(57)【要約】  悪性腫瘍を治療するための薬剤を調製する方法、このような方法により調製される細胞膜、及びその使用を開示する。悪性腫瘍及び免疫系間の個々の伝達構造は、悪性腫瘍の細胞を有する組織サンプルに基づき、組織サンプルにおける組織適合性抗原（ヒト白血球型抗原、ＨＬＡ）の悪性腫瘍特異的発現パターンを決定することにより確認され、免疫担当細胞に対し、抑制作用を発揮することができる組織サンプルの細胞が有する発現パターンの少なくとも一部をマスク又は除去し、発現パターンの一部がマスク又は除去されているそれらの細胞を溶解することで特異的免疫応答を引き起こす個々のワクチンを調製する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
悪性腫瘍を有する個体を治療するための薬剤を調製する方法であって、
（ａ）前記悪性腫瘍の細胞を有する組織サンプルにおける組織適合性抗原（ヒト白血球型抗原、ＨＬＡ）の悪性腫瘍特異的発現パターンを決定すること、
を含む前記悪性腫瘍及び前記免疫系間の前記個々の伝達構造の確認と、
（ｂ）免疫担当細胞に対し、抑制作用を発揮することができる前記組織サンプルの前記細胞が有する前記発現パターンの少なくとも一部をマスク又は除去すること、及び
前記発現パターンの一部がマスク又は除去されているそれらの細胞を溶解して、これにより注入用の細胞膜又は細胞膜の断片を得ること、
を含む特異的免疫応答を引き起こす個々のワクチンの調製と、
からなる方法。
【請求項２】
前記発現パターンが決定される前記組織適合性抗原は、胎児ＨＬＡ群、特にＨＬＡ−Ｅ、Ｆ、及び／又はＧを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
マスク又は除去される前記発現パターンの前記一部は、前記胎児ＨＬＡ群、特にＨＬＡ−Ｅ、Ｆ、及び／又はＧを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記発現パターンの前記少なくとも一部は抗体によりマスクされる、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記発現パターンの前記少なくとも一部は遺伝子操作技術により除去される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記細胞は機械的又は生化学的細胞破壊方法により、特に低張溶解により溶解される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組織サンプルの前記細胞複合体は解離されて単個細胞懸濁液が得られる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法により調製される細胞膜。
【請求項９】
悪性腫瘍を治療するための薬剤として、特に前記免疫系の前記特異的活性化のためのワクチンとしての請求項８に記載の細胞膜の使用。
【請求項１０】
前記免疫系の特異的活性化又は応答を引き起こすため、前記組織サンプルを採取した前記生物に対し、細胞膜又は前記細胞膜の少なくとも断片を含有するワクチンとしての請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は悪性腫瘍を治療するワクチンを提供する分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
切除、化学療法、及び放射線療法など、悪性腫瘍疾患を治療する古典的な治療法に加え、免疫応答を開始するワクチンの投与、又は悪性腫瘍に結合する抗体（抗体断片）の投与に基づいた能動又は受動免疫療法の使用が増加している。悪性腫瘍を治療する薬剤は高度に選択的であるべきであり、任意の耐性を生じさせるべきではない。
【０００３】
免疫学的療法の目的として、例えば新抗原を使用してよい。新抗原は実際に抗原性である（従って免疫担当細胞における応答を引き起こす）タンパク質又はタンパク質様分子であり、悪性変性の一部として生じるゲノムの新突然変異に基づくものである。これらの例としては、ＭＨＣ−Ｉ（主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩ）により提示される新抗原の場合、Ｔ細胞の応答、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の応答、又はＭＨＣ−ＩＩ（主要組織適合遺伝子複合体、クラスＩＩ）により提示される新抗原の場合、ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘発する新抗原が挙げられる。
