(57)【要約】  本開示は、細胞と抗因子Ｂ抗体の有効量とを接触させることを含む、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の表面上での補体活性の誘発での使用のための、因子Ｂｂに特異的に結合する抗体（「抗因子Ｂ抗体」）であって、該細胞と該抗因子Ｂ抗体の有効量とを接触させることを含み、該抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、前記抗体。
【請求項２】
抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する、請求項１に記載の使用のための抗体。
【請求項３】
抗因子Ｂ抗体は、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｉｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉ）血清補体活性の喪失を誘発する、（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害沈着を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する、請求項１または２に記載の使用のための抗体。
【請求項４】
抗因子Ｂ抗体は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域−１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む、抗因子Ｂ抗体；
（ｂ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む、抗因子Ｂ抗体；
（ｃ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む、抗因子Ｂ抗体；
（ｄ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む、抗因子Ｂ抗体；
（ｅ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む、抗因子Ｂ抗体；
ならびに
（ｆ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ抗体であって、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む、抗因子Ｂ抗体
からなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用のための抗体。
【請求項５】
抗因子Ｂ抗体は、細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための抗体。
【請求項６】
疾患または状態は、がん、感染、または自己免疫疾患を含む、請求項５に記載の使用のための抗体。
【請求項７】
（ｉ）因子Ｂｂに特異的に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する抗原結合ドメイン（「抗因子Ｂ結合ドメイン」）と、（ｉｉ）組織特異的であるかまたは細胞特異的である第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗体。
【請求項８】
抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する、請求項７に記載の二重特異性抗体。
【請求項９】
抗因子Ｂ結合ドメインは、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）補体活性を誘発する、（ｉｖ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖｉ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害複合体沈着を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する、請求項７または８に記載の二重特異性抗体。
【請求項１０】
抗因子Ｂ結合ドメインは、ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、請求項７〜９のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
【請求項１１】
抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
【請求項１２】
抗体の抗因子Ｂ結合ドメインは、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン；
（ｂ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン；
（ｃ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン；
（ｄ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン；
（ｅ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン；
ならびに
（ｆ）重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含む抗因子Ｂ結合ドメインであって、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む、抗因子Ｂ結合ドメイン
からなる群から選択される特性の内の１つまたはそれ以上を有する、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
【請求項１３】
（ｉ）請求項７〜１２のいずれか１項に記載の二重特異性結合ドメイン、（ｉｉ）組織特異的であるかまたは細胞特異的である第２の抗原結合ドメイン、および（ｉｉｉ）第３の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体。
【請求項１４】
請求項７〜１２のいずれか１項に記載の二重特異性抗体または請求項１３に記載の多重特異性抗体をコードする核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項１５】
細胞の表面上での補体活性の誘発での使用のための、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の二重特異性抗体または請求項１３に記載の多重特異性抗体であって、抗因子Ｂ結合ドメインはＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、前記二重特異性抗体または前記多重特異性抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は概して、補体関連障害の治療学の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
補体系は自然免疫系の一部である。補体系の主な役割は、抗体および食細胞の能力を「補完」して生物から有害な病原体を除去することである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
補体系は３つの別々の上流の活性化経路を含み、全ては共通の最終経路に収束する。これらの経路の内の下記の２つは、特異的で明確な機序により誘発される：古典経路（ＣＰ）は、抗体が抗原に結合する際に関与し、レクチン経路（ＬＰ）は、病原体の表面上の炭水化物残基により活性化される。代替経路（ＡＰ）は、「ＡＰティックオーバー（ＡＰ  ｔｉｃｋ−ｏｖｅｒ）」と称される基底レベルで継続的に活性であるという点で独特であり、この代替経路（ＡＰ）の活性は、ポジティブフィードバック増幅ループ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｆｅｅｄｂａｃｋ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｌｏｏｐ）を介して、異物性表面および損傷した細胞に基づく様々なシグナルにより大幅に増加する。ＡＰ増幅ループの主な駆動源はＡＰ転換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）である。この酵素は、チモーゲン因子Ｂが切断されて分裂生成物ｆＢｂが生成される際に形成され、ｆＢｂは、表面に結合したＣ３ｂと急速に結合して活性酵素Ｃ３ｂＢｂが形成される。次いで、Ｃ３ｂＢｂは、中心Ｃ３タンパク質の追加の分子を切断し続け、これにより、オプソニン（Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ）、アナフィラトキシン（Ｃ３ａおよびＣ５ａ）、ならびに終末溶解性複合体（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｌｙｔｉｃ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＭＡＣ；Ｃ５ｂ−９）が生成される。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本開示のある特定の態様は、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、因子Ｂｂに特異的に結合する抗体（「抗因子Ｂ抗体」）の有効量とを接触させることを含み、この抗因子Ｂ抗体はＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、方法を対象とする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する。
【０００５】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｉｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉ）血清補体活性の喪失を誘発する、（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害沈着（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｔｔａｃｋ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。
【０００６】
いくつかの実施形態では、補体活性は、補体により媒介される細胞死である。いくつかの実施形態では、補体活性は代替補体経路である。
【０００７】
いくつかの実施形態では、細胞はインビボ細胞である。
【０００８】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体への結合に関して、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と競合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂ上の、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と同一のエピトープに特異的に結合する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域−１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は二重特異性抗体または多重特異性抗体である。
【００１３】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、がん、感染、または自己免疫疾患を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体を、非経口投与するか、静脈内投与するか、皮下投与するか、皮内投与するか、経皮投与するか、筋肉内投与するか、経口投与するか、眼内投与するか、髄腔内投与するか、腹腔内投与するか、鼻腔内投与するか、口腔投与するか、舌下投与するか、直腸投与するか、経膣投与するか、または肺経路を介して投与する。
【００１４】
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）因子Ｂｂに特異的に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する抗原結合ドメイン（「抗因子Ｂ結合ドメイン」）と、（ｉｉ）組織特異的であるかまたは細胞特異的である第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗体を対象とする。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する。
【００１５】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）補体活性を誘発する、（ｉｖ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖｉ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害複合体沈着を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。
【００１７】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、Ｃ３ｂＢｂ複合体への結合に関して、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と競合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｂｂ上の、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と同一のエピトープに特異的に結合する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
【００２１】
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）本明細書で開示されている二重特異性抗体、および（ｉｉ）第３の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を対象とする。
【００２２】
本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されている抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体をコードするポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを対象とする。本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示されているポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含むベクターまたはベクターのセットを対象とする。
【００２３】
本開示のいくつかの態様は、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量とを接触させることを含む方法を対象とする。いくつかの実施形態では、この補体活性は、補体により媒介される細胞死である。
【００２４】
本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象において細胞死を誘発する方法であって、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量を投与することを含む方法を対象とする。
【００２５】
本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象において細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する方法であって、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量を投与することを含む方法を対象とする。
【００２６】
実施形態
Ｅ１．細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、細胞と、因子Ｂｂに特異的に結合する抗体（「抗因子Ｂ抗体」）の有効量とを接触させることを含み、抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、前記方法。
【００２７】
Ｅ２．抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する、Ｅ１に記載の方法。
【００２８】
Ｅ３．抗因子Ｂ抗体は、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｉｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉ）血清補体活性の喪失を誘発する、（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害沈着を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する、Ｅ１またはＥ２に記載の方法。
【００２９】
Ｅ４．抗因子Ｂ抗体は、ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、Ｅ１〜Ｅ３のいずれか１つに記載の方法。
【００３０】
Ｅ５．抗因子Ｂ抗体は、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、Ｅ１〜Ｅ４のいずれか１つに記載の方法。
【００３１】
Ｅ６．補体活性は、補体により媒介される細胞死である、Ｅ１〜Ｅ５のいずれか１つに記載の方法。
【００３２】
Ｅ７．補体活性は代替補体経路である、Ｅ１〜Ｅ６のいずれか１つに記載の方法。
【００３３】
Ｅ８．細胞はインビボ細胞である、Ｅ１〜Ｅ７のいずれか１つに記載の方法。
【００３４】
Ｅ９．抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体への結合に関して、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と競合する、Ｅ１〜Ｅ８のいずれか１つに記載の方法。
【００３５】
Ｅ１０．抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂ上の、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と同一のエピトープに特異的に結合する、Ｅ１〜Ｅ９のいずれか１つに記載の方法。
【００３６】
Ｅ１１．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域−１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む、Ｅ１〜Ｅ１０のいずれか１つに記載の方法。
【００３７】
Ｅ１２．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む、Ｅ１〜Ｅ１１のいずれか１つに記載の方法。
【００３８】
Ｅ１３．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む、Ｅ１〜Ｅ１２のいずれか１つに記載の方法。
【００３９】
Ｅ１４．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む、Ｅ１〜Ｅ１３のいずれか１つに記載の方法。
【００４０】
Ｅ１５．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む、Ｅ１〜Ｅ１４のいずれか１つに記載の方法。
【００４１】
Ｅ１６．抗因子Ｂ抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか１つに記載の方法。
【００４２】
Ｅ１７．抗因子Ｂ抗体のＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、Ｅ１１〜Ｅ１６のいずれか１つに記載の方法。
【００４３】
Ｅ１８．抗因子Ｂ抗体のＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、Ｅ１１〜Ｅ１７のいずれか１つに記載の方法。
【００４４】
Ｅ１９．抗因子Ｂ抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、Ｅ１〜Ｅ１８のいずれか１つに記載の方法。
【００４５】
Ｅ２０．抗因子Ｂ抗体は二重特異性抗体または多重特異性抗体である、Ｅ１〜Ｅ１９のいずれか１つに記載の方法。
【００４６】
Ｅ２１．抗因子Ｂ抗体は、細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する、Ｅ１〜Ｅ２０のいずれか１つに記載の方法。
【００４７】
Ｅ２２．疾患または状態は、がん、感染、または自己免疫疾患を含む、Ｅ２１に記載の方法。
【００４８】
Ｅ２３．がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病のような血液悪性腫瘍；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ２２に記載の方法。
【００４９】
