(57)【要約】本明細書には、NK-92細胞を用いて白血病を治療または予防するための方法が記載される。特に、残存（残留ともいう）白血病細胞および/または白血病幹細胞を殺傷するための1用量または複数用量のNK-92細胞を患者に投与することにより、白血病を治療または予防する方法が提供される。様々な態様では、NK-92細胞は、難治性もしくは抵抗性の白血病、または従来の治療法を受けて白血病の治療により回復している患者において再発した白血病を治療および/または予防するために患者に投与される。2020534252.tif 000008
2020534252.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以前に白血病の治療を受けた患者における残存白血病細胞を処置するための方法であって、白血病の従来の治療法の後で該患者に残っている残存白血病細胞の集団を殺傷するのに十分な量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
【請求項２】
前記患者にNK-92細胞を投与する前、残存白血病細胞の前記集団が、白血病の治療前に該患者で検出された白血病細胞のレベルの約10％未満のレベルで該患者に存在する、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記残存白血病細胞が白血病幹細胞を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記残存白血病細胞がリンパ球、赤血球、白血球、または血小板の骨髄細胞前駆細胞を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記残存白血病細胞が前記従来の治療法に抵抗性である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
白血病から回復している患者における白血病の再発を抑制するための方法であって、該患者における白血病の再発を抑制するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
【請求項８】
前記患者における白血病の再発が、NK-92細胞の投与後少なくとも約3ヶ月間抑制される、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１０】
前記白血病がリンパ球性白血病または骨髄性白血病である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
白血病の治療のための、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物。
【請求項１２】
以前に白血病から回復している患者における白血病の再発を治療するための方法であって、該患者における再発白血病を治療するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１３】
前記1用量または複数用量のNK-92細胞が、少なくとも1つの抗白血病薬と組み合わせて投与される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
白血病の従来の治療を受けた患者における白血病を治療するための方法であって、さらなる従来の治療の代替法として、治療量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項１５】
1用量または複数用量のNK-92細胞の前記患者への投与が、該患者における白血病の再発後の一次療法として役立つ、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記NK-92細胞が未改変NK-92細胞である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記NK-92細胞が遺伝子改変NK-92細胞である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記NK-92細胞が前記患者に投与する前に照射される、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記NK-92細胞がインターロイキン-2（IL-2）を分泌する、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
白血病または残存白血病の治療に使用するための、請求項11に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本開示は、NK-92細胞を用いて白血病の再発を治療、予防または抑制するための方法に関する。本開示はさらに、NK-92細胞を用いて白血病幹細胞を標的化しかつ排除する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
白血病などの悪性血液疾患は、世界中で最も多く見られる癌である。急性骨髄性白血病（AML）のような白血病は、ごくありふれた小児悪性腫瘍の一つであり、子供では病気による死亡の主原因であり続けている。成人では、血液系の悪性腫瘍が全ての癌の約10％を占めている。標的療法と併せた化学療法が治療の中心であることに変わりはないが、白血病やその他の血液由来の癌は高い再発率を有する。例えば、従来の治療法でAMLを治療された患者の約40〜60％は、寛解導入化学療法（remission induction chemotherapy）後に再発を示したと報告されている。他の例では、急性リンパ芽球性白血病（ALL）を患っている小児患者が、寛解導入化学療法後に20％の再発率を示したと報告されている。Choi et al., Blood 110(1):632-639 (2007)。現在では、骨髄移植が白血病を再発した患者に対する唯一の治療手段となっている。
【０００３】
そのような白血病では、従来の治療法（例えば、化学療法および/または放射線療法）が全ての異常な細胞、特に該疾患に関与する異常な幹細胞を全滅させることができないため、再発が起こると考えられている。しかしながら、一次療法としての従来の治療法は、患者の実質上全ての白血病細胞を排除する上で有効であり得る。
【０００４】
白血病の現在の治療法には、非限定的な例として、化学療法、ホルモン療法、および/または患者の異常な細胞を根絶するための放射線治療が含まれる（例えば、Stockdale, 1998, Medicine, vol. 3, Rubenstein and Federman編, Chapter 12, Section IVを参照されたい）。最近では、そのような治療法に生物学的療法または免疫療法も含まれている。しかし、これらのアプローチの全てが患者に重大な不利益をもたらすことは、当技術分野で周知である。
【０００５】
免疫療法では、特定の標的細胞、すなわち白血病細胞に対して細胞傷害活性を有する免疫系の特定の細胞が使用される。例えば、内因性のナチュラルキラー（NK）細胞は、自然免疫系の主成分を構成する細胞傷害性リンパ球である。NK細胞は、一般的に循環リンパ球の約10〜15％に相当し、抗原に関して非特異的に、事前免疫感作なしで、ウイルス感染細胞と多くの悪性細胞を含む標的細胞に結合して、それらを死滅させる。Herberman et al., Science 214:24 (1981)。標的細胞の死滅は、細胞溶解を誘発することにより起こる。この目的に使用される内因性NK細胞は、対象の血液の末梢血リンパ球（「PBL」）画分から単離され、十分な数の細胞を得るために細胞培養で培養され、その後、細胞がその対象に再注入される。NK細胞は、エクスビボ療法とインビボ治療の両方で、ある程度有効であることが示されている。
【０００６】
NK-92細胞は、特定の癌の治療において治療薬として以前に評価されている。内因性のNK細胞とは異なり、NK-92細胞は、非ホジキンリンパ腫の患者の血液中で発見され、そこから得られた癌細胞株である。NK-92細胞は、正常なNK細胞によって提示される主要な抑制性受容体を欠くが、活性化受容体の大部分を保持する。NK-92細胞株の特徴付け（Gong et al., 1994; Yan et al., 1998）により、NK-92細胞はNK細胞よりもかなり広い範囲の白血病細胞型に対して細胞傷害性があり、さらに、これらの標的に対してより高いレベルの細胞傷害性をしばしば示すことが明らかにされた。それにもかかわらず、NK-92細胞は正常な細胞を攻撃することもなく、免疫拒絶反応を誘発することもない。
【０００７】
したがって、特に、白血病が従来の治療法に対して難治性もしくは抵抗性を示す場合、または白血病が従来の治療法による治療後に再発したか、再発のリスクがある場合には、患者の白血病を治療または予防する新しい方法が引き続き必要とされている。
【発明の概要】
【０００８】
本明細書では、白血病の治療のために、化学療法および/または放射線療法などの従来の治療法を、NK-92細胞免疫療法と組み合わせて、使用することが記載される。一局面では、本開示は、従来の治療法と同時にまたはその後に、残存（remnant）（残留ともいう）白血病細胞を殺傷するための、1用量または複数用量のNK-92細胞を患者に投与することにより、白血病から回復している患者における白血病の再発を治療または予防する方法を包含する。様々な態様では、難治性または抵抗性である白血病の再発を防止するために、NK-92細胞が患者に投与される。他の態様では、従来の治療法の下で白血病の治療を受けた後に白血病が再発したか、または再発するリスクがある患者に、NK-92細胞が投与される。さらに他の態様では、1用量または複数用量のNK-92細胞が、任意で少なくとも1つの抗白血病薬と組み合わせて、該患者に投与される。
【０００９】
理論に束縛されるものではないが、従来の治療法の後の癌再発の少なくとも一部は、さもなければ寛解状態にあるとみなされる患者において、その治療法が癌幹細胞を完全に根絶できないためであると考えられる。癌幹細胞は、治療後しばらくの間患者の体内にとどまって、徐々に増殖し、結果として癌が復帰する（再発する）ことがある。例えば、白血病幹細胞は、寛解にもかかわらず患者の体内に残り、最終的に白血病の再発を引き起こす可能性がある。内因性NK細胞は癌幹細胞を標的にして、殺傷する。NK-92細胞を用いた患者の治療は、癌の再発を予防するかまたは遅らせるために、癌幹細胞を標的にして、癌幹細胞を根絶（またはほぼ根絶）すると考えられる。
