(57)【要約】  細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用を含む、癌を治療する組成物及び方法が提供される。細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートは、癌治療において相乗効果を示す。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物であって、
前記イムノコンジュゲートが
１）１個以上のインターロイキンと、
２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成し、
前記１個以上のインターロイキンが前記Ｆｃドメインに融合され、
前記細胞傷害性物質が免疫原性細胞死を誘導することができる、
組成物。
【請求項２】
前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記イムノコンジュゲートが２個以上のインターロイキンを含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個がペプチドリンカーを介して互いに融合されてインターロイキン二量体を形成する、請求項３又は４に記載の組成物。
【請求項６】
前記インターロイキン二量体の少なくとも１個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記２個以上のインターロイキンが同じインターロイキンの２個以上のコピーである、請求項３〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記２個以上のインターロイキンがＩＬ１０の２個以上のコピーである、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記イムノコンジュゲートが前記Ｆｃドメインに融合された標的化部分を更に含み、該標的化部分が腫瘍抗原に対して結合特異性を示す、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記標的化部分が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記腫瘍抗原がＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、及びＦＡＰからなる群から選択される、請求項９又は１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＦｃドメインがＩｇＧ  Ｆｃドメインである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＩｇＧがヒトＩｇＧ１である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記イムノコンジュゲートが
第１の成員と該第１の成員とは異なる第２の成員とを含むイムノコンジュゲートであり、
前記第１の成員が前記第１のＦｃサブユニットを含み、
前記第２の成員が前記第２のＦｃサブユニットに融合された前記１個以上のインターロイキンを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合して前記ヘテロ二量体を形成する、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも２個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合されている、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記第１の成員が、前記第１のＦｃサブユニットに融合された前記標的化部分を更に含む、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記イムノコンジュゲートがいずれの標的化部分も含まない、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと異なり、前記Ｆｃドメインが前記第１のＦｃサブユニットと前記第２のＦｃサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第１のＦｃサブユニットが第１の修飾を含み、
前記第２のＦｃサブユニットが第２の修飾を含み、
前記第１の修飾及び前記第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がＸ放射線及び／又はガンマ放射線を放出する放射性物質を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２７】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２８】
治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬の調製における、細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用であって、
該イムノコンジュゲートが請求項１〜２７のいずれか一項において定義され、前記細胞傷害性療法が免疫原性細胞死を誘導することができる、
使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
腫瘍抗原に対する免疫応答は、検出することができるが（非特許文献１）、疾患を引き起こす悪性細胞は、多くの場合、拒絶をもたらす免疫応答を誘発することができない。研究により、サイトカイン及び共刺激分子等の免疫調節分子を導入することによって腫瘍細胞の免疫原性を高めることが可能であることが実証されているが、残存癌細胞の根絶には、直接遺伝子導入では到達することができない広く散在する微小転移腫瘍進展病巣（ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｔｕｍｏｒ  ｄｅｐｏｓｉｔｓ）を標的化することが必要となる場合がある。加えて、導入した免疫調節分子の発現及び安定性は、十分というには程遠いものであることが多い。免疫系の細胞によって産生されるサイトカイン等の免疫調節物質は、適応免疫応答の細胞を直接的又は間接的に活性化し、防御抗腫瘍免疫の誘発において重要な役割を果たすことができる。自然免疫系は、細菌産物、又はインターロイキン等の炎症性サイトカインの放出をもたらす「危険」シグナルによって引き起こされ得る。
【０００２】
多数の研究から、免疫調節物質が動物モデル及び癌患者の両方において抗腫瘍効果の発揮に有用であり得ることが示されている。しかしながら、免疫調節物質の適用に関連した短い半減期及び全身毒性のために、それらの使用が大幅に限定されている。特許文献１では、腫瘍関連抗原を標的とする抗体のＣ末端に付着したインターフェロンを含むキメラ構築物が記載されている。しかしながら、このようなキメラ構築物によって発現される融合タンパク質は、典型的には、ｉｎ  ｖｉｖｏで非常に不安定であり、その発現収率は、典型的には、工業規模生産にとって十分に高くない。
【０００３】
免疫療法に加えて、手術、化学療法、ホルモン療法、及び放射線療法も、癌の治療に使用されている（例えば、非特許文献２を参照されたい）。しかしながら、患者の健康状態又は進行した病期のため手術が不可能であるか又は許容できない場合があり、また手術後に患者から癌細胞を完全に取り除けないことが頻繁に起こる。放射線療法は、腫瘍組織が正常組織よりも「放射線」に対する感受性が高い場合にのみ有効であり、高線量の放射線療法は、しばしば深刻な副作用を引き起こす可能性がある。ホルモン療法が単独の作用物質として投与されることはめったになく、効果的であり得るものの、他の治療で癌細胞の大部分を除去した後、癌の再発を予防又は遅延させるために使用されることが多い。さらに、患者は、化学療法剤に対する薬物耐性をかなり急速に発現する場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】中国特許出願公開第２００８８０１１７２２５．８号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｄｉｓｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：３３６３−３３６７
【非特許文献２】Ｓｔｏｃｋｄａｌｅ，１９９８，‘Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ’，ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ：Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ｖｏｌ．  ３，  Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｄｅｒｍａｎ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １２，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＩＶ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、癌治療のための新規で効果的な治療法が今も強く望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示は、細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用を含む、癌を治療する組成物及び方法を提供し、本開示の発明は、癌治療において著しい相乗効果を示した。
【０００８】
１つの態様において、本開示は、イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物であって、前記イムノコンジュゲートは、
１）１個以上のインターロイキンと、
２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み、
前記第１のＦｃサブユニットは、前記第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成し、
前記１個以上のインターロイキンは、前記Ｆｃドメインに融合され、
前記細胞傷害性物質は、免疫原性細胞死を誘導することができる、
組成物を提供する。
【０００９】
幾つかの実施の形態において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個は、前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている。
【００１０】
幾つかの実施の形態において、前記イムノコンジュゲートは、２個以上のインターロイキンを含む。
【００１１】
幾つかの実施の形態において、前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個は、前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている。
【００１２】
幾つかの実施の形態において、前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個は、ペプチドリンカーを介して互いに融合されてインターロイキン二量体を形成する。
【００１３】
幾つかの実施の形態において、前記インターロイキン二量体の少なくとも１個は、前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている。
【００１４】
幾つかの実施の形態において、前記２個以上のインターロイキンは、同じインターロイキンの２個以上のコピーである。幾つかの実施の形態において、前記２個以上のインターロイキンは、ＩＬ１０の２個以上のコピーである。
【００１５】
幾つかの実施の形態において、前記イムノコンジュゲートは、前記Ｆｃドメインに融合された標的化部分を更に含み、該標的化部分が腫瘍抗原に対して結合特異性を示す。幾つかの実施の形態において、前記標的化部分は、前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている。幾つかの実施の形態において、前記腫瘍抗原は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、及びＦＡＰからなる群から選択される。幾つかの実施の形態において、前記Ｆｃドメインは、ＩｇＧ  Ｆｃドメインである。幾つかの実施の形態において、前記ＩｇＧは、ヒトＩｇＧ１である。
【００１６】
幾つかの実施の形態において、前記イムノコンジュゲートは、
第１の成員と該第１の成員とは異なる第２の成員とを含むイムノコンジュゲートであり、
前記第１の成員は、前記第１のＦｃサブユニットを含み、
前記第２の成員は、前記第２のＦｃサブユニットに融合された前記１個以上のインターロイキンを含み、
前記第１のＦｃサブユニットは、前記第２のＦｃサブユニットと会合して前記ヘテロ二量体を形成する。
【００１７】
幾つかの実施の形態において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個は、前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている。
【００１８】
幾つかの実施の形態において、前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも２個は、互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体は、前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合されている。
【００１９】
幾つかの実施の形態において、前記第１の成員は、前記第１のＦｃサブユニットに融合された前記標的化部分を更に含む。
【００２０】
幾つかの実施の形態において、前記イムノコンジュゲートは、いずれの標的化部分も含まない。
【００２１】
幾つかの実施の形態において、前記第１のＦｃサブユニットは、前記第２のＦｃサブユニットと異なり、前記Ｆｃドメインは、前記第１のＦｃサブユニットと前記第２のＦｃサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。
【００２２】
幾つかの実施の形態において、前記第１のＦｃサブユニットは、第１の修飾を含み、前記第２のＦｃサブユニットは、第２の修飾を含み、前記第１の修飾及び前記第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【００２３】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質からなる群から選択される。
【００２４】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、シクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む。
【００２５】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、カペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む。
【００２６】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、ブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む。
【００２７】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、タキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む。
【００２８】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、Ｘ放射線及び／又はガンマ放射線を放出する放射性物質を含む。
【００２９】
幾つかの実施の形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質は、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む。
【００３０】
別の態様において、本開示は、治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬の調製における、細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用であって、該イムノコンジュゲートが本開示において定義される通りであり、前記細胞傷害性療法が免疫原性細胞死を誘導することができる、
使用を提供する。
【００３１】
本開示の付加的な態様及び利点は、本開示の例示的な実施の形態のみを示し、説明する以下の発明を実施するための形態から当業者に容易に明らかとなる。認識されるように、本開示において、他の種々の実施の形態が可能であり、その幾つかの細部を全て本開示から逸脱することのない様々な明白な点で変更することが可能である。したがって、図面及び本明細書は、限定的なものではなく、本質的に例示的なものであるとみなされる。
【００３２】
参照による援用
本明細書に記載の全ての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許又は、特許出願が具体的に及び個々に引用することにより本明細書の一部をなすことが示された場合と同じ程度において引用することにより本明細書の一部をなす。
【００３３】
本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本発明の特徴及び利点は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の発明を実施するための形態及び添付の図面（さらに、本明細書での「図」（”ｆｉｇｕｒｅ”ａｎｄ”ＦＩＧ．”））を参照することによってより良好に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１Ａ】ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図１Ｂ】ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図１Ｃ】ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図１Ｄ】ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図１Ｅ】ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図１Ｆ】ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ分析によって示される、本開示のイムノコンジュゲートの精製結果を示す図である。
【図２】放射線治療の放射線量と腫瘍体積との関係を示す図である。
【図３Ａ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図３Ｂ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図３Ｃ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図３Ｄ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図４】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図５Ａ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図５Ｂ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図５Ｃ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ａ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ｂ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ｃ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ｄ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ｅ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図６Ｆ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴの相乗効果を示す図である。
【図７Ａ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｂ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｃ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｄ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｅ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｆ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｇ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｈ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｉ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図７Ｊ】本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた様々な化学療法の効果を示す図である。
【図８Ａ】本開示によるイムノコンジュゲートの例を示す図である。
【図８Ｂ】本開示によるイムノコンジュゲートの例を示す図である。
【図８Ｃ】本開示によるイムノコンジュゲートの例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
本開示の実施形態を説明する前に、このような実施形態が例示としてのみ提示され、本明細書に記載される本開示の実施形態の様々な代替形態を本開示の実施において用いることができることを理解されたい。ここで、本開示から逸脱することなく多数の変更、変化、及び置換が当業者に想起される。
【００３６】
他に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料を本開示の実施又は試験に使用することができ、好適な方法及び材料を下記に説明する。矛盾する場合は、定義を含む本明細書が優先される。加えて、材料、方法、及び実施例は、一例にすぎず、限定を意図するものではない。ここで、本開示から逸脱することなく多数の変更、変化、及び置換が当業者に想起される。
【００３７】
本明細書で使用される場合、文脈上他に明らかに指示されない限り、数量を特定していない単数形（Ｔｈｅ  ｓｉｎｇｕｌａｒ  ｆｏｒｍ“ａ，““ａｎ“ａｎｄ“ｔｈｅ，“）は、概して、複数の指示対象を含む。
【００３８】
「イムノコンジュゲート」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、１個以上の抗体又はそのフラグメントと１個以上の第２の分子とのコンジュゲーションによって形成されるタンパク性分子を指す。第２の分子は、同一でも異なってもよく、例えば、エフェクタータンパク質を含んでもよい。
【００３９】
「タンパク性」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ポリペプチド若しくはタンパク質の、それらに関連する、それらに類似した、又はそれらである物質若しくは子を指す。例えば、本開示のイムノコンジュゲートは、２個以上のポリペプチドを含むヘテロ二量体タンパク質又はヘテロ二量体であり得る。
【００４０】
「ヘテロ二量体」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、２個の異なる成員から構成される分子（例えば、タンパク性分子）を指す。ヘテロ二量体の２個の成員は、構造、機能、活性、及び／又は組成が異なっていてもよい。例えば、２個の異なる成員は、これらのポリペプチドを形成するアミノ酸残基の順序、数、又は種類が異なるポリペプチドを含み得る。ヘテロ二量体の２個の異なる成員は、各々独立して１個、２個、若しくはそれ以上の単位、ポリペプチド鎖、又は部分を含み得る。
【００４１】
「標的化部分」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、標的分子、細胞、粒子、組織、若しくは凝集体に、特異的、選択的、又は優先的に結合する分子、複合体、又は凝集体を指す。例えば、標的化部分は、抗体、抗原結合抗体フラグメント、二重特異性抗体、又は他の抗体ベースの分子若しくは化合物であり得る。標的化部分の他の例として、アプタマー、アビマー（ａｖｉｍｅｒｓ）、受容体結合リガンド、核酸、ビオチン−アビジン結合対、結合ペプチド、又はタンパク質等を挙げることができるが、これらに限定されない。「標的化部分」及び「結合部分」との用語は、本明細書で区別なく使用される。
【００４２】
「腫瘍抗原」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、宿主において免疫応答を引き起こす能力を有し得る、腫瘍細胞において又は腫瘍細胞によって産生される抗原性物質を指す。例えば、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の一部を構成し、腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導することが可能なタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又はそのフラグメントであり得る。腫瘍抗原ペプチドは、腫瘍細胞において腫瘍抗原の分解の結果として生成するペプチドである場合もあり、ＨＬＡ分子との結合によって細胞表面上で発現される際に腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導又は活性化することができる。幾つかの実施形態において、「腫瘍抗原」との用語は、癌細胞上で排他的若しくは優先的若しくは差次的に発現され及び／又は癌細胞と会合して見られ、それにより、癌に優先的若しくは特異的な標的をもたらす生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、糖タンパク質等）を指す場合もある。例えば、優先的発現は、生物内の任意の他の細胞と比較した優先的発現又は生物の特定の領域内での（例えば、特定の器官内又は組織内での）優先的発現であり得る。
【００４３】
「ヘテロ二量体化」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、複合体形成、会合、又は凝集等によって、異なる２個の成員間の共有結合の形成を伴い又は伴わず、異なる２個の成員（例えば、２個の非同一のポリペプチド）間でヘテロ二量体を形成するプロセスを指す。
