(57)【要約】  本発明は、化学療法薬と組み合わせてがんの治療に使用するための、ＢＡＤの発現を増加する薬剤を提供し、その薬剤は、６−β−ナルトレキソール、ナロキソン、メチルナルトレキソンまたはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法薬と組み合わせてがんの治療に使用するための、ＢＡＤの発現を増加する薬剤であって、前記薬剤は、６−β−ナルトレキソール、ナロキソン、メチルナルトレキソンまたはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される、薬剤。
【請求項２】
前記薬剤は、対照に対して少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、ＢＡＤの発現を増加させるのに十分な量で投与される、請求項１に記載の使用するための薬剤。
【請求項３】
前記薬剤は、６−β−ナルトレキソールまたはナロキソンである、請求項１または２のいずれかに記載の使用するための薬剤。
【請求項４】
前記薬剤は、６−β−ナルトレキソールまたはその薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の使用するための薬剤。
【請求項５】
前記６−β−ナルトレキソールは、６−β−ナルトレキソールの血漿中濃度を０．３４〜３，４００ｎｇ／ｍｌ、またはそれ以上に上昇させるのに効果的な量で投与される、請求項４に記載の使用するための薬剤。
【請求項６】
前記６−β−ナルトレキソールは、６−β−ナルトレキソールの血漿中濃度を３４〜３，４００ｎｇ／ｍｌ、またはそれ以上に上昇させるのに効果的な量で投与される、請求項５に記載の使用するための薬剤。
【請求項７】
化学療法薬と別々、連続または同時投与するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用するための薬剤。
【請求項８】
前記薬剤および化学療法薬は、連続または別々に投与される、請求項７のいずれかに記載の使用するための薬剤。
【請求項９】
前記化学療法薬は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤が投与された後で投与される、請求項７または８のいずれか一項に記載の使用するための薬剤。
【請求項１０】
前記化学療法薬は、対照に対して少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、ＢＡＤの発現レベルが増加すると投与され、好ましくはＢＡＤの発現レベルが対照に対して少なくとも１０％増加すると前記化学療法薬は投与される、請求項７〜９のいずれか一項に記載の使用するための薬剤。
【請求項１１】
前記対照は、前記薬剤を投与する前に前記対象から取得された試料中のＢＡＤの発現レベルである、請求項１０に記載の使用するための薬剤。
【請求項１２】
前記薬剤および化学療法薬は同時投与される、請求項７に記載の使用するための薬剤。
【請求項１３】
前記化学療法薬は、ＰＩ３−キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、タキサン、抗代謝剤、アルキル化剤、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤および細胞毒性抗体から成る群より選択される、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の使用するための薬剤。
【請求項１４】
前記化学療法薬は、抗代謝剤、好ましくはゲムシタビンである、請求項１３に記載の使用するための薬剤。
【請求項１５】
前記化学療法薬は、アルキル化剤、好ましくはオキサリプラチンまたはシクロホスファミドから選択される、請求項１３に記載の使用するための薬剤。
【請求項１６】
前記治療されるがんは、肺がん、大腸がん、乳がん、膵がん、リンパ腫またはグリオーマから成るリストより選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の使用するための薬剤。
【請求項１７】
前記がんは、肺がんまたは大腸がんである、請求項１６に記載の使用するための薬剤。
【請求項１８】
前記がんは、乳がんである、請求項１６に記載の使用するための薬剤。
【請求項１９】
ＢＡＤの発現を増加する薬剤を用いた治療のためのがん対象を選択する方法であって、前記方法は、
ａ．それを必要とすると疑われる前記がん対象から試料を取得するステップ、
ｂ．前記試料中のＢＡＤの濃度を測定するステップ、および
ｃ．測定されたＢＡＤの濃度を基準値と比較するステップ、を含み、
前記対象が前記基準値とおよそ等しいかそれ未満のＢＡＤの濃度を有する場合、前記対象はＢＡＤの発現を上昇する薬剤を投与するために選択される、方法。
【請求項２０】
ＢＡＤの発現を増加する薬剤の治療有効性をモニタリングする方法であって、前記方法は、前記対象が前記薬剤を投与された後に請求項１９に従ってステップ（ａ）から（ｃ）を実行するステップを含む、方法。
【請求項２１】
前記ＢＡＤ濃度が、少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、前記基準値より大きい場合、前記対象は化学療法薬を投与するために選択され、好ましくは前記ＢＡＤが前記基準値よりも少なくとも１０％大きく、前記対象は化学療法薬を投与するために選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記対象が前記薬剤を投与された後の前記ＢＡＤ濃度が、５％、１０％、２０％、３０％または４０％前記基準値よりも低い場合、前記対象はＢＡＤの発現を増加する前記薬剤の投与のために選択され、好ましくは前記ＢＡＤが前記基準値よりも１０％低く、前記対象はＢＡＤの発現レベルを増加する薬剤を再投与するために選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記試料は、血液、血漿、血清、リンパ液、組織または組織試料に由来する細胞である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記基準値は、健康な個人から得られた試料中のＢＡＤの発現レベルであるか、前記基準値は、前記薬剤を投与する前の前記対象から得られた試料中のＢＡＤの発現レベルである、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＢＡＤの発現レベルは、ウェスタンブロット、ｍＲＮＡ発現解析、リボソームプロファイリング、フローサイトメトリー、マススペクトロメトリーによって測定される、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＢＡＤの発現を増加する前記薬剤は、６−β−ナルトレキソール、ナロキソン、メチルナルトレキソンまたはその薬学的に許容される塩からなる群より選択され、好ましくは前記薬剤は、６−β−ナルトレキソールまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１
９〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記化学療法薬は、ＰＩ３−キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、タキサン、抗代謝剤、アルキル化剤、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤および細胞毒性抗体から成る群より選択される、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記対象は、肺がん、大腸がん、乳がん、膵がん、リンパ腫またはグリオーマから成るリストより選択されるがんを有する、請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記対象は、肺がんまたは大腸がんを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象は、乳がんを有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１〜１８のいずれか一項に従って使用するためのＢＡＤの発現を増加する薬剤をスクリーニングする方法であって、前記方法は、
ａ．試験薬剤とともに細胞を培養するステップ、
ｂ．前記試験薬剤とともに培養した後ＢＡＤの濃度を測定するステップ、および
ｃ．前記細胞と対照値の間のＢＡＤの発現レベルの増加を比較するステップを含み、
ＢＡＤの発現の前記増加が、前記対照と比較して少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％である場合、前記薬剤は請求項１〜１８のいずれか一項に記載の使用するための薬剤として同定される、方法。
【請求項３２】
ＢＡＤの発現の前記増加が前記対照と比較して少なくとも１０％である場合、前記薬剤は請求項１〜１８のいずれか一項に従って使用するための薬剤として同定される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞は、好ましくはヒト起源の、不死化細胞株に由来する、請求項３１または請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
抗がん剤を対象に投与するステップを含むがんを有する前記対象の治療方法であって、治療される前記対象は対照と比較して、がん細胞のＢＡＤの発現レベルが１０％増加する、方法。
【請求項３５】
ＢＡＤの発現レベルを増加する薬剤を前記対象に投与することにより前記対象内のＢＡＤの発現レベルの増加を誘導するステップをさらに含む、請求項３４に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学療法薬と組み合わせた、がんの治療に使用するための腫瘍バイオマーカーの発現を増加する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くのがん治療の成功は、アジュバントタイプの分子と並んで同時投与することにより成り立っている。いかなる独立した治療有用性がなくとも、アジュバントは、がんを標的とする活性化合物が最大治療効果を達成することができるような対象の免疫システムを刺激する原因である。
【０００３】
アジュバントは、典型的には患者の免疫応答を調製するので、それらは、たいていはヒト化治療抗体などのがんワクチンまたは生物製剤と組み合わせて使用される。それらは、がんワクチンの曝露に応答するか、患者の異物治療抗体に対する免疫原性を抑制するか低減することにより患者の免疫システムを増強して抗体の生成を増加するように作用する。従って、アジュバントは、免疫がん治療を成功する治療結果に駆動するのに重要な役割を果たす。
【０００４】
よくあることに、免疫治療は、放射線治療または化学療法などの伝統的ながん治療と組み合わせられる。有効な免疫治療が存在しない特定のタイプのがんについては、伝統的な治療のみが投与されることができる。伝統的ながん治療は、単独投与に対する効果の和よりも同時投与に対する治療効果が大きい可能性がある場合に、組み合わせて投与されることもできる。
【０００５】
大きな有効性にもかかわらず、伝統的ながん治療の組み合わせは、患者が経験する副作用を悪化させる可能性があり、しばしば治療計画の早期終了を生じる。従って、複数の抗がん剤を同時投与する有利な相乗効果は、治療の厳しい性質により実現されない可能性がある。
【０００６】
有効性が大きく副作用が低減した新しい治療の開発は、特定のがん治療を同時投与する必要性を回避することになりえ、従って、早期治療終了に導かれることがよくある厳しい副作用を回避する。あるいは、化学療法薬の治療有効性をブーストするアジュバント様分子を開発することと同様の結果を達成し得るだろう。
【０００７】
従って、そうでなければ攻撃的ながん治療計画となるであろうものの有害な副作用を最小化するために化学療法薬の治療有用性をブーストする薬剤を開発する必要性がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明者らによって、Ｂｃｌ２関連細胞死アゴニスト（Ｂｃｌ２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ：ＢＡＤ）の発現をブーストする薬剤は、多くのがん細胞株において化学療法薬の細胞毒性を増強することができることが見出された。全体的な細胞毒性の増加は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤の細胞毒性とは独立であり、それ自体には細胞毒性効果はないか最小限である。
【０００９】
本発明の第１の態様に従って、化学療法薬と組み合わせたがんの治療に使用するための、ＢＡＤの発現を増加する薬剤が提供される。
【００１０】
本発明の第２の態様に従って、ＢＡＤの発現を増加する薬剤を用いた治療のためのがんを有する対象を選択する方法であって、その方法は、（ａ）それを必要とすると疑われるその対象から試料を取得するステップ、（ｂ）その試料中のＢＡＤの濃度を測定するステップ、および（ｃ）測定されたＢＡＤの濃度を基準値と比較するステップを含み、その対象がその基準値とおよそ等しいかそれ未満であるＢＡＤ濃度を有する場合、その対象はＢＡＤの発現を増加する薬剤を投与するために選択される、方法が提供される。
【００１１】
本発明の第３の態様に従って、本発明の第１の態様に従って使用するためのＢＡＤの発現を増加する薬剤をスクリーニングする方法であって、その方法は、（ａ）試験薬剤とともに細胞を培養するステップ、（ｂ）その試験薬剤とともに培養した後ＢＡＤの濃度を測定するステップ、および（ｃ）その細胞と対照値の間のＢＡＤの発現の倍率変化を比較するステップを含み、ＢＡＤの発現のその倍率変化が少なくとも１０％である場合、その薬剤は本発明の第１の態様に従って使用するための薬剤として同定される、方法が提供される。
【００１２】
本発明の第４の態様に従って、抗がん剤を投与するステップを含むがんを有する対象の治療方法であって、治療されるその対象は対照と比較して、がん細胞のＢＡＤの発現レベルが１０％増加することを特徴とする、方法が提供される。
【００１３】
