(57)【要約】  式IのIDO阻害剤化合物及び薬学的に許容されるその塩、それらの医薬組成物、それらの調製方法、並びに疾患の予防及び/又は治療におけるそれらの使用方法が提供される。2020525486.tif 000105【選択図】なし
2020525486.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iの化合物
【化１】
2020525486.tif 000104
又は薬学的に許容されるその塩
[式中、
各Xは、CHであるか、又は1つのXは、Nであり、他の2つのXは、CHであり、
R1及びR2は、独立して、H若しくはC1〜3アルキルであるか、又はR1及びR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、3〜6員のシクロアルキルを形成していてもよく、
R3は、CO2H又は酸アイソスターであり、
R4は、N、S、及びOから選択される1〜4個のヘテロ原子を含有する5又は6員のヘテロ環又はヘテロアリールであり、前記ヘテロ環又はヘテロアリールは、ハロゲン、C3〜6シクロアルキル、CH2OH、C(O)NH2、CN、CH2OC1〜3アルキル、1〜3個のハロゲンによって場合により置換されているC1〜3アルキルからなる群から選択される1又は2個の置換基によって場合により置換されていてもよく、ここで、前記CH2OHは、CH2OH基を、CH2OC(O)CH3、CH2OC(O)C(C1〜4アルキル)3、又はOP(O)(OH)2基、又はOP(O)(OC1〜4アルキル)2基に変換することによって、場合によりプロドラッグに変換されており、
R5は、OH若しくはOCH3基又は1若しくは2個のハロゲンで場合により置換されている4、5又は6員のシクロアルキル、或いはハロゲン、OH、C1〜4アルキル、OC1〜3アルキル、C(O)C3〜6シクロアルキル、BOC、C(O)C1〜3アルキル-O-C1〜3アルキル、C(O)C1〜3アルキル、C(O)-O-C1〜3アルキル、並びにN、S、及びOから選択される1〜4個のヘテロ原子を含有する4〜6員のヘテロ環又はヘテロアリールからなる群から選択される置換基によって場合により置換されているO又はNを含有する5又は6員のヘテロ環であり、ここで、前記ヘテロ環又はヘテロアリールは、ハロゲン、C3〜6シクロアルキル、CH2OH、C(O)NH2、CN、CH2OC1〜3アルキル、1〜3個のハロゲンによって場合により置換されているC1〜3アルキルからなる群から選択される1個の置換基によって場合により置換されていてよい]。
【請求項２】
R1及びR2が、独立して、H若しくはCH3であるか、又はR1及びR2が、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピル環を形成している、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項３】
R3が、CO2H、-C(O)-NH-S(O)2-CF3、又は-C(O)-NH-S(O)2-CH3である、請求項1又は2に記載の化合物又は塩。
【請求項４】
R4が、F、Cl、及びシクロプロピルからなる群から選択される1又は2個の置換基によって場合により置換されている、ピリジン、チアジアゾール、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアゾール、又はチアゾールである、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物又は塩。
【請求項５】
R5が、C1〜4アルキル又はO若しくはNを含有する6員のヘテロ環である、請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物又は塩。
【請求項６】
R5が、非置換である、請求項5に記載の化合物又は塩。
【請求項７】
R1及びR2が、独立して、H若しくはCH3であるか、又はR1及びR2が、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピル環を形成しており、R3が、CO2H、-C(O)-NH-S(O)2-CF3、又は-C(O)-NH-S(O)2-CH3であり、R4が、F、Cl、及びシクロプロピルからなる群から選択される1又は2個の置換基によって場合により置換されている、ピリジン、チアジアゾール、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアゾール、又はチアゾールであり、R5が、C1〜4アルキル、又はO若しくはNを含有する6員のヘテロ環である、請求項1に記載の化合物又は塩。
【請求項８】
請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物又は塩を含む、医薬組成物。
【請求項９】
IDO1の阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する方法であって、請求項8に記載の組成物の投与のステップを含む、方法。
【請求項１０】
前記疾患又は状態において、IDO活性のバイオマーカーが上昇している、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記バイオマーカーが、血漿キヌレニン又は血漿キヌレニン/トリプトファン比である、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患又は状態が、慢性ウイルス感染症、慢性細菌感染症、がん、敗血症又は神経学的障害である、請求項9に記載の方法。
【請求項１３】
前記慢性ウイルス感染症が、HIV、HBV又はHCVが関与するものであり、前記慢性細菌感染症が、結核又は人工関節感染症であり、前記神経学的障害が、大鬱病性障害、ハンチントン病又はパーキンソン病である、請求項9に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患又は状態が、HIV感染症に関連する炎症、B型肝炎ウイルス若しくはC型肝炎ウイルスが関与する慢性ウイルス感染症、がん又は敗血症である、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
IDO1の阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する際に使用するための、請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物又は塩。
【請求項１６】
IDO1の阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する医薬の製造における、請求項1から7のいずれか一項に記載の化合物又は塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ある特定のインドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ化合物を治療有効量で投与することによる全身(general)免疫抑制及びAIDSの進行の予防を含む、HIVの予防及び/又は治療のための、化合物、方法及び医薬組成物が開示される。そのような化合物を調製する方法並びに化合物及びその医薬組成物を使用する方法も開示される。
【背景技術】
【０００２】
インドールアミン-2,3-ジオキシゲナーゼ1(IDO1)は、キヌレニン(Kyn)及び一連の下流代謝物に迅速且つ構成的に変換されるN-ホルミルキヌレニンを生成するための、トリプトファンのインドール環の酸化を触媒するヘム含有酵素である。IDO1は、トリプトファン代謝のこのキヌレニン経路の律速段階であり、IDO1の発現は、炎症という観点から誘導性である。IDO1を誘導する刺激は、感染症、腫瘍若しくは無菌組織損傷に関連する炎症性サイトカイン又はウイルス若しくは細菌の生成物を含む。Kyn及びいくつかの下流代謝物は、免疫抑制性であり、Kynは、T細胞及びNK細胞に対して抗増殖性及びアポトーシス促進性であり(Munn、Shafizadehら、1999、Frumento、Rotondoら、2002)、一方、3-ヒドロキシアントラニル酸(3-HAA)又は3-HAA酸化的二量化生成物シンナバリン酸(cinnabarinic acid)(CA)等の代謝物は、食細胞機能を阻害し(Sekkai、Guittetら、1997)、腸保護IL-17又はIL-22産生CD4+ T細胞(Th17及びTh22)の分化を阻害しながら、免疫抑制調節T細胞(Treg)の分化を誘導する(Favre、Moldら、2010)。IDO1誘導は、数ある機序の中でも、活性免疫応答の間の免疫病理学を限定する際、免疫応答の収束を促進する際、及び胎児耐性を促進する際に重要となる可能性がある。しかしながら、がん又は慢性ウイルス若しくは細菌感染症等の慢性的状況において、IDO1活性は、腫瘍又は病原体のクリアランスを妨げ、活性が全身的である場合、IDO1活性は、全身性免疫機能不全をもたらし得る(Boasso及びShearer  2008、Li, Huangら、2012)。これらの免疫調節作用に加えて、Kyn及びキノリン酸等のIDO1の代謝物は、神経毒性であることも公知であり、神経機能不全及び鬱病のいくつかの状態において、上昇していることが観察される。そのため、IDO1は、腫瘍クリアランスを促進するため、難治性ウイルス又は細菌感染症のクリアランスを可能にするため、HIV感染症中の持続性の炎症又は敗血症中の免疫抑制として現れる全身性免疫機能不全を減少させるため、及び神経学的状態を予防する又は逆転させるため等、幅広い適応症における阻害のため
の治療標的である。
【０００３】
IDO1及びHIV感染症における持続性の炎症:
HIV複製の抑制及びAIDS関連状態の発生の減少における抗レトロウイルス療法(ART)の成功にもかかわらず、ARTを受けているHIV感染患者は、非感染の同等者(peer)よりも高い非AIDS罹患及び死亡の発生率を有する。これらの非AIDS状態としては、がん、心臓血管疾患、骨粗しょう症、肝疾患、腎疾患、衰弱及び神経認知機能不全が挙げられる(Deeks  2011)。いくつかの研究では、非AIDS罹患率/死亡率は、持続性の炎症に関連し、これが、同等者と比較して、ARTを受けているHIV感染患者において上昇したままであることを示す(Deeks  2011)。そのため、ARTによるウイルス学的抑制にもかかわらず、持続性の炎症及び免疫機能不全が、これらの非AIDS指標事象(non-AIDS-defining event、NADE)の原因であるという仮説が立てられる。
【０００４】
HIVは、CD4+ T細胞、特に優先的には粘膜表面のリンパ組織内にあるCD4+ T細胞のような細胞に感染して死滅させる(Mattapallil、Douekら、2005)。感染症に対する炎症応答と組み合わせたこれらの細胞の喪失は、宿主と、HIV自体を含むが、皮膚及び粘膜表面における、既往性又は後天性のウイルス感染症、真菌感染症及び常在細菌にまで及ぶすべての病原体との間に混乱した関係をもたらす。この機能不全の宿主と病原体の関係は、典型的には小さな問題であろう宿主の過剰反応をもたらし、且つ微生物叢内での病原体の増生を可能にする。したがって、機能不全の宿主と病原体の相互作用は、炎症の増大をもたらし、これが今度はより深刻な機能不全につながり、悪循環を起こす。炎症は、非AIDS罹患率/死亡率を促進すると考えられているため、変化した宿主と病原体の相互作用を支配する機序は、治療標的である。
【０００５】
IDO1の発現及び活性は、未治療及び既治療のHIV感染症中、並びにSIV感染症の霊長類モデルにおいて増大する(Boasso、Vaccariら、2007、Favre、Ledererら、2009、Byakwaga、Boumら、2014、Hunt、Sinclairら、2014、Tenorio、Zhengら、2014)。IDO1活性は、酵素基質と生成物との血漿レベルの比(Kyn/Tryp又はK:T比)によって示される通り、炎症の他のマーカーに関連し、非AIDS罹患率/死亡率の最強の予測因子の1つである(Byakwaga、Boumら、2014、Hunt、Sinclairら、2014、Tenorio、Zhengら、2014)。加えて、免疫システムに対するIDO1活性増大の予測される影響と一致する特色は、抗原に対するT細胞増殖応答減少並びに全身性及び腸コンパートメントにおけるTreg:Th17の不均衡等、HIV及びSIV誘導性免疫機能不全の主要な特色である(Favre、Ledererら、2009、Favre、Moldら、2010)。そのため、本発明者ら及びその他の研究者は、IDO1が、非AIDS罹患率/死亡率に関連する免疫機能不全及び炎症の悪循環を引き起こす際に役割を果たすという仮説を立てている。故に、本発明者らは、IDO1を阻害することが、ART抑制HIV感染者において、炎症を低減させ、NADEのリスクを減少させるであろうと提案する。
【０００６】
IDO1及びHIVを超える持続性の炎症
上述した通り、既治療慢性HIV感染症に関連する炎症は、複数の末梢臓器疾患を起こす可能性がある[Deeks  2011]。しかしながら、これらの末梢臓器疾患は、HIV感染症に特有のものではなく、実際には、HIV感染集団においてはより早い年齢で出現する一般的な加齢(aging)に伴う疾患である。未感染の一般集団において、病因不明の炎症は、罹患率及び死亡率の主要な相関要因である[Pinti、2016  88号]。実際に、炎症のマーカーの多くは、IL-6及びCRP等、共通している。上記で仮説を立てた通り、IDO1が、消化管又は全身組織において免疫機能不全を誘導することにより、HIV感染集団における持続性の炎症に寄与する場合、IDO1は、より広い集団における炎症及びしたがって末梢臓器疾患にも寄与し得る。これらの炎症関連末梢臓器疾患は、心臓血管疾患、代謝症候群、肝疾患(NAFLD、NASH)、腎疾患、骨粗しょう症及び神経認知機能障害によって例示される。実際に、IDO1経路は、文献において、肝疾患(Vivoli abstracts at Italian Assoc. for the Study of the Liver Conference 2015]、糖尿病[Baban、2010  89号]、慢性腎疾患[Schefold、2009  90号]、心臓血管疾患[Mangge、2014  92号;Mangge、2014  91号]、並びに一般加齢及び全死因死亡率[Pertovaara、2006  93号]との関連を有している。そのため、IDO1の阻害は、炎症及び加齢に関連する具体的な末梢臓器疾患の発生を減少させるための、一般集団における炎症を減少させることにおいて用途を有し得る。
【０００７】
IDO1及び腫瘍学
IDO発現は、いくつかのヒトがん(例えば、メラノーマ、膵臓、卵巣、AML、CRC、前立腺及び子宮内膜のがん)において検出することができ、予後不良と相関している(Munn  2011)。複数の免疫抑制性の役割は、Treg分化及び過活性化の誘導、Teff免疫応答の抑制並びにDC機能減少を含むIDOの作用とされてきたものであり、それらはすべて、免疫認識を損ない、腫瘍成長を促進する(Munn  2011)。ヒト脳腫瘍におけるIDO発現は、生存率低減と相関している。同所性(orthotropic)及びトランスジェニック神経膠腫マウスモデルは、IDO発現低減及びTreg浸潤低減及び長期生存増大の間の相関を実証している(Wainwright、Balyasnikovaら、2012)。ヒトメラノーマにおいて、高い割合の腫瘍(36症例のうち33)がIDO上昇を示し、MDSCの拡大、活性化及び動員を特徴とする免疫抑制性腫瘍微小環境(TME)をTreg依存性様式で確立する際の重要な役割を示唆している(Holmgaard、Zamarinら、2015)。加えて、宿主IDO発現免疫細胞は、流入領域リンパ節において及び腫瘍自体において同定されている(Mellor及びMunn  2004)。それ故、腫瘍及び宿主由来のIDOの両方が、TMEの免疫抑制状態に寄与すると信じられている。
【０００８】