【００４４】
「共有結合」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、電子の共有によって原子間に形成される化学結合を指す。例えば、共有結合は、極性であっても又は無極性であってもよい。幾つかの実施形態において、共有結合は、ジスルフィド結合である。
【００４５】
「非共有対親和性」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、非共有相互作用、例えば、イオン対、水素結合、双極子間相互作用、電荷移動相互作用、π−π相互作用、カチオン−π電子相互作用、ファンデルワールス相互作用、及び分散相互作用、疎水性（親油性）相互作用、複合体形成（例えば、遷移金属カチオンの複合体形成）、若しくは「これらの相互作用の組合せによって互いに結合することが可能な二量体化配列又はヘテロ二量体化配列を指す。
【００４６】
「リンカー」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、２個のポリペプチド配列を接続又は連結する、例えば、２個のポリペプチドのドメインを連結する合成アミノ酸配列を指す。リンカーは、２個のアミノ酸配列をペプチド結合によって接続することができる。幾つかの実施形態において、本開示のリンカーは、生物活性部分を線状配列中の第２の部分に接続する。
【００４７】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」との用語は、任意の長さのアミノ酸の重合体を指すように、本明細書で区別なく使用される。重合体は、線状であっても、又は分岐状であってもよく、修飾アミノ酸を含んでいてもよく、非アミノ酸が割り込んでいてもよい。この用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識化構成要素とのコンジュゲーション等の任意の他の操作によって修飾されたアミノ酸重合体も包含する。この用語は、１個以上のアミノ酸残基が対応する自然発生アミノ酸の人工化学類似体であるアミノ酸重合体、及び自然発生アミノ酸重合体に当てはまる場合もある。この用語は、ポリペプチドを構成するアミノ酸を接合する従来のペプチド結合の変形を含む場合もある。例えば、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、α炭素がペプチド結合によって連結したアミノ酸の鎖であり得る。したがって、鎖の一方の末端（アミノ末端）の末端アミノ酸は、遊離アミノ基を有し、鎖の他方の末端（カルボキシ末端）の末端アミノ酸は、遊離カルボキシル基を有し得る。本明細書で使用される場合、「アミノ末端」との用語（Ｎ末端と略される）は、概して、ペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離αアミノ基、又はペプチド内の任意の他の位置のアミノ酸のαアミノ基（ペプチド結合に関与する場合は、アミノ基）を指す。同様に、「カルボキシ末端」との用語は、概して、ペプチドのカルボキシ末端上の遊離カルボキシル基又はペプチド内の任意の他の位置のアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドは、アミド結合とは対照的に、エーテルによって接合したアミノ酸等のペプチド模倣物を含むが、これに限定されない本質的に任意のポリアミノ酸を含む場合もある。
【００４８】
「アミノ酸」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、Ｄ若しくはＬ光学異性体、又はその両方、アミノ酸類似体、及びペプチド模倣物を含むが、これらに限定されない天然及び／若しくは非天然、又は合成アミノ酸を指す。標準的な１文字コード又は３文字コードがアミノ酸を指定するために使用される。
【００４９】
「変異体」との用語は、タンパク性分子（例えば、ポリペプチド又はタンパク質）との関連で使用される場合、概して、生物活性タンパク質の治療活性及び／又は生物活性の少なくとも一部を保持する、未変性生物活性タンパク質に対して配列相同性を有するタンパク性分子を指す。例えば、変異体タンパク質は、参照生物活性タンパク質と比較して少なくとも、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のアミノ酸配列同一性を有し得る。幾つかの実施形態において、「変異体」は、例えば、部位特異的突然変異誘発、コード遺伝子の合成、挿入によって意図的に修飾されたタンパク質、又は突然変異によって偶発的に修飾されたタンパク質を含み得る。
【００５０】
「コンジュゲートした」、「連結した」、「融合した」、及び「融合」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、例えば、化学的結合又は組み換え手段を含む手段による２個以上の化学元素、配列、又は構成要素の接合を指す。例えば、プロモーター又はエンハンサーは、配列の転写が達成される場合にコード配列に操作可能に連結する。概して、「操作可能に連結する」は、連結しているＤＮＡ配列が近接し、リーディングフェーズ（ｒｅａｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）内又はインフレームであることを意味する。「インフレーム融合」は、元のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の正しいリーディングフレームが維持されるように、より長く連続したＯＲＦを形成するための２個以上のＯＲＦの接合を指す。このため、得られる「融合ポリペプチド」は、元のＯＲＦによってコードされるポリペプチドに相当する２個以上のフラグメント（このセグメントは、通常は、本質的にそのように接合しない）を含有する単一タンパク質である。「融合部位」は、２個以上のフラグメントが互いに接合した配列を指す。融合部位は、場合により、接合している２個以上のフラグメント中の配列と同一の配列であり得る。融合部位は、場合により、接合している２個以上のフラグメントのいずれの配列とも同一でないギャップセグメントを更に含み得る。
【００５１】
ポリペプチドとの関連で、「線状配列」又は「配列」は、配列中の互いに隣り合う残基がポリペプチドの一次構造において近接するアミノ末端からカルボキシル末端の方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序である。「部分配列」は、一方又は両方の方向に付加的な残基を含むことが知られるポリペプチドの一部を形成する線状配列である。
【００５２】
「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「オリゴヌクレオチド」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド、又はその類似体の任意の長さのヌクレオチドの重合体形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造を有し、既知又は未知の任意の機能を果たし得る。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子若しくは遺伝子フラグメントのコード又は非コード領域、連鎖分析によって規定される遺伝子座（単数又は複数）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組み換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、及びプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体等の修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、重合体の会合の前に行われてもよく又はその後に行われてもよい。ヌクレオチドの配列に非ヌクレオチド構成要素が割り込んでいてもよい。ポリヌクレオチドは、重合後に標識化構成要素とのコンジュゲーション等によって更に修飾することができる。
【００５３】
「遺伝子」及び「遺伝子フラグメント」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、転写及び翻訳された後に特定のタンパク質をコードすることが可能な、少なくとも１個のオープンリーディングフレームを含有するポリヌクレオチドを指す。遺伝子又は遺伝子フラグメントは、ポリヌクレオチドがコード領域全体又はそのセグメントに広がり得る、少なくとも１個のオープンリーディングフレームを含有する限りにおいて、ゲノムＤＮＡであっても又はｃＤＮＡであってもよい。「融合遺伝子」は、互いに連結した少なくとも２個の異種ポリヌクレオチドから構成される遺伝子である。
【００５４】
「抗体」との用語は、本明明細書で使用される場合、概して、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによって実質的にコードされる１個以上のポリペプチドを含むタンパク質を指す。免疫グロブリン遺伝子として、κ、λ、α、γ、δ、ε、及びμ定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を挙げることができる。本明細書で使用される場合、軽鎖は、κ又はλのいずれかに分類することができる。重鎖は、γ、μ、α、δ、又はεに分類することができ、これは、免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥをそれぞれ規定する。抗体は、本開示で使用される場合、四量体を含む構造単位を有し得る。各々の四量体は、ポリペプチド鎖の２個の同一の対から構成され、各々の対は、１個の「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１個の「重」鎖（約５０ｋＤ〜７０ｋＤ）を有し得る。各々の鎖のＮ末端は、主として抗原認識に関与する約１００〜１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を規定し得る。「軽鎖可変領域」（ＶＬ）及び「重鎖可変領域」（ＶＨ）との用語は、本明細書で使用される場合、概して、軽鎖及び重鎖のそれぞれのこれらの領域を指す。抗体は、無処置の免疫グロブリン又は様々なペプチダーゼでの消化によって産生される若しくはデノボ発現される、多数のよく特性化されたフラグメントとして存在することができる。このため、例えば、ペプシンによって抗体をヒンジ領域中のジスルフィド連結の下で消化し、Ｆ（ａｂ）’２（それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に接合した軽鎖であるＦａｂの二量体）を作製することができる。Ｆ（ａｂ）’２は、ヒンジ領域中のジスルフィド連結を切断する穏和な条件化で還元され、それにより（Ｆａｂ’）２の二量体がＦａｂ’単量体に変換され得る。Ｆａｂ’単量体は、本質的に、ヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体フラグメントのより詳細な説明については、ＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ． （１９９３）を参照されたい）。様々な抗体フラグメントが無処置抗体の消化に関して規定されているが、斯かるＦａｂ’フラグメントが化学的に又は組み換えＤＮＡ法を利用することによってデノボ合成され得ることが当業者に理解される。このため、抗体との用語は、本明細書で使用される場合、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、及びダイアボディを含むが、これらに限定されない、全抗体の修飾によって作製されるか又は組み換えＤＮＡ法を用いてデノボ合成される抗体フラグメントも含み得る。幾つかの実施形態において、抗体として、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及び一本鎖抗体、例えば、連続したポリペプチドを形成するように可変重鎖及び可変軽鎖が（直接的に又はペプチドリンカーを介して）互いに接合した一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
「抗原結合部位」又は「結合部分」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、抗原結合に関与する抗体の一部を指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖及び／又は軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成され得る。重鎖及び軽鎖のＶ領域内の３個の高い多様性を有するストレッチは、「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」として知られる、より保存された隣接ストレッチ間に介在する「超可変領域」と称される。このため、「ＦＲ」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、免疫グロブリンの超可変領域間に隣接して自然に見られるアミノ酸配列を指す。抗体分子には、軽鎖の３個の超可変領域及び重鎖の３個の超可変領域が互いに関連して３次元空間に配置され、抗原結合「表面」を形成する。この表面は、標的抗原の認識及び結合を媒介し得る。重鎖及び軽鎖の各々の３個の超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」と称され、例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈｅｄ．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）によって特性化される。
【００５６】
「相同性」、「相同な」、又は「配列同一性」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、２個以上のポリヌクレオチド配列間又は２個以上のポリペプチド配列間の配列の類似性又は互換性を指す。プログラム（例えば、Ｅｍｂｏｓｓ  Ｎｅｅｄｌｅ又はＢｅｓｔＦｉｔ）を使用して２個の異なるアミノ酸配列間の配列同一性、類似性、又は相同性を決定する場合、デフォルト設定を用いても、又は同一性、類似性、若しくは相同性スコアを最適化するために、ｂｌｏｓｕｍ４５若しくはｂｌｏｓｕｍ８０等の適切なスコア行列を選択してもよい。幾つかの実施形態において、相同なポリヌクレオチドは、厳しい条件下でハイブリダイズし、これらの配列と比較して少なくとも、６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、更には１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドである。相同なポリペプチドは、同程度の長さの配列を最適にアラインメントした場合に、少なくとも８０％若しくは少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％、若しくは少なくとも９７％、若しくは少なくとも９８％の配列同一性を有するか、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００５７】
「有効量」又は「治療有効量」との用語は、疾患の治療を含むが、これに限定されない、意図する用途を達成するのに十分な組成物の量を指す。治療有効量は、意図する用途（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ）又は治療される被験体及び病状、例えば、被験体の体重及び年齢、病状の重症度、投与様式等によって異なり、当業者は、これを容易に決定することができる。この用語は、標的細胞における特定の応答、例えば、標的遺伝子導入、増殖、及び／又はアポトーシスを誘導する用量に当てはまる場合がある。具体的な用量は、選ばれる特定の化合物、採用される投与計画、他の化合物と組み合わせて投与されるか否か、投与時期、投与対象の組織、及び行われる物理的送達システムに応じて異なる。
【００５８】
「治療」又は「治療する」又は「緩和する」又は「改善する」との用語は、本明細書で区別なく使用され、治療的利益及び／又は予防的利益を含むが、これらに限定されない有益な又は所望の結果を得るためのアプローチを指す。本明細書で使用される場合、治療的利益は、概して、治療される基礎障害の根絶又はその重症度の低減を指す。また、治療的利益は、被験体において改善が観察されるような基礎障害と関連する１個以上の生理的症状の根絶、重症度の低減、又は発生率の低減によって達成されるが、被験体が依然として基礎障害に苦しむこともある。予防的利益のために、前記組成物は、特定の疾患を発症するリスクのある被験体又はこの疾患の診断が下すことができない場合であっても、疾患の１個以上の生理的症状が報告されている被験体に投与することができる。
【００５９】
「治療効果」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、上記のような治療的利益及び／又は予防的利益を包含する。予防的効果は、疾患若しくは病態の出現を遅らせる若しくは解消すること、疾患若しくは病態の症状の発現を遅らせる若しくは解消すること、疾患若しくは病態の進行を減速する、食い止める若しくは逆行させること、又はこれらの任意の組合せを含む。
【００６０】
「併用（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、「と組み合わせて投与する」、「と組み合わせて使用する」との用語、及びそれらと文法的に同等の用語は、本明細書で使用される場合、概して、両方の作用物質及び／又はそれらの代謝産物又は両方の療法が被験体において存在する及び／又は機能するような被験体への２個以上の作用物質及び治療法の適用を包含する。併用には、別個の組成物若しくは形態での同時投与、別個の組成物若しくは形態で異なる時点での投与、又は両方の作用物質が存在する組成物での投与が含まれる。
【００６１】
「作用物質」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、生物学的、薬学的、若しくは化学的な化合物、又は他の部分を指す。非限定的な例として、単純若しくは複雑な有機又は無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、化学療法化合物、又は放射線を生成及び／又は放出することが可能な作用物質が挙げられる。
【００６２】
「インターロイキン」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、Ｔリンパ球及び／若しくはＢリンパ球、及び／若しくは造血細胞の発生若しくは分化を促進することが可能な分泌タンパク質、又はシグナル伝達分子を指す。インターロイキンは、ヘルパーＣＤ４  Ｔリンパ球、並びに単球、マクロファージ、及び内皮細胞によって合成され得る。本明細書で使用される場合、インターロイキン（ＩＬ）として、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３４、ＩＬ−３５、及び／又はＩＬ−３６を挙げることができる。本明細書で使用される場合、「インターロイキン」との用語は、完全長インターロイキン又は対応する野生型インターロイキンの生物活性を実質的に維持する（例えば、対応する野生型インターロイキンの生物活性の少なくとも、８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は、更には、少なくとも１００％の生物活性を有する）、そのフラグメント（例えば、切断型）、若しくは変異体を含み得る。インターロイキンは、本明細書で使用される場合、任意の哺乳動物種に由来し得る。幾つかの実施形態において、インターロイキンは、ヒト、ウマ、ウシ、ネズミ、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ラット、ヤギ、ヒツジ、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される種に由来する。幾つかの実施形態において、インターロイキンは、例えば、その受容体に対する親和性が増大又は減少した突然変異型であってもよい。
【００６３】
「被験体」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ヒト、又はネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット、又はサルを含むが、これらに限定されない非ヒト動物を指す。
【００６４】
「ＥＧＦＲファミリー成員」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、上皮成長因子受容体ファミリーの成員を指す。例えば、これは、ＥｒｂＢ−１（上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）とも指定されている）、ＥｒｂＢ−２（ヒトにおいてＨＥＲ２、齧歯類においてｎｅｕとも指定されている）、ＥｒｂＢ−３（ＨＥＲ３とも指定されている）、及び／又はＥｒｂＢ−４（ＨＥＲ４とも指定されている）であり得る。抗ＥＧＦＲファミリー抗体の例として、以下の抗体の１個以上が挙げられるが、これらに限定されない：Ｃ６．５、Ｃ６ｍＬ３−９、Ｃ６  ＭＨ３−Ｂ１、Ｃ６−Ｂ１Ｄ２、Ｆ５、ＨＥＲ３．Ａ５、ＨＥＲ３．Ｆ４、ＨＥＲ３．Ｈ１、ＨＥＲ３．Ｈ３、ＨＥＲ３．Ｅ１２、ＨＥＲ３．Ｂ１２、ＥＧＦＲ．Ｅ１２、ＥＧＦＲ．Ｃ１０、ＥＧＦＲ．Ｂ１１、ＥＧＦＲ．Ｅ８、ＨＥＲ４．Ｂ４、ＨＥＲ４．Ｇ４、ＨＥＲ４．Ｆ４、ＨＥＲ４．Ａ８、ＨＥＲ４．Ｂ６、ＨＥＲ４．Ｄ４、ＨＥＲ４．Ｄ７、ＨＥＲ４．Ｄ１１、ＨＥＲ４．Ｄ１２、ＨＥＲ４．Ｅ３、ＨＥＲ４．Ｅ７、ＨＥＲ４．Ｆ８、及びＨＥＲ４．Ｃ７等。例えば、米国特許出願公開第２００６／００９９２０５号及び米国特許出願公開第２００４／００７１６９６号（引用することにより本明細書の一部をなす）も参照されたい。
【００６５】
「抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体に特異的又は優先的に結合する抗体を指す。例えば、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体又は抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、又はその抗原結合フラグメントであり得る。
【００６６】
「抗ＥＧＦＲ抗体」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ＥＧＦＲに特異的又は優先的に結合する抗体を指す。場合によっては、抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲの突然変異型（例えば、ＥＧＦＲの最も一般的な細胞外ドメイン突然変異であるＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩとしても知られる）であって、当該突然変異は、ＥＧＦＲ遺伝子のエクソン２〜７の欠失をもたらし、リガンド非依存性構成的活性を持つ切断型細胞外ドメインを特徴とする。）に結合する可能性がある。例えば、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブ、Ｍａｂ８０６、又はその抗原結合フラグメントであり得る。
【００６７】
「抗ＦＡＰ抗体」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ＦＡＰに特異的又は優先的に結合する抗体を指す。「ＦＡＰ」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）を指す。ＦＡＰは、腫瘍マトリクス線維芽細胞に存在し、細胞表面で役割を果たす。ＦＡＰは、ＩＩ型セリンプロテアーゼファミリーのメンバーであり、ジペプチジルペプチダーゼ活性及びコラゲナーゼ活性を有する膜セリンペプチダーゼである。例えば、抗ＦＡＰ抗体は、抗体２８Ｈ１又はその抗原結合フラグメントであり得る。幾つかの実施形態において、抗ＦＡＰ抗体は、抗体２８Ｈ１である。
【００６８】
「成員」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、イムノコンジュゲートの１つの構成要素であるポリペプチド、サブユニット、又は部分を指す。
【００６９】
「Ｆｃドメイン」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、抗体重鎖のＦｃ部分又はＦｃフラグメントを指す。例えば、Ｆｃドメインは、免疫グロブリン重鎖定常領域のカルボキシル末端部分又はＦｃ受容体に結合することができるその類似体若しくは一部を指す場合がある。知られているように、各免疫グロブリン重鎖定常領域は、４個又は５個のドメインを含む。ドメインには、次のように順番に名前が付けられている：ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３（−ＣＨ４）。ＣＨ４は、ＩｇＭに存在し、ヒンジ領域を持たない。本開示において有用な免疫グロブリン重鎖定常領域は、免疫グロブリンヒンジ領域を含み得て、またＣＨ３ドメインも含み得る。例えば、免疫グロブリン重鎖定常領域は、免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含み得る。幾つかの実施形態において、本開示によるＦｃドメインは、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインからなる。
【００７０】
「Ｆｃサブユニット」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、Ｆｃドメインの構成要素を指す。例えば、Ｆｃドメインは、２個以上の成員によって形成され、各成員は、１個のＦｃサブユニットと見なされ得る。
【００７１】
「と複合体化する」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、分子（例えば、抗体）の或る成員／サブユニットと別の成員／サブユニットとの会合（例えば、結合）を指す。例えば、軽鎖は、重鎖と複合体化されて標的化部分を形成し得る。
【００７２】
「結合特異性」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、所与の標的に特異的に結合する（例えば、免疫反応する）能力を指す（ただし、非標的には、結合しない又は実質的に結合しない）。本開示の標的化部分は、単一特異性であって、標的に特異的に結合する１個以上の結合部位を含み得るか又は多重特異性（例えば、二重特異性又は三重特異性）であって、同一又は異なる標的に特異的に結合する２個以上の結合部位を含み得る。
【００７３】
「と会合する」又は「と会合した」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、或る実体が別の実体と物理的に会合又は接触していることを指す。例えば、イムノコンジュゲートの第１の成員は、共有結合的に又は非共有結合的に第２の成員「と会合」し得る。幾つかの実施形態において、イムノコンジュゲートの第１の成員は、界面を介して第２の成員と会合し、界面は、第１の成員及び第２の成員のそれぞれからのアミノ酸残基（すなわち界面残基）によって形成される。
【００７４】