Ｅ２４．自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病（ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ）、関節リウマチ、ループス、セリアック病、シェーグレン症候群、多発性筋痛、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、アジソン病、加齢黄斑変性、脱毛症、自己免疫性肝炎（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎；Ｃ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性皮膚疾患、自己免疫性甲状腺疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、寒冷凝集素症、皮膚筋炎、１型糖尿病、グレーブス病、グッドパスチャー症候群、橋本病、副甲状腺機能低下症、下垂体機能低下症、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患（例えば、クローン病；潰瘍性大腸炎）、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、多発性筋炎、乾癬、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、ぶどう膜炎、ウェゲナー肉芽腫症および多発性／皮膚筋炎（ｐｏｌｙ／ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、加齢性自己免疫疾患、加齢黄斑変性、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、アナフィラキシー、嗜銀顆粒性認知症、関節炎（例えば関節リウマチ）、喘息、アテローム性動脈硬化症、非典型溶血性尿毒症症候群、自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、バラケル・サイモンズ症候群、ベーチェット病、英国型アミロイド血管症、水疱性類天疱瘡、バージャー病、Ｃｌｑ腎症、がん、劇症型抗リン脂質抗体症候群、脳アミロイド血管症、寒冷凝集素症、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、クローン病、クリオグロブリン血症性血管炎、ボクサー認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、円板状エリテマトーデス、ダウン症候群、巣状分節性糸球体硬化症、形式的思考障害、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ  ｗｉｔｈ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １７）、前頭側頭葉変性症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、溶血性尿毒症症候群、遺伝性血管性浮腫、低フォスファターゼ症（ｈｙｐｏｐｈｏｓｐｈａｓｔａｓｉｓ）、特発性肺炎症候群、免疫複合体病、封入体筋炎、炎症性疾患、虚血／再灌流傷害、軽度認知障害、免疫性血小板減少性紫斑病（ｉｍｍｕｎｏｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ）（ＩＴＰ）、Ａ型モリブデン補酵素欠損症（ＭｏＣＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）Ｉ、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）ＩＩ（デンスデポジット病）、膜性腎炎、多発脳梗塞性認知症、ループス（例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、糸球体腎炎、川崎病、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、多系統萎縮症、重症筋無力症、心筋梗塞、筋緊張性ジストロフィー、視神経脊髄炎、Ｃ型ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患（ｎｏｎ−Ｇｕａｍａｎｉａｎ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ｔａｎｇｌｅｓ）、パーキンソン病、痴呆を伴うパーキンソン病、発作性夜間ヘモグロビン尿症、尋常性天疱瘡、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、多発性筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症（ｐｒｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄ  ａｎｇｉｏｐａｔｈ）、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、乾癬、敗血症、志賀毒素大腸菌（Ｅ  ｃｏｌｉ）（ＳＴＥＣ）−ＨｕＳ、脊髄性筋萎縮症、脳卒中、亜急性硬化性全脳炎、もつれのみの痴呆（Ｔａｎｇｌｅ  ｏｎｌｙ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、移植拒絶反応、血管炎（例えばＡＮＣＡ関連血管炎）、ウェーグナー肉芽腫症、鎌状赤血球症、クリオグロブリン血症、混合型クリオグロブリン血症、本態性混合型クリオグロブリン血症、ＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、ＩＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、腎炎、薬物誘発性血小板減少症、ループス腎炎、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、遅発性溶血性輸血反応、低補体血症性蕁麻疹様血管炎症候群、偽水晶体性水疱性角膜症、血小板不応状態、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ２２に記載の方法。
【００５０】
Ｅ２５．感染は、細菌感染（例えばナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）もしくはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ））、ウイルス感染（例えばＨＩＶ）、真菌感染、寄生生物感染、またはこれらの任意の組合せを含む、Ｅ２２に記載の方法。
【００５１】
Ｅ２６．抗因子Ｂ抗体を、非経口投与するか、静脈内投与するか、皮下投与するか、皮内投与するか、経皮投与するか、筋肉内投与するか、経口投与するか、眼内投与するか、髄腔内投与するか、腹腔内投与するか、鼻腔内投与するか、頬側投与するか、舌下投与するか、直腸投与するか、経膣投与するか、または肺経路を介して投与する、Ｅ１〜Ｅ２５のいずれか１つに記載の方法。
【００５２】
Ｅ２７．細胞は腫瘍細胞または病原体である、Ｅ１〜Ｅ２６のいずれか１つに記載の方法。
【００５３】
Ｅ２８．細胞は天然細胞である、Ｅ１〜Ｅ２７のいずれか１つ記載の方法。
【００５４】
Ｅ２９．（ｉ）因子Ｂｂに特異的に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する抗原結合ドメイン（「抗因子Ｂ結合ドメイン」）と、（ｉｉ）組織特異的であるかまたは細胞特異的である第２の抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗体。
【００５５】
Ｅ３０．抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂに特異的に結合する、Ｅ２９に記載の二重特異性抗体。
【００５６】
Ｅ３１．抗因子Ｂ結合ドメインは、（ｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する、（ｉｉ）Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する、（ｉｉｉ）補体活性を誘発する、（ｉｖ）血清中でＣ３切断を誘発する、（ｖ）Ｃ３の血清濃度を低下させる、（ｖｉ）細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する；（ｖｉｉ）細胞表面上で細胞膜傷害複合体沈着を誘発する、および（ｖｉｉｉ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたはそれ以上の特性を有する、Ｅ２９またはＥ３０に記載の二重特異性抗体。
【００５７】
Ｅ３２．抗因子Ｂ結合ドメインは、ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、Ｅ２９〜Ｅ３１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００５８】
Ｅ３３．抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする、Ｅ２９〜Ｅ３２のいずれか１つ記載の二重特異性抗体。
【００５９】
Ｅ３４．抗因子Ｂ結合ドメインは、Ｃ３ｂＢｂ複合体への結合に関して、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と競合する、Ｅ２９〜Ｅ３３のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６０】
Ｅ３５．抗因子Ｂ結合ドメインは、因子Ｂｂ上の、配列番号７を有する重鎖可変領域および配列番号８を有する軽鎖可変領域を含む参照抗体と同一のエピトープに特異的に結合する、Ｅ２９〜Ｅ３４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６１】
Ｅ３６．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む、Ｅ２９〜Ｅ３５のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６２】
Ｅ３７．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む、Ｅ２９〜Ｅ３６のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６３】
Ｅ３８．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む、Ｅ２９〜Ｅ３７のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６４】
Ｅ３９．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む、Ｅ２９〜Ｅ３８のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６５】
Ｅ４０．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む、Ｅ２９〜Ｅ３９のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６６】
Ｅ４１．抗因子Ｂ結合ドメインは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３とを含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む、Ｅ２９〜Ｅ４０のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６７】
Ｅ４２．抗因子Ｂ結合ドメインのＶＨは、配列番号７と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、Ｅ３６〜Ｅ４１のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６８】
Ｅ４３．抗因子Ｂ結合ドメインのＶＬは、配列番号８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、Ｅ３６〜Ｅ４２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００６９】
Ｅ４４．キメラであるかまたはヒト化されているＥ２９〜Ｅ４２のいずれか１つに記載の二重特異性抗体。
【００７０】
Ｅ４５．（ｉ）Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体、および（ｉｉ）第３の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体。
【００７１】
Ｅ４６．Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体またはＥ４４に記載の多重特異性抗体を含む組成物。
【００７２】
Ｅ４７．Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体またはＥ４５に記載の多重特異性抗体をコードする核酸を含むポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット。
【００７３】
Ｅ４８．Ｅ４７のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを含むベクターまたはベクターのセット。
【００７４】
Ｅ４９．ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットはプロモーターに作動可能に連結されている、Ｅ４８に記載のベクターまたはベクターのセット。
【００７５】
Ｅ５０．Ｅ４５に記載のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドのセットまたはＥ４８もしくはＥ４９に記載のベクターもしくはベクターのセットを含む宿主細胞。
【００７６】
Ｅ５１．二重特異性抗体または多重特異性抗体を産生する方法であって、適切な条件下でＥ５０に記載の宿主細胞を培養することを含む前記方法。
【００７７】
Ｅ５２．細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体またはＥ４５に記載の多重特異性抗体の有効量とを接触させることを含む前記方法。
【００７８】
Ｅ５３．補体活性は、補体により媒介される細胞死である、Ｅ５２に記載の方法。
【００７９】
Ｅ５４．補体活性は代替補体経路である、Ｅ５２またはＥ５３に記載の方法。
【００８０】
Ｅ５５．細胞はインビボ細胞である、Ｅ５２〜Ｅ５４のいずれか１つに記載の方法。
【００８１】
Ｅ５６．それを必要とする対象において細胞死を誘発する方法であって、Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体またはＥ４５に記載の多重特異性抗体の有効量を投与することを含む前記方法。
【００８２】
Ｅ５７．それを必要とする対象において細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する方法であって、Ｅ２９〜Ｅ４４のいずれか１つに記載の二重特異性抗体またはＥ４５に記載の多重特異性抗体の有効量を投与することを含む前記方法。
【００８３】
Ｅ５８．疾患または状態は、がん、および感染、または自己免疫疾患を含むＥ５７に記載の方法。
【００８４】
Ｅ５９．がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病のような血液悪性腫瘍；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ５８に記載の方法。
【００８５】
Ｅ６０．感染は、細菌感染（例えばナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）もしくはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ））、ウイルス感染（例えばＨＩＶ）、真菌感染、寄生生物感染、またはこれらの任意の組合せを含む、Ｅ５９に記載の方法。
【００８６】
Ｅ６１．自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病（ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ）、関節リウマチ、ループス、セリアック病、シェーグレン症候群、多発性筋痛、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、アジソン病、加齢黄斑変性、脱毛症、自己免疫性肝炎（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎；Ｃ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性皮膚疾患、自己免疫性甲状腺疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、寒冷凝集素症、皮膚筋炎、１型糖尿病（ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ）、グレーブス病、グッドパスチャー症候群、橋本病、副甲状腺機能低下症、下垂体機能低下症、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患（例えば、クローン病；潰瘍性大腸炎）、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、多発性筋炎、乾癬、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、ぶどう膜炎、ウェゲナー肉芽腫症および多発性／皮膚筋炎、加齢性自己免疫疾患、加齢黄斑変性、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、アナフィラキシー、嗜銀顆粒性認知症、関節炎（例えば関節リウマチ）、喘息、アテローム性動脈硬化症、非典型溶血性尿毒症症候群、自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、バラケル・サイモンズ症候群、ベーチェット病、英国型アミロイド血管症、水疱性類天疱瘡、バージャー病、Ｃｌｑ腎症、がん、劇症型抗リン脂質抗体症候群、脳アミロイド血管症、寒冷凝集素症、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、クローン病、クリオグロブリン血症性血管炎、ボクサー認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、円板状エリテマトーデス、ダウン症候群、巣状分節性糸球体硬化症、形式的思考障害、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、溶血性尿毒症症候群、遺伝性血管性浮腫、低フォスファターゼ症、特発性肺炎症候群、免疫複合体病、封入体筋炎、炎症性疾患、虚血／再灌流傷害、軽度認知障害、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、Ａ型モリブデン補酵素欠損症（ＭｏＣＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）Ｉ、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）ＩＩ（デンスデポジット病）、膜性腎炎、多発脳梗塞性認知症、ループス（例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、糸球体腎炎、川崎病、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、多系統萎縮症、重症筋無力症、心筋梗塞、筋緊張性ジストロフィー、視神経脊髄炎、Ｃ型ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、パーキンソン病、痴呆を伴うパーキンソン病、発作性夜間ヘモグロビン尿症、尋常性天疱瘡、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、多発性筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、乾癬、敗血症、志賀毒素大腸菌（Ｅ  ｃｏｌｉ）（ＳＴＥＣ）−ＨｕＳ、脊髄性筋萎縮症、脳卒中、亜急性硬化性全脳炎、もつれのみの痴呆、移植拒絶反応、血管炎（例えばＡＮＣＡ関連血管炎）、ウェーグナー肉芽腫症、鎌状赤血球症、クリオグロブリン血症、混合型クリオグロブリン血症、本態性混合型クリオグロブリン血症、ＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、ＩＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、腎炎、薬物誘発性血小板減少症、ループス腎炎、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、遅発性溶血性輸血反応、低補体血症性蕁麻疹様血管炎症候群、偽水晶体性水疱性角膜症、血小板不応状態、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ５８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１Ａ】配列番号７の重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域を含む抗因子Ｂ抗体（抗因子Ｂ  Ａｂ、またはＦＢｂ  Ａｂとも称される）と共にインキュベートしたヒト血清中のＣ３ｂＢｂの因子Ｈ解離（図１Ａ）およびＤＡＦ／ＣＤ５５解離（図１Ｂ）を表すグラフである。ストレプトアビジンがコーティングされたＯｃｔｅｔプローブに、抗体または抗体断片（抗因子Ｂ  Ａｂ；抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２；Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ；抗因子Ｂ  Ｆａｂ；Ｃ３ｂＢｂ）と混合したＣ３ｂＢｂ複合体負荷を添加した。Ｃ３ｂ＋ｆＢおよびｆＢを陰性対照として使用した。６００秒で、このプローブを、緩衝液のみを含む溶液に移した。７８０秒で、因子Ｈ（図１Ａ）またはＤＡＦ／ＣＤ５５（図１Ｂ）を添加した。抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２＝抗因子Ｂ  ＡｂのＦ（ａｂ’）２断片；Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ＝市販の因子Ｂ抗体；抗因子Ｂ  Ｆａｂ＝抗因子Ｂ  ＡｂのＦａｂ断片；ｆＢ＝因子Ｂ。
【図１Ｂ】配列番号７の重鎖可変領域および配列番号８の軽鎖可変領域を含む抗因子Ｂ抗体（抗因子Ｂ  Ａｂ、またはＦＢｂ  Ａｂとも称される）と共にインキュベートしたヒト血清中のＣ３ｂＢｂの因子Ｈ解離（図１Ａ）およびＤＡＦ／ＣＤ５５解離（図１Ｂ）を表すグラフである。ストレプトアビジンがコーティングされたＯｃｔｅｔプローブに、抗体または抗体断片（抗因子Ｂ  Ａｂ；抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２；Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ；抗因子Ｂ  Ｆａｂ；Ｃ３ｂＢｂ）と混合したＣ３ｂＢｂ複合体負荷を添加した。Ｃ３ｂ＋ｆＢおよびｆＢを陰性対照として使用した。６００秒で、このプローブを、緩衝液のみを含む溶液に移した。７８０秒で、因子Ｈ（図１Ａ）またはＤＡＦ／ＣＤ５５（図１Ｂ）を添加した。抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２＝抗因子Ｂ  ＡｂのＦ（ａｂ’）２断片；Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ＝市販の因子Ｂ抗体；抗因子Ｂ  Ｆａｂ＝抗因子Ｂ  ＡｂのＦａｂ断片；ｆＢ＝因子Ｂ。
【図２】因子Ｂ抗体で処理した血清試料中でのＣ３切断を検出するウエスタンブロットの画像である。ヒトＣ３を通常は約１４０ｋＤａで検出する。アリコートを、因子Ｂ抗体（抗因子Ｂ  Ａｂ、抗因子Ｂ−Ｆａｂ、またはＱｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ）を含む緩衝液と一緒のインキュベーションの１０分後、２０分後、または３０分後に分析した。緩衝液のみ（レーン２および３）、ならびにｍＩｇＧ２ａと共にインキュベートした試料（レーン４〜６）を、陰性対照として使用した。緩衝液：補体代替経路（ＣＡＰ）希釈緩衝液中の１０％正常ヒト血清（ＮＨＳ）。ｋＤ：キロダルトン；ｍＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体；抗因子Ｂ  Ａｂ：Ｆａｂ：抗因子Ｂ  ＡｂのＦａｂ断片；Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ：市販の因子Ｂ抗体。
【図３】示したように、Ｃ３、因子Ｂ（ＦＢ）、抗因子Ｂ  Ａｂ、因子Ｈ、およびＤＡＦ／ＣＤ５５の内の１つまたはそれ以上で処理し、続いて因子Ｄで処理した血清試料中でのＣ３切断を検出するＣｏｏｍａｓｓｉｅゲルの画像である。ヒトＣ３は通常、約１４０ｋＤで検出される。ｋＤ：キロダルトン。
