(57)【要約】嚢胞性腎疾患を治療する方法を開示する。また、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患における嚢胞のサイズ及び／又は数を低減する方法を開示する。【選択図】図１３Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子を被験体に投与することを含む、それを必要とする被験体の嚢胞性腎疾患を治療する方法。
【請求項２】
前記嚢胞性腎疾患が常染色体優性多発性嚢胞疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が腎嚢胞のサイズ及び／又は数を低減する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、ｃＡＭＰ濃度が低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ２７が減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ９０が減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ７０が減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
嚢胞内腔において塩化物レベルが低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
嚢胞内腔において水が減少する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ＣＦＴＲをＥＲから側底膜及び頂端膜に移動させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ＰＣ２をＥＲからゴルジに移動させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ナトリウムの再吸収を回復させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、ＥＲからのＣａ２＋の放出を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｃＡＭＰの低下は、ＡＣ３の減少によるものである、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
腎臓の集合管においてＡＱＰ２レベルが回復する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
腎臓の近位尿細管（ＰＴ）、遠位尿細管（ＤＴ）、及び／又は集合管において、腎嚢胞のサイズ及び／又は数が低減する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＦＴＲ調節因子が、増強剤、補正剤、増幅剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
ＣＦＴＲ安定剤を更に含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年６月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／５２２，９８５号及び２０１８年５月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／６７６，６７４号の利益を主張するものであり、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、嚢胞性腎疾患を治療するための嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子の調節因子の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
常染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ＡＤＰＫＤ）は、最も有病率の高い、致死的となり得る単一遺伝子性ヒト疾患の１つであり、言い換えれば、２つの遺伝子（ｐｋｄ１及びｐｋｄ２）における１つ又は複数の欠損により引き起こされる疾患である。ＡＤＰＫＤは、家族間及び家族内で大きな変動を伴い、これは、一つにはその遺伝的異質性及び修飾遺伝子により説明することができる。また、ＡＤＰＫＤは、最も一般的な遺伝性嚢胞腎疾患であり、関連しているが異なる病因を有する一群の疾患であり、腎嚢胞及び様々な腎外症状の発症を特徴とする。ＡＤＰＫＤの場合、これらの症状としては、肝臓、精嚢、膵臓、くも膜等の他の臓器における嚢胞、並びに頭蓋内動脈瘤及び延長拡張症、大動脈基部拡張動脈瘤、僧帽弁逸脱、腹壁ヘルニア等の他の異常が挙げられる。ＡＤＰＫＤを患う患者の５０％超が最終的に末期腎疾患を発症し、透析又は腎移植を必要とする。ＡＤＰＫＤは、世界的に見て少なくとも１０００人に１人が罹患すると推定される。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の主題は、一つには、ＣＦＴＲ調節因子を、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ＡＤＰＫＤ）を治療するための潜在的な治療標的として特定する。
【０００５】
いくつかの態様では、本発明の主題は、それを必要とする被験体の嚢胞性腎疾患を治療する方法であり、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の調節因子を当該被験体に投与することを含む方法を提供する。  特定の態様では、嚢胞性腎疾患は常染色体優性多発性嚢胞疾患である。
【０００６】
本発明の方法のいくつかの態様において、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の調節因子は、腎嚢胞のサイズ及び／又は数を低減させる。他の態様では、被験体の腎臓において、ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、ｃＡＭＰ濃度が低下する。更に他の態様では、被験体の腎臓において、ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ２７が減少する。更に他の態様では、被験体の腎臓において、ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ９０が減少する。他の態様では、被験体の腎臓において、ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、Ｈｓｐ７０が減少する。特定の態様では、嚢胞内腔において塩化物レベルが低下する。他の態様では、嚢胞内腔において水が減少する。
【０００７】
本発明の主題の特定の態様を上述したが、それらは本発明の主題により全体的又は部分的に取り上げられ、他の態様は、以下で最も良く説明されるように、添付の実施例及び図面に関連して説明が進むにつれて明らかになるであろう。
【０００８】
本発明の主題を一般的な用語で説明してきたため、ここで添付の図面を参照するが、必ずしも一定の縮尺で描かれてはいない。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃ、図１Ｄ、図１Ｅ、図１Ｆ、及び図１Ｇは、代表的なＣＦＴＲ調節因子、例えば、ＶＸ−８０９が、ｐｋｄ１−／マウスにおいて嚢胞成長を遅らせ、腎機能を改善することを示す。（図１Ａ）ＤＭＳＯ処理マウス及びＶＸ−８０９処理マウス由来の生後２１日（ＰＮＤ２１）の腎切片の代表画像。（図１Ｂ）嚢胞指数、（図１Ｃ）腎重量、及び（図１Ｄ）腎重量／体重比率が有意に低下した。（図１Ｅ）体重に差異は認められなかった。（図１Ｆ）血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベル及び（図１Ｇ）クレアチニンレベルも低下した。方法：全腎臓面積と全嚢胞面積をＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ提供）で測定した。百分率として、嚢胞指数＝１００×（全嚢胞面積／全腎臓面積）で表す。カラムは、ＤＭＳＯ（ビヒクル）処理マウス（ｎ＝４〜５）及びＶＸ−８０９マウスの平均±標準誤差（ＳＥＭ）を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（全てのグラフについて）。統計解析は対応のない両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を用いて行った；
【図２】図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ、及び図２Ｄを示す。（図２Ａ及び図２Ｂ）：ＶＸ−８０９は、フォルスコリンの存在下で嚢胞の成長を阻害する。細胞を、０、２、４、６、８、１０、１２、１４日目に、ＤＭＳＯ（対照）、ＶＸ−８０９、又はＣ１８（１０μＭ）±フォルスコリンで処理した。（図２Ｃ及び図２Ｄ）：ＶＸ−８０９は、フォルスコリンの存在下で確立された嚢胞のサイズを縮小する。細胞を、９〜１６（７）日、ＤＭＳＯ（対照）、Ｃ１８又はＶＸ−８０９（１０μＭ）で処理した。全ての写真を１６日目に撮影した。カラムは平均±ＳＥＭ（ｎ＝６）を示す。対照群の平均嚢胞サイズを１００％とし、残りの嚢胞のサイズをこの平均値と比較した。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。嚢胞サイズは断面積から推定した。
【図３】図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｃ、及び図３Ｄは、細胞増殖がＶＸ−８０９により低減することを示す。（図３Ａ及び図３Ｂ）：Ｐｋｄ１ｆｌ／ｆｌマウス、Ｐａｘ８ｒｔＴＡマウス、ＴｅｔＯ−ｃｒｅマウスの腎臓における増殖。ＤＭＳＯ処理マウス及びＶＸ−８０９処理マウス由来のＰＮ２１腎切片のＫｉ６７（増殖の細胞マーカー）汚色の代表画像。矢印はＫｉ６７陽性細胞を示す。写真は、２０×対物レンズを備えたＺｅｉｓｓ顕微鏡で撮影した。（図３Ｃ）：Ｋｉ６７陽性細胞の要約データ。カラムは、ＤＭＳＯ（ビヒクル）処理マウス（ｎ＝３）及びＶＸ−８０９処理マウス（ｎ＝３）の平均±標準誤差を表す。統計解析は、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を用いて行った。（図３Ｄ）：ＰＮ細胞における増殖。ＰＮ細胞をＶＸ−８０９又はＤＭＳＯで処理した。細胞中のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）濃度は、製造業者のプロトコルに従い、ＢｒｄＵ細胞増殖アッセイキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｓｉｇｍａ＃２７５０）を用いて測定した。カラムは、４５０／５５０ｎＭでのＢｒｄＵのＯＤの平均±ＳＥを表す。データはＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定（ｎ＝５〜７）を用いて解析した。方法は以前記載した（６２）。＊Ｐ＞０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図４】図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄ、及び図４Ｅを示す。（図４Ａ及び図４Ｂ）：ＶＸ−８０９によりｃＡＭＰレベルが低下する。（図４Ａ）：マウス組織中のｃＡＭＰレベルがＶＸ−８０９により低下した。分析した腎サンプル（ｎ＝６）は、図１に示したものから採取した。（図４Ｂ）：コンフルエントＰＮ及びＰＨ細胞を、ＶＸ−８０９（１０μＭ）又はＤＭＳＯで１６時間処理した後、細胞をアッセイ用に採取する前にフォルスコリン（１００μＭ）で３０分間処理した。カラムは、平均±標準誤差を表す。統計解析は、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を用いて行った。各データセットは３つの個々のウェルからのものである。以前に示したように（２５）、静止ｃＡＭＰはＰＨ細胞に対してＰＮ細胞の方が多いことに注目されたい。また、フォルスコリンがｃＡＭＰの大幅な増加を引き起こしたことにも注目されたい。ＩＢＭＸではより小さな増加だった。しかしながら、フォルスコリン単独で誘導した増加は、ＩＢＭＸ＋フォルスコリンによるものと同様であった。ＶＸ−８０９処理は、フォルスコリンの有無のいずれにおいても、未処理ＰＮ細胞と比較して、ｃＡＭＰレベルを低下させた。（図４Ｃ、図４Ｄ、及び図４Ｅ）：アデニリルシクラーゼの発現。（図４Ｃ）：処理ＰＮ細胞及び対照ＰＮ細胞におけるアデニリルシクラーゼ（ＡＣ）６及びＡＣ３の発現を示すウェスタンブロット。（図４Ｄ及び図４Ｅ）：カラムは、ＡＣ３及びＡＣ６の発現の平均±ＳＥＭを表す。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。実験は４回繰り返した。全てのグラフについて、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、及び＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図５】図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃ、図５Ｄ、図５Ｅ、及び図５Ｆは、ＶＸ−８０９（１０μＭ）で１６時間処理したＰＮ細胞のレシオメトリックＦｕｒａ−２  ＡＭ分析によって得られた細胞内Ｃａ２＋（Ｆ３４０／Ｆ３８０）レベルを示す。（図５Ａ）：ＰＮ細胞及びＶＸ−８０９（１０μＭ）で処理した細胞におけるＡＴＰ（１００μＭ）に応答した細胞内Ｃａ２＋放出の代表的トレース。（図５Ｂ及び図５Ｃ）：ＡＴＰに応答した静止カルシウムレベル（図５Ｂ）、及びＡＴＰに応答したＣａ２＋放出の平均振幅（図５Ｃ）をまとめたグラフ。（図５Ｄ）：ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞におけるタプシガルギン（４μＭ）に応答したＥＲのＣａ２＋放出の代表的トレース。（図５Ｅ及び図５Ｆ）：タプシガルギンに応答した静止カルシウムレベル（図５Ｅ）及びＣａ２＋放出の平均振幅（図５Ｆ）。振幅は、シグナルのベースからピーク（Δｆ／ｆ）の標準偏差として測定した。２群間の有意性はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定（ｎ＝４〜５）を用いて分析した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１。データは、ＶＸ−８０９がＥＲのＣａ２＋放出を減少させることを示している。
【図６】図６Ａ及び図６Ｂは、ＰＣ２の発現はＶＸ−８０９によって変化しないことを示す。（図６Ａ）：処理細胞又は対照細胞におけるＰＣ２の発現を示すウェスタンブロット。（図６Ｂ）：カラムは、ＰＣ２発現の平均±ＳＥＭを表す。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。実験は６回（対照）又は７回繰り返した。
【図７】図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ、図７Ｄ、図７Ｅ、及び図７Ｆは、マウスにおいてシャペロンの発現がＶＸ−８０９によって変化することを示す。（図７Ａ及び図７Ｂ）：嚢胞誘発なしのｐｋｄ−／−マウス（ＮＤ）、ドキシサイクリンで嚢胞誘発したｐｋｄ−／−マウス（Ｄ）、又は３０ｍｇ／ｋｇ体重のＶＸ−８０９で処理した嚢胞誘発ｐｋｄ−／−マウス（Ｄ＋ＶＸ−８０９）に由来する腎組織の溶解物中のＨＳＰ２７、７０、９０及びＨＳＰ４０の代表的なウェスタンブロット画像。（図７Ｃ、図７Ｄ、図７Ｅ、及び図７Ｆ）：カラムは、ＨＳＰ２７、７０、９０及びＨＳＰ４０の発現の平均±標準誤差を表す。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。各処理群及び対照群についてｎ＝４。レーン間の黒い線は、同じゲルからの代表的な実験を表している。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図８】図８Ａ、図８Ｂ、図８Ｃ、図８Ｄ、図８Ｅ、図８Ｆ、図８Ｇ、及び図８Ｈは、ＰＨ細胞及びＰＮ細胞においてシャペロンの発現がＶＸ−８０９によって変化することを示す。（図８Ａ）：ＶＸ−８０９処理ＰＮ細胞又は対照ＰＮ細胞におけるＨＳＰ２７、７０及びＨＳＰ９０の発現を示すウェスタンブロット。（図８Ｂ、図８Ｃ、及び図８Ｄ）：カラムは、ＨＳＰ２７、７０、及び９０の発現の平均±標準誤差を表し、ＶＸ−８０９がＨＳＰ２７、７０、及び９０の発現を低下させることを示す。（図８Ｅ）：ＰＨ細胞対ＰＮ細胞におけるＨＳＰ２７、７０、及び９０のウェスタンブロット。（図８Ｆ、図８Ｇ、及び図８Ｈ）：カラムは、ＨＳＰ２７、７０、及び９０の発現の平均±標準誤差を表し、ＨＳＰ２７及び９０の発現がＰＨ細胞に対してＰＮ細胞でより高いことを示す。一方、Ｈｓｐ７０は、ＰＮ細胞に対してＰＨ細胞でより高い。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。実験は４〜５回繰り返した。細胞を、１０ｃｍの培養皿で許容条件（３３℃）にてγ−インターフェロンを含む培地中で増殖させた。次いで、細胞を、３７℃、γ−インターフェロンを含まない培地の非許容条件に移し、完全なコンフルエンスで評価した。４日目に、細胞をＶＸ−８０９（１０μＭ）で１６時間処理し、５日目にアッセイ用に採取した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図９】図９Ａ、図９Ｂ、図９Ｃ、図９Ｄ、図９Ｅ、図９Ｆ、図９Ｇ、及び図９Ｈは、ＶＸ−８０９及び／又はシクロヘキシミドで処理したＰＮ細胞におけるＨｓｐ２７、ＨＳｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現を示す。（Ａ）Ｐｋｄ１ヌル（ＰＮ）細胞を、アッセイ用に採取する前に、ＶＸ−８０９（１０μＭ）及び／又はシクロヘキシミド（２５μＭ）により指定の時点に処理した。（図９Ａ）：ＶＸ−８０９処理（１６時間）ＰＮ細胞、シクロヘキシミド処理ＰＮ細胞、又は対照ＰＮ細胞におけるＨｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現を示すウェスタンブロット。（図９Ｂ、図９Ｃ、及び図９Ｄ）：カラムは、ＶＸ−８０９及び／又はシクロヘキシミドで処理した細胞におけるＨｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現の平均±標準誤差を表す。（（図９Ｅ）：ＶＸ−８０９＋シクロヘキシミドで処理したＰＮ細胞又は対照ＰＮ細胞におけるＨｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現を示すウェスタンブロット。（図９Ｆ、図９Ｇ、及び図９Ｈ）：カラムは、シクロヘキシミドのみで処理した細胞又は対照ＰＮ細胞におけるＨｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現の平均±標準誤差を表す。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。実験は３〜５回繰り返した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図１０】図１０は、アポトーシスがＶＸ−８０９により低減することを示す。アポトーシスは、ＥｎｚＣｈｅｋ  Ｃａｓｐａｓｅ−３アッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｅ１３１８４）を用いて測定した。細胞をＶＸ−８０９又はＤＭＳＯで１６時間、指示濃度で処理するか、又は未処理（対照）のままとした。次に、製造業者のプロトコルに記載されているように、処理細胞及び対照細胞の両方を採取し、溶解し、アッセイした。反応は室温で行い、励起４９６ｎｍ、発光検出５２０ｎｍで、蛍光マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ３）により蛍光を測定した。各値からは非酵素対照用に決定されたバックグラウンド蛍光が差し引かれている。Ａｃ−ＤＥＶＤ−ＣＨＯを阻害剤対照（Ｉｎｈ−ｃｎｔｒｌ）として用い、シグナル検出とカスパーゼ３様プロテアーゼ活性との相関を確認した。データは、一元配置及びＡＮＯＶＡ多重比較を用いて分析した。ｎ＝４〜５。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。