「修飾」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ペプチド骨格（例えば、アミノ酸配列）の任意の操作又はポリペプチドの任意の翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）を指す。例えば、修飾は、対応する野生型ポリペプチドの配列と比較されるものである。修飾は、１個以上（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個以上）のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失であり得る。
【００７５】
「融合タンパク質」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、異種ポリペプチド（すなわち、該異種ポリペプチドが融合されるポリペプチド又はそのドメインとは、無関係のポリペプチド）のアミノ酸配列に直接又は間接的に（例えば、リンカーを介して）融合されたポリペプチドのアミノ酸配列を含む或いはそれからなるポリペプチドを指す。
【００７６】
「Ｃ末端」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ポリペプチドのカルボキシ末端を指す。
【００７７】
「Ｎ末端」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ポリペプチドのアミノ末端を指す。
【００７８】
「免疫グロブリン」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１個以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認識されている免疫グロブリン遺伝子として、κ、λ、α、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、ε、及びμの定常領域遺伝子と並んで、種々の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。免疫グロブリンの一形態は、抗体の基本構造単位を構成する。この形態は、四量体であり、免疫グロブリン鎖の２個の同一のペアからなり、各ペアは、１個の軽鎖及び１個の重鎖を持つ。各ペアにおいて、軽鎖及び重鎖の可変領域が共に抗原への結合を担い、定常領域が抗体エフェクター機能を担う。抗体に加えて、免疫グロブリンは、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）２を含む様々な他の形態で存在し得る。
【００７９】
「フレーム内融合」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、元のＯＲＦの正しいリーディングフレームを維持するように、２個以上のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を接合して連続したより長いＯＲＦを形成することを指す。
【００８０】
「アミノ酸置換」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ポリペプチドの特定の位置の１個のアミノ酸が別のアミノ酸によって置き換えられることを指す。
【００８１】
「ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックス」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１及びＫａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２に従うアミノ酸配列に対応するＥＵ番号のインデックスを指す。
【００８２】
「単離されたポリヌクレオチド」及び「単離された核酸」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、その自然環境から単離された若しくは人工的に合成されたデオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド、又はその類似体のいずれかの任意の長さのヌクレオチドの重合体形態を指す。
【００８３】
「薬学的に許容可能な添加剤」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、薬学的投与に適合する任意のあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、等張剤、及び吸収遅延剤等を指す。
【００８４】
「細胞傷害性物質」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、細胞の機能を阻害し又は妨げ、最終的に細胞の破壊及び／又は細胞死、特に腫瘍細胞死を引き起こす物質又はアプローチを指す。細胞傷害性物質は、放射性同位体、化学療法剤、及び細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素等の毒素又はそれらのフラグメントを含み得る。
【００８５】
「免疫原性細胞死」及び「免疫原性アポトーシス」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、例えば、樹状細胞（ＤＣ）の活性化及びその結果としての特定のＴ細胞応答の活性化を通じて、効果的な抗腫瘍免疫応答を誘導する細胞死の形態を指す。免疫原性細胞死は、損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ：ｄａｍａｇｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｔｅｒｎｓ）の分泌を特徴とし得る。ＤＡＭＰとして、カルレティキュリン（ＣＲＴ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、分泌アンホテリン（ＨＭＧＢ１）、ＡＴＰ等を挙げることができる。ＣＲＴは、通常、小胞体（ＥＲ）の内腔に存在し、免疫原性アポトーシスの誘導後に死にかけている細胞の表面に移行し得て、そこでプロフェッショナル食細胞に対する「ｅａｔ  ｍｅ」シグナルとして機能する。ＨＳＰは、ＨＳＰ７０及びＨＳＰ９０を包含し、これらは、ストレス条件下で原形質膜に移行することもある。ＨＭＧＢ１は、後期アポトーシスマーカーとみなされ、樹状細胞への腫瘍抗原の最適な放出と提示には、細胞外空間への放出を必要とするようである。ＡＴＰは、分泌時に単球に対する「ｆｉｎｄ−ｍｅ」シグナルとして機能し得て、単球のアポトーシス部位への誘引を誘導する。
【００８６】
「アルキル化剤」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、最も古く、最も一般的に使用される化学療法薬のクラスを指し、直接ＤＮＡを損傷して、癌細胞の複製を防ぐことにより働く。アルキル化剤は、通常、細胞周期非特異的であり、細胞周期のどの段階でも癌細胞を死滅させることができる。アルキル化剤の例として、シクロホスファミドを挙げることができる。
【００８７】
「代謝拮抗剤」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、ＤＮＡ及びＲＮＡの成長を妨げる化学療法剤を指す。代謝拮抗剤は、通常、細胞周期特異的であり、細胞分裂の特定の段階で癌細胞を死滅させる。代謝拮抗剤の例として、カペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕを挙げることができる。
【００８８】
「アントラサイクリン」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、癌化学療法で使用され得る、元来ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ）に由来する作用物質のクラスを指す。アントラサイクリンは、ＤＮＡ複製に必要な酵素を妨害し得る。アントラサイクリンは、細胞周期非特異的であり得て、様々な癌の治療に使用され得る。アントラサイクリンは、アグリコンの構造の違い及び付着した糖残基の違いにより、様々な形態で生じる赤色の芳香族ポリケチドを含む場合がある。アントラサイクリンの例として、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、ブレオマイシン、及びマイトマイシン−Ｃを挙げることができる。
【００８９】
「植物アルカロイド」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、有糸分裂を阻害若しくは防止し得る又は酵素による細胞の複製に必要なタンパク質の製造を阻害し得る作用物質を指す。ほとんどの植物アルカロイドは、細胞周期特異的であるが、全ての段階で損傷を引き起こす可能性がある。植物アルカロイドの例として、タキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンを挙げることができる。
【００９０】
「放射性物質」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、或る形態の放射線（例えば、電離放射線）を生成及び／又は放出することができる作用物質を指す。放射性物質の例として、放射性同位元素及び放射性同位元素を含む作用物質を挙げることができる。放射性同位体は、不安定な核を持つ原子からなる放射性元素の形態であってもよく、放射性崩壊を経て安定した形態となり、特徴的なアルファ線、ベータ線、又はガンマ線を放射し得る。
【００９１】
「放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」及び「放射線治療（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）」との用語は、本明細書で区別なく使用され、概して、癌細胞を制御又は死滅させるために電離放射線（Ｘ線発生器又は例えば、ガンマ、ベータ、若しくはアルファの放射体といった放射性同位体等のその他のエネルギー源により放出される）を用いる治療形態を指す。
【００９２】
「分割照射療法」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、複数の分割（又は複数回）に分けられた線量（ｄｏｓｅｓ）を有する放射線療法を指し、１分割（又は１回分）は、別の分割（又は１回分）と同一の線量又は異なる線量を含み得る。
【００９３】
「白金ベース化合物」との用語は、本明細書で使用される場合、概して、白金又はその誘導体を含む作用物質（例えば、化学療法薬）を指す。白金ベース化合物の例として、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンを挙げることができる。
【００９４】
イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物
一態様において、本開示は、イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物を提供する。イムノコンジュゲートは、
１）１個以上のインターロイキンと、
２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメイン
とを含んでもよく、
第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成する。１個以上のインターロイキンは、Ｆｃドメインに融合されてもよい。細胞傷害性物質は、免疫原性細胞死を誘発し得る。
【００９５】
本開示によるイムノコンジュゲートについて、１個以上のインターロイキンの少なくとも１個（例えば、ＩＬ１０）は、Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に（例えば、インフレームで）融合されてもよい。イムノコンジュゲートは、２個以上のインターロイキンを含み得る。幾つかの実施形態において、２個以上のインターロイキンのうち少なくとも２個は、Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合している。幾つかの実施形態において、１個以上のインターロイキンは、ペプチドリンカーを介して（例えば、インフレームで）Ｆｃドメインに融合している。幾つかの実施形態において、２個以上のインターロイキンの少なくとも２個は、ペプチドリンカーを介して（例えば、インフレームで）互いに融合して、インターロイキン二量体を形成する。少なくとも１個のインターロイキン二量体は、Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合され得る。幾つかの実施形態において、２個以上のインターロイキンは、同一のインターロイキンの２個以上のコピーである。例えば、２個以上のインターロイキンは、ＩＬ１０の２個以上のコピーである。したがって、幾つかの実施形態において、２個のＩＬ１０は、（例えば、ペプチドリンカーを介して）互いにインフレームで融合してＩＬ１０二量体を形成し、次いで、該ＩＬ１０二量体のカルボキシ末端、（例えば、インフレームで、例えば、ペプチドリンカーを介して）Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合され得る。
【００９６】
リンカーは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、又はそれ以上のアミノ酸を含むペプチドであり得る。例えば、リンカーは、１個〜１０個のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上のアミノ酸）、１個〜１５個のアミノ酸（例えば、１個〜１１個、１２個、１３個、１４個、１５個のアミノ酸）、１個〜２０個のアミノ酸、１個〜３０個のアミノ酸、又はそれ以上を含み得る。幾つかの実施形態において、リンカーは、配列番号４９に規定されるアミノ酸配列を含む。
【００９７】
イムノコンジュゲートは、更に、Ｆｃドメインに融合した標的化部分を含んでもよく、該標的化部分は、腫瘍抗原に対する結合特異性を示し得る。腫瘍抗原は、腫瘍環境又は腫瘍細胞の表面に特異的に発現される又は存在する任意の免疫原性実体又はその部分であってもよい。幾つかの実施形態において、腫瘍抗原は、ＥＧＦＲファミリーの成員（ＥＧＦＲ又はＨＥＲ２／ｎｅｕ等）及びＦＡＰからなる群から選択される。
【００９８】
標的化部分は、Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合され得る。幾つかの実施形態において、標的化部分は、ペプチドリンカー又は免疫グロブリンヒンジ領域によりＦｃドメインに融合される。
【００９９】
標的化部分は、抗体の抗原結合ドメインを含んでもよく、例えば、抗体の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ部分、ドメイン抗体、又はＳｃＦｖ部分であってもよい。幾つかの実施形態において、抗体の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ部分である。抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び抗ＦＡＰ抗体からなる群から選択され得る。
【０１００】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＥＧＦＲ抗体である。例えば、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブであり得る。幾つかの実施形態において、標的化部分は、セツキシマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、セツキシマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、セツキシマブの重鎖可変領域、セツキシマブの軽鎖可変領域、及び／又はセツキシマブの軽鎖を含む。例えば、標的化部分は、セツキシマブの重鎖可変領域と軽鎖可変領域との両方を含むＦａｂ部分であってもよい。
【０１０１】
例えば、標的化部分は、セツキシマブの対応する重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲを含み得る。代替的には、又は、追加的には、標的化部分は、セツキシマブの対応する軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含み得る。例えば、標的化部分は、セツキシマブの対応する重鎖可変領域に含まれるものと、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、セツキシマブの対応する軽鎖可変領域に含まれるものと、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、セツキシマブの対応する軽鎖に含まれるものと、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み得る。
【０１０２】
セツキシマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６０（ＣＤＲ１）、配列番号６１（ＣＤＲ２）、及び配列番号６２（ＣＤＲ３）に規定される。セツキシマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号５６（ＣＤＲ１）、配列番号５７（ＣＤＲ２）、及び配列番号５８（ＣＤＲ３）に規定される。セツキシマブの重鎖可変領域は、配列番号６３に規定される。セツキシマブの軽鎖可変領域は、配列番号５９に規定される。
【０１０３】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＨＥＲ２抗体である。例えば、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ又はペルツズマブであり得る。幾つかの実施形態において、標的化部分は、トラスツズマブ若しくはペルツズマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、トラスツズマブ若しくはペルツズマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、トラスツズマブ若しくはペルツズマブの重鎖可変領域、トラスツズマブ若しくはペルツズマブの軽鎖可変領域、及び／又はトラスツズマブ若しくはペルツズマブの軽鎖を含む。例えば、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの重鎖可変領域と軽鎖可変領域との両方を含むＦａｂ部分であってもよい。
【０１０４】
例えば、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの対応する重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲを含み得る。代替的には、又は追加的には、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの対応する軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含み得る。例えば、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの対応する重鎖可変領域に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの対応する軽鎖可変領域に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、トラスツズマブ又はペルツズマブの対応する軽鎖に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み得る。
【０１０５】
トラスツズマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６８（ＣＤＲ１）、配列番号６９（ＣＤＲ２）、及び配列番号７０（ＣＤＲ３）に規定される。トラスツズマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号６４（ＣＤＲ１）、配列番号６５（ＣＤＲ２）、及び配列番号６６（ＣＤＲ３）に規定される。トラスツズマブの重鎖可変領域は、配列番号７１に規定される。トラスツズマブの軽鎖可変領域は、配列番号６７に規定される。
【０１０６】
ペルツズマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８８（ＣＤＲ１）、配列番号８９（ＣＤＲ２）、及び配列番号９０（ＣＤＲ３）に規定される。ペルツズマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号８４（ＣＤＲ１）、配列番号８５（ＣＤＲ２）、及び配列番号８６（ＣＤＲ３）に規定される。ペルツズマブの重鎖可変領域は、配列番号９１に規定される。ペルツズマブの軽鎖可変領域は、配列番号８７に規定される。
【０１０７】
幾つかの実施形態において、抗体は、抗ＦＡＰ抗体である。例えば、抗ＦＡＰ抗体は、２８Ｈ１であってもよい。幾つかの実施形態において、標的化部分は、２８Ｈ１の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、２８Ｈ１の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、２８Ｈ１の重鎖可変領域、２８Ｈ１の軽鎖可変領域、及び／又は２８Ｈ１の軽鎖を含む。例えば、標的化部分は、２８Ｈ１の重鎖可変領域と軽鎖可変領域との両方を含むＦａｂ部分であってもよい。
【０１０８】
例えば、標的化部分は、２８Ｈ１の対応する重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲを含み得る。代替的には、又は、追加的には、標的化部分は、２８Ｈ１の対応する軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含み得る。例えば、標的化部分は、２８Ｈ１の対応する重鎖可変領域に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、２８Ｈ１の対応する軽鎖可変領域に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み得る。例えば、標的化部分は、２８Ｈ１の対応する軽鎖に含まれるものと少なくとも、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖を含み得る。
【０１０９】
２８Ｈ１の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７６（ＣＤＲ１）、配列番号７７（ＣＤＲ２）、及び配列番号７８（ＣＤＲ３）に規定される。２８Ｈ１の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号７２（ＣＤＲ１）、配列番号７３（ＣＤＲ２）、及び配列番号７４（ＣＤＲ３）に規定される。２８Ｈ１の重鎖可変領域は、配列番号７９に規定される。２８Ｈ１の軽鎖可変領域は、配列番号７５に規定される。
【０１１０】
本開示によるイムノコンジュゲートについて、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ  Ｆｃドメインであり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択され得る。幾つかの態様において、ＩｇＧは、ヒトＩｇＧ１であり、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン（野生型又は修飾型）である。
【０１１１】
幾つかの態様において、イムノコンジュゲートは、２個の同一の成員からなるタンパク性ホモ二量体である。２個の同一の成員は、それぞれ、Ｆｃドメインのサブユニットに（例えば、インフレームで、例えば、ペプチドリンカーを介して）融合した１個以上のインターロイキン（例えば、ＩＬ１０）を含み得る。例えば、１個以上のインターロイキンのカルボキシ末端は、Ｆｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合され得る。幾つかの実施形態において、１個のインターロイキン（例えば、ＩＬ１０）のカルボキシ末端は、上記２個のＦｃサブユニットの１個のアミノ末端アミノ酸にインフレームで融合して、ホモ二量体の１個の成員を形成し、このような２個の同一の成員は、２個のＦｃサブユニット間の相互作用を介して互いに会合してホモ二量体を形成する（例えば、図８Ａに示される）。幾つかの実施形態において、２個のインターロイキン（例えば、２個のＩＬ１０）は、（例えば、ペプチドリンカーを介して）互いにインフレームで融合してインターロイキン二量体を形成し、次いで、該インターロイキン二量体のカルボキシ末端は、上記２個のＦｃサブユニットの１個のアミノ末端アミノ酸にインフレームで融合してホモ二量体の１個の成員を形成し、このような２個の同一の成員は、２個のＦｃサブユニット間の相互作用を介して互いに会合してホモ二量体を形成する。
【０１１２】
幾つかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、第１の成員と第１の成員とは異なる第２の成員とを含むタンパク性ヘテロ二量体であり、第１の成員は、第１のＦｃサブユニットを含み、第２の成員は、第２のＦｃサブユニットに融合した１個以上のインターロイキンを含み、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットと会合してヘテロ二量体を形成する。
【０１１３】
幾つかの実施形態において、第２の成員において、１個以上のインターロイキンの少なくとも１個は、第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合している。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、第２の成員において、１個以上のインターロイキンの少なくとも２個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体は、第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合している。例えば、２個のＩＬ１０は、互いにインフレームで融合されて（例えば、ペプチドリンカーを介して、ＩＬ１０二量体を形成する）、次いでインフレームで第２のＦｃサブユニットに融合して、タンパク性ヘテロ二量体の第２の成員を形成し得る。例えば、ＩＬ１０二量体のカルボキシ末端は、第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合され得る（例えば、図８Ｂ及び図８Ｃに示される）。
【０１１５】
例えば、イムノコンジュゲートの第２の成員は、融合タンパク質であってもよく、第２のＦｃサブユニットは、インターロイキンにインフレームで融合していてもよい。幾つかの実施形態において、インターロイキン（複数の場合もある）のカルボキシ末端は、第２のＦｃサブユニットのアミノ末端に直接的又は間接的に融合して、融合タンパク質を形成する。幾つかの実施形態において、第２のＦｃサブユニットは、ペプチドリンカーを介してインターロイキン（複数の場合もある）にインフレームで融合している。
【０１１６】
