(57)【要約】  本発明はリポソームを含む固体経口剤形に関し、当該リポソームは、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）と、脂質及び脂肪酸から選択される化合物との複合体を含むとともに、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤に含まれる。本発明は、さらに、治療剤及び診断剤の経口送達のための固体経口剤形の使用に関する。
2020515648.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームを含む固体経口剤形であって、前記リポソームが、
（ａ）少なくとも１種類の細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）と、
（ｂ）脂質及び脂肪酸から選択される化合物と、の複合体を含み、
前記複合体がリポソームの脂質二重層の一部であり、
前記剤形が胃耐性の固体経口剤形である、固体経口剤形。
【請求項２】
前記リポソームが、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤に含まれる、請求項１に記載の固体経口剤形。
【請求項３】
固体経口剤形内に、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤、及び／又は少なくとも１種のプロテアーゼ阻害剤、及び／又は少なくとも１種のリパーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１又は２に記載の固体経口剤形。
【請求項４】
前記少なくとも１種類のＣＰＰが環化ＣＰＰである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項５】
前記少なくとも１種類のＣＰＰが、直鎖又は環化ペネトラチン、直鎖又は環化ＴＡＴ（転写トランス活性化因子）−ペプチド、直鎖又は環化ＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）、直鎖又は環化Ｒ９、直鎖又は環化ｐＶＥＣ、直鎖又は環化トランスポータン、直鎖又は環化ＭＰＧ、それらの組み合わせ及びそれらの二量体からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項６】
前記リポソームが、総脂質及び／又は脂肪酸量に対して、０．０５〜５ｍｏｌ％の量で前記少なくとも１種類のＣＰＰを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項７】
前記少なくとも１種類のＣＰＰが結合される化合物が、コレステロール及びその誘導体、リン脂質、リゾリン脂質、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項８】
前記少なくとも１種類のＣＰＰが、二官能性ＰＥＧ−リンカーを介して前記化合物に結合される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項９】
前記リポソームが凍結乾燥される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項１０】
固体経口剤形内に、少なくとも１種の治療剤及び／又は少なくとも１種の診断剤をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項１１】
医薬に使用する請求項１〜１０のいずれか一項に記載の固体経口剤形。
【請求項１２】
少なくとも１種の治療剤及び／又は少なくとも１種の診断剤の経口送達のための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の固体経口剤形の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はリポソームを含む固体経口剤形に関し、当該リポソームは、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）と、脂質及び脂肪酸から選択される化合物との複合体を含むとともに、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤に含まれる。本発明は、さらに、治療剤及び診断剤の経口送達のための当該固体経口剤形の使用に関する。
【０００２】
経口薬物送達は、特に長期的で繰り返しの投薬を必要とする慢性疾患の治療に対して、最も有利な適用方法であると考えられている。経口経路は、高い薬物安全性を提供し、簡便であるため患者の間で幅広く受け入れられている。さらに、経口薬物形態は無菌状態を必要としないため、生産、保存及び流通にかかる費用を下げ、第三世界の国々におけるヘルスケア改善に寄与し得る。販売されるすべての薬物製剤の９０％は経口用途向けであると推定される。
【背景技術】
【０００３】
高分子薬物、例えば医薬品市場に存在するペプチド、タンパク質、抗体の数は着実に増加している（図１）。しかしながら、これらの有望な薬剤の制限要因は、経口バイオアベイラビリティが低いことである。それらのサイズのため、抗体は特に低い経口バイオアベイラビリティを有する。特に、多くの高分子薬物は、経口投与後の胃内の酸性条件下における非常に低い安定性とともに、胃腸バリアを介した吸収性の低さを示す。したがって、そのような薬物は、皮下又は静脈内に投与する必要があり、それにより必要な医学的取り組みを増大させ、コストの増加、患者のコンプライアンスの低下、及び合併症のリスクの増加を引き起こす。
【０００４】
この問題を克服するために、固体脂質ナノ粒子、ナノエマルジョン又はマイクロエマルジョン、及びリポソームを含む、バイオアベイラビリティを改善するための様々なアプローチが過去数年間テストされてきた。しかしながら、従来のリポソーム製剤は、消化管（ＧＩＴ）におけるそれらの不安定性のため、あまり説得力のあるものではない。さらに、胃環境において顕著に増加した安定性を示す、テトラエーテル脂質を含むいくつかのリポソーム担体系が考案されている。しかしながら、テトラエーテル脂質は、古細菌から実験室規模で単離することしかできず、多大な努力及び非常に高いコストを必要とする。したがって、テトラエーテル脂質は非常に限られた量のみ入手可能である。さらに、各リポソーム製剤は、これまでのところ、貯蔵安定性が低く患者のコンプライアンスが悪い懸濁液としてのみ利用可能である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、本発明の基礎をなす技術的課題は、高分子薬物の改善された経口バイオアベイラビリティを提供する経口投与用の固体剤形を提供することである。上記技術的課題の解決策は、特許請求の範囲で特徴付けられるとともに本明細書に記載される実施形態によって達成される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