IDOの阻害は、がんに対する免疫原性応答の回復のために提案された最初の小分子薬戦略の1つであった(Mellor及びMunn  2004)。1-メチルトリプトファンのd-エナンチオマー(D-1MT又はインドキシモド)は、臨床試験に入った最初のIDO阻害剤であった。この化合物は、明らかにIDOの活性を阻害するが、これは、単離された酵素の非常に弱い阻害剤であり、この化合物についての作用のインビボ機序は依然として解明中である。Incyteの研究者は、スクリーニングプロセスから取得したヒット化合物を、十分な経口曝露で強力且つ選択的な阻害剤に最適化して、マウスメラノーマモデルにおける腫瘍成長の遅延を実証した(Yue、Doutyら、2009)。このシリーズのさらなる開発は、ヒト又はマウス酵素のいずれかを一過性にトランスフェクトした細胞株において、IDO-2及びTDOよりもIDO-1の阻害に対して高度に選択的である、INCB204360をもたらした(Liu、Shinら、2010)。IDO1を内因的に発現する細胞株及び原発性ヒト腫瘍について、同様の効力が見られた(IC50約3〜20nM)。DC及びナイーブCD4+CD25- T細胞の共培養において試験した場合、INCB204360は、これらのT細胞からCD4+FoxP3+ Tregへの変換を遮断した。最後に、免疫適格マウスのシンジェニックモデル(PAN02膵臓細胞)において試験した場合、経口投薬されたINCB204360は、腫瘍成長の有意な用量依存性阻害を呈したが、免疫不全マウスに移植された同じ腫瘍に対しては効果がなかった。同じ研究者による追加の研究は、免疫適格マウスでの追加のシンジェニック腫瘍モデルにおける腫瘍成長の阻害及び全身キヌレニンレベルの抑制と、IDO1の阻害との相関を示した。これらの前臨床研究に基づき、INCB24360は、転移性メラノーマの治療のための臨床試験に入った(Beatty、O'Dwyerら、2013)。
【０００９】
免疫抑制の維持におけるトリプトファンの異化の重要性に照らして、複数の固形腫瘍(例えば、膀胱及び肝臓のがん、メラノーマ)による第2のトリプトファン代謝酵素TDO2の過剰発現も検出されたことは、驚くに当たらない。104種のヒト細胞株の調査は、20/104のTDO発現、17/104のIDO1及び16/104の両方発現を明らかにした(Pilotte、Larrieuら、2012)。IDO1の阻害と同様に、TDO2の選択的阻害は、TDO2を過剰発現している腫瘍において免疫抵抗を逆転させる際に有効である(Pilotte、Larrieuら、2012)。これらの結果は、免疫機能を改善するための実行可能な治療戦略としてTDO2阻害及び/又はデュアルTDO2/IDO1阻害を支持する。
【００１０】
複数の前臨床研究が、CTLA-4、PD-1及びGITRに対するmAbをモジュレートするT細胞チェックポイントとの組み合わせでIDO-1阻害剤を組み合わせることにおいて、有意な、さらには相乗的な、価値を実証している。各事例において、改善された免疫活性/機能の効能及び関連PD態様の両方が、これらの研究において様々なネズミモデルにわたって観察された(Balachandran、Cavnarら、2011、Holmgaard、Zamarinら、2013、M. Mautino  2014、Wainwright、Changら、2014)。Incyte IDO1阻害剤(INCB204360、エパカドスタット)は、CTLA4ブロッカー(イピリムマブ)と組み合わせて臨床的に試験されてきたが、組合せにより見られる用量制限有害事象により、有効用量が実現されたかどうかは不明確である。対照的に、エパカドスタットとMerckのPD-1 mAb(ペンブロリズマブ)とを組み合わせた進行中の試験についての最近公表されたデータは、より高用量のIDO1阻害剤を可能にする組合せの忍容性改善を実証した。有望な種々の腫瘍型にわたっていくつかの臨床応答があった。しかしながら、この組合せがペンブロリズマブの単剤活性を上回る改善であるか否かは未だ不明である(Gangadhar、Hamidら、2015)。同様に、Roche/Genentechは、進行腫瘍患者における第1a相の安全性及びPK/PDの研究の最近の完了後、PD-L1(MPDL3280A、Atezo)及びOX-40について両方のmAbと組み合わせて、NGL919/GDC-0919を進展させている。
【００１１】
IDO1及び慢性感染症
IDO1活性は、少なくともT細胞、NK細胞及びマクロファージ活性を損なう、Kyn及び3-HAA等のキヌレニン経路代謝物を生み出す(Munn、Shafizadehら、1999、Frumento、Rotondoら、2002)(Sekkai、Guittetら、1997、Favre、Moldら、2010)。Kynレベル又はKyn/Tryp比は、慢性HIV感染症(Byakwaga、Boumら、2014、Hunt、Sinclairら、2014、Tenorio、Zhengら、2014)、HBV感染症(Chen、Liら、2009)、HCV感染症(Larrea、Riezu-Bojら、2007、Asghar、Ashiqら、2015)及びTB感染症(Suzuki、Sudaら、2012)の状況において上昇し、抗原特異的T細胞機能不全に関連する(Boasso、Herbeuvalら、2007、Boasso、Hardyら、2008、Loughman及びHunstad  2012、Ito、Andoら、2014、Lepiller、Soulierら、2015)。そのため、これらの慢性感染症の症例において、病原体特異的T細胞応答のIDO1媒介性阻害は、感染症の持続において役割を果たし、IDO1の阻害は、感染症のクリアランス及び解消を促進する際に利益を有し得ると考えられる。
【００１２】
IDO1及び敗血症
IDO1発現及び活性は、敗血症中に上昇することが観察され、Kyn又はKyn/Tryp上昇の程度は、死亡率を含む疾患の重症度増大に対応した(Tattevin、Monnierら、2010、Darcy、Davisら、2011)。動物モデルにおいて、IDO1遺伝子ノックアウト又はIDO1の遮断は、盲腸結紮/穿刺モデルにおける、死亡から又は致死用量のLPSからマウスを保護した(Jung、Leeら、2009、Hoshi、Osawaら、2014)。敗血症は、重症例における免疫抑制段階を特徴とし(Hotchkiss、Monneretら、2013)、IDO1について免疫機能不全のメディエーターとしての役割を潜在的に示し、IDO1の薬理学的阻害が敗血症において臨床的利益を提供し得ることを示す。
【００１３】
IDO1及び神経学的障害
免疫学的状況に加えて、IDO1活性は、神経学的状況における疾患とも関連している(Lovelace Neuropharmacology 2016(Lovelace、Varneyら、2016)において総説されている)。3-ヒドロキシキヌレニン及びキノリン酸等のキヌレニン経路代謝物は、神経毒性であるが、神経保護性である代替代謝物、キヌレン酸又はピコリン酸によって均衡されている。キヌレニン経路代謝物が疾患に関連することが実証されている神経変性及び精神障害としては、多発性硬化症、運動ニューロン障害、例えば、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、大鬱病性障害、統合失調症、拒食症が挙げられる(Lovelace、Varneyら、2016)。神経学的疾患の動物モデルは、疾患に対する1-メチルトリプトファン等の弱いIDO1阻害剤の若干の影響を示し、IDO1阻害が、神経学的及び精神障害の予防又は治療において臨床的利益を提供し得ることを示している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Asghar, K.、M. T. Ashiq、B. Zulfiqar、A. Mahroo、K. Nasir及びS. Murad(2015)。「Indoleamine 2,3-dioxygenase expression and activity in patients with hepatitis C virus-induced liver cirrhosis.」Exp Ther Med 9(3): 901〜904。
【非特許文献２】Balachandran, V. P.、M. J. Cavnar、S. Zeng、Z. M. Bamboat、L. M. Ocuin、H. Obaid、E. C. Sorenson、R. Popow、C. Ariyan、F. Rossi、P. Besmer、T. Guo、C. R. Antonescu、T. Taguchi、J. Yuan、J. D. Wolchok、J. P. Allison及びR. P. Dematteo(2011)。「Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido.」Nature Medicine 17(9): 1094〜1100。
【非特許文献３】Beatty, G. L.、P. J. O'Dwyer、J. Clark、J. G. Shi、R. C. Newton、R. Schaub、J. Maleski、L. Leopold及びT. Gajewski(2013)。「Phase I study of the safety, pharmacokinetics (PK), and pharmacodynamics (PD) of the oral inhibitor of indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO1) INCB024360 in patients (pts) with advanced malignancies.」ASCO Meeting Abstracts 31(15_suppl): 3025。
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【非特許文献６】Boasso, A.及びG. M. Shearer(2008)。「Chronic innate immune activation as a cause of HIV-1 immunopathogenesis.」Clin Immunol 126(3): 235〜242。
【非特許文献７】Boasso, A.、M. Vaccari、A. Hryniewicz、D. Fuchs、J. Nacsa、V. Cecchinato、J. Andersson、G. Franchini、G. M. Shearer及びC. Chougnet(2007)。「Regulatory T-cell markers, indoleamine 2,3-dioxygenase, and virus levels in spleen and gut during progressive simian immunodeficiency virus infection.」J Virol 81(21): 11593〜11603。
【非特許文献８】Byakwaga, H.、Y. Boum, 2nd、Y. Huang、C. Muzoora、A. Kembabazi、S. D. Weiser、J. Bennett、H. Cao、J. E. Haberer、S. G. Deeks、D. R. Bangsberg、J. M. McCune、J. N. Martin及びP. W. Hunt(2014)。「The kynurenine pathway of tryptophan catabolism, CD4+ T-cell recovery, and mortality among HIV-infected Ugandans initiating antiretroviral therapy.」J Infect Dis 210(3): 383〜391。
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【非特許文献１１】Deeks, S. G.(2011)。「HIV infection, inflammation, immunosenescence, and aging.」Annu Rev Med 62: 141〜155。
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【非特許文献１３】Favre, D.、J. Mold、P. W. Hunt、B. Kanwar、P. Loke、L. Seu、J. D. Barbour、M. M. Lowe、A. Jayawardene、F. Aweeka、Y. Huang、D. C. Douek、J. M. Brenchley、J. N. Martin、F. M. Hecht、S. G. Deeks及びJ. M. McCune(2010)。「Tryptophan catabolism by indoleamine 2,3-dioxygenase 1 alters the balance of TH17 to regulatory T cells in HIV disease.」Sci Transl Med 2(32): 32ra36。
【非特許文献１４】Frumento, G.、R. Rotondo、M. Tonetti、G. Damonte、U. Benatti及びG. B. Ferrara(2002)。「Tryptophan-derived catabolites are responsible for inhibition of T and natural killer cell proliferation induced by indoleamine 2,3-dioxygenase.」J Exp Med 196(4): 459〜468。
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【非特許文献４０】Wainwright, D. A.、A. L. Chang、M. Dey、I. V. Balyasnikova、C. K. Kim、A. Tobias、Y. Cheng、J. W. Kim、J. Qiao、L. Zhang、Y. Han及びM. S. Lesniak(2014)。「Durable therapeutic efficacy utilizing combinatorial blockade against IDO, CTLA-4, and PD-L1 in mice with brain tumors.」Clinical Cancer Research 20(20): 5290〜5301。
【非特許文献４１】Yue, E. W.、B. Douty、B. Wayland、M. Bower、X. Liu、L. Leffet、Q. Wang、K. J. Bowman、M. J. Hansbury、C. Liu、M. Wei、Y. Li、R. Wynn、T. C. Burn、H. K. Koblish、J. S. Fridman、B. Metcalf、P. A. Scherle及びA. P. Combs(2009)。「Discovery of potent competitive inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase with in vivo pharmacodynamic activity and efficacy in a mouse melanoma model.」Journal of Medicinal Chemistry 52(23): 7364〜7367。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、慢性HIV感染症において非AIDS罹患率/死亡率の発生を減少させるための疾患修飾療法;並びに/又は敗血症における死亡を予防するための疾患修飾療法;並びに/又はHIV、HBV、HCV及び他の慢性ウイルス感染症、慢性細菌感染症、慢性真菌感染症に対する及び腫瘍に対する免疫応答を強化するための免疫療法として;並びに/又は鬱病若しくは他の神経学的/精神神経障害の治療のために、前述の特性の均衡をもたらすIDO阻害剤を発見することは、当技術分野における進展であろう。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
簡潔に述べると、一態様において、本発明は、式Iの化合物
【００１７】
【化１】
2020525486.tif 000003
又は薬学的に許容されるその塩
[式中、
各Xは、CHであるか、又は1つのXは、Nであり、他の2つのXは、CHであり、
R1及びR2は、独立して、H若しくはCH1〜3アルキルであるか、又はR1及びR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、3〜6員のシクロアルキルを形成していてよく、
