(57)【要約】  抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片、それをコードする単離されたポリヌクレオチド、それを含む医薬組成物およびその使用が提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、２、３、７、８、９、１３、１４、１５、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４３、４４、４５、１３６、１４０および１４１からなる群から選択される１つもしくは複数の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ならびに／または配列番号４、５、６、１０、１１、１２、１６、１７、１８、４０、４１、４２、１３７、１３８および１３９からなる群から選択される１つもしくは複数のカッパ軽鎖ＣＤＲ配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈ）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊ）配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋ）配列番号４３、配列番号４４および配列番号４５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌ）配列番号１３６、配列番号２および配列番号３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍ）配列番号７、配列番号１４０および配列番号９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ｎ）配列番号１３、配列番号１４１および配列番号１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ａ）配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、ならびに
ｅ）配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号４３、配列番号４４および配列番号４５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号１３６、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号７、配列番号１４０および配列番号９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｎ）配列番号１３、配列番号１４１および配列番号１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号４３、および配列番号１３６から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４４、配列番号１４０、および配列番号１４１から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｃ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ３配列
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
ａ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号４０および配列番号１３７から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号４１および配列番号１３８から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｃ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号４２および配列番号１３９から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号４３、および配列番号１３６から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４４、配列番号１４０、および配列番号１４１から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、
ｃ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ３配列、
ｄ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号４０および配列番号１３７から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｅ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号４１および配列番号１３８から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｆ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号４２および配列番号１３９から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
配列番号５４、５５、５６、５７、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８および８９からなる群から選択される１つもしくは複数の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列ならびに／または配列番号５８、５９、６０、６１、７４、７５、７６、７７、９０、９１、９２および９３から選択される１つもしくは複数カッパ軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
配列番号５４、７０および８６から選択される重鎖ＦＲ１配列、配列番号５５、７１および８７から選択される重鎖ＦＲ２配列、配列番号５６、７２および８８から選択される重鎖ＦＲ３配列ならびに配列番号５７、７３および８９から選択される重鎖ＦＲ４配列をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
配列番号５８、７４および９０から選択される軽鎖ＦＲ１配列、配列番号５９、７５および９１から選択される軽鎖ＦＲ２配列、配列番号６０、７６および９２から選択される軽鎖ＦＲ３配列ならびに配列番号６１、７７および９３から選択される軽鎖ＦＲ４配列をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３２ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有するそれらの相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１２０、配列番号１２６、配列番号１３０、配列番号１３４ならびに少なくとも８０％の配列同一性を有するそれらの相同配列からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
ａ）配列番号９４を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号９８を含む重鎖可変領域および配列番号１００を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１０２を含む重鎖可変領域および配列番号１０４を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１０６を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号１０８を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１１０を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１１４を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１１６を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１１８を含む重鎖可変領域および配列番号１２０を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１２２を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号１２４を含む重鎖可変領域および配列番号１２６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１２８を含む重鎖可変領域および配列番号１３０を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｎ）配列番号１３２を含む重鎖可変領域および配列番号１３４を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含むが、ＣＤ１９に対する特異的結合親和性を保持する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
置換が、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中、一方もしくは両方の可変領域配列中、および／またはＦｃ領域中にある、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
置換が、
ａ）ＣＤ１９に対する結合親和性の改善、
ｂ）グリコシル化部位の導入または除去、
ｃ）遊離システイン残基の導入、
ｄ）ＡＤＣＣまたはＣＤＣの増強または低減、
ｅ）血清半減期の増大、および
ｆ）ＦｃＲｎ結合の増大
から選択される１つまたは複数の望ましい特性を付与する、請求項１４または１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
免疫グロブリン定常領域、任意選択で、ＩｇＧの定常領域、任意選択で、ヒトＩｇＧ１の定常領域をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
ヒト化抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
二重特異性である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
１つまたは複数のコンジュゲートと連結している、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
コンジュゲートが、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素基質標識を含む、請求項２１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
ＣＤ１９、任意選択で、ヒトまたはサルに由来するＣＤ１９と特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下のＫＤ値で、細胞上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
フローサイトメトリーアッセイによって、０．９ｎＭ以下または１ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
フローサイトメトリーアッセイによって、３ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞上に発現されたカニクイザルＣＤ１９と特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２７】
Ｆａｂ−Ｚａｐアッセイによって、５０ｐＭ以下のＥＣ５０で、ＣＤ１９を発現する細胞によって内部移行されることが可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２８】
同一エピトープについて、Ｗ７０１１−４．１５５．８と競合する抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２９】
先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列。
【請求項３０】
配列番号９５、９９、１０３、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２３、１２５、１２９および１３３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに／もしくは配列番号９７、１０１、１０５、１２１、１２７、１３１および１３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも８０％の配列同一性を有するが、同一タンパク質配列をコードするそれらの相同配列を含む、請求項２９に記載の単離されたポリヌクレオチド配列。
【請求項３１】
請求項２９または３０に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３２】
請求項３１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、請求項３２に記載の宿主細胞を、請求項３１に記載のベクターが発現される条件下で培養することを含む、方法。
【請求項３４】
直接またはリンカーを介して、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体または抗原結合断片と共有結合によって結合された１種または複数の薬物部分を含む抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３５】
リンカーが、ヒドラゾンリンカー、ジスルフィドリンカー、二官能性リンカー、ジペプチドリンカー、グルクロニドリンカー、チオエーテルリンカーであり、任意選択で、リンカーが、ＳＭＣＣである、請求項３４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３６】
少なくとも１種の薬物部分が、抗体またはその抗原結合断片の特定の部位に結合され、任意選択で、特定の部位が、システイン残基である、請求項３４または３５に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３７】
薬物部分が、細胞毒素または放射性同位元素である、請求項３６に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３８】
コンジュゲートが、毒素、任意選択で、細胞毒素、ＤＮＡ−アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤またはその他の抗癌薬、任意選択で、マイタンシノイド細胞傷害性薬剤であり、任意選択で、毒素が、ＤＭ１である、請求項２１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３９】
請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片または請求項３４〜３７のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲートおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４０】
対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態を処置する方法であって、対象に、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項３４〜３７のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲートあるいは請求項３９に記載の医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む、方法。
【請求項４１】
疾患または状態が癌である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
癌が、リンパ腫、肺癌、肝臓癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、黒色腫、神経膠芽腫、前立腺癌、食道癌または胃癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
疾患または状態が、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病、ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）またはワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
投与が、経口、鼻腔内、静脈内、皮下、舌下または筋肉内投与を介する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
対象がヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＤ１９を発現する細胞においてＣＤ１９活性を調節する方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む、方法。
【請求項４７】
ＣＤ１９を発現する細胞を死滅させるｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、請求項３４〜３７のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲートと接触させることを含む、方法。
【請求項４８】
サンプル中のＣＤ１９の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することとを含む、方法。
【請求項４９】
対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）サンプルを、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ１９の存在または量を、対象における疾患または状態と相関させることとを含む、方法。
【請求項５０】
それを必要とする対象における疾患または状態を処置するための医薬の製造における、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片、請求項３４〜３７のいずれかに記載の抗体−薬物コンジュゲートまたは請求項３９に記載の医薬組成物の使用であって、処置することが、対象に抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を投与することを含む、使用。
【請求項５１】
ＣＤ１９関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、請求項１〜２８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項５２】
請求項１〜２８のいずれかに記載の抗原結合断片およびＴ細胞活性化部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、Ｔ細胞活性化部分が、Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインおよびＴ細胞受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項５３】
抗原結合断片が、ｓｃＦｖである、請求項５２に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項５４】
請求項５２に記載のＣＡＲをコードする核酸配列。
【請求項５５】
Ｔ細胞受容体の膜貫通ドメインおよびＴ細胞受容体のシグナル伝達ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド配列に作動可能に連結された、請求項２９または３０に記載のポリヌクレオチド配列を含む、請求項５４に記載の核酸配列。
【請求項５６】
請求項５４または５５に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項５７】
請求項５２に記載のＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞。
【請求項５８】
対象におけるＣＤ１９を発現する標的に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法であって、対象に、請求項５７に記載のＴ細胞の有効量を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、概して、新規抗ＣＤ１９抗体およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ１９（分化抗原群１９）は、それだけには限らないが、低悪性度から高悪性度形態までのＢ細胞リンパ腫のすべてのサブタイプならびにＢ細胞慢性リンパ性白血病および非Ｔ急性リンパ性白血病、プレＢ細胞、発生初期のＢ細胞（すなわち、未熟Ｂ細胞）、形質細胞への最終分化によって成熟したＢ細胞および悪性Ｂ細胞を含むＢ細胞の表面に発現された、構造的に別個の細胞表面受容体である。ＣＤ１９は、ほとんどのプレＢ急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病、ヘアリー細胞白血病、一般的な急性リンパ性白血病およびいくつかのヌル急性リンパ性白血病によって発現される（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１：２４４−２５０（１９８３）、Ｌｏｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７０：１３１６−１３２４（１９８７）、Ｕｃｋｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，７１：１３−２９（１９８８）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４．Ｂｌｏｏｄ，６３：１４２４−１４３３（１９８４）、Ｓｃｈｅｕｅｒｍａｎｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１８：３８５−３９７（１９９５））。形質細胞でのＣＤ１９の発現は、分化したＢ細胞腫瘍、例えば、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ワルデンストレーム腫瘍上で発現され得ることをさらに示唆する（Ｇｒｏｓｓｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．，１０２：５０９−１５（１９９８）、Ｔｒｅｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，３０：２４８−５２（２００３））。ＣＤ１９はまた、免疫療法のための多数の提案された標的のうちの１つであった。ＣＤ２０（別のＢ細胞表面受容体）とは異なり、ＣＤ１９は、高レベルで発現され、抗ＣＤ１９抗体によって結合されると細胞によって内部移行されると考えられている。
【０００３】
新規抗ＣＤ１９抗体、特に、好都合な内部移行能および高い結合親和性を有するものが依然として必要である。
【発明の概要】
【０００４】
本開示を通じて、冠詞「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、本明細書において、冠詞の文法的対象の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「１種の抗体」は、１種の抗体または１種より多い抗体を意味する。
【０００５】
本開示は、新規モノクローナル抗ＣＤ１９抗体、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列ならびにその使用を提供する。
【０００６】
一態様では、本開示は、配列番号１、２、３、７、８、９、１３、１４、１５、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４３、４４、４５、１３６、１４０および１４１からなる群から選択される１つもしくは複数の（例えば、１、２もしくは３つの）重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ならびに／または配列番号４、５、６、１０、１１、１２、１６、１７、１８、４０、４１、４２、１３７、１３８および１３９からなる群から選択される１つもしくは複数の（例えば、１、２もしくは３つの）カッパ軽鎖ＣＤＲ配列を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０００７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、３、７、８、９、１３、１４、１５、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４３、４４、４５、１３６、１４０、または１４１の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つの重鎖ＣＤＲ配列を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４、５、６、１０、１１、１２、１６、１７、１８、４０、４１、４２、１３７、１３８または１３９の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【０００８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈ）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊ）配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋ）配列番号４３、配列番号４４および配列番号４５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌ）配列番号１３６、配列番号２および配列番号３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍ）配列番号７、配列番号１４０および配列番号９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ｎ）配列番号１３、配列番号１４１および配列番号１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【０００９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１６、配列番号１７および／または配列番号１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、ならびに
ｅ）配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む。
【００１０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１４および配列番号１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２０および配列番号２１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号３７、配列番号３８および配列番号３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４０、配列番号４１および配列番号４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号４３、配列番号４４および配列番号４５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号１３６、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号７、配列番号１４０および配列番号９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｎ）配列番号１３、配列番号１４１および配列番号１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む。
【００１１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【００１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号４３、および配列番号１３６から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４４、配列番号１４０、および配列番号１４１から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｃ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号４０および配列番号１３７から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号４１および配列番号１３８から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｃ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号４２および配列番号１３９から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２２、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３１、配列番号３４、配列番号３７、配列番号４３、および配列番号１３６から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２６、配列番号２９、配列番号３２、配列番号３５、配列番号３８、配列番号４４、配列番号１４０、および配列番号１４１から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、
ｃ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３６、配列番号３９、および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ３配列、
ｄ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号４０、および配列番号１３７から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｅ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号４１、および配列番号１３８から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
