(57)【要約】本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンド、脂質（ジアシル脂質）、リンカー（親水性ポリマー、親水性アミノ酸、多糖）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを記載し、例えば、ＣＡＲ発現細胞の増殖を刺激するための、この構築物を使用する組成物および方法が特許請求される。一部の態様では、脂質は、生理的条件下で細胞膜中に挿入する。一部の態様では、脂質は、生理的条件下でアルブミンに結合する。一部の態様では、脂質は、生理的条件下で細胞膜中に挿入し、生理的条件下でアルブミンに結合する。一部の態様では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンパ節に輸送され、常在性抗原提示細胞（ＡＰＣ）の細胞膜中に挿入する脂質を含み、それによって、ネイティブサイトカイン／受容体共刺激シグナルと一緒に、細胞表面上にＣＡＲ−Ｔ細胞リガンドを共提示する。
2020535128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンド；および
前記ＣＡＲリガンドに作動可能に連結した脂質
を含む両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項２】
前記脂質が、生理的条件下で細胞膜中に挿入する、生理的条件下でアルブミンに結合する、またはその両方である、請求項１に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項３】
前記脂質がジアシル脂質である、請求項１または請求項２に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項４】
前記ジアシル脂質が、１２〜３０個の炭化水素単位、１４〜２５個の炭化水素単位、１６〜２０個の炭化水素単位、または１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む、請求項３に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項５】
前記ＣＡＲリガンドが、リンカーを介して前記脂質に作動可能に連結した、請求項１から４のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項６】
前記リンカーが、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項５に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項７】
前記リンカーが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎが２５〜５０の間である、請求項５に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項８】
リンカーを介してジアシル脂質に作動可能に連結したＣＡＲリガンドを含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、前記ジアシル脂質が、１２〜３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含み、前記リンカーが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎが２５〜５０の間である、両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項９】
前記ＣＡＲリガンドがタグである、請求項１から８のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１０】
前記タグが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される、請求項９に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１１】
前記ＣＡＲリガンドが、腫瘍関連抗原またはその断片である、請求項１から８のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１２】
ポリエチレングリコール部分を介してフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）に作動可能に連結した脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１３】
前記脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）であり、前記ポリエチレングリコール部分がＰＥＧ−２０００である、請求項８から１２のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１４】
前記ＣＡＲリガンドがＣＡＲに結合し、前記ＣＡＲが共刺激ドメインを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１５】
前記ＣＡＲが二特異的結合ドメインを含む、請求項１４に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１６】
前記二特異的結合ドメインが、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、または第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、請求項１５に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１７】
前記二特異的結合ドメインが、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、前記ＣＡＲリガンドがタグである、請求項１６に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１８】
前記二特異的結合ドメインが、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、前記ＣＡＲリガンドが、前記第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である、請求項１５に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項１９】
前記ＣＡＲがタグ結合ドメインを含み、前記ＣＡＲリガンドがタグである、請求項１４に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項２０】
前記ＣＡＲが腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、前記ＣＡＲリガンドが、腫瘍関連抗原またはその断片である、請求項１４に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート。
【請求項２１】
請求項１から１９のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲートおよび薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物およびアジュバントを含む免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、請求項２２に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、パターン認識受容体に結合する、請求項２３に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記免疫賦活性オリゴヌクレオチドがＣｐＧを含む、請求項２４に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ｔｏｌｌ様受容体に対するリガンドである、請求項２３に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、請求項２３から２６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記オリゴヌクレオチドリンカーが、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎが０〜２の間である、請求項２７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記脂質がジアシル脂質である、請求項２３から２８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記ジアシル脂質が、１２〜３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
前記アジュバントが、サイクリックジ−ＧＭＰ（ＣＤＧ）である、請求項２２に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
対象においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させる方法であって、前記対象に、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３３】
ＣＡＲ（−）Ｔ細胞の増殖が、前記対象において増加されない、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
それを必要とする対象において腫瘍のサイズを低減もしくは減少させるまたは腫瘍成長を阻害する方法であって、前記対象に、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含み、前記対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがある、方法。
【請求項３５】
がんを有する対象において抗腫瘍応答を誘導する方法であって、前記対象に、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含み、前記対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがある、方法。
【請求項３６】
対象において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答を刺激する方法であって、前記対象に、前記抗原に標的化されたＣＡＲ−Ｔ細胞、および請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３７】
前記免疫応答が、Ｔ細胞媒介性免疫応答または抗腫瘍免疫応答である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記標的細胞集団または標的組織が、腫瘍細胞または腫瘍組織である、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
抗原の発現または発現の上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、前記抗原に標的化されたＣＡＲ−Ｔ細胞、および請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４０】
ＣＡＲ  Ｔ細胞を受ける前に、前記対象に、前記両親媒性リガンドコンジュゲート、前記組成物または前記免疫原性組成物が投与される、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
ＣＡＲ−Ｔ細胞を受けた後に、前記対象に、前記両親媒性リガンドコンジュゲート、前記組成物または前記免疫原性組成物が投与される、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記両親媒性リガンドコンジュゲート、前記組成物または前記免疫原性組成物、およびＣＡＲ−Ｔ細胞が、同時に投与される、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記両親媒性リガンドコンジュゲートが、リンパ節に輸送される、請求項３２から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記両親媒性リガンドコンジュゲートが、鼠径リンパ節および補助リンパ節に輸送される、請求項３２から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記両親媒性リガンドコンジュゲートが、前記リンパ節に輸送されると、抗原提示細胞の膜中に挿入される、請求項３２から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗原提示細胞が、髄質マクロファージ、ＣＤ８＋樹状細胞および／またはＣＤ１１ｂ＋樹状細胞である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＣＡＲリガンドが、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間または少なくとも２５日間にわたって、前記リンパ節中で保持される、請求項３２から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＣＡＲリガンドがタグであり、前記ＣＡＲがタグ結合ドメインを含み、前記方法が、タグ化タンパク質の製剤を投与することをさらに含み、前記タグ結合ドメインが、前記タグ化タンパク質に結合する、請求項３２から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記タグ化タンパク質のタンパク質が、抗体またはその抗原結合性断片である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記タグ結合ドメインが、抗体またはその抗原結合性断片である、請求項４８または請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記タグ化タンパク質の製剤が、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の前に前記対象に投与される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記タグ化タンパク質の製剤が、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与と併せて前記対象に投与される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記タグ化タンパク質の製剤が、前記ＣＡＲ−Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の後に前記対象に投与される、請求項４８から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞が、前記両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の前に投与される、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞が、前記両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の後に投与される、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＣＡＲ−Ｔ細胞が、前記両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与と併せて投与される、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象ががんを有する、請求項３２から３４および４９から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象がヒトである、請求項３２から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および前記組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキット。
【請求項６０】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびに前記医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキット。
【請求項６１】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物ワクチンの投与に関する指示を含む添付文書を含むキット。
【請求項６２】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびに前記医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキット。
【請求項６３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、および前記アジュバントの投与に関する指示をさらに含む、請求項５９または請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
前記アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、請求項６０、６２および６３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６５】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
【請求項６６】
個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
【請求項６７】
個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための医薬の製造における、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、請求項２１に記載の組成物または請求項２３から３１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物の使用。
【請求項６８】
前記両親媒性リガンドコンジュゲート、前記組成物または前記免疫原性組成物を、非腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、または腫瘍内に投与することを含む、請求項３２から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記標的細胞集団または標的組織が、ウイルスに感染した細胞の集団または組織である、請求項３６に記載の方法。
【請求項７０】
前記ウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記免疫応答がＴ細胞媒介性免疫応答である、請求項６９または請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗原が、ウイルス抗原またはがん抗原である、請求項３９に記載の方法。
【請求項７３】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、請求項１から２０のいずれか一項に記載の両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、および前記組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキット。
【請求項７４】
タグ化タンパク質の製剤、および前記タグ化タンパク質の製剤の投与に関する指示をさらに含むキットであって、前記ＣＡＲが、前記タグ化タンパク質に結合するタグ結合ドメインを含む、請求項７３に記載のキット。
【請求項７５】
ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、および前記アジュバントの投与に関する指示をさらに含む、請求項７３または請求項７４に記載のキット。
【請求項７６】
前記アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、請求項７５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連情報の段落
本出願は、２０１７年９月１９日出願の米国仮特許出願第６２／５６０，５８８号の優先日の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法を使用するがんの臨床的処置において、劇的な進歩が生じている。今日までに開発された最も強力な処置の１つは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ  Ｔ細胞、即ちＣＡＲ−Ｔ）による養子細胞治療である。ＣＡＲ−Ｔは、抗原結合ドメインを、Ｔ細胞受容体複合体由来のＣＤ３シグナル伝達鎖およびＴ細胞活性化の間に支持的シグナルを提供する複数の周知の共受容体のうちの１つに由来の共刺激ドメインに融合させることによって形成された合成抗原受容体を形質導入した患者由来の自家リンパ球である。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、血液学的悪性腫瘍において劇的な完全奏効を示しており、ＦＤＡは最近、Ｂ細胞白血病の処置のためのＣＡＲ−Ｔ治療を承認した。
【０００３】
しかし、ＣＡＲ−Ｔ細胞は現在、患者に単純に注入され、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍細胞の遭遇を介したものを除くさらなる刺激は受けず、それらの完全なエフェクター機能を促進するためにＴ細胞に通常提供される重要なシグナル伝達合図の多くを欠く。さらに、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、一部の患者において機能的に持続することができず、固形腫瘍では概して不十分な応答を示す。したがって、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を改善する薬剤が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンドが、ヒト血清アルブミンに結合し、常在性抗原提示細胞（ＡＰＣ）の膜中に分配する両親媒性物質コンジュゲートの使用によって、リンパ節に効率的に送達され、それによって、ネイティブサイトカイン／受容体共刺激シグナルと一緒に、細胞表面上にＣＡＲ−Ｔ細胞リガンドを共提示するという発見に、少なくとも一部基づく。理論に束縛されないが、両親媒性物質コンジュゲートのこれら二重の特性（即ち、リンパ節標的化および膜挿入）は、組み合わさって、ＣＡＲ−Ｔ細胞のためのブースターワクチンを可能にし、これが、ＣＡＲ−Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで効率的に拡大させ、それらの機能性を増加させ、抗腫瘍活性を増強すると考えられる。
【０００５】
タグまたは腫瘍関連抗原のいずれかを含む両親媒性リガンドコンジュゲートが、タグもしくは腫瘍関連抗原結合ドメイン、またはその両方を含むＣＡＲを発現するＴ細胞の増殖を活性化および誘導したことが実証されている。特に、かかる両親媒性リガンドコンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏでこの活性を保持し、したがって、対象への投与後のＣＡＲ−Ｔ細胞の拡大および活性化を可能にした。さらに、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートの投与は、腫瘍中への有意に増加したＣＡＲ−Ｔ浸潤もまたもたらし、腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞は、チェックポイントインヒビターＰＤ１およびＴＩＭ３の表面発現にもかかわらず、腫瘍細胞に対する増強された反応性を示した。ＣＡＲ−Ｔ細胞治療と併せた本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートによる処置は、腫瘍成長を有意に遅延させ、生存を延長させた。
【０００６】
本開示はまた、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲートが、固形腫瘍において示されるＣＡＲ−Ｔ細胞の不十分な応答を克服するという発見に、少なくとも一部基づく。本明細書で実証されるように、腫瘍関連抗原を発現するＣＡＲ−Ｔ細胞の投与は、両親媒性リガンドコンジュゲートと組み合わせて投与された場合、対照およびＣＡＲ−Ｔ細胞単独と比較して、固形腫瘍の腫瘍成長を遅延させ、腫瘍保有マウスの生存を増加させることが可能であった。
【０００７】
さらに、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の増強された有効性が、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートと組み合わせてリンパ充満状態（lymphreplete  condition）において維持されるという発見に、少なくとも一部基づく。現行のＣＡＲ−Ｔ細胞治療は、重篤な毒性に関連するリンパ枯渇（lymphodepletion）を必要とする。本明細書に示されるように、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートと組み合わせたＣＡＲ−Ｔ細胞治療は、遅延された腫瘍成長およびリンパ枯渇腫瘍保有マウスの増加した生存をもたらした。遅延された腫瘍成長および増加した生存は、同じ治療レジメンを受けたリンパ枯渇されたマウスと同等であった。理論に束縛されることは望まないが、これらの結果は、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートの投与が、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療の前のリンパ枯渇の必要性をなくし、それによって、対象において毒性を緩和し得ることを示している。
【０００８】
したがって、一態様では、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンドおよびＣＡＲリガンドに作動可能に連結した脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。一部の態様では、脂質は、生理的条件下で細胞膜中に挿入する。一部の態様では、脂質は、生理的条件下でアルブミンに結合する。一部の態様では、脂質は、生理的条件下で細胞膜中に挿入し、生理的条件下でアルブミンに結合する。一部の態様では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンパ節に輸送され、常在性抗原提示細胞（ＡＰＣ）の細胞膜中に挿入する脂質を含み、それによって、ネイティブサイトカイン／受容体共刺激シグナルと一緒に、細胞表面上にＣＡＲ−Ｔ細胞リガンドを共提示する。
【０００９】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、ジアシル脂質を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１２〜３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１４〜２５個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１６〜２０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１８個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。
【００１０】
上述または関連の態様のいずれかでは、両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンカーを介して脂質に作動可能に連結したＣＡＲリガンドを含む。一部の態様では、リンカーは、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択される。一部の態様では、リンカーは、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎは２５〜５０の間である。
【００１１】
他の態様では、本開示は、リンカーを介してジアシル脂質に作動可能に連結したＣＡＲリガンドを含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、ジアシル脂質が、１２〜３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含み、リンカーが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎが２５〜５０の間である、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。
【００１２】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、タグであるＣＡＲリガンドを含む。一部の態様では、タグは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ（alkalanine  phosphatase）、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される。
【００１３】
他の態様では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、腫瘍関連抗原またはその断片であるＣＡＲリガンドを含む。例示的な腫瘍抗原には、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ｋ軽鎖、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＲＯＲ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦｒ  ｖＩＩＩ、癌胎児性抗原、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、メソテリン、ＴＡＧ７２、ＰＳＭＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、Ｂ７−Ｈ６、ＩＬ−１３受容体α２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＣＡ９、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＣＤ１７１、ルイスＹ、Ｇ２５０／ＣＡＬＸ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＳＣ１、葉酸受容体−α、ＣＤ４４ｖ７／８、８Ｈ９、ＮＣＡＭ、ＶＥＧＦ受容体、５Ｔ４、胎児ＡｃｈＲ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＣＤ４４ｖ６、ＴＥＭ１および／またはＴＥＭ８のうち１つまたは複数が含まれる。
【００１４】
