】
本発明の抗体は単一特異性、二重特異性又は多重特異性であり得る。「多重特異性抗体」は、１つの標的抗原若しくはポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、又は２つ以上の標的抗原若しくはポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有し得る（Kufer et al. (2004) Trends Biotechnol 22, 238-44）。
【００８４】
本発明の一態様では、抗体は単一特異性抗体である。下記で更に論考されるように、代替的な態様では、抗体は二重特異性抗体である。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体」は、単一の抗原若しくはポリペプチド上又は２つの異なる抗原若しくはポリペプチド上のいずれかの２つの異なるエピトープに結合する能力を有する抗体を指す。
【００８６】
本明細書で論考される本発明の二重特異性抗体は、体細胞交雑等の生物学的方法；又は細胞株若しくは生物における所望の抗体構造をコードする非天然ＤＮＡ配列の発現等の遺伝子法；化学的方法（例えば、別の抗体又は抗体フラグメント等の１つ以上の分子実体への化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性会合又は別の形による）；又はそれらの組合せによって作製することができる。
【００８７】
単一特異性又は二重特異性抗体の作製を可能にする技術及び製品は、代替的なフォーマット、抗体−薬物コンジュゲート、抗体設計方法、ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング方法、定常領域、翻訳後修飾及び化学修飾、Ｆｃエンジニアリング（Fc engineering）等の癌細胞死を誘発する特徴の改善に関しても文献中で広範に概説されるように当該技術分野で既知である（Tiller K and Tessier P, 2015 Annu Rev Biomed Eng. 17: 191-216、Speiss C et al., 2015. Molecular Immunology 67 95-106、Weiner G, 2015. Nat Rev Cancer, 15: 361-370、Fan G et al., 2015. J Hematol Oncol 8:130）。かかる二重特異性抗体は、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＢｉＴＥ  ＤＡＲＴ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ノブインホール、Ｔｒｉｏｍａｂ、又は他の適切な分子フォーマット及びそのフラグメントを含む任意の市販のフォーマットで提供することができる。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」又は「抗原決定基」は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。当該技術分野で既知のように、エピトープは、連続アミノ酸（線状エピトープ）又はタンパク質の三次フォールディングによって並置された非連続アミノ酸（立体配座エピトープ）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは通例、変性溶媒への曝露の際に保持され、三次フォールディングによって形成されるエピトープは通例、変性溶媒での処理の際に失われる。エピトープは通例、少なくとも３個、より一般には少なくとも５個又は８個〜１０個のアミノ酸を独自の空間的立体配座で含む。エピトープの空間的立体配座を決定する方法は、当該技術分野で既知であり、例えばＸ線結晶構造解析及び２Ｄ核磁気共鳴が含まれる。例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed (1996)を参照されたい。
【００８９】
幾つかの実施形態では、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、特に癌の療法又は診断のための治療剤又は診断剤等のコンジュゲートペイロードを更に含む作用物質中に含まれていてもよい。放射性核種又は毒素との抗ＣＤ２５抗体コンジュゲートを使用することができる。一般に使用される放射性核種の例は、例えば特に９０Ｙ、１３１Ｉ及び６７Ｃｕであり、一般に使用される毒素の例は、ドキソルビシン及びカリケアマイシンである。更なる実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、変更された半減期を有するように修飾することができる。半減期の変更を達成する方法は、当該技術分野で既知である。
【００９０】
一実施形態では、抗体は、好ましくはＣＤ２５発現細胞の枯渇（ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣによる）の促進に加えて、ヒトＣＤ２５の機能を遮断することができる。好ましくは、抗体は、ヒトＣＤ２５へのヒトＩＬ−２の結合も遮断し、最も好ましくはＣＤ２５発現細胞におけるヒトＩＬ−２シグナル伝達（上記で論考される）を遮断する。代替的には、抗体は、ヒトＣＤ２５へのＩＬ−２の結合又はＩＬ−２のシグナル伝達を遮断しない。抗ＣＤ２５抗体剤の存在下及び非存在下でのＩＬ−２シグナル伝達の比較は、同じ又は実質的に同じ条件下で行うことができる。
【００９１】
本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明の態様のいずれかの被験体は、哺乳動物、好ましくはネコ、イヌ、ウマ、ロバ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ハムスター、マウス、ラット、ウサギ又はモルモットであるが、最も好ましくは、被験体はヒトである。このため、本明細書に記載される本発明の全ての態様において、被験体がヒトであるのが好ましい。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「癌」、「癌性」又は「悪性」という用語は、通例、無秩序な細胞成長を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指す又は説明するものである。
【００９３】
癌の例としては、癌腫、リンパ腫、白血病、芽細胞腫及び肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより特定の例としては、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、消化器（消化管）癌、腎癌、卵巣癌、肝癌、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、大腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、黒色腫、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵癌、多形膠芽腫、子宮頸癌、脳癌、胃癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌及び頭頸部癌が挙げられる。
【００９４】
一態様では、癌は固形腫瘍を伴う。固形腫瘍の例は、肉腫（海綿骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織、造血組織又は線維性結合組織等の組織中の間葉起源の形質転換細胞から生じる癌を含む）、癌腫（上皮細胞から生じる腫瘍を含む）、中皮腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫等である。固形腫瘍を伴う癌としては、限定されるものではないが、脳癌、肺癌、胃癌、十二指腸癌、食道癌、乳癌、結腸癌及び直腸癌、腎癌、膀胱癌、腎臓癌、膵癌、前立腺癌、卵巣癌、黒色腫、口腔癌、肉腫、眼癌、甲状腺癌、尿道癌、膣癌、頸部癌、リンパ腫等が挙げられる。
【００９５】
