(57)【要約】本発明は、ミトコンドリア由来の活性酸素種（又はＲＯＳ）が関連する疾患の予防及び／又は治療に関する。より詳細には、本発明は、良性前立腺肥大症の予防及び／又は治療のため、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する阻害剤、特にアネトールトリチオンを使用することに関する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
良性前立腺肥大症の予防及び／又は治療における使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項２】
慢性前立腺炎に続くＢＰＨの発生を予防するために投与される、請求項１で定義された使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項３】
単剤療法で投与される、請求項１又は２で定義された使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項４】
ＢＰＨに関連する前立腺のアンドロゲンシグナルを減少させることにおける使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項５】
ＢＰＨに関連する前立腺の炎症を阻害すること／軽減させることにおける使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項６】
ＢＰＨに関連する前立腺のアンドロゲンシグナル及び前立腺の炎症を減少させることにおける使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項７】
４０〜４００ｍｇの間の１日量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのアネトールトリチオン（ＡＴＴ）。
【請求項８】
８０〜２４０ｍｇの間の１日量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのアネトールトリチオン（ＡＴＴ）。
【請求項９】
１回の投与あたり８０ｍｇの用量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のためのアネトールトリチオン。
【請求項１０】
良性前立腺肥大症の予防及び／又は治療における使用のためのアネトールトリチオン（ＡＴＴ）及び賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１１】
α遮断薬、５α還元酵素阻害剤、及びニコチンアミドから選択される少なくとも１種の分子をさらに含む、請求項４で定義された使用のための、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ミトコンドリア由来の活性酸素種（すなわちＲＯＳ）が関連する疾患の予防及び／又は治療に関する。より詳細には、本発明は、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）の予防及び／又は治療のため、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する阻害剤、特にアネトールトリチオンを使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
良性前立腺肥大症
非常に多くのＢＰＨの起因となる慢性前立腺炎であって（Ｄｉ  Ｓｉｌｖｅｒｏ  Ｆ．他、Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ、２００３年、４３：１６４〜１７５頁；Ｒｏｂｅｒｔ  Ｇ．他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ、２００９年、６９：１７７４〜１７８０頁）、少なくとも、単に老化に関連付けられているだけではない慢性前立腺炎は、症候性又は無症候性である場合があり、細菌性又はウイルス性である場合があり、環境起源又は解剖学的起源のものである場合があり、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の増加を伴うか、そうでなければＰＳＡの増加によるものである場合がある。一般集団の男性の３分の１が、生涯において、前立腺炎に一致する症状を呈することがあるということは、近頃一般的に認識されている（Ｓｉｂｅｒ  Ｌ．他、Ｐｒｏｇ  Ｕｒｏｌ、２０１０年、２０：８７２〜８８５頁）。これには、超音波検査によって特定の例で同定されることがあるか、又は追及されることがない場合、特にＰＳＡが正常値のままである場合には、同定されないままとなることがある、炎症性無症候性の前立腺炎の全症例を加えるべきである。ＢＰＨは、３５〜４０歳の年齢から発見され、その有病率は、年齢と共に増加して、５０歳を超える対象では７５％に達し（Ｂｒｉｇａｎｔｉ  Ａ．他、Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ  Ｓｕｐｐｌ、２００９年、８：８６５〜８７１頁）、無症候のままの症例もある。
【０００３】
ＢＰＨは、慢性進行性疾患であり、その組織学的発現は、主に前内側移行領域であるが、尿道周囲領域にも見られる上皮組織及び線維筋性間質の異常な発達を特徴とする。間質肥大及び上皮の肥厚を伴う、この組織リモデリングは、ＲＯＳの過剰産生及び炎症誘発性サイトカインの過剰発現によって制御されている細胞増殖とアポトーシスの間の不均衡の結果である（Ｋｉｍ  Ｈ−Ｊ．他、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ、２０１３年、１８３２：１８３〜１９４頁；Ｍｉｎｉｃｉｕｌｌｏ  ＰＬ．他、Ｕｒｏｌ  Ｉｎｔ、２０１５年、９４：２４９〜２５４頁；Ｓａｉｔｏ  Ｍ．他、Ｓｃｉ  Ｒｅｐ、２０１４年、４：３８２２頁）。実際に、最近の研究では、局所的な血流量の降下（Ｓａｉｔｏ、２０１４年；Ｂｅｒｇｅｒ  ＡＰ．他、ＢＪＵ  Iｎｔ、２００６年、９８：５８７〜５９０頁）、虚血（Ｃｈｏｕ  ＰＳ．他、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１４年、９：ｅ９３０８１）、及び炎症（Ｖｅｌａ  Ｎａｖａｒｒｅｔｅ  Ｒ．他、Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ、２００３年、４４：５４９〜５５５頁；Ｆｉｂｂｉ  Ｂ．他、Ｉｎｔ  Ｊ  Ａｎｄｒｏｌ、２０１０年、３３：４７５〜４８８頁）によって生じる局所的な低酸素が、ＢＰＨの発症及び進展において主要な役割を果たし、ＲＯＳは、それらを関連付ける重要な要素である（Ｒｅｎ  Ｈ．他、Ａｇｉｎｇ  Ｍａｌｅ、２０１５年、Ｅａｒｌｙ  Ｏｎｌｉｎｅ：１−５［２０１５年３月９日］；Ｓａｉｔｏ、２０１４年）ことが示されている。