他の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介してフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）に作動可能に連結した脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。さらに他の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介して腫瘍関連抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）の断片に作動可能に連結した脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。一部の態様では、脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）であり、ポリエチレングリコール部分は、ＰＥＧ−２０００である。
【００１５】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは脂質を含み、この脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）である。一部の態様では、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、ＰＥＧ−２０００を介してＣＡＲリガンドに連結した１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含む。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介してフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）に作動可能に連結した１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。他の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介して腫瘍関連抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）の断片に作動可能に連結した１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。
【００１７】
さらに他の態様では、本開示は、ＰＥＧ−２０００を介してフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）に作動可能に連結した１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。なおさらなる態様では、本開示は、ＰＥＧ−２０００を介して腫瘍関連抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）の断片に作動可能に連結した１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。
【００１８】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、ＣＡＲに結合するＣＡＲリガンドを含み、このＣＡＲは、共刺激ドメインを含む。
【００１９】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、ＣＡＲに結合するＣＡＲリガンドを含み、このＣＡＲは、二特異的結合ドメインを含む。一部の態様では、二特異的結合ドメインは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）を含む。一部の態様では、二特異的結合ドメインは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）および第２の腫瘍関連抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）を含む。一部の態様では、二特異的結合ドメインは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、二特異的結合ドメインは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片を含む。
【００２０】
上述または関連の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、タグを含むＣＡＲリガンドを含み、このＣＡＲは、タグ結合ドメインを含む。他の態様では、ＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片であり、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含む。
【００２１】
別の態様では、本開示は、タグに作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、タグが、タグ結合ドメインを含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。別の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介してタグに作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、タグが、タグ結合ドメインを含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。
【００２２】
別の態様では、本開示は、タグに作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、タグが、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。別の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介してタグに作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、タグが、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。
【００２３】
別の態様では、本開示は、腫瘍関連抗原またはその断片に作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、腫瘍関連抗原が、腫瘍関連抗原結合ドメイン（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲｖＩＩ）を含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。別の態様では、本開示は、ポリエチレングリコール部分を介して腫瘍関連抗原またはその断片に作動可能に連結したジアシル脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートであって、腫瘍関連抗原またはその断片が、腫瘍関連抗原結合ドメイン結合ドメインを含むＣＡＲに結合する、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートは、第１または第２の腫瘍関連抗原のいずれかを含む。
【００２４】
他の態様では、本開示は、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲートおよび薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。
【００２５】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される組成物およびアジュバントを含む免疫原性組成物を提供する。
【００２６】
一部の態様では、免疫原性組成物は、アジュバントを含み、アジュバントは、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の態様では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、パターン認識受容体に結合する。一部の態様では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧを含む。一部の態様では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ｔｏｌｌ様受容体に対するリガンドである。
【００２７】
上述の態様のいずれかでは、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートは、リンカーを含み、このリンカーは、オリゴヌクレオチドリンカーである。一部の態様では、オリゴヌクレオチドリンカーは、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎは０〜２の間である。一部の態様では、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートの脂質は、ジアシル脂質である。一部の態様では、ジアシル脂質は、１２〜３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１４〜２５個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１６〜２０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。一部の態様では、ジアシル脂質は、１８個の炭化水素単位を含むアシル鎖を含む。
【００２８】
他の態様では、免疫原性組成物は、アジュバントを含み、このアジュバントは、サイクリックジ−ＧＭＰ（ＣＤＧ）である。
【００２９】
別の態様では、本開示は、対象においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させる方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含む、方法を提供する。一部の態様では、ＣＡＲ（−）Ｔ細胞の増殖は、対象において増加されない。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００３０】
さらに他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍のサイズを低減もしくは減少させるまたは腫瘍成長を阻害する方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含み、対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００３１】
さらなる態様では、本開示は、がんを有する対象において抗腫瘍応答を誘導する方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含み、対象が、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００３２】
別の態様では、本開示は、対象において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答を刺激する方法であって、対象に、抗原に標的化されたＣＡＲ−Ｔ細胞、および本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含む、方法を提供する。一部の態様では、免疫応答は、Ｔ細胞媒介性免疫応答または抗腫瘍免疫応答である。一部の態様では、標的細胞集団または標的組織は、腫瘍細胞または腫瘍組織である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００３３】
別の態様では、本開示は、対象において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答を刺激する方法であって、対象に、抗原に標的化されたＣＡＲ−Ｔ細胞、および本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含み、標的細胞集団または標的組織が、ウイルスに感染した細胞の集団または組織である、方法を提供する。一部の態様では、ウイルスは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である。一部の態様では、免疫応答は、Ｔ細胞媒介性免疫応答である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。
【００３４】
さらなる態様では、本開示は、抗原の発現または発現の上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を処置する方法であって、対象に、抗原に標的化されたＣＡＲ−Ｔ細胞、および本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物を投与することを含む、方法を提供する。一部の態様では、抗原は、ウイルス抗原またはがん抗原である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。
【００３５】
上述の態様のいずれかでは、この方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を受ける前の、対象への両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与を含む。他の態様では、この方法は、ＣＡＲ−Ｔ細胞を受けた後の、対象への両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与を含む。別の態様では、この方法は、同時に投与されるＣＡＲ−Ｔ細胞と併せた、対象への両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与を含む。
【００３６】
関連する上述の態様のいずれかでは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンパ節に輸送される。一部の態様では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、鼠径リンパ節および補助リンパ節（auxiliary  lymph  node）に輸送される。一部の態様では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンパ節に輸送されると、抗原提示細胞の膜中に挿入される。一部の態様では、抗原提示細胞は、髄質マクロファージ、ＣＤ８＋樹状細胞および／またはＣＤ１１ｂ＋樹状細胞である。
【００３７】
上述の態様のいずれかでは、ＣＡＲリガンドは、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間または少なくとも２５日間にわたって、リンパ節中で保持される。
【００３８】
ＣＡＲリガンドがタグであり、ＣＡＲがタグ結合ドメインを含む上述の態様のいずれかでは、これらの方法は、タグ化タンパク質の製剤を投与することをさらに含み、タグ結合ドメインは、タグ化タンパク質に結合する。一部の態様では、タグ化タンパク質のタンパク質は、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の態様では、タグ結合ドメインは、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の態様では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲＴ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の前に対象に投与される。他の態様では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与と併せて対象に投与される。さらに他の態様では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲ−Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の後に対象に投与される。
【００３９】
上述の態様のいずれかでは、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の前に投与される。他の態様では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与の後に投与される。さらに他の態様では、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の投与と併せて投与される。
【００４０】
上述の態様のいずれかでは、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物は、非腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、または腫瘍内に投与される。
【００４１】
上述の態様のいずれかでは、対象はがんを有する。上述の態様のいずれかでは、対象はヒトである。
【００４２】
別の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００４３】
さらに他の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００４４】
他の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物ワクチンの投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００４５】
一部の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の態様では、ＣＡＲは、タグ結合ドメインおよび腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、タグである。一部の態様では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、第１もしくは第２の腫瘍関連抗原、またはその断片である。
【００４６】
上述の態様のいずれかでは、キットは、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示を含む。一部の態様では、アジュバントは、本明細書に記載される免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。
【００４７】
別の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を活性化、拡大または増加させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の使用を提供する。
【００４８】
さらに他の態様では、本開示は、個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の使用を提供する。
【００４９】
別の態様では、本開示は、個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための医薬の製造における、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、組成物または免疫原性組成物の使用を提供する。
【００５０】
他の態様では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、キットは、タグ化タンパク質の製剤、およびタグ化タンパク質の製剤の投与に関する指示を含み、ＣＡＲは、タグ化タンパク質に結合するタグ結合ドメインを含む。一部の態様では、キットは、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示を含む。一部の態様では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１Ａ】図１Ａは、ＰＥＧ−２０００リンカーを介して小分子（上）、短い直鎖ペプチド（中央）またはタンパク質ドメイン（下）にコンジュゲートされた脂質テイル（例えば、ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートの概略図を提供する。
【００５２】
【図１Ｂ】図１Ｂは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンドを含む両親媒性リガンドコンジュゲートで装飾された（decorated）抗原提示細胞とＣＡＲ−Ｔ細胞との間での相互作用を示す概略図を提供する。
【００５３】
【図２Ａ】図２Ａは、膜貫通抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲのドメイン構造および配向の概略図を提供する。
【００５４】
【図２Ｂ】図２Ｂは、初代マウスＴ細胞中へのレトロウイルス形質導入後の抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ表面発現の程度を示すフローサイトメトリーデータのグラフを提供する。
【００５５】
【図２Ｃ】図２Ｃは、示された種々の濃度のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣで装飾されたＫ５６２細胞との相互作用後の、抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮγの定量を示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００５６】
【図２Ｄ】図２Ｄは、１０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比における、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ細胞との共培養の６時間後の、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣコーティングされたＤＣ２．４細胞の細胞死のパーセンテージを示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００５７】
【図３Ａ】図３Ａは、示された種々の用量のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣまたはＦＩＴＣ単独によるワクチン接種後の引き続く数日後に（after  subsequent  days）マウスから取り出されたリンパ節におけるＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ保持（放射効率によって測定される）の程度を示すグラフを提供する。
【００５８】
【図３Ｂ】図３Ｂは、皮下注射の２４時間後の流入領域鼠径リンパ節中の異なるリンパ系集団によるＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ取込みを示すグラフを提供する。
【００５９】
【図３Ｃ】図３Ｃは、皮下注射後の３つの異なるＡＰＣによる、種々の用量のＤＳＰ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの取込みを示すフローサイトメトリーデータのグラフを提供する。
【００６０】
【図４】図４は、ＰＢＳ、ｃ−ジ−ＧＭＰ（ＣＤＧ）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣまたはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ＋ＣＤＧによってプライムされた鼠径リンパ節中のＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖指数を示すグラフを提供する。ＰＢＳおよびＣＤＧ単独の効果は、ワクチン接種の１日後に評価した。
【００６１】
【図５】図５は、リンパ節細胞集団における、ＣＤＧありまたはなしの、抗原提示細胞表面上のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ表示を示すグラフを提供する。リンパ節は、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種＋／−ＣＤＧの２４時間後および３日後に収集した。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００６２】
【図６】図６は、ＣＤＧありまたはなしの、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣを取り込むＣＤ１１ｃ＋細胞上の種々の共刺激分子の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００６３】
【図７】図７は、実験タイムラインを示す概略図（上）およびリンパ枯渇されたＣＤ４５．２マウスにおける２ラウンドのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種によるＣＤ４５．１  ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフ（下）を提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００６４】
【図８】図８は、実験タイムラインを示す概略図（上）およびリンパ充満ＣＤ４５．２マウスにおける２ラウンドのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種によるＣＤ４５．１  ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００６５】
【図９】図９は、反復ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種に対する経時的な抗体応答を示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００６６】
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧにコンジュゲートされたＥＧＦＲｖＩＩＩペプチドを示す概略図を提供する。
【００６７】
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩによる免疫後のマウスＴ細胞上のＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲの表面発現を示す。
【００６８】
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ｃｅｌｌ  ｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ追跡によって決定した、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩワクチン接種の４８時間後のリンパ節中のＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を示す。
【００６９】
【図１１Ａ】図１１Ａは、細胞表面上に発現されたＥＧＦＲｖＩＩＩを有するまたは有さないＣＴ−２Ａグリオーマ細胞との相互作用後の、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ細胞または対照Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮγの定量を示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００７０】
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ細胞または対照Ｔ細胞との共培養後の、野生型ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩを有するＣＴ−２Ａグリオーマ細胞の細胞死のパーセンテージを示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００７１】
【図１２】図１２は、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＶＡＸ」）または対照ワクチン接種を受けたマウスにおけるＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のパーセンテージを示すグラフを提供する。
【００７２】
【図１３】図１３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＶＡＸ」）ありまたはなしの、ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現標的細胞に応答した循環ＣＡＲ  Ｔまたは非ＣＡＲ  Ｔ細胞（ｎ＝５）のサイトカイン（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）分泌を示すグラフを提供する。
【００７３】
【図１４】図１４は、実験タイムラインを示す概略図（上）およびＥＧＦＲｖＩＩＩ発現ＣＴ−２Ａ細胞が移植されＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＰｅｐＶＩＩＩ  Ｖａｘ」）が投与されたマウスにおける腫瘍１ｍｇ当たりのＣＡＲ−Ｔ細胞の数によって測定したＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の腫瘍浸潤を示すグラフを提供する。
【００７４】
【図１５】図１５は、ＰＢＳまたはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＶＡＸ」）に応答した腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞のサイトカイン（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）分泌を示すグラフを提供する。
【００７５】
【図１６】図１６は、ＰＢＳまたはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＰｅｐＶＩＩＩ  Ｖａｘ」）に応答した腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞の、グランザイムＢの発現レベル（左）およびＫｉ６７によって決定した増殖（右）を示すグラフを提供する。
【００７６】
【図１７】図１７は、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ（「ＶＡＸ」）ありまたはなしの、腫瘍浸潤性ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ細胞上のＰＤ−１およびＴＩＭ３の発現を示すグラフを提供する。
【００７７】
【図１８Ａ】図１８Ａは、リンパ枯渇条件下でＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ＋／−ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩワクチン接種（「ＶＡＸ」）で処置したＣＴ−２Ａ腫瘍保有マウスにおける腫瘍体積を示すグラフを提供する。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００７８】
