(57)【要約】抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体および関連組成物が提供され、これらは、様々な炎症性、腫瘍性、および感染性疾患の治療のための様々な治療方法のうちのいずれに使用されてもよい。ＶＩＳＴＡに結合し、（ｉ）配列番号３〜５、１１〜１３、１９〜２１、２〜２９、３５〜３７、もしくは４３〜４５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、（ｉｉ）それぞれ、配列番号６〜８、１４〜１６、２２〜２４、３０〜３２、３８〜４０、もしくは４６〜４８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、を含む、単離抗体もしくはその抗原結合断片、または前記ＣＤＲ領域中の最大８個のアミノ酸置換を除いて、前記（ｉ）および（ｉｉ）の重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖および軽鎖可変領域を含む、前記抗体のバリアントもしくはその抗原結合断片。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＩＳＴＡに結合し、
（ｉ）配列番号３〜５、１１〜１３、１９〜２１、２〜２９、３５〜３７、もしくは４３〜４５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域と、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号６〜８、１４〜１６、２２〜２４、３０〜３２、３８〜４０、もしくは４６〜４８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域と、を含む、単離抗体もしくはその抗原結合断片、
または前記ＣＤＲ領域中の最大８個のアミノ酸置換を除いて、前記（ｉ）および（ｉｉ）の重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖および軽鎖可変領域を含む、前記抗体のバリアントもしくはその抗原結合断片。
【請求項２】
前記重鎖可変領域が、それぞれ配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
前記軽鎖可変領域が、それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項０または２に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、ヒトＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
それぞれ配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
前記抗体がヒト化されている、請求項０〜８のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
それぞれ、前記ＶＨ領域が、配列番号８６、８８、９０、９２、９４、９６、または９８を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号８７、８９、９１、９３、９５、９７、または９９を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
前記抗体が、一本鎖抗体、ｓｃＦｖ、ヒンジ領域を欠く一価抗体、およびミニボディからなる群から選択される、請求項０〜１０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
前記抗体がＦａｂまたはＦａｂ’断片である、請求項０〜１０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
前記抗体がＦ（ａｂ’）２断片である、請求項０〜１０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
前記抗体が全抗体である、請求項０〜１０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
ヒトＩｇＧ定常ドメインを含む、請求項０〜１４のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
前記ＩｇＧ定常ドメインがＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインを含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
前記ＩｇＧ定常ドメインがＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
修飾されたＦｃ領域を含み、前記修飾されたＦｃ領域が、特定のＦｃγＲに対する改変された結合親和性、増加した血清半減期、ならびに／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞介在性貧食（ＡＤＣＰ）のうちの１つ以上から選択される改変されたエフェクター機能を有し、任意選択で、前記抗体が架橋されて、そのエフェクター機能を改変する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
前記修飾されたＦｃ領域が、特定のＦｃγＲに対して増強した結合親和性を有し、かつ／または前記修飾されたＦｃ領域が、増強したエフェクター機能を有する、請求項１８に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
前記修飾されたＦｃ領域が、特定のＦｃγＲに対して減少した結合親和性を有し、かつ／または前記修飾されたＦｃ領域が、減少したエフェクター機能を有する、請求項１８に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
２．２ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡに結合する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
前記単離抗体またはその抗原結合断片が、
（ａ）Ｔ細胞活性化を増加させるか、
（ｂ）Ｔ細胞増殖を増加させるか、
（ｃ）ＭＨＣ  ＩＩ発現を増加させるか、
（ｄ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、
（ｅ）単球／マクロファージを活性化するか、
（ｆ）任意選択でＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ  ＩＰ−１０、ＴＮＦ−アルファ、およびＭＣＰ−１のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの産生を増加させるか、または
（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のうちのいずれか１つ以上の組み合わせを行う、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
ＶＩＳＴＡ拮抗物質である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
ＶＩＳＴＡ作動物質である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
ＶＩＳＴＡに結合し、（ｉ）図１に示されるＶＨ領域のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）図１に示される抗体のうちのいずれか１つの対応するＶＬ領域のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離抗体もしくはその抗原結合断片、または前記ＣＤＲ領域中の最大８個のアミノ酸置換を除いて前記（ｉ）および（ｉｉ）の重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖および軽鎖可変領域を含む、前記抗体のバリアントもしくはその抗原結合断片。
【請求項２６】
前記図１に示されるＶＨ領域のうちのいずれか１つを含む重鎖可変領域を含む、ＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
前記図１に示される対応するＶＬ領域と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、請求項０に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
前記図１に示される対応する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項２６に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
前記図１に示されるＶＬ領域のうちのいずれか１つを含む軽鎖可変領域を含む、ＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３０】
前記図１に示される対応するＶＨ領域と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をさらに含む、請求項２９に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項３２】
請求項３１に記載の単離ポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３２に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
【請求項３４】
生理学的に許容される担体および治療有効量の請求項１〜３０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその抗原結合断片を含む、組成物。
【請求項３５】
ＶＩＳＴＡの異常発現と関連付けられる癌を有する患者を治療するための方法であって、前記患者に請求項３４に記載の組成物を投与することにより、前記ＶＩＳＴＡの異常発現と関連付けられる癌を治療することを含む、方法。
【請求項３６】
ＶＩＳＴＡ介在性免疫抑制と関連付けられる癌を有する患者を治療するための方法であって、前記患者に請求項３４に記載の組成物を投与することにより、前記ＶＩＳＴＡ介在性免疫抑制と関連付けられる癌を治療することを含む、方法。
【請求項３７】
前記癌が、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、子宮頸、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、および悪性黒色腫のうちの１つ以上から選択される、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記患者に少なくとも１つの癌免疫療法剤を投与することを含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記少なくとも１つの癌免疫療法剤が、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベースの免疫療法のうちの１つ以上から選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記免疫チェックポイント調節剤が、ポリペプチド、任意選択で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または小分子である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子の拮抗物質、または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子の作動物質、を含み、
任意選択で、前記免疫チェックポイント調節剤が、前記免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記阻害性免疫チェックポイント分子が、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、ＢおよびＴ  リンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つ以上から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２拮抗物質であり、任意選択で、前記癌が、大腸癌、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つ以上から選択され、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４ＰＤＲ００１、およびピジリズマブのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＰＤ−１拮抗物質であり、任意選択で、前記ＰＤ−１拮抗物質がニボルマブであり、前記癌が、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
前記ＰＤ−１拮抗物質がペムブロリズマブであり、前記癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、および尿路上皮癌のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、イピリムマブ、トレメリムマブのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＴＬＡ−４拮抗物質であり、任意選択で、前記癌が、黒色腫、前立腺癌、肺癌、および膀胱癌のうちの１つ以上から選択され、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＩＤＯ拮抗物質であり、前記癌が、転移性乳癌および脳の癌、任意選択で多形性膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＤＯ拮抗物質であり、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＩＭ−３拮抗物質であり、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＬＡＧ−３拮抗物質であり、
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択される、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭ拮抗物質であり、かつ／あるいは
前記拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＩＧＩＴ拮抗物質である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記刺激性免疫チェックポイント分子が、ＣＤ４０、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）のうちの１つ以上から選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＡＰＸ００５、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３、およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ４０作動物質であり、前記癌が、黒色腫、膵臓癌、中皮腫、および血液癌、任意選択で非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＯＸ４０作動物質であり、
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＧＩＴＲ作動物質であり、
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ウトミルマブ、および４−１ＢＢリガンドのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ１３７作動物質であり、
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、バルリルマブ、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ２７作動物質であり、
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ２８作動物質であり、かつ／あるいは
前記作動物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンドのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＨＶＥＭ作動物質である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記癌ワクチンが、Ｏｎｃｏｐｈａｇｅ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択でＧａｒｄａｓｉｌまたはＣｅｒｖａｒｉｘ、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択で、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ、またはＴｗｉｎｒｉｘ、およびシプロイセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）のうちの１つ以上から選択されるか、あるいはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（またはＣ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍に発現するジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうちの１つ以上から選択される癌抗原を含み、任意選択で、前記対象が、前記対応する癌抗原を含む癌を有するかまたは有する危険がある、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、タリモジーンラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうちの１つ以上から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】
前記サイトカインが、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうちの１つ以上から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞ベースの免疫療法剤が、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択で体外由来Ｔ細胞を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】
前記癌抗原特異的Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞、およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの癌免疫療法剤が、別々の組成物として別々に投与される、請求項３５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの癌免疫療法剤が、同じ組成物の一部として一緒に投与される、請求項３５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
感染性疾患を有する患者を治療するための方法であって、前記患者に請求項３４に記載の組成物を投与することにより、前記感染性疾患を治療することを含む、方法。
【請求項５４】
前記感染性疾患が、ウイルス、細菌、真菌、任意選択で酵母菌、または原虫感染症である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
癌の治療を、それを必要とする患者において行う方法であって、
（ａ）前記患者から得られた体外由来の自家免疫細胞を、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片とともにインキュベートすることと、
（ｂ）前記自家免疫細胞を前記患者に投与することと、を含む、方法。
【請求項５６】
前記自家免疫細胞が、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および／または樹状細胞を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記リンパ球が、Ｔ細胞、任意選択で細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｔ細胞が、癌抗原特異的Ｔ細胞を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記癌抗原特異的Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される、請求項５８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する記述
本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、ここに本明細書に参照により組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、ＡＰＥＸ−０１９＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは、１１４ＫＢであり、２０１８年６月２２日に作成されたものであり、ＥＦＳ−Ｗｅｂをとおして電気提出される。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下、全体が参照により組み込まれる２０１７年６月２２日出願の米国出願第６２／５２３，６４９号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００３】
技術分野
本開示は、概して、抗ＶＩＳＴＡ抗体、組成物、ならびにその使用および製造方法に関する。そのような抗体は、例えば、様々な炎症性疾患、腫瘍学的疾患、および感染性疾患を治療するための方法において有用である。
【０００４】
背景技術
負のチェックポイント調節因子または阻害性免疫チェックポイントは、免疫応答を抑えることに重要な役割を果たすが、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、および細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）などの負のチェックポイント調節因子は、腫瘍が繁栄できる環境を提供し得る。ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、およびＣＴＬＡ−４に特異的な遮断抗体を含む免疫チェックポイント阻害剤は、これらの負のチェックポイント調節因子によって誘導された免疫抑制を無効にするための癌治療用の有望な治療剤として同定されている。
ごく最近、ＰＤ−１Ｈ、Ｄｉｅｓ１、血小板受容体Ｇｉ２４、ＳＩＳＰ１、Ｃ１０ｏｒｆ５４、およびＢ７−Ｈ５としても知られるＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）が、免疫療法のための有望な標となった（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１１  ２０８（３）：５７７−５９２）。抗ＶＩＳＴＡ抗体は、免疫抑制を遮断し、Ｔ細胞応答を増強する拮抗性の役割（ＵＳ８，４２６，５６３、ＷＯ２０１５／０９７５３６、およびＷＯ２０１６／２０７７１７）、ならびに免疫抑制を増強し、自己免疫疾患、移植片拒絶、および炎症性疾患を治療する作動性の役割（ＵＳ２０１６／００９６８９１およびＦｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１１  １８７：１５３７−１５４１）における使用について説明されている。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせてＶＩＳＴＡ拮抗物質を利用する組み合わせ治療は、Ｔ細胞応答を調節するためにも提案されている（ＵＳ２０１６／００８３４７２、Ｌｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４  ２（６）：５１０−５１７、およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ２０１５  １１２（２１）：６６８２−６６８７、Ｎｏｗａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１７  ２７６：６６−７９）。今日まで、臨床試験に入った抗ＶＩＳＴＡ抗体は１つしかなく、これはＪＮＪ−６１６１０５８８（ＮＣＴ０２６７１９５５）である。
したがって、当該技術分野では、改良された抗癌特性を提供するためにＴ細胞および抗原提示細胞（ＡＰＣ）を活性化し、かつ免疫監視機構を増強する、癌を治療するための治療用組成物および関連する方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第８，４２６，５６３号明細書
【特許文献２】国際公開第２０１５／０９７５３６号
【特許文献３】国際公開第２０１６／２０７７１７号
【特許文献４】米国特許出願公開第２０１６／００９６８９１号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１６／００８３４７２号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１１  ２０８（３）：５７７−５９２
【非特許文献２】Ｆｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１１  １８７：１５３７−１５４１
【非特許文献３】Ｌｉｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１４  ２（６）：５１０−５１７
【非特許文献４】Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ２０１５  １１２（２１）：６６８２−６６８７
【非特許文献５】Ｎｏｗａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１７  ２７６：６６−７９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片、ならびにそれらの使用方法に関する。本開示の一態様は、ＶＩＳＴＡに結合し、それぞれ、（ｉ）配列番号３〜５、１１〜１３、１９〜２１、２〜２９、３５〜３７、もしくは４３〜４５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号６〜８、１４〜１６、２２〜２４、３０〜３２、３８〜４０、または４６〜４８のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離抗体もしくはその抗原結合断片、または該ＣＤＲ領域中の最大８個のアミノ酸置換を除いて前記（ｉ）および（ｉｉ）の重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖および軽鎖可変領域を含む、該抗体の変異体もしくはその抗原結合断片を提供する。
【０００８】
一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片、重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列を含む。一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片、軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む。
【０００９】
本開示の別の態様は、配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、ヒトＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域。
【００１０】
本開示の一態様は、それぞれ配列番号２、１０、１８、２６、３４、または４２に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ヒトＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００１１】
本開示の一態様では、抗体はヒト化されている。一実施形態では、それぞれ、ＶＨ領域は、配列番号８６、８８、９０、９２、９４、９６、または９８を含み、ＶＬ領域は、配列番号８７、８９、９１、９３、９５、９７、または９９を含む。
【００１２】
一実施形態では、抗体は、一本鎖抗体、ｓｃＦｖ、ヒンジ領域を欠く一価抗体、およびミニボディからなる群から選択される。別の実施形態では、抗体はＦａｂまたはＦａｂ’断片である。一実施形態では、抗体はＦ（ａｂ’）２断片である。一実施形態では、抗体は全抗体である。
【００１３】
ある実施形態では、抗体はヒトＩｇＧ定常ドメインを含む。一実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインはＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインを含む。別の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインはＩｇＧ１  Ｆｃ領域を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、抗体は、修飾されたＦｃ領域を含み、例えば、この修飾されたＦｃ領域は、特定のＦｃγＲに対する改変された（例えば、増強した、減少した）結合親和性、増加した血清半減期、ならびに／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および抗体依存性細胞介在性貧食（ＡＤＣＰ）のうちの１つ以上から選択される改変された（例えば、増強した、減少した）エフェクター機能を有する。
【００１５】
一実施形態では、２．２ｎＭ以下のＫＤでＶＩＳＴＡに結合する、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。一実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、（ａ）Ｔ細胞活性化を増加させるか、（ｂ）Ｔ細胞増殖を増加させるか、（ｃ）ＭＨＣ  ＩＩ発現を増加させるか、（ｄ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化するか、（ｅ）単球／マクロファージを活性化するか、（ｆ）例えば、任意選択でＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ  ＩＰ−１０、ＴＮＦ−アルファ、およびＭＣＰ−１のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの産生を増加させるか、または（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のうちのいずれか１つ以上の組み合わせを行う。
【００１６】
ある実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡ拮抗物質である。ある他の実施形態では、単離抗体またはその抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡ作動物質である。
【００１７】
本開示の一態様は、ＶＩＳＴＡに結合し、（ｉ）図１に示されるＶＨ領域のうちのいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）図１に示される抗体のうちのいずれか１つの対応するＶＬ領域のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、およびＶＬＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離抗体もしくはその抗原結合断片、または該ＣＤＲ領域中の最大８個のアミノ酸置換を除いて（ｉ）および（ｉｉ）の重鎖および軽鎖可変領域と同一である重鎖および軽鎖可変領域を含む、該抗体の変異体もしくはその抗原結合断片を提供する。
【００１８】
本開示の別の態様は、図１に示されるＶＨ領域のうちのいずれか１つを含む重鎖可変領域を含む、ＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、軽鎖可変領域は、図１に示される対応するＶＬ領域と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＬは、図１に示される対応する軽鎖可変領域を含む。
【００１９】
本開示の一態様は、図１に示されるＶＬ領域のうちのいずれか１つを含む軽鎖可変領域を含む、ＶＩＳＴＡに結合する単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。一実施形態では、重鎖可変領域は、図１に示される対応するＶＨ領域と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００２０】
本開示の別の態様は、単離抗体またはその抗原結合断片をコードする単離ポリヌクレオチドを提供する。本開示の一態様は、単離ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。本開示の関連する態様は、ベクターを含む単離宿主細胞を提供する。
【００２１】
本開示の一態様は、生理学的に許容される担体および治療有効量の単離抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を提供する。一実施形態では、ＶＩＳＴＡの異常発現と関連付けられる癌を有する患者を治療するための方法は、患者に本組成物を投与することにより、ＶＩＳＴＡの異常発現と関連付けられる癌を治療することを含む。別の実施形態では、ＶＩＳＴＡ介在性免疫抑制と関連付けられる癌を有する患者を治療するための方法は、患者に本組成物を投与することにより、ＶＩＳＴＡ介在性免疫抑制と関連付けられる癌を治療することを含む。
【００２２】
ある実施形態は、患者に少なくとも１つの癌免疫療法剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベースの免疫療法のうちの１つ以上から選択される。
【００２３】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ポリペプチド、任意選択で抗体もしくはその抗原結合断片、またはリガンド、または小分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子の拮抗物質、または
