(57)【要約】ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体ならびに関連の抗体ベースの組成物および分子が開示される。抗体を使用する治療および診断方法も開示される。上記抗体は、ジカウイルス表面の構造的分析および結合性ネットワークによって評価される、より有利な接触に寄与したＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域における突然変異を同定して得られ得る。得られた抗体は、対象におけるジカウイルス感染を処置および予防すること、ならびに妊娠した対象における垂直感染および胎児死亡率を予防し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、ジカウイルスエンベロープタンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＸ１ＦＳＴＹを含み、式中、Ｘ１は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には極性アミノ酸残基であり；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＸ２ＧＥＧＤＳを含み、式中、Ｘ２は極性アミノ酸残基であり；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含み、式中、Ｘ３は極性アミノ酸残基であり、Ｘ４は非極性アミノ酸残基であり；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含み、式中、Ｘ５は極性アミノ酸残基であり、Ｘ６は、極性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸残基であり；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含み、式中、Ｘ７およびＸ８は極性アミノ酸であり；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含み、式中、Ｘ９は極性アミノ酸である、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＸ１ＦＳＴＹを含み、式中、Ｘ１は、ＳおよびＴから選択され；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＸ２ＧＥＧＤＳを含み、式中、Ｘ２は、ＳおよびＴから選択され；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含み、式中、Ｘ３は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ４は、ＡおよびＶから選択され；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含み、式中、Ｘ５は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ６は、ＳおよびＶから選択され；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含み、式中、Ｘ７は、ＲおよびＮから選択され、Ｘ８は、ＳおよびＴから選択され；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含み、式中、Ｘ９は、ＳおよびＴから選択される、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＸ１ＦＳＴＹを含み、式中、Ｘ１は存在せず；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＸ２ＧＥＧＤＳを含み、式中、Ｘ２は、ＳおよびＴから選択され；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含み、式中、Ｘ３は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ４は、ＡおよびＶから選択され；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含み、式中、Ｘ５は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ６は、ＳおよびＶから選択され；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含み、式中、Ｘ７は、ＲおよびＮから選択され、Ｘ８は、ＳおよびＴから選択され；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含み、式中、Ｘ９は、ＳおよびＴから選択される、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＳＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項５】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項６】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＴＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＶを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項７】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＴＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項８】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＴＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項９】
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＲＡＳを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１０】
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＳＱＳＩＳＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＲＡＴを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＴを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１１】
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＴＱＳＩＶＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＮＡＳを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１２】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＳＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＲＡＳを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１３】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＳＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＴＱＳＩＶＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＮＡＳを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１４】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＳＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＲＡＳを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１５】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＴＦＳＴＹを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＴＧＥＧＤＳを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＶを含み；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＳＱＳＩＳＴＦＬＡを含み；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＲＡＴを含み；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＴを含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１６】
配列番号４に記載の重鎖可変領域を含む、ジカウイルスエンベロープタンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１が、Ｎ２８におけるアミノ酸置換または欠失、およびＬ２９、Ｓ３１、Ｓ３２におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２が、Ｓ５２、Ｓ５２Ａ、Ｓ５３、Ｙ５４、Ｇ５５におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３が、Ｓ９９におけるアミノ酸欠失、ならびにＫ１００、Ｋ１００Ａ、Ｐ１００Ｂ、Ｙ１００Ｃ、Ｆ１００Ｄ、Ｓ１００Ｅ、Ｇ１００Ｆ、Ｗ１００Ｇ、Ａ１００Ｈ、およびＹ１０２におけるアミノ酸置換を含み；
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｒ９４、ならびにＣＤＲ３残基Ｔ９５、Ｖ９６、およびＲ９７、ならびにそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１７】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｖ５、Ｙ３３、Ａ４９、Ｓ５０、Ｔ５７、Ａ７１、Ｔ７３、Ａ７８、Ｓ８２Ｂ、Ｌ８２Ｃ、Ａ９３、Ｌ１０８およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１８】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｔ６８におけるアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６または１７に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１９】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ａ２３、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６または１７に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２０】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｅ１、Ａ２３、Ｒ３８、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６または１７に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２１】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｅ１、Ａ２３、Ｒ３８、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｔ６８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６または１７に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２２】
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１が、Ｎ２８ＳまたはＮ２８Ｔ、Ｌ２９Ｆ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３２Ｙを含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２が、Ｓ５２Ｔ、Ｓ５２ＡＧ、Ｓ５３Ｅ、Ｙ５４Ｇ、Ｇ５５Ｄを含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３が、Ｋ１００Ｙ、Ｋ１００ＡＳまたはＫ１００ＡＴ、Ｐ１００ＢＮ、Ｙ１００ＣＦ、Ｆ１００ＤＹ、Ｓ１００ＥＹ、Ｇ１００ＦＹ、Ｗ１００ＧＹ、Ａ１００ＨＴ、およびＹ１０２ＡまたはＹ１０２Ｖを含む、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２３】
前記重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｒ９４、ならびにＣＤＲ３残基Ｔ９５、Ｖ９６、およびＲ９７におけるアミノ酸欠失を含む、請求項１６から２２のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２４】
前記軽鎖可変領域が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）軽鎖ＣＤＲ１が、Ｓ２６、Ｖ２９、Ｓ３１、Ａ３２、およびＶ３３におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ２が、Ｓ５０、Ｓ５３、Ｌ５４、Ｙ５５および任意選択でＳ５６におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉｉ）軽鎖ＣＤＲ３が、Ｈ９１、Ｐ９３、Ｆ９４、Ｙ９５、Ｌ９５Ｂ、Ｆ９６、およびＴ９７におけるアミノ酸置換、ならびにＧ９２におけるアミノ酸欠失を含む、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２５】
（ｉ）軽鎖ＣＤＲ１が、Ｓ２６Ｔ、Ｖ２９Ｉ、Ｓ３１Ｖ、Ａ３２Ｆ、およびＶ３３Ｌを含み；
（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ２が、Ｓ５０Ｄ、Ｓ５３Ｔ、Ｌ５４ＲまたはＬ５４Ｎ、Ｙ５５Ａ、および任意選択でＳ５６Ｔを含み；
（ｉｉｉ）軽鎖ＣＤＲ３が、Ｈ９１Ｒ、Ｐ９３Ｙ、Ｆ９４Ｎ、Ｙ９５Ｗ、Ｌ９５ＢＰ、Ｆ９６Ｙ、およびＴ９７Ｓにおけるアミノ酸置換を含む、請求項２４に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２６】
軽鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｄ１、Ｑ３、Ｍ４、Ｓ９、Ａ１３、Ｖ１５、Ｄ１７、Ｖ１９、Ｉ２１、Ｙ２２、Ｑ３８、Ｋ４２、Ｋ４５、Ｓ６０、Ｑ７９、Ｔ８５、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項１６から２５のいずれかに記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２７】
前記軽鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｓ１０、Ｖ５８、Ｓ７６、Ｓ７７、Ｖ１０４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む、請求項２６に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２８】
ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、重鎖および軽鎖アミノ酸配列が、
（ａ）それぞれ配列番号４および１４；
（ｂ）それぞれ配列番号４および１５；
（ｃ）それぞれ配列番号９および１６；
（ｄ）それぞれ配列番号４および１６；
（ｅ）それぞれ配列番号４および１７；
（ｆ）それぞれ配列番号８および１４；
（ｇ）それぞれ配列番号７および１７；
（ｈ）それぞれ配列番号６および１５；
（ｉ）それぞれ配列番号６および５；
（ｊ）それぞれ配列番号７および５；
（ｋ）それぞれ配列番号８および５；
（ｌ）それぞれ配列番号９および５；
（ｍ）それぞれ配列番号１０および５；
（ｎ）それぞれ配列番号１１および５；
（ｏ）それぞれ配列番号６および１４；
（ｐ）それぞれ配列番号６および１６；
（ｑ）それぞれ配列番号６および１７；
（ｒ）それぞれ配列番号７および１４；
（ｓ）それぞれ配列番号７および１５；
（ｔ）それぞれ配列番号７および１６；
（ｕ）それぞれ配列番号８および１５；
（ｖ）それぞれ配列番号８および１６；
（ｗ）それぞれ配列番号８および１７；
（ｘ）それぞれ配列番号９および１４；
（ｙ）それぞれ配列番号９および１５；
（ｚ）それぞれ配列番号９および１７；
（ａａ）それぞれ配列番号１０および１４；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１０および１５；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１０および１６；
（ｄｄ）それぞれ配列番号１０および１７；
（ｅｅ）それぞれ配列番号１１および１４；
（ｆｆ）それぞれ配列番号１１および１５；
（ｇｇ）それぞれ配列番号１１および１６；ならびに
（ｈｈ）それぞれ配列番号１１および１７
からなる群から選択される、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項２９】
ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｂ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｄ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｅ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｆ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｇ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｈ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｉ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｊ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｋ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｌ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｍ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｎ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｏ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｐ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｑ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｒ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｓ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｔ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｕ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｖ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；ならびに
（ｗ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３０】
ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、前記重鎖可変領域が、配列番号４、６、７、８、９、１０および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み；前記軽鎖可変領域が、配列番号５、１４、１５、１６、および１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、ただし、前記モノクローナル抗体は、配列番号４および５を含まない、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３１】
（ａ）それぞれ配列番号４および１４；
（ｂ）それぞれ配列番号４および１５；
（ｃ）それぞれ配列番号９および１６；
（ｄ）それぞれ配列番号４および１６；
（ｅ）それぞれ配列番号４および１７；
（ｆ）それぞれ配列番号８および１４；
（ｇ）それぞれ配列番号７および１７；
（ｈ）それぞれ配列番号６および１５；
（ｉ）それぞれ配列番号６および５；
（ｊ）それぞれ配列番号７および５；
（ｋ）それぞれ配列番号８および５；
（ｌ）それぞれ配列番号９および５；
（ｍ）それぞれ配列番号１０および５；
（ｎ）それぞれ配列番号１１および５；
（ｏ）それぞれ配列番号６および１４；
（ｐ）それぞれ配列番号６および１６；
（ｑ）それぞれ配列番号６および１７；
（ｒ）それぞれ配列番号７および１４；
（ｓ）それぞれ配列番号７および１５；
（ｔ）それぞれ配列番号７および１６；
（ｕ）それぞれ配列番号８および１５；
（ｖ）それぞれ配列番号８および１６；
（ｗ）それぞれ配列番号８および１７；
（ｘ）それぞれ配列番号９および１４；
（ｙ）それぞれ配列番号９および１５；
（ｚ）それぞれ配列番号９および１７；
（ａａ）それぞれ配列番号１０および１４；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１０および１５；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１０および１６；
（ｄｄ）それぞれ配列番号１０および１７；
（ｅｅ）それぞれ配列番号１１および１４；
（ｆｆ）それぞれ配列番号１１および１５；
（ｇｇ）それぞれ配列番号１１および１６；ならびに
（ｈｈ）それぞれ配列番号１１および１７
からなる群から選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖および軽鎖配列を含む、請求項３０に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３２】
ジカウイルスに対する中和活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３３】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体からなる群から選択される、前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３４】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項３３に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項３５】
前記請求項のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３６】
ジカウイルス感染を処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３７】
請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分の軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖の両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項３８】
請求項３７の核酸を含む発現ベクター。
【請求項３９】
請求項３８に記載の発現ベクターで形質転換した細胞。
【請求項４０】
対象におけるジカウイルス感染を予防するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４１】
妊娠した対象における胎児へのジカウイルスの垂直感染を処置または予防するための方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４２】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記妊娠した対象が、ジカウイルス感染のリスクがある、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
胎児ジカウイルス感染を処置または予防するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４５】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
妊娠した対象における胎児死亡率を処置または予防するための方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４８】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
胎盤ジカウイルス感染を処置または予防するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５１】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
妊娠した対象における胎児死亡率を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５４】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
胎児ジカウイルス感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５７】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
胎盤ジカウイルス感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６０】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染するリスクがある、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
妊娠した対象における胎児へのジカウイルスの垂直感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１から３４のいずれか一項に記載の単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分または請求項３５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６３】
前記妊娠した対象が、ジカウイルスに感染している、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記妊娠した対象が、ジカウイルス感染のリスクがある、請求項６２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年１０月１３日に出願された米国仮出願番号第６２／４０８，０２０号の優先日の利益を主張している。この仮出願の内容は、その全体が参考として本明細書によって援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ蚊によって伝播される媒介動物媒介性のアルボウイルスである。ＺＩＫＶ感染は、典型的には、発熱、発疹、関節痛、および／または結膜炎を含む軽度の症状を引き起こす。しかし、最近の研究は、成人における感染とギラン・バレー症候群との間の関連と共に、新生児における感染と小頭症との間の関連を示している。ＺＩＫＶに対する承認されたワクチンまたは療法がないことから、有効な対抗手段への緊急的な必要性がある。
【０００３】
ＺＩＫＶのウイルス、構造、または生物学については、ほとんど知られていない。ＺＩＫＶは、デング（ＤＶ）、ウエストナイル、日本脳炎、ダニ媒介脳炎（Tick-born  Encephalitis）、および黄熱病ウイルスを含むＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅウイルス科のメンバーである。フラビウイルスのエンベロープ（Ｅ）タンパク質は、宿主細胞侵入および免疫回避を媒介する。Ｅタンパク質は、３つの構造的および機能的ドメインからなる。Ｅタンパク質ドメインＩＩＩ（Ｅ−ＤＩＩＩ）に対する抗体は、ＤＶに感染した動物モデルにおいて予防効果および治療効果を示している（Robinson,  L.ら、Cell  １６２巻：４９３〜５０４頁、２０１５年）。それゆえに、ＺＩＫＶエンベロープタンパク質に対する抗体ベースの薬剤が、ヒトにおけるＺＩＫＶの大発生と戦うための有望な選択肢となる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Robinson,  L.ら、Cell  １６２巻：４９３〜５０４頁、２０１５年
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
要旨
本発明の開示は、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＥＰ）に対する抗体に関する。残基原子間相互作用ネットワーク（またはＳＩＮ）によってガイドされるジカウイルス表面の体系的分析は、構造的に制約されているとして、融合ループエピトープ近位（ＦＬＥＰ）領域の同定をもたらした。構造ベースの計算的アプローチは、ＦＬＥＰ領域と相互作用する可能性を有する有望な足場のセットに至った。これに従い、抗ＴＤＲＤ３（Ｔｕｄｏｒドメイン含有３）抗体を、ＦＬＥＰ領域と相互作用するその能力に起因して調査した。抗原−抗体境界面の相互作用するアミノ酸対間の残基間原子相互作用を計算するための枠組みを利用し、相互作用を、２Ｄグラフ形式でレンダリングして、結合性ネットワークを分析した。構造的分析および結合性ネットワークによって評価される、より有利な接触に寄与したＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域における突然変異を同定し、新たなまたは改善された接触を潜在的に媒介する様々なアミノ酸残基を分析して、ジカウイルスＥＰへの結合を生じるＣＤＲおよび／またはフレームワーク突然変異を同定した。同定された抗体は、対象におけるジカウイルス感染を処置および予防すること、ならびに妊娠した対象における垂直感染および胎児死亡率を予防することが見出された。
【０００６】
それゆえに、本発明の開示は、ジカウイルスＥＰに結合する抗体に関する。これらの抗体を用いてジカウイルスを処置するための宿主細胞および方法も本明細書で提供される。
【０００７】
一部の態様では、ジカウイルスエンベロープタンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含み、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１はＧＦＸ１ＦＳＴＹを含み、式中、Ｘ１は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には極性アミノ酸残基であり；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２はＸ２ＧＥＧＤＳを含み、式中、Ｘ２は極性アミノ酸残基であり；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３はＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含み、式中、Ｘ３は極性アミノ酸残基であり、Ｘ４は非極性アミノ酸残基であり；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１はＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含み、式中、Ｘ５は極性アミノ酸残基であり、Ｘ６は、極性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸残基であり；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２はＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含み、式中、Ｘ７およびＸ８は極性アミノ酸であり；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３はＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含み、式中、Ｘ９は極性アミノ酸である。
【０００８】
他の態様では、重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１がＧＦＸ１ＦＳＴＹを含み、式中、Ｘ１は、ＳおよびＴから選択され；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２がＸ２ＧＥＧＤＳを含み、式中、Ｘ２は、ＳおよびＴから選択され；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３がＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含み、式中、Ｘ３は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ４は、ＡおよびＶから選択され；
（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１がＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含み、式中、Ｘ５は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ６は、ＳおよびＶから選択され；
（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２がＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含み、式中、Ｘ７は、ＲおよびＮから選択され、Ｘ８は、ＳおよびＴから選択され；
（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３がＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含み、式中、Ｘ９は、ＳおよびＴから選択される、
単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される。