【図４】カニクイザルにおける、配列番号１２の重鎖および配列番号１３の軽鎖を含むキメラ抗因子Ｂ  Ａｂの薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）を表すグラフである。ｘ軸上で示すように、血清試料を様々な時点で採取した。血漿中のキメラ抗因子Ｂ  Ａｂの濃度（左Ｙ軸；円形の時点）を３０日間にわたり測定した。３０日間にわたり測定したＰＤ補体代替経路（ＣＡＰ）活性のパーセント（右Ｙ軸；四角形の時点）を、処理前のベースラインレベルに正規化した。
【発明を実施するための形態】
【００８８】
本開示は、不要な細胞の死を誘発するために補体経路を利用する方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、抗因子Ｂ抗体の有効量とを接触させることを含む方法を含む。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する。いくつかの態様では、この抗因子Ｂ抗体は、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。
【００８９】
Ｉ．定義
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、この実体の内の１つまたはそれ以上を指すことに留意すべきであり、例えば、「ヌクレオチド配列（ａ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」は、１つまたはそれ以上のヌクレオチド配列を表すと理解される。したがって、用語「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたはそれ以上」、および「少なくとも１つ」は、本明細書では互換的に使用され得る。
【００９０】
さらに、「および／または」は、本明細書で使用される場合、他と一緒のまたは他を含まない２つの特定の特徴または構成要素のそれぞれの具体的な開示と見なすべきである。そのため、用語「および／または」は、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」等の表現で使用される場合、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（のみ）、ならびに「Ｂ」（のみ）を含むことが意図されている。同様に、用語「および／または」は、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」等の表現で使用される場合、下記の態様のそれぞれを含むことが意図されている：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（のみ）；Ｂ（のみ）；ならびにＣ（のみ）。
【００９１】
本明細書において態様が言葉「含む」で説明されている場合は常に、「からなる」および／または「から本質的になる」の用語で説明されている他の類似の態様も提供されることが理解される。
【００９２】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関連する分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ  Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｕｏ、Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ、第２版、２００２年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版、１９９９年、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびｔｈｅ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｒｅｖｉｓｅｄ、２０００年、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示で使用する用語の内の多くの一般的な辞書を提供する。
【００９３】
単位、接頭辞、および記号を、それらのＳｙｓｔｅｍｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）により承認された形式で示す。数値範囲は、この範囲を定義する数字を含む。別途示されない限り、アミノ酸配列を、アミノからカルボキシへの方向で左から右へと記載する。本明細書に記載されている表題は、本明細書全体を参照することにより得ることができる、本開示の様々な態様を限定するものではない。したがって、すぐ下で定義される用語は、本明細書全体を参照することにより、より完全に定義される。
【００９４】
用語「約」は、本明細書では、おおよそ、大体、およそ、または範囲内を意味するために使用される。用語「約」が数値範囲と共に使用される場合、この用語は、示された数値の上下に境界を広げることにより、この範囲を変更する。そのため「約１０〜２０」は「約１０〜約２０」を意味する。一般に、用語「約」は、例えば１０パーセントの上または下（より高いまたはより低い）分散により、数値を、示された値の上下に変更し得る。
【００９５】
「抗体」には、抗原に特異的に結合し、ジスルフィド結合により相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質免疫グロブリン、またはその抗原結合部分が含まれるが、これらに限定されない。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略される）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメインＣＬを含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、より保存されている領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる）が散在する超可変性の領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる）へとさらに分割される。各ＶＨおよびＶＬは、下記の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、宿主の組織または因子（例えば、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ））への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００９６】
用語「抗体」には、例として、天然に存在する抗体および天然には存在しない抗体の両方；モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体；キメラ抗体およびヒト化抗体；ヒト抗体または非ヒト抗体；完全に合成された抗体；ならびに単鎖抗体が含まれる。非ヒト抗体を組換え法によりヒト化して、この非ヒト抗体のヒトにおける免疫原性を低減させ得る。明確に述べられていない場合、および別途文脈が示さない限り、用語「抗体」には、上述の免疫グロブリンの内のいずれかの抗原結合断片または抗原結合部分も含まれ、一価および二価の断片または部分、ならびに単鎖抗体も含まれる。抗体の抗原結合断片として、この抗体の標的に結合する能力を保持する抗体のあらゆる部分が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体の抗原結合断片は、因子Ｂｂに結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合断片は、この抗体の１個、２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合断片は、この抗体の１個、２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲと、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のフレームワーク領域とを含む。いくつかの実施形態では、抗体の抗原結合断片は、この抗体のＶＨ領域および／またはＶＬ領域を含む。特定の抗原に結合する抗体の能力を損なわない限り、アミノ酸のわずかな付加、欠失、挿入、置換、または改変が許容される。具体的には、抗体の１つまたはそれ以上のフレームワーク領域中の保存的なアミノ酸置換は、本開示の範囲内である。
【００９７】
用語「モノクローナル抗体」（「ｍＡｂ」）は、単一分子組成の天然には存在しない抗体分子を指し、即ち、一次配列が本質的に同一であり、単一の結合特異性および特定のエピトープへの親和性を示す抗体分子を指す。ｍＡｂは、単離抗体の例である。用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を使用して調製された抗体に限定されない。むしろ、モノクローナル抗体は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ、組換え、トランスジェニック、または当業者に既知の他の技術により産生される。
【００９８】
「二重特異性」抗体は、本明細書で使用される場合、２種の抗原に結合し得る抗体を指す。「多重特異性」抗体は、本明細書で使用される場合、３種以上の抗原に結合し得る抗体を指す。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、第１のＶＨ領域、第１のＶＬ領域、第２のＶＨ領域、および第２のＶＬ領域を含み、第１のＶＨ領域および第１のＶＬ領域は因子Ｂｂに結合し、第２のＶＨ領域および第２のＶＬ領域は別の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、この別の抗原は腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞の表面上に存在する抗原）である。いくつかの実施形態では、この腫瘍抗原は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ−１２５、ムチン１（ＭＵＣ−１）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ｐ５３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、例えばＨＥＲ２および／またはＥＧＦＲ１２）、ＣＤ３０、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この別の抗原は、Ｂ細胞上に存在する抗原（例えば分化のクラスタ１９（ＣＤ１９）またはＣＤ２０）である。
【００９９】
用語「結合する」は、例えば、共有結合性相互作用、静電気的相互作用、疎水性相互作用、ならびにイオン性相互作用および／または水素結合相互作用（例えば、塩架橋および水架橋等の相互作用）に起因する、２つの分子の間の直接的会合を指す。本開示の抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂタンパク質内のエピトープに特異的に結合する。「特異的に結合する」は、少なくとも約１０−７Ｍ超の親和性での結合を指し、例えば、５×１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ、およびより高い親和性での結合を指す。「非特異的に結合する」は、約１０−７Ｍ超の親和性での結合を指し、例えば、１０−６Ｍ、１０−５Ｍ、１０−４Ｍ等の親和性での結合を指す。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、少なくとも約１０−７Ｍ、少なくとも約５×１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−８Ｍ、またはより高い親和性で因子Ｂｂに結合する。
【０１００】
用語「交差競合する」および「交差競合」は、本明細書で使用される場合、標的抗原への結合に関して参照抗体と競合する抗体の能力を指す。当分野で既知の任意の方法を使用して、抗体が参照抗体と交差競合するかどうかを決定し得る。例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーを使用して、本発明の抗体との交差競合を実証し得る。因子Ｂｂへの抗体の結合を阻害する試験抗体の能力により、この試験抗体が因子Ｂｂへの結合に関して参照抗体と競合し得ることが実証される。いくつかの実施形態では、抗原（例えば因子Ｂｂ）への結合に関して参照抗体と交差競合する抗体は、この参照抗体と同一のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗原（例えば因子Ｂｂ）への結合に関して参照抗体と交差競合する抗体は、この参照抗体により認識されるエピトープに近接するかまたは隣接するエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗原（例えば因子Ｂｂ）への結合に関して参照抗体と交差競合する抗体は、この参照抗体により認識されるエピトープに対して遠位のエピトープに結合するが、この遠位エピトープへのこの抗体の結合は、抗原に対するこの参照抗体の結合能力を妨害するのに十分である。抗体が、参照抗体と相互作用する抗原上のアミノ酸と同一であるかまたはこのアミノ酸と重複する抗原上のアミノ酸残基と相互作用する場合には、この抗体は、この参照抗体と同一のエピトープに結合する。
【０１０１】
「投与する」は、本明細書で使用される場合、本明細書で開示されている抗因子Ｂ抗体の薬学的に許容される量を、薬学的に許容される経路を介して対象に与えることを意味する。投与経路は静脈内であり得、例えば、静脈内注射および静脈内注入であり得る。さらなる投与経路として、例えば、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経鼻投与、および肺内投与が挙げられる。抗因子Ｂ抗体を、少なくとも１種の賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与し得る。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体を静脈内投与する。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体を皮下投与する。
【０１０２】
「処置する」、「処置」、または「処置すること」は、本明細書で使用される場合、例えば、疾患または状態の重症度の低下；状態の経過の持続時間の短縮；疾患または状態と関連する１つまたはそれ以上の症状の寛解または除去；疾患または状態を有する対象への有益の効果の提供を指すが、疾患または状態の治癒を必ずしも伴わない。いくつかの実施形態では、用語「処置する」または「処置すること」は、それを必要とする対象中において補体活性を誘発することを意味する。
【０１０３】
用語「補体活性を誘発する」は、本明細書で使用される場合、対象中において補体経路を活性化すること、増加すること、またはこの補体経路の終了を防止することを意味する。この補体系は３つの別々の上流の活性化経路を含み、全ては共通の最終経路に収束する。これらの経路の内の下記の２つは、特異的で明確な機序により誘発される：古典経路（ＣＰ）は、抗体が抗原に結合する際に関与し、レクチン経路（ＬＰ）は、病原体の表面上の炭水化物残基により活性化される。代替経路（ＡＰ）は、「ＡＰティックオーバー」と称される基底レベルで継続的に活性であるという点で独特であり、この代替経路（ＡＰ）の活性は、ポジティブフィードバック増幅ループを介して、異物性表面および損傷した細胞に基づく様々なシグナルにより大幅に増加される。ＡＰは、補体成分Ｃ３の自発的加水分解により始まる。次いで、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）は因子Ｂ（配列番号１５；表１）に結合し、続いて因子Ｄにより切断されてＣ３（Ｈ２Ｏ）ＢｂおよびＢａ（副産物）が得られる。次いで、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）Ｂｂは、Ｃ３をＣ３ｂ（Ｃ３の活性型）およびＣ３ａ（副産物）へと切断する。次いで、Ｃ３ｂは因子Ｂと会合し、続いて因子Ｄにより切断されて、Ｃ３ｂＢｂ（「Ｃ３転換酵素」）が得られる。次いで、Ｃ３転換酵素は、中心Ｃ３タンパク質の追加の分子を切断し続け、これにより、食作用を促進するオプソニン（Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ）；免疫細胞のターゲティングを促進するアナフィラトキシン（Ｃ３ａおよびＣ５ａ）；標的細胞の形質膜を損傷して細胞死を促進する終末溶解性複合体（ＭＡＣ；Ｃ５ｂ−９）が生成される。補体活性の誘発は、本明細書で開示される場合、ＣＰ、ＬＰ、および／またはＡＰの内のいずれかの工程の活性化または促進を指し得る。
【０１０４】
【表１】
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【０１０５】
ある特定の実施形態では、補体活性の誘発は、補体成分の阻害因子を阻害することを含む。補体経路の過剰活性化を防止するために、様々なチェックおよびバランスが存在する。例えば、補体受容体１（ＣＲ１）および崩壊促進因子（「ＤＡＦ」または「ＣＤ５５」）を含む膜結合タンパク質は、細胞表面上のＣ３ｂへの結合に関して因子Ｂと競合し、ＣＲ１およびＤＡＦ／ＣＤ５５の両方は、Ｃ３ｂＢｂ複合体からＢｂを変位させ得る。因子ＨはＣ３ｂに同様に結合して因子Ｂの結合を防止するか、またはＣ３ｂＢｂ複合体から因子Ｂｂを変位させる。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、ＣＲ１、ＤＡＦ／ＣＤ５５、および／または因子ＨによるＣ３ｂＢｂ複合体からのＢｂの変位を防止する。
【０１０６】
「対象」は、本明細書で使用される場合、ヒト個体を意味する。対象は、疾患または状態に現在罹患している患者であり得る。ある特定の実施形態では、この疾患または状態は、がんまたは自己免疫疾患を含む。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；血液悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、ループス、セリアック病、シェーグレン症候群、多発性筋痛、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、この疾患または状態は、病原体による感染を含む。いくつかの実施形態では、この病原体は、細菌、寄生生物、真菌、またはこれらの任意の組合せから選択される。
【０１０７】
「治療量」、「用量」、「有効量」、または「投与量」は、本明細書で（互換的に）使用される場合、本明細書で説明されているような治療目的を達成する用量を意味する。いくつかの実施形態では、「治療量」は、対象中において補体活性を誘発する用量を意味する。ある特定の実施形態では、「治療量」は、対象中において、補体活性を誘発し、標的の細胞の死をもたらす用量を意味する。
【０１０８】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられているものである。下記のように、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリが当分野で定義されている：塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。そのため、ポリペプチド中のアミノ酸が同一の側鎖ファミリからの別のアミノ酸に置き換えられている場合には、この置換は保存的であると見なされる。別の実施形態では、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリのメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似するストリングに保存的に置き換えられる。
【０１０９】
２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の間の用語「配列同一性のパーセント」は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入しなければならない付加または欠失（即ちギャップ）を考慮して、比較ウィンドウ全体で配列が共有する同一の一致した位置の数を指す。一致する位置とは、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が標的配列および参照配列の両方で示される位置のことである。標的配列中に示されるギャップはカウントされず、なぜならば、ギャップはヌクレオチドまたはアミノ酸ではないからである。同様に、参照配列中に示されるギャップはカウントされず、なぜならば、参照配列からのヌクレオチドまたはアミノ酸ではなく、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸がカウントされるからである。
【０１１０】
配列同一性のパーセントを、両方の配列において同一のアミノ酸残基または核酸塩基が存在する位置の数を決定して一致する位置の数を求め、この一致する位置の数を、比較のウィンドウ中の位置の総数で除算し、この結果に１００を乗算して配列同一性の割合を求めることにより算出する。配列の比較および２つの配列の間の配列同一性のパーセントの決定を、オンラインでの使用およびダウンロードの両方のために容易に利用可能なソフトウェアを使用して達成し得る。適切なソフトウェアプログラムが様々なソースから入手可能であり、タンパク質配列およびヌクレオチド配列の両方のアラインメントに適している。配列同一性のパーセントを決定するのに適した１つのプログラムは、米国政府のアメリカ国立生物工学情報センター（Ｕ．Ｓ．ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ’ｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なプログラムのＢＬＡＳＴパッケージソフトの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列の間の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮを使用して核酸配列を比較し、ＢＬＡＳＴＰを使用してアミノ酸配列を比較する。他の適切なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳパッケージソフトの一部であるＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａで欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＥＢＩ）からも入手可能である。
【０１１１】
ポリヌクレオチド参照配列またはポリペプチド参照配列とアラインする単一のポリヌクレオチド標的配列内のまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域はそれぞれ、それ自体の配列同一性のパーセントを有し得る。配列同一性のパーセント値は小数第１位に四捨五入されることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、および８０．１４は８０．１に切り捨てられており、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、および８０．１９は８０．２に切り上げられている。長さの値が常に整数であることにも留意されたい。