特に、第１の態様では、本発明は、リポソームを含む固体経口剤形であって、上記リポソームが、
（ａ）少なくとも１種類の細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）と、
（ｂ）脂質及び脂肪酸から選択される化合物と、の複合体を含み、
上記複合体がリポソームの脂質二重層の一部であり、
上記剤形が胃耐性の固体経口剤形である、固体経口剤形に関する。好ましくは、上記リポソームは、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤に含まれる。
【０００７】
本明細書で使用される場合、「固体経口剤形」という用語は、経口投与用の固体剤形、即ちカプセル、錠剤、顆粒又はペレットに関する。
【０００８】
「胃耐性」とは、被験体の胃の酸性環境において、剤形がその治療剤又は診断剤などの活性剤を実質的に放出しないことを意味する。腸溶性コーティングされた製剤は、胃耐性がある。
【０００９】
さらに、本明細書で使用される場合、「リポソーム」という用語は、脂質二重層で構成される人工的に作製された小胞を指す。リポソームは、親油性膜の内側に水溶液の領域をカプセル化するそれらの特有の性質により、薬剤の送達に使用することができる。親油性化合物は脂質二重層に溶解することができ、このようにしてリポソームは親油性化合物と親水性化合物の両方を担持することができる。作用部位へと分子を送達するために、脂質二重層は、細胞膜などの他の二重層と融合して、リポソームの内容物を送達することができる。薬剤の溶液中でリポソームを作製することにより、上記薬剤をリポソームの内腔に送達することができる。
【００１０】
本発明による組成物で使用されるリポソームは、特定の脂質に特に限定されない。特に、上記リポソームの生成に使用される脂質は、本技術分野で公知の任意の適切な脂質であってもよい。これらの脂質は、コレステロール又はその誘導体、リン脂質、リゾリン脂質、又はそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。したがって、好ましい実施形態では、上記リポソームは、コレステロール及びその誘導体、リン脂質、リゾリン脂質、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ又は複数の脂質を含む。本発明における好ましいコレステロール誘導体は、ステロイドと、基本的なステロイド分子構造を有する化合物である。好ましくは、上記リポソームはリン脂質を含み、このリン脂質は、合成、半合成又は天然のリン脂質、又はそれらの組み合わせであってもよい。一般に、適切な脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノサイト、ホスファチジルセリン、セファリン、ホスファチジルグリセロール、リゾリン脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。本発明の特定の実施形態では、リポソームは、卵ホスファチジルコリン（Ｅ−ＰＣ、レシチン）及びコレステロールを、好ましくは約８５〜９５ｍｏｌ％のＥ−ＰＣ、より好ましくは約８９ｍｏｌ％のＥ−ＰＣ、及び約５〜１０ｍｏｌ％のコレステロールの量で含む。一実施形態では、リポソームは、卵ホスファチジルコリン（Ｅ−ＰＣ、レシチン）及びコレステロールを、約８５〜９５ｍｏｌ％のＥ−ＰＣ、より好ましくは約８９ｍｏｌ％のＥ−ＰＣ、及び約５〜１０ｍｏｌ％のコレステロールの量で含み、ここで、相対量は、リポソームの二重層の各内容物に関する。
【００１１】
本発明に従って使用されるリポソーム、ならびに固体経口剤形自体は、リポソームの安定化又はリポソーム特性の変更のために使用することができる酵素阻害剤、浸透促進剤又は他の親油性もしくは親水性物質、又はそれらの組み合わせなどの、本技術分野で公知の任意のさらなる適切な薬剤をさらに含んでもよい。任意の安定化剤は、テトラエーテル脂質を含む。そのような親油性又は親水性物質は、特に限定されず、本技術分野で公知である。それらは、例えば、ビタミンＥ、脂肪酸、ワックス、モノ−、ジ−及びトリグリセリド、及びそれらの混合物を含む。さらに、酵素阻害剤、タイトジャンクション調節剤、キレート剤、又はそれらの混合物などの、封入された活性剤のバイオアベイラビリティを高める物質を添加することができる。
【００１２】
本発明によるリポソームに含まれる複合体は、少なくとも１種類の細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）と、脂質及び脂肪酸から選択される化合物との複合体である。ＣＰＰが結合される化合物は、好ましくは、上記に定義された適切な脂質、例えば、コレステロール及びその誘導体、リン脂質、リゾリン脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される脂質であり、ここで、リン脂質が好ましく、上記脂質は、修飾された及び／又は活性化された脂質であってもよい。この点で、例示的な化合物は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［４−（ｐ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−カルボキサミド］（ナトリウム塩）又は１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノール−アミン−Ｎ−［４−（ｐ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−カルボキサミド］（ナトリウム塩）である。好ましくは、ＣＰＰは、本技術分野で公知の二官能性ＰＥＧ−リンカーからなる群から選択されるリンカーなどのリンカーを介して上記化合物に結合される。ＣＰＰは、単量体であってもよく又は二量体化されてもよい。ここで、単量体ＣＰＰは、リンカーを介してリン脂質に共有結合されるか、二量体化ＣＰＰとすることができ、ここで、ホモ及びヘテロダイマーである可能性があり、リンカーを介してリン脂質に共有結合される。ＣＰＰの二量体化は、本技術分野で公知の任意の手段によって達成することができる。特定の実施形態では、ＣＰＰはトリペプチドＫＡＫによって二量体化される。しかしながら、例えば、マレイミド修飾頭部基を有するリン脂質などの修飾された及び／又は活性化された脂質を使用する場合、リンカーなしでも付着が可能である。