R3は、CO2H又は酸アイソスターであり、
R4は、N、S及びOから選択される1〜4個のヘテロ原子を含有する5又は6員のヘテロ環(複素環)又はヘテロアリールであり、ここで、前記ヘテロ環又はヘテロアリールは、ハロゲン、C3〜6シクロアルキル、CH2OH、C(O)NH2、CN、CH2OC1〜3アルキル、1〜3個のハロゲンによって場合により置換されているC1〜3アルキルからなる群から選択される1又は2個の置換基によって場合により置換されていてよく、ここで、前記CH2OHは、CH2OH基を、CH2OC(O)CH3、CH2OC(O)C(C1〜4アルキル)3、又はOP(O)(OH)2基、又はOP(O)(OC1〜4アルキル)2基に変換することによって、場合によりプロドラッグに変換されており、
R5は、OH若しくはOCH3基又は1若しくは2個のハロゲンで場合により置換されている4、5又は6員のシクロアルキル、或いはハロゲン、OH、C1〜4アルキル、OC1〜3アルキル、C(O)C3〜6シクロアルキル、BOC、C(O)C1〜3アルキル-O-C1〜3アルキル、C(O)C1〜3アルキル、C(O)-O-C1〜3アルキル、並びにN、S及びOから選択される1〜4個のヘテロ原子を含有する4〜6員のヘテロ環又はヘテロアリールからなる群から選択される置換基によって場合により置換されているO又はNを含有する5又は6員のヘテロ環であり、ここで、前記ヘテロ環又はヘテロアリールは、ハロゲン、C3〜6シクロアルキル、CH2OH、C(O)NH2、CN、CH2OC1〜3アルキル、1〜3個のハロゲンによって場合により置換されているC1〜3アルキルからなる群から選択される1個の置換基によって場合により置換されていてよい]
を開示する。
【００１８】
別の態様において、本発明は、IDOの阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する方法を開示する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む、医薬組成物を開示する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、療法において使用するための、式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２１】
別の態様において、本発明は、IDOの阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する際に使用するための、式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２２】
別の態様において、本発明は、IDOの阻害から利益を得るであろう疾患又は状態を治療する際に使用する医薬の製造における、式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用を提供する。
【００２３】
別の態様において、本発明は、ウイルスのレトロウイルスファミリー中のウイルスによって少なくとも部分的に媒介される患者におけるウイルス感染症を治療する方法であって、前記患者に、式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む組成物を投与するステップを含む、方法を開示する。一部の実施形態において、ウイルス感染症は、HIVウイルスによって媒介される。
【００２４】
別の態様において、本発明の特定の実施形態は、HIVに感染した対象を治療する方法であって、対象に、治療有効量の式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、方法を提供する。
【００２５】
また別の態様において、本発明の特定の実施形態は、HIVの感染のリスクがある対象においてHIV感染症の進行を阻害する方法であって、対象に、治療有効量の式Iの化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、方法を提供する。それら及び他の実施形態を、以下の文章においてさらに記述する。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
R1及びR2は、独立してH若しくはCH3であるか、又はR1及びR2は、それらが結合している炭素と一緒になって、シクロプロピル環を形成していることが好ましい。
【００２７】
R3は、CO2H、-C(O)-NH-S(O)2-CF3、又は-C(O)-NH-S(O)2-CH3であることが好ましい。
【００２８】
R4は、ピリジン、チアジアゾール、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアゾール、又はチアゾールであることが好ましい。
【００２９】
R4は、非置換であるか、又はF、Cl、及びシクロプロピルからなる群から選択される1若しくは2個の置換基で置換されていることが好ましい。
【００３０】
R5は、C1〜4アルキル又はO若しくはNを含有する6員のヘテロ環であることが好ましい。
【００３１】
R5は、非置換であることが好ましい。
【００３２】
好適な酸アイソスター(acid isoster)の例には、例えば
【００３３】
【化２】
2020525486.tif 000004
が含まれ、
式中、上記リストのアイソスターにおけるR1及びR2は、独立してC1〜6アルキル又はC1〜6フルオロアルキルである。
【００３４】
好ましい医薬組成物は単位剤形を含む。好ましい単位剤形は錠剤を含む。
【００３５】
特に、本発明の化合物及び組成物は、AIDSの進行及び全身免疫抑制の予防を含むHIVの予防及び/又は治療に有用となることが予測される。多くの事例において、そのような予防及び/又は治療は、そのような予防及び/又は治療に有用であると考えられる少なくとも1つの他の薬物と組み合わせた本発明の化合物で治療することを伴うことが予測される。例えば、本発明のIDO阻害剤は、他の免疫療法、例えば免疫チェックポイント(PD1、CTLA4、ICOS等)と組み合わせて、及びおそらく成長因子又はサイトカイン療法(IL21、IL-7等)と組み合わせて、使用されてよい。
【００３６】
HIVの治療において、1つを超える有効作用物質を用いることは、慣例である。したがって、本発明の別の実施形態に従い、ウイルスのレトロウイルスファミリー中のウイルスによって少なくとも部分的に媒介される哺乳動物におけるウイルス感染症を予防する又は治療する方法であって、前記ウイルス感染症と診断された又は前記ウイルス感染症を発病するリスクがある哺乳動物に、式Iで定義されている通りの化合物を投与するステップを含み、ここで、前記ウイルスは、HIVウイルスであり、HIVウイルスに対して活性な治療有効量の1つ以上の作用物質の投与をさらに含み、ここで、HIVウイルスに対して活性な前記作用物質は、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、侵入、結合及び融合阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、熟成阻害剤、CXCR4阻害剤、並びにCCR5阻害剤からなる群から選択される、方法が提供される。そのようなさらなる作用物質の例は、ドルテグラビル、ビクテグラビル及びカボテグラビルである。
【００３７】
「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野において周知である様々な有機及び無機対イオンに由来する薬学的に許容される塩を指し、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びテトラアルキルアンモニウムが挙げられ、分子が塩基性官能基を含有する場合、有機又は無機酸の塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩及びシュウ酸塩が挙げられる。好適な塩としては、P. Heinrich Stahl、Camille G. Wermuth(編)、Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection, and Use、2002において記述されているものが挙げられる。
【００３８】
本発明は、本明細書において記述されている化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が、既存の酸又は塩基の部分をその塩形態に変換することによって修飾されている、開示化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、これらに限定されないが、アミン等の塩基性残基の鉱物又は有機酸塩、カルボン酸等の酸性残基のアルカリ又は有機塩等が挙げられる。本発明の薬学的に許容される塩は、例えば非毒性無機又は有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性塩を含む。本発明の薬学的に許容される塩は、塩基性又は酸性の部分を含有する親化合物から、従来の化学的方法によって合成することができる。概して、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸又は塩基形態と、化学量論量の適切な塩基又は酸とを、水中若しくは有機溶媒中、又は2つの混合物中で反応させることによって調製することができ、概して、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はACNのような非水性媒体が好ましい。
【００３９】
語句「薬学的に許容される」は、本明細書において、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題若しくは合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適であり、合理的なベネフィット/リスク比に見合った、化合物、材料、組成物及び/又は剤形を指すために用いられる。
【００４０】
一実施形態において、式Iの化合物又はその塩を含有する医薬製剤は、経口又は非経口投与に適応している製剤である。別の実施形態において、製剤は、長時間作用型非経口製剤である。さらなる実施形態において、製剤は、ナノ粒子製剤である。
【００４１】
本発明は、免疫抑制のための新規治療としての実用性を有する、化合物、組成物及び医薬組成物に関する。特定の理論に縛られることは望まないが、本発明の化合物は、分子状酸素又は反応性酸素種を利用して、l-TrpのN-ホルミルキヌレニンへの酸化的ピロール環開裂反応を触媒する酵素を阻害することができると考えられる。
【００４２】
したがって、本発明の別の実施形態において、AIDSの進行及び全身免疫抑制の予防を含む、HIVの予防及び/又は治療の方法が提供される。
【実施例】
【００４３】
下記の実施例は、上述した発明を作製及び使用する様式をより十分に記述するために役立つ。これらの実施例は、本発明の真の範囲を限定するために何ら役立つものではなく、むしろ例証を目的として提示されることと理解される。以下の実施例及び合成スキームにおいて、下記の略語は下記の意味を有する。略語が定義されていない場合、それは、その一般に認められている意味を有する。
【００４４】
2020525486.tif 000005
2020525486.tif 000006
【００４５】
機器記述
1H NMRスペクトルは、Bruker Ascend 400分析計又はVarian 400分析計で記録した。化学シフトは、パーツ・パー・ミリオン(ppm、単位δ)で表現される。カップリング定数は、ヘルツ(Hz)の単位である。分裂パターンは、見掛けの多重度を記述し、s(一重線)、d(二重線)、t(三重線)、q(四重線)、quint(五重線)、m(多重線)、br(広域)と指定される。
【００４６】
分析用低分解能質量スペクトル(MS)は、Waters BEH C18、2.1×50mm、1.7μmを使用するSQ検出器付きのWaters ACQUITY UPLCで、勾配溶離法を使用して記録した。
溶媒A:水中0.1%ギ酸(FA)、
溶媒B:アセトニトリル中0.1%FA、
0.5分間にわたって30%B、続いて、2.5分間かけて30〜100%B。
【００４７】
【化３】
2020525486.tif 000007
【００４８】
メチル2-(4-フルオロフェニル)アセテートの調製
【００４９】
【化４】
2020525486.tif 000008
MeOH(100mL)中の2-(4-フルオロフェニル)酢酸(10.0g、64.9mmol)及び濃H2SO4(1.0mL)の混合物を、還流温度で終夜加熱した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去した。残留物を水で希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を合わせて、飽和NaHCO3水溶液、水及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、標題化合物を蒼白色油状物(pale oil)として得て(11.2g、定量的)、これは精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C9H9FO2の計算値: 168.06. 実測値: 169.16 (M+1)+.
【００５０】
メチル2-(4-フルオロフェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００５１】
【化５】
2020525486.tif 000009
0℃で、THF(100mL)中のNaH(6.7g、167.7mmol)の懸濁液に、THF(50mL)中のメチル2-(4-フルオロフェニル)アセテート(9.4g、55.9mmol)及びヨージドメタン(iodidemethane)(23.8g、167.7mmol)の溶液を滴下添加した。得られた混合物を室温まで加温し、終夜撹拌した。残留物を、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機物を水及びブラインで順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(7.6g、収率69%)。(ESI) m/z C11H13FO2の計算値: 196.09. 実測値: 197.17 (M+1)+.
【００５２】
メチル2-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００５３】
【化６】
2020525486.tif 000010
0℃で、濃硫酸(11mL)に、メチル2-(4-フルオロフェニル)-2-メチルプロパノエート(7.6g、38.8mmol)を一度に添加し、続いてKNO3(3.8g、38.8mmol)を数回に分けて添加した。0℃で3時間撹拌した後、反応混合物を氷水中に注入し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、石油エーテル中の0〜50%の酢酸エチル)により精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(7.6g、81%)。(ESI) m/z C11H12FNO4の計算値: 241.08. 実測値: 242.20 (M+1)+.
【００５４】
メチル2-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００５５】
【化７】
2020525486.tif 000011
メチルメチル2-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエート(7.2g、30.0mmol)及びN-イソブチルテトラヒドロ-2H-ピラン-4-アミン(11.8g、75mmol)の混合物を、160℃で、N2雰囲気下で7時間撹拌した。反応混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製し、標題化合物を赤色油状物として得た(4.7g、収率42%)。(ESI) m/z C20H30N2O5の計算値: 378.22. 実測値: 379.42 (M+1)+.
