(57)【要約】  ＳＴＩＮＧの調節によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は障害を治療するための化合物、組成物及び方法が開示される。このような化合物は次の式（Ｉ）で表される：    【化１】2020500862.tif 000068  式中、Ｒ1A、Ｒ1B、Ｒ1c、Ｂ1、Ｒ2A及びＲ2Bは、本明細書で定義される。
2020500862.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2020500862.tif 000056
［式中、Ｒ1Aは、ヒドロキシ又はフルオロであり、Ｒ1Cは水素であり、
又は、Ｒ1AとＲ1Cが、これらが結合する原子と共に５員環を形成するように、Ｒ1Aは−Ｏ−であり、Ｒ1CはＣＨ2であり；
Ｒ1Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
Ｂ1は、環ｂ１及びｂ２からなる群から選択され、
【化２】
2020500862.tif 000057
Ｒ2Aは、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から選択され；
Ｒ2Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
但し、式（Ｉ）の化合物は、
（１Ｒ，６Ｒ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１５Ｒ，１７Ｒ，１８Ｒ）−１７−（２−アミノ−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−９−イル）−８−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−９−フルオロ−３，１２，１８−トリヒドロキシ−２，４，７，１１，１３，１６−ヘキサオキサ−３λ5，１２λ5−ジホスファトリシクロ［１３．２．１．０6，10］オクタデカン−３，１２−ジオン，ビスアンモニウム塩以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容可能な塩形態。
【請求項２】
Ｂ1が、
【化３】
2020500862.tif 000058
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物
【化４】
2020500862.tif 000059
であって、以下
【化５】
2020500862.tif 000060
【化６】
2020500862.tif 000061
【化７】
2020500862.tif 000062
【化８】
2020500862.tif 000063
【化９】
2020500862.tif 000064
【化１０】
2020500862.tif 000065
【化１１】
2020500862.tif 000066
【化１２】
2020500862.tif 000067
からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び医薬的に許容される希釈剤のうち少なくとも１つとを含む、医薬組成物。
【請求項５】
前記組成物が、固体の経口投与形態である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記組成物が、シロップ剤、エリキシル剤又は懸濁剤である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
請求項３に記載の化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び医薬的に許容される希釈剤のうち少なくとも１つとを含む、医薬組成物。
【請求項８】
ＳＴＩＮＧによって調節される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項９】
疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、前記疾患、症候群又は状態が、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるものであり、当該治療を必要とする対象に治療有効量の請求項１に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項１０】
前記疾患、症候群又は状態が、癌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌が、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患、症候群又は状態が、ウイルス感染である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、該治療を必要とする対象に、治療有効量の請求項４に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１５】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療するための医薬を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
ウイルス感染、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌及び線維肉腫からなる群から選択される疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において前記疾患、症候群又は状態を治療する方法において使用するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
前記ウイルス感染が、Ｂ型肝炎である、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項３に記載の化合物の投与を必要とする対象に、治療有効量の請求項３に記載の化合物を投与することを含む、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１６年１１月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／４２６３５０号、２０１７年５月８日に出願された米国仮特許出願第６２／５０２，９８３号、２０１７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５５５，２３２号に対する優先権を主張し、これらの特許は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ＳＴＩＮＧ（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｓ；インターフェロン遺伝子刺激因子）のアゴニストであり、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節によって影響を受ける障害の治療に有用な、新規化合物に関する。本発明はまた、かかる化合物のうちの１つ以上を含む医薬組成物、かかる化合物及び組成物の調製プロセス、及び様々な疾患、症候群及び障害を治療するためのかかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。本発明は、下流のシグナル伝達経路の活性化に関与していてもよく、更に第２のメッセンジャー及び増殖因子を活性化し、先天性免疫及び適応免疫に関与するインターフェロンの産生に関与し得る。より具体的には、本発明は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及び抗ウイルス療法を含む種々の感染、疾患、症候群及び障害の治療のための、かかる化合物又は医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）は、ＴＭＥＭ１７３、ＭＩＴＡ、ＭＰＹＳ及びＥＲＩＳとしても知られ、細胞内部に位置する膜貫通受容体であり、細胞質核酸の重要なセンサーである（Ｚｈｏｎｇ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．「Ｔｈｅ  Ａｄａｐｔｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭＩＴＡ  Ｌｉｎｋｓ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｅｎｓｉｎｇ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｔｏ  ＩＲＦ３  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．」Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００８．ｖｏｌ．２９：５３８−５５０）。最近の研究により、ＳＴＩＮＧの生物学と、マウスモデルにおいて堅牢な抗腫瘍活性をもたらす先天性免疫反応を動員する際の役割とが明らかになってきた。ＳＴＩＮＧ経路の活性化によって、ＩＲＦ３（インターフェロン調節因子３）経路によるＩ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生が誘導される。ＩＲＦ３の活性化はＴＢＫ１によって介在されると考えられており、ＴＢＫ１は、ＩＲＦ３を動員及びリン酸化させることにより、核に移行してＩ型インターフェロン及びその他の遺伝子を転写させ得るＩＲＦ３ホモ二量体を形成させる（Ｌｉｕ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．「Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｄａｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＭＡＶＳ，ＳＴＩＮＧ，ａｎｄ  ＴＲＩＦ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ＩＲＦ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ」  Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１５：２６３０−２６３７）。ＴＢＫ１はまた、癌原性転写因子ＮＦ−κＢを介し活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサーをも活性化させ、これにより炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなど）の産生が誘導される。これに加えて、ＳＴＩＮＧは、ＳＴＡＴ６（シグナル伝達性転写因子６）を活性化し、ケモカインＣＣＬ２、ＣＣＬ２０及びＣＣＬ２６を含む種々のサイトカインの産生を誘導し（Ｔｈ２型）、増加させ（ＩＬ−１２）、又は減少させる（ＩＬ−１０）（Ｃｈｅｎ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴ６  ｂｙ  ＳＴＩＮＧ  Ｉｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ」Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６）。活性化時のＳＴＩＮＧのＳｅｒ３６６の直接的なリン酸化もまた、ＴＢＫ１を介して起こることが報告されている（Ｃｏｒｒａｌｅｓ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ「Ｄｉｒｅｃｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ」  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１５，ｖｏｌ．１１：１−１３；Ｋｏｎｎｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｔｒｉｇｇｅｒ  ＵＬＫ１  （ＡＴＧ１）  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＩＮＧ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ」Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．１５５：６８８−６９８）。
【０００４】
ＳＴＩＮＧ（２’，３’）環状グアノシンモノホスフェート−アデノシンモノホスフェート（２’，３’−ｃＧＡＭＰ）に結合し、これを活性化させる天然リガンドと、その合成に関与する酵素（ｃＧＡＳ、Ｃ６ｏｒｆ１５０又はＭＢ２１Ｄ１としても知られている）は、この経路を調節する機会を提供することが解明されている。ｃＧＡＭＰは、ＳＴＩＮＧ経路を活性化するための内因性の二次メッセンジャーとして機能する、哺乳動物細胞において産生されるＳＴＩＮＧの高親和性リガンドである。ｃＧＡＭＰは、外因性二本鎖ＤＮＡの存在下（例えば、細菌、ウイルス又は原虫の侵入により放出される）、又は哺乳動物の自己ＤＮＡの存在下でｃＧＡＳによって生成する固有の２’，３’結合を有する環状ジヌクレオチドである（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｓｕｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  Ｓｙｎｔｈａｓｅ  Ｉｓ  ａ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  Ｓｅｎｓｏｒ  Ｔｈａｔ  Ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｈｅ  Ｔｙｐｅ  Ｉ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｐａｔｈｗａｙ」Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，ｖｏｌ．３３９：７８６−７９１；Ｂｈａｔ  Ｎ及びＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ  ＫＡ．「Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ＤＮＡ  ｂｙ  ｃＧＡＳ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ＳＴＩＮＧ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｅｎｓｏｒｓ．」Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４  Ｍａｒ；４４（３）：６３４−４０）。ＳＴＩＮＧ活性化はまた、侵入してきた細菌によって放出される外因性（３’，３）環状ジヌクレオチド（ｃ−ジ−ＧＭＰ、ｃ−ジ−ＡＭＰ及び３’３’−ｃＧＡＭＰ）の結合によって起こり得る（Ｚｈａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．「Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｍｉｘｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ  Ｌｉｎｋａｇｅｓ  Ｉｓ  Ａｎ  Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｈｉｇｈ−Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＳＴＩＮＧ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，２０１３，ｖｏｌ．５１：２２６−２３５；Ｄａｎｉｌｃｈａｎｋａ，Ｏ及びＭｅｋａｌａｎｏｓ，ＪＪ．「Ｃｙｃｌｉｃ  Ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ」Ｃｅｌｌ．２０１３．ｖｏｌ．１５４：９６２−９７０）。
【０００５】
ＳＴＩＮＧ経路の活性化は、特異的なキラーＴ細胞を生成する免疫反応を引き起こし、このキラーＴ細胞が、腫瘍を収縮させ、かつ再発しないように長く持続する免疫を与えることができる。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な抗腫瘍活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、癌を治療するのと、自己免疫疾患を減らすのとの両方の可能性がある。
【０００６】
ＳＴＩＮＧ経路の活性化はまた、抗ウイルス応答にも関与する。細胞又は生物レベルのいずれかでの機能性応答の喪失は、ＳＴＩＮＧが存在しないとウイルス負荷を制御することができないことを示す。ＳＴＩＮＧ経路の活性化が免疫応答のトリガーとなり、その結果、ウイルスに対抗し免疫系の先天性及び適応性のアームを動員する抗ウイルス性及び炎症性サイトカインが得られる。最終的に、長期持続性の免疫が、病原性ウイルスに対して発達する。前臨床モデルにおいてＳＴＩＮＧアゴニストを用いて得られた顕著な腫瘍活性は、この標的について高レベルの興奮を作り出し、ＳＴＩＮＧ経路を調節し得る低分子化合物は、慢性ウイルス感染（例えばＢ型肝炎）を治療する可能性がある。
【０００７】
慢性肝炎Ｂ型ウイルス（ＨＢＶ）への感染は重要な世界的健康問題であり、世界人口の５％以上が感染している（世界中で３億５千万人以上、米国内では１２５万人の患者）。特定のＨＢＶワクチン及び治療が利用可能ではあるが、慢性ＨＢＶ感染の負担は、発展途上国の大部分では治療選択肢が最適とは言えず、また新たな感染の割合が依然高いことから、重要な未解決の世界的な医療上の問題であり続けている。現在の治療は、ウイルスポリメラーゼの阻害剤として作用するインターフェロンα及びヌクレオシド類似体といった２種類の薬剤のみに限定されている。しかしながら、これらの療法のなかに疾患を治癒するものはなく、かつ薬物耐性、低有効性、及び忍容性についての課題によりその効果が制限される。ＨＢＶの治癒率が低いのは、少なくとも一部では、単一の抗ウイルス剤によりウイルス産生を完全に抑制することが困難であるとの事実に起因する。しかしながら、ＨＢＶ  ＤＮＡの持続的な抑制は、肝臓疾患の進行を遅らせ、肝細胞癌の防止につながる。ＨＢＶ感染患者の現在の治療目標は、血清中のＨＢＶのＤＮＡを低いレベル、又は検出不能なレベルにまで低減させ、最終的には肝硬変及び肝細胞癌の発症を低下又は防止することにある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ウイルス産生の抑制を高めることができ、ＨＢＶ感染を治療、寛解、又は予防することができる治療剤が当該技術分野で必要とされている。単独療法として、又は他のＨＢＶ治療若しくは補助的治療との併用で、ＨＢＶ感染した患者に対しかかる治療剤を投与することによって、ウイルス量の大幅な減少、予後の改善、疾患進行の減少、及びセロコンバージョン率の向上がもたらされる。
【０００９】
先天性免疫及び適応免疫の両方を強化する潜在的な治療効果は、ＳＴＩＮＧを、それ自体による刺激活性を示し、他の免疫療法と組み合わせることもできる、魅力的な治療標的にする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【００１１】
【化１】
2020500862.tif 000003
［式中、
Ｒ1Aは、ヒドロキシ若しくはフルオロであり、Ｒ1Cは水素であり、又は、Ｒ1AとＲ1Cが、これらが結合する原子と共に５員環を形成するように、Ｒ1Aは−Ｏ−であり、Ｒ1CはＣＨ2であり；
Ｒ1Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
Ｂ1は、環ｂ１及びｂ２からなる群から選択され、
【００１２】
【化２】
2020500862.tif 000004
Ｒ2Aは、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から選択され；
Ｒ2Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
但し、式（Ｉ）の化合物は、（１Ｒ，６Ｒ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１５Ｒ，１７Ｒ，１８Ｒ）−１７−（２−アミノ−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−９−イル）−８−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−９−フルオロ−３，１２，１８−トリヒドロキシ−２，４，７，１１，１３，１６−ヘキサオキサ−３λ5，１２λ5−ジホスファトリシクロ［１３．２．１．０6，10］オクタデカン−３，１２−ジオン，ビスアンモニウム塩以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００１３】
同様に、本発明はまた、医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、及び／又は医薬的に許容可能な希釈剤と、式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容可能な塩形態とを含むか、又はそれらからなるか、かつ／又はそれらから本質的になる医薬組成物も提供する。
【００１４】
更に、式（Ｉ）の化合物と、医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、及び／又は医薬的に許容可能な希釈剤とを混合することを含む、それよりなる、及び／又は本質的にそれよりなる、医薬組成物を製造するためのプロセスが提供される。
【００１５】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。
【００１６】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。
【００１７】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態がＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象においてウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。
【００１８】
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を用い、哺乳動物及び／又はヒトを含む対象において、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療するか、又は改善するための方法を提供する。
【００１９】
本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調製される、医薬の調製における本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。
【００２０】
本発明はまた、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療を必要とする対象において当該疾患、症候群又は状態を治療するための医薬が調製される、医薬の調製における本明細書に記載のいずれかの化合物の使用に関する。
【００２１】
本発明はまた、ＳＴＩＮＧの選択的なアゴニストとして作用する置換環状ジヌクレオチド誘導体の調製に関する。
【００２２】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧによって調節されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与することを含む、方法である。
【００２３】
本発明の例示は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態を治療する方法であって、当該治療を必要とする対象に、治療有効量の上述の化合物又は医薬組成物のいずれかを投与することを含む、方法である。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２５】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択されるウイルス感染、疾患、症候群又は状態の治療のための式（Ｉ）の化合物を含む組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
置換基に関連して用いられる「独立して」という用語は、２個以上の置換基が存在し得る場合に、それらの置換基が互いに同じであっても異なってもよい状況を意味する。
【００２７】
単独で用いられるか又は置換基の一部として用いられるかによらず、「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味する。したがって、指定された炭素原子の数（例えば、Ｃ1〜8）は、独立して、アルキル部分又はより大きなアルキル含有置換基のアルキル部の炭素原子数を意味する。複数のアルキル基を有する置換基、例えば、（Ｃ1〜6アルキル）2アミノ−において、ジアルキルアミノのＣ1〜6アルキル基は、同じであっても異なってもよい。
【００２８】
「アルコキシ」という用語は、「アルキル」という用語を上記で定義されるものとして−Ｏ−アルキル基を意味する。
【００２９】
「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、２〜８個の炭素原子を有する、直鎖状及び分岐鎖状の炭素鎖を意味し、アルケニル鎖は、少なくとも１つの二重結合を含み、アルキニル鎖は、少なくとも１つの三重結合を含む。
【００３０】
「シクロアルキル」という用語は、飽和又は部分的に飽和の、単環式又は多環式の、３〜１４個の炭素原子の炭化水素環を意味する。このような環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びアダマンチルが挙げられる。
【００３１】
「ヘテロシクリル」という用語は、少なくとも１つの炭素原子とＮ、Ｏ及びＳから独立して選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む３〜１０個の環員を有する非芳香族の単環系又は二環系を意味する。ヘテロシクリルという用語の範囲には、１〜２員がＮである５〜７員の非芳香族環、又は０、１若しくは２員がＮであり、２員以下がＯ若しくはＳであり、少なくとも１員がＮ、Ｏ若しくはＳのいずれかでなければならない５〜７員の非芳香族環が含まれる。環は、所望により、０〜１個の不飽和結合を含んでいてよく、環が６又は７員である場合、所望により、２個以下の不飽和結合を含んでいてよい。ヘテロシクリルの環を構成する炭素原子は、完全に飽和していても部分的に飽和していてもよい。
【００３２】
「ヘテロシクリル」という用語はまた、架橋されることで二環式環を形成する２個の５員の単環式ヘテロシクロアルキル基も含む。このような基は、完全に芳香族性とはみなされず、ヘテロアリール基とは称されない。ヘテロシクリルが二環式の場合、ヘテロシクリルの両環は、非芳香環であり、かつ、少なくとも一方の環はヘテロ原子の環員を含む。ヘテロシクリル基の例としては、限定するものではないが、ピロリニル（２Ｈ−ピロール、２−ピロリニル又は３−ピロリニルを含む）、ピロリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、及びピペラジニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロシクリルは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。
【００３３】
「アリール」という用語は、６〜１０個の炭素員からなる、不飽和、芳香族性の単環又は二環の炭素環を指す。アリール環の例としては、フェニル及びナフタレニルが挙げられる。
【００３４】
「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子とＮ、Ｏ及びＳからなる群から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子とを含む５〜１０個の環員を有する芳香族性の単環式又は二環式の芳香環系を指す。ヘテロアリールという用語の範囲には、５又は６員の芳香環が含まれ、但し環は炭素原子からなり、少なくとも１個のヘテロ原子の環員を有する。適切なヘテロ原子としては、窒素、酸素、及び硫黄が挙げられる。５員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは、１員の窒素、酸素又は硫黄を含み、更に３個以下の更なる窒素を含む。６員環の場合、ヘテロアリール環は、好ましくは１〜３個の窒素原子を含む。６員環が３個の窒素原子を有する場合では、最大で２個の窒素原子が隣り合う。ヘテロアリール基の例としては、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル、イソキノリニル及びキナゾリニルが挙げられる。特に断らない限り、ヘテロアリールは、そのペンダント基と、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子又は炭素原子で結合している。
【００３５】
「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子を指す。
【００３６】
「アルキル」若しくは「アリール」という用語又はこれらの接頭辞の語根のいずれかが、置換基の名称中に現れる場合（例えば、アリールアルキル、アルキルアミノ）、名称は、「アルキル」及び「アリール」について上記に与えられた限定を含むものとして解釈されるものとする。指定される炭素原子数（例えば、Ｃ1〜Ｃ6）は、アルキル部分、アリール部分、又は、アルキルがその接頭辞の語根として現れる、より大きな置換基のアルキル部分の炭素原子数を独立して指す。アルキル及びアルコキシ置換基について、指定される炭素原子数は、指定された所定の範囲内に含まれる全ての独立した構成員を含む。例えば、Ｃ1〜6アルキルには、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル及びヘキシルを個々に含むだけでなく、それらの下位の組み合わせ（例えば、Ｃ1〜2、Ｃ1〜3、Ｃ1〜4、Ｃ1〜5、Ｃ2〜6、Ｃ3〜6、Ｃ4〜6、Ｃ5〜6、Ｃ2〜5など）も含まれる。
【００３７】
一般的に、本開示全体で使用される標準的な命名法の規則の下では、指定される側鎖の末端部分が最初に記載され、続けて結合点の方向に隣接する官能基が記載される。したがって、例えば、「Ｃ1〜Ｃ6アルキルカルボニル」置換基は下式の基：
【００３８】
【化３】
2020500862.tif 000005
を意味する。
【００３９】
立体中心における「Ｒ」という用語は、当該技術分野で定義されているように、その立体中心が純粋にＲ−配置であることを示す。同様に、用語「Ｓ」は、純粋にＳ−配置であることを意味する。本願明細書で使用する場合、立体中心における「*Ｒ」又は「*Ｓ」という用語は、その立体中心が純粋なものであるが、どちらの配置であるか不明であることを指定するのに使用される。本願明細書で使用する場合、「ＲＳ」という用語は、Ｒ−及びＳ−配置の混合物として存在する立体中心を意味する。同様に、「*ＲＳ」又は「*ＳＲ」という用語は、Ｒ配置及びＳ配置の混合物として存在し、その分子内の別の立体中心に関してその配置が不明である立体中心を意味する。
