(57)【要約】本発明は、セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む二日酔い解消用組成物に関し、具体的に、本発明によるセサモールとペプチドの結合体は、アルコール分解の過程に関与するアルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）又はアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）活性を有意的に増加させ、体内アルコール濃度を早く分解し、アルコールによる運動障害を改善するので、二日酔い解消用組成物の有効成分として有用に用いることができるという長所がある。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
セサモール（ｓｅｓａｍｏｌ）及びペプチドの結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を有効成分として含む二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項２】
前記セサモールと前記ペプチドは、リンカーを介して連結される化合物である、請求項１に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項３】
前記リンカーは、ジカルボン酸である、請求項２に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項４】
前記ペプチドは、５から１５個のアミノ酸配列からなる、請求項１から３のいずれか一項に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項５】
前記ペプチドは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項６】
前記結合体は、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、セサモールと配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、又はこれらの混合物である、請求項５に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項７】
前記組成物は、アルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）又はアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）活性を増加させる、請求項１から３のいずれか一項に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項８】
前記組成物は、アルコール性運動障害を改善する、請求項１から３のいずれか一項に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項９】
前記組成物は、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、外用剤、坐剤及び滅菌注射溶液よりなる群から選択される剤形を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【請求項１０】
セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む、二日酔い予防又は解消用健康機能食品。
【請求項１１】
前記ペプチドは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の二日酔い予防又は解消用健康機能食品。
【請求項１２】
前記結合体は、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、セサモールと配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、又はこれらの混合物である、請求項１０に記載の二日酔い予防又は解消用薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セサモール（ｓｅｓａｍｏｌ）とペプチドの結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）、及び前記結合体を有効成分として含む二日酔い解消用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
韓国のアルコール消費は世界最高の水準であり、飲酒による社会経済的及び保健学的な弊害が急激に増加する傾向である。過度なアルコールの摂取は、身体のほとんど全ての部分に影響を及ぼし、肝疾患、胃炎、膵臓炎、高血圧、中風、糖尿病、心臓病などの多くの疾患を起こすものとして報告されている。
【０００３】
最近、保健福祉部傘下の韓国保健社会研究院が実施した国民健康栄養調査の結果によれば、国内の２０歳以上の成人の場合、飲酒日は一ヶ月平均約８日であり、男性は約１１日、女性は約４日程度であるものと表れ、このとき、泥酔回数は週１回以上が約４．７％、１ヶ月に１〜３回が約１０．７％、３ヶ月に１〜３回が約１３．２％であるものと調査されたところにあり、これは国民健康の側面において相当憂慮するに値する水準である。
【０００４】
このように、現代人は、その度が過ぎて、人体内で手に負えない程度にアルコールを過度に摂取しているため、二日酔いを除去することができる薬物又は飲料に対する関心も絶え間なく増加しており、このような要因により、二日酔い解消飲料の市場は現在売上げ１千億ウォンを超える規模で成長しており、海外の市場でも注目を受けている。
