(57)【要約】  本発明は、およそ３週（例えば、２１日）の投与間隔における長時間作用性第ＩＸ因子（ヒトＦＩＸ・ヒトアルブミン）約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇを用いた予防的投与計画に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
予防的投与計画において対象における出血を予防する方法における使用のための、
ａ）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）および
ｂ）ヒトアルブミン
を含む融合タンパク質であって、該ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、該ヒトアルブミンのＮ末端と連結されており、該融合タンパク質は、１９から２３日に１回の投与間隔に対して約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される、前記使用のための融合タンパク質。
【請求項２】
投与間隔は、２１日に１回である、請求項１に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項３】
用量は、静脈投与される、請求項１または２に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項４】
用量は、約１００ＩＵ／ｋｇである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項５】
年間出血回数は、１年当たり２０回未満である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項６】
年間出血回数は、１年当たり３回未満である、請求項５に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項７】
年間自然出血回数は、１年当たり１５回未満である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項８】
年間自然出血回数は、１年当たり２回未満である、請求項７に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項９】
ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、または５から１５％の間超えるトラフ値を維持する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１０】
ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２〜４％超えるトラフを維持する、請求項９に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１１】
リンカーは、ＦＩＸａによっておよび／またはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によって切断可能である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１２】
リンカーは、配列番号２および配列番号３から選択される配列を含む、請求項１１に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１３】
融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７０％同一性を有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１４】
融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列を有する、請求項１３に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１５】
対象は、ヒトである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１６】
ヒトは、血友病Ｂを患っている、請求項１５に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１７】
投与のために、約１００から４００ＩＵ／ｍｌの濃度で提供される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用のための融合タンパク質。
【請求項１８】
予防的投与計画において対象における出血を予防する方法であって、対象に、
ａ）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）および
ｂ）ヒトアルブミン
を含む融合タンパク質を、約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇの用量で１９から２３日に１回の投与間隔で投与すること
を含み、該ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、該ヒトアルブミンのＮ末端と連結されている、前記方法。
【請求項１９】
投与間隔は、２１日に１回である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
用量は、静脈投与される、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
用量は、約１００ＩＵ／ｋｇである、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
年間出血回数は、１年当たり２０回未満である、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
年間出血回数は、１年当たり３回未満である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
年間自然出血回数は、１年当たり１５回未満である、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
年間自然出血回数は、１年当たり２回未満である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、または５から１５％の間超えるトラフ値を維持する、請求項１８〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２〜４％超えるトラフ値を維持する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
リンカーは、ＦＩＸａによっておよび／またはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によって切断可能である、請求項１８〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
リンカーは、配列番号２および配列番号３から選択される配列を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
該融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７０％同一性を有する、請求項１８〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
該融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
対象は、ヒトである、請求項１８〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
ヒトは、血友病Ｂを患っている、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
融合タンパク質は、投与のために、約１００から４００ＩＵ／ｍｌの濃度で提供される、請求項１８〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、およそ３週（例えば、２１日）の投与間隔における長時間作用性第ＩＸ因子（ヒトＦＩＸ・ヒトアルブミン）約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇを用いた予防的投与計画に関する。
【背景技術】
【０００２】
血友病Ｂは、血液凝固の過程に対し中心となる凝固因子である凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸ）の欠乏の結果として生じるＸ連鎖劣性遺伝性出血障害である。血友病Ｂの徴候および症状は、ＦＩＸ欠乏の重症度および出血の場所により多様である。ほとんどの場合、出血は、関節、筋肉および軟部組織への自然出血または外傷によって誘発された出血によって特徴づけられる。同じ場所における再発性の出血は、関節の永久的な損傷につながる場合もある。中枢神経系、咽頭、または胃腸管において、まれだが命に関わる出血が生じることもある。
【０００３】
血友病Ｂに対する治療の目標は、出血を処置または予防することにより、障害を引き起こす関節および組織損傷を低減し、クオリティオブライフ（ＱｏＬ）を向上させることである。ＦＩＸによる補充療法は、因子欠乏の一時的な補正をもたらし、出血の傾向を小さくする。現在、血友病Ｂの予防的および出血時処置に、血漿由来および組換えＦＩＸ製品が使用されている。しかしながら、血漿由来製品は、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルスなどの感染性ウイルスの伝染に関するリスクに関連する。血漿由来および組換えＦＩＸ製品はともに、半減期が短いため、出血エピソードの著しい減少を実現するためには週に２から３回の投与が必要とされる。さらに、出血エピソードを管理するために、繰り返しの投与が必要な場合もあり、投与後の無出血期間は比較的短い。血漿由来または組換えＦＩＸ製品のいずれかの頻繁な静脈（ＩＶ）注射の必要性は、患者および障害を処置する医師に大幅な負担を伴う。幼い小児におけるそのような治療計画は、（常にとは限らないが）感染性合併症を回避し、ライン中の凝血塊の発生を予防するために極めて清潔に保たなければならない静脈アクセスデバイスの挿入を必要とする場合が多い。そのようなデバイスに関連するリスクおよび病的状態は、血友病の一部の非常に幼い小児が適切な看護を受けるのを妨げる場合もある。
【０００４】