【００１３】
ＣＰＰの共有結合に適したリン脂質は、特定のリン脂質に特に限定されない。特に、ＣＰＰの共有結合に使用されるリン脂質は、本技術分野で公知の任意の適切なリン脂質であってもよく、このリン脂質は、合成、半合成又は天然リン脂質、又はそれらの組み合わせであってもよい。一般に、適切なリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノサイト、ホスファチジルセリン、セファリン、ホスファチジルグリセロール、リゾリン脂質、及びそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。この点で特定のリン脂質は、卵ホスファチジルコリン（Ｅ−ＰＣ、レシチン）である。さらに、適切なリン脂質は、上記リン脂質のＰＥＧ修飾型、例えば、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（２０００）マレイミド（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）−２０００］（アンモニウム塩））を含む。
【００１４】
ＣＰＰのリン脂質への共有結合に適したリンカーは、特に限定されず、本技術分野で公知である。例えば、それらは、一般に二機能性ＰＥＧリンカー、例えばＳＭ（ＰＥＧ）２４（ＰＥＧ化、長鎖ＳＭＣＣ架橋剤）を含む。適切な例示的なリンカーは、ＳＭＣＣ（スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）−リンカー、及び６−マレイミドヘキサン酸リンカーである。そのようなリンカー中のＰＥＧ部分の長さは、本発明の固体経口剤形に含まれるリポソームに組み込むことができる薬物のカプセル化効率に影響を与える。したがって、上記ＰＥＧ部分は、好ましくは、８〜５０個の個別のＰＥＧ単位の長さを有する。さらに、リンカーを介してＣＰＰをリン脂質に共有結合させる方法は特に限定されず、本技術分野で公知である。
【００１５】
好ましい実施形態では、本発明の固体経口剤形中に存在するリポソームは、古細菌、例えば好極限性古細菌のスルホロブス・アシドカルダリウスに由来する特定の脂質であるテトラエーテル脂質（ＴＥＬ）を含まない。
【００１６】
本発明によれば、固体経口剤形は、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤などの固体経口剤形内に、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤、及び／又は少なくとも１種のプロテアーゼ阻害剤、及び／又は少なくとも１種のリパーゼ阻害剤をさらに含むことができる。これらは、リポソームの内腔、（例えば、共有結合又は非共有結合的な付着により二重層の一部を形成する）リポソームの脂質二重層、又はリポソームの外側（例えば、剤形の他の部分）に存在する。上記少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤は、好ましくは、モノステアリン酸ソルビタン、トリパルミチン、パルミチン酸セチル、アルギン酸塩、オレイン酸エチル、Ｃ８トリグリセリド、Ｃ１０トリグリセリド、セルロース、二糖類、単糖類、オリゴ糖類、ステアリン酸マグネシウム、コーンスターチ、クエン酸、酒石酸、アミノ酸の酸塩、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらに、上記少なくとも１種のプロテアーゼ阻害剤は、好ましくは、アプロチニン、大豆トリプシン阻害剤、バシトラシン、グリココール酸ナトリウム、ベスタチン、ロイペプチン、シスタチン、カモスタットメシル酸塩、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。さらに、上記少なくとも１種のリパーゼ阻害剤は、好ましくは、オルリスタット、リプスタチン、キチン、キトサン、サポニン、フラボノイド配糖体、ポリフェノール、エベララクトンＡおよびＢ、エステラスチン、バリラクトン、パンクリシン、プロアントシアニジン、ビブララクトン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１７】
本発明に関連して使用できるＣＰＰは、特に限定されず、本技術分野で公知である。好ましくは、ＣＰＰは、正の全電荷を示すＣＰＰである。さらに、本発明によるＣＰＰは、直鎖又は環化ＣＰＰであってもよく、環化ＣＰＰが特に好ましい。「環化ペプチド」、「環状ペプチド」及び「シクロペプチド」という用語は、本明細書で同義的に使用される。
【００１８】
より好ましくは、ＣＰＰは、
−キイロショウジョウバエに由来するペネトラチン（配列番号１、ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫなど）、
−ＨＩＶ−１に由来するＴＡＴ（転写トランス活性化因子）−ペプチド（配列番号２、ＣＧＲＫＫＫＲＲＱＲＲＲＰＱＣなど）、
−人工ペプチドであるＭＡＰ（モデル両親媒性ペプチド）（配列番号３、ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＫＳＫＲＫＶなど）、
−人工ペプチドであるＲ９（配列番号４、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲなど）、
−マウス血管内皮カドヘリンに由来するＣＰＰであるｐＶＥＣ（配列番号５、ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ−ａｍｉｄｅなど）、
−ヒトニューロペプチドガラニンに由来するトランスポータン（配列番号６、ＧＷＴＬＮＳＡＧＹＬＬＧＫＩＮＬＫＡＬＡＡＬＡＫＩＳＩＬ−ａｍｉｄｅなど）、
−ＨＩＶに由来するＭＰＧ（配列番号７、ＧＡＬＦＬＧＦＬＧＡＡＧＳＴＭＧＡＷＳＱＰＳＫＲＫＶなど）、それらの組み合わせ、及びそれらの二量体からなる群から選択される。
【００１９】
一実施形態では、ＣＰＰは環化Ｒ９である。
【００２０】
ここで、上記ペプチドのすべては、直鎖又は環化形態で存在することができ、環化形態が好ましい。さらに、ＣＰＰは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、又はそれらの混合物で構成することができ、直鎖ＣＰＰについては、Ｄ−アミノ酸が好ましい。
【００２１】
