(57)【要約】  本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置において使用するのための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、ＳＭＡの処置において使用すべきその医薬組成物、その処置のその方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでＳＭＡの処置において使用するための、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項２】
患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで、請求項１に記載のＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項３】
経口投与される、請求項１又は２に記載のＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項４】
患者がヒト（例えば、男性又は女性のヒト）であり、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項５】
ＳＭＡがタイプＩＩ  ＳＭＡである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項６】
１日１回投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【請求項７】
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む、方法。
【請求項８】
前記投与用量が１日当たりのものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを１日１回投与する、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与する、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを一度に投与する、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、十分に高い薬物濃度を提供するために７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩をｐＨ４未満、特にｐＨ３．８未満、より特にｐＨ３．６未満、最も特にｐＨ３．０〜３．２の緩衝系、例えばクエン酸緩衝系、リンゴ酸塩緩衝系、マレイン酸塩緩衝系又は酒石酸塩緩衝系、最も特に酒石酸塩緩衝系に溶解させることにより経口水溶液として製剤化された、医薬組成物。
【請求項１３】
経口溶液の構成のために乾燥粉末又は顆粒として７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
緩衝系、例えば三塩基性クエン酸ナトリウム及びクエン酸、リンゴ酸二ナトリウム及びリンゴ酸、酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸又は酒石酸二ナトリウム及び酒石酸、特に酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸が、微粉末として有機酸及びその塩の選択により乾燥製剤に組み込まれ得る、請求項１２又は１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩、希釈剤、例えばソルビトール、イソマルト又は特にマンニトール及びそれらの組み合わせを含み、それにより、経口溶液の構成中の粉末ブレンドの急速溶解を保証し、場合により、流動性を改善してロバストな均一性を保証するために、充填剤を添加して乾式圧縮により顆粒化し得る、請求項１２又は１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；及び
・クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸
を含む、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；及び
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール
を含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；及び
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール
を含む、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；及び
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム
を含む、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；及び
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム
を含む、請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
・１〜１０％ｗｔの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・５〜１５％ｗｔの緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・４０〜７０％ｗｔの希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・１〜４％ｗｔの抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・０．５〜２％ｗｔの安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・０．５〜２％ｗの潤滑剤、特にＰＥＧ６０００；
・０〜３％ｗｔの甘味料、特にスクラロース又はサッカリンナトリウム、最も特にスクラロース；及び
・０〜２０％ｗｔの香味料、特にストロベリーフレーバー又はバニラフレーバー
を含み；
成分の総量が１００％ｗｔを超えない、請求項１２〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
上記本明細書に記載される、本発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、ＳＭＡの処置において使用すべきその医薬組成物、その処置のその方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）は、その最も広い意味において、筋衰弱及び筋委縮を引き起こす脊髄及び脳幹における進行性運動ニューロン喪失を特徴とする遺伝性及び後天性中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の集合を表す。ＳＭＡは、筋委縮につながり麻痺をもたらす脊髄の前角由来のアルファ運動ニューロンの変性を特徴とする。したがって、このアルファ運動ニューロン変性は、患者の生命予後を実質的に損なう。健常被験者では、これらのニューロンは、情報を脳から筋肉に伝達して、後者の収縮をもたらす。このような刺激の非存在下では、筋肉は委縮する。続いて、筋肉の、より特に胴、上腕及び大腿の筋肉の全般的な低下及び麻痺に加えて、これらの障害は、重度の呼吸器問題を伴い得る。
【０００３】
乳児ＳＭＡは、この神経変性障害の最も重度の形態である。症候としては、筋衰弱、不十分な筋緊張、弱い泣き声、虚弱又は転倒傾向、吸込み又は嚥下の困難、肺又は喉における分泌物の蓄積、授乳困難及び呼吸器感染に対する感受性の増加が挙げられる。脚は腕よりも弱い傾向があり、発達の節目、例えば頭の持ち上げ又はお座りを達成することができない。一般に、症候が現れるのが早いほど、寿命は短い。運動ニューロン細胞が劣化するにつれて、症候はそのすぐ後に現れる。疾患の重度の形態は致命的であり、全ての形態について治療法がない。ＳＭＡの経過は、運動ニューロン細胞劣化の速度及びその結果として生じる衰弱の重症度に直接関連する。重度の形態のＳＭＡを有する乳児は、呼吸を支援する筋肉の衰弱による呼吸器疾患で頻繁に死亡する。より軽度の形態のＳＭＡを有する子供は、広範な医療支援、特にスペクトルのより重度の終末での医療支援を必要とし得るが、かなり長く生存する。ＳＭＡ障害の臨床スペクトルは、以下の５つのグループに分類される：
【０００４】
１）タイプ０  ＳＭＡ（子宮内ＳＭＡ）は、疾患の最も重度の形態であり、出生前から始まる。通常、タイプ０  ＳＭＡの最初の症候は、妊娠３０〜３６週目に最初に観察され得る胎児の運動低下である。出生後、これらの新生児はほとんど動かず、嚥下及び呼吸が困難である。
【０００５】
２）タイプＩ  ＳＭＡ（乳児ＳＭＡ又はウェルドニッヒ・ホフマン病）は、０〜６カ月に症候を示す；この形態のＳＭＡは非常に重度である。患者は全く座ることができず、通常、補助換気がなければ最初の２年以内に死亡する。
【０００６】
３）タイプＩＩ  ＳＭＡ（中間型ＳＭＡ）は、７〜１８カ月に発症年齢を有する。患者は、支援なしで座ることができるが、補助なしでは立つことも歩くこともできない。このグループの予後は、呼吸器合併症の程度に主に依存する。
【０００７】
４）タイプＩＩＩ  ＳＭＡ（若年性ＳＭＡ又はクーゲルバーグ・ウェランダー病）は、一般に、１８カ月後に診断される。タイプ３  ＳＭＡ個体は、その疾患経過中のいくつかの時点で独りで歩くことができるが、多くの場合、青年又は成人の間に車椅子生活になる。
【０００８】
５）タイプＩＶ  ＳＭＡ（成人発症型ＳＭＡ）。衰弱は、通常、後期青年期に舌、手又は足で始まり、次いで、他の身体領域に進行する。成人型ＳＭＡの経過はかなり遅く、平均寿命に対する影響はほとんど又は全くない。
【０００９】
全ての形態の脊髄性筋萎縮症は、脊髄の前角由来のニューロンの変性後に、進行性筋衰弱及び麻痺を伴う。現在、ＳＭＡは、最も一般的な乳児死亡原因の１つを構成する。世界の全ての地域において、それは少女又は少年に等しく影響を及ぼし、発生率は１／６０００〜１／１００００である。
【００１０】
現在、運動機能の安定化又は改善を提供する承認された経口ＳＭＡ処置はない。現在、いくつかの薬物候補が非臨床段階及び臨床段階で調査中であり(Lewelt A, et al, Curr Neurol Neurosci Rep. 2012; 12:42-532; Arnold et al., Muscle Nerve. 2015;51:157-67)、最近、ＳＭＮ２プレｍＲＮＡへのエクソン７の組み込みを促進する髄腔内投与用アンチセンスオリゴヌクレオチドであるヌシネルセンは、米国、ＥＵ及び他の管轄区域において承認を受けた。
【発明の概要】
【００１１】
ＳＭＡの遺伝的基盤及び病態生理のより良い理解並びにいくつかの処置戦略が探究されているにもかかわらず、臨床において副作用が限定された経口処置として成功を実証したものはまだない。本発明は、この経口処置の必要性に応えることを意図する。現在、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは臨床第ＩＩ相で調査中である。
【００１２】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンに関する無作為化二重盲検プラセボコントロール第ＩＩ相研究（ＮＴＣ０２９０８６８５又はＢＰ３９０５５）は、２〜２５歳のＳＭＡタイプＩＩ及びタイプＩＩＩの患者に対して実施されている。
【００１３】
驚くべきことに、ＦＭＯ３は、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの排除経路に関与し、薬物の投与量に対して効果を有する可能性があることが見出された。
【００１４】
研究ＢＰ３９０５５の第１部において、驚くべきことに、１２〜２５歳のＳＭＡ患者における５mgの最高評価用量では、ベースラインと対比して１５１％（４９％〜２５１％の範囲）のＳＭＮタンパク質増加中央値が観察され、２〜１１歳のグループにおける０．２５mg/kgの最高試験用量では、ＳＭＮタンパク質の９６％（１７％〜１５０％の範囲）の増加が認められたことが見出された。
【００１５】
その結果として、驚くべきことに、最適用量は、体重２０kg未満の患者の場合には１日１回０．２５mg/kgであり、体重２０kg以上の患者の場合には５mgであることが見出された。したがって、選択したＢＰ３９０５５第２部の用量の予測平均曝露（ＡＵＣ０−２４ｈ，ｓｓ）は、２〜２５歳の全ての患者について１６９０ng・h/mL［９５％ＣＩ  １６００〜１７８０ng・h/mL］であると予想される。
【００１６】
サル研究に基づくと、驚くべきことに、ＳＭＮがさらに増加し得ると予想される場合であっても、いかなる網膜変性も回避するために、用量は、それぞれ男性及び女性において１８７０／２０６０ng・h/mLのＡＵＣ０−２４ｈの曝露を超えるべきではないことが見出された。
【００１７】
さらに、驚くべきことに、上限投与量もまた、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンによるＦＯＸ  Ｍ１及びＭＡＤＤのスプライシングに関連することが見出された。上限投与量は、網膜変性に関連するものと同一である。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１ａ】図１ａ及び１ｂ：in vivoにおけるＳＭＮタンパク質発現の増加  ＨＥＴ＝ヘテロ接合体。Ｃ／Ｃ−対立遺伝子マウス及びＳＭＮΔ７マウスをＲＯ７０３４０６７で処置した。最終投与の１時間後、脳及び大腿四頭筋を収集し、ＨＴＲＦによりＳＭＮタンパク質のレベルを評価した。Ａ．Ｃ／Ｃ対立遺伝子マウスの脳におけるＳＭＮタンパク質。Ｂ．ＳＭＮΔ７マウスの脳におけるＳＭＮタンパク質。Ｃ．Ｃ／Ｃ−対立遺伝子マウスの大腿四頭筋におけるＳＭＮタンパク質。Ｄ．ＳＭＮΔ７マウスの大腿四頭筋におけるＳＭＮタンパク質。データは、動物５〜６匹／群の平均±ＳＥＭを表し、ビヒクル処置コントロールと対比した変化倍率として表される。未処置コントロールと対比して＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図１ｂ】図１ａ及び１ｂ：in vivoにおけるＳＭＮタンパク質発現の増加  ＨＥＴ＝ヘテロ接合体。Ｃ／Ｃ−対立遺伝子マウス及びＳＭＮΔ７マウスをＲＯ７０３４０６７で処置した。最終投与の１時間後、脳及び大腿四頭筋を収集し、ＨＴＲＦによりＳＭＮタンパク質のレベルを評価した。Ａ．Ｃ／Ｃ対立遺伝子マウスの脳におけるＳＭＮタンパク質。Ｂ．ＳＭＮΔ７マウスの脳におけるＳＭＮタンパク質。Ｃ．Ｃ／Ｃ−対立遺伝子マウスの大腿四頭筋におけるＳＭＮタンパク質。Ｄ．ＳＭＮΔ７マウスの大腿四頭筋におけるＳＭＮタンパク質。データは、動物５〜６匹／群の平均±ＳＥＭを表し、ビヒクル処置コントロールと対比した変化倍率として表される。未処置コントロールと対比して＊＝ｐ＜０．０５、＊＊＝ｐ＜０．０１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１。
【図２ａ】図２ａ及び２ｂ：ＲＯ７０３４０６７は、in vitroでＳＭＮ  ｍＲＮＡ及びタンパク質産生を増加させる。ＳＭＡタイプ１患者由来の線維芽細胞を２４時間（Ａ）又は４８時間（Ｂ）培養した；ＳＭＡタイプ１患者ｉＰＳＣ由来の運動ニューロンを７２時間（Ｃ）培養し、ＲＯ７０３４０６７の存在下又は非存在下で健常志願者（ＨＶ）由来の全血細胞を４時間（Ｄ）培養した。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によりＳＭＮスプライシングを評価し、線維芽細胞溶解物における均一時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）により、及び運動ニューロンにおけるＳＭＮの免疫染色により、ＳＭＮタンパク質レベルを評価した。Ａ．ＳＭＡタイプ１線維芽細胞におけるＳＭＮ２スプライシング。Ｂ．ＳＭＡタイプ１線維芽細胞におけるＳＭＮタンパク質。Ｃ．ＳＭＡタイプ１運動ニューロンのＳＭＮタンパク質。Ｄ．ＨＶ由来の全血におけるＳＭＮ１及びＳＭＮ２スプライシング。データは、評価３回／データポイントの平均±ＳＥＭを表し、未処置コントロールと対比した変化倍率として表される。
