(57)【要約】  本発明は、異常内臓脂肪蓄積および異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を処置するためにｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを使用する方法を特徴とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象において異常な脂肪蓄積を処置するかまたは減少させる方法であって、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む宿主細胞を対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
異常な脂肪蓄積が、内臓脂肪蓄積を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ａ）異常内臓脂肪蓄積が、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、腸管、生殖器および胆嚢のうちの１つまたは複数に関連するかまたはその周囲にあるか、
ｂ）異常内臓脂肪蓄積が、心臓、肺、気管、肝臓、膵臓、脳、生殖器、動脈および胆嚢のうちの１つまたは複数において疾患を引き起こすか、または
ｃ）異常内臓脂肪蓄積が、副腎などの内分泌臓器、下垂体、または卵巣などの生殖器における機能不全によって引き起こされる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
異常脂肪分布に関連する１つまたは複数の病状が、軽減されるかまたは排除される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
１つまたは複数の病状が、閉塞型睡眠時無呼吸、肺疾患、心血管疾患、代謝性疾患、神経系疾患、異常脂質血症、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、認知症、不妊症、月経不順、インスリン調節不全およびグルコース調節不全からなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
異常脂質血症が、異常レベルのトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）およびコレステロールのうちの１つまたは複数を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
心血管疾患が、心疾患または脳卒中である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
肺疾患が、喘息および拘束性肺疾患である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
神経系疾患が、認知症またはアルツハイマー病である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
代謝性疾患が、２型糖尿病、グルコース不耐性、非アルコール性脂肪肝疾患および肝毒性である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
インスリン調節不全が、インスリン抵抗性である、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
対象が過体重ではないか、または実質的な皮下脂肪蓄積を欠いている、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
異常な脂肪蓄積が、人体計測技法またはイメージングを使用して判定される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
人体計測技法が、体重指数（ＢＭＩ）またはアンドロイド：ガイノイド脂肪比である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
イメージングが、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
対象が、腹部の外側では実質的な異常な脂肪蓄積を示さない、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
対象が、胎児、新生児、乳児、小児、若年者、青年、または成人である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
内臓脂肪蓄積を低下させる、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの１００〜３７０個の連続したアミノ酸を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの３５０個未満のアミノ酸を含む、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、２、および／または３を含む、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインなどのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインを欠いている、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、成熟ポリペプチドである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの４００個以下の連続したアミノ酸を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの１７５、１５０、１２５、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１５個、またはそれより少ない連続したアミノ酸などの、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの５〜３９９個の連続したアミノ酸を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのチロシンキナーゼドメインを欠いている、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインを欠いている、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３００、２５０、２００、１５０、または１００個よりも少ないアミノ酸の長さを含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症を有する、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
骨格成長遅延障害が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、軟骨形成不全症である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
頭蓋骨早期癒合症候群が、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群からなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、対象におけるリガンド依存性の過剰活性化を示すＦＧＦＲ３変異体の発現によって引き起こされる、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
ＦＧＦＲ３変異体が、配列番号９に示す、３５８位におけるグリシン残基からアルギニン残基へのアミノ酸置換（Ｇ３５８Ｒ）を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症と診断されている、請求項３６から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
対象が、短肢、短体幹、Ｏ脚、動揺性歩行、頭蓋奇形、クローバー葉頭蓋、頭蓋骨早期癒合症、ウォルム骨、手奇形、足奇形、ヒッチハイカー母指および胸部奇形からなる群より選択される骨格成長遅延障害の１つまたは複数の症状を示す、請求項３６から４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
対象が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患などの骨格成長遅延障害を有さない、請求項１から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
対象が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択されるＦＧＦＲ３関連骨系統疾患を有さない、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
天然ヒトＦＧＦＲ３ポリペプチドが、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３のアミノ酸配列を含む、請求項１９から２３および２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）と結合する、請求項１から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
ＦＧＦが、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、線維芽細胞増殖因子９（ＦＧＦ９）、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０）、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ１８）、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）および線維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ２３）からなる群より選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
結合が、約０．２ｎＭ〜約２０ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）によって特徴付けられる、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
結合が約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＫｄによって特徴付けられており、Ｋｄが約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、または約１０ｎｍであってもよい、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５に記載されている、請求項１から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含む、請求項１から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
シグナルペプチドが、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、異種ポリペプチドを含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
異種ポリペプチドが、免疫グロブリンの断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列と少なくとも８５％かつ１００％までの配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
ポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列からなる、請求項５７に記載のポリペプチド。
【請求項５９】
ポリヌクレオチドが、単離されたポリヌクレオチドである、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６０】
ポリヌクレオチドが、ベクター中にある、請求項５７または５８に記載の方法。
【請求項６１】
ベクターが、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクターおよびファージベクターからなる群より選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ベクターが、宿主細胞中にある、請求項６０または６１に記載の方法。
【請求項６３】
宿主細胞が、単離された宿主細胞である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
宿主細胞が、対象由来である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
宿主細胞が、ポリヌクレオチドで形質転換されている、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
宿主細胞が、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、請求項６２または６３に記載の方法。
【請求項６７】
ｓＦＧＦＲ３が、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含む組成物として投与される、請求項１から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
組成物が、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で対象に投与される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
組成物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で投与される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
組成物が、毎日、週に１回、または月に１回投与される、請求項６７から６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
組成物が週に７回、週に６回、週に５回、週に４回、週に３回、週に２回、週に１回、２週間毎、または月に１回投与される、請求項６７から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
組成物が、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で週に１回または２回投与される、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
組成物が、非経口投与、経腸投与、または局所投与によって投与される、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
組成物が、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、または腹腔内投与によって投与される、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
組成物が、皮下投与によって投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
対象は以前にｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与されていない、請求項１から７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
対象がヒトである、請求項１から７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、約２時間〜約２５時間のインビボ半減期を有する、請求項１から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
それを必要とする対象において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む、組成物。
【請求項８０】
異常な脂肪蓄積が、内臓脂肪蓄積を含む、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
ａ）内臓脂肪蓄積が、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、腸管、生殖器および胆嚢のうちの１つまたは複数に関連するかまたはその周囲にあるか、
ｂ）内臓脂肪蓄積が、心臓、肺、気管、肝臓、膵臓、脳、生殖器、動脈および胆嚢のうちの１つまたは複数において疾患を引き起こすか、または
ｃ）内臓脂肪蓄積が、副腎などの内分泌臓器、下垂体、または卵巣などの生殖器における機能不全によって引き起こされる、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
異常脂肪分布に関連する１つまたは複数の病状が、軽減されるかまたは排除される、請求項７９から８１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８３】
１つまたは複数の病状が、閉塞型睡眠時無呼吸、肺疾患、心血管疾患、代謝性疾患、神経系疾患、異常脂質血症、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、認知症、不妊症、月経不順、インスリン調節不全およびグルコース調節不全からなる群より選択される、請求項８２に記載の組成物。
【請求項８４】
異常脂質血症が、異常レベルのトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）およびコレステロールのうちの１つまたは複数を含む、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
心血管疾患が、心疾患または脳卒中である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８６】
肺疾患が、喘息および拘束性肺疾患である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８７】
神経系疾患が、認知症またはアルツハイマー病である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８８】
代謝性疾患が、２型糖尿病、グルコース不耐性、非アルコール性脂肪肝疾患および肝毒性である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８９】
インスリン調節不全が、インスリン抵抗性である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項９０】
対象が過体重ではないか、または実質的な皮下脂肪蓄積を欠いている、請求項７９から８９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９１】
異常な脂肪蓄積が、人体計測技法またはイメージングを使用して判定される、請求項７９から９０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９２】
人体計測技法が、体重指数（ＢＭＩ）またはアンドロイド：ガイノイド脂肪比である、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９３】
イメージングが、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）を含む、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９４】
対象が、腹部の外側では実質的な異常な脂肪蓄積を示さない、請求項７９から９３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９５】
対象が、胎児、新生児、乳児、小児、若年者、青年、または成人である、請求項７９から９４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９６】
内臓脂肪蓄積を低下させる、請求項７９から９５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９７】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含む、請求項７９から９６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの１００〜３７０個の連続したアミノ酸を含む、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの３５０個未満のアミノ酸を含む、請求項９７または９８に記載の組成物。
【請求項１００】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、２、および／または３を含む、請求項９７から９９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０１】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインなどのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインを欠いている、請求項７９から１００のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、成熟ポリペプチドである、請求項７９から１０１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの４００個以下の連続したアミノ酸を含む、請求項７９から１０２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０４】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの１７５、１５０、１２５、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１５個、またはそれより少ない連続したアミノ酸などの、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの５〜３９９個の連続したアミノ酸を含む、請求項１０３に記載の組成物。
【請求項１０５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１０４に記載の組成物。
【請求項１０６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのチロシンキナーゼドメインを欠いている、請求項７９から１０６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインを欠いている、請求項７９から１０７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３００、２５０、２００、１５０、または１００個よりも少ないアミノ酸の長さを含む、請求項７９から１０８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７９から１０９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１１】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、請求項１１０に記載の組成物。
【請求項１１２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７９から１１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、請求項１１２に記載の組成物。
【請求項１１４】
対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症を有する、請求項７９から１１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１５】
骨格成長遅延障害が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患である、請求項１１４に記載の組成物。
【請求項１１６】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択される、請求項１１５に記載の組成物。
【請求項１１７】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、軟骨形成不全症である、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１８】
頭蓋骨早期癒合症候群が、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群からなる群より選択される、請求項１１６に記載の組成物。
【請求項１１９】
ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、対象におけるリガンド依存性の過剰活性化を示すＦＧＦＲ３変異体の発現によって引き起こされる、請求項１１５から１１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２０】
ＦＧＦＲ３変異体が、配列番号９に示す、３５８位におけるグリシン残基からアルギニン残基へのアミノ酸置換（Ｇ３５８Ｒ）を含む、請求項１１９に記載の組成物。
【請求項１２１】
対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症と診断されている、請求項１１４から１２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２２】
対象が、短肢、短体幹、Ｏ脚、動揺性歩行、頭蓋奇形、クローバー葉頭蓋、頭蓋骨早期癒合症、ウォルム骨、手奇形、足奇形、ヒッチハイカー母指および胸部奇形からなる群より選択される骨格成長遅延障害の１つまたは複数の症状を示す、請求項１１４から１２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２３】
対象が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患などの骨格成長遅延障害を有さない、請求項７９から１１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２４】
対象が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択されるＦＧＦＲ３関連骨系統疾患を有さない、請求項１２３に記載の組成物。
【請求項１２５】
天然ヒトＦＧＦＲ３ポリペプチドが、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３のアミノ酸配列を含む、請求項９７から１０１および１０３から１０８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）と結合する、請求項７９から１２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２７】
ＦＧＦが、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、線維芽細胞増殖因子９（ＦＧＦ９）、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０）、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ１８）、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）および線維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ２３）からなる群より選択される、請求項１２６に記載の組成物。
【請求項１２８】
結合が、約０．２ｎＭ〜約２０ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）によって特徴付けられる、請求項１２６または１２７に記載の組成物。
【請求項１２９】