ｆ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号４２および配列番号１３９から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５４、５５、５６、５７、７０、７１、７２、７３、８６、８７、８８および８９からなる群から選択される１つもしくは複数（例えば、１、２、３もしくは４つ）の重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列ならびに／または配列番号５８、５９、６０、６１、７４、７５、７６、７７、９０、９１、９２および９３から選択される１つもしくは複数（例えば、１、２、３もしくは４つ）のカッパ軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列をさらに含む。
【００１６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５４、７０および８６から選択される重鎖ＦＲ１配列、配列番号５５、７１および８７から選択される重鎖ＦＲ２配列、配列番号５６、７２および８８から選択される重鎖ＦＲ３配列ならびに／または配列番号５７、７３および８９から選択される重鎖ＦＲ４配列をさらに含む。
【００１７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５８、７４および９０から選択される軽鎖ＦＲ１配列、配列番号５９、７５および９１から選択される軽鎖ＦＲ２配列、配列番号６０、７６および９２から選択される軽鎖ＦＲ３配列ならびに／または配列番号６１、７７および９３から選択される軽鎖ＦＲ４配列をさらに含む。
【００１８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３２および少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）の配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【００１９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１２０、配列番号１２６、配列番号１３０、配列番号１３４および少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）の配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９４、９８、１０２、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２２、１２４、１２８および１３２からなる群から選択される重鎖可変領域配列のすべてもしくは一部および／または配列番号１００、１０４、１２０、１２６、１３０および１３４からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のすべてもしくは一部を含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９４、９８、１０２、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２２、１２４、１２８および１３２からなる群から選択される重鎖可変領域のすべてまたは一部からなる単一ドメイン抗体である。
【００２１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号９４を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号９８を含む重鎖可変領域および配列番号１００を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１０２を含む重鎖可変領域および配列番号１０４を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１０６を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号１０８を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１１０を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１１２を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１１４を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１１６を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号１１８を含む重鎖可変領域および配列番号１２０を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号１２２を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号１２４を含む重鎖可変領域および配列番号１２６を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１２８を含む重鎖可変領域および配列番号１３０を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｎ）配列番号１３２を含む重鎖可変領域および配列番号１３４を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む。
【００２２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のアミノ酸残基置換をさらに含むが、ＣＤ１９に対して特異的結合親和性を保持する。
【００２３】
特定の実施形態では、置換は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中、一方もしくは両方の可変領域配列中、および／またはＦｃ領域中にある。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列中、ＦＲ配列中、可変領域配列中またはＦｃ領域中の置換のうち少なくとも１つ（またはすべて）は、保存的置換を含む。
【００２４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、および１４１から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。
【００２５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２および９３から選択される１つまたは複数のＦＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９４、９８、１０２、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２２、１２４、１２８および１３２から選択される重鎖可変領域配列のＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列中に合計１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下の置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９６、１００、１０４、１２０、１２６、１３０および１３４から選択される軽鎖可変領域配列のＦＲ中に合計で１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。
【００２６】
特定の実施形態では、置換は、ａ）ＣＤ１９に対する結合親和性の改善、ｂ）グリコシル化部位の導入または除去、ｃ）遊離システイン残基の導入、ｄ）ＡＤＣＣまたはＣＤＣの増強または低減、ｅ）血清半減期の増大およびｆ）ＦｃＲｎ結合の増大から選択される１つまたは複数の望ましい特性を付与する。
【００２７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧの定常領域を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウスＩｇＧ１、マウスＩｇＧ２ａ、マウスＩｇＧ２ｂまたはヒトＩｇＧ１の定常領域を含む。
【００２８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、非ヒト（例えば、マウスまたはげっ歯類）抗体またはヒト化抗体である。
【００２９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。
【００３０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性である。
【００３１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のコンジュゲートと連結している。特定の実施形態では、コンジュゲートは、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素基質標識を含む。特定の実施形態では、コンジュゲートは毒素である。特定の実施形態では、毒素は、細胞毒素、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤またはその他の抗癌薬である。特定の実施形態では、抗癌薬は、マイタンシノイド細胞傷害性薬剤である。特定の実施形態では、毒素はＤＭ１である。
【００３２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ１９と特異的に結合可能である。特定の実施形態では、ＣＤ１９は、マウス、ラット、サルまたはヒトに由来する。
【００３３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下、１×１０−９Ｍ以下、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１×１０−１０Ｍ以下のＫＤ値で、細胞上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合可能である。
【００３４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって０．０４ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下または１ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合可能である。
【００３５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって０．２ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、１ｎＭ以下、２ｎＭ以下または３ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞上に発現されたカニクイザルＣＤ１９と特異的に結合可能である。
【００３６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ−Ｚａｐアッセイによって１ｐＭ以下、２ｐＭ以下、３ｐＭ以下、４ｐＭ以下、５ｐＭ以下、６ｐＭ以下、７ｐＭ以下、８ｐＭ以下、９ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１１ｐＭ以下、１２ｐＭ以下、１３ｐＭ以下、１４ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１６ｐＭ以下、１７ｐＭ以下、１８ｐＭ以下、１９ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、２１ｐＭ以下、２２ｐＭ以下、２３ｐＭ以下、２４ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下または５０ｐＭ以下のＥＣ５０で、ＣＤ１９を発現する細胞によって内部移行されることが可能である。
【００３７】
一態様では、本開示は、同一エピトープについて、Ｗ７０１１−４．１５５．８、Ｗ７０１１−４．２０２．９またはＷ７０１１−４．２２５．７と競合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００３８】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片の治療効果を増強可能である、および／または抗体またはその抗原結合断片の副作用を低減可能である、第２の薬剤をさらに含む。
【００３９】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドをさらに提供する。特定の実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号９５、９９、１０３、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２３、１２５、１２９および１３３からなる群から選択されるヌクレオチド配列、ならびに／もしくは配列番号９７、１０１、１０５、１２１、１２７、１３１および１３５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）の配列同一性を有するが、同一タンパク質配列をコードするそれらの相同配列を含む。
【００４０】
一態様では、本開示は、前記の単離されたポリヌクレオチドを含むベクターをさらに提供する。
【００４１】
一態様では、本開示は、前記ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
【００４２】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、前記宿主細胞を、前記ポリヌクレオチドが発現される条件下で培養することを含む方法をさらに提供する。
【００４３】
一態様では、本開示は、直接またはリンカーを介して、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片と共有結合によって結合された１種または複数の薬物部分を含む抗体−薬物コンジュゲートをさらに提供する。特定の実施形態では、リンカーは、ヒドラゾンリンカー、ジスルフィドリンカー、二官能性リンカー、ジペプチドリンカー、グルクロニドリンカー、チオエーテルリンカーである。特定の実施形態では、リンカーはＳＭＣＣである。
【００４４】
特定の実施形態では、少なくとも１種の薬物部分は、抗体またはその抗原結合断片の特定の部位に結合される。特定の実施形態では、特定の部位は、システイン残基である。特定の実施形態では、薬物部分は、毒素または放射性同位元素である。特定の実施形態では、薬物部分は、毒素、任意選択で、細胞毒素、ＤＮＡ−アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤またはその他の抗癌薬、任意選択で、マイタンシノイド細胞傷害性薬剤であり、任意選択で、毒素はＤＭ１である。
【００４５】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片または本明細書において提供される抗体−薬物コンジュゲートおよび医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【００４６】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態を治療する方法であって、対象に、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片、本明細書において提供される抗体−薬物コンジュゲート、あるいは本明細書において提供される医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む方法をさらに提供する。特定の実施形態では、対象はヒトである。特定の実施形態では、投与は、経口、鼻腔内、静脈内、皮下、舌下または筋肉内投与を介する。特定の実施形態では、前記疾患または状態は、癌である。特定の実施形態では、前記癌は、リンパ腫、肺癌、肝臓癌、子宮頸癌、結腸癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、黒色腫、神経膠芽腫、前立腺癌、食道癌または胃癌である。特定の実施形態では、前記疾患または状態は、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病、ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）またはワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）を含む。
【００４７】
一態様では、本開示は、ＣＤ１９を発現する細胞においてＣＤ１９活性を調節する方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法をさらに提供する。
【００４８】
一態様では、本開示は、ＣＤ１９を発現する細胞を死滅させるｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体−薬物コンジュゲートと接触させることを含む方法をさらに提供する。
【００４９】
一態様では、本開示は、サンプル中のＣＤ１９の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することとを含む方法をさらに提供する。
【００５０】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ１９の存在または量を、対象における疾患または状態と相関させることとを含む方法をさらに提供する。
【００５１】
一態様では、本開示は、対象における疾患または状態を処置するための医薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用をさらに提供し、処置することは、対象に、抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を投与することを含む。
【００５２】
一態様では、本開示は、ＣＤ１９関連疾患または状態を検出するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用をさらに提供する。
【００５３】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗原結合断片およびＴ細胞活性化部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化部分は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の天然Ｔ細胞活性化部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化部分は、ＴＣＲの膜貫通ドメインおよびＴＣＲの細胞内シグナル伝達形質導入ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。
【００５４】
一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲをコードする核酸を提供する。特定の実施形態では、核酸は、ＴＣＲの膜貫通ドメインおよびＴＣＲの細胞内シグナル伝達形質導入ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド配列に作動可能に連結された、本明細書において提供される抗体の抗原結合断片をコードする第１のポリヌクレオチド配列を含む。
【００５５】
一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを提供する。
【００５６】
一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲを発現する単離されたＴ細胞を提供する。
【００５７】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ１９を発現する標的に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法であって、対象に、本明細書において提供されるＴ細胞の有効量を投与することを含む方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ１およびＷＢＰ７０１−ＢＭＫ２のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。Ｍ：タンパク質マーカー；レーン１：ＢＭＫ１、還元；レーン２：ＢＭＫ２、還元；レーン３：ＢＭＫ１、非還元；レーン４：ＢＭＫ４、非還元。
【図２】図２は、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ３のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。Ｍ：タンパク質マーカー；レーン１：ＢＭＫ３、還元；レーン２：ＢＭＫ３、非還元。
【図３Ａ】図３Ａは、ヒトＣＤ１９によってトランスフェクトされた２９３Ｆ細胞株（ＷＢＰ７０１．２９３Ｆ．ｈＰｒｏ１．ＦＬ．Ａ２）におけるＣＤ１９発現についてのフローサイトメトリーヒストグラムを示す図である。左側のピークは、陰性対照シグナルを表す。右にシフトしたピークは、検出された細胞株におけるＣＤ１９発現を表す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ヒトＣＤ１９によってトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞株（ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＰｒｏ１．ＦＬ．Ｂ４）におけるＣＤ１９発現についてのフローサイトメトリーヒストグラムを示す図である。左側のピークは、陰性対照シグナルを表す。右にシフトしたピークは、検出された細胞株におけるＣＤ１９発現を表す。
【図３Ｃ】図３Ｃは、カニクイザルＣＤ１９によってトランスフェクトされた２９３細胞株（ＷＢＰ７０１．２９３Ｆ．ｃｐｒｏ１．ＦＬ．Ｃ１）におけるＣＤ１９発現についてのフローサイトメトリーヒストグラムを示す図である。左側のピークは、陰性対照シグナルを表す。右にシフトしたピークは、検出された細胞株におけるＣＤ１９発現を表す。
【図３Ｄ】図３Ｄは、カニクイザルＣＤ１９によってトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞株（ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１．ｃｐｒｏ１．ＦＬ．Ｃ９）におけるＣＤ１９発現についてのフローサイトメトリーヒストグラムを示す図である。左側のピークは、陰性対照シグナルを表す。右にシフトしたピークは、検出された細胞株におけるＣＤ１９発現を表す。
【図４Ａ】図４Ａは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図４Ｄ】図４Ｄは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図４Ｅ】図４Ｅは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図４Ｆ】図４Ｆは、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図５Ａ】図５Ａは、ＦＡＣＳによるカニクイザルＣＤ１９を発現する細胞（ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１１．ｃｙｎｏＰｒｏ１）に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ＦＡＣＳによるカニクイザルＣＤ１９を発現する細胞（ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１１．ｃｙｎｏＰｒｏ１）に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図５Ｃ】図５Ｃは、ＦＡＣＳによるカニクイザルＣＤ１９を発現する細胞（ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１１．ｃｙｎｏＰｒｏ１）に対する選択されたサブクローンの結合を示す図である。
【図６Ａ】図６Ａは、選択されたサブクローンのＦａｂ−Ｚａｐアッセイを示す図である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、選択されたサブクローンのＦａｂ−Ｚａｐアッセイを示す図である。
【図６Ｃ】図６Ｃは、選択されたサブクローンのＦａｂ−Ｚａｐアッセイを示す図である。
【図６Ｄ】図６Ｄは、選択されたサブクローンのＦａｂ−Ｚａｐアッセイを示す図である。
【図６Ｅ】図６Ｅは、選択されたサブクローンのＦａｂ−Ｚａｐアッセイを示す図である。
【図７Ａ】図７Ａは、ＦＡＣＳによるＢＭＫ１抗体に対する候補抗体ビニングを示す図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ＦＡＣＳによるＢＭＫ２抗体に対する候補抗体ビニングを示す図である。
【図７Ｃ】図７Ｃは、ＦＡＣＳによるＢＭＫ３抗体に対する候補抗体ビニングを示す図である。
【図８】図８は、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５−ＩｇＧ１ｋのＳｃａｒｃｈａｒｄ結合親和性解析を示す図である。
【図９】図９は、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する抗体ＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１Ｋ  （Ｎ−Ｓ）のＳｃａｒｃｈａｒｄ結合親和性を示す図である。
【図１０】図１０は、ＦＡＣＳによるＲａｍｏｓ細胞に対する抗体Ｗ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１ＫのＳｃａｒｃｈａｒｄ結合親和性を示す図である。
【図１１】図１１は、Ｄａｕｄｉ細胞でのヒト化抗体−薬物コンジュゲートＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋ−ＤＭ１およびＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１Ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１の細胞傷害性アッセイを示す図である。
【図１２】図１２は、Ｎａｌｍ−６細胞でのヒト化抗体−薬物コンジュゲートＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１Ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１の細胞傷害性アッセイを示す図である。
【図１３】図１３は、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞でのヒト化抗体−薬物コンジュゲートヒト化抗体−薬物コンジュゲートＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋ−ＤＭ１およびＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１Ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１の細胞傷害性アッセイを示す図である。
【図１４】図１４は、ベンチマーク抗体（Ｗ７０１１−ＢＭＫ１−ＤＭ１）および抗体（Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１）の抗腫瘍効力を示す図であり、データは、Ｎａｌｍ−６リンパ腫癌異種移植片を有する雌のＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの異なる処置群における腫瘍量を表す。データ点は、平均＋ＳＥＭとして表す。矢印は、投薬日を表す。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本開示の以下の説明は、単に、本開示の種々の実施形態を例示するよう意図される。そのようなものとして、論じられる特定の改変は、本開示の範囲に対する制限と解釈されてはならない。本開示の範囲から逸脱することなく、種々の等価物、変法および改変が行われ得ることは当業者には明らかであり、また、このような同等な実施形態は、本明細書に含まれるべきであるということが理解される。刊行物、特許および特許出願を含む本明細書において引用されたすべての参考文献は、参照によりその全文で本明細書に組み込まれる。
【００６０】
定義
用語「抗体」は、本明細書において、特異的抗原と結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価特異性、一価抗体、多重特異的抗体または二重特異的抗体を含む。天然の無傷の抗体は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物重鎖は、α、δ、ε、γおよびμとして分類され、各重鎖は、可変領域（ＶＨ）および第１の、第２の、および第３の定常領域（それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）からなり、哺乳動物軽鎖は、λまたはκとして分類され、各軽鎖は、可変領域（それぞれ、λ軽鎖についてＶＬまたはκ軽鎖についてＶＫ）および定常領域（それぞれ、λ軽鎖についてＣＬまたはκ軽鎖についてＣＫ）からなる。抗体は、「Ｙ」型を有し、Ｙのステムは、ジスルフィド結合を介して一緒に結合している２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙの各アームは、単一軽鎖の可変および定常領域と結合している単一重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合に関与している。両鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度可変ループを含有する。本明細書において開示される抗体および抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ  ５；１８６（３）：６５１−６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ  ２１−２８；３４２（６２５２）：８７７−８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））によって定義または同定され得る。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりもより高度に保存され、超可変ループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として知られる、両端に位置するストレッチの間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５種の主要なクラスまたはアイソタイプとして、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらは、α、δ、ε、γおよびμ重鎖それぞれの存在を特徴とする。主要な抗体クラスのうちいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分割される。
【００６１】
