(57)【要約】  本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、１００％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、経口剤形に関する。本発明は、特定の剤形、自己免疫疾患を上記剤形で処置するための方法、およびそのような方法における上記剤形の使用にさらに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、１００％の前記ＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、経口剤形。
【請求項２】
少なくとも９５％の前記ＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で４時間後に放出される、請求項１に記載の経口剤形。
【請求項３】
２０ｍｇ／ｋｇの用量を使用して、絶食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）と比較して、＋／−３０％である摂食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）を示す、請求項１または２に記載の経口剤形。
【請求項４】
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含む経口剤形であって、３０〜５０％  ＧＡＢＡ、５０〜６０％フィラー材料、および任意選択により、薬学的に許容される賦形剤を含む、経口剤形。
【請求項５】
前記フィラー材料が、微結晶性セルロースおよび／またはヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む、請求項４に記載の経口剤形。
【請求項６】
３０〜３５％ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む、請求項４または５に記載の経口剤形。
【請求項７】
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースが、２８〜３０％のメトキシ基置換度を有する、請求項６に記載の経口剤形。
【請求項８】
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースが、１９〜２４％のメトキシ基置換度を有する、請求項６に記載の経口剤形。
【請求項９】
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースが、水中に２％、２０℃で４０〜６０ｍＰａの粘性を有する、請求項７に記載の経口剤形。
【請求項１０】
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースが、水中に２％、２０℃で２．５〜５．０ｍＰａの粘性を有する、請求項８に記載の経口剤形。
【請求項１１】
前記ヒドロキシプロピルメチルセルロースが、水中に２％、２０℃で８０〜１２０ｍＰａの粘性を有する、請求項８に記載の経口剤形。
【請求項１２】
前記フィラー材料が微結晶性セルロースおよび／またはリン酸二カルシウムを含み、崩壊剤、および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項４に記載の経口剤形。
【請求項１３】
３０〜４０％微結晶性セルロースおよび１５〜２０％リン酸二カルシウムを含む、請求項１２に記載の経口剤形。
【請求項１４】
１００％の前記ＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、請求項４から１３のいずれか一項に記載の経口剤形。
【請求項１５】
少なくとも９５％の前記ＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で４時間後に放出される、請求項４から１４のいずれか一項に記載の経口剤形。
【請求項１６】
絶食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）と比較して、＋／−３０％である摂食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）を示す、請求項４から１５のいずれか一項に記載の経口剤形。
【請求項１７】
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、絶食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）と比較して、＋／−３０％である摂食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）を示す、経口剤形。
【請求項１８】
４０％  ＧＡＢＡを含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の経口剤形。
【請求項１９】
対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法に使用するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の経口剤形。
【請求項２０】
対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法に使用するための、請求項１から１８のいずれか一項に記載の経口剤形の製造におけるＧＡＢＡの使用。
【請求項２１】
前記対象が１８歳より下のヒトである、請求項１９に記載の使用のための経口剤形または請求項２１に記載の使用。
【請求項２２】