【００４０】
１個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、２つのエナンチオマーの混合物である。２個の立体中心を有する化合物であって、両方とも立体化学的結合の指定なしで図示されているものは、４つのジアステレオマーの混合物である。「ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、図示されている相対的な立体化学を有する２成分混合物である。「*ＲＳ」の両方で標識された２個の立体中心を有する化合物であって、立体化学的結合の指定を付して図示されているものは、相対的な立体化学が不明である２成分混合物である。立体化学的結合の指定なしで図示されている未標識の立体中心は、Ｒ−配置とＳ−配置との混合である。立体化学的結合の指定を付して図示されている未標識の立体中心は、その絶対的な立体化学は図示されたとおりのものである。
【００４１】
特に断らない限り、分子内の特定の位置における任意の置換基又はその変形物の定義は、その分子内の他の位置におけるその定義とは独立であることが意図されている。本発明の化合物における置換基及び置換パターンは、化学的に安定であり、かつ当技術分野において周知の技術及び本明細書で説明される方法により容易に合成できる化合物を提供するために、当業者が選択することができると理解される。
【００４２】
「対象」という用語は、治療、観察又は試験の対象となっている動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００４３】
「治療有効量」という用語は、治療される疾患、症候群、状態又は障害の症状の緩和若しくは部分的緩和を含む、研究者、獣医、医師、又は他の臨床専門家が得ようとする生物学的又は医薬的応答を組織系、動物又はヒトにおいて誘導する、本発明の化合物を含む活性化合物又は医薬品の量を指す。
【００４４】
「組成物」という用語は、治療有効量の特定の成分を含む生成物、並びに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接又は間接的にもたらされる任意の生成物を意味する。
【００４５】
「ＳＴＩＮＧアゴニスト」という用語は、ＳＴＩＮＧに結合することによってＳＴＩＮＧに作用し、ＳＴＩＮＧ機能に関連する分子の活性化によって特徴付けられる下流のシグナル伝達を誘導する、化合物を包含することを意図している。この用語には、ＳＴＩＮＧ、ＩＲＦ３及び／又はＮＦ−KＢの直接リン酸化反応も含まれ、ＳＴＡＴ６も含まれ得る。ＳＴＩＮＧ経路活性化によって、Ｉ型インターフェロン（主にＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β）の産生及びインターフェロン刺激遺伝子の発現が増加する（Ｃｈｅｎ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．「Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＴＡＴ６  ｂｙ  ＳＴＩＮＧ  Ｉｓ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」Ｃｅｌｌ．２０１１，ｖｏｌ．１４：４３３−４４６；ａｎｄ  Ｌｉｕ  Ｓ−Ｙ，ｅｔ  ａｌ．「Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ａｎｄ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ」．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１２：ｖｏｌ．１０９  ４２３９−４２４４）。
【００４６】
「ＳＴＩＮＧ調節された」という用語は、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などのウイルス感染、疾患又は状態を含む、ＳＴＩＮＧによって直接、又はＳＴＩＮＧ経路を介して影響を受ける状態を指すために用いられる。
【００４７】
本明細書で使用するとき、特に断りがない限り、「ＳＴＩＮＧによって調節される障害」という用語は、ウイルス感染、疾患、障害又は状態のうち、その特徴的な症状の少なくとも１つがＳＴＩＮＧアゴニストで治療すると緩和するか、又は除去されることを特徴とするものを意味する。好適な例としては、限定されないが、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎が挙げられる。
【００４８】
本明細書で使用される場合、特に断らない限り、（ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害に言及する場合の）「影響する」又は「影響される」という用語は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害の１つ以上の症状又は所見の頻度及び／又は重症度の低下を含み、並びに／又は、当該ウイルス感染、疾患、症候群、状態若しくは障害の１つ以上の症状若しくは所見の進行の予防、又は、ウイルス感染、疾患、状態、症候群又は障害の進行の予防を含む。
【００４９】
本発明の化合物は、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性により影響を受けるウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は寛解させるための方法に有用である。そのような方法は、そのような処置、改善及び／又は予防を必要とする対象（動物、哺乳類、及びヒトを含む）に、式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩の治療有効量を投与することを含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる。
【００５０】
特に、式（Ｉ）の化合物又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物若しくは医薬的に許容される塩形態は、例えば黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などの疾患、症候群、状態又は障害を治療するか、又は改善するのに有用である。
【００５１】
より具体的には、式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩形態は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎感染などの疾患、症候群、状態又は障害を治療するか、又は改善するのに有用であり、当該治療又は改善を必要とする対象に、治療有効量の本明細書で定義した式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容可能な塩形態を投与することを含む。
【００５２】
本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ヘパドナウイルス（Hepadnaviridaee）（例えばＢ型肝炎ウイルス、すなわちＨＢＶ）によって引き起こされる感染を含むウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法に関する。この方法は、ウイルス感染症を患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。
【００５３】
本明細書に開示された他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。
【００５４】
本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ウイルスの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。
【００５５】
本明細書に記載される他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ウイルスの複製を阻害するために使用可能な、本明細書に記載の１種類以上の化合物（例えば、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態）、又は本明細書に記載の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、Ｂ型肝炎ウイルス感染であってもよい。この方法は、ＨＢＶを患っていると特定された対象に、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物を投与することを含んでいてもよい。
【００５７】
本明細書に開示された他の実施形態は、ウイルス感染を寛解させ、及び／又は治療する方法であって、ＨＢＶに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を使用することに関する。
【００５８】
本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶを寛解させ、及び／又は治療するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害する方法であって、ウイルスに感染した細胞と、有効量の式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩を含む医薬組成物とを接触させることを含んでいてもよい、方法に関する。
【００５９】
本明細書に記載される他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するための医薬の製造において、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩を使用することに関する。本明細書に記載される更に他の実施形態は、ＨＢＶの複製を阻害するために使用可能な、式（Ｉ）の１種類以上の化合物、又はその医薬的に許容される塩、又は式（Ｉ）の１種類以上の化合物若しくはその医薬的に許容される塩形態を含む医薬組成物に関する。
【００６０】
本発明の実施形態は、本明細書に定義される式（Ｉ）の化合物、又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物、若しくは医薬的に許容されるその塩形態を含み、本明細書に定義される変数の１つ以上から選択される置換基（例えば、Ｒ1A、Ｒ1B、Ｒ1C、Ｂ1、Ｒ2A、Ｒ2B）は、独立して、以下の表１のリストに例示されるものからの任意の個々の置換基又は任意の置換基のサブセットであるように選択される。
【００６１】
【表１】
2020500862.tif 000006
【００６２】
本発明は、式Ｉの化合物であって、
【００６３】
【化４】
2020500862.tif 000007
［式中、
Ｒ1Aは、ヒドロキシ若しくはフルオロであり、Ｒ1Cは水素であり、又は、Ｒ1AとＲ1Cが、これらが結合する原子と共に５員環を形成するように、Ｒ1Aは−Ｏ−であり、Ｒ1CはＣＨ2であり；
Ｒ1Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
Ｂ1はｂ２であり、
【００６４】
【化５】
2020500862.tif 000008
Ｒ2Aは、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から選択され；
Ｒ2Bは、ヒドロキシ、チオール及びＢＨ3-からなる群から選択され；
但し、式（Ｉ）の化合物は、（１Ｒ，６Ｒ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｒ，１５Ｒ，１７Ｒ，１８Ｒ）−１７−（２−アミノ−６−オキソ−６，９−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−９−イル）−８−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）−９−フルオロ−３，１２，１８−トリヒドロキシ−２，４，７，１１，１３，１６−ヘキサオキサ−３λ5，１２λ5−ジホスファトリシクロ［１３．２．１．０6，10］オクタデカン−３，１２−ジオン，ビスアンモニウム塩以外である］
又はそのエナンチオマー、ジアステレオマー、若しくは医薬的に許容される塩形態に関する。
【００６５】
本発明の更なる実施形態は、化合物１〜２３から選択される式（Ｉ）の化合物：
【００６６】
【化６】
2020500862.tif 000009
【００６７】
【化７】
2020500862.tif 000010
【００６８】
【化８】
2020500862.tif 000011
【００６９】
【化９】
2020500862.tif 000012
【００７０】
【化１０】
2020500862.tif 000013
【００７１】
【化１１】
2020500862.tif 000014
【００７２】
【化１２】
2020500862.tif 000015
【００７３】
【化１３】
2020500862.tif 000016
【００７４】
【化１４】
2020500862.tif 000017
又はその医薬的に許容される塩形態に関する。
【００７５】
医療において使用する場合、式（Ｉ）の化合物の塩とは、非毒性の「医薬的に許容される塩」を指す。しかし、他の塩が式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩形態の調製において有用である場合もある。式（Ｉ）の化合物の適切な医薬的に許容される塩としては、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸のような医薬的に許容される酸の溶液と混合することにより形成され得る酸付加塩が挙げられる。更に、式（Ｉ）の化合物が酸性部分を有する場合、その適切な医薬的に許容される塩としては例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩及びカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び適切な有機リガンドと形成される塩（例えば、第四級アンモニウム塩）を挙げることができる。すなわち、代表的な医薬的に許容される塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カルシウムエデト酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシラート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシネート、ハイドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イソチオネート、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、パモン酸塩（エンボナート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド、及び吉草酸塩が挙げられる。
【００７６】
医薬的に許容可能な塩の調製に使用することができる代表的な酸及び塩基としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、カンファースルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、α−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩化水素酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びウンデシレン酸を含む酸、並びに、アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン（benethamine）、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、及び水酸化亜鉛を含む塩基が挙げられる。
【００７７】
本発明の実施形態には、式（Ｉ）の化合物のプロドラッグが含まれる。一般的には、このようなプロドラッグは、インビボで必要な化合物に容易に変換可能な化合物の機能的誘導体である。したがって、本発明の治療又は予防の方法の実施形態において、「投与すること」という用語には、具体的に開示された化合物による、又は具体的には開示されていない場合もあるが患者への投与後にインビボで特定の化合物に変換される化合物による、記載された様々な疾患、状態、症候群及び障害の治療又は予防が包含される。適切なプロドラッグ誘導体の選択及び調製に関する通常の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【００７８】
本発明の実施形態に基づく化合物が少なくとも１個のキラル中心を有する場合、それに応じて化合物はエナンチオマーとして存在し得る。化合物が２つ以上のキラル中心を有する場合、ジアステレオマーとして追加的に存在してもよい。かかる異性体及びその混合物は全て、本発明の範囲内に包含されると理解される。更に、化合物の結晶型のなかには、多形として存在できるものもあり、そのような多形も本発明に含まれることが意図される。加えて、化合物のなかには、水との溶媒和物（すなわち、水和物）又は一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成できるものもあり、このような溶媒和物もまた、本発明の範囲に包含されることが意図される。当業者は、本明細書で用いる「化合物」という用語が、式（Ｉ）の化合物の溶媒和物を含むことを理解するであろう。
【００７９】
本発明の特定の実施形態に基づく化合物の調製プロセスにより立体異性体の混合物を生じる場合、これらの異性体は、分取クロマトグラフィーなどの従来技術により分離することができる。化合物はラセミ体で調製されてもよく、又は個々のエナンチオマーをエナンチオ選択的合成若しくは分解のいずれかにより調製することもできる。化合物は、例えば、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸及び／又は（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸などの光学活性酸と塩を形成させた後に、分別結晶化を行い、遊離塩基を再生させることによりジアステレオマー対を形成させるなどの標準的技術により、それら化合物の成分であるエナンチオマーに分割することができる。化合物はまた、ジアステレオマーのエステル又はアミドを形成した後、クロマトグラフィー分離を行い、キラル補助基を除去することにより、分解することもできる。あるいは、化合物はキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。
【００８０】
本発明の一実施形態は、式（Ｉ）の化合物の（＋）−エナンチオマーを含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる医薬組成物を含む組成物であって、当該化合物の（−）−異性体を実質的に含まない、組成物を目的とする。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（−）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％、より好ましくは約５％、更により好ましくは約２％未満、及び更により好ましくは約１％未満であることを意味する。
【００８１】
【数１】
2020500862.tif 000018
【００８２】
本発明の別の実施形態は、式（Ｉ）の化合物の（−）−エナンチオマーを含むか、それからなるか、及び／又はそれから本質的になる医薬組成物を含む組成物であって、当該化合物の（＋）−異性体を実質的に含まない、組成物である。本文脈において、実質的に含まないとは、下式で算出される（＋）−異性体が、約２５％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、更により好ましくは約２％未満、更により好ましくは約１％未満であることを意味する。
【００８３】
【数２】
2020500862.tif 000019
【００８４】
本発明の種々の実施形態の化合物を調製するための任意のプロセスにおいて、関連する分子のいずれかにおける感受性基又は反応性基を保護することが必要及び／又は望ましい場合がある。これは、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９７３；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９１；及びＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９などに記載されるような従来の保護基を用いることによって達成されるであろう。保護基は、その後の好都合な段階において、当該技術分野で周知の方法を用いて除去することができる。
【００８５】
本発明の実施形態の化合物（その医薬的に許容される塩及び医薬的に許容される溶媒和物を含む）は単独で投与することができるが、これらの化合物は、一般的には、意図された投与経路及び標準的な製薬学的又は獣医学的な慣行の観点から選ばれる、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤及び／又は医薬的に許容される希釈剤との混合物として投与される。したがって、本発明の特定の実施形態は、式（Ｉ）の化合物及び少なくとも１つの医薬的に許容される担体、医薬的に許容される賦形剤、及び／又は医薬的に許容される希釈剤を含む製薬学的及び獣医学的組成物を目的とする。
【００８６】
一例として、本発明の実施形態の医薬組成物では、式（Ｉ）の化合物は、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤、及びそれらの組み合わせと混合することができる。
【００８７】
本発明の化合物を含む固体の経口投与形態、例えば、錠剤又はカプセルを、必要に応じて１回につき少なくとも１つの投与形態で投与することができる。持続放出性製剤で化合物を投与することも可能である。
【００８８】
本発明の化合物が投与され得る追加の経口形態としては、エリキシル剤、溶液、シロップ剤及び懸濁液が挙げられる。それぞれ任意選択的に香味剤及び着色剤を含有する。
【００８９】
あるいは、式（Ｉ）の化合物は、吸入（気管内又は経鼻的に）により、又は座薬若しくはペッサリーの形態で投与することができる。あるいは、式（Ｉ）の化合物は、ローション、溶液、クリーム、軟膏若しくは散布剤として局所的に塗布することもできる。例えば、式（Ｉ）の化合物は、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンを含む、それからなる、及び／又は本質的にそれからなるクリームに添加することができる。式（Ｉ）の化合物は、クリームの約１重量％〜約１０重量％の濃度で、必要に応じて任意の安定剤及び保存剤と共にワックス又は軟パラフィン基剤を含む、それからなる、及び／又はそれから本質的になる軟膏に添加することもできる。投与の代替手段としては、皮膚又は経皮貼付剤を使用することによる経皮投与が挙げられる。
【００９０】
本発明の医薬組成物（本発明の化合物単独と同様に）は、非経口的に、例えば、陰茎海綿体内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、又は髄腔内に注入することができる。この場合、組成物はまた、適切な担体、適切な賦形剤、及び適切な希釈剤のうちの少なくとも１つを含む。
【００９１】
非経口投与について、本発明の医薬組成物は、例えば、溶液を血液と等張に保つうえで充分な塩及び単糖などの他の物質を含んでもよい滅菌水溶液の形態で最もよく使用される。
【００９２】
癌の治療のための上述の投与経路に加えて、医薬組成物は、腫瘍内又は腫瘍周囲への注射による投与に適合され得る。このように免疫系を活性化して、離れた部位で腫瘍を死滅させることは、アブスコパル効果として一般的に知られており、多数の治療法を用いて動物において実証されている（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｊｅｕｇｈｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１５，６（３），１３５９−１３８１）。局所投与又は腫瘍内若しくは腫瘍周囲への投与の更なる利点は、はるかに低用量で同等の有効性を達成し、ひいては高用量の場合に観察され得る有害事象を最小限に抑えるか又は排除するという能力である（Ｍａｒａｂｅｌｌｅ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，２０（７），１７４７−１７５６）。
【００９３】
口腔又は舌下投与では、本発明の医薬組成物を錠剤又はトローチ剤の形態で投与してもよく、これは従来法で製剤することができる。
【００９４】
更なる例として、活性成分として式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つを含有する医薬組成物を、従来の製薬学的配合技術に従って、化合物と、医薬的に許容される担体、医薬的に許容される希釈剤、及び／又は医薬的に許容される賦形剤とを混合することによって調製することができる。担体、賦形剤、及び希釈剤は、所望の投与経路（例えば、経口、非経口など）に応じ、広範な形態を取ることができる。それゆえに、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤及び溶液などの液体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、安定剤、着色剤及びこれらに類するものが挙げられる。散剤、カプセル剤及び錠剤などの固体経口製剤の場合、適切な担体、賦形剤及び希釈剤としては、デンプン、糖類、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤及びこれらに類するものが挙げられる。吸収及び崩壊の主要部位を調節するために、固体経口製剤を糖などの物質で任意にコーティングするか、又は腸溶性コーティングを施すことができる。非経口投与の場合、担体、賦形剤及び希釈剤は、通常、滅菌水を含み、組成物の溶解度及び保存性を高めるために他の成分を添加してもよい。注射用懸濁剤又は溶剤はまた、水性担体を、適切な添加剤、例えば、可溶化剤及び保存剤と共に使用して、調製することもできる。
【００９５】
式（Ｉ）の化合物又はその医薬組成物の治療有効量としては、平均的な（７０ｋｇの）ヒトについて１日当たり、約１〜約４回のレジメンで、約０．０１ｍｇ〜約３０００ｍｇの用量範囲、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、特に、約０．０５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲、又は更に特定的には、約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、又はこれに含まれる任意の特定の量若しくは範囲の活性成分を含む用量を含むが、式（Ｉ）の化合物の治療有効量は、治療される疾患、症候群、状態及び障害によって変動することが当業者には明らかである。
【００９６】
経口投与では、医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物を約１．０、約１０、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、及び約５００ｍｇ含む錠剤の形態で提供されることが好ましい。
【００９７】
有利な点として、式（Ｉ）の化合物は、１日量を１回で投与してもよく、１日当たりの総投与量を１日に２回、３回及び４回に分割して投与してもよい。
【００９８】
式（Ｉ）の化合物の投与される最適投与量は、容易に決定することができ、用いられる具体的な化合物、投与形態、製剤の強度、及びウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害の進行状態によって変わる。加えて、治療される具体的な対象に関連する要因、例えば、対象の性別、年齢、体重、食事及び投与タイミングにより、適切な治療レベル及び所望の治療効果を得るために用量を調節する必要が生じる。したがって、上記の投与量は平均的な場合の例である。当然、これより高いか低い用量範囲が有効である個々の例が存在することができ、これらも本発明の範囲内に含まれる。
【００９９】
式（Ｉ）の化合物は、これを必要とする対象に式（Ｉ）の化合物を使用することが求められる場合には、上記の組成物及び投与レジメンのいずれかによって、又は当技術分野において確立されているそれらの組成物及び投与レジメンによって投与することができる。
【０１００】
ＳＴＩＮＧタンパク質アゴニストとして、式（Ｉ）の化合物は、ＳＴＩＮＧタンパク質の調節（アゴニスト活性を含む）によってウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害が影響を受ける、動物、哺乳類及びヒトなどの対象における、ウイルス感染、疾患、症候群、状態又は障害を治療又は予防するための方法において有用である。かかる方法は、かかる治療又は予防を必要とする動物、哺乳動物及びヒトなどの対象に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、塩、又は溶媒和物を投与する工程を含むか、それよりなるか、及び／又は本質的にそれよりなる。
【０１０１】
一実施形態では、本発明は、癌の治療、並びに癌疾患及び状態、又はウイルス感染における使用のための、式（Ｉ）の化合物、又はその医薬的に許容される塩形態を目的とする。
【０１０２】
式（Ｉ）の化合物又はその医薬的に許容される塩若しくは溶媒和物が潜在的に有益な抗腫瘍効果を有し得る癌疾患及び病状の例としては、限定されないが、肺、骨、膵臓、皮膚、頭部、頸部、子宮、卵巣、胃、結腸、乳房、食道、小腸、腸、内分泌系、甲状腺、副甲状腺、副腎、尿道、前立腺、陰茎、精巣、尿管、膀胱、腎臓又は肝臓の癌、直腸癌；肛門部分の癌；卵管、子宮内膜、子宮頸管、膣、外陰部、腎盂、腎細胞の癌；軟組織の肉腫；粘液腫；横紋筋腫；線維腫；脂肪腫；奇形腫；胆管癌；肝芽腫；血管肉腫；血管腫；肝癌；線維肉腫；軟骨肉腫；骨髄腫；慢性白血病又は急性白血病；リンパ球性リンパ腫；原発性中枢神経リンパ腫；中枢神経系の腫瘍形成；脊髄軸腫瘍；扁平上皮細胞癌；滑膜肉腫；悪性胸骨上皮腫；脳幹神経膠腫；下垂体腺腫；気管支腺腫；軟骨性過誤腫（chondromatous hanlartoma）；中皮腫；ホジキン病、又は前述の癌のうちの１つ以上の組み合わせが挙げられる。好適には、本発明は、脳（神経膠腫）、膠芽腫、星状細胞腫、多型性グリオブラストーマ、Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ症候群、カウデン病、レルミット・ダクロス病、ウィルムス腫瘍、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、上衣腫、髄芽腫、頭頸部、腎臓、肝臓、黒色腫、卵巣、膵臓、腺癌、導管腺癌、腺扁平上皮癌、腺房細胞癌、グルカゴノーマ、インスリノーマ、前立腺、肉腫、骨肉腫、骨の巨細胞腫瘍、甲状腺、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性好中球性白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、巨核芽球性白血病、多発性骨髄腫、急性巨核芽球性白血病、前骨髄球性白血病、赤白血病、悪性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、神経芽細胞腫、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、腎癌、中皮腫、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、上咽頭癌、口腔癌、口の癌、ＧＩＳＴ（消化管間質腫瘍）及び精巣癌からなる群から選択される癌を治療するか、又は重篤度を下げるための方法に関する。
