(57)【要約】本発明は、セリポリア・ラセラタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉａ  ｌａｃｅｒａｔａ）の菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治療用薬学組成物、及び改善用化粧料組成物に関する。本発明のセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物が、マウス筋原細胞であるＣ２Ｃ１２細胞の細胞増殖率を増加させることを確認した。また、前記菌糸体培養液又はその抽出物が、ヒト角質細胞であるＨａＣａＴ細胞の傷回復を促進させることを確認した。したがって、本発明のセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物は皮膚創傷の治療に有用に使用することができる。
2020525405.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セリポリア・ラセラタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉａ  ｌａｃｅｒａｔａ）の菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む、創傷治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記菌糸体培養液が、１５℃〜３０℃の温度で３日以上培養されたものである、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記菌糸体培養液が、１５℃〜３０℃の温度で９日以上培養されたものである、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項４】
前記菌糸体培養液が、１５℃〜３０℃の温度で１１日以上培養されたものである、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項５】
前記抽出物が、前記セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を蒸留水、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、エーテル、クロロホルム及び酢酸エチルからなる群から選択される溶媒またはこれらの混合溶媒で抽出したものである、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項６】
前記菌糸体培養液又はその抽出物が、薬学組成物の総重量に対して０．１〜８０重量％含まれる、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項７】
前記菌糸体培養液が、セリポリア・ラセラタの菌糸体をブドウ糖を含む培地で培養したものである、請求項１に記載の創傷治療用薬学組成物。
【請求項８】
セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む、創傷治癒改善用化粧料組成物。
【請求項９】
皮膚創傷を治療するためのセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途。
【請求項１０】
皮膚創傷治療用薬剤を製造するためのセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途。
【請求項１１】
セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を、これを必要とする対象に投与するステップを含む、皮膚創傷治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セリポリア・ラセラタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉａ  ｌａｃｅｒａｔａ）の菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治療用薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、人体の一次防御膜であって、温度変化、湿度変化、紫外線、有害物質などの外部環境から体内器官を保護する。皮膚組織が損傷したものが創傷であり、創傷が生じたときに適切に治療しないと、細菌感染などで体内の臓器に致命的な損傷を起こすこともある。創傷の発生時に、損傷した皮膚の部位ができるだけ早く元の皮膚構造と同様に復元されるように治療することが重要である。
【０００３】
創傷の治療は、止血（ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ）及び炎症期（ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）の１段階と、増殖期（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）の２段階と、成熟期（ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）の３段階とからなり、各段階は重畳して連続的に進行する。実質的に線維芽細胞が創傷部位へ移動して回復する段階は増殖期である。増殖期には、新生血管形成、コラーゲンの蓄積、肉芽組織（ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ  ｔｉｓｓｕｅ）形成、上皮化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）、創傷の収縮などが起こる。また、増殖期には、創傷癒合と膠原繊維（ｃｏｌｌａｇｅｎｏｕｓ  ｆｉｂｅｒ）の再配列のための初期段階として、線維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ）が創傷部位に出現するようになる。したがって、実質的に細胞組織が創傷部位へ移動して回復する段階である増殖期を活性化させる物質を見つけようとする試みがなされている。