対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための前記方法が、ＧＡＢＡを２００〜１２００ｍｇ／日、例えば、２００、６００、または１２００ｍｇ／日の用量で投与することを含む、請求項１９もしくは２１に記載の使用のための経口剤形または請求項２０もしくは２１に記載の使用。
【請求項２３】
対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法であって、請求項１から１８のいずれか一項に記載の経口剤形を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
前記対象が１８歳より下のヒトである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＧＡＢＡを２００〜１２００ｍｇ／日、例えば、２００、６００、または１２００ｍｇ／日の用量で投与することを含む、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、医学および医薬製剤の分野に関する。特に、本発明は、ガンマアミノ酪酸を含む医薬製剤および代謝障害の処置におけるその使用に関する。
【０００２】
背景
ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）は、４−アミノ酪酸（ＣＡＳ登録番号５６−１２−２）としても知られる、中枢神経系（ＣＮＳ）阻害活性を有する天然の神経伝達物質である。ＧＡＢＡは、食物サプリメントとして市販されているが、いくつかの国では医薬的物質として規制されている。ＡＴＣ分類体系では、経口または非経口投与を介する１ｇの規定の１日用量で抗てんかん薬として分類されている。ＧＡＢＡは膵島細胞中でも産生され、ここでＧＡＢＡはＧＡＢＡＡ−受容体を介して膵臓細胞のホルモン分泌を制御する。
【０００３】
ＧＡＢＡは、代謝症候群、例えば、１型糖尿病に関連する症状および障害の治療的または予防的な寛解における使用に提案されている（ＷＯ２０１２／０５０９０７を参照）。薬物を剤形から少なくとも６時間の期間にわたって放出させる持続性放出経口剤形が、この治療的または予防的な処置に使用されることが提案されている。
【０００４】
Ｌｉおよび共同研究者（Ｌｉら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、（２０１５）第６巻：２６０）は、健常な志願者においてＧＡＢＡの薬物動態および薬力学を試験した。ＧＡＢＡを、１日当たり１または３回２ｇの用量で絶食状態中に投与した。使用した医薬製剤のタイプは、特定されていない。食事とともに投与することに関連するデータは、示されていない。
【０００５】
発明の概要
特に、糖尿病および／または代謝症候群の処置または予防に使用するための、ガンマアミノ酪酸の改善された製剤を提供することが、本発明の課題である。具体的には、製剤は、付随する食事とは無関係にＧＡＢＡの匹敵するバイオアベイラビリティーを提供する。
【０００６】
一態様では、本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、１００％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、経口剤形に関する。
【０００７】
さらなる態様では、本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含む経口剤形であって、３０〜５０％  ＧＡＢＡ、１〜３５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース、および薬学的に許容される賦形剤を含む、経口剤形に関する。
【０００８】
さらなる態様では、本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、絶食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）と比較して、＋／−３０％である摂食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）を示す、経口剤形に関する。
【０００９】
さらなる態様では、本発明は、対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法に使用するための、本発明に従う経口剤形に関する。
【００１０】
さらなる態様では、本発明は、対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法に使用するための、本発明に従う経口剤形を製造する方法におけるＧＡＢＡの使用に関する。
【００１１】
さらなる態様では、本発明は、対象における糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための方法であって、本発明に従う経口剤形を前記対象に投与することを含む方法に関する。
本発明の好ましい実施形態は、従属請求項に記される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】いくつかのＧＡＢＡ製剤に関する溶解データを示す図である。
【図２】いくつかのＧＡＢＡ製剤に関する薬物動態を試験するための研究プロトコルを示す図である。
【図３−１】試験したＧＡＢＡ製剤に関するＧＡＢＡ血漿濃度曲線および溶解データを示す図である。
【図３−２】試験したＧＡＢＡ製剤に関するＧＡＢＡ血漿濃度曲線および溶解データを示す図である。
【図４】試験したＧＡＢＡ製剤に関するＡＵＣを示す図である。
【図５】先行技術の製剤に対する経時的なＧＡＢＡの平均血清中濃度を示す図である。