一態様では、癌は液性腫瘍を伴う。液性腫瘍は血液、骨髄及び／又はリンパ節中に生じる。液性腫瘍を伴う癌は白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫等を含むが、これらに限定されない。かかる癌は、血液癌としても知られ、一態様では、関連の癌は血液癌である。白血病の種類としては、リンパ性白血病及び骨髄性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。リンパ腫の種類としては、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９６】
一態様では、癌は、ホジキンリンパ腫等のリンパ腫及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）等のリンパ性白血病を含むが、これらに限定されない、ＣＤ２５を発現する腫瘍を伴う。
【００９７】
本発明の一態様では、癌は黒色腫、非小細胞肺癌、腎癌、卵巣癌、膀胱癌、肉腫及び結腸癌から選択される。本発明の好ましい態様では、癌は黒色腫、卵巣癌、非小細胞肺癌及び腎癌から選択される。一実施形態では、癌は黒色腫、卵巣癌又は乳癌ではない。好ましい態様では、癌は肉腫、結腸癌、黒色腫若しくは大腸癌、又はより一般に４Ｔ１、ＭＣＡ２０５、Ｂ１６、ＣＴ２６若しくはＭＣ３８細胞株を、化合物が治療管理に有用であることを検証するための前臨床モデルとすることができる任意のヒト癌である。
【００９８】
本明細書で使用される場合、癌と診断された又は癌を有する疑いがある被験体に適用される「腫瘍」という用語は、任意のサイズの悪性の又は潜在的に悪性の新生物又は組織塊を指し、原発腫瘍及び続発性新生物が含まれる。「癌」、「悪性疾患」、「新生物」、「腫瘍」及び「癌腫」という用語は、相対的に異常な、無制御の及び／又は自律的な成長を示し、顕著な制御不能の細胞増殖を特徴とする異常な成長表現型を示す腫瘍及び腫瘍細胞を指すために本明細書で区別なく用いられる場合もある。概して、検出又は治療にとって関心が持たれる細胞は、前癌性（例えば、良性）、悪性、前転移性（pre-metastatic）、転移性及び非転移性の細胞を含む。本開示の教示は、あらゆる全ての癌に関連し得る。
【００９９】
本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」は、通常は嚢胞又は液体領域を有しない組織の異常な成長又は量、特に白血病又は非固形リンパ腺癌以外の腫瘍及び／又は転移（位置を問わない）である。固形腫瘍は、良性又は悪性であり得る。固形腫瘍の種々のタイプは、固形腫瘍を形成する細胞のタイプ及び／又は固形腫瘍が位置する組織若しくは器官から名付けられる。固形腫瘍の例は、肉腫（海綿骨組織、軟骨組織、脂肪組織、筋組織、血管組織、造血組織又は線維性結合組織等の組織中の間葉起源の形質転換細胞から生じる癌を含む）、癌腫（上皮細胞から生じる腫瘍を含む）、黒色腫、リンパ腫、中皮腫、神経芽細胞腫及び網膜芽細胞腫である。
【０１００】
本発明に従う特に好ましい癌は、固形腫瘍の存在を特徴とするものを含む。すなわち、被験体は非固形腫瘍を有しない。本明細書で論考される本発明の全ての態様において、癌が固形腫瘍であり、すなわち被験体が固形腫瘍を有する（非固形腫瘍を有しない）のが好ましい。
【０１０１】
本明細書で使用される癌を「治療する」（"treat" or "treating"）ことへの言及は、例えば癌細胞の数の低減、腫瘍サイズの低減、末梢器官への癌細胞浸潤の速度の低減、又は腫瘍転移若しくは腫瘍成長の速度の低減等の少なくとも１つのプラスの治療効果の達成を定義するものである。
【０１０２】
癌におけるプラスの治療効果は、多数の方法で測定することができる（例えば、Weber (2009) J Nucl Med 50, 1S-10S）。例としては、腫瘍成長阻害に関して、国立がん研究所（ＮＣＩ）標準によると、Ｔ／Ｃ≦４２％が抗腫瘍活性の最低レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％が高い抗腫瘍活性レベルとみなされ、Ｔ／Ｃ（％）＝治療群の腫瘍体積中央値／対照の腫瘍体積中央値×１００である。幾つかの実施形態では、治療有効量によって達成される治療は、無増悪生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）又は全生存（ＯＳ）のいずれかである。「腫瘍進行までの期間」とも称されるＰＦＳは、癌が成長しない治療中及び治療後の時間の長さを示し、患者が完全奏効又は部分奏効を経験した時間、並びに患者が安定（stable disease）を経験した時間を含む。ＤＦＳは、患者が無病のままである治療中及び治療後の時間の長さを示す。ＯＳは、未処置又は未治療の個体又は患者と比較した平均余命の延長を指す。
【０１０３】
本明細書で使用される「予防」（又は予防法）への言及は、癌の症状の発生を遅らせる又は妨げることを指す。予防は、絶対的なものであっても（疾患が生じないような）、又は一部の個体又は限られた時間のみで効果的なものであってもよい。
【０１０４】
本発明の好ましい態様では、被験体は定着腫瘍を有する。すなわち、被験体は、例えば固形腫瘍として又は液性腫瘍として分類される腫瘍を既に有する。このように、本明細書に記載される本発明は、被験体が固形腫瘍又は液性腫瘍等の腫瘍を既に有する場合に用いることができる。このように、本発明は、既存の腫瘍の治療に用いることができる治療選択を提供する。本発明の一態様では、被験体は、既存の固形腫瘍又は液性腫瘍を有する。本発明は、予防又は好ましくは、固形腫瘍又は液性腫瘍を既に有する被験体において治療として用いることができる。一態様では、本発明は、予防法（preventative or prophylaxis）として用いられない。
【０１０５】
一態様では、本明細書に記載される本発明を用いて、例えば他の癌治療（例えば、所与の癌の標準治療法）と比較して、腫瘍退縮を増強することができ、腫瘍成長を阻害若しくは低減することができ、及び／又は生存時間を延長することができる。
【０１０６】
本発明の一態様では、本明細書に記載される癌を治療又は予防する方法は、癌を有する被験体を特定する工程、特に固形腫瘍又は液性腫瘍等の腫瘍を有する被験体を特定する工程を更に含む。治療方法は概して、被験体への治療有効量の本発明の抗体又は本発明の二重特異性抗体の投与を含む。
【０１０７】
癌患者を治療するのに効果的な本明細書に記載の療法の投与計画は、患者の疾患状態、年齢及び体重、並びに被験体において抗癌応答を誘発する療法の能力等の因子によって異なり得る。適切な投与量の選択は、当業者の能力の範囲内である。例えば０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇである。幾つかの実施形態では、かかる量は、適切な母集団に投与した場合に所望の又は有益な結果と相関することが決定された投与計画（すなわち、治療的投与計画）に従う投与に適切な単位投与量（又はその全画分）である。
【０１０８】
本明細書に記載される本発明の任意の態様による抗体は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤を付加的に含む医薬組成物の形態であってもよい。これらの組成物としては、例えば液体、半固体及び個体の剤形（dosage formulations）、例えば液体溶液（例えば、注射溶液及び注入溶液）、分散液若しくは懸濁液、錠剤、丸薬、又はリポソームが挙げられる。幾つかの実施形態では、好ましい形態は、意図される投与方法及び／又は治療用途によって異なり得る。抗体を含有する医薬組成物は、限定されるものではないが、経口投与、粘膜投与、吸入投与、局所投与、バッカル投与、経鼻投与、直腸投与又は非経口投与（例えば、静脈内、点滴、腫瘍内、節内（intranodal）、皮下、腹腔内、筋肉内、皮内、経皮、又は被験体の組織の物理的切開（physical breaching）及び組織の切開部を介した医薬組成物の投与を伴う他の種類の投与）を含む当該技術分野で既知の任意の適切な方法によって投与することができる。かかる配合物は、例えば皮内、腫瘍内若しくは皮下投与、又は静脈内注入に適切な注射溶液又は輸液溶液の形態であり得る。投与は、間欠投与を含んでいてもよい。代替的には、投与は、他の化合物の投与と同時の又はその投与の間の少なくとも選択期間にわたる持続投与（例えば、灌流）を含んでいてもよい。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、抗体は、埋め込み注射剤、経皮パッチ及びマイクロカプセル化送達系等の制御放出配合物のように急速な放出及び／又は分解を防ぐ担体を用いて調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。