本開示によるペプチドリンカーは、例えば、ペプチド結合を介して２個のポリペプチド配列を接続又は連結する合成アミノ酸配列であってもよい。幾つかの実施形態において、リンカーは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、又はそれ以上のアミノ酸を含むペプチドである。例えば、リンカーは、１個〜１０個のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、又はそれ以上のアミノ酸）、１個〜１５個のアミノ酸（例えば、１個〜１１個、１２個、１３個、１４個、１５個のアミノ酸）、１個〜２０個のアミノ酸、１個〜３０個のアミノ酸、又はそれ以上を含み得る。幾つかの実施形態において、リンカーは、配列番号４１に規定されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、リンカーは、タンパク質分解に抵抗性を示すか、又はタンパク質分解に実質的に抵抗性を示す。
【０１１７】
幾つかの実施形態において、第１の成員は、第１のＦｃサブユニットに融合した標的化部分を更に含む。例えば、標的化部分は、第１のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合され得る。例えば、第１の成員は、抗体のＦａｂ部分を含み得て、そのカルボキシ末端（例えば、ＣＨ１ドメイン又はヒンジ領域等の重鎖部分のカルボキシ末端）は、第１のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている（例えば、図８Ｃにされる）。
【０１１８】
幾つかの実施形態において、タンパク性ヘテロ二量体は、標的化部分を含まない。例えば、第１の成員は、第１のＦｃサブユニットのみを含んでもよい（例えば、図８Ｂに示される）。
【０１１９】
幾つかの実施形態において、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニット（例えば、野生型ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインのサブユニット）と同一である。
【０１２０】
幾つかの実施形態において、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットとは異なり、Ｆｃドメインは、第１のＦｃサブユニットと第２のＦｃサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。例えば、第１のＦｃサブユニットは、第１の修飾を含み得て、第２のＦｃサブユニットは、第２の修飾を含み得る。例えば、第１の修飾は、第１のＦｃサブユニットのＣＨ３ドメインにあり得て、第２の修飾は、第２のＦｃサブユニットのＣＨ３ドメインにあり得る。例えば、第１の修飾及び／又は第２の修飾は、その対応する野生型Ｆｃドメインの配列とそれぞれ比較されるものである。
【０１２１】
例えば、第１の修飾は、Ｔ３６６位でのアミノ酸置換と、Ｙ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換とを含み得て、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１２２】
幾つかの実施形態において、第１の修飾は、Ｔ３６６位でのアミノ酸置換と、Ｙ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換とを含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１２３】
例えば、第１の修飾に含まれるアミノ酸置換は、Ｙ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ、及びＴ３６６Ｗからなる群から選択され得る。
【０１２４】
幾つかの実施形態において、第１の修飾は、２個〜５個のアミノ酸置換を含む。
【０１２５】
幾つかの実施形態において、第１の修飾は、
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６、及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４の群のいずれかのから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１２６】
幾つかの実施形態において、第１の修飾は、
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１２７】
幾つかの実施形態において、第２の修飾は、Ｔ３６６位、Ｌ３６８位、及びＹ４０７位のアミノ酸置換と、Ｄ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換とを含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１２８】
幾つかの実施形態において、第２の修飾に含まれるアミノ酸置換は、Ｄ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される。
【０１２９】
幾つかの実施形態において、第２の修飾は、４位〜６位にアミノ酸置換を含む。
【０１３０】
幾つかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１３１】
幾つかの実施形態において、第２の修飾は、
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１３２】
幾つかの実施形態において、第１のＦｃサブユニットは、第１の修飾を含み、第２のＦｃサブユニットは、第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１３３】
幾つかの実施形態では、第１のＦｃサブユニットは、第１の修飾を含み、第２のＦｃサブユニットは、第２の修飾を含み、第１の修飾及び第２の修飾は、
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１３４】
幾つかの実施形態において、第１のＦｃサブユニットは、第１の修飾を含み、第２のＦｃサブユニットは、第２の修飾を含み、第１の修飾は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、第２の修飾は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋを含み、該アミノ酸の位置は、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される。
【０１３５】
例えば、第１のＦｃサブユニットのアミノ酸配列は、配列番号３９、配列番号４３、又は配列番号４７から選択され得る。インターロイキンのアミノ酸配列は、配列番号５０又は配列番号５２に規定される通りであり得る。第２のＦｃサブユニットのアミノ酸配列は、配列番号５０から選択され得る。
【０１３６】
幾つかの実施形態において、本開示のイムノコンジュゲートは、タンパク性ヘテロ二量体であり、第２の成員のアミノ酸配列は、配列番号５０から選択され得る。
【０１３７】
免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質若しくは放射線療法からなる群から選択され得る。
【０１３８】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法は、シクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む。
【０１３９】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法は、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む。
【０１４０】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質は、カペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む。
【０１４１】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質は、ブレオマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、バルルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む。幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法は、ドキソルビシンを含む。
【０１４２】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質は、タキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む。
【０１４３】
放射性物質は、Ｘ放射線及び／又はガンマ放射線を放出することができる物質（例えば、放射性同位体であるか又はそれを含む）であり得る。
【０１４４】
幾つかの実施形態において、放射性物質は、少なくとも１回分のＸ放射線を放出することができる。各回のＸ線照射は、約５０Ｇｙ以下（例えば、約４５Ｇｙ以下、約４０Ｇｙ以下、約３５Ｇｙ以下、約３０Ｇｙ以下、約２５Ｇｙ以下、約２０Ｇｙ以下、約１５Ｇｙ以下、約１４Ｇｙ以下、約１３Ｇｙ以下、約１２Ｇｙ以下、約１１Ｇｙ以下、約１０Ｇｙ以下、約９Ｇｙ以下、約８Ｇｙ以下、約７Ｇｙ以下、約６Ｇｙ以下、約５Ｇｙ以下、又は約４Ｇｙ以下）の線量によるものであってもよい。幾つかの実施形態において、各回のＸ線照射は、約６Ｇｙ〜１５Ｇｙ、例えば、６〜１４Ｇｙ、６Ｇｙ〜１３Ｇｙ、６Ｇｙ〜１２Ｇｙ、６Ｇｙ〜１１Ｇｙ、６Ｇｙ〜１０Ｇｙ、６Ｇｙ〜９Ｇｙ、６Ｇｙ〜８Ｇｙ、６Ｇｙ〜７Ｇｙ、７Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１４Ｇｙ、７Ｇｙ〜１３Ｇｙ、７Ｇｙ〜１２Ｇｙ、７Ｇｙ〜１１Ｇｙ、７Ｇｙ〜１０Ｇｙ、７Ｇｙ〜９Ｇｙ、又は７Ｇｙ〜８Ｇｙの線量による。
【０１４５】
幾つかの実施形態において、放射性物質は、少なくとも１回分のガンマ放射線を放出することができる。各回のガンマ線照射は、約５０Ｇｙ以下（例えば、約４５Ｇｙ以下、約４０Ｇｙ以下、約３５Ｇｙ以下、約３０Ｇｙ以下、約２５Ｇｙ以下、約２０Ｇｙ以下、約１５Ｇｙ以下、約１４Ｇｙ以下、約１３Ｇｙ以下、約１２Ｇｙ以下、約１１Ｇｙ以下、約１０Ｇｙ以下、約９Ｇｙ以下、約８Ｇｙ以下、約７Ｇｙ以下、約６Ｇｙ以下、約５Ｇｙ以下、又は約４Ｇｙ以下）の線量によるものであってもよい。幾つかの実施形態において、各回のガンマ線照射は、約６Ｇｙ〜１５Ｇｙ、例えば、６Ｇｙ〜１４Ｇｙ、６Ｇｙ〜１３Ｇｙ、６Ｇｙ〜１２Ｇｙ、６Ｇｙ〜１１Ｇｙ、６Ｇｙ〜１０Ｇｙ、６Ｇｙ〜９Ｇｙ、６Ｇｙ〜８Ｇｙ、６Ｇｙ〜７Ｇｙ、７Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１４Ｇｙ、７Ｇｙ〜１３Ｇｙ、７Ｇｙ〜１２Ｇｙ、７Ｇｙ〜１１Ｇｙ、７Ｇｙ〜１０Ｇｙ、７Ｇｙ〜９Ｇｙ、又は７Ｇｙ〜８Ｇｙの線量による。
【０１４６】
幾つかの実施形態において、放射性物質は、約２回分〜１５回分（又は分割）（例えば、少なくとも２回分、少なくとも３回分、少なくとも４回分、少なくとも５回分、少なくとも６回分、少なくとも７回分、少なくとも８回分、少なくとも９回分、少なくとも１０回分、少なくとも１１回分、少なくとも１２回分、又はそれ以上、例えば、２回分〜１４回分、２回分〜１３回分、２回分〜１２回分、２回分〜１１回分、２回分〜１０回分、２回分〜９回分、２回分〜８回分、２回分〜７回分、２回分〜６回分、２回分〜５回分、２回分〜４回分、３回分〜８回分、３回分〜７回分、又は４回分〜１０回分）のＸ放射線又はガンマ放射線を放出することができる。
【０１４７】
組成物の異なる構成成分は、独立して包装されてもよく（例えば、投与まで互いに混合されない）又は事前に混合されて同じ包装単位に包装されてもよい。
【０１４８】
本開示の組成物は、医薬組成物であってもよく、薬学的に許容可能な添加剤を更に含んでもよい。薬学的に許容可能な添加剤の例として、不活性固体希釈剤及び賦形剤、希釈剤、滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過促進剤、可溶化剤、及びアジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４９】
幾つかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、腫瘍部位でのｉｎ−ｓｉｔｕ投与、吸入、直腸投与、膣投与、経皮投与、又は皮下レポジトリ（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）による投与用に製剤化される。
【０１５０】
本開示の組成物は、治療有効量の有効成分（例えば、イムノコンジュゲート及び細胞傷害性物質）を含み得る。治療有効量は、状態若しくは障害（例えば、癌）を患う又はそれを発症するリスクがある被験体における上記状態若しくは障害及び／又はその任意の合併症を（少なくとも部分的に）予防及び／又は治癒することができる主題の組成物の量である。含まれる有効成分の具体的な量／濃度は、投与方法及び患者のニーズに応じて変化し得て、例えば、容量、粘度、及び／又は患者の体重等に基づいて決定され得る。
【０１５１】
癌治療のための方法及び使用
別の態様では、本開示は、細胞傷害性療法と組み合わせて癌を治療するのに使用されるイムノコンジュゲートを提供する。イムノコンジュゲートは、１）１個以上のインターロイキンと、２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み得て、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成する。１個以上のインターロイキンは、Ｆｃドメインに融合されてもよい。細胞傷害性物質は、免疫原性細胞死を誘発し得る。
【０１５２】
別の態様において、本開示は、治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬の調製における細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用を提供する。イムノコンジュゲートは、１）１個以上のインターロイキンと、２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み得て、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成する。１個以上のインターロイキンは、Ｆｃドメインに融合されてもよい。細胞傷害性物質は、免疫原性細胞死を誘発し得る。
【０１５３】
更なる態様において、本開示は、治療を必要とする被験体において癌を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の（ａ）イムノコンジュゲートを、有効量の（ｂ）細胞傷害性療法と組み合わせて被験体に投与することを含む。イムノコンジュゲートは、１）１個以上のインターロイキンと、２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み得て、第１のＦｃサブユニットは、第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成する。１個以上のインターロイキンは、Ｆｃドメインに融合されてもよい。細胞傷害性物質は、免疫原性細胞死を誘発し得る。
【０１５４】
イムノコンジュゲートは、本開示の他の部分において定義されている通りである。例えば、イムノコンジュゲートは、本開示の組成物に含まれるものであってもよい。
【０１５５】
免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質又は放射線療法からなる群から選択され得る。
【０１５６】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、シクロホスファミドからなる群から選択されるアルキル化剤を含む。
【０１５７】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、カペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む。
【０１５８】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、ブレオマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、バルルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む。幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性物質又は細胞傷害性療法は、ドキソルビシンを含む。
【０１５９】
幾つかの実施形態では、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、タキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む。
【０１６０】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む。
【０１６１】
幾つかの実施形態において、免疫原性細胞死を誘導することができる細胞傷害性療法は、少なくとも１回の放射線療法を含む。放射線療法は、Ｘ線照射及び／又はガンマ線照射を含んでもよい。放射線療法は、分割照射療法、例えば、複数回で又は複数の分割線量として適用される放射線療法であってもよい。
【０１６２】
各回又は各分割線量のＸ線照射は、約５０Ｇｙ以下（例えば、約４５Ｇｙ以下、約４０Ｇｙ以下、約３５Ｇｙ以下、約３０Ｇｙ以下、約２５Ｇｙ以下、約２０Ｇｙ以下、約１５Ｇｙ以下、約１４Ｇｙ以下、約１３Ｇｙ以下、約１２Ｇｙ以下、約１１Ｇｙ以下、約１０Ｇｙ以下、約９Ｇｙ以下、約８Ｇｙ以下、約７Ｇｙ以下、約６Ｇｙ以下、約５Ｇｙ以下、又は約４Ｇｙ以下）の線量によるものであってもよい。幾つかの実施形態において、各回又は各分割線量のＸ線照射は、約６Ｇｙ〜１５Ｇｙ、例えば、６Ｇｙ〜１４Ｇｙ、６Ｇｙ〜１３Ｇｙ、６Ｇｙ〜１２Ｇｙ、６Ｇｙ〜１１Ｇｙ、６Ｇｙ〜１０Ｇｙ、６Ｇｙ〜９Ｇｙ、６Ｇｙ〜８Ｇｙ、６Ｇｙ〜７Ｇｙ、７Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１４Ｇｙ、７Ｇｙ〜１３Ｇｙ、７Ｇｙ〜１２Ｇｙ、７Ｇｙ〜１１Ｇｙ、７Ｇｙ〜１０Ｇｙ、７Ｇｙ〜９Ｇｙ、又は７Ｇｙ〜８Ｇｙの線量による。
【０１６３】
幾つかの実施形態において、１回の放射線療法が使用され、放射線照射は、約５Ｇｙ〜１５Ｇｙ（例えば、６Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１０Ｇｙ、又は６Ｇｙ〜１２Ｇｙ）の線量によるＸ線照射又はガンマ線照射である。幾つかの実施形態において、４回〜１０回の回数又は分割線量の放射線療法が使用され、放射線照射は、Ｘ線照射（例えば、分割Ｘ線照射）又はガンマ線照射（例えば、分割ガンマ線照射）であり、各回に約５Ｇｙ〜１５Ｇｙ（例えば、６Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１５Ｇｙ、７Ｇｙ〜１０Ｇｙ、又は６Ｇｙ〜１２Ｇｙ）の線量を含む。
【０１６４】
幾つかの実施形態において、２回以上（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回、少なくとも１１回、少なくとも１２回以上）の細胞傷害性療法を被験体に適用してもよい。例えば、２回〜１５回、２回〜１４回、２回〜１３回、２回〜１２回、２回〜１１回、２回〜１０回、２回〜９回、２回〜８回、３回〜１０回、４回〜１０回、又は４回〜１２回の細胞傷害性療法を被験体に適用してもよい。
【０１６５】
イムノコンジュゲートは、細胞傷害性療法の適用後に被験体に投与されてもよい。幾つかの実施形態において、２回以上の細胞傷害性療法を被験体に適用し、最後の（又は最終）回の細胞傷害性療法の適用後にイムノコンジュゲートを被験体に投与する。
【０１６６】
例えば、２回〜１５回（例えば、２回〜１４回、２回〜１３回、２回〜１２回、２回〜１１回、２回〜１０回、２回〜９回、２回〜８回、３回〜１０回、４回〜１０回、又は４回〜１２回）の細胞傷害性療法が被験体に適用されてもよく、最後の（又は最終）回の細胞傷害性療法の適用後にイムノコンジュゲートを被験体に投与してもよい。
【０１６７】
イムノコンジュゲートは、細胞傷害性療法の適用後（例えば、最後の回の細胞傷害性物質の投与後）１０日以内に（例えば、９日以内、８日以内、７日以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、１日以内に、又は直ちに）被験体に投与されてもよい。幾つかの実施形態において、イムノコンジュゲートは、細胞傷害性療法の適用後、０日〜７日（例えば、０日〜６日、０日〜５日、０日〜４日、０日〜３日、０日〜２日、又は０日〜１日）に被験体に投与される。
【０１６８】
イムノコンジュゲートは、２回以上（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回以上）被験体に投与され得る。
【０１６９】
癌は、固形腫瘍を含み得る。例えば、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、肺癌、気管支癌、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、膀胱癌、脳、又は中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、食道癌、子宮頸癌、黒色腫、子宮、又は子宮内膜の癌、口腔、又は咽頭の癌、肝臓癌、腎臓癌、胆道癌、小腸、又は虫垂の癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、骨肉腫、軟骨肉腫、脂肪肉腫、精巣癌、及び悪性線維性組織球腫からなる群から選択され得る。
【０１７０】
幾つかの実施形態において、癌は、被験体の体内にあり、例えば、ヒト又は非ヒト動物（例えば、哺乳動物）内の癌又は癌細胞である。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。幾つかの実施形態において、哺乳動物は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、スナネズミ、ハムスター、モルモット、サル、又は任意の他の哺乳動物である。多くの斯かる哺乳動物は、固形腫瘍及び／又は他の癌を含む特定の疾患又は障害の前臨床モデルとして当技術分野で知られている被験体であってもよい（例えば、Ｔａｌｍａｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００７Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７０：７９３、Ｋｅｒｂｅｌ，２００３，Ｃａｎｃ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．２（４  Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ１３４、Ｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７Ｃａｎｃ．Ｍｅｔ．Ｒｅｖ．２６：７３７、Ｃｅｓｐｅｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００６、Ｃｌｉｎ．ＴｒａｎｓＬ  Ｏｎｃｏｌ．８：３１８）。
【０１７１】
本開示には、以下の実施形態も含まれる。
【０１７２】
１．イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物であって、前記イムノコンジュゲートが
１）１個以上のインターロイキンと、
２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成し、
前記１個以上のインターロイキンが前記Ｆｃドメインに融合され、
前記細胞傷害性物質が免疫原性細胞死を誘導することができる、
組成物。
【０１７３】
２．前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態１に記載の組成物。
【０１７４】
３．前記イムノコンジュゲートが２個以上のインターロイキンを含む、実施形態１又は２に記載の組成物。
【０１７５】
４．前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態３に記載の組成物。
【０１７６】
５．１個以上の上記インターロイキンがペプチドリンカーを介して上記Ｆｃドメインに融合されている、実施形態１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
【０１７７】
６．前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個がペプチドリンカーを介して互いに融合されてインターロイキン二量体を形成する、実施形態３〜５のいずれか１個に記載の組成物。
【０１７８】
７．少なくとも１個の前記インターロイキン二量体が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態６に記載の組成物。
【０１７９】
８．前記２個以上のインターロイキンが同じインターロイキンの２個以上のコピーである、実施形態３〜７のいずれか１つに記載の組成物。
【０１８０】
９．前記２個以上のインターロイキンがＩＬ１０の２個以上のコピーである、実施形態８に記載の組成物。
【０１８１】
１０．前記イムノコンジュゲートが前記Ｆｃドメインに融合された標的化部分を更に含み、該標的化部分は、腫瘍抗原に対して結合特異性を示す、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の組成物。
【０１８２】
１１．前記標的化部分が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態１０に記載の組成物。
【０１８３】
１２．上記標的化部分がペプチドリンカー又は免疫グロブリンヒンジ領域を介して上記Ｆｃドメインに融合されている、実施形態１０又は１１に記載の組成物。
【０１８４】
１３．上記標的化部分が抗体の抗原結合ドメインを含む、実施形態１０〜１２のいずれか１つに記載の組成物。
【０１８５】
１４．抗体の上記抗原結合ドメインがＦａｂ部分である、実施形態１３に記載の組成物。
【０１８６】
１５．前記腫瘍抗原がＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＦＡＰからなる群から選択される、実施形態１０〜１４のいずれか１つに記載の組成物。
【０１８７】
１６．上記標的化部分が抗体の抗原結合ドメインを含み、該抗体が抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体、及び抗ＦＡＰ抗体からなる群から選択される、実施形態１０〜１５のいずれか１つに記載の組成物。
【０１８８】
１７．上記抗体が抗ＥＧＦＲ抗体である、実施形態１６に記載の組成物。
【０１８９】
１８．上記抗ＥＧＦＲ抗体がセツキシマブである、実施形態１７に記載の組成物。
【０１９０】