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、図１８ＡのＣＴ−２Ａ腫瘍保有マウスのＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ生存グラフを提供する。
【００７９】
【図１９】図１９は、ＦＩＴＣおよび黒色腫関連抗原ＴＲＰ１の両方を標的化するＦＩＴＣ−抗原二特異性ＣＡＲ設計の概略図を提供する。
【００８０】
【図２０】図２０は、Ｔ細胞表面上のＦＩＴＣ−ＴＲＰ１  ＣＡＲ発現を示すグラフを提供する。
【００８１】
【図２１】図２１は、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣコーティングされたＫ５６２細胞またはＢ１６Ｆ１０細胞と共に共培養した際のＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ  ＴのＩＦＮγ分泌を示すグラフを提供する。単一特異性ＦＩＴＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞およびＴＲＰ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞を対照として含めた。＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。
【００８２】
【図２２】図２２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔまたは単一特異性ＴＲＰ１  ＣＡＲ  Ｔ細胞と共に共培養した場合のＴＲＰ１発現標的細胞の細胞死のパーセンテージを示すグラフを提供する。共培養は、１０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で６時間に設定した。
【００８３】
【図２３】図２３は、ｃｅｌｌ  ｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ追跡によって測定したＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種の４８時間後のリンパ節中のＦＩＴＣ−ＴＲＰ１  ＣＡＲ−Ｔ増殖を示すグラフを提供する。
【００８４】
【図２４Ａ】図２４Ａおよび２４Ｂは、リンパ枯渇プレコンディショニングを用いた、ＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔ治療単独またはＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種（「ＶＡＸ」）で処置したＢ１６Ｆ１０腫瘍保有マウスの腫瘍成長（図２４Ａ）および動物生存（図２４Ｂ）を示す。
【図２４Ｂ】図２４Ａおよび２４Ｂは、リンパ枯渇プレコンディショニングを用いた、ＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔ治療単独またはＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種（「ＶＡＸ」）で処置したＢ１６Ｆ１０腫瘍保有マウスの腫瘍成長（図２４Ａ）および動物生存（図２４Ｂ）を示す。
【００８５】
【図２５】図２５は、ＰＢＳまたはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種（「ＶＡＸ」）を受けているマウスの末梢血中のＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔの数を示すグラフを提供する。
【００８６】
【図２６】図２６は、ＰＢＳまたはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種を受けているマウスにおけるＢ１６Ｆ１０腫瘍中へのＦＩＴＣ／ＴＲＰ１−ＣＡＲ  Ｔ細胞の浸潤を示すグラフを提供する。
【００８７】
【図２７Ａ】図２７Ａおよび２７Ｂは、ＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔ治療単独またはＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種（「ＶＡＸ」）で処置したリンパ充満Ｂ１６Ｆ１０腫瘍保有マウスの腫瘍成長（図２７Ａ）および動物生存（図２７Ｂ）を示す。
【図２７Ｂ】図２７Ａおよび２７Ｂは、ＦＩＴＣ−ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔ治療単独またはＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種（「ＶＡＸ」）で処置したリンパ充満Ｂ１６Ｆ１０腫瘍保有マウスの腫瘍成長（図２７Ａ）および動物生存（図２７Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００８８】
概要
種々の疾患が、患者における進行性の免疫抑制の発達によって特徴付けられる。悪性腫瘍を有する患者における障害された免疫応答の存在は、特に十分に報告されてきた。がん患者および腫瘍保有マウスは、種々の変更された免疫機能、例えば、遅延型過敏症における減少、リンパ球の溶解機能および増殖応答における減少を示す。がん患者において免疫機能を増大させることは、腫瘍制御にとって有益な効果を有することができた。
【００８９】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療は、血液学的悪性腫瘍を処置することに成功してきた。しかし、ＣＡＲ−Ｔ細胞は、一部の患者において機能的に持続することができず、固形腫瘍では概して不十分な応答を示す。ＣＡＲ−Ｔ治療のための現行のプロトコールは、多数のＣＡＲ−Ｔ細胞の注入に依存するが、これらの細胞は、死に絶え、または腫瘍に対する機能的活性を迅速に喪失する可能性がある。前臨床動物モデルでは、ワクチン接種を介してＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで拡大させることは、Ｔ細胞治療の有効性を支えるための最も有効な戦略の１つであるが、伝統的なワクチンは、それらのキメラ抗原受容体を介してＣＡＲ−Ｔをブーストすることができないことが公知である。
【００９０】
本開示に基づくと、ＣＡＲ−Ｔの活性化および増殖の増強が、キメラ抗原受容体のリガンドおよび脂質を含む両親媒性リガンドコンジュゲートを使用して達成される。本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、移入されたＣＡＲ−Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏで刺激することによる治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成のための現行のアプローチのいくつかの欠点に対する解答を提供し、耐久性のある治療応答のために必要とされる注入されるＣＡＲ−Ｔ細胞の量を低下させ得、患者リンパ枯渇の必要を緩和し得る。
定義
【００９１】
特許請求の範囲および本明細書において使用される用語は、特記しない限り、以下に示されるように定義される。
【００９２】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「この（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数形の指示対象を含むことに留意すべきである。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「約」は、当業者に理解され、それが使用される文脈に依存してある程度変動する。この用語の使用が、それが使用される文脈を考慮して当業者に明らかでない場合、「約」は、特定の値の最大でプラスまたはマイナス１０％を意味する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、用語「アジュバント」は、特定の免疫原または抗原と共に、生じる免疫応答を増大させるまたは他の方法で変更もしくは改変する化合物を指す。免疫応答の改変には、抗体および細胞性免疫応答のいずれかまたは両方の特異性の強化または広がりが含まれる。免疫応答の改変は、ある特定の抗原特異的免疫応答を減少または抑制することも意味し得る。ある特定の実施形態では、アジュバントは、サイクリックジヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される免疫賦活性オリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、アジュバントは、両親媒性リガンドコンジュゲート、またはこのコンジュゲートを含む組成物の投与の前に、それと併せて、またはその後に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、両親媒性リガンドコンジュゲートと同じ組成物中で共製剤化される。
【００９５】
「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成のアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによってコードされるもの、ならびに後に改変されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメートおよびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基礎的化学構造、即ち、水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかるアナログは、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基礎的化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能する化学化合物を指す。
【００９６】
アミノ酸は、一般に公知の３文字記号、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１文字記号のいずれかによって、本明細書で言及され得る。同様に、ヌクレオチドは、一般に受容された１文字コードによって言及され得る。
【００９７】
「アミノ酸置換」は、所定のアミノ酸配列（出発ポリペプチドのアミノ酸配列）中の少なくとも１つの既存のアミノ酸残基の、第２の異なる「置き換え」アミノ酸残基による置き換えを指す。「アミノ酸挿入」は、少なくとも１つのさらなるアミノ酸の、所定のアミノ酸配列中への取込みを指す。挿入は通常、１つまたは２つのアミノ酸残基の挿入からなるが、本発明のより大きい「ペプチド挿入」、例えば、約３個から約５個まで、またはさらには最大で約１０、１５または２０個までのアミノ酸残基の挿入がなされ得る。挿入された残基（複数可）は、上で開示されるように、天然に存在しても天然に存在しなくてもよい。「アミノ酸欠失」は、所定のアミノ酸配列からの少なくとも１つのアミノ酸残基の除去を指す。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「両親媒性物質」または「両親媒性」は、親水性頭部基および疎水性テイルを含み、それによって両親媒性コンジュゲートを形成する、コンジュゲートを指す。一部の実施形態では、両親媒性物質コンジュゲートは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンドおよび１つまたは複数の疎水性脂質テイルを含み、本明細書で「両親媒性リガンドコンジュゲート」と呼ばれる。一部の実施形態では、両親媒性物質コンジュゲートは、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）をさらに含み、このポリマーは、１つもしくは複数の脂質またはＣＡＲリガンドにコンジュゲートされる。
【００９９】
用語「軽減すること」は、疾患状態の予防、重症度もしくは進行における低下、軽快または治癒を含む、疾患状態、例えば、がんの処置における任意の治療的に有益な結果を指す。
【０１００】
本明細書で使用される場合、用語「抗原性製剤」または「抗原性組成物」または「免疫原性組成物」は、脊椎動物、特に哺乳動物に投与された場合に、免疫応答を誘導する調製物を指す。
【０１０１】
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、その表面上にＭＨＣと複合体化した外来抗原を提示する細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこの複合体を認識する。ＡＰＣの例には、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、単球（例えば、ＴＨＰ−１）、Ｂリンパ芽球様細胞（例えば、Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８  Ｂ−ＬＣＬ）および単球由来樹状細胞（ＤＣ）が含まれるがこれらに限定されない。一部のＡＰＣは、ファゴサイトーシスまたは受容体媒介性エンドサイトーシスのいずれかによって、抗原を内部移行させる。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、用語「二特異性／二特異的（bispecific）」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体またはその断片を指す。二特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含む種々の方法によって産生され得る。例えば、Songsivilai  &  Lachmann,  (1990)  Clin.  Exp.  Immunol.  79:315-321；Kostelny  et  al.,  (1992)  J.  Immunol.  148:1547-1553を参照のこと。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、（ｉ）少なくとも１つの所定のＣＡＲリガンドもしくは抗原、または所定のＣＡＲリガンドおよび抗原に結合することが可能な細胞外ドメイン、（ｉｉ）細胞外ドメインが由来するポリペプチドとは異なるシグナル伝達タンパク質に由来する１つまたは複数の細胞質ドメインを含む細胞内セグメント、ならびに（ｉｉｉ）膜貫通ドメインを含む人工膜貫通タンパク質受容体を指す。「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、「キメラ受容体」、「Ｔ−ボディ（T-body）」または「キメラ免疫受容体（ＣＩＲ）」と呼ばれる場合がある。
【０１０４】
「ＣＡＲ抗原」と相互交換可能に使用される「ＣＡＲリガンド」という語句は、任意の天然もしくは合成の分子（例えば、小分子、タンパク質、ペプチド、脂質、炭水化物、核酸）、またはＣＡＲ（例えば、ＣＡＲの細胞外ドメイン）に特異的に結合できるそれらの一部もしくは断片を意味する。一部の実施形態では、ＣＡＲリガンドは、腫瘍関連抗原またはその断片である。一部の実施形態では、ＣＡＲリガンドは、タグである。当業者は、細胞治療において利用されているＣＡＲに基づく両親媒性リガンドコンジュゲートにおける使用のための適切なＣＡＲリガンドを決定できる。
【０１０５】
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、細胞における生物学的プロセスの活性化または阻害、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞の活性化を引き起こすシグナルを伝達するように機能することが公知の任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドドメインを意味する。例には、ＩＬＲ鎖、ＣＤ２８および／またはＣＤ３ζが含まれる。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「がん抗原」は、（ｉ）腫瘍特異的抗原、（ｉｉ）腫瘍関連抗原、（ｉｉｉ）腫瘍特異的抗原を発現する細胞、（ｉｖ）腫瘍関連抗原を発現する細胞、（ｖ）腫瘍上の胎児性抗原、（ｖｉ）自家腫瘍細胞、（ｖｉｉ）腫瘍特異的膜抗原、（ｖｉｉｉ）腫瘍関連膜抗原、（ｉｘ）成長因子受容体、（ｘ）成長因子リガンド、および（ｘｉ）がんに関連する任意の他の型の抗原もしくは抗原提示細胞または材料を指す。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「ＣＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣＧ  ＯＤＮ）」は、「ＣｐＧ  ＯＤＮ」とも呼ばれ、グアニンヌクレオチド（Ｇ）が後に続くシトシンヌクレオチド（Ｃ）を含む短い一本鎖合成ＤＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、ＣＧ  ＯＤＮである。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族共刺激分子に特異的に結合し、それによって、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドがロードされたＭＨＣ分子との結合によって提供される一次シグナルに加えて、増殖、活性化、分化などが含まれるがこれらに限定されないＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上の分子を含む。共刺激リガンドには、ＣＤ７、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ｒＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体、およびＢ７−Ｈ３に特異的に結合するリガンドが含まれ得るがこれらに限定されない。共刺激リガンドは、とりわけ、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、１ＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドであるがこれらに限定されない、Ｔ細胞上に存在する共刺激分子に特異的に結合する抗体もまた包含する。
【０１０９】
「共刺激分子」は、共刺激リガンドに特異的に結合し、それによって、例えば増殖であるがこれに限定されない、Ｔ細胞による共刺激応答を媒介する、Ｔ細胞上の同族結合パートナーを指す。共刺激分子には、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体が含まれるがこれらに限定されない。
【０１１０】
「共刺激シグナル」は、本明細書で使用される場合、一次シグナル、例えばＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションと組み合わさって、Ｔ細胞増殖および／または重要な分子の上方調節もしくは下方調節をもたらすシグナルを指す。
【０１１１】
指定のポリペプチドまたはタンパク質「に由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。好ましくは、特定の配列に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、その配列またはその一部分と本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、この部分は、少なくとも１０〜２０アミノ酸、好ましくは少なくとも２０〜３０アミノ酸、より好ましくは少なくとも３０〜５０アミノ酸からなるか、またはその配列中にその起源を有するとして当業者には他の方法で同定可能である。
【０１１２】
別のペプチドに由来するポリペプチドは、出発ポリペプチドと比較して１つまたは複数の変異、例えば、別のアミノ酸残基で置換されたまたは１つもしくは複数のアミノ酸残基挿入もしくは欠失を有する１つまたは複数のアミノ酸残基を有し得る。
【０１１３】
ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を含み得る。かかるバリアントは、出発分子と１００％未満の配列同一性または類似性を必然的に有する。好ましい実施形態では、バリアントは、例えば、バリアント分子の長さにわたって、出発ポリペプチドのアミノ酸配列と約７５％〜１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性、より好ましくは約８０％〜１００％未満、より好ましくは約８５％〜１００％未満、より好ましくは約９０％〜１００％未満（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）、最も好ましくは約９５％〜１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性のアミノ酸配列を有する。
【０１１４】
一実施形態では、出発ポリペプチド配列とそれに由来する配列との間には、１アミノ酸の差異が存在する。この配列に関する同一性または類似性は、配列をアラインさせ、必要な場合最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップを導入した後に、候補配列中の、出発アミノ酸残基と同一（即ち、同じ残基）であるアミノ酸残基のパーセンテージとして、本明細書で定義される。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、抗原「交差提示」という用語は、ＡＰＣ上のＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子を介した、Ｔ細胞への外因性タンパク質抗原の提示を指す。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、用語「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答」は、細胞傷害性Ｔ細胞によって誘導される免疫応答を指す。ＣＴＬ応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって主に媒介される。
【０１１７】
本明細書で使用される場合、用語「有効用量」または「有効投薬量」は、所望の効果を達成するまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。用語「治療有効用量」は、疾患に既に罹患している患者において、その疾患およびその合併症を治癒するまたは少なくとも部分的に停止させるのに十分な量として定義される。この使用のために有効な量は、処置されている障害の重症度および患者自身の免疫系の全般的状態に依存する。
【０１１８】
本明細書で使用される場合、用語「エフェクター細胞」または「エフェクター免疫細胞」は、免疫応答に、例えば、免疫エフェクター応答の促進に関与する細胞を指す。一部の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、抗原を特異的に認識する。免疫エフェクター細胞の例には、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、用語「免疫エフェクター機能」または「免疫エフェクター応答」は、標的に対する免疫応答を促進する免疫エフェクター細胞の機能または応答を指す。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、用語「血液学的がん」は、リンパ腫、白血病、骨髄腫またはリンパ性悪性腫瘍、ならびに脾臓およびリンパ節のがんを含む。例示的なリンパ腫には、Ｂ細胞リンパ腫（Ｂ細胞血液学的がん）およびＴ細胞リンパ腫の両方が含まれる。Ｂ細胞リンパ腫には、ホジキンリンパ腫およびほとんどの非ホジキンリンパ腫の両方が含まれる。Ｂ細胞リンパ腫の限定的な例には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫（small  cell  lymphocytic  lymphoma）（慢性リンパ球性白血病と重複する）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（mediastinal  large  B  cell  lymphoma）、ワルデンストレームマクログロブリン血症、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（nodal  marginal  zone  B  cell  lymphoma）、脾辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症が含まれる。Ｔ細胞リンパ腫の非限定的な例には、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫および血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫が含まれる。血液学的悪性腫瘍には、例えば、二次性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病および急性リンパ芽球性白血病であるがこれらに限定されない白血病もまた含まれる。血液学的悪性腫瘍には、例えば、多発性骨髄腫およびくすぶり型多発性骨髄腫であるがこれらに限定されない骨髄腫がさらに含まれる。他の血液学的および／またはＢ細胞もしくはＴ細胞関連がんが、血液学的悪性腫瘍という用語によって包含される。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」は、免疫応答において役割を果たす造血起源の細胞である。免疫細胞には、リンパ球（例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞）、ナチュラルキラー細胞および骨髄性細胞（例えば、単球、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球および顆粒球）が含まれる。
【０１２２】
本明細書で使用される場合、「免疫賦活性オリゴヌクレオチド」は、免疫応答を刺激（例えば、誘導または増強）できるオリゴヌクレオチドである。
【０１２３】
用語「免疫応答を誘導すること」および「免疫応答を増強すること」は、相互交換可能に使用され、特定の抗原に対する免疫応答（即ち、受動または適応のいずれか）の刺激を指す。ＣＤＣまたはＡＤＣＣを誘導することに関して使用される場合、「誘導する」という用語は、特定の直接的細胞殺滅機構の刺激を指す。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「予防を必要とする」、「処置を必要とする」または「それを必要とする」対象は、適切な医療施術者（例えば、ヒトの場合には医師、看護師またはナース・プラクティショナー；非ヒト哺乳動物の場合には獣医師）の判断によって、所与の処置（例えば、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物による処置）から合理的に利益を得る対象を指す。
【０１２５】
用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、生きた生物において生じるプロセスを指す。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、用語「連結した」、「作動可能に連結した」、「融合した」または「融合」は、相互交換可能に使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換えＤＮＡテクノロジーを含む適切な手段によって、さらに２つのエレメントまたは構成成分またはドメインを一緒に接続することを指す。化学的コンジュゲーション（例えば、ヘテロ二機能性架橋剤を使用する）の方法は、組換えＤＮＡテクノロジーの方法と同様、当該分野で公知である。
【０１２７】
用語「脂質」は、非極性溶媒中で可溶性であり水中で不溶性である生体分子を指す。脂質は、水性環境において小胞または膜などの構造をそれらが形成することを可能にする、疎水性または両親媒性分子と記載される場合が多い。脂質には、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、ステロール脂質（コレステロールを含む）、プレノール（prenol）脂質、サッカロ脂質（saccharolipid）およびポリケチドが含まれる。一部の実施形態では、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートに適切な脂質は、生理的条件下でヒト血清アルブミンに結合する。一部の実施形態では、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートに適切な脂質は、生理的条件下で細胞膜中に挿入する。一部の実施形態では、脂質は、生理的条件下でアルブミンに結合し、細胞膜中に挿入する。一部の実施形態では、脂質は、ジアシル脂質である。一部の実施形態では、ジアシル脂質は、１２個よりも多くの炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個または少なくとも１８個の炭素を含む。
【０１２８】
用語「哺乳動物」または「対象」または「患者」は、本明細書で使用される場合、ヒトおよび非ヒトの両方を含み、これには、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ネズミ、ウシ、ウマおよびブタが含まれるがこれらに限定されない。
【０１２９】
「核酸」は、一本鎖形態または二本鎖形態のいずれかの、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーを指す。特に限定しない限り、この用語は、参照核酸と類似の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと類似の様式で代謝される、天然ヌクレオチドの公知のアナログを含む核酸を包含する。他に指示がなければ、特定の核酸配列は、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）および相補配列ならびに明示的に示される配列もまた暗黙に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって、達成され得る（Batzer  et  al.,  Nucleic  Acid  Res.  19:5081,  1991；Ohtsuka  et  al.,  J.  Biol.  Chem.  260:2605-2608,  1985；およびCassol  et  al.,  1992；Rossolini  et  al.,  Mol.  Cell.  Probes  8:91-98,  1994）。アルギニンおよびロイシンについては、２番目の塩基における改変もまた保存的であり得る。核酸という用語は、遺伝子、遺伝子によってコードされるｃＤＮＡおよびｍＲＮＡと相互交換可能に使用される。
【０１３０】