【０１１２】
配列同一性のパーセントの算出のための配列アラインメントの生成は、一次配列データにより排他的に駆動されるバイナリ配列−配列比較に限定されないことを当業者は理解するだろう。配列アラインメントは多重配列アラインメントから導き出される。多重配列アラインメントを生成するのに適した１つのプログラムは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の適切なプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能なＭＵＳＣＬＥである。ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、あるいは例えばＥＢＩから入手可能である。
【０１１３】
配列アラインメントを、配列データと、異種のソースからのデータ（例えば、構造データ（例えば結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば変異の位置）、または系統発生学的データ）とを統合することにより生成し得ることも理解されるだろう。異種データを統合して多重配列アラインメントを生成するのに適したプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能なあるいは例えばＥＢＩから入手可能なＴ−Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一性のパーセントを算出するために使用される最終的なアラインメントが自動的にまたは手動でキュレートされることも理解されるだろう。
【０１１４】
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、または両方で改変を含み得る。一実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレントな置換、付加、または欠失を生じるが、コードされたポリペプチドの特性または活性を変更しない改変を含む。別の実施形態では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝子コードの縮重に起因するサイレントな置換により生じる。他の実施形態では、５〜１０個、１〜５個、または１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換されているか、欠失しているか、または付加しているバリアント。ポリヌクレオチドバリアントは様々な理由により産生され、例えば、特定の宿主に対してコドン発現を最適化するために（ヒトｍＲＮＡ中のコドンを他のもの、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）等の細菌宿主に変更するために）産生される。
【０１１５】
ＩＩ．本開示の方法
本開示は、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、抗因子Ｂ抗体の有効量とを接触させることを含む方法を対象とする。この抗因子Ｂ抗体は、単鎖ポリペプチドとして血液中を循環することが多い因子Ｂに結合し得、代替経路を活性化し得る。代替経路の活性化時に、因子Ｂは補体因子Ｄにより切断されて、非触媒鎖Ｂａおよび触媒サブユニットＢｂが得られる。この活性なサブユニットＢｂは、Ｃ３ｂと会合して代替経路Ｃ３転換酵素（即ち、Ｃ３ｂＢｂ複合体）を形成するセリンプロテアーゼである。いくつかの実施形態では、本開示の抗因子Ｂ抗体はまた、因子Ｂｂにも結合する。因子Ｂｂは、事前に活性化されているＢリンパ球の増殖に関与し、Ｂａはその増殖を阻害する。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は因子Ｂｂ部分に結合し、Ｃ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は二重特異性抗体または多重特異性抗体である。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は因子Ｂｂに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂおよび因子Ｂの両方に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、血清中でＣ３切断を誘発する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３の血清濃度を低下させる。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、細胞の表面上で細胞膜傷害沈着を誘発する。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子Ｂｂに結合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）またはＣ３ｂへの因子Ｂの結合の前に因子Ｂに結合する。他の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）またはＣ３ｂへの因子Ｂの結合の後に、かつ因子Ｄによる因子Ｂの切断の前に、因子Ｂに結合する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は因子Ｂに結合し、因子Ｄによる因子Ｂの切断の後も因子Ｂｂに結合したままである。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、補体経路の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、血清補体活性の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、血清中における代替補体経路の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、古典的補体経路の活性を低下させる。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３の循環レベルがもはや補体経路の活性化を支持しなくなるまでＣ３の消費を促進することにより、補体経路の活性を低下させる。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、阻害因子により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックすることにより、Ｃ３ｂＢｂ複合体の例えば因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、ＤＡＦ／ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。
【０１２１】
ＣＤ５５またはＤＡＦとしても既知である補体崩壊促進因子は、ヒトではＣＤ５５遺伝子によりコードされるタンパク質である。ＤＡＦは、細胞表面上で補体系を調節する。ＤＡＦは、Ｃ４（古典的補体経路およびレクチン経路）ならびにＣ３（代替補体経路）の活性化の最中に作成されるＣ４ｂ断片およびＣ３ｂ断片を認識する。ＤＡＦと、古典的経路およびレクチン経路の細胞結合Ｃ４ｂとの相互作用により、Ｃ２のＣ２ａへの転換が妨げられ、それによりＣ４ｂ２ａ  Ｃ３転換酵素の形成が妨げられ、ＤＡＦと、代替経路のＣ３ｂとの相互作用により、因子Ｄによる因子ＢのＢｂへの転換が妨げられ、それにより代替経路のＣ３ｂＢｂ複合体の形成が妨げられる。ＤＡＦ／ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックすることにより、抗因子Ｂ抗体を使用する本方法は補体経路（例えば代替経路）の負の調節を防止し、それにより補体活性を誘発する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、ＣＲ１により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体への阻害因子の結合を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この阻害因子は、ＤＡＦ／ＣＤ５５、因子Ｈ、ＣＲ１、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、補体活性は、補体により媒介される細胞死を含む。いくつかの実施形態では、補体活性は標的細胞の細胞死を誘発する。いくつかの実施形態では、標的細胞の死は、別の細胞（例えば免疫細胞）による標的細胞の食作用を含む。いくつかの実施形態では、細胞死は、標的細胞の形質膜中での終末溶解性複合体（ＭＡＣ；Ｃ５ｂ−９）の形成の後に起こる。いくつかの実施形態では、細胞死は標的細胞のアポトーシスを含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、補体活性はオプソニンの産生を含む。オプソニンは、本明細書で言及される場合、免疫細胞による終結（例えば食作用）のための細胞のターゲティングを促進する分子である。いくつかの実施形態では、オプソニンは、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、またはＣ３ｂとｉＣ３ｂとの両方を含む。いくつかの実施形態では、補体活性はアナフィラトキシンの産生を含む。いくつかの実施形態では、アナフィラトキシンは、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａとＣ５ａとの両方を含む。いくつかの実施形態では、アナフィラトキシンは走化性因子を含み、この走化性因子は免疫細胞を標的細胞に引き付ける。いくつかの実施形態では、補体活性は終末溶解性複合体（「細胞膜傷害複合体」または「ＭＡＣ」；Ｃ５ｂ−９）の形成を含む。いくつかの実施形態では、終末溶解性複合体は標的細胞の形質膜中に生じ、細孔を作成し、この細孔により標的細胞の死が促進される。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、標的細胞はインビボ細胞である。ある特定の実施形態では、インビボ細胞は自己細胞であり、例えば、ヒト細胞であって、このヒト細胞が位置するヒトにより産生された細胞（例えば生来の細胞）である。他の実施形態では、インビボ細胞は外来細胞であり、例えば病原体である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は異常な細胞であり、例えば、がん細胞または過活動の免疫細胞である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞はがん細胞である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；血液悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。他の実施形態では、インビボ細胞は病原体である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は、細菌、真菌、寄生生物、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、インビボ細胞はウイルスに感染している。
【０１２６】
補体活性の誘発を、当分野で既知の任意の方法を使用して測定し得る。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、細胞表面上でのＣ３ｂのレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、患者の血清中でのＣ３ａレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、患者の血清中でのＣ３のレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、患者の血清中での因子Ｂａのレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、細胞表面上でのＣ３ｂＢｂのレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、標的細胞の死のレベルを検出することにより測定する。いくつかの実施形態では、補体活性の誘発を、免疫反応のレベルを検出することにより測定する。ある特定の実施形態では、免疫反応を、標的細胞への１種またはそれ以上の免疫細胞の局在化により特徴付ける。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、細胞と、抗因子Ｂ抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂのレベルと比較して、細胞の表面上でのＣ３ｂのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、抗因子Ｂ抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂのレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３ｂのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、抗因子Ｂ抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ａのレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３ａのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、抗因子Ｂ抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３のレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３のレベルが低下する。いくつかの実施形態では、細胞と、抗因子Ｂ抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂＢｂのレベルと比較して、細胞の表面上でのＣ３ｂＢｂのレベルが上昇する。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本開示の抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢＢの阻害因子（例えばＤＡＦ／ＣＤ５５および／または因子Ｈ）の存在下でＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する。機序に関与することなく、代替経路の細胞膜結合阻害因子を阻害することにより、抗因子Ｂ抗体は細胞の表面上でＣ３ｂ産生を誘発し、代替補体経路を促進する。
【０１２９】
本開示のある特定の態様は、それを必要とする対象の細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、抗因子Ｂ抗体の有効量とを接触させることを含み、この抗因子Ｂ抗体はＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、方法を対象とする。ある特定の実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は疾患または状態に苦しめられている。
【０１３０】
いくつかの他の実施形態では、本明細書で開示されている抗因子Ｂ抗体は、インビボで投与した場合に、感染（例えば細菌感染）のリスクを増加させない。ある特定の実施形態では、本明細書で開示されている抗因子Ｂ抗体は、インビボで投与した場合に、抗Ｃ５抗体と比較して感染のリスクを増加させない。いくつかの実施形態では、感染は、Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）により引き起こされる。他の実施形態では、感染は、髄膜炎を伴うか、または髄膜炎を引き起こす。
【０１３１】
ある特定の実施形態では、対象は、がんを含む疾患または状態を有する。特定のがんを、当分野で既知のあらゆるがんから選択し得る。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；血液悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は血液悪性腫瘍を有する。ある特定の実施形態では、対象はＢ細胞リンパ腫を有する。他の実施形態では、対象はＴ細胞リンパ腫を有する。他の実施形態は、対象は白血病を有し、例えば慢性骨髄性白血病を有する。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、対象は、自己免疫疾患を含む疾患または状態を有する。特定の自己免疫疾患を、当分野で既知のあらゆる自己免疫疾患から選択し得る。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、ループス、セリアック病、シェーグレン症候群、多発性筋痛、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は多発性硬化症を有する。他の実施形態では、対象は糖尿病を有し、例えば１型糖尿病を有する。他の実施形態では、対象は関節リウマチを有する。他の実施形態では、対象はループスを有する。他の実施形態では、対象はセリアック病を有する。
【０１３３】
本開示の方法を使用して処置される自己免疫疾患または自己免疫障害は下記であるがこれらに限定されない：アジソン病、加齢黄斑変性、脱毛症、自己免疫性肝炎（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎；Ｃ型肝炎ウイルス感染と関連する自己免疫性肝炎）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性皮膚疾患、自己免疫性甲状腺疾患、水疱性類天疱瘡、セリアック病、寒冷凝集素症、皮膚筋炎、１型糖尿病、グレーブス病、グッドパスチャー症候群、橋本病、副甲状腺機能低下症、下垂体機能低下症、甲状腺機能低下症、特発性血小板減少性紫斑病、炎症性腸疾患（例えば、クローン病；潰瘍性大腸炎）、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋炎、視神経脊髄炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、多発性筋炎、乾癬、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、ぶどう膜炎、ならびにウェゲナー肉芽腫症および多発性／皮膚筋炎。
【０１３４】
本開示の方法を使用して処置される疾患として、例えば下記が挙げられる：加齢性自己免疫疾患、加齢黄斑変性、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、アナフィラキシー、嗜銀顆粒性認知症、関節炎（例えば関節リウマチ）、喘息、アテローム性動脈硬化症、非典型溶血性尿毒症症候群、自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、バラケル・サイモンズ症候群、ベーチェット病、英国型アミロイド血管症、水疱性類天疱瘡、バージャー病、Ｃｌｑ腎症、がん、劇症型抗リン脂質抗体症候群、脳アミロイド血管症、寒冷凝集素症、皮質基底核変性症、クロイツフェルト・ヤコブ病、クローン病、クリオグロブリン血症性血管炎、ボクサー認知症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、円板状エリテマトーデス、ダウン症候群、巣状分節性糸球体硬化症、形式的思考障害、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、ギラン・バレー症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、溶血性尿毒症症候群、遺伝性血管性浮腫、低フォスファターゼ症、特発性肺炎症候群、免疫複合体病、封入体筋炎、感染性疾患（例えば、細菌（例えば、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）もしくはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ））、ウイルス（例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、または他の感染病原体により引き起こされる疾患）、炎症性疾患、虚血／再灌流傷害、軽度認知障害、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、Ａ型モリブデン補酵素欠損症（ＭｏＣＤ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）Ｉ、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）ＩＩ（デンスデポジット病）、膜性腎炎、多発脳梗塞性認知症、ループス（例えば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、糸球体腎炎、川崎病、多巣性運動ニューロパチー、多発性硬化症、多系統萎縮症、重症筋無力症、心筋梗塞、筋緊張性ジストロフィー、視神経脊髄炎、Ｃ型ニーマン・ピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、パーキンソン病、痴呆を伴うパーキンソン病、発作性夜間ヘモグロビン尿症、尋常性天疱瘡、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、多発性筋炎、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、乾癬、敗血症、志賀毒素大腸菌（Ｅ  ｃｏｌｉ）（ＳＴＥＣ）−ＨｕＳ、脊髄性筋萎縮症、脳卒中、亜急性硬化性全脳炎、もつれのみの痴呆、移植拒絶反応、血管炎（例えばＡＮＣＡ関連血管炎）、ウェーグナー肉芽腫症、鎌状赤血球症、クリオグロブリン血症、混合型クリオグロブリン血症、本態性混合型クリオグロブリン血症、ＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、ＩＩＩ型混合型クリオグロブリン血症、腎炎、薬物誘発性血小板減少症、ループス腎炎、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、遅発性溶血性輸血反応、低補体血症性蕁麻疹様血管炎症候群、偽水晶体性水疱性角膜症、および血小板不応状態。
【０１３５】
ある特定の実施形態では、対象は感染を有する。いくつかの実施形態では、感染は、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、寄生生物感染、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する。いくつかの実施形態では、抗因子Ｂ抗体は、疾患または状態の１つまたはそれ以上の細胞に対する標的の免疫反応を促進することにより（例えば、オプソニンまたはアナフィラトキシンのレベルを上昇させることにより）細胞死を誘発する。
【０１３７】