【図１１】図１１Ａ、図１１Ｂ、図１１Ｃ、図１１Ｄ、及び図１１Ｅは、ＶＸ−８０９で処理したＰｋｄ１−／−マウスにおけるＥＲストレスマーカーＧＲＰ７８、ＥｒＯ１、及びＧＡＤＤの発現を示す。（図１１Ａ及び図１１Ｄ）：嚢胞誘発なしのＰｋｄ−／−マウス（ＮＤ）、ドキシサイクリンで嚢胞誘発したＰｋｄ−／−マウス（Ｄ）、又は３０ｍｇ／ｋｇ体重のＶＸ−８０９で処理した嚢胞誘発Ｐｋｄ−／−マウス（Ｄ＋ＶＸ−８０９）の腎組織の溶解物におけるＧＲＰ７８、ＥｒＯ１、及びＧＡＤＤの代表的なウェスタンブロット画像。（図１１Ｂ、図１１Ｃ、及び図１１Ｅ）：カラムは、ＧＲＰ７８、ＥｒＯ１、及びＧＡＤＤ１５３の発現の平均±標準誤差を表す。データは、ノンパラメトリックｔ検定により分析した。各処理群及び対照群についてｎ＝４。レーン間の黒い線は、同じゲルからの代表的な実験であるが、異なるレーンにロードされていることを表す。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図１２】図１２Ａ、図１２Ｂ、及び図１２Ｃは、Ｐｋｄ１ｆｌ／ｆｌマウス、Ｐａｘ８ｒｔＴＡマウス、ＴｅｔＯ−ｃｒｅマウスの腎臓におけるＧＡＤＤ１５３の発現を示す。ＤＭＳＯ（図１２Ａ）又はＶＸ−８０９（図１２Ｂ）で処理したＰＮ２１  Ｐｋｄ１ｆｌ／ｆｌマウスにおけるＧＡＤＤの発現（緑色）を表す免疫蛍光画像。カラム（図１２Ｃ）は、ＤＭＳＯ又はＶＸ−８０９で処理したＰＮ２１  Ｐｋｄ１ｆｌ／ｆｌマウスの腎切片におけるＧＡＤＤ免疫陽性（緑色）細胞の％面積を表す。データはＤＭＳＯ（ビヒクル）処理マウス（ｎ＝４）及びＶＸ−８０９処理マウス（ｎ＝４）の平均１±１ＳＥＭで表す。統計解析は、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を用いて行った。ＤＭＳＯ、ジメチルスルホキシド。（６２）に記載のとおり、４％パラホルムアルデヒド中で腎臓を固定した。ＧＡＤＤ１５３抗体（Ｓｃ−７３５１）、ヤギ抗ウサギ（Ａ２１４２９、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ５５５、１：１，０００；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カールズバッド、カリフォルニア州）及びＤＡＰＩ（Ｈ−１２００；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、バーリンゲーム、カリフォルニア州）を使用した。写真は、２０×対物レンズを備えたＺｅｉｓｓ顕微鏡で撮影した。ＧＡＤＤ１５３陽性細胞と総細胞数をＩｍａｇｅＪで測定した。結果は百分率で表す。
【図１３】図１３Ａ及び図１３Ｂは、嚢胞成長に対するＶＸ−８０９の提案される作用メカニズムの模式図を示す。（図１３Ａ）：ヒト嚢胞の遺伝子プロファイリングは、正常な腎臓と比較してＨＳＦ１発現の増加を示し（６３）、ＨＳＦ１の活性化は、本明細書及び他の研究（１６）で指摘されたヒートショック因子の増加を最も促進する可能性が高いいくつかのＨＳＰの転写上方制御に繋がる。以前、ＥＲからのタプシガルギン誘導Ｃａ２＋放出がＰＨ細胞に対してＰＮ細胞で増強され、アデニリルシクラーゼ３を介してｃＡＭＰの増加を導くことが示された（２５）。タプシガルギンは、ＳＥＲＣＡポンプ（筋細胞膜−小胞体Ｃａ２＋ポンプ）を阻害し（６４）、ＩＰ３Ｒ（イノシトール三リン酸受容体）を介してＣａ２＋をＥＲから漏出させる。ｃＡＭＰの上昇、ＥＲからのＣａ２＋放出の増強、及びヒートショック因子の発現増加の組み合わせにより、嚢胞の成長が促進される。（図１３Ｂ）：ＨＳＦ１を上方制御する因子の１つに、異常Ｃａ２＋調節がある（６５）。従って、ＶＸ−８０９は、直接的に（１５）又はタプシガルギンに誘導されるＥＲのＣａ２＋放出の減少を介して、Ｈｓｐ２７発現を低下させる。タプシガルギン誘導性Ｃａ２＋放出の阻害は、ＡＣ３のカルモデュリン調節を介してｃＡＭＰの低下と関連している。従って、タプシガルギンに誘導されるＥＲのＣａ２＋放出を阻害することにより、ＶＸ−８０９はヒートショックタンパク質を減少させ、ｃＡＭＰは、嚢胞から嚢胞の成長を促進するいくつかの成分を奪う。
【図１４】図１４Ａ及び図１４Ｂは、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞におけるＮＨＥ３の発現を示す。ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞におけるＮＨＥ３の発現は、ＰＮ細胞と比較して有意に増加する。
【図１５】図１５Ａ及び図１５Ｂは、ＰＮ細胞及びＰＨ細胞におけるＮＨＥ３活性（図１５Ａ及び図１５Ｂ）及びＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞におけるＮＨＥ３活性を示す。ＰＮ細胞におけるＮＨＥ３活性は、対照ＰＨ細胞と比較して有意に低下する。ＮＨＥ３活性は、ＰＮ細胞と比較してＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞で有意に増加する。
【図１６】図１６Ａ、図１６Ｂ、及び図１６Ｃは、ＰＮ／ＰＨ細胞又はＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞におけるＮＨＥ活性を示す。
【図１７】図１７Ａ及び図１７Ｂは、対照細胞及び処理細胞におけるＰＣ２及び局在化マーカーの共焦点顕微鏡による局在化実験の画像（図１７Ａ）、及び対照細胞及びＶＸ−８０９処理細胞におけるＰＣ２及び局在化マーカーについてのピアソンの相関係数を示すグラフ（図１７Ｂ）を示す。これらの実験は、ＥＲからゴルジへのＰＣ２の移動が統計的に有意であることを示している。
【図１８】図１８Ａ及び図１８Ｂは、対照細胞及び処理細胞におけるＣＦＴＲ及び局在化マーカーの共焦点顕微鏡による局在化実験の画像（図１８Ａ）、及び対照細胞及びＶＸ−８０９処理細胞におけるＣＦＴＲ及び局在化マーカーについてのピアソンの相関係数を示すグラフ（図１８Ｂ）を示す。これらの実験は、ＣＦＴＲがＥＲから側底膜及び頂端膜へ有意に移動することを示す。
【図１９】図１９Ａ、図１９Ｂ、図１９Ｃ、及び図１９Ｄは、ＶＸ−８０９（１０μＭ）で１６時間処理したＰＮ細胞におけるＣＦＴＲの発現を示す。ＶＸ‐８０９処理は、対照ＰＮ細胞と比較してＣＦＴＲの発現を増強した。
【００１０】
本特許又は出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面付きの本特許又は特許出願公開の写しは、要求及び必要手数料の支払いにより、庁より提供されるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の主題は、添付の図面を参照して以下により詳細に記載されるが、本発明の主題の実施形態の全てではなく、一部が示される。同様の番号は、全体を通して同様の要素を指す。本発明の主題は、多くの異なる形態で具体化されてもよく、本明細書に記載の実施形態に限定されるものと解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本発明が適切な法的要件を満たすように提供される。実際に、前述の説明及び関連する図面に示された教示の利益を有する、本明細書に記載の本発明の主題の多くの修正及び他の実施形態が、本発明の主題に関連する分野の当業者に思い浮かぶであろう。従って、本発明の主題は、開示した特定の実施形態に限定されるものではないこと、修正及び他の実施形態は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されることを理解されたい。
【００１２】
本明細書において、嚢胞性腎疾患の治療のための調節因子及び方法を開示する。嚢胞性腎疾患は常染色体優性腎疾患であってもよい。嚢胞性腎疾患を治療する方法を開示する。当該方法は、腎嚢胞の数及び／又はサイズを低減することを含んでいてもよい。
【００１３】
Ｉ．嚢胞性腎疾患の治療方法
開示される調節因子は、嚢胞性腎疾患を治療するための方法に使用することができる。治療方法は、このような治療を必要とする被験体に、本明細書に開示される治療有効量の調節因子を含む組成物を投与することを含むことができる。このような嚢胞性腎疾患の治療は、本発明の調節因子を投与することにより、それを必要とする被験体に、治療レジメンの一部として単独で又は別の活性薬剤と併用して行うことができる。具体的には、本明細書に開示される治療方法は、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患を治療することができる。
【００１４】
ａ．嚢胞性腎疾患
開示される調節因子及び方法を用いて嚢胞性腎疾患を治療することができる。開示される調節因子及び方法は、腎嚢胞のサイズ及び／又は数を低減することができる。嚢胞性腎疾患は、片方又は両方の腎臓上に嚢胞を形成することがある。嚢胞性腎疾患は、片方又は両方の腎臓中に嚢胞を形成することがある。腎嚢胞は液体を含むことがある。嚢胞は固形物を含むことがある。嚢胞は液体及び固形物を含むことがある。１つの腎嚢胞がみられることがある。多くの腎嚢胞がみられることがある。
【００１５】
嚢胞性腎疾患の症状としては、腎疝痛、背部痛、側腹部痛、上腹部痛、再発性尿路感染症、血尿、頭痛、発熱、悪寒、上腹部腫脹、腎結石、高血圧、頻尿、尿閉塞、腎機能低下、及び腎不全を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００１６】
腎嚢胞は、超音波検査、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、又は遺伝子検査により検出することができる。嚢胞性腎疾患は遺伝性の場合がある。嚢胞性腎疾患は非遺伝性の場合がある。嚢胞性腎疾患は自然発生的な場合がある。嚢胞性腎疾患は腎機能の変化を引き起こすことがある。嚢胞性腎疾患は腎機能の低下を引き起こすことがある。嚢胞性腎疾患は腎不全を引き起こすことがある。
【００１７】
開示される組成物及び方法は、胞を除去するための手術の必要性を排除する可能性がある。開示された組成物及び方法で治療し得る胞性腎疾患の分類としては、成人発症、小児発症、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患、常染色体劣性嚢胞性腎疾患、ネフロン癆、多発性嚢胞性腎疾患、海綿腎、単純性腎胞、最小限に複雑な腎胞、中間型腎胞、明らかに悪性の腎胞、フォン・ヒッペル・リンドウ病結核性硬化症複合、限局性腎胞症、先天性ネフローゼ、家族性ネフローゼ症候群、家族性糸球体嚢胞性低形成腎、若年性ネフロン癆−髄質嚢胞性疾患複合、若年性ネフロン癆、後天性腎胞性疾患、良性多房性胞、胞性腎腫、腎杯憩室（ｃａｌｙｃｅａｌ  ｄｉｖｅｒｔｉｃｕｌｕｍ、ｐｙｅｌｏｇｅｎｉｃ  ｃｙｓｔ）、及び多嚢胞性異形成腎が挙げられるが、これらに限定されるものではない。嚢胞性腎疾患は、別の病態又は疾患と同時に発生することがある。いくつかの実施形態において、嚢胞性腎疾患は、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患である。
【００１８】
ｂ．常染色体優性多発性嚢胞腎疾患
開示される組成物及び方法を用いて常染色体優性多発性嚢胞腎疾患を治療することができる。ＡＤＰＫＤの被験体は複数の腎嚢胞を有することがある。ＡＤＰＫＤの被験体は高血圧を有することがある。ＡＤＰＫＤの被験体は腎機能が低下していることがある。ＡＤＰＫＤの被験体は腎不全を有することがある。ＡＤＰＫＤはタンパク質ＰＣ１と関連している可能性がある。ＡＤＰＫＤはタンパク質ＰＣ２と関連している可能性がある。嚢胞は腎臓内又は腎臓上に発生することがある。嚢胞はネフロン分節に発生することがある。ＡＤＰＫＤ嚢胞は液体を含んでいることがある。ＡＤＰＫＤ嚢胞の液体はｃＡＭＰに依存するメカニズムにより生産される可能性がある。ＡＤＰＫＤ嚢胞の形成は、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の活性化が関与している可能性がある。ＣＦＴＲの活性化により、嚢胞内腔に塩化物が分泌される可能性がある。ＣＦＴＲの活性化は、嚢胞内腔へのナトリウムの集積を引き起こす可能性がある。ＣＦＴＲの活性化は嚢胞内腔への水の蓄積を引き起こす可能性がある。
【００１９】
ｃ．嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子
開示される調節因子及び方法は、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス調節因子（ＣＦＴＲ）を標的とすることができる。ＣＦＴＲはＡＴＰ結合カセットファミリーのメンバーである。ＣＦＴＲはｃＡＭＰ依存性塩化物チャンネルとして機能することができる。チャネルの活性化は、調節ドメインのリン酸化、ヌクレオチド結合ドメインによるＡＴＰ結合、及びＡＴＰ加水分解のサイクルにより媒介される可能性がある。ＣＦＴＲ遺伝子の変異は嚢胞性線維症を引き起こす。嚢胞性線維症で最も頻繁に起こる突然変異であるＤｅｌｔａＦ５０８は、コードされたタンパク質の折り畳みと輸送の障害をもたらす。ＣＦＴＲは、ＡＤＰＫＤ嚢胞の内腔膜を補強する可能性がある。ＣＦＴＲはＡＤＰＫＤにおけるｃＡＭＰ依存液体分泌及び嚢胞の成長に寄与する可能性がある。ＣＦＴＲを標的とするために調節因子を使用することができる。
【００２０】
ｄ．嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子の調節因子
１つの実施形態において、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の調節因子を開示する。ＣＦＴＲ調節因子は小分子であってもよい。調節因子は増強剤であってもよい。増強剤はチャネルを活性化することができる。代表的な増強剤としては、イバカフトル（ＶＸ−７７０）が挙げられるが、これに限定されるものではない。調節因子は補正剤であってもよい。補正剤はタンパク質の折り畳みに影響を及ぼすことができる。調節因子は増幅剤であってもよい。増幅剤は遺伝子発現を増加させることができる。一般に、ＣＦＴＲ増幅剤は、増強剤又は補正剤の効果を増強する。ＣＦＴＲ増幅剤の例は、ＰＴＩ１３０及びＰＴＩ−４２８である。増幅剤の例は、国際公開第２０１５／１３８９０９号及び国際公開第２０１５／１３８９３４号にも開示されており、それぞれその全体が参照により組み込まれる。本発明の方法はまた、ＣＦＴＲ安定剤を含むことができる。ＣＦＴＲ安定化剤は、補正剤、補正剤／増強剤、又はＣＦＴＲ調節因子の組み合わせで処理された補正ＣＦＴＲの安定性を増強することができる。ＣＦＴＲ安定剤の例は、カボソンスタット（Ｎ９１１１５）である。安定剤の例は、国際公開第２０１２／０４８１８１号にも開示されており、これはその全体が参照により組み込まれる。
【００２１】
本発明の方法のいくつかの実施形態において、ＣＦＴＲ調節因子は、増強剤、補正剤、増幅剤、及びそれらの組合せからなる群から選択される。特定の実施形態において、ＣＦＴＲ調節因子を補正剤とすることができる。他の実施形態では、ＣＦＴＲ調節因子を増強剤とすることができる。他の実施形態では、ＣＦＴＲ調節因子を増幅剤とすることができる。いくつかの実施形態において、ＣＦＴＲ調節因子は、補正剤と増強剤との組み合わせ；補正剤と増幅剤との組み合わせ；又は補正剤と増強剤と増幅剤との組み合わせを含むことができる。更に別の実施形態では、本発明の方法は、安定剤を、増強剤、補正剤、及び／又は増幅剤等のＣＦＴＲ調節因子と組み合わせて含むことができる。
【００２２】
更に、調節因子はタンパク質輸送を変化させることができる。調節因子は、ＥＲのＣａ２＋放出を減少させることができる。調節因子は、ＥＲのＣａ２＋放出を阻害することができる。ＥＲのＣａ２＋放出を阻害することにより、成長刺激に対するＡＤＰＫＤ嚢胞の応答を妨げることができる。調節因子は、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ９０、及び／又はＨｓｐ７０を減少させることができる。Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ９０、及び／又はＨｓｐ７０の減少は、ＡＤＰＫＤ嚢胞のサイズ又は数を低減することができる。調節因子はｃＡＭＰを減少させることができる。調節因子はＡＣ３を減少させることによりｃＡＭＰレベルを低下させることができる。調節因子は腎臓におけるＣＦＴＲタンパク質の発現を増加させることができる。腎臓におけるＣＦＴＲタンパク質発現の増加は、塩化物の増加を引き起こすことができる。調節因子は、嚢胞内腔への塩化物の分泌を防ぐことができる。嚢胞内腔への塩化物の分泌を防ぐことにより、ナトリウム及び水が嚢胞内腔に入るのを防ぐことができる。嚢胞内腔に水が入るのを防ぐことにより、嚢胞のサイズを縮小させることができる。嚢胞の内腔に水が入るのを防ぐことで、ＡＤＰＫＤを治療することができる。調節因子は、嚢胞の成長を持続させ刺激するｃＡＭＰの能力を無効にすることを含め、ＡＤＰＫＤにおける腎細胞を非嚢胞形成表現型に回復させることができる。調節因子はナトリウム再吸収を引き起こすことができる。調節因子はナトリウム再吸収を回復させることができる。調節因子はＣＦＴＲをＥＲから側底膜及び頂端膜へ移動させることができる。調節因子はＰＣ２をＥＲからゴルジへ移動させることができる。
【００２３】