【図６】試験したＧＡＢＡ製剤および先行技術の製剤についてのＡＵＣを示す図である。
【００１３】
定義
ＡＵＣ（ｘｈ）：投与時間からｘ時間までの薬物血漿濃度曲線下の面積。すなわち、ＡＵＣ（５時間）は、投与時間から５時間までの薬物血漿濃度曲線下の面積である。
Ｃｍａｘ：薬物の投与後に得られる最大薬物血漿濃度。
Ｔｍａｘ：最大薬物血漿濃度が薬物の投与後に得られる時間。
【００１４】
別記しない限り、組成物と関連して全パーセンテージは、重量／重量（ｗ／ｗ）パーセンテージとして与えられる。
【００１５】
詳細な説明
本発明者らは、経口的に投与されたＧＡＢＡの取り込みが、使用される製剤によって有意に影響されること、またＧＡＢＡを取り込んでいる患者の食物摂取に依存することを認識した。食物とともにおよび食物なしの両方で摂取することができ、付随する食事とは無関係にＧＡＢＡの匹敵するバイオアベイラビリティーを提供する、製剤を有することが好ましい。このことは、かなりの期間、例えば月または年などで継続される治療レジメンでより一層好ましく、その理由は、詳細な投与の必要性（例えば、薬物を食事とともにまたは絶食状態で摂取する必要性）が、処方されたレジメンの遵守を減少させる傾向があり、また治療効果の欠如をもたらしうる。
【００１６】
本発明者らは、ＧＡＢＡが、経口投与後最初の２〜３時間の間のみ患者によって取り込まれることも認識した。
【００１７】
したがって、本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含み、それぞれ、摂食および絶食状態で患者に投与される場合に、ＡＵＣの点で匹敵するバイオアベイラビリティーを有する、経口剤形に関する。
【００１８】
一実施形態では、ＡＵＣの点で匹敵するバイオアベイラビリティーは、剤形が、２０ｍｇ／ｋｇの用量を使用して、絶食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）と比較して、＋／−３０％内である摂食状態における患者に投与される場合のＡＵＣ（５時間）を示すことと規定される。
【００１９】
本発明に従う剤形のＡＵＣの点で匹敵するバイオアベイラビリティーは、１００％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、経口剤形で達成されうる。したがって、一態様では、本発明は、ガンマアミノ酪酸（ＧＡＢＡ）および薬学的に許容される賦形剤を含む経口剤形であって、１００％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で０．２５〜５時間以内に放出される、経口剤形に関する。
【００２０】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で４時間後に放出される。
【００２１】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で３時間後に放出される。
【００２２】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で１時間後に放出される。
【００２３】
ＧＡＢＡの放出は、１０００ｍｌの０．０１Ｍ  ＨＣｌ中ＵＳＰ溶解装置２において測定することができ、ここで、経口剤形が３７℃で５０ｒｐｍのパドル速度を使用して混合される。１００％のＧＡＢＡが特定のタイムスパン内に放出されることは、１００％未満のＧＡＢＡが特定のタイムスパン前に放出されたことを意味すると解釈される。
【００２４】
ＵＳＰ溶解装置２は、経口剤形に関する溶解特性を決定する装置である。装置および装置を使用する方法の両方は、米国、欧州、および日本の薬局方にわたって標準化および調和化され、本明細書中に参照によって組み込まれる、＜７１１＞章のＤｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎに広く記載されている。
【００２５】
本発明に従う剤形のＡＵＣの点で匹敵するバイオアベイラビリティーはまた、剤形が、３０〜５０％ＧＡＢＡ、５０〜６０％フィラー材料、および、任意選択により、薬学的に許容される賦形剤を含む、経口剤形で達成されうる。したがって、一態様では、本発明は、３０〜５０％  ＧＡＢＡ、５０〜６０％フィラー材料、および、任意選択により、薬学的に許容される賦形剤を含む、剤形に関する。
【００２６】
フィラー材料は、当分野において周知されており、セルロース（例えば、微結晶性セルロース、セルロースエーテル、植物ベースセルロース）、デンプン、リン酸二カルシウムを含む。フィラーとして有用なヒドロキシプロピルメチルセルロースエーテルは、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）の商品名で市販されている。
【００２７】
一実施形態では、本発明に従う剤形は、３０〜３５％ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。
【００２８】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、フィラー材料として、２８〜３０％のメトキシ基置換度（ｍｅｔｈｏｘｙｌ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  ｇｒａｄｅ）を有する。
【００２９】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、水中に２％、２０℃で８０〜１２０ｍＰａの粘性を有する。
【００３０】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、水中に２％および２０℃で４０〜６０ｍＰａ・ｓの粘性を有する。
