(57)【要約】  本発明は、軟骨障害の治療前又は治療時における、ＦＧＦ−１８化合物に対する臨床反応に関連するバイオマーカーに関する。より具体的には、本発明は、軟骨障害の診断及び治療のために使用することができる、血液、血清、滑液、又は尿中に存在する特定のタンパク質に関する。本発明はさらに、ＦＧＦ−１８化合物の治療に反応する軟骨関連の特定のタンパク質、ならびにそれらの発現プロファイルに基づく診断ツール及びキットを開示する。よって本発明は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療の開始前又は治療時における、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対する反応の予測に使用することができる。本発明は、ＦＧＦ−１８化合物の関節内投与により治療すべき対象の選択／同定に使用することができる。診断におけるこれらのバイオマーカーの使用により対象のベネフィットの増加及びリスクの低下につながる可能性がある。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
軟骨障害を有する対象における、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する感受性を予測する方法であって、
ａ）前記対象由来の試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程；並びに
ｂ）工程ａ）の結果から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する前記対象の高度、中程度、低度又は非感受性を予測する工程：を含む、方法。
【請求項２】
ａ）３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ、
ｂ）４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２：
の存在から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する低度又は非感受性を予測する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ａ）３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ、及び／又は
ｂ）４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２：
の存在から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する高度又は中程度感受性を予測する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
軟骨障害を有する対象を、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験の組み入れ又はそれからの除外に関して、前記治療に対するそれらの感受性の尤度に基づき、選択する方法であって、
ａ）前記対象由来の試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程、ここで、前記タンパク質の少なくとも１種の量が、前記治療に対し感受性であるか又は非感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；並びに
ｂ）感受性の対象を前記治療に対し適切であるとして選択する工程：を含む、方法。
【請求項５】
ａ）  ３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ、及び／又は
ｂ）  ４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２
を示す対象を、前記ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療から除外する工程を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ａ）  ３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ、及び／又は
ｂ）  ４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２
を示す対象を、前記ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に組み入れる工程を含む、請求項４記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項記載の方法を実行するための手段、及び使用説明書を含む、キット。
【請求項８】
対象が３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を示すことを特徴とする、軟骨障害を有する対象の治療における使用のための、ＦＧＦ−１８化合物。
【請求項９】
軟骨障害を有する対象をＦＧＦ−１８化合物を用いて治療する方法であって：
ａ）前記対象由来の試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程であって、ここで、前記量が、前記ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し高度又は中程度感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；
ｂ）ｉ．３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ、及び／又は
ｉｉ．４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２、
を有する対象を選択する工程；
ｃ）前記選択した対象に、ＦＧＦ−１８化合物を関節内投与する工程：
を含む方法。
【請求項１０】
ＦＧＦ−１８化合物が、３週間にわたり週１回投与される治療サイクルを１サイクル行う、請求項８記載の使用又は請求項９記載の方法のためのＦＧＦ−１８化合物。
【請求項１１】
前記治療サイクルが繰り返され得る、請求項１０記載の使用又は方法のためのＦＧＦ−１８化合物。
【請求項１２】
前記ＦＧＦ−１８化合物が、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質である、請求項１〜６及び９〜１１のいずれか一項記載の方法、請求項７記載のキット、又は請求項８０、１０および１１のいずれか一項記載の使用のためのＦＧＦ−１８化合物。
【請求項１３】
前記軟骨障害が、変形性関節症、軟骨損傷、関節軟骨に影響を及ぼす骨折、又は関節軟骨に衝撃を与える手術手技、例えば微小骨折からなる群から選択される、請求項１〜６及び９〜１２のいずれか一項記載の方法、請求項７もしくは１２のいずれか一項記載のキット、又は請求項８および１０〜１２のいずれか一項記載の使用のためのＦＧＦ−１８化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、薬理遺伝学、より具体的には軟骨障害の治療前又は治療時における、ＦＧＦ−１８化合物に対する臨床反応に関連するバイオマーカーに関する。より具体的には、本発明は、とりわけ、軟骨障害の診断および治療のために使用することができる、血液、血清、滑液、又は尿中に存在する特定のタンパク質に関する。本発明は更に、ＦＧＦ−１８化合物の治療に反応する軟骨に関連する特定のタンパク質、並びにそれらの量又は発現プロファイルに基づく、診断ツール及びキットを開示する。従って、本発明は、ＦＧＦ−１８を用いる治療の開始前又は治療時における、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対する反応の予測に使用することができる。本発明は、ＦＧＦ−１８化合物の関節内投与により治療すべき対象の選択／同定に使用することができる。診断におけるこれらのバイオマーカーの使用により対象のベネフィットの増加及びリスクの低下につながる可能性がある。
【背景技術】
【０００２】
軟骨障害は、広義には、結合組織における代謝異常の変性を特徴とする疾患を指し、罹患した身体部分の痛み、硬直および運動の制限といった症状が現れる。これらの障害は、病理が原因のものや、外傷やけがの結果であることがある。とりわけ、軟骨障害として、変形性関節症（ＯＡ）、軟骨損傷（軟骨および関節のスポーツ損傷、ならびに微小骨折などの外科的損傷が含まれる）が挙げられる。成熟軟骨は、特に成熟軟骨細胞に増殖する能力がほとんどなく、そして血管がないために、それ自身を修復する能力が限られている。さらに、軟骨は栄養が不足しており、酸素圧が低い。傷害または疾患により損傷した軟骨、特に関節軟骨の置換は、医師にとって大きな課題であり、利用可能な外科的処置手順は、完全に予測できるものではなく、効果ある期間が限定的であると考えられている。
【０００３】
したがって、若い被験者のほとんどは治療を希望しないか、可能な限り治療を延期するように助言される。治療が必要な場合、標準的な手順は年齢に依存し、関節全置換術、軟骨片の移植、または骨髄刺激技術（微小骨折など）等、多岐にわたる。微小骨折は、骨髄由来の幹細胞による軟骨沈着を刺激するための軟骨下骨の穿通に関与する一般的な手順である。しかしながら、この技術は軟骨欠損を十分に修復せず、そして形成された新しい軟骨は主に線維軟骨であるため、機能や生体力学が不十分または変化してしまうことが示されている。実際、線維軟骨は同等の耐久性を有さず、周囲の硝子軟骨に正しく接着しない場合がある。このため、新しく合成された線維軟骨は、容易に破損するおそれがある（予想される時間枠：５〜１０年）。
【０００４】
変形性関節症の対象にとって、手術によらない治療は、とりわけ理学療法、生活様式の改善（例えば、身体活動の増大）、支持器具、経口及び注射用薬物（例えば、非ステロイド系抗炎症薬）、歩行補助具及び医学的症状管理があるる。ひとたびこれらの治療が失敗すると、関節置換術などの手術が、その対象にとっての主な選択肢となる。脛骨又は大腿骨の骨切除術（骨を切断し、摩耗した関節のバランスを取り戻す）は、症状を軽減し、活動的な生活様式の維持を助け、且つ関節全置換術が必要になるのを遅らせることができる。関節全置換術は、進行した変形性関節症の症状の緩和を提供することができるが、概して対象の生活様式及び／又は活動レベルの変更が必要である。
【０００５】
その時点では、市販されている薬物による治療は、主に疼痛緩和に向けられている。依然、軟骨の損傷を回復するか又は延期する商業的に入手可能な治療は存在しない（Ｌｏｔｚ，２０１０参照）。
【０００６】
線維芽細胞成長因子１８（ＦＧＦ−１８）は、ＦＧＦ−８およびＦＧＦ−１７と密接に関連するタンパクのＦＧＦファミリーのメンバーである。ＦＧＦ−１８は軟骨細胞および骨芽細胞の増殖剤であることが示されている（Ｅｌｌｓｗｏｒｔｈら、２００２；Ｓｈｉｍｏａｋａら、２００２；Ｇｉｇｏｕｔら、２０１７）。ＦＧＦ−１８は、変形性関節症や軟骨損傷などの軟骨障害の治療のために、単独で（ＷＯ２００８／０２３０６３）、またはヒアルロン酸と組み合わせて（ＷＯ２００４／０３２８４９）提案されている。
【０００７】