調節因子は、腎臓の近位尿細管（ＰＴ）、腎臓の遠位尿細管（ＤＴ）、及び／又は腎臓の集合管における嚢胞の成長を低減することができる。調節因子は、集合管においてＡＱＰ２を回復させることができる。調節因子は、ナトリウム、塩化物、及び水の再吸収をもたらし、それにより嚢胞内腔から液体を吸収することによって嚢胞サイズを縮小させることができる。調節因子は、ＣＦＴＲに直接作用して疾患の有害作用を減弱させることができる。調節因子はＣＦＴＲに間接的に作用して疾患の有害作用を減弱させることができる。
【００２４】
本明細書に開示される方法と共に使用することができるＣＦＴＲ調節因子の例としては、ルマカフトール（ＶＸ−８０９）、Ｃｏｒｒ−４ａ、ＶＲＴ−３２５、Ｃ１８、Ｃ４、Ｃ３、ＶＸ−７７０、ＶＸ−７８６、４−フェニル酪酸（４ＰＢＡ）、ＶＲＴ−５３２、Ｎ６０２２、ミグルスタット、シルデナフィル及びその類似体、アタルレン（ＰＴＣ１２４）、オウバイン（ｏｕｂａｉｎ）、ロスコビチン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、ラトンデュイン（ｌａｔｏｎｄｕｉｎｅ）及びその類似体、ＳＡＨＡ、ＦＤＬ１６９、テザカフトル（ＶＸ−６６１）、ＶＸ−６５９、並びにＶＸ−４４５が挙げられるが、これらに限定されるものではない。追加の増強剤及び補正剤は米国特許第９，９８１，９１０号明細書に含まれており、これはその全体が参照により組み込まれる。
【００２５】
ｅ．投与形態
治療方法は、本発明の調節因子を投与する任意の数の形態を含むことができる。投与形態としては、錠剤、丸剤、糖衣錠、硬質及び軟質ゲルカプセル、顆粒、ペレット、水性、脂質、油性又は他の溶液、エマルション、例えば、水中油型エマルション、リポソーム、水性又は油性懸濁液、シロップ、エリキシル、固形エマルション、固体分散液、又は分散性粉末を挙げることができる。経口投与用の医薬組成物の調製のために、薬剤は、例えば、アラビアゴム、タルクム、デンプン、糖（例えば、マンニトース、メチルセルロース、ラクトース）、ゼラチン、界面活性剤、ステアリン酸マグネシウム、水性又は非水性溶媒、パラフィン誘導体、架橋剤、分散剤、乳化剤、潤滑剤、保存剤、香料（例えば、エーテル油）、溶解性増強剤（例えば、安息香酸ベンジル又はベンジルアルコール）又はバイオアベイラビリティ増強剤（例えば、ゲルシア（登録商標））等の一般的に知られ使用されているアジュバント及び賦形剤と混合してもよい。医薬組成物では、薬剤を微粒子、例えば、ナノ粒子組成物中に分散させてもよい。
【００２６】
非経口投与用に、薬剤を、例えば、水、緩衝液、可溶化剤の有無にかかわらず油、界面活性剤、分散剤、又は乳化剤等の生理学的に許容される希釈剤に溶解又は懸濁することができる。油として、例えば、これらに限定されるものではないが、オリーブ油、ピーナッツ油、綿実油、大豆油、ヒマシ油、及びゴマ油を用いることができる。より一般的には、非経口投与用に、薬剤を、水性、脂質、油性又は他の種類の溶液又は懸濁液の形態とすることができ、又はリポソーム若しくはナノ懸濁液の形態で投与することができる。
【００２７】
ｆ．併用療法
用語「組み合わせ（併用）（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」は、その最も広い意味で使用され、被験体が少なくとも２つの薬剤を投与されることを意味する。より詳細には、用語「組み合わせて（併用して）（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」は、例えば、単一疾患状態の治療のための２つの（又はそれよりも多い）活性薬剤の同時投与を指す。本明細書で用いる場合、活性薬剤は、組み合わされて単一剤形で投与してもよく、別個の剤形で同時に投与してもよく、或いは同じ日又は別個の日に交互に又は連続して投与される別個の剤形として投与してもよい。本発明の主題の１つの実施形態において、活性薬剤は、組み合わされて単一剤形で投与される。別の実施形態では、活性薬剤は別個の剤形で投与される（例えば、その場合、一方の量は変化させるが他方の量は変化させないことが望ましい）。単一剤形は、疾患状態の治療のための更なる活性薬剤を含んでもよい。
【００２８】
更に、本発明の組成物は、単独で、又は、薬剤の安定性を高め、特定の実施形態においてそれらを含有する医薬組成物の投与を容易にし、溶解又は分散を増大させ、活性を増大させ、アジュバント療法を提供するといったアジュバントと、その他の有効成分を含めて組み合わせて投与することができる。有利なことに、このような併用療法は、より低用量の従来の治療薬を利用することにより、それらの薬剤を単独療法として使用する場合に生じる可能性のある毒性及び有害な副作用を回避する。
【００２９】
調節因子の投与のタイミングは、これらの薬剤の組み合わせの有益な効果が達成される限り、変化させることができる。従って、用語「と組み合わせて（と併用して）（ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」は、少なくとも２つの調節因子及び任意選択の追加薬剤を、同時に、連続的に、又はそれらの組み合わせで投与することを指す。従って、被験体において全ての薬剤の組み合わせの効果が達成される限り、少なくとも２つの阻害剤及び任意選択の追加薬剤の組み合わせを投与された被験体は、同じ時間に（即ち、同時に）又は異なる時間に（即ち、連続的に、いずれかの順番で、同日に又は異なる日に）、少なくとも２つの阻害剤及び任意選択の追加薬剤の投与を受けることができる。
【００３０】
連続的に投与する場合、これらの薬剤は、互いに１、５、１０、３０、６０、１２０、１８０、２４０分、又はそれより長い時間内に投与することができる。他の実施形態では、連続的に投与される薬剤は、互いに１、２、３、４、５、１０、１５、２０日、又はそれより多い日数内に投与することができる。薬剤を同時に投与する場合、それらは、それぞれが少なくとも１つの阻害剤及び任意選択の追加薬剤のいずれかを含む別個の医薬組成物として被験体に投与することができ、或いは、それらは、全ての薬剤を含む単一の医薬組成物として被験体に投与することができる。
【００３１】
組み合わせて投与される場合、特定の生物学的応答を引き起こすための各薬剤の有効濃度は、単独投与された場合の各薬剤の有効濃度よりも低いものとすることができ、それにより、単剤として投与される場合に必要とされる用量に比して、１つ又は複数の薬剤の用量を減らすことができる。複数の薬剤の効果は、相加的であっても相乗的であってもよいが、そうである必要はない。薬剤は複数回投与してもよい。
【００３２】
いくつかの実施形態において、組み合わせて投与される場合、２つ又はそれよりも多い薬剤は相乗効果を有する可能性がある。本明細書で用いられる場合、用語「相乗作用（ｓｙｎｅｒｇｙ）」、「相乗的な」、「相乗的に」、及びそれらの派生語、例えば、「相乗効果」又は「相乗的組み合わせ」又は「相乗的組成物」等は、薬剤と少なくとも１つの追加の治療薬との組み合わせの生物学的活性が、個別に投与された場合のそれぞれの薬剤の生物学的活性の合計よりも大きい状況を指す。
【００３３】
相乗作用は、「相乗指数（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｉｎｄｅｘ、ＳＩ）」の点からで表すことができ、一般に、
ＱａＱＡ＋ＱｂＱＢ＝相乗指数（ＳＩ）
（式中、
ＱＡは、成分Ａに関するエンドポイントを生じた、単独で作用する成分Ａの濃度であり；
Ｑａは、エンドポイントを生じた、混合物中での成分Ａの濃度であり；
ＱＢは、成分Ｂに関するエンドポイントを生じた、単独で作用する成分Ｂの濃度であり；
Ｑｂは、エンドポイントを生じた、混合物中での成分Ｂの濃度である。）
により求められる比から、Ｆ．Ｃ．Ｋｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ９，５３８（１９６１）に記載の方法で決定することができる。
【００３４】
一般に、Ｑａ／ＱＡとＱｂ／ＱＢとの合計が１を超える場合には、拮抗作用が示唆される。合計が１に等しい場合は、相加作用が示唆される。合計が１未満の場合は、相乗作用が示される。ＳＩが低いほど、その特定の混合物によって示される相乗作用は大きくなる。従って、「相乗的組み合わせ」は、単独で使用した場合に観察される個々の成分の活性に基づいて予測される活性よりも高い活性を有する。更に、成分の「相乗的有効量」は、例えば、組成物中に存在する別の治療薬において相乗効果を誘発するために必要な成分の量を指す。
【００３５】
ＩＩ．医薬組成物
開示される調節因子は、被験体（患者等であり、ヒト又は非ヒトであってよい）への投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。
【００３６】
医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の薬剤を含むことができる。「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するために必要な用量及び期間において有効な量を指す。組成物の治療有効量は、当業者が決定することができ、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重等の因子、及び個体において所望の反応を誘発する組成物の能力によって異なってもよい。治療有効量はまた、開示の調節因子のあらゆる毒性又は有害作用を、治療に有益な効果が上回る量である。
【００３７】
「予防有効量」とは、所望の予防結果を達成するために必要な用量及び期間において有効な量を指す。典型的には、予防投与量は、疾患の前又は初期段階の被験体に用いられるため、予防有効量は、治療有効量よりも少ない可能性がある。
【００３８】
開示される調節因子の治療有効量は、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約９５０ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ〜約９００ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ〜約８５０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約８００ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ〜約７５０ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ〜約７００ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ〜約６５０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ〜約６００ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ〜約５５０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ〜約４５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ〜約３５０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、及び約９０ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇであってよい。
【００３９】
医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含んでいてもよい。本明細書で用いる場合、用語「薬学的に許容される担体」は、任意の種類の非毒性、不活性な固体充填剤、半固体充填剤、又は液体充填剤、希釈剤、封入材料、又は配合補助剤を意味する。薬学的に許容される担体となり得る物質の例としては、これらに限定されないが、ラクトース、グルコース、及びスクロース等の糖；これらに限定されないが、コーンスターチ及びジャガイモデンプン等のデンプン；これらに限定されないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース等のセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；これらに限定されないが、ココアバター及び坐剤用ワックス等の賦形剤；これらに限定されないが、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油等の油；プロピレングリコール等のグリコール；これらに限定されないが、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル等のエステル；寒天；これらに限定されないが、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；発熱因子非含有水（ｐｙｒｏｇｅｎ−ｆｒｅｅ  ｗａｔｅｒ）；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；及びリン酸緩衝液；並びにこれらに限定されないが、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム等の非毒性適合性潤滑剤が挙げられ、また、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、風味料及び香料、保存剤及び抗酸化剤を製剤者の判断に従って組成物中に含めることができる。
【００４０】
従って、化合物及びそれらの生理学的に許容される塩及び溶媒和物は、例えば、固形投与、点眼、油性局所製剤、注射、吸入（口又は鼻のいずれかを通して）、インプラント、又は経口、口腔、非経口、又は直腸投与による投与用に製剤化されてもよい。技術及び製剤は、概して、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍｅａｄｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）に見出すことができる。治療用組成物は、典型的には、製造及び貯蔵の条件下で無菌及び安定でなければならない。
【００４１】
開示される調節因子の投与経路及び組成物の形態は、使用される担体の種類を決定するであろう。組成物は、種々の形態、例えば、全身投与（例えば、経口、直腸、鼻腔、舌下、口腔、インプラント、又は非経口）又は局所投与（例えば、皮膚、肺、鼻腔、耳、眼、リポソーム送達システム、経皮、又はイオントフォレーシス）に適した形態であってよい。
【００４２】
全身投与用の担体としては、典型的には、希釈剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、着色剤、香料、甘味剤、抗酸化剤、保存剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、溶媒、懸濁剤、湿潤剤、界面活性剤、これらの組み合わせ、及びその他のうちの少なくとも１つが挙げられる。全ての担体は、組成物において任意選択である。
【００４３】
適切な希釈剤としては、グルコース、ラクトース、デキストロース、及びスクロース等の糖；プロピレングリコール等のジオール；炭酸カルシウム；炭酸ナトリウム；グリセリン、マンニトール、及びソルビトール等の糖アルコールが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の希釈剤の量は、典型的には約５０〜約９０％である。
【００４４】
適切な潤滑剤としては、シリカ、タルク、ステアリン酸並びにそのマグネシウム塩及びカルシウム塩、硫酸カルシウム；ポリエチレングリコール等の液体潤滑剤、ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及びテオブロマ油等の植物油が挙げられる。全身用又は局所用組成物中の潤滑剤の量は、典型的には約５〜約１０％である。
【００４５】
適切な結合剤としては、ポリビニルピロリドン；ケイ酸アルミニウムマグネシウム；コーンスターチ及びジャガイモデンプン等のデンプン；ゼラチン；トラガカント；並びにセルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、メチルセルロース、微結晶セルロース、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。全身用組成物中の結合剤の量は、典型的には約５〜約５０％である。
【００４６】
適切な崩壊剤としては、寒天、アルギン酸及びそのナトリウム塩、発泡性混合物、クロスカルメロース、クロスポビドン、カルボキシメチルスターチナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、クレー、及びイオン交換樹脂が挙げられる。全身用又は局所用組成物中の崩壊剤の量は、典型的には約０．１〜約１０％である。
【００４７】
適切な着色剤としては、ＦＤ＆Ｃ色素等の着色剤が挙げられる。使用される場合、全身用又は局所用組成物中の着色剤の量は、典型的には約０．００５〜約０．１％である。
【００４８】
適切な香料としては、メントール、ペパーミント、及び果実フレーバーが挙げられる。使用される場合、全身用又は局所用組成物中の香料の量は、典型的には約０．１〜約１．０％である。
【００４９】
適切な甘味料としては、アスパルテーム及びサッカリンが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の甘味料の量は、典型的には約０．００１〜約１％である。
【００５０】
適切な抗酸化剤としては、ブチル化ヒドロキシアニソール（「ＢＨＡ」）、ブチル化ヒドロキシトルエン（「ＢＨＴ」）、及びビタミンＥが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の抗酸化剤の量は、典型的には約０．１〜約５％である。
【００５１】
適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、パラベンメチル、及び安息香酸ナトリウムが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の保存剤の量は、典型的には約０．０１〜約５％である。
【００５２】
適切な流動促進剤としては、二酸化ケイ素が挙げられる。全身用又は局所用組成物中の流動促進剤の量は、典型的には約１〜約５％である。
【００５３】
適切な溶媒としては、水、等張食塩水、オレイン酸エチル、グリセリン、ヒドロキシル化ヒマシ油、エタノール等のアルコール、及びリン酸緩衝液が挙げられる。全身用又は局所用組成物中の溶媒の量は、典型的には約０〜約１００％である。
【００５４】
適切な懸濁剤としては、ＡＶＩＣＥＬ  ＲＣ−５９１（ＦＭＣ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、フィラデルフィア、ペンシルバニア州）及びアルギン酸ナトリウムが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の懸濁剤の量は、典型的には約１〜約８％である。
