(57)【要約】  抗ＣＤ７３抗体または抗体断片を提供する。抗体または抗体断片は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２、および、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３、または、それらの各々の変異型を含む。より一般的には、ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端側の半分から、例えばＣ末端ドメインなどから選択される１または複数のアミノ酸残基に対する特異性を有する抗体または抗体断片が説明される。これらのドメインにおける特異的エピトープアミノ酸は、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１、Ｒ４８０を含む。癌などの疾患を治療および診断するために抗体または抗体断片を使用する方法も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、配列識別番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、配列識別番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、配列識別番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、配列識別番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列識別番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および、配列識別番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を備える、単離された抗体または抗体断片。
【請求項２】
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
【請求項３】
前記軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、請求項２に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４】
前記抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
【請求項５】
前記アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、請求項４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項６】
前記抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項７】
前記抗体または抗体断片はヒト化抗体である、請求項６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項８】
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置３０のＴｈｒ、
（ｂ）位置４４のＬｙｓ、
（ｃ）位置４８のＭｅｔ、
（ｄ）位置６７のＩｌｅ、および、
（ｅ）位置７１のＡｒｇ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む重鎖可変領域、および、それらの組み合わせを備える、請求項６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項９】
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置５のＳｅｒ、
（ｂ）位置４６のＰｒｏ、
（ｃ）位置４７のＴｒｐ、
（ｄ）位置４９のＳｅｒ、
（ｅ）位置７０のＳｅｒ、および、
（ｆ）位置７１のＴｙｒ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む軽鎖可変領域、および、それらの組み合わせを備える、請求項６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１０】
配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を備える、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１１】
前記重鎖可変領域は、配列識別番号７または９のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１２】
配列識別番号８、１５−２０および２２−２４から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８、１５−２０および２２−２４から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を備える、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１３】
前記軽鎖可変領域は配列識別番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１４】
ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、前記ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端側の半分から選択される１または複数のアミノ酸残基に結合する、単離された抗体または抗体断片。
【請求項１５】
前記ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインのうち１または複数に結合する、請求項１４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１６】
前記ヒトＣＤ７３タンパク質のＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０から成る群から選択されるアミノ酸残基のうち少なくとも１つに結合する、請求項１４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１７】
前記アミノ酸残基のうち少なくとも２つに結合する、請求項１６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１８】
Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０の各々に結合する、請求項１６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１９】
前記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する１対のＶＨおよびＶＬだけを備える、請求項１４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項２０】
二重特異性抗体である、請求項１９に記載の抗体または抗体断片。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項２２】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
【請求項２３】
治療を必要とする患者における癌を治療する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を前記患者に投与する段階を備える方法。
【請求項２４】
前記癌は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌から成る群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌は固形腫瘍である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記患者に第２の癌治療剤を投与する段階を更に備える、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記第２の癌治療剤は免疫チェックポイント阻害剤である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔ細胞関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、リンパ球活性化タンパク質３（ＬＡＧ−３）またはそれらの組み合わせの発現または活性を阻害する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、Ｊ４３、ＲＭＰ１−１４、アテゾリズマブ、イピリムマブおよびそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
（ａ）請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を用いて、インビトロでＴ細胞を処理する段階と、（ｂ）処理された前記Ｔ細胞を患者に投与する段階とを備える、治療を必要とする患者の癌を治療する方法。
【請求項３２】
段階（ａ）の前に、前記Ｔ細胞を個人から単離する段階を更に備える、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｔ細胞は前記患者から単離される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ｔ細胞は、前記患者とは異なるドナー個人から単離される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または、それらの組み合わせである、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
試料におけるＣＤ７３の発現を検出する方法であって、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片が前記ＣＤ７３に結合する条件下で、前記抗体または抗体断片に前記試料を接触させる段階と、前記試料における前記ＣＤ７３の発現を示す結合を検出する段階とを備える方法。
【請求項３７】
抗ＣＤ７３療法による治療に適した癌患者を識別する方法であって、前記癌患者から細胞を単離して、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を用いてＣＤ７３タンパク質の存在を検出する段階を備える方法。
【請求項３８】
単離された抗体または抗体断片であって、前記抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、
（ａ）配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号１の位置１、２または３において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号１の変異型と、
（ｂ）配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２、または、配列識別番号２の位置６、７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号２の変異型と、
（ｃ）配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号３の位置７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号３の変異型と、
（ｄ）配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号４の位置３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号４の変異型と、
（ｅ）配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号６の位置１、２、３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号６の変異型と
を含む、単離された抗体または抗体断片。
【請求項３９】
配列識別番号１の前記変異型は、配列識別番号２６−２９から成る群から選択される、請求項３８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４０】
配列識別番号２の前記変異型は、配列識別番号３０−３６から成る群から選択される、請求項３８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４１】
配列識別番号３の前記変異型は、配列識別番号３７−４１から成る群から選択される、請求項３８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４２】
配列識別番号４の前記変異型は、配列識別番号４２−４５から成る群から選択される、請求項３８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４３】
配列識別番号６の前記変異型は、配列識別番号４６−５６から成る群から選択される、請求項３８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４４】
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、請求項３８から４３のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４５】
前記軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、請求項４４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４６】
前記抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、請求項４４に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４７】
前記アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、請求項４６に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４８】
前記抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、請求項３８から４７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
【請求項４９】
請求項３８から４８のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
【請求項５０】
請求項３８から４８のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ＣＤ７３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ７３）は、５'−ヌクレオチダーゼ（５'−ＮＴ）またはエクト５'−ヌクレオチダーゼとしても知られている、ＡＭＰをアデノシンに変換するように機能する酵素である。ＣＤ７３は、免疫抑制腫瘍環境に寄与する細胞外アデノシンの形成を触媒する。ＣＤ７３は、ストローマ細胞および複数の種類腫瘍細胞、ならびに、制御性Ｔ細胞、Ｍ２マクロファージおよび骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）において過剰発現する。
【０００２】
臨床前のエビデンスでは、ＣＤ７３阻害により、アデノシンを媒介するリンパ球抑制が防止され、ＣＤ８＋エフェクター細胞の活性が増加し、ＭＤＳＣおよび制御性Ｔ細胞の両方が減少することが示されている。潜在的な抗癌剤として開発されている抗ＣＤ７３抗体はほとんど無く、臨床用途に承認されたものは無い。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する高い結合親和性を有し、かつ、単独で、または、細胞上に存在するときに、ＣＤ７３の酵素活性を阻害する強力な活性を有する抗ＣＤ７３抗体を提供する。更に、これらの抗体の結合により、ＣＤ７３の腫瘍細胞内在化を誘導でき、細胞表面上でのＣＤ７３活性の更なる減少をもたらす。また、驚くべきことに、これらの抗体の一価単位（例えばＦａｂ断片）は、抗体全体と同等の効力を有する。しかしながら、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅのＭＥＤＩ−９４４７など、既知の抗ＣＤ７３抗体には、そのような特徴が無い。同様に、阻害作用を示すために細胞表面上での高濃度のＣＤ７３発現を必要とするＭＥＤＩ−９４４７および１１Ｆ１１とは異なり、本開示の抗体は、複数の異なるレベルの細胞表面発現において、完全なＣＤ７３阻害を達成できる。本開示の抗体の驚くべき、予期しない特性は、少なくとも部分的に、ＣＤ７３タンパク質上の特徴的な結合部位に起因する。ＣＤ７３タンパク質のＮ末端ドメインに結合するＭＥＤＩ−９４４７および１１Ｆ１１とは異なり、本開示の抗体は、Ｃ末端ドメイン、より具体的には、アミノ酸残基Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１、および、Ｒ４８０に結合する。本開示の抗体のこれらの特性により、本開示の抗体は、治療および診断用途の優れた候補である。
【０００４】
したがって、本開示の一実施形態によれば、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端部分から選択された１または複数のアミノ酸残基に結合する、単離された抗体または抗体断片が提供される。本技術分野において既知であるヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端部分は、配列識別番号６１において示されるように、残基３３７から開始する２３８アミノ酸残基を含む。
【０００５】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインの１または複数に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質のＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０から成る群から選択されるうち少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、アミノ酸残基のうち少なくとも２つに結合する。
【０００６】
本開示の一実施形態は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３とを含む抗ＣＤ７３抗体または抗体断片を提供する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域またはそれらの組み合わせを更に含み得る。いくつかの実施形態において、軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプ、または、より具体的には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。
【０００７】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である。一実施形態において、抗体または抗体断片はヒト化抗体である。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置３０のＴｈｒ、（ｂ）位置４４のＬｙｓ、（ｃ）位置４８のＭｅｔ、（ｄ）位置６７のＩｌｅ、および、（ｅ）位置７１のＡｒｇから成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む重鎖可変領域およびそれらの組み合わせを有する。いくつかの実施形態において、ヒトまたはヒト化抗体または抗体断片は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置５のＳｅｒ、（ｂ）位置４６のＰｒｏ、（ｃ）位置４７のＴｒｐ、（ｄ）位置４９のＳｅｒ、（ｅ）位置７０のＳｅｒ、（ｆ）位置７１のＴｙｒから成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む軽鎖可変領域およびそれらの組み合わせを有する。
【０００９】
したがって、例のＣＤ７３抗体または断片は、配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を有するものを含む。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域は、配列識別番号７または９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号８、１５−２０から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８、１５−２０および２２−２４および２２−２４から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域は、配列識別番号８のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
実験例７が示すように、ＣＤＲ領域では、抗ＣＤ７３抗体の特性を保持する、または、改善もする特定のアミノ酸の追加、欠失、または置換を行うことができる。従って、いくつかの実施形態において、単離された抗体または抗体断片が提供され、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、（ａ）配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号１の位置１、２または３において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号１の変異型と、（ｂ）配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２、または、配列識別番号２の位置６、７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号２の変異型と、（ｃ）配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号３の位置７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号３の変異型と、（ｄ）配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号４の位置３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号４の変異型と、（ｅ）配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、（ｆ）配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号６の位置１、２、３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号６の変異型とを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、単離された抗体または抗体断片が提供され、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、（ａ）配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号１の位置１、２または３において単一の置換を有する配列識別番号１の変異型と、（ｂ）配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２、または、配列識別番号２の位置６、７または８において単一の置換を有する配列識別番号２の変異型と、（ｃ）配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号３の位置７または８において単一の置換を有する配列識別番号３の変異型と、（ｄ）配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号４の位置３または４において単一の置換を有する配列識別番号４の変異型と、（ｅ）配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、（ｆ）配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号６の位置１、２、３または４において単一の置換を有する配列識別番号６の変異型とを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、配列識別番号１の変異型は、配列識別番号２６−２９から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、配列識別番号２の変異型は、配列識別番号３０−３６から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、配列識別番号３の変異型は、配列識別番号３７−４１から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、配列識別番号４の変異型は、配列識別番号４２−４５から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、配列識別番号６の変異型は、配列識別番号４６−５６から成る群から選択される。
【００１３】
また、いくつかの実施形態において、本開示の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物が提供される。また、本開示の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞が提供される。
【００１４】
別の実施形態において、本開示は、必要とする患者における癌を治療する方法を提供し、当該方法は、本開示の抗体または抗体断片を患者に投与する段階を含む。いくつかの実施形態において、癌は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌から成る群から選択される。いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍である。
【００１５】
いくつかの実施形態において、方法は更に、第２の癌治療剤を患者に投与する段階を備える。いくつかの実施形態において、第２の癌治療剤は免疫チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態において、阻害剤は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔ細胞関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、リンパ球活性化タンパク質３（ＬＡＧ−３）またはそれらの組み合わせの発現または活性を阻害する。いくつかの実施形態において、阻害剤は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態において、阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、Ｊ４３、ＲＭＰ１−１４、アテゾリズマブ、イピリムマブおよびそれらの組み合わせから成る群から選択される。
【００１６】