ＦＩＸのペグ化形態が形成され、これは、ミニブタおよびイヌにおいて５から７倍延長されたＦＩＸの半減期を示す（非特許文献１）。患者でも同様の結果が観察された（非特許文献２）。組換えＦＩＸおよびアルブミン（ｒＩＸ−ＦＰ）を含む融合タンパク質は、ラット、ウサギ、およびＦＩＸ欠損マウスにおいて、それが、現在販売されている組換えＦＩＸ製品（例えば、ｒＦＩＸ）の公開されている結果と比較して、改善されたＰＫパラメーター（すなわち、増加した回収率、終末相半減期および濃度−時間曲線下面積［ＡＵＣ］）を有することを実証した（非特許文献３）。ヒトにおける研究は、ｒＩＸ−ＦＰの週単位の予防が、より少ない輸注による従前のＦＩＸ製品と比較して、ＦＩＸの消費を低減することを示した（非特許文献４）。
【０００５】
ＦＩＸを含むそのような融合タンパク質の別の例は、ｒＦＩＸ−Ｆｃである。特許文献１には、ＦＩＸを含む治療効果のあるキメラポリペプチドについて記載されており、これは、ＦｃまたはアルブミンなどのＦｃＲｎ結合パートナーと融合させることができる。ｒＦＩＸ−Ｆｃは、インビボにおいて半減期の延長を示した。この文献は、予防的治療のために、ｒＦＩＸＦｃを週に１回２０ＩＵ／ｋｇ、１０日に１回４０ＩＵ／ｋｇまたは２週間に１回１２０ＩＵ／ｋｇで投与することを提言している。非特許文献５も、ｒＦＩＸ−Ｆｃが、ＢｅｎｅＦＩＸ（登録商標）（すなわち、ｒＦＩＸ）と比較して半減期、ならびに他のＰＫパラメーターの増加を示すことを記載している。ｒＦＩＸ−Ｆｃに関する第３相試験が最近公開され、これは、５０ＩＵ／ｋｇで開始する週に１回の間隔または１０日の投与間隔から開始する１００ＩＵ／ｋｇで投与される場合、血友病Ｂの患者の年間出血回数が少なかったことを示している（非特許文献６）。
【０００６】
特許文献２は、血友病の予防的処置のためのさまざまな用量（２５〜２５０ＩＵ／ｋｇ）および毎日から月に１回に及ぶ投与間隔での第ＩＸ因子を含む融合タンパク質について記載している。ＡＢＲデータは、週に１回の予防（２５〜３５ＩＵ／ｋｇ）に関して示されており、ＦＩＸ活性レベルは、２１日間にわたり１００ＩＵ／ｋｇを受けた血友病の５人の患者に関して報告されている。治療計画は、１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰ注射後２１日目に少なくとも４．１％のＦＩＸ活性を示した。ＰＫ結果は、１００ＩＵ／ｋｇ、２１日の投与間隔に関してシミュレートされた。非特許文献７は、ｒＩＸ−ＦＰの延長された半減期について記載しており、その集団ＰＫモデルは、最大２週間の間隔でのｒＩＸ−ＦＰの延長された投与を支持している。
【０００７】
本発明は、ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）およびヒトアルブミンを含む融合タンパク質である長時間作用性第ＩＸ因子を用いた予防的投与計画を提供し、ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、ヒトアルブミンのＮ末端と連結されており、融合タンパク質は、およそ２１日の投与間隔に対して約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。
【０００８】
アルブミンはヒトＦＩＸの半減期を延長させるが、切断可能なリンカーがないと、ＦＩＸは、一般に活性が低下するか、または低い。切断可能なリンカーは、アルブミンが原因となる、活性を損なう任意の立体障害からポリペプチドが遊離するのを可能にし、それにより、融合タンパク質の生成を可能にし、これが、ＦＩＸの高モル特異的活性を保持する。そのような融合タンパク質は、改善された半減期およびその切断不可能な同等物と比較して高いモル特異的活性を示す。凝固に関与するタンパク質によって切断が起こるとき、これは、非活性化ＦＩＸが、出血事象が起こるまで延長された半減期を有し、ならびに同時のＦＩＸの活性化およびアルブミンからの切断を可能にする。融合物からアルブミンが遊離した活性化ＦＩＸは、高い活性を有し、アルブミンの喪失のために血液から速やかに除去される。
【０００９】
先行技術は、切断不可能なリンカーを有するＦＩＸおよびアルブミンを含む融合タンパク質について記載している。例えば、特許文献３は、多数のさまざまな治療効果のあるポリペプチドの融合ポリペプチドについて記載しており、これは、ヒト血清アルブミンと融合されると、インビボにおける延長された機能的半減期および延長された保存寿命を有することが予想される。例として言及される治療効果のあるポリペプチドの一覧の１つは、第ＩＸ因子である。アルブミンとＦＩＸの間にペプチドリンカーが存在するＦＩＸの融合物も記載されているが、リンカーが切断可能であることは明記されていない。非特許文献８は、マウスＦＩＸ、８アミノ酸のリンカー（ＧＰＧ４ＴＭ）、マウスアルブミンおよび２２アミノ酸のペプチドタグから構成されるマウス第ＩＸ因子アルブミン融合タンパク質、ならびにヒト第ＩＸ因子、７アミノ酸のリンカー（Ｇ６Ｖ）およびヒトアルブミンから構成されるヒト第ＩＸ因子アルブミン融合タンパク質も示している。Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄは、ＦＩＸとアルブミンの間に切断可能なリンカーを使用しておらず、またはそれを使用することも示唆していない。これらの融合タンパク質は、ＦＩＸが活性化するのを可能にするが、アルブミンが存在するため活性が低い。
【００１０】
凝固因子が凝固の間に（ＦＩＸのような）酵素前駆体のタンパク質分解切断によって、または既にタンパク質分解的に「予め」活性化された因子の（組織因子と結合したＦＶＩＩａのような）第２のポリペプチドとの接触によって活性化されると、ここで活性化した凝固因子の長い半減期を維持することはもはや望ましくない。それは、長い半減期は、血栓性合併症につながる可能性があり、活性化因子が延長された半減期を有する場合にさらに一層関連するはずであるためである。したがって、本発明の目的は、およそ２１日の処置期間による予防的治療に適した長続きするヒトＦＩＸを提供することである。
【００１１】
配列番号１に記載の配列（図１を参照）を有するｒＩＸ−ＦＰ（組換えヒトＦＩＸ・ヒトアルブミン融合タンパク質）は、改善されたＰＫパラメーターを示した。具体的には、これは、ｒＦＩＸ（例えば、Ｂｅｎｅｆｉｘ（登録商標））と比較して、５．３倍長い半減期（ｔ１／２）、７倍低下したＣＬ、および７倍大きいＡＵＣによって示される血漿中の循環が延長された（非特許文献９）。これは、驚くべきことに、ＦＩＸ融合タンパク質に関する先行技術によって実証されたものよりも著しく長い投与間隔を用いた血友病の予防的処置を可能にする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ２０１２／００６６２４
【特許文献２】ＷＯ２０１５／０９５９２５
【特許文献３】ＷＯ２００１／７９２７１
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｏｓｔｅｒｇａａｒｄ，Ｈら、２０１１年、Ｂｌｏｏｄ．  １１８（８）：２３３３〜２３４１頁
【非特許文献２】Ｎｅｇｒｉｅｒ  Ｃら、Ｂｌｏｏｄ．  ２０１１年９月８日；１１８（１０）：２６９５〜７０１頁
【非特許文献３】Ｍｅｔｚｎｅｒ  ＨＪら、２００９年、Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．  １０２：６３４〜６４４頁
【非特許文献４】Ｍａｒｔｉｎｏｗｉｔｚら、ＩＳＴＨ、アムステルダム、オランダ、６月２９日〜７月４日、２０１３年要約
【非特許文献５】Ｌｕｋら（２０１１年、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ．  １７：３５２〜３８０頁）
【非特許文献６】Ｐｏｗｅｌｌ  ＪＳら、２０１３年１２月１２日、ＮＥＪＭ．  ３６９：２３１３〜２３頁
【非特許文献７】Ｚｈａｎｇら（（２０１６年）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ．  １４：２１３２〜２１４０頁）
【非特許文献８】Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄら（（２００４年）、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  １２６：  ５６５〜５７３頁）
【非特許文献９】Ｓａｎｔａｇｏｓｔｉｎｏ  Ｅら、Ｂｌｏｏｄ、２０１２年９月２０日；１２０（１２）：２４０５〜１１頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、予防的投与計画において対象における出血を予防する方法における使用のための、
ａ）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）部分、および
ｂ）ヒトアルブミン
を含む融合タンパク質であって、ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、ヒトアルブミンのＮ末端と連結されており、融合タンパク質は、１９から２３日に１回の投与間隔に対して約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇの用量で、対象に投与される、融合タンパク質に関する。好適な実施形態において、投与間隔は、２１日に１回である。用量は、好ましくは、静脈投与される。極めて好適な実施形態において、用量は、約１００ＩＵ／ｋｇである。
【００１５】
これらの実施形態のいずれか１つにおいて、投与間隔は、１９から２３日に１回、好ましくは、およそ２１日に１回である。あるいは、投与間隔は、２６〜３０日に１回、好ましくは、およそ２８日に１回（すなわち、月に１回）である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり２０回未満、１年当たり１５回未満、１年当たり１０回未満、１年当たり９回未満、１年当たり８回未満、１年当たり７回未満、１年当たり６回未満、１年当たり５回未満、１年当たり４回未満、または１年当たり３回未満の年間出血回数をもたらすことが可能である。
【００１７】
好適な実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり２０回未満、最も好ましくは、１年当たり３回未満の年間出血回数をもたらす。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ヒト長時間作用性ＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり１５回未満、１年当たり１２回未満、１年当たり１０回未満、１年当たり９回未満、１年当たり８回未満、１年当たり７回未満、１年当たり６回未満、１年当たり５回未満、１年当たり４回未満、１年当たり３回未満、または１年当たり２回未満の年間自然出血回数をもたらすことが可能である。