【００５５】
適切な界面活性剤としては、レシチン、ポリソルベート８０、及びラウリル硫酸ナトリウム、並びにＴＷＥＥＮＳ（Ａｔｌａｓ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ウィルミントン、デラウェア州）が挙げられる。適切な界面活性剤としては、Ｃ．Ｔ．Ｆ．Ａ．Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９２，ｐｐ．５８７−５９２；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ´ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．１９７５，ｐｐ．３３５−３３７；及びＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ´ｓ  Ｖｏｌｕｍｅ  １，Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ＆Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔｓ，１９９４，Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．２３６−２３９に開示されるものが挙げられる。全身用又は局所用組成物中の界面活性剤の量は、典型的には約０．１％〜約５％である。
【００５６】
全身用組成物中の成分の量は、調製される全身用組成物の種類によって異なってよいが、一般に、全身用組成物は、０．０１％〜５０％の活性薬剤及び５０％〜９９．９９％の１つ又は複数の担体を含む。非経口投与用の組成物は、典型的には、０．１％〜１０％の活性薬剤及び９０％〜９９．９％の担体（希釈剤及び溶媒を含む）を含む。
【００５７】
経口投与用の組成物は、種々の剤形を有することができる。例えば、固形形態としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、及びバルク粉末が挙げられる。これらの経口投与形態は、安全で有効な量、通常は少なくとも約５％、及びより詳細には、約２５％〜約５０％の活性薬剤を含む。経口投与用組成物は、約５０％〜約９５％の担体を含み、より詳細には、約５０％〜約７５％を含む。
【００５８】
錠剤は、圧縮、錠剤トリチュレート、腸溶コーティング、糖衣コーティング、フィルムコーティング、又は多重圧縮が可能である。錠剤は、典型的には、活性成分と、希釈剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤、着色剤、香料、甘味料、流動促進剤、及びそれらの組み合わせから選択される成分を含む担体とを含む。具体的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトース、及びセルロースが挙げられる。具体的な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、及びスクロースが挙げられる。具体的な崩壊剤としては、アルギン酸及びクロスカルメロースが挙げられる。具体的な潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、及びタルクが挙げられる。具体的な着色剤としては、ＦＤ＆Ｃ色素が挙げられ、外観のために添加することができる。チュアブル錠は、アスパルテーム及びサッカリン等の甘味料、又はメントール、ペパーミント、果実フレーバー等の香料、又はそれらの組み合わせを含むことが好ましい。
【００５９】
カプセル（インプラント、持続放出製剤及び徐放性製剤を含む）は、典型的には、ゼラチンを含むカプセル中に、活性化合物及び上記の１つ又は複数の希釈剤を含む担体を含む。顆粒は、典型的には、開示される化合物を含み、好ましくは流動特性を改善するために二酸化ケイ素等の流動促進剤を含む。インプラントは、生分解性又は非生分解性タイプのものであってよい。経口組成物用の担体中の成分の選択は、味覚、コスト、及び保存安定性（ｓｈｅｌｆ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）等の二次的な考慮事項に依存するが、これらは本発明の目的にとって重要ではない。
【００６０】
固体組成物は、開示される化合物が所望の適用の近くで胃腸管内に放出されるように、又は所望の作用を延長するために様々な時点及び時間で、通常の方法によって、典型的にはｐＨ又は時間依存性コーティングで被膜されてよい。コーティングとしては、典型的には、セルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、エチルセルロース、ＥＵＤＲＡＧＩＴコーティング（Ｒｏｈｍ＆Ｈａａｓ  Ｇ．Ｍ．Ｂ．Ｈ．、ダルムシュタット、ドイツから入手可能）、ワックス、及びシェラックからなる群から選択される１つ又は複数の成分が挙げられる。
【００６１】
経口投与用の組成物は、液体形態であってもよい。例えば、適切な液体形態としては、水溶液、エマルジョン、懸濁液、非発泡性顆粒から再構成された溶液、非発泡性顆粒から再構成された懸濁液、発泡性顆粒から再構成された発泡性調製物、エリキシル剤、チンキ、シロップ等が挙げられる。液体組成物は、経口投与してもよく、開示される免疫原性タンパク質、組成物、並びにワクチン及び担体、即ち、希釈剤、着色剤、香料、甘味料、保存剤、溶媒、懸濁剤、及び界面活性剤から選択される担体を含むことができる。経口液体組成物は、好ましくは、着色剤、香料、及び甘味料から選択される１つ又は複数の成分を含む。
【００６２】
本化合物の全身送達を達成するのに有用な他の組成物としては、舌下、口腔、及び経鼻剤形が挙げられる。そのような組成物は、典型的には、１つ又は複数の可溶性充填剤物質、例えば、スクロース、ソルビトール、及びマンニトールを含む希釈剤、並びにアカシア、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース等の結合剤を含む。そのような組成物は、潤滑剤、着色剤、香料、甘味料、抗酸化剤、及び流動促進剤を更に含んでいてもよい。
【００６３】
開示される調節因子は、局所投与してもよい。皮膚に局所的に適用することができる局所組成物は、固体、溶液、オイル、クリーム、軟膏、ゲル、ローション、シャンプー、リーブオン及びリンスアウトへアコンディショナー、ミルク、クレンザー、保湿剤、スプレー、皮膚パッチ等を含む任意の形態であってよい。局所組成物の担体は、好ましくは化合物の皮膚への浸透を助ける。担体は、１つ又は複数の任意成分を更に含んでいてもよい。送達を容易にするために経皮投与を用いてもよい。
【００６４】
開示される化合物と組み合わせて使用される担体の量は、薬剤の単位用量当たりの投与に実用的な量の組成物を提供するのに十分な量である。本発明の方法において有用な剤形を作製するための技術及び組成物は、以下の参考文献に記載されている：Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ９  ａｎｄ  １０，Ｂａｎｋｅｒ＆Ｒｈｏｄｅｓ，ｅｄｓ．（１９７９）；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（１９８１）；ａｎｄ  Ａｎｓｅｌ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，（１９７６）。
【００６５】
担体は、単一成分又は２つ以上の成分の組み合わせを含んでよい。局所組成物における担体としては局所担体が挙げられる。適切な局所担体としては、リン酸緩衝食塩水、等張水、脱イオン水、単官能アルコール、対称アルコール、アロエベラゲル、アラントイン、グリセリン、ビタミンＡ及びＥ油、鉱油、プロピレングリコール、ＰＰＧ−２ミリスチルプロピオネート、ジメチルイソソルビド、ヒマシ油、それらの組み合わせ等から選択される１つ又は複数の成分が挙げられる。皮膚適用のための担体としては、特に、プロピレングリコール、ジメチルイソソルビド、及び水が挙げられ、更に特に、リン酸緩衝食塩水、等張水、脱イオン水、単官能アルコール、及び対称アルコールが挙げられる。
【００６６】
局所組成物の担体は、皮膚柔軟化剤、噴射剤、溶媒、湿潤剤、増粘剤、粉末、香料、顔料、及び保存剤から選択される１つ又は複数の成分を更に含んでいてもよく、これらは全て任意選択である。
【００６７】
適切な皮膚柔軟化剤としては、ステアリルアルコール、モノリシノール酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、プロパン−１，２−ジオール、ブタン−１，３−ジオール、ミンク油、セチルアルコール、イソステアリン酸イソプロピル、ステアリン酸、パルミチン酸イソブチルト、ステアリン酸イソセチル、オレイルアルコール、ラウリン酸イソプロピル、ラウリン酸ヘキシル、オレイン酸デシル、オクタデカン−２−オール、イソセチルアルコール、パルミチン酸セチル、セバシン酸ジ−ｎ−ブチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ポリエチレングリコール、トリエチレングリコール、ラノリン、ゴマ油、ヤシ油、落花生油、ヒマシ油、アセチル化ラノリンアルコール、石油、鉱油、ミリスチン酸ブチル、イソステアリン酸、パルミチン酸、リノール酸イソプロピル、乳酸ラウリル、乳酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸ミリスチル、及びそれらの組み合わせが挙げられる。皮膚用の特定の皮膚柔軟化剤としては、ステアリルアルコール及びポリジメチルシロキサンが挙げられる。皮膚系局所組成物中の皮膚柔軟化剤の量は、典型的には約５〜約９５％である。
【００６８】
適切な噴射剤としては、プロパン、ブタン、イソブタン、ジメチルエーテル、二酸化炭素、亜酸化窒素、及びそれらの組み合わせが挙げられる。局所組成物中の噴射剤の量は、典型的には約０〜約９５％である。
【００６９】
適切な溶媒としては、水、エチルアルコール、塩化メチレン、イソプロパノール、ヒマシ油、エチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。具体的な溶媒としては、エチルアルコール及び同位体アルコールが挙げられる。局所組成物中の溶媒の量は、典型的には約０〜約９５％である。
【００７０】
適切な保湿剤としては、グリセリン、ソルビトール、２−ピロリドン−５−カルボン酸ナトリウム、可溶性コラーゲン、フタル酸ジブチル、ゼラチン、及びそれらの組み合わせが挙げられる。具体的な保湿剤としてはグリセリンが挙げられる。局所組成物中の保湿剤の量は、典型的には約０〜約９５％である。
【００７１】
局所組成物中の増粘剤の量は、典型的には約０〜約９５％である。
【００７２】
適切な粉末としては、ベータ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、チョーク、タルク、フラー土、カオリン、デンプン、ガム、コロイド状二酸化ケイ素、ポリアクリル酸ナトリウム、テトラアルキルアンモニウムスメクタイト、トリアルキルアリールアンモニウムスメクタイト、化学修飾ケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機修飾モンモリロナイト粘土、水和ケイ酸アルミニウム、ヒュームドシリカ、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、モノステアリン酸エチレングリコール、及びそれらの組み合わせが挙げられる。局所組成物中の粉末の量は、典型的には約０〜約９５％である。
【００７３】
局所組成物中の香料の量は、典型的には約０〜約０．５％、特に約０．００１〜約０．１％である。
【００７４】
適当なｐＨ調整添加剤としては、局所用医薬組成物のｐＨを調整するのに十分な量のＨＣｌ又はＮａＯＨが挙げられる。
【００７５】
１つの実施形態において、医薬組成物は、ヒト母乳を含んでいてもよい。活性な医薬成分は、ヒト母乳の成分であってもよい。従って、ヒト母乳は、活性な医薬成分を必要とする被験体に投与してもよい。
【００７６】
ＩＩＩ．キット
調節因子は、免疫原性タンパク質、組成物、及びワクチンを含むキットに含まれていてもよい。また、キットの使用に関する情報、指示、又はその両方は、哺乳動物（特に、ヒト）の医学的症状の治療法を提供するであろう。キットは、併用療法に使用するための追加の医薬組成物を含んでいてもよい。キットは、投与様式を容易にするために、緩衝剤、試薬、又は他の成分を含んでいてもよい。キットは、鼻粘膜投与を容易にするための材料を含んでいてもよい。キットは、舌下投与を容易にする材料を含んでいてもよい。情報及び指示は、単語、絵、又はその両方等の形態であってもよい。キットは、それに加えて又はその代わりに、薬剤、組成物、又はその両方；及び、好ましくは哺乳動物（例えば、ヒト）における医学的症状を治療又は予防するという利益を伴う、薬剤又は組成物の適用方法に関する情報、指示、又はその両方を含んでいてもよい。
【００７７】
本発明の調節因子は、本発明の範囲に限定されるものではなく、例示として意図されている以下の実施例を参照することによって、よりよく理解されるであろう。
【００７８】
ＩＶ．定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。矛盾がある場合には、定義を含めて本明細書が優先する。好ましい方法及び材料を以下に記載するが、本明細書に記載のものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができる。本明細書で言及する全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書に開示される材料、方法、及び実施例は、例示的なものに過ぎず、限定を目的としたものではない。
【００７９】
量と共に使用される修飾語句「約」は、言及された値を包括し、文脈によって規定される意味を有する（例えば、それは特定の量の測定と関連する誤差の程度を少なくとも含む）。また、修飾語句「約」は、２つの終点の絶対値によって定義される範囲を開示するものとみなされるべきである。例えば、表現「約２〜約４」は、「２〜４」という範囲も開示する。用語「約」は、示された数字の±１０％を指すことができる。例えば、「約１０％」は、９％〜１１％の範囲を示すことができ、「約１」は、０．９〜１．１を意味することができる。「約」の他の意味は、四捨五入等のように文脈から明らかであることがあり、従って、例えば、「約１」は０．５〜１．４を意味することができる。
【００８０】
本明細書で用いる場合、用語「投与」又は「投与すること」は、本明細書に記載される調節因子が単独で又は他の化合物又は組成物と組み合わせて被験体に送達される過程を含むことができる。調節因子は、種々の経路で投与されてよく、これらに限定されないが、とりわけ、経口、粘膜、鼻粘膜、非経口（静脈内、動脈内、及び他の適切な非経口経路を含む）、髄腔内、筋肉内、皮下、結腸、直腸、及び鼻腔内、経皮が挙げられる。治療又は予防効果を得るための本明細書に記載される調節因子の投与量は、当該技術分野で知られているように、被験体の状況によって決定されてよい。本明細書中の被験体の投与は、本明細書中の調節因子の個々の用量又は単位用量により、又は調節因子の併用量又は包装量又は予備処方量により達成されてよい。
【００８１】
投与は、調節因子の投与量、投与回数、及び治療期間に依存してよい。例えば、複数の用量の調節因子を投与してもよい。免疫原性タンパク質、組成物、及びワクチンの投与頻度は、様々な因子のいずれかに依存して変化し得る。調節因子の投与期間、例えば、調節因子が投与される期間は、被験体の反応等を含む種々の因子のいずれかに依存して変化してよい。
【００８２】
調節因子の投与量は、個体の感受性の程度、個体の年齢、性別、及び体重、個体の特異体質反応、線量測定等の要因によって変化してよい。本発明の免疫原性タンパク質、組成物、及びワクチンの検出可能に有効な量もまた変化してよい。
【００８３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の言及を含む。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、用語「又は」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、「及び／又は」を含む意味で一般に使用される。
【００８４】
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」、及びその変形例は、追加の作用又は構造の可能性を排除しない、オープンエンドの移行句、用語、又は単語であることが意図される。単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の言及を含む。本発明は、明示的に記載されているか否かにかかわらず、本明細書に示される実施形態又は要素を「含む」、「からなる」、及び「本質的にからなる」他の実施形態も意図する。
【００８５】
本明細書中で使用される場合、用語「非経口的」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、及び関節内注射及び注入を含む投与形態を指す。
【００８６】
「薬学的に許容される賦形剤」、「薬学的に許容される希釈剤」、「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容されるアジュバント」は、一般的に安全で、非毒性で、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない医薬組成物を調製するのに有用な賦形剤、希釈剤、担体、及び／又はアジュバントを意味し、獣医学的使用及び／又はヒトの薬学的使用に許容される賦形剤、希釈剤、担体、及びアジュバントを含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、担体、及び／又はアジュバント」には、１つ又は複数のこのような賦形剤、希釈剤、担体、及びアジュバントが含まれる。
【００８７】
本明細書で使用される場合、用語「被験体」、「患者」又は「生物」は、ヒト及び哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ブタ、ネコ、イヌ、及びウマ）を含む。本発明の薬剤を投与することができる典型的な被験体としては、哺乳類、特に霊長類、とりわけヒトを含むことができる。獣医学用途では、適当な被験体としては、例えば、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）、ヒツジ、ヤギ、ウシ（ｃｏｗ）、ブタ等の家畜；ニワトリ、アヒル、ガチョウ、シチメンチョウ等の家禽；及び飼育動物、特にイヌ及びネコ等のペットを挙げることができる。診断又は研究適用では、適当な被験体としては、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、及び近交系ブタ等のブタ等の哺乳動物を挙げることができる。被験体は、嚢胞性腎疾患を有してよい。被験体は、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患をしてよい。被験体は、嚢胞性腎疾患を発症するリスクがあってよい。
