(57)【要約】本発明は、概して、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化を防止する方法に関する。本発明は、メチオニン酸化の量が最小限に抑えられるイムノコンジュゲートの医薬組成物にも関する。【選択図】図６
2020534326.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イムノコンジュゲートと、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物であって、前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化１】
2020534326.tif 000088
（ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化２】
2020534326.tif 000089
によって表される）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化３】
2020534326.tif 000090
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化４】
2020534326.tif 000091
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣｙｓ上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数である、前記医薬組成物。
【請求項２】
Ｒａ及びＲｂが、両方ともＨであり、Ｒ１が、ＨまたはＭｅである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｐが、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ｑが、−ＳＯ３Ｈである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
Ｑが、Ｈである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
Ｒ３及びＲ４が、両方ともＨであり、ｎが、１〜６の整数である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
−ＬＣ−が、次式：
【化５】
2020534326.tif 000092
によって表される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化６】
2020534326.tif 000093
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
【化７】
2020534326.tif 000094
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＣＢＡが、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３−Ｒα抗原のアミノ酸１０１〜３４６内のエピトープに結合し、（ｂ）抗原陽性ＴＦ−１細胞におけるＩＬ３依存増殖を阻害する抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域と、を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号７のＶＨ配列と、配列番号９のＶＬ配列と、を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記抗体が、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
イムノコンジュゲートと、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物であって、前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化８】
2020534326.tif 000095
（式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化９】
2020534326.tif 000096
によって表される）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化１０】
2020534326.tif 000097
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化１１】
2020534326.tif 000098
のうちのいずれか１つから選択されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ｑは、１〜５の整数である、前記医薬組成物。
【請求項１５】
Ｒｘが、独立して、−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは各々、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２、または３である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
Ｒｆ及びＲｇが、同一であるか、または異なり、かつ−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記イムノコンジュゲートが、
【化１２】
2020534326.tif 000099
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは、１〜１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
【化１３】
2020534326.tif 000100
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化１４】
2020534326.tif 000101
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記抗体が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＮとＣとの間の二重線
【化１５】
2020534326.tif 000102
が、単結合を表し、Ｘが、−Ｈであり、Ｙが、−ＳＯ３Ｈである、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
Ｙが、−ＳＯ３Ｈ、またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記医薬組成物が、０．１ｍＭ〜１０ｍＭのメチオニンを含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記医薬組成物が、０．５ｍＭ〜５ｍＭのメチオニンを含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記医薬組成物が、１．０ｍＭ〜４．０ｍＭのメチオニンを含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記医薬組成物が、３．０ｍＭのメチオニンを含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記医薬組成物が室温で６時間以上露光される場合、前記イムノコンジュゲートが、４０％未満、３５％未満、３０％、２５％未満、２０％未満、または１５％未満のメチオニン酸化を有する、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物を露光から保護する容器に入っている、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化１６】
2020534326.tif 000103
によって表されるイムノコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物であって、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である、前記医薬組成物。
【請求項３５】
前記医薬組成物が、３ｍＭのメチオニンを含む、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記医薬組成物が室温で６時間露光される場合、前記イムノコンジュゲートが、１５％未満のメチオニン酸化を有する、請求項３４または３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物を露光から保護する容器に入っている、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項３４〜３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜３ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記医薬組成物が、１．５ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記医薬組成物が、２ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記医薬組成物が、トレハロース、ポリソルベート２０、及びコハク酸をさらに含む、請求項３４〜４５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記医薬組成物が、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項３４〜４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記医薬組成物が、４〜４．５のｐＨを有する、請求項３４〜４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記医薬組成物が、４．２のｐＨを有する、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化１７】
2020534326.tif 000104
によって表されるイムノコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物であって、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である、前記医薬組成物。
【請求項５１】
前記医薬組成物が、３ｍＭのメチオニンを含む、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記医薬組成物が室温で６時間露光される場合、前記イムノコンジュゲートが、１５％未満のメチオニン酸化を有する、請求項５０または５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物を露光から保護する容器に入っている、請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜３ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記医薬組成物が、１．５ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項５５に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記医薬組成物が、２ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項５６に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項５９に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
前記医薬組成物が、ヒスチジン、トレハロース、及びポリソルベート２０をさらに含む、請求項５０〜６１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記医薬組成物が、２０ｍＭのヒスチジン、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項５０〜５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
前記医薬組成物が、５．５〜６．５のｐＨを有する、請求項５０〜６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
前記医薬組成物が、６．１のｐＨを有する、請求項６４に記載の医薬組成物。
【請求項６６】
イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する方法であって、前記イムノコンジュゲートを０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと混合して、前記イムノコンジュゲートと、メチオニンと、を含む医薬組成物を得ることを含み、前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化１８】
2020534326.tif 000105
（ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化１９】
2020534326.tif 000106
によって表される）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化２０】
2020534326.tif 000107
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化２１】
2020534326.tif 000108
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ１上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数である、前記方法。
【請求項６７】
Ｒａ及びＲｂが、両方ともＨであり、Ｒ１が、ＨまたはＭｅである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択される、請求項６６または６７に記載の方法。
【請求項６９】
Ｐが、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
Ｑが、−ＳＯ３Ｈである、請求項６６〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
Ｑが、Ｈである、請求項６６〜６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
Ｒ３及びＲ４が、両方ともＨであり、ｎが、１〜６の整数である、請求項６６〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
−ＬＣ−が、次式：
【化２２】
2020534326.tif 000109
によって表される、請求項６６〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化２３】
2020534326.tif 000110
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
【化２４】
2020534326.tif 000111
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項６６に記載の方法。
【請求項７５】
ＣＢＡが、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３−Ｒα抗原のアミノ酸１０１〜３４６内のエピトープに結合し、（ｂ）抗原陽性ＴＦ−１細胞におけるＩＬ３依存増殖を阻害する抗体またはその抗原結合断片である、請求項６６〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域と、を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号７のＶＨ配列と、配列番号９のＶＬ配列と、を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗体が、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する方法であって、前記イムノコンジュゲートを０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと混合して、前記イムノコンジュゲートと、メチオニンと、を含む医薬組成物を得ることを含み、前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化２５】
2020534326.tif 000112
（式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化２６】
2020534326.tif 000113
によって表される）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化２７】
2020534326.tif 000114
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化２８】
2020534326.tif 000115
のうちのいずれか１つから選択され、
式中、
ｑは、１〜５の整数であり、
Ｍ＋は、−Ｈ＋またはカチオンである、前記方法。
【請求項８０】
Ｒｘが、独立して、−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは各々、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２、または３である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
Ｒｆ及びＲｇが、同一であるか、または異なり、かつ−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記イムノコンジュゲートが、
【化２９】
2020534326.tif 000116
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは、１〜１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
【化３０】
2020534326.tif 000117
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化３１】
2020534326.tif 000118
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩である、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗体が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である、請求項７９〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
ＮとＣとの間の二重線
【化３２】
2020534326.tif 000119
が、単結合を表し、Ｘが、−Ｈであり、Ｙが、−ＳＯ３Ｈである、請求項６６〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
Ｙが、−ＳＯ３Ｈ、またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩である、請求項６６〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記医薬組成物が、０．１ｍＭ〜１０ｍＭのメチオニンを含む、請求項６６〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
前記医薬組成物が、０．５〜５ｍＭのメチオニンを含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記医薬組成物が、１．０〜４．０ｍＭのメチオニンを含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記医薬組成物が、３．０ｍＭのメチオニンを含む、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記医薬組成物が室温で６時間以上露光される場合、前記イムノコンジュゲートが、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、または１５％未満のメチオニン酸化を有する、請求項６６〜９０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９２】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物を露光から保護する容器に入っている、請求項６６〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９３】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項６６〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
前記医薬組成物が、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの前記イムノコンジュゲートを含む、請求項６６〜９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項６６〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
次式：
【化３３】
2020534326.tif 000120
によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法であって、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化３４】
2020534326.tif 000121