用語「二価」とは、本明細書において、２つの抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指し、用語「一価」とは、１つのみの単一抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指し、用語「多価」とは、複数の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指す。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、二価である。
【００６２】
本明細書において、「二重特異性」抗体とは、２種の異なるモノクローナル抗体に由来する断片を有し、２種の異なるエピトープと結合可能である人工抗体を指す。２種のエピトープは、同一抗原上に存在する場合も、２種の異なる抗原上に存在する場合もある。
【００６３】
用語「抗原結合断片」とは、本明細書において、１、２または３つのＣＤＲを含む、抗体の一部から形成される抗体断片、または抗原と結合するが無傷の天然抗体構造を含まない任意のその他の抗体断片を指す。抗原結合断片の例として、制限するものではないが、ダイアボディー、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディー（ｄｓダイアボディー）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディー）、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディー、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体が挙げられる。抗原結合断片は、親抗体が結合する同一抗原と結合可能である。
【００６４】
抗体に関して「Ｆａｂ」とは、ジスルフィド結合によって単一重鎖の可変領域および第１の定常領域と結合している単一軽鎖（可変および定常領域の両方）からなる抗体の部分を指す。
【００６５】
「Ｆａｂ’」とは、ヒンジ領域の部分を含むＦａｂ断片を指す。
【００６６】
「Ｆ（ａｂ’）２」とは、Ｆａｂ’の二量体を指す。抗体に関して「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合部位を有する抗体の最小断片を指す。Ｆｖ断片は、単一重鎖の可変領域と結合している単一軽鎖の可変領域からなる。
【００６７】
「ｄｓＦｖ」とは、単一軽鎖の可変領域と単一重鎖の可変領域との間の連結がジスルフィド結合である、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片を指す。いくつかの実施形態では、「（ｄｓＦｖ）２」または「（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖：ジスルフィド橋を介して、ペプチドリンカー（例えば、長い可動性リンカー）によって連結され、それぞれ２つのＶＬ部分と結合している２つのＶＨ部分を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’は、各ジスルフィド対形成された重鎖および軽鎖が、異なる抗原特異性を有する二重特異性である。
【００６８】
「一本鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」とは、互いに直接またはペプチドリンカー配列を介して接続している軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる遺伝子操作された抗体を指す（Ｈｕｓｔｏｎ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８５：５８７９（１９８８））。
【００６９】
抗体に関して「Ｆｃ」とは、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常領域と結合している、第１の重鎖の第２および第３の定常領域からなる抗体の部分を指す。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの種々のエフェクター機能に関与するが、抗原結合における機能に関与しない。
【００７０】
「一本鎖Ｆｖ−Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」とは、抗体のＦｃ領域に接続されたｓｃＦｖからなる遺伝子操作された抗体を指す。
【００７１】
「ラクダ化された単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶＨドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ．ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ  １０；２３１（１−２）：２５−３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７−３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、元々、ラクダ科〔Camelidae〕（ラクダ、ヒトコブラクダおよびラマ）に由来していた。ラクダ化抗体は、軽鎖を欠くが、信頼のおける抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ  ３；３６３（６４２８）：４４６−８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．ｅｔ  ａｌ．“Ｈｅａｖｙ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９−４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３−１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生じた最小の既知抗原結合単位に相当する（Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０−８．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊｕｎ  １５  （２００７））。
【００７２】
「ナノボディー」とは、重鎖抗体に由来するＶＨＨドメインおよび２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片を指す。
【００７３】
「ダイアボディー」または「ｄＡｂ」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を含み、この断片は、同一ポリペプチド鎖中でＶＬドメインと接続しているＶＨドメイン（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）を含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．Ｊｕｌ  １５；９０（１４）：６４４４−８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照のこと）。同一鎖上の２つのドメイン間で対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインが、別の鎖の相補的ドメインと対を形成するようにされ、それによって、２つの抗原結合部位を作製する。抗原結合部位は、同一または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る。特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓダイアボディー」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的とするダイアボディーである。特定の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」とは、別のＶＨ−ＶＬ部分と二量体化されたＶＨ−ＶＬ（ペプチドリンカーによって連結されている）を含み、その結果、一方の部分のＶＨが、もう一方の部分のＶＬと協調し、同一抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る２つの結合部位を形成する、二価ダイアボディーまたは二価ＳｃＦｖ（ＢｓＦｖ）である。その他の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」は、ＶＬ１−ＶＨ２（ペプチドリンカーによって連結されている）と会合しているＶＨ１−ＶＬ２（同様にペプチドリンカーによって連結された）を含み、その結果、ＶＨ１およびＶＬ１が協調し、ＶＨ２およびＶＬ２が協調し、各協調対が異なる抗原特異性を有する二重特異性ダイアボディーである。
【００７４】
「ドメイン抗体」とは、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。特定の例では、２つまたはそれ以上のＶＨドメインは、ペプチドリンカーと共有結合によって結合されて、二価または多価ドメイン抗体を作製する。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同一または異なる抗原を標的とし得る。
【００７５】
用語「キメラ」とは、本明細書において、ある種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部ならびに別の種に由来する重鎖および／または軽鎖の残りを有する抗体または抗原結合断片を意味する。例示的例では、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域および非ヒト動物に由来する、例えば、マウスまたはラットに由来する可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモットまたはハムスターである。
【００７６】
用語「ヒト化」とは、本明細書において、抗体または抗原結合断片が、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、および適用可能な場合には、ヒトに由来する定常領域、を含むことを意味する。
【００７７】
本明細書において、用語「ＣＤ１９」とは、白血病前駆体細胞で検出可能な抗原決定基である、分化抗原群１９タンパク質を指す。ヒトおよびマウスＣＤ１９アミノ酸および核酸配列は、公的データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔおよびＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔにおいて見い出すことができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として見い出すことができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８で見い出すことができる。本明細書において、用語ＣＤ１９は、全長野生型ＣＤ１９の変異、例えば、点変異、断片、挿入、欠失およびスプライス変異体を含むタンパク質を含む。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ性白血病、慢性リンパ球白血病および非ホジキンリンパ腫を含むほとんどのＢ系統癌で発現される。また、Ｂ細胞前駆体の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６−１７）：１１５７−１１６５（１９９７）を参照のこと。一態様では、ＣＤ１９タンパク質は、癌細胞で発現される。
【００７８】
用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、本明細書において、例えば、抗体および抗原の間などの２つの分子間の非ランダム結合反応を指す。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片は、ヒトおよび／またはＣＤ１９と、≦１０−６Ｍ（例えば、≦５×１０−７Ｍ、≦２×１０−７Ｍ、≦１０−７Ｍ、≦５×１０−８Ｍ、≦２×１０−８Ｍ、≦１０−８Ｍ、≦５×１０−９Ｍ、≦４×１０−９Ｍ、≦３×１０−９Ｍ、≦２×１０−９Ｍまたは≦１０−９Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する。本明細書において使用されるＫＤとは、会合速度に対する解離速度の割合（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を指し、これは、それだけには限らないが、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケール熱泳動法、ＨＰＬＣ−ＭＳ法およびフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）法を含む当技術分野で公知の任意の従来法を使用することによって決定することができる。特定の実施形態では、ＫＤ値は、フローサイトメトリー法を使用することによって適宜決定できる。
【００７９】
「結合を遮断する」または「同一エピトープについて競合する」能力とは、本明細書において、抗体または抗原結合断片の、２つの分子（例えば、ヒトＣＤ１９および抗ＣＤ１９抗体）の間の結合相互作用を、任意の検出可能な程度に阻害する能力を指す。特定の実施形態では、２種の分子間の結合を遮断する抗体または抗原結合断片は、２種の分子間の結合相互作用を、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９０％阻害する。特定の実施形態では、この阻害は、６０％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超または９０％超であり得る。
【００８０】
用語「エピトープ」は、本明細書において、抗体が結合する、抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２種の抗体は、抗原について競合結合を示す場合には、抗原内の同一または密接に関連するエピトープと結合し得る。例えば、抗体または抗原結合断片が、参照抗体の、抗原（例えば、ヒト／サルＣＤ１９）との結合を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９０％遮断する場合に、抗体または抗原結合断片は、参照抗体と同一／密接に関連するエピトープと結合すると考えられ得る。
【００８１】
当業者ならば、ヒトモノクローナル抗体が、本開示の抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、およびヒト化抗体Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚｌ−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚｌ（Ｎ−Ｓ）およびＷ７０１１−４．１５５．８−ｚｌ−Ｐ１５）と同一のエピトープと結合するか否かを、前者が後者をＣＤ１９抗原ポリペプチドとの結合から妨げるか否かを確認することによって過度に実験することなく決定することが可能であるということを認識するであろう。本開示の抗体によるＣＤ１９抗原ポリペプチドとの結合が減少することによって示されるように、試験抗体が本開示の抗体と競合する場合には、その２種の抗体は、同一または密接に関連するエピトープと結合する。または、試験抗体のＣＤ１９抗原ポリペプチドとの結合が、本開示の抗体によって阻害される場合には、その２種の抗体は、同一または密接に関連するエピトープと結合する。
【００８２】
本明細書において提供されるような抗体名において使用される種々の記号は、種々の表現のものである：「ｍＩｇＧ２」とは、ＩｇＧ２アイソタイプのマウス定常領域を有する抗体を指し、「ｕＩｇＧ１」とは、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト定常領域を有する抗体を指し、「Ｋ」または「Ｌ」とは、カッパまたはλ軽鎖を使用する抗体を指す。
【００８３】
「保存的置換」とは、アミノ酸配列に関して、アミノ酸残基を、同様の生理化学的特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基と置換することを指す。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ）の間で、中性親水性側鎖を有する残基（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）の間で、酸性側鎖を有する残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間で、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＡｒｇ）の間で、または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅ）の間で行われ得る。当技術分野で公知であるように、保存的置換は、通常、タンパク質のコンホメーション構造において重大な変化を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を保持し得る。
【００８４】
用語「相同体」および「相同な」とは、本明細書において、互換的であり、最適にアラインされた場合に別の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補鎖）またはアミノ酸配列を指す。
【００８５】
「配列同一性パーセント（％）」とは、アミノ酸配列（または核酸配列）に関して、配列をアラインし、必要に応じて、ギャップを導入して、同一アミノ酸（または核酸）の最大数を達成した後に、参照配列中のアミノ酸（または核酸）残基に対して同一である、候補配列中のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と考えられる場合も、考えられない場合もある。アミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトで入手可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２（１９９７）も参照のこと）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで入手可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｄ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３−４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７−８（２００７）も参照のこと）およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なツールを使用することによって達成できる。当業者は、ツールによって提供されたデフォルトパラメータを使用してもよく、またはアラインメントのために必要に応じて、例えば、適したアルゴリズムを選択することなどによって、パラメータをカスタマイズしてもよい。
【００８６】
「エフェクター機能」とは、本明細書において、抗体のＦｃ領域の、そのエフェクター、例えばＣ１複合体およびＦｃ受容体との結合に起因する生物活性を指す。例示的エフェクター機能として、抗体と、Ｃ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって誘導される補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域の、エフェクター細胞上のＦｃ受容体との結合によって誘導される抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および食作用が挙げられる。
【００８７】
本明細書において、「内部移行する」または「内部移行されることが可能である」抗体とは、細胞の表面でのその抗原との結合の際に、細胞によって取り込まれる抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、その表面にＣＤ１９を発現する細胞によって少なくともある程度内部移行され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体は、細胞の表面で発現されたＣＤ１９との結合の際に、Ｂ細胞リンパ腫細胞によって内部移行され得る。内部移行は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで起こり得る。治療適用のためには、ｉｎ  ｖｉｖｏで内部移行が起こり得る。哺乳動物細胞との結合の際に抗体が内部移行するか否かは、以下の実施例において記載されるものを含む種々のアッセイによって決定され得る（例えば、Ｆａｂ−Ｚａｐ法）。抗体が細胞中に内部移行するか否かを検出する方法はまた、参照によりその全文が本明細書に組み込まれる米国特許第７，６１９，０６８号に記載されている。いくつかの実施形態では、内部移行されることが可能である抗体およびその抗原結合断片は、内部移行の際に細胞を死滅させる細胞傷害性部分などの抗癌剤と会合され得る、またはそれにコンジュゲートされ得る。いくつかの例では、抗体または抗体コンジュゲートの効力に応じて、単一抗体分子の細胞中への取り込みは、抗体が結合する標的細胞を死滅させるのに十分である。例えば、ある特定の毒素は、抗体にコンジュゲートされた毒素の１分子の内部移行が腫瘍細胞を死滅させるのに十分であるように、死滅させることにおいて高度に強力である。
【００８８】
状態の「処置すること」または「処置」とは、本明細書において、状態を予防することもしくは軽減すること、状態の発症もしくはその発生の速度を減速すること、状態の発生のリスクを低減すること、状態と関連する症状の発生を予防もしくは遅延すること、状態と関連する症状を低減もしくは終結させること、状態の完全または部分退縮をもたらすこと、状態を治癒することまたはそれらのいくつかの組合せを含む。
【００８９】
「単離された」物質は、天然状態から人の手によって変更されている。「単離された」組成物または物質が天然に生じる場合には、元の環境から変化されている、または取り出されている、または両方である。例えば、生存する動物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離されて」いないが、同一ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、実質的に純粋な状態で存在するようにその天然状態の共存する材料から十分に分離されている場合には「単離されている」。単離された「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、同義的に使用され、単離された核酸分子の配列を指す。特定の実施形態では、「単離された抗体またはその抗原結合断片」は、電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動など）またはクロマトグラフィー法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣなど）によって決定されるものとして、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体または抗原結合断片を指す。
【００９０】
用語「ベクター」とは、本明細書において、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、そのタンパク質の発現を引き起こすように作動可能に挿入され得る媒体を指す。ベクターは、宿主細胞内に運ぶ遺伝要素の発現を引き起こすように、宿主細胞を形質転換、形質導入またはトランスフェクトするために使用され得る。ベクターの例として、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージおよび動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用される動物ウイルスのカテゴリーとして、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルスおよびパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能要素およびリポーター遺伝子を含む、発現を制御するための種々のエレメントを含有し得る。さらに、ベクターは、複製起点を含有し得る。ベクターはまた、限定されるものではないが、ウイルス粒子、リポソームまたはタンパク質コーティングを含む、細胞へのその侵入を補助するための材料を含み得る。ベクターは、発現ベクターまたはクローニングベクターであり得る。本開示は、抗体またはその抗原結合断片をコードする本明細書において提供される核酸配列、その核酸配列と作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ−１α）および少なくとも１つの選択マーカーを含有する、ベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。ベクターの例として、それだけには限らないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、λファージおよびＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８−Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ−Ｈｙｇ−ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ−Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ−ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ  ２．１、ｐＥＦ−１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ−Ｂｏｓなどが挙げられる。
【００９１】
語句「宿主細胞」とは、本明細書において、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターが導入されている細胞を指す。
【００９２】
「ＣＤ１９関連疾患または状態」とは、本明細書において、ＣＤ１９の発現または活性の増大または減少によって引き起こされる、増悪される、そうでなければ、関連している任意の疾患または状態を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９関連状態は、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫として、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病、ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）またはワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）が挙げられる。
【００９３】
「癌」とは、本明細書において、悪性細胞成長または新生物、異常な増殖、浸潤または転移を特徴とする任意の医学的状態を指し、固形腫瘍および非固形癌（血液悪性腫瘍）、例えば、白血病の両方を含む。本明細書において、「固形腫瘍」とは、新生物および／または悪性細胞の固体塊を指す。癌の例として、それだけには限らないが、非小細胞肺癌（扁平上皮／非扁平上皮）、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、卵巣癌、乳癌（基底乳癌腫、乳管癌腫および小葉乳癌腫を含む）、膵臓癌、胃癌腫、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌腫、黒色腫、骨髄腫、菌状息肉腫〔mycoses fungoids〕、メルケル細胞癌、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫およびその他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ系腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌腫、甲状腺髄様癌腫、乳頭様甲状腺癌腫、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞／組織球に富むＢ細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、真性赤血球増加症、肥満細胞由来腫瘍、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病、ＣＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、上咽頭癌腫、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫〔craniopharyogioma〕、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫〔menangioma〕、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【００９４】
用語「医薬上許容される」は、指定された担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤（複数可）および／または塩が、一般に、製剤を含むその他の成分と化学的におよび／または物理的に適合しており、そのレシピエントと生理学的に適合していることを示す。
【００９５】
抗ＣＤ１９抗体
本開示は、ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）、およびＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５から選択される抗ＣＤ１９抗体の１つまたは複数の（例えば、１、２、３、４、５または６つ）のＣＤＲ配列を含む抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片を提供する。本開示を通じて、用語「ＷＢＰ７０１１」は、抗体名に関して、「Ｗ７０１１」と同義的に使用される。例えば、抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１はまた、Ｗ７０１１−４．３４．１１とも呼ばれ、このような名称はまた、同一抗体を指す。
【００９６】
「ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１」とは、本明細書において、配列番号９４の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９７】
「ＷＢＰ７０１１−４．８７．６」とは、本明細書において、配列番号９８の重鎖可変領域および配列番号１００のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９８】
「ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８」とは、本明細書において、配列番号１０２の重鎖可変領域および配列番号１０４のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９９】
「ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１」とは、本明細書において、配列番号１０６の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１００】
「ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０」とは、本明細書において、配列番号１０８の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０１】
「ＷＢＰ７０１１−４．１００．１」とは、本明細書において、配列番号１１０の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０２】
「ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３」とは、本明細書において、配列番号１１２の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０３】
「ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３」とは、本明細書において、配列番号１１４の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０４】
「ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６」は、本明細書において、配列番号１１６の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０５】
「ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０」は、本明細書において、配列番号１１８の重鎖可変領域および配列番号１２０のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０６】
「ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５」は、本明細書において、配列番号１２２の重鎖可変領域および配列番号９６のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０７】
「Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５」は、本明細書において、配列番号１２４の重鎖可変領域および配列番号１２６のカッパ軽鎖可変領域を含む、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８をベースとするヒト化抗体を指す。
【０１０８】
「Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）」は、本明細書において、配列番号１２８の重鎖可変領域および配列番号１３０のカッパ軽鎖可変領域を含む、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８をベースとするヒト化抗体を指す。
【０１０９】
「Ｗ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５」は、本明細書において、配列番号１３２の重鎖可変領域および配列番号１３４のカッパ軽鎖可変領域を含む、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８をベースとするヒト化抗体を指す。
【０１１０】
表１は、これら１１種のマウス抗ＣＤ１９抗体の、ならびに３種のヒト化抗体Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）およびＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５のＣＤＲ配列を示す。重鎖および軽鎖可変領域配列もまた、以下に提供する。
【０１１１】
【表１−１】
2020534012.tif 000003
【表１−２】
2020534012.tif 000004
【０１１２】
ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０またはＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、ならびにヒト化Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）およびＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５抗体の重鎖またはカッパ軽鎖可変領域配列を以下に提供する。
【０１１３】
【化１】
2020534012.tif 000005
【０１１４】
【化２】
2020534012.tif 000006
【０１１５】
【化３】
2020534012.tif 000007
【０１１６】
【化４】
2020534012.tif 000008
【０１１７】
【化５】
2020534012.tif 000009
【０１１８】
【化６】
2020534012.tif 000010
【０１１９】
【化７】
2020534012.tif 000011
【０１２０】
【化８】
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【０１２１】
【化９】
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【０１２２】
【化１０】
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【０１２３】
【化１１】
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【０１２４】
【化１２】
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【０１２５】
【化１３】
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【０１２６】
【化１４】
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【０１２７】
【化１５】
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【０１２８】
【化１６】
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【０１２９】
【化１７】
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【０１３０】
【化１８】
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【０１３１】
【化１９】
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【０１３２】
【化２０】
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【０１３３】
【化２１】
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【０１３４】
【化２２】
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【０１３５】
ＣＤＲは、抗原結合と関与しているとわかっているが、６ＣＤＲのすべてが、不可欠である、または不変であるのではないということがわかっている。言い換えれば、抗ＣＤ１９抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５中の１つ、２つまたは３つのＣＤＲを置き換える、または変更する、または修飾するが、ＣＤ１９に対する特異的結合親和性を実質的に保持することが可能である。
【０１３６】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片は、抗ＣＤ１９抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）、またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５のうちの１種の重鎖ＣＤＲ３配列を含む。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片は、配列番号３、９、１５、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９および４５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。重鎖ＣＤＲ３領域は、抗原結合部位の中心に位置し、したがって、抗原と最も接触し、抗体の抗原に対する親和性に最も自由なエネルギーを提供すると考えられる。また、重鎖ＣＤＲ３は、複数の多様化機序（Ｔｏｎｅｇａｗａ  Ｓ．Ｎａｔｕｒｅ．３０２：５７５−８１）によって長さ、アミノ酸組成およびコンホメーションの点で、抗原結合部位のうち群を抜いて最も多様なＣＤＲであると考えられる。重鎖ＣＤＲ３の多様性は、ほとんどの抗体特異性（Ｘｕ  ＪＬ，Ｄａｖｉｓ  ＭＭ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１３：３７−４５）ならびに望ましい抗原結合親和性（Ｓｃｈｉｅｒ  Ｒ，ｅｔｃ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−６７）をもたらすのに十分である。
【０１３７】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、抗体およびその抗原結合断片が、ＣＤ１９と特異的に結合できる限り、適したフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。表１に提供されるＣＤＲ配列は、マウス抗体から得られるが、それらは、当技術分野で公知の適した方法、例えば、組換え技術を使用して任意の適した種、例えば、中でもマウス、ヒト、ラット、ウサギの任意の適したＦＲ配列にグラフトできる。
【０１３８】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、ヒト化される。ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトにおけるその低減された免疫原性において望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列が、ヒトまたは実質的にヒトＦＲ配列にグラフトされるので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合断片のヒト化は、ヒト免疫グロブリン遺伝子において非ヒト（マウスなど）ＣＤＲ遺伝子を、対応するヒトＣＤＲ遺伝子と置換することによって本質的に実施できる（例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６を参照のこと）。
【０１３９】
当技術分野で公知の方法を使用して、適したヒト重鎖および軽鎖可変ドメインを選択して、この目的を達成できる。例示的例では、「ベストフィット」アプローチを使用でき、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体可変ドメイン配列を、既知ヒト可変ドメイン配列のデータベースに対してスクリーニングまたはＢＬＡＳＴし、非ヒトクエリー配列に対して最も近いヒト配列を同定し、非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして使用する（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ、（１９９３）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照のこと）。あるいは、すべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークを、非ヒトＣＤＲのグラフトのために使用してもよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照のこと）。
【０１４０】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的にすべてのヒト配列から構成されている。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全に、または実質的に、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列、例えば、あるヒト抗体に由来するＦＲ配列および別のヒト抗体に由来する定常領域は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来する場合もある。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖／軽鎖ＦＲ１−４を含む。
【０１４１】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体およびその抗原結合断片は、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚｌ（Ｎ−Ｓ）またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５のうち１つまたは複数のＦＲ配列を含む。以下の表２は、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚｌ（Ｎ−Ｓ）またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５のＦＲ配列を示す。表２には対応する天然マウスＦＲ配列も提供されている。重鎖および軽鎖可変領域配列もまた以下に提供する。
【０１４２】
【表２−１】
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【表２−２】
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【０１４３】
【化２３】
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【０１４４】
【化２４】
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【０１４５】
【化２５】
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【０１４６】
【化２６】
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【０１４７】
【化２７】
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【０１４８】
【化２８】
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【０１４９】
例示的ヒト化抗ＣＤ１９抗体Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５はすべて、ＣＤ３を発現する細胞（例えば、ＣＤ４Ｔ細胞）に対して特異的結合親和性を保持しており、その態様において親マウス抗体に対して少なくとも同等またはさらに良好である。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来するヒト免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトＦＲの１個または複数のアミノ酸残基は、親の非ヒト抗体に由来する対応する残基で置換される。これは、特定の実施形態では、ヒト化抗体またはその断片を非ヒト親抗体構造と密接に近似させるために望ましいことであり得る。特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、各ヒトＦＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換を含む、または重鎖もしくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲ中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基におけるこのような変化は、重鎖ＦＲ領域中のみに、軽鎖ＦＲ領域中のみに、または両鎖に存在し得る。
【０１５１】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３２からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１２０、配列番号１２６、配列番号１３０、配列番号１３４からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片は、重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部および／または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む。一実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片は、本明細書において提供される重鎖可変ドメインのすべてまたは一部からなる単一ドメイン抗体である。このような単一ドメイン抗体のさらなる情報は、当技術分野で入手可能である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照のこと）。
【０１５３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体およびその断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、重鎖および／または軽鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジおよび／またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、Ｃκを含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣなどのエフェクター機能が低減している、または枯渇しているＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂアイソタイプの定常領域を有し、これは、当技術分野で公知の種々のアッセイ、例えば、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイおよび細胞溶解アッセイによって評価できる。
【０１５５】
本明細書において提供される抗体および抗原結合断片の結合親和性は、抗原と抗原結合分子間の結合が平衡に達する時の会合速度に対する解離速度の割合（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を表すＫＤ値によって表すことができる。抗原結合親和性（例えば、ＫＤ）は、例えば、フローサイトメトリーアッセイを含む当技術分野で公知の適した方法を使用して適切に決定できる。いくつかの実施形態では、抗体の、種々の濃度の抗原との結合を、フローサイトメトリーによって決定でき、決定された平均蛍光強度（ＭＦＩ）をまず、抗体濃度に対してプロットすることができ、次いで、Ｐｒｉｓｍバージョン５（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、カリフォルニア州、サンディエゴ）を使用して、特異的結合蛍光強度（Ｙ）および抗体の濃度（Ｘ）の依存関係を１サイト飽和方程式：Ｙ＝Ｂｍａｘ＊Ｘ／（ＫＤ＋Ｘ）（Ｓｃａｒｃｈａｒｄ解析）に適合させることによって、ＫＤ値を算出でき、式中、Ｂｍａｘは、試験抗体の、抗原との最大特異的結合を指す。
【０１５６】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、天然にまたは人為的に細胞表面に発現されたヒト／カニクイザルＣＤ１９と特異的に結合可能である。例えば、ヒト／カニクイザルＣＤ１９ＤＮＡ配列を、発現ベクターにクローニングし、次いで、ヒト／カニクイザルＣＤ１９タンパク質がトランスフェクトされた２９３Ｆ細胞の表面で発現され得るように、２９３Ｆ細胞にトランスフェクトし、そこで発現させることができる。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下、１×１０−９Ｍ以下、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下または１×１０−１０Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）で、細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合可能である。
【０１５８】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、細胞表面上に発現されたカニクイザルＣＤ１９と交差反応する。
【０１５９】
抗体の、細胞上に発現されたＣＤ１９との結合は、その最大効果（例えば、結合または阻害など）の５０％が観察される抗体の濃度を指す「半数最大効果濃度」（ＥＣ５０）値によって表すことができる。ＥＣ５０値は、当技術分野で公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどのサンドイッチアッセイ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリーアッセイおよびその他の結合アッセイによって測定できる。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、フローサイトメトリーアッセイによって０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下または１ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞上に発現されたヒトＣＤ１９と特異的に結合する。
【０１６０】
特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、ヒトＣＤ１９のものと同様の結合親和性で、カニクイザルＣＤ１９と結合する。例えば、例示的抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２２５．７またはＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５の、カニクイザルＣＤ１９との結合は、ヒトＣＤ１９のものと同様の親和性またはＥＣ５０値でである。
【０１６１】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって０．２ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、１ｎＭ以下、２ｎＭ以下または３ｎＭ以下のＥＣ５０で細胞上に発現されたカニクイザルＣＤ１９と特異的に結合する。
【０１６２】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、Ｆａｂ−Ｚａｐアッセイによって、１ｐＭ以下、２ｐＭ以下、３ｐＭ以下、４ｐＭ以下、５ｐＭ以下、６ｐＭ以下、７ｐＭ以下、８ｐＭ以下、９ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１１ｐＭ以下、１２ｐＭ以下、１３ｐＭ以下、１４ｐＭ以下、１５ｐＭ以下、１６ｐＭ以下、１７ｐＭ以下、１８ｐＭ以下、１９ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、２１ｐＭ以下、２２ｐＭ以下、２３ｐＭ以下、２４ｐＭ以下、２５ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、３５ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、４５ｐＭ以下または５０ｐＭ以下のＥＣ５０で、ＣＤ１９を発現する細胞によって内部移行される。
【０１６３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、診断的および／または治療的使用のために提供するのに十分である、ヒトＣＤ１９との特異的結合親和性を有する。いくつかの治療戦略は、臨床使用される抗ヒトＣＤ１９モノクローナル抗体によってＢ細胞を標的化する。
【０１６４】
本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、標識化抗体、二価抗体または抗イディオタイプ抗体であり得る。組換え抗体は、動物においてではなく組換え法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製された抗体である。
【０１６５】
抗体変異体
本開示はまた、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片の種々の種類の変異体を包含する。特定の実施形態では、本開示は、本明細書において提供される例示的抗体の変異体、すなわち、ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１、ＷＢＰ７０１１−４．８７．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１５５．８、ＷＢＰ７０１１＿４．５６．１、ＷＢＰ７０１１−４．１５．１０、ＷＢＰ７０１１−４．１００．１、ＷＢＰ７０１１−４．１０６．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１０８．３、ＷＢＰ７０１１＿４．１９１．６、ＷＢＰ７０１１＿４．１９４．１０、ＷＢＰ７０１１＿４．２３１．５、Ｗ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５、Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１（Ｎ−Ｓ）、またはＷ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−Ｐ１５を包含する。
【０１６６】
特定の実施形態では、抗体変異体は、表１に提供されるような１つ、２つ、または３つのＣＤＲ配列中の１つまたは複数の修飾または置換、表２に提供される１つまたは複数のＦＲ配列、本明細書において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列および／または定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。このような抗体変異体は、その親抗体のＣＤ１９に対する特異的結合親和性を保持するが、修飾（複数可）または置換（複数可）によって付与される１つまたは複数の望ましい特性を有する。例えば、抗体変異体は、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、低減されたグリコシル化のリスク、低減された脱アミノ化、低減されたまたは枯渇したエフェクター機能（複数可）、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増大された薬物動態半減期、ｐＨ感受性および／またはコンジュゲーション（例えば、１個または複数の導入されたシステイン残基）に対する適合性を有し得る。
【０１６７】
当技術分野で公知の方法、例えば、「アラニンスキャニング突然変異誘発」を使用して、親抗体配列を、スクリーニングして、修飾または置換される適したまたは好ましい残基を同定してもよい（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５を参照のこと）。手短には、標的残基（例えば、電荷を有する残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕ）を同定し、中性または負電荷を有するアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えることができ、修飾された抗体を製造し、興味深い特性についてスクリーニングする。特定のアミノ酸位置の置換が、興味深い機能的変化を実証する場合には、その位置を修飾または置換にとって有望な残基と同定できる。同定された有望な残基を、異なる種類の残基（例えば、システイン残基、正電荷を有する残基等）と置換することによってさらに評価してもよい。
【０１６８】
親和性変異体
親和性変異体は、表１に提供されるような１つまたは複数のＣＤＲ配列中の修飾または置換、表２に提供される１つまたは複数のＦＲ配列または本明細書において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列を含有し得る。親和性変異体は、その親抗体のＣＤ１９に対する特異的結合親和性を保持する、または親抗体を上回る．改善されたＣＤ１９特異的結合親和性をさらに有する。特定の実施形態では、ＣＤＲ配列中、ＦＲ配列中または可変領域配列中の少なくとも１つの（またはすべて）の置換は、保存的置換を含む。
【０１６９】
当業者ならば、表１および表２に提供されるＣＤＲ配列およびＦＲ配列において、１個または複数のアミノ酸残基が置換されてもよいが、得られた抗体または抗原結合断片は、ＣＤ１９との結合親和性を依然として保持する、または改善された結合親和性さえ有するということは理解するであろう。当技術分野で公知の種々の方法を使用して、この目的を達成できる。例えば、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体変異体（ＦａｂまたはｓｃＦｖ変異体など）のライブラリーを作製し、発現させ、次いで、ヒトＣＤ１９との結合親和性についてスクリーニングできる。別の例のために、コンピュータソフトウェアを使用して、抗体のヒトＣＤ１９との結合を実質的にシミュレートし、結合面を形成する抗体上のアミノ酸残基を同定できる。このような残基は、結合親和性の低減を防ぐために置換において避けられる場合もあり、より強い結合を提供するために置換の標的とされる場合もある。
【０１７０】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中に１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、親和性変異体は、ＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列中に合計１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下の置換を含む。
【０１７１】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、表１に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つのＣＤＲ配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ１９に対する結合親和性を保持する。
【０１７２】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、表２に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数のＦＲ配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ１９に対する結合親和性を保持する。