スプリフェルミンは、ヒトＦＧＦ−１８の切断型であるが、これは、変形性関節症及び軟骨損傷の両方の治療に関する臨床試験において研究中である（詳細については、例えば、ＮＣＴ０１０３３９９４、ＮＣＴ００９１１４６９及びＮＣＴ０１０６６８７１参照）。スプリフェルミンの現在の投薬方式は、３週間にわたり週１回（１治療サイクル）であり、この薬物は関節内注射により投与される。この治療サイクルは、反復することができる。この投薬方式は、ＷＯ２００８／０２３０６３に記載されている。
【０００８】
この時点で、臨床試験時におけるＦＧＦ−１８によるＯＡ（変形性関節症）及び軟骨損傷の治療は、その反応に関する予測情報なしで、すなわちその治療の効果が高い可能性があるか、中等度であるか、あるいはわずかな効果しか示さないそれとも全く効果がないかといった知見なしに、対象へ投与されている（Ｌｏｈｍａｎｄｅｒら、２０１４；Ｄａｈｌｂｅｒｇら、２０１６）。現在、スプリフェルミンによる少なくとも１回の治療サイクル後に、多くの治療対象集団は、ＭＲＩ技術による軟骨厚の測定値やＷＯＭＡＣスコアにて、治療に対する中等度／高度の反応を示すが、治療に反応しない（つまり、ＭＲＩ技術による軟骨厚の測定値の増加がない又は限定的）か、又は反応するが対照と比べて高いＷＯＭＡＣスコアを示してしまう一部の患者も存在する。
【０００９】
ＷＯ２０１４／０２３７０３は、ＦＧＦ−１８による、ＯＡ、軟骨損傷、又は微小骨折などの軟骨障害の治療に対する臨床反応の質に関連する遺伝子マーカー（ＳＮＰｓ、ＩＬ−１ＲＮ  ｒｓ９００５及びＩＬ−１ＲＮ  ｒｓ３１５９５２の組合せ）を記載している。そのようなマーカーは、治療前の遺伝子スクリーニングを通じて、ＦＧＦ−１８を用いる治療に対する非常に良好な臨床反応など、ＦＧＦ−１８を用いる治療に対し特定の反応を示す可能性が高い対象、又は逆にその療法が失敗する可能性がある対象の亜群を同定するのに有用である。
【００１０】
治療に対する対象の臨床反応の種別に関する知見を用い、療法を最適化するか、又は療法を選択する（最初の選択となる療法としてＦＧＦ−１８を用いる治療を選択するなど）か、又は投薬方式を適合させることができる。そのような情報は、対象における、ＯＡ及び／又は軟骨損傷などの軟骨障害の医学的管理にとって、臨床的に有用であろう。例えば、ＯＡ又は軟骨損傷の個体が、ＦＧＦ−１８治療に反応しないリスクが高いことがわかっている場合には、医師は、該対象をＦＧＦ−１８治療から除外し、患者に無駄な処置をせずリスクのない治療を行うことができる。加えて、そのような予測情報は、投薬方式に関する決定に導くためにも臨床的に有用である。
【００１１】
治療される対象あるいは自身の患者に最良の療法を探す医師にとって、幅広い解決法を提供するために、療法の最適化又は療法の選択を補助する更なるバイオマーカーを同定する必要性が存在する。
【発明の概要】
【００１２】
本明細書記載の、ｐｒｏＣ２又はＣＴＸ−ＩＩなどの代謝バイオマーカーは、変形性関節症又は軟骨障害の患者の検出、診断及び／又は治療において、単独又は組合せのいずれかで使用することができる。これらのバイオマーカーの少なくとも１種（又はそれらの組合せ）の発現レベル（又は量）を、例えば、特定の治療に含めるべきあるいは逆に特定の治療から除外されるべき患者を検出するために使用することができる。
【００１３】
本発明は、軟骨障害を有する対象における、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する感受性を予測する方法であって、
ａ）試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程；
ｂ）工程ａ）の結果から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する前記対象の高度、中程度、低度  又は非感受性を予測する工程：を含む、方法に関する。
【００１４】
上記方法によると、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ（正規平均（ｎｏｒｍａｌ  ｍｅａｎ）の＞２４０〜２６０％）及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２（正規平均の＞１２０〜２８０％）の存在は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応がない又は反応が低度である（すなわち、低度感受性又は非感受性）ことの指標となる。逆に、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２の存在は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応が中程度（すなわち、中程度の感受性）又は高度である（すなわち、高い感受性）ことのの指標となる。
【００１５】
また、軟骨障害を有する対象を、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験の組み入れ又はそれからの除外に関して、前記治療に対するそれらの感受性の尤度に基づき、選択する方法であって、
ａ）試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程、ここで、前記タンパク質の少なくとも１種の量が、前記治療に対し感受性であるか又は非感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；並びに
ｂ）感受性の対象を前記治療に対し適切であるとして選択する工程：を含む方法も、本明細書に記載される。
【００１６】
上記方法によると、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２を示す対象は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療から除外される（すなわち、彼等は選択されない）。逆に、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を示す対象は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に組み入れられる（すなわち、彼等は選択される）。
【００１７】
また、軟骨障害を有する対象をＦＧＦ−１８化合物を用いて治療する方法であって、
ａ．試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程であって、ここで、前記量が、前記ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し高度又は中程度感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；
ｂ．３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を有する対象を選択する工程；
ｃ．工程ｂ．において選択した対象に、ＦＧＦ−１８化合物を関節内投与する工程：
を含む方法も記載される。
【００１８】
総じて本発明の特定の実施態様において、すなわち本明細書において言及した方法又は使用のいずれかにおいて、治療として使用されるＦＧＦ−１８化合物は、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質であり、そして対象は、変形性関節症、軟骨損傷、関節軟骨に影響を及ぼす骨折、又は関節軟骨に衝撃を与える手術手技（例えば、微小骨折）からなる群から選択される軟骨障害を有する。
【００１９】
本明細書において言及した方法又は使用のいずれかにおいて、少なくとも１種のタンパク質の量を決定する前に、例えば血液、血清、滑液又は尿などの収集により、該対象の試料（又は被験試料）を得る必要があることは理解されるべきである。更に、本明細書において言及した方法又は使用のいずれも、インビトロにおいて実行され、且つ動物又はヒトの身体上では実行されないことも理解されるべきである。
【００２０】
（定義）
−本明細書において使用される用語「ＦＧＦ−１８化合物」又は「ＦＧＦ−１８」は、ヒトＦＧＦ−１８タンパク質の少なくとも１種の生体活性を維持しているタンパク質であることが意図される。ＦＧＦ−１８は、天然型（ｎａｔｉｖｅ）、その成熟型、又はその切断型であってよい。ヒトＦＧＦ−１８タンパク質の生体活性は、とりわけ、骨芽細胞活性の増加（ＷＯ９８／１６６４４参照）、又は軟骨形成の増加（ＷＯ２００８／０２３０６３参照）である。天然型、又は野生型のヒトＦＧＦ−１８は、骨格の発達時にほとんどが生成されるタンパク質であり、骨及び軟骨の形成に関与している（Ｈａｑｕｅら、２００７参照）。ヒトＦＧＦ−１８は、当初ｚＦＧＦ−５と称され、そしてＷＯ９８／１６６４４において完全に記載されている。配列番号１は、アミノ酸残基１（Ｍｅｔ）〜２７（Ａｌａ）からなるシグナルペプチドを伴う、天然型ヒトＦＧＦ−１８のアミノ酸配列に対応している。ヒトＦＧＦ−１８の成熟型は、配列番号１の残基２８（Ｇｌｕ）〜残基２０７（Ａｌａ）までのアミノ酸配列（１８０個のアミノ酸）に対応している。
【００２１】
ＦＧＦ−１８化合物は、本発明において、出願ＷＯ２００６／０６３３６２により示されたような、組換え法により作製されてよい。発現系及び条件に応じて、本発明のＦＧＦ−１８は、出発メチオニン（Ｍｅｔ）残基を有するか又は選択のためのシグナル配列を持つ組換え宿主細胞において発現される。大腸菌などの原核生物宿主において発現される場合、ＦＧＦ−１８は、その配列のＮ末端に追加のＭｅｔ残基を含む。例えば、ヒトＦＧＦ−１８のアミノ酸配列は、大腸菌において発現される場合、Ｎ末端のＭｅｔ残基（１位）に始まり、それに配列番号１の残基２８（Ｇｌｕ）〜残基２０７（Ａｌａ）が続く。
【００２２】
また、用語「ＦＧＦ−１８化合物」は、ＦＧＦ−１８の天然型、成熟型、又は切断型のバリアント又は変異体、並びに異種タンパク質又は化合物（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）に結合された（生体）活性のあるＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質（ＥＰ１７１９２４６７．３パテントファミリーに開示されたものなど）も含む。そのような融合タンパク質において、ＦＧＦ−１８部分は、ＦＧＦ−１８タンパク質の天然型、成熟型又は切断型、又はそのバリアントもしくは変異体であってもよい。
【００２３】
−本明細書において使用される用語ＦＧＦ−１８の「切断型」は、配列番号１の残基２８（Ｇｌｕ）〜１９６（Ｌｙｓ）を含むか又はこれからなるタンパク質を指す。好ましくは、ＦＧＦ−１８タンパク質の切断型は、「ｔｒＦＧＦ−１８」（１７０個のアミノ酸）と称されるポリペプチドであり、Ｍｅｔ残基（Ｎ末端）で始まり、それに野生型ヒトＦＧＦ−１８のアミノ酸残基２８（Ｇｌｕ）〜１９６（Ｌｙｓ）が続く。ｔｒＦＧＦ−１８のアミノ酸配列は、配列番号２に示されている（配列番号２のアミノ酸残基２〜１７０までは、配列番号１のアミノ酸残基２８〜１９６までに対応している）。ｔｒＦＧＦ−１８は、大腸菌により作製される、ヒトＦＧＦ−１８の組換え切断型である（ＷＯ２００６／０６３３６２参照）。このＦＧＦ−１８の特定の形の国際一般名（ＩＮＮ）は、スプリフェルミンである。スプリフェルミンは、成熟ヒトＦＧＦ−１８と類似の活性を発揮することが示されており、例えば、軟骨細胞増殖及び軟骨沈着を増大し、様々な軟骨組織の修復及び再建をもたらす（ＷＯ２００８／０２３０６３参照）。
