(57)【要約】  トリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物に関し、本明細書に係る組成物は、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進させ、これにより、肌のボリュームや弾力を増進させることができる効果を奏する。したがって、本明細書の組成物は、肌ダメージのような分野で薬学組成物又は化粧料組成物として多様に活用され得る。【選択図】図１
2020535169.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【化１】
2020535169.tif 000009
【請求項２】
前記有効成分の濃度が、組成物の全体積を基準に１〜１００μＭであることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項３】
当該組成物は、薬学組成物であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項４】
当該組成物は、化粧料組成物であることを特徴とする請求項５に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項５】
当該組成物は、皮膚外用剤であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項６】
当該組成物は、食品組成物であることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項７】
当該組成物は、ビタミンＤを更に含むことを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書では、トリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を含む脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物が開示される。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の基本的な構造は皮下脂肪組織によって保持され、該皮下脂肪組織は肌のボリュームや弾力を左右する役割をする。したがって、皮膚の外郭層にある真皮や表皮に弾力を与えるという既存の方法よりは脂肪組職の体積を増加させるという方法のほうが、肌のボリュームや弾力を保たせ得る根本的な解決策になると考えられる。
【０００３】
具体的に、人体には老化が進むにつれて肌にしわが生成され、同時に肌の弾力もまた低下するようになる。しわの生成や弾力の低下といった皮膚老化は、皮膚の構成要素であるコラーゲン（ｃｏｌｌａｇｅｎ）、エラスチン（ｅｌａｓｔｉｎ）のような皮膚繊維の分解及び減少とともに脂肪細胞の活性低下、また、これによる脂肪滴（ｌｉｐｉｄ  ｄｒｏｐｌｅｔ）の減少によって生じる複合現象である。このため、人の脂肪細胞の分化を促進して脂肪滴を生成及び蓄積することができたら、肌のしわ改善や弾力を改善することができるようになる。
【０００４】
一方、アディポネクチンは、脂肪細胞から特異的に分泌されるタンパク質ホルモンであるアディポカイン（ａｄｉｐｏｋｉｎｅ）の一種であって、インスリンの機能を増進させ且つインスリン抵抗性を誘導することで、高血糖、高インスリン症、肥満、動脈硬化のような心血管疾患などを調節するうえで重要な役割をする。また、アディポネクチンは、癌細胞の転移と炎症反応を抑制する機能がある。
【０００５】
特に、アディポネクチンは、角質細胞の増殖だけではなく、皮膚でフィラグリン（ｆｉｌａｇｇｒｉｎ）、ヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）と細胞外基質の発現を促進することで、傷治療、線維化抑制、肌しわ改善、保湿などの機能を遂行する。
【０００６】
しかしながら、このような脂肪細胞の分化促進又はアディポネクチンの生成促進のための物質が、実際に化粧料組成物などに含まれ人体内で十分な程度の肌ボリュームや弾力度増加効能を示すには、その効果が依然として微々たるものであったため、ユーザに対して化粧料組成物の使用による高い満足感を与えるには至っていない。
そこで、ヒト由来の皮下脂肪に対する実験結果を通じて、より改善した効能の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進組成物に関する開発が必要な実情であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】韓国公開特許第１０−２０１１−００００４３３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前記で検討したように、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進は、肌のボリュームや弾力保持にあたって非常に重要な因子である。これに関して、本発明者らは、新規なトリメトキシフェニル化合物を含む組成物が脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進させることを実験的に確認することで本発明を完成するに至った。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、一側面において、トリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一側面において、本発明は、トリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
一側面において、本発明に係るトリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物は、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進させ、このような効果により、肌のボリュームや弾力を増進のための薬学組成物、化粧料組成物又は皮膚外用剤として有効に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の具現例に係るトリメトキシフェニル化合物（以下、ＰＡＣ−１６７４２と称する）を含む組成物、及び陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）をヒト由来皮下脂肪細胞に処理して増殖及び細胞毒性の分析結果を示した図である。