本明細書で開示されている抗因子Ｂ抗体を、当分野で既知の任意の手段により投与し得る。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体を、非経口投与するか、静脈内投与するか、皮下投与するか、皮内投与するか、経皮投与するか、筋肉内投与するか、経口投与するか、眼内投与するか、髄腔内投与するか、腹腔内投与するか、鼻腔内投与するか、口腔投与するか、舌下投与するか、直腸投与するか、経膣投与するか、または肺経路を介して投与する。ある特定の実施形態では、抗因子Ｂ抗体を静脈内投与する。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体を皮下投与する。
【０１３８】
ＩＩ．Ａ．抗因子Ｂ抗体
本開示のいくつかの態様では、この抗因子Ｂ抗体は因子Ｂｂに特異的に結合し、例えばヒト因子Ｂｂ（表１；配列番号１５）に特異的に結合する。いくつかの態様では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂに加えて因子Ｂ（例えばヒト因子Ｂ）に特異的に結合する。いくつかの態様では、この抗因子Ｂ抗体は、因子Ｂｂを介してＣ３ｂＢｂ複合体に特異的に結合する。
【０１３９】
特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂへの結合に関して参照抗体と競合し、この参照抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖は重鎖可変（ＶＨ）領域を含み、軽鎖は軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号１を含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号２を含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号４を含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号５を含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号６を含む（表２）。
【０１４０】
【表２】
2020536544.tif 000003
【表３】
2020536544.tif 000004
【０１４１】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂへの結合に関して参照抗体と競合し、この参照抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域と、配列番号８を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂ上の、参照抗体と同一のエピトープに結合し、この参照抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号１を含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号２を含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号４を含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号５を含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号６を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂ上の、参照抗体と同一のエピトープに結合し、この参照抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域と、配列番号８を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む。
【０１５０】
特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号１を含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号２を含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号４を含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号５を含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号６を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＨは、配列番号７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＨは配列番号７を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＬは、配列番号８と少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体のＶＬは配列番号８を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、配列番号９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、配列番号９を含む重鎖を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、配列番号１０と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、配列番号１０を含む軽鎖を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体はキメラ抗体である。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体はヒト化抗体である。特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体はヒト抗体である。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は二重特異性抗体であり、この二重特異性抗体は、組織特異的であるかまたは細胞特異的である抗原結合ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は多重特異性抗体であり、この多重特異性抗体は、組織特異的であるかまたは細胞特異的である少なくとも１種の抗原結合ドメインをさらに含む。
【０１５６】
ＩＩＩ．二重特異性抗因子Ｂ抗体および多重特異性抗因子Ｂ抗体
本開示のある特定の態様は、（ｉ）抗因子Ｂ結合ドメイン、および（ｉｉ）第２の抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を対象とする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する。ある特定の実施形態では、この二重特異性抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインは、組織特異的であるか、または細胞特異的である。
【０１５７】
本開示の他の態様は、（ｉ）抗因子Ｂ結合ドメイン、（ｉｉ）第２の抗原結合ドメイン、および（ｉｉｉ）第３の抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を対象とする。いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインは、組織特異的であるか、または細胞特異的である。いくつかの実施形態では、第３の抗原結合ドメインは、組織特異的であるか、または細胞特異的である。特定の実施形態では、この多重特異性抗体は、第４の抗原結合ドメイン、第５の抗原結合ドメイン、第６の抗原結合ドメイン、第７の抗原結合ドメイン、またはより多くをさらに含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の分解を減少させるか、阻害するか、または防止する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、血清中でＣ３切断を誘発する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、Ｃ３の血清濃度を低下させる。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、細胞の表面上でＣ３ｂの蓄積を誘発する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、血清補体活性の喪失を誘発する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、細胞の表面上で細胞膜傷害沈着を誘発する。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）またはＣ３ｂへの因子Ｂの結合の前に因子Ｂに結合する。他の実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、Ｃ３（Ｈ２Ｏ）またはＣ３ｂへの因子Ｂの結合の後に、かつ因子Ｄによる因子Ｂの切断の前に、因子Ｂに結合する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、因子Ｂに結合し、因子Ｄによる因子Ｂの切断の後も因子Ｂｂに結合したままである。
【０１６０】
ある特定の実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体は、補体経路の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体は、血清補体活性の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体は、血清中における代替補体経路の活性を低下させる。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体は、古典的補体経路の活性を低下させる。ある特定の実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体は、Ｃ３の循環レベルがもはや補体経路の活性化を支持しなくなるまでＣ３の消費を促進することにより、補体経路の活性を低下させる。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、阻害因子により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックすることにより、Ｃ３ｂＢｂ複合体の例えば因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、ＤＡＦ／ＣＤ５５により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、因子Ｈにより媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、ＣＲ１により媒介されるＣ３ｂＢｂ複合体の解離を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、これらの因子Ｂｂ結合ドメイン）は、Ｃ３ｂＢｂ複合体への阻害因子の結合を減少させるか、またはブロックする。いくつかの実施形態では、この阻害因子は、ＤＡＦ／ＣＤ５５、因子Ｈ、ＣＲ１、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１６２】
ＩＩＩ．Ａ．抗原結合ドメイン
ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂおよび／または因子Ｂｂへの結合に関して参照抗体と競合し、この参照抗体はＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、配列番号１を含むＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号３を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、配列番号４を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号５を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号６を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂへの結合に関して参照抗体と競合し、この参照抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域、および配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂ上の、参照抗体と同一のエピトープに結合し、この参照抗体はＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、配列番号１を含むＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号２を含むＶＨ  ＣＤＲ２、および配列番号３を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、配列番号４を含むＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号５を含むＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号６を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ抗体は、（例えばＣ３ｂＢｂ複合体の）因子Ｂｂ上の、参照抗体と同一のエピトープに結合し、この参照抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域、および配列番号８を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインは重鎖および軽鎖を含み；重鎖はＶＨ領域を含み、軽鎖はＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号３を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号３を含む。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号１を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号１を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号２を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号２を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は、配列番号４を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号４を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ２は、配列番号５を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号５を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ３は、配列番号６を含むか、または１つもしくは２つのアミノ酸置換を有する配列番号６を含む。
【０１７２】
特定の実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインはＶＨ領域およびＶＬ領域を含み；ＶＨ領域は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を含み；ＶＬ領域は、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を含み；ＶＨ  ＣＤＲ１は配列番号１を含み、ＶＨ  ＣＤＲ２は配列番号２を含み、ＶＨ  ＣＤＲ３は配列番号３を含み；ＶＬ  ＣＤＲ１は配列番号４を含み、ＶＬ  ＣＤＲ２は配列番号５を含み、ＶＬ  ＣＤＲ３は配列番号６を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＨは、配列番号７と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＨは配列番号７を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＬは、配列番号８と少なくとも７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、この抗因子Ｂ結合ドメインのＶＬは配列番号８を含む。
【０１７５】
第２の抗原結合ドメインおよび／または第３の抗原結合ドメインを、標的細胞の表面上で発現される任意の抗原を標的とするように選択し得る。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインは腫瘍抗原に結合する。いくつかの実施形態では、この腫瘍抗原は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ−１２５、ムチン１（ＭＵＣ−１）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ｐ５３、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ、例えば、ＨＥＲ１、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ２、および／またはＥＧＦＲ１２）、ＣＤ３０、ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１７６】
他の実施形態では、第２の抗原結合ドメインおよび／または第３の抗原結合ドメインは、内因性ＢＢＢ受容体および／またはトランスフェリン受容体を除いて標的細胞の表面上で発現される任意の抗原を標的とする。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインは、Ｂ細胞上に存在する抗原に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインはＣＤ２０に結合する。他の実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインは、自己抗原特異的Ｔエフェクター細胞上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインまたは第３の抗原結合ドメインは電位開口型カリウムチャネルＫｖ１．３に結合する。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体はキメラである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体はヒト化されている。
【０１７９】
ＩＩＩ．Ｂ．方法
本開示のある特定の態様は、細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量とを接触させることを含む方法を対象とする。本開示の他の態様は、それを必要とする対象において細胞死を誘発する方法であって、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量を投与することを含む方法を対象とする。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、この補体活性は、補体により媒介される細胞死を含む。いくつかの実施形態では、この補体活性は、標的細胞の細胞死を誘発する。いくつかの実施形態では、標的細胞の死は、別の細胞（例えば免疫細胞）による標的細胞の食作用を含む。いくつかの実施形態では、細胞死は、標的細胞の形質膜中での終末溶解性複合体（ＭＡＣ；Ｃ５ｂ−９）の形成の後に起こる。いくつかの実施形態では、細胞死は標的細胞のアポトーシスを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、補体活性はオプソニンの産生を含む。いくつかの実施形態では、オプソニンは、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、またはＣ３ｂとｉＣ３ｂとの両方を含む。いくつかの実施形態では、補体活性はアナフィラトキシンの産生を含む。いくつかの実施形態では、アナフィラトキシンは、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ、またはＣ３ａとＣ５ａとの両方を含む。いくつかの実施形態では、補体活性は終末溶解性複合体（ＭＡＣ；Ｃ５ｂ−９）の形成を含む。いくつかの実施形態では、終末溶解性複合体は標的細胞の形質膜中に生じ、細孔を作成し、この細孔により標的細胞の死が促進される。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、標的細胞はインビボ細胞である。ある特定の実施形態では、インビボ細胞は自己細胞である。他の実施形態では、インビボ細胞は外来細胞であり、例えば病原体である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は異常な細胞である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞はがん細胞である。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；血液悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。他の実施形態では、インビボ細胞は病原体である。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は、細菌、真菌、寄生生物、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、インビボ細胞はウイルスに感染している。
【０１８３】
いくつかの実施形態では、細胞と、二重特異性抗体または多重特異性抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂのレベルと比較して、細胞の表面上でのＣ３ｂのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、二重特異性抗体または多重特異性抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂのレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３ｂのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、二重特異性抗体または多重特異性抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ａのレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３ａのレベルが上昇する。いくつかの実施形態では、細胞と、二重特異性抗体または多重特異性抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３のレベルと比較して、対象の血清中でのＣ３のレベルが低下する。いくつかの実施形態では、細胞と、二重特異性抗体または多重特異性抗体とを接触させることにより、この接触前のＣ３ｂＢｂのレベルと比較して、細胞の表面上でのＣ３ｂＢｂのレベルが上昇する。