【０００９】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＸ１ＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１であって、式中、Ｘ１は存在しない、重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）Ｘ２ＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２であって、式中、Ｘ２は、ＳおよびＴから選択される、重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＹＴＭＤＸ４を含む重鎖ＣＤＲ３であって、式中、Ｘ３は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ４は、ＡおよびＶから選択される、重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１であって、式中、Ｘ５は、ＳおよびＴから選択され、Ｘ６は、ＳおよびＶから選択される、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＸ７ＡＸ８を含む軽鎖ＣＤＲ２であって、式中、Ｘ７は、ＲおよびＮから選択され、Ｘ８は、ＳおよびＴから選択される、軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９を含む軽鎖ＣＤＲ３であって、式中、Ｘ９は、ＳおよびＴから選択される、軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１０】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＳＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１１】
他の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１２】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＴＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＶを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１３】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）ＧＹＴＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１４】
他の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｉｉｉ）ＧＹＴＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１５】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉｖ）ＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＲＡＳを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１６】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉｖ）ＲＡＳＱＳＩＳＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＲＡＴを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＴを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１７】
他の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉｖ）ＲＡＴＱＳＩＶＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＮＡＳを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１８】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＳＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＲＡＳを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００１９】
他の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＳＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＲＡＴＱＳＩＶＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＮＡＳを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００２０】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＳＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡを含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＲＡＳを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００２１】
他の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）ＧＦＴＦＳＴＹを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）ＴＧＥＧＤＳを含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＶを含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＲＡＳＱＳＩＳＴＦＬＡを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｖ）ＤＡＳＴＲＡＴを含む軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｖｉ）ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＴを含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００２２】
一部の態様では、本開示は、配列番号４に記載の重鎖可変領域を含む、ジカウイルスエンベロープタンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ｉ）重鎖ＣＤＲ１が、Ｎ２８におけるアミノ酸置換または欠失、およびＬ２９、Ｓ３１、Ｓ３２におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ２が、Ｓ５２、Ｓ５２Ａ、Ｓ５３、Ｙ５４、Ｇ５５におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ３が、Ｓ９９におけるアミノ酸欠失、ならびにＫ１００、Ｋ１００Ａ、Ｐ１００Ｂ、Ｙ１００Ｃ、Ｆ１００Ｄ、Ｓ１００Ｅ、Ｇ１００Ｆ、Ｗ１００Ｇ、Ａ１００Ｈ、およびＹ１０２におけるアミノ酸置換を含み；
重鎖可変領域が、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｒ９４、ならびにＣＤＲ３残基Ｔ９５、Ｖ９６、およびＲ９７、ならびにそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸欠失を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｖ５、Ｙ３３、Ａ４９、Ｓ５０、Ｔ５７、Ａ７１、Ｔ７３、Ａ７８、Ｓ８２Ｂ、Ｌ８２Ｃ、Ａ９３、Ｌ１０８およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｔ６８におけるアミノ酸置換をさらに含む。一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ａ２３、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｅ１、Ａ２３、Ｒ３８、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｅ１、Ａ２３、Ｒ３８、Ｗ４７、Ｙ５８、Ｔ６８、Ｌ８０、Ｑ８１、Ａ８４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。
【００２３】
上述の態様のいずれかでは、配列番号４に記載の重鎖可変領域を含む、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）Ｎ２８ＳまたはＮ２８Ｔ、Ｌ２９Ｆ、Ｓ３１Ｔ、Ｓ３２Ｙを含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）Ｓ５２Ｔ、Ｓ５２ＡＧ、Ｓ５３Ｅ、Ｙ５４Ｇ、Ｇ５５Ｄを含む重鎖ＣＤＲ２；
（ｉｉｉ）Ｋ１００Ｙ、Ｋ１００ＡＳまたはＫ１００ＡＴ、Ｐ１００ＢＮ、Ｙ１００ＣＦ、Ｆ１００ＤＹ、Ｓ１００ＥＹ、Ｇ１００ＦＹ、Ｗ１００ＧＹ、Ａ１００ＨＴ、およびＹ１０２ＡまたはＹ１０２Ｖを含む重鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００２４】
一部の態様では、重鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｒ９４、ならびにＣＤＲ３残基Ｔ９５、Ｖ９６、およびＲ９７におけるアミノ酸欠失を含む。
【００２５】
上述の態様のいずれかでは、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）軽鎖ＣＤＲ１は、Ｓ２６、Ｖ２９、Ｓ３１、Ａ３２、およびＶ３３におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ２は、Ｓ５０、Ｓ５３、Ｌ５４、Ｙ５５および任意選択でＳ５６におけるアミノ酸置換を含み；
（ｉｉｉ）軽鎖ＣＤＲ３は、Ｈ９１、Ｐ９３、Ｆ９４、Ｙ９５、Ｌ９５Ｂ、Ｆ９６、およびＴ９７におけるアミノ酸置換、ならびにＧ９２におけるアミノ酸欠失を含む。
【００２６】
上述の態様のいずれかでは、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ｉ）Ｓ２６Ｔ、Ｖ２９Ｉ、Ｓ３１Ｖ、Ａ３２Ｆ、およびＶ３３Ｌを含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｉｉ）Ｓ５０Ｄ、Ｓ５３Ｔ、Ｌ５４ＲまたはＬ５４Ｎ、Ｙ５５Ａ、および任意選択でＳ５６Ｔを含む軽鎖ＣＤＲ２；ならびに
（ｉｉ）Ｈ９１Ｒ、Ｐ９３Ｙ、Ｆ９４Ｎ、Ｙ９５Ｗ、Ｌ９５ＢＰ、Ｆ９６Ｙ、およびＴ９７Ｓにおけるアミノ酸置換を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
【００２７】
上述の態様のいずれかでは、軽鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｄ１、Ｑ３、Ｍ４、Ｓ９、Ａ１３、Ｖ１５、Ｄ１７、Ｖ１９、Ｉ２１、Ｙ２２、Ｑ３８、Ｋ４２、Ｋ４５、Ｓ６０、Ｑ７９、Ｔ８５、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。一部の態様では、軽鎖可変領域は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、Ｓ１０、Ｖ５８、Ｓ７６、Ｓ７７、Ｖ１０４、およびそれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸置換をさらに含む。
【００２８】
一部の態様では、本開示は、ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、重鎖および軽鎖アミノ酸配列が、
（ａ）それぞれ配列番号４および１４；
（ｂ）それぞれ配列番号４および１５；
（ｃ）それぞれ配列番号９および１６；
（ｄ）それぞれ配列番号４および１６；
（ｅ）それぞれ配列番号４および１７；
（ｆ）それぞれ配列番号８および１４；
（ｇ）それぞれ配列番号７および１７；
（ｈ）それぞれ配列番号６および１５；
（ｉ）それぞれ配列番号６および５；
（ｊ）それぞれ配列番号７および５；
（ｋ）それぞれ配列番号８および５；
（ｌ）それぞれ配列番号９および５；
（ｍ）それぞれ配列番号１０および５；
（ｎ）それぞれ配列番号１１および５；
（ｏ）それぞれ配列番号６および１４；
（ｐ）それぞれ配列番号６および１６；
（ｑ）それぞれ配列番号６および１７；
（ｒ）それぞれ配列番号７および１４；
（ｓ）それぞれ配列番号７および１５；
（ｔ）それぞれ配列番号７および１６；
（ｕ）それぞれ配列番号８および１５；
（ｖ）それぞれ配列番号８および１６；
（ｗ）それぞれ配列番号８および１７；
（ｘ）それぞれ配列番号９および１４；
（ｙ）それぞれ配列番号９および１５；
（ｚ）それぞれ配列番号９および１７；
（ａａ）それぞれ配列番号１０および１４；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１０および１５；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１０および１６；
（ｄｄ）それぞれ配列番号１０および１７；
（ｅｅ）それぞれ配列番号１１および１４；
（ｆｆ）それぞれ配列番号１１および１５；
（ｇｇ）それぞれ配列番号１１および１６；ならびに
（ｈｈ）それぞれ配列番号１１および１７
からなる群から選択される、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【００２９】
他の態様では、本開示は、ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｂ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｄ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｅ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｆ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｇ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｈ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｉ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｊ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｋ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｌ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｍ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｎ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｏ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｐ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｑ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｒ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｓ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｔ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｕ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；
（ｖ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列；ならびに
（ｗ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列
からなる群から選択される重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【００３０】
一部の態様では、本開示は、ジカウイルスエンベロープタンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、重鎖可変領域が、配列番号４、６、７、８、９、１０および１１からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み；軽鎖可変領域が、配列番号５、１４、１５、１６、および１７からなる群から選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含み、ただし、モノクローナル抗体は、配列番号４および５を含まない、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【００３１】
一部の態様では、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、
（ａ）それぞれ配列番号４および１４；
（ｂ）それぞれ配列番号４および１５；
（ｃ）それぞれ配列番号９および１６；
（ｄ）それぞれ配列番号４および１６；
（ｅ）それぞれ配列番号４および１７；
（ｆ）それぞれ配列番号８および１４；
（ｇ）それぞれ配列番号７および１７；
（ｈ）それぞれ配列番号６および１５；
（ｉ）それぞれ配列番号６および５；
（ｊ）それぞれ配列番号７および５；
（ｋ）それぞれ配列番号８および５；
（ｌ）それぞれ配列番号９および５；
（ｍ）それぞれ配列番号１０および５；
（ｎ）それぞれ配列番号１１および５；
（ｏ）それぞれ配列番号６および１４；
（ｐ）それぞれ配列番号６および１６；
（ｑ）それぞれ配列番号６および１７；
（ｒ）それぞれ配列番号７および１４；
（ｓ）それぞれ配列番号７および１５；
（ｔ）それぞれ配列番号７および１６；
（ｕ）それぞれ配列番号８および１５；
（ｖ）それぞれ配列番号８および１６；
（ｗ）それぞれ配列番号８および１７；
（ｘ）それぞれ配列番号９および１４；
（ｙ）それぞれ配列番号９および１５；
（ｚ）それぞれ配列番号９および１７；
（ａａ）それぞれ配列番号１０および１４；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１０および１５；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１０および１６；
（ｄｄ）それぞれ配列番号１０および１７；
（ｅｅ）それぞれ配列番号１１および１４；
（ｆｆ）それぞれ配列番号１１および１５；
（ｇｇ）それぞれ配列番号１１および１６；ならびに
（ｈｈ）それぞれ配列番号１１および１７
からなる群から選択される重鎖および軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖および軽鎖配列を含む。
【００３２】
本開示の一部の態様は、抗体がヒト化抗体である、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００３３】
本開示の他の態様は、抗体がジカウイルスに対する中和活性を有する、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００３４】
本開示の一部の態様は、抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体からなる群から選択される、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。本開示の一部の態様では、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかは、ＩｇＧ１抗体である。
【００３５】
本開示の他の態様は、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００３６】
本開示の別の態様は、それを必要とする対象におけるジカウイルス感染を処置するための方法であって、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００３７】
本開示の別の態様は、対象におけるジカウイルス感染を予防するための方法であって、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００３８】
他の態様では、本開示は、妊娠した対象における胎児への垂直感染を処置または予防するための方法であって、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、妊娠した対象における胎児への垂直感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００３９】
別の態様では、本開示は、胎児ジカウイルス感染を処置または予防するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、胎児ジカウイルス感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、妊娠した対象に、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００４０】
本開示の別の態様は、妊娠した対象における胎児死亡率を処置または予防するための方法であって、対象に、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、妊娠した対象における胎児死亡率を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００４１】
他の態様では、本開示は、胎盤ジカウイルス感染を処置または予防するための方法であって、それを必要とする妊娠した対象に、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。一部の態様では、本開示は、胎盤ジカウイルス感染を低減するまたはそのリスクを低減するための方法であって、妊娠した対象に、有効量の、前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、または前記単離されたモノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００４２】
前述の方法のいずれかでは、妊娠した対象は、ジカウイルスに感染している。一部の態様では、妊娠した対象は、ジカウイルスに感染するリスクがある。
【００４３】
本開示の一部の態様は、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかの軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖の両方をコードするヌクレオチド配列を含む核酸に関する。一部の態様では、本開示は、核酸を含む発現ベクターに関する。さらなる態様では、本開示は、発現ベクターで形質転換した細胞に関する。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１Ａ】図１Ａは、抗ＴＤＲＤ３抗体の重鎖配列（上）および生成された抗ジカ抗体の重鎖配列（下）を示す。改変は太字と下線で示される。
【００４５】
【図１Ｂ】図１Ｂは、抗ＴＤＲＤ３抗体の軽鎖配列（上）および生成された抗ジカ抗体の軽鎖配列（下）を示す。改変は太字と下線で示される。
【００４６】
【図２−１】図２は、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定した、異なる株のジカウイルスへの抗ジカ抗体の結合データを示す。
【図２−２】図２は、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定した、異なる株のジカウイルスへの抗ジカ抗体の結合データを示す。
【００４７】
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、ジカウイルスＩＬＭ株（Ｂｒａｚｉｌ  Ｐａｒａｉｂａ  ２０１５年）（３Ａ）またはＨ／ＰＦ／２０１３株（３Ｂ）を使用するプラーク減少中和試験において決定した、抗ジカ抗体によるパーセント中和を示すグラフである。
【００４８】
【図４】図４Ａ〜４Ｄは、抗ジカ抗体で予防的（４Ａおよび４Ｃ）または治療的（４Ｂおよび４Ｄ）のいずれかで処置した、ジカウイルス感染（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）を有するマウスにおける長期にわたる体重（４Ａおよび４Ｂ）および長期にわたる生存（４Ｃおよび４Ｄ）を示すグラフである。
【００４９】
【図５】図５は、抗ジカ抗体で予防的（上）または治療的（下）のいずれかで処置した、ジカウイルス感染（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）を有するマウスにおける長期にわたるウイルス負荷を示すグラフである。
【００５０】
【図６】図６Ａは、ジカウイルス感染（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）の１日後に投与した様々な用量のｍＡｂ８で処置したマウスの長期にわたる体重をグラムで示す折れ線グラフである。図６Ｂは、ジカウイルス感染（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）の１日後に投与した様々な用量のｍＡｂ８で処置したマウスにおける長期にわたるウイルス負荷を示す折れ線グラフである。図６Ｃは、ジカウイルス感染（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）の１日後に投与した様々な用量のｍＡｂ８で処置したマウスの生存を示すカプラン・マイヤーグラフである。
【００５１】
【図７】図７Ａは、ジカウイルス（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に感染したＴＨＰ−１細胞における様々な抗体の抗体依存性感染増強活性を示すグラフである。異なる濃度の抗体によるオプソニン化から生じるプラークタイターが示される。図７Ｂは、示された様々な抗体から生じるピーク感染増強タイター（観察された最大の感染増強の点におけるウイルスタイター）の比較を提供する。＊＜０．０５（ノンパラメトリック、両側スチューデントＴ検定）。
【００５２】
【図８Ａ】図８Ａは、ジカウイルス（Ｈ／ＰＦ／２０１３株）に感染した妊娠したＡ１２９マウスにおける垂直感染および胎児死亡率を評価するための研究設計を提供する模式図である。
【００５３】
【図８ＢＣ】図８Ｂ〜８Ｆは、図８Ａに記載される研究の結果を示すグラフを提供する。具体的には、２日目（８Ｂ）または７日目（８Ｃ）での母親におけるウイルスＲＮＡのレベル、パーセント致死率によって測定したパーセント胎児生存（８Ｄ）、ならびにアイソタイプ対照ＩｇＧまたはｍＡｂ８で処置したマウス由来の胎児（８Ｅ）または胎盤（８Ｆ）におけるウイルスＲＮＡが示される。
【００５４】
【図８ＤＥ】図８Ｂ〜８Ｆは、図８Ａに記載される研究の結果を示すグラフを提供する。具体的には、２日目（８Ｂ）または７日目（８Ｃ）での母親におけるウイルスＲＮＡのレベル、パーセント致死率によって測定したパーセント胎児生存（８Ｄ）、ならびにアイソタイプ対照ＩｇＧまたはｍＡｂ８で処置したマウス由来の胎児（８Ｅ）または胎盤（８Ｆ）におけるウイルスＲＮＡが示される。
【００５５】
【図８Ｆ】図８Ｂ〜８Ｆは、図８Ａに記載される研究の結果を示すグラフを提供する。具体的には、２日目（８Ｂ）または７日目（８Ｃ）での母親におけるウイルスＲＮＡのレベル、パーセント致死率によって測定したパーセント胎児生存（８Ｄ）、ならびにアイソタイプ対照ＩｇＧまたはｍＡｂ８で処置したマウス由来の胎児（８Ｅ）または胎盤（８Ｆ）におけるウイルスＲＮＡが示される。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
定義
特許請求の範囲および明細書で使用される用語は、特に他の規定がない限り、以下に記載された通りに定義される。
【００５７】
用語「ジカウイルス」は、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ科のメンバーを指し、発熱、発疹、関節痛または結膜炎を含む軽度の症状と通常関連するが、母子感染による新生児における小頭症、およびギラン・バレー症候群と最近関連付けられている。ジカウイルスのゲノムは、およそ１１ｋｂ長のプラス鎖ＲＮＡの一本鎖からなる。ジカビリオンは、他のフラビウイルスのビリオンと同様、ウイルス粒子中に取り込まれる３つの構造タンパク質を含む、１０個の機能的に別個のタンパク質を含有する。
【００５８】
用語「ジカウイルスエンベロープタンパク質（「Ｅ」または「ＥＰ」）」は、ウイルス侵入およびビリオン出芽を担うタンパク質を指す。これは、３つの別個のドメインから構成される。ＥドメインＩ（Ｅ−ＤＩ）は、Ｅタンパク質構造全体を組織化する中心的ドメインである。ＥドメインＩＩ（Ｅ−ＤＩＩ）は、Ｅ−ＤＩから突出する２つの伸長したループから形成され、Ｅ−ＤＩおよびＥドメインＩＩＩ（Ｅ−ＤＩＩＩ）におけるポケット中にある。Ｅ−ＤＩＩＩは、他の点では平滑な球状成熟ウイルス粒子の表面上に小さい突出を形成する免疫グロブリン様ドメインであり、標的細胞上の細胞受容体と相互作用すると考えられている。Ｅ−ＤＩＩの遠位端は、「融合ループ」と呼ばれる、グリシンリッチな疎水性配列である。融合ループは、残基９８〜１１０を包含し、フラビウイルス間で高度に保存されている。ある特定の実施形態では、「ジカウイルスエンベロープタンパク質」は、融合ループを指す。ある特定の実施形態では、融合ループは、配列番号３に記載のアミノ酸配列を有する。
【００５９】
用語「抗体」は、本明細書で言及される場合、抗体全体およびあらゆる抗原結合性断片（すなわち、「抗原結合性部分」）またはそれらの単鎖を含む。「抗体」は、ある特定の実施形態では、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合性部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存された領域中に散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性を有する領域にさらに細かく分類できる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１の要素（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００６０】
抗体の「抗原結合性部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、ジカウイルスＥＰ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。このような「断片」は、例えば約８から約１５００アミノ酸長、好適には約８から約７４５アミノ酸長、好適には約８から約３００、例えば約８から約２００アミノ酸、または約１０から約５０または１００アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により実行が可能であることが示されている。抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Wardら、（１９８９年）Nature  ３４１巻：５４４〜５４６頁）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または（ｖｉｉ）任意選択で合成リンカーで合体されていてもよい、２つまたはそれより多くの単離されたＣＤＲの組合せが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子にコードされているにもかかわらず、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して１価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Birdら（１９８８年）Science  ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびHustonら（１９８８年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照）のようにすることが可能な合成リンカーによる組換え方法を使用して、合体させることができる。またこのような単鎖抗体は、抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含されることも意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、それが無傷抗体である場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングされる。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生することができる。
【００６１】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を提示する抗体を指す。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一の結合特異性を提示し、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変および任意選択の定常領域を有する抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００６２】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製される、発現される、作製される、または単離される全てのヒト抗体を含み、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマに関してトランスジェニックであるかまたは染色体導入されている動物（例えば、マウス）から単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他のあらゆる手段によって調製された、発現された、作製された、または単離された抗体である。このような組換えヒト抗体は、生殖細胞系遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を利用する可変および定常領域を含むが、それに続いて、例えば抗体成熟中に生じる再配列および突然変異を含む。当業界で公知のように（例えば、Lonberg（２００５年）Nature  Biotech.  ２３巻（９号）：１１１７〜１１２５頁を参照）、可変領域は抗原結合性ドメインを含有し、これは、再配列されて外来抗原に特異的な抗体を形成する様々な遺伝子によってコードされる。再配列に加えて、可変領域は、外来抗原への抗体の親和性を増加させるための複数の単一のアミノ酸変化（体細胞変異または超突然変異と称される）によってさらに改変される可能性がある。定常領域は、抗原へのさらなる応答（すなわち、アイソタイプスイッチ）において変化すると予想される。それゆえに、抗原に応答して、再配列され体細胞突然変異した、軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有さない可能性があるが、その代わりに実質的に同一または類似である（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）と予想される。