１９．上記標的化部分がセツキシマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態１８に記載の組成物。
【０１９１】
２０．上記標的化部分がセツキシマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態１８又は１９に記載の組成物。
【０１９２】
２１．上記標的化部分がセツキシマブの重鎖可変領域を含む、実施形態１８〜２０のいずれか１つに記載の組成物。
【０１９３】
２２．上記標的化部分がセツキシマブの軽鎖可変領域を含む、実施形態１８〜２１のいずれか１つに記載の組成物。
【０１９４】
２３．上記抗体が抗ＨＥＲ２抗体である、実施形態１６に記載の組成物。
【０１９５】
２４．上記抗ＨＥＲ２抗体がトラスツズマブである、実施形態２３に記載の組成物。
【０１９６】
２５．上記標的化部分がトラスツズマブの重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態２４に記載の組成物。
【０１９７】
２６．上記標的化部分がトラスツズマブの軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態２４又は２５に記載の組成物。
【０１９８】
２７．上記標的化部分がトラスツズマブの重鎖可変領域を含む、実施形態２４〜２６のいずれか１つに記載の組成物。
【０１９９】
２８．上記標的化部分がトラスツズマブの軽鎖可変領域を含む、実施形態２４〜２７のいずれか１つに記載の組成物。
【０２００】
２９．上記抗体が抗ＦＡＰ抗体である、実施形態１６に記載の組成物。
【０２０１】
３０．上記抗ＦＡＰ抗体が２８Ｈ１である、実施形態２９に記載の組成物。
【０２０２】
３１．上記標的化部分が２８Ｈ１の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態３０に記載の組成物。
【０２０３】
３２．上記標的化部分が２８Ｈ１の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含む、実施形態３０又は３１に記載の組成物。
【０２０４】
３３．上記標的化部分が２８Ｈ１の重鎖可変領域を含む、実施形態３０〜３２のいずれか１つに記載の組成物。
【０２０５】
３４．上記標的化部分が２８Ｈ１の軽鎖可変領域を含む、実施形態３０〜３３のいずれか１つに記載の組成物。
【０２０６】
３５．前記ＦｃドメインがＩｇＧ  Ｆｃドメインである、実施形態１〜３４のいずれか１つに記載の組成物。
【０２０７】
３６．上記ＩｇＧがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される、実施形態３５に記載の組成物。
【０２０８】
３７．前記ＩｇＧがヒトＩｇＧ１である、実施形態３６に記載の組成物。
【０２０９】
３８．前記イムノコンジュゲートが第１の成員と該第１の成員とは異なる第２の成員とを含むイムノコンジュゲートであり、
前記第１の成員が前記第１のＦｃサブユニットを含み、
前記第２の成員が前記第２のＦｃサブユニットに融合された前記１個以上のインターロイキンを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合して前記ヘテロ二量体を形成する、
実施形態１〜３７のいずれか１つに記載の組成物。
【０２１０】
３９．前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態３８に記載の組成物。
【０２１１】
４０．前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも２個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合されている、実施形態３９に記載の組成物。
【０２１２】
４１．前記第１の成員が前記第１のＦｃサブユニットに融合された前記標的化部分を更に含む、実施形態３８〜４０のいずれか１つに記載の組成物。
【０２１３】
４２．上記第１の成員において、上記標的化部分が上記第１のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている、実施形態４１に記載の組成物。
【０２１４】
４３．前記イムノコンジュゲートがいずれの標的化部分も含まない、実施形態３８〜４０のいずれか１つに記載の組成物。
【０２１５】
４４．前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと異なり、前記Ｆｃドメインが前記第１のＦｃサブユニットと前記第２のＦｃサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、実施形態１〜４３のいずれか１つに記載の組成物。
【０２１６】
４５．前記第１のＦｃサブユニットが第１の修飾を含み、前記第２のＦｃサブユニットが第２の修飾を含む、実施形態４４に記載の組成物。
【０２１７】
４６．上記第１の修飾がＴ３６６位のアミノ酸置換と、Ｙ３４９、Ｆ４０５、Ｋ４０９、Ｄ３９９、Ｋ３６０、Ｑ３４７、Ｋ３９２、及びＳ３５４からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換とを含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５に記載の組成物。
【０２１８】
４７．第１の修飾に含まれるアミノ酸置換がＹ３４９Ｃ、Ｙ３４９Ｄ、Ｄ３９９Ｓ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ４０９Ｅ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｓ３５４Ｄ、Ｋ３９２Ｄ、及びＴ３６６Ｗからなる群から選択される、実施形態４６に記載の組成物。
【０２１９】
４８．上記第１の修飾が２個〜５個のアミノ酸置換を含む、実施形態４５〜４７のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２０】
４９．上記第１の修飾が
１）Ｙ３４９及びＴ３６６；
２）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５；
３）Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９；
４）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７；
８）Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
９）Ｔ３６６及びＫ４０９；
１０）Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４；
１１）Ｔ３６６及びＦ４０５；
１２）Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９；並びに
１３）Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜４８のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２１】
５０．上記第１の修飾が
１）Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ；
２）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ；
３）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ；
４）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
５）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
６）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
７）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
８）Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ；
９）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１０）Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ；
１３）Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ；
１４）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ；
１５）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ；並びに
１６）Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜４９のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２２】
５１．上記第２の修飾がＴ３６６位、Ｌ３６８位、及びＹ４０７位のアミノ酸置換と、Ｄ３５６、Ｄ３９９、Ｅ３５７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、Ｋ３９２、Ｋ４０９、及びＱ３４７からなる群から選択される１個以上の位置のアミノ酸置換とを含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜５０のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２３】
５２．上記第２の修飾に含まれるアミノ酸置換がＤ３５６Ｃ、Ｄ３９９Ｓ、Ｅ３５７Ａ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ４０９Ａ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｇ、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３６６Ｓ、Ｙ４０７Ａ、及びＹ４０７Ｖからなる群から選択される、実施形態５１に記載の組成物。
【０２２４】
５３．上記第２の修飾が４位〜６位のアミノ酸置換を含む、実施形態４５〜５２のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２５】
５４．上記第２の修飾が
１）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
４）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
５）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
６）Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
７）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
８）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
９）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１０）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１１）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；並びに
１２）Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７の群のいずれかから選択される位置群のアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜５３のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２６】
５５．上記第２の修飾が
１）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
４）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
５）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
６）Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
８）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
９）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１０）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１１）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１２）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１３）Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜５４のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２７】
５６．前記第１のＦｃサブユニットが第１の修飾を含み、前記第２のＦｃサブユニットが第２の修飾を含み、前記第１の修飾及び前記第２の修飾が
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜５５のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２８】
５７．上記第１のＦｃサブユニットが第１の修飾を含み、上記第２のＦｃサブユニットが第２の修飾を含み、該第１の修飾及び第２の修飾が
１）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
２）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ；
３）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
４）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、及びＫ４０９Ａ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＦ４０５Ｋ；
５）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＱ３４７Ｒ；
６）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
７）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＱ３４７Ｒ；
８）第１の修飾：Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＱ３４７Ｒ、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、Ｋ３６０Ｅ、及びＱ３４７Ｅ；
９）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｄ３９９Ｓ、及びＦ４０５Ｋ；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、及びＹ３４９Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｋ４０９Ａ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｆ４０５Ｋ、及びＥ３５７Ａ；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＫ４０９Ａ；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＤ３９９Ｓ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＫ３９２Ｄ；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ及びＦ４０５Ｋ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＫ４０９Ａ；
１６）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、及びＹ３４９Ｄ、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａ；
１７）第１の修飾：Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｋ、Ｙ３４９Ｄ、及びＳ３５４Ｄ、並びに第２の修飾：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ａ、及びＥ３５７Ａの群のいずれかから選択されるアミノ酸置換の群を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態４５〜５６のいずれか１つに記載の組成物。
【０２２９】
５８．上記第１のＦｃサブユニットが、第１の修飾を含み、
上記第２のＦｃサブユニットが、第２の修飾を含み、
該第１の修飾が、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａを含み、
該第２の修飾が、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋを含み、
該アミノ酸の位置が、ＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、実施形態５７に記載の組成物。
【０２３０】
５９．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質からなる群から選択される、実施形態１〜５８のいずれか１つに記載の組成物。
【０２３１】
６０．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３２】
６１．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３３】
６２．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３４】
６３．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３５】
６４．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がＸ放射線及び／又はガンマ放射線を放出する放射性物質を含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３６】
６５．上記放射性物質がＸ放射線を放出し、各回のＸ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態６４に記載の組成物。
【０２３７】
６６．上記放射性物質がガンマ放射線を放出し、各回のガンマ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態６５に記載の組成物。
【０２３８】
６７．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、実施形態５９に記載の組成物。
【０２３９】
６８．細胞傷害性療法と組み合わせた癌治療に使用されるイムノコンジュゲートであって、該イムノコンジュゲートが実施形態１〜５８のいずれか１つにおいて定義される通りであり、該細胞傷害性療法は免疫原性細胞死を誘導することができる、イムノコンジュゲート。
【０２４０】
６９．免疫原性細胞死を誘導する前記細胞傷害性療法がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射線療法からなる群から選択される、実施形態６８に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４１】
７０．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性療法が少なくとも１回の放射線療法を含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４２】
７１．上記放射線照射がＸ線照射及び／又はガンマ線照射を含む、実施形態７０に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４３】
７２．上記放射線照射がＸ線照射を含み、各回のＸ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態７１に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４４】
７３．上記放射線照射がガンマ線照射を含み、各回のガンマ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態７１に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４５】
７４．上記放射線療法が分割照射療法である、実施形態７０〜７３のいずれか１つに記載のイムノコンジュゲート。
【０２４６】
７５．上記分割照射療法が２回〜１５回の分割を含む、実施形態７４に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４７】
７６．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４８】
７７．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２４９】
７８．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２５０】
７９．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２５１】
８０．免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、実施形態６９に記載のイムノコンジュゲート。
【０２５２】
８１．治療を必要とする被験体において癌を治療するための医薬の調製における、細胞傷害性療法と組み合わせたイムノコンジュゲートの使用であって、
該イムノコンジュゲートが実施形態１〜５８のいずれか１つにおいて定義される通りであり、前記細胞傷害性療法が免疫原性細胞死を誘導することができる、
使用。
【０２５３】
８２．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性療法がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射線療法からなる群から選択される、実施形態８１の使用。
【０２５４】
８３．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性療法が少なくとも１回の放射線療法を含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２５５】
８４．上記放射線療法がＸ線照射及び／又はガンマ線照射を含む、実施形態８３に記載の使用。
【０２５６】
８５．上記放射線照射がＸ線照射を含み、各回のＸ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態８４に記載の使用。
【０２５７】
８６．上記放射線照射がガンマ線照射を含み、各回のガンマ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態８４に記載の使用。
【０２５８】
８７．上記放射線療法が分割照射療法である、実施形態８３〜８６のいずれか１つに記載の使用。
【０２５９】
８８．上記分割照射療法が２回〜１５回の分割を含む、実施形態８７に記載の使用。
【０２６０】
８９．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２６１】
９０．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２６２】
９１．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２６３】
９２．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２６４】
９３．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性剤がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、実施形態８２に記載の使用。
【０２６５】
９４．治療を必要とする被験体において癌を治療する方法であって、有効量の（ａ）イムノコンジュゲートを、有効量の（ｂ）細胞傷害性療法と組み合わせて上記被験体に投与することを含み、上記イムノコンジュゲートが実施形態１〜５８のいずれか１つに定義される通りであり、上記細胞傷害性療法が免疫原性細胞死を誘導することができる、方法。
【０２６６】
９５．上記イムノコンジュゲートが上記細胞傷害性療法の適用後に上記被験体に投与される、実施形態９３に記載の方法。
【０２６７】
９６．上記イムノコンジュゲートが上記細胞傷害性療法の適用後１０日以内に上記被験体に投与される、実施形態９５に記載の方法。
【０２６８】
９７．上記イムノコンジュゲートが上記細胞傷害性療法の適用後３日以内に上記被験体に投与される、実施形態９５又は９６に記載の方法。
【０２６９】
９８．上記イムノコンジュゲートが上記被験体に２回以上投与される、実施形態９４〜９７のいずれか１つに記載の方法。
【０２７０】
９９．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性療法がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射線療法からなる群から選択される、実施形態９４〜９８のいずれか１つに記載の方法。
【０２７１】
１００．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性療法が少なくとも１回の放射線療法を含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２７２】
１０１．上記放射線療法がＸ線照射及び／又はガンマ線照射を含む、実施形態１００に記載の方法。
【０２７３】
１０２．上記放射線照射がＸ線照射を含み、各回のＸ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態１０１に記載の方法。
【０２７４】
１０３．上記放射線照射がガンマ線照射を含み、各回のガンマ線照射が約５０Ｇｙ以下の線量による、実施形態１０１に記載の方法。
【０２７５】
１０４．上記放射線療法が分割照射療法である、実施形態１００〜１０３のいずれか１つに記載の方法。
【０２７６】