【０００４】
ＲＮＡ分析、質量分析、又はシークエンシングなどによる個々の悪性腫瘍における新突然変異の検出に基づき、例えば樹状細胞との体外培養により、個々のワクチンを発生、作製することができる。しかし、特に新突然変異は新抗原として発現するのは不確かであるため、及び新抗原は癌遺伝子又はスプライシング変異体由来であり、新突然変異に基づかないため、この検出は難しく、誤りが起こりやすい場合がある。高い個体性、及び場合により無秩序な細胞組織化は、腫瘍性疾患においてでさえ、例えば転移癌の新抗原及び原発性腫瘍の新抗原間に違いをもたらす。
【０００５】
それにも関わらず、腫瘍性疾患は免疫応答を回避する機構を有している。そのような所謂回避機構の１つは、ヒトの細胞対話に機能するＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）、特に組織適合性抗原群（ヒト白血球抗原）に基づくものである。文字通り、ＨＬＡの略語はコード遺伝子又はこれらの遺伝子により発現するタンパク質を明示するのに用いてよい。以下で用いられるようなＨＬＡ群の概念は、細胞表面において遺伝子により発現する表面タンパク質を指す。
【０００６】
一般に、ＨＬＡ群は以下の４つのクラスに分割することができる。
（ｉ）ＨＬＡ群Ａ、Ｂ及びＣ（ＭＨＣ−Ｉ）：すべての成熟及び体細胞を本質的に特定する；
（ｉｉ）ＨＬＡ群Ｄ（ＤＲＢ、ＤＱＢ等；ＭＨＣ−ＩＩ）：免疫担当細胞に対する抗原の提示において重要な部分を担う；
（ｉｉｉ）ＨＬＡ群Ｅ、Ｆ及びＧ：特に所謂浸潤先端における胚細胞を特定する；
（ｉｖ）ＨＬＡ群Ｈ、以下参照：所謂偽遺伝子。
【０００７】
悪性腫瘍細胞は、その表面に特徴的な「胎児」ＨＬＡ群（つまりＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ及び／又はＨＬＡ−Ｇ）を発現することができる。「胎児」ＨＬＡ群は、生物自体の非特異的及び／又は特異的免疫防御による攻撃を回避する悪性腫瘍細胞に寄与することができる。細胞表面におけるこれらの特徴的なＨＬＡ群の発現の結果として、後者は免疫担当細胞に対応する受容体を活性化することができるようになる。これらは一般的に、活性化後、ナチュラルキラー細胞におけるキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）又はリンパ球における白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＬＲ）などの免疫担当細胞の機能を抑制する受容体である。
【０００８】
従って、特に胚細胞（特に胎盤及び栄養膜細胞）における抗原ＨＬＡ−Ｅ、Ｆ及びＧは、母体の免疫系が細胞を攻撃するのを妨げる。このように、胎児は免疫応答を回避することができる。この回避機構は妊娠の免疫制御の骨格を構成する。拒絶反応は起こらず、遺伝的に半外来（父方の異質部分５０％）又は外来胚（単細胞ドナー又は胎児ドナー又は代理母の場合、１００％）について、正常満期出産を行うことができる。
【０００９】
非常に様々な組織の悪性腫瘍はこの胚の回避機構を用いることができ、免疫防御を抑制又は少なくする。悪性腫瘍は一部の治療方針を妨げる、つまり攻撃に基づく方針を抑制することもできる。この理由のため、回避機構を考慮すること、悪性腫瘍を治療する際に免疫系を組み込むことは有利となり得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
この背景を考慮して、本発明は薬剤を調製する方法、悪性腫瘍を治療するための細胞膜、及びこのような細胞膜の使用を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
この目的は独立請求項に記載の方法、細胞膜及びその使用により達成される。従属請求項には好ましい実施形態を記載する。
【００１２】
本発明による悪性腫瘍を治療するための薬剤を調製する方法は、悪性腫瘍及び免疫系間の個々の伝達構造を確認することと、特異的免疫応答を引き起こす個々のワクチンを調製することとを含む。