結合が約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＫｄによって特徴付けられており、Ｋｄが約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、または約１０ｎｍであってもよい、請求項１２８に記載の組成物。
【請求項１３０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５に記載されている、請求項７９から１２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３１】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含む、請求項７９から１３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３２】
シグナルペプチドが、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、請求項１３１に記載の組成物。
【請求項１３３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、異種ポリペプチドを含む、請求項７９から１３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３４】
異種ポリペプチドが、免疫グロブリンの断片結晶性領域（Ｆｃ領域）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である、請求項１３３に記載の組成物。
【請求項１３５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列と少なくとも８５％かつ１００％までの配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項７９から１３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３６】
ポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列からなる、請求項１３５に記載の組成物。
【請求項１３７】
ポリヌクレオチドが、単離されたポリヌクレオチドである、請求項１３５または１３６に記載の組成物。
【請求項１３８】
ポリヌクレオチドが、ベクター中にある、請求項１３５または１３６に記載の組成物。
【請求項１３９】
ベクターが、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクターおよびファージベクターからなる群より選択される、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４０】
ベクターが、宿主細胞中にある、請求項１３８または１３９に記載の組成物。
【請求項１４１】
宿主細胞が、単離された宿主細胞である、請求項１４０に記載の組成物。
【請求項１４２】
宿主細胞が、対象由来である、請求項１４１に記載の組成物。
【請求項１４３】
宿主細胞が、ポリヌクレオチドで形質転換されている、請求項１４２に記載の組成物。
【請求項１４４】
宿主細胞が、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、請求項１４０または１４１に記載の組成物。
【請求項１４５】
薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む、請求項７９から１４４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４６】
約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で対象に投与するために配合されている、請求項１４５に記載の組成物。
【請求項１４７】
約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で対象に投与するために配合されている、請求項１４６に記載の組成物。
【請求項１４８】
毎日、週に１回、または月に１回、対象に投与するために配合されている、請求項１４５から１４７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４９】
週に７回、週に６回、週に５回、週に４回、週に３回、週に２回、週に１回、２週間毎、または月に１回、対象に投与するために配合されている、請求項１４５から１４８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５０】
約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で週に１回または２回で対象に投与するために配合されている、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５１】
非経口投与、経腸投与、または局所投与によって対象に投与するために配合されている、請求項１４５から１５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５２】
皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、または腹腔内投与によって対象に投与するために配合されている、請求項１５１に記載の組成物。
【請求項１５３】
皮下投与によって対象に投与するために配合されている、請求項１５２に記載の組成物。
【請求項１５４】
対象は以前にｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与されていない、請求項７９から１５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５５】
対象がヒトである、請求項７９から１５４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、約２時間〜約２５時間のインビボ半減期を有する、請求項７９から１５５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５７】
請求項１から７８のいずれか一項に記載の方法などによる、それを必要とする対象において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための医薬品の製造における、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
短肢小人症の最も一般的な型である軟骨形成不全症は、治癒方法のない稀な遺伝病である。多くの患者では、線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）の膜貫通ドメイン中のＧ３８０Ｒ置換（Ｆｇｆｒ３ａｃｈ）が機能獲得をもたらし、細胞内ＭＡＰＫシグナル伝達を延長させる。成長板では、ＭＡＰＫシグナル伝達は阻害性であり、その続く構成的活性化は軟骨細胞の増殖および分化の阻害をもたらす。突然変異型の受容体を発現する細胞は成熟せず、ミネラル化した骨基質によって置き換えられず、最終的には異常に短い骨をもたらす。
【背景技術】
【０００２】
また、軟骨形成不全症は、これらの患者における主要な健康問題を表す早期肥満症によっても特徴付けられており、小児期中の患者の約５０％に影響を及ぼす。肥満症は、腰椎前彎に関連する罹患率および既存の整形外科的合併症の物理的衝撃を増加させ、たとえば、既に脆弱な膝に対する圧迫重量を増加させる。また、これは、心血管リスク、閉塞型睡眠時無呼吸、または拘束性肺疾患などの重篤な合併症のリスクも増加させる場合もある。軟骨形成不全症患者における、この増加した肥満症の易罹患性の原因は知られていないが、食欲亢進などの食欲調節解除をもたらす場合がある、ホルモン性または神経学的な機能不全には関連していないと考えられる。
【０００３】
肥満の軟骨形成不全症患者は、異常脂質血症、低インスリンレベルおよびグルコース調節不全などの関連する代謝性合併症も患っている場合がある。これらの合併症が単離されており過剰なカロリー摂取および／もしくは身体活動減少などの外生要因に関連しているのか、またはこれらが実際に軟骨形成不全症における根底の欠損を実際に反映しているのかどうかは、不明である。
【０００４】
また、一般集団における異常な脂肪蓄積、より詳細には異常内臓脂肪蓄積も、心血管疾患、代謝疾患、肺疾患、生殖疾患および神経疾患を含めた特定の疾患の発生に関連する。異常内臓脂肪蓄積およびその関連する疾患の発生を処置または防止するための治療の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００５】
第１の面では、本出願は、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはそれをコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を対象に投与することによって、それを必要とする対象（たとえば、胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人などのヒト）において異常な脂肪蓄積（たとえば内臓脂肪蓄積）を処置するかまたは低下させる方法を記載する。いくつかの態様では、異常内臓脂肪蓄積は、以下の臓器、すなわち、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、腸管、生殖器および胆嚢のうちの１つまたは複数に関連するかまたはその周囲にあるか、または、異常内臓脂肪蓄積は、以下の臓器、すなわち、心臓、肺、気管、肝臓、膵臓、脳、生殖器、動脈および胆嚢のうちの１つまたは複数において疾患を引き起こすか、または、異常内臓脂肪蓄積は、副腎などの内分泌臓器、下垂体、または卵巣などの生殖器における機能不全によって引き起こされる。本方法は、閉塞型睡眠時無呼吸、肺疾患、心血管疾患、代謝性疾患、神経系疾患、異常脂質血症、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、認知症、不妊症、月経不順、インスリン調節不全およびグルコース調節不全などの異常脂肪分布に関連する１つまたは複数の病状の、低下もしくは排除、またはそれを発生するリスクの減少をもたらし得る。特に、異常脂質血症が、異常レベルのトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）およびコレステロールのうちの１つまたは複数であり、心血管疾患が、心疾患または脳卒中であり、肺疾患が、喘息および拘束性肺疾患であり、神経系疾患が、認知症またはアルツハイマー病であり、代謝性疾患が、２型糖尿病、グルコース不耐性、非アルコール性脂肪肝疾患および肝毒性であり、インスリン調節不全が、インスリン抵抗性である。
【０００６】
一態様では、異常な脂肪蓄積を有する対象は、過体重ではない、実質的な皮下脂肪蓄積を欠いている、および／または腹部の外側では実質的な異常な脂肪蓄積を示さない。異常な脂肪蓄積は、他の脂肪表現型の非存在下で異常脂肪分布を検出し得る方法である、人体計測技法［たとえば、体重指数（ＢＭＩ）もしくはアンドロイド：ガイノイド脂肪比］またはイメージング［たとえば、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および二重エネルギーＸ線吸収測定（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｏｍｅｔｒｙ）（ＤＸＡ）］を使用して決定し得る。
【０００７】
他の態様では、対象は、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患［たとえば、配列番号９に示す、３５８位におけるグリシン残基からアルギニン残基へのアミノ酸置換（Ｇ３５８Ｒ）を有するＦＧＦＲ３変異体などの、患者におけるリガンド依存性の過剰活性化を示すＦＧＦＲ３変異体の発現によって引き起こされる、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患］等の骨格成長遅延障害を有し得る。ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患は、たとえば、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＡＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群［たとえば、ミュンケ（Ｍｕｅｎｋｅ）症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群］、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）を含み得る。骨格成長遅延障害を有する患者は、短肢、短体幹、Ｏ脚、動揺性歩行、頭蓋奇形、クローバー葉頭蓋、頭蓋骨早期癒合症、ウォルム骨、手奇形、足奇形、ヒッチハイカー母指および胸部奇形からなる群より選択される骨格成長遅延障害の１つまたは複数の症状を有し得る。患者における骨成長の休止の後に上述のもの、たとえば軟骨形成不全症などの骨格成長遅延障害を有する対象（たとえば、胎児、新生児、乳児、小児、および／または青年の対象）は、本明細書中に記載の方法から排除され得る。
【０００８】
代替態様では、患者は、骨格成長遅延障害を有さないが、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症の一形態を有すると特徴付けることができる。
【０００９】
他の態様では、ｓＦＧＦＲ３は、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの少なくとも５０個の連続したアミノ酸［たとえば、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの１００〜３７０個の連続したアミノ酸、または天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの３５０個未満のアミノ酸］を有する。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、２、および／または３を有し得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、特に、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインなどのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインを欠いている。あるいは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、成熟ポリペプチドである。天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドはＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３のアミノ酸配列を有し得る。
【００１０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの４００個以下の連続したアミノ酸（たとえば、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの、１７５、１５０、１２５、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１５個、またはそれより少ない連続したアミノ酸などの５〜３９９個の連続したアミノ酸）を有し得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る（たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３を有し得る）。いくつかの態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのチロシンキナーゼドメインを欠いている、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインを欠いている、または、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３００、２５０、２００、１５０、もしくは１００個よりも少ないアミノ酸の長さである。他の態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０と少なくとも８５％の配列同一性（たとえば８６％〜１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。さらに他の態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜７のいずれか１つの配列と少なくとも８５％の配列同一性（たとえば８６％〜１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有する。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチド（たとえば配列番号２１のアミノ酸配列を有するシグナルペプチド）などのシグナルペプチドも有し得る。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、異種ポリペプチド［たとえば、免疫グロブリンの断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）］も有し得る。
【００１１】
さらに他の態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列と少なくとも８５％かつ１００％までの配列同一性を有する核酸配列を有し得る（たとえば、ポリヌクレオチドは、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列からなり得る）。ポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドであり得る、および／またはベクター（たとえば、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクターおよびファージベクターからなる群より選択されるベクター）中であり得る。ベクターは、宿主細胞（たとえば、宿主細胞が、対象由来、またはＨＥＫ２９３細胞もしくはＣＨＯ細胞など、単離された宿主細胞）中であり得る。また、宿主細胞を、ｓＦＧＦＲ３をコードするポリヌクレオチドで形質転換させ得る。
【００１２】
他の態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）と結合し、ＦＧＦは、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、線維芽細胞増殖因子９（ＦＧＦ９）、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０）、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ１８）、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）および線維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ２３）からなる群より選択される。ＦＧＦとの結合は、約０．２ｎＭ〜約２０ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）または約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＫｄによって特徴付けることができる（たとえば、Ｋｄが約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ｎＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭまたは約１０ｎＭである）。
【００１３】
処置の一面は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を、対象、たとえば、未だｓＦＧＦＲ３ポリペプチドで処置していないナイーブなヒト対象などのヒト対象に投与することを含む。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含有する組成物中で投与し得る。可能な用量は約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ（たとえば約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）である。投与は、毎日、週に１回、または月に１回であり得る。投薬周期は、週に７回、週に６回、週に５回、週に４回、週に３回、週に２回、週に１回、２週間毎、または月に１回であることができる。投薬経路は、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、腹腔内、非経口、経腸、または局所であることができる。反復投与を行い得る。
【００１４】
他の態様では、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは約２時間〜約２５時間のインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）半減期を有する。
【００１５】
本発明の第２の面は、たとえば本発明の第１の面の方法に従った、それを必要とする対象（たとえばヒト対象）において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含有する組成物を特長とする。
【００１６】
本発明の第３の面は、たとえば本発明の第１の面の方法に従った、それを必要とする対象（たとえばヒト対象）において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための医薬品の製造における、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞の使用を特長とする。
【００１７】
定義
本明細書中で使用する「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、別段に指定しない限り、「少なくとも１つ」あるいは「１つまたは複数」を意味する。さらに、内容により明らかにそうでないと指示されない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、複数形の指示対象を含む。
【００１８】
語句「異常内臓脂肪蓄積」は、人体計測技法またはイメージング技法によって決定される、正常な対象において観察される脂肪蓄積のレベルよりも高い、網、腸間膜、後腹膜および心膜における脂肪蓄積のレベルを指す（たとえば、正常を異常の内臓脂肪蓄積から識別するカットオフを定義する、それぞれの技法の値の列挙には、下記の「診断方法」を参照）。たとえば、異常内臓脂肪蓄積を有する対象は、正常な対象の内臓脂肪蓄積値と比較して、内臓脂肪蓄積のカットオフよりも１０％以上高い（たとえば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、５００％、７５０％、１０００％、またはそれより高い）内臓脂肪蓄積値を示す者である。一般に、異常内臓脂肪蓄積は、肥満患者の部分集合、たとえばＢＭＩ＞３０ｋｇ／ｍ２を有する者に関連する。異常内臓脂肪蓄積は様々な状態をもたらす場合がある。これらは、たとえば、骨格成長遅延症候群（たとえば軟骨形成不全症）、コルチゾン過剰症（たとえばクッシング病）および多嚢胞性卵巣症候群を含む。
【００１９】
本明細書中で使用する「約」は、列挙した値の±１０％である量を指し、好ましくは列挙した値の±５％、またはより好ましくは列挙した値の±２％である。たとえば、用語「約」は、本明細書中に列挙したすべての用量または範囲を、列挙した値または範囲の端点の±１０％によって改変するために使用することができる。
【００２０】
語句「人体計測技法」は、体重指数（ＢＭＩ）、アンドロイド：ガイノイド脂肪比、胴囲および矢状径（ＳＤ）を含めた、身長、体重、胴囲および腰囲に基づいた体組成測定値を指す。たとえばShuster et al., Br. J. Radiol. 85(1009):1-10, 2012を参照。
【００２１】
語句「心血管疾患」は、心臓および血管の疾患、特に、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞および高血圧を指す。
【００２２】
語句「異常内臓脂肪蓄積に関連する状態」は、正常患者と比較して内臓脂肪蓄積が異常であることが示された患者において観察される疾患を指す。特に、これらの状態は、心血管疾患、肺疾患、代謝性疾患、生殖疾患および神経疾患を含む。
【００２３】
用語「ドメイン」は、ポリペプチド内で同定可能な構造および／または機能を有する、ポリペプチド（たとえばＦＧＦＲ３ポリペプチド）のアミノ酸配列の保存領域を指す。ドメインの長さは、たとえば約２０個のアミノ酸から約６００個のアミノ酸まで変動することができる。例示的なドメインは、ＦＧＦＲ３の免疫グロブリンドメイン（たとえば、Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン１、Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン２、およびＩｇ様Ｃ２型ドメイン３）、ＦＧＦＲ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ＦＧＦＲ３の細胞内ドメイン（ＩＣＤ）、またはＦＧＦＲ３の膜貫通ドメイン（ＴＭ）、たとえば配列番号８に記載の配列を有するＦＧＦＲ３）を含む。
【００２４】
用語「用量」は、活性薬剤を患者（たとえば、異常内臓脂肪蓄積または内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する患者）に投与した場合に、所望の治療効果（たとえば、異常内臓脂肪蓄積または内臓脂肪蓄積に関連する状態の処置）を生じさせるために計算された、活性薬剤（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％〜１００％の配列同一性を有するその変異体などの、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体）の決定量を指す。用量は、活性薬剤の規定量または特定の投与頻度に関連する規定量に関して規定し得る。剤形は、任意の適切な医薬的賦形剤、担体、または希釈剤と共に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその断片を含み得る。
【００２５】
用語「有効量」、「〜するために有効な量」および「治療上有効な量」は、所望の結果、たとえば、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積の減少、または異常内臓脂肪蓄積に関連づけられる状態に関連する症状の減少を生じさせるために十分である、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３をコードするベクター、および／またはｓＦＧＦＲ３組成物の量を指す。
【００２６】
用語「細胞外ドメイン」および「ＥＣＤ」は、膜貫通ドメインを超えて細胞外空間内へと延びるＦＧＦＲ３ポリペプチドの一部分を指す。ＥＣＤはＦＧＦＲ３と１つまたは複数の線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）との結合を媒介する。たとえば、ＥＣＤは、ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１〜３を含む。特に、ＥＣＤは、野生型（ｗｔ）ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、野生型（ｗｔ）ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン２、および／またはｗｔ  ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン３を含む。また、ＦＧＦＲ３のＥＣＤは、たとえば野生型ＦＧＦＲ３  Ｉｇ様Ｃ２型ドメインの断片も含み得る。
【００２７】
語句「脂肪蓄積」は、内臓脂肪蓄積または皮下脂肪蓄積を指す。
【００２８】