一実施形態において、治療が必要な患者の癌を治療する方法が提供され、当該方法は、（ａ）本開示の抗体または抗体断片を用いて、インビトロでＴ細胞を処理する段階と、（ｂ）処理されたＴ細胞を患者に投与する段階とを備える。いくつかの実施形態において、方法は更に、段階（ａ）の前に、個人からＴ細胞を単離する段階を備える。
【００１７】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は患者から単離される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、患者とは異なるドナー個人から単離される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または、それらの組み合わせである。
【００１８】
また、別の実施形態において、試料におけるＣＤ７３の発現を検出する方法が提供され、当該方法は、本開示の抗体または抗体断片がＣＤ７３に結合する条件下で、抗体または抗体断片に試料を接触させる段階と、試料におけるＣＤ７３の発現を示す結合を検出する段階とを備える。更に、一実施形態において、抗ＣＤ７３療法による治療に適した癌患者を識別する方法も提供され、当該方法は、癌患者から細胞を単離して、本開示の抗体または抗体断片を用いてＣＤ７３タンパク質の存在を検出する段階を備える。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】組み換えヒトＣＤ７３タンパク質に対する１０１−Ｍｕ抗体の結合を示す。
【００２０】
【図２】ヒト卵巣癌細胞の表面上の組み換えヒトＣＤ７３タンパク質に対する１０１−Ｍｕ抗体の結合を示す。
【００２１】
【図３】組換えＣＤ７３タンパク質に対する１０１−Ｍｕ抗体の結合キネティクスを示す。
【００２２】
【図４】１０１−Ｍｕ抗体がＣＤ７３の酵素活性を阻害することを示す。
【００２３】
【図５】１０１−Ｍｕ抗体が細胞表面上のＣＤ７３の酵素活性を阻害することを示す。
【００２４】
【図６】ＩＦＮ−γの生産によって示されるように、１０１−Ｍｕが、ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を戻したことを示す。
【００２５】
【図７】ヒト化抗体の結合キネティクスを示す。
【００２６】
【図８】ヒト化抗体が細胞表面ＣＤ７３タンパク質に結合したことを示す。
【００２７】
【図９】ヒト化抗体がＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害したことを示す。
【００２８】
【図１０】ヒト化抗体が細胞表面ＣＤ７３タンパク質の酵素活性を阻害したことを示す。
【００２９】
【図１１】ＩＦＮ−γの生産によって示されるように、ヒト化抗体がＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を戻したことを示す。
【００３０】
【図１２】可溶性ＣＤ７３および細胞表面ＣＤ７３に対するＨｕ１０１−２８の強力な結合を示す。
【００３１】
【図１３】ＣＤ７３に対するＨｕ１０１−２８の結合は、ＣＤ７３の酵素活性を効果的にブロックすることを示す。
【００３２】
【図１４】Ｈｕ１０１−２８がＣＤ７３活性を非競合的に阻害することを示す。
【００３３】
【図１５】ＣＤ７３に対するＨｕ１０１−２８の結合がＣＤ７３内在化を誘導することを示す。
【００３４】
【図１６】Ｈｕ１０１−２８がＴ細胞応答のＡＭＰ媒介抑制を戻すことを示す。
【００３５】
【図１７】Ｈｕ１０１−２８がＴ細胞応答のＣＤ７３＋腫瘍細胞媒介抑制を戻すことを示す。
【００３６】
【図１８】Ａ３７５ゼノグラフモデルの腫瘍におけるＨｕ１０１−２８によるインビボＣＤ７３酵素阻害を示す染色画像を提示する。
【００３７】
【図１９】Ｈｕ１０１−２８が腫瘍ゼノグラフモデルにおいて単剤療法効果を示したことを示す。
【００３８】
【図２０】腫瘍増殖の阻害において、Ｈｕ１０１−２８が抗ＰＤ−Ｌ１抗体と相乗効果を有することを示す。
【００３９】
【図２１】Ｈｕ１０１−２８によるカニクイザルＣＤ７３活性の結合および阻害を示す。
【００４０】
【図２２】ＣＤ７３に対する結合に関して、Ｈｕ１０１−２８がＭＥＤＩ−９４４７と競合しないことを示す。
【００４１】
【図２３】Ｈｕ１０１−２８と相互作用するＣＤ７３のアミノ酸残基を列挙する。
【００４２】
【図２４】Ｈｕ１０１−２８およびＭＥＤＩ−９４４７のエピトープを図示する。
【００４３】
【図２５】ＭＥＤＩ−９４４７と比較して優れている、Ｈｕ１０１−２８の活性を示す。
【００４４】
【図２６】Ｈｕ１０１−２８が、ＣＤ７３の複数の異なる発現レベルを有する細胞上のＣＤ７３の阻害において有効であることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
［定義］
「１」または「一」という語句のエンティティは、１または複数のエンティティを指すことに留意されたい。例えば、「１つの抗体」は、１または複数の抗体を表すものと理解されるべきである。したがって、本明細書においては、「１」（または「一」）、「１または複数」、「少なくとも１つ」という語句は、交換可能に使用できる。
【００４６】
本明細書において使用される「ポリペプチド」という語句は、単一の「ポリペプチド」、および、複数の「ポリペプチド」を包含することを意図し、アミド結合（ペプチド結合としても知られている）によって直線状に連結されるモノマー（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という語句は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖または複数の鎖を指し、産物の特定の長さを指すものではない。したがって、２つ以上のアミノ酸の鎖または複数の鎖を指すために使用される、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または、任意の他の語句は、「ポリペプチド」の定義に含まれ、「ポリペプチド」という語句は、これらの語句のいずれかの代わりに、または、それらと交換可能に使用され得る。「ポリペプチド」という語句はまた、これらに限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、または、非天然に発生するアミノ酸による改変を含む、ポリペプチドの発現後改変の産物を指すことを意図する。ポリペプチドは、天然の生物学的ソースに由来し得るか、または、組換え技術によって生成され得るが、必ずしも、指定された核酸配列から翻訳されるわけではない。ポリペプチドは、化学合成を含む任意の方式で生成され得る。
【００４７】
本明細書において、細胞、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸に関連して「単離」という語句が使用される場合、高分子の天然のソースに存在する、他のＤＮＡまたはＲＮＡからそれぞれ分離された分子を指す。「単離」という語句は、本明細書において使用される場合、組換えＤＮＡ技法によって生成されたときに細胞物質、ウイルス物質もしくは培地を、または、化学的に合成されたときは前駆的化学物質もしくは他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドを指すこともある。更に、「単離された核酸」は、断片として天然に発生しない、天然の状態で見られないであろう核酸断片を含めることを意味している。「単離」という語句は、本明細書において、他の細胞タンパク質または組織から単離された細胞またはポリペプチドを指すためにも使用される。単離されたポリペプチドとは、精製されたポリペプチド、および、組換えのポリペプチドの両方を包含することを意味している。
【００４８】
本明細書において使用される、「組換え」という語句は、ポリペプチド、または、ポリヌクレオチドに関する場合、天然に存在しないポリペプチドまたはポリヌクレオチドの形態を意図し、それらの非限定的な例は、通常は共に発生しないであろうポリヌクレオチドまたはポリペプチドを組み合わせることによって作成できる。
【００４９】
「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチドの間、または、２つの核酸分子の間の配列類似性を指す。相同性は、比較の目的で揃えられ得る各配列における位置を比較することによって決定できる。比較される配列内のある位置が、同一の塩基またはアミノ酸によって占められるとき、分子はその位置において相同である。配列間の相同性の程度は、配列によって共有される、一致する位置または相同的な位置の数の関数である。「関連のない」、または、「非相同的」配列は、本開示の配列の１つと４０％未満の同一性（好ましくは２５％未満の同一性）を共有する。
【００５０】
ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域（またはポリペプチドまたはポリペプチド領域）が別の配列と特定の割合（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％）の配列同一性を有することは、揃えられたとき、２つの配列の比較において、その割合の塩基（またはアミノ酸）が同一であることを意味する。このアライメントおよび百分率相同性または配列同一性は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  ｅｄｓ．  （２００７）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙにおいて説明されているものなど、本技術分野において知られているソフトウェアプログラムを使用して決定できる。好ましくは、デフォルトパラメータがアライメントのために使用される。１つのアライメントプログラムは、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴである。特に、プログラムは、以下のデフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰである。Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｃｏｄｅ  ＝  ｓｔａｎｄａｒｄ；  ｆｉｌｔｅｒ  ＝  ｎｏｎｅ；  ｓｔｒａｎｄ  ＝  ｂｏｔｈ；  ｃｕｔｏｆｆ  ＝  ６０；  ｅｘｐｅｃｔ  ＝  １０；  Ｍａｔｒｉｘ  ＝  ＢＬＯＳＵＭ６２；  Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ  ＝  ５０  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；  ｓｏｒｔ  ｂｙ  ＝  ＨＩＧＨ  ＳＣＯＲＥ；  Ｄａｔａｂａｓｅｓ  ＝  ｎｏｎ−ｒｅｄｕｎｄａｎｔ，  ＧｅｎＢａｎｋ  ＋  ＥＭＢＬ  ＋  ＤＤＢＪ  ＋  ＰＤＢ  ＋  ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ  ＋  ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ  ＋  ＳＰｕｐｄａｔｅ  ＋  ＰＩＲ。生物学的に同等のポリヌクレオチドとは、上で示された指定の百分率相同性を有し、かつ、同一または同様の生物学的活性を有するポリペプチドをコードするものである。
【００５１】
「同等の核酸またはポリヌクレオチド」という語句は、核酸のヌクレオチド配列またはその相補的配列とある程度の相同性、または、配列同一性を有するヌクレオチド配列を有する核酸を指す。二本鎖核酸のホモログとは、ある程度の相同性を有するヌクレオチド配列を有する核酸、または、その相補的配列を含むことを意図している。一態様において、核酸のホモログは、核酸またはその相補的配列にハイブリダイズすることが可能である。同様に、「同等のポリペプチド」は、基準ポリペプチドのアミノ酸配列とある程度の相同性または配列同一性を有するポリペプチドを指す。いくつかの態様において、配列同一性は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％である。いくつかの態様において、同等のポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、基準のポリペプチドまたはポリヌクレオチドと比較したとき、１、２、３、４または５個の追加、欠失、置換および組み合わせを有する。いくつかの態様において、同等の配列は、基準配列の活性（例えば、エピトープ結合）または構造（例えば塩橋）を保持する。
【００５２】
ハイブリダイゼーション反応は、異なる「厳密性」の条件下で実行できる。一般に、低厳密性ハイブリダイゼーション反応は、約１０倍のＳＳＣ溶液、または、同等のイオン強度／温度の溶液において、約４０℃で実行される。中程度の厳密性のハイブリダイゼーションは、典型的には、約６倍のＳＳＣにおいて、約５０℃で実行される。高厳密性ハイブリダイゼーション反応は、一般的に、約１倍のＳＳＣにおいて、約６０℃で実行される。ハイブリダイゼーション反応は、当業者によく知られている「生理的条件」下で実行することもできる。生理的条件の非限定的な例は、細胞において通常見られる温度、イオン、強度、ｐＨ、および、Ｍｇ２＋濃度である。
【００５３】
ポリヌクレオチドは、４個のヌクレオチド塩基、すなわち、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）の特定配列（ポリヌクレオチドがＲＮＡであるとき、チミンの代わりにウラシル（Ｕ））から構成される。したがって、「ポリヌクレオチド配列」という語句は、ポリヌクレオチド分子の文字表現である。この文字表現は、中央処理装置を有するコンピュータ内のデータベースに入力でき、機能ゲノミクスおよび相同性検索などのバイオインフォマティクスの用途に使用できる。「ポリモーフィズム」という語句は、１つより多くの形態の遺伝子またはその部分が共存することを指す。遺伝子のうち、少なくとも２つの異なる形態、すなわち、２つの異なるヌクレオチド配列がある部分は、「遺伝子の多型領域」と呼ばれる。多型領域は単一のヌクレオチドであってよく、異なる対立遺伝子において同一性は異なる。
【００５４】
「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という語句は、交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドまたはその類似体のいずれかである、任意の長さの高分子形態のヌクレオチドを指す。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造を有することができ、既知または未知の任意の機能を実行し得る。以下はポリヌクレオチドの非限定的な例である。遺伝子または遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴまたはＳＡＧＥタグ）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐型ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブおよびプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体などの修飾されたヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチド構造への修飾は、もしある場合、ポリヌクレオチドの構築の前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって割り込まれ得る。ポリヌクレオチドは重合後、標識部分への連結などにより、更に修飾され得る。また、この語句は、二本鎖および一本鎖の分子両方を指す。別段の記載がある場合を除き、または、必要である場合を除き、本開示の任意の実施形態のポリヌクレオチドは、二本鎖形と、二本鎖形を形成することが知られている、または、予想される、２つの相補的な一本鎖形の各々とを含む。
【００５５】
ポリヌクレオチドに適用される「コード」という語句は、ポリヌクレオチドが天然型の状態において、または、当業者によく知られている方法によって操作されるとき、転写および／または翻訳されてポリペプチドおよび／またはその断片のためのｍＲＮＡを生成できる場合、ポリペプチドを「コード」するといわれるポリヌクレオチドを指す。アンチセンス鎖は、そのような核酸の相補鎖であり、コード配列をそれから推測できる。
【００５６】
本明細書において使用される「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識してそれに結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体および任意の抗原結合断片、または、それらの一本鎖であってよい。したがって、「抗体」という語句は、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む分子を含む任意のタンパク質またはペプチドを含む。そのような例には、これらに限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれらのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、または、それらの任意の部分、または、結合タンパク質の少なくとも１つ一部が含まれる。
【００５７】
本明細書において使用される、「抗体断片」または「抗原結合断片」という語句は、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、および同様のものなどの抗体の一部である。構造にかかわらず、抗体断片は、完全な抗体によって認識される抗原と同一のものに結合する。「抗体断片」という語句は、アプタマー、スピゲルマー、２特異性抗体を含む。「抗体断片」という語句は、特異的抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する、合成タンパク質、または、遺伝子組み換えタンパク質も含む。
【００５８】
「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質を指す。いくつかの態様において、この領域は１０〜約２５アミノ酸の短いリンカペプチドに結合する。リンカは、柔軟性のためのグリシン、および、溶解性のためのセリンまたはスレオニンが豊富であり得、ＶＨのＮ末端、または、ＶＬのＣ末端のいずれかに接続され得る（逆も成立する）。このタンパク質は、定常領域が除去されていてリンカが導入されているが、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。本技術分野において、ＳｃＦｖ分子が知られており、例えば、米国特許第５,８９２,０１９号において説明されている。
【００５９】
抗体という語句は、生化学的に区別できる様々な幅広いクラスのポリペプチドを包含する。当業者であれば、重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、または、イプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、また、それらの中のいくつかのサブクラス（例えば、γ１−γ４）に分類されることを理解するであろう。この鎖の性質によって、抗体の「クラス」がそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＥとして決定される。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などは、特徴がはっきりしており、機能的な特化を付与することが知られている。これらのクラスおよびアイソタイプの各々の改変版は、当業者が本開示を参照して容易に認識でき、従って、本開示の範囲内にある。すべての免疫グロブリンのクラスが本開示の範囲内にあることは明確であり、以下の説明は一般的に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関連する。ＩｇＧに関連して、標準の免疫グロブリン分子は、分子量約２３，０００ドルトンである２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、分子量５３,０００−７０,０００である２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４本の鎖は、典型的には、「Ｙ」の形状でジスルフィド結合によって連結され、軽鎖は「Ｙ」の開いた部分から開始する重鎖と対を形成し、可変領域全体にわたって連続している。
【００６０】
本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、それらの変異型または誘導体には、これらに限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異性、ヒト型、ヒト化、霊長類化もしくはキメラ抗体、一本鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'およびＦ（ａｂ'）２、Ｆｄ、Ｆｖｓ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリによって生成される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書において開示されるＬＩＧＨＴ抗体への抗Ｉｄ抗体を含む）が含まれる。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または、免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。
【００６１】
軽鎖はカッパまたはラムダ（Κ、λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダのいずれかの軽鎖に結合し得る。一般に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合し、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞、または、遺伝子操作した宿主細胞のいずれかによって生成されるとき、２つの重鎖の「テール」部分は、共有結合性ジスルフィド連結または非共有結合性連結によって互いに結合される。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ形状の分岐端におけるＮ末端から、各鎖の底部におけるＣ末端まで続いている。
【００６２】
軽鎖および重鎖は両方、構造および機能的に相同の複数の領域に分割される。「定常」および「可変」という語句は、機能について使用される。これに関連して、軽鎖（ＶＫ）および重鎖（ＶＨ）部分両方の可変ドメインは、抗原認識および特異性を決定することを理解されたい。逆に、軽鎖（ＣＫ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、相補的結合および同様のものなどの重要な生物学的特性を付与する。慣習的に、定常領域ドメインの番号は、抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増加する。可変領域におけるＮ末端部分およびＣ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３およびＣＫドメインはそれぞれ、重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を実際に含む。
【００６３】
上で示されるように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識して特異的に結合することを可能にする。つまり、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または、相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは結合して、３次元の抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この４要素抗体構造は、Ｙの各腕の末端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＫ鎖の各々における３個のＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）によって画定される。いくつかの場合において、例えば、ラクダ科に由来する、または、ラクダ科免疫グロブリンをベースにして操作された特定の免疫グロブリン分子において、完全な免疫グロブリン分子は、軽鎖が無く重鎖のみから成ることがあり得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８  （１９９３）を参照されたい。
【００６４】
天然に発生する抗体において、各抗原結合ドメインに存在する６個の「相補性決定領域」またはＣＤＲは、アミノ酸の短い不連続配列であり、これらは、抗体が水性環境において３次元構成をとるときに、抗原結合ドメインを形成するように特異的に配置される。抗原結合ドメインにおける残りのアミノ酸は、「フレームワーク」領域と呼ばれ、より小さい分子間の可変性を示す。フレームワーク領域は主に、βシートの形態を取り、ＣＤＲは、βシート構造を接続する、および、いくつかの場合には、βシート構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間の非共有結合性相互作用によってＣＤＲを正しい向きに位置決めするため足場を形成するように機能する。位置決めされたＣＤＲによって形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を画定する。この相補的表面は、同族エピトープに対する抗体の非共有結合を促進する。ＣＤＲおよびフレームワーク領域をそれぞれ構成するアミノ酸は、正確に定義されているので（"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，"  Ｋａｂａｔ，  Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  （１９８３）、および、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１−９１７  （１９８７）を参照）、当業者によって、任意の重鎖または軽鎖可変領域について、容易に識別されることができる。
【００６５】
当分野において使用および／または受け入れられている語句に２つ以上の定義がある場合、本明細書において使用される語句の定義は、別段の明示的な記載が無い限り、そのような意味をすべて含むことが意図されている。具体的な例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域において見られる不連続抗原結合部位を説明するために、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という語句を使用することである。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  "Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"  （１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７  （１９８７）によって説明され、これらは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義は、互いに比較したときに、重複するアミノ酸残基のサブセットを含む。上記にかかわらず、抗体またはその変異型のＣＤＲを指すために、いずれかの定義を適用することは、本明細書において定義および使用される語句の範囲内にあることが意図される。上で挙げられた参考文献の各々によって定義されるＣＤＲを含む適切なアミノ酸残基を下の表において比較として説明する。特定のＣＤＲを包含する厳密な残基番号は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて変動する。当業者であれば、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮することで、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかを定型的に決定できる。