直鎖ＣＰＰと対照すると、細胞透過性シクロペプチドは、ペプチダーゼによる加水分解の影響を受けにくく、即ち、より酵素的に安定していることが示される。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「環化ペプチド」という用語は、１つの環系のみを有するペプチドに関するものと解釈されるべきではなく、即ち、本発明は単環式ペプチドに限定されない。したがって、本発明は、さらに、２つ以上の環系が互いに共有結合しているシクロペプチドに関する。さらに、シクロペプチドは、環系の一部ではないアミノ酸を含んでもよい。したがって、ペプチド側鎖は、シクロペプチドに存在してもよい。好ましくは、シクロペプチドは単環式ペプチドであり、より好ましくはペプチド側鎖がない単環式ペプチドである。
【００２３】
一実施形態では、シクロペプチドは、正に帯電する。それにより、各リポソームの粘膜取り込みは強化される。例えば、上記に定義されたシクロペプチドは、主にそれぞれ約９．５及び１１の等電点を有するリジン及び／又はアルギニン部分を含んでもよい。それらの更なるアミノ基により、これらの２つのアミノ酸は、中性条件下でも弱塩基性条件下でも、正に帯電する。したがって、上記２つの特定のアミノ酸の部分を主に含むシクロペプチドは、中性及び弱塩基性条件下で正に帯電する。本明細書において、「主に含む」という用語は、シクロペプチド分子を形成するアミノ酸の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、特に好ましくは少なくとも８０％が、リジン及び／又はアルギニン部分であることを意味する。これにより、シクロペプチドが中性及び弱塩基性条件下で正電荷を有し、即ち７以上の等電点を有することが保証される。したがって、本発明の特定の実施形態では、本発明の固体経口剤形に含まれる上記リポソームのシクロペプチドは、７．０以上、好ましくは７．５以上、より好ましくは８．０以上、特に好ましくは８．５以上の等電点を有する。ここで、シクロペプチドの等電点は、シクロペプチドを形成するアミノ酸の等電点の算術平均である。
【００２４】
本発明の特定の実施形態では、シクロペプチドは、２〜１９、好ましくは３〜１６、より好ましくは４〜１４、特に好ましくは６〜１２のアルギニン部分、ならびにチロシン、スレオニン、セリン及びシステインからなる群から選択される１つの部分を含む。例えば、シクロペプチドは、環系に９個のアルギニン部分と１個のシステイン部分を含むことができ、環状システインＲ９誘導体（配列番号８、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＣなど）と呼ばれる。別の好ましい実施例は、Ｒ９Ｋ誘導体（配列番号９、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲＫ）と呼ばれる、環系に９つのアルギニン部分と１つのリジン部分を含むシクロペプチドである。
【００２５】
シクロペプチドを形成するアミノ酸は、タンパク質構成アミノ酸に限定されない。本明細書において、アミノ酸は、本技術分野で公知の任意のアミノ酸から選択されてもよく、各Ｄ−鏡像異性体、Ｌ−鏡像異性体、又はそれらの任意の混合物を含んでもよい。本明細書において、アミノ酸は、修飾された生分解性ポリマー鎖に共有結合的に付着するようにさらに機能化されてもよい。
【００２６】
本発明によれば、ＣＰＰ複合体はリポソームの脂質二重層の一部である。ここで、「リポソームの脂質二重層の一部である」という用語は、上記複合体がその脂質及び／又は脂肪酸部分によって上記脂質二重層に統合され、即ち、上記脂質及び／又は脂肪酸部分が脂質二重層に含まれることを示すことを意味し、一方、複合体のＣＰＰ部分はリポソームの表面に存在する。
【００２７】
好ましくは、本発明の固体経口剤形に含まれるリポソームは、総脂質及び／又は脂肪酸量に対して、０．０５〜５ｍｏｌ％又は０．０５〜３ｍｏｌ％、好ましくは０．０５〜２ｍｏｌ％、より好ましくは０．１〜１ｍｏｌ％の量で上記ＣＰＰを含む。単量体ＣＰＰの場合、好ましくは、これらは、総脂質及び／又は脂肪酸量に対して、０．０５〜２ｍｏｌ％、好ましくは０．１〜１ｍｏｌ％の量で含まれる。二量体化ＣＰＰの場合、好ましくは、これらは、総脂質及び／又は脂肪酸量に対して、０．０５〜０．５ｍｏｌ％、好ましくは０．１ｍｏｌ％の量で含まれる。ＣＰＰの割合が高い場合、リポソームの多分散性指数はＣＰＰ量の増加と共に増加することが分かっている。ＣＰＰの量が高すぎると、高い反発力を引き起こすＣＰＰの高い正電荷に起因してリポソームが形成されない。
【００２８】
リポソームの作製に使用される脂質及び／又は脂肪酸は、ペプチド配列、抗体、受容体リガンド、界面活性剤及び／又はそれらの組み合わせなどの標的探索構造に付着させることもできる。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明の固体経口剤形に含まれるリポソームは凍結乾燥される。リポソームの凍結乾燥の手段は、特に限定されず、本技術分野で公知である。有利には、リポソームは、例えば、凍結乾燥保護剤として３００〜５００ｍＭのスクロースを使用して凍結乾燥することができる。上記に定義された凍結乾燥は、本発明の固体経口剤形の長期保存を可能にする。
【００３０】
好ましい実施形態では、本発明の固体経口剤形に含まれるリポソームは、水性媒質中に希釈後、動的光散乱によって測定される高くても３５０ｎｍのＺ平均、及び高くても０．３の多分散性指数（ＰＤＩ）を示し、Ｚ平均１００ｎｍ〜２００ｎｍと、多分散性指数０．１〜０．３、好ましくは約０．２とが、特に好ましい。
【００３１】
リポソームの生成方法は特に限定されず、本技術分野で公知である。それらの方法として、例えば、高圧均質化、押し出し、エタノール注入及び二重非対称遠心分離（ＤＡＣ）が含まれる。
【００３２】
好ましい実施形態では、本発明の固体経口剤形は、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤などの剤形内に少なくとも１種の治療剤及び／又は少なくとも１種の診断剤をさらに含むことができる。
【００３３】