【０１７３】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３２、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１２０、配列番号１２６、配列番号１３０、配列番号１３４に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ１９に対する結合親和性を保持する。いくつかの実施形態では、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１０８、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３２、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１２０、配列番号１２６、配列番号１３０、および配列番号１３４から選択される配列において、合計で、１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。
【０１７４】
グリコシル化変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片はまた、グリコシル化変異体を包含し、これは、抗体または抗原結合断片のグリコシル化の程度を増大または減少するために得ることができる。
【０１７５】
抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造）が結合され得る側鎖を有する、１個または複数のアミノ酸残基を含み得る。抗体のグリコシル化は、通常、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、炭水化物部分の、アスパラギン残基、例えば、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）などのトリペプチド配列中のアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースのうち１種の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはトレオニンとの結合を指す。天然グリコシル化部位の除去は、例えば、配列中に存在する、上記のトリペプチド配列のうち１種（Ｎ結合型グリコシル化部位について）またはセリンもしくはトレオニン残基（Ｏ結合型グリコシル化部位について）が置換されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成できる。新規グリコシル化部位は、このようなトリペプチド配列またはセリンもしくはトレオニン残基を導入することによって同様の方法で作製できる。
【０１７６】
システインが遺伝子操作された変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片はまた、システインが遺伝子操作された変異体を包含し、これは、１個または複数の導入された遊離システインアミノ酸残基を含む。
【０１７７】
遊離システイン残基は、ジスルフィド橋の一部ではないものである。システインが遺伝子操作された変異体は、例えば、マレイミドまたはハロアセチルを介した、例えば、中でも、遺伝子操作されたシステインの部位での細胞傷害性および／またはイメージング化合物、標識または放射性同位体とのコンジュゲーションにとって有用である。遊離システイン残基を導入するために抗体または抗原結合断片を遺伝子操作する方法は、当技術分野で公知である、例えば、ＷＯ２００６／０３４４８８を参照のこと。
【０１７８】
Ｆｃ変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片はまた、そのＦｃ領域および／またはヒンジ領域に１個または複数のアミノ酸残基修飾または置換を含むＦｃ変異体を包含する。
【０１７９】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。このような変異体は、リソソームにおける分解から逃れ、次いで、移動され、細胞の外に放出されることを可能にする酸性ｐＨでＦｃＲｎと結合するので、薬物動態半減期の拡大を有し得る。抗体およびその抗原結合断片を遺伝子操作して、ＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は、当技術分野で周知である、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３−７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ  １，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｒｅｇｉｏｎ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９−３２７７（２０１０）；およびＨｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６−３５６（２００６）を参照のこと。
【０１８０】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を変更する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのある特定のアミノ酸残基を、置換して、増強されたＡＤＣＣ活性を提供できる。あるいは、またはさらに、抗体上の炭水化物構造を変更して、ＡＤＣＣ活性を増強できる。抗体エンジニアリングによってＡＤＣＣ活性を変更する方法は、当技術分野で記載されている、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１−６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８−８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５−７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１−５；Ｌａｚａｒ  ＧＡ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５−４０１０；Ｒｙａｎ  ＭＣ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９−３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＪＯ，．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７−２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ  Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６−３４７３を参照のこと。
【０１８１】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、例えば、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改善または減少することによって補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更する、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む（例えば、ＷＯ９９／５１６４２；Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ  Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号、およびＦｃ領域変異体のその他の例に関するＷＯ９４／２９３５１を参照のこと。
【０１８２】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、ヘテロ二量体化を容易にするおよび／または促進するためにＦｃ領域の界面における１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。これらの修飾は、第１のＦｃポリペプチドへの隆起および第２のＦｃポリペプチドへの空洞の導入を含み、ここでは、第１および第２のＦｃポリペプチドの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するために、隆起を空洞中に位置付けることができる。これらの修飾を有する抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。
【０１８３】
抗原結合断片
抗ＣＤ１９抗原結合断片も本明細書において提供される。種々の種類の抗原結合断片が、当技術分野で公知であり、例えば、そのＣＤＲおよびＦＲ配列が表１および２に示されている例示的抗体、その種々の変異体（例えば、親和性変異体、グリコシル化変異体、Ｆｃ変異体、システインが遺伝子操作された変異体など）を含む、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体をベースとして開発することができる。
【０１８４】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗原結合断片は、ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。
【０１８５】
このような抗原結合断片の製造のために種々の技術を使用できる。例示的方法として、無傷の抗体の酵素的消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、大腸菌〔E.Coli〕などの宿主細胞による組換え発現（例えば、Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片のため）、上記で論じられるようなファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖのための）およびＦ（ａｂ’）２断片を形成するための２つのＦａｂ’−ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））が挙げられる。抗体断片の製造のためのその他の技術は、当業者には明らかであろう。
【０１８６】
特定の実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの作製は、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および同５，５８７，４５８号に記載されている。ｓｃＦｖを、アミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質と融合して、融合タンパク質を提供してもよい（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照のこと）。
【０１８７】
本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、標識化抗体、二価抗体または抗イディオタイプ抗体であり得る。組換え抗体は、動物においてではなく組換え法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製された抗体である。
【０１８８】
特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、二重特異性もしくは多価抗体または抗体−薬物コンジュゲートの基材として使用され得る。
【０１８９】
二重特異性抗体、多価抗体
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、二価、四価、六価または多価である。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、単一特異性または二重特異性である。
【０１９０】
用語「価」とは、本明細書において、所与の分子中の指定された数の抗原結合部位の存在を指す。そのようなものとして、用語「二価」、「四価」および「六価」は、抗原結合分子中の、それぞれ、２つの結合部位、４つの結合部位および６つの結合部位の存在を示す。二価分子は、２つの結合部位が両方とも、同一抗原または同一エピトープの特異的結合のためのものである場合に、単一特異性であり得る。同様に、三価分子は、例えば、２つの結合部位が第１の抗原（またはエピトープ）について単一特異性であり、第３の結合部位が、第２の抗原（またはエピトープ）について特異的である場合に二重特異性であり得る。
【０１９１】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、単一特異性であるが、同一抗原またはエピトープに対して特異的である少なくとも２つの結合部位を有する、二価、三価または四価であり得る。これは、特定の実施形態では、一価対応物よりも強力な、抗原またはエピトープとの結合を提供する。特定の実施形態では、二価抗原結合部分では、結合部位の第１の価および結合部位の第２の価は構造的に同一である（すなわち、同一配列を有する）、または構造的に異なっている（すなわち、同一特異性であるが異なる配列を有する）。
【０１９２】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、二重特異性である。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される二重特異性抗体およびその抗原結合断片は、ＣＤ１９に対する第１の特異性、および第２の特異性を有する。いくつかの実施形態では、第２の特異性は、ＣＤ１９に対してであるが、異なるエピトープに対してである。いくつかの実施形態では、第２の特異性は、ＣＤ１９とは異なる第２の抗原に対してであり、近接しているとＣＤ１９を発現する標的細胞に対する免疫応答を容易にするまたは促進することが可能である。例えば、二重特異性抗体は、ＣＤ１９を発現する標的細胞を、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞に近接させ、したがって、免疫系によるこのような標的細胞の認識または排出を促進し得る。
【０１９３】
本明細書において提供される二重特異性抗体および抗原結合断片は、当技術分野で公知の任意の適した方法で作製できる。従来のアプローチでは、異なる抗原特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対を、宿主細胞において同時発現させ、組換え法で二重特異性抗体を製造し（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７（１９８３）を参照のこと）、続いて、アフィニティークロマトグラフィーによって精製できる。
【０１９４】
また、組換えアプローチを使用してもよく、ここでは、２つの特異性の抗体重鎖可変ドメインをコードする配列を、それぞれ免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合し、続いて、発現ベクターに挿入し、それを、二重特異性抗体の組換え発現のために適した宿主細胞に軽鎖配列の発現ベクターとともに同時トランスフェクトする（例えば、ＷＯ９４／０４６９０；Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと）。同様に、ｓｃＦｖ二量体もまた、組換え構築し、宿主細胞から発現させることができる（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）。
【０１９５】
別の方法では、遺伝子融合によって、ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを、２種の異なる抗体のＦａｂ’タンパク質に連結することができる。連結された抗体は、ヒンジ領域で４つの半抗体（すなわち、モノマー）に還元され、次いで、再酸化されてヘテロ二量体を形成する（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２））。
【０１９６】
２つの抗原結合ドメインをコンジュゲートまたは架橋して、二重特異性抗体または抗原結合断片形成してもよい。例えば、１つの抗体をビオチンと、一方で、もう一方の抗体をアビジンとカップリングでき、ビオチンおよびアビジン間の強力な会合は、２つの抗体を一緒にして複合体を形成し、二重特異性抗体を形成する（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／００３７３およびＥＰ０３０８９を参照のこと）。別の例のために、２つの抗体または抗原結合断片を、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるような当技術分野で公知の従来法によって架橋することができる。
【０１９７】
二重特異性抗原結合断片は、二重特異性抗体から、例えば、タンパク質分解による切断によって、または化学的連結によって作製してもよい。例えば、抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ’）を調製し、Ｆａｂ’−チオール誘導体に変換し、次いで、異なる抗原特異性を有する別の変換されたＦａｂ’誘導体と混合し、反応させて、二重特異性抗原結合断片を形成してもよい（例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。
【０１９８】
特定の実施形態では、二重特異性抗体または抗原結合断片を、ノブ・イントゥ・ホール〔knob-into-hole〕会合が形成されて、２つの異なる抗原結合部位のヘテロ二量体化を促進できるように界面で遺伝子操作してもよい。「ノブ・イントゥ・ホール」とは、本明細書において、一方のポリペプチドが、嵩高い側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、チロシンまたはトリプトファン）の存在のために隆起（すなわち、「ノブ」）を有し、もう一方のポリペプチドが、空洞（すなわち、「ホール」）を有し、２種のポリペプチドの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するように、小さい側鎖アミノ酸残基残基（例えば、アラニンまたはトレオニン）および隆起が、空洞中に配置することができるポリペプチド（Ｆｃなど）間の相互作用を指す。ノブ・イントゥ・ホールを用いてポリペプチドを作製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載される。
【０１９９】
コンジュゲート
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片は、コンジュゲートに連結している。コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合断片と結合することができる非タンパク質性部分である。種々のコンジュゲートを、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片と連結してもよいということが考慮される（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと）。これらのコンジュゲートを、その他の方法の中でも、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、ブレンドまたは付加によって抗体または抗原結合断片と連結してもよい。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リンカーを介して１つまたは複数のコンジュゲートと連結している。特定の実施形態では、リンカーは、ヒドラゾンリンカー、ジスルフィドリンカー、二官能性リンカー、ジペプチドリンカー、グルクロニドリンカー、チオエーテルリンカーである。
【０２００】
特定の実施形態では、本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片を、１つまたは複数のコンジュゲートとの結合に利用され得る特定の部位をエピトープ結合部分の外側に含有するように遺伝子操作してもよい。例えば、このような部位は、コンジュゲートとの共有結合を容易にするために、１つまたは複数の反応性アミノ酸残基、例えば、システインまたはヒスチジン残基などを含み得る。
【０２０１】
コンジュゲートは、治療薬（例えば、化学療法剤）、放射性同位元素、検出可能な標識（例えば、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素基質標識）、薬物動態修飾部分または精製部分（磁性ビーズまたはナノ粒子など）であり得る。
【０２０２】
検出可能な標識の例として、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリンまたはテキサスレッド）、酵素基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼまたはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ）、放射性同位元素、その他のランタニド、発光標識、発色団部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子または検出用金を挙げることができる。
【０２０３】
放射性同位元素の例として、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉおよび３２Ｐを挙げることができる。放射性同位元素によって標識された抗体は、受容体によって標的化されるイメージング実験において有用である。
【０２０４】
特定の実施形態では、コンジュゲートは、抗体の半減期を増大するのに役立つ、ＰＥＧなどの薬物動態修飾部分であり得る。その他の適したポリマーとして、例えば、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマーなどが挙げられる。
【０２０５】
特定の実施形態では、コンジュゲートは、磁性ビーズまたはナノ粒子などの精製部分であり得る。
【０２０６】
抗体−薬物コンジュゲート
特定の実施形態では、本開示は、化学療法剤などの細胞傷害性薬剤、薬物、成長阻害剤、毒素または放射性同位元素（すなわち、放射性コンジュゲート）にコンジュゲートされている上記の抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のいずれかを含む抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
【０２０７】
抗体−薬物コンジュゲートは、例えば、癌の処置における細胞傷害性薬剤の局所送達にとって有用であり得る。これは、腫瘍への細胞傷害性薬剤の標的化送達およびそこでの細胞内蓄積を可能にし、これは、これらのコンジュゲートしていない細胞傷害性薬剤の全身投与が、正常細胞に許容されないレベルの毒性をもたらすことがあり、ならびに腫瘍細胞が排除されると考えられる場合に特に有用である（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｌａｎｃｅｔ  ｐｐ．（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３−０５；Ｔｈｏｒｐｅ，（１９８５）“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．ｓ），ｐｐ．４７５−５０６；Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４；Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９７）Ａｄｖ．Ｄｒｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，９７５，２７８）。
【０２０８】
特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、細胞にとって有害である、または細胞に損傷を及ぼし得る、もしくは死滅させ得る任意の薬剤であり得る。特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、任意選択で、細胞毒素、ＤＮＡ−アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤またはその他の抗癌薬である。
【０２０９】
酵素的に活性な細胞毒素の例として、例えば、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖（緑膿菌〔Pseudomonas aeruginosa〕由来）、リシン、アブリン、モデッシン〔modeccin〕、αサルシン、シナアブラギリ〔Aleurites fordii〕タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ〔Phytolaca americana〕タンパク質（ＰＡＲＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ〔momordica charantia〕阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ〔sapaonaria officinalis〕阻害剤、ゲロニン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテセン（例えば、ＷＯ９３／２１２３２を参照のこと）などの細菌毒素および植物毒素が挙げられる。このような大分子毒素は、例えば、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８に記載される当技術分野で公知の方法を使用して本明細書において提供される抗体または抗原結合断片にコンジュゲートされてもよい。
【０２１０】
細胞傷害性薬剤はまた、小分子毒素および薬物、例えば、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊｏｕｒ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１；Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）、マイタンシノイド（ＥＰ１３９１２１３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３）、カリケアマイシン（Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２８；Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２）、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシンおよびその類似体、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカププリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、カリケアマイシン、マイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン、トリコテセンおよびＣＣ１０６５ならびに細胞傷害性活性を有するそれらの誘導体であり得る。
【０２１１】
細胞傷害性薬剤はまた、高度放射性同位元素であり得る。例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性同位元素を抗体とコンジュゲートする方法は、当技術分野で公知であり、例えば、適したリガンド試薬を介してである（例えば、ＷＯ９４／１１０２６；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２，Ｃｏｌｉｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）を参照のこと）。リガンド試薬は、放射性同位元素金属と結合、キレート化、そうでなければ錯体形成できるキレート化リガンドを有し、また、抗体または抗原結合断片のシステインのチオールと反応性である官能基を有する。例示的キレート化リガンドとして、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＴＰＡおよびＴＥＴＡが挙げられる（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ、テキサス州、ダラス）。
【０２１２】
抗体（または抗原結合断片）および細胞傷害性薬剤の本明細書において提供されるコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質を使用して作製され得る。例示的二官能性架橋試薬として、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステル（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）およびビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオム−２，４−ジニトロベンゼンなど）の二官能性誘導体などが挙げられる。
【０２１３】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＲＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣおよびスルホ−ＳＭＰＢおよびＳＶＳＧ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）からなる群から選択されるリンカー試薬を用いて調製される。それらのリンカー試薬は、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、米国、イリノイ州、ロックフォード、２００３−２００４  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ａｎｄ  Ｃａｔａｌｏｇ  ４６７〜４９８頁を参照のこと）。
【０２１４】
特定の実施形態では、リンカーは、特定の生理学的環境下で切断可能であり、それによって、細胞における細胞傷害性薬物の放出が容易になる。例えば、リンカーは、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカーであり得る（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号）。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸残基、例えば、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドを含み得る。リンカー中のアミノ酸残基は、天然または天然に存在しないアミノ酸残基であり得る。このようなリンカーの例として、バリン−シトルリン（ｖｅまたはｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ−ｐｈｅ）、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｙａｌ−ｃｉｔ）、グリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）、バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカロニル（「ｖｃ−ＰＡＢ」）が挙げられる。アミノ酸リンカー成分は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、ＣおよびＤまたはプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断のために、その選択性において設計され、最適化され得る。