【図２】ヒト由来皮下脂肪細胞に本発明の具現例に係るトリメトキシフェニル化合物（図中でＰＡＣ−１６７４２と表示）を含む組成物、及び陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）の処理後、増殖した脂肪細胞量をオイルレッドＯ（Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ、ＯＲＯ）染色して確認した結果を示した図である。
【図３】ヒト皮下脂肪細胞に本発明の具現例に係るトリメトキシフェニル化合物（図中でＰＡＣ−２と表示）を含む組成物、及び陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）を処理後、これらのアディポネクチン（図中でＡｄｉｐｏｑと表示）ｍＲＮＡ発現程度（ｍＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）を測定した結果を示した図である。
【図４】ヒト皮下脂肪細胞に本発明の具現例に係るトリメトキシフェニル化合物（図中でＰＡＣ−２と表示）を含む組成物、及び陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）を処理後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ  ａｓｓａｙ）によって、アディポネクチンの生成量を測定した結果を示した図である。
【図５】本発明の具現例に係るトリメトキシフェニル化合物（ＰＡＣ−１６７４２、以下、ＰＡＣ−２と称する）のＮＭＲ結果を示した図である（Ｓａｍｐｌｅ  Ｎａｍｅ  ７４２と表示）。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
用語の定義
本明細書において、ある部分がある構成要素を「含む」としたとき、これは、特に断りのない限り、他の構成要素を除外することではなく、他の構成要素を更に含んでよいことを意味する。
【００１４】
例示的な具現例の説明
以下、本発明を詳しく説明する。
【００１５】
本発明の例示的な具現例では、本発明は、下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物である。
【００１６】
【化１】
2020535169.tif 000003
【００１７】
前記化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物のＩＵＰＡＣ名は、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸  ５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ５−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｘｏ−４Ｈ−ｐｙｒａｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ）である。
【００１８】
本明細書において「異性体」は、特に光学異性体（ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、本質的に純粋なエナンチオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ）、本質的に純粋なジアステレオマー（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｓ）又はそれらの混合物）だけでなく、配座異性体（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（すなわち、１つ以上の化学結合のその角度のみ異なる異性体）、位置異性体（ｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（特に、互変異性体（ｔａｕｔｏｍｅｒｓ））、又は幾何異性体（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒｓ）（例えば、シス−トランス異性体）を含む。
【００１９】
本明細書において「本質的に純粋な（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｐｕｒｅ）」とは、例えば、エナンチオマー又はジアステレオマーと関連して用いた場合、エナンチオマー又はジアステレオマーを例として挙げることのできる具体的な化合物が約９０％以上、好ましくは約９５％以上、より好ましくは約９７％以上、又は約９８％以上、さらに好ましくは約９９％以上、最も好ましくは約９９．５％以上（ｗ／ｗ）存在することを意味する。
【００２０】
本明細書において「薬学的に許容可能」とは、通常の医薬的服用量（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｄｏｓａｇｅ）で用いる際に相当な毒性効果を避けることにより、動物、より具体的には、ヒトに用いることができるという政府又はこれに準ずる規制機構の承認を受けることができ、又は承認を受け、又は一般的な薬局方に列挙され、又はその他一般的な薬局方に記載されたものと認定されることを意味する。
【００２１】
本明細書において「薬学的に許容可能な塩」は、薬学的に許容可能であり、親化合物（ｐａｒｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の好ましい薬理活性を有する本発明の一側面に係る塩を意味する。前記塩は、（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などといった無機酸から形成されるか；又は、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンテンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２，２，２］−ｏｃｔ−２−エン−１-カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔｅｒｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸といった有機酸から形成される酸付加塩（ａｃｉｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ  ｓａｌｔ）；又は、（２）親化合物に存在する酸性プロトンが置換されるときに形成される塩を含んでよい。
【００２２】
本明細書において「水和物（ｈｙｄｒａｔｅ）」は、水が結合している化合物を意味し、水と混合物との間に化学的な結合力のない内包化合物を含む広範囲な概念である。
【００２３】
本明細書において「溶媒和物」は、溶質の分子やイオンと溶媒の分子やイオンとの間に生じた高次の化合物を意味する。
【００２４】
前記化学式１で表される化合物は、常温で微色の固体化合物である。