【０００５】
二日酔いは、酒を飲んだ後に現われる頭痛、下痢、食欲不振、悪心、嘔吐、寒気、冷汗などの症状を意味し、客観的な症状としては、認識、運動能力の低下、血液学的変化及びホルモンの変化を称する。二日酔いの原因は、脱水、アルコール及びアルコール代謝物（アセトアルデヒド、ホルムアルデヒド、アセトンなど）の毒性、吸収障害による栄養素の欠乏（血糖、ビタミン、無基質の欠乏）などであるものと知られている。二日酔いの程度は、遺伝による個人の偏差、環境状態（栄養状態、運動状態、脱水程度、健康状態）により程度の差が非常に酷い。
【０００６】
飲酒後、アルコールは３つの経路を介して代謝されるところ、エタノールの濃度が低いときは、胃腸管又は肝に存在するアルコール加水分解酵素（Ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）とアセトアルデヒド加水分解酵素（Ａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の作用により、エタノールの濃度の高いときは、小胞体に存在するミクロゾームエタノール酸化系（ＭＥＯＳ：Ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ  ｅｔｈａｎｏｌ  ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）によりアセトアルデヒドと酢酸に代謝され、以後、ペルオキシソーム（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ）に存在するカタラーゼ（ｃａｔａｌａｓｅ）の作用などを経て二酸化炭素（ＣＯ２）と水（Ｈ２Ｏ）に最終分解される。適量のアルコールが流入されると、前述の代謝体系がスムーズに作用してアルコールのために起こる諸症状が起こらないが、多量のアルコール流入時には代謝体系の均衡が破壊されるので、生体の恒常性を維持することができなくなり、短期的には頭痛又は頭重感、集中力の減退、胸やけ及び消化不良などがもたらされ、長期的には肝機能の障害が発生し得る。
【０００７】
一方、現在、皇耆、蓮の実（Ｌｏｔｕｓ  ｓｅｅｄ）、米胚芽及びケンポナシの抽出物を含む二日酔い解消用飲料、米胚芽大豆発酵抽出液及びミルクシスル抽出粉末の成分を主原料にした二日酔い解消用飲料、ハンノキ、ナナカマドの抽出物を有効成分として含む二日酔い解消用飲料が市販されているが、これらは大部分が抽出物を有効成分とするものであるため、原材料の確保が流動的で、大量生産のための抽出に必要な工程や設備を構築するのに多くの費用が必要となる。また、抽出物の特性上、個人により二日酔い解消程度の顕著な差を有し、二日酔いの解消に長い時間が必要となるなどの多様な問題点がある。これにより、原材料の確保や大量生産が容易かつ効率的であり、早い時間内にアルコール分解と二日酔い解消を同時に解決することができる製品の開発が依然として必要な実情である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、二日酔い解消用セサモールとペプチドの結合体を提供することを目的とする。
【０００９】
また、本発明は、前記結合体を有効成分として含む二日酔い解消用組成物を提供することを目的とする。
【００１０】
また、本発明は、前記結合体又はこれを有効成分として含む組成物を、これを要する個体に投与する段階を含む二日酔い解消方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記目的を達成するために、本発明の一側面は、セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む二日酔い予防又は解消用薬学的組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明の他の側面は、セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む二日酔い予防又は解消用健康機能食品を提供する。
【００１３】
さらに、本発明の他の側面は、セサモールとペプチドの結合体又は前記結合体を有効成分として含む組成物を、これを要する個体に投与する段階を含む二日酔い予防又は解消方法を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のセサモールとペプチドの結合体は、アルコール分解過程に関与するアルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）とアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）の活性を有意的に向上させ、体内のアルコールを速やかに分解し、アルコールによる運動障害を改善するので、二日酔い解消用組成物の有効成分として有用に用いることができるという長所がある。
【００１５】
但し、本発明の効果は、前記で言及した効果に制限されず、言及されていないまた他の効果は、下記の記載から当業者に明確に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）のアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）の活性増加の効果を確認した結果を示すグラフである。
【図２】セサモールと配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体のアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）の活性増加の効果を確認した結果を示すグラフである。