【００１３】
悪性腫瘍及び免疫系間の個々の伝達構造を確認するため、悪性腫瘍の細胞を有する組織サンプルにおける組織適合性抗原（ヒト白血球抗原、ＨＬＡ）の悪性腫瘍特異的発現パターンが決定される。
【００１４】
病理組織学的に同一として分類される腫瘍又は転移癌さえ、ある位置から別の位置に個体間又は個体内で異なる発現パターンを有する場合がある。化学治療薬又はホルモン拮抗薬の投与などの治療は、発現パターンにさらに影響する場合がある。個々の発現パターンの決定は、これらの差に対処する。
【００１５】
悪性腫瘍細胞という用語は、原発性悪性腫瘍の転移細胞も含む。本発明による方法は、転移癌の任意の個体差、特に組織適合性抗原の個々の発現パターンを扱うため、いくつか、特に好ましくはすべての転移癌に個別に実施するのが好ましい。
【００１６】
特異的免疫応答を引き起こすように設計される個々のワクチンを調製するため、免疫担当細胞に対し、抑制作用を発揮することができる組織サンプルの細胞が有する発現パターンの少なくとも一部は、マスク又は除去される。組織適合性抗原をマスク、つまり遮断又は除去し、これにより免疫系側受容体がこれらのＨＬＡ群に結合することを妨げることで、免疫系に対する抑制作用を妨げることができる。
【００１７】
さらに、発現パターンの一部がマスク又は除去されているそれらの細胞が溶解されて、注入用の細胞膜又は細胞膜の断片が得られる。同時に、この溶解により、破壊された悪性腫瘍細胞はもはや危険ではない。
【００１８】
請求項２に記載の実施形態において、発現パターンが決定される組織適合性抗原は、「胎児」ＨＬＡ群、特にＨＬＡ−Ｅ、Ｆ及び／又はＧを含む。
【００１９】
請求項３に記載の実施形態において、発現パターンのマスク又は除去される一部は、胎児ＨＬＡ群、特にＨＬＡ−Ｅ、Ｆ及び／又はＧを含む。
【００２０】
請求項４に記載の実施形態において、発現パターンの少なくとも一部は抗体によりマスクされる。抗体マスキングは、マスクされた組織適合性抗原が免疫担当細胞の抑制性受容体に結合するのを妨げることができ、このようにして悪性腫瘍の回避機構を妨害する。このような抗体の例としては、抗ＨＬＡ−Ｅ抗体、抗ＨＬＡ−Ｆ抗体、及び抗ＨＬＡ−Ｇ抗体が挙げられる。あるいは、組み合わされた抗体又は多価抗体を用いてよい。
【００２１】
請求項５に記載の実施形態において、発現パターンの少なくとも一部は遺伝子操作技術により除去される。遺伝子操作技術による除去は、除去された組織適合性抗原が免疫担当細胞の抑制性受容体に結合するのを妨げることができ、これにより悪性腫瘍の回避機構を妨害する。
【００２２】
このような遺伝子操作技術の一例はＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓである。免疫抑制性の組織適合性抗原をコードする遺伝子又はＤＮＡ断片が切除され、その結果、組織サンプルの細胞はもはやこれらのＨＬＡ群を発現することができない。他の例としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、又は修飾ホーミングエンドヌクレアーゼに基づく技術が挙げられる。
【００２３】
請求項６に記載の実施形態において、細胞は機械的又は生化学的細胞破壊方法により、特に低張溶解により溶解される。例えば、細胞を低浸透圧溶液で破裂させてよい。このように、特にワクチン形状で注入するために、高い抗原作用を有する細胞膜又は細胞膜断片を得ることができる。
【００２４】
請求項７に記載の実施形態において、組織サンプルの細胞複合体は解離されて単個細胞懸濁液が得られる。解離は例えばトリプシン又はコラゲナーゼを用いて酵素的に実施してよい。
【００２５】
さらに、本発明は本発明による方法により調製される細胞膜を提供する。
【００２６】
特に、細胞膜は組織適合性抗原の発現パターンを有してよく、免疫系の抑制性応答を抑制することができる一部はマスク又は除去されている。調製された細胞膜は、免疫系の特異的活性化により悪性腫瘍を治療するワクチンとしての使用に好適である。
【００２７】
さらに、本発明は悪性腫瘍を治療するための薬剤として、本発明による細胞膜の使用を提供する。特に、免疫系の特異的活性化用ワクチンとして細胞膜をインビボで用いてよい。
