(57)【要約】  ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントが記載される。また転移の阻害のためのものを含む前記抗体およびフラグメントの使用方法も記載される。【選択図】図１３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、または１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項２】
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、１０９、または１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項３】
配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１または１２２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１または２に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項４】
配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１、または１２２に記載の配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項５】
約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項６】
約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合し、ＩｇＧ抗体である、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項７】
ＩｇＧ抗体を含み、該抗体はヒト化されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項８】
ヒトＴＭ４ＳＦ１に結合し、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９】
前記タンパク質のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合が、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０】
ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１３】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１４】
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１５】
前記結合タンパク質のＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１６】
抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１７】
ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１８】
ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１９】
ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項２０】
抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項２１】
配列番号８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２２】
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項２１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２３】
重鎖可変ドメインが、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２１または２２に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２４】
配列番号２０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号２６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２５】
配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項２４に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２６】
重鎖可変ドメインが、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２４または２５に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２７】
配列番号３２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号３８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２８】
配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項２７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２９】
重鎖可変ドメインが、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２７または２８に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３０】
配列番号４４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号５０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３１】
配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項３０に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３２】
重鎖可変ドメインが、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３０または３１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３３】
配列番号５６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号６２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３４】
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項３３に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３５】
重鎖可変ドメインが、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３３または３４に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３６】
配列番号６８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号７４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３７】
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項３６に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３８】
重鎖可変ドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３６または３７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３９】
配列番号８０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号８６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４０】
配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項３９に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
重鎖可変ドメインが、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９または４０に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
軽鎖可変領域が、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含み、重鎖可変領域が、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む、請求項２１から４１のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４３】
配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む、請求項２１から４２のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４４】
配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む、請求項２１から４３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４５】
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４６】
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項４５に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４７】
重鎖可変ドメインが、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４５または４６に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４８】
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４９】
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項４８に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５０】
重鎖可変ドメインが、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４９または５０に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５１】
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５２】
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項５１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５３】
重鎖可変ドメインが、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５１または５２に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５４】
配列番号１１８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５５】
配列番号１１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項５４に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５６】
重鎖可変ドメインが、配列番号１１２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６０または６１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５７】
配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０または配列番号１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６または配列番号１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５８】
配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０または配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６または配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項５７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５９】
重鎖可変ドメインが、配列番号１１２または１１４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインが、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項５７または５８に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６０】
約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を含み、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６１】
約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＩｇＧ抗体である、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６２】
ヒト化されている、請求項２１から６１のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６３】
カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する、請求項２１から６２のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメント。
【請求項６４】
抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合が、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない、請求項２１から６３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６５】
ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項２１から６４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６６】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項２１から６４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６７】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項２１から６４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６８】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項２１から６４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項６９】
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む、請求項２１から６８のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７０】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項２１から６９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７１】
ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項２１から７０のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７２】
ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項２１から７１のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７３】
ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、請求項２１から７２のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７４】
その抗原結合フラグメントを含み、その抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む請求項２１から７３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項７５】
対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、前記疾患または障害は、異常な内皮細胞（ＥＣ）−細胞相互作用を特徴とし、前記方法は、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項７６】
ＥＣ−細胞相互作用が、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−線維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞、およびＥＣ−神経細胞相互作用の１つまたは複数を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
疾患または障害が、炎症性疾患またはがんを含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
対象における炎症を処置または予防する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法。
【請求項７９】
対象における転移を予防する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、対象は、がんからの部分または完全寛解にある、方法。
【請求項８０】
高い転移リスクを伴うがんを有する対象を処置する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを、高い転移リスクを伴うがんを有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項８１】
がんを有する対象における転移を処置または予防する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを、がんを有する対象に投与することを含む、方法。
【請求項８２】
対象が、転移を誘発する可能性がある処置を受けている、請求項７５から８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記処置が、外科手術、放射線処置および化学療法を含む、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
対象が、ヒトである、請求項７５から８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
がんが、癌腫または肉腫である、請求項７５から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
癌腫が、乳がん、肺がん、結腸がん、または前立腺がんを含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
肉腫が、骨肉腫または軟部組織肉腫を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
がんが、膠芽腫である、請求項７５から８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
ヒト対象におけるリンパまたは血行性転移を処置または予防する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントをヒト対象に投与することを含む、方法。
【請求項９０】
（ｉ）請求項１から２０のいずれか一項に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項９１】
（ｉ）請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項９２】
請求項１から２０のいずれか一項に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を産生するためのプロセスであって、請求項１から２０のいずれか一項に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生されたタンパク質を回収し精製することを含む、プロセス。
【請求項９３】
請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するためのプロセスであって、請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生された抗体またはその抗原結合フラグメントを回収し精製することを含む、プロセス。
【請求項９４】
スキャッチャード分析によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、ＴＭ４ＳＦ１に対する改善された結合親和性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９５】
スキャッチャード分析によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、ＴＭ４ＳＦ１に対する改善された特異性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９６】
ＨＬＡ分子結合によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、低減された免疫原性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９７】
ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、改善された安定性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９８】
改善された化学的安定性を有する、請求項９７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項９９】
改善された物理的安定性を有する、請求項９７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１００】
ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、低減した凝集を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０１】
ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、改善された溶解性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０２】
ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項９４から１０１のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０３】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項９４から１０２のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０４】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項９４から１０４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０５】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、請求項９４から１０５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０６】
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、または１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項９４から１０３のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０７】
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、１０９、または１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１０６に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０８】
配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１または１２２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１０６または１０７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１０９】
配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１、または１２２に記載の配列を含む可変軽鎖を含む、請求項１０６から１０８のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１０】
配列番号９０に記載の配列中に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む重鎖を含む、請求項１０６に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１１】
配列番号９７に記載の配列中に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む軽鎖を含む、請求項１０６に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１２】
配列番号９０に記載の配列中の少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号９０のアミノ酸位置１、４４、および８０から選択されるアミノ酸位置にある、請求項１１０に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１３】
配列番号９７に記載の配列中の少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号９７のアミノ酸位置３、２６、および６２から選択されるアミノ酸位置にある、請求項１１１に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１４】
配列番号９０の１位が、グルタミンからグルタミン酸に置換されている、請求項１１２または１１３に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１５】
配列番号９０の４４位が、アスパラギン酸からグルタミン酸に置換されている、請求項１１２から１１４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１６】
配列番号９０の８０位が、フェニルアラニンからチロシンに置換されている、請求項１１２から１１５のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１７】
配列番号９７の３位が、イソロイシンからバリンに置換されている、請求項１１２から１１６のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１８】
配列番号９７の２６位が、アスパラギンからグルタミンに、またはアスパラギンからセリンに置換されている、請求項１１３から１１７のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１１９】
配列番号９７の６２位が、グリシンからセリンに置換されている、請求項１１３から１１８のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２０】
配列番号１１２に記載の配列を含む重鎖を含む、請求項１１３から１１９のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２１】
配列番号９９または配列番号１０１に記載の配列を含む軽鎖を含む、請求項１１３から１２０のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２２】
ヒト化されている、請求項９４から１２１のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２３】
請求項９４から１２２のいずれか一項に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を産生するためのプロセスであって、請求項９４から１２２のいずれか一項に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生されたタンパク質を回収し精製することを含む、プロセス。
【請求項１２４】
ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２５】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２６】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【請求項１２７】
ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
[0001]本出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる２０１７年８月２８日に出願された米国仮出願第６２／５５０，９９４号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
[0002]腫瘍細胞の内皮細胞への付着を遮断することができる、および／または経内皮遊走とも称される内皮単層を透過する腫瘍細胞の遊走を予防できる療法は、腫瘍転移を阻害または予防することができる。当技術分野において、がん治療薬、特に転移を予防できる治療薬の必要性が未だある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
[0003]一実施形態において、
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、または１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が本明細書で提供される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、１０９、または１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１または１２２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１、または１２２に記載の配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合し、前記タンパク質は、ＩｇＧ抗体である。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ抗体を含み、該抗体はヒト化されている。一部の実施形態において、該タンパク質は、ヒトＴＭ４ＳＦ１に結合し、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。一部の実施形態において、該タンパク質のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、結合タンパク質のＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、結合タンパク質は、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、結合タンパク質は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【０００４】
[0004]一実施形態は、
配列番号８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００５】
[0005]一実施形態は、
配列番号２０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号２６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、特許請求の範囲に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００６】
[0006]一実施形態は、
配列番号３２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号３８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００７】
[0007]一実施形態は、
配列番号４４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号５０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００８】
[0008]一実施形態は、
配列番号５６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号６２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含む。
【０００９】
[0009]一実施形態は、
配列番号６８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号７４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
[0010]一実施形態は、
配列番号８０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号８６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、軽鎖可変領域は、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含み、重鎖可変領域は、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む。一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む。一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む。
【００１１】
[0011]一実施形態は、
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
[0012]一実施形態は、
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
[0013]一実施形態は、
配列番号９６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号９４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１０７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
[0014]一実施形態は、
配列番号１１８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、
配列番号１１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１２に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
[0015]一実施形態は、
配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０または配列番号１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６または配列番号１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメイン
を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、
配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０または配列番号１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１６または配列番号１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項５７に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。一部の実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１２または１１４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
[0016]一実施形態は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を含み、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＩｇＧ抗体である、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む。一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態におい���、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、その抗原結合フラグメントを含み、その抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【００１７】
[0017]一実施形態は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、疾患または障害は、異常な内皮細胞（ＥＣ）−細胞相互作用を特徴とし、前記方法は、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態において、ＥＣ−細胞相互作用は、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−線維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞、およびＥＣ−神経細胞相互作用の１つまたは複数を含む。一部の実施形態において、疾患または障害は、炎症性疾患またはがんを含む。
