(57)【要約】  巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法が本明細書で提供され、前述の方法は、治療有効量のＣＣＲ２アンタゴニストを、それを必要としている被験者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、単剤療法で使用される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、併用療法で使用される。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、ＲＡＡＳ遮断剤及び／又はエンドセリン受容体阻害剤である。【選択図】図４Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法であって、治療有効量のＣＣＲ２アンタゴニストを、それを必要とする被験者に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストが、式Ｉの化合物、
【化１】
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又はその製薬上許容できる形態であり、式中、
Ｒ１及びＲ２が各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、ＣＮ、又はＣ１〜８ハロアルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ１又はＲ２のうちの少なくとも１つが、水素以外であることを条件とし、
Ｒ５が、ハロゲン又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｒ６が、水素又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｘ１及びＸ２が各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、又はＮＯであり、
Ｘ４が、Ｎ又はＮＯであり、
Ｘ３が、ＣＲ７であり、
Ｘ６及びＸ７が各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、及びＮＯから選択され、
Ｒ７が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０ＣＯ２Ｒ８、−ＳＲ８、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０が独立して、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、アリール、若しくはヘテロアリールからなる群から選択されるか、又はＲ９及びＲ８若しくはＲ１０及びＲ８が、それらが付着している原子（複数可）と一緒になって、５、６、又は７員環を形成し、
Ｒ１１が、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員複素環からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式Ｉの前記化合物が、式ＩＩの構造、
【化２】
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又はその製薬上許容できる形態、を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１及びＲ２が各々独立して、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、又はＣ１〜８ハロアルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ１又はＲ２のうちの少なくとも１つが、水素以外であることを条件とし、
Ｒ５が、ハロゲン又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｘ２が、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ８、及び−ＮＲ９Ｒ８からなる群から選択され、
Ｒ１１が、水素又はＣ１〜８アルキルである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１が、ハロゲンであり、
Ｒ２が、Ｃ１〜８ハロアルキルであり、
Ｒ５が、Ｃ１〜８アルキルであり、
Ｘ２が、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１１が、水素又はＣ１〜８アルキルである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
Ｒ１が、クロロであり、
Ｒ２が、トリフルオロメチルであり、
Ｒ５が、メチルであり、
Ｘ２が、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７が独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１１が、水素又はＣ１〜８アルキルである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
式ＩＩの前記化合物が、化合物１の構造、
【化３】
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又はその製薬上許容できる形態、を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
式ＩＩの前記化合物が、化合物２の構造、
【化４】
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又はその製薬上許容できる形態、を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストが、毎日投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストの、それを必要としている前記被験者への投与が、前記被験者における尿アルブミン対クレアチニン比を低減する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記被験者における前記尿アルブミン対クレアチニン比が、処置前の前記被験者における前記アルブミン対クレアチニン比と比較して、前記ＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも２０％低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記被験者における前記尿アルブミン対クレアチニン比が、処置前の前記被験者における前記アルブミン対クレアチニン比と比較して、前記ＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも３０％低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験者における前記尿アルブミン対クレアチニン比が、処置前の前記被験者における前記アルブミン対クレアチニン比と比較して、前記ＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも４０％低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記被験者における前記尿アルブミン対クレアチニン比が、処置前の前記被験者における前記アルブミン対クレアチニン比と比較して、前記ＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも５０％低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記被験者における前記尿アルブミン対クレアチニン比が、処置前の前記被験者における前記アルブミン対クレアチニン比と比較して、前記ＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも６０％低減される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストが、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストが、単剤療法として投与される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＣＲ２アンタゴニストが、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記追加の治療薬が、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断剤である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＲＡＡＳ遮断剤が、レニン阻害剤である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記レニン阻害剤が、アリスキレン、レミキレン、Ｈ−１４２、ＳＰＰ６３５、ＳＰＰ１１４８、ＳＰＰ６７６、及びＳＰＰ１２３４からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＲＡＡＳ遮断剤が、ＡＣＥ阻害剤である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＡＣＥ阻害剤が、エンアゼプリル、カプトプリル、エナラプリル、フォシノプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ランピプリル（Rampipril）、及びトランドラプリルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＲＡＡＳ遮断剤が、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＡＲＢが、スパルセンタン、エプロサルタン、カンデサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、バルサルタン、ＣＧＰ−４２１１２Ａ、ＤｕＰ７５３、サララシン、及びサルトランからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＡＲＢが、エプロサルタン、カンデサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、バルサルタン、ＣＧＰ−４２１１２Ａ、ＤｕＰ７５３、サララシン、及びサルトランからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＡＲＢが、カンデサルタンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記追加の治療薬が、エンドセリン受容体アンタゴニストである、請求項１８〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記エンドセリン受容体アンタゴニストが、スパルセンタン、ボセンタン、マシテンタン、アンブリセンタン、シタゼンタン、アプロシテンタン、及びアルタセンタン（artasentan）からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記エンドセリン受容体アンタゴニストが、スパルセンタンである、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、２０１７年１０月１１日出願の米国特許仮出願第６２／５７０，７７８号の利益を主張する出願であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けてなされた発明に対する権利の記載