【００２８】
いくつかの実施形態において、免疫担当細胞、特にＴ細胞をインビトロで「訓練する」、つまり新抗原を活性化し、その後訓練つまり活性化された免疫担当細胞を生物に再注入するのに細胞膜を用いることができる。インビトロ活性化のため、免疫担当細胞を除き、細胞膜又はワクチンに曝し、活性化後に注入して戻してよい。
【００２９】
請求項１０に記載の実施形態は、組織サンプルを採取した生物に、細胞膜又は細胞膜の少なくとも断片を有するワクチンとして細胞膜を使用することを含み、免疫系の特異的活性化又は応答を引き起こす。特に、その使用はワクチンの注入を含んでよい。
【００３０】
いくつかの実施形態において、細胞膜の使用は局所的又は全身的に行ってよい。局所的使用は例えば悪性腫瘍又はその近辺への注入を含む。全身性使用は例えば以下の、経口、経鼻、舌下、直腸、皮下、静脈内、経皮等のうちの１つの方法による投与を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、その使用はチェックポイント阻害薬、及び／又はカルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、フロイントアジュバント、もしくは水酸化アルミニウムなどの伝統的なアジュバントの使用をさらに含んでよく、免疫応答を高める。
【００３２】
以下の例示的実施形態の説明において添付図が参照される。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は一例示的実施形態による薬剤を調製する方法のフローチャートを示す。
【図２】図２は一実施形態による方法を実施する手順の概略図を示す。
【図３】図３は別の実施形態による方法を実施する手順の概略図を示す。
【図４】図４は一実施形態による細胞膜の概略図を示す。
【図５】図５は一実施形態による細胞膜の使用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
図１は悪性腫瘍を治療するための薬剤を調製する方法１０のフローチャートを示す。方法１０は組織サンプルを採取する工程１２により開始する。方法１０は発現パターンを決定する工程１４と、発現パターンの免疫抑制部分をマスク又は除去する工程１６と、細胞を溶解することにより細胞膜を調製する工程１８と、を含む。
【００３５】
組織サンプルの採取１２において、治療を受ける悪性腫瘍の少なくとも細胞が摘出される。組織サンプルを例えば外科手術又はバイオプシーにより得てよい。
【００３６】
発現パターンの決定１４において、組織サンプルにおける組織適合性抗原の悪性腫瘍特異的発現パターンが決定される。発現パターンの決定は、公知の組織適合性抗原（又はそれらの一部）に限定してよく、つまり限られた数の所定のタンパク質のみを含んでよい。これにより、数及び組成が限定されないか、又は推測的に公知ではない新抗原の決定よりも特異的で、扱い易く発現パターンを決定することができる。
【００３７】
発現パターンの決定は、発現レベルの定量を含むことが好ましい。発現パターン又は発現レベルは、例えばＲＮＡシークエンシング、ＤＮＡマイクロアレイ、定量ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、発現プロファイリング、ＳＡＧＥ法（遺伝子発現連鎖解析）等の公知の方法により決定してよい。
【００３８】
発現パターンの免疫抑制部分のマスク又は除去１６において、免疫担当細胞に対し、抑制作用を発揮することができる組織サンプルの細胞が有する発現パターンの少なくとも一部はマスク又は除去される。いくつかの実施形態において、発現パターンの免疫抑制部分に加えて、発現パターンの他の部分がマスク又は除去されてもよい。
【００３９】
マスク又は除去されなければ、抑制作用を有する組織適合性抗原は例えば免疫担当細胞のＫＩＲ受容体（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＮＫＧ２受容体及びＬＩＬ−Ｒ受容体（白血球免疫グロブリン様受容体）に結合する。抑制作用を有する組織適合性抗原の例としては、特に胎児群ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ及びＨＬＡ−Ｇが挙げられる。
【００４０】