本明細書中で使用する用語「ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患」は、ＦＧＦＲ３の機能獲得型突然変異体の発現によるものなど、ＦＧＦＲ３の活性化の異常な増加によって引き起こされる骨格疾患を指す。語句「ＦＧＦＲ３の機能獲得型突然変異体」は、ＦＧＦリガンドの存在下において対応する野生型ＦＧＦＲ３（たとえば配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）の生物活性よりも高い生物活性（たとえば下流シグナル伝達の始動）を示す、ＦＧＦＲ３の突然変異体を指す。ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患は、遺伝性または散在性の疾患を含み得る。例示的なＦＧＦＲ３関連骨系統疾患としては、これらに限定されないが、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＡＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群（たとえば、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群）、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）が挙げられる。
【００２９】
用語「線維芽細胞増殖因子」および「ＦＧＦ」は、内分泌シグナル伝達経路、発達、創傷治癒および血管形成を含めた様々な代謝プロセスに関与する、構造的に関連するシグナル伝達分子を含む、ＦＧＦファミリーのメンバーを指す。ＦＧＦは広範囲の細胞および組織型の増殖および分化において主要な役割を果たす。この用語は、好ましくは、ＦＧＦＲ３と結合することが示されているＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１およびＦＧＦ２３を指す。たとえば、ＦＧＦは、ヒトＦＧＦ１（たとえば配列番号２６のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ２（たとえば配列番号２７のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ９（たとえば配列番号２８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ１０（たとえば配列番号４０のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ１８（たとえば配列番号２９のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ１９（たとえば配列番号３０のアミノ酸配列を有するポリペプチド）、ヒトＦＧＦ２１（たとえば配列番号３１のアミノ酸配列を有するポリペプチド）およびヒトＦＧＦ２３（たとえば配列番号４１のアミノ酸配列を有するポリペプチド）を含み得る。
【００３０】
本明細書中で使用する用語「線維芽細胞増殖因子受容体３」、「ＦＧＦＲ３」、または「ＦＧＦＲ３受容体」は、１つまたは複数のＦＧＦ（たとえば、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、および／またはＦＧＦ２３）と特異的に結合するポリペプチドを指す。染色体４の遠位短腕上に位置するヒトＦＧＦＲ３遺伝子は、１９個のエクソンを含有しておりシグナルペプチド（たとえば配列番号２１のアミノ酸配列を有するポリペプチド）を含む、８０６個のアミノ酸のタンパク質前駆体（線維芽細胞増殖因子受容体３アイソフォーム１前駆体）をコードする。骨格成長障害（たとえば軟骨形成不全症）をもたらすＦＧＦＲ３のアミノ酸配列中の突然変異は、たとえば、３５８位のグリシン残基からアルギニン残基への置換（すなわちＧ３５８Ｒ、配列番号９）を含む。天然ヒトＦＧＦＲ３遺伝子はＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００１４２．４に示されるヌクレオチド配列を有しており、天然ヒトＦＧＦＲ３タンパク質は、本明細書中では配列番号８によって表す、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３に示されるアミノ酸配列を有する。野生型ＦＧＦＲ３（たとえば配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）は、Ｉｇ様Ｃ２型ドメイン１〜３、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む細胞外免疫グロブリン様膜ドメインからなる。ＦＧＦＲ３は、完全長の野生型ＦＧＦＲ３の断片および／または変異体（たとえば、エクソン９ではなく代替エクソン８を利用したスプライス変異体などのスプライス変異体）を含み得る。
【００３１】
用語「断片」および「一部分」は、参照核酸分子もしくはポリペプチドの全長、またはそのドメイン（たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのＥＣＤ、ＩＣＤ、またはＴＭ）の、好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高くを含有する、ポリペプチドまたは核酸分子などの全体の一部を指す。断片または一部分は、たとえば、参照ポリペプチドの全長までの、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、５００、６００、７００個、またはそれより多くの連続したアミノ酸残基を含有し得る。たとえば、ＦＧＦＲ３断片は、配列番号１〜８のいずれか１つの、少なくとも末端値を含めた約５個から約３００個の連続したアミノ酸、たとえば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、または３００個の連続したアミノ酸を有する任意のポリペプチドを含み得る。
【００３２】
語句「グルコース調節不全」は、許容される正常範囲を上回るかまたは下回る血中のグルコースレベルを指す。
【００３３】
本明細書中で使用する用語「宿主細胞」は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを対応するポリヌクレオチドから発現させるために必要な必要細胞成分、たとえばオルガネラを含むビークルを指す。ポリヌクレオチドの核酸配列は、典型的には、当分野で公知の慣用技術（たとえば、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿および直接微量注入）によって宿主細胞内に導入することができる核酸ベクター（たとえば、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクター、またはファージベクター）中に含める。宿主細胞は、原核細胞、たとえば、細菌もしくは古細菌細胞、または真核細胞、たとえば哺乳動物細胞［たとえば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞もしくはヒト胚性腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）］であり得る。好ましくは、宿主細胞はＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞である。
【００３４】
語句「イメージング技法」は、臨床分析および医療行為の目的で身体内部の視覚表示を作成する方法を指す。イメージング技法の例としては、たとえば、体脂肪量指数が得られる二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）、腰椎の指定したレベルでの内臓脂肪面積がｃｍ２で得られるコンピューター断層撮影（ＣＴ）および磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）などの断層像が挙げられる（たとえばShuster et al., 上記を参照）。
【００３５】
語句「インスリン調節不全」は、許容される正常範囲を上回るかまたは下回る血中のインスリンレベルを指す。
【００３６】
「単離した」は、その天然の環境から分離、回収、または精製されていることを意味する。たとえば、単離されたｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも約８５％から約１００％までの配列同一性を有するその変異体などの、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体）は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、たとえば細胞培養培地から単離した後の、特定の度合の純度によって特徴付けることができる。単離されたｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、ｓＦＧＦＲ３ポリヌクレオチドが、調製物中に存在する全物質（たとえば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、細胞細片および環境的汚染物質）の少なくとも７５重量％（たとえば、調製物中に存在する全物質の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５重量％）を構成するように、少なくとも７５％純粋であることができる。同様に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド（たとえば、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列を有するポリヌクレオチド、もしくはそれに対して少なくとも約８５％から約１００％までの配列同一性を有するその変異体）、または、ポリヌクレオチドを含有する単離された宿主細胞（たとえば、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＯＳ−７細胞、もしくは対象の細胞）は、ポリヌクレオチドもしくは宿主細胞が、調製物中に存在する全物質（たとえば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、細胞細片および環境的汚染物質）の少なくとも７５重量％（たとえば、調製物中に存在する全物質の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または少なくとも９９．５重量％）を構成するように、少なくとも７５％純粋であることができる。
【００３７】
語句「代謝性疾患」は、エネルギーの処理を助ける化学反応の障害、特に、異常脂質血症、インスリン調節不全、グルコース調節不全、非アルコール性脂肪肝および肝毒性を指す。
【００３８】
語句「神経疾患」は、脳または神経の疾患、特に認知症および脳卒中を指す。
【００３９】
本明細書中で使用する用語「非経口投与」、「非経口的に投与した」および他の文法的に等価な語句は、経腸および局所投与以外の、通常は注入による、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドなどのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体（シグナルペプチドを有するか、または有さない）を含む組成物の投与様式を指し、これらに限定されないが、皮下、皮内、静脈内、鼻腔内、眼内、肺の、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内の注射ならびに輸液が挙げられる。
【００４０】
用語「患者」および「対象」は、これらに限定されないが、ヒト（たとえば、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、もしくは異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有するヒト）または非ヒト哺乳動物（たとえば、ウシ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物、ヒツジ様動物、もしくはネコ科動物）などの、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、もしくは異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する非ヒト哺乳動物を含めた哺乳動物を指す。好ましくは、患者は、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有するヒト）、特に、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人である。
【００４１】
「医薬組成物」は、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を用いて配合した、ｓＦＧＦＲ３などの活性薬剤を含有する組成物を意味する。医薬組成物は、患者（たとえば、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する患者）において、疾患または事象（たとえば、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態）を処置するために、治療レジメンの一部として、政府の規制機関の認可の下で製造または販売し得る。医薬組成物は、たとえば、皮下投与（たとえば皮下注射による）もしくは静脈内投与（たとえば、粒子状栓子を含まない無菌的溶液として、および静脈内使用に適した溶媒系中）などの非経口投与用、または経口投与用（たとえば、錠剤、カプセル、カプレット、ジェルカプセル、もしくはシロップとして）に配合することができる。
【００４２】
「薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバント」は、医薬組成物［たとえば、それと一緒に投与されるｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体］の治療的特性を保持する一方で対象（たとえばヒト）において生理的に許容される、希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを意味する。１つの例示的な薬学的に許容される担体は生理食塩水である。他の生理的に許容される希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントおよびその配合物は当業者公知である。
【００４３】
本明細書中で互換性があるように使用される「ポリヌクレオチド」および「核酸分子」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはその類似体、あるいは、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼまたは合成反応によってポリマー内に取り込ませることができる任意の基質であることができる。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびその類似体などの改変ヌクレオチドを含み得る。存在する場合は、ヌクレオチド構造への改変は、ポリマーのアセンブリーの前または後に与えることができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素によって中断することができる。ポリヌクレオチドは、標識とのコンジュゲーションなどによって、合成後にさらに改変することができる。
【００４４】
語句「肺疾患」は、空気交換の疾患、特に、閉塞型睡眠時無呼吸、拘束性肺疾患および喘息を指す。
【００４５】
語句「生殖疾患」は、生殖器系の疾患、特に、不妊症および月経不順を指す。
【００４６】
本明細書中で使用する用語「配列同一性」は、配列をアライメントし、必要な場合は、最大のパーセント同一性を達成するためにギャップを導入（たとえば、最適なアラインメントのために候補および参照配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非相同配列を無視することができる）した後に、参照配列、たとえば、野生型ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドなどのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドもしくはその変異体）のアミノ酸（または核酸）残基と同一である、候補配列、たとえばＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸（または核酸）残基の百分率を指す。パーセント同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術範囲内にある様々な方法で、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＢＬＡＳＴ−Ｐ、ＢＬＡＳＴ−Ｎ、ＢＬＡＳＴ−Ｘ、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、ＣＬＵＳＴＡＬ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較する配列の完全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。たとえば、所定の参照配列に対する所定の候補配列のパーセントアミノ酸（または核酸）配列同一性［あるいは、所定の参照配列に対して特定のパーセントアミノ酸（または核酸）配列同一性を有するか、またはそれを含む、所定の候補配列と言い表すこともできる］は、以下のように計算する：１００×（Ａ／Ｂの分率）［式中、Ａは、候補配列および参照配列のアラインメントにおいて同一としてスコア付けされたアミノ酸（または核酸）残基の数であり、Ｂは、参照配列中のアミノ酸（または核酸）残基の合計数である］。特に、候補配列との比較のためにアライメントした参照配列は、候補配列が、たとえば、候補配列の完全長または候補配列の連続するアミノ酸（もしくは核酸）残基の選択された一部分にわたって５０％〜１００％の同一性を示すことを示すことができる。比較目的のためにアライメントする候補配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、たとえば、少なくとも４０％、たとえば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％である。候補配列中の位置が、参照配列中の対応する位置と同じアミノ酸（または核酸）残基によって占有されている場合、分子はその位置で同一である。
【００４７】
「シグナルペプチド」は、ポリペプチドを分泌経路（たとえば細胞外空間）に向ける、ポリペプチドのＮ末端にある短いペプチド（たとえば、２２個のアミノ酸の長さなどの５〜３０個のアミノ酸の長さ）を意味する。シグナルペプチドは、典型的にはポリペプチドの分泌中に切断される。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞内区画またはオルガネラ、たとえばゴルジ体へと向かわせ得る。シグナル配列は、ポリペプチドを細胞の特定領域に標的化させる既知の機能を有するペプチドに対する相同性または生物活性によって同定し得る。当業者は、容易に利用可能なソフトウェア［たとえば、遺伝子学コンピューターグループの配列解析ソフトウェアパッケージ（Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ）、ウィスコンシン大学生命工学センター（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ）、１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ、ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ、５３７０５、ＢＬＡＳＴ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム］を使用することによって、シグナルペプチドを同定することができる。シグナルペプチドは、たとえば、配列番号２１のアミノ酸配列と実質的に同一であるものであることができる。
【００４８】
本明細書中で使用する用語「骨格成長遅延障害」は、骨の奇形および／または形成異常によって特徴付けられる骨格疾患を指す。これらの障害としては、これらに限定されないが、成長板（骨端軟骨）骨折によって引き起こされる骨格成長遅延障害、特発性骨格成長遅延障害、またはＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が挙げられる。特に、骨格成長遅延障害（たとえば軟骨形成不全症）を有する患者は、健康な患者の骨よりも短い骨を有し得る。たとえば、骨格成長遅延障害としては、骨異形成症、たとえば、軟骨形成不全症、ホモ接合性軟骨形成不全症、ヘテロ接合性軟骨形成不全症、軟骨無形性症、先端骨形成不全症、遠位中間肢異形成、骨発生不全症、屈曲肢異形成症、点状軟骨異形成症、肢根型点状軟骨異形成症、鎖骨頭蓋骨形成不全症、先天性短大腿骨、頭蓋骨早期癒合症（たとえば、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群、アペール症候群、ジャクソン−ワイス症候群、ファイファー症候群、またはクルーゾン外骨格症候群）、指の症状、短指症、屈指症、多指症、合指症、捻曲性骨異形成症、小人症、分節異常骨異形成症、内軟骨腫症、線維軟骨腫発生症、線維状骨異形成症、遺伝性多発性外骨腫症、軟骨低形成症、低ホスファターゼ血症、低リン血症性くる病、ヤッフェ−リヒテンシュタイン症候群、クナイスト骨異形成症、クナイスト症候群、ランガー型中間肢異形成症、マルファン症候群、マクキューン−オールブライト症候群、小肢症、骨幹端異形成症、ヤンセン型骨幹端異形成症、複合有機栄養性骨異形成症、モルキオ症候群、ニーバーゲルト型中間肢異形成症、神経線維腫症、骨関節炎、骨軟骨異形成症、骨形成不全症、周産期致死型骨形成不全症、大理石骨病、骨斑紋症、末梢骨形成不全症、ラインハルト症候群、ロバーツ症候群、ロビノウ症候群、短肋骨多指症候群、低身長、先天性脊髄骨端異形成症および脊髄骨端骨幹端異形成症を挙げることができる。
【００４９】
用語「可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３」、「可溶性ＦＧＦＲ３」および「ｓＦＧＦＲ３」は、膜貫通ドメインの全体または実質的な部分およびＦＧＦＲ３ポリペプチドを細胞膜に係留する任意のポリペプチド一部分（たとえばチロシンキナーゼドメイン）の非存在または機能破壊によって特徴付けられるＦＧＦＲ３を指す。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドはＦＧＦＲ３ポリペプチドの非膜結合形態である。したがって、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、野生型ＦＧＦＲ３ポリペプチド配列（たとえば配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）の膜貫通ドメインのアミノ酸残基の一部分または全体の欠失を含み得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、野生型ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの欠失をさらに含み得る。
【００５０】
例示的なｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、これらに限定されないが、配列番号１〜８の少なくともアミノ酸１〜１００、１〜１２５、１〜１５０、１〜１７５、１〜２００、１〜２０５、１〜２１０、１〜２１５、１〜２２０、１〜２２５、１〜２３０、１〜２３５、１〜２４０、１〜２４５、１〜２５０、１〜２５２、１〜２５５、１〜２６０、１〜２６５、１〜２７０、１〜２７５、１〜２８０、１〜２８５、１〜２９０、１〜２９５、もしくは１〜３００、または１〜３０１を含み得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜８のこれらのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのうちの任意のものに対して少なくとも５０％（たとえば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い）配列同一性を有する任意のポリペプチドを含み得る。さらに、例示的なｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、これらに限定されないが、配列番号１〜８の少なくともアミノ酸１〜１００、１〜１２５、１〜１５０、１〜１７５、１〜２００、１〜２０５、１〜２１０、１〜２１５、１〜２２０、１〜２２５、１〜２３０、１〜２３５、１〜２４０、１〜２４５、１〜２５０、１〜２５５、１〜２６０、１〜２６５、１〜２７０、１〜２７５、１〜２８０、１〜２８５、１〜２９０、１〜２９５、１〜３００、１〜３０５、１〜３１０、１〜３１５、１〜３２０、１〜３２５、１〜３３０、１〜３３５、１〜３４０、１〜３４５、または１〜３４８を含み得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜８のアミノ酸配列を有するこれらのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのうちの任意のものに対して少なくとも５０％（たとえば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い）配列同一性を有する任意のポリペプチドを含み得る。上記ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体のうちの任意のものは、配列番号２１のアミノ酸１〜２２（ＭＧＡＰＡＣＡＬＡＬＣＶＡＶＡＩＶＡＧＡＳＳ）または配列番号４３のアミノ酸１〜１９（たとえばＭＭＳＦＶＳＬＬＬＶＧＩＬＦＨＡＴＱＡ）などのシグナルペプチドをＮ末端位置に含み得る。
【００５１】
語句「皮下脂肪蓄積」は、皮下組織中の脂肪蓄積を指す。
【００５２】
「処置すること」および「処置」は、患者（たとえば、胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人などのヒト）における、異常な脂肪蓄積もしくは異常内臓脂肪蓄積の、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態（たとえば、心血管疾患、肺疾患、代謝性疾患、もしくは神経系疾患）のうちの１つまたは複数の進行、重症度、もしくは頻度の低下（たとえば、少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、またはさらには１００％）を意味する。処置は処置期間の間起こることができ、そこでは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを一定期間の間（たとえば、数日間、数カ月間、数年間、またはそれより長く）、異常な脂肪蓄積、異常内臓脂肪蓄積、または異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する患者（たとえば、胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人などのヒト）を処置するために投与する。ｓＦＧＦＲ３（たとえば、配列番号１〜７のアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはその変異体など、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体）を用いて処置することができる、軟骨形成不全症患者における異常内臓脂肪蓄積に関連する例示的な症状としては、これらに限定されないが、アテローム性動脈硬化症、高血圧、脂質調節不全、閉塞型睡眠時無呼吸、グルコース調節不全、またはインスリン調節不全（たとえばインスリン抵抗性）が挙げられる。
【００５３】
用語「単位剤形」は、ヒト対象および他の哺乳動物用の単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された、事前に決定された量の活性材料を、任意の適切な医薬的賦形剤、担体、または希釈剤と会合して含有する。
【００５４】