【０００４】
一方、セリポリア・ラセラタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉａ  ｌａｃｅｒａｔａ）は、白色腐朽菌の一種であって、生態系でセルロース、ヘミセルロース、その他の多糖類及びグリセロールなどの炭素源を用いるためにリグニン分解という共同代謝（ｃｏ−ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）を行うものと知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者は、皮膚創傷をより効率的に治療できる物質について研究した結果、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液が細胞の増殖を活性化させ、創傷の回復を促進させることを確認することによって本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の一態様は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治療用薬学組成物を提供する。
【０００７】
本発明の他の態様は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治癒改善用化粧料組成物を提供する。
【０００８】
本発明の更に他の態様は、皮膚創傷を治療するための、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途を提供する。
【０００９】
本発明の更に他の態様は、皮膚創傷治療用薬剤を製造するための、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途を提供する。
【００１０】
本発明の更に他の態様は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を、これを必要とする対象に投与するステップを含む皮膚創傷を治療する方法を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物が、マウス筋原細胞であるＣ２Ｃ１２細胞の細胞増殖率を増加させることを確認した。また、前記菌糸体培養液又はその抽出物が、ヒト角質細胞であるＨａＣａＴ細胞の傷回復を促進させることを確認した。したがって、本発明のセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物は、皮膚創傷の治療に有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】傷をつけたＨＴ−２９細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、培養液の濃度及び培養時間による傷の大きさを撮影した写真である。
【図２】傷をつけたＨＴ−２９細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、培養液の濃度及び培養時間による傷の大きさを示したグラフである。
【図３】Ｃ２Ｃ１２細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、培養液の濃度による細胞増殖率を示したグラフである。
【図４】傷をつけたＨａＣａＴ細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、培養液の濃度及び培養時間による傷の大きさを撮影した写真である。
【図５】ＨａＣａＴ細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、培養液の濃度による細胞増殖率を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の一態様は、セリポリア・ラセラタ（Ｃｅｒｉｐｏｒｉａ  ｌａｃｅｒａｔａ）の菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治療用薬学組成物を提供する。
【００１４】
前記菌糸体培養液は、セリポリア・ラセラタを継代培養を通じて育成した母菌を培養したものであり得る。前記菌糸体培養液は、本培養（ｍａｉｎ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）、または本培養の前に前培養（ｐｒｅ−ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を行ったものであり得る。前記菌糸体は、培養条件、例えば、培養温度及び時間に応じて、その生成速度及び培養終了時点が変わり得る。前記培養終了時点は、特定の時点として定められてはいないが、１５℃〜３０℃の温度で培養したとき、培養開始日から１１日目、１３日目、２０日目、または２５日目であってもよい。
【００１５】
前記菌糸体培養液は、１５℃〜３０℃の温度で３日以上培養されたものであってもよい。具体的には、前記菌糸体培養液は、１５℃〜３０℃の温度で９日以上または１１日以上培養されたものであってもよい。
【００１６】