【０１０３】
別の実施形態では、本発明は、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、線維肉腫及びＢ型肝炎からなる群から選択される、ＳＴＩＮＧのアゴニスト活性によって影響を受ける障害の治療に使用するための式（Ｉ）の化合物、又はその意訳的に許容される塩形態に関する。
【０１０４】
開示される式（Ｉ）の化合物は、ＨＢＶ感染症の治療に有用な１種以上の追加の化合物と併用するのに有用であり得る。これらの追加の化合物は、他にも開示される化合物、及び／又はＨＢＶ感染症の症状又は効果を治療、予防、若しくは低減することが公知である化合物を含み得る。そのような化合物としては、限定されないが、ＨＢＶポリメラーゼ阻害剤、インターフェロン、ウイルス侵入阻害剤、ウイルス成熟阻害剤、文献記載のカプシドアセンブリ調節因子、逆転写酵素阻害剤、免疫調節因子、ＴＬＲ−アゴニスト、及びＨＢＶのライフサイクルに影響を及ぼす、又はＨＢＶ感染症の転帰に影響を及ぼす、異なる又は未知の機構を伴う他の薬剤が挙げられる。
【０１０５】
非限定的な例では、開示される化合物は、次のものを含む群から選択される１つ以上の薬物（又はその塩）と併用され得る：
ラミブジン（３ＴＣ、Ｚｅｆｆｉｘ、Ｈｅｐｔｏｖｉｒ、Ｅｐｉｖｉｒ、及びＥｐｉｖｉｒ−ＨＢＶ）、エンテカビル（Ｂａｒａｃｌｕｄｅ、Ｅｎｔａｖｉｒ）、アデフォビルジピボキシル（Ｈｅｐｓａｒａ、Ｐｒｅｖｅｏｎ、ｂｉｓ−ＰＯＭ  ＰＭＥＡ）、テノホビルジソプロキシルフマレート（Ｖｉｒｅａｄ、ＴＤＦ又はＰＭＰＡ）を含むがこれらに限定されないＨＢＶ逆転写酵素阻害剤、並びにＤＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼ阻害剤；
インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）、及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むがこれらに限定されないインターフェロン；
ウイルス侵入阻害剤；
ウイルス成熟阻害剤；
カプシドアセンブリ調節因子、例えば、限定されないが、ＢＡＹ４１−４１０９；
逆転写酵素阻害剤；
ＴＬＲ−アゴニストなどの免疫調節因子；及び
異なる又は未知の機序を伴う薬剤、例えば、限定されないが、ＡＴ−６１（（Ｅ）−Ｎ−（１−クロロ−３−オキソ−１−フェニル−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）ベンズアミド）、ＡＴ−１３０（（Ｅ）−Ｎ−（１−ブロモ−１−（２−メトキシフェニル）−３−オキソ−３−（ピペリジン−１−イル）プロパ−１−エン−２−イル）−４−ニトロベンズアミド）及びこれらの類似体。
【０１０６】
一実施形態では、追加の治療剤はインターフェロンである。「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」という用語は、ウイルス複製及び細胞増殖を阻害し、免疫反応を調節する、高度に相同な種特異的タンパク質のファミリーの任意のメンバーを指す。例えば、ヒトインターフェロンは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、及びインターフェロンオメガ（ＩＦＮ−ω）を含むＩ型、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）を含むＩＩ型、並びにインターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）を含むＩＩＩ型の３つに分類される。開発され、市販されている組み換え型のインターフェロンは、本明細書で使用する用語「インターフェロン」により包含される。化学修飾インターフェロン又は変異インターフェロンなどのインターフェロンのサブタイプも、本明細書で使用する用語「インターフェロン」に包含される。化学修飾インターフェロンとしては、ペグ化インターフェロン及びグリコシル化インターフェロンを挙げてよい。インターフェロンの例としては、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、インターフェロンアルファｎ１、インターフェロン−ベータ１ａ、インターフェロンベータ１ｂ、インターフェロンラムダ１、インターフェロンラムダ２、及びインターフェロンラムダ３も挙げられるが、これらに限定されない。ペグ化インターフェロンの例としては、ペグ化インターフェロンアルファ２ａ及びペグ化インターフェロンアルファ２ｂが挙げられる。
【０１０７】
したがって、一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンラムダ（ＩＦＮ−λ）及びインターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）からなる群から選択されるインターフェロンと併用投与することができる。特定の一実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンアルファ２ａ、インターフェロンアルファ２ｂ、又はインターフェロンアルファｎ１である。別の特定の実施形態では、インターフェロンアルファ２ａ又はインターフェロンアルファ２ｂはペグ化されている。好ましい実施形態では、インターフェロンアルファ２ａはペグ化インターフェロンアルファ２ａ（ＰＥＧＡＳＹＳ）である。別の実施形態では、追加の治療剤は、インターフェロンクラスに属する生物学的薬剤を含む、免疫調節療法又は免疫刺激剤療法から選択される。
【０１０８】
更に、追加の治療剤は、他の必須ウイルスタンパク質又はＨＢＶ複製若しくは持続に要求される宿主タンパク質の機能を破壊する薬剤であってもよい。
【０１０９】
別の実施形態では、追加の治療剤は、ウイルスの侵入若しくは成熟をブロックする、又はヌクレオシド若しくはヌクレオチド若しくは非ヌクレオシ（チ）ドポリメラーゼ阻害剤などのＨＢＶポリメラーゼを標的とする抗ウイルス剤である。併用療法の更なる実施形態では、逆転写酵素阻害剤又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンである。
【０１１０】
一実施形態では、追加の治療剤は、無関係のウイルスに対して免疫応答の誘導をもたらす、自然の限定された免疫応答を誘導する免疫調節剤である。換言すれば、免疫調節因子は、抗原提示細胞の成熟、Ｔ細胞の増殖、及びサイトカイン放出（例、とりわけＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α、β、及びγ並びにＴＮＦ−α）に影響を及ぼし得る。
【０１１１】
更なる実施形態では、追加の治療剤は、ＴＬＲ調節因子又はＴＬＲアゴニスト、例えばＴＬＲ−７アゴニスト若しくはＴＬＲ−９アゴニストなどである。併用療法の更なる実施形態において、ＴＬＲ−７アゴニストは、ＳＭ３６０３２０（９−ベンジル−８−ヒドロキシ−２−（２−メトキシ−エトキシ）アデニン）及びＡＺＤ８８４８（メチル［３−（｛［３−（６−アミノ−２−ブトキシ−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−９Ｈ−プリン−９−イル）プロピル］［３−（４−モルホリニル）プロピル］アミノ｝メチル）フェニル］アセテート）からなる群から選択される。
【０１１２】
本明細書で提供する方法のいずれかにおいて、方法は、少なくとも１つのＨＢＶワクチン、ヌクレオシドＨＢＶ阻害剤、インターフェロン、又はそれらの任意の組み合わせを個体に投与することを更に含み得る。一実施形態では、ＨＢＶワクチンは、ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ  ＨＢ、ＥＮＧＥＲＩＸ−Ｂ、ＥＬＯＶＡＣ  Ｂ、ＧＥＮＥＶＡＣ−Ｂ、又はＳＨＡＮＶＡＣ  Ｂのうちの少なくとも１つである。
【０１１３】
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヌクレオチド／ヌクレオシド類似体、侵入阻害剤、融合阻害剤、及びこれらの又は他の抗ウイルス機序の任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの追加の治療剤を投与する工程を更に含む。
【０１１４】
別の態様では、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は逆転写酵素阻害剤と組み合わせて個体に投与すること；及び、個体に治療有効量のＨＢＶワクチンを更に投与することにより、ＨＢＶウイルス負荷を低下させることを含む、必要のある個体においてＨＢＶ感染症を治療する方法を本明細書で提供する。逆転写酵素阻害剤は、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、ｄｄＡ、スタブジン、ラミブジン、アバカビル、エムトリシタビン、エンテカビル、アプリシタビン、アテビラピン、リバビリン、アシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、テノホビル、アデフォビル、ＰＭＰＡ、シドフォビル、エファビレンツ、ネビラピン、デラビルジン、又はエトラビリンのうち少なくとも１つであり得る。
【０１１５】
別の態様では、本明細書で提供されるのは、ＨＢＶ感染の治療を必要としている個体においてＨＢＶ感染を治療する方法であって、治療有効量の開示される化合物を単独で、又は、ＨＢＶ核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤と組み合わせて個体に投与するか、治療有効量のＨＢＶワクチンを個体に更に投与することによってＨＢＶウイルス負荷を低下させることを含む、治療方法である。アンチセンスオリゴヌクレオチド又はＲＮＡ干渉剤は、ウイルスゲノムの複製、ウイルスＲＮＡの転写、又はウイルスタンパク質の翻訳を阻害するため、標的のＨＢＶ核酸に対する十分な相補性を有する。
【０１１６】
別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時配合される。更なる別の実施形態では、開示される化合物と少なくとも１種類の更なる治療薬とは同時投与される。本明細書に記載される任意の併用療法では、適切な方法、例えばＳｉｇｍｏｉｄ−Ｅmax式（Ｈｏｌｆｏｒｄ＆Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，１９９８１，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９〜４５３）、Ｌｏｅｗｅ加法の式（Ｌｏｅｗｅ  ＆  Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，１９２６，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３〜３２６）、及びメジアン効果式（Ｃｈｏｕ  ＆  Ｔａｌａｌａｙ，１９８４，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７〜５５）などを使用し、相乗効果を計算することができる。上記に挙げた各式に実験データを代入し、対応するグラフを生成して、薬物併用の効果を評価する助けとすることができる。上記の方程式と関連付けられる対応するグラフは、それぞれ濃度−効果曲線、アイソボログラム曲線、及び組み合わせ指標曲線である。
【０１１７】
本明細書において提供する併用療法を施す方法のいずれかの実施形態では、この方法は、対象のＨＢＶウイルス負荷のモニタリング又は検出を更に含むことができ、方法は、一定期間、例えばＨＢＶウイルスが検出不可となるまで実施される。
【０１１８】
本明細書、特にスキーム及び実施例で使用される略語は、以下のとおりである。
【０１１９】
【表２】
2020500862.tif 000020
【０１２０】
具体的実施例
（実施例１）
【０１２１】
【化１５】
2020500862.tif 000021
【０１２２】
【化１６】
2020500862.tif 000022
【０１２３】
【化１７】
2020500862.tif 000023
【０１２４】
工程１：化合物１ｅの調製
３’−Ｏ−メチル−グアノシン１ｄ（ＣＡＳ  １０３００−２７−３、１．０ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（３．２ｍＬ、２５．２ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。１時間後、塩化イソブチリル（１．０８ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。最終混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を、水（３０ｍＬ）を用いて０℃でクエンチし、ＮＨ4ＯＨ（６ｍＬ）を０℃で滴下した。１０分後、混合物を室温で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮した。粗生成物をＦＣＣ（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製し、白色固体として１ｅ（７９０ｍｇ、６３．９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）１２．０８（ｓ，１Ｈ），１１．６７（ｓ，１Ｈ），８．２７（ｓ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．５９−４．５７（ｍ，１Ｈ），４．０１−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．８６−３．８４（ｍ，１Ｈ），３．６５−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），２．７９−２．７６（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｓ，３Ｈ），１．１２（ｓ，３Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３６８．０［Ｍ＋１］+。
【０１２５】
工程２：化合物１ｆの調製
化合物１ｅ（７９０ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）とＤＭＴｒＣｌ（０．７６５ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液を、室温で一晩撹拌した。ＤＭＴＣｌ（０．７６５ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭで抽出した（１０ｍＬ×４回）。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過して、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１５：１、Ｒf＝０．５）、化合物１ｆ（１．２８ｇ、８８．９％）を淡黄色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）１１．８７（ｓ，１Ｈ），７．６８−７．６６（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，４Ｈ），７．３１−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２２−７．１９（ｍ，１Ｈ），６．８７−６．８１（ｍ，４Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３０−５．２７（ｍ，１Ｈ），５．０５−５．０３（ｍ，１Ｈ），４．１９−４．１８（ｍ，１Ｈ），４．０９−４．０７（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．５８−３．５５（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｓ，３Ｈ），３．０５−３．０３（ｍ，１Ｈ），１．４７−１．４０（ｍ，１Ｈ），０．８５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．５５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６７０．２［Ｍ＋１］+。
【０１２６】
工程３：化合物１ｇの調製
化合物１ｆ（１．２８ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（７４１．０ｍｇ、５．７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、３−（（クロロ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（１．３６ｇ、５．７３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＭｅＯＨでクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機層をブラインで２回洗浄した。この有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過して、濾液を濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｒf＝０．６）、化合物１ｇ（１ｇ、６０．１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＣＮ）７．８８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８−７．４１（ｍ，２Ｈ），７．３５−７．２４（ｍ，７Ｈ），６．８８−６．７９（ｍ，４Ｈ），６．０２−５．８９（ｍ，１Ｈ），５．１９−４．９５（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．０７−４．０４（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，７Ｈ），３．６７−３．４８（ｍ，４Ｈ），３．４４（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，３Ｈ），３．３３（ｔｄ，Ｊ＝２．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７２−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．６１−２．５３（ｍ，１Ｈ），２．５１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），１．２６−１．２４（ｍ，４Ｈ），１．１８−１．１２（ｍ，１２Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ3ＣＮ）１５０．９０（ｓ，１Ｐ），１５０．８１（ｓ，１Ｐ），１３．８０（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７８７．２［Ｍ＋１］+。
【０１２７】
工程４：化合物１ｂの調製
化合物１ａ（４．３ｇ、４．５１ｍｍｏｌ）及び水（１５６．８ｍｇ、８．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ3ＣＮ（１６ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１分後、ｔ−ブチルアミン（４ｍＬ）を添加した。得られた混合物を１５℃で２０分間撹拌した。混合物を２時間濃縮して、粗生成物１ｂを白色固体として得た（４．０ｇ）。この粗生成物を、次の工程で直接使用した。
【０１２８】
工程５：化合物１ｃの調製
化合物１ｂ（４．０５ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）及び水（８３２．０ｍｇ、４６．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（２．１ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を室温で５０分間添加した。１０分後、ピリジン（７３０．６ｍｇ、９．２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を濃縮し、残渣をフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝５：１、Ｒf＝０．４）、化合物１ｃ（２．４５ｇ、８９．５％）を白色固体として得た。
【０１２９】
ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４４９．９［Ｍ＋１］+。
【０１３０】
工程６：化合物１ｉの調製
乾燥ＣＨ3ＣＮ（２０ｍＬ）中の化合物１ｃ（３００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液と４Åモレキュラーシーブを室温、Ｎ2下で１０分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（１．５ｇ、８．８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、乾燥ＣＨ3ＣＮ（５ｍＬ）中の化合物１ｇ（０．５４ｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５０分間撹拌した。ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（０．４３ｍＬ、２．３９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物１ｉ（１６８ｍｇ、３４．１％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）８．８９（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．７３−７．６７（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２７−６．１８（ｍ，２Ｈ），５．３８−５．３０（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｓ，１Ｈ），４．２９（ｓ，１Ｈ），４．２６−４．１５（ｍ，３Ｈ），３．９２−３．８５（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６１−３．５７（ｍ，３Ｈ），２．７４（ｔｄ，Ｊ＝６．６，１３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．２１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，１５．２Ｈｚ，６Ｈ），０．８５（ｓ，９Ｈ），０．１２（ｓ，３Ｈ），−０．０４（ｓ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）δ３．６１（ｓ，１Ｐ），−１．６８（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３３．２［Ｍ＋１］+。
【０１３１】
工程７：化合物１ｋの調製
ピリジン（４０ｍＬ）中の化合物１ｉ（１６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液及び４Åモレキュラーシーブに、ＤＭＯＣＰ（８７．０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を室温で１時間撹拌した。ヨウ素（１９９．４ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）及び水（２８．３ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、混合物を濾過し、次いで、濾液の色が淡黄色に変わるまで、Ｎａ2ＳＯ3の飽和溶液を滴下した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−２３％から５３％までのＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として標的化合物１ｋ（４８ｍｇ、３１．３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９７７．５［Ｍ＋１］+。
【０１３２】
工程８：化合物１ｌの調製
化合物１ｋ（４０．０ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）を、メチルアミンのＥｔＯＨ溶液（３３％、１０ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮して粗化合物１ｌ（３２．９ｍｇ、１００％）を得て、これを次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８０３．４［Ｍ＋１］+。
【０１３３】
工程９：化合物２の調製
化合物１ｌ（３２．８６ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）、Ｅｔ3Ｎ（２４８．５ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（１９８．０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）のピリジン（５ｍＬ）溶液を５０℃で５時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（１０ｍＬ）で希釈し、イソプロポキシトリエチルシラン（５４１．５ｍｇ、４．１ｍｍｏｌ）を室温で１．５時間添加した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ（０％−１５％）により精製して、白色固体として、アンモニウム塩（６．７ｍｇ）として標的生成物２を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ＝８．１８−８．１６（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，２Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．７９−５．７７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６２−５．５６（ｍ，１Ｈ），４．９９−４．９４（ｍ，１Ｈ），４．４５（ｍ，１Ｈ），４．３９−４．３４（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．０３（ｍ，４Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１．２８（ｓ，１Ｐ），−２．６５（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８９．５［Ｍ＋１］+。
【０１３４】
工程９：（化合物２Ｎａ塩）の調製
体積３ｍＬのＤｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態）をビーカー（化合物５のアンモニウム塩６．７ｍｇ用）に添加し、脱イオン水（２回）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ４で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物５（６．７ｍｇ）を脱イオン水に溶解し（１ｍＬ中６．７ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、標的化合物２Ｎａ塩（６．４ｍｇ、９４．２％）を白色泡状物として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）８．１６（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），５．７８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６１−５．５６（ｍ，１Ｈ），４．９８−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．６５（ｓ，１Ｈ），４．４４−４．３５（ｍ，３Ｈ），４．１５−４．０５（ｍ，４Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１．２６，−２．６４；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８９．０［Ｍ＋１］+。
【０１３５】
（実施例２）
【０１３６】
【化１８】
2020500862.tif 000024
【０１３７】
【化１９】
2020500862.tif 000025
【０１３８】
工程１：化合物２ｂの調製
ＤＭＴ−２’−ＯＭｅ−Ｂｚ−アデノシン−ＣＥホスホラミダイト２ａ（１．０ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）及び水（４０．６ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ3ＣＮ（４ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（２６１．０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を１５℃で添加した。反応混合物にｔ−ブチルアミン（４ｍＬ）を添加した。混合物を濃縮して、１ｇの粗化合物２ｂを白色固体として得て、これをＤＣＭと共沸させ（３回）、次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４５０．０［Ｍ＋１］+。（ＤＭＴ＝４，４’−ジメトキシトリチル。）
【０１３９】
工程２：化合物２ｃの調製
化合物２ｂ（９３０．０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）及び水（０．２ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸（０．５１ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を１５℃で０．５時間かけて添加した。１０分後、ピリジンを添加した。混合物を濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝５：１、Ｒf＝０．５）、化合物２ｃ（４００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ、６７．６％収率）を白色固体として得た。31Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．０５；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝４５０．０（Ｍ＋１）。