【００５６】
メチル2-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００５７】
【化８】
2020525486.tif 000012
EtOAc(50mL)中のメチル2-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエート(4.7g、12.4mmol)及び10%のPd/C(1.41g)の混合物を、室温で、H2雰囲気(15psi)下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製し、標題化合物を褐色油状物として得た(4.2g、収率96%)。(ESI) m/z C20H32N2O3の計算値: 348.24. 実測値: 349.36 (M+1)+.
【００５８】
メチル2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００５９】
【化９】
2020525486.tif 000013
ジオキサン(12mL)中のメチル2-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(550mg、1.59mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(460mg、2.39mmol)、Pd2(dba)3(146mg、0.159mmol)、キサントホス(185mg、0.318mmol)及びCs2CO3(1.04g、3.18mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(650mg、収率89%)。LCMS (ESI) m/z C25H34ClN3O3の計算値: 459.23. 実測値: 460.05/462.42 (M/M+2)+.
【００６０】
[実施例1]
2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパン酸の調製
【００６１】
【化１０】
2020525486.tif 000014
MeOH(3mL)中のメチル2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(150mg、0.33mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(0.5mL)を添加した。70℃で4時間撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜70%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(78mg、収率54%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.33 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.20 - 8.14 (m, 2H), 7.69 - 7.63 (m, 1H), 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.96 - 6.90 (m, 1H), 3.85 - 3.77 (m, 2H), 3.14 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.89 - 2.82 (m, 1H), 2.82 - 2.77 (m, 2H), 1.70 - 1.62 (m, 2H), 1.57 - 1.49 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 1.37 - 1.30 (m, 1H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C24H32ClN3O3の計算値: 445.21. 実測値: 446.38/448.30 (M/M+2)+.
【００６２】
[実施例2]
2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチル-N-(メチルスルホニル)プロパンアミドの調製
【００６３】
【化１１】
2020525486.tif 000015
DMF(3mL)中の2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパン酸(150mg、0.34mmol)、メタンスルホンアミド(36mg、0.38mmol)及びDMAP(9mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(85mg、0.41mmol)を一度に添加した。室温で5時間撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜80%のMeCN)により精製して、標題化合物を白色粉末として得た(22mg、収率13%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.33 (s, 1H), 8.20 - 8.13 (m, 2H), 8.08 (s, J = 1.6 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 2H), 3.25 - 3.08 (m, 5H), 2.87 - 2.78 (m, 3H), 1.70 - 1.63 (m, 2H), 1.57 - 1.42 (m, 8H), 1.38 - 1.32 (m, 1H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H35ClN4O4Sの計算値: 522.21. 実測値: 523.45/525.62 (M/M+2)+.
【００６４】
[実施例3]
2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチル-N-((トリフルオロメチル)スルホニル)プロパンアミドの調製
【００６５】
【化１２】
2020525486.tif 000016
DMF(3mL)中の2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパン酸(150mg、0.34mmol)、トリフルオロメタンスルホンアミド(57mg、0.38mmol)及びDMAP(9mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(85mg、0.41mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜70%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(21mg、収率11%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.30 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 2H), 3.13 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 3.01 - 2.87 (m, 3H), 1.69 - 1.61 (m, 2H), 1.56 - 1.48 (m, 2H), 1.39 (s, J = 11.5 Hz, 6H), 1.29 - 1.24 (m, 1H), 0.80 (d, J = 6.6 Hz, 6H). スルホンアミド基のプロトンは観測されなかった. LCMS (ESI) m/z C25H32ClF3N4O4Sの計算値: 576.18. 実測値: 577.63/579.64 (M/M+2)+.
【００６６】
【化１３】
2020525486.tif 000017
【００６７】
メチル2-(4-(ジイソブチルアミノ)-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００６８】
【化１４】
2020525486.tif 000018
メチルメチル2-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエート(1.0g、4.0mmol)、ジイソブチルアミン(2.2mL、12.3mmol)、DIPEA(3.6mL、20.5mmol)及びNMP(10mL)の混合物を、110℃で、N2雰囲気下で17時間撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(800mg、収率57%)I。(ESI) m/z C19H30N2O4の計算値: 350.22. 実測値: 351.63 (M+1)+.
【００６９】
メチル2-(3-アミノ-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００７０】
【化１５】
2020525486.tif 000019
EtOAc(50mL)中のメチル2-(4-(ジイソブチルアミノ)-3-ニトロフェニル)-2-メチルプロパノエート(800mg、2.28mmol)及び10%のPd/C(120mg)の混合物を、50℃で、H2雰囲気(15psi)下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製し、標題化合物を得た(680mg、収率93%)。(ESI) m/z C19H32N2O2の計算値: 320.25. 実測値: 321.67 (M+1)+.
【００７１】
メチル2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００７２】
【化１６】
2020525486.tif 000020
トルエン(10mL)中のメチル2-(3-アミノ-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(250mg、0.78mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(301mg、1.56mmol)、Pd2(dba)3(71mg、0.156mmol)、キサントホス(90mg、0.156mmol)及びCs2CO3(588mg、1.56mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(180mg、収率53%)。LCMS (ESI) m/z C24H34ClN3O2の計算値: 431.23. 実測値: 432.64/434.61(M/M+2)+.
【００７３】
[実施例12]
2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパン酸の調製
【００７４】
【化１７】
2020525486.tif 000021
MeOH(6mL)中のメチル2-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(180mg、0.42mmol)の溶液に、1NのNaOH水溶液(5mL)を添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜60%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(78mg、収率54%)。U26886-086-1 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.15 (br, 1H), 8.27 - 8.12 (m, 3H), 7.68 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 2.60 (d, J = 7.1 Hz, 4H), 1.70 - 1.59 (m, 2H), 1.47 (s, 6H), 0.86 (d, J = 6.6 Hz, 12H). LCMS (ESI) m/z C23H32ClN3O2の計算値: 417.22. 実測値: 418.73/ 420.71 (M/M+2)+.
【００７５】
【化１８】
2020525486.tif 000022
【００７６】
メチル2-(4-(ジイソブチルアミノ)-3-((3-(トリフルオロメチル)-1,2,4-チアジアゾール-5-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエートの調製
【００７７】
【化１９】
2020525486.tif 000023
MeCN(4mL)中のメチル2-(3-アミノ-4-(ジイソブチルアミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(200mg、0.64mmol)及び5-クロロ-3-(トリフルオロメチル)-1,2,4-チアジアゾール(180mg、0.96mmol)の混合物を、90℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜60%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(150mg、収率51%)。LCMS (ESI) m/z C22H31F3N4O2Sの計算値: 472.21. 実測値: 473.61 (M+1)+.
【００７８】
[実施例13]
2-(4-(ジイソブチルアミノ)-3-((3-(トリフルオロメチル)-1,2,4-チアジアゾール-5-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパン酸の調製
【００７９】
【化２０】
2020525486.tif 000024
MeOH(6mL)及び1NのNaOH水溶液(5mL)中のメチル2-(4-(ジイソブチルアミノ)-3-((3-(トリフルオロメチル)-1,2,4-チアジアゾール-5-イル)アミノ)フェニル)-2-メチルプロパノエート(150mg、0.32mmol)の溶液を、室温で終夜撹拌した。得られた混合物を、1NのHCl水溶液で中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(103mg、収率70%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.21 (br, 1H), 10.24 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.28 - 7.06 (m, 2H), 2.77 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 1.80 - 1.59 (m, 2H), 1.46 (s, 6H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 12H). LCMS (ESI) m/z C21H29F3N4O2Sの計算値: 458.20. 実測値: 459.59 (M+1)+.
【００８０】
【化２１】
2020525486.tif 000025
【００８１】
1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボニトリルの調製
【００８２】
【化２２】
2020525486.tif 000026
1-(4-フルオロフェニル)アセトニトリル(20.3g、150mmol)、1-ブロモ-2-クロロエタン(25mL、300mmol)及びベンジルトリエチルアンモニウムクロリド(683mg、3.00mmol)の混合物に、50%のNaOH水溶液(84g、1.05mol)を添加し、得られた混合物を50℃で終夜加熱した。冷却後、この混合物を、水中に注入して、ジイソプロピルエーテルで抽出した。有機層を、水、1NのHCl水溶液、及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過、真空中での濃縮により、標題化合物を黄色油状物として得て(16.4g、68%)、これは更に精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C10H8FNの計算値: 161.06. 実測値: 162.28 (M+1)+.
【００８３】
1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【００８４】
【化２３】
2020525486.tif 000027
アセトン(140mL)中の1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボニトリル(16.4g、102mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(100mL)を室温で添加した。30%のH2O2(150mL)を、氷水バス中で冷却しながらこの溶液に滴下添加した。この混合物を室温で放置し、更に2時間撹拌した。反応混合物を氷水バス中で冷却し、Na2SO3水溶液(水中の10%、159mmol)を、この混合物に添加した。溶媒を真空中で蒸発させることにより除去し、沈殿した固体を濾取し、水及びn-ヘキサンで洗浄して、標題化合物を白色固体として得た(17.0g、93%)。(ESI) m/z C10H10FNOの計算値: 179.07. 実測値: 180.11 (M+1)+.
【００８５】
1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【００８６】
【化２４】
2020525486.tif 000028
6NのHCl水溶液(95mL)及び1,4-ジオキサン(150mL)中の1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキサミド(17.0g、94.8mmol)の混合物を、還流温度で終夜加熱した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去し、残留物をEtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、標題化合物を白色固体として得た(16.8g、98%)。(ESI) m/z C10H9FO2の計算値: 180.06. 実測値: 181.12 (M+1)+.
【００８７】
メチル1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【００８８】
【化２５】
2020525486.tif 000029
MeOH(100mL)中の1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(11.8g、65.5mmol)及び濃H2SO4(1.5mL)の混合物を、還流温度で8時間加熱した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去した。残留物を水で希釈し、EtOAcで抽出した。有機物を、飽和NaHCO3水溶液、水、及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、標題化合物を黄色油状物として得て(12.7g、定量的)、これは精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C11H11FO2の計算値: 194.07. 実測値: 195.31 (M+1)+.
【００８９】
メチル1-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【００９０】
【化２６】
2020525486.tif 000030
0℃で、濃硫酸(8mL)に、メチル1-(4-フルオロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(5.6g、28.8mmol)を一度に添加し、続いてKNO3(2.9g、28.8mmol)を数回に分けて添加した。0℃で3時間撹拌した後、反応混合物を氷水中に注入し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、石油エーテル中の0〜50%の酢酸エチル)により精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(5.7g、60%)。(ESI) m/z C11H10FNO4の計算値: 239.06. 実測値: 240.14 (M+1)+.
【００９１】
メチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-ニトロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【００９２】
【化２７】
2020525486.tif 000031
メチル1-(4-フルオロ-3-ニトロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(5.7g、23.8mmol)及びN-イソブチルテトラヒドロ-2H-ピラン-4-アミン(11.3g、71.5mmol)の混合物を、160℃で、N2雰囲気下で7時間撹拌した。反応混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜10%のEtOAc)により精製し、標題化合物を赤色油状物として得た(3.4g、収率40%)。LCMS (ESI) m/z C20H28N2O5の計算値: 376.20. 実測値: 377.32 (M+1)+.
【００９３】
メチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【００９４】
【化２８】
2020525486.tif 000032
EtOAc(30mL)中のメチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-ニトロフェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(3.1g、8.24mmol)及び10%のPd/C(1.1g)の混合物を、室温で、H2雰囲気(15psi)下で6時間撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜20%のEtOAc)により精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(2.1g、収率81%)。LCMS (ESI) m/z C20H30N2O3の計算値: 346.23. 実測値: 347.33 (M+1)+.
【００９５】
メチル1-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【００９６】
【化２９】
2020525486.tif 000033
ジオキサン(12mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(550mg、1.59mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(460mg、2.39mmol)、Pd2(dba)3(146mg、0.159mmol)、キサントホス(185mg、0.318mmol)及びCs2CO3(1.04g、3.18mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(566mg、収率71%)。LCMS (ESI) m/z C25H32ClN3O3の計算値: 457.21. 実測値: 458.33/460.26 (M/M+2)+.
【００９７】
[実施例5]
1-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【００９８】
【化３０】
2020525486.tif 000034
MeOH(3mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(566mg、1.24mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(0.5mL)を添加した。25℃で4時間撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を蒼白色粉末として得た(523mg、収率95%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.19 (br, 1H), 8.24 - 8.20 (m, 2H), 8.16 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.1, 1.9 Hz, 1H), 3.87 - 3.76 (m, 2H), 3.14 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.87 - 2.77 (m, 3H), 1.71 - 1.62 (m, J = 11.0 Hz, 2H), 1.58 - 1.47 (m, 2H), 1.43 (dd, J = 6.4, 3.7 Hz, 2H), 1.38 - 1.30 (m, 1H), 1.16 - 1.10 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C24H30ClN3O3の計算値: 443.20. 実測値: 444.30/446.28 (M/M+2)+.