【図３】セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体とセサモールと配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体に対して、アルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）及びＡＬＤＨ  ｍＲＮＡの発現増加の効果を確認した結果を示す図である。
【図４】本発明によるセサモールとペプチドの結合体を混合した結合体複合物のマウスモデルの運動性向上の効果を確認した結果を示すグラフである。
【図５】本発明によるセサモールとペプチドの結合体を混合した結合体複合物によるマウスモデルの血清内アルデヒド濃度の減少効果を確認した結果を示すグラフである。
【図６】本発明によるセサモールとペプチドの結合体を混合した結合体複合物の二日酔い解消効能を確認した結果を示すグラフである。
【００１７】
前記図１から図３において、「ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１」は、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体処理群であり、「ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２」は、セサモールと配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体処理群であり、図４から図６において、「結合体複合物」は、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体、及びセサモールと配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体を１：１重量比で混合した複合物を処理した群である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００１９】
１．二日酔い予防又は解消用薬学的組成物
本発明の一側面は、セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む二日酔い予防又は解消用薬学的組成物を提供する。
【００２０】
前記セサモールは、化学式Ｃ７Ｈ６Ｏ３の化合物を示すものであって、下記化学式１の化学構造を有する。
【００２１】
【化１】
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【００２２】
前記ペプチドは、ペプチド結合で連結された２個以上のアミノ酸からなるポリマーを意味するところ、ペプチド自体の大きさが大き過ぎるため、標的組織又は細胞に効果的に流入できないか半減期が短くて、短期間に体内で消滅するという短所がある。したがって、本発明の前記ペプチドは２０個以下、好ましくは１５個以下、さらに好ましくは１０個以下のアミノ酸からなる。
【００２３】
本発明の前記ペプチドは、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含んでよく、本発明の二日酔い解消に影響を及ぼさない範囲内で、アミノ酸残基の欠失、挿入、置換又はこれらの組み合せにより異なる配列を有するアミノ酸の変異体又は断片であってよい。前記ペプチドの二日酔い解消活性を全体的に変更させないペプチド水準でのアミノ酸交換は、当該分野に公知となっている。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、糖化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）などに変形されてよい。したがって、本発明は、配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドと実質的に同一なアミノ酸配列を有するペプチド及びその変異体又はその活性断片を含む。前記実質的に同一のペプチドとは、前記配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列とそれぞれ７５％以上、好ましくは８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、最も好ましくは９５％以上の配列相同性を有するアミノ酸配列を意味する。また、前記ペプチドには標的化配列、タグ（ｔａｇ）、表示された残基、半減期又はペプチド安定性を増加させるための特定の目的で製造されたアミノ酸配列がさらに含まれてよい。
【００２４】
また、本発明の前記ペプチドは、当該分野で広く公知となっている多様な方法で獲得することができる。例えば、ポリヌクレオチドの組換えとタンパク質発現システムを用いて製造するか、ペプチド合成などの化学的合成を介して試験管内で合成する方法、及び無細胞タンパク質合成法などで製造されてよい。
【００２５】
また、より良好な化学的安定性、強化された薬理特性（半減期、吸収性、力価、効能など）、変更された特異性（例えば、広範囲の生物学的活性スペクトラム）、減少された抗原性を獲得するために、前記ペプチドのＮ−末端は、アセチル基、フルオレニルメトキシカルボニル基、ホルミル基、パルミトイル基、ミリスチル基、ステアリル基及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）よりなる群から選択される保護基が結合され、安定性を向上させることができる。一方、前記「安定性」は、生体内のタンパク質切断酵素の攻撃から本発明のペプチドを保護するインビボでの安定性だけでなく、貯蔵安定性（例えば、常温貯蔵安定性）も意味する。
