(57)【要約】  マクロファージ刺激タンパク質受容体（又はＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ））に特異的に結合するモノクローナル抗体が開示されている。キメラ抗原受容体、二重特異性抗体、二価抗体、及びそのｂｉＴＥだけでなく、医薬組成物、並びに、がん及び線維症の治療のための上記の抗体の使用、並びに、上記の抗体を使用するがん患者の状態を評価するｅｘ  ｖｉｖｏでの方法も提供されている。特に、ヒト異種移植マウスモデルにおける腫瘍成長を阻害することにおいて良好な治療効果、及び、ヒト異種移植マウス腫瘍イメージングモデルにおける感受性を実証する２つのモノクローナル抗体である７Ｇ８及び６Ｄ４が提供されている。
2020500834.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含む抗原結合領域であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、及び配列番号１３５、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、及び配列番号１３６、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、及び配列番号１３７、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、及び配列番号１４４、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号２２０、配列番号１２３、及び配列番号１４５、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択される、
抗原結合領域。
【請求項２】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む抗原特異的結合領域であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、配列番号１３５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ１を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、配列番号１３６、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ２を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、配列番号１３７、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ３を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、配列番号１４４、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ１を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、配列番号１０９、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ２を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号１１０、配列番号１２３、配列番号１４５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ３を含む群から選択される、
抗原特異的結合領域。
【請求項３】
ＣＤＲＨ１は配列番号１であり、ＣＤＲＨ２は配列番号２であり、さらにＣＤＲＨ３は配列番号３である、請求項１又は２に記載の抗原特異的結合領域、又は、１つ又は複数の修飾された配列１、２及び３が利用され、前記１つ又は複数の修飾は、１つ又は２つのアミノ酸の置換、除去又は付加から独立して選択される、抗原特異的結合領域。
【請求項４】
前記重鎖ＣＤＲは、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号２であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号３であること、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号２７であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号２８であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号２９であること、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号４５であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号４６であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号４７であること、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号５６であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号５７であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号５８であること、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号７３であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号７４であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号７５であること、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号８９であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号９０であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号９１であること、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１００であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号１０１であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号１０２であること、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１３５であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号１３６であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号１３７であること、
を含む群から選択される、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項５】
前記軽鎖ＣＤＲは、
（ａ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号３６であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号３８であること、
（ｃ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号６５であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号６６であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号６７であること、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号８１であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号８２であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号８３であること、
（ｆ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１０８であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号１０９であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号１１０であること、
（ｇ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１４４であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号１４５であること、
を含む群から選択される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項６】
可変重鎖領域が、
（ｉ）配列番号８、
（ｉｉ）配列番号３４、
（ｉｉｉ）配列番号５１、
（ｉｖ）配列番号６３、
（ｖ）配列番号７９、
（ｖｉ）配列番号９５、
（ｖｉｉ）配列番号１０６、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１４２、
を含む群から選択された配列を有する、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項７】
可変軽鎖領域が、
（ｉ）配列番号２５、
（ｉｉ）配列番号４３、
（ｉｉｉ）配列番号５４、
（ｉｖ）配列番号７１、
（ｖ）配列番号８７、
（ｖｉ）配列番号９８、
（ｖｉｉ）配列番号１１４、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１５０、
を含む群から選択された配列を有する、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域を含むキメラ抗原受容体。
【請求項９】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域を含む単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体の分子は、多特異性抗体、全長抗体、又は抗体結合断片から選択される、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記多特異性抗体は、二重特異性抗体である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞誘導体である、請求項１０又は１１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記二重特異性抗体は、第１ＲＯＮ（マクロファージ刺激タンパク質受容体又はＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ））エピトープに特異的に結合する第１結合領域、及び、前記第１ＲＯＮエピトープとは異なる第２ＲＯＮエピトープに特異的に結合する第２結合領域を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
第１ＲＯＮ結合領域が、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む第２ＲＯＮ結合領域を含む、請求項９乃至１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体は、エフェクター機能を含む、請求項９乃至１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、ペイロードに結合される、請求項９乃至１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
前記ペイロードは、毒素、ポリマー、生物学的に活性なタンパク質、核酸及びその断片、放射性核種キレート化金属、ナノ粒子及びレポーター基を含む群から選択される、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記毒素は、アウリスタチン、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、マイタンシノイド、カリチアマイシン、ドラスタチン、マイタンシン、α−アマニチン、及びチューブリシンを含む群から選択される、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体と、賦形剤、希釈剤及び／又は担体とを含む医薬組成物。
【請求項２１】
請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の少なくとも２つの抗原特異的抗体を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも２つの抗原特異的抗体のうちの１つが、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含み、任意的に、前記少なくとも２つの抗体のうち第２抗体が、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
治療において使用するための、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
患者におけるがん又は線維症を予防又は治療する方法であって、予防又は治療の必要がある患者に治療有効量の、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２５】
前記患者は患者集団であり、前記集団を構成する患者はＲＯＮ陽性腫瘍を有することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者は、ＲＯＮ陽性及びＣ−ＭＥＴ陽性腫瘍を有する、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
治療前にＲＯＮ陽性腫瘍を有すると前記患者を同定するステップを含む、請求項２４乃至２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
がん又は線維症の治療のための医薬の製造における、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２９】
配列番号８、配列番号３４、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７９、配列番号９５、配列番号１０６、配列番号１２１、配列番号１３０、配列番号１３３又は１４２の可変の重鎖領域（ＶＨ）を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体。
【請求項３０】
配列番号８と２５、配列番号３４と４３、配列番号５１と５４、配列番号６３と７１、配列番号７９と８７、配列番号９５と９８、配列番号１０６と１１４、配列番号１２１と１３０、又は配列番号１４２と１５０から選択される可変の重鎖領域／可変の軽鎖領域（ＶＨ／ＶＬ）の対を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体。
【請求項３１】
がんの状態を評価するｅｘ  ｖｉｖｏでの方法であって、
（ａ）前記がんの腫瘍を含むことが知られている患者又は該患者の特定の部位を走査するステップであり、前記患者は、第１の時点で標識された形態の抗体を投与されており、前記抗体は、請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体である、ステップ、
（ｂ）１つ又は複数のさらなる時点で（ａ）を繰り返し、さらに、２つ以上の時点からの結果を比較して、前記がんの状態を評価するステップ、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本願は、２０１６年８月２６日に出願したシンガポール特許出願第１０２０１６０７１４７Ｐ号、２０１７年１月１７日に出願したシンガポール特許出願第１０２０１７００３９３Ｐ号、２０１７年１月２０日に出願したシンガポール特許出願第１０２０１７００５２１Ｖ号、及び２０１７年５月１９日に出願したシンガポール特許出願第１０２０１７０３２３４Ｕ号に基づく優先権を主張するものであり、いかなる目的に対しても、参照により全内容を本出願において援用する。
【０００２】
本発明は、医療目的のための製剤又は製剤の特定の治療活性に関する。特に、本発明は、ＲＯＮ（すなわち、マクロファージ刺激タンパク質受容体又はＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ））に結合する抗体及び他の物質、並びに、疾患の治療のために上記の抗体又は他の物質を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
がん治療は、特にＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）等の免疫療法薬が利用可能となり、最近非常に進歩している。しかし、効果的な治療が利用可能でないがんが多数ある。さらに、治療は利用可能であるが治療中に抵抗性が発達する他のがんがある。免疫療法の状況では、有効性を改善するための１つのアプローチは、抗体薬物複合体を調製することである。他の状況では、化学療法の併用が、腫瘍抵抗性に試みる及び取り組むために利用されてきた。これらのアプローチは、限られた成功しかもたらさなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】ＷＯ２０１３／０４０５５７
【特許文献２】ＷＯ９２／２２８５３
【特許文献３】ＷＯ０５／１１３６０５
【特許文献４】ＷＯ２００５／００３１６９
【特許文献５】ＷＯ２００５／００３１７０
【特許文献６】ＷＯ２００５／００３１７１
【特許文献７】ＷＯ９２／０２５５１
【特許文献８】ＷＯ２００４／０５１２６８
【特許文献９】ＷＯ２００４／１０６３７７
【特許文献１０】ＵＳ５，５８５，０８９
【特許文献１１】ＷＯ９１／０９９６７
【特許文献１２】ＷＯ９３／０６２３１
【特許文献１３】ＷＯ９２／２２５８３
【特許文献１４】ＷＯ８９／００１９５
【特許文献１５】ＷＯ８９／０１４７６
【特許文献１６】ＷＯ０３０３１５８１
【特許文献１７】ＷＯ８６／０１５３３
【特許文献１８】ＥＰ０３９２７４５
【特許文献１９】Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．４，７４１，９００
【特許文献２０】ＷＯ０５／１１７９８４
【特許文献２１】ＵＳ５，２１９，９９６
【特許文献２２】ＵＳ５，６６７，４２５
【特許文献２３】ＷＯ９８／２５９７１
【特許文献２４】ＷＯ２００８／０３８０２４
【特許文献２５】ＥＰ０９４８５４４
【特許文献２６】ＥＰ１０９００３７
【特許文献２７】ＷＯ９８／２０７３４
【特許文献２８】ＷＯ２００５／０１６３４６
【特許文献２９】ＷＯ２０１０／０３８０８６
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｙａｏ，Ｈａｎｇ−Ｐｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．“ＭＳＰ−ＲＯＮ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．”Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｃａｎｃｅｒ  １３  ７（２０１３）：４６６−８１
【非特許文献２】Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１２６−１１３６；Ａｄａｉｒ  ａｎｄ  Ｌａｗｓｏｎ，２００５，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ  ２（３），２０９−２１７
【非特許文献３】Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２５４，３９２−４０３，１９９５
【非特許文献４】Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０，７７９−７８３，１９９２
【非特許文献５】Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２５０，３５９−３６８，１９９６
【非特許文献６】Ｐａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，８，７２４−７３３，１９９７
【非特許文献７】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２５６，７７−８８，１９９６
【非特許文献８】Ｃｒａｍｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ，３９１，２８８−２９１，１９９８
【非特許文献９】Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  （ｅｄ．），Ｖｏｌ  ４，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ，１９８６
【非特許文献１０】Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７
【非特許文献１１】Ｋｏｚｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，４：７２
【非特許文献１２】Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ７７−９６，Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８５
【非特許文献１３】Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３（１５）：７８４３−７８４８ｌ
【非特許文献１４】Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６，２５−３４
【非特許文献１５】Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６，５３５−５３９，１９９８
【非特許文献１６】Ｒｅｔｔｅｒ  Ｉ，Ａｌｔｈａｕｓ  ＨＨ，Ｍｕｎｃｈ  Ｒ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｗ：ＶＢＡＳＥ２，ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  Ｖ  ｇｅｎｅ  ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００５  Ｊａｎ  １；３３（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ６７１−４
【非特許文献１７】Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１−９１７（１９８７）
【非特許文献１８】Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，ｐｐ．６２３−５３
【非特許文献１９】Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８
【非特許文献２０】Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ  １９９９，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８３，６７−１２３
【非特許文献２１】Ｃｈａｐｍａｎ，２００２，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，５４，５３１−５４５
【非特許文献２２】“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，１９９２，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ（ｅｄ），Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ
【非特許文献２３】“Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，１９９７，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｓ．  Ｚａｌｉｐｓｋｙ（ｅｄｓ），Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ
【非特許文献２４】“Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１９９８，Ｍ．Ａｓｌａｍ  ａｎｄ  Ａ．Ｄｅｎｔ，Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ
【非特許文献２５】Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．２００２，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００２，５４：５３１−５４５
【非特許文献２６】Ｄｏｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ  ２００９（Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０：１２２９−１２３９（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、現在、代替のがん療法に対するアンメットメディカルニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含む抗原特異的結合領域が提供され、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、及び配列番号１３５、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、及び配列番号１３６、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、及び配列番号１３７、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、及び配列番号１４４、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号２２０、配列番号１２３、及び配列番号１４５、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択される。
【０００８】
別の態様では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む抗原特異的結合領域が提供され、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、配列番号１３５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ１を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、配列番号１３６、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ２を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、配列番号１３７、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ３を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、配列番号１４４、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ１を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、配列番号１０９、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ２を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号１１０、配列番号１２３、配列番号１４５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ３を含む群から選択される。
【０００９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号１であるＣＤＲＨ１、配列番号２であるＣＤＲＨ２、及び配列番号３であるＣＤＲＨ３を有してもよく、又は、１つ又は複数の修飾された配列１、２及び３が利用され、この１つ又は複数の修飾は、１つ又は２つのアミノ酸の置換、除去又は付加から独立して選択されるＲＯＮ特異的結合領域を有してもよい。
【００１０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、
（ｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号１であり、ＣＤＲＨ２が配列番号２であり、ＣＤＲＨ３が配列番号３であること、
（ｉｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号２７であり、ＣＤＲＨ２が配列番号２８であり、ＣＤＲＨ３が配列番号２９であること、
（ｉｉｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号４５であり、ＣＤＲＨ２が配列番号４６であり、ＣＤＲＨ３が配列番号４７であること、
（ｉｖ）ＣＤＲＨ１が配列番号５６であり、ＣＤＲＨ２が配列番号５７であり、ＣＤＲＨ３が配列番号５８であること、
（ｖ）ＣＤＲＨ１が配列番号７３であり、ＣＤＲＨ２が配列番号７４であり、ＣＤＲＨ３が配列番号７５であること、
（ｖｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号８９であり、ＣＤＲＨ２が配列番号９０であり、ＣＤＲＨ３が配列番号９１であること、
（ｖｉｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号１００であり、ＣＤＲＨ２が配列番号１０１であり、ＣＤＲＨ３が配列番号１０２であること、
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲＨ１が配列番号１３５であり、ＣＤＲＨ２が配列番号１３６であり、ＣＤＲＨ３が配列番号１３７であること、
を含む群から選択される重鎖ＣＤＲを有してもよい。
【００１１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、
（ｉ）ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｉｉ）ＣＤＲＬ１が配列番号３６であり、ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、ＣＤＲＬ３が配列番号３８であること、
（ｉｉｉ）ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｉｖ）ＣＤＲＬ１が配列番号６５であり、ＣＤＲＬ２が配列番号６６であり、ＣＤＲＬ３が配列番号６７であること、
（ｖ）ＣＤＲＬ１が配列番号８１であり、ＣＤＲＬ２が配列番号８２であり、ＣＤＲＬ３が配列番号８３であること、
（ｖｉ）ＣＤＲＬ１が配列番号１０８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１０９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号１１０であること、
（ｖｉｉ）ＣＤＲＬ１が配列番号１４４であり、ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、ＣＤＲＬ３が配列番号１４５であること、
を含む群から選択される軽鎖ＣＤＲを有してもよい。
【００１２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、可変重鎖領域が、
（ｉ）配列番号８、
（ｉｉ）配列番号３４、
（ｉｉｉ）配列番号５１、
（ｉｖ）配列番号６３、
（ｖ）配列番号７９、
（ｖｉ）配列番号９５、
（ｖｉｉ）配列番号１０６、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１４２、
を含む群から選択された配列を有する。
【００１３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、可変軽鎖領域が、
（ｉ）配列番号２５、
（ｉｉ）配列番号４３、
（ｉｉｉ）配列番号５４、
（ｉｖ）配列番号７１、
（ｖ）配列番号８７、
（ｖｉ）配列番号９８、
（ｖｉｉ）配列番号１１４、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１５０、
を含む群から選択された配列を有する。
【００１４】
別の態様では、本明細書において記載される結合領域を含むキメラ抗原受容体が提供される。
【００１５】
別の態様では、本明細書において記載される結合領域を含む単離された抗体又は抗体が提供される。
【００１６】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体、全長抗体、及び抗体結合断片を含む群から選択されてもよい。
【００１７】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体が二重特異性抗体である。
【００１８】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、二重特異性抗体が二重特異性Ｔ細胞誘導体（Ｂｉｔｅ（登録商標））である。
【００１９】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、二重特異性抗体が、第１ＲＯＮエピトープに特異的に結合する第１結合領域、及び、第１ＲＯＮエピトープとは異なる第２ＲＯＮエピトープに特異的に結合する第２結合領域を含む。
【００２０】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、第１ＲＯＮ結合領域が、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む。
【００２１】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む第２ＲＯＮ結合領域を含む。
【００２２】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、抗体分子がエフェクター機能を含む。
【００２３】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体はペイロードに結合される。一部の例では、ペイロードは、毒素、ポリマー、生物学的に活性なタンパク質、核酸及びその断片、放射性核種キレート化金属、ナノ粒子及びレポーター基を含む群から選択される。
【００２４】
一部の例では、毒素は、アウリスタチン、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、マイタンシノイド、カリチアマイシン（ｃａｌｏｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ドラスタチン、マイタンシン、α−アマニチン、及びチューブリシンを含む群から選択される。
【００２５】
さらに別の態様では、本明細書において記載される抗体と、賦形剤、希釈剤及び／又は担体とを含む医薬組成物が提供される。
【００２６】
一部の例では、本明細書において記載される医薬組成物は、本明細書において記載される少なくとも２つの抗原特異的抗体を含む。一部の例では、少なくとも２つの抗原特異的抗体のうちの１つが、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含み、任意的に、少なくとも２つの抗体のうち第２抗体が、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む。
【００２７】
さらに別の態様では、療法又は治療において使用するための、本明細書において記載される抗原結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物が提供される。
【００２８】
さらに別の態様では、患者におけるがん又は線維症を予防又は治療する方法が提供され、当該方法は、予防又は治療の必要がある患者に治療有効量の、本明細書において記載される抗原結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物を投与するステップを含む。