本発明のポリヌクレオチドは、未改変ＲＮＡもしくはＤＮＡまたは改変ＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド（polydeoxribonucleotide）から構成され得る。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖領域および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖であり得るまたは一本鎖領域および二本鎖領域の混合物であり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子から構成され得る。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域から構成され得る。ポリヌクレオチドは、１つもしくは複数の改変塩基、または安定性もしくは他の理由のために改変されたＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格もまた含み得る。「改変」塩基には、例えば、トリチル化塩基および普通でない塩基、例えばイノシンが含まれる。種々の改変が、ＤＮＡおよびＲＮＡに対してなされ得る；したがって、「ポリヌクレオチド」は、化学的、酵素的または代謝的に改変された形態を包含する。
【０１３１】
一部の実施形態では、本発明のペプチドは、ヌクレオチド配列によってコードされる。本発明のヌクレオチド配列は、クローニング、遺伝子治療、タンパク質の発現および精製、変異導入、それを必要とする宿主のＤＮＡワクチン接種、例えば受動免疫のための抗体生成、ＰＣＲ、プライマーおよびプローブ生成などを含むいくつかの適用のために有用であり得る。
【０１３２】
本明細書で使用される場合、「非経口投与」、「非経口（で）投与される」および他の文法的に等価な語句は、通常は注射による、経腸および外用投与以外の投与の様式を指し、これには、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内の注射および注入が含まれるがこれらに限定されない。
【０１３３】
本明細書で一般に使用される場合、「薬学的に許容される」は、合理的なベネフィット／リスク比に相応した、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織、臓器および／または体液と接触して使用するのに適切である、確かな医学的判断の範囲内の化合物、材料、組成物および／または投薬形態を指す。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、用語「生理的条件」は、対象のｉｎ  ｖｉｖｏ状態を指す。一部の実施形態では、生理的条件は、中性ｐＨ（例えば、６〜８の間のｐＨ）を指す。
【０１３５】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために、本明細書で相互交換可能に使用される。これらの用語は、１つまたは複数のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーに当てはまる。
【０１３６】
本明細書で使用される場合、「小分子」は、約５００ダルトン未満の分子量を有する分子である。
【０１３７】
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法および組成物は、がんまたは感染症を有する対象を処置するために使用され得る。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。
【０１３８】
用語「十分な量」または「〜するのに十分な量」は、所望の効果を生じるのに十分な量、例えば、腫瘍の直径を低減させるのに十分な量を意味する。
【０１３９】
用語「Ｔ細胞」は、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在によって他の白血球から識別され得るある型の白血球を指す。Ｔヘルパー細胞（別名、ＴＨ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞）ならびにＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、ＴＨ９およびＴＦＨ細胞を含むサブタイプ、細胞傷害性Ｔ細胞（即ち、ＴＣ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔ−キラー細胞、キラーＴ細胞）、メモリーＴ細胞ならびにセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭおよびＴＥＭＲＡ細胞）および常在性メモリーＴ細胞（ＴＲＭ細胞）を含むサブタイプ、調節性Ｔ細胞（別名、Ｔｒｅｇ細胞またはサプレッサーＴ細胞）ならびにＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３−Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞およびＴｒｅｇ１７細胞を含むサブタイプ、ナチュラルキラーＴ細胞（別名、ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、ならびにＶγ９／Ｖδ２  Ｔ細胞を含むガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）が含まれるがこれらに限定されない、Ｔ細胞のいくつかのサブセットが存在する。上述のまたは言及していないＴ細胞のうちいずれか１つまたは複数が、本発明の使用の方法のための標的細胞型であり得る。
【０１４０】
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞活性化」または「Ｔ細胞の活性化」は、それらの表面上に抗原特異的Ｔ細胞受容体を発現する成熟Ｔ細胞が、それらの同族抗原を認識し、細胞周期に入ること、サイトカインまたは溶解酵素を分泌すること、および細胞ベースのエフェクター機能を開始することまたは細胞ベースのエフェクター機能を実施するのにコンピテントになることによって応答する、細胞プロセスを指す。Ｔ細胞活性化は、完全に活性化されるために、少なくとも２つのシグナルを必要とする。第１は、抗原−主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によるＴ細胞抗原特異的受容体（ＴＣＲ）の係合後に生じ、第２は、共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）の引き続く係合によって生じる。これらのシグナルは、核に伝達され、Ｔ細胞のクローン性拡大、細胞表面上の活性化マーカーの上方調節、エフェクター細胞への分化、細胞傷害性もしくはサイトカイン分泌の誘導、アポトーシスの誘導、またはそれらの組合せを生じる。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞媒介性応答」は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）が含まれるがこれらに限定されないＴ細胞によって媒介される任意の応答を指す。Ｔ細胞媒介性応答には、例えば、Ｔ細胞細胞傷害性および増殖が含まれる。
【０１４２】
用語「Ｔ細胞細胞傷害性」は、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化によって媒介される任意の免疫応答を含む。例示的な免疫応答には、サイトカイン産生、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖、グランザイムまたはパーフォリン産生、および感染性病原体のクリアランスが含まれる。
【０１４３】
「治療用抗体」は、抗体、抗体の断片、または抗体に由来する構築物であり、標的細胞上の細胞表面抗原に結合して、治療効果を引き起こすことができる。かかる抗体は、キメラ、ヒト化または完全ヒト抗体であり得る。かかる抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である。かかる抗体には、抗体の単鎖Ｆｃ断片、ミニボディ（minibody）およびダイアボディ（diabody）が含まれる。がん治療に有用であることが当該分野で公知の治療用抗体のいずれかが、本明細書に記載される組成物との併用療法において使用され得る。治療用抗体は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり得る。好ましい実施形態では、治療用抗体は、がん抗原を標的とする。一部の実施形態では、治療用抗体は、タグを含む両親媒性リガンドコンジュゲートによって認識されるタグ結合ドメインを含む。
【０１４４】
本明細書で使用される場合、「治療用タンパク質」は、医薬として対象に投与され得る、任意のポリペプチド、タンパク質、タンパク質バリアント、融合タンパク質および／またはそれらの断片を指す。
【０１４５】
用語「治療有効量」は、疾患の症状を軽減するのに有効な量である。予防は治療とみなされ得るので、治療有効量は「予防有効量」であり得る。
【０１４６】
用語「処置する（treat）」、「処置すること（treating）」および「処置」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される治療的または予防的手段を指す。「処置」の方法は、かかる処置を必要とする対象、例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療受けている対象への、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートの投与を使用する。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、障害もしくは再発している障害を予防、治癒、遅延させるため、障害もしくは再発している障害の重症度を低減させるため、または障害もしくは再発している障害の１つもしくは複数の症状を軽減するため、あるいはかかる処置の非存在下で予測される生存を超えて対象の生存を延長させるために、特定の抗原に対する増強された免疫応答を必要とする対象、またはかかる障害を最終的に獲得し得る対象に投与される。
【０１４７】
本明細書で使用される場合、「ワクチン」は、アジュバントと組み合わせて本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲートを含む製剤を指し、これは、脊椎動物に投与することが可能である形態であり、感染症もしくは疾患を予防するおよび／もしくは軽減するために、ならびに／または感染症もしくは疾患の少なくとも１つの症状を低減させるために、ならびに／または合成ナノ粒子の別の用量の有効性を増強するために免疫を誘導するのに十分な防御免疫応答を誘導する。典型的には、ワクチンは、本明細書に記載される組成物が懸濁または溶解される従来の食塩水または緩衝水溶液媒体を含む。この形態では、本明細書に記載される組成物は、感染症または疾患を予防、軽減または他の方法で処置するために使用される。宿主中に導入されると、ワクチンは、抗体および／もしくはサイトカインの産生ならびに／または細胞傷害性Ｔ細胞、抗原提示細胞、ヘルパーＴ細胞、樹状細胞および／もしくは他の細胞応答の活性化が含まれるがこれらに限定されない免疫応答を惹起する。
キメラ抗原受容体
【０１４８】
一部の態様では、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）エフェクター細胞と併せて使用または実施される組成物および方法を提供する。
【０１４９】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞または他の免疫細胞）に、リガンドに対する任意の特異性を付与し、認識およびリガンドへの結合の際にエフェクター細胞の活性化を生じる、遺伝子操作された人工膜貫通受容体である。典型的には、これらの受容体は、Ｔ細胞に、モノクローナル抗体の抗原特異性を付与するために使用される。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、以下の３つのドメインを含む：１）シグナルペプチド、リガンドまたは抗原認識領域（例えば、ｓｃＦｖ）および可動性スペーサーを典型的には含む、外部ドメイン；２）膜貫通（ＴＭ）ドメイン；３）１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを典型的には含む、内部ドメイン（endodomain）（あるいは「活性化ドメイン」としても公知）。ＣＡＲの外部ドメインは、細胞の外側に存在し、細胞外空間に曝露され、それによって、その同族リガンドとの相互作用のために利用しやすい。ＴＭドメインは、エフェクター細胞の細胞膜中にＣＡＲがアンカリングされるのを可能にする。３番目の内部ドメイン（「活性化ドメイン」としても公知）は、その特異的リガンドへのＣＡＲの結合の際のエフェクター細胞活性化を補助する。一部の実施形態では、エフェクター細胞活性化は、サイトカインおよびケモカイン産生の誘導、ならびに細胞の細胞溶解活性の活性化を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞傷害性を腫瘍細胞へと再方向付ける。
【０１５１】
一部の実施形態では、ＣＡＲは、特異的標的リガンドまたは抗原に結合するリガンド特異的または抗原特異的な認識ドメイン（結合ドメインとも呼ばれる）を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、シグナル伝達ドメインに次に連結される膜貫通ドメインに融合された、単鎖抗体可変断片（ｓｃＦｖ）、係留されたリガンド、または共受容体の細胞外ドメインである。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζまたはＦｃＲγに由来する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４−ｌＢＢとしても公知）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０としても公知）およびＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても公知）などのタンパク質に由来する１つまたは複数の共刺激ドメインを含む。
【０１５２】
ＣＡＲの抗原結合ドメインと標的細胞の表面上のその標的抗原との係合は、ＣＡＲのクラスタリングを生じ、活性化刺激をＣＡＲ含有細胞に送達する。一部の実施形態では、ＣＡＲの主な特徴は、免疫エフェクター細胞の特異性を再方向付けし、それによって、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシス、またはモノクローナル抗体、可溶性リガンドもしくは細胞特異的共受容体の細胞特異的標的化能を活用する主要組織適合複合体（major  histocompatibility）（ＭＨＣ）非依存的様式で標的抗原発現細胞の細胞死を媒介できる分子の産生を誘発するそれらの能力である。ＣＤ３ζまたはＦｃＲγ由来のシグナル伝達ドメインを含むように操作されたｓｃＦｖベースのＣＡＲは、Ｔ細胞活性化およびエフェクター機能のための強力なシグナルを送達することが示されているが、これらは、随伴性の共刺激シグナルの非存在下でＴ細胞の生存および拡大を促進するシグナルを惹起するのには不十分である。１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４およびＣＤ２７８に由来する細胞内共刺激ドメイン）と一緒にＣＤ３ζまたはＦｃＲγに由来する結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通およびシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲの新たな生成は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのＣＡＲ発現Ｔ細胞において、動物モデルおよびがん患者において、抗腫瘍活性ならびに増加したサイトカイン分泌、溶解活性、生存および増殖をより効率的に方向付けることが示されている（Milone  et  al.,  Molecular  Therapy,  2009;  17:  1453-1464；Zhong  et  al.,  Molecular  Therapy,  2010;  18:  413-420；Carpenito  et  al.,  PNAS,  2009;  106:3360-3365）。
【０１５３】
一部の実施形態では、キメラ抗原受容体発現エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）は、疾患または状態を有する患者に由来し、リガンドに対する任意の特異性を有する少なくとも１つのＣＡＲを発現するようにｉｎ  ｖｉｔｒｏで遺伝子改変された細胞である。これらの細胞は、ＣＡＲへのリガンドの特異的結合によって刺激または誘導され、同じ患者の疾患または状態の処置にとって有用な、少なくとも１つのエフェクター機能（例えば、サイトカインの誘導）を実行する。エフェクター細胞は、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞またはヘルパーＴ細胞）であり得る。当業者は、他の細胞型（例えば、ナチュラルキラー細胞または幹細胞）がＣＡＲを発現し得ること、およびキメラ抗原受容体エフェクター細胞が、Ｔ細胞以外のエフェクター細胞を含み得ることを理解するはずである。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、標的もしくは標的細胞（例えば、がん細胞）に接触した場合またはそれと近位になった場合に、標的細胞に対してそのエフェクター機能（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）を発揮するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）である（例えば、Chang  and  Chen  (2017)  Trends  Mol  Med  23(5):430-450を参照のこと）。
【０１５４】
それらの同族抗原へのＴ細胞の長期にわたる曝露は、感染したまたは形質転換された細胞の持続を可能にする、エフェクター機能の消耗を生じ得る。免疫チェックポイント遮断を誘導する薬剤を使用して宿主エフェクター機能を刺激するまたは若返らせるための最近開発された戦略は、いくつかのがんの処置について成功をもたらしている。出現しつつある証拠は、Ｔ細胞消耗が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ−Ｔ細胞）による持続性の長寿命の抗腫瘍活性における顕著な妨害もまた示し得ることを示唆している。一部の実施形態では、ＣＡＲ形質導入の前の患者から回収されたＴ細胞の分化状態、およびＣＡＲ−Ｔ細胞を再導入する前に患者が受けるコンディショニングレジメン（例えば、アルキル化剤、フルダラビン、全身照射の追加または排除）は、ＣＡＲ−Ｔ細胞の持続および細胞傷害潜在力に大きく影響し得る。Ｔ細胞集団を（抗ＣＤ３／ＣＤ２８または刺激細胞を介して）刺激するおよび（ＩＬ−２などのサイトカインを介して）拡大させるｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養条件もまた、ＣＡＲ−Ｔ細胞の分化状態およびエフェクター機能を変更させることができる（Ghoneim  et  al.,  (2016)  Trends  in  Molecular  Medicine  22(12):1000-1011）。
【０１５５】
本開示は、治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞の生成のための現行のアプローチのいくつかの欠点に取り組む。治療用ＣＡＲ−Ｔ細胞調製の既存の方法は、養子細胞移入に十分な数の改変細胞を得るためにｉｎ  ｖｉｔｒｏでの広範な細胞培養を必要とする場合が多く、その間に、Ｔ細胞の天然の実体（identity）または分化状態が変化している場合があり、Ｔ細胞機能が損なわれている場合がある。さらに、患者が疾患進行を予防するための治療を緊急に必要としている場合、十分な量のＣＡＲ−Ｔ細胞を生成するために必要とされる時間は、患者を処置する機会と一致しない場合があり、治療の失敗および患者の死亡を生じる。本開示によって提供される組成物および方法は、この障害を回避し、ＣＡＲ−Ｔ細胞の活性化および増殖をｉｎ  ｖｉｖｏで刺激することによって、好都合でより生理学的に適切な治療的アプローチを提供する。さらに、現行のＣＡＲ−Ｔ細胞治療投薬計画は、患者の健康を弱め、ＣＡＲ−Ｔの有効性を改善し得る助長的な環境を破壊するリンパ枯渇を事前に必要とする。一部の態様では、本開示は、養子移入されたＣＡＲ−Ｔ細胞が、リンパ枯渇の非存在下でｉｎ  ｖｉｖｏでなおも生着でき、活発に増殖でき、拡大できるように、そのＣＡＲ−Ｔ細胞を刺激する方法を提供する。
【０１５６】
現行のＣＡＲ−Ｔ細胞治療は、ＣＡＲ−Ｔエフェクター機能を維持するために、操作された共刺激シグナルのみに依拠する。他の共刺激シグナルおよび天然の刺激環境の欠如は、不完全なＴ細胞成熟化およびＴ細胞消耗の増加をもたらし得る。一態様では、本開示は、免疫細胞にとって生理学的に適切な活性化環境であるリンパ節中にＴ細胞を動員するための方法および組成物、ならびに最適なＣＡＲ−Ｔ細胞活性化のための必須の共刺激シグナルの完全な一揃いを提供するＡＰＣを活性化するためのアジュバントの共投与を提供する。
【０１５７】
一部の実施形態では、特に、ＡＬＬおよび／またはＮＨＬの処置について、適切なＣＡＲは、ＣＤ１９またはＣＤ２０を標的とする。非限定的な例には、以下の構造を含むＣＡＲが含まれる：（ｉ）抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ８  Ｈ／ＴＭドメイン、４−１ＢＢ  ＣＳドメインおよびＣＤ３ζ  ＴＣＲシグナル伝達ドメイン；（ｉｉ）抗ＣＤ１９  ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメインならびにＣＤ３ζ  ＴＣＲシグナル伝達ドメイン；ならびに（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０  ｓｃＦｖ、ＩｇＧヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８／４−１ＢＢ共刺激ドメインならびにＣＤ３ζ  ＴＣＲシグナル伝達ドメイン。一部の実施形態では、Ｋｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル；Ｎｏｖａｒｔｉｓ；以前にはＣＴＬ０１９）およびＹｅｓｃａｒｔａ（商標）（アキシカブタジン  シロルーセル；Ｋｉｔｅ  Ｐｈａｒｍａ）が含まれるがこれらに限定されない、本明細書で開示される組合せおよび方法との組合せに適切なＣＡＲエフェクター細胞が、ＣＤ１９またはＣＤ２０を標的とする。
再標的化ＣＡＲ  Ｔ細胞
【０１５８】
一部の実施形態では、ユニバーサル免疫受容体、タグ、スイッチ、または免疫グロブリン上のＦｃ領域に結合するＣＡＲを発現するように改変されたエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、本明細書に記載される組成物および方法に適切である。
【０１５９】
一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ユニバーサル免疫受容体、即ちＵｎｉｖＩＲを発現するように改変される。ＵｎｉｖＩＲの１つの型は、ビオチン結合免疫受容体（ＢＢＩＲ）である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開ＵＳ２０１４０２３４３４８Ａ１を参照のこと）。ユニバーサルキメラ受容体および／またはユニバーサルキメラ受容体を発現するエフェクター細胞に関する方法および組成物の他の例は、国際特許出願ＷＯ２０１６１２３１２２Ａ１、ＷＯ２０１７１４３０９４Ａ１、ＷＯ２０１３０７４９１６Ａ１、米国特許出願ＵＳ２０１６０３４８０７３Ａ１に記載されており、それらは全て、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６０】
一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ユニバーサルモジュラー抗タグキメラ抗原受容体（ＵｎｉＣＡＲ）を発現するように改変される。この系は、複数の抗原に対するＵｎｉＣＡＲ移植された免疫細胞の再標的化を可能にする（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開ＵＳ２０１７０２４０６１２Ａ１；その全体が参照により本明細書に組み込まれるCartellieri  et  al.,  (2016)  Blood  Cancer  Journal  6,  e458を参照のこと）。
【０１６１】
一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、切り替え可能なキメラ抗原受容体およびキメラ抗原受容体エフェクター細胞（ＣＡＲ−ＥＣ）スイッチを発現するように改変される。この系では、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ上のキメラ抗原受容体によって結合される第１の領域および標的細胞上の細胞表面分子に結合する第２の領域を有し、それによって、結合した標的細胞に対して細胞傷害性であるＣＡＲ−ＥＣからの免疫応答を刺激する。一部の実施形態では、ＣＡＲ−ＥＣはＴ細胞であり、ＣＡＲ−ＥＣスイッチは、ＣＡＲ−ＥＣ活性のための「オンのスイッチ」として作用し得る。活性は、スイッチの投与を低減させるまたは止めることによって「オフにされ」得る。これらのＣＡＲ−ＥＣスイッチは、疾患または状態、例えばがんの処置のために、本明細書で開示されるＣＡＲ−ＥＣ、ならびに既存のＣＡＲ  Ｔ細胞と共に使用され得、ここで、標的細胞は、悪性細胞である。かかる処置は、本明細書で、切り替え可能な免疫療法と呼ばれ得る（その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許公開ＵＳ９６２４２７６Ｂ２）。
【０１６２】
一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分に結合する受容体（例えば、ＣＤ１６Ｖ−ＢＢ−ζ）を発現するように改変される（その全体が参照により本明細書に組み込まれるKudo  et  al.,  (2014)  Cancer  Res  74(1):93-103）。
【０１６３】
一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）に結合するユニバーサル免疫受容体（例えば、切り替え可能なＣＡＲ、ｓＣＡＲ）を発現するように改変される。一部の実施形態では、ペプチドネオエピトープ（ＰＮＥ）は、抗原を標的化する抗体（抗体スイッチ）内の規定された異なる位置に取り込まれている。したがって、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞特異性は、ヒトプロテオーム中に存在しないＰＮＥに対してのみ再方向付けられ、そうして、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞と抗体スイッチとの間の直交性の相互作用を可能にする。この方法では、ｓＣＡＲ−Ｔ細胞は、完全に活性化されるために、抗体スイッチの存在に厳密に依存し、そうして、抗体スイッチの非存在下での内因性組織または抗原のＣＡＲ  Ｔ細胞オフターゲット認識を排除する（その全体が参照により本明細書に組み込まれるArcangeli  et  al.,  (2016)  Transl  Cancer  Res  5(Suppl  2):S174-S177）。切り替え可能なＣＡＲの他の例は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願ＵＳ２０１６０２７２７１８Ａ１によって提供される。
【０１６４】
本明細書で使用される場合、用語「タグ」は、上記ユニバーサル免疫受容体、タグ、スイッチ、または免疫グロブリンのＦｃ領域を包含する。一部の実施形態では、エフェクター細胞は、タグ結合ドメインを含むＣＡＲを発現するように改変される。一部の実施形態では、ＣＡＲは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼまたはマルトース結合タンパク質に結合する。
抗タグキメラ抗原受容体（ＡＴ−ＣＡＲ）
【０１６５】
ＣＡＲ  Ｔ細胞の一般化された臨床適用には、いくつかの制限が存在する。例えば、全てのがん型によって普遍的に発現される単一の腫瘍抗原は存在しないので、ＣＡＲ中の各ｓｃＦｖは、所望の腫瘍抗原に対する特異性を有するように操作される必要がある。さらに、ＣＡＲによって標的とされる腫瘍抗原は、処置に応答して下方調節または変異されて、腫瘍回避を生じ得る。
【０１６６】
代替法として、ユニバーサル抗タグキメラ抗原受容体（ＡＴ−ＣＡＲ）およびＣＡＲ−Ｔ細胞が開発されている。例えば、ヒトＴ細胞は、抗フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）ＣＡＲ（抗ＦＩＴＣ−ＣＡＲと呼ばれる）を発現するように操作されている。このプラットフォームは、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖ（細胞の表面上）とＦＩＴＣとの間の高親和性相互作用、ならびに任意の抗がんベースのモノクローナル抗体、例えば、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（retuximab）（抗ＣＤ２０）およびハーセプチン（抗Ｈｅｒ２）にＦＩＴＣ分子（または他のタグ）をコンジュゲートする能力を利用している。
【０１６７】
したがって、一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１２０８２８４１およびＵＳ２０１６０１２９１０９Ａ１中に少なくとも記載されるように、ユニバーサル抗タグキメラ抗原受容体（ＡＴ−ＣＡＲ）を発現するように改変される。かかるＡＴ−ＣＡＲ系では、Ｔ細胞は、抗体などのタグ化タンパク質を認識し、それに結合する。例えば、一部の実施形態では、ＡＴ−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、タグ標識された抗体、例えば、ＦＩＴＣ標識された抗体を認識する。一部の実施形態では、抗腫瘍抗原抗体は、タグ（例えば、ＦＩＴＣ）にコンジュゲートされ、ＡＴ−ＣＡＲ治療の前に、それと併せて、またはその後に投与される。抗腫瘍抗原抗体は、当業者に公知である。
【０１６８】
示されるように、タグ結合ドメインの結合特異性は、標的細胞に結合するために使用されるタンパク質にコンジュゲートされるタグの実体に依存する。例えば、本開示の一部の態様では、タグはＦＩＴＣであり、タグ結合ドメインは抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦｖである。あるいは、本開示の一部の態様では、タグは、ビオチンまたはＰＥ（フィコエリトリン）であり、タグ結合ドメインは、抗ビオチンｓｃＦｖまたは抗ＰＥ  ｓｃＦｖである。
【０１６９】
一部の実施形態では、タグ化タンパク質の各製剤のタンパク質は、同じまたは異なり、このタンパク質は、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、オマリズマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）およびベバシズマブ（bevacuzimab）（抗ＶＥＧＦ）である。
【０１７０】