【００１９】
極めて好適な実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり１５回未満、最も好ましくは、１年当たり２回未満の年間自然出血回数をもたらす。
【００２０】
本発明の任意の実施形態に関して、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約１％超えるトラフ値で維持される。好ましくは、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２〜５％超える、より好ましくは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２、３、４、または５％超えるトラフ値で維持される。他のさらに好適な実施形態において、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを４から１５％の間または５から１５％の間超えて維持される。
【００２１】
前記融合タンパク質は、凝固因子を活性化するプロテアーゼによって切断可能なリンカーを有し、それにより、リンカーの切断が、凝固が起こる部位での凝固因子の活性化に関連するのを確実にする。本発明による他の好ましい融合タンパク質は、リンカーが、活性化されると、融合タンパク質の一部である凝固因子によって切断可能であるものであり、それにより、融合タンパク質の切断が凝固事象と関連するのも確実にする。本発明による他の好ましい融合タンパク質は、リンカーが、それ自体が融合タンパク質の一部である凝固因子の活性によって直接または間接的に活性化されるプロテアーゼによって切断可能であるものであり、それにより、融合タンパク質の切断が凝固事象と関連するのも確実にする。
【００２２】
好適な実施形態において、リンカーは、ＦＩＸａによっておよび／またはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によって切断可能である。
【００２３】
特に好適な実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３から選択される配列を含む。
配列番号２
Pro Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala Glu Thr Val Phe Pro Asp Val
1               5                   10                  15
配列番号３
Pro Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala Glu Thr Val Phe Pro Asp Val
1               5                   10                  15
【００２４】
代替的な実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と９０％同一である。別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と８０％同一である。さらに別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と７０％同一である。さらに別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と６０％同一である。別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と５０％同一である。
【００２５】
好ましくは、本発明の融合タンパク質は、配列番号１に記載の配列（図１を参照）を有する。あるいは、融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７０％の同一性を有する。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７５％の同一性を有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８０％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９０％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９５％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９８％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９９％の同一性パーセントを有することが可能である。
【００２６】
本発明の目的に対して、融合タンパク質を投与される好ましい対象は、ヒトである。特に好ましいのは、血友病Ｂを患っているヒトである。
【００２７】
本発明の任意の実施形態に関して、融合タンパク質は、投与のために、好ましくは、約１００から４００ＩＵ／ｍｌ、好ましくは、約１００、２００または４００ＩＵ／ｍｌの濃度で提供される。融合タンパク質はまた、投与のために、６００ＩＵ／ｍｌまたは１２００ＩＵ／ｍｌの濃度で提供することができる。
【００２８】
本発明は、予防的投与計画において対象における出血を予防する方法であって、対象に、
ａ）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）部分、および
ｂ）ヒトアルブミン
を含む融合タンパク質を、約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇの用量で１９から２３日に１回の投与間隔で投与することを含み、ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、ヒトアルブミンのＮ末端と連結されている、方法に関する。好適な実施形態において、投与間隔は、２１日に１回である。用量は、好ましくは、静脈投与される。極めて好適な実施形態において、用量は、約１００ＩＵ／ｋｇである。
【００２９】
本発明の方法において、投与間隔は、１９から２３日に１回、好ましくは、およそ２１日に１回である。あるいは、投与間隔は、２６〜３０日に１回、好ましくは、およそ２８日に１回（すなわち、月に１回）である。
【００３０】
いくつかの実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり２０回未満、１年当たり１５回未満、１年当たり１０回未満、１年当たり９回未満、１年当たり８回未満、１年当たり７回未満、１年当たり６回未満、１年当たり５回未満、１年当たり４回未満、または１年当たり３回未満の年間出血回数をもたらすことが可能である。
【００３１】
好適な実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり２０回未満、最も好ましくは、１年当たり３回未満の年間出血回数をもたらす。
【００３２】
いくつかの実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり１５回未満、１年当たり１２回未満、１年当たり１０回未満、１年当たり９回未満、１年当たり８回未満、１年当たり７回未満、１年当たり６回未満、１年当たり５回未満、１年当たり４回未満、１年当たり３回未満、または１年当たり２回未満の年間自然出血回数をもたらすことが可能である。
【００３３】
極めて好適な実施形態において、長時間作用性ヒトＦＩＸの前記予防的投与計画は、１年当たり１５回未満、最も好ましくは、１年当たり２回未満の年間自然出血回数をもたらす。
【００３４】
本発明の方法に関して、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約１％超えるトラフ値で維持される。好ましくは、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２〜５％超える、より好ましくは、投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約２、３、４、または５％超えるトラフ値で維持される。他のさらに好適な実施形態において、ＦＩＸの血漿レベルは、投与間隔の全体にわたりベースラインを４から１５％の間または５から１５％の間超えて維持される。
【００３５】
本発明の方法において、リンカーは、凝固因子を活性化するプロテアーゼによって切断可能であり、それにより、リンカーの切断が、凝固が起こる部位での凝固因子の活性化に関連することを確実にする。本発明による他の好ましい融合タンパク質は、リンカーが、活性化されると、融合タンパク質の一部である凝固因子によって切断可能であるものであり、それにより、融合タンパク質の切断が凝固事象と関連することも確実にする。本発明による他の好ましい融合タンパク質は、リンカーが、それ自体が融合タンパク質の一部である凝固因子の活性によって直接または間接的に活性化されるプロテアーゼによって切断可能であるものであり、それにより、融合タンパク質の切断が凝固事象と関連するのも確実にする。
【００３６】
好適な実施形態において、リンカーは、ＦＩＸａによっておよび／またはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によって切断可能である。
【００３７】
特に好適な実施形態において、リンカーは、以下の配列番号２および配列番号３から選択される配列を含む：
配列番号２
Pro Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala Glu Thr Val Phe Pro Asp Val
1               5                   10                  15
配列番号３
Pro Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala Glu Thr Val Phe Pro Asp Val
1               5                   10                  15
【００３８】
別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と９０％同一である。別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と８０％同一である。さらに別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と７０％同一である。さらに別の実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と６０％同一である。さらなる実施形態において、リンカーは、配列番号２および配列番号３の一方と５０％同一である。