【表１】
2020515508.tif 000002
【００６６】
また、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌは、任意の抗体に適用される可変ドメイン配列について、ナンバリングシステムを定義した。当業者であれば、配列自体以外のいかなる実験データにも頼ることなく、この「Ｋａｂａｔナンバリング」のシステムを任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。本明細書において使用される「Ｋａｂａｔナンバリング」とは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  "Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"  （１９８３）によって説明されるナンバリングシステムを指す。
【００６７】
上の表に加えて、Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、ＣＤＲ領域を以下のように説明する。ＣＤＲ−Ｈ１は、約３１番目のアミノ酸（すなわち、最初のシステイン残基の後の約９残基）から開始し、約５〜７のアミノ酸を含み、次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｈ２は、ＣＤＲ−Ｈ１の末端の後の第１５の残基から開始し、約１６〜１９アミノ酸を含み、次のアルギニンまたはリシン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｈ３は、ＣＤＲ−Ｈ２の末端の後の約３３番目のアミノ酸残基から開始し、３〜２５アミノ酸を含み、配列Ｗ−Ｇ−Ｘ−Ｇにおいて終了し、Ｘは任意のアミノ酸であり、ＣＤＲ−Ｌ１は、約２４番目の残基（すなわち、システイン残基の後）から開始し、約１０〜１７残基を含み、次のトリプトファン残基で終了する。ＣＤＲ−Ｌ２は、ＣＤＲ−Ｌ１の末端の後の約１６番目の残基から開始し、約７残基を含む。ＣＤＲ−Ｌ３は、ＣＤＲ−Ｌ２の末端の後の約３３番目の残基（すなわち、システイン残基の後）から開始し、約７〜１１残基を含み、ＦまたはＷ−Ｇ−Ｘ−Ｇの配列で終了し、Ｘは任意のアミノ酸である。
【００６８】
本明細書において開示される抗体は、鳥類および哺乳類を含む任意の動物起源であり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、または、ニワトリの抗体である。別の実施形態において、可変領域は、（例えばサメからの）コンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）が起源であり得る。
【００６９】
本明細書において使用される「重鎖定常領域」という語句は、免疫グロブリン重鎖由来のアミノ酸配列を含む。重鎖定常領域を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上、中央、および／または、下のヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、もしくは、変異型、または、それらの断片のうち少なくとも１つを含む。例えば、本開示において使用するための抗原結合ポリペプチドは、（ａ）ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｂ）ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｃ）ヒンジドメインの少なくとも一部およびＣＨ２ドメイン、（ｄ）ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、（ｅ）ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、および、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖、または、（ｆ）ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、および、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を備え得る。別の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。更に、本開示に使用される抗体には、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインのすべてまたは一部）が無いことがあり得る。上で説明したように、当業者であれば、天然に発生する免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように重鎖定常領域が改変され得ることを理解するであろう。
【００７０】
本明細書において開示される抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子由来のＣＨ１ドメイン、および、ＩｇＧ３分子由来のヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖定常領域は、部分的にＩｇＧ１分子に由来し、部分的にＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例において、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子に由来し、部分的にＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジを含み得る。
【００７１】
本明細書において使用される、「軽鎖定常領域」という語句は、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうち少なくとも１つを含む。
【００７２】
「軽鎖−重鎖ペア」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合を通して二量体を形成できる軽鎖および重鎖の組を指す。
【００７３】
上述のように、様々な免疫グロブリンのクラスの定常領域のサブユニット構造および３次元構成はよく知られている。本明細書において使用される「ＶＨドメイン」という語句は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という語句は、免疫グロブリン重鎖の第１（最アミノ末端）定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域へのアミノ末端である。
【００７４】
本明細書において使用される「ＣＨ２ドメイン」という語句は、例えば、従来のナンバリング方式を使用すると、抗体の約２４４番目の残基から３６０番目の残基まで延在する重鎖分子の部分を含む（Ｋａｂａｔナンバリングシステムでは残基２４４〜３６０、ＥＵナンバリングシステムでは残基２３１〜３４０、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，アメリカ合衆国保健福祉省，"Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ"  （１９８３）を参照）。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密に対になっていないという点で独自である。むしろ、２つのＮ結合型分岐炭水化物鎖は、完全な天然型のＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挿入される。また、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端へ延在し、約１０８残基を含むことが十分に立証されている。
【００７５】
本明細書において使用される「ヒンジ領域」という語句は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに連結させる重鎖分子の部分を含む。このヒンジ領域は、約２５の残基を含み柔軟であり、したがって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立に移動することを可能にする。ヒンジ領域は、３つの区別されるドメイン、すなわち、上、中央、下ヒンジドメインに細分化され得る（Ｒｏｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６１：４０８３  （１９９８））。
【００７６】
本明細書において使用される「ジスルフィド結合」という語句は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基との間にジスルフィド結合またはブリッジを形成できるチオール基を含む。天然に発生する大部分のＩｇＧ分子において、ＣＨ１およびＣＫ領域はジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用したときの２３９および２４２（ＥＵナンバリングシステムの場合、位置２２６または２２９）に対応する位置における２つのジスルフィド結合によって連結される。
【００７７】
本明細書において使用される「キメラ抗体」という語句は、免疫反応性領域または部位が第１の種から取得され、または、それに由来し、かつ、定常領域（本開示によれば、完全なもの、部分的なもの、または、改変されたものであり得る）が第２の種から取得される、任意の抗体を意味するものとする。特定の実施形態おいて、標的結合領域または部位は、非ヒトのソースに由来し（例えば、マウスまたは霊長類）、定常領域はヒト型である。
【００７８】
本明細書において使用される「ヒト化率」は、ヒト化ドメインと生殖細胞系ドメインとの間のフレームワークアミノ酸の数の差（すなわち、非ＣＤＲの差）を決定し、その数を総アミノ酸数から減算し、それを総アミノ酸数で除算し、１００で乗算することによって算出される。
【００７９】
「特異的に結合」または「特異性を有する」は、一般的に、抗体が抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および、結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を伴うことを意味する。この定義によれば、ランダムな関連のないエピトープに結合する場合より容易に、抗体が抗原結合ドメインを介してエピトープに結合するとき、そのエピトープに「特異的に結合」すると言われる。「特異性」という語句は、本明細書において、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対的な親和性を認めるために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、任意のエピトープについて、抗体「Ｂ」より高い特異性を有すると見なされ得る、または、抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」について有する特異性より高い特異性でエピトープに結合すると言われ得る。
【００８０】
本明細書において使用される「治療」または「治療する」という語句は、治療処置および予防または防止手段の両方を指し、目的は、癌の進行などの、望ましくない生理的変化または障害を防止または鈍化する（緩和する）。有利な、または、望ましい臨床結果には、これらに限定されないが、検出可能かどうかを問わず、症状の軽減、疾患の程度の減弱、病状の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行の遅延または鈍化、病状の改善または緩和、寛解（完全または部分的を問わず）が含まれる。「治療」は、治療を受けない場合に予想される生存期間と比較して、生存期間を延ばすことも意味し得る。治療を必要とする者には、既に病態または障害を有する者、および、病態または障害を有する傾向がある者、または、病態または障害を予防されるべき者が含まれる。
【００８１】
「対象」または「個人」または「動物」または「患者」または「哺乳類」は、任意の対象、特に、診断、予後または治療が望ましい哺乳類対象を意味する。哺乳類対象には、ヒト、家畜動物、農業用の動物、または、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、乳牛など、動物園、スポーツ、もしくは、ペット用の動物などが含まれる。
【００８２】
本明細書において使用される、「治療を必要とする患者に」または「治療を必要とする対象」などの語句は、例えば、検出、診断手順、および／または、治療に使用される、本開示の抗体または組成物の投与から恩恵を受けるであろう、哺乳類対象などの対象を含む。
【００８３】
［抗ＣＤ７３抗体］
本開示は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する高親和性および阻害活性を有する抗ＣＤ７３抗体を提供する。抗体は、遊離ＣＤ７３および細胞表面上のＣＤ７３の両方に効果的に結合できる。細胞表面上のＣＤ７３タンパク質に結合すると、結合は内在化を誘発でき、細胞外アデノシンおよび免疫抑制腫瘍環境を減少させる、ＣＤ７３タンパク質の細胞表面発現の減少をもたらす。更に、これらの抗体はＣＤ７３の活性部位に対する結合に関してＡＭＰ基質と競合しないが、アロステリックに、または、他の非競合的機構を通して機能するので、これらの抗体は、これらの内因性ＡＭＰ基質に結合するＣＤ７３に干渉せず、このことは、これらの抗体の潜在的な副作用を制限する。
【００８４】
加えて、実験例に示されるように、これらの抗体は、ＭｅｄＩｍｍｕｎｅのＭＥＤＩ−９４４７などの既知の抗ＣＤ７３抗体で観察されない独自の特性をいくつか示した。例１２に示されるように、ＭＥＤＩ−９４４７および１１Ｆ１１は、ＣＤ７３タンパク質のＮ末端ドメインに結合するが、本発明の抗体（例えば、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０）の標的アミノ酸は、Ｃ末端ドメインにある。
【００８５】
ＣＤ７３酵素は、グリコシルホスファチジルイノシトールの連結によって細胞膜の外部表面に結合される２つの同一の７０ｋＤサブユニットの二量体から成る。二量体ヒトＣＤ７３の結晶構造から、酵素の開放型と閉鎖型との間の広い立体構造変化が明らかになり、このことは、酵素の適切な機能のために必要である。二量体化インタフェースがＣ末端ドメインによって形成される。Ｃ末端ドメインが他の結合に関与するとき、二量体化および／または立体構造変化がブロックされ、ＣＤ７３活性の阻害をもたらすと考えられる。対照的に、Ｎ末端ドメインによる抗体への結合には、そのような作用がないことがあり得る。
【００８６】
したがって、本開示の抗体がＣ末端ドメインでＣＤ７３タンパク質に結合するとき、タンパク質の二量体化をブロックし、活性を効果的に阻害すると考えられる。したがって、本開示の抗体は、Ｎ末端ドメインに結合する、以前に知られていた抗ＣＤ７３抗体より遥かに優れている。
【００８７】
したがって、本開示の一実施形態によれば、ヒトＣＤ７３タンパク質への特異性を有し、ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端部分から選択された１または複数のアミノ酸残基に結合する、単離された抗体または抗体断片が提供される。本技術分野において既知であるヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端部分は、下の表にける配列識別番号６１において示されるように、残基３３７から開始する２３８アミノ酸残基を含む。
［表Ａ．ＣＤ７３配列］
【表２】
2020515508.tif 000003
【００８８】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインの１または複数に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質のＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０から成る群から選択されるうち少なくとも１つのアミノ酸残基に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、アミノ酸残基のうち少なくとも２つに結合する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５およびＤ３９９に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５およびＥ４００に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９およびＥ４００に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＥ４００およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＥ４００およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＲ４０１およびＲ４８０に結合する。
【００９０】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９およびＥ４００に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｅ４００およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｅ４００およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｒ４０１およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９、Ｅ４００およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９、Ｅ４００およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＥ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０に結合する。
【００９１】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００およびＲ４０１に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｄ３９９、Ｒ４０１およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＹ３４５、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、少なくともＤ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０に結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０の各々に結合する。
【００９２】
本開示の一実施形態によれば、配列識別番号１−６において定義されるＣＤＲ領域を有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含む抗体が提供される。
［表１．ＣＤＲ領域の配列］
【表３】
2020515508.tif 000004
【００９３】
実験例において示されるように、これらのＣＤＲ領域を含む抗体は、マウス、ヒト化、または、キメラのいずれも、強力なＣＤ７３結合および阻害活性を有する。更なるコンピュータモデル化は、抗体の特性を保持または改善するように、ＣＤＲにおける特定の残基を改変できることを示した。そのような残基は、「ホットスポット」と呼ばれ、表１において下線で示される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ７３抗体は、表１に列挙されるように、１、２、または、３個の更なる改変を有するＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲを含む。そのような改変は、アミノ酸の追加、欠失、または、置換であり得る。
【００９４】
いくつかの実施形態において、改変は、ＣＤＲの各々の１つだけのホットスポット位置での置換である。いくつかの実施形態において、改変は、１、２、または、３つのそのようなホットスポット位置での置換である。一実施形態において、改変は、ホットスポット位置のうち１つでの置換である。いくつかの実施形態において、そのような置換は保存的置換である。
【００９５】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換のことである。本技術分野において定義された類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐型側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および、芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、免疫グロブリンポリペプチドにおける非本質的なアミノ酸残基は、好ましくは、同一の側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基に置き換えられる。別の実施形態において、アミノ酸の鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる、構造的に同様の鎖に置き換えることができる。
【００９６】
保存的アミノ酸置換の非限定的な例を以下の表に提供する。ここでは、０またはそれより高い類似性スコアは、２つのアミノ酸の間の保存的置換を示す。
［表２  アミノ酸類似性マトリクス］
【表４】
2020515508.tif 000005
［表３  保存的アミノ酸置換］
【表５】
2020515508.tif 000006
【００９７】
好適な置換を有するＣＤＲの具体的な例が、例７の配列識別番号２６−５６に提供される。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号１または２６−２９のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号２または３０−３６のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号１または３７−４１のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号４または４２−４５のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列識別番号６または４６−５６のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【００９８】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、上記の置換のうち１つだけ、２つだけ、または、３つだけを含む。いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１または配列識別番号２６−２９のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【００９９】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２または配列識別番号３０−３６のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【０１００】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３または配列識別番号３７−４１のいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４または配列識別番号４２−４５のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体断片は、配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１と、配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２と、配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３と、配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１と、配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、配列識別番号６または配列識別番号４６−５６のいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ３とを含む。
【０１０３】
ＶＨの非限定的な例は配列識別番号７および９−１３に提供され、そのうち、配列識別番号１０がマウスＶＨであり、配列識別番号７、９および１１−１３がヒト化ＶＨである。更に、ヒト化ＶＨのうち、配列識別番号７、９および１２−１３は、１または複数の、マウスバージョンへの復帰突然変異を含む。同様に、ＶＬ（ＶＫ）の非限定的な例が配列識別番号８、１５−２０および２２−２４において提供される。例に示すように、配列識別番号１５はマウス配列であり、配列識別番号１６および２２は、元々ヒト化配列に由来する。配列識別番号８、１７−２０および２２−２４は、復帰突然変異を有するヒト化ＶＬである。
【０１０４】
復帰突然変異は、抗ＣＤ７３抗体の特定の特徴を保持するために有用であることが示される。従って、いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ７３抗体、特に、ヒト型またはヒト化抗体は、復帰突然変異のうち１または複数を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨ復帰突然変異（すなわち、指定位置のアミノ酸に含まれる）は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置３０のＴｈｒ、（ｂ）位置４４のＬｙｓ、（ｃ）位置４８のＭｅｔ、（ｄ）位置６７のＩｌｅ、および、（ｅ）位置７１のＡｒｇから選択される１または複数ならびにそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、ＶＬ復帰突然変異は、Ｋａｂａｔナンバリングに従って、（ａ）位置５のＳｅｒ、（ｂ）位置４６のＰｒｏ、（ｃ）位置４７のＴｒｐ、（ｄ）位置４９のＳｅｒ、（ｅ）位置７０のＳｅｒ、および、（ｆ）位置７１のＴｙｒから選択される１または複数ならびにそれらの組み合わせである。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ７３抗体は、配列識別番号７または９−１３のいずれか１つのＶＨ、配列識別番号８または１５−２０および２２−２４のいずれか１つのＶＬ、または、それぞれの生物学的同等物を含む。ＶＨまたはＶＬの生物学的同等物は、全体で８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または、９９％の配列同一性を有する、指定されたアミノ酸を含む配列である。配列識別番号７の生物学的同等物は、したがって、配列識別番号７と全体的に８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するが、ＣＤＲ（配列識別番号１−６またはそれらの変異型）を保持し、任意で、復帰突然変異のうち１または複数、または、すべてを保持するＶＨであり得る。