【００１８】
[0018]一実施形態は、対象における炎症を処置または予防する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の結合タンパク質、または請求項２１から７４のいずれか一項に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態は、対象における転移を予防する方法であって、本開示の結合タンパク質、または本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、対象は、がんからの部分または完全寛解にある、方法を提供する。一実施形態は、高い転移リスクを伴うがんを有する対象を処置する方法であって、本開示による結合タンパク質、または本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを高い転移リスクを伴うがんを有する対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態は、がんを有する対象における転移を処置または予防する方法であって、本開示による結合タンパク質、または本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントをがんを有する対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態において、対象は、転移を誘発する可能性がある処置を受けている。一部の実施形態において、処置は、外科手術、放射線処置および化学療法を含む。一部の実施形態において、対象は、ヒトである。一部の実施形態において、がんは、癌腫または肉腫である。一部の実施形態において、癌腫は、乳がん、肺がん、結腸がん、または前立腺がんを含む。一部の実施形態において、肉腫は、骨肉腫または軟部組織肉腫を含む。一部の実施形態において、がんは、膠芽腫である。
【００１９】
[0019]一実施形態は、ヒト対象におけるリンパまたは血行性転移を処置または予防する方法であって、本開示による結合タンパク質、または本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントをヒト対象に投与することを含む、方法を提供する。一実施形態は、（ｉ）本開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。一実施形態は、（ｉ）本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２０】
[0020]一実施形態は、本開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を産生するためのプロセスであって、本開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生されたタンパク質を回収し精製することを含む、プロセスを提供する。
【００２１】
[0021]一実施形態は、本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するためのプロセスであって、本開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生された抗体またはその抗原結合フラグメントを回収し精製することを含む、プロセスを提供する。一実施形態は、スキャッチャード分析によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、ＴＭ４ＳＦ１に対する改善された結合親和性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、スキャッチャード分析によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、ＴＭ４ＳＦ１に対する改善された特異性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ＨＬＡ分子結合によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、低減された免疫原性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、安定性の改善を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一部の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、改善された化学的安定性を有する。一部の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、改善された物理的安定性を有する。一実施形態は、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、低減した凝集を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、改善された溶解性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、該タンパク質は、配列番号８、２０、３２、４４、５６��６８、または８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、または１２８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、または１２１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、または１１７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、または１１５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、または１２９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、１０９、または１２８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、または１２７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１または１２２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、７５、９０、９２、１１２、または１１４に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９７、９９、１０１、または１２２に記載の配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号９０に記載の配列中の少なくとも１つのアミノ酸置換を含む重鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号９７に記載の配列中に少なくとも１つのア��ノ酸置換を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、配列番号９０に記載の配列中の少なくとも１つのアミノ酸置換は、配列番号９０のアミノ酸位置１、４４、および８０から選択されるアミノ酸位置にある。一部の実施形態において、配列番号９７に記載の配列中の少なくとも１つのアミノ酸置換は、配列番号９７のアミノ酸位置３、２６、および６２から選択されるアミノ酸位置にある。一部の実施形態において、配列番号９０の１位は、グルタミンからグルタミン酸に置換されている。一部の実施形態において、配列番号９０の４４位は、アスパラギン酸からグルタミン酸に置換されている。一部の実施形態において、配列番号９０の８０位は、フェニルアラニン（ｐｈｅｙｌａｌａｎｉｎｅ）からチロシンに置換されている。一部の実施形態において、配列番号９７の３位は、イソロイシンからバリンに置換されている。一部の実施形態において、配列番号９７の２６位は、アスパラギンからグルタミンに、またはアスパラギンからセリンに置換されている。一部の実施形態において、配列番号９７の６２位は、グリシンからセリンに置換されている。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号１１２に記載の配列を含む重鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号９９または配列番号１０１に記載の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ヒト化されている。
【００２２】
[0022]一実施形態は、本開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を産生するためのプロセスであって、本開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生されたタンパク質を回収し精製することを含む、プロセスを提供する。一実施形態は、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一実施形態は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。
【００２３】
[0023]一実施形態は、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、少なくとも１つの改善された機能的特徴を含む抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質であって、改善された機能的特徴は、改善された結合親和性、改善された特異性、改善された抗原性、ヒト免疫グロブリンフレームワーク領域に対する増加した類似性、改善された製造の容易さ、改善された発展性、改善された安定性、改善された溶解性、低減した凝集傾向、発現における改善、改善された産生レベルの少なくとも１つを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。
【００２４】
[0024]本開示は、少なくとも部分的に、例えばがんの処置において有用な、新規の抗膜貫通−４Ｌ６ファミリーメンバー−１（ＴＭＦＳＦ１：Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ−４  Ｌ  ｓｉｘ  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ−１）結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントの同定に基づく。本開示はさらに、少なくとも部分的に、腫瘍転移を阻害するための組成物および方法に基づく。したがって、本開示の一部の実施形態は、腫瘍細胞の血管内皮細胞への付着、および血管内皮細胞を透過するまたは血管内皮細胞間の遊走を予防することによって、例えば肺および他の臓器への腫瘍転移を遮断するための方法および組成物を含む。
【００２５】
[0025]一実施形態において、本開示は、本明細書で開示される抗体の結合領域、例えば、重鎖および軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含むヒト化抗体を特徴とする。
【００２６】
[0026]上記の態様または実施形態のいずれかの一実施形態において、軽鎖可変領域は、本明細書で開示される軽鎖ＣＤＲおよびヒトＩｇＧフレームワーク領域を含み、重鎖可変領域は、本明細書で開示される重鎖ＣＤＲおよびヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む。
【００２７】
[0027]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧ重鎖定常領域を含む。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【００２８】
[0028]一実施形態において、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、または７９に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、または７８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、または８６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、または８５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が提供される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、または７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、または７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、または８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、または８５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に記載の配列を含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合し、前記タンパク質は、ＩｇＧ抗体である。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ抗体を含み、該抗体はヒト化されている。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ヒトＴＭ４ＳＦ１に結合し、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。一部の実施形態において、抗��Ｍ４ＳＦ１結合タンパク質のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗原結合タンパク質またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の抗原結合フラグメントを含み、該抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【００２９】
[0029]一実施形態は、配列番号８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３０】
[0030]一実施形態は、配列番号２０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号１８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項２４に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３１】
[0031]一実施形態は、配列番号３２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号３８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３２】
[0032]一実施形態は、配列番号４４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号５０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号４５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３３】
[0033]一実施形態は、配列番号５６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号６２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、配列番号５６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項３３に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３４】
[0034]一実施形態は、配列番号６８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号７４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、配列番号６８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号６７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号６６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号７４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号６９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３５】
[0035]一実施形態は、配列番号８０に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号８６に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号７９に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号７８に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、および配列番号８４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号８１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域およびヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むＩｇＧバックボーンをさらに含む。
【００３６】
[0036]一実施形態は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を含み、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００３７】
[0037]一実施形態は、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ＩｇＧ抗体である、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【００３８】
一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−９Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプを含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣまたはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。��部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、その抗原結合フラグメントを含み、その抗原結合フラグメントはＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
【００３９】
[0038]一実施形態において、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、疾患または障害は、異常な内皮細胞（ＥＣ）−細胞相互作用を特徴とし、本発明の開示による結合タンパク質または抗体もしくはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態において、ＥＣ−細胞相互作用は、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−線維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞、およびＥＣ−神経細胞相互作用の１つまたは複数を含む。一部の実施形態において、疾患または障害は、炎症性疾患またはがんを含む。
【００４０】
[0039]一実施形態は、対象における炎症を処置または予防する方法であって、結合タンパク質または本発明の開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、方法を提供する。
【００４１】
[0040]一実施形態は、対象における転移を予防する方法であって、本発明の開示による結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを投与することを含み、対象は、がんからの部分または完全寛解にある、方法を提供する。
【００４２】
[0041]一実施形態は、高い転移リスクを伴うがんを有する対象を処置する方法であって、本発明の開示による結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントを、高い転移リスクを伴うがんを有する対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００４３】
[0042]一実施形態は、がんを有する対象における転移を処置または予防する方法であって、本発明の開示による結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントをがんを有する対象に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態において、対象は、転移を誘発する可能性がある処置を受けている。一部の実施形態において、処置は、外科手術、放射線処置および化学療法を含む。一部の実施形態において、対象は、ヒトである。一部の実施形態において、がんは、癌腫または肉腫である。一部の実施形態において、癌腫は、乳がん、肺がん、結腸がん、または前立腺がんを含む。一部の実施形態において、肉腫は、骨肉腫または軟部組織肉腫を含む。一部の実施形態において、がんは、膠芽腫である。
【００４４】
[0043]一実施形態は、ヒト対象におけるリンパまたは血行性転移を処置または予防する方法であって、本発明の開示による結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントをヒト対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００４５】
[0044]一実施形態は、（ｉ）本発明の開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
[0045]一実施形態は、（ｉ）本発明の開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび（ｉｉ）医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００４６】
[0046]一実施形態は、本発明の開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を産生するためのプロセスであって、本発明の開示によるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質の発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生されたタンパク質を回収し精製することを含む、プロセスを提供する。
【００４７】
[0047]一実施形態は、本発明の開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するためのプロセスであって、本発明の開示による抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換またはトランスフェクトされた宿主を、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントの発現を可能にする条件下で培養すること、および培養物から、産生された抗体またはその抗原結合フラグメントを回収し精製することを含む、プロセスを提供する。
【００４８】
[0048]一実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でない方式で、ヒトＴＭ４ＳＦ１と結合する。
【００４９】
[0049]一実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現するようにトランスフェクトされている。さらなる実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、１０６コピーの１８Ｓ  ｒＲＮＡ当たり約６００のｍＲＮＡコピーで、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現する。
【００５０】
[0050]別の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【００５１】
[0051]別の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−８Ｍから約５×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【００５２】
[0052]さらなる実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【００５３】
[0053]ある特定の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプである。
【００５４】
[0054]さらなる実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも１つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。さらなる実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも２つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。さらなる実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０個またはそれより多くの突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【００５５】
[0055]さらに他の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【００５６】
[0056]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１  ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【００５７】
[0057]他の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７Ｑからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【００５８】
[0058]一態様において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質またはその抗ＴＭ４ＳＦ１抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖである。
[0059]一態様において、本開示は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法であって、疾患または障害は、望ましくない内皮細胞（ＥＣ）−細胞相互作用を特徴とし、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５９】
[0060]一実施形態において、ＥＣ−細胞相互作用は、ＥＣ−ＥＣ、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−線維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞およびＥＣ−神経細胞相互作用からなる群から選択される。
【００６０】
[0061]別の実施形態において、疾患または障害は、炎症性疾患またはがんから選択される。
[0062]別の態様において、本開示は、対象における炎症を処置または予防する方法であって、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を特徴とする。
【００６１】
[0063]一態様において、本開示は、対象における転移を予防する方法であって、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、対象は、がんからの部分または完全寛解にある、方法を提供する。
【００６２】
[0064]別の態様において、本開示は、高い転移リスクを伴うがんを有する対象を処置する方法であって、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを、高い転移リスクを伴うがんを有する対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００６３】
[0065]別の態様において、本開示は、がんを有する対象における転移を処置または予防する方法であって、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、方法を提供する。
【００６４】
[0066]さらなる態様において、本開示は、対象における血行性転移を処置または予防する方法であって、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば本明細書に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を含む。
【００６５】
[0067]さらなる態様において、本開示は、対象におけるリンパ転移を処置または予防する方法であって、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば本明細書に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む、方法を含む。
【００６６】
[0068]一実施形態において、対象は、転移を誘発する可能性がある処置を受けている。さらなる実施形態において、処置は、外科手術、放射線処置および化学療法からなる群から選択される。
【００６７】
[0069]一実施形態において、対象は、ヒトである。
[0070]本開示は、さらに、別の態様において、ヒト対象における転移を処置または予防する方法であって、有効量のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば本明細書に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１から８０ｍｇ／ｋｇの量の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、方法を提供する。
【００６８】
[0071]さらに別の態様において、本開示は、高い転移リスクを伴うがんを有する対象を処置する方法であって、有効量のＴＭ４ＳＦ１抗体、例えば本明細書に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含み、有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントは、１から８０ｍｇ／ｋｇの量の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、方法を提供する。
【００６９】
[0072]一実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、次の用量が投与されるまでの期間中、対象において約１μｇ／ｍｌまたはそれより高い血清濃度が維持されるような頻度で投与される。
【００７０】
[0073]ある特定の実施形態において、投与される有効量のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、１週間で循環抗体濃度＞１μｇ／ｍｌを達成するのに十分な量である。
【００７１】
[0074]他の実施形態において、投与される有効量のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１カ月にわたり連続的に抗体の血清濃度を１μｇ／ｍｌにまたはそれより高く維持するのに十分な量である。
【００７２】
[0075]また本開示は、さらなる態様において、ヒト対象における転移を処置または予防する方法であって、１ｍｇ／ｋｇから８０ｍｇ／ｋｇのＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを、週１回、対象に投与することを含む、方法も提供する。本明細書に記載されるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはそのフラグメントは、一部の実施形態において、転移を処置または予防する方法で、維持用量スケジュールに従って使用される。
【００７３】
[0076]一実施形態において、がんは、癌腫（例えば、乳がん、肺がん、結腸がん、および前立腺がん）または肉腫（例えば、骨肉腫または軟部組織肉腫）である。
[0077]一実施形態において、がんは、膠芽腫である。
【００７４】
[0078]一実施形態において、ヒト対象は、高い転移リスクを伴うがんを有する。
[0079]別の実施形態において、対象は、転移を誘発する可能性がある処置を受けている。さらなる実施形態において、処置は、外科手術、放射線処置および化学療法からなる群から選択される。
【００７５】
[0080]別の実施形態において、ヒト対象は、過去にがんに関して処置され、転移を発症するリスクを有する。
参照による組み込み
[0081]本明細書に記載される全ての公報、特許、および特許出願は、それぞれ個々の公報、特許、または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個々に示されたのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
【００７６】
[0082]本開示の新規の特徴は添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本開示の特徴および利点のより良い理解は、例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明を参照することによって得られ、ここでは本開示の原理が利用され、その添付の図面は以下の通りである：
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】[0083]図１は、血管外遊出のための腫瘍細胞（ＴＣ）と内皮細胞（ＥＣ）の相互作用におけるＴＭ４ＳＦ１の役割を示す概略図である。
【図２】[0084]図２は、野生型（＋／＋）ＴＭ４ＳＦ１の正常レベルの約１／２を発現するＴＭ４ＳＦ１（ヘテロ接合（＋／−）マウスにおける肺へのＴＣ転移の頻度を示す図である。転移の数は、腫瘍結節（＃）として示される。例示的な転移は矢印で示される。
【図３】[0085]図３Ａは、１０％または９０％培養密度に増殖したＢ１６Ｆ１０細胞におけるＴＭ４ＳＦ１発現を示すグラフである。図３Ａに示すように、ＴＭ４ＳＦ１発現レベルは、培養密度によって減少する。図３Ｂは、１０％（高ＴＭ４ＳＦ１）または９０％（低ＴＭ４ＳＦ１）発現Ｂ１６Ｆ１０細胞における転移の数を示す図である。図３Ｂに示すように、高ＴＭ４ＳＦ１発現Ｂ１６Ｆ１０細胞は、低ＴＭ４ＳＦ１発現体よりも肺転移を生成する。例示的な転移は矢印で示される。
【図４】[0086]図４は、蛍光ライブイメージング結果を示す図である。ＧＦＰ標識Ｂ１６Ｆ１０細胞は、ＲＦＰ標識ＨＬＭＥＣのローン上に重ねられた。代表的なライブ細胞イメージングからの連続画像は、対照（Ｃｔｌ）抗体と対照的に、抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体ＡＧＸ−０１（１０μｇ／ｍｌ）が遊走のためのＴＣ相互作用と干渉し、細胞脱離をもたらす広範で、不規則な細胞突出を生じることを示す。
【図５】[0087]図５は、抗体ＡＧＸ−Ａ０３の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号９）を示す図である。図５では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号６）、ＣＤＲ２（配列番号７）およびＣＤＲ３（配列番号８）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号１２）、ＣＤＲ２（配列番号１３）およびＣＤＲ３（配列番号１４）配列に下線が引かれる。
【図６】[0088]図６は、抗体ＡＧＸ−Ａ０４の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号２１）を示す図である。図６では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号１８）、ＣＤＲ２（配列番号１９）およびＣＤＲ３（配列番号２０）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号２４）、ＣＤＲ２（配列番号２５）およびＣＤＲ３（配列番号２６）配列に下線が引かれる。
【図７】[0089]図７は、抗体ＡＧＸ−Ａ０５の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号２７）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号３３）を示す図である。図７では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号３０）、ＣＤＲ２（配列番号３１）およびＣＤＲ３（配列番号３２）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号３６）、ＣＤＲ２（配列番号３７）およびＣＤＲ３（配列番号３８）配列に下線が引かれる。
【図８】[0090]図８は、抗体ＡＧＸ−Ａ０７の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号３９）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号４５）を示す図である。図８では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号４２）、ＣＤＲ２（配列番号４３）およびＣＤＲ３（配列番号４４）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号４８）、ＣＤＲ２（配列番号４９）およびＣＤＲ３（配列番号５０）配列に下線が引かれる。
【図９】[0091]図９は、抗体ＡＧＸ−Ａ０８の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号５１）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号５７）を示す図である。図９では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号５４）、ＣＤＲ２（配列番号５５）およびＣＤＲ３（配列番号５６）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号６０）、ＣＤＲ２（配列番号６１）およびＣＤＲ３（配列番号６２）配列に下線が引かれる。
【図１０】[0092]図１０は、抗体ＡＧＸ−Ａ０９の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号６３）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号６９）を示す図である。図１０では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号６６）、ＣＤＲ２（配列番号６７）およびＣＤＲ３（配列番号６８）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号７２）、ＣＤＲ２（配列番号７３）およびＣＤＲ３（配列番号７４）配列に下線が引かれる。