以下の図を参照することにより本発明はさらに定義される。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１ａ】図１ａは、ＨＣＴ１１６細胞におけるＢＡＤ、ｐ２１、ｐＡＫＴ、サイクリンＢ１およびＣＤＫ１の発現レベルに対する異なる濃度の６−β−ナルトレキソールの効果を示す。
【図１ｂ】同上。
【図２ａ】図２は、ＧＥＭまたはＯＸＰと組み合わせて１０ｎＭまたは１０μＭの６−β−ナルトレキソールを同時投与したときのＡ５４９細胞（ａおよびｃ）およびＨＣＴ１１６細胞（ｂおよびｄ）の細胞分裂停止（ａおよびｂ）および細胞毒性（ｃおよびｄ）を示す。細胞の対照試料は、６−β−ナルトレキソールを使用しないものを投与した。
【図２ｂ】同上。
【図３】図３は、異なる濃度の６−β−ナルトレキソールに応じた乳がん細胞中のＢＡＤの発現レベルの用量依存的な増加を示す。
【図４】図４は、１０ｎＭの（６ＢＮ（ｎ））または１０μＭの６−β−ナルトレキソール（６ＢＮ（ｕ））を単独でまたはゲムシタビン（ＧＥＭ）またはオキサリプラチン（ＯＸＰ）と組み合わせて投与したときの乳がん細胞株の細胞分裂停止（ａ）および細胞毒性（ｂ）を示す。薬剤を投与しないか（ＵＮ）、ＧＥＭまたはＯＸＰを単独で投与した対照の細胞に由来する結果も示される。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤は、がん細胞の化学療法薬に対する感受性を増加するという知見に基づく。これは６−β−ナルトレキソールの使用により例証される。従って、６−β−ナルトレキソールを化学療法薬と共に同時投与すると抗がん治療計画の治療有効性をブーストすることができる。治療有効性を増加することにより、６−β−ナルトレキソールは特に攻撃的な治療戦略を実行する必要を妨げることができ、攻撃的な治療戦略は有害な副作用を対象に表すことが良くある。さらに、効力が増加する効果により特定のがんの治療に限定された効力しか示していない特定の化学療法薬を救出しうる。
【００１６】
本発明者らは、６−β−ナルトレキソールの活性は任意の細胞毒性活性とは独立していることを見出した。従って、単独の６−β−ナルトレキソールは無視できる治療効果しか
有さないが、薬剤は同時投与される化学療法薬の細胞毒性を増強するために使用されることができる。６−β−ナルトレキソールが治療活性を増強する能力は、少なくとも２つの別々の分類の化学療法薬を使用して少なくとも３つの独立した細胞株において観察され、従って、６−β−ナルトレキソールの効果は複数のがんの治療に使用するための複数の化学療法薬の治療効力をブーストするために利用できることが示唆される。
【００１７】
理論に拘束されるものではないが、６−β−ナルトレキソールはがん細胞の表現型を細胞の化学療法薬に対する感受性を増加させるように変化させるように思われる。ある特定のマーカーで６−β−ナルトレキソールに応答して発現が変化するのは、ＢＡＤである。従って、ＢＡＤの発現レベル、または本明細書において互換的に使用されるように、「レベル」は、がん細胞が後の抗がん剤の投与に対し敏感になるということを決定するために使用されることができる。従って、ＢＡＤ発現を増加する任意の薬剤は、がん細胞の化学療法薬に対する感受性を増加させるために使用されうると想定される。
【００１８】
本発明は、以下の定義を参照してさらに理解されることができる。
本明細書で使用されるように、「６−β−ナルトレキソール」は、１７−（シクロプロピルメチル）−４，５−エポキシモルフィナン−３，６ベータ，１４−トリオール（ＣＡＳ番号４９６２５−８９−０）およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを指す。６−β−ナルトレキソールは、ナルトレキソンの主要な活性代謝物である。用語６−β−ナルトレキソールは、その機能的に等価な類似体および代謝物も包含し、それは本発明内で具現化された６−β−ナルトレキソールの新規用途に関して機能的等価性を保持する。
【００１９】
本明細書で使用されるように、「発現が増加する」およびその同義語は、６−β−ナルトレキソールを投与したときの特定の細胞バイオマーカーの発現レベル（すなわち「レベル」）の増加を指す。特定の細胞バイオマーカーの発現レベルが増加することにより、がん細胞が第１の薬剤を投与したときに所望の応答を受けたので、化学療法薬の細胞毒性効果に敏感になるということが示される。バイオマーカーの発現レベルは、当業者が利用可能な任意の数の分析方法を使用する試料において測定されることができ、ゲル電気泳動、ウェスタンブロット解析、２Ｄ−ＰＡＧＥ、カラムクロマトグラフィー、リボソームプロファイリング、またはマススペクトロメトリーを含むが、これに限定されない。発現のレベルが増加することは、バイオマーカーの発現レベルを６−β−ナルトレキソールを投与する前後と比較することにより決定することができる。６−β−ナルトレキソールを投与する前のバイオマーカーの発現レベルは、対照として参照することができる。いくつかの実施例では、特定のバイオマーカーの測定のために、発現レベルを解析する前に細胞環境からバイオマーカーを精製することが望ましいとされうる。使用される精製方法のタイプは、解析されるバイオマーカーのタイプに依存するだろう。概して、バイオマーカーの精製技術は当業者に周知であり、徹底的でない技術のリストがＰｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｓｉｍｏｎ  Ｒｏｅ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  （２００１）に見られる（本明細書に全て組み込まれる）。
【００２０】
本発明の文脈において特別興味があるバイオマーカーは、ＢＡＤである。ＢＡＤは、Ｂｃｌ２関連細胞死アゴニスト（Ｂｃｌ２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ
ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ）としても知られ、活性化時に細胞死を開始させるＢＨ３のみのアポトーシス促進タンパクファミリーの一員であり、その活性は各種細胞の生存および死亡シグナルを統合する翻訳後修飾によって大部分が制御される（Ｄａｎｉａｌ  ２００９）。ＢＡＤはミトコンドリア内に位置する、抗アポトーシスパートナーであるＢＣＬ−２、ＢＣＬ−ＸＬおよびＢＣＬ−Ｗの結合および中立作用を介してアポトーシスを特異的に促進し、ミトコンドリアではＢＡＤは成長因子生存信号を中止すると（サイトゾルから）
移動する。本発明は、ＢＡＤのレベルが６−β−ナルトレキソールの投与に応じて増加することを示す。ＢＡＤの発現レベルを増加する任意の分子は、本発明のこの態様内に包含されると想定される。好ましくは、ＢＡＤの発現レベルを対照と比較して、少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％増加する任意の投与計画の任意の薬剤は、本発明の実施例に包含される。より好ましくは、薬剤はＢＡＤの発現レベルを対照と比較して少なくとも１０％増加する。より好ましくは、薬剤はＢＡＤの発現レベルを対照と比較して２５〜１００％増加する。
【００２１】