【００２９】
一部の例では、患者は患者集団であり、この集団を構成する患者はＲＯＮ陽性腫瘍を有することを特徴とする。一部の例では、上記の集団を構成する患者は、ＲＯＮ陽性及びＣ−ＭＥＴ陽性腫瘍を有する。
【００３０】
一部の例では、本明細書において記載される方法は、治療前にＲＯＮ陽性腫瘍を有すると患者を同定するステップを含む。
【００３１】
さらに別の態様では、がん又は線維症の治療のための医薬の製造における、本明細書において記載される抗原結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物の使用が提供される。
【００３２】
さらに別の態様では、配列番号８、配列番号３４、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７９、配列番号９５、配列番号１０６、配列番号１２１、配列番号１３０、配列番号１３３又は１４２の可変の重鎖領域（ＶＨ）を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックする（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋ）か又は該エピトープに結合する抗体が提供される。
【００３３】
さらに別の態様では、配列番号８と２５、配列番号３４と４３、配列番号５１と５４、配列番号６３と７１、配列番号７９と８７、配列番号９５と９８、配列番号１０６と１１４、配列番号１２１と１３０、又は配列番号１４２と１５０を含む群から選択される可変の重鎖領域／可変の軽鎖領域（ＶＨ／ＶＬ）の対を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体が提供される。
【００３４】
さらに別の態様では、がんの状態を評価するｅｘ  ｖｉｖｏでの方法が提供され；当該方法は、（ａ）がんの腫瘍を含むことが知られている患者又は該患者の特定の部位を走査するステップであり、患者は、第１の時点で標識された形態の抗体を投与されており、抗体は、本明細書において記載されるものである、ステップ、（ｂ）１つ又は複数のさらなる時点で（ａ）を繰り返し、さらに、２つ以上の時点からの結果を比較して、がんの状態を評価するステップ、を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１Ａ】被覆された組換え切断型ＲＯＮタンパク質並びにＧＳＴタンパク質に対する例証的な抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４及び７Ｇ８クローン等）のＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイの結果を例示した棒グラフを示す図であり、タンパク質を０．１μｇ／ｍｌで被覆し、さらに、抗体の上澄みを試験し、吸光度を６５０ｎｍにて観察した。
【図１Ｂ】被覆された組換え切断型ＲＯＮタンパク質（ＧＳＴ−ＲＯＮ１及びＧＳＴ−ＲＯＮ３）並びにＧＳＴタンパク質に対する例証的な抗ＲＯＮ抗体のＥＬＩＳＡに基づく結合アッセイの結果を例示した棒グラフを示す図であり、タンパク質を０．１μｇ／ｍｌで被覆し、さらに、抗体の上澄みを試験し、吸光度を６５０ｎｍにて観察した。従って、図１は、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体が、ＧＳＴタンパク質に対する不要な結合（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ）は最小でありながら、ＲＯＮ−ＧＳＴに結合することを示している。
【図２】ＰＦＡ固定ＨＣＴ１１６細胞（ヒト結腸直腸がん）に対する例証的な抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体）の免疫蛍光染色を示した図であり、核の可視化のために細胞をＤＡＰＩで染色し、４８８に対する抗マウス複合体を二次マウス抗体として使用した。従って、図２は、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体が、切断型ＲＯＮタンパク質に結合してヒト結腸直腸細胞（例えばＨＣＴ１１６細胞等）を染色することができることを示している。加えて、抗ＲＯＮ抗体は、（ＴＫＯと呼ばれる）マウス胚性線維芽細胞等のＲＯＮ陰性細胞株を染色しないため、染色はＲＯＮに特異的である。
【図３】例証的な抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４抗体及び７Ｇ４抗体）を使用した異種移植マウス腫瘍組織の免疫組織化学染色を示した図であり、マウス由来の血清に組換えＲＯＮタンパク質を注入し、陽性対照として使用した。従って、図３は、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体を免疫組織化学において使用することができるということを示している。
【図４】ＲＯＮタンパク質領域の概略図であり、Ａは、６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体が結合するＲＯＮタンパク質領域を示し；Ｂは、ＲＯＮタンパク質の様々なアイソフォームを示している。図４は、非特許文献１から抽出した。
【図５】トリプルノックアウト（ＴＫＯ）細胞（左）及びヒト乳がん細胞（Ｔ４７Ｄ細胞）（右）に対する例証的な抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体）のフローサイトメトリーデータを示した図である。図５は、本明細書において記載される例証的な抗ＲＯＮ抗体がトリプルノックアウト細胞に結合しない（すなわち陰性対照である）ことを示している。対照的に、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体は、ヒト乳がん細胞に結合する。従って、図５は、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体ががん細胞に特異的であることを示している。
【図６】ＩｎｃｕＣｙｔｅ生細胞解析システム（Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を介した、対照ＩｇＧ、及び、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体（例えば６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体等）の存在下で７日間モニターした、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの完全培地中のマウスハイブリドーマ細胞株（ＨＴ２９細胞）の細胞増殖を例示した曲線を示した図である。図６は、本明細書において記載される抗体による細胞増殖の用量依存的（１．２５μｇ／ｍｌから１２．５μｇ／ｍｌ）抑制を示している。
【図７】０及び９０時間でのひっかき傷アッセイにおける対照ＩｇＧ、本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４抗体又は７Ｇ８抗体）の存在下でのマウスハイブリドーマ（ＨＴ２９細胞）のひっかき傷阻害アッセイの結果の明瞭な顕微鏡画像を示した図である。図７は、７Ｇ８抗体がＨＴ２９細胞遊走の有意な阻害をもたらすことを示している。ＲＯＮ過剰発現が腫瘍において制御されない細胞遊走をもたらすため、がん細胞の遊走の阻害は望ましい質である。
【図８】ひっかき傷アッセイにおける、対照ＩｇＧ及び本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４抗体又は７Ｇ８抗体）の存在下でのマウスハイブリドーマ（ＨＴ２９細胞）の創傷治癒の阻害の割合の棒グラフを示した図である。割合を、Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアによって推定される残りの創傷治癒面積に基づき計算した。図８は、７Ｇ８抗体がＨＴ２９細胞遊走の有意な阻害をもたらすことを示している。
【図９】１０ｎｇ／ｍｌのＭＳＰの存在下及び非存在下で、例証的なＲＯＮ中和抗体（７Ｇ８若しくは６Ｄ４）又は対照ＩｇＧで処理したＨＴ２９細胞の相対的なタンパク質レベルを示す免疫ブロットを示した図である。細胞を、処理の４８時間後に回収した。図９は、抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４及び７Ｇ８）による処理が、検出されるＲＯＮの量の減少、及び、ＲＯＮシグナル伝達の下流のより低いレベルのリン酸化された標的をもたらすことを示している。従って、図９は、抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４及び７Ｇ８）による処理が、ＲＯＮの分解、及び、その下流のシグナル伝達経路（Ｒａｓ／Ｒａｆ経路及びＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路）の抑止をもたらし得ることを示している。
【図１０】抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ（陽性対照ＩｇＧ  Ｗ６／３２はＡＤＣＣ機能を有する）においてユーロピウム−ＴＤＡ（ＴＤＡ、すなわち２，２′：６′，２′′−テルピリジン−６，６′′−ジカルボン酸）によって測定されたヒト乳がん細胞株（Ｔ４７Ｄ細胞）における特異的細胞溶解の割合を示した図である。抗体をマウス脾細胞（エフェクター細胞）及びＴ４７Ｄ細胞（標的）と共に、１５０：１のエフェクター：標的の比で３７℃にて一晩共インキュベートした後、ユーロピウム−ＴＤＡ放出アッセイにおいて溶解の割合を検出した。従って、図１０は、本明細書において記載される抗体がエフェクター細胞の存在下で乳がん細胞株において細胞溶解を誘発することを示している。
【図１１】ＨＣＴ１１６生細胞の抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４及び７Ｇ８）抗体の例証的な免疫蛍光染色を示した図である。２つの抗体をヒト大腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６細胞）と共に、血清を用いて３７℃で１時間又は４℃で一晩インキュベートした。抗体結合を、二次抗マウスＦＩＴＣ抗体を使用して検出した。従って、図１１は、６Ｄ４も７Ｇ８も生細胞に形質膜陥入され、表面にＲＯＮを発現するがん生細胞の効率的な標的化を可能にすることを示している。
【図１２】７Ｇ８抗体と共に抗マウスＩｇＧ−ＤＭ１（２°ＡＤＣ）を添加して２時間後の細胞死を示すＩｎｃｕＣｙｔｅ画像を示した図である。従って、図１２は、７Ｇ８抗体がヒト大腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６細胞）において細胞死を引き起こし得るということを示している。
【図１３Ａ】ＩｎｃｕＣｙｔｅによる画像モニタリング下で、２°ＡＤＣ（抗体薬物結合体）と共に抗ＲＯＮ抗体のパネルと７２時間インキュベートして細胞増殖を測定する場合の、ヒト大腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６細胞）及びＰ５３、Ｐ２１及びＭＤＭ２トリプルノックアウトマウス胚線維芽細胞（ＴＫＯ細胞）の細胞増殖の割合の棒グラフを示した図である。従って、図１３Ａは、本明細書において記載される抗体が、抗体薬物結合体と結合される場合に、ＲＯＮ陽性細胞においてがん細胞増殖を遅延させるが、ＲＯＮ陰性細胞株においては遅延させないということを示している。
【図１３Ｂ】２°ＡＤＣ（抗体薬物結合体）と共に抗ＲＯＮ抗体のパネルと７２時間インキュベートした場合のヒト大腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６細胞）の細胞生存、及び、Ｃｅｌｌｔｉｔｒｅ  Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ細胞生存アッセイを使用して調査した細胞生存の割合の棒グラフを示した図である。従って、図１３Ｂは、本明細書において記載される抗体（５Ａ５、５Ｂ９、６Ｄ４及び７Ｇ８）が、抗体薬物結合体と結合される場合、５Ａ５、５Ｂ９、６Ｄ４及び７Ｇ８で処理したＨＣＴ１１６細胞のルミネセンス読み取り値の減少からわかるように、がん細胞生存率を低下させるということを示している。
【図１３Ｃ】２°ＡＤＣと共に、抗ＲＯＮ抗体のパネルで処理したヒト大腸がん細胞株（ＨＣＴ１１６細胞）の細胞生存の割合の棒グラフを示した図である。細胞生存率は、図１３Ｃにおいて、生存不能細胞の割合としてプロットされている。従って、図１３Ｃは、本明細書において記載される抗体（５Ａ５、５Ｂ９、６Ｄ４及び７Ｇ８）が、抗体薬物結合体と結合される場合、がん細胞の生存率を低下させるということを示している。
【図１３Ｄ】ＲＯＮ陽性ヒト結腸直腸がん細胞（ＨＣＴ１１６細胞）に対する、１μｇ／ｍｌの２°ＡＤＣ（抗体薬物結合体）の存在下での、用量依存的様式における本明細書において記載される抗ＲＯＮ抗体（６Ｄ４及び７Ｇ８）の細胞傷害プロファイルを示した図である。従って、ＨＣＴ１１６細胞の死滅は、抗体：抗体薬物結合体の比によって制限されるけれども、６Ｄ４及び７Ｇ８は、ヒト結腸直腸がん細胞に対して強力な細胞傷害性を示すということがわかる。
【図１４−１】７Ｇ８重鎖１のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、７Ｇ８重鎖１のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１４−２】７Ｇ８重鎖１のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、７Ｇ８重鎖１のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１５−１】７Ｇ８κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、７Ｇ８κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１５−２】７Ｇ８κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、７Ｇ８κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１６−１】６Ｄ４重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｄ４重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１６−２】６Ｄ４重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｄ４重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１７−１】６Ｄ４κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｄ４κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１７−２】６Ｄ４κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｄ４κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１８−１】３Ｅ１重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｅ１重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１８−２】３Ｅ１重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｅ１重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１９−１】３Ｅ１κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｅ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図１９−２】３Ｅ１κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｅ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２０−１】３Ｇ４重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｇ４重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２０−２】３Ｇ４重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｇ４重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２１−１】３Ｇ４κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｇ４κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２１−２】３Ｇ４κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、３Ｇ４κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２２−１】５Ｂ９重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ｂ９重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２２−２】５Ｂ９重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ｂ９重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２３−１】５Ｂ９κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ｂ９κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２３−２】５Ｂ９κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ｂ９κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２４−１】６Ｅ６重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｅ６重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２４−２】６Ｅ６重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｅ６重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２５−１】６Ｅ６κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｅ６κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２５−２】６Ｅ６κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、６Ｅ６κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２６−１】２Ｆ１重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｆ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２６−２】２Ｆ１重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｆ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２７−１】２Ｆ１κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｆ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２７−２】２Ｆ１κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｆ１κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２８−１】１Ｄ２重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、１Ｄ２重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２８−２】１Ｄ２重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、１Ｄ２重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２９Ａ−１】２Ｂ３重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｂ３重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２９Ａ−２】２Ｂ３重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｂ３重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２９Ｂ−１】２Ｂ３軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｂ３軽鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図２９Ｂ−２】２Ｂ３軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、２Ｂ３軽鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図３０−１】１Ｂ９重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、１Ｂ９重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図３０−２】１Ｂ９重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、１Ｂ９重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図３１Ａ】投与及びイメージングプロトコルを描いたタイムライン、並びに、抗体６Ｄ４及び７Ｇ８で処理したマウスにおいて測定される個々の腫瘍からの生物発光を示す写真画像を示した図である。
【図３１Ｂ】マウス異種移植モデルからの３５日目の腫瘍重量の棒グラフを示した図である。
【図３１Ｃ】抗体６Ｄ４で処理したマウスにおいて測定される個々の腫瘍からの生物発光を示す写真画像を示した図である。従って、図３１は、本明細書において記載される抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍成長を阻害するということを示している。
【図３２】抗体６Ｄ４で処理したマウスにおける腫瘍体積に関するｉｎ  ｖｉｖｏデータを示す折れ線グラフを示した図である。図３２は、本明細書において記載される例証的な抗体で処理したマウスが、腫瘍体積を減少させたということを示している。
【図３３】ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験に対するタイムラインを示した図である。
【図３４】ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図３５】投与６時間後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図３６】投与２４時間後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図３７】投与４８時間後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図３８】投与７２時間後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図３９】投与５日後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図４０】投与７日後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示した図である。
【図４１】投与１４日後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示し、エンドポイントにおける腫瘍の重量を測定した図である。
【図４２】投与２１日後の、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング剤として６Ｄ４抗体及び７Ｇ８抗体を利用した実験の結果の写真画像を示し、腫瘍細胞におけるルシフェラーゼ遺伝子の発現によって反射される光子を測定することによって腫瘍体積を測定した図である。
【図４３】抗体３Ｇ４及び６Ｅ６が、ＲＯＮを発現する異なるがん細胞株を認識するということを立証するウエスタンブロットの結果を示した図である。試験した細胞株は、ヒト結腸直腸がん細胞株（例えばＨＣＴ１１６等）、ヒトケラチノサイト細胞株（例えばＨａＣａｔ等）、マウスハイブリドーマ（例えばＨＴ２９等）、ヒトリンパ芽球バーキットリンパ腫細胞株（例えばＲａｊｉ等）、ヒト胃がん細胞（例えばＭＫＮ４５等）、ヒト結腸直腸腺がん細胞株（例えばＷｉＤｒ等）、ヒト乳がん細胞株（例えばＴ４７Ｄ等）、非小細胞肺がん（例えばＨ１２９９等）、及びラット脳がん細胞株（例えばＣ６等）である。
【図４４Ａ】本開示の抗体（３Ｇ４、６Ａ５、６Ｅ６、及び６Ｄ４）は、ＲＯＮトランスフェクトＨ１２９９細胞を認識するということを示す免疫蛍光染色画像を示した図である。
【図４４Ｂ】本開示の抗体（３Ｅ１、５Ａ５、５Ｄ８、５Ｂ９、６Ｂ５、及び８Ａ８）は、ＲＯＮトランスフェクトＨ１２９９細胞を認識するということを示す免疫蛍光染色画像を示した図である。
【図４５】マウス胚線維芽細胞株（例えば３Ｔ３等）、ヒト結腸直腸がん細胞株（例えばＨＣＴ１１６等）及びマウスハイブリドーマ（例えばＨＴ２９等）細胞株に対する抗体１Ｄ２の免疫沈降結果を示すウエスタンブロットを示した図である。従って、図４５は、ＲＯＮ（ＭＷ  １８０ｋＤａ）を、ＲＯＮ陽性ＨＴ２９及びＨＣＴ１１６細胞において１Ｄ２によって免疫沈降することができるが、ＲＯＮ陰性３Ｔ３細胞においては免疫沈降することができないということを示している。
【図４６】３Ｔ３、ＨＣＴ１１６及びＨＴ２９の細胞株に対する抗体２Ｆ１、２Ｂ３及び１Ｂ９の免疫沈降結果を示すウエスタンブロットを示した図である。従って、図４５は、ＲＯＮ（ＭＷ  １８０ｋＤａ）を、ＲＯＮ陽性ＨＴ２９及びＨＣＴ１１６の細胞において２Ｆ１、２Ｂ３及び１Ｂ９によって免疫沈降することができるが、ＲＯＮ陰性３Ｔ３細胞においては免疫沈降することができないということを示している。
【図４７Ａ】Ｐｅｐｓｃａｎエピトープマッピングの戦略を示した概略図である。
【図４７Ｂ】ペプチドファージディスプレイエピトープマッピングの戦略を示した概略図である。
【図４８Ａ】Ｐｅｐｓｃａｎによるエピトープマッピングの結果を示した図である。
【図４８Ｂ】ファージディスプレイによるエピトープマッピングの結果を示した図である。
【図４９Ａ】抗ＲＯＮ抗体５Ａ５及び６Ｂ５のエンドサイトーシスを示す免疫蛍光画像を示した図である。従って、図４９Ａは、５Ａ５及び６Ｂ５が生細胞に形質膜陥入され、表面にＲＯＮを発現するがん生細胞を標的とする治療薬送達担体としての使用を可能にするということを示している。
【図４９Ｂ】抗ＲＯＮ抗体６Ｄ４のエンドサイトーシスを示す免疫蛍光画像を示した図である。従って、図４９Ｂは、抗体６Ｄ４が形質膜陥入され、従って、表面にＲＯＮを発現するがん生細胞を標的とする治療薬送達担体として抗体が使用されるのを可能にするということを示している。
【図５０Ａ−１】可変５Ａ５重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ａ５重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図５０Ａ−２】可変５Ａ５重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ａ５重鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図５０Ｂ−１】可変５Ａ５κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ａ５κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図５０Ｂ−２】可変５Ａ５κ鎖（軽鎖）のアミノ酸及びヌクレオチド配列、並びに、５Ａ５κ鎖のフレームワーク及びＣＤＲ配列を示した図である。
【図５１】Ｐｒｏｔｅｏｎによって測定された、本明細書において記載される抗体の一例（すなわち２Ｂ３）の結合親和性に関する研究を示す折れ線グラフを示した図である。図５１は、抗体２Ｂ３がＲＯＮ３に対して強い親和性を有するということを示している。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
【表１】
2020500834.tif 000003
マクロファージ刺激タンパク質受容体（又はＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′  Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ））は、リガンドＭＳＰと結合したときに、細胞外マトリックスから細胞質内にシグナルを伝達するｃ−ＭＥＴ関連チロシンキナーゼ受容体である。このシグナル伝達は、ＲＯＮの細胞内領域を刺激し、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＬＣＧ１又はＧＡＢ１等の下流のシグナル伝達分子と結合するための活性部位を提供する。従って、ＲＯＮは、シグナル伝達カスケードの一部である。ヒトＲＯＮ受容体のチロシンキナーゼはＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ０４９１２を有し、マウスタンパク質はＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｑ６２１９０を有する。この受容体は、ヒトではＭＳＴ１Ｒ遺伝子によってコードされる。
【００３７】
マクロファージ刺激タンパク質受容体（ＲＯＮ）は、本発明者等が特にがんの治療にとって重要な治療標的であり得ると考えるｃ−ＭＥＴ関連チロシンキナーゼ受容体である。ＲＯＮの過剰発現は、腫瘍形成を誘発する因子であり得、多くのヒトがんの特徴であるように思われる。ＲＯＮの過剰発現を有するがん患者は、上記の過剰発現を有さない患者と比較して予後不良であるとも考えられる。
【００３８】
ＲＯＮ陽性腫瘍を有する患者は、ＲＯＮ陰性腫瘍を有する患者よりも有意に悪い１０年無病生存率を有する（それぞれ３０．３％対５８．６％；Ｐ＝０．００９）。ＲＯＮ陽性腫瘍もＭＥＴ陽性腫瘍も有する患者は、最も低い１０年無病生存率を有し（１１．８％）、ＲＯＮ陰性腫瘍もＭＥＴ陰性腫瘍も有する患者は、最も高い１０年無病生存率を有する（７９．３％；Ｐ＝０．００８）。ＲＯＮ発現は、一部のがんにおける疾患の進行及び患者の生存に対する予後バイオマーカーとしても使用され得る。
【００３９】
ＲＯＮ陽性とがん患者の生存及び進行とを関連付ける統計を考慮して、本開示の発明者等は、ＲＯＮを認識する及び／又はＲＯＮに結合することができる抗体の提供を試みている。特に、様々な抗体が単離され、細胞表面発現受容体のチロシンキナーゼＲＯＮを認識するとして特徴付けられている。
【００４０】
従って、一態様において、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含むＲＯＮ特異的結合領域が提供され、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、及び配列番号１３５、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、及び配列番号１３６、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、及び配列番号１３７、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、及び配列番号１４４、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号２２０、配列番号１２３、及び配列番号１４５、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択される。
【００４１】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含む（又はこれらから成る）抗原結合領域も開示されており、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、及び配列番号１３５を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、及び配列番号１３６を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、及び配列番号１３７を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、及び配列番号１４４を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号２２０、配列番号１２３、及び配列番号１４５を含む群から選択される。
【００４２】
単離された抗体又はその断片も提供され、上記の抗体又はその断片は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び／又は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含み（又はこれらから成り）、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号１０、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、及び配列番号１１６、Ｓ及び配列番号１００、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号１１、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、及び配列番号１０１、又は配列番号１１７、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号１２、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１及び配列番号１０２、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、及び配列番号１０８、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、及び配列番号１２３、又は上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択される。