【図２ｂ】図２ａ及び２ｂ：ＲＯ７０３４０６７は、in vitroでＳＭＮ  ｍＲＮＡ及びタンパク質産生を増加させる。ＳＭＡタイプ１患者由来の線維芽細胞を２４時間（Ａ）又は４８時間（Ｂ）培養した；ＳＭＡタイプ１患者ｉＰＳＣ由来の運動ニューロンを７２時間（Ｃ）培養し、ＲＯ７０３４０６７の存在下又は非存在下で健常志願者（ＨＶ）由来の全血細胞を４時間（Ｄ）培養した。逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）によりＳＭＮスプライシングを評価し、線維芽細胞溶解物における均一時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）により、及び運動ニューロンにおけるＳＭＮの免疫染色により、ＳＭＮタンパク質レベルを評価した。Ａ．ＳＭＡタイプ１線維芽細胞におけるＳＭＮ２スプライシング。Ｂ．ＳＭＡタイプ１線維芽細胞におけるＳＭＮタンパク質。Ｃ．ＳＭＡタイプ１運動ニューロンのＳＭＮタンパク質。Ｄ．ＨＶ由来の全血におけるＳＭＮ１及びＳＭＮ２スプライシング。データは、評価３回／データポイントの平均±ＳＥＭを表し、未処置コントロールと対比した変化倍率として表される。
【図３】ｓｄＯＣＴ、ＥＲＧ及び組織病理学により網膜において記録された効果と、３９週間の研究期間及び２２週間の回復段階（組織病理学の場合）中の個々のサルにおける曝露との関連。研究終了時の個々の動物曝露（ＡＵＣ０−２４ｈ）は、ＲＯ７０３４０６７の慢性処置のサルにおけるｓｄＯＣＴ及びＥＲＧにより検出された網膜効果に対してプロットされている。３つの時点のいずれかにおける最悪ｓｄＯＣＴ／ＥＲＧ評定を採用した。Ｘ軸の数字は、研究における個々の動物数を指す。＋記号は、組織学における網膜所見の存在を示す。Ｒ：動物が依然として回復段階にあることを示す。グラフにおける黒色の数字１、２、３は、以下のように、処置段階の終了時のｓｄＯＣＴによる網膜効果の重症度評定を指す：１．軽度：周辺においてのみ見られる網膜変化（層の崩壊／薄化）；層は薄化／崩壊し得るが非存在ではない；反射率の増加又は減少、陰影が網膜層に見られ得る；高反射スポット（ＨＲＳ）は、網膜内層及び内部セグメント／外部セグメント接合部（ＩＳ／ＯＳ）に見られ得る。２．中等度：黄斑の近くに見られる網膜変化（崩壊／薄化）；層（例えば、ＩＳ／ＯＳ）は不連続又は非存在であり得る；ＭＭＤは存在し得るが、視神経頭に対して側頭の小領域に限られる；ＦＡＦ画像における斑状の周辺部；ＩＳ／ＯＳが非存在であるＲＰＥにおいて、ＨＲＳが見られ得る）。３．顕著：例えば黄斑の両側により広がったＭＭＤ；断絶、内境界膜及び外核層における光学的空隙。グラフにおける赤色の数字１及び２は、ＥＲＧによる網膜効果を指す。３００匹を超える動物の履歴サンプルに基づいて、「１」の評定は、予測平均よりも１．９６標準偏差（ＳＤ）未満２．３６＊ＳＤ以上低いＢ波振幅に割り当てられ、「２」の評定は、予測平均から２．３６ＳＤ低いＢ波振幅に割り当てられる。一貫して低下したＢ波振幅を有する動物を、処置段階の最後に評定した。偶発的に低いＢ波を有するコントロール及び処置動物を除外した。
【図４】in vitroにおけるＦｏｘＭ１の選択的スプライシング  ＳＭＡタイプ１患者線維芽細胞をＲＯ７０３４０６７で２４時間処置し、ＦｏｘＭ１全長（ＦＬ）及びエクソン９欠如（Δ９）ｍＲＮＡをＲＴ−ｑＰＣＲにより分析した。データは、６回反復の平均±ＳＥＭを表し、未処置コントロールと対比した変化倍率として表される。
【図５】ヒト及びカニクイザルｉＰＳＣにおけるＦＯＸＭ１  ｍＲＮＡ発現レベルに対するＲＯ７０３４０６７の効果  細胞をＲＯ７０３４０６７で２４時間処置し、ＲＴ−ＰＣＲによりＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃ転写産物変異体を分析した。データは、３回反復の平均±ＳＥＭを表し、コントロールと対比した変化倍率として表される。ＩＣ５０値が示されている。Ａ）ヒトｉＰＳＣ。Ｂ）カニクイザルｉＰＳＣ
【図６】ＲＧ７９１６の血漿濃度。時間に対するＲＧ７９１６の血漿濃度が用量ごとにプロットされている。
【図７】ＳＭＮ２  ｍＲＮＡレベルに対するＲＧ７９１６の血漿濃度。（Ａ）ＳＭＮΔ７ｍＲＮＡに対するＳＭＮ２全長ｍＲＮＡの比、（Ｂ）ＳＭＮ２全長ｍＲＮＡ、又は（Ｃ）ＳＭＮΔ７ｍＲＮＡと対比したＲＧ７９１６の時間一致濃度がプロットされている
【図８】ＳＭＮタンパク質レベル。（Ａ）用量ごとの血中ＳＭＮタンパク質濃度。（Ｂ）では、血中のベースラインからのＳＭＮタンパク質変化の比が用量ごとにプロットされている
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書で言及される刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は全て、その全体が参照により組み入れられる。
【００２０】
本出願で使用される命名法は、特に記述がない限り、ＩＵＰＡＣ体系命名法に基づく。
【００２１】
本発明の様々な特徴及び実施態様が本明細書に開示されるが、しかしながら、提供される教示に基づけば、本発明の他の特徴、改変物及び均等物は当業者に明らかであろう。記載される本発明は、提供される実施例及び実施態様に限定されず、様々な代替的な均等物が当業者により認識されよう。本明細書で使用される場合、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という単数形は、文脈上特に明確な指示がない限り、複数形を含む。例えば、「ａ」個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）はまた、複数の個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ）を含む。
【００２２】
特に記述がない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される以下の用語は、以下に示されている意味を有する：
【００２３】
「ＦＭＯ３」という用語は、その酵素委員会番号（ＥＣ番号）ＥＣ１．１４．１３．１４８、ＭＧＩ参照１１００４９６、細胞遺伝学的位置：１ｑ２４．３及びゲノム座標（ＧＲＣｈ３８）：１：１７１，０９０，８７２−１７１，１１７，８１８を有するジメチルアニリンモノオキシゲナーゼ［Ｎ−オキシド形成］３及びトリメチルアミンモノオキシゲナーゼとしても公知のフラビン含有モノオキシゲナーゼ３を指す。
【００２４】
本明細書で互換的に使用される「個体」又は「被験体」は哺乳動物である。哺乳動物としては、限定されないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられる。特定の実施態様では、個体又は被験体はヒトである。本発明の特定の実施態様では、被験体は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を有するヒトである。別の特定の実施態様では、被験体は、ＳＭＮ１遺伝子機能の喪失をもたらす両染色体上のＳＭＮ１遺伝子の活性化突然変異若しくは欠失により引き起こされるＳＭＡを有するヒトである。
【００２５】
「脊髄性筋萎縮症」（又はＳＭＡ）という用語は、ＳＭＮ１遺伝子機能の喪失をもたらす両染色体上のＳＭＮ１遺伝子の活性化突然変異若しくは欠失により引き起こされる疾患に関する。ＳＭＡのタイプに依存するＳＭＡの症候としては、筋衰弱、不十分な筋緊張、弱い泣き声、弱い咳、虚弱又は転倒傾向、吸込み又は嚥下の困難、呼吸困難、肺又は喉における分泌物の蓄積、汗ばんだ手を伴う握り拳、舌のフリック／振動、臥床時でさえ頭部の頻繁な傾斜傾向、腕よりも弱い傾向の脚、「カエル脚」位置を頻繁に呈する脚、授乳困難、呼吸器感染に対する感受性の増加、腸／膀胱の衰弱、正常体重未満、補助なしで座ることができない、歩行不全、這いずり不全、及び筋緊張低下、無反射、並びに前角細胞の喪失に関連する多発性先天拘縮（関節拘縮症）が挙げられる。
【００２６】
「脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置する」又は「脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置」という用語は、以下の効果：（ｉ）ＳＭＡの重症度の低下若しくは改善；（ｉｉ）ＳＭＡ発症の遅延；（ｉｉｉ）ＳＭＡの進行阻害；（ｉｖ）被験体の入院の減少；（ｖ）被験体の入院期間の減少；（ｖｉ）被験体の生存の増加；（ｖｉｉ）被験体の生活の質の改善；（ｖｉｉｉ）ＳＭＡに関連する症候の数の減少；（ｉｘ）ＳＭＡに関連する１つ以上の症候の減少若しくはその重症度の改善；（ｘ）ＳＭＡに関連する症候の期間の減少；（ｘｉ）ＳＭＡに関連する症候の再発の予防；（ｘｉｉ）ＳＭＡの症候の進行若しくは発症の阻害、並びに／又は（ｘｉｉｉ）ＳＭＡに関連する症候の進行の阻害の１つ以上を含む。より特に、「ＳＭＡを処置する」は、以下の有益な効果：（ｉ）筋肉強度の喪失の減少；（ｉｉ）筋肉強度の増加；（ｉｉｉ）筋肉麻痺の減少；（ｉｖ）運動機能の喪失の減少；（ｖ）運動ニューロンの増加；（ｖｉｉ）運動ニューロンの喪失の減少；（ｖｉｉｉ）変性からのＳＭＮ欠損運動ニューロンの保護；（ｉｘ）運動機能の増加；（ｘ）肺機能の増加；及び／又は（ｘｉ）肺機能の喪失の減少の１つ以上を表す。
【００２７】
詳細には、「ＳＭＡの処置」は、ヒト乳児若しくはヒト幼児が補助なしで座る機能的能力をもたらすか若しくは前記機能的能力の保持を支援するか、又はヒト乳児、ヒト幼児、ヒト子供若しくはヒト成人が補助なしで立つ、補助なしで歩く、補助なしで走る、補助なしで呼吸する、補助なしで睡眠中に寝返りを打つ若しくは補助なしで嚥下する機能的能力をもたらすか若しくは前記機能的能力の保持を支援する。
【００２８】
「mg/kg」という用語は、処置すべき被験体の体重１キログラム当たりに使用される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンのミリグラム単位の用量を指す。例えば、０．２５mg/kgは、処置すべき患者の体重１キログラム当たり０．２５ミリグラムの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを意味する。
【００２９】
「患者」という用語は、ＳＭＡと診断されたヒト（例えば、男性又は女性のヒト）を指す。
【００３０】
「活性医薬成分」（又は「ＡＰＩ」）という用語は、特定の生物学的活性を有する医薬組成物中の化合物又は分子を表す。
【００３１】
「薬学的に許容し得る賦形剤」、「薬学的に許容し得る担体」及び「治療的に不活性な賦形剤」という用語は互換的に使用され得、医薬組成物中の任意の薬学的に許容し得る成分であって、治療活性を有さず、投与される被験体に対して非毒性である任意の薬学的に許容し得る成分、例えば医薬品の製剤化において使用される崩壊剤、結合剤、充填剤、溶媒、緩衝液、等張化剤、安定剤、抗酸化剤、界面活性剤、担体、希釈剤又は潤滑剤を表す。
【００３２】
「医薬組成物」という用語は、それに含まれる活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態の調製物であって、組成物が投与される被験体に対して許容し得ない毒性のさらなる成分を含有しない調製物を指す。「薬学的に許容し得る」という用語は、医薬組成物の調製において有用な材料の特質であって、一般には、安全であり、非毒性であり、生物学的に及び他の点で望ましくないものではなく、獣医学及びヒト医薬用途のために許容し得る特質を表す。
【００３３】
「緩衝液」又は「緩衝系」という用語は、医薬調製物のｐＨを安定化する薬学的に許容し得る賦形剤又は賦形剤混合物を表す。適切な緩衝液は当技術分野で周知であり、文献に見られ得る。特定の薬学的に許容し得る緩衝液は、クエン酸緩衝液、リンゴ酸塩緩衝液、マレイン酸塩緩衝液又は酒石酸塩緩衝液、最も特に酒石酸塩緩衝液を含む。本発明の特定の緩衝系は、有機酸とその選択塩との組み合わせ、例えば、三塩基性クエン酸ナトリウム及びクエン酸、リンゴ酸及びリンゴ酸ナトリウム、酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸、又は酒石酸二ナトリウム及び酒石酸、特に酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸。あるいは、有機酸（特に、酒石酸）は、酸と対応する塩との組み合わせの代わりに「酸性化剤」として単独で用いられ得る。使用される緩衝液とは別に、ｐＨは、当技術分野で公知の酸又は塩基、例えば塩酸、酢酸、リン酸、硫酸及びクエン酸、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムを用いて調整され得る。特定の酸性化剤は酒石酸である。
【００３４】
「薬学的に許容し得る担体」は、活性成分以外の医薬組成物中の成分であって、被験体に対して非毒性の成分を指す。薬学的に許容し得る担体としては、限定されないが、緩衝液若しくは酸性化剤、賦形剤、安定剤又は保存剤が挙げられる。
【００３５】
「抗酸化剤」という用語は、活性医薬成分の酸化を防止する薬学的に許容し得る賦形剤を表す。抗酸化剤は、アスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、クエン酸、ＥＤＴＡを含む。
【００３６】
「界面活性剤」という用語は、撹拌及び剪断のような機械的ストレスからタンパク質組成物を保護するために使用される薬学的に許容し得る賦形剤を表す。薬学的に許容し得る界面活性剤の例としては、ポロキサマー、ポリソルベート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（BRIJ（登録商標））、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（TRITON-X（登録商標））、又はドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。
【００３７】
「ポロキサマー」という用語は、ポリ（プロピレン）オキシド（ＰＰＯ）の中央の疎水鎖にポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）の２本の親水鎖が隣接して構成される非イオン性トリブロックコポリマーを表し、各ＰＰＯ又はＰＥＯの鎖は、異なる分子量のものであり得る。ポロキサマーは、商品名Pluronicsとしても公知である。特定のポロキサマーは、ＰＰＯ鎖が１８００ｇ／モルの分子量及び８０％（w/w）のＰＥＯ含量を有するポロキサマーであるPoloxamer 188である。
【００３８】
「ポリソルベート」という用語は、典型的にはエチレンオキシドと共重合するソルビトールのオレイン酸エステル及びその無水物を表す。特定のポリソルベートは、Polysorbate 20（ポリ（エチレンオキシド）（２０）ソルビタンモノラウラート、TWEEN 20（登録商標））又はPolysorbate 80（ポリ（エチレンオキシド）（８０）ソルビタンモノラウラート、TWEEN 80（登録商標））である。
【００３９】
「親水性−親油性バランス」（ＨＬＢ）値は、非イオン性界面活性剤の親水性の程度を表す。ＨＬＢ値は、Griffin W.C., Journal of the Society of Cosmetic Chemists (1949) 1:311に記載されているように、界面活性剤の親水性部分の分子量とその全体の分子量との間の比により決定される。
【００４０】
「親水性」という用語は、極性溶媒、特に水と、又は水素結合、双極子−イオン相互作用及び／若しくは双極子−双極子相互作用により駆動される他の極性部分と相互作用する分子又は分子の一部の能力を表す。
【００４１】
「親油性」及び「疎水性」という用語は互換的に使用され得、ロンドン分散力により駆動される非極性環境、例えば脂肪、油及び非極性溶媒に溶解する分子又は分子の一部の傾向を表す。
【００４２】
（pg/mLの単位で表される）「Ｃｍａｘ」という用語は、最大観察血漿濃度を意味し、本明細書ではコルヒチンのものを指す。
【００４３】
（時間の単位で、又は研究集団におけるＴｍａｘの時間数の中央値として表される）「Ｔｍａｘ」という用語は、薬物投与後にＣｍａｘに到達するまでの観察時間を意味する；それが複数の時点で生じる場合、Ｔｍａｘは、この値を伴う最初の時点として定義される。
【００４４】
（pg・h/mLの単位で表される）「ＡＵＣＴ０−２４ｈ」という用語は、０〜２４時間の時間における台形法を使用して計算された累積血漿時間濃度曲線（ＡＵＣ）下面積を意味する。
【００４５】
「ｓｄＯＣＴ」という用語は、スペクトル領域光コヒーレンストモグラフィーを指す。
【００４６】
「ＮＯＡＥＬ」という用語は、副作用レベルが観察されないことを指す。換言すれば、ＮＯＡＥＬという用語は、実験又は観察により見出された物質の最大濃度又は最大量であって、規定の曝露条件下で患者の形態、機能的能力、成長、発達又は寿命の検出可能な有害変化を引き起こさない最大濃度又は最大量を指す。
【００４７】
「ＮＯＥＬ」という用語は、効果レベルが観察されないことである。
【００４８】
「ＥＲＧ」という用語は、網膜電図を指す。網膜電図は、光（光）刺激による角膜の電位の変動を測定することにより生成される波形である。一般に、直接及び接地電極は、電位を記録するために被験体の角膜上又はその近くに適用される。
【００４９】
「ＦｏｘＭ１」という用語は、フォークヘッドボックスタンパク質Ｍ１（以前はＨＦＨ１１と称された）を指す。現在、ＦＯＸＭ１遺伝子は、ヒトガン原遺伝子として公知である。
【００５０】
「ＭＡＤＤ」という用語は、ＭＡＰキナーゼ活性化デスドメインを指す。
【００５１】