【０００４】
腺塊（ｇｌａｎｄｕｌａｒ  ｍａｓｓ）の４０％を通常形成する間質細胞は、ＢＰＨの事象において、前立腺組織の大部分を形成する。この間質細胞のＲＯＳ、ＨＩＦ１α、及びＩＬ−８の含有量は、顕著に増加しており、この増加は、低酸素の場合に増強され、顕著な細胞増殖を伴う（Ｒｅｎ、２０１５年）。血管の老化それ自体が、局所的な虚血（Ｌａｋａｔｔａ  ＥＧ．、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００３年、１０７：４９０〜４９７頁）及び低酸素の根源であり、Ｗｕは、症例の７０％において、ＢＰＨが組織低酸素と関連しており、ヒトでは、前立腺の腺房内重量に関連付けられている前立腺のＨＩＦ１αレベルと関連していることを、さらに示している（Ｗｕ  Ｆ．他、Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ、２０１６年、７：１２０５３〜１２０６２頁）。ＨＩＦ（低酸素誘導因子）経路が、Ｏ２の欠乏に対する応答における最初の細胞調節経路であることから、この慢性低酸素に対する応答は、ＨＩＦの活性化で始まる（Ｋｕｍａｒ  Ｈ．及びＣｈｏｉ  Ｄ−Ｋ、Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、２０１５年、ＩＤ５８４７５８、Ｈｉｎｄａｗｉ  Ｐｕｂｌｉｓｈ  Ｃｏｒｐ；Ｍｅｎｅｓｅｓ  ＡＭ．及びＷｉｅｌｏｃｋｘ  Ｂ．、Ｈｙｐｏｘｉａ、２０１６年、４、５３〜６７頁）。ＨＩＦは、３種のアイソフォーム（ＨＩＦ１α、２α、及び３α）が知られており、このため、低酸素に対する転写性細胞応答（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）の調整を担うヘテロ二量体である。ＨＩＦは、もっぱら低酸素によって誘導されるαタンパク質、すなわちＨＩＦα及び構成的に発現されるβタンパク質、すなわちＡＲＮＴ（アリール炭化水素受容体核輸送体）からなる。
【０００５】
酸素正常状態において、α断片は、産生されるにつれて分解される。ＨＩＦ−１αの分解を指示し、ある意味で、低酸素のセンサーであるといえるものは、３種のアイソフォーム（ＰＨＤ１〜３）からなるジオキシゲナーゼファミリーであるＰＨＤ（プロリルヒドロキシラーゼドメイン酵素）、すなわちオキシダーゼである。この目的のため、ＰＨＤは、ＨＩＦ−αのＯＤＤドメイン（酸素依存的分解ドメイン）に共有結合し、これによって生じるヒドロキシラーゼ活性は、実質的にＰＨＤの阻害剤であるｍｔＲＯＳによって調節される。これらの作用は、中等度の低酸素の場合に、ミトコンドリアによるＲＯＳの産生が、逆説的に過剰となるという事実によって促進される（Ｋｕｍａｒ、２０１５年）。ＲＯＳスカベンジャー（フリーラジカルスカベンジャー）の流入のような、ミトコンドリア複合体１の阻害は、低酸素によって誘導されたＨＩＦ−１αの安定化も阻害する（Ｋｕｍａｒ、２０１５年）。Ｋｕｍａｒ（２０１５年）によると、ｍｔＲＯＳの産生は、「低酸素」シグナルの細胞伝播を担う要素である。
【０００６】
ＲＯＳは、セカンドメッセンジャーとして働き、多数の細胞シグナル伝達経路を活性化し、これによって、細胞の増殖を促す成長因子、サイトカイン、ＮＦ−κＢ（ＲＯＳインデューサーであり、増殖誘発性、抗アポトーシス、及び炎症誘発性の要素である）、及びいくつかのケモカインの作用を促進するものである。ＨＩＦ−１αの過剰産生が、強力な細胞移動要因であり、前述の組織リモデリングにも関与する、上皮間葉移行の刺激に寄与することも加えるべきである（Ｋｉｍ、２０１３年；Ｗｕ  Ｘ．他、Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｌｅｔｔ、２０１７年、２６５：９〜１６頁）。
【０００７】
フリーラジカル、ＲＯＳ、及びｍｔＲＯＳの過剰産生の状況下において（この状況下では、１つの産生が他の産生を刺激することで、相互酸化による完全な増幅システムを形成する［Ｓｃｈｒａｍｍ  Ａ．他、Ｖａｓｃｕｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０１２年、５６：２１６〜２３１頁］）、このように産生された過剰なＲＯＳに対処するため、細胞の抗酸化物質が、急速に消費され、細胞に存在しなくなる（Ｋｈａｎｄｒｉｋａ  Ｌ．他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ、２００９年、２８２：１２５〜１３６頁；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ＤＳ．及びＭｉｔｔａｌ  ＲＤ．、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、２００５年、２０：１６２〜１６５頁）。
【０００８】
最終的に、炎症それ自体は、間質細胞及び炎症性領域に浸潤する免疫細胞によって産生される種々のサイトカインを介して、ＨＩＦ−１αの発現を刺激する（Ｋｉｍ、２０１３年；Ｓａｉｔｏ、２０１４年）。この点において、全ての前立腺感染症が、炎症反応の原因であり、この炎症反応が、ＲＯＳの過剰産生並びにＮＦ−κＢ及び炎症誘発性サイトカイン（ＩＬ−１β、−６、−８）のアップレギュレーションを局所的に伴うことになること（Ｇｕ  Ｎ−Ｙ．他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ、２０１６年、７６：８８５〜８９６頁；Ｈａｎ  ＩＨ．他、Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１６年、３８：６７８〜６８７頁；Ｋｉｍ  Ｓ−Ｓ．他、Ｋｏｒｅａｎ  Ｊ  Ｐａｒａｓｉｔｏｌ、２０１６年、５４：１２３〜１３２頁；Ｓｅｏ  Ｍ−Ｙ．他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ、２０１４年、７４：４４１〜４４９頁）、感染症に対する応答として上皮細胞によって放出されるこれらの炎症メディエーターが、マスト細胞の遊走及び活性化を誘導し、ＣＸＣＬ８−ＣＸＣＲ１及びＣＣＬ２−ＣＣＲ２シグナル伝達経路を介した間質細胞の増殖をもたらし（Ｋｉｍ  ＪＨ．他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ、２０１６年、７６：１４３１〜１４４４頁）、組織リモデリングの不可欠な要素である上皮間葉移行（ＥＭＴ）を促すことによって、その侵襲力（ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｐｏｗｅｒ）を増強すること（Ｈａｎ、２０１６年）は、強調されるべきである。
【０００９】
ミトコンドリア及びＲＯＳ産生