【０２１５】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるＡＤＣにおいて、抗体（または抗原結合断片）は、約１対約２０、約１対約６、約２対約６、約３対約６、約２対約５、約２対約４または約３対約４の抗体：薬剤比で、１種または複数の細胞傷害性薬剤にコンジュゲートされる。
【０２１６】
本明細書において提供されるＡＤＣは、当技術分野で公知の任意の適した方法によって調製できる。特定の実施形態では、抗体（または抗原結合断片）の求核性基を、二官能性リンカー試薬とまず反応させ、次いで、細胞傷害性薬剤と連結させる、または逆に、すなわち、まず細胞傷害性薬剤の求核性を二官能性リンカーと反応させ、次いで、抗体と連結する。
【０２１７】
特定の実施形態では、細胞傷害性薬剤は、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片の遊離システインのシステインチオールと反応し得るチオール反応性官能基を含有し得る（または含有するように修飾される）。例示的チオール反応性官能基として、例えば、マレイミド、ヨードアセトアミド、ピリジルジスルフィド、ハロアセチル、スクシンイミジルエステル（例えば、ＮＨＳ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、イソチオシアネート、スルホニルクロリド、２，６−ジクロロトリアジニル、ペンタフルオロフェニルエステルまたはホスホルアミダイトが挙げられる（Ｈａｕｇｌａｎｄ，２００３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，１９９２，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：２；Ｇａｒｍａｎ，１９９７，Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ；Ｍｅａｎｓ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１：２；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．４０−５５，６４３−６７１）。
【０２１８】
細胞傷害性薬剤または抗体を架橋試薬と反応させ、その後、ＡＤＣを形成するためにコンジュゲートしてもよい。例えば、細胞傷害性薬剤のＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル（ＮＨＳ）を前もって形成し、単離し、精製し、および／もしくは特性決定してもよい、またはその場で形成し、抗体の求核性基と反応させてもよい。通常、コンジュゲートのカルボキシル形態は、カルボジイミド試薬のいくつかの組合せ、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミドまたはウロニウム試薬、例えば、ＴｓＴｕ（Ｏ−−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）またはＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、アクチベーター、例えば、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応させることによって活性化され、ＮＨＳエステルをもたらす。いくつかの場合には、細胞傷害性薬剤および抗体は、１ステップでの、その場での活性化およびＡＤＣを形成する反応によって連結されてもよい。その他の活性化および架橋試薬として、ＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾ−１−イル）−１−１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＴＦＦＨ（Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラメチルウロニウム  ２−フルオロ−ヘキサフルオロホスフェート）、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ＥＥＤＱ（２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロ−キノリン）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＰＣＤＩ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ＭＳＮＴ（１−（メシチレン−２−スルホニル）−３−ニトロ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールおよびアリールスルホニルハリド、例えば、トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリドが挙げられる。別の例では、抗体または抗原結合断片は、ビオチンにコンジュゲートされ、次いで、アビジンにコンジュゲートされている第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートされてもよい。
【０２１９】
マイタンシンおよびマイタンシノイド
一実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のいずれかが、１つまたは複数のマイタンシノイド分子にコンジュゲートされる。マイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤〔mitototic inhibitors〕である。
【０２２０】
マイタンシノイド薬物部分として使用するのに適したマイタンシン化合物（例えば、マイタンシノールおよびＣ−３マイタンシノールエステルなど）は、当技術分野で周知であり、公知の方法に従って天然供給源から単離でき、遺伝子工学技術を使用して製造でき（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ（２００２）ＰＮＡＳ  ９９：７９６８−７９７３を参照のこと）、またはマイタンシノールおよびマイタンシノール類似体を公知の方法に従って合成によって調製できる（例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；同第４，２４８，８７０号；同第４２５６，７４６号；同第４，２６０，６０８号；同第４，２６５，８１４号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３０８，２６８号；同第４，３０８，２６９号；同第４，３０９，４２８号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３１７，８２１号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４２４，２１９号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３６２，６６３号；および同第４，３７１，５３３号）を参照のこと。
【０２２１】
適したマイタンシノイドは、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号に、およびその他の本明細書において言及されている特許および非特許刊行物に開示されている。例示的マイタンシノイドとして、芳香環において、またはマイタンシノール分子のその他の位置で修飾されたマイタンシノールおよびマイタンシノール類似体がある、例えば、Ｃ−４９−デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）、Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号および同４，３０７，０１６号）、Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）、Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４，３３１，５９８号）、Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）、Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）、Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号および同４，３１５，９２９号）、Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号および同４，３２２，３４８号）および４，５−デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）を参照のこと。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体にコンジュゲートされているマイタンシノイドは、ＤＭ１（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン）またはＤＭ４（Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−６−メチルマイタンシン）である。
【０２２２】
抗ＣＤ１９抗体−マイタンシノイドコンジュゲートは、抗体またはマイタンシノイド分子のいずれかの生物活性を大幅に減少させることなく、抗体をマイタンシノイド分子に化学的に連結することによって調製できる。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号（その開示内容が、参照により本明細書に明確に組み込まれる）を参照のこと。特定の実施形態では、抗体の機能または溶解度に負に影響を及ぼすことなく、抗体分子あたり平均で１〜４つ、２〜４つまたは３〜４つのマイタンシノイド分子がコンジュゲートされる。
【０２２３】
マイタンシノイド部分は、当技術分野で公知の任意の適したリンカーを介して抗体または抗原結合断片に連結され得る、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同６，４４１，１６３号またはＥＰ特許０４２５  ２３５Ｂ１、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）およびＵＳ２００５／０１６９９３３Ａ１を参照のこと、参照によりそれらの開示内容が本明細書に明確に組み込まれる。本明細書において提供されるＡＤＣにおけるリンカーとして、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基またはエステラーゼ不安定基が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＡＤＣにおけるリンカーは、二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステル（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスヘレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）およびｈｉｓ−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）の二官能性誘導体などである。
【０２２４】
リンカーは、連結の種類に応じて種々の位置でマイタンシノイド分子と結合され得る。例えば、従来のカップリング技術を使用してヒドロキシル基との反応によってエステル結合が形成され得る。反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位およびヒドロキシル基を有するＣ−２０位で起こり得る。好ましい実施形態では、連結は、マイタンシノールまたはマイタンシノール類似体のＣ−３位で形成される。
【０２２５】
アウリスタチンおよびドロスタチン
一実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片のいずれかが、１つまたは複数のドロスタチン、ドロスタチンペプチド類似体および誘導体またはアウリスタチンにコンジュゲートされる（米国特許第５，６３５，４８３号、同５，７８０，５８８号）。ドラスタチンおよびアウリスタチンは、おそらくは微小管動態、ＧＴＰ加水分解ならびに核および細胞分裂の干渉による抗癌および抗真菌活性を有する（例えば、米国特許第５，６６３，１４９号；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５；Ｗｏｙｋｅ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４を参照のこと）。
【０２２６】
例示的アウリスタチンとして、ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦが挙げられる。オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、ＵＳ２００５／０２３８６４９、米国特許第５，６３５，４８３号、同５，７８０，５８８号；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７；Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５；Ｐｅｔｔｉｔ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１  ５：８５９−８６３；およびＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製され得る。
【０２２７】
ドラスタチンまたはオーリスタチン薬物部分は、ペプチド薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を介して抗体と結合され得る（ＷＯ０２／０８８１７２）。
【０２２８】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）組成物
本開示はまた、ＣＤ１９と特異的に結合する本明細書において提供される抗体の抗原結合断片およびＴ細胞活性化部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化部分は、ＴＣＲの天然Ｔ細胞活性化部分を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化部分は、ＴＣＲの膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
【０２２９】
抗原結合断片
いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、それだけには限らないが、本明細書において提供される抗体のうち任意の１つまたは複数に由来する抗原認識ドメインを含む、ＣＤ１９と結合する任意の断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片が、ＣＡＲが最終的に使用される同一種に由来することが有益である。例えば、ヒトにおいて使用するためには、ヒト抗体またはヒト化抗体に由来するＣＡＲにおいて使用される抗原結合断片を有することが有益であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂおよび（Ｆａｂ’）２ならびに二官能性（すなわち、二重特異性）ハイブリッド抗体断片を含む種々のその他の形態で存在し得る（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））。
【０２３０】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインに関して、種々の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインと融合している膜貫通ドメインを含むように設計される。一実施形態では、ＣＡＲ中のドメインの１つと天然に会合している膜貫通ドメインが使用される。いくつかの例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体のその他のメンバーとの相互作用を最小にするために、このようなドメインの、同一または異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとの結合を避けるように、選択され得る、またはアミノ酸置換によって修飾され得る。
【０２３１】
膜貫通ドメインは、天然に由来するか、または合成供給源に由来するかのいずれかであり得る。供給源が天然である場合には、ドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。本発明において特に使用される膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４に由来し得る（すなわち、少なくともその膜貫通領域（複数可）を含む）。いくつかの例では、同様にヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジを含む種々のヒトヒンジが使用され得る。
【０２３２】
一実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であってもよく、その場合には、主に疎水性残基、例えば、ロイシンおよびバリンを含む。一態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインの各末端に見られる。任意選択で、２から１０個のアミノ酸長の間の短いオリゴ−またはポリペプチドリンカーが、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインの間に連結を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは、特に適したリンカーを提供する。
【０２３３】
シグナル伝達ドメイン
本開示のＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが置かれている、Ｔ細胞の正常なＴＣＲエフェクター機能のうち少なくとも１つの活性化に関与している。Ｔ細胞のＴＣＲエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解性活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、用語「シグナル伝達ドメイン」とは、ＴＣＲエフェクター機能シグナルを伝達し、Ｔ細胞に特殊化した機能を発揮するように指示するタンパク質の部分を指す。普通、完全細胞内シグナル伝達ドメインが使用され得るが、多くの場合、全鎖を使用することが使用することが必ずしも必要ではない。エフェクター機能シグナルを伝達する限り、細胞内シグナル伝達ドメインの末端切断型部分が使用される程度まで、このような末端切断型部分が無傷の鎖の代わりに使用されてもよい。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲエフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意の末端切断部分を含むものとする。
【０２３４】
本開示のＣＡＲにおいて使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例は、抗原受容体会合後にシグナル伝達を開始するように協調して作用するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質配列、ならびにこれらの配列の任意の誘導体または変異体および同一の機能的能力を有する任意の合成配列を含む。
【０２３５】
ＴＣＲ単独によって生じたシグナルがＴ細胞の十分な活性化にとって不十分であること、および二次的または共刺激シグナルも必要であることがわかっている。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞質シグナル伝達配列：ＴＣＲ（一次細胞質シグナル伝達配列）による抗原依存性一次活性化を開始するものおよび二次的または共刺激シグナル（二次的細胞質シグナル伝達配列）を提供するために抗原独立的な方法で作用するものによって媒介されるといえる。
【０２３６】
一次細胞内シグナル変換配列は、刺激性方法で、または阻害性方法のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する。刺激性方法で作用する一次細胞内シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフすなわちＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有し得る。
【０２３７】
本発明において特に使用される一次細胞質シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭの例として、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。本発明のＣＡＲ中の細胞質シグナル伝達分子が、ＣＤ３ζに由来する細胞質シグナル伝達配列を含むことが特に好ましい。
【０２３８】
好ましい実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、自身で、または本開示のＣＡＲに関連して有用な任意のその他の所望の細胞質ドメイン（複数可）と組み合わせて、ＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインを含むように設計される。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分および共刺激シグナル伝達領域を含み得る。共刺激シグナル伝達領域とは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要である抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例として、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能と関連する抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。ＣＤ３ζ鎖部分および共刺激シグナル伝達領域は、ランダムに、または指定の順序で互いに連結され得る。任意選択で、例えば、２から１０個のアミノ酸長の間の短いオリゴ−またはポリペプチドリンカーが連結を形成し得る。グリシン−セリンダブレットは、特に適したリンカーを提供する。
【０２３９】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体の抗原結合断片をコードする第１のポリヌクレオチド配列および、任意選択で、ＴＣＲの膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む、本明細書において提供されるＣＡＲをコードする核酸配列をさらに提供する。いくつかの実施形態では、抗原結合断片をコードする配列は、ＴＣＲの膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインをコードする配列に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、シグナル伝達は、共刺激シグナル伝達領域および／またはＣＤ３ζ鎖部分を含む。所望の分子をコードする核酸配列は、当技術分野で公知の組換え法を使用して、例えば、標準技術を使用して、遺伝子を発現する細胞から得たライブラリーをスクリーニングすることによって、それを含むとわかっているベクターから遺伝子を導くことによって、またはそれを含有する細胞および組織から直接単離することによって得ることができる。あるいは、対象の遺伝子は、クローニングするのではなく、合成によって製造することができる。
【０２４０】
一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、細胞に直接形質導入され得る本開示のＣＡＲを発現するレトロウイルスおよびレンチウイルスベクター構築物、または細胞に直接トランスフェクトされ得るＲＮＡ構築物である。
【０２４１】
一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲを発現する単離された宿主細胞を提供する。
【０２４２】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ１９を発現する標的に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法であって、対象に、本明細書において提供されるＣＡＲを発現するＴ細胞の有効量を投与することを含む方法をさらに提供する。
【０２４３】
ポリヌクレオチドおよび組換え法
本開示は、抗ＣＤ１９抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態では、例示的抗体の可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３および／または１３５で示されるような、１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、シーケンシングされる。コードするＤＮＡはまた、合成法によって得ることもできる。
【０２４４】
抗ＣＤ９抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド（例えば、配列番号９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１，１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３および／または１３５に示されるような配列を含む）を、当技術分野で公知の組換え技術を使用して、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のために、または発現のためにベクター中に挿入できる。多数のベクターが入手可能である。ベクター構成成分は、一般に、それだけには限らないが、以下のうち１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１種または複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ−１α）および転写終結配列。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ベクター系として、哺乳動物、細菌、酵母系などが挙げられ、それだけには限らないが、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ，ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＤ１８−Ｔ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ−Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ４２０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２などといったプラスミドならびにその他の実験室および市販のベクターを含む。適したベクターとして、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を挙げることができる。
【０２４６】
抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入できる。本明細書においてベクター中のＤＮＡをクローニングまたは発現させるための適した宿主細胞として、上記の原核生物、酵母またはより高度の真核生物細胞がある。この目的のために適した原核生物として、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、エシェリキア属〔Escherichia〕、例えば、大腸菌〔E.coli〕、エンテロバクター属〔Enterobacter〕、エルウィニア属〔Erwinia〕、クレブシエラ属〔Klebsiella〕、プロテウス属〔Proteus〕、サルモネラ属〔Salmonella〕、例えば、サルモネラ・チフィリウム〔Salmonella typhimurium〕、セラチア属〔Serratia〕、例えば、セラチア・マルセッセンス〔Serratia marcescans〕および赤痢菌属〔Shigella〕ならびにＢ．スブチリス〔subtilis〕およびＢ．リケニフォルミス〔licheniformis〕などのバチルス属〔Bacilli〕、Ｐ．エルジノーサ〔aeruginosa〕などのシュードモナス属〔Pseudomonas〕およびストレプトマイセス属〔Streptomyces〕などの腸内細菌科〔Enterobacteriaceae〕が挙げられる。
【０２４７】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核細胞微生物は、抗ＣＤ１９抗体をコードするベクターの適したクローニングまたは発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ〔Saccharomyces cerevisiae〕または一般的なパン酵母は、下等真核細胞宿主微生物の中で最もよく使用されている。しかし、シゾサッカロミセス・ポンベ〔Schizosaccharomyces pombe〕；例えば、Ｋ．ラクチス〔lactis〕、Ｋ．フラギリス〔fragilis〕（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス〔bulgaricus〕（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィッカーアミー〔wickeramii〕（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチー〔waltii〕（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム〔drosophilarum〕（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス〔thermotolerans〕およびＫ．マーキシアヌス〔marxianus〕などのクリベロミセス属〔Kluyveromyces〕宿主；ヤロウイア属〔yarrowia〕（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス〔Pichia pastoris〕（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ属〔Candida〕；トリコデルマ・リーゼイ〔Trichoderma reesia〕（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ〔Neurospora crassa〕；シュワニオミセス・オクシデンタリス〔Schwanniomyces occidentalis〕などのシュワニオミセス属〔Schwanniomyces〕；および例えば、アカパンカビ属〔Neurospora〕、アオカビ属〔Penicillium〕、トリポクラジウム属〔Tolypocladium〕ならびにＡ．ニデュランス〔A.nidulans〕およびクロコウジカビ〔A.niger〕などのアスペルギルス属〔Aspergillus〕宿主などの糸状菌などの、いくつかのその他の属、種および株が一般に入手可能であり、本明細書において有用である。
【０２４８】