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化３５】
2020534326.tif 000122
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化３６】
2020534326.tif 000123
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化３７】
2020534326.tif 000124
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ１上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数であり、
ＬＣ’は、
【化３８】
2020534326.tif 000125
によって表される、前記方法。
【請求項１００】
前記抗酸化剤が、前記イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗酸化剤が、Ｎ−アセチルメチオニンである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
Ｒａ及びＲｂが、両方ともＨであり、Ｒ１が、ＨまたはＭｅである、請求項９９〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択される、請求項９９〜１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０４】
Ｐが、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａである、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
Ｑが、−ＳＯ３Ｈである、請求項９９〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
Ｑが、Ｈである、請求項９９〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
Ｒ３及びＲ４が、両方ともＨであり、ｎが、１〜６の整数である、請求項９９〜１０６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０８】
−ＬＣ−が、次式：
【化３９】
2020534326.tif 000126
によって表され、
−ＬＣ’が、次式：
【化４０】
2020534326.tif 000127
によって表される、請求項９９〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記イムノコンジュゲートが、次式：
【化４１】
2020534326.tif 000128
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
【化４２】
2020534326.tif 000129
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項９９〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
ＣＢＡが、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３−Ｒα抗原のアミノ酸１０１〜３４６内のエピトープに結合し、（ｂ）抗原陽性ＴＦ−１細胞におけるＩＬ３依存増殖を阻害する抗体またはその抗原結合断片である、請求項９９〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記抗体またはその抗原結合断片が、
ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域と、を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号７のＶＨ配列と、配列番号９のＶＬ配列と、を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
前記抗体が、
ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、
ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１４】
次式：
【化４３】
2020534326.tif 000130
式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化４４】
2020534326.tif 000131
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化４５】
2020534326.tif 000132
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化４６】
2020534326.tif 000133
のうちのいずれか１つから選択されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ｑは、１〜５の整数である）によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法であって、
（ａ）次式：
【化４７】
2020534326.tif 000134
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次の：
【化４８】
2020534326.tif 000135
から選択される二官能性架橋剤と反応させて、
細胞毒性薬物−リンカー化合物を形成するステップであって、式中、Ｘは、ハロゲン、ＪＤ−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、または−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、またはニトロピリジルであり、Ｒｇは、アルキルであり、ｑは、１〜５の整数であり、Ｕは、−ＨまたはＳＯ３Ｈである、前記ステップと、
（ｂ）前記ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、前記細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、前記イムノコンジュゲートを形成する前記ステップと、を含む前記方法。
【請求項１１５】
前記細胞毒性薬物−リンカー化合物が、ステップ（ｂ）で前記ＣＢＡと反応する前に精製されない、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記抗酸化剤が、前記イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する、請求項１１４または１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
前記抗酸化剤が、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
Ｒｘが、独立して、−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは各々、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２、または３である、請求項１１４〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１９】
Ｒｆ及びＲｇが、同一であるか、または異なり、かつ−Ｈ及び−Ｍｅから選択される、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記イムノコンジュゲートが、
【化４９】
2020534326.tif 000136
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは、１〜１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
【化５０】
2020534326.tif 000137
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とする、請求項１１４〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記抗体が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である、請求項１１４〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２２】
ＮとＣとの間の二重線
【化５１】
2020534326.tif 000138
が、単結合を表し、Ｘが、−Ｈであり、Ｙが、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈである、請求項９９〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２３】
Ｙが、−ＳＯ３Ｈ、またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩である、請求項９９〜１２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２４】
前記方法が、前記イムノコンジュゲートを製剤緩衝液中に精製して、前記イムノコンジュゲートと、０．１ｍＭ〜１０ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を得ることをさらに含む、請求項９９〜１２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２５】
前記医薬組成物が、０．５ｍＭ〜５ｍＭのメチオニンを含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
前記医薬組成物が、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンを含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２７】
前記医薬組成物が、３ｍＭのメチオニンを含む、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２８】
前記医薬組成物が、亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１２４〜１２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２９】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３２】
次式：
【化５２】
2020534326.tif 000139
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化５３】
2020534326.tif 000140
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である、前記方法。
【請求項１３３】
前記抗酸化剤が、前記イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３４】
前記抗酸化剤が、Ｎ−アセチルメチオニンである、請求項１３１に記載の方法。
【請求項１３５】
前記方法が、前記イムノコンジュゲートを製剤緩衝液中に精製して、前記イムノコンジュゲートと、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を得ることをさらに含む、請求項１３１〜１３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３６】
前記医薬組成物が、３ｍＭのメチオニンを含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１３７】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１３５または１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記医薬組成物が、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１３５に記載の方法。
【請求項１４１】
次式：
【化５４】
2020534326.tif 000141
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、
（ａ）次式：
【化５５】
2020534326.tif 000142
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次式：
【化５６】
2020534326.tif 000143
によって表される二官能性架橋剤スルホ−ＳＰＤＢと反応させて、次式：
【化５７】
2020534326.tif 000144
によって表される細胞毒性薬物−リンカー化合物またはその薬学的に許容される塩を形成するステップと、
（ｂ）ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、前記細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、前記イムノコンジュゲートを形成するステップと、を含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈであり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である、前記方法。
【請求項１４２】
前記細胞毒性薬物−リンカー化合物が、ステップ（ｂ）で前記ＣＢＡと反応する前に精製されない、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４３】
前記抗酸化剤が、前記イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する、請求項１４１または１４２に記載の方法。
【請求項１４４】
前記抗酸化剤が、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである、請求項１４１または１４２に記載の方法。
【請求項１４５】
前記方法が、前記イムノコンジュゲートを製剤緩衝液中に精製して、前記イムノコンジュゲートと、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を得ることをさらに含む、請求項１４１〜１４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４６】
前記医薬組成物が、３ｍＭのメチオニンを含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
前記医薬組成物が、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、または３０μＭ〜８０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１４５または１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記医薬組成物が、４０μＭ〜６０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記医薬組成物が、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１４８に記載の方法。
【請求項１５０】
前記医薬組成物が、２０ｍＭのヒスチジン、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０をさらに含む、請求項１４５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本出願は、米国特許法第１１９（ｅ）条の下、２０１７年９月２２日出願の米国仮出願第６２／５６２，０４９号、２０１７年１０月１７日出願の米国仮出願第６２／５７３，３２２号、及び２０１８年７月３１日出願の米国仮出願第６２／７１２，５８４号の優先権を主張する。上記の参照出願の各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、概して、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化を防止する方法に関する。本発明は、メチオニン酸化の量が最小限に抑えられるイムノコンジュゲートの医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００３】
細胞結合剤−薬物コンジュゲート（抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）など）は、様々ながんにわたって有効性を有する抗腫瘍剤の強力なクラスとなっている。細胞結合剤−薬物コンジュゲート（ＡＤＣなど）は、一般的に３つの異なる要素：細胞結合剤（例えば、抗体）、リンカー、及び細胞毒性部分から構成される。細胞毒性薬物部分は、抗体上のリジンと共有結合することができ、抗体分子上の異なる位置で結合される様々な数の薬物を保有するＡＤＣの不均一な混合物であるコンジュゲートをもたらす。あるいは、細胞毒性薬物部分は、マレイミド基などのチオール反応性基を介して抗体上のシステインチオール基と共有結合して、部位特異的ＡＤＣを形成することができる。
【０００４】
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）などの三環系ベンゾジアゼピン及びインドリノベンゾジアゼピンなどの四環系ベンゾジアゼピンを含むベンゾジアゼピン化合物は、抗体と連結してＡＤＣを生成する細胞毒性薬物として用いられ、有望な抗腫瘍活性を示している。これらのベンゾジアゼピン化合物は、イミン結合を含有し、これは、ＤＮＡの副溝に結合し、ＤＮＡ機能に干渉し、細胞死をもたらすことができる。
【０００５】
したがって、細胞結合剤及びイミン含有ベンゾジアゼピン薬物のコンジュゲートを調製するための新しい方法、ならびに製造プロセス及び／または保管中に安定性のあるこれらのコンジュゲートの新しい医薬組成物を開発する必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、ベンゾジアゼピン細胞毒性薬物を含むイムノコンジュゲートが、特に光の存在下で、メチオニン酸化しやすい可能性があるという驚くべき知見に基づく。ネイキッド抗体との比較データは、メチオニン酸化が少なくとも一部、ベンゾジアゼピン細胞毒性薬物の存在によって誘導されることを示唆する。驚くべきことに、抗体−ベンゾジアゼピンイムノコンジュゲートの医薬組成物におけるメチオニンの存在が観察されたメチオニン酸化の量を低減し得ることが分かっている。加えて、抗体とベンゾジアゼピン細胞毒性薬物との間のコンジュゲーション反応におけるメチオニン抗酸化剤の存在は、産生されたイムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を大幅に減少させることができる。
【０００７】
本発明の一態様は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートと、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を提供する。
【０００８】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物中のイムノコンジュゲートは、次式：
【化１】
2020534326.tif 000003
（ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化２】
2020534326.tif 000004
によって表される）によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化３】
2020534326.tif 000005
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化４】
2020534326.tif 000006
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣｙｓ上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数である。
【０００９】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物中のイムノコンジュゲートは、次式：
【化５】
2020534326.tif 000007
によって表され、式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化６】
2020534326.tif 000008
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化７】
2020534326.tif 000009
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化８】
2020534326.tif 000010
のうちのいずれか１つから選択されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ｑは、１〜５の整数である。
【００１０】
ある特定の実施形態では、本発明は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化９】
2020534326.tif 000011
によって表されるイムノコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩と、を含む医薬組成物を提供し、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である。
【００１１】
ある特定に実施形態では、本発明は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化１０】
2020534326.tif 000012
によって表されるイムノコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩と、を含む医薬組成物を提供し、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である。