【００３９】
好ましくは、本発明の方法は、配列番号１に記載の配列（図１を参照）を有する融合タンパク質を投与する。あるいは、融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７０％の同一性を有する。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも７５％の同一性を有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８０％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも８５％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９０％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９５％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９８％の同一性パーセントを有することが可能である。融合タンパク質の配列は、配列番号１に記載の配列と少なくとも９９％の同一性パーセントを有することが可能である。
【００４０】
本発明の方法に関して、融合タンパク質を投与される好ましい対象は、ヒトである。特に好ましいのは、血友病Ｂを患っているヒトである。
【００４１】
本発明の任意の方法に関して、融合タンパク質は、好ましくは、約１００から４００ＩＵ／ｍｌ、好ましくは、約１００、２００または４００ＩＵ／ｍｌの濃度で投与される。融合タンパク質はまた、６００ＩＵ／ｍｌまたは１２００ＩＵ／ｍｌの濃度で投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】成熟ｒＩＸ−ＦＰのアミノ酸配列（配列番号１）である。ＦＩＸは、ａａ１〜４１６に示されており、リンカー配列は、太字で示され、下線が引かれており（ａａ４１６〜４３３）、アルブミン配列は、ａａ４３４〜１０１８に示されている。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
「予防的処置」は、本明細書中で使用される場合、対象の血漿中の第ＩＸ因子活性のレベルを増加させるために、経時的に第ＩＸ因子融合タンパク質を複数用量で対象に投与することを意味する。好ましくは、増加したレベルは、自然出血の発生率を低下させるか、または予想外の損傷の場合に出血を予防するのに十分なものである。予防的処置は、出血エピソード、例えば、出血時処置下において示される出血エピソードを低減または予防する。「投与間隔」において述べられるとおり、例えば、患者間のばらつきを打ち消すために、予防的処置は固定化することも、または個別化することもできる。
【００４４】
「投与間隔」は、本明細書中で使用される場合、対象に投与される複数の用量間に経過する時間の量を意味する。キメラヒトＦＩＸ・ヒトアルブミン、例えば、ＦＩＸ−ＦＰを使用した本発明の方法における投与間隔は、同等量（ＩＵ／ｋｇ単位）のヒトアルブミンを伴わない前記第ＩＸ因子（すなわち、前記ＦＩＸから成るポリペプチド）に必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１と１／２から８倍長い場合もある。例えば、本発明のヒト第ＩＸ因子・ヒトアルブミン融合タンパク質を投与する場合、投与間隔は、同等量のヒトアルブミンを伴わない前記ヒト第ＩＸ因子に必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１と１／２から８倍長い場合もある。投与間隔は、同等量のアルブミンを伴わない前記ヒト第ＩＸ因子（または前記第ＩＸ因子から成るポリペプチド）に必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１と１／２から８倍長い場合もある。
【００４５】
「用量中央値」は、本明細書中で使用される場合、試験対象の半分がその用量よりも高い用量を使用し、試験対象の半分がその用量よりも低い用量を使用したことを意味する。「平均用量」は、（すべての用量を合計し、用量の総数で割ることによって算出される）平均用量を意味する。およそ２１日に１回、およそ２８日に１回、またはおよそ１か月に１回の投与間隔に関して、「およそ」は、プラスまたはマイナス２日を意味する。
【００４６】
「年間出血回数」は、１年にわたる対象の出血事象の算出された総数を意味する（（出血エピソードの数）／（対象の観察処置期間）×３６５．２５）。「年間自然出血回数」は、１年にわたる対象の自然出血事象の算出された数を意味する（（自然出血エピソードの数）／（対象の観察処置期間）×３６５．２５）。
【００４７】
「ＦＩＸの血漿レベルを少なくとも約」特定のパーセンテージ「のトラフ値に維持すること」は、血漿中のＦＩＸ生物学的活性がＦＩＸを必要とする患者の特定の投与計画中に前記パーセンテージレベル未満に低下しないことを意味し、１００％の前記ＦＩＸ生物学的活性は、正常なヒト血漿中のＦＩＸ活性濃度である１Ｕ／ｍｌに相当し、ＦＩＸ生物学的活性は、好ましくは、実施例に記載されている実証された凝固一段法を使用して測定される。
【００４８】
「トラフ」は、ＦＩＸを必要とする患者の処置の間、投与計画全体をとおしての前記ＦＩＸ生物学的活性の最低レベルである。患者間のばらつきのため、トラフレベルは、一般に中央値を参照し、これは、試験対象の半分がそれより高いトラフレベルを有し、試験対象の半分がそれより低いトラフレベルを有したことを意味する。中央値を使用するのがより一般的であるが、すべての患者に関する値を合計し、患者の数で割ることによって求めた平均値としてＰＫデータからトラフレベルを算出することも可能あろう。
【００４９】
「ベースライン」は、１００ＩＵ／ｄＬまたは１００％であると定義される健康なヒトにおけるＦＩＸ活性のＩＵ／ｄＬまたは％単位で選択的に表される所与の患者におけるＦＩＸ活性レベルを意味する。重症の血友病Ｂでは、所与の患者のベースラインレベルはゼロまたはほぼゼロと非常に低いが、軽症の血友病では、患者のベースラインは、健康なヒトにおけるＦＩＸ活性濃度の１％超、２％超または３％超または４％超または５％超など高い可能性がある。ｉ）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）部分、およびｉｉ）ヒトアルブミンを含む融合タンパク質が本発明に従って投与される場合、まずＦＩＸ活性濃度が急激に増加し、ゆっくりと除去される、すなわち、個々のベースラインレベルに戻っていく。とりわけ、重症の血友病Ｂでは、出血を予防するためにＦＩＸ活性濃度が最低レベル未満に低下しないケアが行われなければならない。この最低レベルはトラフレベルと呼ばれる。重症の血友病Ｂ患者では、ベースラインが実質的にゼロの場合、ベースラインを１％超えるトラフレベルは、健康なヒトにおけるＦＩＸ活性濃度の約１％のＦＩＸ活性濃度を意味する。健康なヒトにおけるＦＩＸ活性濃度の３％のＦＩＸ活性のベースラインレベルを有する軽症の血友病Ｂ患者において、ベースラインを１％超えるトラフレベルは、健康なヒトにおけるＦＩＸ活性濃度の約４％のＦＩＸ活性濃度を意味する。
【００５０】
本発明において、投与間隔は、２１日に１回（すなわち、１９から２３日に１回）である。最も好適な投与間隔は、３週（２１日）である。あるいは、投与間隔は、２６〜３０日に１回、好ましくは、およそ２８日に１回（すなわち、月に１回）である。
【００５１】
あるいは、投与間隔は、薬物動態学的データまたはその対象についての他の情報に基づいてそれぞれの対象に対して決定される個別の間隔とすることもできる。個別の用量／投与間隔の組み合わせは、前の段落の固定された間隔の治療計画に関するものと同じでも、または異なることも可能である。治療計画は、最初に固定された投与間隔で、その後、個別の投与間隔に変えることができる。治療計画は、最初に固定された用量（ＩＵ／ｋｇ）および投与間隔で、その後、固定された用量で個別の投与間隔に変えることができる。治療計画はまた、最初に固定された投与間隔および用量（ＩＵ／ｋｇ）で、その後、同じ固定された投与間隔で個別の用量に変えることができる。
【００５２】
本発明の方法において使用することができる治療用量は、約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇ、約９０〜９５ＩＵ／ｋｇ、約９５〜１００ＩＵ／ｋｇ、約１００〜１０５ＩＵ／ｋｇ、および約１０５〜１１０ＩＵ／ｋｇである。使用することができる他の治療用量は、１１０〜１１５ＩＵ／ｋｇ、約１１５〜１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２０〜１２５ＩＵ／ｋｇ、約１２５〜１３０ＩＵ／ｋｇ、約１３０〜１３５ＩＵ／ｋｇ、約１３５〜１４０ＩＵ／ｋｇ、約１４０〜１４５ＩＵ／ｋｇ、および約１４５〜１５０ＩＵ／ｋｇである。
【００５３】
本発明は、約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇ、約９０〜１０５ＩＵ／ｋｇ、約９０〜１００ＩＵ／ｋｇ、約９０〜９５ＩＵ／ｋｇ、約９５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、約９５〜１０５ＩＵ／ｋｇ、約９５〜１００ＩＵ／ｋｇ、約１００〜１１０ＩＵ／ｋｇ、約１００〜１０５ＩＵ／ｋｇ、約１０５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１０５ＩＵ／ｋｇまたは約１１０ＩＵ／ｋｇの用量を意図する。使用することができる他の治療用量は、１１５ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１３５ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１４５ＩＵ／ｋｇ、および約１５０ＩＵ／ｋｇである。極めて好ましい実施形態において、用量は、約１００ＩＵ／ｋｇ、最も好ましくは、１００ＩＵ／ｋｇである。
【００５４】