【００６３】
用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列の可変および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された突然変異）を含んでいてもよい（Lonberg,  N.ら（１９９４年）Nature  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁）；Lonberg,  N.（１９９４年）Handbook  of  Experimental  Pharmacology  １１３巻：４９〜１０１頁；Lonberg,  N.およびHuszar,  D.（１９９５年）Intern.  Rev.  Immunol.  １３巻：６５〜９３頁、およびHarding,  F.およびLonberg,  N.（１９９５年）Ann.  N.Y.  Acad.  Sci  ７６４巻：５３６〜５４６頁を参照）。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖細胞系由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフト化されている抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。
【００６４】
「異種抗体」は、本明細書で使用される場合、このような抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物で構成されていない生物に見出されるものに相当し、全体的にトランスジェニック非ヒト動物のもの以外の種に由来するアミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体を指す。
【００６５】
「中和抗体」は、本明細書で使用される場合、形成されたウイルス粒子を崩壊させること、またはウイルス粒子のフォーマット化を阻害すること、またはウイルス粒子による哺乳動物細胞への結合もしくは感染を予防することが可能な抗体、例えばモノクローナル抗体を指す。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ジカウイルスを中和する。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「診断用抗体」または「検出抗体（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「検出抗体（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、試料中の抗原性標的の存在を検出することが可能な抗体、例えばモノクローナル抗体を指す。当業者には認識されるように、このような診断用抗体は、好ましくはそれらの抗原性標的に高い特異性を有する。
【００６７】
用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち、「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の可変フレームワーク領域、および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）を含み、定常領域（例えば、軽鎖の場合、少なくとも１つの定常領域またはその部分、重鎖の場合、好ましくは３つの定常領域）をさらに含む可変領域を有する、免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、それぞれ軽鎖または重鎖）を指す。用語「ヒト化可変領域」（例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の可変フレームワーク領域、および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を指す。
【００６８】
成句「実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の」または「実質的にヒト」は、比較目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体アミノ酸配列にアラインされる場合、領域が、ヒトフレームワークまたは定常領域配列と、少なくとも８０〜９０％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは少なくとも９５〜９９％の同一性（すなわち、局所的な配列同一性）を有しており、例えば、保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などが許容されることを意味する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰突然変異などの導入はしばしばヒト化抗体または鎖の「最適化」と称される。成句「実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の」または「実質的に非ヒト」は、非ヒト生物、例えば、非ヒト哺乳動物の配列と、少なくとも８０〜９５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な、免疫グロブリンまたは抗体配列を有することを意味する。
【００６９】
アミノ酸に関する十分に認識された命名法に関して、任意のアミノ酸残基を示すためのコード「Ｘａａ」または「Ｘ」を含む、３文字コードまたは１文字コードが使用される。したがって、ＸａａまたはＸは、２０種の天然に存在するアミノ酸のいずれかを典型的には示し得る。
【００７０】
好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換のために異なっている。アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、以下：Ｉ群（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；ＩＩ群（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；ＩＩＩ群（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；ＩＶ群（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；Ｖ群（鎖の配向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびＶＩ群（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅのように群分けされる。保存的置換は、同じクラス内でのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することとみなされる。
【００７１】
突然変異（例えば、復帰突然変異）が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記突然変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力と比較して少なくとも一桁の規模で影響を与える（例えば、減少させる）場合、その突然変異は抗原結合を指示する重鎖または軽鎖の能力に実質的に影響を与えると言われる。突然変異が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記突然変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力の２、３、または４倍しか影響を与えない（例えば、減少させない）場合、その突然変異は「抗原結合を指示する鎖の能力に実質的に影響を与えない（例えば、減少させない）」。
【００７２】
ある特定の実施形態では、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の親和性の３倍、４倍、または５倍以内の親和性で抗原に結合する。例えば、非ヒト化抗体が１０９Ｍ−１の結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は、少なくとも３×１０９Ｍ−１、４×１０９Ｍ−１または１０９Ｍ−１の結合親和性を有すると予想される。免疫グロブリンまたは抗体鎖の結合特性を説明する場合、鎖は、「抗原（例えば、ジカウイルスＥＰ）結合を指示する」その能力に基づいて説明され得る。鎖が、無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合性断片）に特異的な結合特性または結合親和性を付与する場合、その鎖は「抗原結合を指示する」と言われる。
【００７３】
用語「キメラ免疫グロブリン」または抗体は、その可変領域が第１の種に由来し、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、例えば異なる種に属する免疫グロブリンの遺伝子セグメントから遺伝子工学によって構築されてもよい。用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、以下で定義されるようなキメラ免疫グロブリンまたは抗体を包含することは意図されない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、それらの構築においてキメラであるが（すなわち、１つより多くのタンパク質種由来の領域を含む）、それらは、本明細書で定義されるようなキメラ免疫グロブリンまたは抗体に存在しない追加の特徴（すなわち、ドナーのＣＤＲ残基およびアクセプターのフレームワーク残基を含む可変領域）を含む。
【００７４】
「単離された抗体」は、本明細書で用いられる場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ジカウイルスＥＰに特異的に結合する単離された抗体は、ジカウイルスＥＰ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。単離された抗体は、典型的には、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まない。本開示のある特定の実施形態では、異なるジカウイルスＥＰ特異性を有する「単離された」抗体の組合せは、明確な組成で組み合わされる。
【００７５】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸またはタンパク質の３次フォールディングによって並列させた隣接していないアミノ酸の両方から形成される可能性がある。隣接するアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒に露出した状態で保持され、それに対して３次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処置で失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的なコンフォメーションで、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体と結合するかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は当業界において周知であり、そのようなものとしては、例えば、免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイが挙げられ、それらにおいて、ジカウイルスＥＰ由来のオーバーラップまたは隣接するペプチドが、所与の抗ＥＰ抗体との反応性に関して試験される。エピトープの空間的なコンフォメーションを決定する方法としては、当業界における技術および本明細書に記載の技術、例えば、Ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Epitope  Mapping  Protocols  in  Methods  in  Molecular  Biology、６６巻、G.  E.  Morris編（１９９６年）を参照）。
【００７６】
同じエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合をブロックする能力を示す簡単なイムノアッセイ、すなわち、競合結合アッセイで同定することができる。競合結合は、試験を受ける免疫グロブリンが参照抗体の共通の抗原への特異的な結合を阻害するアッセイで決定される。多数のタイプの競合結合アッセイが公知であり、例えば、固相の直接的または間接的なラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接的または間接的な酵素免疫検査法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahliら、Methods  in  Enzymology  ９巻：２４２頁（１９８３年）を参照）；固相の直接的なビオチン−アビジンＥＩＡ（Kirklandら、J.  Immunol.  １３７巻：３６１４頁（１９８６年）を参照）；固相の直接的な標識アッセイ、固相の直接的な標識サンドイッチアッセイ（HarlowおよびLane、Antibodies：A  Laboratory  Manual、Cold  Spring  Harbor  Press（１９８８年）を参照）；１−１２５標識を使用する固相の直接的な標識ＲＩＡ（Morelら、Mol.  Immunol.  ２５巻（１号）：７頁（１９８８年）を参照）；固相の直接的なビオチン−アビジンＥＩＡ（Cheungら、Virology  １７６巻：５４６頁（１９９０年））；および直接的な標識ＲＩＡ（Moldenhauerら、Scand.  J.  Immunol.  ３２巻：７７頁（１９９０年））である。典型的には、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製された抗原またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識の試験用免疫グロブリンおよび標識された参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験用免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験用免疫グロブリンは、過量で存在する。通常、競合抗体が過量で存在する場合、競合抗体は、参照抗体の共通の抗原への特異的な結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％  ７０〜７５％またはそれより多く阻害すると予想される。
【００７７】
用語「エピトープマッピング」は、抗体−抗原認識のための分子決定基を同定するプロセスを指す。エピトープマッピングに関する多数の方法が当業界において公知であり、例えば、Ｘ線分析、プロテアーゼマッピング、水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）、２Ｄ核磁気共鳴、アラニンスキャニング、およびディープ突然変異スキャニング（ｄｅｅｐ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ）である。
【００７８】
ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＥＰ）を標的化する抗体の操作を容易にするために、エピトープホットスポットを、境界面残基の埋もれた表面積のパーセントを分析することによって決定した。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体は、残基Ｄ９８、Ｒ９９およびＷ１０１を含む融合ループ（配列番号３）上のエピトープに結合する。
【００７９】
「結合親和性」は一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強さを指す。特記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間での１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、解離定数（Ｋｄ）によって一般に示すことができる。例えば、Ｋｄは、約２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、８ｎＭ、６ｎＭ、４ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、またはそれよりも強くてもよい。親和性は、本明細書に記載の方法を含む、当業界で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は一般に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるが、高親和性抗体は一般に、抗原により速く結合し、より長い時間結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法は、当業界で公知であり、本発明の開示の目的のためにそれらのいずれかを使用することもできる。
【００８０】
用語「特異的な結合」、「選択的な結合」、「選択的に結合する」、および「特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、予め決定された抗原上のエピトープへの抗体結合を指す。典型的には、抗体は、分析物として組換えジカウイルスＥＰおよびリガンドとして抗体を使用するＢＩＡＣＯＲＥ２０００機器での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定した場合、およそ１０−７Ｍ未満、例えばおよそ１０−８Ｍ、１０−９Ｍもしくは１０−１０Ｍ未満の、またはそれよりさらに低い平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、予め決定された抗原または近縁の抗原以外の非特異的な抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に関するその親和性の少なくとも２倍の親和性で、予め決定された抗原に結合する。成句「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書において、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と同義的に使用される。
【００８１】
用語「ＫＤ」は、本明細書で用いられる場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指すことが意図される。
【００８２】
用語「ｋｄ」は、本明細書で用いられる場合、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関するオフレート定数を指すことが意図される。
【００８３】
用語「ｋａ」は、本明細書で用いられる場合、抗体と抗原との会合に関するオンレート定数を指すことが意図される。
【００８４】
用語「ＥＣ５０」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかのアッセイにおいて応答を誘導する、抗体またはその抗原結合性部分の濃度を指し、その濃度は、最大反応の５０％、すなわち最大反応とベースラインとの中間である。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域の遺伝子によってコードされる抗体のクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧｌ）を指す。一実施形態では、本開示のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプに属する。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号１に記載の重鎖定常ドメイン配列および配列番号２に記載の軽鎖定常ドメイン配列を有する。
【００８６】
用語「ジカウイルスＥＰに結合する」は、本明細書に記載の抗体の、例えば細胞表面上に発現された、または固体支持体に付着しているジカウイルスＥＰに結合する能力を指す。
【００８７】
用語「核酸分子」は、本明細書で用いられる場合、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００８８】
本発明の開示はまた、配列番号４〜５３に記載の配列の「保存的配列改変」、すなわち、アミノ酸配列の改変であって、そのヌクレオチド配列によってコードされるかまたはそのアミノ酸配列を含有する抗体の抗原への結合をなくさない改変も包含する。このような保存的配列改変は、保存的ヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、加えてヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失を含む。例えば、改変は、当業界において公知の標準的な技術、例えば部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発によって、配列番号４〜５３に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当業界において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電性極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。したがって、ヒト抗ＥＰ抗体における予測の非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合をなくさないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当業界において周知である（例えば、Brummellら、Biochem.  ３２巻：１１８０〜１１８７頁（１９９３年）；Kobayashiら  Protein  Eng.  １２巻（１０号）：８７９〜８８４頁（１９９９年）；およびBurksら  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９４巻：４１２〜４１７頁（１９９７年）を参照）。
【００８９】
代替として、ある特定の実施形態では、突然変異は、抗ＥＰ抗体のコード配列の全部または一部に沿って、例えば飽和突然変異誘発によってランダムに導入することができ、結果得られた改変された抗ＥＰ抗体は、結合活性に関してスクリーニングすることができる。
【００９０】
核酸の場合、用語「実質的な相同性」は、２つの核酸またはそれらの指定された配列が、最適にアラインされ比較される場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を含んで、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、一般的にはヌクレオチドの少なくとも約９０％から９５％、より好ましくは少なくとも約９８％から９９．５％同一であることを示す。あるいは、セグメントが、選択的なハイブリダイゼーション条件下で鎖の相補体とハイブリダイズすると予想される場合、実質的な相同性が存在する。
【００９１】
２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一な位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同一な位置の数／位置の総数×１００）。２つの配列間の配列の比較およびパーセント同一性の決定は、以下の非限定的な例で説明されるような数学的なアルゴリズムを使用して達成することができる。
【００９２】
２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）を使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０、または８０のギャップウェイトおよび１、２、３、４、５、または６のレングスウェイトを使用して、決定することができる。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．  ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．  Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（CABIOS、４巻：１１〜１７頁（１９８９年））を使用して、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップの伸長ペナルティーおよび４のギャップペナルティーを使用して、決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）に組み込まれたNeedlemanおよびWunsch（J.  Mol.  Biol.（４８巻）：４４４〜４５３頁（１９７０年））のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイトおよび１、２、３、４、５、または６のレングスウェイトを使用して、決定することができる。
【００９３】
本発明の開示の核酸およびタンパク質の配列はさらに、公開データベースへの検索を実行して、例えば関連の配列を同定するための「クエリー配列」としてとして使用することができる。このような検索は、Altschulら（１９９０年）J.  Mol.  Biol.  ２１５巻：４０３〜１０頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本開示の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、語長＝１２を用いて実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本開示のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、語長＝３を用いて実行することができる。比較目的でギャップ有りアライメントを得るために、ギャップ有りＢＬＡＳＴは、Altschulら、（１９９７年）Nucleic  Acids  Res.  ２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁で説明されるようにして利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ有りＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【００９４】
核酸は、全細胞中、細胞溶解産物中、または一部精製したまたは実質的に純粋な形態中に存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当業界において周知の他のものなどの標準的な技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製される場合、「単離される」かまたは「実質的に純粋にされる」。F.  Ausubelら編  Current  Protocols  in  Molecular  Biology、Greene  Publishing  and  Wiley  Interscience、New  York（１９８７年）を参照されたい。
【００９５】
アミノ酸配列が与えられたら、当分野を熟知するものは、遺伝子コードにおける冗長性を考慮して、アミノ酸配列を変更することなくそれをコードするヌクレオチド配列に保存的置換をなすことができる。核酸の組成は、ｃＤＮＡ、ゲノムまたはそれらの混合物のいずれか由来の自然の配列（ただし改変された制限部位などを除く）における場合が多いが、遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って突然変異させることができる。コード配列の場合、これらの突然変異は、要求に応じてアミノ酸配列に影響を与えることができる。特定には、自然のＶ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載の他のこのような配列に実質的に相同であるかまたはそれら由来のＤＮＡ配列が予期される（この場合、「誘導された」は、配列が、別の配列と同一であるかまたはそれから改変されていることを示す）。
【００９６】
用語「ベクター」は、本明細書で用いられる場合、連結させた別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントをライゲートさせることができる環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートさせることができる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソームの哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されたときに宿主細胞のゲノムに統合させることができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結している遺伝子の発現を指示することが可能である。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般的に、組換えＤＮＡ技術において有用性を有する発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書において、プラスミドはベクターの最も一般的に使用される形態であるため、「プラスミド」および「ベクター」は、同義的に使用することができる。しかしながら、本開示は、例えば等価な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損型レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形態も含むことが意図される。
【００９７】
用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、本明細書で用いられる場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図される。このような用語は、特定の対象細胞だけではなくこのような細胞の後代も指すことが意図されることが理解されるものとする。後の世代で突然変異または環境の影響のいずれかに起因するある種の改変が起こる可能性があるため、このような後代は、実際には親細胞と同一ではない可能性があるが、それでもなお本明細書で使用される用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【００９８】
用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の治療的または予防的措置を指す。「処置」方法は、障害もしくは再発する障害の１つまたは複数の症状を、予防する、治癒させる、遅延させる、その重症度を低減させる、もしくは緩和するために、またはこのような処置の非存在下で予測される寿命より長く対象の寿命を延長するために、このような処置が必要な対象、例えば、特定の抗原（例えば、ジカウイルス）に対する強化された免疫応答が必要な対象、または最終的にこのような障害を受ける可能性がある対象に、本発明の開示のヒト抗体を投与することを採用する。
【００９９】
用語「有効量」または「有効投薬量」は、所望の作用を達成するかまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、すでに疾患に罹った患者における疾患およびその合併症を治癒させるかまたは少なくとも部分的に抑えるのに十分な量と定義される。この使用のために有効な量は、処置されている障害の重症度および患者自身の免疫系の全身状態によって決まると予想される。
【０１００】
用語「患者」は、防止的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の開示の方法および組成物は、免疫障害を有する対象を処置するのに使用することができる。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。一部の実施形態では、対象は妊娠している。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「垂直感染」は、病原体（例えば、ジカウイルス）の母子感染を指す。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体は、妊娠した対象における垂直感染を予防する。
【０１０３】
本開示の様々な態様は、以下のサブセクションでさらに詳細に説明される。
【０１０４】
ジカウイルスエンベロープタンパク質に対する抗体の産生
本発明の開示は、ジカウイルスＥＰと結合する抗体を包含する。一部の実施形態では、ジカウイルスＥＰと結合する抗体は、抗ＴＤＲＤ３（Ｔｕｄｏｒドメイン含有３）ヒトモノクローナル抗体をベースとしたＣＤＲまたは最適化されたＣＤＲを含む、最適化されたモノクローナル抗体である。以下を含む（表２および３にさらに記載される）重鎖および軽鎖可変領域配列を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分が本明細書で提供される：
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｂ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｄ）それぞれ配列番号２０、２６および３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｅ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｆ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｇ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｈ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｉ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｊ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｋ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｌ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３７、４３および４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｍ）それぞれ配列番号２１、２７および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｎ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｏ）それぞれ配列番号２１、２８および３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｐ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｑ）それぞれ配列番号２２、２８および３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｒ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｓ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｔ）それぞれ配列番号２３、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｕ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３８、４４および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；