【００１２】
本発明の別の態様は、イムノコンジュゲートを、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと混合して、イムノコンジュゲート及びメチオニンを含む医薬組成物を得ることを含む、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する方法を提供する。
【００１３】
ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、上述の式（ＩＡ）によって表される。
【００１４】
ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、上述の式（ＩＢ）によって表される。
【００１５】
また別の態様では、本発明は、細胞結合剤（ＣＢＡ）を、抗酸化剤の存在下で、本明細書に記載される細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減することを含む、本明細書に記載されるイムノコンジュゲートを調製する方法を提供する。
【００１６】
ある特定の実施形態では、本発明は、次式：
【化１１】
2020534326.tif 000013
によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法を提供し、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化１２】
2020534326.tif 000014
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化１３】
2020534326.tif 000015
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化１４】
2020534326.tif 000016
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化１５】
2020534326.tif 000017
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ１上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数であり、
ＬＣ’は、
【化１６】
2020534326.tif 000018
によって表される。
【００１７】
ある特定の実施形態では、本発明は、次式：
【化１７】
2020534326.tif 000019
式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化１８】
2020534326.tif 000020
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化１９】
2020534326.tif 000021
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化２０】
2020534326.tif 000022
のうちのいずれか１つから選択され、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ｑは、１〜５の整数である）によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法であって、
（ａ）次式：
【化２１】
2020534326.tif 000023
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次の：
【化２２】
2020534326.tif 000024
から選択される二官能性架橋剤と反応させて、
細胞毒性薬物−リンカー化合物を形成するステップであって、式中、Ｘは、ハロゲン、ＪＤ−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、または−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、またはニトロピリジルであり、Ｒｇは、アルキルであり、ｑは、１〜５の整数であり、Ｕは、−ＨまたはＳＯ３Ｈである、該ステップと、
（ｂ）ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、イムノコンジュゲートを形成するステップと、を含む、該方法である。
【００１８】
ある特定の実施形態では、本発明は、次式：
【化２３】
2020534326.tif 000025
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化２４】
2020534326.tif 000026
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である。
【００１９】
ある特定の実施形態では、本発明は、次式：
【化２５】
2020534326.tif 000027
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、
（ａ）次式：
【化２６】
2020534326.tif 000028
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次式：
【化２７】
2020534326.tif 000029
によって表される二官能性架橋剤Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）と反応させて、次式：
【化２８】
2020534326.tif 000030
によって表される細胞毒性薬物−リンカー化合物またはその薬学的に許容される塩を形成するステップと、
（ｂ）ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、イムノコンジュゲートを形成するステップと、を含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈであり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である。
【００２０】
本発明の一態様にのみ記載されるもの（他で記載されていない、または他で繰り返されていないが）及び実施例にのみ記載されるものを含む、本明細書に記載される任意の１つの実施形態は、明示的に否定されているか、または不適切でない限り、本発明の任意の１つ以上の他の実施形態と組み合わせることができることが企図される。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】７２時間にわたる、メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２試料におけるメチオニン酸化のパーセンテージを示す。
【図２】７２時間にわたる、メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２試料中の単量体のパーセンテージを示す。
【図３】７２時間にわたる、メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２試料中の高分子量種のパーセンテージを示す。
【図４】７２時間にわたる、メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２試料中の遊離薬物の量を示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、ＵＰＬＣ質量分析（Ａ）及びＵＶ検出（Ｂ）により検出された酸化及び未変性トリプシンペプチドのクロマトグラムを示す。Ｍｅｔ酸化％（位置２５２（ＥＵ番付）で測定された）は、［１００×酸化領域／（酸化領域＋未変性領域）］として計算される。
【図６】７日間にわたる、メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２及びＩＭＧＮ７７９試料におけるメチオニン酸化のパーセンテージを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
１．定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語及び語句を以下に定義する。
【００２３】
本明細書で互換的に使用される「（ヒト）ＩＬ−３Ｒα」、「インターロイキン−３受容体アルファ」、または「ＣＤ１２３」という用語は、特に明記しない限り、任意の天然（ヒト）ＩＬ−３ＲαまたはＣＤ１２３を指す。ＣＤ１２３タンパク質は、ヘテロ二量体サイトカイン受容体（ＩＬ−３受容体またはＩＬ−３Ｒ）のインターロイキン３特異的サブユニットである。ＩＬ−３Ｒは、リガンド特異的アルファサブユニット、ならびにインターロイキン３（ＩＬ３）、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２／ＧＭ−ＣＳＦ）、及びインターロイキン５（ＩＬ５）の受容体によって共有されるシグナル伝達共通ベータサブユニット（ＣＤ１３１としても知られる）から構成される。ＣＤ１２３／ＩＬ−３ＲαのＩＬ３への結合は、ベータサブユニットに依存する。ベータサブユニットは、リガンド結合によって活性化され、ＩＬ３の生物活性に必要である。
【００２４】
上記のＣＤ１２３のこれらの用語のすべては、本明細書に示されるタンパク質または核酸配列のいずれかを指すことができる。「ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα」という用語は、「完全長」の非プロセス型ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαならびに細胞内でプロセシングによって生じるＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαの任意の形態を包含する。本用語は、ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαタンパク質または核酸の天然に存在する変異型、例えば、スプライス変異型、対立遺伝子変異型、及びアイソフォームも包含する。本明細書に記載されるＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαポリペプチド及びポリヌクレオチドは、ヒト組織型または別の源からなどの様々な源から単離されるか、または組換え法もしくは合成法によって調製され得る。ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα配列の例としては、限定されないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００２１７４＆ＮＭ＿００２１８３（ヒトＣＤ１２３変異型１のタンパク質及び核酸配列）及びＮＰ＿００１２５４６４２  ＆  ＮＭ＿００１２６７７１３（ヒトＣＤ１２３変異型２のタンパク質及び核酸配列）が挙げられる。
【００２５】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述の組み合わせなどの標的を認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗体が所望の生物活性を示す限り、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片など）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のうちのいずれかのものであり得、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと称されるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づく。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる及び周知のサブユニット構造ならびに三次元配置を有する。抗体は、ネイキッドであり得るか、または毒素、放射性同位体などの他の分子にコンジュゲートされ得る。
【００２６】
いくつかの実施形態では、抗体は、天然に存在しない抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、天然の成分から精製される。いくつかの実施形態では、抗体は、組換え産生される。いくつかの実施形態では、抗体は、ハイブリドーマによって産生される。
【００２７】
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαなどの、それが結合する抗原の生物活性を阻害または低減するものである。ある特定の実施形態では、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、実質的に、または完全に、抗原の生物活性を阻害する。望ましくは、生物活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらには１００％低減される。
【００２８】
「抗ＣＤ１２３抗体」、「抗ＩＬ−３Ｒα抗体」、または「ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαに（特異的に）結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαを標的とする診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαに結合可能な抗体を指す。特に明記しない限り、無関係な非ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαタンパク質への抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体の結合の程度は、例えば、放射イムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される抗体のＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαへの結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒαに結合する抗体は、≦０．５ｎΜ、≦０．３ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０５ｎＭ、または≦０．０１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体は、共通ベータ鎖ＣＤ１３１に結合しない。一実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体は、７Ｇ３（マウスＩｇＧ２ａ）、６Ｈ６（マウスＩｇＧ１）、及び９Ｆ５（マウスＩｇＧ１）などの既知及び市販のＣＤ１２３抗体により結合されるＣＤ１２３の同じエピトープに結合しない（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ８７（１）：８３−９２，１９９６）。
【００２９】
本発明の抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体及びその抗原結合断片の配列が本明細書に提供される。本発明の様々な抗体及びイムノコンジュゲートの命名法が以下に別個に提供される。
【００３０】
「抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部分を指し、無傷の抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖状抗体、単鎖抗体、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。抗体の「抗原結合断片」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を含む。抗体の抗原結合機能は完全長抗体のある特定の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例としては、（限定されない）、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片（例えば、パパインによって消化された抗体は、３つの断片：２つの抗原結合Ｆａｂ断片と、抗原に結合しない１つのＦｃ断片をもたらす）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片（例えば、ペプシンによって消化された抗体は、２つの断片：二価の抗原結合Ｆ（ａｂ’）２断片、及び抗原に結合しないｐＦｃ’断片をもたらす）、及びその関連Ｆ（ａｂ’）の一価単位、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片（すなわち、Ｆａｂに含まれる重鎖のその部分）、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、ならびに関連するジスルフィド連結Ｆｖ  、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ（ドメイン抗体）またはｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００３１】
「モノクローナル」抗体は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均一な抗体集団を指す。これは、典型的に、異なる抗原決定基に向けられる異なる抗体を含む、ポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体という用語は、無傷及び完全長両方のモノクローナル抗体、ならびに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含む任意の数の様式で作製された、そのような抗体を指す。
【００３２】
「ヒト化抗体」という用語は、最小の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有する具体的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲからの残基で置き換えられるヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８）。
【００３３】
いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種からの抗体の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体は、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を洗練及び最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域において及び／または置き換えられた非ヒト残基内のいずれかの追加の残基の置換によりさらに修飾され得る。一般に、ヒト化抗体は、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものであるのに対し、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含有する少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの実質的にすべての可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むこともできる。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号及び同第５，６３９，６４１号、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１（３）：９６９−９７３，１９９４、ならびにＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４，１９９６（すべて参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は、再表面化抗体である。いくつかの実施形態では、「ヒト化抗体」は、ＣＤＲグラフト抗体である。
【００３４】
抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域の、単独または組み合わせのいずれかを指す。重鎖及び軽鎖の可変領域は各々、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲにより近接して一緒に保持され、他の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技法が存在する：（１）異種間配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．）、及び（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８，１９９７）。加えて、これらの２つのアプローチの組み合わせは、ＣＤＲを決定するために当該技術分野で時おり使用される。
【００３５】
可変ドメインにおける残基を参照する場合（軽鎖のおよそ残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）、Ｋａｂａｔ番付システムが一般的に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。
【００３６】
Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置の番付は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）（参照により本明細書に組み込まれる）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用される番付システムを指す。この番付システムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮または挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入される残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含むことができる。残基のＫａｂａｔ番付は、「標準的な」Ｋａｂａｔ番付された配列を伴う抗体の配列の相同性領域のアラインメントにより、所与の抗体について決定され得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，１９８７）。Ｋａｂａｔ番付規定を使用して番付された場合のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの終わりは、ループの長さに応じてＨ３２〜Ｈ３４の間で異なる。これは、Ｋａｂａｔ番付案が挿入をＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協点を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用される。
【表１】
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【００３７】
「ヒト」抗体という用語は、ヒトにより産生された抗体、または当該技術分野で知られている任意の技法を使用して作製された、ヒトにより産生された抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ある特定の実施形態では、ヒト抗体は非ヒト配列を有しない。このヒト抗体の定義は、無傷もしくは完全長抗体またはその抗原結合断片を含む。
【００３８】
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）の１種に由来する抗体の可変領域に対応し、一方、定常領域は、その種における免疫応答を誘発する可能性を避ける、または低減するために、別（通常はヒト）に由来する抗体の配列と相同である。ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、例えば、マウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体などの、少なくとも１つのヒト重鎖及び／または軽鎖ポリペプチドを含む抗体またはその抗原結合断片を含み得る。
【００３９】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、本明細書で互換的に使用され、特定の抗体によって認識され、特異的に結合され得る抗原のその部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、タンパク質の三次折り畳みによって並置される隣接するアミノ酸及び非隣接アミノ酸からの両方を形成し得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは典型的に、タンパク質の変性時に保持されるが、三次折り畳みによって形成されるエピトープは典型的に、タンパク質の変性時に欠失する。エピトープは、典型的に、独特の空間的高次構造において少なくとも３、より一般的には少なくとも５、または８〜１０のアミノ酸を含む。
【００４０】
「結合親和性」は、一般的に、分子の単一結合部位（例えば、抗体）と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記されない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）または最大半量効果濃度（ＥＣ５０）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は一般的に抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向がある一方で、高親和性抗体は一般的に抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野で知られており、そのいずれも本発明の目的に使用することができる。具体的な例示的な実施形態が本明細書に記載される。
【００４１】
結合親和性を指すために本明細書で使用される場合の「またはより良い」とは、分子とその結合パートナーとの間のより強い結合を指す。本明細書で使用される場合の「またはより良い」とは、より小さな数値のＫｄ値によって表される、より強い結合を指す。例えば、抗原に対して「０．３ｎＭまたはより良い」親和性を有する抗体の、抗原に対する抗体の親和性は≦０．３ｎＭ、例えば、０．２９ｎＭ、０．２８ｎＭ、０．２７ｎＭなど、または０．３ｎＭ以下の任意の値である。一実施形態では、Ｋｄによって決定される抗体の親和性は、約１０−３〜約１０−１２Ｍ、約１０−６〜約１０−１１Ｍ、約１０−６〜約１０−１０Ｍ、約１０−６〜約１０−９Ｍ、約１０−６〜約１０−８Ｍ、または約１０−６〜約１０−７Ｍであろう。
【００４２】
「特異的に結合する」とは、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合し、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にある相補性を伴うことを意味する。この定義により、抗体は、ランダムな無関係のエピトープに結合するであろうよりも容易にその抗原結合ドメインを介してそのエピトープに結合する場合、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、本明細書において、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対親和性を限定するために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、所与のエピトープに対して抗体「Ｂ」よりも高い特異性を有するとみなすことができるか、または抗体「Ａ」は、関連エピトープ「Ｄ」に対して有するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言うことができる。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、非ＣＤ１２３抗原に対する結合特異性よりもＣＤ１２３抗原（任意の種から）に対して高い結合特性を有するという点で、ＣＤ１２３抗原に「特異的に結合する」。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、非ヒトＣＤ１２３抗原（例えば、マウスまたはラットＣＤ１２３）に対する結合特異性よりもヒトＣＤ１２３抗原に対して高い結合特異性を有するという点で、ヒトＣＤ１２３抗原に「特異的に結合する」。
【００４４】
「優先的に結合する」とは、抗体が、関連の、同等の、相同の、または類似のエピトープに結合するであろうよりも容易にエピトープに特異的に結合することを意味する。よって、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのような抗体が関連エピトープと交差反応することができても、関連エピトープよりもそのエピトープに結合する可能性が高いであろう。例えば、ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、マウスＣＤ１２３よりもヒトＣＤ１２３抗原に「優先的に結合する」。
【００４５】
抗体は、参照抗体のエピトープとの結合を、ある程度遮断する範囲でそのエピトープと優先的に結合する場合に、参照抗体の所与のエピトープとの結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの当該技術分野で知られている任意の方法によって決定され得る。抗体は、参照抗体の所与のエピトープとの結合を競合的に少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％阻害すると言うことができる。
【００４６】
本明細書で使用される「実質的に同等」または「実質的に同じ」という語句は、２つの数値の間の十分に高い程度の同等性を示し（一般に、一方は本発明の抗体に関連し、他方は参照／比較抗体に関連する）、そのため、当業者は、２つの値の間の差が、該値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特性の状況下で生物学的及び／または統計的有意性が低いまたは無いと考えるであろう。該２つの値の間の差は、参照／比較抗体に対する値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満である。
【００４７】
本明細書で使用される「イムノコンジュゲート」、「コンジュゲート」、または「ＡＤＣ」という用語は、細胞結合剤（すなわち、抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体またはその断片）に連結され、一般式：Ａ−Ｌ−Ｃによって定義され、式中、Ｃ＝細胞毒、Ｌ＝リンカー、及びＡ＝細胞結合剤（ＣＢＡ）、例えば、抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体または抗体断片である。イムノコンジュゲートは、逆の順番の一般式：Ｃ−Ｌ−Ａによっても定義することができる。
【００４８】
「リンカー」は、化合物、通常は薬物（本明細書に記載される細胞毒性薬物など（例えば、ＩＧＮ（インドリノベンゾジアゼピン）化合物））を、安定した共有結合様式で細胞結合剤（抗体またはその断片など）に連結することができる任意の化学部分である。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件下で、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に対して感受性または実質的に耐性であり得る。好適なリンカーは当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸解離性基、光解離性基、ペプチダーゼ解離性基、及びエステラーゼ解離性基を含む。リンカーは、本明細書で記載される、荷電リンカー及びその親水性形態も含み、当該技術分野で知られている。
【００４９】
「がん」及び「がん性」という用語は、細胞の集団が無秩序な細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的な状態を指すか、または説明する。「腫瘍」及び「新生物」は、前がん性病変を含む良性（非がん性）または悪性（がん性）のいずれかの過剰な細胞の成長または増殖からもたらされる、１つ以上の細胞を指す。
【００５０】
がんの例には、リンパ腫及び白血病が含まれる。本発明の方法及び試薬（例えば、抗ＣＤ１２３抗体、その抗原結合断片、またはそのイムノコンジュゲート）によって治療及び／または予防することができるがんまたは腫瘍原性疾患の例には、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＡＬＬ（例えば、Ｂ−ＡＬＬ）、ＣＬＬ、骨髄異形成症候群、一般的な形質細胞様ＤＣ新生物（ＢＰＤＣＮ）白血病、Ｂ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、前駆Ｂリンパ芽球性白血病リンパ腫／リンパ腫、及び成熟Ｂ細胞新生物、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ−ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病を含む）、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（低悪性度、中悪性度、及び高悪性度ＦＬを含む）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ型、結節型、及び脾臓型）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞性骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、ならびにホジキン白血病（ＨＬ）が含まれる。
【００５１】
「対象」という用語は、限定されないが、特定の治療のレシピエントとなるヒト、非ヒト霊長類、齧歯類などを含む、任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。典型的には、「対象」及び「患者」という用語は、ヒト対象に関連して、本明細書では互換的に使用される。
【００５２】
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物活性を有効にするような形態であり、製剤が投与されるであろう対象にとって許容できない毒性である追加構成成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は、滅菌であり得る。
【００５３】
本明細書で開示される抗体またはイムノコンジュゲートの「有効量」は、具体的に言及された目的を実施するのに十分な量である。「有効量」は、言及された目的との関連で、経験的に、及び通例の様式で、決定されることができる。
【００５４】
本明細書で使用される「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子の飽和直鎖状または分岐状鎖一価の炭化水素ラジカルを指す。アルキルの例には、限定されないが、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−メチル−１−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル、２−メチル−２−プロピル、１−ペンチル、２−ペンチル３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル１−ヘキシル）、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル−３−ペンチル、２−メチル−３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチル、３，３−ジメチル−２−ブチル、１−ヘプチル、１−オクチルなどが挙げられる。好ましくは、アルキルは、１〜１０個の炭素原子を有する。より好ましくは、アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する。
【００５５】
基の炭素原子の数は、本明細書で、接頭辞「Ｃｘ−ｘｘ」（式中、ｘ及びｘｘは整数である）で指定することができる。例えば、「Ｃ１−４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基である。
【００５６】
「化合物」または「細胞毒性化合物」という用語は、互換的に使用される。それらは、構造もしくは式またはそれらの任意の誘導体が本発明に開示されている化合物、あるいは参照により組み込まれている構造もしくは式またはそれらの任意の誘導体を含むことが意図される。本用語は、本発明に開示される式すべての化合物の立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物、及び塩（例えば、薬学的に許容される塩）も含む。本用語は、任意の溶媒和物、水和物、及び前述の任意の多形も含む。本出願に記載される発明のある特定の態様における「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒和物」、「代謝物」、「塩」、「コンジュゲート」、「コンジュゲートの塩」、「溶媒和物」、「水和物」、または「多形」の具体的な列挙は、「化合物」という用語がこれらの他の形態を列挙することなく使用される本発明の他の態様において、これらの形態の意図した省略と解釈されるべきではない。
【００５７】
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせることができない特性を有する分子を指す一方で、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。
【００５８】
「立体異性体」という用語は、同一の化学構造及び結合性を有するが、単結合の周りの回転により相互変換することができない空間においてそれらの原子の異なる配向を有する化合物を指す。
【００５９】
「ジアステレオマー」は、２つ以上の不斉中心を有する立体異性体を指し、その分子は互いの鏡像ではない。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、分光特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、結晶化、電気泳動、及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順により分離することができる。
【００６０】
「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【００６１】
本明細書で使用される立体化学の定義及び規定は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本発明の化合物は、非対称またはキラル中心を含有することができ、したがって、異なる立体異性形態で存在する。限定されないが、ジアステレオマー、エナンチオマー、及びアトロプ異性体、ならびにそれらの混合物、例えば、ラセミ混合物を含む、本発明の化合物のすべての立体異性体が本発明の一部を形成することが意図される。多くの有機化合物は、光学的活性形態で存在する、すなわち、それらは、直線偏光の平面を回転する能力を有する。光学的活性化合物を説明する際に、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳを使用して、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表す。接頭辞ｄ及びＩまたは（＋）及び（−）を用いて、化合物による直線偏光の回転のサインを示し、（−）または１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞が付いた化合物は右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いに鏡像であることを除いて、同一である。具体的な立体異性体は、エナンチオマーとも称され得、そのような異性体の混合物は、時おりエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ体と称され、これは、化学反応またはプロセスにおいて立体選択または立体特異性がなかった場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性がない、２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。
【００６２】
「互変異性体」または「互変異性形態」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能な異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異性体としても知られる）は、ケト−エノール及びイミン−エナミン異性化などの、プロトンの転位を介した相互変換を含む。原子価互変異性体は、結合電子のいくつかの再編成による相互変換を含む。
【００６３】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という語句は、本発明の化合物の薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシレート」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が挙げられる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオン、または他の対イオンなどの別の分子の包含を伴い得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。よって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
【００６４】
本発明の化合物が塩基性である場合、所望の薬学的に許容される塩は、当該技術分野で利用可能な任意の好適な方法、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸などを用いて、または有機酸、例えば、酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸、例えば、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸、アルファヒドロキシ酸、例えば、クエン酸もしくは酒石酸、アミノ酸、例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸、芳香族酸、例えば、安息香酸もしくはケイ皮酸、スルホン酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸などを用いて遊離塩基を処理することによって調製することができる。
【００６５】
本発明の化合物が酸性である場合、所望の薬学的に許容される塩は、任意の好適な方法、例えば、無機もしくは有機塩基、例えば、アミン（一級、二級、または三級）、アルカリ金属水酸化物、またはアルカリ土塁金属水酸化物などを用いて遊離酸を処理することによって調製することができる。好適な塩の例示的な例には、限定されないが、アミノ酸、例えば、グリシン及びアルギニン、アンモニア、一級、二級、及び三級アミン、ならびに環状アミン、例えば、ピペリジン、モルホリン、及びピペラジンに由来する有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、及びリチウムに由来する無機塩が挙げられる。
【００６６】
本明細書で使用される、「溶媒和物」という用語は、非共有結合の分子間力によって結合される、水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンジクロロメタン、２−プロパノールなどの溶媒の化学量論量または非化学量論量をさらに含む化合物を意味する。本化合物の溶媒和物または水和物は、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、または水などの少なくとも１モル当量のヒドロキシル溶媒を化合物に添加して、イミン部分の溶媒和または水和をもたらすことにより容易に調製される。
【００６７】
「薬学的に許容される」という語句は、物質または組成物が、製剤を含む他の成分、及び／またはそれによって治療される哺乳動物と、化学的及び／または毒物学的に適合性でなければならないことを示す。