【００１０】
一局面では、以前に白血病の治療を受けた患者における残存白血病細胞を処置するための方法が提供され、その方法は、白血病の従来の治療法の後で患者に残っている残存白血病細胞の集団を殺傷するのに十分な量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。
【００１１】
いくつかの態様では、患者にNK-92細胞を投与する前、残存白血病細胞の集団は、白血病の治療前に患者で検出された白血病細胞のレベルの約10％未満のレベルで該患者に存在する。いくつかの態様では、残存白血病細胞は白血病幹細胞を含む。いくつかの態様では、残存白血病細胞はリンパ球、赤血球、白血球、または血小板の骨髄細胞前駆細胞を含む。いくつかの態様では、従来の治療法は化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植の1つまたは複数を含む。いくつかの態様では、残存白血病細胞は従来の治療法に対して抵抗性である。
【００１２】
一態様では、NK-92細胞は従来の癌治療と同時に患者に投与される。一態様では、NK-92細胞は従来の癌治療の後に、例えば治療の直後に、かつ/または患者が寛解状態にある間に、患者に投与される。一態様では、NK-92細胞は白血病の再発の最初の兆候（複数可）の際に患者に投与される。一態様では、NK-92細胞は白血病の再発時に患者に投与される。
【００１３】
特に、従来の治療法が功を奏して癌がなくなったようにみえる白血病患者に対しては、従来の治療法では手に負えない異常な幹細胞を含めて、残っている未検出の癌細胞を根絶するために、かつ/または該疾患の再発を防ぐために、NK-92細胞免疫療法が提供される。そうした方法では、唯一の一次療法としてNK-92免疫療法または従来の治療法のいずれかを使用する場合と比較して、再発率が大幅に減少すると考えられる。
【００１４】
一局面では、従来の治療法による白血病の一次治療を受けた患者において、異常な幹細胞などの、残っている白血病細胞を根絶するための方法が提供される。一態様では、その方法は、従来の治療法による白血病の一次治療を受けていて、回復していると考えられる患者集団を特定する段階；および異常な幹細胞などの、残っている白血病癌細胞の全てまたは実質上全て（例えば、少なくとも50％、60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、または99.9％）を根絶するために、有効量のNK-92細胞を該患者に投与する段階；を含む。
【００１５】
別の局面では、白血病から回復している患者における白血病の再発を抑制するための方法が提供され、その方法は、存在すれば、該患者に白血病の再発を引き起こす可能性のある異常な幹細胞などの、残っている白血病細胞の全てまたはほぼ全てを根絶するために、有効量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。いくつかの態様では、該方法は、患者における白血病の再発を抑制するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。一態様では、患者における白血病の再発が防止される。一態様では、患者における白血病の再発が遅延される。いくつかの態様では、患者における白血病の再発は、NK-92細胞の投与後少なくとも約3ヶ月間抑制される。いくつかの態様では、白血病はリンパ球性白血病または骨髄性白血病である。
【００１６】
別の局面では、一次療法として白血病の従来の治療を受けた患者における再発白血病を治療するための方法が提供され、その方法では、1用量または複数用量のNK-92細胞が該患者に投与される。いくつかの態様では、該方法は、以前に白血病から回復している患者における白血病の再発を治療するためのものであり、該方法は、該患者における再発白血病を治療するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。一態様では、該患者は、少なくとも1つの抗白血病薬をNK-92細胞治療と組み合わせて投与される。
【００１７】
別の局面では、白血病の従来の治療を受けた患者における白血病を治療するための方法が提供され、その方法は、化学療法の代替法として、治療量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与することを含む。いくつかの態様では、該患者に投与される1用量または複数用量のNK-92細胞は、該患者に白血病が再発した後の一次療法として役立つ。
【００１８】
いくつかの態様では、NK-92細胞は未改変NK-92細胞である。いくつかの態様では、NK-92細胞は遺伝子改変NK-92細胞である。いくつかの態様では、NK-92細胞は患者に投与する前に照射される。いくつかの態様では、NK-92細胞はインターロイキン-2（IL-2）を分泌する。
【００１９】
別の局面では、遺伝的に白血病にかかりやすい患者を治療するために方法が提供され、その方法は、該患者を治療するのに十分な、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。
【００２０】
本明細書に記載の局面および態様のいずれにおいても、従来の治療法には、限定するものではないが、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、骨髄移植、生物学的療法、または免疫療法（NK-92療法以外）のうちの1つ以上が含まれる。
【００２１】
別の局面では、白血病を治療するための、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物が提供される。
【００２２】
別の局面では、骨髄異形成症候群などの白血病に遺伝的にかかりやすい患者を治療するための、予防用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物が提供される。
【００２３】
別の局面では、骨髄異形成症候群などの白血病に遺伝的にかかりやすい患者を効果的に治療するための、または回復期の患者における白血病の再発を抑制するための、予防用量のNK-92細胞を含むキットが提供される。
【００２４】
別の局面では、疾患を治療するための本明細書に記載の組成物の使用が提供される。いくつかの態様では、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患治療用の医薬として使用するために提供される。いくつかの態様では、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患の治療に使用するために提供される。いくつかの態様では、本明細書に記載のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患の治療に使用するために従来の治療法と組み合わされる。いくつかの態様では、該疾患は白血病または残存白血病である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図1は、1日目および2日目の、治療前および注入の4時間後に全ての患者に対して行われたNK細胞の細胞傷害作用を示す。1人の患者（患者5）を除き、aNK細胞を注入した後に、末梢血での細胞傷害性の有意な増加は観察されなかった。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
定義
本明細書および後続の特許請求の範囲では、以下の意味を持つと定義される多くの用語を参照されたい。
【００２７】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「1つの（a）」、「1つの（an）」、および「その（the）」には、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の指示対象が含まれる。
【００２８】
数値の前に使用される用語「約」は、記載された値を含み、かつ文脈によって決定づけられた意味を有する（例えば、特定の量の測定に伴う程度の誤差を含む）。用語「約」には、癌免疫療法の分野の当業者が通常経験するばらつきが含まれる。例えば、約という用語は、その値が列挙された数値または範囲の±0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、または10.0％だけ変化し得ることを示す。常に明示的に記載されるわけではないが、全ての数字表示はその前に用語「約」が付いている可能性があることを理解されたい。また、常に明確に記載されるわけではないが、本明細書に記載の試薬は単なる例示であって、その等価物が当技術分野で知られていることも理解されたい。
【００２９】
用語「ナチュラルキラー（NK）細胞」とは、特定の抗原刺激の非存在下で、主要組織適合遺伝子複合体（MHC）クラスによる拘束なしに、標的細胞を殺傷する免疫系の細胞を指す。標的細胞は、腫瘍細胞またはウイルスを保有する細胞であり得る。NK細胞は、CD56表面マーカーの存在とCD3表面マーカーの非存在によって特徴付けられる。
【００３０】
用語「内因性NK細胞」は、本明細書に記載のNK-92細胞とは区別されるような、ドナー（または患者）由来のNK細胞を指すために使用される。内因性NK細胞は、一般に、NK細胞が濃縮されている不均一な細胞集団である。内因性NK細胞は、患者の自己治療用または同種間治療用であり得る。
【００３１】
用語「NK-92」は、Gong et al. (1994)に記載され、その権利をNantKwest社が所有する、非常に強力でユニークな細胞株に由来するナチュラルキラー細胞を指す（以下、「NK-92（商標）細胞」という）。不死のNK細胞株は、もともとは非ホジキンリンパ腫の患者から得られたものである。特に明記しない限り、「NK-92（商標）」という用語は、元のNK-92細胞株ならびに（例えば、外因性遺伝子の導入により）改変されたNK-92細胞株を指すものとする。NK-92（商標）細胞およびその例示的かつ非限定的な改変細胞は、米国特許第7,618,817号；同第8,034,332号；同第8,313,943号；同第9,181,322号；同第9,150,636号；および公開された米国特許出願第10/008,955号（これらの全てはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）に記載されており、野生型NK-92（商標）、NK-92（商標）-CD16、NK-92（商標）-CD16-γ、NK-92（商標）-CD16-ζ、NK-92（商標）-CD16(F176V)、NK-92（商標）MI、およびNK-92（商標）CIが含まれる。NK-92細胞は当業者に公知であり、そのような細胞はNantKwest社から容易に入手可能である。