抑制作用は免疫担当細胞における組織適合性抗原（リガンド）及び受容体間の受容体−リガンド結合により与えられる。発現した組織適合性抗原の抑制部分をマスク又は除去することにより、免疫担当細胞に対する抑制作用が妨げられるか、又は少なくとも低減される。
【００４１】
また、他の組織適合性抗原、特にクラスＩ及びＩＩの古典的ＨＬＡ群（つまり、ＨＬＡ−Ａ〜Ｃ又はＨＬＡ−Ｄ）がマスク又は除去されてもよく、これにより調製されるワクチンに対する免疫応答を高める。しかし、これに関して、新抗原のいくつかがＭＨＣ−Ｉ（ＨＬＡ群Ａ、Ｂ及びＣ）を必要とし、いくつかの新抗原がＭＨＣ−ＩＩ（ＨＬＡ群ＤＱＢ、ＤＲＢ等）を必要とするため、すべての組織適合性抗原がすべての細胞において除去又はマスクされるべきではないことに留意する。
【００４２】
細胞溶解による細胞膜の調製１８において、発現パターンの一部がマスク又は除去されている細胞が溶解される。注入用の細胞膜（又は細胞膜の断片）はこのようにして得られる。細胞の溶解により注入後に細胞をさらに分解及び増殖することができず、これにより実質的な免疫応答を引き起こす。
【００４３】
組織サンプルを採取する工程１２、及び発現パターンを決定する工程１４は、悪性腫瘍及び免疫系間の個々の伝達構造を確認する。特に、これは悪性腫瘍が免疫応答を回避するために使用する任意の回避機構を明らかにすることができる。
【００４４】
マスク又は除去工程１６及び溶解工程１８は、特異的免疫応答を引き起こす個々のワクチンを調製する。ワクチンの調製は特にインビトロで、すなわち細胞膜の注入前に行われる。悪性腫瘍及び免疫系間の個々の伝達構造を事前に確認し、ワクチンを個別に作製することもできる。
【００４５】
摘出された悪性腫瘍細胞により表面タンパク質として発現し、悪性腫瘍に特徴的である任意の新抗原は、抑制性の組織適合性抗原のマスク又は除去により作用されないか、又は少なくとも著しく作用されない。従って、新抗原は調製された細胞膜にも存在する。新抗原を有する細胞膜が注入されるとき、免疫系はこれらの新抗原に、特にマスクにより抑制性の組織適合性抗原の抑制作用を受けることなく応答し、免疫応答を開始する。
【００４６】
図２は方法を実施する手順の概略図である。左上から始まり、時計回りに、本方法を実施する手順における異なる時間の一連の概略図を示す。
【００４７】
ある個体２０は悪性腫瘍２２を有する。転移癌を含む他の例示的実施形態を実施することもできるが、図示するのは原発性腫瘍である。悪性腫瘍２２は例えば悪性黒色腫でよい。通常、悪性黒色腫は多数の新抗原を有する。
【００４８】
悪性腫瘍２２の細胞２６を含む組織サンプル２４は個体２０から採取されている。組織サンプル２４、特に悪性腫瘍２２の摘出細胞２６における組織適合性抗原の発現パターン２８が決定される。ここで図示するのは、この決定は、組織サンプル２４の細胞２６が、例えば３つの異なる群の組織適合性抗原の発現パターン２８を発現することを示す。
【００４９】
この場合、３つの組織適合性抗原はＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ａ及びＨＬＡ−Ｆ群のタンパク質である。ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｆ群のタンパク質は免疫担当細胞に対する抑制作用を発揮することができる。
【００５０】
例えば、ＨＬＡ−Ｆはリンパ球をＬＩＬ受容体に結合することができ、リンパ球の活性を軽減することができる。同様に、ＨＬＡ−Ｅは例えばＮＫＧ２受容体に結合することができ、ナチュラルキラー細胞の活性を軽減することができる。このように、ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｆ群は、免疫応答を弱めるか、又は抑えることができる発現パターン２８の部分２９を形成する。
【００５１】
これに関連して抑制作用は免疫調節作用に関係し、免疫担当細胞の細胞毒性を低減又は妨げる。例えば免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）、つまり細胞質リン酸化により、このシグナル経路を引き起こすことができる。
【００５２】
ＨＬＡ−Ａ群のタンパク質は本質的に免疫担当細胞に対する抑制作用を発揮することができない。