（ｖ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号３９、４５および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖；ならびに
（ｗ）それぞれ配列番号２１、２８および３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖、ならびにそれぞれ配列番号４０、４６および５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖。
【０１０５】
一部の実施形態では、ジカウイルスＥＰに結合する抗体は、抗ＴＤＲＤ３ヒトモノクローナル抗体をベースとした、重鎖および／もしくは軽鎖可変領域または最適化された重鎖および／もしくは軽鎖可変領域を含む、最適化されたモノクローナル抗体である。以下を含む重鎖および軽鎖可変配列を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分も本明細書で提供される：
（ａ）それぞれ配列番号４および１４；
（ｂ）それぞれ配列番号４および１５；
（ｃ）それぞれ配列番号９および１６；
（ｄ）それぞれ配列番号４および１６；
（ｅ）それぞれ配列番号４および１７；
（ｆ）それぞれ配列番号８および１４；
（ｇ）それぞれ配列番号７および１７；
（ｈ）それぞれ配列番号６および１５；
（ｉ）それぞれ配列番号６および５；
（ｊ）それぞれ配列番号７および５；
（ｋ）それぞれ配列番号８および５；
（ｌ）それぞれ配列番号９および５；
（ｍ）それぞれ配列番号１０および５；
（ｎ）それぞれ配列番号１１および５；
（ｏ）それぞれ配列番号６および１４；
（ｐ）それぞれ配列番号６および１６；
（ｑ）それぞれ配列番号６および１７；
（ｒ）それぞれ配列番号７および１４；
（ｓ）それぞれ配列番号７および１５；
（ｔ）それぞれ配列番号７および１６；
（ｕ）それぞれ配列番号８および１５；
（ｖ）それぞれ配列番号８および１６；
（ｗ）それぞれ配列番号８および１７；
（ｘ）それぞれ配列番号９および１４；
（ｙ）それぞれ配列番号９および１５；
（ｚ）それぞれ配列番号９および１７；
（ａａ）それぞれ配列番号１０および１４；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１０および１５；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１０および１６；
（ｄｄ）それぞれ配列番号１０および１７；
（ｅｅ）それぞれ配列番号１１および１４；
（ｆｆ）それぞれ配列番号１１および１５；
（ｇｇ）それぞれ配列番号１１および１６；ならびに
（ｈｈ）それぞれ配列番号１１および１７。
【０１０６】
本明細書に記載のモノクローナル抗体は、様々な公知の技術、例えばKohlerおよびMilstein、Nature  ２５６巻：４９５頁（１９７５年）によって説明されている標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を使用して産生することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則的に、モノクローナル抗体を産生するための他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは腫瘍形成性形質転換、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用するファージディスプレイ技術も採用することができる。
【０１０７】
したがって、ある特定の実施形態では、ジカウイルスＥＰと結合する抗体を産生するために、ハイブリドーマ方法が使用される。この方法において、マウスまたは他の適切な宿主動物は、免疫化に使用される抗原に特異的に結合すると予想される抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を発生させるのに好適な抗原で免疫化することができる。代替として、リンパ球は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化されてもよい。次いでリンパ球をポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成することができる（Goding、Monoclonal  Antibodies：Principles  and  Practice、５９〜１０３頁（Academic  Press、１９８６年））。ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、抗原に対するモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。所望の特異性、親和性、および／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によってサブクローニングして、標準的な方法によって成長させてもよい（Goding、Monoclonal  Antibodies：Principles  and  Practice、５９〜１０３頁（Academic  Press、１９８６年））。この目的に好適な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長させてもよい。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水、または血清から分離することができる。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、ジカウイルスＥＰと結合する抗体および抗体部分は、例えば、McCaffertyら、Nature、３４８巻：５５２〜５５４頁（１９９０年）Clacksonら、Nature、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）、Marksら、J.  Mol.  Biol.、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１年）およびHoetら（２００５年）Nature  Biotechnology  ２３巻、３４４〜３４８頁；Ladnerらの米国特許第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；および同第５，５７１，６９８号；Dowerらの米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号；McCaffertyらの米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号；およびGriffithsらの米国特許第５，８８５，７９３号；同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号および同第６，５９３，０８１号で説明されている技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。加えて、チェーンシャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲の）ヒト抗体の産生（Marksら、Bio/Technology、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年））だけでなく、非常に多くのファージライブラリーを構築するための戦略として組合せ感染（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）およびｉｎ  ｖｉｖｏでの組換え（Waterhouseら、Nuc.  Acids.  Res.、２１巻：２２６５〜２２６６頁（１９９３年））も、使用することができる。
【０１０９】
ある特定の実施形態では、ジカウイルスＥＰと結合する抗体は、上記のHoetらによって説明されているファージディスプレイ技術を使用して産生される。この技術は、ヒトドナーから単離された免疫グロブリン配列の固有な組合せを有し、重鎖ＣＤＲにおいて合成の多様性を有するヒトＦａｂライブラリーの生成を含む。次いでライブラリーを、ジカウイルスＥＰに結合するＦａｂに関してスクリーニングする。
【０１１０】
本開示の抗体を産生するハイブリドーマを生成するための好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は当業界において周知であり、免疫化された脾細胞を単離して融合させるための免疫化プロトコールおよび技術などが挙げられる。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、ジカウイルスＥＰに対する抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックまたは染色体導入されたマウスを使用して生成される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、本明細書では「ＨｕＭＡｂマウス」と称されるトランスジェニックマウスを使用して生成され、このマウスは、再配列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列を、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された突然変異と共にコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）を含有する（Lonberg,  N.ら（１９９４年）Nature  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低減を表し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子はクラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（Lonberg,  N.ら（１９９４年）、上記；Lonberg,  N.（１９９４年）Handbook  of  Experimental  Pharmacology  １１３巻：４９〜１０１頁；Lonberg,  N.およびHuszar,  D.（１９９５年）Intern.  Rev.  Immunol.  １３巻：６５〜９３頁、ならびにHarding,  F.およびLonberg,  N.（１９９５年）Ann.  N.Y.  Acad.  Sci  ７６４巻：５３６〜５４６頁に総論されている）。ＨｕＭＡｂマウスの調製は、以下で、さらに、Taylor,  L.ら（１９９２年）Nucleic  Acids  Research  ２０巻：６２８７〜６２９５頁；Chen,  J.ら（１９９３年）International  Immunology  ５巻：６４７〜６５６頁；Tuaillonら（１９９３年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci  USA  ９０巻：３７２０〜３７２４頁；Choiら（１９９３年）Nature  Genetics  ４巻：１１７〜１２３頁；Chen,  J.ら（１９９３年）EMBO  J.  １２巻：８２１〜８３０頁；  Tuaillonら（１９９４年）J.  Immunol.  １５２巻：２９１２〜２９２０頁；Lonbergら、（１９９４年）Nature  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁；Lonberg,  N.（１９９４年）Handbook  of  Experimental  Pharmacology  １１３巻：４９〜１０１頁；Taylor,  L.ら（１９９４年）International  Immunology  ６巻：５７９〜５９１頁；Lonberg,  N.およびHuszar,  D.（１９９５年）Intern.  Rev.  Immunol.  １３巻：６５〜９３頁；Harding,  F.およびLonberg,  N.（１９９５年）Ann.  N.Y.  Acad.  Sci  ７６４巻：５３６〜５４６頁；Fishwild,  D.ら（１９９６年）Nature  Biotechnology  １４巻：８４５〜８５１頁で詳細に説明されている。さらに、全てLonbergおよびKayならびにGenPharm  Internationalの、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号；および同第５，７７０，４２９号；Suraniらの米国特許第５，５４５，８０７号；１９９８年６月１１日に公開された国際公開ＷＯ９８／２４８８４号；１９９４年１１月１０日に公開されたＷＯ９４／２５５８５号；１９９３年６月２４日に公開されたＷＯ９３／１２２７号；１９９２年１２月２３日に公開されたＷＯ９２／２２６４５号；１９９２年３月１９日に公開されたＷＯ９２／０３９１８号を参照されたい。
【０１１２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、導入遺伝子および導入染色体（transchomosome）にヒト免疫グロブリン配列を有するマウス、例えばヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を有するマウスを使用して発生させることができる。このようなマウスは、当業界では「ＫＭマウス」と称され、IshidaらのＰＣＴ公報ＷＯ０２／４３４７８号で詳細に説明されている。
【０１１３】
さらにその上、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系が当業界において利用可能であり、本開示の抗ジカウイルスＥＰ抗体を発生させるのに使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称される代替のトランスジェニック系を使用することができ、このようなマウスは、例えば、Kucherlapatiらの米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号および同第６，１６２，９６３号で説明されている。
【０１１４】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替の導入染色体動物系が当業界において利用可能であり、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体を発生させるのに使用することができる。例えば、ヒト重鎖導入染色体とヒト軽鎖導入染色体（tranchromosome）の両方を有するマウスは、当業界では「ＴＣマウス」と称され、使用が可能であり、このようなマウスは、Tomizukaら（２０００年）Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ９７巻：７２２〜７２７頁で説明されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を有するウシが当業界において説明されており（Kuroiwaら（２００２年）Nature  Biotechnology  ２０巻：８８９〜８９４頁）、本開示の抗ジカウイルスＥＰ抗体を発生させるのに使用することができる。
【０１１５】
当業界で説明されるヒト抗体を発生させるための追加のマウス系、これらに限定されないが、（ｉ）マウスにおいてキメラ抗体（ヒトＶ／マウスＣ）を発生させ、それに続き標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して完全ヒト抗体に変換されるように、内因性マウス重鎖および軽鎖可変領域が、内因性マウス定常領域に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域と相同組換えにより置き換えられている、ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；および（ｉｉ）再配列されていないヒト重鎖可変領域を含有するが単一の再配列されたヒトに共通の軽鎖可変領域を含有しないマウスである、ＭｅＭｏ（登録商標）マウス（Ｍｅｒｕｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）なども、本開示の抗ジカウイルスＥＰ抗体を発生させるのに適用することができる。このようなマウス、および抗体を発生させるためのその使用は、例えば、ＷＯ２００９／１５７７７、ＵＳ２０１０／００６９６１４、ＷＯ２０１１／０７２２０４、ＷＯ２０１１／０９７６０３、ＷＯ２０１１／１６３３１１、ＷＯ２０１１／１６３３１４、ＷＯ２０１２／１４８８７３、ＵＳ２０１２／００７０８６１およびＵＳ２０１２／００７３００４で説明されている。
【０１１６】
本明細書に記載のヒトモノクローナル抗体は、免疫化されたときにヒト抗体反応が生成できるようにヒト免疫細胞が再構築されたＳＣＩＤマウスを使用して調製することもできる。このようなマウスは、例えば、Wilsonらの米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号で説明されている。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のｍＡｂは、参照により本明細書に組み入れられるOlingerら、PNAS  ２０１２年；１０９巻、１８０３０〜１８０３５頁で説明されるような分解されたウイルスベクターを使用して植物で産生することができる。ある特定の実施形態では、ｍＡｂは、タバコ植物で産生される。
【０１１８】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、本明細書に記載のマウスモノクローナル抗体の配列をベースとして調製することができる。キメラ抗体は、軽鎖および重鎖遺伝子が典型的には異なる種に属する免疫グロブリンの遺伝子セグメントから遺伝子工学によって構築されている抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変（Ｖ）セグメントは、ヒト定常（Ｃ）セグメント、例えばＩｇＧ１およびＩｇＧ４に合体させてもよい。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。したがって典型的なキメラ抗体は、マウス抗体由来のＶまたは抗原−結合ドメインおよびヒト抗体由来のＣまたはエフェクタードメインからなるハイブリッドタンパク質である。
【０１１９】
ヒト化抗体の産生
用語「ヒト化抗体」は、実質的にヒト抗体鎖（アクセプター免疫グロブリンまたは抗体と称される）由来の可変領域のフレームワーク残基を含む少なくとも１つの鎖および実質的にマウス抗体（ドナー免疫グロブリンまたは抗体と称される）由来の少なくとも１つの相補性決定領域を含む抗体を指す。Queenら、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA  ８６巻：１００２９〜１００３３頁（１９８９年）、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、Selickら、ＷＯ９０／０７８６１、およびWinter、米国特許第５，２２５，５３９号（あらゆる目的のために参照によりそれら全体が開示に組み入れられる）を参照されたい。定常領域も、存在する場合、実質的にまたは全体的にヒト免疫グロブリン由来である。
【０１２０】
マウスＣＤＲのヒト可変ドメインフレームワークへの置換は、ヒト可変ドメインフレームワークがＣＤＲの起源となるマウス可変フレームワークと同じまたは類似のコンフォメーションをとる場合、その正しい空間的な方向の保持をもたらす可能性が最も高い。これは、フレームワーク配列が、ＣＤＲが誘導されたマウス可変フレームワークドメインと高度な配列同一性を表すヒト抗体由来のヒト可変ドメインを得ることによって達成される。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同一または異なるヒト抗体配列から誘導することができる。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であってもよいし、または数種のヒト抗体のコンセンサス配列であってもよい。Kettleboroughら、Protein  Engineering  ４巻：７７３頁（１９９１年）；Kolbingerら、Protein  Engineering  ６巻：９７１頁（１９９３年）およびCarterら、ＷＯ９２／２２６５３を参照されたい。
【０１２１】
マウスドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性決定領域が同定されたら、次のステップは、結果得られるヒト化抗体の特性を最適化するために、もしあるとすればこれらの要素由来のどの残基が置換されるべきかを決定することである。一般的に、マウス残基の導入は、ヒトにおいてヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を惹起する抗体のリスクを増加させるため、ヒトアミノ酸残基のマウスのものでの置換は最小化されるべきである。特定の患者における、または治験中のＨＡＭＡ応答をモニターするために、当業界で認識されている免疫応答の決定方法を実行することができる。ヒト化抗体が投与された患者は、前記療法の投与開始時とその間中、免疫原性評価を受けることができる。ＨＡＭＡ応答は、例えば、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／または固相ＥＬＩＳＡ分析などの当業者公知の方法を使用して、患者からの血清試料中でヒト化された治療試薬に対する抗体を検出することによって測定される。
【０１２２】
ヒト可変領域のフレームワーク残基由来のある特定のアミノ酸は、ＣＤＲコンフォメーションおよび／または抗原への結合へのその起こり得る影響に基づく置換のために選択される。マウスＣＤＲ領域とヒト可変フレームワーク領域との天然にはない並置が、天然にはないコンフォメーションの制約を引き起こす可能性があり、このような制約は、ある特定のアミノ酸残基の置換によって修正されない限り、結合親和性の損失をもたらす。
【０１２３】
置換のためのアミノ酸残基の選択は、コンピューターモデリングによって部分的に決定される。免疫グロブリン分子の３次元画像を作成するためのコンピューターのハードウェアおよびソフトウェアが、本明細書に記載される。一般的に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖またはそのドメインの解像済みの構造から開始して作成される。モデル化しようとする鎖は、アミノ酸配列の類似性に関して、解像済みの３次元構造の鎖またはドメインと比較され、最大の配列類似性を示す鎖またはドメインが、分子モデル構築の開始点として選択される。少なくとも５０％の配列同一性を有する鎖またはドメインが、モデリングのために選択され、好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％またはそれより高い配列同一性を有するものがモデリングのために選択される。解像済みの開始構造は、モデル化される免疫グロブリン鎖またはドメイン中の実際のアミノ酸と開始構造中のアミノ酸との差を考慮に入れるように改変される。次いで改変された構造は、複合免疫グロブリンに組み立てられる。最終的に、エネルギーの最小化によって、さらに、全ての原子が互いに適切な距離内であること、および結合距離と角度が化学的に許容できる限界内であることを検証することによって、モデルを洗練させる。
【０１２４】
置換のためのアミノ酸残基の選択はまた、特定の配置におけるアミノ酸の特徴の調査、または特定のアミノ酸の置換もしくは変異誘発の作用の実験的な観察によって部分的に決定することもできる。例えば、マウス可変領域のフレームワーク残基と選択されたヒト可変領域のフレームワーク残基とでアミノ酸が異なる場合、ヒトフレームワークのアミノ酸は通常、マウス抗体由来の等価なフレームワークのアミノ酸が：
（１）抗原と直接非共有結合するか、
（２）ＣＤＲ領域と隣接するか、
（３）別の方法でＣＤＲ領域と相互作用するか（例えば、コンピューターモデリングによって決定した場合、ＣＤＲ領域の約３〜６オングストローム以内である）、または
（４）ＶＬ−ＶＨの境界面に関与している
と合理的に予測される場合、そのアミノ酸で置換されると予想される。
【０１２５】
「抗原と直接非共有結合する」残基としては、確立された化学的な力に従って、例えば水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによって抗原上のアミノ酸と直接相互作用する優れた見込みを有する、フレームワーク領域中の位置にあるアミノ酸が挙げられる。
【０１２６】
ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のKabatらまたはChothiaらで定義された通りである。上記のKabatらで定義されるフレームワーク残基が、上記のChothiaらで定義される構造的なループ残基を構成する場合、マウス抗体に存在するアミノ酸は、ヒト化抗体への置換のために選択することが可能である。「ＣＤＲ領域に隣接する」残基としては、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列中のＣＤＲの１つまたは複数に直接隣接する位置にあるアミノ酸残基、例えば、Kabatで定義されるＣＤＲまたはChothiaで定義されるＣＤＲに直接隣接する位置にあるアミノ酸残基が挙げられる（例えば、ChothiaおよびLesk  J  M  B  １９６巻：９０１頁（１９８７年）を参照）。これらのアミノ酸は特に、ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用する可能性が高く、アクセプターから選択される場合、ドナーＣＤＲを歪ませて親和性を低下させる可能性が高い。さらに、隣接するアミノ酸は、抗原と直接相互作用する可能性があり（Amitら、Science、２３３巻：７４７頁（１９８６年）、参照により本明細書に組み入れられる）、ドナーからこれらのアミノ酸を選択することが、元の抗体において親和性を提供する抗原の接触を全て維持するために望ましい場合がある。
【０１２７】
「別の方法でＣＤＲ領域と相互作用する」残基としては、二次構造分析によってＣＤＲ領域に影響を与えるのに十分な空間的な方向にあることが決定されるものが挙げられる。ある特定の実施形態では、「別の方法でＣＤＲ領域と相互作用する」残基は、ドナー免疫グロブリンの３次元モデル（例えば、コンピューター生成モデル）を分析することによって同定される。典型的には元のドナー抗体の３次元モデルは、ＣＤＲの外側におけるある特定のアミノ酸がＣＤＲに近接しており、水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによってＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用する優れた見込みを有することを示す。そのアミノ酸位置において、アクセプター免疫グロブリンのアミノ酸ではなくドナー免疫グロブリンのアミノ酸が選択され得る。この基準によるアミノ酸は、一般的に、ＣＤＲ中のいくつかの原子の約３オングストローム単位（Ａ）以内に側鎖原子を有すると予想され、例えば上記で列挙したものなどの確立された化学的な力によってＣＤＲ原子と相互作用できる原子を含有するはずである。
【０１２８】
水素結合を形成する可能性がある原子のケースでは、それらの核の間で３オングストロームが測定されるが、結合を形成しない原子の場合は、それらのファンデルワールス表面間で３オングストロームが測定される。したがって、後者のケースでは、核は、相互作用が可能であるとみなされる原子に対して約６オングストローム（３オングストローム＋ファンデルワールス半径の合計）以内でなければならない。多くのケースにおいて、核は、４または５から６オングストローム離れていると予想される。アミノ酸がＣＤＲと相互作用できるかどうかの決定において、重鎖ＣＤＲ２の最後の８アミノ酸をＣＤＲの一部とみなさないことが好ましく、これはなぜなら、構造の観点から、これらの８アミノ酸はよりフレームワークの一部としての挙動を示すためである。
【０１２９】
ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用することが可能なアミノ酸は、さらに別の方法でも同定することができる。各フレームワークのアミノ酸の溶媒接触表面積は、２つの方法で、すなわち（１）無傷抗体において、および（２）そのＣＤＲが除去された抗体からなる仮定の分子において計算される。これらの数値間の有意差が約１０平方オングストロームまたはそれより高いことは、フレームワークのアミノ酸の溶媒へのアクセスが、ＣＤＲによって少なくとも部分的にブロックされており、それゆえにアミノ酸がＣＤＲと接触していることを示す。アミノ酸の溶媒接触表面積は、当業界において公知のアルゴリズムを使用して抗体の３次元モデルに基づいて計算することができる（例えば、Connolly,  J.  Appl.  Cryst.  １６巻：５４８頁（１９８３年）ならびにLeeおよびRichards、J.  Mol.  Biol.  ５５巻：３７９頁（１９７１年）、これらの両方は、参照により本明細書に組み入れられる）。フレームワークのアミノ酸もまた、場合により、次にＣＤＲと接触する別のフレームワークのアミノ酸のコンフォメーションに影響を及ぼすことによって、ＣＤＲと間接的に相互作用する場合がある。
【０１３０】
フレームワーク中の数々の位置におけるアミノ酸が、多くの抗体においてＣＤＲと相互作用が可能なことが公知である（ChothiaおよびLesk、上記、Chothiaら、上記ならびにTramontanoら、J.  Mol.  Biol.  ２１５巻：１７５頁（１９９０年）、これらの全ては、参照により本明細書に組み入れられる）。とりわけ、軽鎖の２、４８、６４および７１位ならびに重鎖の２６〜３０、７１および９４位におけるアミノ酸（Kabatによる番号付け）は、多くの抗体においてＣＤＲと相互作用することが可能なことが公知である。軽鎖の３５位ならびに重鎖の９３および１０３位におけるアミノ酸も、ＣＤＲと相互作用する可能性が高い。全てのこれらの番号付けされた位置において、ヒト化免疫グロブリン中にあるべきものとしてアクセプターアミノ酸ではなくドナーアミノ酸を選択すること（それらが異なる場合）が好ましい。一方で、ＣＤＲ領域と相互作用することが可能なある特定の残基、例えば軽鎖の最初の５アミノ酸は、時には、ヒト化免疫グロブリンにおける親和性を損なわずにアクセプター免疫グロブリンから選択されてもよい。
【０１３１】
「ＶＬ−ＶＨの境界面に関与する」残基または「充填残基」としては、例えば、NovotnyおよびHaber、Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA、８２巻：４５９２〜６６頁（１９８５年）または上記のChothiaらによって定義されるような、ＶＬとＶＨとの境界面における残基が挙げられる。一般的に、異例な充填残基は、それらがヒトフレームワーク中のものとは異なる場合、ヒト化抗体中に保持されると予想される。
【０１３２】
一般的に、上記の基準を満たすアミノ酸の１つまたは複数が置換されている。一部の実施形態では、上記の基準を満たす全てまたはほとんどのアミノ酸が置換されている。場合によっては、特定のアミノ酸が上記の基準を満たすかどうかについて多少の曖昧さがあることから、代替のバリアント免疫グロブリンが産生され、そのうちの１つはその特定の置換を有するが、その他のものは有さない。このようにして産生された代替のバリアント免疫グロブリンを、所望の活性に関して本明細書に記載のアッセイのいずれかで試験して、好ましい免疫グロブリンを選択することができる。
【０１３３】
通常、ヒト化抗体におけるＣＤＲ領域は、実質的に同一であり、より一般的には、ドナー抗体の対応するＣＤＲ領域に同一である。通常望ましくないが、結果得られたヒト化免疫グロブリンの結合親和性に目立った影響を与えずに、ＣＤＲ残基の１つまたは複数の保存的アミノ酸置換をなすことも時には考えられる。保存的置換としては、ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；およびｐｈｅ、ｔｙｒなどの組合せが意図される。
【０１３４】
置換のための追加の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンにとって異例であるかまたは「まれな」アクセプターヒトフレームワークのアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の等価な位置からの、またはより典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置からのアミノ酸で置換することができる。例えば、アクセプター免疫グロブリンのヒトフレームワーク領域中のアミノ酸が、その位置にとってまれであり、ドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸が、ヒト免疫グロブリン配列におけるその位置において共通している場合；またはアクセプター免疫グロブリン中のアミノ酸が、その位置にとってまれであり、ドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸も、他のヒト配列に対してまれである場合、置換が望ましい可能性がある。これらの基準は、ヒトフレームワーク中の不規則なアミノ酸が抗体構造を確実に崩壊させないことの助けになる。さらに、異例なヒトアクセプターのアミノ酸を、ヒト抗体にとって偶然にも典型的なドナー抗体由来のアミノ酸で置き換えることによって、ヒト化抗体の免疫原性をより低くすることができる。
【０１３５】
用語「まれな」は、本明細書で使用される場合、その位置において、代表的な配列サンプル中の配列の約２０％未満、ただし通常は約１０％未満で生じるアミノ酸を示し、用語「共通の」は、本明細書で使用される場合、代表的なサンプル中の配列の約２５％超、ただし通常は約５０％超で生じるアミノ酸を示す。例えば、全てのヒト軽鎖および重鎖可変領域配列は、互いに特に相同であり、ある特定の重要な位置に同じアミノ酸を有する配列の「下位群」にそれぞれ群分けされる（Kabatら、上記）。ヒトアクセプター配列中のアミノ酸が、ヒト配列のなかで「まれ」かまたは「共通」かを決定する場合、アクセプター配列として同じ下位群中のヒト配列のみを考察することがしばしば好ましいと予想される。
【０１３６】
置換のための追加の候補は、上記のChothiaらによって提唱されている代替の定義に基づきＣＤＲ領域の一部として同定されると予想されるアクセプターのヒトフレームワークのアミノ酸である。置換のための追加の候補は、ＡｂＭおよび／または接触の定義に基づきＣＤＲ領域の一部として同定されると予想されるアクセプターのヒトフレームワークのアミノ酸である。
【０１３７】
置換のための追加の候補は、まれなまたは異例なドナーのフレームワーク残基に相当するアクセプターのフレームワーク残基である。まれなまたは異例なドナーのフレームワーク残基は、その位置でマウス抗体にとってまれかまたは異例なもの（本明細書で定義される通り）である。マウス抗体の場合、下位群をKabatに従って決定して、コンセンサスとは異なる残基の位置を同定することができる。これらのドナーの特異的な差は、活性を強化するマウス配列における体細胞変異を指摘している可能性がある。結合に影響を与えることが予測される異例な残基は保持され、それに対して結合にとって重要ではないと予測される残基は置換され得る。