【００８８】
本明細書における目的のための「治療有効量」は、当該技術分野で知られるような考慮事項により決定してよい。化合物の治療有効量としては、ｉｎ  ｖｉｖｏで治療上有効な結果をもたらすために必要な量を挙げることができる。化合物又は組成物の量は、これらに限定されるものではないが、病態の全予防（例えば、保護）、生存率の改善又はより迅速な回復、病態（癌等）に関連した症状の改善又は消失、又は適切な手段として当業者が選択する他の指標を含めた、反応を達成するために有効でなければならない。本明細書で使用される場合、適切な単回投与サイズとしては、適切な期間にわたって１回又は複数回投与された場合に、被験体における症状を予防又は緩和（軽減又は消失）することが可能な用量が挙げられる。本明細書に記載の化合物又は組成物の「治療有効量」は、投与経路、治療される被験体のタイプ、及び被験体の身体的特性に依存してよい。これらの因子及びこれらと用量との関係は、別段の指示がない限り、医薬分野の当業者に周知である。
【００８９】
本明細書中で使用される場合、「治療する」、「治療」、「治療すること」等は、病態を改善又は改変することによって病態に影響を及ぼす薬剤を用いて病態に作用することを指す。この病態には、これに限定されるものではないが、嚢胞性腎疾患が含まれる。嚢胞性腎疾患は、常染色体優性多発性嚢胞腎疾患であってもよい。上記用語は、被験体（例えば、哺乳動物、典型的には、ヒト又は獣医学的に関心のある非ヒト動物）における病態の１つ又は複数の治療に及び、以下を含む：（ａ）病態にかかりやすいと判定されたがまだ診断されていない被験体における病態の発生リスクを低下させること、（ｂ）病態の発症を妨げること、及び／又は（ｃ）病態を緩和すること、例えば、病態の退行を引き起こすこと、及び／又は１つ又は複数の病状を緩和すること（例えば、嚢胞性腎疾患を治療し、嚢胞のサイズ及び／又は数を低減すること）。
【００９０】
本明細書中の数値範囲の記載については、同程度の精度でそこに入る各数値を明示的に意図する。例えば、６〜９の範囲については、６及び９に加えて数値７及び８を意図し、６．０〜７．０の範囲については、数値６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０を明示的に意図する。
【実施例】
【００９１】
実施例１
ＶＸ−８０９はＰｋｄ１ｆｌ／ｆｌ；Ｐａｘ８ｒｔＴＡ；ＴｅｔＯ−ｃｒｅマウスにおいて嚢胞の成長を低減し、腎機能を改善する
ＶＸ−８０９がｉｎ  ｖｉｖｏで嚢胞の成長を低減させる効果があることを示すために、Ｐｋｄ１ｆｌ／ｆｌ；Ｐａｘ８ｒｔＴＡ；ＴｅｔＯ−ｃｒｅモデルマウスの腹腔空間（ＩＰ）に薬剤を注射した。ドキシサイクリンで処理すると、これらのマウスはＣｒｅを発現し、ＰＣ１のノックアウトを引き起こす（１８）。以前に示されたように、ドキシサイクリンの注射は、約３週齢でこれらのマウスに複数の大きな嚢胞の発生をもたらした（１８、１９）（図１Ａ）。際立って対照的に、この系統のマウスに生後１０日（ＰＮＤ１０）からＰＮＤ２０まで毎日ＶＸ−８０９（３０ｍｇ／ｋｇ）又はＤＭＳＯを注射したところ、嚢胞の成長が有意に低かった（〜６０．４％）（図１Ａ、図１Ｂ）。腎重量（図１Ｃ）及び腎重量／体重比率（図１Ｄ）も対照マウスのそれらより低かった。処理群と未処理群との間で全体重に差はなかった（図１Ｅ）。血液尿素窒素（ＢＵＮ）（図１Ｆ）及びクレアチニン（図１Ｇ）の数値がＤＭＳＯ処理マウスよりもＶＸ−８０９処理マウスで低かったことから明らかなように、ＶＸ−８０９の投与は腎機能を改善した。ＶＸ−８０９注射の用量は、ルマカフトール５００ｍｇ／日であるヒト小児用量よりも低く、成人用量は８００ｍｇ／日である。
【００９２】
実施例２
ＶＸ−８０９はｉｎ  ｖｉｔｒｏで嚢胞の成長を低減させる
実験は、モデルＡＤＰＫＤ細胞株（ＰＨ＝ｐｋｄ１＋／−ヘテロ接合体対照、ＰＮ＝ｐｋｄ−／−ノックアウト）を用いて行い、Ｈ−２Ｋｂ−ｔｓＡ５８遺伝子を有する不死化マウスで作製したｐｋｄｆｌ／−マウスから得た単一の親クローンからクローン単離した。ヌル細胞（ＰＮ）は、Ｃｒｅリコンビナーゼを安定に発現する。全ての細胞が近位尿細管由来である（２０、２１）。ＶＸ−８０９がどのように嚢胞の成長を低減するのかを明らかにするために、フォルスコリンの存在下で嚢胞を成長させた（図２）。フォルスコリン処理後、得られた嚢胞は対照細胞のものより大きく、既報のとおり（２２）、嚢胞の成長が確かにｃＡＭＰ依存性であることを示した。図２は、隔日に投与した場合、及び既に嚢胞が確立されたマウスにおいて９〜１６日目に投与した同じ処理について、Ｃ１８又はＶＸ−８０９の嚢胞の成長に対する効果を示す。この薬物治療計画は、フォルスコリンによって作り出された過剰刺激環境の存在下でも、嚢胞サイズを劇的に縮小させるのに有効であった。また、ＶＸ８０９及び関連化合物Ｃ１８（１５）は、いずれもフォルスコリンの存在下及び非存在下で同様に良好に嚢胞の成長を低減させることができた（図２）。この発見は、ＶＸ−８０９が、フォースコリンによって誘発されるｃＡＭＰレベルの上昇による強力な刺激効果を克服し、依然として嚢胞の成長を低減することができることを示している。図１に提供する動物データと総合すると、これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ結果は、ＣＦＴＲ補正因子が嚢胞成長の低減に有効であることを明確に示している。
【００９３】
実施例３
ＶＸ−８０９は増殖を抑制する
ＡＤＰＫＤにおける嚢胞の特徴は、ｃＡＭＰに応答した増殖の増加である（２３）。そこで、ＶＸ−８０９が増殖に影響を及ぼすか否かを調べた。３０ｍｇ／ｋｇ（図１参照）のＶＸ−８０９のマウスへの投与（図３Ａ−Ｃ）、又は１μＭ及び１０μＭのＶＸ−８０９の細胞への投与（図３Ｄ）は、ＤＭＳＯ処理マウス又は細胞と比較して、細胞増殖を有意に阻害した。
【００９４】
実施例４
ＶＸ−８０９はｃＡＭＰレベルを下方制御する
機能的ＰＣ１を欠損する細胞では、正常細胞と比較してｃＡＭＰレベルが上昇することが、ＡＤＰＫＤの動物及び細胞培養モデルの両方において以前に示されている（２４）。ＣＦＴＲ補正因子の効果を評価するために、ｃＡＭＰ活性を、ＰＣ１コンディショナルノックアウトマウスの腎臓において、及び未処理又はＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞において測定した。ＶＸ−８０９の投与（図４Ａ−Ｂ）はｃＡＭＰレベルを有意に低下させた。図４Ｂは、ＰＨ（ｐｋｄ１ヘテロ接合体）細胞では、以前に示したＰＮ細胞（２５）と比較して、静止ｃＡＭＰがより低いことを示す。細胞をフォルスコリンで処理したところ、ｃＡＭＰレベルが劇的に上昇した（図４Ｂ）。ＶＸ−８０９は、ｃＡＭＰのフォルスコリン誘導性増加を低減し、これは、アデニリルシクラーゼ活性に対するＶＸ−８０９の直接的な作用を示すことに注意されたい。ＶＸ−８０９がホスホジエステラーゼ活性も阻害するか否かを調べるために、細胞をフォルスコリンで処理するか、又はホスホジエステラーゼ阻害剤である３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）と組み合わせてフォルスコリンで処理し、アデニリルシクラーゼ活性を最大限に刺激した。ＰＮ細胞をフォルスコリン又はＩＢＭＸで処理すると（図４Ｂ）、ｃＡＭＰ活性が〜１０倍増加した。しかしながら、ＶＸ−８０９は、フォルスコリン又はＩＢＭＸによるアデニリルシクラーゼ活性の上昇に影響を及ぼさず（データバー５及び９を比較、図４Ｂ）、ＶＸ−８０９はホスホジエステラーゼ活性に影響を及ぼさないことが示された。これらのデータから、基礎条件下において、（図１に示されるように）ＶＸ−８０９が嚢胞の成長を低減する方法の１つは、静止ｃＡＭＰレベルを減少させることによるものである可能性が最も高いことが示唆される。しかしながら、上記の結果は、ＶＸ−８０９がフォルスコリン（ｃＡＭＰ活性をほぼ５００倍上昇させる）の存在下においても嚢胞の成長を阻害できることを示しており、他の機序も関与していることを強く示唆している。
【００９５】
実施例５
ＶＸ−８０９はＡＣ３を調節するが、ＡＣ６は調節しない
Ｃａ２＋依存性アデニリルシクラーゼ活性は、ＡＤＰＫＤにおける嚢胞の成長に関与していることが示されている（２６）。細胞内Ｃａ２＋により調節されるアデニリルシクラーゼには２つのクラスがある：一方のクラスは活性化され、他方のクラスは阻害される。これら２つのクラスそれぞれからの１つであるＡＣ３及びＡＣ６に注目した。ＡＣ６の活性はＣａ２＋により阻害されるが、ＡＣ３の活性は細胞内Ｃａ２＋の増加により増強される（２７）。ＡＣ３とＡＣ６はどちらもラットの腎臓の近位尿細管に発現しており（２８）、ＡＣ６はＡＤＰＫＤに関与することが既に知られている（２７）。ＡＣ３とＡＣ６はどちらもＰＮ細胞に発現していることが示されている（図４Ｃ−Ｅ）。ＡＣ３レベルは、ＶＸ−８０９でＰＮ細胞を処理した後、低下した。この結果は、ＶＸ−８０９がベースのｃＡＭＰレベル及びフォースコリンにより刺激されたｃＡＭＰレベルの両方を減少させるという観察結果と一致する。
【００９６】
実施例６
ＶＸ−８０９は細胞内静止Ｃａ２＋レベル及びＥＲからのＣａ２＋の放出を下方制御する
Ｃａ２＋依存性シグナル伝達は、嚢胞形成と関連している（２６）、（２９）。ＶＸ−８０９がＣａ２＋の挙動を変えるか否かを調べるために、プリン作動性受容体を刺激するＡＴＰで細胞を処理した（３０）。ＶＸ−８０９が静止Ｃａ２＋をわずかに減少させたが、ＡＴＰに応答した細胞内Ｃａ２＋の挙動には影響を及ぼさないことを見出した（図５Ａ−Ｃ）。ＰＣ２はＥＲのＣａ２＋の正の調節因子であることが示唆された。このＣａ２＋の放出に対するＶＸ−８０９の効果に対処するために、細胞を、ＥＲ  Ｃａ２＋−ＡＴＰａｓｅの特異的阻害剤であるタプシガルギンで処理した。タプシガルギンは、適用されると、Ｃａ２＋が独立したＣａ２＋透過性経路を介してＥＲから漏出することを可能にする（３３）。静止Ｃａ２＋に対するＶＸ−８０９のわずかな効果が観察された。ＶＸ−８０９は、タプシガルギンが誘発するＥＲからのＣａ２＋放出を劇的に減少させた（図５Ｄ−Ｆ）。
【００９７】
実施例７
ＶＸ−８０９はＰＣ２に影響を及ぼさない
ＰＣ２は９６８アミノ酸のタンパク質であり、その単量体型でおよそ分子量１００ｋＤａである。ＶＸ−８０９がＰＣ２タンパク質の発現に影響するか否かを調べるために、ＰＮ細胞に対してウェスタンブロット実験を行い、内因性ＰＣ２の静止レベルを調べた。その結果、ＶＸ−８０９はＰＣ２の発現に影響を及ぼさないことが示された（図６）。
【００９８】
実施例８
ＶＸ−８０９はヒートショックタンパク質の定常状態レベルを低下させる
腎臓での成長を促進するために、嚢胞は、ストレスからの保護に最も役立つ可能性が高いタンパク質のネットワーク変化を発達させている（３４）。次に、ＶＸ−８０９がｐｋｄ−／−マウス及びＰＮ細胞におけるＨｓｐのレベルを変化させるか否かを調べた。図７は、マウスにおける結果を示す。Ｈｓｐ２７、７０、及び９０は全て、正常な対照と比較して嚢胞腎で上昇している。ＰＣ１レベルがノックアウトされた腎臓をＶＸ−８０９で処理した結果、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現が有意に低下した。Ｈｓｐ４０に変化はない。同様に、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞（図８Ａ−Ｄ）は、処理後、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ７０、及びＨｓｐ９０の発現低下を示した。両データセットは、嚢胞の成長に対するヒートショック応答の変化と一致している。ｐｋｄ＋／−であるＰＨを、ｐｋｄ−／−であるＰＮ細胞と比較すると、ＰＨ細胞に対してＰＮ細胞では、Ｈｓｐ２７及び９０は上昇し、Ｈｓｐ７０は低下していることが示された（図８Ｆ−Ｈ）。
【００９９】
実施例９
ＶＸ−８０９はＨｓｐ７０及びＨｓｐ９０の消失を促進する
ＶＸ−８０９がＨｓｐタンパク質レベルを変更させるメカニズムについてより深い洞察を得るために、シクロヘキシミドを用いて翻訳を阻害し（３５）、３つのＨｓｐの消滅をモニターした。図９Ａ−Ｄは、各Ｈｓｐの定常状態レベルがシクロヘキシミド処理直後の８時間にわたって変化しなかったことを示しており、それらが長寿命で安定なタンパク質であることを示唆している。対照的に、ＶＸ−８０９による処理後、Ｈｓｐ７０レベルは、時間０で観察されたレベルの約半分まで、８時間にわたって低下した。Ｈｓｐ９０は約２５％低下し、Ｈｓｐ２７は変化しなかった。これらのデータは、ＶＸ−８０９が２つの重要なＨｓｐの半減期を、恐らく分解速度を増加させることにより減少させることを示唆している。
【０１００】
実施例１０
ＶＸ−８０９はアポトーシスを低減する
アポトーシスは、ＡＤＰＫＤにおいてＰＣ１が存在しないことと関連している（３６）。アポトーシスがＶＸ−８０９によって直接変化するか否かを評価するために、カスパーゼ３の活性をＰＮ細胞でモニターした。図１０は、ＶＸ−８０９での処理後、ＰＮ細胞におけるカスパーゼ３の活性がわずかに低下したことを示す。
【０１０１】
実施例１１
ＶＸ−８０９はＥＲストレス関連タンパク質ＧＡＤＤ１５３を劇的に減少させる
ＶＸ−８０９がＨｓｐの集合体を変化させると仮定して、ＶＸ−８０９がＥＲストレスに関連するタンパク質を変化させるか否かを評価した。この疑問に取り組むために、３つのＥＲストレス関連タンパク質：７８ｋＤａグルコース調節タンパク質（ＧＲＰ７８）、ＥＲオキシドレダクチン１（Ｅｒｏ１）、及びＣ／ＥＢＰ相同タンパク質（ＣＨＯＰ）としても知られるＤＮＡ損傷誘導性タンパク質３（ＧＡＤＤ１５３）のレベルを測定した（３７）。結果を図１１に示すが、ＧＲＰ７８又はＥｒｏ１にはＶＸ−８０９に応答した変化は見られない。際立って対照的に、嚢胞をマウスに誘導すると、正常な同腹子と比較してＧＡＤＤ１５３が劇的に増加し、嚢胞を含むマウスをＶＸ８０９で処理すると、ＧＡＤＤ１５３が同様に劇的に減少する。また、マウスの腎臓におけるＧＡＤＤ１５３の免疫染色でも、マウスをＶＸ−８０９で処理すると、大幅な減少が認められる（図１２）。
【０１０２】
実施例１２
ＮＨＥ３の発現及び活性
ＮＨ３の発現及び活性を評価した。具体的には、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞においてＮＨＥ３の発現を評価した。本実験は、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞では、ＰＮ細胞と比較してＮＨＥ３の発現が有意に増加していることを示す（図１４Ａ及び図１４Ｂ）。ＰＮ細胞、ＰＨ細胞、及びＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞においてもＮＨ３の発現を検討した。対照ＰＨ細胞と比較して、ＰＮ細胞ではＮＨＥ３活性が有意に低下していることがわかった（図１５Ａ）。更に、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞では、ＰＮ細胞と比較して、ＮＨＥ３活性が有意に増加している（図１５Ｂ）。次に、ＰＮ／ＰＨ細胞又はＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞において、ＮＨＥ３活性を評価した。ＮＨＥ３活性は、ＰＮ細胞と比較して、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞において増加した（図１６Ａ）。ＮＨＥ３活性は、ＰＮ細胞よりも対照ＰＨ細胞において高かった（図１６Ｂ）。ＶＸ−８０９によるＰＮ細胞の処理により、対照ＰＨ細胞におけるＮＨＥ３活性と比較して、ＮＨＥの活性レベルが同程度となった（図１６Ｃ）。ＮＨＥ３活性は、対照ＰＮ細胞と比較して、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞及び対照ＰＨ細胞の両方において増加した（図１６Ｃ）。
【０１０３】
実施例１３
ＰＣ２及びＣＦＴＲの局在化実験
対照細胞におけるＰＣ２及びＣＦＴＲの局在化を、ＶＸ−８０９処理細胞におけるＰＣ２及びＣＦＴＲの局在化と比較した。ＰＣ２及びＥＲマーカー、ＰＣ２及びゴルジマーカー、ＰＣ２及びＰＭマーカー（ＮＡ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ）、並びにＰＣ２及びＰＭマーカー（カドヘリン）の評価により、ＶＸ−８０９処理により、ＥＲからゴルジへのＰＣ２の統計的に有意な移動があることが分かる（図１７Ａ及び図１７Ｂ）。ＣＦＴＲ及びＥＲマーカー、ＣＦＴＲ及びゴルジマーカー、ＣＦＴＲ及びＰＭマーカー（ＮＡ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ）、並びにＣＦＴＲ及びＰＭマーカー（カドヘリン）の評価により、ＶＸ−８０９処理により、ＥＲから側底及び頂端膜へのＣＦＴＲの統計的に有意な移動があることが分かる（図１８Ａ及び図１８Ｂ）。
【０１０４】
実施例１４
ＰＮ細胞におけるＣＦＴＲの発現
ＣＦＴＲの発現を、ＶＸ−８０９で処理したＰＮ細胞及び対照ＰＮ細胞で評価した。ＰＮ細胞を、１０μＭのＶＸ−８０９で１６時間、又は対照薬で処理した。ＶＸ−８０９処理は、対照ＰＮ細胞と比較してＣＦＴＲの発現を増強した（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。ＣＦＴＲのビオチン化は、対照ＰＮ細胞と比較して、ＶＸ−８０９処理で処理したＰＮ細胞において有意に増加した（図１９Ｃ及び図１９Ｄ）。
【０１０５】
本明細書に開示される実施例は、少なくとも次のことを示す：１）ＣＦＴＲはＥＲから側底膜及び頂端膜へ移動する；２）ＰＣ２はＥＲからゴルジへ移動する；３）ヒートショックタンパク質であるＨｓｐ２７、７０、９０は減少する；４）Ｎａ再吸収が回復する；５）ＥＲからのＣａ放出が減少する；６）ＡＣ３を減少させることによりｃＡＭＰレベルが低下する；７）ＰＴ、ＤＴ、及び集合管における嚢胞の成長が低減する；及び８）ＡＱＰ２が集合管で回復する。
【０１０６】
実施例１５
実験方法
細胞培養及び試薬：Ｐｋｄ１−ヌル（ＰＮ）細胞及びＰｋｄ１−ヘテロ接合体（ＰＨ）細胞を上述のように培養した（２０、２１）。フォルスコリン（＃１１０１８）はＳｉｇｍａから購入し（ＳＣ２３９５０）；ＶＸ−８０９（＃Ｓ１５６５）はＳｅｌｌｅｃｋ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ヒューストン、テキサス州、米国から購入し；エズリン（ＳＣ５８７５８）、アデニル酸シクラーゼ３（ＳＣ５８８）、ＰＣ２（ＳＣ２８３３１）、Ｈｓｐ２７（ＳＣ１３２）、Ｈｓｐ７０（ＳＣ６６０４８）、抗ＧＡＤＤ１５３抗体（ＳＣ７３５１）、抗ＥｒＯ１抗体（ＳＣ３６５５２６）、及びβ−アクチン（ＳＣ４７７７８）はＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、テキサス州、米国から購入した。Ｈｓｐ９０（ＡＤＩ−ＳＰＡ−８３０Ｆ）は、Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニューヨーク州、米国から購入した。ＡＣ６（ＧＴＸ４７７９８）は、ＧｅｎｅＴｅｘ、アーバイン、カリフォルニア州、米国から購入した。抗ＧＲＰ７８  ＢｉＰ抗体は、Ａｂｃａｍから購入した（Ｃａｔ＃ａｂ２１６８５）。