本明細書で使用されるように、用語「対象」は、任意の動物（哺乳類等）を指し、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、げっ歯類等を含むが、これに限定されず、本発明に従ってＢＡＤの発現を増加する薬剤が使用される治療のレシピエントとされる。典型的には、用語「対象」および「患者」は、ヒト対象に関して本明細書において互換的に使用される。
【００２２】
本明細書で使用されるように、「化学療法薬」は、当該技術分野において使用されるその従来の意味を有する。用語「化学療法薬」および「抗がん剤」は本発明において同意語として使用される。
【００２３】
本発明の第１の態様に従って、化学療法薬と組み合わせてがんの治療に使用するための、ＢＡＤの発現を増加する薬剤が提供され、「組み合わせ」は、薬剤は化学療法薬とともに抗がん治療計画の一部を形成することを意味する。
【００２４】
特定の実施例において、薬剤は、対照と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％ＢＡＤの発現を増加するのに十分な量で投与される。好ましくは、薬剤は、対照と比較して、少なくとも１０％ＢＡＤの発現レベルを増加するのに十分な量で投与される。特定の実施例において、対照は、薬剤を投与する前に対象から得られた試料中のＢＡＤの発現レベルである。当業者は、そのような有効量をルーチンの検査室実験を実行して増加した量の薬剤を投与することに応じたＢＡＤの発現レベルの増加を測定することにより決定することができるだろう。特定の実施例において、本方法で使用するために対象から得られた生物学的試料は、血液、血漿、血清、リンパ液、組織または組織試料に由来する細胞である。好ましくは、試料は対象の腫瘍生検により得られる。対象から任意の上記生物学的試料を得るための従来技術は、当業者に周知である。
【００２５】
好ましくは、ＢＡＤの発現を増加する薬剤は、６−β−ナルトレキソール、ナロキソン、メチルナルトレキソンまたはその薬学的に許容される塩からなるリストより選択される。好ましくは、薬剤は、６−β−ナルトレキソールまたはその薬学的に許容される類似体である。
【００２６】
特定の実施例において、薬剤が６−β−ナルトレキソールである場合、６−β−ナルトレキソールは、６−β−ナルトレキソールの血漿中濃度を少なくとも０．３４ｎｇ／ｍｌ、少なくとも３．４ｎｇ／ｍｌ、少なくとも３４ｎｇ／ｍｌまたは少なくとも３４０ｎｇ／ｍｌ上昇させるのに効果的な量で投与される。特定の実施例において、６−β−ナルトレキソールは、６−β−ナルトレキソールの血漿中濃度を０．３〜３，４００ｎｇ／ｍｌ、好ましくは３４〜３，４００ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは３４０〜３，４００ｎｇ／ｍｌの範囲内に上昇させるのに効果的な量で投与される。そのような量を達成するのに効果的な量は、当業者に知られた任意の数の従来技術を使用して決定されることができる。例えば、当業者は、ある量の６−β−ナルトレキソールを投与した後の試料内の６−β−ナルトレキソールの濃度の増加を測定するために、対象から得られた血漿試料にマススペクトロメトリーを実行しうる。有効量は、血漿中濃度の所望の増加をもたらすよう決定され
た量である。
【００２７】
本明細書で使用されるように、用語「治療する」および「治療」および「治療すること」は、１）診断された病的状態または障害の進行を治癒、緩徐、および／又は停止する治療的処置および２）標的となる病的状態または障害の発生を予防するおよび／または緩徐する予防又は防止処置の両方を指す。従って、治療を必要とするものは、既に障害にかかったもの、障害にかかる傾向にあるもの、および障害を防止すべきものを含む。いくつかの例において、対象が以下の１つ以上を示すなら、本発明に従って腫瘍／がんはうまく「治療」されたと言える：がん細胞の数の減少または完全な欠如、腫瘍のサイズの減少、軟組織および骨へのがんの伝播などを含む、周辺組織へのがん細胞の浸潤の阻害または欠如、腫瘍の転移の阻害または欠如、腫瘍の増殖の阻害または欠如、罹患率または死亡率の減少、腫瘍の腫瘍形成能、腫瘍化頻度または腫瘍化能力の低下、腫瘍におけるがん幹細胞の数または頻度の低下、腫瘍化細胞の非腫瘍化状態への分化、またはいくつかの効果の組合せである。
【００２８】
本明細書で使用されるように、用語「腫瘍／がん」は、良性（非がん性）または前がん性を含む、悪性（がん性）病変のいずれかの、過剰な細胞成長、増殖および／または生存から生ずる、組織の任意の腫瘍を指す。用語「腫瘍／がん」および「新生物」は、互換的に使用されうる。用語「腫瘍細胞」は、腫瘍／がんに由来する細胞または複数の細胞を指す。
【００２９】
本明細書において使用されるように、用語「がん細胞」は、腫瘍またはがんに由来する細胞または不死化細胞株を指す。
【００３０】
特定の実施例において、ＢＡＤの発現を増加する薬剤は、化学療法薬とともに同時に、別々にまたは連続して投与されうる。
【００３１】
本明細書で使用されるように、用語「同時投与」または「同時に」または「同時の」、「連続」または「別々」は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤と化学療法薬の投与が同じ治療計画の一部として生じることを意味する。
【００３２】
「同時」投与は、本明細書において定義されるように、ＢＡＤの発現を増加する薬剤と化学療法薬をお互いに約２時間または約１時間またはそれ未満以内に投与することを含み、さらに好ましくは同時である。
【００３３】
「別々」投与は、本明細書において定義されるように、ＢＡＤの発現を増加する薬剤と化学療法薬を約１２時間、または約８時間、または約６時間または約４時間または約２時間以上離して投与することを含む。
【００３４】
「連続」投与は、本明細書において定義されるように、ＢＡＤの発現を増加する薬剤と化学療法薬を各々複数の分割量および／または用量および／または別の機会に投与することを含む。ＢＡＤの発現を増加する薬剤は、化学療法薬の投与前または後に対象に投与されうる。あるいは、化学療法薬は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤を用いた治療が終わったあとに対象に適用し続けてもよい。
【００３５】
特定の実施例において、化学療法薬は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤が投与された後に投与される。
【００３６】
特定の実施例において、化学療法薬は、ＢＡＤの発現レベルが対照に対して少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、ま
たは少なくとも４０％、増加すると投与される。好ましくは、化学療法薬は、ＢＡＤの発現レベルが対照に対して少なくとも１０％増加すると投与される。
【００３７】
特定の実施例において、薬剤と化学療法薬は、同時投与される。
【００３８】
さらにその第１の態様に従って、化学療法薬は、ＰＩ３−キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、タキサン、抗代謝剤、アルキル化剤、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤および細胞毒性抗体から成る群より選択されうる。化学療法薬は、任意の従来の方法で投与されることができ、投与方法は使用される抗がん剤に大きく依存する。従って、とりわけ、非経口、経口、舌下、経鼻および／または肺性経路による投与が想定される。