本発明の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは、ＲＧ７９１６、ＲＯ７０３４０６７、ＣＡＳ番号１８２５３５２−６５−５としても公知の式（Ｉ）
【化１】
2020536090.tif 000002
の化合物を指し、化合物を作製及び使用する方法は、欧州特許出願公開第３１４３０２５号に記載されている。
【００５２】
医薬組成物を作製及び使用する方法は、国際公開公報第２０１７０８０９６７号に記載されている。
【００５３】
一実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでＳＭＡの処置において使用するための、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５４】
特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５５】
特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には１日１回０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には１日１回５mgでＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５６】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５７】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでタイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５８】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでタイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００５９】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでタイプＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６０】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６１】
より特に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでＳＭＡ、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【００６２】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６３】
特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６４】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、タイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６５】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、タイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６６】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、タイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６７】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、タイプＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。
【００６８】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者において、タイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであって、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで投与、特に経口投与される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを提供する。より特に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgでＳＭＡ、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置において使用するための７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン。
【００６９】
一実施態様では、本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７０】
特定の実施態様では、本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、ＳＭＡの処置のための方法であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを１日１回投与する方法を提供する。
【００７１】
さらなる特定の実施態様では、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７２】
別の特定の実施態様では、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７３】
別の特定の実施態様では、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７４】
別の特定の実施態様では、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、タイプＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト、例えば男性又は女性のヒトである患者に、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７５】
別の特定の実施態様では、本発明は、タイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。より特に、本発明は、タイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための方法であって、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者に、経口投与により、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kg/日で及び体重２０kg以上の患者の場合には５mg/日で、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７６】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７７】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００７８】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００７９】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００８０】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの投与量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００８１】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの投与量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg未満の患者の場合には１日当たり体重１キログラム当たり０．２５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００８２】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００８３】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００８４】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００８５】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００８６】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの投与量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００８７】
別の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの投与量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。特に、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の処置のための方法であって、体重２０kg以上の患者の場合には１日当たり５mgの用量の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを経口投与することを含む方法を提供する。
【００８８】
さらなる実施態様では、本発明は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）を処置する方法であって、患者に、体重２０kg未満の患者の場合には０．２５mg/kgで及び体重２０kg以上の患者の場合には５mgで、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを投与することを含む方法を提供する。
【００８９】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９０】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９１】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９２】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９３】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９４】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００９５】
医薬組成物は、患者、特にヒト（すなわち、男性又は女性のヒト）における脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡを処置するために使用され得る。
【００９６】
本発明の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは、高い水溶性を有することが見出された。全ての年齢群のＳＭＡ患者における嚥下障害により、溶液の投与が好ましいことが見出された。
【００９７】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含み、十分に高い薬物濃度を提供するために７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンをｐＨ４未満、特にｐＨ３．８未満、より特にｐＨ３．６未満、最も特にｐＨ３．０〜３．２の緩衝系、例えばクエン酸緩衝系、リンゴ酸塩緩衝系、マレイン酸塩緩衝系又は酒石酸塩緩衝系、最も特に酒石酸塩緩衝系に溶解させることにより経口水溶液として製剤化された医薬組成物を提供する。
【００９８】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、経口溶液の構成のために乾燥粉末又は顆粒として７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンを含む医薬組成物を提供する。緩衝系、例えば三塩基性クエン酸ナトリウム及びクエン酸、リンゴ酸二ナトリウム及びリンゴ酸、酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸又は酒石酸二ナトリウム及び酒石酸、特に酒石酸カリウムナトリウム及び酒石酸が、微粉末として有機酸及びその塩の選択により乾燥製剤に組み込まれ得る。あるいは、有機酸（特に、酒石酸）は、酸と対応する塩との組み合わせに代えて、酸性化剤として単独で使用され得る。
【００９９】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、希釈剤、例えばソルビトール、イソマルト又は特にマンニトール及びそれらの組み合わせを含み、それにより、経口溶液の構成中の粉末ブレンドの急速溶解を保証する医薬組成物を提供する。場合により、流動性を改善してロバストな均一性を保証するために、充填剤を添加して乾式圧縮により顆粒化し得る。
【０１００】
７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンのための溶媒系の構成のための成分は、別個の製剤として製剤化され得る。構成溶媒は、経口溶液の使用期間の開始時にボトル中の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの溶解に使用され得る。
【０１０１】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、経口溶液の構成のために粉末形態で７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物を提供する。
【０１０２】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、経口ディスペンサーの使用のためのアダプターを有する複数回投与ボトルに充填された医薬組成物を提供する。経口ディスペンサーの使用のためのアダプターを有するこのような複数回投与ボトルは、高い投与フレキシビリティ、例えば体重調整投与を可能にし、安全かつ便利な用量投与を提供することが見出された。
【０１０３】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、ローラー圧縮による乾式造粒、続いてボトル充填により調製された医薬組成物を提供する。このような加工は、分離を防止するために（特に水溶性充填剤の場合に）有益であることが見出された。
【０１０４】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、経口水溶液であるか、又は経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１０５】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、エアロゾルを含まない経口水溶液であるか、又は経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１０６】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、エアロゾルではない医薬組成物を提供する。
【０１０７】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、等張化剤、例えば塩化ナトリウムなどの塩を含まない医薬組成物を提供する。
【０１０８】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、経口水溶液であるか、又は経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末であり、前記経口水溶液がｐＨ４未満、特にｐＨ３．８未満、より特にｐＨ３．６未満、最も特にｐＨ３．０〜３．２を有する医薬組成物を提供する。
【０１０９】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩及びクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、最も特に酒石酸塩緩衝系；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸を含み；経口水溶液であるか、又は経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１１０】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、経口水溶液である医薬組成物を提供する。