ミトコンドリアは、心血管疾患、神経変性疾患（パーキンソン病、アルツハイマー病など）、糖尿病、加えて虚血起原の組織機能不全を含む、老化と関連するほぼ全ての疾患の病因に関与している。ミトコンドリアが、老化のフリーラジカル説において中心的な役割を果たしていることは、広く認められている。この学説では、活性酸素種（ＲＯＳ）によりもたらされる損傷の蓄積が、多くの細胞機能、特にエネルギー供給及び良好な細胞の機能性のために不可欠なミトコンドリア機能に影響するとされている。このため、最適な細胞の機能性が、細胞自体の修復のために、細胞によって必要とされるエネルギーを供給するために極めて重要であることから、ミトコンドリアはＲＯＳの主な標的であると思われる。
【００１０】
ミトコンドリアは、主なＲＯＳの発生源であることに加えて、これらのＲＯＳによりもたらされる損傷に対する感度も特に高い。結果として、ミトコンドリア自体は、細胞機能不全及び細胞死に寄与する酸化損傷の起源であるＲＯＳを産生する。
【００１１】
ＲＯＳの作用を打ち消すための抗酸化剤の能力を評価するために、多くの研究が実施されてきた。いくつかの抗酸化分子は、前臨床試験で条件を満たすことが証明されたが、その有効性は、治験の大半で、部分的に確認されるのみであった（Ｏｒｒ他、２０１３年、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ、６５：１０４７−５９）。
【００１２】
さらに、最近の研究では、ＲＯＳの過度の減少は、細胞に有害作用を招くことが示されており、これは、バランスのとれたＲＯＳの産生が、良好な細胞の機能性に寄与することを示唆している（Ｇｏｏｄｍａｎ他、２００４年１２月１日、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６（２３）：１７４３−５０；Ｂｊｅｌａｋｏｖｉｃ  Ｇ他、２００７年２月２８日、ＪＡＭＡ．２９７（８）：８４２−５７）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
多くの病状における酸化ストレスの役割に関する研究は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する選択的阻害剤を入手することの利点を明らかにしてきた。現時点で入手可能な抗酸化剤は、このような特異性を有しておらず、結果的に、細胞質ＲＯＳの産生が影響を受けた場合に生じる副作用のリスクがあり、これらの副作用は、詳細に記載されている。
【００１４】
ＢＰＨにおけるＲＯＳの役割は、すでに明白に示されている。一方で、実験的な膣トリコモナス（Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）前立腺感染症モデルにおいて、抗ＮＯＸ２（ＤＰＩ：ジフェニレンヨードニウム）による、ＲＯＳ産生の阻害は、前述の全てのサイトカインの過剰発現を強く防ぎ、これは、ＲＯＳがこの過剰発現の起源であること（Ｋｉｍ  Ｓ−Ｓ．、２０１６年）、及び感染性前立腺炎後のＢＰＨ発症を予防する目的を踏まえて、この治療アプローチは想像できることを示唆している。他方で、最近の研究では、非特異的ＲＯＳスカベンジャーであるエダラボンを用いた治療によって、前立腺ＲＯＳ、ＨＩＦ−１α、及びＶＥＧＦのレベルが低下し、細胞増殖が減少し、最終的にアポトーシスが促され、これによって増殖とアポトーシスの間の正常なバランスが回復されることが示されている（Ｒｅｎ、２０１５年）。全体として考えると、これらの結果は、ＢＰＨにおけるＲＯＳの中心的な役割を示唆する。
【００１５】
これらの知見を考慮して、本発明者らは、非選択的抗酸化剤の有害な副作用を経験することなく、細胞のための予防的作用を促すために、詳細にはミトコンドリアレベルにおけるＲＯＳ産生を低下させることを提案する。このため、本発明者らは、ＢＰＨの予防及び／又は治療のために、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤、特にアネトールトリチオン（ＡＴＴ）を投与することの利点を確立した。
【００１６】
特に、本発明者らは、ＡＴＴが、従来の抗酸化剤とは異なり、主にミトコンドリア呼吸鎖の複合体ＩのＩＱ部位であって、主要なＲＯＳ産生部位及びミトコンドリア機能不全の主要部位の両方であるＩＱ部位における、ミトコンドリアＲＯＳの産生に直接的及び選択的に作用することを、思いがけなく示した。
【００１７】
さらに、本発明者らは、ＡＴＴが、ミトコンドリアの酸化的リン酸化に影響を及ぼすことがなく、これは、ＡＴＴ分子の長期間使用における、望ましくない副作用がないこと、酸素のフリーラジカルに関連する疾患の治療及び／又は予防の可能性を示唆することを、予め明示している。この特性は特に関心が高い。
【００１８】
最終的に、本発明者らは、マウスの良性前立腺肥大症モデルにおいて、ＡＴＴの投与が、アンドロゲンシグナルを減少させ、前立腺の炎症を軽減することを、ここで示している。これらの前臨床結果は、非常に満足のいくものであり、良性前立腺肥大症患者に使用できる見込みが高い。
【００１９】
ＡＴＴは、胆汁及び唾液の分泌物を増加させるための、スルファレム（Ｓｕｌｆａｒｌｅｍ）（登録商標）という商品名にて販売承認をすでに得ている。ＡＴＴは、消化困難及び口内乾燥を治療するために使用される。このため、ＡＴＴ分子の長期的使用に伴う副作用の報告は、これまでのところない。したがって、ＡＴＴは、ヒトへの使用がＦＤＡ及びＥＭＡによって承認された最初の薬剤であって、ミトコンドリアがＩＱ部位においてＲＯＳを産生することを予防する薬物である。
【００２０】
本発明は、非常に驚くべき画期的方法による、新規の治療適用、すなわちＢＰＨの予防及び治療のための、この薬剤の使用を提案する。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の最初の主題は、ＢＰＨの予防及び／又は治療のための、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤、特にアネトールトリチオン（ＡＴＴ）の使用に関する。
【００２２】
「ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤」は、細胞質基質における細胞ＲＯＳの産生に影響を及ぼすことなく、ミトコンドリア呼吸鎖におけるＲＯＳの産生を特異的に阻害する能力を持つ全ての化合物であると理解される。特に、非選択的抗酸化剤によってＲＯＳの産生が過度に阻害される事象において、細胞質基質におけるＲＯＳの欠如に関連する副作用を予防することから、この特異性は極めて優れている。好ましい実施形態において、この阻害剤は、ミトコンドリア呼吸鎖のＩＱ部位における、ＲＯＳの産生に対する特異的な阻害を誘発する能力がある。
【００２３】
阻害に対する同じ特異性を有する他のいずれの化合物も適切であるが、この種類の阻害剤は、例えば、ＡＴＴ、ＡＴＸ、又はＮＣ−ＰＯＢＳである。
【００２４】
好ましい実施形態において、ＢＰＨの予防及び／又は治療のために使用される、ミトコンドリアＲＯＳの特異的阻害剤は、ＡＴＴである。