【００３１】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、水中に２％および２０℃で２．５〜５．０ｍＰａ・ｓの粘性を有する。
【００３２】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、１９〜２４％のメトキシ基置換度を有する。
【００３３】
一実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、２８〜３０％のメトキシ基置換度を有する。
【００３４】
一実施形態では、本発明に従う剤形は、４０％  ＧＡＢＡ、３０〜３５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（２８〜３０％のメトキシ基置換度および水中に２％、２０℃で４０〜６０ｍＰａ・ｓの粘性を有する）、２３．５〜２８．５％微結晶性セルロース、および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００３５】
一実施形態では、本発明に従う剤形は、４０％  ＧＡＢＡ、３０％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（２８〜３０％のメトキシ基置換度および水中に２％、２０℃で２．５〜５．０ｍＰａの粘性を有する）、２８．５％微結晶性セルロース、および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００３６】
一実施形態では、本発明に従う剤形は、４０％  ＧＡＢＡ、３０％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（１９〜２４％のメトキシ基置換度および水中に２％、２０℃で８０〜１２０ｍＰａの粘性を有する）、２８．５％微結晶性セルロース、および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００３７】
本発明の一実施形態では、フィラー材料は、微結晶性セルロースおよび／またはリン酸二カルシウムを含む。
【００３８】
一実施形態では、剤形は、崩壊剤および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。
【００３９】
一実施形態では、経口剤形は、３０〜４０％微結晶性セルロース、および１５〜２０％リン酸二カルシウムを含む。
【００４０】
一実施形態では、経口剤形は、４０％  ＧＡＢＡ、３６．７５％微結晶性セルロース、および１６．７５％リン酸二カルシウム、崩壊剤（例えば、クロスカルメロースナトリウム）、および、任意選択により、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００４１】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で４時間後に放出される。
【００４２】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で３時間後に放出される。
【００４３】
一実施形態では、少なくとも９５％のＧＡＢＡが、０．０１Ｍ  ＨＣｌ中３７℃でＵＳＰ溶解装置２中で１時間後に放出される。
【００４４】
本発明の一態様では、経口剤形は、４０％  ＧＡＢＡを含む。
本発明の一態様では、経口剤形は、２００ｍｇ  ＧＡＢＡを含む。
【００４５】
薬学的に許容される賦形剤は、当分野において知られている、流動促進剤、滑沢剤、着色剤、風味剤、コーティング剤、味覚マスキング剤、崩壊剤などを含み得る。これらには、セルロース、微結晶性セルロース、二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロースナトリウムなどが含まれる。
経口剤形は、固体経口剤形、例えば、錠剤、カプセルなどであってもよい。
【００４６】
さらなる態様では、本発明は、糖尿病または代謝症候群の処置または予防の方法に使用するための、本発明に従う経口剤形に関する。糖尿病には、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠糖尿病、および成人期の潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）が含まれる。代謝症候群は、過剰腹部脂肪；アテローム性脂質異常症；高血圧症；高血糖；インスリン抵抗性；炎症誘発性状態；およびプロトロンビン状態を含む、循環器病および２型糖尿病に関する代謝性リスク因子のクラスターである。
【００４７】
さらなる態様では、本発明は、糖尿病または代謝症候群の処置または予防のための、本発明に従う経口剤形の製造のための方法におけるＧＡＢＡの使用に関する。
【００４８】
一実施形態では、本発明に従う経口剤形での糖尿病または代謝症候群の処置または予防に供される患者は、子供、例えば１８歳より下のヒト対象などである。
【００４９】
一実施形態では、本発明に従う処置または予防の方法は、必要とする患者に２００〜１２００ｍｇ／日、例えば、２００、４００、６００、８００、１０００または１２００ｍｇ／日のＧＡＢＡ１日用量を投与することを含む。
【００５０】
本発明の実施では、当業者は、当分野における共通の一般的知識を提供するいくつかのテキストブック、例えば、参照によって本明細書に組み入れられる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  ｅｄ．、ＩＳＢＮ  ０−７８１７−４６７３−６、およびＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、Ｂｒｅｎｎｅｒ＆Ｓｔｅｖｅｎｓ、３ｒｄ  ｅｄ．２０１０（Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＵＳＡ）などに頼ってもよい。