【００２５】
前記化学式１で表される化合物は、下記の反応式１で表されるように、下記化学式２で表されるピラノン誘導体化合物と化学式３で表されるトリメトキシフェニルエステル化合物とを反応させて製造する：
【００２６】
【化２】
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【００２７】
（前記反応式１中、Ｘはハロゲン元素であり、ＭはＬｉ、Ｎａ又はＫである）
前記反応式１を見ると、化学式１で表される化合物は、ピラノン化合物のハロゲン元素とトリメトキシフェニルエステル化合物の金属との間の結合反応によって製造される。
【００２８】
このとき、化学式２で表されるピラノン化合物においてＸはハロゲン元素であり、このとき、ハロゲン元素は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであってよく、好ましくは、Ｃｌである。このような化学式２で表される化合物は、市販品を購入して用い、又は直接製造して用いてよい。
【００２９】
本発明の一実施例においてＸがＣｌである５−ヒドロキシ−２−（クロロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オンであってよく、これは、５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オンを塩化チオニル（ＳＯＣｌ２）と反応させて製造することができる。
【００３０】
また、化学式３で表されるトリメトキシフェニルエステル化合物は、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）のイオン化塩の形態であって、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）のカルボキシ基に陽イオン（Ｍ＋）が結合した形態で存在してよい。
【００３１】
前記陽イオン（Ｍ＋）は、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋からなる群より選択される１種である。好ましくは、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）とＮａ＋のイオン結合物であってよく、これを製造するために、一例として、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）と水酸化ナトリウムを共にメタノールに溶かしてイオン化した後にメタノールを蒸留することで得ることができる。
【００３２】
本発明の好ましい一実施例において、化学式２で表される化合物は、５−ヒドロキシ−２−（クロロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オンであってよく、化学式３で表される化合物は、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ  ３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）であってよい。また、これらのエステル結合によって化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物を製造することができる。
【００３３】
このとき、反応は本発明において特に限定されず、前記ハロゲン−金属結合反応が十分になされ得る条件下で行なわれればよい。
【００３４】
反応温度は、溶媒の還流温度、一例として、５０〜２５０℃で０．５〜５時間、好ましくは、１〜３時間行なわれてよい。
【００３５】
このとき、溶媒は、化学式２及び３で表される化合物を十分に溶解させ得るものであればいずれでも可能であり、一例として、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｎ,Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ、ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジオキサン、ベンゼン、トルエン、エーテル、メタノール、ヘキサン、シクロヘキサン、ピリジン、Ｎ−メチルピロリドン、及びこれらの組み合わせからなる群より選択された１種であってよく、好ましくは、ＤＭＦを用いてよい。
【００３６】
反応後、前記溶媒を蒸留してから、通常の洗浄、乾燥、精製などの後処理過程を経て高純度の化合物を得ることができる。
【００３７】
本発明に係る化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物は、多様な分野への適用が可能であり、好ましくは、化粧料組成物の有効成分として用いることができる。具体的には、前記トリメトキシフェニル化合物を有効成分として含む場合、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進させ、肌のボリュームや弾力を増進のための薬学組成物、化粧料組成物又は皮膚外用剤として有効に用いられ得る。
【００３８】
本明細書では、特に、後述する試験例において、前記組成物の効果をラットなどの動物ではない、ヒト由来皮下脂肪細胞を対象に実験を行い、前記組成物を実際に人体に化粧料又は薬学組成物などとして適用した場合に脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進効果があることが明らかに分かる。
【００３９】
一具現例において、前記有効成分の濃度が組成物の全体積を基準に１〜１００μＭであってよく、例えば、１０μＭ以上、１５μＭ以上、２０μＭ以上、２５μＭ以上、３０μＭ以上、３５μＭ以上、又は４０μＭ以上であってよく、且つ９０μＭ以下、８０μＭ以下、７０μＭ以下、又は６０μＭ以下であってよい。本明細書の一具現例において、好ましくは、前記有効成分の濃度は５０μＭであってよい。
【００４０】
前記濃度が１μＭ未満であると、脂肪細胞の分化促進効果が微々たるものとなり、また１００μＭを超えると、細胞毒性が現われることがある。
【００４１】
一具現例において、当該組成物は、薬学組成物、化粧料組成物、又は皮膚外用剤であってよい。
【００４２】
本発明の一実施例に係る前記脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用薬学組成物は、防腐剤、安定化剤、水和剤又は乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び／又は緩衝剤などの薬剤学的補助剤、並びにその他治療的に有用な物質をさらに含有してよく、通常的な方法によって種々の経口投与剤又は非経口投与剤の形で剤形化してよい。
【００４３】