【０１０６】
一実施形態において、ＶＨは配列識別番号７のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号８のアミノ酸配列を有する。一実施形態において、ＶＨは配列識別番号９のアミノ酸配列を有し、ＶＬは配列識別番号８のアミノ酸配列を有する。
【０１０７】
また、当業者であれば、本明細書に開示される抗体は、それらの由来となる、天然に発生する結合ポリペプチドと比較して、アミノ酸配列が変動するように改変され得ることを理解するであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は同様であり得て、例えば、開始配列に対して、特定のパーセントの同一性を有し、例えば、開始配列に対して、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であり得る。
【０１０８】
特定の実施形態において、抗体は、通常は抗体に関連しない、アミノ酸配列、または、１または複数の部分を含む。例示的な改変は、以下でより詳細に説明される。例えば、本開示の抗体は、柔軟なリンカ配列を含み得る、または、官能基（例えば、ＰＥＧ、薬剤、毒物、または、標識）を追加するように改変され得る。
【０１０９】
本開示の抗体、変異型、または、それらの誘導体は、改変された誘導体、すなわち、エピトープへの抗体の結合が共有結合によって防止されないように任意の種類の分子を抗体に共有結合させることによって改変された誘導体を含む。例えば、これらに限定されないが、抗体は例えば、グリコシル化、アセチル化、ＰＥＧ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって改変できる。多数の化学改変のいずれも、これらに限定されないが、特異的な化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含む、既知の技法によって実行され得る。加えて、抗体は、１または複数の非従来型アミノ酸を含み得る。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物応答調節剤、医薬品、またはＰＥＧと結合され得る。
【０１１１】
抗体は、放射性標識などの検出可能な標識を含み得る治療剤、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療剤、光活性診断剤、薬物または毒物であり得る細胞傷害性剤、超音波造影剤、非放射性標識、それらの組み合わせ、および、本技術分野において既知である他のそのような物質に結合または融合され得る。
【０１１２】
抗体は、化学発光化合物と結合させることによって、検出可能に標識できる。その後、化学発光標識された抗原結合ポリペプチドの存在は、化学反応の過程において生じる発光の存在を検出することによって判定される。特に有用な化学発光標識化合物の例には、ルミノール、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、およびシュウ酸エステルがある。
【０１１３】
また、抗体は、１５２Ｅｕまたはランタニド系列の他のものなどの蛍光放射金属を使用して検出可能に標識できる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの金属キレート基を使用して、抗体に取り付けることができる。様々な部分を抗体に結合させる技法は既知である。例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ２４３−５６  （Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．  （１９８５）のＡｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  "Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ"、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （２ｎｄ  Ｅｄ．），  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （ｅｄｓ．），  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  ｐｐ．  ６２３−  ５３  （１９８７）のＨｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ"、  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  '８４：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  ｐｐ．  ４７５−５０６  （１９８５）のＴｈｏｒｐｅ，  "Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ"、  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．），  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  ｐｐ．  ３０３−１６  （１９８５）の"Ａｎａｌｙｓｉｓ，  Ｒｅｓｕｌｔｓ，  Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ"、および、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  （５２：１１９−５８  （１９８２））のＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，  "Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ"を参照されたい。
【０１１４】
［抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体の調製方法］
また、本開示は、開示の抗体、変異型、または、誘導体をコードする、単離ポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。ポリヌクレオチドの例は、配列識別番号５７−６０を含む。本開示のポリヌクレオチドは、同一のポリヌクレオチド分子上で、または、別個のポリヌクレオチド分子上で、抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の全体をコードし得る。加えて、本開示のポリヌクレオチドは、同一のポリヌクレオチド分子上で、または、別個のポリヌクレオチド分子上で、抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の一部をコードし得る。
【０１１５】
抗体を作成する方法は、本技術分野において既知であり、本明細書において説明されている。特定の実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域および定常領域の両方は、完全にヒト型である。完全ヒト抗体は、本技術分野において説明される技法を使用して、本明細書において説明されるように作成できる。例えば、特異的抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原投与に応答してそのような抗体を生成するが内因性の遺伝子座を欠損するように改変されたトランスジェニック動物に抗原を投与することによって調製できる。そのような抗体を作成するために使用できる例示的技法は、参照によって全体が組み込まれる米国特許第６，１５０，５８４号、第６，４５８，５９２号、第６，４２０，１４０号に説明されている。
【０１１６】
特定の実施形態において、調製された抗体は、例えばヒトなど、治療されるべき動物において、有害な免疫反応を誘発しない。一実施形態において、本開示の抗原結合ポリペプチド、その変異型または誘導体は、本分野において認識されている技法を使用することによって、免疫原性を低減するように改変される。例えば、抗体はヒト化、霊長類化、脱免疫化でき、または、キメラ抗体を作成できる。これらの種類の抗体は、親抗体の抗原結合特性を保持する、または、実質的に保持するが、ヒトにおいては免疫原性がより小さい、典型的にはマウスまたは霊長類抗体などの非ヒト抗体に由来する。これは、（ａ）非ヒト可変ドメイン全体をヒト定常領域に移植してキメラ抗体を生成すること、（ｂ）非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）の１または複数の少なくとも一部を、重大なフレームワーク残基を保持する、または保持しない、ヒトフレームワークおよび定常領域に移植すること、または、（ｃ）非ヒト可変ドメイン全体を移植するが、表面残基の置き換えによって、ヒト様領域でそれらを「クローキング（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」することを含む、様々な方法によって達成され得る。そのような方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ５７：６８５１−６８５５  （１９８４）；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４４：６５−９２  （１９８８）；  Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６  （１９８８）；  Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎ．  ２５：４８９−４９８  （１９９１）；  Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎ．  ３１：１６９−２１７  （１９９４）、および米国特許第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、および第６，１９０，３７０号において開示され、これらすべては全体として、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１７】
脱免疫は、抗体の免疫原性を低減するために使用することもできる。本明細書において使用される「脱免疫」という語句は、Ｔ細胞エピトープを改変するように抗体を変更することを含む（例えば、国際特許出願公報第ＷＯ／９８５２９７６  Ａ１およびＷＯ／００３４３１７  Ａ２を参照）。例えば、開始抗体の可変重鎖および可変軽鎖の配列が解析され、相補性決定領域（ＣＤＲ）に関連するエピトープおよび配列内の他の重要な残基の位置を示す、各Ｖ領域のヒトＴ細胞エピトープ「マップ」が作成される。最終的な抗体の活性を変更するリスクが低い、代替的なアミノ酸置換を同定するべく、Ｔ細胞エピトープマップの個々のＴ細胞エピトープが解析される。アミノ酸置換の組み合わせを含む様々な代替的な可変重鎖および可変軽鎖の配列が設計され、これらの配列は後に、様々な結合ポリペプチドに組み込まれる。典型的には、１２から２４の間の変異型抗体が生成され、結合および／または機能について試験される。完全な重鎖および軽鎖遺伝子は、改変された可変領域を含み、ヒト定常領域は、発現ベクターにクローニングされ、その後、全抗体を生成するための細胞株にプラスミドが導入される。次に、抗体は、適切な生化学および生物学的アッセイにおいて比較され、最適な変異型が識別される。
【０１１８】
本開示の抗原結合ポリペプチドの結合特異性は、免疫沈降、放射免疫測定（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロアッセイによって決定できる。
【０１１９】
代替的に、一本鎖ユニットの生成について説明される技法（米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４４２  （１９８８）；  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ５５：５８７９−  ５８８３  （１９８８）；およびＷａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５５４  （１９８９））は、本開示の一本鎖ユニットを生成するよう適合できる。一本鎖ユニットは、アミノ酸ブリッジを介してＦｖ領域の重鎖および軽鎖断片を連結することによって形成され、一本鎖融合ペプチドが結果として得られる。大腸菌における機能性Ｆｖ断片の組み立てについての技法も使用され得る（Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：  １０３８−１０４１  （１９８８））。
【０１２０】
一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）および抗体を生成するために使用できる技法の例には、米国特許第４，９４６，７７８号および第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８  （１９９１）；  Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：１９９５−１９９９  （１９９３）；およびＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０  （１９８８）において説明されるものが含まれる。ヒトにおける抗体のインビボ使用、および、インビトロ検出アッセイを含む、いくつかの使用について、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、ヒト抗体を使用することが好ましいことがあり得る。キメラ抗体とは、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有する抗体など、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を生成する方法は本技術分野において知られている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２  （１９８５）；  Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４  （１９８６）；  Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２  （１９８９）；米国特許第５，８０７，７１５号；第４，８１６，５６７号；および第４，８１６３９７号を参照されたい。これらは全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
ヒト化抗体とは、非ヒト種およびフレームワーク領域ならびにヒト免疫グロブリン分子の１または複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）を有し、所望される抗原に結合する、非ヒト種抗体に由来する抗体分子である。ヒトフレームワーク領域におけるフレームワーク残基はしばしば、抗原結合を変更する、好ましくは改善するために、対応するＣＤＲドナー抗体の残基に置換される。これらのフレームワーク置換は、本技術分野において既知の方法により同定され、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用をモデル化することにより、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定する方法、および、配列比較により、特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定する方法が使用される。（例えば、参照によって全体が本明細書に組み込まれるＱｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号；  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３  （１９８８）を参照されたい。）抗体は、例えば、ＣＤＲ移植（ＥＰ  ２３９，４００；  ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９１／０９９６７、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号；および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェイシング（ＥＰ  ５９２，１０６；  ＥＰ  ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８  （１９９１）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４  （１９９４）、Ｒｏｇｕｓｋａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：９６９−９７３  （１９９４））、チェインシャフリング（全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５６５，３３２号）を含む、本技術分野において知られている様々な技法を使用してヒト化できる。
【０１２２】
完全ヒト抗体は、ヒトの患者の治療処置に特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージディスプレイ法を含む、本技術分野において知られている様々な方法によって作成できる。米国特許第４，４４４，８８７号および第４，７１６，１１１号、ならびに、ＰＣＴ公報ＷＯ  ９８／４６６４５、ＷＯ  ９８／５０４３３、ＷＯ  ９８／２４８９３、ＷＯ  ９８／１６６５４、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９６／３３７３５およびＷＯ  ９１／１０７４１も参照されたい。これらは各々、全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１２３】
また、機能的内因性免疫グロブリンを発現できないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを使用してヒト抗体を生成できる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、マウス胚性幹細胞内に、無作為に、または、相同組換えによって導入され得る。代替的に、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、多様性領域がマウス胚性幹細胞内に導入され得る。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン座位の導入と別個に、または同時に、非機能性を付与され得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合型欠失は、内因性抗体の生成を防止する。改変された胚性幹細胞を増殖させ、胚盤胞に微量注入することにより、キメラマウスを作る。次に、キメラマウスを繁殖させることにより、ヒト抗体を発現するホモ接合型の子孫を作る。例えば、所望の標的ポリペプチドの全部または一部など、選択された抗原を用いて、通常の方式でトランスジェニックマウスを免疫化する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫化されたトランスジェニックマウスから取得できる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化中に再編成し、その後、クラススイッチおよび体細胞突然変異が起きる。したがって、そのような技法を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を生成することが可能である。ヒト抗体を生成するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７３：６５−９３  （１９９５）を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を生成するためのこの技術、ならびに、そのような抗体を生成するためのプロトコルの詳細な説明については、例えば、参照によって全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公報ＷＯ  ９８／２４８９３、ＷＯ  ９６／３４０９６、ＷＯ  ９６／３３７３５、米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号および第５，９３９，５９８号を参照されたい。加えて、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州フリーモント）ＧｅｎＰｈａｒｍ（カリフォルニア州サンノゼ）などの企業は、上で説明されたものと同様の技術を使用して、選択された抗原に対するヒト抗体の提供に従事できる。
【０１２４】
選択されたエピトープを認識する完全ヒト抗体は、「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」と呼ばれる技法を使用して生成することもできる。この手法において、選択された非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体は、同一のエピトープを認識する完全ヒト抗体の選択を誘導するために使用される。（Ｊｅｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７２：８９９−９０３  （１９８８）。また、全体として参照によって組み込まれる米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい。
【０１２５】
別の実施形態において、所望されるモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離およびシーケンシングされ得る。単離およびサブクローニングされたハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として機能する。ＤＮＡは一旦単離されると、発現ベクター内に配置され得て、これが次に、本来は免疫グロブリンを生成しない、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または、骨髄腫細胞など、原核性または真核性の宿主細胞内にトランスフェクトされる。より具体的には、単離されたＤＮＡ（本明細書に説明されるように合成され得る）は、本明細書において参照によって組み込まれる、１９９５年１月２５日に出願された米国特許第５，６５８，５７０号（Ｎｅｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）に説明されるような製造抗体について、定常領域および可変領域の配列をクローニングするために使用され得る。基本的に、これは、選択された細胞からのＲＮＡの抽出、ｃＤＮＡへの変換、Ｉｇに特異的なプライマーを使用するＰＣＲによる増幅を伴う。この目的のための好適なプライマーはまた、米国特許第５，６５８，５７０号に記載される。以下でより詳細に説明されるように、所望の抗体を発現する形質転換された細胞は、免疫グロブリンの臨床および商業用のサプライを提供するために比較的大量に増殖され得る。
【０１２６】
加えて、定型的な組換えＤＮＡ技法を使用することにより、本開示の抗原結合ポリペプチドのＣＤＲのうちの１または複数は、非ヒト抗体をヒト化するべく、フレームワーク領域内、例えば、ヒトフレームワーク領域内に挿入され得る。フレームワーク領域は、天然に発生する、または、コンセンサスフレームワーク領域であり得て、好ましくは、ヒトフレームワーク領域（ヒトフレームワーク領域の一覧は、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２７８：４５７−４７９  （１９９８）を参照されたい）であり得る。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み合わせによって生成されるポリヌクレオチドは、例えばＬＩＧＨＴなど、所望されるポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、フレームワーク領域内において、１または複数のアミノ酸置換が成され得て、好ましくは、アミノ酸置換は抗原に対する抗体の結合を改善する。加えて、そのような方法は、１または複数の鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体分子を生成するべく、鎖内ジスルフィド結合に関与する１または複数の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を行うために使用され得る。ポリヌクレオチドへの他の変更は本開示に包含され、本技術分野の範囲内にある。
【０１２７】
加えて、適切な生物学的活性のヒト抗体分子の遺伝子と共に、適切な抗原特異性を有する、マウス抗体分子の遺伝子をスプライシングすることによる、「キメラ抗体」を生成するために開発された技法を使用できる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ：８５１−８５５  （１９８４）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：６０４−６０８  （１９８４）、Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４  （１９８５））。本明細書において使用されるキメラ抗体とは、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを有するものなど、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。
【０１２８】
組換え抗体を生成するための更に別の非常に効率的な手段がＮｅｗｍａｎ，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：  １４５５−１４６０  （１９９２）において開示される。具体的には、この技法の結果、サルの可変ドメインおよびヒト定常配列を含む霊長類化抗体が生じる。この参考文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。更に、この技法は、各々が参照によって本明細書に組み込まれる、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第５，６５８，５７０号、第５，６９３，７８０号および第５，７５６，０９６号において説明される。
【０１２９】
代替的に、当業者によく知られている技法を使用して、抗体生成細胞株が選択および培養され得る。そのような技法は、様々な実験室マニュアルおよび一次公報において説明されている。これに関して、後述する開示における使用に好適な技法が、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９１）において説明され、これは、参照によって付録を含む全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３０】