各治療剤としては、特に限定されず、経口送達が意義を有し得る任意の薬剤が挙げられる。治療剤としては、例えば、ペプチド薬物（例えばバンコマイシン、酢酸グラチラマー、ミルクルデックスＢ、オクトレオチド、あらゆる種類のインスリン及びリラグルチド、並びにエキセナチド、リキシセナチド、アルビグルチド、デュラグルチド、タスポグルチド及びセマグルチド等の他のＧＬＰ（グルカゴン様ペプチド）−アナログ）、及びタンパク質又は抗体（例えばエタネルセプト、ペグフィルグラスチム、アダリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、エポエチンアルファ、トラスツズマブ、ラニビズマブ、ベータ−インターフェロン、オマリズマブ）等の巨大分子が挙げられる。他の例として、ヒト成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン、成長ホルモン放出ペプチド、インターフェロン、コロニー刺激因子、インターロイキン、マクロファージ活性化因子、マクロファージペプチド、Ｂ細胞因子、Ｔ細胞因子、プロテインＡ、アレルギー阻害剤、細胞壊死糖タンパク質、免疫毒素、リンホトキシン、腫瘍壊死因子、腫瘍抑制因子、転移増殖因子、アルファ−１抗トリプシン、アルブミン及びそのフラグメントポリペプチド、アポリポタンパク質−Ｅ、エリスロポイエチン、血液凝固第ＶＩＩ因子、血液凝固第ＶＩＩＩ因子、血液凝固第ＩＸ因子、プラスミノゲン活性化因子、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プロテインＣ、Ｃ−反応性タンパク質、レニン阻害剤、コラゲナーゼ阻害剤、スーパーオキシドジスムターゼ、血小板由来増殖因子、表皮増殖因子、骨形成増殖因子、骨刺激タンパク質、カルシトニン、インスリン、アトリオペプチン、軟骨誘導因子、結合組織活性化因子、卵胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、神経成長因子、副甲状腺ホルモン、リラキシン、セクレチン、ソマトメジン、インスリン様増殖因子、副腎皮質ホルモン、グルカゴン、コレシストキニン、膵臓ポリペプチド、ガストリン放出ペプチド、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、甲状腺刺激ホルモン、様々なウイルス、細菌又は毒素に対するモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、ウイルス由来ワクチン抗原、オクトレオチド、シクロスポリン、リファンピシン、ロピナビル、リトナビル、バンコマイシン、テラバンシン、オリタバンシン、ダルババンシン、ビスホスホネート、イトラコナゾール、ダナゾール、パクリタキセル、シクロスポリン、ナプロキセン、カプサイシン、硫酸アルブテロール、硫酸テルブタリン、塩酸ジフェンヒドラミン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸ロラタジン、塩酸フェキソフェナジン、フェニルブタゾン、ニフェジピン、カルバマゼピン、ナプロキセン、シクロスポリン、ベタメタゾン、ダナゾール、デキサメタゾン、プレドニゾン、ヒドロコルチゾン、１７ベータ−ストラジオール、ケトコナゾール、メフェナム酸、ベクロメタゾン、アルプラゾラム、ミダゾラム、ミコナゾール、イブプロフェン、ケトプロフェン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾン、フェニトイン、テストステロン、フルニソリド、ジフルニサール、ブデソニド、フルチカゾン、インスリン、グルカゴン様ペプチド、Ｃ−ペプチド、エリスロポイエチン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン、リュープロリド、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンベータ−Ｉａ、サルグラモスチム、アルデスロイキン、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−ｎ３、アルファ−プロテイナーゼ阻害剤、エチドロネート、ナファレリン、絨毛膜性生殖腺刺激ホルモン、プロスタグランジンＥ２、エポプロステノール、アカルボース、メトホルミン、デスモプレシン、シクロデキストリン、抗生物質、抗真菌薬、ステロイド、抗癌剤、鎮痛剤、抗炎症剤、駆虫剤、抗不整脈薬、ペニシリン、抗凝血薬、抗鬱薬、抗糖尿病薬、抗てんかん薬、抗ヒスタミン薬、血圧降下薬、抗ムスカリン剤、抗マイコバクテリア剤、抗腫瘍剤、ＣＮＳ活性剤、免疫抑制剤、抗甲状腺薬、抗ウイルス剤、抗不安鎮静剤、催眠薬、神経遮断薬、収斂薬、ベータ−アドレナリン受容体遮断薬、血液製剤及び代用血液、心臓変力薬、造影剤、副腎皮質ステロイド、鎮咳薬、去痰剤、粘液溶解薬、利尿薬、ドーパミン作動薬、抗パーキンソン病薬、止血薬、免疫学的薬剤、脂質調節剤、筋弛緩薬、副交感神経作用薬、甲状腺カルシトニン、プロスタグランジン、放射性医薬品、性ホルモン、ステロイド、抗アレルギー剤、賦活薬、食思減退薬、交感神経作用薬、甲状腺薬、血管拡張剤、キサンチン、ヘパリン、治療用オリゴヌクレオチド、ソマトスタチン及びそれらのアナログ、並びにそれらの薬理学的に許容可能な有機塩及び無機塩、又は金属錯体からなる群から選択される薬学的活性剤が挙げられる。
【００３４】
さらに、各診断剤は特に限定されず、経口送達が意義を有し得る任意の薬剤を含む。
【００３５】
上記薬剤は、例えば、上記薬剤が親水性であるか、又はリポソーム膜へ統合される場合、例えば、上記薬剤が親油性である場合、リポソームに封入された本発明の固体経口剤形、即ち上記リポソームの内腔に存在してもよい。ここで、治療剤及び／又は診断剤のカプセル化は、上記薬剤の親水性及びリポソーム作製方法に依存する。
【００３６】
好ましい実施形態では、本発明による固体経口剤形中の治療剤及び／又は診断剤の含有量は、固体経口剤形に関して０より大きく最大５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは５〜２０％（ｗ／ｗ）である。
【００３７】
本発明で使用するための腸溶コーティング、すなわち胃液に耐性のあるコーティングは、特に限定されず、本技術分野で公知である。例示的なコーティングは、水  ３％（ｗ／ｗ）、トリアセチン  １．２５％（ｗ／ｗ）、イソプロパノール  ８２．７５％（ｗ／ｗ）、及びオイドラギットＬ１００  １３％（ｗ／ｗ）を含む。ここで、オイドラギットＬ１００は、酸とエステルの比が１：１のメタクリル酸とアクリル酸エチルの陰イオン共重合体である。
【００３８】
本発明の固体経口剤形は、医薬に使用することができる。本発明の剤形は、治療剤の定期的な投与を必要とする慢性疾患の治療に特に有用である。好ましくは、上記固体経口剤形は、敗血症、糖尿病、リウマチ、先端巨大症、あらゆる種類の肝炎、あらゆる種類の癌、又は貧血の治療に使用される。さらに、剤形は、自己免疫疾患、免疫抑制剤の投与を必要とする疾患、感染性疾患、成長ホルモンの投与を必要とする疾患、酵素欠損症、又は神経変性疾患（アルツハイマー病、パーキンソン病）の治療に使用されてもよい。
【００３９】
