(57)【要約】  ｇｐ３５０、ｇＨ、ｇＬ及びｇＢ等の宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する少なくとも２つのヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ）ポリペプチド、又は該ポリペプチドをコードする核酸を含む、抗原性組成物及びその使用を提供する。２つのＨＨＶポリペプチドは、ｇＢポリペプチド；ｇｐ３５０ポリペプチド；ｇＬポリペプチド；及びｇＨポリペプチド、並びに任意に以下のポリペプチド：ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＢＤＬＦ２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ及びｇｐＫ８．１のうちのいずれか１つ以上の任意の組み合わせを含む。また、被験体に、少なくとも２つのＨＨＶポリペプチド又はそれをコードする核酸（複数の場合もある）を投与することによって、該被験体において、免疫応答を誘導する又はＨＨＶ感染を治療若しくは予防する方法を開示する。また高力価抗ＨＨＶ抗体又は免疫細胞を使用して受動的に免疫移入させる方法を開示する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のヒトヘルペスウイルスポリペプチド：
ヒトヘルペスウイルスｇＢの細胞外ドメインを含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）ポリペプチド、
ヒトヘルペスウイルスｇｐ３５０の細胞外ドメインを含む糖タンパク質３５０（ｇｐ３５０）ポリペプチド、
糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）ポリペプチド、及び、
ヒトヘルペスウイルスｇＨの細胞外ドメインを含む糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）ポリペプチド、
の少なくとも２つ、又は前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドをコードする１つ以上の核酸を含む抗原性組成物であって、
前記抗原性組成物が、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体の形態でｇＨポリペプチドとｇＬポリペプチドとを含む場合には、前記抗原性組成物が、前記ｇｐ３５０ポリペプチド及び／又は前記ｇＢポリペプチドを更に含む、抗原性組成物。
【請求項２】
前記ヒトヘルペスウイルスが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ−２）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、又はカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ｇＢポリペプチド、前記ｇｐ３５０ポリペプチド、及び／又は前記ｇＨポリペプチドが存在する場合、それぞれが、対応するｇＢ、ｇｐ３５０及び／又はｇＨの各細胞内ドメインを更に含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記細胞外ドメインが、ポリペプチドリンカー配列を介して前記細胞内ドメインに融合される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリペプチドリンカー配列が、約６個〜約７０個のアミノ酸長である、又は前記ペプチドリンカーが約１５個のアミノ酸長である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドの少なくとも２つが融合タンパク質を形成し、該融合タンパク質が、任意に、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドを連結するポリペプチドリンカー配列を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記少なくとも少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドの少なくとも３つが融合タンパク質を形成し、前記融合タンパク質が、任意に、前記少なくとも３つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドを連結する１つ以上のポリペプチドリンカー配列を含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＢポリペプチド、と、前記ｇｐ３５０ポリペプチド、前記ｇＬポリペプチド及び前記ｇＨポリペプチドの１つ以上とを含み、前記ｇＢポリペプチドが単量体又は多量体である、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＢポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドと、前記ｇＨポリペプチドとを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体、又は三量体であり、前記ｇＬポリペプチド及び前記ｇＨポリペプチドがｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成し、任意に、前記ｇＢポリペプチドが単量体であり、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドがＨＣＭＶポリペプチドである、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｏ（ｇＯ）ポリペプチドを更に含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、ＨＣＭＶユニークロング１２８（ＵＬ１２８）ポリペプチド、ＨＣＭＶユニークロング１３０（ＵＬ１３０）ポリペプチド、ＨＣＭＶユニークロング１３１Ａ（ＵＬ１３１Ａ）ポリペプチド、また任意にＨＣＭＶ糖タンパク質Ｍ（ｇＭ）ポリペプチド及び／又はＨＣＭＶ糖タンパク質Ｎ（ｇＮ）ポリペプチドを更に含む、請求項１１又は１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、ヒトＥＢＶポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇｐ３５０ポリペプチドと前記ｇＢポリペプチドとを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ｇｐ３５０ポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体のｇｐ３５０であり、前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体のｇＢであり、任意に、前記ｇｐ３５０ポリペプチドが単量体又は四量体であり、前記ｇＢポリペプチドが三量体である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇｐ３５０ポリペプチドと、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドとを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ｇｐ３５０ポリペプチドが単量体であり、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する、又は前記ｇｐ３５０ポリペプチドが四量体であり、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが三量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＢポリペプチドと、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドとを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ｇＢポリペプチドが三量体ｇＢであり、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体又は三量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、単量体ｇｐ３５０ポリペプチドと、三量体ｇＢポリペプチドと、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、四量体ｇｐ３５０ポリペプチドと、三量体ｇＢポリペプチドと、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された三量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２３】
ヒトＥＢＶ糖タンパク質４２（ｇｐ４２）ポリペプチド、ＢＤＦＬ２ポリペプチド、及び／又はヒトＥＢＶ  ＢＭＲＦ−２ポリペプチドを更に含む、請求項１４〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、ヒトＨＳＶ−１ポリペプチド又はヒトＨＳＶ−２ポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドと、前記ｇＢポリペプチドとを含み、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体であり、前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、任意に、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体ｇＢポリペプチドとを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）ポリペプチドを更に含み、該ｇＤポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、ヒトＶＺＶポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記少なくとも２つのヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドと、前記ｇＢポリペプチドとを含み、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体であり、前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、任意に、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体ｇＢポリペプチドとを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
ヒトＶＺＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）ポリペプチド、ヒト糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）ポリペプチド、及びヒトＶＺＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）ポリペプチドの１つ以上を更に含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、ヒトＨＨＶ−６ポリペプチド又はヒトＨＨＶ−７ポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記少なくとも２つのヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドと、前記ｇＢポリペプチドとを含み、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体であり、前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、任意に、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体ｇＢポリペプチドとを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドがヒトＫＳＨＶポリペプチドである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチドと、前記ｇＬポリペプチドと、前記ｇＢポリペプチドとを含み、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体であり、前記ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、任意に、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、前記ｇＨポリペプチド及び前記ｇＬポリペプチドによって形成された単量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体ｇＢポリペプチドとを含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
ヒトＫＳＨＶ糖タンパク質Ｍ（ｇＭ）ポリペプチド、ヒトＫＳＨＶ糖タンパク質Ｎ（ｇＮ）ポリペプチド、ヒトＫＳＨＶオープンリーディングフレーム６８（ＯＲＦ６８）ポリペプチド、及びヒトＫＳＨＶ糖タンパク質Ｋ８．１ポリペプチドの１つ以上を更に含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記１つ以上の核酸が、前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドの発現を可能とするウイルスベクター中にある、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
薬学的に許容可能な賦形剤及び／又はアジュバントを更に含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
被験体においてヒトヘルペスウイルス感染を予防又は治療する方法であって、治療有効量の先行する請求項のいずれか一項に記載の組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３８】
被験体においてヒトヘルペスウイルスに対する免疫を誘導する方法であって、治療有効量の請求項１〜３６のいずれか一項に記載の組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項３９】
前記被験体が、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがあり、原発性免疫不全症候群を患う、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記組成物中の前記少なくとも２つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが、順次又は同時に投与される、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
ヒトヘルペスウイルスポリペプチドをコードする組み換え核酸構築物であって、該核酸構築物が、ヒトヘルペスウイルスｇＬポリペプチドをコードする第１の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスｇＨポリペプチドをコードする第２の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスＵＬ１２８ポリペプチドをコードする第３の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスＵＬ１３０ポリペプチドをコードする第４の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードする第５の核酸分子とを含み、前記ポリペプチドが宿主細胞において前記核酸構築物から発現されると五量体複合体が形成され、前記コードされるポリペプチドのいずれもが膜貫通ドメイン配列又は細胞内ドメイン配列を含まない、組み換え核酸構築物。
【請求項４２】
前記第１の核酸に制御可能に連結された第１のプロモーターと、前記第３の核酸分子に制御可能に連結された第２のプロモーターとを更に含む、請求項４１に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４３】
前記第１の核酸分子と前記第２の核酸分子との間に位置する第１の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）と、前記第３の核酸分子と前記第４の核酸分子との間に位置する第２のＩＲＥＳと、前記第４の核酸分子と前記第５の核酸分子との間に位置する第３のＩＲＥＳとを更に含む、請求項４１又は４２に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４４】
ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２、第３、第４及び第５のヌクレオチド配列を更に含み、該ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２、第３、第４及び第５のヌクレオチド配列がそれぞれ、前記第１の核酸分子、第２の核酸分子、第３の核酸分子、第４の核酸分子及び第５の核酸分子とインフレームである、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４５】
ヒトヘルペスウイルスポリペプチドをコードする組み換え核酸構築物であって、該核酸構築物が、ヒトヘルペスウイルスｇＬポリペプチドをコードする第１の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスｇＨポリペプチドをコードする第２の核酸分子と、ヒトヘルペスウイルスｇＯポリペプチドをコードする第３の核酸分子とを含む、組み換え核酸構築物。
【請求項４６】
前記第１の核酸に制御可能に連結された第１のプロモーターと、前記第３の核酸分子に制御可能に連結された第２のプロモーターとを更に含む、請求項４５に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４７】
前記第１の核酸分子と前記第２の核酸分子との間に位置する配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を更に含む、請求項４５又は４６に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４８】
ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２及び第３のヌクレオチド配列を更に含み、前記ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２及び第３のヌクレオチド配列がそれぞれ、前記第１の核酸分子、第２の核酸分子及び第３の核酸分子とインフレームである、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項４９】
前記ヒトヘルペスウイルスが、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−２）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）、又はカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）である、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の組み換え核酸構築物。
【請求項５０】
宿主細胞における請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の組み換え核酸構築物の発現によって形成されるタンパク質複合体。
【請求項５１】
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法であって、免疫細胞又は高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞又は高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンが、該高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項５２】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンの力価が、選択されていない血液、血漿又は血清試料から得られた抗ＥＢＶ免疫グロブリンの平均力価よりも最大２５倍高い、請求項５１又は５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンの力価が、選択されていない血液、血漿又は血清試料から得られた抗ＥＢＶ免疫グロブリンの平均力価よりも４倍〜２５倍又は１０倍〜２０倍高い、請求項５１又は５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１０及び請求項１４〜２３のいずれか一項に記載の組成物により、又は四量体ｇｐ３５０、三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主細胞へのＥＢＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する多量体ＥＢＶタンパク質により免疫化したドナーから得られる、請求項５１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記被験体が、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがある、又は上咽頭癌（ＮＰＣ）、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃癌、重症伝染性単核球症、慢性活動性ＥＢＶ感染、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、若しくはは関節リウマチを有する若しくはそれらを発症するリスクがある、請求項５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記被験体が、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがあり、原発性免疫不全症候群を患う、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記被験体がＥＢＶに対して血清反応陰性である、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記被験体が、同時に、抗ＣＤ２０抗体投与、抗ウイルス療法、インターフェロンアルファ投与、放射線療法、及び化学療法の１つ以上を受けている、請求項５１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
高いＥＢＶ中和活性を備える１以上のヒト被験体から得られた血液、血漿又は血清試料を識別することと、
高いＥＢＶ中和活性を備える前記血液、血漿又は血清試料から高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項５１〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記識別する工程が、前記血液、血漿又は血清試料をＲａｊｉ  Ｂ細胞中和アッセイ及び／又はＨｅＬａ細胞中和アッセイに供することを含み、任意に、前記血液、血漿又は血清試料が、選択されていない血液、血漿又は血清試料の平均ＩＣ５０よりも４倍〜２５倍又は１０倍〜２０倍高いＩＣ５０を有する場合に、前記血液、血漿又は血清試料が高いＥＢＶ中和活性を備えると識別される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、以下のＥＢＶポリペプチド：ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチド、ＥＢＶ  ｇＨポリペプチドとＥＢＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、及びＥＢＶ  ｇＢポリペプチドの少なくとも２つを含む免疫原性組成物を１以上のヒトドナー被験体に投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項５１〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドが単量体、二量体、三量体又は四量体であり、前記ＥＢＶ  ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＨｅＬａ細胞中和アッセイが、ＧＦＰ標識化ＥＢＶでＨｅＬａ細胞を感染させてＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞を生じさせることと、前記血液、血漿又は血清試料を前記ＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞とインキュベートすることと、フローサイトメトリー又はＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって前記血液、血漿又は血清試料の中和活性を分析することと、任意に、前記血液、血漿又は血清試料のＩＣ５０を計算することとを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法であって、免疫細胞又は高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞又は高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンが、該高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項６６】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物により、又は三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主細胞へのＨＣＭＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する多量体ＨＣＭＶタンパク質により免疫化したドナーから得られたものである、請求項６５又は６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＨＣＭＶ感染にかかるリスクがある前記被験体が、妊婦、移植患者、化学療法若しくは放射線療法により免疫抑制されている患者、又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者である、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
１以上のヒトドナー被験体に対して、前記被験体において高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリン応答を生成するのに十分な量で、ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチド、ＨＣＭＶ  ｇＨポリペプチドとＨＣＭＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｏ（ｇＯ）ポリペプチド、ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８ポリペプチド、ＨＣＭＶ  ＵＬ１３０ポリペプチド、及びＨＣＭＶユニークＵＬ１３１Ａポリペプチドの少なくとも２つを含む免疫原性組成物を投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項６５〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）又は単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）に対する免疫を受動的に移入させる方法であって、免疫細胞又は抗ＨＳＶ−１及び／又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞、又は抗ＨＳＶ−１若しくは抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンが、抗ＨＳＶ−１又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項７２】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１０及び請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の組成物により、又は三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主へのＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２の結合、融合及び侵入の媒介に関与するＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２の多量体タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである、請求項７１又は７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記被験体がＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の感染によって引き起こされる脳炎を発症するリスクがある、又は前記被験体が活動性のＨＳＶ−２若しくはＨＳＶ−１の感染及び／又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）関連脳炎を有する妊婦である、請求項７１〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
１以上のヒトドナー被験体に対して、抗ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）ポリペプチド、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨポリペプチドとＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＬポリペプチドとを含むＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＢポリペプチドの少なくとも２つを含む免疫原性組成物を投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記抗ＨＳＶ−１及び／又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項７１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
前記ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）に対する免疫を受動的に免疫移入させる方法であって、免疫細胞又は高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞又は高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンが、該高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項７８】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１０及び請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の組成物により、又は三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主細胞へのＶＺＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する多量体ＶＺＶタンパク質により免疫化したドナー被験体から得られたものである、請求項７７又は７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記被験体が帯状ヘルペス（帯状疱疹）又は水痘（水疱瘡）を発症するリスクがある、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
１以上のヒトドナー被験体に対して、高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＶＺＶ  ｇＨポリペプチドとＶＺＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＶＺＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＶＺＶ  ｇＢポリペプチド、ＶＺＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）ポリペプチド、ＶＺＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）ポリペプチド、及びＶＺＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）ポリペプチドの少なくとも２つを含む免疫原性組成物を投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項７７〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＶＺＶ  ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ＶＺＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）又はヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）に対する免疫を受動的に移入させる方法であって、免疫細胞又は抗ＨＨＶ−６若しくは抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞又は前記抗ＨＨＶ−６若しくは抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンが、該抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項８４】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１０及び請求項３０〜３１のいずれか一項に記載の組成物により、又は三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主細胞へのＨＨＶ−６若しくはＨＨＶ−７の結合、融合及び侵入の媒介に関与するＨＨＶ−６若しくはＨＨＶ−７の多量体タンパク質により免疫化したドナー被験体から得られたものである、請求項８３又は８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
１以上のヒトドナー被験体に対して、抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＨポリペプチドとＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＬポリペプチドとを含むＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、及びＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢポリペプチドを含む免疫原性組成物を投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項８３〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
カポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法であって、免疫細胞又は高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することを含み、前記免疫細胞又は高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンが、該高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料から得られたものである、方法。
【請求項８９】
前記１つ以上の血液、血漿又は血清試料がヒトの血液、血漿又は血清試料である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記血液、血漿又は血清試料が、請求項１〜１０及び請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の組成物により、又は三量体ｇＨ／ｇＬ若しくは三量体ｇＢ等の宿主細胞へのＫＳＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する多量体ＫＳＨＶタンパク質により免疫化したドナーから得られたものである、請求項８８又は８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記被験体が、ＫＳＨＶ関連カポジ肉腫、原発性滲出性リンパ腫、多中心性キャッスルマン病、ＫＳＨＶ関連炎症性サイトカイン症候群、又はＫＳＨＶ免疫再構築炎症反応症候群を発症するリスクがある、請求項８８〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを前記被験体に投与する工程の前に、
１以上のヒトドナー被験体に対して、高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＫＳＨＶ  ｇＨポリペプチドとＫＳＨＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＫＳＨＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＫＳＨＶ  ｇＢポリペプチド、ＫＳＨＶ  ｇＭポリペプチド、ＫＳＨＶ  ｇＮポリペプチド、ＫＳＨＶ  ＯＲＦ６８ポリペプチド、及びＫＳＨＶ  Ｋ８．１ポリペプチドの少なくとも２つを含む免疫原性組成物を投与することと、
前記１以上のヒトドナー被験体から前記高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを収集することと、
を更に含む、請求項８８〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記ＫＳＨＶ  ｇＢポリペプチドが単量体、二量体又は三量体であり、前記ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体が単量体、二量体、三量体又は四量体である、請求項９２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本願は、２０１７年１月２７日付で出願された米国仮特許出願第６２／４５１，３９６号の利益を主張し、その出願日に依拠し、その開示全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００２】
［政府の権益］
本発明は、ユニフォームド・サービシズ・ユニバーシティにより与えられた助成金番号Ｑ５７４ＬＪ１５による政府の支援のもとで行われた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
［配列表］
本願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。２０１８年１月２５日付けで作製された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前はＨＭＪ−１５３−ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、２０７５４５バイトのサイズである。
【背景技術】
【０００４】
ヒトヘルペスウイルスは、世界的にヒトにおける著しい罹患率及び死亡率の原因となっている、エンベロープを持つ一群のＤＮＡウイルスである（非特許文献１）。既知のヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ）には、（ｉ）単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）である１型ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ−１）、（ｉｉ）単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ−２）であるＨＨＶ−２、（ｉｉｉ）水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）であるＨＨＶ−３、（ｉｖ）エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であるＨＨＶ−４、（ｖ）ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）であるＨＨＶ−５、（ｖｉ）ＨＨＶ−６、（ｖｉｉ）ＨＨＶ−７、及び（ｖｉｉｉ）カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）であるＨＨＶ−８を含む８種類がある。
【０００５】
ヒトでは、これらのウイルスは、以下の疾患を引き起こすことが知られている。ＨＳＶ−１は口腔ヘルペスを引き起こし、ＨＳＶ−２は性器ヘルペスを引き起こし、ＶＺＶは水疱瘡及び帯状疱疹を引き起こす。ＥＢＶは伝染性単核球症を引き起こし、幾つかのＢ細胞リンパ腫、上咽頭癌及び胃腺癌と強く関連する。ＨＣＭＶは、免疫抑制された患者において重症の感染を引き起こし、難聴の代表的な非遺伝的原因である。ＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７は小児バラ疹（第６病）を引き起こし、ＨＶＶ−８はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者を含む幾つかの臨床状況においてカポジ肉腫を引き起こす。
【０００６】
ＥＢＶは、主に、Ｂ細胞及び上咽頭上皮細胞に感染する。Ｂ細胞のＥＢＶ感染は、補体受容体ＣＲ２／ＣＤ２１へのＥＢＶエンベロープタンパク質ｇｐ３５０の結合により開始される（非特許文献２及び非特許文献３）。Ｂ細胞ＣＲ２に結合することにより、ＥＢＶ  ｇｐ４２は、細胞表面ＭＨＣ−ＩＩ受容体と相互作用して、そのヘテロ二量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質との会合をもたらす。次いで、ヘテロ二量体ｇＨ／ｇＬは、ｇｐ４２を結合することによってコンフォメーション変化を経て、ウイルス−宿主細胞膜融合を直接媒介するＥＢＶ融合タンパク質ｇＢの活性化をもたらす（非特許文献４）。ＥＢＶのように、他のＨＨＶファミリーメンバーの結合、融合及び宿主細胞侵入は、典型的には宿主細胞表面の種々の受容体に結合する他のアクセサリータンパク質と共に、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドによって主に媒介される。
【０００７】
現在、臨床用途の予防用ＥＢＶワクチンはない。ｇｐ３５０に基づくワクチン接種戦略を使用する非ヒト霊長類での研究は、ＥＢＶ誘導性リンパ腫及びＥＢＶ複製に対する保護を示した（非特許文献５）。組み換え単量体ｇｐ３５０タンパク質対プラセボを使用して、ＥＢＶ血清反応陰性の若年成人において行われた第ＩＩ相臨床試験は、伝染性単核球症（ＩＭ）の発症に対するｇｐ３５０ワクチン接種の部分的な保護効果を示唆した（非特許文献６及び非特許文献７）。しかしながら、ワクチンは無症候性ＥＢＶ感染を予防しなかった。慢性腎疾患を有する小児に与えられた組み換え単量体ｇｐ３５０タンパク質の第Ｉ相試験では、検出可能な中和血清抗ｇｐ３５０力価を呈した被験体はごく僅かであったことが示された（非特許文献８）。
【０００８】
また今日、商業的に入手可能な予防用ＨＣＭＶワクチンもない。幾らかの有効性がハイリスクのレシピエント−ドナー＋腎移植レシピエントにおける顕性ＨＣＭＶ疾患で実証されたが、いずれも五量体複合体（ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ）の発現を欠く、弱毒化生Ｔｏｗｎｅワクチン又はＡＤ１６９  ＨＣＭＶウイルスワクチンを使用するより初期の臨床試験は、健康なボランティア又は腎移植レシピエントのいずれでも、ＨＣＭＶ感染の予防に効果がないことが判明した（非特許文献９）。五量体複合体を発現するように操作された新たなＨＣＭＶウイルス株が現在評価中であるが、このアプローチを使用しても安全性の懸念は残り続ける。ＨＣＭＶのＴｏｗｎｅ株に由来する組み換えＨＣＭＶ  ｇＢタンパク質を使用する第ＩＩ相臨床試験（非特許文献１０）は、ＨＣＭＶ血清反応陰性の女性でＨＣＭＶ感染の予防に５０％の有効性を実証し（非特許文献１１）、固形臓器移植患者でＨＣＭＶウイルス血症の予防に５０％の有効性を実証した。第ＩＩ相臨床試験で使用されるＨＣＭＶ  ｇＢタンパク質を、フーリン（furin）切断部位を除去するように修飾した。したがって、ｇＢは、その本来の三量体コンフォメーションにならなかった（非特許文献１２）。これらの２つの研究は予防用ＨＣＭＶワクチンとしてのｇＢの更なる評価に貢献したが、それらの研究は、より有効な予防用ワクチン製剤に対する切実なニーズを示す。
【０００９】
特許文献１及び特許文献２は、抗原を多量体化することを含む、免疫を増強するための戦略を記載する。例えば、特許文献１は、ｇｐ３５０、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬ等の多量体ＨＨＶ抗原を含む、リンカー配列によって分離される少なくとも２つの抗原及びオリゴマー化ドメインを含む融合タンパク質を記載する。特許文献２は、ヘルペスウイルスｇＢポリペプチド細胞外ドメインのフーリン切断部位にペプチドリンカーを挿入することによって得られた改変ヘルペスウイルスｇＢを記載する。改変ヘルペスウイルスｇＢの発現が増強された免疫原性を提供するホモ三量体ｇＢ複合体の産生をもたらすように、ペプチドリンカーの挿入はフーリン認識配列を除去する。
【００１０】
ワクチンにおいて複数の抗原を組み合わせることは、必ずしも増強された免疫、或いは相加作用さえもたらすわけではない。実際、複数の抗原を多成分ワクチンの一部として又は連続する免疫化スケジュールの一部として同時投与する場合、１つ以上の抗原に対する抗体応答は、ワクチン又は免疫干渉により減少される又は減弱される場合がある（非特許文献１３）。同様に、或る特定のハプテンを担体タンパク質と組み合わせた場合、レシピエントが担体タンパク質で予め免疫化されていると、ハプテンに対する抗体応答がしばしば阻害される。この現象は、担体誘導性エピトープ抑制と称されており、多くのペプチド−担体タンパク質コンジュゲートにより起こることが実証されている（非特許文献１４）。また、或る特定のサッカライドを担体タンパク質と組み合せた場合、特にレシピエントが高用量（すなわち、担体タンパク質に対して抗体応答を誘導するのに十分高用量）の担体タンパク質で予備刺激される場合に起こり得る（非特許文献１４）。そのため、しばしば、２つ以上の抗原が被験体に投与される場合、免疫干渉によって１つ以上の抗原に対する抗体応答が減弱される。したがって、ワクチン接種又は免疫化スケジュールの一部として複数のタンパク質を投与する場合には、タンパク質間の相互作用、及びそれらの相互作用がどのように免疫系の応答に影響し得るのかを注意深く評価することが重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第２０１４／０１８８５８号