【００２６】
前記セサモールと前記ペプチドは、リンカーを介して互いに連結されてよい。前記リンカーは、脂肪族、脂環族又は芳香族ジカルボン酸であってよく、好ましくは脂肪族又は脂環族ジカルボン酸であってよく、さらに好ましくは脂肪族ジカルボン酸であってよい。より具体的に、前記脂肪族ジカルボン酸は、下記化学式２の化学構造を有するジカルボン酸であってよい。
【００２７】
【化２】
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【００２８】
前記化学式２中、Ｒは、炭素数１から１２、好ましくは炭素数１から１０、より好ましくは炭素数１から６のアルキレン基；炭素数２から１２、好ましくは炭素数２から１０、より好ましくは炭素数２から６のアルケニレン基；又は炭素数２から１２、好ましくは２から１０、より好ましくは２から６のアルキニレン基であってよい。
【００２９】
特に、前記リンカーは、下記化学式３の化学構造を有する脂肪族飽和ジカルボン酸であってよい。
【００３０】
【化３】
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【００３１】
前記化学式３中、ｎは、１から１２、好ましくは１から１０、より好ましくは１から６、最も好ましくは１から４の整数である。
【００３２】
前記ジカルボン酸の一側のカルボキシル基は、前記セサモールのヒドロキシ基（−ＯＨ）とエステル結合を形成し、前記ジカルボン酸の他側のカルボキシル基は、前記ペプチドのＮ−末端に露出されたアミノ基（−ＮＨ２）とペプチド結合を形成することで、前記セサモールと前記ペプチドが互いに連結され、本発明の結合体が形成され得る。
【００３３】
また、本発明の前記セサモールとペプチドの結合体は、ｉ）ペプチドを準備する段階、ｉｉ）前記ペプチドとリンカーを反応させてペプチドにリンカーを結合させる段階、及びｉｉｉ）前記ペプチドに結合されたリンカーとセサモールを反応させてリンカーとセサモールを結合させる段階を介して製造することができる。
【００３４】
また、前記セサモールとペプチドの結合体は、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、セサモールと配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの結合体、又はこれらの混合物であってよい。
【００３５】
本発明のセサモールとペプチドの結合体のアルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）の活性増加の効果を確認するために、本発明の具体的な実施例では、肝癌細胞にセサモールと配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体をそれぞれ処理した後、ＡＬＤＨ活性分析を行った結果、本発明のセサモールとペプチドの結合体を処理した細胞で濃度依存的にＡＬＤＨ活性が増加することを確認した（図１及び図２参照）。
【００３６】
また、本発明のセサモールとペプチドの結合体のアルコール分解過程に関与するアルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）及びＡＬＤＨの発現増加の効果を確認するために、本発明の具体的な実施例では、肝癌細胞にセサモールと配列番号１又は配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体をそれぞれ処理した後、ＡＤＨ及びＡＬＤＨの発現量をＲＴ−ＰＣＲを介して確認した結果、無処理対照群と比べて、本発明のセサモールとペプチドの結合体を処理した細胞は、ＡＤＨ４、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２  ｍＲＮＡの発現がいずれも有意的に増加することを確認した（図３参照）。
【００３７】
また、本発明のセサモールとペプチドの結合体の運動性向上の効果を確認するために、本発明の具体的な実施例では、セサモールと配列番号１又は２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体を１：１重量比で混合した後、アルコールとともにマウスモデルに投与し、行動試験を行った結果、結合体複合物を投与した群は、アルコール摂取により低下した運動能力を有意的に向上させることを確認した（図４参照）。
【００３８】
また、本発明のセサモールとペプチドの結合体のアルコール分解効果を確認するために、本発明の具体的な実施例では、前記結合体複合物をアルコールとともにマウスモデルに投与した後、マウス血清内のアルデヒド分析を行った結果、結合体複合物を投与した群は、血清内アルデヒドの濃度を有意的に下げることを確認した（図５参照）。
【００３９】
また、本発明のセサモールとペプチドの結合体の二日酔い解消効能を確認するために、本発明の具体的な実施例では、臨床試験の対象者に結合体複合物をアルコールとともに摂取するようにした後、１時間後及び２時間後の血中アルコールの濃度を測定した結果、結合体複合物を投与した群は、血中アルコールの濃度を顕著に下げることを確認した（図６参照）。
【００４０】
したがって、本発明の前記セサモールとペプチドの結合体は、アルコール分解過程に関与するアルコール加水分解酵素又はアルデヒド加水分解酵素の活性を有意的に増加させ、体内アルコールの濃度を速やかに分解し、アルコールによる運動障害を改善するので、二日酔い解消用組成物の有効成分として有用に用いることができる。