【００４３】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号３の配列を有するＣＤＲＨ３、及び／又は、配列番号１０の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１１の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１２の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｂ）配列番号２７の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２８の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号２９の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｃ）配列番号４５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号４６の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号４７の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｄ）配列番号５６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号５７の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号５８の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｅ）配列番号７３の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号７４の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号７５の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｆ）配列番号８９の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号９０の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０１の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｇ）配列番号１１６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１１７の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０２の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｈ）配列番号１１６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１１７の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０２の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ｉ）配列番号１１６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１０１の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０２の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
（ａ）配列番号１００の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１０１の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０２の配列を有するＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、並びに、
（ｊ）表１に記載されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、又はＣＤＲＨ３、
を含む群から選択される重鎖ＣＤＲを有する。
【００４４】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ｂ）配列番号１８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｃ）配列番号３６の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号３７の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号３８の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｄ）配列番号１８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｅ）配列番号６５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｆ）配列番号８１の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８２の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｇ）配列番号６５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｈ）配列番号１０８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１０９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号１２３の配列を有するＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
（ｉ）表１に記載されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３、又は、上記の配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、又はＣＤＲＬ３、
を含む群から選択される軽鎖ＣＤＲを有する。
【００４５】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号１の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号３の配列を有するＣＤＲＨ３、及び／又は、配列番号１０の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１１の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１２の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｂ）配列番号２７の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２８の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号２９の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号３６の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号３７の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号３８の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｃ）配列番号４５の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号４６の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号４７の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号２０の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｄ）配列番号５６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号５７の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号５８の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｅ）配列番号７３の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号７４の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号７５の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号８１の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号８２の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号８３の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｆ）配列番号８９の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号９０の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号９１の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号６５の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号６６の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号６７の配列を有するＣＤＲＬ３、
（ｇ）配列番号１１６の配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号１１７の配列を有するＣＤＲＨ２、及び配列番号１０２の配列を有するＣＤＲＨ３、並びに、配列番号１０８の配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１０９の配列を有するＣＤＲＬ２、及び配列番号１２３の配列を有するＣＤＲＬ３、並びに、
（ｈ）表１に記載される配列を有するＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、並びに、表１に記載されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、
を含む群から選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを有する。
【００４６】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、表１に記載されるか、又は、配列番号９、配列番号３５、配列番号５２、配列番号６４、配列番号８０、配列番号９６、配列番号１２２、配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１０７を含む群から選択されるヌクレオチド配列の１つと少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００４７】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、表１に記載されるか、又は、配列番号２６、配列番号４４、配列番号５５、配列番号７２、配列番号８８、配列番号９９、及び配列番号１２８を含む群から選択されるヌクレオチド配列の１つと少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００４８】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、配列番号９、配列番号３５、配列番号５２、配列番号６４、配列番号８０、配列番号９６、配列番号１２２、配列番号１３１、配列番号１３４、配列番号１０７を含む群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００４９】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、配列番号２６、配列番号４４、配列番号５５、配列番号７２、配列番号８８、配列番号９９、及び配列番号１２８を含む群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００５０】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号７９のアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号９５のアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号１２１のアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号１３０のアミノ酸配列、
（ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列、
（ｊ）配列番号１０６のアミノ酸配列、及び、
（ｋ）（ａ）から（ｋ）の少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列、
を含む群から選択される重鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００５１】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号７１のアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号８７のアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号９８のアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号１２７のアミノ酸配列、及び、
（ｈ）（ａ）から（ｈ）の少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．９５％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列、
を含む群から選択される軽鎖可変領域を含む（又はその領域から成る）。
【００５２】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、さらにフレームワーク配列を含み得る（又はその配列から成り得る）。
【００５３】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号４の配列を有するＦＲ１、配列番号５の配列を有するＦＲ２、配列番号６の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７の配列を有するＦＲ４、配列番号１４の配列を有するＦＲ２、及び配列番号１５の配列を有するＦＲ３、
（ｂ）配列番号３０の配列を有するＦＲ１、配列番号３１の配列を有するＦＲ２、配列番号３２の配列を有するＦＲ３、及び配列番号３３の配列を有するＦＲ４、
（ｃ）配列番号４８の配列を有するＦＲ１、配列番号４９の配列を有するＦＲ２、配列番号５０の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７の配列を有するＦＲ４、
（ｄ）配列番号５９の配列を有するＦＲ１、配列番号６０の配列を有するＦＲ２、配列番号６１の配列を有するＦＲ３、及び配列番号６２の配列を有するＦＲ４、
（ｅ）配列番号７６の配列を有するＦＲ１、配列番号７７の配列を有するＦＲ２、配列番号８６の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７の配列を有するＦＲ４、
（ｆ）配列番号９２の配列を有するＦＲ１、配列番号９３の配列を有するＦＲ２、配列番号９４の配列を有するＦＲ３、及び配列番号６２の配列を有するＦＲ４、
（ｇ）配列番号１１８の配列を有するＦＲ１、配列番号１１９の配列を有するＦＲ２、配列番号１２０の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７の配列を有するＦＲ４、
（ｈ）配列番号１２９の配列を有するＦＲ１、配列番号１１９の配列を有するＦＲ２、配列番号１２０の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７の配列を有するＦＲ４、
（ｉ）配列番号１２９の配列を有するＦＲ１、配列番号１１９の配列を有するＦＲ２、配列番号１２０の配列を有するＦＲ３、及び配列番号１３２の配列を有するＦＲ４、
（ｊ）配列番号１０３の配列を有するＦＲ１、配列番号１０４の配列を有するＦＲ２、配列番号１０５の配列を有するＦＲ３、並びに、
（ｋ）表１に記載のＦＲ、
を含む群から選択されるフレームワーク配列と少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を含む（又はそれらから成る）重鎖フレームワーク配列を含んでもよい。
【００５４】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、
（ａ）配列番号２１の配列を有するＦＲ１、配列番号２２の配列を有するＦＲ２、配列番号２３の配列を有するＦＲ３、及び配列番号２４の配列を有するＦＲ４、
（ｂ）配列番号３９の配列を有するＦＲ１、配列番号４０の配列を有するＦＲ２、配列番号４１の配列を有するＦＲ３、及び配列番号４２の配列を有するＦＲ４、
（ｃ）配列番号５３の配列を有するＦＲ１、配列番号２２の配列を有するＦＲ２、配列番号２３の配列を有するＦＲ３、及び配列番号２４の配列を有するＦＲ４、
（ｄ）配列番号６８の配列を有するＦＲ１、配列番号６９の配列を有するＦＲ２、配列番号４１の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７０の配列を有するＦＲ４、
（ｅ）配列番号８４の配列を有するＦＲ１、配列番号８５の配列を有するＦＲ２、配列番号８６の配列を有するＦＲ３、及び配列番号４２の配列を有するＦＲ４、
（ｆ）配列番号９７の配列を有するＦＲ１、配列番号６９の配列を有するＦＲ２、配列番号４１の配列を有するＦＲ３、及び配列番号７０の配列を有するＦＲ４、並びに、
（ｇ）配列番号１２４の配列を有するＦＲ１、配列番号１２５の配列を有するＦＲ２、配列番号１２６の配列を有するＦＲ３、（及び任意的に配列番号４２の配列を有するＦＲ４）、並びに、
（ｈ）表１に記載のＦＲ、
を含む群から選択されるフレームワーク配列と少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を含む軽鎖フレームワーク配列を含み得る（又はその配列から成り得る）。
【００５５】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、受容体チロシンキナーゼＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ（ＲＯＮ）、又は、マクロファージ刺激タンパク質受容体（ＭＳＰ  Ｒ若しくはＭＳＴ１−Ｒ））に結合する。
【００５６】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、ヒト及び／又はマウスのＲＯＮに特異的に結合する。
【００５７】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、細胞表面発現ＲＯＮに結合する。
【００５８】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、標的細胞によって形質膜陥入される能力を有する（又は形質膜陥入される）。これは、ペイロードが（単に細胞の外側ではなく）細胞内に送達され得るため、抗体分子がペイロードに結合される場合に特に有利であり得る。従って、がん細胞の内側の酵素によって活性化されるペイロードの使用が想定される。
【００５９】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、モノクローナル抗体であり得る。
【００６０】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、キメラ抗体及び／又は多特異性抗体であり得る。
【００６１】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、ヒト化抗体であり得る。
【００６２】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ′フラグメント、Ｆ（ａｂ′）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、二特異性抗体、単鎖抗体分子等の断片であり得るが、これらに限定されない。
【００６３】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、又はＩｇＧ４抗体であり得る。
【００６４】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、ヒトＩｇＧ足場に導入され得る。
【００６５】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、治療薬、免疫接着分子、及び検出標識（イメージング標識等）を含む群から選択される化学部分に結合され得る。
【００６６】
一部の例では、検出標識は、放射標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、ビオチン等を含み得るが、これらに限定されない。
【００６７】
一部の例では、治療薬は、抗がん剤治療であり得る。
【００６８】
一部の例では、本明細書において記載される抗体又はその断片を含む医薬組成物が提供される。
【００６９】
一部の例では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤をさらに含み得る。
【００７０】
一部の例では、本明細書において記載されるＲＯＮ特異的結合領域、キメラ抗原受容体、抗体、又は組成物を含むキットが提供される。
【００７１】
一部の例では：
（ｇ）本明細書において記載される抗体又はその断片をコードするヌクレオチド配列；
（ｈ）表１に記載される重鎖領域のうちの１つ、又は、配列番号９、配列番号３５、配列番号５２、配列番号６４、配列番号８０、配列番号９６、配列番号１２２、配列番号１３１、配列番号１３４、及び配列番号１０７を含む群から選択される１つの少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％を有する重鎖領域；及び／又は、
表１に記載される１つの軽鎖領域のうち、又は、配列番号２６、配列番号４４、配列番号５５、配列番号７２、配列番号８８、配列番号９９、及び配列番号１２８を含む群から選択される１つの少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は１００％を有する軽鎖領域；
をコードするヌクレオチド配列；
（ｉ）（ａ）又は（ｂ）における配列のうちいずれか１つに相補的な核酸；並びに、
（ｊ）ストリンジェントな条件下で（ａ）、（ｂ）又は（ｃ）にハイブリダイズする能力を有する核酸配列；
を含む群から選択されたいずれか１つを含む単離された核酸が提供される。
【００７２】
一部の例では、本明細書において記載される核酸を含む発現ベクターが提供される。
【００７３】
一部の例では、本明細書において記載される発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。
【００７４】
一部の例では、免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むポリペプチドを作製する方法が提供され、当該方法は、宿主細胞が免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は免疫グロブリン重鎖可変領域を含むポリペプチドを発現するような条件下で、本明細書において記載される宿主細胞を増殖させるステップを含む。
【００７５】
一部の例では、本明細書において記載されるポリペプチドを作製する方法は、免疫グロブリン重鎖可変領域及び／又は免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むポリペプチドを精製するステップをさらに含む。
【００７６】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又はその断片、又は、本明細書において記載される医薬組成物は、医薬において使用するためのものである。
【００７７】
一部の例では、１４０に対する本明細書において記載される単離された抗体又はその断片、又は、本明細書において記載される医薬組成物は、がんの治療において使用するためのものである。
【００７８】
一部の例では、がんの治療を必要とする対象においてがんを治療する方法が提供され、当該方法は、対象に、本明細書において記載される単離された抗体又はその断片を投与するステップを含む。
【００７９】
一部の例では、本明細書において記載されるがんを治療する方法は、抗がん剤（第２の抗がん抗体等）及び化学療法剤を含む群から選択された治療薬を投与するステップをさらに含む。
【００８０】
一部の例では、治療薬は、薬物複合体（例えばメルタンシン又はＤＭ１（Ｎ２′−デアセチル−Ｎ２′−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン）等の抗がん剤であり得るが、これらに限定されない。
【００８１】
一部の例では、がんは、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肺がん、腎臓がん、膀胱がん、胃腸腫瘍、肝臓がん、膵臓がん、胃がん、頭頸部がん等のＲＯＮ発現がんであり得るが、これらに限定されない。
【００８２】
一部の例では、単離された抗体又はその断片は、薬学的に有効な量で投与され得る。
【００８３】
一部の例では、対象における腫瘍細胞を検出する方法が提供され、当該方法は、本明細書において記載される抗体を使用して、対象から得られた試料におけるＲＯＮの発現を検出するステップを含む。
【００８４】
一部の例では、腫瘍細胞は、がん細胞であり得る。
【００８５】
一部の例では、がんは、結腸直腸がん、非小細胞肺がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、子宮頸がん、肺がん、腎臓がん、膀胱がん、胃腸腫瘍、肝臓がん、膵臓がん、胃がん、頭頸部がん等のＲＯＮ発現がんであるが、これらに限定されない。
【００８６】
ＲＯＮは、多くのがん、特に多くの上皮がんによって発現され、さらに、過剰発現され得る。
【００８７】
本開示の結合領域は、表面発現ＲＯＮを標的とすることができる。しかし、本発明によって生成されたデータは、上記の結合領域を含む抗体分子が、エンドサイトーシスとして知られる能動輸送を含むプロセスによって（ＲＯＮを発現する）細胞内に取り込まれるということを示唆している。細胞内に入ると、抗体分子は、細胞質又は細胞核に局在し得る。これは、抗体分子に結合された毒素又は生物学的分子ががん性細胞内に内部移行され得るという点で、本当に有益である可能性が高い。従って、例えば、細胞の内側でのみ活性化される毒素を利用することによって、全身毒性及びオフターゲット作用を最小限に抑えることが可能であり得る。
【００８８】
特に、結合領域は、抗体又はその結合断片の一部である。本開示は、結合領域（又は、結合領域を有する抗体又は結合断片等の実体）、結合領域をコードするポリヌクレオチド（又は、結合領域を有する抗体又は結合断片等の実体をコードするポリヌクレオチド）を含む医薬組成物にも及ぶ。さらなる態様では、治療、特にがんの治療において使用するための、結合領域若しくは該結合領域を含む実体、又は、結合領域若しくは該結合領域を含む実体のうちいずれか１つの医薬組成物が提供される。一例において、本開示による結合領域は、さらなる治療薬との併用療法において利用される。抗体及びその結合断片等の実体は、研究ツール、試薬、診断薬又はその一部、及び／又は、予後診断薬又はその一部としても利用され得る。
【００８９】
上述のように、ＲＯＮは、多くのがん、特に多くの上皮がんによって発現され、さらに、過剰発現され得る。本開示の実験の項から生成された図において例示されているように、本開示の結合領域は、表面発現ＲＯＮを標的とすることができる。さらに、本発明によって生成されたデータは、上記の結合領域を含む抗体分子が、エンドサイトーシスとして知られる能動輸送を含むプロセスによって（ＲＯＮを発現する）細胞内に取り込まれるということを示唆している。細胞内に入ると、抗体分子は、細胞質又は細胞核に局在し得る。これは、抗体分子に結合された毒素又は生物学的分子ががん性細胞内に内部移行され得るという点で、本当に有益である可能性が高い。従って、例えば、細胞の内側でのみ活性化される毒素を利用することによって、全身毒性及びオフターゲット作用を最小限に抑えることが可能であり得る。
【００９０】
本開示の結合領域（及び抗体分子）は、ヒトＲＯＮに特異的であるが、例えばマウスＲＯＮ等、少なくとも１つの非ヒトＲＯＮタンパク質も認識する（すなわち、該タンパク質と交差反応性である）。従って、抗体は、マウス及びヒトのタンパク質と交差反応する。これは、マウス治療モジュールにおける正常な組織及び器官に対するあり得る毒性の容易な前臨床分析を可能にして、治療指数の決定を可能にするため、非常に有用な予想外の特性である。従って、交差反応性は、ヒトへ投与される前に分子の安全性を評価するために予備毒性学及びｉｎ  ｖｉｖｏ分析が行われるのを可能にするため、有益である。
【００９１】
従って、別の態様では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む（又はそれらから成る）抗原特異的結合領域が提供され、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、配列番号１３５、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ１を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、配列番号１３６、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ２を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、配列番号１３７、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ３を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、配列番号１４４、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ１を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、配列番号１０９、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ２を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号１１０、配列番号１２３、配列番号１４５、及び１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で上記の配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ３を含む群から選択される。
【００９２】
一部の例では、ＣＤＲＨ１は配列番号１であってもよく、ＣＤＲＨ２は配列番号２であり、さらにＣＤＲＨ３は配列番号３であるか、又は、抗原特異的結合領域は、１つ又は複数の修飾された配列１、２及び３が利用され、１つ又は複数の修飾は、１つ又は２つのアミノ酸の置換、除去又は付加から独立して選択される。
【００９３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、
（ａ）ＣＤＲＨ１が配列番号１であり、ＣＤＲＨ２が配列番号２であり、ＣＤＲＨ３が配列番号３であること、又は、
（ｂ）ＣＤＲＨ１が配列番号２７であり、ＣＤＲＨ２が配列番号２８であり、ＣＤＲＨ３が配列番号２９であること、又は、
（ｃ）ＣＤＲＨ１が配列番号４５であり、ＣＤＲＨ２が配列番号４６であり、ＣＤＲＨ３が配列番号４７であること、又は、
（ｄ）ＣＤＲＨ１が配列番号５６であり、ＣＤＲＨ２が配列番号５７であり、ＣＤＲＨ３が配列番号５８であること、又は、
（ｅ）ＣＤＲＨ１が配列番号７３であり、ＣＤＲＨ２が配列番号７４であり、ＣＤＲＨ３が配列番号７５であること、又は、
（ｆ）ＣＤＲＨ１が配列番号８９であり、ＣＤＲＨ２が配列番号９０であり、ＣＤＲＨ３が配列番号９１であること、又は、
（ｇ）ＣＤＲＨ１が配列番号１００であり、ＣＤＲＨ２が配列番号１０１であり、ＣＤＲＨ３が配列番号１０２であること、又は、
（ｈ）ＣＤＲＨ１が配列番号１３５であり、ＣＤＲＨ２が配列番号１３６であり、ＣＤＲＨ３が配列番号１３７であること、
を含む重鎖ＣＤＲを有してもよい。
【００９４】
一部の例では、抗原特異的結合領域は、
（ａ）ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｂ）ＣＤＲＬ１が配列番号３６であり、ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、ＣＤＲＬ３が配列番号３８であること、
（ｃ）ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が配列番号６５であり、ＣＤＲＬ２が配列番号６６であり、ＣＤＲＬ３が配列番号６７であること、
（ｅ）ＣＤＲＬ１が配列番号８１であり、ＣＤＲＬ２が配列番号８２であり、ＣＤＲＬ３が配列番号８３であること、
（ｆ）ＣＤＲＬ１が配列番号１０８であり、ＣＤＲＬ２が配列番号１０９であり、ＣＤＲＬ３が配列番号１１０であること、さらに、
（ｇ）ＣＤＲＬ１が配列番号１４４であり、ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、ＣＤＲＬ３が配列番号１４５であること、
を含む軽鎖ＣＤＲを有してもよい。
【００９５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、
（ｉ）配列番号８、
（ｉｉ）配列番号３４、
（ｉｉｉ）配列番号５１、
（ｉｖ）配列番号６３、
（ｖ）配列番号７９、
（ｖｉ）配列番号９５、
（ｖｉｉ）配列番号１０６、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１４２、
等の可変重鎖領域を有してもよい。
【００９６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、
（ｉ）配列番号２５、
（ｉｉ）配列番号４３、
（ｉｉｉ）配列番号５４、
（ｉｖ）配列番号７１、
（ｖ）配列番号８７、
（ｖｉ）配列番号９８、
（ｖｉｉ）配列番号１１４、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１５０、
等の可変軽鎖領域を有してもよい。
【００９７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号１、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１とは異なる配列であるＣＤＲＨ１を有し得る。
【００９８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２とは異なる配列であるＣＤＲＨ２を有し得る。
【００９９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号３、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号３とは異なる配列であるＣＤＲＨ３を有し得る。
【０１００】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号１８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１８とは異なる配列であるＣＤＲＬ１を有し得る。
【０１０１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号１９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１９とは異なる配列であるＣＤＲＬ２を有し得る。
【０１０２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２０、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２０とは異なる配列であるＣＤＲＬ３を有し得る。
【０１０３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号８で示される配列、又は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号８から得られる配列を有する可変重鎖領域を有してもよく、本開示の独立した態様において、配列番号８と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号８の誘導体が提供される。
【０１０４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２５で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号２５から得られる配列を有する可変軽鎖領域を含んでもよく、本開示の独立した態様において、配列番号２５と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号２５の誘導体が提供される。