【特許文献２】国際公開第２０１５／０８９３４０号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Eisenberg et al., Viruses, 4:800-32, 2012
【非特許文献２】Hutt-Fletcher, J. Virol., 81:7825-32, 2007
【非特許文献３】Shannon-Lowe et al., Curr. Opin. Virol., 4:78-84, 2014
【非特許文献４】Neuhierl et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 99:15036-41, 2002
【非特許文献５】Cohen, Clin. Transl. Immunology, 4:e32, 2015
【非特許文献６】Sokal et al., J. Infect. Dis., 196:1749-53, 2007
【非特許文献７】Moutschen et al., Vaccine, 25:4697-705, 2007
【非特許文献８】Rees et al., Transplantation, 88:1025-9, 2009
【非特許文献９】Fu et al., Vaccine, 32:2525-33, 2014
【非特許文献１０】Spaete RR, Transplant Proc., 23:90-6, 1991
【非特許文献１１】Pass RF, J. Clin. Virol., 46 Suppl 4:S73-6, 2009
【非特許文献１２】Sharma et al., Virology, 435:239-49, 2013
【非特許文献１３】PrabhuDas et al., Nature Immunology, 12(3):189-194, 2011
【非特許文献１４】Peeters et al., Infection and Immunity, 59(10):3504-3510, 1991
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
ＨＨＶに対する免疫応答を増強するための新たな改善された抗原組成物が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
ヒトヘルペスウイルスは、宿主細胞の感染に対する共通の戦略を共有する。具体的には、ウイルスのエンベロープ膜が宿主細胞の形質膜と融合し、その後、細胞質へと侵入する、又はウイルスが形質膜陥入された後にウイルスのエンベロープ膜がエンドソーム膜と融合し、次いで宿主細胞の細胞質へと侵入する。融合プロセスに関与するコアＨＨＶエンベロープタンパク質は、保存された糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）及び糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）である。ｇＨ及びｇＬのタンパク質は、典型的には、融合プロセスの間に非共有結合的に会合したヘテロ二量体複合体を形成する。
【００１５】
本出願で開示されるように、ｇｐ３５０、ｇＨ、ｇＬ及びｇＢ等の宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与するこれらのＨＨＶタンパク質の２つ以上の組み合わせによる免疫化は、相加的又は相乗的な抗体応答をもたらす。当該技術分野において認識されている、マルチコンポーネントワクチン又は連続するワクチン接種スケジュールの一部として複数の抗原を投与する場合に一般的に観察されるワクチン又は免疫干渉の課題を考慮すると、これらのロバストな結果は特に予想外である。いかなる理論にも束縛されることを意図するものではないが、２つ以上のＨＨＶポリペプチドの組み合わせが、ウイルス−宿主細胞融合プロセスの種々の段階を遮断することで、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＨＨＶ感染に対して改善された保護を提供する高力価の中和抗体応答を誘発するようである。
【００１６】
最近、免疫原性を増強するためにＨＨＶタンパク質を多量体化する戦略が報告されたが
（例えば、特許文献１及び特許文献２を参照されたい）、本発明者らは、単量体又は多量体の形態のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質を組み合わせることにより、予想外の相加的及び相乗的な抗体応答を得ることができることを発見した。したがって、或る特定の実施の形態では、ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質の１つ以上は単量体及び／又は多量体である。ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質は、組み換えタンパク質又はネイティブタンパク質であってもよい。或る特定の実施の形態では、ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質は修飾されており、天然起源のタンパク質ではない。例えば、タンパク質は、切断されてもよく、多量体であってもよく、又は融合タンパク質において組み合わされてもよい。
【００１７】
典型的にはポリペプチドとして投与されるが、ＤＮＡワクチン、ＲＮＡワクチン又はウイルスベクターワクチンとして、ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質をコードする核酸を投与することも可能である。また、ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質を発現するウイルス様粒子を投与することも可能である。
【００１８】
また、本開示は、本明細書に開示されるＨＨＶタンパク質の組み合わせに応答して生成された抗体等の高力価抗ＨＨＶ抗体が、免疫を受動的に移入させて、ＨＨＶ感染に対して保護し得ることを初めて開示する。この態様は、高力価抗ＨＨＶ抗体を含む生体試料を識別する方法、並びにＨＨＶ抗原に高度に血清反応陽性の個体及び／又は本明細書に開示される抗原性組成物を投与された個体から抗体及び／又は免疫細胞を収集し、それらの抗体及び／又は免疫細胞を、それを必要とする被験体に投与することによって、該被験体へと免疫を受動的に移入させ、特に免疫低下しているか又はＨＨＶ感染を発症するリスクがある個体において、ＨＨＶ感染から該被験体を保護する方法を包含する。
【００１９】
第１の態様では、本開示は、以下の抗原性ヒトヘルペスウイルスポリペプチド（又はそれをコードする１つ以上の核酸）：ヒトヘルペスウイルスｇＢの細胞外ドメインを含む糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）ポリペプチド；ヒトヘルペスウイルスｇｐ３５０の細胞外ドメインを含む糖タンパク質３５０（ｇｐ３５０）ポリペプチド；糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）ポリペプチド；及びヒトヘルペスウイルスｇＨの細胞外ドメインを含む糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）ポリペプチドの少なくとも２つを含む抗原性組成物を提供する。かかる組成物は、任意に、ワクチン開発の分野で一般的なアジュバント及び／又は賦形剤を含んでもよい。
【００２０】
ポリペプチドが得られるヒトヘルペスウイルスは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ−２）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、及び／又はカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＨＳＨＶ）であってもよい。一実施の形態では、該ポリペプチドはＥＢＶポリペプチドである。
【００２１】
或る特定の実施の形態では、ｇＢポリペプチド、ｇｐ３５０ポリペプチド、ｇＬポリペプチド、及び／又はｇＨポリペプチドは、抗原性組成物中に存在する場合、それぞれが対応する細胞内ドメインを更に含む。選択されたポリペプチドの細胞外ドメインは、例えば、約６アミノ酸長〜約７０アミノ酸長、又は特に約１５アミノ酸長のポリペプチドリンカー配列を介して細胞内ドメインに融合され得る。他の実施の形態では、少なくとも２つ、又は任意に３つのヒトヘルペスウイルスポリペプチドが融合タンパク質を形成し、該融合タンパク質は、任意に、該ポリペプチドを共有結合により連結するポリペプチドリンカー配列を含む。
【００２２】
更なる実施の形態では、抗原性組成物は、ｇＢポリペプチドと、ｇｐ３５０、ｇＬ及びｇＨのポリペプチドの１つ以上とを含む。本明細書で言及される様々な実施の形態では、ｇＢポリペプチドは単量体又は多量体（例えば、二量体、三量体、四量体等）であってもよい。或る特定の実施の形態では、抗原性組成物はｇＢポリペプチドと、ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドとを含む。ｇＬポリペプチド及びｇＨポリペプチドは、任意に、ヘテロ二量体として存在してもよい。或る特定の実施の形態では、ヘテロ二量体は融合タンパク質である。他の実施の形態では、ヘテロ二量体は、非共有結合的に会合したタンパク質複合体である。一実施の形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＬポリペプチド及びｇＨポリペプチドはヘテロ二量体を形成する。別の実施の形態では、ｇＢポリペプチドは単量体であり、ｇＬポリペプチド及びｇＨポリペプチドは単量体のヘテロ二量体を形成する。
【００２３】
抗原性組成物のＨＣＭＶの実施の形態では、少なくとも以下：ｇＢポリペプチド、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドの組み合わせが企図される。一実施の形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＬポリペプチド及びｇＨポリペプチドは、単量体又は多量体（例えば、単量体、二量体、三量体又は四量体）であってもよいヘテロ二量体を形成する。別の実施の形態では、ｇＢポリペプチドは単量体又は三量体であり、ｇＬポリペプチド及びｇＨポリペプチドは単量体又は三量体のヘテロ二量体を形成する。これらの抗原性組成物は、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｏ（ｇＯ）ポリペプチド又はＨＣＭＶユニークロング１２８（ＵＬ１２８）ポリペプチド、ＨＣＭＶユニークロング１３０（ＵＬ１３０）ポリペプチド、及びＨＣＭＶユニークロング１３１Ａ（ＵＬ１３１Ａ）ポリペプチド、並びに任意に、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｍポリペプチド及び／又はＨＣＭＶ糖タンパク質Ｎポリペプチドを更に含んでもよい。
【００２４】
抗原性組成物のＥＢＶの実施の形態では、少なくとも以下の組み合わせが企図される：（ａ）ｇｐ３５０ポリペプチドとｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、ｇｐ３５０ポリペプチドは単量体又は四量体のｇｐ３５０であり、ｇＢポリペプチドは三量体ｇＢである；（ｂ）ｇｐ３５０ポリペプチドと、ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドとの組み合わせであって、（ｉ）ポリペプチドは単量体である、又は（ｉｉ）ｇｐ３５０ポリペプチドは四量体であり、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは三量体である；（ｃ）ｇＢポリペプチドと、ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドとの組み合わせであって、ｇＢポリペプチドは三量体ｇＢであり、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドはいずれも単量体又は三量体である；並びに（ｄ）単量体ｇｐ３５０ポリペプチドと、単量体ｇＨポリペプチド及び単量体ｇＬポリペプチドと、三量体ｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、ｇｐ３５０ポリペプチドは四量体であり、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体又は三量体であり、ｇＢポリペプチドは三量体である。また、ＥＢＶ抗原組成物は、任意に、ヒトＥＢＶ糖タンパク質４２（ｇｐ４２）ポリペプチド、ＢＤＬＦ２ポリペプチド、及び／又はヒトＥＢＶ  ＢａｍＨ１−Ｍ右側リーディングフレーム２（ＢＭＲＦ−２）ポリペプチドを含んでもよい。
【００２５】
抗原性組成物のＨＳＶ−１及び／又はＨＳＶ−２の実施の形態では、少なくとも以下の組み合わせが企図される：ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドと、ｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、各ポリペプチドは単量体又は多量体であり、任意に、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る特定の実施の形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体であり、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。一実施の形態では、上記組み合わせは単量体又は三量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体又は三量体のｇＢポリペプチドとを含む。また、これらの抗原性組成物は、任意に、単量体、二量体、三量体又は四量体の形態のＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）ポリペプチドを含んでもよい。
【００２６】
抗原性組成物のＶＺＶの実施の形態では、少なくとも以下の組み合わせが企図される：ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドと、ｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、各ポリペプチドは単量体又は多量体であり、任意に、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る特定の実施の形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は、単量体、二量体、三量体又は四量体であり、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。一実施の形態では、上記組み合わせは、単量体又は三量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体又は三量体のｇＢポリペプチドとを含む。また、これらの抗原性組成物は、任意に、ヒトＶＺＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）ポリペプチド、ヒトＶＺＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）ポリペプチド、及び／又はヒトＶＺＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）ポリペプチドの１つ以上を含んでもよい。
【００２７】
抗原性組成物のＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７の実施の形態では、少なくとも以下の組み合わせが企図される：ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドと、ｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、各ポリペプチドは単量体又は多量体であり、任意に、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る特定の実施の形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は、単量体、二量体、三量体又は四量体であり、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。一実施の形態では、上記組み合わせは、単量体又は三量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体又は三量体ｇＢポリペプチドとを含む。
【００２８】
抗原性組成物のＫＳＨＶの実施の形態では、少なくとも以下の組み合わせが企図される：ｇＨポリペプチドと、ｇＬポリペプチドと、ｇＢポリペプチドとの組み合わせであって、各ポリペプチドは単量体又は多量体であり、任意に、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る特定の実施の形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体であり、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。一実施の形態では、上記組み合わせは、単量体又は三量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と、単量体又は三量体のｇＢポリペプチドとを含む。また、これらの抗原性組成物は、任意に、ヒトＫＳＨＶ糖タンパク質Ｍ（ｇＭ）ポリペプチド、ヒトＫＳＨＶ糖タンパク質Ｎ（ｇＮ）ポリペプチド、ヒトＫＳＨＶオープンリーディングフレーム６８（ＯＲＦ６８）ポリペプチド、及び／又はヒトＫＳＨＶ  Ｋ８．１ポリペプチドの１つ以上を含んでもよい。
【００２９】
核酸を含む抗原性組成物では、核酸はヒトヘルペスウイルスポリペプチドの発現を可能とするウイルスベクター中にあってもよい。
【００３０】
また、開示される抗原組成物を構成する２つ以上のＨＨＶポリペプチドを治療有効量投与することによって、被験体においてヒトヘルペスウイルス感染を予防又は治療する方法を提供する。さらに、１つ以上の開示される抗原性組成物を構成する２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質を治療有効量投与することによって、被験体においてヒトヘルペスウイルスに対する免疫を誘導する方法を提供する。２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質は、同時に又は別々に投与されてもよい。
【００３１】
治療される被験体は、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ：post-transplantation lymphoproliferative disorder）を発症するリスクがある者、及び／又は原発性免疫不全症候群を患っている者であってもよい。開示される方法では、抗原性組成物は、連続して又は同時に投与されてもよい。
【００３２】
また、ＨＨＶポリペプチド又はタンパク質複合体を発現する組み換え核酸構築物も、それらの対応するコードされたポリペプチドと並んで開示される。
【００３３】
一実施の形態では、組み換え核酸構築物は、ＨＨＶ  ｇＬポリペプチドをコードする第１の核酸分子と、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドをコードする第２の核酸分子と、ＨＨＶ  ＵＬ１２８ポリペプチドをコードする第３の核酸分子と、ＨＨＶ  ＵＬ１３０ポリペプチドをコードする第４の核酸分子と、ＨＨＶ  ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードする第５の核酸分子とを含む。或る特定の実施の形態では、ポリペプチドが宿主細胞において核酸構築物から発現されると、五量体のｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａタンパク質複合体が形成される。ポリペプチドは、任意に、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内ドメインを含まない。一実施の形態では、組み換え核酸構築物は、第１の核酸に制御可能に連結された第１のプロモーターと、第３の核酸分子に制御可能に連結された第２のプロモーターとを更に含む。また核酸構築物は、任意に、第１の核酸の分子と第２の核酸分子との間に位置する第１の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）と、第３の核酸分子と第４の核酸分子との間に位置する第２のＩＲＥＳと、第４の核酸分子と第５の核酸分子との間に位置する第３のＩＲＥＳとを含む。また任意に、核酸構築物は、ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２、第３、第４、及び第５のヌクレオチド配列を含み、ここで、ＩｇＧカッパー軽鎖リーダーペプチドをコードする第１、第２、第３、第４及び第５のヌクレオチド配列はそれぞれ、第１、第２、第３、第４及び第５の核酸分子とインフレームである。或る特定の実施の形態では、ＨＨＶはＨＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＶＺＶ、ＫＳＨＶである。
【００３４】
別の実施の形態では、組み換え核酸構築物は、ＨＨＶ  ｇＬポリペプチドをコードする第１の核酸分子と、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドをコードする第２の核酸分子と、ＨＨＶ  ｇＯポリペプチドをコードする第３の核酸分子とを含む。或る特定の実施の形態では、ポリペプチドが宿主細胞において核酸構築物から発現されると、三量体のｇＬ／ｇＨ／ｇＯタンパク質複合体が形成される。或る特定の実施の形態では、ＨＨＶは、ＨＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ＶＺＶ又はＫＳＨＶである。
【００３５】
また、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法も開示される。これらの方法は、免疫細胞又は高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することによって達成され、該免疫細胞又は高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンは、高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。これらの実施の形態では、高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンの力価は、選択されていない血液、血漿又は血清試料から得られた抗ＥＢＶ免疫グロブリンの平均力価よりも、最大２５倍、４倍〜２５倍又は１０倍〜２０倍高い場合がある。血液、血漿又は血清試料を、２つ以上のＥＢＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。また、血液、血漿又は血清試料は、四量体ｇｐ３５０、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むが、これらに限定されない、宿主細胞へのＥＢＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体ＥＢＶタンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。処置を必要とする被験体は、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがある、又は上咽頭癌（ＮＰＣ：nasopharyngeal carcinoma）、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃癌、重症伝染性単核球症、慢性活動性ＥＢＶ感染、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス若しくは関節リウマチを有する若しくはそれらを発症するリスクがある被験体であってもよい。或る特定の実施の形態では、被験体はＥＢＶに対して血清反応陰性である。
【００３６】
一実施の形態では、ＥＢＶに対する免疫を受動的に移入させる方法は、抗ＣＤ２０抗体投与、抗ウイルス療法、インターフェロンアルファ投与、放射線療法及び化学療法の１つ以上を同時に受けている被験体に対して行われる。
【００３７】
受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、以下の工程：（ｉ）高いＥＢＶ中和活性を備える１以上のヒト被験体から得られた血液、血漿又は血清試料を識別する工程；及び／又は（ｉｉ）高いＥＢＶ中和活性を備える血液、血漿又は血清試料から高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。この実施の形態及び関連する方法の実施の形態では、識別する工程は、任意に、血液、血漿又は血清試料をＲａｊｉ  Ｂ細胞中和アッセイ及び／又はＨｅＬａ細胞中和アッセイに供することを含む。この実施の形態では、ＨｅＬａ細胞中和アッセイは、ＧＦＰ標識化ＥＢＶでＨｅＬａ細胞を感染させて、ＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞を生じさせる工程と、ＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞と共に血液、血漿又は血清試料をインキュベートする工程と、フローサイトメトリー又はＥＬＩＳｐｏｔアッセイで血液、血漿又は血清試料の中和活性を分析する工程と、任意に、血液、血漿又は血清試料のＩＣ５０を計算する工程とを含む。また、この実施の形態では、血液、血漿又は血清試料は、血液、血漿又は血清試料が、選択されていない血液、血漿又は血清試料の平均ＩＣ５０より４倍〜２５倍又は１０倍〜２０倍高いＩＣ５０を有する場合、高いＥＢＶ中和活性を備えると識別される。
【００３８】
受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は１以上のヒトドナー被験体に対し、高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、以下のＥＢＶポリペプチド：ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチド、ＥＢＶ  ｇＨポリペプチドとＥＢＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、及びＥＢＶ  ｇＢポリペプチドの少なくとも２つを投与することと、被験体に高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを投与する工程の前に、１以上のヒトドナー被験体から高力価抗ＥＢＶ免疫グロブリンを収集することとを含む。或る特定の実施の形態では、ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体であり、ＥＢＶ  ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００３９】
更なる実施の形態では、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法を提供する。該方法は、免疫細胞又は高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与する工程を含み、該免疫細胞又は高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンは、高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンに対して選択された、１つ以上の血液、血漿又は血清試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。任意に、血液、血漿又は血清試料は、２つ以上のＨＣＭＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである。また、血液、血漿又は血清試料は、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むがこれらに限定されない、宿主細胞へのＨＣＭＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体ＨＣＭＶタンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。この受動移入方法の一実施の形態では、ＨＣＭＶ感染にかかるリスクがある被験体は、妊婦、移植患者、化学療法若しくは放射線療法中に免疫抑制されている患者、又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者である。
【００４０】
またＨＣＭＶ受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを被験体に投与する工程の前に行われる、以下の工程：（ｉ）１以上のヒトドナー被験体に対し、該被験体において高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリン応答を生成するのに十分な量で、ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチド、ＨＣＭＶ  ｇＨポリペプチドとＨＣＭＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＨＣＭＶ糖タンパク質Ｏ（ｇＯ）ポリペプチド、ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８ポリペプチド、ＨＣＭＶ  ＵＬ１３０ポリペプチド、及びＨＣＭＶユニークＵＬ１３１Ａポリペプチドの少なくとも２つを投与する工程、並びに（ｉｉ）上記１以上のヒトドナー被験体から高力価抗ＨＣＭＶ免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。或る特定の実施の形態では、ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００４１】
また、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）又は単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）に対する免疫を受動的に移入させる方法も開示される。これらの方法は、免疫細胞、又は抗ＨＳＶ−１及び／又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することにより受動移入を達成し、該免疫細胞、又は抗ＨＳＶ−１又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンは、該抗ＨＳＶ−１又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。任意に、血液、血漿又は血清試料は、２つ以上のＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである。また、血液、血漿又は血清試料は、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むがこれらに限定されない、宿主細胞へのＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体のＨＳＶ−１タンパク質又はＨＳＶ−２タンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。この方法の別の実施の形態では、被験体は、ＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２の感染によって引き起こされる脳炎を発症するリスクがある、又は被験体は活動性のＨＳＶ−２若しくはＨＳＶ−１の感染、及び／又はＨＳＶ脳炎を有する妊婦である。
【００４２】
またＨＳＶ−２又はＨＳＶ−１の受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、抗ＨＳＶ−２又はＨＳＶ−１の高力価免疫グロブリンを被験体に投与する工程の前に行なわれる、以下の工程：（ｉ）１以上のヒトドナー被験体に対し、抗ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）ポリペプチド、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨポリペプチドとＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＬポリペプチドとを含むＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＢポリペプチドの少なくとも２つを投与する工程、及び／又は（ｉｉ）上記１以上のヒトドナー被験体から抗ＨＳＶ−１及び／又は抗ＨＳＶ−２の高力価免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。或る特定の実施の形態では、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２  ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００４３】
また、ＶＺＶに対する免疫を受動的に移入させる方法を開示する。これらの方法は、免疫細胞又は高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することにより受動移入を達成し、該免疫細胞又は高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンは、高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。任意に、血液、血漿又は血清試料は、２つ以上のＶＺＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである。また、血液、血漿又は血清試料は、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むがこれらに限定されない、宿主細胞へのＶＺＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体ＶＺＶタンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。この方法の別の実施の形態では、被験体は帯状ヘルペス（帯状疱疹）又は水痘（水疱瘡）を発症するリスクがある。
【００４４】
また、ＶＺＶ受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを被験体に投与する工程の前に行われる以下の工程：（ｉ）１以上のヒトドナー被験体に対して、高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＶＺＶ  ｇＨポリペプチドとＶＺＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＶＺＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＶＺＶ  ｇＢポリペプチド、ＶＺＶ糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）ポリペプチド、ＶＺＶ糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）ポリペプチド、及びＶＺＶ糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）ポリペプチドの少なくとも２つを投与する工程、及び／又は（ｉｉ）上記１以上のヒトドナー被験体から高力価抗ＶＺＶ免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。或る特定の実施の形態では、ＶＺＶ  ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ＶＺＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００４５】
また、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）又はヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）に対する免疫を受動的に移入させる方法も開示する。これらの方法は、免疫細胞、又は抗ＨＨＶ−６若しくは抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することにより受動移入を達成し、該免疫細胞、又は抗ＨＨＶ−６若しくは抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンは、抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンに対して選択された、血液、血漿又は血清の１つ以上の試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。任意に、血液、血漿又は血清試料は、２つ以上のＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７の融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである。また、血液、血漿又は血清試料は、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むがこれらに限定されない、宿主細胞へのＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７の結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体のＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のタンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。また、ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７の受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを被験体に投与する工程の前に行なわれる以下の工程：（ｉ）１以上のヒトドナー被験体に対して、抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、少なくともＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、及びＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢポリペプチドを投与する工程；及び／又は（ｉｉ）上記１以上のヒトドナー被験体から抗ＨＨＶ−６又は抗ＨＨＶ−７の高力価免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。或る特定の実施の形態では、ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００４６】
また、カポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）に対する免疫を受動的に移入させる方法を開示する。これらの方法は、免疫細胞又は高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを、それを必要とする被験体に投与することにより受動移入を達成し、該免疫細胞又は高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンは、高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンに対して選択された１つ以上の血液、血漿又は血清試料、任意にヒトの血液、血漿又は血清試料から得られたものである。任意に、血液、血漿又は血清試料は、２つ以上のＫＳＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質により免疫化したドナーから得られたものである。また、血液、血漿又は血清試料は、三量体ｇＨ／ｇＬ又は三量体ｇＢを含むがこれらに限定されない、宿主細胞へのＫＳＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する単一の多量体ＫＳＨＶタンパク質により免疫化したドナーから得ることができる。この方法の別の実施の形態では、被験体は、ＫＳＨＶ関連カポジ肉腫、原発性滲出性リンパ腫、多中心性キャッスルマン病、ＫＳＨＶ関連炎症性サイトカイン症候群、又はＫＳＨＶ免疫再構築炎症反応症候群を発症するリスクがある。
【００４７】
またＫＳＨＶの受動移入方法の別の実施の形態では、該方法は、高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを被験体に投与する工程の前に行われる以下の工程：（ｉ）１以上のヒトドナー被験体に対して、高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを生成するのに十分な量で、ＫＳＨＶ  ｇＨポリペプチドとＫＳＨＶ  ｇＬポリペプチドとを含むＫＳＨＶ  ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、ＫＳＨＶ  ｇＢポリペプチド、ＫＳＨＶ  ｇＭポリペプチド、ＫＳＨＶ  ｇＮポリペプチド、ＫＳＨＶ  ＯＲＦ６８ポリペプチド、及びＫＳＨＶ  Ｋ８．１ポリペプチドの少なくとも２つを投与する工程、及び／又は（ｉｉ）上記１以上のヒトドナー被験体から高力価抗ＫＳＨＶ免疫グロブリンを収集する工程の１つ以上を含む。或る特定の実施の形態では、ＫＳＨＶ  ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【００４８】
引用することにより本明細書の一部をなす添付の図面は、幾つかの実施形態を解説し、本明細書と共に本明細書に開示される構築物及び方法の幾つかの原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】多量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、ｇＨ／ｇＬ及びｇＢの非限定的な実施形態を発現するための組み換え構築物の概要を示す図である。図１は、配列番号３として「（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ１）３」、配列番号４９として「Ｈｉｓ６」、及び配列番号５５として「ＲＲＲＲＲＤ」を開示する。
【図２Ａ】単量体及び多量体のＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬポリペプチドのウェスタンブロット画像を示す図である。
【図２Ｂ】単量体及び多量体のＥＢＶ  ｇＢポリペプチドのウェスタンブロット画像を示す図である。
【図２Ｃ】単量体及び多量体のＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドのウェスタンブロット画像を示す図である。
【図３】ｇｐ３５０単量体（左パネル、白丸）、ｇｐ３５０四量体（左パネル、黒丸）、ｇＢ三量体（右パネル）、ｇＨ／ｇＬ単量体（中パネル、白丸）、及びｇＨ／ｇＬ三量体（中パネル、黒丸）により免疫化したウサギに由来する血清のＥＢＶ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和分析を示す図である。
【図４Ａ】Ｒａｊｉ細胞における、アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮアジュバント中の単量体若しくは四量体のＥＢＶ  ｇｐ３５０、単量体若しくは三量体のＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ＥＢＶ  ｇＢにより免疫化したウサギに由来する血清の中和力価を示す図である。
【図４Ｂ】ナイーブ末梢血ヒトＢ細胞における、アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮアジュバント中の単量体若しくは四量体のＥＢＶ  ｇｐ３５０、単量体若しくは三量体のＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ＥＢＶ  ｇＢにより免疫化したウサギに由来する血清の中和力価を示す図である。
【図５】三量体ＥＢＶ  ｇＢ若しくは単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ＥＢＶ  ｇＢと単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬとの相乗的組み合わせにより免疫化したウサギに由来する免疫血清のＥＢＶ中和活性を示す図である。
【図６Ａ】四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＢ、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ又は相乗作用を示すそれらの組み合わせにより免疫化したウサギ（ｎ＝５）に由来するプール免疫血清のＥＢＶ中和活性を示す図である。
【図６Ｂ】単量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＢ、単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ又はそれら相乗的組み合わせにより免疫化したウサギ（ｎ＝５）に由来するプール免疫血清のＥＢＶ中和活性を示す図である。
【図７Ａ】ヒト化マウスのＥＢＶ感染に先立つ免疫ウサギ血清の受動移入は、ＥＢＶ  ＤＮＡ量を減少させ、負荷された（challenged）マウスの生存率を高めたことを示す図である。図７Ａは、四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ、三量体ＥＢＶ  ｇＢ又はアジュバント単独（対照）により免疫化したウサギに由来する血清の受動移入後に高用量の生ＥＢＶの感染に曝露されたマウスの生存率を示す図である。
【図７Ｂ】ヒト化マウスのＥＢＶ感染に先立つ免疫ウサギ血清の受動移入は、ＥＢＶ  ＤＮＡ量を減少させ、負荷されたマウスの生存率を高めたことを示す図である。四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０又は三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清が、ヒト化マウス３匹の複数の臓器でＥＢＶ  ＤＮＡのコピー数（幾何平均）を減少させたことを示す図である。