【００３９】
化学療法薬がＰＩ３−キナーゼ阻害剤である場合、適した例は、ワートマニン、ＬＹ２９４００２、デメトキシビリジン、ＩＣ８７１１４、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＢＡＹ  ８０−６９４６、ＢＫＭ１２０、ＧＤＣ−０９４１、ＧＤＣ−９０８０を含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。
【００４０】
化学療法薬がＡＫＴ阻害剤である場合、適した例は、ＭＫ−２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、ペリフォシン、ＰＨＴ−４２７、ＡＴ７８６７、ホノキオール、ＰＦ−０４６９１５０２を含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。
【００４１】
化学療法薬がタキサンである場合、適した例は、パクリタキセルおよびドセタキセルを含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。
【００４２】
化学療法薬が抗代謝剤である場合、適した例は、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、カペシタビン、シトシンアラビノシド（シタラビン）、ゲムシタビン、６−チオグアニン、ペントスタチン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、フルダラビンおよびクラドリビンを含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。ゲムシタビンは、特に好ましい抗代謝剤である。例として、ゲムシタビンは８００〜１２００ｍｇ／ｍ２、好ましくは９００〜１１００ｍｇ／ｍ２、例えば約１０００ｍｇ／ｍ２または１０００ｍｇ／ｍ２の用量（投与あたり）で投与されうる。
【００４３】
化学療法薬がアルキル化剤である場合、適した例は、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミド、メルファラン（Ｌ−サルコリシン）、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾシン（ストレプトゾトシン）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ；ジメチルトリアゼノイミダゾールカルボキサミド）、テモゾロミドおよびオキサリプラチンを含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。シクロホスファミドおよびオキサリプラチンは特に好ましいアルキル化剤である。例として、オキサリプラチンは、６５〜１０５ｍｇ／ｍ２、好ましくは７５〜９５ｍｇ／ｍ２、例えば約８５ｍｇ／ｍ２または８５ｍｇ／ｍ２の用量（投与当たり）で投与されうる。例として、シクロホスファミドは、１８００ｍｇ／ｍ２まで、例えば４００〜１８００ｍｇ／ｍ２の用量（投与当たり）で投与されうる。
【００４４】
化学療法薬が細胞周期阻害剤である場合、適した例は、エポチロン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、スタウロスポリン／ＵＣＮ−０１、１７ＡＡＧ、ＸＬ８４４、ＣＨＩＲ
−１２４、ＰＦ−００４７７７３６、ＣＥＰ−３８９１、フラボピリドール、ベルベリン、Ｐ２７６−００、テラメプロコル、イソフラボンダイゼイン、ＢＩ２５３６、ＢＩ６７２７、ＧＳＫ４６１３６４、シクラポリン、ＯＮ−０１９１０、ＮＭＳ−Ｐ９３７、ＴＡＫ−９６０、イスピネシブ、モナストロール、ＡＺＤ４８７７、ＬＹ２５２３３５５、ＡＲＲＹ−５２０、ＭＫ−０７３１、ＳＢ７４３９２１、ＧＳＫ９２３２９５、ロナファーニブ、ｐｒｏＴＡＭＥ、ボルテゾミブ、ＭＬＮ９７０８、ＯＮＸ０９１２、ＣＥＰ−１８７７０を含み、その組み合わせ、および上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。細胞周期阻害剤の特に適した例は、ヘスペラジン、ＺＭ４４７４３９、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ−８０５４、ＰＨＡ−７３９３５８、ＡＴ−９２８３、ＡＺＤ１１５２、ＭＬＮ８２３７、ＥＮＭＤ２０７６、ＳＵ６６６８を含み、その組み合わせ、ならびにオーロラキナーゼの他の阻害剤を含み、そして上記の任意の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、立体異性体、包接化合物およびプロドラッグを含むが、これに限定されない。
【００４５】
特定の実施例において、化学療法薬は、抗代謝剤、好ましくはゲムシタビンである。
【００４６】
特定の実施例において、化学療法薬は、アルキル化剤、好ましくはオキサリプラチンである。
【００４７】
本発明は、肉腫、がん、腺がん、メラノーマ、骨髄腫、芽腫、グリオーマ、リンパ腫または白血病を含むがんを治療するために使用されうる。代表的ながんは、例えば、がん、肉腫、腺がん、メラノーマ、神経性（芽腫、グリオーマ）、中皮腫および網内系、リンパ性または造血器腫瘍障害（例えば骨髄腫、リンパ腫または白血病）を含む。特定の態様において、腫瘍またはがんは、肺腺がん、肺がん，びまん性または間質性胃がん、大腸腺がん、前立腺腺がん、食道がん、乳がん、すい臓腺がん、卵巣腺がん、副腎の腺がん、子宮内膜の腺がんまたは子宮腺がんを含む。
【００４８】
腫瘍およびがんは、良性、悪性、転移性および非転移性タイプを含み、任意のステージ（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶ）またはグレード（Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３等）の進行している、悪化している、安定化したまたは寛解した腫瘍、がんまたは転移を含む。本発明に従って治療されうるがんは、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、大腸、食道、胃腸（ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎｅｓ）、歯肉、頭、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、首、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌または子宮を含むが、これに限定されない。好ましくは、がんは、前立腺がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、乳がん、大腸がん、膵がん、脳がん、肝細胞がん、リンパ腫、白血病、胃がん、子宮頚がん、卵巣がん、甲状腺がん、メラノーマ、頭頚部がん、皮膚がんおよび軟部組織肉腫および／または他の形状のがんから選択される。腫瘍は、転移性または悪性腫瘍でありうる。
【００４９】
