(57)【要約】  本研究の１つの態様は、ＧＭ６として知られるＭＮＴＦ由来ペプチドが、アルツハイマー病に関連する遺伝子の発現を改変するかどうかを評価するための生物情報学的解析を提供することであった。遺伝子発現解析は、ＤＮＡマイクロアレイまたはＲＮＡ−ｓｅｑ技術により生成されたいくつかの遺伝子発現プロファイリングデータセットを用いて行われる。本発明者らの結果は、アルツハイマー病関連遺伝子が、ＧＭ６処置に対して固有の応答を示し、アルツハイマー病発症および進行の根底にある中核的プロセスに関連するシグナル伝達経路に影響を及ぼすことを示している。本明細書に記載された特定の目的とする１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現。本発明者らは、ＧＭ６で治療されたＡＬＳ患者が、治療後に血漿中タウの存在量の大幅な減少を示すことを示す（図１Ｄ）。本発明者らはまた、ＧＭ６がＳＨ−５ＹＳＹ細胞におけるＭＡＰＴ  ｍＲＮＡを抑制したことも示す（図２）。
2020515813.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＡＰＯＥ  ｅ２、ＡＰＯＥ  ｅ３、およびＡＰＯＥ  ｅ４からなる群から選択されるアポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）の１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現レベルを検出することを含み、前記１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの対照発現レベルと比較した、前記試料中の前記１つまたは複数の遺伝子バリアントの差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法。
【請求項２】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＡＰＯＥ  ｅ２、ＡＰＯＥ  ｅ３、およびＡＰＯＥ  ｅ４からなる群から選択されるアポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）の１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項３】
患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＰＬＡＵ、ＮＧＦＲ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＬＵ、およびＲＹＲ３からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、前記試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法。
【請求項４】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＰＬＡＵ、ＮＧＦＲ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＬＵ、およびＲＹＲ３からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項５】
患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＤＯＣＫ２、ＶＥＧＦＡ、ＩＬ６Ｒ、ＨＭＧＢ１およびＰＴＫ２Ｂからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、前記試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法。
【請求項６】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＤＯＣＫ２、ＶＥＧＦＡ、ＩＬ６Ｒ、ＨＭＧＢ１およびＰＴＫ２Ｂからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項７】
患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＣＯＸ４１２、ＮＤＵＦＳ２、ＮＤＵＦＢ８、ＮＤＵＦＳ４およびＣＯＸ１０からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、前記試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法。
【請求項８】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＣＯＸ４１２、ＮＤＵＦＳ２、ＮＤＵＦＢ８、ＮＤＵＦＳ４およびＣＯＸ１０からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項９】
患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＡＢＣＡ７、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＬＤ３、ＴＲＥＭ２、およびＳＯＲＬ１からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、前記試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法。
【請求項１０】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＡＢＣＡ７、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＬＤ３、ＴＲＥＭ２、およびＳＯＲＬ１からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項１１】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＡ１２、ＣＯＸ５Ａ、ＡＴＰ５Ｏ、ＣＯＸ７Ｂ、ＣＯＸ７Ａ２、ＮＤＵＦＢ７、ＮＤＵＦＢ２、ＮＤＵＦＡＢ１、ＣＯＸ６Ｃ、ＮＤＵＦＣ１、ＮＤＵＦＢ６、ＮＤＵＦＢ４、ＣＯＸ７Ｃ、ＵＱＣＲＨ、ＮＤＵＦＡ２、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＳ６、ＮＤＵＦＡ７、ＮＤＵＦＢ１１、ＮＤＵＦＢ１０、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＢ９、ＮＤＵＦＡ１３、ＡＴＰ５Ｄ、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＡ６、ＣＯＸ５Ｂ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＡ１、ＣＯＸ６Ｂ１、ＮＤＵＦＳ３、ＵＱＣＲＱ、ＰＳＥＮＥＮ、ＮＤＵＦＡ９、ＦＡＤＤ、ＣＡＬＭ３、ＣＯＸ８Ａ、ＡＴＰ５Ｇ３、ＰＰＰ３ＣＡ、ＰＬＣＢ２、ＮＤＵＦＢ３、ＣＯＸ４Ｉ１、ＣＹＣ１、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＣＹＣＳ、ＳＤＨＢ、ＣＤＫ５、ＮＤＵＦＡ５、ＡＰＨ１Ａ、ＮＤＵＦＢ５、ＣＯＸ７Ａ２Ｌ、ＡＴＰ５Ｃ１、ＡＴＰ５Ｆ１、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＭＡＰＴ、ＭＡＰＫ３、ＢＡＤ、ＣＯＸ６Ｂ２、ＦＡＳ、ＡＴＰ５Ｊ、およびＵＱＣＲＢの１つまたは複数を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する、方法。
【請求項１２】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＧＮＡＱ；ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０；ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ９、ＩＴＰＲ３、ＧＳＫ３Ｂ、ＲＴＮ３、ＢＡＣＥ１、ＣＤＫ５Ｒ１、ＩＴＰＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ＡＤＡＭ１７、ＣＡＬＭＬ４、ＮＣＳＴＮ、ＡＴＰ５Ｂ、ＡＴＦ６、ＡＰＰ、ＡＴＰ２Ａ１、ＰＬＣＢ４の１つまたは複数を調節することにより、アミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる、方法。
【請求項１３】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、タウ（ＭＡＰＴ）の発現および蓄積を制限することによりアルツハイマー病を阻害または予防するステップを含む方法。
【請求項１４】
ＧＭ６の投与が、ＮＤＵＦＢ１；ＮＤＵＦＡ１２；ＣＯＸ５Ａ；ＡＴＰ５Ｏ；ＣＯＸ７Ｂ；ＣＯＸ７Ａ２；ＮＤＵＦＢ７；ＮＤＵＦＢ２；ＮＤＵＦＡＢ１；ＣＯＸ６Ｃ；ＮＤＵＦＣ１；ＮＤＵＦＢ６；ＮＤＵＦＢ４；ＣＯＸ７Ｃ；ＵＱＣＲＨ；ＮＤＵＦＡ２；ＮＤＵＦＡ８；ＮＤＵＦＳ６；ＮＤＵＦＡ７；ＮＤＵＦＢ１１；ＮＤＵＦＢ１０；ＮＤＵＦＳ５；ＮＤＵＦＢ９；ＮＤＵＦＡ１３；ＡＴＰ５Ｄ；ＮＤＵＦＳ８；ＮＤＵＦＡ６；ＣＯＸ５Ｂ；ＮＤＵＦＳ４；ＮＤＵＦＡ１；ＣＯＸ６Ｂ１；ＮＤＵＦＳ３；ＵＱＣＲＱ；ＰＳＥＮＥＮ；ＮＤＵＦＡ９；ＦＡＤＤ；ＣＯＸ８Ａ；ＡＴＰ５Ｇ３；ＰＬＣＢ２；ＮＤＵＦＢ３；ＣＯＸ４Ｉ１；ＮＤＵＦＢ５から選択される遺伝子を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ＧＭ６の投与が、ＮＤＵＦＢ１；ＮＤＵＦＡ１２；ＣＯＸ５Ａ；ＡＴＰ５Ｏ；およびＣＯＸ７Ｂから選択される遺伝子を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
ＧＭ６の投与が、ＧＮＡＱ；ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０；ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；およびＣＡＳＰ３から選択される遺伝子を調節してアミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
ＧＭ６の投与が、ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＰＩＣＡＬＭから選択される遺伝子を調節してアミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＶＬＤＬＲ、ＳＯＲＬ１、Ｃ３ｏｒｆ１７、ＳＴＫ１１、ＲＮＦ６、ＣＮＴＮ１、ＳＴＫ２４、ＲＥＬＮ、ＭＡＮ２Ａ１、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＣＴＮＮＡ２、ＦＡＲＰ１、ＡＰＢＢ２、ＡＰＰ、ＰＳＥＮ１、ＡＤＡＭ１０の１つまたは複数を調節することにより、樹状突起形態形成、神経発生、または軸索発達を増加させる、方法。
【請求項１９】
アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、
ｉ）患者を選択するステップと、