また、前記菌糸体培養液は、２０℃〜２５℃の温度で３日以上培養されたものであってもよい。具体的には、前記菌糸体培養液は、２０℃〜２５℃の温度で９日以上または１１日以上培養されたものであってもよい。
【００１７】
また、前記菌糸体培養液は、１５℃〜３０℃の温度で３日〜２５日、９日〜１３日、または９日〜１１日間培養されたものであってもよい。具体的には、前記菌糸体培養液は、２０℃〜２５℃の温度で３日〜２５日、９日〜１３日、または９日〜１１日間培養されたものであってもよい。
【００１８】
本発明の一実施例において、前記菌糸体培養液は、２０℃〜２５℃の温度で９日または１１日間菌糸体を培養して得られ得る。前記培養は液体培養であってもよい。
【００１９】
前記セリポリア・ラセラタ菌糸体の培養のための培地は、ブドウ糖を含む培地であってもよい。また、前記培地は、追加的に澱粉、大豆粉、消泡剤及び蒸留水などを含むことができる。前記培地の成分及び成分の含量は、前記菌糸体の十分な成長のために適宜変更されてもよい。本発明の一実施例において、前記培養のための培地は、培地１Ｌ当たり、ブドウ糖１２．５ｇ、澱粉２．５ｇ、大豆粉５ｇ及び消泡剤０．１２５ｇを含むことができる。
【００２０】
本発明の一実施例において、前記セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液は、乾燥させて粉末化することができる。前記乾燥は、有効物質の消滅を防止するために、４０℃以下の温度または３０℃以下の温度で４８〜９６時間行うことができる。前記乾燥は、蒸発温度を相対的に高く設定する真空乾燥機よりも真空凍結乾燥機を使用することが、有効物質の含量の変化が最小化されるので好ましい。
【００２１】
前記創傷治療用薬学組成物は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の抽出物を有効成分として含むことができる。前記抽出物は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を溶媒で抽出することによって製造することができる。また、前記抽出物は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を乾燥させて粉末化したものを溶媒で抽出することによって製造することができる。
【００２２】
本発明の一実施例において、前記溶媒は、蒸留水、炭素数１〜４の低級アルコール、アセトン、エーテル、クロロホルム及び酢酸エチルからなる群から選択される溶媒またはこれらの混合溶媒であってもよい。具体的には、前記溶媒は、水、メタノール、エタノール、ブタノール、アセトン及び酢酸エチルからなる群から選択される溶媒またはこれらの混合溶媒であってもよく、好ましくは酢酸エチルであってもよい。
【００２３】
本発明者らは、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の創傷治療効果を確認するために、ヒトまたはマウス細胞株を用いて実験を行った。
【００２４】
具体的には、細胞の中央に傷をつけたＨＴ−２９細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、１２時間、４８時間及び７２時間培養して、菌糸体培養液の濃度及び培養時間による傷の大きさの変化を観察した。その結果、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で傷の大きさが有意に減少したことを確認した（図１及び図２）。
【００２５】
また、マウス筋原細胞株であるＣ２Ｃ１２細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、１２時間、４８時間及び７２時間培養し、各培養時間による細胞増殖率を測定した。その結果、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で細胞増殖率が増加したことを確認した（図３）。
【００２６】
さらに、細胞の中央に傷をつけたＨａＣａＴ細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、１２時間、４８時間及び７２時間培養し、菌糸体培養液の濃度及び培養時間による傷の大きさの変化を観察した。その結果、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で傷の大きさが有意に減少したことを確認した（図４）。
【００２７】
また、ＨａＣａＴ細胞にセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した後、１２時間、４８時間及び７２時間培養し、培養時間による細胞増殖率を測定した。その結果、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で細胞増殖率が増加したことを確認した（図５）。
【００２８】
これを通じて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を含む創傷治療用薬学組成物は、細胞の増殖率を増加させ、創傷の回復を促進させることを確認した。したがって、本発明の薬学組成物は創傷の治療に有用に使用することができる。
【００２９】
前記菌糸体培養液又はその抽出物は、創傷治療用薬学組成物の総重量に対して０．１〜８０重量％、または０．１〜５０重量％含まれてもよい。前記菌糸体培養液又はその培養液の抽出物の有効含量は、薬学組成物の使用方法及び目的に応じて適宜調節することができる。
【００３０】
前記薬学的組成物は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液、前記菌糸体培養液の乾燥粉末、または前記菌糸体培養液の抽出物を有効成分として含むことができる。