【図１１】[0093]図１１は、抗体ＡＧＸ−Ａ１１の可変重鎖（ＶＨ）配列（配列番号７５）、可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号８１）を示す図である。図１１では、重鎖ＣＤＲ１（配列番号７８）、ＣＤＲ２（配列番号７９）およびＣＤＲ３（配列番号８０）配列に下線が引かれ、軽鎖ＣＤＲ１（配列番号８４）、ＣＤＲ２（配列番号８５）およびＣＤＲ３（配列番号８６）配列に下線が引かれる。
【図１２】[0094]図１２は、本開示のいくつかの抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、ｈＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ１、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ２、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ３、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｖ４、およびｈＡＧＸ−Ａ０１  Ｈ１Ｌ１０の標的結合を示す図である。
【図１３】[0095]図１３は、異なる阻害剤の存在下での、ＨＵＶＥＣにおけるＴＭ４ＳＦ１の内部移行への効果を示す図である。図１３（Ａ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識されたＨＵＶＥＣを示す図である。図１３（Ｂ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識され、３７℃での培養に戻されたＨＵＶＥＣによるＡＧＸ−Ａ０１の取り込みを示す図である。図１３（Ｃ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識され、クラスリン阻害剤、２０μＭ  ｐｉｔｓｔｏｐ−２の存在下で、３７℃での培養に戻されたＨＵＶＥＣによるＡＧＸ−Ａ０１の取り込みを示す図である。図１３（Ｄ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識され、クラスリンおよびカベオリン媒介エンドサイトーシス阻害剤、１０μＭクロルプロマジン（ｃｈｌｏｒｏｐｒｏｍａｚｉｎｅ）の存在下で、３７℃での培養に戻されたＨＵＶＥＣによるＡＧＸ−Ａ０１の取り込みを示す図である。図１３（Ｅ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識され、オートファジー阻害剤、０．４μＭバフィロマイシン（Ｂｉｆｉｌｏｍｙｃｉｎ）Ａの存在下で、３７℃での培養に戻されたＨＵＶＥＣによるＡＧＸ−Ａ０１の取り込みを示す図である。図１３（Ｆ）は、４℃でＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌの濃度で）によって前標識され、ダイナミン阻害剤、２０μＭダイナソアの存在下で、３７℃での培養に戻されたＨＵＶＥＣによるＡＧＸ−Ａ０１の取り込みを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７８】
[0096]膜貫通−４Ｌ６ファミリーメンバー−１（ＴＭ４ＳＦ１）は、多くのヒト上皮性腫瘍細胞上で高度に発現されるテトラスパニンの形態を有する小さい膜糖タンパク質である。
【００７９】
[0097]一実施形態において、本開示は、新規のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。本開示は、一部の例において、がんを処置または予防するために、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを使用する方法を含む。本開示は、これらに限定されないが、血行性腫瘍転移を阻害するための組成物および方法を含む。したがって、本開示は、少なくとも部分的に、腫瘍細胞（ＴＣ）の血管内皮細胞（ＥＣ）への付着および血管内皮細胞（ＥＣ）を透過する遊走を予防することによって、肺および他の臓器への腫瘍転移を遮断する、ヒトＴＭ４ＳＦ１に対する抗体を提供する。
【００８０】
Ｉ．定義
[0098]本明細書において別段の定義がない限り、本発明の開示と関連して使用される科学用語および専門用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。用語の意味および範囲は明確であるべきであるが、何らかの潜在的なあいまいさがある場合、本明細書で提供される定義が、いずれの辞書または非本質的な定義よりも優先される。さらに、文脈上別段の要求がなされない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。本出願において、「または」の使用は、別段の指定がない限り「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、加えて他の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」の使用は、非限定的である。
【００８１】
[0099]一般的に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連して使用される学術名、およびその技術は、周知であり、当技術分野において一般的に使用されるものである。本発明の開示の方法および技術は、一般的に、別段の指定がない限り、当技術分野において周知の従来の方法に従って、さらに、本明細書中で引用および考察される様々な一般的な参考文献やより詳細な参考文献に記載されるように実行される。酵素反応および精製技術は、当技術分野で一般的に達成される通り、または本明細書に記載される通り、製造元の詳細な説明に従って実行される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬および製薬化学と関連して使用される学術名、ならびにそれらの実験手順および技術は、周知であり、当技術分野において一般的に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、配合、および送達、ならびに患者の処置に関して、標準的な技術が使用される。
【００８２】
[0100]本発明の開示がより容易に理解できるように、選択される用語は、以下で定義される。用語「膜貫通−４Ｌ６ファミリーメンバー−１」または「ＴＭ４ＳＦ１」は、本明細書で使用される場合、腫瘍血管系内皮細胞（ＥＣ）、腫瘍細胞（ＴＣ）、網膜血管系および血管新生の血管を発達させるＥＣ上で高度に発現される膜貫通４スーパーファミリー／テトラスパニンファミリーのポリペプチドを指す。ＴＭ４ＳＦ１は、４つの膜貫通ドメイン（Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、およびＭ４）によって分離される２つの細胞外ループ（ＥＣＬ１およびＥＣＬ２）、ＮおよびＣ末端、ならびに細胞内ループ（ＩＣＬ）を有する。ＥＣＬ２は、２つのＮ−グリコシル化部位を含有する。ヒトＴＭ４ＳＦ１（ｈＴＭ４ＳＦ１）のアミノ酸配列は、配列番号９０に記載される（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１も参照）。
【００８３】
[0101]用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、特定の抗原（例えば、ＴＭ４ＳＦ１）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むあらゆる抗原結合分子を意味する。用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互連結された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、加えて、それらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、超可変性を有する領域にさらに細かく分類でき、この領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存された領域に散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される。本開示の異なる実施形態において、抗ＴＭＳ４Ｆ１抗体（またはその抗原結合部位）のＦＲは、ヒト生殖細胞系配列に同一であってもよいし、または天然にもしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれより多くのＣＤＲの並行分析に基づき定義することができる。
【００８４】
[0102]用語「無傷の抗体」は、４つのポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互連結した２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む抗体を指す。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、無傷の抗体である。一実施形態において、無傷の抗体は、無傷のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプである。ある特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプである。
【００８５】
[0103]抗体の「抗原結合部位」、抗体の「抗原結合フラグメント」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原と特異的に結合して複合体を形成する、あらゆる天然に存在する、酵素によって入手可能な、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質分解消化、または抗体の可変ドメインおよび任意選択で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術などのあらゆる好適な標準的技術を使用して、無傷の抗体分子から得ることができる。このようなＤＮＡは公知であり、および／または例えば、商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーなど）から容易に入手可能であり、または合成することができる。ＤＮＡは、シーケンシングし、化学的に、または分子生物学的技術を使用することによって操作して、例えば、１つまたは複数の可変および／または定常ドメインを好適な配置に配列する、またはコドンを導入する、システイン残基を作り出す、アミノ酸の改変、付加もしくは欠失などをもたらすことができる。
【００８６】
[0104]抗原結合フラグメントの非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の高度可変領域（例えば、単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ３ペプチド）、または拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模擬するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。
【００８７】
[0105]抗体またはそのフラグメントの「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ−１、ＣＤＲ−２、およびＣＤＲ−３）、およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体分子の軽鎖および重鎖の部分を指す。ＶＨは、重鎖の可変ドメインを指す。ＶＬは、軽鎖の可変ドメインを指す。本開示で使用される方法によれば、ＣＤＲおよびＦＲに割り振られたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７および１９９１））に従って定義することができる。抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸の番号付けも、Ｋａｂａｔの番号付けに従う。
【００８８】
[0106]用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、本明細書で使用される場合、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれの３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域のそれぞれにつきＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される。用語「ＣＤＲセット」は、本明細書で使用される場合、抗原に結合が可能な単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔによって説明されるシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．  （１９８７）および（１９９１）））は、抗体のあらゆる可変領域に適用可能な疑いのない残基の番号付けシステムを提供することに加えて、３つのＣＤＲを定義する正確な残基の境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲと称する場合もある。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７（１９８７）およびＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ内の特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチドバックボーンコンフォメーションをとることを見出した。これらの下位部分を、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と指定した。ここで「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ軽鎖および重鎖領域を指示する。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲと称する場合もあり、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップする境界を有する。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３〜１３９（１９９５））およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２（５）：７３２〜４５（１９９６））によって説明されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、上記のシステムのどちらかに厳密に従っていない場合があるが、それでもＫａｂａｔ  ＣＤＲとオーバーラップすると予想され、それにもかかわらず、それらは、特定の残基もしくは残基の群が、またはＣＤＲ全体も、抗原結合に顕著な影響を与えないという予測または実験的発見の観点で、短くしたりまたは長くしたりすることができる。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができるが、好ましい実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【００８９】
[0107]用語「フレームワーク領域」（以下ＦＲ）は、本明細書で使用される場合、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基を指す。各可変ドメインは、典型的には、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４として同定された４つのＦＲを有する。抗体またはその機能的なフラグメントの可変領域のうち共通の構造的特徴は当技術分野において周知である。特定の抗体をコードするＤＮＡ配列は、一般的に、周知の方法、例えば、参考文献として本明細書に組み込まれるＫａｂａｔら、１９８７  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤに記載される方法に従って見出すことができる。加えて、抗体から機能的な可変領域をクローニングするための一般的な方法は、参考文献として本明細書に組み込まれるＣｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．ら、１９９０  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１０６６に見出すことができる。
【００９０】
[0108]本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用され、例えば、天然配列のＦｃ領域、組換えＦｃ領域、およびバリアントＦｃ領域が含まれる。抗体重鎖のＦｃ領域の境界は変わる場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端への伸長部分と定義されることが多い。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムに従って残基４４７）は、例えば、抗体の産生または精製中に除去してもよいし、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去してもよい。したがって、無傷の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有するおよび有さない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでいてもよい。
【００９１】
[0109]用語「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、目的の抗原（例えば、ヒトＴＭ４ＳＦ１）に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む、抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくはフラグメントを指す。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦｃの少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化方法は、当技術分野において公知である。例えば、全て参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜７；Ｑｕｅｅｎらの、米国特許第５，５３０，１０１号；５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；５，６９３，７６２号；および６，１８０，３７０号；ＥＰ２３９４００；ＰＣＴ公報ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；ＥＰ５９２１０６；ＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ、１９９１、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８：４８９〜４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．７：８０５〜８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９〜９７３；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい。
【００９２】
[0110]用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、可能性のある突然変異、例えば少量で存在する可能性がある天然に存在する突然変異を除いて、同一である。したがって、修飾句「モノクローナル」は、分離した抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。特定の実施形態において、このようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的と結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られた。例えば、選択プロセスは、複数のクローンからの、例えばハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプールからの固有なクローンの選択であってもよい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して向けられる。
【００９３】
[0111]用語「キメラ抗体」は、本明細書で使用される場合、所望の生物学的活性を示す限り、特定の種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同な重鎖および／または軽鎖の部分を有し、それと同時に、鎖の残部が、別の種由来の、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、加えてこのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一または相同である抗体（免疫グロブリン）を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１〜６８５５（１９８４））。
【００９４】
[0112]用語「エピトープ」は、本明細書で使用される場合、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域中の特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が、１つより多くのエピトープを有する場合もある。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合する場合もあるし、異なる生物学的作用を有する場合もある。エピトープは、構造的または機能的と定義される場合もある。機能的エピトープは、一般的に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。またエピトープは、配座エピトープであってもよく、すなわち非線形アミノ酸で構成されていてもよい。特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの化学的に活性な表面の分子群である決定基を含む場合もあり、特定の実施形態において、特定の３次元構造特徴、および／または特定の電荷の特徴を有していてもよい。
【００９５】
[0113]「結合親和性」は、一般的に、分子（例えば、抗体などの結合タンパク質）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合による全体の相互作用の強度を指す。結合分子Ｘ（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体）のその結合パートナーＹ（例えば、ヒトＴＭ４ＳＦ１）に対する親和性は、一般的に、解離定数（ＫＤ）によって表することができる。親和性は、本明細書に記載されるものなどの当技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般的に、ゆっくり抗原と結合し、容易に解離する傾向があり、それに対して高親和性抗体は、一般的に、より速く抗原と結合し、より長く結合したままの状態である傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野において公知であり、それらのいずれかは、本発明の開示の目的のために使用することができる。特定の例示的な実施形態は、以下を含む。一実施形態において、「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当技術分野において公知のアッセイによって、例えば結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、ＲＩＡで測定することができ、これは例えば、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実行される（Ｃｈｅｎら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９３：８６５〜８１）。ＫＤはまた、ＦＡＣＳ、またはＢＩＡＣＯＲＥによる、例えばＢＩＡＣＯＲＥ２０００もしくはＢＩＡＣＯＲＥ３０００を使用する、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって、または例えばＯＣＴＥＴ  ＱＫ３８４システムを使用するバイオレイヤー干渉法によっても測定できる。特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のＫＤは、ＨＵＶＥＣ細胞を用いる標準的なフローサイトメトリーアッセイを使用して決定される。また、「オンレート」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」および「オフレート」または「解離の速度」または「解離速度」または「ｋｏｆｆ」も、例えばＢＩＡＣＯＲＥ２０００もしくはＢＩＡＣＯＲＥ３０００、またはＯＣＴＥＴ  ＱＫ３８４システムを使用する、上述した同じ表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法技術で決定することができる。
【００９６】
[0114]用語「ｋｏｎ」は、本明細書で用いられる場合、当技術分野において公知のように、抗体／抗原複合体を形成するための抗体の抗原への会合に関するオンレート定数を指すことが意図される。
【００９７】
[0115]用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書で用いられる場合、当技術分野において公知のように、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関するオフレート定数を指すことが意図される。
【００９８】
[0116]用語「阻害」または「阻害する」は、本明細書で使用される場合、部分的な（例えば、１％、２％、５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、９０％、９５％、９９％の）または完全な（すなわち、１００％の）阻害を指す。
【００９９】
[0117]用語「がん」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物における典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする生理学的状態を指すかまたは記載する。
[0118]用語「高い転移リスクを伴うがん」は、本明細書で使用される場合、がんを有する対象が転移がんを発症させるリスクを増加させることがわかっている少なくとも１つの因子に関連するがんを指す。転移リスクの増加に関連する因子の例としては、これらに限定されないが、対象が最初のがん診断時に有するがん性のリンパ節の数、腫瘍のサイズ、組織学的な格付け、および最初の診断時のがんの段階が挙げられる。
【０１００】
[0119]用語「血行性転移」は、本明細書で使用される場合、がん細胞が血管壁に侵入し、その後、血流（循環腫瘍細胞）を介して体内の他の部位および組織に循環できる能力を指す。
【０１０１】
[0120]用語「リンパ転移」は、本明細書で使用される場合、がん細胞がリンパ管に侵入し、血管に排出する能力を指す。
[0121]本開示に関して、用語「処置する」または「処置」は、本明細書で使用される場合、このような用語が適用される障害もしくは状態、またはこのような障害もしくは状態の１つまたは複数の症状を、回復させること、軽減すること、その進行を阻害すること、または予防することを意味する。用語「がんを処置する」は、本明細書で使用される場合、がん細胞の増殖および／または増殖の阻害を意味する。一実施形態において、本明細書に記載される組成物および方法は、転移がんを有する対象における転移を処置するのに使用される。
【０１０２】
[0122]用語「がんを予防する」または「がんの予防」は、発癌または腫瘍形成の発生が証明されていないが、例えば遺伝学的スクリーニングによって決定したかまたはそれ以外の方法によるかにかかわらず、がんの素因が同定されている哺乳動物におけるがんの発病を、遅らせること、阻害すること、または予防することを指す。この用語はまた、悪性になる前の状態を有する哺乳動物を処置して、悪性になる前の状態から悪性状態への進行を止める、またはそのような進行を逆行させることも包含する。悪性になる前の状態の例としては、過形成、形成異常、および異形成が挙げられる。一部の実施形態において、がんの予防は、がんからの寛解にある対象に関して使用される。
【０１０３】
[0123]悪性もしくは良性のおよび／または原発性もしくは続発性などの様々ながんが、本開示による方法で処置または予防することができる。このようながんの例は、当業者に公知であり、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｍｅｒｃｋにより出版）などの標準的な教本に列挙される。
【０１０４】
[0124]用語「対象」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。
[0125]用語「投与する」は、本明細書で使用される場合、抗体またはそのフラグメント、または組成物（例えば、医薬組成物）の投薬量を対象に与える方法を指す。投与方法は、様々な要因（例えば、投与される結合タンパク質または医薬組成物、および処置される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて変更することができる。
【０１０５】
[0126]用語「有効量」は、本明細書で使用される場合、所望の転帰をもたらすのに十分な、本明細書で提供される抗体または医薬組成物の量を指す。
[0127]用語「約」および「およそ」は、所与の値または範囲の、２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、またはそれ未満を意味する。
【０１０６】
[0128]用語「同一性」、または「相同性」は、本明細書では置き換え可能に使用され、最適な比較目的で配列をアライメントすること（例えば、第１の配列の配列中にギャップを導入してもよい）によって決定できる２つまたはそれより多くのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の「同一性」、「相同性」、または「パーセント相同性」の計算値であり得る。次いで対応する位置のヌクレオチドを比較することができ、２つの配列間のパーセント同一性は、配列が共通する同一の位置の数の関数であり得る（すなわち、％相同性＝同一の位置の数／位置の合計数×１００）。例えば、第１の配列における位置は、第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドで占められていてもよく、その場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント相同性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共通する同一の位置の数の関数であり得る。一部の実施形態において、比較目的でアライメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９５％であり得る。ＢＬＡＳＴ（登録商標）検索は、２つの配列間の相同性を決定することができる。２つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列、またはそのフラグメントであり得る。２つの配列の実際の比較は、周知の方法によって、例えば数学的なアルゴリズムを使用して達成することができる。このような数学的なアルゴリズムの非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０−５８７３−５８７７（１９９３）に記載され得る。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５：３３８９〜３４０２（１９９７）に記載されるように、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている場合もある。ＢＬＡＳＴおよびギャップ有りＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）のあらゆる関連パラメーターを使用することができる。例えば、配列比較に関するパラメーターは、スコア＝１００、ワード長さ＝１２に設定してもよいし、または変更してもよい（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０）。他の例としては、Ｍｙｅｒｓおよびミラー、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズム、ＡＤＶＡＮＣＥ、ＡＤＡＭ、ＢＬＡＴ、およびＦＡＳＴＡが挙げられる。別の実施形態において、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）中のＧＡＰプログラムを使用して達成することができる。
【０１０７】
[0129]用語「製造性」は、本明細書で使用される場合、特定のタンパク質の組換え発現および精製中におけるそのタンパク質の安定性を指す。製造性は、発現および精製の条件下における分子の固有の特性によると考えられる。改善された製造性の特徴の例としては、タンパク質の均一なグリコシル化、増加した細胞力価、タンパク質の組換え産生中の増殖およびタンパク質発現、改善された精製特性、凝集する傾向が低いことまたは凝集しないこと、ならびにこれらに限定されないが、低いｐＨでの熱安定性および安定性などの改善された安定性が挙げられる。一部の実施形態において、他のＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、インビトロおよびインビボでの活性の保持と共に製造性を実証するＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が提供される。一部の実施形態において、ＣＤＲまたはフレームワーク領域中にアミノ酸置換をもたらすことによる親ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質のヒト化は、追加の製造性の利益を付与することができる。
【０１０８】
[0130]一部の実施形態において、これらに限定されないが、例えばプロテインＡ精製またはサイズ排除クロマトグラフィー後の改善された精製収量、精製後の改善された均一性、改善された熱安定性などの改善された発展性の特徴を実証するＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が提供される。一部の場合において、改善は、ＨＬＡ分子結合によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４−５−１３−１３Ｆ（ＰＴＡ−１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体に関する改善である。
【０１０９】
[0131]一部の例において、結合親和性は、スキャッチャード分析によって決定され、この分析は、未結合リガンドに結合したリガンドの濃度と結合したリガンドの濃度との比率のプロットであるスキャッチャードプロットを作成することを含む。
【０１１０】
ＩＩ．ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質
[0132]本開示の一実施形態は、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を提供する。一部の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、例えばがんを処置または予防するのに使用できる抗体およびその抗原結合フラグメントである。特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体および抗原結合フラグメントは、腫瘍細胞の転移を予防するのに使用することができる。本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントは、一部の例において、腫瘍細胞と血管内皮細胞との相互作用を妨害することによって腫瘍細胞の転移を予防する。
【０１１１】
[0133]ＴＭ４ＳＦ１は、テトラスパニン形態を有するが相同性を有さない小さい原形質膜糖タンパク質である（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１）（Ｗｒｉｇｈｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．９：１５９４〜１６００、２０００）。これは、原形質膜上にＴＭ４ＳＦ１濃縮ドメイン（ＴＭＥＤ）を形成し、この場合、真のテトラスパニンのように、機能的に関連する膜およびサイトゾル分子を補充する分子促進剤として役立ち（Ｓｈｉｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６９：３２７２〜３２７７、２００９；Ｚｕｋａｕｓｋａｓら、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．１４：３４５〜３５４、２０１１）、がん細胞増殖（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４６：３９１７〜３９２３、１９８６）、運動性（Ｃｈａｎｇら、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．１１６：２４３〜２５２、２００５）、および転移（Ｒｉｃｈｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９１６ｓ〜５９２０ｓ、１９９５）において重要な役割を果たす。ヒトＴＭ４ＳＦ１タンパク質のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１）は、以下に配列番号１３４として示される。
ＭＣＹＧＫＣＡＲＣＩ  ＧＨＳＬＶＧＬＡＬＬ  ＣＩＡＡＮＩＬＬＹＦ  ＰＮＧＥＴＫＹＡＳＥ  ＮＨＬＳＲＦＶＷＦＦ  ＳＧＩＶＧＧＧＬＬＭ  ＬＬＰＡＦＶＦＩＧＬ  ＥＱＤＤＣＣＧＣＣＧ  ＨＥＮＣＧＫＲＣＡＭ  ＬＳＳＶＬＡＡＬＩＧ  ＩＡＧＳＧＹＣＶＩＶ  ＡＡＬＧＬＡＥＧＰＬＣＬＤＳＬＧＱＷＮＹＴＦＡＳＴＥＧＱＹＬＬＤＴＳＴＷＳＥＣＴＥＰＫＨＩＶＥＷＮＶＳＬＦＳＩＬＬＡＬＧ  ＧＩＥＦＩＬＣＬＩＱＶＩＮＧＶＬＧＧＩＣ  ＧＦＣＣＳＨＱＱＱＹ  ＤＣ（配列番号９１）
[0134]本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ドメインに特異的である。ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ドメインのアミノ酸配列は、ＥＧＰＬＣＬＤＳＬＧＱＷＮＹＴＦＡＳＴＥＧＱＹＬＬＤＴＳＴＷＳＥＣＴＥＰＫＨＩＶＥＷＮＶＳＬＦＳ（配列番号９２）である。
【０１１２】
[0135]以下の表２に記載されるように、ＴＭ４ＳＦ１に特異的な新規の抗体が本開示に含まれる。表２に記載される抗体は、モノクローナルマウス抗体ＡＧＸ−Ａ０３、ＡＧＸ−Ａ０４、ＡＧＸ−Ａ０５、ＡＧＸ−Ａ０７、ＡＧＸ−Ａ０８、ＡＧＸ−Ａ０９、およびＡＧＸ−Ａ１１であり、これらのそれぞれは実施例に記載されるスクリーニングで同定されたものであり、ＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２領域と結合する。さらに以下の表２に、ヒト化抗体ｈＡＧＸ−Ａ０７およびｈＡＧＸ−Ａ０１が提供される。
【０１１３】
[0136]一部の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号７３または７４に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を含むＩｇＧ重鎖定常領域を含む。
【０１１４】
[0137]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８９に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【０１１５】