【００４１】
一方、本発明の前記セサモールとペプチドの結合体は、コロイド懸濁液、粉末、食塩水、脂質、リポソーム、微小球体（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ）、又はナノ球形粒子のような薬学的に許容可能な担体に運搬されてよい。これらは運搬手段と複合体を形成するか係わってよく、脂質、リポソーム、微細粒子、金、ナノ粒子、ポリマー、縮合反応剤、多糖類、ポリアミノ酸、デンドリマー、サポニン、吸着増進物質又は脂肪酸のような、当業界に公知の運搬システムを用いて生体内に運搬されてよい。
【００４２】
他にも、薬学的に許容される担体は、製剤時に通常用いられるラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルなどを含んでよいが、これに限定されるものではない。また、前記成分以外に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などをさらに含んでよい。
【００４３】
本発明の薬学的組成物は、目的とする方法に応じて経口投与するか非経口投与（例えば、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮下、皮内、または局所に適用）することができ、投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路及び時間により異なるが、当業者により適切に選択されてよい。
【００４４】
本発明の薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明において「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット/リスクの比率で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効容量の水準は、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出の比率、治療期間、同時に使用される薬物を含んだ要素、及びその他医学分野でよく知られている要素により決定されてよい。本発明に係る薬学的組成物は、個別治療剤として投与するか、他の二日酔い解消剤と併用して投与されてよく、従来の二日酔い解消剤とは同時、別途、又は順次に投与されてよく、単一又は多重に投与されてよい。前記要素を全て考慮し、副作用なく最小限の量で最大の効果を得ることができる量を投与するのが重要であり、これは当業者により容易に決定され得る。
【００４５】
具体的に、本発明の薬学的組成物の有効量は、患者の年齢、性別、状態、体重、体内への活性成分の吸収度、不活性率、排泄の速度、疾病の種類、併用される薬物により異なることがあり、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢などにより増減されてよく、例えば、本発明のペプチドを１日当り、患者の体重１ｋｇ当り、約０．０００１μｇから５００ｍｇ、好ましくは０．０１μｇから１００ｍｇ投与することができる。
【００４６】
２．二日酔い予防又は解消用健康機能食品
本発明のまた他の側面は、セサモールとペプチドの結合体を有効成分として含む二日酔い予防又は解消用健康機能食品を提供する。
【００４７】
前記セサモールとペプチドの結合体は、前記「１．二日酔い予防又は解消用薬学的組成物」の項目で説明したセサモールとペプチドの結合体と同一なので、具体的な説明は、前記「１．二日酔い予防又は解消用薬学的組成物」の項目を援用し、以下では、健康機能食品特有の構成に対してのみ説明する。
【００４８】
前記薬学的組成物と同様、本発明の前記セサモールとペプチドの結合体は、アルコール分解過程に関与するアルコール加水分解酵素又はアルデヒド加水分解酵素の活性を有意的に増加させ、体内アルコールの濃度を速やかに分解し、アルコールによる運動障害を改善するので、二日酔い解消用健康機能食品に有効成分として有用に用いられ得る。
【００４９】
本発明の健康機能食品において、有効成分を食品にそのまま添加するか、他の食品または食品成分とともに用いられてよく、通常の方法により適切に用いられてよい。有効成分の混合量は、その使用目的（予防または改善用）に応じて適宜決定されてよい。一般に、食品または飲料の製造時に、本発明の組成物は、原料に対して好ましくは１５重量％以下、さらに好ましくは１０重量％以下の量で添加されてよい。しかし、健康及び衛生を目的とするか、又は健康調節を目的とする長期間の摂取の場合に、前記量は前記範囲以下であってよい。
【００５０】
本発明の健康機能食品は、前記有効成分を含むこと以外には特に制限なく他の成分を必須成分として含有してよい。例えば、通常の飲料のように多様な香味剤または天然炭水化物などを追加成分として含有してよい。前述の天然炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖など；ジサッカライド、例えば、マルトース、スクロースなど；及び、ポリサッカライド、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどのような通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールであってよい。前述したもの以外の香味剤として、天然香味剤（タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、グリチルリチンなど））及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を有利に用いてよい。前記天然炭水化物の比率は、当業者の選択に応じて適宜決定されてよい。