【０１１０】
当業者には、例えば送達経路（例えば、経口対静脈内対皮下対腫瘍内等）が用量に影響する可能性があり、及び／又は必要とされる用量が送達経路に影響する可能性があることが理解される。例えば、特定の部位又は位置（例えば、腫瘍内）において特に高濃度の作用物質を目的とする場合、集中的な送達（例えば、この例では腫瘍内送達）が所望される及び／又は有用である可能性がある。経路及び／又は投与スケジュールを所与の治療計画に最適化する場合に考慮すべき他の因子は、例えば治療される特定の癌（例えば、タイプ、ステージ、位置等）、被験体の臨床状態（例えば、年齢、健康全般等）、併用療法の有無、及び医師に知られている他の因子を含み得る。
【０１１１】
医薬組成物は通例、滅菌であり、製造及び貯蔵の条件下で安定したものとする。組成物は溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、又は高い薬物濃度に適した他の規則構造として配合することができる。滅菌注射溶液は、必要量の抗体を、必要に応じて上記に列挙した成分の１つ又は組合せと共に適切な溶媒に組み入れ、続いて濾過減菌（filtered sterilization）を行うことによって調製することができる。非経口投与用の配合物としては、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中のエマルション、ペースト、及び本明細書で論考されるような埋め込み可能な徐放性又は生分解性配合物が挙げられるが、これらに限定されない。滅菌注射製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒を用いて調製することができる。本発明に従って使用される各医薬組成物は、用いられる投与量及び濃度で被験体に対して非毒性である薬学的に許容可能な分散剤、湿潤剤、懸濁化剤、等張剤、コーティング剤、抗細菌剤及び抗真菌剤、担体、賦形剤、塩又は安定化剤を含み得る。好ましくは、かかる組成物は、所与の方法及び／又は投与部位に適合する、例えば非経口（例えば、皮下、皮内又は静脈注射）、腫瘍内又は腫瘍周囲投与のための癌の治療に用いられる薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を更に含んでいてもよい。
【０１１２】
本発明による治療方法又は使用のための組成物の実施形態は、全被験体においてプラスの治療効果を達成するのに効果的でない場合もあるが、適切な医療行為並びにスチューデントｔ検定、χ２検定、マン−ホイットニーのＵ検定、クラスカル−ウォリス検定（Ｈ検定）、ヨンクヒール−タプストラ検定及びウィルコクソン検定等の当該技術分野で既知の任意の統計的検定によって決定されるような統計的に有意な被験体数と適合する医薬組成物及び投与計画を用いて行うものとする。
【０１１３】
以上及び以降で腫瘍、腫瘍性疾患、癌腫又は癌に言及する場合、代替的又は付加的に、腫瘍及び／又は転移の位置を問わず、元の器官若しくは組織及び／又は任意の他の位置における転移も意味する。
【０１１４】
本明細書で論考されるように、本発明はＣＤ２５＋細胞、特に制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させることに関する。このため、本発明の一態様では、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体はＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる又は低減する。一態様では、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体はＣＤ２５細胞、特にＴｒｅｇを枯渇させ又は低減し、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合、又は少なくともＣＤ２５を介したインターロイキン２のシグナル伝達を阻害しない。代替的には、一態様では、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体はＣＤ２５＋細胞、特にＴｒｅｇを枯渇させ又は低減し、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合、又は少なくともＣＤ２５を介したインターロイキン２のシグナル伝達を阻害する。
【０１１５】
一態様では、上記枯渇はＡＤＣＣによるものである。別の態様では、上記枯渇はＡＤＣＰによるものである。抗ＣＤ２５抗体は、循環制御性Ｔ細胞を枯渇させる又は低減することもできる。一態様では、上記枯渇はＡＤＣＣによるものである。別の態様では、上記枯渇はＡＤＣＰによるものである。
【０１１６】
このように、本発明は、被験体において腫瘍中の制御性Ｔ細胞を枯渇させる方法であって、該被験体にヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体を投与することを含む、方法を提供する。一態様では、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体は、上記で論考されるように、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合、又は少なくともＣＤ２５を介したＩＬ−２のシグナル伝達を阻害しない。
【０１１７】
好ましい実施形態では、ＣＤ２５＋細胞を枯渇させる。「枯渇させる」とは、ＣＤ２５＋細胞の数、比率又はパーセンテージが、本明細書に記載される抗ＣＤ２５抗体を投与しない場合と比べて減少していることを意味する。本明細書に記載される本発明の特定の実施形態では、約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％超のＣＤ２５＋細胞を枯渇させる。
【０１１８】
特に好ましい実施形態では、Ｔｒｅｇを固形腫瘍又は液性腫瘍中で枯渇させる。「枯渇させる」とは、Ｔｒｅｇの数、比率又はパーセンテージが、本明細書に記載される抗ＣＤ２５抗体を投与しない場合と比べて減少していることを意味する。本明細書に記載される本発明の特定の実施形態では、約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％超の腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる。
【０１１９】
Ｔｒｅｇ細胞の枯渇は、例えば実施例に記載されるような標準的な方法論を用いて測定することができる。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「制御性Ｔ細胞」（「Ｔｒｅｇ」、「Ｔｒｅｇ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」）は、自己免疫、アレルギー及び感染の制御に特化したＣＤ４＋Ｔリンパ球の系統を指す。これらは通例、Ｔ細胞集団の活性を調節するが、或る特定の自然免疫系の細胞型に影響を与える場合もある。Ｔｒｅｇは通常、バイオマーカーＣＤ４、ＣＤ２５及びＦｏｘｐ３の発現によって特定される。自然発生Ｔｒｅｇ細胞は通常、末梢性ＣＤ４＋Ｔリンパ球の約５％〜１０％を占める。しかしながら、腫瘍微小環境（すなわち、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞）では、これらは全ＣＤ４＋Ｔリンパ球集団の２０％〜３０％も占める場合がある。
【０１２１】
活性化ヒトＴｒｅｇ細胞は、エフェクターＴ細胞及びＡＰＣ等の標的細胞をパーフォリン依存性経路又はグランザイムＢ依存性経路を介して直接殺傷させることができる。細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４＋）Ｔｒｅｇ細胞は、ＡＰＣによってインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）発現を誘導し、これらが次にトリプトファンを還元することによってＴ細胞活性化を抑制する。Ｔｒｅｇ細胞は、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）及び形質転換成長因子（ＴＧＦβ）をｉｎ  ｖｉｖｏで放出することにより、Ｔ細胞活性化を直接阻害し、ＭＨＣ分子、ＣＤ８０、ＣＤ８６及びＩＬ−１２の発現を阻害することによってＡＰＣ機能を抑制する。Ｔｒｅｇ細胞は、抗原提示細胞上のＣＤ８０及びＣＤ８６に結合し得る高レベルのＣＴＬＡ４を発現し、エフェクターＴ細胞の適当な活性化を妨げることによって免疫を抑制することもできる。