【０１８４】
本開示のある特定の態様は、それを必要とする対象の細胞の表面上で補体活性を誘発する方法であって、この細胞と、本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体の有効量とを接触させることを含み、この二重特異性抗体または多重特異性抗体はＣ３ｂＢｂ複合体の解離を阻害する、方法を対象とする。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子ＢｂおよびＣ３ｂへの解離を阻害する。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は疾患または状態に苦しめられている。
【０１８５】
本開示の他の態様は、それを必要とする対象において細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する方法であって、本明細書で開示されている二重特性抗体または多重特異性抗体の有効量を投与することを含む方法を対象とする。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、対象は、がんを含む疾患または状態を有する。特定のがんを、当分野で既知のあらゆるがんから選択し得る。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫（ＭＥＬ）；腎細胞癌（ＲＣＣ）；肺がん；結腸直腸がん（ＣＲＣ）；前立腺がん；肝がん；頭頸部の扁平上皮癌；食道、卵巣、消化管、および乳房の癌腫；血液悪性腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、および慢性骨髄性白血病；ならびにこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は血液悪性腫瘍を有する。ある特定の実施形態では、対象はＢ細胞リンパ腫を有する。他の実施形態では、対象はＴ細胞リンパ腫を有する。他の実施形態は、対象は白血病を有し、例えば慢性骨髄性白血病を有する。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、対象は、自己免疫疾患を含む疾患または状態を有する。特定の自己免疫疾患を、当分野で既知のあらゆる自己免疫疾患から選択し得る。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、多発性硬化症、１型糖尿病、関節リウマチ、ループス、セリアック病、シェーグレン症候群、多発性筋痛、強直性脊椎炎、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、対象は多発性硬化症を有する。他の実施形態では、対象は糖尿病を有し、例えば１型糖尿病を有する。他の実施形態では、対象は関節リウマチを有する。他の実施形態では、対象はループスを有する。他の実施形態では、対象はセリアック病を有する。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、対象は感染を有する。いくつかの実施形態では、感染は、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、寄生生物感染、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、細胞死を誘発することにより疾患または状態を処置する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、疾患または状態の１つまたはそれ以上の細胞に対する標的の免疫反応を促進することにより（例えば、オプソニンまたはアナフィラトキシンのレベルを上昇させることにより）細胞死を誘発する。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、終末溶解性複合体（「細胞膜傷害複合体」または「ＭＡＣ」；Ｃ５ｂ−９）の形成により細胞死を誘発する。いくつかの実施形態では、終末溶解性複合体は標的細胞の形質膜中に形成し、細孔を作成し、この細孔により標的細胞の死が促進される。
【０１９０】
本明細書で開示されている二重特異性抗体または多重特異性抗体を、当分野で既知の任意の手段により投与し得る。いくつかの実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体を、非経口投与するか、静脈内投与するか、皮下投与するか、皮内投与するか、経皮投与するか、筋肉内投与するか、経口投与するか、眼内投与するか、髄腔内投与するか、腹腔内投与するか、鼻腔内投与するか、口腔投与するか、舌下投与するか、直腸投与するか、経膣投与するか、または肺経路を介して投与する。ある特定の実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体を静脈内投与する。ある特定の実施形態では、この二重特異性抗体または多重特異性抗体を皮下投与する。
【０１９１】
ＩＶ．ポリヌクレオチド
本開示のある特定の態様は、本明細書で開示されている抗体をコードする核酸を含むポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを対象とする。いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、配列番号１１と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、このポリヌクレオチドは配列番号１１を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、配列番号１３と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、このポリヌクレオチドは配列番号１３を含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、配列番号１２と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、このポリヌクレオチドは配列番号１２を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、配列番号１３と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一である核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、このポリヌクレオチドは配列番号１３を含む。
【０１９５】
本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列を、意図される標的細胞（例えば、コードされる抗体を合成するために遺伝子が改変されている細胞）中でのこのヌクレオチド配列の発現を可能にする１種またはそれ以上の調節エレメント（例えばプロモーターおよびエンハンサー）に作動可能に連結し得る。そのため、いくつかの場合では、本開示は、本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、このヌクレオチド配列は、１種またはそれ以上の調節エレメント（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）に作動可能に連結されている、核酸を提供する。
【０１９６】
適切なプロモーターエレメントおよびエンハンサーエレメントは当分野で既知である。原核宿主細胞中での使用に適したプロモーターとして下記が挙げられるがこれらに限定されない：バクテリオファージＴ７  ＲＮＡポリメラーゼプロモーター；Ｔ３プロモーター；Ｔ５プロモーター；ラムダＰプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えば、ｌａｃ／ｔａｃハイブリッドプロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；およびｔａｃプロモーター等；ｇｐｔプロモーター；ａｒａＢＡＤプロモーター；インビボで調節されるプロモーター、例えば、ｓｓａＧプロモーターまたは関連するプロモーター（例えば、米国特許出願公開第２００４０１３１６３７号を参照されたい）、ｐａｇＣプロモーター（ＰｕｌｋｋｉｎｅｎおよびＭｉｌｌｅｒ、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１９９１年：１７３（１）：８６〜９３頁；Ａｌｐｕｃｈｅ−Ａｒａｎｄａ他、ＰＮＡＳ、１９９２年；８９（２１）：１００７９〜８３頁）、およびｎｉｒＢプロモーター（Ｈａｒｂｏｒｎｅ他（１９９２年）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏ．６：２８０５〜２８１３頁）等（例えば、Ｄｕｎｓｔａｎ他（１９９９年）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７：５１３３〜５１４１頁；ＭｃＫｅｌｖｉｅ他（２００４年）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２２：３２４３〜３２５５頁；およびＣｈａｔｆｉｅｌｄ他（１９９２年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：８８８〜８９２頁を参照されたい）；シグマ７０プロモーター、例えば、コンセンサスシグマ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＡＸ７９８９８０、ＡＸ７９８９６１、およびＡＸ７９８１８３を参照されたい）；定常期プロモーター、例えば、ｄｐｓプロモーター、およびｓｐｖプロモーター等；病原性アイランドＳＰＩ−２に由来するプロモーター（例えばＷＯ９６／１７９５１を参照されたい）；ａｃｔＡプロモーター（例えばＳｈｅｔｒｏｎ−Ｒａｍａ他（２００２年）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０：１０８７〜１０９６頁を参照されたい）；ｒｐｓＭプロモーター（例えばＶａｌｄｉｖｉａおよびＦａｌｋｏｗ（１９９６年）．Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２２：３６７頁を参照されたい）；ｔｅｔプロモーター（例えば、Ｈｉｌｌｅｎ，Ｗ．およびＷｉｓｓｍａｎｎ，Ａ．（１９８９年）Ｉｎ  Ｓａｅｎｇｅｒ、Ｗ．ａｎｄ  Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，Ｕ．（編）、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ｍａｃｍｉｌｌａｎ，Ｌｏｎｄｏｎ、ＵＫ、第１０巻、１４３〜１６２頁を参照されたい）；ならびにＳＰ６プロモーター（例えばＭｅｌｔｏｎ他（１９８４年）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：７０３５頁を参照されたい）等。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）等の原核生物中での使用に適した強力なプロモーターとして、Ｔｒｃ、Ｔａｃ、Ｔ５、Ｔ７、およびＰラムダが挙げられるがこれらに限定されない。細菌宿主細胞中での使用のためのオペレーターの非限定的例として下記が挙げられる：ラクトースプロモーターオペレーター（ＬａｃＩリプレッサータンパク質は、ラクトースと接触した場合にコンフォメーションを変化させ、それによりＬａｃＩリプレッサータンパク質がオペレーターと結合することが防止される）、トリプトファンプロモーターオペレーター（トリプトファンと複合体を形成した場合に、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質は、オペレーターに結合するコンフォメーションを有し、トリプトファンの非存在下では、ＴｒｐＲリプレッサータンパク質は、オペレーターに結合しないコンフォメーションを有する）、およびｔａｃプロモーターオペレーター（例えば、ｄｅＢｏｅｒ他（１９８３年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２１〜２５頁を参照されたい）。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、例えば酵母細胞中での発現の場合、適切なプロモーターは、構成的プロモーター、例えば、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＥＮＯプロモーター、およびＰＹＫ１プロモーター等；または調節可能なプロモーター、例えば、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ７プロモーター、ＭＥＴ２５プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＣＹＣ１プロモーター、ＨＩＳ３プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰＤＨプロモーター、ＡＤＣ１プロモーター、ＴＲＰ１プロモーター、ＵＲＡ３プロモーター、ＬＥＵ２プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＴＰ１プロモーター、およびＡＯＸ１（例えばピキア（Ｐｉｃｈｉａ）での使用の場合）である。
【０１９８】
真核細胞中での発現の場合、適切なプロモーターとして下記が挙げられるがこれらに限定されない：軽および／または重鎖免疫グロブリン遺伝子プロモーターおよびエンハンサーエレメント；サイトメガロウイルス最初期プロモーター；単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター；初期および後期ＳＶ４０プロモーター；レトロウイルスからの末端反復配列中に存在するプロモーター；マウスメタロチオネイン−Ｉプロモーター；ならびに様々な当分野で既知の組織特異的プロモーター。構成的な哺乳動物プロモーターとして、下記の遺伝子のためのプロモーター：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ−アクチンプロモーター、および他の構成的プロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。真核細胞中で構成的に機能する追加の例のウイルスプロモーターとして、例えば下記が挙げられる：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えばＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニーマウス白血病ウイルスの長末端反復配列（ＬＴＲ）、および他のレトロウイルスからのプロモーター、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター。他の構成的プロモーターが当業者に既知である。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターとして、誘導性プロモーターも挙げられる。誘導性プロモーターは誘導剤の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、特定の金属イオンの存在下で転写および翻訳を促進するように誘導される。他の誘導性プロモーターが当業者に既知である。
【０１９９】
適切なベクターおよびプロモーターの選択は、十分に当分野における通常の技術のレベルの範囲内である。
【０２００】
本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、当分野で既知の任意のベクター（例えば発現ベクターまたはクローニングベクター）中で存在し得る。本明細書で使用される場合、発現ベクターは、適切な宿主細胞に導入された場合に、挿入されているコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含むか、またはＲＮＡウイルスベクターの場合には複製および翻訳に必要なエレメントを含むあらゆる核酸構築物を指す。発現ベクターとして、プラスミド、ファージミド、ウイルス、およびこれらの誘導体が挙げられる。
【０２０１】
多数の適切なベクターおよびプロモーターが当業者に既知であり、多くが、対象組換えベクターを生成するために市販されている。例として、下記のベクターが提供される。細菌：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＳＫ、ｐＢｓ  ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核生物：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。適切な発現ベクターとしてウイルスベクターが挙げられるがこれに限定されない。ウイルスベクターの例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：下記をベースとするウイルスベクター：ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；アデノウイルス（例えば、Ｌｉ他、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９頁、１９９４年；Ｂｏｒｒａｓ他、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４頁、１９９９年；ＬｉおよびＤａｖｉｄｓｏｎ、ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４頁、１９９５年；Ｓａｋａｍｏｔｏ他、Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７頁、１９９９年；ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４、およびＷＯ９５／００６５５を参照されたい）；アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ他、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６頁、１９９８年、Ｆｌａｎｎｅｒｙ他、ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１頁、１９９７年；Ｂｅｎｎｅｔｔ他、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３頁、１９９７年；Ｊｏｍａｒｙ他、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０頁、１９９７年、Ｒｏｌｌｉｎｇ他、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８頁、１９９９年；Ａｌｉ他、Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４頁、１９９６年；ＷＯ９３／０９２３９でのＳｒｉｖａｓｔａｖａ、Ｓａｍｕｌｓｋｉ他、Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９年）６３：３８２２〜３８２８頁；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ他、Ｖｉｒｏｌ．（１９８８年）１６６：１５４〜１６５頁；およびＦｌｏｔｔｅ他、ＰＮＡＳ（１９９３年）９０：１０６１３〜１０６１７頁を参照されたい）；ＳＶ４０；単純ヘルペスウイルス；レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾壊死ウイルス、ならびにレトロウイルス（例えば、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ他、ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３頁、１９９７年；Ｔａｋａｈａｓｈｉ他、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６頁、１９９９年を参照されたい）、ならびに骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳房腫瘍ウイルス））に由来するベクター等。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス、ハーベイマウス肉腫ウイルス、マウス乳癌ウイルス、およびラウス肉腫ウイルス；アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス；ＳＶ４０型ウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタイン・バーウイルス；パピローマウイルス；ヘルペスウイルス；ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；ならびにレトロウイルス等のＲＮＡウイルスからなる群から選択される核酸配列を含むウイルスベクターである。当分野で公知の他のベクターを容易に利用し得る。ある特定のウイルスベクターは、非必須遺伝子が目的の遺伝子に置き換えられている非細胞変性真核生物ウイルスをベースにする。非細胞変性ウイルスとしてレトロウイルスが挙げられ、このレトロウイルスのライフサイクルは、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写と、それに続く宿主細胞ＤＮＡへのプロウイルスの組込みを含む。レトロウイルスは、ヒトでの遺伝子治療試験用に承認されている。最も有用なのは、複製欠損性である（即ち、所望のタンパク質の合成を指示し得るが、感染性粒子を作り得ない）レトロウイルスである。そのように遺伝子が変更されているレトロウイルス発現ベクターは、インビボでの遺伝子の高効率の形質導入に一般的に有用である。複製欠損レトロウイルスを産生するための標準的なプロトコル（プラスミドへの外因性遺伝物質の組込み、プラスミドによるパッケージング細胞株のトランスフェクション、このパッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの産生、組織培養培地からのウイルス粒子の回収、およびウイルス粒子による標的細胞の感染の工程を含む）が、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９０年）およびＭｕｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第７巻、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．（１９９１年）に記載されている。
【０２０３】
一実施形態では、ウイルスは、二本鎖ＤＮＡウイルスであるアデノ随伴ウイルスである。アデノ随伴ウイルスは複製欠損性であるように操作されており、多種多様な細胞型および細胞種に感染し得る。さらに、アデノ随伴ウイルスは、熱および脂質溶媒の安定性；造血細胞等の多様な系統の細胞での高い形質導入頻度；ならびに重複感染の阻害の欠如により一連の複数の形質導入が可能であること等の利点を有する。報告によると、アデノ随伴ウイルスは部位特異的にヒト細胞ＤＮＡに組み込まれ、それにより、レトロウイルス感染に特徴的な挿入変異誘発の可能性および挿入遺伝子発現の変動性が最小限に抑えられる。加えて、野生型アデノ随伴ウイルス感染は、選択圧力の非存在下では１００回超の継代にわたり組織培養で引き継がれており、アデノ随伴ウイルスのゲノム組込みは比較的安定した事象であることが暗示される。アデノ随伴ウイルスはまた、染色体外でも機能し得る。