好ましい用量および投与間隔は：およそ３週に１回の約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９０〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９０〜１００ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９０〜９５ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９５〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９５〜１００ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約１００〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約１００〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約１０５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９０ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約９５ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約１００ＩＵ／ｋｇ、およそ３週に１回の約１０５ＩＵ／ｋｇ、およびおよそ３週に１回の約１１０ＩＵ／ｋｇである。「およそ３週またはそれより長い日数に１回」は、およそ１９から２３日に１回、およびおよそ２０から２２日に１回、好ましくは、およそ２１日に１回を含む。最も好ましい用量および投与間隔は、３週（すなわち、２１日）に１回の１００ＩＵ／ｋｇである。先行技術では、３週の投与間隔の臨床効能については開示されていない。
【００５５】
他の好ましい用量および投与間隔は：およそ２８日に１回の約９０〜１５０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９０〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９０〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９０〜１００ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９０〜９５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９５〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９５〜１００ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１００〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１００〜１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１０５〜１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１１０〜１１５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１１５〜１２０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１２０〜１２５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１２５〜１３０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１３０〜１３５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１３５〜１４０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１４０〜１４５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１４５〜１５０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約９５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１００ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１０５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１１０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１１５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１２０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１２５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１３０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１３５ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１４０ＩＵ／ｋｇ、およそ２８日に１回の約１４５ＩＵ／ｋｇ、およびおよそ２８日に１回の約１５０ＩＵ／ｋｇである。
【００５６】
「およそ２８日以上またはそれより長い日数に１回」は、およそ２６から３０日に１回、およびおよそ２７から２９日に１回、好ましくは、およそ２８日に１回を含む。極めて好ましい用量および投与間隔は、２８日（すなわち、１か月）に１回の１００ＩＵ／ｋｇである。
【００５７】
１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰ用量の投与後、２１日の投与間隔の全体にわたりＦＩＸ活性の血漿レベル中央値がベースラインを少なくとも約５％超えるトラフ値を維持する実施形態が、本発明に包含される。１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰ用量が２１日に１回、適用される場合に、ＦＩＸ活性の血漿レベル中央値が投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約４％超えるトラフ値を維持する実施形態も本発明に包含される。あるいは、ＦＩＸ活性の血漿レベルを平均値として算出することも可能であろう。
【００５８】
ＦＩＸ活性の血漿レベル中央値が１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰ用量の投与後、２８日間の投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約５％、４％、３％または２％超えるトラフ値を維持する実施形態も本発明に包含される。１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰ用量が２８日に１回適用される場合に、ＦＩＸ活性の血漿レベル中央値が投与間隔の全体にわたりベースラインを少なくとも約１％超えるトラフ値を維持する実施形態も本発明に包含される。あるいは、ＦＩＸ活性の血漿レベルを平均値として算出することも可能であろう。
【００５９】
特に、本発明は、ＦＩＸおよびヒトアルブミンを含む融合タンパク質に関する予防的投与計画を提供し、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）部分は、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して、ヒトアルブミンと連結されている。
【００６０】
リンカーは、ＦＩＸの活性化の前の切断を可能にする。ｒＦＩＸ−ＦＰ融合タンパク質は、ヒトアルブミンによりＦＩＸの半減期の延長を示すが、出血事象の前に切断が起こるため、活性化の前に活性化ＦＩＸの半減期が短縮される。
【００６１】
凝固関連の様式でのタンパク質分解切断は、本発明の意味では、少なくとも１つの凝固因子または凝固補助因子の活性化の結果として起こる任意のタンパク質分解切断である。凝固因子は、リンカーペプチドのタンパク質分解切断とほぼ同時に活性化される（図１参照）。活性化は、例えば、凝固因子のタンパク質分解切断によって、または補助因子との結合によって起こることもある。アルブミンは、出血事象が起こるまで血液中のＦＩＸの半減期を延長させ、出血事象は、同時にＦＩＸを活性化し、アルブミンからそれを切断する。切断は、アルブミンが原因となる、活性を損なう任意の立体障害からポリペプチドを遊離させ、それにより、融合タンパク質の生成を可能にし、これが、ＦＩＸの高モル特異的活性を保持する。切断されたＦＩＸは、その後、アルブミンの喪失のために血液から速やかに除去される。そのような融合タンパク質は、その切断不可能な同等物と比較して増加した、改善された半減期およびモル特異的活性を示す。したがって、ｒＩＸを含む切断不可能な融合タンパク質と比較して、ある治療効果をもたらすために必要とされるｒＩＸ−ＦＰが少ない。
【００６２】
本発明による好ましい融合タンパク質は、少なくとも１つの凝固関連アッセイにおいて、アミノ酸配列ＧＧＧＧＧＧＶ（配列番号４）を有する切断不可能なリンカーを介して連結された治療効果のある融合タンパク質のものと比較して少なくとも２５％増加した治療効果のある融合タンパク質のモル特異的活性、特に、モル特異的凝固関連活性を有するものである。適用可能な少なくとも１つの異なる凝固関連アッセイにおいて、モル特異的活性が少なくとも５０％増加した融合タンパク質が、より好ましく、モル特異的活性が少なくとも１００％増加したものがさらにより好ましい。
【００６３】
さらなる実施形態において、リンカーペプチドは、２つ以上のプロテアーゼに対する切断部位を含む。これは、異なるプロテアーゼによって同じ位置で切断可能なリンカーペプチドによって、または２つまたはそれ以上の異なる切断部位を提供するリンカーペプチドによってのいずれかで達成することができる。治療効果のある融合タンパク質は、酵素活性を実現するためにタンパク質分解切断によって活性化されなければならない有利な状況、および異なるプロテアーゼがこの活性化段階に寄与することが可能な有利な状況が存在する場合もある。ＦＩＸの活性化は、ＦＸＩａによってまたはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によってのいずれかで達成することができる。好適な実施形態において、リンカーは、ＦＩＸａによっておよび／またはＦＶＩＩａ／組織因子（ＴＦ）によって切断可能である。
【００６４】