【００２５】
本発明の意味において、「阻害剤」の使用は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する、少なくとも１種の特異的阻害剤の使用であると理解されるものであり、このため、「阻害剤」は、以下に記載される通り、１種の阻害剤又は複数の阻害剤の組合せであってもよい。
【００２６】
ＡＴＴ、アネトールトリチオンは、５−（４−メトキシフェニル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンである。ＡＴＴは、ＡＯＬとしても知られている。ＡＴＴは以下の式を有する：
【００２７】
【化１】
2020536856.tif 000002
【００２８】
ＡＴＸは、ヒト及び動物の両方において、肝臓で代謝されたＡＴＴのフェノール形態（ｐｈｅｎｏｌｉｃ  ｆｏｒｍ）に相当する。この４−ＯＨ−アネトールトリチオン形態については、過去に記述されている（Ｌｉ他、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ａｎａｌ、２００８年、４７：６１２〜６１７頁）。ＡＴＴの構造が、この代謝の間保持されているため、特に、現時点で市販の剤形である経口投与後に認められる、血中生成物の大部分がＡＴＸであることから、ＡＴＴによってもたらされる抗ＲＯＳ活性が、ＡＴＸに認められると想定する理由がある（Ｙｕ、２０１１年）。加えて、ＡＴＸは、エステルの形成を可能にするパラフェノール基を携えている。ある特定の実施形態において、ＡＴＸは、エステル化形態で使用され、例えば、リン酸エステル、エチリデンホスフェート、硫酸エステル、ヘミコハク酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、イソ酪酸エステル、ヘキサン酸エステル、ピバル酸エステル、エトキシカルボン酸エステル、若しくはニコチン酸エステルの形態、又はグリシンエステル、ジエチルグリシンエステル、若しくはバリンエステルのようなアミノ酸のエステルの形態でさえあり、この一覧は非限定的である。
【００２９】
ＮＣ−ＰＯＢＳは、Ｎ−シクロヘキシル−４−（４−ニトロフェノキシ）ベンゼンスルホンアミドに相当し、呼吸鎖のＩＱ部位におけるミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤として、文献に記載されている唯一の分子である（Ｏｒｒ他、２０１３年、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．、６５：１０４７〜１０５９頁）。
【００３０】
好ましい実施形態において、特異的阻害剤は、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択される。特異的阻害剤がＡＴＴであることは、特に好ましい。特定の実施形態において、ＢＰＨの予防及び／又は治療は、ＡＴＴ、ＡＴＸ、及びＡＴＸエステルのうちの少なくとも２つの分子の組合せの結果として達成される。
【００３１】
本発明の意味において、「予防」は、無症候性ではあるが、ＢＰＨを発症する可能性が高い対象における、前内側移行領域及び尿道周囲領域の間質過形成及び／又は上皮の肥厚の発生を回避することであると理解される。ＢＰＨを発症する可能性が高い対象は、特に慢性前立腺炎を有する患者である。
【００３２】
本発明の意味において、「治療」は、ＢＰＨに関連する症状を軽減すること、特に、ＢＰＨに罹患した対象における、前内側移行領域及び尿道周囲領域の間質過形成及び／又は上皮の肥厚の出現を安定化するか、逆行させるか、又は遅延させることであると理解される。最も広い意味では、「治療」という用語は、ＢＰＨの発生を予防することも含む。治療を受ける対象は、ヒト又は動物であってもよい。
【００３３】
これまでのところ、ＢＰＨに関連する症状を示す患者に利用可能な治療のうち、５α還元酵素阻害剤及び植物療法に先行して、α遮断薬が主体である。しかし、これらの治療は、部分的に有効であり、及び／又は長期副作用を有する。
【００３４】
慢性前立腺炎は、多くのＢＰＨの起源であると考えられている。しかし、細菌を起源とする場合、慢性前立腺炎は、抗菌薬治療に抵抗性を示すことがあり、結果として代替治療が存在しない。この場合、他の慢性前立腺炎の症例と同様に、本発明者らは、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤を、３０歳又は４０歳から投与開始することによって、ＢＰＨの出現を予防することを提案する。
【００３５】
したがって、第１の特定の実施形態において、本発明は、慢性前立腺炎に続くＢＰＨの発生を予防することに関する。
【００３６】
冒頭に記載されている通り、ＢＰＨの発生は、複数の因子の組合せの結果であり、その中心的な要素はＲＯＳである。この文脈において、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤を投与することは、それ自体が、新規のＢＰＨの病因に基づく治療（ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を可能にし得る。
【００３７】
本発明の意味において、「新規のＢＰＨ」は、最近診断されたＢＰＨであると理解される。実際には、患者は、最初の臨床徴候が煩わしくなった際に、診察のために訪れるであろう。診断が下されるとすぐに、対応が検討され得る。しかし、現時点で利用可能な薬剤（α遮断薬及び５α還元酵素阻害剤）が長期副作用を有するため、対症療法の実施は、遅れることが多い。このため、副作用のない代替治療を入手することは、大変興味深いことであろう。本発明者らの仮説によると、この利点は、ＡＴＴのような、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する阻害剤を投与することによって達成され得る。期待される有益な作用は、過形成の早期にミトコンドリアＲＯＳを阻害することで、ＢＰＨの発症を遅延させること又はＢＰＨを安定化することから、ＢＰＨの症状を逆行させる可能性があることに及ぶ可能性がある。
【００３８】
したがって、第２の特定の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤であって、好ましくは、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである阻害剤を投与することによる単剤療法によって、ＢＰＨを治療することに関する。この実施形態は、より詳細に新規のＢＰＨについて言及する。
【００３９】
好ましい実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を投与することによる単剤療法によって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４０】
