(57)【要約】血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物を作製する方法が記載される。本方法は、哺乳動物から血液を採取するか、または哺乳動物由来の血液を提供する段階；該血液を容器に送達する段階；該血液を遠心分離して該血液から多血小板血漿成分を分離する段階；該多血小板血漿成分を収集する段階；血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物を作製するために該多血小板血漿成分を細孔フィルターに通す段階；および、該保存安定性自己由来組成物を収集する段階を含む。該保存安定性自己由来組成物は、凍結状態で保存された場合に少なくとも9ヶ月間まで再生生物学的活性を保持する。記載の方法によって作製される、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物も記載される。2020500933.tif 000005
2020500933.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物を作製する方法であって、
哺乳動物由来の血液を提供する段階；
該血液を容器に送達する段階；
該血液を遠心分離して多血小板血漿成分を該血液から分離する段階；
該多血小板血漿成分を収集する段階；
血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む該保存安定性自己由来組成物を作製するために該多血小板血漿成分を細孔フィルターに通す段階；および
該保存安定性自己由来組成物を収集する段階
を含み、該保存安定性自己由来組成物が、凍結状態で保存された場合に少なくとも9か月間まで再生生物学的活性を保持する、該方法。
【請求項２】
前記保存安定性自己由来組成物が-70〜-196℃の範囲内の温度で保存される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記保存安定性自己由来組成物が-80℃で保存される、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記保存安定性自己由来組成物が-196℃で保存される、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記保存安定性自己由来組成物が、二度目に、0.15μm〜1μmの範囲内の孔サイズを有する第二の細孔フィルターに通して送達される、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記細孔フィルターの孔サイズが0.15μm〜1μmの範囲内にある、請求項1に記載の方法。
【請求項７】
前記細孔フィルターの孔サイズが約0.22μmである、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
前記成長因子および前記サイトカインが、IL-4、IL-10、IL-13、PDGF、TGF-β、IGF1、およびVEGFを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
前記容器が、ある量の抗凝血物質を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗凝血物質が約4％のクエン酸である、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記容器が管である、請求項1に記載の方法。
【請求項１２】
前記保存安定性自己由来組成物を凍結および保存する前に、該保存安定性自己由来組成物をアリコートに分割する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１３】
前記アリコートが、前記保存安定性自己由来組成物の体積で約10ccである、請求項1に記載の方法。
【請求項１４】
前記血液を遠心分離して多血小板血漿成分を該血液から分離する段階が、約7500rpmで約30秒間行われる、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
請求項1の方法によって作製された、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物。
【請求項１６】
請求項9の方法によって作製された、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物。
【請求項１７】
血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物であって、
生物学的に活性な濃度のIL-4、IL-10、IL-13、PDGF、TGF-β、IGF1、およびVEGFを含み、-70〜-196℃の範囲内の温度において凍結状態で保存された場合に少なくとも9か月間まで再生生物学的活性を保持する、該保存安定性自己由来組成物。
【請求項１８】
保存温度が-80℃である、請求項17に記載の保存安定性自己由来組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は概して薬物に指向しており、より特定的には、中でも慢性腱症、慢性筋断裂（腱炎）、軟骨組織断裂、変形性関節症のような慢性変形性関節疾患、ならびにアトピー性皮膚炎および慢性的な創傷を含む慢性炎症性皮膚疾患を含む、損傷および／または負傷した結合組織の治療において有用な生体組成物の長期間の保存のための方法に指向している。さらに、該生体組成物は、歯科インプラントを含む歯科治療、および美容適用のために使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
背景
多血小板血漿（PRP）療法は、哺乳動物における、損傷および／もしくは負傷した結合組織、慢性腱症、慢性筋断裂、および／もしくは慢性変形性関節疾患、ならびに炎症性皮膚疾患の治療のために使用される。多血小板血漿は、典型的には多血小板成分を単離するための血液の遠心分離により、血小板を濃縮した血漿である。血小板は、損傷および／もしくは負傷した結合組織、慢性腱症、慢性筋断裂、および／もしくは変形性関節症のような慢性変形性関節疾患、ならびに、炎症性皮膚疾患の治療に有効な成長因子およびサイトカインを含むタンパク質を含有する。これらのタンパク質は、歯科インプラント装置によって引き起こされる歯科インプラント関連炎症についての適用を含む歯槽骨炎症の治療において有用である。さらに、これらのタンパク質は美容目的のためにも有効である。これらのサイトカインおよび成長因子はIL-4、IL-10、IL-13、VEGF、PDGF、TGFβ、およびIGFを含む。
【０００３】