【００９９】
[実施例4]
1-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１００】
【化３１】
2020525486.tif 000035
DCM(3mL)中の1-(3-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(150mg、0.34mmol)、メタンスルホンアミド(36mg、0.38mmol)及びDMAP(9mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(85mg、0.41mmol)を一度に添加した。室温で5時間撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(56mg、収率32%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 8.30 - 8.08 (m, 3H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.32 (s, 3H), 3.14 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.91 - 2.74 (m, 3H), 1.74 - 1.61 (m, 2H), 1.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 1.49 - 1.42 (m, 2H), 1.30 - 1.20 (m, 2H), 1.19 - 1.07 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.5 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H33ClN4O4Sの計算値: 520.19. 実測値: 521.30/523.27 (M/M+2)+.
【０１０１】
【化３２】
2020525486.tif 000036
【０１０２】
メチル1-(3-(2-(シクロプロパンカルボニル)ヒドラジン-1-カルボチオアミド)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１０３】
【化３３】
2020525486.tif 000037
MeCN(5mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(500mg、1.45mmol)の溶液に、TCDI(517mg、2.9mmol)を添加し、得られた反応混合物を25℃でN2雰囲気下で3時間撹拌した。得られた混合物を濃縮して、粗製のイソチオシアネート中間体を得て、これをEtOH(10mL)中に溶解し、シクロプロパンカルボヒドラジド(218mg、2.18mmol)で処理した。50℃で終夜撹拌した後、反応混合物を濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜60%のEtOAc)により精製して、標題化合物を白色固体として得た(734mg、収率100%)。LCMS (ESI) m/z C25H36N4O4Sの計算値: 488.25. 実測値: 489.35 (M+1)+.
【０１０４】
メチル1-(3-((5-シクロプロピル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１０５】
【化３４】
2020525486.tif 000038
メチル1-(3-(2-(シクロプロパンカルボニル)ヒドラジン-1-カルボチオアミド)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(734mg、1.50mmol)を、濃H2SO4(10mL)に0℃で、数回に分けて添加した。室温で3時間撹拌した後、この混合物を、NaOH水溶液(4N)で注意深くpH5〜6に中和し、DCMで抽出した。合わせた有機層を、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、粗生成物を得て(639mg、収率90%)、これは精製することなく次の工程で使用した。LCMS (ESI) m/z C25H34N4O3Sの計算値: 470.24. 実測値: 471.73 (M+1)+.
【０１０６】
[実施例14]
1-(3-((5-シクロプロピル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１０７】
【化３５】
2020525486.tif 000039
MeOH(3mL)中のメチル1-(3-((5-シクロプロピル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(639mg、1.36mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(1mL)を添加した。室温で5時間撹拌した後、得られた混合物を1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜70%のMeCN)により精製し、標題化合物を蒼白色粉末として得た(44mg、収率62%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.23 (br, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.10 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 11.1, 3.5 Hz, 2H), 3.17 (t, J = 11.3 Hz, 2H), 2.88 (ddd, J = 11.4, 7.8, 3.8 Hz, 1H), 2.78 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 2.34 - 2.27 (m, 1H), 1.72 - 1.64 (m, 2H), 1.53 - 1.42 (m, 4H), 1.32 (dt, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.14 - 1.06 (m, 4H), 0.95 - 0.91 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C24H32N4O3Sの計算値: 456.22. 実測値: 457.32 (M+1)+.
【０１０８】
[実施例19]
1-(3-((5-シクロプロピル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１０９】
【化３６】
2020525486.tif 000040
DCM(1mL)及びDMF(1mL)中の1-(3-((5-シクロプロピル-1,3,4-チアジアゾール-2-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(150mg、0.33mmol)、メタンスルホンアミド(35mg、0.36mmol)及びDMAP(9mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(83mg、0.40mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の20〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(30mg、収率17%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.12 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 3.82 (dd, J = 11.1, 3.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.07 (m, 5H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.78 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 2.34 - 2.27 (m, 1H), 1.69 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 1.55 - 1.42 (m, 4H), 1.28 - 1.19 (m, 1H), 1.16 - 1.03 (m, 4H), 0.96 - 0.89 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H35N5O4S2の計算値: 533.21. 実測値: 534.28 (M+1)+ .
【０１１０】
【化３７】
2020525486.tif 000041
【０１１１】
5-ブロモ-N-イソブチル-3-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-2-アミンの調製
【０１１２】
【化３８】
2020525486.tif 000042
NMP(150mL)中の5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(15.3g、64.5mmol)、N-イソブチルテトラヒドロ-2H-ピラン-4-アミン(15.2g、96.7mmol)及びDIPEA(22.5mL、129mmol)の混合物を、140℃で4時間撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜10%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(9.7g、収率42%)。LCMS (ESI) m/z C14H20BrN3O3の計算値: 357.07. 実測値: 358.24/360.22 (M/M+2)+.
【０１１３】
ジメチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)マロネートの調製
【０１１４】
【化３９】
2020525486.tif 000043
5-ブロモ-N-イソブチル-3-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-2-アミン(6.0g、16.81mmol)、マロン酸ジメチル(6.66g、50.42mmol)、ヨウ化銅(640mg、3.36mmol)、ピコリン酸(830mg、6.80mmol)、Cs2CO3(16.4g、50.34mmol)及びジオキサン(60mL)の混合物を、100℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(2.8g、収率41%)。(ESI) m/z C19H27N3O7の計算値: 409.18. 実測値: 410.15 (M+1)+.
【０１１５】
エチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)アセテートの調製
【０１１６】
【化４０】
2020525486.tif 000044
ジメチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)マロネート(2.8g、6.85mmol)、KOH(3.84g、68.46mmol)及びエタノール(50mL)の混合物を、還流温度で2時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物を、6NのHClを用いてpH4〜5に調節した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去し、得られた残留物をEtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)酢酸を赤色固体として得た。EtOH(100mL)中の上記粗製の酸及び濃H2SO4(1.5mL)の混合物を、還流温度で8時間加熱した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去した。残留物を水で希釈し、EtOAcで抽出した。有機物を、飽和NaHCO3水溶液、水、及びブラインで順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(2.2g、収率88%)。(ESI) m/z C18H27N3O5の計算値: 365.20. 実測値: 366.03 (M+1)+.
【０１１７】
エチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエートの調製
【０１１８】
【化４１】
2020525486.tif 000045
0℃で、DMF(8mL)中のNaH(247mg、6.16mmol)の懸濁液に、エーテル(2mL)中のエチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)アセテート(750mg、2.06mmol)及びヨージドメタン(729mg、5.14mmol)の溶液を滴下添加した。得られた混合物を室温まで加温し、終夜撹拌した。残留物を、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機物を水及びブラインで順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(690mg、収率86%)。(ESI) m/z C20H31N3O5の計算値: 393.23. 実測値: 394.23 (M+1)+.
【０１１９】
エチル2-(5-アミノ-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエートの調製
【０１２０】
【化４２】
2020525486.tif 000046
EtOAc(10mL)中のエチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエート(690mg、1.76mmol)及び10%のPd/C(700mg)の混合物を、25℃でH2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(620mg、収率97%)。(ESI) m/z C20H33N3O3の計算値: 363.25. 実測値: 364.02 (M+1)+.
【０１２１】
エチル2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエートの調製
【０１２２】
【化４３】
2020525486.tif 000047
ジオキサン(8mL)中のエチル2-(5-アミノ-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエート(620mg、1.71mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(657mg、3.42mmol)、Pd2(dba)3(312mg、0.342mmol)、キサントホス(395mg、0.683mmol)及びCs2CO3(1.11g、3.42mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(400mg、収率49%)。LCMS (ESI) m/z C25H35ClN4O3の計算値: 474.24. 実測値: 475.63/477.70 (M/M+2)+.
【０１２３】
[実施例6]
2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパン酸の調製
【０１２４】
【化４４】
2020525486.tif 000048
MeOH(2mL)中のエチル2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパノエート(60mg、0.126mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(0.32mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の60〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(29mg、収率51%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.51 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.01 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.83 - 3.76 (m, 2H), 3.27 - 3.20 (m, 1H), 3.12 - 3.03 (m, 2H), 2.95 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.67 - 1.52 (m, 4H), 1.49 (s, 6H), 1.44 - 1.37 (m, 1H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C23H31ClN4O3の計算値: 446.21. 実測値: 447.36/449.67 (M/M+2)+.
【０１２５】
[実施例7]
2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチル-N-(メチルスルホニル)プロパンアミドの調製
【０１２６】
【化４５】
2020525486.tif 000049
DCM(3mL)中の2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパン酸(130mg、0.29mmol)、メタンスルホンアミド(33mg、0.35mmol)及びDMAP(7mg、0.06mmol)の溶液に、DCC(78mg、0.38mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(51mg、収率34%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.43 (s, 1H), 8.13 - 8.08 (m, J = 5.8, 2.5 Hz, 2H), 8.06 (s, 1H), 7.94 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, J = 10.8 Hz, 2H), 3.28 - 3.18 (m, 4H), 3.07 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.97 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.70 - 1.53 (m, 4H), 1.50 (s, 6H), 1.46 - 1.37 (m, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 0.87 - 0.75 (m, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C24H34ClN5O4Sの計算値: 523.20. 実測値: 524.25/526.60 (M/M+2)+ .
【０１２７】
[実施例8]
2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチル-N-((トリフルオロメチル)スルホニル)プロパンアミドの調製
【０１２８】
【化４６】
2020525486.tif 000050
DCM(3mL)中の2-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-2-メチルプロパン酸(130mg、0.29mmol)、トリフルオロメタンスルホンアミド(52mg、0.35mmol)及びDMAP(7mg、0.06mmol)の溶液に、DCC(78mg、0.38mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の40〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(54mg、収率32%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.67 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.91 - 3.71 (m, 3H), 3.19 - 3.02 (m, 4H), 1.78 - 1.64 (m, 2H), 1.63 - 1.51 (m, 3H), 1.42 (s, 6H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H). スルホンアミド基のプロトンは観測されなかった。 LCMS (ESI) m/z C24H31ClF3N5O4Sの計算値: 577.17. 実測値: 578.25/580.68 (M/M+2)+ .
【０１２９】
【化４７】
2020525486.tif 000051
【０１３０】
エチル1-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１３１】
【化４８】
2020525486.tif 000052
エチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)アセテート(1g、2.74mmol)、1-ブロモ-2-クロロエタン(784mg、548mmol)及びベンジルトリエチルアンモニウムクロリド(4.4g、19.31mmol)の混合物に、50%のNaOH水溶液(20mL)を添加し、得られた混合物を、50℃で1時間加熱した。冷却後、この混合物を、水中に注入して、EtOAcで抽出した。有機層を、水、1NのHCl水溶液、及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過、真空中での濃縮により、標題化合物を黄色油状物として得て(500mg、47%)、これは更に精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C20H29N3O5の計算値: 391.21. 実測値: 392.02 (M+1)+.
【０１３２】
エチル1-(5-アミノ-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１３３】
【化４９】
2020525486.tif 000053
EtOAc(10mL)中のエチル1-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(500mg、1.28mmol)及び10%のPd/C(500mg)の混合物を、25℃でH2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(420mg、収率91%)。(ESI) m/z C20H31N3O3の計算値: 361.24. 実測値: 362.40 (M+1)+.
【０１３４】
エチル1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１３５】
【化５０】
2020525486.tif 000054
ジオキサン(8mL)中のエチル1-(5-アミノ-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(420mg、1.16mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(448mg、2.33mmol)、Pd2(dba)3(213mg、0.233mmol)、キサントホス(269mg、0.465mmol)及びCs2CO3(757mg、2.33mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(290mg、収率53%)。(ESI) m/z C25H33ClN4O3の計算値: 472.22. 実測値: 473.01/475.23 (M/M+2)+.
【０１３６】
[実施例9]
1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１３７】
【化５１】
2020525486.tif 000055
MeOH(3mL)中のエチル1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(60mg、1.24mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(0.32mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を黄色粉末として得た(22mg、収率39%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.53 (br, 1H), 8.20 (dd, J = 15.4, 2.4 Hz, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.94 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.22 - 3.16 (m, 1H), 3.13 - 3.05 (m, 2H), 2.95 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.67 - 1.51 (m, 4H), 1.48 - 1.37 (m, 3H), 1.19 - 1.09 (m, 2H), 0.80 (d, J = 6.6 Hz, 6H). (ESI) m/z C23H29ClN4O3の計算値: 444.19. 実測値: 445.11/447.29 (M/M+2)+.