【０１１１】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、ｐＨ４未満、特にｐＨ３．８未満、より特にｐＨ３．６未満、最も特にｐＨ３．０〜３．２の緩衝系中の経口水溶液である医薬組成物を提供する。
【０１１２】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、最も特に酒石酸塩緩衝系；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸中の経口水溶液である医薬組成物を提供する。
【０１１３】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１１４】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、ｐＨ４未満、特にｐＨ３．８未満、より特にｐＨ３．６未満、最も特にｐＨ３．０〜３．２の経口水溶液の構成に適切な緩衝系を含む乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１１５】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩緩衝系、最も特に酒石酸塩緩衝系；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸を含む乾燥粉末であって、経口水溶液の構成に適切な乾燥粉末である医薬組成物を提供する。
【０１１６】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、外部粒状充填剤、例えばラクトース、デンプン、加水分解デンプン、マルトデキストリン、微結晶性セルロース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、デキストロース、二塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム又はそれらの組み合わせを場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。
【０１１７】
本発明の特定の実施態様では、外部粒状充填剤は、ソルビトール、イソマルト、マンニトール又はそれらの組み合わせ、特にマンニトール、より特に結晶性マンニトール、最も特に１６０μmの平均直径を有する結晶性マンニトール（Pearlitol（登録商標）160C）である。
【０１１８】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、希釈剤、例えばラクトース、デンプン、加水分解デンプン、マルトデキストリン、微結晶性セルロース、マンニトール、イソマルト（Ｅ  ９５３、（２ξ）−６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−アラビノ−ヘキシトール）、ソルビトール、スクロース、デキストロース、二塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム又はそれらの組み合わせを場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。
【０１１９】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、希釈剤、例えばラクトース、デンプン、加水分解デンプン、微結晶性セルロース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、デキストロース、二塩基性リン酸カルシウム、硫酸カルシウム又はそれらの組み合わせを場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。
【０１２０】
本発明の特定の実施態様では、希釈剤は、マンニトール、特に、直接圧縮に適切なＤ−マンニトール、例えば、Parteck（登録商標）Ｍ１００である。
【０１２１】
本発明の特定の実施態様では、希釈剤は、マンニトール及びイソマルト、特に、Ｄ−マンニトール及び（２ξ）−６−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｄ−アラビノ−ヘキシトール）の混合物である。
【０１２２】
第２の希釈剤としてのイソマルトは、顆粒の特性を改善することが見出された。
【０１２３】
緩衝液中の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの構成経口溶液は、安定剤、及び抗酸化剤、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、パルミチン酸レチニル、セレン、システイン、メチオニン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、エデト酸二ナトリウム、ブチルヒドロキシトルオール、リボフラビン、アスコルビン酸、又はこれらの組み合わせを使用することにより、２週間以上の使用時間を提供され得る。
【０１２４】
緩衝液中の７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの構成経口溶液は、安定剤、及び抗酸化剤、例えば、ビタミンＥ  ＴＰＧＳ、エデト酸二ナトリウム、ブチルヒドロキシトルオール、リボフラビン、アスコルビン酸、又はこれらの組み合わせを使用することにより、２週間以上の使用時間を提供され得る。
【０１２５】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、抗酸化剤及び／又は安定剤、例えばビタミンＥ  ＴＰＧＳ（Ｄ−αトコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（エデト酸二ナトリウム、Ｎａ２ＥＤＴＡ）、ブチルヒドロキシルトルオール、リボフラビン、アスコルビン酸又はそれらの組み合わせを場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。抗酸化剤及び／又は安定剤は、複数回投与容器における長期使用時間に、又は使用期間にわたる溶液中の薬物安定性を改善するために有益であり得ることが見出された。
【０１２６】
本発明の特定の実施態様では、抗酸化剤は、アスコルビン酸（（５Ｒ）−［（１Ｓ）−１，２−ジヒドロキシエチル］−３，４−ジヒドロキシフラン−２（５Ｈ）−オン）である。
【０１２７】
本発明の特定の実施態様では、安定剤は、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（エデト酸二ナトリウム、Ｎａ２ＥＤＴＡ）。
【０１２８】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、潤滑剤を場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。潤滑剤は、ローラー圧縮のための加工助剤として使用され得ることが見出された。さらに、潤滑剤は、外観の許容性を保証するために、ＰＥＧなどの水溶性成分に使用され得る。
【０１２９】
本発明の特定の実施態様では、潤滑剤は、ポリ（エチレングリコール）、特に６０００の数平均分子量Ｍｎを有するポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ６０００）である。
【０１３０】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含み、嗜好性を改善するために甘味料及び／又は香味料を場合によりさらに含む医薬組成物を提供する。
【０１３１】
本発明の特定の実施態様では、フレーバーは、ストロベリーフレーバー又はバニラフレーバーである。
【０１３２】
本発明の特定の実施態様では、甘味料は、スクラロース（１，６−ジクロロ−１，６−ジデオキシ−β−Ｄ−フルクトフラノシル−４−クロロ−４−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシド、Ｅ９５５）又はサッカリンナトリウムである。
【０１３３】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；及び
・クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩又は酒石酸塩から選択される緩衝系、特にリンゴ酸塩又は酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３４】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；及び
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３５】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・  ７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；及び
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３６】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・  ７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；及び
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３７】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；及び
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３８】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；及び
・潤滑剤、特にＰＥＧ６０００
を含む医薬組成物を提供する。
【０１３９】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤、特にＰＥＧ６０００
を含む医薬組成物を提供する；並びに
【０１４０】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤、特にＰＥＧ６０００；
・場合により甘味料、特にスクラロース又はサッカリンナトリウム、最も特にスクラロース；及び
・場合により香味料、特にストロベリーフレーバー又はバニラフレーバー
を含む医薬組成物を提供する。
【０１４１】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・１〜１０％ｗｔの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・５〜１５％ｗｔの緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・４０〜７０％ｗｔの希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・１〜４％ｗｔの抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・０．５〜２％ｗｔの安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・０．５〜２％ｗの潤滑剤、特にＰＥＧ６０００；
・０〜３％ｗｔの甘味料、特にスクラロース又はサッカリンナトリウム、最も特にスクラロース；及び
・０〜２０％ｗｔの香味料、特にストロベリーフレーバー又はバニラフレーバー；
を含み、
成分の総量が１００％ｗｔを超えない医薬組成物を提供する。
【０１４２】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、
・２〜６％ｗｔの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩；
・９〜１３％ｗｔの酒石酸塩緩衝系；
・第１の希釈剤として４５〜５５％ｗｔのマンニトール及び第２の希釈剤として８〜１０％ｗｔのイソマルト；
・抗酸化剤として１〜３％ｗｔのアスコルビン酸；
・安定剤として０．５〜２％ｗｔのエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤として０．５〜２％ｗのＰＥＧ６０００；
・甘味料として１．５〜２％ｗｔのスクラロース；並びに
・１３〜１７％ｗｔのストロベリーフレーバー
を含み、
成分の総量が１００％ｗｔを超えない医薬組成物を提供する。
【０１４３】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物の調製のためのキットであって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩を含む粉末ブレンド、及び
・構成のための溶媒としての水
を含むキットを提供する。
【０１４４】
さらに別の実施態様では、本発明は、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンで投与、特に１日１回経口投与される、ＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物の調製のためのキットであって、
・７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩，
・構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンド、及び
・場合により構成のための溶媒としての水
を含むキットを提供する。
【０１４５】
特に、本明細書に記載される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩の構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンドは、
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；及び
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール
を含む。
【０１４６】
特に、本明細書に記載される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩の構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンドは、
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤、特にＰＥＧ６０００
を含む；及び
【０１４７】
特に、本明細書に記載される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩の構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンドは、
・緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤、特にＰＥＧ６０００；
・場合により甘味料、特にスクラロース又はサッカリンナトリウム、最も特にスクラロース；及び
・場合により香味料、特にストロベリーフレーバー又はバニラフレーバー
を含む。
【０１４８】
特に、本明細書に記載される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩の構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンドは、
・４〜１５％ｗｔの緩衝系、特にクエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩若しくは酒石酸塩から選択される緩衝系、より特にリンゴ酸塩若しくは酒石酸塩、最も特に酒石酸塩；又はあるいは酸性化剤としての緩衝系の対応する酸のみ、特に酒石酸；
・４０〜７０％ｗｔの希釈剤、特にマンニトール又はマンニトールとイソマルトとの混合物、より特にマンニトール；
・１〜４％ｗｔの抗酸化剤、特にアスコルビン酸；
・０．２〜２％ｗｔの安定剤、特にエデト酸二ナトリウム；
・０．５〜２％ｗの潤滑剤、特にＰＥＧ６０００；
・０〜３％ｗｔの甘味料、特にスクラロース又はサッカリンナトリウム、最も特にスクラロース；及び
・０〜２０％ｗｔの香味料、特にストロベリーフレーバー又はバニラフレーバー
を含み、
成分の総量は１００％ｗｔを超えない。
【０１４９】
特に、本明細書に記載される７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン又はその薬学的に許容し得る塩の構成のためのビヒクルとしての粉末ブレンドは、