したがって、一部の実施形態では、タグ化タンパク質には、ＦＩＴＣコンジュゲート抗体、ビオチンコンジュゲート抗体、ＰＥコンジュゲート抗体、ヒスチジンコンジュゲート抗体およびストレプトアビジンコンジュゲート抗体が含まれ、この抗体は、標的細胞によって発現されるＴＡＡまたはＴＳＡに結合する。例えば、タグ化タンパク質には、ＦＩＴＣコンジュゲートセツキシマブ、ＦＩＴＣコンジュゲートリツキシマブ、ＦＩＴＣコンジュゲートハーセプチン、ビオチンコンジュゲートセツキシマブ、ビオチンコンジュゲートリツキシマブ、ビオチンコンジュゲートハーセプチン、ＰＥコンジュゲートセツキシマブ、ＰＥコンジュゲートリツキシマブ、ＰＥコンジュゲートハーセプチン、ヒスチジンコンジュゲートセツキシマブ、ヒスチジンコンジュゲートリツキシマブ、ヒスチジンコンジュゲートハーセプチン、ストレプトアビジンコンジュゲートセツキシマブ、ストレプトアビジンコンジュゲートリツキシマブおよびストレプトアビジンコンジュゲートハーセプチンが含まれるがこれらに限定されない。
【０１７１】
一部の実施形態では、ＡＴ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞の各集団のＡＴ−ＣＡＲは、同じまたは異なり、ＡＴ−ＣＡＲは、タグ結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、タグ結合ドメインは、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の態様では、タグ結合ドメインは、ＦＩＴＣ、ビオチン、ＰＥ、ヒスチジンまたはストレプトアビジンに特異的に結合する。一部の実施形態では、タグ結合ドメインは抗原結合性断片であり、抗原結合性断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、例えば、ＦＩＴＣ、ビオチン、ＰＥ、ヒスチジンまたはストレプトアビジンに特異的に結合するｓｃＦｖである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８α鎖のヒンジおよび膜貫通領域である。一部の実施形態では、活性化ドメインは、ＣＤ２８の細胞質領域、ＣＤ１３７（４１ＢＢ）、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ３ζおよびＦｃＲεの細胞質領域のうち１つまたは複数を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、タグ化タンパク質の各製剤のタグは、同じまたは異なり、タグは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ヒスチジン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される。
【０１７３】
タグは、化学的カップリングおよび化学的クロスリンカーなどの技術を使用して、タンパク質にコンジュゲートされ得る。あるいは、タグ化タンパク質を融合タンパク質としてコードするポリヌクレオチドベクターが調製され得る。次いで、細胞系は、タグ化タンパク質を発現するように操作され得、タグ化タンパク質は、培養培地から単離され得、精製され得、本明細書で開示される方法において使用され得る。
【０１７４】
一部の実施形態では、タグ化タンパク質は、ＡＴ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞の投与の前に、それと併せて、またはその後に、対象に投与される。一部の実施形態では、本開示は、対象においてがんを処置する方法であって、（ａ）処置を必要とする対象に、タグ化タンパク質の製剤を投与することであって、タグ化タンパク質が、対象におけるがん細胞に結合する、こと、および（ｂ）対象に、抗タグキメラ抗原受容体（ＡＴ−ＣＡＲ）発現Ｔ細胞の治療有効集団を投与することであって、ＡＴ−ＣＡＲ発現Ｔ細胞が、タグ化タンパク質に結合し、がん細胞死を誘導する、ことを含み、それによって対象においてがんを処置する、方法を提供する。
タンデムＣＡＲ（ＴａｎＣＡＲ）エフェクター細胞
【０１７５】
がん処置、腫瘍不均一性および免疫編集のためにＣＡＲアプローチを使用することは、ＣＡＲ処置からの回避を引き起こし得ることが観察されている（Grupp  et  al.,  New  Eng.  J.  Med  (2013)  368:1509-1518）。代替的アプローチとして、タンデムＣＡＲまたはＴａｎＣＡＲとして公知の二特異性ＣＡＲが、複数のがん特異的マーカーを同時に標的とするための試みにおいて開発されている。ＴａｎＣＡＲでは、細胞外ドメインは、リンカーによって接続された２つの抗原結合特異性をタンデムで含む。したがって、２つの結合特異性（ｓｃＦｖ）は共に、単一の膜貫通部分に連結される：一方のｓｃＦｖは、膜に隣接し、他方のｓｃＦｖは、遠位位置にある。例示的なＴａｎＣＡＲとして、Grada  et  al.  (Mol  Ther  Nucleic  Acids  (2013)  2,  e105)は、ＣＤ１９特異的ｓｃＦｖとそれに続くＧｌｙ−ＳｅｒリンカーおよびＨＥＲ２特異的ｓｃＦｖとを含むＴａｎＣＡＲを記載している。ＨＥＲ２−ｓｃＦｖは、膜近傍位置にあり、ＣＤ１９−ｓｃＦｖは、遠位位置にあった。ＴａｎＣＡＲは、２つの腫瘍制限抗原（tumor  restricted  antigen）の各々に対する別個のＴ細胞反応性を誘導することが示された。
【０１７６】
したがって、本開示の一部の態様は、Ｔ細胞の二特異性活性化および標的化を媒介するタンデムキメラ抗原受容体に関する。本開示は、ＣＡＲについて二特異性に言及するが、一部の態様では、ＣＡＲは、３つ、４つまたはそれよりも多くの腫瘍抗原を標的とすることができる。ＣＡＲ  Ｔ細胞を使用して複数の抗原を標的化することは、Ｔ細胞活性化を増強し得るおよび／または抗原喪失による腫瘍回避を相殺し得る。ＴａｎＣＡＲはまた、複数の発現された抗原を標的とし得、広い特異性を有する同じ細胞産物を使用して種々の腫瘍を標的とし得、および／または複数の特異性に起因して同じ結果を達成するあまり強くシグナル伝達しないＣＡＲによるより良い毒性プロファイルを提供し得る。
【０１７７】
一部の実施形態では、本開示は、２つの標的化ドメインを含むＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、３つまたはそれよりも多くの標的化ドメインを含む多特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。別の実施形態では、本開示は、細胞表面において第１のＣＡＲおよび第２のＣＡＲを提供し、各ＣＡＲは抗原結合ドメインを含み、第１のＣＡＲの抗原結合ドメインは、第１の腫瘍抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＨＥＲ２）に結合し、第２のＣＡＲの抗原結合ドメインは、別の（異なる）腫瘍抗原に結合する。ＴａｎＣＡＲは、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３０３２３０Ａ１およびＵＳ２０１７０３４０７０５Ａ１に記載されている。
【０１７８】
一部の実施形態では、本開示のＴａｎＣＡＲは、２つまたはそれよりも多くの腫瘍抗原を標的とする。例示的な腫瘍抗原には、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ｋ軽鎖、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ３８、ＲＯＲ１、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３／４、ＥＧＦｒ  ｖＩＩＩ、癌胎児性抗原、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、メソテリン、ＴＡＧ７２、ＰＳＭＡ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、Ｂ７−Ｈ６、ＩＬ−１３受容体α２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＣＡ９、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＭＷ−ＭＡＡ、ＣＤ１７１、ルイスＹ、Ｇ２５０／ＣＡＬＸ、ＨＬＡ−ＡＩ  ＭＡＧＥ  Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２  ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＰＳＣ１、葉酸受容体−α、ＣＤ４４ｖ７／８、８Ｈ９、ＮＣＡＭ、ＶＥＧＦ受容体、５Ｔ４、胎児ＡｃｈＲ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＣＤ４４ｖ６、ＴＥＭ１および／またはＴＥＭ８のうち１つまたは複数が含まれる。
【０１７９】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ１９および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ２２および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＨＥＲ２および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＩＬ１３Ｒ−アルファ２および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦ−Ａおよび別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、Ｔｅｍ８および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＦＡＰおよび別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＥｐｈＡ２および別の腫瘍抗原を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、以下の腫瘍抗原のうち１つもしくは複数、２つもしくはそれよりも多く、３つもしくはそれよりも多く、または４つもしくはそれよりも多くを標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する：ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＨＥＲ２、ＩＬ１３Ｒ−アルファ２、ＶＥＧＦ−Ａ、Ｔｅｍ８、ＦＡＰまたはＥｐｈＡ２、およびそれらの任意の組合せ。一部の実施形態では、本開示は、ＨＥＲ２およびＩＬ１３Ｒ−アルファ２を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＣＤ１９およびＣＤ２２を標的とする二特異性ＴａｎＣＡＲを提供する。
キメラ抗原受容体およびＣＡＲエフェクター細胞を生成するための方法
【０１８０】
一部の実施形態では、対象のエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、キメラ抗原受容体で遺伝子改変される（Sadelain  et  al.,  Cancer  Discov.  3:388-398,  2013）。例えば、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が提供され、キメラ抗原受容体をコードする組換え核酸が、ＣＡＲ細胞を生成するために、患者由来エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入される。一部の実施形態では、対象に由来しないエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が、キメラ抗原受容体で遺伝子改変される。例えば、一部の実施形態では、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、「既製の」養子細胞治療として使用されるように操作された同種細胞、例えば、Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓによって開発されたユニバーサルキメラ抗原受容体Ｔ細胞（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｔ  ｃｅｌｌ）（ＵＣＡＲＴ）である。ＵＣＡＲＴは、特定のがん型を有する最大数の患者を処置するために使用されるように操作された同種ＣＡＲ  Ｔ細胞である。Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓが開発中のＵＣＡＲＴの非限定的な例には、以下の腫瘍抗原を標的とするものが含まれる：ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＳ１およびＣＤ３８。
【０１８１】
当該分野で公知の種々の異なる方法が、本明細書で開示される核酸または発現ベクターのいずれかをエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入するために使用され得る。核酸をエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入するための方法の非限定的な例には、リポフェクション、トランスフェクション（例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、高度に分岐した有機化合物を使用したトランスフェクション、カチオン性ポリマーを使用したトランスフェクション、デンドリマーベースのトランスフェクション、光学的トランスフェクション、粒子ベースのトランスフェクション（例えば、ナノ粒子トランスフェクション）、またはリポソーム（例えば、カチオン性リポソーム）を使用したトランスフェクション）、マイクロインジェクション、電気穿孔、細胞圧搾、ソノポレーション、プロトプラスト融合、インペイルフェクション（impalefection）、水力学的送達、遺伝子銃、マグネトフェクション、ウイルストランスフェクションおよびヌクレオフェクションが含まれる。さらに、当該分野で公知のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ゲノム編集テクノロジーが、ＣＡＲ細胞活性を増強するために、ＣＡＲ核酸をエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入するため、および／または他の遺伝子改変（例えば、以下に記載されるもの）をエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）中に導入するために使用され得る（ＣＡＲ  Ｔ細胞に関してのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９テクノロジーの使用については、例えば、ＵＳ９，８９０，３９３；ＵＳ９，８５５，２９７；ＵＳ２０１７／０１７５１２８；ＵＳ２０１６／０１８４３６２；ＵＳ２０１６／０２７２９９９；ＷＯ２０１５／１６１２７６；ＷＯ２０１４／１９１１２８；ＣＮ１０６７５５０８８；ＣＮ１０６５９１３６３；ＣＮ１０６４８００９７；ＣＮ１０６３９９３７５；ＣＮ１０４８９４０６８を参照のこと）。
【０１８２】
本明細書に記載される細胞または組成物のいずれかを生成するために使用され得る方法が本明細書に提供され、各細胞は、ＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲのいずれか）を発現し得る。
【０１８３】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および抗原結合ドメインが抗原に結合した場合にＴ細胞を刺激するのに十分なＣＤ３ζ配列の細胞質配列を含み、必要に応じて、抗原結合ドメインが抗原に結合した場合にＴ細胞の共刺激を提供する１つまたは複数の（例えば、２つ、３つまたは４つの）共刺激タンパク質の細胞質配列（例えば、Ｂ７−Ｈ３、ＢＴＬＡ、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ８０、ＣＤ１６０、ＣＤ２４４、ＩＣＯＳ、ＬＡＧ３、ＬＦＡ−１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＴＩＭ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドのうち１つまたは複数の細胞質配列）を含む細胞質シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、リンカーをさらに含み得る。ＣＡＲの非限定的な態様および特色は、以下に記載される。例示的な抗原結合ドメイン、リンカー、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲおよびＣＡＲ細胞のさらなる態様は、例えば、Kakarla  et  al.,  Cancer  J.  20:151-155,  2014；Srivastava  et  al.,  Trends  Immunol.  36:494-502,  2015；Nishio  et  al.,  Oncoimmunology  4(2):  e988098,  2015；Ghorashian  et  al.,  Br.  J.  Haematol.  169:463-478,  2015；Levine,  Cancer  Gene  Ther.  22:79-84,  2015；Jensen  et  al.,  Curr.  Opin.  Immunol.  33:9-15,  2015；Singh  et  al.,  Cancer  Gene  Ther.  22:95-100,  2015；Li  et  al.,  Zhongguo  Shi  Yan  Xue  Ye  Xue  Za  Zhi  22:1753-1756,  2014；Gill  et  al.,  Immunol.  Rev.  263:68-89,  2015；Magee  et  al.,  Discov.  Med.  18:265-271,  2014；Gargett  et  al.,  Front.  Pharmacol.  5:235,  2014；Yuan  et  al.,  Zhongguo  Shi  Yan  Xue  Ye  Xue  Za  Zhi  22:1137-1141,  2014；Pedgram  et  al.,  Cancer  J.  20:127-133,  2014；Eshhar  et  al.,  Cancer  J.  20:123-126,  2014；Ramos  et  al.,  Cancer  J.  20:112-118,  2014；Maus  et  al.,  Blood  123:2625-2635,  2014；Jena  et  al.,  Curr.  Hematol.  Malig.  Rep.  9:50-56,  2014；Maher  et  al.,  Curr.  Gene  Ther.  14:35-43,  2014；Riches  et  al.,  Discov.  Med.  16:295-302,  2013；Cheadle  et  al.,  Immunol.  Rev.  257:83-90,  2014；Davila  et  al.,  Int.  J.  Hematol.  99:361-371,  2014；Xu  et  al.,  Cancer  Lett.  343:172-178,  2014；Kochenderfer  et  al.,  Nat.  Rev.  Clin.  Oncol.  10:267-276,  2013；Hosing  et  al.,  Curr.  Hematol.  Malig.  Rep.  8:60-70,  2013；Hombach  et  al.,  Curr.  Mol.  Med.  13:1079-1088,  2013；Xu  et  al.,  Leuk.  Lymphoma  54:255-260,  2013；Gilham  et  al.,  Trends  Mol.  Med.  18:377-384,  2012；Lipowska-Bhalla  et  al.,  Cancer  Immunol.  Immunother.  61:953-962,  2012；Chmielewski  et  al.,  Cancer  Immunol.  Immunother.  61:1269-1277,  2013；Jena  et  al.,  Blood  116:1035-1044,  2010；Dotti  et  al,  Immunology  Reviews  257(1):  107-126,  2013；Dai  et  al.,  Journal  of  the  National  Cancer  Institute  108(7):  djv439,  2016；Wang  and  Riviere,  Molecular  Therapy-Oncolytics  3:  16015,  2016；米国特許出願公開第２０１８／００５７６０９号；同第２０１８／００３７６２５号；同第２０１７／０３６２２９５号；同第２０１７／０１３７７８３号；同第２０１６／０１５２７２３号、同第２０１６／０２０６６５６号、同第２０１６／０１９９４１２号、同第２０１６／０２０８０１８号、同第２０１５／０２３２８８０号、同第２０１５／０２２５４８０号；同第２０１５／０２２４１４３号；同第２０１５／０２２４１４２号；同第２０１５／０１９０４２８号；同第２０１５／０１９６５９９号；同第２０１５／０１５２１８１号��同第２０１５／０１４００２３号；同第２０１５／０１１８２０２号；同第２０１５／０１１０７６０号；同第２０１５／００９９２９９号；同第２０１５／００９３８２２号；同第２０１５／００９３４０１号；同第２０１５／００５１２６６号；同第２０１５／００５０７２９号；同第２０１５／００２４４８２号；同第２０１５／００２３９３７号；同第２０１５／００１７１４１号；同第２０１５／００１７１３６号；同第２０１５／００１７１２０号；同第２０１４／０３７００４５号；同第２０１４／０３７００１７号；同第２０１４／０３６９９７７号；同第２０１４／０３４９４０２号；同第２０１４／０３２８８１２号；同第２０１４／０３２２２７５号；同第２０１４／０３２２２１６号；同第２０１４／０３２２２１２号；同第２０１４／０３２２１８３号；同第２０１４／０３１４７９５号；同第２０１４／０３０８２５９号；同第２０１４／０３０１９９３号；同第２０１４／０２９６４９２号；同第２０１４／０２９４７８４号；同第２０１４／０２８６９７３号；同第２０１４／０２７４９０９号；同第２０１４／０２７４８０１号；同第２０１４／０２７１６３５号；同第２０１４／０２７１５８２号；同第２０１４／０２７１５８１号；同第２０１４／０２７１５７９号；同第２０１４／０２５５３６３号；同第２０１４／０２４２７０１号；同第２０１４／０２４２０４９号；同第２０１４／０２２７２７２号；同第２０１４／０２１９９７５号；同第２０１４／０１７０１１４号；同第２０１４／０１３４７２０号；同第２０１４／０１３４１４２号；同第２０１４／０１２０６２２号；同第２０１４／０１２０１３６号；同第２０１４／０１０６４４９号；同第２０１４／０１０６４４９号；同第２０１４／００９９３４０号；同第２０１４／００８６８２８号；同第２０１４／００６５６２９号；同第２０１４／００５０７０８号；同第２０１４／００２４８０９号；同第２０１３／０３４４０３９号；同第２０１３／０３２３２１４号；同第２０１３／０３１５８８４号；同第２０１３／０３０９２５８号；同第２０１３／０２８８３６８号；同第２０１３／０２８７７５２号；同第２０１３／０２８７７４８号；同第２０１３／０２８０２２１号；同第２０１３／０２８０２２０号；同第２０１３／０２６６５５１号；同第２０１３／０２１６５２８号；同第２０１３／０２０２６２２号；同第２０１３／００７１４１４号；同第２０１２／０３２１６６７号；同第２０１２／０３０２４６６号；同第２０１２／０３０１４４８号；同第２０１２／０３０１４４７号；同第２０１２／００６０２３０号；同第２０１１／０２１３２８８号；同第２０１１／０１５８９５７号；同第２０１１／０１０４１２８号；同第２０１１／００３８８３６号；同第２００７／００３６７７３号；および同第２００４／００４３４０１号に記載されている。例示的な抗原結合ドメイン、リンカー、膜貫通ドメインおよび細胞質シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲおよびＣＡＲ細胞のさらなる態様は、ＷＯ２０１６／１６８５９５；ＷＯ１２／０７９０００；同２０１５／０１４１３４７；同２０１５／００３１６２４；同２０１５／００３０５９７；同２０１４／０３７８３８９；同２０１４／０��１９９７８；同２０１４／０２０６６２０；同２０１４／００３７６２８；同２０１３／０２７４２０３；同２０１３／０２２５６６８；同２０１３／０１１６１６７；同２０１２／０２３０９６２；同２０１２／０２１３７８３；同２０１２／００９３８４２；同２０１２／００７１４２０；同２０１２／００１５８８８；同２０１１／０２６８７５４；同２０１０／０２９７０９３；同２０１０／０１５８８８１；同２０１０／００３４８３４；同２０１０／００１５１１３；同２００９／０３０４６５７；同２００４／００４３４０１；同２０１４／０３２２２５３；同２０１５／０１１８２０８；同２０１５／００３８６８４；同２０１４／００２４６０１；同２０１２／０１４８５５２；同２０１１／０２２３１２９；同２００９／０２５７９９４；同２００８／０１６０６０７；同２００８／０００３６８３；同２０１３／０１２１９６０；同２０１１／００５２５５４；および同２０１０／０１７８２７６に記載されている。
Ａ．抗原結合ドメイン
【０１８４】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）中に含まれる抗原結合ドメインは、抗原（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または非がん性細胞上では発現されない抗原）またはユニバーサル受容体（例えば、タグ）に特異的に結合し得る。抗原結合ドメインの非限定的な例には、モノクローナル抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤ）（例えば、完全ヒトまたはキメラ（例えば、ヒト化）抗体）、抗体の抗原結合性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２断片）（例えば、完全ヒトまたはキメラ（例えば、ヒト化）抗体の断片）、ダイアボディ、トリアボディ（triabody）、テトラボディ（tetrabody）、ミニボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦａｂ、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ｈｃ−ＩｇＧ、ＢｉＴＥ、単一ドメイン抗体（例えば、Ｖ−ＮＡＲドメインまたはＶｈＨドメイン）、ＩｇＮＡＲ、および多特異性（例えば、二特異性抗体）抗体が含まれる。これらの抗原結合ドメインを作製する方法は、当該分野で公知である。
【０１８５】
一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合することが可能な抗体、例えば、免疫グロブリン分子（例えば、軽鎖または重鎖免疫グロブリン分子）および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な（抗原結合性）断片の、少なくとも１つの（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの）ＣＤＲ（例えば、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン由来の３つのＣＤＲのいずれかまたは免疫グロブリン重鎖可変ドメイン由来の３つのＣＤＲのいずれか）を含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、単鎖抗体（例えば、Ｖ−ＮＡＲドメインもしくはＶＨＨドメイン、または本明細書に記載される単鎖抗体のいずれか）である。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体分子全体（例えば、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体）またはマルチマー抗体（例えば、二特異性抗体）である。
【０１８７】
一部の実施形態では、抗原結合ドメインには、抗体断片および多特異性（例えば、二特異性）抗体または抗体断片が含まれる。抗体およびその抗原結合性断片の例には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、Ｆｖ、およびＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片が含まれるがこれらに限定されない。
【０１８８】
本明細書に提供されるさらなる抗原結合ドメインは、ポリクローナル、モノクローナル、多特異性（マルチマー、例えば、二特異性）、ヒト抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト−マウスキメラ）、単鎖抗体、細胞内で作製された抗体（即ち、イントラボディ）、およびそれらの抗原結合性断片である。抗体またはその抗原結合性断片は、任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、ＩｇＧ１抗体またはその抗原結合性断片である。一部の例では、抗原結合ドメインは、ＩｇＧ４抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、重鎖および軽鎖を含む免疫グロブリンである。
【０１８９】
抗原結合ドメインのさらなる例は、ＩｇＧの抗原結合性断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗原結合性断片）（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ、例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の抗原結合性断片）、ＩｇＡの抗原結合性断片（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２の抗原結合性断片）（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＡ、例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＡ１またはＩｇＡ２の抗原結合性断片）、ＩｇＤの抗原結合性断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＤの抗原結合性断片）、ＩｇＥの抗原結合性断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＥの抗原結合性断片）またはＩｇＭの抗原結合性断片（例えば、ヒトまたはヒト化ＩｇＭの抗原結合性断片）である。
【０１９０】
一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、例えば、食塩水中またはリン酸緩衝食塩水中で、約１×１０−７Ｍもしくは１×１０−７Ｍ未満（例えば、約１×１０−８Ｍもしくは１×１０−８Ｍ未満、約５×１０−９Ｍもしくは５×１０−９Ｍ未満、約２×１０−９Ｍもしくは２×１０−９Ｍ未満、または約１×１０−９Ｍもしくは１×１０−９Ｍ未満）の親和性（ＫＤ）で、特定の抗原（例えば、腫瘍関連抗原）に結合できる。
【０１９１】