ｉｉ）前記患者において、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＡ１２、ＣＯＸ５Ａ、ＡＴＰ５Ｏ、ＣＯＸ７Ｂ、ＣＯＸ７Ａ２、ＮＤＵＦＢ７、ＮＤＵＦＢ２、ＮＤＵＦＡＢ１、ＣＯＸ６Ｃ、ＮＤＵＦＣ１、ＮＤＵＦＢ６、ＮＤＵＦＢ４、ＣＯＸ７Ｃ、ＵＱＣＲＨ、ＮＤＵＦＡ２、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＳ６、ＮＤＵＦＡ７、ＮＤＵＦＢ１１、ＮＤＵＦＢ１０、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＢ９、ＮＤＵＦＡ１３、ＡＴＰ５Ｄ、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＡ６、ＣＯＸ５Ｂ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＡ１、ＣＯＸ６Ｂ１、ＮＤＵＦＳ３、ＵＱＣＲＱ、ＰＳＥＮＥＮ、ＮＤＵＦＡ９、ＦＡＤＤ、ＣＡＬＭ３、ＣＯＸ８Ａ、ＡＴＰ５Ｇ３、ＰＰＰ３ＣＡ、ＰＬＣＢ２、ＮＤＵＦＢ３、ＣＯＸ４Ｉ１、ＣＹＣ１、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＣＹＣＳ、ＳＤＨＢ、ＣＤＫ５、ＮＤＵＦＡ５、ＡＰＨ１Ａ、ＮＤＵＦＢ５、ＣＯＸ７Ａ２Ｌ、ＡＴＰ５Ｃ１、ＡＴＰ５Ｆ１、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＭＡＰＴ、ＭＡＰＫ３、ＢＡＤ、ＣＯＸ６Ｂ２、ＦＡＳ、ＡＴＰ５Ｊ、およびＵＱＣＲＢ；ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＧＮＡＱ、ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０、ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ９、ＩＴＰＲ３、ＧＳＫ３Ｂ、ＲＴＮ３、ＢＡＣＥ１、ＣＤＫ５Ｒ１、ＩＴＰＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ＡＤＡＭ１７、ＣＡＬＭＬ４、ＮＣＳＴＮ、ＡＴＰ５Ｂ、ＡＴＦ６、ＡＴＰ２Ａ１、およびＰＬＣＢ４；ＶＬＤＬＲ、Ｃ３ｏｒｆ１７、ＳＴＫ１１、ＲＮＦ６、ＣＮＴＮ１、ＳＴＫ２４、ＲＥＬＮ、ＭＡＮ２Ａ１、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＣＴＮＮＡ２、ＦＡＲＰ１、ＡＰＢＢ２、ＡＰＰからなる群から選択される、アルツハイマー病のバイオマーカーを定量化するステップと、
ｉｉｉ）前記バイオマーカーの量が、選択された対象の所定のレベルと十分に異なると判定される場合、前記患者をアルツハイマー病の治療を必要とすると分類するステップと、
ｉｖ）治療を必要とすると分類された対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して上記のバイオマーカーの１つまたは複数を制御し、ＧＭ６の投与が、ミトコンドリア媒介細胞死を阻害し、アミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させ、またはタウ（ＭＡＰＴ）の発現および蓄積を制限するステップと、
ｖ）前記バイオマーカーの前記制御をアルツハイマー病進行の改善と相関させるステップと
を含む方法。
【請求項２０】
ＧＭ６が、別の薬物または療法と組み合わせて使用される、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
ＧＭ６が静脈内投与される、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＧＭ６が経口投与される、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術分野は、アルツハイマー病の診断、モニタリング、予後診断、予防、発症遅延、または治療のために、ＧＭ６として知られるＭＮＴＦ因子を使用することを含む。
【０００２】
関連出願
本出願は、その全体が参照により組み込まれる、Ｐｕｉ−Ｙｕｋ  Ｄｏｒｏｔｈｙ  Ｋｏによる「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｕｓｉｎｇ  ＧＭ６  ｉｎ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ」と題する、２０１６年１２月２３日に出願された米国特許出願公開第６２／４３８，８３７号明細書からの優先権を受けるものである。
【背景技術】
【０００３】
以下は、本発明を理解する上で有用となり得る情報を含む。本明細書に提供された情報のいずれかが、本明細書に記載もしくは主張された発明の従来技術であり、または本明細書に記載もしくは主張された発明に関係があること、あるいは明確にまたは暗示的に言及された任意の刊行物または文献が従来技術であることを認めるものではない。
【０００４】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶喪失、脳萎縮、およびニューロン死を特徴とする進行性認知症である。病因は十分に理解されていないが、細胞外βアミロイド斑および細胞内タウ神経原線維変化の加齢関連蓄積を伴うとされている。今日まで、５種類の薬物のみが米国食品医薬品局によって承認されており、利用可能な治療がこれまでにＡＤ患者に提供してきた有益性および有効性は限られている（例えば、ＡＣｈ阻害剤、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬）。しかし、他の神経変性疾患のために開発中の治療が、ＡＤに対して有効性を示す可能性がある（すなわち「多目的」神経変性薬）。
【０００５】
ラット筋肉組織からの２種類の運動ニューロン栄養因子（ＭＮＴＦ１およびＭＮＴＦ２）の単離および特徴付け、ならびにヒト網膜芽細胞腫ｃＤＮＡライブラリーから得られた組換えＭＮＴＦ１−Ｆ６遺伝子のその後のクローニングは、本出願人の以前の米国特許第６，３０９，８７７号明細書においてすでに報告されている。ＭＮＴＦ１−Ｆ６遺伝子配列は、以下のアミノ酸配列：ＬＧＴＦＷＧＤＴＬＮＣＷＭＬＳＡＦＳＲＹＡＲＣＬＡＥＧＨＤＧＰＴＱ［配列番号１］を有する、配列番号１と本明細書で呼ばれる３３アミノ酸配列をコードする。
【０００６】
天然に存在するおよび組換えＭＮＴＦ１ポリペプチドは、ラット腰髄外植片から単離された前角運動ニューロンのインビトロでの生存能を選択的に高めることが示された。処置された培養物の顕微鏡写真は、有髄神経線維の神経突起伸長、ならびに非ニューロン細胞、例えばグリア細胞および線維芽細胞の成長の著しい低下を示した。同様に、外科的に軸索切断されたラット末梢神経へのＭＮＴＦ１のインビボ投与は、未処置対照より著しく高いパーセンテージの生存している運動ニューロンをもたらし、これは、抗ＭＮＴＦ１モノクローナル抗体の同時投与によってブロックすることができた。
【０００７】
ＭＮＴＦ１のさらなる有益な効果が、脊髄半側切断に供され、末梢神経自家移植片によって修復され、脊髄との神経移植接合部にごく近接してＭＮＴＦ１含有ゲル切片を移植されたラットにおいて実証された。ＭＮＴＦ１処置された動物は、より多数の生存している運動ニューロン、運動および感覚機能の回復の改善、炎症反応の低下（より少ない浸潤マクロファージおよびリンパ球）、ならびに移植部位におけるコラーゲン含有瘢痕組織形成の減少、正常なシュワン細胞形態ならびに正常な有髄および無髄神経線維形成を示した。
【０００８】
ＭＮＴＦ１の既知の生物学的活性にとって十分であると思われる、ＭＮＴＦ１−Ｆ６分子内の２つの以前に認識されていない重複ドメインが現在同定されている。本明細書で「ＷＭＬＳＡＦＳ」および「ＦＳＲＹＡＲ」ドメインとして指定されるこれらのドメインの各々は、ＭＮＴＦ１−Ｆ６  ３３−ｍｅｒと類似の方法で運動ニューロン由来細胞株の増殖を刺激するのに十分である。同様に、「ＦＳＲＹＡＲ」ドメインは、ＭＮＴＦ１−Ｆ６  ３３−ｍｅｒと類似の方法でインビボでの運動ニューロンによる筋肉標的の選択的神経再支配を指示するのに十分である。さらに、「ＦＳＲＹＡＲ」ドメインは、ＭＮＴＦ１−Ｆ６  ３３−ｍｅｒを含む「ＦＳＲＹＡＲ」配列を含有する任意のＭＮＴＦペプチドを認識する抗体を産生するのに十分な抗原エピトープを提供する。
【０００９】
ニューロン細胞における生存能および成長を調節することができるＭＮＴＦの活性断片由来の新規のペプチドおよび組成物、ならびに神経栄養機能または神経向性機能にとって十分な「ＷＭＬＳＡＦＳドメイン」または「ＦＳＲＹＡＲドメイン」のどちらかを含有する新規のペプチドおよび組成物を使用して、ニューロン細胞生存能および成長を調節する方法が、米国特許第７，１８３，３７３号明細書に記載されている。その中で実証されているポリペプチドドメインは、ニューロン細胞の選択的な維持および軸索再生、ならびにその構造および／または機能を模倣することができるペプチドおよび／または分子にとって十分であった。その発明の好ましい実施形態は、ＡＬＳ適応のＧＭ６０４としても知られるＧＭ６の配列である、アミノ酸配列：ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］を有するペプチド、およびそのアナログを含む。好ましくはそのようなアナログは、ＧＭ６［配列番号２］の機能的等価物である。
【００１０】
ＧＭ６は、ニューロンが作られ、終末のシナプス標的に達する胎児発生期に存在する内因性の主要な神経成長調節物質、ＭＮＴＦの活性ドメインを包含する。胎生期は、特にＣＮＳ内でヒト成長および発達の最も著しいおよび急速な時期である。前臨床試験では、げっ歯類におけるＧＭ６０４の処置が神経の再生を促進し、栄養効果および向性効果の両方を示すことを実証した（Chau RMW et al. 1990 Neuronotrophic Factor. Chin J. Neuroanat. 6:129-138；Chau RMW et al. 1992. Muscle neurotrophic factors specific for anterior horn motoneurons of rat spinal cord. Recent Adv. Cell Mol Biol. 5:89-94；Yu J. et al. 2008. Motoneuronotrophic Factor analog GM604 reduces infarct volume and behavioral deficits following transient ischemia in the mouse. Brain Res. 1238:143-153；米国特許第７，１８３，３７３号明細書）。
【００１１】
本発明者らのインビトロおよびインビボ試験から、本発明者らは、本明細書に記載されＧＭ６０４と呼ばれるＭＮＴＦ  ６  ｍｅｒが、複数の作用機序を含むことを現在理解している。ＧＭ６は、インスリン受容体に結合し、インスリン受容体およびＩＧＦ−１のＴｙｒ  １１６２／１１６３の自己リン酸化を引き起こす（米国特許第８，９８６，６７６号明細書）。ＧＭ６はまた、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞パーキンソン病モデルによるインビトロ試験で示されたように（ワートマニン（ＰＩ３Ｋ阻害剤）による処置がＭＮＴＦの作用を抑制し、ＰＩ３Ｋ経路を通じた作用を意味した）、ＰＩ３Ｋを通じた経路も活性化し、調節する。（米国特許第８，６７３，８５２号明細書）。本発明者らはまた、抗アポトーシス、神経発生および抗炎症におけるＧＭ６の役割も示した。米国特許第８，６７３，８５２号明細書において、本発明者らは、ＧＭ６０４が血液脳関門を透過できることを示した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本出願は、アルツハイマー病におけるＧＭ６の役割の研究における本発明者らの結果を報告するものであり、本明細書に提供された本発明の実施形態は、アルツハイマー病を診断、モニタリング、予後診断、および予防、発症遅延、または治療する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本明細書に記載および主張された本発明は、本概要に明記または記載または言及されたものを含むがこれらに限定されない、多くの属性および実施形態を有する。本明細書に記載および主張された本発明は、本概要に同定された特徴または実施形態に限定されず、または本概要に同定された特徴または実施形態によって限定されない。本概要は、例示の目的のみで含まれ、制限の目的で含まれるものではない。