配列番号１に記載の配列を有するｒＩＸ−ＦＰ（組換えヒトＦＩＸ−ヒトアルブミン融合タンパク質）は、ｒＦＩＸ（例えば、Ｂｅｎｅｆｉｘ（登録商標））と比較して、５．３倍長い半減期（ｔ１／２）、７倍低下したＣＬ、および７倍大きいＡＵＣによって示される血漿中の長期の循環を有する。さらに、ｒＩＸ−ＦＰの薬物動態学的パラメーターを、Ａｌｐｒｏｌｉｘ（商標）ＦＤＡ処方情報のＦＩＸ−Ｆｃの対応する薬物動態学的データと比較した場合、ｒＩＸ−ＦＰは、ｒＩＸ−Ｆｃ（ＡＬＰＲＯＬＩＸ（商標））と比較して、約３．８倍高いＡＵＣ０−ｉｎｆ、約３．７倍低下したＣＬ／ＢＷ、約２６％高い増分回収率（ｉｎｃｒｅｍｅｎｔａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）、約３．２倍低い分布容積、および約１９％延長された薬物の平均滞留時間を有する。
【００６５】
予防は、予想される出血を予防するための因子濃縮物の静脈注射による処置である。予防は、＞１ＩＵ／ｄｌ（＞１％）の凝固因子レベルを有する中等症血友病患者がめったに自然出血を経験せず、関節機能の維持がはるかに良好であるという観察から考え出された。したがって、出血および関節破壊を予防するために１％超に維持されるＦＩＸ活性による予防が正常な筋骨格機能を保護するための治療の目標であるべきである（ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＭＡＮＡＧＥＭＥＮＴ  ＯＦ  ＨＥＭＯＰＨＩＬＩＡ、第２版、Ｐｒｅｐａｒｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，  ｏｎ  ｂｅｈａｌｆ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ  （ＷＦＨ））。ｒＩＸ−ＦＰ単回投与は、１４日およびそれ以上の間、１％を超えるＦＩＸ活性を維持することができる。
【００６６】
注射の頻度が減ることにより、感染症のリスク、患者の苦痛、および必要とされる医療従事者を訪問する回数が減る。こうした利点は、患者のコンプライアンスにプラスの影響を及ぼすことになり、それにより血友病に対する予防的治療の効果にプラスの影響を及ぼすことになる。
【００６７】
ヒトＦＩＸ
ビタミンＫ依存性ポリペプチドのグループのメンバーの１つであるヒトＦＩＸは、分子量が５７ｋＤａの一本鎖の糖タンパク質であり、これは、４１５アミノ酸の不活性酵素前駆体として肝臓細胞によって血流に分泌される。これは、ポリペプチドのＮ末端Ｇｌａドメインに局在する１２のγ−カルボキシグルタミン酸残基を含む。Ｇｌａ残基は、その生合成のためにビタミンＫを必要とする。Ｇｌａドメインに続いて、２つの上皮増殖因子ドメイン、活性化ペプチド、およびトリプシン型セリンプロテアーゼドメインが存在する。ＦＩＸのさらなる翻訳後修飾は、ヒドロキシル化（Ａｓｐ６４）、Ｎ（Ａｓｎ１５７およびＡｓｎ１６７）およびＯ型グリコシル化（Ｓｅｒ５３、Ｓｅｒ６１、Ｔｈｒ１５９、Ｔｈｒ１６９、およびＴｈｒ１７２）、硫酸化（Ｔｙｒ１５５）、ならびにリン酸化（Ｓｅｒ１５８）を包含する。
【００６８】
ＦＩＸは、Ａｒｇ１４５〜Ａｌａ１４６およびＡｒｇ１８０〜Ｖａｌ１８１における活性化ペプチドのタンパク質分解によって、その活性型、第ＩＸａ因子に変換されて、２つのポリペプチド鎖、Ｎ末端軽鎖（１８ｋＤａ）およびＣ末端重鎖（２８ｋＤａ）の形成に至り、これが、１つジスルフィド結合によって一緒にされる。第ＩＸ因子の活性化切断は、インビトロにおいて、例えば、第ＸＩａ因子または第ＶＩＩａ因子／ＴＦによって実現することができる。第ＩＸ因子は、ヒト血漿中に５〜１０μｇ／ｍｌの濃度で存在する。ヒトにおける第ＩＸ因子の終末相血漿中半減期は、約１５から１８時間であることが分かった（Ｗｈｉｔｅ  ＧＣら、１９９７年、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｆａｃｔｏｒ  ＩＸ．  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ．  ７８：  ２６１〜２６５ページ；Ｅｗｅｎｓｔｅｉｎ  ＢＭら、２００２年、Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｆ  ＩＸ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ  ｉｎ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｏｄｅｒａｔｅ  ｏｒ  ｓｅｖｅｒｅ  ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ  Ｂ．  Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ  ４２：１９０〜１９７ページ）。
【００６９】
半減期延長アルブミン  「ヒト血清アルブミン」（ＨＳＡ）および「ヒトアルブミン」（ＨＡ）という用語は、本出願において同義に使用される。「アルブミン」および「血清アルブミン」という用語は、より広く、ヒト血清アルブミン（ならびにそのフラグメントおよび変異体）ならびに他の種由来のアルブミン（ならびにそのフラグメントおよび変異体）を包含する。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、「アルブミン」は、アルブミンポリペプチドもしくはアミノ酸配列、またはアルブミンフラグメントもしくはアルブミンの１つまたはそれ以上の機能活性（例えば、生物学的活性）を有する変異体をまとめて指す。特に、「アルブミン」は、ヒトアルブミンまたはそのフラグメント、とりわけ、成熟形態のヒトアルブミンを指す。例えば、アルブミンは、参照によってその全体を本明細書に組み入れるＵＳ２００８２６０７５５Ａ１に記載の配列またはその変異体を有することが可能である。アルブミン融合タンパク質のアルブミン部分は、完全長ＨＡ配列を含む場合もあり、または治療活性の安定化もしくは延長が可能な１つまたはそれ以上のそのフラグメントを含む場合もある。そのようなフラグメントは、１０またはそれ以上のアミノ酸長から成る場合もあり、またはＨＡ配列の約１５、２０、２５、３０、５０またはそれ以上の連続したアミノ酸を含む場合もあり、またはＨＡの特定のドメインの一部もしくはすべてを含む場合もある。
【００７１】
本発明の融合タンパク質のヒトアルブミン部分は、天然または人工のいずれかの正常なＨＡの変異体が可能である。本発明の融合タンパク質の治療効果のあるポリペプチド部分は、本明細書に記載されている対応する治療効果のあるポリペプチドの変異体も可能である。「変異体」という用語は、保存的または非保存的のいずれかで、天然または人工のいずれかの挿入、欠失、および置換を含み、その場合、参照によってその全体を本明細書に組み入れるＵＳ２００８２６０７５５Ａ１に記載されているとおり、そのような変化は、治療効果のあるポリペプチドの治療活性を与える活性部位、または活性ドメインを実質的に変えない。
【００７２】
本発明は、特に、形成される融合タンパク質が、ヒトアルブミンと連結されていない凝固因子と比較してインビボにおける延長された半減期を有し、融合タンパク質が、適用可能な少なくとも１つの異なる凝固関連アッセイにおいて、切断不可能なリンカーを伴う対応する融合タンパク質と比較して、少なくとも２５％高いモル特異的活性を有するように、介在する切断可能なペプチドリンカーが治療効果のあるポリペプチドとヒトアルブミンの間に組み込まれるよう、凝固因子またはそのフラグメントもしくは変異体のヒトアルブミンのＮ末端との連結を含む融合タンパク質に関する。
【００７３】
上記定義内の「第ＩＸ因子」は、任意の自然多型を含む天然アミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。これはまた、ポリペプチドが実質的にそれぞれの治療効果のあるポリペプチドの活性を保持する限り、わずかに改変されたアミノ酸配列、例えば、末端アミノ酸欠失もしくは付加を含む、改変されたＮ末端またはＣ末端を有するポリペプチドを含む。含まれる変異体は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が野生型配列とは異なる。そのような差異の例としては、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基（例えば、好ましくは１から３０アミノ酸残基）のＮ末端および／もしくはＣ末端の切断、またはＮ末端および／もしくはＣ末端における１つまたはそれ以上の追加の残基の付加、ならびに保存的アミノ酸置換、すなわち、類似の特徴を有するアミノ酸、例えば、（１）小さなアミノ酸、（２）酸性アミノ酸、（３）極性アミノ酸、（４）塩基性アミノ酸、（５）疎水性アミノ酸、および（６）芳香族アミノ酸のグループ内で行われる置換を挙げることができる。そのような保存的置換の例が以下の表に示される。
【００７４】
【表１】
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【００７５】
一般に終末相半減期またはβ半減期として求められる本発明の融合タンパク質の生体内半減期は、通常、非融合ポリペプチドの生体内半減期よりも少なくとも約２５％、好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは１００％を超えて高い。
【００７６】
本発明の融合タンパク質は、切断可能なリンカーを伴わない対応する融合タンパク質と比較して、少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも１００％増加したモル特異的活性を有する。
【００７７】
この関連でモル特異的活性（またはここでは特に考慮されるモル特異的凝固関連活性）は、対象の治療効果のあるポリペプチドまたは治療効果のある融合タンパク質のモル（または、例えば、ｎｍｏｌｅ）で表される活性と定義される。モル特異的活性の計算は、試験されるポリペプチドのさまざまな分子量または光学密度の影響を受けない、さまざまなコンストラクトの活性の直接的な比較を可能にする。モル特異的活性は、ＦＩＸおよびＦＩＸ−ＦＰ融合タンパク質に関して下記表２に例示されているとおりに算出することができる。
【００７８】
【表２】
2020525498.tif 000003
【００７９】
モル特異的凝固関連活性を測定するために、凝固過程と関連した酵素または補助因子の活性を測定する任意のアッセイを使用することができる。
【００８０】