【図７Ｃ】ヒト化マウスのＥＢＶ感染に先立つ免疫ウサギ血清の受動移入は、ＥＢＶ  ＤＮＡ量を減少させ、負荷されたマウスの生存率を高めたことを示す図である。四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ又は三量体ＥＢＶ  ｇＢにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清が、対照と比較して、末梢血（マウス３匹の幾何平均）においてＥＢＶウイルス量を著しく減少させたことを示す図である。
【図８】野生型ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチド及び三量体ＨＣＭＶ  ｇＢポリペプチドの非限定的な実施形態を発現するための組み換え構築物の概要を示す。図８は、配列番号３として「ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ」、配列番号４９として「Ｈｉｓ６」及び配列番号５３として「ＲＴＫＲＳ」を開示する。
【図９Ａ】単量体ＨＣＭＶ  ｇＢのウェスタンブロットの画像を示す図である。
【図９Ｂ】三量体ＨＣＭＶ  ｇＢのウェスタンブロットの画像を示す図である。
【図９Ｃ】単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬのウェスタンブロットの画像を示す図である。
【図９Ｄ】三量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬのウェスタンブロットの画像を示す図である。
【図９Ｅ】単量体ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８／１３０／１３１Ａのウェスタンブロットの画像を示す図である。
【図１０】組み換え三量体ＵＬ１２８／１３０／１３１Ａを発現するための非限定的なクローニング戦略の概略を示す図である。図１０は、配列番号３として「（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３」、配列番号４９として「Ｈｉｓ６」を開示する。
【図１１】単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ＋単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ＋単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬの複合体によるウサギの免疫化後の抗ｇＨ／ｇＬ抗体（左パネル）及び抗ｇＢ抗体（右パネル）の血清ＩｇＧ力価を示す図である。
【図１２Ａ】単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ、ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）、三量体ｇＢ、又はそれらの或る特定の相乗的組み合わせにより免疫化したウサギに由来する非熱不活性化血清の、ＡＲＰＥ１９上皮細胞株を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和力価（ＩＣ５０）を示す図である。
【図１２Ｂ】単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ＨＣＭＶ  ｇＢと単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬとの相乗的組み合わせにより免疫化したウサギに由来する熱不活性化血清の、ＭＲＣ−５線維芽細胞株を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和力価（ＩＣ５０）を示す図である。
【図１３】五量体複合体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａの発現のための非限定的なＤＮＡ構築物の概要図を示す図である。
【図１４】ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体の発現のための非限定的なＤＮＡ構築物の概要図を示す図である。
【図１５】単量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を示す図である。
【図１６】三量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を示す図である。
【図１７】単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を示す図である。
【図１８】単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ及び単量体ＨＭＣＶ  ｇＨ／ｇＬにより免疫化したウサギに由来するｉｎ  ｖｉｔｒｏで組み合わされた免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を示す図である。
【図１９】三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ及び単量体ＨＭＣＶ  ｇＨ／ｇＬにより免疫化したウサギに由来するｉｎ  ｖｉｔｒｏで組み合わされた免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を示す図である。
【図２０】個々のＨＣＭＶタンパク質（単量体ｇＢ、三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬ）により免疫化したウサギに由来するプール免疫血清、又はＨＣＭＶタンパク質（単量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬ）により免疫化したウサギに由来する血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏの組み合わせのｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和活性を比較し、ＨＣＭＶタンパク質の組み合わせが相乗作用を呈することを示す図である。
【図２１Ａ】異なる量のＨＣＭＶ三量体ｇＢ又はＨＣＭＶ単量体ｇＢにより免疫化したマウスに由来するｇＢ特異的ＩｇＧのマウス血清力価を示す図である。
【図２１Ｂ】様々な量（１μｇ、５μｇ及び２５μｇ）の単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、若しくは三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、又は対照として１０ｍｇ／ｍＬのＣｙｔｏＧａｍ（商標）ＩＶＩｇ（米国ペンシルベニア州キング・オブ・プルシアのCSL Behring）により免疫化したマウスに由来する熱不活性化血清の中和力価（ＩＣ５０）を示す図である。
【図２１Ｃ】様々な量（１μｇ、５μｇ及び２５μｇ）の単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、若しくは三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、又は対照として１０ｍｇ／ｍＬのＣｙｔｏＧａｍ（商標）ＩＶＩｇ（米国ペンシルベニア州キング・オブ・プルシアのCSL Behring）により免疫化したマウスに由来する非熱不活性化血清の中和力価（ＩＣ５０）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
以下の発明を実施するための形態は読者に本発明の幾つかの実施形態、特徴及び態様の詳細のより十分な理解をもたらすために提示され、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではないことを理解されたい。
【００５１】
定義
本発明がより容易に理解され得るように、幾つかの用語を初めに定義する。付加的な定義は発明を実施するための形態の全体にわたって説明する。
【００５２】
本開示で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン又はその抗原結合断片を指す。該用語は、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多特異的、非特異的、ヒト化、ヒト、単鎖、キメラ、合成、組み換え、ハイブリッド、変異、グラフト化、及びｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成された抗体を含むが、これらに限定されない。抗体は、カッパー、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン及びミューの定常域遺伝子等の定常領域、又はそれらの部分を含んでもよい。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ及びＩｇＥを含む様々なアイソタイプの重鎖定常領域を使用することができる。例として、軽鎖定常領域はカッパー又はラムダであってもよい。
【００５３】
「抗原結合ドメイン」及び「抗原結合断片」という用語は、抗体と抗原との間の特異的結合を担うアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。幾つかの抗原については、抗原結合ドメイン又は抗原結合断片は、その抗原の一部に結合し得るにすぎない。抗体によって特異的に認識され結合される抗原の部分は、「エピトープ」又は「抗原決定基」と呼ばれる。抗原結合ドメイン及び抗原結合断片は、Ｆａｂ（Fragment antigen-binding）、Ｆ（ａｂ’）２断片、つまりジスルフィド架橋によってヒンジ領域で結合された２つのＦａｂ断片を有する二価の断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）（例えば、Bird et al. (1988)Science 242:423-426及びHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照のこと）、２つのＶＨドメインとＣＨ１ドメインとを有するＦｄ断片、ｄＡｂ（Ward et al. (1989)Nature 341:544-546）並びに抗原結合機能を保った他の抗体断片を含む。上記Ｆａｂ断片は、定常領域間でジスルフィド結合によって共有結合されたＶＨ−ＣＨ１ドメインとＶＬ−ＣＬドメインとを有する。ＦＶ断片はより小さいものであり、共有結合されていないＶＨドメインとＶＬドメインとを有する。共有結合されていないドメインが解離される傾向を克服するために、ｓｃＦＶを構築することができる。ｓｃＦＶは、（１）ＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に結合する、又は（２）ＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端に結合するフレキシブルなポリペプチドを含む。１５−ｍｅｒの（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチド（配列番号３）をリンカーとして使用することができるが、他のリンカーが当該技術分野で知られている。これらの抗体断片は、当業者に知られた慣用の技法を使用して得られ、かつ該断片は、機能についてインタクトな抗体と同じように評価される。
【００５４】
本願で使用される「抗原」は、動物又はヒトの細胞又は組織で発現された場合に免疫応答を惹起することが可能なタンパク質若しくはその断片、又はタンパク質担体に連結されたポリサッカリドを意味する。タンパク質又はその断片は、グリコシル化されてもよく、又はグリコシル化されなくてもよい。
【００５５】
「細胞外ドメイン」という用語は、全長ポリペプチドの部分であって、細胞膜を越えて、内側に該ポリペプチドを持つ細胞が存在している媒体へと伸長する、部分の意味を指す。ポリペプチドは、一般的には、細胞内ドメイン、膜貫通ドメインを含むことが知られており、残りは細胞外ドメイン（「ＥＣＤ」）である。「細胞外ドメイン」すなわち「ＥＣＤ」という用語が本明細書で使用される場合、該用語は、野生型の形態では細胞膜を越えて伸長するポリペプチドのアミノ酸、又は抗体によって認識可能なその任意の部分を指す。したがって、細胞外ドメインは、ドメイン全体、又は組み換え発現及び抗原性組成物に含めることが可能な任意の数の残基を含み、これには、ポリペプチドの野生型細胞外ドメイン全体の７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％を占めるポリペプチドが含まれる。すなわち、ポリペプチドの細胞外ドメインのより効率的でロバストな発現を得る必要に応じて、ポリペプチドのカルボキシ末端若しくはアミノ末端のいずれか、又はそれらの両方にある外来ドメインを除去するため、細胞外ドメインは、当該技術分野で知られている方法によって短縮されてもよく、又は切断されてもよい。
【００５６】
所与のポリペプチドについて「全長」という用語は、アミノ酸配列中の最初のメチオニンをコードするＡＴＧ開始コドンから始まり、ＴＧＡ、ＴＡＧ若しくはＴＴＡの停止コドン、又は生体によって利用されるいずれかの停止コドンで終了する、コードＤＮＡ配列から天然に翻訳されたポリペプチドの形態を意味する。
【００５７】
「融合タンパク質」という用語は、第１のタンパク質をコードする第１の核酸配列と、第２のタンパク質をコードする少なくとも第２の核酸とを組み合わせることにより生成された核酸転写産物から翻訳されたタンパク質を指し、融合タンパク質は天然起源タンパク質ではない。核酸コンストラクトは、単一のポリペプチド鎖を作るために融合タンパク質につながれる２つ以上のタンパク質をコードする場合がある。２つ以上の核酸配列は、任意に、単一のプロモーターに制御可能に連結されるか、又は２つ以上の別々のプロモーターに制御可能に連結される。
【００５８】
「糖タンパク質」という用語は、１つ以上の糖部分又はオリゴ糖鎖がそれに共有結合により付着されたポリペプチドを意味する。糖部分は通常、糖タンパク質に対して、翻訳と同時に、又は翻訳後の修飾として付着される。
【００５９】
「単離された」という用語はポリペプチド又は核酸との関連で使用される場合、その自然環境を実質的に含まないため、自然に発生し得るポリペプチド又は核酸から区別可能であるポリペプチド又は核酸を指す。例えば、単離されたポリペプチド又は核酸は、細胞物質又は由来元である細胞若しくは組織起源からの他のポリペプチド若しくは核酸を実質的に含まない。この用語は、単離されたポリペプチド又は核酸が医薬組成物にとって十分な純度、又は少なくとも７０％（ｗ／ｗ）〜８０％（ｗ／ｗ）の純度、又は少なくとも８０％（ｗ／ｗ）〜９０％（ｗ／ｗ）の純度、又は少なくとも９０％（ｗ／ｗ）〜９５％（ｗ／ｗ）の純度、又は少なくとも９５％（ｗ／ｗ）、９６％（ｗ／ｗ）、９７％（ｗ／ｗ）、９８％（ｗ／ｗ）、９９％（ｗ／ｗ）若しくは１００％（ｗ／ｗ）の純度の調製物も指す。
【００６０】
「リーダー配列」という用語は、組み換えタンパク質が宿主細胞から分泌されるように誘導する組み換えタンパク質のＮ末端の短いペプチド配列を指す。
【００６１】
「ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質」という用語は、ヒトヘルペスウイルスのｇＢポリペプチド、ｇＨポリペプチド、ｇＬポリペプチド、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体、又はｇｐ３５０ポリペプチドを指す。
【００６２】
「ＨＨＶアクセサリータンパク質」という用語は、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＢＤＬＦ２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ及びｇｐＫ８．１を含むがこれらに限定されない、ウイルスの結合、融合及び宿主細胞侵入の媒介に関与するｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＨ／ｇＬ又はｇｐ３５０以外のヒトヘルペスウイルスポリペプチドを指す。
【００６３】
「免疫細胞」という用語は、抗原（例えば自己抗原）に対する免疫応答の調節に関与する造血系統の任意の細胞を意味する。典型的な実施形態では、免疫細胞は、白血球（white blood cell）等のロイコサイト（leukocyte）である。免疫細胞としては、好中球、好酸球、好塩基球、リンパ球及び／又は単球が挙げられる。リンパ球は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球を含む。また、免疫細胞は、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び／又は肥満細胞であってもよい。
【００６４】
「細胞内ドメイン」という用語は、宿主細胞の細胞質に存在するポリペプチドの部分を意味する。細胞内ドメインは、膜貫通ドメインではなく、かつ細胞外ドメインではないポリペプチドのその部分を含む。
【００６５】
「ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体」という用語は、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドとＨＨＶ  ｇＬポリペプチドとを含むポリペプチド又はポリペプチドの複合体を指す。例えば、ヘテロ二量体は、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドとＨＨＶ  ｇＬポリペプチドとの間で非共有結合的に会合される複合体であってもよい。代替的には、ヘテロ二量体は、ＨＨＶ  ｇＬタンパク質につながれたＨＨＶ  ｇＨタンパク質を含む組み換え融合タンパク質であってもよい。ＨＨＶ  ｇＨタンパク質は、ペプチドリンカーによりＨＨＶ  ｇＬタンパク質につながれてもよい。
【００６６】
本明細書で使用される「改変ｇＢポリペプチド」という用語は、特許文献２に記載されるように、ｇＢポリペプチドの細胞外ドメインのフーリン切断部位が、リンカー配列によって置き換えられているＨＨＶ  ｇＢポリペプチドを指す。
【００６７】
「制御可能に連結される」という用語は、プロモーター又は同様の調節エレメントが、発現可能なヌクレオチド配列又はコード領域の隣に、そのコーディング領域の転写がそのプロモーターによって制御され、調節されるように配置されることを意味する。
【００６８】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は本明細書で区別なく使用され、アミノ酸の重合体を指す。
【００６９】
「ペプチドリンカー」という用語は、２つのタンパク質又はタンパク質の断片を連結する短い非ネイティブペプチド配列を指す。
【００７０】
「組み換え」という用語は核酸との関連で使用される場合、本来結合していないヌクレオチド配列を有する核酸を意味し、そうでなければ分離された配列の２つのセグメントを人工的に合わせることによって作製され得る。この人工的な結合は、化学合成、又はより一般的には、核酸の単離されたセグメントの人工的な操作によって、例えば、遺伝子工学の技法によって完成されることが多い。組み換え核酸は、好適な宿主細胞を形質転換又は形質移入するために使用することができる増幅した又は会合した核酸を含む核酸ベクターを含む。組み換え核酸を含む宿主細胞は、「組み換え宿主細胞」と呼ばれる。遺伝子は、その後、組み換え宿主細胞において発現されて「組み換えポリペプチド」を産生する。また、組み換え核酸は、非コーディング機能（例えば、プロモーター、複製起点、リボソーム結合部位等）の役目をする場合がある。
【００７１】
「膜貫通ドメイン」（又は「ＴＭ」）という用語は、宿主細胞がその中に存在する、外部媒体から細胞質を分離する疎水性リン脂質二重層である細胞膜を天然に完全に通過するポリペプチドの部分を意味する。膜貫通ドメインは、典型的には、ポリペプチドに応じて約２０アミノ酸長〜約２５アミノ酸長である。膜貫通型のものは、典型的には親油性であるため、発現、精製及び可溶化させることが難しいことから、典型的には本明細書に開示される抗原性組成物に含まれていない。
【００７２】
「薬学的に許容可能な担体」又は「薬学的に許容可能な賦形剤」という用語は、薬学的投与に適合する溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤並びに吸収遅延剤等を意味する。薬学的に活性な物質へのかかる媒体及び作用物質の使用は当該技術分野で既知である。或る特定の実施形態では、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤は天然由来ではない。
【００７３】
「予防する、予防すること」という用語は、疾患又は疾患の状態に関して使用される場合、疾患又は障害の病理学的な特徴又は症状の発症を止める、或いは遅らせる組成物の予防的投与を意味する。
【００７４】
「治療する、治療すること」という用語は、疾患又は疾患の状態に関して使用される場合、疾患、障害、又は疾患の症状若しくは疾患と関連する状態を回復させる、改善する又は治療することを意味する、或いはウイルスの複製を停止させる等のその疾患の生化学的基礎を分子レベルで完全に又は部分的に停止させることを意味し得る。
【００７５】
活性物質の量に関して使用される場合、「治療有効量」という用語は、疾患、障害、又は疾患若しくは病態の症状の改善又は治療（remediation）をもたらす量を意味する。
【００７６】
「受動移入」又は「受動免疫療法」又は「受動免疫」という用語は、抗原に曝露された被験体から抗体及び／又は免疫細胞を得て、それらの抗体及び／又は免疫細胞を第２の被験体に投与することによって、該第２の被験体に抗原による負荷に対する免疫防御を備えさせることを意味する。抗体又は免疫細胞を、血液、血漿、精製された抗体又は免疫細胞、血清等の形態で移入させることができる。第２の被験体は、免疫低下状態であってもよく及び／又はナイーブ（抗原に曝露されたことがない）であってもよい（Keller et al., Clin. Microbiol. Rev., 13(4):602-614, 2000を参照されたい）。
【００７７】
ヒトヘルペスウイルス。ヘルペスウイルス科は、生物学的特性及びＤＮＡゲノム類似性に基づいて、アルファヘルペスウイルス、ベータヘルペスウイルス及びガンマヘルペスの３つの亜科へと細分される（Davison et al., Antiviral Res., 56:1-11, 2002、MacDonald et al., Am. J. Cardiol., 64:359-362, 1989）（表１； Willis et al., Br. Med. Bull., 62(1):125-138, 2002を参照されたい）。アルファヘルペスウイルスとしては、ＨＨＶ−１、ＨＨＶ−２、ＶＺＶ及び仮性狂犬病ウイルス（ＰＲＶ：pseudorabies virus）が挙げられ、神経向性である、すなわち、それらのウイルスは宿主の神経系に主に感染する又はそれを攻撃する傾向がある。アルファヘルペスウイルス科は最も広い宿主域を有し、細胞培養で急速に広がる。潜在アルファヘルペスウイルス感染は、通常感覚ニューロンにおいて確立され、溶解感染が表皮細胞で起こる（Roizman B, Sears AE. Herpes simplex viruses and their replication. In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM, eds. Fields virology. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1996:2231-95）。
【００７８】
【表１】
2020515522.tif 000003
【００７９】
ベータヘルペスウイルス亜科は、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ、ＨＨＶ−８）、ＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７を含む全てのサイトメガロウイルスからなり、通常、ロゼオロウイルスと称される。ベータヘルペスウイルス科は、限定的な宿主域及び長い感染サイクルを有する。ベータヘルペスウイルスのウイルス潜伏は、分泌腺、腎臓及び他の組織において維持される（Hendrix et al., Expert Rev. Anti Infect. Ther., 5:427-439, 2007）。
【００８０】
ガンマヘルペスウイルス亜科は、ＥＢＶ、ラジノウイルス及びＨＨＶ−８（ＫＳＨＶ）を含むリンホクリプトウイルスに分けられる。ガンマヘルペスウイルスは非常に狭い宿主域を有し、ウイルス複製は、典型的にはリンパ芽球様細胞で起こるが、上皮細胞及び線維芽細胞にも溶解感染し得る。ガンマヘルペスウイルス感染の潜伏形態は、Ｂリンパ球及びＴリンパ球で主に観察される（Ackerman, Vet. Microbiol., 113:211-222, 2006）。
【００８１】
ガンマヘルペスウイルス：エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ、ＨＨＶ−４）、及びカポジ肉腫ウイルス関連ヘルペス（ＫＳＨＶ、ＨＨＶ−８）
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ、ＨＨＶ−４）。エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）は、最初に発見されたヒト癌ウイルスであり、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）及び未分化上咽頭癌（ＮＰＣ）の病因と強く結び付けられる。両方の例において、疾患の発症及び重症度はＥＢＶ血症のレベルと正に相関し、疾患の永続化において溶解ＥＢＶ再活性化の役割を強く示唆する。ヒトヘルペスウイルス４（ＨＨＶ−４）としても知られるエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）は、バーキットリンパ腫、上咽頭癌、伝染性単核球症、ホジキン病のサブセット、及び免疫抑制された患者におけるリンパ増殖性症候群等の病理学的存在に関わり、世界的な罹患率及び死亡率の主な原因である（Cohen JI, Curr. Opin. Immunol., 1999 Aug; 11(4):365-70、Thorley-Lawson DA, J., Allergy Clin. Immunol., 2005 Aug; 116(2):251-61; quiz 62、及びVetsika EK, Callan M., Expert Rev. Mol. Med., 2004 Nov 5;6(23):1-16）。ＥＢＶは二本鎖の直鎖ＤＮＡゲノムを持つ。ＥＢＶゲノムのヌクレオチド配列、及びそれによってコードされるウイルスタンパク質のアミノ酸配列が知られており、ＮＣＢＩ参照番号ＮＣ＿００９３３４、Ｖｅｒｓｉｏｎ  ＮＣ＿００９３３４．１、ＧＩ：１３９４２４４７０に示され、それらの配列が参照することにより本明細書の一部をなす。
【００８２】
ＥＢＶは、ガンマヘルペスウイルス亜科のメンバーであり、リンホクリプトウイルスに更に分けられ、ＫＳＨＶ（ＨＨＶ−８）もそのメンバーである。これらのファミリーのメンバーに対する複製は、典型的にはリンパ芽球様細胞に生じるが、それらは上皮細胞（例えば上咽頭上皮細胞）及び線維芽細胞にも感染し得る。潜伏感染は、Ｂリンパ球及びＴリンパ球で主に観察される（Ackerman, Vet. Microbiol., 113:211-222, 2006）。
【００８３】
移植後リンパ増殖性疾患（ＰＬＴＤ）。固形臓器又は幹細胞の移植を受ける患者は、非ホジキンリンパ腫へと発展し得る制御されていないＥＢＶ駆動型のＢ細胞増殖を特徴とする、移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがある（LaCasce, Oncologist, 11:674-80, 2006）。ＰＴＬＤは、血清反応陽性のレシピエントにおけるＥＢＶの再活性化、又はドナー同種移植片に由来する一次ＥＢＶ感染から生じ得て、更に大きなリスクをもたらす（Dharnidharka et al., Am. J. Transplant, 12:976-83, 2012）。同様の現象が、ＡＩＤＳの患者にも起こる。
【００８４】
ほとんどのＰＴＬＤの症例がＥＢＶ駆動型の過剰なＢ細胞（少数（１０％〜１５％）の症例ではＮＫ細胞／Ｔ細胞型である）の増殖を含む（Petrara et al., Cancer Lett., 369(1):37-44, 2015、及びStarzl et al., Lancet, 1:583-7, 1984）。ＰＴＬＤの頻度は、移植の種類、レシピエントの年齢、免疫抑制治療の持続期間及び種類に応じて１％〜２０％の範囲である（Ibrahim et al., Adv Hematol., 2012:230173, 2012、及びSmets et al., Recent Results Cancer Res., 193:173-90, 2014）。ＥＢＶ血清反応陰性である、より若い患者は、事前の免疫が無いため、造血幹細胞又は固形臓器の移植後にＰＴＬＤを発症するリスクが最も高い。原発性免疫不全症候群の患者もまた、ＥＢＶ駆動型Ｂ細胞リンパ増殖及びリンパ腫を発症するリスクが高い（Rickinson et al., Trends Immunol., 35:159-69, 2014）。ＷＨＯは、重症度の昇順に、ＰＴＬＤの３つの主な組織学的種類、すなわち初期病変、多形性（Ｐ−ＰＴＬＤ）及び単形性（Ｍ−ＰＴＬＤ）を定義する（Harris et al., Semin. Diagn. Pathol., 14:8-14, 1997）。Ｍ−ＰＴＬＤは典型的には非ホジキンリンパ腫として顕在化する。
【００８５】
ＰＴＬＤの初期の管理は、免疫抑制の減少である。追加の治療選択肢は、Ｂ細胞枯渇抗ＣＤ２０  ｍＡｂ治療、抗ウイルス療法、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）及びインターフェロン（ＩＦＮ）−γを含む（LaCasce AS, Oncologist, 11:674-80, 2006）。特にＩＶＩｇはＰＴＬＤを治療するために他の治療と組み合わせて経験的に使用されてきたが、その可能性のある臨床的な利益を評価する研究はなかった。
【００８６】
上咽頭癌とＥＢＶ。上咽頭の扁平上皮癌（ＮＰＣ）の非角質化バリアントは、東アジア及び南東アジア、並びに北アフリカ及び東アフリカの一部において地域流行性であり、２０１２年には世界で８６５００症例の癌を占めた（Chua et al., Lancet, 387(10022):1012-1024, 2016）。ＮＰＣは、頸部リンパ節への頻繁な転移を伴って、鼻出血、片側性鼻閉、聴覚の愁訴（auditory complaints）及び脳神経麻痺として臨床に顕在化する。放射線療法は、ＮＰＣに対する一次治療であり、追加の化学療法がより進行した症例で利用される（同上）。５年生存は、ステージに応じて７０％〜９８％であるが、ＮＰＣは再発しやすい。
【００８７】
未分化のＮＰＣは、例外なくＥＢＶと関連し、腫瘍の発症及び進行に病原性の役割を果たすと考えられる（Tsang et al., Virol. Sin., 30:107-21, 2015）。前悪性の上咽頭上皮細胞における潜伏ＥＢＶ感染の確立は、悪性転換を更に駆動するように見える。ウイルスカプシド抗原及び初期抗原等のＥＢＶ溶解抗原に特異的な血清ＩｇＡレベルの上昇は、ＮＰＣへの進行と相関する（Ji et al., Br. J. Cancer, 96:623-30, 2007）。血漿ＥＢＶのＤＮＡレベルは、ＮＰＣ腫瘍負荷と直接相関する（To et al., Clin. Cancer Res., 9:3254-9, 2003）。したがって、潜在ＥＢＶの再活性化はＮＰＣの形成及び進行の重要な特徴であり、抗体に基づく免疫療法に対する可能性のある役割を示唆する。健康な血清反応陽性個体の血液及び唾液から複数株のＥＢＶが単離され得るが、典型的にはＥＢＶの単一の株のみがＮＰＣ細胞から単離され、その病原性の役割と一致する（Tsang et al., Virol. Sin., 30:107-21, 2015）。ＥＢＮＡ２、３Ａ、３Ｂ及び３Ｃの配列における株のバリエーションが記載されているが、エンベロープタンパク質ｇｐ３５０、ｇＨ／ｇＬ及びｇＢは高度に保存されており、これらの後者のタンパク質を交差株の防御に対して理想的なワクチン候補としている（Sample et al., J. Virol., 64:4084-92, 1990、及びRowe et al., J. Virol., 63:1031-9, 1989）。
【００８８】
循環ＥＢＶのＤＮＡコピー数は、ＥＢＶと関連する悪性腫瘍の切迫した発症及び臨床上の重症度と正に相関する。ＥＢＶ  ｑＰＣＲアッセイは、通常、移植後に使用される（Meerbach et al., J. Med. Virol., 80:441-54, 2008、Tsai et al., Am. J. Transplant, 8:1016-24, 2008、Wagner et al., Transplantation, 74:656-64, 2002、及びvan Esser et al., Blood 98:972-8, 2001）。血液中のＥＢＶ  ＤＮＡの上昇は、ＰＴＬＤに対するリスクの増加と関連する一方で、減少は治療成功と相関する（Baldanti et al., J. Clin. Microbiol., 38:613-9, 2000、Hakim et al., J. Clin. Microbiol., 45:2151-5, 2007、Wagner et al., Transplantation, 72:1012-9, 2001、及びClave et al., Transplantation, 77:76-84, 2004）。また、循環ＥＢＶ  ＤＮＡも、ホジキンリンパ腫（Kanakry et al., Blood, 121:3547-53, 2013）及びＥＢＶとも病原的に（pathogenically）関連付けられるリンパ節外ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫（Wang et al., Oncotarget., 6(30):30317-30326, 2015）と並んで、ＮＰＣにおける有害な生存転帰と正に相関する（Jin et al., Eur. J. Cancer, 48:882-8, 2012、Hsu et al., Head Neck, 34:1064-70, 2012、及びHsu et al., Oral Oncol., 49:620-5, 2013）。
【００８９】
発展途上世界では、ＥＢＶの血清転換は典型的には幼児期に起こるが、先進国では青年期に罹患することがより多い傾向にある。伝染性単核球症は、典型的には、この後者の群にのみ生じる（Vetsika et al., Expert Rev. Mol. Med., 2004 Nov 5; 6(23):1-16）。潜伏ＥＢＶ及びＥＢＶ伝播に対する主なヒトの感染源は休止しているメモリーＢリンパ球である（Babcock et al., Immunity, 1998 Sep; 9(3):395-404）。ＥＢＶは、感染力及びＢ細胞腫瘍性形質転換にとって重要な事象である（Thorley-Lawson DA, J. Allergy Clin. Immunol., 2005 Aug; 116(2):251-61; quiz 62）、Ｂ細胞へのウイルス侵入のためのｇｐ３５０−ＣＤ２１結合事象に依存する（Tanner et al., Cell, 1987 Jul 17; 50(2):203-13、及びTanner et al., J. Virology, 1988; 62(12):4452-64）。ｇｐ３５０は主なＥＢＶ外膜糖タンパク質であり、一方、２型補体受容体（ＣＲ２）としても知られるＣＤ２１は、ｉＣ３ｂ補体タンパク質に結合するＢ細胞表面の受容体である。活動性ＥＢＶ感染を有する患者に由来する血清は、Ｂ細胞へのＥＢＶの侵入を阻止する抗体（「中和」抗体）を含有する。ｇｐ３５０によるこれらの血清の吸着は、この中和活性の大半を排除し（Thorley-Lawson et al., J. Virology, 1982 Aug; 43(2):730-6）、ｇｐ３５０が、防御的液性免疫応答が向けられる主要なＥＢＶ抗原としての役割を果たすことを示す。
【００９０】
多くの研究は、アジュバント中のサブユニットｇｐ３５０ワクチンによる非ヒト霊長類の免疫化が実験的なＥＢＶ誘導性リンパ腫又はＥＢＶ複製を防御することを実証した。したがって、リポソーム、ＩＳＣＯＭ又はムラミルジペプチドと共にコットントップ・マーモセット（ＣＴＭ：cottontop marmosets）に注射された精製されたネイティブｇｐ３５０は、ＥＢＶ誘導性リンパ腫を防御した（Morgan et al., J. Med. Virol., 1984; 13(3):281-92、及びMorgan et al., J. Med. Virol., 1989 Sep; 29(1):74-8）。アラム又はムラミルジペプチド中の組み換えｇｐ３５０も同様に防御的である（Finerty et al., J. Gen. Virol., 1992 Feb; 73 (Pt 2):449-53、及びFinerty et al., Vaccine, 1994 Oct; 12(13):1180-4）。コモン・マーモセット（common marmosets）も、アラム中の組み換えｇｐ３５０による免疫化に続くＥＢＶ負荷後のウイルス複製の減少を示した（Cox et al., J. Med. Virol., 1998 Aug; 55(4):255-61）。アデノウイルスベクター又はワクシニアウイルスベクターによって発現されたｇｐ３５０を使用する非ヒト霊長類研究は、同様に、ＣＴＭ又はコモン・マーモセットにおける実験的なＥＢＶ誘導性リンパ腫又はＥＢＶ複製に対する防御を示した（Mackett et al., J. Med. Virol., 1996 Nov; 50(3):263-71、Ragot et al., J. Gen. Virol., 1993 Mar; 74 (Pt 3):501-7、及びMorgan et al., J. Med. Virol., 1988 Jun; 25(2):189-95）。
【００９１】
また、ヒトにおけるパイロット研究は、ＥＢＶに対する宿主保護におけるｇｐ３５０ワクチン接種に対する可能性のある役割を示唆した。Gu et al.（Dev. Biol. Stand., 1995; 84:171-7）による研究では、ワクシニアウイルス（ＶＶ）によって発現された単回用量のｇｐ３５０／２２０が、ＥＢＶ血清反応陰性及びＶＶ血清反応陰性であった１歳児〜３歳児に対するスカリフィケーション（scarification）により与えられた。これらの子供は、ＥＢＶ（１：４０〜１：１６０）に対する中和抗体を生じた。１０名中１０名のワクチン接種をしていない対照が、１６ヶ月の追跡調査で感染したが、９名中わずか３名のワクチン接種を受けた子供のみがこの時期に感染した。より最近では、健康なＥＢＶ血清反応陰性成人をアラム＋／−モノホスホリルリピドＡ中の組み換え単量体ｇｐ３５０タンパク質により免疫化した第Ｉ／ＩＩ相研究が行われた（非特許文献６、及び非特許文献７）。３回の投薬の後、被験体の最大８２％が検出可能な中和血清抗ｇｐ３５０抗体力価を有した。ワクチンは、無症候性ＥＢＶ感染の予防ではなく伝染性単核球症の発症の予防において７８．０％の有効性を実証した。最後に慢性腎疾患を有する子供に与えられたアラム中の組み換え単量体ｇｐ３５０タンパク質の追加の第Ｉ相試験は、少数の被験体のみが検出可能な中和血清抗ｇｐ３５０力価を示すことを実証した（非特許文献８）。
【００９２】
現在、ＥＢＶ関連疾患に対する有効な免疫療法も、臨床的に許可された予防用ＥＢＶワクチンも存在しない。ＥＢＶ  ｇｐ３５０、ｇＨ／ｇＬ複合体及びｇＢは、ＥＢＶに対する可能性のあるワクチン標的抗原となる３つのエンベロープタンパク質である。ＥＢＶ  ｇｐ３５０は、そのＣＤ２１への結合によりＢ細胞へのＥＢＶの付着を媒介する。ＥＢＶのｇＨ／ｇＬ及びｇＢは、Ｂ細胞と上皮細胞の両方へのＥＢＶの融合及び侵入の媒介に関与する。
【００９３】
ＥＢＶ  ｇｐ３５０／ｇｐ２２０。ＥＢＶ糖タンパク質ｇｐ３５０及び関連するスプライスバリアントｇｐ２２０は、Ｂ細胞上のＣＲ２への高親和性によりＥＢＶの付着を担う。ＥＢＶ結合を遮断するｇｐ３５０又はｇｐ２２０に対する抗体は、Ｂ細胞感染を中和する。ｇｐ３５０及びｇｐ２２０はそれぞれ、高度にグリコシル化された一回膜貫通タンパク質である。選択的スプライシングの結果、ウイルス糖タンパク質は、２つの形態、すなわちおよそ３５０ｋＤａ及び２２０ｋＤａの質量を伴って出現する。２００ｋＤａスプライス形態は、全長ｇｐ３５０の５００残基〜７５７残基を欠く。ｇｐ３５０及びｇｐ２２０はいずれも、アミノ末端にＣＲ２結合ドメインを保持する。ｇｐ３５０の切断型又はｇｐ３５０のアミノ酸１〜４７０を有するｇｐ２２０は、ＣＲ２を結合する能力を保持し、ＣＲ２へのＥＢＶの結合を阻害し得て、本明細書に記載される組成物において全長のｇｐ３５０若しくはｇｐ２００、又はｇｐ３５０の細胞外ドメイン形態に置き換えられ得る（Sarrias et al., J. Immunol., 2001 Aug 1;167(3):1490-9）。さらに、ｇｐ３５０配列の部分、及びｇｐ３５０配列のアミノ酸２１〜２６又はアミノ酸３７２〜３７８のｇｐ２２０のタンパク質は、ＣＲ２結合に関連している（Tanner et al., Cell, 203-213 (1987)、及びNemerow et al., Cell, 61:1416-20, 1987）。したがって、ｇｐ３５０タンパク質又はｇｐ３５０抗原（又はｇｐ２２０のタンパク質又は抗原）という用語は、全長のｇｐ３５０又はｇｐ２２０のタンパク質だけでなく、ＣＲ２を結合する能力を保持するその断片又は改変型も指す。
【００９４】
アクセッション番号Ｍ１０５９３、Ｖｅｒｓｉｏｎ  Ｍ１０５９３．１、ＧＩ  ３３０３６０によりＧｅｎＢａｎｋに公開されるｇｐ３５０のアミノ酸及び核酸の配列は、参照することにより本明細書の一部をなす。ｇｐ３５０のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１）：
MEAALLVCQY TIQSLIHLTG EDPGFFNVEI PEFPFYPTCN VCTADVNVTI 50 
NFDVGGKKHQ LDLDFGQLTP HTKAVYQPRG AFGGSENATN LFLLELLGAG 100
ELALTMRSKK LPINVTTGEE QQVSLESVDV YFQDVFGTMW CHHAEMQNPV 150
YLIPETVPYI KWDNCNSTNI TAVVRAQGLD VTLPLSLPTS AQDSNFSVKT 200
EMLGNEIDIE CIMEDGEISQ VLPGDNKFNI TCSGYESHVP SGGILTSTSP 250
VATPIPGTGY AYSLRLTPRP VSRFLGNNSI LYVFYSGNGP KASGGDYCIQ 300
SNIVFSDEIP ASQDMPTNTT DITYVGDNAT YSVPMVTSED ANSPNVTVTA 350
FWAWPNNTET DFKCKWTLTS GTPSGCENIS GAFASNRTFD ITVSGLGTAP 400
KTLIITRTAT NATTTTHKVI FSKAPESTTT SPTLNTTGFA DPNTTTGLPS 450  
STHVPTNLTA PASTGPTVST ADVTSPTPAG TTSGASPVTP SPSPWDNGTE 500
SKAPDMTSST SPVTTPTPNA TSPTPAVTTP TPNATSPTPA VTTPTPNATS 550
PTLGKTSPTS AVTTPTPNAT SPTLGKTSPT SAVTTPTPNA TSPTLGKTSP 600
TSAVTTPTPN ATGPTVGETS PQANATNHTL GGTSPTPVVT SQPKNATSAV 650
TTGQHNITSS STSSMSLRPS SNPETLSPST SDNSTSHMPL LTSAHPTGGE 700
NITQVTPASI STHHVSTSSP EPRPGTTSQA SGPGNSSTST KPGEVNVTKG 750
TPPQNATSPQ APSGQKTAVP TVTSTGGKAN STTGGKHTTG HGARTSTEPT 800
TDYGGDSTTP RPRYNATTYL PPSTSSKLRP RWTFTSPPVT TAQATVPVPP 850
TSQPRFSNLS MLVLQWASLA VLTLLLLLVM ADCAFRRNLS TSHTYTTPPY 900
DDAETYV                                               907
【００９５】
アクセッション番号Ｍ１０５９３、Ｖｅｒｓｉｏｎ  Ｍ１０５９３．１、ＧＩ  ３３０３６０によりＧｅｎＢａｎｋに公開され、参照することにより本明細書の一部をなす、ｇｐ２２０アミノ酸の配列は、以下の通りである（配列番号２）：
MEAALLVCQY TIQSLIHLTG EDPGFFNVEI PEFPFYPTCN VCTADVNVTI 50
NFDVGGKKHQ LDLDFGQLTP HTKAVYQPRG AFGGSENATN LFLLELLGAG 100
ELALTMRSKK LPINVTTGEE QQVSLESVDV YFQDVFGTMW CHHAEMQNPV 150
YLIPETVPYI KWDNCNSTNI TAVVRAQGLD VTLPLSLPTS AQDSNFSVKT 200
EMLGNEIDIE CIMEDGEISQ VLPGDNKFNI TCSGYESHVP SGGILTSTSP 250
VATPIPGTGY AYSLRLTPRP VSRFLGNNSI LYVFYSGNGP KASGGDYCIQ 300
SNIVFSDEIP ASQDMPTNTT DITYVGDNAT YSVPMVTSED ANSPNVTVTA 350
FWAWPNNTET DFKCKWTLTS GTPSGCENIS GAFASNRTFD ITVSGLGTAP 400
KTLIITRTAT NATTTTHKVI FSKAPESTTT SPTLNTTGFA DPNTTTGLPS 450
STHVPTNLTA PASTGPTVST ADVTSPTPAG TTSGASPVTP SPSPWDNGTE 500
STPPQNATSP QAPSGQKTAV PTVTSTGGKA NSTTGGKHTT GHGARTSTEP 550
TTDYGGDSTT PRPRYNATTY LPPSTSSKLR PRWTFTSPPV TTAQATVPVP 600
PTSQPRFSNL SMLVLQWASL AVLTLLLLLV MADCAFRRNL STSHTYTTPP 650
YDDAETYV                                             658
【００９６】
ＥＢＶのｇＨ、ｇＬ、ｇＢ及びｇｐ４２。Ｂ細胞とのウイルス融合に対する最小要件としては、ＥＢＶ糖タンパク質であるｇＨ、ｇＬ、ｇＢ及びｇｐ４２が挙げられる。Ｂ細胞の感染に関して、ｇｐ４２は、宿主細胞ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合し、ウイルス細胞膜融合を起こす。一方、上皮細胞の感染については、ｇｐ４２は必要ではない。むしろ、ＥＢＶのｇＨ、ｇＬ及びｇＢのタンパク質が上皮細胞とのウイルス融合に十分である。ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬは非共有結合的に会合した複合体として或る特定の環境に存在する。
【００９７】
ＥＢＶ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４）：
MQLLCVFCLV LLWEVGAASL SEVKLHLDIE GHASHYTIPW TELMAKVPGL 50