加えて、本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列に、これらに限定されないが、アミノ酸置換を引き起こす特定部位突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む突然変異を導入するために、当業者に知られている標準的な技法を使用できる。好ましくは、変異型（誘導体を含む）は、基準となる可変重鎖領域、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、可変軽鎖領域、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、または、ＣＤＲ−Ｌ３に対して、５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または、２未満のアミノ酸置換をコードする。代替的に、突然変異は、飽和突然変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）など、コード配列の全部または一部に沿って、無作為に導入でき、結果として生じる変異型は生物学的活性についてスクリーニングされ、活性を保持する変異型を同定できる。
【０１３１】
［治療方法］
本明細書において説明されるように、本開示の抗体、変異型または誘導体は、特定の治療および診断方法において使用され得る。
【０１３２】
本開示は更に、本明細書において説明される障害または病状の１または複数を治療するために、動物、哺乳類およびヒトなどの患者に開示の抗体を投与することを伴う抗体ベースの治療法に関連する。本開示の治療用化合物には、これらに限定されないが、本開示の抗体（本明細書において説明される変異型、および、変異型の誘導体を含む）、および、本開示の抗体（本明細書において説明される変異型、および、変異型の誘導体を含む）をコードする核酸またはポリヌクレオチドが含まれる。
【０１３３】
本開示の抗体は、癌を治療または阻害するために使用することもできる。上で提供されるように、ＣＤ７３は、腫瘍細胞において過剰発現できる。腫瘍由来ＣＤ７３は、エクト酵素として機能でき、細胞外アデノシンを生成し、これは、アデノシン受容体シグナリングを介して抗癌Ｔ細胞免疫を制限することによって、腫瘍増殖を促進する。小型分子阻害剤、または、マウス腫瘍モデルにおけるＣＤ７３を標的にしたモノクローナル抗体を用いた結果は、ＣＤ７３を標的にした治療法は、腫瘍増殖の効果的制御に対する重要な代替的かつ現実的手法であることを示す。特に、それは、適応免疫反応機構を強化することにより、Ｔ細胞を利用した療法を助け、これにより、腫瘍浸潤Ｔリンパ球の機能を増加させて癌患者における生存率の改善をもたらし得る。
【０１３４】
従って、いくつかの実施形態において、治療を必要とする患者の癌を治療するための方法を提供する。一実施形態において、当該方法は、本開示の抗体の有効量を患者に投与することを伴う。いくつかの実施形態において、患者における癌細胞のうち少なくとも１つ（例えばストローマ細胞）はＣＤ７３を過剰発現する。
【０１３５】
癌の非限定的な例には、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌が含まれる。
【０１３６】
細胞療法、より具体的には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法も本開示において提供される。好適なＴ細胞を使用でき、それは、本開示の抗ＣＤ７３抗体に接触させられる（または、代替的に、本開示の抗ＣＤ７３抗体を発現するように操作される）。そのような接触または操作の後に、治療を必要とする癌患者にＴ細胞を導入することができる。癌患者は、本明細書に開示されるような任意の種類の癌を有し得る。Ｔ細胞は、例えば、これらに限定されないが、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または、それらの組み合わせであり得る。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は癌患者自身から単離されたものである。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ドナーによって、または、細胞バンクから提供される。Ｔ細胞を癌患者から単離するとき、望ましくない免疫反応を最小限に抑えることができる。
【０１３８】
開示の抗体もしくは変異型、または、それらの誘導体を用いて治療、予防、診断、および／または、予後され得る、細胞生存の増加に関連する追加の疾患または病状には、これらに限定されないが、白血病（急性白血病、（例えば、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病を含む）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ球性白血病））を含む）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、原発性マクログロブリン血症、重鎖病、および、固形腫瘍（これらに限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮種、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、肺小細胞癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、悪性黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫などの肉腫および癌腫などを含む）などの悪性腫瘍および関連する障害の進行および／または転移が含まれる。
【０１３９】
特定の患者に対する具体的な投与量および治療計画は、特定の抗体、使用される変異型または誘導体、患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別、食生活、投与時刻、排泄率、併用薬剤、治療対象である特定の疾病の重症度を含む様々な要素に依存するであろう。医療従事者による、そのような要素の判断は、当分野における一般的な能力の範囲内である。また、その量は、治療される個々の患者、投与経路、製剤の種類、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および、所望の効果に依存するであろう。使用される量は、本技術分野において既知の薬学的および薬物動態学な原理によって決定できる。
【０１４０】
抗体または変異型の投与方法には、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および、経口の経路が含まれる。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、任意の好都合の経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜内壁（例えば、口腔粘膜、直腸および腸の粘膜など）を通した吸収によって投与され得て、他の生物学的活性剤と共に投与され得る。したがって、開示の抗原結合ポリペプチドを含む医薬組成物は、経口、経直腸、非経口、嚢内、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、注入薬または経皮パッチとして）、口腔内に、または、口腔もしくは鼻腔スプレーとして投与され得る。
【０１４１】
本明細書において使用される「非経口」という語句は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下、関節内の注射および注入を含む投与方式を指す。
【０１４２】
投与は全身投与であっても、または、局所的投与であってもよい。加えて、脳室内および髄腔内注射を含む好適な経路によって中枢神経系に本開示の抗体を導入することが望ましいことがあり得る。脳室内注射は、例えば、オマヤリザーバーなどのリザーバーに取り付けられた脳室内カテーテルによって容易になり得る。また、例えば吸入器または噴霧器、および、エアロゾル剤の製剤の使用によって、肺投与を利用できる。
【０１４３】
開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましいことがあり得る。これは、例えば、これらに限定されないが、手術中の局所注入、局所適用（例えば、手術後の創傷包帯と組み合わせる）、注射によって、カテーテルによって、座薬によって、または、インプラントによって達成され得て、上記インプラントは、シアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜などの膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、または、ゲル状物質である。好ましくは、抗体を含む、本開示のタンパク質を投与するとき、タンパク質が吸収されない材料を使用するように注意する必要がある。
【０１４４】
別の実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、小胞、特に、リポソームにおいて輸送できる（Ｌａｎｇｅｒ，  １９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３；  Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ  （ｅｄｓ．），  Ｌｉｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐｐ．  ３５３−３６５  （１９８９）；  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，  ｉｂｉｄ．，  ｐｐ．  ３１７−３２７；  ｓｅｅ  ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｉｂｉｄ．を参照されたい）。
【０１４５】
更に別の実施形態において、抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、制御された放出システムにおいて輸送できる。一実施形態において、ポンプが使用され得る（Ｓｅｆｔｏｎ，  １９８７，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｆ．  Ｂｉｏｍｅｄ．  Ｅｎｇ．  １４：２０１；  Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０，  Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；  Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３２１：５７４を参照されたい）。別の実施形態において、高分子物質が使用され得る（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．），  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，  Ｆｌａ．  （１９７４）；  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，  Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ  （ｅｄｓ．），  Ｗｉｌｅｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８４）；  Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，  Ｊ．，  １９８３，  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２３：６１を参照されたい。Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；  Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ２５：３５１；  Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７１：１０５も参照されたい）。更に別の実施形態において、制御された放出システムは、治療対象、すなわち、脳の付近に配置でき、したがって、全身用量投与の場合の数分の１のみが必要になる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ｓｕｐｒａ，  ｖｏｌ．  ２，  ｐｐ．  １１５−１３８  （１９８４）を参照されたい）。他の制御された放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ  （１９９０，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）のレビューにおいて説明されている。
【０１４６】
本開示の組成物が、核酸、または、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、特定の実施形態において、核酸は、それを適切な核酸発現ベクターの一部として構築して、それが細胞内になるように投与することによって（例えば、レトロウイルスベクターの使用によって（米国特許第４，９８０，２８６号を参照））、または、直接注射によって、または、微粒子ボンバードメントの使用によって（例えば、遺伝子銃、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）、または、脂質もしくは細胞表面受容体もしくはトランスフェクト剤でコーティングすることによって、または、核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに結合させて投与することなどによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８を参照されたい）、コードされたタンパク質の発現を促進するように核酸をインビボで投与できる。代替的に、核酸は、細胞内に導入され得て、相同組換えによって、発現するように宿主細胞ＤＮＡ内に組み込まれ得る。
【０１４７】
炎症性、免疫性もしくは悪性の疾患、障害または病状の、治療、抑制および予防に効果的となるであろう、本開示の抗体の量は、標準的な臨床的技法によって決定できる。加えて、最適な投与量範囲を同定することに役立てるべく、インビトロアッセイが任意で利用され得る。製剤において利用される厳密な用量は、投与経路、ならびに、疾病、障害または病態の重症度に依存し、医療従事者の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験システムから得られる用量反応曲線から推定され得る。
【０１４８】
一般的な提案として、患者に投与される、本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、典型的には、患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇの間、患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇの間、または、患者の体重に対して１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇの間である。一般的に、ヒト抗体は、他の種に由来する抗体と比べて、ヒトの身体内における半減期が長い。これは、外来ポリペプチドに対する免疫反応に起因する。したがって、ヒト抗体の投与量を少なくすること、および、投与の頻度を少なくすることが、しばしば可能である。更に、例えば脂質化などの改変によって、抗体の（例えば脳への）吸収および組織透過性を向上させることによって、本開示の抗体の投与の投与量および頻度が減少し得る。
【０１４９】
本開示の抗体、変異型または誘導体の投与を含む、感染性または悪性の疾患、病態または障害を治療するための方法は、典型的には、インビトロで試験され、次に、ヒトに使用される前に、所望される治療または予防活性について、許容される動物モデルにおいてインビボで試験される。トランスジェニック動物を含む好適な動物モデルは当業者にとって既知である。例えば、本明細書において説明される、抗原結合ポリペプチドの治療有用性を示すインビトロアッセイは、細胞株または患者の組織試料に対する、抗原結合ポリペプチドの作用を含む。細胞株および／または組織試料に対する抗原結合ポリペプチドの作用は、本明細書の別の箇所に開示されているアッセイなど、当業者に知られている技法を利用して決定できる。本開示によれば、特定の抗原結合ポリペプチドの投与が適応されるかどうかを決定するために使用できるインビトロアッセイは、インビトロ細胞培養アッセイを含み、このアッセイでは、患者の組織試料を培地において増殖させ、化合物に曝し、または、そうでない場合、化合物を投与し、組織試料に対する当該化合物の作用を観察する。
【０１５０】
例えば、リポソーム内におけるカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、化合物を発現可能な組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，  １９８７，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：４４２９−４４３２を参照）、レトロウイルスもしくは他のベクターの一部としての核酸の構築など、様々な輸送システムが知られており、これらは、本開示の抗体、または、本開示の抗体をコードするポリヌクレオチドを投与するために使用できる。
【０１５１】
更なる実施形態において、本開示の組成物は、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤、抗菌剤もしくは抗生物質製剤、または、抗真菌剤と組み合わせて投与される。本技術分野において知られている、これらの製剤のいずれかは、本開示の組成物において投与され得る。
【０１５２】
別の実施形態において、本開示の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得る化学療法剤には、これらに限定されないが、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン）、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５−ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンアルファ−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、６−チオグアニン）、細胞傷害性剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミドエストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、ビンクリスチン硫酸塩）、ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、二リン酸ジエチルスチルベストロール、クロロトリアニセン、テストラクトン）、ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メルファラン、クロラムブシル、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、チオテパ）、ステロイドおよび組み合わせ（例えば、リン酸ベタメタゾンナトリウム）、その他（例えば、ダカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトタン、ビンクリスチン硫酸塩、ビンブラスチン硫酸塩、エトポシド）などが含まれる。
【０１５３】
さらなる実施形態において、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物と共に投与され得るサイトカインには、これらに限定されないが、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ―６、ＩＬ−７、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、および、ＴＮＦ−αが含まれる。
【０１５４】
さらなる実施形態において、本開示の組成物は、例えば、放射線療法など、他の治療または予防方式と組み合わせて投与される。
【０１５５】
［併用療法］
本開示の抗ＣＤ７３抗体のうち１または複数を第２抗癌（化学療法）剤と共に使用することを含む併用療法も提供される。化学療法剤は、作用機序によって、例えば、ピリミジン類似体フロクスウリジン、カペシタビン、シタラビンなどの代謝拮抗剤／抗癌剤；プリン類似体、葉酸アンタゴニスト、および、関連する阻害剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン）などの天然産物、および、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））、エピポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）などの微小管を含む抗増殖／抗有糸分裂剤；アクチノマイシン、アムサクリン、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イフォスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、エトポシド、トリエチレンチオホスホラミドなどのＤＮＡ損傷剤；ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンなどの抗生物質；全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力が無い細胞を取り除く、Ｌ−アスパラギナーゼなどの酵素；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタードシクロホスファミドおよび類似体（メルファラン、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ）、アルキルニトロソウレア（カルムスチン）および類似体、ストレプトゾシン、トリアゼン（ダカルバジン）などの抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤；葉酸類似体（メトトレキサート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗物質；白金配位錯体（シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）、および、アロマターゼ阻害剤（レトロゾールおよびアナストロゾール）；ヘパリン、合成ヘパリン塩、および、トロンビンの他の阻害剤などの抗凝固薬；組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレルなどの線維素溶解剤；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレフェルジン）；免疫抑制剤タクロリムス、シロリムス、アザチオプリン、ミコフェノール酸；化合物（ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン）および増殖因子阻害剤（血管内皮増殖因子阻害剤および線維芽細胞増殖因子阻害剤）；アンギオテンシン受容体ブロッカー、一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；トラスツズマブおよびリツキシマブなどの抗体；トレチノインなどの細胞周期阻害剤および分化誘導因子；阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン、ミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；機能障害誘導因子；コレラ毒素、リシン、シュードモナス外毒素、ボルデテラ・ペルツシスのアデニル酸シクラーゼ毒素、ジフテリア毒素、カスパーゼ活性化因子；クロマチンの群に分類され得る。
【０１５６】
更に、化学療法剤の例には、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、ウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、トリメチロールメラミンを含むエミレルミンならびにメミラメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、ビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ズオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγａ２およびカリケアマイシンΦ１）、ジネマイシンＡを含むジネマイシン、クロドロナートなどのビスホスホナート、エスペラマイシン、ネオカルジノスタチンクロモホアおよび関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモホア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デモプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン��どのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、アングイジン）；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））などのタキソイド；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ヘストラブシル；ビスアントレン；エダトラキサート；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルムチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン、エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロイコボリン；ロニダミン；メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；フルオロピリミジン；フォリン酸；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ポリサッカリド−Ｋ（ＰＳＫ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２'，２''−トリクオロトリエミルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ − Ｃ」）；シクロホスファミド；チオペタ；クロラムブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イフォスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；ＦＯＬＦＩＲＩ（フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン）；および、上記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体などが含まれる。
【０１５７】
また、「化学療法剤」の定義には、抗エストロゲン剤、および、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、酵素アロマターゼの阻害剤、抗アンドロゲン剤、ならびに、腫瘍に対するホルモン作用を調節もしくは阻害するように機能する、上記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体などの抗ホルモン剤が含まれる。
【０１５８】