【０１４０】
工程３：化合物２ｆの調製
乾燥ＣＨ3ＣＮ（１６ｍＬ）中の化合物２ｃ（８６０．０ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）溶液及び４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）をＮ2下、１５℃で１０分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（５．１６ｇ、３０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、乾燥ＣＨ3ＣＮ（４ｍＬ）中のＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−Ｇ（ｉＢｕ）−ＣＥホスホラミダイト２ｄ（２．０５ｇ、８．１１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５０分間撹拌した。Ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド溶液（ＴＢＨＰ、１．４８ｍＬ、８．１４ｍｍｏｌ、ヘキサン中５．５Ｍ）を添加した。得られた混合物を１５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物２ｆ（６００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、３５．７％収率）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）δ８．６１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４１−８．３０（ｍ，１Ｈ），８．２４−８．１７（ｍ，１Ｈ），８．０４−７．９０（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．４９（ｍ，２Ｈ），７．４８−７．４０（ｍ，２Ｈ），６．１１−６．０３（ｍ，１Ｈ），６．０２−５．９８（ｍ，１Ｈ），５．３６−５．１２（ｍ，１Ｈ），４．５５−４．４３（ｍ，２Ｈ），４．４１−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．１９（ｍ，２Ｈ），４．１３−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．８５（ｍ，２Ｈ），３．７５−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．６３−３．５３（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．６９（ｍ，１Ｈ），２．６０−２．５２（ｍ，２Ｈ），１．１０−１．０３（ｍ，６Ｈ），０．８２−０．７７（ｍ，９Ｈ），０．０４−０．００（ｍ，６Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）δ３．１７，３．１３，−２．５８，−２．６９；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５１７．１［Ｍ／２＋１］+及び１０３２．３［Ｍ＋１］+。
【０１４１】
工程４：化合物２ｉ＋化合物２ｊの調製
ピリジン（６０ｍＬ）中の化合物２ｇ（２８０．０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）溶液及び４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）に、５，５−ジメチル−２−オキソ−２−クロロ−１，３，２−ジオキサ−ホスフィナン（ＤＭＯＣＰ、１５０．２ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を１６℃で添加した。混合物を１６℃で１時間撹拌した。ヨウ素（３４４．３ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）及び水（４８．９ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、飽和Ｎａ2ＳＯ3溶液を用い、反応をクエンチした。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物２ｉと化合物２ｊの混合物（１７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０．８％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３０．４［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１４２】
工程５：化合物２ｊの調製
化合物２ｉと化合物２ｊの混合物（１７０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を、メチルアミンのＥｔＯＨ溶液（１５ｍＬ、３３％）で処理し、得られた溶液を１５℃で１時間撹拌した。粗生成物２ｊ（１３４．３ｍｇ）を次の工程に直接使用した。
【０１４３】
工程６：化合物１の調製
化合物２ｊ（１３４．３ｍｇ、粗）、Ｅｔ3Ｎ（１．０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ、８０７．４ｍｇ、５．００ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液を５０℃で５時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（１０ｍＬ）で希釈し、イソプロポキシトリメチルシラン（２．２ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）を添加した。１５℃で１時間撹拌した後、混合物を１５℃で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、凍結乾燥時に白色固体として、アンモニウム塩として化合物１（１９．５ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を得た。 1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２６（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），６．１１６（ｓ，１Ｈ），５．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），４．９５（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｍ，５Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−１．５７，−３．３８；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８８．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１４４】
化合物１ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（２５ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（６０ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（５０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。化合物１アンモニウム塩（１６ｍｇ）を最小限の量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＵＶに基づきＣＤＮの適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥させ、化合物１のナトリウム塩形態（１３．５ｍｇ）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．１７（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５８−５．５２（ｍ，１Ｈ），５．０１（ｓ，１Ｈ），４．９８−４．９０（ｍ，１Ｈ），４．０４−４．５１（ｍ，５Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ）；３１Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−１．６３，−２．２９；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４５】
（実施例３）
【０１４６】
【化２０】
2020500862.tif 000026
【０１４７】
【化２１】
2020500862.tif 000027
【０１４８】
【化２２】
2020500862.tif 000028
【０１４９】
工程１：化合物３ａの調製
ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−Ｇ（ｉＢｕ）−ＣＥホスホラミダイト化合物２ｄ（１ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）及び水（３７．１ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）のＣＨ3ＣＮ（４ｍＬ）溶液に、ピリジニウムトリフルオロアセテート（２３８．９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物にｔｅｒｔ−ブチルアミン（４ｍＬ）を添加した。得られた混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物を濃縮して、化合物３ａ（９４１．１ｍｇ）を白色固体として得て、これをＤＣＭと共沸させ（３回）、次の工程に直接使用した。
【０１５０】
工程２：化合物３ｂの調製
化合物３ａ（９４１．１ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）及び水（０．１９ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍＬ）溶液に、ジクロロ酢酸溶液（０．４７ｇ、３．６２ｍｍｏｌ、ＤＣＭ中６％）の溶液を室温で０．５時間かけて添加した。ピリジン（０．１６３ｇ、２．０６ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、混合物を濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１、Ｒf＝０．５）、化合物３ｃ（５１５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５３２．１［Ｍ＋１］+。
【０１５１】
工程３：化合物３ｅａ＋化合物３ｅｂの調製
乾燥ＣＨ3ＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物３ｂ（５００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ溶液）及び４Å  ＭＳ（０．５ｇ）を室温、Ｎ2下で３分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（ＩＭＰ、２．５４ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ＣＨ3ＣＮ（５ｍＬ）中のＬＮＡ−ｄＡ（Ｂｚ）−ＣＥホスホラミダイト、化合物３ｃ（９４３ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５０分間撹拌した。ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド溶液（ＴＢＨＰ、ヘキサン中５．５Ｍ、０．７４ｍＬ、４．０９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ）により精製して、白色固体として化合物３ｅａと化合物３ｅｂの混合物（１３５．７ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）を得た。この生成物の混合物を、次の工程で直接使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３０．１［Ｍ＋１］+。
【０１５２】
工程４：化合物３ｇの調製
ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物３ｅａと化合物３ｅｂ（１３５．７ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）の溶液と４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）に、２９℃でＤＭＯＣＰ（７２．６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２９℃で１時間撹拌した。ヨウ素（１６６．３ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及び水（２３．６ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、飽和Ｎａ2ＳＯ3溶液を用い、反応をクエンチした。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−３５％から６５％までのＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物３ｇ（２２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝５１４．５［Ｍ／２＋１］+及び１０２９．３［Ｍ＋１］+。
【０１５３】
工程５：化合物３ｈの調製
化合物３ｇ（２２ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を、メチルアミンのＥｔＯＨ溶液（３３％、１０ｍＬ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮して粗化合物３ｈを得て、これをピリジンと共沸させ（３回）、次の工程に直接使用した。
【０１５４】
工程６：化合物６アンモニウム塩の調製
化合物３ｈ、Ｅｔ3Ｎ（１７６．７ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（Ｅｔ3Ｎ・３ＨＦ、１４０．７ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液を５０℃で５時間撹拌した。混合物をＴＨＦ（１０ｍＬ）で希釈し、イソプロポキシトリエチルシラン（３８４．９ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を１５℃で１時間かけて添加した。混合物を室温で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ（０％〜１５％）により精製して、凍結乾燥時に白色固体として、アンモニウム塩（６．１ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）として化合物６を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）８．３０（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｂｒｓ，１Ｈ），６．１９（ｓ，１Ｈ），５．９６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｓ，１Ｈ），４．３６−４．３０（ｍ，３Ｈ），４．１６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），４．０４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，２Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１．７３，−３．４０；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８７．０［Ｍ＋１］+。
【０１５５】
化合物６ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（２ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（１５ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。化合物６アンモニウム塩（３．５ｍｇ）を最小限の量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＵＶに基づきＣＤＮの適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥させ、化合物６のナトリウム塩（３．０２ｍｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６５−５．５８（ｓ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．２６−４．１９（ｍ，２Ｈ），４．１３−４．０１（ｍ，３Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−１．６４，−１．９１。
【０１５６】
（実施例４）
【０１５７】
【化２３】
2020500862.tif 000029
【０１５８】
【化２４】
2020500862.tif 000030
【０１５９】
工程１：化合物４ｂａ及び化合物４ｂｂの調製
乾燥ＣＨ3ＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物１ｃ（３００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）溶液及び４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）をＮ2下、２９℃で３分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（１．７６ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、乾燥ＣＨ3ＣＮ（１０ｍＬ）中の化合物１ｇ（５００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）溶液を添加した。混合物を室温で５０分間撹拌し、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ、０．５２ｍＬ、２．８４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２９℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物４ｂａと４ｂｂの混合物（１００ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を得た。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）−０．６６，−２．４４；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９３２．３（Ｍ＋１）。
【０１６０】
工程２：化合物４ｄａ及び化合物４ｄｂの調製
ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物４ｂａと化合物４ｂｂ（１００．０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）と４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）の懸濁物に、２８℃でＤＭＯＣＰ（５９．４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２８℃で１時間撹拌した。ヨウ素（１３６．２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及び水（１９．３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、飽和Ｎａ2ＳＯ3溶液を用い、反応をクエンチした。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−１％から２８％までのＡＣＮ）により精製して、白色固体として化合物４ｄａと４ｄｂの混合物（５０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を得た。この生成物を、次の工程で直接使用した。
【０１６１】
工程３：化合物３アンモニウム塩の調製
化合物４ｄａ及び４ｄｂの混合物（５０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を、メチルアミンのＥｔＯＨ（３３％、２０ｍＬ）溶液で処理し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮して粗化合物３を得て、これを分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ（０％〜１０％）により精製して、化合物３アンモニウム塩を白色固体として得た（１６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１．５３，−３．４１。
【０１６２】
生成物を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ｖ／ｖ）−０％から１０%までのＣＨ3ＣＮ）により更に精製して、白色固体として化合物３をアンモニウム塩として得た。
【０１６３】
工程４：化合物３ナトリウム塩の調製
化合物３アンモニウム塩を高真空下で乾燥させて、白色固体（１２ｍｇ）を得た。Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、３ｍＬ）をビーカー（化合物６１２ｍｇ用）に添加し、脱イオン水（２回）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（５０ｍＬ、脱イオン水）を添加し、混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した（少なくとも４ＣＶ）。化合物３を脱イオン水に溶解し（１ｍＬ中１２ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、変換されたナトリウム塩は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物３ナトリウム塩（７．４ｍｇ、０．０１０ｍｍｏｌ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δｐｐｍ  ８．１７（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６５−５．５９（ｍ，１Ｈ），５．０２−５．００（ｍ，１Ｈ），４．４４（ｓ，１Ｈ），４．３６−４．２９（ｍ，３Ｈ），４．１５−４．１１（ｍ，３Ｈ），４．０４−４．０１（ｍ，１Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１．５３，−２．６２；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７０２．５（Ｍ＋１）。
【０１６４】
（実施例５）
【０１６５】
【化２５】
2020500862.tif 000031
【０１６６】
【化２６】
2020500862.tif 000032
【０１６７】
【化２７】
2020500862.tif 000033
【０１６８】
工程１：化合物５ｂの調製
ＤＭＴ−２’−Ｆ−ｄＡ（Ｂｚ）−ＣＥホスホラミダイト５ａ（２．２０ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）のＣＨ3ＣＮ（１２．０ｍＬ）溶液に、水（９０．５ｍｇ、５．０２ｍｍｏｌ、２．０当量）及びピリジニウムトリフルオロアセテート（５８２．１ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を２５℃で５分間撹拌した。次いで、ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１２．０ｍＬ）を添加し、反応混合物を２５℃で１５分間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して泡状物を得て、これをＣＨ3ＣＮ（１０．０ｍＬ）に溶解し、再度濃縮して、白色泡状物として化合物５ｂ（１．６９ｇ、２．２９ｍｍｏｌ、収率９１．０％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７４０．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１６９】
工程２：化合物５ｃの調製
化合物５ｂ（１．６９ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（２４．０ｍＬ）溶液に、水（４１１．８ｍｇ、２１．９ｍｍｏｌ、１０．０当量）及び２，２−ジクロロ酢酸の溶液（ＤＣＭ中６％、２４ｍＬ）をゆっくりと加えた。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応物をピリジン（２ｍＬ）でクエンチし、反応混合物を濃縮して残渣を得て、これをシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１〜５／１）によって精製して、白色泡状物として化合物５ｃ（８５６ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ、７０．９％収率）を得た。
【０１７０】
工程３：化合物５ｅの調製
化合物５ｃ（３８０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）のＣＨ3ＣＮ（１２．０ｍＬ）溶液に、４Åモレキュラーシーブ（０．５ｇ）を加え、得られた混合物を２５℃で１０分間撹拌した。１Ｈ−イミダゾール過塩素酸塩（ＩＭＰ、３５６．７ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、３．０当量）を加え、混合物を更に１０分間撹拌した後、ＤＭＴ−３’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−Ｇ（ｉＢｕ）−ＣＥホスホラミダイト２ｄ（（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００１，１２３，８１６５−８１７６）、８１１．６ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌して、化合物５ｄの溶液（ＣＨ3ＣＮ溶液）を得て、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（５−スルファニリデン−１，２，４−ジチアゾール−３−イル）メタンイミドアミド（ＤＤＴＴ、７１５．７ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ、５当量）を、上の反応混合物に２５℃で加え、同じ温度で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを分取ＨＰＬＣ（Ｈ2Ｏ−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物５ｅ（１３０．０ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、２工程かけて収率１８．０％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１０３６．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１７１】
工程４：化合物５ｆの調製
化合物５ｅ（１３０．０ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）のピリジン（２４ｍＬ）溶液に、２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン（ｄｉｏｘａｐｈｏｓｐｈｉｎａｎｅ）２−オキシド（ＤＭＯＣＰ、６９．５ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ、３．０当量）を２５℃で添加し、混合物を２５℃で１時間撹拌して、化合物５ｆの溶液（１２７．７ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１００％収率、ピリジン溶液）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。
【０１７２】
工程５：化合物５ｇａ＋化合物５ｇｂの調製
化合物５ｆ（１２７．７ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）のピリジン溶液に、３Ｈ−ベンゾ［ｃ］［１，２］ジチオール−３−オン（２１１．１ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、１０当量）を２５℃で添加し、得られた混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを分取ＨＰＬＣ（水（０．２２５％ギ酸）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として化合物５ｇａ（２２．０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ、２工程にわたって収率１８．１％）を、白色固体として化合物５ｇｂ（５５．０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、２工程にわたって収率４５．２％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １０５０．２［Ｍ＋Ｈ］+、５２５．８［Ｍ／２＋Ｈ］+（化合物５ｇａ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １０５０．２［Ｍ＋Ｈ］+、５２５．６［Ｍ／２＋Ｈ］+（化合物５ｇｂ）。
【０１７３】
工程６：化合物５ｈｂの調製
化合物５ｇｂ（５５．０ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、１．００当量）をメチルアミン溶液（３．００ｍＬ、ＥｔＯＨ中３５％）で処理し、得られた混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、化合物５ｈｂ（３９．０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ、９０．５％収率）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８２３．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１７４】