【０１３８】
置換のための追加の候補は、アクセプターのフレームワーク領域中に生じる非生殖細胞系の残基である。例えば、アクセプター抗体鎖（すなわち、ドナー抗体鎖と有意な配列同一性を有するヒト抗体鎖）が、生殖細胞系の抗体鎖（同様にドナー鎖と有意な配列同一性を有する）にアラインされる場合、アクセプター鎖のフレームワークと生殖細胞系の鎖のフレームワークとで一致しない残基は、生殖細胞系の配列由来の対応する残基で置換することができる。
【０１３９】
上記で論じられた特異的なアミノ酸置換以外に、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、通常、実質的に同一であり、より一般的には、それらが誘導されたヒト抗体のフレームワーク領域に同一である。当然ながら、フレームワーク領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性または親和性にほとんど直接寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多くの個々の保存的置換が、結果得られたヒト化免疫グロブリンの特異性または親和性を明らかに変化させることなく許容され得る。したがって、一実施形態では、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに少なくとも８５％の配列同一性を有する。別の実施形態では、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも９０％、好ましくは９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。しかしながら、一般的に、このような置換は望ましくない。
【０１４０】
ヒト化抗体は、好ましくは、少なくとも１０７、１０８、１０９または１０１０Ｍ−１の抗原への特異的な結合親和性を表す。通常、抗原へのヒト化抗体の結合親和性の上限は、ドナー免疫グロブリンの結合親和性の３倍、４倍または５倍以内である。多くの場合、結合親和性の下限も、ドナー免疫グロブリンの結合親和性の３倍、４倍または５倍以内である。代替として、結合親和性は、置換がないヒト化抗体（例えば、ドナーＣＤＲおよびアクセプターＦＲを有するがＦＲ置換がない抗体）の結合親和性と比較することができる。このような例において、最適化された抗体（置換を有する）の結合は、非置換の抗体の結合より、好ましくは少なくとも２倍から３倍大きいか、または３倍から４倍大きい。比較するために、様々な抗体の活性は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（すなわち、非標識の試薬を使用する表面プラズモン共鳴）または競合結合アッセイによって決定することができる。
【０１４１】
改変された配列を有する抗体の生成
ある特定の実施形態では、抗ＴＤＲＤ３モノクローナル抗体由来の重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ（それぞれ配列番号４および５）を含む抗体であって、抗体がジカウイルスＥＰに結合するように、少なくとも１つのＣＤＲがアミノ酸置換を含む、抗体が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、２８、２９、３１、３２、５２、５２Ａ、５３、５４、５５、１００、１００Ａ、１００Ｂ、１００Ｃ、１００Ｄ、１００Ｅ、１００Ｆ、１００Ｇ、１００Ｈ、１０２位、またはそれらの組合せにおけるアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、２８位におけるアミノ酸置換は、セリンである。ある特定の実施形態では、２８位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、２８位におけるアミノ酸は、欠失される。ある特定の実施形態では、２９位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニンである。ある特定の実施形態では、３１位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、３２位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、５２位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、５２Ａ位におけるアミノ酸置換は、グリシンである。ある特定の実施形態では、５３位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。ある特定の実施形態では、５４位におけるアミノ酸置換は、グリシンである。ある特定の実施形態では、５５位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸である。ある特定の実施形態では、９９位におけるアミノ酸は、欠失される。ある特定の実施形態では、１００位におけるアミノ酸置換は、セリンチロシンである。ある特定の実施形態では、１００Ａ位におけるアミノ酸置換は、セリンである。ある特定の実施形態では、１００Ａ位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、１００Ｂ位におけるアミノ酸置換は、アスパラギンである。ある特定の実施形態では、１００Ｃ位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニンである。ある特定の実施形態では、１００Ｄ位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、１００Ｅ位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、１００Ｆ位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、１００Ｇ位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、１００Ｈ位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、１０２位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。ある特定の実施形態では、１０２位におけるアミノ酸置換は、バリンである。
【０１４２】
ある特定の実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、２６、２９、３１、３２、３３、５０、５３、５４、５５、５６、９１、９３、９４、９５、９５Ｂ、９６、９７位、またはそれらの組合せにおけるアミノ酸置換を有する。ある特定の実施形態では、２６位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、２９位におけるアミノ酸置換は、イソロイシンである。ある特定の実施形態では、３１位におけるアミノ酸置換は、バリンである。ある特定の実施形態では、３２位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニンである。ある特定の実施形態では、３３位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。ある特定の実施形態では、５０位におけるアミノ酸置換は、アスパラギン酸である。ある特定の実施形態では、５３位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、５４位におけるアミノ酸置換は、アルギニンである。ある特定の実施形態では、５４位におけるアミノ酸置換は、アスパラギンである。ある特定の実施形態では、５５位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。ある特定の実施形態では、５６位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。ある特定の実施形態では、９１位におけるアミノ酸置換は、アルギニンである。ある特定の実施形態では、９３位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、９４位におけるアミノ酸置換は、アスパラギンである。ある特定の実施形態では、９５位におけるアミノ酸置換は、トリプトファンである。ある特定の実施形態では、９５Ｂ位におけるアミノ酸置換は、プロリンである。ある特定の実施形態では、９６位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。ある特定の実施形態では、９７位におけるアミノ酸置換は、セリンである。ある特定の実施形態では、プロリンが、９５Ｂ位のアミノ酸と９６位のアミノ酸との間に付加される。
【０１４３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲを含み、重鎖可変領域ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＸ１ＦＳＴＹ（配列番号５４）を有し、式中、Ｘ１は、存在してもしなくてもよく、セリンおよびスレオニンから選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ２は、アミノ酸配列Ｘ２ＧＥＧＤＳ（配列番号５５）を有し、式中、Ｘ２は、セリンおよびスレオニンから選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＹＸ３ＮＦＹＹＹＴＭＤＸ４（配列番号５６）を有し、式中、Ｘ３は、セリンおよびスレオニンから選択され、Ｘ４は、アラニンおよびバリンから選択される。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＳＦＳＴＹ（配列番号２１）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＧＳＴＹ（配列番号２２）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＦＳＴＹ（配列番号２３）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＴＧＥＧＤＳ（配列番号２８）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＧＥＧＤＳ（配列番号２７）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＡ（配列番号３２）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＹＳＮＦＹＹＹＹＴＭＤＶ（配列番号３３）を有する。ある特定の実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＧＹＴＮＦＹＹＹＴＭＤＡ（配列番号３４）を有する。
【０１４５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲを含み、軽鎖可変領域ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＸ５ＱＳＩＸ６ＴＦＬＡ（配列番号５７）を有し、式中、Ｘ５は、セリンおよびスレオニンから選択され、Ｘ６は、セリンおよびバリンから選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＴＸ７ＡＸ８（配列番号５６）を有し、式中、Ｘ７は、アルギニンおよびアスパラギンから選択され、Ｘ８は、セリンおよびスレオニンから選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＸ９（配列番号５６）を有し、式中、Ｘ９は、セリンおよびスレオニンから選択される。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＴＱＳＩＳＴＦＬＡ（配列番号３８）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＳＱＳＩＳＴＦＬＡ（配列番号３９）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＲＡＴＱＳＩＶＴＦＬＡ（配列番号４０）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＴＲＡＳ（配列番号４４）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＴＲＡＴ（配列番号４５）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＤＡＳＴＮＡＳ（配列番号４６）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＳ（配列番号５０）を有する。ある特定の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＲＹＮＷＰＰＹＴ（配列番号５１）を有する。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体は、可変領域配列中にフレームワーク突然変異を含有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、重鎖可変領域配列は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、１、５、２３、３３、３８、４７、４９、５０、５７、５８、６８、７１、７３、７８、８０、８１、８２Ｂ、８２Ｃ、８４、９３、１０８位、またはそれらの組合せにおけるアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、１位におけるアミノ酸置換は、グルタミンである。一部の実施形態では、５位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。一部の実施形態では、２３位におけるアミノ酸置換は、セリンである。一部の実施形態では、３３位におけるアミノ酸置換は、セリンである。一部の実施形態では、３８位におけるアミノ酸置換は、リシンである。一部の実施形態では、４７位におけるアミノ酸置換は、チロシンである。一部の実施形態では、４９位におけるアミノ酸置換は、セリンである。一部の実施形態では、５０位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。一部の実施形態では、５７位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。一部の実施形態では、５８位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニンである。一部の実施形態では、６８位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、７１位におけるアミノ酸置換は、アルギニンである。一部の実施形態では、７３位におけるアミノ酸置換は、アスパラギンである。一部の実施形態では、７８位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。一部の実施形態では、８０位におけるアミノ酸置換は、フェニルアラニンである。一部の実施形態では、８１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、８２（Ｂ）位におけるアミノ酸置換は、リシンである。一部の実施形態では、８２（Ｃ）位におけるアミノ酸置換は、バリンである。一部の実施形態では、８４位におけるアミノ酸置換は、プロリンである。一部の実施形態では、９３位におけるアミノ酸置換は、バリンである。一部の実施形態では、１０８位におけるアミノ酸置換は、セリンである。一部の実施形態では、１０８位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。一部の実施形態では、１０８位におけるアミノ酸置換は、メチオニンである。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体は、可変領域配列中にフレームワーク突然変異を含有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、重鎖および軽鎖可変領域配列を含み、軽鎖可変領域配列は、Ｃｈｏｔｈｉａによる番号付けで、１、３、４、９、１０、１３、１５、１７、１９、２１、２２、３８、４２、４５、５８、６０、７６、７７、７９、８５、１０４位、またはそれらの組合せにおけるアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、１位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、３位におけるアミノ酸置換は、バリンである。一部の実施形態では、４位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。一部の実施形態では、９位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。一部の実施形態では、１０位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。一部の実施形態では、１３位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。一部の実施形態では、１５位におけるアミノ酸置換は、プロリンである。一部の実施形態では、１７位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、１９位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。一部の実施形態では、２１位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。一部の実施形態では、２２位におけるアミノ酸置換は、セリンである。一部の実施形態では、３８位におけるアミノ酸置換は、ヒスチジンである。一部の実施形態では、４２位におけるアミノ酸置換は、グルタミンである。一部の実施形態では、４５位におけるアミノ酸置換は、アルギニンである。一部の実施形態では、５８位におけるアミノ酸置換は、イソロイシンである。一部の実施形態では、６０位におけるアミノ酸置換は、アラニンである。一部の実施形態では、７６位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。一部の実施形態では、７７位におけるアミノ酸置換は、アルギニンである。一部の実施形態では、７７位におけるアミノ酸置換は、スレオニンである。一部の実施形態では、７９位におけるアミノ酸置換は、グルタミン酸である。一部の実施形態では、８５位におけるアミノ酸置換は、バリンである。一部の実施形態では、１０４位におけるアミノ酸置換は、ロイシンである。
【０１４９】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体の可変領域配列またはその部分は、結合（すなわち、改変されていない抗体と同じエピトープへの）を保持する構造的に関連する抗ジカウイルスＥＰ抗体が作製されるように改変される。
【０１５０】
したがって、本開示の一態様において、上述した操作された抗体のＣＤＲ１、２、および／または３の領域は、本明細書で開示された抗体のアミノ酸配列のような正確なアミノ酸配列を含んでいてもよい。しかしながら、本開示の他の態様において、抗体は、本明細書で開示された抗体の正確なＣＤＲ配列由来の誘導体を含み、それでもなおジカウイルスＥＰと効果的に結合する能力を保持する。このような配列改変は、１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換、例えば、上述したような保存的配列改変を含んでいてもよい。また配列改変は、本明細書で開示された抗体の特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列について上述したコンセンサス配列に基づいていてもよい。
【０１５１】
したがって、別の実施形態では、操作された抗体は、例えば、本明細書で開示された抗体の１つまたは複数のＣＤＲに９０％、９５％、９８％または９９．５％同一な１つまたは複数のＣＤＲで構成されていてもよい。上記で列挙された値の間の範囲、例えば、上記の配列の１つまたは複数に９０〜９５％、９５〜９８％、または９８〜１００％同一なＣＤＲも、本発明の開示に包含されることが意図される。
【０１５２】
別の実施形態では、理想的な結合定数が達成されるように、より好ましい結合のオンレート、より好ましい結合のオフレート、または両方を達成するために、ＣＤＲの１つまたは複数の残基を変更して、結合を改変してもよい。この戦略を使用して、例えば１０１０Ｍ−１またはそれを超える極めて高い結合親和性を有する抗体を獲得することができる。ＣＤＲ領域を変更し、それに続いて結果生じる結合分子を所望の結合の変化に関してスクリーニングするのに、当業界において周知の親和性成熟技術および本明細書に記載の技術を使用することができる。したがって、ＣＤＲが変更される場合、最もよい組合せの結合および低い免疫原性に関して最適化された抗体が獲得されるように、結合親和性の変化に加えて免疫原性をモニターしてスコア付けすることができる。
【０１５３】
したがって、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内の可変領域の改変のために、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介変異誘発を実行して突然変異を導入することができ、抗体結合に対する作用または目的とする他の機能特性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのアッセイで評価することができる。好ましくは、保存的改変（本明細書で論じられるように）が導入される。突然変異は、アミノ酸の置換、付加または欠失であり得るが、好ましくは置換である。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４または５つのみの残基が変更される。
【０１５４】
一般的に、抗体のフレームワーク領域は、それらが誘導されたヒト生殖細胞系の配列のフレームワーク領域に、通常実質的に同一であり、より一般的には同一である。当然ながら、フレームワーク領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性または親和性にほとんど直接寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多くの個々の保存的置換は、結果得られた免疫グロブリンの特異性または親和性の明らかな変化がなければ、許容することができる。したがって、一実施形態では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系の可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも８５％の配列同一性を有する。別の実施形態では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系の可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有する。
【０１５５】
フレームワーク改変はまた、例えばＵＳ２００３／０１５３０４３でCarrらによって説明されるようにして、抗体の免疫原性を低減するか、またはその中に存在するＴ細胞エピトープを低減もしくは除去するようになすこともできる。
【０１５６】
本開示の操作された抗体としては、例えば抗体の特性を改善するためにＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に改変がなされたものが挙げられる。典型的には、このようなフレームワーク改変は、抗体の免疫原性を減少させるためになされる。例えば、１つのアプローチは、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系の配列に「復帰突然変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が誘導される生殖細胞系の配列とは異なるフレームワーク残基を含有する可能性がある。このような残基は、抗体のフレームワーク配列を抗体が誘導される生殖細胞系の配列と比較することによって同定することができる。
【０１５７】
別のタイプのフレームワーク改変は、Ｔ細胞エピトープを除去することによって抗体の起こり得る免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内の１つもしくは複数の残基を突然変異させること、または１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つもしくは複数の残基でさえも突然変異させることを含む。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも称され、米国特許公開第２００３０１５３０４３号でさらに詳細に説明されている。
【０１５８】
無傷抗体を発現させるための部分的な抗体配列の使用
抗体は、６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）中に配置されたアミノ酸残基を介して優勢に標的抗原と相互作用する。この理由のために、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間で、ＣＤＲの外側の配列より多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体−抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上にグラフト化された、特異的な天然に存在する抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特異的な天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Riechmann,  L.ら、１９９８年、Nature  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Jones,  P.ら、１９８６年、Nature  ３２１巻：５２２〜５２５頁；およびQueen,  C.ら、１９８９年、Proc.  Natl.  Acad.を参照、U.S.A.  ８６巻：１００２９〜１００３３頁を参照）。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系の抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースから得ることができる。これらの生殖細胞系の配列は、Ｂ細胞の成熟中のＶ（Ｄ）Ｊの合体によって形成される完全に組み立てられた可変遺伝子を含まないと予想されることから、成熟抗体の遺伝子配列とは異なると予想される。生殖細胞系の遺伝子配列はまた、個体における高親和性二次レパートリー抗体の配列とも、可変領域全体にわたりむらなく異なっていると予想される。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域のアミノ末端部分において比較的低頻度である。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域１のアミノ末端部分およびフレームワーク領域４のカルボキシ末端部分において比較的低頻度である。さらに、多くの体細胞変異は、抗体の結合特性を有意に変更しない。この理由のために、元の抗体の結合特性に類似した結合特性を有する無傷の組換え抗体を再度作製するために特定の抗体のＤＮＡ配列全体を得ることは、必ずしも必要ではない（１９９９年３月１２日付けで出願されたＰＣＴ／ＵＳ９９／０５５３５を参照）。この目的のためには、典型的にはＣＤＲ領域にわたる部分的な重鎖および軽鎖配列で十分である。部分的な配列は、どの生殖細胞系の可変および合体する遺伝子セグメントが組み換えられた抗体可変遺伝子に寄与するのかを決定するのに使用される。次いで生殖細胞系の配列は、可変領域の失われた部分を満たすのに使用される。重鎖および軽鎖リーダー配列は、タンパク質成熟中に切断され、最終的な抗体の特性に寄与しない。失われた配列を付加するために、クローニングされたｃＤＮＡ配列は、ライゲーションまたはＰＣＲ増幅によって合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。代替として、短いオーバーラップするオリゴヌクレオチドのセットとして可変領域全体を合成して、ＰＣＲ増幅によって組み合わせることにより、全体的に合成の可変領域クローンを作製することもできる。このプロセスは、特定の制限部位の除去もしくは包含、または特定のコドンの最適化などの一定の利点を有する。
【０１５９】
ハイブリドーマからの重鎖および軽鎖転写物のヌクレオチド配列は、天然配列と同一なアミノ酸をコードする能力を有する合成Ｖ配列を作製するために、合成オリゴヌクレオチドのオーバーラップするセットを設計するのに使用される。合成重鎖およびカッパ鎖配列は、以下の３つの方法：オリゴヌクレオチド合成およびＰＣＲ増幅を促進するために、一続きの繰り返されたヌクレオチド塩基を中断させる方法；コザックのルール（Kozak、１９９１年、J.  Biol.  Chem.  ２６６巻：１９８６７〜１９８７０頁）に従って最適な翻訳開始部位を取り入れる方法；および翻訳開始部位の上流でＨｉｎｄＩＩＩ部位を操作する方法で、天然配列と異なるようにすることができる。
【０１６０】
重鎖および軽鎖可変領域の両方に関して、最適化されたコードおよび対応する非コード鎖配列は、対応する非コードオリゴヌクレオチドのおよそ中間点である３０〜５０ヌクレオチドに分解される。したがって、各鎖につき、オリゴヌクレオチドは、１５０〜４００ヌクレオチドのセグメントにわたるオーバーラップする二本鎖のセットに組み立てることができる。次いでそのプールは、１５０〜４００ヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を産生するための鋳型として使用される。典型的には、単一の可変領域オリゴヌクレオチドのセットは、２つのプールに分解されると予想され、これらは別々に増幅されて、２種のオーバーラップするＰＣＲ産物を生成する。次いでこれらのオーバーラップする産物はＰＣＲ増幅によって組み合わされて、完全な可変領域を形成する。発現ベクター構築物に容易にクローニングすることができる断片を生成するために、ＰＣＲ増幅において重鎖または軽鎖定常領域のオーバーラップする断片（カッパ軽鎖のＢｂｓＩ部位、またはガンマ重鎖の場合はＡｇｅＩ部位を含む）を含むことも望ましい場合がある。
【０１６１】
次いで再構築された重鎖および軽鎖可変領域は、発現ベクター構築物を形成するために、クローニングされたプロモーター、リーダー配列、翻訳開始、リーダー配列、定常領域、３’非翻訳、ポリアデニル化、および転写終結配列と組み合わされる。重鎖および軽鎖発現構築物は、単一のベクターに組み合わされて、宿主細胞に共にトランスフェクトされるか、連続的にトランスフェクトされるか、または別々にトランスフェクトされてもよく、次いでこれを融合して、両方の鎖を発現する宿主細胞を形成する。
【０１６２】
発現ベクターの構築で使用するためのプラスミドを、ＰＣＲで増幅したＶ重鎖およびＶカッパ軽鎖のｃＤＮＡ配列が、完全な重鎖および軽鎖のミニ遺伝子を再構築するのに使用できるように構築した。これらのプラスミドは、完全ヒトＩｇＧ１κまたはＩｇＧ４κ抗体を発現させるのに使用することができる。
【０１６３】
本明細書に記載の完全ヒト、ヒト化、およびキメラ抗体はまた、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤ抗体も含む。他の重鎖アイソタイプの発現のために、またはラムダ軽鎖を含む抗体の発現のために、類似のプラスミドを構築することができる。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２０、２６および３１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２２、２８および３３に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３９、４５および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２０、２６および３１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３９、４５および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２０、２６および３１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２７および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２７および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２７および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３７、４３および４９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７２】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３７、４３および４９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２２、２８および３３に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３７、４３および４９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２３、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３７、４３および４９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３７、４３および４９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２７および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３９、４５および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３９、４５および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２２、２８および３３に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２２、２８および３３に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２３、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２３、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３８、４４および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号３９、４５および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号２１、２８および３４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４０、４６および５０に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、ジカウイルスＥＰに結合する、方法が提供される。ジカウイルスＥＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１８６】