【００３２】
用語「aNK」は、Gong et al. (1994)に記載され、その権利をNantKwest社が所有する、非常に強力でユニークな細胞株に由来する未改変型ナチュラルキラー細胞を指す（以下、「aNK（商標）細胞」という）。用語「haNK」は、細胞表面にCD16を発現するように改変された、Gong et al. (1994)に記載され、その権利をNantKwest社が所有する、非常に強力でユニークな細胞株に由来するナチュラルキラー細胞を指す（以下、「CD16+ NK-92（商標）細胞」または「haNK（登録商標）細胞」という）。いくつかの態様では、CD16+ NK-92（商標）細胞は、細胞表面に高親和性CD16受容体を含む。用語「taNK」は、キメラ抗原受容体を発現するように改変された、Gong et al. (1994)に記載され、その権利をNantKwest社が所有する、非常に強力でユニークな細胞株に由来するナチュラルキラー細胞を指す（以下、「CAR改変型NK-92（商標）細胞」または「taNK（登録商標）細胞」という）。用語「t-haNK」は、細胞表面にCD16を発現しかつキメラ抗原受容体を発現するように改変された、Gong et al. (1994)に記載され、その権利をNantkWest社が所有する、非常に強力でユニークな細胞株に由来するナチュラルキラー細胞を指す（以下、「CAR改変型CD16+ NK-92（商標）細胞」または「t-haNK（商標）細胞」という）。いくつかの態様では、t-haNK（商標）細胞は、細胞表面に高親和性CD16受容体を発現する。
【００３３】
「回復」または「回復した」という用語は、従来の治療法を使用したことにより白血病でなくなったと考えられるが、統計的には再発のリスクがある患者を指す。
【００３４】
本明細書で使用する「非照射NK-92細胞」は、照射されていないNK-92細胞である。照射により、細胞は成長および増殖ができなくなる。NK-92細胞は患者の治療前に治療施設かどこか他の場所で照射されることが想定される；なぜなら、照射から注入までの時間は、最適な活性を維持するために、長くても4時間程度にする必要があるためである。あるいは、NK-92細胞は別のメカニズムで不活性化されてもよい。
【００３５】
本明細書で使用する場合、NK-92細胞の「不活性化」は、それらを成長および増殖できなくする。不活性化はNK-92細胞の死にも関係することがある。NK-92細胞が治療上の応用で病変に関連する細胞の生体外サンプルを効果的にパージした後、または体内に存在する多くのまたは全ての標的細胞を効果的に殺傷するのに十分な時間、それらが哺乳動物の体内にとどまった後では、NK-92細胞を不活性化し得ると想定される。不活性化は、非限定的な例として、NK-92細胞が感受性である不活性化剤を投与することによって、誘導することができる。
【００３６】
本明細書で使用する用語「キメラ受容体」とは、一般的に、標的細胞の表面上の特定の抗原および活性化/刺激ドメインに対する外因性抗体を指す。
【００３７】
本明細書で使用される用語「キメラ抗原受容体」（CAR）は、NK-92細胞の細胞内シグナル伝達ドメインに融合された細胞外抗原結合ドメインを指す。
【００３８】
「細胞傷害性」および「細胞溶解性」という用語は、NK細胞などのエフェクター細胞の活性を説明するために使用される場合、同義語であることが意図される。一般的に、細胞傷害活性は、様々な生物学的、生化学的、または生物物理学的メカニズムのいずれかによる標的細胞の殺傷に関係する。細胞溶解は、より具体的には、エフェクターが標的細胞の原形質膜を溶解し、それにより該細胞の物理的完全性を破壊する活性を指す。これは標的細胞の死滅をもたらす。理論に束縛されるものではないが、NK細胞の細胞傷害効果は細胞溶解によるものであると考えられる。
【００３９】
本明細書で使用する「標的細胞」は、本明細書に記載のNK細胞の細胞傷害活性により殺傷される白血病細胞である。
【００４０】
「白血病」という用語は、造血組織の悪性新生物を指す。白血病には、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、および急性骨髄芽球性白血病が含まれるが、これらに限定されない。白血病は従来の治療法に対して再発性、難治性、または抵抗性であり得る。
【００４１】
白血病、特に慢性白血病、例えば、慢性骨髄性白血病（CML）、慢性骨髄単球性白血病などは、造血幹細胞および/または前駆細胞、特に骨髄細胞系統に特化された前駆細胞、の存在を分析することによって病期分類される；そのような前駆細胞には、CMP（骨髄系共通前駆細胞）、巨核球・赤芽球前駆細胞（MEP）、および骨髄単球系統（GMP）が含まれる。病期分類は予後と治療に有用である。
【００４２】
本明細書で使用する用語「骨髄異形成症候群」（MDS）は、血液細胞の無効な産生を伴う血液学的医学的症状の多様な集まりである、以前には前白血病（preleukemia）として知られていた症状を意味する。しばしば無症候性であるが、MDS患者は重度の貧血を発症することがあり、これは輸血で治療される。場合によっては、この病気は悪化して、患者は進行性の骨髄不全に起因する血球減少症（血球数の減少）を発症する。MDS進行の見通しは、この疾患のタイプと重症度に依存する。一態様では、NK-92細胞は、MDSを治療するために、本明細書に記載のように使用することができる。
【００４３】
用語「再発」は、治療後に白血病が寛解したが、その後に骨髄で白血病細胞が復帰し、かつ正常な血液細胞が減少している患者の状態を指す。
【００４４】
用語「難治性」または「抵抗性」は、集中治療後であっても、患者がそのような治療に抵抗を示す残留白血病細胞を骨髄内に持っている状況を指す。
【００４５】
白血病についての「従来の治療法」または「従来の治療」という用語には、限定するものではないが、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法（NK-92療法以外）など、またはそれらの1つ以上の組み合わせが含まれる。
【００４６】
本明細書で使用する「白血病幹細胞」、「癌幹細胞」、または「異常な幹細胞」という用語は、白血病の少なくとも1つの特徴を示す細胞であって、少なくとも1つの、追加的な、表現型的に異なる細胞型を生成することができる細胞を指す。さらに、白血病幹細胞は、非対称複製と対称複製の両方が可能である。白血病幹細胞は、幹細胞形質を獲得する分化した白血病細胞、および/または白血病細胞に関連する表現型を獲得する幹細胞から生じ得ることが理解される。白血病幹細胞を特徴付けるための一般的なアプローチには、形態、細胞表面マーカー、転写プロファイル、および薬物応答の評価が含まれる。
【００４７】
本明細書で使用する「内因性」とは、所定の生物、細胞、組織もしくは系に由来する物質、またはその内部で生成される物質を指す。
【００４８】
本明細書で使用する「外因性」とは、所定の生物、細胞、組織もしくは系から導入されるか、またはその外部で生成される物質を指す。
【００４９】
細胞または細胞集団に関する「殺傷する」という用語は、その細胞または細胞集団の死につながるあらゆるタイプの操作を含むものとする。
【００５０】
用語「予防する」および「抑制する」は、相互に交換可能であり、患者が白血病の再発に悩み始める前に起こす行動を指す。予防は、白血病の完全な予防をもたらす必要はない。この用語には、部分的な予防、再発の遅延、または悪性腫瘍の減少が含まれる。
【００５１】
免疫原性組成物の「非経口」投与には、例えば、皮下（s.c.）、静脈内（i.v.）、筋肉内（i.m.）、または胸骨内の注射もしくは注入技術が含まれる。
【００５２】
「患者」、「対象」、「個体」などの用語は、本明細書では交換可能に使用され、本明細書に記載の方法に適しているあらゆる脊椎動物、例えば、限定するものではないが、哺乳動物対象、例えば、ヒト、家畜（例：ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、およびマウスなど）、および家畜化されていない動物、またはインビトロもしくはインサイチュにかかわらずその細胞を指す。
【００５３】
白血病に関係する範囲で、「治療（treatment）」または「治療する（treating）」という用語は、本明細書中で特に指示がない限り、白血病の発生を予防すること、白血病を抑制すること、白血病を排除すること、および/または再発などの白血病の1つまたは複数の症状を緩和すること（例えば、再発の予防または遅延）を含む。
【００５４】
本明細書で使用する用語「治療（therapeutic）」は、治療（treatment）および/または予防を意味する。治療効果は病状の抑制、寛解、または根絶によって得られる。
【００５５】
用語「治療有効量」は、投与されたときに、白血病の発症を予防するか、白血病の兆候もしくは症状の1つ以上をある程度緩和するか、またはその再発を抑制するのに十分なNK-92細胞の量を含む。NK-92細胞の治療有効量は、治療される白血病とその重症度、ならびに治療すべき患者の年齢、体重などによって変化する。
【００５６】
タイトルまたはサブタイトルは、読者の便宜を図るために本明細書で使用されているが、本開示の範囲を限定することを意図したものではない。さらに、本明細書で使用されるいくつかの用語は、以下でより具体的に定義される。
【００５７】
発明の詳細な説明
本発明の組成物および方法を開示しかつ説明する前に、下記の局面は、特定の組成物、方法、または使用に限定されず、当然それらは変化し得ることを理解されたい。また、本明細書で使用する専門用語は、特定の局面のみを説明するためのものであり、限定することを意図したものではないことも理解されたい。
【００５８】
NK-92細胞株