【００５３】
発現パターン２８に加えて、悪性腫瘍の細胞２６は表面に、悪性変性の過程で生じる新突然変異に基づいた特徴的な新抗原３３も含む。これらの新抗原の決定は必要ではないが、新抗原３３をここに模式的に示す。
【００５４】
次の工程において、免疫担当細胞に対し、抑制作用を発揮することができる発現パターン２８の部分２９は、抗体３６によりマスクされる。このように、この場合、抑制部分２９は、ＨＬＡ−Ａではなく、ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｆの組織適合性抗原である。
【００５５】
他の実施形態において、クラスＩ又はＩＩの古典的ＨＬＡ群（この場合、例えばＨＬＡ−Ａ）はマスクされてもよく、これにより調製されるワクチンに対する免疫応答を高める。図示した例では、いくつかの新抗原はＭＨＣ−Ｉ（ＨＬＡ群Ａ、Ｂ及びＣ）を必要とするため、ＨＬＡ−Ａはマスクされていない。このように、示される例示的実施形態において、提示された新抗原による免疫系の特異的活性化を確実に行うため、すべての細胞においてすべての組織適合性抗原がマスクされているとは限らない。
【００５６】
ＨＬＡ−Ｅ群を抗ＨＬＡ−Ｅ抗体によりマスクすることができる。ＨＬＡ−Ｆ群を抗ＨＬＡ−Ｆ抗体によりマスクすることができる。他の例示的実施形態において、二価抗体（抗ＨＬＡ−Ｅ／Ｆ）を代わりに用いてよい。抗体３６によりマスク後、ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｆ群のタンパク質はもはや免疫担当細胞の対応するＬＩＬ及び／又はＮＫＧ２受容体に結合することができず、従って免疫担当細胞に対する抑制作用を発揮しない。
【００５７】
抑制作用を有する組織適合性抗原をマスクする抗体をこのように使用することで、免疫担当細胞に存在する受容体への組織適合性抗原の結合が妨げられるか、低減される。抗体は組織適合性抗原に対する高い親和性を示すのが好ましく、特に免疫受容体の親和性に匹敵する、より大きい、又は実質的に大きい親和性を示すのが好ましい。親和性は抗体の拡散及び／又は拮抗する転移を妨げるのに十分大きいのが好ましい。
【００５８】
発現パターン２８の免疫抑制部分２９がマスクされると、（発現パターンの一部がマスクされている）細胞２６は溶解されて、注入用の細胞膜３２が得られる。組織適合性抗原の発現パターン２８に加えて、細胞膜３２は悪性腫瘍に特徴的な新抗原３３、並びに発現パターン２８の抑制部分２９をマスクする抗体３６を示す。
【００５９】
細胞膜３２の注入（図示せず）は、悪性腫瘍細胞２６を有する組織サンプル２４が採取された個体２０について実施してよい。
【００６０】
図３はさらなる方法を実施する手順の概略図を示す。左上から始まり、時計回りに、本方法を実施する手順における異なる時間の一連の概略図を示す。
【００６１】
図３に示す方法の順序において、図２に示す方法と同様に、悪性腫瘍２２の細胞２６を有する組織サンプル２４は個体２０から採取され、少なくとも１つの細胞２６における組織適合性抗原の発現パターン２８が決定される。細胞２６は悪性腫瘍に特徴的な新抗原３３を有する。
【００６２】
しかしながら、図２に示す方法とは対照的に、図３によれば、発現パターンが決定されると、免疫担当細胞に対する抑制作用を発揮することができる発現パターンの部分２９は、遺伝子操作技術により除去される。
【００６３】
図２に示す例示的実施形態と同様に、いくつかの新抗原がＭＨＣ−Ｉを必要とするため、ＨＬＡ−Ａもここで示す例では除去されていない。従って、示される例示的実施形態では、提示された新抗原による免疫系の特異的活性化を確実に行うため、すべての細胞からすべての組織適合性抗原が除去されるとは限らない。
【００６４】
図示した例において、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ手順により除去することができる。ＨＬＡ−Ｅ及びＨＬＡ−Ｆ群の組織適合性抗原をコードするＤＮＡ断片が細胞２６のゲノムから切除され、このようにして修飾された細胞が培養される。これにより、摘出された悪性腫瘍細胞と実質的に同一であるが、組織適合性抗原の免疫抑制部分２９（破線の外形により模式的に示される部分２９）を発現しない細胞２６が調製される。特に、これらの細胞は少なくとも悪性腫瘍に特徴的な新抗原３３を発現する。