【０１２２】
本発明の好ましい実施形態では、固形腫瘍又は液性腫瘍におけるエフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率が増大する。幾つかの実施形態では、固形腫瘍又は液性腫瘍におけるエフェクターＴ細胞の制御性Ｔ細胞に対する比率は、５、１０、１５、２０、４０又は８０超増大する。
【０１２３】
免疫エフェクター細胞は、免疫応答のエフェクター相に関与する免疫細胞を指す。例示的な免疫細胞としては、骨髄又はリンパ系起源の細胞、例えばリンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性（cytolytic）Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、マスト細胞及び好塩基球が挙げられる。
【０１２４】
免疫応答のエフェクター相に関与する免疫エフェクター細胞は、特異的Ｆｃ受容体を発現し、特定の免疫機能を行う。エフェクター細胞は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導し得る。例えば、好中球がＡＤＣＣを誘導することが可能である。例えば、ＦｃαＲを発現する単球、マクロファージ、好中球、好酸球及びリンパ球は、標的細胞の特異的殺傷及び免疫系の他の構成要素への抗原の提示、又は抗原を提示する細胞への結合に関与する。エフェクター細胞は、標的抗原、標的細胞又は微生物を貪食することもできる。本明細書で論考されるように、本発明による抗体は、ＡＤＣＣを誘導する能力について最適化することができる。
【０１２５】
幾つかの実施形態では、癌に対する異なる作用物質を、抗体と組み合わせて同じ又は異なる送達経路により及び／又は異なるスケジュールに従って投与することができる。代替的又は付加的には、幾つかの実施形態では、１つ以上の用量の第１の活性物質を１つ以上の他の活性物質と実質的に同時に、幾つかの実施形態では共通の経路により及び／又は単一の組成物の一部として投与する。当業者には、本発明に従って提供される併用療法の幾つかの実施形態が相乗効果を達成することが更に理解される。一部のかかる実施形態では、組合せで利用される１つ以上の作用物質の用量が、その作用物質が異なる治療計画で（例えば、単独療法として及び／又は異なる併用療法の一部として）利用される場合に標準の、好ましい又は必要とされるものとは実質的に異なっていてもよく（例えば、より低い）、及び／又はその作用物質が異なる治療計画で（例えば、単独療法として及び／又は異なる併用療法の一部として）利用される場合に標準の、好ましい又は必要とされる経路の代替的な経路によって送達されてもよい。
【０１２６】
２つ以上の活性物質を本発明に従って利用する幾つかの実施形態では、かかる作用物質は、同時又は順次に投与することができる。幾つかの実施形態では、或る作用物質の投与を、別の作用物質の投与に対して特別にタイミングを合わせる。例えば、幾つかの実施形態では、特定の効果が観察される（又は例えば所与の投与計画と対象の特定の効果との間の相関を示す集団研究に基づいて観察されることが期待される）ように第１の作用物質を投与する。幾つかの実施形態では、組合せで投与される作用物質の所望の相対的投与計画を、例えばｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを用いて評定するか又は経験的に決定することができる。幾つかの実施形態では、かかる評定又は経験的決定は、ｉｎ  ｖｉｖｏで患者集団（例えば、相関が確立されるように）又は代替的には対象の特定の患者において行われる。
【０１２７】
本発明の別の態様では、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた場合に改善された治療効果を有する。ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体及び免疫チェックポイント阻害剤を用いた併用療法は、定着腫瘍の治療において相乗効果を有し得る。一態様では、組合せにより腫瘍退縮の増強、腫瘍成長の障害若しくは低減の増強をもたらすことができ、及び／又は生存時間を、本明細書に記載される本発明を用いて、例えば抗ＣＤ２５抗体又はＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断単独（抗ＰＤ１抗体を用いて直接的に、又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いて間接的に）のいずれかと比較して延長することができる。本発明のヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５がＣＤ２５へのＩＬ−２の結合を阻害しない抗ＣＤ２５抗体である場合、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及び免疫チェックポイント阻害剤を用いた併用療法は、癌の治療に適切な投与量でのインターロイキン−２の投与を更に含んでいてもよい。
【０１２８】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイントタンパク質」は、特にＴ細胞応答の調整のための免疫系における抑制性経路に属するタンパク質を指す。正常な生理的条件下では、免疫チェックポイントは、自己免疫の予防、特に病原体に対する応答時の自己免疫の予防に極めて重要である。癌細胞は、免疫監視を回避するために免疫チェックポイントタンパク質の発現の調節を変化させることができる。
【０１２９】
免疫チェックポイントタンパク質の例としては、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ及びＴＩＭ３、更にはＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４−１ＢＢ及びＨＶＥＭが挙げられるが、これらに限定されない。免疫チェックポイントタンパク質は、免疫反応を抑制的に調節する他の免疫チェックポイントタンパク質に結合するタンパク質を指す場合もある。かかるタンパク質としては、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＶＥＭ、ＬＬＴ１及びＧＡＬ９が挙げられる。
【０１３０】
「免疫チェックポイントタンパク質阻害剤」は、免疫チェックポイントタンパク質によって媒介されるシグナル伝達及び／又はタンパク質間相互作用を妨げることができる任意のタンパク質を指す。本発明の一態様では、免疫チェックポイントタンパク質は、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１である。本明細書に記載される本発明の好ましい態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を介してＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を妨げる。
【０１３１】
このように、本発明は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療剤、好ましくはチェックポイント阻害剤を被験体に投与することを含む、癌を治療する方法も提供する。本発明は、癌の治療に使用される、ヒトＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤も提供する。
【０１３２】
本発明は、癌の治療のための薬剤の製造へのヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤の使用を付加的に提供する。ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及び免疫チェックポイント阻害剤等の更なる治療剤の投与は同時、別個又は順次であり得る。
【０１３３】