NK-92細胞株は、インターロイキン2（IL-2）の存在下で増殖することが発見されたユニークな細胞株である。Gong et al., Leukemia 8:652-658 (1994)。NK-92細胞は、白血病をはじめとする様々な癌に対して高い細胞溶解活性を持つことが知られている。NK-92細胞株は、細胞の拡大または増殖後の収量が予測可能な、幅広い抗腫瘍細胞傷害性を示す均一な癌性NK細胞集団である。第I相臨床試験により、NK-92細胞の安全性プロファイルと特定の患者における抗白血病反応が確認された。
【００５９】
NK-92細胞は、CD56bright、CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、およびCD54表面マーカーを示すが、CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、およびCD34マーカーを示さない。培養中のNK-92細胞の成長は組換えインターロイキン2（rIL-2）の存在に依存しており、増殖を維持するには1IU/mLという低用量で十分である。IL-7およびIL-12は、長期増殖を支持せず、試験した他のサイトカイン、例えば、IL-1α、IL-6、腫瘍壊死因子α、インターフェロンα、インターフェロンγなども支持しない。NK-92は、低いエフェクター：標的（E：T）比、例えば1：1でさえも、高い細胞傷害性を有する。Gong, et al., 前出。NK-92細胞は、CRL-2407という名称でアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC）に寄託されている。
【００６０】
これまで、内因性NK細胞に関する研究により、IL-2（1000IU/mL）は輸送中にNK細胞の活性化にとって重要であること、しかし該細胞は37℃、5％二酸化炭素で維持される必要はないことが示されている。Koepsell, et al., Transfusion 53:398-403 (2013)。しかしながら、内因性NK細胞は、主にその明確な起源のため、NK-92細胞と大きく異なっている：NK-92は癌由来の細胞株であるが、内因性NK細胞はドナー（または対象となる患者）から採取されて、患者に注入するために処理される。内因性NK細胞調製物は不均一な細胞集団であり、一方NK-92細胞は均一なクローン細胞株である。NK-92細胞は細胞傷害性を維持しながら培養下で容易に増殖するが、内因性NK細胞はそうではない。さらに、内因性NK細胞の不均一集団は、NK-92細胞とは違って、高密度に凝集しない。
【００６１】
いくつかの態様では、NK-92細胞は、培地、例えばヒト血清またはその同等物、を含む。いくつかの態様では、該培地はヒト血清アルブミンを含む。いくつかの態様では、該培地はヒト血漿を含む。いくつかの態様では、該培地は約1％〜約15％のヒト血清またはヒト血清同等物を含む。いくつかの態様では、該培地は約1％〜約10％のヒト血清またはヒト血清同等物を含む。いくつかの態様では、該培地は約1％〜約5％のヒト血清またはヒト血清同等物を含む。好ましい態様では、該培地は約2.5％のヒト血清またはヒト血清同等物を含む。いくつかの態様では、該血清はヒトAB血清である。いくつかの態様では、ヒト治療薬での使用が許容される、当技術分野で公知の血清代替物が、ヒト血清の代わりに使用される。約15％を上回るヒト血清の濃度を使用してもよいが、約5％超の濃度は費用が高すぎると考えられる。
【００６２】
様々な態様において、患者に投与されるNK-92細胞には、本明細書に記載される元のNK-92細胞だけでなく、CD16または本明細書に開示される任意のマーカーを発現するように改変された元のNK-92細胞などの、遺伝子改変NK-92細胞が含まれる。例示的なNK-92細胞としては、限定するものではないが、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ATCC）からアクセッション番号：PTA 6670、PTA 6672、PTA 8836、PTA 8837、CRL-2407およびCRL-2408として入手できるNK-92細胞株が挙げられる。
【００６３】
他の態様では、患者に投与されるNK-92細胞には、キメラ抗原受容体（CAR）を発現するように改変されたNK-92細胞が含まれる。CARを発現するようにNK-92細胞を遺伝子操作する方法は、Boissel et al., Oncoimmunology 2:10, e26527 (2013)に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【００６４】
治療方法
本明細書では、白血病の患者または遺伝的に白血病にかかりやすい患者を治療するためにNK-92細胞を使用する方法が提供される。一態様では、そのような方法は、白血病から回復している患者の治療を含む。特定の理論に制限されるものではないが、そのようなNK-92細胞が患者に導入されると、該細胞は白血病幹細胞を含む残留および/または抵抗性白血病細胞を根絶すること、つまり再発前は従来の治療法で治療された白血病が再発した後に一次療法としてNK-92細胞を使用できることを理解されたい。
【００６５】
上述したように、本明細書に記載の方法は、限定するものではないが、急性T細胞白血病、急性骨髄性白血病（AML）、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、前駆B急性リンパ芽球性白血病、前駆T急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病、または急性混合型白血病；慢性白血病、例えば、慢性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病（CML）、慢性単球性白血病、慢性リンパ性白血病（CLL）、またはB細胞性前リンパ球性白血病、T細胞性前リンパ球性白血病、ならびに遺伝的に白血病にかかりやすい患者の治療を対象としている。
【００６６】
本開示は、以前に白血病の治療を受けたことがあるが、標準治療に対して抵抗性の白血病細胞を保持しているか、または保持している疑いがある患者を治療する方法を包含する。一部の白血病は特定の年齢層に多くみられるが、本開示は、患者の年齢に関係なく患者を治療する方法をも包含する。白血病患者は均質でない臨床症状および多様な臨床転帰を有するため、患者に施される治療は、該患者の予後に応じて様々であり、その全ては熟練した臨床医の権限の範囲内にある。
【００６７】
これらの方法による治療に適した患者には、以前に白血病の治療を受けたことがあり、回復（例えば、寛解）期にある患者が含まれる。本明細書に記載の方法に適した他の患者は、従来の治療（複数可）の後に白血病の再発を経験するリスクが高いと考えられる患者である。治療計画には、NK-92細胞を患者に投与することによる白血病細胞の根絶が含まれる。したがって、本開示に含まれる方法は、そのような患者に1用量または複数用量のNK-92細胞を投与する段階を含む。
【００６８】
特定の態様では、有効量のNK-92細胞は、そのような患者に、検出可能な治療上の効果または兆候を該個体にもたらす任意の分量または回数で投与される。検出可能な治療上の効果は、例えば、患者が、全ての有核細胞の5％未満への骨髄芽球のクリアランス、形態学的に正常な造血、および末梢血細胞数の正常レベルへの回復を評価される場合である。いくつかの態様では、NK-92細胞の絶対数、例えば、約、少なくとも約、または多くても約1×108、1×107、5×107、1×106、5×106、1×105、5×105、1×104、5×104、1×103、5×103個(など)のNK-92細胞を、そのような患者に投与することができる。他の態様では、NK-92細胞は、細胞の相対数で、例えば、患者体重キログラムあたり約、少なくとも約、または多くても約1×108、1×107、5×107、1×106、5×106、1×105、5×105、1×104、5×104、1×103、5×103個(など)のNK-92細胞が、そのような患者に投与され得る。他の態様では、総用量は、体表面積m2で算出することができ、例えば、m2あたり約1×1011、1×1010、1×109、1×108、または1×107個を含む。平均的な人は約1.6〜約1.8m2である。
【００６９】
NK-92細胞はまた、NK-92細胞の数と患者の疑われる白血病細胞の数との間のおおよその比率に従って、そのような患者に投与され得る。例えば、NK-92細胞は、個体の白血病細胞の推定数に対して約、少なくとも約、または多くても約1：1、1：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、15：1、20：1、25：1、30：1、35：1、40：1、45：1、50：1、55：1、60：1、65：1、70：1、75：1、80：1、85：1、90：1、95：1または100：1の比率で患者に投与することができる。そのような患者の白血病細胞の数は、例えば、患者由来の組織のサンプル、例えば、血液サンプル、生検サンプル中の白血病細胞の数をカウントすることにより、推定することができる。
【００７０】
NK-92細胞、および必要に応じて他の抗白血病薬は、治療中、白血病が再発した患者に1回投与されるか、または複数回、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、もしくは23時間ごとに1回、または1、2、3、4、5、6、もしくは7日ごとに1回、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10週もしくはそれ以上に1回、患者に投与され得る。NK-92細胞と免疫調節化合物またはサリドマイドを使用する態様では、免疫調節化合物またはサリドマイドと、細胞または灌流液は、個体に、一緒に、例えば同じ製剤で；個別に、例えば別々の製剤で、ほぼ同時に；または個別に、例えば異なる投与スケジュールで、もしくは1日のうちの異なる時間に；投与することができる。灌流液、灌流液細胞、ナチュラルキラー細胞、例えばPINK細胞、プールおよび/またはそれらの組み合わせは、その同じ灌流液、灌流液細胞、ナチュラルキラー細胞、例えばPINK細胞、プールおよび/または組み合わせが過去に該個体に投与されたかどうかに関係なく、投与することができる。
【００７１】