ポリペプチドに関する用語「変異体」は、変異体が由来するポリペプチド（たとえば、たとえば配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドなどの参照ポリペプチド）からアミノ酸配列の１つまたは複数の変化によって異なるポリペプチド（たとえばｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体、シグナルペプチドを有するか、または有さない）を指す。ポリヌクレオチドに関する用語「変異体」は、変異体が由来するポリヌクレオチド（たとえば、たとえば配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列を有するｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドなどの参照ポリヌクレオチド）から核酸配列の１つまたは複数の変化によって異なるポリヌクレオチドを指す。変異体のアミノ酸または核酸配列中の変化は、たとえば、アミノ酸または核酸の置換、挿入、欠失、Ｎ末端切断、もしくはＣ末端切断、またはその任意の組合せであることができる。特に、アミノ酸置換は保存的および／または非保存的置換であり得る。変異体は、参照ポリペプチドまたは親ポリヌクレオチドに対するそれぞれアミノ酸配列同一性または核酸配列同一性によって特徴付けることができる。たとえば、変異体は、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対して少なくとも５０％（たとえば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより高い）配列同一性を有する任意のポリペプチドを含み得る。
【００５５】
「ベクター」は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド［たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドまたはその変異体などのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体、シグナルペプチドを有するか、または有さない］をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドまたはその断片を含むＤＮＡコンストラクトを意味する。ベクターは細胞（たとえば、宿主細胞または軟骨形成不全症などのヒト骨格成長遅延障害を有する患者の細胞）を感染させるために使用することができ、その結果、ベクターのポリヌクレオチドがｓＦＧＦＲ３ポリペプチドへと翻訳されることがもたらされる。ベクターの一種は「プラスミド」であり、追加のＤＮＡセグメントをそれ内にライゲーションさせ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。特定のベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律複製が可能である（たとえば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（たとえば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入した際に宿主細胞のゲノム内に組み込まれることができ、したがって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結する遺伝子の発現を指示することができる。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、多くの場合はプラスミドの形態である。
【００５６】
語句「内臓脂肪蓄積は、腸間膜および大網、後腹膜の脂肪組織を含めた内蔵脂肪組織、ならびに心膜を含めた胸腔内脂肪組織を指す。
【００５７】
本明細書中における端点による数値範囲の列挙は、その範囲内に包含されるすべての数字を含むことが意図される（たとえば、１〜５の列挙は１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４および５を含む）。
【００５８】
本発明の他の特長および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【００５９】
特許または出願ファイルは、カラーで作成した少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面を伴ったこの特許または特許出願公開のコピーは、依頼および必要な手数料の支払いがなされた際に特許庁によって提供される。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】図１Ａ〜１Ｄは、軟骨形成不全症を有する小児が血糖値の増加を伴わない腹部肥満を発生することを示す表、画像およびグラフである。図１Ａは、（［０〜３］歳の群ではｎ＝７３個のデータ点、［４〜８］歳の群ではｎ＝６１個のデータ点、［９〜１８］歳の群ではｎ＝３６個のデータ点）の範囲の３つの年齢層における体重、身長およびＢＭＩの測定値ならびに対応する身長対年齢およびＢＭＩ対年齢のｚスコアを示す表である。事後分析の結果：ａ：［０〜３］と［４〜８］の群の間で有意に異なる、ｂ：［０〜３］と［９〜１８］の群の間で有意に異なる、ｃ：［４〜８］と［９〜１８］の群の間で有意に異なる。図１Ｂは、ＤＸＡによって評価した様々な目的領域（ＲＯＩ）の画像表示である。図１Ｃは、（［０〜３］歳の群ではｎ＝４個のデータ点、［４〜８］歳の群ではｎ＝６個のデータ点、［９〜１８］歳の群ではｎ＝９個のデータ点）の範囲の３つの年齢層におけるアンドロイド：ガイノイド脂肪比測定を示すグラフである。図１Ｄは、［４〜８］および［９〜１８］歳の範囲の２つの年齢層における血漿空腹時血糖濃度を示すグラフである（［４〜８］歳の群ではｎ＝１６個のデータ点、［９〜１８］歳の群ではｎ＝１２個のデータ点）。水平線は正常値を表す。データは平均±ＳＤとして表し、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。
【図２】図２Ａ〜２Ｈは、トランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスが内蔵肥満症を優先的に発生し、これは、ｓＦＧＦＲ３（配列番号１）で処置した際に防止されることを示すグラフおよび画像である。図２Ａは、ビークル処置したＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスおよびｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスの、１０週間のＮＤまたはＨＦＤチャレンジ後の体重を示すグラフである。図２Ｂは腹部除脂肪：脂肪比を示す画像およびグラフである。図２Ｃは精巣上体脂肪組織（ｅＡＴ）の重量を示すグラフである。図２Ｄは体重１グラムあたりの皮下脂肪組織（ｓｃＡＴ）重量を示すグラフである。図２ＥはｓｃＡＴ脂肪細胞面積を示すグラフである。図２ＦはｅＡＴ脂肪細胞面積を示すグラフである。図２Ｇは、その直径による、脂肪細胞のｓｃａｔ散乱を示すグラフである。データは平均＋／−標準偏差として表される（各群にｎ＝８〜１０匹のマウス）。データは正常分布に従っていた。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋、スチューデントのｔ検定。図２Ｈは、その直径による、脂肪細胞のｅＡＴ散乱を示すグラフである。データは平均＋／−標準偏差として表される（各群にｎ＝８〜１０匹のマウス）。データは正常分布に従っていた。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋、スチューデントのｔ検定。
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、未処置またはｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスから単離されたＭＳＣが、ＷＴマウスと比較してインスリン応答の変更と伴わずに脂肪生成に向かう予約を実証していることを示すグラフである。図３Ａは、脂肪生成分化の様々な工程に関与する遺伝子（表１に列挙する遺伝子）の発現を示すグラフである。発現をＨＰＲＴ、ＲＰＬ６およびＲＰＬ１３ａの発現に対して正規化し、ＷＴと比較した変化のパーセントとして表した。図３Ｂは、５０ｎＭのインスリンで０、５、１５、もしくは３０分間または０、１、１０、５０、または１００ｎＭのインスリンで５分間の間刺激した細胞の結果を示すグラフである。Ｅｒｋ１／２の全発現に対して正規化したＰ−Ｅｒｋ１／２の発現を、ＷＴに対して正規化した値として表した。データは平均±ＳＤとして表す。データは正常分布に従っていた。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋。テューキーの多重検定を用いた二方向ＡＮＯＶＡ。
【図４】図４Ａ〜４Ｅは、グルコース代謝がトランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいて変更されており、ｓＦＧＦＲ３処置で修復されていることを示すグラフおよび顕微鏡画像である。図４Ａは、１０週間のＮＤに続くマウスの空腹時糖血症およびインスリン血症を示すグラフである。図４Ｂは、１０週間のＨＦＤに続くマウスの空腹時糖血症およびインスリン血症を示すグラフである。図４ＣはＨＦＤグルコース負荷試験の結果のグラフを示し、グルコースレベルを、時間−１５分間の値およびマウスの各群に対応する曲線下面積に対して正規化した。図４Ｄはまず、マウス膵臓インスリン含有量の顕微鏡観察を示す（パラフィン包埋切片の免疫組織化学、赤色：インスリン、緑色：グルコース、青色：ＤＡＰＩ染色）。また、図４Ｄは、マウス膵臓インスリン含有量、全表面に対して正規化した膵島の平均およびＨＦＤ条件下での各群における島数の平均のグラフを示す。図４Ｅは、ＨＦＤ条件下における肝臓のＨ＆ＥおよびＰＡＳ染色の顕微鏡観察を示す。図４Ｆは肝結節のＨ＆Ｅ染色の顕微鏡観察を示す。データは平均±ＳＤとして表す（各群にｎ＝８〜１０匹のマウス）。データは正常分布に従っていた。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋、スチューデントのｔ検定。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、未処置のトランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスが本質的にすべてのそのエネルギーを脂質から引き出すことを示すグラフである。図５Ａは、１０週間のＮＤチャレンジに続く夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎呼吸商（ＲＱ＝ＶＣＯ２／ＶＯ２）を示す。図５Ｂは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＮＤチャレンジマウスにおける基礎炭水化物および脂質酸化を示す。図５Ｃは、１０週間のＨＦＤチャレンジに続く夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎呼吸商（ＲＱ＝ＶＣＯ２／ＶＯ２）を示す。図５Ｄは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＨＦＤチャレンジマウスにおける基礎炭水化物および脂質酸化を示す。データは平均±ＳＤとして表す（各群にｎ＝８〜１０匹のマウス）。データは正常分布に従っていた。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋、スチューデントのｔ検定。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、未処置またはｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスの血清で調査された循環アディポカインを示すグラフである。図６ＡはＮＤでチャレンジしたマウスの結果を示すグラフである。図６ＢはＨＦＤでチャレンジしたマウスの結果を示すグラフである。結果はＷＴと比較した変化のパーセントとして表した。ＡｇＲＰ、アグーチ関連タンパク質；ＡＮＧＰＴ−Ｌ３、アンジオポエチン−３；ＣＲＰ、Ｃ反応性タンパク質；ＤＰＰＩＶ、ジペプチジルペプチダーゼＶ；ＦＧＦ、線維芽細胞増殖因子；ＨＧＦ、肝細胞増殖因子；ＩＣＡＭ−１、細胞間接着分子−１；ＩＧＦ、インスリン様増殖因子；ＩＧＦＢＰ、インスリン様増殖因子結合タンパク質；ＭＣＰ−１、単球走化性タンパク質−１；Ｍ−ＣＳＦ、マクロファージコロニー刺激因子；Ｐｒｅｆ−１、前脂肪細胞因子１；ＲＡＧＥ、終末糖化産物受容体；活性化の際制御され（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｕｐｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、正常Ｔ細胞で発現および分泌される、ＲＡＮＴＥＳ；ＲＢＰ４、レチノール結合タンパク質；ＴＩＭＰ−１、メタロプロテイナーゼ組織阻害剤；ＶＥＧＦ、血管内皮増殖因子。
【図７】図７Ａ〜７Ｈは、トランスジェニック軟骨形成不全マウスが間接熱量測定中に正常なエネルギー消費、蓄積活性および蓄積育成を示したことを示すグラフである。図７Ａは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＮＤチャレンジマウスにおける夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎酸素消費を示す。図７Ｂは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＮＤチャレンジマウスにおける夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎二酸化炭素生産を示す。図７Ｃは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＮＤチャレンジマウスにおける夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎エネルギー消費を示す。図７Ｄは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＮＤチャレンジマウスにおける基礎蓄積活性および育成を示す。図７Ｅは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＨＦＤチャレンジマウスにおける夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎酸素消費を示す。図７Ｆは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＨＦＤチャレンジマウス夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎二酸化炭素生産を示す。図７Ｇは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＨＦＤチャレンジマウスにおける夜間または日中の絶食および摂食期間中の基礎エネルギー消費を示す。図７Ｈは、ＷＴおよびＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋のＨＦＤチャレンジマウス基礎蓄積活性および育成を示す。データは平均±ＳＤとして表す（各群にｎ＝８〜１０匹のマウス）。データは正常分布に従っていた。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１対ビークル処置したＷＴ、＃＃＃ｐ＜０．００１対ビークル処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋、スチューデントのｔ検定。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
本発明者らは、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチドおよびｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびにその変異体を、それを必要とする患者（たとえば、ヒト、特に、胎児、新生児、小児、青年および成人）において異常内臓脂肪蓄積を処置するために使用できることを発見した。特に、本明細書中に記載の処置方法において使用することができるｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するもの、およびそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその変異体を含む。また、ｓＦＧＦＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含有する細胞も処置方法において投与することができる。
【００６２】
処置方法
本発明は、異常内臓脂肪蓄積および異常内臓脂肪蓄積に関連する状態を有する患者を処置する方法を提供する。特に、患者は、上昇した体重指数、矢状径、アンドロイド：ガイノイド脂肪比、体脂肪量指数および内臓脂肪面積を有する場合がある。また、患者は、骨格成長遅延症候群、たとえば、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＡＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群（たとえば、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群）、屈指、高身長、ならびに難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）も有し得る。患者が骨格成長遅延症候群ならびに異常内臓脂肪蓄積に関連する状態［たとえば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心筋梗塞、異常脂質血症、睡眠時無呼吸、拘束性肺疾患、喘息、認知症、インスリン調節不全（たとえばインスリン抵抗性）、グルコース代謝の調節不全、不妊症、月経不順、脳卒中および認知症を有するという場合もあり得る。
【００６３】
あるいは、患者は、骨格成長遅延症候群を有さないが、異常内臓脂肪蓄積をもたらす状態［たとえば、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群およびコルチゾン過剰症（たとえばクッシング病）］を有する者であり得る。たとえば、患者は、異常内臓脂肪蓄積ならびに異常内臓脂肪蓄積に関連する状態［たとえば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、心筋梗塞、異常脂質血症、睡眠時無呼吸、拘束性肺疾患、喘息、認知症、インスリン調節不全（たとえばインスリン抵抗性）、グルコース代謝の調節不全、不妊症、月経不順、脳卒中および認知症）を有し得る。また、方法は、下垂体機能不全によって引き起こされるクッシング病を有する患者など、ＦＧＦ１０の異常なシグナル伝達を有する患者を処置するためのｓＦＧＦＲ３の投与も含み得る。
【００６４】
また、患者は、以下の臓器、すなわち、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、腸管、生殖器および胆嚢のうちの１つまたは複数に関連するかまたはその周囲にある内臓脂肪蓄積を有するとして特徴付けられる。
【００６５】
方法は、たとえば本明細書中に記載のものなどの本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、異常内臓脂肪蓄積を有する患者に投与することを含む。患者は、異常な腹部脂肪蓄積を発生するリスクにある胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人であり得る。また、患者は、骨格成長遅延症候群（たとえば軟骨形成不全症）、肥満症、コルチゾン過剰症（たとえばクッシング病）、または多嚢胞性卵巣症候群も有し得る。患者（たとえばヒト）は、異常内臓脂肪蓄積の徴候および症状が発生する前に処置することができる。特に、本明細書中に記載の本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いて処置することができる患者は、これらに限定されないが、異常な体脂肪量指数、内臓脂肪の異常面積、上昇したＢＭＩ、胴囲の増加、矢状径の増加およびアンドロイド：ガイノイド脂肪比の増加を含めた症状を示す者である。さらに、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いて処置することができる患者は、異常な内臓脂肪分布および異常内臓脂肪蓄積に関連する状態（たとえば、代謝性疾患、心血管疾患、肺疾患、生殖疾患、または神経疾患）を有する。さらに、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いた処置は、異常内臓脂肪蓄積に関連する前述の症状のうちの１つまたは複数の改善をもたらすことができる（たとえば未処置の患者と比較して）。患者（たとえばヒト）は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与する前に、骨格成長遅延症候群（たとえば軟骨形成不全症）、肥満症、コルチゾン過剰症（たとえばクッシング病）および多嚢胞性卵巣症候群を伴うものなどの異常内臓脂肪蓄積と診断されていてもよい。さらに、異常内臓脂肪蓄積を有する患者は、以前にｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いて処置されていない者であることができる。
【００６６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いて処置することができる患者は、肥満患者などの、糖尿病を有するか、または発生するリスクにある患者も含む。この患者の処置は、糖尿病の発生を処置または防止するために可溶性ＦＧＦＲ３を膵臓に局所投与することを含み得る。
【００６７】
可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド
可溶性ＦＧＦＲ３ポリペプチドおよびその変異体は、異常内臓脂肪蓄積を有する患者を処置する方法において使用することができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチド（たとえば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３に記載の配列を有するＦＧＦＲ３ポリペプチド、配列番号８も参照）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含み得る。特に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドのＥＣＤの１００〜３７０個の連続したアミノ酸（たとえば３５０個未満の連続したアミノ酸）を含み得る。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、２、および／または３も有し得る。
【００６８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、シグナルペプチドを有していても、欠いていてもよい（たとえば、配列番号２１に対応するものなどのＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチド。特に、ｓＦＧＦＲ３は、細胞からの発現および分泌中に切断されるシグナルペプチドを欠く成熟ポリペプチドである）。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＴＭなどの膜貫通ドメイン（ＴＭ）も欠いている。
【００６９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメイン（ＩＣＤ）の全体または一部分も含有し得る。たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩＣＤの４００個以下の連続したアミノ酸（たとえば、１７５、１５０、１２５、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１５個、またはそれより少ない連続したアミノ酸などの５〜３９９個の連続したアミノ酸）を有し得る。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩＣＤは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのチロシンキナーゼドメインを欠いていてもよい。あるいは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば配列番号８のＦＧＦＲ３ポリペプチド）のＩＣＤの任意のアミノ酸を欠いていてもよい。
【００７０】
また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３と少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％または９９％の配列同一性を有する、またはその配列を有するアミノ酸配列も有し得る。
【００７１】
本明細書中に記載の方法において使用するためのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３００、２５０、２００、１５０、もしくは１００個よりも少ないアミノ酸の長さであり得る、および／または配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有し得る。また、ｓＦＧＦＲポリペプチドは、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を有するものであり得る。特に、ｓＦＧＦＲ３は、配列番号５または６のアミノ酸配列（たとえば配列番号５のアミノ酸配列）を有する。また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号６の配列を有していてもよいが、ただし、２５３位の残基はアラニン、グリシン、プロリン、またはスレオニンである。
【００７２】
また、方法において投与することができるｓＦＧＦＲ３ポリペプチド変異体は、配列番号１〜８のいずれか１つのアミノ酸配列の断片（たとえば、配列番号８の少なくともアミノ酸１〜２００、１〜２０５、１〜２１０、１〜２１５、１〜２２０、１〜２２５、１〜２３５、１〜２３０、１〜２４０、１〜２４５、１〜２５０、１〜２５３、１〜２５５、１〜２６０、１〜２６５、１〜２７５、１〜２８０、１〜２８５、１〜２９０、もしくは１〜３００）、または配列番号１〜８のいずれか１つに対して少なくとも５０％の配列同一性（たとえば、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれより高い配列同一性）を有する（かつ、たとえばシグナルペプチドおよびＴＭドメインを欠いている）ポリペプチドも含む。
【００７３】
また、本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）と結合すると特徴付けることができる。特に、ＦＧＦは、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１、配列番号２６）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２、配列番号２７）、線維芽細胞増殖因子９（ＦＧＦ９、配列番号２８）、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０、配列番号４０）、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ１８、配列番号２９）、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９、配列番号３０）、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１、配列番号３１）および線維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ２３、配列番号４１）からなる群より選択される。結合は、約０．２ｎＭ〜約２０ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）（たとえば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＫｄ、Ｋｄが約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、または約１０ｎｍであってもよい）によって特徴付けられる。
【００７４】