工程７：化合物４アンモニウム塩の調製
化合物５ｈｂ（４４．０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）のピリジン（１３．０ｍＬ）溶液に、Ｅｔ3Ｎ（３２４．７ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ、６０当量）及びトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（２５８．６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ、３０当量）を２５℃で添加し、混合物を５０℃で５時間撹拌した後、次いで、イソプロポキシトリメチルシラン（７０７．４ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ、１００当量）を１５℃で添加し、１時間撹拌した。混合物を１５℃で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体としてアンモニウム塩としての化合物４を得た（６．０ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ、１５．８％収率）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．３３（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｓ，１Ｈ），５．５１（ｓ，０．５Ｈ），５．３８（ｓ，０．５Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝２１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５３−４．４２（ｍ，５Ｈ），４．１０（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−１２２．９４（ｂｒ，ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ５５．９９（ｂｒｓ，１Ｐ），５１．１９（ｂｒｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝７０８．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１７５】
工程６ａ：化合物５ｈａの調製
化合物５ｇａ（１３．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１．００当量）をメチルアミンの溶液（１．００ｍＬ、ＥｔＯＨ中３５％）で処理し、溶液を２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、化合物５ｈａ（９．０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、８８．４％収率）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８２３．３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１７６】
工程７ａ：化合物５アンモニウム塩の調製
化合物５ｈａ（３９．０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）のピリジン（７．０ｍＬ）溶液に、Ｅｔ3Ｎ（２８７．８ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、６０当量）及びトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（２２９．２ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ、３０当量）を２５℃で添加し、混合物を５０℃で５時間撹拌した後、イソプロポキシトリメチルシラン（６２７．０ｍｇ、４．７４ｍｍｏｌ、１００当量）を加え、１５℃で１時間撹拌した。混合物を１５℃で濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（水（０．０５％ＮＨ4ＯＨ  ｖ／ｖ）−ＣＨ3ＣＮ）により精製して、白色固体として、アンモニウム塩としての化合物５を得た（６．６０ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１９．６％収率）。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．５４（ｓ，１Ｈ），８．２５（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８１−５．７５（ｍ，１Ｈ），５．５４（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，０．５Ｈ），５．４１（ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，０．５Ｈ），５．３０−５．２３（ｍ，１Ｈ），４．５４−４．４０（ｍ，５Ｈ），４．０９−４．０４（ｍ，２Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．９２（ｂｒｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ５５．９７（ｓ，１Ｐ），５３．９０（ｂｒｓ，１Ｐ）；ＭＳ：ｍ／ｚ  ７０８．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１７７】
工程８：化合物４ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（３ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（１５ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。化合物４アンモニウム塩（６．９ｍｇ）を最小限の量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＵＶに基づきＣＤＮの適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥させ、化合物４のナトリウム塩形態（６．４５ｍｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．４１（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｓ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７２−５．６８（ｍ，１Ｈ），５．４３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，０．５Ｈ），５．３０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，０．５Ｈ），５．１８−５．１０（ｍ，１Ｈ），４．６５−４．２９（ｍ，５Ｈ），４．０５−３．９３（ｍ，２Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．７６；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ５５．８８，５３．９１．
【０１７８】
工程９：化合物５ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（３ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（１５ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。化合物５アンモニウム塩（６．０ｍｇ）を最小限の量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＵＶに基づきＣＤＮの適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥させ、化合物５のナトリウム塩形態（５．１２ｍｇ）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．１５（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），６．３４（ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），５．６５−５．５８（ｍ，１Ｈ），５．４５（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，０．５Ｈ），５．３２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，０．５Ｈ），５．２０−５．０５（ｍ，１Ｈ），４．６５−４．２９（ｍ，５Ｈ），３．９０−４．０４（ｍ，２Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．９２；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ５５．７４，５３．２３；ＭＳ：ｍ／ｚ  ７０９．００［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１７９】
（実施例６）
【０１８０】
【化２８】
2020500862.tif 000034
【０１８１】
【化２９】
2020500862.tif 000035
【０１８２】
【化３０】
2020500862.tif 000036
【０１８３】
工程１：化合物６ｄの調製
ヌクレオシド化合物６ａ（１．６３ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）を無水トルエン：無水アセトニトリル（１：１、ｖ／ｖ、３×２０ｍＬ）の混合物と共沸させた後、無水アセトニトリル（５０ｍＬ）及びホスホラミダイト６ｂ（２．１ｇｒ、２．１２ｍｍｏｌ）に溶解した。４Åモレキュラーシーブ粉末（４．０グラム）をこれに添加した。得られた不均質混合物をアルゴンガスで４分間バブリングした。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、０．４５Ｍテトラゾールをアセトニトリル（３０ｍＬ、１２．７２ｍｍｏｌ）に室温で添加した。反応物を４５分間撹拌した後、反応混合物を濾過し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１回×２０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（１回×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾液を乾燥するまで濃縮させ、亜リン酸化合物６ｃを得て、これを更に精製することなく次の工程に直接使用した。
【０１８４】
粗亜リン酸塩化合物６ｃを無水ＣＨ2Ｃｌ2（４０ｍＬ）に溶解し、次いで、４Åモレキュラーシーブ粉末（４．０グラム）をこれに添加した。得られた不均質混合物をアルゴンガスで４分間バブリングした。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、ボランジメチルスルフィド錯体溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ、ＢＨ3・ＤＭＳ、３．４９ｍＬ、６．９９ｍｍｏｌ）を０℃で５分間にわたって非常にゆっくりと添加した。反応物を室温で２０分間撹拌した後、反応混合物を素早く濾過し、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。相を分離させ、有機相を水（１回×２０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し（１回×２０ｍＬ）、次いで、水相をＥｔＯＡｃで逆抽出した（１回×２０ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥するまで蒸発させ、得られた粗物質をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜８５％ＥｔＯＡｃ、ｖ／ｖ）により精製して、ボラノホスフェートダイマー６ｄ（９８０ｍｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １６７０．３０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１８５】
工程２：化合物６ｅの調製
ジ−ＤＭＴｒ−ボラノホスフェートダイマー６ｄ（２．３グラム、１．３７ｍｍｏｌ）を８０％ＡｃＯＨ：ＣＨ3ＣＮ水溶液（３：１、ｖ／ｖ、１３ｍＬ）に溶解した。反応混合物を３７℃で１６時間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）で希釈し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３回×２０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ（１回×１５ｍＬ）水溶液で連続して洗浄した。有機相を乾燥するまで蒸発させて粗残渣を得て、これをシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中２０〜１００％アセトン、ｖ／ｖ）により精製して、ジオール−ボラノホスフェートダイマー６ｅ（０．９ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ１０６６．４５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１８６】
工程３：化合物６ｆの調製
ジオールヌクレオシド化合物６ｅ（０．５５ｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）を無水トルエン：無水アセトニトリル（１：１、ｖ／ｖ、３×２０ｍＬ）の混合物と共沸させた後、無水アセトニトリル（２０ｍＬ）及び４Åモレキュラーシーブ粉末（１．０ｇ）をこれに添加した。得られた不均質混合物をアルゴンガスで４分間バブリングした。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、アセトニトリル中０．４５Ｍテトラゾール（７ｍＬ、３．０９ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応物を７５分間撹拌し、次いで混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１回×２０ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ（１×２０ｍＬ）水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ（５分間撹拌し、次いで、濾過し）、乾燥するまで蒸発させ、化合物６ｆを得た。得られた混合物を、更なる精製は行わずに次の工程に直接使用した。粗亜リン酸塩６ｆを無水ＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）に溶解し、次いで、４Åモレキュラーシーブ粉末（１．０ｇ）をこれに添加した。得られた不均質混合物をアルゴンガスで４分間バブリングした。この混合物を室温で３０分間撹拌した後、ボランジメチルスルフィド錯体溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ、ＢＨ3・ＤＭＳ、０．９３ｍＬ、１．８４ｍｍｏｌ）を０℃で５分間にわたって非常にゆっくりと添加した。反応物を室温で撹拌した後、反応混合物を素早く濾過し、ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。相を分配させ、有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し（１回×２０ｍＬ）、次いで、水相をＥｔＯＡｃで逆抽出した（１回×２０ｍＬ）。合わせた有機相を乾燥するまで蒸発させ、得られた粗物質をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜１０％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、完全に保護された環状ボラノホスフェート６ｆ（４８０ｍｇ、純度７５％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １１７９．７３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１８７】
工程４：化合物６ｇの調製
３’−シリル−Ｇ（ｉＢｕ）−２’−シリル−Ａ（Ｂｚ）−２’、３’−シクロジヌクレオチド（cyclicdinucleotide）−ボラノホスフェート６ｆ（４３７ｍｇ、約７５％純度）を、アンモニア水溶液：ＥｔＯＨ（７ｍＬ、３：１、ｖ／ｖ）の混合物に溶解した。反応混合物を５０℃で１６時間撹拌した後、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、ＥｔＯＨ（２回×１０ｍＬ）及びトルエン（２回×２０ｍＬ）と共沸させた。得られた粗固体をジクロロメタン（４０ｍＬ）で洗浄し、沈殿物を濾過により回収して、ジ−ＴＢＳ保護環状ダイマー６ｇ（ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ８９６．２０［Ｍ−Ｈ］-）を得て、これを更なる精製を行わずに次の反応に使用した。
【０１８８】
ＴＢＳ基を除去するために、環状ダイマー化合物６ｇ（３５０ｍｇ粗）を無水ＤＭＳＯ（５．５ｍＬ）に溶解し、これにトリエチルアミン三フッ化水素酸塩（ＨＦ．３ＴＥＡ、２．８ｍＬ及びトリメチルアミン（０．６ｍＬ）を添加した。反応混合物を５０℃で３．５時間撹拌した後、トリエチルアミンで中和し、分取ＨＰＬＣ（緩衝液Ａ：Ｈ2Ｏ中の５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム）緩衝剤Ｂ：ＣＨ3ＣＮ中の５０ｍＭトリエチルアンモニオムアセテート、勾配：３０分にわたってＢを０〜３０％、流速２４ｍＬ／分）により精製し、白色固体として、トリエチルアンモニウム塩としてボラノホスフェート６ｉ（９ｍｇ）及び６ｊ（４ｍｇ）の２つの異性体を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６６８．６［Ｍ−Ｈ］-。
【０１８９】
工程５：化合物７及び化合物８のナトリウム塩としての調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（３ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（２０ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性になるまで脱イオン水で洗浄した。環状ボラノホスフェート６ｉ（９ｍｇ）及び６ｊ（４ｍｇ）の両方の異性体のトリエチルアンモニウム形態を、最小量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出した。ＵＶに基づきＣＤＮの適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥させ、化合物７のナトリウム塩形態（８．２ｍｇ）及び化合物８のナトリウム塩形態（３．３ｍｇ）をそれぞれ得た。
【０１９０】
化合物７：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．１５（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９８−４．９３（ｍ，１Ｈ），４．８７−４．８０（ｍ，１Ｈ），４．７４−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．３７（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｓ，１Ｈ），４．２４−４．１５（ｍ，２Ｈ），３．９２−３．８２（ｍ，２Ｈ），０．５から−０．５まで（非常に広いピーク，６Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）  ９４．７０（非常に広いピーク）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６６８．６［Ｍ−１］-。
【０１９１】
化合物８：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．１２（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２２−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．８３−４．７６（ｍ，１Ｈ），４．７５−４．７１（ｍ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．３１（ｓ，１Ｈ），４．２５−４．１８（ｍ，１Ｈ），４．１５−４．１０（ｍ，１Ｈ），４．０２−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．９０−３．８４（ｍ，１Ｈ），−０．２から０．９まで（非常に広いピーク，６Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９３．７５（非常に広いピーク）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：６６８．７［Ｍ−１］-。
【０１９２】
（実施例７）
【０１９３】
【化３１】
2020500862.tif 000037
【０１９４】
【化３２】
2020500862.tif 000038
【０１９５】
【化３３】
2020500862.tif 000039
【０１９６】
工程１：化合物７ｃの調製
ヌクレオシド化合物１ｆ（２．３ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）を無水トルエン／無水アセトニトリル（１：１、ｖ／ｖ、３×５０ｍＬ）の混合物と共沸させた後、無水アセトニトリル（８０ｍＬ）に溶解した。４Åモレキュラーシーブ粉末（４．０ｇ）及びアセトニトリル（６１ｍＬ、０．４５Ｍ、２７．４４ｍｍｏｌ）中のテトラゾールを反応混合物に添加した。得られた不均質混合物をバブリングＡｒ(g)で４分間パージした。室温で１０分間撹拌した後、アミダイト７ａ（３．０ｇ、３．４３ｍｍｏｌ、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ  Ｃｏｒｐ．）の無水アセトニトリル（１５ｍＬ）溶液を室温で添加した。室温で１時間４５分撹拌した後、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１回×４０ｍＬ）及びブライン（１回×４０ｍＬ）で洗浄した。次いで、濾液を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、５分間撹拌し、濾過し、濾液を乾燥するまで濃縮させて、亜リン酸塩７ｂを得た（ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １４４４．４５［Ｍ＋１］+）。
【０１９７】
粗亜リン酸塩化合物７ｂは、更に精製することなく次の工程で使用した。粗化合物７ｂを無水ピリジン（１００ｍＬ）に溶解し、（Ｅ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ’−（３−チオキソ−３Ｈ−１，２，４−ジチアゾール−５−イル）ホルムイミダミド（ＤＤＴＴ、２．１２ｇ、１０．２９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。室温で１時間撹拌した後、反応混合物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１回×４０ｍＬ）及びブライン（１回×４０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥するまで濃縮した。水相を酢酸エチル（１回×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を減圧下で乾燥するまで濃縮し、粗物質を得て、これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中０〜８％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、ジ−ＤＭＴｒ−ホスホロチオエートダイマー７ｃ（４．６ｇ、約９２％、純度９０％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  １４７６．９０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９８】
工程２：化合物７ｄの調製
二量体７ｃ（４．５ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を８０％ＡｃＯＨ水溶液：アセトニトリル（９０ｍＬ、８：２、ｖ／ｖ）に溶解した。反応混合物を４５℃で２０時間撹拌した後、混合物を酢酸エチル（４００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３回×８０ｍＬ）及びブライン（１回×５０ｍＬ）で連続して洗浄した。水相を分離し、酢酸エチル（１回×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を減圧下で乾燥するまで濃縮し、得られた粗残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中０〜１５％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、ダイマー７ｄ（１．６５ｇ、６３％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ８７２．１０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０１９９】
工程３：化合物７ｆの調製
ダイマー化合物７ｄ（２７５ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）を無水トルエン／無水アセトニトリル（１：１、ｖ／ｖ、３×１０ｍＬ）の混合物と共沸させた後、無水アセトニトリル（２０ｍＬ）に溶解し、化合物７ｄを完全溶解させるために５分間超音波処理した。次いで、４Åモレキュラーシーブ粉末（０．６ｇ）及びアセトニトリル中のテトラゾール（５．６ｍＬ、０．４５Ｍ、２．５２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた不均質混合物をバブリングＡｒ(g)で４分間パージした。混合物を室温で１０分間撹拌した後、２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホラミダイト（１４２ｍｇ、０．４７３ｍｍｏｌ、１．５当量）を５回にわけ、室温で２０分間かけて添加した。室温で９０分間撹拌した後、反応混合物を酢酸エチル（６０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１×２０ｍＬ）及びブライン（１×２０ｍＬ）で連続して洗浄した。次いで、濾液を５分間撹拌しながら乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮し、化合物７ｅ（ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ９７１．１０［Ｍ＋１］+）を得た。得られた残留物を更に精製せずに次の工程で使用した。
【０２００】
粗化合物７ｅを無水ジクロロメタン（２５ｍＬ）に溶解し、これに、４Åモレキュラーシーブ粉末（０．５ｇ）を添加した。得られた不均質混合物をバブリングＡｒ(g)で４分間パージした。混合物を室温で１０分間撹拌したら、混合物を０℃まで冷却した。ボランジメチルスルフィド錯体溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ、ＢＨ3・ＤＭＳ、５５０μＬ、３．５当量）を０℃で５分間にわたって非常にゆっくり添加し、反応混合物を室温で１２分間撹拌した。次いで、混合物を素早く濾過し、酢酸エチル（８０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。有機相をブラインで洗浄し（１×２０ｍＬ）、水層を酢酸エチルで抽出した（１×２０ｍＬ）。合わせた有機層を減圧下で乾燥するまで濃縮して粗残渣を得て、これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜１０％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、ジアステレオマー７ｆの混合物（１３０ｍｇ、２工程について約４２％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ９８４．９５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２０１】
工程４：化合物７ｇ及び化合物７ｈの調製
ジアステレオマー７ｆ（１３０ｍｇ）の混合物を、アンモニア／エタノール水溶液の混合物（７ｍＬ、３：１、ｖ／ｖ）に溶解した。反応混合物を５０℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を乾燥するまで濃縮し、エタノール（２回×１０ｍＬ）及びトルエン（２回×２０ｍＬ）と共沸させた。得られた粗固体をジクロロメタン（１５ｍＬ）で洗浄し、濾過により回収し、逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ  ４μ，Ｈｙｄｒｏ  ＲＰ、２５０ｍｍ×３０ｍｍ、移動相：緩衝液Ａ：Ｈ2Ｏ中の５０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム；緩衝剤Ｂ：ＣＨ3ＣＮ中５０ｍＭのトリエチルアンモニオムアセテート、勾配：３０分にわたってＢの０〜３０％、流速２４ｍＬ／分）により精製し、第１の微量成分のボラノホスホチオエート異性体７ｇ（８．７ｍｇ）及び第２の主なボラノホスホチオエート異性体７ｈ（１３．１ｍｇ）を、酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＡ）塩として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ７０３．１［Ｍ−１］-。
【０２０２】