一局面では、患者における残留または残存白血病細胞を殺傷するための方法が提供され、ここで、該患者は白血病の治療から回復しつつあり、該方法は、該患者の体内に残っている全てのまたは実質上全ての残存白血病細胞を殺傷するのに十分な、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。様々な態様では、二次療法は、患者が従来の治療法の下で治療を受けた後で、該患者にNK-92細胞を投与する段階を含み、その場合、NK-92細胞の投与は、異常かつ抵抗性の白血病幹細胞などの、残存白血病細胞の維持および/または発生を防ぐことができる。
【００７２】
例えば、NK-92細胞を患者に投与する前には、残存白血病細胞は、白血病治療前の患者において検出された白血病細胞のレベルの約20％未満、約10％未満、約5％未満、または約1％未満のレベルで該患者に存在し得る。
【００７３】
いくつかの態様では、残存白血病細胞は白血病幹細胞を含む。残存白血病細胞はまた、リンパ球、赤血球、白血球または血小板の骨髄細胞前駆細胞をも含んでいてよい。
【００７４】
いくつかの態様では、白血病の治療は、化学療法、放射線療法、ホルモン療法または骨髄移植などの従来の治療法を含み、前記残存白血病細胞はこれらの従来の治療法に対して実質的に抵抗性であった、かつ依然として抵抗性のままである。
【００７５】
再発を抑制するための治療方法
別の局面では、患者における白血病の再発を抑制するために方法が提供され、ここで、該患者は白血病の治療から回復しつつあり、該方法は、該患者における白血病の再発を抑制するのに十分な、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。一態様では、患者が化学療法などの従来の治療法の下で治療を受けた後に、NK-92細胞を投与することができ、NK-92細胞の投与は、白血病の再燃、すなわち再発、を予防することができる。
【００７６】
いくつかの態様では、患者の白血病の再発は、NK-92細胞の投与後、少なくとも約1ヶ月、少なくとも約2ヶ月、少なくとも約3ヶ月、少なくとも約4ヶ月、少なくとも約6ヶ月、または少なくとも約12ヶ月間抑制される。
【００７７】
いくつかの態様において、白血病の治療には、従来の治療法、例えば、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、骨髄移植、生物学的療法、または免疫療法（NK-92療法以外）の1つ以上の療法が含まれる。
【００７８】
再発後の治療方法
別の局面では、患者において白血病が再発した後で白血病を治療するための方法が提供され、この場合、該患者は従来の治療法で治療した後に白血病の再発を経験する。いくつかの態様では、この方法は、該患者に治療効果をもたらすのに十分な、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む。
【００７９】
いくつかの態様では、従来の治療後に白血病の再発を経験した患者を治療するために、NK-92細胞を別の薬剤または治療法と組み合わせて使用することができる。抗白血病薬の例としては、mda-7、ヒト線維芽細胞インターフェロン、メゼレイン、およびスイセン属（Narcissus）のアルカロイド（プレタゼチン）が挙げられるが、これらに限定されない。NK-92細胞と従来の抗白血病薬の併用は、特定の患者に予想外に効果的な、ユニークな治療レジメンを提供し得る。理論により制限されるものではないが、NK-92細胞は、従来の治療法の後で白血病の再発を経験した患者に、従来の抗白血病薬と同時に投与した場合、相加または相乗効果をもたらし得ると考えられる。
【００８０】
薬学的組成物
別の局面では、従来の治療法で治療した後の白血病を治療するための、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物が提供される。
【００８１】
NK-92薬学的組成物は、資格のある臨床医が適切であると認めた方法（例えば、静脈内投与）で投与することができる。適切な用量は臨床試験によって決定され得るが、投与量および投与頻度は、患者の状態、患者の疾患のタイプおよび重症度などの要因によって決まるであろう。
【００８２】
「有効量」が示される場合、投与されるNK-92細胞の望ましい量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者の状態の個体差を考慮して、臨床医が決定することができる。細胞は、免疫療法で一般的に知られている注入技術を用いて投与される（例えば、Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988を参照されたい）。特定の患者に対する最適な投与量および治療計画は、疾患の兆候について患者をモニタリングし、それに応じて治療を調整することにより、医学分野の当業者によって容易に決定され得る。
【００８３】
さらなる態様では、本明細書に記載の細胞組成物は、骨髄移植；フルダラビンなどの化学療法剤、体外照射療法（XRT）、シクロホスファミド、またはOKT3もしくはCAMPATHなどの抗体のいずれかを用いるT細胞除去療法と併せて（例えば、その前、同時または後に）患者に投与される。別の態様では、本明細書に記載の細胞組成物は、例えば、リツキサンなどの、CD20と反応する薬剤を用いる、B細胞除去療法の後に投与される。例えば、一態様では、患者は高用量化学療法とそれに続く末梢血幹細胞移植による標準治療を受けることができる。特定の態様では、移植後に、患者は本明細書に記載のNK-92細胞の注入を受ける。
【００８４】
以下の実施例は、クレームに記載された対象を例示するために含まれ、それを限定するためではない。本明細書で引用された全ての刊行物または参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【実施例】
【００８５】
実施例1
この実施例は、難治性および再発AMLの患者における養子移入aNK細胞を用いた第1相臨床試験の結果を提供する。その目的は、予め治療されたAML患者におけるこの養子細胞療法の安全性と実現可能性を判断し、かつaNK細胞注入が患者の免疫系に及ぼす影響を調べることであった。結果は、難治性/再発AML患者における「既製」（off-the-shelf）のaNK細胞による養子細胞療法の安全性と実現可能性を実証する。
【００８６】
方法
患者
世界保健機関の分類［Swerdlow SH, 世界保健機関（World Health Organization）の国際がん研究機関（International Agency for Research on Cancer）；造血組織腫瘍とリンパ組織腫瘍のWHO分類；国際がん研究機関; 2008］で定義されている、再発/難治性AMLを患う18歳以上の患者は、この試験に適格であり、書面によるインフォームドコンセントを提出した後にピッツバーグ大学で治療を受けた。その他の重要な適格基準は、米国東海岸癌臨床試験グループ（Eastern Cooperative Oncology Group）のパフォーマンスステータス（performance status）≦2および適切な末端臓器（end-organ）機能であった。除外基準には、急性前骨髄球性白血病、症候性中枢神経系障害、左室駆出率＜45％、および同種造血細胞移植の前歴の診断が含まれていた。好中球減少症、貧血および血小板減少症は、これらの異常が再発/難治性AML患者に予想されたため、除外基準にはならなかった。プロトコルは、ピッツバーグ大学の施設内治験審査委員会（Institutional Review Board）によって審査され、施設内ガイドライン（clinicaltrials.gov識別子NCT00900809）に従って承認された。
【００８７】
臨床グレードのaNK細胞
臨床グレードのaNK細胞は、Production Assistance for Cell Therapies（NHLBI-PACT）プログラムにより支援されたプロジェクトとして、テキサス州ヒューストンのベイラー医科大学の細胞・遺伝子治療センターのGMP施設で拡大培養した。20×106個の細胞を含む細胞バイアルは、凍結保存ワーキングセルバンクからNantKwest社によって提供された。細胞を解凍し、ゲンタマイシンまたはフェノールレッドを含まないX-VIVO 10培地（Lonza社）に5％（v/v）ヒトAB血清（Valley Biomedical社）、450IU/mL IL-2（USPグレードのプロロイキン（Proleukin）；Novartis Vaccines and Diagnostics社）、0.036mmol/L アスパラギン（Sigma-Aldrich社）、0.45mmol/L-グルタミン（Gibco Thermo Fisher Scientific社）および0.32mmol/L セリン（Sigma-Aldrich社）を補充して培養した。最初の10日間は、細胞をT-25フラスコで培養し、その後5〜10×106個のaNK細胞を10〜40mLの培養培地を含むG-Rex10ユニット（Wilson Wolf Manufacturing Corporation）に移した。細胞数が50×106を超えたら、細胞を他のG-Rex100フラスコに移し、培養を続けて2〜8×105細胞/mLを得た。採取したてのaNK細胞を、完全培養培地中の1〜5×106/mLの細胞濃度で数個のG Rex100容器に入れ、37℃に予熱したゲルパックと共にピッツバーグ大学に一晩出荷した。
【００８８】
ピッツバーグ大学のImmune Monitoring and Cell Products Laboratoryに到着したら、出荷した細胞の半分からなるアリコートをX-VIVO 10培地（サプリメントなし）で洗浄し、さらなる細胞増殖を防ぐために米国食品医薬品局によって義務付けされているように1000cGyで照射して、5％（v/v）ヒト血清アルブミン（ブミネート（Buminate），Baxter社）中に再懸濁した。その照射線量はaNK細胞の細胞傷害性を低下させなかった。残りの半分の細胞を含むアリコートを、操作なしで空気中5％CO2の雰囲気下に37℃のインキュベータに移し、一晩インキュベートした。これらの細胞を、先に記載したように2回目の細胞注入用に調製した。aNK細胞のリリース基準は、＞90％のCD56+CD3-細胞；＜5％のCD16+CD3+細胞；＞70％の細胞生存率；BACTECアッセイおよびグラム染色による細菌陰性；MycoAlertによるマイコプラズマ陰性；Kinetic-QCLによるエンドトキシンが≦5EU/用量であった。