【００６８】
「アミノ酸」という用語は、天然に生じるアミノ酸または天然に生じないアミノ酸を指す。一実施形態では、アミノ酸は、ＮＨ２−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨによって表され、式中、Ｒａａ及びＲａａ’は各々、独立して、Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する任意選択で置換されている直鎖状、分岐状、もしくは環状アルキル、アルケニル、またはアルキニル、アリール、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであるか、またはＲａａ及びＮ末端窒素原子は複素環式環（例えば、プロリンにあるような）を一緒に形成することができる。「アミノ酸残基」という用語は、−ＮＨ−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−などの、１個の水素原子がアミン及び／またはアミノ酸のカルボキシ端から除去されるときの対応する残基を指す。
【００６９】
「カチオン」という用語は、正の荷電イオンを指す。カチオンは、一価（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＮＨ４＋など）、二価（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋など）、または多価（例えば、Ａｌ３＋など）であり得る。好ましくは、カチオン一価である。
【００７０】
「メチオニン酸化」という用語は、細胞結合剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）上に位置する１つ以上のメチオニン残基の酸化を指す。ある特定の実施形態では、酸化は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＥＵ番付によるＭｅｔ２５２、Ｍｅｔ３５８、Ｍｅｔ４２８）に位置する１つ以上のメチオニン残基で生じる。ある特定の実施形態では、メチオニン酸化、特に、抗体のＦｃ領域でのメチオニン酸化は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への抗体結合を低減し得るが、抗体の循環半減期に影響を及ぼす可能性がある。
【００７１】
実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語と共に本明細書に記載される箇所はどこでも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」及び／または「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語で記載される別の類似の実施形態も提供されることが理解される。
【００７２】
本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような語句で使用される、「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、ならびに「Ｂ」の両方を含むように意図されている。同様に、Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような語句で使用される、「及び／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）のそれぞれを包含するように意図されている。
【００７３】
抗体、化合物、及びイムノコンジュゲートの命名法
本明細書で使用される、抗体、細胞毒性化合物、及びそれらのイムノコンジュゲートに使用される命名法は一般に、以下の意味を採用する。
【００７４】
本発明の例示的な抗体またはその抗原結合断片を下の表に示す。例えば、Ｇ４７２３Ａ抗体は、配列番号８の重鎖完全長配列及び配列番号１０の軽鎖完全長配列を有する、ＥＵ番付位置４４２にシステインを有するヒト化抗ＣＤ１２３抗体である。
【表２】
2020534326.tif 000032
【表３】
2020534326.tif 000033
【００７５】
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、Ｌｙｓ側鎖アミノ基またはＣｙｓ側鎖チオール基との連結のいずれかを介して、ある特定の細胞毒性薬物にコンジュゲートされ得る。本明細書に記載される（実施例を含む）ある特定の代表的（非限定）な細胞毒性薬物及びイムノコンジュゲートが、例示の目的のため以下に列記される。ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ５４９−Ｃ、及びＤＧＮ５４９−Ｌなどの大半の化合物はスルホン化され得る（それぞれ、ｓＤＧＮ４６２及びｓＤＧＮ５４９−Ｃのように示される）ことに留意する。
【表４】
2020534326.tif 000034
【表５】
2020534326.tif 000035
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、ＷＣは、２であり、ＷＬは、１〜１０の整数である。
【００７６】
２．医薬組成物
第１の態様では、本発明は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）と、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を提供する。驚くべきことに、かなりの量のメチオニン酸化が本発明のイムノコンジュゲートの調製及び／または保管中に生じることが分かっている。特に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２４、４８、７２時間以上にわたってなど、長期間にわたる露光が、イムノコンジュゲートにおける大量のメチオニン酸化をもたらす。同等の条件下で、対応するネイキッド抗体に関しては、かなりの量のメチオニン酸化は、露光及び／または保管時に観察されない。本明細書に記載されるイムノコンジュゲートを含む本発明の医薬組成物におけるメチオニンの存在は、特に露光時に、メチオニンを含まない医薬組成物と比較して、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【００７７】
第１の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）と、０．１ｍＭ〜１０ｍＭのメチオニンと、を含む。
【００７８】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）と、０．５ｍＭ〜５ｍＭメチオニンと、を含む。
【００７９】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）と、１．０ｍＭ〜４．０ｍＭのメチオニンと、を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物におけるメチオニン濃度は、３ｍＭである。
【００８０】
ある特定の実施形態では、上述の本発明の医薬組成物が室温で６時間以上露光される場合、イムノコンジュゲートは、５０％未満、４０％未満、３５％未満、３０％、２５％未満、２０％未満、または１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満のメチオニン酸化を有する。
【００８１】
第２の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化２９】
2020534326.tif 000036
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩と、を含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である。
【００８２】
第３の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化３０】
2020534326.tif 000037
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩と、を含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である。
【００８３】
第４の実施形態では、第１、第２、または第３の実施形態の医薬組成物は、３ｍＭのメチオニンを含む。
【００８４】
第５の実施形態では、第１、第２、第３、または第４の実施形態の医薬組成物が室温で６時間露光される場合、イムノコンジュゲートは、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満のメチオニン酸化を有する。
【００８５】
第６の実施形態では、第１、第２、第３、第４、または第５の実施形態の医薬組成物は、露光から医薬組成物を保護する容器に入っている。任意の好適な容器（例えば、バイアルまたはシリンジ）が使用され得る。例えば、耐光性（例えば、琥珀色、黄緑色、または青色）容器、例えば、色ガラスまたは着色プラスチック容器（例えば、バイアルまたはシリンジ）を使用して、露光を最小限に抑えることができる。あるいは、紙箱、プラスチック箱、またはアルミ箔などの耐光性の不透明被覆により保護される場合、無色または半透明の容器を使用してもよい。加えて、４００〜４３５ｎｍより下の光を遮断して、細胞毒性ペイロード（例えば、ＤＧＮ４６２、ＤＧＮ５４９）の吸収スペクトルと同等の波長の光が医薬組成物に入るのを防止する任意の容器、フィルタ、またはバイアルは、本発明に有用である。加えて、露光された場合に医薬組成物を保護するために、光吸収添加剤が製剤に添加され得る。
【００８６】
第７の実施形態では、第１、第２、第３、第４、第５、または第６の実施形態の医薬組成物は、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３ｍｇ／ｍＬ、または１．５ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬのイムノコンジュゲートを含む。ある特定の実施形態では、第２、第３、第４、第５、または第６の実施形態の医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬのイムノコンジュゲートを含む。
【００８７】
第８の実施形態では、第１、第２、第３、第４、第５、第６、または第７の実施形態の医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の亜硫酸水素ナトリウムの濃度は、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、３０μＭ〜８０μＭ、３０μＭ〜７０μＭ、４０μＭ〜６０μＭ、または４５μＭ〜５５μＭの亜硫酸水素ナトリウムである。ある特定の実施形態では、第２、第３、第４、第５、第６、または第７の実施形態の医薬組成物は、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む。
【００８８】
第９の実施形態では、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の実施形態の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容されるビヒクル（例えば、担体、賦形剤）（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００）をさらに含む。好適な薬学的に許容されるビヒクルには、限定されないが、非毒性緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、及び他の有機酸：塩、例えば、塩化ナトリウム；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば、約１０未満のアミノ酸残基；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；炭水化物、例えば、単糖、二糖、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【００８９】
ある特定の実施形態では、第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の実施形態の医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、緩衝液、糖、及び非イオン性界面活性剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、コハク酸またはヒスチジン緩衝液、トレハロース、及びポリソルベート２０をさらに含む。
【００９０】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の緩衝液（例えば、コハク酸またはヒスチジン）濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭ、５ｍＭ〜２５ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、１０ｍＭ〜２５ｍＭ、または１５ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である。ある特定の実施形態では、緩衝液濃度は、１０ｍＭまたは２０ｍＭである。
【００９１】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、５〜１０％、６〜８％、６．５〜７．５％、７．０〜７．４％、７．１〜７．３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、７．２％（ｗ／ｖ）である。
【００９２】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０１〜０．１％、０．０１〜０．０５％、または０．０１〜０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【００９３】
第１０の実施形態では、第１、第２、第４、第５、第６、第７、第８、または第９の実施形態の医薬組成物は、４〜５、４〜４．５、４〜４．４、または４．１〜４．３のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、４．２である。
【００９４】
第１１の実施形態では、第１、第３、第４、第５、第６、第７、第８、または第９の実施形態の医薬組成物は、５．５〜６．５、５．９〜６．３、または６．０〜６．２のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、６．１である。
【００９５】
第１２の実施形態では、本発明の医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＡ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、４．２である。
【００９６】
第１３の実施形態では、本発明の医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＢ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、２０ｍＭのヒスチジン、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、６．１である。
【００９７】
３．メチオニン酸化の低減方法
第２の態様では、本発明は、イムノコンジュゲートを、０．１ｍＭ〜２０ｍＭのメチオニンと混合して、イムノコンジュゲート及びメチオニンを含む医薬組成物を得ることを含む、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）におけるメチオニン酸化の量を低減する方法を提供する。
【００９８】
第１の実施形態では、第２の態様の方法は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）を、０．５ｍＭ〜５ｍＭのメチオニンと混合することを含む。
【００９９】
ある特定の実施形態では、第２の態様の方法は、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、式（ＩＡ）、（ＩＢ）、もしくは（ＩＣ）のイムノコンジュゲート、または以下に記載される第１〜第２６の具体的な実施形態のイムノコンジュゲート）を、１．０ｍＭ〜４．０ｍＭのメチオニンと混合することを含む。
【０１００】
ある特定の実施形態では、上述の本発明の第２の態様の方法によって調製された医薬組成物が室温で６時間以上露光される場合、イムノコンジュゲートは、５０％未満、４０％未満、３５％未満、３０％、２５％未満、２０％未満、または１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満のメチオニン酸化を有する。
【０１０１】
第２の実施形態では、第２の態様の方法は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化３１】
2020534326.tif 000038
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩と、を混合して、イムノコンジュゲート及びメチオニンを含む医薬組成物を得ることを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である。
【０１０２】
第３の実施形態では、第２の態様の方法は、１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、次式：
【化３２】
2020534326.tif 000039
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩と、を混合することを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である。
【０１０３】
第４の実施形態では、第２の態様の第１、第２、または第３の実施形態の方法は、３ｍＭメチオニンをイムノコンジュゲートと混合することを含む。
【０１０４】
第５の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、または第４の実施形態の方法によって調製された医薬組成物が室温で６時間露光される場合、イムノコンジュゲートは、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満のメチオニン酸化を有する。
【０１０５】
第６の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、または第５の実施形態の方法によって調製された医薬組成物は、露光から医薬組成物を保護する容器に入っている。任意の好適な容器（例えば、バイアルまたはシリンジ）が使用され得る。例えば、耐光性（例えば、琥珀色、黄緑色、または青色）容器、例えば、色ガラスまたは着色プラスチック容器（例えば、バイアルまたはシリンジ）を使用して、露光を最小限に抑えることができる。あるいは、紙箱またはプラスチック箱などの耐光性の不透明被覆により保護される場合、無色または半透明の容器を使用してもよい。
【０１０６】
第７の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、または第６の実施形態によって調製された医薬組成物は、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３ｍｇ／ｍＬ、または１．５ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬのイムノコンジュゲートを含む。ある特定の実施形態では、第２の態様の第２、第３、第４、第５、または第６の実施形態の方法によって調製された医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬのイムノコンジュゲートを含む。
【０１０７】
第８の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、または第７の実施形態の方法によって調製された医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の亜硫酸水素ナトリウムの濃度は、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、３０μＭ〜８０μＭ、３０μＭ〜７０μＭ、４０μＭ〜６０μＭ、または４５μＭ〜５５μＭの亜硫酸水素ナトリウムである。ある特定の実施形態では、第２の態様の第２、第３、第４、第５、第６、または第７の実施形態の方法によって調製された医薬組成物は、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムをさらに含む。
【０１０８】