SPEALWREAN VTEDLASMLN RYKLIYKTSG TLGIALAEPV DIPAVSEGSM 100
QVDASKVHPG VISGLNSPAC MLSAPLEKQL FYYIGTMLPN TRPHSYVFYQ 150
LRCHLSYVAL SINGDKFQYT GAMTSKFLMG TYKRVTEKGD EHVLSLIFGK 200
TKDLPDLRGP FSYPSLTSAQ SGDYSLVIVT TFVHYANFHN YFVPNLKDMF 250
SRAVTMTAAS YARYVLQKLV LLEMKGGCRE PELDTETLTT MFEVSVAFFK 300
VGHAVGETGN GCVDLRWLAK SFFELTVLKD IIGICYGATV KGMQSYGLER 350
LAAVLMATVK MEELGHLTTE KQEYALRLAT VGYPKAGVYS GLIGGATSVL 400
LSAYNRHPLF QPLHTVMRET LFIGSHVVLR ELRLNVTTQG PNLALYQLLS 450
TALCSALEIG EVLRGLALGT ESGLFSPCYL SLRFDLTRDK LLSMAPQEAM 500
LDQAAVSNAV DGFLGRLSLE REDRDAWHLP AYKCVDRLDK VLMIIPLINV 550
TFIISSDREV RGSALYEAST TYLSSSLFLS PVIMNKCSQG AVAGEPRQIP 600
KIQNFTRTQK SCIFCGFALL SYDEKEGLET TTYITSQEVQ NSILSSNYFD 650
FDNLHVHYLL LTTNGTVMEI AGLYEERAHV VLAIILYFIA FALGIFLVHK 700
IVMFFL                                               706
【００９８】
ＥＢＶ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号５）：
MRTVGVFLAT CLVTIFVLPT WGNWAYPCCH VTQLRAQHLL ALENISDIYL 50
VSNQTCDGFS LASLNSPKNG SNQLVISRCA NGLNVVSFFI SILKRSSSAL 100
TGHLRELLTT LETLYGSFSV EDLFGANLNR YAWHRGG             137
【００９９】
ＥＢＶ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号６）：
MTRRRVLSVV VLLAALACRL GAQTPEQPAP PATTVQPTAT RQQTSFPFRV 50
CELSSHGDLF RFSSDIQCPS FGTRENHTEG LLMVFKDNII PYSFKVRSYT 100
KIVTNILIYN GWYADSVTNR HEEKFSVDSY ETDQMDTIYQ CYNAVKMTKD 150
GLTRVYVDRD GVNITVNLKP TGGLANGVRR YASQTELYDA PGWLIWTYRT 200
RTTVNCLITD MMAKSNSPFD FFVTTTGQTV EMSPFYDGKN KETFHERADS 250
FHVRTNYKIV DYDNRGTNPQ GERRAFLDKG TYTLSWKLEN RTAYCPLQHW 300
QTFDSTIATE TGKSIHFVTD EGTSSFVTNT TVGIELPDAF KCIEEQVNKT 350
MHEKYEAVQD RYTKGQEAIT YFITSGGLLL AWLPLTPRSL ATVKNLTELT 400
TPTSSPPSSP SPPAPPAARG STSAAVLRRR RRDAGNATTP VPPAAPGKSL 450
GTLNNPATVQ IQFAYDSLRR QINRMLGDLA RAWCLEQKRQ NMVLRELTKI 500
NPTTVMSSIY GKAVAAKRLG DVISVSQCVP VNQATVTLRK SMRVPGSETM 550
CYSRPLVSFS FINDTKTYEG QLGTDNEIFL TKKMTEVCQA TSQYYFQSGN 600
EIHVYNDYHH FKTIELDGIA TLQTFISLNT SLIENIDFAS LELYSRDEQR 650
ASNVFDLEGI FREYNFQAQN IAGLRKDLDN AVSNGRNQFV DGLGELMDSL 700
GSVGQSITNL VSTVGGLFSS LVSGFISFFK NPFGGMLILV LVAGVVILVI 750
SLTRRTRQMS QQPVQMLYPG IDELAQQHAS GEGPGINPIS KTELQAIMLA 800
LHEQNQEQKR AAQRAAGPSV ASRALQAARD RFPGLRRRRY HDPETAAALL 850
GEAETEF                                              857
【０１００】
ＥＢＶ  ｇｐ４２のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号７）：
MVSFKQVRVP LFTAIALVIV LLLAYFLPPR VRGGGRVSAA AITWVPKPNV 50
EVWPVDPPPP VNFNKTAEQE YGDKEIKLPH WTPTLHTFQV PKNYTKANCT 100
YCNTREYTFS YKERCFYFTK KKHTWNGCFQ ACAELYPCTY FYGPTPDILP 150
VVTRNLNAIE SLWVGVYRVG EGNWTSLDGG TFKVYQIFGS HCTYVSKFST 200
VPVSHHECSF LKPCLCVSQR SNS                            223
【０１０１】
ＥＢＶ  ＢＭＲＦ−２のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号８）：
MFSCKQHLSL GACVFCLGLL ASTPFIWCFV FANLLSLEIF SPWQTHVYRL 50
GFPTACLMAV LWTLVPAKHA VRAVTPAIML NIASALIFFS LRVYSTSTWV 100
SAPCLFLANL PLLCLWPRLA IEIVYICPAI HQRFFELGLL LACTIFALSV 150
VSRALEVSAV FMSPFFIFLA LGSGSLAGAR RNQIYTSGLE RRRSIFCARG 200
DHSVASLKET LHKCPWDLLA ISALTVLVVC VMIVLHVHAE VFFGLSRYLP 250
LFLCGAMASG GLYLGHSSII ACVMATLCTL TSVVVYFLHE TLGPLGKTVL 300  
FISIFVYYFS GVAALSAAMR YKLKKFVNGP LVHLRVVYMC CFVFTFCEYL 350
LVTFIKS  
【０１０２】
ＥＢＶ  ＢＤＬＦ２のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号９）：
MVDEQVAVEH GTVSHTISRE EDGVVHERRV LASGERVEVF YKAPAPRPRE 50
GRASTFHDFT VPAAAAVPGP EPEPEPHPPM PIHANGGGET KTNTQDQNQN 100
QTTRTRTNAK AEERTAEMDD TMASSGGQRG APISADLLSL SSLTGRMAAM 150
APSWMKSEVC GERMRFKEDV YDGEAETLAE PPRCFMLSFV FIYYCCYLAF 200
LALLAFGFNP LFLPSFMPVG AKVLRGKGRD FGVPLSYGCP TNPFCKVYTL 250
IPAVVINNVT YYPNNTDSHG GHGGFEAAAL HVAALFESGC PNLQAVTNRN 300
RTFNVTRASG RVERRLVQDM QRVLASAVVV MHHHCHYETY YVFDGVGPEF 350
GTIPTPCFKD VLAFRPSLVT NCTAPLKTSV KGPNWSGAAG GMKRKQCRVD 400
RLTDRSFPAY LEEVMYVMVQ  
【０１０３】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＥＢＶタンパク質は、抗原性組成物において組み合わされる。２つ以上のＥＢＶタンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＥＢＶ感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＥＢＶポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ及びｇｐ３５０の２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る実施形態では、ｇｐ３５０ポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。
【０１０４】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＥＢＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇｐ３５０と、単量体又は多量体のｇＢとを含む。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体又は四量体であり、ｇＢは単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体であり、ｇＢは三量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は四量体であり、ｇＢは三量体である。
【０１０５】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＥＢＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇｐ３５０と、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体又は四量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は四量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。
【０１０６】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＥＢＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＥＢＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＥＢＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。
【０１０７】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＥＢＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇｐ３５０と、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体又は四量体であり、ｇＢは単量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は単量体であり、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０は四量体であり、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。
【０１０８】
或る実施形態では、２つ以上のＥＢＶタンパク質は、単量体であってもよく、又は多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であってもよい、ＢＭＲＦ−２ポリペプチド、ＢＤＬＦ２ポリペプチド及び／又はｇｐ４２ポリペプチドの１つ以上を更に含む。
【０１０９】
カポジ肉腫ウイルス関連ヘルペス（ＫＳＨＶ、ＨＨＶ−８）。２つのヒトガンマヘルペスウイルス、すなわちガンマ１リンホクリプトウイルスであるエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、及びガンマ２ラジノウイルスであるカポジ肉腫関連ウイルス（ＫＳＨＶ）には多くの共通する特徴がある。それらのウイルスは、ヘルペスウイルス科の全てのメンバーに固有の構造を共有し、該ウイルスはリンパ球において潜伏を確立する能力を共有し、また該ウイルスはいずれもヒト腫瘍のイニシエーター又はポテンシエーターである（Chandran et al., Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Imunoprophylaxis, Eds. Arvin, A., Campadelli-Fiume, G.、及びMocarski E., et al., Cambridge University Press, 2007, Ch. 23）。ＫＳＨＶは、末梢血に由来するＢ細胞、原発性滲出性リンパ腫（ＰＥＬ）又は体腔性Ｂ細胞リンパ腫（ＢＣＢＬ：body-cavity based B-cell lymphomas）及び多中心性キャッスルマン病（ＭＣＤ）におけるＢ細胞、カポジ肉腫（ＫＳ）病変の血管腔に付着する扁平内皮細胞、典型的なＫＳ紡錘細胞、ＫＳ病変におけるＣＤ４５＋／ＣＤ６８＋単球、角化細胞、及び上皮細胞を含む多くの種類の宿主細胞に広く感染する（同上）。さらに、ＫＳＨＶ感染は多発性骨髄腫と関連づけられている（Rettig et al., Science, 276:1851-4, 1997）。ＥＢＶのように、ＫＳＨＶもまた細胞融合及び侵入を媒介するｇＢ、ｇＨ及びｇＬを発現する。また、ＫＳＨＶは、それらのＥＢＶ相当物と比較して同一ではないにせよ、同様の役割を媒介する、保存された糖タンパク質ｇＭ及びｇＮを発現する（同上）。
【０１１０】
しかしながら、ＥＢＶのｇｐ３５０糖タンパク質は、ＫＳＨＶではＫ８．１と称されるポリペプチドで置き換えられる。Ｋ８．１遺伝子は、約２２ｋＤａの予測分子量を持つ１９７アミノ酸をコードし、ＴＭドメインに対応する配列を持たない。ＥＢＶ  ｇｐ３５０／２２０と同様に、ＫＳＨＶ  Ｋ８．１遺伝子は、スプライスされたメッセージより、ｇｐＫ８．１Ａ及びｇｐＫ８．１Ｂと命名される２つのＯＲＦをコードする。より大きなｃＤＮＡは、７５２ｂｐ長（７６２１４ｂｐ〜７６９４１ｂｐ）であり、７７０１３ｂｐの位置でポリアデニル化シグナル配列（ＡＡＴＡＡＡ）を利用する。２２８アミノ酸長のコードされるタンパク質は、ｇｐＫ８．１Ａと命名され、該タンパク質はシグナル配列、膜貫通ドメイン及び４つのＮグリコシル化部位を含む。あるいは、ＫＳＨＶ  ｇｐＫ１８．１ポリペプチドは、ＥＢＶ  ｇｐ３５０について報告されるのと同様の機能を果たし、ｇＢと複合体を形成して、宿主細胞上の細胞表面ヘパリン硫酸分子に結合する。
【０１１１】
ＫＳＨＶ  ＯＲＦ６８は、ＫＳＨＶエンベロープの成分である膜貫通糖タンパク質をコードする、後期溶解感染、後初期構造及びアッセンブリ遺伝子である（Nakamura et al., J. Virol., 77(7):4205-20, 2003、及びJha et al., mBio, 5(6):e02261-14, 2014、及びStuerzl et al., Thromb. Haemost., 102:1117-34, 2009）。ＯＲＦ６８は、宿主細胞のユビキチンプロテアソーム経路と相互作用して、その経路を阻害することにより、タンパク質分解を阻害することが知られている（Gardner, M., 8th Annual CEND Symposium, 22 March 2016）。ＯＲＦ６８は、ＫＳＨＶにおけるウイルスゲノム複製にとって不可欠である。ＫＳＨＶ  ＯＲＦ６８が、ＫＳＨＶ  ＤＮＡ複製にとって不可欠な宿主細胞の細胞質中のタンパク質のプロテアソーム媒介性分解を抑制するタンパク質をコードすると想定される（同上）。
【０１１２】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＫＳＨＶタンパク質は、抗原性組成物において組み合わせられる。２つ以上のＫＳＨＶタンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＫＳＨＶ感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＫＳＨＶポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。
【０１１３】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＫＳＨＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＫＳＨＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＫＳＨＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。
【０１１４】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＫＳＨＶタンパク質は、単量体であってもよく、又は多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であってもよい、ｇＮポリペプチド、ｇＭポリペプチド、ＯＲＦ６８ポリペプチド及び／又はｇｐＫ８．１ポリペプチドの１つ以上を更に含む。
【０１１５】
アクセッション番号ＡＡＣ６３２７０．１、ＧＩ３４１４８６７によりＧｅｎＢａｎｋに公開されるＫＳＨＶ  ｇｐＫ８．１Ａのアミノ酸及び核酸の配列は、参照することにより本明細書の一部をなす。ｇｐＫ８．１のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１０）：
1  msstqirtei pvallilclc lvachancpt yrshlgfwqe gwsgqvyqdw lgrmncsyen
61 mtaleavsln gtrlaagsps seypnvsvsv edtsasgsge daidesgsge eerpvtshvt
121 fmtqsvqatt eltdalisaf sgsyssgeps rttrirvspv aengrnsgas nrvpfsattt
181 ttrgrdahyn aeirthlyil wavglllglv lilylcvprc rrkkpyiv
【０１１６】
アクセッション番号ＡＪＥ２９６９８．１、ＧＩ７４８０１６４０４によりＧｅｎＢａｎｋに公開され、参照することにより本明細書の一部をなすＫＳＨＶ  ｇｐＫ８．１Ｂのアミノ酸及び核酸の配列。ｇｐＫ８．１Ｂのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１１）：
1  MSSTQIRTEI PVALLILCLC LVACHANCPT YRSHLGFWQE GWSGQVYQDW LGRMNCSYEN
61 MTALEAVSLN GTRLAAGSPS RSYSSGEPSR TTRIRVSPVA ENGRNSGASN RVPFSATTTT
121 TRGRDAHYNA EIRTHLYILW AVGLLLGLVL ILYLCVPRCR RKKPYIV
【０１１７】
ＫＳＨＶ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１２）：
MQGLAFLAAL ACWRCISLTC GATGALPTTA TTITRSATQL INGRTNLSIE 50
LEFNGTSFFL NWQNLLNVIT EPALTELWTS AEVAEDLRVT LKKRQSLFFP 100
NKTVVISGDG HRYTCEVPTS SQTYNITKGF NYSALPGHLG GFGINARLVL 150
GDIFASKWSL FARDTPEYRV FYPMNVMAVK FSISIGNNES GVALYGVVSE 200
DFVVVTLHNR SKEANETASH LLFGLPDSLP SLKGHATYDE LTFARNAKYA 250
LVAILPKDSY QTLLTENYTR IFLNMTESTP LEFTRTIQTR IVSIEARRAC 300
AAQEAAPDIF LVLFQMLVAH FLVARGIAEH RFVEVDCVCR QYAELYFLRR 350
ISRLCMPTFT TVGYNHTTLG AVAATQIARV SATKLASLPR SSQETVLAMV 400
QLGARDGAVP SSILEGIAMV VEHMYTAYTY VYTLGDTERK LMLDIHTVLT 450
DSCPPKDSGV SEKLLRTYLM FTSMCTNIEL GEMIARFSKP DSLNIYRAFS 500
PCFLGLRYDL HPAKLRAEAP QSSALTRTAV ARGTSGFAEL LHALHLDSLN 550
LIPAINCSKI TADKIIATVP LPHVTYIISS EALSNAVVYE VSEIFLKSAM 600
FISAIKPDCS GFNFSQIDRH IPIVYNISTP RRGCPLCDSV IMSYDESDGL 650
QSLMYVTNER VQTNLFLDKS PFFDNNNLHI HYLWLRDNGT VVEIRGMYRR 700
RAASALFLIL SFIGFSGVIY FLYRLFSILY       
【０１１８】
ＫＳＨＶ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１３）：
MGIFALFAVL WTTLLVTSHA YVALPCCAIQ ASAASTLPLF FAVHSIHFAD 50
PNHCNGVCIA KLRSKTGDIT VETCVNGFNL RSFLVAVVRR LGSWASQENL 100
RLLWYLQRSL TAYTVGFNAT TADSSIHNVN IIIISVGKAM NRTGSVSGSQ 150
TRAKSSSRRA HAGQKGK
【０１１９】
ＫＳＨＶ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１２）：
MQGLAFLAAL ACWRCISLTC GATGALPTTA TTITRSATQL INGRTNLSIE 50
LEFNGTSFFL NWQNLLNVIT EPALTELWTS AEVAEDLRVT LKKRQSLFFP 100
NKTVVISGDG HRYTCEVPTS SQTYNITKGF NYSALPGHLG GFGINARLVL 150
GDIFASKWSL FARDTPEYRV FYPMNVMAVK FSISIGNNES GVALYGVVSE 200
DFVVVTLHNR SKEANETASH LLFGLPDSLP SLKGHATYDE LTFARNAKYA 250
LVAILPKDSY QTLLTENYTR IFLNMTESTP LEFTRTIQTR IVSIEARRAC 300
AAQEAAPDIF LVLFQMLVAH FLVARGIAEH RFVEVDCVCR QYAELYFLRR 350
ISRLCMPTFT TVGYNHTTLG AVAATQIARV SATKLASLPR SSQETVLAMV 400
QLGARDGAVP SSILEGIAMV VEHMYTAYTY VYTLGDTERK LMLDIHTVLT 450
DSCPPKDSGV SEKLLRTYLM FTSMCTNIEL GEMIARFSKP DSLNIYRAFS 500
PCFLGLRYDL HPAKLRAEAP QSSALTRTAV ARGTSGFAEL LHALHLDSLN 550
LIPAINCSKI TADKIIATVP LPHVTYIISS EALSNAVVYE VSEIFLKSAM 600
FISAIKPDCS GFNFSQIDRH IPIVYNISTP RRGCPLCDSV IMSYDESDGL 650
QSLMYVTNER VQTNLFLDKS PFFDNNNLHI HYLWLRDNGT VVEIRGMYRR 700
RAASALFLIL SFIGFSGVIY FLYRLFSILY
【０１２０】
ＫＳＨＶ  ｇＮのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１４）：
MTASTVALAL FVASILGHCW VTANSTGVAS STERSSPSTA GLSARPSPGP 50
TSVTTPGFYD VACSADSFSP SLSSFSSVWA LINALLVVVA TFFYLVYLCF 100
FKFVDEVVHA            
【０１２１】
ＫＳＨＶ  ｇＭのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１５）：
MRASKSDRFL MSSWVKLLFV AVIMYICSAV VPMAATYEGL GFPCYFNNLV 50
NYSALNLTVR NSAKHLTPTL FLEKPEMLVY IFWTFIVDGI AIVYYCLAAV 100
AVYRAKHVHA TTMMSMQSWI ALLGSHSVLY VAILRMWSMQ LFIHVLSYKH 150
VLMAAFVYCI HFCISFAHIQ SLITCNSAQW EIPLLEQHVP DNTMMESLLT 200
RWKPVCVNLY LSTTALEMLL FSLSTMMAVG NSFYVLVSDA IFGAVNMFLA 250
LTVVWYINTE FFLVKFMRRQ VGFYVGVFVG YLILLLPVIR YENAFVQANL 300
HYIVAINISC IPILCILAIV IRVIRSDWGL CTPSAAYMPL ATSAPTVDRT 350
PTVHQKPPPL PAKTRARAKV KDISTPAPRT QYQSDHESDS EIDETQMIFI 400
【０１２２】
ＫＳＨＶ  ＯＲＦ６８のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１６）：
MFVPWQLGTI TRHRDELQKL LAASLLPEHP EESLGNPIMT QIHQSLQPSS 50
PCRVCQLLFS LVRDSSTPMG FFEDYACLCF FCLYAPHCWT STMAAAADLC 100
EIMHLHFPEE EATYGLFGPG RLMGIDLQLH FFVQKCFKTT AAEKILGISN 150
LQFLKSEFIR GMLTGTITCN FCFKTSWPRT DKEEATGPTP CCQITDTTTA 200
PASGIPELAR ATFCGASRPT KPSLLPALID IWSTSSELLD EPRPRLIASD 250
MSELKSVVAS HDPFFSPPLQ ADTSQGPCLM HPTLGLRYKN GTASVCLLCE 300
CLAAHPEAPK ALQTLQCEVM GHIENNVKLV DRIAFVLDNP FAMPYVSDPL 350
LRELIRGCTP QEIHKHLFCD PLCALNAKVV SEDVLFRLPR EQEYKKLRAS 400
AAAGQLLDAN TLFDCEVVQT LVFLFKGLQN ARVGKTTSLD IIRELTAQLK 450
RHRLDLAHPS QTSHLYA                 
【０１２３】
ベータヘルペスウイルス：ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ、ＨＨＶ−５）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）、及びヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ、ＨＨＶ−５）。ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、ヘルペスウイルス科のエンベロープを持つ二本鎖ＤＮＡのβヘルペスウイルスである。ＨＣＭＶはベータヘルペスウイルス亜科に属し、ＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７もまたそのメンバーである。この科のウイルスによって感染した細胞は、しばしば肥大するよう（巨細胞腫）になる。ＨＣＭＶは、幼年期の難聴の代表的な非遺伝的原因であり、また精神遅滞を含む神経発達の遅延の重大な原因である（Demmler-Harrison GJ, J. Clin. Virol., 46 Suppl 4, 2009: S1-5、Jeon et al., Infect. Dis. Obstet. Gynecol., 2006:80383, 2006、及びMorton et al., N. Engl. J. Med., 354:2151-64, 2006）。米国では、１年当たり２００００名〜４００００名の乳児がＨＣＭＶ感染を伴って生まれ、年間８０００の恒久的障害及び１８億６０００万ドルの医療費を占める。また、ＨＣＭＶは、移植レシピエント及びＡＩＤＳを有する患者を含む免疫抑制された個体において著しい臨床疾患を引き起こす（Bonaros et al., Clin. Transplant., 22:89-97, 2008、及びSteininger et al., J. Clin. Virol., 37:1-9, 2006）。免疫適格性の個体におけるＨＣＭＶ感染は、一般に無症候性であるが、より年齢が上の子供及び成人の一次感染の１０％に単核球症症候群をもたらす可能性がある（Horwitz et al., Medicine (Baltimore), 65:124-34, 1986）。２００１年には、全米科学アカデミーの医学研究所が、先天的なＨＣＭＶ感染を予防するワクチンがとりわけ米国の最優先事項であると述べた（Stratton et al., "Vaccines for the 21st Century: A tool for decisionmaking," Washington, DC, National Academy Press, 2001）。
【０１２４】
ＨＣＭＶは、主に唾液及び尿、並びに胎児への経胎盤感染を介して広がる（Krause et al., Vaccine, 32:4-10, 2014）。また、ＨＣＭＶは母乳を通して乳児に（Maschmann et al., Clin. Infect. Dis., 33:1998-2003, 2001）、性活動を通して、固形臓器又は造血幹細胞の移植を通して、及びまれに血液製剤の輸液注射によって伝播され得る。ＨＣＭＶは、主に線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、単球マクロファージ、肝細胞及びニューロンに感染する。哺乳動物細胞へのＨＣＭＶの融合及び侵入の機構は、ヘルペスウイルス科の他のメンバーによって用いられるものと類似する（Heldwein et al., Cell. Mol. Life Sci., 65:1653-68, 2008、及びWhite et al., Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol., 43:189-219, 2008）。ＨＣＭＶは、形質膜（線維芽細胞）（Compton et al., Virology, 191:387-95, 1992）又はエンドソーム膜（上皮細胞及び内皮細胞）（Ryckman et al., J. Virol., 80:710-22, 2006）のいずれかと、そのエンベロープを融合させることにより細胞に侵入する。
【０１２５】
ＨＣＭＶのｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＯ（ＵＬ７４）、ｇＭ、ｇＮ（ｇｐＵＬ７３）及びＵＬ１２８／１３０／１３１Ａ。９つの糖タンパク質ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＯ（ＵＬ７４）、ｇＭ、ｇＮ（ｇｐＵＬ７３）及びＵＬ１２８／１３０／１３１Ａは、一括して、宿主細胞へのＨＣＭＶの融合及び侵入に重要な役割を果たすエンベロープ糖タンパク質であると確認された（Hahn et al., J. Virol., 78:10023-33, 2004、Ryckman et al., J. Virol., 82:60-70, 2008、Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 102:18153-8, 2005、及びWille et al., J. Virol., 84:2585-96, 2010）。ガンマヘルペスウイルス科メンバーと同様に、ＨＣＭＶのｇＨ／ｇＬタンパク質及びｇＢタンパク質は、宿主細胞へのＨＣＭＶの融合及び侵入に重要な役割を果たす。ｇＢタンパク質は、全ての宿主細胞膜とのＨＣＭＶの融合の直接的なメディエーターである。ＨＣＭＶ  ｇＢ及びその融合活性の活性化は、ｇＨ／ｇＬ及びｇＯとの会合を必要とし、共にｇＨ／ｇＬ／ｇＯヘテロ三量体タンパク質複合体を形成する。しかしながら、また、ＵＬ１２８／１３０／１３１Ａ変異体が上皮細胞及び内皮細胞に感染しなかったことから、ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／１３０／１３１Ａ（五量体複合体）タンパク質は、これらの細胞へのＨＣＭＶの効率的なターゲティングにとって重要である（Ryckman et al., J. Virol., 80:710-22, 2006、Hahn et al., J. Virol., 78:10023-33, 2004、Adler et al., J. Gen. Virol., 87: 2451-60, 2006、及びWang et al., J. Virol., 79:10330-8, 2005）。対照的に、ｇＯヌルＨＣＭＶが線維芽細胞、上皮及び内皮細胞を含む試験した全ての細胞型に感染することができなかったため、また線維芽細胞と上皮細胞の感染はいずれも、一般には、五量体複合体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１ＡではなくｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体の存在量と相関したことから、ｇＯは、全てのＨＣＭＶ宿主細胞とのＨＣＭＶの融合に関与するようである（Wille et al., J. Virol., 84:2585-96, 2010、Jiang et al., J. Virol., 82:2802-12, 2008、及びZhou et al., J. Virol., 89(17):8999-9009, 2015）。３つ全てのＵＬ１２８−１３１遺伝子が、どの既知のクラスのタンパク質に対しても相同性を有しない、アミノ末端シグナルペプチド、中心ケモカイン様ドメイン及びカルボキシ末端ドメインを含む共通する構造を共有する（Patrone et al., J. Virol., 79(13):8361-8373, 2005）。ＨＣＭＶのｇＢタンパク質又はｇＨ／ｇＬタンパク質は、線維芽細胞と上皮細胞の両方に対して血清ＨＣＭＶ中和抗体を誘発することが示された。しかしながら、五量体複合体は、上皮細胞及び内皮細胞に対する最も高い血清中和力価を誘導するものの、線維芽細胞に対してはそれ以上の改善はない（Wen et al., Vaccine, 32:3796-804, 2014、Freed et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 110:E4997-5005, 2013、及びSchuessler et al., J. Virol., 86:504-12, 2012）。ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体は、哺乳動物細胞（ＨＥＫ−２３９）において産生されたが（Kinzler et al., J. Clin. Virol., 25 Suppl 2:S87-95, 2002）、ＨＣＭＶ中和抗体を誘導するその能力に関する報告はない。
【０１２６】
糖タンパク質のＭポリペプチド及びＮポリペプチドは、糖タンパク質複合体ＩＩ（ＧＣＩＩ）抗原である。糖タンパク質Ｎは、ウイルス表面に露出した部分、及びエンベロープの内側まで伸びる部分を有する成熟したウイルス粒子のエンベロープ成分である。糖タンパク質Ｎは、ディフェンスボディ（defense bodies）のマトリクス及び「ブロックホール（block holes）」に存在する（Pignatelli, et al., Arch. Virol., 147:1247, 2002）。ＨＣＭＶ  ｇＭポリペプチドは、３７２アミノ酸長であり、およそ４２ｋＤａの分子量を有し、７つのＴＭドメインを持つ。ＨＣＭＶ  ｇＮは、１２９アミノ酸長であり、約１５ｋＤａの予測分子量を有するが、重度のグリコシル化のため、４０ｋＤａ〜５０ｋＤａタンパク質として現われる傾向がある。糖タンパク質Ｍ（ｇＭ、ＵＬ１００）及び糖タンパク質Ｎ（ｇＮ、ＵＬ７３）は、ＨＣＭＶエンベロープの最も豊富なタンパク質成分であるｇＭ／ｇＮタンパク質複合体を形成する。最近の研究は、ｇＭ又はｇＮのいずれかをコードするウイルス遺伝子の欠失がＨＣＭＶには致死であるが、他のＨＨＶではそうではないことを示した（Baines et al., J. Virol., 67:1441-1452, 1993、Fuchs et al., Virus Res., 112:108-114, 2005、Hobom et al., J. Virol., 74:7720-7729, 2000、Mach et al., J. Virol., 81:5212-5224, 2007、及びMacLean et al., J. Gen. Virol., 74(pt. 6):975-983, 1993）。
【０１２７】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＨＣＭＶタンパク質は、抗原性組成物において組み合わされる。２つ以上のＨＣＭＶタンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＨＣＭＶ感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＨＣＭＶポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。
【０１２８】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＨＭＣＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＨＭＣＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＨＭＣＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。
【０１２９】
或る実施形態では、２つ以上のＨＣＭＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、任意に、多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であるｇＯポリペプチドを更に含む。他の実施形態では、２つ以上のＨＣＭＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体であってもよく、又は多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であってもよい、ｇＮ及び／又はｇＭポリペプチドを更に含む。更に他の実施形態では、２つ以上のＨＣＭＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、ｇＢポリペプチド、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドと、ＵＬ１２８ポリペプチド、ＵＬ１３０ポリペプチド及びＵＬ１３１Ａポリペプチドとを含む。或る特定の実施形態では、２つ以上のＨＣＭＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、三量体ｇＢと、単量体ｇＨ／ｇＬと、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａとを含み、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａは好ましくは融合タンパク質として組み合わせられる。或る特定の実施形態では、これらの５つのＨＣＭＶポリペプチドは五量体タンパク質複合体として組成物中に存在する。或る特定の実施形態では、それらのポリペプチドは融合タンパク質として組成物中に存在する。
【０１３０】
また、ＨＨＶポリペプチドｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａを含むタンパク質複合体又は融合タンパク質をコードする組み換え核酸を開示する。五量体複合体を構成するこれらのＨＨＶポリペプチドの配列は、例えば、ＨＣＭＶを含む任意のベータヘルペスウイルス亜科のメンバーに由来してもよい。例示的に制御可能に連結されたプロモーター配列等を含む、五量体複合体の５つ全てのＨＣＭＶポリペプチドをコードする核酸構築物の実施形態を図１３に示す。タンパク質精製タグ等としての当該技術分野で知られているｈｉｓ−タグ配列、又は免疫グロブリンカッパー配列等の追加の核酸配列は、精製を補助するため、かかる核酸配列中に含まれ得る。別の実施形態では、核酸構築物は、ＨＨＶポリペプチドｇＨ、ｇＬ及びｇＢをコードする配列を含んでもよい。これらの高度に保存されたポリペプチドは、全てのＨＨＶゲノムに見られることから、任意の既知のＨＨＶ  ｇＢ、ｇＨ及び／又はｇＬの配列に対応し得る。
【０１３１】
ＨＣＭＶ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１７）：
MRPGLPPYLT VFTVYLLSHL PSQRYGADAA SEALDPHAFH LLLNTYGRPI 50
RFLRENTTQC TYNSSLRNST VVRENAISFN FFQSYNQYYV FHMPRCLFAG 100
PLAEQFLNQV DLTETLERYQ QRLNTYALVS KDLASYRSFS QQLKAQDSLG 150
QQPTTVPPPI DLSIPHVWMP PQTTPHDWKG SHTTSGLHRP HFNQTCILFD 200
GHDLLFSTVT PCLHQGFYLM DELRYVKITL TEDFFVVTVS IDDDTPMLLI 250
FGHLPRVLFK APYQRDNFIL RQTEKHELLV LVKKAQLNRH SYLKDSDFLD 300
AALDFNYLDL SALLRNSFHR YAVDVLKSGR CQMLDRRTVE MAFAYALALF 350
AAARQEEAGT EISIPRALDR QAALLQIQEF MITCLSQTPP RTTLLLYPTA 400
VDLAKRALWT PDQITDITSL VRLVYILSKQ NQQHLIPQWA LRQIADFALQ 450
LHKTHLASFL SAFARQELYL MGSLVHSMLV HTTERREIFI VETGLCSLAE 500
LSHFTQLLAH PHHEYLSDLY TPCSSSGRRD HSLERLTRLF PDATVPATVP 550
AALSILSTMQ PSTLETFPDL FCLPLGESFS ALTVSEHVSY VVTNQYLIKG 600
ISYPVSTTVV GQSLIITQTD SQTKCELTRN MHTTHSITAA LNISLENCAF 650
CQSALLEYDD TQGVINIMYM HDSDDVLFAL DPYNEVVVSS PRTHYLMLLK 700
NGTVLEVTDV VVDATDSRLL MMSVYALSAI IGIYLLYRML KTC 
【０１３２】
ＨＣＭＶ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１８）：
MCRRPDCGFS FSPGPVILLW CCLLLPIVSS AAVSVAPTAA EKVPAECPEL 50
TRRCLLGEVF EGDKYESWLR PLVNVTGRDG PLSQLIRYRP VTPEAANSVL 100 
LDEAFLDTLA LLYNNPDQLR ALLTLLSSDT APRWMTVMRG YSECGDGSPA 150
VYTCVDDLCR GYDLTRLSYG RSIFTEHVLG FELVPPSLFN VVVAIRNEAT 200 
RTNRAVRLPV STAAAPEGIT LFYGLYNAVK EFCLRHQLDP PLLRHLDKYY 250
AGLPPELKQT RVNLPAHSRY GPQAVDAR       
【０１３３】
ＨＣＭＶ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号１９）：
MESRIWCLVV CVNLCIVCLG AAVSSSSTSH ATSSTHNGSH TSRTTSAQTR 50
SVYSQHVTSS EAVSHRANET IYNTTLKYGD VVGVNTTKYP YRVCSMAQGT 100
DLIRFERNII CTSMKPINED LDEGIMVVYK RNIVAHTFKV RVYQKVLTFR 150
RSYAYIYTTY LLGSNTEYVA PPMWEIHHIN KFAQCYSSYS RVIGGTVFVA 200
YHRDSYENKT MQLIPDDYSN THSTRYVTVK DQWHSRGSTW LYRETCNLNC 250
MLTITTARSK YPYHFFATST GDVVYISPFY NGTNRNASYF GENADKFFIF 300
PNYTIVSDFG RPNAAPETHR LVAFLERADS VISWDIQDEK NVTCQLTFWE 350
ASERTIRSEA EDSYHFSSAK MTATFLSKKQ EVNMSDSALD CVRDEAINKL 400
QQIFNTSYNQ TYEKYGNVSV FETSGGLVVF WQGIKQKSLV ELERLANRSS 450 
LNITHRTRRS TSDNNTTHLS SMESVHNLVY AQLQFTYDTL RGYINRALAQ 500
IAEAWCVDQR RTLEVFKELS KINPSAILSA IYNKPIAARF MGDVLGLASC 550
VTINQTSVKV LRDMNVKESP GRCYSRPVVI FNFANSSYVQ YGQLGEDNEI 600
LLGNHRTEEC QLPSLKIFIA GNSAYEYVDY LFKRMIDLSS ISTVDSMIAL 650
DIDPLENTDF RVLELYSQKE LRSSNVFDLE EIMREFNSYK QRVKYVEDKV 700
VDPLPPYLKG LDDLMSGLGA AGKAVGVAIG AVGGAVASVV EGVATFLKNP 750
FGAFTIILVA IAVVIITYLI YTRQRRLCTQ PLQNLFPYLV SADGTTVTSG 800
STKDTSLQAP PSYEESVYNS GRKGPGPPSS DASTAAPPYT NEQAYQMLLA 850
LARLDAEQRA QQNGTDSLDG QTGTQDKGQK PNLLDRLRHR KNGYRHLKDS 900
DEEENV  
【０１３４】
ＨＣＭＶ  ｇＮのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２０）：
MEWNTLVLGL LVLSVVAESS GNNSSTSTSA TTSKSSASVS TTKLTTVATT 50
SATTTTTTTL STTSTKLSST THDPNVMRRH ANDDFYKAHC TSHMYELSLS 100
SFAAWWTMLN ALILMGAFCI VLRHCCFQNF TATTTKGY  
【０１３５】
ＨＣＭＶ  ｇＭのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２１）：