【００６５】
抑制部分２９が除去されている細胞２６が溶解されて、注入用の細胞膜が得られる。部分２９の除去により、細胞膜３２が免疫系に対する抑制作用を発揮しないか、又は少なくとも抑制作用を低減する。しかしながら、細胞膜はやはり注入後に免疫応答を引き起こすことができる新抗原３３を含む。
【００６６】
図４は本発明に記載の方法により、悪性腫瘍（図示せず）から調製された細胞膜３２に基づくワクチン３４の概略図を示す。これは例えば図２の例示的実施形態により調製された細胞膜でよい。
【００６７】
細胞膜３２は組織適合性抗原の発現パターン２８を有する。免疫系の抑制性応答を抑制することができる発現パターン２８の部分２９は、抗体３６によりマスクされている。これにより、免疫系に対する発現パターン２８の部分２９の抑制作用を妨げるか又は少なくとも低減することができる。
【００６８】
発現パターン２８に加えて、細胞膜３２はさらに新抗原３３を有する。新抗原は、悪性変性の過程で生じる悪性腫瘍細胞のゲノムの新突然変異に基づくタンパク質である。新抗原は悪性腫瘍に特徴的であり、免疫系応答を引き起こすことができる（免疫応答が抑制されていなければ）。
【００６９】
図示した細胞膜３２は、免疫系の特異的活性化により悪性腫瘍を治療するためのワクチン３４として使用するのに好適である。
【００７０】
図５は悪性腫瘍を治療するワクチン３４として、図４に記載の細胞膜３２を使用する概略図を示す。細胞膜３２は、治療を受ける悪性腫瘍の細胞を有する組織サンプルから調製されている。
【００７１】
ワクチンとして使用するため、組織適合性抗原の発現パターンの抑制部分２９をマスクするのに結合した抗体３６、及び新抗原３３を有する細胞膜３２が、悪性腫瘍を患う生物に注入される。
【００７２】
生物の免疫担当細胞は、細胞膜３２により提示されるいくつかのタンパク質を外来抗原として認識する。生物により認識されない新抗原３３が細胞膜で発現し、提示されるなら、対応する免疫応答、例えば抗体の形成及び／又はＴ細胞の活性化が起こる。免疫抑制性の組織適合性抗原が「可視」でないため、この免疫応答は遮断されない。
【００７３】
ここに図示した例では、本発明により調製される細胞膜３２は特に免疫系３０との２つの相互作用を示す。第１に、悪性腫瘍に特徴的な新抗原３３は、これらの悪性腫瘍特有新抗原に対する適応免疫応答を引き起こす。
【００７４】
第２に、組織適合性抗原の部分２９は抗体３６によりマスクされているため、免疫応答に対するその抑制作用は妨げられるか、又は少なくとも低減される。マスクされていない状態では、部分２９が特に新抗原３３に対する免疫系３０による応答を抑制することができる。
【００７５】
生物の免疫系３０は免疫応答を引き起こす。概略図において、免疫系３０は免疫担当細胞３０ａ、３０ｂ、具体的には抗原提示細胞（ＡＰＣ）３０ａ及びＣＤ８＋Ｔ細胞３０ｂを含む。
【００７６】
（抗原提示細胞３０ａ及びＴ細胞３０ｂの形状でここに模式的に示される）適応免疫応答に基づき、免疫系３０は内在する新抗原３３を有する任意の細胞３８を認識することができる。これらは、特に細胞膜３２形状のワクチンを得るのに用いた組織サンプルの悪性腫瘍細胞を含む。ワクチンを個々に調製することにより、例えば精巧なシークエンシングにより最初に新突然変異又は新抗原を決定することはなく、悪性腫瘍において実際に発現する新抗原３３に免疫応答を向けることができる。
【００７７】
免疫応答は例えばＴ細胞受容体を有するＣＤ８＋Ｔ細胞３０ｂにより実行される。細胞傷害性Ｔ細胞３０ｂは、新抗原３３又は新抗原３３の部分ペプチドを提示する抗原提示細胞３０ａにより活性化されている。活性化Ｔ細胞３０ｂが新抗原３３により悪性腫瘍細胞３８を認識する場合、悪性腫瘍細胞のアポトーシスを開始する（悪性腫瘍細胞３８の破線の外形により表される）。
【図１】
2020525440.tif 000002
【図２】
2020525440.tif 000003
【図３】
2020525440.tif 000004
【図４】
2020525440.tif 000005
【図５】
2020525440.tif 000006
【国際調査報告】
2020525440.tif 000007
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