【００２４】
−用語「マーカー」又は「バイオマーカー」は、互換的に使用される。本発明の文脈において、これらは、タンパク質である。「予後バイオマーカー」は、どの療法であるかにかかわらず、疾患の進行、疾患の重症度又は疾患転帰を含むがこれらに限定されない対象の状態についての情報を与える。「予測バイオマーカー」は、有効性及び安全上の転帰を含むがこれらに限定されない受けた治療の効果についての情報を与える。予後及び予測の観点からの定義として互いに排他的ではないため、バイオマーカーは、予後と予測のいずれであってもよい。バイオマーカーの量又はバイオマーカーの発現レベルは、本明細書において、所与のタンパク質のｎＭｏｌ、μＭｏｌ、ｍＭｏｌ、ｎｇ、μｇ、ｍｇ又はｇとして表される。該量又はレベルは、絶対値として（例えば、１０ｎｇもしくは２μｇ）、又は濃度として（例えば、１０ｎｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍｍｏｌ又は２μｇ／ｍｍｏｌ）表すことができる。これらのバイオマーカーに関し、用語「量」又は「発現レベル」は、互換的に使用することができる。
【００２５】
−用語「代謝バイオマーカー」は、非限定的に、ＣＴＸ−ＩＩ、ＰｒｏＣ２、ＰＩＩＡＮＰ、Ｃ２Ｍ、ＡＲＧＳ、ＡＧＮｘ１などのバイオマーカーを指す。より具体的には、用語「代謝バイオマーカー」は、軟骨代謝のバイオマーカー、すなわち、コラーゲンおよびアグリカン代謝回転その他の軟骨基質成分の分解および／または合成を指す。様々なコラーゲンおよびアグリカンマーカーが記載されている（Ｋａｒｓｄａｌら、２０１６）。
【００２６】
−用語「ＣＴＸ−ＩＩ」または「ＣＴＸＩＩ」は、ＩＩ型コラーゲン架橋Ｃ−テロペプチドを指す。これは、変形性関節症の一因であるＩＩ型コラーゲン分解のバイオマーカーである（たとえばＤｕｃｌｏｓら、２０１０参照）。
【００２７】
−用語「ｐｒｏＣ２」は、ＩＩ型コラーゲンの合成中に生成されるＩＩ型コラーゲンのネオエピトープを指し、ｐｒｏＣ２アッセイでエピトープとして認識される配列シーケンスＱＤＶＲＱＰを有する。ＰｒｏＣ２は、軟骨形成（ＩＩ型コラーゲン形成）アッセイのマーカーである。ＰｒｏＣ２は修復能に関連しており、軟骨に起因する疾患を有する患者を特定するための有用なツールとなりうる。ＰｒｏＣ２は、臨床サンプルの前臨床試験で試験されたバイオマーカーである（例えば、Ｇｕｄｍａｎｎら、２０１６；Ｍｕｎｋら、２０１６；Ｇｕｄｍａｎｎら、２０１４参照）。
【００２８】
−用語ＰＩＩＡＮＰは、ＩＩ型コラーゲンのプロペプチドを指す。ＩＩＡ型プロコラーゲンには、ＩＩ型コラーゲン遺伝子のエクソン２によってコードされるＮ末端６９アミノ酸のシステインリッチな球状ドメインが含まれる。ＩＩＡ型プロコラーゲンは、罹患軟骨の変形性関節症軟骨細胞によって合成されることが判明しており、軟骨細胞が罹患軟骨を修復しようとする動きを反映する特定の関節炎バイオマーカーとして寄与できる（Ｖａｌｄｅｓら、２０１４）。
【００２９】
−用語Ｃ２Ｍは、軟骨の分解に関連する血清学的なＩＩ型コラーゲン分解ネオエピトープを指す。Ｃ２Ｍは、ＭＭＰによって生成されるＩＩ型コラーゲンのらせん間フラグメントである。このバイオマーカーは、薬物反応、疼痛測定、およびＸ線写真によりみられる重症度に関連すると記載されている（Ｖａｌｄｅｓら、２０１４）
【００３０】
−用語ＡＲＧＳは、アグリカン分解中に生成されるネオエピトープを指す。アッセイにより、血清および滑液中のアグリカン分解産物が検出される。ＡＲＧＳレベルは軟骨障害の進行に関連する（Ｓｔｒｕｇｌｉｃｓら、２０１１；Ｓｔｒｕｇｌｉｃｓら、２０１５）。
【００３１】
−用語ＡＧＮｘ１は、アグリカン分解中に生成される別のネオエピトープを検出するアッセイに関連する。
【００３２】
−用語「マーカー」又は「バイオマーカー」は、互換的に使用される。
【００３３】
−用語「ＳＤ」は、標準偏差を意味し、任意の検証アッセイ／システムの通常の偏差に関連する。
【００３４】
−「軟骨障害」は、本明細書で使用される場合、外傷などの損傷、軟骨障害または関節炎に起因する障害を包含する。本明細書に記載のＦＧＦ−１８製剤の投与により治療できる軟骨障害の例として、変形性関節症などの関節炎、軟骨損傷、関節軟骨に影響を与える骨折、または関節軟骨に影響を与える外科的処置（例えば、微小骨折）が挙げられるが、これらに限定されない。軟骨石灰化症、多発性軟骨炎、再発性多発性軟骨炎、強直性脊椎炎または肋軟骨炎といった軟骨または関節の変性疾患／障害もこの用語に含まれる。国際軟骨再生会議（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ  Ｒｅｐａｉｒ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）は、軟骨欠損の重症度を評価するために関節鏡検査の等級付けシステムを提案する。グレード０：（正常な）健康な軟骨、グレード１：軟骨にソフトスポットまたは水ぶくれがある、グレード２：軟骨に軽微な亀裂が見える、グレード３：病変に深い裂け目（軟骨層の５０％超）、グレード４：軟骨の亀裂が下層（軟骨下層）の骨を露出している（例えば、http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdfの１３頁参照）。
【００３５】
−用語「変形性関節症」は、関節症の最も一般的な形態を意図するのに使用される。「変形性関節症」という用語は、原発性変形性関節症および続発性変形性関節症の両方を包含する（例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，１７th  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅ  ４４９参照）。変形性関節症を分類／等級付けする最も一般的な方法は、ケルグレン・ローレンスのＸ線等級化スケールを使用することである（下の表を参照）。変形性関節症は、軟骨の破壊によって引き起こされることがある。軟骨の破片が割れて骨間の関節に痛みと腫れを引き起こすことがある。時間が経つにつれて、軟骨が完全にすり減り、骨同士がこすれることもある。変形性関節症はあらゆる関節に影響を与える可能性があるが、通常は手、腰、膝、足、脊椎などの体重を支える関節が関係する。好ましい例では、変形性関節症は、変形性膝関節症または変形性股関節症であってもよい。変形性関節症は、本発明にかかるＦＧＦ−１８化合物を投与することによって治療することができる好ましい軟骨障害の１つである。
【００３６】
変形性関節症のシェルグレン・ローレンスＸ線等級化スケールを、以下に記載する：
【００３７】
【表１】
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【００３８】
グレード１及び２は、この疾患の重症度の低い型と考えられるのに対し、グレード３及び４は、この疾患のより重症な型と考えることができる。
【００３９】
−本明細書で使用される「軟骨損傷」という用語は、特に外傷に起因する軟骨障害または軟骨損傷である。軟骨損傷は、とりわけ外傷性の物理的な破損の後、更にとりわけ事故または手術（例えば、微小骨折手術）に起こり得る。この用語「軟骨損傷」には、軟骨または骨軟骨の骨折、半月板損傷、および微小骨折も含まれる。また、この定義において、関節の組織のスポーツによる損傷またはスポーツによる摩耗も考慮される。
【００４０】
−「ＷＯＭＡＣ総スコア」又は「ＷＯＭＡＣスコア」（「ウェスタンオンタリオ大学・マクマスター大学変形性関節症指数（Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｏｎｔａｒｉｏ  ａｎｄ  ＭｃＭａｓｔｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｉｎｄｅｘ）」の「ＷＯＭＡＣ」）は、疼痛（ＷＯＭＡＣ疼痛スコア）、機能（ＷＯＭＡＣ機能スコア）及び拘縮（ＷＯＭＡＣ拘縮スコア）を測定する。軟骨損傷に関連する疼痛及び機能障害の評価に適用される場合、これは３つのサブクラスに分類された２４項目を含む質問からなる（疼痛に関する５項目、拘縮に関する２項目及び身体機能に関する１７項目）（Ｂｅｌｌａｍｙら、１９８８；Ｗｏｌｆｅ、１９９９参照）。これは、とりわけＯＡ重症度の評価において広範に使用される周知の手段である。
【００４１】
−軟骨修復を評価するために、軟骨容積測定が、軟骨の側面容積（ＬＦＴＣとも称される）、軟骨の内側容積（ＭＦＴＣとも称される）、軟骨の総容積（ＬＦＴＣ＋ＭＦＴＣとも称される）、及び新たな総平均軟骨厚みの測定を含む磁気共鳴画像（ＭＲＩ）の測定により実施された。
【００４２】
−用語「ベースライン」は、治療前（すなわち、試験登録時）を意味する。これは、とりわけ、試験登録時（すなわち、ＦＧＦ−１８化合物又はプラセボによる治療前）の所定の対象の軟骨容積及びＷＯＭＡＣ総スコアといった（ただしこれらに限定されない）臨床変数を指す。
【００４３】
−「対象」または「患者」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物の両方を指す。非ヒトという用語は、げっ歯類（マウスを含む）、ウサギ、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、または霊長類などの哺乳動物を含む。
【００４４】
−「感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる軟骨障害の治療に対する反応を示す対象である。好ましくは、感受性対象（又は治療に対し感受性／反応を示す対象）は、とりわけ総軟骨厚み及び／又は総軟骨容積においてプラセボ治療した対象よりもより高い増加、すなわち軟骨修復を示す。また、感受性対象は、プラセボと比較して、ＷＯＭＡＣ総スコアにおいて少なくとも同等の改善を示す。用語「超感受性（ｓｕｐｅｒ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」（又は「高度感受性（ｈｉｇｈ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」又は「高度に感受性（ｈｉｇｈｌｙ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」）、「中程度感受性（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」、及び「非感受性（ｎｏｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」（「低度感受性（ｌｏｗ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」を含む）は、ＦＧＦ−１８化合物の投薬方式後に、軟骨容積の増加度が非常に異なる種々の対象群を指す。超感受性は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し高度な反応（すなわち、高度な軟骨修復）を示し、中程度感受性は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し良好又は中程度の反応（つまり、良好又は中程度の軟骨修復）を示し、そして非感受性は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し反応を示さない又は低度の反応を示す。超感受性及び感受性対象のいずれも、プラセボに対し、ＷＯＭＡＣ総スコアにおいて改善を有し、その改善は同等である。逆に、非反応者はＷＯＭＡＣ合計スコアの改善がプラセボよりも有意に小さい。用語「超感受性」、「高度感受性」は互換的に使用される。超感受性はＡＩＲイベントのリスクが高いことが示されていることに留意すべきである。