【実施例】
【００５１】
実施例
本発明は、いくつかの実施例によってさらに説明される。実施例は、添付の特許請求の範囲の範囲である、本発明の範囲の限定として解釈されるべきではない。
【００５２】
錠剤の製造
異なる放出特性を有するＧＡＢＡの５つの製剤を、製造し、評価した。錠剤を、直接圧縮によって製造し、標的硬度１１０Ｎで５００ｍｇ充填重量に圧縮した。１０ｍｍの円形凹状工具を、単一パンチＦプレス上での圧縮のために使用した。
【００５３】
【表１】
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【００５４】
【表２】
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【００５５】
【表３】
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【００５６】
【表４】
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【００５７】
【表５】
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【００５８】
製剤２〜４を、異なる放出プロファイルを標的とする目的で開発した。２タイプのＭｅｔｈｏｃｅｌ（商標）（ＨＰＭＣＰ）を、評価した（タイプＫおよびＥ）。タイプＫは、タイプＥよりも強いゲルを形成することが知られており、より遅い放出速度を標的とする制御放出マトリックスに適切である。２つのタイプに沿って、様々な粘性を評価した、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）には、より高い粘性が、より強いゲルバリアを形成する等級があり、拡散に関して、より遅い薬物放出速度をもたらす。ポリマーを制御する速度に加えて、微結晶性セルロースも、錠剤に含めて弾性を与えた。
【００５９】
より弱いゲルを形成する、グレードＥ５０  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（商標）を使用する製剤において、製剤中のＨＰＭＣＰのパーセンテージを、約３５％に増加させることができた（製剤２ｂに示される）。これを、タイプＥ  ＨＰＭＣＰのより低い粘稠性グレード、例えば、Ｅ３、Ｅ５、Ｅ６またはＥ１５の導入とさらに組み合わせることができたが、ＨＰＭＣＰの相対量を剤形の３０〜３５％に維持した。タイプＫ  ＨＰＭＣＰグレードＫ４Ｍは、１９〜２４％のメトキシ基置換度および水中に２％、２０℃で２，６６３〜４，９７０ｍＰａ・ｓの粘性を有する。タイプＫ  ＨＰＭＣＰグレードＫ１００ＬＶは、１９〜２４％のメトキシ基置換度および水中に２％、２０℃で８０〜１２０ｍＰａ・ｓの粘性を有する。
【００６０】
溶解速度
上記の通り製造された錠剤を使用する溶解速度を、１０００ｍｌの０．０１Ｍ  ＨＣｌ中ＵＳＰ溶解装置２において測定し、錠剤を、３７℃で５０ｒｐｍのパドル速度を使用して混合した。
製剤１、２、３、および４についての溶解速度は、図１に示される。
【００６１】
薬物動態
上記に従う４つの製剤の経口投与後のイヌでのＧＡＢＡの薬物動態プロファイルを評価した。
【００６２】
１〜６歳の８匹の雄性イヌを研究に含めた。イヌを各々２匹のイヌの４群に分けた。製剤についてのクロスオーバー投与スキームを、図２に示される通り設計した。投与した用量レベルは、表１に提供される。
【００６３】
【表６】
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【００６４】
研究スケジュール
イヌ１匹当たり各時点当たり、血漿の以下のアリコートを調製した：
・Ｋ２ＥＤＴＡチューブ：５００μｌの１アリコート（潜在的な血液分析に対して）
・ヘパリンリチウムチューブ：
ｏ  ２００μｌの１アリコート（潜在的なＧＬＰ−１分析に対して）：血液採取（≒５００μｌ血液）の直後（＜３０秒間）、適切な量のＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（Ｍｅｒｃｋ）を、血漿分離前に製造者の指示に従って添加した。
ｏ  ２００μｌの５〜７アリコートを、臨床生化学、ＧＡＢＡ分析およびさらなる他のホルモン／分析に対して。
アリコートを、直接ドライアイス中で生物分析試験場に輸送またはさらなる分析まで凍結貯蔵した。
【００６５】
尿サンプル（ｎ＝１２８）をアリコートに分けることは、採取した量（１チューブ当たり０．５ｍＬ）ならびにさらなる分析に従った貯蔵および／または輸送に応じた。
【００６６】
血漿サンプル（ｎ＝３２０、全時点）をＧＡＢＡのレベルに関して分析し、薬物動態（ＰＫ）パラメータを計算した。
【００６７】
各サイクルに関して、動物１匹当たり５つの血漿サンプル（４、５、７、１０および２４時間後投与）を、毒性パラメータに関して、以下の通り分析した（すなわち、１サイクル当たり４０サンプル、全１６０サンプル）。
【００６８】
臨床生化学的パラメータ（縮小パネル）：ＬＤＨ、ＡＬＴ、ＡＬＫＰの量。１サンプル当たり必要とされる血漿の容量：ヘパリンリチウムチューブ中に２００μｌ。
【００６９】
インスリン（ＥＬＩＳＡ）：１サンプル当たり必要とされる血漿の容量：ヘパリンリチウムチューブ中に１５０〜２００μｌ。
【００７０】
処置
ＧＡＢＡを、図２および表１に従って経口投与を介してｔ＝０に投与した。カプセルを、消化管に直接置いた。絶食させたイヌに関して、ＧＡＢＡカプセルを食物なしで投与し、絶食させていないイヌに関して、ＧＡＢＡカプセルを食物（全ての動物に与えられた同じ量の食物）とともに投与した。イヌは晩に通常摂食させた。絶食させたイヌに関して、食物を実験前に晩に与えた。１０時間での血液サンプル採取後、食物を全てのイヌに与えた。