【００５１】
前記以外に、本発明の健康機能食品は、多様な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤などの風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に用いられる炭酸化剤などを含んでよい。このような成分は独立してまたは組み合わせて用いられてよく、このような添加剤の比率も当業者により適宜選択されてよい。
【００５２】
３．二日酔い予防又は解消方法
本発明のまた他の側面は、セサモールとペプチドの結合体又は前記結合体を有効成分として含む組成物を、これを要する個体に投与する段階を含む二日酔い予防又は解消の方法を提供する。
【００５３】
前記セサモールとペプチドの結合体は、前記「１．二日酔い予防又は解消用薬学的組成物」の項目で説明したセサモールとペプチドの結合体と同一なので、具体的な説明は、前記「１．二日酔い予防又は解消用薬学的組成物」の項目を援用する。
【００５４】
前述のとおり、本発明のセサモールとペプチドの結合体又は前記結合体を有効成分として含む組成物、例えば、薬学的組成物又は健康機能食品は、体内のアルコールを速やかに分解してアルコールによる運動障害を改善することができるので、前記結合体又は組成物を、これを要する個体、例えばヒトに投与時に優れた二日酔い解消の効果を達成することができる。
【実施例】
【００５５】
以下、本発明を製造例及び実験例により詳しく説明する。
但し、下記製造例及び実験例は本発明を具体的に例示するものであり、本発明の内容が下記製造例及び実験例により限定されない。
【００５６】
［製造例１］スクシニル化されたペプチドの作製
自動ペプチド合成器（Ｍｉｌｌｉｇｅｎ  ９０５０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、米国）を用いて、下記［表１］に記載された、配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドをそれぞれ合成し、それぞれのペプチド（１ｍｍｏｌ）と無水コハク酸（ｓｕｃｃｉｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ、２００ｍｇ、２．０ｅｑｕｉｖ．）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍｌ）に溶かし、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（３８８ｍｇ、３．０ｅｑｕｉｖ．）を添加して常温で２時間反応させ、前記それぞれのペプチドをスクシニル化させた。Ｃ１８逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、米国）を用いて、これら合成されたスクシニル化ペプチドをそれぞれ分離精製した。カラムは、ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ３００  Ｃ１８（２．１  １００ｍｍ、１．７ｕｍ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏ、米国）を用いた。
【００５７】
【表１】
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【００５８】
［製造例２］本発明のセサモールとペプチドの結合体の作製
ペプチド反応器で、前記［製造例１］で製造したスクシニル化ペプチド（１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍｌ）に溶かし、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、２７０ｍｇ、２．０ｅｑｕｉｖ．）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ、１．０４ｇ、２．０ｅｑｕｉｖ．）及びセサモール（ｓｅｓａｍｏｌ、２７７ｍｇ、２．０ｅｑｕｉｖ．）を添加して３０分間撹拌させた。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３８８ｍｇ、３ｅｑｕｉｖ．）を添加して常温で４時間反応させた後、ジエチルエーテル（１０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を用いて、再結晶化、濾過及び乾燥の過程を経て、セサモールと配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体、及びセサモールと配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチドの結合体をそれぞれ得た。
【００５９】
［実験例１］アルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）の活性増加の効果の確認
アルコールは、アルコール分解酵素であるアルコール加水分解酵素（ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＤＨ）によりアセトアルデヒド（ａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ）に転換され、転換されたアセトアルデヒドは、アルデヒド加水分解酵素（ａｌｄｅｈｙｄｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ；ＡＬＤＨ）によりアセテート（ａｃｅｔａｔｅ）に転換され分解される。よって、アルコール分解過程に関与するＡＬＤＨ活性増加の効果を確認するために、前記［製造例２］で製造された２種のセサモールとペプチドの結合体を肝癌細胞にそれぞれ処理した後、ＡＬＤＨ活性分析を行った。