抗エストロゲン剤およびＳＥＲＭの例には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））が含まれる。
【０１５９】
酵素アロマターゼの阻害剤は、副腎におけるエストロゲン生成を調節する。例には、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＣＥ（登録商標））、エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、アナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））が含まれる。
【０１６０】
抗アンドロゲン剤の例には、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、ゴセレリンが含まれる。
【０１６１】
また、化学療法剤の例には、これらに限定されないが、レチノイド酸およびその誘導体、２−メトキシエストラジオール、アンギオスタチン（登録商標）、エンドスタチン（登録商標）、スラミン、スクアラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤、メタロプロテイナーゼ−２の組織阻害剤、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−１、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤−２、軟骨由来阻害剤、パクリタキセル（ｎａｂ−パクリタキセル）、血小板第４因子、硫酸プロタミン（クルペイン）、硫酸化キチン誘導体（ズワイガニの殻から調製）、硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ｓｐ−ｐｇ）、スタウロスポリン、プロリン類似体（Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸（ＬＡＣＡ））を含む基質代謝のモジュレーター、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チアプロリン、α，α'−ジピリジル、β−アミノプロピオニトリルフマル酸塩、４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３ｈ）−オキサゾロン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ヘパリン、インターフェロン、２マクログロブリン血清、ニワトリのメタロプロテイナーゼ−３阻害剤（ＣｈＩＭＰ−３）、キモスタチン、β−シクロデキストリンテトラデカ硫酸塩、エポネマイシン、フマギリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、ｄ−ペニシラミン、β−１−アンチコラゲナーゼ血清、α−２−抗プラスミン、ビスアントレン、ロベンザリット二ナトリウム、ｎ−２−カルボキシフェニル−４−クロロアントラニル酸二ナトリウムまたは（「ＣＣＡ」）、サリドマイド、抗血管新生ステロイド、カルボキシアミノイミダゾール、ＢＢ−９４などのメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む抗血管新生剤が含まれる。他の抗血管新生剤には、抗体、好ましくは、これらの血管新生増殖因子に対するモノクローナル抗体（β−ＦＧＦ、α−ＦＧＦ、ＦＧＦ−５、ＶＥＧＦアイソフォーム、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＨＧＦ／ＳＦ、Ａｎｇ−１／Ａｎｇ−２）が含まれる。
【０１６２】
また、化学療法剤の例には、これらに限定されないが、β−アミノプロピオニトリル（ＢＡＰＮ）などの化合物、ならびに、参照によって本明細書に組み込まれる、コラーゲンの異常堆積に関連する疾病および病態の治療におけるリシルオキシダーゼの阻害剤およびその使用に関連する、米国特許第４，９６５，２８８号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．）、および、様々な病理的線維性状態の治療のためにＬＯＸを阻害する化合物に関連する、米国特許第４，９９７，８５４号（Ｋａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．）に開示される化合物を含む抗線維化剤が含まれる。更に、例示的な阻害剤が、参照によって本明細書に組み込まれる、２−イソブチル−３−フルオロ−、クロロ−、または、ブロモ−アリルアミンなどの化合物に関連する米国特許第４，９４３，５９３号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ）、２−（１−ナフチルオキシメチル）−３−フルオロアリルアミンに関連する米国特許第５，０２１，４５６号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）、第５，０５９，７１４号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．），第５，１２０，７６４号（Ｍｃｃａｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．）、第５，１８２，２９７号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）、第５，２５２，６０８号（Ｐａｌｆｒｅｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許公開公報２００４／０２４８８７１（Ｆａｒｊａｎｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）号に記載されている。
【０１６３】
また、例示的な抗線維化剤には、リシルオキシダーゼの活性部位のカルボニル基と反応する第一級アミン、より具体的には、カルボニルとの結合後に、共鳴によって安定化される産物を生成するもの、すなわち、エミレンマミン、ヒドラジン、フェニルヒドラジン、および、それらの誘導体；セミカルバジドおよび尿素誘導体；ＢＡＰＮまたは２−ニトロエチルアミンなどのアミノニトリル；２−ブロモ−エチルアミン、２−クロロエチルアミン、２−トリフルオロエチルアミン、３−ブロモプロピルアミン、ｐ−ハロベンジルアミンなどの不飽和または飽和ハロアミン；セレノホモシステインラクトンなどの第一級アミンなどが含まれる。
【０１６４】
他の抗線維化剤は、細胞を貫通する、または、貫通しない銅キレート剤である。例示的な化合物には、リシルオキシダーゼによるリシル残基およびヒドロキシリシル残基の酸化的脱アミノ化で生じるアルデヒド誘導体をブロックする間接的阻害剤を含む。例には、チオールアミン、特に、ｄ−ペニシラミン、および、２−アミノ−５−メルカプト−５−メチルヘキサン酸、Ｄ−２−アミノ−３−メチル−３−（（２−アセトアミドエチル）ジチオ）酪酸、ｐ−２−アミノ−３−メチル−３−（（２−アミノエチル）ジチオ）酪酸、ナトリウム−４−（（ｐ−１−ジメチル−２−アミノ−２−カルボキシエチル）ジチオ）硫化ブタン、２−アセトアミドエチル−２−アセトアミドエタンチオールスルファネート、ナトリウム−４−メルカプトブタンスルフィナート三水和物など、その類似体が含まれる。
【０１６５】
また、化学療法剤の例には、これらに限定されないが、患者の治療に好適な治療用抗体を含む、免疫療法剤も含まれる。治療用抗体の一部の例には、シムツズマブ、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクトモマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレントキシマブ、カンツズマブ、カツマキソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクツムマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、ダラツマブ、ドロジツマブ、ドリゴツマブ、デュシギツマブ、デツモマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、エクロメキシマブ、エロツズマブ、エンシツキシマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、ファレツズマブ、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フツキシマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、イマツズマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、インテツムマブ、イピリムマブ、イラツマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツママブ、ミツモマブ、モキセツモマブ、ナルナツマブ、ナプツモマブ、ネチツムマブ、ニモツズマブ、ノフェツモマブ、オカラツズマブ、オフアツムマブ、オララツマブ、オナツズマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、パニツムマブ、パサツズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペルツズマブ、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サツモマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、ソリトマブ、タカツズマブ、タプリツモマブ、テナツモマブ、テプロツムマブ、チガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブ、ウブリツキシマブ、ベルツズマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ、ザルツムマブ、ＣＣ４９、３Ｆ８が含まれる。辺縁帯リンパ腫、ＷＭ、ＣＬＬ、および、小リンパ球性リンパ腫を含む緩慢性Ｂ細胞癌を治療するためにリツキシマブを使用できる。リツキシマブおよび化学療法剤の組み合わせは、特に効果的である。
【０１６６】
例示的な治療用抗体は更に、インジウム−１１１、イットリウム−９０、または、ヨウ素−１３１などの放射性同位体粒子で標識され得る、または、それと組み合わされ得る。
【０１６７】
一実施形態において、追加の治療薬は、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。ナイトロジェンマスタードアルキル化剤の非限定的な例には、クロラムブシルが含まれる。
【０１６８】
一実施形態において、本明細書において説明される化合物および組成物は、１または複数の追加の治療薬と共に使用され得る、または、それらと組み合わされ得る。１または複数の治療剤には、これらに限定されないが、Ａｂｌの阻害剤、活性化ＣＤＣキナーゼ（ＡＣＫ）、アデノシンＡ２Ｂ受容体（Ａ２Ｂ）、アポトーシスシグナル調節キナーゼ（ＡＳＫ）、オーロアキナーゼ、ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）、ＢＲＤ４などのＢＥＴ−ブロモドメイン（ＢＲＤ）、ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＤＫ活性化キナーゼ（ＣＡＫ）、カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼ（ＣａＭＫ）、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）、カゼインキナーゼ（ＣＫ）、ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、フォーカルアドヒージョンキナーゼ（ＦＡＫ）、Ｆｌｔ−３、ＦＹＮ、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ）、ＨＣＫ、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ＩＫＫβεなどのＩＫＫ、ＩＤＨ１などのイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）、ＫＤＲ、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、リシルオキシダーゼタンパク質、リシルオキシダーゼ様タンパク質（ＬＯＸＬ）、ＬＹＮ、マトリクスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、ＭＥＫ、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）、ＮＥＫ９、ＮＰＭ−ＡＬＫ、ｐ３８キナーゼ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ホスホリラーゼキナーゼ（ＰＫ）、ポロ様キナーゼ（ＰＬＫ）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、タンパク質キナーゼＡ、Ｂおよび／またはＣなどのタンパク質キナーゼ（ＰＫ）、ＰＹＫ、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）、セリン／スレオニンキナーゼＴＰＬ２、セリン／スレオニンキナーゼＳＴＫ、シグナル伝達兼転写活性化因子（ＳＴＡＴ）、ＳＲＣ、ＴＢＫ１などのセリン／スレオニンタンパク質キナーゼ（ＴＢＫ）、ＴＩＥ、チロシンキナーゼ（ＴＫ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、ＹＥＳ、またはそれらの任意の組み合わせが含まれる。
【０１６９】
ＡＳＫ阻害剤にはＡＳＫ１阻害剤が含まれる。ＡＳＫ１阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＷＯ  ２０１１／００８７０９  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＷＯ  ２０１３／１１２７４１  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）において説明されるものが含まれる。
【０１７０】
ＢＴＫ阻害剤の例には、これに限定されないが、イブルチニブ、ＨＭ７１２２４、ＯＮＯ−４０５９およびＣＣ−２９２が含まれる。
【０１７１】
ＤＤＲ阻害剤には、ＤＤＲ１および／またはＤＤＲ２の阻害剤が含まれる。ＤＤＲ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＷＯ  ２０１４／０４７６２４  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＵＳ  ２００９／０１４２３４５  （Ｔａｋｅｄａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ＵＳ  ２０１１／０２８７０１１  （Ｏｎｃｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＷＯ  ２０１３／０２７８０２  （Ｃｈｕｇａｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）およびＷＯ  ２０１３／０３４９３３  （Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）において開示されるものが含まれる。
【０１７２】
ＨＤＡＣ阻害剤の例には、これに限定されないが、プラシノスタットおよびパノビノスタットが含まれる。
【０１７３】
ＪＡＫ阻害剤は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、および／または、ＪＡＫ３を阻害する。ＪＡＫ阻害剤の例には、これらに限定されないが、フィルゴチニブ、ルキソリチニブ、フェドラチニブ、トファシチニブ、バリシチニブ、レスタウルチニブ、パクリチニブ、ＸＬ０１９、ＡＺＤ１４８０、ＩＮＣＢ０３９１１０、ＬＹ２７８４５４４、ＢＭＳ９１１５４３およびＮＳ０１８が含まれる。
【０１７４】
ＬＯＸＬ阻害剤には、ＬＯＸＬ１、ＬＯＸＬ２、ＬＯＸＬ３、ＬＯＸＬ４、および／または、ＬＯＸＬ５の阻害剤が含まれる。ＬＯＸＬ阻害剤の例には、これに限定されないが、ＷＯ  ２００９／０１７８３３  （Ａｒｒｅｓｔｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）において説明される抗体が含まれる。
【０１７５】
ＬＯＸＬ２阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＷＯ  ２００９／０１７８３３  （Ａｒｒｅｓｔｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ），  ＷＯ  ２００９／０３５７９１  （Ａｒｒｅｓｔｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＷＯ  ２０１１／０９７５１３  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）において説明される抗体が含まれる。
【０１７６】
ＭＭＰ阻害剤には、ＭＭＰ１〜１０の阻害剤が含まれる。ＭＭＰ９阻害剤の例には、これらに限定されないが、マリマスタット（ＢＢ−２５１６）、シペマスタット（Ｒｏ  ３２−３５５５）、および、ＷＯ  ２０１２／０２７７２１  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）において説明されるものが含まれる。
【０１７７】
ＰＩ３Ｋ阻害剤には、ＰＩ３Ｋγ、ＰＩ３Ｋδ、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋα、および／または、ｐａｎ−ＰＩ３Ｋの阻害剤が含まれる。ＰＩ３Ｋ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ウォルトマンニン、ＢＫＭ１２０、ＣＨ５１３２７９９、ＸＬ７５６およびＧＤＣ−０９８０が含まれる。
【０１７８】
ＰＩ３Ｋγ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＺＳＴＫ４７４、ＡＳ２５２４２４、ＬＹ２９４００２およびＴＧ１００１１５が含まれる。
【０１７９】
ＰＩ３Ｋδ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＰＩ３Ｋ  ＩＩ、ＴＧＲ−１２０２、ＡＭＧ−３１９、ＧＳＫ２２６９５５７、Ｘ−３３９、Ｘ−４１４、ＲＰ５０９０、ＫＡＲ４１４１、ＸＬ４９９、ＯＸＹ１１１Ａ、ＩＰＩ−１４５、ＩＰＩ−４４３、および、ＷＯ  ２００５／１１３５５６  （ＩＣＯＳ）、ＷＯ  ２０１３／０５２６９９  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）、ＷＯ  ２０１３／１１６５６２  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）、ＷＯ  ２０１４／１００７６５  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）、ＷＯ  ２０１４／１００７６７  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｃａｌｉｓｔｏｇａ）、ＷＯ  ２０１４／２０１４０９  （Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に記載される化合物が含まれる。
【０１８０】
ＰＩ３Ｋβ阻害剤の例には、これらに限定されないが、ＧＳＫ２６３６７７１、ＢＡＹ  １０８２４３９１およびＴＧＸ２２１が含まれる。
【０１８１】
ＰＩ３Ｋα阻害剤の例には、これらに限定されないが、ブパルリシブ、ＢＡＹ  ８０−６９４６、ＢＹＬ７１９、ＰＸ−８６６、ＲＧ７６０４、ＭＬＮ１１１７、ＷＸ−０３７、ＡＥＺＡ−１２９およびＰＡ７９９が含まれる。
【０１８２】
ｐａｎ−ＰＩ３Ｋ阻害剤の例には、これらに限定されなが、ＬＹ２９４００２、ＢＥＺ２３５、ＸＬ１４７（ＳＡＲ２４５４０８）およびＧＤＣ−０９４１が含まれる。
【０１８３】
ＳＹＫ阻害剤の例には、これらに限定されないが、タマチニブ（Ｒ４０６）、フォスタマチニブ（Ｒ７８８）、ＰＲＴ０６２６０７、ＢＡＹ−６１−３６０６、ＮＶＰ−ＱＡＢ  ２０５  ＡＡ、Ｒ１１２、Ｒ３４３、および、米国特許第８，４５０，３２１号（Ｇｉｌｅａｄ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）に記載のものが含まれる。
【０１８４】
ＴＫＩは、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）と、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の受容体とを標的とし得る。ＥＧＦＲを標的とするＴＫＩの例には、これらに限定されないが、ゲフィチニブおよびエルロチニブが含まれる。スニチニブは、ＦＧＦ、ＰＤＧＦおよびＶＥＧＦの受容体を標的とするＴＫＩの非限定的な例である。
【０１８５】
［免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ］
免疫チェックポイントは、シグナルを大きくする（共刺激分子）、または、シグナルを小さくする、免疫系における分子である。多くの癌は、Ｔ細胞シグナルを阻害することにより免疫系から自身を防衛する。免疫チェックポイント阻害剤は、癌細胞によるそのような防衛機構を止めることを助けることができる。免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ−３（ＣＤ２２３としても知られる）、ＣＤ２８、ＣＤ１２２、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られる）、または、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても知られる）などのチェックポイント分子のうちいずれかの１または複数を標的化し得る。
【０１８６】
プログラムＴ細胞死１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞の表面に見られる膜貫通タンパク質であり、プログラムＴ細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）または腫瘍細胞に結合したとき、Ｔ細胞活性の抑制、または、Ｔ細胞媒介細胞毒性の減少をもたらす。したがって、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１は、免疫ダウンレギュレータ、または、免疫チェックポイントの「オフスイッチ」である。ＰＤ−１阻害剤の例には、これらに限定されないが、ニボルマブ、（Ｏｐｄｉｖｏ）（ＢＭＳ−９３６５５８）、ペムブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ）、ピジリズマブ、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩ０６８０  （ＡＭＰ−５１４）、ＰＤＲ００１、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＢＭＳ−９３６５５９およびＭＳＢ００１０７１８Ｃが含まれる。
【０１８７】
分化抗原群２７４（ＣＤ２７４）またはＢ７ホモログ１（Ｂ７−Ｈ１）としても知られているプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）は、ヒトにおいて、ＣＤ２７４遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＰＤ−Ｌ１阻害剤の非限定的な例には、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＢＭＳ９３５５５９（ＭＤＸ−１１０５）およびＡＭＰ−２２４が含まれる。
【０１８８】
ＣＴＬＡ−４は、免疫系をダウンレギュレートするタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ−４阻害剤の非限定的な例には、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））（ＢＭＳ−７３４０１６、ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１としても知られる）、および、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ、ＣＰ−６７５，２０６）が含まれる。
【０１８９】
リンパ球活性遺伝子３（ＬＡＧ−３）は、制御性Ｔ細胞への作用によって、および、ＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接作用によって、免疫反応を抑制するように機能する、細胞表面上の免疫チェックポイント受容体である。ＬＡＧ−３阻害剤には、これらに限定されないが、ＬＡＧ５２５およびＢＭＳ−９８６０１６が含まれる。
【０１９０】
ＣＤ２８は、ほぼすべてのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞、および、すべてのＣＤ８  Ｔ細胞のうち約半分で恒常的に発現される。ＣＤ２８はＴ細胞の増殖を促す。ＣＤ２８阻害剤の非限定的な例には、ＴＧＮ１４１２が含まれる。
【０１９１】
ＣＤ１２２は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖を増加させる。非限定的な例には、ＮＫＴＲ−２１４が含まれる。
【０１９２】
４−１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）は、Ｔ細胞の増殖に関与する。また、ＣＤ１３７媒介シグナリングは、Ｔ細胞、特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、活性化誘導細胞死から保護することが知られている。ＰＦ−０５０８２５６６、ウレルマブ（ＢＭＳ−６６３５１３）およびリポカリンは、ＣＤ１３７阻害剤の例である。
【０１９３】
上記の併用療法のいずれかについて、抗ＣＤ７３抗体を、その他の抗癌剤と同時に、または、別個に投与することができる。別個に投与するとき、抗ＣＤ７３抗体を、その他の抗癌剤の前または後に投与することができる。
【０１９４】
［診断方法］
ＣＤ７３の過剰発現は、特定の腫瘍試料において観察され、ＣＤ７３過剰発現細胞を有する患者は、本開示の抗ＣＤ７３抗体を用いる治療に反応する可能性がある。従って、本開示の抗体は、診断および予後の目的のために使用することもできる。
【０１９５】
好ましくは細胞を含む試料は、癌患者であり得る、または、診断を所望する患者であり得る患者から取得できる。細胞は、腫瘍組織もしくは腫瘍塊の細胞、血液試料、尿試料、または、患者からの任意の試料であり得る。試料の任意の前処理の後に、試料に潜在的に存在するＣＤ７３タンパク質と抗体が相互作用することを可能にする条件下で、本開示の抗体と共に試料をインキュベートできる。抗ＣＤ７３抗体を利用する、ＥＬＩＳＡなどの方法を使用して、試料中のＣＤ７３タンパク質の存在を検出できる。
【０１９６】
試料中のＣＤ７３タンパク質の存在（任意で、量または濃度）は、当該抗体を用いる治療に患者が適しているという指標として、または、患者が癌治療に反応した（または、反応しなかった）という指標として、癌の診断に使用できる。予後の方法については、治療の進捗を示すために、癌治療の開始後に、特定の段階において検出を１回、２回、または、それ以上実行できる。
【０１９７】
［組成物］