１０５．上記分割照射療法が２回〜１５回の分割を含む、実施形態１０４に記載の方法。
【０２７７】
１０６．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２７８】
１０７．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２７９】
１０８．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２８０】
１０９．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２８１】
１１０．免疫原性細胞死を誘導することができる上記細胞傷害性物質がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、実施形態９９に記載の方法。
【０２８２】
本明細書では、本発明の様々な実施形態を示して説明したが、斯かる実施形態は、例としてのみ提供されていることは、当業者に明らかであろう。当業者は、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置換を想到するであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態の様々な代替物を使用することができることを理解されたい。
【実施例】
【０２８３】
以下の実施例は、当業者に本発明の製造方法及び使用方法の、完全な開示及び説明を提供するために記載されており、本発明者らが自身の発明とみなす範囲を限定することを意図するものではなく、また以下の実験は、行われる全て又は唯一の実験であることを表すことを意図するものでもない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して正確性を確保するための努力がなされたが、幾らかの実験誤差及び偏差を考慮しなくてはならない。特に明記しない限り、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧又はほぼ大気圧である。標準の略語、例えば、ｂｐ、塩基対（複数の場合もある）；ｋｂ、キロベース（複数の場合もある）；ｐｌ、ピコリットル（複数の場合もある）；ｓ又はｓｅｃ、秒（複数の場合もある）；ｍｉｎ、分（複数の場合もある）；ｈ又はｈｒ、時間（複数の場合もある）；ａａ、アミノ酸（複数の場合もある）；ｎｔ、ヌクレオチド（複数の場合もある）；ｉ．ｍ．、筋肉内（筋肉内に）；ｉ．ｐ．、腹腔内（腹腔内に）；ｓ．ｃ．、皮下（皮下に）等が使用される場合もある。
【０２８４】
実施例１  核酸の修飾及び調製
１．１  Ｆｃの修飾
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの界面残基にアミノ酸修飾（アミノ酸置換等）を行い、以下の群の修飾（以下の表１に示す）を得て、本開示では、鎖Ａは、Ｆｃ９又は第１のＦｃサブユニットとも称され、鎖Ｂは、Ｆｃ６又は第２のＦｃサブユニットとも称される：
【０２８５】
【表１】
2020535145.tif 000002
【０２８６】
続いて、上記の表１に収載された群の修飾を含むヘテロ二量体タンパク質の形成を、以下で詳細に説明するように、ＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃシステムを使用して検査した。
【０２８７】
まず、ヒト免疫グロブリンガンマ１（ＩｇＧ１）定常領域のアミノ酸配列をデータベースＵｎｉｐｒｏｔ（Ｐ０１８５７）から取得し、野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ領域アミノ酸配列（配列番号３０）を得た。野生型ヒトＩｇＧ１−Ｆｃをコードするポリヌクレオチド断片を、ヒトＰＢＭＣ全ＲＮＡからのＲＴ−ＰＣＲによって得た（配列番号３１、Ｆｃ遺伝子フラグメントと命名した）。マウスカッパＩＩＩシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド断片（配列番号３２）を、重複ＰＣＲによりＦｃ遺伝子の５’末端に付加し、次いでベクターｐｃＤＮＡ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＶ８６２２０）にサブクローニングして、哺乳動物細胞でヒトＩｇＧ１−Ｆｃを発現させるための組換え発現ベクターを得た。
【０２８８】
ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子（配列番号３３）を合成し、ここでＳｃＦｖは、抗ＨＥＲ２単鎖抗体を指し、ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３４に規定される。次いで、ＳｃＦｖ−Ｆｃ遺伝子断片をベクターｐｃＤＮＡ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＶ８６２２０）にサブクローニングして、哺乳動物細胞でＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質を発現させるための組換え発現ベクターを得た。
【０２８９】
場合によっては、ラクダ単一ドメイン抗体（ＶｈＨ）の可変領域をコードするポリペプチドをＦｃ遺伝子断片のＮ末端に融合させて、融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃ（配列番号３６に規定される）をコードする融合遺伝子断片（配列番号３５に規定される）を得た。次いで、これをベクターｐｃＤＮＡ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＶ８６２２０）にサブクローニングして、哺乳動物細胞で融合タンパク質ＶｈＨ−Ｆｃを発現させるための組換え発現ベクターを得た。
【０２９０】
次いで、上記の表１に収載されているアミノ酸修飾を、それぞれＳｃＦｖ−Ｆｃ（群１〜群１７）、ＶｈＨ−Ｆｃ（群９〜群１２、群１４、群１５、及び群１７）、及びＦｃ遺伝子断片（群１〜群８）に重複ＰＣＲによって導入し、ここで、鎖Ａは、ＳｃＦｖ−ＦｃのＦｃサブユニットを指し、鎖Ｂは、独立したＦｃサブユニット又はＶｈＨ−ＦｃのＦｃサブユニットを指す。アミノ酸修飾された遺伝子断片をそれぞれベクターｐｃＤＮＡ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＶ８６２２０）にサブクローニングし、哺乳動物細胞において修飾ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質、修飾Ｆｃタンパク質、及び修飾ＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質を発現するための組換え発現ベクターを得た。
【０２９１】
次いで、懸濁培養したＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５７３（商標））を、ＰＥＩで構築した発現ベクターで形質転換した。各群について、Ａ鎖（ＳｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質）を発現する発現ベクター及びＢ鎖（Ｆｃタンパク質又はＶｈＨ−Ｆｃ融合タンパク質）を発現する発現ベクターを１：１の比率で同時に形質転換した。５日〜６日間培養した後、一過性発現産物の上清を収集し、ＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して対応するタンパク質ヘテロ二量体を含む発現産物を予備精製した。予備精製された発現産物は、それぞれ、ＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＳｃＦｖ−Ｆｃホモ二量体タンパク質、Ｆｃ／Ｆｃホモ二量体タンパク質（又はＶｈＨ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃホモ二量体タンパク質）、及びＳｃＦｖ−Ｆｃ／Ｆｃヘテロ二量体タンパク質（又はＳｃＦｖ−Ｆｃ／ＶｈＨ−Ｆｃヘテロ二量体タンパク質）を含み、それらは、それぞれ様々な割合で存在する。これらのタンパク質（すなわち、ホモ二量体及びヘテロ二量体）の分子量が異なるため、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに反映される対応するバンド強度に従って、対応する割合を決定することができた。強度を定量化し、結果を以下の表２〜表５に要約する。
【０２９２】
【表２】
2020535145.tif 000003
【０２９３】
【表３】
2020535145.tif 000004
【０２９４】
【表４】
2020535145.tif 000005
【０２９５】
【表５】
2020535145.tif 000006
【０２９６】
上記の表２〜表５からわかるように、全ての修飾群がヘテロ二量体形成を非常に効果的に促進した。説明のため、群１０の修飾（鎖Ａの修飾：Ｔ３６６Ｗ＋Ｋ４０９Ａ；鎖Ｂの修飾：Ｔ３６６Ｓ＋Ｌ３６８Ｇ＋Ｙ４０７Ａ＋Ｆ４０５Ｋ）を以下の実施例で使用して、本開示のイムノコンジュゲート又はタンパク質混合物を生成した。
【０２９７】
１．２  抗ＥＧＦＲ（セツキシマブ）の調製
セツキシマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列（上皮成長因子受容体ＥＧＦＲに対する抗体である、アービタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）すなわちＥｒｂとしても知られる）を取得して、これらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列をオンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を使用して取得した。次いで、セツキシマブの軽鎖（Ｅｒｂ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｅｒｂ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号３７に規定され、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号３８に規定される。次いで、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をセツキシマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾セツキシマブ重鎖をコードする核酸分子（本明細書において、ｅｒｂ−Ｆｃ９と呼ぶ）を合成し、それをコードする対応するポリペプチドをＥｒｂ−Ｆｃ９と命名した。Ｅｒｂ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号３９に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４０に規定される。
【０２９８】
１．３  抗ＨＥＲ２（トラスツズマブ）の調製
トラスツズマブの重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列は、米国特許第７８７９３２５号（引用することにより本明細書の一部をなす）に従って得られた。次いで、これらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列をオンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を使用して取得した。次いで、トラスツズマブの軽鎖（Ｔ−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。Ｔ−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号４１に規定され、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号４２に規定される。次いで、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をトラスツズマブ重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾トラスツズマブ重鎖をコードする核酸分子を合成し（本明細書において、ｔ−Ｆｃ９と呼ぶ）、それをコードする対応するポリペプチドをＴ−Ｆｃ９と命名した。Ｔ−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号４３に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４４に規定される。
【０２９９】
１．４  抗ＦＡＰ（２８Ｈ１）の調製
２８Ｈ１の重鎖及び軽鎖の全長アミノ酸配列は、米国特許出願公開第２０１２０１２８５９１号（引用することにより本明細書の一部をなす）に従って得られた。次いで、これらのアミノ酸配列をコードする対応するＤＮＡ配列をオンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を使用して取得した。次いで、２８Ｈ１の軽鎖（２８Ｈ１−ＬＣ）をコードする核酸分子を合成した。２８Ｈ１−ＬＣのアミノ酸配列は、配列番号４５に規定され、それをコードする対応するポリヌクレオチド配列は、配列番号４６に規定される。次いで、点変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）を２８Ｈ１重鎖遺伝子のＦｃ領域をコードするポリヌクレオチド配列に導入し、修飾２８Ｈ１重鎖をコードする核酸分子を合成し（本明細書において、２８Ｈ１−Ｆｃ９と呼ぶ）、それをコードする対応するポリペプチドを２８Ｈ１−Ｆｃ９と命名した。２８Ｈ１−Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号４７に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４８に規定される。
【０３００】
１．５  （ＩＬ１０）２−Ｆｃ６の調製
まず、ヒトインターロイキン１０（ＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ（すなわち、Ｐ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）のアミノ酸配列を、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔによるヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に従って得た。その後、点突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｇ、Ｙ４０７Ａ、及びＦ４０５Ｋ）をＩｇＧ１−Ｆｃフラグメントに導入した。それにより得られるポリペプチドは、Ｆｃ６と称される。次いで、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号４９）をＦｃ６のＮ末端に付加し、リンカー−Ｆｃ６を得た。次いで、それをコードする対応するＤＮＡ配列をオンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を用いて設計した。次いで、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号４９）をＩＬ１０の２個のコピー間に付加し、（ＩＬ１０）２を得た。（ＩＬ１０）２をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に付加し、それにより融合タンパク質（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６をコードするポリヌクレオチド配列を得て、合成した。（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６のアミノ酸配列は、配列番号５０に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５１に規定される。
【０３０１】
１．６  ＩＬ１０−Ｆｃの調製
まず、ヒトインターロイキン１０（ＩＬ１０）（Ｐ２２３０１）の配列情報を国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）から入手し、それをコードする完全長ポリヌクレオチド配列を得た。次いで、ヒトＩｇＧ１−Ｆｃ（すなわち、Ｐ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）のアミノ酸配列を、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔによるヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に従って得た。次いで、リンカー配列「（ＧＧＧＧＳ）３」（配列番号４９）をＩｇＧ１−ＦｃのＮ末端に付加し、リンカー−Ｆｃを得た。次いで、それをコードする対応するＤＮＡ配列をオンラインツールＤＮＡｗｏｒｋｓ（ｈｅｌｉｘｗｅｂ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｎａｗｏｒｋｓ／）を用いて設計した。次いで、ＩＬ１０をコードするポリヌクレオチド配列をリンカー−Ｆｃをコードするポリヌクレオチド配列の５’末端に付加することにより、融合タンパク質ＩＬ１０−Ｆｃをコードするポリヌクレオチドを合成した。ＩＬ１０−Ｆｃのアミノ酸配列は、配列番号５２に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５３に規定される。
【０３０２】
１．７  Ｆｃ９の調製
ヒトＩｇＧ１−Ｆｃのアミノ酸配列（すなわち、Ｐ０１８５７の残基１０４〜残基３３０）を、タンパク質データベースＵｎｉｐｒｏｔからのヒト免疫グロブリンγ１（ＩｇＧ１）定常領域（Ｐ０１８５７）のアミノ酸配列に従って取得した。その後、点突然変異（Ｔ３６６Ｗ及びＫ４０９Ａ）をＩｇＧ１Ｆｃフラグメントに導入し、それにより得られたポリペプチドをＦｃ９と呼ぶ。Ｆｃ９のアミノ酸配列は、配列番号１７に規定され、それをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５４に規定される。
【０３０３】
実施例２  組換えプラスミドの構築
実施例１に従って得られた核酸分子（Ｅｒｂ−Ｆｃ９、Ｔ−Ｆｃ９、２８Ｈ１−Ｆｃ９、Ｆｃ９、Ｔ−ＬＣ（トラスツズマブ軽鎖）、Ｅｒｂ−ＬＣ（セツキシマブ軽鎖）、２８Ｈ１−ＬＣ、（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６、及びＩＬ１０−Ｆｃをコードする）をＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩ（Ｔａｋａｒａ）で消化し、次いでベクターｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ−ＨｉｓＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ８６３−２０）にそれぞれサブクローニングした。得られたプラスミドを配列決定によって検証し、正しい組換えプラスミドをそれぞれ、次のように命名した：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｆｃ９、ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ、ｐｃＤＮＡ４−（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６、及びｐｃＤＮＡ４−ＩＬ１０−Ｆｃ。
【０３０４】
実施例３  イムノコンジュゲートの発現及び精製
トランスフェクションの２日前に、１２×６００ｍＬの順化（ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄ）ＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１５７３（商標））細胞の懸濁液を一過性トランスフェクションのために調製し、細胞を０．８×１０６細胞／ｍｌの密度で播種した。２日後に、３個の細胞懸濁液の一定量を遠心分離した後、６００ｍＬのＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３培養培地に再懸濁した。
【０３０５】
実施例２により得られた組み換え発現ベクターを以下の群に分けた：
群１：ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｅｒｂ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）；
群２：ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−Ｔ−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）；
群３：ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−２８Ｈ１−ＬＣ（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）；
群４：ｐｃＤＮＡ４−Ｆｃ９（２００μｇ）＋ｐｃＤＮＡ４−（ＩＬ１０）２−Ｆｃ６（２００μｇ）；
群５：ｐｃＤＮＡ４−ＩＬ１０−Ｆｃ（２００μｇ）。
【０３０６】
全てのタンパク質を一過性に形質転換した２９３Ｆ細胞から作製した。簡潔に述べると、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を２９３Ｆ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させ、非線状化プラスミドＤＮＡ及び２９３Ｆｅｃｔｉｎ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で形質転換し、３７℃、５％ＣＯ２で６日間、８０ｍＬ／フラスコ〜１００ｍＬ／フラスコの容量のシェーカーフラスコバッチで増殖させた。全てのタンパク質をワンステッププロテインＡクロマトグラフィーにより精製した。各タンパク質の品質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥＣ−ＨＰＬＣによって判定した。同様に、本出願の他のイムノコンジュゲートの発現及び精製結果をＳＤＳ−ＰＡＧＥで検証し、確認した。
【０３０７】
このようにして得られた群１〜群５に由来するイムノコンジュゲートを、それぞれＥｒｂ−（ＩＬ１０）２、Ｔｍａｂ−（ＩＬ１０）２、２８Ｈ１−（ＩＬ１０）２、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、及び（ＩＬ１０−Ｆｃ）２と命名する。
【０３０８】
図１Ａ〜図１Ｆは、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２、Ｔｍａｂ−（ＩＬ１０）２、（ＩＬ１０−Ｆｃ）２、及びＦｃ９−（ＩＬ１０）２のイムノコンジュゲートの発現及び精製に成功したことを示す。図１Ａでは、レーン１にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２（還元）をロードし、レーン２にマーカーをロードし、レーン３にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２（非還元）をロードした。図１Ｂでは、レーン１にＴｍａｂ−（ＩＬ１０）２（還元）をロードし、レーン２にマーカーをロードし、レーン３にＴｍａｂ−（ＩＬ１０）２（非還元）をロードした。
【０３０９】
図１Ｃでは、レーン１に（ＩＬ１０−Ｆｃ）２（元のサンプル）をロードし、レーン２に（ＩＬ１０−Ｆｃ）２（フロースルー）をロードし、レーン３に（ＩＬ１０−Ｆｃ）２（溶出）をロードし、レーン４にマーカーをロードし、レーン５に標準陽性対照ＢＳＡをロードし、レーン６にブランクバッファーをロードし、レーン７は、ブランクであり、そしてレーン８に（ＩＬ１０−Ｆｃ）２（溶出、非還元）をロードした。
【０３１０】
図１Ｄでは、レーン１にＦｃ９−（ＩＬ１０）２（元のサンプル）をロードし、レーン２にＦｃ９−（ＩＬ１０）２（フロースルー）をロードし、レーン３にＦｃ９−（ＩＬ１０）２（溶出）をロードし、レーン４にマーカーをロードし、レーン５に標準陽性対照ＢＳＡをロードし、レーン６にブランクバッファーをロードし、レーン７は、ブランクであり、レーン８にＦｃ９−（ＩＬ１０）２（溶出、非還元）をロードした。
【０３１１】
図１Ｅは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果を示し、（ＩＬ１０−Ｆｃ）２の発現産物中の望ましくないオリゴマーの割合は、約２７％であったことがわかる。
【０３１２】
図１Ｆは、ＳＥＣ−ＨＰＬＣの結果を示し、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２の発現産物中の望ましくないオリゴマーの割合は、約３．３％であったことがわかる。
【０３１３】
これらの結果から、本開示のイムノコンジュゲートの生産に成功したことがわかる。興味深いことに、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２の発現産物には、（ＩＬ１０−Ｆｃ）２の発現産物と比較して、望ましくないオリゴマーがはるかに少ない。
【０３１４】
実施例４  放射線療法の線量及び腫瘍制御の調査
４．１  動物及び細胞培養
雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを６週齢〜８週齢で中国科学院の実験動物センター（中国、上海）から入手し、特定の病原体を含まない条件下で飼育した。全ての動物を地元の倫理委員会に従って使用した。この研究は、医療実験動物の管理及び使用のためのガイド（１９９８年、中華人民共和国、衛生部）の推奨事項によって承認された。ヒトＥＧＦＲ及びＫｂ結合ペプチド抗原ＳＩＹＲＹＹＧＬ（ＳＩＹ、配列番号５５）を発現するＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ黒色腫細胞株を社内で生成し、１０％（体積／体積）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００単位／ｍｌペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加したＤＭＥＭ培地で増殖させた。
【０３１５】
４．２  腫瘍の増殖
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ黒色腫細胞（５×１０５）をマウスの腹側部に皮下（ｓ．ｃ．）接種し、約１０日間増殖させた。腫瘍体積を２個の垂直の直径（長さ及び幅）で記録し、Ｖ＝ａｂ２／２（式中、ａ及びｂは、それぞれ最長と最短の直径である）として計算した。腫瘍サイズに応じて、マウスを無作為に群に割り当てた。それぞれ体重がおよそ１８ｇ〜２０ｇのＣ５７／ＢＬ６マウスに約１５０μｌ／２０ｇの１％（重量／体積）のペントバルビタールナトリウムを腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することによって麻酔をかけた。ブロックの平らな水平面に側臥位で置いた麻酔をかけた各マウスを、１０ｍｍ×１０ｍｍの穴のある鉛シールドで保護した。次いで、蘇州大学の第一付属病院、放射線治療部において、穴を通して１回（電子ビーム照射、３Ｇｙ／分、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｉｎｅａｒ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｏｒｓ、ＳＩＥＭＥＮＳ  Ｐｒｉｍｕｓ、ドイツ）により局所放射線照射を実施し、腫瘍体積を週に２回測定した。それにより、Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを得た。