追加の抗体の改変
本発明の開示の抗体は、軽鎖または重鎖可変領域のいずれかにおいて１つまたは複数の糖付加部位を含有していてもよい。このような糖付加部位は、抗体の免疫原性の増加または変更された抗原結合に起因する抗体のｐＫの変更を引き起こす可能性がある（Marshallら（１９７２年）Annu  Rev  Biochem  ４１巻：６７３〜７０２頁；GalaおよびMorrison（２００４年）J  Immunol  １７２巻：５４８９〜９４頁；Wallickら（１９８８年）J  Exp  Med  １６８巻：１０９９〜１０９頁；Spiro（２００２年）Glycobiology  １２巻：４３Ｒ〜５６Ｒ；Parekhら（１９８５年）Nature  ３１６巻：４５２〜７頁；Mimuraら（２０００年）Mol  Immunol  ３７巻：６９７〜７０６頁）。糖付加は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフで起こることがすでに公知である。一部の場合において、可変領域の糖付加を含有しない抗ジカウイルス抗体を有することが好ましい。これは、可変領域に糖付加モチーフを含有しない抗体を選択すること、または糖付加領域内の残基を突然変異させることのいずれかによって達成することができる。
【０１８７】
例えば、ある特定の実施形態では、抗体の糖付加が改変され、例えば、可変領域が、可変領域に存在する１つまたは複数の糖付加部位がなくなるように変更される。より特定には、本発明の抗体の配列において糖付加を受けやすい部位をなくすことが望ましい。これは、親の可変領域に生じる１つまたは複数のＮ−Ｘ−（Ｓ／Ｔ）配列（式中、Ｘはあらゆるアミノ酸残基である）の出現を、特にＮ残基および／またはＳもしくはＴ残基を置換することによって変更することにより達成される。一実施形態では、Ｔ９５は、Ｋ９５に突然変異されている。別の実施形態では、Ｎ４７は、Ｒ４７に突然変異されている。
【０１８８】
例えば、非グリコシル化（すなわち、糖付加がない）抗体を作製することができる。糖付加は、例えば、抗原への抗体の親和性を増加させるように変更することができる。このような炭水化物の改変は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数の糖付加部位を変更することによって達成することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域のフレームワークの糖付加部位を排除することによって、その部位における糖付加をなくす１つまたは複数のアミノ酸置換をなすことができる。このような非グリコシル化は、抗原への抗体の親和性を増加させる可能性がある。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同号６，３５０，８６１号を参照されたい。
【０１８９】
加えて、または代替として、抗体は、フコシル残基の量が低減された低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体またはバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などの、糖付加が変更されたタイプを有し得る。このような変更された糖付加パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されてきた。このような炭水化物の改変は、例えば、糖付加機構が変更された宿主細胞で抗体を発現することによって達成することができる。糖付加機構が変更された細胞は当業界で説明されており、これらは、本明細書に記載の組換え抗体を発現させることによって糖付加が変更された抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞株で発現される抗体がそれらの炭水化物上におけるフコースを欠失するように、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼの遺伝子、ＦＵＴ８（α（１，６）−フコシルトランスフェラーゼ）を欠失している。２つの置換ベクターを使用したＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的化された崩壊によって、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９ＦＵＴ８−／−細胞株が作製された（米国特許公開第２００４０１１０７０４号およびYamane-Ohnukiら（２００４年）Biotechnol  Bioeng  ８７巻：６１４〜２２頁を参照）。別の例として、ＥＰ１，１７６，１９５は、機能的に崩壊したＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株であって、このような細胞株で発現される抗体が、α−１，６結合に関連する酵素を低減するかまたはなくすることによって低フコシル化を表すようにフコシルトランスフェラーゼをコードしている、細胞株を説明している。またＥＰ１，１７６，１９５は、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンへのフコースの付加に関して低い酵素活性を有するかまたは酵素活性を有さない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）も説明している。ＰＣＴ公開公報ＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）が連結した炭水化物にフコースを付着させる能力が低減され、その結果としてその宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化も引き起こされる、バリアントＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３細胞を説明している（Shieldsら（２００２年）J.  Biol.  Chem.  ２７７巻：２６７３３〜２６７４０頁も参照）。改変された糖付加プロファイルを有する抗体はまた、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０６／０８９２３１で説明されるようにニワトリの卵で産生させることもできる。代替として、改変された糖付加プロファイルを有する抗体は、植物細胞、例えばＬｅｍｎａで産生させることもできる。植物系で抗体を産生するための方法は、２００６年８月１１日に出願されたＡｌｓｔｏｎ＆Ｂｉｒｄ  ＬＬＰ代理人の整理番号０４０９８９／３１４９１１に対応する米国特許出願で開示されている。ＰＣＴ公開公報ＷＯ９９／５４３４２は、操作された細胞株で発現される抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらすバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造の増加を表すように、糖タンパク質を改変するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現��るように操作された細胞株を説明している（Umanaら（１９９９年）Nat.  Biotech.  １７巻：１７６〜１８０頁も参照）。代替として、抗体のフコース残基を、フコシダーゼ酵素を使用して切断して除去することができ、例えば、α−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Tarentinoら（１９７５年）Biochem.  １４巻：５５１６〜２３頁）。
【０１９０】
上記で説明したように産生された抗体の可変性のセグメント（例えば、キメラまたはヒト化抗体の重鎖および軽鎖可変領域）は、典型的には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ領域）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部に連結される。ヒト定常領域のＤＮＡ配列は、様々なヒト細胞から、ただし好ましくは不死化Ｂ細胞から、周知の手順に従って単離することができる（Kabatら、上記、およびLiuら、ＷＯ８７／０２６７１を参照）（これらのそれぞれは、あらゆる目的のために参照によりその全体が開示に組み入れられる）。通常は、抗体は、軽鎖および重鎖定常領域の両方を含有すると予想される。重鎖定常領域は通常、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含む。本明細書に記載の抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥなどの全てのタイプの定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４などのあらゆるアイソタイプを有する抗体を含む。抗体（例えば、ヒト化抗体）は、細胞傷害活性を表すことが望ましい場合、定常ドメインは通常、補体結合性の定常ドメインであり、クラスは、典型的にはＩｇＧ１である。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであってもよい。ヒト化抗体は、１つより多くのクラスまたはアイソタイプからの配列を含んでいてもよい。抗体は、２つの軽鎖と２つの重鎖とを含有する四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖および軽鎖可変ドメインがスペーサーを介して連結されている単鎖抗体として発現させてもよい。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、抗体は、抗体の物理的安定性が改善されるように突然変異されている可変領域を含む。一実施形態では、抗体は、重鎖定常領域のヒンジ領域における２２８位に対応する位置にセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体である。この突然変異は、ヒンジ領域において重鎖間のジスルフィド架橋の不均一をなくすことが報告されている（Angalら  上記；２４１位は、Kabatの番号付けシステムに基づく）。例えば、ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体は、上記のAngalらで説明されるように、２４１位に対応する位置におけるセリンがプロリンに突然変異したヒトＩｇＧ４の定常領域に連結した、本明細書に記載の抗体のいずれかの重鎖可変領域を含んでいてもよい。したがって、ヒトＩｇＧ４の定常領域に連結した重鎖可変領域の場合、この突然変異は、ＥＵインデックスによればＳ２２８Ｐ突然変異に相当する。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が変更される、例えば増加するかまたは減少するように改変される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号でさらに説明されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを容易にするために、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるために変更される。
【０１９３】
加えて、抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化することができる。抗体をペグ化するために、典型的には、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着した状態になる条件下で、抗体またはその断片を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。用語「ポリエチレングリコール」は、本明細書で使用される場合、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されてきたＰＥＧの形態のいずれか、例えば、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール−マレイミドを包含することが意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当業界において公知であり、本明細書に記載のの抗体に適用することができる。例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０１９４】
免疫化
ジカウイルスＥＰに対する完全ヒト抗体を生成するために、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するトランスジェニックまたは染色体導入されたマウス（例えば、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ７またはＫＭマウス）は、例えば、Lonbergら（１９９４年）Nature  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁；Fishwildら（１９９６年）Nature  Biotechnology  １４巻：８４５〜８５１頁およびＷＯ９８／２４８８４で説明されるようにして、ジカウイルスＥＰ抗原および／またはジカウイルスＥＰを発現する細胞の精製または高濃度化した調製物で免疫化することができる。本明細書で説明されるように、ＨｕＭＡｂマウスは、免疫原として組換えジカウイルスＥＰタンパク質またはジカウイルスＥＰを発現する細胞株のいずれかで免疫化される。代替として、マウスは、ジカウイルスＥＰをコードするＤＮＡで免疫化することができる。好ましくは、マウスは、最初の注入のとき６〜１６週齢であると予想される。例えば、組換えジカウイルスＥＰ抗原の精製または高濃度化した調製物（５〜５０μｇ）は、腹腔内によりＨｕＭＡｂマウスを免疫化するのに使用することができる。
【０１９５】
様々な抗原での累積的な経験から、最初に完全フロイントアジュバント中の抗原で腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）により免疫化し、それに続いて隔週で不完全フロイントアジュバント中の抗原でＩＰ／ＳＣにより免疫化する（合計１０回まで）場合に、ＨｕＭＡｂトランスジェニックマウスは、最もよく応答することが示されている。免疫応答は、眼窩後方の採血により得られる血漿試料での免疫化プロトコールの経過にわたりモニターすることができる。血漿は、ＥＬＩＳＡ（後述する通り）によってスクリーニングすることができ、抗ジカウイルスＥＰヒト免疫グロブリンの十分なタイターを有するマウスが、融合に使用される可能性がある。マウスは、屠殺しておよび脾臓を取り出す３日前に静脈内に抗原でブーストされてもよい。
【０１９６】
ジカウイルスＥＰに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
ジカウイルスＥＰに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫化されたマウス由来の脾細胞およびリンパ節細胞を単離して、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合させることができる。次いで結果得られたハイブリドーマは、抗原特異的な抗体の産生に関してスクリーニングすることができる。例えば、免疫化されたマウス由来の脾臓リンパ球の単一細胞の懸濁液は、５０％ＰＥＧ（ｗ／ｖ）と共にＳＰ２／０−Ａｇ８．６５３非分泌性マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）に融合させることができる。細胞を平底のマイクロタイタープレートでおよそ１×１０５個で平板培養して、それに続いて通常の試薬の他にも１０％胎仔クローン血清、５〜１０％のオリゲンハイブリドーマクローニングファクター（ＩＧＥＮ）および１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）を含有する選択培地中で２週間インキュベートすることができる。およそ２週間後、細胞は、ＨＡＴがＨＴで置き換えられた培地中で培養することができる。次いで個々のウェルは、ＥＬＩＳＡによってヒト抗ジカウイルスＥＰモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体に関してスクリーニングすることができる。大規模なハイブリドーマ成長が一旦起これば、培地は、通常１０〜１４日後に観察してもよい。ハイブリドーマを分泌する抗体は、再度平板培養して再度スクリーニングすることができ、それでもなおＩｇＧ陽性の場合、抗ジカウイルスＥＰモノクローナル抗体を限界希釈によって少なくとも２回サブクローニングすることができる。次いで安定なサブクローンをｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、特徴付けのために組織培養培地中で抗体を生成させることができる。
【０１９７】
ジカウイルスＥＰに対するモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本明細書に記載の抗体はまた、例えば、当業界において周知のようにして組換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション方法との組合せを使用して、宿主細胞のトランスフェクトーマで産生することもできる（Morrison,  S.（１９８５年）Science  ２２９巻：１２０２頁）。
【０１９８】
例えば、ある特定の実施形態では、目的の遺伝子、例えばヒト抗体遺伝子は、発現ベクターに、例えば、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８８４１で開示されたＧＳ遺伝子発現系によって使用されるような真核性発現プラスミド、または当業界において周知の他の発現系にライゲートすることができる。クローニングされた抗体遺伝子を有する精製されたプラスミドは、ＣＨＯ細胞もしくはＮＳＯ細胞などの真核宿主細胞、または代替として植物由来の細胞、菌類もしくは酵母細胞のような他の真核細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するのに使用される方法は、エレクトロポレーション、リポフェクチン、リポフェクトアミンまたはその他のものなどの当業界で説明されている方法であり得る。宿主細胞にこれらの抗体遺伝子を導入した後、抗体を発現する細胞を同定し、選択することができる。これらの細胞は、代表的なトランスフェクトーマであり、これらを次いでその発現レベルに応じて増幅して、抗体を産生するためにアップスケールすることができる。これらの培養上清および／または細胞から、組換え抗体を単離および精製することができる。
【０１９９】
代替として、これらのクローニングされた抗体遺伝子は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの他の発現系または生物の完全体で発現させることもでき、または合成的に発現させることもできる。
【０２００】
組換え抗体の発現
キメラおよびヒト化抗体は、典型的には、組換え発現によって産生される。任意選択で定常領域に連結された、軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸を発現ベクターに挿入する。軽鎖および重鎖は、同一または異なる発現ベクターでクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター中の制御配列に作動可能に連結している。発現制御配列としては、これらに限定されないが、プロモーター（例えば、天然において関連するまたは異種プロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、および転写終結配列が挙げられる。真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおいて、発現制御配列は、好ましくは真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に一旦取り込まれたなら、宿主は、高レベルのヌクレオチド配列発現、ならびに交差反応抗体の収集および精製に好適な条件下で維持される。
【０２０１】
これらの発現ベクターは、典型的には、宿主生物においてエピソームまたは宿主染色体のＤＮＡの統合部分のいずれかとして複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換した細胞の検出が可能になるように、選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性またはネオマイシン耐性）を含有する（例えば、Itakuraら、米国特許第４，７０４，３６２号を参照）。
【０２０２】
Ｅ．ｃｏｌｉは、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ配列）をクローニングするのに特に有用な原核宿主の１つである。使用に好適な他の微生物宿主としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓなどの杆菌、ならびにＳａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、および様々なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種などの他の腸内細菌科が挙げられる。これらの原核宿主において、典型的には、宿主細胞に適合する発現制御配列（例えば、複製起点）を含有すると予想される発現ベクターを作製することもできる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはファージラムダ由来のプロモーター系などの多数の様々な周知のプロモーターも存在すると予想される。プロモーターは、典型的には、任意選択でオペレーター配列と共に発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了させるためのリボソーム結合部位配列などを有すると予想される。酵母などの他の微生物も、発現に有用である。
【０２０３】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、要求に応じて発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終結配列などを有する好適なベクターが用いられる好ましい酵母宿主である。典型的なプロモーターとしては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の糖分解酵素が挙げられる。誘導性酵母プロモーターとしては、なかでも、アルコールデヒドロゲナーゼ由来のプロモーター、イソチトクロムＣ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用に関与する酵素が挙げられる。
【０２０４】
微生物に加えて、哺乳動物組織の細胞培養物も、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、免疫グロブリンまたはその断片をコードするポリヌクレオチド）を発現および産生するのに使用することができる。Winnacker、From  Genes  to  Clones、VCH  Publishers、N.Y.、N.Y.（１９８７年）を参照されたい。異種タンパク質（例えば、無傷の免疫グロブリン）を分泌することが可能な多数の好適な宿主細胞株が当業界において開発されていることから、実際には真核細胞が好ましく、そのようなものとしては、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは、骨髄腫細胞株、または形質転換したＢ細胞もしくはハイブリドーマが挙げられる。好ましくは、細胞は、非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起点、プロモーター、およびエンハンサー（Queenら、Immunol.  Rev.  ８９巻：４９頁（１９８６年））、ならびに必要なプロセシング情報の部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列を含んでいてもよい。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルス由来のプロモーターなどである。Coら、J.  Immunol.  １４８巻：１１４９頁（１９９２年）を参照されたい。
【０２０５】
代替として、トランスジェニック動物のゲノムへの導入とそれに続くトランスジェニック動物の乳汁での発現のために、抗体−コード配列を導入遺伝子に取り込むことができる（例えば、Deboerら、米国特許第５，７４１，９５７号、Rosen、米国特許第５，３０４，４８９号、およびMeadeら、米国特許第５，８４９，９９２号を参照）。好適な導入遺伝子は、カゼインまたはベータラクトグロブリンなどの乳腺特異的遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結されている軽鎖および／または重鎖のコード配列を含む。
【０２０６】
目的のポリヌクレオチド配列（例えば、重鎖および軽鎖をコードする配列および発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて様々な周知の方法によって宿主細胞に移入させることができる。例えば、原核細胞には、塩化カルシウムトランスフェクションが広く利用されており、それに対して他の細胞宿主には、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、遺伝子銃またはウイルスベースのトランスフェクションが使用され得る。（一般的に、Sambrookら、Molecular  Cloning：A  Laboratory  Manual（Cold  Spring  Harbor  Press、第２版、１９８９年）を参照（あらゆる目的のためにその全体が参照により組み入れられる）。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法としては、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェクションの使用が挙げられる（一般的に、Sambrookら、上記を参照）。トランスジェニック動物の産生のために、導入遺伝子を受精した卵母細胞にマイクロインジェクションしてもよいし、または胚性幹細胞のゲノムに取り込ませてもよく、このような細胞の核を除核した卵母細胞に移入させてもよい。
【０２０７】
重鎖および軽鎖が別々の発現ベクターでクローニングされる場合、ベクターは、無傷の免疫グロブリンの発現およびアセンブリを達成するために共にトランスフェクトされる。本発明の開示の抗体全体、その二量体、個々の軽鎖および重鎖、または他の免疫グロブリンの形態は、一旦発現されたら、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ精製、ゲル電気泳動などの当業界の標準的手順に従って精製することができる（一般的にScopes、Protein  Purification（Springer-Verlag、N.Y.、（１９８２年）を参照）。少なくとも約９０から９５％の均一性を有する実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、医薬品用途の場合は９８から９９％またはそれより高い均一性が最も好ましい。
【０２０８】
抗体断片
また抗体断片も、本開示の範囲内であると予期される。一実施形態では、非ヒトおよび／またはキメラ抗体の断片が提供される。別の実施形態では、ヒト化抗体の断片が提供される。典型的には、これらの断片は、少なくとも１０７、より典型的には１０８または１０９Ｍ−１の親和性での抗原への特異的な結合を表す。ヒト化抗体断片は、別々の重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、およびＦｖを含む。断片は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素または化学的分離によって産生される。
【０２０９】
抗体を特徴付けるためのアッセイ
本明細書に記載の抗体は、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＥＰ）への結合に関して、例えば標準的なＥＬＩＳＡによって試験することができる。簡単に言えば、ジカウイルスエンベロープタンパク質またはジカウイルス自体の連続希釈液を、本明細書に記載の抗体と混合する。これらの混合物を、室温で一晩インキュベートして、平衡に到達させる。間接的ＥＬＩＳＡを使用して、未結合の抗体および単独で結合した抗体の濃度を測定する。代替として、マイクロタイタープレートを、精製されたジカウイルスでコーティングし、次いでＰＢＳ中の５％乾燥脱脂乳でブロックする。洗浄後、精製された本明細書に記載の抗体を、抗原を含有するウェルに添加し、室温で２時間インキュベートする。ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウスＩｇＧ二次抗体およびＡＢＴＳ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、結合した抗体を検出する。
【０２１０】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、３μｇ／ｍＬと２５μｇ／ｍＬとの間のＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも３μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも５μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも１０μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも１５μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも２０μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＬＩＳＡによって決定される、少なくとも２５μｇ／ｍＬのＫｄ値でジカウイルスＥＰに結合する。
【０２１１】
上述したようなＥＬＩＳＡアッセイは、抗体、したがってジカウイルスＥＰとの陽性の反応性を示す抗体を産生するハイブリドーマに関してスクリーニングするのに使用することができる。次いで、ジカウイルスＥＰに好ましくは高親和性で結合する抗体を産生するハイブリドーマをサブクローニングして、さらに特徴付けることができる。次いで、親細胞の反応性を保持する（ＥＬＩＳＡにより）各ハイブリドーマからの１つのクローンを、細胞バンクを作製するため、および抗体精製のために、選択することができる。
【０２１２】
フレームワークの突然変異が本明細書で開示された抗ＥＰ抗体のＥＰに結合する能力に影響を与えないことを確認するために、上述したＥＬＩＳＡアッセイも使用することができる。
【０２１３】
抗ジカウイルスＥＰ抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマは、モノクローナル抗体精製のための２リットルのスピナーフラスコで成長させることができる。プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーの前に、上清を濾過して濃縮してもよい。溶出したＩｇＧをゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーでチェックして、純度を確認することができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換してもよく、濃度は、１．４３の吸光係数を使用してＯＤ２８０により決定してもよい。モノクローナル抗体をアリコートにして、−８０℃で貯蔵することができる。
【０２１４】
選択された抗ジカウイルスＥＰモノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを決定するために、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して各抗体をビオチン化することができる。ビオチン化ＭＡｂの結合は、ストレプトアビジン標識プローブで検出することができる。非標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合研究は、上述したようにしてジカウイルスＥＰがコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを使用して実行することができる。
【０２１５】
精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡは、特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使用して実行することができる。例えば、プレートを抗ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ重鎖に特異的な抗体（１００ｎｇ／ウェル）でコーティングして、ハイブリドーマ培養上清と共にインキュベートする。ｍＡｂのサブタイプは、アルカリホスファターゼにコンジュゲートした、抗ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、またはＩｇＡ重鎖に特異的な抗体を使用することによって検出される。
【０２１６】
抗ジカウイルスＥＰ抗体は、ジカウイルスＥＰ抗原との反応性についてウェスタンブロッティングによってさらに試験することができる。簡単に言えば、非標識のジカウイルスＥＰを１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（polyacrylaminde）ゲル上で分解し、ＰＶＤＦ膜に移す。０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中の乾燥脱脂乳を使用して非特異的な結合部位をブロックした後、精製されたｍＡｂ（１０ｕｇ／ｍｌ）を室温で１時間かけて膜に添加する。次いで膜をホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＡ＋ＩｇＧ＋ＩｇＭ二次抗体と共に１時間インキュベートして、ＥＣＬ化学発光キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して展開する。
【０２１７】
様々な抗ジカウイルスＥＰ抗体の結合親和性、交差反応性、および結合速度論を分析するための方法としては、当業界において公知の標準的なアッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析が挙げられる。
【０２１８】
本明細書に記載の抗体の中和を決定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのプラーク減少中和（ＰＲＮＴ）アッセイを実行することができる。簡単に言えば、プラークアッセイは、密集化したＢＨＫ−２１細胞を使用してなされる。本明細書に記載の抗体の２倍連続希釈液を、５０ＰＦＵのジカウイルスと３７℃で１時間混合する。混合物を細胞単層に適用し、４〜７日間インキュベートする。感染を、４Ｇ２免疫染色とその後のＴＭＢペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ）によって定量し、吸光度をプレートリーダーで測定する。１００％感染は、抗体に曝露されていないウェルにおける平均ＯＤ６００と対応する。一部の実施形態では、ＰＲＮＴアッセイのアウトプットは、ＰＲＮＴ５０（プラーク形成を５０％減少させる抗体の濃度）である。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、少なくとも０．０３μｇ／ｍＬのＰＲＮＴ５０値を有する。