本明細書中に記載の結果を考慮すると、本発明は特定のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはその変異体に限定されない。上述の例示的なｓＦＧＦＲ３ポリペプチドおよびその変異体に加えて、配列番号１〜７のアミノ酸配列を有するｓＦＧＦＲ３ポリペプチドと同様の結合親和性を有する１つまたは複数のＦＧＦと結合する任意のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドも、それを必要とする対象における異常内臓脂肪蓄積の処置において有用であると想定される。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、たとえば、ＦＧＦＲ３転写物変異体２の断片（受託番号ＮＭ＿０２２９６５）に対応する、ＩｇＧ３ドメインのＣ末端半分をコードするエクソン８および９ならびに膜貫通ドメインを含めたエクソン１０を欠く、ＦＧＦＲ３アイソフォーム２の断片（たとえば配列番号８のアミノ酸配列の断片）であり得る。
【００７５】
上述のように、本発明の方法において使用するためのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、Ｎ末端位置にシグナルペプチドを含み得る。例示的なシグナルペプチドは、これらに限定されないが、配列番号２１のアミノ酸１〜２２（たとえばＭＧＡＰＡＣＡＬＡＬＣＶＡＶＡＩＶＡＧＡＳＳ）を含み得る。したがって、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、Ｎ末端シグナルペプチドを欠く分泌型およびＮ末端シグナルペプチドを含む非分泌型のどちらも含む。たとえば、分泌されたｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列であるがＮ末端シグナルペプチド（たとえば配列番号２１の配列）を有さないものを含み得る。あるいは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド）は、配列番号２１のアミノ酸配列などのシグナルペプチドを含む。当業者には、Ｎ末端シグナルペプチドの位置は様々なｓＦＧＦＲ３ポリペプチドにおいて変化し、たとえば、ポリペプチドのＮ末端の最初の５、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２７、３０個、またはそれより多くのアミノ酸残基を含み得ることが理解されよう。当業者は、たとえばBendtsen et al. (J. Mol. Biol. 340(4):783-795, 2004)に記載されており、ウェブ上でｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ／にて利用可能なものなどの適切なコンピューターアルゴリズムによって、シグナル配列切断部位の位置を予測することができる。
【００７６】
さらに、本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドはグリコシル化することができる。特に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを変更して、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドがグリコシル化される程度を増加または減少させることができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドへのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって達成することができる。たとえば、オリゴ糖がアスパラギン残基のアミド窒素に付着するＮ結合型グリコシル化は、配列番号５または６およびその変異体のアミノ酸配列の位置Ａｓｎ７６、Ａｓｎ１４８、Ａｓｎ１６９、Ａｓｎ２０３、Ａｓｎ２４０、Ａｓｎ２７２、および／またはＡｓｎ２９４で起こることができる。また、これらのＡｓｎ残基のうちの１つまたは複数を置換してグリコシル化部位を除去することもできる。たとえば、オリゴ糖がアミノ酸残基の酸素原子に付着するＯ結合型グリコシル化は、配列番号５または６およびその変異体のアミノ酸配列の位置Ｓｅｒ１０９、Ｔｈｒ１２６、Ｓｅｒ１９９、Ｓｅｒ２７４、Ｔｈｒ２８１、Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９９、および／またはＴｈｒ３０１で起こることができる。さらに、Ｏ結合型グリコシル化はｓＦＧＦＲ３内のセリン残基で起こることができる。また、これらのＳｅｒまたはＴｈｒ残基のうちの１つまたは複数を置換してグリコシル化部位を除去することもできる。
【００７７】
ｓＦＧＦＲ３融合ポリペプチド
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド［たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体］を、異種ポリペプチドからの機能的ドメイン［たとえば、断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域、配列番号３５および３６のアミノ酸配列を有するポリペプチドなど）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、配列番号３７のアミノ酸配列を有するポリペプチドなど）］と融合させて、ｓＦＧＦＲ３融合ポリペプチドを提供することができる。セリンまたはグリシンに富んだ配列（たとえば、配列番号３８および３９などのポリグリシンまたはポリグリシン／セリンリンカー）等、柔軟なリンカーをｓＦＧＦＲ３ポリペプチドと異種ポリペプチド（たとえばＦｃ領域またはＨＳＡ）との間に適宜含めることができる。
【００７８】
たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドおよびその変異体は、たとえばＮ末端またはＣ末端ドメインでの免疫グロブリンのＦｃ領域を含めた融合ポリペプチドであることができる。特に、有用なＦｃ領域は、任意の哺乳動物（たとえばヒト）からのＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥおよびその様々なサブクラス（たとえば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２、ＩｇＧ−３、ＩｇＧ−４、ＩｇＡ−１、ＩｇＡ−２）を含めた、任意の免疫グロブリン分子のＦｃ断片を含み得る。たとえば、Ｆｃ断片ヒトＩｇＧ−１（配列番号３５）または配列番号３５の２９７位のアスパラギンからアラニンへの置換を含む変異体（たとえば配列番号３６のアミノ酸配列を有するポリペプチド）などのヒトＩｇＧ−１の変異体。本発明のＦｃ断片は、たとえば、重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインならびにヒンジ領域の任意の一部分を含み得る。また、本発明のｓＦＧＦＲ３融合ポリペプチドは、たとえば、ＣＨ２またはＣＨ３ドメインなどの単量体Ｆｃも含み得る。Ｆｃ領域は、当業者公知の任意の適切な１つまたは複数のアミノ酸残基でグリコシル化されていてもよい。本明細書中に記載のＦｃ断片は、本明細書中に記載のＦｃ断片のうちの任意のものに対して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０個、またはそれより多くの付加、欠失、または置換を有し得る。
【００７９】
さらに、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、水溶液中でのタンパク質の溶解度および安定性を改善させる目的で、Ｎ末端またはＣ末端ドメインで他の分子とコンジュゲーションされていることができる。そのような分子の例としては、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＰＥＧ、ＰＳＡおよびウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が挙げられる。たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、ヒトＨＳＡ（たとえば配列番号３７のアミノ酸配列を有するポリペプチド）またはその断片とコンジュゲーションされていることができる。
【００８０】
ｓＦＧＦＲ３融合ポリペプチドは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドと異種ポリペプチド（たとえばＦｃ領域またはＨＳＡ）との間にペプチドリンカー領域を含み得る。リンカー領域は、ｓＦＧＦＲ３が生物活性を保つことを許容する、たとえば立体障害のない、任意の配列および長さのものであり得る。例示的なリンカーの長さは、１〜２００個のアミノ酸残基、たとえば、１〜５、６〜１０、１１〜１５、１６〜２０、２１〜２５、２６〜３０、３１〜３５、３６〜４０、４１〜４５、４６〜５０、５１〜５５、５６〜６０、６１〜６５、６６〜７０、７１〜７５、７６〜８０、８１〜８５、８６〜９０、９１〜９５、９６〜１００、１０１〜１１０、１１１〜１２０、１２１〜１３０、１３１〜１４０、１４１〜１５０、１５１〜１６０、１６１〜１７０、１７１〜１８０、１８１〜１９０、または１９１〜２００個のアミノ酸残基である。たとえば、リンカーは柔軟な一部分、たとえば顕著な固定された二次または三次構造のない領域を含むか、またはそれからなる。好ましい範囲は５〜２５および１０〜２０個のアミノ酸の長さである。そのような柔軟性は、一般に、アミノ酸が小さく、アミノ酸鎖の回転または屈曲を妨害する嵩高い側鎖を有さない場合に増加する。したがって、好ましくは、本発明のペプチドリンカーは、小さなアミノ酸、特に、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、ロイシンおよびイソロイシンの含有量が増加している。
【００８１】
例示的な柔軟なリンカーは、たとえば少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはさらには１００％のグリシン残基を含有する、グリシンに富んだリンカーである。また、リンカーは、たとえば、たとえば少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはさらには１００％のセリン残基を含有する、セリンに富んだリンカーも含有し得る。一部の事例では、リンカーのアミノ酸配列はグリシンおよびセリン残基のみからなる。たとえば、リンカーは、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧ（配列番号３８）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３９）のアミノ酸配列であることができる。リンカーは、任意の適切な１つまたは複数のアミノ酸残基でグリコシル化されていてもよい。また、リンカーは非存在であることもでき、その場合はｓＦＧＦＲ３ポリペプチドと異種ポリペプチド（たとえばＦｃ領域またはＨＳＡ）は直接一緒に融合され、介在残基はない。
【００８２】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、患者（たとえば、胎児、新生児、乳児、小児、青年、または成人などのヒト）において異常内臓脂肪蓄積を有する患者を処置するために使用することができる。たとえば、ポリヌクレオチドは、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列、または配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその変異体（たとえば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれより高い配列同一性）を有することができる。さらに、ポリヌクレオチドは、配列番号１４もしくは１５の核酸配列、または配列番号１４もしくは１５の核酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれより高い配列同一性）を有する変異体を有することができる。
【００８３】
また、ｓＦＧＦＲ３融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、Ｆｃ領域またはＨＳＡなどの異種ポリペプチド）と融合したｓＦＧＦＲ３ポリペプチド）およびシグナルペプチドなし（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド）またはシグナルペプチドあり（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドも特長とする。さらに、ポリヌクレオチドは、本明細書中に記載またはポリペプチド中に存在することが公知のグリコシル化部位のうちの任意のものを変更する、１つまたは複数の突然変異を有することができる。
【００８４】
本発明のポリヌクレオチドは、特にポリヌクレオチドの核酸配列によってコードされているｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを変更せずに宿主生物（たとえばヒト）の典型的なコドン使用頻度を反映するために、適宜コドン最適化して核酸中のコドンを変更することができる。コドン最適化したポリヌクレオチド（たとえば配列番号１４または１６の核酸配列を有するポリヌクレオチド）は、たとえば、ＧＣ含有量を減少させることによって遺伝子操作を促進することができる、および／または宿主細胞（たとえばＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞）中での発現のためである。コドン最適化は、たとえば、ＪＡＶＡコドン適応ツール（ＪＡＶＡ  Ｃｏｄｏｎ  Ａｄａｐｔｉｏｎ  Ｔｏｏｌ、ｗｗｗ．ｊｃａｔ．ｄｅ）または統合ＤＮＡ技術ツール（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｔｏｏｌ、ｗｗｗ．ｅｕ．ｉｄｔｄｎａ．ｃｏｍ／ＣｏｄｏｎＯｐｔ）などのオンラインツールを使用することによって、ポリヌクレオチドの核酸配列およびコドンを最適化する対象の宿主生物を単純に入力することによって、当業者が行うことができる。様々な生物のコドン使用頻度は、オンラインデータベース、たとえばｗｗｗ．ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｄｏｎにて利用可能である。
【００８５】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを発現させるための宿主細胞
哺乳動物細胞を、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）を発現させるための宿主細胞として使用することができる。方法において有用な、例示的な哺乳動物細胞の種類としては、これらに限定されないが、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ、たとえばＨＥＫ２９３）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、ＢＨＫ細胞、ＣＯＳ−７細胞、ＨｅＬａ細胞、ＰＣ３細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＭＣ３Ｔ３細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＶＥＲＹ細胞、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ細胞、Ｗ１３８細胞、ＢＴ４８３細胞、Ｈｓ５７８Ｔ細胞、ＨＴＢ２細胞、ＢＴ２０細胞、Ｔ４７Ｄ細胞、ＮＳ０細胞、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ細胞およびＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞、または当分野で公知の任意の他の適切な哺乳動物宿主細胞が挙げられる。あるいは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞を、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを発現させるための宿主細胞として使用することができる。大腸菌株の例としては、これらに限定されないが、大腸菌２９４［ＡＴＣＣ（商標）３１，４４６］、大腸菌λ１７７６［ＡＴＣＣ（商標）３１，５３７、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）［ＡＴＣＣ（商標）ＢＡＡ−１０２５］、大腸菌ＲＶ３０８［ＡＴＣＣ（商標）３１，６０８］、または当分野で公知の任意の他の適切な大腸菌株が挙げられる。
【００８６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクター
また、上述のポリヌクレオチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体をコードするポリヌクレオチド）のうちの任意の１つまたは複数を含む組換えベクターも特長とする。本発明のベクターは、本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドおよびその変異体をコードするポリヌクレオチドをデリバリーするために使用することができ、哺乳動物、ウイルスおよび細菌の発現ベクターを含み得る。たとえば、ベクターは、プラスミド、人工染色体（たとえば、ＢＡＧ、ＰＡＣおよびＹＡＣ）、ならびにウイルスまたはファージベクターであることができ、ポリヌクレオチドの発現のプロモーター、エンハンサー、またはレギュレーターを含んでいてもよい。また、ベクターは、細菌プラスミドの場合はアンピシリン、ネオマイシン、および／もしくはカナマイシン耐性遺伝子、または真菌ベクターでは耐性遺伝子などの、１つまたは複数の選択マーカー遺伝子も含有することができる。ベクターは、ＤＮＡもしくはＲＮＡを生成するためにインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で使用するか、または、ベクターによってコードされているｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを生成させるために哺乳動物宿主細胞などの宿主細胞をトランスフェクションもしくは形質転換させるために使用することができる。また、ベクターは、遺伝子治療方法においてインビボで使用するために適応させることもできる。
【００８７】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）をコードするポリヌクレオチドをデリバリーするために使用することができる例示的なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス［たとえば、Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ１１、Ａｄ１２、Ａｄ２４、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、Ａｄ４０、Ａｄ４８、Ａｄ４９、Ａｄ５０およびＰａｎ９（ＡｄＣ６８としても公知である）］、パルボウイルス（たとえばアデノ関連ウイルス）、コロナウイルス、オルトミクソウイルスなどのマイナス鎖ＲＮＡウイルス（たとえばインフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（たとえば狂犬病および水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（たとえば麻疹およびセンダイ）、ピコルナウイルスおよびアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、アデノウイルスを含めた二本鎖ＤＮＡウイルス、ヘルペスウイルス（たとえば、単純ヘルペスウイルス１型および２型、エプスタイン−バーウイルス、サイトメガロウイルス）、ならびにポックスウイルス［たとえば、ワクシニア、改変（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘およびカナリア痘］が挙げられる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのデリバリーに有用な他のウイルスとしては、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルスおよび肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血症−肉腫、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ−ＢＬＶ群、レンチウイルスおよびスプマウイルスが挙げられる（Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields, et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996）。
【００８８】
生成方法
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）は、当分野で公知の任意の方法によって生成することができる。たとえば、分子クローニング方法を使用してポリヌクレオチドを作製し、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクター、またはファージベクターなどのベクター内に入れる。ベクターを使用して、ポリヌクレオチドをｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの発現に適した宿主細胞内に形質転換させる。
【００８９】
核酸ベクターのコンストラクションおよび宿主細胞
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）は、宿主細胞から生成させることができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、配列番号１４または１６の核酸配列を有するポリヌクレオチドおよびその変異体）を、当分野で公知の慣用技術（たとえば、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接微量注入、または感染）によって宿主細胞内に導入することができるベクター内に含めることができる。ベクターの選択は、使用する宿主細胞に部分的に依存する。一般に、宿主細胞は原核（たとえば細菌）または真核（たとえば哺乳動物）のどちらかの起源である。
【００９０】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）は、当分野で公知の様々な方法によって調製することができる。これらの方法は、これらに限定されないが、オリゴヌクレオチド媒介性（または部位特異的な）突然変異誘発およびＰＣＲ突然変異誘発を含む。ＳＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、標準技法、たとえば遺伝子合成を使用して得ることができる。あるいは、野生型ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば配列番号８のアミノ酸配列を有するポリペプチド）をコードするポリヌクレオチドを、当分野における標準技法、たとえばＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）突然変異誘発を使用して、特定のアミノ酸置換を含有するように突然変異させることができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、たとえば、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。
【００９１】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）をコードするポリヌクレオチドを、原核または真核の宿主細胞においてポリヌクレオチドを複製および発現することができるベクター内に挿入することができる。方法において有用な、例示的なベクターとしては、これらに限定されないが、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクターおよびファージベクターを挙げることができる。たとえば、ウイルスベクターとしては、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの核酸配列を含有する、上述のウイルスベクター、たとえば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはポックスウイルスベクター［たとえば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター］、アデノ関連ウイルスベクターおよびアルファウイルスベクターを挙げることができる。それぞれのベクターは、特定の宿主細胞との適合性のために調整および最適化され得る様々な構成要素を含有することができる。たとえば、ベクター構成要素としては、これらに限定されないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位、シグナル配列、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの核酸配列、および／または転写終結配列を挙げることができる。
【００９２】
上述のベクターを、当分野における慣用技術、たとえば、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿および直接微量注入を使用して、適切な宿主細胞内（たとえば、ＨＥＫ２９３細胞もしくはＣＨＯ細胞、または対象の宿主細胞内）に導入し得る。本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを生成させるための宿主細胞内にベクターを導入した後、宿主細胞を、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの増幅に適するように改変した慣用の栄養素培地中で培養する。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドなどの治療タンパク質の発現方法は当分野で公知であり、たとえば、そのそれぞれがその全体で本明細書中に参考として組み込まれているPaulina Balbas, Argelia Lorence (eds.) Recombinant Gene Expression: Reviews and Protocols (Methods in Molecular Biology), Humana Press; 2nd ed. 2004 (July 20, 2004)およびVladimir Voynov and Justin A. Caravella (eds.) Therapeutic Proteins: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology) Humana Press; 2nd ed. 2012 (June 28, 2012)を参照。
【００９３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの生成、回収および精製
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）を生成するために使用する宿主細胞（たとえばＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞）は、当分野で公知であり、選択された宿主細胞の培養に適切な培地中で成長させることができる。哺乳動物宿主細胞の適切な培地の例としては、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｅｘｐｉ２９３（登録商標）発現培地、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）補助ＤＭＥＭおよびＲＰＭＩ−１６４０が挙げられる。細菌宿主細胞の適切な培地の例としては、ルリアブロス（ＬＢ）と選択剤、たとえばアンピシリンなどの必要な補助剤が挙げられる。宿主細胞を、約２０℃〜約３９℃、たとえば２５℃〜約３７℃、好ましくは３７℃などの適切な温度、および５〜１０％（好ましくは８％）などの適切なＣＯ２レベルで培養する。培地のｐＨは、宿主生物に主に依存して、一般に約６．８〜７．４、たとえば７．０である。誘導性プロモーターを発現ベクター中で使用する場合、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの発現はプロモーターの活性化に適した条件下で誘導する。