成長因子およびサイトカインが血小板から放出されるためには、血小板は活性化されなければならない。血小板の凝集が血小板の早期活性化をもたらし、その結果、成長因子およびサイトカインが血小板から早期に放出されるため、PRP画分は典型的には、血液抗凝血物質の存在下で収集される。幾つかのPRP調製工程には30分ほどかかる。そのような工程において抗凝血物質を使用しないと、PRP成分を単離する前に血液が凝固してしまう可能性がある。
【０００４】
クエン酸ナトリウムのような抗凝血物質の存在下において収集されたPRP画分については、多くの手段で血小板の活性化を達成することができる。これらの手段は、CaClの添加、トロンビンの添加、血小板の凍結および解凍、ならびに超音波の使用を含む。
【０００５】
これらの活性化法の各々には欠点がある。凍結-解凍サイクルの繰り返しは、TGFβおよびPDGFのような生物学的に活性なタンパク質の分解をもたらす。トロンビンのウシ動物タンパク質は、病原体のもととなり得るか、または、アレルギー反応をもたらし得る。あるPRPキットにおいて使用されるヒトトロンビンは非常に高価である。CaClを添加すると、サイトカインレベルおよび成長因子レベルの重要な測定を行う能力が干渉され、PRP組成物に不純物が混じるもととなる。最後に、超音波の使用には規制問題があり、かつ、この技術は信頼し得る有効性を有することが示されていない。
【０００６】
したがって、血小板を活性化して、それにより、その中に含有される成長因子およびサイトカインを放出させる、より効率的な方法が必要とされている。
【０００７】
活性化された血小板から得られた成長因子とサイトカインとを含有する組成物は典型的には、生物学的活性を失うまで室温で約6時間しか保存できない。典型的なPRP治療プロトコールでは、3〜9か月間の期間に渡って数回のフォローアップでの注射が必要とされる。典型的なPRP組成物は、治療と治療の間の期間には保存されない。したがって、毎回の来診時に患者から血液を採取する必要があり、各PRP治療にしばしば高価なキットが使用される。この治療計画は侵襲的でもあり高価でもある。
【０００８】
したがって、血小板から得られた成長因子とサイトカインとを含む組成物を作製する方法であって、該組成物が、損傷および／もしくは負傷した結合組織、慢性腱症、慢性筋断裂、ならびに／または変形性関節症のような慢性変形性関節疾患、炎症性皮膚疾患、美容適用、ならびに歯槽骨炎症を治療するのに有効であり、かつ、該組成物が、該組成物の生物学的活性を低下させることなく9か月間まで保存されることができる、該方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００９】
開示の概要
多血小板血漿から得られたサイトカインと成長因子とを含むタンパク質を含有する安定性組成物を作製するための方法が記載される。組成物中のサイトカインおよび成長因子は、凍結された場合の少なくとも9か月間までの長期保存の後も生物学的活性および治療効果を保持する。組成物は好ましくは-70℃〜-196℃の間で保存される。組成物は、超低温フリーザーを使用することによって-70℃の温度において保存することができる。液体窒素の使用を含む、当技術分野において公知の方法によって、-196℃における保存は達成することができる。凍結状態でのそのような長期保存の後に、損傷および／もしくは負傷した結合組織、慢性腱症、慢性筋断裂、および／もしくは変形性関節症のような慢性変形性関節疾患、炎症性皮膚疾患、ならびに歯槽骨炎症の治療について、組成物は依然として有効である。好ましくは、組成物はIL-4、IL-10、IL-13、VEGF、PDGF、TGFβを含む。また、本明細書において記載される方法によって作製される組成物についても記載される。
【００１０】
ある局面に従って、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物を作製する方法が提供され、該方法は、以下の段階：哺乳動物から血液を採取するか、または哺乳動物由来の血液を提供する段階；該血液を、好ましくは抗凝血物質を含む容器に送達する段階；該血液を遠心分離して多血小板血漿成分を該血液から分離する段階；該多血小板血漿成分を収集する段階；血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物を作製するために該多血小板血漿成分を細孔フィルターに通す段階；および、該保存安定性自己由来組成物を収集する段階を含み、該保存安定性自己由来組成物は、凍結状態で保存された場合に少なくとも9か月間まで再生生物学的活性を保持する。
【００１１】
別の局面に従って、本明細書において記載される方法によって作製される、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物が提供される。
【００１２】
別の局面に従って、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物が提供され、該組成物は、生物学的に活性な濃度のIL-4、IL-10、IL-13、PDGF、TGF-β、IGF1、およびVEGFを含み、該保存安定性自己由来組成物は、凍結状態で保存された場合に少なくとも9か月間まで再生生物学的活性を保持する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】トロンビンにより活性化したPRPにおけるIL-4レベルと機械的に活性化したPRPにおけるIL-4レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-4濃度の図である。
【図２】トロンビンにより活性化したPRPにおけるIL-10レベルと機械的に活性化したPRPにおけるIL-10レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-10濃度の図である。
【図３】トロンビンにより活性化したPRPにおけるIL-13レベルと機械的に活性化したPRPにおけるIL-13レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-13濃度の図である。
【図４】トロンビンにより活性化したPRPにおけるPDGFレベルと機械的に活性化したPRPにおけるPDGFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のPDGF濃度の図である。
【図５】トロンビンにより活性化したPRPにおけるVEGFレベルと機械的に活性化したPRPにおけるVEGFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のVEGF濃度の図である。