【０２１９】
一部の実施形態では、抗ジカウイルスＥＰ抗体は、感染の抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）を低減する。ＡＤＥは、感染が、既存の感染増強性抗体の背景において生じる場合、増加した疾患重症度を媒介すると提唱されている現象である。機構的に、感染増強性抗体が成熟および未成熟ウイルス粒子に結合し、宿主細胞上に存在するＦｃγ受容体の抗体係合を介してウイルス侵入を媒介する場合に、これが生じる。４Ｇ２、Ｅ５３、およびＥ−二量体エピトープ（ＥＤＥ）に対するｍＡｂを含む、数種のＦＬＥに対する抗体が、文献中で説明されている（Dejnirattisai  Wら、２０１５年）。数々の研究により、ＤＥＮＶを、Ｆｃγ受容体によって貪食される抗体レベルでオプソニン化した場合、ファゴソーム膜とのウイルス融合を阻害できる抗体のみが感染を予防し、したがってＡＤＥを予防することが示されている（Chan  KRら、２０１１年、Wu  Rら、２０１２年）。それゆえに、一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体の、Ｅ−二量体境界面においてジカウイルスＦＬＥエピトープを係合する能力は、融合阻害によりＡＤＥ活性の低減を生じる。
【０２２０】
一部の実施形態では、ＡＤＥの低減を、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ１（ＬＩＬＲＢ１）を発現し、したがってＡＤＥに対して高度に感受性である細胞を使用することによって試験する。そのような細胞の非限定的な例は、ＴＨＰ１．２Ｓ単球である。細胞を、感染前に本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体と共にインキュベートする。次いでウイルス複製を、ウイルス感染に対して感受性の細胞を使用するプラークアッセイによって測定する。そのような細胞の非限定的な例は、ＢＨＫ２１細胞である。次いでプラークタイターを測定し、対照と比較したプラークタイターにおける低減は、試験した抗ジカウイルスＥＰ抗体がＡＤＥを低減するのに有効であることを示す。ＡＤＥを測定する他の方法は、当業界で公知であり、ＡＤＥに対する本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体の影響を決定するために使用できる。
【０２２１】
抗体の競合結合
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ジカウイルスＥＰへの結合に関して、本明細書に記載の特定の抗ジカウイルスＥＰ抗体と競合する（例えば、交差競合する）。このような競合する抗体は、標準的なジカウイルスＥＰ結合アッセイにおいて本明細書に記載のｍＡｂの１つまたは複数のジカウイルスＥＰへの結合を競合的に阻害するその能力に基づいて同定することができる。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用することができ、このようなアッセイにおいて、組換えジカウイルスＥＰがプレート上に固定され、抗体の１つが蛍光標識され、標識された抗体の結合を競合的に分離する（ｃｏｍｐｅｔｅ  ｏｆｆ）非標識抗体の能力が評価される。加えて、または代替として、交差競合する抗体の能力を評価するために、ＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用することができる。試験抗体が本明細書に記載の抗ＥＰ抗体のジカウイルスＥＰへの結合を阻害する能力を有するということは、試験抗体がジカウイルスＥＰへの結合に関して抗体と競合できることを実証する。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、競合する抗体は、本明細書に記載の特定の抗ＥＰモノクローナル抗体と同じジカウイルスＥＰ上のエピトープに結合する抗体である。抗体が参照抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、標準的なエピトープマッピング技術、例えばＸ線結晶学および２次元核磁気共鳴を使用することができる（例えば、Epitope  Mapping  Protocols  in  Methods  in  Molecular  Biology、６６巻、G.  E.  Morris編（１９９６年）を参照）。
【０２２３】
ある特定の実施形態では、ジカウイルスＥＰへの結合に関して競合する、および／またはジカウイルスＥＰ上の同じエピトープに結合する抗体は、ヒト化抗体である。
【０２２４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体は、残基Ｄ９８、Ｒ９９およびＷ１０１を含む融合ループ（配列番号３）上のエピトープに結合する。一部の実施形態では、ジカウイルスＥＰへの結合に関して競合する抗体は、残基Ｄ９８、Ｒ９９およびＷ１０１を含む融合ループ（配列番号３）上のエピトープに結合する。
【０２２５】
本明細書に記載の所望の特性を有する単一の原型の抗ＥＰ  ｍＡｂが単離されたら、当業界公知の方法を使用することによって、類似の特性を有する、例えば同じエピトープを有する他のｍＡｂを生成することが簡単である。例えば、本明細書に記載されるジカウイルスでマウスを免疫化し、ハイブリドーマを産生し、結果得られたｍＡｂを、ジカウイルスＥＰへの結合に関して原型のｍＡｂと競合する能力についてスクリーニングしてもよい。またマウスは、原型のｍＡｂが結合するエピトープを含有するより小さいジカウイルスＥＰの断片で免疫化してもよい。例えば、ジカウイルスＥＰにわたる一連のオーバーラップするペプチドへの結合に関してスクリーニングすることによって、エピトープを局所化することができる。代替として、原型のｍＡｂと同じエピトープ、それゆえにそれと類似の特性を有するｍＡｂの選択をガイドするために、Jespersら、Biotechnology  １２巻：８９９号、１９９４年の方法を使用してもよい。ファージディスプレイを使用して、まず原型の抗体の重鎖を（好ましくはヒト）軽鎖のレパートリーと対合させ、ジカウイルスＥＰと結合するｍＡｂを選択し、次いで新しい軽鎖を（好ましくはヒト）重鎖のレパートリーと対合させ、原型のｍＡｂと同じエピトープを有する（好ましくはヒト）ジカウイルスＥＰと結合するｍＡｂを選択する。代替として、原型のｍＡｂのバリアントは、抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発により得ることができる。
【０２２６】
エピトープマッピングは、例えば、Champeら（１９９５年）J.  Biol.  Chem.  ２７０巻：１３８８〜１３９４頁で説明されるように、抗体が目的のエピトープと結合するかどうかを決定するために実行することができる。CunninghamおよびWells（１９８９年）Science  ２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって説明されるような「アラニンスキャニング変異誘発」、またはヒトジカウイルスＥＰにおけるアミノ酸残基の点変異誘発の一部の他の形態も、本明細書に記載の抗ＥＰ抗体の機能的なエピトープを決定するために使用することができる。しかしながら、変異誘発研究はまた、ジカウイルスＥＰの全体的な３次元構造にとって重要であるが抗体−抗原の接触に直接関与しないアミノ酸残基を解明する可能性もあるため、この方法を使用して決定された機能的なエピトープを確認するために、他の方法が必要になるある場合がある。
【０２２７】
また特異的な抗体と結合するエピトープは、ジカウイルスＥＰの断片を含むペプチドへの抗体の結合を評価することによって決定してもよい。ジカウイルスＥＰの配列を包含する一連のオーバーラップするペプチドを合成し、例えば直接ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ（この場合、マイクロタイタープレートのウェルに結合したジカウイルスＥＰへの抗体の結合を予防するその能力に関して、ペプチドが評価される）で、またはチップ上で、結合に関してスクリーニングすることができる。このようなペプチドスクリーニング方法は、一部の不連続の機能的なエピトープ、すなわちジカウイルスＥＰポリペプチド鎖の一次配列に沿って隣接していないアミノ酸残基を含む機能的なエピトープを検出することができない場合がある。
【０２２８】
また本明細書に記載の抗体と結合するエピトープは、構造的な方法、例えばＸ線結晶構造決定（例えば、ＷＯ２００５／０４４８５３）、分子モデリングおよび核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、例えば遊離の場合、および目的の抗体との複合体において結合している場合のジカウイルスＥＰ中の不安定なアミド水素のＨ−Ｄ交換速度のＮＭＲ決定などによって決定してもよい（Zinn-Justinら（１９９２年）Biochemistry  ３１巻、１１３３５〜１１３４７頁；Zinn-Justinら（１９９３年）Biochemistry  ３２巻、６８８４〜６８９１頁）。
【０２２９】
Ｘ線結晶学に関して、結晶化は、当業界において公知の方法（例えばGiegeら（１９９４年）Acta  Crystallogr.  Ｄ５０巻：３３９〜３５０頁；McPherson（１９９０年）Eur.  J.  Biochem.  １８９巻：１〜２３頁）のいずれか、例えば、マイクロバッチ（例えばChayen（１９９７年）Structure  ５巻：１２６９〜１２７４頁）、ハンギングドロップ蒸気拡散（例えばMcPherson（１９７６年）J.  Biol.  Chem.  ２５１巻：６３００〜６３０３頁）、シーディングおよび透析などを使用して達成することができる。少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有するタンパク質調製物を使用することが望ましい。結晶化は、ポリエチレングリコール１０００〜２０，０００（ＰＥＧ；平均分子量は約１０００から約２０，０００Ｄａの範囲）、好ましくは約５０００から約７０００Ｄａ、より好ましくは約６０００Ｄａを約１０％から約３０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で含有する沈殿剤溶液中で最もよく達成することができる。また、タンパク質安定化剤、例えばグリセロールを約０．５％から約２０％の範囲の濃度で含むことも望ましい場合がある。塩化ナトリウム、塩化リチウムまたはクエン酸ナトリウムなどの好適な塩も、沈殿剤溶液中において、好ましくは約１ｍＭから約１０００ｍＭの範囲の濃度で、望ましい場合がある。沈殿剤は、好ましくは約３．０から約５．０、好ましくは約４．０のｐＨに緩衝化される。沈殿剤溶液中で有用な特定の緩衝液は変更してもよく、当業界において周知である（Scopes、Protein  Purification：Principles  and  Practice、第３版、（１９９４年）Springer-Verlag、New  York）。有用な緩衝液の例としては、これらに限定されないが、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＭＥＳおよび酢酸塩が挙げられる。結晶は、２℃、４℃、８℃および２６℃などの様々な温度で成長させることができる。
【０２３０】
抗体：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、これらの開示が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配信；例えばBlundellおよびJohnson（１９８５年）Meth.  Enzymol.  １１４巻および１１５巻、H.  W.  Wyckoffら編、Academic  Press）；米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号を参照）、およびＢＵＳＴＥＲ（Bricogne（１９９３年）Acta  Cryst.  Ｄ４９巻：３７〜６０頁；Bricogne（１９９７年）Meth.  Enzymol.  ２７６Ａ巻：３６１〜４２３頁、CarterおよびSweet編；Roversiら（２０００年）Acta  Cryst.  Ｄ５６巻：１３１３〜１３２３頁）などのコンピューターソフトウェアを使用して精製することができる。
【０２３１】
抗体競合アッセイは、本明細書に記載される場合、抗体が別の抗体と「同じエピトープに結合する」かどうかを決定するために使用することができる。典型的には、エピトープと相互作用することが公知の抗体が、第２の抗体と、第２の抗体が過量であり第１の抗体が全ての部位を飽和させる条件下で、５０％またはそれより多く、６０％またはそれより多く、７０％またはそれより多く、例えば７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多く競合することが、抗体が「同じエピトープに結合する」ことを示す。２つの抗体間の競合のレベルを評価するために、例えば、ラジオイムノアッセイまたは抗体のための他の標識を使用するアッセイを使用することができる。例えば、ジカウイルスＥＰ抗原は、標識された化合物（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、ビオチン、またはルビジウム）にコンジュゲートした飽和量の第１の抗ＥＰ抗体またはその抗原結合性断片と、同じ量の第２の非標識抗ＥＰ抗体の存在下でインキュベートすることができる。次いで非標識ブロッキング抗体の存在下で抗原に結合する標識された抗体の量を評価し、非標識ブロッキング抗体の非存在下における結合と比較する。競合は、ブロッキング抗体の非存在と比較した、非標識ブロッキング抗体の存在下における結合シグナルのパーセンテージの変化によって決定される。したがって、ブロッキング抗体の非存在下における結合と比較してブロッキング抗体の存在下において標識された抗体の結合の５０％の阻害がある場合、２つの抗体間の５０％の競合がある。したがって、５０％またはそれより多く、６０％またはそれより多く、７０％またはそれより多く、例えば７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多くの第１および第２の抗体間の競合という言及は、第１の抗体が抗原への第２の抗体の結合を、５０％、６０％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多く（第１の抗体の非存在下における第２の抗体による抗原の結合と比較して）阻害する（または逆もまた同様）ことを意味する。したがって、５０％、６０％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多くの、第２の抗体による抗原への第１の抗体の結合の阻害は、２つの抗体が同じエピトープに結合することを示す。
【０２３２】
動物モデルでの治療効能に関する抗体の試験
動物モデルは、ジカウイルスＥＰに対する抗体の治療効能を試験するのに効果的である。ある特定の実施形態では、ジカ感染にげっ歯類（すなわち、マウス）を使用することができる。簡単に言えば、成体マウスの５０％致死量のおよそ３００倍を腹膜内に接種することにより、マウス適合化ジカウイルス株（例えば、Ｈ／ＰＦ／２０１３（Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ  ２０１３年））でマウスを攻撃する。ある特定の実施形態では、ジカ感染にモルモットを使用することができる。モルモットは、モルモット適合化ウイルスで攻撃される。加えて、ある特定の実施形態では、非ヒト霊長類を、感染の動物モデルとして使用する。全ての動物モデルにおいて、治療効能に関して試験するために、抗体は、感染の２４または４８時間後に投与することができる。一部の実施形態では、予防効能に関して試験するために、抗体は、感染の２４または４８時間前に投与する。
【０２３３】
ジカウイルスを予防または処置する抗体の効能を、動物の死亡率、ウイルス負荷、および／または体重を長期にわたり分析することによって決定する。一部の実施形態では、ジカウイルスに感染した未処置の動物は、感染後１０〜１１日以内に死亡する。一部の実施形態では、ジカウイルス感染の前または後に本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した動物は、未処置の動物と比較して、有意に長く生存する。一部の実施形態では、ジカウイルス感染の前または後に本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した動物は、最大で２２日間生存する。一部の実施形態では、ジカウイルス感染の前または後に本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した動物は、未処置の動物と比較して、長期にわたり体重を維持する。一部の実施形態では、ジカウイルス感染の前または後に本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した動物は、未処置の動物と比較して、低減されたウイルス負荷を有する。
【０２３４】
一部の実施形態では、動物モデル（例えば、マウス）を使用して、妊娠中の垂直感染および胎児死亡率を処置または予防することにおける抗ジカウイルスＥＰ抗体の効能を決定する。一部の実施形態では、動物モデルを使用して、妊娠中の垂直感染および胎児死亡率を低減するまたはそのリスクを低減することにおける抗ジカウイルスＥＰ抗体の効能を決定する。一部の実施形態では、妊娠した動物に、適合化ジカウイルス（例えば、マウスに関してＨ／ＰＦ／２０１３）を静脈内で感染させる。本明細書に記載の抗ジカウイルスＥＰ抗体を、感染の前または後に投与して、それぞれ治療効能または予防効能に関して試験する。一部の実施形態では、抗体の効能を、胎児生存率を決定すると共に、母親、胎児および胎盤におけるウイルス負荷を測定することによって決定する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した母親は、低減されたウイルス負荷を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した母親由来の胎児は、より高い生存率および低減されたウイルス負荷を有する。一部の実施形態では、胎児のより高い生存率は、パーセント致死率における低減として測定される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカ抗体で処置した母親由来の胎盤は、低減されたウイルス負荷を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体で処置した母親由来の胎児は、正常な胚発生を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体で処置した母親由来の胎児は、未処置の母親と比較して、正常な胚発生を有する。一部の実施形態では、未処置の母親由来の胎児は死亡する（すなわち、１００％の致死率）。
【０２３５】
免疫毒素、イムノコンジュゲートおよび抗体誘導体
別の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、細胞毒素、薬物または放射線同位体などの治療成分に連結される。細胞毒素にコンジュゲートされる場合、これらの抗体コンジュゲートは「免疫毒素」と称される。細胞毒素または細胞傷害性物質としては、細胞に有害な（例えば、細胞を殺す）あらゆる薬剤が挙げられる。
【０２３６】
このような治療成分を抗体にコンジュゲートするための技術は当業界において周知である。
【０２３７】
免疫毒素の毒素要素は、例えば、化学療法剤、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性な毒素などの毒素、またはそれらの断片、または小分子毒素であり得る。
【０２３８】
使用することができる追加の毒素およびその断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性の活性断片、コレラ毒素、ボツリヌス毒素、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ダイアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ  Ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、サポリン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテシン（tricothcene）が挙げられる。小分子毒素としては、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、パリトキシンおよびＣＣ１０６５が挙げられる。
【０２３９】
また本明細書に記載の抗体は、試料の試験およびｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングなどの診断目的で使用することもでき、この目的のために、抗体（またはその結合断片）を適切な検出可能な薬剤にコンジュゲートさせて、イムノコンジュゲートを形成することができる。診断目的で、適切な薬剤は、全身イメージングのためには放射性同位体を含む検出可能な標識であり、試料の試験のためには放射性同位体、酵素、蛍光標識および他の好適な抗体タグである。
【０２４０】
ジカウイルスＥＰ検出のために、検出可能な標識は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの診断法の分野において現在使用される様々なタイプのいずれであってもよく、このようなものとしては、コロイド金などの金属ゾルなどの微粒子標識、Ｎ２Ｓ２、Ｎ３ＳまたはＮ４タイプのペプチドキレート剤と共に提供されるＩ１２５またはＴｃ９９などの同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光性マーカーなどの発色団、加えて、所与の基質を検出可能なマーカーに変換する酵素標識、および例えばポリメラーゼ連鎖反応による増幅後に顕示化されるポリヌクレオチドタグが挙げられる。好適な酵素標識としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなどが挙げられる。例えば、標識は、酵素アルカリホスファターゼであってもよく、これは、１，２ジオキセタン基質、例えばアダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、３−（４−（メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’−クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１  ３，７｝デカン｝−４−イル）フェニルリン酸二ナトリウム（ＣＳＰＤ）、加えてＣＤＰおよびＣＤＰ−ｓｔａｒ（登録商標）、または当業者に周知の他の発光基質、例えばテルビウム（ＩＩＩ）およびユーロピウム（ＩＩＩ）などの好適なランタニドのキレートの変換後に化学発光の存在または形成を測定することによって検出される。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識またはその反応生成物の発生は、標識が微粒子であり適切なレベルに累積するようなケースでは肉眼を使用して達成してもよいし、または分光光度計、ルミノメーター、蛍光分光計など機器を全て標準的な実施に従って使用して達成してもよい。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当業界において公知であり容易に入手可能な追加の非タンパク質様成分を含有するようにさらに改変されていてもよい。抗体の誘導体化に好適な成分としては、これらに限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレン（propropylene）グリコールホモポリマー、プロピレン（prolypropylene）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性のために製造において利点を有し得る。ポリマーは、あらゆる分子量を有していてもよく、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に付着したポリマーの数は様々であってもよく、１つより多くのポリマーが付着している場合、それらは同一または異なる分子であり得る。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、これらに限定されないが、改善しようとする抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下での療法に使用されるのかどうかなどの考察に基づいて決定することができる。
【０２４２】
組成物
ある特定の実施形態では、組成物、例えば、担体（例えば、薬学的に許容される担体）と共に製剤化された、１つまたは複数の本明細書に記載のモノクローナル抗体を含有する組成物が提供される。一部の実施形態では、組成物は、複数の（例えば、２またはそれより多くの）本明細書に記載の単離された抗体の組合せを含む。好ましくは、組成物の抗体のそれぞれは、ジカウイルスＥＰの別個の予め選択されたエピトープに結合する。
【０２４３】
また本明細書に記載の医薬組成物は、併用療法で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、少なくとも１つまたは複数の追加の治療剤と共に本明細書に記載の組成物を含んでいてもよい。また他の抗体との共投与も、本開示に包含される。
【０２４４】
本明細書で使用される場合、用語「担体」および「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、例えば抗体は、化合物を不活性化する可能性がある酸および他の天然条件の作用から化合物を保護するための材料でコーティングされていてもよい。
【０２４５】
「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物活性を保持し、いかなる望ましくない毒物学的作用も付与しない塩を指す（例えば、Berge,  S.M.ら（１９７７年）J.  Pharm.  Sci.  ６６巻：１〜１９頁を参照）。このような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などの非毒性の無機酸由来のもの、加えて脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性の有機酸由来のものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属由来のもの、加えてＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性の有機アミン由来のものが挙げられる。
【０２４６】
本明細書に記載の組成物は、当業界において公知の様々な方法によって投与することができる。当業者であれば認識していると予想されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変更されると予想される。活性化合物は、急速な放出から化合物を保護すると予想される担体、例えばインプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化された送達系などの放出制御製剤を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。このような調合物を調製するための多くの方法が特許化されているかまたは一般的に当業者公知である。例えば、Sustained  and  Controlled  Release  Drug  Delivery  Systems、J.R.  Robinson編、Marcel  Dekker,  Inc.、New  York、１９７８年を参照されたい。
【０２４７】
ある特定の投与経路によって本明細書に記載の化合物を投与するために、その不活性化を予防する材料で化合物をコーティングするか、または化合物をそのような材料と共に投与することが必要になる場合がある。例えば、化合物は、適切な担体、例えばリポソームまたは希釈剤中で対象に投与されてもよい。許容できる希釈剤としては、塩類溶液および水性緩衝溶液が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水型ＣＧＦエマルジョンに加えて従来のリポソームが挙げられる（Strejanら（１９８４年）J.  Neuroimmunol.  ７巻：２７号）。
【０２４８】
担体としては、滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための、滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末が挙げられる。医薬活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当業界において公知である。どのような従来の媒体または薬剤でも活性化合物に適合する限りは、本明細書に記載の医薬組成物におけるそれらの使用が予期される。補助的な活性化合物も、組成物に取り込むことができる。
【０２４９】
治療用組成物は、典型的には、製造および貯蔵条件下で滅菌されており、安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の規則正しい構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液のケースでは必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くのケースにおいて、組成物中に、等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましいと予想される。注射用組成物の持効性吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含ませることによって達成することができる。
【０２５０】
滅菌注射用溶液は、適切な溶媒中に、必要に応じて上記で列挙された成分の１つまたは組合せと共に活性化合物を必要な量で取り込ませ、それに続いて滅菌精密濾過することによって調製することができる。一般的に、分散液は、ベースの分散媒および上記で列挙されたものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を取り込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末のケースでは、好ましい調製方法は、活性成分に加えてあらゆる追加の所望の成分の粉末を前もって滅菌濾過したそれらの溶液から生産する真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０２５１】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が提供されるように調整される。例えば、単回のボーラスが投与されてもよいし、数回分の分割用量が長期にわたり投与されてもよいし、または治療状況の緊急性により必要に応じて用量を比例的に低減または増加させてもよい。例えば、本明細書に記載の抗体は、皮下もしくは筋肉内注射によって週１回もしくは２回、または皮下もしくは筋肉内注射によって１月１回もしくは２回投与されてもよい。
【０２５２】
投与のしやすさおよび投薬量の均一性のために、非経口用組成物を投薬単位形態で製剤化することが特に有利である。投薬単位形態は、本明細書で使用される場合、処置される対象への一体的な投薬として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体を併用して所望の治療作用が生じるように計算された、予め決定された量の活性化合物を含有する。本明細書に記載の投薬量単位形態に関する詳細は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成しようとする特定の治療作用、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置に関してこのような活性化合物を調合する分野における固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０２５３】
薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
【０２５４】
治療用組成物の場合、本明細書に記載の調合物としては、経口、経鼻、局所（頬側および舌下など）、直腸、経膣および／または非経口投与に好適なものが挙げられる。調合物は、都合のよい形態としては単位剤形で提供してもよく、薬学分野において公知のあらゆる方法によって調製されてもよい。単一の剤形を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される対象および特定の投与様式に応じて変更されると予想される。単一の剤形を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的に、治療作用をもたらす組成物の量と予想される。一般的に、この量は、１００パーセントのうち、約０．００１パーセントから約９０パーセントの活性成分、好ましくは約０．００５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約０．０１パーセントから約３０パーセントの範囲であると予想される。
【０２５５】
膣内投与に好適な本明細書に記載の調合物としては、適切であることが当業界において公知の担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォームまたはスプレー調合物も挙げられる。本明細書に記載の組成物の局所または経皮投与のための剤形としては、粉末剤、スプレー剤、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、パッチおよび吸入剤が挙げられる。活性化合物は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体と共に、さらに必要な可能性があるあらゆる保存剤、緩衝液、または噴射剤と共に混合されてもよい。
【０２５６】
成句「非経口投与」および「非経口投与される」は、本明細書で使用される場合、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、このようなものとしては、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられる。
【０２５７】
本明細書に記載の医薬組成物で採用される可能性がある好適な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油、例えばオリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散液のケースでは必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０２５８】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有していてもよい。微生物の存在の予防は、上記の滅菌手順と、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含との両方によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含ませることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な医薬形態の持効性吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含ませることによって達成することができる。
【０２５９】