関連する態様では、本発明は、少なくとも１種の治療剤及び／又は少なくとも１種の診断剤の経口送達のための本発明の固体経口剤形の使用に関する。本発明は、さらに、
−経口送達により所望の治療効果を達成するのに十分な量の本発明の固体経口剤形を被験体に投与すること
を含む、それを必要とする被験体を治療する方法を含む。
【００４０】
被験体は、ヒトなどの哺乳動物であり得る。
【００４１】
ここで、「経口送達」という用語は、上記剤形の経口投与による１つ又は複数の薬剤の送達に関する。
【００４２】
この態様では、本発明の他の態様に対して与えられる全ての関連する限定及び定義は同じように適用される。特に、固体経口剤形、治療剤、及び診断剤は上記に定義された通りである。
【００４３】
さらに関連する態様では、本発明は、本発明の固体経口剤形を上記被験体に投与する、好ましくは経口投与するステップを含む、少なくとも１種の治療剤及び／又は少なくとも１種の診断剤を被験体に送達する方法に関する。
【００４４】
この態様では、本発明の他の態様に対して与えられる全ての関連する限定及び定義は同じように適用される。特に、固体経口剤形、治療剤、及び診断剤は上記に定義された通りである。
【００４５】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、明示された値の±１０％の修飾語であることを意味する。例として、「約５％」という用語は、４．５％〜５．５％の範囲を包含することが意図される。
【００４６】
「含んでいる／含む」、「からなっている／からなる」、及び「から本質的になっている／から本質的になる」という用語は、本明細書で置き換え可能に使用され、すなわち、上記用語は各々、他の２つの用語のうちの１つと明確に交換可能である。
【００４７】
本発明は、有利には、とりわけ、経口投与用のＣＰＰ結合リポソームを含む固体経口剤形を提供し、上記リポソームは、例えば、腸溶性コーティングされたカプセル又は腸溶性コーティングされた錠剤に含まれる。ＣＰＰは腸粘膜でのリポソームの吸収を顕著に増加させるが、胃耐性の剤形は胃の通過を保証する（図２）。したがって、上記リポソームに含まれる薬物の経口バイオアベイラビリティの顕著な増加が達成される。これにより、患者のコンプライアンスを向上させる広範囲の高分子薬物の経口投与は可能になる。さらに、リポソームの凍結乾燥は、各剤形の貯蔵安定性を向上させる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
図面は以下のとおり示す。
【００４９】
【図１】従来技術において分子量が５００Ｄａ未満の薬物のみを経口投与できることを示す図である。分子量がより高い薬物の大部分、例えばペプチド及び生物学的製剤は、非経口投与する必要がある。
【図２】ＣＰＰでコーティングされたリポソームが経口投与されることを示す図である。したがって、リポソームは凍結乾燥され、固体剤形に移される。胃の通過は、剤形の腸溶コーティングによって確保される。さらに、腸粘膜でのリポソームの吸収は、ＣＰＰによって顕著に増加される。
【図３】遊離バンコマイシンとは対照的に、環状Ｒ９  ＣＰＰでコーティングされたリポソームのウッシングチャンバー研究を示す図である。
【図４】ウィスターラットの環状Ｒ９  ＣＰＰを含むリポソームに組み込まれた遊離バンコマイシンとバンコマイシンの経口適用後のバンコマイシンの血液レベルを示す図である。
【図５】０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰペネトラチンを含むリポソームのサイズとＰＤＩを示す図である。
【図６】０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰ  ＭＡＰを含むリポソームのサイズとＰＤＩを示す図である。
【図７】０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰペネトラチンを含むリポソームのゼータ電位を示す図である。
【図８】０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰ  ＭＡＰを含むリポソームのゼータ電位を示す図である。
【図９】好ましい例示的な複合体の合成を示す図である。
【図１０】好ましい例示的な複合体の合成を示す図である。
【図１１】複合体の作製に使用された、修飾されたリン脂質の構造を示す図である。
【図１２】動物実験で使用された複合体及び修飾されたリン脂質の例を示す図である。
【図１３】さらなる複合体及び修飾されたリン脂質の例を示す図である。
【図１４】ＰＤＩと異なるリポソームのサイズを示す図である。
【図１５】凍結乾燥後のバンコマイシンをロードしたリポソームのＰＤＩ及びサイズを示す図である。
【図１６】凍結乾燥後のリラグルチドをロードしたリポソームのＰＤＩ及びサイズを示す図である。
【図１７】バンコマイシンとリラグルチドのカプセル化効率を示す図である。
【図１８】実施例７に従って作製されたリポソーム製剤のゼータ電位を示す図である。
【図１９】イヌにおけるアダリムマブの静脈内及び経口のＡＵＣ値の比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、これらに限定されない。
【００５１】
１．リポソームの作製
【００５２】
ＳｐｅｅｄＭｉｘｅｒ（商標）を使用した二重非対称遠心分離によるフィルム法によってリポソームを作製した。クロロホルム／メタノール９：１（ｖ／ｖ）を溶媒として使用した。有機溶媒を窒素流により蒸発させた。得られた脂質フィルムを真空チャンバーで１時間乾燥させた。その後、２０ｍｇのガラスビーズを添加した。リポソームは、特殊なバイアルホルダーを使用して二重非対称遠心分離機で３０００ｒｐｍで高速混合することにより作製された。次の表に示すように、３回実行し、異なる量のＰＢＳを添加した。
【００５３】
【表１】
2020515648.tif 000003
【００５４】
２．複合体の作製
【００５５】
ａ．図３及び４に示される実施例の複合体
【００５６】
図９は、好ましい例示的な複合体、特に図３及び４に示される実施例で使用される複合体の合成を示す。この実施例で使用されたリンカーは、それぞれＳＭ（ＰＥＧ）８、ＰＥＧ化された長鎖ＳＭＣＣ架橋剤及びスクシンイミジル（［Ｎ−マレイミドプロピオンアミド］−エチレングリコール）エステルである。Ｒ９−ＣＰＰは、直鎖又は環状ノナアルギニンペプチドを表す。環状の場合、それはリシン（Ｒ９Ｋ）によって環化され、このリシンの側鎖アミノ機能で結合される。
【００５７】