【０３１６】
４．３  放射線療法の線量及び腫瘍制御
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍を、５Ｇｙ、１０Ｇｙ、２０Ｇｙ、３０Ｇｙの局所単回放射線療法（ＲＴ）で治療した。また、更なる局所単回照射（ｌｏｃａｌ  ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ）対照を含まないＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを対照として設定した。
【０３１７】
２１日間のＲＴ治療後、Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルは、１２３．４±４３．７ｍｍ３から２７９７．１±９１７．８ｍｍ３の体積に増殖したが、これは、５Ｇｙ〜３０Ｇｙの局所単回照射ＲＴによって減速した（図２）。図２は、ＲＴの単回照射と腫瘍の体積との関係を反映している。ＲＴの単回線量（ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ）の増加に伴い、腫瘍に対するＲＴの抑制効果が強化され、３０Ｇｙは、腫瘍のほぼ完全な消失を媒介したが、５Ｇｙは、ほとんど効果がなかった。これらの結果は、照射された腫瘍の増殖抑制に関して、異なる放射線照射計画（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｒｅｇｉｍｅｎ）が同等ではない直接効果を引き起こすことを示唆した。
【０３１８】
実施例５  ＲＴ及び本開示のイムノコンジュゲートの相乗効果
実施例３で得られたＥｒｂ−（ＩＬ１０）２又はアイソタイプ対照（ヒトＩｇＧ１）の投与をＲＴの３日後に開始し、３日〜４日毎に１ｍｇ／ｋｇの用量で合計３回（特に明記しない限り）ｉ．ｐ．投与した。
【０３１９】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、１０日目に局所照射を行い、その後、１３日目に２００μｌのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２（１ｍｇ／ｋｇ）又はＦｃ９−（ＩＬ１０）２（１ｍｇ／ｋｇ）又はアイソタイプ対照をｉ．ｐ．注射し、これを３日〜４日毎に合計３回行った。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２、ＲＴ；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、ＲＴ、及びＥｒｂ−（ＩＬ１０）２とＲＴとの組み合わせ；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２とＲＴとの組み合わせの有効性を判定し、結果を図３Ａ〜図３Ｃに示す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン５．０ソフトウェア（カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。対応のないスチューデントのｔ検定を使用して、２個の群の比較を行った。報告された全てのｐ値は、両側であり、統計的有意水準を＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．００１として設定した。また、０．０５未満のＰ値を統計的に有意であると見なした。
【０３２０】
図３Ａ及び図３Ｃは、腫瘍体積と、それぞれ１０Ｇｙ、５Ｇｙ、１０Ｇｙの単回照射のＲＴによる腫瘍チャレンジ後の日数との関係を反映している。また、図３Ｂでは、水平座標は、腫瘍チャレンジ後の日数であり、垂直座標は、マウスの生存パーセントである。ＲＴ  ５Ｇｙは、アイソタイプ対照群と比較して腫瘍の増殖にわずかな影響を及ぼしたが、ＲＴ  １０Ｇｙ、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２は、腫瘍の進行を遅らせた（図３Ａ及び図３Ｃ）。ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の組み合わせによる治療は、腫瘍増殖を効果的に制御した（Ｐ＝０．０３４９、ＲＴ  １０Ｇｙ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２は、３４日目に１５９７．６±４７４．７ｍｍ３対３２９．４±１５６．５ｍｍ３の腫瘍体積を示す）（図３Ａ）。ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせで治療した腫瘍では、アイソタイプ対照群の１／５匹と比較して、５／５匹が２０００ｍｍ３の体積に達しなかった（図３Ａ）。単回放射線照射の５Ｇｙへの低減は、ＲＴ  ５Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２に明らかな相乗効果がないことを示した（Ｐ＝０．７０８８、３４日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２  １９４０．２±５３９．７ｍｍ３対ＲＴ  ５Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １６５４．３±５０４．４ｍｍ３）（図３Ｃ）。さらに、図３Ｂに示すように、ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせにより生存率が有意に向上した。
【０３２１】
これらのデータは、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２がＲＴ  １０Ｇｙの効果を有意に改善し、ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせがＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ腫瘍を持つマウスの生存期間を延長することを示す。
【０３２２】
実施例３で得られたＦｃ９−（ＩＬ１０）２又はアイソタイプ対照（ヒトＩｇＧ１）の投与をＲＴの３日後に開始し、３日〜４日毎に１ｍｇ／ｋｇの用量で合計３回ｉ．ｐ．投与した（特に明記しない限り）。
【０３２３】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、１０日目に局所照射を行い、その後、１３日目に０．３２ｍｇ／ｋｇのＦｃ９−（ＩＬ１０）２又は０．５ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照をｉ．ｐ注射し、これを３日〜４日毎に合計３回行った。Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、ＲＴ；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、ＲＴ、及びＦｃ９−（ＩＬ１０）２とＲＴとの組み合わせ；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２とＲＴとの組み合わせの有効性を判定し、結果を図３Ｄに示す。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン５．０ソフトウェア（カリフォルニア州サンディエゴ）を使用してデータを分析した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。
【０３２４】
図３Ｄは、腫瘍体積と、１０Ｇｙの単回照射ＲＴによる腫瘍チャレンジ後の日数との関係を反映している。ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２の組み合わせによる治療は、腫瘍増殖を効果的に制御した（図３Ｄ）。データは、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２がＲＴ  １０Ｇｙと有効な相乗効果を発揮することを示している。
【０３２５】
実施例６  ＲＴ及び本開示のイムノコンジュゲートの投与計画の決定
本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせたＲＴ治療の相乗効果に対する投与計画の影響を判定するため、ＲＴ治療後の異なる日にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２治療を提供した。それぞれ、ＲＴ  １０Ｇｙを投与する３日前（１０日目）、ＲＴ  １０Ｇｙと同時に（１３日目）、又はＲＴ  １０Ｇｙの３日後（１６日目）に、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２をマウスにｉ．ｐ．注射した。
【０３２６】
結果は、図４に示されており、水平座標は、腫瘍チャレンジ後の日数であり、垂直座標は、腫瘍の体積である。図４からわかるように、全ての組み合わせで１０日目から３０日目までの腫瘍増殖の速度に有意な効果があった。
【０３２７】
腫瘍増殖に対する効果は、全ての治療群で同等であったが（Ｐ＝０．５２１８、３０日目にＲＴ  １０Ｇｙ  ｄ１０＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  ｄ１３対ＲＴ  １０Ｇｙ  ｄ１０＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  ｄ１０＝８５３．０±４７６．２ｍｍ３対１３１８．８±５０６．７ｍｍ３；Ｐ＝０．３１１５、３０日目にＲＴ  １０Ｇｙ  ｄ１０＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  ｄ１３対ＲＴ  １０Ｇｙ  ｄ１０＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  ｄ１６＝８５３．０±４７６．２ｍｍ３対２１０９．４±１０６１．２ｍｍ３）、驚いたことに、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２と、ＲＴの同時投与又はＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の投与を１６日目まで遅延させることと比べて、ＲＴのおよそ３日後のＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の投与は、最も有効な相乗効果を発揮した。
【０３２８】
実施例７  相乗効果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞依存性である
次いで、ＲＴとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせの相乗効果の根底にあるメカニズムを調査した。まず、併用治療後の抗腫瘍効果の媒介におけるエフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞の機能を調査した。
【０３２９】
ＲＴ及びＥｒｂ−（ＩＬ１０）２で治療したマウスは、さらに、それぞれ、１０日目に開始して１週間に１回の抗ＣＤ４  ｍＡｂ（クローンＴＩＢ２０７、２００μｇ／マウス）、抗ＣＤ８  ｍＡｂ（クローンＴＩＢ２１０、２００μｇ／マウス）、又は抗ＮＫ  ｍＡｂ（クローンＰＫ１３６、２００μｇ／マウス）のｉ．ｐ．注射を受け、治療を合計２回適用した。図５Ａ及び図５Ｃに示すように、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＮＫ細胞の枯渇は、腫瘍増殖に対する併用療法の効果に有意な影響を与えなかった（Ｐ＝０．２８７２、２７日目にＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＋抗ＣＤ４  ｍＡｂ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＝７７１．４±１７２．５ｍｍ３対４７４．８±１９０．７ｍｍ３；Ｐ＝０．１６５１、２７日目にＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＋抗ＮＫ  ｍＡｂ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＝９４０．１±２１９．７ｍｍ３対４７４．８±１９０．７ｍｍ３）。しかしながら、図５Ｂに示すように、ＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、治療効果を劇的に低下させ、急速な腫瘍増殖をもたらした（Ｐ＝０．０３７６、２７日目にＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＋抗ＣＤ８  ｍＡｂ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １ｍｇ／ｋｇ＝１８９６．１±４９９．６ｍｍ３対４７４．８±１９０．７ｍｍ３）。したがって、これらの結果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞が併用療法の抗腫瘍効果に不可欠であることを実証するものである。
【０３３０】
実施例８  併用療法は、遠隔腫瘍に対するアブスコパル効果を媒介し、腫瘍塊における腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞機能を改善した
８．１  アブスコパル効果
０日目に右側腹部に５×１０５個のＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞（一次腫瘍）を、及び左側腹部に同数の細胞（二次腫瘍）をＣ５７ＢＬ／６マウスにｓ．ｃ．注射した。示されるように、一次腫瘍を、１０日目にＲＴ  １０Ｇｙで局所治療し、次いで１３日目に１ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２をｉ．ｐ．注射し、これを３日〜４日毎に３回行った。一次腫瘍及び二次腫瘍の体積を測定し、モニターした。
【０３３１】
ＲＴ及びＲＴ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の組み合わせのアブスコパル効果（間接効果）を評価するため、Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの両腹側部にｓ．ｃ．注射し、直接治療効果を判断するため右腹側部の一次腫瘍に放射線照射したのに対し、左腹側部の二次腫瘍は、照射せず、潜在的で間接的な全身効果を測定するのに役立てた。これらの治療は、図３Ａに示すものと同様に、一次腫瘍の有意な増殖遅延をもたらした。
【０３３２】
二次腫瘍増殖に対する効果を図６Ａに示した。１群当たり５匹のマウスを使用して３個の実験を行った。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２のｉ．ｐ．投与単独の効果は、一次腫瘍で見られたものと同様であった。しかしながら、単回のＲＴ  １０Ｇｙ治療は、一次腫瘍の有意な増殖遅延を引き起こしたが、二次腫瘍では、効果は、観察されなかった（図６Ａ）。
【０３３３】
対照的に、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２とＲＴとの組み合わせは、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の投与単独で得られた結果と比較して、二次腫瘍の有意な更なる増殖遅延をもたらした（Ｐ＝０．０００９、２６日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２＝９７０．２±１１９．６ｍｍ３対２５３．９±７１．６ｍｍ３）。まとめると、これらの結果は、単回の局所放射線照射（１０Ｇｙ）がアブスコパル効果を引き起こす可能性は、低いが、ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせは、遠隔腫瘍に対する有意な抗腫瘍効果を誘発することができることを示す。
【０３３４】
８．２  抗原特異的Ｔ細胞応答の増強
腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答の増強における併用療法の効果を調査するために、ＳＩＹペプチドを使用してＳＩＹ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞を識別した。
【０３３５】
酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイにより、９６ウェルプレートを使用してインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を分泌する細胞を定量した。製造業者の指示に従って、ＥＬＩＳＰＯＴキットを使用した（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５１０８３）。記載されるように、単一細胞の懸濁液を得るため腫瘍流入領域リンパ節（ＤＬＮ：Ｔｕｍｏｒ−ｄｒａｉｎｉｎｇ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ）を除去した。９６ウェルＥＬＩＳＰＯＴプレートに、５μｇ／ｍｌの精製抗マウスＩＦＮ−γ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５１−２５２５ｋｃ）を４℃で一晩プレコートした。１ウェル当たり５×１０５個のリンパ節細胞を１０μｇ／ｍｌのＳＩＹポリペプチド（ＳＬ−９  ＧＬ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  カタログ番号０５７７８７）又はオボアルブミン（ＯＶＡ）ポリペプチド（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ  カタログ番号ｖａｃ−ｓｉｎ）の存在下で共培養し、後者を抗原特異性の陰性対照として使用した。７２時間のインキュベーション後、細胞を除去し、２μｇ／ｍｌのビオチン化抗マウスＩＦＮ−γ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５１−１８１８ｋｚ）を添加し、プレートを室温で２時間インキュベートした。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５７６３０）及びＡＥＣ基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  カタログ番号５５１９５１）を使用してスポットを視覚化し、その後、画像分析及びスポットの計数を行った。各条件を複数で試験し、それらの平均値を示した。前述のように、腫瘍は、ＲＴ  １０Ｇｙを受け、１ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２をｉ．ｐ．投与した。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の２回目の投与の３日後、マウスを屠殺し、腫瘍ＤＬＮを除去して、単一細胞の懸濁液を取得し、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施した。
【０３３６】
Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の２回目の投与の３日後（すなわち１９日目）、腫瘍ＤＬＮに由来するリンパ球をＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ黒色腫細胞を接種したマウスから単離した。図６Ｂに示すように、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおいて、各群のマウスの腫瘍流入領域リンパ節細胞をＳＩＹ又はＯＶＡペプチドを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化し、次いでＩＦＮ−γ分泌細胞の数を測定した。ＲＴとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との併用治療を受けたマウスのＤＬＮにおけるＳＩＹ特異的ＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋Ｔ細胞の数は、ＲＴ又はＥｒｂ−（ＩＬ１０）２単独で治療されたものと比較して、有意に増加した（Ｐ＝０．００２６、アイソタイプ対照対ＲＴ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２；Ｐ＝０．００３４、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２対ＲＴ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２；Ｐ＝０．００６４、ＲＴ対ＲＴ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２）。全体として、これらの知見は、ＲＴとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との併用療法が、腫瘍ＤＬＮにおける腫瘍特異的Ｔ細胞の全身活性化を改善し、腫瘍微小環境における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の機能を増強することにより、腫瘍制御の効果を高めることを実証するものである。
【０３３７】
８．３  併用療法による治療後の活性化Ｔ細胞の誘導
ＦＴＹ７２０（ＳＩＧＭＡ、カタログ番号ＳＭＬ０７００−５ＭＧ）を使用して、腫瘍微小環境におけるＴ細胞の活性化を試験した。ＦＴＹ７２０は、親油性の免疫調節性スフィンゴシン−１−リン酸類似体であり、アゴニストによって誘導される受容体の内在化により、リンパ球がリンパ器官から出ることを防ぐことでマウスにおいて重度の末梢血リンパ球減少症を誘発し、リンパ球減少症を維持する。
【０３３８】
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をマウスの両腹側部にｓ．ｃ．接種した。Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ黒色腫細胞移植後１０日目から開始して、放射線療法＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２群のマウスは、最初のｉ．ｐ．注射を受けた。次いで３日後、枯渇抗体又はＦＴＹ７２０の最初の投与の後、リンパ球懸濁液をそれらのマウスの末梢血から調製し、ＡＰＣ抗ｍＣＤ４（クローンＧＫ１．５、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣ抗ｍＣＤ８ａ（クローン５３−６．７、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣ−抗ｍＣＤ３（クローン１７Ａ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、又はＡＰＣ−抗ｍＮＫ１．１（クローンＰＫ１３６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で標識した。両腹側部の腫瘍体積を測定及びモニターした。Ｌｉｆｅ  Ａｔｔｕｎｅ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｉｆｅ）でサンプルを分析し、データを分析した。１群当たり５匹〜６匹のマウスで実施した３個の実験から得られた結果に基づいて代表的なデータを図６Ｃ〜図６Ｆに示す。
【０３３９】
末梢血におけるＣＤ４＋及びＣＤ８＋のリンパ球の分布を、ＦＴＹ７２０の最初の投与から３日後に評価すると、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の相対数は、図６Ｃに示されるように、それぞれ約０．５％及び１．５％に低下することがわかった。
【０３４０】
しかしながら、図６Ｄに示されるように、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２１ｍｇ／ｋｇ単独の抗腫瘍効果は、ＦＴＹ７２０治療によって減少しないことが観察された。併用療法（すなわち、ＲＴ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２）では、ＦＴＹ７２０は、二次腫瘍に対する抗腫瘍効果を有意に無効にしたのに対し（Ｐ＝０．００８１、３１日目にＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２１ｍｇ／ｋｇ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２１ｍｇ／ｋｇ＋ＦＴＹ７２０＝３９２．５±３３．９ｍｍ３対１０５２．４±１９７．５ｍｍ３）（図６Ｆに示す）、一次腫瘍には、わずかな影響しかなかった（Ｐ＝０．０６６５、３１日目にＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２１ｍｇ／ｋｇ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２１ｍｇ／ｋｇ＋ＦＴＹ７２０＝２９８．１±７３．４ｍｍ３対５３７．９±９０．４ｍｍ３）（図６Ｅに示される）。したがって、ＲＴと本開示のイムノコンジュゲートとの組み合わせは、腫瘍微小環境内のＴ細胞を活性化した。
【０３４１】
上記の実験において、Ｔｍａｂ−（ＩＬ１０）２、２８Ｈ１−（ＩＬ１０）２、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、及び（ＩＬ１０−Ｆｃ）２についても同様の結果が得られた。
【０３４２】
実施例９  本開示のイムノコンジュゲートと組み合わせた細胞傷害性化学療法の効果
９．１  ドキソルビシンと組み合わせた本開示によるイムノコンジュゲートの効果
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを、上記の実施例４に記載される通りに得た。ドキソルビシンと組み合わせたＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、１ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（２０μｇ／マウス）で治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２群、１ｍｇ／ｋｇ（２０μｇ／マウス）のＥｒｂ−（ＩＬ１０）２で治療；ドキソルビシン群、５ｍｇ／ｋｇ（１００μｇ／マウス）のドキソルビシンで治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２＋ドキソルビシン群、１ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２と５ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＥｒ−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にドキソルビシンを尾静脈から注射した。