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子の作動物質、を含み、
任意選択で、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ−１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３  （ＬＡＧ−３）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）のうちの１つ以上から選択される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２拮抗物質であり、任意選択で、癌は、大腸癌、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、および腎細胞癌のうちの１つ以上から選択され、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４ＰＤＲ００１、およびピジリズマブのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＰＤ−１拮抗物質であり、任意選択で、ＰＤ−１拮抗物質はニボルマブであり、癌は、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、および卵巣癌のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
ＰＤ−１拮抗物質はペムブロリズマブであり、癌は、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、および尿路上皮癌のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、イピリムマブ、トレメリムマブのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＴＬＡ−４拮抗物質であり、任意選択で、癌は、黒色腫、前立腺癌、肺癌、および膀胱癌のうちの１つ以上から選択され、
拮抗物質が、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＩＤＯ拮抗物質であり、癌は、転移性乳癌および脳の癌、任意選択で多形性膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫、または悪性脳腫瘍のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、６８０Ｃ９１、およびＬＭ１０のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＤＯ拮抗物質であり、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＩＭ−３拮抗物質であり、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子、およびＢＭＳ−９８６０１６のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＬＡＧ−３拮抗物質であり、
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択される、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＨＶＥＭ拮抗物質であり、かつ／あるいは
拮抗物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＴＩＧＩＴ拮抗物質である。
【００２６】
いくつかの実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）のうちの１つ以上から選択される。
【００２７】
いくつかの実施形態では、作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＡＰＸ００５、ＡＰＸ００５Ｍ、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３、およびｒｈＣＤ４０Ｌのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ４０作動物質であり、前記癌が、黒色腫、膵臓癌、中皮腫、および血液癌、任意選択で非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫のうちの１つ以上から任意選択で選択され、
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、およびＧＳＫ３１７４９９８のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＯＸ４０作動物質であり、
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、およびＭＥＤＩ１８７３のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＧＩＴＲ作動物質であり、
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ウトミルマブ、および４−１ＢＢリガンドのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ１３７作動物質であり、
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、バルリルマブ、およびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ２７作動物質であり、
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、およびＴＡＢ０８のうちの１つ以上から任意選択で選択されるＣＤ２８作動物質であり、かつ／あるいは
作動物質は、抗体もしくは抗原結合断片またはそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンドのうちの１つ以上から任意選択で選択されるＨＶＥＭ作動物質である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、癌ワクチンは、Ｏｎｃｏｐｈａｇｅ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択でＧａｒｄａｓｉｌまたはＣｅｒｖａｒｉｘ、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択で、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ、またはＴｗｉｎｒｉｘ、およびシプロイセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）のうちの１つ以上から選択されるか、あるいはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（またはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍に発現するジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうちの１つ以上から選択される癌抗原を含み、任意選択で、対象は、対応する癌抗原を含む癌を有するかまたは有する危険がある。
【００２９】
いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーンラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうちの１つ以上から選択される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、サイトカインは、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のうちの１つ以上から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択で体外由来Ｔ細胞を含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞、およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される。
【００３３】
いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの癌免疫療法剤は、別々の組成物として別々に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片および少なくとも１つの癌免疫療法剤は、同じ組成物の一部として一緒に投与される。
【００３４】
感染性疾患を有する患者を治療するための方法も含まれ、本方法は、患者に、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を投与することにより、感染性疾患を治療することを含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ウイルス、細菌、真菌、任意選択で酵母菌、または原虫感染症である。
【００３５】
癌の治療を、それを必要とする患者において行う方法も含まれ、本方法は、（ａ）患者から得られた体外由来の自家免疫細胞を、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片とともにインキュベートすることと、（ｂ）自家免疫細胞を患者に投与することと、を含む。いくつかの実施形態では、自家免疫細胞は、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および／または樹状細胞を含む。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞、任意選択で細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、癌抗原特異的Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１Ａ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図１Ｂ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図１Ｃ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図１Ｄ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図１Ｅ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図１Ｆ】図１Ａ〜図１Ｆは、ウサギ抗ＶＩＳＴＡのＶＨ領域（図１Ａ〜１Ｃ）およびＶＬ領域（図１Ｄ〜１Ｆ）のアミノ酸配列アライメントを示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲ１〜３には下線を引いてある。
【図２】ヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体ＶＳＴＢ１１２と比較したウサギ−ヒトキメラ抗ＶＩＳＴＡ抗体のエピトープビニングを示す線グラフである。
【図３】ヒト抗ＶＩＳＴＡ抗体ＶＳＴＢ１１２と比較した、キメラ抗ＶＩＳＴＡ抗体によるヒト単球の活性化を示す線グラフである。
【図４】ＥＬＩＳＡにより測定した、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体の可溶性ＶＩＳＴＡへの結合を示す線グラフである。
【図５】フローサイトメトリーにより測定した、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞の表面におけるヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＩＳＴＡへの結合を示す線グラフである。
【図６Ａ−６Ｃ】図６Ａ〜図６Ｇは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体によるＴ細胞のブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）刺激の増強を示す一連の線グラフである。
【図６Ｄ−６Ｆ】図６Ａ〜図６Ｇは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体によるＴ細胞のブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）刺激の増強を示す一連の線グラフである。
【図６Ｇ】図６Ａ〜図６Ｇは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体によるＴ細胞のブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）刺激の増強を示す一連の線グラフである。
【図７Ａ−７Ｃ】図７Ａ〜図７Ｆは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体による混合リンパ球反応におけるＣＤ４  Ｔ細胞増殖の増強を示す一連の線グラフである。
【図７Ｄ−７Ｆ】図７Ａ〜図７Ｆは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体による混合リンパ球反応におけるＣＤ４  Ｔ細胞増殖の増強を示す一連の線グラフである。
【図８Ａ−８Ｃ】図８Ａ〜図８Ｃは、抗ＶＩＳＴＡモノクローナル抗体がヒトＮＫ細胞を活性化する能力を示す。
【図９Ａ−９Ｃ】図９Ａ〜図９Ｉは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が全血アッセイにおいてサイトカイン放出を誘導する能力を示す。
【図９Ｄ−９Ｆ】図９Ａ〜図９Ｉは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が全血アッセイにおいてサイトカイン放出を誘導する能力を示す。
【図９Ｇ−９Ｉ】図９Ａ〜図９Ｉは、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が全血アッセイにおいてサイトカイン放出を誘導する能力を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
配列の簡単な説明
ウサギ抗ＶＩＳＴＡ抗体クローンである２Ｄ１２、３Ａ５、１４Ｄ８、１４Ｆ１、２９Ｇ７、および４１Ａ１１のＶＨ領域、ＶＬ領域、およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を以下の表１に提供する。
【表１】
2020525005.tif 000003
【００３８】
例示的なウサギ抗ＶＩＳＴＡ抗体クローンのＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列識別子を以下の表２に提供する。
【表２】
2020525005.tif 000004
【００３９】
例示的なヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体である２Ｄ１２−ＨＺＤ３、３Ａ５−ＨＺＤ、１４Ｄ８−ＨＺＤ２、１４Ｆ１−ＨＺＤ２、２９Ｇ７−ＨＺＤ２、２９Ｇ７−ＨＺＤ４、および４１Ａ１１−ＨＺＤ２のＶＨ領域、ＶＬ領域、ＣＤＲ重鎖、および軽鎖のアミノ酸配列識別子を以下の表３に提供する。
【表３】
2020525005.tif 000005
【表７−１】
2020525005.tif 000006
【表７−２】
2020525005.tif 000007
【表７−３】
2020525005.tif 000008
【表７−４】
2020525005.tif 000009
【表７−５】
2020525005.tif 000010
【表７−６】
2020525005.tif 000011
【表７−７】
2020525005.tif 000012
【表７−８】
2020525005.tif 000013
【表７−９】
2020525005.tif 000014
【００４０】
詳細な説明
本開示は、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合断片、具体的には特定のエピトープ特異性および機能特性を有する抗体に関する。本開示の一実施形態は、ＶＩＳＴＡに結合すること、ＶＩＳＴＡのリガンドへの結合を遮断すること、および／または受容体に対抗して誘導された下流細胞シグナル伝達および生物学的影響を阻害することが可能な特定のヒト化抗体およびその断片を包含する。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡ拮抗物質または阻害剤である。ＶＩＳＴＡの拮抗物質は、ＶＩＳＴＡの免疫抑制作用を遮断、さもなければ低減することによって、免疫応答を増強する。本開示のＶＩＳＴＡ拮抗物質抗体は、例えば、癌、特にＶＩＳＴＡ発現性癌、および感染性疾患の治療および防止に有用である。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡ作動物質または活性化物質である。ＶＩＳＴＡの作動物質は、ＶＩＳＴＡの免疫抑制作用を増加させることにより、免疫応答を抑制する。本開示のＶＩＳＴＡ作動物質抗体は、例えば、自己免疫疾患および障害、移植（例えば、移植片対宿主病および移植片拒絶）、ならびに炎症性疾患および障害の治療および防止に有用である。
【００４１】
本開示の実施形態は、ＶＩＳＴＡまたはその異常発現と関連付けられる疾患および障害の診断、評定、および治療のための抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片の使用に関連する。主題の抗体は、数ある疾患の中でも癌の治療または予防に使用される。本開示の他の実施形態は、異常なまたは望ましくない炎症性Ｔ細胞応答と関連付けられる疾患および障害の診断、評定、および治療のための抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片の使用に関連する。
【００４２】
本開示の実施は、具体的に相反する指示がない限り、当業者の範囲内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学、および組換えＤＮＡ技法についての従来の方法を利用することとなり、これらの多くは、例示目的のために下記に記載される。そのような技法は文献において十分に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００９）、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９５、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）、Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２）、ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ＆ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、および他の同様の参考文献を参照されたい。
【００４３】
本明細書および添付の特許請求の範囲において用いる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明確に別の指示がない限り、複数への参照を含む。
【００４４】
「拮抗物質」は、別の薬剤または分子の生理学的作用に干渉するか、さもなければそれを低減する薬剤（例えば、抗体）を指す。一部の場合、拮抗物質は、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全拮抗物質および部分拮抗物質が含まれる。
【００４５】
「作動物質」は、別の薬剤または分子の生理学的作用を増加または増大させる薬剤（例えば、抗体）を指す。一部の場合、作動物質は、他の薬剤または分子に特異的に結合する。完全作動物質および部分作動物質が含まれる。
【００４６】
「調節すること」および「改変すること」には、典型的に、対照と比べて統計的に有意なまたは生理学的に有意な量または程度で、「増加させること」、「増強させること」、または「刺激すること」、および「減少させること」または「低減すること」が含まれる。「増加した」、「刺激された」、または「増強した」量は、典型的に、「統計的に有意な量」であり、組成物なしで（例えば、薬剤が存在しない）または対照組成物で産生される量の１．１倍、１．２倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、またはそれ以上（例えば、５００倍、１０００倍）（すべての整数、および例えば１．５、１．６、１．７、１．８などの間の範囲を含む）である増加を含んでもよい。「減少した」または「低減された」量は、典型的に、「統計的に有意な」量であり、組成物なしで（例えば、薬剤が存在しない）または対照組成物で産生される量における１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の減少（すべての整数および間の範囲を含む）を含んでもよい。比較および「統計的に有意な」量の例は、本明細書に記載されている。
【００４７】
「実質的に」または「本質的に」は、ほぼ全面的にまたは完全に、例えば、何らかの所与の量の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上を意味する。
【００４８】
「統計的に有意な」とは、結果が偶然に生じた可能性は低いことを意味する。統計的有意性は、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定することができる。一般に使用されている有意性の測定は、帰無仮説が真である場合に、観察された事象が生じ得る頻度または確率であるｐ値を含む。得られたｐ値が有意性レベルより小さい場合には、帰無仮説は拒絶される。単純なケースでは、有意性レベルは０．０５以下のｐ値で定義される。
【００４９】
本明細書を通して、文脈上別の要求がない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、またはその変化形、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられている要素、整数、または要素群もしくは整数群の包含を含意するが、任意の他の要素もしくは整数、または要素群もしくは整数群の除外を含意しないものと理解される。
【００５０】
「からなる」とは、「からなる」という語句に続くものが何であれ、非限定的に含むことを意味する。このため、「ならなる」という語句は、列挙される要素が要求されるかまたは必須であること、および他の要素が存在してもよいことを示す。「から本質的になる」とは、この語句の後に列挙されるいずれの要素も含み、かつ列挙される要素に対して、本開示で指定される活性または作用に干渉も寄与もしない他の要素に限定されることを意味する。このため、「から本質的になる」は、列挙される要素が要求されるかまたは必須であること、しかし他の要素は任意選択であり、それらが列挙される要素の活性または作用に物質的に影響するか否かに応じて存在する場合もしない場合もあることを示す。
【００５１】
本明細書における各実施形態は、特に別の言明がない限り、あらゆる他の実施形態に準用されるものとする。
【００５２】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）については標準技術を用いることができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般に遂行されているように、または本明細書に記載するように行うことができる。これらのおよび関連する技術および手順は、一般に、当該技術分野において周知の従来の方法に従って行うことができ、ならびに本明細書中の至る所で引用され、議論されている様々な一般的なおよびより専門的な参考文献に記載されているように行うことができる。特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分子生物学、分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および製薬化学に関連して用いられる命名法、ならびにそれらの実験手順および技術は、当該技術分野において周知の、かつ一般に用いられているものである。組換え技術、分子生物学的合成、微生物学的合成、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化および送達、ならびに患者の治療には標準技術を用いることができる。
【００５３】
本開示の実施形態は、ＶＩＳＴＡに結合する抗体に関する。具体的には、本明細書に記載される抗体は、ＶＩＳＴＡに予想外に高い親和性で特異的に結合し、ＶＩＳＴＡの抗原提示細胞（ＡＰＣ）および／またはＴ細胞への結合を遮断し、ＶＩＳＴＡ活性を遮断し、ＶＩＳＴＡの異常発現と関連付けられる疾患の治療に対して治療的有用性を有する。本明細書に記載される抗体はまた、有利な特性、例えば、様々なＶＩＳＴＡ介在性の生物学的影響（例えば、Ｔ細胞増殖の阻害、Ｔ細胞活性化の阻害、および当業者に既知である他のＶＩＳＴＡ介在性の影響）を阻害する能力を有する。ＶＩＳＴＡに対するリガンドおよび／または対抗受容体は、未だ知られていない。しかしながら、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＶＩＳＴＡのそのリガンドおよび／または対抗受容体への結合を遮断し得る。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、Ｔ細胞が増殖する。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、Ｔ細胞が活性化される。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、ＩＦＮ−γの分泌が増加する。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、ＩＬ−２の分泌が増加する。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、ＭＨＣ  ＩＩの発現が増加する。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化が増加する。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、単球／マクロファージの活性化が増加する。いくつかの実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用することで、サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ  ＩＰ−１０、ＴＮＦ−アルファ、およびＭＣＰ−１のうちの１つ以上から選択されるサイトカインの産生が増加する。
【００５４】
例示的な抗体、またはその抗原結合断片もしくは相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列は、配列番号１〜１１３に示される。
【００５５】
当該技術分野において周知であるように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域内に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書において用いる場合、この用語は、インタクトなポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（例えば、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その合成変異体、自然発生変異体、必要とされる特異性の抗原結合断片を伴う抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、および必要とされる特異性の抗原結合部位または断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された形態も包含する。「ダイアボディ」、すなわち、遺伝子融合によって構築される多価または多重特異性断片（ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，１９９３）も、本明細書において企図される抗体の特定の一形態である。ＣＨ３ドメインに結合したｓｃＦｖを含むミニボディも本明細書に含まれる（Ｓ．Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６）。例えば、Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９）；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５；ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０  ６４４４−６４４８，１９９３；Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１４、１２３９−１２４５，１９９６；Ｓ．Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６を参照されたい。
【００５６】
本明細書において用いる場合、用語「抗原結合断片」は、目的の抗原、具体的にはＶＩＳＴＡに結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含む、ポリペプチド断片を指す。これに関連して、本明細書に記載される抗体の抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡに結合する抗体に由来する本明細書に示されるＶＨおよびＶＬ配列の１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲを含んでもよい。本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体の抗原結合断片は、ＶＩＳＴＡに結合可能である。ある実施形態では、抗原結合断片または抗原結合断片を含む抗体は、Ｔ細胞および／またはＡＰＣへのＶＩＳＴＡの結合ならびに後続するシグナル伝達事象を防止または阻害する。ある実施形態では、抗原結合断片は、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合し、かつ／あるいはヒトＶＩＳＴＡの生物活性を阻害または調節する。ある実施形態では、抗原結合断片は、ヒトＶＩＳＴＡに特異的に結合し、かつ／あるいはヒトＶＩＳＴＡの生物活性を増強または上方調節する。
【００５７】
用語「抗原」は、抗体などの選択的結合剤によって結合でき、かつ加えて、その抗原のエピトープに結合が可能な抗体を産生するために動物において使用することができる、分子または分子の一部分を指す。抗原は、１つ以上のエピトープを有してもよい。
【００５８】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体への特異的結合が可能な、任意の決定基、好ましくは、ポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体によって結合される抗原の一領域である。ある実施形態では、エピトープ決定基は、分子の化学的に活性な表面原子団、例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルを含み、またある実施形態では、特異的三次元構造特性および／または特異的電荷特性を有してもよい。ある実施形態では、抗体がタンパク質および／または高分子の複合混合物中のその標的抗原を優先的に認識するとき、抗体は抗原に特異的に結合する、と言われる。平衡解離定数が、≦１０−７または１０−８Ｍであるとき、抗体が抗原に特異的に結合する、と言われる。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、≦１０−９Ｍまたは≦１０−１０Ｍであってもよい。
【００５９】
ある実施形態において、本明細書に記載される抗体およびそれらの抗原結合断片は、重鎖および軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）セット間にそれぞれ挿入された重鎖および軽鎖ＣＤＲセットを含み、このＦＲセットは、ＣＤＲを支持し、かつＣＤＲの互いに対する空間的関係を規定する。本明細書において用いる場合、用語「ＣＤＲセット」は、重鎖または軽鎖Ｖ領域の３つの超可変領域を指す。重鎖または軽鎖のＮ末端から進んで、これらの領域を「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、および「ＣＤＲ３」とそれぞれ表示する。したがって、抗原結合部位は、重鎖および軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３）を含むポリペプチドを、本明細書では「分子認識単位」と称する。多数の抗原−抗体複合体の結晶解析により、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合抗原との広範な接触を形成し、その最も広範な抗原接触が重鎖ＣＤＲ３とのものであることは立証されている。したがって、分子認識単位が主として抗原結合部位の特異性に関与する。
【００６０】
本明細書において用いる場合、用語「ＦＲセット」は、重鎖または軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲの枠組みを形成する４つの隣接アミノ酸配列を指す。一部のＦＲ残基は、結合抗原と接触し得るが、ＦＲ、特にＣＤＲに直接隣接したＦＲ残基は、主として、抗原結合部位へのＶ領域の折り畳みに関与する。ＦＲ内では、あるアミノ酸残基およびある構造特徴が非常に高度に保存される。これに関連して、すべてのＶ領域配列は、約９０個アミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含有する。Ｖ領域が結合部位へと折り畳まれると、ＣＤＲは、抗原結合面を形成する突出型ループモチーフとして提示される。その正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、ある「標準的な（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」構造に折り畳まれたＣＤＲループ形状に影響を及ぼすＦＲの保存された構造領域があることは、一般に認識されている。さらに、抗体重鎖と軽鎖との相互作用を安定化させる非共有結合性ドメイン間接触にあるＦＲ残基が関与することが知られている。
【００６１】
免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、現在ではインターネット上で利用可能である（ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ）、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７、およびその更新版を参照することにより決定されてもよい。
【００６２】