【００７１】
血液採取
血液採取に関して、５ｍｌシリンジ（ＴＥＲＵＭＯ）を使用し、血液サンプリングは頚静脈で直接的に採取した。血液サンプルを、以下の時点でＫ２−ＥＤＴＡチューブおよびＬｉ−ヘパリンチューブに採取した：
投与（１サイクル当たり全８０サンプル）後、ｔ＝０（ベースライン／ブランク）、０．５、１、２、３、４、５、７、１０および２４時間。
各群に関して、血液を、全ての８匹のイヌから抜いた。
【００７２】
尿採取
全尿を、４つの時点でカテーテルを介して採取した：投与（１サイクル当たり全３２サンプル）後、ｔ＝０（ベースライン／ブランク）、ならびに次に４時間、８時間および１２時間。サンプルをさらなる分析に従って凍結貯蔵および／または輸送した。
【００７３】
血液サンプル調製
血液サンプルを、血漿分離のために１５００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。血漿を、ピペットを使用して収集し、清浄な１．５ｍｌ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブにただちに移し、輸送のためにドライアイス中に貯蔵し、ただちに輸送しない場合には、サンプルをフリーザーに貯蔵した。各バイアルを、日付、研究コード、イヌの番号およびグループならびに時点で標識した。
【００７４】
血漿サンプルの分析
血漿サンプルを、ＧＡＢＡレベルについてＬＣ／ＭＳ−ＭＳによって分析した。また、いくつかのサンプルを、毒物学パラメータおよびホルモン：ＬＤＨ、ＡＬＴおよびＡＬＫＰならびにインスリンの量について分析した。
【００７５】
結果
製剤１、２、３、および４のバイオアベイラビリティーを、経時的な血漿ＧＡＢＡ濃度、それぞれ投与後５時間および２４時間に対する血漿濃度曲線下面積（ＡＵＣ）、ピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）およびピーク血漿濃度に対する時間（Ｔｍａｘ）の点で評価した。
経時的な血漿濃度は、図３に示される。
ＡＵＣ（２４時間）値は、表２および図４に示される。
【００７６】
【表７】
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【００７７】
製剤１、２、および３が望ましいバイオアベイラビリティー特性を、それらがＡＵＣ（２４時間）の点で高いバイオアベイラビリティーを提供し、また食物とともにおよび食物なしの両方で摂取することができ、製剤１が付随する食事とは無関係にＧＡＢＡの匹敵するバイオアベイラビリティーを提供することにおいて有することが見出された。
【００７８】
先行技術製剤との比較
Ｌｉおよび共同研究者（Ｌｉら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、（２０１５）第６巻：２６０）によって提供された結果および粉末形態の標準的な市販の食物サプリメント（ＮＯＷ  Ｆｏｏｄｓ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＵＳＡ）で比較を行った。
ＡＵＣ（２４時間）データを、Ｌｉらの表１から取り込んだ。
【００７９】
食物サプリメント製品に関するデータを、食物とともにまたは食物なしのいずれかで２ｇ  ＧＡＢＡを受けている４名の健常ヒト個体における研究から得た。血清を、ベースライン（ｔ＝０）および１５分、３０分、４５分、６０分、９０分、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間に得た。経時的なＧＡＢＡの平均血清中濃度は、図５に示される。
【００８０】
食物サプリメント研究およびＬｉらにおけるヒト対象に与えられる用量は、Ｌｉらの場合には、平均６２ｋｇと測定された成人に対して２ｇであった。したがって、用量は、約３２ｍｇ／ｋｇであった。本開示の製剤のイヌの研究における用量は、約１００ｍｇ／ｋｇであった。これは、ヒトの等価用量の５４ｍｇ／ｋｇ（Ｎａｉｒ  ＡＢ、Ｊａｃｏｂ  Ｓ．  Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｄｏｓｅ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｎｉｍａｌｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ．  Ｊ  Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  ２０１６；第７巻：２７〜３１）、（すなわち、約１．７倍高い）に相当する。種を横断してバイオアベイラビリティーを比較するために、イヌにおいて試験した新しい製剤に関するＡＵＣ（２４時間）値を、それ故、１．７で割った。
ＡＵＣ値は、表３および図６中で比較される。
【００８１】
【表８】
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【００８２】
比較データから、製剤１、２、および３のバイオアベイラビリティーが、ＡＵＣ（２４時間）によって示される通り、バイオアベイラビリティーの点で現存の製剤に対して有意に改善され、製剤４に対しても優れていることが明らかである。
【００８３】
１型糖尿病患者のβ細胞再生における経口ＧＡＢＡ療法の効果を調査するための研究
以下のプロトコルを使用し、本発明の経口剤形を使用して、１型糖尿病患者のβ細胞再生における経口ＧＡＢＡ療法の効果を調査することができる。
【００８４】