【００６０】
具体的に、ヒト肝癌細胞（ｈｕｍａｎ  ｌｉｖｅｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ）であるＨｅｐＧ２（ｌｉｖｅｒ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）細胞を４×１０５細胞／ウェルの密度で６−ウェルプレートに接種した後、一晩（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔ）培養した。その後、前記［製造例２］で製造した２種のセサモールとペプチドの結合体をそれぞれ５０μＭ又は１００μＭの濃度で処理して２４時間培養し、細胞を回収した後、ＡＬＤＨ活性分析キット（ＡＬＤＨ  ａｃｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙ  ｋｉｔ．ａｂｃａｍ、ａｂ１５５８９３）を用いてＡＬＤＨ活性を分析した。一方、陽性対照群には５μＭのスルフォラファン（ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ）を処理した。
【００６１】
ＡＬＤＨ活性の分析は、前記回収した細胞のそれぞれに、キットに含まれているＡＬＤＨ活性分析バッファーを処理した後、氷下でホモジナイザー（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）で溶解した。その後、４℃、１３,０００ｒｐｍの条件で１０分間遠心分離した後、上澄み液を回収した。前記回収した上澄み液にＡＬＤＨ分析バッファー、ＡＬＤＨ基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）及びアセトアルデヒドを処理して常温で１時間反応させた後、分光光度計を用いて２分おきに２０分間４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。その後、下記［数式１］を用いてＡＬＤＨ活性を計算した。
【００６２】
【数１】
2020536938.tif 000007
【００６３】
Ｂ：実験群で発生したＮＡＤＨの量（ｎｍｏｌ）
△Ｔ：反応時間（分）
Ｖ：反応ウェルで用いられた実験群の体積（ｍｌ）
【００６４】
その結果、図１及び図２に示したように、本発明の２種のセサモールとペプチドの結合体は、それぞれ無処理対照群と比べてＡＬＤＨ活性を有意的に増加させることを確認した（図１及び図２）。
【００６５】
［実験例２］ＡＤＨ及びＡＬＤＨ発現増加の効果の確認
アルコール分解過程に関与するＡＤＨ及びＡＬＤＨ発現増加の効果を確認するために、前記［製造例２］で製造された２種のセサモールとペプチドの結合体を肝癌細胞にそれぞれ処理した後、ＲＴ−ＰＣＲを行った。
【００６６】
具体的に、ＨｅｐＧ２細胞を４×１０５細胞／ウェルの密度で６−ウェルプレートに接種した後、一晩培養した。その後、前記［製造例２］で製造された２種のセサモールとペプチドの結合体をそれぞれ１０μＭ又は５０μＭの濃度で処理し、６時間培養して細胞を回収した。その後、前記回収した細胞を、Ｔｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を用いて製造社のプロトコルにより総ＲＮＡを分離した後、分離したＲＮＡ  １μｇを、ｃＤＮＡ合成キット（Ｉｎｔｒｏｎ、Ｋｏｒｅａ）を用いて製造社のプロトコルによりｃＤＮＡを合成した。前記ｃＤＮＡは、下記［表２］のプライマーを用いてＰＣＲを行った後、５％アガロースゲルに電気泳動してＡＤＨ４、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２のｍＲＮＡ発現の程度を確認した。
【００６７】
【表２】
2020536938.tif 000008
【００６８】
その結果、図３に示したとおり、本発明の２種のセサモールとペプチドの結合体は、それぞれ無処理対照群と比べてＡＤＨ４、ＡＬＤＨ１及びＡＬＤＨ２  ｍＲＮＡの発現をいずれも有意的に増加させることを確認した（図３）。早いアルコール分解のためには、アルコール分解に関与する酵素であるＡＤＨ及びＡＬＤＨの活性を高めて早い分解を誘導するのが必要なので、前記［実験例１］及び［実験例２］の結果から、本発明のセサモールとペプチドの結合体は、ＡＤＨ及びＡＬＤＨの活性及び発現を有意的に増加させてアルコールの早い分解を誘導することが分かる。
【００６９】
［実験例３］アルコール投与マウスモデルに対する運動性向上の効果の確認
アルコールを投与した動物モデルでの運動性向上の効果を確認するために、マウスモデルに前記［製造例２］で製造されたセサモールとペプチドの結合体及びアルコールを投与した後、Ｒｏｔａ−ｒｏｄ機器を用いて行動試験を行った。
【００７０】
具体的に、マウスモデルとして８週齢の雄のＢａｌｂ／ｃマウスを用いて、固形飼料と水道水を自由に摂取するようにして１週間予備飼育した後、試験に用いた。また、マウスを（１）正常対照群、（２）アルコール投与群、及び（３）実験群に分けて、グループ当たり５匹のマウスを試験に用いた。
【００７１】
行動試験のために、Ｒｏｔａ−ｒｏｄ機器にマウスを載せて３回以上適応訓練をした。
【００７２】