【００４５】
より具体的には、「中程度感受性」、「超感受性」、「非感受性」、「中程度反応者」、「超反応者」及び「非反応者」（低度の反応者を含む）は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療後の軟骨量の増加度およびＷＯＭＡＣ総スコアの改善度が異なる種々の対象群を含むが、これらに限定されない。
【００４６】
感受性／反応の評価に関して提唱された判定基準は、以下である（しかしこれらに限定されない）：
１．ベースラインと比べ正の軟骨増加、
２．プラセボにおける変化よりも有意に高い軟骨増加の変化（例えば、α＝５％で、ＢＭＩ、ＫＬグレード、性別及び年齢について調節した線型モデルで試験した場合）、
３．ベースラインと比べたＷＯＭＡＣスコア改善、すなわち縮小（例えば、５ポイントを上回る減少）、
４．プラセボにおける変化を有意に上回らないＷＯＭＡＣスコアの変化（例えば、α＝５％で、ＢＭＩ、ＫＬグレード、性別及び年齢について調節した線型モデルで試験した場合）。
【００４７】
−ＦＧＦ−１８化合物の治療に対する「反応（ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」又は「感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）」は、初回注射から少なくとも１年又はより好ましくは２年後の、１）例えばＭＲＩ又はＸ線での測定による軟骨容積及び／又は軟骨厚みの増加、２）ＷＯＭＡＣ総スコアの減少、又は３）プラセボ由来の変化を有意に上回らないＷＯＭＡＣ総スコアの変化、として理解される（「感受性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓ）」の定義も参照）。
【００４８】
−本発明において使用される用語「ＭＡＤ」は、反復容量漸増（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ａｓｃｅｎｄｉｎｇ  Ｄｏｓｅ）を意味する。この用語に数字が続く場合、その数字は、ＦＧＦ−１８化合物が治療時に注射される容量に相当する。例えば、ＭＡＤ１００は、治療期間に対象が１回の注射当たりＦＧＦ−１８化合物１００ｍｃｇを受け取る治療を指す。略語「ＰＬ」（及び「ＭＡＤＰＬ」）は、プラセボを指す。
【００４９】
−本明細書において使用される用語「記憶装置」は、任意の好適な演算装置又は処理装置又はデータもしくは情報の記憶のために構成もしくは適合されたその他の装置を含むことが意図されている。本発明での使用に適した電子装置の例は、スタンドアローン演算装置、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、ワイドエリアネットワーク（ＷＡＮ）、インターネット、イントラネット及びイクストラネットを含むデータの電気通信ネットワーク、並びにローカル及び分散形コンピュータ処理システムがある。記憶装置はまた、以下を含むが、これらに限定されるものではない：フロピーディスク、ハードディスク記憶媒体、磁気テープなどの磁気記憶媒体、例えばＣＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤなどの光学記憶媒体、例えばＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、一般的ハードディスクなどの電子記憶媒体、並びに例えば磁気／光学記憶媒体などの、これらのカテゴリのハイブリッドがある。
【００５０】
−本明細書に使用される用語「記憶される」とは、記憶装置上に情報をコード化するプロセスを指す。当業者は、発現レベル情報を含む製品（ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｓ）を作製するための公知の媒体上に情報を記録するための現在公知の方法のいずれかを、容易に採用することができる。
【００５１】
（発明の詳細な説明）
変形性関節症、軟骨損傷、関節軟骨に影響を及ぼす骨折、又は関節軟骨に衝撃を与える手術手技（例えば、微小骨折）などの、軟骨障害を有する対象の治療に関して、ＦＧＦ−１８化合物の治療の臨床有効性（とりわけ軟骨菲薄化及び／又は軟骨修復に関して）を推測する必要性が存在する。このような対象の治療を最適化するために、とりわけ軟骨修復に関して、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対する所与の対象の反応の予測因子として使用することができるバイオマーカーを同定することは重要である。そのような予測バイオマーカーは、非感受性であるか、または逆に治療に対して感受性または高感受性であるかのいずれかである高リスク群を同定するために使用してもよい。たとえば、変形性関節症を有する対象が治療に対する反応がない（又は非感受性である）リスクが高いことがわかっている場合、医師は、前記対象に、スプリフェルミンまたはＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物を提案しないことを決定できる。逆に、変形性関節症を有する対象が治療に対し高度感受性であるリスクが高いことがわかっている場合、医師は該対象に投与するＦＧＦ−１８化合物の投与量を低減すべく投与計画を適合することを決定できる。実際、ＦＧＦ−１８化合物に高度感受性であることは、ＡＩＲ（急性炎症反応）などの望ましくない副作用を引き起こす可能性がある。そのような予測情報は、とりわけ患者へ適用すべき投薬方式について、あるいは、必要に応じて（たとえば、ＦＧＦ−１８化合物の治療が推奨されない場合）関節置換手術のタイミングで、医学的決定へのガイドとして臨床的に有用である。
【００５２】
本発明の驚くべき知見は、ＦＧＦ−１８化合物（例えばスプリフェルミン）投与に関連する可能性のあるバイオマーカーを同定することを目指す研究に基づく。この研究において、バイオマーカーとして数多くのタンパク質マーカーが使用された（表１参照）。タンパク質マーカーと臨床反応変数の間の関係が、評価された。この種の分析の背景となる論理的根拠は、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物を用いて治療すべき対象について、臨床転帰（とりわけ、軟骨修復に関して）を予測するバイオマーカー（複数）として有用なタンパク質（複数）を同定することであった。これらのタンパク質は、特定の対象集団を階層化および標的化するために使用することができる。
【００５３】
様々なバイオマーカーが、高値と低値の基準を適用することによって、ＦＧＦ−１８療法に対する反応の変化を示すか、あるいは転帰（すなわち、軟骨の厚さまたは体積、ＷＯＭＡＣスコア）の変化を示した。例としてＣ１Ｍ、Ｃ３Ｍ及びｈｓ−ＣＲＰが挙げられる。本発明者らは、驚くべきことに、ある種の代謝タンパク質と転帰（例えば軟骨修復）との関係を発見した。ＣＴＸ−ＩＩ及びＰｒｏＣ２タンパク質が特に興味深い。ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２のみが本明細書において具体的に記載されるが、ＰＩＩＡＮＰ、Ｃ２Ｍ、ＡＲＧＳ又はＡＧＮｘ１などの他の代謝バイオマーカーを使用することもできることに留意すべきである。よって、本発明の教示に基づき、これらのバイオマーカーの各々の閾値を発見することは、当業者にとって慣習的な事柄である。
【００５４】
これらのタンパク質は、変形性関節症におそらく関連があるものとして、文献に記載されている。例えば、ＣＴＸ−ＩＩ及びＰｒｏＣ２は、代謝バイオマーカーと考えられている（Ｂａｙ−Ｊｅｎｓｅｎ，２０１６）。
【００５５】
驚くべきことに、本発明者らにより、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣなどの代謝バイオマーカーの量が少ないほど、軟骨損傷に罹患した対象において、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含有する融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応が良好であることが発見された。これらの対象は、感受性と称され、この群は、中程度感受性又は高度感受性対象の両者を含む。逆に、これもまた驚くべきことに、本発明者らにより、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の量が多いほど、軟骨障害に罹患した対象において、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含有する融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応がない又は反応が低度である（すなわち、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する低度又は非感受性）ことも発見された。これらの対象は、非感受性対象と称され、この群は低度感受性又は非感受性対象の両者を含む。更に驚くべきことに、これらのバイオマーカーの各々は、単独で使用しても、ＦＧＦ−１８化合物に対する反応の効果的な予測を提供できることが発見された。
【００５６】
従って本発明の知見は、バイオマーカーＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣは、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含有する融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物の治療に対する対象の反応性の予測バイオマーカーとして単独又は組合せのいずれかで使用できることである。好ましくは、この対象は、変形性関節症、軟骨損傷、関節軟骨に影響を及ぼす骨折、又は関節軟骨に衝撃を与える手術手技（例えば、微小骨折）などの軟骨障害を有する。特定の実施態様において、対象は、ＣＴＸ−ＩＩの量が３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌ（正規平均の＞２４０〜２６０％）よりも高いか、及び／又は、ＰｒｏＣ２の量が４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬ（正規平均の＞１２０〜２８０％）よりも高い場合に、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対し非感受性（又は低度感受性）であると予測される。逆に、対象は、ＣＴＸ−ＩＩ量が３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いか、及び／又は、ＰｒｏＣ２量が４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低い場合に、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対し感受性（又は反応者又は良好な反応者）であると予測される。