また、本開示は医薬組成物を提供する。そのような組成物は、有効量の抗体、および、許容可能な担体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は更に、第２抗癌剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を含む。
【０１９８】
特定の実施形態において、「薬学的に許容可能な」という語句は、動物、より具体的には、ヒトへの使用について、連邦政府または州政府の規制機関によって承認されている、または、米国薬局方協会もしくは他の一般的に認識されている薬局方に記載されていることを意味する。更に、「薬学的に許容可能な担体」とは、一般的に、非毒性の固体、半固体、または、液体の増量剤、希釈剤、封入材、または、任意の種類の製剤補助物である。
【０１９９】
「担体」という語句は、治療薬の投与に用いる、希釈剤、補助剤、賦形剤、または、ビヒクルを指す。当該医薬担体は、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ごま油、および、同様のものなど、石油、動物、植物、または、合成に由来するものを含む、水および油などの無菌液体であってよい。医薬組成物が静脈内投与されるとき、水は好ましい担体である。また、生理食塩水、ならびに、デキストロースおよびグリセロールの水溶液を、液体担体として、特に注射液に利用できる。好適な医薬品の賦形剤には、澱粉、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。また、組成物は、所望される場合、わずかな量の湿潤剤もしくは乳化剤、または、酢酸塩などのｐＨ緩衝剤、クエン酸、または、リン酸塩を含み得る。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化物質、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、および、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの浸透圧調整剤も想定される。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、タブレット、錠剤、カプセル、粉末、徐放性製剤などの形態を取り得る。組成物は、トリグリセライドなど、従来の結合剤および担体と共に、座薬として製剤化され得る。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、マグネシウム、ステアリン酸塩、サッカリンナトリウム、セルロース、マグネシウム炭酸塩などの標準的な担体を含み得る。好適な医薬品担体の例は、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｅ．  Ｗ．  ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。そのような組成物には、患者に対する適切な投与のための形態を提供するように、好適な量の担体と組み合わされた、好ましくは精製された形態の、治療有効量の抗原結合ポリペプチドが含まれるであろう。製剤は、投与の方式に好適なものであるべきである。非経口製剤は、ガラスまたはプラスチックからできている、アンプル、使い捨てシリンジ、または、多回投与バイアルの中に封入され得る。
【０２００】
一実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合された医薬組成物として、定型的な手順に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌水性等張緩衝液の溶液である。必要である場合、組成物はまた、可溶化剤と、注射の部位における疼痛を緩和するためのリグノカインなどの局所麻酔剤とを含み得る。一般的に、成分は、例えば、活性薬剤の量を示すアンプルまたは小袋などの密封容器における、凍結乾燥粉末または無水濃縮物などの単位投与量形態で、別個に供給されるか、または、共に混合されるかのいずれかである。組成物が注入によって投与される場合、組成物は、医薬品グレードの無菌水または生理食塩水を含む注入ボトルを用いて分注できる。組成物が注射によって投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用の無菌水または生理食塩水のアンプルが提供され得る。
【０２０１】
本開示の化合物は、中性または塩の形態として製剤化できる。薬学的に許容可能な塩には、塩酸塩、リン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩などに由来するものなどの陰イオンと共に形成されるものと、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなど、陽イオンと共に形成されるものとが含まれる。
【０２０２】
［例］
［例１．マウス抗体１０１−Ｍｕのクローニング］
この例は、ハイブリドーマ技術を使用して、抗ヒトＣＤ７３マウスモノクローナル抗体を調製するプロセスを説明する。ヒトＣＤ７３タンパク質は、ＣＤ７３を発現する組換えＣＨＯＫ１細胞株（ＣＤ７３−ＣＨＯＫ１）を使用して調製された。ヒトＣＤ７３に対するマウスモノクローナル抗体を生成するために、まず、１．５×１０７  ＣＤ７３−ＣＨＯＫ１細胞を用いて、６〜８週齢雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫化した。最初の免疫化の１４日後および３３日後に、１．５×１０７  ＣＤ７３−ＣＨＯＫ１細胞を用いて、免疫化マウスを再免疫化した。ＣＤ７３タンパク質に結合する抗体を生成するマウスを選択するために、免疫化マウスからの血清をＥＬＩＳＡによって試験した。簡単に説明すると、１μｇ／ｍｌのヒトＣＤ７３タンパク質のＰＢＳ溶液をウェルあたり１００μｌ加えてマイクロタイタープレートをコーティングし、室温（ＲＴ）で一晩放置した後に、ウェルあたり１００μｌの５％ＢＳＡでブロックした。免疫化マウスからの血漿の希釈物を各ウェルに加え、室温で１〜２時間インキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎを用いてプレートを洗浄し、次に、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）と結合させた抗マウスＩｇＧ抗体と室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＡＢＴＳ基質を用いてプレートを現像し、分光光度計によってＯＤ  ４０５ｎｍで解析した。免疫化の５４日後に、５０μｇヒトＣＤ７３−Ｆｃタンパク質を用いて、抗ＣＤ７３  ＩｇＧの十分な抗体価を有するマウスを追加免疫した。その結果として得られるマウスを融合物のために使用した。ＥＬＩＳＡによって、抗ＣＤ７３  ＩｇＧについて、ハイブリドーマの上清を試験した。８種類の異なるハイブリドーマクローンが識別され、その中から、更なる解析のために１０１−Ｍｕが選択された。１０１−ＭＵのＶＨ配列は配列識別番号１０として表６に示され、ＶＬ配列は配列識別番号１５として表７に示される。対応するＤＮＡ配列は配列識別番号５７および５８として表１０に示される。
【０２０３】
［例２．ＣＤ７３に対する１０１−Ｍｕの結合］
この例では、単独の、または、細胞表面上の組み換えヒトＣＤ７３タンパク質（１μｇ／ｍｌ、１００μｌ）に対するマウス抗ＣＤ７３  ｍＡｂ  １０１−ＭｕのＥＬＩＳＡ結合の用量反応を試験する。
【０２０４】
組み換えヒトＣＤ７３タンパク質（Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）をＰＢＳにおいて１μｇ／ｍｌの濃度でマイクロタイタープレート上に室温（ＲＴ）で２時間コーティングした。抗原のコーティング後、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳＴ）を用いて、ウェルを室温で１時間ブロックした。ＰＢＳＴでウェルを洗浄した後に、異なる濃度の抗ＣＤ７３抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。結合抗体の検出のために、マウスＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に対するＨＲＰ結合型二次的抗体を添加し、次に、蛍光原基質（ロシュ）を添加した。すべてのインキュベート段階の間に、プレートのウェルをＰＢＳＴで３回洗浄した。蛍光はＴＥＣＡＮ  Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒプレートリーダーで測定した。
【０２０５】
ヒト抗ＣＤ７３、ｍＡｂ１を陽性対照として使用した。ｍＡｂ１は、ＵＳ２０１６／０１９４４０７において開示された配列に従って生成された。比較結果を図１に示す。ここでは、１０１−ＭｕのＥＣ５０が０．０８ｎＭであり、ｍＡｂ１のＥＣ５０が０．０３ｎＭであることが示されている。
【０２０６】
図２は、ヒト卵巣癌細胞株（ＳＫ−ＯＶ−３細胞）を使用する結合アッセイの結果を示す。表面上でヒトＣＤ７３を内在的に発現する。示された抗体を用いてインキュベートした後に、複数の異なる濃度のＩｇＧ対照、マウス抗ＣＤ７３（１０１−Ｍｕ）および基準抗体（ｍＡｂ１）を用いて、４℃で３０分間にわたって細胞を染色した。次に、ＰＢＳを用いて細胞を３回洗浄し、その後、ＡＰＣ標識された抗マウスＦｃ特異的抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標））と共に４℃で３０分間にわたってインキュベートした。結合は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して測定された。図１と同様に、この図は、１０１−ＭｕがＣＤ７３に対してｍＡｂ１と同等の結合親和性を有することを示す（１０１−Ｍｕの場合、ＥＣ５０は０．５４ｎＭ、ｍＡｂ１の場合、ＥＣ５０は０．３０ｎＭであった）。
【０２０７】
図３は、組み換えヒトＣＤ７３に対する１０１−ＭｕおよびｍＡｂ１の結合キネティクスをプロットしたものである（組み換えヒトＣＤ７３は、連続的濃度（１００、５０、２５、１２．５、６．２５、３．１２５  ｎＭ）を有する分析物として設定された）。抗原に対する抗体の結合キネティクスアッセイは、ヒト抗体捕捉手法を通して、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００システムを使用した実行した。抗マウスＦｃ  ＩｇＧを製造元の指示に従って、ＣＭ５センサーチップ上で固定化した。試験抗体を注入し、固定化した抗ヒトＦｃ  ＩｇＧによって捕捉した。次に、連続的濃度の抗原を個別に注入し、抗原分析物の各濃度について、結合プロファイルをそれぞれ記録した。１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ  ｐＨ１．５を３０秒間にわたって注入することにより、アッセイシステムを再生した。泳動バッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  Ｐ２０）であった。アッセイ温度は２５℃であり、結合時間および解離時間はそれぞれ、１８０秒および６００秒であった。Ｂｉａｃｏｒｅデータは、１：１結合モデルに従ってＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェア１．０を使用して結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数ならびに平衡定数（ＫＤ）を算出してフィッティングされた。図３に加えて、以下の表において、いくつかの概要データが示される。
【表６】
2020515508.tif 000007
【０２０８】
例３．１０１−ＭｕによるＣＤ７３酵素活性の阻害
この例では、ＣＤ７３の酵素活性を阻害する１０１−Ｍｕ抗体の能力を試験する。
【０２０９】
複数の異なる用量の抗ＣＤ７３またはアイソタイプ対照Ａｂの存在下で、組み換えヒトＣＤ７３タンパク質（０．３μｇ／ｍｌ）を９６ウェル平底マイクロプレートにおいてインキュベートした。プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。次に、ＡＴＰ（１００μＭ）およびＡＭＰ（１００μＭ）を各ウェルに追加し、３７℃で更に３０分間インキュベートした。ルシフェラーゼを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））をウェルに追加し、照度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ（登録商標））によって発光阻害を測定した。
【０２１０】
過剰なＡＭＰは、ＡＴＰ依存的ルシフェラーゼ活性をブロックすることが知られている。ＡＭＰを触媒してアデノシンおよび無機リン酸塩を生成するＣＤ７３の追加により、ルシフェラーゼ活性および発光が戻る。したがって、ＣＤ７３の酵素活性をブロックする抗体は、発光を減衰できる。酵素活性の割合は、下で説明されるように評価される。残存ＣＤ７３活性を、（ＣＤ７３＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＣＤ７３＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ)×１００として算出した。結果を図４にプロットした。これは、陰性対照ＩｇＧとは異なり、１０１−Ｍｕが用量依存的にＣＤ７３の酵素活性を阻害することを示す（ＩＣ５０＝３．８９ｎＭ）。
【０２１１】
複数の異なる用量の抗ＣＤ７３Ａｂまたはアイソタイプ対照Ａｂの存在下で、ウェルあたりの細胞数が１×１０５個になるように、ＣＤ７３を発現するＳＫ−ＯＶ−３細胞を９６ウェルプレートに蒔いた。プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。ＡＭＰ（１００μＭ）を各ウェルに追加し、３７℃で１時間インキュベートした。上清を新しい９６ウェルプレートに回収し、最終濃度が１００μＭとなるようにＡＴＰを追加した。１：１となるようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を追加し、発光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ（登録商標））を測定することにより、細胞性ＣＤ７３酵素活性を判定した。酵素活性の割合は、下で説明されるように評価される。残存ＣＤ７３活性を、（ＳＫ−ＯＶ−３細胞＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＳＫ−ＯＶ−３細胞＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）×１００として算出した。結果を図５にプロットした。これは、陰性対照ＩｇＧとは異なり、１０１−Ｍｕが用量依存的にＣＤ７３の酵素活性を阻害することを示す（ＩＣ５０＝４．６２ｎＭ）。
【０２１２】
［例４．１０１−ＭｕによりＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を戻す］
この例は、ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を戻す抗体の能力を試験する。
【０２１３】
ヒトＣＤ４マイクロビード（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（登録商標））を使用して、正の選択により、ＰＢＭＣからヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。ＡＭＰ（５００μＭ）の存在下または非存在下で、プレコートされた抗ＣＤ３抗体（２μｇ／ｍｌ）および可溶性抗ＣＤ２８抗体（１μｇ／ｍｌ）を用いて、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激した。抗ＣＤ７３抗体および対照ＩｇＧの連続希釈系列を各ウェルに追加し、７２時間培養し、ＥＬＩＳＡによって、ＩＦＮ−γについて上清を分析した。図６に示されるように、１０１−Ｍｕは、ＣＤ４＋細胞のＩＦＮ−γの生成を用量依存的に増加させるが、対照では関連する影響が無かった。
【０２１４】
［例５．１０１−Ｍｕのヒト化］
上の例は、１０１−Ｍｕ抗体がＣＤ７３酵素活性の強力な阻害剤であり、Ｔ細胞活性化に対するアデノシンの免疫抑制作用を完全に戻すことができることを示す。従って、当該抗体がヒト化のための基礎として選択された。
【０２１５】
１０１−Ｍｕ可変領域遺伝子は、ヒト化ＭＡｂを作成するために利用された。１０１−ＭｕのＲｈｅ  ＶＨおよびＶＫを、ヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースに対して比較し、全体的にもっともよく一致するヒト生殖細胞系Ｉｇ遺伝子配列を識別した。軽鎖については、最も近いヒトのマッチは、Ａ１０／Ｊｋ４（設計１）およびＬ６／Ｊｋ４（設計２）遺伝子であった。重鎖については、最も近いヒトのマッチは、ＶＨ４−Ｂ／ＪＨ６遺伝子であった。次に、ヒト化可変ドメイン配列が設計され、１０１−Ｍｕ軽鎖のＣＤＲ１（配列識別番号４）、ＣＤＲ２（配列識別番号５）、および、ＣＤＲ３（配列識別番号６）が、マッチした軽鎖遺伝子のフレームワーク配列上に移植され、１０１−ＭＵ  ＶＨのＣＤＲ１（配列識別番号１）、ＣＤＲ２（配列識別番号２）、ＣＤＲ３（配列識別番号３）配列が、マッチしたＶＨ遺伝子のフレームワーク配列上に移植された。
【０２１６】
次に、マウスのアミノ酸をヒトのアミノ酸に置き換えることによって結合および／またはＣＤＲの形態に影響を生じさせ得る何らかのフレームワーク位置があるかどうかを決定するために、３次元モデルを生成した。識別された有用な復帰突然変異、および、そのような変異を含むペプチド配列が、下の表に示される（下線）。
［表３．ＶＨ復帰突然変異、および、復帰突然変異を有するＶＨ配列］
【表７】
2020515508.tif 000008
［表４．ＶＫ復帰突然変異、および、復帰突然変異を有するＶＫ配列（設計１）］
【表８】
2020515508.tif 000009
［表５．ＶＫ復帰突然変異、および、復帰突然変異を有するＶＫ配列（設計１）］
【表９】
2020515508.tif 000010
［表６．ヒト化ＶＨ、および、復帰突然変異を有するヒト化ＶＨ］
【表１０】
2020515508.tif 000011
太文字：ＣＤＲ領域、下線：復帰突然変異  ［表７．ヒト化ＶＫ、および、復帰突然変異を有するヒト化ＶＫ（設計１）］
【表１１】
2020515508.tif 000012
太文字：ＣＤＲ領域、下線：復帰突然変異  ［表８．ヒト化ＶＫ、および、復帰突然変異を有するヒト化ＶＫ（設計２）］
【表１２】
2020515508.tif 000013
太文字：ＣＤＲ領域、下線：復帰突然変異
【０２１７】
ヒト化ＶＨおよびＶＫ遺伝子を合成的に生成し、次に、ヒトγ１およびヒトκ定常ドメインを含むベクターにそれぞれをクローニングした。ヒトＶＨおよびヒトＶＫの対により、下の表において列挙されるような複数のヒト化抗体が作成された。  ［表９．ヒト化抗体］
【表１３】
2020515508.tif 000014
【０２１８】
表１０は、１０１−ＭｕおよびＨｕ１０１−２８抗体のＶＨおよびＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列のいくつかの例を示す。
［表１０．ヌクレオチド配列］
【表１４】
2020515508.tif 000015
【０２１９】
［例６．ヒト化抗体の試験］
この例では、結合親和性および阻害活性の観点からヒト化抗体を試験した。試験手順は、例１−４において説明されるものと同様であり、結果は図７〜図１１に示される。
【０２２０】
結合アッセイのために、ヒト抗体捕捉手法を通して、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００システムを使用した。製造元の指示に従って、抗ヒトＦｃ  ｌｇＧをＣＭ５センサーチップ上で固定化した。試験抗体を注入し、固定化した抗ヒトＦｃ  ＩｇＧによって捕捉した。次に、連続的濃度の抗原を個別に注入し、抗原分析物の各濃度について、結合プロファイルをそれぞれ記録した。１０ｍＭグリシン−ＨＣＬ  ｐＨ１．５を３０秒間にわたって注入することにより、アッセイシステムを再生した。泳動バッファーはＨＢＳ−ＥＰ＋（１０ｍＭ  ＨＥＰＥ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０５％  Ｐ２０）であった。アッセイ温度は２５℃であり、結合時間および解離時間はそれぞれ、１８０秒および６００秒であった。Ｂｉａｃｏｒｅデータは、１：１結合モデルに従ってＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェア１．０を使用して結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数ならびに平衡定数（ＫＤ）を算出してフィッティングされた。
【０２２１】
試験したすべての抗体の中で、Ｈｕ１０１−２５およびＨｕ１０１−２８がもっとも高い結合親和性を示し（図７および下の表を参照）、後の分析に使用された。
【表１５】
2020515508.tif 000016
【０２２２】
表面上でヒトＣＤ７３を内在的に発現したヒト卵巣癌細胞株（ＳＫ−ＯＶ−３細胞）が、複数の異なる濃度のＩｇＧ対照、キメラ抗ＣＤ７３（１０１−Ｍｕキメラまたは１０１−Ｃｈｉ）およびヒト化抗ＣＤ７３抗体（Ｈｕ１０１−２５およびＨｕ１０１−２８）を用いて℃で３０分間染色された。次に、ＰＢＳを用いて細胞を３回洗浄し、その後、ＡＰＣ標識した抗ヒトＦｃ特異的抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標））を用いて、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（登録商標））を使用して結合を測定し、結果は図８に示されている（下の表も参照されたい）。
【表１６】
2020515508.tif 000017
【０２２３】
複数の異なる用量の抗ＣＤ７３またはアイソタイプ対照Ａｂの存在下で、組み換えヒトＣＤ７３タンパク質（０．３μｇ／ｍｌ）を９６ウェル平底マイクロプレートにおいてインキュベートした。プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。次に、ＡＴＰ（１００μＭ）およびＡＭＰ（１００μＭ）を各ウェルに追加し、３７℃で更に３０分間インキュベートした。ルシフェラーゼを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））をウェルに追加し、照度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ（登録商標））によって発光阻害を測定した。  過剰なＡＭＰは、ＡＴＰ依存的ルシフェラーゼ活性をブロックすることが知られている。ＡＭＰを触媒してアデノシンおよび無機リン酸塩を生成するＣＤ７３の追加により、ルシフェラーゼ活性および発光が戻る。したがって、ＣＤ７３の酵素活性をブロックする抗体は、発光を減衰できる。酵素活性の割合は、下で説明されるように評価される。
残存ＣＤ７３活性：ＣＤ７３＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＣＤ７３＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ)×１００
【０２２４】
図９は、３つの試験された抗体すべてが強い阻害活性を示したことを示す（下の表も参照されたい）。
【表１７】
2020515508.tif 000018
【０２２５】
図１０は、ヒト化抗体によるＣＤ７３酵素活性の阻害を試験した結果を示す。複数の異なる用量の抗ＣＤ７３Ａｂまたはアイソタイプ対照Ａｂの存在下で、ウェルあたり１×１０５個の細胞数になるように、ＣＤ７３を発現するＳＫ−ＯＶ−３細胞を９６ウェルプレートに蒔いた。プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。ＡＭＰ（１００μＭ）を各ウェルに追加し、３７℃で１時間インキュベートした。上清を新しい９６ウェルプレートに回収し、最終濃度が１００μＭになるようにＡＴＰを追加した。１：１となるようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を追加し、発光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ（登録商標））を測定することにより、細胞性ＣＤ７３酵素活性を判定した。酵素活性の割合は、下で説明されるように評価される。
残存ＣＤ７３活性：（ＳＫ−ＯＶ−３細胞＋Ａｂ＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）／（ＳＫ−ＯＶ−３細胞＋ＡＴＰ＋ＡＭＰ）−（ＡＴＰ＋ＡＭＰ）×１００
結果は図１０および下の表に示され、これらの抗体による強力な阻害作用を実証する。
【表１８】
2020515508.tif 000019
【０２２６】
ＡＭＰ媒介ＣＤ４＋Ｔ細胞抑制を戻す抗体の能力を試験するために、ヒトＣＤ４マイクロビード（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（登録商標））を使用して、正の選択により、ＰＢＭＣからヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。ＡＭＰ（５００μＭ）の存在下または非存在下で、プレコートされた抗ＣＤ３抗体（２μｇ／ｍｌ）および可溶性抗ＣＤ２８抗体（１μｇ／ｍｌ）を用いて、単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞を刺激した。抗ＣＤ７３抗体および対照ＩｇＧの連続希釈系列を各ウェルに追加し、７２時間培養し、ＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−γについて上清を分析した。図１１に示されるように、３つの試験された抗体はすべて、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＡＭＰ媒介抑制を用量依存的に戻した。
【０２２７】
［例７  ヒト化抗体の更なる変形および最適化のコンピュータシミュレーション］
ＣＤＲ領域またはフレームワーク領域における特定のアミノ酸残基を変更することにより、抗体の活性および／または安定性が更に改善される得る、または、保持され得ることが考えられた。計算ツール（ＶｅｃｔｏｒＮＴＩ、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏ／で入手可能）を用いて、構造、配座、機能の特性に関連して、変異型を試験した。可能性を示したもの（ＣＤＲ領域内）を下の表に列挙する。
［表１１  ヒト化抗体への組み入れに好適なＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲおよび変異型］
【表１９】
2020515508.tif 000020
【表２０】
2020515508.tif 000021
【表２１】
2020515508.tif 000022
【表２２】
2020515508.tif 000023
【表２３】
2020515508.tif 000024
下線：ホットスポット変異残基およびその置換
【０２２８】
［例８．Ｈｕ１０１−２８は二重機構の抗ＣＤ７３抗体である］
この例は、Ｈｕ１０１−２８が二重の作用機構を有することを示す。ＣＤ７３の酵素活性を非競合的方式でブロックするだけでなく、細胞表面ＣＤ７３の内在化も誘導する。
【０２２９】