特定の実施例において、治療されるがんは、肺がん、大腸がん、乳がん、膵がん、リンパ腫またはグリオーマから成るリストより選択される。
【００５０】
特定の実施例において、治療されるがんは、好ましくは乳がんである。
【００５１】
特定の実施例において、治療されるがんは、肺がんまたは大腸がんである。好ましくは、治療されるがんは、大腸がんである。好ましくは、治療されるがんは、大腸がんである。
【００５２】
本発明の第２の態様において、ＢＡＤの発現レベルを増加する薬剤を用いた治療のためのがんを有する対象を選択する方法であって、その方法は、（ａ）それを必要とすると疑われるそのがん対象から試料を取得するステップ、（ｂ）その試料中のＢＡＤの濃度を測
定するステップ、および（ｃ）測定されたＢＡＤの濃度を基準値と比較するステップを含み、その対象がその基準値とおよそ等しいかそれ未満である場合、その対象はＢＡＤの発現を増加する薬剤を投与するために選択される、方法を提供する。
【００５３】
用語「およそ」は、用語が先行する厳密値、そして用語が先行する値に近いまたは前後の値に対する忠実な支持を提供するために本明細書において使用される。その値が具体的に列挙された値に近いまたは前後するかどうかを決定する際、近いまたは前後の列挙されていない値は、それが存在する文脈において、具体的に列挙された値に実質的に同等のものを提供する値でありうる。例えば、「およそ」は、その値が基準値の１％、２％または５％以内であることを意味しうる。
【００５４】
第２の態様の特定の実施例において、方法は、ＢＡＤの発現を増加する薬剤の治療有効性をモニタリングするために使用されることができ、対象がその薬剤を投与された後に本発明の第２の態様に従ってステップ（ａ）から（ｃ）を実行するステップを含む。
【００５５】
その薬剤を投与した後にＢＡＤの発現レベルをモニタリングすると、その対象が一度その化学療法薬に敏感になってから、次に化学療法薬を投与することができる。その薬剤を投与された後のそのＢＡＤ濃度が、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％または少なくとも４０％、好ましくは少なくとも１０％基準値よりも高い場合、その対象は化学療法薬の投与のために選択されることができる。あるいは、そのＢＡＤ濃度が、５％、１０％、２０％、３０％または４０％その基準値よりも低い場合、その対象はＢＡＤの発現を増加するその薬剤の再投与のために選択される。好ましくは、その薬剤を投与した後そのＢＡＤ濃度がその基準値よりも１０％低いとき、その対象はＢＡＤの発現を増加する薬剤を再投与するために選択される。
【００５６】
本発明の第２の態様に従って、フレーズ「基準値」および「対照値」は、本明細書において互換的に使用される。本方法において使用するための「基準」値は、健康な対象から得られた生物学的試料から測定されるＢＡＤの発現レベルであることができる。本明細書において使用されるように、「健康な対象」は、がんに罹患していない対象を指す。基準値は、本発明の第２の態様の方法を実行する時点で健康な個人から得られた試料中のＢＡＤの発現レベルを測定することにより決定されうる。あるいは、基準値は、健康な個人から得られた等価な試料中のＢＡＤの発現レベルを事前に測定することによる規定値でありうる。ＢＡＤの発現を増加する薬剤の治療有効性をモニタリングするとき、基準値は健康な個人に由来するものでありえ、または基準値は対象から事前に得られた試料中の測定されたＢＡＤ濃度でありうる、すなわち、基準値は、薬剤の投与前に対象から得られた試料中のＢＡＤの発現レベルでありうる。
【００５７】
特定の実施例において、本方法において使用するための対象から得られた生物学的試料は、血液、血漿、血清、リンパ液、組織または組織試料に由来する細胞である。好ましくは、試料は、対象の腫瘍生検から得られる。対象から任意の上記生物学的試料を得るための従来技術は、当業者に周知である。
【００５８】
特定の実施例において、ＢＡＤの発現レベルは、ウェスタンブロット、ｍＲＮＡ発現解析、リボソームプロファイリング、フローサイトメトリー、マススペクトロメトリーからなるリストより選択される任意の方法によって測定される。ＢＡＤの発現レベルは、当業者に知られた他の従来の分析方法を使用しても決定されうる。
【００５９】
特定の実施例において、ＢＡＤの発現を増加する薬剤は、６−β−ナルトレキソール、ナロキソン、メチルナルトレキソンまたはその薬学的に許容される塩からなる群より選択される。好ましくはＢＡＤの発現を増加する薬剤は、６−β−ナルトレキソールまたはそ
の薬学的に許容される塩である。
【００６０】
特定の実施例において、化学療法薬は、ＰＩ３−キナーゼ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、タキサン、抗代謝剤、アルキル化剤、細胞周期阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤および細胞毒性抗体から成る群より選択される。
【００６１】
特定の実施例において、がん対象は、肺がん、大腸がん、乳がん、膵がん、リンパ腫またはグリオーマから成るリストより選択されるがんを有する。好ましくは、がん対象は、肺がんまたは大腸がんを有する。特定の実施例において、がんは、大腸がんである。特定の実施例において、がんは、乳がんである。
【００６２】
本発明の第３の態様に従って、本発明の第１の態様の任意の実施例に従って使用するためのＢＡＤの発現を増加する薬剤をスクリーニングする方法であって、その方法は、（ａ）試験薬剤とともに細胞を培養するステップ、（ｂ）その試験薬剤とともに培養した後ＢＡＤの濃度を測定するステップ、（ｃ）その細胞と対照値の間のＢＡＤの発現レベルの増加を比較するステップを含み、ＢＡＤの発現レベルのその増加が、その対照と比較して少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％である場合、その薬剤は本発明の第１の態様に従って使用するための薬剤として同定される。好ましくは、その薬剤がＢＡＤの発現レベルをその対照と比較して少なくとも１０％増加する場合、その薬剤は本発明の第１態様の任意の実施例に従って使用するための薬剤として同定される方法が提供される。
【００６３】
本発明の第３の態様の方法を実行するために、当業者は、生体外薬剤スクリーニングプロトコルでルーチンに使用される任意の数の標準的な細胞培養技術を利用しうる。例えば、マルチウェル生体外細胞培養フォーマットを使用することができ、複数の候補薬剤を同時に複数の濃度でスクリーニングすることができる。従って、そのようなフォーマットから、当業者は薬剤の濃度の関数としてどのようにＢＡＤの発現が増加するかを分析することにより最も適切な薬剤を決定することができうる。ＢＡＤの発現レベルを決定するために、ＲＴ−ＰＣＲ、ウェスタンブロッティング、免疫組織化学および上記の適切な誘導体を含むがこれに限定されない、当該技術分野において任意の数の既知の方法が当業者によって実行されることができる。発現の倍率変化は、媒介剤とともにまたは全く薬剤を含まずに培養された細胞の集団に由来する対照値を参照して決定することができ、ただし、媒介剤はＢＡＤの発現レベルを増加しないことが知られている分子の場合である。適切な媒介剤は当業者に周知であり、あるいは適切な媒介剤はスクリーニング方法から決定されるようにＢＡＤの発現を増加しない薬剤でありうる。あるいは、対照値はアッセイで使用される細胞の集団でＢＡＤ発現の内在性レベルに対応する規定値でありうる。