【０００２】
該当なし
コンパクトディスクにより提出された、「配列表」、表、又はコンピュータープログラムリストの付録への参照
【０００３】
該当なし
【背景技術】
【０００４】
巣状分節性糸球体硬化症（focal segmental glomerulosclerosis、ＦＳＧＳ）は、顕著なタンパク尿、ネフローゼ症候群、進行性腎不全、及び組織病理学上の特徴的な糸球体病変を示す、まれな疾患群を含む。ＦＳＧＳを有する患者のための現在の標準治療としては、グルココルチコイド、続いて必要に応じて、グルココルチコイドに対する不耐性又は不十分な応答に対するカルシニューリン阻害剤等の免疫抑制薬が挙げられる。レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（renin-angiotensin-aldosterone、ＲＡＡＳ）遮断剤もまた、ＦＳＧＳの重要な特徴であるタンパク尿を制御するために使用される。しかしながら、既存の治療は、わずかしか成功していない。最良の治療にもかかわらず、治療の失敗は一般的であり、ＦＳＧＳは、かなりの割合の末期腎疾患における原因となる。したがって、ＦＳＧＳの新規の疾患修飾治療に対する満たされていないニーズが存在する。
【発明の概要】
【０００５】
巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法が本明細書で提供され、前述の方法は、治療有効量のＣＣＲ２アンタゴニストを、それを必要とする被験者に投与することを含む。
【０００６】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、式Ｉの化合物、
【化１】
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又はその製薬上許容できる形態であり、式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、ＣＮ、又はＣ１〜８ハロアルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ１又はＲ２のうちの少なくとも１つが、水素以外であることを条件とし、
Ｒ５は、ハロゲン又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｒ６は、水素又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｘ１及びＸ２は各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、又はＮＯであり、
Ｘ４は、Ｎ又はＮＯであり、
Ｘ３は、ＣＲ７であり、
Ｘ６及びＸ７は各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、及びＮＯから選択され、
Ｒ７は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０ＣＯ２Ｒ８、−ＳＲ８、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立して、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、アリール、若しくはヘテロアリールからなる群から選択されるか、又はＲ９及びＲ８若しくはＲ１０及びＲ８は、それらが付着している原子（複数可）と一緒になって、５、６、又は７員環を形成し、
Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員複素環からなる群から選択される。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、式ＩＩの化合物である。
【化２】
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【０００８】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、追加の治療薬と組み合わせて投与される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】化合物１の滴定及びＷＥＨＩ細胞への放射標識ｍＪＥ結合の阻害を示す。方法に記載されるように、化合物１を示された濃度で添加し、マウスＣＣＬ２（ＪＥ）の細胞への結合と競合させた。ＩＣ５０を２７０ｎＭと決定した。
【図２】マウスにおける化合物１の薬物動態プロファイルを示す。化合物１を、皮下注射によって投与し、血中濃度を決定した。３０ｍｇ／ｋｇ（黒丸）及び９０ｍｇ／ｋｇ（黒正方形）の測定レベルが示される。
【図３Ａ】化合物１は、アドリアマイシンを攻撃接種したマウスにおける腎機能を改善する。方法に記載されるように、マウスにアドリアマイシンを攻撃接種した。アドリアマイシン攻撃接種の１時間前に試験化合物処置を開始した。尿を、方法に記載されるように、示された時点（Ａ、１週目、Ｂ、２週目）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。血清クレアチニン（Ｃ）及びＢＵＮ（Ｄ）を、２週間の処置後に終末出血の時点で測定した。エラーバーは、標準誤差を表す。１週目にＮ＝１０／群、及び２週目にＮ＝８。
【図３Ｂ】化合物１は、アドリアマイシンを攻撃接種したマウスにおける腎機能を改善する。方法に記載されるように、マウスにアドリアマイシンを攻撃接種した。アドリアマイシン攻撃接種の１時間前に試験化合物処置を開始した。尿を、方法に記載されるように、示された時点（Ａ、１週目、Ｂ、２週目）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。血清クレアチニン（Ｃ）及びＢＵＮ（Ｄ）を、２週間の処置後に終末出血の時点で測定した。エラーバーは、標準誤差を表す。１週目にＮ＝１０／群、及び２週目にＮ＝８。
【図３Ｃ】化合物１は、アドリアマイシンを攻撃接種したマウスにおける腎機能を改善する。方法に記載されるように、マウスにアドリアマイシンを攻撃接種した。アドリアマイシン攻撃接種の１時間前に試験化合物処置を開始した。尿を、方法に記載されるように、示された時点（Ａ、１週目、Ｂ、２週目）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。血清クレアチニン（Ｃ）及びＢＵＮ（Ｄ）を、２週間の処置後に終末出血の時点で測定した。エラーバーは、標準誤差を表す。１週目にＮ＝１０／群、及び２週目にＮ＝８。
【図３Ｄ】化合物１は、アドリアマイシンを攻撃接種したマウスにおける腎機能を改善する。方法に記載されるように、マウスにアドリアマイシンを攻撃接種した。アドリアマイシン攻撃接種の１時間前に試験化合物処置を開始した。尿を、方法に記載されるように、示された時点（Ａ、１週目、Ｂ、２週目）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。血清クレアチニン（Ｃ）及びＢＵＮ（Ｄ）を、２週間の処置後に終末出血の時点で測定した。エラーバーは、標準誤差を表す。１週目にＮ＝１０／群、及び２週目にＮ＝８。
【図４Ａ】化合物１は、部分腎摘出マウスにおける腎機能を改善する。マウスは、方法に記載されるように、５／６腎摘出を受けた。手術の３週間後、マウスを、４週間の研究期間にわたって上記に示された群に無作為化した。尿を、方法に記載されるように、１週目（Ａ）及び３週目（Ｂ）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｐ＜０．０５：＊、Ｐ＜０．０１：＊＊、Ｐ＜０．００１：＊＊＊、ビヒクルと比較したＰ値、Ｐ＜０．０１：＃＃  ＲＡＡＳｂと比較したＰ値
【図４Ｂ】化合物１は、部分腎摘出マウスにおける腎機能を改善する。マウスは、方法に記載されるように、５／６腎摘出を受けた。手術の３週間後、マウスを、４週間の研究期間にわたって上記に示された群に無作為化した。尿を、方法に記載されるように、１週目（Ａ）及び３週目（Ｂ）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｐ＜０．０５：＊、Ｐ＜０．０１：＊＊、Ｐ＜０．００１：＊＊＊、ビヒクルと比較したＰ値、Ｐ＜０．０１：＃＃  ＲＡＡＳｂと比較したＰ値
【図５Ａ】化合物１は、部分腎摘出マウスにおける血清クレアチニン（Ａ）及びＢＵＮ（Ｂ）の上昇を軽減する。４週目の時点で測定を行った。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｐ＜０．０５：＊、Ｐ＜０．０１：＊＊、ビヒクルと比較したＰ値。
【図５Ｂ】化合物１は、部分腎摘出マウスにおける血清クレアチニン（Ａ）及びＢＵＮ（Ｂ）の上昇を軽減する。４週目の時点で測定を行った。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｐ＜０．０５：＊、Ｐ＜０．０１：＊＊、ビヒクルと比較したＰ値。
【図６Ａ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。方法に記載されるように、処置が開始された５週間後、腎臓を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、１００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、管状崩壊を示し、黒矢じりは、管状拡張を示す。
【図６Ｂ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。方法に記載されるように、処置が開始された５週間後、腎臓を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、１００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、管状崩壊を示し、黒矢じりは、管状拡張を示す。
【図６Ｃ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。方法に記載されるように、処置が開始された５週間後、腎臓を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、１００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、管状崩壊を示し、黒矢じりは、管状拡張を示す。