【００９４】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）は、宿主細胞の上清から回収することができる。あるいは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、宿主細胞を破壊し（たとえば、浸透圧ショック、超音波処理、または溶解を使用）、次いで遠心分離または濾過でｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを除去することによって回収することができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの回収の際、ここでｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをさらに精製することができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、タンパク質Ａ親和性、他のクロマトグラフィー（たとえば、イオン交換、親和性およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差的溶解度、またはタンパク質を精製するための任意の他の標準技法などの、当分野で公知の任意のタンパク質精製方法によって精製することができる（その全体で本明細書中に参考として組み込まれているProcess Scale Purification of Antibodies, Uwe Gottschalk (ed.) John Wiley & Sons, Inc., 2009を参照）。
【００９５】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド（たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドおよびその変異体）は、精製のための検出可能な標識と適宜コンジュゲーションされていることができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの精製において使用するための適切な標識の例としては、これらに限定されないが、タンパク質タグ、フルオロフォア、発色団、放射標識、金属コロイド、酵素、または化学発光もしくは生物発光分子が挙げられる。特に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの精製に有用なタンパク質タグとしては、これらに限定されないが、クロマトグラフィータグ（たとえば、ＦＬＡＧタグなどのポリアニオン系アミノ酸もしくは赤血球凝集素「ＨＡ」タグからなるペプチドタグ）、親和性タグ［たとえば、ポリ（Ｈｉｓ）タグ、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、もしくはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）］、可溶化タグ［たとえば、チオレドキシン（ＴＲＸ）およびポリ（ＮＡＮＰ）］、エピトープタグ（たとえば、Ｖ５タグ、ＭｙｃタグおよびＨＡタグ）、または蛍光タグ（たとえば、ＧＦＰ、ＧＦＰ変異体、ＲＦＰおよびＲＦＰ変異体）が挙げることができる。
【００９６】
診断方法
異常内臓脂肪蓄積を有する患者は、当分野で公知の多数の技法のうちの１つによって処置を必要としていると同定することができる。技法には２つの分類、すなわち人体計測技法およびイメージングが存在する。人体計測技法は巻尺および重量計に基づいた測定値に依存する。イメージング技法は、Ｘ線ビームが患者を通って移動する際の減衰または患者の水素原子核の磁気特性に依存する。
【００９７】
患者を正常体重、過体重、または肥満として分類する、一般に使用されている人体計測技法は体重指数（ＢＭＩ）である。ＢＭＩは、患者の体重（ｋｇ）を患者の身長（ｍ）の二乗で除算することによって計算する。成人において肥満症を示すカットオフは小児における閾値とは異なる。成人では、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上である場合に肥満症が存在するとみなされ（たとえばNuttall, Nutr. Today 50(3):117-28, 2015を参照）、小児では、肥満症の閾値は年齢および身長に基づいて変化する（たとえばvan der Sluis et al., Arch. Dis. Child. 87(4):341-347, 2002を参照）。小児におけるＢＭＩの標準表は、軟骨形成不全の小児を検討する場合には制限がある（たとえばHoover-Fong et al., Am. J. Clin. Nutr. 88, 364-371, 2008を参照）。
【００９８】
人体計測技法のなかで、ＢＭＩは皮下脂肪蓄積と内臓脂肪蓄積とを識別しない。その結果、異常腹部内臓脂肪は、胴囲（腸骨稜の触った上端のすぐ上を測定）、矢状径（腰のくびれから前腹部までの前後方向の距離）およびアンドロイド：ガイノイド脂肪比（胴囲を腰囲で除算）を使用してより良好に同定される。
【００９９】
成人女性の異常胴囲のカットオフは８３ｃｍを超えるものであり、成人男性では９０ｃｍを超えるものである（たとえばZhu et al., Am. J. Clin. Nutr. 76(4):743-749, 2002を参照）。矢状径では、女性のカットオフは２０．１ｃｍを超えるものであり、男性では２３．１ｃｍを超えるものである。たとえばPimentel et al, Nutr. Hosp. 25(4):656-61, 2010を参照。最後に、アンドロイド：ガイノイド脂肪比では、女性のカットオフは０．８５を超えるものであり、一方、男性では０．９を超えるものである。たとえばPrice et al, Am. J. Clin. Nutr. 84(2):449-460, 2006を参照）。
【０１００】
Ｘ線に依存する１つのイメージング技法は、異なるエネルギーの２つのＸ線ビームを使用して脂肪（除脂肪に対立するものとして）の質量を決定し、この決定から、体脂肪量指数（測定された体脂肪量を身長の二乗で除算）と呼ばれる測定値を導く方法である、二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）である。女性における異常な脂肪蓄積のカットオフは１３を超えるものであり、男性における異常な脂肪蓄積のカットオフは９を超えるものである。たとえばKelly et al, PLOS One, 4(9): 2009を参照）。
【０１０１】
ＣＴ（Ｘ線を使用）およびＭＲＩ（身体の磁気特性に依存）はどちらも腹部を横断面でイメージングすることができ、したがって内蔵脂肪蓄積と皮下脂肪蓄積とが識別される。ＣＴまたはＭＲＩのどちらにおいても、女性における異常内臓脂肪蓄積のカットオフは１１０ｃｍ２であり、男性では１３２ｃｍ２である。たとえばWajchenberg, Endocr. Rev. 21(6):697-738, 2000を参照。
【０１０２】
治療のモニタリング方法
治療の効果を評価するために、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いて処置した患者を、症状の様々なバイオマーカーを使用して経過観察することができる。異常内臓脂肪蓄積を低下させるかまたは防止するために処置した患者では、モニタリング技法は、たとえば、ＢＭＩ、矢状径、アンドロイド：ガイノイド比、胴囲、体脂肪量指数、および標準化された腹部の断面画像での内臓脂肪面積の改善を決定することを含む。また、治療の効果は、たとえば患者からの試料（たとえば、血液、尿、または痰の試料）中に見つかる１つまたは複数のバイオマーカーを使用しても評価することができる。糖尿病または脂肪肝などの代謝性疾患を防止または改善するために処置した患者の場合では、治療の効果をモニタリングするための血液試験は、たとえば、患者試料を、グルコースおよび／またはインスリンレベルの変化、グルコース負荷試験における改善、ならびに上昇したレベルのアラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、および／またはアルカリホスファターゼの減少について評価することを含む。
【０１０３】
患者が、心血管疾患を処置するかまたはそのリスク低下させるためにｓＦＧＦＲ３ポリペプチド治療を受けている場合、血液試験を行って、トリグリセリド、高密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、および／またはコレステロールのレベルの改善を示すことができる。あるいは、放射性同位元素ストレス試験を行うって、患者の運動負荷および／または心灌流の改善を示すことができる。
【０１０４】
認知症を改善させるかまたはそのリスクを低下させるために処置した患者では、一連の神経心理学的試験を行うことができる。
【０１０５】
不妊症または月経不順を処置するかまたはそのリスクを低下させるためにｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与する場合は、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、エストラジオールおよびプロラクチンなどの血液バイオマーカーのレベルを測定することができる。
【０１０６】
患者が睡眠時無呼吸に苦しんでいるかまたはそのリスクを有する場合は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを用いた治療に続いて、たとえば、睡眠中の患者の酸素、呼吸数、心拍数、いびき、および／または身体の動きを測定する研究を行って、治療の効果を評価することができる。
【０１０７】
拘束性肺疾患または喘息を処置または防止するためにｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを与える患者では、たとえばスパイロメトリーまたはプレチスモグラフィーを使用した肺機能試験を使用して、一回呼吸量、肺活量、残気量および／または努力肺活量などの肺の測定値の改善を示すことができる。
【０１０８】
モニタリング技法により、患者がｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを使用した処置に応答していない可能性がある、またはより大きな処置効果が所望され得ることが示される場合は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの投与を１回もしくは複数回繰り返し得る、または投与頻度を増加させ得る。
【０１０９】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの投与
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与して、異常内臓脂肪蓄積を有するか、またはそのリスクにある患者を処置することができる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの例としては、たとえば、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体が挙げられる。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、非経口投与、経腸投与、または局所投与によってなど、当分野で公知の任意の経路によって投与することができる。特に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、内臓脂肪蓄積）の増加を有する患者に、皮下（たとえば皮下注射による）、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、または腹腔内で投与することができる。
【０１１０】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、患者（たとえばヒト）に、顕著な毒性を誘導せずに増加した内臓脂肪蓄積を処置するために有効な量などの事前に決定された用量で、投与することができる。たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、増加した内臓脂肪蓄積を有する患者に、約０．００２ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲（たとえば、０．００２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、または０．２ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ）の個々の用量で投与することができる。特に、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、たとえば、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜７ｍｇ／ｋｇ、たとえば０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの個々の用量で投与することができる。
【０１１１】
増加した内臓脂肪蓄積）を有する患者（たとえばヒト）に投与するための、本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチド）の例示的な用量は、たとえば、０．００５、０．０１、０．０２、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または２０ｍｇ／ｋｇを含む。これらの用量を、１日、１週間、１カ月、または１年に１回または複数回（たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２回、またはそれより多く）投与することができる。たとえば、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを、週に１回、たとえば、約０．００１４ｍｇ／ｋｇ／週間〜約１４０ｍｇ／ｋｇ／週間、たとえば約０．１４ｍｇ／ｋｇ／週間〜約１０５ｍｇ／ｋｇ／週間、またはたとえば約１．４ｍｇ／ｋｇ／週間〜約７０ｍｇ／ｋｇ／週間（たとえば、５ｍｇ／ｋｇ／週間）の範囲の用量で患者に投与することができる。
【０１１２】
遺伝子治療
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、核酸分子として患者に投与することができる。投与することができる核酸分子の例としては、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするもの、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体が挙げられる。たとえば、核酸分子は、配列番号１０〜１８のいずれか１つの配列、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体を有し得る。
【０１１３】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードする核酸分子は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを目的組織にデリバリーし、インビボで発現させる、遺伝子治療によってデリバリーすることができる。遺伝子治療方法は、たとえば、そのそれぞれが本明細書中に参考として組み込まれているVerme et al. (Nature 389:239-242, 1997)、Yamamoto et al. (Molecular Therapy 17:S67-S68, 2009)およびYamamoto et al., (J. Bone Miner. Res. 26: 135-142, 2011)に記述されている。
【０１１４】
本発明のｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの核酸配列を含有するベクター［たとえば、プラスミド、人工染色体（たとえば、ＢＡＧ、ＰＡＣおよびＹＡＣ）、またはウイルスベクター］を投与することによって、増加した内臓脂肪蓄積を有する患者（たとえばヒト）の細胞によって生成させることができる。たとえば、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはポックスウイルスベクター［たとえば、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）などのワクシニアウイルスベクター］、アデノ関連ウイルスベクター、またはアルファウイルスベクターであることができる。ベクターは、たとえば、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、または直接微量注入によって骨格成長遅延障害（たとえば軟骨形成不全症）を有する患者（たとえばヒト）の細胞の内部に入った後、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの発現を促進し、その後これが細胞から分泌される。本発明は、患者（たとえばヒト）にｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを発現する細胞を投与する、細胞に基づく治療をさらに含む。
【０１１５】
医薬組成物
本明細書中に記載のように、異常内臓脂肪蓄積を有する対象を処置するために投与することができる医薬組成物は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含有する。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドは、配列番号１〜７のいずれか１つのアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体を有することができる。核酸分子は、配列番号１０〜１８のいずれか１つの配列、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性（たとえば、それに対して８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性などの、８６％〜１００％の配列同一性）を有するその変異体を有し得る。ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む組成物は、様々な用量で、様々な配合物中で、および薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と組み合わせて配合することができる。
【０１１６】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む医薬組成物は、顕著な毒性を誘導せずに増加した内臓脂肪蓄積を有する患者（たとえばヒト）を処置するために有効な用量などの特定の用量で配合することができる。たとえば、組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチド（たとえば、１０ｍｇ／ｍＬ〜３００ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ〜８０ｍｇ／ｍＬ、または６０ｍｇ／ｍＬ〜７０ｍｇ／ｍＬのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチド）を含むように配合することができる。
【０１１７】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含む医薬組成物は、液体の溶液、分散液、もしくは懸濁液、粉末、または安定貯蔵に適した他の規則正しい構造などの、様々な形態で調製することができる。たとえば、全身または局所デリバリーを意図する、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含む組成物は、非経口投与（たとえば、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、または腹腔内投与）などのための、注射用または輸液用の溶液の形態であることができる。注射（たとえば皮下または静脈内注射）用のｓＦＧＦＲ３組成物は、無菌的溶液または任意の薬学的に許容される液体をビークルとして使用して配合することができる。薬学的に許容されるビークルとしては、これらに限定されないが、滅菌水、生理食塩水および細胞培養培地［たとえば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、α−改変イーグル培地（α−ＭＥＭ）、Ｆ−１２培地］が挙げられる。配合方法は当分野で公知であり、たとえば、その全体で本明細書中に参考として組み込まれているBanga (ed.) Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing and Delivery Systems (2nd ed.) Taylor & Francis Group, CRC Press (2006)を参照。
【０１１８】
ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含む組成物は、増加した内臓脂肪蓄積を有する患者（たとえばヒト）に、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と組み合わせて提供することができる。許容される賦形剤、担体、または希釈剤としては、緩衝液、抗酸化剤、保存料、ポリマー、アミノ酸および炭水化物を挙げることができる。水性賦形剤、担体、または希釈剤としては、水、水−アルコール溶液、乳濁液または懸濁液を挙げることができ、そのようなものとして、生理食塩水、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース溶液、デキストロース＋塩化ナトリウム溶液、ラクトース含有リンゲル液を含めた緩衝医薬用非経口媒体および不揮発性油が挙げられる。非水性賦形剤、担体、または希釈剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、魚油および注射用有機エステルである。
【０１１９】
また、薬学的に許容される塩もｓＦＧＦＲ３組成物中に含めることができる。例示的な薬学的に許容される塩としては、鉱酸塩（たとえば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、および硫酸塩）ならびに有機酸塩（たとえば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩および安息香酸塩）を挙げることができる。さらに、湿潤剤または乳化剤およびｐＨ緩衝物質などの補助物質が存在することができる。薬学的に許容される賦形剤、担体および希釈剤の詳細な記述は、その全体で本明細書中に参考として組み込まれているRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Ed., Allen (2012)で利用可能である。
【０１２０】
また、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含む医薬組成物は、インプラントおよびマイクロカプセル封入のデリバリー系を含めた徐放性配合物など、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを急速放出から保護する担体を用いて配合することもできる。たとえば、ｓＦＧＦＲ３組成物は、ヒドロキシメチルセルロース、ゼラチン、またはポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル、コロイド状薬物デリバリー系（たとえば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、もしくはナノカプセル）、またはマクロ乳濁液など、コアセルベーション技法または界面重合によって調製したマイクロカプセル中に捕捉することができる。さらに、ｓＦＧＦＲ３組成物は、持続放出組成物として配合することができる。たとえば、持続放出組成物は、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含有する固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスを挙げることができ、ここで、マトリックスはフィルムまたはマイクロカプセルなどの造形品の形態である。
【実施例】
【０１２１】
以下の実施例は、本開示を限定するのではなく例示することを意図する。
【０１２２】
実施例１
研究設計
軟骨形成不全症において腹部肥満の発生を防止するｓＦＧＦＲ３治療（たとえば配列番号１の配列を有するｓＦＧＦＲ３）の潜在性を評価するために、本発明者らはまず、遡及的なカルテ再調査を行うことによって小児における肥満症の発生を特徴付け、その後、ほとんどのヒト症状が反復されるマウスモデルであるＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいて研究を実施した。カルテ再調査には、軟骨形成不全症を有する１１人の対象（５人の女児および６人男児）を、フランス、トゥールーズにあるプルパン小児病院（Ｐｕｒｐａｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）の内分泌、骨疾患、遺伝医学婦人科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ｂｏｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ）において出生から１８歳まで追跡した。この遡及的なカルテ再調査研究はヘルシンキ宣言および生物医学研究に関するフランスの規制に従って実施し、非介入研究についての倫理委員会の承認を必要としなかった。すべての患者がＧ３８０Ｒ  ＦＧＦＲ３突然変異［Ｇ３８０Ｒは、シグナルペプチドを含めた完全長ＦＧＦＲ３中での付番を指し、シグナルペプチドなしの残基の付番はＧ３５８Ｒである（配列番号９を参照）を保有しており、分子学的試験によって確認されている。何らかの成長処置を受けている患者は排除した。小児は平均して４カ月ごとに専門のセンターで経過観察した。それぞれの来院時中、データは身長、体重、およびその結果の体重指数（ＢＭＩ＝ｋｇ／ｍ２）を含んでいた。血液分析は年に１回のみ行い、二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）は１回行った。マウス研究は、トランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスまたはその野生型（ＷＴ）同腹仔に対して行った。これには、同腹仔を盲検的に週に２回、３日目から開始して２１日目まで、２．５μｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３またはビークルの皮下注射によって処置した。マウスは３週齢で離乳させた。１週間の順化後、正常（ＮＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を用いてマウスを１０週間チャレンジした。肥満症の発生は、体組成の測定、間接熱量測定、ならびにグルコースおよび脂質プロフィールの古典的評価、また、肝臓および膵臓の機能評価によって評価した。１群あたりの頭数ｎは図の凡例中に提示されている。
【０１２３】
臨床分析