本明細書において提供されるグリコシル化抗体または抗原断片の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。脊椎動物細胞の例として、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株および変異体ならびにヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕（イモムシ）、ネッタイシマカ〔Aedes aegypti〕（蚊）、ヒトスジシマカ〔Aedes albopictus〕（蚊）、キイロショウジョウバエ〔Drosophila melanogaster〕（ショウジョウバエ）およびカイコ〔Bombyx mori〕などの宿主に由来する対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ〔Autographa californica〕ＮＰＶのＬ−１変異体およびカイコ〔Bombyx mori〕ＮＰＶのＢｍ−５株が公的に入手可能であり、このようなウイルスは、本明細書において、本発明に従って、特に、ヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕細胞のトランスフェクションのためにウイルスとして使用され得る。ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマトおよびタバコの植物細胞培養物も宿主として使用され得る。
【０２４９】
しかし、関心は、脊椎動物細胞において最大であり、培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例として、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）；ヒト胚性腎臓株（２９３または懸濁培養における成長のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞腫株（Ｈｅｐ  Ｇ２）がある。いくつかの好ましい実施形態では、宿主細胞は、２９３Ｆ細胞である。
【０２５０】
宿主細胞は、抗ＣＤ１９抗体生成のために上記の発現またはクローニングベクターを用いて形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択するか、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地で培養される。別の実施形態では、抗体は、当技術分野で公知の相同組換えによって生成され得る。
【０２５１】
本明細書において提供される抗体または抗原結合断片を生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地で培養され得る。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．第５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同４，６５７，８６６号；同４，９２７，７６２号；同４，５６０，６５５号；または同５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または再発行米国特許第３０，９８５号に記載される培地のいずれも、宿主細胞のための培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモンおよび／またはその他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸など）、バッファー（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）およびグルコースまたは同等のエネルギー供給源を用いて補給され得る。任意のその他の必要な栄養補助剤もまた、当業者に公知であろう適当な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨなどといった培養状態は、発現のために選択された宿主細胞とともにこれまでに使用されたものであり、当業者には明らかとなろう。
【０２５２】
細胞から調製される抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥ−セルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、塩析およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。
【０２５３】
特定の実施形態では、固層で固定化されたプロテインＡは、抗体およびその抗原結合断片の免疫親和性精製のために使用される。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに応じて変わる。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖をベースとする抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３））。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプに対して、およびヒトγ３に対して推奨される（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．５：１５６７  １５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、最も多くはアガロースであるが、その他のマトリックスが利用可能である。コントロールドポアガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースを用いて達成され得るものよりも迅速な流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合には、精製にはＢａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ．ＴＭ．樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ニュージャージー州、フィリップスバーグ）が有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のためのその他の技術も、回収されるべき抗体に応じて利用可能である。
【０２５４】
任意の予備的精製ステップ（単数または複数）後に、対象の抗体および混入物質を含む混合物は、約２．５〜４．５の間のｐＨの溶出バッファーを使用する、好ましくは、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍの塩）で実施される低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに付され得る。
【０２５５】
医薬組成物
本開示は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片または本明細書において提供される抗体−薬物コンジュゲートおよび１種または複数の医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【０２５６】
本明細書において開示される医薬組成物において使用するための医薬上許容される担体として、例えば、医薬上許容される液体、ゲルまたは固体担体、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張化剤、バッファー、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁剤／分配剤、封鎖剤またはキレート化剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤または非毒性補助物質、当技術分野で公知のその他の成分またはそれらの種々の組合せを挙げることができる。
【０２５７】
適した成分として、例えば、抗酸化剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、保存料、滑沢剤、香味料、増粘剤、着色剤、乳化剤または糖およびシクロデキストリンなどの安定化剤を挙げることができる。適した抗酸化剤として、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール〔butylated hydroxanisol〕、ブチル化ヒドロキシトルエンおよび／または没食子酸プロピルを挙げることができる。本明細書において開示されるように、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片およびコンジュゲートを含む組成物中に、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含めることによって、抗体または抗原結合断片の酸化が減少される。この酸化の低減は、結合親和性の喪失を防ぐまたは低減し、それによって、抗体安定性を改善し、有効期間を最大化する。したがって、特定の実施形態では、本明細書において開示されるような１種または複数の抗体または抗原結合断片およびメチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含む組成物が提供される。抗体または抗原結合断片を、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤と混合することによって、酸化を防ぐための、有効期間を延長するための、および／または本明細書において提供されるような抗体もしくは抗原結合断片の有効性を改善するための方法がさらに提供される。
【０２５８】
さらに例示するために、医薬上許容される担体として、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、等張性デキストロース注射、滅菌水注射またはデキストロースおよび乳酸リンゲル注射などの水性ビヒクル、植物起源の硬化油、綿実油、トウモロコシオイル、ゴマ油またはピーナッツオイルなどの非水性ビヒクル、静菌性または静真菌性濃度の抗菌剤、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性剤、リン酸またはクエン酸バッファーなどのバッファー、重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、塩酸プロカインなどの局所麻酔、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリビニルピロリドンなどの懸濁剤および分散剤、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０）などの乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）などの封鎖剤またはキレート化剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸を挙げることができる。担体として利用される抗菌剤を、複数回用量容器中の医薬組成物に添加してもよく、これとして、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンズアルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムが挙げられる。適した賦形剤として、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールを挙げることができる。適した非毒性補助物質として、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解促進剤、または酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンもしくはシクロデキストリンなどの薬剤を挙げることができる。
【０２５９】
医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、丸剤、カプセル剤、錠剤、持続放出製剤または散剤であり得る。経口製剤はとして、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどといった標準担体を挙げることができる。
【０２６０】
特定の実施形態では、医薬組成物は、注射用組成物に製剤化される。注射用医薬組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、エマルジョンまたは液体溶液、懸濁液またはエマルジョンを作製するのに適した固体形態などの任意の従来の形態で調製され得る。注射のための調製物として、注射用に準備された滅菌および／または非発熱性溶液、皮下錠剤を含む、使用直前に溶媒と組み合わされるべく準備された凍結乾燥散剤などの滅菌乾燥可溶性製剤、注射用に準備された滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと組み合わされるべく準備された滅菌乾燥不溶性製剤、ならびに滅菌および／または非発熱性エマルジョンを挙げることができる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。
【０２６１】
特定の実施形態では、単位用量非経口調製物は、アンプル、バイアルまたはニードルを備えたシリンジ中にパッケージングされる。非経口投与用のすべての調製物は、当技術分野で公知であり、実施されるように滅菌および非発熱性でなくてはならない。
【０２６２】
特定の実施形態では、滅菌、凍結乾燥散剤は、適した溶媒中に本明細書において開示されるような抗体または抗原結合断片を溶解することによって調製される。溶媒は、散剤または散剤から調製された再構成された溶液の安定性またはその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有し得る。使用され得る賦形剤として、それだけには限らないが、水、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロースまたはその他の適した薬剤が挙げられる。溶媒は、クエン酸、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムなどのバッファーまたは、一実施形態ではおよそ中性のｐＨの、当業者に公知のその他のこのようなバッファーを含有し得る。当業者に公知の溶液のその後の滅菌濾過と、それに続く標準状態下での凍結乾燥によって、望ましい製剤が提供される。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥のためにバイアル中に配分される。各バイアルは、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片またはその組成物の単一投与量または複数回投与量を含有し得る。バイアルに用量または用量のセットに必要なものを上回る少量（例えば、約１０％）を過剰充填することは、正確なサンプル引き出しおよび正確な投薬を促進するために許容される。凍結乾燥散剤は、約４℃〜室温などの適当な状態下で保存され得る。
【０２６３】
注射水を用いる凍結乾燥散剤の再構成は、非経口投与において使用するための製剤を提供する。一実施形態では、再構成のために滅菌および／または非発熱性水またはその他の液体の適した担体が、凍結乾燥散剤に付加される。正確な量は、与えられている選択された療法に応じて変わり、経験的に決定され得る。
【０２６４】
使用方法
本開示は、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片の治療上有効な量を、それを必要とする対象に投与し、それによって、ＣＤ１９関連状態または障害を処置または予防することを含む治療方法もまた提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９関連状態または障害は、癌である。いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫からなる群から選択され、非ホジキンリンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（ＭＡＬＴ）、小リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病、ＣＬＬ）またはマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）またはワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症（ＷＭ）を含む。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【０２６５】
別の態様では、免疫応答のＣＤ１９の調節から恩恵を受けるであろう対象における状態を処置するための方法であって、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片の治療上有効な量を、それを必要とする対象に投与することを含む方法が、提供される。
【０２６６】
本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片の治療上有効な量は、当技術分野で公知の種々の因子、例えば、対象の体重、年齢、過去の病歴、現在の薬物適用、健康の状態および交差反応の可能性、アレルギー、感受性および有害な副作用、ならびに投与経路および疾患発達の程度などに応じて変わる。投与量は、これらおよびその他の状況または必要条件によって示されるように、当業者（例えば、医師または獣医師）によって比例的に低減または増大され得る。
【０２６７】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるような抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ）の治療上有効な投与量で投与され得る。これらの実施形態のうち特定のものでは、抗体または抗原結合断片は、約５０ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で投与され、これらの実施形態のうち特定のものでは、投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下または０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。特定の実施形態では、投薬量は、治療過程にわたって変化し得る。例えば、特定の実施形態では、初期投薬量は、その後の投薬量よりも高い場合がある。特定の実施形態では、投薬量は、対象の反応に応じて処置過程にわたって変わり得る。
【０２６８】
投与計画は、最適な望ましい応答（例えば、治療的応答）を提供するように調整され得る。例えば、単回用量が投与される場合も、または数回の分割用量が経時的に投与される場合もある。
【０２６９】
本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体および抗原結合断片は、例えば、非経口（例えば、皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内または皮内注射）または非経口ではない（例えば、経口、鼻腔内、眼球内、舌下、直腸内または局所）経路などの当技術分野で公知の任意の経路によって投与され得る。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、単独で、または１種もしくは複数のさらなる治療手段または薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片は、別の治療薬、例えば、化学療法剤または抗癌剤と組み合わせて投与され得る。
【０２７１】
これらの実施形態の特定のものでは、１種または複数のさらなる治療薬と組み合わせて投与される本明細書において開示される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、１種または複数のさらなる治療薬と同時に投与されてもよく、これらの実施形態の特定のものでは、抗体または抗原結合断片およびさらなる治療薬（複数可）は、同一医薬組成物の一部として投与されてもよい。しかし、別の治療薬と「組み合わせて」投与される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、薬剤と同時に、または薬剤と同一組成物中で投与されなくてもよい。別の薬剤に先立って、またはその後に投与される抗ＣＤ１９抗体または抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片および第２の薬剤が、異なる経路によって投与される場合でさえ、その語句が本明細書において使用される場合、その薬剤と「組み合わせて」投与されると考えられる。可能であれば、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片と組み合わせて投与されるさらなる治療薬は、さらなる治療薬の添付文書に列挙されるスケジュールに従って、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３年（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２））もしくは当技術分野で周知のプロトコールに従って投与される。
【０２７２】
本開示は、抗ＣＤ１９抗体またはその抗原結合断片を使用する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＤ１９を発現する細胞の成長を阻害する方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ１９を発現する細胞においてＣＤ１９活性を調節する方法であって、ＣＤ１９を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法をさらに提供する。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本開示は、サンプル中のＣＤ１９の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することとを含む方法をさらに提供する。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ１９の存在または量を決定することと、ｄ）対象におけるＣＤ１９関連疾患または状態の存在を決定することとを含む方法を提供する。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本開示は、任意選択で、検出可能な部分とコンジュゲートされている本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を含むキットを提供する。キットは、ＣＤ１９の検出またはＣＤ１９関連疾患の診断において有用であり得る。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ＣＤ１９関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。
【０２７７】
以下の実施例は、特許請求された本発明をより良好に例示するために提供され、本発明の範囲を制限すると解釈されてはならない。以下に記載されるすべての特定の組成物、材料および方法は、全体で、または一部で本発明の範囲内に入る。これらの特定の組成物、材料および方法は、本発明を制限するものではなく、単に、本発明の範囲内に入る特定の実施形態を例示するものである。当業者は、発明の能力を行使することなく、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の組成物、材料および方法を開発し得る。本発明の範囲内にとどまりながら本明細書に記載される手順において多数の変法を行うことができるということが理解されよう。このような変法が本発明の範囲内に含まれることは本発明者らの意図である。
【実施例】
【０２７８】
［実施例１］材料作製
１．１  参照抗体作製
抗ＣＤ１９参照抗体の可変領域遺伝子（ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ１は、特許ＵＳ２０１４００７２５８７Ａ１におけるｈｕＢ４に対応し、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ２は、特許ＵＳ８２４２２５２Ｂ２におけるｈＢＵ１２に対応し、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ３は、特許ＵＳ８０９７７０３Ｂ２における２１Ｄ４に対応する）を、ヒトＦｃ領域遺伝子を含有する発現ベクターにクローニングした。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ２９３トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ａ１４５２４）を使用して、発現プラスミドをＥｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ａ１４５２７）にトランスフェクトした。細胞を、３７℃インキュベーター中、１３５ｒｐｍで回転するオービタルシェーカープラットフォーム上でＥｘｐｉ２９３発現培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ａ１４３５１０１）で培養した。回収した上清を、プロテインＡカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  １７５４３８０２）を使用して精製した。
【０２７９】
上記の方法に従って作製した参照抗体ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ１、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ２およびＷＢＰ７０１−ＢＭＫ３を、ＳＤＳ  ＰＡＧＥで解析した。図１および２は、３種の作製した参照抗体はすべて、軽鎖および重鎖に対応する、還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける２５ｋＤａおよび５５ｋＤａの見かけの分子量と共に移動することを示した。非還元条件下での主なバンドは、約１５０ＫＤのＭ．Ｗ．を有する全ＩｇＧに対応する。参照抗体の純度は、９５％より高い（図１および２を参照のこと）。
【０２８０】
１．２  ヒトまたはカニクイザルＣＤ１９発現細胞株の作製
全長ヒトまたはカニクイザルＣＤ１９の遺伝子を、ｐｃＤＮＡ３．３ベクターにクローニングした。手短には、１×１０６個／ｍＬの密度の、３０ｍＬの容量のＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ２９３Ｆ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ−Ｒ７９００７）を、Ｐｌａｓｆｅｃｔ試薬（Ｂｉｏｌｉｎｅ−４６０２５）を使用し、３０μｇのＤＮＡを用いてトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、３７℃、８％  ＣＯ２のインキュベーター設定および１００ｒｐｍ振盪速度において培養した。トランスフェクションの２４時間後、４〜１０μｇ／ｍＬの最終濃度のブラストサイジン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−Ａ１１１３９０２）を使用して、安定なプールを作製した。選択されたクローンを、抗ＣＤ１９抗体を使用するＦＡＣＳによって試験した。選択の２〜３継代後、ＰＥがコンジュゲートしている抗ＣＤ１９抗体および抗ＰＥマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ−０１３−０４８−８０１）によって細胞を濃縮した。制限希釈によって安定な単細胞クローンを単離し、抗ＣＤ１９抗体を使用するＦＡＣＳによってスクリーニングした。
【０２８１】
全長ヒトまたはカニクイザルＣＤ１９の遺伝子を、ｐｃＤＮＡ３．３ベクターにクローニングした。次いで、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用して、各発現ベクターを、それぞれＣＨＯ−Ｋ１細胞にトランスフェクトした。細胞を１０％  ＦＢＳを有するＦ１２−Ｋで培養した。トランスフェクションの２４〜４８時間後にブラストサイジンを添加した。選択の２〜３継代後、ＰＥがコンジュゲートしている抗ＣＤ１９抗体および抗ＰＥマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ−０１３−０４８−８０１）によって細胞を濃縮した。制限希釈によって安定な単細胞クローンを単離し、抗ＣＤ１９抗体を使用するＦＡＣＳによってスクリーニングした。
【０２８２】
トランスフェクトされた細胞株のヒトＣＤ１９およびカニクイザルＣＤ１９の発現を、フローサイトメトリーによって抗ＣＤ１９抗体を使用して検出した。トランスフェクトされた細胞株ＷＢＰ７０１．２９３Ｆ．ｈＰｒｏ１．ＦＬ．Ａ２、ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＰｒｏ１．ＦＬ．Ｂ４、ＷＢＰ７０１．ｃＰｒｏ１．２９３Ｆ．ＦＬ．Ｃ１およびＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１．ｃｐｒｏ１．ＦＬ．Ｃ９はすべて、ヒトまたはサルＣＤ１９の高発現を示した（図３Ａ〜３Ｄ）。
【０２８３】
［実施例２］抗体作製
２．１  免疫処置
Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ＣＤ１９がトランスフェクトされた２９３Ｆ細胞を用いて免疫処置した。細胞膜溶解物を、ＣｐＧ−ＯＤＮおよびＡｄｊｕ−ＰｈｏｓまたはＴｉｔｅｒ−Ｍａｘを含むアジュバントと混合した。マウスを、足蹠、皮下または腹膜内経路によって２週間の間隔で２回免疫処置した。高血清力価を有するマウスに、１×１０６個細胞／動物の細胞膜溶解物およびＰＢＳ中１０μｇのＥＣＤタンパク質／動物を用いて最終ブーストを与えた。
【０２８４】
２．２  血清力価検出
血清力価は、フローサイトメトリーによって検出した。９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度で、ＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞を広げた。染色バッファー（１×ＰＢＳ／１％ＢＳＡ）を使用して、マウス血清を、１００倍希釈から出発して１：３の比で希釈した。血清サンプルを細胞とともに、４℃で１時間インキュベートした。細胞を染色バッファーを用いて２回洗浄した後、ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０２８５】
すべてのマウスは、ＣＤ１９特異的力価を示した。ハイブリドーマ融合のために高血清力価を有するマウスを選択した（表３）。
【０２８６】
【表３】
2020534012.tif 000035
【０２８７】
２．３  ハイブリドーマ作製
リンパ節細胞を、一般的な電気融合手順に従って、電気融合によってＳｐ２／０骨髄腫細胞と融合した。細胞融合後、細胞を、２０％ＦＢＳおよび１％  ＨＡＴを有するＤＭＥＭ培地と共に、１×１０４個リンパ球／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングした。プレートを３７℃で１０〜１２日間インキュベートした。
【０２８８】
２．４  抗体スクリーニング
２．４．１  ヒトＣＤ１９との結合
ヒトＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞を、９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。ハイブリドーマ上清をプレートに移し、細胞とともに４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を染色バッファー（ＢＳＡ／１×ＰＢＳ）を用いて２回洗浄した。ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  １１５−１１５−１６４）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０２８９】
２．４．２  カニクイザルＣＤ１９との結合
カニクイザルＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞を、９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。ハイブリドーマ上清をプレートに移し、細胞とともに４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を染色バッファー（ＢＳＡ／１×ＰＢＳ）を用いて２回洗浄した。ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  １１５−１１５−１６４）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０２９０】
２．４．３  内部移行アッセイ
Ｆａｂ−ＺＡＰは、ヤギ抗ヒト一価抗体およびリボソーム不活性化タンパク質、サポリンの化学コンジュゲートである。Ｆａｂ−ＺＡＰは、抗体の内部移行能を調べるために使用される。ハイブリドーマ上清中のＩｇＧ濃度は、ＥＬＩＳＡによって調べた。正規化されたハイブリドーマ上清およびＦａｂ−ＺＡＰを、１：３のモル比で混合した。Ｒａｍｏｓ細胞（５０００個／ウェル）を、種々の濃度のコンジュゲートとともに、３７℃、５％  ＣＯ２インキュベーター中で９６時間インキュベートした。細胞の細胞傷害性は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって調べた。細胞生存力（％）は、以下のように算出した：細胞生存力（％）＝サンプルのＲＬＵ／対照のＲＬＵ×１００％、式中、ＲＬＵは、相対光単位を示す。
【０２９１】
結果：
ハイブリドーマ上清を一次スクリーニングのために使用した。一次結合スクリーニングによって、抗原特異的結合性抗体を生成し得る１１６種のハイブリドーマを同定した。次いで、抗原特異的ハイブリドーマを、ＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞で結合を確認し、親のＣＨＯ−Ｋ１細胞でカウンタースクリーニングした。選択された４０種のハイブリドーマ株を、Ｒａｍｏｓ細胞で結合を確認した。次いで、陽性結合したものを、Ｆａｂ−Ｚａｐアッセイにおいてスクリーニングした。結合および内部移行能に基づいてサブクローニングのために１３種のハイブリドーマ株を選択した。
【０２９２】
２．５  ハイブリドーマのサブクローニング
選択された株各々のハイブリドーマ細胞を、９６ウェルプレートにおいて１個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。プレートを、３７℃、６％ＣＯ２の加湿インキュベーター中で１０〜１２日間維持した。単一クローンを選び取り、ＦＡＣＳによって試験した。
【０２９３】
２．６  アイソタイプ
ＥＬＩＳＡによって抗体アイソタイプを同定した。２μｇ／ｍｌのヤギ抗マウスＩｇＧ１、抗マウスＩｇＧ２ａ、抗マウスＩｇＧ２ｂ、抗マウスＩｇＧ３、抗マウスＩｇＭ抗体を用いて、プレート（Ｎｕｎｃ）を４℃で一晩コーティングした。ブロッキングおよび洗浄後、ハイブリドーマ上清を、コーティングされたプレートに移し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、二次抗体ヤギ抗マウスカッパＨＲＰまたはヤギ抗マウスラムダＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）とともに４５分間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ基質を添加し、２Ｍ  ＨＣｌによって反応を停止させた。マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して４５０ｎＭでの吸光度を読み取った。
【０２９４】
結果：
ハイブリドーマサブクローンを、ＣＤ１９細胞株との結合によって確認し、そのアイソタイプも検出した（表４を参照のこと）。選択されたサブクローンを精製し、結合アッセイ、内部移行アッセイ、ファミリー間結合アッセイおよびビニングアッセイにおいてさらに評価した。
【０２９５】
【表４】
2020534012.tif 000036
【０２９６】
［実施例３］抗体候補特性決定
３．１  抗体精製
回収したハイブリドーマ上清を、ｐＨを７．０に調整した後、プロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ、ＧＥ）にロードした。抗体をグリシンによって溶出し、続いて、１Ｍ  Ｔｒｉｓを使用して直ちに中和した。抗体濃度をＮａｎｏ  Ｄｒｏｐ  （Ｔｈｅｒｍａｌ−Ｆｉｓｈｅｒ）によって試験した。タンパク質の純度を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮｕＰＡＧＥ  ４％〜１２％  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル）およびＨＰＬＣ−ＳＥＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。
【０２９７】
３．２  ＦＡＣＳによる親和性
ＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞またはＲａｍｏｓ細胞を、９６ウェルプレート（ＢＤ）において５×１０４個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。試験されるべき抗体を、染色バッファー（１×ＰＢＳ／１％  ＢＳＡ）で段階希釈し、細胞とともに４℃で１時間インキュベートした。上清を破棄した後、ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  １１５−１１５４−１６４）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。結合しているＩｇＧおよび遊離ＩｇＧ濃度を、定量的ビーズ（ＰＥ蛍光定量化キット、ＢＤ３４０４９５）の蛍光強度に基づいて算出した。ＫＤをスキャッチャード解析法を使用して算出した。
【０２９８】
結果：
選択された候補抗体の親和性を、フローサイトメトリーによってＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞で試験した。ＫＤ値は、表５にまとめられた。すべての候補抗体は、ヒトＣＤ１９に対してナノモル未満の結合親和性を示した。
【０２９９】
【表５】
2020534012.tif 000037
【０３００】
３．３  ヒトＣＤ１９に対する結合
Ｒａｍｏｓ細胞を、９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。精製された抗体を、染色バッファー（１×ＰＢＳ／１％  ＢＳＡ）で段階希釈し、４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を染色バッファー（ＢＳＡ／１×ＰＢＳ）を用いて２回洗浄した。ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  １１５−１１５−１６４）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０３０１】
選択されたサブクローンの結合活性を、フローサイトメトリーによってＲａｍｏｓ細胞で試験した（図４）。結合ＥＣ５０値は表６にまとめられた。すべての候補抗体は、結合アッセイにおいてナノモル未満のＥＣ５０を示した。
【０３０２】
【表６】
2020534012.tif 000038
【０３０３】
３．４  カニクイザルＣＤ１９に対する結合
カニクイザルＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞を、９６ウェルＵ底プレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。精製された抗体を、染色バッファー（１×ＰＢＳ／１％  ＢＳＡ）で段階希釈し、４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を染色バッファー（ＢＳＡ／１×ＰＢＳ）を用いて２回洗浄した。ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  １１５−１１５−１６４）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。次いで、細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファーに再懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０３０４】
候補抗体のカニクイザルＣＤ１９に対する結合活性を、カニクイザルＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞株を使用して評価した（図５）。結合ＥＣ５０値は、表７にまとめられた。すべての選択されたクローンは、カニクイザルＣＤ１９細胞に対する強力な結合を示した。
【０３０５】
【表７】
2020534012.tif 000039
【０３０６】
３．５  内部移行アッセイ
Ｆａｂ−ＺＡＰは、抗体の内部移行能を調べるために使用される。段階希釈された抗体を、１：３のモル比でＦａｂ−Ｚａｐと混合した。Ｒａｍｏｓ細胞（５０００個／ウェル）を、種々の濃度のコンジュゲートとともに、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で９６時間インキュベートした。細胞の細胞傷害性は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって調べた。細胞生存力（％）は、以下のように算出した：細胞生存力（％）＝サンプルのＲＬＵ／対照のＲＬＵ×１００％。
【０３０７】
選択されたサブクローンの内部移行活性を、Ｆａｂ−Ｚａｐアッセイを使用してＲａｍｏｓで試験した（図６）。細胞生存力のＥＣ５０は、表８にまとめられた。すべての候補抗体は、Ｒａｍｏｓ細胞で内部移行でき、Ｆａｂ−ＺａｐアッセイにおいてピコモルのＥＣ５０値を示した。
【０３０８】
【表８】
2020534012.tif 000040
【０３０９】
３．６エピトープビニング
ＣＤ１９がトランスフェクトされた細胞ＷＢＰ７０１．ＣＨＯ−Ｋ１．ｈＰｒｏ１．Ｂ４を、９６ウェルプレート（ＢＤ）において、１×１０５個細胞／ウェルの密度でプレーティングした。試験されるべき抗体を段階希釈し、参照抗体と混合した。混合物をプレートに添加し、４℃で３０分間インキュベートした。洗浄後、ＰＥがコンジュゲートしているヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ）を添加し、４℃、暗所で３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、１００μＬの染色バッファー（１×ＰＢＳ／１％  ＢＳＡ）に懸濁した。フローサイトメトリー（ＢＤ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ）によって蛍光強度を測定し、ＦｌｏｗＪｏによって解析した。
【０３１０】
選択された候補クローンを、ＢＭＫ１、ＢＭＫ２およびＢＭＫ３参照抗体に対する競合結合について試験した。いくつかの候補抗体は、参照抗体のＣＤ１９との結合を遮断できる。Ｗ７０１１−４．１５５．８、Ｗ７０１１−４．２０２．９およびＷ７０１１−４．２２５．７は、参照抗体と競合しない（図７）。競合結合結果に基づいて、抗体は、２つのエピトープビンに割り当てられる（表９）。
【０３１１】
【表９】
2020534012.tif 000041
【０３１２】
抗体クローンをシーケンシングすると、本発明者らは、抗体クローンＷ７０１１−４．１５５．８、Ｗ７０１１−４．２０２．９およびＷ７０１１−４．２２５．７のアミノ酸配列が同一であることを見い出した。抗体クローンのアミノ酸および核酸配列は、詳細な説明の節に列挙されている。
【０３１３】
［実施例４］抗体ヒト化および親和性成熟
４．１  ハイブリドーマシーケンシング
Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ−１５５９６０１８）を使用してハイブリドーマ細胞からＲＮＡを単離した。５’−ＲＡＣＥキット（Ｔａｋａｒａ−２８００１４８８）を使用してｃＤＮＡを増幅し、続いて、３’縮重プライマーおよび３’アダプタープライマー（ＥｘＴａｑ：Ｔａｋａｒａ−ＲＲ００１Ｂ）を使用してＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ断片を、ｐＭＤ１８−Ｔベクター（Ｔａｋａｒａ−Ｄ１０１Ｃ）に挿入し、シーケンシングのために送った（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｂｉｏｓｕｎｅ）。
【０３１４】
ハイブリドーマから得た抗体配列（マウス）は、配列番号９４〜１２３によって示されるとおりである。
【０３１５】
４．２  ヒト化
「ベストフィット」アプローチを使用して、抗体軽鎖および重鎖をヒト化した。軽鎖について、対応するＶ遺伝子のアミノ酸配列を、インハウスヒト生殖系列Ｖ遺伝子データベースに対してブラストした。ヒト化ＶＬ遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ定義を使用して上位ヒットにあるヒトＣＤＲ配列を、マウスＣＤＲ配列と置き換えることによって導かれた。重鎖については、上記の方法に従ってまず４つのヒト化配列が導かれ、軽鎖については、１つのヒト化配列が導かれ、マウスフレームワークをヒト生殖系列Ｖ遺伝子データベースに対してブラストすることによって、３つのさらなる配列が作出された。フレームワークはＫａｂａｔ  ＣＤＲ１がＮ末端の５個のアミノ酸によって拡張された、拡張されたＣＤＲ定義を使用して定義された。上位３ヒットを使用して、ヒト化Ｖ遺伝子の配列を導いた。ヒト化遺伝子を戻し翻訳し、哺乳動物発現のためにコドン最適化し、ＧｅｎｅＡｒｔ  Ｃｏｓｔｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって合成した。合成遺伝子をＩｇＧ発現ベクターに再クローニングし、発現し、精製した。
【０３１６】
４．３  親和性成熟
６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）の各アミノ酸は、ハイブリダイゼーション変異誘発法（Ｋｕｎｋｅｌ，１９８５）を使用して２０種のアミノ酸に個別に変異された。２０種のアミノ酸をコードするＮＮＳコドンを含有するＤＮＡプライマーを使用して、標的化されたＣＤＲ位置各々に変異を導入した。ハイブリダイゼーション変異誘発反応において個々の縮重プライマーを使用した。ＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲの合成生成物をそれぞれプールした。ｓｃＦｖ断片の製造のために、２００ｎｇのプールされたライブラリーＤＮＡをＢＬ２１にトランスフェクトした。
【０３１７】
変異体を、細菌のペリプラズム抽出物を使用する捕獲ＥＬＩＳＡによってまずスクリーニングした。９６ウェルＭａｘｉｓｏｒｐ  Ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ（Ｎｕｎｃ）を、コーティングバッファー（２００ｍＭ  Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．２）中の抗ｃ−ｍｙｃ抗体を用いて４℃で一晩コーティングした。カゼインを用いて室温で１時間のブロッキング後、次いで、ペリプラズム抽出物サンプルをプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ビオチン化ＣＤ１９  ＥＣＤタンパク質を添加し、室温で１時間インキュベートし、続いて、ストレプトアビジン−ＨＲＰとともに１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ基質を添加し、２Ｍ  ＨＣｌによって反応を停止した。マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して４５０ｎＭでの吸光度を読み取った。
【０３１８】
親クローンよりも大きい４５０ｎＭでの光学濃度（ＯＤ）シグナルを示すクローンを、シーケンシングのために選び取った。正規化ｓｃＦｖ濃度下でのＦＡＣＳによってユニークなクローンを確認して、変異体ｓｃＦｖおよび親抗体の相対結合親和性を調べた。
【０３１９】
抗原との結合にとって有益であると決定されたＶＨおよびＶＬにおける点変異をさらに組み合わせて、さらなる結合相乗作用を得た。コンビナトリアル変異体は、ｓｃＦｖとして発現され、捕獲ＥＬＩＳＡを使用してスクリーニングした。親クローンよりも大きい４５０ｎＭでの光学濃度（ＯＤ）シグナルを示すクローンを、シーケンシングし、結合ＦＡＣＳによってさらに確認した。
【０３２０】
４．４  遺伝子操作された抗体の結合親和性
４．４．１  ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５−ＩｇＧ１ｋ
抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１を、ヒト化し、親和性成熟させた。遺伝子操作された抗体ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５の親和性を、ＦＡＣＳによってＲａｍｏｓ細胞で測定した（図８）。ＫＤを、スキャッチャード解析法を使用して算出した。ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５−ＩｇＧ１ｋの親和性は、０．２３ｎＭである。
【０３２１】
４．４．２  ＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）
抗体ＷＢＰ７０１１−４．８７．６をヒト化し、ＰＴＭ危険残基で遺伝子操作した。ＦＡＣＳによってＲａｍｏｓ細胞で最終リード抗体ＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）の親和性を測定した（図９）。ＫＤは、スキャッチャード解析法を使用して算出した。ＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）の親和性は、０．２５ｎＭである。
【０３２２】
４．４．３  Ｗ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋ
抗体Ｗ７０１１−４．１５５．８をヒト化した。ＦＡＣＳによってＣＤ１９がトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞で、ヒト化抗体Ｗ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋの親和性を測定した（図１０）。ＫＤは、スキャッチャード解析法を使用して算出した。Ｗ７０１１−４．１５５．８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋの親和性は、０．８２ｎＭである。
【０３２３】
４．５  遺伝子操作された抗体配列
遺伝子操作された抗体配列は、配列番号１２４〜１３５によって示されるとおりである。
【０３２４】
［実施例５］抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の作製
抗体をＰＢＳ（ｐＨ７．４）バッファーにバッファー交換し、ＤＭＡ（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）と混合した。次いで、ＤＭ１−ＳＭＣＣ（ＢｒｉｇｈｔＧｅｎｅ）を添加し、コンジュゲーションのために混合物を２２℃で穏やかに回転しながらインキュベートした。
【０３２５】
遊離薬物を除去するために、ＡＤＣ生成物を、３０ＫＤａの限外濾過チューブ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してＡＤＣ貯蔵バッファーにバッファー交換した。８回バッファー交換した後、ＡＤＣ生成物を、最終特性決定のために０．２２μｍの膜を用いて濾過した。
【０３２６】
ＡＤＣの濃度を、ＵＶ−ｖｉｓ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて特性決定した。ＤＡＲ値を、ＵＶ−ｖｉｓおよびＳＥＣ−ＨＰＬＣによって決定した。凝集レベルおよび純度を、ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって決定した。遊離薬物を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定した。内毒素レベルは、動的濁度アッセイによって決定した。
【０３２７】
リード抗体を、ＤＭ１とコンジュゲートした。コンジュゲーション後に、濃度、純度、ＤＡＲ、凝集レベルおよび遊離薬物％を評価した（表１０）。
【０３２８】
【表１０】
2020534012.tif 000042
【０３２９】
［実施例６］ＡＤＣの細胞毒性解析
Ｂリンパ腫細胞（５０００個／ウェル）を、種々の濃度のＤＭ１がコンジュゲートしている抗体とともに３７℃で７２時間インキュベートした。細胞の細胞傷害性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって調べた。細胞生存力（％）は、以下のように算出した：細胞生存力（％）＝サンプルのＲＬＵ／対照のＲＬＵ×１００％。
【０３３０】
ＤＭ１がコンジュゲートしている抗体を、Ｄａｕｄｉ、Ｎａｌｍ−６およびＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞での細胞傷害性アッセイにおいて試験した（図１１、１２、１３）。ＥＣ５０値は、表１１、１２および１３にまとめられた。ＡＤＣ  ＷＢＰ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ＩｇＧ１Ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１は、すべての試験した腫瘍細胞で、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ１−ＤＭ１よりも良好な細胞傷害活性を示した。ＡＤＣ  ＷＢＰ７０１１−４．３４．１１−ｚ１−ｍ５−ｕＩｇＧ１Ｋ−ＤＭ１は、ＷＢＰ７０１−ＢＭＫ１−ＤＭ１と同等の細胞傷害活性を示した。
【０３３１】
【表１１】
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【０３３２】
【表１２】
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【０３３３】
【表１３】
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【０３３４】
［実施例７］ＡＤＣの抗腫瘍解析
７．１  細胞培養
Ｎａｌｍ−６腫瘍細胞を、１０％ウシ胎児血清を補給したＲＰＭＩ−１６４０においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで懸濁培養物として、３７℃で加湿雰囲気（９５％空気および５％ＣＯ２）において維持した。腫瘍細胞を、週に２回、日常的に継代培養した。対数増殖期で成長している細胞を回収し、腫瘍接種のためにカウントした。
【０３３５】
７．２  腫瘍接種群割り当て
各マウスに、腫瘍発生のためにＮａｌｍ−６腫瘍細胞（１０００万個＋マトリゲル）を用いて右側腹部に皮下移植した。平均腫瘍容量が１１３ｍｍ３に達した時点で処置を開始した。各群における試験品投与および動物数が、以下の表に示された。
【０３３６】
【表１４】
2020534012.tif 000046
【０３３７】
７．３  知見
この研究における動物の管理および使用を含むプロトコールおよび任意の改正（複数可）または手順は、実施に先立ってＷｕＸｉ  ＡｐｐＴｅｃの施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって概説および承認される。研究の間、動物の管理および使用は、実験動物管理評価協会〔Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care〕（ＡＡＡＬＡＣ）の規則に従って実施された。接種後、動物を罹病率および死亡率について毎日調べた。日常的なモニタリング時に、動物を、可動性、食物および水の消費などの正常挙動、体重増加／減少（体重は毎日測定した）、眼／毛の艶がなくなることに対する腫瘍成長および処置の任意の効果ならびに任意のその他の異常な効果について調べた。各サブセット内の動物数に基づいて、死亡および観察された臨床徴候を記録した。
【０３３８】
７．４  腫瘍測定およびエンドポイント
主要なエンドポイントは、腫瘍成長が遅延され得る、またはマウスが治癒され得るかどうか確かめることであった。腫瘍の大きさをノギスを使用して２次元で週に２回測定し、容量は、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａおよびｂは、それぞれ、腫瘍の長径および短径である）を使用してｍｍ３で表した。次いで、Ｔ／Ｃ値およびＴＧＩの算出のために腫瘍の大きさを使用した。Ｔ／Ｃ値（パーセントで）は、抗腫瘍効果を示し、ＴおよびＣは、それぞれ、２１日目および２８日目の処置群および対照群の平均容量である。ＴＧＩは、式：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００を使用して各群について算出した；Ｔｉは、２１日目および２８日目の処置群の平均腫瘍容量であり、Ｔ０は、処置開始日での処置群の平均腫瘍容量であり、Ｖｉは、２１日目および２８日目での媒体対照群の平均腫瘍容量であり、Ｖ０は、処置開始日での媒体群の平均腫瘍容量である。
【０３３９】
プロトコールに従って、すべての群は、２８日目に停止した。
【０３４０】
すべての動物は、実験期間の間その体重を良好に維持した。
【０３４１】
７．５  Ｎａｌｍ−６リンパ腫癌異種移殖片モデルにおける有効性研究
この研究では、参照抗体−薬物コンジュゲートＷ７０１１−ＢＭＫ１−ＤＭ１およびＷ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１の有効性を、雌のＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスにおけるＮａｌｍ−６リンパ腫癌異種移殖片において評価した。種々の時点でのすべての群の腫瘍量は、図１４に示されている。
【０３４２】
ＰＧ−Ｄ２１で、アイソタイプ対照処置群の平均腫瘍容量は、８４０ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝３６４ｍｍ３、ＴＧＩ＝６６％、ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝３２７ｍｍ３、ＴＧＩ＝７１％、ｐ＜０．００１）のＷ７０１１−ＢＭＫ１−ＤＭ１を用いる処置は、有意な抗腫瘍活性を示した。１ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝３９８ｍｍ３、ＴＧＩ＝６１％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝３８７ｍｍ３、ＴＧＩ＝６２％、ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝３３２ｍｍ３、ＴＧＩ＝７０％、ｐ＜０．００１）のＡＤＣ  Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１はすべて、有意な抗腫瘍活性を示した。
【０３４３】
懸濁液を１週間投薬した後、アイソタイプ対照処置群の平均腫瘍容量は、１２６６ｍｍ３に達した。１ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝５９３ｍｍ３、ＴＧＩ＝５８％、ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝４９９ｍｍ３、ＴＧＩ＝６７％、ｐ＜０．００１）のＷ７０１１−ＢＭＫ１−ＤＭ１を用いる処置は、有意な抗腫瘍活性を示した。１ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝５６２ｍｍ３、ＴＧＩ＝６１％、ｐ＜０．０１）、３ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝５５６ｍｍ３、ＴＧＩ＝６２％、ｐ＜０．０１）および１０ｍｇ／ｋｇ（ＴＶ＝５０２ｍｍ３、ＴＧＩ＝６６％、ｐ＜０．００１）のＡＤＣ  Ｗ７０１１−４．８７．６−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋ（Ｎ−Ｓ）−ＤＭ１はすべて、有意な抗腫瘍活性を示した。
【０３４４】
すべての動物は、実験期間の間その体重を良好に維持した。
【図１】
2020534012.tif 000047
【図２】
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【図３Ａ】
2020534012.tif 000049
【図３Ｂ】
2020534012.tif 000050
【図３Ｃ】
2020534012.tif 000051
【図３Ｄ】
2020534012.tif 000052
【図４Ａ】
2020534012.tif 000053
【図４Ｂ】
2020534012.tif 000054
【図４Ｃ】
2020534012.tif 000055
【図４Ｄ】
2020534012.tif 000056
【図４Ｅ】
2020534012.tif 000057
【図４Ｆ】
2020534012.tif 000058
【図５Ａ】
2020534012.tif 000059
【図５Ｂ】
2020534012.tif 000060
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2020534012.tif 000062
【図６Ｂ】
2020534012.tif 000063
【図６Ｃ】
2020534012.tif 000064
【図６Ｄ】
2020534012.tif 000065
【図６Ｅ】
2020534012.tif 000066
【図７Ａ】
2020534012.tif 000067
【図７Ｂ】
2020534012.tif 000068
【図７Ｃ】
2020534012.tif 000069
【図８】
2020534012.tif 000070
【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2020534012.tif 000076
【配列表】
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【国際調査報告】
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2020534012.tif 000078
2020534012.tif 000079
2020534012.tif 000080
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