【図６】トロンビンにより活性化したPRPにおけるTGFβレベルと機械的に活性化したPRPにおけるTGFβレベルとの比較を示す、pg/ml単位のTGFβ濃度の図である。
【図７】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるIL-4レベルと9か月間保存された安定性溶液におけるIL-4レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-4濃度の図である。
【図８】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるIL-10レベルと9か月間保存された安定性溶液におけるIL-10レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-10濃度の図である。
【図９】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるIL-13レベルと9か月間保存された安定性溶液におけるIL-13レベルとの間の比較を示すグラフである。
【図１０】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるPGDFレベルと9か月間保存された安定性溶液におけるPDGFレベルとの間の比較を示すグラフである。
【図１１】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるVEGFレベルと9か月間保存された安定性溶液におけるVEGFレベルとの間の比較を示すグラフである。
【図１２】図12Aは、多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるTGFβレベルと9か月間保存された安定性溶液におけるTGFβレベルとの間の比較を示すグラフである。図12Bは、異なる条件におけるTGF-β1濃度の不安定性を示すグラフである。
【図１３】多血小板血漿成分についての新鮮な安定性溶液におけるIFG1レベルと9か月間保存された安定性溶液におけるIFG1レベルとの間の比較を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
本開示は、多血小板血漿成分を含む安定性組成物を作製するための方法に関し、該組成物は、損傷および／もしくは負傷した結合組織、慢性腱症、慢性筋断裂、および／もしくは変形性関節症のような慢性変形性関節疾患、炎症性皮膚疾患、ならびに、歯科インプラントなどによって引き起こされる歯槽骨炎症を治療するために、好ましくは-70℃〜-196℃において保存された場合の少なくとも9か月間までの長期保存後に生物学的活性および治療効果を保持する。
【００１５】
前記組成物の多血小板血漿成分は好ましくは、以下の治療的に活性なタンパク質を含む：IL-45、IL-106,7、IL-138、PDGF9、TGF-β10,11、IGF1、およびVEGF。12,13,14
【００１６】
IL-4、IL-10、IL-13、PDGF、IGF1、TGF-βは、血小板α顆粒に含有され、かつ、多血小板血漿成分によって組成物に送達される。該組成物を長期間保存できることによって、患者に投与するのに効率良くかつ対費用効果の良い、強力かつ入手可能な生理活性自己由来産物が提供される。したがって、多血小板血漿成分に含まれる治療的に活性なタンパク質の保存安定性組成物により、再生生物学的因子および抗炎症性サイトカインおよび成長因子の供給源が提供される。該組成物によって、変形性関節症を含む変形性疾患、慢性腱症および慢性筋断裂ならびに炎症性皮膚疾患、ならびに、歯科インプラント装置によって引き起こされる歯科インプラント関連炎症のような歯科処置によって引き起こされる歯槽骨炎症の効果的かつ対費用効果の良い治療も提供される。加えて、該組成物によって効果的かつ対費用効果の良い美容適用も提供される。
【００１７】
本明細書において使用される場合、「治療」は、対象における疼痛および／または炎症が低減される再生治療および緩和療法を含む。
【００１８】
血小板から得られた再生性成長因子およびサイトカインを好ましくは含む、多血小板血漿成分の安定性組成物を作製および保存するための記載される方法は、哺乳動物の自己由来生理液、好ましくは血液を、無菌操作によって採取する段階を含む。好ましくは、哺乳動物はヒトである。しかし、この組成物および方法は、例えばウマ、イヌ、およびラクダの治療のような広範な獣医学的適用についても好適である。
【００１９】
静脈穿刺の部位および採取管の表面は2％チンキのヨウ素溶液で洗浄してよい。部位の洗浄を始める前にはいずれも、患者はヨウ素に対するアレルギーがないかどうかを問われ得る。また採血前の起こりうる汚染も避けるために、採取用容器のカバーは80％アルコール溶液で洗浄される。
【００２０】
採血は好ましくは、抗凝血物質の存在下で実施される。好ましくは、該抗凝血物質は4％クエン酸である。好ましくは、比率は分率で全血9.5（9.5cc）：4％クエン酸0.5（0.5cc）である。その後、血液を約7500 rpmにて好ましくは約30秒間遠心分離に供して、PRP画分を単離する。しかし、当業者には、血液を加工できること、または、Harvest（商標）およびArthrex（商標）のような商業的に入手可能なキットを用いてPRP画分を単離できることが理解される。
【００２１】
好ましくは、単離されたPRP画分を回収し、細孔サイズのフィルターに通して滅菌プラスチックバイアルに収集することによって、PRP画分を機械的に活性化する。好ましくは、フィルターの孔サイズは約0.15μm〜約1μmの範囲内にある。最も好ましくは、フィルターの孔サイズは約0.22μmである。本方法を実施するのに好適なフィルターの一例は、Millipore Corporation, Millex-GP 33mm PES.22um Sterile, Catalog N SLGPM33RSである。好ましくは、該PRP画分をシリンジに添加してシリンジの動作によって該PRP画分をフィルターに通して送ることで、単離されたPRP画分がこのフィルターに通される。
【００２２】
多血小板血漿成分を細孔フィルターに通すことによって、PRP画分中の血小板が機械的に活性化される。これによって血小板からサイトカインおよび成長因子が放出される。血小板細片はフィルターに捕捉される。PRP画分をこのフィルターに通した後に得られる液体組成物は、血小板から得られた再生性成長因子とサイトカインとを含む保存安定性自己由来組成物である。
【００２３】
好ましくは、その後保存安定性自己由来組成物は、二度目に、約0.15μm〜約1μmの範囲内の孔サイズ、好ましくは約0.22μmの孔サイズを有する別個の細孔フィルターに通す。PRP画分を一度目に通したフィルターと同じフィルターを使用することは可能である。しかし、フィルターの目詰まりの可能性があるためこれは好ましくない。