MAPSHVDKVN TRTWSASIVF MVLTFVNVSV HLVLSNFPHL GYPCVYYHVV 50
DFERLNMSAY NVMHLHTPML FLDSVQLVCY AVFMQLVFLA VTIYYLVCWI 100
KISMRKDKGM SLNQSTRDIS YMGDSLTAFL FILSMDTFQL FTLTMSFRLP 150
SMIAFMAAVH FFCLTIFNVS MVTQYRSYKR SLFFFSRLHP KLKGTVQFRT 200
LIVNLVEVAL GFNTTVVAMA LCYGFGNNFF VRTGHMVLAV FVVYAIISII 250
YFLLIEAVFF QYVKVQFGYH LGAFFGLCGL IYPIVQYDTF LSNEYRTGIS 300
WSFGMLFFIW AMFTTCRAVR YFRGRGSGSV KYQALATASG EEVAVLSHHD 350
SLESRRLREE EDDDDDEDFE DA         
【０１３６】
ＨＣＭＶ  ｇＯのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２２）：
MGRKEMMVRD VPKMVFLISI SFLLVSFINC KVMSKALYNR PWRGLVLSKI 50
GKYKLDQLKL EILRQLETTI STKYNVSKQP VKNLTMNMTE FPQYYILAGP 100
IQNYSITYLW FDFYSTQLRK PAKYVYSQYN HTAKTITFRP PPCGTVPSMT 150
CLSEMLNVSK RNDTGEQGCG NFTTFNPMFF NVPRWNTKLY VGPTKVNVDS 200
QTIYFLGLTA LLLRYAQRNC THSFYLVNAM SRNLFRVPKY INGTKLKNTM 250
RKLKRKQAPV KEQFEKKAKK TQSTTTPYFS YTTSAALNVT TNVTYSITTA 300
ARRVSTSTIA YRPDSSFMKS IMATQLRDLA TWVYTTLRYR QNPFCEPSRN 350
RTAVSEFMKN THVLIRNETP YTIYGTLDMS SLYYNETMFV ENKTASDSNK 400
TTPTSPSMGF QRTFIDPLWD YLDSLLFLDE IRNFSLRSPT YVNLTPPEHR 450
RAVNLSTLNS LWWWLQ                
【０１３７】
ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２３）：
MSPKNLTPFL TALWLLLGHS RVPRVRAEEC CEFINVNHPP ERCYDFKMCN 50
RFTVALRCPD GEVCYSPEKT AEIRGIVTTM THSLTRQVVH NKLTSCNYNP 100
LYLEADGRIR CGKVNDKAQY LLGAAGSVPY RWINLEYDKI TRIVGLDQYL 150
ESVKKHKRLD VCRAKMGYML Q       
【０１３８】
ＨＣＭＶ  ＵＬ１３０のアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２４）：
MLRLLLRHYF HCLLLCAVWA TPCLASSWST LTANQNPSPP WSKLTYSKPH 50
DAATFYCPFL YPSPPRSPSQ FSGFQRVSTG PECRNETLYL LYNREGQTLV 100
ERSSTWVKKV IWYLSGRNQT ILQRMPRTAS KPSDGNVQIS VEDAKIFGAH 150
MVPKQTKLLR FVVNDGTRYQ MCVMKLESWA HVFRDYSVSF QVRLTFTEAN 200
NQTYTFCTHP NLIV               
【０１３９】
ＨＣＭＶ  ＵＬ１３１Ａのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２５）：
MRLCRVWLSV CLCAVVLGQC QRETAEKNDY YRVPHYWDAC SRALPDQTRY 50
KYVEQLVDLT LNYHYDASHG LDNFDVLKRI NVTEVSLLIS DFRRQNRRGG 100
TNKRTTFNAA GSLAPHARSL EFSVRLFAN      
【０１４０】
ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）及びヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）。ＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７はゲノム配列の点からＨＣＭＶとは区別されるが、それらのヒトヘルペスウイルスは、齧歯類ＣＭＶで保存されるヘルペスウイルスに共通する８０個のＯＲＦのコアを保持した（Mocarski E., Cell. Microb., 6(8):707-717, 2004）。ＨＨＶ−６は、リンパ増殖性障害及びＡＩＤＳを示す患者の末梢血ロイコサイトから１９８６年に最初に単離された（Flamand et al., J. Virol., 67(11):6768-6777, 1993）。２歳までに約９０％の個体がＨＨＶ−６に感染し、非工業国では１００％に達すると推定されている（Salahuddin et al., Science, 234:596, 1986、Willis et al., Br. Med. Bull., 62(1):125-138, 2002）。ＨＨＶ−６感染は、小児バラ疹（第６病）、突発性発疹（バラ発疹）を引き起こし、髄膜脳炎、肝炎、致死的血球貪食症候群及び間質肺炎と同様に、異好性陰性（heterophile-negative）伝染性単核球症と関連する（同上）。さらに、幾つかのＢ細胞リンパ腫におけるＨＨＶ−６のゲノム配列の検出、及びＨＨＶ−６が齧歯類細胞を癌化（transform）させる可能性により、或る特定の癌においてＨＨＶ−６の役割を示唆する幾つかの証拠がある（Ablashi et al., J. Virol. Methods, 21:29-48, 1988、Josephs et al., Science, 234:601-603, 1986、Razzaque, A., Oncogene, 5:1356-1370, 1990、及びTorelli et al., Blood, 77:2251-2258, 1991）。遺伝シークエンシングによって確認された、ＨＨＶ−６の２つのバリアント、ＨＨＶ−６Ａ及びＨＨＶ−６Ｂが存在する（Ablashi et al., Arch. Virol., 159(5):863-870, 2014）。２つのバリアントのゲノムは、コリニア（co-linear）であり、９０％の全体配列同一性を共有する（同上）。高度に保存された糖タンパク質ｇＨ、ｇＢ、ｇＮ及びｇＯであっても、配列が識別可能に異なり、一貫して異なる（単離株を越えて保存されている）。また、２つのバリアントは、わずかに異なる病因及び疾患関連性を示すように見える（同上）。それにもかかわらず、他のＨＨＶ科メンバーに存在する同じ糖タンパク質は、ＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７のゲノムによってコードされる。
【０１４１】
ＨＨＶ−６は、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ及びｇＭを含む、他のＨＨＶ科のメンバーについて先に言及されるのと同じ多くの表面糖タンパク質をコードし、比較的保存されたホモログが、全ての既知の哺乳動物ヘルペスウイルスで同定された（Santoro et al., J. Biol. Chem., 278:25964-25969, 2003、及びDockrell, D. H., J. Med. Microbiol., 52:5-18, 2003）。他の科のメンバーと同様に、糖タンパク質のｇＨ及びｇＬは、特異抗体の阻害活性に基づくＨＨＶ−６膜融合に顕著な役割を果たす（Foa-Tomasi et al., J. Virol., 65:4124-4129, 1991、Gompels et al., J. Virol., 65:2393-2401, 1991、Liu et al., Virology, 197:12-22, 1993、及びQian et al., Virology, 194:380-386, 1993）。他のヘルペスウイルスの場合のように、これらの糖タンパク質はヘテロ二量体複合体を形成し、ｇＬは、ｇＨの正しい折り畳み、細胞内成熟及び表面発現に必要である（Anderson et al., J. Gen. Virol., 80:1485-1494, 1999、Hutchinson et al., J. Virol., 66:2240-2250, 1992、Liu et al., J. Gen. Virol., 74:1847-1857, 1993、及びRoop et al., J. Virol., 67:2285-2297, 1993）。ヘルペスウイルスの中で最も高度に保存された糖タンパク質であることが知られているＨＨＶ−６糖タンパク質ｇＢ、及び糖タンパク質ｇｐ８２−ｇｐ１０５（ＨＨＶ−６及び関連するβ−ヘルペスウイルス、ＨＨＶ−７でのみ見られる）は融合／侵入プロセスに重要である（Takeda et al., Virology, 222:176-183, 1996、Pfeiffer et al., J. Virol., 69:3490-3500, 1995、及びPfeiffer et al., J. Virol., 67:4611-4620, 1993）。
【０１４２】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＨＨＶ−６タンパク質及びＨＨＶ−７タンパク質は、抗原性組成物において組み合わされる。２つ以上のＨＨＶ−６タンパク質及びＨＨＶ−７タンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＨＨＶ−６若しくはＨＨＶ−７感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＨＨＶ−６及びＨＨＶ−７ポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。
【０１４３】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＨＨＶ−６タンパク質又はＨＨＶ−７タンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＨＨＶ−６又はＨＨＶ−７のｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。
【０１４４】
ＨＨＶ−６Ａ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２６）：
MLLRLWVFVL LTPCYGWRPL NISNSSHCRN GNFENPIVRP GFITFNFYTK 50
NDTRIYQVPK CLLGSDITYH LFDAINTTES LTNYEKRVTR FYEPPMNDIL 100
RLSPVPSVKQ FNLDRSIQPQ VVYSLNMYPS QGIYYVRVVE VRQMQYDNVS 150
CKLPNSLKEL IFPVQVRCAK ITRYVGEDIY THFFTPDFMI LYIQNPAGDL 200
TMMYGNTTSI NFKAPYKKSS FIFKQTLTDD LLLIVEKDVI DVQYRFISDA 250
TFVDETLNDV DEVEALLLKF NNLGIQTLLR GDCKKPNYAG IPQMMFLYGI 300
VHFSYSTKNT GPMPVLRVLK THENLLSIDS FVNRCVNVSE GTLQYPKMKE 350
FLKYEPSDYS YITKNKSISV STLLTYLATA YESNVTISKY KWTDIANTLQ 400
NIYEKHMFFT NLTFSDRETL FMLAEIANII PTDERMQRHM QLLIGNLCNP 450
VEIVSWARML TADRAPNLEN IYSPCASPVR RDVTNSFLKT VLTYASLDRY 500
RSDMMEMLSV YRPPNMERVA AIQCLSPSEP AASLTLPNVT FVISPSYVIK 550
GVSLTITTTI VATSIIITAI PLNSTCVSTN YKYAGQDLLV LRNISSQTCE 600
FCQSVVMEYD DIDGPLQYIY IKNIDELKTL TDPNNNLLVP NTRTHYLLLA 650
KNGSVFEMSE VGIDIDQVSI ILVIIYILIA IIALFGLYRL IRLC
【０１４５】
ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２７）：
MLFRLWVFVL LTPCYSWRPW TISDESHCKN GNSENPIVRP GFITFNFYTK 50
NDTRIYQVPK CLLGSDITYH LFDAINTTES LTNYEKRVTR FYEPPMNDIL 100
RLSTVPAVKQ FNLDHSIQPQ IVYSLNLYPS HGIYYIRVVE VRQMQYDNVS 150
CKLPNSLNEL IFPVQVRCAK ITRYAGENIY THFFTPDFMI LYIQNPAGDL 200
TMMYGNTTDI NFKAPYRKSS FIFKQTLTDD LLLIVEKDVV DEEYRFISDA 250
TFVDETLDDV DEVEALLLKF NNLGIQTLLR GDCKKPDYAG IPQMMFLYGI 300
VHFSYSTKNT GPMPVLRVLK THENLLSIDS FVNRCVNVSE GTIQYPKMKE 350
FLKYEPSDYS YITKNKSIPV STLLTYLATA YETNVTISRY KWSDIANTLQ 400
KIYEKHMFFT NLTFSDRETL FMLAEIANFI PADERMQRHM QLLIGNLCNP 450
VEIVSWAHML TADKAPNLEN IYSPCASPVR RDVTNSFVKT VLTYASLDRY 500
RSDMMEMLSV YRPPDMARVA AIQCLSPSEP AASLPLPNVT FVISPSYVIK 550
GVSLTITTTI VATSIIITAI PLNSTCVSTN YKYAGQDLLV LRNISSQTCE 600
FCQSVVMEYD DIDGPLQYIY IKNIDELKTL TDPNNNLLVP NTRTHYLLLA 650
KNGSVFEMSE VGIDIDQVSI ILVIIYVLIA IIALFGLYRL IRLC 
【０１４６】
ＨＨＶ−６Ａ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２８）：
MELLLFVMSL ILLTFSKAIP LFNHNSFYFE KLDDCIAAVI NCTKSEVPLL 50
LEPIYQPPAY NEDVMSILLQ PPTKKKPFSR IMVTDEFLSD FLLLQDNPEQ 100
LRTLFALIRD PESRDNWLNF FNGFQTCSPS VGITTCIRDN CRKYSPEKIT 150
YVNNFFVDNI AGLEFNISEN TDSFYSNIGF LLYLENPAKG VTKIIRFPFN 200
SLTLFDTILN CLKYFHLKTG VELDLLKHME TYNSKLPFRS SRPTILIRNT 250
【０１４７】
ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号２９）：
MELLLFVMSL ILLTFSKAMP LFDHNSFYFE KLDDCIAAVI NCTRSEVPLL 50
LEPIYQPPVY NEDVMSILLK PPTKKKPFSR IMVTNEFLSD FLLLQDNPEQ 100
LRTLFALIGD PESRDNWLNF FNGFQTCSPS VGITTCISDN CRKYLPERIT 150
YVNNFFVDNI AGLEFNISEN TDSFYSNIGF LLYLENPATG ITKIIRFPFN 200
SLTLFDTILN CLKYFHLKTG VEFDLLKQME AYNSKLPFRS SRPTILIRNT 250
【０１４８】
ＨＨＶ−６Ａ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３０）：
MSKMAVLFLA VFLMNSVLMI YCDPDHYIRA GYNHKYPFRI CSIAKGTDLM 50
RFDRDISCSP YKSNAKMSEG FFIIYKTNIE TYTFPVRTYK KELTFQSSYR 100
DVGVVYFLDR TVMGLAMPVY EANLVNSHAQ CYSAVAMKRP DGTVFSAFHE 150
DNNKNNTLNL FPLNFKSITN KRFITTKEPY FARGPLWLYS TSTSLNCIVT 200
EATAKAKYPF SYFALTTGEI VEGSPFFNGS NGKHFAEPLE KLTILENYTM 250
IEDLMNGMNG ATTLVRKIAF LEKADTLFSW EIKEENESVC MLKHWTTVTH 300
GLRAETNETY HFISKELTAA FVAPKESLNL TDPKQTCIKN EFEKIINEVY 350
MSDYNDTYSM NGSYQIFKTT GDLILIWQPL VQKSLMFLEQ GSEKIRRRRD 400
VGDVKSRHDI LYVQLQYLYD TLKDYINDAL GNLAESWCLD QKRTITMLHE 450
LSKISPSSIV SEVYGRPISA QLHGDVLAIS KCIEVNQSSV QLHKSMRVVD 500
AKGVRSETMC YNRPLVTFSF VNSTPEVVPG QLGLDNEILL GDHRTEECEI 550
PSTKIFLSGN HAHVYTDYTH TNSTPIEDIE VLDAFIRLKI DPLENADFKV 600
LDLYSPDELS RANVFDLENI LREYNSYKSA LYTIEAKIAT NTPSYVNGIN 650
SFLQGLGAIG TGLGSVISVT AGALGDIVGG VVSFLKNPFG GGLMLILAIV 700
VVVIIIVVFV RQRHVLSKPI DMMFPYATNP VTTVSSVTGT TVVKTPSVKD 750
VDGGTSVAVS EKEEGMADVS GQVSDDEYSQ EDALKMLKAI KSLDESYRRK 800
PSSSESHASK PSLIDRIRYR GYKSVNVEEA      
【０１４９】
ＨＨＶ−６Ｂ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３１）：
MSKMRVLFLA VFLMNSVLMI YCDSDDYIRA GYNHKYPFRI CSIAKGTDLM 50
RFDRDISCSP YKSNAKMSEG FFIIYKTNIE TYTFPVRTYK NELTFPTSYR 100
DVGVVYFLDR TVMGLAMPVY EANLVNSRAQ CYSAVAIKRP DGTVFSAYHE 150
DNNKNETLEL FPLNFKSVTN KRFITTKEPY FARGPLWLYS TSTSLNCIVT 200
EATAKAKYPF SYFALTTGEI VEGSPFFDGS NGKHFAEPLE KLTILENYTM 250
IEDLMNGMNG ATTLVRKIAF LEKGDTLFSW EIKEENESVC MLKHWTTVTH 300
GLRAETDETY HFISKELTAA FVASKESLNL TDPKQTCIKN EFEKIITDVY 350
MSDYNDAYSM NGSYQIFKTT GDLILIWQPL VQKSLMVLEQ GSVNLRRRRD 400
LVDVKSRHDI LYVQLQYLYD TLKDYINDAL GNLAESWCLD QKRTITMLHE 450
LSKISPSSIV SEVYGRPISA QLHGDVLAIS KCIEVNQSSV QLYKSMRVVD 500
AKGVRSETMC YNRPLVTFSF VNSTPEVVLG QLGLDNEILL GDHRTEECEI 550
PSTKIFLSGN HAHVYTDYTH TNSTPIEDIE VLDAFIRLKI DPLENADFKL 600
LDLYSPDELS RANVFDLENI LREYNSYKSA LYTIEAKIAT NTPSYVNGIN 650
SFLQGLGAIG TGLGSVISVT AGALGDIVGG VVSFLKNPFG GGLMLILAIV 700
VVVIIIVVFV RQKHVLSKPI DMMFPYATNP VTTVSSVTGT TVVKTPSVKD 750
ADGGTSVAVS EKEEGMADVS GQISGDEYSQ EDALKMLKAI KSLDESYRRK 800
PSSSESHASK PSLIDRIRYR GYKSVNVEEA      
【０１５０】
ＨＨＶ−７  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３２）：
MYFYINSLLL IVSINGWKHW NILNSSICVN EKTNQTIIQP GLITFNFHDY 50 
NETRVYQIPK CLFGYTFVSN LFDSVNFDES FDQYKHRITR FFNPSTEKAV 100
KIYAQKFQTN IKPVSHTKTI TVSFLPLFYE KDVYFANVSE IRKLYYNQYI 150
CTLSNGLTDY LFPITERCVM RHYNYLNTVF MLALTPSFFI ISVETGMDDV 200
VFIFGNVSRI FFKAPFRKSS FIYRQTVSDD LLLITKKTTI ERFYPFLKID 250
FLDDIWKQNY DISFLIAKFN KLATVYIMEG FCGKPVNKDT FHLMFLFGLT 300
HFLYSTRGDG LLPLLEILNT HQSIITMGRF LEKCFKMTKS HLLYPEMEKL 350
QNFQLVDYSY ITSDLTIPIS AKLAFLSLAD GRIVTVPQNK WKEIENNIET 400
LYEKHKLFTN LTQPERANLF LLSEIGNSLV FQEKIKRKIH VLLASLCNPL 450
EMYFWTHMLD NVMDIETMFS PCATATRKDL TQRVVNNILS YKNLDAYTNK 500
VMNTLSVYRK KRLDMFKSIS CVSNEQAAFL TLPNITYTIS SKYILAGTSF 550
SVTSTVISTT IIITVVPLNS TCTPTNYKYS VKNIKPIYNI SSHDCVFCES 600
LVVEYDDIDG IIQFVYIMDD KQLLKLIDPD TNFIDVNPRT HYLLFLRNGS 650
VFEITALDLK SSQVSIMLVL LYLIIIIIVL FGIYHVFRLF   
【０１５１】
ＨＨＶ−７  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３３）：
MKTNIFFIFL ISILNQIYAL FNNSYYSNLE QECIKNILNC TQSKTLSLLE 50
PIDQAPIPKS DIISRLLYHT PYISRRDQVL IDEDFLETFY LLYNNPNQLH 100
TLLSLIKDSE SGHNWLGFLN NFERCLSDNT LLTCRDNVCK SYSYEKLKFT 150
GNIFVENIIG FEFNIPSNMI NFNMSILIYL ENEETRTQRI VRIDHHGINV 200
FDALLNCLRY FSRYYNFSFP LIQEMEKYNE VLPFRSEFSN LLIRTY 
【０１５２】
ＨＨＶ−７  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３４）：
MKILFLSVFI TFSLQLSLQT EADFVMTGHN QHLPFRICSI ATGTDLVRFD 50
REVSCASYGS NIKTTEGILI IYKTKIEAHT FSVRTFKKEL TFQTTYRDVG 100
TVYFLDRTVT TLPMPIEEVH MVNTEARCLS SISVKRSEEE EYVAYHKDEY 150
VNKTLDLIPL NFKSDTVRRY ITTKEPFLRN GPLWFYSTST SINCIVTDCI 200
AKTKYPFDFF ALSTGETVEG SPFYNGINSK TFNEPTEKIL FRNNYTMLKT 250
FDDGSKGNFV TLTKMAFLEK GNTIFSWEVQ NEESSICLLK HWMTIPHALR 300 
AENANSFHFI AQELTASFVT GKSNYTLSDS KYNCINSNYT SILDEIYQTQ 350
YNNSHDKNGS YEIFKTEGDL ILIWQPLIQR KLTVLENFSN ASRKRRKREL 400
ETNKDIVYVQ LQYLYDTLKD YINTALGKLA EAWCLNQKRT ITVLHELSKI 450
SPSGIISAVY GKPMSAKLIG DVLAVSKCIE VNQTSVQLHK SMRLTKDSSY 500
DALRCYSRPL LTYSFANSSK ETYLGQLGLD NEILLGNHRT EECEQSNTKI 550
FLSGKFAHIF KDYTYVNSSL ITEIEALDAF VDLNIDPLEN ADFTLLELYT 600
KDELSKANVF DLETILREYN SYKSALHHIE TKIATVTPTY IGGIDTFFKG 650 
LGALGLGLGA VLGVTAGALG DVVNGVFSFL KNPFGGALTI LLTLGVIGLV 700
IFLFLRHKRL AQTPIDILFP YTSKSTNSVL QATQSVQAQV KEPLDSSPPY 750
LKTNKDTEPQ GDDITHTNEY SQVEALKMLK AIKLLDESYK KAEIAEAKKS 800
QRPSLLERIQ YRGYQKLSTE EL            
【０１５３】
アルファヘルペスウイルス：１型ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ−１）、２型ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ−２）、及び水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ、ＨＨＶ−３）
ＨＨＶ−１、すなわち単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−１）は、口腔ヘルペスを引き起こし、ＨＨＶ−２、すなわち単純ヘルペスウイルス１（ＨＳＶ−２）は性器ヘルペスを引き起し、ＨＨＶ−３、すなわちＶＺＶは水疱瘡及び帯状疱疹を引き起こす。これらのウイルスは各々、ヘルペスウイルス科のアルファヘルペスウイルス亜科に属し、神経向性ウイルスである。ＶＺＶは、ほぼ全てのヒトに感染し、一次感染は水疱瘡（水痘）を引き起こす。潜伏ＶＺＶは、最も一般的には、神経軸索に沿って、脳神経神経節、後根神経節及び自律神経節に存在する。この亜科のウイルスは自発的に再活性化して、帯状疱疹（帯状ヘルペス）を生じる。帯状ヘルペスの皮膚病変は通常１週間を超えて続くが、一部の個体では、感染は慢性疼痛又はヘルペス後神経痛（ＰＨＮ、３ヶ月を超えて続く疼痛）に結びつく場合があり、また同様に血管症は６０歳より年齢が上の患者の約４０％で起こり得る。また、帯状ヘルペス麻痺（Zoster paresis）（下位運動ニューロン型筋力低下を伴う帯状ヘルペス）は、腕、脚、横隔膜及び／又は腹筋に起こり得る。帯状ヘルペスの病理学的特徴としては、関連する神経炎による炎症及び出血性壊死、限局性軟膜炎、片側性分節性急性灰白髄炎（unilateral segmental poliomyelitis）、並びに関連する運動根及び知覚根の変性が挙げられる。脱髄は、単核細胞（ＭＮＣ）の浸潤及びミクログリア増殖を伴う領域で見られる。核内封入体、ウイルス抗原及びヘルペスウイルス粒子は、急性的に感染した神経節で見つかった。血管障害（又は脳卒中）は、脳動脈の増殖性ウイルス感染によって引き起こされる場合があり、肉芽腫性血管炎、ＶＺＶ血管炎／脳炎、水痘後動脈症（post-varicella arteriopathy）、及び遅発性対側片麻痺を伴う眼部帯状ヘルペスと称される。症状としては、発熱、精神状態の変化、頭痛及び局所神経障害を挙げることができる（Gilden et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 37(5):441-463, 2012）。ＶＺＶ感染の他の重篤な合併症として、モラレ髄膜炎、多発性帯状ヘルペス（Zoster multiplex）、脊髄炎、眼部ヘルペス（herpes ophthalmicus）（無疱疹性帯状疱疹）及びラムゼイ−ハント症候群が挙げられる。研究は、帯状ヘルペス後の脳卒中リスクの増加を示した（Kang et al., Stroke, 40(11):3443-3448, 2009、及びLin et al., Neurology, 74(10):792-797, 2010）。ＶＺＶの急性感染は、髄膜炎、髄膜脳炎、髄膜神経根炎及び小脳炎に結び付く場合がある（Habib et al., J. Neurovirol., 15(2):206-208, 2009、Klein et al., Scan. J. Infect. Dis., 42(8):631-633, 2010、Gunson et al., J. Clin. Virol., 50(3):191-193, 2011、及びMoses et al., Lancet Neurol., 5(11):984-988, 2006）。
【０１５４】
ＶＺＶゲノムは、１９８６年に完全に配列決定された最初のヘルペスウイルスゲノムであった。ＶＺＶゲノムは並外れて安定であり、１２００回を超える継代の間わずか３つの点突然変異を生じたに過ぎない（Liu et al., Arch. Virol., 153(10):1943-7, 2008）。感染はランゲルハンス細胞から流入領域リンパ節の近くの常在型Ｔ細胞へと進む。ウイルスを含む（virus-loaded）Ｔ細胞を真皮に輸送する皮膚ホーミング因子を発現するようにＴ細胞が誘導され、真皮では線維芽細胞及び角化細胞が感染に曝露されて炎症誘発性のサイトカインを産生し、水痘を生じる（Taylor et al., J. Virol., 79(17):11501-6, 2005、及びHuch et al., J. Virol., 84(8):4060-72, 2010）。ＶＺＶは、腎臓細胞、メラノーマ細胞、線維芽細胞等を含む幾つかの細胞型においてアポトーシスを起こす（Pugazhenthi et al., J. Virol., 83(18):9273-82, 2009）。
【０１５５】
水疱瘡に対するアシクロビル、帯状疱疹に対するファムシクロビル、バラシクロビル、帯状ヘルペス免疫グロブリン（ＺＩＧ）、及びビダラビンを含む、様々な医薬治療剤がＶＺＶ感染に対して利用可能である。また、ＶＺＶ免疫グロブリンも一つの治療剤である（Centers for Disease Control and Prevention (CDC), March 2012, "FDA approval of an extended period for administering VariZIG for postexposure prophylaxis of varicella," Morb. Mortal. Wkly. Rep., 61(12):212, PMID 2245612）。
【０１５６】
ＶＺＶ及びＨＳＶ−１／ＨＳＶ−２は、他のＨＨＶ種で見られる同一又は同様の糖タンパク質及び関連するタンパク質の機能に対応する既知のエンベロープ糖タンパク質ｇＢ、ｇＨ及びｇＬ、ｇＭ、ｇＮを産生する。ＶＺＶにはＨＨＶ−１／ＨＨＶ−２糖タンパク質ｇＤの等価物はないが、ＶＺＶの糖タンパク質ｇＥは同様の機能を果たす（Cohen, J. I., Curr. Top. Microbiol. Immunol., 342:1-14, 2010）。ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの発現は、宿主細胞へのウイルス粒子の侵入に先立って膜融合を誘導するのに必要条件であり、かつ十分条件であって、ヌクレオカプシドが細胞質へのアクセスを得ることを可能にする。ｇｐ４２、ｇＤ、ｇＯ又はＵＬ１２８−１３０に類似する他のアクセサリー糖タンパク質は、融合に必要ではない（非特許文献１、Vleck et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108:18412-7, 2011、及びOliver et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 110:1911-6, 2013）。
【０１５７】
インスリン分解酵素（ＩＤＥ）及びミエリン関連糖タンパク質（ＭＡＧ）の少なくとも２つの細胞タンパク質が、宿主細胞へのＶＺＶの侵入に対する受容体として機能すると考えられているが、他の研究では、インテグリンのαＶサブユニットがＶＺＶに対する膜融合において役割を果たすことが示されている（Yang et al., J. Virol., 90(16):7567-78, 2016）。
【０１５８】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＶＺＶタンパク質は、抗原性組成物において組み合わされる。２つ以上のＶＺＶタンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＶＺＶ感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＶＺＶポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。
【０１５９】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＶＺＶタンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＶＺＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＶＺＶのｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。或る特定の実施形態では、２つ以上のＶＺＶタンパク質は、単量体であってもよく、又は多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であってもよい、以下の糖タンパク質：ｇＩ、ｇＣ、及び／又はｇＥの１つ以上を更に含む。
【０１６０】
ＶＺＶ  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３５）：
MFALVLAVVI LPLWTTANKS YVTPTPATRS IGHMSALLRE YSDRNMSLKL 50
EAFYPTGFDE ELIKSLHWGN DRKHVFLVIV KVNPTTHEGD VGLVIFPKYL 100
LSPYHFKAEH RAPFPAGRFG FLSHPVTPDV SFFDSSFAPY LTTQHLVAFT 150
TFPPNPLVWH LERAETAATA ERPFGVSLLP ARPTVPKNTI LEHKAHFATW 200
DALARHTFFS AEAIITNSTL RIHVPLFGSV WPIRYWATGS VLLTSDSGRV 250
EVNIGVGFMS SLISLSSGPP IELIVVPHTV KLNAVTSDTT WFQLNPPGPD 300
PGPSYRVYLL GRGLDMNFSK HATVDICAYP EESLDYRYHL SMAHTEALRM 350
TTKADQHDIN EESYYHIAAR IATSIFALSE MGRTTEYFLL DEIVDVQYQL 400
KFLNYILMRI GAGAHPNTIS GTSDLIFADP SQLHDELSLL FGQVKPANVD 450
YFISYDEARD QLKTAYALSR GQDHVNALSL ARRVIMSIYK GLLVKQNLNA 500
TERQALFFAS MILLNFREGL ENSSRVLDGR TTLLLMTSMC TAAHATQAAL 550
NIQEGLAYLN PSKHMFTIPN VYSPCMGSLR TDLTEEIHVM NLLSAIPTRP 600
GLNEVLHTQL DESEIFDAAF KTMMIFTTWT AKDLHILHTH VPEVFTCQDA 650
AARNGEYVLI LPAVQGHSYV ITRNKPQRGL VYSLADVDVY NPISVVYLSR 700
DTCVSEHGVI ETVALPHPDN LKECLYCGSV FLRYLTTGAI MDIIIIDSKD 750
TERQLAAMGN STIPPFNPDM HGDDSKAVLL FPNGTVVTLL GFERRQAIRM 800
SGQYLGASLG GAFLAVVGFG IIGWMLCGNS RLREYNKIPL T 
【０１６１】
ＶＺＶ  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３６）：
MASHKWLLQI VFLKTITIAY CLHLQDDTPL FFGAKPLSDV SLIITEPCVS 50
SVYEAWDYAA PPVSNLSEAL SGIVVKTKCP VPEVILWFKD KQMAYWTNPY 100
VTLKGLAQSV GEEHKSGDIR DALLDALSGV WVDSTPSSTN IPENGCVWGA 150
DRLFQRVCQ              
【０１６２】
ＶＺＶ  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３７）：
MSPCGYYSKW RNRDRPEYRR NLRFRRFFSS IHPNAAAGSG FNGPGVFITS 50
VTGVWLCFLC IFSMFVTAVV SVSPSSFYES LQVEPTQSED ITRSAHLGDG 100
DEIREAIHKS QDAETKPTFY VCPPPTGSTI VRLEPTRTCP DYHLGKNFTE 150
GIAVVYKENI AAYKFKATVY YKDVIVSTAW AGSSYTQITN RYADRVPIPV 200
SEITDTIDKF GKCSSKATYV RNNHKVEAFN EDKNPQDMPL IASKYNSVGS 250
KAWHTTNDTY MVAGTPGTYR TGTSVNCIIE EVEARSIFPY DSFGLSTGDI 300
IYMSPFFGLR DGAYREHSNY AMDRFHQFEG YRQRDLDTRA LLEPAARNFL 350
VTPHLTVGWN WKPKRTEVCS LVKWREVEDV VRDEYAHNFR FTMKTLSTTF 400
ISETNEFNLN QIHLSQCVKE EARAIINRIY TTRYNSSHVR TGDIQTYLAR 450
GGFVVVFQPL LSNSLARLYL QELVRENTNH SPQKHPTRNT RSRRSVPVEL 500
RANRTITTTS SVEFAMLQFT YDHIQEHVNE MLARISSSWC QLQNRERALW 550
SGLFPINPSA LASTILDQRV KARILGDVIS VSNCPELGSD TRIILQNSMR 600
VSGSTTRCYS RPLISIVSLN GSGTVEGQLG TDNELIMSRD LLEPCVANHK 650
RYFLFGHHYV YYEDYRYVRE IAVHDVGMIS TYVDLNLTLL KDREFMPLQV 700
YTRDELRDTG LLDYSEIQRR NQMHSLRFYD IDKVVQYDSG TAIMQGMAQF 750
FQGLGTAGQA VGHVVLGATG ALLSTVHGFT TFLSNPFGAL AVGLLVLAGL 800
VAAFFAYRYV LKLKTSPMKA LYPLTTKGLK QLPEGMDPFA EKPNATDTPI 850
EEIGDSQNTE PSVNSGFDPD KFREAQEMIK YMTLVSAAER QESKARKKNK 900
TSALLTSRLT GLALRNRRGY SRVRTENVTG V      
【０１６３】
ＶＺＶ  ｇＩのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３８）：
MFLIQCLISA VIFYIQVTNA LIFKGDHVSL QVNSSLTSIL IPMQNDNYTE 50
IKGQLVFIGE QLPTGTNYSG TLELLYADTV AFCFRSVQVI RYDGCPRIRT 100
SAFISCRYKH SWHYGNSTDR ISTEPDAGVM LKITKPGIND AGVYVLLVRL 150
DHSRSTDGFI LGVNVYTAGS HHNIHGVIYT SPSLQNGYST RALFQQARLC 200
DLPATPKGSG TSLFQHMLDL RAGKSLEDNP WLHEDVVTTE TKSVVKEGIE 250
NHVYPTDMST LPEKSLNDPP ENLLIIIPIV ASVMILTAMV IVIVISVKRR 300
RIKKHPIYRP NTKTRRGIQN ATPESDVMLE AAIAQLATIR EESPPHSVVN 350
PFVK                       
【０１６４】
ＶＺＶ  ｇＣのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号３９）：
MKRIQINLIL TIACIQLSTE SQPTPVSITE LYTSAATRKP DPAVAPTSAA 50
SRKPDPAVAP TSAASRKPDP AVAPTSAASR KPDPAVAPTS AATRKPDPAV 100
APTSAASRKP DPAVAPTSAA TRKPDPAVAP TSAASRKPDP AANTQHSQPP 150
FLYENIQCVH GGIQSIPYFH TFIMPCYMRL TTGQQAAFKQ QQKTYEQYSL 200
DPEGSNITRW KSLIRPDLHI EVWFTRHLID PHRQLGNALI RMPDLPVMLY 250
SNSADLNLIN NPEIFTHAKE NYVIPDVKTT SDFSVTILSM DATTEGTYIW 300
RVVNTKTKNV ISEHSITVTT YYRPNITVVG DPVLTGQTYA AYCNVSKYYP 350
PHSVRVRWTS RFGNIGKNFI TDAIQEYANG LFSYVSAVRI PQQKQMDYPP 400
PAIQCNVLWI RDGVSNMKYS AVVTPDVYPF PNVSIGIIDG HIVCTAKCVP 450
RGVVHFVWWV NDSPINHENS EITGVCDQNK RFVNMQSSCP TSELDGPITY 500
SCHLDGYPKK FPPFSAVYTY DASTYATTFS VVAVIIGVIS ILGTLGLIAV 550
IATLCIRCCS                  
【０１６５】
ＶＺＶ  ｇＥのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４０）：
MGTVNKPVVG VLMGFGIITG TLRITNPVRA SVLRYDDFHT DEDKLDTNSV 50
YEPYYHSDHA ESSWVNRGES SRKAYDHNSP YIWPRNDYDG FLENAHEHHG 100
VYNQGRGIDS GERLMQPTQM SAQEDLGDDT GIHVIPTLNG DDRHKIVNVD 150
QRQYGDVFKG DLNPKPQGQR LIEVSVEENH PFTLRAPIQR IYGVRYTETW 200
SFLPSLTCTG DAAPAIQHIC LKHTTCFQDV VVDVDCAENT KEDQLAEISY 250
RFQGKKEADQ PWIVVNTSTL FDELELDPPE IEPGVLKVLR TEKQYLGVYI 300
WNMRGSDGTS TYATFLVTWK GDEKTRNPTP AVTPQPRGAE FHMWNYHSHV 350
FSVGDTFSLA MHLQYKIHEA PFDLLLEWLY VPIDPTCQPM RLYSTCLYHP 400
NAPQCLSHMN SGCTFTSPHL AQRVASTVYQ NCEHADNYTA YCLGISHMEP 450
SFGLILHDGG TTLKFVDTPE SLSGLYVFVV YFNGHVEAVA YTVVSTVDHF 500
VNAIEERGFP PTAGQPPATT KPKEITPVNP GTSPLLRYAA WTGGLAAVVL 550
LCLVIFLICT AKRMRVKAYR VDKSPYNQSM YYAGLPVDDF EDSESTDTEE 600
EFGNAIGGSH GGSSYTVYID KTR            
【０１６６】
本願の抗原性組成物及び方法は、典型的には、宿主細胞へのＨＨＶの結合、融合及び侵入の媒介に関与する２つ以上のＨＨＶタンパク質を含む。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される２つ以上のＨＳＶ−１タンパク質又はＨＳＶ−２タンパク質は、抗原性組成物において組み合わされる。２つ以上のＨＳＶ−１タンパク質又はＨＳＶ−２タンパク質は、被験体において、免疫応答を誘導する又はＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２感染を治療若しくは予防するため、同時に又は別々に投与され得る。或る特定の実施形態では、抗原性組成物（又は投与方法）は、以下のＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２ポリペプチド（又はそれをコードする核酸）：ｇＢ、ｇＨ及びｇＬの２つ以上を含む。或る実施形態では、ｇＢポリペプチドは単量体、二量体又は三量体である。或る実施形態では、ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは単量体、二量体、三量体又は四量体である。典型的には、ｇＨ及びｇＬはｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。
【０１６７】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＨＳＶ−１タンパク質又はＨＳＶ−２タンパク質（又はそれをコードする核酸）は、単量体又は多量体のｇＢと、単量体又は多量体のｇＨ／ｇＬヘテロ二量体とを含む。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体、二量体又は三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは単量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体である。或る特定の実施形態では、ｇＢは三量体であり、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は三量体である。或る特定の実施形態では、共に混合された場合、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドはタンパク質複合体を形成する。或る特定の実施形態では、ＨＳＶ−１又はＨＳＶ−２のｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドは、ｇＢ、ｇＨ及びｇＬのポリペプチドを含むタンパク質複合体として投与されない。例えば、ｇＢをｇＨ及び／又はｇＬとは別に投与することができ、又はタンパク質複合体としてではなくｇＨ及びｇＬと共に投与することもできる。
【０１６８】