【図６Ｄ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。方法に記載されるように、処置が開始された５週間後、腎臓を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、１００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、管状崩壊を示し、黒矢じりは、管状拡張を示す。
【図７Ａ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、４００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、糸球体硬化症を示し、黒矢じりは、メサンギウム拡大を示す。
【図７Ｂ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、４００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、糸球体硬化症を示し、黒矢じりは、メサンギウム拡大を示す。
【図７Ｃ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、４００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、糸球体硬化症を示し、黒矢じりは、メサンギウム拡大を示す。
【図７Ｄ】５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析。方法に記載されるように、処置開始の５週間後、腎臓（８匹の動物／処置群）を採取し、固定及び染色した。ビヒクル処置がパネルＡに示され、化合物１処置がパネルＢに示され、ＲＡＡＳ遮断剤がパネルＣに示され、化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤の組み合わせがパネルＤに示される。倍率は、４００倍である。黒いサイクルは、ヒアリン沈着物の領域を示し、黒い矢印は、糸球体硬化症を示し、黒矢じりは、メサンギウム拡大を示す。
【図８Ａ】５／６腎摘出モデルにおけるＣＣＲ２、ＲＡＡＳ、及びエンドセリン受容体遮断物の相対的有効性。マウスは、方法に記載されるように、５／６腎摘出を受けた。手術の３週間後、マウスを、４週間の研究期間にわたって示された群に無作為化した。尿を、方法に記載されるように、１週目（Ａ）及び４週目（Ｂ）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｎ＝１０／群。
【図８Ｂ】５／６腎摘出モデルにおけるＣＣＲ２、ＲＡＡＳ、及びエンドセリン受容体遮断物の相対的有効性。マウスは、方法に記載されるように、５／６腎摘出を受けた。手術の３週間後、マウスを、４週間の研究期間にわたって示された群に無作為化した。尿を、方法に記載されるように、１週目（Ａ）及び４週目（Ｂ）におけるアルブミン及びクレアチニンの測定のために採取した。エラーバーは、標準誤差を表す。Ｎ＝１０／群。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
Ｉ．一般
ＣＣＲ２アンタゴニストを使用して、巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法が本明細書で提供される。ＣＣＲ２アンタゴニストは、単剤療法として、又は組み合わせて投与されてもよい。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、単剤療法として投与される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、エンドセリン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断剤及びエンドセリン受容体アンタゴニストと組み合わせて投与される。
【００１１】
ＩＩ．定義
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、別途記載のない限り、指定される炭素原子数（即ち、Ｃ１〜８は、１〜８個の炭素を意味する）を有する直鎖又は分枝鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル等が挙げられる。「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する不飽和アルキル基を指す。同様に、「アルキニル」という用語は、１つ以上の三重結合を有する不飽和アルキル基を指す。そのような不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−及び３−プロピニル、３−ブチニル、並びに高級相同体及び異性体が挙げられる。「シクロアルキル」という用語は、示された環原子数（例えば、Ｃ３〜６シクロアルキル）を有し、完全に飽和しているか、又は環頂点間に１つを超えない二重結合を有する炭化水素環を指す。「シクロアルキル」はまた、例えば、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン等の二環式及び多環式炭化水素環を指すことも意図される。「ヘテロシクロアルカン」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「ヘテロシクリル」という用語は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜５個のヘテロ原子を含有するシクロアルキル基を指し、窒素及び硫黄原子は、任意に酸化され、窒素原子（複数可）は、任意に四級化される。ヘテロシクロアルカンは、単環式、二環式、又は多環式環系であってもよい。ヘテロシクロアルカン基の非限定的な例としては、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ブチロラクタム、バレロラクタム、イミダゾリジノン、ヒダントイン、ジオキソラン、フタルイミド、ピペリジン、１，４−ジオキサン、モルホリン、チオモルホリン、チオモルホリン−Ｓ−オキシド、チオモルホリン−Ｓ，Ｓ−オキシド、ピペラジン、ピラン、ピリドン、３−ピロリン、チオピラン、ピロン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、キヌクリジン等が挙げられる。ヘテロシクロアルカン基は、環炭素又はヘテロ原子を通して分子の残りの部分に付着することができる。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「アルキレン」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−によって例示されるように、アルカンから誘導される二価ラジカルを意味する。典型的には、アルキル（又はアルキレン）基は、１〜２４個の炭素原子を有し、１０個以下の炭素原子を有する基が、本開示において好ましい。「低級アルキル」又は「低級アルキレン」は、一般に４個以下の炭素原子を有する短鎖アルキル又はアルキレン基である。同様に、「アルケニレン」及び「アルキニレン」は、それぞれ、二重結合又は三重結合を有する「アルキレン」の不飽和形態を指す。「ヘテロアルキレン」という用語は、１個又は２個の炭素原子がＮ、Ｏ、又はＳによって置き換えられているアルキレン基を指す。
【００１３】
本明細書で使用される場合、本明細書に示される任意の化学構造において単一、二重、又は三重結合を交差する波線
【化３】
2020536919.tif 000005
は、分子の残りの部分への単一、二重、又は三重結合の点付着を表す。
【００１４】
本明細書で使用される場合、「ハロ」又は「ハロゲン」という用語は、それ自体又は別の置換基の一部として、別途記載のない限り、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を意味する。加えて、「ハロアルキル」及び「ハロアルコキシ」等の用語は、それぞれ、アルキル及びアルコキシのモノハロ及びポリハロバージョンを含むことが意図される。例えば、「Ｃ１〜４ハロアルキル」という用語は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピル等を含むことが意図される。
【００１５】
本明細書で使用される場合、「アリール」又は「芳香環」という用語は、別途記載のない限り、一緒に縮合又は共有結合した単一の環又は複数の環（最大３つの環）であり得る多価不飽和、典型的には芳香族の炭化水素基を意味する。同様に、「ヘテロアリール」及び「ヘテロ芳香環」という用語は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１〜５個のヘテロ原子を含有するアリール基（又は環）を指し、窒素及び硫黄原子は、任意に酸化され、窒素原子（複数可）は、任意に四級化される。ヘテロアリール基又はヘテロ芳香環は、ヘテロ原子を通して分子の残りの部分に付着することができる。アリール基の非限定的な例としては、フェニル、ナフチル及びビフェニルが挙げられる一方で、ヘテロアリール基の非限定的な例としては、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニル、キノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シノリニル、フタラジニル、ベンゾトリアジニル、プリニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、イソベンゾフリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンゾトリアジニル、チエノピリジニル、チエノピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、イミダゾピリジン、ベンゾチアキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、インドリル、キノリル、イソキノリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、インダゾリル、プテリジニル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、ピロリル、チアゾリル、フリル、チエニル等が挙げられる。上記のアリール及びヘテロアリール環系の各々の置換基は、以下に記載される許容可能な置換基の群から選択される。
【００１６】
本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」という用語は、酸素（oxygen、Ｏ）、窒素（nitrogen、Ｎ）、硫黄（sulfur、Ｓ）、及びケイ素（silicon、Ｓｉ）を含むことが意図される。
【００１７】