【００２４】
次の段階は、保存安定性自己由来組成物を収集すること、および滅菌技術を用いた今後の加工のために、または保存のために、それをアリコートに分割することを含む。この工程は、滅菌環境において（HEPAフィルターを用いたラミナーフローフードにおいて）実施される。生物学的に活性な作用物質を含有する保存安定性自己由来組成物の2〜4 ccを、滅菌シリンジおよび滅菌針によって慎重に抜き取る。PRP成分含有産物の長期保存は、これらのアリコートを凍結させることによって達成される。好ましくは、アリコートは、約-70℃〜約-196℃の範囲内の温度、最も好ましくは約-80℃の温度で凍結され、その後、該保存安定性自己由来組成物の許容される生物学的活性および治療効果を維持しながら9か月間まで保存される。保存安定性自己由来組成物は、許容される生物学的活性および治療効果を維持しながら少なくとも9か月間凍結および保存することができる。
【００２５】
本開示のPRPの機械的活性化の方法によって、トロンビンによる活性化と同じサイトカインおよび成長因子が組成物中にもたらされる。
【００２６】
本組成物は、その生物学的活性を低減することなくかつIL-4、IL-10、IL-13、PDGF、TGF-β、IGF1、およびVEGFの濃度を減少させることなく、凍結状態で少なくとも9か月間保存することができる。
【００２７】
前記保存安定性自己由来組成物の特性については、以下の例証的な実施例の助けを得ながらさらに記載される。
【実施例】
【００２８】
実施例1 - 血小板の機械的活性化によって得られたサイトカインおよび成長因子のレベルと血小板のウシトロンビンを用いた活性化によって得られたサイトカインおよび成長因子のレベルとの比較
複数の患者から血液を採取して本開示の方法に従って各患者から該血液のPRP画分を得た。
【００２９】
各患者について、以下の手順に従ってPRP画分における血小板を活性化した。PRP 1ccにつき100単位でウシトロンビンを添加した。サンプルを室温で10分間インキュベートして血漿を凝固させた。
【００３０】
各患者について、約0.22μmの孔サイズを有するフィルターにPRP画分を通すことによって、本開示において述べられる手順に従ってPRP画分中の血小板を機械的に活性化した。PRP画分は二度目に0.22μmフィルターに通した。
【００３１】
得られたデータは図1〜6に要約される。
【００３２】
図1は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のIL-4レベルとPRP画分から活性化された血小板から得られた組成物中のIL-4レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-4濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のIL-4レベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のIL-4レベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３３】
図2は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のIL-10レベルとPRP画分から活性化された血小板から得られた組成物中のIL-10レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-10濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のIL-10レベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のIL-10レベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３４】
図3は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のIL-13レベルとPRP画分から活性化された血小板から得られた組成物中のIL-13レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-13濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のIL-13レベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のIL-13レベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３５】
図4は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のPDGFレベルとPRP画分から活性化された血小板から得られた組成物中のPDGFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のPDGF濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のPDGFレベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のPDGFレベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３６】
図5は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のVEGFレベルとVEGF画分から活性化された血小板から得られた組成物中のVEGFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のVEGF濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のVEGFレベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のVEGFレベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３７】
図6は、トロンビンによって活性化された血小板から得られた組成物中のTGFβレベルとTGFβ画分から活性化された血小板から得られた組成物中のTGFβレベルとの比較を示す、pg/ml単位のTGFβ濃度の図である。結果から、本開示の方法に従って血小板が機械的に活性化された組成物中のTGFβレベルと比べて、血小板がトロンビンによって活性化された組成物中のTGFβレベルは統計的に有意な差がないことが示される。
【００３８】