・９〜１３％ｗｔの酒石酸塩緩衝系又は酒石酸；
・第１の希釈剤として４５〜５５％ｗｔのマンニトール及び第２の希釈剤として８〜１０％ｗｔのイソマルト；
・抗酸化剤として１〜３％ｗｔのアスコルビン酸；
・安定剤として０．３〜０．９％ｗｔのエデト酸二ナトリウム；
・潤滑剤として０．５〜２％ｗのＰＥＧ６０００；
・甘味料として０．８〜２．０％ｗｔのスクラロース；並びに
・７．５〜１９％ｗｔのストロベリーフレーバー
を含み、
成分の総量は１００％ｗｔを超えない。
【０１５０】
特定の実施態様では、本発明は、本明細書に記載されるＳＭＡ（より特に、タイプＩＩ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡ）の処置において使用するための医薬組成物であって、１日１回経口投与される医薬組成物を提供する。
【０１５１】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５２】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５３】
特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５４】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５５】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５６】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５７】
別の実施態様では、本発明は、ＳＭＡ、特にタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための医薬の調製のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５８】
特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるＳＭＡの処置のための医薬の調製のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１５９】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ又は／及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための医薬の調製のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１６０】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ又はタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための医薬の調製のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１６１】
より特定の実施態様では、本発明は、患者（特に、それを必要とする患者）、特にヒト（例えば、男性又は女性のヒト）である患者におけるタイプＩＩ  ＳＭＡ及びタイプＩＩＩ  ＳＭＡの処置のための医薬の調製のための、投与、特に１日１回経口投与される、体重２０kg未満の患者の場合には体重１キログラム当たり０．２５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン、又は体重２０kg以上の患者の場合には５mgの７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンの使用を提供する。
【０１６２】
本発明の患者は、特にヒト、より特に男性又は女性のヒトである。ヒトは、任意の人種のもの（例えば、白人又は東洋人）であり得る。
【０１６３】
特定の実施態様では、本発明の方法、使用、医薬組成物、７−（４，７−ジアザスピロ［２．５］オクタン−７−イル）−２−（２，８−ジメチルイミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−イル）ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンは１日１回投与される。
【０１６４】
以下の実施例は、本発明の実施を例示することのみを意図し、限定として提供されるものではない。
【実施例】
【０１６５】
実施例１：
研究ＢＰ３９０５５は、タイプ２及び３脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）におけるＲＯ７０３４０６７の安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、薬理動態（ＰＤ）及び有効性を調査する２部構成の実施的にシームレスな多施設無作為化プラセボコントロール二重盲検研究である。研究は、探索用量設定部分（第１部）及び確認部分（第２部）からなる。
【０１６６】
第１部の主な目的は、タイプ２及びタイプ３（外来又は非外来）ＳＭＡを有する患者におけるＲＯ７０３４０６７の安全性、忍容性、ＰＫ及びＰＤを評価し、研究の第２部の用量を選択することである。
【０１６７】
第１部は、タイプ２及びタイプ３（外来及び非外来）ＳＭＡ患者における二重盲検プラセボコントロール無作為化（２：１のＲＯ７０３４０６７：プラセボ）探索用量設定研究であった。この後、研究の第２部で選択したのと同じ用量による非盲検継続投与（ＯＬＥ）が続く。
【０１６８】
研究の第１部は、２つの年齢グループの患者を登録した：
・グループＡ：１２〜２５歳の青年及び成人患者
・グループＢ：２〜１１歳の子供
【０１６９】
両方の年齢グループにおいて、時差的な用量漸増方法でＲＯ７０３４０６７用量レベルを調査した。
【０１７０】
プロトコールにしたがって、研究の第１部の実行のために以下の工程を実施した。
【０１７１】
−最初に、１日１回の盲検ＲＯ７０３４０６７ ３mg（プロトコールで定義される初回用量レベル、７００ng・h/mLのＡＵＣ０−２４ｈ，ｓｓをターゲットとする）を受ける成人及び青年患者（コホートＡ１）に研究参加を開放した；１２・１６歳の患者 １０人がコホートＡ１に参加した。
【０１７２】
−この用量レベルのＲＯ７０３４０６７が、コホートＡ１に参加した患者 ９人において少なくとも４週間にわたって安全かつ忍容性良好であることが示されたら（プロトコールによる最小は、１２・１７歳の積極的処置患者 ３人であり、２：１の無作為化で患者 最低６人が保証された）、より若年患者のコホート（コホートＢ１）に参加を開放した。ターゲットＡＵＣ０−２４ｈ，ｓｓ ７００ng・h/mLにしたがってこの年齢グループについてＩＭＣが推奨する用量は０．０２mg/kgであった（添付資料１の２０１６年１２月１２日のＩＭＣ推奨を参照のこと）；３〜１１歳の患者 １０人がコホートＢ１に参加した。
【０１７３】
−同じ時点で（すなわち、コホートＡ１の患者 ９人における１日１回３mgの少なくとも４週間の処置のレビューに基づいて安全性及び忍容性が確認されたら）、１日１回のＲＯ７０３４０６７ ５mgを受ける成人及び青年患者 ９人の別のコホート（コホートＡ２）に参加を開放した（添付資料１の２０１７年１月１９日のＩＭＣ推奨を参照のこと）。プロトコールにしたがって、より高い用量レベルは、例えば曝露上限を超えずに、最大ＳＭＮタンパク質増加を達成することを決定した（Ｃｍａｘ ４００ng/mL；平均ＡＵＣ０２４ｈ，ｓｓ ２０００ng・h/mL）；１３・２４歳の患者 １０人がコホートＡ２に参加した。
【０１７４】
−コホートＢ１に参加した患者 ９人における０．０２mg/kgによる最低４週間の処置のレビューに基づいて、ＩＭＣにより以下の推奨が行われた：ｉ）これらの患者における用量を、上限用量 ３mgを超えずに０．０５mg/kgに増加させること、及びｉｉ）２・６歳の患者 少なくとも５人をターゲットとし、上限用量 ３mgを超えずに用量 ０．０５mg/kgで２・１１歳の追加患者 最低９人を参加させること（コホートＢ２）（添付資料１の２０１７年３月１３日のＩＭＣ推奨を参照のこと）；２・６歳の患者 １１人がこの追加コホート（コホートＢ２）に参加した。
【０１７５】
−ＲＯ７０３４０６７が、用量 ０．０５mg/kgでコホートＢ２に参加した患者 ９人において少なくとも４週間にわたって安全かつ忍容性良好であることが示されたら、コホートＢ１及びＢ２の全ての進行中の患者における用量を、上限用量 ３mgを超えずに０．１５mg/kgに増加させるように、ＩＭＣにより推奨された（添付資料１の２０１７年５月２３日のＩＭＣ推奨を参照のこと）。同じ時点で、上限用量 ５mgを超えない用量 ０．２５mg/kgの患者 ９人の別のコホート（コホートＢ３）に参加を開放し、例えば曝露上限を超えずに、最大運動ニューロン生存（ＳＭＮ）タンパク質増加を達成することを決定した（Ｃｍａｘ ４００ng/mL；平均ＡＵＣ０２４ｈ，ｓｓ ２０００ng・h/mL）；２・１１歳の患者 １０人がコホートＢ３に参加した。
【０１７６】
−各コホートの患者 最低９人による少なくとも１２週間のプラセボコントロール処置の完了後、ＩＭＣは、コホートからの全ての利用可能なデータをレビューして、プラセボ患者を、それらの各コホートで試験した用量による積極的処置に切り替えることを決定した。各コホートにおいてプラセボ患者を積極的処置に切り替えるＩＭＣ決定の日付は、セクション１．３に提供されている。
【０１７７】
−第１部の最後のコホート（コホートＢ３）では、９人目の患者による最低４週間の処置の完了後の全ての利用可能な安全性、忍容性、ＰＫ及びＰＤデータ（９人目の患者の約１週間後に参加した最後のコホートの１０人目の患者の全ての利用可能なデータ、及び全ての以前のコホートからの全ての利用可能なデータを含む）は、研究の第２部において投与すべき用量を選択するために、ＩＭＣによりレビューされた。この用量選択は、同じデータパッケージのレビュー後に外部ｉＤＭＣにより確認された。この用量決定の根拠となったデータは、この報告において要約されている。
【０１７８】
−ｉＤＭＣによる全ての利用可能な第１部データのレビュー及びＩＭＣ用量選択の確認後、第２部を開始し、第１部の全ての患者を、この研究のＯＬＥ段階の一部として第２部のために選択した用量に切り替える。第１部の最後のコホートの患者は、ＯＬＥの開始前に、それらのコホートの１２週間の処置期間の終了までに処置を完了する必要がある。ＲＯ７０３４０６７処置の長期データを提供するために、研究のＯＬＥ段階の一部として安全性、忍容性及び有効性について、患者を引き続き追跡する。これらの患者は、研究の第２部において行った確認的有効性分析に寄与しない。
【０１７９】
患者 合計５１人が研究の第１部に参加した。５つの異なるセンター（イタリア［２つのセンター］、ドイツ、フランス及びベルギー）において、患者が参加した。患者は、プラセボ及び積極的処置の患者を１：２の比で含む５つのコホートに参加した。
【表１】
2020536090.tif 000003
【０１８０】
プロトコールは、研究の第２部の用量選択基準を、第１部のデータに基づいて安全かつ忍容性良好であると思われる用量であって、ｉ）タイプ２及び３ＳＭＡ患者における運動ニューロン生存（ＳＭＮ）タンパク質の臨床関連増加をもたらす曝露を達成すると予想される用量として定義し、ｉｉ）ＲＯ７０３４０６７の平均ＡＵＣ０  ２４ｈ，ｓｓ（投与後０時間と２４時間との間の曲線下定常状態面積）は、曝露上限 ２０００ng.h/mL未満のままでなければならない。
【表２】
2020536090.tif 000004
【０１８１】
研究プロトコールで定義されているように、利用可能なデータは、ＳＭＮタンパク質レベルの１００％の増加がより重度のＳＭＡ表現型をより軽度の形態に変えると実際に予想されるが、さらなる増加はさらに大きな利益を提供する可能性があることを示唆している。
【表３】
2020536090.tif 000005
【０１８２】
実施例２：（ＢＩ§４．１．２．２からの採用）
成体Ｃ／Ｃ対立遺伝子マウスをビヒクル又はＲＯ７０３４０６７（１、３又は１０mg/kgを毎日経口［ＰＯ］）で１０日間処置し、ＰＮＤ３  ＳＭＮΔ７マウスをビヒクル又はＲＯ７０３４０６７（０．１、０．３、１又は３mg/kgを毎日腹腔内［ＩＰ］）で７日間処置した。ＲＯ７０３４０６７は、脳及び筋肉組織中のＳＭＮタンパク質レベルを用量依存的に増加させ、成体Ｃ／Ｃ対立遺伝子マウスでは１０mg/kgにおいて、及び新生児ＳＭＮΔ７マウスでは１〜３mg/kgにおいて、２〜３倍の増加の最大効果が達成された（図１ａ及び１ｂ）。したがって、用量 １０mg/kgのＣ／Ｃ対立遺伝子マウスの筋肉では、達成されたＳＭＮレベルは、ヘテロ接合型マウスにおけるものと同様であった。ＳＭＮΔ７マウスでは、ＳＭＮタンパク質増加は、脳及び筋肉の両方において部分的であったにすぎず、ヘテロ接合型マウスにおけるタンパク質レベルの約４３％（脳）及び５５％（筋肉）に達した。これらのデータは、ＲＯ７０３４０６７が、ＳＭＡのトランスジェニックマウスモデルの脳及び筋肉組織の両方におけるＳＭＮタンパク質を増加させ、重度ＳＭＮΔ７マウスモデルでは、１００％を超えるＳＭＮタンパク質の増加の可能性があることを実証している。
【０１８３】
実施例３：
強制飼養により、試験品を経口投与した。動物は、剖検の日を含む３９週間の期間にわたって投与された。動物は、ｓｄＯＣＴ評価の日に投与されなかった。試験品に関連する臨床徴候により、グループ４動物（７．５mg/kg/日を投与）は、１３〜２５日目に投与されなかった。臨床症状不良により、７．５mg/kg/日を投与した雌（動物０１１４） １匹は、１２日目に投与されなかった。回復した動物は、２７３日目（３９週目）以降に投与されなかった。
【０１８４】
研究デザイン及び用量レベル
以下の研究デザイン及び用量レベルを選択した：
【表４】
2020536090.tif 000006
【０１８５】
５．５  投与量
投与量 ５mL/kgを使用した。個々の投与量は、個々の体重に基づいた。
【０１８６】
試験品の製剤化
調製
製剤を毎週調製した。
【０１８７】
ｐＨ３の１０mMアスコルビン酸／０．００６４mg/mLチオ硫酸ナトリウムの溶液として試験品を製剤化した。
【０１８８】
保存
製剤を酸素の非存在下（窒素下）、２〜８℃で保存し、密閉容器内で光から保護した。投与前にそれらを室温に到達させ、動物室への到着後直ぐに撹拌し、次いで、投与の間は引き続き撹拌した。
【０１８９】
製剤分析
試験品の含有量について、製剤を分析した。
【０１９０】
安定性
安定性データにより、０．０２５〜５mg/mLの範囲内の製剤は、酸素の非存在下（すなわち、窒素下）、２〜８℃で保存した場合に、最大４週間安定であったことが実証された。
【０１９１】
達成濃度
（グループ４の投与の中断及び再開と一致する）投与段階の１、１３、２６及び３９週目並びに１２及び２６日目に使用するために調製したサンプル（試験品製剤の３×１mLアリコート；コントロール品製剤の２×１mLアリコート）を達成濃度の分析に採用した。サンプリング時期が一致した達成濃度として、均一性結果の平均を採用した。
【０１９２】
９週目に使用するために調製した製剤からはサンプルを採用せず、投与段階の１３週目にサンプルを収集した。
【０１９３】
試験系
種、系統及び供給業者
各性別の健常動物 １６匹を提供するために、目的繁殖カニクイザル（Macaca fascicularis）３２匹をNoveprim Ltd (Mauritius)から入手した。
【０１９４】
詳細
投与開始時において、動物は２４〜２６カ月齢であった。
【０１９５】
環境
実験手順が別途示されている短期間を除いて、以下の環境で動物を飼育した。１時間当たり最低１５回の空気交換を提供するように空調されている専用部屋にそれらを収容した。一般に、温度及び相対湿度範囲をそれぞれ２１〜２５℃及び４０〜７０％の指定範囲内に維持した。蛍光灯を自動でコントロールして、１２時間の光（０６００時〜１８００時）及び１２時間の闇のサイクルを与えた。
【０１９６】
the Code of practice for the housing and care of animals bred, supplied or used for scientific purposes (Home Office, London, 2014)に準拠した檻に動物を収容した。同じグループ及び性別の動物を同じ檻に集団収容した。
【０１９７】
食餌、水及び寝床
各動物に、霊長類用認定実験食(LabDiet 5048)のペレットを少なくとも１日２回提供した（およそ、午前に６つのペレット及び午後に６つのペレット）；時折、午後の健康診断で追加ペレットを提供した。新鮮果物又は野菜も平日に１日１回提供し、他の機会では乾燥代替品を提供した。
【０１９８】
水筒を介して、水道水を自由に供給した。水は、特定の汚染物質について定期的に分析されている。
【０１９９】
清潔なAspen wood chips (Datesand Ltd, Manchester, UK)及びLignocel mix (International Product Supplies Ltd, London, UK)の使用により、寝具を各ケージに毎週提供した。