【００５７】
従って本発明は、軟骨障害を有する対象において、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する感受性を予測する方法であって、
ａ）前記対象の生体試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程；  
ｂ）工程ａ）の結果から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する前記対象の高度、中程度又は非感受性を予測する工程：を含む方法に関する。
【００５８】
少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する前に、例えば血液、血清、滑液又は尿の収集により、該対象の試料（又は生体試料又は被験試料）を得ることが必要である。従って本発明は、軟骨障害を有する対象において、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する感受性を予測する方法であって、
ａ）前記対象から試料を得る工程；
ｂ）試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程；並びに
ｃ）工程ａ）の結果から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する前記対象の高度、中程度又は非感受性を予測する工程：を含む方法に関する。
【００５９】
上記方法によると、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ（正規平均の＞２４０〜２６０％）及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２（正規平均の＞１２０〜２８０％）の存在は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応がない又は反応が低度（例えば、非感受性又は低度感受性）であることの指標となる。よって、その対象は非感受性であると予測される。逆に、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２の存在は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する反応が中程度（例えば、中程度感受性）又は高度（例えば、高度感受性）であることの指標となる。よって、その対象はＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し感受性（又は反応性）である（つまり、反応者である）と予測される。この予測から、医師は、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対し、中程度感受性及び高度感受性の両者を含む感受性であると予測される対象のみを容易に選択できる。
【００６０】
また、本発明は、軟骨障害を有する対象を、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験の組み入れ又はそれからの除外に関して、前記治療に対するそれらの感受性の尤度に基づき、選択する方法であって、
ａ）前記対象の生体試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程、ここで、これらのバイオマーカーの少なくとも１種の量が、前記治療に対し感受性であるか又は非感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；並びに
ｂ）感受性の対象を前記治療に対し適切であるとして選択する工程：を含む方法を包含する。
【００６１】
先に開示したアッセイにおいて、少なくとも１種のタンパク質の量を決定する前に、例えば、血液、血清、滑液又は尿の収集により、対象の試料（又は被験試料又は生体試料）を得ることが必要である。従って本発明は、軟骨障害を有する対象を、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験の組み入れ又はそれからの除外に関して、前記治療に対するそれらの感受性の尤度に基づき、選択する方法であって、
ａ．該対象から生体試料を得る工程；
ｂ．試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程、ここで、これらのバイオマーカーの少なくとも１種の量が、前記治療に対し感受性であるか又は非感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；並びに
ｃ．感受性の対象を前記治療に対し適切であるとして選択する工程：を含む方法に関する。
【００６２】
上記方法によると、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２を示す対象は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療から除外される（すなわち、彼等は選択されない）。逆に、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を示す対象は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に組み入れられる（すなわち、彼等は選択される）。
【００６３】
代替的に、軟骨障害を有する対象を、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験への組み入れ又はそれからの除外に関して、ＦＧＦ−１８化合物に対するそれらの感受性の尤度を基に、選択する方法であって、
（ａ）軟骨障害を有すると診断されたヒト対象由来の試験試料を、ＣＴＸ−ＩＩおよび／またはＰｒｏＣ２からなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つの量を決定するように適合された少なくとも１つのアッセイに供する工程；
（ｂ）前記アッセイから、前記治療に対して感受性または非感受性であることについて対象の尤度を決定する工程；並びに
（ｃ）前記アッセイにより、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２が検出された場合、その対象をＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験へ組み入れ、そして、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２が検出された場合、その対象をＦＧＦ−１８化合物を用いる治療又は臨床試験から除外するよう対象を選択する工程：を含む方法も記載する。
【００６４】
代替的に、ＦＧＦ−１８化合物を試験するための臨床試験に対するヒト対象を選択する方法は、ａ）軟骨障害と診断されたヒト対象由来の生体試料を、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量について、アッセイする工程；
ｂ）ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量を決定する工程；並びに
ｃ）３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２を示すヒト対象を臨床試験に選択する工程：を含んでよい。
【００６５】
また、本発明は、ＦＧＦ−１８化合物を試験する臨床試験から、ヒト対象を除外する方法であって、
（ａ）ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量について、軟骨障害と診断されたヒト対象由来の生体試料をアッセイする工程；
（ｂ）前記アッセイから、前記対象が治療に対し感受性又は非感受性である尤度を決定する工程；並びに、
（ｃ）３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２を示すヒト対象を、臨床試験から除外する工程：を含む方法も記載する。
【００６６】
試料中の１又は複数のバイオマーカーの量（又は発現レベル）は、必要ならば、参照試料由来の参照量（又は参照発現レベル）と比較することができる。該参照レベルは、健常対象から、又は該治療前もしくは治療中に診断もしくは治療される同じ患者から、入手することができる。
【００６７】
ＦＧＦ−１８化合物は、通常、１治療サイクルにつき、注射あたり１００ｍｃｇの用量で週１回ずつ３週間にわたり、関節内投与される。高度感受性であると予測される対象のために提案される代替投薬方式は、ＦＧＦ−１８化合物を、治療サイクルあたり３週間、週１回、注射あたり３０ｍｃｇの用量で関節内投与することである。好ましい用量は注射あたり１００ｍｃｇであり、おそらく高度感受性の場合は注射あたり３０ｍｃｇに低減されるものの、本発明は前記用量に限定されないことを理解されたい。したがって、ＦＧＦ−１８化合物は、注射あたり５０〜３００ｍｃｇ、好ましくは６０〜２５ｍｃｇ、さらに好ましくは１００〜２００ｍｃｇの用量で関節内投与することができる。超感受性対象の場合、前記用量は、例えば、１／２又は約１／２、または１／３、または約１／３に低減できる場合がある。たとえば、通常の用量が注射あたり５０ｍｃｇである場合、用量は注射あたり１６〜２５ｍｃｇの間に低減されることがある。
【００６８】
ＦＧＦ−１８化合物は、通常、１サイクルにつき、注射あたり１００ｍｃｇの用量で週１回ずつ３週間にわたり、関節内投与される。ＦＧＦ−１８化合物は、通常、少なくとも１回の治療サイクルで投与される。好ましくは、治療サイクルは、初回治療サイクルの開始後、例えば６ヶ月（又は約２６週間）に少なくとも１回繰り返される。２年以内に最大４サイクルの治療サイクルを行うことが、有望な結果を示す（図１参照）。
【００６９】
本発明は更に、対象が３５０ｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２ｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を有するという特徴を有する、軟骨障害を有する対象の治療における使用のための、ＦＧＦ−１８化合物を包含する。したがって、これらの基準を満たさない対象は、好ましくはＦＧＦ−１８化合物の治療から除外される。
【００７０】