ＢＰＨの症状が生じた後にＢＰＨの治療が開始された場合、又はα遮断薬を使用して、すでに症状の制御ができ始めている場合、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤は、α遮断薬と組み合わせることが可能である。現時点で利用可能なα遮断薬には、アルフゾシン、テラゾシン、タムスロシン、及びプラゾシンが含まれる。
【００４１】
したがって、第３の特定の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤であって、好ましくは、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである阻害剤を、α遮断薬と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４２】
好ましい実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を、α遮断薬と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４３】
同様に、ＢＰＨの症状が生じた後にＢＰＨの治療が開始された場合、又は５α還元酵素を使用して、すでに症状の制御ができ始めている場合、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤は、５α還元酵素阻害剤と組み合わせることが可能である。現時点で利用可能な５α還元酵素阻害剤には、ＩＩ型５α還元酵素の選択的阻害剤であるフィナステリド及びＩ型及びＩＩ型の両方のアイソザイムの阻害剤であるデュタステリドが含まれる。
【００４４】
好ましい実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を、５α還元酵素阻害剤と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４５】
第４の特定の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤であって、好ましくは、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである阻害剤を、５α還元酵素阻害剤と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４６】
好ましい実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を、ニコチンアミドと組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４７】
加えて、特に、ＢＰＨは老化病状であり、詳細には、老化に伴いニコチンアミドレベルが低下しているため（Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＰＡ．他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１７年、３５５：７５６〜７６０頁）、ＳＯＤ、ＧＰＸ、カタラーゼのような細胞の抗酸化酵素を誘導し、３種の炎症誘発性サイトカインのＴＮＦα、ＩＬ−６、及びＩＬ−８の産生を阻害する分子であるニコチンアミドとの組合せは、想像できる（Ｌａｐｐａｓ  Ｍ．及びＰｅｒｍｅｚｅｌ  Ｍ．、Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、２０１１年、２２：１１９５〜１２０１頁；Ｙａｎｇ  ＳＪ．、Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、２０１４年、２５：６６〜７２頁）。
【００４８】
第５の特定の実施形態において、本発明は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤であって、好ましくは、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである阻害剤を、ニコチンアミドと組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。本発明の変形例において、ＢＰＨ治療は、（ｉ）ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤、（ｉｉ）ニコチンアミド、及び（ｉｉｉ）α遮断薬を投与することによって達成される。代替の実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を、ニコチンアミド及びα遮断薬と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００４９】
本発明の別の変形例において、ＢＰＨ治療は、（ｉ）ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤、（ｉｉ）ニコチンアミド、及び（ｉｉｉ）５α還元酵素阻害剤を投与することによって達成される。
【００５０】
別の代替実施形態において、本発明は、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）を、ニコチンアミド及び５α還元酵素阻害剤と組み合わせて投与することによって、ＢＰＨを治療することに関する。
【００５１】
本発明は、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤の治療上有効な用量を、特異的阻害剤を必要とする患者に投与することを伴う、ＢＰＨを治療する方法にも関する。
【００５２】
本発明の第２の主題は、前立腺のアンドロゲンシグナルを減少させるための、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤の使用に関する。この使用は、特にＢＰＨ治療に適用可能である。
【００５３】
好ましい実施形態において、本発明は、前立腺のアンドロゲンシグナルを減少させるための、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）の使用に関する。
【００５４】
この使用は、現時点でＢＰＨ治療に最も使用される分子である、５α還元酵素阻害剤の薬効によって達成される、治療上の利点に適合する。
【００５５】
ＡＴＴのこの作用は、以下の実施例、特に段落３の図３Ａ〜６Ｃに関して提示された結果であって、アンドロゲン受容体、５α還元酵素１及び２受容体（テストステロンを、その活性代謝物であるジヒドロテストステロンに変換することを担う）、並びにＰＳＰ９４受容体（アンドロゲン経路を介して活性化される標的遺伝子）への明白な抗アンドロゲン作用を示す結果によって裏付けられる。
【００５６】