【００１４】
本明細書に記載および主張された本発明のこれらのおよび他の態様および実施形態は、本出願および特許請求の範囲から、ならびに本出願および特許請求の範囲を通して明らかとなり、それらの全てが、その書かれた記載の一部と見なされるものとする。
【００１５】
本明細書に提供された本発明は、アルツハイマー病を診断、モニタリング、予後診断、および予防、発症遅延、または治療する方法に関する。
【００１６】
したがって、１つの実施形態は、アルツハイマー病を予防、発症遅延、または治療する方法に関する。方法は、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＡ１２、ＣＯＸ５Ａ、ＡＴＰ５Ｏ、ＣＯＸ７Ｂ、ＣＯＸ７Ａ２、ＮＤＵＦＢ７、ＮＤＵＦＢ２、ＮＤＵＦＡＢ１、ＣＯＸ６Ｃ、ＮＤＵＦＣ１、ＮＤＵＦＢ６、ＮＤＵＦＢ４、ＣＯＸ７Ｃ、ＵＱＣＲＨ、ＮＤＵＦＡ２、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＳ６、ＮＤＵＦＡ７、ＮＤＵＦＢ１１、ＮＤＵＦＢ１０、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＢ９、ＮＤＵＦＡ１３、ＡＴＰ５Ｄ、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＡ６、ＣＯＸ５Ｂ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＡ１、ＣＯＸ６Ｂ１、ＮＤＵＦＳ３、ＵＱＣＲＱ、ＰＳＥＮＥＮ、ＮＤＵＦＡ９、ＦＡＤＤ、ＣＡＬＭ３、ＣＯＸ８Ａ、ＡＴＰ５Ｇ３、ＰＰＰ３ＣＡ、ＰＬＣＢ２、ＮＤＵＦＢ３、ＣＯＸ４Ｉ１、ＣＹＣ１、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＣＹＣＳ、ＳＤＨＢ、ＣＤＫ５、ＮＤＵＦＡ５、ＡＰＨ１Ａ、ＮＤＵＦＢ５、ＣＯＸ７Ａ２Ｌ、ＡＴＰ５Ｃ１、ＡＴＰ５Ｆ１、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＭＡＰＴ、ＭＡＰＫ３、ＢＡＤ、ＣＯＸ６Ｂ２、ＦＡＳ、ＡＴＰ５Ｊ、およびＵＱＣＲＢの１つまたは複数を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する。
【００１７】
別の実施形態は、アルツハイマー病を予防、発症遅延、または治療する方法であって、アミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を対象に投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＧＮＡＱ；ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０；ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ９、ＩＴＰＲ３、ＧＳＫ３Ｂ、ＲＴＮ３、ＢＡＣＥ１、ＣＤＫ５Ｒ１、ＩＴＰＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ＡＤＡＭ１７、ＣＡＬＭＬ４、ＮＣＳＴＮ、ＡＴＰ５Ｂ、ＡＴＦ６、ＡＰＰ、ＡＴＰ２Ａ１、ＰＬＣＢ４の１つまたは複数を調節することにより、アミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる、方法に関する。
【００１８】
別の実施形態は、アルツハイマー病を予防、発症遅延、または治療する方法であって、対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、タウ（ＭＡＰＴ）の発現および蓄積を制限することによりアルツハイマー病を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ＧＭ６の投与は、ＮＤＵＦＢ１；ＮＤＵＦＡ１２；ＣＯＸ５Ａ；ＡＴＰ５Ｏ；ＣＯＸ７Ｂ；ＣＯＸ７Ａ２；ＮＤＵＦＢ７；ＮＤＵＦＢ２；ＮＤＵＦＡＢ１；ＣＯＸ６Ｃ；ＮＤＵＦＣ１；ＮＤＵＦＢ６；ＮＤＵＦＢ４；ＣＯＸ７Ｃ；ＵＱＣＲＨ；ＮＤＵＦＡ２；ＮＤＵＦＡ８；ＮＤＵＦＳ６；ＮＤＵＦＡ７；ＮＤＵＦＢ１１；ＮＤＵＦＢ１０；ＮＤＵＦＳ５；ＮＤＵＦＢ９；ＮＤＵＦＡ１３；ＡＴＰ５Ｄ；ＮＤＵＦＳ８；ＮＤＵＦＡ６；ＣＯＸ５Ｂ；ＮＤＵＦＳ４；ＮＤＵＦＡ１；ＣＯＸ６Ｂ１；ＮＤＵＦＳ３；ＵＱＣＲＱ；ＰＳＥＮＥＮ；ＮＤＵＦＡ９；ＦＡＤＤ；ＣＯＸ８Ａ；ＡＴＰ５Ｇ３；ＰＬＣＢ２；ＮＤＵＦＢ３；ＣＯＸ４Ｉ１；ＮＤＵＦＢ５から選択される遺伝子を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する。いくつかの実施形態においてＧＭ６の投与は、ＮＤＵＦＢ１；ＮＤＵＦＡ１２；ＣＯＸ５Ａ；ＡＴＰ５Ｏ；およびＣＯＸ７Ｂから選択される遺伝子を調節することによりミトコンドリア媒介細胞死を阻害する。いくつかの実施形態においてＧＭ６の投与は、ＧＮＡＱ；ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０；ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；およびＣＡＳＰ３から選択される遺伝子を調節してアミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる。いくつかの実施形態においてＧＭ６の投与は、ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＰＩＣＡＬＭから選択される遺伝子を調節してアミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させる。
【００２０】
別の実施形態は、アルツハイマー病を予防、発症遅延、または治療する方法であって、対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失を阻害または予防するステップを含み、ＧＭ６の投与が、以下の遺伝子：ＶＬＤＬＲ、ＳＯＲＬ１、Ｃ３ｏｒｆ１７、ＳＴＫ１１、ＲＮＦ６、ＣＮＴＮ１、ＳＴＫ２４、ＲＥＬＮ、ＭＡＮ２Ａ１、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＣＴＮＮＡ２、ＦＡＲＰ１、ＡＰＢＢ２、ＡＰＰ、ＰＳＥＮ１、ＡＤＡＭ１０の１つまたは複数を調節することにより、樹状突起形態形成、神経発生、または軸索発達を増加させる、方法に関する。
【００２１】
別の実施形態は、アルツハイマー病を予防、発症遅延、または治療する方法であって、患者を選択するステップと、ｉｉ）前記患者において、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＡ１２、ＣＯＸ５Ａ、ＡＴＰ５Ｏ、ＣＯＸ７Ｂ、ＣＯＸ７Ａ２、ＮＤＵＦＢ７、ＮＤＵＦＢ２、ＮＤＵＦＡＢ１、ＣＯＸ６Ｃ、ＮＤＵＦＣ１、ＮＤＵＦＢ６、ＮＤＵＦＢ４、ＣＯＸ７Ｃ、ＵＱＣＲＨ、ＮＤＵＦＡ２、ＮＤＵＦＡ８、ＮＤＵＦＳ６、ＮＤＵＦＡ７、ＮＤＵＦＢ１１、ＮＤＵＦＢ１０、ＮＤＵＦＳ５、ＮＤＵＦＢ９、ＮＤＵＦＡ１３、ＡＴＰ５Ｄ、ＮＤＵＦＳ８、ＮＤＵＦＡ６、ＣＯＸ５Ｂ、ＮＤＵＦＳ４、ＮＤＵＦＡ１、ＣＯＸ６Ｂ１、ＮＤＵＦＳ３、ＵＱＣＲＱ、ＰＳＥＮＥＮ、ＮＤＵＦＡ９、ＦＡＤＤ、ＣＡＬＭ３、ＣＯＸ８Ａ、ＡＴＰ５Ｇ３、ＰＰＰ３ＣＡ、ＰＬＣＢ２、ＮＤＵＦＢ３、ＣＯＸ４Ｉ１、ＣＹＣ１、ＨＳＤ１７Ｂ１０、ＣＹＣＳ、ＳＤＨＢ、ＣＤＫ５、ＮＤＵＦＡ５、ＡＰＨ１Ａ、ＮＤＵＦＢ５、ＣＯＸ７Ａ２Ｌ、ＡＴＰ５Ｃ１、ＡＴＰ５Ｆ１、ＣＡＣＮＡ１Ｆ、ＭＡＰＴ、ＭＡＰＫ３、ＢＡＤ、ＣＯＸ６Ｂ２、ＦＡＳ、ＡＴＰ５Ｊ、およびＵＱＣＲＢ；ＣＬＵ、ＳＯＲＬ１、ＧＮＡＱ、ＩＤＥ；ＡＤＡＭ１０、ＰＳＥＮ１；ＰＰＰ３ＣＢ；ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ９、ＩＴＰＲ３、ＧＳＫ３Ｂ、ＲＴＮ３、ＢＡＣＥ１、ＣＤＫ５Ｒ１、ＩＴＰＲ２、ＥＩＦ２ＡＫ３、ＡＤＡＭ１７、ＣＡＬＭＬ４、ＮＣＳＴＮ、ＡＴＰ５Ｂ、ＡＴＦ６、ＡＴＰ２Ａ１、およびＰＬＣＢ４；ＶＬＤＬＲ、Ｃ３ｏｒｆ１７、ＳＴＫ１１、ＲＮＦ６、ＣＮＴＮ１、ＳＴＫ２４、ＲＥＬＮ、ＭＡＮ２Ａ１、ＴＭＥＭ１０６Ｂ、ＰＩＣＡＬＭ、ＣＴＮＮＡ２、ＦＡＲＰ１、ＡＰＢＢ２、またはＡＰＰからなる群から選択される、アルツハイマー病のバイオマーカーを定量化するステップと、ｉｉｉ）前記バイオマーカーの量が、選択された対象の所定のレベルと十分に異なると判定される場合、患者をアルツハイマー病の治療を必要とすると分類するステップと、ｉｖ）治療を必要とすると分類された対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＧＭ６の投与が、ミトコンドリア媒介細胞死を阻害し、アミロイド前駆体タンパク質の異化を増加させるように、またはタウ（ＭＡＰＴ）の発現および蓄積を制限することにより、上記のバイオマーカーの１つまたは複数を制御するステップと、ｖ）バイオマーカーの制御をアルツハイマー病進行の改善と相関させるステップとを含む方法に関する。
【００２２】
別の実施形態は、患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＡＰＯＥ  ｅ２、ＡＰＯＥ  ｅ３、およびＡＰＯＥ  ｅ４からなる群から選択されるアポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）の１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの対照発現レベルと比較した、試料中の前記１つまたは複数の遺伝子バリアントの差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法に関する。
【００２３】
別の実施形態は、アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＡＰＯＥ  ｅ２、ＡＰＯＥ  ｅ３、およびＡＰＯＥ  ｅ４からなる群から選択されるアポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）の１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【００２４】
別の実施形態は、患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＰＬＡＵ、ＮＧＦＲ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＬＵ、およびＲＹＲ３からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法に関する。
【００２５】