【００８９】
試験デザインと治療プラン
この第1相臨床試験は、単一施設、非盲検、用量漸増試験であった。2つの細胞用量レベルを採用した：1×109細胞/m2および3×109細胞/m2。これらの用量は、固形腫瘍がある患者にaNK細胞を使用した以前の臨床経験に基づいて選択された［Arai S et al., Cytotherapy 2008;10(6):625-32; Tonn T et al., Cytotherapy 2013; 15(12):1563-70］。患者は、従来の3＋3用量漸増デザインに基づいた用量レベルに登録された。患者は、その登録順序によって決定された用量で順次登録された。患者内の用量漸増は許可されなかった。
【００９０】
aNK細胞の投与は外来診療の場で行った。1つの治療コースは同じ細胞用量の2回の注入で構成され、各細胞注入を24時間間隔（1日目と2日目）で行った。患者には、aNK細胞注入の15分前に、ジフェンヒドラミン（25mg）を静脈内投与し、アセトアミノフェン（500mg）を経口投与して事前に投薬した。aNK細胞は60分かけて静脈内投与し、注入後4時間にわたり患者をモニタリングした。2日目に行ったaNK細胞の2回目の注入についても同じ手順に従った。この2回目の注入は、aNKの初回注入に起因する用量制限毒性が現れなかった場合にのみ行った。患者は各治療コースの21日後に骨髄生検を受けた。病気が安定しているか、白血病芽球が減少した患者は、追加のaNK注入を受ける資格があった。
【００９１】
臨床毒性と応答評価
有害事象は帰属と重症度の観点から特徴付けられ、NCI有害事象共通用語規準（CTCAE）v4.0に従って報告される。疾患評価をaNK細胞投与の21日後に実施し、骨髄生検の応答を確立された基準により評価した［Cheson BD et al., J Clin Oncol 2003;21(24):4642-9］。
【００９２】
免疫表現型解析（immunophenotyping）、NK細胞の細胞傷害性およびサイトカイン
静脈血のサンプル（20〜50mL）を、各aNK細胞注入の前、各注入の4時間後、および注入後4、7、および21日目に採取した。ヘパリン処理したチューブに血液を引き込み、検査室に持ち込み、Ficoll-Paque Plus（GE Healthcare社）勾配を用いて直ちに処理した。採取した血液は、血漿サイトカインのレベルとNK細胞の活性の測定、およびフローサイトメトリー分析に使用した。補足資料には、使用した実験方法が記載される。
【００９３】
統計分析
aNK細胞を受け取った全患者を安全性分析に加えた。安全性データは、記述統計学（descriptive statistics）を使用して、有害事象の頻度と重症度別にまとめた。各患者および各サイトカインについて、各時点とベースラインとの差を計算した。その差に基づいて、両側2標本t検定と両側1標本t検定を用いて、2つの細胞用量が同じ効果を有するかどうかを試験した。細胞傷害性アッセイとフローサイトメトリーについては、対応のある両側t検定を用いて、ベースラインと各時点からの活性、受容体発現、および免疫細胞サブセットの変化を調べた。データは、測定のたびに平均±SEまたはSDとして示した。0.05未満のp値（p＜0.05）を統計的に有意とみなした。統計分析はSASソフトウェアを用いて行った。
【００９４】
結果
aNK細胞培養、表現型および細胞傷害性
テキサス州ヒューストンのベイラー医科大学のGMP施設で行ったaNK細胞の増殖中央値は24日（20〜28日の範囲）であった。ピッツバーグ大学へのaNK細胞の夜間輸送は、細胞の到着が遅れることなく効率的に実行された。到着したら、細胞をG Rex100容器から最終輸液バッグに移し、無菌性、生存率、および表現型について評価した。全ての細胞製品はリリース基準を満たした。
【００９５】
aNK細胞の平均細胞生存率は、1日目で96％（95％〜98％の範囲）、2日目で94％（89％〜94％の範囲）であった。注入前の全てのaNK細胞製品の平均細胞傷害性は、1日目で4409±2606溶解単位（lytic unit：LU）、2日目で3628±2064LUであった。aNK細胞の表現型は、CD3-、CD56+、CD16-、NKG2D+、CD94+、NKG2A+、CD158a-およびCD158b-であった。
【００９６】
患者の特性および治療
この試験に登録された7人の難治性または再発AML患者は、合計20回のaNK細胞注入により治療された。年齢の中央値は71歳（56〜80歳の範囲）であり、全ての患者が以前に複数のAML治療を受けていた。患者の人口統計、ベースライン特性、および以前の治療法は、（エラー！参照元が見つからない）に示される。最初の3人の患者は1×109細胞/m2の細胞用量で治療し、4人の患者は3×109細胞/m2の細胞用量で治療した（表II）。
【００９７】
安全性
7人の患者はいずれも、aNK細胞の投与の間に、または注入後の21日間の観察期間に用量制限毒性（DLT）を経験しなかった。aNK細胞の注入に関連がある（関連がある可能性が高い、または確実に関連がある）グレード3〜4の毒性は発生しなかった。1人の患者は、各aNK細胞注入後にグレード2の発熱と悪寒があり、入院が必要であった；これらの既知の副作用はサポーティブケア（supportive care）、静脈内水分補給、および解熱剤により回復可能であった。観察期間中に生じた入院は、aNK細胞注入とは関係がなく、中心線関連菌血症（central-line related bacteremia）、好中球減少性発熱、赤血球と血小板の輸血、および肺炎が含まれていた。
【００９８】
末梢血の免疫細胞
各注入の4時間後および7日目と21日目に、CD4+、CD8+ T細胞、制御性T細胞、NK細胞サブセットまたは骨髄由来サプレッサー細胞（MDSC）の割合と絶対数に有意な変化は観察されなかった（表III）。フローサイトメトリーにより養子移入後の内因性NK細胞とaNK細胞を区別するために、CD3-、CD56+、CD16-、CD158a-、CD158a-細胞にゲートを設定し、NK細胞受容体の発現レベルを測定した。天然の細胞傷害性受容体NKp30、NKp44、NKp46、NKG2DおよびNKG2Aの発現レベルに有意な変化は観察されなかつた（データは示してない）。
【００９９】
NK受容体/リガンドおよびNK細胞活性
aNK細胞の活性は受容体とリガンドの相互作用に依存するため、白血病芽球上のNK細胞リガンドの発現レベルを評価した。フローサイトメトリーを用いて、白血病芽球をCD45、CD33、CD34、およびCD117の発現に基づいてゲーティングした。ULPB1、ULPB2、およびMICA/Bを発現する芽球の割合は、それぞれ4.3±5.2、1.6±1.5および9.2±16であった。各aNK注入の4時間後および7日目と21日目に、これらのリガンドを発現する芽球の割合に有意な変化は観察されなかった。
【０１００】
（表I）患者のベースライン特性
2020534252.tif 000003
ECOG，米国東海岸癌臨床試験グループ（Eastern Cooperative Oncology Group）；F，女性；M，男性；FLT3，FMS様チロシンキナーゼ-3；Hg，ヘモグロビン；NPM1，ヌクレオホスミン；PS，パフォーマンスステータス；Pt，患者；WBC，白血球。
【０１０１】
（表II）aNK細胞療法および治療結果
2020534252.tif 000004
BM，骨髄；Pt，患者。
a 1つのコースは24時間間隔で投与される2回のaNK細胞注入で構成された。
b 2回目の治療コースのためのaNK細胞の増殖に13日を要した。
c 2回目と3回目の治療コースのためのaNK細胞の増殖に、それぞれ19日と5日を要した。
【０１０２】
（表III）aNK細胞療法の前後のリンパ球サブセット
2020534252.tif 000005
リンパ球サブセットは、aNK療法の前、各注入の4時間後、および注入後7日目と21日目に測定した。モニタリングしたリンパ球サブセットの割合に有意な変化は検出されなかった。Treg，制御性T細胞；MDSC，骨髄由来サプレッサー細胞。
【０１０３】
注入後のNK細胞の平均細胞傷害性は、患者の血液への最初の養子移入の4時間後に測定されたが、治療前の細胞傷害性レベルと比較して全ての患者で減少し（治療前74±59LUに対して治療後34.8±37LU、P＜0.01）、その後24時間以内に治療前レベルに回復し（69.7±59LU）、2回目のaNK細胞注入後には患者5を除いて変化しなかった（82.2±128LU）。患者5では、NK細胞の細胞傷害性が2回目のaNK細胞注入後に65LUから364LUに増加した（図1）。全体的に、循環NK細胞の細胞傷害性の有意な増加は、aNK細胞の注入後に観察されなかった。
【０１０４】
血漿サイトカイン
線維芽細胞増殖因子（P＝0.0285）、顆粒球コロニー刺激因子（P＝0.0345）およびRANTES（P＝0.0486）の血漿レベルの有意な低下が、治療後24時間で観察された（補足資料を参照）。IL-1Rαのレベルの増加（P＝0.0243）は、両方のaNK細胞用量（1×109細胞/m2および3×109細胞/m2）による治療の4日後に生じた。IL-6、IL-1RA、IL-10、血管内皮細胞増殖因子（VEGF）およびIP-10のレベルの用量依存的な効果が観察された；より低用量のaNK細胞の注入後に、これらのサイトカインのレベルは変化しなかったが、aNK細胞のより高用量では、IL-6（P＝0.0293）およびIL-1Rα（P＝0.0231）のレベルが治療後7日目に増加し、IL-10（P＝0.0252）、VEGF（P＝0.0478）およびIP-10（P＝0.0478）のレベルは治療の21日後に増加した。NK細胞の恒常性のサイトカインであるIL-15のレベルには有意な変化が観察されなかった。
【０１０５】
有効性
7人の患者全員が初回の治療コースを完了した；6人の患者は、治療の21日後に応答について評価可能であった（表II）。完全寛解に達した患者はいなかった。1人の患者では、治療コース後に芽球の割合が70％から48％に減少し、その患者はaNK細胞の追加のコースを受けた。2人の患者では、初回の治療コース後に、芽球の割合は安定した状態を保っていた；これらの2人のうち1人の患者は、aNK細胞による追加の2つの治療コースを受けた。
【０１０６】
考察