工程５：化合物９及び化合物１０の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（５ｍＬ、Ｈ形態）をビーカーに加え、脱イオン水（３０ｍＬ）で洗浄した。次いで、樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、次いで、デカンテーションした（３０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性ｐＨ７が得られるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂を上述のビーカーに戻し、１５％ＮａＯＨ水溶液（脱イオン水）を添加し、混合物を穏やかに５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４ＣＶ）、次いで、中性ｐＨ７が得られるまで脱イオン水で洗浄した。各ボラノホスホチオエート異性体７ｇ（８．７ｍｇ）及び７ｈ（１３．１ｍｇ）のＴＥＡＡ塩を最小量の脱イオン水に溶解し、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出した。化合物９及び１０の適切な画分を一緒にプールし、凍結乾燥して、ナトリウム塩としてそれぞれ化合物１０（７．８ｍｇ）及び化合物９（１２．４ｍｇ）を得た。
【０２０３】
化合物９（主要異性体）：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．０７（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，０．５Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，０．５Ｈ）５．１６−５．１９（ｍ，１Ｈ），４．８３−４．８９（ｍ，１Ｈ），４．４１−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．２５−４．３２（ｍ，２Ｈ），４．０６−４．１７（ｍ，２Ｈ），３．８８−３．９４（ｍ，１Ｈ），３．４６（ｓ，３Ｈ），−０．１から０．６５まで（非常に広いピーク，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９４−９５（非常に広いピーク，ボラノホスフェート），５２．５９（ホスホロチオエート）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７９ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．７（多重）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：７０３．１［Ｍ−１］-。
【０２０４】
化合物１０（微量成分異性体）：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）：δ８．１８（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，０．５Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，０．５Ｈ）５．０７〜５．３０（ｍ，２Ｈ），４．４０〜４．４８（ｍ，２Ｈ），４．２０〜４．３５（ｍ，２Ｈ），４．１０〜４．１４（ｍ，１Ｈ），３．９６〜４．００（ｍ，１Ｈ），３．８３〜３．８８（ｍ，１Ｈ），３．４８（ｓ，３Ｈ），０．２から０．８まで（非常に広いピーク，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９４〜９５（非常に広いピーク，ボラノホスフェート），５７．７９（ホスホロチオエート）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７９ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０２．４（多重）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ：７０３．１［Ｍ−１］-。
【０２０５】
（実施例８）
【０２０６】
【化３４】
2020500862.tif 000040
【０２０７】
【化３５】
2020500862.tif 000041
【０２０８】
【化３６】
2020500862.tif 000042
【０２０９】
工程１：化合物８ａの調製
化合物７ｂ（８ｇ、５．５３８ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（８０ｍＬ）溶液に、４Åモレキュラーシーブ粉末（８ｇ）を添加し、得られた不均質な混合物をアルゴンで４分間バブリングした。室温で３０分間撹拌した後、ボランジメチルスルフィド錯体溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ、ＢＨ3・ＤＭＳ、９．１３８ｍＬ、１８．２７７ｍｍｏｌ）を０℃で５分間にわたって非常にゆっくり添加した。反応物を室温で２時間撹拌した後、反応混合物を素早く濾過し、ＣＨ2Ｃｌ2（４０ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）でクエンチした。相を分離し、有機層を水（１×５０ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で順次洗浄し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（１×５０ｍＬ）で逆抽出した。合わせた有機層を減圧下で乾燥するまで濃縮し、得られた粗物質をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１／０〜０／１）により精製し、淡黄色の油状物として化合物８ａ（７．５ｇ、５．１４３ｍｍｏｌ）を得た。
【０２１０】
工程２：化合物８ｂの調製
化合物８ａ（７．５ｇ、５．１４３ｍｍｏｌ）を、ＣＨ3ＣＮ（２０ｍＬ）の８０％酢酸水溶液（６０ｍＬ）（ＣＨ3ＣＮ／酢酸水溶液＝１／３、酢酸４８ｍＬ、Ｈ2Ｏ１２ｍＬ、ＣＨ3ＣＮ２０ｍＬ）に添加した。混合反応物を２５℃で一晩撹拌した後、トリエチルシランを添加し、反応物を２５℃で更に１時間撹拌した。反応混合物を素早く濾過し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。飽和ＮａＨＣＯ3水溶液を用い、ｐＨを７〜８に調整した。相を分離し、有機層を水（１×１００ｍＬ）、ブライン（１×１００ｍＬ）で連続的に洗浄し、減圧下乾燥するまで濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（石油／ＥｔＯＡｃ＝０／１、次いでＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝１／０〜２０／１）により精製して、白色固体として化合物８ｂ（６．５ｇ、７．１２６ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝８５４．１［Ｍ＋１］+；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．０７（ｂｒｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，１Ｈ），１１．５６（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），１１．２２（ｂｒｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），８．５６−８．４１（ｍ，１Ｈ），８．２７−８．１８（ｍ，１Ｈ），８．０２（ｂｒｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６５−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．５６−７．５０（ｍ，２Ｈ），６．３５（ｂｒｔ，Ｊ＝１９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），５．６５−５．４３（ｍ，１Ｈ），５．３４−５．２０（ｍ，２Ｈ），４．７５−４．５５（ｍ，１Ｈ），４．１６−３．９７（ｍ，６Ｈ），３．９２−３．８２（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．４９（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ），２．８１−２．６６（ｍ，３Ｈ），１．０８（ｂｒｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），０．５９−−０．１８（ｍ，３Ｈ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）１１５．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｐ）。
【０２１１】
工程３：化合物８ｃの調製
化合物８ｂ（１ｇ、１．０９６ｍｍｏｌ）をＣＨ3ＣＮ（３×２０ｍＬ）と共沸させ、無水ＣＨ3ＣＮ（４４ｍＬ）に溶解した。次いで、４Åのモレキュラーシーブ粉末（１０００ｍｇ）に加え、混合物を３０分間撹拌した後、テトラゾールのＣＨ3ＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１４．６ｍＬ、６当量）を室温で添加した。得られた混合物を室温で１５分間攪拌した。次いで、３−（（ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル）オキシ）プロパンニトリル（４９５．６４７ｍｇ、１．６４４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ3ＣＮ（５．０ｍＬ）溶液を２０分かけて滴下した。反応混合物を１時間撹拌した後、ＣＨ3ＣＮ（０．４５Ｍ、９．７ｍＬ、４当量）中のテトラゾールの更なる溶液をこの混合物に室温で添加した。次いで、反応混合物を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃで抽出した（３回×４００ｍＬ）。合わせた有機層をＮａＨＣＯ3水溶液（３×２００ｍＬ）、ブライン（３×２００ｍＬ）で連続して洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  １００：０〜ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  ９０：１０）により精製して、白色固体として化合物８ｃ（６００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を得た。
【０２１２】
工程４：化合物８ｄの調製
化合物８ｃ（６００ｍｇ  ０．６３ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2（１５ｍＬ）溶液に、２Ｍボラン−ジメチルスルフィド錯体のＴＨＦ溶液（１０３９．２７６μＬ、２．０７９ｍｍｏｌ）を０℃で５分間にわたって非常にゆっくりと添加した。反応混合物を０℃で１５分間撹拌した後、反応を０℃でＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を用いてクエンチし、次いで減圧下で濃縮した。この反応を、同じスケールを用いて２回繰り返した。２つの粗バッチを合わせ、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶出剤：ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  １００：０〜ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ  ９０：１０）により精製して、白色固体として化合物８ｄ（１ｇ、１．０３５ｍｍｏｌ、バッチを合わせたもの）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝９６６．４［Ｍ＋１］+。
【０２１３】
工程５：化合物１１及び１２の調製
化合物８ｄ（１．０ｇ、１．０３５ｍｍｏｌ）を、ＭｅＮＨ2のＥｔＯＨ溶液（３３％、１０ｍＬ）で処理した。室温で３時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を分取高速液体クロマトグラフィー（分取ＨＰＬＣ条件：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  ＸＢ−Ｃ１８  １５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μｍ；条件：Ｈ2Ｏ（Ａ）−ＣＨ3ＣＮ（Ｂ）；Ｂ：０で開始；Ｂ：２０で終了；流速：２５ｍＬ／分）により精製した。純粋画分を回収し、乾燥するまで凍結乾燥して、粗化合物１１（０．１１ｇ、０．１６０ｍｍｏｌ）及び粗化合物１２（０．１４ｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。
【０２１４】
粗化合物１１及び１２を、更に、分取高速液体クロマトグラフィー（Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ条件：カラム：ＤｕｒａＳｈｅｌｌ  １５０×２５ｍｍ×５μｍ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）（Ａ）−ＣＨ3ＣＮ（Ｂ）；Ｂ：０で開始；Ｂ：１５で終了；流速：３５ｍＬ／分）により精製した。純粋画分を回収し、乾燥するまで凍結乾燥して、化合物１１（０．０８ｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）及び化合物１２（０．０４ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）をそれぞれ白色固体として得た。
【０２１５】
化合物１１：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２１（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，２Ｈ），８．０５（ｓ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．７３−５．５５（ｍ，１Ｈ），５．１９−５．０２（ｍ，２Ｈ），４．５５−４．４８（ｍ，２Ｈ），４．３４−４．２４（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０５−３．９４（ｍ，２Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ），０．７６−０．１３（ｍ，３Ｈ），−０．３２（ｂｒｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８６．９［Ｍ＋１］+；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−２０２．０２（ｔｄ，Ｊ＝２０．０，５０．３Ｈｚ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δｐｐｍ−９４．４２（ｂｒ  ｓ，１Ｐ）。
【０２１６】
化合物１２：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．３１（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｂｒｓ，１Ｈ），６．４０（ｂｒｄ，Ｊ＝１５．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｂｒｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），５．６４−５．４７（ｍ，１Ｈ），５．３５（ｂｒｓ，１Ｈ），５．００−４．８６（ｍ，１Ｈ），４．５４−４．４５（ｍ，２Ｈ），４．３８（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｂｒｄ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｂｒｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｂｒｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｓ，３Ｈ），０．２４（ｂｒｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８６．９［Ｍ＋１］+；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−２００．７７−−２０２．５７（ｍ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）９９．６８−８４．６７（ｍ，１Ｐ）。
【０２１７】
工程６：化合物１１ナトリウム塩及び化合物１２ナトリウム塩の調製
化合物１１ナトリウム塩。Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、５０ｇ）をビーカーに添加し（化合物１１の４５ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１１を脱イオン水に溶解し（４０ｍＬ中５０ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物１１は、カラムから初期の画分において溶出した。生成物を凍結乾燥し、標的化合物１１ナトリウム塩（２４．３ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８６．９［Ｍ＋１］+；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ７．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｓ），５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ），５．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．１６〜５．３２（１Ｈ，ｍ），４．６５〜４．８４（２Ｈ，ｍ），４．１９〜４．２８（２Ｈ，ｍ），３．９６〜４．１１（２Ｈ，ｍ），３．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），３．６９〜３．８０（２Ｈ，ｍ），３．３１（３Ｈ，ｓ），−１．０７−０．４５（６Ｈ，ｍ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−２０２．０６（１Ｆ，ｓ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）９４．３９（１Ｐ，ｂｒ  ｓ）。
【０２１８】
化合物１２ナトリウム塩。Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、５０ｇ）をビーカーに添加し（化合物１２の５０ｍｇ用）、脱イオン水で洗浄し（２回）、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１２を脱イオン水に溶解し（４０ｍＬ中５０ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物１２は、カラムから初期の画分において溶出した。生成物を凍結乾燥し、標的化合物１２ナトリウム塩（４３．３ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８６．９［Ｍ＋１］+；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．１１（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），６．２８（ｄ，Ｊ＝１６．０６Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝８．５３Ｈｚ，１Ｈ），５．４４〜５．６０（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｔｄ，Ｊ＝８．９７，４．３９Ｈｚ，１Ｈ），４．８６〜５．００（ｍ，１Ｈ），４．４６〜４．５５（ｍ，２Ｈ），４．３７（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），４．１９〜４．２８（ｍ，１Ｈ），４．１９〜４．２８（ｍ，１Ｈ），４．１５（ｂｒｄｄ，Ｊ＝１１．６７，２．１３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｂｒｄ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），−０．０１〜０．７５（ｍ，６Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−２０１．５９（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）９４．０１（ｂｒ  ｓ，１Ｐ）。
【０２１９】
（実施例９）
【０２２０】
【化３７】
2020500862.tif 000043
【０２２１】
【化３８】
2020500862.tif 000044
【０２２２】
【化３９】
2020500862.tif 000045
【０２２３】
工程１：化合物８ａの調製
化合物７ｂ（１０．４６ｇ、７．２４１ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ2Ｃｌ2（１００ｍＬ）に溶解し、４Åモレキュラーシーブ粉末（４．０ｇ）をこの溶液に添加した。得られた不均質な混合物を減圧下で脱気し、アルゴンで数回パージした。この混合物を２５℃で３０分間撹拌した後、ボランジメチルスルフィド錯体溶液（ＴＨＦ中２．０Ｍ、ＢＨ3・ＤＭＳ、１１．９４８ｍＬ、２３．８９７ｍｍｏｌ）を０℃で５分間非常にゆっくり添加した。反応物を２５℃で２０分間撹拌した後、反応混合物を素早く濾過し、ＣＨ2Ｃｌ2（１２０ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。有機相を、水（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で連続的に洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで逆抽出した（５０ｍＬ）。合わせた有機層を減圧下で濃縮し、得られた粗物質をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製して、黄色固体として化合物８ａ（１１．１ｇ、７．６１２ｍｍｏｌ）を得た。
【０２２４】
工程２：化合物８ｂの調製
化合物８ａ（１１．１ｇ、７．６１２ｍｍｏｌ）を８０％ＡｃＯＨ水溶液／ＣＨ3ＣＮ／Ｅｔ3ＳｉＨ（３／１／１、ｖ／ｖ、２００ｍＬ）に溶解した。混合物を３７℃で１６時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で中和した。有機層を水（５００ｍＬ）及びブライン（２×２５０ｍＬ）で連続的に洗浄し、次いでＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発させ、残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製して、白色泡状物として化合物８ｂ（３．６ｇ、４．２１８ｍｍｏｌ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ８５４．２［Ｍ＋Ｈ］+；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤ3ＣＮ）δ−２０３．０９（ｓ，１Ｆ），−２０３．３６（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，ＣＤ3ＣＮ）δ１１６．９５〜１１６．３４（ｍ，１Ｐ）。
【０２２５】
工程３：化合物８ｃの調製
化合物８ｂ（１．５ｇ、１．７５７ｍｍｏｌ）を無水トルエン／ＣＨ3ＣＮ（１／１  ｖ／ｖ、３×２０ｍＬ）の混合物と共沸させて、白色固体を得た。次いで、この固体を無水ＣＨ3ＣＮ（８０ｍＬ）に溶解し、４Åモレキュラーシーブ粉末（２．０ｇ）をこの溶液に添加した。この混合物を２５℃で３０分間撹拌した後、この溶液に、テトラゾールのＣＨ3ＣＮ溶液（０．４５Ｍ、３１．２４２ｍＬ、１４．０５９ｍｍｏｌ）を、２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で２０分間攪拌した。この溶液に、２−シアノエトキシビス−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスフィン（７９４．５１９ｍｇ、２．６３６ｍｍｏｌ）を２０分かけて添加した（５回にわけて）。６０分間撹拌した後、更なるテトラゾールのＣＨ3ＣＮ溶液（０．４５Ｍ、１０ｍＬ）をこの溶液に添加した。更に１時間撹拌した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、濾過した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ（５分間攪拌後、濾過）、濾液を乾燥するまで蒸発させて、化合物８ｃ（１．７６ｇ、粗）を白色固体として得た。得られた固体を、更なる精製は行わずに次の工程に直接使用した。工程３を、同じスケールを用いて２回繰り返した。
【０２２６】
工程４：化合物９ａ及び９ｂの調製
化合物８ｃ（１．７６ｇ、１．８４８ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（３０ｍＬ）溶液に、２５℃で３Ｈ−ベンゾ［ｃ］［１，２］ジチオール−３−オン１，１−ジオキシド（１．８５ｇ、９．２３８ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃で１時間撹拌した後、反応混合物を濾過し、得られたケーキをＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨで洗浄した（１０／１、２０ｍＬ×３）。合わせた濾液を加圧下で濃縮し、残渣を得た。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ＝１００／１〜１０／１）により精製して、黄色の泡状物として化合物９ａ（６５２ｍｇ）を得て、黄色の泡状物として化合物９ｂ（６６０ｍｇ）を得た。
【０２２７】
化合物９ａを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８  ２５０×５０  １０ｍμ）移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ、Ｂ：３０で開始、Ｂ：６０で終了；流速：２５ｍＬ／分勾配時間：１５分）により再精製し、化合物９ａ（２２５ｍｇ、０．２２９ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。化合物９ｂを逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０×２５  ５μｍ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ、Ｂ：３７で開始、Ｂ：６７で終了；流速：２５ｍＬ／分勾配時間：８分）により再精製し、化合物９ｂ（３５１ｍｇ、０．３５６ｍｍｏｌ、収率１９．２９４％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ９８５．５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２８】
工程５：化合物１３アンモニウム塩の調製
化合物９ａ（１００ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）をＭｅＮＨ2（ＥｔＯＨ中３３％、５ｍＬ）で処理し、２５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得た。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μｍ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ、Ｂ：０で開始、Ｂ：１５％で終了、流速：３５ｍＬ／分、勾配時間：１０分）により精製し、化合物１３アンモニウム塩（５６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ７０４．８［Ｍ＋Ｈ］+。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．３０（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．９３（ｂｒｓ，２Ｈ），６．４１（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９８−５．６８（ｍ，２Ｈ），５．５７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），５．２４−４．９５（ｍ，１Ｈ），４．６２−４．３５（ｍ，３Ｈ），４．２９−４．１２（ｍ，３Ｈ），４．０２（ｂｒｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），−０．４８（ｂｒ，ｓ，３Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−１９９．６４−−２０１．３７（ｍ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）９１．３７（ｓ，１Ｐ），９１．３１（ｓ，１Ｐ），９０．５２（ｓ，１Ｐ），８９．９４（ｓ，１Ｐ），５２．３６（ｓ，１Ｐ），５２．２６（ｓ，１Ｐ）。
【０２２９】
工程６：化合物１３ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（Ｈ形態、５０ｇ）をビーカーに添加し（化合物１３の５６ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１２を脱イオン水に溶解し（４０ｍＬ中５０ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、化合物１２は、カラムから初期の画分において溶出した。化合物１３を脱イオン水に溶解し（３０ｍＬ中５６ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、カラムから初期の画分において溶出した。生成物を凍結乾燥し、標的化合物１３Ｎａ塩（４５．４ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２５（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｓ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝１４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９１−５．８４（ｍ，１．５Ｈ），５．７６（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，０．５Ｈ），５．６０−５．５１（ｍ，１Ｈ），５．１９−５．０４（ｍ，１Ｈ），４．６１−４．５３（ｍ，２Ｈ），４．５２−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．２７−４．１８（ｍ，３Ｈ），４．０７（ｄｄ，Ｊ＝４．０，１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），０．４７−−０．８９（ｍ，３Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）−２０１．９３（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９２．４７（ｂｒｄｄ，Ｊ＝２６．４，７３．４Ｈｚ，１Ｐ），９１．９８（ｓ，１Ｐ），９１．７１（ｓ，１Ｐ），９１．２４（ｓ，１Ｐ），９１．１９（ｓ，１Ｐ），９１．１０（ｓ，１Ｐ），９０．９７（ｓ，１Ｐ），５２．７８（ｓ，１Ｐ），５２．６４（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ７０４．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３０】