本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、二重結合酸素（＝Ｏ）を指す。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「製薬上許容できる塩」という用語は、本明細書に記載の化合物上で見られる特定の置換基に応じて、比較的非毒性の酸又は塩基で調製される活性化合物の塩を含むことが意図される。本開示の化合物が比較的酸性の官能基を含有する場合、塩基付加塩は、そのような化合物の中性形態を、好適な不活性溶媒の近く、又はその中のいずれかで、十分な量の所望の塩基と接触させることによって得られ得る。製薬上許容できる無機塩基由来の塩の例としては、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、マンガン（manganic）、マンガン（manganous）、カリウム、ナトリウム、亜鉛等が挙げられる。製薬上許容できる有機塩基由来の塩としては、一級、二級、及び三級アミンの塩が挙げられ、置換アミン、環状アミン、天然に存在するアミン等、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ν，Ν’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等が挙げられる。本開示の化合物が比較的塩基性の官能基を含有する場合、酸付加塩は、そのような化合物の中性形態を、好適な不活性溶媒の近く、又はその中のいずれかで、十分な量の所望の酸と接触させることによって得られ得る。製薬上許容できる酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、又は亜リン酸等の無機酸由来のもの、並びに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸等の比較的非毒性の有機酸由来の塩が挙げられる。また、アルギニン酸塩等のアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸（galactunoric acid）等の有機酸の塩も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７７，６６，１−１９を参照されたい）。本開示のある特定の具体的な化合物は、塩基性及び酸性官能基の両方を含有し、これらは、化合物が塩基又は酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする。
【００１９】
化合物の中性形態は、塩を塩基又は酸と接触させ、親化合物を従来の方法で単離することによって再生され得る。化合物の親形態は、極性溶媒への溶解度等のある特定の物理的特性において様々な塩形態とは異なるが、他の方法では、塩は、本開示の目的のために化合物の親形態と同等である。
【００２０】
塩形態に加えて、本開示は、プロドラッグ形態である化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、本開示の化合物を提供するために、生理学的条件下で化学的変化を容易に受ける化合物である。加えて、プロドラッグは、生体外環境において化学的又は生化学的方法によって本開示の化合物に変換され得る。例えば、プロドラッグは、好適な酵素又は化学試薬と経皮パッチリザーバ内に配置されたときに、本開示の化合物にゆっくりと変換され得る。
【００２１】
本開示のある特定の化合物は、非溶媒和形態、並びに水和形態を含む溶媒和形態で存在し得る。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本開示の範囲内に包含されるよう意図される。本開示のある特定の化合物は、多数の結晶又は非晶質形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態は、本開示によって企図される用途に対して同等であり、本開示の範囲内であるよう意図される。
【００２２】
本開示のある特定の化合物は、非対称炭素原子（光学中心）又は二重結合を有し、ラセミ化合物、ジアステレオマー、幾何異性体、位置異性体、及び個々の異性体（例えば、別々のエナンチオマー）は全て、本開示の範囲内に包含されるよう意図される。立体化学的描写が示される場合、異性体のうちの１つが存在し、かつ他の異性体を実質的に含まない化合物を指すことが意図される。別の異性体「を実質的に含まない」は、２つの異性体の少なくとも８０／２０の比、より好ましくは９０／１０、又は９５／５以上を示す。いくつかの実施形態では、異性体のうちの１つは、少なくとも９９％の量で存在する。
【００２３】
本開示の化合物はまた、そのような化合物を構成する原子のうちの１つ以上において、原子同位体の不自然な割合を含有してもよい。同位体の不自然な割合は、自然界に見られる量から、問題の原子の１００％を構成する量までの範囲として定義され得る。例えば、化合物は、例えば、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、若しくは炭素−１４（１４Ｃ）等の放射性同位体、又は重水素（２Ｈ）若しくは炭素−１３（１３Ｃ）等の非放射性同位体を組み込んでもよい。そのような同位体変動は、本出願の他の箇所に記載されているものに更なる有用性を提供することができる。例えば、本開示の化合物の同位体変異体は、診断及び／若しくは撮像試薬として、又は細胞毒性／放射毒性治療薬として挙げられるがこれらに限定されない、更なる有用性を見出し得る。加えて、本開示の化合物の同位体変種は、治療中の安全性、忍容性、又は有効性の向上に寄与し得る、変化した薬物動態学的及び薬力学的特徴を有することができる。本開示の化合物の全ての同位体変動は、放射性であるか否かにかかわらず、本開示の範囲内に包含されるよう意図される。重水素、即ち、２Ｈ等のより重い同位体による置換は、代謝安定性がより高い結果として得られる、ある特定の治療的利点をもたらし得る。例えば、インビボ半減期が増加し得るか、又は投与量の必要条件が低減され得る。
【００２４】
本明細書で使用される場合、「被験者」、「患者」、又は「個体」という用語は、ヒト又は動物を含むために本明細書において互換的に使用される。例えば、動物被験者は、哺乳動物、霊長類（例えば、サル）、家畜動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、若しくはヤギ）、コンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ）、実験質試験動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、トリ）、動物用動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、鳥類）、獣医学的に重要な動物、又は経済的に重要な動物であってもよい。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「尿アルブミン対クレアチニン比」という用語は、被験者の尿試料（例えば、尿アルブミン／尿クレアチニン）で測定されるようなアルブミン対クレアチニン比を指す。これは、腎臓が適切に機能しているとき、尿中にアルブミンがほとんど又は全く見られず、クレアチニンが通常、比較的一定の速度で尿に放出されるため、腎臓機能を判定するために使用される一般的な尺度である。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、研究者、獣医、医師、又は他の治療提供者によって求められている、細胞、組織、系、又はヒト等の動物の生物学的又は医学的応答を引き出す、対象化合物の量を意味する。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「選択的ＣＣＲ２アンタゴニスト」という用語は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＦＰＲＬ２、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、Ｃ３ａＲ、及び／又はＣ５ａＲ等の非標的タンパク質に対する交差反応性がほとんど又は全くない正常なＣＣＲ２活性を阻害する、高度に識別可能な化合物を指す。いくつかの実施形態では、「選択的ＣＣＲ２アンタゴニスト」は、本出願の実施例３に記載のアッセイタイプで測定される場合、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＦＰＲＬ２、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、Ｃ３ａＲ、及び／又はＣ５ａＲ等のタンパク質よりも少なくとも１０、１００、５００、１，０００、５，０００、１０，０００倍、又はそれ以上低いＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、「選択的ＣＣＲ２アンタゴニスト」は、本出願の実施例３に記載されるアッセイタイプにおいて１μΜ以下の濃度で、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＦＰＲＬ２、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、Ｃ３ａＲ、及び／又はＣ５ａＲの活性を阻害しない。上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の１００％、９９％、９５％、９０％、又は８５％を維持する場合、「阻害されない」と見なされる。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、指定された量で指定された成分を含む製品、並びに指定された量の指定された成分の組み合わせから直接的又は間接的に生じる任意の製品を包含するよう意図される。「製薬上許容できる」とは、担体、希釈剤、又は賦形剤が、製剤の他の成分と適合性がなければならず、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
ＩＩＩ．巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法
【００２９】
巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法が提供され、前述の方法は、治療有効量のＣＣＲ２アンタゴニストを、それを必要とする被験者に投与することを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、式Ｉの化合物、
【化４】
2020536919.tif 000006
又はその製薬上許容できる形態であり、式中、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、ＣＮ、又はＣ１〜８ハロアルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ１又はＲ２のうちの少なくとも１つが、水素以外であることを条件とし、
Ｒ５は、ハロゲン又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｒ６は、水素又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｘ１及びＸ２は各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、又はＮＯであり、
Ｘ４は、Ｎ又はＮＯであり、
Ｘ３は、ＣＲ７であり、
Ｘ６及びＸ７は各々独立して、ＣＲ７、Ｎ、及びＮＯから選択され、