【０３４３】
結果を図７Ａに示す。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２とドキソルビシンとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３４４】
ドキソルビシンと組み合わせたＦｃ９−（ＩＬ１０）２を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む次の幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（１０μｇ／マウス）で治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＦｃ９−（ＩＬ１０）２で治療；ドキソルビシン群、５ｍｇ／ｋｇの（１００μｇ／マウス）のドキソルビシンで治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２＋ドキソルビシン群、０．５ｍｇ／ｋｇのＦｃ９−（ＩＬ１０）２と５ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＦｃ９−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にドキソルビシンを尾静脈から注射した。
【０３４５】
結果を図７Ｂに示す。Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２とドキソルビシンとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３４６】
９．２  オキシプラチンと組み合わせた本開示によるイムノコンジュゲートの効果
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを、上記の実施例４に記載される通りに得た。オキシプラチンと組み合わせたＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（１０μｇ／マウス）で治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＥｒｂ−（ＩＬ１０）２で治療；オキシプラチン群、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／マウス）のオキシプラチンで治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２＋オキシプラチン群、０．５ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２＋１５ｍｇ／ｋｇのオキシプラチンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にオキシプラチンを尾静脈から注射した。
【０３４７】
結果を図７Ｃに示す。オキシプラチンの毒性が高いため、オキシプラチン群のマウスは、全て１４日後に死亡した（図７Ｉを参照されたい）。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２とオキシプラチンとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３４８】
オキシプラチンと組み合わせたＦｃ９−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（１０μｇ／マウス）で治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＦｃ９−（ＩＬ１０）２で治療；オキシプラチン群、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／マウス）のオキシプラチンで治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２＋オキシプラチン群、０．５ｍｇ／ｋｇのＦｃ９−（ＩＬ１０）２＋１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／マウス）のオキシプラチンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＦｃ９−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にオキシプラチンを尾静脈から注射した。
【０３４９】
結果を図７Ｄに示す。オキシプラチンの毒性が高いため、オキシプラチン群及びＦｃ９−（ＩＬ１０）２＋オキシプラチン群のマウスは、全て１４日後に死亡した（図７Ｊを参照されたい）。したがって、相乗効果を群間で比較することはできない。
【０３５０】
９．３  ＣＴＸ（シクロホスファミド）と組み合わせた本開示によるイムノコンジュゲートの効果
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを、上記の実施例４に記載される通りに得た。ＣＴＸと組み合わせたＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：ＰＢＳ群、ＰＢＳ緩衝液（ｂｕｆｆｅｒｉｎｇ）で治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＥｒｂ−（ＩＬ１０）２で治療；ＣＴＸ群、１００ｍｇ／ｋｇ（２ｍｇ／マウス）のＣＴＸで治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２＋ＣＴＸ群、０．５ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２と１００ｍｇ／ｋｇのＣＴＸで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にＣＴＸを尾静脈から注射した。
【０３５１】
結果を図７Ｅに示す。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２とＣＴＸとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３５２】
ＣＴＸと組み合わせたＦｃ９−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、１ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（２０μｇ／マウス）で治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２群、０．６５ｍｇ／ｋｇ（１３μｇ／マウス）のＦｃ９−（ＩＬ１０）２で治療；ＣＴＸ群、１００ｍｇ／ｋｇ（２ｍｇ／マウス）のＣＴＸで治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２＋ＣＴＸ群、０．６５ｍｇ／ｋｇのＦｃ９−（ＩＬ１０）２と１００ｍｇ／ｋｇのＣＴＸで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＦｃ９−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にＣＴＸを尾静脈から注射した。
【０３５３】
結果を図７Ｆに示す。Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２とＣＴＸとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３５４】
９．４  ビノレルビンと組み合わせた本開示によるイムノコンジュゲートの効果
Ｂ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ対照腫瘍モデルを、上記の実施例４で記載される通りに得た。ビノレルビンと組み合わせたＥｒｂ−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを、１群当たりマウス５匹を含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（１０μｇ／マウス）で治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＥｒｂ−（ＩＬ１０）２で治療；ビノレルビン群、５ｍｇ／ｋｇ（１００μｇ／マウス）のビノレルビンで治療；Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２＋ビノレルビン群、０．５ｍｇ／ｋｇのＥｒｂ−（ＩＬ１０）２＋５ｍｇ／ｋｇのビノレルビンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にビノレルビンを尾静脈から注射した。
【０３５５】
結果を図７Ｇに示す。Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２とビノレルビンとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３５６】
ビノレルビンと組み合わせたＦｃ９−（ＩＬ１０）２の効果を比較するため、マウスを１群当たり５匹のマウスを含む幾つかの群に分けた：アイソタイプ対照群、０．５ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１（１０μｇ／マウス）で治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２群、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／マウス）のＦｃ９−（ＩＬ１０）２で治療；ビノレルビン群、５ｍｇ／ｋｇ（１００μｇ／マウス）のビノレルビンで治療；Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２＋ビノレルビン群、０．５ｍｇ／ｋｇのＦｃ９−（ＩＬ１０）２＋５ｍｇ／ｋｇのビノレルビンで治療。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０日目にＢ１６−ＥＧＦＲ−ＳＩＹ細胞をｓ．ｃ．接種し、７日目、１０日目、１４日目にＦｃ９−（ＩＬ１０）２をそれぞれｉ．ｐ．注射し、７日目にビノレルビンを尾静脈から注射した。
【０３５７】
結果を図７Ｈに示す。Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２とビノレルビンとの組み合わせにおいて、腫瘍増殖の制御に相乗効果が観察されたことがわかる。
【０３５８】
図７Ｉは、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２、オキシプラチン、及びＥｒｂ−（ＩＬ１０）２とオキシプラチンとの組み合わせの生存率に対する影響を示す。
【０３５９】
図７Ｊは、Ｆｃ９−（ＩＬ１０）２、オキシプラチン、及びＦｃ９−（ＩＬ１０）２とオキシプラチンとの組み合わせの生存率に対する影響を示す。
【０３６０】
上記の実験において、Ｔｍａｂ−（ＩＬ１０）２、２８Ｈ１−（ＩＬ１０）２、及び（ＩＬ１０−Ｆｃ）２について同様の結果が得られた。加えて、本開示のイムノコンジュゲートは、様々な他の化学療法薬と組み合わせて投与された場合、（選択的な）相乗効果を有することが分かった。
【０３６１】
本発明の好ましい実施形態が本明細書において示され、説明されたが、斯かる実施形態は、例としてのみ提供されることは、当業者に明らかであろう。本発明が本明細書内で提供される具体的な例によって限定されることを意図するものではない。上記の明細書を参照して本発明を説明したが、本明細書の実施形態の記載及び実例は、限定的な意味で解釈されることを意図していない。ここで、当業者は、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、及び置換を想到するであろう。さらに、本発明の全ての態様は、様々な条件及び変数に依存する本明細書に規定される具体的な描写、構成、又は相対的割合に限定されないことを理解されたい。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明を実施する際に利用され得ることを理解されたい。したがって、本発明は、任意の斯かる代替、修正、変形、又は均等物も網羅することが企図される。以下の実施形態は、本発明の範囲を定義し、これらの実施形態及びそれらの同等物の範囲内の方法及び構造がそれによって網羅されることが意図される。
【図１Ａ】
2020535145.tif 000007
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
2020535145.tif 000037
【図８】
2020535145.tif 000038
【配列表】
2020535145000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年4月22日(2020.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イムノコンジュゲートと細胞傷害性物質とを含む組成物であって、
前記イムノコンジュゲートが
１）１個以上のインターロイキンと、
２）第１のＦｃサブユニット及び第２のＦｃサブユニットからなるＦｃドメインとを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合して二量体を形成し、
前記１個以上のインターロイキンが前記Ｆｃドメインに融合され、
前記細胞傷害性物質が免疫原性細胞死を誘導することができる、
組成物。
【請求項２】
前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記イムノコンジュゲートが２個以上のインターロイキンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記２個以上のインターロイキンの少なくとも２個がペプチドリンカーを介して互いに融合されてインターロイキン二量体を形成する、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記インターロイキン二量体の少なくとも１個が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記２個以上のインターロイキンが同じインターロイキンの２個以上のコピーである、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記２個以上のインターロイキンがＩＬ１０の２個以上のコピーである、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記イムノコンジュゲートが前記Ｆｃドメインに融合された標的化部分を更に含み、該標的化部分が腫瘍抗原に対して結合特異性を示す、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記標的化部分が前記Ｆｃドメインのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記腫瘍抗原がＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、及びＦＡＰからなる群から選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＦｃドメインがＩｇＧ  Ｆｃドメインである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＩｇＧがヒトＩｇＧ１である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記イムノコンジュゲートが
第１の成員と該第１の成員とは異なる第２の成員とを含むイムノコンジュゲートであり、
前記第１の成員が前記第１のＦｃサブユニットを含み、
前記第２の成員が前記第２のＦｃサブユニットに融合された前記１個以上のインターロイキンを含み、
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと会合してヘテロ二量体を形成する、
請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも１個が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に融合されている、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２の成員において、前記１個以上のインターロイキンの少なくとも２個が互いに融合してインターロイキン二量体を形成し、該インターロイキン二量体が前記第２のＦｃサブユニットのアミノ末端アミノ酸に更に融合されている、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記第１の成員が、前記第１のＦｃサブユニットに融合された前記標的化部分を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
前記イムノコンジュゲートがいずれの標的化部分も含まない、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
前記第１のＦｃサブユニットが前記第２のＦｃサブユニットと異なり、前記Ｆｃドメインが前記第１のＦｃサブユニットと前記第２のＦｃサブユニットとの間のヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第１のＦｃサブユニットが第１の修飾を含み、
前記第２のＦｃサブユニットが第２の修飾を含み、
前記第１の修飾及び前記第２の修飾が、
１）第１の修飾：Ｙ３４９及びＴ３６６、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
２）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、及びＹ４０７；
３）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
４）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＱ３４７；
５）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
６）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｋ３６０、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＱ３４７；
７）第１の修飾：Ｙ３４９、Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＱ３４７、並びに
第２の修飾：Ｄ３５６、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、Ｋ３６０、及びＱ３４７；
８）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＫ３９２、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｄ３９９、及びＦ４０５；
９）第１の修飾：Ｔ３６６及びＫ４０９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＦ４０５；
１０）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１１）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｋ４０９、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｆ４０５、及びＥ３５７；
１２）第１の修飾：Ｔ３６６及びＦ４０５、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、及びＫ４０９；
１３）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＤ３９９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＫ３９２；
１４）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、及びＹ３４９、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
１５）第１の修飾：Ｔ３６６、Ｆ４０５、Ｙ３４９、及びＳ３５４、並びに
第２の修飾：Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｙ４０７、Ｋ４０９、及びＥ３５７；
の群のいずれかから選択される位置群にアミノ酸置換を含み、該アミノ酸の位置がＫＡＢＡＴ番号のＥＵインデックスに従って決定される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がアルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、白金ベース化合物、及び放射性物質からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がシクロホスファミドから選択されるアルキル化剤を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカペシタビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、及び５−Ｆｕからなる群から選択される代謝拮抗剤を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２４】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がブレオマイシン、ドキソルビシン、及びマイトマイシン−Ｃからなる群から選択されるアントラサイクリンを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がタキサン、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビンからなる群から選択される植物アルカロイドを含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２６】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がＸ放射線及び／又はガンマ放射線を放出する放射性物質を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２７】
免疫原性細胞死を誘導することができる前記細胞傷害性物質がカルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンからなる群から選択される白金ベース化合物を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２８】
癌を治療するための、細胞毒性療法と組み合わせた、請求項１に記載の免疫複合体であって、前記細胞毒性療法は免疫原性細胞死を誘導することができる、免疫複合体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６６】
９５．上記イムノコンジュゲートが上記細胞傷害性療法の適用後に上記被験体に投与される、実施形態９４に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２０】
図３Ａ及び図３Ｃは、腫瘍体積と、それぞれ１０Ｇｙ及び５Ｇｙの単回照射のＲＴによる腫瘍チャレンジ後の日数との関係を反映している。また、図３Ｂでは、水平座標は、腫瘍チャレンジ後の日数であり、垂直座標は、マウスの生存パーセントである。ＲＴ  ５Ｇｙは、アイソタイプ対照群と比較して腫瘍の増殖にわずかな影響を及ぼしたが、ＲＴ  １０Ｇｙ、Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２は、腫瘍の進行を遅らせた（図３Ａ及び図３Ｃ）。ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２の組み合わせによる治療は、腫瘍増殖を効果的に制御した（Ｐ＝０．０３４９、ＲＴ  １０Ｇｙ対ＲＴ  １０Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２は、３４日目に１５９７．６±４７４．７ｍｍ３対３２９．４±１５６．５ｍｍ３の腫瘍体積を示す）（図３Ａ）。ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせで治療した腫瘍では、アイソタイプ対照群の１／５匹と比較して、５／５匹が２０００ｍｍ３の体積に達しなかった（図３Ａ）。単回放射線照射の５Ｇｙへの低減は、ＲＴ  ５Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２に明らかな相乗効果がないことを示した（Ｐ＝０．７０８８、３４日目にＥｒｂ−（ＩＬ１０）２  １９４０．２±５３９．７ｍｍ３対ＲＴ  ５Ｇｙ＋Ｅｒｂ−（ＩＬ１０）２  １６５４．３±５０４．４ｍｍ３）（図３Ｃ）。さらに、図３Ｂに示すように、ＲＴ  １０ＧｙとＥｒｂ−（ＩＬ１０）２との組み合わせにより生存率が有意に向上した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７Ｃ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７Ｃ】
2020535145.tif 000039
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７Ｄ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７Ｄ】
2020535145.tif 000040
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７Ｉ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７Ｉ】
2020535145.tif 000041
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７Ｊ
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７Ｊ】
2020535145.tif 000042
【国際調査報告】
2020535145.tif 000043
2020535145.tif 000044
2020535145.tif 000045
2020535145.tif 000046
2020535145.tif 000047
2020535145.tif 000048