別の実施形態は、アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲ［配列番号２］からなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＰＬＡＵ、ＮＧＦＲ、ＣＡＣＮＡ１Ｇ、ＣＬＵ、およびＲＹＲ３からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【００２６】
別の実施形態は、患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＤＯＣＫ２、ＶＥＧＦＡ、ＩＬ６Ｒ、ＨＭＧＢ１およびＰＴＫ２Ｂからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法に関する。
【００２７】
別の実施形態は、アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ｉ）ＤＯＣＫ２、ＶＥＧＦＡ、ＩＬ６Ｒ、ＨＭＧＢ１およびＰＴＫ２Ｂからなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【００２８】
別の実施形態は、患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＣＯＸ４１２、ＮＤＵＦＳ２、ＮＤＵＦＢ８、ＮＤＵＦＳ４およびＣＯＸ１０からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法に関する。
【００２９】
別の実施形態は、アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６０４）を投与して、ＣＯＸ４１２、ＮＤＵＦＳ２、ＮＤＵＦＢ８、ＮＤＵＦＳ４およびＣＯＸ１０からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子の発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【００３０】
別の実施形態は、患者におけるアルツハイマー病を診断する方法であって、前記患者由来の生物学的試料中のＡＢＣＡ７、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＬＤ３、ＴＲＥＭ２、およびＳＯＲＬ１からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを検出するステップを含み、前記１つまたは複数の遺伝子の対照発現レベルと比較した、試料中の前記１つまたは複数の遺伝子の差次的発現がアルツハイマー病を示す、方法に関する。
【００３１】
別の実施形態は、アルツハイマー病を治療または予防する方法であって、ｉ）対象にアミノ酸ＦＳＲＹＡＲからなるＭＮＴＦペプチド（ＧＭ６）を投与して、ＡＢＣＡ７、ＣＬＵ、ＣＲ１、ＰＩＣＡＬＭ、ＰＬＤ３、ＴＲＥＭ２、およびＳＯＲＬ１からなる群から選択される１つまたは複数の遺伝子または遺伝子バリアントの発現を調節することにより、アルツハイマー病に関連するニューロン喪失または機能障害を阻害または予防するステップを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】２週間のＧＭ６治療後のＡＬＳ患者における血漿中タウの減少を示す図である（パネルＡ〜Ｄ、フェーズ２Ａ試験）。（Ａ）ＣＳＦタウ。患者は、２週間ＧＭ６で治療され（受診１〜６）、治療後１０週間追跡された（受診７および８）。（Ｂ）血漿タウ。（Ｃ）ベースラインのＣＳＦタウ（受診１）対最後のＧＭ６治療後のＣＳＦタウ（受診６）。（Ｄ）最後のＧＭ６治療後の血漿中タウ（受診６）対治療後の追跡調査３１日目の血漿中タウ（受診７）。（Ｃ）および（Ｄ）では、受診間でタウが等しい患者は対角線に沿って位置する。Ｐ値は、ＧＭ６およびプラセボ治療患者における受診間のタウの変化を比較して得られた（片側ｔ検定）。
【図２】ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるＫＥＧＧ  ＡＤ病経路（ｈｓａ０５０１０）に関連する１３４個の遺伝子およびＧＭ６に対するそれらの応答を示す図である。グレーフォント（＊）で示された遺伝子は、ＧＭ６により増加またはＧＭ６により減少された（ＦＤＲ＜０．１０）。倍変化推定値（ＧＭ６／ＣＴＬ）が遺伝子ごとに示されている。
【図３】ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞においてＧＭ６によって優位に抑制され、ミトコンドリアと関連するＡＤ関連遺伝子を例示する図である。（Ａ、Ｂ）シミュレーション解析。１３４個のＳＨ−ＳＹ５Ｙ発現遺伝子のセットが無作為に採取された。（Ａ）において、ヒストグラムは、１３４個の無作為に採取された遺伝子セットの平均ＦＣを示す（矢印：１３４個のＡＤ関連遺伝子の観察された平均ＦＣ）。（Ｂ）において、ヒストグラムは、遺伝子発現における非方向性変化を表す、採取された遺伝子セットごとの２ａｂｓ［ｌｏｇ２（ＦＣ）］の平均値を示す（矢印：１３４個のＡＤ関連遺伝子の観察された値）。（Ｃ）ＡＤ関連ＧＭ６減少遺伝子の濃縮されたＧＯ  ＢＰターム（条件付き超幾何分布検定；左の欄外の括弧：各タームと関連するＧＭ６減少遺伝子の数；右の欄外：各タームと関連する例示的なＧＭ６減少遺伝子）。
【図４】ＫＥＧＧ  ＡＤ病経路（ｈｓａ０５０１０）を例示する図である。ＧＭ６増加遺伝子またはＧＭ６減少遺伝子と関連する経路成分が示されている（ＦＤＲ＜０．１０；凡例を参照のこと）。
【図５】遺伝子研究によってＡＤに関連づけられたＧＭ６増加遺伝子と関連するＧＯ  ＢＰタームを示す図である。（Ａ）ＮＨＧＲＩ−ＥＢＩ  ＧＷＡＳカタログ。（Ｂ）ＯＭＩＭデータベース。左の欄外の括弧：各タームと関連するＧＭ６増加遺伝子の数。右の欄外：各タームと関連する例示的なＧＭ６増加遺伝子。
【図６】ＧＭ６が、ＡＬＳおよびＡＤ患者ＣＳＦ内で毒性因子に対して防御的であることを示す図である。Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット皮質ニューロン細胞が、対照の対象または（Ａ）ＡＬＳもしくは（Ｂ）ＡＤと診断された患者由来の死後ＣＳＦで処置された。４８時間後の細胞生存率が、ＭＴＴアッセイを用いて評価された（１群あたりｎ＝５）。同じ文字を共有しない群は、有意に異なる（Ｐ＜０．０５；Ｔｕｋｅｙ  ＨＳＤ検定）。
【図７】ＡＤと関連する遺伝子およびＧＭ６処置に対するその応答を示す図である（５＋データベースソース；方向性検定）。ＡＤ関連遺伝子が同定され、その平均倍変化（ＧＭ６／ＣＴＬ）が、無作為に採取された遺伝子セットと比較された。矢印は、ＡＤ関連遺伝子の平均倍変化（ＧＭ６／ＣＴＬ）を示す。緑色のヒストグラムは、無作為に採取された遺伝子セット（解析ごとに１０，０００無作為試料）における平均倍変化推定値の分布を表す。この解析に使用されたＡＤ関連遺伝子は、少なくとも５つのデータベースソースに基づきＡＤに関連づけられたもののみを含む。
【図８】ＡＤと関連する遺伝子およびＧＭ６処置に対するその応答を示す図である（４＋データベースソース；方向性検定）。ＡＤ関連遺伝子が同定され、その平均倍変化（ＧＭ６／ＣＴＬ）が、無作為に採取された遺伝子セットと比較された。矢印は、ＡＤ関連遺伝子の平均倍変化（ＧＭ６／ＣＴＬ）を示す。緑色のヒストグラムは、無作為に採取された遺伝子セット（解析ごとに１０，０００無作為試料）における平均倍変化推定値の分布を表す。この解析に使用されたＡＤ関連遺伝子は、少なくとも４つのデータベースソースに基づきＡＤに関連づけられたもののみを含む。
【図９】ＡＤと関連する遺伝子およびＧＭ６処置に対するその応答を示す図である（５＋データベースソース；非方向性検定）。ＡＤ関連遺伝子が同定され、その平均絶対倍変化［２＾ａｂｓ（ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ））］が、無作為に採取された遺伝子セットと比較された。矢印は、ＡＤ関連遺伝子の平均倍変化を示す。緑色のヒストグラムは、無作為に採取された遺伝子セット（解析ごとに１０，０００無作為試料）における平均絶対倍変化推定値の分布を表す。この解析に使用されたＡＤ関連遺伝子は、少なくとも５つのデータベースソースに基づきＡＤに関連づけられたもののみを含む。
【図１０】ＡＤと関連する遺伝子およびＧＭ６処置に対するその応答を示す図である（４＋データベースソース；非方向性検定）。ＡＤ関連遺伝子が同定され、その平均絶対倍変化［２＾ａｂｓ（ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ））］が、無作為に採取された遺伝子セットと比較された。矢印は、ＡＤ関連遺伝子の平均絶対倍変化を示す。緑色のヒストグラムは、無作為に採取された遺伝子セット（解析ごとに１０，０００無作為試料）における平均絶対倍変化推定値の分布を表す。この解析に使用されたＡＤ関連遺伝子は、少なくとも４つのデータベースソースに基づきＡＤに関連づけられたもののみを含む。
【図１１】ＧＭ６によって最も強く変化したＡＤ関連遺伝子を示す図である（マイクロアレイ）。図は、４８時間ＧＭ６で処置されたＳＨ−５ＹＳＹ細胞において最も強く変化したＡＤ関連遺伝子を示す。ｐ値が最も低いＡＤ関連遺伝子が示されている。全ての遺伝子が、ＦＣ＞１．５０またはＦＣ＜０．６７とＧＭ６によって大幅に変化した（ＦＤＲ＜０．１０）。遺伝子は、７つの可能性のあるデータベースソースの２つ以上に基づきＡＤに関連づけられた。
【図１２】ＧＭ６によって最も強く変化したＡＤ関連遺伝子を示す図である（ＲＮＡ−ｓｅｑ）。図は、（Ａ）６時間ＧＭ６で処置（ＵＭ、ＲＮＡ−ｓｅｑ）、（Ｂ）２４時間ＧＭ６で処置（ＵＭ、ＲＮＡ−ｓｅｑ）、（Ｃ）４８時間ＧＭ６で処置（ＵＭ、ＲＮＡ−ｓｅｑ）、（Ｄ）６時間ＧＭ６で処置（ＳＢＨ、６時間）、および（Ｅ）２４時間ＧＭ６で処置（ＳＢＨ、２４時間）されたＳＨ−５ＹＳＹ細胞において最も強く変化したＡＤ関連遺伝子を示す。いずれの場合にも、ｐ値が最も低いＡＤ関連遺伝子が示されている。黒いバーを有する遺伝子が、ＦＣ＞１．５０またはＦＣ＜０．６７とＧＭ６によって変化した。アスタリスク（＊）は、ＦＤＲ＜０．１０で大幅に変化した遺伝子を表すのに使用される（左の欄外）。遺伝子は、７つの可能性のあるデータベースソースの２つ以上に基づきＡＤに関連づけられた。
【図１３】ＧＭ６によって変化したＡＤ関連遺伝子と関連する遺伝子オントロジー生物学的プロセス（ＢＰ）タームを示す図である（ＵＭ、ＲＮＡ−ｓｅｑ）。（Ａ）ＧＭ６増加ＡＤ関連遺伝子に関して濃縮された遺伝子オントロジーＢＰターム（ＦＤＲ＜０．１０；３  ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  実験からプール）。括弧内の値（左の欄外）は、各カテゴリーのＧＭ６増加遺伝子の数を示す（右の欄外：ＧＭ６によって最も強く誘導された典型遺伝子）。（Ｂ）ＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子に関して濃縮された遺伝子オントロジーＢＰターム（ＦＤＲ＜０．１０；３  ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  実験からプール）。括弧内の値（左の欄外）は、各カテゴリーのＧＭ６減少遺伝子の数を示す（右の欄外：ＧＭ６によって最も強く抑制される典型遺伝子）。