したがって、「凝固関連アッセイ」は、本発明の意味では、凝固過程に関連する酵素もしくは補助因子の活性を測定するか、または内因性もしくは外因性のいずれかの凝固カスケードが活性化されたことを判断することができる任意のアッセイである。したがって、「凝固関連」アッセイは、ａＰＴＴ、ＰＴ、またはトロンビン生成アッセイのような直接凝固アッセイである場合もある。しかしながら、例えば、特定の凝固因子に適用される発色アッセイのようなその他のアッセイも含まれる。そのようなアッセイまたは対応する試薬に関する例は、対応する凝固因子が不足した血漿（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）を用いたＰａｔｈｒｏｍｔｉｎ（登録商標）ＳＬ（ａＰＴＴアッセイ、Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）もしくはＴｈｒｏｍｂｏｒｅｌ（登録商標）Ｓ（プロトロンビン時間アッセイ、Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）、例えば、凝固因子が不足した血漿を使用したトロンビン生成アッセイキット（Ｔｅｃｈｎｏｃｌｏｎｅ、Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ）、Ｂｉｏｐｈｅｎ  Ｆａｃｔｏｒ  ＩＸ（Ｈｙｐｈｅｎ  ＢｉｏＭｅｄ）、Ｓｔａｃｌｏｔ（登録商標）ＦＶＩＩａ−ｒＴＦ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ）、Ｃｏａｔｅｓｔ（登録商標）Ｆａｃｔｏｒ  ＶＩＩＩ：Ｃ／４（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ）のような発色アッセイ、またはその他である。
【００８１】
本発明の目的に関して、上記のアッセイまたは同等の凝固関連アッセイの任意の１つにおける増加は、モル特異的活性の増加を示すと考えられる。例えば、２５％の増加は、任意の上記アッセイまたは同等のアッセイにおける２５％の増加を指す。
【００８２】
ＦＩＸに関して、ａＰＴＴアッセイが凝固活性の測定に使用されることが多い。しかしながら、その他の凝固関連アッセイまたはアッセイ原理もＦＩＸに関するモル特異的活性を測定するために適用することができる。
【００８３】
不活性化凝固因子に関して高いインビボ回収率および長い半減期を有することが望ましいが、血栓形成促進のリスクを回避するために、その活性化後またはその補助因子の活性化後には凝固因子の半減期を制限するのが有利である。したがって、凝固過程が開始した後で、活性凝固因子の半減期が再び短縮されるべきである。これは、凝固関連様式で不活性化を増大させることによってまたは凝固因子の除去によってのいずれかで達成することができる。
【００８４】
本発明による不活性化は、例えば、凝固因子と対応する凝固因子のインヒビターとの複合体形成によって、または例えば、ＦＶＩＩＩおよびＦＶの場合に知られている、さらなるタンパク質分解切断によって引き起こすことができる、治療効果のあるポリペプチドの活性の低下を意味する。
【００８５】
活性化された治療効果のある融合タンパク質の不活性化速度は、例えば、インヒビターとの反応によってまたはタンパク質分解不活性化によって活性が低下していく速度と定義される。不活性化速度は、生理学的な量のこの凝固因子のインヒビターの存在下において経時的に活性化凝固因子のモル特異的活性を追跡することによって測定することができる。
【００８６】
あるいは、不活性化速度は、活性化生成物を動物に投与し、それに続いて活性および抗原アッセイを使用して適切な時間枠で血漿サンプルを試験することによって求めることができる。
【００８７】
活性化された治療効果のある融合タンパク質の排出速度は、ポリペプチドがヒトまたは動物の血液循環から排出される速度と定義される。排出速度は、静脈投与後の活性化された治療効果のある融合タンパク質の薬物動態を測定することによって求めることができる。抗原アッセイを使用して、血液循環からの直接的な除去により排出を求めることができる。さらに活性アッセイを使用して、特異的除去および不活性化速度を求めることができる。
【００８８】
本発明によると、ＦＩＸは、凝固に関与するプロテアーゼまたは凝固酵素によって活性化されるプロテアーゼによって切断可能なリンカーを介して、ヒトアルブミンのＮ末端と連結されている。リンカーは非免疫原性でなければならず、プロテアーゼによる切断を可能にするだけ十分に柔軟でなければならない。
【００８９】
切断可能なリンカーは、好ましくは、
ａ）治療効果のあるポリペプチドの活性化の過程でタンパク質分解切断されるタンパク質分解切断部位を含む場合に、それ自体が投与される治療効果のあるポリペプチド、
ｂ）この治療効果のあるポリペプチドの基質ポリペプチド、または
ｃ）治療効果のあるポリペプチドの直接的もしくは間接的な関与によって活性化もしくは形成されるプロテアーゼによって切断される基質ポリペプチド
由来の配列を含む。
【００９０】
さらに好適な実施形態におけるリンカー領域は、適用される治療効果のあるポリペプチドの配列を含み、これが、発現融合タンパク質のネオアンチゲン特性のリスクを低下させるはずである。
【００９１】
リンカー配列は、ＦＩＸの活性化領域の配列由来、ＦＸもしくはＦＶＩＩのようなＦＩＸの任意の基質の切断領域由来、または活性化にＦＩＸａが関与するプロテアーゼによって切断される任意の基質ポリペプチドの切断領域由来のいずれかである。
【００９２】
極めて好適な実施形態において、リンカーペプチドは、ＦＩＸ自体に由来する。別の好適な実施形態において、リンカーペプチドは、ＦＸもしくはＦＶＩＩ由来である。別の好適な実施形態において、ＦＩＸの生理学的に関連した２つの活性化因子であるＦＸＩａまたはＦＶＩＩａ／ＴＦによって切断することができるリンカー配列は、２つの切断配列を含む。
【００９３】
リンカーが、リンカーを切断するプロテアーゼ（複数可）によって依然として切断可能な限り、記載されているリンカーの変異体およびフラグメントも本発明に包含される。「変異体」という用語は、保存的または非保存的のいずれかの挿入、欠失および置換を含む。
【００９４】
医薬組成物および投与様式
本発明の融合タンパク質は、投与に適した医薬組成物に組み込むことができる。そのような組成物は、一般に本タンパク質および薬学的に許容される担体を含む。本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、薬学的な投与に適合した任意およびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張化剤、吸収遅延剤（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。適した担体は、参照によって本明細書に組み入れる本分野における標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。そのような担体または希釈剤の好適な例としては、水、生理的食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。リポソームおよび非水性ビヒクル、例えば、不揮発性油も使用することができる。薬学的に活性な物質に対する、そのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野においてよく知られている。従来のあらゆる媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合にだけ、組成物にその使用が考えられる。補足の活性化合物も組成物に組み込むことができる。
【００９５】
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するよう製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）；経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用に使用される溶液または懸濁液は、以下の構成成分を含むことが可能である：滅菌された希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張性の調節のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。酸または塩基；例えば、塩酸または水酸化ナトリウムによりｐＨを調節することができる。非経口調製物は、ガラスもしくはプラスチックでできたアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアルに封入することができる。静脈注射としての投与が、投与の好適な経路である。
【００９６】
注射用途に適した医薬組成物としては、（水溶性の場合）滅菌水溶液または分散液、および滅菌された注射可能な溶液または分散液の即席の調製のための滅菌された粉末が挙げられる。静脈投与に適した担体としては、生理的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ＢＡＳＦ、パーシッパニー、ニュージャージー州）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。あらゆる場合において、組成物は、滅菌されていなければならず、シリンジ操作が容易になる程度まで流体であるべきである。組成物は、製造および保管の条件下において安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール、など）、および適したそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒が可能である。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要とされる粒子径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、組成物中に等張化剤、例えば、砂糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムを含むのが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期の吸収は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって引き起こすことができる。
【００９７】
滅菌された注射可能な溶液は、必要に応じて、活性化合物（例えば、ｒＩＸ−ＦＰ）を必要量で、上で挙げられた成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒に組み込み、続くろ過滅菌によって製造することができる。一般に、分散液は、ベースの分散媒および上で挙げられたもののうち必要とされるその他の成分を含む滅菌されたビヒクルに活性化合物を組み込むことによって製造される。滅菌された注射可能な溶液の調製のための滅菌された粉末の場合、製造の方法は、予め滅菌ろ過したその溶液から活性成分プラス任意の追加の所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライである。
【００９８】