本発明の第３の主題は、前立腺の炎症を軽減するための、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤の使用に関する。この使用は、特に前立腺炎及びＢＰＨの治療に適用可能である。
【００５７】
好ましい実施形態において、本発明は、前立腺の炎症を軽減するための、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）の使用に関する。
【００５８】
良性前立腺肥大症の進行の促進における炎症の作用は、認識が深まっており、このため、前立腺の炎症の阻害は、ＢＰＨの治療において特に望ましい（Ｄｅ  Ｎｕｎｚｉｏ他、２０１６年）。
【００５９】
ＡＴＴのこの作用は、以下の実施例、特に段落４の図７〜９Ｃに関して提示された結果であって、ＣＤ４５マーカーの減少、同様にＩＬ６及びＴＮＦα炎症誘発性マーカーの減少を介した、明白な抗炎症性作用を示す結果によって裏付けられる。
【００６０】
好ましい実施形態において、本発明は、同時に前立腺のアンドロゲンシグナルを減少させ、前立腺の炎症を軽減するための、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤の使用に関する。
【００６１】
さらにより好ましい実施形態において、本発明は、同時に前立腺のアンドロゲンシグナルを減少させ、前立腺の炎症を軽減するための、アネトールトリチオン（ＡＴＴ）の使用に関する。
【００６２】
これまでのところ利用可能な治療の基礎において、前立腺内の炎症とアンドロゲンシグナルの間に負の相関があり、特に、アンドロゲンシグナルを実験的に減少させると（例えば、去勢）、炎症の増強に繋がる際に明白となることが認められている。
【００６３】
しかし、全く驚くべきことに、本発明者らは、アネトールトリチオンのような、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤の使用によって、前立腺内の炎症の軽減を伴うアンドロゲンシグナルの減少がもたらされることをここに示している。この種類の作用機序は、完全に独自のものであり、良性前立腺肥大症の起源であるパラメーターのうちの２つを低下させるため、この疾病の治療に特に適している。
【００６４】
別の好ましい実施形態において、ＢＰＨの予防及び／又は治療におけるその使用のためのアネトールトリチオンの１日量は、４０〜４００ｍｇの間である。優先的に、この１日量は、８０〜２４０ｍｇの間である。
【００６５】
さらにより好ましい実施形態において、アネトールトリチオンの１日量は、それぞれ２０〜２００ｍｇの２回の投与に分割され、さらにより優先的には、それぞれ４０〜１２０ｍｇの２回の投与に分割される。
【００６６】
例として、各投与は、ＡＴＴを４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１５０、又は２００ｍｇ含んでもよい。
【００６７】
好ましい実施形態において、アネトールトリチオンの用量は、１回の投与あたり８０ｍｇである。
【００６８】
本発明の第４の主題は、ＢＰＨの予防及び／又は治療のための、ＡＴＴ、ＡＴＸ、若しくはＡＴＸエステルから選択されるか、又はこれらの分子の少なくとも２つの組合せである、ミトコンドリアＲＯＳの産生に対する特異的阻害剤を含む医薬組成物に関する。
【００６９】
好ましい実施形態において、前記組成物は、少なくともＡＴＴを含む。
【００７０】
特定の実施形態において、前記組成物は、ＡＴＴ並びにα還元酵素分子、α遮断薬分子、及びニコチンアミドから選択される少なくとも１種の他の分子を含む。
【００７１】
この種類の組成物は、本発明の治療的使用に適しており、例えば、経口投与又は静脈内投与が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺の重量（ｍｇ単位）と動物の重量（ｇ単位）の間の比を示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における半分の前立腺の重量（ｍｇ単位）と動物の重量（ｇ単位）の間の比を示す図である。
【図２】対照群及びＡＴＴ群における免疫組織化学検査（ＩＨＣ）で観察されたＫｉ−６７の発現レベルを示す図である。
【図３】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたアンドロゲン受容体の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたアンドロゲン受容体の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたアンドロゲン受容体の発現レベルを示す図である。
【図４】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ１受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ１受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ１受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。
【図５】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ２受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ２受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＳＲＤ５Ａ２受容体（５α還元酵素受容体）の発現レベルを示す図である。
【図６】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＳＰ９４（アンドロゲン経路を介して活性化される標的遺伝子）受容体の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＳＰ９４（アンドロゲン経路を介して活性化される標的遺伝子）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＳＰ９４（アンドロゲン経路を介して活性化される標的遺伝子）の発現レベルを示す図である。
【図７】対照群及びＡＴＴ群における半分の前立腺に対する免疫標識化（ｉｍｍｕｎｅ−ｍａｒｋｉｎｇ）によって観察されたＣＤ４５マーカーの発現レベルを示す図である。
【図８】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＩＬ６サイトカイン（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＩＬ６サイトカイン（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＩＬ６サイトカイン（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。