また、本発明は、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対する感受性を決定するか、又はＦＧＦ−１８化合物を用いる治療方式を決定するためのアッセイにも関し、（ａ）軟骨障害を有すると診断されたヒト対象由来の被験試料を、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量を決定する少なくとも１種のアッセイに供する工程、（ｂ）ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量を決定する工程、並びに（ｃ）工程ｂ）の結果から、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する前記対象の感受性又は非感受性を決定する工程：を含むアッセイにも関する。このアッセイによると、３５０ｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２ｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２の存在は、ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対する非感受性の指標となる。逆に、３５０ｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２ｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２の存在は、感受性の指標となる。このアッセイの結果から、医師は、ＦＧＦ−１８化合物の治療に対し、中程度感受性  及び高度感受性の両者を含む感受性であると予測される対象のみを容易に選択できる。先に開示したアッセイにおいて、少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する前に、例えば血液、血清、滑液又は尿の収集により、該対象のバイオマーカー（又は被験）試料を得ることが必要とされる。
【００７１】
また、本発明は、軟骨障害のヒト対象に対する治療方式を選択するアッセイであって、（ａ）軟骨障害を有すると診断されるヒト対象由来の被験試料を、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２の少なくとも１種の量を決定する少なくとも１種のアッセイに供する工程、（ｂ）前記対象がＦＧＦ−１８治療に対し中程度感受性又は高度感受性である尤度を決定する工程、並びに（ｃ）工程ｂ）の結果から、前記対象に対し好適な治療方式を決定する工程：を含むアッセイに関する。対象が３５０ｎｇ／ｍｍｏｌより低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２ｎｇ／ｍＬより低いＰｒｏＣ２を有する場合、この量が上記化合物に対する反応に関連するという認識に基づいて、好適な治療方式での治療への選択および治療がされ、対象が３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも高いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも高いＰｒｏＣ２を有する場合、この量が上記化合物に対する反応に関連するという認識に基づいて、この対象をＦＧＦ−１８化合物を用いる治療から除外することができる。
【００７２】
また、軟骨障害を有する対象をＦＧＦ−１８化合物を用いて治療する方法であって、
ａ．試料から、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定する工程であって、ここで、前記量が、前記ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療に対し高度又は中程度感受性であることに関する対象のリスクの指標となる工程；
ｂ．３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を有する対象を選択する工程；
ｃ．工程ｂ．において選択した対象に、ＦＧＦ−１８化合物を関節内投与する工程：
を含む方法も記載される。
【００７３】
更に、軟骨障害のヒト対象を治療する方法であって、
（ａ）ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２からなる群から選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量について、軟骨障害を有すると診断された対象の生体試料をアッセイする工程；並びに
（ｂ）対象が、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌよりも低いＣＴＸ−ＩＩ及び／又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬよりも低いＰｒｏＣ２を有する場合、有効量のＦＧＦ−１８化合物を含む組成物を含む投薬方式で対象に投与する工程：を含む方法が開示される。
【００７４】
総じて本発明の文脈において、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２は、ＦＧＦ−１８化合物に対する反応の有用な予測バイオマーカーであることが示されている。従ってこれらは、予測バイオマーカーと考えられる。
【００７５】
総じて本発明の文脈において、本発明の少なくとも１種のバイオマーカーの量のアッセイ又はその他の決定は、治療前又は治療時に行ってもよい。実際、治療時に投薬方式を新規バイオマーカーの状況に適合させる必要があることもある。
【００７６】
総じて本発明の文脈において、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌのＣＴＸ−ＩＩ又は４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬのＰｒｏＣ２の範囲内である患者に関し、別の代謝バイオマーカーを用い診断又はバイオマーカー試験を完了することが勧められる。例えば、ＣＴＸ−ＩＩのレベルが３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌの範囲内である場合、次にＰｒｏＣ２のレベルが考慮できる。患者が、３５０±２ＳＤｎｇ／ｍｍｏｌのＣＴＸ−ＩＩ及び  ４．２±２ＳＤｎｇ／ｍＬのＰｒｏＣ２の範囲を示す希少例（ｒａｒｅ  ｃａｓｅ）において、次にＷＯ２０１４０２３７０３で開示されたもののような、炎症バイオマーカー又はＳＮＰバイオマーカーなどの別の種類のバイオマーカーを用いる診断又はバイオマーカー試験を完了することが勧められる。
【００７７】
本発明の別の実施態様において、データを得るためのシステム（及びコンピュータシステムとするためのコンピュータ可読（ｒｅａｄａｂｌｅ）媒体）も提供される。該データは、とりわけ、対象におけるＦＧＦ−１８化合物を用いる治療の適合性を評価するか、又は所定の対象に関するＦＧＦ−１８化合物の治療有効性をモニタリングするか、もしくは単に疾患の進行をモニタリングするために使用することができる。該システムは、臨床試験時ＦＧＦ−１８化合物を用いる治療が想定される場合、又は該化合物を用いる治療が既に進行中である場合に、使用することができる。
【００７８】
従って、本発明の実施態様には、少なくとも１名の軟骨障害の対象から得られた少なくとも１種の被験試料からデータを得るためのコンピュータシステムが含まれ、このシステムは以下を備える：
（ａ）少なくとも１種の該被験試料を受け取り、本発明の少なくとも１種のバイオマーカーの量を決定するために、少なくとも１種の該被験試料に対し、少なくとも１種の分析を実行するように構成された、少なくとも１種の決定モジュール；
（ｂ）該決定モジュールからのデータ出力を記憶するよう構成された少なくとも１種の記憶装置；並びに、
（ｃ）一部該決定モジュールからのデータ出力に基づくコンテンツを表示するための、少なくとも１つのディスプレイモジュール、ここでこのコンテンツは、これらの条件の少なくとも１つの存在、及び任意にこれらの条件のいずれか一つの非存在の指標となるシグナルを含む。
【００７９】
このコンピュータ可読媒体は、コンピュータ上で方法を実行するためのソフトウェアモジュールを規定するために、それらの上に記録されたコンピュータ可読命令を有することができる。そのような場合、該コンピュータ可読の記憶媒体は：
（ａ）記憶装置上に記憶されたデータを、参照データと比較し、比較結果を提供するための命令であって、ここで比較は、本発明に従う少なくとも１種のバイオマーカーの量を基にしているもの；並びに
（ｂ）一部該決定モジュールからのデータ出力に基づくコンテンツを表示するための命令であって、ここでこのコンテンツは、少なくとも１種の条件の存在、及び任意に１又は複数の条件の非存在の指標となるシグナルを含む。
【００８０】
コンピュータ可読の記憶媒体は、コンピュータによりアクセスすることができる、任意の利用可能な有形（ｔａｎｇｉｂｌｅ）媒体であってもよい。コンピュータ可読の記憶媒体は、コンピュータ可読命令、データ構造（ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）、プログラムモジュール又は他のデータなどの、情報の記憶に関する任意の方法又は技術において実行された、揮発性及び不（１６ｏｎ）揮発性、取り外し可能及び取り外しができない有形媒体を含む。コンピュータ可読の記憶媒体は、ＲＡＭ（ランダムアクセスメモリー）、ＲＯＭ（リードオンリーメモリー）、ＥＰＲＯＭ（消去可能なプログラム可能なリードオンリーメモリー）、ＥＥＰＲＯＭ（電気的に消去可能なプログラム可能なリードオンリーメモリー）、フラッシュメモリー又は他のメモリー技術、ＣＤ−ＲＯＭ（コンパクトディスクリードオンリーメモリー）、ＤＶＤ（デジタル多用途ディスク）又は他の光学記憶媒体、磁気カセット、磁気テープ、磁気ディスク記憶又は他の磁気記憶媒体、他の型の揮発性及び不揮発性メモリー、並びに所望の情報の記憶に使用することができ、且つ好適な前述の組わせを含むコンピュータにアクセスすることができる、任意の他の有形媒体を含むが、これらに限定されるものではない。
【００８１】
１又は複数のコンピュータ可読の媒体上に具現化された（ｅｍｂｏｄｉｅｄ）コンピュータ可読データは、例えば、コンピュータによる実行結果として、コンピュータに、本明細書記載の１又は複数の機能、並びに／又はそれらの様々な実施態様、変動及び組合せを実行することを命令する１又は複数のプログラムの一部として、命令を規定してよい。そのような命令は、例えば、Ｊａｖａ、Ｊ＃、Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ、Ｃ、Ｃ＃、Ｃ＋＋、Ｆｏｒｔｒａｎ、Ｐａｓｃａｌ、Ｅｉｆｆｅｌ、Ｂａｓｉｃ、ＣＯＢＯＬアッセンブリ言語、及び同類のものなどの複数のプログラミング言語のいずれか、もしくはそれらの様々な組合せで記載されてよい。その上にそのような命令が具体化されているコンピュータ可読の媒体は、システムのいずれかの１又は複数のコンポーネント上に存在するか、又は本明細書記載のコンピュータ可読の記憶媒体は、１又は複数のそのようなコンポーネントにわたって分布してもよい。
【００８２】
コンピュータ可読媒体は、その媒体上に記憶された命令が、本明細書において検討した本発明の態様を実行するため任意のコンピュータ資源に格納されるように、可搬型（ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｂｌｅ）であってよい。
【００８３】
決定モジュールにおいて決定された情報は、記憶装置により読み取ることができる。記憶装置は、その上に記録された発現レベル又はタンパク質レベルの情報を有するように、適合又は構成される。そのような情報は、例えばインターネットを介して、ディスケット上で、ＵＳＢ（ユニバーサルシリアルバス）を介して又は任意の他の好適な通信モードを介して、電子的伝達及び読み取りできるデジタル型で提供されてよい。
【００８４】
総じて本発明の文脈において、例えば本発明の方法、使用、アッセイ又はキットのいずれか一つの文脈において、好ましいＦＧＦ−１８化合物は、スプリフェルミン、又はＦＧＦ−１８部分を含む融合タンパク質などの、切断型ＦＧＦ−１８であり、好ましい軟骨障害は、変形性関節症、軟骨損傷、関節軟骨に影響を及ぼす骨折、又は関節軟骨に衝撃を与える手術手技、例えば微小骨折などからなる群から選択される。