【０１０５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２７とは異なる配列であるＣＤＲＨ１を有し得る。
【０１０６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２８とは異なる配列であるＣＤＲＨ２を有し得る。
【０１０７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号２９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２９とは異なる配列であるＣＤＲＨ３を有し得る。
【０１０８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号３６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号３６とは異なる配列であるＣＤＲＬ１を有し得る。
【０１０９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号３７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号３７とは異なる配列であるＣＤＲＬ２を有し得る。
【０１１０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号３８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号３８とは異なる配列であるＣＤＲＬ３を有し得る。
【０１１１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、配列番号３４で示される配列、又は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号３４から得られる配列を有する重鎖可変領域を有してもよく、又は、本開示の独立した態様において、配列番号３４と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号３４の誘導体が提供される。
【０１１２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号４３で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号４３から得られる配列を有し、又は、本開示の独立した態様において、配列番号４３と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号４３の誘導体が提供される。
【０１１３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号４５、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号４５とは異なる配列である。
【０１１４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号４６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号４６とは異なる配列である。
【０１１５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号４７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号４７とは異なる配列である。
【０１１６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号１８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１８とは異なる配列である。
【０１１７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号１９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１９とは異なる配列である。
【０１１８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号２０、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号２０とは異なる配列である。
【０１１９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号５１で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号５１から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号５１と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号５１の誘導体が提供される。
【０１２０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号５４で示される配列、又は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号５４から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号５４と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号５４の誘導体が提供される。
【０１２１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号５６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号５６とは異なる配列である。
【０１２２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が配列番号５７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号５７とは異なる配列である。
【０１２３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号５８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号５８とは異なる配列である。
【０１２４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号６５、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６５とは異なる配列である。
【０１２５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号６６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６６とは異なる配列である。
【０１２６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号６７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６７とは異なる配列である。
【０１２７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号６３で示される配列、又は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号６３から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号６３と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号６３の誘導体が提供される。
【０１２８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号７１で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号７１から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号７１と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号７１の誘導体が提供される。
【０１２９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号７３、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号７３とは異なる配列である。
【０１３０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号７４、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号７４とは異なる配列である。
【０１３１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号７５、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号７５とは異なる配列である。
【０１３２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号８１、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号８１とは異なる配列である。
【０１３３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号８２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号８２とは異なる配列である。
【０１３４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号８３、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号８３とは異なる配列である。
【０１３５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号７９で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号７９から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号７９と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号７９の誘導体が提供される。
【０１３６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号８７で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号８７から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号８７と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号８７の誘導体が提供される。
【０１３７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号８９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号８９とは異なる配列である。
【０１３８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号９０、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号９０とは異なる配列である。
【０１３９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号９１、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号９１とは異なる配列である。
【０１４０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号６５、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６５とは異なる配列である。
【０１４１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号６６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６６とは異なる配列である。
【０１４２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号６７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号６７とは異なる配列である。
【０１４３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号９５で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号９５から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号９５と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号９５の誘導体が提供される。
【０１４４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号９８で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号９８から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号９８と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号９８の誘導体が提供される。
【０１４５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号１００、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１００とは異なる配列である。
【０１４６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号１０１、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０１とは異なる配列である。
【０１４７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号１０２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０２とは異なる配列である。
【０１４８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号１０８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０８とは異なる配列である。
【０１４９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号１０９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０９とは異なる配列である。
【０１５０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号１１０、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１０とは異なる配列である。
【０１５１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１０６で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１０６から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１０６と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１０６の誘導体が提供される。
【０１５２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号１１４で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１１４から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１１４と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１１４の誘導体が提供される。
【０１５３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号１１６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１６とは異なる配列である。
【０１５４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号１１７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１７とは異なる配列である。
【０１５５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号１０２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０２とは異なる配列である。
【０１５６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号１０８、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０８とは異なる配列である。
【０１５７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号１０９、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０９とは異なる配列である。
【０１５８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号１２３、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１２３とは異なる配列である。
【０１５９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１２１で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１２１から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１２１と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１２１の誘導体が提供される。
【０１６０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、軽鎖可変領域が、配列番号１２７で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１２７から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１２７と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１２７の誘導体が提供される。
【０１６１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号１１６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１６とは異なる配列である。
【０１６２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が配列番号１１７、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１７とは異なる配列である。
【０１６３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号１０２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０２とは異なる配列である。
【０１６４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１３０で示される配列、又は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１３０から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１３０と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１３０の誘導体が提供される。
【０１６５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号１１６、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１１６とは異なる配列である。
【０１６６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号１０１、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０１とは異なる配列である。
【０１６７】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号１０２、又は、１つ又は２つのアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去又は付加されるという点で配列番号１０２とは異なる配列である。
【０１６８】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１３３で示される配列、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸が独立して（代替のアミノ酸と）置換、除去、又は付加される配列番号１３３から得られる配列を有するか、又は、本開示の独立した態様において、配列番号１３３と少なくとも９５％の同一性を有する配列番号１３３の誘導体が提供される。
【０１６９】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ１が、配列番号１３５である。
【０１７０】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ２が、配列番号１３６である。
【０１７１】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＨ３が、配列番号１３７である。
【０１７２】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１４２で示される配列を有する。
【０１７３】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ１が、配列番号１４４である。
【０１７４】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ２が、配列番号３７である。
【０１７５】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、ＣＤＲＬ３が、配列番号１４５である。
【０１７６】
一部の例では、本明細書において記載される抗原特異的結合領域は、重鎖可変領域が、配列番号１５０で示される配列を有する。
【０１７７】
さらに別の態様では、本明細書において記載される結合領域を含むキメラ抗原受容体が提供される。
【０１７８】
一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、細胞表面に発現される。一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、細胞がＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞等）、ＮＫ細胞及びＮＫＴ細胞を含む。一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、細胞内シグナル伝達領域を含む。一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、細胞内シグナル伝達領域が、例えば、参照により本明細書において援用する特許文献１に記載されているＣＤ３−ゼータ由来である。
【０１７９】
一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、共刺激分子領域をさらに含む。一部の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体は、共刺激分子領域が、ＣＤ２８、４−１ＢＢ又はＯＸ４０、及び、ＣＤ２８と４−１ＢＢ若しくはＣＤ２８とＯＸ４０等のその組み合わせを含む群から独立して選択される。
【０１８０】
さらに別の態様では、本明細書において記載される結合領域を含む単離された抗体又は抗体が提供される。一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体（二重特異性抗体等）、全長抗体又は抗体結合断片を含み得るが、これらに限定されない。
【０１８１】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体が二重特異性抗体である。一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体が二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴｅ（登録商標））である。
【０１８２】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、多特異性抗体が２つの異なるＲＯＮ結合領域を含む。一部の例では、本明細書において記載される抗体は、２つの異なるＲＯＮ結合領域が異なるエピトープに特異的である。
【０１８３】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、図４８Ａ、図４８Ｂ、及び表１において記載されるＲＯＮ内のエピトープに結合する能力を有する（又は結合する）。一部の例では、本明細書において記載される抗体は、限定されるものではないが、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６を含む配列を有するＲＯＮ内のエピトープに結合する能力を有する（又は結合する）。
【０１８４】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、第１ＲＯＮ結合領域が、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、それぞれ配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む（特に、配列番号８及び２５で示される可変領域、又は、該配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨ及び／又はＶＬ領域の変異体で利用される）。
【０１８５】
一部の例では、本願明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、第２ＲＯＮ結合領域を含み、第２ＲＯＮ結合領域は、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、それぞれ配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む（特に、配列番号３４及び４３で示される可変領域、又は、該配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨ及び／又はＶＬの変異体で利用される）。
【０１８６】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、抗体結合断片がＦａｂ、修飾されたＦａｂ、Ｆａｂ′、修飾されたＦａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、ｄｓ−ＦＶ、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨ又はＶＬ又はＶＨＨ）、ｓｃＦｖ、及びｄｓ−ｓｃＦｖを含みが得るが、これらに限定されない。
【０１８７】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、抗体分子がエフェクター機能を含む。
【０１８８】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、エフェクター機能が抗体定常領域（Ｆｃ領域等）によって提供される。一部の例では、本明細書において記載される抗体分子は、エフェクター機能が、抗体定常領域又はその活性断片、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４（特にＩｇＧ１又はＩｇＧ４）等の完全長ＩｇＧアイソタイプ等によって提供される。
【０１８９】
一部の例では、本明細書において記載される単離された抗体又は抗体は、ペイロードに結合される。一部の例では、本明細書において記載される抗体は、ペイロードが、毒素、ポリマー（例えば、合成又は自然発生のポリマー等）、生物学的に活性なタンパク質（例えば、酵素、他の抗体又は抗体断片等）、核酸及びその断片（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びその断片等）、放射性核種（特に、放射性ヨウ化物（ｒａｄｉｏｉｏｄｉｄｅ）、放射性同位体）キレート化金属、ナノ粒子及びレポーター基（蛍光若しくは発光標識、又は、ＮＭＲ若しくはＥＳＲ分光法によって検出され得る化合物等）を含むが、これらに限定されない。
【０１９０】
一部の例では、毒素は、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ−ＣＡＳ番号：４７４６４５−２７−７）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ−ＣＡＳ番号：７４５０１７−９４−１）等）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ドキソルビシン（ＣＡＳ番号：２３２１４−９２−８）、デュオカルマイシン、マイタンシノイド（例えば、Ｎ２′−デアセチル−Ｎ２′−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１；ＣＡＳ番号：１３９５０４−５０−０）、Ｎ２′−デアセチル−Ｎ２′−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）及びＮ２′−デアセチル−Ｎ２′−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４；ＣＡＳ番号：７９６０７３−６９−３））、カリケアミシン（ＣＡＳ番号：１０８２１２−７５−５）、ドラスタチン、マイタンシン（ＣＡＳ番号：３５８４６−５３−８）、α−アマニチン（ＣＡＳ番号：２３１０９−０５−９）、及びチューブリシン（ＣＡＳ番号：２０５３０４−８６−５）から選択される。一部の例では、毒素は、アウリスタチン、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、マイタンシノイド、カリケアミシン、ドラスタチン、マイタンシン、α−アマニチン、及びチューブリシンを含む群から選択される。
【０１９１】
さらに別の態様では、本明細書において記載される抗体と、賦形剤、希釈剤及び／又は担体とを含む医薬組成物が提供される。
【０１９２】
一部の例では、本明細書において記載される医薬組成物は、混合物中に少なくとも２つのモノクローナル抗体、例えば本明細書において記載される２つの抗原特異的抗体等を含む。
【０１９３】
一部の例では、医薬組成物は、少なくとも２つの抗原特異的抗体のうちの１つを含み、上記の抗体は、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、それぞれ配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含み、任意的に、少なくとも２つの抗体のうち第２抗体は、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む。一部の例では、医薬組成物は、少なくとも２つの抗原特異的抗体のうちの１つを含み、上記の抗体は、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含み、任意的に、少なくとも２つの抗体のうち第２抗体は、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む。
【０１９４】
一部の例では、本明細書において記載される医薬組成物は、少なくとも１つの抗原特異的抗体が、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、それぞれ配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む（特に、配列番号８及び２５で示される可変領域、又は、該配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨ及び／又はＶＬの変異体で利用される）。
【０１９５】
一部の例では、本明細書において記載される医薬組成物は、第２ＲＯＮ結合領域を含む少なくとも１つの抗原特異的抗体が、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む（特に、配列番号３４及び４３で示される可変領域、又は、該配列と少なくとも９５％の同一性を有するＶＨ及び／又はＶＬの変異体で利用される）。
【０１９６】
一部の例では、本明細書において記載される医薬組成物は、製剤が非経口的である。
【０１９７】
さらに別の態様では、治療（又は療法）において使用するための、本明細書において記載されるＲＯＮ結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される組成物、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物が提供される。
【０１９８】
さらに別の態様では、治療（又は療法）において使用するための、本明細書において記載されるＲＯＮ結合領域が提供される。
【０１９９】
さらに別の態様では、治療（又は療法）において使用するための、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される医薬組成物が提供される。
【０２００】
さらに別の態様では、治療（又は療法）において使用するための、本明細書において記載される抗体分子、又は本明細書において記載される組成物が提供される。
【０２０１】
さらに別の態様では、がん又は線維症（特にがん）の治療のための薬物の製造における、本明細書において記載される抗原結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物の使用が提供される。ある例では、がんはＲＯＮ陽性がんである。
【０２０２】
さらに別の態様では、がん又は線維症（特にがん）の治療のための薬物の製造における、本明細書において記載される抗原結合領域の使用が提供される。
【０２０３】
さらに別の態様では、がん又は線維症（特にがん）の治療のための薬物の製造に対する、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される医薬組成物の使用が提供される。
【０２０４】
さらに別の態様では、腫瘍、がん又は線維症（特に、固形がん腫瘤及び／又は転移がん等のがん）の治療のための薬物の製造に対する、本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される組成物の使用が提供される。ある例では、がんはＲＯＮ発現がんである。
【０２０５】
さらに別の態様では、患者におけるがん又は線維症を予防又は治療する方法が提供され、当該方法は、治療有効量の、本明細書において記載される抗原結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物を、予防又は治療を必要とする患者に投与するステップを含む。
【０２０６】
一部の例では、患者は、患者集団であり（又はその一部を形成し）、その集団を構成する患者がＲＯＮ陽性腫瘍を有するということを特徴とする。一部の例では、その集団を構成する患者は、ＲＯＮ陽性及びＣ−ＭＥＴ陽性腫瘍を有する。
【０２０７】
一部の例では、本明細書において記載される方法は、治療前にＲＯＮ陽性腫瘍を有する患者を同定するステップを含む。