[0138]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１１６】
[0139]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９０または９２に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１１７】
[0140]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１２または１１４に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１２または１１４に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１１８】
[0141]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１１９】
[0142]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９７、９９、１０１、１０３、または１０５に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９７、９９、１０１、１０３または１０５に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９７、９９、または１０１に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９７、９９、または１０１に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１２０】
[0143]別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１２２に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【０１２１】
[0144]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、または７８に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、または７９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、または８０に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１２２】
[0145]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、または８４に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、または８５に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、または８６に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１２３】
[0146]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９４または配列番号１１５に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９５、配列番号１１６、または配列番号１１７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９６、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２１に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１２４】
[0147]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１０９または配列番号１２８に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１０、配列番号１１１、または配列番号１２９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１０、または配列番号１２９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１２５】
[0148]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０３のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号６、７、および８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号１２、１３、および１４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号６、７、および８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号１２、１３、および１４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０３のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０３の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号３および９に記載される。
【０１２６】
[0149]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０４のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１８、１９、および２０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号２４、２５、および２６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号１８、１９、および２０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０４のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０４の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１５および２１に記載される。
【０１２７】
[0150]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０５のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号３０、３１、および３２（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号３６、３７、および３８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号３０、３１、および３２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号３６、３７、および３８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０５のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０５の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号２７および３３に記載される。
【０１２８】
[0151]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０７のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号４２、４３、および４４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号４８、４９、および５０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号４２、４３、および４４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号４８、４９、および５０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０７のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０７の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号３９および４５に記載される。
【０１２９】
[0152]一実施形態において、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７（ｈＡＧＸ−Ａ０７）抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７（ｈｍＡＧＸ−Ａ０７）抗体またはその抗原結合フラグメントである。表２に示されるように、配列番号９０に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｈ２とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、１つまたは複数の置換は、配列番号９０のアミノ酸位置１、４４、および８０にある、抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｅ１Ｑ（重鎖、配列番号９０の１位におけるグルタミン酸からグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ４４Ｇ（重鎖、配列番号９０の４４位におけるアスパラギン酸からグリシンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆ８０Ｙ（重鎖、配列番号９０の８０位におけるフェニルアラニンからチロシンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号９２のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表２に示されるように、配列番号９２に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｈ２ｖ１とも称される。一部の実施形態において、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表２に示されるように、配列番号９７に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで１つまたは複数の置換は、配列番号９７のアミノ酸位置３、２６、６２、および９０にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｉ３Ｖ（軽鎖、配列番号９７の３位におけるイソロイシン（ｉｓｏｌｕｅｃｉｎｅ）からバリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ２６Ｑ（軽鎖、配列番号９７の２６位におけるアスパラギンからグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ２６Ｓ（軽鎖、配列番号９７の２６位におけるアスパラギンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｇ６２Ｓ（軽鎖、配列番号９７の６２位におけるグリシンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｗ９０Ｙ（軽鎖、配列番号９７の９０位におけるトリプトファンからチロシンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、および配列番号１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表２に示されるように、配列番号９９に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ１とも称され、配列番号１０１に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ２とも称され、配列番号１０３に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ３とも称され、配列番号１０５に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ４とも称される。ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９１で提供される。ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９３で提供される。ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９８（ＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５）で提供される。ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号１００（ＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ１）、配列番号１０２（ＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ２）、配列番号１０４（ＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ３）、および配列番号１０６（ＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ４）で提供される。
【０１３０】
[0153]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。
【０１３１】
[0154]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４に記載の重鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号９４に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９５に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号９５に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９６に記載の重鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号９６に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【０１３２】
[0155]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０７、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０７、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０８、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０８、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。
【０１３３】
[0156]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７または１０８に記載の軽鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１０７または１０８に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０９に記載の軽鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１０９に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１０または１１１に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１０または１１１に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１０に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１０に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。
【０１３４】
[0157]一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７は、配列番号１３２中に以下のアミノ酸置換：Ｑ１Ｅ、Ｄ４４Ｇ、Ｆ８０Ｙを含む重鎖可変領域（本明細書ではＡＧＸ−Ａ０７Ｈ２とも称される）、および配列番号１３３中に以下のアミノ酸置換：Ｉ３Ｖ、Ｎ２６Ｑ、Ｇ６２Ｓを含む軽鎖可変領域（本明細書ではＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５とも称される）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７は、配列番号１３２中に以下のアミノ酸置換：Ｑ１Ｅ、Ｄ４４Ｇ、Ｆ８０Ｙを含む重鎖可変領域、および配列番号１３３中に以下のアミノ酸置換：Ｉ３Ｖ、Ｎ２６Ｑ、Ｇ６２Ｓを含む軽鎖可変領域を含み、この重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号９４）、ＣＤＲ２（配列番号９５）、およびＣＤＲ３（配列番号９６）を含み、この軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１０８）、ＣＤＲ２（配列番号１０９）、およびＣＤＲ３（配列番号１１０）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７は、ＡＧＸ−Ａ０７Ｈ２ｖ１Ｌ５ｖ２であり、配列番号１３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖（本明細書ではＡＧＸ−Ａ０７Ｈ２ｖ１とも称される）、および配列番号１３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖（本明細書ではＡＧＸ−Ａ０７Ｌ５ｖ２とも称される）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０７は、配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１３５】
[0158]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０８のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号５４、５５、および５６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号６０、６１、および６２（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号５４、５５、および５６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号６０、６１、および６２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０８のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０８の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号５１および５７に記載される。
【０１３６】
[0159]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ０９のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号６６、６７、および６８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号７２、７３、および７４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号６６、６７、および６８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号７２、７３、および７４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ０９のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ０９の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号６３および６９に記載される。
【０１３７】
[0160]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ−Ａ１１のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号７８、７９、および８０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号８４、８５、および８６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号７８、７９、および８０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号８４、８５、および８６２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ−Ａ１１のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ−Ａ１１の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号７５および８１に記載される。
【０１３８】
[0161]ヒト化抗体ＡＧＸ−Ａ０１（ｈＡＧＸ−Ａ０１）のアミノ酸配列は、表２に記載される。表２に示されるように、配列番号１１２に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０１Ｈ１とも称される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１１５、１１６、および１１８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号１２４、１２８、および１２９（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。さらに、例示的なヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１１２および１２２に記載される。ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１の重鎖および軽鎖の例示的なコード配列は、それぞれ配列番号１１３および１２３に記載される。
【０１３９】
[0162]一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１（ｈｍＡＧＸ−Ａ０１）抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１１２のアミノ酸位置６３および１０６にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｇ６３Ｓ（重鎖、配列番号１１２の６３位におけるグリシンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ１０６Ｅ（重鎖、配列番号１１２の１０６位におけるアスパラギン酸からグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ１０６Ｓ（重鎖、配列番号１１２の１０６位におけるアスパラギン酸からセリンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号１１４のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表２に示されるように、配列番号１１４に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０１Ｈ１ｖ１とも称される。
【０１４０】
[0163]一部の実施形態において、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表２に示されるように、配列番号１２２に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ−Ａ０１Ｌ１０とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１２２のアミノ酸位置１、３３、４２、５１、８６、および９０から選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にある。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１２２のアミノ酸位置１、３３、４２、５１、および８６から選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ａ１Ｅ（軽鎖、配列番号１２２の１位におけるアラニンからグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ３３Ｓ（軽鎖、配列番号１２２の３３位におけるアスパラギンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｍ４２Ｑ（軽鎖、配列番号１２２の４２位におけるメチオニンからグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｖ５１Ｌ（軽鎖、配列番号１２２の５１位におけるバリンからロイシンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ８６Ｅ（軽鎖、配列番号１２２の８６位におけるアスパラギン酸からグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｉ９０Ｖ（軽鎖、配列番号１２２の９０位におけるイソロイシンからバリンへの置換）を含む。
【０１４１】
[0164]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６（ＣＤＲ２）；および１１８（ＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６（ＣＤＲ２）；および１１８（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６または１１７（ＣＤＲ２）；および１１８、１１９、１２０、または１２１（ＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６または１１７（ＣＤＲ２）；および１１８、１１９、１２０、または１２１（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。
【０１４２】
[0165]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５に記載の重鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１１５に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１６に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１１６に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１１７に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１８、１１９、１２０および１２１から選択される配列に記載の重鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１８、１１９、１２０、および１２１から選択される配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【０１４３】
[0166]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１２４（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４、１２５、１２６、もしくは１２７（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１２４、１２５、１２６、もしくは１２７（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。
【０１４４】
[0167]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２５、１２６、１２７、もしくは１２８に記載の軽鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１２５、１２６、１２７、もしくは１２８に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２９に記載の軽鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１２９に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ−Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３０に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１３０に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。
【０１４５】
[0168]一実施形態において、本開示は、配列番号３に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１５に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号２１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号２７に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号３３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号３９に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号４５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号５１に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号５７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号６３に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号６９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号７５に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号８１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【０１４６】
[0169]一実施形態において、本発明の開示は、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１１２、または配列番号１１４から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の重鎖可変ドメイン配列を有し；配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、配列番号８１、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０５、または配列番号１２２から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の軽鎖可変ドメイン配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本発明の開示は、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１１２、または配列番号１１４から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の重鎖可変ドメイン配列を有し；配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、配列番号８１、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、または配列番号１２２から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の軽鎖可変ドメイン配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
【０１４７】
[0170]一実施形態において、本開示は、ＩｇＧであり、それぞれ重鎖可変ドメインならびに重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む２つの重鎖と、それぞれ軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む２つの軽鎖とを包含する４つのポリペプチド鎖を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を含む。特定の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４である。特定の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。他の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ２である。重鎖および軽鎖可変ドメイン配列は、表２に記載のＣＤＲを含有していてもよい。
【０１４８】
[0171]相補性決定領域（ＣＤＲ）は、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方において高度可変領域として公知である。それより高度に保存された可変ドメインの部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。所与の抗体のＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔら、上記；Ｌｅｆｒａｎｃら、上記および／またはＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、上記により説明されたシステムを使用して同定することができる。また、Ｋａｂａｔら（１９９１、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１〜３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｖａ．）に記載される番号付けシステムも当業者によく知られている。これに関して、Ｋａｂａｔらは、あらゆる抗体に適用可能なＣＤＲの同定を含む可変ドメイン配列の番号付けシステムを定義した。
【０１４９】
[0172]１つまたは複数のＣＤＲを、共有結合または非共有結合のいずれかで分子に取り込むことで、それを抗原結合タンパク質にすることもできる。
[0173]抗原結合タンパク質は、ＣＤＲをより大きいポリペプチド鎖の一部として取り込んでいてもよいし、共有結合でＣＤＲが別のポリペプチド鎖に連結されていてもよいし、または非共有結合でＣＤＲを取り込んでいてもよい。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が目的の特定の抗原に特異的に結合することを許容する。特にＣＤＲ３は、抗体または抗体フラグメントの抗原結合において重要な役割を果たすことがわかっている。
【０１５０】
[0174]一実施形態において、本開示は、配列番号８、配列番号２０、配列番号３２、配列番号４４、配列番号５６、配列番号６８、または配列番号８０のいずれか１つに記載のＣＤＲ３ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、または配列番号７５のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１４、配列番号２６、配列番号３８、配列番号５０、配列番号６２、配列番号７４、または配列番号８６のいずれか１つに記載のＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ３ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持するか、または親と比較して改善された機能的特徴、例えば結合親和性を有する。
【０１５１】
[0175]一実施形態において、本開示は、配列番号７、配列番号１９、配列番号３１、配列番号４３、配列番号５５、配列番号６７、または配列番号７９のいずれか１つに記載のＣＤＲ２ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、または配列番号７５のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１３、配列番号２５、配列番号３７、配列番号４９、配列番号６１、配列番号７３、または配列番号８５のいずれか１つに記載のＣＤＲ２ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ２ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持するか、または親と比較して改善された機能的特徴、例えば結合親和性を有する。
【０１５２】
[0176]一実施形態において、本開示は、配列番号６、配列番号１８、配列番号３０、配列番号４２、配列番号５４、配列番号６６、または配列番号７８のいずれか１つに記載のＣＤＲ１ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号４５、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１２、配列番号２４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号６０、配列番号７２、または配列番号８４のいずれか１つに記載のＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ１ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持する。
【０１５３】
[0177]また表２に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびフラグメントは、ヒト化されていてもよい。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト源からそれに導入される１つまたは複数のアミノ酸残基を有していてもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と称されることが多く、これは、典型的には「インポート」可変ドメインから得られる。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２〜２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４〜３６の方法に従って、高度可変領域配列をヒト抗体の対応する配列で置換することによって実行することができる。