【図１４】ＧＭ６によって変化したＡＤ関連遺伝子と関連する遺伝子オントロジー生物学的プロセス（ＢＰ）タームを示す図である（ＳＢＨ、ＲＮＡ−ｓｅｑ）。（Ａ）ＧＭ６増加ＡＤ関連遺伝子に関して濃縮された遺伝子オントロジーＢＰターム（ＦＤＲ＜０．１０；２  ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  実験からプール）。括弧内の値（左の欄外）は、各カテゴリーのＧＭ６増加遺伝子の数を示す（右の欄外：ＧＭ６によって最も強く誘導された典型遺伝子）。（Ｂ）ＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子に関して濃縮された遺伝子オントロジーＢＰターム（ＦＤＲ＜０．１０；２  ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑ実験からプール）。括弧内の値（左の欄外）は、ＧＭ６減少遺伝子各カテゴリーの数を示す（右の欄外：ＧＭ６によって最も強く抑制される典型遺伝子）。
【図１５】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、マイクロアレイ、４８時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）に対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図１６】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ、６時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）と対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図１７】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ、２４時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）に対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図１８】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ、４８時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）に対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図１９】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑ、６時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）に対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図２０】ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を示す図である（ｈｓａ０５０１０；ＳＨ−５ＹＳＹ細胞、ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑ、２４時間のＧＭ６処置）。濃いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における上方制御された遺伝子に関連し、薄いグレーの要素は、ＣＴＬ細胞と比較されたＧＭ６処置細胞における下方制御された遺伝子に関連する。カラースケール（右下）は、ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ）に対応する。このダイアグラムのインタラクティブ版は、オンラインで利用可能である：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｊｐ／ｋｅｇｇ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗ＿ｐａｔｈｗａｙ？ｈｓａ０５０１０
【図２１】仮定された作用機序を示す図である。この解析は、４つの可能性のある作用機序と一致する、ＧＭ６によって制御されるＡＤ関連遺伝子を同定した。図は、これらの機序を要約し、媒介的役割を果たしている可能性のあるＧＭ６制御遺伝子をリストしている。図に示された全ての遺伝子は、どちらかのＲＮＡ−ｓｅｑ実験または両方のＲＮＡ−ｓｅｑ実験においてＧＭ６によって制御された。
【図２２】ＧＭ６が血液脳関門を迅速に通過することを示す図である。ＥＬＩＳＡアッセイが行われ、結果が図示されている。脳ホモジネートからの上清は、対照と比較して全ての用量（０．２ｍｇ／ｋｇおよび２．０ｍｇ／ｋｇ）で統計的に有意なレベルでＧＭ６が検出された（ｐ＝０．０００１）。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義
「バイオマーカー」は、治療的介入に対する正常な生物学的プロセス、発病プロセスまたは薬理ゲノム学的プロセスの指標として客観的に測定され、評価される任意の特徴として定義される。ＦＤＡおよびＥＭＡの両方は、医薬品開発プロセスにおいてバイオマーカーのますます重要な役割を認識している。深刻な疾患に関して、疾患関連バイオマーカーの探索により、薬物標的の同定を促進することができる。治験における代替エンドポイントとしての疾患関連バイオマーカーの使用は、腫瘍学における医薬品承認を促進している。疾患特異的バイオマーカーの潜在的な臨床的有益性には、医薬品開発を加速することになる、より迅速および正確な疾患診断、ならびに臨床治験の規模および期間の潜在的低減が挙げられる。アルツハイマー病の医薬品開発へのバイオマーカーの適用は、薬物がその提案された標的に命中するかどうか（「標的バイオマーカー」）、および薬物が疾患の経過を変えるかどうか（「有効性バイオマーカー」）の両方を決定するべきである。
【００３４】
「代替エンドポイント」は、アルツハイマー病の場合などで、既知の臨床的エンドポイントの代わりになることが意図されるバイオマーカーとして定義される。代替エンドポイントは、疫学的、治療的、病態生理学的または他の科学的証拠に基づき有益性（または有害性、もしくは有益性の欠如）を予測すると予想される（Biomarkers Definitions Working Group (2001), Biomarkers and surrogate endpoints: preferred definitions and conceptual framework. Clin. Pharmacol. Ther.;69(3):89-95）。そのようなバイオマーカーはまた、療法に応答した疾患進行をモニタリングするのにしばしば使用される。
【００３５】
医薬組成物
本明細書に提供された医薬製剤は、任意選択の成分として、薬学的に許容される担体、希釈剤、可溶化剤または乳化剤、および当技術分野で利用可能なタイプの塩をさらに含んでもよい。そのような物質の例には、生理緩衝食塩水などの通常の生理食塩水および水が挙げられる。本発明の医薬製剤において有用な担体および／または希釈剤の特定の非限定的な例には、水、およびリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．０〜８．０などの生理学的に許容される緩衝生理食塩水が挙げられる。適切な薬学的担体には、滅菌水、塩類溶液（リンゲル液など）、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロースまたはデンプンなどの炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的調製物は滅菌することができ、所望であれば、助剤、例えば、活性化合物と有害に反応しない潤滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤、および／または芳香物質等と混合することができる。薬学的調製物はまた、所望であれば、代謝分解を低減する他の活性物質、例えば、酵素阻害剤と組み合わせることもできる。
【００３６】
本明細書に提供された化合物は、該化合物に加えて、薬学的に許容される担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、防腐剤、表面活性剤、中性またはカチオン性脂質、脂質複合体、リポソーム、浸透促進剤、担体化合物、および他の薬学的に許容される担体または賦形等を含み得る医薬組成物に製剤化することができる。
【００３７】
医薬組成物はまた、インターフェロン、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬等などの１つまたは複数の活性成分も含むことができる。非経口投与用の製剤には、緩衝液、リポソーム、希釈剤、および他の適切な添加剤も含有し得る滅菌水溶液が挙げられ得る。本明細書に提供された化合物を含む医薬組成物は、化合物の食事性送達を増強するために浸透促進剤を含んでもよい。浸透促進剤は、５つの広義のカテゴリー、すなわち、脂肪酸、胆汁塩、キレート剤、界面活性剤および非界面活性剤の１つに属するものとして分類され得る（Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 8, 91-192 (1991)；Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 7, 1-33 (1990)）。これらの広義のカテゴリーの１つまたは複数からの１つまたは複数の浸透促進剤が含まれ得る。
【００３８】
特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、局所、経鼻、経口、胃腸、気管支内、膀胱内、膣内、子宮内、皮下、筋肉内、関節周囲、関節内、脳脊髄液内（ＩＣＳＦ）、脳組織内（例えば頭蓋内投与）、脊髄内、創傷内、腹腔内もしくは胸腔内、または全身、例えば静脈内、動脈内、門脈内、もしくは心臓などの器官に直接的に投与することができる。
【００３９】
本明細書に提供された化合物は、非経口投与されてもよい。医薬組成物を製造するために、特定の化合物が薬学的に許容される担体または希釈剤と組み合わされることが、時として好ましい。適切な担体および希釈剤には、等張生理食塩水、例えばリン酸緩緩衝生理食塩水が挙げられる。組成物は、非経口、筋肉内、脳内、静脈内、皮下、または経皮投与用に製剤化されてもよい。哺乳動物細胞による核酸の取り込みは、いくつかの公知のトランスフェクション法、例えば、トランスフェクション剤を使用するものによって増強される。投与される製剤は、そのような薬剤を含有してもよい。これらの剤の例には、カチオン性薬剤（例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥ−デキストラン）およびリポフェクタント（例えばリポフェクタム（商標）およびトランスフェクタム（商標））が挙げられる。
【００４０】
局所投与用の製剤には、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、点滴薬、座薬、スプレー、液体、および粉末が挙げられ得る。従来の薬学的担体、水性、粉末または油性基剤、増粘剤等が必要である、または望ましい場合がある。コーティングされた手袋、コンドーム等も有用であり得る。経口投与用の組成物には、粉末もしくは顆粒、水もしくは非水性媒体中の懸濁液もしくは溶液、カプセル、サシェまたは錠剤が挙げられる。増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合がある。非経口投与用の組成物には、緩衝液、希釈剤および他の適切な添加剤も含有し得る滅菌水溶液が挙げられ得る。いくつかの場合において、治療レジメンの有効性を高めるために、他の伝統的な治療モダリティと併用した化合物で患者を治療することがより有効であり得る。本明細書で使用される場合、用語「治療レジメン」は、治療、緩和および予防モダリティを包含することを意味する。