【０２０８】
さらに別の例では、治療量の、本明細書において記載されるＲＯＮ結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される組成物、又は本明細書において記載される抗体、又は本明細書において記載される医薬組成物を投与するステップを含む、がん又は線維症の患者を治療する方法が提供される。
【０２０９】
さらに別の例では、治療量の、本明細書において記載されるＲＯＮ結合領域を投与するステップを含む、がん又は線維症の患者を治療する方法が提供される。
【０２１０】
さらに別の例では、治療量の、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体又は本明細書において記載される組成物を投与するステップを含む、がん又は線維症の患者を治療する方法が提供される。
【０２１１】
さらに別の例では、治療量の、本明細書において記載される抗体又は本明細書において記載される組成物を投与するステップを含む、がん又は線維症の患者を治療する方法が提供される。
【０２１２】
さらに別の例では、本明細書において記載されるＲＯＮ結合領域、又は本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、又は本明細書において記載される組成物、又は本明細書において記載される抗体を用いて患者集団を治療する方法が提供され、ここで、その集団は、その集団を構成する患者がＲＯＮ陽性腫瘍を有するということを特徴とする。一部の例では、その集団を構成する患者はＲＯＮ陽性及びＣ−ＭＥＴ陽性腫瘍を有する。
【０２１３】
さらに別の例では、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体、本明細書において記載されるキメラ抗原受容体を含む組成物、本明細書において記載される抗体分子、又は本明細書において記載される抗体分子を含む組成物を用いて患者集団を治療する方法が提供され、ここで、その集団は、その集団を構成する患者がＲＯＮ陽性腫瘍を有するということを特徴とする。
【０２１４】
さらに別の例では、本明細書において記載される患者集団を治療する方法が提供され、ここで、その集団を構成する患者はＲＯＮ陽性及びＭＥＴ陽性腫瘍を有する。
【０２１５】
さらに別の例では、本開示による治療が施行される前に、集団にいるとして患者を同定するステップを含む、本明細書において記載される患者集団を治療する方法が提供される。
【０２１６】
さらに別の例では、診断薬又は予後因子として使用するための、本明細書において記載される組成物又は本明細書において記載される抗体の使用が提供される。さらに別の態様では、診断薬又は予後因子として使用するための、本明細書において記載される抗体分子、又は本明細書において記載される組成物の使用が提供され、例えば、抗体分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏで可視化できるイメージング剤に結合される。
【０２１７】
一部の例では、治療有効量の本開示による結合領域（特に、本明細書において開示される抗体分子）を投与することによって、患者におけるＲＯＮ発現を下方制御する方法が提供される。
【０２１８】
さらに別の態様では、配列番号８、配列番号３４、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７９、配列番号９５、配列番号１０６、配列番号１２１、配列番号１３０又は配列番号１３２のＶＨを含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体が提供される。
【０２１９】
さらに別の態様では、配列番号８と２５、配列番号３４と４３、配列番号５１と５４、配列番号６３と７１、配列番号７９と８７、配列番号９５と９８、配列番号１０６と１１４、又は配列番号１２１と１３０から選択されるＶＨ／ＶＬ対を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体が提供される。
【０２２０】
一部の例では、本明細書において記載される抗体は、図４８Ａ、図４８Ｂ、又は表１において定められているエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する。
【０２２１】
さらに別の態様では、がんの状態を評価するｅｘ  ｖｉｖｏでの方法が提供され、ここで、当該方法は：ａ）がんの腫瘍を含むと知られている患者又は患者の特定の部位を走査するステップであって、患者は、第１の時点で、標識された形態の抗体が投与されており、抗体は、本明細書において定められている抗体である、ステップ、ｂ）１つ又は複数のさらなる時点でａ）を繰り返し、さらに、２つ以上の時点からの結果を比較して、がんの状態を評価するステップを含む。
【０２２２】
さらに別の例では、本明細書において定められている抗体分子を使用してがん患者をモニターする方法が提供され、当該方法は：第１の時点で、がん、特に腫瘍にアクセスするために標識された形態の抗体分子を使用するステップと、少なくとも第２の時点で、がん、特に腫瘍にアクセスするために標識された形態の抗体分子を使用するステップと、２つ以上の時点からの結果を比較して、がんの状態を評価するステップとを含む。一部の例では、本明細書において記載されるがん患者をモニターする方法において、第１の時点とその後の時点の間の腫瘍によるＲＯＮ発現の減少が、改善された予後と相関する。
【０２２３】
一例では、本開示の抗体によって結合されるエピトープは、コンフォメーションエピトープに結合する。
【０２２４】
一例では、本開示の抗体によって結合されるエピトープは、リニアエピトープに結合する。
【０２２５】
一例では、ペプチド配列における、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５のアミノ酸等、少なくとも５つのアミノ酸に特異的に結合する抗体が提供される。
【０２２６】
一部の例では、本明細書において記載される抗体又は抗原結合領域によって結合される（認識される）エピトープは、図４８Ａ、図４８Ｂ、及び表１において記載されているペプチドを含む。
【０２２７】
一例では、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号２５又は配列番号２５と少なくとも９５％同一の配列を含む結合領域が提供される。
【０２２８】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号４３又は配列番号４３と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２２９】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号５１又は配列番号５１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３０】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号６３又は配列番号６３と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７１又は配列番号７１と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３１】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号７９又は配列番号７９と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号９７又は配列番号９７と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３２】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号９５又は配列番号９５と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号９８又は配列番号９８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３３】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１０６又は配列番号１０６と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１４又は配列番号１１４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３４】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１２１又は配列番号１２１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１３０又は配列番号１３０と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３５】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号４３又は配列番号４３と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３６】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３７】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７１又は配列番号７１と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３８】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８７又は配列番号８７と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２３９】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号９８又は配列番号９８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４０】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１４又は配列番号１１４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４１】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号８又は配列番号８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１２７又は配列番号１２７と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４２】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７１又は配列番号７１と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４３】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８７又は配列番号８７と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４４】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号９８又は配列番号９８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４５】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１４又は配列番号１１４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４６】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号３４又は配列番号３４と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１２７又は配列番号１２７と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４７】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号５１又は配列番号５１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７０又は配列番号７０と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４８】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号５１又は配列番号５１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８６又は配列番号８６と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２４９】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号５１又は配列番号５１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１０２又は配列番号１０２と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５０】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号５１又は配列番号５１と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１８又は配列番号１１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５１】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号６２又は配列番号６２と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５２】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号６２又は配列番号６２と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８６又は配列番号８６と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５３】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号６２又は配列番号６２と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１０２又は配列番号１０２と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５４】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号６２又は配列番号６２と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１８又は配列番号１１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５５】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号７８又は配列番号７８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５６】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号７８又は配列番号７８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７０又は配列番号７０と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５７】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号７８又は配列番号７８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１０２又は配列番号１０２と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５８】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号７８又は配列番号７８と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１８又は配列番号１１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２５９】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号９６又は配列番号９６と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６０】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号９６又は配列番号９６と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７０又は配列番号７０と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６１】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号９６又は配列番号９６と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８６又は配列番号８６と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６２】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号９６又は配列番号９６と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１１８又は配列番号１１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６３】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１１０又は配列番号１１０と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号５４又は配列番号５４と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６４】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１１０又は配列番号１１０と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号７０又は配列番号７０と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６５】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１１０又は配列番号１１０と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号８６又は配列番号８６と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６６】
一例では、本開示の結合領域は、配列番号１１０又は配列番号１１０と少なくとも９５％同一の配列、及び、配列番号１０２又は配列番号１０２と少なくとも９５％同一の配列を含む。
【０２６７】
一例では、抗体分子等の本開示による結合領域は、ヒト化のものである。
【０２６８】
一例では、本開示による結合領域、キメラ受容体、又は抗体分子をコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡ等）が提供され、例えば、重鎖及び軽鎖が、同じポリヌクレオチド（ＤＮＡ等の）分子において、又は、異なるポリヌクレオチド（ＤＮＡ等の）分子でコードされる。
【０２６９】
一例では、本開示によるポリヌクレオチド（ＤＮＡ等）を含むベクターが提供される。
【０２７０】
本開示によるポリヌクレオチド（ＤＮＡ等）又は本明細書において定められているベクターを含む細胞は、例えば、哺乳動物細胞である。一例では、細胞は、コードされるタンパク質の発現のために単に設計される、例えばＣＨＯ、ＨＥＫ、ＰｅｒＣ６、Ｅ．ｃｏｌｉ又は類似の細胞等の宿主細胞である。一例では、細胞は、本開示による結合領域を発現するように操作される治療上の哺乳動物細胞であり、例えば、Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞等）、ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞等である。
【０２７１】
一例では、操作されたＴ細胞受容体を有する細胞傷害性Ｔ細胞等の哺乳動物リンパ細胞（特に、ＮＫＴ細胞又はＴ細胞）が提供され、ここで、上記の受容体は、本明細書において開示される抗体由来の６つのＣＤＲを含む。
【０２７２】
従って、一例では、ＲＯＮタンパク質に結合するモノクローナル抗体を投与するステップを含む、ヒトがんの治療方法が提供され、抗体は、リストされたＣＤＲ配列を有する。
【０２７３】
一例では、治療、特にがんの治療において使用するための本開示による細胞が提供される。
【０２７４】
一例では、抗体分子等の本開示の結合領域は、腫瘍細胞上のＲＯＮ発現を下方制御する。これは、例えば、化学療法に対して患者を感作させる等、がん治療に対してがんをより影響されやすくするか又はより感受性を高くし得る。
【０２７５】
従って、１つの独立した態様において、本開示による抗体分子治療を施行することによって、ＲＯＮ陽性患者集団からＲＯＮ陰性患者集団へ患者を変えるステップを含む、がん患者の予後を変化させる方法が提供される。
【０２７６】
有利に、本開示の抗体分子のオフターゲット作用は、ＲＯＮががん組織においては非常に過剰発現されるけれども、非がん性細胞においては限定された発現を有するため、最小であると思われる。
【０２７７】
一例では、抗体分子はＲＯＮ阻害物質（アンタゴニスト）である。本明細書において利用されるＲＯＮ阻害物質は、ＲＯＮ受容体チロシンキナーゼ（ＭＳＴ１Ｒとしても既知）の関連する生物学的活性を減らすか又は取り消す又はブロックする、特にヒトタンパク質を阻害する抗体又は結合断片等の実体を指す。がん細胞に対する阻害効果には、以下の、（治療に対する反応の改善及びより良好な予後をもたらし得る）がん細胞増殖の阻害、がん細胞遊走の阻害、ＲＯＮの発現低下のうち１つ又は複数が含まれ得る。
【０２７８】
一例では、阻害物質は、関連するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで測定されるとき等、関連する生物学的活性を、例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は１００％低下させる。
【０２７９】
一例では、本開示による阻害物質は、直接的な阻害物質である。直接的な阻害とは、阻害物質が結合相互作用に直接結合するか又は結合相互作用を物理的にブロックして、生物学的活性を阻害する場合である。
【０２８０】
抗体分子は、本明細書において利用される場合、完全長の重鎖及び軽鎖を有する完全な抗体分子又はその断片（Ｆａｂ、修飾されたＦａｂ、Ｆａｂ′、修飾されたＦａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、Ｆａｂ−Ｆｖ、Ｆａｂ−ｄｓＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨ又はＶＬ又はＶＨＨ等）、ｓｃＦｖであり得るが、これらに限定されない）、及び、二価、三価、又は四価の抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体等、例えば本開示による結合領域を含む（完全長の抗体の一部又は抗体断片として含む）多特異性抗体のフォーマット、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を指す。
【０２８１】
本明細書において特に言及される抗体に関して、本開示は、特に、多特異性抗体を含む任意の抗体又は断片フォーマットにおける上記の抗体からの対として可変領域の使用を含むということが当業者には明らかになる。一例では、６つのＣＤＲが、ヒトフレームワーク等の代替のフレームワークと組み合わせて本明細書において開示される抗体から利用される。
【０２８２】
抗体は、本明細書において利用される場合、完全長の重鎖及び軽鎖を有する完全な抗体、又は、少なくとも完全な抗体を含み、例えば二重特異性等の複数の特異性を含み得るか又は単一特異性であり得る多価の抗体を指す（例えば、特許文献２及び特許文献３を参照）。二重特異性及び多特異性の抗体バリアントは、治療目的が２つの独立した標的タンパク質、すなわちＲＯＮ受容体チロシンキナーゼと、例えば、ＰＤ−１経路（特にＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１）におけるタンパク質等の第２の治療標的とを阻害することである場合、一例における本開示の治療分子の役割として特に関連している。
【０２８３】
一例では、本開示の抗体分子は多価である。
【０２８４】
多価は、本明細書において利用される場合、所与の標的（同じ標的を含む）に２回以上結合する抗体分子を指す。多価の抗体分子は、標的を架橋させることができ、例えば、補体経路等を誘発することができる。
【０２８５】
一例では、本開示の抗体分子は一価である。一価は、本明細書において利用される場合、一度だけ標的に結合するように設計又は操作された抗体分子を指す。
【０２８６】
一例では、本開示による抗体分子はキメラである。
【０２８７】
一例では、本開示による抗体分子、特にその中の結合領域はヒト化される。
【０２８８】
一例では、本開示による抗体分子はモノクローナルである。
【０２８９】
「多特異性分子」は、本明細書において利用される場合、少なくとも２つの別々の抗原、例えば異なる抗原に特異的に結合する能力を有する分子を指す。一例では、多特異性分子は、二重特異性、三重特異性又は四重特異性の分子、特に二重特異性又は三重特異性の分子である。多価抗体は、複数の特異性、例えば二重特異性等を含んでもよく、又は、単一特異性であってもよい（例えば、特許文献２及び特許文献３を参照）。
【０２９０】
「抗体断片」は、本明細書において利用される場合、限定されるものではないが、Ｆａｂ、修飾されたＦａｂ、Ｆａｂ′、修飾されたＦａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、二価、三価又は四価の抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、及び上記のいずれのエピトープ結合断片を含む抗体結合断片を指す（例えば、非特許文献２を参照）。
【０２９１】
「エピトープ」は、本明細書において利用される場合、特異的な抗体によって結合される能力を有する高分子の一部分又は複数部分を指し、本開示では、ポリペプチドの一部、特にＲＯＮを指す。エピトープは、一般的に、化学的に活性な表面基から成り、特異的な三次元構造の特徴だけでなく、特異的な電荷特徴も有する。
【０２９２】
「クロスブロックする」、「クロスブロックされた」及び「クロスブロックしている」という用語は、アミノ酸配列又は他の結合物質（本明細書において記載される抗原結合領域等）が、本明細書において記載される他のアミノ酸配列又は抗原結合領域の所与の標的（例えば、本明細書において記載されるエピトープ）への結合に干渉する能力を意味するために、本明細書において交換可能に使用される。本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域が別のアミノ酸配列又は抗原結合領域の標的エピトープへの結合に干渉することができる程度、従って、本開示によるクロスブロックと言えるかどうかは、当技術分野において既知の競合結合アッセイを使用して決定することができる。
【０２９３】
１つの特に適した定量アッセイは、表面プラズモン共鳴技術を使用して相互作用の程度を測定することができるビアコア装置を使用する。別の適した定量クロスブロッキングアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用して、本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域間の競合を、標的エピトープへのその結合の点から測定する。
【０２９４】
以下は、概して、本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域が、クロスブロックするか又はクロスブロックする能力を有するかどうかを決定するための適したビアコアアッセイを記載している。このアッセイは、本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域のいずれとも使用することができるということが正しく理解されることになる。ビアコア装置（例えばＢｉａｃｏｒｅ３０００）は、製造業者の薦めに従って操作される。従って、１つのクロスブロッキングアッセイにおいて、標的タンパク質は、標準的なアミンカップリングの化学的作用を使用してＣＭ５ビアコアチップに結合され、標的で被覆された表面が生成される。典型的には、２００〜８００のレゾナンスユニットの標的が、チップに結合され得る（容易に測定可能な結合のレベルを与えるが、使用されている試験試薬の濃度によって容易に飽和可能な量である）。互いにクロスブロックする能力について評価されることになる（Ａ＊及びＢ＊と名付けられた）２つの試験アミノ酸配列が、適した緩衝液において結合部位の１対１のモル比で混合され、試験混合物が作製される。濃度を結合部位ベースで計算する場合、アミノ酸配列の分子量は、アミノ酸配列の総分子量を、そのアミノ酸配列上の標的結合部位の数で割ったものであると仮定される。試験混合物中の各アミノ酸配列の濃度は、ビアコアチップ上に捕獲された標的分子上のそのアミノ酸配列に対する結合部位を容易に飽和させるために十分高くあるべきである。混合物中のアミノ酸配列は（結合ベースで）同じモル濃度であり、その濃度は、典型的には、（結合部位ベースで）１．００から１．５マイクロモルであろう。Ａ＊のみ及びＢ＊のみを含有する別々の溶液も調製される。これらの溶液中のＡ＊及びＢ＊は、試験混合物中のものと同じ緩衝液中に同じ濃度であるべきである。試験混合物は、標的により被覆されたビアコアチップを通過させられ、結合の総量が記録される。次に、チップに結合した標的に損傷を与えることなく、結合したアミノ酸配列を除去するような方法で、チップが処理される。典型的には、これは、６０秒間３０ｍＭ  ＨＣｌでチップを処理することによって行われる。次に、Ａ＊のみの溶液が、標的により被覆された表面を通過させられ、結合の量が記録される。ここでも、チップに結合した標的に損傷を与えることなく、結合したアミノ酸配列の全てを除去するためにチップは処理される。次に、Ｂ＊のみの溶液が、標的により被覆された表面を通過させられ、結合の量が記録される。次に、Ａ＊及びＢ＊の混合物の最大の理論上の結合が計算され、単独で標的表面を通過させられたときの各アミノ酸配列の結合の和が計算される。実際の記録された混合物の結合がこの理論上の最大値よりも小さい場合、２つのアミノ酸配列は互いにクロスブロックしている。従って、一般に、本明細書において記載されるクロスブロックするアミノ酸配列又は抗原結合領域は、アッセイ中本明細書において記載される第２のアミノ酸配列又は抗原結合領域の存在下で、記録された結合が、組み合わされた本明細書において記載される２つのアミノ酸配列又は抗原結合領域の（上記の）最大の理論上の結合の８０％から０．１％（例えば、８０％から���％等）、特に、最大の理論上の結合の７５％から０．１％（例えば、７５％〜４％）、より具体的には、最大の理論上の結合の７０％から０．１％（例えば、７０％〜４％）であるように、上記のビアコアクロスブロッキングアッセイにおいて標的に結合することになるものである。上記のビアコアアッセイは、本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域が本開示に従って互いにクロスブロックするかどうかを決定するために使用される主要なアッセイである。
【０２９５】
以下は、概して、標的に対して作られた本明細書において記載されるアミノ酸配列又は抗原結合領域が、本明細書において定められているようにクロスブロックするか又はクロスブロックする能力を有するかどうかを決定するためのＥＬＩＳＡアッセイを記載している。アッセイは、本明細書において記載されるアミノ酸配列（又は、本明細書において記載される抗原結合領域）のいずれとも使用することができるということが正しく理解されることになる。このアッセイの一般的原理は、ＥＬＩＳＡプレートのウェル上に被覆された標的エピトープに対して作られたアミノ酸配列又は抗原結合領域を有することである。過剰量の第２のクロスブロックの可能性のある抗標的アミノ酸配列が、溶液中に添加される（すなわち、ＥＬＩＳＡプレートには結合しない）。次に、限られた量の標的がウェルに添加される。被覆されたアミノ酸配列及び溶液中のアミノ酸配列が、限られた数の標的分子の結合に対して競合する。プレートは洗浄され、被覆されたアミノ酸配列によって結合されていない余分な標的が除去され、さらに、第２の溶液相のアミノ酸配列、並びに、第２の溶液相のアミノ酸配列と標的との間に形成されたいかなる複合体も除去される。次に、結合した標的の量が、標的を検出するのに適切な試薬を使用して測定される。被覆されたアミノ酸配列をクロスブロックすることができる溶液中のアミノ酸配列は、第２の溶液相のアミノ酸配列の非存在下で被覆されたアミノ酸配列が結合することができる標的分子の数と比較して、被覆されたアミノ酸配列が結合することができる標的分子の数を減少させ得る。例えばＡｂ−Ｘ等の第１のアミノ酸配列が、固定化されるアミノ酸配列として選ばれる場合、その配列はＥＬｌＳＡプレートのウェル上に被覆され、その後、プレートは、適したブロッキング溶液を用いてブロックされ、続いて添加される試薬の非特異的結合が最小限にされる。次に、過剰量の第２のアミノ酸配列、すなわちＡｂ−Ｙが、１つのウェルあたりのＡｂ−Ｙ［標的］結合部位のモルが、ＥＬＩＳＡプレートの被覆中の１つのウェルあたりの使用したＡｂ−Ｘ［標的］結合部位のモルよりも少なくとも１０倍多いように、ＥＬＩＳＡプレートに添加され、次に、１つのウェルあたりに添加される［標的］のモルが、各ウェルを被覆するために使用したＡｂ−Ｘ［標的］結合部位のモルよりも少なくとも２５分の１であるように、［標的］が添加される。適したインキュベーション期間に続いて、ＥＬｌＳＡプレートが洗浄され、標的を検出するための試薬が添加されて、被覆された抗［標的］アミノ酸配列（この場合Ａｂ−Ｘ）によって特異的に結合された標的の量が測定される。アッセイに対するバックグラウンド信号は、被覆されたアミノ酸配列（この場合Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相のアミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｙ）、［標的］緩衝液のみ（すなわち標的なし）、及び標的検出試薬を有するウェル中で得られた信号として定められる。アッセイに対する陽性対照の信号が、被覆されたアミノ酸配列（この場合、Ａｂ−Ｘ）、第２の溶液相のアミノ酸配列の緩衝液のみ（すなわち、第２の溶液相アミノ酸配列なし）、標的及び標的検出試薬を有するウェル中で得られた信号として定められる。ＥＬＩＳＡアッセイは、陽性対照信号をバックグラウンド信号の少なくとも６倍とするような様式で実行されてもよい。どのアミノ酸配列をコーティングアミノ酸配列として使用するかの選択、及び、第２の（競合）アミノ酸配列として使用するかの選択に起因するいかなるアーチファクト（例えば、［標的］に対するＡｂ−Ｘ及びＡｂ−Ｙ間の有意に異なる親和性等）も回避するために、クロスブロッキングアッセイは、２つのフォーマットで実行されてもよく：１）フォーマット１は、Ａｂ−Ｘが、ＥＬＩＳＡプレート上に被覆されるアミノ酸配列であり、Ａｂ−Ｙが、溶液中の競合アミノ酸配列であり、２）フォーマット２は、Ａｂ−Ｙが、ＥＬＩＳＡプレート上に被覆されるアミノ酸配列であり、Ａｂ−Ｘが、溶液中の競合アミノ酸配列である。Ａｂ−Ｘ及びＡｂ−Ｙは、フォーマット１又はフォーマット２において、溶液相の抗標的アミノ酸配列が、溶液相の抗標的アミノ酸配列の非存在下（すなわち、陽性対照ウェル）で得られた標的検出信号と比較して、標的検出信号（すなわち、被覆されたアミノ酸配列によって結合された標的の量）の６０％から１００％、具体的には７０％から１００％、より具体的には８０％から１００％の減少を引き起こし得る場合、クロスブロッキングとして定められる。
【０２９６】