「モノクローナル抗体」は同種抗体集団を指し、ここで、このモノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合に関与する（自然発生の、または自然発生でない）アミノ酸で構成されている。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一のエピトープに指向される。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体だけでなく、それらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに必要とされる特異性およびエピトープに結合する能力の抗原結合断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾形態も包含する。抗体の供給源または抗体を作製する手法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによる）に関して、限定されることは意図していない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに「抗体」の定義のもとに上記された断片も含む。
【００６３】
タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断していくつかの断片を生じさせ、そのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）はそれぞれインタクトな抗原結合部位を含む共有結合性ヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含むいくつかの断片を生じさせることができる。本開示のある実施形態に従って使用するためのＦｖ断片は、ＩｇＭのおよび稀にＩｇＧまたはＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的タンパク質分解性切断によって産生することができる。しかし、より一般的には、Ｆｖ断片は、当該技術分野において既知の組換え技術を用いて得られる。Ｆｖ断片は、天然の抗体分子の抗原認識および結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６９：２６５９−２６６２、Ｈｏｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １５：２７０６−２７１０、およびＥｈｒｌｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９：４０９１−４０９６。
【００６４】
ある実施形態において、一本鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ抗体が企図される。例えば、カッパ体（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９−５７（１９９７）、ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １３：５３０５−９（１９９４）、ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：６４４４−８（１９９３）、またはＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ  １０：３６５５−５９  （１９９１）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５１−５２（１９９２）は、標準的な分子生物学的技術を用い、所望の特異性を有する抗体の選択に関しては本明細書の教示に従って、調製することができる。さらに他の実施形態では、本開示のリガンドを包含する二重特異性またはキメラ抗体を作製してもよい。例えば、キメラ抗体は、異なる抗体に由来するＣＤＲおよびフレームワークを含むことができ、一方で、１つの結合ドメインを介してＶＩＳＴＡに、および第２の結合ドメインを介して第２の分子に特異的に結合する二重特異性抗体を生成してもよい。これらの抗体は、組換え分子生物学技術によって産生されてもよく、または物理的にともにコンジュゲートされてもよい。
【００６５】
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチドは、ペプチドをコードするリンカーによって連結されたＶＨをコードする遺伝子とＶＬをコードする遺伝子を含む遺伝子融合体から発現される共有結合的に連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５（１６）：５８７９−５８８３。自然に凝集しているが化学的に分離されている、軽および重ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造に折り畳むｓｃＦｖ分子に変換するための化学構造の識別のために、多数の方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらの米国特許第５，０９１，５１３号および同第５，１３２，４０５号、ならびにＬａｄｎｅｒらの米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。
【００６６】
ある実施形態において、本明細書に記載のＶＩＳＴＡ結合抗体は、ダイアボディの形態である。ダイアボディは、ポリペプチドの多量体であって、各ポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、これらの２つのドメインは（例えば、ペプチドリンカーによって）連結されているが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない多量体である。抗原結合部位は、この多量体内のあるポリペプチドの第１のドメインと同じ多量体内の別のポリペプチドの第２のドメインとの会合によって形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。
【００６７】
抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６（１９８９））。
【００６８】
二重特異性抗体を使用する場合、これらは、化学的にもしくはハイブリッドハイブリドーマから調製するなど、様々な方法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ  Ｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４，４４６−４４９（１９９３））で製造することができる従来の二重特異性抗体であってもよく、または上述した二重特異性抗体断片のうちのいずれかであってもよい。Ｆｃ領域を伴うことなく、可変ドメインのみを使用して、ダイアボディおよびｓｃＦｖを構築することで、抗イディオタイプ反応の影響を軽減できる可能性がある。
【００６９】
二重特異性完全抗体と対照的に、二重特異性ダイアボディも、それらが容易に構築でき、かつＥ．ｃｏｌｉにおいて発現することができるので、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片などの他の多数のポリペプチド）は、ファージディスプレイを用いて（ＷＯ９４／１３８０４）ライブラリーから容易に選択することができる。例えば、抗原Ｘに対して指向させた特異性を伴うダイアボディの１本のアームを定常に保つならば、他のアームを改変し、適切な特異性の抗体が選択されるライブラリーを作製することができる。二重特異性完全抗体は、ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓエンジニアリングにより作製できる（Ｊ．Ｂ．Ｂ．Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９，６１６−６２１，１９９６）。
【００７０】
ある実施形態において、本明細書で記載される抗体は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態で提供されてもよい。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、ヒンジ領域が除去されたＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ  Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ、また例えばＵＳ２００９／０２２６４２１も参照されたい）。この独占的な抗体技術は、現在の小さな抗体フォーマットより長い治療ウインドウが期待される、安定で、より小さい抗体を創出する。ＩｇＧ４抗体は、不活性であると考えられ、それ故に、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体を、抗体のヒンジ領域を削除することにより修飾して、対応するインタクトなＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ，Ｕｔｒｅｃｈｔ）とは異なる安定特性を有する半分子断片を得ることができる。ＩｇＧ４分子を半分にすることで、コグネイト抗原（例えば、疾患標的）に結合することができるＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）上の一領域のみを残し、それ故に、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、標的細胞上の一部位のみに一価結合する。ある癌細胞表面抗原について、この一価結合は、同じ抗原特異性を有する二価抗体を用いた場合にみられるような、癌細胞を刺激して成長させることがないこともあり、それ故に、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）技術は、従来の抗体を用いる治療に対して難治性であり得るいくつかの型の癌について治療選択を与えることができる。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の小さなサイズは、いくつかの型の癌を治療する際に、より大きな固形腫瘍にわたって分子をより良好に分布させることができ、かつ潜在的に効果を増大することができるために、非常に有利であり得る。
【００７１】
ある実施形態において、本開示の抗体は、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）の形態をとってもよい。Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）は、単一遺伝子によってコードされ、ほぼすべての原核および真核宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、米国特許第６，７６５，０８７号を参照されたい）、カビ（例えば、ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、および酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、またはＰｉｃｈｉａ（例えば、米国特許第６，８３８，２５４号を参照されたい）において効果的に産生される。産生プロセスは、スケール調整可能であり、数キログラムの量のＮａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）が産生されている。Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓは、長い貯蔵期間を有する、使用準備が整った溶液として配合されてもよい。Ｎａｎｏｃｌｏｎｅ（登録商標）法（例えば、ＷＯ０６／０７９３７２を参照されたい）は、Ｂ細胞の自動ハイスループット選択に基づく、所望の標的に対してナノボディを生成するための独自の方法である。
【００７２】
ある実施形態において、本明細書で開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化されている。これは、一般に組換え技術を用いて調製された、非ヒト種からの免疫グロブリンに由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子の残りの免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメインに融合された完全な可変ドメインか、または可変ドメイン内の適切なフレームワーク領域にグラフトされたＣＤＲのみのいずれかを含んでもよい。エピトープ結合部位は、野生型であってもよく、または１つ以上のアミノ酸置換により修飾されてもよい。これにより、ヒト個体における免疫原としての定常領域は除去されるが、外来可変領域に対する免疫応答の可能性は依然として残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９８８）８６：１００２９−１００３３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３２：３２３−３２７）。本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体をヒト化するための例示的な方法は、米国特許第７，４６２，６９７号に記載されている方法を含む。ある実施形態による例示的なヒト化抗体は、配列番号８６〜１１３にて提供されるヒト化配列を含む。
【００７３】
別のアプローチは、ヒト形態に可能な限り似せて形成し直すために、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、可変領域の修飾にも焦点を当てる。重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、特定の種において比較的保存されており、かつＣＤＲのための足場を提供していると推定されている４つのフレームワーク領域（ＦＲ）に隣接する、問題となるエピトープに応じて様々であり、かつ結合能力を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことが知られている。非ヒト抗体が特定のエピトープに対して調製されるとき、修飾されるべきヒト抗体内に存在するＦＲ上に非ヒト抗体に由来するＣＤＲをグラフトすることにより、可変領域は、「形成し直す」または「ヒト化する」ことができる。種々の抗体に対するこのアプローチの適用は、Ｓａｔｏ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５３：８５１−８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−３７８３、Ｍａｅｄａ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２：１２４−１３４、Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：４１８１−４１８５、Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：２６６−２７１、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８：２８６９−２８７３、Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：４２８５−４２８９、およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：１１４９−１１５４により報告されている。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、すべてのＣＤＲ配列を保存する（例えば、ウサギ抗体由来の６つすべてのＣＤＲを含むヒト化ウサギ抗体）。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対して改変された１つ以上（１、２、３、４、５、６つ）のＣＤＲを有し、これは、元の抗体からの１つ以上のＣＤＲに「由来する」１つ以上のＣＤＲとも称される。
【００７４】
ある実施形態において、本開示の抗体は、キメラ抗体であり得る。これに関連して、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に作動可能に連結しているか、あるいはそれに融合した抗ＶＩＳＴＡ抗体の抗原結合断片からなる。ある実施形態において、異種Ｆｃドメインは、ヒト起源のものである。他の実施形態において、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ならびにＩｇＭを含む、親抗体とは異なるＩｇクラスに由来してもよい。さらなる実施形態において、異種Ｆｃドメインは、１つ以上の異なるＩｇクラスからのＣＨ２およびＣＨ３ドメインから構成されてもよい。ヒト化抗体に関連して上記したように、ヒト化抗体の抗ＶＩＳＴＡ抗原結合断片は、本明細書に記載される抗体のＣＤＲ（例えば、本明細書に記載される抗体の１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ）のうちの１つ以上を含んでもよく、または可変ドメイン全体（ＶＬ、ＶＨ、またはその両方）を含んでもよい。
【００７５】
ある実施形態において、ＶＩＳＴＡ結合抗体は、本明細書に記載の抗体のＣＤＲのうちの１つ以上を含む。これに関連して、いくつかの場合において、所望の特異的結合を保持したままで、抗体のＶＨＣＤＲ３のみの移入が実施可能であることが示されている（Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９５）９２：２５２９−２５３３）。ＭｃＬａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９５）９２：５２１４−５２１８、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９４）１１６：２１６１−２１６２も参照されたい。
【００７６】
Ｍａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９２，１０：７７９−７８３）は、可変ドメイン領域の５’末端に指向されたまたは隣接するコンセンサスプライマーをヒトＶＨ遺伝子の第３フレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと併用して、ＣＤＲ３を欠くＶＨ可変ドメインのレパートリーを提供する、抗体可変ドメインのレパートリーを産生する方法を記載している。Ｍａｒｋｓらは、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３とどのように組み合わせることができるかを、さらに記載している。類似の技術を用いて、本明細書に記載の抗体のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフリングしてもよく、シャッフリングされた完全ＶＨまたはＶＬドメインを同種のＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせて、ＶＩＳＴＡに結合する抗体またはその抗原結合断片を提供してもよい。次いで、好適な抗体またはその抗原結合断片が選択されるように、ＷＯ９２／０１０４７のファージディスプレイ系などの好適な宿主系において、レパートリーを提示させてもよい。レパートリーは、少なくとも約１０４の個々のメンバー、およびその数桁分上方の数、例えば、約１０６〜１０８または１０１０またはそれ以上のメンバーからなってもよい。類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術もＳｔｅｍｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ，１９９４，３７０：３８９−３９１）により開示されており、Ｓｔｅｍｍｅｒは、β−ラクタマーゼ遺伝子に関する技術を記載しているが、そのアプローチを抗体の生成に用いることができると述べている。
【００７７】
さらなる代替法は、１つ以上の選択されたＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム変異導入法を使用して可変ドメイン全体の中で突然変異を生成することで、本明細書に記載される１つ以上のＣＤＲ由来配列を担持する新規のＶＨまたはＶＬ領域を生成することである。そのような技法は、エラープローンＰＣＲを使用したＧｒａｍら（１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０）によって説明されている。使用され得る別の方法は、変異導入法をＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に向けることである。そのような技法は、Ｂａｒｂａｓら（１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１：３８０９−３８１３）およびＳｃｈｉｅｒら（１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７）によって開示されている。
【００７８】
ある実施形態では、本明細書に記載の抗体の特定のＶＨおよび／またはＶＬを使用して、相補的可変ドメインのライブラリーをスクリーニングし、ＶＩＳＴＡに対する増加した親和性などの望ましい特性を有する抗体を同定してもよい。そのような方法は、例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１５０：８８０−８８７、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ（１９９１）３５２：６２４−６２８において説明されている。
【００７９】
また、他の方法を使用して、ＣＤＲを様々に組み合わせ、ＶＩＳＴＡへの結合などの所望の結合活性を有する抗体を同定してもよい。例えば、Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２０００）８３：２５２−２６０は、マウスＶＬ、ならびにＣＤＲ３およびＦＲ４がマウスＶＨから保持されたヒトＶＨライブラリーを使用するスクリーニングプロセスを説明する。抗体を得た後、ＶＨをヒトＶＬライブラリーに対してスクリーニングして、抗原に結合した抗体を得た。Ｂｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）２９６：８３３−８４９は、全長マウス重鎖およびヒト軽鎖ライブラリーを使用するスクリーニングプロセスを説明する。抗体を得た後、１つのＶＬを、マウスのＣＤＲ３が保持されたヒトＶＨライブラリーと組み合わせた。抗原に結合することが可能な抗体が得られた。Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９８）９５：８９１０−８９１５は、上記のＢｅｉｂｏｅｒらに類似したプロセスを説明する。
【００８０】
これらの今記載した技法は、それら自体がそのように当該技術分野で既知である。当業者であれば、そのような技法を使用して、当該技術分野で慣例となっている方法を使用し、本明細書に記載のいくつかの実施形態に従い抗体またはその抗原結合断片を得ることが可能であろう。
【００８１】
ＶＩＳＴＡ抗原に特異的な抗体抗原結合ドメインを得るための方法も本明細書で開示され、本方法は、本明細書に示されるＶＨドメインのアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入により、ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを提供すること、１つ以上のＶＬドメインを有するようにＶＨドメインを組み合わせること、およびＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬの組み合わせ（単数または複数）を試験して、特定の結合メンバー、またはＶＩＳＴＡに特異的であり任意選択で１つ以上の所望の特性を有する抗体抗原結合ドメインを同定することを含む。ＶＬドメインは、実質的に本明細書に示されるとおりであるアミノ酸配列を有してもよい。本明細書に開示されるＶＬドメインの１つ以上の配列変異体を１つ以上のＶＨドメインと組み合わせる類似の方法を用いてもよい。
【００８２】
抗体またはポリペプチドに対して「特異的に結合する」または「優先的に結合する」（本明細書においては互換的に使用される）エピトープは、当該技術分野において十分に理解されている用語であり、このような特異的または優先的結合を測定するための方法も当該技術分野において周知である。分子が、特定の細胞または物質と、別の細胞または物質と反応または会合するよりも高頻度で、より迅速に、より長い持続時間、および／またはより大きい親和性で反応または会合する場合、分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が、標的に、他の物質に結合するより大きい親和性で、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間、結合する場合、抗体は標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＶＩＳＴＡエピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、それが他のＶＩＳＴＡエピトープまたは非ＶＩＳＴＡエピトープに結合するより大きな親和性で、結合力で、より迅速に、および／またはより長い持続時間、ある１つのＶＩＳＴＡエピトープに結合する抗体である。例えば、第１の標的に特異的にまたは優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）が、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合しても、しなくてもよいことが、この定義を読むことにより理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、排他的結合を（含む場合もあるが）必ずしも必要としない。一般に、必然的ではないが、結合への言及は優先的結合を意味する。
【００８３】
免疫学的結合は、例えば、例示を目的とするものであり、限定するものではないが、静電的、イオン的、親水性および／または疎水性の引力または反発力、立体障害力、水素結合、ファンデルワールス力ならびに他の相互作用の結果としての、免疫グロブリン分子とその免疫グロブリンが特異的である抗原との間で生じる類の非共有的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、その相互作用の解離定数（Ｋｄ）によって表すことができ、ここで、より小さいＫｄは、より大きい親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性を、当該技術分野において周知の方法を用いて定量化することができる。そのような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体形成および解離の速度の測定を伴い、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、および両方向の速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）と「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方を、濃度ならびに実際の会合速度および解離速度の計算によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しないすべてのパラメータの相殺を可能にし、したがって解離定数Ｋｄに等しい。概して、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９−４７３を参照されたい。
【００８４】
ある実施形態では、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、約１００、１５０、１５５、１６０、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８または１９９ピコモルの親和性を有し、またいくつかの実施形態では、抗体は、ＶＩＳＴＡについてさらにより高い親和性を有してもよい。
【００８５】
存在するエピトープに関しての用語「免疫学的に活性の」または「依然として免疫学的に活性の」は、異なる条件下で、例えば、エピトープを還元および変性条件に付した後、エピトープに結合する抗体（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）の能力を指す。
【００８６】
本出願のある好ましい実施形態に従う抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）抗原に特異的に結合すること、ならびに（ｉｉ）本明細書に開示されるＶＨおよび／もしくはＶＬドメインを含むか、または本明細書に開示されるＶＨ  ＣＤＲ３もしくはそれらのいずれかの変異体を含むことの両方を行う、本明細書に記載される任意の抗体とＶＩＳＴＡへの結合について競合するものであってもよい。抗体間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、および／または特定のレポーター分子を、他のタグ付けされていない抗体の存在下で検出することができるある抗体にタグ付けして、同じエピトープもしくは重複しているエピトープに結合する特定の抗体の同定を可能にすることによって、インビトロで容易にアッセイすることができる。よって、ＶＩＳＴＡに結合する本明細書に記載される抗体と競合する、ヒト抗体抗原結合部位を含む特定の抗体またはその抗原結合断片が本明細書で提供される。
【００８７】
これに関連して、本明細書において用いる場合、用語「と競合する」、「結合を阻害する」、および「結合を遮断する」（例えば、リガンドおよび／もしくは対抗受容体のＶＩＳＴＡへの結合の阻害／遮断を指す、または抗ＶＩＳＴＡ抗体のＶＩＳＴＡへの結合の阻害／遮断を指す）は、互換的に用いられ、部分的および完全な阻害／遮断の両方を包含する。ＶＩＳＴＡのリガンドおよび／または対抗受容体は、未だ定義されていない（Ｎｏｗａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２０１７  ２７６：６６−７９）。リガンドおよび／または対抗受容体のＶＩＳＴＡへの阻害／遮断は、好ましくは、リガンドおよび／または対抗受容体が阻害または遮断なくＶＩＳＴＡに結合するときに生じる正常なレベルまたは種類の細胞シグナル伝達を低減または改変する。阻害および遮断はまた、抗ＶＩＳＴＡ抗体と接触していないリガンドと比較して、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体と接触したときのリガンドおよび／または対抗受容体のＶＩＳＴＡへの結合のあらゆる測定可能な減少、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のリガンドおよび／または対抗受容体のＶＩＳＴＡへの遮断を含むことが意図される。
【００８８】
免疫グロブリンの定常領域は、可変領域より少ない配列多様性を示し、かつ重要な生化学的事象を惹起するための多数の天然タンパク質の結合に関与する。ヒトの場合、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）ならびにＩｇＭを含む、抗体の５つの異なるクラスがある。より細かい相違がＶ領域に存在することもあるが、これらの抗体クラス間を識別する特徴は、それらの定常領域である。
【００８９】
抗体のＦｃ領域は、多数のＦｃ受容体およびリガンドと相互作用し、それによって、エフェクター機能と呼ばれる一連の重要な機能的能力を付与する。一実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体はＦｃ領域を含む。ＩｇＧについて、Ｆｃ領域は、ＩｇドメインＣＨ２およびＣＨ３と、ＣＨ２につながるＮ末端ヒンジとを含む。ＩｇＧクラスについてのＦｃ受容体の重要なファミリーはＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）である。これらの受容体は、抗体と免疫系の細胞アームとの間のコミュニケーションを媒介する（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０、Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。ヒトの場合、このタンパク質ファミリーは、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂおよびＦｃγＲＩｃを含む、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１およびＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ−１およびＦｃγＲＩＩｂ−２を含む）、およびＦｃγＲＩＩｃを含む、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８およびＦ１５８を含む）、およびＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ１およびＦｃγＲＩＩＩｂ−ＮＡ２）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）を含む、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、を含む。これらの受容体は、典型的に、Ｆｃへの結合を媒介する細胞外ドメインと、膜貫通領域と、細胞内の何らかのシグナリング事象を媒介し得る細胞内ドメインとを有する。これらの受容体は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴ細胞を含む様々な免疫細胞において発現される。Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、これらのエフェクター細胞を結合抗原部位に動員し、典型的には、細胞内のシグナリング事象および重要な後続の免疫応答、例えば、炎症媒介因子の放出、Ｂ細胞活性化、エンドサイトーシス、食作用および細胞傷害性攻撃を生じる。
【００９０】
細胞傷害性および食作用性エフェクター機能を媒介する能力は、抗体が標的細胞を破壊する、可能性のある機序である。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、その標的細胞の溶解を生じさせる細胞介在性反応は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）と呼ばれる（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８：７３９−７６６、Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、その標的細胞の食作用を生じさせる細胞介在性反応は、抗体依存性細胞介在性食作用（ＡＤＣＰ）と称される。すべてのＦｃγＲは、Ｆｃ上の同じ領域をＣｇ２（ＣＨ２）ドメインのＮ末端およびその前のヒンジで結合する。この相互作用は、構造的に十分に特徴付けられており（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９：７３７−７４９）、ヒトＦｃγＲＩＩＩｂの細胞外ドメインに結合したヒトＦｃのいくつかの構造が解明されている（ｐｄｂ受託コード１Ｅ４Ｋ）（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：２６７−２７３．）（ｐｄｂ受託コード１ＩＩＳおよび１ＩＩＸ）（Ｒａｄａｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：１６４６９−１６４７７）。