或る特定の実施形態では、２つ以上のＨＳＶ−１タンパク質又はＨＳＶ−２タンパク質は、単量体であってもよく、又は多量体（例えば、二量体、三量体又は四量体）であってもよいｇＤポリペプチドを更に含む。
【０１６９】
ＨＳＶ−１  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４１）：
MGNGLWFVGV IILGAAWGQV HDWTEQTDPW FLDGLGMDRM YWRDTNTGRL 50
WLPNTPDPQK PPRGFLAPPD ELNLTTASLP LLRWYEERFC FVLVTTAEFP 100
RDPGQLLYIP KTYLLGRPPN ASLPAPTTVE PTAQPPPAVA PLKGLLHNPT 150
ASVLLRSRAW VTFSAVPDPE ALTFPRGDNV ATASHPSGPR DTPPPRPPVG 200
ARRHPTTELD ITHLHNASTT WLATRGLLRS PGRYVYFSPS ASTWPVGIWT 250
TGELVLGCDA ALVRARYGRE FMGLVISMHD SPPAEVMVVP AGQTLDRVGD 300
PADENPPGAL PGPPGGPRYR VFVLGSLTRA DNGSALDALR RVGGYPEEGT 350
NYAQFLSRAY AEFFSGDAGA EQGPRPPLFW RLTGLLATSG FAFVNAAHAN 400
GAVCLSDLLG FLAHSRALAG LAARGAAGCA ADSVFFNVSV LDPTARLQLE 450
ARLQHLVAEI LEREQSLALH ALGYQLAFVL DSPSAYDAVA PSAAHLIDAL 500
YAEFLGGRVV TTPVVHRALF YASAVLRQPF LAGVPSAVQR ERARRSLLIA 550
SALCTSDVAA ATNADLRTAL ARADHQKTLF WLPDHFSPCA ASLRFDLDES 600
VFILDALAQA TRSETPVEVL AQQTHGLAST LTRWAHYNAL IRAFVPEASH 650
RCGGQSANVE PRILVPITHN ASYVVTHSPL PRGIGYKLTG VDVRRPLFLT 700
YLTATCEGST RDIESKRLVR TQNQRDLGLV GAVFMRYTPA GEVMSVLLVD 750
TDNTQQQIAA GPTEGAPSVF SSDVPSTALL LFPNGTVIHL LAFDTQPVAA 800
IAPGFLAASA LGVVMITAAL AGILKVLRTS VPFFWRRE 
【０１７０】
ＨＳＶ−１  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４２）：
MGILGWVGLI AVGVLCVRGG LPSTEYVIRS RVAREVGDIL KVPCVPLPSD 50
DLDWRYETPS AINYALIDGI FLRYHCPGLD TVLWDRHAQK AYWVNPFLFV 100
AGFLEDLSYP AFPANTQETE TRLALYKEIR QALDSRKQAA SHTPVKAGCV 150
NFDYSRTRRC VGRQDLGPTN GTSGRTPVLP PDDEAGLQPK PLTTPPPIIA 200
TSDPTPRRDA ATKSRRRRPH SRRL         
【０１７１】
ＨＳＶ−１  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４３）：
MHQGAPSWGR RWFVVWALLG LTLGVLVASA APTSPGTPGV AAATQAANGG 50 
PATPAPPPLG AAPTGDPKPK KNKKPKNPTP PRPAGDNATV AAGHATLREH 100
LRDIKAENTD ANFYVCPPPT GATVVQFEQP RRCPTRPEGQ NYTEGIAVVF 150
KENIAPYKFK ATMYYKDVTV SQVWFGHRYS QFMGIFEDRA PVPFEEVIDK 200
INAKGVCRST AKYVRNNLET TAFHRDDHET DMELKPANAA TRTSRGWHTT 250
DLKYNPSRVE AFHRYGTTVN CIVEEVDARS VYPYDEFVLA TGDFVYMSPF 300
YGYREGSHTE HTTYAADRFK QVDGFYARDL TTKARATAPT TRNLLTTPKF 350
TVAWDWVPKR PSVCTMTKWQ EVDEMLRSEY GGSFRFSSDA ISTTFTTNLT 400
EYPLSRVDLG DCIGKDARDA MDRIFARRYN ATHIKVGQPQ YYQANGGFLI 450
AYQPLLSNTL AELYVREHLR EQSRKPPNPT PPPPGASANA SVERIKTTSS 500
IEFARLQFTY NHIQRHVNDM LGRVAIAWCE LQNHELTLWN EARKLNPNAI 550 
ASVTVGRRVS ARMLGDVMAV STCVPVAADN VIVQNSMRIS SRPGACYSRP 600
LVSFRYEDQG PLVEGQLGEN NELRLTRDAI EPCTVGHRRY FTFGGGYVYF 650
EEYAYSHQLS RADITTVSTF IDLNITMLED HEFVPLEVYT RHEIKDSGLL 700
DYTEVQRRNQ LHDLRFADID TVIHADANAA MFAGLGAFFE GMGDLGRAVG 750 
KVVMGIVGGV VSAVSGVSSF MSNPFGALAV GLLVLAGLAA AFFAFRYVMR 800
LQSNPMKALY PLTTKELKNP TNPDASGEGE EGGDFDEAKL AEAREMIRYM 850
ALVSAMERTE HKAKKKGTSA LLSAKVTDMV MRKRRNTNYT QVPNKDGDAD 900
EDDL            
【０１７２】
ＨＳＶ−１  ｇＤのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４４）：
MGGAAARLGA VILFVVIVGL HGVRGKYALA DASLKMADPN RFRGKDLPVP 50
DRLTDPPGVR RVYHIQAGLP DPFQPPSLPI TVYYAVLERA CRSVLLNAPS 100
EAPQIVRGGS EDVRKQPYNL TIAWFRMGGN CAIPITVMEY TECSYNKSLG 150
ACPIRTQPRW NYYDSFSAVS EDNLGFLMHA PAFETAGTYL RLVKINDWTE 200
ITQFILEHRA KGSCKYALPL RIPPSACLSP QAYQQGVTVD SIGMLPRFIP 250
ENQRIVAVYS LKIAGWHGPK APYTSTLLPP ELSETPNATQ PELAPEDPED 300
SALLEDPVGT VAPQIPPNWH IPSIQDAATP YHPPATPNNM GLIAGAVGGS 350
LLAALVICGI VYWMRRRTQK GPKRIRLPHI REDDQPSSHQ PLFY 
【０１７３】
ＨＳＶ−２  ｇＨのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４５）：
MGPGLWVVMG VLVGVAGGHD TYWTEQIDPW FLHGLGLART YWRDTNTGRL 50
WLPNTPDASD PQRGRLAPPG ELNLTTASVP MLRWYAERFC FVLVTTAEFP 100
RDPGQLLYIP KTYLLGRPRN ASLPELPEAG PTSRPPAEVT QLKGLSHNPG 150
ASALLRSRAW VTFAAAPDRE GLTFPRGDDG ATERHPDGRR NAPPPGPPAG 200
APRHPTTNLS IAHLHNASVT WLAARGLLRT PGRYVYLSPS ASTWPVGVWT 250
TGGLAFGCDA ALVRARYGKG FMGLVISMRD SPPAEIIVVP ADKTLARVGN 300
PTDENAPAVL PGPPAGPRYR VFVLGAPTPA DNGSALDALR RVAGYPEEST 350
NYAQYMSRAY AEFLGEDPGS GTDARPSLFW RLAGLLASSG FAFINAAHAH 400
DAIRLSDLLG FLAHSRVLAG LAARGAAGCA ADSVFLNVSV LDPAARLRLE 450
ARLGHLVAAI LEREQSLAAH ALGYQLAFVL DSPAAYGAVA PSAARLIDAL 500
YAEFLGGRAL TAPMVRRALF YATAVLRAPF LAGAPSAEQR ERARRGLLIT 550
TALCTSDVAA ATHADLRAAL ARTDHQKNLF WLPDHFSPCA ASLRFDLAEG 600
GFILDALAMA TRSDIPADVM AQQTRGVASA LTRWAHYNAL IRAFVPEATH 650
QCSGPSHNAE PRILVPITHN ASYVVTHTPL PRGIGYKLTG VDVRRPLFIT 700
YLTATCEGHA REIEPKRLVR TENRRDLGLV GAVFLRYTPA GEVMSVLLVD 750
TDATQQQLAQ GPVAGTPNVF SSDVPSVALL LFPNGTVIHL LAFDTLPIAT 800
IAPGFLAASA LGVVMITAAL AGILRVVRTC VPFLWRRE      
【０１７４】
ＨＳＶ−２  ｇＬのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４６）：
MGFVCLFGLV VMGAWGAWGG SQATEYVLRS VIAKEVGDIL RVPCMRTPAD 50
DVSWRYEAPS VIDYARIDGI FLRYHCPGLD TFLWDRHAQR AYLVNPFLFA 100
AGFLEDLSHS VFPADTQETT TRRALYKEIR DALGSRKQAV SHAPVRAGCV 150
NFDYSRTRRC VGRRDLRPAN TTSTWEPPVS SDDEASSQSK PLATQPPVLA 200
LSNAPHGGSP RREVGAGILA SDATSHVCIA SHPGSGAGQP TRLAAGSAVQ 250
RRRPRGCPPG VMFSASTTPE QPLGLSGDAT PPLPTSVPLD WAAFRRAFLI 300
DDAWRPLLEP ELANPLTARL LAEYDRRCQT EEVLPPREDV FSWTRYCTPD 350
DVRVVIIGQD PYHHPGQAHG LAFSVRADVP VPPSLRNVLA AVKNCYPDAR 400
MSGRGCLEKW ARDGVLLLNT TLTVKRGAAA SHSKLGWDRF VGGVVRRLAA 450
RRPGLVFMLW GAHAQNAIRP DPRQHYVLKF SHPSPLSKVP FGTCQHFLAA 500
NRYLETRDIM PIDWSV       
【０１７５】
ＨＳＶ−２  ｇＢのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４７）：
MRGGGLICAL VVGALVAAVA SAAPAAPAAP RASGGVAATV AANGGPASRP 50
PPVPSPATTK ARKRKTKKPP KRPEATPPPD ANATVAAGHA TLRAHLREIK 100
VENADAQFYV CPPPTGATVV QFEQPRRCPT RPEGQNYTEG IAVVFKENIA 150
PYKFKATMYY KDVTVSQVWF GHRYSQFMGI FEDRAPVPFE EVIDKINTKG 200
VCRSTAKYVR NNMETTAFHR DDHETDMELK PAKVATRTSR GWHTTDLKYN 250
PSRVEAFHRY GTTVNCIVEE VDARSVYPYD EFVLATGDFV YMSPFYGYRE 300
GSHTEHTSYA ADRFKQVDGF YARDLTTKAR ATSPTTRNLL TTPKFTVAWD 350
WVPKRPAVCT MTKWQEVDEM LRAEYGGSFR FSSDAISTTF TTNLTEYSLS 400
RVDLGDCIGR DAREAIDRMF ARKYNATHIK VGQPQYYLAT GGFLIAYQPL 450
LSNTLAELYV REYMREQDRK PRNATPAPLR EAPSANASVE RIKTTSSIEF 500
ARLQFTYNHI QRHVNDMLGR IAVAWCELQN HELTLWNEAR KLNPNAIASA 550
TVGRRVSARM LGDVMAVSTC VPVAPDNVIV QNSMRVSSRP GTCYSRPLVS 600
FRYEDQGPLI EGQLGENNEL RLTRDALEPC TVGHRRYFIF GGGYVYFEEY 650
AYSHQLSRAD VTTVSTFIDL NITMLEDHEF VPLEVYTRHE IKDSGLLDYT 700
EVQRRNQLHD LRFADIDTVI RADANAAMFA GLCAFFEGMG DLGRAVGKVV 750
MGVVGGVVSA VSGVSSFMSN PFGALAVGLL VLAGLVAAFF AFRYVLQLQR 800
NPMKALYPLT TKELKTSDPG GVGGEGEEGA EGGGFDEAKL AEAREMIRYM 850
ALVSAMERTE HKARKKGTSA LLSSKVTNMV LRKRNKARYS PLHNEDEAGD 900
EDEL                  
【０１７６】
ＨＳＶ−２  ｇＤのアミノ酸配列は以下の通りである（配列番号４８）：
MGRLTSGVGT AALLVVAVGL RVVCAKYALA DPSLKMADPN RFRGKNLPVL 50
DRLTDPPGVK RVYHIQPSLE DPFQPPSIPI TVYYAVLERA CRSVLLHAPS 100
EAPQIVRGAS DEARKHTYNL TIAWYRMGDN CAIPITVMEY TECPYNKSLG 150
VCPIRTQPRW SYYDSFSAVS EDNLGFLMHA PAFETAGTYL RLVKINDWTE 200
ITQFILEHRA RASCKYALPL RIPPAACLTS KAYQQGVTVD SIGMLPRFIP 250
ENQRTVALYS LKIAGWHGPK PPYTSTLLPP ELSDTTNATQ PELVPEDPED 300
SALLEDPAGT VSSQIPPNWH IPSIQDVAPH HAPAAPSNPG LIIGALAGST 350
LAVLVIGGIA FWVRRRAQMA PKRLRLPHIR DDDAPPSHQP LFY 
【０１７７】
ＨＨＶタンパク質。本願は、ウイルスの結合、融合及び宿主細胞侵入の媒介に関与するＨＨＶタンパク質の様々な組み合わせが、ワクチン又は免疫干渉について当該技術分野における懸念にもかかわらず、予想外に相乗的又は相加的な中和抗体応答を誘導することを実証する。本明細書に開示される抗原性組成物において組み合わされ（例えば、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇｐ３５０）、又は被験体においてＨＨＶ感染を予防若しくは治療する、又は免疫を誘導するために（同時に又は別々に）投与されるＨＨＶタンパク質は、任意の従来技術を用いて作製され得る。
【０１７８】
例えば、或る特定の実施形態では、１つ以上のＨＨＶタンパク質は天然起源である。他の実施形態では、ＨＨＶタンパク質の１つ以上は組み換え体である（すなわち、組み換えＤＮＡ技術を使用して調製された）。或る特定の実施形態では、組み換えＨＨＶタンパク質は、天然起源のＨＨＶタンパク質のグリコシル化パターンに１つ以上の違いを有する。或る特定の実施形態では、１つ以上のＨＨＶタンパク質は修飾されており、天然起源のタンパク質ではない。或る特定の実施形態では、全てのＨＨＶタンパク質が修飾されており、天然起源のタンパク質ではない。例えば、ＨＨＶタンパク質は、野生型タンパク質の変異型、野生型タンパク質の切断型、多量体化タンパク質、又は融合タンパク質であってもよい。
【０１７９】
或る特定の実施形態では、修飾されたＨＨＶタンパク質は、特異的標的分子に結合するタンパク質であり、修飾されたＨＨＶタンパク質は標的分子に結合するその能力を保持する。或る特定の実施形態では、切断型ＨＨＶタンパク質は、例えば、ｇＢ、ｇｐ３５０、ｇＬ又はｇＨの１つ以上の細胞外ドメインを含む、ＨＨＶタンパク質の細胞外ドメイン、又はその標的分子に結合する能力を保持するその部分からなる。例として、ｇｐ３５０はＢ細胞の表面にあるＣＤ２１（ＣＲ２としても知られる）に結合し、ｇｐ４２はＨＬＡクラスＩＩ分子に結合し、ｇＤはネクチン−１（ＨｖｅＣ、ＣＤ１１１）及びヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）に結合し、ｇｐＫ８．１Ａ及びｇｐＫ８．１Ｂは細胞表面ヘパリン硫酸分子に結合する。
【０１８０】
或る特定の実施形態では、ＨＨＶポリペプチドは、１つ以上の欠失、挿入又は置換を含むバリアントＨＨＶポリペプチドである。例えば、ＣＲ２に結合するｇｐ３５０ポリペプチド及びｇｐ２２０ポリペプチドとしては、ｇｐ３５０又はｇｐ２２０のポリペプチドのいずれかと実質的に同一であるが、１つ以上の欠失、挿入又は置換のためｇｐ３５０又はｇｐ２２０とは異なるアミノ酸を有する、天然起源の又は合成によりプログラム化されたバリアントポリペプチドが挙げられる。幾つかのｇｐ３５０／２２０バリアント配列は、異なる株のＥＢＶのＤＮＡをシークエンシングすることにより既に同定されており、当業者にとって容易に利用可能である（Beisel et al., J. Viriol., 1985, 54(3):665-74）。
【０１８１】
同様に、バリアントのｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ及びｇｐＫ８．１のポリペプチドは、ｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ及びｇｐＫ８．１のポリペプチドのいずれかに実質的に同一であるが、１つ以上の欠失、挿入又は置換のため、ｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ及びｇｐＫ８．１とは異なるアミノ酸配列を有する、天然起源の又は合成によりプログラム化されたバリアントポリペプチドを含み得る。
【０１８２】
バリアントアミノ酸配列は、好ましくは、ｇｐ３５０、ｇｐ２２０ポリペプチド又はｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及びｇｐＫ８．１に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、又は８０％同一であり、より好ましくは少なくとも８５％同一であり、更により好ましくは少なくとも９０％同一であり、最も好ましくは少なくとも９５％同一である。パーセント同一性は、例えば、Devereux et al.（Nucl. Acids Res., 12:387, 1984）によって記載され、University of Wisconsin Genetics Computer Group（ＵＷＧＣＧ）より入手可能なＧＡＰコンピュータープログラム、バージョン６．０を使用して配列情報を比較することにより決定され得る。ＧＡＰプログラムは、Smith and Waterman（Adv. Appl. Math, 2:482, 1981）によって改訂されたNeedleman及びWunschのアライメント法（J. Mol. Biol., 48:443, 1970）を利用する。ＧＡＰプログラムに対する好ましい初期設定パラメーターは以下を含む：（１）ヌクレオチドに関する単一要素比較マトリクス（一致を表す数値１と不一致を表す数値０を含む）、及びSchwartz and Dayhoff, eds., Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358, 1979に記載されるGribskov and Burgess, Nucl. Acids Res., 14:6745, 1986の荷重比較マトリクス、（２）各ギャップに対するペナルティー３．０及び各ギャップの各シンボルについての追加０．１０ペナルティー、並びに（３）末端ギャップに対してはペナルティーなし。
【０１８３】
バリアントポリペプチドを、ｇｐ３５０、ｇｐ２２０、ｇＨ、ｇＬ、ｇＢ、ｇｐ４２、ｇＭ、ｇＮ、ｇＩ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＤ、ＯＲＦ６８、ＢＭＲＦ−２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１３１Ａ、及び／又はｇｐＫ８．１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の変異によって得ることができる。アミノ酸配列の変更は、自然に発生し得る、又は多くの従来法のいずれかによって遂行され得る。変異は、ネイティブ配列の断片へのライゲーションを可能とする制限酵素部位に隣接する、変異配列を含むオリゴヌクレオチドを合成することによって、特定の遺伝子座に導入され得る。ライゲーションに続いて、得られた再構成された配列は、所望のアミノ酸の挿入、置換又は欠失を有するアナログをコードする。
【０１８４】
代替的には、オリゴヌクレオチド指向部位特異的突然変異導入法の手順は、予め特定されたコドンが置換、欠失又は挿入によって変更され得る、変更された遺伝子を提供するため利用され得る。上に記載される代替法の一例は、Walder et al．（Gene, 42:133, 1986）、Bauer et al.（Gene 37:73, 1985）、Craik,（BioTechniques, Jan. 12-19, 1985）、Smith et al.（Genetic Engineering: Principles and Methods, Plenum Press, 1981）、Kunkel（Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:488, 1985）、Kunkel et al.（Methods in Enzymol., 154:367, 1987）、並びに米国特許第４，５１８，５８４号及び同第４，７３７，４６２号に開示され、それらの全てが参照することにより本明細書の一部をなす。
【０１８５】
ＨＨＶタンパク質を多量体化することによりそれらの免疫原性を増強することが示されてはいるものの（それらの全体が参照することにより本明細書の一部をなす、米国特許出願公開第２０１５−０１７４２３７号及び同第２０１６−０３０３２２５号を参照されたい）、多量体及び／又は単量体のＨＨＶタンパク質の両方を組み合わせた場合に、予想外の相加的及び相乗的な抗体応答が観察された。したがって、或る特定の実施形態では、１つ以上のＨＨＶタンパク質は単量体形態のタンパク質である。或る特定の実施形態では、１つ以上のＨＨＶタンパク質は多量体形態のタンパク質である。或る特定の実施形態では、１つ以上のＨＨＶタンパク質は単量体であり、１つ以上のＨＨＶタンパク質は多量体である。或る特定の実施形態では、抗原性組成物は、単量体又は多量体である、ＨＨＶ  ｇＢポリペプチドを含む。或る特定の実施形態では、多量体ｇＢポリペプチドは二量体又は三量体であり、好ましくは三量体である。或る特定の実施形態では、ｇｐ３５０ポリペプチドは単量体又は多量体である。或る特定の実施形態では、多量体ｇｐ３５０は二量体、三量体又は四量体であり、好ましくは四量体である。ＨＨＶタンパク質を多量体化する方法は当該技術分野で知られており、本願において別途検討される。
【０１８６】
ＨＨＶのｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは、本明細書に記載される抗原性組成物及び方法において、個々のポリペプチドとして組み合わされ得る。他の実施形態では、ｇＨ及びｇＬは、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体を形成する。或る特定の実施形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は、天然に生じ、或る特定のｉｎ  ｖｉｔｒｏ条件下で自発的に形成し得るｇＨ／ｇＬタンパク質複合体等の非共有結合的に会合したタンパク質複合体である。他の実施形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は融合タンパク質である。ＨＨＶ抗原性組成物がｇＨ／ｇＬヘテロ二量体の形態でｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドを含む場合、抗原性組成物はｇＢポリペプチドを更に含み、又はＥＢＶについては、抗原性組成物はｇＢ及び／又はｇｐ３５０ポリペプチドを更に含む。或る特定の実施形態では、ｇＨポリペプチド又はｇＬポリペプチドは単量体又は多量体である。或る特定の実施形態では、ｇＨポリペプチド又はｇＬポリペプチドは二量体、三量体又は四量体であり、好ましくは三量体である。或る特定の実施形態では、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は単量体又は多量体である。或る特定の実施形態では、多量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体は、二量体、三量体又は四量体であり、好ましくは三量体である。
【０１８７】
ＨＨＶタンパク質の多量体化。上で検討されるように、開示される抗原性組成物において２つ以上のＨＨＶポリペプチドは多量体化されてもよく、又はそれらは単量体であってもよい。例えば、或る条件下では、少なくともｇＨとｇＬのポリペプチドがヘテロ二量体を形成することが知られている。さらに、或る条件下では、ｇＢポリペプチドは多量体、例えば少なくともホモ三量体として存在することが知られている（Ma, A., Virology, 178(2):588-592, 1990）。さらに、ポリペプチドｇＢは、或る特定の条件下でヘテロ二量体ｇＨ／ｇＬと会合して、ｇＢ／ｇＨ／ｇＬのヘテロ三量体を形成することが知られている。したがって、かかるＨＨＶポリペプチドを組成物に導入することにより、或る条件下で自発的に多量体化が起こり得る。
【０１８８】
適切な条件下で幾つかのポリペプチドに対してＨＨＶポリペプチドの多量体化が自発的に起こり得るのに対し、その他は自然条件下で多量体を形成しない。或る実施形態では、それらの免疫原性を増強させるために多量体を形成するように２つ以上のＨＨＶポリペプチドを修飾することが有利である。或る特定の実施形態では、宿主細胞において修飾されたＨＨＶ  ｇＢポリペプチドを発現することによって、三量体ＨＨＶ  ｇＢポリペプチドが形成される。修飾されたｇＢポリペプチドにおいて、ｇＢポリペプチドの細胞外ドメイン中のフーリン切断部位は、特許文献２（米国特許出願公開第２０１６−０３０３２２５号としても公開され、その全体が参照することにより本明細書の一部をなす）に記載されるように、リンカー配列によって置き換えられる。図１、右パネル及び図７は、宿主細胞で発現された場合にホモ三量体ｇＢ複合体を形成する、例示的な修飾されたＥＢＶ及びＨＣＭＶのｇＢ構築物を示す。これらの実施形態では、リンカー配列（例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３））は、ＥＢＶ又はＨＣＭＶのｇＢポリペプチドの細胞外ドメイン中のフーリン切断部位を置き換える。組み換えポリペプチドの分泌を誘導するため、構築物に任意のリーダー配列を付加してもよい。これらの実施形態はＥＢＶ及びＨＣＭＶのｇＢポリペプチドを用いて示されるが、任意のＨＨＶ  ｇＢ配列が構築物において置換されて、所望の修飾されたｇＢポリペプチドを産生し得る。
【０１８９】
或る特定の実施形態では、多量体ＨＨＶタンパク質は、オリゴマー化ドメインとＨＨＶポリペプチドとを組み合わせるための組み換えクローニング技術を使用して合成され得て、任意に、例えば、特許文献１（米国特許出願公開第２０１５−０１７４２３７号としても公開され、その全体が参照することにより本明細書の一部をなす）に記載される融合タンパク質として発現される。
【０１９０】
融合タンパク質。多量体ＨＨＶタンパク質を作製するため使用される融合タンパク質は、標準的な組み換えクローニング技術を使用して合成され得る。例えば、融合タンパク質を作製する一つの戦略は、コードされる融合タンパク質が、単一の核酸構築物から二量体、三量体、四量体、六量体、七量体又は八量体の複合体を形成することができるように、オリゴマー化モチーフ配列と、２つ以上の抗原を隔てるリンカー配列とを含む核酸構築物を作ることを含む（全ての目的で参照することにより本明細書の一部をなす特許文献１を参照されたい）。このプラットフォームを、例えば、ｇｐ３５０、ｇｐ２２０ポリペプチド又はｇＢを含む、目的の単一の抗原の複数のコピーを含む多量体融合タンパク質を作るため使用することができる。例えば、ホモ二量体、ホモ三量体又はホモ四量体は、それぞれ、二量体化、三量体化又は四量体化のドメインを有する、同じポリペプチドの２つ、３つ又は４つのコピーを使用して作製され得る。オリゴマー化ドメインが互いに会合する場合、構築物は、（二量体化ドメインが使用される場合）同じポリペプチドの４つのコピーを含む四量体を形成し、（三量体化ドメインが使用される場合）同じポリペプチドの６つのコピーを含む六量体を形成し、又は（四量体化ドメインが使用される場合）同じポリペプチドの８つのコピーを含む八量体を形成する。
【０１９１】
代替的には、このプラットフォームは目的の２つ以上の種々の抗原を含む多量体融合タンパク質を作製するために使用され得る。例えば、ヘテロ二量体は、ＨＨＶのｇＨとｇＬとの間に形成されたヘテロ二量体等の第２の異なるＨＨＶポリペプチド（又は２つ若しくは３つの異なる抗原を含むヘテロ三量体）に連結された第１のＨＨＶポリペプチドを用いて作製され得る。オリゴマー化ドメインが共に会合する場合、構築物は、（二量体化ドメインが使用される場合）第１と第２のＨＨＶポリペプチドの両方に対して二量体である四量体を形成し、（構築物において三量体化ドメインが使用される場合）少なくとも第１と第２のＨＨＶポリペプチドに対して二量体である、若しくは第１、第２及び第３のＨＨＶポリペプチドに対して三量体である六量体を形成し、又は（四量体化ドメインが使用される場合）八量体を形成する。
【０１９２】
一実施形態では、三量体タンパク質は、本来のポリペプチドが三量体化ドメインと会合して単量体の形態で提示される場合に形成され得る。融合タンパク質は、任意に、第３のポリペプチド及び第２のリンカー配列を更に含んでもよく、この場合、第２のリンカー配列は第３のポリペプチド、第１のポリペプチド又はオリゴマー化ドメインに第２のポリペプチドをつなぐ。他の実施形態では、融合タンパク質は４つ以上のポリペプチド及び追加のリンカーを含む。一実施形態では、宿主細胞で発現されると、融合タンパク質は多量体ポリペプチドを形成する。別の実施形態で、第１及び第２のポリペプチドは、多量体のタンパク質として天然には生じない。
【０１９３】
或る実施形態では、各ＨＨＶポリペプチドの細胞外ドメインの一部のみが、融合タンパク質をコードする核酸構築物へと操作される。より短いポリペプチドは、より大きな量での発現がより容易であり、或る実施形態では、所望の免疫学的効果を達成するためにＨＨＶポリペプチドの一部のみ、すなわち、免疫応答を誘発するＨＨＶポリペプチドのそれらの部分が必要である又は望ましい。
【０１９４】
任意に、核酸構築物は、発現された融合タンパク質が哺乳動物宿主細胞、例えば、ＨｅＬａ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞、ＣＯＳ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、及びKhan, K., Adv. Pharm. Bull., 3(2):257-263, 2013等の当該技術分野で開示されるその他の細胞等の１つ以上の宿主細胞を含む組織培養物から分泌されるように、シグナルペプチドをコードする核酸を含む。融合タンパク質の分泌は、既知の方法論によるタンパク質の採取及び精製の容易な手段を提供する。
【０１９５】
一実施形態では、融合タンパク質は、ロイシンジッパーオリゴマー化ドメイン等の二量体化ドメインと共に発現される場合、ｇｐ３５０四量体が形成されるように、１つ以上のｇｐ３５０ポリペプチド、例えば、２つのかかる配列をコードする核酸配列を含む核酸構築物の発現から形成される（図１左パネルを参照されたい）。ｇｐ３５０核酸配列は、かかる配列を含む任意のＨＨＶゲノムに由来し得る。代替的には、ｇｐ３５０配列は、本明細書に開示される１つ以上の他のＨＨＶによって置換され得る。
【０１９６】
図１の中央パネルに示されるように、別の実施形態では、融合タンパク質は、ｇＨをコードする第１の核酸構築物及びｇＬをコードする第２の核酸、並びにＴ４フォルドンオリゴマー化ドメイン等の三量体化ドメインによってコードされることによって、発現の際、例えば、三量体ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体をもたらすことができる。ｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドは、既知のＨＨＶゲノムのいずれかに見られる任意のｇＨ／ｇＬポリペプチド配列であってもよい。代替的には、別の実施形態では、ｇＨ及び／又はｇＬポリペプチドは、１つ以上の他のＨＨＶポリペプチドによって置換されて本明細書に記載される所望のＨＨＶタンパク質を形成することができる。
【０１９７】
かかる実施形態では、核酸構築物は全長ＨＨＶポリペプチド配列を含む必要はない。配列は修飾されていてもよい。例えば、修飾された配列は、部分、切断、或いは変更又は変異された配列であってもよい。かかる修飾された配列は、例えば膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインの配列の除去によって、タンパク質発現を改善させることができる、又は例えば本明細書において検討されるＨＨＶポリペプチドの免疫原性の高いエピトープを戦略的に配置することによって、よりロバストな免疫応答を誘発させることができる。
【０１９８】
リンカー配列。修飾されたｇＢポリペプチドにおいてリンカー配列を使用し、ｇＢポリペプチドの細胞外ドメインのフーリン切断部位を置き換える。また、融合タンパク質においてリンカー配列を使用し、融合タンパク質の種々のコンポーネントを隔てる。したがって、或る特定の実施形態では、リンカー配列のアミノ末端はペプチド結合によって第１のポリペプチドにつながれ、リンカー配列のカルボキシ末端はペプチド結合によって第２のポリペプチドにつながれる。第１及び第２のポリペプチドは、各々のＨＨＶの融合及び宿主細胞侵入タンパク質の１つ、又はＨＨＶアクセサリータンパク質の１つである。或る特定の実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは同じ（例えばｇｐ３５０）である。他の実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは異なる（例えばｇＨ及びｇＬ）。介在するポリペプチド配列なしに共につながっている第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとは対照的に、かかるリンカー配列は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをつなぐ。第１及び第２のポリペプチドが偶然、共に組み合わされて天然に存在する場合、リンカー配列は、第１と第２のポリペプチドを天然に隔てる配列ではないと理解される。
【０１９９】
一実施形態では、リンカー配列は、５アミノ酸〜２５アミノ酸、特に６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０のアミノ酸長を有するポリペプチドである。別の実施形態では、リンカー配列は１０アミノ酸〜２５アミノ酸を有するポリペプチドである。リンカー配列は、好ましくはグリシン及びセリンのアミノ酸を含む。一実施形態では、リンカー配列は、１５アミノ酸長であり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）を有する。
【０２００】
他の好適なペプチドリンカーは、それぞれがその全体を参照することにより本明細書の一部をなす、米国特許第４，７５１，１８０号、同第４，９３５，２３３号及び同第５，０７３，６２７号に記載されるものである。所望のリンカー配列をコードするＤＮＡ配列は、例えば、当該技術分野で知られている従来技術を使用して、第１及び第２のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列の間に、それと同じリーディングフレーム中に挿入される。例えば、リンカーをコードする化学合成されたオリゴヌクレオチドは、第１及び第２のポリペプチドをコードする配列間にライゲートされ得る。
【０２０１】
オリゴマー化ドメイン。オリゴマー化ドメインは、或る特定の実施形態では、多量体ＨＨＶポリペプチドを作製するため使用される。オリゴマー化ドメインは、該オリゴマー化ドメインを含むポリペプチドをオリゴマー化させる、すなわち、対応する又は同族のオリゴマー化ドメインを含む別のポリペプチドと共有結合及び／又は非共有結合による会合を形成する、一続きのアミノ酸残基である。したがって、２つ以上のポリペプチドは、それらがオリゴマー化ドメインによって互いに結合される場合、「オリゴマー化」される。当該技術分野で知られている任意のオリゴマー化ドメインを使用することができる。例としては、ロイシンジッパードメイン、補体Ｃ１ｑドメイン、α−ヘリックスコイルドコイルドメイン、トロンボスポンジンドメイン及びフィブリチンドメインが挙げられる（Engel et al., Matrix Biol., 19(4):283-288, 2000を参照されたい）。オリゴマー中のポリペプチドは、同一のポリペプチド配列、類似するポリペプチド配列、又は異なるポリペプチド配列を有してもよい。
【０２０２】
ホモ二量体化及びホモオリゴマー化は、二量体又はオリゴマーを形成するための同じポリペプチドコンポーネントの会合を指す。ヘテロ二量体化及びヘテロオリゴマー化は、二量体又はオリゴマーを形成するための異なるポリペプチドの会合を指す。したがって、ホモオリゴマーは特定のポリペプチドの複数のコピーの会合を含むのに対し、ヘテロオリゴマーは異なるポリペプチドのコピーの会合を含む。接頭語を伴う又は伴わない、「オリゴマー化」、「オリゴマー化する」及び「オリゴマー」は、「二量体化」、「二量体化する」及び「二量体」を包含することを意図する。したがって、一実施形態では、オリゴマー化ドメインは、２つのＨＨＶポリペプチド及び／又は２つのＨＨＶ融合タンパク質の自己会合を媒介する二量体化ドメインである。別の実施形態では、オリゴマー化ドメインは、３つのＨＨＶポリペプチド及び／又は３つのＨＨＶ融合タンパク質の自己会合を媒介する三量体化ドメインである。別の実施形態では、オリゴマー化ドメインは、４つのＨＨＶポリペプチド及び／又は４つのＨＨＶ融合タンパク質の自己会合を媒介する四量体化ドメインである。一実施形態では、三量体化ドメインは、フィブリチンモチーフ若しくは真核生物ＧＣＮ４転写因子モチーフ、又はそれらの誘導体である。
【０２０３】
一実施形態では、オリゴマー化ドメインはロイシンジッパードメインを含む。ロイシンジッパードメインは、それらが見られるタンパク質のオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、はじめはいくつかのＤＮＡ結合タンパク質において同定され（Landschulz et al., Science, 240:1759, 1988）、以来、様々な異なるタンパク質で見出された。既知のロイシンジッパーのうち、二量化又は三量体化する天然起源のペプチド及び誘導体である。例えば、酵母ＧＣＮ４ロイシンジッパーを、目的のポリペプチドを二量化させるために使用することができる（Czerwinski et al., Transfusion, 35(2):137-44, 1995、及びO'Shea et al., Science, 243(4890):538-42, 1989）。可溶性多量体タンパク質の産生に適したロイシンジッパードメインの他の例は、国際特許出願の国際公開第９４／１０３０８号に記載され、肺サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰＤ）に由来するロイシンジッパーはHoppe et al. FEBS Lett. 344:191, 1994に記載される。それに融合された異種性タンパク質の安定した三量体化を可能とする修飾されたロイシンジッパーの使用は、Fanslow et al., Semin. Immunol., 6:267, 1994に記載される。
【０２０４】
さらに別の実施形態では、オリゴマー化ドメインはフィブリチン三量体化チーフ、特にバクテリオファージフィブリチン三量体化モチーフ、より詳しくはバクテリオファージＴ４に由来するフィブリチン三量体化ドメイン（Ｔ４フォルドン又はフォルドンドメインとも称される）若しくはファージＲＢ６９に由来するフィブリチン三量体化ドメイン若しくはファージＡＲ１に由来するフィブリチン三量体化ドメイン、又はそれらの誘導体である。Ｔ４フィブリチン三量体化ドメイン及びそのバリアントは、米国特許第６，９１１，２０５号、米国特許第８，１４７，８４３号、及び国際公開第０１／１９９５８号に記載され、それらの全体が参照することにより本明細書の一部をなす。
【０２０５】
タンパク質複合体。或る特定の実施形態では、本明細書に開示されるＨＨＶポリペプチドは、タンパク質複合体として抗原性組成物中に存在する。例えば、或る特定の実施形態では、ＨＨＶのｇＢ、ｇＬ及びｇＨはタンパク質複合体として抗原性組成物中に存在する。他の実施形態では、ＨＨＶのｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａのポリペプチドは、タンパク質複合体として抗原性組成物中に存在する。更に別の実施形態では、ＨＨＶのｇＨ、ｇＬ及びｇＯのポリペプチドはタンパク質複合体として抗原性組成物中に存在する。
【０２０６】
タンパク質複合体中のタンパク質は、典型的には、水素結合及び塩橋を含むがこれらに限定されない、非共有結合のタンパク質−タンパク質相互作用によって連結される。個々のタンパク質の集合及び相互作用から得られる配置又は形状に対応して、タンパク質複合体は四次構造を有することから、ＨＨＶタンパク質複合体上の構造的エピトープに対する中和抗体を誘導するのに有用である。或る実施形態では、本明細書で使用されるタンパク質複合体は、ヘルペスウイルスの表面に存在し、そのためネイティブタンパク質複合体を指さない。むしろ、タンパク質複合体は、個々のタンパク質をｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートし、再構築されたタンパク質複合体を作製することにより形成される。
【０２０７】
核酸、クローニング及び発現系。本開示は、開示の単量体又は多量体ＨＨＶポリペプチドをコードする単離核酸を更に提供する。核酸はＤＮＡ又はＲＮＡを含んでいてもよく、完全又は部分的に合成又は組み換えされていてもよい。本明細書に規定されるようなヌクレオチド配列への言及は、文脈上他の意味に解すべき場合を除いて、指定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＴがＵに置換された指定の配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
【０２０８】
また、本開示は、単量体若しくは多量体のＨＨＶ融合若しくは宿主侵入タンパク質、又はそれらの部分をコードする少なくとも１つの核酸を含む、プラスミド、ベクター、ファージミド、転写又は発現のカセットの形態の構築物を提供する。本開示は、上の１つ以上の構築物を含む宿主細胞を更に提供する。
【０２０９】
また、これらの核酸によってコードされる単量体又は多量体のＨＨＶポリペプチドを作製する方法も提供する。単量体又は多量体のＨＨＶポリペプチドは、組み換え技術を使用して産生され得る。組み換えタンパク質の産生及び発現は、当該技術分野でよく知られており、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Ed. 2012), Cold Spring Harbor Pressに開示される手順等の従来の手順を用いて行われ得る。例えば、融合タンパク質の発現は、単量体又は多量体のＨＨＶポリペプチドをコードする核酸を含む組み換え宿主細胞を、適切な条件下で培養することによって達成され得る。発現による産生に続いて、単量体又は多量体のＨＨＶポリペプチドは、任意の好適な技術を用いて単離及び／又は精製され得た後、必要に応じて使用され得る。本明細書で検討されるように、或る特定の条件下では、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質、並びに任意に１つ以上のＨＨＶアクセサリータンパク質は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでインキュベートした場合にタンパク質複合体を形成する。
【０２１０】
様々な異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング及び発現のための系は当該技術分野で既知である。本願に開示される構築物に適合する任意のタンパク質発現系を用いて、開示の単量体又は多量体ＨＨＶポリペプチドを産生することができる。
【０２１１】
好適なベクターをプロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子及び必要に応じて他の配列を含む適切な調節配列を含有するように選択又は構築することができる。
【０２１２】
本開示の更なる態様は本明細書で開示されるような核酸を含む宿主細胞を提供する。また更なる態様では、かかる核酸を宿主細胞に導入することを含む方法を提供する。導入には任意の利用可能な技法を用いることができる。真核細胞については、好適な技法としてリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、及びレトロウイルス又は他のウイルス、例えばワクシニアウイルス、又は昆虫細胞についてはバキュロウイルスを用いた形質導入を挙げることができる。細菌細胞については、好適な技法として塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、及びバクテリオファージを用いたトランスフェクションを挙げることができる。これらの技法は当該技術分野で既知である（例えば、"Current Protocols in Molecular Biology," Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons (2010)を参照されたい）。ＤＮＡ導入に続いて、ベクターを含有する細胞を選択する選択法（例えば抗生物質耐性）を行うことができる。
【０２１３】
ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ。ｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａを含むＨＨＶタンパク質複合体を産生させるため、組み換え核酸構築物を設計した。一実施形態では、組み換え核酸構築物は、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドをコードする第１の核酸と、ＨＨＶ  ｇＬポリペプチドをコードする第２の核酸と、ＨＨＶ  ＵＬ１２８ポリペプチドをコードする第３の核酸と、ＨＨＶ  ＵＬ１３０ポリペプチドをコードする第４の核酸と、ＨＨＶ  ＵＬ１３１Ａポリペプチドをコードする第５の核酸とを含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸が宿主細胞で発現されると、五量体複合体が形成される。或る特定の実施形態では、コードされるポリペプチドのいずれも膜貫通ドメイン又は細胞内のドメインを含まない。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、単一の転写産物からの複数のタンパク質の発現を促進するための１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、第１の核酸と第２の核酸との間に第１のＩＲＥＳ、第２の核酸と第３の核酸との間に第２のＩＲＥＳ、及び／又は第４の核酸と第５の核酸との間に第３のＩＲＥＳを含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、ＨＨＶポリペプチドの発現を促進するための１つ以上のプロモーター配列を含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、第１の核酸に制御可能に連結された第１のプロモーターと、第３の核酸に制御可能に連結された第２のプロモーターとを含む。一実施形態では、プロモーターはＣＭＶプロモーターである。或る特定の実施形態では、ＨＨＶは、例えばＨＣＭＶを含むベータヘルペスウイルス亜科メンバーである。かかる組み換え核酸の非限定的で例示的な実施形態を図１３に示す。精製を補助するためのタンパク質精製タグ（例えばｈｉｓ−タグ配列）又は宿主細胞からの分泌を促進するためのリーダー配列（例えば免疫グロブリンカッパー軽鎖リーダー配列）等の追加の核酸配列をかかる核酸配列に含んでもよい。或る特定の実施形態では、リーダー配列は、第１、第２、第３、第４及び第５の核酸の各々とインフレームで挿入される。
【０２１４】
ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ。組み換え核酸構築物は、ｇＨ、ｇＬ及びｇＯを含むＨＨＶ複合体を産生するように設計された。一実施形態では、組み換え核酸構築物は、ＨＨＶ  ｇＨポリペプチドをコードする第１の核酸と、ＨＨＶ  ｇＬポリペプチドをコードする第２の核酸と、ＨＨＶ  ｇＯポリペプチドをコードする第３の核酸とを含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸が宿主細胞において発現されると、三量体複合体が形成される。或る特定の実施形態では、コードされるポリペプチドのいずれもが膜貫通ドメイン又は細胞内ドメインを含まない。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、単一の転写産物からの複数のタンパク質の発現を促進するため、１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、第１の核酸と第２の核酸との間にＩＲＥＳを含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、ＨＨＶポリペプチドの発現を促進するため１つ以上のプロモーター配列を含む。或る特定の実施形態では、組み換え核酸は、第１の核酸に制御可能に連結された第１のプロモーター、及び第３の核酸に制御可能に連結された第２のプロモーターを含む。一実施形態では、プロモーターはＣＭＶプロモーターである。或る特定の実施形態では、ＨＨＶは、例えば、ＨＣＭＶを含むベータヘルペスウイルス亜科メンバーである。かかる組み換え核酸の例示的な実施形態を図１４に示す。精製を補助するため、タンパク質精製タグ（例えばｈｉｓ−タグ配列）又はリーダー配列（例えば免疫グロブリンカッパー軽鎖リーダー配列）等の追加の核酸配列がかかる核酸配列に含まれてもよい。或る特定の実施形態では、リーダー配列は、第１、第２、及び第３の核酸の各々とインフレームで挿入される。
【０２１５】
ワクチン組成物。本願に記載される単量体及び／又は多量体のＨＨＶポリペプチドの組み合わせ、並びにそれらをコードする核酸は、ＨＨＶワクチンを開発するための改善されたプラットフォームを提供する。
【０２１６】
したがって、一態様は、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質（又はそれらをコードする核酸）を含む、本明細書に記載される抗原性組成物に関する。或る特定の実施形態では、ワクチンはウイルス様粒子を含む。或る特定の実施形態では、抗原性組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤、及び任意にアジュバント（以下、「ワクチン組成物」と称する）を更に含む。或る特定の実施形態では、ワクチン組成物はアジュバントを含まない。
【０２１７】
或る特定の実施形態では、ワクチンは、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質をコードする核酸を含む核酸ワクチンである。或る特定の実施形態では、核酸ワクチンはＤＮＡワクチンである。他の実施形態では、核酸ワクチンはＲＮＡワクチンである。或る特定の実施形態では、核酸ワクチンはウイルスベクターワクチンである。
【０２１８】
薬学的に許容可能な賦形剤は、例えばデンプン、微結晶性セルロース、リン酸二カルシウム、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、スクロース、メチルデキストリン等の希釈剤、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ジヒドロキシプロピルセルロース及びカルボキシルメチルセルロース（carboxylmethylcellulose）ナトリウム等の結合剤、及びクロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム等の崩壊剤、並びに上述のいずれかの混合物から選ぶことができる。薬学的に許容可能な賦形剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、硬化植物油、フマル酸グリセリン等の滑沢剤、及びコロイド状二酸化ケイ素等の流動促進剤、並びにそれらの混合物から更に選ぶことができる。或る実施形態では、薬学的に許容可能な賦形剤は微結晶性セルロース、デンプン、タルク、ポビドン、クロスポビドン、ステアリン酸マグネシウム、コロイド状二酸化ケイ素、ドデシル硫酸ナトリウム、及び上述のいずれかの混合物から選ばれる。賦形剤は粒内、粒間又はそれらの混合物であり得る。
【０２１９】
ワクチン組成物は、当該技術分野で好適な任意の手段に従って凍結乾燥又は液体調製物として配合することができる。液体形態調製物の非限定的な例としては、溶液、懸濁液、シロップ、スラリー及びエマルションが挙げられる。好適な液体担体としては、好ましくは滅菌形態の、任意の好適な有機又は無機溶媒、例えば水、アルコール、食塩溶液、緩衝食塩溶液、生理食塩溶液、デキストロース溶液、プロピレングリコール水溶液等が挙げられる。配合の後、ワクチン組成物を滅菌容器に入れ、続いて密閉し、低温（例えば４℃）で保管することができるか又は凍結乾燥させることができる。
【０２２０】
ワクチン組成物は中性又は塩形態で配合することができる。薬学的に許容可能な塩としては、例えば塩酸若しくはリン酸等の無機酸、又は酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等の有機酸により形成される酸付加塩（活性ポリペプチドの遊離アミノ基により形成される）が挙げられる。遊離カルボキシル基から形成される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム又は水酸化第二鉄等の無機塩基、及びイソプロピルアミン、トリメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基等に由来していてもよい。
【０２２１】
ワクチン組成物は、アジュバント等のワクチンの予防効果を増強する作用物質を任意に含み得る。アジュバントには、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質に対する免疫応答を増大し、それによりワクチンに必要とされるタンパク質（又はそれをコードする核酸）の量、及び／又は防御免疫応答を生じさせるのに必要な投与頻度を低減するように作用する任意の化合物（複数の場合もある）が含まれる。アジュバントとしては、例えば乳化剤、ムラミルジペプチド、アブリジン、水酸化アルミニウム等の水性アジュバント、キトサン系アジュバント及び様々な任意のサポニン、油、並びに当該技術分野で既知の他の物質、例えばＡｍｐｈｉｇｅｎ、ＬＰＳ、細菌細胞壁抽出物、細菌ＤＮＡ、ＣｐＧ配列、合成オリゴヌクレオチド及びそれらの組み合わせ（Schijns et al. (2000) Curr. Opin. Immunol. 12:456）、マイコバクテリウム・フレイ（Mycobacterial phlei；M. phlei）細胞壁抽出物（ＭＣＷＥ）（米国特許第４，７４４，９８４号）、マイコバクテリウム・フレイＤＮＡ（Ｍ−ＤＮＡ）及びマイコバクテリウム・フレイ細胞壁複合体（ＭＣＣ）を挙げることができる。乳化剤として機能し得る化合物としては、天然及び合成乳化剤、並びにアニオン性、カチオン性及び非イオン性化合物が挙げられる。合成化合物の中でも、アニオン性乳化剤としては、例えばラウリン酸及びオレイン酸のカリウム、ナトリウム及びアンモニウム塩、脂肪酸のカルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩、並びにラウリル硫酸ナトリウム等の有機スルホン酸塩が挙げられる。合成カチオン性作用物質としては、例えば臭化セチルトリメチルアンモニウムが挙げられ、合成非イオン性作用物質はグリセリルエステル（例えばモノステアリン酸グリセリル）、ポリオキシエチレングリコールエステル及びエーテル、並びにソルビタン脂肪酸エステル（例えばモノパルミチン酸ソルビタン）及びそれらのポリオキシエチレン誘導体（例えばポリオキシエチレンモノパルミチン酸ソルビタン）によって例示される。天然乳化剤としては、アラビアゴム、ゼラチン、レシチン及びコレステロールが挙げられる。
【０２２２】
他の好適なアジュバントは単一の油、油の混合物、油中水型エマルション又は水中油型エマルション等の油成分により形成することができる。油は鉱油、植物油又は動物油であり得る。鉱油は石油から蒸留法によって得られる液体炭化水素であり、当該技術分野で流動パラフィン、流動ワセリン又は白色鉱油とも称される。好適な動物油としては、例えばタラ肝油、ハリバ油、メンヘーデン油、オレンジラフィー油及びサメ肝油が挙げられ、それら全てが市販されている。好適な植物油としては、例えば菜種油、扁桃油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ラッカセイ油、サフラワー油、ゴマ油、ダイズ油等が挙げられる。フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）及びフロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）はワクチン調製に一般に使用され、本発明への使用にも好適な２つの一般的なアジュバントである。ＦＣＡ及びＦＩＡはどちらも鉱油中水型エマルションであるが、ＦＣＡは死んだマイコバクテリウム属の一種も含有する。
【０２２３】
ワクチンの有効性を増強するために、ワクチン組成物に例えばアジュバントとして免疫調節サイトカインを使用することもできる。かかるサイトカインの非限定的な例としては、インターフェロンα（ＩＦＮ−α）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）又はそれらの組み合わせが挙げられる。
【０２２４】
ワクチン組成物は混合、超音波処理及び顕微溶液化を含むが、これらに限定されない当業者に既知の技法を用いて調製することができる。アジュバントは約１０％〜約８０％（ｖ／ｖ）、より好ましくは約２０％〜約５０％（ｖ／ｖ）、より好ましくは約２０％〜約３０％（ｖ／ｖ）又はこれらの範囲内の任意の整数値のワクチン組成物を含み得る。
【０２２５】
ワクチン組成物は任意の動物、好ましくはヒト、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタ等の哺乳動物に投与することができる。ヒトが最も好ましい。
【０２２６】
ワクチン組成物の投与は注入又は注射（例えば静脈内、筋肉内、皮内、皮下、髄腔内、十二指腸内、腹腔内等）によるものであり得る。ワクチン組成物は鼻腔内、経膣、直腸内、経口、扁桃内又は経皮でも投与することができる。さらに、ワクチン組成物は「無針」送達系によって投与することができる。
【０２２７】
ワクチン組成物の有効量は患者の種、品種、大きさ、身長、体重、年齢、全身健康状態、配合物のタイプ、又は投与の様式若しくは方法を含むが、これらに限定されない様々な変動要素に左右され得る。適切な有効量は、日常的な最適化法及び専門家の情報に基づいた判断及び当業者に明白な他の要因を用いて当業者によって日常的に決定することができる。本明細書に記載のワクチン組成物の治療上効果的な用量は、被験体に対して実質的な毒性を引き起こすことなく治療的な予防効果をもたらすものであるのが好ましい。
【０２２８】
ワクチン組成物は、２以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質に対する免疫応答を誘導する及び／又は持続させる適切な任意の計画で患者に投与することができる。例えば、本明細書に記載及び例示されるように患者にワクチン組成物を一次免疫として投与し、続いて防御免疫を強化及び／又は維持するために二次免疫又は追加免疫を実施することができる。
【０２２９】
一次免疫及び追加免疫の実施を含むワクチン投与計画は、患者に必要とされる期間にわたって、例えば数年間にわたって、更には患者の生涯を通じて継続することができる。一次ワクチン及び追加免疫の実施の頻度及び投与用量は、管理医師によって決定されるように当該技術分野で好適な任意の手段に従って、個々の患者の特定の要求を満たすように変更及び／又は調整することができる。
【０２３０】
ワクチン組成物は予防的（対象の抗原又は病原体への曝露前）又は治療的（対象の抗原又は病原体への曝露後）に投与することができる。
【０２３１】
免疫応答を誘導する方法。別の態様では、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質（又はそれらをコードする核酸）を、被験体において、免疫応答を誘導する方法、或いはＨＨＶ感染を治療又は予防する方法において使用することができる。免疫応答は、先にＨＨＶに曝露されたことがないナイーブ被験体において誘導され得る。代替的には、免疫応答は、先にＨＨＶに曝露されたことがある被験体において誘導され得て、既存の免疫応答を増強するため使用され得る。
【０２３２】
一実施形態では、免疫応答を誘導する方法は、被験体において２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質に対して免疫応答を誘導するのに十分な量で、本明細書に記載される２つ以上のＨＨＶ融合又は宿主細胞侵入タンパク質を被験体に投与することを含む。別の実施形態では、免疫応答を誘導する方法は、被験体において２つ以上のＨＨＶポリペプチドに対する免疫応答を誘導するのに十分な量で、本明細書に記載される２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質をコードする１つ以上の核酸構築物を被験体に投与することを含む。或る特定の実施形態では、上記方法は、２つ以上のＨＨＶ融合又は宿主細胞侵入タンパク質に対する相加的な抗体応答を誘導する。或る特定の実施形態では、上記方法は、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質に対する相乗的な抗体応答を誘導する。
【０２３３】
免疫応答を誘導するこれらの方法では、免疫応答は本願に開示されるもの等の当該技術分野で日常的な方法を用いて測定され得る。これらの日常的な方法としては、ＨＨＶタンパク質に対する抗体応答等の抗体応答の測定、及び例えばトリチウムチミジン取込み又はサイトカイン（例えばＩＦＮ−γ）産生の測定を含む、細胞増殖の測定が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３４】
或る特定の実施形態では、ＨＨＶ感染を治療又は予防する方法は、本明細書に記載される、治療有効量の２つ以上のＨＨＶポリペプチド、又はそれらをコードする１つ以上の核酸構築物を被験体に投与することを含む。
【０２３５】
２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質を投与する工程を含むこれらの方法では、該タンパク質は、同時に又は順次に投与され得る。或る特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原性組成物を構成するＨＨＶタンパク質は、例えば、同じ組成物の部分として、又は同時に投与される異なる組成物の部分として、同時に（付随して）投与される。他の実施形態では、本明細書に開示される抗原性組成物を構成するＨＨＶタンパク質は、別々に（順次に）投与される、例えば、異なるときに個別の組成物として投与される。すなわち、上記組成物中の少なくとも２つのＨＨＶポリペプチドは、本明細書に開示される効果を達成するため同時に又は別々に投与され得る。さらに、組成物は、所望の結果を達成するため１回以上の投薬により投与され得る。
【０２３６】
典型的には、被験体はヒトである。或る特定の実施形態では、被験体は、造血幹細胞又は固形臓器の移植等の移植後にＰＴＬＤを発症するリスクがある。或る特定の実施形態では、被験体は、例えばＡＩＤＳを含む原発性免疫不全症候群を患う。或る特定の実施形態では、被験体は上咽頭癌を発症するリスクがある。或る特定の実施形態では、被験体は上咽頭癌を有する。
【０２３７】
或る実施形態では、被験体は、抗ＣＤ２０抗体、抗ウイルス療法、インターフェロンアルファ、放射線療法、及び／又は化学療法の１つ以上を同時に受ける。ＣＤ−２０抗体療法及び関連する生物学的製剤は、放射線療法及び化学療法のように、当該技術分野で知られている。これらのカテゴリーの既知の治療レジメンのいずれかを、それを必要とする被験体に同時に適用することができる。
【０２３８】
受動免疫療法及び細胞媒介免疫の養子移入。様々な適応症に対する受動免疫療法の方法が当該技術分野で知られており、１２０年以上に亘って様々な形態で利用されてきた（Waldman, T.A., Nature Medicine, 9(3):269-277, 2003、及びChippeaux et al., J. Venom. Anim. Toxins Incl. Trop. Dis., 21:3, 2013を参照されたい；またCasadevall et al., Clin. Infect. Dis., 21(1):150-61, 1995も参照されたい）。炎症、免疫不全、急性及び慢性の自己免疫疾患、並びに癌に対する抗体を受動的に移入させる利点は、十分に確立されている（Kivity et al., Clin. Rev. Allergy Immunol., 38:201-69, 2010、及びToubi et al., Clin. Rev. Allergy Immunol., 29:167-72, 2005）。研究は、中和によるそのＦａｂとＦｃの両方の部分による体液性及び細胞性免疫応答の媒介、並びに病原体のクリアランスの増強を含む、受動的に移入された抗体の多機能の機構を立証した。また、受動免疫療法は、時には、任意に、細胞移入療法、免疫グロブリン療法、抗血清療法、受動移入、又は受動免疫とも称される。免疫細胞が、それを必要とする被験体に投与される免疫成分又は中和物質である場合、上記方法は、しばしば養子移入、養子細胞療法（ＡＣＴ）、又は養子免疫療法と称される。
【０２３９】
受動免疫療法では、抗体（又は免疫グロブリン）又は他の免疫系成分、すなわち、免疫細胞等の抗原中和活性を持つ物質は、これらの成分が投与される被験体の外で作製され、典型的には、実験室で作製される及び／又は第２の被験体（又は数名の他の被験体）によってｅｘ  ｖｉｖｏで産生される。或る実施形態では、被験体に投与される免疫系成分はモノクローナル抗体である。他の実施形態では、免疫成分はポリクローナル抗体である。更に他の実施形態では、免疫成分は１つ以上の免疫細胞である。全ての例において、免疫成分は、ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質上に存在する標的抗原等の標的抗原を特異的に認識する抗体又は細胞を含む。
【０２４０】
ＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質の様々な組み合わせが高力価中和抗体を誘導することを示したため、かかる高力価中和抗体は、ＨＨＶに対する免疫を受動的に移入させるために使用され得ることが企図される。したがって、本明細書に記載される、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質によって免疫化された被験体により生成された抗体は、被験体から採取され、単離され得る。ドナー被験体は、高力価の抗ＨＨＶ抗体を誘導するため、本明細書に記載されるＨＨＶ（例えばＥＢＶ、ＨＣＭＶ、ＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＨＶ−７又はＫＳＶＨ）の融合又は宿主細胞侵入タンパク質の任意の組み合わせにより免疫化され得る。
【０２４１】
ＥＢＶ受動免疫化又は養子移入の実施形態では、ドナー被験体は、例えば四量体のＥＢＶ  ｇｐ３５０タンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。更なるＥＢＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。別の例示的なＥＢＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ｇＢタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。
【０２４２】
ＨＣＭＶの受動免疫化又は養子移入の実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＨＣＭＶ  ｇＢタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。更なるＨＣＭＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。
【０２４３】
ＨＳＶの受動免疫化又は養子移入の実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＨＳＶ  ｇＢタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。更なるＨＳＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＨＳＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。
【０２４４】
ＶＺＶの受動免疫化又は養子移入の実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＨＳＶ  ｇＢタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。更なるＶＺＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＶＺＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。
【０２４５】
ＫＳＨＶ受動免疫化又は養子移入の実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＫＳＨＶ  ｇＢタンパク質により免疫化され、それから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を受けるアクセプター被験体への免疫を受動移入に利用される。更なるＫＳＨＶの実施形態では、ドナー被験体は、例えば三量体ＫＳＨＶ  ｇＨ／ｇＬタンパク質により免疫化され、そこから得られる誘導された高力価中和抗体は、それから利益を得るアクセプター被験体への免疫の受動移入に利用される。
【０２４６】
２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質による免疫化は、ドナー被験体において所望の中和活性が得られる限り、同時であってもよく、複数回投与であってもよく、又は時差（staggered）投与であってもよい。ドナー被験体において誘導されたこれらの抗体を、次いで、それを必要とする別の被験体に投与することができる。代替的には、ＨＨＶ融合又は宿主細胞侵入タンパク質に対する高力価中和抗体を、高力価抗体について選択された１つ以上の血液、血清又は血漿試料から得ることができる。或る特定の実施形態では、１つ以上の血液、血清又は血漿試料を、ヒトドナーから得る。
【０２４７】
また、免疫成分は、モノクローナル抗体として合成により、組織培養物中に産生されて、若しくは動物によって得られてもよく、又は所望の抗原を特異的に認識する免疫成分に対して血清陽性であるか、若しくは抗原に曝露されたため血清陽性となったいずれかの別のドナー被験体から得られてもよい。或る特定の実施形態では、ドナー被験体は、抗原に対する高度の反応性を持つ、すなわち、高濃度又は高力価の抗原中和免疫成分（例えば、抗体又は免疫細胞）を持つ。次いで、これらの免疫成分をドナー被験体から取り出し、又は組織培養物若しくは動物から得て、可能性のある移植片対宿主反応又は他の有害反応を回避する必要に応じて、実験室で精製、或いは操作し、その後、それを必要とする被験体に投与する。
【０２４８】
受動免疫療法又は養子移入のプロトコル又は方法論を実施するための工程は、或る実施形態では、まず、ＨＨＶに対して高い中和活性を持つドナー被験体を同定することを含む。或る特定の実施形態では、高力価の抗ＨＨＶ抗体又は免疫細胞を、ドナー被験体から収集した血液、血清及び／又は血漿試料から得る。次いで、これらの免疫成分を、第２の被験体において免疫防御効果を誘導するため、それを必要とする第２の被験体に移入させ、それによりＨＨＶ感染を予防又は治療する。第２の被験体は、ＨＨＶに感染していてもよく、又はＨＨＶに感染しやすいものであってもよい。抗体は、任意に、それを必要とする被験体への投与に先立って抽出及び／又は精製されてもよい。さらに、他の実施形態では、任意に、ドナー被験体は、血液、血清及び／又は血漿がそれを必要とする被験体に投与され得るように、それを必要とする被験体と組織適合性である。或る実施形態では、血液、血清及び／又は血漿は、ヒトドナーから得られる。
【０２４９】
本明細書で使用される「高力価」という用語は、ドナー被験体の一般的な集団に由来し、同じ特異性を持つ抗体を含む、選択されていない血漿、血清又は血液試料による平均力価よりも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１２倍、１４倍、１６倍、１８倍、２０倍、２５倍、又は或る実施形態では、３０倍も多い量で所望のＨＨＶポリペプチドに特異的な力価を有する抗体を指す。或る特定の実施形態では、ドナー被験体はＨＨＶポリペプチド抗原に曝露されたことがあり、血清反応陰性又はナイーブではない。或る特定の実施形態では、ドナー被験体（複数の場合もある）において高力価抗体応答をもたらすため、該ドナー被験体には、２つ以上のＨＨＶ融合及び宿主細胞侵入タンパク質が投与されている。高力価抗体は、本願に記載される方法（例えば、Ｒａｊｉ  Ｂ細胞中和アッセイ又はＨｅＬａ細胞中和アッセイ）、又は当該技術分野で知られている任意の方法を用いて同定又は選択され得る。抗体力価は、当該技術で認識されている様々なスクリーニング方法によって又は本願に開示される方法によって決定され得る。一実施形態では、高力価抗体は、例えば、本願の実施例において記載される、Ｒａｊｉ  Ｂ細胞中和アッセイ又はＨｅＬａ細胞中和アッセイを用いて同定又は選択される。或る特定の実施形態では、ＨｅＬａ細胞中和アッセイは、標識化されたＥＢＶ（例えば緑色蛍光タンパク質等の蛍光標識を有するＥＢＶ）によりＨｅＬａ細胞を感染させて、ＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞を生じさせることと、該ＥＢＶに感染したＨｅＬａ細胞と共に血液、血漿又は血清試料をインキュベートすることと、該血液、血漿又は血清試料の中和活性を（例えばフローサイトメトリー又はＥＬＩＳｐｏｔアッセイを用いて）分析することと、任意に、該血液、血漿又は血清試料のＩＣ５０を計算することとを含む。
【０２５０】
処置を必要とする被験体は、ナイーブ（ＨＨＶに対して血清反応陰性）、免疫低下している、或いは感染しやすい、又は１つ以上のＨＨＶに既に感染している被験体である。或る特定の実施形態では、被験体には、高力価抗ＥＢＶ抗体が投与され、該被験体は、造血幹細胞又は固形臓器の移植後に移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）を発症するリスクがある、又は上咽頭癌（ＮＰＣ）、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃癌、重症伝染性単核球症、慢性活動性ＥＢＶ感染症、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス又は関節リウマチを有する若しくはそれらを発症するリスクがある。或る特定の実施形態では、被験体は、例えば造血幹細胞又は固形臓器の移植後にＰＴＬＤを発症するリスクがある。或る特定の実施形態では、被験体は上咽頭癌を発症するリスクがある。
【０２５１】
別の実施形態では、被験体には、高力価抗ＨＣＭＶ抗体を投与され、該被験体は、妊婦、移植患者、化学療法若しくは放射線療法中に免疫抑制されている患者、又はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者である。別の実施形態では、被験体には、高力価の抗ＨＳＶ−１抗体又はＨＳＶ−２抗体が投与され、該被験体は、ＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２感染によって引き起こされる脳炎を発症するリスクがある、又は活動性のＨＳＶ−２若しくはＨＳＶ−１の感染及び／又はＨＳＶ脳炎を有する妊婦である。別の実施形態では、被験体には、高力価抗ＺＶＺ抗体が投与され、該被験体は、帯状ヘルペス（帯状疱疹）又は水痘（水疱瘡）を発症するリスクがある。更なる実施形態では、被験体には、高力価抗ＫＳＨＶ抗体が投与され、該被験体は、ＫＳＨＶ関連カポジ肉腫、原発性滲出性リンパ腫、多中心性キャッスルマン病、ＫＳＨＶ関連炎症性サイトカイン症候群、又はＫＳＨＶ免疫再構築炎症反応症候群を発症するリスクがある。
【０２５２】
別の実施形態では、処置を必要とする被験体は、同時に、抗ウイルス療法、抗ＣＤ２０抗体組成物、インターフェロン−アルファ、放射線療法及び／又は化学療法を受けている。
【０２５３】
他に規定のない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様の又は均等の方法及び材料を、本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は引用することによりその全体が本明細書の一部をなす。矛盾が生じる場合には、定義を含めて本明細書に従うものとする。さらに、材料、方法、及び実施例は一例にすぎず、限定を意図するものではない。
【実施例】
【０２５４】
１．エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）
実施例１．１−ＥＢＶ  ｇＨポリペプチド及びＥＢＶ  ｇＬポリペプチドの産生
ＥＢＶのｇＨポリペプチド及びｇＬポリペプチドを組み換えにより産生するため、ＥＢＶ  ｇＨ及びｇＬのコード配列を、ＮＣＢＩウェブサイトのＥＢＶ  ｇＨヌクレオチド１２９４５４〜１３１５７４及びＥＢＶ  ｇＬヌクレオチド９８５００〜９８９１３を含む参照配列ＮＣ＿００９３３４．１からダウンロードした。アミノ酸２３〜１３７をコードするｇＬ配列を使用し、アミノ酸１〜２２にあるシグナルペプチドをＩｇＧκリーダー配列で置き換えた。アミノ酸１９〜６７８に対応するアミノ酸をコードするｇＨ配列はｇＬ配列の３’末端に連結され、１５アミノ酸リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）配列によって隔てられる（図１の代表的な概略を参照されたい）。Ｔ４ファージフィブリチンに由来するフォルドン三量体化ドメインコード配列（例えば、米国特許第６，９１１，２０５号；米国特許第８，１４７，８４３号；及び国際公開第０１／１９９５８号）をｇＨの３’末端に連結し、その後ろにＨｉｓ６（配列番号４９）コード配列が続いた。三量体ｇＨ／ｇＬをコードするＤＮＡを合成し、ベクターｐＯｐｔｉＶＥＶ（米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）にクローニングし、シークエンシングによって配列を検証した。単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ構築物を、フォルドン三量体化コード配列を含まないＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬのＰＣＲ増幅によって作製し、ｐＯｐｔｉＶＥＶにクローニングした。その配列をシークエンシングによって検証した。
【０２５５】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＧ４４株、米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）を得られたｐＯｐｔｉＶＥＶ−ｇＨ／ｇＬ構築物によりトランスフェクトし、メトトレキサート（ＭＴＸ）の濃度を最大４μＭまで徐々に増加させながら陽性細胞を選択した。選択されたＣＨＯ細胞を、タンパク質産生のため「Ｆｉｂｅｒｃｅｌｌ」カートリッジ（米国メリーランド州フレデリックのFiberCell Systems）に充填した。上清を濃縮し、コバルトアフィニティ精製（米国マサチューセッツ州ウォルサムのThermo Fisher Scientific）を使用して精製した。Ｓｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ２００カラム又はＳｕｐｅｒｏｓｅ（商標）６  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  １０／３００  ＧＬカラム（英国リトル・チャルフォントのGE Healthcare）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーによって組み換えタンパク質を更に精製した。
【０２５６】
ネイティブオリゴマーを破壊する還元条件下での抗Ｈｉｓ６（配列番号４９）ｍＡｂ又は抗ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ  ｍＡｂ（クローン  Ｅ１Ｄ１、米国ルイジアナ州シュリーヴポートのルイジアナ州立大学健康科学センターのL. M. Hutt-Fletcher博士より寄贈）を使用する三量体ｇＨ／ｇＬポリペプチドのウェスタンブロット分析は、単量体ｇＨ／ｇＬの予測サイズと一致する約９０キロダルトン（ｋＤａ）の分子量（ＭＷ）バンドを明らかにした（図２Ａ）。非還元条件下では、約２７０ｋＤａのＭＷバンドが観察され、三量体ｇＨ／ｇＬの予測サイズと一致した（図２Ａ）。
【０２５７】
実施例１．２−ＥＢＶ  ｇＢポリペプチドの産生
組み換えによりＥＢＶ  ｇＢポリペプチドを産生するため、参照配列ＮＣ＿００９３３４．１、ヌクレオチド１５７７７５〜１６０３４８に対応するＥＢＶ  ｇＢのコード配列をＮＣＢＩウェブサイトからダウンロードした。ＥＢＶ  ｇＢの細胞外のドメインをコードする配列（野生型ＥＢＶのアミノ酸２３〜７３２）を、三量体ｇＢ発現のための構築物の設計に使用した。アミノ酸１〜２２に対応するシグナルペプチドをＩｇＧκリーダー配列で置き換え、アミノ酸４２７（Ｌ）と４３４（Ａ）との間のフーリン切断部位のコード配列（ＲＲＲＲＤ）（配列番号５０）を、１５アミノ酸（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）リンカー配列で置き換えた（図１）。Ｈｉｓ６（配列番号４９）配列をタンパク質精製のため３’末端に連結させた。下記の全ての工程は、ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬについて上に記載される通りであった。
【０２５８】
抗Ｈｉｓ６（配列番号４９）ｍＡｂ又は抗ｇＢ  ｍＡｂ（米国メリーランド州タネイタウンのVirusys Corp.）を使用する完全な還元条件下でのウェスタンブロット分析は、ＥＢＶ  ｇＢタンパク質が単量体形態（約８０ｋＤａ）の予測サイズであることを実証した（図２Ｂ）。ＥＢＶ  ｇＢタンパク質のネイティブ形態の検出を可能とする修正された非還元条件下で、三量体ＥＢＶ  ｇＢ（約２４０ｋＤａ）の予測サイズを有する均一なバンドが観察された（図２Ｂ）。
【０２５９】
実施例１．３−ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドの産生
ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドを以前に記載されている通りに発現させた（Cui et al., Vaccine, 31:3039-45, 2013を参照されたい；またその全体が引用することにより本明細書の一部をなす特許文献１も参照されたい）。簡潔には、ＥＢＶの単量体ｇｐ３５０構築物を、Ｂ９５−８株のｇｐ３５０  ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅によって作製した。アミノ酸１〜４７０をコードする配列を、５’末端に付加されたＩｇＧκリーダー配列、及び３’末端に付加されたＨｉｓ６（配列番号４９）コード配列と共にクローニングした。四量体ｇｐ３５０構築物を、単量体ｇｐ３５０構築物（Ｈｉｓ６（配列番号４９）を含まない）の３’末端への第２のｇｐ３５０断片（１〜４７０）のライゲーションによって作製した。第２のｇｐ３５０断片は、ホモ二量体化のため５’末端に（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）リンカー、３’末端にロイシンジッパー配列、続いてタンパク質精製のためのＨｉｓ６（配列番号４９）配列を有する（図１）。単量体及び四量体のｇｐ３５０  ＤＮＡをｐＯｐｔｉＶＥＶにクローニングし、それらの配列をシークエンシングによって検証した。下記の全ての工程はＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬについて上に記載される通りであった。
【０２６０】
抗ｇｐ３５０  ｍＡｂであるクローン２Ｌ１０（米国マサチューセッツ州ビレリカのMerck Millipore）、７２Ａ１（米国バージニア州マナッサスのATCC）又は抗Ｈｉｓ６（配列番号４９）ｍＡｂを変性（還元）条件下で使用するウェスタンブロット分析は、単量体ｇｐ３５０に対応する単一の約１００ｋＤａのバンド及び四量体ｇｐ３５０を形成する２つのｇｐ３５０二量体の解離により生じたｇｐ３５０二量体と一致する約２００ｋＤａの単一のバンドを明らかにした（図２Ｃ）。ネイティブ（非還元）条件下で、単量体ｇｐ３５０と一致する約１００ｋＤａの単一のバンドを明らかにし、四量体ｇｐ３５０と一致する約４００ｋＤａの単一のバンドが観察された（図２Ｃ）。
【０２６１】
実施例１．４−ウサギにおけるＥＢＶ免疫応答の誘導
得られたＥＢＶポリペプチドは、ワクチン調製物で、ウサギにおける免疫応答を誘導するそれらの能力について調べた。この研究及びこの実施例の後に続く実施例では、免疫応答のレベルを、血清中に見られたＥＢＶポリペプチド特異抗体のレベルによって決定した。この研究では、１２週齢〜１５週齢の５匹の雄性のニュージーランドホワイトウサギ群を、単量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０又は単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬに対して四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ又は三量体ＥＢＶ  ｇＢを含む、各２５μｇのＥＢＶ抗原により皮下免疫化した。抗原を水酸化アルミニウムに吸着させ（アラム；１ｍｇのタンパク質当たり０．２５μｇのアラム）、注射に先立って、ウサギでの使用に最適化させた１２−ｍｅｒホスホロチオエート修飾ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）（以下、ＯＤＮ  ２００７、ＴＣＧＴＣＧＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ（配列番号５１））５０μｇと混合した（Ioannou et al., Vaccine, 21:4368-72, 2003を参照されたい）。ＯＤＮ  ２００７の活性を、ウサギ脾細胞（同上）に添加した場合のＩｇＭ分泌を刺激するその能力によって確認した。アラム及びＣｐＧ−ＯＤＮ単独により免疫化したウサギは陰性対照としての役割を果たした。ウサギを、０日目、２１日目及び４２日目に免疫化した。血清サンプルを、初回免疫化前及び各免疫化の１０日後に採取した。
【０２６２】
Ｒａｊｉ  Ｂリンパ腫細胞及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識化ＥＢＶの培養物におけるＩＣ５０中和力価の測定のため、最後の免疫化の１０日後に血清を得た。図３に示されるＩＣ５０値は、５０％ＥＢＶ中和をもたらす血清力価の逆数を表す。ＥＢＶ感染をフローサイトメトリーによって測定した。図３に示されるように、四量体ｇｐ３５０及び三量体ｇＨ／ｇＬは、それらの単量体相当物よりも有意に（＊ｐ＜０．０５）高いＩＣ５０力価を誘発した。注目すべきは、ｇＨ／ｇＬ（ＩＣ５０＝５０６）＞ｇＢ（ＩＣ５０＝８９）＞ｇｐ３５０（ＩＣ５０＝２２）で、多量体タンパク質間でＩＣ５０力価の有意差（ｐ＜０．０５）も観察されたことである。
【０２６３】
したがって図３に示されるように、単量体ｇｐ３５０（図３、左パネル、白丸）及び単量体ｇＨ／ｇＬ（図３、中央パネル、白丸）を含む１回目の追加免疫の後、５つのＥＢＶポリペプチドは、各々増大したＩｇＧ応答を誘導した。血清ＩｇＧ力価の更に有意な増大が２回目の追加免疫の後に続いた。四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０（図３、左パネル、黒丸）は、１回目及び２回目の追加免疫の後に、単量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０（図３、左パネル、白丸）と比べて、２０倍超の血清ｇｐ３５０特異的ＩｇＧ力価を誘導した。三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ（図３、中央パネル、黒丸）は、一次免疫化及び１回目の追加免疫の後、それぞれ、血清ｇＨ／ｇＬ特異的ＩｇＧ力価の３０倍超及び９０倍超の増大を誘導し、２回目の追加免疫によって力価は同等となった。これらのデータは、四量体の融合ＥＢＶ  ｇｐ３５０ポリペプチドの多量体化が免疫原性の著しい増加を誘導することを示した、四量体及び単量体のｇｐ３５０を使用してマウスで行われた従来の研究（Cui et al., Vaccine, 31:3039-45, 2013）と一致する。
【０２６４】
実施例１．５−単量体及び四量体のｇｐ３５０によって誘導された力価と比較した単量体ｇＨ／ｇＬ、三量体ｇＨ／ｇＬ及び三量体ｇＢによって誘導されたＥＢＶ抗体力価
血清ｉｎ  ｖｉｔｒｏＥＢＶ中和力価の決定を、Ｒａｊｉ細胞（ＥＢＶ陽性ヒトバーキットリンパ腫細胞株）を使用して記載される通りに行った（Sashihara et al., Virology, 391:249-56, 2009）。簡潔には、ＥＢＶ  ＢＺＬＦ１及びＥＢＶ  ＢＡＬＦ４をそれぞれ発現するプラスミドｐ５０９及びｐ２６７０で２９３個／２０８９個の細胞をトランスフェクションすることにより、ＧＦＰ−ＥＢＶ（Ｂ９５−８／Ｆ）を作製した（米国メリーランド州ベセスダのN.I.H.のJeffrey I. Cohen博士による寄贈）（非特許文献４、及びDelecluse et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A, 95:8245-50, 1998）。血清の段階希釈物を、９６ウェルプレートにおいてＧＦＰ−ＥＢＶと２時間混合した後、更に１時間Ｒａｊｉ細を添加した。次いで、細胞を洗浄し、培地単独で３日間再度培養し、パラホルムアルデヒドで固定して、ＧＦＰ＋Ｒａｊｉ細胞についてフローサイトメトリーによって分析した。ＧＦＰ陽性細胞数の低減に基づく感染力が５０％（ＩＣ５０）阻害される血清希釈率をＰｒｉｓｍ  ６ソフトウェアを用いた非線形回帰分析によって計算した（米国カリフォルニア州ラ・ホーヤのGraphPad Software, Inc.）。ＥＢＶ中和抗ｇｐ３５０  ｍＡｂ（７２Ａ１）を陽性対照として使用した。免疫前血清及びアラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮ単独により免疫化したウサギに由来する血清は、陰性対照としての役割を果たした。末梢血ナイーブヒトＢ細胞を使用する血清中和力価の決定のため、健康なドナーの末梢血から単離したナイーブヒトＢ細胞をＧＦＰ−ＥＢＶとインキュベートし、１００ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４（米国カリフォルニア州サンディエゴのBioLegend）及び１μｇ／ｍｌのＣＤ４０抗体（米国ミネソタ州ミネアポリスのR&D Systems）を含有するＲＰＭＩ  １６４０培地で培養した。
【０２６５】
図４Ａに示されるように、四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０は、単量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０よりも、有意に高いＩＣ５０力価（５０％まで感染力を阻害した抗体の有効希釈率）を誘導した（ＩＣ５０、それぞれ２２対５未満）。注目すべきは、三量体ｇＨ／ｇＬは、単量体ｇＨ／ｇＬよりも有意に高いＩＣ５０力価（ＩＣ５０、それぞれ５０６対１０７）、すなわち四量体ｇｐ３５０によって誘導されるよりも著しく有意に高い力価レベルを誘導したことである。同様に、三量体ＥＢＶ  ｇＢは、四量体のｇｐ３５０（ＩＣ５０  ２２）より有意に高いＩＣ５０力価（ＩＣ５０  ８９）を誘導し、単量体ｇＨ／ｇＬ（ＩＣ５０  １０７）によって誘発されたものに匹敵した。以前に第ＩＩ相臨床試験で試験されている単量体ｇｐ３５０と比較して、三量体ｇＨ／ｇＬ、単量体ｇＨ／ｇＬ、三量体ｇＢ及び四量体ｇｐ３５０は、それぞれ、１００倍、２０倍、１８倍及び４倍高いＩＣ５０力価を誘発した。Ｒａｊｉ細胞を使用して計算されたもの（図４Ａ）と比較して単量体及び四量体のｇｐ３５０がわずかに高いＩＣ５０を示したという点を除き、ＥＢＶ中和力価の決定のためＧＦＰ−ＥＢＶ及び健康なドナーに由来するナイーブ末梢血ヒトＢ細胞を利用して（図４Ｂ）、図４Ａに示される各群からプールされた血清から同様のデータが得られた。したがって、ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ及びＥＢＶ  ｇＢのタンパク質は、ＥＢＶ  ｇｐ３５０のように、ウサギにおいて、Ｒａｊｉバーキットリンパ腫及びナイーブ末梢ヒトＢ細胞へのＥＢＶの侵入を阻む抗体を誘発する。しかしながら、ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ及びＥＢＶ  ｇＢのタンパク質は、ＥＢＶ  ｇｐ３５０よりも重量ベース当たりでは有意により強力であるように見える。