Ｒ７は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、−ＣＮ、−ＮＯ２、ＯＲ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０ＣＯ２Ｒ８、−ＳＲ８、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ９Ｒ８、−ＮＲ１０Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員ヘテロシクリルからなる群から選択され、
各Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は独立して、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、アリール、若しくはヘテロアリールからなる群から選択されるか、又はＲ９及びＲ８若しくはＲ１０及びＲ８は、それらが付着している原子（複数可）と一緒になって、５、６、又は７員環を形成し、
Ｒ１１は、水素、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ２〜８アルケニル、Ｃ２〜８アルキニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、及び３〜１０員複素環からなる群から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物は、式ＩＩの構造、
【化５】
2020536919.tif 000007
又はその製薬上許容できる形態、を有する。
【００３２】
式ＩＩの化合物のいくつかの実施形態では、
Ｒ１及びＲ２は各々独立して、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、又はＣ１〜８ハロアルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ１又はＲ２のうちの少なくとも１つが、水素以外であることを条件とし、
Ｒ５は、ハロゲン又はＣ１〜８アルキルであり、
Ｘ２は、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキル、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ８、及び−ＮＲ９Ｒ８からなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素又はＣ１〜８アルキルである。
【００３３】
式ＩＩの化合物のいくつかの実施形態では、
Ｒ１は、ハロゲンであり、
Ｒ２は、Ｃ１〜８ハロアルキルであり、
Ｒ５は、Ｃ１〜８アルキルであり、
Ｘ２は、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素又はＣ１〜８アルキルである。
【００３４】
式ＩＩの化合物のいくつかの実施形態では、
Ｒ１は、クロロであり、
Ｒ２は、トリフルオロメチルであり、
Ｒ５は、メチルであり、
Ｘ２は、ＣＲ７又はＮであり、
Ｒ７は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１〜８アルキルからなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素又はＣ１〜８アルキルである。
【００３５】
いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物は、化合物１の構造、
【化６】
2020536919.tif 000008
又はその製薬上許容できる形態、を有する。
【００３６】
いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物は、化合物２の構造、
【化７】
2020536919.tif 000009
又はその製薬上許容できる形態、を有する。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストである。選択的ＣＣＲ２アンタゴニストは、他のケモカイン受容体との交差反応性をほとんど又は全く有しない高度に識別可能な化合物である。いくつかの実施形態では、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストは、本出願の実施例３に記載のアッセイタイプで測定される場合、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＦＰＲＬ２、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、Ｃ３ａＲ、及び／又はＣ５ａＲ等のタンパク質よりも少なくとも１０、１００、５００、１，０００、５，０００、１０，０００倍、又はそれ以上低いＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストは、本出願の実施例３に記載されるアッセイタイプにおいて１μΜ以下の濃度で、ＣＣＲ１、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＦＰＲＬ２、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、Ｃ３ａＲ、及び／又はＣ５ａＲの活性を阻害しない。上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の１００％、９９％、９５％、９０％、又は８５％を維持する場合、「阻害されない」と見なされる。いくつかの実施形態では、上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の１００％を維持する。いくつかの実施形態では、上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の９９％を維持する。いくつかの実施形態では、上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の９５％を維持する。いくつかの実施形態では、上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の９０％を維持する。いくつかの実施形態では、上記のタンパク質は、選択的ＣＣＲ２アンタゴニストを用いて参照された条件下で、それらの活性の８５％を維持する。
【００３８】
正常な腎臓機能を有する個体は、尿中にアルブミンをほとんど又は全く有しない。一方、クレアチニンは通常、一定速度で尿に放出される。したがって、被験者の尿中のアルブミン対クレアチニン比は、腎臓機能の測定基準として使用され得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストの、それを必要としている被験者への投与は、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比を低減する。
【００３９】
いくつかの実施形態では、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比はＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも２０％低減される。いくつかの実施形態では、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比はＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも３０％低減される。いくつかの実施形態では、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比はＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも４０％低減される。いくつかの実施形態では、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比はＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも５０％低減される。いくつかの実施形態では、前述の被験者における尿アルブミン対クレアチニン比はＣＣＲ２アンタゴニストを３週間投与した後に、少なくとも６０％低減される。
【００４０】
巣状分節性糸球体硬化症の治療又は予防において、適切な投与量レベルは一般に、１日当たり患者の体重１ｋｇ当たり約０．００１〜１００ｍｇであり、これは、単回又は複数回投与で投与され得る。好ましくは、投与量レベルは、１日当たり約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１日当たり約０．０５〜約１０ｍｇ／ｋｇである。好適な投与量レベルは、１日当たり約０．０１〜２５ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は１日当たり約０．１〜５ｍｇ／ｋｇであってもよい。この範囲内で、投与量は、１日当たり０．００５〜０．０５、０．０５〜０．５、０．５〜５．０、又は５．０〜５０ｍｇ／ｋｇであってもよい。経口投与の場合、組成物は、好ましくは、治療される患者に対する投与量の対症調整のために、１．０〜１０００ミリグラムの活性成分、特に１．０、５．０、１０．０、１５．０、２０．０、２５．０、５０．０、７５．０、１００．０、１５０．０、２００．０、２５０．０、３００．０、４００．０、５００．０、６００．０、７５０．０、８００．０、９００．０、及び１０００．０ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で提供される。化合物は、１日当たり１〜４回、好ましくは１日１回又は２回のレジメンで投与されてもよい。いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２アンタゴニストは、毎日投与される。
【００４１】
しかしながら、任意の特定の患者に対する特定の投与量レベル及び投与頻度が変更されてもよく、用いられる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用の長さ、年齢、体重、遺伝的特徴、全体的な健康、性別、食事、投与方法及び時間、排泄速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、並びに療法を受けている宿主を含む様々な要因に依存することが理解されるであろう。
ＩＶ．併用療法
【００４２】
いくつかの実施形態では、巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法は、本明細書に記載のＣＣＲ２アンタゴニストを併用療法の一部として投与することを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断剤である。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、エンドセリン受容体アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）遮断剤、及びエンドセリン受容体アンタゴニストである。