【０２００】
栄養補助食品及び環境強化
報酬として以下のものを提供した：ブドウ、ブルーベリー、ヒマワリの種、パスタ、ナッツ、ウッドウール及び飼料ミックス；これらは、環境強化の形態として分析を必要としなかった。
【０２０１】
多くの追加アイテム／戦略、例えば玩具（ボール、不活性ナイロンチュウ）、ブランコ及び採餌材料の提供を使用して、動物の環境及び福祉を強化した。
【０２０２】
実験前手順
試験系の識別
電子インプラントにより、動物を個別に識別した。
【表５】
2020536090.tif 000007
【０２０３】
眼科検査
標準的な眼科検査
投与開始前並びに投与段階の４、１３、２３及び３６週目に全ての動物に対して、調査を実施した。
【０２０４】
２３及び３６週目の調査は、投与段階の２２及び３５週目を指定したプロトコールに反していた。時間差は最小限であり、研究の完全性に対して影響がなかった。
【０２０５】
動物をケタミンで軽く鎮静させ、間接及び細隙灯眼科検査前に、散瞳剤を眼に注入した。
【０２０６】
網膜電図検査（ＥＲＧ）
投与段階の２０、２６及び３４週目に全ての動物に対して、並びに回復段階の８、１３及び２２週目に全ての回復動物に対して、調査を実施した。
【０２０７】
ＥＲＧ手順前に動物を少なくとも２時間絶食させ、暗所視試験前に少なくとも２時間暗順応させ、明所視試験前に少なくとも１０分間明順応させた。
【０２０８】
動物をケタミンで軽く鎮静させ、検査前に、散瞳剤を眼に注入した。
【０２０９】
スペクトル領域光コヒーレンストモグラフィー
投与段階の２２、２７及び３５週目並びに回復段階の８、１３及び２２週目に全ての動物に対して、スペクトル領域光コヒーレンストモグラフィー（ｓｄＯＣＴ）を実施した。検査前に動物は一晩絶食され、ｓｄＯＣＴ評価の日に投与されなかった。
【０２１０】
動物をケタミンで軽く鎮静させ、検査前に、散瞳剤を眼に注入した。
【０２１１】
毒性動態
投与段階の１、１２（２週目）、２６（グループ４のみ）、５７（９週目）、９２（１４週目）、１８０（２６週目）及び２６７日目（３９週目）に以下の時点で、全ての試験品処置動物から毒性動態用の血液サンプル（名目上０．５mL）を採取した：
・０（投与前）、投与後１、３、７及び２４時間
【０２１２】
１２日目の投与後７２時間（すなわち、１５日目）に、全てのグループ４動物から追加サンプルを採取した。
【０２１３】
汚染を回避するために、（２６週目を除く）異なる日に、コントロールグループ（グループ１）からのサンプルを採取した：投与段階の３、１５（３週目）、５９（９週目）、８９（１３週目）、１８０（２６週目）及び２６９日目（３９週目）。
【０２１４】
投与段階の１８０日目（２６週目）に、３mg/kg/日を投与した雌（動物０１１１）１匹からの１時間サンプルを６分早く採取したが、これは、ＳＯＰが許可する偏差域から２分はずれていた。この時間的逸脱は最小限であったので、研究の完全性に対して影響はなかった。
【０２１５】
大腿静脈／動脈からサンプルを採取した。各血液サンプルを手で穏やかに混合し、次いで、約４℃、２３００ｇで１０分間遠心分離するまで、湿った砕氷上に置いた。得られた血漿を分離し、２つのユニークなラベル付き透明ポリプロピレンチューブに分注し、−５０℃未満（名目上−８０℃）で凍結した。分析のために、一方のサンプルをドライアイス上で冷凍して主任研究者に送り、他方をCovanceに保管した。
【０２１６】
方法及び結果は、添付資料１３及び添付資料１７に示されている。
【０２１７】
臨床病理学
サンプル及び時期
投与開始前；投与段階の４、１３、２６、３５及び３９週目；並びに回復段階の１３及び２２週目に、全ての動物の大腿静脈／動脈から、血液サンプル（名目上、ＥＤＴＡ抗凝固剤に収集した０．５mL、クエン酸三ナトリウム抗凝固剤に収集した０．５mL、及びヘパリンリチウム抗凝固剤に収集した０．６mL）を採取した。誤って一晩飢餓させなかった動物の１３週目回復段階サンプルを除いて、一晩絶食期間後にサンプルを収集した。これは影響がなかった。
【０２１８】
終了手順
全ての動物を剖検に供した。
【０２１９】
毒性動態組織サンプリング
毒性動態調査のために剖検時に、動物 １匹／性別／グループの左眼の硝子体液及び房水から眼サンプルを採取し、ラベル付きエッペンドルフチューブに等分し、計量した。切除後、網膜、脈絡膜、ＲＰＥ、角膜、虹彩、強膜及び水晶体をそれぞれ別個のPrecellysホモジナイズチューブ（２mL）に入れた：次いで、チューブを液体窒素で瞬間凍結し、名目上−７０℃で凍結保存した。
【０２２０】
電子顕微鏡検査
メイングループ剖検時の動物 ２匹／性別／グループ及び回復剖検時の動物 １匹／性別／グループの左眼を、剖検時にホルマリン／グルタルアルデヒド混合物で固定した。小さな（２５〜２７ゲージ）針を有するシリンジを使用して、眼の上部から、４％緩衝グルタルアルデヒドと１０％ＮＢＦとの１：１混合物を、長後毛様動脈に対して垂直の位置で強膜を通して硝子体に注入した。固定液 約０．２〜０．３mLを眼に注入し、次いで、４％緩衝グルタルアルデヒドと１０％ＮＢＦとの１：１混合物を充填した容器に３６〜４８時間浸漬した。
【０２２１】
データ評価
概要の表の見出しに掲載されている動物の数は、それぞれの各剖検区間に割り当てられた動物の数を示す病理学の表を除いて、それぞれの各段階の開始時に各グループに割り当てられた動物の数を反映する。観察結果に関する概要の表は、特定の性質、重症度、可逆性、発生率／動物の数、又は症状が持続した時間の長さに関係なく、症状が観察された動物の数を示す。
【０２２２】
試験品処置動物からのデータをコントロールデータと比較した。
【０２２３】
この報告におけるいくつかの表は、コンピューターで作成されている。このシステムでは、個々の数値及び派生した数値は丸められる。それにより、いくつかの場合では、報告に示されている個々のデータからの派生値の再計算はわずかなばらつきをもたらすであろう。
【０２２４】
ＥＲＧデータに対して、統計分析を実施した。
【０２２５】
処置をモデルの単一因子とする分散分析（ＡＮＯＶＡ；Winer et al., 1991）を使用して、以下に掲載されている網膜電図検査パラメータのＡ波（該当する場合）及びＢ波振幅並びに潜時を分析した。有意な全処置効果（Ｐ＝０．０５）が認められた場合、ダネット検定(Dunnett, 1955 and 1964)により、グループ比較（グループ２、３及び４対グループ１）を評価した。雄及び雌のデータを別個に分析した。
・暗所視−３４ｄＢ青色単一フラッシュ
・暗所視−８ｄＢ赤色単一フラッシュ
・暗所視０ｄＢ白色単一フラッシュ
・振動電位
・明所視０ｄＢ単一フラッシュ
・明所視０ｄＢ  ３０．３Hz白色
・ＶＥＰ  ４．１Hz
【０２２６】
加えて、レーベン検定(Levene, 1960)を使用して、グループ間の分散の同等性を試験した。レーベン検定が有意である場合（Ｐ＝０．０１）、ランク変換データ(Draper and Hunter, 1969)をＡＮＯＶＡモデルで使用した。
【０２２７】
各動物の２つの眼（右及び左）の間の平均を計算し、分析に使用した。
【０２２８】
結果
製剤
全ての試験品製剤の測定含有量は名目上９４〜１０３％の範囲であったが、これは、許容し得る濃度が投与のために調製されたことを実証している。
【０２２９】
コントロールサンプルでは、試験品は検出されなかった。
【０２３０】
生物分析及び毒性動態
血漿中の結果は以下を示した：
【０２３１】
コントロールグループのサンプルは、定量可能な血漿濃度のＲＯ７０３４０６７を含有していなかった。全ての結果は、定量下限（＜５．００ng/mL）未満であった。
【０２３２】
１．５、３又は７．５／．５mg/kg/日を投与した全ての動物をＲＯ７０３４０６７に曝露し、全ての調査日に、サンプリング区間全体（２４時間）の完全な血漿濃度−時間プロファイルを得た。
【０２３３】
特に７．５／．５mg/kg/日を投与したグループでは、このグループの動物 ２匹（動物０１１２及び０１１４；動物０１１２の毒性動態［ＴＫ］サンプリング日ではない）において高頻度で、投与直後に逆流が観察された。８９、９０及び９１日目における３日間の逆流の後、動物０１１４における９２日目のＲＯ７０３４０６７への曝露は、５mg/kg/日を投与した全ての他の動物と比較して明らかに低かった。この動物についても逆流が観察された５７日目（ＴＫサンプリング日）に、これはあまり顕著ではなかった。その結果として、５７及び９２日目の比及び統計計算から、動物０１１４における曝露を除外した。
【０２３４】
全体として、各評価日に、ＡＵＣ（０−２４ｈ）のおよその用量比例増加が１．５〜５mg/kg/日で観察された。１及び１２日目に、これは１．５〜７．５mg/kg/日でも観察された。
【０２３５】
全体として、３９週間の投与段階において、ＡＵＣ（０−２４ｈ）又はＣｍａｘの関連性差は、いかなる用量レベルでも観察されなかった。
【０２３６】
１２及び２６７日目の主な結果（平均値）は、以下の表に要約されている：
【表６】
2020536090.tif 000008
【０２３７】
網膜電図検査（非ＧＬＰ）
定性的評価
International Society for Clinical Electrophysiology of Vision（ＩＳＣＥＶ）プロトコール下で誘発した網膜電図検査（ＥＲＧ）応答の目視検査により、投与２０週目に、７．５／５mg/kg/日を投与したいくつかの動物でＥＲＧの顕著な低下が認められた。３mg/kg/日を投与した雄 １匹（動物０００９）及び７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ２匹（動物００１３及び００１４）は、暗所視−３４ｄＢ青色Ｂ波振幅の低下が認められた。３mg/kg/日を投与した雌 ２匹（動物０１１０及び０１１１）及び７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ３匹（動物０１１４、０１１５及び０１１６）もまた、暗所視−３４ｄＢ青色状態のＢ波振幅の顕著な低下が認められた。７．５／５mg/kg/日を投与した雄 １匹（動物００１４）及び雌 ２匹（動物０１１４及び０１１５）もまた、投与段階の２０週目に、明所視０ｄＢ白色及び３０Hzフリッカー振幅の減少が認められた。
【０２３８】
投与段階の２６週目におけるＥＲＧ応答の定性的評価により、７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ２匹（動物００１３及び００１４）では暗所視−３４ｄＢ青色Ｂ波振幅が低下し、７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ２匹（動物０１１４及び０１１５）ではさらに明所視改善の証拠があり、明所視０ｄＢ単一白色Ｂ波振幅が低下したことが示された。
【０２３９】
投与段階の３４週目におけるＥＲＧ応答の定性的評価により、雄 ３匹（動物００１２、００１４及び００１５）及び雌 ４匹（動物０１１３、０１１４  ０１１５及び０１１６）では、７．５／５mg/kg/日で暗所視−３４ｄＢ青色Ｂ波振幅が低下したことが示された。７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１４）は、ほぼ消滅した暗所視及び明所視応答を示した。１．５mg/kg/日を投与した雄 １匹（動物０００４）は、３４週目時点で、予想よりも低い暗所視−３４ｄＢ  Ｂ波振幅を有していた。
【０２４０】
コントロール及び７．５／５mg/kg/日グループの両方の雄及び雌 ２匹において、回復段階の８、１３及び２２週目に、網膜電図検査（ＥＲＧ）及びＶＥＰを記録した。コントロール動物 ４匹から記録されたＥＲＧは全て、３つの回復時点で、予想正常範囲内であった。７．５／５mg/kg/日を以前に投与した雌 １匹（動物０１１４）は、回復段階の８及び１３週目に、振幅ＥＲＧ応答が引き続き減少していた；しかしながら、回復段階の２２週目に、この動物のＥＲＧ  Ｂ波の振幅は以前の試験と比較して著しく増加したが、それは依然として、わずかに予想正常範囲未満であった。雄のグループ４動物 ２匹は、３つの各回復区間で、予想正常範囲内の暗所視及び明所視Ｂ波を有していた。
【０２４１】
網膜電図検査評定
各動物の−３４ｄＢ暗所視青色Ｂ波振幅を、同一の装置及び麻酔を用いて試験したカニクイザルの大きなサンプル（Ｎ＝３２０）から得られた値(Ver Hoeve et al., 2014)と比較することにより、ＥＲＧ評定を半定量的に実施した。その研究からの大きなサンプル量を使用して、１．９６＊標準偏差及び２．３６＊標準偏差に基づいて低い信頼区間を計算したところ、平均は１８７．８であり、標準偏差は５１．７マイクロボルトであったが、これらは、それぞれ０．０５又は０．０１未満の確率で逸脱に対応する。これらの値に基づいて、０の評定は、１．９６標準偏差内のＢ波振幅に割り当てられ；１の評定は、予想平均よりも１．９６標準偏差未満しかし２．３６＊標準偏差以上高いＢ波振幅に割り当てられ、２の評定は、予想平均から２．３６標準偏差低いＢ波振幅に割り当てられた。
【０２４２】
投与段階
前述の評定基準に基づくと、７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ５匹のうち４匹は、２０週目に桿体反応が低下し；７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ５匹のうち２匹は、２６週目に桿体反応が低下し；７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ５匹のうち４匹は、投与段階の３４週目に桿体反応が低下した。７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ５匹のうち４匹は、２０週目に桿体反応が低下し；７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ５匹のうち２匹は、２６週目に桿体反応が低下し；７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ５匹のうち５匹は、投与段階の３４週目に桿体反応が低下した。
【０２４３】
これらの評定基準を使用すると、３mg/kg/日を投与した雌 ３匹は全て、２２週目に桿体反応が低下し；これらの雌はいずれも、２７週目に桿体反応が低下せず；３mg/kg/日を投与した雌 ３匹のうち１匹は、投与段階の３５週目に桿体反応が低下した。３mg/kg/日を投与した雄については、３匹のうち１匹は、２２週目に桿体反応が低下したが、いずれも、投与段階の２６又は３５週目に桿体反応が低下しなかった。
【０２４４】
１mg/kg/日を投与した雌 ２匹は、投与段階の３４週目に基準未満の桿体ＥＲＧを有していた。１mg/kg/日を投与した雄は、予想範囲未満の桿体反応を有していなかった。
【０２４５】
コントロール動物のうち、雌 １匹（動物０１０２）のみが予想範囲外の桿体反応を有しており、これは、投与段階の２２及び３４週目に発生した。コントロール雄 １匹のみが基準未満の桿体反応を有しており、これは、投与段階の３４週目に発生した。
【０２４６】
コントロール又は１mg/kg/日を投与したグループでは、ＯＣＴ及びＥＲＧ所見はわずかであったか又は存在しなかった。３mg/kg/日を投与した動物では、ＯＣＴ及びＥＲＧにより比較的軽度の異常が見出され、７．５／５mg/kg/日を投与した動物では、両方とも、高い割合の異常が存在することを示していた。
【０２４７】
回復期間
コントロール動物 ２匹／性別及び７．５／５mg/kg/日を投与した動物 ２匹／性別を回復中に追跡し、回復段階の８、１３及び２２週目に試験した。
【０２４８】
投与段階に７．５／５mg/kg/日を投与した雌 ２匹のうち１匹は、投与段階の２２、２６及び３４週目に桿体反応が有意に減少し（動物０１１４）、回復８週目及び回復１３週目に依然として低下していた。回復２２週目に、番号１１４は、回復８週目の３４．１、３３．５（mcV、右、左眼）から回復２２週目の４３．４、５２．７mcVへのＢ波振幅の大きな増加を示した。しかしながら、この応答は依然として、予想平均よりも２．３６標準偏差超低かった。影響がある他のグループ４の雌である番号０１１５では、ＥＲＧ  Ｂ波にあまり影響がなく、回復８及び１３週目に依然として予想範囲未満であり、回復段階の２２週目に完全に回復した。グループ４の雄は両方とも、３回の各回復試験で予想正常範囲内の暗所視及び明所視ｂ波を有していた。
【０２４９】
定量的評価
投与段階の３４週目に収集したデータからのＥＲＧ  Ａ波及びＢ波のピーク潜時（潜在的時間）並びに振幅の統計的評価は、Covance統計学者が実施した。
【０２５０】
暗所視−３４ｄＢ青色単一フラッシュＢ波振幅は、Ｂ波潜時（Ｐ＜０．０３７０）と同様に、グループ間で有意差があったが（Ｐ＜０．００４７）、このスモールＮ分析では、コントロールとの個々のグループ比較（ダネット検定）は有意に達しなかった。
【０２５１】
暗所視０ｄＢ白色Ａ波の潜時はグループ間で有意差があり（Ｐ＜０．０１１６）、ダネット検定では、７．５／５mg/kg/日グループとコントロールグループとの間の差は有意であった（Ｐ＜０．００９５）。