【００３１】
前記薬学組成物は、通常使用される適切な担体、賦形剤及び希釈剤をさらに含むことができる。
【００３２】
前記薬学組成物は、それぞれ、通常の方法によって剤形化して使用することができる。好適な剤形としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、糖衣錠、硬質又は軟質のカプセル剤、溶液剤、懸濁剤又は乳化液剤、注射剤、坐剤などがあるが、これに限定されるものではない。
【００３３】
前記薬学組成物は、薬学的に不活性である有機または無機担体を用いて好適な剤形に製造することができる。すなわち、剤形が錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠及び硬質カプセル剤である場合、ラクトース、スクロース、澱粉又はその誘導体、タルク、カルシウムカーボネート、ゼラチン、ステアリン酸又はその塩を含むことができる。また、剤形が軟質カプセル剤である場合、植物性油、ワックス、脂肪、半固体及び液体のポリオールを含むことができる。さらに、剤形が溶液またはシロップ形態である場合、水、ポリオール、グリセロール、及び／又は植物性油などを含むことができる。
【００３４】
前記薬学組成物は、前記の担体以外にも、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、溶解剤、甘味剤、着色剤、浸透圧調節剤、酸化防止剤などをさらに含むことができる。
【００３５】
前記薬学組成物の投与方法は、剤形に応じて容易に選択することができ、経口または非経口投与されてもよい。投与量は、患者の年齢、性別、体重、病症の程度、投与経路に応じて変わり得るが、一般的に、有効成分である前記菌糸体培養液を基準として５〜１，０００ｍｇ／ｋｇ体重の量、具体的には１０〜６００ｍｇ／ｋｇ体重の量を１日１回〜３回に分けて投与することができる。しかし、前記投与量は、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３６】
前記薬学組成物の投与形態は、創傷の治療を必要とする部位に局所的塗布または皮内注射であってもよいが、これに制限されるものではない。
【００３７】
本発明の他の態様は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を有効成分として含む創傷治癒改善用化粧料組成物を提供する。
【００３８】
前記化粧料組成物は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液、前記菌糸体培養液の乾燥粉末、または前記菌糸体培養液の抽出物を有効成分として含むことができる。
【００３９】
前記化粧料組成物は、当業界で通常製造される化粧料の剤形に製剤化され得る。前記化粧料組成物は、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、粉末ファンデーション、乳濁液ファンデーション、ワックスファンデーション及びスプレーなどに剤形化されてもよいが、これに制限されるものではない。より詳しくは、柔軟化粧水、栄養化粧水、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、アイクリーム、パック、スプレーまたはパウダーの剤形に製剤化されてもよい。
【００４０】
本発明の更に他の態様は、皮膚創傷を治療するための、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途を提供する。
【００４１】
本発明の更に他の態様は、皮膚創傷治療用薬剤を製造するための、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物の用途を提供する。
【００４２】
本発明の更に他の態様は、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液又はその抽出物を、これを必要とする対象に投与するステップを含む皮膚創傷を治療する方法を提供する。
【００４３】
前記対象は哺乳類動物、より具体的にはヒトであってもよい。
【００４４】
前記セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液、前記菌糸体培養液の乾燥粉末、または前記菌糸体培養液の抽出物は、前述した通りである。
【００４５】
以下、本発明を下記の実施例によってより詳細に説明する。ただし、下記の実施例は本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらのみに限定されるものではない。
【００４６】
製造例１．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の製造
１．１．前培養（ｐｒｅ−ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）培地の準備
前培養は、本培養の培地量の０．１％の割合で準備し、前培養時に使用した培地はＰＤＢ（Ｐｏｔａｔｏ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ｂｒｏｔｈ，２５４９２０，Ｄｉｆｃｏ，ＵＳＡ）である。前記ＰＤＢ培地は、製造社の指示に従って、１Ｌの三角フラスコに２４ｇ／Ｌの濃度で蒸留水に溶解させ、溶解された培地のｐＨは４．５±０．１であった。三角フラスコの口をストッパーで密封した後、アルミホイルでさらに密封した。その後、１２１℃の温度で１５分間、高温湿式滅菌し、滅菌が完了した前培養培地は、クリーンベンチ（Ｃｌｅａｎ  ｂｅｎｃｈ，ＨＢ−４０２Ｖ，ＨＡＮＢＡＥＫ，Ｋｏｒｅａ）内で６時間放置して室温まで温度を下げた。