本発明は、被験体における癌の治療に使用される、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５と更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤との組合せを提供するが、ここで、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及び免疫チェックポイント阻害剤等の更なる治療剤は同時、別個又は順次に投与される。かかるヒトＩｇＧ２抗ヒトＣＤ２５抗体は、特にＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣを可能にする配列を呈する又は欠く、免疫チェックポイントを標的とする抗体と組み合わせて用いることができる。
【０１３４】
代替的な態様では、本発明は、癌の治療に使用されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体を提供するが、ここで、上記抗体は、更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。本発明は、癌を治療するための薬剤の製造におけるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５の使用も提供するが、ここで、上記薬剤は、更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。
【０１３５】
一実施形態では、癌の治療において更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合を阻害しないヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体であり得る。
【０１３６】
本発明は、薬学的に許容可能な媒体中のヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤とを含む医薬組成物を提供する。上記で論考されるように、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１の阻害剤、すなわちＰＤ−１アンタゴニストであってもよく、及び／又はヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５へのインターロイキン２の結合を阻害しない。
【０１３７】
ＣＤ２７９としても知られるＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）は、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞上で発現される細胞表面受容体である。そのリガンドとの相互作用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方でＴ細胞応答を弱めることが示されている。ＰＤ−１は、２つのリガンド、すなわちＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２に結合する。ＰＤ−１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する。ＰＤ−１シグナル伝達は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によって提示されるペプチド抗原にごく接近したＰＤ−１リガンドへの結合を必要とする（Freeman (2008) Proc Natl Acad Sci USA 105, 10275-6）。したがって、Ｔ細胞膜上のＰＤ−１及びＴＣＲのコライゲーション（co-ligation）を妨げるタンパク質、抗体又は小分子は、有用なＰＤ−１アンタゴニストである。
【０１３８】
一実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断する抗ＰＤ−１抗体又はその抗原結合フラグメントである。抗ＰＤ−１抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。抗ＰＤ−１抗体は、ヒト又はヒト化抗体であってもよい。抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤ−１受容体への特異的結合が可能な抗体である。当該技術分野で既知の抗ＰＤ−１抗体としては、ニボルマブ及びペムブロリズマブが挙げられる。
【０１３９】
本発明のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１のリガンドを結合及び／又は遮断してＰＤ−１受容体へのリガンドの結合を妨げる若しくは阻害するか、又はＰＤ−１受容体を介した抑制性シグナル伝達を誘導することなくＰＤ−１受容体に直接結合して遮断する化合物又は作用物質も含む。代替的には、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、抑制性シグナル伝達を誘発することなくＰＤ−１受容体に直接結合することができ、更にはＰＤ−１受容体のリガンドに結合して、リガンドのＰＤ−１受容体を介したシグナル伝達の誘発を低減する又は阻害する。ＰＤ−１受容体に結合し、抑制性シグナルの伝達を誘発するリガンドの数及び／又は量を低減することにより、より少数の細胞がＰＤ−１シグナル伝達によって送達される負のシグナルによって減弱され、より強固な免疫応答を達成することができる。
【０１４０】
一実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を遮断する抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合フラグメントである。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体であり得る。抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）等のヒト又はヒト化抗体であり得る。
【０１４１】
本発明は、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及びＴ細胞活性化共刺激経路のアゴニストである抗体を被験体に投与することを含む、癌を治療する方法も提供する。Ｔ細胞活性化共刺激経路の抗体アゴニストとしては、限定されるものではないが、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＬＩＧＨＴ及び４−１ＢＢに対するアゴニスト抗体が挙げられる。
【０１４２】
癌を治療する更なる方法は、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）を減少させる、遮断する、阻害する及び／又はそれに拮抗する化合物とを投与することを含む。かかるＦｃγＲＩＩｂアンタゴニストは、ＦｃγＲＩＩｂによって誘導される細胞内シグナル伝達に干渉する小分子、抑制型ＦｃγＲＩＩｂ受容体に係合しない修飾抗体又は抗ヒトＦｃγＲＩＩｂ（抗ＣＤ３２ｂ）抗体であり得る。例えば、アンタゴニスト抗ヒトＦｃγＲＩＩｂ抗体は、それらの抗腫瘍特性についても特性評価されている（Roghanian A et al., 2015, Cancer Cell. 27, 473-488、Rozan C et al., 2013, Mol Cancer Ther. 12:1481-91、国際公開第２０１５１７３３８４号、国際公開第２００８００２９３３号）。
【０１４３】
更なる態様では、本発明は、
（ａ）ＣＤ２５に結合する第１の抗原結合部分と、
（ｂ）免疫チェックポイントタンパク質、腫瘍関連抗原、抗ヒト活性化型Ｆｃ受容体抗体（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩ）又はアンタゴニスト抗ヒトＦｃγＲＩＩｂ抗体に結合する第２の抗原結合部分と、
を含む二重特異性抗体であって、この二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ２二重特異性抗体であり、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる、二重特異性抗体を提供する。
【０１４４】
代替的には、一態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ２５に結合する第１の抗原結合部分と、免疫チェックポイントタンパク質、腫瘍関連抗原、抗ヒト活性化型Ｆｃ受容体抗体（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩ）に結合する第２の抗原結合部分とを含み得るが、ＣＤ２５に結合する結合部分は、ヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体に基づくものである。