当業者に理解され得るように、ＣＡＲ中に含める抗原結合ドメインの選択は、それを必要とする対象において標的とされる細胞（例えば、がん細胞または腫瘍）の表面を定義するリガンドの型および数に依存し、ならびに／または両親媒性リガンドコンジュゲート上に存在するリガンドに依存する。例えば、一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、がん細胞上の細胞表面マーカーとして作用する、または腫瘍関連抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３０、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥＧＦＲまたはＢＣＭＡ）もしくは腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）であるリガンドを認識するように選択される。一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、両親媒性リガンドコンジュゲート上のリガンドを認識する。
【０１９２】
一部の実施形態では、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、腫瘍抗原に結合するＣＡＲ分子を含む（例えば、腫瘍抗原結合ドメインを含む）。一部の実施形態では、ＣＡＲ分子は、固形腫瘍（例えば、乳がん、結腸がんなど）の腫瘍抗原を認識する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲ分子は、少なくとも２つの抗原結合ドメインを含む、上記タンデムＣＡＲ分子である。一部の実施形態では、ＣＡＲ分子は、血液学的悪性腫瘍（例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性赤血球増加症、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫など）の腫瘍抗原を認識する抗原結合ドメインを含む。
【０１９３】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に特有であり、身体中の他の細胞上には存在しない。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＡＡは、腫瘍細胞に特有ではなく、その代わり、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導できない条件下で正常細胞上でも発現される。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に対して応答できるようにする条件下で生じ得る。一部の実施形態では、ＴＡＡは、免疫系が未熟であって応答できない胎児発生の間に正常細胞上で発現される、または正常細胞上では非常に低いレベルで通常は存在するが、腫瘍細胞上ではかなり高いレベルで発現される。
【０１９４】
ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、患者の腫瘍細胞を配列決定し、腫瘍中でのみ見出される変異したタンパク質を同定することによって決定される。これらの抗原は、「ネオ抗原」と呼ばれる。ネオ抗原が同定されると、治療用抗体がそれに対して産生され得、本明細書に記載される方法において使用され得る。
【０１９５】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、上皮がん抗原（例えば、乳房、胃腸、肺）、前立腺特異的がん抗原（ＰＳＡ）もしくは前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、膀胱がん抗原、肺（例えば、小細胞肺）がん抗原、結腸がん抗原、卵巣がん抗原、脳がん抗原、胃がん抗原、腎細胞癌抗原、膵がん抗原、肝臓がん抗原、食道がん抗原、頭頸部がん抗原または結腸直腸がん抗原である。ある特定の実施形態では、腫瘍抗原は、リンパ腫抗原（例えば、非ホジキンリンパ腫またはホジキンリンパ腫）、Ｂ細胞リンパ腫がん抗原、白血病抗原、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫または形質細胞性骨髄腫）抗原、急性リンパ芽球性白血病抗原、慢性骨髄性白血病（chronic  myeloid  leukemia）抗原または急性骨髄性白血病（acute  myelogenous  leukemia）抗原である。
【０１９６】
ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）によって標的とされ得る腫瘍抗原（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）および腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ））には、１ＧＨ−ＩＧＫ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、シクロフィリン（acyclophilin）Ｃ関連タンパク質、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、α−アクチニン−４、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＡＲＴ−４、Ｂ７、Ｂａ７３３、ＢＡＧＥ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ベータ−カテニン、ベータ−ＨＣＧ、ＢｒＥ３−抗原、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３／ＣＡ  ２７．２９／ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ−１、炭酸脱水酵素ＩＸ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＣＡＳＰ−８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ−ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ６８、ＣＤ７０、ＣＤ７０Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３２、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ４、ＣＤＫ４ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＯ−０２９、ＣＴＬＡ４、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、ＨＩＦ−１ａ、結腸特異的抗原−ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ−Ｍｅｔ、ＤＡＭ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ−１（ＴＲＯＰ−２）、ＥＧＰ−２、ＥＬＦ２−Ｍ、Ｅｐ−ＣＡＭ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ−５、Ｆｌｔ−１、Ｆｌｔ−３、葉酸受容体、Ｇ２５０抗原、Ｇａ７３３ＶＥｐＣＡＭ、ＧＡＧＥ、ｇｐ１００、ＧＲＯ−β、Ｈ４−ＲＥＴ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＭ１．２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ−１、低酸素誘導性因子（ＨＩＦ−１）、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ＨＴｇｐ−１７５、Ｉａ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λ、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１３Ｒ、ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＩＬ−２５、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、ＫＣ４−抗原、ＫＳＡ、ＫＳ−１−抗原、ＫＳ１−４、ＬＡＧＥ−１ａ、Ｌｅ−Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＲＴ−１、ＭＡＲＴ−２、ＴＲＡＧ−３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１Ａ、ＭＩＰ−１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ａｃ、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１６、ＭＵＭ−１／２、ＭＵＭ−３、ＭＹＬ−ＲＡＲ、ＮＢ／７０Ｋ、Ｎｍ２３Ｈ１、Ｎ��ＭＡ、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｐ１５、ｐ１６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ３、ＰＡＭ４抗原、膵がんムチン、ＰＤ１受容体（ＰＤ−１）、ＰＤ−１受容体リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）、ＰＤ−１受容体リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）、ＰＩ５、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、Ｐｍｅｌ１７前立腺酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、ＰｌＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−６、ＩＬ−２５、ＲＣＡＳ１、ＲＳ５、ＲＡＧＥ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｒａｓ、Ｔ１０１、ＳＡＧＥ、Ｓ１００、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＤＤＣＡＧ１６、ＴＡ−９０／Ｍａｃ２結合タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＣ、ＴＡＧ−７２、ＴＬＰ、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＴＳＰ−１８０、ＴＮＦ−α、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ−Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、チロシナーゼ、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ−Ｂフィブロネクチン、ＷＴ−１、１７−１Ａ−抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ５、血管新生マーカー、ｂｃ１−２、ｂｃ１−６およびＫ−ｒａｓ、癌遺伝子マーカーおよび癌遺伝子産物が含まれるがこれらに限定されない（例えば、Sensi  et  al.,  Clin  Cancer  Res  2006,  12:5023-32；Parmiani  et  al.,  J  Immunol  2007,  178:1975-79；Novellino  et  al.  Cancer  Immunol  Immunother  2005,  54:187-207を参照のこと）。
【０１９７】
一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ヒト慢性疾患またはがん（例えば、子宮頸がん）に関連するウイルスに由来するウイルス抗原である。例えば、一部の実施形態では、ウイルス抗原は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ＨＰＶ抗原Ｅ６および／もしくはＥ７、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する。
【０１９８】
例示的ながんまたは腫瘍およびかかる腫瘍に関連する特異的腫瘍抗原（排他的ではないが）には、急性リンパ芽球性白血病（ｅｔｖ６、ａｍｌ１、シクロフィリンｂ）、Ｂ細胞リンパ腫（Ｉｇ−イディオタイプ）、グリオーマ（Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ）、膀胱がん（ｐ２１ｒａｓ）、胆道がん（ｐ２１ｒａｓ）、乳がん（ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２）、子宮頸癌（ｐ５３、ｐ２１ｒａｓ）、結腸癌（ｐ２１ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＭＵＣファミリー）、結腸直腸がん（結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）−ＣＯ１７−１Ａ／ＧＡ７３３、ＡＰＣ）、絨毛癌（ＣＥＡ）、上皮細胞がん（シクロフィリンｂ）、胃がん（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ｇａ７３３糖タンパク質）、肝細胞がん（α−フェトプロテイン）、ホジキンリンパ腫（Ｉｍｐ−１、ＥＢＮＡ−１）、肺がん（ＣＥＡ、ＭＡＧＥ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１）、リンパ系細胞由来白血病（シクロフィリンｂ）、黒色腫（ｐ５タンパク質、ｇｐ７５、癌瘍胎児性抗原、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｃｄｃ２７、ＭＡＧＥ−３、ｐ２１ｒａｓ、ｇｐ１００）、骨髄腫（mycloma）（ＭＵＣファミリー、ｐ２１ｒａｓ）、非小細胞肺癌（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２）、鼻咽頭がん（Ｉｍｐ−１、ＥＢＮＡ−１）、卵巣がん（ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２）、前立腺がん（前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）ならびにその抗原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ｇａ７３３糖タンパク質）、腎がん（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｃ−ｅｒｂＢ−２）、子宮頸部および食道の扁平上皮がん、精巣がん（ＮＹ−ＥＳＯ−１）、およびＴ細胞白血病（ＨＴＬＶ−１エピトープ）、ならびにウイルス産物またはタンパク質が含まれる。
【０１９９】
一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子を含む免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、メソテリン結合ドメインを含むＣＡＲを発現する（即ち、ＣＡＲ  Ｔ細胞は、メソテリンを特異的に認識する）。メソテリンは、卵巣がん、肺がんおよび膵がんを含む種々のがんにおいて過剰発現される腫瘍抗原である。
【０２００】
一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子を含む免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、ＣＤ１９結合ドメインを含むＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子を含む免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、ＨＥＲ２結合ドメインを含むＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子を含む免疫エフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、ＥＧＦＲ結合ドメインを含むＣＡＲを発現する。
【０２０１】
一部の実施形態では、ＣＤ１９標的化または結合ドメインを含むＣＡＲを発現するＣＡＲエフェクター細胞は、Ｋｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル；Ｎｏｖａｒｔｉｓ；その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６１０９４１０を参照のこと）またはＹｅｓｃａｒｔａ（商標）（アキシカブタジン  シロルーセル；Ｋｉｔｅ；その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１６０３４６３２６を参照のこと）である。
Ｂ．リンカー
【０２０２】
（１）抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間、および／または（２）膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間にリンカーを必要に応じて含み得るＣＡＲが、本明細書に提供される。一部の実施形態では、リンカーは、ポリペプチドリンカーであり得る。例えば、リンカーは、約１アミノ酸と約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸、約１２アミノ酸、約１０アミノ酸、約８アミノ酸、約６アミノ酸、約４アミノ酸もしくは約２アミノ酸との間；約２アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸、約１２アミノ酸、約１０アミノ酸、約８アミノ酸、約６アミノ酸もしくは約４アミノ酸；約４アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸、約１２アミノ酸、約１０アミノ酸、約８アミノ酸もしくは約６アミノ酸；約６アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸、約１２アミノ酸、約１０アミノ酸もしくは約８アミノ酸；約８アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸、約１２アミノ酸もしくは約１０アミノ酸；約１０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸、約１４アミノ酸もしくは約１２アミノ酸；約１２アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸、約１６アミノ酸もしくは約１４アミノ酸；約１４アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸、約１８アミノ酸もしくは約１６アミノ酸；約１６アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸、約２０アミノ酸もしくは約１８アミノ酸；約１８アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸、約２５アミノ酸もしくは約２０アミノ酸；約２０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸、約３０アミノ酸もしくは約２５アミノ酸；約２５アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸、約３５アミノ酸もしくは約３０アミノ酸；約３０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸、約４０アミノ酸もしくは約３５アミノ酸；約３５アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸、約５０アミノ酸もしくは約４０アミノ酸；約４０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸、約６０アミノ酸もしくは約５０アミノ酸；約５０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸、約７０アミノ酸もしくは約６０アミノ酸；約６０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１５０アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸、約８０アミノ酸もしくは約７０アミノ酸；約７０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸、約９０アミノ酸もしくは約８０アミノ酸；約８０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸、約１００アミノ酸もしくは約９０アミノ酸；約９０アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸、約２００アミノ酸もしくは約１００アミノ酸；約１００アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸、約３００アミノ酸もしくは約２００アミノ酸；約２００アミノ酸〜約５００アミノ酸、約４００アミノ酸もしくは約３００アミノ酸；約３００アミノ酸〜約５００アミノ酸もしくは約４００アミノ酸；または約４００アミノ酸〜約５００アミノ酸の長さを有し得る。
【０２０３】
リンカーのさらなる例および態様は、本明細書で引用される参考文献に記載され、したがって、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
Ｃ．膜貫通ドメイン
【０２０４】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、膜貫通ドメインもまた含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞質ドメイン中の配列と天然に会合する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するために、ドメインの他の膜貫通ドメイン（例えば、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメイン）への結合を回避するため、１つまたは複数の（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個の）アミノ酸置換によって改変され得る。
【０２０５】
一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、天然の供給源に由来し得る。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、任意の膜結合型または膜貫通タンパク質に由来し得る。本明細書で使用され得る膜貫通ドメインの非限定的な例は、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータもしくはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７またはＣＤ１５４に由来し得る（例えば、それらの膜貫通配列または膜貫通配列の一部を少なくとも含み得る）。
【０２０６】
一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であり得る。例えば、膜貫通ドメインが合成供給源由来である一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、疎水性残基（例えば、ロイシンおよびバリン）を含み得る（例えば、優勢に含み得る）。一部の実施形態では、合成膜貫通ドメインは、合成膜貫通ドメインの最後に、少なくとも１つの（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは少なくとも６つの）、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインを含み得る。
【０２０７】
膜貫通ドメインのさらなる具体的な例は、本明細書で引用される参考文献に記載されている。
Ｄ．細胞質ドメイン
【０２０８】
例えば、抗原結合ドメインが抗原に結合した場合にＴ細胞を刺激するのに十分なＣＤ３ζの細胞質配列を含み、必要に応じて、Ｔ細胞の共刺激を提供する共刺激タンパク質のうちの１つまたは複数の細胞質配列（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ１６０、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＴＩＭ３、ＣＤ２４４、ＣＤ８０、ＬＡＧ３、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、およびＩＴＡＭ配列のいずれかのうち１つまたは複数の細胞質配列）を含む細胞質シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲ分子もまた、本明細書に提供される。ＣＡＲ免疫エフェクター細胞の刺激は、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞の１つまたは複数の抗がん活性の活性化を生じ得る。例えば、一部の実施形態では、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞の刺激は、サイトカインの分泌を含む、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞の細胞溶解活性またはヘルパー活性における増加を生じ得る。一部の実施形態では、共刺激タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメイン全体が、細胞質シグナル伝達ドメイン中に含まれる。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、共刺激タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分（例えば、ＣＡＲ免疫エフェクター細胞においてエフェクター機能シグナルを伝達する細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分）を含む。細胞質シグナル伝達ドメイン中に含まれ得る細胞内シグナル伝達ドメインの非限定的な例には、抗原受容体係合後にシグナル伝達を開始するように協力して作用するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）および共受容体の細胞質配列、ならびに少なくとも１つの（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個の）置換を含み、同じまたはほぼ同じ機能的能力を有する、これらの配列の任意のバリアントが含まれる。
【０２０９】
一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、２つの別個のクラスの細胞質シグナル伝達配列を含み得る：ＴＣＲを介した抗原依存的活性化を開始するシグナル伝達配列（一次細胞質シグナル伝達配列）（例えば、ＣＤ３ζ細胞質シグナル伝達配列）および二次または共刺激シグナルを提供するように抗原非依存的様式で作用する共刺激タンパク質のうちの１つまたは複数の細胞質配列（二次細胞質シグナル伝達配列）。
【０２１０】
一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、それ自体で、またはＣＡＲとの関連で有用な任意の他の所望の細胞質シグナル伝達配列（複数可）と組み合わせて、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むように設計され得る。一部の例では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３ζ鎖部分および共刺激細胞質シグナル伝達配列を含み得る。共刺激細胞質シグナル伝達配列は、共刺激タンパク質（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−ＩＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンド）の細胞質シグナル伝達配列を含むＣＡＲの一部分を指す。
【０２１１】
一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質シグナル伝達ドメイン内の細胞質シグナル伝達配列は、ランダムな順序で位置付けられる。一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞質シグナル伝達ドメイン内の細胞質シグナル伝達配列は、特定の順序で互いに連結される。一部の実施形態では、リンカー（例えば、本明細書に記載されるリンカーのいずれか）が、異なる細胞質シグナル伝達配列間に連結を形成するために使用され得る。
【０２１２】
一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列および共刺激タンパク質ＣＤ２８の細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列および共刺激タンパク質４−ＩＢＢの細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列ならびに共刺激タンパク質ＣＤ２８および４−１ＢＢの細胞質シグナル伝達配列を含むように設計される。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、４−１ＢＢの細胞質シグナル伝達配列を含まない。
ＣＡＲ  Ｔ細胞のさらなる改変
【０２１３】
別の実施形態では、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１７／０４９１６６に記載されるように、増殖の増強、エフェクターサイトカイン産生の調節および脱顆粒に関連する５−ヒドロキシメチルシトシンの総レベルの減少をもたらし、それによって、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）の増殖および／または機能を増加させる、メチルシトシンジオキシゲナーゼ遺伝子（例えば、Ｔｅｔｌ、Ｔｅｔ２、Ｔｅｔ３）の破壊によって増強される。したがって、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲを発現するように操作され得、前記エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）におけるＴｅｔｌ、Ｔｅｔ２および／またはＴｅｔ３の発現および／または機能は、低減または排除されている。
【０２１４】
別の実施形態では、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／１２６６０８および米国公開第２０１８／００４４４２４号に記載されるように、ＣＡＲを構成的に発現し（非条件的ＣＡＲ（nonconditional  CAR）と呼ばれる）、がんを処置するのに有用な別の薬剤を条件的に発現するエフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用することによって増強される。かかる実施形態では、条件的に発現される薬剤は、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化、例えば、非条件的ＣＡＲのその標的への結合の際に発現される。一実施形態では、条件的に発現される薬剤は、ＣＡＲである（本明細書で条件的ＣＡＲと呼ばれる）。別の実施形態では、条件的に発現される薬剤は、免疫応答のチェックポイントインヒビターを阻害する。別の実施形態では、条件的に発現される薬剤は、ＣＡＲの有効性を改善または増強し、これには、サイトカインを含み得る。