第９の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の実施形態の方法によって調製された医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容されるビヒクル（例えば、担体、賦形剤）（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００）をさらに含む。好適な薬学的に許容されるビヒクルには、限定されないが、非毒性緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、及び他の有機酸；塩、例えば、塩化ナトリウム；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば、約１０未満のアミノ酸残基）；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；炭水化物、例えば、単糖、二糖、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の実施形態の方法により調製された医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、緩衝液、糖、及び非イオン性界面活性剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、または第８の実施形態の方法による医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、コハク酸またはヒスチジン緩衝液、トレハロース、及びポリソルベート２０をさらに含む。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の緩衝液（例えば、コハク酸またはヒスチジン）濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭ、５ｍＭ〜２５ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、１０ｍＭ〜２５ｍＭ、または１５ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である。ある特定の実施形態では、緩衝液濃度は、１０ｍＭまたは２０ｍＭである。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、５〜１０％、６〜８％、６．５〜７．５％、７．０〜７．４％、７．１〜７．３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、７．２％（ｗ／ｖ）である。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０１〜０．１％、０．０１〜０．０５％、または０．０１〜０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【０１１３】
第１０の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、または第９の実施形態の方法による医薬組成物は、４〜５、４〜４．５、４〜４．４、または４．１〜４．３のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、４．２である。
【０１１４】
第１１の実施形態では、第２の態様の第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、もしくは第８、または第９の実施形態の方法による医薬組成物は、５．５〜６．５、５．９〜６．３、または６．０〜６．２のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、６．１である。
【０１１５】
第１２の実施形態では、第２の態様の第２、第４、第５、第６、第７、もしくは第８、または第９の実施形態の方法により調製された医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＡ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、４．２である。
【０１１６】
第１３の実施形態では、第２の態様の第３、第４、第５、第６、第７、第８、または第９の実施形態の方法により調製された医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＢ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、２０ｍＭのヒスチジン、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、６．１である。
【０１１７】
４．イムノコンジュゲートの調製方法
第３の態様では、本発明は、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させることを含む、本発明のイムノコンジュゲートを調製する方法を提供する。
【０１１８】
第３の態様の第１の実施形態では、本発明は、次式：
【化３３】
2020534326.tif 000040
によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法を提供し、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化３４】
2020534326.tif 000041
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、ＬＣ’は、
【化３５】
2020534326.tif 000042
によって表され、残りの変数は、式（ＩＡ）に関して上述される通り、または上述の第１〜第１３の具体的な実施形態の通りである。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１２１】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンである。
【０１２２】
第３の態様の第２の実施形態では、本発明は、次式：
【化３６】
2020534326.tif 000043
によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法を提供し、
（ａ）次式：
【化３７】
2020534326.tif 000044
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次の：
【化３８】
2020534326.tif 000045
から選択される二官能性架橋剤と反応させて、
細胞毒性薬物−リンカー化合物を形成するステップであって、式中、Ｘは、ハロゲン、ＪＤ−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、または−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、またはニトロピリジルであり、Ｒｇは、アルキルであり、ｑは、１〜５の整数であり、Ｕは、−ＨまたはＳＯ３Ｈである、ステップと、
（ｂ）ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、イムノコンジュゲートを形成するステップと、を含み、残りの変数は、式（ＩＢ）または第１４〜第１９の具体的な実施形態に関して上述される通りである。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、細胞毒性薬物−リンカー化合物は、ステップ（ｂ）でＣＢＡと反応する前に精製されない。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである。
【０１２７】
第３の態様の第３の実施形態では、本発明は、次式：
【化３９】
2020534326.tif 000046
によって表されるイムノコンジュゲートを調製する方法を提供し、ＣＢＡを、次式：
【化４０】
2020534326.tif 000047
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、Ｃ（＝Ｏ）Ｅは、反応性エステル基、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、ニトロフェニル（例えば、２または４−ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（例えば、２，４−ジニトロフェニル）エステル、スルホ−テトラフルロフェニル（例えば、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）エステル、またはペンタフルオロフェニルエステル、好ましくは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであり、残りの変数は、第２０〜第２６の具体的な実施形態に上述される通りである。
【０１２８】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１２９】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１３０】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである。
【０１３１】
第３の態様の第４の実施形態では、本発明は、次式：
【化４１】
2020534326.tif 000048
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、次式：
【化４２】
2020534326.tif 000049
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈまたはそのナトリウム塩であり、
ＷＣは、２であり、
ＣＢＡは、ａ）配列番号８の免疫グロブリン重鎖完全配列と、ｂ）配列番号１０の免疫グロブリン軽鎖完全配列と、を含む、抗ＣＤ１２３抗体である。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンである。
【０１３５】
第３の態様の第５の実施形態では、本発明は、次式：
【化４３】
2020534326.tif 000050
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、
（ａ）次式：
【化４４】
2020534326.tif 000051
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩を、次式：
【化４５】
2020534326.tif 000052
によって表される二官能性架橋剤スルホ−ＳＰＤＢと反応させて、次式：
【化４６】
2020534326.tif 000053
によって表される細胞毒性薬物−リンカー化合物またはその薬学的に許容される塩を形成するステップと、
（ｂ）ＣＢＡを、抗酸化剤の存在下で、細胞毒性薬物−リンカー化合物と反応させて、イムノコンジュゲートを形成するステップと、を含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈであり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む、抗ＣＤ３３抗体である。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、細胞毒性薬物−リンカー化合物は、ステップ（ｂ）でＣＢＡと反応する前に精製されない。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである。
【０１４０】
第６の実施形態では、本発明は、次式：
【化４７】
2020534326.tif 000054
によって表されるイムノコンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供し、ＣＢＡを、次式：
【化４８】
2020534326.tif 000055
によって表される細胞毒性薬物またはその薬学的に許容される塩と反応させることを含み、式中、
Ｙは、−ＳＯ３Ｈであり、
ＷＬは、１〜１０の整数であり、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片である。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、イムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の量を低減する。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、アミン及び／またはカルボキシル保護基（例えば、Ｎ−アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びカルボキシベンジル（Ｃｂｚ））を有するメチオニン誘導体、水溶性非求核性チオエーテル、または硫化ジメチルである。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、抗酸化剤は、Ｎ−アセチルメチオニンメチルエステルである。
【０１４４】
第７の実施形態では、第３の態様の第１、第２、第３、第４、第５、または第６の実施形態の方法は、イムノコンジュゲートを製剤緩衝液中に精製して、イムノコンジュゲートと、０．１ｍＭ〜２０ｍＭ、０．１ｍＭ〜１０ｍＭ、０．５ｍＭ〜５ｍＭ、または１ｍＭ〜４ｍＭのメチオニンと、を含む医薬組成物を得ることをさらに含む。ある特定の実施形態では、製剤緩衝液は、３ｍＭのメチオニンを含む。
【０１４５】
第８の実施形態では、第３の態様の第７の実施形態の医薬組成物は、亜硫酸ナトリウムをさらに含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の亜硫酸水素ナトリウムの濃度は、１０μＭ〜１００μＭ、２０μＭ〜９０μＭ、３０μＭ〜８０μＭ、３０μＭ〜７０μＭ、４０μＭ〜６０μＭ、または４５μＭ〜５５μＭの亜硫酸水素ナトリウムである。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の亜硫酸水素ナトリウムの濃度は、５０μＭである。
【０１４６】
第９の実施形態では、第３の態様の第７または第８の実施形態の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容されるビヒクル（例えば、担体、賦形剤）（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００）をさらに含む。好適な薬学的に許容されるビヒクルには、限定されないが、非毒性緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、コハク酸、ヒスチジン、及び他の有機酸；塩、例えば、塩化ナトリウム；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば、約１０未満のアミノ酸残基；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；炭水化物、例えば、単糖、二糖、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、第３の態様の第９の実施形態の医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、緩衝液、糖、及び非イオン性界面活性剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、第３の態様の第９の実施形態の医薬組成物は、亜硫酸水素ナトリウム、コハク酸またはヒスチジン緩衝液、トレハロース、及びポリソルベート２０をさらに含む。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の緩衝液（例えば、コハク酸またはヒスチジン）濃度は、５ｍＭ〜５０ｍＭ、５ｍＭ〜２５ｍＭ、５ｍＭ〜１５ｍＭ、１０ｍＭ〜２５ｍＭ、または１５ｍＭ〜２５ｍＭの範囲である。ある特定の実施形態では、緩衝液濃度は、１０ｍＭまたは２０ｍＭである。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、５〜１０％、６〜８％、６．５〜７．５％、７．０〜７．４％、７．１〜７．３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の糖（例えば、トレハロース）濃度は、７．２％（ｗ／ｖ）である。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０１〜０．１％、０．０１〜０．０５％、または０．０１〜０．０３％（ｗ／ｖ）の範囲である。ある特定の実施形態では、医薬組成物中の非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）濃度は、０．０２％（ｗ／ｖ）である。
【０１５１】
第１０の実施形態では、第３の態様の第７、第８、または第９の実施形態の方法に関して、医薬組成物中のイムノコンジュゲート濃度は、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ〜３ｍｇ／ｍＬ、または１．５ｍｇ／ｍＬ〜２．５ｍｇ／ｍＬの範囲である。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート濃度は、２ｍｇ／ｍＬである。
【０１５２】
第１１の実施形態では、第３の態様の第７、第８、第９、または第１０の実施形態の方法に関して、医薬組成物は、４〜５、４〜４．５、４〜４．４、または４．１〜４．３のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、４．２である。
【０１５３】
第１２の実施形態では、第３の態様の第７、第８、第９、または第１０の実施形態の方法に関して、医薬組成物は、５．５〜６．５、５．９〜６．３、または６．０〜６．２のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ｐＨは、６．１である。
【０１５４】
第１３の実施形態では、第３の態様の第７、第８、または第９の実施形態の方法に関して、医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＡ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、４．２である。
【０１５５】
第１４の実施形態では、第３の態様の第７、第８、または第９の実施形態の方法により調製された医薬組成物は、２ｍｇ／ｍＬの式（ＩＩＢ）のイムノコンジュゲート、３ｍＭのメチオニン、２０ｍＭのヒスチジン、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロース（または８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物）、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、医薬組成物のｐＨは、６．１である。
【０１５６】
ある特定の実施形態では、上述の方法に関して、任意の好適な量の抗酸化剤が、ＣＢＡと、細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物との反応において使用され得る。ある特定の実施形態では、ＣＢＡに対して過剰量の抗酸化剤が使用され得る。抗酸化剤とＣＢＡとの例示的なモル比は、２００：１〜１．５：１、１５０：１〜１．５：１、１００：１〜１．５：１、５０：１〜１．５：１、２０：１〜２：１、１５：１〜２：１、１０：１〜２：１、または１０：１〜５：１の範囲である。ある特定の実施形態では、抗酸化剤とＣＢＡとの比率は、１０：１である。
【０１５７】
ある特定の実施形態では、ＣＢＡと、細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物との反応は、好適な溶媒（複数可）中で行われる。ある特定の実施形態では、溶媒（複数可）は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）及び／またはプロピレングリコールを含む。ある特定の実施形態では、ＣＢＡと、細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物との反応は、ＤＭＡ、プロピレングリコール、及び水性緩衝溶液中で行われる。任意の好適な水性緩衝液を使用することができる。例示的な緩衝液としては、限定されないが、リン酸、クエン酸、コハク酸、及びヒスチジンが挙げられる。
【０１５８】
ある特定の実施形態では、ＣＢＡと、細胞毒性薬物または細胞毒性薬物−リンカー化合物との反応は、好適な温度で行われる。ある特定の実施形態では、反応は、１５℃〜２５℃、５℃〜１５℃、２０℃〜２５℃の温度で行われる。ある特定の実施形態では、反応は、室温で行われる。
【０１５９】
５．細胞結合剤
本発明のイムノコンジュゲートの細胞結合剤は、任意の種類の現在知られているもの、または知られるようになるものであり得、ペプチド及び非ペプチドを含む。一般に、これらは、抗体（ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体、特にモノクローナル抗体など）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン（その細胞表面受容体に結合することができる葉酸など、例えば、葉酸受容体）、栄養輸送分子（トランスフェリンなど）、または任意の他の細胞結合分子もしくは物質であり得る。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、抗体、単鎖抗体、標的細胞に特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体断片（または「抗原結合部分」）、キメラ抗体、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体断片（または「抗原結合部分」）、ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ）、または標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体断片である。
【０１６１】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、ヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体断片（または「抗原結合部分」）である。