【０１３８】
[実施例10]
1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１３９】
【化５２】
2020525486.tif 000056
DCM(3mL)中の1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(150mg、0.34mmol)、メタンスルホンアミド(38mg、0.40mmol)及びDMAP(8mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(90mg、0.44mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(32mg、収率18%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.20 (s, 1H), 8.21 - 8.15 (m, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.92 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 2H), 3.26 - 3.21 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.09 (t, J = 10.3 Hz, 2H), 2.96 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 4H), 1.52 - 1.46 (m, 2H), 1.45 - 1.39 (m, 1H), 1.22 - 1.14 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). (ESI) m/z C24H32ClN5O4Sの計算値: 521.19. 実測値: 522.25/524.60 (M/M+2)+.
【０１４０】
[実施例11]
1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)-N-((トリフルオロメチル)スルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１４１】
【化５３】
2020525486.tif 000057
DCM(3mL)中の1-(5-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(150mg、0.34mmol)、トリフルオロメタンスルホンアミド(60mg、0.40mmol)及びDMAP(8mg、0.07mmol)の溶液に、DCC(90mg、0.41mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(68mg、収率35%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.51 (s, 1H), 8.20 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 3.87 - 3.81 (m, 2H), 3.70 - 3.54 (m, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 4H), 1.73 - 1.58 (m, 4H), 1.55 - 1.46 (m, 1H), 1.41 - 1.35 (m, 2H), 1.07 - 1.00 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.6 Hz, 6H). スルホンアミド基のプロトンは観測されなかった。 LCMS (ESI) m/z C24H29ClF3N5O4Sの計算値: 575.16. 実測値: 576.25/578.68 (M/M+2)+.
【０１４２】
【化５４】
2020525486.tif 000058
【０１４３】
6-ブロモ-2-ニトロピリジン-3-アミンの調製
【０１４４】
【化５５】
2020525486.tif 000059
酢酸(150mL)中の2-ニトロ-ピリジン-3-イルアミン(25.0g、179.7mmol)及び酢酸ナトリウム(15.5g、188.7mmol)の撹拌された懸濁液に、酢酸(50mL)中の臭素(13.8mL、269.6mmol)の溶液を滴下添加し、反応混合物を終夜撹拌した。減圧下で酢酸を除去した。残留物を0℃まで冷却し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和して、pHを約7まで調節し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を、ブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチルで摩砕して、化合物を黄色固体として得た(34.4g、収率88%)。LCMS (ESI) m/z 6-ブロモ-2-ニトロピリジン-3-アミンC5H4BrN3O2の計算値: 216.95. 実測値: 218.1/220.1 (M/M+2)+.
【０１４５】
6-ブロモ-2-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミンの調製
【０１４６】
【化５６】
2020525486.tif 000060
0℃で、6-ブロモ-2-ニトロピリジン-3-アミン(34.4g、157.8mmol)、テトラヒドロ-4H-ピラン-4-オン(39.5g、394.5mmol)、酢酸(170mL)及びTHF(340mL)の懸濁液に、Me2S中の2MのBH3(87mL、173.6mmol)を滴下添加した。室温で更に2時間撹拌した後、この混合物を氷水中に注入した。沈殿した固体を濾取し、減圧下で40℃で終夜乾燥して、標題化合物を黄色固体として得た(39.2g、収率83%)。LCMS (ESI) m/z C10H12BrN3O3の計算値: 301.0. 実測値: 302.4/304.4 (M/M+2)+.
【０１４７】
6-ブロモ-N-(2-メチルアリル)-2-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミンの調製
【０１４８】
【化５７】
2020525486.tif 000061
0℃で、DMF(120mL)中の6-ブロモ-2-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミン(8.0g、26.6mmol)の溶液に、NaH(2.13g、53.2mmol)を数回に分けて添加し、得られた混合物を0℃で更に30分間撹拌した。3-ブロモ-2-メチルプロパ-1-エン(7.18g、53.2mmol)を滴下添加し、これを0℃で2時間撹拌した。得られた混合物を、EtOAcと飽和NH4Cl水溶液との間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(5.8g、収率61%)。LCMS (ESI) m/z C14H18BrN3O3の計算値: 355.05. 実測値: 356.24/358.26 (M/M+2)+.
【０１４９】
メチル2-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)アセテートの調製
【０１５０】
【化５８】
2020525486.tif 000062
6-ブロモ-N-(2-メチルアリル)-2-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミン(10.0g、28.2mmol)、マロン酸ジメチル(7.46g、56.4mmol)、ヨウ化銅(1.07g、5.64mmol)、ピコリン酸(694mg、5.64mmol)、Cs2CO3(18.4g、56.4mmol)及びジオキサン(150mL)の混合物を、100℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(4.6g、収率47%)。(ESI) m/z C17H23N3O5の計算値: 349.16. 実測値: 350.46 (M+1)+.
【０１５１】
1-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１５２】
【化５９】
2020525486.tif 000063
メチル2-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)アセテート(3.0g、8.59mmol)、1-ブロモ-2-クロロエタン(2.46g、17.2mmol)、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド(13.9g、61mmol)及びTHF(20mL)の混合物に、50%のNaOH水溶液(20mL)を添加し、得られた混合物を、50℃で1時間加熱した。冷却後、この混合物を氷水中に注入し、6NのHClで中和した。得られた混合物をEtOAcで抽出した。有機層を分離し、水、1NのHCl水溶液及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過、真空中での濃縮により、標題化合物を得て(2.4g、77%)、これは更に精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C18H23N3O5の計算値: 361.16. 実測値: 362.43 (M+1)+.
【０１５３】
メチル1-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１５４】
【化６０】
2020525486.tif 000064
0℃で、MeOH(24mL)中の1-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(2.4g、6.65mmol)の溶液に、SOCl2(1.5mL、19.95mmol)を滴下添加した。得られた混合物を室温で18時間撹拌した。溶媒を、真空中で蒸発させることにより除去した。残留物を水で希釈し、EtOAcで抽出した。有機物を、飽和NaHCO3水溶液、水及びブラインで順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(2.0g、収率80%)。(ESI) m/z C19H25N3O5の計算値: 375.18. 実測値: 376.20 (M+1)+.
【０１５５】
メチル1-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１５６】
【化６１】
2020525486.tif 000065
メチル1-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(2.0g、5.3mmol)、4-メチルベンゼンスルホノヒドラジド(7.9g、42.4mmol)及びキシレン(20mL)の混合物を、110℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(1.0g、収率50%)。(ESI) m/z C19H27N3O5の計算値: 377.20. 実測値: 378.44 (M+1)+.
【０１５７】
メチル1-(6-アミノ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１５８】
【化６２】
2020525486.tif 000066
メチル1-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(200mg、0.52mmol)、SnCl2(1.08g、5.2mmol)、Et3N(3.0mL、15.6mmol)及びEtOH(6mL)の混合物を、80℃で3時間撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜50%のEtOAc)により精製し、標題化合物を得た(128mg、収率71%)。(ESI) m/z C19H29N3O3の計算値: 347.22. 実測値: 348.45 (M+1)+.
【０１５９】
メチル1-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１６０】
【化６３】
2020525486.tif 000067
ジオキサン(3mL)中のメチル1-(6-アミノ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(130mg、0.38mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(147mg、0.76mmol)、Pd2(dba)3(35mg、0.038mmol)、キサントホス(44mg、0.076mmol)及びCs2CO3(248mg、0.76mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(106mg、収率61%)。LCMS (ESI) m/z C24H31ClN4O3の計算値: 458.21. 実測値: 460.48/461.34 (M/M+2)+.
【０１６１】
[実施例15]
1-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１６２】
【化６４】
2020525486.tif 000068
MeOH(1.0mL)中のメチル1-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(103mg、0.224mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(1.0mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これを分取HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の30〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を得た(90mg、収率90%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.61 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.38 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.25 - 3.17 (m, 2H), 2.92 - 2.77 (m, 3H), 1.75 - 1.64 (m, 2H), 1.56 - 1.44 (m, 4H), 1.41 - 1.28 (m, 3H), 0.84 (d, J = 6.5 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C23H29ClN4O3の計算値: 444.19. 実測値: 445.33/447.30 (M/M+2)+.
【０１６３】
[実施例16]
1-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１６４】
【化６５】
2020525486.tif 000069
THF(1mL)中の1-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(50mg、0.11mmol)、メタンスルホンアミド(12mg、0.12mmol)及びDMAP(3mg、0.022mmol)の溶液に、DCC(27mg、0.132mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の20〜80%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(21mg、収率36%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.88 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.39 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 - 7.78 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 2H), 3.25 - 3.18 (m, 5H), 2.93 - 2.76 (m, 3H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.60 - 1.43 (m, 4H), 1.40 - 1.29 (m, 3H), 0.85 (d, J = 6.4 Hz, 6H).  LCMS (ESI) m/z C24H32ClN5O4Sの計算値: 521.19. 実測値: 522.66/524.64 (M/M+2)+ .
【０１６５】
【化６６】
2020525486.tif 000070
【０１６６】
メチル2-メチル-2-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)プロパノエートの調製
【０１６７】
【化６７】
2020525486.tif 000071
0℃で、DMF(20mL)中のNaH(510mg、12.9mmol)の懸濁液に、エーテル(5mL)中のメチル2-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)アセテート(1.5g、4.3mmol)及びヨージドメタン(1.8g、12.9mmol)の溶液を滴下添加した。得られた混合物を室温まで加温し、終夜撹拌した。残留物を、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機物を水及びブラインで順次洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾過及び真空中での濃縮により、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(1.6g、収率96%)。(ESI) m/z C19H27N3O5の計算値: 377.20. 実測値: 378.22 (M+1)+.
【０１６８】
メチル2-(6-アミノ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパノエートの調製
【０１６９】
【化６８】
2020525486.tif 000072
EtOAc(20mL)中のメチル2-メチル-2-(5-((2-メチルアリル)(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-6-ニトロピリジン-2-イル)プロパノエート(1.6g、4.4mmol)及び10%のPd/C(500mg)の混合物を、25℃でH2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(560mg、収率36%)。(ESI) m/z C19H31N3O3の計算値: 349.24. 実測値: 350.79 (M+1)+.
【０１７０】
メチル2-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパノエートの調製
【０１７１】
【化６９】
2020525486.tif 000073
ジオキサン(6mL)中のメチル2-(6-アミノ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパノエート(560mg、1.60mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(544mg、3.2mmol)、Pd2(dba)3(140mg、0.16mmol)、キサントホス(196mg、0.32mmol)及びCs2CO3(1.11g、0.16mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(400mg、収率49%)。LCMS (ESI) m/z C24H33ClN4O3の計算値: 460.22. 実測値: 461.12/463.14 (M/M+2)+.
【０１７２】
[実施例17]
2-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパン酸の調製
【０１７３】
【化７０】
2020525486.tif 000074
MeOH(4.0mL)中のメチル2-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパノエート(560mg、1.21mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(2.0mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の60〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(510mg、収率94%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.34 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.52 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.22 (t, J = 11.5 Hz, 2H), 2.95 - 2.75 (m, 3H), 1.74 - 1.63 (m, 2H), 1.63 - 1.42 (m, 8H), 1.36 - 1.28 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.3 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C23H31ClN4O3の計算値: 446.21. 実測値: 447.18/ 449.23 (M/M+2)+.
【０１７４】
[実施例18]
2-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチル-N-(メチルスルホニル)プロパンアミドの調製
【０１７５】
【化７１】
2020525486.tif 000075
DCM(3mL)中の2-(6-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-2-メチルプロパン酸(130mg、0.29mmol)、メタンスルホンアミド(33mg、0.35mmol)及びDMAP(7mg、0.06mmol)の溶液に、DCC(78mg、0.38mmol)を一度に添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(51mg、収率34%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.33 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.45 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.90 - 3.79 (m, 2H), 3.29 - 3.10 (m, 5H), 2.98 - 2.78 (m, 3H), 1.76 - 1.65 (m, 2H), 1.61 - 1.47 (m, 8H), 1.40 - 1.32 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.4 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C24H34ClN5O4Sの計算値: 523.20. 実測値: 524.49/526.47 (M/M+2)+ .
【０１７６】
[実施例20]
【０１７７】
【化７２】
2020525486.tif 000076
2020525486.tif 000077
【０１７８】
メチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((2-メトキシピリミジン-5-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１７９】
【化７３】
2020525486.tif 000078
ジオキサン(10mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(550mg、1.59mmol)、5-ブロモ-2-メトキシピリミジン(385mg、2.06mmol)、Pd2(dba)3(143mg、0.159mmol)、キサントホス(187mg、0.318mmol)及びCs2CO3(1.55g、4.76mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(450mg、収率62%)。LCMS (ESI) m/z C25H34N4O4の計算値: 454.26. 実測値: 455.37 (M+1)+.