工程７：化合物９ｃの調製
化合物９ｂ（３１１ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ／ＥｔＯＨ（１／１、５ｍＬ）溶液にｔｅｒｔ−ブチルアミン（５ｍＬ）を加えた。２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得た。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０×２５  ５μｍ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ、Ｂ：８で開始、Ｂ：３８で終了；流速：２５ｍＬ／分勾配時間：８分）により再精製し、化合物９ｃ（２４３ｍｇ、０．２７７ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。
【０２３１】
工程８：化合物１４アンモニウム塩の調製
化合物９ｃ（２４３ｍｇ、０．２７７ｍｍｏｌ）をＭｅＮＨ2（ＥｔＯＨ中３３％、１０ｍＬ）で処理し、２５℃で１２時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得た。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μｍ；移動相：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ、Ｂ：０で開始、Ｂ：１５％で終了、流速：３５ｍＬ／分、勾配時間：１０分）により精製し、化合物１４アンモニウム塩（１２５ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０１（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９５−５．７６（ｍ，２Ｈ），５．５６（ｄｔ，Ｊ＝４．３，８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．２１−５．０５（ｍ，１Ｈ），４．６４−４．４６（ｍ，３Ｈ），４．３３−４．１５（ｍ，４Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），０．９６−−０．３９（ｍ，３Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．７７（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９３．５０（ｓ，１Ｐ），９２．４４（ｓ，１Ｐ），５２．５１（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ７０４．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３２】
工程９：化合物１４ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（Ｈ形態、５０ｇ）をビーカーに添加し（化合物１４の１２５ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１４を脱イオン水に溶解し（４０ｍＬ中１２５ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、標的化合物１４ナトリウム塩（１０５．４ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２１（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），６．３８（ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，１Ｈ），５．８９−５．７２（ｍ，２Ｈ），５．６７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），５．１９−５．０２（ｍ，１Ｈ），４．６２−４．４２（ｍ，３Ｈ），４．２７−４．１７（ｍ，３Ｈ），４．０７（ｂｒｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ），０．３６（ｂｒ，ｓ，３Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７７ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．２５（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９２．４２−９０．９３（ｍ，１Ｐ），５２．３５（ｓ，１Ｐ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ７０４．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３３】
（実施例１０）
【０２３４】
【化４０】
2020500862.tif 000046
【０２３５】
【化４１】
2020500862.tif 000047
【０２３６】
工程１：化合物７ｂの調製
化合物１ｆ（５．０ｇ、７．４７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１８０ｍＬ）溶液に、１Ｈ−テトラゾール（０．４５Ｍ、１３２．７ｍＬ）を２５℃で添加した。溶液を２５℃で１０分間撹拌した後、化合物７ａ（６．８７ｇ、７．８４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）溶液を滴下した。２５℃で２時間撹拌した後、この溶液を、更に精製することなく次の工程に使用した。
【０２３７】
工程２：化合物１０ａの調製
上述の化合物７ｂ（３３２．７ｍＬ、７．４４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（３．３５ｇ、３７．２２ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。２５℃で１．５時間撹拌した後、溶液をＥＡ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（２×１００ｍＬ）及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4上で連続的に乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて、白色固体として化合物１０ａ（１０ｇ）を得た。
【０２３８】
工程３：化合物１０ｂの調製
化合物１０ａ（１０ｇ、粗）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液に、トリエチルシラン（４０ｍＬ）及び８０％酢酸のアセトニトリル溶液（２００ｍＬ）を２５℃で添加した。溶液を５０℃で１２時間撹拌した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液でｐＨ８に中和した。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で連続的に洗浄し、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。水層をＥｔＯＡｃ（２回×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。混合した粗物質を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中０〜９％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、白色固体として化合物１０ｂ（５ｇ）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ８５６．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２３９】
工程４：化合物１０ｃの調製
テトラヒドロフラン（２ｍＬ）及びアセトニトリル（７５ｍＬ）中の化合物１０ｂ（１．５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｈ−テトラゾール（０．４５Ｍ、１５．５８ｍＬ、７．０１ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。次いで、３−（（ビス（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ）オキシ）プロパンニトリル（８４５．３４ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５ｍＬ）溶液を２５℃で添加した。２５℃で１．５時間撹拌した後、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で溶液を洗浄し、減圧下で蒸発させて、黄色固体として化合物１０ｃ（１．８ｇ）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９５５．５［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４０】
化合物１５の調製
工程５：化合物１０ｄ＋１０ｅの調製
化合物１０ｃ（１．５ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、０℃で２分間かけて、ボランジメチルスルフィド（２．３６ｍＬ、４．７１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１５分間撹拌した後、水（３０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して黄色固体を得た。固体をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、有機層を水（２×１００ｍＬ）、ブライン（３×１００ｍＬ）で連続的に洗浄し、加圧下で濃縮して残渣を得た。粗固体をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2中０〜９％ＭｅＯＨ、ｖ／ｖ）により精製して、黄色固体として化合物１０ｄ及び１０ｅの混合物（５００ｍｇ、粗）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９６９．３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４１】
工程６：化合物１５の調製
エタノール（１４ｍＬ）とＮＨ4ＯＨ（４２ｍＬ）との混合物中の化合物１０ｄ及び１０ｅ（５００ｍｇ、粗）の溶液を５０℃で１２時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、黄色固体を得た。黄色固体を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｐｏｌａｒ−ＲＰ  １００×３０  ５μＭ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ；Ｂ：０で開始、Ｂ：２０で終了；勾配時間（分）：１２；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製して、白色固体として化合物１５（１１０ｍｇ）を得た。化合物１５を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  ＸＢ−Ｃ１８  １５０ｍｍ×３０ｍｍ、５μＭ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ；Ｂ：０で開始、Ｂ：５で終了；勾配時間（分）：７；流速（ｍＬ／分）：３０）により２回目の精製を行い、化合物１５アンモニウム塩（４５ｍｇ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ  ８．３１（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），６．４３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６７−５．４７（ｍ，１Ｈ），５．２８（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．９３（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．６１−４．４９（ｍ，２Ｈ），４．４３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｂｒ，ｓ，２Ｈ），４．１８（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．０５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），０．３３（ｂｒｓ，３Ｈ）．19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ２０１．８２（ｓ，１Ｆ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９６．０９（ｂｒ，ｓ，１Ｐ），−２．４０（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８８．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４２】
工程７：化合物１５ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（Ｈ形態、５ｍＬ）をビーカーに添加し（化合物１５アンモニウム塩の４５ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１５アンモニウム塩を脱イオン水に溶解し（５ｍＬ中４５ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物１５ナトリウム塩Ｐ１（４２．６ｍｇ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２１（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），６．３９（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．７０−５．５２（ｍ，１Ｈ），５．２３（ｄｔ，Ｊ＝４．５，８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．０４−４．８８（ｍ，１Ｈ），４．６３−４．５１（ｍ，３Ｈ），４．４４（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３１−４．１９（ｍ，３Ｈ），４．０６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），０．６７−０．１２（ｍ，３Ｈ）。19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０１．８０（ｓ，１Ｆ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９５．４５（ｓ，１Ｐ），−２．２６（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８８．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４３】
化合物１５及び化合物１６の調製
工程５：化合物１０ｄ＋１０ｅの調製
化合物１０ｃ（２．３ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）溶液に、０℃で２分間、ボランジメチルスルフィド（３．６１ｍＬ、７．２３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１５分間撹拌した後、水（２０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して黄色固体を得た。固体をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、有機層を水（２ｘ１００ｍＬ）、ブライン（３×１００ｍＬ）で連続的に洗浄し、加圧下で濃縮して黄色残渣を得た。粗固体を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μＭ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ；Ｂ：２５で開始、Ｂ：５５で終了；勾配時間（分）：１２；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製し、化合物１０ｄ及び１０ｅ（６５ｍｇ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）δ８．８１−８．７１（ｍ，１Ｈ），８．５０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６９−７．５４（ｍ，３Ｈ），６．５９−６．５０（ｍ，１Ｈ），６．３７−６．２６（ｍ，２Ｈ），６．０２−５．８６（ｍ，１Ｈ），５．２６−５．０４（ｍ，２Ｈ），４．７７−４．６８（ｍ，１Ｈ），４．６３−４．５４（ｍ，３Ｈ），４．４３（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．３４−４．２７（ｍ，２Ｈ），３．８６−３．６９（ｍ，２Ｈ），２．９８−２．９０（ｍ，３Ｈ），２．７１（ｂｒ，ｄｄ，Ｊ＝５．８，１３．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６１−２．４９（ｍ，１Ｈ），１．２２（ｔｄ，Ｊ＝３．３，６．７Ｈｚ，７Ｈ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９６９．３［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４４】
工程６：化合物１５及び化合物１６の調製
エタノール（４ｍＬ）とＮＨ4ＯＨ（１２ｍＬ）との混合物中の化合物１０ｄ及び１０ｅ（６５ｍｇ、粗）の溶液を５０℃で１２時間撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、残渣を得た。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｐｏｌａｒ−ＲＰ  １００×３０  ５μＭ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＡＣＮ；Ｂ：０で開始、Ｂ：２０で終了；勾配時間（分）：１２；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製して、白色固体として化合物１５（３７ｍｇ）及び化合物１６（１７ｍｇ）を得た。
【０２４５】
化合物１５アンモニウム塩：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．４１（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），８．２３（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），７．９８（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），６．４６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ，１Ｈ），５．９９（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），５．７４−５．４６（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），５．０７−４．９１（ｍ，１Ｈ），４．６１−４．５０（ｍ，２Ｈ），４．４２（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．２６（ｂｒ，ｓ，２Ｈ），４．１６（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），４．０５（ｂｒ，ｓ，１Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），０．７１−０．０７（ｍ，２Ｈ）。19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−７５．６３（ｓ，１Ｆ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９４．５６（ｓ，１Ｐ），−３．６９（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８８．９［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４６】
化合物１６アンモニウム塩：1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．３７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．２４（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９１−５．８８（ｍ，１Ｈ），５．８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．５１（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３８（ｂｒｓ，１Ｈ），５．３２−５．２０（ｍ，１Ｈ），４．５６−４．４８（ｍ，２Ｈ），４．４５−４．３６（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．１７（ｍ，３Ｈ），４．０９（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｓ，３Ｈ），０．６１−０．１０（ｍ，３Ｈ）。19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−２０２．９（ｓ，１Ｆ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９６．６７（ｍ，１Ｐ），−３．０２（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８９．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４７】
工程７：化合物１５ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００〜４００（Ｈ形態、５ｍＬ）をビーカーに添加し（化合物１５アンモニウム塩の３７ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂（１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液、５０ｍＬ）に添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラム体積）。化合物１５アンモニウム塩を脱イオン水に溶解し（５ｍＬ中３７ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物１５ナトリウム塩Ｐ１（２８．４ｍｇ）を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２５（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０２（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），５．７０−５．５２（ｍ，１Ｈ），５．３０−５．２１（ｍ，１Ｈ），５．０６−４．９１（ｍ，１Ｈ），４．６２−４．５４（ｍ，２Ｈ），４．４４（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｂｒ，ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），０．７１−０．０９（ｍ，３Ｈ）。19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−７５．６２（ｓ，１Ｆ），−２０１．８９（ｓ，１Ｆ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９６．０８（ｓ，１Ｐ），−２．２４（ｓ，１Ｐ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ６８８．８［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４８】
（実施例１１）
【０２４９】
【化４２】
2020500862.tif 000048
【０２５０】
【化４３】
2020500862.tif 000049
【０２５１】
工程１：（１１ａ）の調製
８ｂ（１００ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＣＨ3ＣＮ／ＴＨＦ（１：１、ｖ／ｖ、４．４ｍＬ）溶液に、４Åモレキュラーシーブ（１ｇ）及び１Ｈ−テトラゾールのＣＨ3ＣＮ溶液（１．９４ｍＬ、０．９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した後、この混合物に、ＣＨ3ＣＮ中の２−シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（４９．５６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌し、ＣＨ3ＣＮ中の１Ｈ−テトラゾール（０．４９ｍＬ、０．２２ｍｍｏｌ、０．４５Ｍ）を混合物に添加した。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した後、０．５Ｍ  Ｉ2のＴＨＦ：Ｐｙ：Ｈ2Ｏ（８：１：１；Ｖ／Ｖ／Ｖ）（０．６６ｍＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を反応物に加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を添加した。得られた混合物を濾過し、濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ａｇｅｌａ  Ｄｕｒａｓｈｅｌｌ  Ｃ１８  １５０×２５  ５μＭ；条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＣＡＮ  Ａ：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）  Ｂ：ＭｅＣＮ；Ｂ：２５％で開始、Ｂ：５５％で終了、勾配時間（分）１２；１００％Ｂ保持時間（分）２．２；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製した。純粋画分を回収し、減圧下で溶媒を濃縮し、水層を乾燥するまで凍結乾燥させ、１１ａを白色固体として得た（２０ｍｇ）。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ９６９．３［Ｍ＋１］＋。
【０２５２】
工程２：化合物１７及び１８の調製
１１ａ（２０ｍｇ  ０．０１７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．５ｍＬ）溶液に、ＮＨ3・Ｈ2Ｏ（１．５ｍＬ、２５％）を添加した。この溶液を５０℃で３日間撹拌した後、反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で乾燥するまで濃縮した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｓｙｎｅｒｉ  Ｐｏｌａｒ−ＲＰ  １００×３０  ５μＭ条件：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）−ＭｅＣＮ  Ａ：水（１０ｍＭ  ＮＨ4ＨＣＯ3）Ｂ：ＭｅＣＮ；Ｂ：０％で開始、Ｂ：２０％で終了、勾配時間（分）１２；１００％Ｂ保持時間（分）２．２；流速（ｍＬ／分）：２５）により精製した。純粋画分を回収し、溶媒を減圧下で蒸発させて、白色固体として１７（２５ｍｇ）及び１８（２０ｍｇ）を得た。
【０２５３】
類似体１７アンモニウム塩：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８８．８［Ｍ＋１］＋。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２６（ｂｒｓ，１Ｈ）８．１８（ｓ，１Ｈ）７．７７（ｂｒｓ，１Ｈ）６．３８（ｂｒｄ，Ｊ＝１４．３１Ｈｚ，１Ｈ）５．７７（ｂｒｄ，Ｊ＝８．０３Ｈｚ，１Ｈ）５．６４（ｂｒｓ，１Ｈ）５．３０〜５．５２（ｍ，１Ｈ）４．９５〜５．１３（ｍ，１Ｈ）４．５０（ｂｒｄ，Ｊ＝９．０３Ｈｚ，１Ｈ）４．３４〜４．４４（ｍ，２Ｈ）４．０７〜４．２５（ｍ，３Ｈ）３．９９（ｂｒｄ，Ｊ＝１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）３．５２（ｓ，３Ｈ）−０．９２−０．０５（ｍ，３Ｈ）。
【０２５４】
類似体１８アンモニウム塩：ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６８８．８［Ｍ＋１］＋。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２９（ｓ，１Ｈ）８．１８（ｓ，１Ｈ）７．７５（ｓ，１Ｈ）６．３５（ｄ，Ｊ＝１４．０５Ｈｚ，１Ｈ）５．７６（ｓ，２Ｈ）５．３０−５．５２（ｍ，１Ｈ）４．９９−５．２０（ｍ，１Ｈ）４．３５〜４．５０（ｍ，３Ｈ）４．０９〜４．２２（ｍ，３Ｈ）３．９４〜４．０３（ｍ，１Ｈ）３．４７（ｓ，３Ｈ）０．０５（ｓ，３Ｈ）。
【０２５５】