行動試験を行う前に４時間空腹を維持し、アルコール投与の前にＲｏｔａ−ｒｏｄ機器にマウスを載せて、４ｒｐｍから４０ｒｐｍに徐々にｒｐｍが上がる条件で歩かせた後、運動能力を喪失して下段の踏み台に落ちるのにかかる時間を測定し、秒単位に換算してＬａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値を獲得した。
【００７３】
その後、セサモール−配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチド結合体とセサモール−配列番号２のアミノ酸配列を有するペプチド結合体を１：１重量比で混合して複合物（以下、「結合体複合物」と記す）を製造した後、水に溶かして１００ｍｇ／ｋｇの容量で実験群マウスに経口投与し、３０分間放置した。一方、正常対照群の場合、同一体積の水を経口投与した。その後、アルコール投与群及び実験群マウスの個体に２０％アルコールを個体当たり４００μｌで経口投与し、３０分、１時間及び２時間後、前記に記載の方法と同一の方法で、Ｒｏｔａ−ｒｏｄ機器を用いて各グループ別にＬａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値を獲得した。
【００７４】
その結果、図４に示したとおり、行動試験を行う前に、正常対照群、アルコール投与群及び実験群のいずれも平均Ｌａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値が２５０程度に表れ、３グループのいずれも類似のＬａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値を示すことを確認した。
【００７５】
一方、アルコールを投与した後、３０分、１時間及び２時間後に行動試験を行った結果、アルコール投与群はＬａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値が顕著に減少する反面、本発明の結合体複合物をアルコールとともに投与した実験群は、アルコール投与群に比べてＬａｔｅｎｃｙ  ｔｏ  ｆａｌｌ（ｓｅｃ．）値が顕著に増加することを確認した（図４）。
【００７６】
前記結果から、本発明のセサモールとペプチドの結合体は、アルコール摂取により低下した運動能力を有意的に向上させることが分かる。
【００７７】
［実験例４］アルコール投与マウスモデルに対するアルコール分解効果の確認
アルコールを投与した動物モデルでのアルコール分解効果を確認するために、マウス血清内アルデヒドの分析を行った。
【００７８】
具体的に、前記［実験例３］で２時間の行動実験を終了した（１）正常対照群、（２）アルコール投与群、及び（３）実験群の血液をそれぞれ採取した。その後、前記採取した血液を常温で２０分間固めた後、３,０００ｒｐｍで遠心分離して上澄み液である血清を獲得した。前記獲得した血清内のアルデヒド分析は、アルデヒド定量分析キット（Ａｌｄｅｈｙｄｅ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、ａｂｃａｍ、ａｂ１１２１１３）を用いて行った。より具体的に、前記獲得した血清とキットの２×Ｙｅｌｌｏｓ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｉｘｔｕｒｅを１：１で混合し、常温で１時間反応させた後、分光光度計を用いて５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７９】
その結果、図５に示したように、アルコール投与群は、正常対照群に比べて血清内アルデヒドの濃度が高く表れる反面、本発明の結合体複合物をアルコールとともに投与した実験群は、アルコール投与群に比べて血清内アルデヒドの濃度が顕著に低く表れることを確認した（図５）。
【００８０】
前記結果から、本発明のセサモールとペプチドの結合体は、ＡＤＨ及びＡＬＤＨの活性及び発現を有意的に増加させ、アルコールの早い分解を誘導することが分かる。
【００８１】
［実験例５］二日酔い解消効能の確認
二日酔い解消効能を確認するために、前記結合体複合物を用いて臨床試験を行った。
【００８２】
具体的に、臨床試験を行うために、２０〜４０歳の成人男性４名、女性４名を募集した。その後、前記被験者を対象に基本のアルコール吸収パターンを調べるための対照試験を行った。より具体的に、同一の食事を進めた後、３時間空腹を維持させ、３０分間市販の２０％の酒類（焼酎）一本を摂取させた。摂取１時間及び２時間後の血中アルコールの濃度を、飲酒測定器（センテックコリア、ＡＬ−９０００）を用いて測定した。
【００８３】
その後、結合体複合物の二日酔い解消効能を確認するために、対照試験３日後、同一の被験者を対象に［製造例２］で製造した２種のセサモールとペプチドの結合体をそれぞれ１００ｐｐｍずつ含んだドリンク剤１００ｍｌを摂取させ、３０分後前記記載の方法と同一の方法でアルコールを摂取させて血中アルコールの濃度を測定した後、対照試験の結果と血中アルコールの濃度を比較、分析してグラフ化した。
【００８４】
その結果、図６に示したとおり、本発明の結合体複合物を摂取した群は、アルコール摂取から１時間及び２時間後、アルコールのみ摂取した群に比べて血中アルコールの濃度が顕著に低くなることを確認した（図６）。
【００８５】
したがって、前記結果から、本発明のセサモールとペプチドの結合体は、アルコールの早い分解を誘導して二日酔いを解消することが分かる。
【図１】
2020536938.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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