【０１８０】
1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((2-メトキシピリミジン-5-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１８１】
【化７４】
2020525486.tif 000079
MeOH(4mL)中のメチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((2-メトキシピリミジン-5-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(450mg、0.99mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(1mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、標題化合物を蒼白色固体として得て(436mg、収率100%)、これは精製することなく次の工程で使用した。LCMS (ESI) m/z C24H32N4O4の計算値: 440.24. 実測値: 441.35 (M+1)+.
【０１８２】
1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((2-メトキシピリミジン-5-イル)アミノ)フェニル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１８３】
【化７５】
2020525486.tif 000080
THF(2mL)中の1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((2-メトキシピリミジン-5-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(200mg、0.454mmol)の溶液に、CDI(110mg、0.545mmol)を添加し、得られた混合物を50℃で加熱した。2時間後、この混合物を室温まで冷却し、THF(1mL)中のメタンスルホンアミド(50mg、0.49mmol)及びDBU(0.15mL、0.908mmol)を添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(112mg、収率48%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.99 (s, 1H), 8.50 (s, 2H), 7.16 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.1, 2.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.83 (dd, J = 11.1, 3.6 Hz, 2H), 3.22 - 3.11 (m, 5H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.79 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.76 - 1.68 (m, 2H), 1.60 - 1.49 (m, 2H), 1.42 - 1.34 (m, 3H), 1.13 - 1.05 (m, 2H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H35N5O5Sの計算値: 517.24. 実測値: 518.74 (M+1)+.
【０１８４】
[実施例21]
【０１８５】
【化７６】
2020525486.tif 000081
【０１８６】
メチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((6-(メトキシメチル)ピリジン-3-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１８７】
【化７７】
2020525486.tif 000082
ジオキサン(5mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(500mg、1.44mmol)、5-ブロモ-2-メトキシピリミジン(437mg、2.16mmol)、Pd2(dba)3(138mg、0.15mmol)、キサントホス(168mg、0.29mmol)及びCs2CO3(939mg、2.88mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(435mg、収率65%)。LCMS (ESI) m/z C27H37N3O4の計算値: 467.28. 実測値: 468.37 (M+1)+.
【０１８８】
1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((6-(メトキシメチル)ピリジン-3-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１８９】
【化７８】
2020525486.tif 000083
MeOH(4mL)中のメチル1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((6-(メトキシメチル)ピリジン-3-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(435mg、0.93mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(1mL)を添加した。25℃で4時間撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、標題化合物を蒼白色固体として得て(378mg、収率90%)、これは精製することなく次の工程で使用した。LCMS (ESI) m/z C26H35N3O4の計算値: 453.26. 実測値: 454.38 (M+1)+.
【０１９０】
1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((6-(メトキシメチル)ピリジン-3-イル)アミノ)フェニル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１９１】
【化７９】
2020525486.tif 000084
THF(2mL)中の1-(4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-3-((6-(メトキシメチル)ピリジン-3-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(180mg、0.4mmol)の溶液に、CDI(130mg、0.8mmol)を添加し、得られた混合物を50℃で加熱した。2時間後、この混合物を室温まで冷却し、THF(1mL)中のメタンスルホンアミド(76mg、0.8mmol)及びDBU(122mg、0.8mmol)を添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(114mg、収率54%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.10 (s, 1H), 8.39 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 2H), 6.91 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H), 3.81 (dd, J = 11.0, 3.2 Hz, 2H), 3.35 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.09 (t, J = 11.0 Hz, 2H), 2.94 - 2.86 (m, 1H), 2.79 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.67 - 1.52 (m, 4H), 1.45 - 1.35 (m, 3H), 1.18 - 1.13 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C27H38N4O5Sの計算値: 530.26. 実測値: 531.33 (M+1)+.
【０１９２】
[実施例22及び実施例23]
【０１９３】
【化８０】
2020525486.tif 000085
【０１９４】
メチル1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０１９５】
【化８１】
2020525486.tif 000086
トルエン(10mL)中のメチル1-(3-アミノ-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(600mg、1.73mmol)、5-ブロモ-2-メトキシピリミジン(478mg、2.60mmol)、Pd2(dba)3(158mg、0.17mmol)、キサントホス(200mg、0.35mmol)及びK2CO3(717mg、5.20mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(720mg、収率93%)。LCMS (ESI) m/z C25H31N5O3の計算値: 449.24. 実測値: 450.38 (M+1)+.
【０１９６】
1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０１９７】
【化８２】
2020525486.tif 000087
THF(7mL)中のメチル1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(720mg、1.60mmol)の溶液に、1NのLiOH水溶液(6.4mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これを精製して、標題化合物を蒼白色固体として得た(270mg、収率39%)。LCMS (ESI) m/z C24H29N5O3の計算値: 435.23. 実測値: 436.35 (M+1)+.
【０１９８】
1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０１９９】
【化８３】
2020525486.tif 000088
THF(2mL)中の1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパン-1-カルボン酸(110mg、0.253mmol)の溶液に、CDI(82mg、0.505mmol)を添加し、得られた混合物を50℃で加熱した。2時間後、この混合物を室温まで冷却し、THF(1mL)中のメタンスルホンアミド(60mg、0.631mmol)及びDBU(77mg、0.505mmol)を添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(68mg、収率52%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 8.53 (s, 2H), 8.28 (s, 1H), 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 3.85 - 3.76 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.11 - 3.02 (m, 2H), 3.01 - 2.94 (m, 1H), 2.77 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.61 - 1.48 (m, 4H), 1.46 - 1.35 (m, 3H), 1.20 - 1.13 (m, 2H), 0.78 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H32N6O4Sの計算値: 512.22. 実測値: 513.45 (M+1)+.
【０２００】
5-((2-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-(1-((メチルスルホニル)カルバモイル)シクロプロピル)フェニル)アミノ)ピリミジン-2-カルボキサミドの調製
【０２０１】
【化８４】
2020525486.tif 000089
0℃で、DMSO(2mL)中の1-(3-((2-シアノピリミジン-5-イル)アミノ)-4-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)フェニル)-N-メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミド(150mg、0.29mmol)及びK2CO3(121mg、0.878mmol)の懸濁液に、H2O2(0.5mL)を添加した。室温で30分間撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を黄色粉末として得た(101mg、収率65%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.08 (s, 1H), 8.64 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 3.08 (t, J = 10.6 Hz, 2H), 2.97 - 2.91 (m, 1H), 2.79 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 1.65 - 1.50 (m, 4H), 1.46 - 1.36 (m, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 2H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 6H). LCMS (ESI) m/z C25H34N6O5Sの計算値: 530.23. 実測値: 531.29 (M+1)+.
【０２０２】
[実施例24及び実施例25]
【０２０３】
【化８５】
2020525486.tif 000090
2020525486.tif 000091
【０２０４】
2-ブロモ-5-フルオロピリジン1-オキシドの調製
【０２０５】
【化８６】
2020525486.tif 000092
2-ブロモ-5-フルオロピリジン(5g、28.4mmol)、トリフルオロ酢酸(23mL)及び過酸化水素(水中の35%)(3mL、34.1mmol)を、70℃で終夜撹拌した。混合物を水中に注入し、ジクロロメタンで抽出した。有機層をNaHCO3(水溶液)で洗浄し、MgSO4で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して、標題化合物を得て(6g、収率100%)、これは精製することなく次の工程で使用した。LCMS (ESI) m/z C5H3BrFNOの計算値: 190.94. 実測値: 192.45/194.44 (M/M+2)+.
【０２０６】
2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロピリジン1-オキシドの調製
【０２０７】
【化８７】
2020525486.tif 000093
0℃で、発煙硝酸(2.0mL)を、2-ブロモ-5-フルオロピリジン1-オキシド(6g、31.3mmol)及び濃硫酸(30mL)の混合物に添加した。0℃で30分間撹拌した後、この混合物を100℃まで加熱し、この温度で4時間撹拌した。反応混合物を、0℃で水中に注入し、濃アンモニアを添加することによりpH2に調節した。沈殿した固体を濾取し、水で洗浄し、周囲温度で終夜乾燥して、標題化合物を得た(2.5g、収率34%)。LCMS (ESI) m/z C5H2BrFN2O3の計算値: 235.92. 実測値: 237.01/238.99 (M/M+2)+.
【０２０８】
2-ブロモ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン1-オキシドの調製
【０２０９】
【化８８】
2020525486.tif 000094
2-ブロモ-5-フルオロ-4-ニトロピリジン1-オキシド(2g、16.9mmol)、N-イソブチルテトラヒドロ-2H-ピラン-4-アミン(1.6g、20.3mmol)及びNMPの混合物を、60℃で、N2雰囲気下で18時間撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜10%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(3g、収率77%)。LCMS (ESI) m/z C14H20 BrN3O4の計算値: 373.06. 実測値: 374.32/376.30 (M/M+2)+.
【０２１０】
6-ブロモ-N-イソブチル-4-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミンの調製
【０２１１】
【化８９】
2020525486.tif 000095
2-ブロモ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン1-オキシド(3g、8.0mmol)、ビス(ピナコラト)二ホウ素(8g、32.1mmol)及びジオキサンの混合物を、100℃で、N2雰囲気下で18時間撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜10%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(1.7g、収率59%)。LCMS (ESI) m/z C14H20 BrN3O3の計算値: 357.07. 実測値: 358.12/360.34 (M/M+2)+.
【０２１２】
メチル2-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン-2-イル)アセテートの調製
【０２１３】
【化９０】
2020525486.tif 000096
6-ブロモ-N-イソブチル-4-ニトロ-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ピリジン-3-アミン(23g、64.2mmol)、マロン酸ジメチル(25.3g、191.5mmol)、ヨウ化銅(11.5g、60.4mmol)、NaI(20g、107.6mmol)、N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(7g、79.4mmol)、Cs2CO3(62g、190.3mmol)及びジオキサン(400mL)の混合物を、100℃で16時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(4g、収率18%)。(ESI) m/z C17H25N3O5の計算値: 351.18. 実測値: 352.27 (M+1)+.
【０２１４】
1-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０２１５】
【化９１】
2020525486.tif 000097
エチル2-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)アセテート(1.5g、4.27mmol)、1-ブロモ-2-クロロエタン(1.2g、8.39mmol)及びベンジルトリエチルアンモニウムクロリド(6.9g、30.3mmol)の混合物に、50%のNaOH水溶液(20mL)を添加し、得られた混合物を、室温で1時間。冷却後、この混合物を、水中に注入して、ジイソプロピルエーテルで抽出した。有機層を、水、1NのHCl水溶液、及びブラインで順次洗浄し、MgSO4で乾燥した。濾過、真空中での濃縮により、標題化合物を黄色油状物として得て(730mg、47%)、これは更に精製することなく次の工程で使用した。(ESI) m/z C18H25N3O5の計算値: 363.18. 実測値: 364.31 (M+1)+.
【０２１６】
メチル1-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０２１７】
【化９２】
2020525486.tif 000098
0℃で、MeOH(10mL)中の1-(5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-4-ニトロピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(730mg、2.01mmol)の混合物に、SOCl2(1mL)を滴下添加し、次に、得られた混合物を室温で終夜撹拌した。この混合物を水中に注入し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空中で濃縮して、残留物を得て、これをシリカゲルによるクロマトグラフィーで精製して、標題化合物を黄色油状物として得た(400mg、53%)。(ESI) m/z C19H27N3O5の計算値: 377.20. 実測値: 378.34 (M+1)+.
【０２１８】
メチル1-(4-アミノ-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０２１９】
【化９３】
2020525486.tif 000099
MeOH(5mL)中のエチル1-(6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)-5-ニトロピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(400mg、1.06mmol)、亜鉛粉末(347mg、5.30mmol)及びNH4Cl(284mg、5.30mmol)の懸濁液を、65℃で、窒素雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜40%のEtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(210mg、収率57%)。(ESI) m/z C19H29N3O3の計算値: 347.22. 実測値: 348.43 (M+1)+.
【０２２０】
メチル1-(4-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレートの調製
【０２２１】
【化９４】
2020525486.tif 000100
ジオキサン(4mL)中のエチル1-(5-アミノ-6-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-3-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(170mg、0.49mmol)、2-ブロモ-5-クロロピリジン(153mg、0.80mmol)、Pd2(dba)3(51mg、0.056mmol)、キサントホス(64mg、0.11mmol)及びCs2CO3(460mg、1.41mmol)の混合物を、100℃で、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中の0〜30%のEtOAc)により精製して、標題化合物を得た(110mg、収率49%)。(ESI) m/z C24H31ClN4O3の計算値: 458.21. 実測値: 459.34/461.33(M/M+2)+.