【０１５４】
[0178]一部の場合において、ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティングによって構築され、この場合、親非ヒト抗体（例えば、げっ歯類）の６つのＣＤＲのアミノ酸配列が、ヒト抗体フレームワーク上にグラフト化される。例えば、Ｐａｄｌａｎらは、ＣＤＲ中の残基の約３分の１のみが実際に抗原と接触することを決定し、これらを「特異性決定残基」、またはＳＤＲと名付けた（Ｐａｄｌａｎら、１９９５、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．９：１３３〜３９）。ＳＤＲグラフティングの技術において、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワーク上にグラフト化される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５〜３４を参照）。
【０１５５】
[0179]ヒト化抗体の作製において使用される、ヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖の両方の選択は、抗原性を低減させるのに重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」方法に従って、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。げっ歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして選択され得る（Ｓｉｍｓら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６〜３０８；およびＣｈｏｔｈｉａら、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜１７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用される可能性がある（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：４２８５〜８９；およびＰｒｅｓｔａら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３〜３２）。一部の場合において、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラスであるＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）およびＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列由来である。別の方法において、ヒト生殖細胞系遺伝子は、フレームワーク領域の源として使用される。
【０１５６】
[0180]さらに、一般的に、抗体が、その抗原に対する親和性や他の好都合な生物学的特性を保持しながらヒト化されることが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化された配列の３次元モデルを使用した親配列および様々な概念のヒト化生成物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性がある３次元立体配座構造を例示および表示するコンピュータープログラムが利用可能である。そのようなものとしては、例えば、ＷＡＭ（ＷｈｉｔｅｌｅｇｇおよびＲｅｅｓ、２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：８１９〜２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（ＳａｌｉおよびＢｌｕｎｄｅｌｌ、１９９３、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９〜８１５）、およびＳｗｉｓｓ  ＰＤＢ  Ｖｉｅｗｅｒ（ＧｕｅｘおよびＰｅｉｔｓｃｈ、１９９７、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  １８：２７１４〜２３）が挙げられる。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の可能性がある役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を許容する。この方法では、ＦＲ残基は、所望の抗体の特徴、例えば標的抗原への親和性の増加が達成されるように、レシピエントおよびインポート配列から選択し組み合わせることができる。一般的に、高度可変領域残基は、直接的に、ほぼ実質的に、抗原結合への影響に関与する。
【０１５７】
[0181]ヒト化に使用可能なヒトフレームワーク領域としては、これらに限定されないが、「ベストフィット」方法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１（１９９３）２２９６を参照）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９（１９９２）４２８５；およびＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１（１９９３）２６２３を参照）；ヒト成熟（体細胞突然変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ、およびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３（２００８）１６１９〜１６３３を参照）；およびＦＲライブラリーをスクリーニングすることによって得られたフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１９９７）１０６７８〜１０６８４およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（１９９６）２２６１１〜２２６１８を参照）が挙げられる。
【０１５８】
[0182]ヒト化抗体およびその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ、およびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３（２００８）１６１９〜１６３３で総論され、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２（１９８８）３２３〜３２９；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６（１９８９）１００２９〜１００３３；米国特許第５，８２１，３３７号、７，５２７，７９１号、６，９８２，３２１号、および７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６（２００５）２５〜３４（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを説明する）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（１９９１）４８９〜４９８（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を説明する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６（２００５）４３〜６０（「ＦＲシャッフリング」を説明する）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６（２００５）６１〜６８およびＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３（２０００）２５２〜２６０（ＦＲシャッフリングへの「ガイド選択」アプローチを説明する）で説明される。
【０１５９】
[0183]一部の実施形態において、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、裸であるか、コンジュゲートしていないか、および／または改変されていない。一部の実施形態において、結合タンパク質はさらに、薬剤を包含する。一部の実施形態において、薬剤は、治療剤または診断剤である。一部の実施形態において、治療剤は、生物学的に活性な成分である。一部の実施形態において、生物学的に活性な成分は、細胞傷害性物質、化学療法剤、タンパク質、ペプチド、抗体、増殖阻害剤、および抗ホルモン剤を含む。一部の実施形態において、細胞傷害性物質は、リボソーム不活性化タンパク質、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、チューブリン阻害剤、アルキル化剤、抗生物質、抗新生物剤、抗増殖剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、ホルモンのアゴニストまたはアンタゴニスト、イムノモジュレーター、ＤＮＡ副溝結合剤、および放射活性物質を含む。特定の実施形態において、リボソーム不活性化タンパク質は、サポリンである。一部の実施形態において、診断剤は、標識である。一部の実施形態において、標識は、蛍光標識、色素産生標識、または放射標識である。一部の実施形態において、薬剤は、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に直接的にコンジュゲートされる。他の実施形態において、薬剤は、ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に、間接的に、任意選択でリンカーによって、コンジュゲートされる。
【０１６０】
[0184]一部の実施形態において、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、コンジュゲート（すなわち、コンジュゲートした結合タンパク質）であり、さらに、１つまたは複数の薬剤（例えば、１、２、３、または４つまたはそれより多くの薬剤）、例えばＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質と相加的または相乗的に作用して、例えば病的な血管新生に関連する障害、例えばがんの処置において腫瘍細胞（ＴＣ）および／または腫瘍血管系内皮細胞（ＥＣ）を致死させるかまたは阻害する治療剤を含む。例えば、治療剤は、生物学的に活性な成分、例えば細胞傷害性物質、化学療法剤、タンパク質、ペプチド、抗体、増殖阻害剤、および／または抗ホルモン剤であり得る。
【０１６１】
[0185]本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に直接的または間接的のいずれかでコンジュゲートできるチューブリン阻害剤の例としては、これらに限定されないが、重合阻害剤（例えば、チューブリンのビンカドメインに結合することができる、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルニン、クリプトフィシン５２、ハリコンドリン（ｈａｌｌｃｈｏｎｄｒｉｎ）、ドラスタチン、ヘミアステリン；チューブリンのコルヒチン（ｃｈｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）ドメインに結合することができる、コルチン（ｃｏｌｃｈｉｎｅ）、コンブレタスタチン、２−メトキシ−エストラジオール、Ｅ７０１０；解重合阻害剤、例えば、タキサン部位に結合することができる、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、ディスコデルモリド）が挙げられる。
【０１６２】
[0186]例示的な化学療法剤としては、これらに限定されないが、メトトレキセート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤；核酸分解酵素、抗生物質、および毒素などの酵素およびそのフラグメント、例えば細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素、ならびにそれらのフラグメントおよび／またはバリアントなどが挙げられる。使用することができる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。
【０１６３】
[0187]加えて、様々な放射性核種は、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質へのコンジュゲーションのために使用することができる。その例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。代替として、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、１種のまたはより小さい分子毒素、例えばカリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン（ａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、トリコテセン、およびＣＣ１０６５にコンジュゲートしていてもよいし、毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体も、本明細書において予期される。本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質にコンジュゲートできる他の治療剤としては、様々な例において、ＢＣＮＵ、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｉｃｉｎ）、ビンクリスチンおよび５−フルオロウラシルなどが挙げられる。
【０１６４】
[0188]コンジュゲーションに関する診断剤は、一部の実施形態において、標識、例えば蛍光標識、色素産生標識、または放射標識である。したがって、標識は、検出目的で使用でき、蛍光化合物、酵素、補欠分子団、発光物質、生物発光物質、または放射活性物質であり得る。放射標識は、例えば、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）映像法（磁気共鳴映像法、ＭＲＩとしても公知）のためのスピン標識、例えばここでもヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄を含んでいてもよい。
【０１６５】
[0189]１つまたは複数の薬剤（例えば、治療剤および／または診断剤）は、薬剤がタンパク質に隣接してコンジュゲートされるように、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に直接的にコンジュゲートさせてもよい（例えば、直接的な共有結合または非共有結合による相互作用の方法によって）。薬剤は、例えば直接的なペプチド結合によって、本開示の結合タンパク質に直接的にコンジュゲートさせてもよい。他の例において、直接的なコンジュゲーションは、直接的な非共有結合による相互作用、例えば本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質とＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に特異的に結合する薬剤（例えば、抗体薬剤）との相互作用の方法によってなされる。
【０１６６】
[0190]１つまたは複数の薬剤（例えば、治療剤および／または診断剤）は、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質に間接的にコンジュゲートさせてもよい（例えば、直接的な共有結合または非共有結合による相互作用でリンカーを用いることによって）。リンカーは、化学的な連結剤、例えばホモ二官能性およびヘテロ二官能性架橋剤であってもよく、これらは、多くの商業的な供給源より入手可能である。架橋に利用可能な領域は、本開示の結合タンパク質（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体）上に見出すことができる。リンカーは、フレキシブルなアーム、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の炭素原子を含んでいてもよい。例示的なリンカーとしては、ＢＳ３（［ビス（スルホスクシンイミジル）スベリン酸塩］；ＢＳ３は、接近可能な第一アミンを標的化するホモ二官能性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである）、ＮＨＳ／ＥＤＣ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよびＮ−エチル−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ）；ＮＨＳ／ＥＤＣは、第一アミン基とカルボキシル基とのコンジュゲーションを可能にする）、スルホ−ＥＭＣＳ（［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロン酸］ヒドラジド；スルホ−ＥＭＣＳは、スルフヒドリルおよびアミノ基に反応性を有するヘテロ二官能性反応性基（マレイミドおよびＮＨＳ−エステル）である）、ヒドラジド（ほとんどのタンパク質は露出した炭水化物を含有し、ヒドラジドは、カルボキシル基を第一アミンに連結するのに有用な試薬である）、およびＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート；ＳＡＴＡは、アミンに反応性を有し、保護されたスルフヒドリル基を付加する）が挙げられる。共有結合を形成するために、化学的に反応性の基は、様々な活性カルボキシル基（例えば、エステル）であり、その場合、ヒドロキシル部分は、ペプチドを改変するのに必要なレベルで生理学的に許容される。特定の薬剤としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ−ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）、マレイミド−ベンゾイル−スクシンイミド（ＭＢＳ）、ガンマ−マレイミド−ブチリルオキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）、マレイミドヘキサン酸（ＭＨＡ）、およびマレイミドウンデカン酸（ＭＵＡ）が挙げられる。第一アミンは、ＮＨＳエステルの主要な標的である。タンパク質のＮ末端に存在する接近可能なａ−アミノ基およびリジンのε−アミンは、ＮＨＳエステルと反応する。アミド結合は、ＮＨＳエステルのコンジュゲーション反応物が第一アミンと反応してＮ−ヒドロキシスクシンイミドを放出すると形成される。これらのスクシンイミドを含有する反応性基は、本明細書ではスクシンイミジル基と称される。本開示の特定の実施形態において、タンパク質上の官能基は、チオール基と予想され、化学的に反応性の基は、マレイミドを含有する基、例えばガンマ−マレイミド−ブチリルアミド（ＧＭＢＡまたはＭＰＡ）と予想される。このようなマレイミドを含有する基は、本明細書では、マレイミド（ｍａｌｅｉｄｏ）基と称される。マレイミド基は、反応混合物のｐＨが６．５〜���．４である場合、ペプチド上のスルフヒドリル基にとって最も選択的である。ｐＨ７．０において、マレイミド基のスルフヒドリル（例えば、血清アルブミンまたはＩｇＧなどのタンパク質上のチオール基）との反応速度は、アミンより１０００倍速い。したがって、マレイミド基とスルフヒドリルとの間の安定なチオエーテル結合を形成することができる。
【０１６７】
[0191]他の実施形態において、リンカーは、少なくとも１つのアミノ酸を含む（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０、２５、４０、または５０アミノ酸のペプチド）。特定の実施形態において、リンカーは、単一のアミノ酸（例えば、あらゆる天然に存在するアミノ酸、例えばＣｙｓ）である。他の実施形態において、グリシンリッチなペプチド、例えばペプチドが使用できる。一部の場合において、リンカーは、単一のアミノ酸（例えば、あらゆるアミノ酸、例えばＧｌｙまたはＣｙｓ）であってもよい。好適なリンカーの例は、コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、およびＡｓｐであるか、またはＧｌｙ−Ｌｙｓなどのジペプチドである。リンカーがコハク酸である場合、その１つのカルボキシル基は、アミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成することができ、その他のカルボキシル基は、例えば、ペプチドまたは置換基のアミノ基とアミド結合を形成することができる。リンカーがＬｙｓ、Ｇｌｕ、またはＡｓｐである場合、それらのカルボキシル基は、アミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成でき、それらのアミノ基は、例えば、置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成できる。Ｌｙｓがリンカーとして使用される場合、さらなるリンカーが、Ｌｙｓのε−アミノ基と置換基との間に挿入される場合もある。１つの特定の実施形態において、さらなるリンカーは、コハク酸であり、これは例えば、Ｌｙｓのε−アミノ基および置換基に存在するアミノ基とアミド結合を形成する。一実施形態において、さらなるリンカーは、ＧｌｕまたはＡｓｐであり（例えばこれは、Ｌｙｓのε−アミノ基とアミド結合を形成し、置換基に存在するカルボキシル基と別のアミド結合を形成する）、すなわち置換基は、ＮＥアシル化リジン残基である。
【０１６８】
[0192]一実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１×１０−６Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。
[0193]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する。
【０１６９】
[0194]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【０１７０】
[0195]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１×１０−３Ｍから約１×１０−４Ｍ、約１ｘ１０−４Ｍから約１ｘ１０−５Ｍ、約１ｘ１０−５Ｍから約１ｘ１０−６Ｍ、約１ｘ１０−６から約１ｘ１０−７Ｍ、約１ｘ１０−７から約１ｘ１０−８Ｍ、約１ｘ１０−８Ｍから約１ｘ１０−９Ｍ、約１ｘ１０−９Ｍから約１ｘ１０−１０Ｍ、約１ｘ１０−１０Ｍから約１ｘ１０−１１Ｍ、約１ｘ１０−１１Ｍから約１ｘ１０−１２Ｍ、約２ｘ１０−３Ｍから約２ｘ１０−４Ｍ、約２ｘ１０−４Ｍから約２ｘ１０−５Ｍ、約２ｘ１０−５Ｍから約２ｘ１０−６Ｍ、約２ｘ１０−６から約２ｘ１０−７Ｍ、約２ｘ１０−７から約２ｘ１０−８Ｍ、約２ｘ１０−８Ｍから約２ｘ１０−９Ｍ、約２ｘ１０−９Ｍから約２ｘ１０−１０Ｍ、約２ｘ１０−１０Ｍから約２ｘ１０−１１Ｍ、約２ｘ１０−１１Ｍから約２ｘ１０−１２Ｍ、約３ｘ１０−３Ｍから約３ｘ１０−４Ｍ、約３ｘ１０−４Ｍから約３ｘ１０−５Ｍ、約３ｘ１０−５Ｍから約３ｘ１０−６Ｍ、約３ｘ１０−６から約３ｘ１０−７Ｍ、約３ｘ１０−７から約３ｘ１０−８Ｍ、約３ｘ１０−８Ｍから約３ｘ１０−９Ｍ、約３ｘ１０−９Ｍから約３ｘ１０−１０Ｍ、約３ｘ１０−１０Ｍから約３ｘ１０−１１Ｍ、約３ｘ１０−１１Ｍから約３ｘ１０−１２Ｍ、約４ｘ１０−３Ｍから約４ｘ１０−４Ｍ、約４ｘ１０−４Ｍから約４ｘ１０−５Ｍ、約４ｘ１０−５Ｍから約４ｘ１０−６Ｍ、約４ｘ１０−６から約４ｘ１０−７Ｍ、約４ｘ１０−７から約４ｘ１０−８Ｍ、約４ｘ１０−８Ｍから約４ｘ１０−９Ｍ、約４ｘ１０−９Ｍから約４ｘ１０−１０Ｍ、約４ｘ１０−１０Ｍから約４ｘ１０−１１Ｍ、約４ｘ１０−１１Ｍから約４ｘ１０−１２Ｍ、約５ｘ１０−３Ｍから約５ｘ１０−４Ｍ、約５ｘ１０−４Ｍから約５ｘ１０−５Ｍ、約５ｘ１０−５Ｍから約５ｘ１０−６Ｍ、約５ｘ１０−６から約５ｘ１０−７Ｍ、約５ｘ１０−７から約５ｘ１０−８Ｍ、約５ｘ１０−８Ｍから約５ｘ１０−９Ｍ、約５ｘ１０−９Ｍから約５ｘ１０−１０Ｍ、約５ｘ１０−１０Ｍから約５ｘ１０−１１Ｍ、約５ｘ１０−１１Ｍから約５ｘ１０−１２Ｍ、約５ｘ１０−７Ｍから約５ｘ１０−１１Ｍ、約５×１０−７Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約５×１０−１０Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約５×１０−１１Ｍまたは約１×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、ＫＤは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定される。
【０１７１】
[0196]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【０１７２】
[0197]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−６Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現するようにトランスフェクトされている。さらなる実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、１０６コピーの１８Ｓ  ｒＲＮＡ当たり約６００のｍＲＮＡコピーで、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現する。
【０１７３】
[0198]抗体または抗体フラグメントのＫＤを決定する方法は、当技術分野において公知である。例えば、表面プラズモン共鳴は、抗原に対する抗体のＫＤを決定するのに使用することができる（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を、約１０反応単位（ＲＵ）での固定化した抗原またはＦｃ受容体ＣＭ５チップと共に、２５℃で使用して）。特定の実施形態において、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリーは、ＫＤを決定するのに使用され、ＴＭ４ＳＦ１を発現する細胞、例えばＨＥＫ２９３細胞またはＨＵＶＥＣ細胞は、抗体またはフラグメントに結合させて、標準的な方法に従ってＫＤを測定するのに使用される。フローサイトメトリーを使用する抗体の親和性決定は、例えば、Ｇｅｕｉｊｅｎら（２００５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．３０２（１〜２）：６８〜７７に記載される。特定の実施形態において、ＦＡＣＳは、抗体の親和性を決定するのに使用される。
【０１７４】
[0199]一実施形態において、本開示は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、表２に記載のアミノ酸配列ＣＤＲに対して、少なくとも９５％同一の（または少なくとも９６％同一の、または少なくとも９７％同一の、または少なくとも９８％同一の、または少なくとも９９％同一の）ＣＤＲのアミノ酸配列を含むように、本明細書に記載される保存的アミノ酸置換を含むＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換される置換である。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないものである。２つまたはそれより多くのアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度は、置換の保存的性質のために補正されるように上方調整される場合がある。この調整を行うための手段は当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７〜３３１を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸のグループの例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；（３）アミドを含有する側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄を含有する側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。
【０１７５】
[0200]本開示はさらに、一態様において、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とし、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を含み、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。
【０１７６】
[0201]本開示の別の態様において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０−８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−６Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０−８Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、１ｘ１０−３Ｍから約１ｘ１０−４Ｍ、約１ｘ１０−４Ｍから約１ｘ１０−５Ｍ、約１ｘ１０−５Ｍから約１ｘ１０−６Ｍ、約１ｘ１０−６から約１ｘ１０−７Ｍ、約１ｘ１０−７から約１ｘ１０−８Ｍ、約１ｘ１０−８Ｍから約１ｘ１０−９Ｍ、約１ｘ１０−９Ｍから約１ｘ１０−１０Ｍ、約１ｘ１０−１０Ｍから約１ｘ１０−１１Ｍ、約１ｘ１０−１１Ｍから約１ｘ１０−１２Ｍ、約２ｘ１０−３Ｍから約２ｘ１０−４Ｍ、約２ｘ１０−４Ｍから約２ｘ１０−５Ｍ、約２ｘ１０−５Ｍから約２ｘ１０−６Ｍ、約２ｘ１０−６から約２ｘ１０−７Ｍ、約２ｘ１０−７から約２ｘ１０−８Ｍ、約２ｘ１０−８Ｍから約２ｘ１０−９Ｍ、約２ｘ１０−９Ｍから約２ｘ１０−１０Ｍ、約２ｘ１０−１０Ｍから約２ｘ１０−１１Ｍ、約２ｘ１０−１１Ｍから約２ｘ１０−１２Ｍ、約３ｘ１０−３Ｍから約３ｘ１０−４Ｍ、約３ｘ１０−４Ｍから約３ｘ１０−５Ｍ、約３ｘ１０−５Ｍから約３ｘ１０−６Ｍ、約３ｘ１０−６から約３ｘ１０−７Ｍ、約３ｘ１０−７から約３ｘ１０−８Ｍ、約３ｘ１０−８Ｍから約３ｘ１０−９Ｍ、約３ｘ１０−９Ｍから約３ｘ１０−１０Ｍ、約３ｘ１０−１０Ｍから約３ｘ１０−１１Ｍ、約３ｘ１０−１１Ｍから約３ｘ１０−１２Ｍ、約４ｘ１０−３Ｍから約４ｘ１０−４Ｍ、約４ｘ１０−４Ｍから約４ｘ１０−５Ｍ、約４ｘ１０−５Ｍから約４ｘ１０−６Ｍ、約４ｘ１０−６から約４ｘ１０−７Ｍ、約４ｘ１０−７から約４ｘ１０−８Ｍ、約４ｘ１０−８Ｍから約４ｘ１０−９Ｍ、約４ｘ１０−９Ｍから約４ｘ１０−１０Ｍ、約４ｘ１０−１０Ｍから約４ｘ１０−１１Ｍ、約４ｘ１０−１１Ｍから約４ｘ１０−１２Ｍ、約５ｘ１０−３Ｍから約５ｘ１０−４Ｍ、約５ｘ１０−４Ｍから約５ｘ１０−５Ｍ、約５ｘ１０−５Ｍから約５ｘ１０−６Ｍ、約５ｘ１０−６から約５ｘ１０−７Ｍ、約５ｘ１０−７から約５ｘ１０−８Ｍ、約５ｘ１０−８Ｍから約５ｘ１０−９Ｍ、約５ｘ１０−９Ｍから約５ｘ１０−１０Ｍ、約５ｘ１０−１０Ｍから約５ｘ１０−１１Ｍ、約５ｘ１０−１１Ｍから約５ｘ１０−１２Ｍ、約５ｘ１０−７Ｍから約５ｘ１０−１１Ｍ、約５×１０−７Ｍ、約１×１０−７Ｍ、約５×１０−８Ｍ、約１×１０−８Ｍ、約５×１０−９Ｍ、約１×１０−９Ｍ、約５×１０−１０Ｍ、約１×１０−１０Ｍ、約５×１０−１１Ｍまたは約１×１０−１１ＭのＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、ＫＤは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定される。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１を発現するＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０−１０Ｍ以下のＫＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。
【０１７７】
[0202]一実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントのヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でなく、すなわち、抗体の結合は、ＥＣＬ２ループ（配列番号７７）内のＴＭ４ＳＦ１のグリコシル化から独立している。
【０１７８】
[0203]本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、いずれかのアイソタイプ（例えば、これらに限定されないが、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）のいずれかであり得る。特定の実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧアイソタイプである。具体的な実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプ由来である。特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４アイソタイプである。
【０１７９】
[0204]ＩｇＧ２は、天然において、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性が最も低い（Ａｎら、ＭＡｂｓ．２００９年１１月〜１２月；１（６）：５７２〜５７９）。したがって、特定の実施形態において、ＩｇＧ２は、有利に使用される。しかしながら、ＩｇＧ２は、２つの余分なシステイン（４つのヒンジ間ジスルフィド結合を生じる）を有し、それにより抗体間ジスルフィド結合の形成を介した凝集が起こりやすくなる。関連する実施形態において、凝集を減少させるために、ＩｇＧ２システインへの突然変異が作製される。
【０１８０】
[0205]本発明の開示は、ＴＭ４ＳＦ１に結合する抗体フラグメントを提供する。特定の環境において、全抗体よりも抗体フラグメントを使用するほうが利点がある。フラグメントのサイズが小さいほど迅速なクリアランスが可能になり、それにより細胞、組織、または臓器への改善された接近をもたらすことができる。特定の抗体フラグメントの総論に関して、Ｈｕｄｓｏｎら、２００３、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．９：１２９〜３４を参照されたい。
【０１８１】
[0206]抗体フラグメントを産生するための様々な技術が開発されてきた。従来、これらのフラグメントは、無傷の抗体のタンパク質分解消化を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７〜１７；およびＢｒｅｎｎａｎら、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１〜８３を参照）。しかしながら、現在これらのフラグメントは、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ抗体フラグメントは全て、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母細胞で発現および分泌させることができ、したがって大量のこれらのフラグメントの容易な産生が可能である。抗体フラグメントは、上記で論じられた抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替として、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３〜６７）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボでの半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、例えば、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体フラグメントを産生するための他の技術は、熟練した専門家には明らかであると予想される。特定の実施形態において、抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である（例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および５，５８７，４５８号を参照）。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域を欠く無傷の結合部位を有する。したがってそれらは、インビボでの使用中における非特異的な結合の低減に適している可能性がある。ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築して、ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合をもたらすことができる（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、上記を参照）。抗体フラグメントはまた、「線状抗体」であってもよく、例えば、上記で引用された参考文献に記載されたものである。このような線状抗体は、単一特異性または多重特異性、例えば二重特異性であってもよい。
【０１８２】
[0207]特定の実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖからなる群から選択される。
[0208]例えばヒトＴＭ４ＳＦ１に高親和性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（およびフラグメント）は、当技術分野において公知のスクリーニング技術を使用して同定することができる。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜９７により最初に説明されたハイブリドーマ方法を使用して作製してもよいし、または組換えＤＮＡ方法によって作製してもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。
【０１８３】
[0209]ハイブリドーマ方法において、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターは、例えばヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループまたはＴＭ４ＳＦ１を発現する細胞を使用することにより免疫化されて（それによってＥＣＬ２ループが細胞表面上に発現される）、免疫化に使用されるタンパク質に特異的に結合すると予想される抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を惹起する。代替として、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。免疫化後、リンパ球を単離し、次いで好適な融合剤、例えばポリエチレングリコールを使用して骨髄腫細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ５９〜１０３（１９８６））。
【０１８４】
[0210]このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好適な培養培地中にシーディングされ、増殖させ、このような培養培地は、特定の実施形態において、融合していない親の骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含有する。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を喪失している場合、ハイブリドーマに選択的な培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含むと予想され（ＨＡＴ培地）、これは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を予防するものである。
【０１８５】