【００４４】
ＲＡＡＳ遮断剤としては、レニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、及びアンギオテンシン受容体遮断剤が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、ＲＡＡＳ遮断剤は、レニン阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡＡＳ遮断剤は、ＡＣＥ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡＡＳ遮断剤は、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）である。
【００４５】
いくつかの実施形態では、レニン阻害剤は、アリスキレン、レミキレン、Ｈ−１４２、ＳＰＰ６３５、ＳＰＰ１１４８、ＳＰＰ６７６、ＳＰＰ１２３４、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、ベナゼプリル（商品名Ｌｏｔｅｎｓｉｎ（登録商標））、カプトプリル（商品名Ｃａｐｏｔｅｎ（登録商標））、エナラプリル（商品名Ｖａｓｏｔｅｃ（登録商標））、フォシノプリル（商品名Ｍｏｎｏｐｒｉｌ（登録商標））、リシノプリル（商品名Ｐｒｉｎｉｖｉｌ（登録商標）、Ｚｅｓｔｒｉｌ（登録商標））、ペリンドプリル（商品名Ａｃｅｏｎ（登録商標））、キナプリル（商品名Ａｃｃｕｐｒｉｌ（登録商標））、ランピプリル（Ｒａｍｐｉｐｒｉｌ）（商品名Ａｌｔａｃｅ（登録商標））、トランドラプリル（商品名（Ｍａｖｉｋ（登録商標））、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００４７】
いくつかの実施形態では、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）は、エプロサルタン（商品名Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、カンデサルタン（商品名Ａｔａｃａｎｄ（登録商標））、イルベサルタン（商品名Ａｖａｐｒｏ（登録商標））、ロサルタン（商品名Ｃｏｚａａｒ（登録商標））、オルメサルタン（商品名Ｂｅｎｉｃａｒ（登録商標））、テルミサルタン（商品名Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、バルサルタン（商品名Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ＣＧＰ−４２１１２Ａ、ＤｕＰ７５３、サララシン、サルトラン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）は、スパルセンタン、エプロサルタン（商品名Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、カンデサルタン（商品名Ａｔａｃａｎｄ（登録商標））、イルベサルタン（商品名Ａｖａｐｒｏ（登録商標））、ロサルタン（商品名Ｃｏｚａａｒ（登録商標））、オルメサルタン（商品名Ｂｅｎｉｃａｒ（登録商標））、テルミサルタン（商品名Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、バルサルタン（商品名Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ＣＧＰ−４２１１２Ａ、ＤｕＰ７５３、サララシン、サルトラン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）は、スパルセンタンである。当業者であれば、スパルセンタンが、エンドセリン（Ａ型）受容体及びアンギオテンシンＩＩ受容体のための二重作用性受容体アンタゴニストであることを認識するであろう。
【００４８】
いくつかの実施形態では、エンドセリン受容体アンタゴニストは、スパルセンタン、ボセンタン、マシテンタン、アンブリセンタン、シタゼンタン、アプロシテンタン、及びアルタセンタン（artasentan）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、エンドセリン受容体アンタゴニストは、ボセンタン、マシテンタン、アンブリセンタン、シタゼンタン、アプロシテンタン、及びアルタセンタン（artasentan）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、エンドセリン受容体アンタゴニストは、スパルセンタンである。当業者であれば、スパルセンタンが、エンドセリン（Ａ型）受容体及びアンギオテンシンＩＩ受容体のための二重作用性受容体アンタゴニストであることを認識するであろう。
【００４９】
いくつかの実施形態では、追加の治療薬の量は、単独で投与される場合、治療量以下である。当業者であれば、「組み合わせ」が、治療における組み合わせを伴うことができる（即ち、２つ以上の薬物が混合物として、若しくは少なくとも同時に投与され得るか、又は異なる時間であるが、両方が同時に被験者の血流中にあるように被験者に導入され得る）ことを理解するであろう。加えて、本開示の組成物は、第２の治療レジメンの前又は後に投与されてもよい。
【００５０】
本開示のＣＣＲ２アンタゴニストの第２の活性成分に対する重量比は、変更されてもよく、各成分の有効量に依存する。一般に、各々の有効用量が使用される。
Ｖ．医薬組成物
【００５１】
本開示の化合物の投与のための医薬組成物は、簡便に単位剤形で提示されてもよく、薬剤の技術分野において周知の方法のいずれかによって調製され得る。全ての方法は、活性成分を、１つ以上の副成分を構成する担体と会合させる工程を含む。一般に、医薬組成物は、活性成分を液体担体若しくは微粉化固体担体又はその両方と均一かつ密接に会合させ、次いで、必要に応じて、生成物を所望の製剤に成形することによって調製される。医薬組成物において、活性物体化合物は、所望の効果をもたらすのに十分な量で含まれる。
【００５２】
活性成分を含有する医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ、トローチ剤、水性若しくは油性懸濁液、分散性粉末若しくは顆粒、米国特許第６，４５１，３３９号に記載されるエマルション及び自己乳化、硬カプセル、軟カプセル、又はシロップ剤若しくはエリキシル剤として、経口使用に好適な形態であってもよい。経口使用を目的とする組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野において既知の任意の方法に従って調製され得る。そのような組成物は、薬学的に上品かつ口当たりの良い調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤、及び防腐剤から選択される１つ以上の薬剤を含有してもよい。錠剤は、錠剤の製造に好適である他の非毒性の製薬上許容できる賦形剤と混合した活性成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、セルロース、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、グルコース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、リン酸カルシウム、又はリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；造粒剤及び崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、又はアルギン酸；結合剤、例えばＰＶＰ、セルロース、ＰＥＧ、デンプン、ゼラチン、又はアカシア、並びに潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、又はタルクであってもよい。錠剤は、コーティングされていなくてもよく、又は錠剤は、経腸的に若しくは別様に、胃腸管内での崩壊及び吸収を遅延させ、それにより、より長い期間にわたって持続作用を提供するための既知の技法でコーティングされてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリル等の時間遅延材料が用いられ得る。時間遅延材料はまた、米国特許第４，２５６，１０８号、同第４，１６６，４５２号、及び同第４，２６５，８７４号に記載される技法によってコーティングされて、制御放出のための浸透圧性治療錠剤を形成してもよい。
【００５３】
経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、若しくはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセル、又は活性成分が水若しくは油媒体、例えばピーナッツオイル、流動パラフィン、若しくはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセルとして提示されてもよい。加えて、エマルションは、油等の非水混和性成分と調製され、モノ−ジグリセリド、ＰＥＧエステル等の界面活性剤で安定化され得る。
【００５４】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合した活性物質を含有する。そのような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トトラガントガム、及びアラビアゴムであり、分散剤又は湿潤剤は、天然に存在するリン脂質、例えばレシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、又はモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール等のエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステル及びヘキシトールとの縮合生成物、又はエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステル及びヘキシトール無水物との縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリエチレンソルビタンであってもよい。水性懸濁液はまた、１つ以上の防腐剤、例えばエチル、又はｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、及びスクロース若しくはサッカリン等の１つ以上の甘味剤を含有してもよい。
【００５５】
油性懸濁液は、活性成分を植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油、若しくはココヤシ油中、又は流動パラフィン等の鉱油中に懸濁することによって製剤化され得る。油性懸濁液は、増粘剤、例えば蜜蝋、固形パラフィン、又はセチルアルコールを含有してもよい。上記のもの等の甘味剤、及び香味剤が、口当たりの良い経口調製物を提供するために添加され得る。これらの組成物は、アスコルビン酸等の抗酸化剤を添加することによって保存され得る。
【００５６】