【００６４】
本発明の第３の態様の実施例において、細胞は、不死化細胞株である、または由来し、好ましくは、ヒト起源である。「不死化」細胞株は、突然変異に起因して不確定に増殖し、通常の細胞老化を避ける細胞集団を指す。例えば、細胞は、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、Ｈｅｐ−Ｇ２、ＨＥＫ  ２９３、ＲＡＷ  ２６４．７、ＨｅＬａ、ＭＲＣ−５、Ａ２７８０、ＣＡＣＯ−２、ＴＨＰ  １、Ａ５４９、ＰＤ  ３０、ＭＣＦ７、ＳＮＬ  ７６／７、Ｃ２Ｃ１２、Ｊｕｒｋａｔ  Ｅ６．１、Ｕ９３７、Ｌ９２９、３Ｔ３  Ｌ１、ＨＬ６０、ＰＣ−１２、ＨＴ２９、ＯＥ３３、ＯＥ１９、ＮＩＨ  ３Ｔ３、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、Ｋ５６２、Ｕ−８７  ＭＧ、ＰＤ−２５、Ａ２７８０ｃｉｓ、Ｂ９、ＣＨＯ−Ｋ１、ＭＤＣＫ、１３２１Ｎ１、Ａ４３１、ＡＴＤＣ５、ＨＵＶＥＣ、Ｖｅｒｏ、Ｆａｏ、Ｊ７７４Ａ．１、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１、Ｊ７７４．２、ＰＮＴ１Ａ、Ｕ−２  ＯＳ、ＨＣＴ  １１６、ＭＡ１０４、ＢＥＡＳ−２Ｂ、ＮＢ２−１１、ＢＨＫ  ２１、ＮＳ０、Ｎｅｕｒｏ  ２ａ、Ｔ４７Ｄ、１３０１、ＰＮＴ２、ＰＣ−３、ＴＦ１、ＣＯＳ−７、ＭＤＣＫ、ＮＣＩ−３２２、ＳＫ，Ｎ．ＳＨ、ＬＮＣａＰ．ＦＧＣ、ＯＥ２１、ＰＳＮ１、ＩＳＨＩＫＡＷＡ、ＭＦ
Ｅ−２８０、ＭＧ−６３、ＲＫ  １３、ＥｏＬ−１  ｃｅｌｌ、ＶＣａＰ、ｔｓＡ２０１、ＣＨＯ、ＨＴ  １０８０、ＰＡＮＣ−１、Ｓａｏｓ−２、ＳＫ−ＯＶ−３、ＣＯＶ４３４、Ｈｅｐ  ３Ｂ、Ａ３７５、ＡＧＳ、ＣＡＫＩ  ２、ＣＯＬＯ  ２０５、ＣＯＲ−Ｌ２３、ＩＭＲ  ３２、ＱＴ  ３５、ＷＩ  ３８、ＨＭＶＩＩ、ＨＴ５５またはＴＫ６細胞でありえ、または由来しうる。
【００６５】
本発明の第４の態様に従って、抗がん剤を投与するステップを含むがんを有する対象の治療方法であって、治療されるその対象は対照と比較して、がん細胞のＢＡＤの発現レベルが１０％増加することを特徴とする、方法が提供される。
【００６６】
本発明のこの態様は、ＢＡＤの発現レベルが増加する腫瘍細胞株は、抗がん剤の効果により敏感になるという発見に基づく。本明細書において使用されるように、「敏感になる（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）」は、抗がん剤の投与に応じてがん細胞の細胞毒性に対する感受性が増加することを指し、それにより増加した「感受性」は対照と比較してＢＡＤの発現レベルが増加したことに起因する。ＢＡＤの発現レベルが増加することは腫瘍細胞の固有の特徴でありえ、または発現レベルの増加はＢＡＤの発現を増加する薬剤投与することにより誘導されうる。発現レベルの増加は、抗がん剤を投与される対象の非腫瘍細胞のＢＡＤ発現の基礎レベルに関連して決定されることができる。この例において、非腫瘍細胞の発現の基礎レベルは、対照として参照される。あるいは、ＢＡＤ発現の基礎レベルは、健康な対象の非腫瘍細胞のＢＡＤの発現レベルに由来する規定値でありうる。
【００６７】
第４の態様において、抗がん剤を対象に投与するステップを含むがんを有する対象の治療方法であって、治療されるその対象は対照と比較して、がん細胞のＢＡＤの発現レベルが１０％増加することを特徴とする、方法が提供される。対象のＢＡＤの発現レベルは、本発明の第１の態様に従った薬剤を投与することにより増加しうる。
【００６８】
本発明の第５の態様において、がんを治療するための薬物の製造におけるＢＡＤの発現を増加する薬剤の使用であって、その薬物は化学療法薬と組み合わせて投与される、使用が提供される。
【００６９】
本発明の第４および第５の態様の両者のさらなる実施例において、その方法またはその使用は、本発明の第１の態様に適用できるものと同じ任意で好ましい特徴を有する。
【００７０】
本発明の使用について、６−β−ナルトレキソールまたはその類似体あるいはいずれかの薬学的に許容される塩を含む医薬組成物が提供される。その医薬組成物は、経口水溶液、カプレット、カプセル、注射剤、不溶解性剤、座薬、トローチ剤または錠剤として提供されうる。特定の実施例において、その医薬組成物は、経口投与型、具体的には錠剤として提供される。
【００７１】
本明細書で使用されるように、用語「医薬組成物」は、例えば、特定の量、例えば治療有効量の治療化合物または複数の化合物を、疾患を治療するためにヒトなどの哺乳類に投与される薬学的に許容される担体中に含む混合物を意味する。
【００７２】
本明細書で使用されるように、用語「薬学的に許容される」は、化合物、材料、組成物および／または剤形を指し、医学的良識の範囲内で、哺乳類、特にヒトの組織、と接触をするのに適しており、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応および他の問題となる合併症を伴わず、妥当な利益／リスク率を示すものである。
【００７３】
用語製剤は、固形剤形を提供する担体としての被包材料を有する活性成分（複数含む）の混合物を含むことを意図し、活性化合物は（他の担体の有無に関わらず）担体によって
囲まれるので、担体は従って製剤に関連する。同様に、カシェーが含まれる。錠剤、散剤、カシェーおよびカプセル剤を経口投与に適した固形剤形として使用することができる。
【００７４】
医薬製剤は、単位剤形であることができる。そのような剤形においては、組成物は、適切な量の活性成分（複数含む）を含む複数の単位投与量に分割される。単位剤形は、包装された製剤であることができ、包装は、例えば小瓶またはアンプル内に小包された錠剤、カプセル剤および散剤等の、別々の量の製剤を含む。単位剤形は、カプセル剤、カシェーまたは錠剤自体であることもでき、または適切な数の任意のこれらの包装された形であることができる。
【００７５】
１つの実施例において、６−β−ナルトレキソール産物は、本発明の組成物において治療有効量の６−β−ナルトレキソールを含む固形経口剤形で利用され、例えば、錠剤あたり約０．０１〜５０ｍｇ、好ましくは約０．０１〜４０ｍｇ、最も好ましくは約０．０１〜２０ｍｇの６−β−ナルトレキソール産物であってもよく、錠剤あたり約０．０１ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇまたは約５０ｍｇの６−β−ナルトレキソール産物であってもよい。特定の実施例において、組成物は、もしあれば、６−β−ナルトレキソール産物の分解を説明する適切な投与量の６−β−ナルトレキソール産物を含む。特定の実施例において、組成物は３〜４．５ｍｇの６−β−ナルトレキソール産物を含む。
【００７６】