[0211]例示的な融合パートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定して高レベルの抗体産生を維持し、融合していない親細胞を選択する選択的な培地に感受性を有するものである。例示的な骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えばＳＰ−２および誘導体、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．）より入手可能なＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞、ならびにＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）より入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のものである。またヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株も、ヒトモノクローナル抗体産生に関して記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、１９８４、Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１〜０５；およびＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ５１〜６３（１９８７））。
【０１８６】
[0212]ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地は、抗原に対して向けられたモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロでの結合アッセイ、例えばＲＩＡもしくはＥＬＩＳＡによって決定される。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、１９８０、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０〜３９に記載されるスキャッチャード分析によって決定することができる。
【０１８７】
[0213]所望の特異性、親和性、および／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定されたら、クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させる（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）。この目的のために好適な培養培地としては、例えば、ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍として、例えばマウスへの細胞のｉ．ｐ．注射によって、インビボで増殖させることができる。
【０１８８】
[0214]サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、好適には、培養培地、腹水、または血清から、例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧ−セファロースを使用するもの）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製手順によって分離される。
【０１８９】
[0215]モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離およびシーケンシングされる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの源として役立つ可能性がある。ＤＮＡは、単離されたら、発現ベクターに入れてもよく、次いで発現ベクターは、トランスフェクトされなければ抗体タンパク質を産生しない宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成が達成される。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総論としては、Ｓｋｅｒｒａら、１９９３、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６〜６２およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１〜８８が挙げられる。
【０１９０】
[0216]さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’ＢｒｉｅｎおよびＡｉｔｋｅｎ編、２００２）に記載される技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。原則的に、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質に融合した抗体可変領域（Ｆｖ）の様々なフラグメントを提示するファージを含有するファージライブラリーをスクリーニングすることによって選択される。このようなファージライブラリーは、所望の抗原に対してスクリーニングされる。所望の抗原に結合することが可能なＦｖフラグメントを発現するクローンは抗原に吸着されるため、ライブラリー中の非結合クローンから分離される。次いで結合クローンは抗原から溶出され、さらに、抗原吸着／溶出の追加のサイクルによって濃縮することができる。
【０１９１】
[0217]可変ドメインは、例えばＷｉｎｔｅｒら、１９９４、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３〜５５に記載されるように、ＶＨとＶＬとが短いフレキシブルなペプチドを介して共有結合で連結されている単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントとして、またはそれぞれ定常ドメインに融合しており、非共有結合によって相互作用するＦａｂフラグメントとしてのいずれかで、ファージ上に機能的に提示させることが可能である。
【０１９２】
[0218]ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ＰＣＲによって別々にクローニングし、ファージライブラリー中でランダムに組み換えることができ、これは次いで、Ｗｉｎｔｅｒら、上記に記載されるように、抗原結合クローンに関して検索することができる。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とせずに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。代替として、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９３、ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５〜３４で記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして、免疫化をまったく行わなくても、多様な非自己に対する、さらには自己抗原にも対するヒト抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１〜８８によって記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ−遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。
【０１９３】
[0219]ライブラリーのスクリーニングは、当技術分野において公知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ＴＭ４ＳＦ１（例えば、ＥＣＬ２ループまたは前記ループを発現する細胞の可溶性形態）を使用して、吸着プレートのウェルをコーティングする、吸着プレートに付着させた宿主細胞上で発現させる、またはセルソーティングで使用する、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズを捕獲するためにビオチンにコンジュゲートする、またはディスプレイライブラリーをパニングするための他のあらゆる方法で使用することができる。遅い解離速度論（例えば、優れた結合親和性）を有する抗体の選択は、Ｂａｓｓら、１９９０、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ８：３０９〜１４およびＷＯ９２／０９６９０に記載されるように、長い洗浄および１価ファージディスプレイの使用によって、さらに、Ｍａｒｋｓら、１９９２、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９〜８３に記載されるように抗原の低いコーティング密度の使用によって向上させることができる。
【０１９４】
[0220]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、目的のファージクローンを選択するのに好適な抗原スクリーニング手順を設計し、それに続き、目的のファージクローンからの、ＶＨおよび／もしくはＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、またはＶＨおよびＶＬ配列からの様々なＣＤＲ配列、ならびにＫａｂａｔら、上記に記載される好適な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列を使用して全長抗ＴＭ４ＳＦ１抗体クローンを構築することにより得ることができる。
【０１９５】
[0221]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のスクリーニングは、抗体がＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループに治療的な親和性を有するかどうかを決定するために、当技術分野において公知の、および本明細書に記載される結合アッセイを使用して実行することができる。転移性の細胞活性を阻害したりまたは減少させたりする抗体の能力は、当技術分野における標準的なアッセイや、本明細書に記載される標準的なアッセイを使用して測定することができる。前臨床アッセイは、一般的に以下の３つのタイプのうち１つの転移の動物モデルの使用を必要とする：（ｉ）転移性マウス腫瘍細胞、例えばＢ１６Ｆ１０黒色腫ＴＣを、一般的に、肺転移を生成するために尾静脈注射を介して、肝臓転移を生成するために門脈または脾臓内注射を介して、または骨および他の転移を生成するために心臓の左心室への注射を介してマウスに注射すること；（ｉｉ）転移性腫瘍細胞または無傷の腫瘍フラグメントを、マウスに同所移植することであり、この方法はしばしば、原発性腫瘍増殖に関連する罹患率を抑えるために後の原発性腫瘍の外科的切除を必要とするもの；および（ｉｉｉ）遺伝子操作された自然転移のマウスモデルであり、そのうち最も一般的なものは、ＭＭＴＶ−Ｐｙｔ（マウス乳がんウイルス−ポリオーマウイルス中型Ｔ抗原）マウス乳癌モデルであり、これは、ヒトがん転移の極めてリアルなマウスモデルを提供し、半接合ＭＭＴＶ−ＰｙＭＴ雌の８５％より多くが、８〜１６週齢で肺に転移する触診可能な乳がんを自然に発症するもの。生きた動物を画像化するか、またはＴＭ４ＳＦ１免疫遮断（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｃｋａｄｅ）の程度の関数として致死させた動物の肺における転移性小結節を直接計数するかのいずれかによって肺における転移性の負荷量を定量化して、治療的なレベル、例えば肺転移の少なくとも５０％の低減が達成されることが、治療抗体が例えば本開示の方法で使用できることの指標となると予想される。さらに、異種間反応性アッセイは、当技術分野において公知である。使用できるアッセイの例は、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＫｈａｎｎａおよびＨｕｎｔｅｒ（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２００５年３月；２６（３）：５１３〜２３）ならびにＳａｘｅｎａおよびＣｈｒｉｓｔｏｆｏｒｉ（Ｍｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．２０１３年４月；７（２）：２８３〜９６）に記載される。
【０１９６】
[0222]本開示の一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはフラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる突然変異を含有する。
【０１９７】
[0223]用語「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）」は、本明細書で使用される場合、細胞傷害性顆粒の内容物の放出を特徴とする非食細胞プロセスを介した細胞傷害性エフェクター細胞によって、または細胞死誘導分子の発現によって、抗体被覆標的細胞を致死させることを指す。ＡＤＣＣは、標的結合抗体（ＩｇＧまたはＩｇＡまたはＩｇＥクラスに属する）と、特定のＦｃ受容体（ＦｃＲ）、すなわち免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域に結合するエフェクター細胞表面上に存在する糖タンパク質との相互作用を介して開始される。ＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球および樹状細胞が挙げられる。ＡＤＣＣは、迅速なエフェクターメカニズムであり、その効能は、多数のパラメーター（標的細胞の表面上の抗原の密度および安定性；抗体親和性ならびにＦｃＲ結合親和性）に依存する。ＰＢＭＣベースのＡＤＣＣアッセイおよびナチュラルキラー細胞ベースのＡＤＣＣアッセイは、ＡＤＣＣを検出するのに使用することができる。これらのアッセイにおける読み出しは、終点駆動型（標的細胞溶解）である。
【０１９８】
[0224]「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、補体
の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の要素（Ｃ１ｑ）が、その同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスに属するもの）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３を参照）を実行してもよい。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）および増加または減少したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチドバリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ１９９９／５１６４２；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２０００、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８〜８４を参照）。ＣＤＣ活性をほとんど有さない抗体（またはフラグメント）も使用のために選択され得る。
【０１９９】
[0225]用語「エフェクター機能」は、本明細書で使用される場合、ＩｇＧのＦｃエフェクタードメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域）が寄与する機能を指す。このような機能は、例えば、Ｆｃエフェクタードメインが、食細胞または溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体に結合することによって、またはＦｃエフェクタードメインが補体系の要素に結合することによって達成することができる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；貪食（ＡＤＣＰ）；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化が挙げられる。
【０２００】
[0226]用語「低減する」または「消失させる」は、本明細書で使用される場合、全体で、好ましくは２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれより多くの減少を引き起こす能力を指す。低減または消失は、処置される障害（例えば、がん）の症状、転移の存在もしくはサイズまたは原発性腫瘍のサイズを指す場合もある。
【０２０１】
[0227]用語「低減したＡＤＣＣ／ＣＤＣ機能」は、本明細書で使用される場合、対照（例えば突然変異を含まないＦｃ領域を有する抗体）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも、少なくとも約９０％またはそれより多くの、特異的なエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの低減を指す。
【０２０２】
[0228]したがって、特定の実施形態において、本開示の突然変異した抗体は、本開示の抗体と同じアミノ酸配列を有するがＦｃ領域への少なくとも１つのアミノ酸残基の付加、置換、または欠失を含まない抗体（本明細書では「改変されていない抗体」とも称される）と比較して、エフェクター機能を促進することに関与するＦｃリガンドへの親和性が低減または消失している。
【０２０３】
[0229]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる少なくとも２つの突然変異を含むＦｃ領域を含む。さらなる実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減させるまたは消失させる、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０個またはそれより多くの突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２０４】
[0230]特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＡおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２０５】
[0231]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｇ２３７Ａ突然変異と共に、またはＧ２３７Ａ突然変異なしで、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２０６】
[0232]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２０７】
[0233]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＡｎ  Ｚら、Ｍａｂｓ  ２００９年１１月−Ｅｃ；１（６）：５７２〜９で記載されるように、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合、および低減したＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を提供するＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／デルタＧ２３６（欠失）突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２０８】
[0234]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｎ２９７ｘ突然変異（式中、ｘ＝Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｑ）を含むＦｃ領域を含む。
【０２０９】
[0235]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１０】
[0236]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣａｎｆｉｅｌｄおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ（１９９１）１７３（６）：１４８３〜９１．１０．１０８４で記載されるように、Ｃ１ｑへの低減した結合を提供するＫ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびＰ３３１Ａの１つまたは複数に突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１１】
[0237]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＨｅｚａｒｅｈら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００１年１２月；７５（２４）：１２１６１〜８に記載されるように、ＦｃγＲＩＩＢへの強化された結合および強化されたＡＤＣＣを提供するＶ２６３Ｌ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１２】
[0238]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡまたはＬ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１３】
[0239]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５ＥまたはＰ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１４】
[0240]特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１５】
[0241]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
[0242]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１ＳまたはＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１６】
[0243]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１７】
[0244]特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣｈａｐｐｅｌら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ（１９９１）８８（２０）：９０３６〜４０に記載されるように、低減したＦａｂ−アーム交換および低減した凝集を提供するＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１８】
[0245]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
[0246]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｅ２３３Ｐ／Ｆ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／デルタＧ２３６（欠失）突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２１９】
[0247]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｎ２９７ｘ突然変異（式中、ｘ＝Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｑ）を含むＦｃ領域を含む。
【０２２０】
[0248]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２１】
[0249]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳａｘｅｎａら、Ｆｒｏｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６年１２月１２日；７：５８０に記載されるように、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合および低減したＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター活性を提供するＬ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２２】
[0250]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６デルタ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２３】
[0251]一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、少なくともＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む。Ａｎｇａｌら（Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３年１月；３０（１）：１０５〜８）は、残基２４１におけるセリンの存在（ＥＵ番号付けシステムに従って、ここではＫａｂａｔ番号付けにおける残基２２８に対応する）が、分泌されたヒトＩｇＧ４の所定の割合において、ヒンジ領域における重鎖間ジスルフィド架橋の不均質性の原因であることを決定するための、ヒトＩｇＧ４重鎖のヒンジ配列の分析を記載する。Ｓｉｌｖａら（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２０１５年２月２７日；２９０（９）：５４６２〜９）は、インビボおよびインビトロにおけるＩｇＧ４  Ｆａｂ−アーム交換を防止するヒトＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ突然変異を記載する。
【０２２４】
[0252]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｌ２３５ＥまたはＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２５】
[0253]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＮ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２６】
[0254]他の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒ突然変異を含むＦｃ領域を含む。
【０２２７】
[0255]例示的な実施形態の一つにおいて、いずれかのＩｇＧアイソタイプの突然変異したＦｃ領域が、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２９７位、３１８位、３２０位、３２２位（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ１９８８００７０８９に記載される通り）に１つまたは複数の突然変異を含む。また置換、欠失および付加などのＦｃ領域における他の可能性のある突然変異は、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１４０１７０１４０、ＷＯ２００９１００３０９、ＵＳ２００９０１３６４９４およびＵＳ８９６９５２６にも記載される。
【０２２８】
[0256]インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減または消失を確認するのに実行することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を喪失しているが（したがってＡＤＣＣ活性を喪失している可能性がある）、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、それに対して単球は、ＦｃγＲＩ、ＲＩＩおよびＲＩＩＩを発現する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３（１９８６）７０５９〜７０６３を参照）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２（１９８５）１４９９〜１５０２；米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６（１９８７）１３５１〜１３６１を参照）に記載される。代替として、非放射性アッセイ方法が採用される場合がある（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．；およびＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）を参照されたい。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、例えばＣｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５（１９９８）６５２〜６５６で開示された動物モデルで、評価することができる。またＣ１ｑ結合アッセイを行って、抗体が、Ｃ１ｑに結合できないこと、したがってＣＤＣ活性を喪失していることを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２に記載のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実行することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２（１９９６）１６３；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ  １０１（２００３）１０４５〜１０５２；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．、およびＧｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｌｏｏｄ  １０３（２００４）２７３８〜２７４３を参照）。またＦｃＲｎ結合およびインビボにおけるクリアランス／半減期の決定も、当技術分野において公知の方法を使用して実行することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）（２００６）１７５９〜１７６９を参照）。
【０２２９】
[0257]一実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変されていない抗体と比較して、低減または消失したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。別の実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変されていない抗体のＡＤＣＣエフェクター機能の、２分の１以下、または３分の１以下、または５分の１以下、または１０分の１以下、または５０分の１以下、または１００分の１以下に低減したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。さらに別の実施形態において、本開示の抗体は、改変されていない抗体と比べて、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％低減したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。本開示のさらなる態様において、本発明の開示の抗体またはその抗原結合フラグメントにより誘発されたＡＤＣＣエフェクター機能の低減または下方調節は、改変されていない抗体によるＡＤＣＣの誘発について観察された値の０、２．５、５、１０、２０、５０または７５％の低減である。特定の実施形態において、ＡＤＣＣ活性の低減および／または消失は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃリガンドおよび／または受容体に対する低減した親和性に起因する可能性がある。
【０２３０】
ＩＩＩ．ポリヌクレオチド
[0258]また、一部の実施形態において、本明細書に記載されるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドも提供される。一部の実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、ＤＮＡコンストラクトとして提供される。他の実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。
【０２３１】
[0259]一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号４、１６、２８、４０、５２、６４、または７６のいずれか１つに記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメインを含む。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１０、２２、３４、４６、５８、７０、または８２のいずれか１つに記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む。
【０２３２】
[0260]一部の実施形態において、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、またはＣＨＯ細胞などの真核細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列が提供される。一部の例において、核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化されている。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号５、１７、２９、４１、５３、６５、または７７のいずれか１つに記載のコドンが最適化された核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメインを含む。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１１、２３、３５、４７、５９、７１、または８３のいずれか１つに記載のコドンが最適化された核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む。特定の場合において、配列番号５、１７、２９、４１、５３、６５、または７７のいずれか１つの核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列である。特定の場合において、配列番号１１、２３、３５、４７、５９、７１、または８３のいずれか１つの核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列である。
【０２３３】
[0261]ポリヌクレオチド分子は、公知の方法によって、例えば、好適なプロモーターに、および任意選択で好適な転写ターミネーターに連結された遺伝学的コンストラクトに、結合タンパク質をコードする遺伝子を取り込ませ、それを細菌または他の適切な発現系、例えばＣＨＯ細胞などで発現することによって構築される。利用されるベクター系および宿主に応じて、構成的および誘導性プロモーターを含む様々な好適な転写および翻訳エレメントを使用することができる。プロモーターは、それがそれぞれの宿主細胞においてポリヌクレオチドの発現を駆動するように選択される。
【０２３４】
[0262]一部の実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、ベクター、好ましくは発現ベクターに挿入され、これは、さらなる実施形態の一つに相当する。この組換えベクターは、公知の方法に従って構築することができる。特に興味深いベクターとしては、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ウイルス（ｖｉｒｉｉ）（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルスなど）、およびコスミドが挙げられる。
【０２３５】
[0263]様々な発現ベクター／宿主系が、記載されたＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有および発現するのに利用することができる。Ｅ．ｃｏｌｉでの発現のための発現ベクターの例は、ｐＳＫＫ（Ｌｅ  Ｇａｌｌら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００４）２８５（１）：１１１〜２７）であり、または哺乳類細胞での発現のためには、ｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。
【０２３６】
[0264]したがって、本明細書に記載されるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、一部の実施形態において、上述したタンパク質をコードするベクターを宿主細胞に導入し、前記宿主細胞を、タンパク質ドメインが発現される条件下で培養することによって産生され、これらは単離してもよいし、任意選択でさらに精製してもよい。
【０２３７】
ＩＶ．  処置の方法
[0265]本開示は、内皮細胞（ＥＣ）特異的であるが、例えば、ＥＣ−ＥＣ、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−繊維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞、およびＥＣ−神経細胞相互作用に限定されない細胞−細胞相互作用を阻害する方法をさらに提供する。特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびフラグメントは、異常なＥＣ−細胞相互作用によって特徴付けられる病理を有する任意のヒトの疾患または障害を処置するために使用され得る。特定の実施形態において、ＥＣ−細胞相互作用は、ＥＣ−白血球相互作用であり、ＥＣ−白血球相互作用の阻害は炎症を予防するために使用される。
【０２３８】
[0266]他の実施形態において、本開示は、対象における疾患または障害を処置または予防する方法に注目し、疾患または障害は、異常な内皮細胞（ＥＣ）−細胞相互作用を特徴とし、前記方法は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。特定の実施形態において、ＥＣ−細胞相互作用は、ＥＣ−間葉幹細胞、ＥＣ−繊維芽細胞、ＥＣ−平滑筋細胞、ＥＣ−腫瘍細胞、ＥＣ−白血球、ＥＣ−脂肪細胞、およびＥＣ−神経細胞相互作用の１つまたは複数を含む。例示的な実施形態において、疾患は、炎症性疾患または障害であり、本開示の抗体およびフラグメントは、ＥＣ−白血球相互作用を阻害するために使用される。別の例示的な実施形態において、疾患または障害は、炎症性疾患またはがんから選択される。白血球の血管内皮への付着は、炎症工程の顕著な特徴である。したがって、一実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、またはその抗原結合フラグメントは炎症性疾患を処置するために使用され、白血球の内皮細胞への接着、または内皮を透過する白血球遊出の阻害は処置に有用である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＲｙｃｈｌｙら、Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００６；１２（２９）：３７９９〜８０６参照）。例としては、限定はされないが、敗血症、炎症性腸疾患、乾癬、または多発性硬化症が挙げられる。
【０２３９】
[0267]米国だけでも、毎年およそ５０万人の患者ががんにより死亡する。腫瘍転移は、これらの死の約９０％の原因である。転移を遮断する治療は公知ではない。本開示は、新規の標的、ＴＭ４ＳＦ１によって媒介される腫瘍細胞（ＴＣ）−内皮細胞（ＥＣ）相互作用の免疫遮断に基づいてがんを処置し、転移細胞を阻害することができる抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。
【０２４０】