【００９１】
異なるＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲに対して異なる親和性を有し、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、典型的に、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４より実質的に良好にその受容体に結合する（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）。すべてのＦｃγＲは、異なる親和性ではあるが、ＩｇＧ  Ｆｃ上の同じ領域を結合する：高親和性結合剤ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１に対して１０−８Ｍ−１のＫｄを有し、一方で、低親和性受容体ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、一般に、それぞれ１０−６および１０−５で結合する。ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂの細胞外ドメインは９６％同一であるが、ＦｃγＲＩＩＩｂは、細胞内シグナリングドメインを有しない。さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ、およびＦｃγＲＩＩＩａは、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する細胞内ドメインを有することを特徴とする、免疫複合体誘発活性化の陽性調節因子であるが、ＦｃγＲＩＩｂは、免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を有するため、阻害性である。故に、前者は活性化受容体と呼ばれ、ＦｃγＲＩＩｂは阻害性受容体と呼ばれる。これらの受容体はまた、異なる免疫細胞上での発現パターンおよびレベルが異なる。さらに別のレベルの複雑性は、ヒトプロテオームにおける多数のＦｃγＲ多形の存在である。臨床的有意性を有する特に関連のある多形は、Ｖ１５８／Ｆ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａである。ヒトＩｇＧ１は、Ｆ１５８アロタイプより大きい親和性でＶ１５８アロタイプに結合する。親和性、ならびにおそらくＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰに対するその効果におけるこれらの差異は、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの登録商標）の効力の有意な決定因子であることが示されている。Ｖ１５８アロタイプを有する患者はリツキシマブ治療に対して好適に応答するが、より低い親和性Ｆ１５８アロタイプを有する患者の応答は乏しい（Ｃａｒｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。おおよそ１０〜２０％のヒトはＶ１５８／Ｖ１５８ホモ接合型であり、４５％はＶ１５８／Ｆ１５８ヘテロ接合型であり、３５〜４５％のヒトはＦ１５８／Ｆ１５８ホモ接合型である（Ｌｅｈｒｎｂｅｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｌｏｏｄ  ９４：４２２０−４２３２、Ｃａｒｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。したがって、８０〜９０％のヒトは応答不良者であり、すなわち、彼らはＦ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａの少なくとも１つの対立遺伝子を有する。
【００９２】
Ｆｃ領域は、補体カスケードの活性化にも関与する。古典的な補体経路では、Ｃ１は、そのＣ１ｑサブユニットを用いて、抗原（複数可）と複合体を形成しているＩｇＧまたはＩｇＭのＦｃ断片に結合する。ある実施形態において、Ｆｃ領域に対する修飾は、補体系を活性化するための本明細書に記載のＶＩＳＴＡ特異的抗体の能力を改変する（増強するまたは低下するかのいずれか）修飾を含む（例えば、米国特許第７，７４０，８４７号を参照されたい）。補体活性化を評価するために、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）を参照されたい）。
【００９３】
したがって、ある実施形態において、本開示は、改変された機能特性、例えば、低減もしくは増強したＣＤＣ、ＡＤＣＣ、もしくはＡＤＣＰ活性、または特定のＦｃγＲに対する増強した結合親和性、または増加した血清半減期を伴う、修飾されたＦｃ領域を有する抗ＶＩＳＴＡ抗体を提供する。本明細書において企図される他の修飾されたＦｃ領域は、例えば、発行済みの米国特許第７，３１７，０９１号；同第７，６５７，３８０号；同第７，６６２，９２５号；同第６，５３８，１２４号；同第６，５２８，６２４号；同第７，２９７，７７５号；同第７，３６４，７３１号；公開された米国特許出願第ＵＳ２００９／０９２５９９号；同第ＵＳ２００８／０１３１４３５号；同第ＵＳ２００８／０１３８３４４号；および公開された国際特許出願第ＷＯ２００６／１０５３３８号；同第ＷＯ２００４／０６３３５１号；同第ＷＯ２００６／０８８４９４号；同第ＷＯ２００７／０２４２４９号に記載されている。
【００９４】
したがって、ある実施形態では、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。ある実施形態では、融合は、ヒンジ、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域の少なくとも一部分を含むＩｇ重鎖定常ドメインとのものである。融合体の少なくとも１つの中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、必要に応じて免疫グロブリン軽鎖とをコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主細胞にコトランスフェクトする。これにより、構築に用いられた３つのポリペプチドの不均等な比が、所望の二重特異性抗体の最適な収量をもたらす実施形態では、この３つのポリペプチド断片の相互の割合を調節する際に、より大きな自由度が得られる。しかし、等比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収量を生じるとき、またはその比が所望の鎖の組み合わせの収量に有意な影響を及ぼさないときは、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖についてのコーディング配列を単一の発現ベクターに挿入することが可能である。
【００９５】
また、本開示の抗体（ならびにその抗原結合断片および変異体）を、例えば精製または診断への適用に用いるために、エピトープタグまたは標識を含むように修飾してもよい。抗体コンジュゲートを作製するための多くの連結基は、当該技術分野において知られており、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、またはＥＰ特許第０４２５２３５Ｂ１号、およびＣｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）に開示されているものを含む。連結基としては、上で特定した特許に開示されているような、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定性基、感光性基、ペプチダーゼ不安定性基、またはエステラーゼ不安定性基が挙げられ、ジスルフィドおよびチオエーテル基が好ましい。
【００９６】
別の企図される実施形態において、本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体は、本明細書においてコンジュゲートと称される別の治療用化合物にコンジュゲートまたは作動可能に連結されてもよい。コンジュゲートは、細胞傷害性薬、化学療法薬、サイトカイン、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、毒素、放射性同位元素、または他の治療活性剤であってもよい。化学療法薬、サイトカイン、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤および他の治療薬は、上に記載されており、これらの上述の治療薬のすべてが抗体コンジュゲートとして利用を見出すことができる。
【００９７】
代替的な一実施形態において、抗体は、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素および酵素的に活性な毒素を含むがこれらに限定されない毒素に、コンジュゲートまたは作動可能に連結される。小分子毒素としては、サポリン（Ｋｕｒｏｄａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ７０：１２８６−１２９４（２０１０）、Ｌｉｐ，ＷＬ．ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ４：２４１−２５１、Ｑｕａｄｒｏｓ  ＥＶ．，ｅｔ  ａｌ．，２０１０  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ；９（１１）；３０３３−４０、Ｐｏｌｉｔｏ  Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．２００９  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，１４７，７１０−７１８）、カリケアマイシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５が挙げられるが、これらに限定されない。毒素としては、ＲＮａｓｅ、ゲロニン、エンジイン、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒素、ゲロニン、緑膿菌外毒素（ＰＥ４０）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）毒素、ウェルシュ菌毒素、およびヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
一実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合断片を１つ以上のメイタンシノイド分子にコンジュゲートさせる。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは最初、東アフリカの低木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ）から単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。その後、一定の微生物もメイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステルなどのメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノールならびにその誘導体および類似体は、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；同第４，２４８，８７０号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２６０，６０８号；同第４，２６５，８１４号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３０８，２６８号；同第４，３０８，２６９号；同第４，３０９，４２８号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３１７，８２１号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４２４，２１９号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３６２，６６３号；および同第４，３７１，５３３号に開示されている。メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲートおよびそれらの治療用途は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、および欧州特許第ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号に開示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）には、ヒト結腸直腸癌に対して指向されたモノクローナル抗体Ｃ２４２に連結されたＤＭ１と称するメイタンシノイドを含む免疫コンジュゲートが記載されている。このコンジュゲートは、培養結腸癌細胞に対して高い細胞傷害性であることが見出され、インビボ腫瘍成長アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。
【００９９】
抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体またはメイタンシノイド分子いずれかの生物活性を有意に減少させることなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学的に連結させることによって調製される。抗体分子あたり平均３〜４個のメイタンシノイド分子は、抗体の機能または溶解度に負の影響を及ぼすことなく標的細胞の細胞傷害性の増強において効力を示したが、１分子の毒素／抗体でさえ裸の（ｎａｋｅｄ）抗体の使用にわたって細胞傷害性を増強すると予想された。メイタンシノイドは当該技術分野において周知であり、かつ既知の技術によって合成することができ、または天然源から単離することができる。好適なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号ならびに先に言及した他の特許および非特許刊行物に開示されている。好ましいメイタンシノイドは、メイタンシノール、およびメイタンシノール分子の芳香族環または他の部分が修飾されているメイタンシノール類似体、例えば、様々なメイタンシノールエステルである。
【０１００】
対象となる別のコンジュゲートは、１つ以上のカリケアマイシン分子にコンジュゲートされた抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリーは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることが可能である。使用され得るカリケアマイシンの構造類似体（Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６−３３４２、Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５−２９２８）（米国特許第５，７１４，５８６号、米国特許第５，７１２，３７４号、米国特許第５，２６４，５８６号、米国特許第５，７７３，００１号）。オーリスタチンＥ（ＡＥ）およびモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）などのドラスタチン１０アナログは、開示の抗体またはその変異体のためのコンジュゲートとしての利用を見出すことができる（Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１（７）：７７８−８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３  Ｂｌｏｏｄ  １０２（４）：１４５８−６５）。有用な酵素活性のある毒素としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ゴーヤー（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセンが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＰＣＴ  ＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。本開示はさらに、本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体と、核酸分解活性を有する化合物、例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）との間でコンジュゲートまたは融合体が形成される実施形態を企図する。
【０１０１】
代替的な一実施形態において、本明細書に開示の抗体を、放射性同位元素にコンジュゲートまたは作動可能に連結させて、放射性コンジュゲートを形成してもよい。様々な放射性同位元素を放射性コンジュゲート抗体の産生に利用可能である。例としては、９０Ｙ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、および２１２Ｂｉが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
本明細書に記載される抗体は、他のある実施形態では、治療用部分、例えば、細胞毒（例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤）、治療薬または放射性元素（例えば、アルファ放射体、ガンマ放射体など）にコンジュゲートされてもよい。細胞毒または細胞傷害性薬剤は、細胞に有害である任意の薬剤を含む。例としては、パクリタキセル／パクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシンならびにこれらのアナログまたはホモログが挙げられる。１つの好ましい例示的な細胞毒は、サポリン（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡから入手可能）である。治療薬としては、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−ルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）、および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０３】
さらに、ＶＩＳＴＡ特異的抗体（抗原結合断片などの本明細書で提供されるその機能的断片を含む）は、ある実施形態では、治療用部分、例えば、放射性金属イオンをコンジュゲートするのに有用な放射性材料または大環状キレーターにコンジュゲートされてもよい。ある実施形態において、大環状キレーターは、リンカー分子を介して抗体に連結することができる、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。そのようなリンカー分子は当該技術分野において一般に既知であり、Ｄｅｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４：２４８３−９０、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：５５３、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６：９４３−５０に記載されている。
【０１０４】
さらなる別の実施形態では、抗体は、腫瘍前処置に利用するために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）にコンジュゲートされてもよく、ここで、この抗体−受容体コンジュゲートは、患者に投与され、次いで、清浄剤を利用して非結合コンジュゲートが循環から除去され、次いで、細胞傷害性薬剤（例えば、放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートされている「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。代替的な実施形態において、抗体は、抗体依存性酵素介在プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）を利用するために、酵素にコンジュゲートまたは作動可能に連結される。プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法薬、ＰＣＴ  ＷＯ８１／０１１４５を参照されたい）を活性抗癌薬に変換するプロドラッグ活性化酵素に抗体をコンジュゲートまたは作動可能に連結させることにより、ＡＤＥＰＴを使用してもよい。例えば、ＰＣＴ  ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。ＡＤＥＰＴに有用な免疫コンジュゲートの酵素成分は、プロドラッグに対して、それをそのより活性な細胞傷害性形態に変換するように作用することが可能な任意の酵素を含む。これらおよび関連する実施形態の方法において有用である酵素としては、ホスフェート含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なアルカリホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なアリールサルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンの抗癌薬、５−フルオロウラシルへの変換に有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグの遊離薬物への変換に有用なプロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチターゼ、およびカテプシン（例えば、カテプシンＢおよびＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグの変換に有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグの遊離薬物への変換に有用な炭水化物切断酵素、例えば、ベータ−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼ；ベータ−ラクタムで誘導体化された薬物の遊離薬物への変換に有用なベータ−ラクタマーゼ；ならびにアミン窒素がフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物の遊離薬物への変換に有用なペニシリンアミダーゼ、例えばペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、当該技術分野において「アブザイム」としても知られている酵素活性を有する抗体を使用して、プロドラッグを遊離活性薬物に変換してもよい（例えば、Ｍａｓｓｅｙ，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：４５７−４５８を参照されたい）。腫瘍細胞集団へアブザイムを送達するために、抗体−アブザイムコンジュゲートを調製することができる。
【０１０５】
様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジプイミダートＨＣＬ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタレルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアナート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアナート）、およびビス活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンを使用して、免疫コンジュゲートを作製し得る。特定のカップリング剤としては、ジスルフィド連結を提供するためのＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１７３：７２３−７３７［１９７８］）およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノアート（ＳＰＰ）が挙げられる。リンカーは、１つ以上の切断可能な成分の放出を促進する「切断可能リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカーを使用してもよい（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）。
【０１０６】
本開示の抗体（およびポリペプチド）の他の修飾も本明細書において企図される。例えば、抗体は、様々な非タンパク質様ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーの１つに連結されてもよい。抗体は、例えば、コアセルベーション技術もしくは界面重合によって調製したマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリラート）マイクロカプセル）内に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）内に、またはマクロエマルジョン内に捕捉されてもよい。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。
【０１０７】
本明細書において用いる場合、「担体」は、使用される投与量および濃度でそれに曝露される細胞または哺乳動物に非毒性である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容可能な担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理的に許容される担体の例としては、緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレート、および他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化物質；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシン；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標））ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標））などが挙げられる。
【０１０８】
抗ＶＩＳＴＡ抗体の所望の機能特性は、当業者に既知の様々な方法、親和性／結合アッセイ（例えば、表面プラズモン共鳴、競合阻害アッセイ）；細胞傷害性アッセイ、細胞生存率アッセイ、細胞増殖または分化アッセイ、インビトロもしくはインビボモデルを用いる癌細胞および／または腫瘍成長阻害を使用して、評価されてもよい。他のアッセイにより、本明細書に記載される抗体が、正常なＶＩＳＴＡ介在性応答、例えば、Ｔ細胞増殖の阻害、Ｔ細胞活性化の阻害、Ｔ細胞サイトカイン（例えば、ＩＦＮγおよびＩＬ−２）産生の阻害、ならびに単球によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１ベータ、およびＴＮＦ−アルファ産生の誘導を遮断する能力を試験してもよい。また、本明細書に記載の抗体をインビトロおよびインビボ効力について試験してもよい。そのようなアッセイは、当業者に既知の十分に確立されたプロトコル（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．Ｉｎｃ．＆Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ  Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ  Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ  Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ編，Ｗａｒｒｅｎ  Ｓｔｒｏｂｅｒ  ２００１  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；または市販のキットを用いて、実施することができる。
【０１０９】
ある実施形態において、本開示はさらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸、例えば、本明細書に記載のＣＤＲまたはＶＨもしくはＶＬドメインをコードする核酸を提供する。核酸は、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。これらおよび関連する実施形態は、本明細書に記載のＶＩＳＴＡに結合する抗体をコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。本明細書において用いる場合の用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源のポリヌクレオチド、またはその組み合わせを意味し、その起源のため、この単離されたポリヌクレオチドは、（１）単離されたポリヌクレオチドが天然に見出されるポリヌクレオチドのすべてまたは一部と関連していない、（２）天然では連結されていないポリヌクレオチドに連結されている、または（３）より大きな配列の一部として天然には存在しない。
【０１１０】
用語「作動可能に連結された」は、この用語が適用される成分が、適切な条件下でそれらの固有の機能を実施することが可能である関係にあることを意味する。例えば、タンパク質コーディング配列に「作動可能に連結された」転写制御配列は、制御配列の転写活性と適合する条件下でタンパク質コーディング配列の発現が達成されるように、タンパク質コーディング配列にライゲートされる。
【０１１１】
本明細書において用いる場合の用語「制御配列」は、それらがライゲートまたは作動可能に連結されるコーディング配列の発現、プロセシングまたは細胞内局在に影響を及ぼし得るポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は、宿主生物に依存し得る。特定の実施形態では、原核生物についての転写制御配列は、プロモーター、リボソーム結合部位、および転写終結配列を含んでもよい。他の特定の実施形態では、真核生物についての転写制御配列は、転写因子についての１つまたは複数の認識部位を含むプロモーター、転写エンハンサー配列、転写終結配列、およびポリアデニル化配列を含んでもよい。ある実施形態では、「制御配列」は、リーダー配列および／または融合パートナー配列を含むことができる。
【０１１２】
本明細書において用いる場合、用語「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖核酸ポリマーを指す。ある実施形態において、ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドであるか、またはいずれかのタイプのヌクレオチドの修飾形態であり得る。そのような修飾には、ブロモウリジンなどの塩基修飾、アラビノシドなどのリボソーム修飾、ならびに２’，３’−ジデオキシリボース、およびヌクレオチド間連結修飾、例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダート、およびホスホロアミダートが含まれる。用語「ポリヌクレオチド」は、具体的には、一本鎖および二本鎖形態のＤＮＡを含む。
【０１１３】
用語「自然発生ヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む。用語「修飾されたヌクレオチド」は、修飾または置換された糖基などを伴うヌクレオチドを含む。用語「オリゴヌクレオチド連結」は、オリゴヌクレオチド連結、例えば、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート、ホスホラニラダート、ホスホロアミダートなどを含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１４：９０８１、Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０６：６０７７、Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１６：３２０９、Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，６：５３９、Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ  ＡＮＤ  ＡＮＡＬＯＧＵＥＳ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．），Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ、Ｓｔｅｃら、米国特許第５，１５１，５１０号、Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，１９９０，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，９０：５４３を参照されたい。これらの開示内容はあらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチドまたはそれらのハイブリダイゼーションの検出を可能にするために検出可能標識を含み得る。
【０１１４】
用語「ベクター」は、宿主細胞にコーディング情報を伝達するために使用される任意の分子（例えば、核酸、プラスミドまたはウイルス）を指すために用いられる。用語「発現ベクター」は、宿主細胞の形質転換に好適なベクターであって、挿入される異種核酸配列の発現を指示および／または制御する核酸配列を含むベクターを指す。発現は、転写、翻訳、およびイントロンが存在する場合にはＲＮＡスプライシングなどのプロセスを含むが、これらに限定されない。
【０１１５】
当業者には理解されるであろうが、ポリヌクレオチドは、ゲノム配列、ゲノム外およびプラスミドコード配列、ならびにタンパク質、ポリペプチド、ペプチドなどを発現するか、または発現するように適合することができる、より小さな操作された遺伝子セグメントを含んでもよい。そのようなセグメントは、自然に単離されてもよく、または当業者によって合成的に修飾されてもよい。
【０１１６】