【０１６２】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、再表面化抗体、再表面化単鎖抗体、または再表面化抗体断片（または「抗原結合部分」）である。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤が抗体またはその抗原結合部分（抗体の誘導体を含む）場合、ＣＢＡは、細胞表面リガンド（細胞表面受容体を含む）などの標的細胞上のリガンドに結合し得る。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３−Ｒα抗原のアミノ酸１０１〜３４６内のエピトープに結合し、（ｂ）抗原陽性ＴＦ−１細胞におけるＩＬ３依存増殖を阻害する抗体またはその抗原結合断片である（ＷＯ２０１７／００４０２６を参照されたい、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、ＷＯ２０１７／００４０２６（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片である。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片は、ａ）それぞれ、３つの連続的な相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸配列を有する）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片と、ｂ）それぞれ、３つの連続的な相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸配列を有する）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片と、を含み得る。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３抗体は、配列番号８の重鎖完全長配列、及び配列番号１０の軽鎖完全長配列を有する。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤は、米国特許第７，３４２，１１０号及び同第７，５５７，１８９号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合断片である。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合断片は、ａ）それぞれ、３つの連続的な相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を有する）を含む少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片と、ｂ）それぞれ、３つの連続的な相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を有し、ＣＤＲ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する）を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片と、を含み得る。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７のアミノ配列を有する重鎖可変領域、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１７２】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１８の重鎖完全長配列、及び配列番号２０の軽鎖完全長配列を有する。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３３抗体は、ｈｕＭｙ９−６抗体である。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、マウス、非ヒト哺乳動物、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である。例えば、ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト化抗体または再表面化抗体であり得る。ある特定の実施形態では、抗体は、完全長抗体である。ある特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ−Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ−Ｆｃである。
【０１７５】
６．イムノコンジュゲート
本発明のイムノコンジュゲートは、本明細書に記載される細胞毒性薬物の１つ以上の分子と共有結合した、本明細書に記載される細胞結合剤（例えば、抗体またはその抗原結合断片）を含む。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、細胞毒性薬物は、ベンゾジアゼピン化合物、例えば、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）またはインドリノベンゾジアゼピン（ＩＧＮ）化合物である。
【０１７７】
本明細書で使用される「ベンゾジアゼピン」化合物は、ベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。ベンゾジアゼピンコアは、非置換であるかまたは置換され、かつ／または１つ以上の環構造と縮合され得る。それは、リンカーによって連結された２つのベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。ベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能性（−Ｃ＝Ｎ−）は低減され得る。
【０１７８】
本明細書で使用される「ピロロベンゾジアゼピン」（ＰＢＤ）化合物は、ピロロベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。ピロロベンゾジアゼピンは、非置換であるかまたは置換され得る。それは、リンカーによって連結された２つのピロロベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能性（−Ｃ＝Ｎ−）は低減され得る。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、任意選択で置換され得る、
【化４９】
2020534326.tif 000056
によって表されるコア構造を含む。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は、任意選択で置換され得る、
【化５０】
2020534326.tif 000057
によって表されるコア構造を含む。
【０１８１】
本明細書で使用される「インドリノベンゾジアゼピン」（ＩＧＮ）化合物は、インドリノベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物である。インドリノベンゾジアゼピンは、置換または非置換され得る。それは、リンカーによって連結された２つのインドリノベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能性（−Ｃ＝Ｎ−）は低減され得る。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は、任意選択で置換され得る、
【化５１】
2020534326.tif 000058
によって表されるコア構造を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は、任意選択で置換され得る、
【化５２】
2020534326.tif 000059
によって表されるコア構造を含む。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、本発明のイムノコンジュゲートは、細胞結合剤（以下の第１〜第１３の具体的な実施形態に記載されるものなど）上に位置する１つ以上のシステイン残基のチオール基（−ＳＨ）を介して、本明細書に記載される細胞毒性薬物と共有結合した、本明細書に記載される細胞結合剤（抗体またはその抗原結合断片を含む）を含む。
【０１８５】
第１の具体的な実施形態では、イムノコンジュゲートは、次式：
【化５３】
2020534326.tif 000060
によって表され、ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、式中、ＣＢＡは、ＣＢＡ上に位置する１つ以上のシステイン残基のチオール基を介してＣｙＣｙｓに連結され、
ＷＣは、１または２であり、
ＣｙＣｙｓは、次式：
【化５４】
2020534326.tif 000061
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化５５】
2020534326.tif 000062
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数であり、
ＬＣは、
【化５６】
2020534326.tif 000063
によって表され、ｓ１は、ＣＢＡと共有結合する部位であり、ｓ２は、ＣｙＣｙｓ上の−Ｃ（＝Ｏ）−基と共有結合する部位であり、
Ｒ２は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は、各出現において、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
ｎは、１〜１０の整数である。
【０１８６】
第２の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｒａ及びＲｂは、両方ともＨであり、Ｒ１は、ＨまたはＭｅであり、残りの変数は、第１の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１８７】
第３の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｐは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択され、残りの変数は、第１または第２の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１８８】
第４の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｐは、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａであり、残りの変数は、第１または第２の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１８９】
第５の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｑは、−ＳＯ３Ｈであり、残りの変数は、第１、第２、第３、または第４の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１９０】
第６の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｑは、Ｈであり、残りの変数は、第１、第２、第３、または第４の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１９１】
第７の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｒ３及びＲ４は、両方ともＨであり、ｎは、１〜６の整数であり、残りの変数は、第１、第２、第３、第４、第５、または第６の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１９２】
第８の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、−ＬＣ−は、次式：
【化５７】
2020534326.tif 000064
によって表され、残りの変数は、第１、第２、第３、第４、第５、第６、または第７の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１９３】
第９の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、イムノコンジュゲートは、次式：
【化５８】
2020534326.tif 000065
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
【化５９】
2020534326.tif 000066
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、残りの変数は、第１の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、ＮとＣとの間の二重線
【化６０】
2020534326.tif 000067
は、単結合を表し、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＳＯ３Ｈである。
【０１９５】
第１０の具体的な実施形態では、第１〜第９の具体的な実施形態のイムノコンジュゲートに関して、ＣＢＡは、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３−Ｒα抗原のアミノ酸１０１〜３４６内のエピトープに結合し、（ｂ）抗原陽性ＴＦ−１細胞におけるＩＬ３依存増殖を阻害する抗体またはその抗原結合断片である。
【０１９６】
第１１の具体的な実施形態では、第１〜第１０の具体的な実施形態のイムノコンジュゲートに関して、ＣＢＡは、
ａ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域と、を含む抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片である。
【０１９７】
第１２の具体的な実施形態では、第１〜第１１の具体的な実施形態のイムノコンジュゲートに関して、ＣＢＡは、配列番号７のＶＨ配列、及び配列番号９のＶＬ配列を含む抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片である。
【０１９８】
第１３の具体的な実施形態では、第１〜第１１の具体的な実施形態のイムノコンジュゲートに関して、ＣＢＡは、ａ）配列番号８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、ｂ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む抗ＣＤ１２３抗体である。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、上記の第１〜第１３の具体的な実施形態に記載されるイムノコンジュゲートに関して、ｗＣは、２である。
【０２００】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、上述の第１〜第１３の具体的な実施形態に記載されるイムノコンジュゲート）に関して、イムノコンジュゲートを含む組成物中の抗体分子当たりのＣｙＣｙｓによって表される細胞毒性薬物の数の平均比（すなわち、ｗＣの平均値、「ＤＡＲ」とも称される）は、１．５〜２．１、１．６〜２．１、１．７〜２．１、１．８〜２．１、１．５〜２．０、１．６〜２．０、１．７〜２．０、または１．８〜２．０の範囲である。ある特定の実施形態では、ＤＡＲは、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、または２．１である。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、本発明のイムノコンジュゲートは、細胞結合剤（ＣＢＡ）（以下の第１４〜第２６の具体的な実施形態に記載されるイムノコンジュゲートなど）上に位置する１つ以上のリジン残基のε−アミノ基を介して、本明細書に記載される細胞毒性薬物と共有結合した、本明細書に記載される細胞結合剤（抗体またはその抗原結合断片を含む）を含む。
【０２０２】
第１４の具体的な実施形態では、イムノコンジュゲートは、次式：
【化６１】
2020534326.tif 000068
によって表され、式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化６２】
2020534326.tif 000069
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化６３】
2020534326.tif 000070
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒｘは、独立して、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、−ＮＲｅであり、
Ｒｅは、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ１−Ｒｋであり、
ｎ１は、２〜６の整数であり、
Ｒｋは、−Ｈまたは−Ｍｅであり、
Ｚｓは、次式：
【化６４】
2020534326.tif 000071
のうちのいずれか１つから選択され、
式中、
ｑは、１〜５の整数であり、
Ｍ＋は、−Ｈ＋またはカチオンである。
【０２０３】
第１５の具体的な実施形態では、式（ＩＢ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｒｘは、独立して、−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは各々、独立して、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２、または３であり、残りの変数は、第１４の具体的な実施形態に記載される。
【０２０４】
第１６の具体的な実施形態では、式（ＩＢ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｒｆ及びＲｇは、同一であるか、または異なり、かつ−Ｈ及び−Ｍｅから選択され、残りの変数は、第１５の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２０５】
第１７の具体的な実施形態では、式（ＩＢ）のイムノコンジュゲートに関して、イムノコンジュゲートは、
【化６５】
2020534326.tif 000072
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは、１〜１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
【化６６】
2020534326.tif 000073
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、残りの変数は、第１４の具体的な実施形態に記載される。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、ＮとＣとの間の二重線
【化６７】
2020534326.tif 000074
は、単結合を表し、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＳＯ３Ｈである。
【０２０７】
第１８の具体的な実施形態では、式（ＩＢ）のイムノコンジュゲートに関して、イムノコンジュゲートは、
【化６８】
2020534326.tif 000075
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、変数は、第１３の具体的な実施形態に記載される。
【０２０８】
第１９の具体的な実施形態では、第１４〜第１８の具体的な実施形態のイムノコンジュゲートに関して、ＣＢＡは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖と、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖と、を含む抗ＣＤ３３抗体である。
【０２０９】
第２０の具体的な実施形態では、イムノコンジュゲートは、次式：
【化６９】
2020534326.tif 000076
によって表され、式中、
ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片であり、式中、ＣＢＡは、ＣＢＡ上に位置する１つ以上のリジン残基のε−アミノ基を介してＣｙＬｙｓ１に連結され、
ＷＬは、１〜２０の整数であり、
ＣｙＬｙｓ１は、次式：
【化７０】
2020534326.tif 000077
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化７１】
2020534326.tif 000078
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ４）アルキルであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、
Ｒ１は、−Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ１は、アミノ酸残基または２〜５個のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して、−Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン化基Ｑであり、
ｍは、１〜６の整数である。
【０２１０】
第２１の具体的な実施形態では、式（ＩＣ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｒａ及びＲｂは、両方ともＨであり、Ｒ１は、ＨまたはＭｅであり、残りの変数は、第２０の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１１】
第２２の具体的な実施形態では、式（ＩＣ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｐは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２１）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号２２）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｍｅｔ、及びＭｅｔ−Ａｌａから選択され、残りの変数は、第２０または第２１の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１２】
第２３の具体的な実施形態では、式（ＩＣ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｐは、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、またはＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａであり、残りの変数は、第２０または第２１の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１３】
第２４の具体的な実施形態では、式（ＩＣ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｑは、−ＳＯ３Ｈであり、残りの変数は、第２０、第２１、第２２、または第２３の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１４】