前記経口投与剤は、例えば、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤などがあり、これらの剤形は、有効成分の他、界面活性剤、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸及びそのマグネシウム又はカルシウム塩、並びにポリエチレングリコール）を含有してよい。錠剤は、さらに、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びポリビニルピロリジンといった結合剤を含有してよく、場合に応じて、澱粉、寒天、アルギン酸又はそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤などの薬学的添加剤を含有してよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化又はコーティング方法によって製造されてよい。また、前記非経口投与形態のものは径皮投与型剤形であってよく、例えば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチなどの剤形であってよいが、これらに制限されるものではない。
【００４４】
本発明の一実施例に係る前記薬学組成物は、非経口、直腸、局所、経皮、皮下などに投与されてよい。
【００４５】
前記薬学組成物は、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進させることができる。
【００４６】
前記有効成分の投与量の決定は、当業者の水準内にあり、薬物の１日投与用量は投与対象の肥満進行程度、発病時期、年齢、健康状態、合併症などの様々な要因によって変わるが、成人を基準にするとき、一般的には、前記組成物１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってよく、例えば、０．１ｍｇ／Ｋｇ〜２０ｍｇ／Ｋｇ、０．５ｍｇ／Ｋｇ〜２０ｍｇ／Ｋｇ、又は１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇを１日１〜３回分割して投与してよく、前記投与量は如何なる方法であっても本発明の範囲を限定するものではない。
【００４７】
本発明の一実施例に係る前記脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物は、化粧料組成物であってよく、化粧料組成物の外形は、化粧品学又は皮膚科学的に許容可能な媒質又は基剤を含有する。これは、局所適用に適したあらゆる剤形として、例えば、溶液、ゲル、固体、無水ペースト、水相に油相を分散させて得たエマルジョン、懸濁液、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、微細顆粒球又はイオン型（リポーソム）及び非イオン型の小嚢分散剤の形態で、又はクリーム、スキン、ローション、パウダー、軟膏、スプレー又はコンシーラースティックの形態で提供されてよい。これらの組成物は、当該分野における通常の方法に従い製造されてよい。また、本発明に係る組成物は、泡沫（ｆｏａｍ）の形態で又は圧縮された推進剤をさらに含有したエアロゾル組成物の形態で用いられてもよい。
【００４８】
本発明の一実施例に係る前記化粧料組成物は、その剤形において特に限定されるものではなく、例えば、柔軟化粧水、収れん化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、アイエッセンス、クレンジングクリーム、クレンジングフォーム、クレンジングウォーター、パック、パウダー、ボディーローション、ボディークリーム、ボディーオイル、及びボディーエッセンスなどの化粧品に剤形化されてよい。
【００４９】
本発明の剤形がペースト、クリーム又はゲルの場合は、担体成分として、動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカンド、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、又は酸化亜鉛などが用いられてよい。
【００５０】
本発明の剤形がパウダー又はスプレーの場合は、担体成分として、ラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、又はポリアミドパウダーが用いられてよく、特にスプレーの場合は、更に、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタン、又はジメチルエーテルのような推進剤を含んでよい。
【００５１】
本発明の剤形が溶液又は乳濁液の場合は、担体成分として、溶媒、溶媒和剤、又は乳濁化剤が用いられ、例えば、水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪族エステル、ポリエチレングリコール、又はソルビタンの脂肪酸エステルが挙げられる。
【００５２】
本発明の剤形が懸濁液の場合は、担体成分として、水、エタノール、又はプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、及びポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天又はトラガカントなどが用いられてよい。
【００５３】
本発明の剤形が界面活性剤含有クレンジングの場合は、担体成分として、脂肪族アルコールサルフェート、脂肪族アルコールエーテルサルフェート、スルホコハク酸モノエステル、イセチオネート、イミダゾリニウム誘導体、メチルタウレート、サルコシネート、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、アルキルアミドベタイン、脂肪族アルコール、脂肪酸グリセリド、脂肪酸ジエタノールアミド、植物性油、ラノリン誘導体、又はエトキシル化グリセロール脂肪酸エステルなどが用いられてよい。
【００５４】
本発明の一実施例に係る化粧料組成物には、前記有効成分の他、機能性添加物及び一般的な化粧料組成物に含まれる成分が更に含まれてよい。前記機能性添加物としては、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質、及び海草エキスからなる群より選択された成分を含んでよい。
【００５５】
本発明の化粧料組成物には、更に、前記機能性添加物と共に必要に応じて一般的な化粧料組成物に含まれる成分を配合してもよい。その他含まれる配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００５６】