注射用製剤は、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）融合タンパク質（例えば、ｒＦＩＸ−ＦＰ）を治療有効量で含むことが可能であり、その量は、当業者が決定することができる。特に、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）融合タンパク質（例えば、ｒＦＩＸ−ＦＰ）は、約１００から４００ＩＵ／ｍｌの濃度で投与することができる。例えば、融合タンパク質は、投与のために、約１００、２００または４００ＩＵ／ｍｌの濃度で提供することができる。融合タンパク質は、投与のために、６００ＩＵ／ｍｌおよび１２００ＩＵ／ｍｌなどのより高い濃度で提供される場合もある。
【００９９】
投与の容易さおよび投与量の均一性のために、注射用組成物などの医薬組成物を単位剤形に製剤化するのがとりわけ有利である。単位剤形は、本明細書中で使用される場合、処置される対象に対する単位投与量として適した物理的に個別の単位を指し；各単位は、必要とされる医薬担体と関連した所望の治療効果をもたらすよう算出された活性化合物の所定の量を含有する。単位剤形に関する仕様は、活性化合物の固有の特徴および達成される特定の治療効果によって決定され、それに直接依存する。
【０１００】
医薬組成物は、投与のための説明書とともに容器、パック、またはディスペンサーに含めることが可能である。
【０１０１】
これまで本発明を詳細に記載してきたが、これは、例示のためだけに含まれ、本発明を限定することは意図しない以下の実施例を参照することによってさらに明確に理解されるであろう。本明細書において参照されるすべての特許および公報を明白に参照により組み入れる。
【実施例１】
【０１０２】
血友病Ｂの対象における組換え凝固第ＩＸ因子アルブミン融合タンパク質（ｒＩＸ−ＦＰ）を用いた２１日の予防的投与計画の試験
本試験は、出血エピソードを予防するため、ならびにこの投与間隔の安全性および薬物動態（ＰＫ）を評価するためにｒＩＸ−ＦＰ（組換えヒトＦＩＸ・ヒトアルブミン融合タンパク質）の投与に関する２１日の予防的治療計画の効能を評価することを目的とした。
【０１０３】
ｒＩＸ−ＦＰを５０〜７５ＩＵ／ｋｇ用いた１４日の予防的治療計画は、血友病Ｂ患者における出血エピソードを予防することにおいて効果的であり、２．１３のＡＢＲ（中央値０．９２、Ｑ１：Ｑ３：０、３．１９）および１．１９のＡｓＢＲ値（中央値０、Ｑ１：Ｑ３：０、１．５８）を得た（ｎ＝４８、４９０日の平均継続期間）。この試験において、１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰを用いた２１日の投与間隔がこれらの血友病患者における出血エピソードを予防することにおいて効果的であるかどうかを調査した。
【０１０４】
患者
すべての患者は、先天的な第ＩＸ因子（ＦＩＸ）欠乏症（血友病Ｂ）であった。１４日のｒＩＸ−ＦＰの治療計画（４８人の患者）を予め受けた１１人の患者を２１日の治療計画に切り換えた。対象は、２１日に１回静脈内に１００ＩＵ／ｋｇのｒＩＸ−ＦＰの予防的処置を受けた。１４日の治療計画下では、これらの患者は、０．４７のＡＢＲ値（中央値：０、Ｑ１：Ｑ３、０、１）および０．１８のＡｓＢＲ値（中央値：０、Ｑ１：Ｑ３：０、０）を有し、２９５日間の１４日の治療計画を使用して処置した。試験の積極的処置期間（ａｃｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｐｅｒｉｏｄ）の間に起こったすべての出血事象は、ｒＩＸ−ＦＰで処置した。すべての対象は、定期的な予防および出血事象の処置の両方のためにｒＩＸ−ＦＰ処置を自分で施し、処置および出血事象を対象が電子手帳に記録した。
【０１０５】
試験目的およびエンドポイント
試験の主目標は、ｒＩＸ−ＦＰで処置される出血の予防に関するｒＩＸ−ＦＰを用いた２１日の定期的な予防投与計画の臨床反応を評価することであった。
【０１０６】
分析方法
ＦＩＸ活性は、実証された凝固一段法を使用して測定した。簡単にいえば、試験サンプルを等量のＦＩＸ除去血漿と混合し、活性化剤としてＰａｔｈｒｏｍｔｉｎ  ＳＬ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、マールブルグ）を使用した活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）のインビトロ測定によって試験し、ｒＩＸ−ＦＰ活性測定は、Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＢＣＳ）を使用して行った。その結果を、ＦＩＸに対するＷＨＯ基準（国際的血液凝固因子ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ヒト、血漿）に対して製造業者が較正した標準ヒト血漿（ＳＨＰＬ）から作製した基準曲線を使用して解釈し、その結果を基準のパーセントまたは国際単位で報告している。
【０１０７】
インヒビターを、ナイメゲン変法に従ったベセスダ法、ヒトクエン酸血漿中におけるａＰＴＴのインビトロ測定に基づく凝固アッセイによって定量した。≧０．６ベセスダ単位（ＢＵ）の結果を陽性の結果と定義した。
【０１０８】
ＦＩＸ活性、ＦＩＸ抗原、インヒビターおよびｒＩＸ−ＦＰに対する抗体の分析をＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ、マールブルグ、ドイツの中央研究室で行った。
【０１０９】
効能
出血事象の処置に対するｒＩＸ−ＦＰの効能を判定するために、止血を実現するための輸注の数を表にした。さらに、治験責任医師が出血事象の処置の効能を４段階評価し、これは、対象が受けた輸注の数ならびに対象が報告した処置後の痛みの緩和の両方を考慮に入れた。
【０１１０】
２１日の治療計画に関する年間自然出血回数は、少なくとも１２週の処置が完了した２１日の処置期間中に処置が必要とされた自然出血の数によって導き出された。
【０１１１】
医薬品
ｒＩＸ−ＦＰは、ＣＨＯ細胞において合成されるおよそ１２５，０００Ｄａの分子量の一本鎖の糖タンパク質である。製造および製剤化には、動物またはヒト由来の賦形剤は添加しない（Ｍｅｔｚｎｅｒ  ＨＪ、Ｗｅｉｍｅｒ  Ｔ、Ｋｒｏｎｔｈａｌｅｒ  Ｕら、Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  ａｌｂｕｍｉｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｆａｃｔｏｒ  ＩＸ．  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ２００９年；  １０２：  ６３４〜４４頁）。
【０１１２】
ｒＩＸ−ＦＰは、ＦＩＸ活性化に関与する内因性ＦＩＸ配列由来の短い切断可能なリンカーによって、組換えヒト凝固ＦＩＸを組換えヒトアルブミンと連結している高度に精製された組換え融合タンパク質である。リンカーは、血液凝固の過程でＦＩＸを活性化する同じ酵素、例えば、凝固第ＸＩａ因子または第ＶＩＩａ因子／組織因子によって融合タンパク質から切断され、アルブミン部分を除去する。ｒＩＸ−ＦＰは、５００および１０００ＩＵ／バイアルの単回使用バイアル中のＩＶ注射用の凍結乾燥した滅菌製剤として供給され、注射用の滅菌水２．５ｍＬで再構成した。
【０１１３】
結果
用量
静脈内の１００ＩＵ／ｋｇの予防用量のｒＩＸ−ＦＰを４２９日の平均継続期間の間に２１日に１回すべての対象に与えた（表３を参照）。これは、ｒＩＸ−ＦＰが７、１０および１４日の投与間隔で投与された時間の長さと同様であった。７日、１０日および１４日の治療計画試験に関するｒＩＸ−ＦＰ投与の平均継続期間も表３に示す。
【０１１４】
【表３】
2020525498.tif 000004
【０１１５】
効能
２１日のプロトコールは、非常に低い平均ＡｓＢＲおよび平均ＡＢＲ値をもたらした。ＡＢＲは、１．１（中央値：０、Ｑ１：Ｑ３：０、２．１）であり、ＡｓＢＲは、０．５３（中央値：０、Ｑ１：Ｑ３：０、０）であった（１４日から２１日に切り換えた１人の対象は、８週未満の継続期間を有し、この出血回数は、計算には使用しなかった）。結果を表４に示す。
【０１１６】
【表４】
2020525498.tif 000005
【０１１７】
２１日に１回ｒＩＸ−ＦＰを受けている患者間の出血回数の変動を表５に示す。３人の患者のみが２を超えるＡＢＲを有し、１人の患者のみが１を超えるＡｓＢＲを有した。対象００２０に関するわずかに多い出血回数以外、結果は極めて一貫しており、２１日の投与プロトコールの患者に関する極めて少ない出血回数を示す。
【０１１８】
【表５】
2020525498.tif 000006
【０１１９】
２０１７年３月の終わりのデータカットに基づいて更新された結果
試験全体で８３人の患者が参加した。
【０１２０】
【表６】
2020525498.tif 000007
【０１２１】
延長試験の開始時、≧１２歳のＰＴＰは、７日（ｎ＝１９）、１０日（ｎ＝１３）または１４日（ｎ＝２７）の投与間隔であった。＜１２歳のＰＴＰは、７日（ｎ＝１８）、１０日（ｎ＝２）または１４日（ｎ＝４）の投与間隔であった。
【０１２２】
データカットの時点において、≧１２歳のＰＴＰの７９％が１０（ｎ＝１２）、１４（ｎ＝２６）または２１日（ｎ＝９）の投与間隔であった。
【０１２３】
≧１８歳の１１人のＰＴＰを、試験中に２１日の治療計画に切り換え、そのうちの２人を、出血頻度を減少させるために１４日に戻した。
【０１２４】
データカットの時点において、＜１２歳のＰＴＰの２５％が１０（ｎ＝１）または１４日の投与間隔であった；少ない出血回数を維持するために、２人の患者を、１４日の治療計画から１０（ｎ＝１）または７日（ｎ＝１）の治療計画に戻し、２人の患者を、１０日の治療計画から７日の治療計画に切り換えた。
【０１２５】
それぞれの投与計画に関するＡＢＲおよびＡｓＢＲを算出した；分析は、延長試験中の任意の時点においてそれぞれの治療計画を受けた患者の総数を含む（表７）。
【０１２６】
【表７】
2020525498.tif 000008
【０１２７】
考察
この試験は、血友病Ｂ患者における出血エピソードを予防することにおいて非常に効果的であったため、出血エピソードを予防するために２１日の投与間隔を使用することを初めて支持している。特に長い投与間隔を考慮すると、出血回数は極めて少なかった。ｒＩＸ−ＦＰを静脈内投与することの不都合さのため、より長い投与間隔は、有利であり、患者にとってより都合がよい。このことは、患者のコンプライアンスを高め、血友病Ｂ患者における出血事象のさらに良好な管理をもたらすはずである。
【図１】
2020525498.tif 000009
【配列表】
2020525498000001.app
【国際調査報告】
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