当業者にはまた認識されるであろうが、ポリヌクレオチドは、一本鎖（コーディングもしくはアンチセンス）または二本鎖であってもよく、またＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成）またはＲＮＡ分子であってもよい。ＲＮＡ分子は、イントロンを含有し、かつＤＮＡ分子に１対１の様式で対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含有しないｍＲＮＡ分子を含む。さらなるコーディングまたは非コーディング配列は、本開示によるポリヌクレオチド内に、必要ではないが、存在してもよく、またポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持材料に、必要ではないが、連結されてもよい。ポリヌクレオチドは、天然配列を含んでもよく、またはそのような配列の変異体もしくは誘導体をコードする配列を含んでもよい。
【０１１７】
したがって、これらおよび関連する実施形態によると、本開示は、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体をコードするポリヌクレオチドも提供する。ある実施形態において、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチド配列の一部またはすべてを含むポリヌクレオチド、およびそのようなポリヌクレオチドの相補体が提供される。
【０１１８】
他の関連する実施形態において、ポリヌクレオチド変異体は、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体をコードするポリヌクレオチド配列に実質的な同一性を有してもよい。例えば、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載する方法（例えば、下記のような標準パラメータを使用するＢＬＡＳＴ分析）を用いて、本明細書に記載の抗体をコードする参照ポリヌクレオチド配列と比較して、少なくとも７０％の配列同一性、好ましくは、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％またはそれ以上の配列同一性を含むポリヌクレオチドであってもよい。コドン縮重、アミノ酸類似性、リーディングフレーム位置決定などを考慮することにより、これらの値を適切に調整して、２つのヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質の対応する同一性を決定可能であることは、当業者であれば認識することになる。
【０１１９】
典型的に、ポリヌクレオチド変異体は、好ましくは、変異体ポリヌクレオチドによってコードされる抗体の結合親和性が、本明細書に具体的に示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる配列に比べて実質的に軽減しないように、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含有する。
【０１２０】
ある他の関連する実施形態では、ポリヌクレオチド断片は、本明細書に記載の抗体をコードする配列と同一のまたはそれに相補的な配列の様々な長さの連続ストレッチを含んでもよく、またはそれらから本質的になってもよい。例えば、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする配列の少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００、３００、４００、５００、もしくは１０００またはそれ以上の連続するヌクレオチドならびにそれらの間にあるすべての中間長のヌクレオチドを含むか、あるいはそれらから本質的になるポリヌクレオチドが提供される。この文脈での「中間長」が、２００〜５００；５００〜１，０００などのすべての整数を含む、引用された値の間の任意の長さ、例えば、５０、５１、５２、５３など；１００、１０１、１０２、１０３など；１５０、１５１、１５２、１５３などを意味することは、容易に理解されるであろう。本明細書に記載のポリヌクレオチド配列は、天然配列中では見出されないさらなるヌクレオチドにより、一端または両端で延長されてもよい。このさらなる配列は、本明細書に記載する抗体をコードするポリヌクレオチドのいずれかの末端にある、または本明細書に記載する抗体をコードするポリヌクレオチドの両端にある、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のヌクレオチドからなってもよい。
【０１２１】
別の実施形態において、本明細書において提供される抗体もしくはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列に中程度〜高度のストリンジェント条件下でハイブリダイズすることが可能であるポリヌクレオチド、またはその断片、またはその相補配列が提供される。ハイブリダイゼーション技術は、分子生物学の技術分野において周知である。例示を目的として、本明細書において提供されるポリヌクレオチドと他のポリヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを試験するために好適な中程度のストリンジェント条件は、５×ＳＳＣ、０．５％  ＳＤＳ、１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で予備洗浄すること；５０℃〜６０℃、５×ＳＳＣで一晩ハイブリダイズさせること；次いで、０．１％  ＳＤＳを含有する２×、０．５×、および０．２×のＳＳＣの各々を用いて、６５℃で２０分間２回洗浄することを含む。例えばハイブリダイゼーション溶液の塩含有量および／またはハイブリダイゼーションを行う温度を変えることにより、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを容易に操作することができることは、当業者には理解されるであろう。例えば、別の実施形態において、好適な高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションの温度を例えば６０℃〜６５℃または６５℃〜７０℃に上昇させることを除き、上に記載したものを含む。
【０１２２】
ある実施形態において、上に記載したポリヌクレオチド、例えば、ポリヌクレオチド変異体、断片、およびハイブリダイジング配列は、ＶＩＳＴＡまたはその抗原結合断片に結合する抗体をコードする。他の実施形態において、そのようなポリヌクレオチドは、ＶＩＳＴＡに少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、およびある実施形態においては、少なくとも約９０％結合する抗体またはその抗原結合断片もしくはＣＤＲ、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列をコードする。さらなる実施形態において、そのようなポリヌクレオチドは、本明細書に示される抗体より大きい親和性でＶＩＳＴＡに結合する、例えば、定量的に少なくとも約１０５％、１０６％、１０７％、１０８％、１０９％または１１０％結合する抗体またはその抗原結合断片もしくはＣＤＲ、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列をコードする。
【０１２３】
本明細書中の他の箇所に記載するように、代表的なポリペプチド（例えば、本明細書で提供されるような変異体ＶＩＳＴＡ特異的抗体、例えば、本明細書で提供されるような抗原結合断片を有する抗体タンパク質）の三次元構造の決定は、定型的な方法論によって行うことができ、その結果、選択された天然または非天然アミノ酸を用いた１つ以上のアミノ酸の置換、付加、欠失または挿入を、そのように誘導された構造変異体が本開示の種の空間充填特性を保持するかどうかを判定するために、実質的にモデル化することができる。例えば、親和性が維持されるまたはより良好な親和性が達成されるような抗体内の適切なアミノ酸置換（またはアミノ酸配列をコードする適切なポリヌクレオチド）を決定するための様々なコンピュータプログラムが当業者に既知である。
【０１２４】
本明細書に記載されるポリヌクレオチド、またはコーディング配列自体の長さに関わらず、その断片を、他のＤＮＡ配列、例えば、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、さらなる制限酵素部位、マルチクローニングサイト、他のコーディングセグメントなどと組み合わせることができ、その結果、それらの全長はかなり様々であり得る。したがって、ほぼあらゆる長さの核酸断片を使用してもよいことが企図され、その全長は、好ましくは、意図される組換えＤＮＡプロトコルにおける調製および使用の容易さによって制限される。例えば、約１０，０００、約５０００、約３０００、約２，０００、約１，０００、約５００、約２００、約１００、約５０塩基長など（すべての中間長を含む）の全長を有する例示的なポリヌクレオチドセグメントが有用であると企図される。
【０１２５】
ポリヌクレオチド配列を比較するとき、下記するように、一致が最大となるようアラインした場合に、２つの配列中のヌクレオチドの配列が同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的に、比較ウインドウにわたってこれらの配列を比較して、配列類似性の局在領域を同定し、比較することによって行われる。本明細書において用いる場合の「比較ウインドウ」は、少なくとも約２０、通常は３０〜約７５、４０〜約５０の連続する位置のセグメントを指し、ここで、ある配列は、２つの配列を最適にアラインした後に、同数の連続した位置の参照配列と比較され得る。
【０１２６】
比較のための配列の最適なアライメントは、デフォルトパラメータを用いて、バイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のＬａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）ｓｕｉｔｅのＭｅｇａｌｉｇｎ（商標）プログラムを用いることにより行うことができる。このプログラムは、以下の参考文献に記載されているいくつかのアライメントスキームを具現化したものである：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（１９７８）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｉｎ  Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（ｅｄ．）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  Ｖｏｌ．  ５，Ｓｕｐｐｌ．３，ｐｐ．３４５−３５８、Ｈｅｉｎ  Ｊ．，Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ，ｐｐ．６２６−６４５（１９９０）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．，ＣＡＢＩＯＳ  ５：１５１−１５３（１９８９）、Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ．，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１−１７（１９８８）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．，Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ  １１：１０５（１９７１）、Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．Ｎｅｓ，Ｍ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６−４２５（１９８７）、Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．，Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ−ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９７３）、Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：７２６−７３０（１９８３）。
【０１２７】
あるいは、比較のための配列の最適なアライメントは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｄ．ＡＰＬ．Ｍａｔｈ  ２：４８２（１９８１）の局所同一性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の同一性アライメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法により、これらのアルゴリズムをコンピューターで実施することにより（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、または検査により、行うことができる。
【０１２８】
配列同一性および配列類似性パーセントの決定に好適なアルゴリズムの好ましい一例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、これらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９７７）、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０を、例えば、本明細書に記載するパラメータとともに使用して、２つ以上のポリヌクレオチド間の配列同一性パーセントを決定することができる。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを通して公的に入手することができる。例示的な一例では、ヌクレオチド配列について、パラメータＭ（１対のマッチ残基についてのリワードスコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティスコア；常に＜０）を用いて、累積スコアを計算することができる。各方向のワードヒットの拡張は、累積アライメントスコアが、その最大達成値からＸ量だけ低下した場合、１つ以上の負のスコアの残基アライメントの蓄積のため、累積スコアがゼロ以下になった場合、またはいずれかの配列の末端に達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、およびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして１１のワード長（Ｗ）および１０の期待値（Ｅ）、ならびにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ａｎｄ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）アライメント、５０の（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を用いる。
【０１２９】
ある実施形態において、「配列同一性のパーセント」は、少なくとも２０の位置の比較ウインドウにわたって最適にアラインされた２つの配列を比較することにより決定され、ここで、比較ウインドウ内のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアライメントのために（付加および欠失を含まない）参照配列と比較して、２０パーセント以下、通常は５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。パーセンテージは、マッチした位置の数を得るために同一の核酸塩基が両方の配列内に出現する位置の数を決定すること、そのマッチした位置の数を参照配列内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で割ること、そしてそれらの結果に１００をかけて配列同一性のパーセンテージを得ること、によって計算される。
【０１３０】
遺伝子コードの縮重の結果として、本明細書に記載の抗体をコードする多くのヌクレオチド配列が存在することは、当業者には理解されるであろう。これらのポリヌクレオチドの一部は、ＶＩＳＴＡに結合する抗体をコードする天然のまたは元のポリヌクレオチド配列のヌクレオチド配列に対して最小限の配列同一性しか持たない。それにも関わらず、コドン使用における差異に起因して異なるポリヌクレオチドが、本開示によって明確に企図される。ある実施形態では、哺乳動物発現用にコドン最適化された配列が具体的に企図される。
【０１３１】
したがって、別の実施形態では、部位特異的変異誘発などの変異誘発アプローチを、本明細書に記載する抗体の変異体および／または誘導体の調製に利用してもよい。このアプローチにより、ポリペプチド配列における特定の修飾を、それらをコードする基礎ポリヌクレオチドの変異誘発によって行うことができる。これらの技術は、例えば、上述の考察の１つ以上を組み入れて、１つ以上のヌクレオチド配列変化をポリヌクレオチドに導入することによる、配列変異体を調製および試験するために複雑でないアプローチを提供する。
【０１３２】
部位特異的変異誘発により、所望の変異のＤＮＡ配列をコードする特異的オリゴヌクレオチド配列、および十分な数の隣接ヌクレオチドの使用により突然変異体を産生し、交差した欠失接合部の両側に安定した二重鎖を形成するために十分なサイズおよび配列複雑性のプライマー配列をもたらすことが可能となる。選択されたポリヌクレオチド配列における変異を用いて、そのポリヌクレオチド自体の特性を改善、改変、減少、修飾、もしくは別様に変化させてもよく、かつ／またはコードされたポリペプチドの特性、活性、組成、安定性、もしくは一次配列を改変してもよい。
【０１３３】
ある実施形態において、本発明者らは、コードされるポリペプチドの１つ以上の特性、例えば、抗体もしくはその抗原結合断片の結合親和性、または特定のＦｃ領域の機能、または特定のＦｃγＲに対するＦｃ領域の親和性を改変するための、本明細書に開示する抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列の変異誘発を企図する。部位特異的変異誘発の技法は当該技術分野において周知であり、ポリペプチドとポリヌクレオチドとの両方の変異体を創出するために広く用いられている。例えば、部位特異的変異誘発は、多くの場合、ＤＮＡ分子の特異的部分を改変するために用いられる。そのような実施形態では、配列の接合部の両側の約５〜約１０残基が改変される、典型的に約１４〜約２５ヌクレオチドほどを含む長さのプライマーが用いられる。
【０１３４】
当業者には理解されるであろうが、部位特異的変異誘発技術は、多くの場合、一本鎖および二本鎖形態の両方に存在するファージベクターを利用する。部位指向性変異誘発において有用な典型的なベクターは、Ｍ１３ファージなどのベクターを含む。これらのファージは、商業的に容易に入手することができ、それらの使用は、当業者に一般に周知である。二本鎖プラスミドはまた、対象とする遺伝子をプラスミドからファージへと移入する段階を排除する部位指向性変異誘発において従来利用されている。
【０１３５】
一般的に、本明細書による部位指向性変異誘発は、先ず、一本鎖ベクターを得ること、または所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列をその配列内に含む二本鎖ベクターの２本の鎖を融解して分離させることによって行う。一般的に、所望の変異配列を保有するオリゴヌクレオチドプライマーは、合成的に調製される。次いで、このプライマーを一本鎖ベクターとアニールし、Ｅ．ｃｏｌｉポリメラーゼＩクレノウ断片などのＤＮＡポリメラーゼ酵素に供して、変異を保有する鎖の合成を完了する。このようにして、１つの鎖が元の非変異配列をコードし、第２の鎖が所望の変異を保有するヘテロ二重鎖が形成される。次いで、このヘテロ二重鎖ベクターを使用して、Ｅ．Ｃｏｌｉ細胞などの適切な細胞を形質転換させ、変異配列配置を保有する組換えベクターを含むクローンを選択する。
【０１３６】
部位指向性変異誘発を用いる、選択されたペプチドをコードするＤＮＡセグメントの配列変異体の調製は、有用である可能性のある種を産生する手段を提供し、これは、ペプチドの配列変異体およびそれらをコードするＤＮＡ配列を得ることができる他の方法を限定することを意図しない。例えば、所望のペプチド配列をコードする組換えベクターを、ヒドロキシルアミンなどの変異誘発剤で処理して、配列変異体を得てもよい。これらの方法およびプロトコルに関する具体的な詳細は、Ｍａｌｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４、Ｓｅｇａｌ，１９７６、Ｐｒｏｋｏｐ  ａｎｄ  Ｂａｊｐａｉ，１９９１、Ｋｕｂｙ，１９９４、およびＭａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２の教示の中で見出され、これらの各文献は、その目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３７】
本明細書において用いる場合、用語「オリゴヌクレオチド指向性変異誘発手順」は、特異的核酸分子の濃度のその初期濃度に対する増加、または増幅などの検出可能シグナルの濃度の増加をもたらす、テンプレート依存性プロセスおよびベクター媒介増殖を指す。本明細書において用いる場合、用語「オリゴヌクレオチド指向性変異誘発手順」は、プライマー分子のテンプレート依存性伸長を含むプロセスを指すことを意図する。テンプレート依存性プロセスという用語は、核酸の新規に合成された鎖の配列が相補的塩基対合についての周知の規則（例えば、Ｗａｔｓｏｎ、１９８７を参照されたい）によって規定される、ＲＮＡまたはＤＮＡ分子の核酸合成を指す。典型的に、ベクター媒介方法論は、核酸断片のＤＮＡまたはＲＮＡへの導入、ベクターのクローン増幅、および増幅された核酸断片の回収を含む。そのような方法論の例は、米国特許第４，２３７，２２４号により提供され、これはその全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
【０１３８】
ポリペプチド変異体の産生のためのもう１つのアプローチでは、米国特許第５，８３７，４５８号において記載されるような再帰的配列組換えを利用することができる。このアプローチでは、組換えおよびスクリーニングまたは選択の反復サイクルを行って、例えば、増大した結合親和性を有する個々のポリヌクレオチド変異体を「展開」させる。ある実施形態は、本明細書に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写または発現カセットの形態の構築物も提供する。
【０１３９】
多くの実施形態において、対象モノクローナル抗体をコードする核酸を宿主細胞に直接導入し、コードされた抗体の発現を誘導するのに十分な条件下でその細胞をインキュベートする。当業者に周知の標準的な技術を本明細書で提供されるポリペプチドおよび核酸配列とともに用いて、本開示の抗体を調製する。ポリペプチド配列を使用して、それによって開示される特定の抗体をコードする適切な核酸配列を決定してもよい。当業者に周知の標準的な方法に従って、様々な発現系に対する特定のコドン「選好性」を反映するように、核酸配列を最適化してもよい。
【０１４０】
ある関連する実施形態に従って、本明細書に記載の１つ以上の構築物を含む組み換え宿主細胞；任意の抗体、そのＣＤＲ、ＶＨもしくはＶＬドメイン、または抗原結合断片をコードする核酸；およびコード核酸からの発現を含む、コードされた産物の産生方法が提供される。発現は、核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって、都合よく達成し得る。発現による産生の後、抗体またはその抗原結合断片を、任意の好適な技術を用いて単離および／または精製し、その後、必要に応じて使用してもよい。
【０１４１】
本明細書で提供される抗体または抗原結合断片、ならびにコードする核酸分子およびベクターは、例えば、それらの天然の環境から実質的に純粋なもしくは均質な形態で単離および／もしくは精製されてもよく、または核酸の場合には、所望の機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の元の核酸もしくは遺伝子を伴わずに、もしくは実質的に伴わずに、単離および／もしくは精製されてもよい。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、完全にまたは部分的に合成のものであってもよい。本明細書で示される場合のヌクレオチド配列への言及は、特定された配列を伴うＤＮＡ分子を包含し、かつ文脈上他のものが必要とされない限り、ＴをＵで代用する特定された配列を伴うＲＮＡ分子を包含する。
【０１４２】
様々な異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニングおよび発現のための系は周知である。好適な宿主細胞としては、細菌、哺乳動物細胞、酵母、およびバキュロウイルス系が挙げられる。異種ペプチドの発現のために当該技術分野において利用可能な哺乳動物細胞系としては、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウス黒色腫細胞、および多数の他のものが挙げられる。一般的な好ましい細菌宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉである。
【０１４３】
Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞における抗体および抗原結合断片の発現は、当該技術分野において十分に確立されている。総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：５４５−５５１（１９９１）を参照されたい。真核細胞における培養での発現も、抗体またはそれらの抗原結合断片の産生の選択肢として当業者に利用可能であり、最近の総説については、例えば、Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３−５７６、ＴｒｉｌｌＪ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ６：５５３−５６０を参照されたい。
【０１４４】
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および他の配列を適宜含む適切な調節配列を含有する好適なベクターを選択または構築することができる。ベクターは、適宜、プラスミド、ウイルス性、例えばファージ、またはファージミドであってもよい。さらなる詳細については、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。核酸の操作、例えば、核酸構築物の調製、変異誘発、シークエンシング、ＤＮＡの細胞への導入および遺伝子発現についての、ならびにタンパク質の分析についての、多くの既知の技術およびプロトコルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９２またはその後の最新版に詳細が記載されている。
【０１４５】
用語「宿主細胞」は、本明細書に記載の抗体のうちの１つ以上をコードする核酸配列が導入される細胞、またはそれを導入することが可能な細胞、および任意の本明細書に記載の抗体をコードする遺伝子などの対象となる選択された遺伝子をさらに発現するか、または発現することが可能である細胞を指すために用いられる。この用語は、選択された遺伝子が存在する限り、その後代が形態の点でまたは構成する遺伝子の点でその元の親と同一であるかに関わらず、親細胞の後代を含む。したがって、そのような核酸を宿主細胞へ導入することを含む方法も企図される。導入には任意の利用可能な技術を用いてもよい。真核細胞については、好適な技術には、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えば、ワクシニアウイルスもしくは昆虫細胞についてはバキュロウイルスを使用する形質導入が含まれる。細菌細胞については、好適な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを使用するトランスフェクションが含まれる。導入の後、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することにより、核酸からの発現を生じさせるか、または発現を可能にしてもよい。一実施形態において、核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれる。標準的な技術に従って、ゲノムでの組換えを促進する配列を含めることによって、組み込みを促進することができる。
【０１４６】
ある実施形態において、本開示は、ＶＩＳＴＡ特異的抗体などの特定のポリペプチドを発現させるための発現系における上記の構築物の使用を含む方法も提供する。用語「形質導入」は、通常はファージによる、ある細菌から別の細菌への遺伝子の移入を指すために用いられる。「形質導入」は、レトロウイルスによる真核細胞配列の獲得および移入も指す。用語「トランスフェクション」は、細胞による外来または外因性ＤＮＡの取り込みを指すために使用され、細胞は、外因性ＤＮＡが細胞膜の内部に導入されたときに、「トランスフェクト」される。多数のトランスフェクション技術が当該技術分野において周知であり、本明細書で開示されている。例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５２：４５６、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢＡＳＩＣ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、およびＣｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｇｅｎｅ  １３：１９７を参照されたい。そのような技術を用いて、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を好適な宿主細胞に導入することができる。
【０１４７】
本明細書において用いる場合の用語「形質転換」は、細胞の遺伝子特徴における変化を指し、細胞は、新たなＤＮＡを含有するように修飾されたときに、形質転換される。例えば、細胞は、その天然の状態から遺伝子的に修飾されるときに、形質転換される。トランスフェクションまたは形質導入の後、形質転換するＤＮＡを、細胞の染色体への物理的組み込みによりその細胞のＤＮＡと組み換えてもよく、または複製することなくエピソーム成分として一過的に維持してもよく、またはプラスミドとして独立して複製してもよい。細胞は、その細胞の分裂に伴ってＤＮＡが複製されるときに、安定に形質転換されると考えられる。生体物質、例えば、核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞などに関連して使用される場合の用語「自然発生」または「天然の」は、天然に見出される材料であって、かつヒトによって操作されていない材料を指す。同様に、本明細書において用いる場合の「非自然発生」または「非天然の」は、天然で見出されない材料であるか、またはヒトによって構造を修飾されたかまたは合成された材料を指す。
【０１４８】
用語「ポリペプチド」、「タンパク質」、および「ペプチド」、および「糖タンパク質」は、互換的に使用され、任意の特定の長さに限定されないアミノ酸のポリマーを意味する。この用語は、ミリスチル化、硫酸化、グリコシル化、リン酸化、およびシグナル配列の付加または欠失などの修飾を排除しない。用語「ポリペプチド」または「タンパク質」は、アミノ酸の１つ以上の鎖を意味し、ここで、各鎖は、ペプチド結合によって共有結合的に連結されたアミノ酸を含み、およびこのポリペプチドまたはタンパク質は、天然タンパク質の配列、すなわち、自然発生の、および具体的には非組み換え細胞によって産生されたタンパク質、または遺伝子改変もしくは組換え細胞によって生産されたタンパク質の配列を有する、ペプチド結合によって互いに非共有結合的および／または共有結合的に連結された複数の鎖を含むことができ、ならびに天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、またはこの天然配列の１つ以上のアミノ酸からの欠失、このアミノ酸の付加および／もしくは置換を有する分子を含むことができる。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、具体的には、本開示のＶＩＳＴＡに結合する抗体、または抗ＶＩＳＴＡ抗体の１つ以上のアミノ酸からの欠失、このアミノ酸への付加、および／もしくはこのアミノ酸の置換を有する配列を包含する。したがって、「ポリペプチド」または「タンパク質」は、１つのアミノ酸鎖（「単量体」と呼ばれる）または複数のアミノ酸鎖（「多量体」と呼ばれる）を含み得る。
【０１４９】
本明細書において言及される用語「単離されたタンパク質」は、対象のタンパク質が、（１）天然に典型的にともに見出される少なくとも一部の他のタンパク質を含まないこと、（２）同じ源からの、例えば、同じ種からの、他のタンパク質を本質的に含まないこと、（３）異なる種からの細胞によって発現されること、（４）天然でそれが関連しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の材料の少なくとも約５０パーセントから分離されていること、（５）「単離されたタンパク質」が天然で関連しているタンパク質の部分と（共有結合性もしくは非共有結合性相互作用によって）関連付けられていないこと、（６）天然で関連していないポリペプチドと（共有結合性もしくは非共有結合性相互作用によって）作動可能に関連付けられていること、または（７）天然に存在しないこと、を意味する。そのような単離されたタンパク質は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、もしくは他のＲＮＡによってコードされるか、合成起源のものであるか、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ある実施形態において、単離されたタンパク質は、その用途（治療、診断、予防、研究、または他のもの）を妨害し得るその天然環境において見出されるタンパク質またはポリペプチドまたは他の混入物を実質的に含まない。
【０１５０】
用語「ポリペプチド断片」は、自然発生または組換え的に産生されたポリペプチドのアミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失、および／または内部欠失もしくは置換を有する、単量体または多量体であり得るポリペプチドを指す。ある実施形態において、ポリペプチド断片は、少なくとも５〜約５００アミノ酸長のアミノ酸を含むことができる。ある実施形態において、断片は、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または４５０アミノ酸長であることが理解されるであろう。特に有用なポリペプチド断片は、抗体の抗原結合ドメインまたは断片を含む、機能的ドメインを含む。抗ＶＩＳＴＡ抗体の場合、有用な断片は、ＣＤＲ領域、特に、重鎖または軽鎖のＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変領域；２つのＣＤＲを含む抗体鎖の一部分またはその可変領域のみ；などを含むが、これらに限定されない。
【０１５１】