身長対年齢のｚスコアおよびＢＭＩ対年齢のｚスコアを含めた人体計測的な計算は、ＷＨＯ  ＡｎｔｈｒｏＰｌｕｓソフトウェア［パーソナルコンピューター用ＷＨＯ  ＡｎｔｈｒｏＰｌｕｓマニュアル：世界中の小児および青年の成長を評価するためのソフトウェア。ジュネーブ：ＷＨＯ、２００９（www.who.int/growthref/tools/en/）を使用して行った。ｚスコアは、ＷＨＯの標準（出生から６０カ月まで）およびＷＨＯの参照資料２００７（６１カ月から１９歳まで）に基づいている。体組成は、ＤＸＡによってＬｕｎａｒ  Ｐｒｏｄｉｇｙ装置（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して評価した。領域性体組成のための目的領域（ＲＯＩ）を製造者の指示を使用して規定した（図１Ｂ）。手短に述べると、体幹のＲＯＩを骨盤カット（下境界）から頸部カット（上境界）まで測定し、アンドロイドＲＯＩを骨盤カット（下境界）から頸部と骨盤カットとの間の距離の２０％となる骨盤カットの上（上境界）まで測定し、臍ＲＯＩはアンドロイドの下境界からアンドロイド距離の１５０％によって規定し、ガイノイドＲＯＩは臍ＲＯＩの下境界からアンドロイドＲＯＩの高さの２倍に等しい線（下境界）までであった。血液試料は少なくとも１２時間の絶食期間後に採取し、プルパン病院の生物学連合研究所（Ｆｅｄｅｒａｔｉｖｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＩＦＢ）にて分析した。空腹時血糖およびインスリン、全、ＨＤＬおよびＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、ＴＧＯ、ＴＧＰ、ｇＧＴ濃度、ならびに血漿全カルシウム、ナトリウム、カリウム、バイカーボネート、ホスフェート、クロライドおよびアルカリホスファターゼは、Ｒｏｃｈｅ  ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓのＣ７０１モジュールを使用して、Ｃｏｂａｓ  ８０００モジュラー分析器シリーズ上で標準の比色または比色酵素方法を使用して測定した。全２５ＯＨビタミンＤの血清濃度は、Ｒｏｃｈｅ  ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓのＥ６０２モジュールを使用して、Ｃｏｂａｓ  ８０００モジュラー分析器シリーズ上で化学発光性免疫アッセイ方法によって測定した。公開されている参考文献（Mellerio et al., Pediatrics 129: e1020-1029 (2012)、Fischer et al., Ann. Clin. Biochem. 49:546-553, 2012およびHaine et al., J. Bone Miner. Res. 30:1369-1376, 2015）を使用して、すべての値を小児病院内でそれぞれの年齢層について確立されている参照値と比較した。１２時間の終夜の絶食後、確立された推奨（Alberti et al., Diabet. Med. 15:539-553, 1998）によって、ＯＧＴＴを患者において行った。１．７５ｇ／ｋｇのグルコースの経口投与に続いて、血液試料をベースラインならびに３０分後および１２０分後に採取し、ヘキソキナーゼ方法を使用してグルコース濃度を測定した。グルコース調節は米国糖尿病境界（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）の指針に従って評価した。正常グルコース調節は空腹時血糖＜５．６ｍｍｏｌ／Ｌおよび１２０分グルコース＜７．８ｍｍｏｌ／Ｌとして規定され、空腹時高血糖は空腹時血糖５．６〜６．９ｍｍｏｌ／Ｌとして規定され、耐糖能異常は１２０分グルコース７．８〜１１．０ｍｍｏｌ／Ｌとして規定された。
【０１２４】
動物および処置
実験をトランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスに対して行った（Naski et al., Development 125: 4977-4988, 1998）。離乳時に、以前に記載のようにゲノムＤＮＡのＰＣＲによってマウスの遺伝子型を検証するために、耳生検を使用した（Garcia et al., Science Translational Medicine 5:203ra124, 2013）。
【０１２５】
実験中、マウスを標準の実験室条件下で飼育し、食料および水を自由に摂取させた。研究は、現地の実験動物使用のための組織的倫理委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｅｔｈｉｃ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）（ＣＩＥＰＡＬ  Ａｚｕｒ）に承認されていた（承認＃ＮＣＥ−２０１２−５２およびＮＣＥ−２０１５−２２５）。３日目に、以前に記載のように、新生マウスを、２．５ｍｇ／ｋｇのＦＬＡＧタグ付けしたｓＦＧＦＲ３を用いて処置した（Garcia et al., Science Translational Medicine 5:203ra124, 2013）。対照同腹仔は、５０％のグリセロールを含有する１０μｌのＰＢＳ（ビークル）を受けた。３日齢から２２日齢まで、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはｓＦＧＦＲ３またはビークルの６回の皮下注射を受けた。４週齢で離乳させた１週間後、処置および未処置のマウスを２つの群に分け、正常（ＮＤ、Ａ０３、ＳＡＦＥ）または高脂肪食（ＨＦＤ、５２％ｋｃａｌが脂肪として、オーダーメイド、５４％の脂質を含有、ＳＡＦＥ）のそれぞれを用いた１０週間チャレンジした。６時間の絶食後、血液を尾静脈から採取した。糖血症をグルコース計（Ａｂｂｏｔ）で測定し、血清インスリン含有量をＥＬＩＳＡ（Ｍｅｒｃｏｄｉａ）によって決定した。グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を、１０週間のＮＤまたはＨＦＤチャレンジ後のマウスに対して行った。６時間の絶食後、マウスに腹膜内グルコース溶液（１ｇ／ｋｇ）を注射した。血液を尾静脈から採取し、グルコース計またはＥｎｚｙＣｈｒｏｍグルコースアッセイキット（Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ）（ＢｉｏＡｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してグルコースレベルを経時的にモニタリングした。グルコースレベルをそれぞれのマウスの時間−１５分間の値に対して正規化した。
【０１２６】
間接熱量測定を、正常（ＮＤ）または高脂肪（ＨＦＤ）の食餌で１０週間チャレンジしたマウスについて調査した。上述のように、マウスを成長期間中に２．５ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３またはビークルを用いて処置し、２週間の食餌チャレンジに供し、その後、代謝チャンバーに供した。個々の代謝ケージ内で２４時間の順化後、２４時間の食料の摂取制限なし、次いで一晩の絶食の期間中に、個々のマウスにおいて３２分間隔でＯ２消費（ＶＯ２）およびＣＯ２生成（ＶＣＯ２）を測定した（Ｏｘｙｌｅｔ、Ｐａｎｌａｂ−Ｂｉｏｓｅｂ）。呼吸商を計算し、以下のように分析した：ＲＱ＝ＶＣＯ２／ＶＯ２、ＲＱ＝１は炭水化物の酸化に対応し、ＲＱ〜０．７は脂肪の酸化に対応する。エネルギー消費（ｋｃａｌ／日／体重×０．７５＝１．４４×ＶＯ２×［３．８１５＋１．２３２×ＲＱ］）、炭水化物（ｇ／分／ｋｇ０．７５＝［４．５５×ＶＣＯ２］−［３．２１×ＶＯ２］）、および脂質（ｇ／分／ｋｇ０．７５＝［１．６７×ＶＯ２］−［１．６７×ＶＣＯ２］）に酸化を計算した。マウスの歩行活動および育成は重量トランスデューサー技術または赤外線光電池ビーム中断方法（Ｏｘｙｌｅｔ、Ｐａｎｌａｂ−Ｂｉｏｓｅｂ）によってモニタリングした。
【０１２７】
体組成はＳｋｙＳｃａｎ  １１７８Ｘ線マイクロＣＴシステムを使用して決定した。４および１０週齢のマウスを麻酔し、同じパラメータを使用してスキャンした：１０４μｍのピクセルサイズ、４９ｋＶ、０．５ｍｍ厚のアルミニウムフィルター、０．９°の回転工程。全脂肪組織容量を鼻の先端と尾の上部との間で決定し、腹部脂肪組織容量を腰部Ｌ１と仙骨Ｓ１との間で決定した。その後、脂肪組織の定量をより精密に実施した。体組成分析はスキャン画像の３Ｄ再構築後の目的領域の分界に基づいている。３Ｄ再構築分析はＮＲｅｃｏｎおよびＣＴＡｎソフトウェア（Ｓｋｙｓｃａｎ）を使用して行った。
【０１２８】
屠殺時に動物を秤量し、いくつかの組織および臓器（皮下、精巣上体脂肪組織、肝臓、膵臓）を、組織化学またはｑＰＣＲによるさらなる分析のために収穫した。一部の群では、大腿骨をフラッシュすることによって骨髄由来の間葉系幹細胞を収穫した（Zhu et al., Nat Protoc 5:550-560, 2010）。
【０１２９】
脂質プロフィールは心臓内血液を採取することによって評価した。Ｂｅｃｋｍａｎ  ＡＵ  ２７００分析器を使用して、血清に対して総コレステロール、トリグリセリド（ＴＧ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を測定した。マウスアディポカインアレイ（＃ＡＲＹ０１３、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造者の指示に従って、ニトロセルロース膜上で、血清を、炎症、肥満症、インスリン経路、またはＦＧＦに関連する選択されたアディポカインのタンパク質レベルについて分析した。ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび化学発光検出に続いて、濃度測定を使用してそれぞれの捕捉された抗体に結合したタンパク質を定量し、レベルをＷＴマウスからのパーセント変化と比較した。
【０１３０】
間葉系幹細胞研究
間葉系幹細胞を、大腿骨をフラッシュすることによって未処置またはｓＦＧＦＲ３で処置した６〜８週齢のマウスから提供された大腿骨髄を単離し（Zhu et al., Nat. Protoc. 5:550-560, 2010）、１０％の血清を補助した培地中で８０％コンフルエントまで培養した。その後、培地を脂肪生成培地［ＤＭＥＭ−Ｆ１２中に２％の血清、１％の抗生物質、６６ｍＭのインスリン、１ｎＭのトリヨードサイロニン、１００ｍＭのコルチゾール、１０μｇ／ｍｌのトランスフェリン、および３μＭのロシグリタゾンを補助したＤＭＥＭ  Ｆ１２］で置き換えた。Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびクロロホルム（Ｓｉｇｍａ）を使用して全ＲＮＡを抽出した。ランダム六量体およびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して１マイクログラムの全ＲＮＡをｃＤＮＡへと逆転写させた。Ｆａｓｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｓｉｇｍａ）を用いて、カスタムＲＴ２  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲアレイ（ＣＡＰＭ１３０８０）を使用して、リアルタイムｑＰＣＲをＳｔｅｐＯｎｅ  ＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）で行った。調査した遺伝子を表１に列挙する。遺伝子発現をＨＰＲＴ、ＲＰＬ１３ａ、およびＲＰＬ６ハウスキーパー遺伝子に対して正規化した。ＦＧＦＲ発現は以下のプライマーを使用して行った：FGFR1、For-5' CAGATGCACTCCCATCCTCG 3' Rev-5' TCT GGGGATGTCCAGTAGGG 3'; FGFR2 For-5' TGGCAGTGAAGATGTTGAAAG 3' Rev-5' ATCATCTTCATCATCTCCATCTCTTG 3'; FGFR3 For-5' TTATCCTTGGCTCCTGGGTG 3' Rev-5' CTGGAAGGTAGCAGTGGGAA 3'; FGFR4 For-5' GCTCGGAGGTAGAGGTCTTGT 3' Rev-5' CCACGCTGACTGGTAGGAA 3'; HSP90 For-5' TTTGGTGGACACAGGCATTG 3' Rev-5' CAAACTGCCCGATCATGGAG 3'
【０１３１】
【表１】
2020534367.tif 000002
【０１３２】
インスリンシグナル伝達実験では、単離の２４時間後、細胞を６時間枯渇させ、５０ｎＭのインスリンを用いて０、５、１５、３０分間、または０、１、１０、５０、１００ｎＭを用いて５分間刺激した。細胞抽出物をウエスタンブロット分析用に処理した。このために、細胞をＲＩＰＡ溶解緩衝液（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）中で溶解し、３０分間、渦撹拌を使用してホモジナイズした。タンパク質を１４００ｇで１５分間遠心分離することによってペレット化し、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して全タンパク質含有量を評価した。試料を試料還元緩衝液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で希釈し、沸騰させ、標準手順を使用することによって免疫ブロッティング用に処理した。モノクローナル抗体は以下のように使用した：抗ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（４６９５Ｓ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、抗ホスホ−ｐ４４／４２  ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）（４３７０Ｓ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）。結果をＨＳＰ９０発現（４８７７Ｓ、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）に対して正規化した。
【０１３３】
組織学および免疫組織化学
組織学分析を１２週齢のマウスの脂肪組織、肝臓および膵臓に対して行った。臓器を４％のホルマリン中で２４時間固定し、パラフィン包埋し、５μｍの切片をヘマトキシリンおよびエオシンで染色する。脂肪細胞直径をそれぞれの試料において１枚または２枚の異なる切片で測定した（それぞれの切片中に１００〜３００個の脂肪細胞が計数された）。
【０１３４】
膵島の数および面積を、Ｆｉｊｉ  Ｉｍａｇｅ  Ｊシステムを使用して１枚の切片で測定した（島の面積を全膵臓面積に対して正規化した）。肝臓グリコーゲン含有量を過ヨウ素酸−Ｓｈｉｆｆ（ＰＡＳ）染色によって評価した。免疫組織化学を膵臓の５μｍ切片に対して行った。切片をＰＢＳ  １％のＢＳＡで４５分間遮断し、抗インスリンモノクローナル一次抗体（４μｇ／ｍｌ）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｓｃ−９１６８）、抗グルカゴンポリクローナル抗体（４μｇ／ｍｌ）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｓｃ−７７７９）と共に終夜、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４二次抗体（２μｇ／ｍｌ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ−２１４４２）およびＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８二次抗体（４μｇ／ｍｌ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ａ−２１４６７）と共に１時間、湿チャンバー内でインキュベートした。切片をＤＡＰＩ溶液（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）で対比染色し、自己蛍光除去試薬を用いて処置し、蛍光顕微鏡観察下で可視化した。二次抗体なしの染色を陰性対照として使用した。
【０１３５】
統計分析
統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄプリズム６．０ソフトウェアを使用して行った。データは平均±ＳＤとして表した。正規性および等分散を検証するために、アゴスティーノおよびピアソンオムニバス正規性試験（ａ＝０．０５）、シャピロ−ウィル区正規性試験（ａ＝０．０５）、ならびにＫＳ正規性試験（ａ＝０．０５）を行った。対応のない両側スチューデントのｔ検定またはテューキーの多重比較検定を使用して有意性を決定した。患者では、参照データを使用して参照集団の平均から、身長およびＢＭＩの生の結果を年齢に特異的なｚスコアに変換した。健康な集団における、これらの値の予想された平均結果は０である。Ｐ値＜０，０５が有意とみなされた（＊Ｐ＜０，０５、＊＊Ｐ＜０，０１、＊＊＊Ｐ＜０，００１）。
【０１３６】
実施例２
軟骨形成不全症患者は古典的な合併症なしに過剰な腹部脂肪組織を発生する
対象は軟骨形成不全症を有する小児および青年であった。これらを平均して８．６±５．６年間の間同じ観察者によって実施された長期的な遡及的研究に含めた。人体計測的測定値および体組成を経過観察の来院中に記録し、［０〜３］、［４〜８］および［９〜１８］歳の範囲の３つの年齢層の間で比較した。いくつかの代謝血液パラメータを測定し、様々な年齢層において比較した。乳児における食物摂取の制限、したがってこの幼い年齢で代謝パラメータを制御することは困難であるため、３歳未満での来院時の血液値は考慮しなかった。
【０１３７】
軟骨形成不全症患者は成長の障害を示すだけでなく、体重が過剰に増えて過体重またはさらには肥満症がもたらされる傾向もあることが公知である（Hoover-Fong et al., Am. J. Med. Genet. A. 143A:2227-2235, 2007）。図１Ａに見られるように、軟骨形成不全症を有する患者のＢＭＩは小児期中に有意に増加し、［９〜１８］歳の群で約３０ｋｇ／ｍ２の値に達する（［０〜３］と［４〜８］の群の間でＰ＝０．２４０７、［９〜１８］の群を両方の他の群と比較してＰ＜０．０００１、テューキーの多重比較検定）。ＢＭＩと身長の間で負の相関が観察され（ピアソンｒ係数＝−０．５６６０、Ｐ＝０．００２１）、最も小さな小児が最も高いＢＭＩを有する傾向があった。その代謝状態およびその進展を研究するために、濃度測定分析を最初に行って、様々な年齢層における体脂肪および除脂肪質量の分布を決定した（図１Ｂ）。８歳までは、全脂肪：除脂肪比は比較的一定であり、それぞれ［０〜３］および［４〜８］の年齢層で０．２１±０．０２および０．２０±０．０５から［９〜１８］の年齢層で０．８４±０．２９まで、青年期中に有意に上昇したことが観察された（［０〜３］と［４〜８］の群の間でＰ＝０．９９５４、［９〜１８］を［０〜３］および［４〜８］の年齢層と比較してそれぞれＰ＝０．００５３およびＰ＜０．０００１、テューキーの多重比較検定）（表２）。
【０１３８】
【表２】
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【０１３９】
興味深いことに、図１Ｃに見られるように、体脂肪量の増加は均質でなく、患者では腰（ガイノイド）体脂肪量（＋５５％）を超えて腹部（アンドロイド）体脂肪量（＋２０４％）が優先的に発達した（［０〜３］と［４〜８］の群の間でＰ＝０．０９７４、［９〜１８］を［０〜３］および［４〜８］の年齢層と比較してそれぞれＰ＝０．０００２およびＰ＝０．００１、テューキーの多重比較検定）。同時に、アンドロイドおよびガイノイド除脂肪質量はどちらもこの期間中に変動しなかった（表１）。その結果、小児期全体にわたって脂肪：除脂肪比が腹部面積において有意に増加した（［０〜３］と［４〜８］の群の間でＰ＝０．３１８７、［９〜１８］を［０〜３］および［４〜８］の年齢層と比較してそれぞれＰ＝０．０９２４およびＰ＜０．０００１、テューキーの多重比較検定）。体幹、脚および腕は、非常に類似した傾向に沿っており、幼年期から成人期までにパーセント体脂肪量が増加し、パーセント除脂肪質量が減少した（表１）。３歳以降に脊髄骨塩密度（ＢＭＤ）をＬ１とＬ４の間で決定した。どちらの年齢層でも、ＢＭＤが年齢に適切な正常範囲値未満であることが見出された（van der Sluis et al., Arch. Dis. Child. 87:341-347, 2002）（同じ年齢の参照群での０．６４５±０．０７１ｇ／ｃｍ２および０．９１３±０．１９９ｇ／ｃｍ２と比較して、［４〜８］および［９〜１８］の年齢層でそれぞれ０．５１１±０．０６５ｇ／ｃｍ２および０．８９８±０．２２３ｇ／ｃｍ２）。
【０１４０】
［４〜８］と［９〜１８］の年齢層の間で様々な血液パラメータを比較した。予想外に、どちらの年齢層においても、かつそのＢＭＩとは独立して、軟骨形成不全症の小児は、低い血漿総コレステロール（［４〜８］および［９〜１８］の年齢層でそれぞれ３．３８±０．３６ｍｍｏｌ／Ｌおよび３．７３±０．４４ｍｍｏｌ／Ｌ、正常値は小児で３．９０〜５．７０ｍｍｏｌ／Ｌを含む）および低いトリグリセリド（［４〜８］および［９〜１８］の年齢層でそれぞれ０．５６±０．１４ｍｍｏｌ／Ｌおよび０．６３±０．１３ｍｍｏｌ／Ｌ、正常値は小児で０．６０〜１．７０ｍｍｏｌ／Ｌを含む）の傾向を示した。同様に、空腹時血中グルコース（図１Ｄ）およびインスリンレベルは年齢に伴って増加せず、正常範囲内に保たれた（［４〜８］および［９〜１８］の年齢層でそれぞれ７．３±５．４ｍＵＩ／Ｌおよび１３．４±３．４ｍＵＩ／Ｌ、正常値は小児で２．６〜１６ｍＵＩ／Ｌを含む）。これらの結果は、経口投与（０分で４．５３±０．２２ｍｍｏｌ／ｌ、３０分で７．９７±１．７２ｍｍｏｌ／ｌ、および１２０分で５．１７ｍｍｏｌ／ｌ）に続いて０、３０および１２０分で正常なグルコースレベルを示した経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）中に得られたグルコースレベルによって確認された。どちらの年齢層においても統計的差異は見出されなかった。ＯＧＴＴ中の高いレベルの溶血が原因で、インスリンレベルに関するデータは残念ながら利用可能でない。すべての他の血液パラメータは正常範囲内であった（データ示さず）。
【０１４１】
代謝変更が痩せたおよび肥満のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスで観察され、ｓＦＧＦＲ３処置によって修正される
軟骨形成不全症におけるこの内蔵肥満症の優先的な発生におけるＦＧＦＲ３ａｃｈの役割を決定するために、Ｇ３８０Ｒ突然変異を保有するトランスジェニックＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスまたはその野生型（ＷＴ）同腹仔の処置を、ｓＦＧＦＲ３またはビークルを用いて、３日目に開始して３週間の間行った。その後、正常（ＮＤ）または高脂肪食（ＨＦＤ）を用いたマウスのチャレンジを、４週齢に開始して１０週間の間行って、肥満症の発生を評価した。
【０１４２】
４週齢での離乳後、予想通り、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはそのＷＴ同腹仔と比較して体重が２０．４％減少していた。低下した除脂肪および脂肪組織（それぞれ５０％および３３．９％）と関連していた。処置した動物はＷＴマウスと比較して１４．１％の体重の減少を示した（Ｐ＜０．０００１）。
【０１４３】
１０週間の食餌チャレンジの後、すべてのＨＦＤ群がＮＤと比較して体重の有意な増加を示した（図２Ａ）。しかし、興味深いことに、体組成は両方の遺伝子型で異なっていた。未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは、食餌とは独立して、Ｌ１とＳ１の間で測定して、ＷＴマウスよりも高い腹部除脂肪：脂肪比を有していた（図２Ｂ）。ＮＤを給餌した場合、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは精巣上体（内蔵）および皮下脂肪組織がＷＴ動物よりも少なかった（図２Ｃおよび２Ｄ）。しかし、１０週間のＨＦＤチャレンジ後、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスではＷＴ動物よりも多くの精巣上体脂肪組織が発達し、これは皮下脂肪組織を優先的に発達させた（図２Ｃおよび２Ｄ）。これらのデータにより、軟骨形成不全症患者と同様、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスでは内蔵脂肪組織が発達する傾向があることが示された。
【０１４４】
ｓＦＧＦＲ３処置は体重増加に影響を与えなかった（図２Ａ）。しかし、体組成はｓＦＧＦＲ３処置によって有意に影響を受け、ＮＤを給餌したマウスにおいて腹部除脂肪：脂肪比が有意に減少し（図２Ｂ）、これは、除脂肪質量の減少および体脂肪量の増加のそれぞれによって引き起こされている。非常に興味深いことに、ｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは、ＮＤまたはＨＦＤを給餌したかにかかわらず、ＷＴ動物のものに似た脂肪組織分布を示した（図２Ｃおよび２Ｄ）。
【０１４５】
ＨＦＤチャレンジの後、組織学的分析により、ＷＴと比較して、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいて、皮下面積におけるより小さな脂肪細胞およびより高い割合のこれら小脂肪細胞が示された（図２Ｅおよび２Ｇ）。両方の遺伝子型間で精巣上体脂肪細胞の大きさまたは分散の差異は観察されなかった（図２Ｆおよび２Ｈ）。ｓＦＧＦＲ３処置は皮下脂肪細胞の大きさおよび散乱を修復し、精巣上体脂肪細胞の大きさのわずかな増加を誘導した（図２Ｅ〜２Ｈ）。小脂肪細胞の割合の増加は炎症に関連づけられているため（Kursawe et al., Diabetes 59: 2288-2296, 2010およびLafontan, Diabetes Metab. 40:16-28, 2014）、いくつかの循環アディポカインを測定して、これらの動物における全身性炎症の程度を評価した（図６Ａおよび６Ｂ）。アディポカインを４つの分類、すなわち、炎症誘発性、肥満症関連、インスリン経路、およびＦＧＦに分け、これらはすべて、ＷＴ同腹仔と比較してトランスジェニックマウスにおいて増加していた（表３）。未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはＷＴ動物と比較して低グレードの炎症性ベースラインを示し、これはＨＦＤチャレンジ下で悪化した（表３）。ＮＤまたはＨＦＤ下の処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋動物は、そのＷＴ同腹仔のものに類似した全身性プロフィールを有する。インビトロでは、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスから単離した間葉系幹細胞（ＭＳＣ）により、Ｓｒｅｂｆ−１、ＣＥＢＰ／ｄ、ＣＥＰＢ／ａ、およびＰＰＡＲｇなどの分化過程の初期および中期遺伝子が既に発現されていたことが示された（図３Ａ）。非常に興味深いことに、ｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスから単離したＭＳＣは、抗脂肪生成マーカーおよび茶色脂肪組織活性化マーカーの有意な増加、ならびに成熟脂肪細胞の機能に関与する遺伝子の発現の減少を示した（図３Ａ）。インビボデータと合わせると、これは、ｓＦＧＦＲ３処置によって防止することができる、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおける脂肪生成の素因を示唆する。
【０１４６】
【表３】
2020534367.tif 000004
【０１４７】
そのＷＴ同腹仔と比較して、ＦＧＦＲ３突然変異を保有するマウスは低い空腹時糖血症および非常に低いインスリンのベースラインレベルを有していた（図４Ａ）。ＨＦＤ食餌を用いてチャレンジした場合（図４Ｂ）、血糖レベルは上昇したが、ＷＴ動物のものよりも低いままであった。インスリンレベルは極度に低いままであった。ｓＦＧＦＲ３で処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋動物では、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスと比較して糖血症は修復され、インスリンレベルは有意に増加した（図４Ａおよび４Ｂ）。
【０１４８】
グルコース不耐性の発生を評価するために、グルコース負荷試験（ＧＴＴ）を１０週間の食餌チャレンジの後に行った。未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはそのＷＴ同腹仔よりも高いグルコースレベルおよびＡＵＣを示し（それぞれＣｍａｘ  ３２０．９±３２．０ｍｇ／ｄＬおよび２７３．３±２３．９ｍｇ／ｄＬ、ＡＵＣ  １．２×１０４±０．７×１０４および１．７×１０４±０．４×１０４）、一部の基礎グルコース不耐性はＮＤよりさえ低いことを示した。これはＨＦＤ下でさらに悪化した（図４Ｃ）。Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスを２．５ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３を用いて処置した場合、正常ＧＴＴ応答が修復された（図４Ｃ）。トランスジェニックマウスにおいてＮＤまたはＨＦＤ下でインスリン抵抗性試験を行うことを試みたが、そのより低い基礎血糖レベルが原因で、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはインスリン注射を支持せず、迅速に死亡した。Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋またはＷＴマウスから単離した間葉系幹細胞のインスリン感受性の分析はＥｒｋ１／２リン酸化レベルの差異を示さず、これは、両種類のマウスにおいてインスリン刺激に対する同様の応答を示唆する（図３Ｂ）。これらの結果は、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはインスリン調節に対してより感受性があるようにみえないが、その低い基礎糖血症が原因で、ＩＴＴ中のインスリン注射が恐らく致死的低血糖症を誘導したことを示唆する。膵臓分析により、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいてより低いインスリンおよびグルカゴン含有量を有するより小さくより多いランゲルハンス島が示され（図４Ｄ）、これは、インスリン生成および／または貯蔵の変更を示唆する。これは処置した動物において部分的に修復された（図３Ｂおよび４Ａ〜４Ｃ）。また、肝臓切片中のグリコーゲンの減少によってみられるように、グルコース貯蔵も未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋動物の肝臓において損なわれているようにみえる（図４Ｅ）。予想通り、１０週間のＨＦＤチャレンジに続いて、ＷＴマウスはグレードＩＩＩ大滴性脂肪症を発生し、肝細胞の７５％より多くが核よりも大きい脂質液胞を示した（図４Ｅ）。対照的に、１０週間のＨＦＤの後、未処置のＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは可逆的良性肝結節（図４Ｆ）およびグレードＩＩ小滴性脂肪症を発生し、肝細胞の５０％未満が小液胞を表示した（図４Ｅ）。興味深いことに、ｓＦＧＦＲ３処置は、処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいて正常肝臓応答を修復し（図４Ｅ）、小結節は観察されなかった。