さらに、前記本発明の一実施例に係る脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物は、皮膚外用剤であり、前記皮膚外用剤は、外皮に塗布されるものであればいずれも含み得る組成物の総称であって、多様な剤形の化粧品、医薬品がこれに含まれ得る。
【００５７】
また、前記本発明の一実施例に係る脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物は、食品組成物であってよく、前記食品組成物は、液状又は固体状態の剤形であってよく、錠剤、カプセル剤、軟質カプセル剤、丸剤、顆粒剤、飲料（ドリンク剤）、ダイエットバー、チョコレート、キャラメル剤形、又はお菓子類の剤形であってよく、その剤形が特に限定されるものではない。本発明の食品組成物は、前記有効成分の他、必要に応じて賦形剤、糖類、香料、色素、油脂類、タンパク質などを適宜含んでよい。
【００５８】
一具現例において、前記組成物は、ビタミンＤを更に含んでよい。前記組成物は、ビタミンＤを更に含むことで、毛嚢に栄養素を供給することができる。これらの量は、全組成物の０．０００１〜１０重量％、特に、０．０１〜１重量％が好ましい。
【００５９】
本発明のもう一つの例示的な具現例において、本発明は、下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物を、これを必要とする対象に有効量で投与して脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進する方法である。
【００６０】
【化３】
2020535169.tif 000005
【００６１】
本発明のもう一つの例示的な具現例において、本発明は、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物を製造するための、下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物の用途である。
【００６２】
【化４】
2020535169.tif 000006
【００６３】
本発明のもう一つの例示的な具現例において、本発明は、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成を促進するための、下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物である。
【００６４】
【化５】
2020535169.tif 000007
【００６５】
以下、下記の実施例を通じて本発明をより具体的に説明する。なお、下記の実施例は本発明についての理解を助けるための目的から例示したものに過ぎず、本発明の範疇及び範囲がこれらに限定されるものではない。
【００６６】
製造例：３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸  ５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ５−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｘｏ−４Ｈ−ｐｙｒａｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ）の製造
下記の反応式２に従い、本発明の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物である３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸  ５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ５−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｘｏ−４Ｈ−ｐｙｒａｎ−２−ｙｌｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ）を製造した。
【００６７】
【化６】
2020535169.tif 000008
【００６８】
前記反応式２を行なった詳細な過程は下記のとおりである。
【００６９】
５０ｇの５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（０．３５ｍｍｏｌ）をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド２５０ｍｌに溶かし、１０℃の氷水浴で冷却し塩化チオニル５０ｇ（０．４２ｍｏｌ）を３０分間滴下した。常温で２時間撹拌した後に氷水２０００ｍｌに反応液を加えた。生成された固体をろ過し、酢酸エチル１０００ｍｌに固体（ろ過物）を溶かした。硫酸マグネシウムと活性炭を加えて乾燥、脱色を行い、ろ過した後、ろ液を濃縮しヘキサンを加えて結晶を得た。真空乾燥して反応生成物である黄色い固体の化学式２−１で表される５−ヒドロキシ−２−（クロロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン  ３９．５ｇ（７０％）を得た。
【００７０】
次いで、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）（３−（２,６,６−ｔｉｍｅｔｈｙｌ−ｃｙｃｌｏｈｅｘ−２−ｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）５ｇ（０．０２６ｍｏｌ）と水酸化ナトリウム１．３ｇ（０．０３１ｍｏｌ）をメタノール４０ｍｌに溶かしメタノールを蒸留した後に残った残渣をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド７０ｍｌに溶かして、化学式３−１で表される化合物を製造した。
【００７１】
前記製造された化学式３−１で表される化合物に、前記製造した化学式２−１で表される５−ヒドロキシ−２−（クロロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン  ４．２ｇ（０．０２６ｍｏｌ）を加え、１１０℃、オイル槽で２時間加熱撹拌した。溶媒を蒸留し残渣を酢酸エチル３００ｍｌに溶かした後、酢酸エチル溶液を５％塩酸と蒸留水で洗浄し、硫酸マグネシウムと活性炭を加えて乾燥、脱色を施した。次いで、不溶物をろ過し、そのろ液を減圧下で蒸発させて、微色固体の反応生成物５．９ｇ（６９％収率）を得た。
【００７２】
前記微色固体のＮＭＲ結果を図５に示した。
【００７３】
実施例
実施例１：脂肪細胞の増殖及び細胞毒性分析
細胞培養及び分化
ヒト皮下脂肪細胞（ｈｕｍａｎ  Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｆａｔ  ｃｅｌｌｓ、以下、ｈＳＣＦｓ）と皮下脂肪前駆細胞分化培地をＺｅｎＢｉｏ  Ｉｎｃ．（ＮＣ、ＵＳＡ）から購入し、湿度５％のＣＯ２培養器で７日間培養した。