【０２２２】
1-(4-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸の調製
【０２２３】
【化９５】
2020525486.tif 000101
MeOH(1mL)中のメチル1-(4-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボキシレート(40mg、0.087mmol)の溶液に、4NのNaOH水溶液(1mL)を添加した。25℃で終夜撹拌した後、得られた混合物を、1NのHClで中和し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(18mg、収率46%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.48 (s, 1H), 8.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.59 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 2H), 3.39 - 3.26 (m, 2H), 3.01 - 2.79 (m, 3H), 2.12 - 2.03 (m, 2H), 1.74 - 1.58 (m, 4H), 1.53 - 1.49 (m, 1H), 1.47 - 1.43 (m, 2H), 0.98 - 0.81 (m, 6H). カルボキシ基のプロトンは観測されなかった。 (ESI) m/z C23H29ClN4O3の計算値: 444.19. 実測値: 445.31/447.30 (M/M+2)+.
【０２２４】
1-(4-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)-N-(メチルスルホニル)シクロプロパン-1-カルボキサミドの調製
【０２２５】
【化９６】
2020525486.tif 000102
THF中の1-(4-((5-クロロピリジン-2-イル)アミノ)-5-(イソブチル(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アミノ)ピリジン-2-イル)シクロプロパン-1-カルボン酸(40mg、0.090mmol)の溶液に、CDI(22mg、0.135mmol)、メタンスルホンアミド(13mg、0.135mmol)及びDBU(27mg、0.18mmol)を添加した。得られた混合物を室温で2時間撹拌した後、DCC(28mg、0.135mmol)を添加した。室温で終夜撹拌した後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗生成物を得て、これをHPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の10〜100%のMeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(13mg、収率28%)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.69 (s, 1H), 8.41 - 8.30 (m, 3H), 7.85 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.88 - 3.81 (m, 2H), 3.25 - 3.20 (m, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.00 - 2.86 (m, 3H), 1.84 - 1.75 (m, 2H), 1.57 - 1.44 (m, 4H), 1.43 - 1.30 (m, 3H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 6H).スルホンアミド基のプロトンは観測されなかった。 LCMS (ESI) m/z C24H32ClN5O4Sの計算値: 521.19. 実測値: 522.32/524.37 (M+1)+.
【０２２６】
IDO1 HeLa RapidFire MSアッセイ
本発明の化合物を、質量分析を介するキヌレニン及びエンドポイントとしての細胞毒性の検出を利用するハイスループット細胞アッセイを介して試験した。質量分析及び細胞毒性アッセイのために、ヒト上皮HeLa細胞(CCL-2、ATCC(登録商標)、Manassas、VA)をヒトインターフェロン-γ(IFN-γ)(Sigma-Aldrich Corporation、St. Louis、MO)で刺激して、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ(IDO1)の発現を誘導した。IDO1阻害特性を持つ化合物は、トリプトファン異化経路を介して細胞によって産生されるキヌレニンの量を減少させた。化合物治療の効果による細胞毒性は、代謝活性細胞のインジケーターであるATPの発光検出に基づく、CellTiter-Glo(登録商標)試薬(CTG)(Promega Corporation、Madison、WI)を使用して測定した。
【０２２７】
アッセイのための準備において、試験化合物を、1mM又は5mMの典型的な最高濃度からDMSO中で3倍連続希釈し、蓋付きの384ウェルポリスチレン透明底組織培養処理プレート(Greiner Bio-One、Kremsmuenster、Austria)中0.5μLで平板培養して、11点用量応答曲線を作成した。低対照ウェル(0%キヌレニン又は100%細胞毒性)は、質量分析アッセイについて非刺激(-IFN-γ)HeLa細胞の存在下の0.5μLのDMSO、又は細胞毒性アッセイについて細胞の非存在下の0.5μLのDMSOのいずれかを含有しており、高対照ウェル(100%キヌレニン又は0%細胞毒性)は、質量分析及び細胞毒性アッセイの両方について刺激(+IFN-γ)HeLa細胞の存在下の0.5μLのDMSOを含有していた。
【０２２８】
HeLa細胞の凍結ストックを洗浄し、10%v/v認定ウシ胎児血清(FBS)(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)及び1×ペニシリン-ストレプトマイシン抗生物質溶液(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)を補充したHEPES(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)を加えたDMEM高グルコース培地中に回収した。細胞を、補充したDMEM培地中で100,000細胞/mLに希釈した。50μLの、質量分析アッセイ用の細胞懸濁液又は細胞毒性アッセイ用の培地単独のいずれかを、予め調製した384ウェル化合物プレート上の低対照ウェルに添加して、それぞれ5,000細胞/ウェル又は0細胞/ウェルをもたらした。IFN-γを残りの細胞懸濁液に10nMの最終濃度で添加し、50μLの刺激細胞を、384ウェル化合物プレート上の残りすべてのウェルに添加した。次いで、蓋付きプレートを、37℃、5%CO2加湿インキュベーター内で2日間にわたって平板培養した。
【０２２９】
インキュベーション後、384ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、室温に30分間にわたって平衡させた。細胞毒性アッセイのために、CellTiter-Glo(登録商標)を製造業者の説明書に従って調製し、10μLを各プレートウェルに添加した。室温で20分間のインキュベーション後、発光をEnVision(登録商標)マルチラベルリーダー(PerkinElmer Inc.、Waltham、MA)で読み取った。質量分析アッセイのために、化合物処理プレートの各ウェルから10μLの上清を、384ウェルポリプロピレンV底プレート(Greiner Bio-One、Kremsmuenster、Austria)中の、10μMの正規化のための内部標準を含有する40μLのアセトニトリルに添加して、有機被分析物を抽出した。2000rpmで10分間にわたる遠心分離の後、アセトニトリル抽出プレートの各ウェルから10μLを、RapidFire300(Agilent Technologies、Santa Clara、CA)及び4000QTRAP MS(SCIEX、Framingham、MA)でのキヌレニン及び内部標準の分析のために、384ウェルポリプロピレンV底プレート中の90μLの滅菌蒸留H2Oに添加した。Agilent TechnologiesのRapidFire Integratorソフトウェアを使用してMSデータを積分し、分析のためにキヌレニンと内部標準との比としてデータを正規化した。
【０２３０】
質量分析アッセイにおける用量応答についてのデータを、式100-(100×((U-C2)/(C1-C2)))[式中、Uは、未知の値であり、C1は、高(100%キヌレニン、0%阻害)対照ウェルの平均であり、C2は、低(0%キヌレニン、100%阻害)対照ウェルの平均であった]を使用して、正規化後のIDO1阻害%対化合物濃度としてプロットした。細胞毒性アッセイにおける用量応答についてのデータを、式100-(100×((U-C2)/(C1-C2)))[式中、Uは、未知の値であり、C1は、高(0%細胞毒性)対照ウェルの平均であり、C2は、低(100%細胞毒性)対照ウェルの平均であった]を使用して、正規化後の細胞毒性%対化合物濃度としてプロットした。
【０２３１】
曲線当てはめは、方程式y=A+((B-A)/(1+(10x/10C)D))[式中、Aは、最小応答であり、Bは、最大応答であり、Cは、log(XC50)であり、Dは、ヒル勾配であった]を用いて実施した。各試験化合物についての結果を、質量分析アッセイについてはpIC50値として、及び細胞毒性アッセイについてはpCC50値として(上記の方程式における-C)記録した。
【０２３２】
IDO1 PBMC RapidFire MSアッセイ
本発明の化合物を、質量分析を介するキヌレニン及びエンドポイントとしての細胞毒性の検出を利用する、ハイスループット細胞アッセイを介して試験した。質量分析及び細胞毒性アッセイのために、ヒト末梢血単核細胞(PBMC)(PB003F、AllCells(登録商標)、Alameda、CA)を、ヒトインターフェロン-γ(IFN-γ)(Sigma-Aldrich Corporation、St. Louis、MO)及びサルモネラミネソタ(Salmonella minnesota)由来のリポ多糖(LPS)(Invivogen、San Diego、CA)で刺激して、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ(IDO1)の発現を誘導した。IDO1阻害特性を持つ化合物は、トリプトファン異化経路を介して細胞によって産生されるキヌレニンの量を減少させた。化合物治療の効果による細胞毒性は、代謝活性細胞のインジケーターであるATPの発光検出に基づく、CellTiter-Glo(登録商標)試薬(CTG)(Promega Corporation、Madison、WI)を使用して測定した。
【０２３３】
アッセイのための準備において、試験化合物を、1mM又は5mMの典型的な最高濃度からDMSO中で3倍連続希釈し、蓋付きの384ウェルポリスチレン透明底組織培養処理プレート(Greiner Bio-One、Kremsmuenster、Austria)中0.5μLで平板培養して、11点用量応答曲線を作成した。低対照ウェル(0%キヌレニン又は100%細胞毒性)は、質量分析アッセイについて非刺激(-IFN-γ/-LPS)PBMCの存在下の0.5μLのDMSO、又は細胞毒性アッセイについて細胞の非存在下の0.5μLのDMSOのいずれかを含有しており、高対照ウェル(100%キヌレニン又は0%細胞毒性)は、質量分析及び細胞毒性アッセイの両方について刺激(+IFN-γ/+LPS)PBMCの存在下の0.5μLのDMSOを含有していた。
【０２３４】
PBMCの凍結ストックを洗浄し、10%v/v熱失活ウシ胎児血清(FBS)(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)及び1×ペニシリン-ストレプトマイシン抗生物質溶液(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)を補充したRPMI1640培地(Thermo Fisher Scientific, Inc.、Waltham、MA)中に回収した。細胞を、補充したRPMI1640培地中で1,000,000細胞/mLに希釈した。50μLの、質量分析アッセイ用の細胞懸濁液又は細胞毒性アッセイ用の培地単独のいずれかを、予め調製した384ウェル化合物プレート上の低対照ウェルに添加して、それぞれ50,000細胞/ウェル又は0細胞/ウェルをもたらした。IFN-γ及びLPSを残りの細胞懸濁液にそれぞれ100ng/ml及び50ng/mlの最終濃度で添加し、50μLの刺激細胞を、384ウェル化合物プレート上の残りすべてのウェルに添加した。蓋付きプレートを、37℃、5%CO2加湿インキュベーター内で2日間にわたって平板培養した。
【０２３５】
インキュベーション後、384ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、室温に30分間にわたって平衡させた。細胞毒性アッセイのために、CellTiter-Glo(登録商標)を製造業者の説明書に従って調製し、40μLを各プレートウェルに添加した。室温で20分間のインキュベーション後、発光をEnVision(登録商標)マルチラベルリーダー(PerkinElmer Inc.、Waltham、MA)で読み取った。質量分析アッセイのために、化合物処理プレートの各ウェルから10μLの上清を、384ウェルポリプロピレンV底プレート(Greiner Bio-One、Kremsmuenster、Austria)中の、10μMの正規化のための内部標準を含有する40μLのアセトニトリルに添加して、有機被分析物を抽出した。2000rpmで10分間にわたる遠心分離の後、アセトニトリル抽出プレートの各ウェルから10μLを、RapidFire300(Agilent Technologies、Santa Clara、CA)及び4000QTRAP MS(SCIEX、Framingham、MA)でのキヌレニン及び内部標準の分析のために、384ウェルポリプロピレンV底プレート中の90μLの滅菌蒸留H2Oに添加した。Agilent TechnologiesのRapidFire Integratorソフトウェアを使用してMSデータを積分し、分析のためにキヌレニンと内部標準との比としてデータを正規化した。
【０２３６】
質量分析アッセイにおける用量応答についてのデータを、式100-(100×((U-C2)/(C1-C2)))[式中、Uは、未知の値であり、C1は、高(100%キヌレニン、0%阻害)対照ウェルの平均であり、C2は、低(0%キヌレニン、100%阻害)対照ウェルの平均であった]を使用して、正規化後のIDO1阻害%対化合物濃度としてプロットした。細胞毒性アッセイにおける用量応答についてのデータを、式100-(100×((U-C2)/(C1-C2)))[式中、Uは、未知の値であり、C1は、高(0%細胞毒性)対照ウェルの平均であり、C2は、低(100%細胞毒性)対照ウェルの平均であった]を使用して、正規化後の細胞毒性%対化合物濃度としてプロットした。
【０２３７】
曲線当てはめは、方程式y=A+((B-A)/(1+(10x/10C)D))[式中、Aは、最小応答であり、Bは、最大応答であり、Cは、log(XC50)であり、Dは、ヒル勾配であった]を用いて実施した。各試験化合物についての結果を、質量分析アッセイについてはpIC50値として、及び細胞毒性アッセイについてはpCC50値として(上記の方程式における-C)記録した。
【０２３８】
【表１】
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【国際調査報告】
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