水の添加による水性懸濁液の調製に好適な分散性粉末及び顆粒は、分散剤又は湿潤剤、懸濁化剤、及び１つ以上の防腐剤との混合物で活性成分を提供する。好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤は、既に上述したものによって例示される。追加の賦形剤、例えば甘味剤、香味剤、及び着色剤も存在してもよい。
【００５７】
本開示の医薬組成物はまた、水中油型エマルションの形態であってもよい。油相は、植物油、例えばオリーブ油若しくは落花生油、又は鉱油、例えば流動パラフィン、又はこれらの混合物であってもよい。好適な乳化剤は、天然に存在するガム、例えばアラビアゴム又はトラガントガム、天然に存在するリン脂質、例えば大豆、レシチン、並びに脂肪酸及びヘキシトール無水物由来のエステル又は部分エステル、例えばモノオレイン酸ソルビタン、並びに前述の部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンであってもよい。エマルションはまた、甘味剤及び香味剤を含有してもよい。
【００５８】
シロップ剤及びエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、又はスクロースと共に製剤化されてもよい。そのような製剤はまた、粘滑剤、防腐剤、並びに香味剤及び着色剤を含有してもよい。経口溶液は、例えば、シクロデキストリン、ＰＥＧ、及び界面活性剤と組み合わせて調製され得る。
【００５９】
医薬組成物は、滅菌注射用水性又は油脂性懸濁液の形態であってもよい。この懸濁液は、上述された好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤又は溶媒中の滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよい。用いられ得る許容できるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌固定油（sterile, axed oil）は、従来、溶媒又は懸濁媒体として用いられている。この目的のために、合成モノ−又はジグリセリドを含む任意の無菌性固定油が使用されてもよい。加えて、オレイン酸等の脂肪酸は、注射剤の調製において使用される。
【００６０】
本開示の化合物はまた、薬物の直腸投与のための座薬の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、通常の温度で固体であるが、直腸温度で液体であり、したがって直腸内で溶解して薬物を放出する、好適な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製され得る。そのような材料は、カカオバター及びポリエチレングリコールである。加えて、化合物は、溶液又は軟膏によって眼の送達を介して投与され得る。更に、対象化合物の経皮送達は、イオントフォレシスパッチ等によって達成され得る。
【００６１】
局所使用のために、本開示の化合物を含有するクリーム、軟膏、ゼリー、溶液、又は懸濁液が用いられる。本明細書で使用される場合、局所適用はまた、うがい薬及び口内洗浄液の使用を含むことが意図される。
【００６２】
本開示の医薬組成物及び方法は、上記の病的状態の治療に適用されるもの等、本明細書に記載される他の治療効果のある化合物を更に含んでもよい。
【００６３】
一実施形態では、本開示は、製薬上許容できる担体及び本開示の化合物からなる組成物を提供する。
ＶＩ．キット
【００６４】
また、本明細書では、式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物の医薬組成物を含み、併用療法のためのキットを含む、キットも提供される。
【００６５】
いくつかの態様では、本発明は、式ＩＩの化合物を含むキット又は式ＩＩの化合物を提供する。本明細書に記載のキットのいくつかは、式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物を投与する方法を記載するラベルを含む。本明細書に記載のキットのいくつかは、１つ以上（（例えば、１、２、３、１〜２、又は１〜３個）の追加の治療薬と組み合わせて、式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物を投与する方法を記載するラベルを含む。本明細書に記載のキットのいくつかは、巣状分節性糸球体硬化症を治療する方法を記載するラベルを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキットは、尿アルブミン排泄を低減する方法を記載するラベルを含む。
【００６６】
化合物を含有する１つ以上の投与量を提供し得る、瓶、広口瓶、バイアル瓶、アンプル、チューブ、又は米国食品医薬品局（United States Food and Drug Administration、ＦＤＡ）若しくは他の規制機関によって承認された他の容器栓システム内に、化合物１及び化合物２を含む組成物を含むがこれらに限定されない、本発明の組成物。パッケージ又はディスペンサはまた、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定される形態で容器に関連付けられた注意書きを伴ってもよく、注意書きは、機関による承認を示す。ある特定の態様では、キットは、本明細書に記載の製剤又は組成物、製剤又は製剤を含む投薬単位形態を含む容器栓システム、及び本明細書に記載の使用方法を記載する注意書き又は指示書を含んでもよい。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例は、例示目的のために提供され、いかなる方法によっても本発明を限定することを意図するものではない。当業者は、本質的に同じ結果を得るように変更又は修正され得る様々な重要ではないパラメータを容易に認識するであろう。
材料及び方法
細胞及び試薬
【００６８】
ＷＥＨＩ−２７４．１及びＴｈＰ１細胞は、ＡＴＣＣ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）からのものであった。ヒト単球及び好中球を、ＭＡＣＳ分離試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して健康なボランティア（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から単離した。ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘでＣＣＲ２アンタゴニスト化合物１を発見及び合成し、インビボでの使用のための製剤の時間まで乾燥粉末として保存した。化合物を、示された濃度での皮下（subcutaneous、ｓ．ｃ．）注射のために、水中１％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（hydroxylpropyl methylcellulose、ＨＰＭＣ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で製剤化した。カンデサルタン（ＡＫ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｕｎｉｏｎ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）及びそのビヒクルを、水中５ｍ／ｋｇで１日１回経口投与した。組み換えケモカインを、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から入手した。［１２５Ｉ］−ＣＣＬ２は、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）からのものであった。ヒト血漿及びマウス血漿は、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ（Ｈｉｃｋｓｖｉｌｌｅ，ＮＹ）からのものであった。
マウス
【００６９】
Ｂａｌｂ／ｃ、１２９ｓ、及び１２９Ｘ１／ＳｖＪマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から購入し、Ｇｕｉｄｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌに記載のガイドラインに従ってＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ動物施設に収容した。全ての研究は、ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。全ての動物研究を、「Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ」、番号ＣＣＸ１７６−２００８のプロトコル下で実施した。
マウス薬物動態（ＰＫ）研究
【００７０】
化合物１を、６及び１８ｍｇ／ｍＬの濃度のそれぞれの水中１％  ＨＰＭＣ中で製剤化した。投与群当たり５匹の雄１２９ｓマウスに、３０及び９０ｍｇ／ｋｇの化合物１を皮下注射した。投与後０．５、２、５、４、８、１２、及び２４時間において血液を採取した。化合物１の薬物レベルを、血漿試料を用いてＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘでＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析した。
アドリアマイシン誘発ＦＳＧＳモデル
【００７１】
これらの実験を、雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）を使用して実施した。マウスに、標準的な飼料を与え続け、水に自由にアクセスさせた。１０週齢で、７．５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシン（Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）又は生理食塩水（対照）を、イソフルラン麻酔動物の尾静脈を介して注射した（０日目）。化合物１及び／又はビヒクルを、１％  ＨＰＭＣ中で製剤化した９０ｍｇ／ｋｇで１日１回皮下投与した。ＲＡＡＳ遮断剤カンデサルタン（ＡＫ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｕｎｉｏｎ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）及びそのビヒクルを、水中で製剤化した５ｍ／ｋｇで１日１回経口投与した。全ての投与は、アドリアマイシン攻撃接種の２時間前に開始した。尿アルブミン及びクレアチニンの定量採集のために、マウスを代謝ケージに個々に収容した。
５／６腎摘出モデル
【００７２】