【００４７】
１．２．前培養
セリポリア・ラセラタを継代培養を通じて育成した母菌を−８０℃の温度で冷凍保管し、保管中の菌株をＰＤＡ（ｐｏｔａｔｏ  ｄｅｘｔｒｏｓｅ  ａｇａｒ）培地（８７プラスチック培養具；Ｄｉｆｃｏ，Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）で２回〜３回継代培養した菌株（以下、“ＰＤＡ培養菌株”という）を４℃の温度の冷蔵庫に保管して使用した。
【００４８】
クリーンベンチ内で滅菌されたミキサーにＰＤＡ培養菌株１個と前記製造例１．１の前培養培地２００ｍｌを入れ、８０秒間混合した後、前記製造例１．１の前培養培地４００ｍｌを追加して混合した。その後、混合液を新しい三角フラスコに入れ、ストッパーで密封した後に、２５℃の温度、１５０ｒｐｍの条件にセットされた振とう培養器（ＨＢ−２０１ＳＬ，ＨＡＮＢＡＥＫ，Ｋｏｒｅａ）に入れた後、９日間培養した。
【００４９】
１．３．本培養（ｍａｉｎ−ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ）培地の準備
下記の表１に記載された原料と蒸留水を培地溶解槽に入れ、インペラー（ｉｍｐｅｌｌｅｒ）を１５分間稼働して培地を十分に溶解させた。溶解された培地に、総量が６００Ｌとなり、各原料の濃度が下記の表１の濃度となるように蒸留水を添加した。その後、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｆｅｒｍｅｎｔｏｒ（Ａｅｒｏｂｉｃ  ｔｙｐｅ，Ｎｏｎ−ｓｔｉｒｒｅｄ）を用いて、１２１℃の温度で６０±５分間培地を滅菌した。
【００５０】
【表１】
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【００５１】
１．４．本培養
前記製造例１．３の滅菌された培地を、冷却水を用いて２２±１℃の温度まで冷却させ、陰圧を防止するためにフィルタリングされた空気を注入し続けることで、外部汚染を防止した。接種口の周辺に火炎を起こして外部粒子（ｐａｒｔｉｃｌｅ）の流入を防止しながら、フラスコを火炎口の内側に入れてシード（ｓｅｅｄ）を接種した。接種完了後、空気流入量を０．０５〜１ｖｖｍ（ｖｏｌｕｍｅ／培地  ｖｏｌｕｍｅ・ｍｉｎｕｔｅ）に調節しながら約１１日間培養して、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を製造した。
【００５２】
１．５．セリポリア・ラセラタ培養液粉末の製造
前記製造例１．４のセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を、真空凍結乾燥機を用いて２５℃の温度で７２時間真空凍結乾燥させて粉末化することによって、セリポリア・ラセラタ菌糸体培養液粉末を製造した。
【００５３】
製造例２．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の抽出物
前記製造例１．４で製造されたセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液６００ｍｌに酢酸エチル９００ｍｌを添加し、混合した後、静置した。その後、静置物中の酢酸エチル層を分離した後、真空回転濃縮機（ｒｏｔａｒｙ  ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて３５℃の温度で減圧濃縮した。前記減圧濃縮物を真空凍結乾燥機を用いて２５℃の温度で７２時間真空凍結乾燥させて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の酢酸エチル抽出物を収得した。
【００５４】
実験例１．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の処理によるＨＴ−２９細胞の傷回復能の評価
韓国細胞株銀行から分譲されたヒト直腸腺癌細胞株（ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ，ＨＴ−２９）を、１０％ＦＢＳ（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）及び１％Ｐ／Ｓ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）を含むＲＰＭＩ  １６４０培地で４８時間培養した。その後、前記細胞を、細胞培養用１２−ウェルプレートにウェル当たり３×１０５（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種して培養した。その後、細胞が付着されると、マイクロピペットのチップ（ｔｉｐ）で細胞が培養された部分の中央を引っ掻いて傷をつけた後、０時間に該当する写真を撮影した。その後、前記製造例１．５で製造したセリポリア・ラセラタ菌糸体培養液粉末をＤＭＳＯに溶解して濃度別（０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ及び１，０００μｇ／ｍｌ）に処理し、ＣＯ２培養器で１２時間、４８時間及び７２時間培養して、各時間による傷の大きさの変化を観察した。
【００５５】
図１及び図２に示されたように、対照群（０μｇ／ｍｌ）に比べて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で傷の大きさが減少した。特に、５００μｇ／ｍｌのセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した実験群で、傷の大きさが時間の経過に伴って最も多く減少した。