【０２５２】
最後に、明所視０ｄＢ白色Ｂ波振幅はグループ間で有意差があったが（Ｐ＜０．０４４９）、コントロールとのグループ比較では有意性に達しなかった。
【０２５３】
要約すると、７．５／５mg/kg/日を投与した動物 数匹は、投与段階の２０週目に暗所視及び明所視ＥＲＧの顕著な低下が認められた。これらの動物では、網膜機能は依然として、投与段階の２６及び３４週目に低下しており、７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１４）は、進行性ＥＲＧ機能不全の兆候を明らかに示した。当然のことながら、番号０１１４は、回復段階の２２週目までに回復の明確な兆候を示した。一般に、中用量及び低用量グループ動物（３．０及び１．５mg/kg/日）は依然として予想範囲内であり、投与段階の間に、ＥＲＧ振幅の減少傾向の証拠はなかった。
【０２５４】
影響がある動物では、桿体光レセプター媒介性暗所視−３４ｄＢ青色単一フラッシュの顕著な低下が認められた。最も影響がある動物（７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ３匹［動物００１２、００１４及び００１５］及び雌 ２匹［動物０１１４及び０１１６］）では、暗所視０ｄＢ単一白色（混合桿体錐体刺激））Ａ波は、Ｂ波よりもあまり低下していないと思われた。これは、ＲＯ７０３４０６７が、光レセプター活性化自体よりも光レセプター−双極細胞間伝搬に対して比較的大きな効果を有していたことを示唆していた。この推論は、７．５／５mg/kg/日を投与した動物では、双極細胞層が網膜機能不全の主要な遺伝子座であった可能性につながる。
【０２５５】
また、注目すべきことに、ＲＯ７０３４０６７の投与に応じて顕著な個体差が認められ、７．５／５mg/kg/日を投与したいくつかの動物は正常ＥＲＧを示し、他の動物は、前述のようにＥＲＧの低下が認められた。７．５／５mg/kg/日を投与した動物でさえ、フラッシュ誘発ＶＥＰが依然として存在していた。これは、網膜反応に影響があった動物でさえ、ＲＯ７０３４０６７投与が、網膜神経節細胞又は視覚皮質へのそれらの軸索投射を有意に損なわなかったことを示唆していた。これは、周辺網膜（これは網膜のかなり大部分を占めており、全視野ＥＲＧに大きな役割を果たす）と比較して黄斑部が比較的余分にある場合に起こり得る。ｓｄＯＣＴ及び組織病理学により、実際に、黄斑部は実質的な網膜損傷を免れていることが示された。
【０２５６】
１．５mg/kg/日又はコントロール品（ビヒクル）を投与した動物は、ＥＲＧ欠損が認められなかった。
【０２５７】
スペクトル領域光コヒーレンストモグラフィー（ｓｄＯＣＴ、非ＧＬＰ）
投与段階
７．５／５mg/kg/日を投与した雄 ３匹（動物００１２、００１４及び００１６）は、２７週目に、２２週目と比較してわずかに悪化したように思われた。動物００１４は、微小類嚢胞黄斑変性（ＭＭＤ）及び周辺のＯＮＬにおける液腔が増加していたが、動物００１６は、周辺における薄化及び組織崩壊がより多かった。ＭＭＤ腔はＩＮＬにおいてのみ認められ、周辺のＯＮＬにおいて認められた腔とは様相が異なっていた。３５週目に、動物００１４もまた、２７週目よりもわずかに悪化したように思われ、ＭＭＤ並びに周辺のＩＮＬ及びＯＮＬにおける液腔の数が継続的に増加し、周辺における網膜層の薄化及び組織崩壊がわずかに増加した。
【０２５８】
２７週目に、７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１３）は、視神経頭及び黄斑付近のＭＭＤ腔が２２週目よりも少なかったが、周辺における網膜層の組織崩壊がより多かった；７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１４）はＭＭＤがより多く、ＩＮＬにおける嚢胞腔が周辺に伸びており、周辺における組織崩壊及び薄化が２２週目よりもわずかに多かった；７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１６）は、周辺におけるＩＮＬ及び視神経付近に腔があった。３５週目に、７．５／５mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１１３）は依然として、視神経頭及び黄斑付近にＭＭＤ腔があった；しかしながら、周辺では、２７週目よりも多くの網膜層の組織崩壊が認められ、（右よりも左眼において）ＩＬＭ下で光学的空隙が認められた；動物０１１４は、３５週目に、ＭＭＤが２７週目よりも多く、ＩＮＬにおける嚢胞腔が周辺に伸びており、周辺で組織崩壊及び薄化がより多く、ＯＮＬ及びＩＬＭで光学的空隙が増加していた。また、３５週目に、動物０１１５は、周辺に伸びるＩＮＬのＭＭＤ腔が２７週目と比較して増加しており、ＯＮＬにおける腔がほとんどなかった。
【０２５９】
３mg/kg/日を投与した雄は、ｓｄＯＣＴ区間全体にわたって、周辺における最小／軽度の網膜組織崩壊があった（投与段階の２２、２７及び３５週目）。３mg/kg/日を投与した雌 ２匹（動物０１０９及び０１１０）は、２７週目に、２２週目よりもわずかに悪化したように思われ、ＯＮＬ浸潤／反射スポット及び内部セグメント／外部セグメント（ＩＳ／ＯＳ）脱落が多かった。３５週目に、３mg/kg/日を投与した雌 １匹（動物０１０９）は、ＩＳ／ＯＳが周辺中に存在しないより大きな領域を示した。
【０２６０】
コントロール及び１．５mg/kg/日を投与した動物は、正常な網膜様相を保持した。
【０２６１】
眼底自発蛍光（ＦＡＦ）画像により、コントロール品（ビヒクル）、１．５又は３mg/kg/日を投与したグループでは、経時的な変化がほとんどないことが示された。７．５／５mg/kg/日を投与した最も影響がある動物においてのみ、斑状の低蛍光が認められた。７．５／５mg/kg/日を投与したいくつかの動物では、これらの暗色点状スポットは、網膜変性が最も顕著であった遠周辺において、より大きな暗色斑点と一体化するように思われた。広範なＭＭＤを有する眼のＦＡＦ画像では、中心窩周囲において暗色環が認められた。このＦＡＦ所見は、ヒト患者のＭＭＤを記録した多くの眼科学術論文において報告されている。
【０２６２】
考察
この研究において認められた主要な効果は、網膜の完全性及び機能に対するＲＯ７０３４０６７の用量及び発生率関連効果であった。類似の薬理学的特性の別の試験品を用いた慢性サル毒性研究における網膜変化のその後の同定のために、投与段階の２０週目からＥＲＧ及びｓｄＯＣＴを行った。生存中の網膜変化をモニタリングするために、投与期間を１３週間から３９週間に延長した。ＲＯ７０３４０６７による処置中に、ｓｄＯＣＴにより構造異常と識別された動物と、ＥＲＧにより機能異常と識別された動物との間で明らかな関連が認められ、ｓｄＯＣＴによるより重度の異常はＥＲＧ波反応の低下と関連していた。この関連は、投与段階の２０／２２週目の初回調査時に存在しており、投与段階の以下の２つの調査において継続していた。用量 ３mg/kg/日グループにおけるわずかなｓｄＯＣＴ異常のみを有するいくつかの動物は、ＥＲＧによるいかなる機能的変化も示さなかった。加えて、７．５／５mg/kg/日を投与した動物 ３匹（動物００１４、０１１４及び０１１６）は、ｓｄＯＣＴ評定によれば最も影響がある動物であり、最大のＥＲＧ低下を有していた。
【０２６３】
図３は、ｓｄＯＣＴ、ＥＲＧ及び組織病理学的変化と、研究期間の終了時（及び組織病理学については２２週間の回復段階の終了時）の個々の動物曝露との曝露効果相関を示す。それぞれ雄及び雌で平均１８７０／２０６０ng・h/mL ＡＵＣ０−２４ｈ並びに個別に最大２３００ng・h/mL ＡＵＣ０−２４ｈに曝露した動物は、網膜に対する効果がなかった。網膜所見を伴う中用量による動物の最低曝露は、動物番号１１、１０９、１１１では４５４０／４５６０／４５６０ng・h/mL ＡＵＣ０−２４ｈであった。効果は、ｓｄＯＣＴ及び組織学により、用量 ３mg/kg/日、曝露 ４８８０／４８５０ng・h/mL（Ｍ／ＦでＡＵＣ０−２４ｈ）で見られた。ＥＲＧの低下及びＩＮＬにおける微小嚢胞腔は、高用量（５mg/kg/日）で曝露 ５８８０／６４７０ng・h/mL（Ｍ／ＦでＡＵＣ０−２４ｈ）の動物で主に見られた。研究中、曝露は、非常に低い経時的変動のみを示した。
【０２６４】
ある程度まで３mg/kg/日以上を投与した全ての動物のＯＣＴ所見は、ＩＳ／ＯＳの組織崩壊及び薄化並びに反射率の増加及び網膜周辺におけるＯＮＬの薄化を含んでいた。ＩＮＬにおける微小嚢胞腔の独特のパターンを特徴とする微小類嚢胞黄斑変性（ＭＭＤ）も認められた。ＩＬＭ及びＯＮＬでは、体液蓄積であると思われるものが認められた。これらの効果は、３mg/kg/日を投与した雌 １匹及び７．５／５mg/kg/日を投与した動物 ２匹／性別の網膜の中央から周辺部における変性の有害な組織病理学的所見と相関しており、光レセプター層のいくらかの喪失を伴う網膜の外顆粒層及び光レセプター層の多巣性組織崩壊；網膜色素上皮細胞の多巣性肥大；内顆粒層のいくらかの薄化、組織崩壊及び空胞化；並びに神経節細胞層の空胞化を特徴としていた。
【０２６５】
微小類嚢胞黄斑変性（ＭＭＤ）は、ＩＬＭ及びＯＮＬにおける液腔からの明確な所見である；微小類嚢胞黄斑浮腫として文献で頻繁に報告されているように、ＭＭＤは、通常、ＭＳ又は緑内障などの変性疾患に関連する。その病因はほとんど理解されていないが、通常の提示は、傍中心窩領域の微小嚢胞腔の独特のパターンであり、周辺ではさらに外側に伸びることもあるが常にＩＮＬの中にあり、常に細長く、腔に対して垂直の様相であるのに対して、ＯＮＬ又はＩＬＭにおける液腔の様相は様々であり、形状が不規則であり、縦よりも横長であり得る。遠周辺におけるＩＮＬの薄化性質により、腔の正確な形状を認識することが困難であった；いくつかは古典的ＭＭＤのように見え、黄斑周囲に認められる腔の突起であると思われたが、周辺のＩＮＬにおける他の腔はそうではなかった。
【０２６６】
網膜の周辺では、ＯＮＬのいくらかの薄化及び光レセプター／ＲＰＥ層のいくらかの組織崩壊は通常である。特にサルでは、それらのより小さな目及び曲率の増加に部分的に起因して、遠周辺に向かって画質は低下するので、その場所では、網膜層の完全性に関する確定的結論がより困難であった。しかしながら、グループ間で画像を比較したところ、ｓｄＯＣＴでは用量反応があるように思われ、より高用量グループは、ＩＳ／ＯＳにおけるより多くの組織崩壊及び薄化と、周辺のＯＮＬ及びＩＮＬ並びにＩＬＭにおけるより多くの液体蓄積と、黄斑周囲のＭＭＤ腔とを示した。また、３又は７．５／５mg/kg/日を投与した雌は、これらのグループの雄よりも影響があったと思われた。
【０２６７】
眼底自発蛍光（ＦＡＦ）イメージングにより、最も顕著な変性変化を有する動物の周辺においてのみ、斑点のある低蛍光及び高蛍光の領域が示された。ＦＡＦは、眼において自然に発生し得るか又は疾患プロセスの副産物として蓄積し得る蛍光を記録するために使用され、ＲＰＥの健康が重要な役割を果たす状況に関する有用な情報を提供し得る。高自発蛍光は、変性変化又は酸化傷害を示し得るリポフスチン蓄積の増加の兆候であり得る。低自発蛍光の領域は、ＲＰＥ細胞の欠落又は変化を示し得る。今回の研究におけるＦＡＦ変化により、周辺網膜の変性変化及び中心窩周囲のＭＭＤが示された。
【０２６８】
遠周辺に認められる高ＡＦシグナルの明るい斑点領域は、ＲＰＥの障害により損なわれた光レセプター細胞の変性におけるリポフスチン形成の増加に起因し得る。一般に、低ＡＦ（暗い）領域は、ＲＰＥ細胞の欠落又は変化を示し、最変性変化−光レセプターの喪失及びＯＮＬの組織崩壊−が認められた場所である。経時的に、病的ＲＰＥ細胞を示唆する高ＡＦ領域は低ＡＦの領域になり得るが、これは、ＲＰＥの喪失を示唆している。７．５／５mg/kg/日を投与した動物の遠周辺に認められる白色高ＡＦスポットのバンドは、細胞が機能障害を有し得る移行部とみなすことができた；しかしながら、回復の可能性は依然として存在する。回復段階の早期において遠周辺の移行部は依然として同じあったが、回復段階の２２週目までに減少するように思われたという事実は、不可逆的損傷の転換点がその領域に到達しておらず、経時的な回復が可能であったことを示していた可能性がある。ＯＣＴ所見及びＥＲＧ試験により、特に最終区間である回復段階の２２週目に、全ての動物において明らかな改善が示された。４匹のうち動物 １匹のみにおいて、ＥＲＧは正常範囲未満であった。
【０２６９】
ＦＡＦイメージングでは、特にサルにおいて、方向及び／又は眼球運動のわずかな変化に起因するＦＡＦ様相の微妙な変化があり得ることに留意すべきである。ソフトウェアは、最大１００フレームを平均化して最終的な画像を作成するが、その結果、いくらかの画像コントラスト又は陰影のばらつきが生じ得る。最も影響がある動物の遠周辺において収集された画像は、より顕著な変性変化と相関すると思われる変化を示した。結果の解釈における注意点は、各区間で全ての動物をイメージングしたわけではなく、ＦＡＦ様相、用量反応、及びこのような小さなサンプルサイズによる経時的な進行について確定的な発表を行うことが困難であったことである。
【０２７０】
ＯＣＴ所見は、周辺の光レセプター層の多巣性喪失を伴う網膜の外顆粒層及び光レセプター層の組織崩壊を特徴とする網膜変性の病理学的所見と相関していた。内顆粒層の薄化、組織崩壊及び空胞化の病理学的所見はＭＭＤのＯＣＴ所見と一致しており、神経節細胞層の空胞化は、ＩＬＭの光学的空隙（流体）の増加のＯＣＴ所見と一致していた。ＩＮＬにおけるＭＭＤのＯＣＴ所見は本来は局所的であり、組織病理学切片では腔（又は液胞）が組織病理学的に必ずしも認められず、回復段階中に網膜変性は可逆的ではなかったが、内顆粒層の空胞化はもはや存在しなかった。網膜変性は有害であると考えられた。
【０２７１】
結論
３９週間にわたるカニクイザルへの１．５、３又は７．５／５mg/kg/日ＲＯ７０３４０６７の投与は、７．５／５mg/kg/日を投与した動物の皮膚の臨床兆候に主に関連し、表皮過形成の非有害顕微鏡的所見と相関していた。加えて、３又は７．５／５mg/kg/日を投与した動物では、眼における用量関連発生率並びに重症度の機能的（ＥＲＧにより測定）及び形態学的（有害網膜変性）の変化が観察され、７．５／５mg/kg/日を投与した雌の胸腺（非有害）もまた、試験品関連組織病理学的変化の部位として識別された。
【０２７２】
この研究の条件下では、３又は７．５／５mg/kg/日を投与した動物の眼の所見、及び１．５mg/kg/日を投与した動物における試験品効果の欠如に基づいて、観察可能な有害効果がないレベル（ＮＯＡＥＬ）は１．５mg/kg/日であると考えられ、雄／雌に関する投与段階の３９週目の４１４／３９６ng/mL（Ｃｍａｘ）及び１８７０／２０６０ng・ｈｒ／mL（ＡＵＣ０−２４）の全身ＲＯ７０３４０６７曝露に対応する。
【０２７３】
サルの３９週間慢性毒性研究（２２週間の回復段階あり）では、４２６０ng・h/mL ＡＵＣ０−２４ｈの曝露において、ｓｄＯＣＴにより、周辺網膜変性（光レセプター喪失）、高反射ＲＰＥ、及びより多くの中心ＭＭＤ（液胞）が検出された（処置の２０週目以降から評価）。ＥＲＧデータの補完取得はＢ波の低下を示した。
【０２７４】
サルにおける３９週間慢性毒性研究からの網膜では、ｓｄＯＣＴにより検出された、サルの網膜内層における肥大ＲＰＥ及び微小嚢胞腔（液胞）を伴う光レセプター層における多巣性周辺網膜変性が認められた。これは、ＥＲＧにおける暗所視（桿体）Ｂ波の低下及び幾分影響が少ない明所視（錐体）Ｂ波に関連していた。２０週目（その分子を用いた慢性サル毒性研究の終了時にＲＯ６８８５２４７の網膜変化を報告した後）にｓｄＯＣＴ及びＥＲＧ評価を開始し、研究の３５週目まで継続した。組織病理学により、これらの所見を確認した。３９週間の処置による網膜所見のＮＯＥＬは、４８８０／４８５０ng.h/mL（Ｍ／ＦでＡＵＣ０−２４ｈ）の曝露でｓｄＯＣＴ及び組織学により効果が見られた１８７０／２０６０ng.h/mL（Ｍ／ＦでＡＵＣ０−２４ｈ）である。５８８０／６４７０ng.h/mL（Ｍ／ＦでＡＵＣ０−２４ｈ）の曝露による高用量の動物では、ＥＲＧの低下及びＩＮＬにおける微小嚢胞腔が見られた。
【０２７５】
実験的証拠は、網膜に対する効果が組織増殖に対する効果に直接関連しないが、網膜における高メラニン結合及び組織保持のin vitro証拠に関係することを示唆している。サル及び有色ラットＲＰＥ／網膜における高い組織蓄積及び組織保持にもかかわらず、有色ラットでは、処置の２６週間後にいかなる網膜効果の証拠も存在しなかったが、サルでは、この時点で網膜変化が明らかに見られた。したがって、メラニン結合ＲＯ７０３４０６７は毒性自体を付与せず、高レベルのメラニン結合ＲＯ７０３４０６７の存在以外の因子が、サルにおけるその網膜効果において役割を果たすはずである。in vitroのヒトＲＰＥ細胞では、リソソーム機能／オートファゴソーム蓄積の障害が見られた。
【０２７６】