ポリペプチドは、翻訳と同時にまたは翻訳後にタンパク質の移入を指示するシグナル（またはリーダー）配列をそのタンパク質のＮ末端に含んでもよい。シグナルペプチドを含む本明細書で提供される任意のポリペプチドアミノ酸配列もまた、そのようなシグナルまたはリーダーペプチドを伴わない本明細書に記載される任意の用途のために企図される。当業者には分かるであろうが、シグナルペプチドは、通常、プロセシング中に切断され、活性抗体タンパク質中には含まれない。ポリペプチド（例えば、ポリ−Ｈｉｓ）の合成、精製もしくは同定を容易にするために、または固体支持体へのポリペプチドの結合を強化するために、ポリペプチドをリンカーまたは他の配列にインフレーム融合またはコンジュゲートさせてもよい。
【０１５２】
複数のポリペプチド成分を、各ポリペプチドがその二次および／または三次構造に確実に折り畳まれるように十分な距離で隔離するために、必要に応じて、ペプチドリンカー／スペーサー配列を利用してもよい。当該技術分野において周知の標準的な技術を用いて、そのようなペプチドリンカー配列を融合ポリペプチドに組み込むことができる。
【０１５３】
あるペプチドスペーサー配列は、例えば、（１）柔軟な伸長された立体配座構造をとることができるそれらの能力；（２）それらが第１および第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用し得る二次構造をとることができないこと；ならびに／または（３）ポリペプチドの機能的エピトープと反応し得る疎水性もしくは荷電残基の欠如、に基づいて、選択することができる。
【０１５４】
例示的な一実施形態において、ペプチドスペーサー配列は、例えば、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含む。他のほぼ中性のアミノ酸、例えば、ＴｈｒおよびＡｌａを、スペーサー配列に含めてもよい。
【０１５５】
スペーサーとして有用に利用することができる他のアミノ酸配列としては、Ｍａｒａｔｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４０：３９  ４６（１９８５）、Ｍｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：８２５８  ８２６２（１９８６）、米国特許第４，９３５，２３３号および米国特許第４，７５１，１８０号において開示されているものが挙げられる。
【０１５６】
他の例示的なスペーサーとしては、例えば、Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（配列番号Ｘ）（Ｃｈａｕｄｈａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：１０６６−１０７０）およびＬｙｓ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（配列番号Ｘ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６）を挙げることができる。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを離隔するためにおよび立体障害を防止するために用いることができる非必須Ｎ末端アミノ酸領域を有するとき、スペーサー配列は必要とされない。任意のスペーサーを用いることなく、または例えば１〜３回反復される５量体Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（配列番号Ｘ）からなる柔軟なポリリンカーを使用することにより、２つのコーディング配列を直接融合することができる。そのようなスペーサーは、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を構築する際にＶＨとＶＬとの間に挿入されることにより使用されている（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５９７９−５８８３）。
【０１５８】
ある実施形態において、ペプチドスペーサーは、一本鎖抗体の可変領域を形成する２つのベータシート間の妥当な相互作用を可能にするように設計される。
【０１５９】
ある例示的な実施形態において、ペプチドスペーサーは、１〜５個のアミノ酸、５〜１０個のアミノ酸、５〜２５個のアミノ酸、５〜５０個のアミノ酸、１０〜２５個のアミノ酸、１０〜５０個のアミノ酸、１０〜１００個のアミノ酸、または任意のその範囲内のアミノ酸である。
【０１６０】
他の例示的な実施形態において、ペプチドスペーサーは、約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０個またはそれ以上のアミノ酸長を含む。
【０１６１】
本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）も企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改良することが望ましいことがある。例えば、抗体のアミノ酸配列変異体を、その抗体をコードするポリヌクレオチドもしくはその鎖に適切なヌクレオチド変化を導入することにより、またはペプチド合成により調製してもよい。そのような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはその残基への挿入および／または置換が挙げられる。最終的な構築物が所望の特性（例えば、ＶＩＳＴＡへの高親和性結合）を有する限り、最終的な抗体に到達するために、欠失、挿入、および置換のいずれかの組み合わせを行ってもよい。アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を改変するなどの、抗体の翻訳後プロセスを改変してもよい。本開示のポリペプチドについて上で説明した任意の変異および修飾が、本開示の抗体に含まれてもよい。
【０１６２】
本開示は、本明細書に開示される抗体の変異体を提供する。ある実施形態では、そのような変異抗体もしくは抗原結合断片またはそれらのＣＤＲは、ＶＩＳＴＡに少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、およびある実施形態では、少なくとも約９０％、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列に結合する。さらなる実施形態において、そのような変異抗体もしくは抗原結合断片またはそれらのＣＤＲは、本明細書に示される抗体より大きい親和性でＶＩＳＴＡに結合する、例えば、定量的に少なくとも約１０５％、１０６％、１０７％、１０８％、１０９％または１１０％結合する、ならびに本明細書に具体的に示される抗体配列。
【０１６３】
特定の実施形態では、主題の抗体は、ａ）本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体の重鎖可変領域と少なくとも８０％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または少なくとも９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ｂ）本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体の軽鎖可変領域と少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一、または少なくとも９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を有してもよい。例示的な重鎖領域および軽鎖領域のアミノ酸配列は、配列番号１〜１１３に示される。
【０１６４】
特定の実施形態では、抗体は、ａ）ｉ．本明細書に記載される選択された抗体の重鎖ＣＤＲ１領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ１領域、ｉｉ．選択された抗体の重鎖ＣＤＲ２領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ２領域、およびｉｉｉ．選択された抗体の重鎖ＣＤＲ３領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ３領域、を含む、重鎖可変領域と、ｂ）ｉ．選択された抗体の軽鎖ＣＤＲ１領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ１領域、ｉｉ．選択された抗体の軽鎖ＣＤＲ２領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ２領域、およびｉｉｉ．選択された抗体の軽鎖ＣＤＲ３領域とアミノ酸配列が同一であるＣＤＲ３領域、を含む、軽鎖可変ドメインと、を含んでもよく、ここで、抗体は、選択された標的（例えば、ＶＩＳＴＡ）に特異的に結合する。さらなる実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は変異抗体であり、この変異体は、重鎖および軽鎖が、ＶＨおよびＶＬ領域のＣＤＲ領域における最大８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個、またはそれ以上アミノ酸置換を除いて、選択された抗体と同一である。これに関連して、選択された抗体のＣＤＲ領域におけるアミノ酸置換は、１、２、３、４、５、６、７、８個、またはある実施形態では、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個以上であってもよい。置換は、ＶＨ領域および／またはＶＬ領域のいずれかのＣＤＲ中にあってもよい。（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ，１９９８，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６：１１５３−１１６７を参照されたい）。
【０１６５】
代表的なポリペプチド（例えば、本明細書で提供されるような変異ＶＩＳＴＡ特異的抗体、例えば、本明細書で提供されるような抗原結合断片を有する抗体タンパク質）の三次元構造の決定は、定型的な方法論によって行ってもよく、その結果、選択された天然または非天然アミノ酸を用いた１つ以上のアミノ酸の置換、付加、欠失または挿入を、そのように誘導された構造変異体が本開示の種の空間充填特性を保持するかどうかを判定するために、実質的にモデル化することができる。例えば、Ｄｏｎａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．３：２３７８、Ｂｒａｄｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９：１８６８−１８７１（２００５）、Ｓｃｈｕｅｌｅｒ−Ｆｕｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１０：６３８（２００５）、Ｄｉｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：１２４４（２００６）、Ｄｏｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：１７６（２００７）、Ｑｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５０：２５９  （２００７）、Ｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２７：１０１４−１０１８（２０１０）を参照されたい。これらおよび関連する実施形態に用いられ得る、例えば、本明細書で提供されるＶＩＳＴＡ特異的抗体その抗原結合ドメインの合理的設計のために用いられ得るコンピュータアルゴリズムのいくつかのさらなる非限定的な例としては、３Ｄグラフィックおよび内蔵スクリプトを使用して大きな生体分子系を表示、動画化、および分析するための分子可視化プログラムであるＶＭＤが挙げられる（Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ  ａｔ  Ｕｒｂａｎａ−Ｃｈａｍｐａｇｎｅのウェブサイト、ｋｓ．ｕｉｕｃ．ｅｄｕ／Ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｖｍｄ／を参照されたい。多くの他のコンピュータプログラムが当該技術分野において既知であり、かつ当業者に利用可能であり、それらにより、エネルギー最小化立体配座の空間充填モデル（ファンデルワールス半径）から原子寸法の決定が可能となる。ＧＲＩＤは、異なる化学基に対して高親和性の領域を決定し、それにより結合を増強しようと努めるものであり、Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏサーチは、数学的アライメントを計算するものであり、ＣＨＡＲＭＭ（Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．４：１８７−２１７）およびＡＭＢＥＲ（Ｗｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９８１）Ｊ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１０６：７６５）は、力の場の計算を評定し、分析するものである（Ｅｉｓｅｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６１：Ｃ３７６−３８６、Ｌｙｂｒａｎｄ（１９９１）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｅｌｇ．４６：４９−５４、Ｆｒｏｉｍｏｗｉｔｚ（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ８：６４０−６４４、Ｂｕｒｂａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ７：９９−１１１、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ（１９８５）Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．６１：１８５−１９０、およびＫｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｄｙ��．９：４７５−４８８も参照されたい）。様々な適切な計算用コンピュータプログラムは、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ（Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）などからも市販されている。
【０１６６】
別の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体およびそれらのヒト化バージョンは、ウサギモノクローナル抗体に由来し、特に、ＲａｂＭＡｂ（登録商標）技術を用いて生成される。これらの抗体は、最小限の配列修飾しか必要とせず、それにより、変異系統誘導（ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｌｉｎｅａｇｅ  ｇｕｉｄｅｄ）（ＭＬＧ）ヒト化技術（例えば、米国特許第７，４６２，６９７号を参照されたい）を用いるヒト化後の機能特性の保持が助長されるので、有利である。したがって、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体を作製するための例示的な方法は、例えば、米国特許第５，６７５，０６３号および同第７，４２９，４８７号に記載されている、ＲａｂＭａｂ（登録商標）ウサギモノクローナル抗体技術を含む。これに関連して、ある実施形態において、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ウサギにおいて産生される。特定の実施形態において、ウサギ脾細胞との融合が可能なウサギ由来不死Ｂリンパ球または末梢Ｂリンパ球を使用して、抗体を産生するハイブリッド細胞を産生する。不死Ｂリンパ球は、内因性免疫グロブリン重鎖を検出可能な程度には発現せず、ある実施形態では、改変された免疫グロブリン重鎖をコードする遺伝子を含有し得る。
【０１６７】
組成物および使用方法
本開示は、ＶＩＳＴＡ特異的抗体またはその抗原結合断片を含む組成物、ならびに癌、炎症性疾患、および感染性疾患の治療を含む様々な治療設定におけるそのような組成物の投与を提供する。
【０１６８】
純粋な形態または適切な薬学的組成物中での本明細書に記載のＶＩＳＴＡ特異的抗体の投与は、同様の効用をもたらす剤の容認された任意の投与モードを介して実施することができる。薬学的組成物は、抗体もしくは抗体含有組成物を適切な生理的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わせることにより調製することができ、また、固体、半固体、液体もしくは気体形態の調製物、例えば、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、軟膏、溶液、坐剤、注射、吸入剤、ゲル、微粒子、およびエアロゾルへと製剤化することができる。加えて、他の薬学的に活性な成分（本明細書の他の箇所に記載されるような他の抗癌剤を含む）および／または好適な賦形剤、例えば、塩、緩衝液、および安定化剤が組成物中に存在してもよいが、これらは必須ではない。投与は、経口、非経口、経鼻、静脈内、経皮、皮下、または局所を含む、種々の異なる経路により成し遂げてもよい。好ましい投与様式は、治療または予防すべき状態の性質に依存する。投与後に、癌の進行および／または転移を軽減、阻害、予防、または遅延させる量が、有効であるとみなされる。
【０１６９】
ある実施形態において、投与される量は、生存腫瘍の量の統計学的に有意な減少、例えば、腫瘍質量の少なくとも５０％減少、またはスキャン寸法の変化（例えば、統計学的有意性を伴う減少）によって示されるような腫瘍退縮をもたらすのに十分な量である。
【０１７０】
正確な投与量および治療の継続期間は、治療される疾患の関数であり、既知の試験プロトコルを用いて経験的に決定してもよく、または当該技術分野において既知のモデル系において組成物を試験し、そこから外挿することにより決定してもよい。また、比較臨床試験を実施してもよい。投与量はまた、緩和すべき状態の重篤度に応じて変化し得る。薬学的組成物は一般に、望ましくない副作用を最小限にする一方で、治療上有用な効果を発揮するように、製剤化および投与される。組成物は１回で投与されてもよく、または多数のより小さい用量に分割して、時間間隔をあけて投与されてもよい。任意の特定の対象については、特定の投与レジメンを、個々の必要性に応じて経時的に調整することができる。
【０１７１】
ＶＩＳＴＡ特異的抗体含有組成物は、単独で投与されてもよく、または、放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光力学的療法などの他の既知の癌療法と組み合わせて投与されてもよい。また、組成物は、抗生物質と組み合わせて投与されてもよい。
【０１７２】
したがって、これらのおよび関連する薬学的組成物の典型的な投与経路には、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸内、膣内、硝子体内、および鼻腔内経路が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合の非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または注入技術を含む。ある実施形態に従う薬学的組成物は、患者に組成物を投与するとその中に含有された活性成分が生物学的に利用可能になるように、製剤化される。対象または患者に投与され得る組成物は、１つ以上の投与量単位の形態をとってもよく、例えば、錠剤は、単一投与量単位であってもよく、また、エアロゾル形態の本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体の容器は、複数の投与量単位を保持してもよい。そのような剤形の実際の調製方法は当業者に既知であるか、または明らかであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照されたい。投与される組成物は、いずれの事象においても、本明細書の教示に従って対象となる疾患または状態を治療するために、治療上有効量の本開示の抗体を含有する。
【０１７３】
薬学的組成物は、固体または液体の形態であってもよい。一実施形態では、担体（複数可）は、粒子状であり、その場合、組成物は、例えば、錠剤または粉末形態である。担体（複数可）は、組成物が、例えば、経口油、注射液、または例えば吸入投与の際に有用であるエアロゾルであると、液体であってもよい。経口投与が意図されるとき、薬学的組成物は、好ましくは、固体または液体形態のいずれかであり、半固体、半液体、懸濁液、およびゲル形態は、本明細書において固体または液体のいずれかとして考えられる形態の中に含まれる。
【０１７４】
経口投与用の固体組成物として、薬学的組成物は、粉末、顆粒、圧縮錠剤、ピル、カプセル、チューインガム、ウエハースなどへと製剤化してもよい。そのような固体組成物は、典型的に１つ以上の不活性希釈剤または可食担体を含有することになる。加えて、結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガム、またはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトース、またはデキストリン、崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなど；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘ；流動化促進剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリン；着香剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジフレーバリング；ならびに着色剤、のうちの１つ以上が存在してもよい。薬学的組成物は、カプセル、例えばゼラチンカプセルの形態であるとき、上記の種類の材料に加えて、ポリエチレングリコールまたは油などの液体担体を含有してもよい。
【０１７５】
薬学的組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルジョン、または懸濁液の形態であってもよい。２つの例として、液体は、経口投与用または注射による送達用であってもよい。経口投与が意図されるとき、好ましい組成物は、本化合物に加えて、甘味剤、保存剤、色素／着色剤、および香味増強剤のうちの１つ以上を含有する。注射による投与が意図される組成物の場合には、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定剤、および等張剤のうちの１つ以上が含まれてもよい。
【０１７６】
液体薬学的組成物は、溶液、懸濁液、または他の同様の形態であるかに関わらず、以下のアジュバント：無菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩溶液、好ましくは、生理食塩水、リンガー溶液、等張性塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒体として機能し得る固定油、例えば、合成モノもしくはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；アセテート、シトレートまたはホスフェートなどの緩衝剤、張性調整剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース、のうちの１つ以上を含んでもよい。非経口調製物を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器、または多回投与用バイアルに封入することができる。生理食塩水が好ましいアジュバントである。注射用薬学的組成物は、好ましくは無菌である。
【０１７７】
非経口投与または経口投与のいずれかが意図された液体薬学的組成物は、好適な投与量が得られるように、本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ特異的抗体の量を含有する必要がある。典型的に、この量は、組成物中、少なくとも０．０１％の抗体である。経口投与が意図されるとき、この量は、組成物の重量の０．１〜約７０％で変化させることができる。ある経口薬学的組成物は、約４％〜約７５％の抗体を含有する。ある実施形態では、薬学的組成物および調製物は、非経口投与量単位が希釈前に０．０１〜１０重量％の抗体を含有するように、調製される。
【０１７８】
薬学的組成物は、局所投与を意図されてもよく、この場合、担体は、好適には、溶液、エマルジョン、軟膏またはゲル基剤を含んでもよい。基剤は、例えば、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤、例えば水およびアルコール、ならびに乳化剤および安定剤、のうちの１つ以上を含んでもよい。局所投与用の薬学的組成物中に増粘剤が存在してもよい。経皮投与が意図される場合、組成物は、経皮パッチまたはイオン注入デバイスを含んでもよい。薬学的組成物は、例えば、直腸内で融解して薬物を放出することとなる坐剤の形態での、直腸内投与を意図されてもよい。直腸内投与用の組成物は、好適な無刺激性の賦形剤として油性基剤を含有してもよい。そのような基剤としては、ラノリン、カカオ脂、およびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７９】
薬学的組成物は、固体または液体投与量単位の物理的形態を修飾する様々な材料を含んでもよい。例えば、組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含んでもよい。コーティングシェルを形成する材料は、典型的に不活性であり、例えば、糖、シェラック、および他の腸溶コーティング剤から選択されてもよい。あるいは、活性成分をゼラチンカプセルに収容してもよい。固体または液体形態の薬学的組成物は、抗体に結合し、それにより化合物の送達を補助する剤を含んでもよい。この能力において作用し得る好適な剤は、他のモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、１つ以上のタンパク質またはリポソームを含む。薬学的組成物は、エアロゾルとして投与することができる投薬量単位から本質的になってもよい。エアロゾルという用語は、コロイド的性質のものから、加圧パッケージからなる系までの範囲にわたる、様々な系を示すために用いられる。送達は、液化もしくは圧縮ガスによるか、または活性成分を投与する適切なポンプシステムにより、行われてもよい。活性成分（複数可）を送達するために、単相、二相、または三相系でエアロゾルを送達してもよい。エアロゾルの送達は、ともにキットを形成し得る、必須の容器、活性剤、弁、副容器などを含む。当業者は、過度の実験を伴うことなく、好ましいエアロゾルを決定し得る。
【０１８０】
薬学的組成物は、薬学的技術分野において周知の方法論によって調製し得る。例えば、注射により投与されることが意図される薬学的組成物は、本明細書に記載のＶＩＳＴＡ特異的抗体を含む組成物と、場合により、塩、緩衝剤および／または安定剤のうちの１つ以上とを含む組成物を滅菌蒸留水と合わせて溶液を形成することにより、調製することができる。均質な溶液または懸濁液の形成を促進するために、界面活性剤を添加してもよい。界面活性剤は、抗体組成物と非共有結合的に相互作用して、水性送達系における抗体の溶解または均質懸濁を促進する化合物である。
【０１８１】
組成物は、治療上有効な量で投与されてもよく、この有効量は、使用される特定の化合物（例えば、ＶＩＳＴＡ特異的抗体）の活性；化合物の代謝安定性および作用の長さ；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；投与モードおよび回数；排泄速度；薬物の組み合わせ；特定の障害または状態の重症度；ならびに対象が受ける治療、を含む種々の因子に依存して変化し得る。一般に、治療上有効な１日用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．０７ｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７．０ｇ）であり、好ましくは、治療上有効な用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．７ｍｇ）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、３．５ｇ）であり、より好ましくは、治療上有効な用量は、（７０ｋｇ哺乳動物については）約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｍｇ）〜約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、１．７５ｇ）である。
【０１８２】
本開示のＶＩＳＴＡ特異的抗体を含む組成物は、１つ以上の他の治療薬の投与と同時に投与されてもよく、その前に投与されてもよく、またはその後に投与されてもよい。そのような組み合わせ療法は、抗体および１つ以上のさらなる活性剤を含有する単一の薬学的投与用製剤の投与と、本開示の抗体および各活性剤をその独自の別個の薬学的投与用製剤中に含む組成物の投与と、を含んでもよい。例えば、本明細書に記載の抗体および他の活性剤を、錠剤もしくはカプセルなどの単一の経口投与用組成物中でともに患者に投与することができ、または各剤を別々の経口投与用製剤中にて投与することができる。同様に、本明細書に記載の抗体および他の活性剤を、生理食塩水もしくは他の生理的に許容される溶液中などの単一の非経口投与用組成物中でともに患者に投与することができ、または各剤を別々の非経口投与用製剤中にて投与することができる。別々の投与用製剤を使用する場合、抗体および１つ以上のさらなる活性剤を含む組成物は、本質的に同じ時点で、すなわち、同時に投与されることができ、または別々に時間をずらして、すなわち、逐次的および任意の順序で、投与することができる。組み合わせ療法は、これらのすべてのレジメンを含むことが理解される。
【０１８３】
したがって、ある実施形態では、１つ以上の他の治療薬と組み合わせた、本開示の抗ＶＩＳＴＡ抗体組成物の投与も企図される。そのような治療薬は、本明細書に記載の特定の疾患状態、例えば、関節リウマチ、炎症または癌についての標準的治療として当該技術分野において受け入れられ得る。企図される例示的な治療薬としては、サイトカイン、成長因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、化学療法薬、放射線療法剤、または他の活性剤および補助剤が挙げられる。
【０１８４】
ある実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、１つ以上の癌免疫療法剤と組み合わせて投与される。ある場合には、免疫療法剤は、対象の免疫応答を調節して、例えば、癌関連または癌特異的免疫応答を増加させるかまたは維持することにより、免疫細胞の阻害または癌細胞の減少をもたらす。例示的な免疫療法剤には、ポリペプチド、例えば、抗体およびその抗原結合断片、リガンド、および小ペプチド、ならびにそれらの混合物が含まれる。また、免疫療法剤としては、小分子、細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞）、様々な癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルスなどのウイルス剤を含む遺伝子療法または他のポリヌクレオチド系薬剤、および当該技術分野で既知の他のものも含まれる。このため、ある実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、および細胞ベースの免疫療法のうちの１つ以上から選択される。
【０１８５】
ある実施形態では、癌免疫療法剤は免疫チェックポイント調節剤である。特定の例には、１つ以上の阻害性免疫チェックポイント分子の「拮抗物質」、および１つ以上の刺激性免疫チェックポイント分子の「作動物質」が挙げられる。一般に、免疫チェックポイント分子は、シグナルを上向きにする（共刺激性分子）かまたはシグナルを下向きにするかのいずれかを行う免疫系の成分であり、これの標的化は、癌細胞が免疫チェックポイント分子の自然な機能を乱し得ることを理由に、癌における治療可能性を有する（例えば、Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８：５６−６１，２０１５、Ｔｏｐａｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２７：４５０−４６１，２０１５、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ．１２：２５２−２６４，２０１２）。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤（例えば、拮抗物質、作動物質）は、本明細書に記載される１つ以上の免疫チェックポイント分子に「結合する」または「特異的に結合する」。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１つ以上の阻害性免疫チェックポイント分子の拮抗物質または阻害剤である。例示的な阻害性免疫チェックポイント分子には、プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、プログラム死１（ＰＤ−１）、細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連４（ＣＴＬＡ−４）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）が含まれる。
【０１８７】