環状ＣＰＰを二官能性ＰＥＧ−リンカーに結合するために、最初のステップとして、環状ＣＰＰを更なるリジンによってリンカーに結合した（１．）。この反応では、過剰のＣＰＰを使用した。第２のステップで、この中間生成物をチオールで修飾されたリン脂質に結合させた（２．）。修飾されたリン脂質は、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオエタノール、ナトリウム塩である。
【００５８】
ｂ．図５〜８に示される実施例の複合体
【００５９】
図１０は、好ましい例示的な複合体、特に図５〜８に示される実施例で使用される複合体の合成を示す。
【００６０】
システインで修飾されたペネトラチンは、図１１に示す頭部基で修飾されたリン脂質に結合された。その化学名は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）−２０００］、アンモニウム塩である。
【００６１】
ｃ．動物実験で使用される複合体
【００６２】
図１２は、動物研究用のリポソームで使用された複合体と、複合体の作製に使用された修飾されたリン脂質を示す。
【００６３】
ｄ．さらなる複合体
【００６４】
環状Ｒ９Ｃを含むさらなる複合体が作製された。作製された複合体と、それを作製するために使用された修飾された脂質を図１３に示す。
【００６５】
３．血液レベルの特定
【００６６】
薬物の経口投与後、ウィスターラットを用いてバンコマイシンの血液レベルを評価した。この動物試験では、図９に示すように結合した細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）を含むリポソームの経口バイオアベイラビリティを、経口適用後の遊離バンコマイシンと比較した。標準リポソームは対照として機能し、レシチンとコレステロールで構成された。バンコマイシンの血液レベルを、イムノアッセイによって特定した。経口適用の６時間前に、ラットの食物を取り除いた。経口適用のために、イソフルランの使用によりラットを麻酔し、経口適用は強制投与により行われた。経口投与の１時間後、ラットを屠殺し、バンコマイシンの血液レベルを特定した。これらの結果を図４に示す。
【００６７】
動物試験では、遊離ペプチドと標準リポソームとを比較すると、ＣＰＰ−リポソームを使用することにより、バンコマイシンの経口アベイラビリティが顕著に増加することを示している（図４）。
【００６８】
４．ウッシングチャンバー試験
【００６９】
ウッシングチャンバー試験では、図９に示される環状Ｒ９誘導体を１ｍｏｌ％含むリポソーム製剤を使用し、遊離ペプチド（バンコマイシン）と比較した。上記実施例１で説明したように、リポソームをリン酸緩衝液ｐＨ＝６．８で作製した。この実験では、屠殺したラット（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）の小腸をＮａＣｌで洗浄し、その後にウッシングチャンバー（０．６４ｃｍ２の表面、Ｆｉｒｍａ  ＮａｖｉＣｙｔｅ、ＭＡ１６６−００ＸＸ）に固定した。その後、チャンバーをインキュベーション培地（クレブス−リンガー緩衝液）で満たし、リポソーム製剤及び遊離ペプチド中の等量のバンコマイシンを添加した。試験を５時間以上実行した。特定された時点で、サンプルをアクセプターチャンバーから採取し、クレブス−リンガー緩衝液で置き換えた。サンプル中のバンコマイシンの累積量を特定した。これらの結果を図３に示す。
【００７０】
ウッシングチャンバーの研究では、遊離ペプチドとは対照的に、ＣＰＰリポソームの粘膜バリアを超えるバンコマイシンの輸送が大幅に増加することを示した。したがって、ＣＰＰリポソームは粘膜バリアを通過する物質の輸送を強力に強化すると考えられる（図３）。
【００７１】
５．粒子サイズとＰＤＩ
【００７２】
Ｍａｌｖｅｒｎ（商標）（英国ウースタシャーのＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．）製Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳを使用して、全てのリポソーム製剤の粒径とＰＤＩを室温で特定した。自動モードを使用して、ｐＨ７．４の１０ｍＭのリン酸緩衝液で０．０７６ｍｇ／ｍｌの脂質濃度に希釈した後、サイズとＰＤＩを測定した。
【００７３】
図５は０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰペネトラチンを含むリポソームのサイズとＰＤＩを示す。リポソームのサイズはほぼ一定であるが、ＰＤＩは、より多くの量のペネトラチンの使用により増加を示す。
【００７４】
図６は０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰ  ＭＡＰを含むリポソームのサイズとＰＤＩを示す。リポソームに組み込まれたＣＰＰの量は、リポソームのサイズとＰＤＩに影響を与えなかった。
【００７５】
６．ゼータ電位
【００７６】
Ｍａｌｖｅｒｎ（商標）（英国ウースタシャーのＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．）製Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳを使用して、全てのリポソーム製剤のゼータ電位を室温で特定した。ｐＨ７．４の５０ｍＭのリン酸緩衝液により０．９５ｍｇ／ｍｌの脂質濃度に希釈した後にゼータ電位を特定した。Ｍａｌｖｅｒｎ（商標）（英国ウースタシャーのＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．）製のＺｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳの自動モードのデフォルト設定は、測定回数＝３、実行時間＝１０秒、実行回数＝１０、平衡化時間＝６０秒、溶媒の屈折率１．３３０、ポリスチレンキュベットの屈折率１．５９０、粘度＝０．８８７２ｍＰａ・ｓ、温度＝２５℃、誘電率＝７８．５Ｆ／ｍ、後方散乱モード（１７３°）、自動電圧選択、スモルコフスキー方程式である。
【００７７】
図７は０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰペネトラチンを含むリポソームのゼータ電位を比較している。ＣＰＰの量が多いほど、ＣＰＰの正電荷によるゼータ電位が高くなった。
【００７８】
図８は０．１〜１ｍｏｌ％のＣＰＰ  ＭＡＰを含むリポソームのゼータ電位を示す。ＣＰＰの量が多いほど、ゼータ電位が高くなった。一般に、−５〜１０ｍＶの範囲のゼータ電位が望ましく、−３〜７ｍＶが好ましい。可能であれば、ゼータ電位は正であるべきである。しかしながら、ゼータ電位が高すぎると、リポソームが安定しない。
【００７９】
７．動物試験用の複合体の作製（犬のアダリムマブ）