NK細胞の臨床使用は、徹底的な研究の領域である。エクスビボ活性化されたNK細胞は血液癌または固形癌の治療に使用されているが、それは、腫瘍細胞を溶解するNK細胞が第一線の抗腫瘍防御を提供するためである［Knorr DA, Bachanova V, Verneris MR, Miller JS. et al., Semin Immunol 2014;26(2):161-72; Miller JS., Hematology 2013;2013:247-53］。aNK細胞は、AML芽球を含めて、広範な原発腫瘍細胞と培養腫瘍細胞に対する高レベルの細胞傷害活性を媒介し［Klingemann H, Boissel L, Toneguzzo F., Front Immunol 2016;7:91; Suck G et al., Cancer Immunol Immunother 2016;65(4):485-92］、治療的有用性を支持する、十分に特徴付けられた安定した免疫表現型を有する。それらは活性化受容体を発現するが、抑制性KIRのほとんどを欠くため、主要組織適合遺伝子複合体クラスI分子を発現する癌細胞に対する細胞傷害性を保持する。それらは、臨床の場で養子移入に必要とされる、一様に効力のあるエフェクター細胞を大量に生産するために、現在のGMP条件下で培養可能である。それらは「既製」の製品に相当し、このレポートに示されるように、治療のために遠隔地に出荷して、進行悪性腫瘍の患者に安全に投与することができる。aNK細胞による治療を受けた一部の固形癌患者は、臨床的に有意な応答を達成した［Arai S et al., Cytotherapy 2008;10(6):625-32; Tonn T et al., Cytotherapy 2013; 15(12):1563-70］。固形癌患者におけるこれらの初期の肯定的な報告およびaNK細胞の抗白血病効果は、本発明者らに、難治性/再発AML患者に対するaNK細胞の初めての養子療法を開始する動機を与えた。
【０１０７】
再発/難治性AMLの患者は、機能不全に陥った自己のNK細胞を取り換え、かつ少なくとも部分的に抗白血病活性を回復するために、同種異系aNK細胞の移入から利益を得る可能性がある。同種NK細胞は、移植および非移植の両方の場で、AML患者における安全性と有効性について以前に評価されている。ハプロタイプ一致の造血細胞移植（HCT）を受けているAML患者におけるKIRエピトープ不適合に基づいたNK細胞のアロ反応性（alloreactivity）は、生存率の改善を示した［Ruggeri L et al., Science 2002;295(5562):2097-100; Ruggeri L et al., Blood 2007;110(1):433-40］。レシピエントのリンパ球を枯渇させて、IL-2投与により同種NK細胞の増殖を促進するために、ハプロタイプ一致のNK細胞を化学療法と併用する養子療法は、再発および難治性AML患者においてCRを誘導した［Bachanova V et al., Blood 2014; 123(25):3855-63; Curti A et al., Blood 2011;118(12):3273-9; Miller JS. et al., Blood 2005;105(8):3051-7; Rubnitz JE et al., J Clin Oncol 2010; 28(6):955-9］。
【０１０８】
同種HCTの候補ではなく、かつ化学療法に不応性であるAML患者の場合、治療の選択肢は限られている。aNK細胞はロバストな抗白血病活性を媒介するため、毒性なしで許容されるならば、それらの移入はこうした再発/難治性AML患者にとって有益であると考えられる。我々が実施した第1相試験は、aNK細胞の送達が安全であることを示した。合計20回のaNK細胞注入を受けた再発/難治性AML患者では、用量制限毒性は発生しなかった。1人の患者は注入関連毒性を発症したが、これはサポーティブケアにより回復可能であった。
【０１０９】
養子aNK細胞療法を検討する際には、NK細胞の増殖を促進するためのリンパ球枯渇前処置療法の使用と、注入後のNK細胞傷害性を高めるための戦略、例えばサイトカインの使用または制御性T細胞の枯渇など、を検討する必要がある［Bachanova V et al., Blood 2014;123(25):3855-63; Miller JS. et al., Blood 2005;105(8):3051-7］。今回の研究では、そのような戦略は使用しなかった；というのは、以前の化学療法によってすでに易感染性にされた、大いに免疫抑制的な環境にaNK細胞が移入されるからである。aNK細胞は、各注入前に使用された照射のために注入後に増殖せず、また、aNK細胞の安全性と毒性は、aNK細胞の移入前または移入後に追加の療法によって悪化しなかった。
【０１１０】
本発明者らは、aNK細胞の送達が、白血病芽球の減少および/または移入されたaNK細胞によって誘導される宿主サイトカイン環境の変化により、AML患者において少なくとも部分的な免疫細胞の再構成をもたらすであろうと予想した。それゆえに、患者の免疫状態を、治療の直前および治療後のさまざまな時点でモニタリングした。予想されたように、治療前にモニタリングした、重度に前処置されたAML患者は、低頻度のNK細胞を含む低リンパ球数および末梢血中のNK細胞の抗白血病細胞傷害性の低下により、免疫無防備状態であった。養子療法後、免疫細胞の絶対数または割合の有意な変化は観察されなかった。免疫細胞の表現型プロファイルは変化しなかった；1つを除いて、循環中のNK細胞の細胞傷害性の増加は治療後に観察されなかった。代わりに、aNK細胞注入の4時間後に、おそらく肺と肝臓へのNK細胞の移動のため、末梢血中のNK細胞の細胞傷害性レベルの有意な低下が観察された［Nannmark U et al., In Vivo 2000;14(5):651-8; Pegram HJ et al., Cancer Immunol Immunother 2010;59(8):1235-46］。しかし、循環免疫抑制因子が養子移入されたaNK細胞の機能喪失および骨髄へのaNK細胞のホーミング機構に寄与したことも同様にありそうである［Boyiadzis M et al., Blood 2016;128:1609］。
【０１１１】
AML患者の治療前の血中サイトカインプロファイルは非常に多様であり、一部の患者ではIL-1β、IL-1Rα、MCP-1、およびIL-12のレベルが非常に上昇していた。数種のサイトカイン（顆粒球コロニー刺激因子、線維芽細胞増殖因子、およびRANTES）の血漿レベルは、治療後24時間で減少し、IL-1Rαのレベルは治療後4日目と7日目に増加した。血液中の数種のサイトカインのレベルに対する細胞用量効果が観察され、高用量のaNK細胞の注入後のみ、7日目に炎症性IL-1RαおよびIL-6のレベル、21日目に免疫抑制性IL-10、IP-10およびVEGFのレベルが有意に増加した。
【０１１２】
興味深いことに、本発明者らは、NK細胞の分化、末梢での増殖および生存に主要な役割を果たすサイトカインであるIL-15のレベルに有意な変化を検出しなかった。血漿IL-15レベルは、細胞減少療法後に著しく増加することが実証されている［Miller JS. et al., Blood 2005;105(8):3051-7; Boyiadzis M et al., Biol Blood Marrow Transplant 2008;14(3):290-300; Chik KW et al., J Pediatr Hematol Oncol 2003;25(12):960-4］。報告された血漿IL-15レベルの上昇は、通常は循環IL-15を消費するリンパ球集団の療法誘発性枯渇に関連している可能性がある。今回の研究ではリンパ球枯渇前処置療法が使用されなかったため、これが我々のIL-15データを説明している可能性がある。
【０１１３】
全体として、これらのデータは、養子aNK細胞療法が、炎症反応を最初に支持しかつ後で弱めるサイトカインプロファイルに、一時的ではあるが測定可能な効果を及ぼしたことを示唆している。したがって、aNK細胞の用量、注入の回数、および患者の損なわれた免疫系が治療後に観察された免疫の回復不足の一因となった可能性がある。
【０１１４】
結論として、この試験は、難治性/再発AML患者における「既製」のaNK細胞による養子細胞療法の安全性と実現可能性を実証した。最大細胞用量を使用してもグレード3〜4の毒性は現れなかった。これらのデータは、将来の併用免疫療法試験のための、およびAML患者におけるaNK細胞ベースの治療の最適化のための土台を提供する。上記のデータは、Boyiadzis M. et al., Cytotherapy, 2017; 19: 1225-1232から得られる。
【０１１５】
実施例2
この実施例では、NK-92細胞を投与することにより難治性または再発急性骨髄性白血病（AML）の患者を治療するための代表的な方法を説明する。
【０１１６】
NK-92細胞を、難治性または再発急性骨髄性白血病（AML）の患者に、28日サイクルで、約1×103〜約1×108個/日のNK-92細胞量で21日間投与し、その後7日間休止する。AMLと診断された患者は、少なくとも2サイクルの治療後に治療に対して難治性であるとみなされた患者、または2サイクルの治療後に再発した患者から選択される。この研究は、ESMO臨床診療ガイドライン（ESMO Clinical Practice Guidelines）に準拠して実施される。毎朝ほぼ同じ時間に投与し、全ての用量を絶食状態で投与する（投与の少なくとも2時間前と投与後2時間は食事を取らない）。応答は、30日目とその後月1回、連続的な末梢血カウントと反復骨髄検査により評価する。患者は、全ての有核細胞の5％未満までの骨髄芽球のクリアランス、形態学的に正常な造血、および末梢血細胞数の正常レベルへの復帰について評価される。安定した疾患または良好な応答を示す患者は、最大12ヶ月間治療を継続する。
【０１１７】