組織病理学により網膜変性の全ての特徴を確認したところ、高曝露の動物 数匹ではＢ波の低下が顕著であったにもかかわらず、（一般的な行動及び眼科評価に基づいて）動物の視力を損なうように思われなかった。ＭＭＤ及びＥＲＧの低下は、サル研究の２２週間回復段階にほぼ完全に回復したが、周辺光レセプターの喪失及び高反射／肥大ＲＰＥは回復しなかった。ＲＯ７０３４０６７については、最大１５，１００ng.h/mL ＡＵＣ０−２４ｈの個体曝露を用いた２週間サル毒性研究では、網膜変化は見られなかった。ＲＯ７０３４０６７を用いた３９週間サル毒性研究の生存期間にわたって、低用量は依然として、評価の最終週（３５週目）まで、ｓｄＯＣＴ及びＥＲＧのいかなる試験品関連変化もなかった。この低用量 １．５mg/kg/日では、それぞれ雄／雌について、網膜はまた、３９週目に、全身ＲＯ７０３４０６７曝露 ４１４／３９６ng/mL（Ｃｍａｘ）及び１８７０／２０６０ng.h/mL（ＡＵＣ０−２４）に対応するいかなる組織病理学的変化もなかった。
【０２７７】
実施例４
他のスプライシング改変化合物により選択的にスプライシングされる遺伝子ＦｏｘＭ１は、細胞周期レギュレーターをコードする。ＦｏｘＭ１ａ（ＦＬ）及びＦｏｘＭ１ｂ／ｃ（Δ９）の特異的プライマーを用いたＲＴ−ｑＰＣＲを使用して、ＲＯ７０３４０６７処理後のＦｏｘＭ１の選択的スプライシングの改変を確認した（ＦＬについてはＥＣ５０６７±３２nM、Δ９  ｍＲＮＡについては１３９±４３nM；＿図４を参照のこと）。スプライシング変化が生物学的に重要なレベルである場合、ＦｏｘＭ１Ａアイソフォームの存在量の増加は、エクソン９を欠くＦｏｘＭ１アイソフォームの存在量の減少と共に、細胞周期進行を妨害及び阻害する能力を有する。したがって、ＲＯ７０３４０６７は、ＳＭＮ２及びＦｏｘＭ１スプライシング機構に対して同様に作用するが、タンパク質機能に関する結果は逆である。アポトーシスプロセスに関与する遺伝子であるＭＡＤＤもまた、二次スプライシングターゲットとして同定されている。
【０２７８】
ＲＯ７０３４０６７を用いた毒性学的研究（細胞周期分析及び動物組織のＲＮＡシーケンシング調査を含む）において同定されたＦｏｘＭ１及びＭＡＤＤの機能不全の機能的結果は、以下に記載されている。
【０２７９】
ＲＯ７０３４０６７を含む一連のＳＭＮ２スプライシング改変因子を用いて行われたin vitro研究では、異なる数の遺伝子転写産物が選択的スプライシングにより影響を受け得ることが示唆された(Palacino J. et al. Nat Chem Biol. 2015; 11:511-7.)。したがって、ＲＯ７０３４０６７による処置により引き起こされる毒性の機構的理解を高めるために、ＲＮＡシーケンシング分析とそれに続くスプライシングされた遺伝子の詳細な分析を、ＲＯ７０３０４６７についてラット及びサルにおいて行った２週間用量範囲所見反復投与毒性研究に統合した。２週間処置したラットの脾臓、十二指腸及び精巣において、遺伝子発現分析を実施した（ＭＡＤＤ遺伝子）。ＲＯ７０３４０６７処置動物の遺伝子発現分析により、最高用量 ７．５mg/kg/日の際に、ＭＡＤＤ遺伝子転写産物について、脾臓、十二指腸及び精巣におけるスプライシング応答が明らかになった。ＭＡＤＤ遺伝子産物はアポトーシスプロセスに干渉すると報告されているので、ＭＡＤＤ転写産物のスプライシングの変化は、同じ用量で観察されたＧＩ管におけるアポトーシスの観察結果と一致する。
【０２８０】
同様の調査を、ＲＯ７０３４０６７を用いてカニクイザルにおいて行った２週間用量範囲所見毒性研究に統合した。この目的のために、０．７５、１．５、３及び６mg/kg/日で処置した動物から脾臓、十二指腸及び精巣を分析した。ｍＲＮＡアイソフォーム特異的ｑＰＣＲアッセイを用いた分析により、最高用量の際に、ＭＡＤＤ遺伝子転写産物について、３つ全ての器官においてＲＯ７０３４０６７処置に対する二次薬理学的応答が明らかになった。脾臓では二次薬理学が検出されたので、ＲＮＡシーケンシングにより、トランスクリプトームワイドｍＲＮＡスプライシング又は発現変化について、この器官をさらに分析した。この分析により、上記スプライシング転写産物とは別に、ｍＲＮＡの大多数は、ＲＯ７０３４０６７による処置の際の選択的スプライシングの変化に関して、選択的スプライシングの変化又は用量依存的傾向を示さなかったことが明らかになった。さらに、経路発現変化の用量依存的傾向は検出されなかった。したがって、ＲＯ７０３４０６７媒介性選択的転写産物スプライシングのいくつかの変化は、in vitroデータ及び他のＳＭＮ２スプライシング改変因子のものと一致するが、この研究の条件下では、それらは、生物学的経路又はプロセスに基本的に影響を及ぼさないようである。
【０２８１】
実施例５
試験品及びコントロール品
【表７】
2020536090.tif 000009
ラパマイシン、Sigma-Aldrich# R8781、２．５mg/ml（２．７４mM）ストック溶液（ＤＭＳＯ中２mM）をＤＭＳＯで３．７５μMに希釈し、等分して−２０℃で保存した。
【０２８２】
人工多能性幹細胞の培養
標準培地としてmTeSR1(Stem Cell Technologies)中でヒトｉＰＳＣ(hIPS_Neo_Clone_1)を培養し、１０ng/mlアクチビンＡ及び１５ng/ml ＦＧＦ２を補充したＭＴ培地中でカニクイザルｉＰＳＣ(cips_54-1285_cFIB_Clone_8)を培養した。
【０２８３】
遺伝子発現プロファイリングでは、Accutase(Stem Cell Technologies)を用いて幹細胞を分離し、１０μM Rock阻害剤Y-27632(Sigma-Aldrich)を補充した各標準培地中、Matrigel(BD Biosciences)でコーティングした１２ウェルプレートにプレーティングした。十分なＲＮＡを得るために、処置の２４時間前に、サル幹細胞を細胞１５０００個/cm2で播種し、ヒト幹細胞を細胞４００００個/cm2で播種した。その後、０．６４nM〜約１０μMの濃度範囲で、新鮮予温培地中、試験品の系列希釈物（１：５）で幹細胞を２４時間処置した。実験を停止するために、ベータメルカプトエタノールを含むQiaGen溶解緩衝液ＲＬＴで細胞を溶解した。
【０２８４】
細胞周期の分析では、Accutase(Stem Cell Technologies)を用いてサル幹細胞を分離し、１０ng/mlアクチビンＡ、１５ng/ml ＦＧＦ２及び１０μM Rock阻害剤を補充したＭＴ培地中、Matrigel(BD Biosciences)でコーティングした６ウェルプレートに細胞１５０００個/cm2でプレーティングした。細胞を１日エクスパンションさせ、次いで、補充物質のＦＧＦ２及びアクチビンＡを含まないＭＴ培地中で７時間飢餓させることにより同調させた。フローサイトメトリーの前に、補充物質のＦＧＦ２及びアクチビンＡと、８０nM、４００nM及び２０００nMの試験品又は３０nMラパマイシン（ポジティブコントロールとして）とを含有する新鮮ＭＴ培地と共に細胞を２４時間インキュベーションして、細胞をＧ１期で停止させた。Accutase(Stem Cell Technologies)を用いてヒト幹細胞を分離し、１０μM Rock阻害剤Y-27632 (Sigma-Aldrich)を補充したmTeSR1培地中、Matrigel(BD Biosciences)でコーティングした６ウェルプレートに細胞４００００個/cm2でプレーティングした。培地を毎日交換して、細胞を３日間エクスパンションさせた。成長因子除去による飢餓中に、ヒトｉＰＳＣはそれらの特性を喪失するので、２００ng/mlノコダゾール(Sigma-Aldrich)で幹細胞を５時間同調させ、続いて、mTesR1培地で２回洗浄した。フローサイトメトリーの前に、８０nM、４００nM及び２０００nMの試験品又は３０nMラパマイシン（ポジティブコントロールとして）を含有する新鮮TesR1培地と共に細胞を２４時間インキュベーションして、細胞をＧ１期で停止させた。
【０２８５】
フローサイトメトリー及びＤＮＡ染色
細胞周期分析では、ヒトｉＰＳＣをＰＢＳで洗浄し、Accutase(Stem Cell Technologies)を用いて分離し、遠心分離により収集した。７ＡＡＤ／サポニン／ＲＮＡｓｅミックス（２５μg/ml ７ＡＡＤ  (#559925, BD)、５０μg/ml ＲＮａｓｅ及び０．０３％サポニンを溶解させたＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、５％ＦＢＳ、１０mM Ｈｅｐｅｓ））６００ulを用いて、細胞を３７℃で１時間染色した。カニクイザルｉＰＳＣをＰＢＳで洗浄し、Accutase(Stem Cell Technologies)を用いて分離し、遠心分離により収集した。培地１ml当たりVybrant Dye Cycle Violet Stain (#V35003, 1000x stock, Invitrogen)１ulを含有する（ＦＧＦ２及びアクチビンＡを含む）標準ＭＴ培地 ３００ulで、細胞を３７℃で３０分間染色した。加えて、透過処理なしで７ＡＡＤ（５０μg/ml ７ＡＡＤ）２ulを添加して、死細胞を標識した；細胞を３７℃で１０分間インキュベーションした。Canto IIサイトメーター(BD Biosciences)を使用してフローサイトメトリー分析を実施し、FlowJoソフトウェアを使用してデータを分析した。
【０２８６】
定量的リアルタイムＰＣＲ
カスタムプライマーと、RocheのＦＡＭ蛍光標識ユニバーサルプローブライブラリー（ＵＰＬ）プローブ、又は５’ＦＡＭ標識及び３’末端BlackHole Dark Quencher 1（ＢＨＱ１）を含有するMicrosynthのプローブとを用いて、ヒト及びカニクイザルｍＲＮＡ発現を測定した。プライマー及びＦＡＭ標識プローブの配列は、以下のように掲載されている：
【表８】
2020536090.tif 000010
【０２８７】
定量的リアルタイムＰＣＲでは、１２ウェルプレートで培養してRoche化合物で２４時間処置した細胞を、ベータメルカプトエタノールを含む１ウェル当たりQiaGen溶解緩衝液ＲＬＴ ５００ulで溶解させた。固相支持体上のＤＮａｓｅ処理と組み合わせてRNeasy Mini kitを用いて、全ＲＮＡを抽出した。Nanodrop吸収分光法及びAgilent Bioanalyzer 2100のマイクロ流体キャピラリーアレイ電気泳動プロファイルを使用することにより、ＲＮＡの完全性をコントロールした。
【０２８８】
オリゴｄＴプライマーを用いて全ＲＮＡ ３００ng〜８００ngを逆転写し、製造業者の推奨プロトコールにしたがってTranscriptor First Strand cDNA Synthesis Kit (Roche Applied Science # 04379012001)を使用して、最終濃度 １０ng/uLでＭＳ２  ＲＮＡをスパイクした。1x LightCycler 480 Probes Master、０．４μMフォワードプライマー及びリバースプライマー並びに０．２μM ＦＡＭ標識加水分解プローブを含有する混合物 ２０μl中、インプットとして全ＲＮＡ由来ｃＤＮＡ ６７．５ngを使用してLightCycler 480 qPCRマシンにより、定量的ＰＣＲを実施した。温度プログラムは、９５℃で１０分間のプレインキュベーションと、それに続く５０サイクルの増幅（９５℃で１０秒間、６０℃で３０秒間、７２℃で５秒間）から構成されていた。ｃＤＮＡテンプレートの非存在下でネガティブコントロール反応を行って、マスターミックスにおけるｃＤＮＡ混入の非存在を確認した。各サンプル−ｍＲＮＡ組み合わせについて、Ｃｔ（サイクル閾値）値の測定を実施した。２−ΔΔＣｔ法(Livak KJ et al. Method. Methods. 2001; 25(4):402-8.)を使用して、データは、未処置コントロールと比べた、内因性参照遺伝子に対して正規化した遺伝子発現の変化倍率として示されている。個々のΔＣｔ値を求めるために、各サンプルの各ターゲットｍＲＮＡのＣｔ値を、ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ）の内因性参照ｍＲＮＡのＣｔ値に対して正規化した。各処置グループの各ΔＣｔ値からビヒクルコントロールグループのΔＣｔ値を差し引くことにより、ΔＣｔ値を計算した。得られた発現比（２−ΔΔＣｔ）は、ビヒクルコントロールと対比した処置関連ｍＲＮＡ発現変化を反映していた。ＩＣ５０は、最大（上）応答と最大阻害（下）応答との間の中間で応答を引き起こす阻害剤の濃度として定義される。ＩＣ５０を求めるためのモデルは、用量反応曲線が−１．０のヒルスロープ（又はスロープファクター）に等しい標準スロープを有すると想定する。モデル方程式：Ｙ＝下＋（上−下）／（１＋１０＾（（Ｘ−ＬｏｇＩＣ５０）））；Ｙは応答データであり、Ｘはｌｏｇ１０濃度（μM単位）である。
【０２８９】
結果
ＦＯＸＭ１  ｍＲＮＡ変異体（ＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃ）の発現に対する濃度−効果関係について、ＲＯ７０３４０６７をin vitroで試験した。０．６４nM〜約１０μMの試験品で２４時間処置したヒト及びサルｉＰＳＣにおいて、ＲＴ−ｑＰＣＲにより、ＧＡＰＤＨと比べてＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃ転写産物変異体の発現レベルを測定した。ＲＯ７０３４０６７による処置は、ヒト及びサル細胞においてＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃ転写産物変異体の濃度依存的ダウンレギュレーションをもたらした（表１及び表２）。ＲＯ７０３４０６７がＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃの発現レベルに影響を及ぼしていたヒト及びサル細胞では、ＩＣ５０値は、それぞれヒト及びサル細胞において１１４nM及び１５５nMであった（図５）。
【０２９０】
ｉＰＳＣの細胞周期に対するその濃度依存的効果について、ＲＯ７０３４０６７をin vitroで試験した。サルｉＰＳＣでは、化合物ＲＯ７０３４０６７は、Ｇ２期の細胞周期停止を濃度依存的に誘導した。ヒトｉＰＳＣでは、ＲＯ７０３４０６７は、Ｓ期の細胞周期停止を濃度依存的に誘導した（表３及び表４）。３０nMラパマイシンによる処置は、予想通り、Ｇ１期のヒト及びサル細胞の停止をもたらした(Metcalfe et al. Oncogene 15, 1635-1642)。
【０２９１】
【表９】
2020536090.tif 000011
ＧＡＰＤＨに対してリアルタイムＰＣＲシグナルを正規化し、各処置サンプルについて、ヒトｉＰＳＣのコントロールサンプルに対してｍＲＮＡ発現比（２−ΔΔＣｔ）を計算した。
【０２９２】
【表１０】
2020536090.tif 000012
ＧＡＰＤＨに対してリアルタイムＰＣＲシグナルを正規化し、各処置サンプルについて、カニクイザルｉＰＳＣのコントロールサンプルに対してｍＲＮＡ発現比（２−ΔΔＣｔ）を計算した。
【０２９３】
【表１１】
2020536090.tif 000013
【表１２】
2020536090.tif 000014
【０２９４】
結論
ＦＯＸＭ１マーカーｍＲＮＡ発現及び細胞周期に対するＲＯ７０３４０６７スプライシング改変因子の効果を評価するために、ヒト及びカニクイザル由来の人工多能性幹細胞を用いて、濃度効果関係のin vitro試験を行った。０．６４nM〜約１０μMのＲＯ７０３４０６７で２４時間処置すると、化合物は、ＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃ転写産物変異体の濃度依存的ダウンレギュレーションを示した。濃度反応曲線から求めたＩＣ５０値は、ヒト及びカニクイザル細胞間で同程度であったが、これは、薬理学的反応における高い種類似性を実証している。ＲＯ７０３４０６７について、カニクイザル細胞において有糸分裂停止を誘導する濃度依存的効果が検出された。ヒトＩＰＳＣの細胞周期分析により、ＲＯ７０３４０６７による細胞周期を変化させる濃度依存的効果が明らかになった。ヒト及びカニクイザル細胞の両方において、ＦＯＸＭ１Ｂ／Ｃのダウンレギュレーションは細胞周期関連所見に関連するようであるが、これは、細胞周期移行の媒介におけるＦＯＸＭ１の重要な役割と一致する。このダウンレギュレーションは顕著でなければならず、約８０％以上の発現の減少は細胞周期の有意な変化に関連する。
【図１ａ】
2020536090.tif 000015
【図１ｂ】
2020536090.tif 000016
【図２ａ】
2020536090.tif 000017
【図２ｂ】
2020536090.tif 000018
【図３】
2020536090.tif 000019
【図４】
2020536090.tif 000020
【図５】
2020536090.tif 000021
【図６】
2020536090.tif 000022
【図７】
2020536090.tif 000023
【図８】
2020536090.tif 000024
【配列表】
2020536090000001.app
【国際調査報告】
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