【００８５】
総じて本発明の文脈において、例えば本発明の方法、使用、アッセイ、コンピュータシステム又はキットのいずれかひとつの文脈において、本発明の少なくとも１種のバイオマーカー（例えば、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２）の量を決定する前に、例えば、血液、血清、滑液又は尿の収集により、対象の試料（又は生体試料又は被験試料）を得ることが必要であることが理解されるべきである。また、細胞、組織、軟骨又は滑液からも得ることができるがこれらに限定されない。
【００８６】
軟骨障害に罹患し、且つ本明細書記載の方法、使用、アッセイ、キット及び他のコンピュータシステムのいずれかに従い試験、検査及び／又は治療される個体は、スプリフェルミン又はＦＧＦ−１８部分を含有する融合タンパク質などのＦＧＦ−１８化合物を用いる治療の候補であるヒト対象である。好ましい実施態様において、個体は、軟骨障害と診断されているか、又は軟骨障害の症状を示している。
【００８７】
更なる実施態様において、本発明は、先に記載された方法を実行する手段、並びに使用説明書を含むキットを包含する。好ましくは、キットは、本発明のバイオマーカー（例えば、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２）の少なくとも１種の存在を検出するための手段、並びにそれらを定量するための手段を含む。キットは、本発明のバイオマーカーの少なくとも２種の存在を検出するための手段、並びにそれらを定量するための手段も含んでよい。
【００８８】
本発明の方法及びキットは、臨床診断的な適用に有用である。ただし、本明細書において使用される用語「診断的」は、臨床用途又は医学用途に限定されず、本明細書において請求される本発明の診断的方法及びキットは、本明細書記載の任意のマーカーの存在又は非存在に関し対象を試験することが望ましい任意の研究応用や臨床試験時にも有用である。
【００８９】
本発明の文脈において、少なくとも１種の本発明のバイオマーカー（例えば、ＣＴＸ−ＩＩ及び／又はＰｒｏＣ２）の存在及びそれらの定量は、例えばＥＬＩＳＡを含む、それ自体が当業者に公知である任意の技術により、検出されてよい。
【００９０】
本明細書の請求の範囲内の本発明の他の実施態様は、本明細書に開示の本発明の明細書の記載又は実施を考慮すれば当業者には明らかであろう。本明細書の記載は、本願の実施例と共に、本願請求項により特定される本発明の範囲及び精神を伴う単なる例示であるという意図である。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
（図面の説明）
【図１】図１：フォワード試験においてスプリフェルミンについて使用した投薬方式のスキーム。
【図２】図２：総大腿脛骨関節の軟骨厚み（ｍｍ）に関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化における平均及び９５％ＣＩ−ｍＩＴＴ解析セット。
【図３】図３：総大腿脛骨関節の軟骨容積（μＬ）に関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化における平均及び９５％ＣＩ−ｍＩＴＴ解析セット。
【図４】図４：軟骨代謝亜群ごとの、バイオマーカーによる総大腿脛骨関節における軟骨厚み（ｍｍ）に関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化における平均及び９５％ＣＩ−ＩＴＴ解析セット−ＰｒｏＣ２代謝バイオマーカー。
【図５】図５：軟骨代謝亜群ごとの、バイオマーカーによる総大腿脛骨関節における軟骨厚み（ｍｍ）に関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化における平均及び９５％ＣＩ−ＩＴＴ解析セット−ＣＴＸ−ＩＩ代謝バイオマーカー。
【図６】図６：軟骨代謝亜群ごとの、標的膝におけるＷＯＭＡＣ総スコアに関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化に関する平均及び９５％ＣＩ−ＩＴＴ解析セット−ＰｒｏＣ２代謝バイオマーカー。
【図７】図７：軟骨代謝亜群ごとの、標的膝におけるＷＯＭＡＣ総スコアに関する、治療による数週間にわたるベースラインからの絶対変化に関する平均及び９５％ＣＩ−ＩＴＴ解析セット−ＣＴＸ−ＩＩ代謝バイオマーカー。
【００９２】
（配列の説明）
配列番号１：天然型ヒトＦＧＦ−１８のアミノ酸配列。
配列番号２：組換え切断型ＦＧＦ−１８（ｔｒＦＧＦ−１８）のアミノ酸配列。
配列番号３：マーカーＣＴＸ−ＩＩのアミノ酸配列。
配列番号４：マーカーＰＲＯＣ２のアミノ酸配列。
【実施例】
【００９３】
１．ＦＧＦ−１８化合物
本実施例において治療として使用するＦＧＦ−１８化合物は、スプリフェルミンである。これは、「定義」の項において定義したように、ＦＧＦ−１８の切断型である。２種の強度：３０μｇ及び１００μｇのスプリフェルミンが、本試験に供給された。スプリフェルミンは、３ｍＬガラスバイアル内の白色の滅菌した凍結乾燥散剤として供給された。各バイアルは、スプリフェルミン活性物質３１．５μｇ又は１０５μｇのいずれかを含み；これらの量は、各々、３０μｇ又は１００μｇのスプリフェルミン活性物質の抽出を可能にするよう、５％過剰に含まれ、引き続き０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム注射液（本明細書において「生理食塩水」と称す）により再構成される。この製剤の賦形剤は、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）、水酸化ナトリウム、Ｏ−リン酸、ショ糖、及びポロキサマー１８８である。３０μｇ治療のためのキットは、スプリフェルミン（強度３０μｇ）の１ガラスバイアル、及び注射用の滅菌生理食塩水（２ｍＬ／アンプル）の１ガラスアンプルを含んだ。１００μｇ治療のためのキットは、スプリフェルミン（強度１００μｇ）の１ガラスバイアル、及び注射用の滅菌生理食塩水（２ｍＬ／アンプル）の１ガラスアンプルを含んだ。全ての治療群に関して、投与容積は、２ｍＬであった。
【００９４】
２．方法
フォワード試験
本試験は、フォワード試験（ＥＭＲ７００６９２−００６）に基づく。５群の患者を試験した：
・グループ１（プラセボ４サイクル；以後プラセボと称す）：１０８名の対象。
・グループ２（スプリフェルミン３０μｇ／注射２サイクル、プラセボ２サイクルと交代；以後スプリフェルミン／プラセボ３０μｇと称す）：１１０名の対象。
・グループ３（スプリフェルミン３０μｇ／注射４サイクル；以後スプリフェルミン３０μｇと称す）：１１１名の対象。
・グループ４（スプリフェルミン１００μｇ／注射２サイクル、プラセボ２サイクルと交代；以後スプリフェルミン／プラセボ１００μｇと称す）：１１０名の対象。
・グループ５（スプリフェルミン１００μｇ／注射４サイクル；以後スプリフェルミン１００μｇと称す）：１１０名の対象。
【００９５】
このフォワード試験に従い、患者は、６ヶ月の間隔で、４サイクルの治療（各々、連続する３週間にわたり、週１回の関節内注射を３回行うことからなる）を受けた（図１参照）。注射は全て、関節内投与であった（関節内に行った）。
【００９６】
主要有効性評価項目は、２年時点でＭＲＩにより評価した、総大腿脛骨関節中の軟骨厚みのベースラインからの変化であった。
【００９７】
探索的評価項目は、治療に対する反応又は疾患進行に関連するベースラインタンパク質マーカー及び／又は遺伝子マーカーを含んだ（反応は、ＭＲＩ及び／又は質問票により評価した）。
【００９８】
組み入れ基準／除外基準
本試験は、シェルグレン・ローレンスグレード（ＫＬＧ）２度又は３度を有し、並びに内側区画内で最少関節腔幅（ＪＳＷ）≧２．５ｍｍを有する、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）の臨床及びＸ線判定基準に従い原発性大腿脛骨ＯＡを持つ、男女いずれかの成人対象を参加させた。対象は、ほとんどの日に標的膝に疼痛を有し、及び／又は、前月のほとんどの日に、パラセタモル（アセトアミノフェン）、ＣＯＸインヒビター（ＣＯＸｉｂｓ）を含む全身性非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、又はトラマドールによる、膝疼痛の対症療法を必要としなければならず、且つ以下の両点を有さなければならない：１）少なくとも６ヶ月間の標的膝のＯＡに起因した疼痛の病歴、並びに２）アセトアミノフェン、局所もしくは経口のＮＳＡＩＤＳ、ＣＯＸｉｂｓ、オピオイド、及び／又はトラマドールの鎮痛薬投薬の少なくとも５半減期のウォッシュアウト後の、スクリーニング及びベースライン時に、ウェストオンタリオ大学・マクマスター大学変形膝関節症指数（ＷＯＭＡＣ）の疼痛指数の質問１（「平地を歩くとき［過去４８時間にわたり、標的膝において］どの程度痛みを感じましたか？」）に応えて、４〜９ポイントの標的膝の疼痛スコア。妊娠の可能性のある女性は、本試験を通じて１年当たり１％未満の妊娠率（ｆａｉｌｕｒｅ  ｒａｔｅ）の避妊法を使用した。
【００９９】
主要除外基準には、標的膝の大腿脛骨軸における＞５度のゆがみ（ｍａｌａｌｉｇｎｍｅｎｔ）、標的膝中の臨床の炎症徴候（すなわち、発赤）、スクリーニング前６ヶ月以内のいずれかの膝へのコルチコステロイド又はヒアルロン酸の関節内投与、その後２年以内の何らかの膝手術の計画（標的膝又は対側膝のいずれかに影響を及ぼす）、試験参加の不適合であるとみなされる共存する病態又は治療、ＭＲＩ走査への禁忌（スキャナへのフィット不能又は膝コイルを含む）、妊娠又は授乳、過去３０日以内の別の臨床試験への参加、及び法的無能力者又は法的能力の限界者が含まれた。
【０１００】
書面によるインフォームドコンセントは、各試験実施の前に得た。
【０１０１】
統計学的方法
主要評価項目に対する治療効果は、ベースライン値、治療群、評価時点、並びに国因子（ｃｏｕｎｔｒｙ  ａｓ  ｆａｃｔｏｒ）、及び治療群と評価時点の交互作用（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｂｙ−ｔｉｍｅ  ｐｏｉｎｔ  ａｓ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）を含む、ベースラインからの絶対変化に対する、反復測定の分散分析を使用し（ＡＮＯＶＡ、ＳＡＳのＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤを使用）、投与量−範囲（ｄｏｓｅ−ｒａｎｇｉｎｇ）により評価した。主要有効性分析は、２年目での、線形の投与量関係及び総括的治療効果を試験することからなる。有意レベルは、両方の試験に関して両側５％に設定した。一対比較（スプリフェルミン、対、プラセボ、及びスプリフェルミン投与量群及び方式群の間）を、このモデル化フレームワークの状況内で行った。各一対比較に関して、治療間の差異及び対応する９５％信頼区間（ＣＩ）及びｐ値を示した。主要評価項目に使用したものと同じＡＮＯＶＡモデルを使用し、各評価時点及び全時間（ｏｖｅｒ  ｔｉｍｅ）での、ＭＲＩ評価項目、ＷＯＭＡＣ評価項目（総、疼痛、機能、及び拘縮のスコア）、並びにＸ線評価項目などの、持続する副次的評価項目に対する治療効果を評価した。ロジスティック回帰を使用し、ＯＭＥＲＡＣＴ−ＯＡＲＳＩ反応率などの、２値（ｂｉｎａｒｙ）有効性評価項目に対する治療効果を評価した。各一対比較に関する点推定及び対応する９５％ＣＩ及びｐ値を示す。