【０１０７】
マウスの系統及び処理：Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  ＰＫＤ  Ｃｅｎｔｅｒより、Ｃ５７ＢＬ／６背景のＰｋｄ１ｆｌ／ｆｌマウス、Ｐａｘ８ｒｔＴＡマウス、ＴｅｔＯ−ｃｒｅマウス（６１）の提供を受けた。本実験では雄雌両方のマウスを用いた。マウスにドキシサイクリン（Ｓｉｇｍａ、＃Ｄ９８９１）（ドキシサイクリン４μｇ／ｇ体重）を生後１１日（ＰＮＤ１１）、ＰＮＤ１２、及びＰＮＤ１３にＩＰ注射して、非常に急速かつ積極的に嚢胞成長を生じさせた（１８、１９）。ＰＮＤ２１に、マウスを安楽死させた。
【０１０８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞発生：分化を誘導するために、細胞をγ−インターフェロンなしで少なくとも６日間、３７oＣに保った。１週間後、細胞を３Ｄ培養物又は他の実験に使用した。増殖因子還元マトリゲル＃３５４２３０（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用い、２５μＬの培地中に約６，０００個の細胞が存在するように細胞希釈液を調製し、２５μＬの細胞調製液を５０μＬのマトリゲルと混合した（２５を参照）。写真はＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏ顕微鏡で撮影した。嚢胞の面積はＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ提供）で分析した。
【０１０９】
サイクリックＡＭＰアッセイ：コンフルエント細胞をＶＸ−８０９（１０μＭ）又はＤＭＳＯで１６時間処理した後、アッセイ用に採取した。サイクリックＡＭＰレベルは、製造業者のプロトコルに従い、直接ｃＡＭＰ酵素免疫測定キット（Ｓｉｇｍａ、＃ＣＡ２００）で測定した。結果をｐｍｏｌ／ｍＬで表す。統計解析は、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を用いて行った。
【０１１０】
Ｆｕｒａ−２  Ｃａ２＋イメージングアッセイ：細胞培養５日目に、細胞に、カルシウム指示薬ｆｕｒａ−２（ｆｕｒａ−２／ＡＭ）の細胞透過性アセトキシメチル（ＡＭ）エステルを３７℃で９０分間負荷した。測定は、Ｓｕｔｔｅｒ  Ｌａｍｂｄａ  １０−２コントローラ及びフィルターホイールアセンブリーを装備したＺｅｉｓｓ倒立顕微鏡で行った。ＡＴＰ刺激実験のため、画像緩衝液で希釈した１００μＭのＡＴＰに細胞を曝露した。Ｚｅｉｓｓ  ＦｌｕｏｒＡｒｃ水銀灯を用いて３４０ｎｍ及び３８０ｎｍで細胞を励起し、５１０ｎｍで発光応答を測定した。細胞蛍光は、４秒に１回、３４０ｎｍで１０００ｍｓ及び３８０ｎｍで２００ｍｓの励起に対する応答を測定した。画像収集、画像解析、及びフィルターホイール制御は、ＩＰＬａｂソフトウェアで行った（２５を参照）。
【０１１１】
開示された実施形態に対する様々な変更及び改変は、当業者に明らかであろう。そのような変更及び改変は、これらに限定されるものではないが、本発明の化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成物、組成物、製剤、又は使用方法に関するものを含み、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。
【０１１２】
参考文献
本明細書において言及された全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、本明細書に開示される主題が関係する当業者のレベルを示す。全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、各個々の刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献が、参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。多くの特許出願、特許、及び他の参考文献が本明細書で言及されているが、そのような参考文献は、これらの文献の何れも当該技術分野における共通の一般知識の一部をなすことを認めるものではないことが理解される。本明細書と組み込まれた参考文献との間に矛盾がある場合、本明細書（組み込まれた参照に基づく可能性のあるその任意の修正を含む）が優先するものとする。本明細書では、特に明記しない限り、標準的な技術的に受け入れられた用語の意味が用いられる。本明細書では、様々な用語に対して標準的な略語を使用する。
【０１１３】
１．Ｔｏｒｒｅｓ，Ｖ．Ｅ．，ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｐ．Ｃ．（２００７）ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓ：ｇｅｎｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ，ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ．
Ｊ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．２６１，１７−３１
２．Ｃａｌｖｅｔ，Ｊ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｊ．Ｊ．（２００１）Ｔｈｅ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ２１，１０７−１２３
３．Ａｌ−Ｂｈａｌａｌ，Ｌ．，ａｎｄ  Ａｋｈｔａｒ，Ｍ．（２００５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｄｖ．Ａｎａｔ．Ｐａｔｈｏｌ．１２，１２６−１３３
４．Ｂａｓｔｏｓ，Ａ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｏｎｕｃｈｉｃ，Ｌ．Ｆ．（２０１１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｒａｚ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．４４，６０６−６１７
５．Ｏｎｇ，Ａ．Ｃ，ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｐ．Ｃ．（２０１５）Ａ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−ｃｅｎｔｒｉｃ  ｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｙｓｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｔｈｅ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ
６．Ｉｋｅｄａ，Ｍ．，Ｆｏｎｇ，Ｐ．，Ｃｈｅｎｇ，Ｉ，Ｂｏｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｑｉａｎ，Ｆ．，Ｚｈａｎｇ，Ｘ．Ｍ．，Ｃａｉ，Ｈ．，Ｇｅｒｍｉｎｏ，Ｇ．Ｇ，ａｎｄ  Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．（２００６）Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−１  ｏｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８，９−２０
７．Ｆｕｌｌｅｒ，Ｃ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｎｏｓ，Ｄ．Ｊ．（１９９２）ＣＦＴＲ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ：Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２６３，Ｃ２６７−Ｃ２８６
８．Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｚｅｉｔｌｉｎ，Ｐ．Ｌ．（１９９８）ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｌａｎｃｅｔ  ３５１，２７７−２８２
９．Ｒｉｏｒｄａｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｒｏｍｍｅｎｓ，Ｊ．Ｍ．，Ｋｅｒｅｍ，Ｂ．，Ａｌｏｎ，Ｎ．，Ｒｏｚｍａｈｅｌ，Ｒ．，Ｇｒｚｅｌｃｚａｋ，Ｚ．，Ｚｉｅｌｅｎｓｋｉ，Ｊ．，Ｌｏｋ，Ｓ．，Ｐｌａｖｓｉｃ，Ｎ．，ａｎｄ  Ｃｈｏｕ，Ｊ．Ｌ．（１９８９）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｇｅｎｅ：ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ＤＮＡ［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｅｒｒａｔｕｍ  ａｐｐｅａｒｓ  ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８９  Ｓｅｐ  ２９；２４５（４９２５）：１４３７］．ｓｃ  ２４５，１０６６−１０７３
１０．Ｐｅｄｅｍｏｎｔｅ，Ｎ．，Ｌｕｋａｃｓ，Ｇ．Ｌ．，Ｄｕ，Ｋ．，Ｃａｃｉ，Ｅ．，Ｚｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ，Ｏ．，Ｇａｌｉｅｔｔａ，Ｌ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｖｅｒｋｍａｎ，Ａ．Ｓ．（２００５）Ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｃｏｒｒｅｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ＤｅｌｔａＦ５０８−ＣＦＴＲ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １１５，２５６４−２５７１
１１．Ｖａｎ，Ｇ．Ｆ．，Ｈａｄｉｄａ，Ｓ．，Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ，Ｐ．Ｄ．，Ｂｕｒｔｏｎ，Ｂ．，Ｓｔａｃｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｓｔｒａｌｅｙ，Ｋ．Ｓ．，Ｄｅｃｋｅｒ，Ｃ．Ｉ，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．，ＭｃＣａｒｔｎｅｙ，Ｉ，Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｒ．，Ｗｉｎｅ，Ｊ．Ｉ，Ｆｒｉｚｚｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，Ａｓｈｌｏｃｋ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｎｅｇｕｌｅｓｃｕ，Ｐ．Ａ．（２０１１）Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆ５０８ｄｅｌ−ＣＦＴＲ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｄｅｆｅｃｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇ  ＶＸ−８０９．
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  １０８，１８８４３−１８８４８
１２．Ｒｅｎ，Ｈ．Ｙ．，Ｇｒｏｖｅ，Ｄ．Ｅ．，Ｄｅ  Ｌａ  Ｒｏｓａ，Ｏ．，Ｈｏｕｃｋ，Ｓ．Ａ．，Ｓｏｐｈａ，Ｐ．，Ｖａｎ，Ｇ．Ｆ．，Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｂ．Ｉ，ａｎｄ  Ｃｙｒ，Ｄ．Ｍ．（２０１３）ＶＸ−８０９  ｃｏｒｒｅｃｔｓ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｓｐａｎｎｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  １．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ  ２４，３０１６−３０２４
１３．Ｖａｎ，Ｇ．Ｆ．，Ｓｔｒａｌｅｙ，Ｋ．Ｓ．，Ｃａｏ，Ｄ．，Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｉ，Ｈａｄｉｄａ，Ｓ．，Ｈａｚｌｅｗｏｏｄ，Ａ．，Ｊｏｕｂｒａｎ，Ｊ．，Ｋｎａｐｐ，Ｔ．，Ｍａｋｉｎｇｓ，Ｌ．Ｒ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｔ．，Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．，Ｐａｎｃｈｅｎｋｏ，Ｖ．，Ｒａｄｅｒ，Ｊ．，Ｓｉｎｇｈ，Ａ．，Ｓｔａｃｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｔｕｎｇ，Ｒ．，Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ，Ｐ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｎｅｇｕｌｅｓｃｕ，Ｐ．（２００６）Ｒｅｓｃｕｅ  ｏｆ  ＤｅｌｔａＦ５０８−ＣＦＴＲ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ａｎｄ  ｇａｔｉｎｇ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ａｉｒｗａｙ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｂｙ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＡｍＪ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２９０，Ｌ１１１７−Ｌ１１３０
１４．Ｂａｌｃｈ，Ｗ．Ｅ．，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ，Ｒ．Ｉ．，Ｄｉｌｌｉｎ，Ａ．，ａｎｄ  Ｋｅｌｌｙ，Ｊ．Ｗ．（２００８）Ａｄａｐｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｏｓｔａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ｓｃ  ３１９，９１６−９１９
１５．Ｌｏｐｅｓ−Ｐａｃｈｅｃｏ，Ｍ．，Ｂｏｉｎｏｔ，Ｃ，Ｓａｂｉｒｚｈａｎｏｖａ，Ｉ．，Ｍｏｒａｌｅｓ，Ｍ．Ｍ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｌ．（２０１５）Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｒｅｃｔｏｒｓ  Ｒｅｓｃｕｅ  ＡＦ５０８−ＣＦＴＲ  ｂｙ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ｉｔｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｈｓｐ４０  ａｎｄ  Ｈｓｐ２７．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９０，２５６３６−２５６４５
１６．Ｓｅｅｇｅｒ−Ｎｕｋｐｅｚａｈ，Ｔ．，Ｐｒｏｉａ，Ｄ．Ａ．，Ｅｇｌｅｓｔｏｎ，Ｂ．Ｌ．，Ｎｉｋｏｎｏｖａ，Ａ．Ｓ．，Ｋｅｎｔ，Ｔ．，Ｃａｉ，Ｋ．Ｑ．，Ｈｅｎｓｌｅｙ，Ｈ．Ｈ．，Ｙｉｎｇ，Ｗ．，Ｃｈｉｍｍａｎａｍａｄａ，Ｄ．，ａｎｄ  Ｓｅｒｅｂｒｉｉｓｋｉｉ，Ｉ．Ｇ．（２０１３）Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＨＳＰ９０  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｓｌｏｗｓ  ｃｙｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１０，１２７８６−１２７９１
１７．Ｒｏｔｈ，Ｄ．Ｍ．，Ｈｕｒｔ，Ｄ．Ｍ．，Ｔｏｎｇ，Ｊ．，Ｂｏｕｃｈｅｃａｒｅｉｌｈ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｎ．，Ｓｅｅｌｅｙ，Ｔ．，Ｄｅｋｋｅｒｓ，Ｊ．Ｆ．，Ｂｅｅｋｍａｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｇａｒｚａ，Ｄ．，Ｄｒｅｗ，Ｌ．，Ｍａｓｌｉａｈ，Ｅ．，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ，Ｒ．Ｉ．，ａｎｄ  Ｂａｌｃｈ，Ｗ．Ｅ．（２０１４）Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｌａｄａｐｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍａｎａｇｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｌｄｉｎｇ．ＰＬｏＳ．Ｂｉｏｌ．１２，ｅｌ００１９９８
１８．Ｔｒａｙｋｏｖａ−Ｂｒａｕｃｈ，Ｍ．，Ｓｃｈｏｎｉｇ，Ｋ，Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｏ．，Ｍｉｌｏｕｄ，Ｔ．，Ｊａｕｃｈ，Ａ．，Ｂｏｄｅ，Ｍ．，Ｆｅｌｓｈｅｒ，Ｄ．Ｗ．，Ｇｌｉｃｋ，Ａ．Ｂ．，Ｋｗｉａｔｋｏｗｓｋｉ，Ｄ．Ｊ．，Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．，Ｈｏｒｓｔ，Ｊ．，ｖｏｎ  Ｋｎｅｂｅｌ  Ｄｏｅｂｅｒｉｔｚ，Ｍ．，Ｎｉｇｇｌｉ，Ｆ．Ｋ，Ｋｒｉｚ，Ｗ．，Ｇｒｏｎｅ，Ｈ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｋｏｅｓｔｅｒｓ，Ｒ．（２００８）Ａｎ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｔｕｂｕｌａｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １４，９７９−９８４