医薬組成物は、６−β−ナルトレキソール産物と薬学的に許容される賦形剤の組み合わせの混合物として提供されてもよい。本明細書において使用されるように、用語「賦形剤」は、固形経口投与製剤を調製するための製薬技術において共通して使用される薬学的に許容される成分を指す。賦形剤の分類の例は、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、滑剤、安定剤、フィラーおよび希釈剤を含むが、これに限定されない。使用される各賦形剤の量は、当該技術分野において通常の範囲内で変動しうる。全て参照により本明細書に組み入れられる以下の参考文献は、経口剤形を処方するために使用される技術および賦形剤を開示する。Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，  ４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  （２００３）；  ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：    ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ
ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  ２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｅｄ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  （２０００）を参照する。
【００７７】
適切な賦形剤は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、ラクトース一水和物、糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガント、結晶セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、コーンスターチ、コロイド性無水シリカ、二酸化チタン、低融点ワックス、カカオバター等を含む。
【００７８】
他の実施例において、医薬組成物は、少なくとも１つの賦形剤を含む。
【００７９】
本発明を以下の非限定的な実施例により説明する。
【実施例】
【００８０】
実施例１
６−β−ナルトレキソールを投与した後のＢＡＤの発現レベルの測定
ＢＡＤ、ｐＡＫＴ、ｐ２１、サイクリンＢ１およびＣＤＫ１の発現レベルに対する６−β−ナルトレキソールまたはナルトレキソンの効果を測定するために、ＨＣＴ１１６大腸
がん細胞を６−ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェル濃度で播種して、一晩付着させた。次に細胞を１０ｎＭまたは１０μＭの濃度でのナルトレキソンまたは６−β−ナルトレキソールの存在下さらに４８時間培養した。次に細胞を収集してＢＡＤ、またはｐＡＫＴ、ｐ２１、サイクリンＢ１およびＣＤＫ１を測定するために標準的な免疫ブロット法を使用して処理した。
【００８１】
結果から、１０μＭの６−β−ナルトレキソールはＢＡＤの発現レベルがＨＣＴ１１６細胞で１０％より大きく増加したが、両方の濃度のナルトレキソン及び１０ｎＭの６−β−ナルトレキソールはＢＡＤの発現レベルに対して無視できる効果しか有さないことが示された。
【００８２】
実施例２
ＢＡＤ発現レベルが増加すると抗がん剤の効果がブーストされる
６−β−ナルトレキソールと他の化学療法薬を組み合わせた影響を、細胞を２つの治療期を含む治療スケジュールに従って培養することにより試験した。第１期は、他の薬剤でさらに４８時間治療する前に、１０ｎＭの６−β−ナルトレキソールまたは１０μＭの６−β−ナルトレキソールで４８時間刺激するステップを含む。Ａ５４９およびＨＣＴ１１６を６−ウェルプレートに２×１０５細胞／ウェル濃度で播種して、一晩付着させた。４８時間後に培地を除去して、細胞を薬剤フリーな培地で穏やかにすすいだ。ゲムシタビン（ＧＥＭ）またはオキサリプラチン（ＯＸＰ）を含有する新鮮な培養液を次に細胞に加えた。使用される化学療法薬濃度は、これまでに確立しているように、約１／４  ＩＣ５０とした（Ｌｉｕ  ＷＭ，  Ｆｏｗｌｅｒ  ＤＷ，  Ｓｍｉｔｈ  Ｐ，  Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ  ＡＧ．  Ｐｒｅ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃａｎ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｕｍｏｕｒｓ  ｂｙ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ａｄａｐｔｉｖｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１０  Ｊａｎ  ５；１０２（１）：１１５−２３．  ｄｏｉ：  １０．１０３８／ｓｊ．ｂｊｃ．６６０５４６５．）。次に細胞をさらに４８時間放置し、その後、生細胞と死細胞を判別する方法としてトリパンブルー色素を使用する細胞計数によって細胞数または生存率を評価した。細胞数が減少したが、細胞生存率には関連する減少がなかったことから細胞分裂停止が示された。
【００８３】
実験から、６−β−ナルトレキソールをＢＡＤの発現レベルが少なくとも１０％上昇するのに効果的な量で加えるとき、両者の化学療法薬の細胞毒性効果を増加することが示される。この効果は、６−β−ナルトレキソールを単独で投与することに起因する細胞毒性を独立に増加させることなく観察された（図２ｃとｄ、１０ｎＭの６ＢＮ−０または１０μＭの６ＢＮ−０）。さらに、ＢＡＤの発現レベルがさらに大きく増加するとき（すなわち、大用量の６−β−ナルトレキソールを投与することによる）、細胞毒性効果は大きく増強される。
【００８４】
従って、実験から、ＢＡＤの発現を増加する薬剤は特定の抗がん剤の治療有効性を増強することができることが示される。
【００８５】
実施例３
がん細胞株に対する６ＢＮの効果の測定
Ａ５４９およびＨＣＴ１１６細胞に実行されたものと同様の実験を乳がん細胞株ＭＣＦ−７においても完了させて、ウェスタンブロット法によりタンパク質発現に対する６ＢＮの効果を評価し、結果から６ＢＮはアポトーシス促進タンパク質ＢＡＤの発現を用量依存的に増加することが示された（図３）。６ＢＮを化学療法薬ゲムシタビンまたはオキサリプラチンと組み合わせた効果を、ＭＣＦ−７細胞に対して６ＢＮ（１０ｎＭまたは１０ｕ
Ｍ）をゲムシタビン（０．５ｕＭ）またはオキサリプラチン（０．５ｕＭ）と同時に培養することにより試験した。次に細胞数および生存率を４８時間後に生／死細胞を判別する手段としてトリパンブルー色素排除を使用して評価した。結果から、１０ｕＭの６ＢＮを任意の化学療法と組み合わせると細胞生存率に最大の効果が生じることが示された（図４）。
【図１ａ】
2020515649.tif 000003
【図１ｂ】
2020515649.tif 000004
【図２ａ】
2020515649.tif 000005
【図２ｂ】
2020515649.tif 000006
【図３】
2020515649.tif 000007
【図４】
2020515649.tif 000008
【国際調査報告】
2020515649.tif 000009
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