[0268]上記のように、ＴＭ４ＳＦ１は、元々は、ＴＣ浸潤および転移における役割を有するＴＣ抗原として発見された小さい、テトラスパニン様、細胞表面糖タンパク質である。ＴＭ４ＳＦ１は、ＴＣおよびＥＣによって選択的に発現される。ＴＭ４ＳＦ１は、マウスとヒトの両方において正常組織に供給する血管ＥＣに低レベルで発現される。ＴＭ４ＳＦ１は、多くのヒトがんに供給する血管の内側にある血管ＥＣに約１０〜２０倍の高レベルで発現され、培養ＥＣに同等の高レベルで発現されることが示されている。図１は、血管外遊出のためのＴＣとＥＣの相互作用におけるＴＭ４ＳＦ１の推定の役割を示す概略図を提供する。ＴＭ４ＳＦ１濃縮マイクロドメイン（ＴＭＥＤ）は細胞表面タンパク質様インテグリンを動員し、ナノポディア、細胞表面から伸びた薄膜チャネルの形成を補助し、細胞−細胞相互作用を媒介する。したがって、特定の例において、本明細書に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびフラグメントは、ナノポディア媒介相互作用を干渉し、ＴＣ血管外遊出に必要であるＴＣのＥＣとの相互作用を阻害する。
【０２４１】
[0269]本明細書に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質または医薬組成物のいずれか１つは、病的血管新生（例えば、がん、例えば乳がん、卵巣がん、腎臓がん、結腸直腸がん、肝臓がん、胃がん、および肺がん；肥満；黄斑変性症；糖尿病性網膜症；乾癬；リウマチ性関節炎；細胞性免疫；および酒さと関連する障害を有する対象（例えばヒト）を処置するために製剤化され得る。
【０２４２】
[0270]ＴＭ４ＳＦ１は、ほとんどの上皮ＴＣの表面に高度に発現され、腫瘍血管の内側にあるＥＣおよび培養ＥＣにおいても高度に発現される。それは、正常血管ＥＣの表面に約１０〜２０分の１の低レベルで発現される。マウスモデルでは、肺への腫瘍転移は、ＥＣとＴＣの両方でのＴＭ４ＳＦ１発現と関連する。転移は、血管ＥＣへのＴＣの最初の接着、および肺または他の転移部位に侵入するＥＣを透過するそれらのその後の遊走を必要とする。以下の例は、一部の例において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体が培養においてＴＣ−ＥＣ相互作用と干渉し、インビボで腫瘍転移も阻害し得ることを示す。
【０２４３】
[0271]したがって、本開示の抗体およびフラグメントは、転移の初期段階、すなわち、血管ＥＣへのＴＣ接着および／またはＥＣを透過するＴＣの遊出の１つまたは両方を遮断するために使用され（図１参照）、それによりリスクのあるがん患者における転移を予防するまたは転移の数を実質的に低減させることができる。
【０２４４】
[0272]本開示は、転移を予防する方法をさらに提供する。ヒト腫瘍は、典型的には増殖の初期に血液およびリンパにＴＣを流す；それゆえに、原発性腫瘍の早期処置は転移がまだ起こっていないという保証を与えない。したがって、ＴＭ４ＳＦ１の免疫遮断は、血行性転移を処置もしくは予防するため、またはリンパ性転移を処置もしくは予防するために使用され得る。
【０２４５】
[0273]本開示の方法は、一部の実施形態において、対象における転移細胞を阻害することに向けられる。一実施形態において、対象は、がん、例えば転移と関連するがんまたはすでに転移したがんを有する。他の実施形態において、対象はすでにがんを処置され、寛解または部分寛解であり、本明細書に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはフラグメントを投与することの利点は、それらが転移を予防し、寛解または部分寛解を維持するために作用することである。
【０２４６】
[0274]特定の実施形態において、本開示は、転移発生のリスクが高いヒトを処置する方法を提供し、本明細書に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびフラグメントの投与は、転移の発生を阻害または遅延するために使用され得る。
【０２４７】
[0275]本開示には、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を、それを必要とする対象に投与することにより、腫瘍転移、特に肺への転移を遮断する方法が含まれる。一部の例において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体はヒト抗ＴＭ４ＳＦ１抗体であり、本明細書において抗ｈＴＭ４ＳＦ１とも呼ばれる。特定の実施形態において、方法は、有効量の抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体のそれを必要とする対象への投与を含み、有効量の抗体は、血管内皮細胞（ＥＣ）への腫瘍細胞（ＴＣ）の接着および血管内皮細胞（ＥＣ）を透過する遊走を予防する。
【０２４８】
[0276]特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、投与量および頻度が長期のＴＭ４ＳＦ１免疫遮断を維持するように、がんを有する対象または転移を有するリスクのある対象に投与される。投与レジメンは、対象の正常血管ＥＣに発現するＴＭ４ＳＦ１を飽和するのに十分な量で対象に抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を投与することによりＴＭ４ＳＦ１媒介転移を最大限に阻害する。
【０２４９】
[0277]特定の実施形態において、投与される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、またはその抗原結合フラグメントの有効量は、１週間で循環抗体濃度＞１μｇ／ｍｌを達成するのに十分な量である。
【０２５０】
[0278]特定の実施形態において、投与される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、またはその抗原結合フラグメントの有効量は、抗体の血清濃度を約１カ月間継続して１μｇ／ｍｌ以上に維持するのに十分な量である。
【０２５１】
[0279]一実施形態において、本開示は、有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することを含むヒト対象における転移を処置または予防する方法を提供し、抗体、またはその抗原結合フラグメントの有効量は、１〜８０ｍｇ／ｋｇの量の抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む。
【０２５２】
[0280]本開示の抗体の治療用途のための投与の様式は、抗体を宿主に送達する任意の好適な経路、例えば錠剤、カプセル剤、溶液、粉末、ゲル、粒子の、およびシリンジ、移植装置、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプに含有される製剤を使用する、非経口投与、例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内または皮下、肺、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）、または当業者によって認められ、当技術分野で周知の他の手段であり得る。部位特異的投与は、例えば、関節内（ｉｎｔｒａｒｔｉｃｕｌａｒ）、気管支内、腹内、嚢内、軟骨内、体腔内、腔内、小脳内、脳室内、結腸内、子宮頸部内、胃内、肝臓内、心臓内、骨内、骨盤内、心膜内、腹腔内、腹膜内、前立腺内、肺内、直腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、関節滑液嚢内、胸腔内、子宮内、血管内、膀胱内、病巣内、膣、直腸、頬側、舌下、鼻腔内、または経皮送達によって達成され得る。
【０２５３】
[0281]一部の実施形態において、本開示の抗体は、対象に、任意の好適な経路によって、例えば静脈内（ｉ．ｖ．）注入またはボーラス注射により非経口的に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）、筋肉内または皮下または腹腔内に投与され得る。ｉ．ｖ．注入は、例えば１５、３０、６０、９０、１２０、１８０、もしくは２４０分にわたって、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２時間から与えられ得る。一部の実施形態において、対象に与えられる用量は、約０．００５ｍｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．０５ｍｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、または約４ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇまたは約２４ｍｇ／ｋｇ、または例えば約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態において、対象に与えられる用量は、例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約０．１ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約０．１ｍｇ／ｋｇである。一部の実施形態において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約０．３ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約０．３ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約１．０ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約１．０ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約３．０ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約３．０ｍｇ／ｋｇである。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、静脈内投与を介して約１０．０ｍｇ／ｋｇであり得る。一部の例において、対象に与えられる本開示の抗体の用量は、皮下投与を介して約１０．０ｍｇ／ｋｇである。
【０２５４】
[0282]特定の実施形態において、本開示の抗体の固定単位用量、例えば５０、１００、２００、５００または１０００ｍｇが与えられ、または用量は患者の表面積、例えば５００、４００、３００、２５０、２００、または１００ｍｇ／ｍ２に基づき得る。一部の例において、１〜８の間の用量（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８）が投与され、患者を処置するが、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の用量が与えられる。
【０２５５】
[0283]本明細書に記載の本開示の抗体の投与は、一部の実施形態において、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１カ月、５週間、６週間、７週間、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月またはそれ以上の後に反復される。慢性投与として、処置の反復コースも可能である。反復投与は、同じ用量または異なる用量である。一部の例において、本明細書に記載の本開示の抗体は、８週間の間１週間間隔で８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇ、続いてさらに１６週間の間２週間毎に８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇでの投与、続いて静脈内注入によって４週間毎に８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇでの投与で投与される。代わりに、一部の実施形態において、本明細書に記載の本開示の抗体は、１７週間の間１週間間隔で０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの間で投与される。例えば、一部の場合、本開示の抗体は１日投与量として、２４、１２、８、６、４、または２時間毎の単回または分割用量、または任意のそれらの組合せを使用して、処置の開始後少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０日目の少なくとも１日、または代わりに、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０週目の少なくとも１週、またはそれらの任意の組合せに、１日当たり、約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば０．５、０．９、１．０、１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ｍｇ／ｋｇの量で提供される。一部の実施形態において、本明細書に記載の本開示の抗体は、炎症性疾患、例えばＲＡ、乾癬性関節炎または乾癬の発症のリスクを低減させるため、炎症性疾患、例えばＲＡ、乾癬性関節炎または乾癬の進行における事象の出現の発病を遅らせるために予防的に投与される。一部の例において、本開示の抗体は、貯蔵のために凍結乾燥され、使用前に好適な担体で再構成される。一部の場合、本開示の抗体は、フリップオフキャップの栓およびアルミニウムシールを有するガラスバイアル中の滅菌された凍結液体として供給される。一部の例において、各バイアルは、ｐＨ５．８の１０ｍＭヒスチジン、８．５％（ｗ／ｖ）スクロース、および０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０の製剤中３．３ｍＬの抗体の５０ｍｇ／ｍＬ溶液（１０％過剰量を含む）を含有する。一部の例において、バイアルは保存剤を含有せず、単回使用用である。バイアルは凍結して保存され、光から保護される。ＩＶ投与のための抗体を調製するため、抗体製剤は、一部の例において、滅菌希釈剤に希釈される前に０．２２ミクロンフィルターによって濾過される。一部の例において、およそ１００ｍＬまで体積を合わせた希釈抗体は、インライン０．２２ミクロンフィルターを使用して少なくとも３０分の期間にわたってＩＶ注入によって投与される。代わりに、一部の実施形態において、抗体は、約３．３ｍＬ中５０ｍｇ／ｍＬ抗体の１または２回の皮下注射として投与される。皮下注射部位は、例えば、腹部領域内であってよい。
【０２５６】
Ｖ．医薬組成物
[0284]本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質のいずれか１つ（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、またはその抗原結合フラグメント）または本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、組成物（例えば、医薬組成物）に含まれ得る。本開示の医薬組成物は、医薬的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含み得る。
【０２５７】
[0285]本明細書で使用する用語「医薬組成物」は、医薬的に許容される担体によって製剤化される本明細書に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含有する組成物を指し、哺乳動物における疾患の処置のための治療レジメンの一部として政府規制機関の認可により製造または販売される。医薬組成物は、例えば、単位剤形（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット、ゲルカップ、またはシロップ）での経口投与のため、局所投与のため（例えば、クリーム、ゲル、ローション、または軟膏として）、静脈内投与のため（例えば、粒状塞栓のない滅菌溶液としておよび静脈内使用に適した溶媒系で）、または本明細書に記載の任意の他の製剤で製剤化され得る。
【０２５８】
[0286]本明細書で使用する用語「医薬的に許容される担体」は、それにより投与されるタンパク質の治療特性を保持しながら処置される哺乳動物（例えば、ヒト）に生理的に許容される担体を指す。１つの例示的な医薬的に許容される担体は、生理食塩水である。他の生理的に許容される担体およびそれらの製剤は当業者に公知であり、例えば参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ、１９９０、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）に記載される。
【０２５９】
[0287]上記のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含有する医薬組成物は、一部の実施形態において、吸入可能剤形として、鼻腔内剤形として、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組合せとして、溶液、グリセロール中分散液、液体ポリエチレングリコール、および油中、固体剤形中のそれらの任意の組合せとして調製される。
【０２６０】
[0288]医薬的に許容される賦形剤は、一部の例において、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（１９８６）に記載の賦形剤である。好適な賦形剤の非限定的な例としては、緩衝剤、保存剤、安定剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、キレート剤、分散強化剤、崩壊剤、風味剤、甘味料、着色料が挙げられる。
【０２６１】
[0289]一部の実施形態において、賦形剤は緩衝剤である。好適な緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素マグネシウム、炭酸カルシウム、および炭酸水素カルシウムが挙げられる。緩衝剤としては、一部の実施形態において、本開示の医薬組成物において、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｇｌｕｃｏｍａｔｅ）、水酸化アルミニウム、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、および他のカルシウム塩またはそれらの組合せが使用される。
【０２６２】
[0290]一部の実施形態において、賦形剤は保存剤を含む。好適な保存剤の非限定的な例としては、抗酸化剤、例えばαトコフェロールおよびアスコルビン酸塩、ならびに抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、およびフェノールが挙げられる。一部の例において、抗酸化剤としては、限定はされないが、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ−アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノールおよびＮ−アセチルシステインがさらに挙げられる。一部の例において、保存剤としては、バリダマイシンＡ、ＴＬ−３、オルトバナジウム酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、Ｎ−ａ−トシル−Ｐｈｅ−クロロメチルケトン、Ｎ−ａ−トシル−Ｌｙｓ−クロロメチルケトン、アプロチニン、フッ化フェニルメチルスルホニル、ジイソプロピルフルオロリン酸、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞接着阻害剤、細胞分裂阻害剤、細胞周期阻害剤、脂質シグナル伝達阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、還元剤、アルキル化剤、抗菌剤、オキシダーゼ阻害剤、または他の阻害剤が挙げられる。
【０２６３】
[0291]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として結合剤を含む。好適な結合剤の非限定的な例としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキサゾリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｏｘｏａｚｏｌｉｄｏｎｅ）、ポリビニルアルコール、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカリド、オリゴサッカリド、およびこれらの組合せが挙げられる。医薬製剤に使用される結合剤は、一部の例において、デンプン、例えばジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、コムギデンプン；糖、例えばスクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース、マルトデキストリン；天然および合成ゴム；ゼラチン；セルロース誘導体、例えば結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース；ポリビニルピロリドン（ポビドン）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ワックス；炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；アルコール、例えばソルビトール、キシリトール、マンニトール、および水またはこれらの任意の組合せから選択される。
【０２６４】
[0292]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として潤滑剤を含む。好適な潤滑剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、水添植物油、ステロテックス、モノステアリン酸ポリオキシエチレン、滑石、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムおよび軽油が挙げられる。医薬製剤に使用される潤滑剤は、一部の実施形態において、ステアリン酸金属塩類（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム）、脂肪酸エステル（例えば、フマル酸ステアリルナトリウム）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、脂肪アルコール、ベヘン酸グリセリル、鉱油、パラフィン、水添植物油、ロイシン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ラウリル硫酸金属塩類（ｍｅｔａｌｌｉｃ  ｌａｕｒｙｌ  ｓｕｌｐｈａｔｅ）（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム）、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および滑石またはこれらの組合せから選択される。
【０２６５】
[0293]一部の実施形態において、医薬製剤は賦形剤として分散強化剤を含む。好適な分散剤の非限定的な例としては、一部の例において、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーゴム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート、および高ＨＬＢ乳化剤界面活性剤としての結晶セルロースが挙げられる。
【０２６６】
[0294]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として崩壊剤を含む。一部の実施形態において、崩壊剤は非起泡性崩壊剤である。好適な非起泡性崩壊剤の非限定的な例としては、デンプン、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、これらのアルファ化および修飾デンプン、甘味料、粘土、例えばベントナイト、結晶セルロース、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウム、ゴム、例えばカンテン、ガウア、イナゴマメ、カラヤ、ペシチン（ｐｅｃｉｔｉｎ）、およびトラガカントが挙げられる。一部の実施形態において、崩壊剤は起泡性崩壊剤である。好適な起泡性崩壊剤の非限定的な例としては、クエン酸と組み合わせた炭酸水素ナトリウムおよび酒石酸と組み合わせた炭酸水素ナトリウムが挙げられる。
【０２６７】
[0295]一部の実施形態において、賦形剤は風味剤を含む。外層に組み込まれる風味剤は、一部の例において、合成風味油および風味香料；天然油；植物、葉、花および果物からの抽出物ならびにこれらの組合せから選択される。一部の実施形態において、風味剤は、ケイヒ油；ウインターグリーン油；ハッカ油；クローバー油；干し草油；アニス油；ユーカリ；バニラ；柑橘類の油、例えばレモン油、オレンジ油、ブドウおよびグレープフルーツ油；ならびにリンゴ、モモ、セイヨウナシ、イチゴ、ラズベリー、サクランボ、プラム、パイナップルおよびアプリコットを含む果実エキスからなる群から選択され得る。
【０２６８】
[0296]一部の実施形態において、賦形剤は、甘味料を含む。好適な甘味料の非限定的な例としては、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、フルクトースおよびこれらの混合物（担体として使用されない場合）；サッカリンおよびその様々な塩、例えばナトリウム塩；ジペプチド甘味料、例えばアスパルテーム；ジヒドロカルコン化合物、グリチルリジン；ステビア（Ｓｔｅｖｉａ  Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）（ステビオシド）；スクロースのクロロ誘導体、例えばスクラロース；および糖アルコール、例えばソルビトール、マンニトール、シリトール（ｓｙｌｉｔｏｌ）などが挙げられる。
【０２６９】
[0297]一部の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、着色料を含む。好適な着色料の非限定的な例としては、食品、医薬品および化粧品色素（ＦＤ＆Ｃ）、医薬品および化粧品色素（Ｄ＆Ｃ）、ならびに外用医薬品および化粧品色素（Ｅｘｔ．Ｄ＆Ｃ）が挙げられる。着色料は、染料またはこれらの対応するレーキとして使用され得る。
【０２７０】
[0298]一部の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、キレート剤を含む。一部の場合、キレート剤は殺真菌性キレート剤である。例としては、限定はされないが、以下が挙げられる：エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）；ＥＤＴＡの二ナトリウム、三ナトリウム、四ナトリウム、二カリウム、三カリウム、二リチウムおよび二アンモニウム塩；ＥＤＴＡのバリウム、カルシウム、コバルト、銅、ジスプロシウム、ユーロピウム、鉄、インジウム、ランタン、マグネシウム、マンガン、ニッケル、サマリウム、ストロンチウム、または亜鉛キレート；トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸一水和物；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン；１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；１，３−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二プロピオン酸二塩酸塩；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）半水和物；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸）；Ｏ，Ｏ’−ビス（２−アミノエチル）エチレングリコール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ−二酢酸；１，６−ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸；イミノ二酢酸；１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；ニトリロ三酢酸；ニトリロ三プロピオン酸；ニトリロトリス（メチレンホスホン酸（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ））の三ナトリウム塩；７，１９，３０−トリオキサ−１，４，１０，１３，１６，２２，２７，３３−オクタアザビシクロ［１１，１１，１１］ペンタトリアコンタンヘキサヒドロブロミド；またはトリエチレンテトラミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’−六酢酸。
【０２７１】
[0299]また、本明細書で開示される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体および１つまたは複数の他の抗菌剤または抗真菌剤、例えば、ポリエン、例えば、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＣＤ）、リポソーム型アンホテリシンＢ（Ｌ−ＡＭＢ）およびリポソーム型ナイスタチン、アゾールおよびトリアゾール、例えばボリコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール（ｐｏｚａｃｏｎａｚｏｌｅ）など；グルカンシンターゼ阻害剤、例えば、カスポファンギン、ミカファンギン（ＦＫ４６３）、およびＶ−エキノカンジン（ＬＹ３０３３６６）；グリセオフルビン；アリルアミン、例えば、テルビナフィン；フルシトシンまたは本明細書に記載されるそれらを含む他の抗真菌剤を含む組合せ製品が考えられる。さらに、ペプチドは、局所抗真菌剤、例えば、シクロピロックスオラミン、ハロプロジン、トルナフテート、ウンデシレン酸塩、局所ナイスタチン（ｎｙｓａｔｉｎ）、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィンおよび他の局所薬剤と組み合わされ得ると考えられる。一部の例において、医薬組成物は、さらなる薬剤を含む。一部の場合、さらなる薬剤は医薬組成物に治療有効量で存在する。
【０２７２】
[0300]貯蔵および使用の通常の条件下で、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含み、微生物の増殖を防止する。特定の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含まない。注射可能な使用に好適な医薬品形態は、滅菌注射可能溶液または分散液の即時調製のための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。医薬組成物は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、および／または植物油、またはこれらの任意の組合せを含有する溶媒または分散培地である担体を含む。良好な流動性は、例えば、コーティング、例えばレシチンの使用によって、分散液の場合必要な粒子サイズの維持によって、ならびに界面活性剤の使用によって維持される。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムが含まれる。注射可能な組成物の吸収の延長は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物での使用によってもたらされ得る。
【０２７３】
[0301]水溶液での非経口投与のため、例えば、液体剤形は必要であれば好適に緩衝され、液体希釈剤は十分な生理食塩水またはグルコースによって等張にされる。液体剤形は、特に静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、および腹腔内投与に好適である。これに関連して、用いられ得る滅菌水性培地は、本開示に照らして当業者に公知である。例えば、１回の投与量は、特定の場合、１ｍＬ〜２０ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液に溶解され、１００ｍＬ〜１０００ｍＬの液体、例えば炭酸水素ナトリウム緩衝生理食塩水に添加されるか、注入の提案された部位で注射された。
【０２７４】
[0302]特定の実施形態において、滅菌注射可能溶液は、免疫療法剤を、必要な場合、上記に列挙した様々な他の成分と適切な溶媒に必要な量で組み入れ、滅菌濾過することによって調製される。通常、分散液は様々な滅菌活性成分を、基本分散培地および上記に列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。本明細書で開示される組成物は、一部の例において、中性または塩形態に製剤化される。医薬的に許容される塩としては、例えば、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基によって形成される）が挙げられ、それらは無機酸、例えば塩酸もしくはリン酸など、または有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などによって形成される。遊離カルボキシル基によって形成された塩は、一部の場合、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムなど、または水酸化第二鉄、および有機塩基、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどに由来する。製剤時、医薬組成物は、一部の実施形態において、投与製剤に対応した方法および治療に有効であるような量で投与される。
【０２７５】
[0303]特定の実施形態において、本開示の医薬組成物は、医薬的に許容される担体と組み合わせて本明細書で開示される有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を含む。本明細書で使用する「医薬的に許容される」は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉しないおよび／または投与される患者に毒性ではない任意の担体を含む。好適な医薬担体の非限定的な例としては、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水型エマルジョン、様々な型の湿潤剤および滅菌溶液が挙げられる。医薬的に適合する担体のさらなる非限定的な例としては、ゲル、生体吸収性マトリックス材、免疫療法剤または任意の他の好適なビヒクルを含有する移植エレメント、送達または分配手段または材料が挙げられ得る。そのような担体は、例えば従来の方法によって製剤化され、有効量で対象に投与される。
【０２７６】
ＶＩ．組合せ療法
[0304]特定の実施形態において、本開示の方法は、１つまたは複数のさらなる治療に続く、先行されるまたは組み合わせる、本明細書で開示される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を投与することを含む。さらなる治療の例としては、限定はされないが、化学療法、放射線、抗がん剤、またはこれらの任意の組合せが挙げられ得る。さらなる治療は、免疫療法の投与と同時にまたは順に投与され得る。特定の実施形態において、本開示の方法は、１つまたは複数の抗がん剤またはがん治療に続く、先行される、または組み合わせる本明細書で開示される免疫療法を投与することを含む。抗がん剤としては、限定はされないが、化学療法剤、放射線療法剤、サイトカイン、免疫チェックポイント阻害剤、抗血管新生剤、アポトーシス誘導剤、抗がん抗体、および／または抗サイクリン依存性キナーゼ剤が挙げられる。特定の実施形態において、がん治療としては、化学療法、生物学的療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管療法、寒冷療法、毒物療法、および／または外科手術またはこれらの組合せが挙げられる。特定の実施形態において、本開示の方法は、１つまたは複数のさらなる免疫調節剤に続く、先行される、または組み合わせる本明細書で開示される免疫療法を投与することを含む。免疫調節剤としては、一部の例において、腫瘍またはがんと関連する抗ウイルス免疫を抑制することができる任意の化合物、分子または物質が挙げられる。さらなる免疫調節剤の非限定的な例としては、抗ＣＤ３３抗体またはこれらの可変領域、抗ＣＤ１１ｂ抗体またはこれらの可変領域、ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブ、サイトカイン、例えばＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＦＮ３およびＩＦＮγ、ならびにケモカイン、例えばＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、およびＩＬ−８が挙げられる。
【０２７７】
[0305]特定の例において、さらなる治療は例示的な放射線量が５，０００Ｒａｄｓ（５０Ｇｙ）〜１００，０００Ｒａｄｓ（１０００Ｇｙ）、または５０，０００Ｒａｄｓ（５００Ｇｙ）、または記載した範囲内の他の適切な線量である。代わりに、例えば上記の線量測定試験によって決定された線量により、放射線量は約３０〜６０Ｇｙ、約４０〜約５０Ｇｙ、約４０〜４８Ｇｙ、または約４４Ｇｙ、または記載した範囲内の他の適切な線量である。本明細書で使用する「Ｇｙ」は、１００Ｒａｄｓに等しい放射線の特定の吸収線量の単位を指し得る。Ｇｙは、「グレイ（Ｇｒａｙ）」の省略形である。
【０２７８】
[0306]特定の例において、さらなる治療は化学療法であり、例示的な化学療法剤としては、限定されないが、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード誘導体、エチレンイミン、スルホン酸アルキル、ヒドラジンおよびトリアジン、ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ならびに金属塩）、植物アルカロイド（例えば、ベンカアルカロイド、タキサン、ポドフィロトキシン、およびカンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａｎ）類似体）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン、クロモマイシンなど）、代謝拮抗薬（例えば、葉酸拮抗薬、ピリミジン拮抗薬、プリン拮抗薬、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤）、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、および種々の抗悪性腫瘍薬（例えば、リボヌクレオチド還元酵素阻害剤、副腎皮質ステロイド阻害剤、酵素、微小管阻害剤、およびレチノイド）が挙げられる。例示的な化学療法剤としては、限定はされないが、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射剤（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射剤（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン（ｃｏｓｍｅｇａｎ））、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注射剤（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イフォスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキセート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラント含有ポリフェプロサン２０（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用の塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ、およびブレンツキシマブベドチンが挙げられ得る。
【０２７９】