実施例2 - 新鮮な自己由来組成物中および-80℃で9か月間保存された自己由来組成物中の血小板の機械的活性化によって得られたサイトカインおよび成長因子のレベルの比較
本開示の方法に従って、保存安定性自己由来組成物を得た。滅菌シリンジおよび滅菌針による該組成物の慎重な抜き取りによって、該組成物を2〜4ccのアリコートに分割した。アリコートは-80℃で9か月間保存した。
【００３９】
図7は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のIL-4レベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のIL-4レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-4濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のIL-4の濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４０】
図8は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のIL-10レベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のIL-10レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-10濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のIL-10の濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４１】
図9は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のIL-13レベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のIL-13レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIL-13濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のIL-13の濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４２】
図10は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のPGDFレベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のPGDFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のPGDF濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のPGDFの濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４３】
図11は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のVEGFレベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のVEGFレベルとの比較を示す、pg/ml単位のVEGF濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のVEGFの濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４４】
図12Aは、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のTGFβレベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のTGFβ-1レベルとの比較を示す、pg/ml単位のTGFβ-1濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のTGFβ-1の濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４５】
図12Bは、新鮮な自己由来血液産物（インキュベートされた血液およびPRPの組み合わせ）中のTGFβレベルと凍結乾燥した自己由来血液産物（インキュベートされた血液およびPRPの組み合わせ）中のTGFβレベルとの比較を示す、pg/ml単位のTGFβ-1濃度の図である。結果から、凍結乾燥法はTGFβ-1レベルの著しい減少をもたらす一方で凍結法（A）は正常な濃度を保つことが示される。
【００４６】
図13は、新鮮な保存安定性自己由来組成物中のIGF1レベルと-80℃で9か月間保存された保存安定性自己由来組成物中のIGF1レベルとの比較を示す、pg/ml単位のIGF1濃度の図である。結果から、各々のレベルには統計的に有意な差がないこと、および、したがって保存安定性自己由来組成物中のIGF1の濃度は-80℃で9か月間保存した後も保たれることが示される。
【００４７】
本発明が例証的な態様に関連して記載されているが、本発明がこれらの正確な態様に限定されないことは理解されるべきである。本発明の範囲から逸脱することなく、上記に記載される本発明の特定の態様に数多の改変、変形、および適応を行うことができる。請求項の範囲は、実施例中に記載される好ましい態様によって限定されるべきではなく、全体として該記載と矛盾しない最も広い解釈を与えられるべきである。
【００４８】
参照文献
2020500933.tif 000003
2020500933.tif 000004
【００４９】
これらの参照文献の内容は参照により本明細書に組み入れられる。
【図１】
2020500933.tif 000006
【図２】
2020500933.tif 000007
【図３】
2020500933.tif 000008
【図４】
2020500933.tif 000009
【図５】
2020500933.tif 000010
【図６】
2020500933.tif 000011
【図７】
2020500933.tif 000012
【図８】
2020500933.tif 000013
【図９】
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【図１０】
2020500933.tif 000015
【図１１】
2020500933.tif 000016
【図１２】
2020500933.tif 000017
【図１３】
2020500933.tif 000018
【国際調査報告】
2020500933.tif 000019
2020500933.tif 000020