ある実施形態では、薬剤は、ＰＤ−１（受容体）拮抗物質または阻害剤であり、その標的化により、腫瘍環境中で免疫機能が回復することが示されている（例えば、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：３９−４６，２０１５を参照されたい）。ＰＤ−１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、プロＢ細胞上で発現される細胞表面受容体である。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２という２つのリガンドと相互作用する。ＰＤ−１は、例えば、Ｔ細胞の活性化を低減または防止し、それにより今度は自己免疫を低減し、自己寛容を促進することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能する。ＰＤ−１の阻害効果は、リンパ節中の抗原特異的Ｔ細胞におけるアポトーシスを促進し、同時にまた調節性Ｔ細胞（抑制Ｔ細胞）におけるアポトーシスを低減する二重機序を少なくとも部分的に手段として、達成される。ＰＤ−１拮抗物質または阻害剤のいくつかの例には、ＰＤ−１に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上、例えば、その下流シグナル伝達またはそのＰＤ−Ｌ１との相互作用を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。ＰＤ−１拮抗物質または阻害剤の特定の例には、抗体であるニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＰＤＲ００１、ＭＫ−３４７５、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４、およびピジリズマブ、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号、同第８，９９３，７３１号、同第９，０７３，９９４号、同第９，０８４，７７６号、同第９，１０２，７２７号、同第９，１０２，７２８号、同第９，１８１，３４２号、同第９，２１７，０３４号、同第９，３８７，２４７号、同第９，４９２，５３９号、同第９，４９２，５４０、および米国出願第２０１２／００３９９０６号、同第２０１５／０２０３５７９号を参照されたい）。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＰＤ−Ｌ１拮抗物質または阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ−１受容体に対する天然のリガンドのうちの１つである。ＰＤ−Ｌ１拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上、例えば、そのＰＤ−１受容体への結合を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。ＰＤ−Ｌ１拮抗物質の特定の例には、抗体アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、およびデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる（例えば、米国特許第９，１０２，７２５号、同第９，３９３，３０１号、同第９，４０２，８９９号、同第９，４３９，９６２号を参照されたい）。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＰＤ−Ｌ２拮抗物質または阻害剤である。上述のように、ＰＤ−Ｌ２は、ＰＤ−１受容体に対する天然のリガンドのうちの１つである。ＰＤ−Ｌ２拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＰＤ−Ｌ２に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上、例えば、そのＰＤ−１受容体への結合を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＴＬＡ−４拮抗物質または阻害剤である。ＣＤ１５２（表面抗原分類１５２）としても知られるＣＴＬＡ４またはＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔ−リンパ球関連４）は、例えば、抗原提示細胞の表面上でＣＤ８０またはＣＤ８６に結合しているときに阻害性シグナルをＴ細胞に伝達することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ−４拮抗物質または阻害剤の一般例には、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。特定の例には、抗体であるイピリムマブおよびトレメリムマブ、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。イピリムマブの活性の少なくとも一部は、ＣＴＬＡ−４を発現する抑制性Ｔｒｅｇを抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が殺滅することにより媒介されると考えられる。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＩＤＯ拮抗物質もしくは阻害剤、またはＴＤＯ拮抗物質もしくは阻害剤である。ＩＤＯおよびＴＤＯは、免疫阻害特性を有するトリプトファン異化酵素である。例えば、ＩＤＯは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来抑制細胞を生成および活性化し、腫瘍血管新生を促進することが知られている。ＩＤＯおよびＴＤＯ拮抗物質または阻害剤の一般例には、ＩＤＯまたはＴＤＯに特異的に結合し（例えば、Ｐｌａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照されたい）、１つ以上の免疫抑制活性を低減または阻害する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。ＩＤＯ拮抗物質または阻害剤の特定の例には、インドキシモド（ＮＬＧ−８１８９）、１−メチル−トリプトファン（１ＭＴ）、β−カルボリン（ノルハルマン、９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール）、ロスマリン酸、およびエパカドスタットが挙げられる（例えば、Ｓｈｅｒｉｄａｎ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１−３２２，２０１５を参照されたい）。ＴＤＯ拮抗物質または阻害剤の特定の例には、６８０Ｃ９１およびＬＭ１０が挙げられる（例えば、Ｐｉｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ．１０９：２４９７−２５０２，２０１２を参照されたい）。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＴＩＭ−３拮抗物質または阻害剤である。Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）は、活性化されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上で発現され、Ｔｈ１およびＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ−３はまた、そのリガンドであるガレクチン−９と相互作用する際に細胞死を誘発することにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の調節因子として作用する。ＴＩＭ−３は、抑制性の腫瘍微小環境に寄与し、その過剰発現は、様々な癌における予後不良と関連付けられる（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ．５４：１７０６−１３，２０１５を参照されたい）。ＴＩＭ−３拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＴＩＭ−３に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上を低減または阻害する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＬＡＧ−３拮抗物質または阻害剤である。リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）は、活性化されたＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、および形質細胞様樹状細胞上で発現される。これは、ＣＴＬＡ−４およびＰＤ−１に類似した様式で、Ｔ細胞の細胞増殖、活性化、および恒常性を負に調節し（例えば、Ｗｏｒｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｖｉｇｎａｌｉ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．３３：９７０−９，２００３、およびＷｏｒｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎ．１７２：５４５０−５，２００４を参照されたい）、Ｔｒｅｇ抑制機能において役割を果たすことが報告されている（例えば、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２１：５０３−１３，２００４を参照されたい）。ＬＡＧ３はまた、ＣＤ８＋  Ｔ細胞を寛容原性状態に維持し、ＰＤ−１と組み合わさって、ＣＤ８  Ｔ細胞枯渇を維持する。ＬＡＧ−３拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＬＡＧ−３に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上を阻害する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。特定の例には、抗体であるＢＭＳ−９８６０１６、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＢＴＬＡ拮抗物質または阻害剤である。Ｂ−およびＴ−リンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）発現は、Ｔ細胞の活性化の最中に誘導され、腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、および細胞表面受容体のＢ７ファミリーとの相互作用を介して、Ｔ細胞を阻害する。ＢＴＬＡは、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）としても知られる腫瘍壊死因子（受容体）スーパーファミリーのメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）に対するリガンドである。ＢＴＬＡ−ＨＶＥＭ複合体は、例えば、ヒトＣＤ８＋癌特異的Ｔ細胞の機能を阻害することにより、Ｔ細胞免疫応答を負に調節する（例えば、Ｄｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １２０：１５７−６７，２００９を参照されたい）。ＢＴＬＡ拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＢＴＬＡ−４に特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＨＶＥＭ拮抗物質または阻害剤、例えば、ＨＶＥＭに特異的に結合し、そのＢＴＬＡまたはＣＤ１６０との相互作用に干渉する拮抗物質または阻害剤である。ＨＶＥＭ拮抗物質または阻害剤の一般例には、ＨＶＥＭに特異的に結合し、任意選択でＨＶＥＭ／ＢＴＬＡおよび／またはＨＶＥＭ／ＣＤ１６０の相互作用を低減し、それによりＨＶＥＭの免疫抑制活性のうちの１つ以上を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０拮抗物質または阻害剤、例えば、ＣＤ１６０に特異的に結合し、そのＨＶＥＭとの相互作用に干渉する拮抗物質または阻害剤である。ＣＤ１６０拮抗物質または阻害剤の一般例には、ＣＤ１６０に特異的に結合し、任意選択でＣＤ１６０／ＨＶＥＭ相互作用を低減し、それによりその免疫抑制活性のうちの１つ以上を低減または阻害する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＴＩＧＩＴ拮抗物質または阻害剤である。Ｔ細胞ＩｇおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）は、様々なリンパ球系細胞の表面上に見られ、例えばＴｒｅｇを介して抗腫瘍免疫を抑制する共阻害性受容体である（Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５）。ＴＩＧＩＴ拮抗物質または阻害剤の一般例としては、ＴＩＧＩＴに特異的に結合し、その免疫抑制活性のうちの１つ以上を低減する、抗体または抗原結合断片または小分子が挙げられる（例えば、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２６：９２３−３７，２０１４を参照されたい）。
【０１９８】
ある実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、１つ以上の刺激性免疫チェックポイント分子の作動物質である。例示的な刺激性免疫チェックポイント分子には、ＣＤ４０、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、およびヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）が挙げられる。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ４０作動物質である。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）および一部の悪性腫瘍上で発現される。そのリガンドはＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）である。ＡＰＣ上では、ライゲーションにより共刺激性分子の上方調節が生じ、抗腫瘍免疫応答におけるＴ細胞の支援の必要性を回避できる可能がある。ＣＤ４０作動物質療法は、ＡＰＣ突然変異およびそれらの腫瘍からリンパ節への移行に重要な役割を果たし、抗原提示およびＴ細胞活性化を高める。抗ＣＤ４０作動物質抗体は、動物モデルにおいて相当な応答および耐久性のある抗癌免疫を生み、これは、細胞傷害性Ｔ細胞によって少なくとも部分的に媒介される効果である（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２１：１３２１−１３２８，２０１５、およびＶｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ  ａｎｄ  Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：１０３５−４３，２０１３を参照されたい）。ＣＤ４０作動物質の一般例には、ＣＤ４０に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＣＰ−８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ  Ｌｏｂ  ７／４、ＡＤＣ−１０１３、ＣＤ４０Ｌ、ｒｈＣＤ４０Ｌ、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。ＣＤ４０作動物質の特定の例には、ＡＰＸ００５（例えば、ＵＳ２０１２／０３０１４８８を参照されたい）およびＡＰＸ００５Ｍ（例えば、ＵＳ２０１４／０１２０１０３を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２００】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＯＸ４０作動物質である。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、エフェクターおよびメモリーＴ細胞の拡大を促進し、Ｔ調節性細胞の分化および活性を抑制する（例えば、Ｃｒｏｆｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ．２２９：１７３−９１，２００９を参照されたい）。そのリガンドはＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）である。ＯＸ４０シグナル伝達は、Ｔ細胞の活性化と生存との両方に影響するので、リンパ節における抗腫瘍免疫応答の開始、および腫瘍微小環境における抗腫瘍免疫応答の維持に主要な役割を果たす。ＯＸ４０作動物質の一般例には、ＯＸ４０に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＯＸ８６、ＯＸ−４０Ｌ、Ｆｃ−ＯＸ４０Ｌ、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＥＤＩ０５６２（ヒト化ＯＸ４０作動物質）、ＭＥＤＩ６４６９（マウスＯＸ４作動物質）、およびＭＥＤＩ６３８３（ＯＸ４０作動物質）、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＧＩＴＲ作動物質である。グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）は、Ｔ細胞拡大を増加させ、Ｔｒｅｇの抑制活性を阻害し、Ｔエフェクター細胞の生存を延長する。ＧＩＴＲ作動物質は、Ｔｒｅｇ系列安定性の喪失を介して抗腫瘍応答を促進することが示されている（例えば、Ｓｃｈａｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．１：３２０−３１，２０１３を参照されたい）。これらの多様な機序により、ＧＩＴＲが、リンパ節における免疫応答の開始、および腫瘍組織における免疫応答の維持に重要な役割を果たすことが示される。そのリガンドはＧＩＴＲＬである。ＧＩＴＲ作動物質の一般例には、ＧＩＴＲに特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＧＩＴＲＬ、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ−１、ＭＥＤＩ１８７３、およびそれらの抗原結合断片が挙げられる。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ１３７作動物質である。ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであり、ＣＤ１３７の架橋により、Ｔ細胞増殖、ＩＬ−２分泌、生存、および細胞傷害活性が増強する。ＣＤ１３７介在性シグナル伝達はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞を、活性化による誘導される細胞死から保護する。ＣＤ１３７作動物質の一般例には、ＣＤ１３７に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＣＤ１３７（または４−１ＢＢ）リガンド（例えば、Ｓｈａｏ  ａｎｄ  Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．８９：２１−９，２０１１を参照されたい）、および抗体であるウトミルマブ（その抗体断片を含む）が挙げられる。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２７作動物質である。ＣＤ２７の刺激は、未感作Ｔ細胞の抗原特異的拡大を増加させ、Ｔ細胞記憶、およびＴ細胞免疫の長期的な維持に寄与する。そのリガンドはＣＤ７０である。作動物質抗体によるヒトＣＤ２７の標的化により、Ｔ細胞活性化および抗腫瘍免疫が刺激される（例えば、Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１４；３：ｅ２７２５５．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２７２５５、およびＨｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４１７４−８３，２０１３を参照されたい）。ＣＤ２７作動物質の一般例には、ＣＤ２７に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＣＤ７０、ならびに抗体であるバルリルマブおよびＣＤＸ−１１２７（１Ｆ５）（それらの抗原結合断片を含む）が挙げられる。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２８作動物質である。ＣＤ２８は、構成的に発現されるＣＤ４＋Ｔ細胞、一部のＣＤ８＋Ｔ細胞である。そのリガンドはＣＤ８０およびＣＤ８６を含み、その刺激により、Ｔ細胞拡大が増加する。ＣＤ２８作動物質の一般例には、ＣＤ２８に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。特定の例には、ＣＤ８０、ＣＤ８６、抗体であるＴＡＢ０８、およびその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＣＤ２２６作動物質である。ＣＤ２２６は、リガンドをＴＩＧＩＴと共有する刺激性受容体であり、ＴＩＧＩＴとは反対に、ＣＤ２２６が関与することで、Ｔ細胞活性化が増強する（例えば、Ｋｕｒｔｕｌｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３−４０６２，２０１５、Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９８４：５５７−５６７，２００３、およびＴａｈａｒａ−Ｈａｎａｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５３３−５３８，２００４を参照されたい）。ＣＤ２２６作動物質の一般例には、ＣＤ２２６に特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンド（例えば、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５）が挙げられる。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、薬剤は、ＨＶＥＭ作動物質である。腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）としても知られるヘルペス侵入ウイルスメディエーター（ＨＶＥＭ）は、ＴＮＦ−受容体スーパーファミリーのヒト細胞表面受容体である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞、ＡＰＣ、および他の免疫細胞を含む様々な細胞上で見られる。他の受容体とは異なり、ＨＶＥＭは、静止Ｔ細胞において高レベルで発現され、活性化時に下方調節される。ＨＶＥＭシグナル伝達は、Ｔ細胞活性化の初期段階、およびリンパ節における腫瘍特異的リンパ球集団の拡大中に重要な役割を果たすことが示されている。ＨＶＥＭ作動物質の一般例には、ＨＶＥＭに特異的に結合し、その免疫刺激活性のうちの１つ以上を増加させる、抗体または抗原結合断片または小分子またはリガンドが挙げられる。
【０２０７】
ある実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、１つ以上の二重特異性または多重特異性抗体と組み合わせて投与される。例えば、ある特定の二重特異性または多重特異性抗体は、（ｉ）１つ以上の阻害性免疫チェックポイント分子に結合してそれを阻害し、かつ（ｉｉ）１つ以上の刺激性免疫チェックポイント分子に結合してそれを作動させることもできる。ある実施形態では、二重特異性または多重特異性抗体は、（ｉ）ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、ＣＴＬＡ−４、ＩＤＯ、ＴＤＯ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、および／またはＴＩＧＩＴのうちの１つ以上に結合してそれらを阻害し、かつ（ｉｉ）ＣＤ４０、ＯＸ４０グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、および／またはヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）のうちの１つ以上に結合してそれらを作動させる。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、１つ以上の癌ワクチンと組み合わせて投与される。ある実施形態では、癌ワクチンは、Ｏｎｃｏｐｈａｇｅ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、任意選択でＧａｒｄａｓｉｌまたはＣｅｒｖａｒｉｘ、Ｂ型肝炎ワクチン、任意選択で、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ、またはＴｗｉｎｒｉｘ、およびシプロイセル−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）のうちの１つ以上から選択されるか、あるいはヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ−３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ−Ａ）、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＴＬＡ−４、ＮＰＣ−１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、アルファ−フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ−ＩＸ）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ−７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（またはＣＡ−１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ−ＬＵ−１３抗原、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０ＢまたはＴＲＡＩＬ−Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７−１Ａ）、プログラム死−１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝のホスファターゼ３（ＰＲＬ−３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍に発現するジシアロガングリオシド）、グリピカン−３（ＧＰＣ３）、およびメソテリンのうちの１つ以上から選択される。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、１つ以上の腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、タリモジーンラハーパレプベック（Ｔ−ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、Ｏｎｃｏｒｉｎｅ（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ−０１０）、セネカウイルスＳＶＶ−００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ−１７１６）、ＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ−ＯＮＣ１、ＭＶ−ＮＩＳ、およびＤＮＸ−２４０１のうちの１つ以上から選択される。
【０２１０】
ある実施形態では、癌免疫療法剤はサイトカインである。例示的なサイトカインには、インターフェロン（ＩＦＮ）−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）が挙げられる。
【０２１１】
ある実施形態では、癌免疫療法剤は、細胞ベースの免疫療法、例えば、Ｔ細胞ベースの養子免疫療法である。いくつかの実施形態では、細胞ベースの免疫療法は、癌抗原特異的Ｔ細胞、任意選択で体外由来Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞、およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、およびペプチド誘導性Ｔ細胞のうちの１つ以上から選択される。特定の実施形態では、ＣＡＲ修飾Ｔ細胞はＣＤ−１９を標的にする（例えば、Ｍａｕｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１２５：４０１７−４０２３，２０１５を参照されたい）。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、養子免疫療法、例えば、自家免疫療法の一部として使用される。このため、ある実施形態は、癌の治療を、それを必要とする患者において行う方法を含み、本方法は、
（ａ）体外由来の免疫細胞を、本明細書に記載される抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片とともにインキュベートすることと、
（ｂ）自家免疫細胞を患者に投与することと、を含む。
【０２１３】
一部の場合、体外由来の免疫細胞は、治療される患者から得られる自家細胞である。いくつかの実施形態では、自家免疫細胞は、リンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、および／または樹状細胞（ＤＣ）を含む。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｔ細胞、任意選択で細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を含む。養子Ｔ細胞およびＮＫ細胞免疫療法の説明については、例えば、Ｊｕｎｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．１１７：１４６６−１４７６，２００７、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８：６２−６８，２０１５、Ｃｏｏｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１３：３３−４２，２００７、およびＬｉ  ａｎｄ  Ｓｕｎ，Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３０：１７３−１９６，２０１８を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、本明細書に記載される少なくとも１つの「癌抗原」に向けられる癌抗原特異的Ｔ細胞を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体またはその抗原結合断片により、養子導入された免疫細胞の効力が増強する。
【０２１４】
ある実施形態では、本明細書に開示される抗ＶＩＳＴＡ抗体は、いずれの数の化学療法薬とともに投与されてもよい。化学療法薬の例は、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））；アルキルスルホナート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパおよびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロロメラミンを含む、エチレンイミンおよびメチラメラミン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、ピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、５−ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎薬、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フォリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デホファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエ���ルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤  ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルオミチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｍｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えば、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デノロイキンジフティトックス）；エスペラマイシン；カペシタビン；ならびに上記いずれかのものの薬学的に許容される塩、酸または誘導体を含む。この定義には、腫瘍上のホルモン作用を調節もしくは阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン；ならびに、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；ならびに上記いずれかのものの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体、も含まれる。
【０２１５】
様々な他の治療薬が、本明細書に記載の抗ＶＩＳＴＡ抗体とともに使用され得る。一実施形態において、抗体は、抗炎症剤とともに投与される。抗炎症剤または薬としては、ステロイドおよび糖質コルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミドおよびミコフェノラートを含む非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１６】
例示的なＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ−２阻害剤、例えば、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）、およびシアリラートからなる群から選択される。例示的な鎮痛薬は、アセトアミノフェン、オキシコドン、プロポキシフェン塩酸塩のトラマドールからなる群から選択される。例示的な糖質コルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンまたはプレドニゾンからなる群から選択される。例示的な生物学的応答修飾剤には、細胞マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）に指向された分子、サイトカイン阻害剤、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））およびインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）））、ケモカイン阻害剤、および接着分子阻害剤が含まれる。生物学的応答修飾剤は、モノクローナル抗体、および組換え型の分子も含む。例示的なＤＭＡＲＤには、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）および筋肉内）、ならびにミノサイクリンが含まれる。
【０２１７】