【０１４５】
ヒトＩｇＧ２二重特異性抗体は、腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるのが好ましい。一実施形態では、ヒトＩｇＧ２二重特異性抗体は、少なくとも１つの活性化型Ｆｃγ受容体、好ましくは活性化型Ｆｃγ受容体ＦｃγＲＩＩａに高い親和性で結合する。一実施形態では、第１の抗原結合部分は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害しない。代替的には、第１の抗原結合部分は、ＣＤ２５へのインターロイキン−２の結合を阻害する。
【０１４６】
好ましい実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＰＤ−Ｌ１に結合する。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「腫瘍関連抗原」は、腫瘍細胞を隣接する非癌細胞と区別可能なものにする腫瘍細胞上で発現される抗原を指し、限定されるものではないが、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＰＤ−Ｌ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲＶ３、ＣＥＡ、ＴＹＲＰ１及びＨＥＲ２が含まれる。関連の腫瘍関連抗原及び対応する治療上有用な抗腫瘍抗体剤を記載する様々な総説論文が公開されている（例えば、Sliwkowski & Mellman (2013) Science 341, 192-8を参照されたい）。かかる抗原及び対応する抗体としては、限定されるものではないが、ＣＤ２２（ブリナツモマブ）、ＣＤ２０（リツキシマブ、トシツモマブ）、ＣＤ５６（ロルボツズマブ）、ＣＤ６６ｅ／ＣＥＡ（ラベツズマブ）、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４（イピリムマブ）、ＣＤ２２１／ＩＧＦ１Ｒ（ＭＫ−０６４６）、ＣＤ３２６／Ｅｐｃａｍ（エドレコロマブ）、ＣＤ３４０／ＨＥＲ２（トラスツズマブ、ペルツズマブ）及びＥＧＦＲ（セツキシマブ、パニツムマブ）が挙げられる。
【０１４８】
一態様では、本明細書に記載される本発明による二重特異性抗体は、ＡＤＣＣ、又は一態様では、ＡＤＣＣの増強をもたらす。
【０１４９】
二重特異性抗体は、ＣＤ２５上の特異的エピトープと、本明細書で規定される免疫チェックポイントタンパク質又は腫瘍関連抗原上の特異的エピトープとに結合し得る。一実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ−２の結合に影響を及ぼさないＣＤ２５上の特異的エピトープに結合し得る。好ましい実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＰＤ−Ｌ１に結合する。好ましい態様では、本発明は、
（ａ）ＣＤ２５に結合する第１の抗原結合部分と、
（ｂ）腫瘍細胞上で発現される免疫チェックポイントタンパク質に結合する第２の抗原結合部分と、
を含む二重特異性抗体であって、この二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ２二重特異性抗体であり、ＣＤ２５＋細胞、特に腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させる、二重特異性抗体を提供する。
【０１５０】
特定の実施形態では、腫瘍細胞上で発現される免疫チェックポイントタンパク質は、ＰＤ−Ｌ１、ＶＩＳＴＡ、ＧＡＬ９、Ｂ７Ｈ３又はＢ７Ｈ４である。更に好ましくは、抗ＣＤ２５抗体は、腫瘍浸潤制御性Ｔ細胞を枯渇させるヒトＩｇＧ２抗体である。特定の一実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、少なくとも１つの活性化型Ｆｃγ受容体、好ましくはＦｃγＲＩＩａに高い親和性で結合するヒトＩｇＧ２抗体である。
【０１５１】
当業者であれば、既知の方法を用いて二重特異性抗体を作製することが可能である。本発明による二重特異性抗体は、本明細書に記載される本発明の態様のいずれかに用いることができる。本発明による二重特異性抗体内の第２の抗原結合部分は、ヒトＰＤ−１、ヒトＰＤ−Ｌ１又はヒトＣＴＬＡ−４に結合するのが好ましい。
【０１５２】
一態様では、二重特異性抗体は、ＣＤ２５と、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ上で高レベルに発現される免疫調節受容体、例えばＣＴＬＡ４、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４−１ＢＢ又はＯＸ４０とに結合し得る。
【０１５３】
本発明は、本明細書に記載されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、本明細書で論考される更なる治療剤、好ましくは免疫チェックポイント阻害剤、好ましくはＰＤ−１アンタゴニスト（抗ＰＤ１抗体を用いて直接的に、又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を用いて間接的に）とを含むキットも提供する。一態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−Ｌ１である。代替的な実施形態では、キットは、本明細書に記載される抗ＣＤ２５抗体と、Ｔ細胞活性化共刺激経路のアゴニストである抗体とを含む。キットは、使用説明書を含み得る。
【０１５４】
更なる態様では、キットは、本明細書に記載されるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体と、ＦｃγＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）を減少させる、遮断する、阻害する及び／又はそれに拮抗する化合物、又は代替的には本明細書に記載される抗ＣＤ２５抗体と、抗ヒト活性化型Ｆｃ受容体抗体（抗ＦｃγＲＩ、抗ＦｃγＲＩＩｃ又は抗ＦｃγＲＩＩＩａ）とを含み得る。
【０１５５】
本明細書に記載される本発明の任意の態様は、付加的な治療剤、特に付加的な癌療法と組み合わせて行うことができる。特に、本発明によるヒトＩｇＧ２抗ＣＤ２５抗体及び任意に免疫チェックポイント阻害剤は、共刺激抗体、化学療法及び／又は放射線療法（体外から放射線照射を行うこと又は放射性コンジュゲート化合物を投与することによる）、サイトカイン療法、標的療法、モノクローナル抗体療法、ワクチン若しくはアジュバント又は任意のそれらの組合せと組み合わせて投与することができる。
【０１５６】
本明細書で使用される化学療法物質（entity）は、細胞に有害な物質を指す。すなわち、この物質は細胞の生存能力を低減する。化学療法物質は、細胞毒性薬であり得る。企図される化学療法剤としては、限定されるものではないが、アルキル化剤、アントラサイクリン、エポチロン、ニトロソウレア、エチレンイミン／メチルメラミン、スルホン酸アルキル、アルキル化剤、代謝拮抗物質、ピリミジン類似体、エピポドフィロトキシン（epipodophylotoxins）、Ｌ−アスパラギナーゼ等の酵素；ＩＦＮα、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、Ｇ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ等の生物学的応答調節物質；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン等の白金配位錯体、アントラセンジオン、ヒドロキシウレア等の置換尿素、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）及びプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、ミトタン（ｏ，ｐ’−ＤＤＤ）及びアミノグルテチミド等の副腎皮質抑制剤（adrenocortical suppressants）；プレドニゾン及び同等物等の副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、デキサメタゾン及びアミノグルテチミドを含むホルモン及びアンタゴニスト；カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン及び酢酸メゲストロール等のプロゲスチン；ジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール同等物等のエストロゲン；タモキシフェン等の抗エストロゲン；プロピオン酸テストステロン及びフルオキシメステロン／同等物を含むアンドロゲン；フルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体及びロイプロリド等の抗アンドロゲン；並びにフルタミド等の非ステロイド性抗アンドロゲンが挙げられる。