本明細書に記載の化合物がヒトおよび動物に医薬品として投与される場合、これらは、単独で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば０．００１から９０％（より好ましくは、０．００５から７０％、例えば０．０１から３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。
【０２６０】
選択された投与経路に関係なく、好適な水和物の形態で使用することができる本明細書に記載の化合物、および／または本明細書に記載の医薬組成物は、当業者公知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０２６１】
本明細書に記載の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、患者にとって毒性にならずに、特定の患者、組成物、および投与様式ごとに所望の治療応答を達成するのに効果的な活性成分の量が達成されるように変更することができる。選択された投薬レベルは、採用される本明細書に記載の特定の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、採用される特定の化合物の排出の頻度、処置の持続時間などの様々な薬物動態学的な要因、採用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態およびそれまでの病歴、ならびに医療分野において周知の類似の要因に依存すると予想される。当業界における通常の技術を有する医師または獣医師は、必要な有効量の医薬組成物を容易に決定して、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療作用を達成するために必要なレベルより低いレベルで医薬組成物で用いられる本明細書に記載の化合物の投与を開始して、所望の作用が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般的に、本明細書に記載の組成物の好適な１日用量は、治療作用をもたらすのに有効な最も低い用量である化合物量と予想される。このような有効量は、一般的に、上述した要因によって決まると予想される。投与は、好ましくは静脈内、筋肉内、腹膜内、または皮下であり、好ましくは標的部位の近位に投与される。必要に応じて、治療用組成物の有効な１日用量は、一日中適切なインターバルで、任意選択で単位剤形により別々に投与される２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれより多くの下位用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）として投与されてもよい。本明細書に記載の化合物は単独で投与することが可能であるが、化合物を医薬製剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０２６２】
治療用組成物は、当業界において公知の医療用デバイスを用いて投与することができる。例えば、ある特定の実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、無針の皮下注射デバイス、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号で開示されたデバイスを用いて投与することができる。本発明の開示において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で治療薬物を投薬するための埋め込み型マイクロ注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療デバイスを開示する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で治療薬物を送達するための治療薬物用の注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための可変流量埋め込み型注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，１９６号が挙げられる。他の多くのこのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者公知である。
【０２６３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏで適した分配が確実に達成されるように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本明細書に記載の治療化合物が確実にＢＢＢを超えるように（必要に応じて）、それらを例えばリポソーム中に製剤化することができる。リポソームを製造する方法に関して、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送される１つまたは複数の成分を含み、したがって標的化された薬物送達を強化することができる（例えば、V.V.  Ranade（１９８９年）J.  Clin.  Pharmacol.  ２９巻：６８５頁を参照）。例示的な標的部分としては、葉酸塩またはビオチン（例えば、Lowらの米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Umezawaら、（１９８８年）Biochem.  Biophys.  Res.  Commun.  １５３巻：１０３８頁）；抗体（P.G.  Bloemanら（１９９５年）FEBS  Lett.  ３５７巻：１４０頁；M.  Owaisら（１９９５年）Antimicrob.  Agents  Chemother.  ３９巻：１８０頁）；界面活性プロテインＡ受容体（Briscoeら（１９９５年）Am.  J.  Physiol.  １２３３巻：１３４頁）であって、その様々な種が、本明細書に記載の調合物に加えて発明された分子の成分を含み得る、受容体；ｐ１２０（Schreierら（１９９４年）J.  Biol.  Chem.  ２６９巻：９０９０頁）が挙げられ、さらに、K.  Keinanen；M.L.  Laukkanen（１９９４年）FEBS  Lett.  ３４６巻：１２３頁；J.J.  Killion；I.J.  Fidler  （１９９４年）Immunomethods  ４巻：２７３頁も参照されたい。一実施形態では、本明細書に記載の治療化合物は、リポソーム中に製剤化され、ある特定の実施形態では、リポソームは、標的部分を含む。ある特定の実施形態では、リポソーム中の治療化合物は、腫瘍または感染の近位の部位にボーラス注射によって送達される。組成物は、容易なシリンジ操作性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流体でなければならない。これは、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および菌類などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。
【０２６４】
組成物は、滅菌されており、シリンジによって組成物を送達できる程度に流体でなければならない。水に加えて、担体は、等張緩衝塩類溶液、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレン（polyetheylene）グリコールなど）、およびそれらの好適な混合物であり得る。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液のケースでは必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くのケースにおいて、組成物中に、等張剤、例えば糖、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含ませることによって達成することができる。
【０２６５】
活性化合物が好適に保護される場合、上述したように、化合物は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体と共に経口投与されてもよい。
【０２６６】
使用および方法
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体、二重特異性分子、および組成物は、対象においてジカウイルス感染を処置および／または予防する（例えば、それに対して免疫化する）のに使用することができる。本明細書に記載の抗体の、エンベロープタンパク質のドメインＩＩ内の融合ループに結合する能力は、フラビウイルス科内での交差反応性を示唆している。それゆえに、一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体、二重特異性分子および組成物は、フラビウイルス科の任意のメンバーを処置および／または予防する（例えば、それに対して免疫化する）のに使用することができる。
【０２６７】
療法で使用するために、本明細書に記載の抗体は、単独かまたは免疫促進剤などの他の療法と共にのいずれかで、直接（すなわち、ｉｎ  ｖｉｖｏで）対象に投与できる。全てのケースにおいて、抗体、組成物、ならびに免疫促進剤および他の療法は、それらの所望の治療作用を発揮する有効量で投与される。用語「有効量」は、所望の生物学的な作用を実現するのに必要または十分な量を指す。当業者は、過度の実験を要せずに、経験的に特定の分子の有効量を決定することができる。
【０２６８】
ワクチンの好ましい投与経路としては、例えば、注射（例えば、皮下、静脈内、非経口、腹膜内、髄腔内）が挙げられる。注射は、ボーラスまたは連続的な注入の形態であってもよい。他の投与経路としては、経口投与が挙げられる。
【０２６９】
本明細書に記載の抗体はまた、アジュバントおよび他の治療剤と共投与することもできる。用語「共投与される」は、本明細書で使用される場合、用量レジメンの一部としての投与を含む、本明細書に記載の抗体およびコンジュゲートとアジュバントおよび他の薬剤との同時の、別々の、または逐次的な投与のいずれかまたは全部を含むことが理解されよう。抗体は、典型的には、単独で、またはこのような薬剤と組み合わせて担体中に製剤化される。このような担体の例としては、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤、エマルジョンなどが挙げられる。このような医薬活性物質のための媒体の使用は当業界において周知である。分子との使用に好適な他のあらゆる従来の担体が本開示の範囲内に含まれる。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、予防適用のために利用できる。ある特定の実施形態では、予防適用は、ジカウイルス感染に対して感受性のおよび／またはジカウイルス感染の症状を示す個体におけるジカウイルス感染および／または任意の他のジカウイルス関連状態を予防する、その進行を阻害する、および／またはその発症を遅延させるための、システムおよび方法を含む。ある特定の実施形態では、予防適用は、ジカウイルス感染を有する母親の新生児における小頭症を予防する、その進行を阻害する、および／またはその発達を遅延させるための、システムおよび方法を含む。
【０２７１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、妊娠した対象におけるジカウイルス感染の垂直伝播を処置または予防するために利用される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、妊娠した対象におけるジカウイルス感染の垂直伝播を低減するまたはそのリスクを低減するために利用される。一部の実施形態では、抗体は、ジカウイルスに感染した妊娠した対象に投与される。一部の実施形態では、抗体は、ジカウイルスに感染するリスクがある妊娠した対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ジカウイルスに感染したまたはジカウイルスに感染するリスクがある妊娠した対象における胎児死亡率を処置または予防するために利用される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ジカウイルスに感染したまたはジカウイルスに感染するリスクがある妊娠した対象における胎児死亡率を低減するまたはそのリスクを低減するために利用される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、妊娠した対象、胎児および／または胎盤におけるウイルス負荷を低減するために利用され、妊娠した対象は、ジカウイルスに感染している。ウイルス負荷は、本明細書に記載のように測定することができる。
【０２７２】
ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＥＰ）エピトープに基づくペプチドおよび組成物
上述した抗体は、ワクチン組成物に製剤化される。これらのワクチン組成物は、高度な抗ジカ性を有する抗体の免疫応答を惹起するために、対象を免疫化するのに採用することができる。ワクチン組成物はまた、それを必要とする対象に投与して、防御免疫応答を誘導するのにも有用である。このようなワクチン組成物は当業界において周知であり、例えば、生理学的に適合する緩衝液、保存剤、および塩類溶液など、加えてアジュバントを含む。
【０２７３】
「アジュバント」は、特定の抗原に対する免疫応答を非特異的に増加させる薬剤であり、したがって、あらゆる所与のワクチンにおいて必要な抗原の量、および／または目的の抗原に対する十分な免疫応答をもたらすために必要な注射頻度を低減する。動物のワクチン接種に好適なアジュバントとしては、これらに限定されないが、アジュバント６５（落花生油、モノオレイン酸マンニトール（mannide  monooleate）およびモノステアリン酸アルミニウムを含有する）；フロイント完全または不完全アジュバント；ミネラルゲル、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムおよびアラム；界面活性剤、例えばヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、リゾレシチン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシメチル）プロパンジアミン、メトキシヘキサデシルグリセロールおよびプルロニックポリオール；ポリアニオン、例えばピラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ、ポリアクリル酸およびカーボポール；ペプチド、例えばムラミールジペプチド、ジメチルグリシンおよびタフトシン；ならびに油乳濁液が挙げられる。タンパク質またはペプチドはまた、リポソームまたは他のマイクロキャリアーに取り込ませた後に投与してもよい。アジュバントおよびイムノアッセイの様々な態様に関する情報は、例えば、参照により本明細書に組み入れられるP.  Tijssen、Practice  and  Theory  of  Enzyme  Immunoassays、第３版、１９８７年、Elsevier、N.Y.によるシリーズで開示されている。
【０２７４】
ワクチン組成物は、免疫応答を惹起するのに十分な量の所望の免疫原、例えば本開示のペプチドを含む。投与される量は、動物の質量に対して約０．０００１ｇ／ｋｇから約１．０ｇ／ｋｇの範囲であってもよい。ポリクローナル抗血清を得るために、あらゆる好適な脊椎動物が容易に採用できる。動物は、好ましくは哺乳動物であり、これらに限定されないが、げっ歯類、例えばマウス、ラット、ウサギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、例えばヤギおよびヒツジ、霊長類、例えばサル、大型類人猿およびヒトなどが挙げられる。
【０２７５】
ワクチン組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、および／または経口などのあらゆる標準的な経路によって容易に投与される。ワクチン組成物は、好ましくは、各タイプのレシピエント動物および投与経路に適切なように製剤化されることを、技術者は理解しているものと予想される。
【０２７６】
本開示の他の態様は、それを必要とする対象に本開示に係るワクチンの有効量を投与することによってジカウイルス感染を処置または予防する方法に関する。
【０２７７】
本発明の開示は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これらは、さらなる限定として解釈されないものとする。配列リスト、図面、ならびに本出願にわたり引用された全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、明示的に参照により本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【０２７８】
（実施例１）
抗ジカウイルスＥＰ抗体の生成
抗ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＥＰ）抗体を生成するために、エンベロープタンパク質の外部ドメインＩＩ（Ｅ−ＤＩＩ）中に位置するＦＬＥＰ領域を調査した。どの足場を採用するかを決定するために、ＲＣＳＢ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）を利用し、５００を超える抗原−抗体の構造的複合体を、境界面形成に関して分析した。抗ＴＤＲＤ３（Ｔｕｄｏｒドメイン含有３）ヒト抗体が、ジカウイルスのＦＬＥＰ領域と相互作用する有望な可能性を有する足場として同定された。それゆえに、この抗体を最適化のために選択して、ジカウイルスＥＰを標的化する抗体を生成した。抗ＴＤＲＤ３の重鎖および軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号４および５に示される。
【０２７９】
ジカウイルスＥＰを標的化する抗体を、Robinson,  L.ら、Cell、１６２巻：４９３〜５０４頁（２０１５年）に説明されるように、エピトープ−パラトープ結合性ネットワークを計算することによって設計した。これらの抗体を、融合ループ内の残基Ｄ９８、Ｒ９９およびＷ１０１を標的化するように設計した。簡潔に述べると、ＦＬＥＰとの複合体中の抗ＴＤＲＤ３抗体の結晶構造を使用して、抗原−抗体境界面にわたる様々な残基間原子間接触を決定した。ＣＤＲ残基とその隣接エピトープ残基との間の相互作用を、２Ｄネットワークグラフでレンダリングして、結合性ネットワークを分析した。構造的分析および結合性ネットワークによって評価される、より有利な接触に寄与したＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域における突然変異を同定し、新たなまたは改善された接触を潜在的に媒介する様々なアミノ酸残基を分析した。生成された可変領域およびＣＤＲは、表２および３ならびに図１Ａおよび１Ｂに示される。
【０２８０】
次いでこれらの抗体を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いた一時的トランスフェクションによってＦｒｅｅｓｔｙｌｅ  ２９３細胞において発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製した。精製された抗体を、ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡによって定量した。簡単に言えば、９６ウェルプレートを、適切な抗原で４℃で一晩コーティングした。プレートを洗浄し、１％ｂｌｏｔｔ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でブロックした。抗体の連続希釈液をプレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。抗原結合したＩｇＧを、ＲｂαＨｕ  ＩｇＧ  ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）とその後のＴＭＢ基質（ＫＰＬ）添加を使用して検出した。
【０２８１】
（実施例２）
ジカウイルスＥＰ抗体の結合親和性
生成された抗体がジカウイルスに結合することが可能かどうかを決定するために、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用した。具体的には、表２に示されるｍＡｂ３、６、７、および８を試験した。加えて、融合ループ標的化汎フラビウイルス抗体（４Ｇ２）およびＨＩＶ−１中和抗体（ＰＧＴ１２４）を利用した。４Ｇ２の重鎖および軽鎖可変領域配列は、それぞれ配列番号１２および１８に記載される。ＰＧＴ１２４の重鎖および軽鎖可変領域配列は、それぞれ配列番号１３および１９に記載される。ＰＧＴ１２４抗体は、ジカウイルスの融合ループエピトープ領域の近傍に存在するＮ−グリカンを標的化する。
【０２８２】
マイクロタイタープレートを、炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）中０．０５μｇの精製されたマウス４Ｇ２で４℃で一晩コーティングし、１０％ＢＳＡで室温で２時間ブロックした。その後、５×１０４ｐｆｕのジカウイルスを添加した。具体的には、株Ｈ／ＰＦ／２０１３（Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ  ２０１３年）、ＩＬＭ（Ｂｒａｚｉｌ  Ｐａｒａｉｂａ  ２０１５年）、またはＭＲ７６６−ＮＩＩＤ（Ｕｇａｎｄａ  １９４７年）を利用した。室温で１時間のインキュベーション後、抗体の２倍連続希釈液を１時間添加し、その後、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ交差吸着ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＩｇＧを４５分間添加した。抗体結合を、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（3,3',5,5'-tetramethylbenzidene）基質を添加することによって可視化し、１０分後に反応を硫酸で停止させた。異なるステップ間で、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ）で２回洗浄した。吸光度を、プレートリーダーを使用して４５０ｎｍで読み取った。結果は、図２および以下の表１に示される。
【表１】
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【０２８３】
これらの結果は、実施例１で生成された抗体が、様々なジカウイルス株に結合することが可能であったことを示した。
【０２８４】
（実施例３）
ジカウイルスエンベロープタンパク質抗体の中和
抗ジカウイルス抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏでジカウイルスを中和できるかどうかを決定するために、精製されたｍＡｂを、ジカウイルスによるプラーク形成を阻害するそれらの能力に関して評価した。プラーク中和試験（ＰＲＮＴ）を、以前に説明されたように（Robinson,  L.ら、Cell、１６２巻：４９３〜５０４頁、２０１５年）実施した。簡単に言えば、ＰＲＮＴを、ＢＨＫ−２１細胞に対して実施した。ＲＰＭＩ維持培地（ＭＭ）中の、ｍＡｂ６および８を含有する血清の２倍連続希釈液を、等しい体積中の５０ｐｆｕのジカウイルス（ＩＬＭ株またはＨ／ＰＦ／２０１３株）と共に１時間インキュベートし、その後ＢＨＫ−２１に添加した。３７℃で１時間のインキュベーション後、培地を吸引し、細胞を、ＭＭ中１％のメチルセルロースで覆った。３７℃で５日間の後、細胞を２０％ホルムアルデヒドで固定し、１％クリスタルバイオレットで染色した。ＰＲＮＴ５０値を、シグモイド用量応答曲線フィットを使用して決定し、逆数値として報告した。
【０２８５】
図３Ａおよび３Ｂに示されるように、ｍＡｂ６および８は、ジカウイルスを中和することが可能であった。ＩＬＭ株に関して、ｍＡｂ８のＰＲＮＴ５０は５．１２２μｇ／ｍＬであったが、ｍＡｂ６のＰＲＮＴ５０は０．０５９７μｇ／ｍＬであった。ｍＡｂ８のＰＲＮＴ５０は、Ｈ／ＰＦ／２０１３株に関して５．０９２μｇ／ｍＬであった。これらの結果は、ジカウイルスに対して生成された抗体が、ウイルスに結合しそれを中和できたことを示した。
【０２８６】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｖｏの予防および治療研究
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでジカウイルスに結合しそれを中和することが可能な抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏで保護効能および治療効能を有するかどうかを決定するために、ｍＡｂ６および８を、成体Ａ１２９マウス（８〜１１週齢）において試験した。Ａ１２９マウスに、１０３ｐｆｕのＨ／ＰＦ／２０１３株（Ｆｒｅｎｃｈ  Ｐｏｌｙｎｅｓｉａ）を腹腔内（ｉｐ）感染させた。ｍＡｂの保護効能または予防効能を評価するために、マウスに、感染の１日前にｍＡｂ（５０μｇ）をｉｐ注射した。治療効能を評価するために、マウスに、感染の１日後にｍＡｂ（５０μｇ）をｉｐ注射した。ｍＡｂの効能を、死亡率、体重減少およびウイルス血症の低減を評価することによってモニターした。簡潔に言うと、マウス血液を、感染後１〜８日目に顔面静脈から収集して、リアルタイムＰＣＲによって血清ウイルス血症レベルを測定した。マウスが感染に屈するまで、体重を毎日モニターした。マウス生存を、感染の２０日後までモニターした。
【０２８７】
図４Ｃおよび４Ｄに示されるように、ウイルス感染は、感染後１０日目までに１００％の死亡率を引き起こした。加えて、マウスは、神経関連疾患の症状を有した（麻痺；データ示さず）。ｍＡｂ６または８による処置は、予防モデルおよび処置モデルの両方において、死亡率および体重減少を有意に低減した（図４Ａ〜４Ｄ）。加えて、図５は、ｍＡｂ６および８が、予防的または治療的のいずれかで抗体を投与したマウスにおいて、ウイルス血症を低減することができたことを示している。具体的には、ウイルス負荷は、約２〜３ｌｏｇ低減され、ピークウイルス血症が遅延された。
【０２８８】
これらの結果は、生成された抗ジカウイルス抗体が、予防効果および治療効果の両方を有したことを示した。
【０２８９】
（実施例５）
ｉｎ  ｖｉｖｏの投薬量および抗体依存性感染増強研究
体重減少、ウイルス血症および生存に対する抗ジカウイルス抗体の投薬の影響を評価した。Ａ１２９マウスに、ジカウイルス（株Ｈ／ＰＦ／２０１３）による感染の１日後に、様々な用量のｍＡｂ８（１０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇまたは０．２ｍｇ／ｋｇ）を投与した。図６Ａ〜６Ｃは、２ｍｇ／ｋｇ（約６０μｇ）において、ｍＡｂ８がウイルス血症を低減し、体重減少および生存に対する完全な保護を提供したことを示している。注目すべきことに、顕著に低い用量（０．２ｍｇ／ｋｇ（約６μｇ））のｍＡｂ８を投与した場合であっても、ウイルス血症または加速された死亡において、観察可能な差異は存在しなかった。これらの結果は、ｍＡｂ８が、疾患の進行と関連するウイルス血症の増加を伴わずに、顕著に低い濃度であっても、部分的な保護を提供する可能性を有することを示した。
【０２９０】
加えて、抗ジカウイルスｍＡｂ８の抗体依存性感染増強（ＡＤＥ）活性を分析した。ＡＤＥは、感染が、既存の感染増強性抗体の背景において生じる場合、増加した疾患重症度を媒介すると提唱されている現象である。機構的に、感染増強性抗体が成熟および未成熟ウイルス粒子に結合し、宿主細胞上に存在するＦｃγ受容体の抗体係合を介してウイルス侵入を媒介する場合に、これが生じる。４Ｇ２、Ｅ５３、およびＥ−二量体エピトープ（ＥＤＥ）に対するｍＡｂを含む、数種のＦＬＥに対する抗体が、文献中で説明されている（Dejnirattisai  Wら、２０１５年）。数々の研究により、ＤＥＮＶを、Ｆｃγ受容体によって貪食される抗体レベルでオプソニン化した場合、ファゴソーム膜とのウイルス融合を阻害できる抗体のみが感染を予防し、したがってＡＤＥを予防することが示されている（Chan  KRら、２０１１年、Wu  Rら、２０１２年）。それゆえに、Ｅ−二量体境界面においてジカウイルスＦＬＥエピトープのｍＡｂ８との係合の、融合阻害によりそのＡＤＥ活性を低減する能力を試験した。
【０２９１】
具体的には、ＬＩＬＲＢ１を発現し、したがってＡＤＥに対して高度に感受性であることが公知のＴＨＰ１．２Ｓ単球細胞を利用した。ＺＩＫＶ  Ｈ／ＰＦ／２０１３株の非常に弱い結合および中和（Ｋｄ＝５０．８５ｕｇ／ｍｌ；ＰＲＮＴ５０＞５００ｕｇ／ｍｌ）を示したｍＡｂ８の初期設計バリアントを対照として使用した（「ｍＡｂ対照」）。異なる濃度の抗体を、ＴＨＰ１．２Ｓ単球に感染させる前に、ＺＩＫＶ（株Ｈ／ＰＦ／２０１３）と共に１時間インキュベートした。７０時間後、培養上清におけるウイルス複製を、ＢＨＫ２１細胞に対するプラークアッセイによって測定した。図７Ａに示されるように、試験した全てのｍＡｂは、ＴＨＰ１．２Ｓ細胞においてＡＤＥを示したが、ｍＡｂ１３は、高い抗体濃度にもかかわらず、いずれのＺＩＫＶ中和活性も有さずに、高いＡＤＥ活性を示した。対照的に、ｍＡｂ８は、別の融合ループ抗体であるがＺＩＫＶに対する中和活性を有さない４Ｇ２と匹敵する、ピーク感染増強における少なくとも３分の１低いウイルスタイターのＡＤＥを示した（図７Ｂ）。これらの結果は、実施例１で生成された抗ジカウイルスＥＰ抗体がＡＤＥを低減することが可能であったことを示した。
【０２９２】
（実施例６）
母児移入（ｍａｔｅｒｎａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）に対する効能
胎盤および胎児感染が、胎児死亡率と共に、ＺＩＫＶに感染した妊娠したＡ１２９マウスにおいて観察されている。それゆえに、妊娠したＡ１２９マウスにおける垂直感染および胎児死亡率を予防するｍＡｂ８の可能性を評価した。全体的研究設計は図８Ａに提供される。具体的には、４日間にわたって雄性マウスと交配させた（０日目の夕方に開始し、４日目の朝に別々にした）１８匹の妊娠したＡ１２９マウスに、１０３ＰＦＵのジカウイルス（アジア系統のＨ／ＰＦ／２０１３株）を、１０日目（７〜１０日目の胚、すなわちＥ７〜Ｅ１０に対応する）に静脈内感染させた。次いでマウスを、５０μｇのｍＡｂ８（ｎ＝９）またはアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｎ＝９）で、感染後２４時間（Ｅ８〜Ｅ１１）にわたって処置した。マウスを、１７日目（Ｅ１４〜Ｅ１７）に屠殺し、ウイルスＲＮＡレベルを、１２日目（血液）および１７日目（血液、胎盤および胎児区画）に分析した。
【０２９３】
この研究の結果は、図８Ｂ〜８Ｈに提供される。アイソタイプ対照ＩｇＧ処置マウスと比較した場合、ｍＡｂ８処置マウスは、１２日目（ｐ値＜０．０００１；両側ｔ検定）および１７日目（ｐ値＝０．０１８；両側ｔ検定）に、血液中にかなり低いレベルのウイルスＲＮＡを有する（図８Ｂおよび８Ｃ）。有意なことに、ｍＡｂ８処置は、胎盤（ｐ値＜０．０００１；両側ｔ検定）および胎児（ｐ値＜０．０００１；両側ｔ検定）感染を低減し、胎児死亡率に対する保護を提供した。対照的に、対照群から回収した胎児は、胎児および胎盤区画における顕著なウイルス血症と共に、１００％の致死率を有した（図８Ｄ〜８Ｆ）。ｍＡｂ８で処置したマウスから回収した胎児は、いずれの発生上の障害も伴わずに、正常な胚発生の徴候を示した。対照的に、アイソタイプ対照ＩｇＧ処置マウス由来の胎児は、回収前に死亡し、これは、正常胎児と比較した明確な形態学的差異を明らかにしている（データ示さず）。これらの結果は、本明細書に記載の抗ジカウイルス抗体が、妊娠したマウスにおける垂直感染および胎児死亡率を予防することが可能であることを示した。
【０２９４】
（実施例７）
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける非ヒト霊長類の研究
マカク属のカニクイザルを使用して、抗ＥＰ  ｍＡｂが、高用量のＺＩＫＶ感染後に投与された場合、生存を改善できるかどうか、およびそれがどの程度効果的かを試験する。
【０２９５】
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、完全最小必須培地（ｃＭＥＭ）、２％ＦＢＳ、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（stretopmycin）中、Ｖｅｒｏ細胞で産生される。
【０２９６】
マカクを、処置レジメンに基づく群、加えて感染の陽性対照としてＰＢＳのみを与えた群にランダム化する。各対象を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中の１０００ＰＦＵ（筋肉内の２つの部位に各１ｍＬ）のＺＩＫＶで感染させる。群の半分は、感染後２４時間で処置を開始し、群の他の半分は、感染後４８時間で処置を開始する。対象を、本明細書で開示されたＺＩＫＶ−ＥＰ特異的な中和抗体の１つ、ｍＡｂ（２５ｍｇ／ｋｇ）で、伏在静脈中の５ｍＬの徐放性ボーラス（ｓｌｏｗ  ｂｏｌｕｓ）として静脈内処置する。対象を毎日モニターして、内部スコア付けプロトコールで疾患進行に関してスコア付けする。スコア付けにより、対象の状態／活動、態度、活動レベル、便／尿排出量、食物／水の摂取、体重、体温、呼吸の変化、およびスコア付けされる疾患の兆候、例えば目に見える発疹、出血、チアノーゼ、または皮膚の紅潮を等級付けする。動物がｍＡｂを受ける前に、２４時間の群では感染後１、４、７、１４、２１、および２８日目、または４８時間の群では感染の２、５、８、１４、２１、および２８日後に、体重、体温、血液、ならびに口腔咽頭、鼻、および直腸スワブの試験を行う。
【０２９７】
（実施例８）
ヒトの研究
ジカウイルスに感染したヒトに、本明細書で開示された単一の抗ＥＰ抗体を与える。理想的には、抗体は、感染の２４または４８時間後に与えられる。対象を、疾患の兆候、例えば目に見える発疹、発熱、または関節痛に関してモニターする。加えて、本明細書で開示された抗ＥＰ抗体を受けている妊娠した女性からの新生児を、小頭症に関してモニターする。ウイルスタイターもまたモニターする。
【０２９８】
等価体
当業者は、慣例的な実験のみを使用することで、本明細書に記載の本開示の具体的な実施形態の多くの等価体を認識するか、または確認できると予想される。このような等価体は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【表２】
2020500007.tif 000003
【表３−１】
2020500007.tif 000004
【表３−２】
2020500007.tif 000005
【表３−３】
2020500007.tif 000006
【表３−４】
2020500007.tif 000007
【図１Ａ】
2020500007.tif 000008
【図１Ｂ】
2020500007.tif 000009
【図２−１】
2020500007.tif 000010
【図２−２】
2020500007.tif 000011
【図３】
2020500007.tif 000012
【図４】
2020500007.tif 000013
【図５】
2020500007.tif 000014
【図６】
2020500007.tif 000015
【図７】
2020500007.tif 000016
【図８Ａ】
2020500007.tif 000017
【図８ＢＣ】
2020500007.tif 000018
【図８ＤＥ】
2020500007.tif 000019
【図８Ｆ】
2020500007.tif 000020
【配列表】
2020500007000001.app
【国際調査報告】
2020500007.tif 000021
2020500007.tif 000022
2020500007.tif 000023
2020500007.tif 000024
2020500007.tif 000025