薬物動態パラメータの分析のための血液サンプリングは、次のサンプリング計画に従って1日目と28日目に実施する：投与前、投与後0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、18、24時間。有害事象、バイタルサイン、ECG、臨床検査評価（血液化学、血液学、およびリンパ球表現型検査）、および研究中の特定の時間での理学的検査をモニタリングすることによって安全性の評価を行う。全ての患者を毒性試験に利用する。応答評価に利用できる患者を評価する。治療中の患者を応答評価のために評価し、その場合、完全奏効または部分奏効を達成した患者を評価する。安定した疾患を達成した（治療を継続した）患者についても評価する。（完全奏効、部分奏効、および安定した疾患）として定義される客観的奏効率を含めて、評価可能な患者の全奏効率を計算する。
【０１１８】
研究結果から、NK-92細胞の投与は難治性または再発白血病の治療に有効であることが示されると期待される。
【０１１９】
本明細書に記載の実施例および態様は、例示のみを目的としたものであり、それらに照らして様々な修正または変更が当業者には示唆されており、本出願の精神および範囲内に、そして添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。本明細書に引用される全ての刊行物、配列アクセッション番号、特許、および特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１２０】
参考文献
2020534252.tif 000006
2020534252.tif 000007
【図１】
2020534252.tif 000009
【手続補正書】
【提出日】令和2年6月11日(2020.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以前に白血病の治療を受けた患者における残存白血病細胞を処置するためのNK-92細胞を含む薬学的組成物であって、該NK-92細胞が、白血病の従来の治療法の後で該患者に残っている残存白血病細胞の集団を殺傷するのに十分な量で該患者に投与される、前記薬学的組成物。
【請求項２】
前記患者へのNK-92細胞の投与前に、残存白血病細胞の前記集団が、白血病の治療前に該患者で検出された白血病細胞のレベルの約10％未満のレベルで該患者に存在する、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記残存白血病細胞が白血病幹細胞を含む、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記残存白血病細胞がリンパ球、赤血球、白血球、または血小板の骨髄細胞前駆細胞を含む、請求項1に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記残存白血病細胞が前記従来の治療法に抵抗性である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
白血病から回復している患者における白血病の再発を抑制するためのNK-92細胞を含む薬学的組成物であって、該NK-92細胞が、該患者における白血病の再発を抑制するのに十分な量で1用量または複数用量で該患者に投与される、前記薬学的組成物。
【請求項８】
前記患者における白血病の再発が、NK-92細胞の投与後少なくとも約3ヶ月間抑制される、請求項7に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、請求項7または8に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記白血病がリンパ球性白血病または骨髄性白血病である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
白血病の治療のための、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物。
【請求項１２】
以前に白血病から回復している患者における白血病の再発を治療するためのNK-92細胞を含む薬学的組成物であって、該NK-92細胞が、該患者における再発白血病を治療するのに十分な量で1用量または複数用量で該患者に投与される、前記薬学的組成物。
【請求項１３】
前記1用量または複数用量のNK-92細胞が、少なくとも1つの抗白血病薬と組み合わせて投与される、請求項12に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
白血病の従来の治療を受けた患者における白血病を治療するためのNK-92細胞を含む薬学的組成物であって、さらなる従来の治療の代替として、該NK-92細胞が、治療量で1用量または複数用量で該患者に投与される、前記薬学的組成物。
【請求項１５】
前記1用量または複数用量のNK-92細胞の患者への投与が、該患者における白血病の再発後の一次療法として役立つ、請求項14に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記NK-92細胞が未改変NK-92細胞である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記NK-92細胞が遺伝子改変NK-92細胞である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記NK-92細胞が前記患者への投与前に照射される、請求項1〜17のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記NK-92細胞がインターロイキン-2（IL-2）を分泌する、請求項1〜18のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
白血病または残存白血病の治療に使用するための、請求項11に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
別の局面では、疾患を治療するための本明細書に記載の組成物の使用が提供される。いくつかの態様では、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患治療用の医薬として使用するために提供される。いくつかの態様では、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患の治療に使用するために提供される。いくつかの態様では、本明細書に記載のNK-92細胞を含む薬学的組成物は、疾患の治療に使用するために従来の治療法と組み合わされる。いくつかの態様では、該疾患は白血病または残存白血病である。
[本発明1001]
以前に白血病の治療を受けた患者における残存白血病細胞を処置するための方法であって、白血病の従来の治療法の後で該患者に残っている残存白血病細胞の集団を殺傷するのに十分な量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1002]
前記患者にNK-92細胞を投与する前、残存白血病細胞の前記集団が、白血病の治療前に該患者で検出された白血病細胞のレベルの約10％未満のレベルで該患者に存在する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記残存白血病細胞が白血病幹細胞を含む、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記残存白血病細胞がリンパ球、赤血球、白血球、または血小板の骨髄細胞前駆細胞を含む、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
前記残存白血病細胞が前記従来の治療法に抵抗性である、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
白血病から回復している患者における白血病の再発を抑制するための方法であって、該患者における白血病の再発を抑制するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1008]
前記患者における白血病の再発が、NK-92細胞の投与後少なくとも約3ヶ月間抑制される、本発明1007の方法。
[本発明1009]
前記従来の治療法が化学療法、放射線療法、ホルモン療法、または骨髄移植のうちの1つまたは複数を含む、本発明1007または1008の方法。
[本発明1010]
前記白血病がリンパ球性白血病または骨髄性白血病である、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
白血病の治療のための、治療用量のNK-92細胞を含む薬学的組成物。
[本発明1012]
以前に白血病から回復している患者における白血病の再発を治療するための方法であって、該患者における再発白血病を治療するのに十分な量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与する段階を含む、前記方法。
[本発明1013]
前記1用量または複数用量のNK-92細胞が、少なくとも1つの抗白血病薬と組み合わせて投与される、本発明1012の方法。
[本発明1014]
白血病の従来の治療を受けた患者における白血病を治療するための方法であって、さらなる従来の治療の代替法として、治療量の、1用量または複数用量のNK-92細胞を該患者に投与することを含む、前記方法。
[本発明1015]
1用量または複数用量のNK-92細胞の前記患者への投与が、該患者における白血病の再発後の一次療法として役立つ、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記NK-92細胞が未改変NK-92細胞である、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記NK-92細胞が遺伝子改変NK-92細胞である、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1018]
前記NK-92細胞が前記患者に投与する前に照射される、本発明1001〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記NK-92細胞がインターロイキン-2（IL-2）を分泌する、本発明1001〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
白血病または残存白血病の治療に使用するための、本発明1011の薬学的組成物。
【国際調査報告】
2020534252.tif 000010
2020534252.tif 000011