【０２０４】
別の実施形態では、ウイルスベクターは、本明細書で開示されているような抗Ｃ１ｓ抗体をコードするポリヌクレオチドを担持するように操作されているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）を得るための一般的な方法が開示されている。例えば、米国特許第８，７３４，８０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８０１号、ならびにこれらで引用されている参考文献を参照されたい。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、１つまたはそれ以上のＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）、および目的の導入遺伝子（例えば、最適化されたＦＩＸポリヌクレオチド配列）を含む。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶを作製する方法は、ＡＡＶキャプシドタンパク質またはその断片；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ末端逆位配列（ＩＴＲ）および目的の導入遺伝子で構成されているｒＡＡＶベクター；ならびに組換えＡＡＶベクターのＡＡＶキャプシドタンパク質へのパッケージングを可能にする十分なヘルパー機能をコードする核酸配列を含む所望の宿主細胞を培養することを含む。これらの手順および関連する手順を実施するための物質および方法が、例えば、米国特許第８，７３４，８０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８０１号、ＰＣＴ／ＵＳ１９９７／０１５６９２、ＰＣＴ／ＵＳ２００２／０３３６９２、ＰＣＴ／ＵＳ２００２／０３３６３０、ＷＯ２００７／１４８９７１、ＷＯ００／２０５６１、ＷＯ０３／０４２３６１、およびＷＯ２００７／０４６７０で開示されている。
【０２０５】
ほぼ全ての血清型に由来する様々なＡＡＶベクター配列の内の１つまたはそれ以上を、本発明に従って使用し得る。特定のＡＡＶベクター配列の選択は、既知のパラメータ（例えば、目的の指向性、必要とされるベクター収率等）により導かれるだろう。一般に、ＡＡＶ血清型は、アミノ酸レベルおよび核酸レベルで有意な相同性のゲノム配列を有し、遺伝子機能の関連したセットを提供し、関連しているビリオンを生じ、同様に複製し集合する。様々なＡＡＶ血清型のゲノム配列、およびゲノム類似性の概要に関して、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｕ８９７９０；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｊ０１９０１；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＡＦ０４３３０３；ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＡＦ０８５７１６；Ｃｈｌｏｒｉｎｉ他（１９９７年、Ｊ．Ｖｉｒ．７１：６８２３〜３３頁）；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ他（１９８３年、Ｊ．Ｖｉｒ．４５：５５５〜６４頁）；Ｃｈｌｏｒｉｎｉ他（１９９９年、Ｊ．Ｖｉｒ．７３：１３０９〜１３１９頁）；Ｒｕｔｌｅｄｇｅ他（１９９８年、Ｊ．Ｖｉｒ．７２：３０９〜３１９頁）；およびＷｕ他（２０００年、Ｊ．Ｖｉｒ．７４：８６３５〜４７）を参照されたい。ＡＡＶ血清型１、２、３、４、および５は、本発明の文脈での使用のためのＡＡＶヌクレオチド配列の例示的な供給源である。ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、もしくはＡＡＶ９、または例えばキャプシドシャッフリング技術およびＡＡＶキャプシドライブライリにより得られるかまたは新規に設計され、開発されたもしくは進化したＩＴＲからの新規に開発されたＡＡＶ様粒子もまた、ある特定の発明の用途に適している。Ｄａｌｋａｒａ，Ｄ他（２０１３年）、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．５（１８９）：１８９ｒａ７６；Ｋｏｔｔｅｒｍａｎ，ＭＡ  Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．（２０１４年）１５（７）：４５５頁を参照されたい。
【０２０６】
他の実施形態では、ベクターはレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、ベクターは、非分裂細胞に感染し得る組換えレンチウイルスのベクターである。
【０２０７】
レンチウイルスゲノムおよびプロウイルスＤＮＡは概して、レトロウイルスで見出される３種の遺伝子（ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ）を有し、これらの遺伝子は、２つの長末端反復配列（ＬＴＲ）の配列に隣接している。ｇａｇ遺伝子は内部構造（マトリックス、キャプシド、およびヌクレオキャプシド）タンパク質をコードし；ｐｏｌ遺伝子はＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（逆転写酵素）、プロテアーゼ、およびインテグラーゼをコードし；ｅｎｖ遺伝子は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質をコードする。５’ＬＴＲおよび３’ＬＴＲは、ビリオンＲＮＡの転写およびポリアデニル化を促進するのに役立つ。ＬＴＲは、ウイルス複製に必要な他の全てのシス作用配列を含む。レンチウイルスは、（ＨＩＶ−ｌ、ＨＩＶ−２、および／またはＳＩＶ中における）ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ｎｅｆ、およびｖｐｘ等のさらなる遺伝子を有する。
【０２０８】
５’ＬＴＲに隣接しているのは、ゲノムの逆転写（ｔＲＮＡプライマー結合部位）およびウイルスＲＮＡの粒子（Ｐｓｉ部位）への効率的なキャプシド形成に必要な配列である。キャプシド形成（またはレトロウイルスＲＮＡの感染性ビリオンへのパッケージング）に必要な配列がウイルスゲノムから欠けている場合には、シス欠損はゲノムＲＮＡのキャプシド形成を防止する。
【０２０９】
しかしながら、得られた変異体は、全てのビリオンタンパク質の合成を指示し得るままである。本発明は、非分裂細胞に感染し得る組換えレンチウイルスを産生する方法であって、パッケージング機能（即ち、ｇａｇ、ｐｏｌ、およびｅｎｖ、ならびにｒｅｖ、およびｔａｔ）を担持する２つ以上のベクターで適切な宿主細胞をトランスフェクトすることを含む、方法を提供する。本明細書の下記で開示されているように、機能的ｔａｔ遺伝子を欠くベクターは、ある特定の用途に望ましい。そのため、例えば、第１のベクターは、ウイルスｇａｇおよびウイルスｐｏｌをコードする核酸を提供し得、別のベクターは、パッケージング細胞を産生するためにウイルスｅｎｖをコードする核酸を提供し得る。本明細書においてトランスファーベクターとして同定される、異種遺伝子を提供するベクターをパッケージング細胞に導入することにより、目的の外来遺伝子を担持する感染性ウイルス粒子を放出する産生細胞が得られる。
【０２１０】
ベクターおよび外来遺伝子の上述の配置に従って、第２のベクターは、ウイルスエンベロープ（ｅｎｖ）遺伝子をコードする核酸を提供し得る。ｅｎｖ遺伝子は、レトロウイルス等のほぼ全ての適切なウイルスに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｅｎｖタンパク質は、ヒトおよび他の種の細胞の形質導入を可能にする広宿主性のエンベロープタンパク質である。
【０２１１】
レトロウイルス由来のｅｎｖ遺伝子の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶまたはＭＭＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶまたはＨＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭｕＭＴＶまたはＭＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶまたはＧＡＬＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）。肝炎ウイルスおよびインフルエンザの他のｅｎｖ遺伝子（例えば水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）タンパク質Ｇ（ＶＳＶ  Ｇ））も使用し得る。
【０２１２】
ウイルスｅｎｖ核酸配列を提供するベクターは、本明細書の他の箇所で説明されている調節配列と作動可能に結合している。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、ベクターとして、非分裂細胞を形質導入するベクターの能力を損なうことなくＨＩＶ病原性遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、およびｎｅｆが欠失されたレンチウイルスベクターが挙げられる。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、ベクターとして、３’ＬＴＲのＵ３領域が欠失しているレンチウイルスベクターが挙げられる。Ｕ３領域の欠失は、完全な欠失または部分的な欠失であり得る。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本明細書で説明されている抗体をコードするヌクレオチド配列を含む本発明のレンチウイルスベクターは、（ａ）ｇａｇ遺伝子、ｐｏｌ遺伝子、またはｇａｇ遺伝子およびｐｏｌ遺伝子を含む第１のヌクレオチド配列、ならびに（ｂ）異種ｅｎｖ遺伝子を含む第２のヌクレオチド配列で細胞内でトランスフェクトされ得、このレンチウイルスベクターは機能的ｔａｔ遺伝子を欠く。他の実施形態では、細胞は、ｒｅｖ遺伝子を含む第４のヌクレオチド配列でさらにトランスフェクトされる。ある特定の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、およびｎｅｆ、またはこれらの組合せから選択される機能的遺伝子を欠く。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｇａｇタンパク質、Ｒｅｖ反応因子、中央ポリプリン追跡（ｃｅｎｔｒａｌ  ｐｏｌｙｐｕｒｉｎｅ  ｔｒａｃｋ）（ｃＰＰＴ）、またはこれらの任意の組合せをコードする１種またはそれ以上のヌクレオチド配列を含む。
【０２１７】
レンチウイルスベクターの例は、ＷＯ９９３１２５１、Ｗ０９７１２６２２、Ｗ０９８１７８１５、Ｗ０９８１７８１６、およびＷＯ９８１８９３４で開示されており、これらは、その全体を参照によって本明細書に組み入れる。
【０２１８】
他のベクターとしてプラスミドベクターが挙げられる。プラスミドベクターは当分野で広く説明されており、当業者に公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９年を参照されたい。ここ数年、プラスミドベクターは、宿主ゲノム内で複製し得ず、宿主ゲノムに組み込まれないことから、インビボで細胞に遺伝子を送達するのに特に有利であることが見出されている。しかしながら、宿主細胞と適合するプロモーターを有するこれらのプラスミドは、このプラスミド内で作動可能にコードされている遺伝子からペプチドを発現し得る。商業的サプライヤから入手可能ないくつかの一般的に使用されるプラスミドとして、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、様々なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、様々なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０、およびｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが挙げられる。具体的なプラスミドのさらなる例として、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０；およびｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログ番号Ｖ５３２２０が挙げられ、全てはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ．）製である。他のプラスミドが当業者に公知である。さらに、プラスミドを、標準的な分子生物学的技術を使用してカスタムに設計し、ＤＮＡの特定の断片を除去し得、および／または付加し得る。
【０２１９】
Ｖ．宿主細胞
本開示は、対象の核酸で遺伝子が改変されている単離された遺伝子改変宿主細胞（例えばインビトロ細胞）を提供する。いくつかの実施形態では、対象の単離された遺伝子改変宿主細胞は、対象の抗体を産生し得る。そのような細胞は、「組換え細胞」または「遺伝子改変宿主細胞」と称される。本開示の遺伝子改変宿主細胞は、本開示の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
【０２２０】
適切な宿主細胞として、真核宿主細胞（例えば、哺乳動物細胞；昆虫宿主細胞；酵母細胞）、および原核細胞（例えば細菌細胞）が挙げられる。対象核酸の宿主細胞への導入を、例えば、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポソーム媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、または他の既知の方法によりもたらし得る。
【０２２１】
適切な哺乳動物細胞として、初代細胞および不死化細胞株が挙げられる。適切な哺乳動物細胞株として、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、および齧歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株等が挙げられる。適切な哺乳動物細胞株として下記が挙げられるがこれらに限定されない：ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＣＶＩ（サル腎臓株）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、およびＨＬＨｅｐＧ２細胞等。いくつかの場合では、細胞はＨＥＫ細胞である。ある特定の実施形態では、細胞はＨＥＫ  ２９３細胞である。いくつかの場合では、細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−６１）、ＣＨＯ−Ｍ細胞、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−３３５６）、ＤＵＸＢ１１（チャイニーズハムスター卵巣株、ＤＨＦＲマイナス）、Ｒ１６１０（チャイニーズハムスター線維芽細胞）、ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎臓株）、ＳＰ２／Ｏ（マウス骨髄腫）、Ｐ３ｘ６３−Ａｇ３．６５３（マウス骨髄腫）、ＢＦＡ−１ｃ１ＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球）、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、ＮＳ０、ＣＡＰ、およびＢＨＫ２１等である。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＯＳ細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は２９３細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。
【０２２２】
適切な酵母細胞として下記が挙げられるがこれらに限定されない：ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）、ピキア・フィンランディカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ）、ピキア・トレハロフイラ（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ）、ピキア・コクラマエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｋｏｃｌａｍａｅ）、ピキア・メンブラナエファキエンス（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｍｂｒａｎａｅｆａｃｉｅｎｓ）、ピキア・オプンティアエ（Ｐｉｃｈｉａ  ｏｐｕｎｔｉａｅ）、ピキア・サーモトレランス（Ｐｉｃｈｉａ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、ピキア・サリクタリア（Ｐｉｃｈｉａ  ｓａｌｉｃｔａｒｉａ）、ピキア・グエルキューム（Ｐｉｃｈｉａ  ｇｕｅｒｃｕｕｍ）、ピキア・ピジュペリ（Ｐｉｃｈｉａ  ｐｉｊｐｅｒｉ）、ピキア・スティピティス（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｔｉｓ）、ピキア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）、ピキア属の種（Ｐｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サッカロミケス・ケレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロミケス属の種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、メタノール資化酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、クルイウェロマイセス属の種（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、クルイウェロマイセス・ラクティス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、クロコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ニホンコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）、クリソスポリウム・ラクノウェンス（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、フザリウム属の種（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐ．）、フザリウム・グラミネウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、フザリウム・ベネナタム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｅｎｅｎａｔｕｍ）、アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）、およびコナミドリムシ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）等。いくつかの実施形態では、宿主細胞はサッカロミケス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞はピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）である。
【０２２３】
適切な原核細胞として、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）（例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））、およびラクトバチルス属の種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）等の様々な実験室株の内のいずれかが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ｃａｒｒｉｅｒ他（１９９２年）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１７６〜１１８１頁；米国特許第６，４４７，７８４号；およびＳｉｚｅｍｏｒｅ他（１９９５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７０：２９９〜３０２頁を参照されたい。典型的には、この実験室株は非病原性のものである。いくつかの実施形態では、宿主細胞は大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）である。
【０２２４】
本発明の単離核酸分子の宿主細胞への導入を、当業者に公知の様々な技術により達成し得る。これとして、トランスフェクション（例えば電気泳動およびエレクトロポレーション）、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープＤＮＡとの細胞融合、マイクロインジェクション、および無傷のウイルスによる感染が挙げられるがこれらに限定されない。Ｒｉｄｇｗａｙ，Ａ．Ａ．Ｇ．”Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ”第２４．２章、４７０〜４７２頁  Ｖｅｃｔｏｒｓ、ＲｏｄｒｉｇｕｅｚおよびＤｅｎｈａｒｄｔ編（Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．１９８８年）を参照されたい。最も好ましくは、宿主へのプラスミド導入は、エレクトロポレーションによるものである。形質転換細胞を、軽鎖および重鎖の産生に適切な条件下で増殖させ、重鎖および／または軽鎖のタンパク質合成に関してアッセイする。例示的なアッセイ技術として、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）、および免疫組織化学等が挙げられる。
【０２２５】