[0307]例示的なアルキル化剤としては、限定はされないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレアおよびトリアゼン）：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ  Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イフォスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスフォルアミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。さらなる例示的なアルキル化剤としては、限定はされないが、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤとしても公知、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、およびフェニルアラニンマスタードとしても公知、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵとしても公知、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（ＣＤＤＰとしても公知、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても公知、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イフォスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドニマスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよび塩酸メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｏｅｔｈａｍｉｎｅ）としても公知、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（チオホスファミド（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｅ）、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても公知、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；およびベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられる。
【０２８０】
[0308]例示的なアントラサイクリンとしては、限定はされないが、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）およびＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（Ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（塩酸ダウノルビシン（ｄａｕｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ダウノマイシン、および塩酸ルビドマイシン、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（クエン酸ダウノルビシンリポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ  ＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；およびデスアセチルラビドマイシンが挙げられ得る。
【０２８１】
[0309]例示的なビンカアルカロイドとしては、限定はされないが、酒石酸ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）））；ビンブラスチン（硫酸ビンブラスチン、ビンカロイコブラスチンおよびＶＬＢとしても公知、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標））；およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられる。
【０２８２】
[0310]例示的なプロテオソーム阻害剤としては、限定はされないが、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カルフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；クエン酸イキサゾミブ（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；およびＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）が挙げられ得る。
【０２８３】
[0311]本明細書で使用する「と組み合わせて」は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体とさらなる治療が、処置レジメンまたは計画の一部として対象に投与されることを意味する。特定の実施形態において、組合せで使用されることは、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体とさらなる治療が投与前に物理的に組み合わされるまたは同じ時間枠にわたって投与される必要がない。例えば、限定としてではなく、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体と１つまたは複数の薬剤は、処置される対象に同時に投与される、または同時にもしくは任意の順序でもしくは異なる時点で順に投与される。
【０２８４】
ＶＩＩ．キット
[0312]本開示は、本開示の組成物（例えば医薬組成物）（例えば本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を含む組成物）を含むキットを提供する。キットは、臨床医（例えば医師または看護師）がそこに含有される組成物を対象に投与し、病的血管新生（例えばがん）と関連する障害を処置することを可能にする説明書を含む。
【０２８５】
[0313]特定の実施形態において、キットは、有効量の本開示の抗体を含有する単回用量の医薬組成物のパッケージを含む。任意選択により、医薬組成物を投与することに必要な器具または装置がキットに含まれ得る。例えば、本開示のキットは、本開示の有効量のワクチン、ベクター、安定化三量体、または最適化ウイルスポリペプチドを含有する１つまたは複数のプレフィルドシリンジを提供し得る。さらに、キットはさらなる構成成分、例えば、病的血管新生（例えばがん）と関連する障害を有する対象の投与スケジュールに関する説明書も含み、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質またはポリヌクレオチドを含有する医薬組成物を使用し得る。
【０２８６】
[0314]本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく、本開示の組成物、方法、およびキットに様々な修正および変更がなされ得ることは当業者には明らかである。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物の範囲内に入ることを条件に本開示の修正および変更をカバーすることを意図する。
【実施例】
【０２８７】
[0315]以下の実施例は、例示のために提供され、ここで請求する開示に限定しない。
実施例１．腫瘍細胞（ＴＣ）−内皮細胞（ＥＣ）相互作用はＴＭ４ＳＦ１によって媒介される
[0316]本研究の目的は、ＴＭ４ＳＦ１の発現とＴＣ転移の間のＴＣ相関におけるＴＭ４ＳＦ１の発現、ならびに本開示に記載の、ＥＣ−ＴＣ相互作用への例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の効果を決定することであった。ＴＭ４ＳＦ１のレベルは、野生型マウス（ＴＭ４ＳＦ１＋／＋）と比較して、ＴＭ４ＳＦ１ヘテロ接合（＋／−）マウスを使用する転移とインビボで相関した。肺へのＴＣ転移の頻度は、ＥＣ  ＴＭ４ＳＦ１発現によって変わる。図２に示すように、Ｂ１６Ｆ１０  ＴＣの尾静脈注射後の肺転移は、野生型（＋／＋）ＴＭ４ＳＦ１の正常レベルの約１／２を発現するＴＭ４ＳＦ１ヘテロ接合（＋／−）マウスにおいておよそ５分の１であった。
【０２８８】
[0317]ＴＭ４ＳＦ１発現は、Ｂ１６Ｆ１０細胞においても研究された。図３Ａおよび図３Ｂに示す結果は、Ｂ１６Ｆ１０  ＴＣの転移能力が、ＴＭ４ＳＦ１発現によって変わることを示す。図３Ａに示すように、ＴＭ４ＳＦ１発現レベルは培養密度によって減少した。図３Ｂに示すように、高ＴＭ４ＳＦ１発現Ｂ１６Ｆ１０細胞は、低ＴＭ４ＳＦ１発現体よりも肺転移を生成した。
【０２８９】
[0318]さらなる実験は、Ｂ１６Ｆ１０細胞が、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体ＡＧＸ−Ａ０１によって処置されたヒト肺微小血管ＥＣ（ＨＬＭＥＣ）の単層に弱く接着し、異常に遊走し、頻繁に剥がれることを示した（図４；ＡＧＸ−Ａ０１は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９７６１では抗体８Ｇ４と呼ばれ、ＡＧＸ−Ａ０１の可変重鎖および軽鎖は、それぞれ配列番号１および配列番号２として記載されたアミノ酸配列を含む）。ＧＦＰ標識Ｂ１６Ｆ１０細胞は、ＲＦＰ標識ＨＬＭＥＣのローンの上に重ねられた。図４に示す代表的なライブ細胞イメージングからの連続画像は、対照（Ｃｔｌ）抗体と対照的に、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（１０μｇ／ｍｌ）は遊走のためのＴＣ相互作用と干渉し、細胞脱離をもたらす広範で、不規則な細胞突出を生じることを実証する。
【０２９０】
実施例２．抗ヒトＴＭ４ＳＦ１抗体はＴＣ−ＥＣ相互作用を阻害し、ＴＣ遊走を遮断することができる
[0319]いくつかの例示的なモノクローナル抗体（ＡＧＸ−Ａ０３、ＡＧＸ−Ａ０４、ＡＧＸ−Ａ０５、ＡＧＸ−Ａ０７、ＡＧＸ−Ａ０８、ＡＧＸ−Ａ０９、およびＡＧＸ−Ａ１１）が、ヒトＴＭ４ＳＦ１（ｈＴＭ４ＳＦ１）に対して生じた。それらの治療価値を決定するため、各例示的な抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体が試験され、どの抗体が培養ヒト肺微小血管内皮細胞（ＥＣ）への腫瘍細胞（ＴＣ）接着および／または培養ヒト肺微小血管内皮細胞（ＥＣ）を透過する遊走を阻害することができるか決定する。
【０２９１】
[0320]例示的な抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体の７個全て（ＡＧＸ−Ａ０３、ＡＧＸ−Ａ０４、ＡＧＸ−Ａ０５、ＡＧＸ−Ａ０７、ＡＧＸ−Ａ０８、ＡＧＸ−Ａ０９、およびＡＧＸ−Ａ１１）は、ヒトおよびカニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。
【０２９２】
[0321]対照的に、抗体ＡＧＸ−Ａ０１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９７６１では、抗体８Ｇ４と呼ばれる）は、ヒトに対してナノモル以下の親和性で反応するが、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１とは反応しない。７個の抗体のそれぞれの可変領域を含むキメラ抗体が作成され、切除されたＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を有するアイソタイプヒトＩｇＧ１である。それらは、ＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ−２ループ上の異なるエピトープと反応する。
【０２９３】
[0322]アイソタイプ適合抗体は、他に指定しない限り、以下および本明細書に記載の実験を通して対照として働く。
[0323]それぞれ高い（１０９±１７  ｍＲＮＡコピー数／細胞）および低い（１．５±２．６  ｍＲＮＡコピー数／細胞）レベルのＴＭ４ＳＦ１を発現する２つのヒト乳腺癌細胞株、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８およびＭＣＦ−７が、これらの研究のために選択される。１２０±１７  ｍＲＮＡコピー数／細胞でＴＭ４ＳＦ１を発現するヒト肺微小血管内皮細胞（ＨＬＭＥＣ）は、ヒト肺微小血管系由来である（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｉｎｃ）。１０μｇ／ｍｌ  ＡＧＸ−Ａ０１は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８とＨＬＭＥＣの両方においてフローサイトメトリーで細胞表面のＴＭ４ＳＦ１結合を飽和することが示されており、Ｂ１６Ｆ１０  ＴＣ−ＥＣ相互作用を遮断する用量が図４に示された。２日間の細胞培養では１ｍｇ／ｍｌ  ＡＧＸ−Ａ０１もの高い用量でもインビボでのＨＬＭＥＣに対する毒性が観察されなかった。
【０２９４】
ＥＣ−ＴＣ相互作用（ＥＣへのＴＣ接着および／またはＥＣを透過する遊走）を阻害する抗体濃度の決定
[0324]研究は、ＥＣ−ＴＣ相互作用（ＥＣへのＴＣ接着および／またはＥＣを透過する遊走）を阻害する抗体濃度を決定するために実施される。ＨＬＭＥＣを増殖させ、４ウェルスライドチャンバーに単層を形成させる。段階希釈１００、１０、１および０μｇ／ｍｌの抗体（７個の抗ｈＴＭ４ＳＦ１試験抗体またはアイソタイプ適合対照抗体のそれぞれ）が各ウェルに添加され、１０３個のＧＦＰトランスフェクトＴＣの添加前に０．５時間ＨＬＭＥＣによって平衡化させる。１時間および４時間後、培養培地は優しくリンスした後に除去され、弱く結合した、または剥がれたＴＣを除き、チャンバーは温かい培養培地によって１回洗浄され、次いで３７℃に前もって温めたパラホルムアルデヒドによって固定される。ＥＶＯＳ  ＦＬ  Ａｕｔｏ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）が用いられ、単層の上部からマトリックスの下部まで、Ｚスタック機能によってウェル全体がスキャンされる。次いで、個々の画像は、自動で合わされ、ＥＶＯＳによって一緒にＺスタックされ、蛍光シグナルが計数され、接着および遊出したＴＣの数が得られる。ライブ細胞イメージングもＥＶＯＳイメージングシステムを使用して実行され、それらが起こる場合、ＥＣ−ＴＣ相互作用が観察される。
【０２９５】
[0325]７個の例示的な抗ｈＴＭ４ＳＦ１試験抗体のそれぞれがＨＬＭＥＣ単層へのＴＣ接着を阻害することが観察される。さらに、８個の例示的な抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体のそれぞれがＨＬＭＥＣ単層を透過する遊走を阻害することが観察される。
【０２９６】
実施例３．抗ＴＭ４ＳＦ１抗体投与レジメン
[0326]以下の実験は、Ｃ５７Ｂ１／６マウスにおける長期のＴＭ４ＳＦ１免疫遮断を確立および維持する本開示の例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の投与レジメンを決定するために実施される。投与レジメンは、Ｃ５７Ｂ１／６マウスの正常な血管ＥＣに発現するＴＭ４ＳＦ１を飽和するのに十分な例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の量を注射することによってＴＭ４ＳＦ１媒介転移を最大限に阻害する。
【０２９７】
[0327]本明細書の実施例３に規定する「飽和用量」は、注射した例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の数がインビボでマウスにおいて利用可能な結合部位の数に等しい用量である。例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の様々な用量での薬力学（ＰＫ）アッセイは、血清抗ＴＭ４ＳＦ１抗体濃度が、注射用量が飽和用量を超えるとすぐに急速に上昇するため、飽和用量を同定する。以下に示す表１は、約０．５ｎＭの親和性Ｋｄを有する例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の注射用量、血清濃度、および免疫遮断のレベルの間の予期される関係を要約する。
【０２９８】
[0328]
【０２９９】
【表１】
2020534351.tif 000003
【０３００】
[0329]特定の例において、３ｍｇ／ｋｇの例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の投与が、１２時間でおよそ０．０７μｇ／ｍｌの血清濃度に達し、予測される平衡血清濃度をわずかに上回ることが観察される。対照的に、任意のマウスタンパク質と相互作用しない抗ｈＴＭ４ＳＦ１抗体（ＡＧＸ−Ａ０１）は、同じ用量で、および抗体応答を誘導せずに１２日間より長く＞５μｇ／ｍｌの血清レベルを維持する。
【０３０１】
３．１  １週間で高レベルの免疫遮断を達成するために必要な例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の初期用量の決定
[0330]研究が実施され、それにより例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体が３０ｍｇ／ｋｇの単回用量でマウスに投与される。抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の腹腔内投与の２４時間後、Ｂ１６Ｆ１０転移ＴＣがマウスに注射される。抗ｍＴＭ４ＳＦ１抗体を受けるマウスは、腫瘍細胞を注射されるが、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体によって処置されない対照マウスに対して、例えば約８３％まで肺転移の低減を示すことが観察される。
【０３０２】
[0331]さらなる実験では、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の飽和用量は、５匹の８週齢の雌のＣ５７Ｂ１／６マウスの群への例示的な抗ｍＴＭ４ＳＦ１試験抗体の単一の高い（４０ｍｇ／ｋｇ）用量、ならびに２つの低い（２０および１０ｍｇ／ｋｇ）用量からなる一連のＰＫアッセイによって同定される。
【０３０３】
[0332]血清に存在する例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体のレベルは、フローサイトメトリーによってアッセイされる。簡単に言うと、血液（約３０μｌ）が回収され、血清は４℃で３０分間、高レベルのマウスＴＭ４ＳＦ１（２１５±２７  ＴＭ４ＳＦ１  ｍＲＮＡコピー数／細胞）を発現するＭＳ１マウスＥＣとのインキュベーションのためにＰＢＳで必要に応じて希釈される。次いで、細胞は、ＰＢＳで洗浄され、未結合の抗体が除去され、４℃で３０分間ＡｌｅｘａＦｌｏｕｒ−４８８標識抗ヒト二次抗体とインキュベートされる。存在する例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の量は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の１０倍段階希釈濃度を使用して作成された標準曲線から決定される。このアッセイは、典型的には０．００１μｇ／ｍｌの感受性を有する。特定の場合において、免疫遮断は、血清レベル１μｇ／ｍｌで約９３％、血清レベル約５μｇ／ｍｌで９８．５％であることが見出された。
【０３０４】
[0333]これらの実験の目的は、１週間で、循環抗体濃度＞１μｇ／ｍｌ、例えば約５μｇ／ｍｌを達成する初期用量を同定することである。
３．２  長期の、高レベル免疫遮断を維持するために必要な１週間当たりの維持用量のサイズの決定
[0334]この実験の目的は、一貫して１μｇ／ｍｌを超える循環中の抗ｍＴＭ４ＳＦ１抗体のレベルによって示される、血管ＴＭ４ＳＦ１の高レベルの免疫遮断を維持する例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の１週間当たりの維持用量を同定することである。
【０３０５】
[0335]所望の１週間当たりの維持用量は、次の維持用量注射まで少なくとも７日間、１μｇ／ｍｌを超える、理想的には５μｇ／ｍｌに近い、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の血清濃度を維持する。維持用量を決定するため、上記の３．１で決定した初期用量は開始用量として使用され、次いで約７日で、初期用量の１００％、５０％、２５％および０％に等しい維持用量が試験される。例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の１４日目の血清濃度に依存して、１４日目の維持用量は、注射後７日目の血清濃度を所望の１〜５μｇ／ｍｌ範囲にするためにマウスの各群で調整される。このサイクルは、全ての群が同じ維持用量に収束するまで繰り返される。対照抗体群により、これらの実験は１２０匹の８週齢の雌のＣ５７Ｂ１／６マウスを使用する（２抗体×４群×５匹のマウス／群×３回繰り返し）。
【０３０６】
３．３．毒性および抗ｍＴＭ４ＳＦ１免疫原性のモニタリング
[0336]実験は、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の１週間当たりの維持用量を投与されるマウスにおける毒性を決定するために実施される。実施例３．２で決定された１週間当たりの維持用量は、少なくとも３カ月の期間続けられ、マウスは毒性の兆候および抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体免疫原性をモニターされる。
【０３０７】
[0337]免疫遮断の維持を確実にするため、およびマウスが抗ｍＴＭ４ＳＦ抗体に対する抗体を発生するかどうか調べるため、血液が毎週採取され、以下が評価される：（ａ）抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の血清濃度；および（ｂ）アッセイされる抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体によってコートされたプレートおよび抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用するＥＬＩＳＡアッセイによって開発された任意の抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体存在の可能性。これらの実験は３０匹のマウスを含む（２抗体×５匹のマウス／群×３回繰り返し）。
【０３０８】
実施例４．肺転移の２匹のマウスモデルにおける例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の抗転移能力
[0338]３つのレベルの免疫遮断の有効性がＢ１０Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞およびＭＭＴＶ  Ｐｙｔ（マウス乳腺腫瘍ポリオーマウイルスミドルＴ抗原）において試験される。投与は、上記の実施例３で同定された投与スケジュールの１００％、５０％、および２５％などであり、肺で生じる転移負荷が定量される。
【０３０９】
[0339]両モデルにおいて、免疫遮断のレベルの関数として転移の数が定量され、達成される目的は肺転移の少なくとも５０％低減である。
４．１．Ｂ１６Ｆ１０  ＴＣのｉｖ（尾静脈）注射後の肺転移の定量
[0340]尾静脈を介して注射されたＴＣ（１００μｌ  ＰＢＳ中２×１０５個の細胞）は、最初の通過後、肺による循環から除去され；１４日目までに目に見える肺転移が発生する。転移は標準的な方法（例えば、Ｏｖｅｒｗｉｊｋ  ＷＷ、Ｒｅｓｔｉｆｏ  ＮＰ．Ｂ１６  ａｓ  ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１；Ｃｈａｐｔｅｒ  ２０：Ｕｎｉｔ  ２０  １；Ｂｒｏｗｎ  ＬＭ、Ｗｅｌｃｈ  ＤＲ、Ｒａｎｎｅｌｓ  ＳＲ．Ｂ１６Ｆ１０  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｉｓ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｂｙ  ｐａｒｔｉａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｅｃｔｏｍｙ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ２００２；１９：３６９〜７６．３５；Ｋｈａｎｎａ  Ｃ、Ｈｕｎｔｅｒ  Ｋ．Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２００５；２６：５１３〜２３に記載される）によって評価され、目に見える腫瘍結節の総数および腫瘍大結節（直径＞１ｍｍ）対腫瘍小結節（直径＜１ｍｍ）の数を計数する。
【０３１０】
４．１．１．例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体によるマウスの処置
[0341]研究は、肺での転移負荷がＴＭ４ＳＦ１免疫遮断の程度の関数であるかどうか、およびどの程度であるか決定するために実施される。３つのレベルの抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体免疫遮断は、実施例３．１の結果に基づいて試験される：１００％遮断を達成する例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体用量（例えば、血清中１〜５μｇ／ｍｌの抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体）、ならびにその用量の５０％および２５％を示す用量の単回注射。Ｂ１６Ｆ１０細胞注射は、抗体注射後４日で実施され、それは典型的には免疫遮断が１００％免疫遮断に近づき始める時間である。マウスは、Ｂ１６Ｆ１０細胞注射後１４日、すなわち最初の注射後１８日で屠殺される。血液試料は、−０日、−４日（細胞注射前）、＋７日（細胞注射後）、＋１４日、および＋１８日目に採取され、抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の血清濃度を評価する。対照抗体群を含み、９０匹の８週齢の雌のＣ５７Ｂ１／６マウス（２抗体×３用量／抗体×５匹のマウス／群×３回繰り返し）が研究に使用される。
【０３１１】
４．１．２．マウスへの注射前の抗ｍＴＭ４ＳＦ１抗体によるＴＣの処置
[0342]Ｂ１６Ｆ１０細胞は、高レベルのＴＭ４ＳＦ１（図３Ａに示すように１０％の培養密度で終夜培養後の約１３０ＴＭ４ＳＦ１  ｍＲＮＡコピー数／細胞）を発現する。肺転移へのＴＣ  ＴＭ４ＳＦ１の選択的免疫遮断の効果は本研究で調べられる。これらの実験は、ＴＣを４℃で１時間、１０μｇ／ｍｌの例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体とインキュベートし、ＴＭ４ＳＦ１結合部位を飽和し、次いで洗浄して、マウスへの注射前に未結合の抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体を除去することを除いて、実施例４．１．１．に記載したプロトコールに従う。例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体および対照抗体のため、本研究では３０匹のマウス（２抗体×１用量／抗体×５匹のマウス／群×３回繰り返し）が使用される。
【０３１２】
[0343]上記のように処置されたＴＣは、続いて尾静脈を介して注射され、肺を通る最初の通過後に循環から除去されることが見出され、それによりＴＣ  ＴＭ４ＳＦ１の免疫遮断がマウスにおいてインビボで転移阻害に寄与することを実証する。
【０３１３】
４．２．ＭＭＴＶ−Ｐｙｔモデルにおける自発的肺転移
[0344]ＭＭＴＶ−Ｐｙｔマウス乳腺腫瘍転移モデルは、過形成から前悪性、次いで直に８〜１２週齢まで転移能力を有する浸潤性腺管癌にヒトがんの進行を再現する。８週齢後、ＴＣは継続して流され、継続的な免疫遮断が転移の予防に必要なヒトにおける臨床状況を複製する。目に見える肺転移は、およそ１３週で開始するようである。
【０３１４】
[0345]例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の有効性を試験するため、抗体処置は、原発性悪性腫瘍が乳腺で最初に現れる年齢である、８週齢の雌のＭＭＴＶ−Ｐｙｔマウスに始めに投与される。実施例３で開発された抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の投与スケジュールが本明細書で使用される。マウスは、１６週で屠殺される。肺転移の数および腫瘤が評価され、実施例４．１に記載のように転移を計数する。対照抗体も含めて、９０匹の７週齢の雌のＰｙｔマウス（２抗体×３用量／Ａｂ×５匹のマウス／群×３回繰り返し）が研究のために使用される。
【０３１５】
[0346]腫瘍血管のＴＣおよび血管新生ＥＣの両方とも、新しい表面ＴＭ４ＳＦ１を定常的に生成する細胞を活発に代謝および分裂するため、腫瘍の存在（乳腺および肺転移おいて両方とも原発性）は、免疫遮断を維持するために必要とされる抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体の用量を増加し得ることが可能である。結果として、実施例３の腫瘍なしマウスで開発された投与スケジュールは、特定の例において、実施例４．２の腫瘍担持マウスにおける等価な免疫遮断を維持するように調整される。循環する抗ＴＭ４ＳＦ１試験抗体レベルのＰＫ評価が定期的に行われ、血清抗体レベルを１μｇ／ｍｌより高く維持することを確認する；そうでない場合、さらなる抗体が注射され、所望の免疫遮断を維持する。
【０３１６】
[0347]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（ヒトＩｇＧバックボーンに対する）は、実験期間の８週中に発生することが可能であるが、そのような抗体は１２日目までに発生することが見出されていない。抗ＴＭ４ＳＦ１抗体が発生する場合、研究は、ヒトＩｇＧの代わりにマウスＩｇＧバックボーンを含む例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体によって繰り返される。
【０３１７】
[0348]本明細書に記載の両モデルにおいて、目的はＴＭ４ＳＦ１免疫遮断の程度の関数として肺での転移負荷を定量し、肺転移の少なくとも５０％低減を達成することである。
実施例５．ヒト化突然変異ＴＭ４ＳＦ１抗体は、原発性内皮細胞においてＴＭ４ＳＦ１に結合し得る
[0349]ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、４℃で様々な試験抗体（１μｇ／ｍｌ）によって前標識され、３７℃の培養に戻された。
【０３１８】
[0350]本研究に使用した試験抗体は以下であった：ヒト化ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５（配列番号９７に記載の軽鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｌ５）および配列番号９０に記載の重鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２）を含む）；ヒト化突然変異（ｈｍ）ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ１（配列番号９９に記載の軽鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｌ５ｖ１）および配列番号９２に記載の重鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２ｖ１）を含む）；ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ２（配列番号１０１に記載の軽鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｌ５ｖ２）および配列番号９２に記載の重鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２ｖ１）を含む）；ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ３（配列番号１０３に記載の軽鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｌ５ｖ３）および配列番号９２に記載の重鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２ｖ１）を含む）；ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ４（配列番号１０５に記載の軽鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｌ５ｖ４）および配列番号９２に記載の重鎖アミノ酸配列（ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２ｖ１）を含む）；ならびにヒト化ＡＧＸ−Ａ０１。
【０３１９】
[0351]図１２の平均蛍光強度（ＭＦＩ）プロットに示すように、９０位にトリプトファン残基を有する軽鎖配列を含む試験抗体ｈＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ１およびｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ２（ｈＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ１、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ２の高ＭＦＩ値；およびｈＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５のＥＣ５０＝１．５３ｎＭ；ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ１のＥＣ５０＝１．５８ｎＭ、ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ２のＥＣ５０＝１．６４ｎＭによって示される）は、９０位にトリプトファンからチロシンへの置換（Ｗ９０Ｙ）を有する軽鎖配列を含む試験抗体ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ３およびｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ４（ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ３およびｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ４の低ＭＦＩ値；ｈｍＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ３のＥＣ５０＝４．１９ｎＭ；ｈｍ  ＡＧＸ−Ａ０７  Ｈ２Ｌ５  Ｖ４のＥＣ５０＝４６．０６ｎＭによって実証される）と比較してＨＵＶＥＣ細胞結合に優れていた。ヒト化ＡＧＸ−Ａ０１もＥＣ５０＝３．０３ｎＭで結合することができた。
【０３２０】
実施例６．抗ＴＭ４ＳＦ１抗体によって前標識された原発性内皮細胞におけるＴＭ４ＳＦ１の内部移行（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）
[0352]ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、４℃で様々なＡＧＸ−Ａ０１（１μｇ／ｍｌ）によって前標識され（図１３（Ａ）に示す染色）、以下の阻害剤なしで（図１３（Ｂ）に示す）または以下の阻害剤の存在下で３７℃の培養に戻された；２０μＭ  ｐｉｔｓｔｏｐ−２（クラスリン阻害剤）（図１３（Ｃ）に示す）；１０μＭクロルプロマジン（クラスリンおよびカベオリン媒介エンドサイトーシス阻害剤）（図１３（Ｄ）に示す）；０．４μＭバフィロマイシン（ｂｉｆｉｌｏｍｙｃｉｎ）Ａ（オートファジー阻害剤）（図１３（Ｅ）に示す）；または２０μＭダイナソア（ダイナミン阻害剤）（図１３（Ｆ）に示す）。４時間後、細胞は４％パラホルムアルデヒド中で固定され、Ａｌｅｘａ−４８８標識ロバ抗ヒトＡｂ、ファロイジン（ｐｈａｌｌｏｄｉｎ）（アクチン線維を染色）およびＤＡＰＩ（核を染色）によって染色された。
免疫細胞化学は、阻害剤添加なし（図１３（Ａ））またはｐｉｔｓｔｏｐ−２（図１３（Ｃ）、クロルプロマジン（図１３（Ｄ））、もしくはバフィロマイシン（ｂｉｆｉｌｏｍｙｃｉｎ）Ａ（図１３（Ｅ））の存在下で、４時間で実質的に等価なＡＧＸ−Ａ０１取り込みを実証した。しかしながら、ＡＧＸ−Ａ０１は、ダイナソアと培養した場合（図１３（Ｆ））、細胞表面に多く残った。
【０３２１】
【表２−１】
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【０３２２】
【表２−２】
2020534351.tif 000005
【０３２３】
【表２−３】
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【０３２４】
【表２−４】
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【０３２５】
【表２−５】
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【０３２６】
【表２−６】
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【０３２７】
【表２−７】
2020534351.tif 000010
【０３２８】
【表２−８】
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【０３２９】
【表２−９】
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【０３３０】
【表２−１０】
2020534351.tif 000013
【０３３１】
【表２−１１】
2020534351.tif 000014
【０３３２】
【表２−１２】
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【０３３３】
【表２−１３】
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【０３３４】
【表２−１４】
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【０３３５】
【表２−１５】
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【０３３６】
【表２−１６】
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【０３３７】
【表２−１７】
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【０３３８】
【表２−１８】
2020534351.tif 000021
【０３３９】
【表２−１９】
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【０３４０】
【表２−２０】
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【０３４１】
【表２−２１】
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【０３４２】
【表２−２２】
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【０３４３】
[0353]本開示の好ましい実施形態が示され、本明細書に記載されるが、当業者にはそのような実施形態が例示のためだけに提供されることが明らかである。多くの変更、改変および置換が、ここで本開示から逸脱することなく当業者に想起されるであろう。本明細書に記載の本開示の実施形態の様々な代替えが本開示の実行に用いられ得ることが理解されるはずである。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を規定し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法および構造ならびにそれらの等価物がそれによりカバーされることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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2020534351.tif 000040
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