【００８０】
環化Ｒ９のペプチド合成は、０．８９ｍｍｏｌ／ｇの容量を有するクロロ−（２’−クロロ）トリチルポリスチレン樹脂で行った。３当量のＤＩＰＥＡを備えたＤＣＭ中の１ｇ樹脂当たりの０．８ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨで、ローディングを２時間行った。過剰な２−クロロトリチル官能基をＭｅＯＨ−ローディングにより、１７：２：１のＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＰＥＡの混合物でクエンチした。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨを結合する９つの連続したステップでは、過剰な７等量のアミノ酸、６．６等量のＨＢＴＵ及び４等量のＤＩＰＥＡを使用した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンで処理することにより、Ｆｍｏｃ基を取り除いた。ステップ間では、ＤＭＦで樹脂を厳密に洗浄した。
【００８１】
側鎖保護ペプチドの切断は、７：２：１のＤＣＭ／トリフルオロエタノール／酢酸の混合物によって達成された。切断溶液を、ロータリーエバポレーターでトルエンと３回共蒸発させた。側鎖保護ペプチドを３ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＦに溶解した。４当量のＰｙＡＯＰ及びＤＩＰＥＡを用いて、室温で環化を一晩行った。水との反応を停止した後、溶液を開始体積の５０分の１から１００分の１まで濃縮し、側鎖保護シクロペプチドを冷たいｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルに注いで沈殿させた。
【００８２】
沈殿した保護シクロペプチドを乾燥させ、続いてＴＦＡ中の５％ジチオエタノールの混合物で脱保護した。ジエチルエーテルで沈殿させた後、シクロペプチドを精製した。
【００８３】
次いで、得られたペプチドを使用して、前述のように複合体及びリポソームを作製した。リポソームを、それぞれアダリムマブとリラグルチドでロードした。薬物を含まない対照リポソームも同様に作製した。
【００８４】
リポソームのサイズとＰＤＩを図１４に示す。
【００８５】
リポソームを凍結乾燥した。凍結乾燥後のバンコマイシンをロードしたリポソームのＰＤＩ及びサイズを図１５に示す。凍結乾燥後のバンコマイシンをロードしたリポソームのＰＤＩ及びサイズを図１６に示す。凍結乾燥は、サイズ又はＰＤＩに対して顕著な影響を与えなかった。
【００８６】
これらのリポソーム製剤のゼータ電位を図１８に示す。ＣＰＰ−複合体の高い正電荷のため、ｃｙｃＲ９−ＣＰＰ−リポソームは、対照リポソームとは対照的に、正のゼータ電位を示している。
【００８７】
８．カプセル化効率
【００８８】
５分以内（流量２ｍｌ／分、ＵＶ吸光度λ＝２１４ｎｍ）で、アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ（溶離液Ｂ）に対して水中の０．１％ＴＦＡ（溶離液Ａ）の直線勾配を適用し、Ｃ１８カラム（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈｅ（登録商標）Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ、１００ｍｍ−３ｍｍ）を使用する逆相ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズ）によって全てのペプチドモデル物質のカプセル化効率を特定した。スピード混合プロセスの後、リポソームを１００μｌずつ２つの部分に分割した。１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００を５０μｌ添加することによってリポソームを破壊し、ＨＰＬＣによってモデル物質の曲線下面積（ＡＵＣ）を特定することにより、部分１を使用して１００％の値を計算して得た。部分２をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５ゲル濾過クロマトグラフィー（ＮＡＰ（商標）−５カラム）によって精製し、部分１と同様に定量した。カプセル化効率Ｅ（％）は、次の式を使用して計算した。
【００８９】
Ｅ（％）＝（［ＡＵＣ］モデル物質の部分２／［ＡＵＣ］モデル物質の部分１）×１００％
【００９０】
これにより、［ＡＵＣ］モデル物質の部分２は、精製されたリポソーム画分中のモデル物質の濃度であり、［ＡＵＣ］モデル物質の部分１は、リポソーム懸濁液中のモデル物質の濃度である。
【００９１】
図１７は、両方のモデル物質についての結果を比較している。
【００９２】
９．動物研究
【００９３】
静脈内投与後のアダリムマブと比較した経口アダリムマブ（ヒュミラ（商標））の単回投与量ＰＫ研究。動物として、２匹のビーグル犬を使用した。アダリムマブの経口投与量は、前述の１ｍｏｌ％のｃｙｃＲ９複合体を含有するカプセル化リポソーム１５ｍｇであった。リポソームを凍結乾燥し、その後に腸溶性カプセルに充填した。静脈内投与量は３ｍｇであった。経口投与のための血液サンプリング時点は、０（投与前）、０：１５、０：３０、１：００、２：００、４：００、８：００、２４：００、４８：００、９６：００ｈｐ．ａであった。静脈内投与のための血液サンプリング時点は、０（投与前）、０：１５、０：３０、１：００、２：００、４：００、８：００、２４：００、４８：００、９６：００ｈｐ．ａであった。全ての血液サンプルをＥＬＩＳＡ測定（ＩＤＫモニター（登録商標）アダリムマブ薬物レベルＥＬＩＳＡ、免疫診断ＡＧ、Ｂｅｎｓｈｅｉｍ）によって分析した。
【００９４】
結果を図１９に示す。結果として、ＡＵＣ値を比較することによって、経口投与後のアダリムマブの３．５５％バイオアベイラビリティが得られた。これらの結果は、高分子剤の経口送達のためのこのリポソーム製剤の膨大な可能性を実証している。本発明者らの知る限り、抗体の経口投与のためのこのような高いバイオアベイラビリティは、以前に報告されていない。
【図１】
2020515648.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
2020515648.tif 000018
【図１６】
2020515648.tif 000019
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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