【０２１５】
別の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／０６９２８２および米国公開第２０１７／０３３５３３１号に記載されるように、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ベータ−２ミクログロブリン、ＨＬＡ分子、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ１およびＦＡＳからなる群から選択される内因性遺伝子の発現を変更（例えば、下方モジュレート）することが可能な核酸を用いて、ＣＡＲ  Ｔ細胞を改変することによって増強される。
【０２１６】
別の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１５／１１２６２６および米国公開第２０１６／０３４０４０６号に記載されるように、Ｔ細胞において、ＣＡＲおよび１つまたは複数の、Ｔ細胞プライミングのエンハンサー（「ＥＴＰ」）を共発現させることによって増強される。ＣＡＲ  Ｔ細胞へのＥＴＰ構成成分の添加は、増強された「専門的」抗原提示細胞（ＡＰＣ）機能を付与する。ある実施形態では、ＣＡＲおよび１つまたは複数のＥＴＰは、Ｔ細胞において一過的に共発現される。したがって、操作されたＴ細胞は、（ＣＡＲ／ＥＴＰ発現の一過的な性質を考慮すると）安全であり、ＡＰＣ機能を介して長期にわたる免疫を誘導する。
【０２１７】
別の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１６／０５５５５１および米国公開第２０１７／０２９２１１８号に記載されるように、Ｔ細胞において、ＣＡＲ、および結合（またはダイマー化）ドメインを含む阻害性膜タンパク質（ＩＭＰ）を共発現させることによって増強される。ＣＡＲおよびＩＭＰは共に、特に、ＣＡＲ内に含まれる第２の結合ドメインを介して、可溶性化合物に対して反応性にされ、それによって、ダイマー化またはリガンド認識による、ＣＡＲ活性化を低下させる効果を有する、ＩＭＰが有する阻害性シグナル伝達ドメインとＣＡＲが有するシグナル伝達ドメインとの共局在化を可能にする。阻害性シグナル伝達ドメインは、好ましくは、ＩＬ−２産生およびＴ細胞増殖のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）媒介性活性化を減弱させるプログラム死−１（ＰＤ−１）である。
【０２１８】
別の実施形態では、ＣＡＲ  Ｔ細胞の治療有効性は、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１７／０３２７７７に記載されるように、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの細胞外部分のコンフォメーションにおける制御されたバリエーションが、小分子の添加の際に得られるシステムを使用して増強される。この統合システムは、抗原と抗原結合ドメインとの間の相互作用を、オン／オフ状態の間でスイッチする。ＣＡＲの細胞外部分のコンフォメーションを制御することができることによって、ＣＡＲ  Ｔ細胞の下流機能、例えば、細胞傷害性が、直接モジュレートされ得る。したがって、ＣＡＲは、ａ）ｉ）細胞外抗原結合ドメイン；ならびにｉｉ）所定の多価リガンドに結合して、前記２つの結合ドメインおよびそれらが結合することが可能な多価リガンドを含むマルチマーを形成することが可能な、少なくとも第１のマルチマー化リガンド結合ドメインおよび第２のマルチマー化リガンド結合ドメインを含むスイッチドメインを含む少なくとも１つの外部ドメイン；ｂ）少なくとも１つの膜貫通ドメイン；ならびにｃ）シグナル伝達ドメインおよび必要に応じて共刺激ドメインを含む少なくとも１つの内部ドメインを含むという点で特徴付けられ得る；ここで、スイッチドメインは、細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。
両親媒性コンジュゲート
Ａ．概要
【０２１９】
アジュバントまたは抗原（例えば、ペプチド）を、リンパ節へのワクチンの局在化を促進する親油性ポリマーテイルに連結することを含む両親媒性物質ワクチンテクノロジーが開発されている（Liu  et  al.  (2014)  Nature  507:519-522）。かかる両親媒性物質−抗原（例えば、ａｍｐｈ−ペプチド）は、細胞膜中に挿入することも可能である（例えば、Liu  et  al.  (2011)  Angewandte  Chemie-Intl.  Ed.  50:7052-7055を参照のこと）。したがって、本開示は、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）を刺激、拡大、活性化するのに使用するための、ＣＡＲリガンドを含む両親媒性コンジュゲートを提供する。
【０２２０】
一部の実施形態では、本開示の両親媒性コンジュゲートは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）発現細胞治療（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療）で使用される。一部の実施形態では、本開示の両親媒性コンジュゲートは、特異的標的、例えば腫瘍関連抗原に対する特異的免疫応答を刺激する。一部の実施形態では、本開示の両親媒性コンジュゲートは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の増殖をｉｎ  ｖｉｖｏで刺激する。一部の実施形態では、本開示の両親媒性コンジュゲートは、ＣＡＲリガンドを含み、本明細書で両親媒性リガンドコンジュゲートと呼ばれる。一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートは、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含み、本明細書で両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートと呼ばれる。
【０２２１】
図１Ａに示されるように、多様な両親媒性リガンドコンジュゲート構造が開示され、図中、親油性部分、即ち「脂質テイル」（例えば、ＤＳＰＥ）は、リンカー（例えば、ＰＥＧ−２０００）を介してＣＡＲリガンドに連結（例えば、共有結合的に連結）される。この設計のモジュール性は、小分子（例えば、ＦＩＴＣ）、短いペプチド（例えば、ＣＡＲに特異的なエピトープを提供する直鎖ペプチド）、またはモジュラータンパク質ドメイン（例えば、ＣＡＲに特異的なコンフォメーションエピトープを提供するフォールディングされたポリペプチドまたはポリペプチド断片）が含まれるがこれらに限定されない種々のリガンドが、脂質に（例えば、共有結合的に）連結されて、調整された（tailored）特異性を有する両親媒性リガンドコンジュゲートを生じるのを可能にする。
【０２２２】
理論に束縛されないが、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートは、リンパ節に主に送達されると考えられ、この場所で、脂質テイル部分は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の膜中に挿入され、ＣＡＲリガンドによるＡＰＣの装飾を生じる（図１Ｂ）。埋め込まれたＣＡＲリガンドは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）（これらは、本開示の両親媒性リガンドコンジュゲートの前に投与され、それに引き続いて投与され、またはそれと共投与される）の表面上に発現されたＣＡＲに対する特異的な標的として機能し、ＣＡＲリガンドで装飾されたＡＰＣへの、ＣＡＲ発現細胞の動員を生じる。ＣＡＲと埋め込まれたＣＡＲリガンドとの相互作用は、ＣＡＲを介した刺激シグナルを提供するが、ＡＰＣは、他の天然に存在する共刺激シグナルをさらに提示し、最適なＣＡＲ発現細胞活性化、長期にわたる生存および効率的なメモリー形成を生じる。
Ｂ．脂質コンジュゲート
【０２２３】
ある特定の実施形態では、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１３／０２９５１２９に記載される脂質コンジュゲート（例えば、両親媒性コンジュゲート）が、本明細書で開示される方法において使用される。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、細胞膜中に挿入する疎水性テイルを含む。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、そのコンジュゲートをリンパ節にｉｎ  ｖｉｖｏで効率的に標的化するために、アルブミン結合脂質を含む。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、疎水性テイルを含むアルブミン結合脂質を含み、この疎水性テイルは、細胞膜中に挿入し、そのコンジュゲートは、リンパ節にｉｎ  ｖｉｖｏで効率的に標的化される。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、それらをリンパ管および流入領域リンパ節に標的化する内因性アルブミンに結合し、それらは、抗原提示細胞によるアルブミンの選別に起因して、そこに蓄積する。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、抗原性ペプチドまたは分子アジュバントを含み、それによって、ロバストな免疫応答を誘導または増強する。一部の実施形態では、脂質コンジュゲートは、ＣＡＲリガンドを含み、それによって、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲエフェクター細胞、例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の拡大、増殖および／または活性化を誘導または増強する。ＣＡＲリガンドを含む脂質コンジュゲートは、上で定義したように、「両親媒性リガンドコンジュゲート」と呼ばれる。
【０２２４】
一部の実施形態では、リンパ節に効率的に標的化される脂質コンジュゲートは、「リンパ節標的化コンジュゲート」と呼ばれる。一部の実施形態では、リンパ節標的化コンジュゲートは、高度に親油性のアルブミン結合ドメイン（例えば、アルブミン結合脂質）、およびカーゴ、例えば、ＣＡＲリガンドまたは分子アジュバントを含む。一部の実施形態では、リンパ節標的化コンジュゲートは、以下の３つのドメインを含む：高度に親油性のアルブミン結合ドメイン（例えば、アルブミン結合脂質）、カーゴ、例えば、ＣＡＲリガンドまたは分子アジュバント、およびコンジュゲートの溶解度を促進し、脂質が細胞形質膜中に挿入する能力を低減させる極性ブロックリンカー。したがって、ある特定の実施形態では、コンジュゲートの一般構造はＬ−Ｐ−Ｃであり、式中、「Ｌ」はアルブミン結合脂質であり、「Ｐ」は極性ブロックであり、「Ｃ」は、カーゴ、例えば、ＣＡＲリガンドまたは分子アジュバントである。一部の実施形態では、カーゴ自体が極性ブロックドメインとしても機能し得、別の極性ブロックドメインは必要とされない。したがって、ある特定の実施形態では、コンジュゲートは、以下の２つのドメインのみを有する：アルブミン結合脂質およびカーゴ。
【０２２５】
一部の実施形態では、コンジュゲートのカーゴは、ＣＡＲリガンドであり、それによって、両親媒性リガンドコンジュゲートを生じる。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、アジュバントと共に投与または製剤化され、このアジュバントは、分子アジュバント、例えば、免疫賦活性オリゴヌクレオチド、またはペプチド抗原をカーゴとして含む両親媒性リガンドである。
（ｉ）脂質
【０２２６】
一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートの脂質構成成分は、疎水性テイルを含む。一部の実施形態では、疎水性テイルは、細胞膜中に挿入する。一部の実施形態では、脂質は、直鎖、分岐鎖または環状である。一部の実施形態では、脂質は、１２よりも大きい炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１３炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１４炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１５炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１６炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１７炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１８炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、１９炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２０炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２１炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２２炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２３炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２４炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２５炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２６炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２７炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２８炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、２９炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、３０炭素長である。一部の実施形態では、脂質は、少なくとも１７〜１８炭素長であるが、それが良好なアルブミン結合およびリンパ節への適切な標的化を示す場合には、より短くてもよい。
【０２２７】
リンパ節標的化コンジュゲートには、送達の部位からリンパを介してリンパ節へと輸送され得る、両親媒性リガンドコンジュゲートおよび両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートが含まれる。ある特定の実施形態では、活性は、コンジュゲートが対象の血液中のアルブミンに会合する能力に一部依拠する。したがって、リンパ節標的化コンジュゲートは、典型的には、生理的条件下でアルブミンに結合できる脂質を含む。リンパ節を標的とするのに適切な脂質は、脂質または脂質を含む脂質コンジュゲートがアルブミンに結合する能力に基づいて選択され得る。脂質または脂質コンジュゲートがアルブミンに結合する能力を試験するのに適切な方法は、当該分野で公知である。
【０２２８】
例えば、ある特定の実施形態では、複数の脂質コンジュゲートは、水溶液中で自発的にミセルを形成することができる。ミセルは、アルブミン、またはウシ胎仔血清（ＦＢＳ）などのアルブミンを含む溶液と共にインキュベートされる。試料は、結合が生じたかどうかを決定するために、例えば、ＥＬＩＳＡ、サイズ排除クロマトグラフィーまたは他の方法によって解析され得る。脂質コンジュゲートは、上で議論したように、アルブミン、またはウシ胎仔血清（ＦＢＳ）などのアルブミンを含む溶液の存在下で、ミセルが解離し、脂質コンジュゲートがアルブミンに結合する場合に、リンパ節標的化コンジュゲートとして選択され得る。
【０２２９】
リンパ節標的化脂質コンジュゲートにおける使用のために好ましい脂質の例には、直鎖不飽和および飽和脂肪酸、分岐鎖飽和および不飽和脂肪酸、ならびに脂肪酸誘導体、例えば、脂肪酸エステル、脂肪酸アミドおよび脂肪酸チオエステル、ジアシル脂質、コレステロール、コレステロール誘導体、およびステロイド酸、例えば胆汁酸、リピドＡ、またはそれらの組合せが含まれるがこれらに限定されない、８〜３０個の炭素の脂肪族テイルを有する脂肪酸が含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、脂質は、飽和である。一部の実施形態では、脂質は、８〜３０、１２〜３０、１５〜２５または１６〜２０個の炭素を含む少なくとも１つの脂質テイルを含む。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、脂質は、ジアシル脂質または二本鎖脂質である。一部の実施形態では、ジアシル脂質中のテイルは、約８〜約３０個の炭素を含み、飽和、不飽和、またはそれらの組合せであり得る。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和である。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、約８〜約３０個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１２個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１３個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１４個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１５個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１６個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１７個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１８個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、１９個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２０個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２１個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２２個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２３個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２４個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２５個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２６個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２７個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２８個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、２９個の炭素を含む。一部の実施形態では、ジアシル脂質は飽和であり、各テイルは、３０個の炭素を含む。テイルは、エステル結合連結、アミド結合連結、チオエステル結合連結、またはそれらの組合せを介して、頭部基にカップリングされ得る。特定の実施形態では、ジアシル脂質は、リン酸脂質（phosphate  lipid）、糖脂質、スフィンゴ脂質、またはそれらの組合せである。
【０２３１】
一部の実施形態では、脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）である。一部の実施形態では、ジアシル脂質は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ９，１０７，９０４に記載されるように合成される。一部の実施形態では、ジアシル脂質は、以下に提供されるように合成される：
【化１】
2020535128.tif 000003
＃１  ステアロイルクロリド
【０２３２】
好ましくは、リンパ節標的化コンジュゲートは、８またはそれよりも多くの炭素単位長の脂質を含む。脂質単位の数を増加させると、細胞の形質膜中への脂質の挿入が低減し、これにより、脂質コンジュゲートが自由にアルブミンに結合して、リンパ節に移動できるようになると考えられる。
【０２３３】
例えば、一部の実施形態では、脂質は、２つのＣ１８炭化水素テイルから構成されるジアシル脂質であり得る。ある特定の実施形態では、リンパ節標的化脂質コンジュゲートを調製する際の使用のための脂質は、単鎖炭化水素（例えば、Ｃ１８）ではない。
（ｉｉ）分子アジュバント
【０２３４】
ある特定の実施形態では、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートが、両親媒性リガンドコンジュゲートと共に使用される。オリゴヌクレオチドコンジュゲートは、典型的には、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）に対するリガンドとして機能し得る。ＰＲＲの例には、自然免疫応答の開始において役割を果たし、後のより抗原特異的な適応免疫応答にも影響を与える、Ｔｏｌｌ様ファミリーのシグナル伝達分子が含まれる。したがって、オリゴヌクレオチドは、Ｔｏｌｌ様ファミリーシグナル伝達分子、例えばＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）に対するリガンドとして機能し得る。
【０２３６】
例えば、非メチル化ＣｐＧ部位は、ヒトでは、形質細胞様樹状細胞およびＢ細胞上のＴＬＲ９によって検出され得る（Zaida,  et  al.,  Infection  and  Immunity,  76(5):2123-2129,  (2008)）。したがって、オリゴヌクレオチドの配列は、１つまたは複数の非メチル化シトシン−グアニン（相互交換可能に使用されるＣＧまたはＣｐＧ）ジヌクレオチドモチーフを含み得る。「ｐ」は、以下でより詳細に議論されるように、ＤＮＡのホスホジエステル骨格を指し、ＣＧを含む一部のオリゴヌクレオチドは、改変骨格、例えばホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有し得る。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、近接して整列された、または介在するヌクレオチド（複数可）によって分離された、１つよりも多くのＣＧジヌクレオチドを含み得る。ＣｐＧモチーフ（複数可）は、オリゴヌクレオチド配列の内部にあり得る。多数のヌクレオチド配列は、ＣＧジヌクレオチド（複数可）の数および位置ならびにＣＧダイマーに隣接する正確な塩基配列におけるバリエーションを伴って、ＴＬＲ９を刺激する。
【０２３８】
典型的には、ＣＧ  ＯＤＮは、それらの配列、二次構造、およびヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）に対する効果に基づいて分類される。５つのクラスは、クラスＡ（Ｄ型）、クラスＢ（Ｋ型）、クラスＣ、クラスＰおよびクラスＳである（参照により本明細書に組み込まれるVollmer,  J  &  Krieg,  A  M,  Advanced  drug  delivery  reviews  61(3):  195-204  (2009)）。ＣＧ  ＯＤＮは、Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮα）の産生を刺激でき、樹状細胞（ＤＣ）の成熟化を誘導できる。一部のクラスのＯＤＮは、間接的サイトカインシグナル伝達を介したナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の強いアクチベーターでもある。一部のクラスは、ヒトＢ細胞および単球成熟化の強い刺激因子である（Weiner,  G  L,  PNAS  USA  94(20):  10833-7  (1997)；Dalpke,  A  H,  Immunology  106(1):  102-12  (2002)；Hartmann,  G,  J  of  Immun.  164(3):1617-2  (2000)、これらは各々、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０２３９】
一部の実施形態によれば、親油性−ＣｐＧオリゴヌクレオチドコンジュゲートは、抗原に対する免疫応答を増強するために使用される。親油性−ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下によって示され、式中、「Ｌ」は親油性化合物、例えばジアシル脂質であり、「Ｇｎ」はグアニンリピートリンカーであり、「ｎ」は１、２、３、４または５を示す。
５’−Ｌ−ＧｎＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ−３’
【０２４０】
他のＰＲＲ  Ｔｏｌｌ様受容体には、それぞれ二本鎖ＲＮＡ、一本鎖および短い二本鎖ＲＮＡを認識し得るＴＬＲ３およびＴＬＲ７、ならびにレチノイン酸−誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ−Ｉ）様受容体、即ちＲＩＧ−Ｉ、ならびにサイトゾル中のＲＮＡ感知性受容体として最も知られる黒色腫分化関連遺伝子５（ＭＤＡ５）が含まれる。したがって、ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７もしくはＲＩＧ−Ｉ様受容体、またはそれらの組合せに対する機能的リガンドを含む。
【０２４１】
免疫賦活性オリゴヌクレオチド、およびそれらを作製する方法の例は、当該分野で公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるBodera,  P.  Recent  Pat  Inflamm  Allergy  Drug  Discov.  5(1):87-93  (2011)を参照のこと。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドカーゴは、２つまたはそれよりも多くの免疫賦活性配列を含む。
【０２４３】
オリゴヌクレオチドは、例えば、５ヌクレオチド塩基長、１０ヌクレオチド塩基長、１５ヌクレオチド塩基長、２０ヌクレオチド塩基長、２５ヌクレオチド塩基長、３０ヌクレオチド塩基長、３５ヌクレオチド塩基長、４０ヌクレオチド塩基長、４５ヌクレオチド塩基長、５０ヌクレオチド塩基長、６０ヌクレオチド塩基長、７０ヌクレオチド塩基長、８０ヌクレオチド塩基長、９０ヌクレオチド塩基長、９５ヌクレオチド塩基長、９８ヌクレオチド塩基長、１００ヌクレオチド塩基長またはそれよりも長い塩基長を含め、２〜１００ヌクレオチド塩基長の間であり得る。
【０２４４】
オリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端は、極性ブロックまたは脂質にコンジュゲートされ得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端は、極性ブロックまたは脂質に連結される。
【０２４５】
オリゴヌクレオチドは、複素環式塩基（核酸塩基）、複素環式塩基に結合した糖部分、および糖部分のヒドロキシル官能基をエステル化するリン酸部分を典型的には含む、ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドであり得る。主要な天然に存在するヌクレオチドは、複素環式塩基としてウラシル、チミン、シトシン、アデニンおよびグアニンを含み、ホスホジエステル結合によって連結されたリボースまたはデオキシリボース糖を含む。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡカウンターパートと比較して、安定性、半減期、または標的受容体に対する特異性もしくは親和性を改善するために化学的に改変されたヌクレオチドアナログから構成される。化学的改変には、核酸塩基、糖部分、ヌクレオチド連結の化学的改変、またはそれらの組合せが含まれる。本明細書で使用される場合、「改変ヌクレオチド」または「化学的に改変されたヌクレオチド」は、複素環式塩基、糖部分またはリン酸部分構成要素のうち１つまたは複数の化学的改変を有するヌクレオチドを定義する。ある特定の実施形態では、改変ヌクレオチドの電荷は、同じ核酸塩基配列のＤＮＡまたはＲＮＡオリゴヌクレオチドと比較して低減される。例えば、オリゴヌクレオチドは、低い負の電荷を有する、電荷を有さない、または正の電荷を有することができる。
【０２４６】
典型的には、ヌクレオシドアナログは、標準的なポリヌクレオチド塩基とＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対合によって水素結合することが可能な塩基を支持し、ここで、アナログ骨格は、標準的なポリヌクレオチド（例えば、一本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＤＮＡ）中のオリゴヌクレオチドアナログ分子と塩基との間での、配列特異的様式でのかかる水素結合を許容する様式で塩基を提示する。ある特定の実施形態では、アナログは、実質的に非荷電のリン含有骨格を有する。
（ｉｉｉ）キメラ抗原受容体リガンド
【０２４７】
一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、抗原性タンパク質またはポリペプチド、例えば、腫瘍関連抗原またはその部分である。一部の実施形態では、ＣＡＲリガンドは、小分子、ペプチドもしくはタンパク質ドメイン、またはそれらの断片である。一部の実施形態では、リガンドは、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）上のＣＡＲに結合する。したがって、本明細書に記載される方法および組成物は、ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）に対して相補的な両親媒性リガンドコンジュゲートを利用する。一部の実施形態では、ＣＡＲリガンドは、上記ＣＡＲのいずれか１つに結合する。
【０２４８】
一部の実施形態では、ペプチドは、例えば、５アミノ酸、１０アミノ酸、１５アミノ酸、２０アミノ酸、２５アミノ酸、３０アミノ酸、３５アミノ酸、４０アミノ酸、４５アミノ酸または５０アミノ酸を含め、２〜１００アミノ酸である。一部の実施形態では、ペプチドは、５０アミノ酸よりも大きい。一部の実施形態では、ペプチドは、＞１００アミノ酸である。
【０２４９】