【００４１】
投薬は、治療される病状の重症度および応答性、ならびに数日から数ヶ月続く治療経過により、または治癒がもたらされる、もしくは病状の縮小が達成されるまでを含むいくつかの要因に依存し得る。本明細書に提供された化合物の毒性および治療的有効性は、細胞培養物または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定することができる。例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に死をもたらす用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するため。毒性作用と治療効果の間の用量比は治療指数であり、それは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。有毒な副作用を示す化合物が使用され得るが、非感染細胞への潜在的傷害を最小限にするために、そのような化合物を罹患組織の部位にターゲティングする送達系を設計し、それにより副作用を低減する注意が払われるべきである。
【００４２】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投与量範囲を策定する上で使用することができる。そのような化合物の投与量は、毒性がほとんどない、または毒性がないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に好ましくはある。投与量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動し得る。本発明の方法において使用される任意の化合物に関して、治療有効用量は、細胞培養アッセイから初めに推定することができる。用量は、細胞培養で決定されるようなＩＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成するテスト化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルで策定され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するのに使用することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。投薬スケジュールは、患者の体内における薬物蓄積の測定から計算することができる。
【００４３】
適切な投与量は、投与経路に応じて、例えば、約０．１ｕｇから総用量約１グラムまで変動し得る。特定の投与量および送達方法に関するガイダンスが文献に提供されており、当業者に一般に利用可能である。当業者は、タンパク質またはその阻害剤用とは異なるヌクレオチド用の製剤を使用するであろう。同様に、本明細書に提供された化合物の送達は、特定の細胞、状態、および位置に特異的であろう。一般に、投与量は、体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇであり、日、週、月もしくは年に１回もしくはそれ以上、またはさらに低い頻度で与えられてもよい。特定の状態の治療または予防において、適当な投与量レベルは、一般に、患者の体重１ｋｇあたり１日約０．００１から１００ｍｇであり、単回または複数回で投与することができる。本発明による化合物（例えば、抗体およびその結合断片）は、周知の方法論による投与のための医薬組成物に製剤化することができる。医薬組成物は、例えば、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤と組み合わせて１つまたは複数の組換え発現構築物、および／またはそのような構築物の発現産物を含んでもよい。そのような担体は、使用される投与量および濃度においてレシピエントに非毒性となろう。適切な投与量は、典型的には皮内、皮下、筋肉内または静脈内経路、または他の経路により、約０．０１μｇ／ｋｇから約１ｇ／ｋｇ体重であり得る。より典型的な投与量は、約１μｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇであり、約１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、およびこれらの量内の様々な範囲が、投与のためにさらにより典型的である。投与の回数および頻度が宿主の応答に依存することは、当業者に明白であろう。治療的使用のための「薬学的に許容される担体」は、薬学分野で周知であり、例えば、Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro edit. 1985)に記載されている。例えば、生理学的ｐＨの滅菌生理食塩水およびリン酸緩緩衝生理食塩水が使用されてもよい。防腐剤、安定剤、色素およびさらに香味剤が、医薬組成物中で提供されてもよい。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが、防腐剤として添加されてもよい。同上、1449。さらに、抗酸化剤および懸濁剤が使用されてもよい。同上。
【００４４】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物および有機酸もしくは無機酸（酸付加塩）または有機塩基または無機塩基（塩基付加塩）の組み合わせから得られる本発明の化合物の塩を指す。本発明の化合物は、遊離塩基形態または遊離塩形態のどちらかで使用することができ、両方の形態は本発明の範囲内であると見なされる。
【００４５】
しかし、本明細書に提供された医薬組成物は、組成物が患者に投与されるようにするいずれの形態であってもよい。例えば、組成物は、固体、液体または気体（エアロゾル）の形態であってもよい。典型的な投与経路には、経口、局所、非経口（例えば、舌下または口腔）、舌下、直腸、膣、および鼻内が挙げられるが、これらに限定されない。非経口という用語は、本明細書で使用される場合、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内、陰茎海綿体内、髄腔内、内耳道内、尿道内注射または注入法を含む。医薬組成物は、その中に含有される活性成分が、患者への組成物の投与時に生体利用可能となるように製剤化される。患者に投与される組成物は、１つまたは複数の投与単位の形態をとり、例えば、錠剤は単一投与単位であり得、エアロゾル形態での本発明の１つまたは複数の化合物の容器は、複数の投与単位を保ち得る。
【００４６】
経口投与に関して、賦形剤および／または結合剤が存在してもよい。例は、スクロース、カオリン、グリセリン、デンプンデキストリン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、およびエチルセルロースである。着色剤および／または香味剤が存在してもよい。コーティングシェルが使用されてもよい。
【００４７】
組成物は、液体の形態、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、エマルションまたは懸濁液であってもよい。液体は、２つの例として、経口投与用または注射による送達用であってもよい。経口投与用である場合、好ましい組成物は、１つまたは複数の結合ドメイン−免疫グロブリン融合構築物または発現産物に加えて、１つまたは複数の甘味剤、防腐剤、色素/着色料および調味料を含有する。注射により投与されることが意図される組成物では、１つまたは複数の界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安定剤および等張剤が含まれてもよい。
【００４８】
液体医薬組成物は本明細書で使用される場合、溶液、懸濁液の形態であろうとまたは他の同様の形態であろうと、１つまたは複数の以下の補助剤を含んでもよい：注射用の水、生理食塩水、好ましくは生理学的食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、溶媒または懸濁媒体として機能し得る合成モノグリセリドまたはジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒などの滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸、クエン酸またはリン酸などの緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調整剤。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは反復投与バイアルに封入することができる。生理学的食塩水が好ましい補助剤である。注射用医薬組成物は、好ましくは滅菌されている。
【００４９】
本明細書に記載された化合物は、診断、治療、予防において、ならびに研究試薬としておよびキットで使用することができる。本発明の化合物を検出する手段の提供は、日常的に達成され得る。そのような提供には、酵素共役、放射標識または任意の他の適切な検出系が挙げられ得る。本発明の化合物の存在または非存在を検出するキットもまた調製することができる。
【００５０】
本発明の化合物はまた、研究目的に使用することもできる。故に、化合物によって示される特定の活性またはモダリティが、アッセイ、精製、細胞産物の調製のために、および当業者に理解され得る他の方法論で使用され得る。
【００５１】
本発明の様々な態様が、以下の実験セクションを参照してこれより記載される。これらは実例としてのみ提供され、本発明の範囲に対する制限となるものではないことが理解される。
【００５２】
以下の実施例は、例示のために含まれ、制限するものではない。
【実施例】
【００５３】
[実施例１]
本試験は、ＧＭ６にＡＤ薬候補と一致する効果があるかどうかを評価するために行った。本発明者らは、筋萎縮性側索硬化症患者のＧＭ６による短期（２週間）治療が、血漿中タウの有意な治療後減少をもたらしたことを示す（Ｐ＝０．００５）。これと一致して、ＧＭ６によるＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の処置は、タウタンパク質をコードするＭＡＰＴ  ｍＲＮＡの発現を抑制した。マイクロアレイ解析は、ミトコンドリア機能を有するＡＤ関連遺伝子がＧＭ６によって抑制されることをさらに示した（例えば、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＡ１２、ＣＯＸ５Ａ）。対照的に、遺伝子研究によってＡＤに関連づけられ、アミロイド前駆体タンパク質の異化と関連するいくつかの遺伝子は、ＧＭ６によって上方制御された（例えば、ＳＯＲＬ１、ＰＩＣＡＬＭ）。最後に、本発明者らは、ＡＤ患者由来の死後ＣＳＦで処置したラット皮質ニューロンの生存率を、ＧＭ６が部分的にレスキューすることを示す。これらの知見は、ミトコンドリア機能障害の減弱、および神経原線維変化またはアミロイド斑蓄積を含む、ＧＭ６がＡＤに有効となり得る複数の機序を示唆するものである。本発明者らは、１２名のＡＬＳ患者による最近のフェーズ２Ａ治験からのタウタンパク質の変化、ＧＭ６発現シグネチャのマイクロアレイおよび生物情報学的解析、ならびにＡＤ患者由来の死後ＣＳＦ内の細胞毒に対するＧＭ６の保護効果を評価するインビトロ試験からの結果を報告する。
【００５４】