【０１５７】
付加的な癌療法は、癌ワクチンの投与も含み得る。本明細書で使用される「癌ワクチン」は、癌患者に投与され、患者自身の免疫応答を強化することにより癌細胞を根絶するように設計された治療用癌ワクチンを指す。癌ワクチンとしては、腫瘍細胞ワクチン（自家及び同種）、樹状細胞ワクチン（ｅｘ  ｖｉｖｏ生成及びペプチド活性化した）、タンパク質／ペプチドベースの癌ワクチン及び遺伝子ワクチン（ＤＮＡ、ＲＮＡ及びウイルスベースのワクチン）が挙げられる。したがって、治療用癌ワクチンは原則として、外科手術、放射線療法及び化学療法等の従来の療法が無効である進行癌及び／又は再発腫瘍の更なる成長を阻害するために利用することができる。腫瘍細胞ベースのワクチン（自家及び同種）は、サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ１２、ＧＭＣＳＦ、ＦＬＴ３Ｌ）等の可溶性免疫刺激剤（immune stimulatory agents）、免疫調節受容体（ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ）に対する一本鎖Ｆｖ抗体を分泌し、及び／又は特にＩＣＯＳ−リガンド、４−１ＢＢリガンド、ＧＩＴＲ−リガンド及び／又はＯＸ４０リガンド等の免疫刺激受容体に対するリガンドを膜上に発現するように遺伝子操作されたものを含む。
【０１５８】
付加的な癌療法は、末梢及び腫瘍微小環境内での免疫調節を低減する他の抗体又は小分子試薬、例えばＴＧＦβ経路、ＩＤＯ（インドールアミンジオキシゲナーゼ）、アルギナーゼ及び／又はＣＳＦ１Ｒを標的とする分子であり得る。
【０１５９】
「組合せで」とは、本発明による任意の態様の投与の前、それと同時又はその後の付加的な療法の実施を指す場合がある。
【０１６０】
ここで、以下の実施例を用いて本発明を更に説明するが、実施例は、当業者が図面を参照して本発明を実施するのを助ける働きをすることを意図し、何ら本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０１６１】
実施例１  −  ヒトＩｇＧ１及びヒトｉｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５は、腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞及び末梢Ｔｒｅｇ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで枯渇させる
【０１６２】
細胞株
ＭＣＡ２０５腫瘍細胞（３−メチルコラントレン誘導弱免疫原性線維肉腫細胞；Gustave Roussy Cancer InstituteのG. Kroemerによる）及びレトロウイルス産生に用いられる２９３Ｔ細胞を１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、Sigma）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（全てGibcoによる）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Sigma）中で培養した。抗体産生に用いられるＫ５６２細胞は、１０％ＩｇＧ枯渇ＦＣＳ（Life Technologies）を添加したフェノールレッド不含イスコフ改変ダルベッコ培地（Iscove modified Dulbecco medium；ＩＭＤＭ）中で培養した。
【０１６３】
抗体産生
ヒトＩｇＧアイソタイプの抗マウスＣＤ２５（ｍＣＤ２５）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、クローンＰＣ６１から得られる抗マウスＣＤ２５の可変領域を用いて生成した。
【０１６４】
ラット抗マウスＣＤ２５  ＰＣ６１の重鎖及び軽鎖の可変領域の配列を、ＰＣ−６１．５．３ハイブリドーマ（ＡＴＣＣカタログ番号ＴＩＢ−２２２）からｃＤＮＡ末端の迅速増幅（rapid amplification of cDNA ends；ＲＡＣＥ）によって分割した後、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）又はヒトＩｇＧ２（ｈＩｇＧ２）をコードする発現ベクターに挿入し、抗体産生のための２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションに使用した。
【０１６５】
抗体を、プロテインＧ  ＨｉＴｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（GE Healthcare）を用いて上清から精製し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で透析し、濃縮し、濾過滅菌した。
【０１６６】
ＰＣ−６１．５．３抗体に由来する再クローニングした抗マウスＣＤ２５可変重鎖ＤＮＡ配列は、以下のタンパク質配列をコードする：
2020525517.tif 000003
【０１６７】
ＰＣ−６１．５．３抗体に由来する再クローニングした抗マウスＣＤ２５可変軽鎖ＤＮＡ配列は、以下のタンパク質配列をコードする：
2020525517.tif 000004
【０１６８】
腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞及び末梢Ｔｒｅｇ細胞のｉｎ  ｖｉｖｏ枯渇
マウスＦｃγＲの代わりにヒトＦｃγＲを発現するヒトＦｃ−γ受容体（ＦｃγＲ）トランスジェニックマウス（Smith et al 2012）を、０日目に５×１０５個のＭＣＡ２０５肉腫細胞で皮下にチャレンジした。マウスを未処理のままにするか（Ｎｏ  ｔｘ）、又は腫瘍チャレンジ後５日目及び７日目に２００μｇの抗ｍＣＤ２５（ＰＣ６１）−ｈＩｇＧ１若しくは抗ｍＣＤ２５（ＰＣ６１）−ｈＩｇＧ２で処理した。９日目にマウスを屠殺し、Ｔ細胞亜集団（ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋制御性細胞、Ｔｒｅｇ；ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３−エフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋ｅｆｆ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）の頻度を定量化するために、フローサイトメトリーを腫瘍及びリンパ節（ＬＮ）からの単一細胞懸濁液に対して行った。結果を図１に示す。
【０１６９】
抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をｉｎ  ｖｉｖｏで促進するヒトＩｇＧ１  ｍＡｂの能力と一致して、ｈＩｇＧ１アイソタイプの抗ＣＤ２５  ｍＡｂが腫瘍及びＬＮ中のＴｒｅｇ細胞を効率的に枯渇させ、ＣＤ４＋ｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比の増大をもたらすことがデータから実証される。驚くべきことに、当該分野における一般的な考え方に反して、ｈＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５は腫瘍浸潤Ｔｒｅｇ細胞の効率的な枯渇を促進するとともに、さらにＣＤ４＋ｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比及びＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を増大させた。データから、ｉｎ  ｖｉｖｏでｈＩｇＧ２アイソタイプの抗ＣＤ２５がＴｒｅｇ細胞を効果的に枯渇させるという考えが支持される。