【００５６】
実験例２．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の処理によるＣ２Ｃ１２細胞の増殖率の評価
韓国細胞株銀行から分譲されたマウス筋原細胞株（ｍｏｕｓｅ  ｍｙｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ，Ｃ２Ｃ１２）を、１０％ＦＢＳ及び１％Ｐ／Ｓを含むＤＭＥＭ培地で４８時間培養した。その後、前記細胞を、細胞培養用２４−ウェルプレートにウェル当たり１．５×１０５（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種して培養した。その後、細胞が付着されると、前記製造例１．５で製造したセリポリア・ラセラタ菌糸体培養液粉末をＤＭＳＯに溶解して濃度別（０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ及び１，０００μｇ／ｍｌ）に処理し、ＣＯ２培養器内で２４時間培養した。前記培養したＣ２Ｃ１２細胞の培養液を９６−ウェルプレートにそれぞれ１００μlずつ分注した後、ＣＣＫ−８分析キット（Ｄｏｊｉｎｄｏ、米国）を用いて４５０ｎｍの波長で吸光度を測定することによって、各群の細胞増殖率を観察した。
【００５７】
図３に示されたように、対照群（０μｇ／ｍｌ）に比べて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で細胞増殖率が増加した。特に、５００μｇ／ｍｌのセリポリア・ラセラタ菌糸体培養液処理群で細胞増殖率が最も高く示された。
【００５８】
実験例３．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の処理によるＨａＣａＴ細胞の傷回復能の評価
ＣＬＳ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｓｅｒｖｉｃｅ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から分譲されたヒト角質細胞（ｈｕｍａｎ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ，ＨａＣａＴ）を、１０％ＦＢＳ及び１％Ｐ／Ｓを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で４８時間培養した。その後、前記細胞を、細胞培養用の１２−ウェルプレートにウェル当たり３×１０５（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種して培養した。その後、細胞が付着されると、マイクロピペットのチップで細胞が培養された部分の中央を引っ掻いて傷をつけた後、０時間に該当する写真を撮影した。その後、前記製造例１．５で製造したセリポリア・ラセラタ菌糸体培養液粉末をＤＭＳＯに溶解して濃度別（０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ及び１，０００μｇ／ｍｌ）に処理し、ＣＯ２培養器で１２時間、４８時間及び７２時間培養して、各時間による傷の大きさの変化を観察した。
【００５９】
図４に示されたように、対照群（０μｇ／ｍｌ）に比べて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で傷の大きさが減少した。特に、１，０００μｇ／ｍｌのセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した実験群で、傷の大きさが時間の経過に伴って最も多く減少した。
【００６０】
実験例４．セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の処理によるＨａＣａＴ細胞の増殖率の評価
韓国細胞株銀行から分譲されたＨａＣａＴ細胞株を、１０％ＦＢＳ及び１％Ｐ／Ｓを含むＤＭＥＭ培地で４８時間培養した。その後、前記細胞を、細胞培養用の２４−ウェルプレートにウェル当たり１．５×１０５（ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）で接種して培養した。その後、細胞が付着されると、前記製造例１．５で製造したセリポリア・ラセラタ菌糸体培養液粉末をＤＭＳＯに溶解して濃度別（０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ及び１，０００μｇ／ｍｌ）に処理し、ＣＯ２培養器内で２４時間培養した。前記培養したＨａＣａＴ細胞の培養液を９６−ウェルプレートにそれぞれ１００μlずつ分注した後、ＣＣＫ−８分析キットを用いて４５０ｎｍの波長で吸光度を測定することによって、各群の細胞増殖率を観察した。
【００６１】
図５に示されたように、対照群（０μｇ／ｍｌ）に比べて、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液を処理した群で細胞増殖率が増加し、特に、１，０００μｇ／ｍｌのセリポリア・ラセラタの菌糸体培養液の処理群で細胞増殖率が最も高く示された。
【００６２】
前記実験例１．〜実験例４．の結果から確認されるように、セリポリア・ラセラタの菌糸体培養液は、細胞増殖率を増加させ、創傷の回復を促進させることを確認した。前記菌糸体培養液の抽出物も同じ効果を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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