本発明者らは、フェーズ２Ａ試験においてＡＬＳ患者由来のＣＳＦおよび血漿中のタウタンパク質を調べた。フェーズ２Ａ試験中、患者は２週間にわたりＧＭ６またはプラセボの６回投与を受け（受診１〜６）、次いで治療後１０週間モニタリングされた（受診７および８）（図１）。最終のＧＭ６治療後、ＧＭ６治療患者由来のＣＳＦでタウ減少のわずかな証拠があった（Ｐ＝０．０９５；図１Ｂ）。血漿では、全てのＧＭ６治療患者が、受診６と７の間の治療後期間にタウ減少を示した（図１Ｂおよび１Ｄ；Ｐ＝０．００５）。ＡＬＳ患者における短期ＧＭ６治療は、故に、血漿中タウの有意な治療後減少をもたらした（図１Ｄ）。
【００５５】
タウを低下させることがＡＤを治療する戦略の１つであるため、フェーズ２Ａ血漿バイオマーカータウデータは、ＧＭ６がＡＤを治療するための治療選択肢となり得る肯定的な兆しを示すことを示すものである。
【００５６】
[実施例２]−生物情報学的解析および作用機序
ＤＮＡマイクロアレイを使用して、ＧＭ６および対照処置ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞における遺伝子発現を比較した（１回の処置あたり、ｎ＝２複製物；４８時間のＧＭ６処置）。ＫＥＧＧ  ＡＤ病経路（ｈｓａ０５０１０）に基づき、本発明者らは１７１個のＡＤ関連遺伝子を同定し、このうち１３４個がＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において検出可能なレベルで発現した（図２）。これらの１３４個のＡＤ関連遺伝子のうち、２２個はＧＭ６により増加したが、より多く（６２個）はＧＭ６により減少した（図２）。集団として、シミュレーション解析は、１３４個のＡＤ関連遺伝子が、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞によって発現される無作為に採取された遺伝子セットと比較して、ＧＭ６により減少する可能性が平均的にはるかに高いことを示した（図３Ａ）。６２個のＡＤ関連ＧＭ６減少遺伝子は、ミトコンドリアと関連する遺伝子オントロジー（ＧＯ）生物学的プロセス（ＢＰ）タームと高い頻度で関連づけられた（図３Ｃ）。特に、微小管関連タンパク質タウをコードするＭＡＰＴ  ｍＲＮＡは、ＧＭ６によって下方制御された（ＦＣ＝０．７１；ＦＤＲ＝０．０２３；図２）。
【００５７】
ＫＥＧＧ  ＡＤ経路ダイアグラムの検討により、６つのミトコンドリア成分の５つがＧＭ６によって下方制御されたことが明らかにされた（図４）。電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ｆ）およびＦａｓ関連デスドメイン（Fas associated via death domain）（ＦＡＤＤ）をコードする遺伝子を含む複数の上流経路成分も、ＧＭ６により抑制された（図４）。
【００５８】
本発明者らは、ＮＨＧＲＩ−ＥＢＩ  ＧＷＡＳカタログおよびＯｎｌｉｎｅ  Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ  Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ  ｉｎ  Ｍａｎ（ＯＭＩＭ）データベースを使用して、遺伝子解析によってＡＤに関連づけられた遺伝子を同定した。そのような遺伝子は、ＧＭ６によって不釣り合いに誘導された（ＧＷＡＳカタログ：２０２遺伝子、Ｐ＝０．０２６；ＯＭＩＭ：１４遺伝子、Ｐ＝０．００２；ｎ＝２０００回シミュレーション試行）。ＡＤと遺伝的に関連するＧＭ６増加遺伝子は、アミロイド前駆体タンパク質の異化およびニューロン形態形成に関与していた（図５）。
【００５９】
最後に、本発明者らは、ＡＬＳおよびＡＤ患者由来の死後ＣＳＦに曝露後のラット皮質ニューロンを、ＧＭ６がレスキューし得るかどうかを評価した（図６）。神経変性疾患がない対照患者由来のＣＳＦで処置したニューロン培養物（４８時間）は、生存率の低下を示さなかったが、ＡＬＳまたはＡＤ患者由来のＣＳＦは、生存率が６０％低下した（図６）。両方の疾患に関して、ＧＭ６は、部分的レスキューを提供し、細胞生存率が有意に改善した（図５）。ＧＭ６は、故に、ＡＬＳおよびＡＤ  ＣＳＦにおいて細胞毒性因子によって誘導される細胞死を改善した。これは、ＧＭ６が複数の神経変性疾患による細胞死と闘い得るという概念を支持する。これらの知見は、ＡＤ薬候補としてのＧＭ６の試験に対する支持および根拠を提供し、この文脈でＧＭ６が神経変性を遅らせ得る複数の機序を示唆するものである。
【００６０】
ＧＭ６で治療したＡＬＳ患者では、血漿中タウが治療後有意に減少し（図１Ｄ）、これと一致して、ＧＭ６はＳＨ−５ＹＳＹ細胞においてＭＡＰＴ  ｍＲＮＡを抑制した（図２）。マイクロアレイ解析は、ＡＤと関連するミトコンドリア遺伝子が、ＧＭ６によって優位に下方制御され（図３および４）、一方、ＡＰＰ異化と関連するいくつかを含む、遺伝子研究によってＡＤに関連づけられた遺伝子は上方制御されることをさらに示した（例えば、ＳＯＲＬ１；図５）。本発明者らは、ＡＤ患者由来の死後ＣＳＦを用いて培養したラット皮質ニューロンにおける生存率を、ＧＭ６が部分的にレスキューすることをさらに示した（図６）。
【００６１】
これらのデータは、ＧＭ６が、ミトコンドリア機能障害（例えば、ＲＯＳ生成、内因アポトーシスの調節異常）を減弱し、タウ発現および蓄積（ＭＡＰＴ）を制限し、ならびにＡＰＰ異化を強化することにより、ＡＤ関連ニューロン喪失を防ぎ得ることを示唆している。ＡＤ患者におけるＧＭ６の臨床的有効性に取り組むために、無作為化二重盲検プラセボ対照試験からの長期データが必要とされる。
【００６２】
追加の生物情報学的解析
培養ＳＨ−５ＹＳＹ細胞を様々な時間、ＧＭ６で処置したインビトロ試験から生成した６つのデータセットに関して、分析を反復した（表１）。
【００６３】
【表１】
2020515813.tif 000003
【００６４】
データセット（１）は、ＤＮＡマイクロアレイ技術および２つの技術的反復を用いて生成された。これらのデータに関して、差次的発現解析は、推定倍変化（ＦＣ）値およびＦＤＲ推定値に基づき行われる。技術的反復および非生物学的反復がこの実験で使用されたため、ＦＤＲ推定値はヒューリスティックな目的で計算されるが、真のＦＤＲ推定値（生物学的複製を必要とすることになる）ではない。
【００６５】
データセット（２）〜（６）は、ＲＮＡ−ｓｅｑ技術を用いて生成され、実験はＳｕｎｎｙ  Ｂｉｏｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（サンタ・ポーラ、ＣＡ）またはＳＢＨ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ナティック、ＭＡ）の研究所によって実施された。データセット（２）〜（４）に関して、ＲＮＡ−ｓｅｑデータはＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ（アン・アーバー、ＭＩ）の中核施設によって生成されたが、データセット（５）および（６）のＲＮＡ−ｓｅｑは、Ｐｈａｌａｎｘ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（サンディエゴ、ＣＡ）によって実施された。
【００６６】
遺伝子は、７つのデータベースソースの１つまたは複数からの関連に基づきＡＤに関連づけられた（表２）。使用したデータベースは、遺伝子をＡＤ関連遺伝子として同定するための基準および厳密性の点で異なる。この報告に含まれる全ての解析は、７つのデータベースソースの少なくとも２に基づきＡＤに関連づけられた遺伝子を用いて行った。この報告で浮かび上がった全ての遺伝子は、故に少なくとも２つの異なるソースによってＡＤに関連づけられ、多くの遺伝子が、いくつかのソースに基づきＡＤに関連づけられた（表２）。
【００６７】
【表２】
2020515813.tif 000004
【００６８】
（３）結果
５つ以上のソースに基づきＡＤに関連づけられた遺伝子の平均倍変化（ＧＭ６／ＣＴＬ）は、３つのデータセットに関して有意に増加した（アレイ  ４８時間；ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  ４８時間；ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  ２４時間；図７および８）。例えば、マイクロアレイ試験に関して、５＋ソースに基づきＡＤに関連づけられた２４個のＡＤ関連遺伝子は３０％増加した。これは、無作為に採取された２４個の遺伝子セットで観察されるよりも有意に強い増加である（Ｐ＝０．００１；図７Ｂ）。全体として、ＧＭ６による２４時間以上のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の処置は、ＡＤ関連遺伝子の発現を増加させる傾向があるという一般的傾向があった（表３）。
【００６９】
第２のアプローチは、発現が上昇または抑制されたかどうかにかかわらず、他の遺伝子と比べて、ＡＤ関連遺伝子がＧＭ６刺激に対してより応答したかどうかを評価することであった。故に、平均絶対倍変化［ａｂｓ（ｌｏｇ２（ＧＭ６／ＣＴＬ））］を検定統計量として、上記の解析を繰り返した（図９および１０）。これは、上記で同定されたいくつかの傾向を確認したが、４＋データベースソースによってＡＤに関連づけられた遺伝子に関して、および２つのデータセットについてのみであった（アレイ  ４８時間；ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑ  ４８時間；図１０Ａおよび１０Ｄ）。
【００７０】
上記に記載した遺伝子セット解析は、ＡＤ関連遺伝子に対するＧＭ６の平均効果を評価する（すなわち、遺伝子セット解析；図７〜１０）。表３は、これらの解析および２つの代替解析方法から生成されたｐ値を要約している。まとめると（表３；図７〜１０）、これらの結果は、ＧＭ６がＡＤ関連遺伝子の発現に対して方向効果を有し、ＡＤ関連遺伝子の発現を減少させるよりむしろＡＤ関連遺伝子を増加させる傾向があることを示唆している。
【００７１】
【表３】
2020515813.tif 000005
【００７２】
ＡＤとの関連が、強い証拠によって最も頑健に支持される個々の遺伝子の間の傾向を調べることは有益である。全体として、４５３５個の遺伝子が、少なくとも１つのデータベースソースに基づきＡＤに関連づけられると同定されたが、これらのごく一部のみが複数のソースに基づきＡＤに関連づけられた（データ不図示）。１個の遺伝子、アポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）のみが、解析に組み込まれた７つ全てのデータベースに基づきＡＤに関連づけられた（表２）。ＲＮＡ−ｓｅｑ知見にはＧＭ６がＡＰＯＥ発現を増加させることを実証する明らかな傾向があり、１つの実験はＧＭ６処置の４８時間後に２．８６倍の増加を実証した（Ｐ＝０．０００６９７；データ不図示）。
【００７３】
同様に、６つ以上のデータベースソースに基づくＡＤと関連する７個の遺伝子があり、これらのうち６個が、少なくとも１つの比較に関してＧＭ６によって有意に変化した（Ｐ＜０．０５；ＰＳＥＮ２、ＰＳＥＮ１、ＡＰＰ、ＡＤＡＭ１０、ＭＡＰＴ、ＳＯＲＬ１；データ不図示）。これらのうち、最も高い頻度で変化したのは微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）であり、マイクロアレイデータセットに関して有意に減少した（ＦＣ＝０．７１；Ｐ＝０．００７２１）が、対照的に、ＲＮＡ−ｓｅｑデータセットに関連する３つの比較に関しては有意に増加した（Ｐ≦０．０００５８６で２３〜３８％増加；データ不図示）。
【００７４】