【０１７０】
実施例２  −  Ｆｃγ受容体への抗体結合：
Ｆｃγ受容体への抗体結合の測定を、標準逐次結合アッセイを用いてＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６システム（Pall Forte Bio Corp.，USA）で行った。全てのヒト組換えＦｃγ受容体がSino Biologicalから供給された。全センサーを動態バッファー中で１０分間、オフラインで較正した。抗ＣＤ２５非ＩＬ−２遮断抗体のヒトＩｇＧ１型（抗体１）、ヒトＩｇＧ２型（抗体２）及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ型（抗体３）を試験した。
【０１７１】
全ての抗体が同じ可変軽鎖配列及び可変重鎖配列を有していた。抗体の定常領域により関連ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ変異体アイソタイプを有する非遮断抗ＣＤ２５抗体を得た。ＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ型は、Oganesyan V et al, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. 2008 Jun;64(Pt 6):700-704に記載されるように改変した。
【０１７２】
ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）については、１０μｇ／ｍＬの組換えｈｉｓタグ付きヒトＣＤ１６をＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に１２００秒間ロードした。１５秒間の洗浄及び動態バッファーに対する４５秒間のベースライン工程の後に、センサーを６６．６ｎＭの抗体に１５０秒間曝露し、続いて動態バッファー中で１５０秒間解離させた。
【０１７３】
ＣＤ３２ｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）については、０．６２５μｇ／ｍＬの組換えｈｉｓタグ付きヒトＣＤ１６をＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に９００秒間ロードした。１５秒間の洗浄及び動態バッファーに対する４５秒間のベースライン工程の後に、センサーを６６．６ｎＭの抗体に１５０秒間曝露し、続いて動態バッファー中で１５０秒間解離させた。
【０１７４】
データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ９．０を用いて参照サブトラクションにより処理した。
【０１７５】
結果を図２Ａ及び図２Ｂに示す。結果から、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有する抗体がＣＤ３２ａ（ＦｃγＲＩＩａ）に対してヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する抗体よりも高い結合親和性を有していたことが示される。しかしながら、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体及びヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体は、どちらもＣＤ３２ｂに対して同等の結合親和性を有していた。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ変異体抗体（陰性対照として使用した）は、ＣＤ３２ａ又はＣＤ３２ｂに結合しなかった。
【０１７６】
実施例３  −  ＣＤ２５への抗体結合
組換えヒトＣＤ２５（Sino Biologicalによる）への結合のＫＤの決定を、標準逐次結合アッセイを用いてＦｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ９６システム（Pall Forte Bio Corp.，USA）で行った。全センサーを動態バッファー中で１０分間、オフラインで平衡化した。０．６２５μｇ／ｍＬのｈｉｓタグ付き組換えヒトＣＤ２５をＮｉ−ＮＴＡバイオセンサー上に３００秒間ロードした。１５秒間の洗浄及び動態バッファーに対する４５秒間のベースライン工程の後に、センサーを一連の抗体濃度（３３．３ｎＭ、８．３ｎＭ、２．２ｎＭ及び０．５ｎＭ）の抗体に１８００秒間曝露し、続いて動態バッファー中で１２００秒間解離させた。
【０１７７】
データを、Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ９．０を用いて参照サブトラクションにより処理した。
【０１７８】
ＣＤ２５への抗ＣＤ２５抗体の結合の結果を図３Ａ〜図３Ｃに示す。３つ全ての抗ＣＤ２５非遮断抗体が１０−９Ｍ範囲のＫＤ値でヒトＣＤ２５に結合する。ヒトＣＤ２５への抗体結合は、アイソタイプの変化に影響を受けなかった。
【０１７９】
実施例４  −  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＰアッセイ
本明細書で標的（Ｔ）細胞と称するＣＤ２５発現ＫＡＲＰＡＳ  ２９９細胞を、低ＩｇＧ  ＦＢＳ添加培地（ＲＰＭＩ中の４％ＦＢＳ）中でＣＤ２５に対する異なる濃度の抗ＣＤ２５非遮断抗体（ヒトＩｇＧ１（抗体１）、ヒトＩｇＧ２（抗体２）及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ型（抗体３））と共に３７℃で２０分間インキュベートする。次いで、ＡＤＣＰエフェクター（Ｅ）細胞を細胞−ｍＡｂ混合物に１：１のＥ：Ｔ比で添加する。エフェクター細胞は、ルシフェラーゼレポーターシステムで安定にトランスフェクトし、ＣＤ３２Ａ／ＦｃγＲＩＩＡ＋／−ＣＤ３２Ｂ／ＦｃγＲＩＩＢを過剰発現するＪｕｒｋａｔ細胞である。３７℃で一晩のインキュベーション後に、細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ活性を特異的ルシフェラーゼ基質の加水分解による発光放出（相対発光量（ＲＬＵ））を用い、製造業者の説明書（PromegaのＢｉｏ−Ｇｌｏプロトコル）に従って測定する。
【０１８０】
図４に示されるように、ＩｇＧ２アイソタイプを有する抗体のＡＤＣＰを誘導する能力は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する抗体のＡＤＣＰ活性を誘導する能力と同等であった。抑制型受容体ＣＤ３２ｂの存在は、ヒトＩｇＧ１抗体又はヒトＩｇＧ２抗体のいずれかのＡＤＣＰ活性に僅かにしか影響を及ぼさなかった。ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ  ｓｉｌｅｎｔ変異体（陰性対照として使用した）は、このアッセイにおいてＡＤＣＰを誘導しなかった。
【０１８１】
ＩｇＧ２抗体及びＩｇＧ１抗体の両方についてのＡＤＣＰ活性に対するＣＤ３２ｂの存在の限定的な影響から、図２Ｂに示す結果及びＣＤ３２ｂに対するこれらの抗体の同等の弱い結合親和性が確認される。
【０１８２】
このデータから、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有する抗ＣＤ２５抗体がＴｒｅｇ細胞を効果的に枯渇させるという考えが更に支持される。
【０１８３】
上記の明細書で言及される全ての文献は、引用することにより本明細書の一部をなす。記載される本発明の方法及びシステムの様々な変更形態及び変形形態が、本発明の範囲及び趣旨を逸脱することなく当業者に明らかである。本発明を特定の好ましい実施形態に関連して説明したが、特許請求される本発明がかかる特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことを理解されたい。実際に、分子生物学、細胞免疫学又は関連分野の当業者に明白な記載の本発明を実施するための形態の様々な変更形態が添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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