「クロスブロック」という用語は、「結合」とは対照的であり、本明細書において使用される場合、共に化学的に結合する一対の種間の選択的親和性を指す。本願においては、結合は、本明細書において記載されるエピトープに対する抗原結合領域の特異的認識を指す。従って、これは、本明細書において記載されるＲＯＮエピトープに対する本明細書において記載される抗原結合領域の結合に干渉する「クロスブロック」とは対照的である。
【０２９７】
本発明において使用するための他の抗体断片には、特許文献４、５及び６に記載されているＦａｂ及びＦａｂ′断片が含まれる。
【０２９８】
「結合断片」は、本明細書において利用される場合、その断片をペプチド又は抗原に対して特異的であるとして特徴付けるのに十分な特異性を有して標的ペプチド又は抗原に結合する能力を有する抗体断片を指す。
【０２９９】
特異的は、本明細書において利用される場合、特異的である抗原のみを認識する抗体分子、又は、非特異的である抗原に対する結合親和性と比較して、特異的である抗原に対して有意に高い結合親和性を有する抗体分子、例えば、５、６、７、８、９、１０倍以上高い結合親和性を有する抗体分子等を指す。
【０３００】
「Ｆａｂフラグメント」という用語は、本明細書において使用される場合、軽鎖（ＣＬ）のＶＬ（可変軽鎖）領域及び定常領域、並びに、重鎖のＶＨ（可変重鎖）領域及び第１定常領域（ＣＨ１）を含む軽鎖断片を含む抗体断片を指す。
【０３０１】
Ｆｖは、２つの可変領域、例えば、同族の対等の協同的な可変領域、又は、ＶＨ及びＶＬの対等の親和性成熟可変領域等を指す。
【０３０２】
協同的な可変領域は、本明細書において利用される場合、互いに補完する、及び／又は、どちらも抗原結合に寄与し、当の抗原に特異的なＦｖ（ＶＨ／ＶＬ対）にする可変領域である。
【０３０３】
結合領域は、本明細書において利用される場合、３つのＣＤＲをそれぞれ含むＶＨ及びＶＬ等の２つの協同的な可変領域を指し、ここで、結合領域は、特定の（標的）抗原に特異的である。
【０３０４】
一例では、本開示の抗体分子は高い親和性を有し、例えば４００、３００、２００、１５０、１２５、１１５、１１４、１１３、１１２、１１１、１１０、１０９、１０８、１０７、１０６、１０５、１０４、１０３、１０２、１０１、１００、９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１ｎＭ又はそれ以上の親和性等、５００ｎＭの親和性又はそれ以上の親和性を有する。
【０３０５】
より高い結合親和性は、本明細書において利用される場合、より小さい数値的な親和性の値を指し、例えば、１ｎＭの親和性は、１０ｎＭの親和性よりも高い親和性（増加した親和性とも呼ばれる）である。
【０３０６】
結合親和性（親和性）は、多くの標準的なアッセイ、例えばビアコア等の表面プラズモン共鳴等によって測定することができる。
【０３０７】
元の抗体の親和性は、ＣＤＲを突然変異すること（非特許文献３）、鎖シャフリング（非特許文献４）、大腸菌の突然変異誘発株の使用（非特許文献５）、ＤＮＡシャフリング（非特許文献６）、ファージディスプレイ（非特許文献７）及びセクシャルＰＣＲ（非特許文献８）を含む親和性成熟プロトコルを利用することによって増やすことができる。Ｖａｕｇｈａｎ等（前出）は、これらの親和性成熟の方法について論じている。増加した親和性は、本明細書において利用される場合、これに関して、出発分子と比べた改善を指す。
【０３０８】
一例では、本開示の抗体分子は、本明細書において開示される配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む。この例は、本明細書において開示される所与の配列に対して９６、９７、９８又は９９％の配列にも及ぶ。
【０３０９】
これらの抗体及び抗体断片を作製及び製造する方法は、当技術分野において良く知られている。本開示において使用するための抗体は、当技術分野において既知のいかなる適した方法も使用して得ることができる。融合タンパク質、例えばポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質を含むポリペプチド／タンパク質、又は、（活性化Ｔ細胞としての）ポリペプチドを組換えで又は自然に発現する細胞は、例えば、宿主を免疫化し、標的ポリペプチド／タンパク質を特異的に認識する抗体を産生させるために使用することができる。ポリペプチドは、完全長のポリペプチド又は生物学的に活性な断片又はその誘導体であってもよい。
【０３１０】
ポリペプチドは、発現系を含む遺伝子修飾の宿主細胞から、当技術分野において良く知られたプロセスによって調製することができるか、又は、自然の生物学的供給源から回収することができる。本願において、「ポリペプチド」という用語は、ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質を含む。これらは、特に指定しない限り、互換的に使用される。抗原ポリペプチドは、場合によっては、例えば、アフィニティタグに融合される融合タンパク質等、より大きなタンパク質の一部であってもよい。
【０３１１】
抗原ポリペプチドに対して生成される抗体は、動物の免疫化が必要である場合、良く知られたルーチンのプロトコルを使用して、動物、好ましくは非ヒト動物にポリペプチドを投与することによって得ることができ、例えば、非特許文献９を参照されたい。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ、ラクダ又はブタ等の多くの温血動物を免疫化することができる。しかし、マウス、ウサギ、ブタ及びラットが一般的に最も適している。
【０３１２】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（非特許文献１０）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（非特許文献１１）、及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（非特許文献１２）等、当技術分野において既知のいかなる方法によっても調製することができる。
【０３１３】
本開示において使用するための抗体は、例えば、非特許文献１３、特許文献７、８及び９により記載される方法によって、特異的抗体の産生のために選択された単一リンパ球から生成された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニング及び発現することによって、単一リンパ球抗体方法を使用して生成することもできる。
【０３１４】
ヒト化抗体（ＣＤＲ移植抗体を含む）は、非ヒト種由来の１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する抗体分子である（例えば、特許文献１０；１１を参照）。ＣＤＲ全体ではなく、ＣＤＲの特異性決定残基を移すことのみが必要であり得るということが正しく理解されることになる（例えば、非特許文献１４を参照）。ヒト化抗体は、任意的に、ＣＤＲを得た非ヒト種から得られる１つ又は複数のフレームワーク残基をさらに含み得る。
【０３１５】
本明細書において使用される場合「ヒト化抗体分子」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体等）の重鎖及び／又は軽鎖の可変領域フレームワークに移植されたドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）由来の１つ又は複数のＣＤＲ（必要に応じて、１つ又は複数の修飾されたＣＤＲを含む）を有する抗体分子を指す。概説については、非特許文献１５を参照されたい。一例では、ＣＤＲ全体が移されるのではなく、本明細書において先に記載されたＣＤＲのいずれか１つ由来の特異性決定残基のうち１つ又は複数のみが、ヒト抗体フレームワークに移される（例えば、非特許文献１４を参照）。一例では、本明細書において先に記載されたＣＤＲのうち１つ又は複数由来の特異性決定残基のみが、ヒト抗体フレームワークに移される。別の例では、本明細書において先に記載されたＣＤＲのそれぞれ由来の特異性決定残基のみが、ヒト抗体フレームワークに移される。
【０３１６】
ＣＤＲ又は特異性決定残基が移植される場合、マウス、霊長類及びヒトのフレームワーク領域を含む、ＣＤＲが得られるドナー抗体のクラス／タイプを考慮したいかなる適切なアクセプター可変領域フレームワーク配列も使用することができる。適切には、本発明によるヒト化抗体は、ヒトアクセプターフレームワーク領域、並びに、本明細書において提供されるＣＤＲのうち１つ又は複数を含む可変領域を有する。
【０３１７】
本明細書において言及されるＣＤＲは、ＶＢＡＳＥ２ソフトウェアによって定められている：非特許文献１６。
【０３１８】
独立した代替の例では、本明細書において開示される可変領域のそれぞれにおいて定められているＣＤＲが提供され、ＣＤＲは、以下に記載されているようにＫａｂａｔ／Ｃｌｏｔｈｉａナンバリングによって定められている。
【０３１９】
重鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによると、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）及び残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置している。しかし、Ｃｈｏｔｈｉａ（非特許文献１７）によると、ＣＤＲ−Ｈ１に等しいループが、残基２６から残基３２に及ぶ。従って、別段の指示がない限り、「ＣＤＲ−Ｈ１」は、本明細書において利用される場合、Ｋａｂａｔナンバリングシステム及びＣｈｏｔｈｉａのトポロジカルなループ定義の組み合わせによって記載されるように、残基２６から３５を指すよう意図される。
【０３２０】
軽鎖可変領域のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによると、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）及び残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置している。
【０３２１】
Ｋａｂａｔの残基指定は必ずしもアミノ酸残基のリニアナンバリングに直接対応するわけではない。実際の直鎖状のアミノ酸配列は、基本的な可変領域構造のフレームワーク又は相補性決定領域（ＣＤＲ）であろうとなかろうと、構造成分の短縮又は構造成分への挿入に対応する厳密なＫａｂａｔナンバリングにおけるものよりも少ないか又はさらなるアミノ酸を有し得る。正しい残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体の配列における相同性の残基を「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列とアライメントすることによって、所与の抗体について決定することができる。
【０３２２】
「１つ又は複数の抗体エフェクター機能」又は「エフェクター機能」という用語は、本明細書において使用される場合、抗体の定常領域（例えば、免疫グロブリンの１つ又は複数のＦｃエフェクター領域等）によって寄与される機能を指す。そのような機能は、例えば、病原性活性又は溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体への１つ又は複数のＦｃエフェクター領域の結合によって、又は、補体系の成分への１つ又は複数のＦｃエフェクター領域の結合によってもたらすことができる。エフェクター機能の例として、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２３】
一例では、本開示による抗体分子は、標的（がん）細胞の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発（又は増加）し得る。ＡＤＣＣは、免疫エフェクター細胞によって抗体により被覆された標的細胞の溶解を導く免疫機構である。標的細胞は、Ｆｃ領域を含む抗体又はその断片が、一般的に、Ｆｃ領域に対してＮ末端であるタンパク質部分を介して特異的に結合する細胞である。ＡＤＣＣを決定する例証的な方法は、本開示の実験の項において見つけることができる。
【０３２４】
一例では、本開示による抗体分子は、少なくとも１つのペイロードに結合され得る。ペイロードは、本発明の抗体に結合することができる単一分子又は連結されて単一部分を形成するように２つ以上のそのような分子を含み得るということが正しく理解されることになる。１つの分子に連結される抗体断片を得ることが望ましい場合、これは、抗体断片をエフェクター分子に直接又はカップリング剤を介して連結させる標準的な化学的手順又は組換えＤＮＡ手順によって調製することができる。そのようなエフェクター分子を抗体に結合させる技術は、当技術分野において良く知られている（非特許文献１８、１９及び２０を参照）。特定の化学的手順には、例えば、特許文献１２乃至１６において記載されているものが含まれる。或いは、分子がタンパク質又はポリペプチドである場合、連結は、例えば、特許文献１７及び１８において記載されている組換えＤＮＡ手順を使用して達成することができる。
【０３２５】
ペイロードという用語は、本明細書において使用される場合、例えば、酵素等の生物学的に活性なタンパク質、他の抗体又は抗体断片、合成又は自然発生のポリマー、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ及びその断片等の核酸及びその断片、放射性核種、特に、放射性ヨウ化物、放射性同位元素、キレート化金属、ナノ粒子及びレポーター基（蛍光化合物、又は、ＮＭＲ若しくはＥＳＲ分光法によって検出され得る化合物等）を含む。
【０３２６】
他のペイロードには、１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、Ｂｉｓｍｕｔｈ２１３、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉｕｍ２５２、Ｉｒｉｄｉｕｍ１９２及びＴｕｎｇｓｔｅｎ１８８／Ｒｈｅｎｉｕｍ１８８等のキレート化放射性核種；又は、限定されるものではないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、タキソイド及びスラミン等の薬物が含まれ得る。
【０３２７】
他のペイロードには、タンパク質、ペプチド及び酵素が含まれる。関心のある酵素は、タンパク質分解酵素、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼを含むが、これらに限定されない。関心のあるタンパク質、ポリペプチド及びペプチドは、免疫グロブリン、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素若しくはジフテリア毒素等の毒素、インスリン、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子若しくは組織プラスミノーゲン活性化因子等のタンパク質、血栓剤、若しくは、例えばアンジオスタチン若しくはエンドスタチン等の抗血管新生剤、又は、リンホカイン、インターロイキン１（ＩＬ−１）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）若しくは他の成長因子及び免疫グロブリン等の生物学的応答調節物質を含むが、これらに限定されない。
【０３２８】
他のペイロードには、例えば診断において有用な検出可能物質が含まれ得る。検出可能物質の例として、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、放射活性核種、（陽電子放出断層撮影において使用するための）陽電子放出金属、及び非放射性の常磁性金属イオンが挙げられる。診断用の抗体に結合させることができる金属イオンについては、一般的に特許文献１９を参照されたい。適した酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼを含み；適した補欠分子族は、ストレプトアビジン、アビジン及びビオチンを含み；適した蛍光材料は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド及びフィコエリトリンを含み；適した発光材料はルミノールを含み；適した生物発光材料は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを含み；さらに、適した放射活性核種は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ及び９９Ｔｃを含む。
【０３２９】
別の例では、ペイロードは、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗体の半減期を長くすることができ、及び／又は、抗体の免疫原性を低下させることができ、及び／又は、免疫系への上皮バリアを横切る抗体の送達を改良することができる。このタイプの適したエフェクター分子の例として、特許文献２０において記載されているもの等、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合タンパク質、又はアルブミン結合化合物が挙げられる。
【０３３０】
エフェクター分子がポリマーである場合、一般に、合成又は自然発生のポリマー、例えば、任意的に置換された直鎖若しくは分岐鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン若しくはポリオキシアルキレンのポリマー、又は、分岐若しくは非分岐の多糖、例えばホモ多糖若しくはヘテロ多糖等であり得る。
【０３３１】
上述の合成ポリマー上に存在し得る特定の任意の置換基は、１つ又は複数のヒドロキシ基、メチル基又はメトキシ基を含む。
【０３３２】
合成ポリマーの特定の例として、任意的に置換された直鎖又は分岐鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、又はその誘導体、特に、メトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体等、任意的に置換されたポリ（エチレングリコール）が挙げられる。
【０３３３】
特定の自然発生のポリマーには、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン又はその誘導体が含まれる。
【０３３４】
「誘導体」は、本明細書において使用される場合、反応性の誘導体、例えばマレイミド等のチオール選択的反応基を含むよう意図される。反応基は、ポリマーに直接又はリンカーセグメントを介して連結されてもよい。そのような基の残基は、場合によっては、抗体断片とポリマーとの連結基として、生成物の一部を形成するということが正しく理解されることになる。
【０３３５】
ポリマーのサイズは、要望通りに変えることができるが、一般的に、５００Ｄａから５００００Ｄａ、例えば５０００から４００００Ｄａ、２００００から４００００Ｄａ等の平均分子量の範囲内になる。ポリマーサイズは、特に、生成物の意図された用途、例えば、腫瘍等の特定の組織に局在化する能力、又は、循環の半減期（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）を延長させる能力に基づき選択することができる（概説については、非特許文献２１を参照）。
【０３３６】
従って、例えば、腫瘍の治療において使用するために、例えば、生成物が循環を離れ、組織に侵入するように意図されている場合、例えば、約５０００Ｄａの分子量を有する小さい分子量のポリマーを使用することが有利であり得る。生成物が循環内に残る用途に対しては、例えば２００００Ｄａから４００００Ｄａの範囲内の分子量を有するより大きな分子量のポリマーを使用することが有利であり得る。
【０３３７】
適したポリマーには、ポリ（エチレングリコール）又は特にメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体等、特に約１５０００Ｄａから約４００００Ｄａの範囲内の分子量を有するポリアルキレンポリマーが含まれる。
【０３３８】
一例では、本発明において使用するための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に結合される。１つの特定の例では、抗体は抗体断片であり、ＰＥＧ分子は、抗体断片内に位置する任意の利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば、任意の遊離なアミノ基、イミノ基、チオール基、ヒドロキシル基、又はカルボキシル基を介して結合させることができる。そのようなアミノ酸は、抗体断片において自然に発生してもよく、又は、組換えＤＮＡ方法を使用して断片内に操作されてもよい（例えば、特許文献２１乃至２４を参照）。一例では、本発明の抗体分子は、修飾されたＦａｂフラグメントであり、ここで、修飾は、エフェクター分子の結合を可能にするための、その重鎖のＣ末端への１つ又は複数のアミノ酸の付加である。適切に、付加的なアミノ酸は、エフェクター分子が結合され得る１つ又は複数のシステイン残基を有する修飾されたヒンジ領域を形成する。多数の部位を使用して、２つ以上のＰＥＧ分子を結合させることができる。
【０３３９】
適切に、ＰＥＧ分子は、抗体断片内に位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基を介して共有結合される。修飾された抗体断片に結合する各ポリマー分子は、断片内に位置するシステイン残基の硫黄原子に共有結合されてもよい。共有結合は、一般的に、ジスルフィド結合、又は、特に硫黄−炭素結合である。チオール基が結合点として使用される場合、適切に活性化されたエフェクター分子、例えば、マレイミド及びシステイン誘導体等のチオール選択的誘導体を使用することができる。活性化ポリマーは、上記のようにポリマーにより修飾された抗体断片を調製する際の出発材料として使用することができる。活性化ポリマーは、αハロカルボン酸若しくはエステル、例えばヨードアセトアミド、イミド、例えばマレイミド、ビニルスルホン又はジスルフィド等、チオール反応基を有するいかなるポリマーであってもよい。そのような出発材料は、商業的に（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、ＵＳＡから）得ることができるか、又は、従来の化学的手順を使用して、商業的に入手可能な出発材料から調製することができる。特定のＰＥＧ分子には、２０Ｋメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ（以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ）；Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ；及びＳｕｎＢｉｏから入手可能）、及び、Ｍ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ（以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ）から入手可能）が含まれる。
【０３４０】
一例では、抗体は、例えば特許文献２５又は２６開示されている方法に従って、ＰＥＧ化された、すなわち、ＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を共有結合させた修飾されたＦａｂフラグメント又はｄｉＦａｂである（非特許文献２２、２３及び２４；２５も参照）。一例では、ＰＥＧは、ヒンジ領域内のシステインに結合される。一例では、ＰＥＧにより修飾されたＦａｂフラグメントは、マレイミド基を、修飾されたヒンジ領域内の単一のチオール基に共有結合させている。リジン残基は、マレイミド基に共有結合させてもよく、リジン残基上のアミン基のそれぞれに、約２０，０００Ｄａの分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーを結合させてもよい。従って、ＰＥＧが結合したＦａｂフラグメントの総分子量は約４０，０００Ｄａであり得る。
【０３４１】
特定のＰＥＧ分子は、ＰＥＧ２ＭＡＬ４０Ｋ（Ｎｅｋｔａｒ（以前はＳｈｅａｒｗａｔｅｒ）から入手可能）としても知られるＮ，Ｎ′−ビス（メトキシポリ（エチレングリコール）ＭＷ２０，０００）修飾リジンの２−［３−（Ｎ−マレイミド）プロピオンアミド］エチルアミドを含む。
【０３４２】
ＰＥＧリンカーの代替の供給源は、ＧＬ２−４００ＭＡ２（以下の構造中のｍは５である）及びＧＬ２−４００ＭＡ（ｍは２である）を供給するＮＯＦを含み、ｎは約４５０である。
【０３４３】
【化１】
2020500834.tif 000004
すなわち、各ＰＥＧは、約２０，０００Ｄａである。
【０３４４】
以下のタイプのさらなる代替のＰＥＧエフェクター分子：
【０３４５】
【化２】
2020500834.tif 000005
が、Ｄｒ  Ｒｅｄｄｙ、ＮＯＦ及びＪｅｎｋｅｍから入手可能である。
【０３４６】
一例では、（例えば、本明細書において記載されるＰＥＧを用いて）ＰＥＧ化され、例えば（配列ナンバリングによる）重鎖のアミノ酸２２６等、鎖内のアミノ酸２２６又はその付近にて、システインアミノ酸残基を介して結合される抗体が提供される。
【０３４７】
Ｔ細胞受容体及びキメラ抗原受容体
Ｔ細胞受容体及びキメラ抗原受容体技術の比較及び概説が、非特許文献２６において提供されている。
【０３４８】
一例では、本開示によるキメラ抗原受容体は、参照により本明細書において援用する特許文献１において開示されている技術を含む。要するに、本明細書において使用される場合、「キメラ抗原受容体」という用語は、抗原に対する抗体ベースの特異性を、特定の細胞免疫活性を有する細胞受容体活性化細胞内領域と組み合わせる分子を指す。例えば、キメラ抗原受容体は、本明細書において記載される抗原結合領域を、特定の抗腫瘍細胞免疫活性を有する細胞受容体活性化細胞内領域（例えば、Ｔ細胞受容体活性化細胞内領域等）と組み合わせることができる。次に、キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞活性化及び共刺激信号を提供する細胞内領域に融合した単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗原特異的細胞外領域を介したＭＨＣ非依存性の一次活性化をＴ細胞が達成するのを可能にする。
【０３４９】
医薬組成物
一態様では、本発明による医薬製剤又は医薬組成物は、本開示による抗体分子、並びに、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤及び／又は担体を含む。
【０３５０】
そのような担体により、医薬組成物が、患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、及び懸濁剤として製剤化されるのが可能になる。
【０３５１】
治療用組成物における薬学的に許容される担体は、水、生理食塩水、グリセロール及びエタノール等の液体をさらに有してもよい。加えて、湿潤剤若しくは乳化剤等の補助物質又はｐＨ緩衝物質が、そのような組成物中に存在してもよい。
【０３５２】
本発明の医薬組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、経皮的（例えば、特許文献２７を参照）、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、膣内、又は直腸の経路を含むがこれらに限定されないいかなる数の経路によっても投与することができる。皮下噴射器を使用して、本発明の医薬組成物を投与することもできる。典型的には、治療用組成物は、注射剤として、液体溶液又は懸濁液として調製することができる。注射に先立つ液体溶媒中の溶液又は懸濁液に適した固形も調製することができる。
【０３５３】
投与に適した形態には、例えばボーラス注射又は持続注入による等、例えば注射又は注入による非経口投与に適した形態が含まれる。生成物が注射又は注入用である場合、油性又は水性の溶媒中の懸濁液、溶液又は乳剤の形態をとることができ、懸濁剤、保存剤、安定化剤、及び／又は分散剤等の調合剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ）を含有してもよい。或いは、抗体分子は、注射用のグリコース、生理食塩水、水又はその２つ以上の組み合わせ等の適切な滅菌液を用いて使用前に再構成するための乾燥形態（凍結乾燥等）であってもよい。
【０３５４】
従って、一例では、製剤は、非経口投与のため、特に静脈内又は皮下注射のために提供される。
【０３５５】
製剤化されると、本発明の組成物は、対象に直接投与することができる。処置が行われることになる対象は動物であり得る。しかし、１つ又は複数の例では、組成物は、ヒト対象への投与に適応する。
【０３５６】
適切に、本開示による製剤において、最終製剤のｐＨは、抗体又は断片の等電点の値と類似しておらず、例えば、製剤のｐＨが７である場合、８〜９又はそれ以上のｐＩが適切であり得る。理論により縛られることは望まないけれども、これは、最終的に、改善された安定性を有する、例えば、抗体又は断片が溶液中に残る最終製剤を提供することができるということが考えられる。
【０３５７】
一例では、本開示による液体製剤のｐＨは、ｐＨ６、６．５、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８又は７．９等、ｐＨ５．５から８の範囲内にある。
【０３５８】
一例では、提供される製剤は、等張性であるか、又は、構成後に等張性である。
【０３５９】
一例では、本開示の組成物又は製剤は、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８又は１９９ｍｇ／ｍｌ等、１〜２００ｍｇ／ｍＬの本開示による抗体分子を含む。
【０３６０】
評価
実験の項において例示されるように、本開示の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍の成長を追跡するために使用することができる。従って、本明細書において定められる抗体は、患者におけるがんの状態を評価するために使用され得るということが考察される。
【０３６１】
「状態」という用語は、本明細書において使用される場合、所与の時点での腫瘍又はがん腫瘤の状況又は状態を指す。従って、本明細書において使用される場合、がん患者の状態は、腫瘍のサイズ、腫瘍の位置（又は位置の数）、及び観察される腫瘍のステージによって定めることができる。従って、がんのタイプに応じて、患者の状態は、観察される腫瘍のステージと同じであってもよい。一部の例では、状態は、「リンパ節転移の状態」、「局所」、「遠隔」、又は「再発」であり得る。
【０３６２】
治療
従って、一例では、治療、特にがん又は線維症の治療において使用するための、本開示による抗体分子又は組成物が提供される。
【０３６３】
「線維症」という用語は、本明細書において使用される場合、例えば修復又は反応プロセスにおける、器官又は組織における過剰な線維性結合組織の形成を指す。これは、器官又は組織の正常な成分としての線維性組織の形成に対抗している。従って、本開示において、「線維症」という用語は、異常な治癒プロセスを正常な治癒プロセスから区別するために使用される。一部の例では、「線維症」という用語は、例えば固形がん腫瘤又は転移がん等のがんに関連する線維症に限定される。
【０３６４】
一例では、本開示の治療は、例えば、肝がん（肝細胞がん等）、胆管がん、乳がん（ｎｏｎＥＲ＋乳がん等）、前立腺がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、肺がん、胃がん、食道がん、膵がん、骨がん、膀胱がん、頭頸部がん、甲状腺がん、皮膚がん、腎がん、及び食道がん、並びに、その組み合わせ等から選択される上皮がん、例えば、胃がんに対して施行される。
【０３６５】
一例では、がんは、肝細胞がん、胆管がん、乳がん、前立腺がん、結腸直腸がん、卵巣がん、肺がん、胃がん、膵がん、及び食道がんを含む群から選択される。
【０３６６】
一例では、胆管がんは、肝内胆管、左肝管、右肝管、総肝管、胆嚢管、総胆管、ファーター膨大部、及びその組み合わせから選択される位置にある。
【０３６７】
一例では、胆管がんは肝内胆管内にある。一例では、胆管がんは左肝管内にある。一例では、胆管がんは右肝管内にある。一例では、胆管がんは総肝管内にある。一例では、胆管がんは胆嚢管内にある。一例では、胆管がんは総胆管内にある。一例では、胆管がんはファーター膨大部内にある。
【０３６８】
一例では、上皮がんは細胞腫である。
【０３６９】
一例では、がんは、例えば固形腫瘍、液体腫瘍、又はその組合せ等の腫瘍である。
【０３７０】
一例では、本開示による治療は、例えば手術後の補助療法である。
【０３７１】
一例では、本開示による療法は、例えば手術前に腫瘍を縮小させるためのネオアジュバント治療である。
【０３７２】
一例では、腫瘍は固形腫瘍である。一例では、がんは、原発がん、二次がん、転移、又はその組み合わせである。一例では、本開示による治療は、二次腫瘍の治療に適している。一例では、がんは転移がんである。一例では、本開示による治療は、原発がん及び転移の治療に適している。一例では、本開示による治療は、二次がん及び転移の治療に適している。一例では、本開示による治療は、原発がん、二次がん及び転移の治療に適している。
【０３７３】
一例では、本開示による治療は、本開示のがんに対するリンパ節におけるがん性細胞の治療に適している。
【０３７４】
一例では、肝がんは原発性肝がんである。一例では、肝がんは二次性肝がんである。一例では、肝がんは、ステージ１、２、３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、４Ａ又は４Ｂである。
【０３７５】
一例では、胃がんは、ステージ０、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶである。
【０３７６】
一例では、がんはＲＯＮ陽性である。一例では、がんはＭｅｔ陽性である。一例では、がんはＲＯＮ陽性及びＭｅｔ陽性である。
【０３７７】
一例では、がんは、１つ又は複数の利用可能ながん治療に対して抵抗性又は耐性である。
【０３７８】
一例では、本開示の療法は、第一選択治療である。一例では、本開示による療法は、第二選択治療又はその後の選択治療である。
【０３７９】
一例では、本開示による抗体分子は、併用療法において利用される。
【０３８０】
一例では、併用療法は、ＣＴＬＡ４阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、又はＰＤ−Ｌ１阻害剤等のチェックポイント阻害剤、特に抗体又はその結合断片を含む。
【０３８１】
一例では、本開示の併用療法は、化学療法剤を含むか又は化学療法剤をさらに含む。
【０３８２】
一例では、併用療法は、例えば２００ｍｇ、３００ｍｇ又は４００ｍｇ等、１０ｍｇから５００ｍｇの範囲の用量で１日１回又は２回投与される、例えばハーセプチン又はｐａｎ−ＨＥＲ阻害剤バルリチニブ［（Ｒ）−Ｎ４−［３−クロロ−４−（チアゾール−２−イルメトキシ）−フェニル］−Ｎ６−（４−メチル−４，５，−ジヒドロ−オキサゾール−２−イル）−キナゾリン−４，６−ジアミン（特許文献２８において開示されているバルリチニブ実施例５２）］等のＨＥＲ阻害剤を含む。
【０３８３】
化学療法剤及び化学療法又は細胞傷害性薬物は、文脈上他の意味を示さない限り、本明細書において交換可能に利用される。
【０３８４】
化学療法は、本明細書において利用される場合、悪性の細胞及び組織に対して「選択的に」破壊性である特定の抗悪性腫瘍の化学薬品又は薬物、例えば、アルキル化剤、チミジル酸シンターゼ阻害剤を含む代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイドを含む微小管阻害剤、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ｐａｒｐ阻害剤、及び他の抗腫瘍剤等を指すように意図される。選択的には、これに関して、当然ながらこれらの薬剤の多くが重大な副作用を有するため、緩く使用される。
【０３８５】
好ましい用量は、治療されているがんの性質に基づき、専門家によって選ばれてもよい。
【０３８６】
本開示の方法において利用することができるアルキル化剤の例として、アルキル化剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、テトラジン、アジリジン、プラチン、及び誘導体、並びに、非古典的なアルキル化剤が挙げられる。
【０３８７】
白金含有化学療法剤（プラチンとも呼ばれる）の例として、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、及びリポプラチン（シスプラチンのリポソームバージョン）が挙げられ、特にシスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンが挙げられる。
【０３８８】
シスプラチンの用量は、正確ながんに応じて、約２０から約２７０ｍｇ／ｍ２に及ぶ。多くの場合、用量は、約７０から約１００ｍｇ／ｍ２の範囲内である。
【０３８９】
ナイトロジェンマスタードには、メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、及びブスルファンが含まれる。
【０３９０】
ニトロソウレアには、Ｎ−ニトロソ−Ｎ−メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）及びセムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、及びストレプトゾトシンが含まれる。テトラジンには、ダカルバジン、ミトゾロミド及びテモゾロミドが含まれる。