【図９】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＴＮＦα（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＴＮＦα（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＴＮＦα（炎症マーカー）の発現レベルを示す図である。
【図１０】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のブロットによって観察されたタンパク質の酸化／カルボニル化の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のブロットによって観察されたタンパク質の酸化／カルボニル化の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のブロットによって観察されたタンパク質の酸化／カルボニル化の発現レベルを示す図である。
【図１１】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ１ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ１ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ１ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。
【図１２】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ３ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ３ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＰＨＤ３ジオキシゲナーゼ（酸化ストレスマーカー）の発現レベルを示す図である。
【図１３】（Ａ）対照群及びＡＴＴ群における背側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＨＩＦ１α（低酸素マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｂ）対照群及びＡＴＴ群における外側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＨＩＦ１α（低酸素マーカー）の発現レベルを示す図である。（Ｃ）対照群及びＡＴＴ群における腹側前立腺のＲＴ−ｑＰＣＲによって観察されたＨＩＦ１α（低酸素マーカー）の発現レベルを示す図である。
【実施例】
【００７３】
実施例１：前臨床評価
ＡＴＴ（アネトールトリチオン）を、プロバシン−プロラクチン（Ｐｂ−ＰＲＬ）マウスに投与した。これは、トランスジェニックマウスモデルであり、詳細には、この前立腺の上皮細胞によってプロラクチンが過剰発現され、ヒトの病状（組織肥大、上皮細胞及び間質細胞の過形成、及び前立腺内の炎症）と共通の特徴を有する良性過形成の発症を招く（Ｋｉｎｄｂｌｏｍ他、２００３年；Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、２０１５ａ；Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、２０１５ｂ）。
【００７４】
試験のため、精製したヤシ油中１５ｍｇ／ｍＬの濃度でＡＴＴを可溶化し、６０ｍｇ／ｋｇ（又は４ｍＬ／ｋｇ、マウス１匹あたり約１２０〜１５０μＬに相当）の用量で、１日１回、連続２８日間、胃管によって投与した。対照群（賦形剤）は、ヤシ油のみで処置した。
【００７５】
したがって、ヒトにおいて、７５ｍｇ（又は１ｍｇ／ｋｇ［Ｈｅ他、２００１年］）の単回経口投与後の血漿ピークから２〜３時間以内に通常観察される濃度と同程度の血漿中の平均ＡＴＣ濃度（１５３ｎｇ／ｍＬ、ｎ＝６マウス）に、１０時間の時点で達することを可能にすることから、６０ｍｇ／ｋｇに固定された用量を、試験のために選択し、この用量は、げっ歯類におけるこの生成物の非常に短い半減期（ラットにおいて０．４時間）の観点から、妥当な用量で、２４時間周期の少なくとも半分の間、ヒトにおいて実施されるのと同程度の濃度を保証する。
【００７６】
各群は、生後平均６±０．４ヵ月のＰｂ−ＰＲＬマウス１２匹を含んだ。
【００７７】
Ｉ．処置及び回収
Ｐｂ−ＰＲＬマウスを、標準状態（餌は約２０〜２２ｋｃａｌ／日、１２時間の日中／夜間）に適応させた。本試験は、マウス５匹を対象に、６ヵ月間まで実施された。前記化合物を、４ｍＬ／ｋｇの用量で、１日１回、連続２８日間、胃管によって投与した。動物の重量を毎週測定し、忍容性レベルを評価した。胃管による投与に関連するストレスの結果として、マウスの重量の２〜３ｇの減少が観察された。
【００７８】
本試験には、Ｐｂ−ＰＲＬマウス１２匹からなる２つの実験群が含まれた：
１群（対照群）：賦形剤（精製したヤシ油、５ｍＬ／ｋｇ）。
２群（ＡＴＴ群）：アネトールトリチオン（６０ｍｇ／ｋｇ／日）。
【００７９】
２８日間の処置終了時に、動物を屠殺し（頚椎脱臼）、その前立腺を回収して、過去の文献に記載された標準の手順で分析した（Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２０１５年、Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、ＰＬｏＳ．ＯＮＥ  ２０１５年、Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１７年）。
【００８０】
１．Ｐｂ−ＰＲＬマウスの前立腺の重量に対するＡＴＴの作用に関する試験
各前立腺葉の新たな重量を、屠殺後に測定し、マウスの重量に対して正規化した。同様に、ＡＴＴ群と対照群の前立腺を識別する巨視的特徴を一覧にした。
【００８１】
外側前立腺及び半分の前立腺についての結果を、それぞれ図１Ａ及び１Ｂに示す。
【００８２】
前立腺における重量の減少傾向が認められ、外側葉においては統計的に有意である。
【００８３】
２．上皮の増殖に対するＡＴＴの作用に関する試験
上皮増殖の指数を計算すること（手動計数又はＣａｌｏｐｉｘソフトウエア）を可能にするＩＨＣ  Ｋｉ−６７によって、細胞増殖を測定した。
【００８４】
半分の前立腺における上皮の増殖に対するＡＴＴの作用についての分析結果を図２に提示する。
【００８５】
因子であるＫｉ−６７の免疫組織化学検査によって推定される通り、前立腺の上皮の増殖における統計的に有意な減少が認められた（図２）。
【００８６】
３．アンドロゲンシグナルに対するＡＴＴの作用に関する試験