【０２６６】
実施例１．６−ＥＢＶ  三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬによるウサギの免疫化
１２週齢〜１５週齢のニュージーランドホワイトウサギを、水酸化アルミニウムに吸着させ（アラム；タンパク質１ｍｇ当たりアラム０．２５μｇ）、ウサギに対して最適化された１２−ｍｅｒホスホロチオエート修飾ＣｐＧ−ＯＤＮ（ＴＣＡＴＡＡＣＧＴＴＣＣ（配列番号５２））（Ioannou et al., Vaccine, 21:4368-72, 2003）１００μｇと混合した、各２５μｇのＥＢＶの三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬの組み合わせにより皮下免疫化した。ウサギを、０日目、２１日目及び４２日目に免疫化し、初回免疫化の前及び各免疫化の１０日後に血清サンプルを採取した。Ｒａｊｉバーキットリンパ腫Ｂ細胞へのＧＦＰ標識化ＥＢＶの侵入のフローサイトメトリー分析に基づくＥＢＶ中和アッセイを使用して、ＲａｊｉＢ細胞の感染力を５０％阻害する血清ＥＢＶ中和力価（ＩＣ５０）を測定した。ＥＢＶの三量体ｇＢと単量体ｇＨ／ｇＬの両方を投与することは、個々のＥＢＶタンパク質を投与することと比較して、相乗的な結果をもたらした。より具体的には、５２日目には、ＥＢＶの三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬにより免疫化したウサギは、ＥＢＶの三量体ｇＢ又は単量体ｇＨ／ｇＬ単独で免疫化したウサギと比較して、それぞれ、１６倍及び１４倍高いＥＢＶ中和活性を実証した（図５）。
【０２６７】
実施例１．７−抗血清の組み合わせによるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＥＢＶ中和
三量体ＥＢＶ  ｇＢ、単量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ又は単量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０により免疫化したウサギから得られた血清の種々の組み合わせを、Ｒａｊｉ細胞を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＥＢＶ中和力価について分析した。三量体ｇＢ＋単量体ｇＨ／ｇＬ血清、三量体ｇＢ＋単量体ｇｐ３５０血清、単量体ｇＨ／ｇＬ＋単量体ｇｐ３５０血清、及び三量体ｇＢ＋単量体ｇＨ／ｇＬ＋単量体ｇｐ３５０血清はいずれも、個々のタンパク質免疫血清の中和活性の合計と比較して、ＥＢＶ中和活性の２倍超の増加を示し、ＥＢＶ中和活性に対する相乗作用を明らかに実証した（図６Ｂ）。
【０２６８】
また、ＥＢＶ三量体ｇＢ、三量体ｇＨ／ｇＬ又は四量体ｇｐ３５０により免疫化したウサギに由来する血清の種々の組み合わせを、Ｒａｊｉ細胞を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＥＢＶ中和力価について分析した。三量体ｇＢ＋三量体ｇＨ／ｇＬ血清、三量体ｇＨ／ｇＬ＋四量体ｇｐ３５０血清、及び三量体ｇＢ＋三量体ｇＨ／ｇＬ＋四量体ｇｐ３５０血清は、個々のタンパク質免疫血清の中和活性の合計に匹敵するＥＢＶ中和活性を示した（図６Ｂ）。三量体ｇＢ＋四量体ｇｐ３５０の血清は、個々のタンパク質免疫血清の中和活性の合計と比較して、ＥＢＶ中和活性の２倍超の増加を示し、相乗作用を実証した（図６Ａ）。
【０２６９】
或る特定のＥＢＶタンパク質を組み合わせた場合に得られた相乗的な結果は予想外であった。他のＥＢＶタンパク質を組み合わせた場合に得られた相加的な結果も、ワクチン又は免疫干渉による抗体応答の減弱の可能性を考慮すると、同様に予想外であった。
【０２７０】
実施例１．８−ＮＯＧマウスにおけるＥＢＶに対する免疫の受動移入
この研究では、上でＥＢＶポリペプチドに曝露されたウサギに由来する、すなわち受動免疫移入モデルによる抗血清が、ＥＢＶ感染からマウスを保護し得るかどうかを判断するため、マウスを生ＥＢＶにより負荷した。ＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒγｎｕｌｌ（ＮＯＧ）マウスは、当該技術分野において認識されている、ヒトにおけるＥＢＶ感染の重要な態様を模するＥＢＶ感染のヒト化モデルマウスである（Yajima et al., J. Infect. Dis., 198:673-82, 2008）。ＮＯＧマウスは免疫不全であり、成熟したＴ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー細胞を欠く。ヒト臍帯血に由来する造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植することによって、ＮＯＧマウスの免疫系を機能的なヒト免疫系で再構成させて、ヒト化ＮＯＧ（ｈｕ−ＮＯＧ）マウスを作製することができる（Yajima et al., J. Infect. Dis., 198:673-82, 2008）。約１×１０３ＴＤ５０（５０％トランフォーミング量）のＥＢＶによるマウスの接種は、組織病理学の所見を伴うＢ細胞リンパ増殖及び免疫低下状態のヒトで観察されるものに類似する潜在ＥＢＶ遺伝子発現、並びに感染から１０週間までの死亡を引き起こすことから、ヒトにおけるＥＢＶ由来ＰＴＬＤに対する有用なモデルと見なされる（Dittmer et al., Curr. Opin. Virol., 14:145-50, 2015）。
【０２７１】
Ｈｕ−ＮＯＧマウスは、それでもタンパク質抗原に対する特異的ヒトＩｇＧ応答の誘発を欠くことから、直接的なワクチン接種の研究には適しておらず（Seung et al., J. Infect. Dis., 208 Suppl 2:S155-9, 2013）、ＥＢＶ特異抗体に対する保護的役割を判断する受動免疫化研究を必要とする。この点で、初期の研究は、ＥＢＶ血清反応陽性の健康なドナーに由来する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を腹腔内注射したＳＣＩＤマウスの８５％が、１５０日間に亘りＢ細胞リンパ腫を発症したことを報告した。しかしながら、腫瘍形成は、２つの異なる市販のＩＶＩｇ調製物（高ＥＢＶ中和活性について特異的に選択されていない）による毎週の治療によって、又はＥＢＶの血清反応陰性ではなく血清反応陽性であるドナーに由来する精製されたＩｇＧによって予防された（Abedi et al., Int. J. Cancer, 71:624-9, 1997）。
【０２７２】
この研究では、ｈｕ−ＮＯＧマウスは、臍帯血から単離したヒトＣＤ３４（＋）ＨＳＣの静脈注射によって生じた（約１×１０４〜１．２×１０５細胞／６週齢〜１０週齢の雌性マウス）。ヒト血液−免疫系を再構成した後、４群（ｎ＝４）のｈｕ−ＮＯＧマウスに、四量体ＥＢＶ  ｇｐ３５０、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬ、三量体ＥＢＶ  ｇＢ又は対照（アジュバント（アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮ）単独）により免疫化したウサギに由来する５２日目のプール血清３００μｌの腹腔内注射を行った。ウサギ血清の腹腔内注射の２時間後、Ｂ細胞リンパ増殖及び約１０週以内又は約１０週間の致死を誘導する用量である約１×１０３ＴＤ５０のＥＢＶ（ＡＫＡＴＡバーキットリンパ腫細胞株）によりｈｕ−ＮＯＧマウスを静脈内で感染させた（Yajima et al., J. Infect. Dis., 198:673-682, 2008）。
【０２７３】
ＥＢＶ感染から７５日後、アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮを注射したウサギに由来する血清を受けた３匹のｈｕ−ＮＯＧマウスはいずれも死亡したのに対し、三量体ｇＢ特異的プール抗血清を受けた３匹のマウスはいずれも、ＥＢＶ感染後の１３２日間生存した（図７Ａ）。四量体ｇｐ３５０特異的プール抗血清を受けた１匹のｈｕ−ＮＯＧマウスは１１９日間生存し、三量体ｇＨ／ｇＬ特異的プール抗血清を受けた１匹のｈｕ−ＮＯＧマウスは１３２日生存した（図７Ａ）。対照（アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮ血清）を受けたｈｕ−ＮＯＧマウスと比較して、三量体ｇＨ／ｇＬ特異的プール抗血清又は四量体ｇｐ３５０特異的プール抗血清を受けたマウスの複数の臓器に由来するＥＢＶのコピー数は、複数の臓器においてアラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮを単独で注射したウサギに由来する血清と比べて有意に低かった（図７Ｂ）。ＥＢＶの臓器の併発に対するｇＢ特異的プール抗血清の効果は、実験が進行中であったことから、報告されなかった。また、ｇＢ、ｇＨ／ｇＬ又はｇｐ３５０に特異的なプール抗血清を受けたＨｕ−ＮＯＧマウスも、アジュバント対照と比べて、著しく低いＥＢＶ  ＤＮＡ血液レベルを示したが、三量体ｇＢ特異的プール抗血清を受けたｈｕ−ＮＯＧマウスは、四量体ｇｐ３５０特異的プール抗血清又は三量体ｇＨ／ｇＬ特異的プール抗血清を受けるたマウスと比較して、末梢血においてより高いＥＢＶ量を有した（図７Ｃ）。
【０２７４】
２．ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）
実施例２．１−三量体ＨＣＭＶ  ｇＢの産生
ＥＢＶ融合／細胞進入タンパク質による上の結果は、ＥＢＶポリペプチドを組み合わせた場合に、予想外に高いレベルの抗体誘導を示した。これらの新規な知見に基づき、本発明者らは、ＨＣＭＶ等の他のＨＨＶ科に由来する融合／細胞進入タンパク質を組み合わせる場合に同様の結果を得ると予想した。この目的で、ＨＣＭＶのような他のＨＨＶ科メンバーまでＥＢＶ研究でなされた観察結果を拡大することができることを示すため、同様の研究を計画した。
【０２７５】
ＨＣＭＶについて、ＨＣＭＶ  ｇＢのコード配列を、ＮＣＢＩウェブサイトの参照配列ＮＣ＿００６２７３．２、Ｍｅｒｌｉｎ株、ヌクレオチド８２０６６〜８４７８９から得た。ＨＣＭＶ  ｇＢのアミノ酸２３〜７５０（ｇＢの細胞外ドメインに対応する）をコードするＤＮＡ配列を使用し、シグナルペプチド（アミノ酸１〜２２に対応する）をＩｇＧκリーダー配列で置き換えた。ｇＢポリペプチドの三量体型を作製するため、切断部位のコード配列であるアミノ酸４５６（Ｎ）と４６２（Ｔ）との間のＲＴＫＲＳ（配列番号５３）を１５アミノ酸（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）リンカー配列で置き換えた（図８Ａ）。Ｈｉｓ６（配列番号４９）配列を、タンパク質精製のため３’末端に付加した。ｇＢタンパク質をコードするＤＮＡを合成し、ｐＯｐｔｉＶＥＶ（米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）にクローニングし、シークエンシングによって配列を検証した。ＣＨＯ細胞（ＤＧ４４株；米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）をｐＯｐｔｉＶＥＣ−ｇＢで安定にトランスフェクトし、メトトレキサートの濃度を最大４μＭまで増大させながら陽性細胞を選択した。コバルトカラム（米国マサチューセッツ州ウォルサムのThermo Fisher Scientific）を使用するアフィニティー精製のため上清を濃縮した。
【０２７６】
精製されたタンパク質を、還元条件下で３％〜８％のＮｕＰＡＧＥ  Ｔｒｉｓ酢酸塩Ｍｉｎｉ−Ｇｅｌ上の電気泳動によって分析した。精製されたＨＣＭＶ  ｇＢを、５０ｍＭのＤＴＴを含有する硫酸ドデシルリチウムサンプルローディングバッファー中で１０分間沸騰させ、抗ｇＢモノクローナル抗体２Ｆ１２（米国メリーランド州タネイタウンのVirusys Corp.）、又はＬＳ−Ｃ６４４５７（米国ワシントン州シアトルのLifeSpan BioSciences, Inc.）でブロットしたところ、いずれも単量体に相当する１２０ｋＤａのバンドを示した（図９Ａ）。また、精製したＨＣＭＶ  ｇＢも修正した非還元条件下でＰＡＧＥによって分析し（タンパク質を、ＤＴＴを含まないドデシル硫酸リチウムサンプルバッファーと混合し、ネイティブランニングバッファー中３％〜８％のＰＡＧＥ上で分解した）、抗ｇＢモノクローナル抗体ＬＳ−Ｃ６４４５７によりブロットしたところ、三量体ｇＢと一致する約３６０ｋＤａの分子量を持つバンドを示した（図９Ｂ）。
【０２７７】
実施例２．２−単量体及び三量体のＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬポリペプチドの産生
同様に、ＨＣＭＶのｇＨ及びｇＬのコード配列を、ＮＣＢＩウェブサイトの参照配列ＮＣ＿００６２７３．２、Ｍｅｒｌｉｎ株、ｇＨヌクレオチド１０９２２４〜１１１４５２、ｇＬヌクレオチド１６５０２２〜１６５８５８から得た。三量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬの発現のための構築物を、ＭａｃＶｅｃｔｏｒ（米国ノースカロライナ州エイペックスのMacVector, Inc.）を使用し、三量体ＥＢＶ  ｇＨ／ｇＬを発現させるために使用された設計に従って合成した。アミノ酸３１〜２７８をコードするｇＬ配列を使用し、アミノ酸１〜３０に対応するシグナルペプチドをＩｇＧκリーダー配列で置き換えた。アミノ酸２４〜７１８をコードするｇＨ配列はｇＬの３’末端に連結され、１５アミノ酸リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）配列によって隔てられた。Ｔ４ファージフィブリチンに由来するフォルドン三量体化ドメインコード配列をｇＨの３’末端に連結し、その後ろにタンパク質精製のためのＨｉｓ６（配列番号４９）コード配列が続いた。三量体ｇＨ／ｇＬをコードするＤＮＡを合成し、ｐＯｐｔｉＶＥＶ（米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）にクローニングし、シークエンシングによって配列を検証した。単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ構築物をフォルドン三量体化ドメインコード配列のない三量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬのＰＣＲ増幅によって作製し、ｐＯｐｔｉＶＥＶにクローニングし、シークエンシングによって配列を検証した。
【０２７８】
Ｆｒｅｅ−ｓｔｙｌｅ  Ｍａｘ試薬（米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）を使用し、得られたｐＯｐｔｉＶＥＣ−ｇＨ／ｇＬ構築物を用いてチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＧ４４株）（Invitrogen）に安定的にトランスフェクトし、メトトレキサートの濃度を最大４μＭまで徐々に増大させながら陽性形質転換体を選択した。上清を濃縮し、コバルトアフィニティ精製（米国マサチューセッツ州ウォルサムのThermo Fisher Scientific）を使用して精製し、抗Ｈｉｓ６（配列番号４９）抗体及び抗ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ抗体（米国テキサス州ダラスのSanta Cruz Biotech）の両方を使用してウェスタンブロットにより分析した。還元条件下では、ウェスタンブロットは、約１１０ｋＤａのバンドとして単量体ｇＨ／ｇＬを示し（図９Ｃ）、非還元条件下では、三量体ｇＨ／ｇＬが約３３０ｋＤａのバンドとして現れた（図９Ｄ）。
【０２７９】
実施例２．３−三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬによるＨＣＭＶ  ＩｇＧの誘導
所望のＨＣＭＶポリペプチド構築物を生成したことから、多量体ポリペプチド及び／又は様々なポリペプチドの組み合わせが、単量体ポリペプチドよりも実質的に大きな免疫応答を生じるかどうかを判断するため、比較研究を行った。したがって、７群の１２週齢〜１５週齢の雄性ニュージーランドホワイトウサギ５匹を、単一のＨＣＭＶエンベロープタンパク質２５μｇ又はＨＣＭＶエンベロープタンパク質の組み合わせ（組み合わせにおいて各タンパク質２５μｇ）により皮下免疫化した。各タンパク質２５μｇを水酸化アルミニウム（アラム；タンパク質１ｍｇ当たりアラム０．２５μｇ）に吸着させ、ウサギで既知の活性を有するＣｐＧ−ＯＤＮ２５μｇ（ＴＣＧＴＣＧＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴの配列（配列番号５１）を有するＯＤＮ  ２００７）と混合した。使用したＨＣＭＶタンパク質／組み合わせは、単量体ｇＨ／ｇＬ、単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ、単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）、三量体ｇＢ、単量体ｇＨ／ｇＬ＋単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ、三量体ｇＢ＋単量体ｇＨ／ｇＬ、又は三量体ｇＢ＋単量体ｇＨ／ｇＬ＋単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａであった。０日目、２１日目及び４２日目にウサギを免疫化し、初回免疫の前、及び免疫化後１０日目、３１日目、５２日目及び７２日目に血清サンプルを採取した。線維芽細胞（細胞株ＭＲＣ−５、米国バージニア州マナッサスのATCC）及び上皮細胞（細胞株ＡＲＰＥ−１９、米国バージニア州マナッサスのATCC）を使用して、生ＨＣＭＶに対する抗原特異性ＩｇＧの血清力価を決定した。三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ及び単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬの組み換えタンパク質を室温で３０分間共にインキュベートしたところ、高力価のタンパク質特異的ＩＧｇを誘導することが分かった（図１１）。
【０２８０】
ＨＣＭＶ中和アッセイ。単一のＨＣＭＶエンベロープタンパク質又はＨＣＭＶエンベロープタンパク質の組み合わせにより免疫化した各コホートの５匹のウサギに由来するプールした５２日目及び７２日目の血清を、補体活性を排除するため５６℃で３０分間熱不活性化した、又は熱処理しなかった。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して血清ＨＣＭＶ中和抗体力価を決定した。各血清サンプルを、培養培地を用いて四連で１：２の段階希釈をして調製した。ＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ＷＴ１３１を含有する等量の培養培地と各希釈物を混合し、３７℃で４時間インキュベートし、次いでＡＲＰＥ−１９（上皮細胞系列、米国バージニア州マナッサスのATCC）又はＭＲＣ−５（線維芽細胞系列、米国バージニア州マナッサスのATCC）の単層を含む９６ウェルプレートのウェルに添加し、５％ＣＯ２にて３７℃で一晩培養した。細胞を無水エタノールで固定し、再水和し、ＰＢＳ中の５％正常ウマ血清でブロックした後、抗ＩＥ１モノクローナル抗体ＭＡＢ８１０（米国マサチューセッツ州バーリントンのMerck Millipore）、ヤギ抗マウス二次抗体（米国ペンシルベニア州ウエストグルーブのJackson ImmunoResearch Labs）と共にそれぞれ１時間、またＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  ＡＢＣ試薬（米国カリフォルニア州バーリンゲームのVector Labs）と共に３０分間インキュベートした。各工程の間でプレートをＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎＲ  ２０で３回洗浄し、発色のためＴｒｕｅＢｌｕｅ（米国ミズーリ州セントルイスのSigma-Aldrich）を添加した。ＣＴＬ−ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（商標）Ｓ６  Ｍｉｃｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（米国オハイオ州クリーブランドのImmunoSpot, Cellular Technology Limited）を使用して、プレートをスキャンし、分析した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値及び平均の標準誤差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを用いて各血清希釈物の三連値の平均をｌｏｇ血清濃度に対してプロットし、データの最良適合４パラメーター式を算出し、ＩＣ５０中和力価として曲線の中点に血清希釈率を内挿することによって算出した。
【０２８１】
図１２Ａは、ウサギ免疫血清を熱不活性化しなかった場合の、ＡＲＰＥ−１９細胞を用いて分析したＨＣＭＶ中和活性を示す。単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａによるウサギの免疫化は、ＨＣＭＶ中和活性をほとんど誘発せず、１０未満のＩＣ５０力価をもたらした（図１２Ａ）。単量体ｇＨ／ｇＬによる免疫化は、低レベルの補体依存性ＨＣＭＶ中和活性（１９０．９のＩＣ５０、図１２Ａ）を誘発した。単量体ｇＨ／ｇＬ＋単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａの組み合わせによるウサギの免疫化は、単量体ｇＨ／ｇＬ又は単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ単独により誘発されたＨＣＭＶ中和の合計よりも３倍高い補体依存性ＨＣＭＶ中和活性（６７６．９のＩＣ５０）を誘発した（図１２Ａ）。単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）によるウサギの免疫化は、中程度の補体依存性ＨＣＭＶ中和活性（５２８．０のＩＣ５０）を誘発し、三量体ｇＢは、単量体ｇＢ（２１６８．８のＩＣ５０）と比べて４倍高い補体依存性ＨＣＭＶ中和活性を誘発した（図１２Ａ）。三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬの組み合わせによる免疫化は、三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬによって個別に誘発されたＨＣＭＶ中和の合計よりも２倍高い補体依存性ＨＣＭＶ中和活性（４２９９．２のＩＣ５０）を誘発し、相乗効果を実証した（図１２Ａ）。三量体ｇＢ、単量体ｇＨ／ｇＬ及び単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａの組み合わせによるウサギの免疫化は、三量体ｇＢ、単量体ｇＨ／ｇＬ及び単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａにより個別に誘発されたＨＣＭＶ中和の合計よりも５倍高い補体依存性ＨＣＭＶ中和活性（１０９１０．８のＩＣ５０）を誘発し、相乗効果を実証した（図１２Ａ）。三量体ｇＢ、単量体ｇＨ／ｇＬ及び単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａの組み合わせによる免疫化によって誘発された補体依存性ＨＣＭＶ中和活性は、第ＩＩ相臨床試験におけるＨＣＭＶ感染の予防において５０％有効性を実証した単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）より２０倍高かった。
【０２８２】
補体活性を排除するためウサギ免疫血清を５６℃で３０分間熱不活性化した場合の線維芽細胞株ＭＲＣ−５を用いて分析したＨＣＭＶ中和活性を図１２Ｂに示す。単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）によるウサギの免疫化は低レベルの補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性（１０３．５のＩＣ５０）を誘発し、三量体ｇＢは単量体ｇＢと比較して２０倍高い補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性を誘発した（２１８５．２のＩＣ５０、図１２Ｂ）。また、単量体ｇＨ／ｇＬによるウサギの免疫化は、低レベルの補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性（１６７．７のＩＣ５０）を誘発した。対照的に、三量体ｇＢと単量体ｇＨ／ｇＬの組み合わせによる免疫化は、三量体ｇＢ及び単量体ｇＨ／ｇＬによって個別に誘発されたＨＣＭＶ中和活性の合計よりも５倍高い補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性（１２２９９．４のＩＣ５０）を誘発し、相乗効果を実証した（図１２Ｂ）。三量体ｇＢと単量体ｇＨ／ｇＬとの組み合わせによる免疫化によって誘発された補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性は、第ＩＩ相臨床試験でＨＣＭＶ感染の予防において５０％有効性を実証した単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ）より１００倍超高かった。
【０２８３】
実施例２．４−ＨＣＭＶ  ｇＢ及びｇＨ／ｇＬ抗血清を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和アッセイ
ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して血清ＨＣＭＶ中和抗体力価を決定した。血清サンプルを合わせて、次いで三連で培養培地を用いて１：２の段階希釈によって分けた。各希釈物を、２００ｐｆｕのＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ＷＴ１３１を含有する等量の培養培地と混合し、３７℃で１時間インキュベートした後、ＭＲＣ−５単層を含む９６ウェルプレートのウェルに添加し、５％ＣＯ２にて３７℃で培養した。細胞を無水エタノールで固定し、再水和し、ＰＢＳ中１％ＢＳＡでブロックした後、抗ＩＥ１モノクローナル抗体ＭＡＢ８１０（Millipore）、ビオチン標識化ヤギ抗マウス二次抗体及びＡＢＣ試薬（Vector Laboratories）と共に、それぞれ１時間インキュベートした。各工程の間でプレートをＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ（商標）２０で３回洗浄し、発色のためＴｒｕｅＢｌｕｅを添加した。ＣＴＬ−ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（商標）Ｓ６  Ｍｉｃｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（オハイオ州クリーブランドのCellular Technology Limited）を使用してプレートをスキャンし、分析した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値及び平均の標準誤差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを用いて各血清希釈物の三連値の平均をｌｏｇ血清濃度に対してプロットし、データの最良適合４パラメーター式を算出し、ＩＣ５０中和力価として曲線の中点に血清希釈率を内挿することによって算出した。
【０２８４】
単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ、単量体ＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ及びそれらのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組み合わせにより免疫化したウサギに由来するプール免疫血清を使用して得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＨＣＭＶ中和の結果を図１５〜図２０に提示する。ＨＣＭＶポリペプチドを多量体化することは、単量体型のポリペプチドと比較して、多量体化されたポリペプチドに対して生成された抗体の中和活性を有意に増強した。例えば、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢのＩＣ５０  ２２８３と比較して、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢのＩＣ５０は９１．９４であった（図１５及び図１６）。ＨＣＭＶ  ｇＢ免疫血清とＨＣＭＶ  ｇＨ／ｇＬ免疫血清とを組み合わせることは、予想外に、各タンパク質によって個別に誘導される中和活性の合計よりも高いＨＣＭＶ中和活性を誘導し、相乗作用を実証した。例えば、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢ免疫血清及び単量体ｇＨ／ｇＬ免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組み合わせのＩＣ５０は、各個別のタンパク質に対する９１．９４及び１６９．６のＩＣ５０と比較して（図１５及び図１７）、８３６．４（図１８）であった。同様に、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ免疫血清及び単量体ｇＨ／ｇＬ免疫血清のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組み合わせのＩＣ５０は、２２８３及び１６９．６のＩＣ５０（図１６及び図１７、それぞれ、個別に各タンパク質に対して）と比較して、３０９３（図１９）であった。これらの相乗効果の結果を図２０に要約する。
【０２８５】
したがって、ＥＢＶの場合のように、これらの比較試験は、ＨＣＭＶ融合／細胞進入タンパク質（例えばｇＢ及びｇＨ／ｇＬ）を組み合わせることが予想外にｉｎ  ｖｉｖｏでＨＣＭＶ中和活性を増強することを実証する。ＨＣＭＶの三量体又は単量体のｇＢと単量体ｇＨ／ｇＬとの組み合わせによるウサギの免疫化は、個々のタンパク質の合計よりも有意に高いＨＣＭＶ中和活性を誘発し、予想外の相乗作用を実証した。
【０２８６】
実施例２．５−ＨＣＭＶの単量体ポリペプチドチド及び三量体ＵＬ１２８／１３０／１３１ポリペプチドの産生
ＨＨＶポリペプチドを含む抗原組成物を投与することによって高められた抗体力価を生じる可能性を更に特性評価する取り組みの一環で、ＨＣＭＶタンパク質ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１を組み換えにより産生させた。簡潔には、ＨＣＭＶ  ＵＬ１２８のコード配列を、ＮＣＢＩウェブサイトの参照配列ＧＱ１２１０４１．１、Ｔｏｗｎｅ株、ヌクレオチド１７５６５３〜１７６４１０から得た。また、ＨＣＭＶのＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａのコード配列を、ＮＣＢＩウェブサイトの参照配列ＮＣ＿００６２７３．２、Ｍｅｒｌｉｎ株、ＵＬ１３０ヌクレオチド１７６９８４〜１７７６２８及びＵＬ１３１Ａヌクレオチド１７７９１１〜１７８１４６につなげられたヌクレオチド１７７６４９〜１７７８０２から得た。Ｍｅｒｌｉｎ株に由来するＵＬ１２８が変異を有し、機能しないことから、Ｔｏｗｎｅ株に由来するＵＬ１２８を使用した。ＭａｃＶｅｃｔｏｒを使用して、三量体ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１Ａ発現のための構築物を設計した。アミノ酸２８〜１７１をコードするＵＬ１２８配列、アミノ酸２６〜２１４をコードするＵＬ１３０配列、及びアミノ酸１９〜１２９をコードするＵＬ１３１Ａ配列を、各コード配列間の１５アミノ酸リンカー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３（配列番号３）によって連結した（図１０）。Ｔ４ファージフィブリチンに由来するフォルドン三量体化ドメインコード配列をＵＬ１３１Ａの３’末端に連結し、その後ろにＨｉｓ６（配列番号４９）コード配列が続き、組み換えタンパク質の分泌のため、ＩｇＧκリーダー配列をＵＬ１２８配列に対して５’に配置した（図１０）。三量体ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１ＡをコードするＤＮＡを合成し、ｐＯｐｔｉＶＥＶ（米国カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）にクローニングして、配列を検証した。単量体ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１Ａ構築物を、フォルドン三量体化ドメインコード配列を含まない三量体ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１ＡのＰＣＲ増幅によって作製し、ｐＯｐｔｉＶＥＶにクローニングし、配列を検証した。
【０２８７】
ＣＨＯ細胞（ＤＧ４４株、Invitrogen、米国カリフォルニア州カールスバッドのThermo Fisher Scientific）をＦｒｅｅ−ｓｔｙｌｅ  Ｍａｘ試薬（カリフォルニア州カールスバッドのInvitrogen）を使用して、得られたｐＯｐｔｉＶＥＣ−ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１Ａ構築物を用いて安定的にトランスフェクトし、メトトレキサートの濃度を最大４μＭまで徐々に増大させながら陽性形質移入体を選択した。上清を濃縮し、コバルトアフィニティ精製（米国マサチューセッツ州ウォルサムのThermo Fisher Scientific）を使用して精製した。抗Ｈｉｓ６（配列番号４９）及び抗ＵＬ１２８抗体を使用して、単量体ＵＬ１２８−ＵＬ１３０−ＵＬ１３１Ａ構築物によりトランスフェクトしたＣＨＯ細胞に由来する上清のウェスタンブロット分析は、単量体ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａと一致する約５７ｋＤａのバンドを示した（図９Ｅ）。
【０２８８】
実施例２．６−ＨＣＭＶの五量体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／１３０／１３１複合体の産生
ＨＣＭＶのｇＨ、ｇＬ、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａのコード配列をＮＣＢＩウェブサイトから得た。五量体複合体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａ発現のための構築物を、ＭａｃＶｅｃｔｏｒを使用して設計し、図１３に示す。該構築物は、アミノ酸３１〜２７８をコードするｇＬ配列、アミノ酸２４〜７１８をコードするｇＨ配列を含み、いずれの配列のシグナルペプチドもＩｇＧκリーダー配列で置き換えられた。ＥＶ７１配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列をｇＨ配列とｇＬ配列との間に挿入し、Ｈｉｓ６（配列番号４９）コード配列をタンパク質精製のためｇＨの３’末端に付加させた。また、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１ＡのシグナルペプチドをＩｇＧκリーダー配列で置き換え、アミノ酸２８〜１７１をコードするＵＬ１２８配列、アミノ酸２６〜２１４をコードするＵＬ１３０配列、及びアミノ酸１９〜１２９をコードするＵＬ１３１Ａ配列を各々の間のＥＶ７１  ＩＲＥＳ配列の挿入によって共に連結した。ＵＬ１２８、ＵＬ１３０及びＵＬ１３１Ａは、ＵＬ１２８の５’末端及びｇＨ−Ｈｉｓ６（配列番号４９）コード配列の３’末端に配置された第２のＣＭＶプロモーターによって駆動された。ＨＣＭＶのｇＬ及びｇＨは、ベクターｐＯｐｔｉＶＥＣに由来する第１のＣＭＶプロモーターによって駆動された。
【０２８９】
五量体複合体ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１ＡをコードするＤＮＡを合成し、ｐＯｐｔｉＶＥＶ（Invitrogen）にクローニングして、検証した。ＣＨＯ細胞（ＤＧ４４株；Invitrogen）をｐＯｐｔｉＶＥＣ−ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８／ＵＬ１３０／ＵＬ１３１Ａによりトランスフェクトし、同様の構築物について既に上で概説される手順を用いて、メトトレキサートの濃度を最大４μＭまで徐々に増大させながら陽性形質転換体を選択することができる。
【０２９０】
実施例２．７−ＨＣＭＶのｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体の産生
上で検討される他のＨＣＭＶ構築物を用いる場合のように、ＨＣＭＶのｇＨ、ｇＬのコード配列もＮＣＢＩウェブサイトから得られ、ＨＣＭＶ  ｇＯのコード配列も、ＮＣＢＩウェブサイトの参照配列ＮＣ＿００６２７３．２、Ｍｅｒｌｉｎ株、ｇＯヌクレオチド１０７４３０〜１０８８４８から得た。ＭａｃＶｅｃｔｏｒを使用して、アミノ酸３１〜２７８をコードするｇＬ配列及びアミノ酸２４〜７１８をコードするｇＨ配列を含めてｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体発現のための構築物を設計し、図１４に示す。いずれの配列のシグナルペプチドもＩｇＧκリーダー配列で置き換えられた。ＥＶ７１配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列をｇＨ配列とｇＬ配列との間に挿入し、Ｈｉｓ６（配列番号４９）コード配列をタンパク質精製のためｇＨの３’末端に付着させた。また、ｇＯのシグナルペプチドをＩｇＧκリーダー配列で置き換え、アミノ酸３１〜４６６をコードするｇＯ配列をｇＯの５’末端及びｇＨ−Ｈｉｓ６（配列番号４９）コード配列の３’末端に配置された第２のＣＭＶプロモーターによって駆動させた。ＨＣＭＶのｇＨ及びｇＬは、ベクターｐＯｐｔｉＶＥＣに由来する第１のＣＭＶプロモーターによって駆動された。
【０２９１】
ｇＨ／ｇＬ／ｇＯ複合体をコードするＤＮＡを、先に記載される通り合成し、ｐＯｐｔｉＶＥＶにクローニングした。安定なＣＨＯ形質転換体を、サイズ排除クロマトグラフィー及び多角度光散乱（ＳＥＣ−ＭＡＬＳ）により精製し、分析する。
【０２９２】
実施例２．８−ＨＣＭＶ三量体ｇＢ及び単量体ｇＢによるマウスの免疫化
６群の７週齢〜１０週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝５）を、１μｇ、５μｇ若しくは２５μｇのＨＣＭＶ三量体ｇＢ、又は１μｇ、５μｇ若しくは２５μｇのＨＣＭＶ単量体ｇＢ（Ｓｉｎｏ  ｇＢ、中国のSino Biological Inc.）により腹腔内（ｉ．ｐ．）経路によって免疫化した。抗原を水酸化アルミニウム（アラム；タンパク質１ｍｇ当たりアラム０．２５μｇ）に吸着させ、マウスに対して最適化された３０−ｍｅｒホスホロチオエート修飾ＣｐＧ−ＯＤＮ（ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＧＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号５４））２５μｇと混合した。アラム＋ＣｐＧ−ＯＤＮのみにより免疫化したマウスは、陰性対照としての役割を果たした。０日目、２１日目及び４２日目にマウスを免疫化し、初回免疫の前、各免疫化の１０日後、及び６３日目に血清サンプルを採取した。個々のマウス血清サンプルを、ＥＬＩＳＡによってｇＢ特異的ＩｇＧの力価、また線維芽細胞（ＭＲＣ−５）及び上皮細胞（ＡＲＰＥ−１９）を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏ中和活性について分析した。
【０２９３】
ＨＣＭＶ中和アッセイ。単量体又は三量体のｇＢにより免疫化したマウスに由来する血清を、補体活性を排除するため５６℃で３０分間熱不活性化した、又は熱処理しなかった。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイを使用して血清ＨＣＭＶ中和抗体力価を決定した。各血清サンプルを、培養培地を用いて三連で１：２の段階希釈をして調製した。ＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ＷＴ１３１を含有する等量の培養培地と各希釈物を混合し、３７℃で４時間インキュベートし、次いでＭＲＣ−５（線維芽細胞系列、米国バージニア州マナッサスのATCC）の単層を含む９６ウェルプレートのウェルに添加し、５％ＣＯ２にて３７℃で一晩培養した。細胞を無水エタノールで固定し、再水和し、ＰＢＳ中の５％正常ウマ血清でブロックした後、抗ＩＥ１モノクローナル抗体ＭＡＢ８１０（米国マサチューセッツ州バーリントンのMerck Millipore）、ヤギ抗マウス二次抗体（米国ペンシルベニア州ウエストグルーブのJackson ImmunoResearch Labs）と共にそれぞれ１時間、またＶＥＣＴＡＳＴＡＩＮ  ＡＢＣ試薬（米国カリフォルニア州バーリンゲームのVector Labs）と共に３０分間インキュベートした。各工程の間でプレートをＰＢＳ中０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄し、発色のためＴｒｕｅＢｌｕｅ（米国ミズーリ州セントルイスのSigma-Aldrich）を添加した。ＣＴＬ−ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ（商標）Ｓ６  Ｍｉｃｒｏ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（米国オハイオ州クリーブランドのImmunoSpot, Cellular Technology Limited）を使用して、プレートをスキャンし、分析した。５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値及び平均の標準誤差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェアを用いて各血清希釈物の三連値の平均をｌｏｇ血清濃度に対してプロットし、データの最良適合４パラメーター式を算出し、ＩＣ５０中和力価として曲線の中点に血清希釈率を内挿することによって算出した。
【０２９４】
単量体及び三量体のＨＣＭＶ  ｇＢを、抗原特異性ＩｇＧの総血清力価の誘発について並べて直接比較した。図２１Ａに示されるように、各群のＨＣＭＶタンパク質は、１回目の追加免疫後に増大した血清ＩｇＧ応答を誘導し、２回目の追加免疫の後、血清ＩｇＧ力価の更に有意な増大を誘導した。三量体ＨＣＭＶ  ｇＢは、１回目及び２回目の免疫化の後、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢと比べて、ｇＢ特異抗体ＩｇＧ力価の５倍〜１１倍高い血清力価を誘導し、より低い用量でより大きな差が観察された。三量体及び単量体のＨＣＭＶ  ｇＢによって誘発されたＨＣＭＶ  ｇＢ特異的ＩｇＧ力価の違いは、３回目の免疫化の後に減少し、高用量でより小さな差が観察された。５μｇの三量体ＨＣＭＶ  ｇＢは、最適な抗原特異的ＩｇＧ応答を誘発した。２５μｇの三量体ＨＣＭＶ  ｇＢは、わずかに高いｇＢ特異的ＩｇＧ力価を誘発したが、５μｇのＨＣＭＶ三量体ｇＢのものと比べて有意差はなかった。
【０２９５】
ＭＲＣ−５線維芽細胞株を使用することにより、（補体活性の排除のため）５６℃で３０分間熱不活性化した三量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したマウスに由来する免疫血清は、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したマウスに由来する免疫血清のＨＣＭＣ中和活性と比較して、ＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ｗｔ１３１に対して５０倍高いＨＣＭＶ中和活性を実証した（図２１Ｂ）。単量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したマウスに由来する非熱不活性化血清（図２１Ｃ）は、熱不活性化血清と比較して６倍高いＨＣＭＶ中和活性を実証したのに対し（図２１Ｂ）、三量体ｇＢにより免疫化したマウスに由来する非熱不活性化血清は、熱不活性化血清と比較して、２倍〜３倍高いＨＣＭＶ中和活性を実証した。熱不活性化がなければ、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢによって誘発されたＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ｗｔ１３１に対するＨＣＭＶ中和活性は、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢのものより２０倍高く、単量体ＨＣＭＶ  ｇＢはより補体依存性の応答を誘導することが示唆された（図２１Ｃ）。ＨＣＭＶ血清反応陽性の健康なドナーの血漿に由来する高力価のＨＣＭＶ中和抗体を含有する市販のサイトメガロウイルスＣＭＶ−ＩｇＩＶ免疫グロブリンであるＣｙｔｏＧａｍ（商標）（米国ペンシルベニア州キング・オブ・プルシアのCSL Behring）は、三量体ｇＢと比べて、ＨＣＭＶ株ＡＤ１６９ｗｔ１３１に対して、はるかに低いＨＣＭＶ中和活性を示した。ＭＲＣ−５細胞株を使用して、１０ｍｇ／ｍｌのＣｙｔｏＧａｍ（商標）は、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したマウスに由来する血清の約３０分の１の補体非依存性ＨＣＭＶ中和活性を実証した。熱不活性化はＣｙｔｏＧａｍ（商標）に対する影響がなく、これは、三量体ＨＣＭＶ  ｇＢ又は単量体ＨＣＭＶ  ｇＢにより免疫化したマウスに由来する非熱不活性化血清と比較して、その補体依存性ＨＣＭＶ中和活性をより一層低いものとした。
【図１】
2020515522.tif 000004
【図２Ａ】
2020515522.tif 000005
【図２Ｂ】
2020515522.tif 000006
【図２Ｃ】
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【図３】
2020515522.tif 000008
【図４Ａ】
2020515522.tif 000009
【図４Ｂ】
2020515522.tif 000010
【図５】
2020515522.tif 000011
【図６Ａ】
2020515522.tif 000012
【図６Ｂ】
2020515522.tif 000013
【図７Ａ】
2020515522.tif 000014
【図７Ｂ】
2020515522.tif 000015
【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
2020515522.tif 000019
【図９Ｃ】
2020515522.tif 000020
【図９Ｄ】
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【図９Ｅ】
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【図１０】
2020515522.tif 000023
【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020515522.tif 000039
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