【００７４】
分化を誘導するために培養７日後から、ｈＳＣＦｓは１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＰＡＡ、Ｐａｓｃｈｉｎｇ、オーストリア）、１０μｇ／ｍｌインスリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ＭＯ、ＵＳＡ）、０．５ｍＭ  ３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）１μＭデキサメタゾン（ＤＥＸ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃ、ＭＯ、ＵＳＡ）、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）及び１μＭトログリタゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を含有したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ；Ｌｏｎｚａ、Ｍｄ、ＵＳＡ）を隔日に取り替えつつ、１４日を更に培養した。
【００７５】
細胞増殖及び細胞毒性分析
ｈＳＣＦｓ生存力は、ＥＺ−Ｃｙｔｏｘ細胞生存能分析キット（ＭＴＴ  ａｓｓａｙ、Ｄａｅｉｌ  ｌａｂ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｏｕｔｈ  Ｋｏｒｅａ）を用いてメーカの指示に従って測定した。要約すると、ｈＳＣＦｓを未分化状態で７日間培養し、陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ、以下、ＫＡ）４００μＭ、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ、以下、ＣＡ）６０μＭ、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ、以下、ＧＣ）３０μＭ及び化学物質ＰＡＣ−２を種々の濃度（μＭ）にてそれぞれ２４時間及び７２時間にかけてｈＳＣＦｓに処理した。その後、ＥＺ−Ｃｙｔｏｘ溶液（１０μｌ）を各ウェルに添加し、３７℃で２時間培養した。分光光度計（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ２、ＢｉｏＴｅｋ．、ＶＴ、ＵＳＡ）を用いて４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。全ての実験を３回行い、データを吸光度にて示した。
【００７６】
実験の結果、本発明に係る化合物の陽性対照群であるコウジ酸（Ｋｏｇｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸（Ｃｉｎａｍｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及びグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ））と類似し又はそれより優れた水準でｈＳＣＦｓ細胞増殖効果を示すことから、脂肪細胞の分化が促進し、このことから、肌ボリュームや弾力増加などの効果を奏し得ることを推定することができる。
【００７７】
さらに、細胞毒性もまた、正常対照群と同等か、陽性対照群の数値を超えない水準であることから、人体に有害ではないことを確認した。
【００７８】
実施例２：脂肪細胞の分化量分析
オイルレッドＯ（Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ、ＯＲＯ）染色
前記実施例１で培養したｈＳＣＦｓに種々の濃度（μＭ）のＰＡＣ−２を含む組成物、及び陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）を処理し、計１４日間分化を進め、次いで、冷たいＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）で２回洗浄し、３．７％ホルムアルデヒド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）で１時間固定させた。固定されたｈＳＣＦｓをＰＢＳ中の６０％プロピレングリコール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）で洗浄し、オイルレッドＯ（６０％プロピレングリコール中の０．３％オイルレッド；ＯＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）で３０分間処理した。細胞を８５％プロピレングリコールで３回洗浄し水道水で洗い流した。Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ染料で染色された脂質液滴はＩＸ７１顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）で視覚化した。
【００７９】
図２を参照すると、ＰＡＣ−２を含む組成物（図中ではＰＡＣ−１６７４２と表示）の場合、陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）に比べて、濃度が１０μＭの場合は、陽性対照群と類似の水準であるが、２５μＭ、５０μＭの場合は、染色された細胞が顕著に増加したことを確認し、濃度が高くなるほど染色された細胞が増加するという有意な結果を示した。また、既存の脂肪細胞の分化を促進させると知られているセルレチノイドＧ（ｓｅｌｅｔｉｎｏｉｄ  Ｇ）に比べても有意性があることを確認した。したがって、本発明に係るトリメトキシフェニル化合物を含む組成物の場合、脂肪細胞の分化を効果的に促進させるという事実を確認した。
【００８０】
実施例３：アディポネクチンｍＲＮＡ発現（ｍＲＮＡ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）分析
リアルタイム定量ＰＣＲ（Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ））
ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いてメーカの指針に従い、前記実施例１で培養したｈＳＣＦｓに種々の濃度（μＭ）のＰＡＣ−２を含む組成物、及び陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）を種々の濃度にて処理し、総ＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ第１鎖ｃＤＮＡ合成キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ、ＵＳＡ）を用いて相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡｓ）を合成するために、１μｇの総ＲＮＡを用いた。約１μｇのｃＤＮＡサンプル及び各ＴａｑＭａｎ(登録商標)プローブ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）をＱｕａｎｔｉｔｅｃｔ  Ｐｒｏｂｅ  ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ、ＵＳＡ）の反応混合物に希釈し、ＰＣＲを７５００高速リアルタイムＰＣＲシステム（Ｆａｓｔ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ｓｙｓｔｅｍ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって行なった。各ＴａｑＭａｎ(登録商標)プローブは次のとおりである：
【００８１】
ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＧＡＰＤＨ；Ｐａｒｔ  #  ４３５２３３９Ｅ）である。すべてのデータはＧＡＰＤＨ対照群に比べて倍数変化で示し、３回の独立した実験で得たものである。
【００８２】
アディポネクチンｍＲＮＡ発現程度を示した図３を参照すると、ＰＡＣ−２を含む組成物の場合、陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）に比べて、濃度が１０μＭの場合は、アディポネクチンｍＲＮＡの発現が陽性対照群と類似の水準であるが、濃度が２５μＭの場合は、３倍以上、５０μＭの場合は、５倍以上の差があることを確認し、濃度が高くなるほど発現程度が高くなるという有意な結果を示した。
【００８３】
実施例４：アディポネクチンの生成量分析
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ  ａｓｓａｙ）
前記実施例１で培養したｈＳＣＦｓに陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）、並びにＰＡＣ−２を含む組成物を種々の濃度にて処理した。培養培地を回収し、１３,０００ｒｐｍで１５分間遠心分離を行なって破片を除去した。分泌されたアディポネクチンはメーカの指示に従い測定した（Ｅｎｚｏ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ、ＮＹ、ＵＳＡ）。
【００８４】
図４を参照すると、ＰＡＣ−２を含む組成物の場合、陽性対照群であるＫＡ（４００μＭ）、ＣＡ（６０μＭ）、及びＧＣ（３０μＭ）に比べて、濃度が１０μＭの場合は、アディポネクチンの溶出量が陽性対照群と類似の水準である、２５μＭの場合は、３倍以上、５０μＭの場合は、７倍以上の差があることを確認し、濃度が高くなるほど培地内溶出したアディポネクチンの定量結果が高くなるという有意な結果を示した。
【図１】
2020535169.tif 000010
【図２】
2020535169.tif 000011
【図３】
2020535169.tif 000012
【図４】
2020535169.tif 000013
【図５】
2020535169.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月31日(2020.3.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
次いで、３−（３,４,５−トリメトキシ−フェニル）−アクリル酸（３−（３,４,５−Ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−ｐｈｅｎｙｌ）−ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）５ｇ（０．０２６ｍｏｌ）と水酸化ナトリウム１．３ｇ（０．０３１ｍｏｌ）をメタノール４０ｍｌに溶かしメタノールを蒸留した後に残った残渣をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド７０ｍｌに溶かして、化学式３−１で表される化合物を製造した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表されるトリメトキシフェニル化合物、その異性体、その薬学的に許容可能な塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分として含む、脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【化１】
2020535169.tif 000015
【請求項２】
前記有効成分の濃度が、組成物の全体積を基準に１〜１００μＭであることを特徴とする請求項１に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項３】
当該組成物は、薬学組成物であることを特徴とする請求項１又は２に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項４】
当該組成物は、化粧料組成物であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項５】
当該組成物は、皮膚外用剤であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項６】
当該組成物は、食品組成物であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項７】
当該組成物は、ビタミンＤを更に含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項８】
当該組成物は、肌のボリューム又は弾力増進用のものである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【請求項９】
当該組成物は、アディポネクチン関連疾患を調節するためのものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の脂肪細胞の分化又はアディポネクチンの生成促進用組成物。
【国際調査報告】
2020535169.tif 000016
2020535169.tif 000017
2020535169.tif 000018
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