ＣＤ７３タンパク質の結合は、可溶性および細胞表面ＣＤ７３を用いて試験された。その結果を図１２に示す。左側のパネルにおいて、組み換えヒトＣＤ７３を含む１００μｌの溶液（２μｇ／ｍｌ）がＥＬＩＳＡ結合アッセイにおいて使用され、グラフはＨｕ１０１−２８を示す。右側のパネルにおいて、ヒト卵巣癌腫細胞株（ＳＫ−ＯＶ−３）は、複数の異なる濃度のＨｕ１０１−２８で染色され、フローサイトメトリーによって、表面結合について解析された。示されるように、試験におけるＥＣ５０はそれぞれ、８８．７ｐＭ、および、０．６７ｎＭであり、抗体の高親和性を示す。
【０２３０】
次に、ＣＤ７３活性をブロックするＨｕ１０１−２８の能力。組み換えヒトＣＤ７３（０．３μｇ／ｍｌ）をＨｕ１０１−２８で１５分間インキュベートした。次に、ＡＴＰ（１００μＭ）およびＡＭＰ（１００μＭ）を追加し、更に３０分間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を追加して、照度計によって発光阻害を測定した。図１３に示すように、左側のパネルにおいて、溶液のＩＣ５０は２．８４ｎＭであった。細胞に結合したＣＤ７３に関連して、Ｈｕ１０１−２８を用いて、ＳＫ−ＯＶ−３またはＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（１×１０５個の細胞）を１５分間インキュベートして、次に、ＡＭＰ（１００μＭ）およびＡＴＰ（１００μＭ）を順次に追加して、更に１時間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を追加し、照度計によって発光阻害を測定した。図１３に示すように、右側のパネルにおいて、ＩＣ５０は、ＳＫ−ＯＶ−３およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１について、それぞれ２．５２ｎＭおよび８．２１ｎＭであった。
【０２３１】
更なる実験は、Ｈｕ１０１−２８は、活性部位への結合について、ＡＭＰ基質と競合せず、アロステリックに、または、複数の内因性ＡＭＰ基質と競合する必要性を回避するという観点からより好ましい他の非競合的機構を通じて作用することを示した。図１４に示すように、ＡＭＰ基質濃度の増加は、Ｈｕ１０１−２８による加水分解の阻害を防止しなかった。このことは、Ｈｕ１０１−２８が非競合的阻害剤として作用することを示す。対照的に、基質の濃度を増加させて、活性部位への結合についてＡＤＰと過剰に競合させることによって、ＡＤＰの阻害活性を圧倒することができる。
【０２３２】
予想外の驚くべき発見を図１５に示す。Ｈｕ１０１−２８結合時のＣＤ７３の内在化は、フローサイトメトリーにより細胞表面ＣＤ７３レベルを測定することによって、または、毒物が結合した二次抗体の存在下で、Ｈｕ３０９結合後のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞生存率を測定することによって示された。細胞表面ＣＤ７３レベルを変化させなかったＩｇＧと比較して、Ｈｕ１０１−２８では、６時間以内に細胞表面ＣＤ７３レベルが半分より多く減少し（左側のパネル）、更により著しい細胞傷害性につながった（右側のパネル）。
【０２３３】
したがって、上の実験は、Ｈｕ１０１−２８が二重の作用機構（ＭｏＡ）、すなわち、非競合的方式によるＣＤ７３の酵素活性のブロック、および、細胞表面ＣＤ７３の内在化の誘導を有することを実証する。
【０２３４】
［例９．Ｈｕ１０１−２８はＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答のＡＭＰまたは腫瘍細胞を媒介した抑制を完全に戻す］
この例は、Ｈｕ１０１−２８が、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答のＡＭＰおよび腫瘍細胞を媒介した抑制を完全に戻すことを示す。
【０２３５】
ＡＭＰの存在下または非存在下で、ヒトＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体で刺激した。Ｈｕ１０１−２８を培養液に追加して７２時間培養した。ＩＦＮ−ｇの生成について、ＥＬＩＳＡによって培養液上清を解析した。図１６の左側のパネルにおいて、Ｈｕ１０１−２８は、ＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−ガンマの生成を用量依存的に増加させた。同様に、右側のパネルに示されるように、Ｈｕ１０１−２８は、ＣＤ８＋細胞におけるＩＦＮ−ガンマの生成を用量依存的に増加させた。
【０２３６】
Ｔ細胞の反応の腫瘍細胞を媒介した抑制に対するＨｕ１０１−２８の影響を試験するために、ＣＤ７３を発現するＳＫ−ＯＶ−３細胞をマイトマイシンＣで処理し、抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体の存在下で、精製されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞と共に共培養した。Ｈｕ１０１−２８を培養液に追加して７２時間培養し、ＩＦＮ−ガンマの生成について、ＥＬＩＳＡによって上清を解析した。図１７の左側のパネルにおいて示されるように、Ｈｕ１０１−２８は、ＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−ガンマの生成を用量依存的に増加させた。同様に、右側のパネルに示されるように、Ｈｕ１０１−２８は、ＣＤ８＋細胞におけるＩＦＮ−ガンマの生成を用量依存的に増加させた。
【０２３７】
［例１０：Ｈｕ１０１−２８が腫瘍増殖を抑制する］
この例では、腫瘍由来ＣＤ７３活性の抑制においてＨｕ１０１−２８が有効であり、単剤または併用治療による腫瘍増殖の阻害につながることを実証する。
【０２３８】
インビボＣＤ７３酵素活性を、Ａ３７５ゼノグラフモデルの腫瘍における酵素組織化学によって測定し、染色結果を図１８に示した。茶色の部分は、活性ＣＤ７３の存在を示し、茶色でない部分は、ＣＤ７３酵素活性が抗体によって阻害されたことを示す。Ｈｕ１０１−２８またはＩｇＧ対照で処理されたＡ３７５異種移植モデルの腫瘍を採取し、その結果、ＩｇＧ対照群と比較して、Ｈｕ１０１−２８処理により、腫瘍部分におけるＣＤ７３活性が著しく低下したことが示された。
【０２３９】
また、Ｈｕ１０１−２８の単剤療法効果を腫瘍異種移植モデルにおいて評価した。Ａ３７５悪性黒色腫細胞およびヒトＰＢＭＣをＮＳＧ免疫不全マウスに生着させた。生着の同日に、腫瘍を有するマウスに異なる用量のＨｕ１０１−２８またはＩｇＧ対照を腹腔内注射によって、２日に１回投与した。図１９に示される通り、Ｈｕ１０１−２８は、用量依存的かつ持続的に腫瘍増殖を抑制した。
【０２４０】
Ｈｕ１０１−２８および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ効果を評価した。ＨＣＣ８２７細胞をＮＳＧマウスに生着させた。腫瘍の体積が１００〜１５０ｍｍ３に到達したとき、新鮮分離したヒトＰＢＭＣを、尾静脈注射によって、腫瘍を有するマウスに投与し、続いて、ＰＢＭＣ移植の日から１日おきに、示されている用量で、ＩｇＧ対照、ＰＤ−Ｌ１抗体単独、Ｈｕ１０１−２８単独、および、ＰＤ−Ｌ１抗体＋Ｈｕ１０１−２８で処理した。図２０は、Ｈｕ１０１−２８と抗ＰＤ−Ｌ１抗体との間の相乗効果を示す。
【０２４１】
［例１１：Ｈｕ１０１−２８がカニクイザルＣＤ７３と交差反応する］   この例は、ヒト化抗体Ｈｕ１０１−２８がカニクイザルＣＤ７３と交差反応し、探索的前臨床試験において、許容可能なファーマコキネティクスおよび安全性プロファイルを発揮することを示す。
【０２４２】
図２１は、Ｈｕ１０１−２８によるカニクイザルＣＤ７３活性の結合および阻害を示す。インビトロ生化学アッセイを通して、Ｈｕ１０１−２８は、ヒトＣＤ７３と比較して、カニクイザルＣＤ７３活性の結合および阻害において同等の効力を発揮したが、齧歯類ＣＤ７３に対するＨｕ１０１−２８の結合は無かった。この結果は、Ｈｕ１０１−２８の毒性、ファーマコキネティクス、および、トキシコキネティクスを評価するための非臨床試験モデルへのカニクイザルの使用を支持するものである。
【０２４３】
［例１２：Ｈｕ１０１−２８がＣＤ７３のＣ末端ドメインに結合する］
この例は、ヒト化抗体の１つＨｕ１０１−２８が、Ｎ末端ドメインに結合する既知の抗ＣＤ７３抗体と異なりＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインに結合することを示す。
【０２４４】
ＣＤ７３抗体のエピトープビニングを競合ＥＬＩＳＡによって評価した。ＣＤ７３  ＥＣＤタンパク質およびＨｕ１０１−２８をプレインキュベートし、次に、ストレプトアビジンＨＲＰ抗体によって検出されたビオチン化ＭＥＤＩ−９４４７（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）を追加した。この結果は、ビオチン化Ｒ９４４７の追加がＨｕ１０１−２８の結合と競合しなかったことを示し、両方の抗体が非重複エピトープビンに配置されたことを示す（図２２）。対照として、ビオチン化ＭＥＤＩ−９４４７の追加は、自己結合と競合できた。
【０２４５】
Ｈｕ１０１−２８のエピトープを識別するために、単一のアミノ酸が変異したＣＤ７３変異型のクローンのライブラリを作成した。ライブラリにおける各変異型へのＨｕ１０１−２８  Ｆａｂの結合は、高スループットフローサイトメトリーによって２連で判定した。各ＣＤ７３変異型について、グラフ上でＣＤ７３発現の関数として平均結合値をプロットし（対照反応性として表される）、グラフから重要な残基が識別された。ＣＤ７３  Ｆａｂ結合の重要な残基（四角で囲まれている）は、その変異が試験用Ｆａｂ結合に対して陰性であるが、対照のＭＡｂに対して陽性であるものとして識別された。スクリーニングにおいて識別された重要な残基についての平均結合反応性（および範囲）を列挙し、図２３に示した。Ｈｕ３０９は、Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０のエピトープにおいてＣＤ７３のＣ末端に結合し（図２４の上の左側のパネルにおいて視覚化されている）、一方で、ＭＥＤＩ−９４４７はＮ末端に結合する（図２４における比較を参照されたい）。
【０２４６】
Ｈｕ１０１−２８の独自の結合特性は、既知の抗体と比較して、優れたＣＤ７３阻害プロファイルをもたらすと考えられた。このことは図２５において示された。上の比較は、Ｈｕ１０１−２８が、「フック効果」無しで、ＣＤ７３活性の完全な阻害を示し、一方、ＭＥＤＩ−９４４７が、高用量で著しい「フック効果」を示したことを示している。下の比較パネルにおいて、Ｈｕ１０１−２８  Ｆａｂは、ＣＤ７３活性阻害において、完全ＩｇＧと同等の効力を示し、一方で、ＭＥＤＩ−９４４７  Ｆａｂは、可溶性ＣＤ７３を阻害しなかったことを示した。
【０２４７】
このことは、ＣＤ７３阻害が、完全ＭＥＤＩ−９４４７抗体上の両方の結合部位の結合を必要とする一方で、Ｈｕ１０１−２８による一価結合が十分であることを示唆する。ＭＥＤＩ−９４４７は２つの異なるＣＤ７３二量体に結合して阻害活性を発揮し、Ｈｕ１０１−２８はそのような要求を有しないという仮説を立てた。この仮説を試験するべく、異なるレベルのＣＤ７３発現を有する細胞を用いて、Ｈｕ１０１−２８の阻害作用を試験した。図２６に示されるように、Ｈｕ１０１−２８は、ＣＤ７３分子が互いから遠い可能性が高い低発現を有するものを含む、表面上で異なるレベルのＣＤ７３を発現する細胞上のＣＤ７３活性の完全阻害を達成できた。
【０２４８】
本開示は、開示の個々の態様の１つの例示であることが意図される、記載された特定の実施形態によって範囲が限定されることを意図するものではなく、機能的に同等の任意の組成物または方法は、本開示の範囲内にある。本開示の思想または範囲から逸脱することなく、様々な改変および変形を開示の方法および組成物に成すことができることは、当業者にとって明らかであろう。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびその同等物の範囲に該当する限り、本開示の改変および変形を包含することを意図している。
【０２４９】
本明細書において言及されるすべての公報および特許出願は、個々の公報または特許出願が各々、参照によって、具体的かつ別個に組み込まれることが示される場合と同一の程度で、参照によって本明細書に組み込まれる。
【０２５０】
（項目１）
ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、配列識別番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１、配列識別番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２、配列識別番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３、配列識別番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列識別番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および、配列識別番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３を備える、単離された抗体または抗体断片。
（項目２）
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目３）
上記軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、項目２に記載の抗体または抗体断片。
（項目４）
上記抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、項目１に記載の抗体または抗体断片。
（項目５）
上記アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、項目４に記載の抗体または抗体断片。
（項目６）
上記抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、項目１から５のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目７）
上記抗体または抗体断片はヒト化抗体である、項目６に記載の抗体または抗体断片。
（項目８）
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置３０のＴｈｒ、
（ｂ）位置４４のＬｙｓ、
（ｃ）位置４８のＭｅｔ、
（ｄ）位置６７のＩｌｅ、および、
（ｅ）位置７１のＡｒｇ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む重鎖可変領域、および、それらの組み合わせを備える、項目６に記載の抗体または抗体断片。
（項目９）
Ｋａｂａｔナンバリングに従って、
（ａ）位置５のＳｅｒ、
（ｂ）位置４６のＰｒｏ、
（ｃ）位置４７のＴｒｐ、
（ｄ）位置４９のＳｅｒ、
（ｅ）位置７０のＳｅｒ、および、
（ｆ）位置７１のＴｙｒ
から成る群から選択される１または複数のアミノ酸残基を含む軽鎖可変領域、および、それらの組み合わせを備える、項目６に記載の抗体または抗体断片。
（項目１０）
配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号７および９−１３から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を備える、項目１から９のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目１１）
上記重鎖可変領域は、配列識別番号７または９のアミノ酸配列を含む、項目１０に記載の抗体または抗体断片。
（項目１２）
配列識別番号８、１５−２０および２２−２４から成る群から選択されるアミノ酸配列、または、配列識別番号８、１５−２０および２２−２４から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を備える、項目１から１１のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目１３）
上記軽鎖可変領域は配列識別番号８のアミノ酸配列を含む、項目１２に記載の抗体または抗体断片。
（項目１４）
ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、上記ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端側の半分から選択される１または複数のアミノ酸残基に結合する、単離された抗体または抗体断片。
（項目１５）
上記ヒトＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインのうち１または複数に結合する、項目１４に記載の抗体または抗体断片。
（項目１６）
上記ヒトＣＤ７３タンパク質のＹ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０から成る群から選択されるアミノ酸残基のうち少なくとも１つに結合する、項目１４に記載の抗体または抗体断片。
（項目１７）
上記アミノ酸残基のうち少なくとも２つに結合する、項目１６に記載の抗体または抗体断片。
（項目１８）
Ｙ３４５、Ｄ３９９、Ｅ４００、Ｒ４０１およびＲ４８０の各々に結合する、項目１６に記載の抗体または抗体断片。
（項目１９）
上記ヒトＣＤ７３タンパク質に結合する１対のＶＨおよびＶＬだけを備える、項目１４に記載の抗体または抗体断片。
（項目２０）
二重特異性抗体である、項目１９に記載の抗体または抗体断片。
（項目２１）
項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
（項目２２）
項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
（項目２３）
治療を必要とする患者における癌を治療する方法であって、項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を上記患者に投与する段階を備える方法。
（項目２４）
上記癌は、膀胱癌、乳癌、大腸癌、子宮体癌、食道癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肝癌、肺癌、リンパ腫、悪性黒色腫、膵癌、前立腺癌および甲状腺癌から成る群から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
上記癌は固形腫瘍である、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
上記患者に第２の癌治療剤を投与する段階を更に備える、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
上記第２の癌治療剤は免疫チェックポイント阻害剤である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
上記免疫チェックポイント阻害剤は、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、細胞傷害性Ｔ細胞関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、リンパ球活性化タンパク質３（ＬＡＧ−３）またはそれらの組み合わせの発現または活性を阻害する、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
上記免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
上記免疫チェックポイント阻害剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、Ｊ４３、ＲＭＰ１−１４、アテゾリズマブ、イピリムマブおよびそれらの組み合わせから成る群から選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
（ａ）項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を用いて、インビトロでＴ細胞を処理する段階と、（ｂ）処理された上記Ｔ細胞を患者に投与する段階とを備える、治療を必要とする患者の癌を治療する方法。
（項目３２）
段階（ａ）の前に、上記Ｔ細胞を個人から単離する段階を更に備える、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
上記Ｔ細胞は上記患者から単離される、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
上記Ｔ細胞は、上記患者とは異なるドナー個人から単離される、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
上記Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔリンパ球、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または、それらの組み合わせである、項目３１から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
試料におけるＣＤ７３の発現を検出する方法であって、項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片が上記ＣＤ７３に結合する条件下で、上記抗体または抗体断片に上記試料を接触させる段階と、上記試料における上記ＣＤ７３の発現を示す結合を検出する段階とを備える方法。
（項目３７）
抗ＣＤ７３療法による治療に適した癌患者を識別する方法であって、上記癌患者から細胞を単離して、項目１から２０のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片を用いてＣＤ７３タンパク質の存在を検出する段階を備える方法。
（項目３８）
単離された抗体または抗体断片であって、上記抗体または抗体断片は、ヒトＣＤ７３タンパク質に対する特異性を有し、
（ａ）配列識別番号１のＶＨ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号１の位置１、２または３において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号１の変異型と、
（ｂ）配列識別番号２のＶＨ  ＣＤＲ２、または、配列識別番号２の位置６、７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号２の変異型と、
（ｃ）配列識別番号３のＶＨ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号３の位置７または８において単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号３の変異型と、
（ｄ）配列識別番号４のＶＬ  ＣＤＲ１、または、配列識別番号４の位置３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号４の変異型と、
（ｅ）配列識別番号５のＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）配列識別番号６のＶＬ  ＣＤＲ３、または、配列識別番号６の位置１、２、３または４における単一の置換、欠失または挿入を有する配列識別番号６の変異型と
を含む、単離された抗体または抗体断片。
（項目３９）
配列識別番号１の上記変異型は、配列識別番号２６−２９から成る群から選択される、項目３８に記載の抗体または抗体断片。
（項目４０）
配列識別番号２の上記変異型は、配列識別番号３０−３６から成る群から選択される、項目３８に記載の抗体または抗体断片。
（項目４１）
配列識別番号３の上記変異型は、配列識別番号３７−４１から成る群から選択される、項目３８に記載の抗体または抗体断片。
（項目４２）
配列識別番号４の上記変異型は、配列識別番号４２−４５から成る群から選択される、項目３８に記載の抗体または抗体断片。
（項目４３）
配列識別番号６の上記変異型は、配列識別番号４６−５６から成る群から選択される、項目３８に記載の抗体または抗体断片。
（項目４４）
重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域、または、それらの組み合わせを更に備える、項目３８から４３のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目４５）
上記軽鎖定常領域はカッパまたはラムダ鎖定常領域である、項目４４に記載の抗体または抗体断片。
（項目４６）
上記抗体または抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤのアイソタイプである、項目４４に記載の抗体または抗体断片。
（項目４７）
上記アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である、項目４６に記載の抗体または抗体断片。
（項目４８）
上記抗体または抗体断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または、完全ヒト抗体である、項目３８から４７のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片。
（項目４９）
項目３８から４８のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
（項目５０）
項目３８から４８のいずれか一項に記載の抗体または抗体断片をコードする１または複数のポリヌクレオチドを含む単離細胞。
【０２５１】
【図１】
2020515508.tif 000025
【図２】
2020515508.tif 000026
【図３】
2020515508.tif 000027
【図４】
2020515508.tif 000028
【図５】
2020515508.tif 000029
【図６】
2020515508.tif 000030
【図７】
2020515508.tif 000031
【図８】
2020515508.tif 000032
【図９】
2020515508.tif 000033
【図１０】
2020515508.tif 000034
【図１１】
2020515508.tif 000035
【図１２】
2020515508.tif 000036
【図１３】
2020515508.tif 000037
【図１４】
2020515508.tif 000038
【図１５】
2020515508.tif 000039
【図１６】
2020515508.tif 000040
【図１７】
2020515508.tif 000041
【図１８】
2020515508.tif 000042
【図１９】
2020515508.tif 000043
【図２０】
2020515508.tif 000044
【図２１】
2020515508.tif 000045
【図２２】
2020515508.tif 000046
【図２３】
2020515508.tif 000047
【図２４】
2020515508.tif 000048
【図２５】
2020515508.tif 000049
【図２６】
2020515508.tif 000050
【配列表】
2020515508000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和1年10月1日(2019.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2020515508000001.app
【国際調査報告】
2020515508.tif 000051
2020515508.tif 000052
2020515508.tif 000053
2020515508.tif 000054
2020515508.tif 000055