【０１０２】
疼痛評価及び機能評価
ＷＯＭＡＣは、臨床ＯＡ試験における症状改変を評価するために使用され有効性が確認されている手段である。この臨床スコアは、１９８１年に開発され、臨床研究者及び規制当局の両方により、有効な手段であると見なされている。ＷＯＭＡＣは、股関節（ｈｉｐ）及び膝のＯＡの臨床試験において広範に使用され、有効性も確認されている。
【０１０３】
対象は、自身で２４問の質問（すなわち、疼痛に関する５項目、拘縮に関する２項目及び身体機能に関する１７項目）全てに、過去４８時間に関して、１１−ボックスＮＲＳ評価（カテゴリー０から１０まで）を用い、回答しなければならなかった。右膝及び左膝に関して、異なる形態の質問票が存在し：対側膝の症状によるＷＯＭＡＣ反応の混乱を減少するために、対象は、標的膝に特定されたＷＯＭＡＣ質問票を使用した。その後、質問票の管理（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に関して、ＷＯＭＡＣ３．１指数に関する指示を行った。
【０１０４】
ＪＳＷのＸ線評価
Ｘ線により測定したＪＳＷの変化は、ＯＡにおける有効性試験で使用するために欧州医薬品庁（ＥＭＡ）及び米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された評価項目である。ＪＳＷは、標準化された技術を用いて測定した。
【０１０５】
ｑＭＲＩ評価
ＤＢＰＣ治療相に関する主要評価項目は、ｍＩＴＴにおいて２年目にｑＭＲＩにより評価した、総大腿脛骨関節の軟骨厚みのベースラインからの変化であった。総大腿脛骨関節の軟骨厚みは、２つの方式で計算した：
１．平均軟骨厚み（総表面積で除算した総容積）
２．総軟骨厚み（内側区画及び側面区画の軟骨厚みの合計）。
【０１０６】
主要評価項目に対する治療効果は、治療群、評価時点、並びに固定された因子としての（プールされた）国及び共分散としてのベースライン値、及び治療群と評価時点の交互作用を含む、ベースラインからの絶対変化に対する、反復測定の分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用し、投与量−範囲を通じて評価した。経時的な測定を繰り返すことにより、「非構造化された（ｕｎｃｔｒｕｃｔｕｒｅｄ）」共分散パターンの使用を示す。
【０１０７】
軟骨厚みにおけるベースラインからの絶対変化の一対比較（スプリフェルミン治療群、対、プラセボ）は、先に記載したモデル化フレームワークの状況内で実行した。各一対比較に関して、治療間の差異及び対応する９５％信頼区間（ＣＩ）及びｐ値を提示した。ｐ値（母数効果のタイプ３試験に対応）は、一緒にした全ての評価時点に関する当初の「総括的」モデルにおける全ての共変量（すなわち、ベースライン値、治療、評価時点、治療群と評価時点の交互作用、国）について、並びに全ての評価時点について報告する。推定された係数、ｐ値、及び９５％ＣＩは、（ｉ）投与量関係（線形の傾向）及び（ｉｉ）投与量レベルとプラセボの間の各一対比較：について、全時間及び各評価時点で提示される。
【０１０８】
一次結果のロバトネスを評価するために、線形の投与量−関係に関する試験及び総括的治療効果に関する試験は、ＰＰ解析セットを用いて繰り返した。ｍＩＴＴ解析セットに関して、一次解析の代替方法として、総大腿脛骨関節内の軟骨厚みの順序のあるデータに関して、ノンパラメトリックな解析を行った。データは、ランク変換を使用するＤＢＰＣ治療相時の２年間にわたる、ベースラインからの絶対変化の大きさにより、順位付けした。
【０１０９】
バイオマーカー測定
骨及び関節組織の代謝回転並びに滑液炎症の血清学的及び尿の生化学マーカーを、評価した。軟膏代謝の可能性のあるバイオマーカーは、ＩＩ型コラーゲン分解のネオ−エピトーププロペプチド（ｐｒｏＣ２）およびＩＩ型コラーゲン架橋Ｃ−テロペプチド（ＣＴＸ−ＩＩ）を含むが、これらに限定されるものではない。全身性バイオマーカー評価のための血液及び尿試料を、以下の時点で収集した：０週目（スプリフェルミンの初回注射前）、２６週目、５４週目、８０週目及び１０４週目。注射が同じく投与される評価時点に関しては、注射前に試料を採取した。滑液の液体試料を、これらの時点で収集した。これらの試料は、関節内注射手技の一部として、及び注射に使用した針と同じ針を使用し、注射直前に収集した。尿収集に関して、朝２番目の排尿試料を得た。
【０１１０】
以下の評価を、探索的評価項目として行った：
−本化合物の投与に関連する血清及び尿マーカーにおけるベースラインからの変化。
−治療又は疾患進行に対する反応に関連するベースラインタンパク質マーカー及び／又は遺伝子マーカー（ＭＲＩ及び／又は質問票により評価した反応）。
【０１１１】
３．結果
主要評価項目（ａｌｌｃｏｍｅｒ）
総大腿脛骨関節（Ｔｏｔａｌ  ｆｅｍｏｒｏｔｉｂｉａｌ  ｊｏｉｎｔ）：２年目で、総大腿脛骨関節における軟骨厚みのベースラインからの変化に対する統計学的に有意な治療効果を認めた（図２参照）。スプリフェルミン／プラセボ１００μｇ群及びスプリフェルミン１００μｇ群の両方は、１０４週目で、プラセボ群（ベースラインからの平均変化：−０．０２ｍｍ）と比べ、より大きい改善を示した（ベースラインからの平均変化：各々、＋０．０２ｍｍ及び＋０．０３ｍｍ）（両方の比較に関してｐ＜０．００１）。この治療群の差異は、スプリフェルミン／プラセボ１００μｇ群の７８週目、及びスプリフェルミン１００μｇ群の５２週目に始まった。統計学的有意性は、両群において１０４週間を通じて維持された。プラセボ群は、１０４週目までのいずれの来院時にも、ベースラインからの改善を示さなかった。スプリフェルミン／プラセボ１００μｇ群及びスプリフェルミン１００μｇ群における、プラセボ群と比べて、増大した軟骨厚みに関して、全体的に（全ての週間）、統計学的有意差が存在した（各々、ｐ＝０．００２及びｐ＜０．００１）。ＡＮＣＯＶＡモデルは、治療（ｐ＜０．００１）、週数（ｐ＜０．００１）、治療＊週数（ｐ＝０．０２９）、及びプールデータのある国（ｐ＝０．００９）に関して統計学的に有意であった。
【０１１２】
総大腿脛骨関節内の軟骨容積：総大腿脛骨関節内の軟骨容積において、ベースラインからの変化に対する、統計学的に有意な治療効果が存在する（図３；ｐ＜０．００１）。スプリフェルミン／プラセボ１００μｇ群及びスプリフェルミン１００μｇ群は、プラセボ群と比較してより大きい改善を示した。プラセボと比較したスプリフェルミン１００μｇの統計学的有意性は、７８週目に始まり、１０４週間を通じて持続され；スプリフェルミン／プラセボ１００μｇのプラセボと比較した、統計学的有意性は、２６週目に明らかであり、且つ７８週目から１０４週目まで持続された。１０４週目までのベースラインからの平均変化は、スプリフェルミン／プラセボ３０μｇ群、スプリフェルミン３０μｇ群、スプリフェルミン／プラセボ１００μｇ群、及びスプリフェルミン１００μｇ群において、各々、−２８．２μＬ、＋９．５μＬ、＋９６．６μＬ（ｐ＜０．００１）、及び＋１１６．５μＬ（ｐ＜０．００１）であり、プラセボ群において−５５．５μＬであった。プールデータのある国に関して統計学的に有意な効果が存在した（ｐ＝０．０１１）。
【０１１３】
探索的評価項目（バイオマーカー統計）：薬力学（ＰＤ）／バイオマーカー分析の総括的目的は、以下である：
−プラセボに対し、症状の転帰を改善しながら（ＷＯＭＡＣ総スコア及びＷＯＭＡＣ疼痛指数スコア）、正の構造的転帰を維持する患者（スプリフェルミン、対、プラセボによる、ＭＲＩ総軟骨厚みにおける差異に基づく）の確定のための予測バイオマーカー（複数可）の同定、
−ＡＩＲなどの安全性パラメータに関する、予測バイオマーカー（複数可）の同定、
−可能性のある予測バイオマーカーとしての機能性バイオマーカーの特徴決定、及び可能性のある予測カットオフ値の評価、
−可能性のある予後バイオマーカーの同定（プラセボ群のみ）、
−ＰＤバイオマーカーとしての生化学バイオマーカー（例えば、ＰｒｏＣ２及びＣＴＸ−ＩＩ）の評価。
【０１１４】
階層化及び総大腿脛骨関節における軟骨厚み：総大腿脛骨関節における軟骨厚みのベースラインからの変化は、１０４週目に、バイオマーカー亜群間で以下の注目すべき差異を示した。ベースラインで軟骨代謝のバイオマーカー（ｐｒｏＣ２およびＣＴＸ−ＩＩ）のレベルが低い対象は、軟骨代謝のバイオマーカーのレベルが高い対象と比較して、スプリフェルミン（プラセボ対）による１０４週間の治療後に総軟骨厚みが改善された結果を示した。この異なる反応は、主にプラセボ反応が異なることによる（図４および５）。驚くべきことに、結果は、代謝の高い軟骨細胞（高いｐｒｏＣ２及び／又は高いＣＴＸ−ＩＩ）は、スプリフェルミンなどの同化療法に対する反応が一貫しないことを示す。
【０１１５】
階層化及びＷＯＭＡＣ総スコア：ＷＯＭＡＣ総スコアにおけるベースラインからの変化は、１０４週目に、バイオマーカー亜群間で以下の注目すべき差異を示した。ベースライン時より軟骨代謝のマーカー（ｐｒｏＣ２及びＣＴＸ−ＩＩ）のレベルが低い対象は、プラセボを投与した対象又は高いレベルの軟骨代謝のバイオマーカーを有する対象と比較して、スプリフェルミンによる１０４週間の治療後、ＷＯＭＡＣ総スコアが改善された結果を示した（図６及び７）。これらの結果は驚くべきことに、より代謝が低い（低ｐｒｏＣ２及び／又は低ＣＴＸ−ＩＩ）関節は、軟骨厚みに関するスプリフェルミンなどの同化療法に対する反応が良好であるのみではなく、ＷＯＭＡＣ総スコアに対しても正の影響も奏することを示している。
【０１１６】
参考文献
【化１】
2020535436.tif 000003
【０１１７】
（略語）
ＯＡ＝変形性関節症
ＣＩ＝信頼区間
ＤＢＰＣ＝二重盲検プラセボ対照
ＣＴＸ−ＩＩ＝ＩＩ型コラーゲン架橋Ｃ−テロペプチド
ＩＣＯＡＰ＝間欠的及び持続的変形性関節症疼痛の測定
ＩＴＴ＝治療意図に基づく
ＫＯＯＳ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｉｎｄｅｘ＝膝損傷及び変形性関節症転帰スコアの症状指数
ＫＯＯＳ  ＱＯＬ＝膝損傷及び変形性関節症転帰スコアの生活の質
ＬＯＣＦ＝フォワードに実行された最終観察
ＬＦＴＣ＝側面大腿脛骨区画
ＭＦＴＣ＝内側大腿脛骨区画
ｍＩＴＴ＝改変された治療意図に基づく
ＭＯＳ  ＳＦ−３６＝医学的転帰試験ショートフォーム−３６健康状態調査
ＭＲＩ＝磁気共鳴画像法
ＮＲＳ  ｐａｉｎ  ｓｃｏｒｅ＝数値化スケールの疼痛スコア
ＰＧＡ＝患者の総括的評価
ＰＧＩＣ＝患者の変化の総括的印象
ＰＫ＝薬物動態
ＰＲＯＣ２＝ＩＩ型コラーゲンプロペプチドのネオエピトープ
Ｗ＝週
ＷＯＭＡＣ＝ウェスタンオンタリオ大学・マクマスター大学変形性関節症指数。
【図１】
2020535436.tif 000004
【図２】
2020535436.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2020535436.tif 000009
【図７】
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【配列表】
2020535436000001.app
【国際調査報告】
2020535436.tif 000011
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