本発明の単離核酸分子を含む宿主細胞を、適切な増殖培地中で増殖させる。本明細書で使用される場合、用語「適切な増殖培地」は、細胞の増殖に必要な栄養素を含む培地を意味する。細胞増殖に必要な栄養素として、炭素源、窒素源、必須アミノ酸、ビタミン、ミネラル、および増殖因子が挙げられる。場合により、培地は、１種またはそれ以上の選択因子を含み得る。場合により、培地は、子ウシ血清またはウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含み得る。一実施形態では、培地はＩｇＧを実質的に含まない。増殖培地は一般に、例えば、薬物選択によるか、またはＤＮＡ構築物上の選択マーカーにより補完されるかもしくはＤＮＡ構築物と共トランスフェクトされる必須栄養素の欠乏により、ＤＮＡ構築物を含む細胞を選択する。培養される哺乳動物細胞を一般に、市販の血清含有培地または血清フリー培地（例えば、ＭＥＭ、ＤＭＥＭ、ＤＭＥＭ／Ｆ１２）で増殖させる。一実施形態では、培地はＣＤｏｐｔｉＣＨＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）である。別の実施形態では、培地はＣＤ１７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）である。使用される特定の細胞株に適した培地の選択は、当業者の水準内である。
【０２２６】
ＶＩ．医薬組成物
本発明の抗体を含む組成物は、適切な薬学的に許容される担体を含み得る。例えば、この組成物は、作用部位への送達のために設計された調製物への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および／または補助剤を含み得る。
【０２２７】
医薬組成物を、非経口投与（即ち、静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与）用に製剤化し得る。
【０２２８】
本発明の組成物は様々な形態であり得、例えば、液体（例えば、注射可能な溶液および注入可能な溶液）、分散液、懸濁液、半固体、および固体の投与形態であり得る。好ましい形態は投与様式および治療用途によって決まる。
【０２２９】
投与レジメンを、最適な望ましい反応を得るように調整し得る。例えば、単回ボーラスを投与してもよい、いくつかの分割した用量を経時的に投与してもよいし、治療状況の緊急事態により示されるように用量を相対的に減少してもいし増加させてもよい。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を製剤化することが有利である。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１９８０年）を参照されたい。
【０２３０】
適切な薬学的担体の非限定的な例はまた、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによりＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓでも説明されている。賦形剤のいくつかの例として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリコール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、およびエタノール等が挙げられる。組成物はまた、ｐＨ緩衝試薬と、湿潤剤または乳化剤とも含み得る。
【０２３１】
経口投与のために、医薬組成物は、常法により製造された錠剤またはカプセルの形態を取り得る。この組成物を液体（例えばシロップまたは懸濁液）としても調製し得る。この液体は、懸濁剤、乳化剤、非水ビヒクル、および保存料を含み得る。この調製物はまた、香料、着色料、および甘味料も含み得る。あるいは、この組成物を、水または別の適切なビヒクルとの構成のための乾燥品として提示し得る。
【０２３２】
口腔投与のために、組成物を、従来のプロトコルに従って錠剤またはロゼンジの形態を取り得る。
【０２３３】
吸入による投与のために、本発明に従う使用のための化合物は、場合により噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素、または他の適切な気体）と共に、賦形剤と共にもしくは賦形剤なしの噴霧エアロゾルの形態で、または加圧パックもしくは噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合には、計量された量を送達するためにバルブを設けることにより、投与量単位を決定し得る。この化合物および適切な粉末基剤（例えばラクトースまたはデンプン）の粉末ミックスを含む、吸入器（ｉｎｈａｌｅｒ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）での使用のための（例えばゼラチンの）カプセルおよびカートリッジを製剤化し得る。
【０２３４】
医薬組成物を、例えば従来の座薬基剤（例えば、ココアバターまたは他のグリセリド）を含む座薬または停留浣腸として、直腸投与用にも製剤化し得る。
【０２３５】
一実施形態では、医薬組成物は、抗体（例えば、抗因子Ｂ抗体、二重特異性抗体、もしくは多重特異性抗体）、この抗体をコードするポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドを含むベクター、またはこのベクターを含む宿主細胞と、薬学的に許容される担体とを含む。
【実施例】
【０２３６】
ここで詳細に本発明を説明することにより、本発明は、説明の目的のみのために含まれ、本発明を限定することは意図されない下記の実施例への参照によって、より明確に理解されるであろう。
【実施例１】
【０２３７】
抗因子Ｂ抗体の産生
抗ヒト補体因子Ｂ（ｆＢｂ）モノクローナル抗体を下記のように産生した：精製したｆＢｂタンパク質によるＮＺＢＷマウスの免疫付与により、当業者に既知の技術を使用して、標的への結合に関してスクリーニングされるハイブリドーマライブラリを生成した。フローサイトメトリーを使用して単細胞クローンを生成し、この個々のクローンからの上清を、直接酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）により、ｆＢｂへの優先的な結合に関してスクリーニングした。ｆＢｂに特異的に結合するクローンを培養で展開し、ハイブリドーマ上清からモノクローナル抗体を精製した。精製したｍＡｂを、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｗａｙ  ＷＩＥＳＬＡＢキット（Ｅｕｒｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、代替経路（ＡＰ）活性の阻害に関してさらにスクリーニングした。これらの結果から、ｆＢｂに結合する新規の抗体を同定した。本明細書では、この抗体を抗因子Ｂ  Ａｂと命名した。
【実施例２】
【０２３８】
ヒト因子Ｂへの抗因子Ｂ  Ａｂの結合親和性結合
抗因子Ｂ  Ａｂの相対ＥＣ５０値をＥＬＩＳＡにより決定した。非標識の精製したヒト因子Ｂｂを高結合ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、精製したｍＡｂの量を増加させつつ（１０μｇ／ｍＬで始まる３倍連続希釈）共にインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を検出に使用し、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１−Ｓｔｅｐ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と反応させた。反応を等量の１Ｎ硫酸で停止させ、ＯＤ４５０ｎｍでの吸光度を測定した。各モノクローナルのＥＣ５０を、ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用して算出した。抗因子Ｂ  Ａｂは、完全長のヒト補体因子Ｂとその活性酵素型である因子Ｂｂとの両方に類似の親和性で結合することを見出した。
【実施例３】
【０２３９】
抗因子Ｂ  Ａｂは、Ｃ３ｂＢｂ複合体の因子Ｈ解離をブロックする
ヒトまたはカニクイザルのいずれかの血清中の抗因子Ｂ  Ａｂのプレインキュベーションにより、補体の代替経路（ＡＰ）の濃度依存的な減衰が引き起こされ、ＡＰ  ＥＬＩＳＡキットを使用してインビトロで実証するか、またはＡＰを特異的に活性化するように設計されているウサギ赤血球溶血実験で実証する。
【０２４０】
Ｏｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して、因子Ｈ（ＦＨ）によるＣ３ｂＢｂ複合体の解離速度への抗因子Ｂ抗体の効果を調べた。簡潔に説明すると、ビオチン化されたプロパージンを調製し、ストレプトアビジンがコーティングされたＯｃｔｅｔプローブに結合させた。その後、この結合したプロパージンプローブを、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＣ３ｂＢｂ複合体含有溶液中でインキュベートした。この溶液を、５０μｇ／ｍｌの濃度で抗体（抗因子Ｂ  Ａｂ、抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２、Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ、抗因子Ｂ  Ｆａｂ、Ｃ３ｂＢｂ、Ｃ３ｂ＋ｆＢ、またはＣ３ｂのみ）を混合することにより調製した。Ｃ３転換酵素がプロパージンプローブに結合する場合には、この会合を測定した。図１を参照されたい。インキュベーションの６００秒後、このプローブを、緩衝液のみを含む溶液に移して、このプロパージン結合プローブからのＣ３ｂＢｂ複合体の解離を測定した。実験の開始から７８０秒後に、アッセイ緩衝液中に５０μｇ／ｍＬの因子Ｈを含む解離溶液を添加した。図１Ａに示すように、抗因子Ｂ  Ａｂは、Ｃ３ｂＢｂ複合体に最も強力に結合したままであった。このことは、抗因子Ｂ  Ａｂは、Ｃ３ｂＢｂ複合体中のＡＰ  Ｃ３転換酵素の一次流体相阻害因子である因子ＨがＣ３ｂＢｂ複合体に結合して混乱させることを防止することを実証する。
【実施例４】
【０２４１】
抗因子Ｂ  Ａｂは、Ｃ３ｂＢｂ複合体のＣＤ５５解離をブロックする
上記の実施例３で説明したのと同一のＯｃｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、ＣＤ５５によるＣ３ｂＢｂ複合体の解離速度への抗因子Ｂ抗体の効果を調べた。簡潔に説明すると、ビオチン化されたプロパージンを調製し、ストレプトアビジンがコーティングされたＯｃｔｅｔプローブに結合させた。その後、この結合したプロパージンプローブを、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＣ３ｂＢｂ複合体含有溶液中でインキュベートした。この溶液を、５０μｇ／ｍｌの濃度で抗体（抗因子Ｂ  Ａｂ、抗因子Ｂ  Ｆ（ａｂ’）２、Ｑｕｉｄｅｌ  α−ｆＢ、抗因子Ｂ  Ｆａｂ、Ｃ３ｂＢｂ、Ｃ３ｂ＋ｆＢ、またはＣ３ｂのみ）を混合することにより調製した。Ｃ３転換酵素がプロパージンプローブに結合する場合には、この会合を測定した。図２を参照されたい。インキュベーションの６００秒後、このプローブを、緩衝液のみを含む溶液に移して、このプロパージン結合プローブからのＣ３ｂＢｂ複合体の解離を測定した。実験の開始から７８０秒後に、アッセイ緩衝液中に５０μｇ／ｍＬのＣＤ５５を含む解離溶液を添加した。図１Ｂに示すように、抗因子Ｂ  Ａｂは、Ｃ３ｂＢｂ複合体に最も強力に結合したままであり、ＣＤ５５がＣ３ｂＢｂ複合体に結合してこのＣ３ｂＢｂ複合体の解離を混乱させることを防止した。これらのデータは、抗因子Ｂ  Ａｂは、補体カスケードの膜結合阻害性調節因子であるＣ３  ＡＰ転換酵素へのＤＡＦ／ＣＤ５５の結合を防止することを実証する。
【実施例５】
【０２４２】
抗因子Ｂ  Ａｂは血清中でＣ３切断を誘発する
正常ヒト血清を試験して、Ｍ４が血清中でＣ３の切断を誘発するかどうかを決定した。ＣＡＰ希釈緩衝液との最初のインキュベーションの後、Ｍ４、Ｍ４  Ｆａｂ、またはＱｕｉｄｅｌ  α−ｆＢを試料に添加した。陰性対照として、ＣＡＰ希釈緩衝液中の１０％のＮＨＳのみ、またはｍＩｇＧ２ａ抗体を含むＣａｐ希釈緩衝液を血清に添加した。血清試料への抗体の添加の１０分後、２０分後、または３０分後に、血清のアリコートを採取して試料緩衝液（還元剤を含む）に添加した。この血清から抽出した溶解物をウエスタンブロットで分析した。溶解物を４〜１２％のＮｕＰＡＧＥ  Ｇｅｌ（ＭＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒ）上で泳動させ、還元させた。細胞膜への転写の後、この細胞膜を、１：１０００の希釈でポリクローナルウサギαヒトＣ３一次抗体と共にインキュベートし、１：５０００の希釈でＬｉｃｏｒ抗ウサギＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。
【０２４３】
正常なＣ３は約１４０ｋＤａで検出される。図２に示すように、抗因子Ｂ  Ａｂおよび抗因子Ｂ  Ｆａｂ（緩衝液のみ、ｍＩｇＧ２ａ、またはＱｕｉｄｅｌ  α−ｆＢと共にインキュベートされた血清ではない）は、時間依存的にＣ３切断を誘発した。抗因子Ｂ  Ａｂおよび抗因子Ｂ  Ｆａｂの処理による正常なＣ３発現の時間依存的な低下も存在した。２０分および３０分にわたり抗因子Ｂ  Ａｂとインキュベートされた試料では、切断されたＣ３が約６５ｋＤａで検出され、このことはＣ３の切断を実証する。
【実施例６】
【０２４４】
抗因子Ｂ  Ａｂは、溶液中で因子Ｈの活性およびＣＤ５５  ＤＡＦの活性の両方をブロックする
次に、正常ヒト血清を試験して、抗因子Ｂ  Ａｂが溶液中で因子Ｈの活性およびＤＡＦ／ＣＤ５５の活性の両方をブロックするかどうかを決定した。Ｃ３、因子Ｂ、抗因子Ｂ  Ａｂ、因子Ｈ、および／またはＤＡＦ／ＣＤ５５との最初のインキュベーションの後、因子Ｄを試料に添加し、４５分にわたり３７℃でインキュベートした。４５分後、血清のアリコートを採取して試料緩衝液（還元剤を含む）に添加した。この血清から抽出した溶解物をゲル上で分離し、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ染色を使用して分析した。図３に示すように、因子ＨまたはＤＡＦ／ＣＤ５５の処理のみは正常なＣ３発現を維持するが、抗因子Ｂ  Ａｂと因子ＨまたはＤＡＦ／ＣＤ５５との処理は、Ｃ３の切断を引き起こす。レーン６および８における単一バンドと比較したレーン７および９における約１４０ｋＤａでの二重バンドを参照されたい。そのため、抗因子Ｂ  Ａｂは、溶液中で因子Ｈの活性およびＤＡＦ／ＣＤ５５の活性の両方をブロックする。
【実施例７】
【０２４５】
キメラ抗因子Ｂ  Ａｂ
ハイブリドーマクローン抗因子Ｂ  Ａｂ用の可変ドメインを、クローニングに必要な追加のフランキング配列と一緒に合成した。この可変ドメインを、マウス可変領域とヒトＩｇＧ４定常／Ｆｃ領域とから構成されるキメラ抗体を生成する発現ベクターにクローニングした。この構築物をＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトし、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅを使用して培養上清から精製した。ヒトＩｇＧ４抗体の定常領域上に移植された抗因子Ｂ  Ａｂの可変領域を含むキメラ抗体を、キメラ抗因子Ｂ  Ａｂと称する。
【実施例８】
【０２４６】
キメラ抗因子Ｂ  Ａｂを使用するインビボアッセイ
インビボでの実験を実施して、カニクイザルにおけるキメラ抗因子Ｂ  Ａｂの薬物動態および薬力学を評価した。簡潔に説明すると、カニクイザルに、３０ｍｇ／ｋｇのキメラ抗因子Ｂ  Ａｂを静脈内投与した。最大３０日の様々な時点で血漿および血清を採取した。図４に示すように、ＰＫ／ＰＤ研究の期間を通じて特定の時点で採取した血清試料および血漿試料の分析から、キメラ抗因子Ｂ  Ａｂの静脈内投与により、投与された動物において検出可能な血清ＡＰ活性が喪失されることが明らかになった。
【０２４７】
血清古典経路活性も有意に減衰することも分かった。これらの試料のウエスタンブロット分析はＣ３の低下を示し、カニクイザル血漿Ｃ３濃度を測定するために構築されたインハウスのＥＬＩＳＡを使用して知見を裏付けた。
【０２４８】
インビボ研究からのデータと共に、この結果から、抗因子Ｂ  Ａｂおよびキメラ抗因子Ｂ  Ａｂが流体相ＡＰ  Ｃ３転換酵素および固体相ＡＰ  Ｃ３転換酵素の両方に結合して安定化させ、その分解を防止し、Ｃ３の消費および血清補体活性の喪失をもたらすという仮説が導かれた。
【実施例９】
【０２４９】
抗因子Ｂ  Ａｂのヒト化抗体の治療的使用
ＡＰ  Ｃ３転換酵素に結合してこのＡＰ  Ｃ３転換酵素の阻害を防止する、抗因子Ｂ  Ａｂまたはキメラ抗因子Ｂ  Ａｂの完全ヒト化バージョンを使用して、自然免疫系が正常に機能しない患者の細胞の表面上での補体活性を治療的に標的として誘発する。
【実施例１０】
【０２５０】
抗因子Ｂ  Ａｂの二重特異性抗体の治療的使用
二重特異性抗体を、ヒト化抗因子Ｂ  Ａｂと、目的の細胞上の膜結合タンパク質に結合する第２の抗体の可変領域（または例えばＦ（ａｂ）領域もしくはＦ（ａｂ’）２領域）とで構築し、この二重特異性の第２の抗体をホーミング機構として使用する。例えば、一方の端部上のヒト化抗因子Ｂ  Ａｂと他方の端部上のＣＤ２０に対する可変領域とからなる二重特異性抗体を使用して、（リンパ腫または自己免疫疾患のいずれかの場合で）Ｂ細胞を特異的に標的とし得た。同様に、ヒト化抗因子Ｂ  Ａｂまたはその断片と、電位開口型カリウムチャネルＫｖ１．３（多発性硬化症および１型糖尿病等の自己免疫疾患を有する患者の自己抗原特異的Ｔエフェクター細胞の表面上で上方調節されている）を標的とする可変領域とを含む二重特異性抗体を使用して、非自己反応性リンパ球を保存しつつ自己免疫性リンパ球の表面上で特異的に補体カスケードを活性化し得た。そのため、ヒト化抗因子Ｂ  Ａｂの可変領域およびホーミング抗体を二重特異的に使用することにより、目的の任意の細胞型の表面上で補体活性を集中するプラットフォームが提供される。
【実施例１１】
【０２５１】
代替補体経路の阻害は、抗体がコーティングされたＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の全血死滅を防止しない
背景：病原体の検出およびクリアランスに関与する補体カスケードは、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）、または代替経路（ＡＰ）により活性化され、これらのそれぞれは、経路特異的なパターン認識受容体により独立して活性化される。しかしながら、多数の疾患で異常な補体活性化が観察される。Ｃ５のレベルでの治療的補体阻害は、様々な疾患の処置に成功したアプローチであることが証明されているが、予防的にワクチン接種する場合であっても感染（特に、浸潤性の髄膜炎菌性疾患）のリスクの増加と関連する。経路特異的な成分を標的とすることにより、免疫監視のために他の経路をそのままの状態に保ちつつ、疾患の発症を引き起こす経路を選択的に阻害するという理論的な利点が得られる。
【０２５２】
目的：この実験は、抗因子Ｂｂ抗体が潜在的な感染リスクの増加を示すかどうかを調べることである。本発明者らは、インビトロでの殺菌アッセイ（補体媒介）および全血死滅アッセイ（補体媒介および免疫細胞媒介）を実施して、Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の死滅におけるＡＰの相対的な寄与を評価した。
【０２５３】
方法：実験を、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株ＴＩＧＲ４および群Ｃ  Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）株４２４３を使用して実施した。フローサイトメトリーを使用してＣ３およびＣ４の沈着を測定し、経路特異的阻害剤を使用して、細菌上でのオプソニン化補体断片の沈着における様々な経路の相対的な寄与を決定した。無傷の補体および食細胞の両方を含む正常ヒト血漿および全血死滅アッセイにおける殺菌実験を、抗因子Ｂｂ抗体の存在下で実施した。ワクチン接種状態および非ワクチン接種状態それぞれを模倣するために莢膜抗体の存在下または非存在下で実験を実施した。
【０２５４】
結果：飽和濃度の抗Ｃ１ｓ抗体を使用するＣＰのみの阻害により、正常ヒト血漿および全血の両方においてＣ４沈着およびＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の死滅が防止された。しかしながら、特異的な抗髄膜炎菌性抗体を含む全血死滅アッセイでは、抗体がコーティングされたＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の死滅を防止するためにはＣＰおよびＡＰの両方の同時の阻害が必要であった。抗体がコーティングされたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の場合には、抗因子Ｂｂ抗体のみでＣ３沈着が完全にブロックされた。予想されるように、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の死滅は、食細胞の存在下では全血中でのみ観察され、ＡＰをブロックしても特異的抗体の存在下では肺炎球菌の死滅は損なわれなかった（３時間で＞９０％の死滅）。
【０２５５】
結論：本明細書で提示されるデータは、抗体がコーティングされたＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は補体のＡＰを活性化し得、細胞膜傷害複合体により媒介される死滅が、ブロックされていない経路により依然として起こり得ることから、経路の阻害は、抗Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）抗体の存在下でＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）死滅に有意な影響を及ぼさないであろうことを示唆する。食細胞を必要とする、抗体により媒介されるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の死滅も、ＡＰがブロックされた場合にはスムーズに進行した。これらのデータは、Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチン接種が重要であり、治療用ＡＰ阻害剤を投与する際に有効である可能性があることを示唆する。
【０２５６】
特定の実施形態の上記の説明は、他者が、当分野の技能内の知識を適用することにより、本発明の全体的な概念から逸脱することなく、過度な実験なしに、そのような特定の実施形態を容易に改変し得、および／または様々な用途に適応し得るように、本発明の全体的な性質を十分に明らかにする。したがって、そのような適応および改変は、本明細書で提示されている教示および指導に基づいて、開示されている実施形態の等価物の意味および範囲内であることが意図されている。本明細書の用語または専門用語は、説明を目的としており限定を目的としておらず、そのため、本明細書の専門用語または用語は、教示および指導を考慮して当業者により解釈されるべきものであることを理解すべきである。
【０２５７】
本発明の他の実施形態は、本明細書の考察および本明細書で開示されている本発明の実行から当業者に明らかであるだろう。本明細書および実施例は、下記の特許請求の範囲により示されている本発明の真の範囲および趣旨により、例示的なものとしてのみ考慮されることが意図されている。
【０２５８】
本明細書で開示されている全ての刊行物、特許、および特許出願を、個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照によって組み入れることが具体的にかつ個々に示されていたのと同程度に、参照によって組み入れる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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