課題：
主要な課題
主要な課題は、経口ＧＡＢＡ処置の急性および長期安全性を評価することである。
【００８５】
副次的な課題
副次的な課題は、２つの処置群間の効果の差を評価することである。ならびに、Ｃペプチドによって測定されるような内因性インスリン分泌の回復、全体的な糖尿病状態、処置の安全性、ＧＡＢＡの血清レベル、免疫系における効果、および患者の生活の質（ＱｏＬ）における経口ＧＡＢＡ処置の転帰を分析することである。
【００８６】
研究デザイン：
研究の第１部は、６名の患者を含み、低（２００ｍｇ）、中間（６００ｍｇ）および高用量（１２００ｍｇ）のＧＡＢＡでの３ステップの安全性および用量漸増研究として実施される。安全性パラメータ、ＧＡＢＡの血漿濃度、インスリンおよび糖耐性が、次に評価される。安全性の懸念が生じない場合、この部分の研究に既に含められる対象は、次に主研究に登録される。
【００８７】
主研究は、２群、オープンラベル、単一施設、臨床試験である。適格性がある患者は、２つの積極的な処置群の１つにランダム化され、経口ＧＡＢＡ処置を６カ月受ける。患者は、割り当てられる処置群に応じて、全７〜８カ月を追跡される。全ての患者は、全研究期間の間に彼らのかかりつけの医師から、看護および集中的なインスリン処置の彼らの通常の標準を継続的に受ける。
【００８８】
患者の選択：
患者は≧１８かつ≦５０歳であるべきであり、彼らは２５歳前に１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断されていなければならない。登録される適格性がある患者は彼らのＴ１Ｄ診断を≧５年有していなければならず、彼らの絶食Ｃペプチドレベルは検出不可能なレベルから＜０．１２ｎｍｏｌ／Ｌまでの範囲にあるべきである。研究における除外基準は、妊娠の可能性がある女性、有効な避妊を使用していない男性、母乳栄養継続中、ｅＧＦＲ  ＜６０ｍｌ／分、既知のがん疾患、アラニンまたはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加した血漿濃度を有する肝疾患の徴候、膵炎または他の外分泌性膵臓障害の以前の病歴、ＨｂＡ１ｃ＞９０ｍｍｏｌ／ｍｏｌである。
【００８９】
予定される患者の数：およそ２４患者が登録される。２４患者が登録されることを保証するために、およそ３５患者がスクリーニングされる。
【００９０】
処置群の説明：
安全性および用量漸増研究：
６患者は、適格性を評価され、次に研究の安全性評価および用量漸増部分に含められる。患者は、低（２００ｍｇ）、中間（６００ｍｇ）および高用量（１２００ｍｇ）のＧＡＢＡを受け、薬物動態および安全性を評価される。ＧＡＢＡ処置の安全性は、データ安全性監視委員会（ＤＳＭＢ）によって評価され、安全性の懸念が生じない場合、主研究が開始される。
【００９１】
主研究：
患者は、訪問２（１日）の１４から２８日前のスクリーニング訪問（訪問１）に適格性を評価され、研究に適格性を有する患者は２処置群の１にランダム化される。
【００９２】
・およそ１２患者が、低用量（２００ｍｇ）のＧＡＢＡを６カ月受けることに割り当てられる。３カ月後、ＧＡＢＡ処置の安全性が、ＤＳＭＢによって評価される。安全性の懸念が生じない場合、処置がさらに３カ月継続され、処置群２が開始される。
およそ１２患者が、高用量（６００ｍｇ）の経口ＧＡＢＡ処置を１カ月と７カ月（４４日から２２５日）の間で受けることに割り当てられる。１カ月後、ＧＡＢＡ処置の安全性が、ＤＳＭＢによって評価される。安全性の懸念が生じない場合、処置がさらに５カ月継続される。
【００９３】
エンドポイント：
主要なエンドポイント：
・ＧＡＢＡ処置に多分または恐らく関連するＡＥ／ＳＡＥの数
・経時的な検査パラメータ、身体検査およびバイタルサインにおける変化対ベースライン値
【００９４】
副次的なエンドポイント：
・ベースラインと経口ＧＡＢＡ処置の６カ月後の間の混合食事負荷試験（ＭＭＴＴ）の間のＣペプチド（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。
・ベースラインと処置の３および６カ月後の間ならびにベースラインとフォローアップ訪問の間のＭＭＴＴの間のＣペプチド（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。
【００９５】
・ベースラインと処置の３および６カ月後の間ならびにベースラインとフォローアップ訪問の間のＭＭＴＴの間のＣペプチド（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。超高感度ＥＬＩＳＡでの分析。
・ベースラインと処置の３および６カ月後の間ならびにベースラインとフォローアップ訪問の間のＭＭＴＴの間の最大刺激したＣペプチドにおける差。
【００９６】
・ベースラインと処置の３および６カ月後の間ならびにベースラインとフォローアップ訪問の間のＭＭＴＴの間の最大刺激したＣペプチドにおける差。超高感度ＥＬＩＳＡでの分析。
・処置の３および６カ月後の処置群１と処置群２の間ならびにベースラインとフォローアップ訪問の間のＭＭＴＴの間のＣペプチド（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。
【００９７】
・ベースラインと処置の６カ月の間の低血糖クランプの間のグルカゴン（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。
・処置群１と処置群２の間、ベースラインと処置の６カ月の間の低血糖クランプの間のグルカゴン（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）における差。
【００９８】