１９．Ｐｉｏｎｔｅｋ，Ｋ．，Ｍｅｎｅｚｅｓ，Ｌ．Ｆ．，Ｇａｒｃｉａ−Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｍ．Ａ．，Ｈｕｓｏ，Ｄ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｇｅｒｍｉｎｏ，Ｇ．Ｇ．（２００７）Ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｓｗｉｔｃｈ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ｔｈｅ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｋｉｄｎｅｙ  ｃｙｓｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  Ｐｋｄｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １３，１４９０−１４９５
２０．Ｊｏｌｙ，Ｄ．，Ｉｓｈｉｂｅ，Ｓ．，Ｎｉｃｋｅｌ，Ｃ，Ｙｕ，Ｚ．，Ｓｏｍｌｏ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｃａｎｔｌｅｙ，Ｌ．Ｇ．（２００６）Ｔｈｅ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ  １−Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ＥＲＫ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｐｒｅａｄｉｎｇ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８１，２６３２９−２６３３９
２１．Ｗｅｉ，Ｆ．，Ｋａｒｉｈａｌｏｏ，Ａ，Ｙｕ，Ｚ．，Ｍａｒｌｉｅｒ，Ａ．，Ｓｅｔｈ，Ｐ．，Ｓｈｉｂａｚａｋｉ，Ｓ．，Ｗａｎｇ，Ｔ．，Ｓｕｋｈａｔｍｅ，Ｖ．Ｐ．，Ｓｏｍｌｏ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｃａｎｔｌｅｙ，Ｌ．Ｇ．（２００８）Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｌｉｐｏｃａｌｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｃｙｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｂｙ  Ｐｋｄｌ  ｎｕｌｌ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．７４，１３１０−１３１８
２２．Ｈａｎａｏｋａ，Ｋ，ａｎｄ  Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．（２０００）ｃＡＭＰ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｙｓｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆＮｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  １１，１１７９−１１８７
２３．Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｎａｇａｏ，Ｓ．，Ｗａｌｌａｃｅ，Ｄ．Ｐ．，Ｂｅｌｉｂｉ，Ｆ．Ａ．，Ｃｏｗｌｅｙ，Ｂ．Ｄ．，Ｐｅｌｌｉｎｇ，Ｊ．Ｃ，ａｎｄ  Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｊ．Ｊ．（２００３）Ｃｙｃｌｉｃ  ＡＭＰ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  Ｂ−Ｒａｆ  ａｎｄ  ＥＲＫ  ｉｎ  ｃｙｓｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ−ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｋｉｄｎｅｙｓ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．６３，１９８３−１９９４
２４．Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｑ．，Ｙａｎｄａ，Ｍ．，Ｂｏｉｎｏｔ，Ｃ，Ｏｕｔｅｄａ，Ｐ．，Ｈｕｓｏ，Ｄ．Ｌ．，Ｗａｔｎｉｃｋ，Ｔ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｖ．（２０１６）Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ６  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｙｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
２５．Ｙａｎｄａ，Ｍ．Ｋ，Ｌｉｕ，Ｑ．，Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｖ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｌ．（２０１７）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ６  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｙｓｔｓ  ｂｙ  ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ  ｖｉａ  ｃＡＭＰ  ａｎｄ  Ｃａ２＋  ｉｎ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ
２６．Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｔ．，Ｐｅｌｌｉｎｇ，Ｊ．Ｃ，Ｒａｍａｓｗａｍｙ，Ｎ．Ｔ．，Ｅｐｐｌｅｒ，Ｊ．Ｗ．，Ｗａｌｌａｃｅ，Ｄ．Ｐ．，Ｎａｇａｏ，Ｓ．，Ｒｏｍｅ，Ｌ．Ａ．，Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｌ．Ｐ．，ａｎｄ  Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｊ．Ｊ．（２０００）ｃＡＭＰ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｃｙｓｔ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．５７，１４６０−１４７１
２７．Ｒｉｅｇ，Ｔ．，ａｎｄ  Ｋｏｈａｎ，Ｄ．Ｅ．（２０１４）Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｐｈｒｏｎ  ｗａｔｅｒ  ａｎｄ  ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｂｙ  ａｄｅｎｙｌｙｌ  ｃｙｃｌａｓｅｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｒｅｎａｌ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ３０６，Ｆ７０１−７０９
２８．Ｓｈｅｎ，Ｔ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｙ．，Ｐｏｙａｒｄ，Ｍ．，Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｎ．，Ｄｅｆｅｒ，Ｎ．，ａｎｄ  Ｈａｎｏｕｎｅ，Ｊ．（１９９７）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｅｎｙｌｙｌ  ｃｙｃｌａｓｅ  ｍＲＮＡｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ，ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ，ａｎｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ  ｒａｔ  ｋｉｄｎｅｙ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ−Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２７３，Ｃ３２３−Ｃ３３０
２９．Ｍａｎｇｏｌｉｎｉ，Ａ．，ｄｅ  Ｓｔｅｐｈａｎｉｓ，Ｌ．，ａｎｄ  Ａｇｕｉａｒｉ，Ｇ．（２０１６）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｉｎ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｆｒｏｍ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｏ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｗｏｒｌｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  ５，７６
３０．Ｍｅｎｚｉｅｓ，Ｒ．Ｉ．，Ｔａｒｎ，Ｆ．Ｗ．，Ｕｎｗｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｂａｉｌｅｙ，Ｍ．Ａ．（２０１６）Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
３１．Ｌｉ，Ｙ．，Ｓａｎｔｏｓｏ，Ｎ．Ｇ．，Ｙｕ，Ｓ．，Ｗｏｏｄｗａｒｄ，Ｏ．Ｍ．，Ｑｉａｎ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．（２００９）Ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−１  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｏｓｉｔｏｌ  １，４，５−ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８４，３６４３１−３６４４１
３２．Ｓａｎｔｏｓｏ，Ｎ．Ｇ，Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｌ．，ａｎｄ  Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．（２０１１）Ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−１，２，ａｎｄ  ＳＴＩＭ１  ｉｎｔｅｒａｃｔ  ｗｉｔｈ  ＩＰ（３）Ｒ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ＥＲ  Ｃａ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７，７１５−７２６
３３．Ｔｈａｓｔｒｕｐ，Ｏ．，Ｃｕｌｌｅｎ，Ｐ．Ｊ．，Ｄｒｏｂａｋ，Ｂ．，Ｈａｎｌｅｙ，Ｍ．Ｒ，ａｎｄ  Ｄａｗｓｏｎ，Ａ．Ｐ．（１９９０）Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ，ａ  ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ｄｉｓｃｈａｒｇｅｓ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋  ｓｔｏｒｅｓ  ｂｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  Ｃａ２（＋）−ＡＴＰａｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ８７，２４６６−２４７０
３４．Ｔｏｒｒｅｓ，Ｖ．Ｅ．，Ｒｏｓｓｅｔｔｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｐ．Ｃ．（２００７）Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｉｎｅｒｖａ  Ｍｅｄ．９８，６６９−６９１
３５．Ｏｂｒｉｇ，Ｔ．Ｇ，Ｃｕｌｐ，Ｗ．Ｉ，ＭｃＫｅｅｈａｎ，Ｗ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｈａｒｄｅｓｔｙ，Ｂ．（１９７１）Ｔｈｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｂｙ  ｗｈｉｃｈ  ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｌｕｔａｒｉｍｉｄｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｎ  ｒｅｔｉｃｕｌｏｃｙｔｅ  ｒｉｂｏｓｏｍｅｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４６，１７４−１８１
３６．Ｂｏｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｑｉａｎ，Ｆ．，Ｏｎｕｃｈｉｃ，Ｌ．Ｆ．，Ｂｈｕｎｉａ，Ａ．Ｋ．，Ｐｈａｋｄｅｅｋｉｔｃｈａｒｏｅｎ，Ｂ．，Ｈａｎａｏｋａ，Ｋ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．，Ｍｏｎａｃｏ，Ｌ．，ａｎｄ  Ｇｅｒｍｉｎｏ，Ｇ．Ｇ．（２０００）Ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−１，ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｆ  ＰＫＤｌ，ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｔｕｂｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ＭＤＣＫ  ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  ６，１２６７−１２７３
３７．Ａｋｅｒｆｅｌｔ，Ｍ．，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ，Ｒ．Ｉ．，ａｎｄ  Ｓｉｓｔｏｎｅｎ，Ｌ．（２０１０）Ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｆａｃｔｏｒｓ：ｉｎｔｅｇｒａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｓｔｒｅｓｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｌｉｆｅｓｐａｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  １１，５４５
３８．Ｖａｎ  Ｇｏｏｒ，Ｆ．，Ｈａｄｉｄａ，Ｓ．，Ｇｒｏｏｔｅｎｈｕｉｓ，Ｐ．Ｄ．，Ｂｕｒｔｏｎ，Ｂ．，Ｓｔａｃｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｓｔｒａｌｅｙ，Ｋ．Ｓ．，Ｄｅｃｋｅｒ，Ｃ．Ｉ，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．，ＭｃＣａｒｔｎｅｙ，Ｉ，Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｒ，Ｗｉｎｅ，Ｊ．Ｉ，Ｆｒｉｚｚｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，Ａｓｈｌｏｃｋ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｎｅｇｕｌｅｓｃｕ，Ｐ．Ａ．（２０１１）Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆ５０８ｄｅｌ−ＣＦＴＲ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｄｅｆｅｃｔ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇ  ＶＸ−８０９．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０８，１８８４３−１８８４８
３９．Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｌｏｏ，Ｔ．Ｗ．，Ｂａｒｔｌｅｔｔ，Ｍ．Ｃ，ａｎｄ  Ｃｌａｒｋｅ，Ｄ．Ｍ．（２００７）Ｃｏｒｒｅｃｔｏｒｓ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ（ＣＦＴＲ）−ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｂｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８２，３３２４７−３３２５１
４０．Ｒｏｔｈ，Ｄ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｂａｌｃｈ，Ｗ．Ｅ．（２０１１）Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｒｏｔｅｏｓｔａｓｉｓ：ｐｒｏｔｅｏｍｅ  ｂａｌａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２３，１２６−１３４
４１．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｋ．Ｗ．，Ｏｋｉｙｏｎｅｄａ，Ｔ．，Ｂａｌｃｈ，Ｗ．Ｅ．，Ｂｒａａｋｍａｎ，Ｉ．，Ｂｒｏｄｓｋｙ，Ｊ．Ｌ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．，Ｐｅｎｌａｎｄ，Ｃ．Ｍ．，Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｈ．Ｂ．，Ｓｏｒｓｃｈｅｒ，Ｅ．Ｉ，Ｓｋａｃｈ，Ｗ．Ｒ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ｐ．Ｊ．，Ｌｕｋａｃｓ，Ｇ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｆｒｉｚｚｅｌｌ，Ｒ．Ａ．（２０１１）ＣＦＴＲ  Ｆｏｌｄｉｎｇ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ：ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ＣＦＴＲ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７４２，３３５−３５３