１２９Ｘ１／ＳｖＪバックグラウンドの５／６腎摘出マウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手し、ＪＡＸで手術を行った後にＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘで受け取った。イソフルラン麻酔下で、左腎臓質量の２分の３を５〜６週齢で除去した。次いで、７〜１０日後、右の片側腎摘出を実施した。マウスに標準的な飼料を供給し、水に自由にアクセスさせた。５／６腎摘出の３週間後、マウスをグループ分けして、各処置群における同様の開始ＵＡＥＲを確実にした。化合物１又はそのビヒクルを、１％  ＨＰＭＣ中で製剤化して１日１回皮下投与した。ＲＡＡＳ遮断剤カンデサルタン（ＡＫ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｕｎｉｏｎ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）及びそのビヒクルを、水中で製剤化した５ｍ／ｋｇで１日１回経口投与した。エンドセリン（Ａ型）受容体及びアンギオテンシンＩＩ受容体のための二重作用性受容体アンタゴニストであるスパルセンタン（Ｍｕｒｕｇｅｓａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００５）を、ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘで合成し、１％  ＨＰＭＣ中で製剤化した９０ｍｇ／ｋｇで１日２回経口投与した。尿アルブミン及びクレアチニンの定量採集のために、マウスを代謝ケージに個々に収容した。
生体外実験
【００７３】
走化性、カルシウム動員、及び放射性リガンド結合アッセイを、既に記載されているように実施した（Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ，２０１３、Ｗａｌｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，２０１０）。阻害値（ＩＣ５０）を、１部位競合モデルを用いた非線形回帰を使用して計算した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ，ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。走化性アッセイにおける効力の評価のためのＡ２値は、ケモカイン用量反応曲線を２倍右にシフトさせるのに必要なアンタゴニストの濃度を示す。化合物１の血漿濃度を、１００％マウス血清中の走化性アッセイで測定された効力で除算することによって、受容体結合指数（receptor engagement index、ＲＥＩ）を計算した。尿アルブミンを、ＥＬＩＳＡ（Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｓ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）によって測定した。尿及び血清クレアチニンは、ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘでＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって測定した。尿アルブミン排泄速度（urinary albumin excretion rate、ＵＡＥＲ）を２４時間当たりのマイクログラムとして計算した。血中尿素窒素（blood urea nitrogen、ＢＵＮ）をＡｎｔｅｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）によって測定した。アルブミン対クレアチニン比（albumin to creatinine ratio、ＡＣＲ）は、クレアチニン１ミリグラム当たりのアルブミンのマイクログラムとして計算した。
組織学
【００７４】
腎臓を採取し、ホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、５μｍ厚の切片に切断した。切片を、ヘマトキシリン及びエオジン（Haematoxylin and Eosin、Ｈ＆Ｅ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）並びにＰＡＳ（過ヨウ素酸シッフ（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｃｈｉｆｆ））（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、標準的なプロトコルを使用して染色した。糸球体肥大、メサンギウム拡大、糸球体硬化症、及び管状構造を、処置群に盲検化した観察者による切片の検査によって決定しれた。
統計的方法
【００７５】
処置群間の差を、スチューデントｔ検定を使用して分析した。
実施例１：化合物１を使用したＷＥＨＩ−２７４マウス単球細胞株におけるＣＣＬ２結合の阻害
【００７６】
ＣＣＲ２がＦＳＧＳにおいて重要な役割を果たすかどうかを判定するために、我々は、ＣＣＲ２を内因的に発現させるＷＥＨＩ−２７４マウス単球細胞株中の放射標識ＣＣＲ２リガンド、ｍＪＥ（ＣＣＬ２）結合を遮断する、化合物１の能力を検査した。図１に示されるように、化合物１は、ＩＣ５０が２７０ｎＭであるＷＥＨＩ  ２７４細胞におけるｍＪＥ結合を阻害した。
実施例２：マウスにおける化合物１の薬物動態
【００７７】
化合物１がインビボ実験に適しているかどうかを判定するために、我々は、マウスにおけるその薬物動態プロファイルを分析した。図２に示されるように、９０ｍｇ／ｋｇでの化合物１の単一の皮下注射は、投与後２４時間、約３．５μΜの濃度の血液中の化合物１の一貫したレベルを提供した。したがって、我々は、化合物１の１日１回の皮下投与が、十分過ぎるＣＣＲ２範囲を提供すると結論付けた。
実施例３：化合物１阻害の選択性
【００７８】
化合物１の選択性を決定するために、ある特定のケモカイン受容体を内因的に発現させるか、又は他のケモカイン若しくは走化性補体フラグメントのための様々な受容体で個々にトランスフェクトした細胞株について、様々な結合競合及び機能アッセイを行った。表１に要約されるように、化合物１は、１マイクロモルをはるかに上回る濃度でさえ、他の受容体の多様な選択においていかなる活性も阻害しなかった。
【表１】
2020536919.tif 000010
指定された応答の阻害のＩＣ５０値が示される。
実施例４：アドリアマイシン誘発ＦＳＧＳモデル
【００７９】
ＦＳＧＳの化合物１の治療可能性を評価するために、アドリアマイシン誘発ＦＳＧＳモデルを使用した。アドリアマイシンは、単回注入後にげっ歯類においてタンパク尿及び糸球体硬化症を誘発する腫瘍溶解性抗生物質である。アドリアマイシン腎症モデルにおける、化合物１単独による又はＲＡＡＳ遮断物と組み合わせた尿アルブミン排泄速度（ＵＡＥＲ）（ｍｇ／日）の急速な低減が観察される（図３）。単一の薬剤としての化合物１は、アドリアマイシン注入後２週間までに、尿アルブミン対クレアチニン比（ＵＡＣＲ）の顕著な低減を達成した。アドリアマイシン処置マウスは、化合物１単独又はＲＡＡＳ遮断物との組み合わせに応答してＵＡＥＲの有意な低減を示した表２）。保護のレベルは、ＲＡＡＳ遮断物のものと同等以上であった。化合物１及びＲＡＡＳ遮断剤による併用治療は、血清クレアチニン及びＢＵＮレベルの同様の改善を伴い、ビヒクルと比較してＵＡＣＲの統計的に有意な減少を達成した（図３）。
【表２】
2020536919.tif 000011
実施例５：５／６腎摘出モデル
【００８０】
上記の知見を裏付けるために、アドリアマイシンアプローチと機構的に異なる別のＦＳＧＳモデルである、５／６腎摘出モデルを試験した。手術の完了の３週間後に開始して、マウスを化合物１又はＲＡＡＳ遮断剤を用いて単独で又は組み合わせて処置した。上記のように、ＵＡＣＲ、ＵＡＥＲ血清クレアチニン、及びＢＵＮレベルを測定することによって、腎機能を定量化した。
【００８１】
単剤療法として、化合物１は、ＵＡＣＲを著しく低減し、これは処置開始の１週間後に明らかであった（図４）。この阻害は、４週間の研究全体にわたって持続し、３週目及び４週目のそれぞれに７２％及び５７％低減した。予想されるように、ＲＡＡＳ遮断物もまた、ＵＡＣＲを著しく減少させた。特に、ＲＡＡＳ遮断物への化合物１の添加は、ＵＡＣＲの更なる統計的に有意な低減、２つの異なる作用機構と一致する相加効果を達成し、同様の結果がＵＡＥＲに関して得られた（表４）。
【表３】
2020536919.tif 000012
【表４】
2020536919.tif 000013
【００８２】
化合物１は、４週間の時点でのビヒクル対照と比較して、クレアチニン及びＢＵＮの両方の顕著な低減に関連した（図５）。化合物１の単剤療法がこれらのパラメータを低減した程度は、ＲＡＡＳ遮断物単独で観察されたもの以上であった。
実施例６：５／６腎摘出モデルからの腎臓の組織学的分析
【００８３】
病理のために、５／６腎摘出マウスから固定腎臓切片を得た。切片を染色し、評価して、化合物１の媒介による腎機能改善が解剖学的変化に関連したかどうかを判定した。図６（１００倍の倍率）に示されるように、（ビヒクル対照に関する）管状拡張及びヒアリン沈着物の低減は、化合物１単独で又はＲＡＡＳ遮断物と組み合わせて処置したマウスからの残存腎臓において明らかであった。高倍率（４００倍）では、糸球体硬化症、メサンギウム拡大、ヒアリン沈着物、及び管状崩壊の低減を含む、糸球体の変化が明らかであった（図７）。
実施例７：５／６腎摘出モデルにおけるエンドセリン受容体阻害に対するＣＣＲ２阻害の比較
【００８４】
エンドセリンはまた、ＦＳＧＳに関与しており、最近の臨床試験は、エンドセリン（Ａ型）及びアンギオテンシンＩＩ受容体（１型）を特徴とする（Ｍｕｒｕｇｅｓａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００５）。我々は、５／６腎摘出モデルを使用して、ＦＳＧＳ様疾患における腎保護を提供することにおいて、化合物１がこのアンタゴニストとどのように比較されるかを決定した。化合物１とＲＡＡＳ遮断物との組み合わせは、ＵＡＣＲ及びＵＡＥＲの両方によって決定されるように、エンドセリン受容体阻害とＲＡＡＳ遮断物との組み合わせと同じくらい有効であった（図８）。具体的には、ＵＡＣＲは、１週目に、化合物１単独（６４．８％）又はＲＡＡＳ遮断剤単独（７３．４％）の投与によって低減した。ＲＡＡＳ遮断物へのＣＣＲ２アンタゴニストの添加は、ＵＡＣＲを更に低減し（ビヒクルと対比して９２．７％低減、ｐ＝０．０２、ＲＡＡＳ遮断物単独と対比してｐ＜．０４５）、これは、エンドセリン受容体とＲＡＡＳ遮断物との組み合わせ（ビヒクルと対比して９３．５％低減、ｐ＝０．０１９）に匹敵した。これらの結果は、ＣＣＲ２阻害及びエンドセリン受容体阻害が、このＦＳＧＳモデルにおけるＲＡＡＳ遮断物と組み合わせたときに同等に有効であることを示す。
【００８５】
上記の発明は、理解を明確にする目的で実例及び例としてある程度詳細に説明されてきたが、当業者は、ある特定の変更及び修正が添付の特許請求の範囲内で実施され得ることを理解するであろう。加えて、本明細書で提供される各参照は、あたかも各参照が参照により個々に組み込まれるのと同じ程度に、参照によりその全体が組み込まれる。本出願と本明細書で提供される参照との間に矛盾が存在する場合、本出願が支配するものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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