【０３９１】
アジリジンには、チオテパ、マイトマイシン及びジアジクオン（ＡＺＱ）が含まれる。
【０３９２】
本開示の方法において利用することができる代謝拮抗剤の例としては、葉酸代謝拮抗剤（例えば、メソトレキセート及びペメトレキセド等）、プリン類似体（例えば、アザチオプリン、メルカプトプリン、チオプリン、フルダラビン（リン酸形態を含む）、ペントスタチン、及びクラドリビン等のチオプリン等）、ピリミジン類似体（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等のフルオロピリミジン、及び、カペシタビン［Ｘｅｌｏｄａ（登録商標）］等のそのプロドラッグ等）、フロクスウリジン、ゲムシタビン、シタラビン、デシタビン、ラルチトレキセド（トムデックス）ヒドロクロリド、クラドリビン、及び６−アザウラシルが挙げられる。
【０３９３】
本開示の方法において利用することができるアントラサイクリンの例としては、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ダウノルビシン（リポソーム）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシン（リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン（現在、膀胱がんを治療するためだけに使用される）、及びミトキサントロン、アントラサイクリン類似体が挙げられ、特にドキソルビシンが挙げられる。
【０３９４】
本開示の方法において利用することができる微小管阻害剤の例としては、ビンカアルカロイド及びタキサンが挙げられる。
【０３９５】
ビンカアルカロイドは、完全に自然の化学物質、例えばビンクリスチン及びビンブラスチン等を含み、半合成のビンカアルカロイド、例えばビノレルビン、ビンデシン及びビンフルニン等も含む。
【０３９６】
タキサンには、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、カバジタキセル、及びその誘導体が含まれる。タキサンの誘導体は、本明細書において利用される場合、例えばミセル製剤における、タキソールのようなタキサンの組成変更を含み、誘導体は、合成化学が、タキサンである出発材料を改変するために利用される化学的誘導体も含む。
【０３９７】
本開示の方法において利用することができるトポイソメラーゼ阻害剤には、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤、ＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、及びＩＩ型トポイソメラーゼの毒が含まれる。Ｉ型阻害剤には、トポテカン、イリノテカン、インドテカン（ｉｎｄｏｔｅｃａｎ）、及びインジミテカン（ｉｎｄｉｍｉｔｅｃａｎ）が含まれる。ＩＩ型阻害剤には、以下の構造：
【０３９８】
【化３】
2020500834.tif 000006
を有するゲニステイン及びＩＣＲＦ  １９３が含まれる。
【０３９９】
ＩＩ型の毒には、アムサクリン、エトポシド、エトポシドリン酸塩、テニポシド、並びに、ドキソルビシン及びフルオロキノロンが含まれる。
【０４００】
一例では、化学療法剤はＰＡＲＰ阻害剤である。
【０４０１】
一例では、利用される化学療法剤の組合せは、例えば、プラチン及び５−ＦＵ若しくはそのプロドラッグ、例えば、ＦＯＬＦＯＸ等、シスプラチン又はオキサプラチン及びカペシタビン又はゲムシタビンである。
【０４０２】
一例では、化学療法は、化学療法剤、特に細胞傷害性の化学療法剤の組み合わせを含む。
【０４０３】
一例では、化学療法の併用は、シスプラチン等のプラチン、及び、フルオロウラシル又はカペシタビンを含む。
【０４０４】
一例では、化学療法の併用は、カペシタビン及びオキサリプラチン（ＸＥＬＯＸ）である。
【０４０５】
一例では、化学療法は、フォリン酸及び５−ＦＵの組み合わせであり、任意的に、オキサリプラチンとの組み合わせ（ＦＯＬＦＯＸ）である。
【０４０６】
一例では、化学療法は、フォリン酸、５−ＦＵ及びイリノテカンの組み合わせ（ＦＯＬＦＩＲＩ）であり、任意的に、オキサリプラチンとの組み合わせ（ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ）である。例えば、このレジメンは：フォリン酸（１２０分にわたる４００ｍｇ／ｍ2［又は２×２５０ｍｇ／ｍ2］のＩＶ）と同時にイリノテカン（９０分にわたる１８０ｍｇ／ｍ2のＩＶ）；続くフルオロウラシル（４００〜５００ｍｇ／ｍ2のＩＶボーラス）、続くフルオロウラシル（４６時間にわたる２４００〜３０００ｍｇ／ｍ2の静脈内注入）；を含む。このサイクルは、典型的には、２週間ごとに繰り返される。上記の投与量は、サイクル毎に変わり得る。
【０４０７】
一例では、化学療法の併用は、例えば、ビンクリスチン硫酸塩、エポチロンＡ、Ｎ−［２−［（４−ヒドロキシフェニル）アミノ］−３−ピリジニル］−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（ＡＢＴ−７５１）等の微小管阻害剤、例えば、パクリタキセル、アブラキサン、若しくはドセタキセル等のタキソール由来の化学療法剤、又はその組合せを利用する。
【０４０８】
一例では、化学療法の併用は、ｍＴｏｒ阻害剤を利用する。ｍＴｏｒ阻害剤の例としては：エベロリムス（ＲＡＤ００１）、ＷＹＥ−３５４、ＫＵ−００６３７９４、パパマイシン（シロリムス）、テムシロリムス、デフォロリムス（ＭＫ−８６６９）、ＡＺＤ８０５５及びＢＥＺ２３５（ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５）が挙げられる。
【０４０９】
一例では、化学療法の併用は、ＭＥＫ阻害剤を利用する。ＭＥＫ阻害剤の例としては：ＡＳ７０３０２６、ＣＩ−１０４０（ＰＤ１８４３５２）、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ３１８０８８、ＰＤ０３２５９０１、ＡＺＤ８３３０、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＢＩＸ０２１８９、又はＢＩＸ０２１８８が挙げられる。
【０４１０】
一例では、化学療法の併用は、ＡＫＴ阻害剤を利用する。ＡＫＴ阻害剤の例としては：ＭＫ−２２０６及びＡＴ７８６７が挙げられる。
【０４１１】
一例では、併用は、オーロラキナーゼ阻害剤を利用する。オーロラキナーゼ阻害剤の例としては：オーロラＡ阻害剤Ｉ、ＶＸ−６８０、ＡＺＤ１１５２−ＨＱＰＡ（バラセルチブ）、ＳＮＳ−３１４メシル酸塩、ＰＨＡ−６８０６３２、ＺＭ−４４７４３９、ＣＣＴ１２９２０２及びヘスペラジンが挙げられる。
【０４１２】
一例では、化学療法の併用は、Ｎ−［４−（｛４−［３−（３−ｔｅｒｔ−ブチル−１−ｐ−トリル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ウレイド］ナフタレン−１−イルオキシ｝メチル）ピリジン−２−イル］−２−メトキシアセトアミド等、例えば特許文献２９において開示されているｐ３８阻害剤を利用する。
【０４１３】
一例では、併用は、Ｂｃｌ−２阻害剤を利用する。Ｂｃｌ−２阻害剤の例としては：メシル酸オバトクラックス、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−２６３（ナビトクラックス）及びＴＷ−３７が挙げられる。
【０４１４】
一例では、化学療法の併用は、カペシタビン（ゼローダ）、リン酸フルダラビン、フルダラビン（フルダラ）、デシタビン、ラルチトレキセド（トムデックス）、ゲムシタビン塩酸塩、及び／又はクラドリビン等の代謝拮抗剤を含む。
【０４１５】
一例では、化学療法の併用は、免疫応答及び／又は腫瘍脈管構造（ｔｕｍｏｕｒ  ｖａｓｃｕｌａｔｉｏｎ）の制御に寄与し得るガンシクロビルを含む。
【０４１６】
「併用療法の施行」は、本明細書において利用される場合、併用で利用される療法が同時に施行されることを要求しない。併用療法は、本明細書において利用される場合、同じ治療期間にわたって利用されている２つ以上の療法のモード、すなわち、連続療法の逆を指す。２つ以上の療法のモードは、本明細書において利用される場合、異なる作用モード及び／又は異なる活性及び／又は異なる投与経路を有する少なくとも２つの療法を指す。
【０４１７】
「治療している」又は「治療」又は「治療するため」等の用語は、本明細書において利用される場合、診断された病理的状態又は障害の症状を治癒させる、遅らせる、寛解させる、及び／又は、その進行を停止させる治療手段；又は、標的にされる病理的状態又は障害の発生を予防する及び／又は遅らせる予防的若しくは防止的手段を指す。従って、治療を必要とする者には、すでに障害のある者；障害を有する傾向のある者；並びに、障害が予防されることになる者、及び障害の再発を予防する必要がある者（例えば、寛解した状態にある者等）；が含まれる。特定の態様では、患者が、例えば、疾患又は状態の完全な寛解、部分的な寛解、又は一過性の寛解を示す場合に、対象は、例えばがん等の疾患又は状態を「治療」することに成功している。
【０４１８】
治療有効量は、本明細書において利用される場合、必要な治療効果を引き出すのに適した量を指す。本開示の併用療法において、ＲＯＮ阻害剤は、該阻害剤を用いた単独療法の用量以下の用量で利用されてもよい。一例では、利用されるＰＤ−１経路阻害剤の用量は、該阻害剤を用いた単独療法の用量以下である。一例では、ＲＯＮ阻害剤に対する用量は、単独療法において利用される用量と同じであり、ＰＤ−１経路阻害剤の用量は、単独療法において利用される用量と同じである。一例では、ＲＯＮ阻害剤に対する用量は、単独療法において利用される用量よりも少なく、ＰＤ−１経路阻害剤の用量は、単独療法において利用される用量と同じである。一例では、ＲＯＮ阻害剤に対する用量は、単独療法において利用される用量と同じであり、ＰＤ−１経路阻害剤の用量は、単独療法において利用される用量よりも少ない。一例では、ＲＯＮ阻害剤に対する用量は、単独療法において利用される用量よりも少なく、ＰＤ−１経路阻害剤の用量は、単独療法において利用される用量よりも少ない。適した用量は、当業者によって確立することができる。
【０４１９】
より詳細ながんのタイプ
一例では、胃がんは、胃の腺がん、扁平上皮がん、胃のリンパ腫、胃間質腫瘍、及び神経内分泌腫瘍を含む群から選択される。
【０４２０】
一例では、肝がんは、例えば、肝細胞がん、胆管細胞がん、血管肉腫、及び肝芽腫を含む群から選択され、特に肝細胞がんである。一例では、原発性肝がんは、ステージ１、２、３又は４である。一例では、肝がんは、二次性又は転移性肝がんである。
【０４２１】
肺がんは、組織型に従って分類され、顕微鏡下で組織病理学者により見られる悪性細胞のサイズ及び外観によってカテゴリー化される。治療目的で、非小細胞肺がん及び小細胞肺がんの２つの幅の広いクラスが区別される。
【０４２２】
一例では、上皮がんは、例えば小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）等の肺がんである。
【０４２３】
非小細胞肺がん
ＮＳＣＬＣの３つの主なサブタイプは、腺がん、扁平上皮がん及び大細胞がんである。
【０４２４】
肺がんの約４０％は、通常は末梢肺組織に起こる腺がんである。腺がんのサブタイプである細気管支肺胞がんは、非喫煙の女性においてより一般的であり、より良好な長期生存率を有し得る。
【０４２５】
扁平上皮がんは、肺がんの約３０％を占め、典型的には、大きな気道の近くで発生する。空洞及びそれに伴う細胞死が、一般的に、腫瘍の中心部にて見られる。肺がんの約９％は大細胞がんであり、がん細胞が大きく、細胞質が過剰で、核が大きく、核小体が目立つことから、そのように名付けられている。
【０４２６】
小細胞肺がん
小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）では、細胞は、高密度の神経分泌顆粒（神経内分泌ホルモンを有する小胞）を有し、この腫瘍に内分泌／腫瘍随伴症候群の関連性を与えている。大部分の症例は、より大きな気道（一次気管支及び二次気管支）において発生する。これらのがんは急速に増殖し、疾患の経過における初期に広がる。６０から７０パーセントが診察時に転移性疾患を有する。
【０４２７】
一例では、がんは非小肺がんである。
【０４２８】
一例では、がんは、例えば、肝臓に広がった、例えば大腸がん等の原発がん由来の肝臓転移等の肝がんである。一例では、肝がんは、ＨＣＣ肝細胞がんである。
【０４２９】
一例では、例えば、腎細胞がん及び／又は尿路上皮細胞がん等の腎がんの治療が提供される。腎がんの他の例としては、扁平上皮がん、傍糸球体細胞腫瘍（レニノーマ）、血管筋脂肪腫、腎膨大細胞腫、ベリーニ管がん、腎臓明細胞肉腫、間葉芽腎腫、ウィルムス腫瘍、腎複合上皮間質腫瘍、明細胞腺がん、移行上皮がん、内反性乳頭腫、腎リンパ腫、奇形腫、がん肉腫、及び腎盂のカルチノイド腫瘍が挙げられる。
【０４３０】
一例では、がんは膀胱がんであり、例えば、膀胱の上皮裏層（すなわち尿路上皮）から発生するいくつかのタイプの悪性腫瘍のいずれかである。膀胱がんの約９０％は移行上皮がんである。残りの１０％は、扁平上皮がん、腺がん、肉腫、小細胞がん、及び体内の他の部位のがんからの二次沈着物である。そのステージ分類が以下に与えられる。
【０４３１】
Ｔ（原発腫瘍）
ＴＸ  原発腫瘍は評価することができない
Ｔ０  原発腫瘍の証拠なし
Ｔａ  非浸潤性乳頭がん
Ｔｉｓ  上皮内がん（「扁平腫瘍」）
Ｔ１  腫瘍が上皮下結合組織に浸潤している
Ｔ２ａ  腫瘍が表在性筋肉（内側半分）に浸潤している
Ｔ２ｂ  腫瘍が深部筋肉（外側半分）に浸潤している
Ｔ３  腫瘍が膀胱周囲の組織に浸潤している：
Ｔ３ａ  顕微鏡的
Ｔ３ｂ  巨視的（膀胱外腫瘤）
Ｔ４ａ  腫瘍が前立腺、子宮又は膣に浸潤している
Ｔ４ｂ  腫瘍が骨盤壁又は腹壁に浸潤している
Ｎ（リンパ節）
ＮＸ  所属リンパ節は評価することができない
Ｎ０  所属リンパ節転移なし
Ｎ１  最大径が２ｃｍ以下の単一のリンパ節における転移
Ｎ２  最大径が２ｃｍを超えるが５ｃｍ以下の単一のリンパ節における転移、又は、最大径が５ｃｍ以下の多数のリンパ節における転移
Ｎ３  最大径が５ｃｍを超えるリンパ節における転移
Ｍ（遠隔転移）
ＭＸ  遠隔転移は評価することができない
Ｍ０  遠隔転移なし
Ｍ１  遠隔転移。
【０４３２】
膀胱がん
本開示は、膀胱がんのあらゆるステージに及ぶ。
【０４３３】
卵巣がん
最初に発生した細胞のタイプに従って分類される３０を超える異なるタイプの卵巣がんがある。がん性卵巣腫瘍は、３つの一般的な細胞タイプ：
表面上皮−卵巣の裏層を覆う細胞
胚細胞−卵子を形成するように運命づけられた細胞
間質細胞−ホルモンを放出し、卵巣の異なる構造体をつなぐ細胞
から発生し得る。
【０４３４】
本開示は、例えば本明細書において記載される、特に上皮細胞等、任意の出所からの卵巣がんの治療に関する。上皮性卵巣がん（ＥＯＣ）は、全ての卵巣のがんのうち８５から９０パーセントを占める。
【０４３５】
一般的な上皮性腫瘍
上皮性卵巣腫瘍は、卵巣の外表面を覆う細胞から発生する。ほとんどの上皮性卵巣腫瘍は良性（非がん性）である。漿液性腺腫、粘液性腺腫、及びブレンナー腫瘍を含む、いくつかのタイプの良性上皮性腫瘍がある。がん性上皮性腫瘍は、細胞がんであり、卵巣を覆う組織において発生するということを意味する。がん性上皮性腫瘍は、全てのタイプの卵巣がんの中で最も一般的であり、最も危険である。残念ながら、一般的な上皮性卵巣がんを有する女性のほぼ７０パーセントが、疾患のステージが進行するまで診断されない。
【０４３６】
卵巣上皮性腫瘍の中には、顕微鏡下での外観がそれらをがん性であるとして明確に同定しないものがあり、境界腫瘍又は低悪性度の腫瘍（ＬＭＰ腫瘍）と呼ばれる。本開示の方法は、後者の治療を含む。
【０４３７】
胚細胞腫瘍
卵巣胚細胞腫瘍は、卵細胞又は卵子を産生する細胞から発生する。ほとんどの胚細胞腫瘍は良性（非がん性）であるが、一部はがん性で、生命を脅かすものであり得る。最も一般的な胚細胞悪性腫瘍は、成熟奇形腫、未分化胚細胞腫、及び内胚葉洞腫瘍である。胚細胞悪性腫瘍は、１０代及び２０代の女性において最も多く発生する。現在、卵巣胚細胞悪性腫瘍を有する患者の９０パーセントは治癒させることができ、その妊孕能を保つことができる。
【０４３８】
間質腫瘍
卵巣間質腫瘍は、卵巣を共に保持する結合組織細胞、並びに、女性ホルモンであるエストロゲン及びプロゲステロンを産生するものから発生する稀な種類の腫瘍である。最も一般的なタイプは、顆粒膜−卵胞膜腫瘍及びセルトリ−ライディッヒ細胞腫である。これらの腫瘍はきわめて稀で、通常は低悪性度のがんであると考えられ、約７０パーセントがステージＩの疾患（がんは、片側又は両側の卵巣に限定されている）として現れる。
【０４３９】
原発性腹膜がん
卵巣の除去により、卵巣がんのリスクは排除されるが、原発性腹膜がんと呼ばれるもっと稀ながんのリスクは排除されない。原発性腹膜がんは、上皮性卵巣がん（最も一般的なタイプ）と密接に関係しており、腹膜（腹部の裏層）由来の細胞において発生し、顕微鏡下では同じように見え、症状、広がり、及び治療は類似している。
【０４４０】
卵巣がんのステージ
卵巣がんと診断されると、手術の間に腫瘍のステージを決定することができ、その際、医師は、がんが卵巣の外側に広がっているかどうかわかる。卵巣がんには、ステージＩ（早期の疾患）からステージＩＶ（進行した疾患）の４つのステージがある。治療計画及び予後（患者の疾患のほぼ確実な経過及び転帰）が、患者が有するがんのステージによって決定されることになる。
【０４４１】
以下は、卵巣がんの様々なステージについての説明である：
ステージＩ  がんの増殖は片側又は両側の卵巣に限定されている。
【０４４２】
ステージＩＡ  増殖は片側の卵巣に限定され、腫瘍は卵巣の内側に限局している。卵巣の外表面にがんはない。悪性細胞を含有する腹水は存在しない。莢膜は無傷である。
【０４４３】
ステージＩＢ  増殖は両側の卵巣に限定され、外表面にいかなる腫瘍もない。悪性細胞を含有する腹水は存在しない。莢膜は無傷である。
【０４４４】
ステージＩＣ  腫瘍はステージＩＡ又はＩＢとして分類され、以下のうち１つ又は複数が存在している：（１）腫瘍が、片側又は両側の卵巣の外表面に存在している；（２）莢膜が破裂している；及び、（３）悪性細胞を含有する腹水がある又は腹腔洗浄液が陽性である。
【０４４５】
ステージＩＩ  がんの増殖は、骨盤内への拡大を有して片側又は両側の卵巣に及んでいる
ステージＩＩＡ  がんは、子宮若しくは卵管、又はその両方まで及んでいる及び／又は巻き込んでいる。
【０４４６】
ステージＩＩＢ  がんは他の骨盤内臓器まで及んでいる。
【０４４７】
ステージＩＩＣ  腫瘍はステージＩＩＡ又はＩＩＢとして分類され、以下のうち１つ又は複数が存在している：（１）腫瘍が、片側又は両側の卵巣の外表面に存在している；（２）莢膜が破裂している；及び、（３）悪性細胞を含有する腹水がある又は腹腔洗浄液が陽性である。
【０４４８】
ステージＩＩＩ  がんの増殖は、片側又は両側の卵巣に及んでおり、以下のうち１つ又は複数が存在している：（１）がんが、腹部の裏層まで骨盤を越えて広がっている；及び、（２）がんが、リンパ節にまで広がっている。腫瘍は、小骨盤に限定されているが、小腸又は網への悪性の拡大が組織学的に証明されている。
【０４４９】
ステージＩＩＩＡ  ステージ分類の施行の間に、専門家は、卵巣の片側又は両側に及ぶがんを見ることができるが、がんは、腹部において肉眼的に可視ではなく、リンパ節まで広がっていない。しかし、生検が顕微鏡下で調べられると、非常に小さながんの沈着物が腹部の腹膜表面において見られる。
【０４５０】
ステージＩＩＩＢ  腫瘍は、片側又は両側の卵巣にあり、外科医が見るには十分大きいが直径は２ｃｍを超えないがんの沈着物が腹部に存在している。がんは、リンパ節まで広がっていない。
【０４５１】
ステージＩＩＩＣ  腫瘍は、片側又は両側の卵巣にあり、以下のうち１つ又は複数が存在している：（１）がんが、リンパ節まで広がっている；及び／又は、（２）がんの沈着物が、直径２ｃｍを超えており、腹部において見られる。
【０４５２】
ステージＩＶ  このステージは、卵巣がんの最も進行したステージである。がんの増殖は、片側又は両側の卵巣に及んでおり、遠隔転移（腹腔の外側に位置する器官へのがんの広がり）が発生している。（肺を取り囲む空洞からの）胸水における卵巣がん細胞の発見も、ステージＩＶの疾患の証拠である。
【０４５３】
一例では、卵巣がんは：例えばＩＡ、ＩＢ又はＩＣ等のＩ型；例えばＩＩＡ、ＩＩＢ又はＩＩＣ等のＩＩ型；例えばＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ又はＩＩＩＣ等のＩＩＩ型；又はＩＶ型である。
【０４５４】
一例では、乳がんが、非浸潤性乳管がん、非浸潤性小葉がん、浸潤性乳がん、浸潤性小葉乳がん、パジェット病、乳房の血管肉腫、髄様乳がん、粘液性乳がん、管状乳がん、乳房の腺様嚢胞がん、化生乳がん、乳房のリンパ腫、ベーサル型の乳がん、葉状腫瘍又は葉状嚢胞肉腫、及び乳頭状乳がんを含む群から選択される。
【０４５５】
一例では、前立腺がんが、管状腺がん、移行上皮（尿路上皮）がん、扁平上皮がん、カルチノイド、小細胞がん、肉腫及び肉腫様がんを含む群から選択される。
【０４５６】
【表２−１】
2020500834.tif 000007
【表２−２】
2020500834.tif 000008
【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
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【表２−１０】
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【表２−１１】
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【表２−１２】
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【表２−１３】
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【表２−１４】
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【表２−１５】
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【表２−１６】
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【表２−１７】
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【表２−１８】
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【表２−１９】
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【表２−２０】
2020500834.tif 000026
本明細書において例示的に記載される本発明は、本明細書において具体的に開示されていないいかなる１つ又は複数の要素、１つ又は複数の制限の非存在下でも適切に実行され得る。従って、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語は、拡張的に且つ制限なく読まれるものとする。加えて、本明細書において利用される用語及び表現は、説明の用語として使用されており、限定の用語として使用されたものではなく、示され且つ記載される特徴又はその一部のいかなる等価物も排除するそのような用語及び表現の使用は意図しないが、特許請求の範囲において記載される発明の範囲内で様々な修正が可能であるということが認識される。従って、本発明は、好ましい実施例及び任意の特徴によって具体的に開示されているけれども、本明細書において開示され具体化される発明の修正及び変更が、当業者によって訴えられてもよいということ、及び、そのような修正及び変更は、本発明の範囲内にあると考えられるということが理解されるべきである。
【０４５７】
本発明は、本明細書において広く且つ一般的に説明されている。一般的な開示に含まれるより狭い種及び亜属のグループのそれぞれも、本発明の一部を構成する。これには、削除される材料が本明細書において具体的に記載されているか否かにかかわらず、類概念からいかなる主題も除去するという条件付き又は消極的な限定付きで本発明の一般的な説明が含まれる。
【０４５８】
他の実施例が、以下の特許請求の範囲及び非限定的な実施例において含まれる。加えて、本発明の特徴又は態様がマーカッシュ群の点から記載される場合、本発明も、その結果、マーカッシュ群のいかなる個々のメンバー又はメンバーのサブグループの点から記載されるということを当業者は認識することになる。
【０４５９】
実験の項
【実施例１】
【０４６０】
組換えＲＯＮ抗原の設計、発現及び精製
ＲＯＮの抗原指数を予測するために、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ  Ｐｒｏｔｅａｎ  ｖ８．１プログラム（ＤＮＡＳＴＡＲ  Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）においてＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆアルゴリズムを用いて、ＲＯＮの翻訳配列の抗原性を分析した。このアルゴリズムは、親水性（Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ）、表面確率（Ｅｍｉｎｉ）、タンパク質骨格の柔軟性（Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ）、及び二次構造予測（Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ及びＧａｒｎｉｅｒ）（Ｊａｍｅｓｏｎ＆Ｗｏｌｆ，１９８８）等のその一次アミノ酸鎖の特徴に基づき、配列の抗原性を計算するためにいくつかのパラメータを統合する。
【０４６１】
ｐＣＭＶ６ベクター（ＲＣ２１２７８６）において完全長ヒトＲＯＮ  ｃＤＮＡを有するエントリーベクターを、Ｏｒｉｇｅｎｅから得た。ＲＯＮの３つのトランケートされる領域を、細胞外領域における最も抗原性の高い配列に基づき選択し、ＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ制限部位を使用してｐＧＥＸ‐４Ｔ１ベクター（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）内にサブクローニングした。組換えプラスミドを、ＢＬ２１  Ｅ．ｃｏｌｉコンピテント細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に形質転換し、３７℃で一晩インキュベートされるＬＢプレート上に蒔いた。単一のコロニーを原核生物の発現のために選んだ。形質転換した細胞を、０．６〜０．８のＯＤ６００に達するまで１Ｌ培養物中で増殖させた。３００μＭの最終濃度までＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオ−ガラクトシド）を添加することによりタンパク質発現を誘発した。次に、培養物を、１８℃で一晩さらに増殖させた。細胞を１５分間の６０００ｒｐｍでの遠心分離により回収し、２０ｍｌの溶解緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１Ｍ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００及び１ｍＭ  ＤＴＴ）において再懸濁した。細胞を溶解緩衝液において４ｏＣで３０分間インキュベートし、超音波処理の前に一定に回旋させた。再懸濁した細胞を、３分間ソニケーター（Ｓｏｎｉｃｓ，Ｖｉｂｒａｃｅｌｌ，ＵＳＡ）を使用して氷上で超音波処理によって溶解した。超音波処理を、１秒のＯＮ及び０．１秒のＯＦＦで、振幅３８％で４サイクル行った。結果として得られた懸濁液を１８，０００ｒｐｍで４０分間遠心分離し、得られた上澄み（予め精製された上澄み）を、タンパク質精製に使用した。溶菌液の上澄みを、グルタチオンカラムに添加し、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１Ｍ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００、及び１ｍＭ  ＤＴＴで洗浄した。ＧＳＴによりタグされたＲＯＮタンパク質を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９．６、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、及び１０ｍＭ  グルタチオンの緩衝液を使用して溶出した。溶出したタンパク質分画を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析のために集めた。
【実施例２】
【０４６２】
マウスへのトランケートされたＲＯＮの免疫処置
５匹の８週齢のＢａｌｂ／ｃ雌マウスを、Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）から得て、組換えヒトタンパク質ＲＯＮ免疫原を接種させた。最初の免疫処置を、アジュバントとしてＳｉｇｍａ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｉｇｍａ）を用いて腹腔内で行い、３週間間隔で５回の腹腔内及び皮下注射が続いた。４回目の免疫処置の１週間後に、ランセット（ＭＥＤＩｐｏｉｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）を使用して頬出血を介してそれぞれのマウスから採血した。約１０μｌの血液を１６００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、血清を吸引して４℃で保存した。その後、免疫処置に使用されるＲＯＮタンパク質がＥＬＩＳＡプレートに固定化された酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって抗体応答を測定した。血清抗体価が最も高いマウスを、骨髄腫細胞株ＳＰ２／０との融合のための脾臓ドナーとして選択した。
【０４６３】
ハイブリドーマ細胞を得るための、骨髄腫細胞とのマウス脾臓の融合
マウスは、アジュバントなしのＲＯＮ融合タンパク質の静脈内注射によって最後の追加免疫を受けた。マウスの骨髄腫ＳＰ２／０細胞株を、融合パートナーとして使用した。従って、融合の１週間前に、対数増殖期において＞７０％の培養密度に達するまで、細胞をＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）及び１０％ＦＢＳ中で培養した。免疫化されたマウスの脾臓細胞を無菌条件下で除去した。ハイブリドーマ細胞の生成、選択及びクローニングを、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹハイブリドーマクローニングキット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用して行った。
【実施例３】
【０４６４】
ＲＯＮ抗体に対するハイブリドーマ細胞のスクリーニング
ＥＬＩＳＡ
ヒトＲＯＮを標的とするｍＡｂを分泌するハイブリドーマクローンを、組換えＲＯＮ及びＧＳＴで別々に被覆した９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）を使用して、ＥＬＩＳＡアッセイによって選択した。個々のハイブリドーマウェルから集めた上澄みを、ＥＬＩＳＡプレート上で試験した。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を、ブロッキング及び抗体希釈に使用した。０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）を有する１ＸＰＢＳを、洗浄に使用した。洗浄後、１０％  ＦＢＳを有するＰＢＳＴ中のＨＲＰ（Ｂｉｏｒａｄ）に結合した１：５０００ヤギ抗マウスＩｇＧを使用して、ＩｇＧを検出した。洗浄後、プレートを、１×ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ基質溶液（Ｓｉｇｍａ）で現像した。吸光度を、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて６５０ｎｍで測定した。
【実施例４】
【０４６５】
免疫蛍光染色
４％パラホルムアルデヒド固定ＨＣＴ１１６及びＴＫＯ細胞に、０．４％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を用いた透過処理を２０分間受けさせた。ＰＢＳですすいだ後、ＰＢＳＴｒｉｔｏｎＸ（ＰＢＳＴＸ）中５％  ＢＳＡを用いて細胞を２０分間ブロックし、４℃でのハイブリドーマ上澄みにおける一晩のインキュベートが続いた。１％ＢＳＡを有するＰＢＳＴＸ中の１：１０００ヤギＡｌｅｘａｆｌｏｒ  ４８８  Ｄｏｎｋｅｙ抗マウスＩｇＧコンジュゲート（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｉｇｉｅｓ）を使用して、ＩｇＧを検出した。その後、細胞をＤＡＰＩで対比染色し、Ｉｎｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて観察した。
【実施例５】
【０４６６】
パラフィン包埋切片の免疫組織化学染色
ＨＴ２９異種移植マウスモデル由来の腫瘍組織を、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＡＭＰＬ），Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙによってパラフィンブロックに加工した。次に、５μｍのワックス切片をスライド（Ｌｅｉｃａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上に集め、５０℃のホットプレート上で１時間乾燥させた。
【０４６７】
切片を、キシレン（ＣｈｅｍＴｅｃｈ  Ｔｒａｄｉｎｇ）中で脱パラフィンし、水に対して下降する割合のエタノール（ＣｈｅｍＴｅｃｈ  Ｔｒａｄｉｎｇ）を介して再水和した。組織切片を、２１００  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｔｒｉｅｖｅｒ  （Ａｐｔｕｍ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）中Ｔａｒｇｅｔ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＨ９（Ｄａｋｏ）を用いて加熱して、抗原を露出させ、次に、ＰＢＳ中で三度すすいだ。内在性ペルオキシダーゼをＰＢＳ中２％（ｖ／ｖ）過酸化水素（Ｍｅｒｃｋ）で３０分間ブロックし、水ですすぎ、次にＰＢＳですすいだ。切片を、ＰＢＳ中１０％（ｖ／ｖ）ヤギ血清（Ｄａｋｏ）で１時間ブロックし、次に、一次抗体６Ｄ４又は７Ｇ８と共に４℃で一晩インキュベートした。
【０４６８】
切片を水道水で洗浄して、次に、ＰＢＳ中ですすいだ後、ヤギ抗マウス又は抗ウサギ免疫グロブリンに結合するＥｎＶｉｓｉｏｎペルオキシダーゼ標識ポリマー（Ｄａｋｏ；適切な濃度）又は１：１００の希釈ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウス又は抗マウスＩｇＧ（Ｆｃγ断片特異的）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共にインキュベートした。次に、抗原抗体相互作用を、３，３′−ジアミノベンジジンを基質として使用して可視化し、切片を、Ｃｙｔｏｓｅａｌ６０合成樹脂（Ｒｉｃｈａｒｄ−Ａｌｌａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標），Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で脱水及びマウントする前にヘマトキシリンで軽く対比染色した。スライドを、ＡｘｉｏＩｍａｇｅｒ  （Ｚｅｉｓｓ）光学顕微鏡を使用して明視野下で画像化し、ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｒｅｌ  ４．８ソフトウェア（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ  ＡＧ）で分析した。
【実施例６】
【０４６９】
腹水産生
ＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ′ｓ  Ａｄｊｕｖａｎｔ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）０．２５ｍＬを単回腹腔内（ＩＰ）注射した。１４日後、マウスに、０．５ｍＬの体積中４×１０５の上記のハイブリドーマ細胞を単回腹腔内注射した後、腹部膨満によって認識される腹水の発生を毎日調べた。
【０４７０】