アンドロゲンシグナル伝達に関連する要素の発現及び前立腺におけるアンドロゲン受容体の従来の標的（ＡＲ、ＰＳＰ９４、Ｓｒｄ５Ａ１、Ｓｒｄ５Ａ２）の発現についてのＲＴ−ｑＰＣＲ分析によって、本試験を実施した（Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２０１５年、Ｓａｃｋｍａｎｎ  Ｓａｌａ他、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１７年）。
【００８７】
観察可能なアンドロゲンシグナルに対するＡＴＴの作用についての分析結果：
背側、外側、及び腹側前立腺のアンドロゲン受容体レベルにおける分析結果を、それぞれ図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃに提示する。
【００８８】
背側、外側、及び腹側前立腺のＳＲＤ５Ａ１（５α還元酵素）受容体レベルにおける分析結果を、それぞれ図４Ａ、４Ｂ、及び４Ｃに提示する。
【００８９】
背側、外側、及び腹側前立腺のＳＲＤ５Ａ２（５α還元酵素）受容体レベルにおける分析結果を、それぞれ図５Ａ、５Ｂ、及び５Ｃに提示する。
【００９０】
背側、外側、及び腹側前立腺のＰＳＰ９４受容体レベルにおける分析結果を、それぞれ図６Ａ、６Ｂ、及び６Ｃに提示する。
【００９１】
アンドロゲン受容体メッセンジャーＲＮＡ、５α還元酵素１及び２酵素（テストステロンを、その活性代謝産物であるジヒドロテストステロンに転換する）、並びにアンドロゲン経路を介して活性化される標的遺伝子であるＰＳＰ９４の発現における統計的に有意な減少によって明らかにされる、抗アンドロゲン作用が観察された（Ｓａｃｋｍａｎｎ  Ｓａｌａ他、２０１７年）。
【００９２】
４．炎症に対するＡＴＴの作用に関する試験
２つの手法を使用して炎症を測定した：
ＣＤ４５免疫標識（ＩＨＣ）：炎症部位の数及びサイズの定量化を可能にする（Ｃａｌｏｐｉｘソフトウエアを使用した画像解析）。
【００９３】
選択されたサイトカインのＲＴ−ｑＰＣＲ：ＩＬ６及びＴＮＦａ。
【００９４】
炎症に対するＡＴＴの作用についての分析結果：
半分の前立腺におけるＣＤ４５免疫標識によって可視化された分析結果を、図７に提示する。
【００９５】
背側、外側、及び腹側前立腺におけるＩＬ６のＲＴ−ｑＰＣＲによって可視化された分析結果を、それぞれ図８Ａ、８Ｂ、及び８Ｃに提示する。
【００９６】
背側、外側、及び腹側前立腺におけるＴＮＦαのＲＴ−ｑＰＣＲによって可視化された分析結果を、それぞれ図９Ａ、９Ｂ、及び９Ｃに提示する。
【００９７】
ＣＤ４５マーカーに対する白血球細胞陽性部位の数の統計的に有意な減少によって明らかにされる、炎症の軽減が観察される（Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、２０１５ａ）。いくつかの炎症誘発性サイトカイン／受容体（ＩＬ６及びＴＮＦα）の発現の減少及び炎症の軽減の際にこのモデルで典型的に観察される瘢痕線維化の統計的に有意な減少によって、この作用は裏付けられる（Ｂｅｒｎｉｃｈｔｅｉｎ他、２０１５ａ）。
【００９８】
５．酸化ストレスに対するＡＴＴの作用に関する試験
２つの手法を使用して酸化ストレスを測定する：
ブロット（オキシブロット（Ｏｘｙｂｌｏｔ）（商標）、Ｍｅｒｃｋ）によるタンパク質の酸化／カルボニル化。
ＰＨＤ１及びＰＨＤ３ジオキシゲナーゼの発現（ＲＴ−ｑＰＣＲ）
【００９９】
酸化ストレスに対するＡＴＴの作用についての分析結果：
背側、外側、及び腹側前立腺に対するブロットによるタンパク質の酸化／カルボニル化によって観察された分析結果を、それぞれ図１０Ａ、１０Ｂ、及び１０Ｃに提示する。
【０１００】
背側、外側、及び腹側前立腺におけるＰＨＤ１ジオキシゲナーゼの発現によって観察された分析結果を、それぞれ図１１Ａ、１１Ｂ、及び１１Ｃに提示する。
【０１０１】
背側、外側、及び腹側前立腺におけるＰＨＤ３ジオキシゲナーゼの発現によって観察された分析結果を、それぞれ図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃに提示する。
【０１０２】
全葉におけるタンパク質のカルボニル化（オキシブロット（商標）方法）及びＰＨＤ１／ＰＨＤ３ジオキシゲナーゼ酵素のメッセンジャーＲＮＡの発現の統計的に有意な減少によって明らかにされた、酸化ストレスの減少が観察されている。
【０１０３】
６．低酸素に対するＡＴＴの作用に関する試験
背側、外側、及び腹側の前立腺におけるＲＴ−ｑＰＣＲによって測定されるＨＩＦ１αの分析によって、低酸素が観察された。結果を、それぞれ図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃに提示する。
【０１０４】
１つ又は複数の前立腺葉における、ＨＩＦ１α低酸素マーカーのメッセンジャーＲＮＡの発現の統計的に有意な増加によって明らかにされた、低酸素の増加が観察されている。
【０１０５】
ＩＩ．結論
この前臨床試験の結果は、ＡＴＴ分子が、良性前立腺肥大症の有効な治療のための２つの望ましい作用：酸化ストレスに対する有益な作用に加えて、抗アンドロゲン作用及び抗炎症性作用を有することを示す。
【０１０６】
この試験において、１２時間に対して十分な１回用量を用いて、マウスを毎日処置したことが注視されるかもしれない。これは、動物に対する胃管による投与に関与するストレスに伴うリスクのためである。
【０１０７】
このため、マウスは、ヒトで計画されるであろう２４時間中２４時間ではなく、２４時間中１２時間のみ処置され、これは短縮された期間で終了する。
【０１０８】
したがって、得られた結果は、短い処置期間及び２４時間中１２時間の処置にも関わらず、ＢＰＨの有効な治療のために、望ましいパラメーターで良好な結果が得られたことから、非常に見込みがある。
【０１０９】
実施例２：臨床評価
方法論的観点において、ＢＰＨを呈する対象における臨床的改善は、コンセンサスが得られている基準に準拠して評価され得る：ＩＰＳＳ（国際前立腺症状スコア）。
【０１１０】
この種類の試験は、２つの期間に渡って実施され得る：
２〜３ヵ月の短期間に渡って、主な評価基準として２つの要素：臨床的改善及びＰＳＡレベル（上昇しているかどうか）を追跡する、
例えば、２年間の長期間に渡って、α１遮断薬又は５α還元酵素を使用した治療に不満を持つ対象における本疾患の臨床症状及び進行速度を評価する。この種類の試験には、３つの治療群（ｂｒａｎｃｈｅｓ）が含まれてもよい：治療群１：α１遮断薬又は５α還元酵素のみを使用した従来処方される治療、治療群２：α１遮断薬又は５α還元酵素＋スルファレム（登録商標）（又はＡＴＴのようなミトコンドリアＲＯＳの産生に対する別の阻害剤）を用いた治療、治療群３：スルファレム（登録商標）（又はＡＴＴのようなミトコンドリアＲＯＳの産生に対する別の阻害剤）のみを使用した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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