ある実施形態では、本明細書に記載される抗体は、サイトカインとともに投与される。本明細書において用いる場合の「サイトカイン」とは、別の細胞に対して細胞間媒介因子として作用するある細胞集団によって放出されるタンパク質についての総称を意味する。そのようなサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインには、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパクホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−アルファおよび−ベータ；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えば、ＮＧＦ−ベータ；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータ；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン−アルファ、ベータ、および−ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＩＬ−１５、腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−アルファまたはＴＮＦ−ベータ；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子、が含まれる。本明細書において用いる場合、サイトカインという用語は、天然源または組換え細胞培養からのタンパク質、および天然配列サイトカインの生物活性のある等価物を含む。
【０２１８】
本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体を含む組成物は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、および感染性疾患を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載される疾患に罹患した個体に投与されてもよい。癌には、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、頸部、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、および悪性黒色腫が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１９】
自己免疫疾患には、関節炎（関節リウマチ、反応性関節炎を含む）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、脳脊髄炎、ブドウ膜炎、重症筋無力症、多発性硬化症、インスリン依存型糖尿病、アジソン病、セリアック病、慢性疲労症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性脱毛症、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、線維筋痛症、尋常性天疱瘡、シェーグレン症候群、川崎病、甲状腺機能亢進症／ブレーブス病、甲状腺機能低下症／橋本病、子宮内膜症、強皮症、悪性貧血、グッドパスチャー症候群、ギラン・バレー症候群、ウェーグナー病、糸球体腎炎、再生不良性貧血（多数回輸血を受けた再生不良性貧血患者を含む）、発作性夜間ヘモグロビン尿症、骨髄異形成症候群、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、エバンス症候群、第ＶＩＩＩ因子阻害物質症候群、全身性血管炎、皮膚筋炎、多発性筋炎およびリウマチ熱、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性水疱性類天疱瘡、パーキンソン病、サルコイドーシス、白斑、原発性胆汁性肝硬変、ならびに自己免疫性心筋炎が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２０】
炎症性疾患には、クローン病、大腸炎、皮膚炎、乾癬、憩室炎、肝炎、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、エリテマトーデス、腎炎、パーキンソン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病、関節炎、関節リウマチ、喘息、ならびに様々な心血管疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症および血管炎が含まれるが、これらに限定されない。ある実施形態では、炎症性疾患は、リウマチ性関節炎、糖尿病、痛風、クリオピリン関連周期性症候群、および慢性閉塞性肺障害からなる群から選択される。
【０２２１】
これに関連して、一実施形態は、作動性抗ＶＩＳＴＡ抗体を含む治療有効量の本明細書に開示される組成物を、それを必要とする患者に投与することにより、炎症もしくは炎症性疾患を治療する、炎症もしくは炎症性疾患の重症度を低減する、または炎症もしくは炎症性疾患を予防する方法を提供する。一実施形態は、作動性抗ＶＩＳＴＡ抗体を含む治療有効量の本明細書に開示される組成物を、それを必要とする移植患者に投与することにより、移植片対宿主病を治療する、移植片対宿主病の重症度を低減する、または移植片対宿主病を予防する方法を提供する。一実施形態は、作動性抗ＶＩＳＴＡ抗体を含む治療有効量の本明細書に開示される組成物を、それを必要とする移植患者に投与することにより、移植片拒絶を治療する、移植片拒絶の重症度を低減する、または移植片拒絶を予防する方法を提供する。
【０２２２】
ある実施形態は、作動性抗ＶＩＳＴＡ抗体を含む治療有効量の本明細書に開示される組成物を、それを必要とする患者に投与することにより、感染性疾患を治療する、感染性疾患の重症度を低減する、または感染性疾患を予防する方法を提供する。感染性疾患には、ウイルス、細菌、真菌、任意選択で酵母菌、および原虫感染が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２３】
ヒト疾患の治療のためのインビボ使用のために、本明細書に記載される抗体は、一般に、投与前に薬学的組成物中に組み込まれる。薬学的組成物は、本明細書で記載される１つ以上の抗体を、本明細書の他の箇所で記載される生理的に許容される担体または賦形剤と組み合わせて含む。薬学的組成物を調製するために、有効量の１つ以上の化合物を、当業者に既知である任意の薬学的担体（複数可）または賦形剤と混合して、特定の投与様式に好適なものとする。薬学的担体は、液体、半液体、または個体であってもよい。非経口、皮内、皮下、または局所用途のために用いられる溶液または懸濁液は、例えば、無菌希釈剤（例えば、水）、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールおよびメチルパラベン）；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸および重亜硫酸ナトリウム）ならびにキレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝液（例えば、アセテート、シトレート、およびホスフェート）を含んでもよい。静脈内投与される場合、好適な担体には、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、およびこれらの混合物を含有する溶液が含まれる。
【０２２４】
本明細書に記載されるＶＩＳＴＡ特異的抗体を含む組成物は、身体からの急速な排出に対して抗体を保護する担体、例えば、徐放性製剤またはコーティングを用いて、調製してもよい。そのような担体には、例えば、限定はされないが、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系、および生体分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、および当業者に既知の他のものなどの、放出制御製剤が含まれる。
【０２２５】
ＶＩＳＴＡに結合する抗体を使用する治療法が本明細書で提供される。一実施形態では、本開示の抗体は、ＶＩＳＴＡの不適切な発現を伴う疾患を有する患者に投与され、疾患とは、本開示の文脈において、例えば、存在するタンパク質の量における変化（例えば、統計的に有意な増大もしくは減少）、または突然変異タンパク質の存在、またはその両方に起因する、ＶＩＳＴＡの異常な発現または活性を特徴とする疾患および障害を含むことを意味する。過多は、分子レベルでの過剰発現、作用部位における長期もしくは蓄積された出現、または正常に検出可能なものに対して増大した（例えば、統計的に有意な様式で）ＶＩＳＴＡの活性を含むがこれらに限定されない、いずれの原因に起因してもよい。そのようなＶＩＳＴＡの過多は、ＶＩＳＴＡシグナル伝達事象の正常な発現、出現、または活性と比較して測定することができ、該測定は、本明細書に記載される抗体の開発および／または臨床試験において重要な役割を果たし得る。
【０２２６】
具体的には、本抗体は、ＶＩＳＴＡの発現と関連付けられる様々な癌の治療に有用である。例えば、一実施形態は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、頸部、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、および悪性黒色腫を含むがこれらに限定されない癌を、治療有効量の本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ特異的抗体を癌患者に投与することによって治療するための方法を提供する。投与後に、統計的に有意な様式で（すなわち、当業者であれば分かる適切な対照と比べて）癌の進行および／または転移を阻害する、防止する、または遅延させる量が、有効であるとみなされる。
【０２２７】
別の実施形態は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、頸部、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、および悪性黒色腫を含むがこれらに限定されない癌の転移を、治療有効量の本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ特異的抗体（例えば、投与後に、統計的に有意な様式で、すなわち、当業者であれば分かる適切な対照と比べて、癌の転移を阻害する、予防する、または遅延させる量）を癌患者に投与することによって防止するための方法を提供する。
【０２２８】
別の実施形態は、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、頸部、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、および悪性黒色腫を含むがこれらに限定されない癌を、治療有効量の本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ特異的抗体を癌患者に投与することによって防止するための方法を提供する。
【０２２９】
非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、膵臓、結腸、胃腸、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、頸部、乳房、肺、鼻咽頭の癌腫、または悪性黒色腫を、これらの疾患のうちの１つ以上に罹患している患者に治療有効量の本明細書に開示されるＶＩＳＴＡ特異的抗体を投与することによって、治療する、それらの進行の阻害する、またはそれらを防止するための方法を提供する。
【０２３０】
別の実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ抗体を使用して、結合した抗原の構造、例えば、立体構造エピトープを決定し、その後、その構造を使用して、例えば化学モデリングおよびＳＡＲ法によって、この構造を有するまたは模倣する化合物を開発してもよい。
【０２３１】
様々な他の実施形態は、ＶＩＳＴＡを発現している細胞または組織の存在を検出するための診断用途に一部関する。このため、本開示は、ＶＩＳＴＡを発現している細胞または組織の検出など、試料中でＶＩＳＴＡを検出する方法を提供する。そのような方法は、免疫組織化学（ＩＨＣ）、免疫細胞化学（ＩＣＣ）、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、全載インサイツハイブリダイゼーション（ＷＩＳＨ）、蛍光ＤＮＡインサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、フローサイトメトリー、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、および酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を含むがこれらに限定されない、様々な既知の検出形式で適用することができる。
【０２３２】
ＩＳＨは、標識された相補的ＤＮＡまたはＲＮＡ鎖（すなわち、一次結合剤）を使用して、特定のＤＮＡまたはＲＮＡ配列を、細胞または組織のある部分もしくはセクション（インサイツ）、または組織が十分に小さい場合、組織全体（全載ＩＳＨ）に局在させるハイブリダイゼーションの種類である。当業者であれば、これは、抗体を一次結合剤として使用してタンパク質を組織セクションに局在させる免疫組織化学とは異なることを理解する。ＤＮＡ  ＩＳＨをゲノムＤＮＡに使用して、染色体の構造を決定することができる。蛍光ＤＮＡ  ＩＳＨ（ＦＩＳＨ）は、例えば医療診断に使用して、染色体の完全性を評定することができる。ＲＮＡ  ＩＳＨ（ハイブリダイゼーション組織化学）を使用して、ｍＲＮＡおよび他の転写産物を測定し、組織セクションまたは全載内に局在させる。
【０２３３】
様々な実施形態においては、本明細書に記載される抗体を、直接的または間接的に検出され得る検出可能な標識にコンジュゲートする。これに関連して、抗体「コンジュゲート」は、検出可能な標識に共有結合した抗ＶＩＳＴＡ抗体を指す。本開示では、ＤＮＡプローブ、ＲＮＡプローブ、モノクローナル抗体、その抗原結合断片、およびその抗体誘導体、例えば、一本鎖可変断片抗体またはエピトープタグ付けされた抗体はすべて、検出可能な標識に共有結合してもよい。「直接検出」では、たった１つの検出可能な抗体、すなわち検出可能な一次抗体が使用される。このため、直接検出は、検出可能な標識にコンジュゲートされる抗体が、第２の抗体（二次抗体）を加える必要なく、それ自体で検出され得ることを意味する。
【０２３４】
「検出可能な標識」は、試料中の標識の存在および／または濃度を示す検出可能な（目視により、電気的に、または他の方法で）シグナルを産生することができる分子または物質である。抗体にコンジュゲートされると、検出可能な標識は、特定の抗体が向けられる標的を発見および／または定量化するために使用することができる。これにより、検出可能な標識によって産生されるシグナルを検出することで、試料中の標的の存在および／または濃度を検出することができる。検出可能な標識は直接的または間接的に検出することができ、異なる特異的抗体にコンジュゲートしたいくつかの異なる検出可能な標識を組み合わせて使用して、１つ以上の標的を検出することができる。
【０２３５】
直接的に検出され得る検出可能な標識の例には、蛍光色素および放射性物質および金属粒子が含まれる。対照的に、間接検出には、一次抗体の適用後に、１つ以上の追加の抗体、すなわち二次抗体の適用が求められる。このため、検出は、二次抗体または結合剤の検出可能な一次抗体への結合を検出することによって行われる。二次結合剤または抗体の適用が求められる検出可能な一次結合剤または抗体には、検出可能な酵素結合剤、および検出可能なヘプテン結合剤または抗体が含まれる。
【０２３６】
いくつかの実施形態では、検出可能な標識を、第１の結合剤を含む核酸ポリマーにコンジュゲートする（例えば、ＩＳＨ、ＷＩＳＨ、ＦＩＳＨプロセスにおいて）。他の実施形態では、検出可能な標識を、第１の結合剤を含む抗体にコンジュゲートする（例えば、ＩＨＣプロセスにおいて）。
【０２３７】
本開示の方法に使用される抗体にコンジュゲートしてもよい検出可能な標識の例には、蛍光標識、酵素標識、放射性同位体、化学発光標識、電気化学発光標識、生物発光標識、ポリマー、ポリマー粒子、金属粒子、ヘプタン、および色素が含まれる。
【０２３８】
蛍光標識の例には、５−（または６）−カルボキシフルオレセイン、５−ｏｒ６−カルボキシフルオレセイン、６−（フルオレセイン）−５−（または６）−カルボキサミドヘキサン酸、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、テトラメチルローダミン、ならびに色素、例えば、Ｃｙ２、Ｃｙ３、およびＣｙ５、任意選択で置換されたクマリン、例えば、ＡＭＣＡ、ＰｅｒＣＰ、Ｒ−フィコエリトリン（ＲＰＥ）およびアロフィコエリトリン（ＡＰＣ）を含むフィコビリタンパク質、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ｒｅｄ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、およびそれらの類似体、ならびにＲ−フィコエリトリンまたはアロフィコエリトリンのコンジュゲート、コーティングされたＣｄＳｅナノ結晶などの半導体材料に基づく粒子などの無機蛍光標識が含まれる。
【０２３９】
ポリマー粒子標識の例には、ポリスチレンの微粒子もしくはラテックス粒子、蛍光色素に埋め込むことができるＰＭＭＡもしくはシリカ、または色素、酵素、もしくは基質を含むポリマーミセルもしくはカプセルが含まれる。
【０２４０】
金属粒子標識の例には、銀染色によって変換することができる金粒子およびコーティングされた金粒子が含まれる。ヘプテンの例には、ＤＮＰ、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ビオチン、およびジゴキシゲニンが含まれる。酵素標識の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰまたはＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ（ＧＡＬ）、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、β−Ｎ−アセチルグルコサミミダーゼ（ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｍｉｄａｓｅ）、β−グルクロニダーゼ、インベルターゼ、キサンチンオキシダーゼ、蛍ルシフェラーゼ、およびグルコースオキシダーゼ（ＧＯ）が含まれる。西洋ワサビペルオキシダーゼに一般にしようされる基質の例には、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、ニッケル増強されたジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）、ベンジジン二塩酸塩（ＢＤＨＣ）、Ｈａｎｋｅｒ−Ｙａｔｅｓ試薬（ＨＹＲ）、インドファンブルー（Ｉｎｄｏｐｈａｎｅ  ｂｌｕｅ）（ＩＢ）、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、４−クロロ−１−ナフトール（ＣＮ）、アルファ−ナフトールピロニン（アルファ−ＮＰ）、ｏ−ジアニシジン（ＯＤ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）、２−（ｐ−ヨードフェニル）−３−ｐ−ニトロフェニル−５−フェニルテトラゾリウムクロリド（ＩＮＴ）、テトラニトロブルーテトラゾリウム（ＴＮＢＴ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシル−ベータ−Ｄ−ガラクトシド／フェロ−フェリシアン化物（ＢＣＩＧ／ＦＦ）が含まれる。
【０２４１】
アルカリホスファターゼのための一般に使用される基質の例には、ナフトール−ＡＳ−Ｂ  １−リン酸／ｆａｓｔ  ｒｅｄ  ＴＲ（ＮＡＢＰ／ＦＲ）、ナフトール−ＡＳ−ＭＸ−リン酸／ｆａｓｔ  ｒｅｄ  ＴＲ（ＮＡＭＰ／ＦＲ）、ナフトール−ＡＳ−Ｂ１−リン酸／−ｆａｓｔ  ｒｅｄ  ＴＲ（ＮＡＢＰ／ＦＲ）、ナフトール−ＡＳ−ＭＸ−リン酸／ｆａｓｔ  ｒｅｄ  ＴＲ（ＮＡＭＰ／ＦＲ）、ナフトール−ＡＳ−Ｂ１−リン酸／ニューフクシン（ＮＡＢＰ／ＮＦ）、リン酸ブロモクロロインドリル／ニトロブルーテトラゾリウム（ＢＣＩＰ／ＮＢＴ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−ｂ−−ｄ−ガラクトピラノシド（ＢＣＩＧ）が含まれる。
【０２４２】
発光標識の例には、ルミノール、イソルミノール、アクリジニウムエステル、１，２−ジオキセタン、およびピリドピリダジンが含まれる。電気化学発光標識の例には、ルテニウム誘導体が含まれる。放射性標識の例には、ヨウ化物、コバルト、セレン、トリチウム、炭素、硫黄、およびリンの放射性同位体が含まれる。
【０２４３】
検出可能な標識は、本明細書に記載される抗体、または目的の生物学的マーカーに特異的に結合する任意の他の分子、例えば、抗体、核酸プローブ、もしくはポリマーに連結させてもよい。さらに、当業者であれば、検出可能な標識を、第２、および／または第３、および／または第４、および／または第５の結合剤または抗体などにコンジュゲートすることもできることを理解する。その上、当業者であれば、目的の生物学的マーカーを特性評価するために使用される各追加の結合剤または抗体が、シグナル増幅ステップとして機能し得ることを理解する。生物学的マーカーは、検出可能な物質が、例えば、色素、コロイド金粒子、発光試薬である場合、例えば、光学顕微鏡、蛍光顕微鏡、電子顕微鏡を使用して目視により検出してもよい。生物学的マーカーに結合した目視により検出可能な物質はまた、分光光度計を使用して検出してもよい。検出可能な物質が放射性同位体である場合、検出は、オートラジオグラフィーにより目視で、またはシンチレーション計数管を使用して目視によらずに行うことができる。例えば、Ｌａｒｓｓｏｎ，１９８８，Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．８０  １９９８，Ｊｏｈｎ  Ｄ．Ｐｏｕｎｄ（ｅｄ．）（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）を参照されたい。
【０２４４】
本開示は、試料中でＶＩＳＴＡまたはＶＩＳＴＡを発現している細胞もしくは組織を検出するためのキットをさらに提供し、本キットは、本明細書に記載される少なくとも１つの抗体、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクター、または宿主細胞を含む。ある実施形態では、キットは、緩衝液、酵素、標識、基質、本開示の抗体が付着するビーズまたは他の表面など、および使用説明書を含んでもよい。
【実施例】
【０２４５】
実施例１
抗ＶＩＳＴＡ抗体の産生およびヒト化
ニュージーランドシロウサギを、組換えヒトＶＩＳＴＡおよびＶＩＳＴＡ発現細胞で免疫した。すべてのウサギは、ヒトＶＩＳＴＡへの特異的結合の血清力価が高く、細胞融合のために屠殺した。ＥＬＩＳＡにより測定してＶＩＳＴＡへの結合が陽性であった２６個のハイブリドーマを、機能アッセイのために選択した。２６個のクローンのＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列を図１で整列させる。抗体のうちのいくつかは、以下の表４に示すように、同じＶＬ領域と対にした異なるＶＨ領域を有した。
【表４】
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【０２４６】
クローンのうちの６個、２Ｄ１２、３Ａ５、１４Ｄ８、１４Ｆ１、２９Ｇ７、および４１Ａ１１を、機能特性評価用の分子クローニングおよび組換え発現のために選択した。
【０２４７】
組換え抗ＶＩＳＴＡ抗体の機能スクリーニング
多数のアッセイを使用して、上で特定した選択した抗ＶＩＳＴＡ抗体の効力を特性評価した。選択された抗体を、ウサギｍＡｂから、ウサギＦａｂおよびヒトＩｇＧ１を有するキメラｍＡｂに変換した。抗ＶＩＳＴＡヒトＩｇＧ１抗体であるＶＳＴＢ１１２を、比較試験のベンチマークとして選択した。ＶＳＴＢ１１２は、国際公開第ＷＯ２０１５／０９７５３６号および同第ＷＯ２０１６／２０７７１７号に記載されている。
【０２４８】
ＶＳＴＢ１１２を用いた競合ＥＬＩＳＡアッセイを行った。９６ウェルプレートにＶＩＳＴＡ−ｈｉｓタンパク質をコーティングした。ヒトＩｇＧ１キメラ抗ＶＩＳＴＡ抗体をタンパク質とともに１時間インキュベートした。ビオチンで標識したＶＳＴＢ１１２をウェルに加え、さらに１時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、図２に示すように、ストレプトアビジン−ＨＲＰを使用してＶＳＴＢ１１２を検出した。これらの結果により、Ｓ２Ｄ１２が、ＶＳＴＢ１１２と比較して、ＶＩＳＴＡ上の明確に異なるエピトープに結合することが示され、２９Ｇ７も、ＶＳＴＢ１１２と比較して、異なる結合エピトープを示した。
【０２４９】
キメラＶＩＳＴＡモノクローナル抗体が単球上で主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ分子を上方調節する能力を試験した。ヒトＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度遠心分離によって軟膜から単離した。単球を、ＣＤ１４マイクロビーズを使用してヒトＰＢＭＣから濃縮し、１ウェルあたり１００，０００細胞で丸底９６ウェルプレートにプレーティングした。抗ＶＩＳＴＡ抗体を、０．０２、０．２、２、および２０ｎＭの濃度で加え、プレートを３７℃で４８時間インキュベートした。細胞を採取し、汎（ｐａｎ−）ＭＨＣＩＩ（ＤＰ、ＤＱ、ＤＲ）発現についてフローサイトメトリーにより分析した（図３）。図３に示すように、６個すべてのキメラＶＩＳＴＡ抗体が、ＶＳＴＢ１１２と比較して、より大きいＭＨＣＩＩの発現を誘導した。
【０２５０】
６個のクローン、２Ｄ１２、３Ａ５、１４Ｄ８、１４Ｆ１、２９Ｇ７、および４１Ａ１１を、独自の突然変異系統誘導（ＭＬＧ）ヒト化技術を使用してヒト化した（例えば、米国特許第７，４６２，６９７号を参照されたい）。ヒト化により、２９Ｇ７クローンから２個の候補、すなわち、２９Ｇ７−ＨＺＤ２および２９Ｇ７−ＨＺＤ４が得られた。ヒト化ＶＨおよびＶＬ領域の７個のセットのアミノ酸配列を、配列番号８６〜９９に示す。ヒト化配列は、上の表３に要約してある。
【０２５１】
候補のヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体の機能スクリーニング
多数のインビトロアッセイを使用して、上で特定した７個の候補のヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体の効力を特性評価した。まず、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体を、図４に示すように、可溶性ＶＩＳＴＡへの結合について試験した。
【０２５２】
７個のヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が細胞表面に発現されたＶＩＳＴＡに結合する能力を検査するために、ＨＥＫ２９３細胞を、Ｆｕｇｅｎｅ  ６トランスフェクション試薬を使用してヒトＶＩＳＴＡ  ｃＤＮＡで２４時間トランスフェクトした。細胞をトリプシン処理によって採取し、ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、９６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を、図５に示す抗ＶＩＳＴＡ抗体の濃度で、３０分間氷上でインキュベートした。抗ヒトＩｇ抗体を使用して抗体を検出し、結合をＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメトリーにおいて評定した（図５）。７個のヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体の結合親和性を以下の表５に提供する。
【表５】
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【０２５３】
ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が免疫応答を増強させる能力を、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）刺激アッセイにおいて試験した。ヒトＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度遠心分離を使用して軟膜から単離した。ＰＢＭＣを、９６ウェル平底プレートの１ウェルあたり２００，０００細胞でプレーティングした。ＶＩＳＴＡ抗体を、図６に示す濃度で加えた。最後に、ＳＥＢを１０ｎｇ／ｍＬで加え、プレートを３７℃で４日間インキュベートした。インキュベートした後、上清を採取し、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−γについて分析した（図６）。図６に示すように、２９Ｇ７−ＨＺＤ４、２９Ｇ７−ＨＺＤ２、２Ｄ１２−ＨＺＤ３、３Ａ５−ＨＺＤ、および４１Ａ１１−ＨＺＤ２を加えることで、ＩＦＮγの産生が増加し、これにより、これらのヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体がＶＩＳＴＡ拮抗物質であることが実証された。
【０２５４】
次に、ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体を、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の増強について試験した。端的には、ヒト単球を、ＣＤ１４マイクロビーズを使用してＰＢＭＣから単離し、５０ｎｇ／ｍＬのヒトＧＭ−ＣＳＦおよび１００ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−４を含有する完全培地中で７日間分化させて樹状細胞にした。ＣＤ４  Ｔ細胞を、ＣＤ４マイクロビーズを使用してヒトＰＢＭＣから濃縮し、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅ  Ｖｉｏｌｅｔで標識した。単球由来樹状細胞（ｍｏＤＣ）を、平底９６ウェルプレートに１ウェルあたり５０，０００細胞で播種した。抗体を、図７に示す濃度で加えた。最後に、濃縮しヴァイオレット標識したＨＬＡミスマッチＣＤ４  Ｔ細胞を、１ウェルあたり２００，０００個で加え、２００μＬの培地において３７℃で５日間共培養した。
【０２５５】
細胞を採取し分析して、増殖率を決定した（図７）。図７に示すように、２９Ｇ７−ＨＺＤ２、２９Ｇ７−ＨＺＤ４、２Ｄ１２、１４Ｄ８−ＨＺＤ２、および４１Ａ１１−ＨＺＤ２を加えることで、アロ抗原に応答したＴ細胞増殖が増加し、これにより、これらの抗ＶＩＳＴＡ抗体がＶＩＳＴＡ介在性免疫抑制を無効にできることが示された。
【０２５６】
実施例２
抗ＶＩＳＴＡ抗体の生物活性
ヒトキメラＶＩＳＴＡモノクローナル抗体がヒトＮＫ細胞を活性化する能力を試験した。ヒトＰＢＭＣを、Ｆｉｃｏｌｌ密度遠心分離により軟膜から単離し、１ウェルあたり２００，０００細胞で丸底９６ウェルプレートにプレーティングした。抗ＶＩＳＴＡ抗体を示す濃度で加え、プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。上清を、ＥＬＩＳＡによりＩＦＮ−ガンマ産生について分析した。細胞を採取し、フローサイトメトリーにより、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞上のＣＤ６９およびＣＤ２５発現について分析した。
【０２５７】
図８Ａ〜８Ｃに示すように、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、ＮＫ細胞活性化およびＩＦＮ−ガンマ分泌を誘導した。
【０２５８】
ヒト化抗ＶＩＳＴＡ抗体が全血アッセイにおいてサイトカイン放出を誘導する能力も試験した。ヒト全血を、９６ウェル丸底プレートの１ウェルあたり２００ｕＬでプレーティングした。ＶＩＳＴＡ抗体を、１００、１０、１、および０．１ｎＭで加えた。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。インキュベートした後、プレートを２０００ＲＰＭで５分間遠心分離させ、血漿を、Ｌｕｍｉｎｅｘを使用するサイトカインおよびケモカイン分析のために収集した。
【０２５９】
以下の表６は、６つのドナーからの代表的なデータを示す。（ＤＣ＝樹状細胞、ＭＭ＝単球／マクロファージ、Ｌ＝リンパ球）。
【表６】
2020525005.tif 000017
【０２６０】
図９Ａ〜９Ｉに示されるように、抗ＶＩＳＴＡ抗体は、全血培養物中で細胞からのサイトカイン分泌を誘導することができる。抗ＶＩＳＴＡ抗体によって誘導されたサイトカインには、ＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｂ  ＩＰ−１０、ＴＮＦ−アルファ、およびＭＣＰ−１が含まれ、これらの大部分は、骨髄由来の細胞型によって分泌される。
【０２６１】
上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書において言及されたおよび／または出願データシートに記載された米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および非特許刊行物のすべては、参照によりそれらのすべてが本明細書に組み込まれる。必要に応じて、様々な特許、出願および刊行物の内容を利用して、本実施形態の態様を修飾して、よりさらなる実施形態を提供することができる。
【０２６２】
上述の詳細な説明を照らして、これらのおよび他の変更を本実施形態に加えることができる。一般的に、以下の特許請求の範囲において使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲において開示された特定の実施形態に特許請求の範囲を限定するものとして解釈してはならず、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに、すべての可能な実施形態を含むものとして解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。
【図１Ａ】
2020525005.tif 000018
【図１Ｂ】
2020525005.tif 000019
【図１Ｃ】
2020525005.tif 000020
【図１Ｄ】
2020525005.tif 000021
【図１Ｅ】
2020525005.tif 000022
【図１Ｆ】
2020525005.tif 000023
【図２】
2020525005.tif 000024
【図３】
2020525005.tif 000025
【図４】
2020525005.tif 000026
【図５】
2020525005.tif 000027
【図６Ａ−６Ｃ】
2020525005.tif 000028
【図６Ｄ−６Ｆ】
2020525005.tif 000029
【図６Ｇ】
2020525005.tif 000030
【図７Ａ−７Ｃ】
2020525005.tif 000031
【図７Ｄ−７Ｆ】
2020525005.tif 000032
【図８Ａ−８Ｃ】
2020525005.tif 000033
【図９Ａ−９Ｃ】
2020525005.tif 000034
【図９Ｄ−９Ｆ】
2020525005.tif 000035
【図９Ｇ−９Ｉ】
2020525005.tif 000036
【配列表】
2020525005000001.app
【国際調査報告】
2020525005.tif 000037
2020525005.tif 000038
2020525005.tif 000039
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