２つ以上データベースソースに基づきＡＤに関連づけられた遺伝子のうち、マイクロアレイデータセットにおいて最も強く増加した遺伝子は、ＩＲＥＢ２、ＧＮＡＱおよびＲＧＳ４を含み、最も強く減少した遺伝子は、ＮＤＵＦＢ１、ＮＤＵＦＢ７およびＮＤＵＦＡ１２を含んだ（ＦＤＲ＜０．１０；図５Ｂ）。ＲＮＡ−ｓｅｑ解析は、ＥＤＮＲＢ（ＦＣ＝３．８２）、ＡＣＨＥ（ＦＣ＝３．６１）およびＰＴＧＳ１（ＦＣ＝３．６１）の強い発現増加、ならびにＤＯＣＫ２（ＦＣ＝０．３８）、ＣＯＸ４ｌ２（ＦＣ＝０．４８）およびＮＥＤＤ９（ＦＣ＝０．５４）の強い発現減少を実証した（図１２）。
【００７５】
ＵＭおよびＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑデータセットは、最も良好に反復され（１回の処置あたりｎ＝３〜５）、故にさらなる解析を行って、これらの実験から同定されたＧＭ６制御遺伝子を特徴付けた（図１３および１４）。ＵＭ  ＲＮＡ−ｓｅｑデータセットに関して、評価した３つの時点全ての中から、合計６４個のＧＭ６増加ＡＤ関連遺伝子および３０個のＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子を同定した（ＦＤＲ＜０．１０）。６４個のＧＭ６増加遺伝子は、死の制御、ベータアミロイド形成の負の制御、およびコレステロールの流出の正の制御と有意に関連した（図１２Ａ）が、３０個のＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子は、細胞走化性、白血球遊走の制御、および挙動の正の制御と有意に関連した（図１２Ｂ）。同様に、ＳＢＨ  ＲＮＡ−ｓｅｑデータセットに関して、評価した２つの時点から、合計９７個のＧＭ６増加ＡＤ関連遺伝子および４７個のＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子を同定した（ＦＤＲ＜０．１０）。９７個のＧＭ６増加ＡＤ関連遺伝子は、局在化の制御、細胞死の制御、および二価金属イオンの輸送と関連した（図１４Ａ）が、４７個のＧＭ６減少ＡＤ関連遺伝子は、核酸塩基小分子代謝、ヌクレオチド代謝およびリボースリン酸代謝と関連した（図１４Ｂ）。
【００７６】
ＧＭ６遺伝子制御のパターンを、ＡＤダイアグラムにおけるＫＥＧＧ経路を用いて可視化した（ｈｓａ０５０１０）。このダイアグラムは、ヒトＡＤの様々な形態において最も多く活性化または阻害される経路に対する遺伝子マッピングを提供する。該経路は、アポトーシスの誘導、ＡＰＰプロセシング、遺伝子発現の調節、酸化的リン酸化、ニューロン損傷、および神経原線維変化と集合的に関係している（図１５〜２０）。これらのダイアグラムは、いくつかの上流制御因子がＧＭ６によって有意に変化することを明らかにした（図１５〜２０）。ＲＮＡ−ｓｅｑ解析に関して、ＧＭ６によって上方制御される遺伝子は、上流成分ＬＲＰ、ＮＭＤＡＲ、ＡｐｏＥ、ＶＤＣＣ、ＮＥＰおよびＰＬＣと関連し、ＧＭ６によって下方制御される遺伝子は、上流成分ＢＡＣＥおよびＲｙＲと関連した（図１５〜２０）。マイクロアレイおよびＲＮＡ−ｓｅｑデータセットの両方に関して、ミトコンドリア成分と関連する遺伝子の下方制御の傾向があり、最も強い効果が、ＳＨ−５ＹＳＹ細胞の長期処置について観察された（すなわち、≧２４時間；図１５、１６、１７および２０）。
【００７７】
（４）結論
ＧＭ６によって制御されるＡＤ関連遺伝子を同定し、そのような遺伝子の機能特性を特徴付けした。ＧＭ６は、ＳＨ−５ＹＳＹにおけるＡＤ関連遺伝子の発現を高い頻度で増加させ、より強い傾向が２４時間以上処置した細胞で観察された（図７〜１０）。ＧＭ６によるＡＤ関連遺伝子発現の調節を、故に処置期間の延長によって最大化した（＞２４時間）。解析はまた、ＡＤ発症および進行に対して潜在的に重要な効果を有するＧＭ６制御遺伝子も同定した（図２１）。これらの遺伝子を、（１）遺伝子リスクの調節、（２）Ａβ分解／クリアランスの増大によるＡβ産生の阻害、（３）神経炎症の阻害、および（４）内因性アポトーシスカスケードの阻害を含む、４つの仮定された作用機序に関して分類した（図２１）。
【００７８】
アポリポタンパク質Ｅ（ＡＰＯＥ）をコードする遺伝子は、両方のＲＮＡ−ｓｅｑ試験でＧＭ６によって有意に増加し、ＧＭ６処置の４８時間後、３倍近く上昇した（ＦＣ＝２．８６；Ｐ＝０．０００６９７）。ＡＰＯＥは、本解析に含まれた７つのデータベースソース全てに基づきＡＤに関連づけられた唯一の遺伝子であった。これは、極めて高い信頼度の遺伝子−疾患関連を示すものである（データ不図示）。ＡＰＯＥ遺伝子のバリアントは、遅発性ＡＤの最も重要な遺伝子リスク因子である（ＰＭＩＤ：２３２９６３３９）。該遺伝子は、リポタンパク質成分の異化を媒介するカイロミクロンアポタンパク質をコードする。特にＡＰＯＥ  ｅ４対立遺伝子は、ＡＤにおける病的バリアントとして同定されているが、ｅ４バリアントが、毒性機能の獲得または保護機能の喪失によりＡＤリスクを増大させるかどうかは不明なままである。潜在的に、ＧＭ６によるＡＰＯＥ発現の上方制御は、ＡＰＯＥ  ｅ４担体において好ましい代償効果を有し得る。これは、ＧＭ６の効果が表現型依存性であり得、ｅ２またはｅ３バリアントを有するものと比べて、病的ｅ４バリアントを有するものにおいて異なる応答が観察されたことを示唆する。この可能性の重要な帰結は、ＡＤに対するＧＭ６の効果を評価する臨床試験を設計し、表現型特異的治療応答の検出を可能にするために分析すべきであるということである。
【００７９】
ＡＤ病理における細胞外Ａβ斑の役割は、広範な議論の対象となっている（ＰＭＩＤ：２８９９４７１５）。ＡＤ関連認知症の媒介物質としての推定上の役割に加えて、Ａβ斑は、頭蓋内出血の長期リスクを増加させる得る血管障害を促進すると考えられている（ＰＭＩＤ：２９１２０９２０）。本解析は、ＰＬＡＵ（プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ）、ＮＧＦＲ（神経成長因子受容体）、およびＣＡＣＮＡ１Ｇ（カルシウム電位依存性チャネルサブユニットアルファ１  Ｇ）の上方制御、ならびにＣＬＵ（クラスタリン）およびＲＹＲ３（リアノジン受容体３）の下方制御を含む、ＧＭ６がＡβ斑負荷を減弱し得るいくつかの機序を同定した（図１５）。ＰＬＡＵは、Ａβ斑に寄与すると考えられる分泌セリンプロテアーゼをコードするのに対し（ＰＭＩＤ：１５６１５７７２）、ＮＧＦＲは、Ａβ毒性に対する保護機能を有する（ＰＭＩＤ：２５９１７３６７）。ＣＡＣＮＡ１Ｇは、神経伝達物質放出に関与するカルシウムシグナル伝達に寄与する電位感受性カルシウムチャネルをコードし、ＡＤは、ＣＡＣＮＡ１Ｇ発現の加齢に伴う減少を増悪するようである（ＰＭＩＤ：２４２６８８８３）。クラスタリン（ＣＬＵ）は、ＡＤおよび他の疾患の治療標的として登場し、その存在量はＡＤ脳で上昇し、Ａβ斑存在量に影響を与えると考えられている（ＰＭＩＤ：２７９７８７６７）。最後に、ＲＹＲ３は、Ａβ斑産生を媒介し、ＡＤのより後期に急性病的効果を有し得る、細胞内カルシウム放出を制御するリアノジン受容体をコードする（ＰＭＩＤ：２２９１５１２３）。ＧＭ６に対するこれらの遺伝子発現応答全体が、それ故に、認知的加齢の過程においてＡβ斑の蓄積低減に有利に働き得る。
【００８０】
慢性神経炎症は、ＡＤ、パーキンソン病および多発性硬化症などの加齢の複数の神経変性疾患に寄与する（ＰＭＩＤ：  ２８７９０８９３）。神経炎症の制御因子は、それ故に、そのような疾患の治療標的として登場した（ＰＭＩＤ：  ２５６５２６４２）。炎症性反応の成分として、ＤＯＣＫ２（dedicator of cytokinesis 2）は、リンパ球遊走を促進することが実証されており、末梢血白血球およびミクログリアで高度に発現される。ＤＯＣＫ２発現は、６時間のＧＭ６処置によって下方制御された（ＦＣ＝０．３８；Ｐ＝７．５１ｅ−０６）が、２４時間のＧＭ６処置は、ＤＯＣＫ２発現を増加させた（ＦＣ＝２．０９；Ｐ＝０．０１６８）。ＤＯＣＫ２発現のＧＭ６の効果は、それ故に時間依存性であるが、観察された最も強い応答は、短期の６時間の処置時間後に下方制御された。ＤＯＣＫ２は、ＡＤ脳内のミクログリア細胞の自然免疫状態を制御するため、この短期の応答はＡＤの設定において有益であり得（ＰＭＩＤ：１９７２９４８４）、ＤＯＣＫ２の除去は、Ａβ斑レベルを低減することが示された。これは、ＤＯＣＫ２が有効な治療標的となり得ることを示唆している（ＰＭＩＤ：２３３１８６４９）。
【００８１】
アポトーシス率の上昇は、ＡＤの特徴のようであり、ニューロン喪失に寄与し得る（ＰＭＩＤ：２５３２２８２０）。そのようなアポトーシス性ニューロン死は、ミトコンドリアに局在化したカスケードに大きく媒介され（ＰＭＩＤ：１４５５５２４３）、ミトコンドリアはＡβ斑毒性をさらに促進するようである（ＰＭＩＤ：１１３８７２５０）。この試験は、４８時間のＧＭ６処置後にＣＯＸ４Ｉ２（シトクロムｃオキシダーゼサブユニット４Ｉ２）の有意な下方制御を見出した（ＦＣ＝０．４８；Ｐ＝７．７１ｅ−０７）。この遺伝子は、ミトコンドリア呼吸鎖の末端酵素である、酵素シトクロムｃオキシダーゼ（ＣＯＸ）のサブユニットをコードする。様々な時点でＧＭ６によって下方制御される他のミトコンドリア関連遺伝子には、ＮＤＵＦＳ２、ＮＤＵＦＢ８、ＮＤＵＦＳ４およびＣＯＸ１０が挙げられる（図１５）。これらの結果は、ＧＭ６がミトコンドリアの活性および／または存在量に対する阻害効果を有している可能性があり、内因性経路を通じたアポトーシスの減少および／または活性酸素種の産生低下に寄与し得ることを示している（ＰＭＩＤ：１９８５３６５７）。
【００８２】
[実施例３]
ＧＭ６は重要なＣＮＳ治療的処置戦略として血液脳関門を通過することができる
脳に移行する能力をテストした。Ｃ５７ＢＬ６マウスを、０．２および２．０ｍｇ／ｋｇでＧＭ６の単回ボーラスＩＶ尾静脈注射により注射した。４時間時点で、動物をと殺し、脳の半分をＥＬＩＳＡ解析用に凍結させた。脳ホモジネートからの上清を用いたＥＬＩＳＡアッセイは、対照と比較して、用量依存的に全ての用量で統計的に有意なレベルでＧＭ６を検出した（Ｐ＝０．０００１）（図２２を参照のこと）。
【００８３】
結論
本発明者らの結果は、ＡＬＳ患者が、ＧＭ６による治療によって有意に減少する血漿中タウ存在量を有することを示している（図１Ｄ）。本発明者らはまた、ＧＭ６がＳＨ−５ＹＳＹ細胞におけるＭＡＰＴ  ｍＲＮＡを抑制したことも示している（図２）。マイクロアレイ解析は、ＡＤと関連するミトコンドリア遺伝子が、ＧＭ６によって優位に下方制御され（図３および４）、一方、ＡＰＰ異化と関連するいくつかを含む、遺伝子研究によってＡＤに関連づけられた遺伝子は上方制御されることをさらに示した（例えば、ＳＯＲＬ１；図５）。本発明者らは、ＡＤ患者由来の死後ＣＳＦを用いて培養したラット皮質ニューロンにおける生存率を、ＧＭ６が部分的にレスキューすることをさらに示した（図６）。ＲＮＡ−ｓｅｑは、追加の有意に上方または下方制御されたＡＤ関連遺伝子を同定した。これらの遺伝子を、（１）遺伝子リスクの調節、（２）Ａβ分解／クリアランスの増大によるＡβ産生の阻害、（３）神経炎症の阻害、および（４）内因性アポトーシスカスケードの阻害を含む、４つの仮定された作用機序に関して分類した。脳に達するＧＭ６の能力、およびＡＤ患者のＣＳＦにおける毒性効果に対するニューロンのためのＧＭ６の神経保護は、上記に概説した作用機序を通じた、ＡＤに対する可能性のある治療的処置であるという結論を支持するものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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