・糖尿病状態を示す変数、例えば、血漿Ｃペプチド、グルカゴン、グルカゴン様−ペプチド１、脂質およびヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）。毎日の外因性インスリン消費、血糖の変動性、および低血糖の自己申告数。
・免疫系における効果を示す変数、例えば、ＧＡＤ６５およびＩｓｌｅｔ  Ａｎｔｉｇｅｎ−２に対する血清自己抗体（およびアイソタイプ）ならびに血中の免疫細胞の一般的なプロファイリング。
【００９９】
・処置の３および６カ月後ならびにフォローアップ訪問でのＧＡＢＡ血漿レベルの分析。
・ＤＴＳＱアンケートによる患者ＱｏＬの測定。
・ＲＡＮＤ−３６アンケートによる患者ＱｏＬの測定。
【０１００】
サンプルサイズ：
潜在的有効性を評価するために使用される主な副次的なエンドポイントは、処置後ベースラインからの改善を示す、２時間ＭＭＴＴからのＣペプチド値の比率である。本発明者らのアプローチは、分析に利用可能なデータポイントの数を最大化し、各１２０分間ＭＭＴＴはＣペプチド（０、１５、３０、６０、９０、１２０分間の時間での）の６つの測定値を産する観察を基にする。したがって、２０対象の全サンプルサイズが、１．５％の有用率を検出する検出力８０％を保証することが計画される。
【０１０１】
副次的なエンドポイント変数の分析：
ＭＭＴＴ間のＣペプチド（曲線下面積［ＡＵＣ］平均０〜１２０分）におけるΔ変化は、対応のある両側スチューデントのｔ検定によって解析される。反復測定ＡＮＯＶＡを適用して、研究の過程で他のパラメータの変化を評価する。研究内で得られたＱｏＬデータの分析は、ＲＡＮＤ−３６および糖尿病処置満足度アンケート（ＤＴＳＱ）で評価される。
【０１０２】
治験デザイン
研究デザインおよび手順の説明
患者は、何らかの研究関連手順を実施する前に、書面でのインフォームドコンセントを提出する。研究の第１部は、６名の患者を含み、低（２００ｍｇ）、中間（６００ｍｇ）および高用量（１２００ｍｇ）のＧＡＢＡでの３ステップの安全性および用量漸増研究として実施される。安全性パラメータ、ＧＡＢＡの血漿濃度、インスリンおよび糖耐性が次に評価される。最初の患者が３つの用量漸増ステップを完了した後、ＤＳＭＢが安全性データを再検討し、安全性の懸念が生じない場合、他の５患者の開始が許可される。
【０１０３】
処置スケジュールは、以下の表に与えられる。
全ての６患者が用量漸増研究を完了した場合、ＤＳＭＢは安全性データを再度検討する。安全性の懸念が生じない場合、この部分の研究に既に含められる対象は、次に、少なくとも１カ月のウォッシュアウト期間後、主研究に登録される。
【０１０４】
主研究は、２群、オープンラベル、単一施設、臨床試験である。適格性がある患者は、２つの積極的な処置群の１つにランダム化され、経口ＧＡＢＡ処置を６カ月受ける。患者は、割り当てられる処置群に応じて、全７〜９カ月を追跡される。全ての患者は、全研究期間の間に彼らのかかりつけの医師から、看護および集中的なインスリン処置の彼らの通常の標準を継続的に受ける。
【０１０５】
１日（訪問２）、スクリーニング訪問（用量漸増研究に含められた患者は、スクリーニング訪問を行わないが、少なくとも１カ月のウォッシュアウト期間を有する）後２〜４週に、研究に適格性を有する患者は、Ｃペプチドレベルによって１：１比にランダム化され：
１）２００ｍｇのＧＡＢＡを６カ月（１日から１８１日）、
または
２）６００ｍｇのＧＡＢＡを６カ月（４４日から２２５日）を受ける。
【０１０６】
群１および群２に関して処置スケジュールは、以下の表に記載される。
スクリーニング訪問で、患者は、３桁の連続的なスクリーニング番号を割り当てられ、この番号は、３桁の患者識別（患者番号）、すなわち、ＸＸＸとして使用される。
【０１０７】
個々の患者は、ＧＡＢＡに６カ月曝露される。全ての患者は、全研究期間の間に彼らのかかりつけの医師から、集中的なインスリン処置を継続的に受ける。
【０１０８】
【表９】
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【０１０９】
【表１０】
2020534302.tif 000012
【０１１０】
【表１１】
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【０１１１】
【表１２−１】
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【表１２−２】
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【０１１２】
【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１３−３】
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【０１１３】
【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１４−３】
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【図１】
2020534302.tif 000022
【図２】
2020534302.tif 000023
【図３−１】
2020534302.tif 000024
【図３−２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2020534302.tif 000030
2020534302.tif 000031
2020534302.tif 000032
2020534302.tif 000033
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