【０１４９】
Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスの基礎エネルギー代謝速度を間接熱量測定によって評価した。本発明者らは、正常食餌（ＮＤ）を給餌した除脂肪ＷＴ動物は炭水化物源からエネルギーを引き出した一方で（呼吸商ＲＱほぼ１）、給餌したトランスジェニック軟骨形成不全マウスは、そのエネルギーを本質的に脂質源から引き出した（ＲＱほぼ０．７）ことを見出した（図５Ａ）。絶食エピソードでは、予想通り、両方の種類の動物がそのエネルギーを脂質源から引き出した。この優先的な脂質利用は、ＷＴ動物よりもＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおいてそれぞれ低かったおよび高かった、炭水化物および脂質酸化の計算によって確認された（図５Ｂ）。２４時間の期間にわたって、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは夜間のみだけでなく常に食べる傾向があるが、エネルギー消費および食物摂取は両方の遺伝子型間で有意な差異がなかった（図７Ａ〜Ｄ）。予想通り、ＨＦＤ下では、すべての動物がそのエネルギーを脂質源から引き出し、同様の炭水化物および脂質酸化指数がもたらされた（図５Ｃ〜Ｄ、図７Ｅ〜Ｈ）。非常に興味深いことに、成長期間中にｓＦＧＦＲ３処置を受けたＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋動物は、離乳後にＮＤまたはＨＦＤを給餌したかにかかわらず未処置のＷＴマウスのような挙動であり、これは、処置期間中にグルコース代謝能力が修復されたことを示唆する（図５および図７Ａ〜Ｈ）。
【０１５０】
様々な身体部位における脂肪組織沈着の変動を評価して、軟骨形成不全症における肥満症の重症度を評価することができる。ＢＭＩのｚスコアおよび摘んだ皮膚の皮下脂肪測定値と比較して、アンドロイド：ガイノイド比は過体重および肥満の小児におけるすべての危険因子と密に関連する。軟骨形成不全症では、小児は、小児期の最初期中に発生する、より高いアンドロイド：ガイノイド比を示す。Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおける本発明者らの発見は、これらの患者における優先的な内蔵肥満症に対する素因を示唆する。実際、間葉系統に由来する細胞は、ＷＴ動物から単離した細胞よりも脂肪生成の傾向が高いようにみられ、分化過程において脂肪細胞に向かう予約がされているようにみえる。さらに、異なる脂肪細胞分布が観察され、ＷＴ動物と比較してＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスの皮下脂肪組織において小脂肪細胞の割合が高かった。脂肪細胞の数は小児期および青年期中に設定され、成人期中に一定に保たれる。軟骨形成不全症患者における肥満症は小児期中の最初期に設定される場合があり、たとえばＤＸＡスキャンを使用して早くも４〜８歳でモニタリングすることが許可され得る。
【０１５１】
腹部肥満の発生は、通常、最も有害な種類の肥満症であるとみなされている（Smith, J. Clin. Invest. 125:1790-1792, 2015）。本発明者らの結果は、腹部肥満は、ＦＧＦＲ３に影響を与える突然変異の結果である可能性が高いことを示す。現在、ＦＧＦファミリーの３つのメンバー、すなわち、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１５／１９およびＦＧＦ２１が肥満症に関連づけられている（Nies et al., Front. Endocrinol. (Lausanne) 6:193, 2015）。ＦＧＦ１はＰＰＡＲｇによって調節されており、注目すべきことに、ＷＡＴにおいて高度に上方調節されている（２８）。ＦＧＦ１は、Ｅｒｋ１／２シグナル伝達を介して前脂肪細胞の増殖および分化を促進することが公知である。また、これは、ＷＡＴにおけるＦＧＦＲ２シグナル伝達に依存するとみられている、急性の血液低下効果を始動させる。ＦＧＦ１５／１９は、摂食応答のレギュレーターとしてみなされている。これは肝細胞の細胞膜上のＦＧＦＲ４／ｂｋｌｏｔｈｏ受容体複合体と結合し、最終的には糖新生の抑圧をもたらす（Tomlinson et al., Endocrinology 143:1741-1747, 2002）。ＦＧＦ２１は主にＦＧＦＲ１と結合し、ＰＰＡＲａを介して適応絶食応答を調節する（Kharitonenkov et al., J. Clin. Invest. 115:1627-1635, 2005）。Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスでは、胚形成中のＦＧＦＲ３ａｃｈの過剰発現は、様々な細胞種においてＦＧＦシグナル伝達を改変する場合がある。このことに従って、本発明者らは、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスからの間葉系幹細胞が、そのＷＴ同腹仔と比較して高レベルのＦＧＦＲ３を発現することを見出した。同様に、新生Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスはＡＴおよび肝臓において増加したレベルのＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ４を発現する。合わせると、これらのデータは、Ｆｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスにおける腹部肥満に関連する低糖血症を説明することができる。これに沿って、本発明者らは、患者は空腹時糖血症およびインスリン血症さえも減る傾向にあり、グルコース不耐性を有する患者がいないことも観察し、これは、同様の機構をヒトに適応できることを示唆する。
【０１５２】
ｓＦＧＦＲ３処置を出生の直後に適用し、腹部肥満の発生を含めたほとんどの代謝性合併症が防止された。処置したＦｇｆｒ３ａｃｈ／＋マウスは肥満症自体からは保護されていないが、均質肥満症およびグルコース代謝の修復の発生を伴って本質的にＷＴ動物のように挙動し、ＨＦＤ下でのグルコース耐性がもたらされる。これは、生後まもなくに適用した場合、処置がこれらの非定型代謝組織に対するＦｇｆｒ３ａｃｈ突然変異の効果を逆戻りさせることができることを示唆する。
【０１５３】
結論として、本発明者らのデータは、不適合肥満症の発生が優先的に腹部であり、ＦＧＦＲ３突然変異によって始動されるようにみえることを確立する。また、本発明者らのデータは、異常内臓脂肪蓄積を有する軟骨形成不全症患者の処置を、異常内臓脂肪蓄積およびそれに由来する状態を有する他の患者集団に適用し得ることも示す。骨格成長遅延障害を有する患者は、たとえば、骨成長が終わった後の、そうでなければｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが関連する治療であるとみなされないであろう場合に、異常内臓脂肪蓄積およびそれに関連する状態を制御するために処置し得る。また、患者は、糖尿病およびＣＶＳリスクなどの肥満症のコモビリティ（ｃｏ−ｍｏｒｂｉｔｙ）のモニタリングからも恩恵を受け得る。
【０１５４】
他の態様
上記明細書中で言及したすべての出版物、特許および特許出願は、それぞれの個々の出版物、特許、または特許出願が具体的かつ個々にその全体で参考として組み込まれていると示されている場合と同じ程度に、本明細書中に参考として組み込まれている。
【０１５５】
本発明の記載した方法、医薬組成物およびキットの様々な改変および変形が、本発明の範囲および精神から逸脱せずに当業者に明らかとなるであろう。本発明を具体的な態様に関連して記載したが、これはさらなる改変が可能であり、特許請求した本発明はそのような具体的な態様に過度に制限されるべきでないことが理解されよう。実際、当業者には明らかである、記載した発明を実施するための形態の様々な改変が、本発明の範囲内にあることを意図する。本出願は、一般に本発明の原理に従った本発明の任意の変形、使用、または適応をカバーすることを意図し、本開示からのそのような逸脱を含めることは本発明が属する分野内の既知の慣行の範囲内にあり、本明細書中上述した必須の特長に適用し得る。
【０１５６】
具体的な態様
以下の具体的な態様も本発明を説明する。
【０１５７】
１．それを必要とする対象において異常な脂肪蓄積を処置するかまたは減少させる方法であって、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む宿主細胞を対象に投与することを含む、方法。
【０１５８】
２．異常な脂肪蓄積が、内臓脂肪蓄積を含む、１に記載の方法。
【０１５９】
３．ａ）異常内臓脂肪蓄積が、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、膵臓、腸管、生殖器および胆嚢のうちの１つまたは複数に関連するかまたはその周囲にあるか、
ｂ）異常内臓脂肪蓄積が、心臓、肺、気管、肝臓、膵臓、脳、生殖器、動脈および胆嚢のうちの１つまたは複数において疾患を引き起こすか、または
ｃ）異常内臓脂肪蓄積が、副腎などの内分泌臓器、下垂体、または卵巣などの生殖器における機能不全によって引き起こされる、２に記載の方法。
【０１６０】
４．異常脂肪分布に関連する１つまたは複数の病状が、軽減されるかまたは排除される、１から３のいずれかに記載の方法。
【０１６１】
５．１つまたは複数の病状が、閉塞型睡眠時無呼吸、肺疾患、心血管疾患、代謝性疾患、神経系疾患、異常脂質血症、高血圧、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、認知症、不妊症、月経不順、インスリン調節不全およびグルコース調節不全からなる群より選択される、４に記載の方法。
【０１６２】
６．異常脂質血症が、異常レベルのトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）およびコレステロールのうちの１つまたは複数を含む、５に記載の方法。
【０１６３】
８．心血管疾患が、心疾患または脳卒中である、５に記載の方法。
【０１６４】
９．肺疾患が、喘息および拘束性肺疾患である、５に記載の方法。
【０１６５】
１０．神経系疾患が、認知症またはアルツハイマー病である、５に記載の方法。
【０１６６】
１１．代謝性疾患が、２型糖尿病、グルコース不耐性、非アルコール性脂肪肝疾患および肝毒性である、５に記載の方法。
【０１６７】
１２．インスリン調節不全が、インスリン抵抗性である、５に記載の方法。
【０１６８】
１３．対象が過体重ではないか、または実質的な皮下脂肪蓄積を欠いている、１から１２のいずれかに記載の方法。
【０１６９】
１４．異常な脂肪蓄積が、人体計測技法またはイメージングを使用して判定される、１から１３のいずれかに記載の方法。
【０１７０】
１５．人体計測技法が、体重指数（ＢＭＩ）またはアンドロイド：ガイノイド脂肪比である、１４に記載の方法。
【０１７１】
１６．イメージングが、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および二重エネルギーＸ線吸収測定（ＤＸＡ）を含む、１４に記載の方法。
【０１７２】
１８．患者が、腹部の外側では実質的な異常な脂肪蓄積を示さない、１から１８のいずれかに記載の方法。
【０１７３】
１９．対象が、胎児、新生児、乳児、小児、若年者、青年、または成人である、１から１８のいずれかに記載の方法。
【０１７４】
２０．内臓脂肪蓄積を低下させる、１から１９のいずれかに記載の方法。
【０１７５】
２１．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含む、１から２０のいずれかに記載の方法。
【０１７６】
２２．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然線維芽細胞増殖因子受容体３（ＦＧＦＲ３）ポリペプチドの細胞外ドメインの１００〜３７０個の連続したアミノ酸を含む、２１に記載の方法。
【０１７７】
２３．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞外ドメインの３５０個未満のアミノ酸を含む、２１または２２に記載の方法。
【０１７８】
２４．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのＩｇ様Ｃ２型ドメイン１、２、および／または３を含む、２１から２３のいずれかに記載の方法。
【０１７９】
２５．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインなどのシグナルペプチドおよび／または膜貫通ドメインを欠いている、１から２４のいずれかに記載の方法。
【０１８０】
２６．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、成熟ポリペプチドである、１から２５のいずれかに記載の方法。
【０１８１】
２７．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの４００個以下の連続したアミノ酸を含む、１から２６のいずれかに記載の方法。
【０１８２】
２８．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの１７５、１５０、１２５、１００、７５、５０、４０、３０、２０、１５個、またはそれより少ない連続したアミノ酸などの、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインの５〜３９９個の連続したアミノ酸を含む、２７に記載の方法。
【０１８３】
２９．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３に対して少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、２８に記載の方法。
【０１８４】
３０．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸４０１〜４１３を含む、２９に記載の方法。
【０１８５】
３１．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのチロシンキナーゼドメインを欠いている、１から３０のいずれかに記載の方法。
【０１８６】
３２．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドの細胞内ドメインを欠いている、１から３１のいずれかに記載の方法。
【０１８７】
３３．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、４７５、４５０、４２５、４００、３７５、３５０、３００、２５０、２００、１５０、または１００個よりも少ないアミノ酸の長さを含む、１から３３のいずれかに記載の方法。
【０１８８】
３４．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、１から３３のいずれかに記載の方法。
【０１８９】
３５．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号８のアミノ酸残基１〜２８０に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、３４に記載の方法。
【０１９０】
３６．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、１から３５のいずれかに記載の方法。
【０１９１】
３７．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１〜７のいずれか１つの配列に対して８６％〜１００％の配列同一性を有する、３６に記載の方法。
【０１９２】
３８．対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症を有する、１から３７のいずれかに記載の方法。
【０１９３】
３９．骨格成長遅延障害が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患である、３８に記載の方法。
【０１９４】
４０．ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択される、３９に記載の方法。
【０１９５】
４１．骨格成長遅延障害が、軟骨形成不全症である、４０に記載の方法。
【０１９６】
４２．頭蓋骨早期癒合症候群が、ミュンケ症候群、クルーゾン症候群およびクルーゾン外骨格症候群からなる群より選択される、４０に記載の方法。
【０１９７】
４３．ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患が、患者におけるリガンド依存性の過剰活性化を示すＦＧＦＲ３変異体の発現によって引き起こされる、３８から４２のいずれかに記載の方法。
【０１９８】
４４．ＦＧＦＲ３変異体が、配列番号９に示す、３５８位におけるグリシン残基からアルギニン残基へのアミノ酸置換（Ｇ３５８Ｒ）を含む、４３に記載の方法。
【０１９９】
４５．対象が、骨格成長遅延障害、肥満症、多嚢胞性卵巣症候群、またはクッシング病などのコルチゾン過剰症と診断されている、３８から４４のいずれかに記載の方法。
【０２００】
４６．対象が、短肢、短体幹、Ｏ脚、動揺性歩行、頭蓋奇形、クローバー葉頭蓋、頭蓋骨早期癒合症、ウォルム骨、手奇形、足奇形、ヒッチハイカー母指および胸部奇形からなる群より選択される骨格成長遅延障害の１つまたは複数の症状を示す、３８から４５のいずれかに記載の方法。
【０２０１】
４７．対象が、ＦＧＦＲ３関連骨系統疾患などの骨格成長遅延障害を有さない、１から３７のいずれかに記載の方法。
【０２０２】
４８．対象が、軟骨形成不全症、致死性骨異形成症Ｉ型（ＴＤＩ）、致死性骨異形成症ＩＩ型（ＴＤＩＩ）、発達遅延および黒色表皮腫を伴った重症軟骨形成不全症（ＳＡＤＤＥＮ）、軟骨低形成症、頭蓋骨早期癒合症候群、ならびに屈指、高身長および難聴症候群（ＣＡＴＳＨＬ）からなる群より選択されるＦＧＦＲ３関連骨系統疾患を有さない、４７に記載の方法。
【０２０３】
４９．天然ヒトＦＧＦＲ３ポリペプチドが、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＰ＿０００１３３のアミノ酸配列を含む、２１から２５および２７から３２のいずれかに記載の方法。
【０２０４】
５０．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）と結合する、１から４９のいずれかに記載の方法。
【０２０５】
５１．ＦＧＦが、線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）、線維芽細胞増殖因子２（ＦＧＦ２）、線維芽細胞増殖因子９（ＦＧＦ９）、線維芽細胞増殖因子１０（ＦＧＦ１０）、線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ１８）、線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）および線維芽細胞増殖因子２３（ＦＧＦ２３）からなる群より選択される、５０に記載の方法。
【０２０６】
５２．結合が、約０．２ｎＭ〜約２０ｎＭの平衡解離定数（Ｋｄ）によって特徴付けられる、５０または５１に記載の方法。
【０２０７】
５３．結合が約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＫｄによって特徴付けられており、Ｋｄが約１ｎｍ、約２ｎｍ、約３ｎｍ、約４ｎｍ、約５ｎｍ、約６ｎｍ、約７ｎｍ、約８ｎｍ、約９ｎｍ、または約１０ｎｍであってもよい、５２に記載の方法。
【０２０８】
５４．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号５に記載されている、１から５３のいずれかに記載の方法。
【０２０９】
５５．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、天然ＦＧＦＲ３ポリペプチドのシグナルペプチドなどのシグナルペプチドを含む、１から５４のいずれかに記載の方法。
【０２１０】
５６．シグナルペプチドが、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、５５に記載の方法。
【０２１１】
５７．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、異種ポリペプチドを含む、１から５６のいずれかに記載の方法。
【０２１２】
５８．異種ポリペプチドが、免疫グロブリンの断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）またはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である、５７に記載の方法。
【０２１３】
５９．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列と少なくとも８５％かつ１００％までの配列同一性を有する核酸配列を含む、１から５９のいずれかに記載の方法。
【０２１４】
６０．ポリヌクレオチドが、配列番号１０〜１８のいずれか１つの核酸配列からなる、５９に記載のポリペプチド。
【０２１５】
６１．ポリヌクレオチドが、単離されたポリヌクレオチドである、５９または６０に記載の方法。
【０２１６】
６２．ポリヌクレオチドが、ベクター中にある、５９または６０に記載の方法。
【０２１７】
６３．ベクターが、プラスミド、人工染色体、ウイルスベクターおよびファージベクターからなる群より選択される、６２に記載の方法。
【０２１８】
６４．ベクターが、宿主細胞中にある、６２または６３に記載の方法。
【０２１９】
６５．宿主細胞が、単離された宿主細胞である、６４に記載の方法。
【０２２０】
６６．宿主細胞が、対象由来である、６５に記載の方法。
【０２２１】
６７．宿主細胞が、ポリヌクレオチドで形質転換されている、６６に記載の方法。
【０２２２】
６８．宿主細胞が、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である、６４または６５に記載の方法。
【０２２３】
６９．ｓＦＧＦＲ３が、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤を含む組成物として投与される、１から６８のいずれかに記載の方法。
【０２２４】
７０．組成物が、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で対象に投与される、６９に記載の方法。
【０２２５】
７１．組成物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で投与される、７０に記載の方法。
【０２２６】
７２．組成物を毎日、週に１回、または月に１回投与する、６９から７１のいずれかに記載の方法。
【０２２７】
７３．組成物を週に７回、週に６回、週に５回、週に４回、週に３回、週に２回、週に１回、２週間毎、または月に１回投与する、６９から７２のいずれかに記載の方法。
【０２２８】
７４．組成物が、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇのｓＦＧＦＲ３ポリペプチドの用量で週に１回または２回投与される、７３に記載の方法。
【０２２９】
７５．組成物が、非経口投与、経腸投与、または局所投与によって投与される、６９から７４のいずれかに記載の方法。
【０２３０】
７６．組成物が、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与、または腹腔内投与によって投与される、７５に記載の方法。
【０２３１】
７７．組成物が、皮下投与によって投与される、７６に記載の方法。
【０２３２】
７８．対象は以前にｓＦＧＦＲ３ポリペプチドを投与されていない、１から７７のいずれかに記載の方法。
【０２３３】
７９．対象がヒトである、１から７８のいずれかに記載の方法。
【０２３４】
８０．ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドが、約２時間〜約２５時間のインビボ半減期を有する、１から７９のいずれかに記載の方法。
【０２３５】
８１．１から８０のいずれかに記載の方法などによる、それを必要とする対象において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはポリヌクレオチドを含む宿主細胞を含む組成物。
【０２３６】
８２．１から８０のいずれかに記載の方法などによる、それを必要とする対象において異常脂肪分布を処置するかまたは低下させるための医薬品の製造における、可溶性線維芽細胞増殖因子受容体３（ｓＦＧＦＲ３）ポリペプチド、ｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、またはｓＦＧＦＲ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞の使用。
【図１Ａ】
2020534367.tif 000005
【図１Ｂ】
2020534367.tif 000006
【図１Ｃ】
2020534367.tif 000007
【図１Ｄ】
2020534367.tif 000008
【図２Ａ】
2020534367.tif 000009
【図２Ｂ】
2020534367.tif 000010
【図２Ｃ】
2020534367.tif 000011
【図２Ｄ】
2020534367.tif 000012
【図２Ｅ】
2020534367.tif 000013
【図２Ｆ】
2020534367.tif 000014
【図２Ｇ】
2020534367.tif 000015
【図２Ｈ】
2020534367.tif 000016
【図３Ａ】
2020534367.tif 000017
【図３Ｂ】
2020534367.tif 000018
【図４Ａ】
2020534367.tif 000019
【図４Ｂ】
2020534367.tif 000020
【図４Ｃ】
2020534367.tif 000021
【図４Ｄ】
2020534367.tif 000022
【図４Ｅ】
2020534367.tif 000023
【図４Ｆ】
2020534367.tif 000024
【図５Ａ】
2020534367.tif 000025
【図５Ｂ】
2020534367.tif 000026
【図５Ｃ】
2020534367.tif 000027
【図５Ｄ】
2020534367.tif 000028
【図６Ａ】
2020534367.tif 000029
【図６Ｂ】
2020534367.tif 000030
【図７Ａ】
2020534367.tif 000031
【図７Ｂ】
2020534367.tif 000032
【図７Ｃ】
2020534367.tif 000033
【図７Ｄ】
2020534367.tif 000034
【図７Ｅ】
2020534367.tif 000035
【図７Ｆ】
2020534367.tif 000036
【図７Ｇ】
2020534367.tif 000037
【図７Ｈ】
2020534367.tif 000038
【配列表】
2020534367000001.app
【国際調査報告】
2020534367.tif 000039
2020534367.tif 000040
2020534367.tif 000041