４２．Ｓｏｎｇ，Ｘ．，Ｄｉ  Ｇｉｏｖａｎｎｉ，Ｖ．，Ｈｅ，Ｎ．，Ｗａｎｇ，Ｋ．，Ｉｎｇｒａｍ，Ａ．，Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ，Ｎ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｐｅｉ，Ｙ．（２００９）Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｕｔｏｓｏｍａｌ  ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤＰＫＤ）：ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ．Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  １８，２３２８−２３４３
４３．Ｅｌ−Ｈａｒｉｒｙ，Ｉ．，Ｐｒｏｉａ，Ｄ．，ａｎｄ  Ｖｕｋｏｖｉｃ，Ｖ．（２０１４）Ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ＨＳＰ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｇｏｏｇｌｅ  Ｐａｔｅｎｔｓ
４４．Ｐｒｏｉａ，Ｄ．，Ｇｏｌｅｍｉｓ，Ｅ．，ａｎｄ  Ｓｅｅｇｅｒ−Ｎｕｋｐｅｚａｈ，Ｔ．（２０１３）Ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｈｓｐ９０  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｇｏｏｇｌｅ  Ｐａｔｅｎｔｓ
４５．Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｅ．（２０１３）Ｔｈｅ  ＨＳＰ７０  ｆａｍｉｌｙ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３４，１１８１−１１８８
４６．Ｇｙｒｄ−Ｈａｎｓｅｎ，Ｍ．，Ｎｙｌａｎｄｓｔｅｄ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｊａａｔｔｅｌａ，Ｍ．（２００４）Ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ７０  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｂｙ  ｓａｆｅｇｕａｒｄｉｎｇ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ３，１４８４−１４８５
４７．Ｋｉｍ，Ｙ．Ｅ．，Ｈｉｐｐ，Ｍ．Ｓ．，Ｂｒａｃｈｅｒ，Ａ．，Ｈａｙｅｒ−Ｈａｒｔｌ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈａｒｔｌ，Ｆ．Ｕ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｌｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｏｓｔａｓｉｓ．Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８２，３２３−３５５
４８．Ｂｏｂｏ，Ｌ．Ｄ．，Ｅｌ  Ｆｅｇｈａｌｙ，Ｒ．Ｅ．，Ｃｈｅｎ，Ｙ．−Ｓ．，Ｄｕｂｂｅｒｋｅ，Ｅ．Ｒ，Ｈａｎ，Ｚ．，Ｂａｋｅｒ，Ａ．Ｈ．，Ｌｉ，Ｉ，Ｂｕｒｎｈａｍ，Ｃ．Ａ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈａｓｌａｍ，Ｄ．Ｂ．（２０１３）ＭＡＰＫ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ２  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８１，７１３−７２２
４９．Ｍｙｍｒｉｋｏｖ，Ｅ．Ｖ．，Ｓｅｉｔ−Ｎｅｂｉ，Ａ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｇｕｓｅｖ，Ｎ．Ｂ．（２０１１）Ｌａｒｇｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  ｓｍａｌｌ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．９１，１１２３−１１５９
５０．Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｃｈｅｎ，Ｍ．，Ｚｈｏｕ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｘ．（２０１４）ＨＳＰ２７，７０  ａｎｄ  ９０，ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ４５，１８−３０
５１．Ｏｙａｄｏｍａｒｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｍｏｒｉ，Ｍ．（２００４）Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＣＨＯＰ／ＧＡＤＤ１５３  ｉｎ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  １１，３８１−３８９
５２．Ｚｅｅｓｈａｎ，Ｈ．，Ｌｅｅ，Ｇ，Ｋｉｍ，Ｈ．−Ｒ．，ａｎｄ  Ｃｈａｅ，Ｈ．−Ｊ．（２０１６）Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  Ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ＲＯＳ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １７，３２７
５３．Ｘｕ，Ｃ，Ｂａｉｌｌｙ−Ｍａｉｔｒｅ，Ｂ．，ａｎｄ  Ｒｅｅｄ，Ｊ．Ｃ．（２００５）Ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ  ｓｔｒｅｓｓ：ｃｅｌｌ  ｌｉｆｅ  ａｎｄ  ｄｅａｔｈ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１５，２６５６−２６６４
５４．Ｇｕｒｌｏ，Ｔ．，Ｒｉｖｅｒａ，Ｊ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ａ．，Ｃｏｒｙ，Ｍ．，Ｈｏａｎｇ，Ｊ．，Ｃｏｓｔｅｓ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｕｔｌｅｒ，Ｐ．Ｃ．（２０１６）ＣＨＯＰ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ，ｂｕｔ  ｉｓ  ｎｏｔ  ｔｈｅ  ｏｎｌｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ，ＩＡＰＰ  ｉｎｄｕｃｅｄ  β−ｃｅｌｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ３０，４４６−４５４
５５．Ｓｏｕｔｈｗｏｏｄ，Ｃ．Ｍ．，Ｆｙｋｋｏｌｏｄｚｉｅｊ，Ｂ．，Ｍａｈｅｒａｓ，Ｋ．Ｊ．，Ｇａｒｓｈｏｔｔ，Ｄ．Ｍ．，Ｅｓｔｉｌｌ，Ｍ．，Ｆｒｉｂｌｅｙ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｏｗ，Ａ．（２０１６）Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＨＯＰ  ｉｎ  ｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｃｏｎｆｅｒ  ａ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｕｎｄｅｒ  ｎｏｒｍａｌ  ｏｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３６，６８０３−６８１９
５６．Ｔｏｒｒｅｓ，Ｖ．Ｅ．（２０１５）Ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ，ａｎｄ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  ６６，１９５−２１０
５７．Ｕｍｅｍｕｒａ，Ｍ．，Ｂａｌｊｉｎｎｙａｍ，Ｅ．，Ｆｅｓｋｅ，Ｓ．，Ｄｅ  Ｌｏｒｅｎｚｏ，Ｍ．Ｓ．，Ｘｉｅ，Ｌ．Ｈ．，Ｆｅｎｇ，Ｘ．，Ｏｄａ，Ｋ．，Ｍａｋｉｎｏ，Ａ．，Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．，Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｕ．，Ｉｗａｔｓｕｂｏ，Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｓ．，Ｇｏｙｄｏｓ，Ｊ．Ｓ．，Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｙ．，ａｎｄ  Ｉｗａｔｓｕｂｏ，Ｋ．（２０１４）Ｓｔｏｒｅ−ｏｐｅｒａｔｅｄ  Ｃａ２＋  ｅｎｔｒｙ（ＳＯＣＥ）ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．９，ｅ８９２９２
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６２．Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｑ．，Ｙａｎｄａ，Ｍ．Ｋ．，Ｂｏｉｎｏｔ，Ｃ，Ｏｕｔｅｄａ，Ｐ．，Ｈｕｓｏ，Ｄ．Ｌ．，Ｗａｔｎｉｃｋ，Ｔ．，Ｇｕｇｇｉｎｏ，Ｗ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｃｅｂｏｔａｒｕ，Ｖ．（２０１６）Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ６  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｙｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ９０，９０−９９
６３．Ｄａｉ，Ｃ，ａｎｄ  Ｓａｍｐｓｏｎ，Ｓ．Ｂ．（２０１６）ＨＳＦ１  ：ｇｕａｒｄｉａｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｏｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ２６，１７−２８
６４．Ｔｈａｓｔｒｕｐ，Ｏ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ａ．，Ｓｃｈａｒｆｆ，Ｏ．，Ｆｏｄｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｌｌｅｎ，Ｐ．，Ｄｒｏｂａｋ，Ｂ．，Ｂｊｅｒｒｕｍ，Ｐ．，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｈａｎｌｅｙ，Ｍ．（１９８９）Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｙｉｎｇ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｒｅｌｅａｓｅ  ａｎｄ  ｓｔｏｒａｇｅ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ａｃｔｉｏｎｓ  ２７，１７−２３
６５．Ｋｒｅｂｓ，Ｊ．，Ａｇｅｌｌｏｎ，Ｌ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｍｉｃｈａｌａｋ，Ｍ．（２０１５）Ｃａ  ２＋  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ（ＥＲ）ｓｔｒｅｓｓ：Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ４６０，１１４−１２１
【０１１４】
前述の主題は、理解を明確にするために例示及び実施例によってある程度詳細に記載されているが、当業者には、添付の特許請求の範囲内で、ある種の変更及び修正を実施できることが理解されるであろう。
【図１−１】
2020525446.tif 000003
【図１−２】
2020525446.tif 000004
【図１−３】
2020525446.tif 000005
【図２−１】
2020525446.tif 000006
【図２−２】
2020525446.tif 000007
【図３−１】
2020525446.tif 000008
【図３−２】
2020525446.tif 000009
【図４−１】
2020525446.tif 000010
【図４−２】
2020525446.tif 000011
【図５−１】
2020525446.tif 000012
【図５−２】
2020525446.tif 000013
【図６】
2020525446.tif 000014
【図７−１】
2020525446.tif 000015
【図７−２】
2020525446.tif 000016
【図８−１】
2020525446.tif 000017
【図８−２】
2020525446.tif 000018
【図９−１】
2020525446.tif 000019
【図９−２】
2020525446.tif 000020
【図９−３】
2020525446.tif 000021
【図１０】
2020525446.tif 000022
【図１１−１】
2020525446.tif 000023
【図１１−２】
2020525446.tif 000024
【図１２−１】
2020525446.tif 000025
【図１２−２】
2020525446.tif 000026
【図１３】
2020525446.tif 000027
【図１４】
2020525446.tif 000028
【図１５】
2020525446.tif 000029
【図１６】
2020525446.tif 000030
【図１７】
2020525446.tif 000031
【図１８】
2020525446.tif 000032
【図１９】
2020525446.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月22日(2020.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする被験体の嚢胞性腎疾患を治療するための嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子の使用。
【請求項２】
前記ＣＦＴＲ調節因子が、ルマカフトール（ＶＸ−８０９）、Ｃｏｒｒ−４ａ、ＶＲＴ−３２５、Ｃ１８、Ｃ４、Ｃ３、ＶＸ−７７０、ＶＸ−７８６、４−フェニル酪酸（４ＰＢＡ）、ＶＲＴ−５３２、Ｎ６０２２、ミグルスタット、シルデナフィル及びその類似体、アタルレン（ＰＴＣ１２４）、オウバイン、ロスコビチン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸、ラトンデュイン及びその類似体、ＳＡＨＡ、ＦＤＬ１６９、テザカフトル（ＶＸ−６６１）、ＶＸ−６５９、並びにＶＸ−４４５からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記ＣＦＴＲ調節因子が、ＶＸ−８０９又はＶＸ−６６１を含む、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記嚢胞性腎疾患が常染色体優性多発性嚢胞疾患を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が腎嚢胞のサイズ及び数のうちの１つ又は複数を低減する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、ｃＡＭＰ、Ｈｓｐ２７、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、ＮＨＥ３、及びＡＣ３のうちの１つ又は複数の濃度が低下する、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記ｃＡＭＰの濃度の低下は、ＡＣ３の減少によるものである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
嚢胞内腔において塩化物の量及び水の量のうちの１つ又は複数が低下する、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ＣＦＴＲを小胞体（ＥＲ）膜から細胞の側底膜に移動させる、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ＰＣ２を小胞体（ＥＲ）膜から細胞のゴルジに移動させる、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、ナトリウムの再吸収を回復させる、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）調節因子が、被験体の腎臓において、前記ＣＦＴＲ調節因子を投与されていない対照被験体の腎臓と比較して、ＥＲからのＣａ２＋の放出を減少させる、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
腎臓の集合管においてＡＱＰ２レベルが回復する、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
腎臓の近位尿細管（ＰＴ）、遠位尿細管（ＤＴ）、及び集合管のうちの１つ又は複数において、腎嚢胞のサイズ及び数のうちの１つ又は複数が低減する、請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
ＣＦＴＲ安定剤を使用することを更に含む、請求項１に記載の使用。
【国際調査報告】
2020525446.tif 000034
2020525446.tif 000035
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