工程３：１７ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、２５ｇ）をビーカーに添加し（化合物１７の３３ｍｇ用）、脱イオン水（２回）で洗浄し、次いで樹脂に、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液（８０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回×１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回×１０ｍＬ）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラム体積）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１７アンモニウム塩を脱イオン水に溶解し（５ｍＬ中３３ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物１７ナトリウム塩（１２．４ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８８．８［Ｍ＋１］+。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．０８−８．０５（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ），７．３７−７．３６（ｍ，１Ｈ），６．４１−６．３３（ｍ，１Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４４−５．２７（ｍ，２Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２０−４．１１（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，３Ｈ），３．４６（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２２−３．１８（ｍ，１Ｈ）；19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−１９６．８７（ｓ，１Ｆ）；31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ７．８０（ｓ，１Ｐ），−１．２２（ｓ，１Ｐ）。
【０２５６】
工程４：１８ナトリウム塩の調製
Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｗ×８，２００−４００（Ｈ形態、１５ｇ）をビーカーに添加し（化合物１８の３０ｍｇ用）、脱イオン水（２回×１０ｍＬ）で洗浄し、次いで樹脂に１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液（８０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回×１０ｍＬ）。樹脂を、１５％Ｈ2ＳＯ4脱イオン水溶液の入ったカラムに移し、１５％Ｈ2ＳＯ4で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、樹脂が中性になるまで脱イオン水で洗浄した。樹脂をビーカーに戻し、ＮａＯＨ溶液（１５％ＮａＯＨ水溶液、５０ｍＬ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、デカンテーションした（１回×１０ｍＬ）。樹脂をカラムに移し、１５％ＮａＯＨ水溶液で洗浄し（少なくとも４カラムボリューム）、次いで、中性になるまで水で洗浄した（少なくとも４カラムボリューム）。化合物１８アンモニウム塩を脱イオン水に溶解し（５ｍＬ中３０ｍｇ）、カラムの上部に添加し、脱イオン水で溶出させた。ＴＬＣ（ＵＶ）によって検出されるように、生成物は、初期の画分に溶出した。生成物を凍結乾燥し、化合物１８ナトリウム塩（１３．２ｍｇ）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝６８８．８［Ｍ＋１］+；1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ８．２２（ｓ，１Ｈ）８．１４（ｓ，１Ｈ）７．７６（ｓ，１Ｈ）６．３４（ｄ，Ｊ＝１４．０５Ｈｚ，１Ｈ）５．７７（ｄ，Ｊ＝８．２８Ｈｚ，１Ｈ）５．６０−５．６９（ｍ，１Ｈ）５．３０−５．４８（ｍ，１Ｈ）４．９４−５．１１（ｍ，１Ｈ）４．４９（ｂｒｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ）４．３５−４．４５（ｍ，２Ｈ）４．１７−４．２３（ｍ，１Ｈ）４．１２−４．１７（ｍ，１Ｈ）４．０９（ｂｒｄ，Ｊ＝４．５２Ｈｚ，１Ｈ）３．９９（ｂｒｄｄ，Ｊ＝１２．０５，４．５２Ｈｚ，１Ｈ）３．５２（ｓ，３Ｈ）−０．８７−０．０１（ｍ，３Ｈ）。31Ｐ  ＮＭＲ（１６２ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ９２．３８（ｂｒ  ｓ，１Ｐ）−１．３１（ｓ，１Ｐ）。19Ｆ  ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ−７５．６４（ｓ，１Ｆ）−２０２．９１（ｂｒ  ｓ，１Ｆ）。
【０２５７】
適切な試薬に置き換え、実施例３の方法によって以下の化合物を当業者によって調製することができる。
【０２５８】
【表３】
2020500862.tif 000050
【０２５９】
生物学的実施例
インビトロ・アッセイ
生物学的実施例１
ＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイは、トリチウム標識された２’，３’ｃＧＡＭＰ（環状（グアノシン−（２’→５’）−モノホスフェート−アデノシン−（３’→５’）−モノホスフェート）から、ビオチン化ＳＴＩＮＧタンパク質への置換を測定する。４つの膜貫通ドメインを欠いており、２３２位にＲを有する（Ｈ２３２Ｒ）Ｑ８６ＷＶ６の残基１３９−３７９を含む可溶化態様の組み替えＳＴＩＮＧを、Ｅ．ｃｏｌｉ内で発現させた。集団について対立遺伝子頻度が５８％であることに基づき、Ｈ２３２Ｒは、野生型であると考えられる（Ｙｉ，ｅｔ．ａｌ．，「Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ＳＴＩＮＧ  ｃａｎ  ａｆｆｅｃｔ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｙｃｌｉｃ  ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」  ＰＬＯＳ  ＯＮＥ．２０１３，８（１０），ｅ７７８４６）。ＳＴＩＮＧコンストラクトは、Ｎ末端にＨＩＳタグを有しており、それに続き、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位及びＡＶＩタグを有しており、ＢｉｒＡビオチンリガーゼによる選択的ビオチン化を可能にする（Ｂｅｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｉｎ  ｂｉｏｔｉｎ  ｈｏｌｏｅｎｚｙｍｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ−ｃａｔａｌｙｚｅｄ  ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ．（１９９９）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８，９２１〜９２９）。精製後、かつビオチン化の前に、ＨＩＳタグを切断させる。
【０２６０】
８ｎＭの［3Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰ及び４０ｎＭビオチン−ＳＴＩＮＧタンパク質をアッセイバッファー［２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ２５−０６０−Ｃ１）ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ  Ｓ５１５０）、０．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ  １５２６０−０３７）、０．００１％Ｔｗｅｅｎ−２０（Ｓｉｇｍａ  Ｐ７９４９）、分子生物学グレードの水（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ４６−０００−ＣＭ）］に加えることによって、ウェルあたりの合計体積８μＬで、１５３６ウェルプレートでアッセイを行った。試験化合物（８０ｎＬ）を、アコースティックディスペンサー（ＥＤＣ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて１００％ＤＭＳＯに加え、最終アッセイ濃度を１％ＤＭＳＯとした。プレートを１分間遠心分離し、室温で６０分間インキュベートした。最後に、（２μＬ）ポリスチレンストレプトアビジンＳＰＡビーズ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＲＰＮＱ０３０６）を加え、プレートを密封し、室温で１分間遠心分離した。プレートを２時間暗所で適応させ、プレート当たり１２分間ＶｉｅｗＬｕｘ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。［3Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰに関する飽和結合曲線は、ＳＴＩＮＧに対する結合について、天然リガンドについて報告されている値に匹敵する３．６±０．３のＫDを示した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ−ＡＭＰ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍｉｘｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ  ｌｉｎｋａｇｅｓ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＳＴＩＮＧ。
【０２６１】
環状ジ−ＧＭＰを含む他の天然リガンドもまた、予想される範囲内で、このアッセイにおいて値を返した。参照化合物はｃＧＡＭＰであり、結果は、阻害率及びＩＣ50値として報告される。マウスＳＴＩＮＧに対する結合は、Ｑ３ＴＢＴ３の残基１３８−３７８を含有する上述のものと類似のコンストラクトを使用した。
【０２６２】
完全長ヒトＳＴＩＮＧ結合アッセイ
２３２位にＲを有し（Ｈ２３２Ｒ）、Ｎ末端に６ＨＩＳタグを有し、それに続きＦＬＡＧタグ、ＴＥＶプロテアーゼ開裂部位及びビオチン化のためのＡＶＩタグを有する、Ｑ８６ＷＶ６の残基１−３７９由来のヒトＳＴＩＮＧを、ＨＥＫ２９３−ＥＸＰＩ細胞内で組み換え発現した。これらの細胞から精製膜を調製し、ＳＴＩＮＧ発現を確認し、免疫ブロットにより定量した。Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェルアッセイプレート中でＳＴＩＮＧ含有膜を試験化合物と合わせ、ＳＴＩＮＧ  ＳＰＡ結合アッセイに使用したのと同じアッセイバッファー中、室温で１時間インキュベートした。次に、［3Ｈ］−２’３’−ｃＧＡＭＰを加え、プレートを室温で３０分間インキュベートした。反応物を予め洗浄したＰａｌｌ  ５０７３フィルタープレートに移し、各ウェルを５０μＬのアッセイバッファーで３回洗浄した。フィルタープレートを５０℃で１時間乾燥させた。各ウェルに、１０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔシンチレーション流体を加え、プレートを密封し、ウェル当たり１分間ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取った。
【０２６３】
ＳＴＩＮＧ  ＳＰＲ結合アッセイ
化合物を、Ｓ２００  ｂｉａｃｏｒｅ  ＳＰＲ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で分析した。Ｅ．ｃｏｌｉで産生した切断型ＳＴＩＮＧタンパク質を、ビオチン捕捉（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃ＢＲ１００５３１）を介して、一連のＳストレプトアビジンチップ上に固定化した。化合物を、実施バッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．００５％Ｐ２０、１ｍＭ  ＴＥＣＥＰ）中、１００ｕＭ〜０．１９５ｕＭまで１：２希釈でスクリーニングした。１：１結合モデルを用いて定常状態の親和性及び動態評価を行った（ＳＴＩＮＧはダイマーとして処理した）。実験パラメータは以下のとおりであった。ＩＦＭ化合物については６０秒オン、３００秒オフ、環状ジ−ＧＭＰ（６０秒オン／６０秒オフ）、チオール異性体１（６０秒オン／３００秒オフ）、及びｃＧＡＭＰ（６０秒オン／１２００ｓｅｃオフ）、流速５０μＬ／ｍｉｎ及び２５℃、４０Ｈｚでのデータ収集。
【０２６４】
ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイ
ヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）により誘導可能なＳＥＡＰレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、ヒトＴＨＰ１単球細胞株由来のＴＨＰ１−ＩＳＧ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，カタログ番号ｔｈｐ−ｉｓｇ）において評価される。ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。結果として、ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞により、ＳＥＡＰ活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になる。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導性ＳＥＡＰのレベルは、アルカリホスファターゼ検出培地、ＳＥＡＰ検出試薬によって容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用した。アッセイを行うために、６０，０００個の細胞を、白色で底が不透明の組織培養処理された３８４ウェルプレートに３０μＬ／ウェルで分配した。
【０２６５】
試験化合物を１０μＬの体積で添加した（最終濃度１％ＤＭＳＯ）。最初に化合物を１００％ＤＭＳＯ中で調製し、中間希釈プレート上にスポットし、その後、移す前に培地で希釈した。アッセイを３７℃、５％ＣＯ2で２４時間インキュベートした後、プレートを１２００ｒｐｍ（１２０ｘｇ）で５分間遠心分離した。最後のインキュベートの後、９０μＬのアルカリホスファターゼ検出培地を新しい３８４ウェル透明プレートの各ウェルに加え、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸを使用して、１０μＬの細胞上清をアッセイプレートから新しいアルカリホスファターゼ検出培地プレートに移し、４回混合した。プレートを室温で２０分間インキュベートした後、６５５ｎｍでの吸光度をＴｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ  ２で決定した。
【０２６６】
ＳＴＩＮＧマウス細胞レポーターアッセイ
マウスＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、インターフェロン誘導性Ｌｕｃｉａルシフェラーゼレポーターコンストラクトの安定な組み込みによって、マウスＲＡＷ−２６４．７マクロファージ細胞株由来のＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、カタログ番号ｒａｗｌ−ｉｓｇ）において評価される。ＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞は、５つのインターフェロン（ＩＦＮ）刺激応答配列と共に、ＩＳＧ５４ミニマルプロモーターの制御下で、分泌型ルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する。結果として、ＲＡＷ  Ｌｕｃｉａ細胞により、ルシフェラーゼの活性を測定してＩＲＦ活性化をモニタリングすることが可能になあ。細胞培養上清中のＩＲＦ誘導性ルシフェラーゼのレベルは、ルシフェラーゼ検出試薬ＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ（商標）を用いて容易に評価される。これらの細胞は、ゼオシン耐性である。このアッセイにおいて、陽性対照として２’３’ｃＧＡＭＰを使用する。アッセイを行うために、１００，０００個の細胞を、透明で底が平らな組織培養物処理された９６ウェルプレートに９０μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を１０μＬの体積で添加した。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ２で、２４時間及び４８時間インキュベートした。インキュベート後、アッセイプレートから２０μＬの細胞上清を新しい９６ウェル白色プレートに移し、５０ｕＬのＱＵＡＮＴＩ−Ｌｕｃ基質を加えた。プレートをインキュベートし、室温で５分間振盪した後、０．１秒の積分時間で発光をＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０４で読み取った。
【０２６７】
ヒトインターフェロン−β誘導アッセイ
ＴＨＰ１  Ｂｌｕｅ  ＩＳＧ細胞を使用して、ＳＴＩＮＧ経路活性化後の培養上清へのＩＮＦ−βの分泌を測定する。アッセイを行うために、抗ＩＮＦ−β捕捉抗体を９６ウェルＭｕｌｔｉＡｒｒａｙプレート（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上にコーティングした。１時間のインキュベート後、プレートを洗浄し、このコーティングされたプレート内で、ＳＴＩＮＧヒト細胞レポーターアッセイプレート由来の５０μＬの上清又はＩＦＮ−β標準を、Ｓｕｌｆｏｔａｇを付加した２０μＬの共役検出抗体と混合した。プレートをインキュベートし、２時間振盪し、洗浄し、読み取りバッファーを加えた。電気化学発光をＳｅｃｔｏｒＩｍａｇｅｒで測定した。
【０２６８】
ＳＴＩＮＧ細胞シグナル伝達経路の評価
ＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性は、ホスホ−ＳＴＩＮＧ（Ｓ３６６）、ホスホ−ＴＢＫ１（Ｓ１７２）及びホスホ−ＩＲＦ３（Ｓ３９６）のウェスタンブロットによって、ＴＨＰ１  ＢＬＵＥ  ＩＳＧ細胞において測定された。簡潔に述べると、９０μＬのヌクレオフェクション（商標）バッファー中の５万個の細胞を、１０μＬの試験化合物と混合した。これらの混合物を、Ａｍａｘａ  Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（Ｌｏｎｚａ）上でプログラムＶ−００１を用いてエレクトロポレーションした。細胞を新鮮な培地を入れた１２ウェルプレートに移し、３７℃、５％ＣＯ2で１時間回復させた。次いで、細胞を冷ＨＢＳＳで洗浄し、ＲＩＰＡバッファーに溶解させた。サンプルは、総タンパク質を正規化し、ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅサンプルバッファー又はＬＤＳローディングバッファーのいずれかで希釈した。サンプルを９５℃で５分間加熱変性した後、ＰｅｇｇｙＳｕｅ（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）を使用してホスホ−及び総ＳＴＩＮＧ及びＩＲＦ３を測定し、一方、ＮｕＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）システムを使用してＴＢＫ１を測定した。データを、Ｃｏｍｐａｓｓ又はＬｉｃｏｒ  Ｏｄｙｇｓｅｙソフトウェアを使用してそれぞれ分析した。
【０２６９】
ＳＴＩＮＧインビボ活性
全ての試験において、雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスはＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得て、６〜８週齢になり、体重が約２０ｇになったときに使用した。全ての動物を、実験での使用前に最低５日間、あらゆる輸送関連ストレスから順応及び回復させた。逆浸透処理し塩素を添加した水及び照射された食品（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｕｔｏｃｌａｖａｂｌｅ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ５０１０、Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ）を不断給餌で与え、動物を１２時間の明暗サイクルに維持した。使用前にケージ及び床敷きをオートクレーブ処理し、毎週交換した。全ての実験は、Ｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って行い、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｒ＆Ｄ（Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈｏｕｓｅ，ＰＡ）により承認された。各実験群には、８匹のマウスが含まれていた。５００，０００個のＣＴ２６結腸癌腫瘍細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに皮下移植し、腫瘍を１００〜３００ｍｍ3に成長させることによって、マウスＣＴ２６腫瘍モデルにおけるインビボ有効性を決定した。化合物を、リン酸緩衝生理食塩水中で、１回の注入当たり０．１ｍＬの体積で配合し、腫瘍内注射した。約３日おきに０．０５ｍｇ、合計３回用量をマウスに投与した。次式：（（Ｃ−Ｔ）／（Ｃ））＊１００（全ての対照動物が試験下にある場合）により、対照腫瘍体積（Ｃ）に対する、治療した腫瘍体積（Ｔ）のサイズの減少によって計算される腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）として、有効性を評価した。治癒は、最後の用量を投与した後に、１０腫瘍体積倍加時間（ＴＶＤＴ）を測定可能な腫瘍が検出されなかった動物の数であると定義された。
【０２７０】
得られたデータを表２に示す。
【０２７１】
【表４】
2020500862.tif 000051
ＮＤ−実施せず。ヒトＩＦＮ−βのランク付け値は、ＴＨＰ−１細胞において試験した投与範囲（０．７８〜５０ｕＭ）にわたる全累積ＩＦＮ−β誘導によって決定されるランク付け値によって決定される。
*ＩＣ50及びＥＣ50は、少なくとも３つの値の平均である。
【０２７２】
生物学的実施例２
ＳＴＩＮＧ初代ヒトＰＢＭＣサイトカイン誘導アッセイ
ヒト全血由来の初代ヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）においてヒトＳＴＩＮＧ経路のアゴニスト活性を評価する。１パイント（約４２０ｍＬ）の新鮮なドナー血液（ＡｌｌＣｅｌｌｓ  Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ））を、リンパ球分離培地（１．０７７〜１．０８０ｇ／ｍｌ、Ｃｏｒｎｉｎｇ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））上に層状に配置し、次いで、破壊することなく、室温、５００ｇで２０分間遠心分離する。血清とリンパ球分離培地との間の界面で集めたＰＢＭＣを採取し、洗浄し、次いで計測する。ＰＢＭＣは、Ｂ細胞、Ｔ細胞などのリンパ球及び単球のサブタイプから構成され、文献において、これらのサブタイプは、異なるレベルのＳＴＩＮＧタンパク質を発現するとして特徴付けられている。２’３’−ｃＧＡＭＰなどのＳＴＩＮＧアゴニストに応答して、これらの細胞が活性化され、様々な炎症性及び抗ウイルス性サイトカインの発現が誘導される。また、ＳＴＩＮＧアゴニストで刺激すると、これらの細胞は、活性化マーカーを上方調節する。サイトカイン誘導レベルは、ＥＬＩＳＡ、Ｌｕｍｉｎｅｘ及びＭＳＤを含む様々な方法によって測定することができる。活性化マーカーの上方調節のレベルは、フローサイトメトリーによって測定することができる。
【０２７３】
アッセイを行うために、１，０００，０００個の細胞を、底が平らな組織培養処理された９６ウェルプレートに２２５μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を、１０倍濃度で、２５μＬの体積で添加した。一部の化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解し、これらの化合物を投与する培養物におけるＤＭＳＯの最終濃度は１％とした。このアッセイを、３７℃、５％ＣＯ2で４８時間インキュベートした。プレートの底部の細胞を乱さないように２００μＬの上清を採取し、次いで、Ｌｕｍｉｎｅｘ測定の時間まで−２０℃で凍結させた。ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄ  Ｐａｎｅｌ−Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔからのＧ−ＣＳＦ、ＩＦＮα２、ＩＦＮγ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０）、ＩＬ−１２（ｐ７０）、ＴＮＦα、及びＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｂｅａｄ  Ｐａｎｅｌ  ＩＶキット（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、ＭＡ）からのＩＦＮβ１検体を用い、製造業者のプロトコルに従って、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。サイトカイン誘導は、Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＦｌｅｘＭＡＰ  ３Ｄ（登録商標）装置（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（ラドノール、ＰＡ））を使用して測定した。収集されたＬｕｍｉｎｅｘデータの分析は、ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  Ａｎａｌｙｓｔソフトウェア（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して行った。
【０２７４】
ＳＴＩＮＧ活性化された初代ヒトＰＢＭＣからの馴化培地を使用したＰＨＨ細胞におけるＨＢＶウイルスの抑制
初代ヒト肝細胞は、Ｂ型肝炎ウイルスに感染し得るものであり、感染中は、ＥＬＩＳＡによって検出可能なＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇなどのウイルスタンパク質を産生する。エンテカビルなどの化合物による治療処置は、ＨＢＶ複製を抑制することができ、この抑制は、ウイルスタンパク質の産生の減少によって評価することができる。（細胞数）４ｘ１０5個／ウェルの初代ヒト肝細胞（ＢｉｏＲｅｃｌａｍａｔｉｏｎ、ウェストベリー、ＮＹ）を、５００μＬ／ウェルの底が平らな組織培養処理された２４ウェルプレートに分配した。２４時間後、細胞を３０〜７５ｍｏｉのＨＢＶに感染させた。翌日、ＰＨＨを３回洗浄し、新鮮な維持培地を細胞に添加した。同時に、ヒトＰＢＭＣを、上述のとおり単離した。ＰＢＭＣを刺激するために、１０，０００，０００個の細胞を、底が平らな組織培養物処理された２４ウェルプレートに４００μＬ／ウェルで分配した。試験化合物を体積１００μＬで添加した後、培養物を３７℃、５％ＣＯ2で４８時間インキュベートした。上清を回収した。フローサイトメトリーを使用して、活性化マーカーのアップレギュレーションについて細胞を測定した。簡潔に述べると、細胞を、ＣＤ５６、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ８ａ、ＣＤ１４、ＣＤ６９、ＣＤ５４、ＣＤ１６１、ＣＤ４及びＣＤ８０を対象とする蛍光標識抗体で染色した。Ａｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カールスバッド、ＣＡ）でサンプルを分析した。
【０２７５】
刺激したＰＢＭＣ培養物から、上述のとおり、Ｌｕｍｉｎｅｘによるサイトカイン検出のために上清の一部を確保した。残りの上清を半分に分割し、アッセイのｄ８で使用するために１つのアリコートを４℃で保存した。上清の他のアリコートを２ＸＰＨＨ培地で１：１に希釈した後、ｄ４感染したＰＨＨ細胞に添加した。９６時間後、使用済み培地を交換し、上清に、２ＸＰＨＨ培地を添加し１：１希釈した。この時点で、ＨＢｓＡｇ  ＥＬＩＳＡキット（Ｗａｎｔａｉ  Ｂｉｏ  ｐｈａｒｍ、北京、中国）を使用してＨＢｓＡｇの仮測定を行った。９６時間後、培地を回収し、ＨＢｓＡｇを測定した。
【０２７６】
表３：ＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養中のサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、約２０μＭの化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳで誘導された細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで割ることによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。
【０２７７】
【表５】
2020500862.tif 000052
【０２７８】
表４：より高濃度のＣＤＮ化合物で刺激したＰＢＭＣ培養におけるサイトカインの誘導倍率。誘導倍率は、指定の濃度の化合物で４８時間後に誘導されたサイトカインの濃度を測定し、次いで、ＰＢＳで誘導された細胞のサイトカイン産生のベースラインレベルで割ることによって計算される。データは、３つの実験にわたる複数のドナーの平均である。ｎｔ＝試験せず。
【０２７９】
【表６】
2020500862.tif 000053
【０２８０】
表５．ＣＤＮで刺激されたＰＢＭＣからの馴化培地は、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞のウイルス負荷を抑制することができる。ＰＢＭＣを、記載のＣＤＮを用いて２０、４、０．８μＭで４８時間刺激した。上澄み液を新鮮な培地と１：１の比率で混合した後、ＨＢＶ感染したＰＨＨ細胞に添加した。ＨＢｓＡｇ産生は、８日後に測定した。データは、２人の独立したドナーの平均である。
【０２８１】
【表７】
2020500862.tif 000054
【０２８２】
表６．ＣＤＮはＰＢＭＣを活性化する。ＰＢＭＣを２０μＭのＣＤＮで４８時間刺激した。細胞を、単球上のＣＤ５４のアップレギュレーションについて、フローサイトメトリーによって評価した。平均蛍光強度の増加倍率は、休止細胞のレベルに対して計算した。データは、２人の独立したドナーの平均である。
【０２８３】
【表８】
2020500862.tif 000055
【０２８４】
上記の明細書は、説明を目的として与えられる実施例と共に本発明の原理を教示するものであるが、本発明の実施には、以下の特許請求の範囲及びその均等物の範囲内に含まれる全ての通常の変形例、適合例及び／又は改変例が包含される点が理解されるであろう。
【国際調査報告】
2020500862.tif 000069
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