ハイブリドーマ細胞の注射の７から１０日後、マウスに麻酔をかけ、腹水の採取を、全てのグループの全てのマウスに対して行った。腹水を、１８〜２２ゲージの針を用いた腹腔穿刺によって、無菌の遠心管への重力流によって、麻酔をかけられたマウスから無菌的に採取した。指圧を腹部に優しく加え、必要に応じてマウスの位置を変えて腹水の除去を促進した。腹水を、それぞれ別のケージのマウスに対してプールした。
【実施例７】
【０４７１】
得られた抗体のエピトープマッピング
Ｐｅｐｓｃａｎ
細胞外ヒトＲＯＮ配列を覆う重複（５アミノ酸）２５−ｍｅｒペプチドを、Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓから注文し、全部で９３のビオチン化ペプチドを生成した。そのペプチドを、１００％  ＤＭＳＯにおいて再懸濁して３０ｍｇ／ｍｌの保存液を調製し、次にこれを１０ｕｇ／ｍｌまで希釈した後、ストレプトアビジン高結合能被覆９６−ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ）に室温にて１時間添加した。ＥＬＩＳＡを、製造業者のプロトコルのとおり行った。要するに、１ｕｇ／ｍｌの精製抗体をプレート内に添加し、室温で３０分間インキュベートした。ＰＢＳＴで洗浄した後、１０％ＦＢＳを有するＰＢＳＴ中のＨＲＰ（Ｂｉｏｒａｄ）に結合した１：５０００のヤギ抗マウスＩｇＧを使用して、ＩｇＧを検出した。その後、プレートを１  Ｘ  ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ基質溶液（Ｓｉｇｍａ）で染色し、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて６５０ｎｍにて吸光度を測定した。
【０４７２】
ペプチドファージディスプレイ
ｐＩＩＩ被覆タンパク質（２．７×１０９配列）のＮＨ２末端にて無作為の１２−ｍｅｒペプチドをコードするＭ１３ファージライブラリー（Ｐｈ．Ｄ．−１２，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用した。５０ｎｍの精製抗体を、９６ウェルのＭａｘｉｓｏｒｐプレート（Ｎｕｎｃ）上に被覆した。ウェルを、ブロッキング緩衝液（１ＸＰＢＳ、０．５％  Ｔｗｅｅｎ２０、２％  ＢＳＡ）と共に室温で１時間インキュベートし、洗浄緩衝液（１ＸＰＢＳ、１％  Ｔｗｅｅｎ２０、２％  ＢＳＡ）で洗浄し、さらに、４×１０１０ファージと共に室温にて洗浄緩衝液中でインキュベートした。結合したファージを０．２Ｍグリシン（ｐＨ２．２）で溶出し、１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ９．１）で中和した。溶出したファージを、製造業者により指示されているように増幅した。選択プロセスを３サイクル繰り返した。最後の回からのファージプラークを、製造業者により記載されているように採取し、配列決定した。
【実施例８】
【０４７３】
抗体を使用する細胞増殖アッセイ
ＲＯＮ発現ＨＣＴ１１６細胞を、各ウェル１０００個の細胞で９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）に播種した。８時間の血清飢餓期間の後、特定濃度の濾過滅菌精製ｍＡｂをウェルに添加し、細胞をさらに３日間インキュベートした。
【０４７４】
ＩｎｃｕＣｙｔｅシステム
ＲＯＮ発現ＨＣＴ１１６細胞を９６ウェルプレートに移し、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＨＤシステム（Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）を使用して画像化した。フレームを、２０×対物レンズを使用して、１つのウェルあたり４つの別々の９５０×７６０−μｍ２領域から２時間間隔でキャプチャした。播種した細胞を、８時間血清飢餓状態とし、濾過滅菌精製ｍＡｂを各処理ウェル内に添加した。抗ＲＯＮ  ｍＡｂｓを１０μｇ／ｍｌにて添加してから３０分後に、ＩｇＧ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ−ＤＭ１  ２°ＡＤＣ（Ｍｏｒａｄｅｃ）を細胞に添加した。培養物を、ずっとウォータージャケットＣＯ２インキュベーションチャンバー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において３７℃で維持し、７２時間にわたって３回実行した。細胞培養密度データを、ＩｎｃｕＣｙｔｅソフトウェアによって計算した。各ウェルの３つの領域全てからの値をプールし、３つの増殖全てにわたって平均した。
【実施例９】
【０４７５】
受容体依存性エンドサイトーシス
９６ウェルプレートにおける１つのウェルあたり５×１０４細胞の細胞を、４℃で一晩又は３７℃で１時間、１０ｕｇ／ｍｌ  ｍＡｂで処理し、ＦＩＴＣと結合したヤギ抗マウスＩｇＧでの処理が続いた。固定を、その後、４％  ＰＦＡを使用して２０分間行った。核ＤＮＡを４′６‐ジアミノ‐２‐フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色した。Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｃｏｎｆｏｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ  ＦＶ１０００下で免疫蛍光を観察した。
【実施例１０】
【０４７６】
ウェスタンブロットアッセイ
プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を補充したＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶解を行った。ＱｕｉｃｋＳｔａｒｔ  Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ＢＳＡを標準としてタンパク質濃度を決定した。全タンパク質のうち等量を、ＮｕＰＡＧＥドデシル硫酸リチウム（ＬＤＳ）及び試料還元緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と混合し、９５℃で５分間加熱し、電気泳動のためにＮｕＰＡＧＥ１０％又は１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）内に添加した。分けられたタンパク質を、ｉＢｌｏｔ  ２ゲルトランスファー装置（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してニトロセルロース膜上に移した。ブロッキングを、０．１％Ｔｗｅｅｎ（ＴＢＳＴ）を補充したＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中５％ミルク又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて行った。ＡＫＴ（４２９８Ｓ）、ＥＲＫ１／２（４３４８Ｓ）、ｐ−ＡＫＴ（９２７１Ｓ）、及びｐ−ＥＲＫ（８５４４Ｓ）抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ由来であった。ＲＯＮ抗体を自主作製し、Ａｃｔｉｎ−ＨＲＰ（Ａ３８５４）はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。抗ウサギ（Ｐ０２１７）及び抗マウス（Ｐ０１６１）二次抗体はＤａｋｏ由来であった。使用した増強化学発光（ＥＣＬ）試薬はＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｄｕｒａ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｄｕｒａｔｉｏｎ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃３４０７６）であった。画像化及び取得は、Ｌｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｆｃ及びＩｍａｇｅ  Ｓｔｕｄｉｏ  （バージョン３．１）を用いて行った。
【実施例１１】
【０４７７】
細胞生存率アッセイ
代謝的に活性な細胞によって生成されたＡＴＰを定量化するために、細胞生存率アッセイを行った。アッセイは、製造業者の指示のとおりにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏルミネセンス細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して行った。要するに、５×１０３細胞／ｍｌを、完全ＭｃＣｏｙ５Ａ培地において増加濃度のｍＡｂ（０から２０μＭ）の存在下で滅菌９６ウェルプレートにおいて培養した。次に、プレートを７２時間インキュベートし、次に、１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を添加して細胞を溶解した。室温で１０分間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）上で１つのウェルあたり１秒の積分時間でルミノメーターにおいて発光を記録した。抗体で処理された細胞に対する発光信号を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で処理された細胞から得た発光信号によって正規化した。
【実施例１２】
【０４７８】
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）
標的細胞を、製造業者の指示に従ってＤＥＬＦＩＡ  ＢＡＴＤＡ試薬（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で標識した。標識後、細胞を３７℃にて６０分間抗体で被覆した。その細胞を洗浄し、次に、ウサギ補体（１０％）と共に６０分間３７℃にて共培養した。次に、細胞上澄みをＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕｒｏｐｉｕｍ溶液と反応させ、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して蛍光を測定した。特異的溶解を、式：（実験的溶解数−自発的溶解数）÷（（溶解緩衝液による）最大溶解数−自発的溶解数）×１００％によって計算した。
【実施例１３】
【０４７９】
抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
標的細胞を、製造業者の指示に従ってＤＥＬＦＩＡ  ＢＡＴＤＡ試薬（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で標識した。標識後、細胞を３７℃にて６０分間抗体で被覆した。その細胞を洗浄し、次に、エフェクター細胞と共に１５０：１の比（エフェクター対標的）で３７℃にて一晩共培養した。次に、細胞上澄みをＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕｒｏｐｉｕｍ溶液と反応させ、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ  （Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して蛍光を測定した。特異的溶解を、式：（実験的溶解数−自発的溶解数）÷（（溶解緩衝液による）最大溶解数−自発的溶解数）×１００％によって計算した。
【実施例１４】
【０４８０】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの実験結果及び動物モデル
ＨＴ２９ヒト異種移植マウスモデルにおける腫瘍成長を阻害する抗体
モノクローナル抗体は、がん免疫療法のターゲティングにおいて大きな役割を果たす。ＲＯＮは、がん細胞において過剰発現され、正常細胞において最小限に発現されるため、がん治療のための標的となる理想的な候補として同定される。ＲＯＮは、線維芽細胞、内皮細胞、及び血中白血球において発現されないため、ＲＯＮのターゲティングは良好な安全性プロフィールを有する。抗ＲＯＮマウスｍＡｂの７Ｇ８及び６Ｄ４を、ヒト異種移植マウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻害するその能力について試験した。ＨＴ‐２９がん細胞異種移植実験のために、雌のｎｕ／ｎｕヌードマウス（８週齢；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ）に、１匹のマウスあたり５×１０６ＨＴ‐２９‐ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を皮下接種した。マウスを、異なるグループ（１つのグループあたり５匹のマウス）に無作為化した。この試験は、全部で８回の静脈内注射で３〜４日毎に１０ｍｇ／ｋｇの抗体でマウスを処理することによって行った。対照グループには、ＰＢＳを静脈内注射した。個々の腫瘍からの生物発光を、Ｃａｌｉｐｅｒ  ＩＶＩＳ画像システム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して２１日目に測定した。腫瘍体積が２，０００ｍｍ３を超える場合、又は、腫瘍が壊死した若しくは皮膚を通って潰瘍化した場合、動物を安楽死させた。
【０４８１】
ヒト細胞株ＨＴ２９−ｌｕｃ由来腫瘍に対するｍＡｂの６Ｄ４又は７Ｇ８の複数回投与（１５ｍｇ／ｋｇ）の治療効果を調査した。投薬を図３１Ａに従って行った。２１日目に、ｍＡｂ  ７Ｇ８で処理したヌードマウスは、対照と比較して７６．４５％の腫瘍サイズの阻害を示し、ｍＡｂ  ６Ｄ４で処理したマウスは、ＰＢＳ対照と比較して５０．１９％の腫瘍サイズの阻害を示した。抗体７Ｇ８及び６Ｄ４はいずれも、ヌードマウスにおけるＨＴ２９腫瘍異種移植成長を阻害する治療能力を示した（図３１Ａ）。
【実施例１５】
【０４８２】
ヒト異種移植マウスのイメージング
モノクローナル抗体は、がん免疫療法のターゲティングにおいて大きな役割を果たす。ＲＯＮは、がん細胞において過剰発現され、正常細胞において最小限に発現されるため、がん治療のための標的となる理想的な候補として同定される。ＲＯＮは、線維芽細胞、内皮細胞、及び血中白血球において発現されないため、ＲＯＮのターゲティングは良好な安全性プロフィールを有する。
【０４８３】
抗ＲＯＮマウスｍＡｂの７Ｇ８及び６Ｄ４を、ヒト異種移植マウスモデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻害するその能力について試験した。ＨＴ‐２９がん細胞異種移植実験のために、雌のｎｕ／ｎｕヌードマウス（８週齢；Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｒｅ）に、１匹のマウスあたり５×１０６ＨＴ‐２９‐ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を皮下接種した。
【０４８４】
マウスを、異なるグループ（１つのグループあたり５匹のマウス）に無作為化した。この試験は、全部で８回の静脈内注射で３〜４日毎に１０ｍｇ／ｋｇの抗体でマウスを処理することによって行った。対照グループには、ＰＢＳを静脈内注射した。
【０４８５】
個々の腫瘍からの生物発光を、Ｃａｌｉｐｅｒ  ＩＶＩＳ画像システム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して２１日目に測定した。腫瘍体積が２，０００ｍｍ３を超える場合、又は、腫瘍が壊死した若しくは皮膚を通って潰瘍化した場合、動物を安楽死させた。
【０４８６】
ヒト細胞株ＨＴ２９−ｌｕｃ由来腫瘍に対するｍＡｂの６Ｄ４又は７Ｇ８の複数回投与（１５ｍｇ／ｋｇ）の治療効果を調査した。投薬を図３１〜４２に従って行った。２１日目に、ｍＡｂ  ７Ｇ８で処理したヌードマウスは、対照と比較して７６．４５％の腫瘍サイズの阻害を示し、ｍＡｂ  ６Ｄ４で処理したマウスは、ＰＢＳ対照と比較して５０．１９％の腫瘍サイズの阻害を示した。抗体７Ｇ８及び６Ｄ４はいずれも、ヌードマウスにおけるＨＴ２９腫瘍異種移植成長を阻害する治療能力を示した（図３１〜４２）。
【０４８７】
ＨＴ−２９腫瘍保有ヌードマウスを、イメージング実験のために使用した。調査を行って、ｍＡｂの６Ｄ４及び７Ｇ８をｉｎ  ｖｉｖｏ分子としてがんにおけるＲＯＮ発現腫瘍を検出するのに使用することができるかどうかを決定した。蛍光色素（ＸｅｎｏＬｉｇｈｔ  ＣＦ７５０，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を、その反応基を介して６Ｄ４及び７Ｇ８と結合させた。ＣＦ７５０の蛍光信号の検出を、Ｃａｌｉｐｅｒ  ＩＶＩＳ画像システム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して非侵襲的に行い、励起を波長７１０ｎｍに設定し、発光を７８０ｎｍに設定した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２４−１】
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【図２４−２】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
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【図２６−１】
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【図２６−２】
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【図２７−１】
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【図２７−２】
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【図２８−１】
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【図２８−２】
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【図２９Ａ−１】
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【図２９Ａ−２】
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【図２９Ｂ−１】
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【図２９Ｂ−２】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３１Ｃ】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４８Ａ】
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【図４８Ｂ】
2020500834.tif 000100
【図４９Ａ】
2020500834.tif 000101
【図４９Ｂ】
2020500834.tif 000102
【図５０Ａ−１】
2020500834.tif 000103
【図５０Ａ−２】
2020500834.tif 000104
【図５０Ｂ−１】
2020500834.tif 000105
【図５０Ｂ−２】
2020500834.tif 000106
【図５１】
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【配列表】
2020500834000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年6月26日(2018.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３の重鎖ＣＤＲ、及び、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３の軽鎖ＣＤＲを含む抗原結合領域であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、及び配列番号１３５、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、及び配列番号１３６、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、及び配列番号１３７、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、及び配列番号１４４、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、及び配列番号１０９、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号１１０、配列番号１２３、及び配列番号１４５、又は、前記配列とは１つ又は２つのアミノ酸が異なるＣＤＲＬ３配列を含む群から選択される、
抗原結合領域。
【請求項２】
ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む抗原特異的結合領域であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、配列番号１、配列番号２７、配列番号４５、配列番号５６、配列番号７３、配列番号８９、配列番号１００、配列番号１１６、配列番号１３５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ１を含む群から選択され、
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、配列番号２、配列番号２８、配列番号４６、配列番号５７、配列番号７４、配列番号９０、配列番号１０１、配列番号１１７、配列番号１３６、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ２を含む群から選択され、
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、配列番号３、配列番号２９、配列番号４７、配列番号５８、配列番号７５、配列番号９１、配列番号１０２、配列番号１３７、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＨ３を含む群から選択され、
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、配列番号１８、配列番号３６、配列番号６５、配列番号８１、配列番号１０８、配列番号１４４、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ１を含む群から選択され、
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、配列番号１９、配列番号３７、配列番号６６、配列番号８２、配列番号１０９、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ２を含む群から選択され、さらに、
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、配列番号２０、配列番号３８、配列番号６７、配列番号８３、配列番号１１０、配列番号１２３、配列番号１４５、及び１つ又は２つのアミノ酸が置換、除去又は付加されるという点で前記配列のいずれとも異なるＣＤＲＬ３を含む群から選択される、
抗原特異的結合領域。
【請求項３】
ＣＤＲＨ１は配列番号１であり、ＣＤＲＨ２は配列番号２であり、さらにＣＤＲＨ３は配列番号３である、請求項１又は２に記載の抗原特異的結合領域、又は、１つ又は複数の修飾された配列１、２及び３が利用され、前記１つ又は複数の修飾は、１つ又は２つのアミノ酸の置換、除去又は付加から独立して選択される、抗原特異的結合領域。
【請求項４】
前記重鎖ＣＤＲは、
（ａ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号２であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号３であること、
（ｂ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号２７であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号２８であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号２９であること、
（ｃ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号４５であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号４６であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号４７であること、
（ｄ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号５６であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号５７であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号５８であること、
（ｅ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号７３であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号７４であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号７５であること、
（ｆ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号８９であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号９０であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号９１であること、
（ｇ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１００であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号１０１であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号１０２であること、
（ｈ）前記ＣＤＲＨ１が配列番号１３５であり、前記ＣＤＲＨ２が配列番号１３６であり、前記ＣＤＲＨ３が配列番号１３７であること、
を含む群から選択される、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項５】
前記軽鎖ＣＤＲは、
（ａ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１８であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号１９であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号２０であること、
（ｂ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号３６であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号３８であること、
（ｃ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号６５であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号６６であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号６７であること、
（ｄ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号８１であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号８２であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号８３であること、
（ｅ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１０８であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号１０９であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号１１０であること、
（ｆ）前記ＣＤＲＬ１が配列番号１４４であり、前記ＣＤＲＬ２が配列番号３７であり、前記ＣＤＲＬ３が配列番号１４５であること、
を含む群から選択される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項６】
可変重鎖領域が、
（ｉ）配列番号８、
（ｉｉ）配列番号３４、
（ｉｉｉ）配列番号５１、
（ｉｖ）配列番号６３、
（ｖ）配列番号７９、
（ｖｉ）配列番号９５、
（ｖｉｉ）配列番号１０６、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１４２、
を含む群から選択された配列を有する、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項７】
可変軽鎖領域が、
（ｉ）配列番号２５、
（ｉｉ）配列番号４３、
（ｉｉｉ）配列番号５４、
（ｉｖ）配列番号７１、
（ｖ）配列番号８７、
（ｖｉ）配列番号９８、
（ｖｉｉ）配列番号１１４、及び、
（ｖｉｉｉ）配列番号１５０、
を含む群から選択された配列を有する、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の抗原特異的結合領域。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域を含むキメラ抗原受容体。
【請求項９】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域を含む単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体の分子は、多特異性抗体、全長抗体、又は抗体結合断片から選択される、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記多特異性抗体は、二重特異性抗体である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記二重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞誘導体である、請求項１０又は１１に記載の抗体。
【請求項１３】
前記二重特異性抗体は、第１ＲＯＮ（マクロファージ刺激タンパク質受容体又はＲＯＮ（Ｒｅｃｅｐｔｅｕｒ  ｄ′Ｏｒｉｇｉｎｅ  Ｎａｎｔａｉｓ））エピトープに特異的に結合する第１結合領域、及び、前記第１ＲＯＮエピトープとは異なる第２ＲＯＮエピトープに特異的に結合する第２結合領域を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
第１ＲＯＮ結合領域が、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１５】
それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３、並びに、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３を含む第２ＲＯＮ結合領域をさらに含む、請求項９乃至１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体は、エフェクター機能を含む、請求項９乃至１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体は、ペイロードに結合される、請求項９乃至１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
前記ペイロードは、毒素、ポリマー、生物学的に活性なタンパク質、核酸及びその断片、放射性核種キレート化金属、ナノ粒子及びレポーター基を含む群から選択される、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記毒素は、アウリスタチン、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンＦ）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、マイタンシノイド、カリチアマイシン、ドラスタチン、マイタンシン、α−アマニチン、及びチューブリシンを含む群から選択される、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体と、賦形剤、希釈剤及び／又は担体とを含む医薬組成物。
【請求項２１】
請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の少なくとも２つの抗原特異的抗体を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも２つの抗原特異的抗体のうちの１つが、それぞれ配列番号１、２、３で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号１８、１９及び２０で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含み、任意的に、前記少なくとも２つの抗体のうち第２抗体が、それぞれ配列番号２７、２８、２９で示されるＣＤＲＨ１、Ｈ２及びＨ３と、配列番号３６、３７及び３８で示されるＣＤＲＬ１、Ｌ２及びＬ３とを含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
治療において使用するための、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
患者におけるがん又は線維症を予防又は治療する方法であって、予防又は治療の必要がある患者に治療有効量の、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２５】
前記患者は患者集団であり、前記集団を構成する患者はＲＯＮ陽性腫瘍を有することを特徴とする、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者は、ＲＯＮ陽性及びＣ−ＭＥＴ陽性腫瘍を有する、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
治療前にＲＯＮ陽性腫瘍を有すると前記患者を同定するステップを含む、請求項２４乃至２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
がん又は線維症の治療のための医薬の製造における、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の抗原結合領域、又は請求項８に記載のキメラ抗原受容体、又は請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２０乃至２２のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２９】
配列番号８、配列番号３４、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７９、配列番号９５、配列番号１０６、配列番号１２１、配列番号１３０、配列番号１３３又は１４２の可変の重鎖領域（ＶＨ）を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体。
【請求項３０】
配列番号８と２５、配列番号３４と４３、配列番号５１と５４、配列番号６３と７１、配列番号７９と８７、配列番号９５と９８、配列番号１０６と１１４、配列番号１２１と１３０、又は配列番号１４２と１５０から選択される可変の重鎖領域／可変の軽鎖領域（ＶＨ／ＶＬ）の対を含む抗体と同じエピトープをクロスブロックするか又は該エピトープに結合する抗体。
【請求項３１】
がんの状態を評価するｅｘ  ｖｉｖｏでの方法であって、
（ａ）前記がんの腫瘍を含むことが知られている患者又は該患者の特定の部位を走査するステップであり、前記患者は、第１の時点で標識された形態の抗体を投与されており、前記抗体は、請求項９乃至１９のいずれか一項に記載の抗体である、ステップ、
（ｂ）１つ又は複数のさらなる時点で（ａ）を繰り返し、さらに、２つ以上の時点からの結果を比較して、前記がんの状態を評価するステップ、
を含む方法。
【国際調査報告】
2020500834.tif 000108
2020500834.tif 000109
2020500834.tif 000110
2020500834.tif 000111
2020500834.tif 000112