第２５の具体的な実施形態では、式（ＩＡ）のイムノコンジュゲートに関して、Ｑは、Ｈであり、残りの変数は、第２０、第２１、第２２、または第２３の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１５】
第２６の具体的な実施形態では、式（ＩＣ）のイムノコンジュゲートに関して、イムノコンジュゲートは、次式：
【化７２】
2020534326.tif 000079
によって表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
【化７３】
2020534326.tif 000080
は、単結合または二重結合を表すが、但し、二重結合である場合、Ｘは、不在であり、Ｙは、−Ｈであり、単結合である場合、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｈであることを条件とし、残りの変数は、第２０の具体的な実施形態に記載される通りである。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、ＮとＣとの間の二重線
【化７４】
2020534326.tif 000081
は、単結合を表し、Ｘは、−Ｈであり、Ｙは、−ＳＯ３Ｈである。ある特定の実施形態では、ＣＢＡは、抗体またはその抗原結合断片である。
【０２１７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるイムノコンジュゲート（例えば、上述の第１４〜第２６の具体的な実施形態に記載されるイムノコンジュゲート）に関して、イムノコンジュゲートを含む組成物中の抗体分子当たりのＣｙＬｙｓ１またはＣｙＬｙｓ２によって表される細胞毒性薬物の数の平均比（すなわち、ｗＬの平均値）（「ＤＡＲ」とも称される）は、１．０〜５．０、１．５〜４．０、２．０〜３．５、または２．５〜３．０の範囲である。ある特定の実施形態では、ＤＡＲは、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０である。ある特定の実施形態では、ＤＡＲは、２．８または２．７である。
【０２１８】
一実施形態では、第１９の具体的な実施形態に記載されるイムノコンジュゲートのＤＡＲ値は、２．４〜３．０の範囲である。一実施形態では、ＤＡＲは、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３．０である。別の実施形態では、ＤＡＲ値は、２．８である。
【０２１９】
７．使用方法
本明細書に記載される医薬組成物は、局所または全身治療のいずれかのために任意の数の方法で投与され得る。投与は、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐剤、スプレー、液体、及び粉末などの局所（膣及び直腸送達を含む粘膜になど）；肺（例えば、ネブライザーによるものを含む、粉末もしくはエアロゾルの吸入または吹送により；気管内、鼻腔内、表皮、及び経皮）；経口；または静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋肉内注射または注入を含む非経口；あるいは頭蓋内（例えば、くも膜下腔内または脳室内）投与であり得る。いくつかの特定の実施形態では、投与は静脈内である。本明細書に記載される医薬組成物は、インビトロまたはエクスビボでも使用され得る。
【０２２０】
本発明の医薬組成物は、併用療法として、第２の化合物、例えば、関心の疾患または障害の治療に有効であることが知られているものと共に使用することができる。いくつかの実施形態では、第２の化合物は、抗がん剤である。いくつかの実施形態では、本方法は、医薬組成物単独の投与と比較してより良い効力をもたらす第２の化合物及び本発明の医薬組成物の投与を包含する。第２の化合物は、例えば、局所、肺、経口、非経口、または頭蓋内投与を含む、任意の数の方法により投与され得る。いくつかの実施形態では、投与は経口である。いくつかの実施形態では、投与は静脈内である。いくつかの実施形態では、投与は、経口及び静脈内の両方である。
【０２２１】
本発明の医薬組成物は、鎮痛薬または他の薬物と共に、医薬組み合わせ製剤、または併用療法としての投与レジメンにおいて組み合わせることもできる。
【０２２２】
本発明の医薬組成物は、抗がん特性を有する第２の化合物と共に、医薬組み合わせ製剤、または併用療法としての投与レジメンにおいて組み合わせることもできる。医薬組み合わせ製剤または投与レジメンの第２の化合物は、それらが互いに悪影響を及ぼさないように、組み合わせのＡＤＣに対して相補的な活性を有し得る。
【０２２３】
本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における異常な細胞成長を阻害するか、または増殖障害を治療する方法を含み、該哺乳動物に、治療有効量の本発明の医薬組成物を、単独でまたは第２の治療薬と組み合わせて投与することを含む。
【０２２４】
ある特定の実施形態では、哺乳動物における異常な細胞成長または増殖障害は、血液癌、白血病、またはリンパ腫を含むがんである。ある特定の実施形態では、増殖障害は、リンパ器官のがんまたは血液悪性腫瘍である。
【０２２５】
例えば、がんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ、ＣＤ３３低ＡＭＬ、Ｐ糖タンパク質陽性ＡＭＬ、再発ＡＭＬ、または不応性ＡＭＬを含む）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（ＣＭＬの急性転化及びＣＭＬに関連するエーベルソンがん遺伝子（Ｂｃｒ−ＡＢＬ転座）を含む）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（限定されないが、急性Ｂリンパ芽球性白血病またはＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）を含む）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（リヒター症候群またはＣＬＬのリヒター形質転換、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）を含む）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、Ｂ細胞慢性リンパ増殖性疾患（Ｂ−ＣＬＰＤ）、非定型慢性リンパ球性白血病（好ましくは顕著なＣＤ１１ｃ発現を伴う）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（マントル細胞白血病（ＭＣＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含む）、ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症、及びバーキットリンパ腫からなる群から選択され得る。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、Ｂ−ＡＬＬは、ＣＤ１９陽性Ｂ−ＡＬＬである。ある特定の他の実施形態では、Ｂ−ＡＬＬは、ＣＤ１９陰性Ｂ−ＡＬＬである。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、がんは、少なくとも１つの負の予後因子、例えば、Ｐ糖タンパク質の過剰発現、ＥＶＩ１の過剰発現、ｐ５３の変化、ＤＮＭＴ３Ａ変異、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複を有する。
【０２２８】
がん療法、ならびにそれらの投薬量、投与経路、及び推奨使用法は、当該技術分野で知られており、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）などの文献に記載されている。ＰＤＲは、様々ながんの治療に使用されている薬剤の投薬量を開示する。治療上有効である投与レジメン及びそれらの前述の化学療法薬の投薬量は、治療される特定のがん、疾患の程度、及び当該技術分野の医師に知られている他の要因に依存し、医師によって決定され得る。ＰＤＲの内容は、参照によりその全体が本明細書に明示的に組み込まれる。当業者は、次のパラメータのうちの１つ以上を使用して、本発明の教示に従い使用され得る投与レジメンならびに化学療法薬及びコンジュゲートの投薬量を決定するためにＰＤＲを見直してもよい。これらのパラメータは、総合索引；製造業者；製品（会社名または商標薬物名）；カテゴリー索引；ジェネリック／化学索引（非商標の一般的な薬物名）；薬物の色画像；製品情報、ＦＤＡ表示と一致；化学情報；機能／作用；兆候＆禁忌；治験研究、副作用、警告を含む。
【０２２９】
インビトロ使用の例には、疾患細胞もしくは悪性細胞を殺傷するために、同じ患者に移植する前に自家骨髄を治療する；コンピテントＴ細胞を殺傷し、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するために、移植前に骨髄を治療する；標的抗原を発現しない所望の変異型を除くすべての細胞を殺傷するために、または望ましくない抗原を発現する変異型を殺傷するために、細胞培養物を治療することが含まれる。
【０２３０】
非臨床のインビトロ使用の条件は、当業者によって容易に決定される。
【０２３１】
臨床のエクスビボ使用の例は、がん治療または自己免疫疾患の治療において、自家移植前に腫瘍細胞もしくはリンパ球細胞を骨髄から除去すること、またはＧＶＨＤを予防するために、移植前にＴ細胞及び他のリンパ球細胞を自家もしくは同種骨髄または組織から除去することである。治療は次のように行うことができる。骨髄は、患者または他の個体から採取され、次いで、約３７℃で約３０分間〜約４８時間、１０μΜ〜１ｐＭの範囲のイムノコンジュゲートの濃度で、本発明の医薬組成物を添加される血清を含有する培地中でインキュベートされる。濃度及びインキュベーション時間の正確な条件、すなわち、用量は、当業者により容易に決定される。インキュベーション後、骨髄細胞を、血清を含有する培地で洗浄し、既知の方法に従い、静脈内に患者に戻される。患者が骨髄の採取時と治療した細胞の再注入時との間に一連の切除化学療法または全身照射などの他の治療を受ける場合、治療した骨髄細胞は標準的な医療器具を使用して、液体窒素中で冷凍保存される。
【０２３２】
臨床のインビボ使用に関して、本発明の細胞毒性化合物またはコンジュゲートは、減菌及び内毒素レベルに関して試験される溶液または凍結乾燥粉末として供給される。
【０２３３】
選択された細胞集団における細胞死を誘導するための、細胞成長を阻害するための、及び／またはがんを治療するための本発明の方法は、インビトロ、インビボ、またはエクスビボで実施され得る。
【実施例】
【０２３４】
実施例１．ＩＭＧＮ６３２コンジュゲーション反応におけるメチオニンベースの抗酸化剤の添加
還元状態で２つの操作されたシステイン残基（重鎖ＣＨ３領域のＣ４４２位置で）を保有するＧ４７２３Ａ抗体は、既知の方法による鎖間ジスルフィド結合の完全還元及び再酸化により調製された。５０ｍＭのリン酸カリウム、５０ｍＭの塩化ナトリウムｐＨ６．０中のこの中間体の溶液に、１０モル当量のＮ−アセチルメチオニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、プロピレングリコール、及び１０モル当量のｓＤＧＮ５４９−Ｃを添加して、５０ｍＭのリン酸カリウム、５０ｍＭの塩化ナトリウムｐＨ６．０中２％ｖ／ｖのＤＭＡ及び３８％ｖ／ｖのプロピレングリコールの最終溶媒組成物の反応混合物を得た。２５℃で一晩、反応を進行させた。
【０２３５】
コンジュゲートを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５脱塩カラムを使用して、１０ｍＭのコハク酸、８％のトレハロース二水和物、１ｍＭのメチオニン、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ４．２製剤緩衝液中に精製し、１０ｋＤａ分子量カットオフの再生セルロース膜を通して限外濾過により濃縮し、０．２２μｍのシリンジフィルタを通して濾過した。１０ｋＤａ分子量カットオフの透析カセットを使用して、コンジュゲートを同じ製剤緩衝液に対して透析し、０．２２μｍのシリンジフィルタを通して再度濾過した。
【０２３６】
精製したコンジュゲートは、ＵＶ−Ｖｉｓにより平均２ｍｏｌのｓＤＧＮ５４９／ｍｏｌ抗体、ＳＥＣにより９７．７％の単量体、及びタンデム型ＳＥＣ−Ｃ１８  ＲＰＬＣにより０．７％のコンジュゲートしていないＤＧＮ５４９を有することが分かった。表１に示されるように、メチオニン添加剤は、添加剤なしのコンジュゲーション反応と比較して、コンジュゲーションの収率及びコンジュゲートの品質に影響を及ぼさない。加えて、反応にメチオニン添加剤及び製剤にメチオニンを含むことにより、Ｍｅｔ２５６（免除番付またはＥＵ番付においてＭｅｔ２５２）の酸化パーセンテージが低減されるように思われる。
【０２３７】
抗体の細胞毒性薬物へのリジン連結コンジュゲーションは、１０モル当量のＮ−アセチルメチオニンエステル及び５モル当量のＤＧＮ５４９−Ｌ（２５℃で４時間、ＤＭＡ及び５０ｍＭのコハク酸ｐＨ５．５の９５：５混合物において５倍過剰の亜硫酸水素ナトリウムにより調製された）が使用されることを除き、同等の反応条件に従う。
表１．反応におけるＩＭＧＮ６３２コンジュゲーション＋／−  Ｎ−アセチルメチオニン及び製剤における＋／−メチオニン
【表６】
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【０２３８】
実施例２．ＩＭＧＮ６３２のメチオニン酸化及び光安定性研究
ＩＭＧＮ６３２試料において観察された高レベルのメチオニン酸化の原因をさらに検証し、メチオニン酸化レベルを低減するための方法を決定するために、３つの実験を行った：１）凍解及び安定性研究、２）メチオニンスパイク研究、ならびに３）白色光実験研究。
【０２３９】
研究１では、酸化レベルに対する保存バイアルの種類の影響の可能性を評価し、窒素オーバーレイを使用した酸化レベルの低減を決定し、酸化に対する温度の影響を評価し、異なる光波長への曝露を評価し、凍解サイクルの影響を評価した。表２に見られるように、初期の実験傾向は、メチオニン酸化レベルに対してバイアルの種類の明らかな大きな影響はなかったことを示す。窒素オーバーレイは保護的であり得るが、これらの実験の結果は決定的ではなかった。メチオニン酸化に対する温度の大きな影響もなかった。表３は、メチオニン酸化レベルに対するＵＶ及び卓上光への曝露の結果を提供する。卓上光またはＵＶ光への曝露は、６時間後に高レベルのメチオニン酸化を生じさせる。これらの結果は、アルミ箔にバイアルを包むことによって光から保護することが経時的な酸化レベルを抑える有効な方法であり得ることを示唆する。表４は、凍解（２時間／サイクル）中の光への曝露は酸化を生じさせるが、光保護による凍解自体はメチオニン酸化に大きな影響はないことを示す。
表２．バイアルの種類及び窒素オーバーレイ
【表７】
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表３．ＵＶ及び卓上光への曝露
【表８】
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表４．凍解結果
【表９】
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【０２４０】
研究２では、ＩＭＧＮ６３２及び抗体単独（Ｇ４７２３Ａ）の製剤における異なる濃度のメチオニンのスパイク及び酸化に対するその効能を、室温で６時間のＵＶ曝露により試験した。表５に見られるように、製剤緩衝液における１〜３ｍＭのレベルでのメチオニンスパイクは、イムノコンジュゲート製剤においてメチオニン酸化を防止することができる。驚くべきことに、イムノコンジュゲート製剤緩衝液に希釈され、露光されたＧ４７２３Ａ抗体単独は、酸化を受けず、抗体におけるメチオニン酸化が、コンジュゲーションプロセス、または抗体が溶液中でイムノコンジュゲートとして存在する場合、ペイロードの存在に関連することを示唆する。
表５．メチオニンスパイク及び抗体対照
【表１０】
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【０２４１】
研究３では、イムノコンジュゲート試料を、製剤中０ｍＭ、１ｍＭ、または３ｍＭのメチオニンと共に、２５℃で７２時間、４ｋＬｕｘの白色光に曝露した。メチオニン酸化パーセント、単量体パーセント、高分子量パーセント、遊離薬物濃度、及びＤＡＲを測定した。
【０２４２】
図１は、製剤において少なくとも１ｍＭのメチオニンの添加が、溶液が露光されるときに、経時的なメチオニン酸化レベルを低減し得ることを示す。これらの結果は、ＤＧＮ５４９などのＤＮＡアルキル化ペイロードを含有するイムノコンジュゲートの製剤におけるメチオニン（１ｍＭ〜３ｍＭのメチオニン）の添加をさらに支持する。図２及び３は、経時的な露光により、製剤中のメチオニンの存在または不在下の単量体パーセントがわずかに減少し、製剤中のメチオニンの存在または不在下の高分子量種のパーセントが増加することを示す。図４は、露光によりペイロード（ＤＧＮ５４９）が分解され、遊離薬物を増加させることを示す。しかしながら、表６に見られるように、濃度／ＤＡＲに対する露光の影響は最小〜影響なしである。
表６．濃度（ｍｇ／ｍＬ）及びＤＡＲ結果
【表１１】
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【０２４３】
実施例３．ＵＶ検出によるイムノコンジュゲートにおけるメチオニン酸化の監視
ＵＶ検出による２つの操作されたシステイン残基（重鎖ＣＨ３領域の位置４４２）を保有するＧ４７２３Ａ抗体のメチオニン酸化を監視するための分析方法を開発した。質量分析検出法によるプラットホームペプチドマッピングの条件を最適化して、質量分析検出ステップをＵＶ検出に置き換えた。図５Ａ及び５Ｂに見られるように、酸化及び未変性トリプシンペプチドは、原理上、質量分析ならびにＵＶ検出法を使用して特定することができ、したがって、プラットホーム方法の最適化は、メチオニン酸化を監視するためのＵＶ検出の互換的な使用を可能にするはずである。プラットホーム方法の最適化条件は、次のステップからなる：
●７０℃で１０〜１５分間、４．５ＭのグアニジンＨＣｌ、１．２Ｍのトリス、１０ｍＭのＥＤＴＡ、７ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ７．８を使用する、試料変性
●ＤＴＴクエンチすることなく、室温の暗所で４５分間、７μＬの１Ｍのインドール−３−酢酸（ＩＡＡ）を使用する、試料アルキル化
●最大反応体積（５０７μＬ）を充填し、４００μＬで洗浄し、５０ＭＭのトリス、１０ｍＭの塩化カルシウム、５ｍＭのメチオニン、ｐＨ８．０の３００μＬで溶出する、Ｉｌｌｕｓｔｒａ  ＮＡＰ−５精製カラムを用いた、緩衝液交換
●３７℃で１時間、１：３３のトリプシン：抗体比でのトリプシンの消化、ＴＦＡでの試料のクエンチ、及びＨＰＬＣバイアルへの移動
●ＵＶ検出によるＵＰＬＣでの試料分析
【０２４４】
上記ステップを使用して、メチオニン酸化は、関心の酸化範囲において、ペプチドマッピング−質量分析検出法と同等の結果で、ＵＰＬＣ−ＵＶ検出により良好に定量化され得る。特に、ペプチドマッピングステップは、試料調製及び試料実行時間に関して最適化された（すなわち、調製及び実行時間の短縮）。さらに、ＵＶ検出ステップの感度は、緩衝液交換溶出／収集体積を最適化し（すなわち、より濃縮された回収された試料）、試料注入体積を増加させる（すなわち、１０〜５０μＬの注入体積）ことにより改善された。
【０２４５】
実施例４．ＩＭＧＮ６３２及びＩＭＧＮ７７９の光安定性研究
メチオニンを含むまたは含まないＩＭＧＮ６３２及びＩＭＧＮ７７９のイムノコンジュゲート試料を、経時的に室温で、約１０００ｌｕｘの白色光に曝露した。Ｍｅｔ２５２でのメチオニン酸化のパーセンテージを経時的に測定した。次のイムノコンジュゲート試料の光安定性を試験した：
（１）メチオニンを含まないＩＭＧＮ７７９：２ｍｇ／ｍｌのＩＭＧＮ７７９、２０ｍＭのヒスチジン、８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物（７．２％ｗ／ｖのトレハロースとも称される）、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、及び５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、ｐＨ６．１
（２）メチオニンを含むＩＭＧＮ７７９：２ｍｇ／ｍｌのＩＭＧＮ７７９、２０ｍＭのヒスチジン、８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物（７．２％ｗ／ｖのトレハロースとも称される）、０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、及び３ｍＭのメチオニン、ｐＨ６．１。
（３）メチオニンを含まないＩＭＧＮ６３２：２ｍｇ／ｍＬのＩＭＧＮ６３２、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物（７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロースとも称される）、及び０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、ｐＨ４．２。
（４）メチオニンを含むＩＭＧＮ６３２：２ｍｇ／ｍＬのＩＭＧＮ６３２、１０ｍＭのコハク酸、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、８．０％（ｗ／ｖ）のトレハロース二水和物（７．２％（ｗ／ｖ）のトレハロースとも称される）０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０、及び３ｍＭのメチオニン、ｐＨ４．２。
【０２４６】
図６に示されるように、ＩＭＧＮ７７９製剤（３ｍＭのメチオニンを含まない）が室温で約１０００ｌｕｘの白色光に曝露されるとき、Ｍｅｔ２５２残基の酸化が７日間にわたって１８〜７４％に増加した。同等の条件下で、３ｍＭのメチオニンを含有するＩＭＧＮ７７９製剤に関して、メチオニン酸化の増加はほとんどまたは全く観察されなかった。同等の結果がＩＭＧＮ６３２イムノコンジュゲートに関して観察された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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