一部の実施形態では、タンパク質／ペプチドは、直鎖、分岐鎖または環状である。一部の実施形態では、ペプチドは、Ｄアミノ酸、Ｌアミノ酸、またはそれらの組合せを含む。一部の実施形態では、ペプチドまたはタンパク質は、ペプチドまたはタンパク質のＮ末端またはＣ末端において、極性ブロックまたは脂質にコンジュゲートされる。
【０２５０】
一部の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、このタンパク質またはペプチドに対する抗体およびＴ細胞応答を発達させる免疫系の能力を誘導または増強できる、任意のタンパク質またはペプチドであり得る。がん抗原は、典型的にはがん細胞によって優先的に発現される抗原であり（即ち、これは、非がん細胞上よりもがん細胞においてより高いレベルで発現される）、一部の例では、がん細胞のみによって発現される。がん抗原は、がん細胞内で、またはがん細胞の表面上に発現され得る。がん抗原は、ＣＤ１９、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、ＦＡＰ、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）  −  Ｃ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡＰ−１、ＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ＡＭＬ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、ＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖およびＣＤ２０であり得るが、これらに限定されない。がん抗原は、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−０５）、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン、γ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫性ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ−イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２ガングリオシド、ＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶコード核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１およびＣＴ−７、ＣＤ２０、またはｃ−ｅｒｂＢ−２からなる群から選択され得る。
【０２５１】
一部の実施形態では、本開示の方法および組成物は、以前にはＣＴＬ０１９であった静脈内注入用Ｋｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）懸濁物と組み合わせて使用される。例えば、一実施形態では、本開示の組成物は、ＣＡＲリガンドがＣＤ１９またはその抗原性部分である両親媒性リガンドコンジュゲートを含む。かかる組成物は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ−Ｔ細胞の集団）、がん、例えば、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の処置のためのＫｙｍｒｉａｈ（商標）（チサゲンレクルユーセル；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）などと組み合わせて、対象に投与され得る。
【０２５２】
適切な抗原は、当該分野で公知であり、commercial  governmentおよび科学的情報源（scientific  source）から入手可能である。ある特定の実施形態では、抗原は、不活性化されたまたは照射された腫瘍細胞全体である。抗原は、腫瘍に由来する、精製されたまたは部分的に精製されたポリペプチドであり得る。抗原は、異種発現系においてポリペプチド抗原をコードするＤＮＡを発現させることによって産生される組換えポリペプチドであり得る。抗原は、抗原性タンパク質の全てまたは一部をコードするＤＮＡであり得る。ＤＮＡは、ベクターＤＮＡ、例えば、プラスミドＤＮＡの形態であり得る。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、抗原は、単一の抗原として提供され得る、または組み合わせて提供され得る。抗原は、ポリペプチドまたは核酸の複雑な混合物としても提供され得る。
【０２５４】
一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートのＣＡＲリガンドは、上記タグ結合ドメインを含むＣＡＲに結合するタグである。一部の実施形態では、タグは、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼまたはマルトース結合タンパク質である。
【０２５５】
一部の実施形態では、ＣＡＲは腫瘍抗原結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドは、腫瘍抗原またはその断片である。一部の実施形態では、ＣＡＲはタグ結合ドメイン（例えば、ＡＴ−ＣＡＲ）を含み、ＣＡＲリガンドはタグである。一部の実施形態では、ＣＡＲはタンデムＣＡＲであり、ＣＡＲリガンドは、タンデムＣＡＲ上に存在する抗原結合ドメインのうち少なくとも１つに結合する。一部の実施形態では、ＣＡＲは二特異性であり、腫瘍抗原結合ドメインおよびタグ結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドはタグである。一部の実施形態では、ＣＡＲは二特異性であり、腫瘍抗原結合ドメインおよびタグ結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドは、腫瘍抗原またはその断片である。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第１の腫瘍関連抗原結合ドメインおよび第２の腫瘍関連抗原結合ドメインを含み、ＣＡＲリガンドは、第１または第２の腫瘍関連抗原である。
（ｉｖ）極性ブロック／リンカー
【０２５６】
コンジュゲートがリンパ節に効率的に輸送されるためには、コンジュゲートは、可溶性のままであるべきである。したがって、一部の実施形態では、極性ブロックリンカーが、コンジュゲートの溶解度を増加させるために、カーゴと脂質との間に含まれる。極性ブロックは、細胞、例えば、注射部位に隣接する組織中の細胞の形質膜中に脂質が挿入する能力を低減または防止する。極性ブロックは、カーゴ、例えば、ＰＳ骨格を含む合成オリゴヌクレオチドが、投与の部位において細胞外基質タンパク質と非特異的に会合する能力を低減または防止することもできる。一部の実施形態では、極性ブロックは、それがアルブミンに結合する能力を防止することなしに、コンジュゲートの溶解度を増加させる。特徴のこの組合せは、コンジュゲートを、血清または間質液中に存在するアルブミンに結合させ、アルブミンがリンパ節に輸送されそこで保持されるまで、循環中に残存させると考えられる。一部の実施形態では、カーゴは、極性ブロックとして機能し、したがって、別の極性ブロックは必要とされない。
【０２５７】
極性ブロックの長さおよび組成は、選択された脂質およびカーゴに基づいて調整され得る。例えば、オリゴヌクレオチドコンジュゲートについて、オリゴヌクレオチド自体、例えば、１０、１５、２０またはそれよりも多くのヌクレオチド長であるオリゴヌクレオチドが、コンジュゲートの溶解度を保証するのに十分に極性であり得る。したがって、ある特定の実施形態では、さらなる極性ブロックリンカーは必要とされない。しかし、アミノ酸配列に依存して、一部の脂質付加されたペプチドは、本質的に不溶性であり得る。これらの場合には、極性オリゴヌクレオチドの効果を模倣する極性ブロックを含むことが望ましい場合がある。
【０２５８】
一部の実施形態では、極性ブロックは、細胞膜挿入／アルブミンへの優先的分配を低減させる、本明細書で開示される方法における使用に適切な脂質コンジュゲート、例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび両親媒性リガンドコンジュゲートのいずれかの一部として使用される。一部の実施形態では、適切な極性ブロックには、オリゴヌクレオチド、例えば、上で議論したもの、ポリ（エチレングリコール）（ＭＷ：５００Ｄａ〜２０，０００Ｄａ）、ポリアクリルアミド（ＭＷ：５００Ｄａ〜２０，０００Ｄａ）、ポリアクリル酸が含まれるがこれらに限定されない親水性ポリマー；一連の親水性アミノ酸、例えば、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジンもしくはそれらの組合せ；デキストラン（ＭＷ：１，０００Ｄａ〜２，０００，０００Ｄａ）が含まれるがこれに限定されない多糖、またはそれらの組合せが含まれるがこれらに限定されない。
【０２５９】
一部の実施形態では、極性ブロックは、別々の構成成分であれカーゴ自体であれ、極性ブロックの分子量に基づいて、脂質コンジュゲート全体に溶解度を提供する。例えば、一部の実施形態では、２，０００Ｄａの分子量を有する極性ブロックが、脂質コンジュゲートをアルブミン結合のために可溶性にするのに十分である。一部の実施形態では、極性ブロックは、約３００〜約２０，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約１５，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，５００〜約１０，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約２，０００〜約５，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約２，５００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約３，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約３，５００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約４，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１，０００〜約５，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約５，０００〜約１０，０００Ｄａの分子量を有する。一部の実施形態では、極性ブロックは、約１５，０００〜約２０，０００Ｄａの分子量を有する。
【０２６０】
一部の実施形態では、疎水性脂質およびリンカー／カーゴは、共有結合的に連結される。一部の実施形態では、共有結合は、非切断性連結または切断性連結である。一部の実施形態では、非切断性連結には、アミド結合またはリン酸結合が含まれ、切断性連結には、ジスルフィド結合、酸切断性連結、エステル結合、無水物結合、生分解性結合または酵素切断性連結が含まれる。
ａ．エチレングリコールリンカー
【０２６１】
ある特定の実施形態では、極性ブロックは、１つまたは複数のエチレングリコール（ＥＧ）単位、より好ましくは２つまたはそれよりも多くのＥＧ単位（即ち、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））である。例えば、ある特定の実施形態では、脂質コンジュゲートは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子またはその誘導体もしくはアナログによって連結されたカーゴ（即ち、ＣＡＲリガンドまたは分子アジュバント）および疎水性脂質を含む。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される方法における使用に適切な脂質コンジュゲートは、共有結合的に、またはオリゴミセルにハイブリダイズするタンパク質−オリゴコンジュゲートの形成を介して、疎水性脂質または脂質−Ｇｎ−ＯＮコンジュゲートに次に連結される、ＰＥＧに連結されたＣＡＲリガンドを含む。ＥＧ単位の正確な数は、脂質およびカーゴに依存するが、典型的には、極性ブロックは、約１個と約１００個との間、約２０個と約８０個との間、約３０個と約７０個との間または約４０個と約６０個との間のＥＧ単位を有し得る。ある特定の実施形態では、極性ブロックは、約４５個と５５個との間のＥＧ単位を有する。例えば、ある特定の実施形態では、極性ブロックは、４８個のＥＧ単位を有する。
【０２６３】
一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約３００〜２０，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１，５００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約２，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約２，５００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約３，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約３，５００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約４，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約５，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約６，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約７，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約８，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約９，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１０，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１１，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１２，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１３，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１４，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１５，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１６，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１７，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１８，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約１９，０００ダルトンの分子量を有する。一部の実施形態では、ＰＥＧ分子は、約２０，０００ダルトンの分子量を有する。
ｂ．オリゴヌクレオチドリンカー
【０２６４】
上で議論したように、ある特定の実施形態では、極性ブロックは、オリゴヌクレオチドである。極性ブロックリンカーは、任意の配列を有し得、例えば、オリゴヌクレオチドの配列は、ランダム配列、またはその分子的もしくは生化学的特性（例えば、高度に極性）について具体的に選択された配列であり得る。ある特定の実施形態では、極性ブロックリンカーは、１つまたは複数の、一連の連続するアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、またはそれらのアナログを含む。ある特定の実施形態では、極性ブロックリンカーは、一連の連続するアデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、ウラシル（Ｕ）、またはそれらのアナログからなる。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、リンカーは、１つまたは複数のグアニン、例えば、１〜１０個の間のグアニンである。ＣｐＧオリゴヌクレオチドなどのカーゴと脂質テイルとの間のグアニンの数を変更することは、血清タンパク質の存在下でのミセル安定性を制御することが発見されている。したがって、リンカー中のグアニンの数は、アルブミンなどの血清タンパク質に対するコンジュゲートの所望の親和性に基づいて選択され得る。カーゴがＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドであり、脂質テイルがジアシル脂質である場合、グアニンの数は、水溶液中で形成されたミセルが血清の存在下で解離する能力に影響を与える：非安定化ミセル（ｌｉｐｏ−Ｇ０Ｔ１０−ＣＧ）の２０％はインタクトであったが、残り８０％は破壊され、ＦＢＳ構成成分に結合した。グアニンの存在下では、インタクトなミセルのパーセンテージは、３６％（ｌｉｐｏ−Ｇ２Ｔ８−ＣＧ）から７３％（ｌｉｐｏ−Ｇ４Ｔ６−ＣＧ）へと増加し、最終的に９０％（ｌｉｐｏ−Ｇ６Ｔ４−ＣＧ）に達した。グアニンの数を８（ｌｉｐｏ−Ｇ８Ｔ２−ＣＧ）および１０（ｌｉｐｏ−Ｇ１０Ｔ０−ＣＧ）に増加させることがミセル安定性をさらに増強させることはなかった。
【０２６６】
したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で開示される方法における使用に適切なリンパ節標的化コンジュゲート中のリンカーは、０個、１個または２個のグアニンを含み得る。以下でより詳細に議論するように、３つまたはそれよりも多くの連続するグアニンを含むリンカーが、本明細書で開示される方法における使用に適切な特性を有するミセル安定化コンジュゲートを形成するために使用され得る。
Ｃ．免疫原性組成物
【０２６７】
本明細書で開示される方法における使用に適切な脂質コンジュゲートは、免疫原性組成物中で、またはワクチン中の構成成分として使用され得る。典型的には、本明細書で開示される免疫原性組成物は、アジュバント、抗原、またはそれらの組合せを含む。アジュバントおよび抗原の組合せは、ワクチンと呼ばれ得る。組み合わせて対象に投与される場合、アジュバントおよび抗原は、別々の医薬組成物中で投与され得、またはこれらは、同じ医薬組成物中で一緒に投与され得る。組み合わせて投与される場合、アジュバントは脂質コンジュゲートであり得、抗原は脂質コンジュゲートであり得、またはアジュバントおよび抗原は共に脂質コンジュゲートであり得る。
【０２６８】
一部の実施形態では、本明細書で開示される方法における使用に適切な免疫原性組成物は、単独で、またはアジュバントと組み合わせて投与される両親媒性リガンドコンジュゲートを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、限定なしに、アラム（alum）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）；Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａ木の樹皮から精製されたサポニン、例えばＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画で２１番目のピーク中に溶出する糖脂質；Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、Ｍａｓｓ．）；ポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン］（poly[di(carboxylatophenoxy)phosphazene）（ＰＣＰＰポリマー；Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）、Ｆｌｔ３リガンド、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ伸長因子（精製されたＬｅｉｓｈｍａｎｉａタンパク質；Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈ．）、ＩＳＣＯＭＳ（混合サポニン、脂質を含み、抗原を保持できる孔を有するウイルスサイズの粒子を形成する、免疫賦活性複合体；ＣＳＬ、Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＳＢ−ＡＳ４（アラムおよびＭＰＬを含むＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム＃４；ＳＢＢ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、ミセルを形成する非イオン性ブロックコポリマー、例えばＣＲＬ  １００５（これらは、ポリオキシエチレンの鎖が隣接した疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む、Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、Ｇａ．）、ならびにＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＭＳ（例えば、ＩＭＳ  １３１２、可溶性免疫賦活薬と組み合わせた水ベースのナノ粒子、Ｓｅｐｐｉｃ）である。
【０２６９】
一部の実施形態では、アジュバントは、上で議論したものなどのＴＬＲリガンドである。一部の実施形態では、ＴＬＲ３を介して作用するアジュバントには、限定なしに二本鎖ＲＮＡが含まれる。一部の実施形態では、ＴＬＲ４を介して作用するアジュバントには、限定なしに、リポ多糖の誘導体、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ；Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）およびムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）およびスレオニル−ムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；Ｒｉｂｉ）；ＯＭ−１７４（リピドＡに関連するグルコサミン二糖；ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、Ｍｅｙｒｉｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれる。一部の実施形態では、ＴＬＲ５を介して作用するアジュバントには、限定なしにフラジェリンが含まれる。一部の実施形態では、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を介して作用するアジュバントには、一本鎖ＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）、合成低分子量化合物、例えば、イミダゾキノリンアミン（例えば、イミキモド（Ｒ−８３７）、レシキモド（Ｒ−８４８））が含まれる。一部の実施形態では、ＴＬＲ９を介して作用するアジュバントには、ウイルスもしくは細菌起源のＤＮＡ、または合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、例えば、ＣｐＧ  ＯＤＮが含まれる。一部の実施形態では、別のアジュバントクラスは、ホスホロチオエート含有分子、例えば、ホスホロチオエート骨格連結を含むホスホロチオエートヌクレオチドアナログおよび核酸である。
【０２７０】
一部の実施形態では、アジュバントは、油エマルジョン（例えば、フロイントアジュバント）；サポニン製剤；ビロソームおよびウイルス様粒子；細菌および微生物誘導体；免疫賦活性オリゴヌクレオチド；ＡＤＰリボシル化毒素および解毒された誘導体；アラム；ＢＣＧ；鉱物含有組成物（例えば、鉱物塩、例えば、アルミニウム塩およびカルシウム塩、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩など）；生体接着物質（bioadhesive）および／または粘膜接着物質（mucoadhesive）；マイクロ粒子；リポソーム；ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル製剤；ポリホスファゼン；ムラミルペプチド；イミダゾキノロン化合物；ならびに表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（登録商標）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニンおよびジニトロフェノール）から選択される。
【０２７１】
一部の実施形態では、アジュバントは、免疫調節物質、例えば、サイトカイン、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子および腫瘍壊死因子から選択される。
【０２７２】
一部の実施形態では、アジュバントは、上記のような、免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。
【０２７３】
一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴｉｍｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｇｅｎｅｓ））アゴニストである。免疫細胞中のＳＴＩＮＧシグナル伝達経路は、自然免疫応答の中心的メディエーターであり、刺激されると、免疫活性を増幅および強化する種々のインターフェロン、サイトカインおよびＴ細胞動員因子の発現を誘導する。例えば参照により本明細書に組み込まれるDubensky,  T.,  et  al.,  Therapeutic  Advances  in  Vaccines,  Vol.  1(4):  131-143  (2013)；およびHanson,  M.,  et  al.,  The  Journal  of  Clinical  Investigation,  Vol.  125  (6):  2532-2546  (2015)に記載される、最近の研究により、ＳＴＩＮＧアゴニストが有効なアジュバントであり、免疫応答を効率的に惹起することが示されている。
【０２７４】
一部の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、サイクリックジヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、サイクリックジヌクレオチドには、ｃｄＡＭＰ、ｃｄＧＭＰ、ｃｄＩＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰおよびｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰ、ならびにホスホロチオエートアナログが含まれるがこれに限定されないそれらのアナログが含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、本開示における使用に適切なサイクリックジヌクレオチドは、例えば、米国特許第７，７０９，４５８号および同第７，５９２，３２６号；ＷＯ２００７／０５４２７９；ＵＳ２０１４／０２０５６５３；ならびにYan  et  al.  Bioorg.  Med.  Chem  Lett.  18:  5631  (2008)にいくらか詳細に記載されており、これらは各々、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２７５】
ある特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、化学的に合成される。ある特定の実施形態では、ＳＴＩＮＧアゴニストは、天然に存在するサイクリックジヌクレオチドのアナログである。サイクリックジヌクレオチドのアナログを含む、本開示における使用に適切なＳＴＩＮＧアゴニストは、米国特許第７，７０９，４５８号および同第７，５９２，３２６号；ならびにＵＳ２０１４／０２０５６５３に提供される。
ポリペプチドを作製する方法
【０２７６】
一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートにおける使用のための本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、腫瘍関連抗原）は、組換えＤＮＡ技術を使用して、形質転換された宿主細胞において作製される。そのために、ペプチドをコードする組換えＤＮＡ分子が調製される。かかるＤＮＡ分子を調製する方法は、当該分野で周知である。例えば、ペプチドをコードする配列は、適切な制限酵素を使用して、ＤＮＡから切り取られ得る。あるいは、ＤＮＡ分子は、ホスホロアミデート法などの化学的合成技術を使用して合成され得る。また、これらの技術の組合せが使用され得る。
【０２７７】
ポリペプチドを作製する方法は、適切な宿主においてペプチドを発現することが可能なベクターもまた含む。ベクターは、適切な発現制御配列に作用的に連結した、ペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む。ＤＮＡ分子がベクター中に挿入される前または後のいずれかにこの作用的連結に影響を与える方法は、周知である。発現制御配列には、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、オペレーター、リボソームヌクレアーゼドメイン、開始シグナル、停止シグナル、キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル、および転写または翻訳の制御に関与する他のシグナルが含まれる。
【０２７８】
その上にＤＮＡ分子を有する得られたベクターは、適切な宿主を形質転換するために使用される。この形質転換は、当該分野で周知の方法を使用して実施され得る。
【０２７９】
多数の利用可能で周知の宿主細胞のいずれかが、本明細書で開示される方法における使用に適切であり得る。特定の宿主の選択は、当該分野で認識されるいくつかの因子に依存する。これらには、例えば、選択された発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によってコードされるペプチドの毒性、形質転換の比率、ペプチドの回収の容易さ、発現特徴、バイオセーフティーおよびコストが含まれる。全ての宿主が特定のＤＮＡ配列の発現にとって等しく有効なわけではない場合があることを理解して、これらの因子のバランスをとるべきである。これらの一般的ガイドライン内で、有用な微生物宿主には、培養物中の細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ種）、酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種）および他の真菌、昆虫、植物、哺乳動物（ヒトを含む）細胞、または当該分野で公知の他の宿主が含まれる。
【０２８０】
次に、形質転換された宿主は、培養および精製される。宿主細胞は、所望の化合物が発現されるように、従来の発酵条件下で培養され得る。かかる発酵条件は、当該分野で周知である。最後に、ペプチドは、当該分野で周知の方法によって、培養物から精製される。
【０２８１】
化合物は、合成方法によっても作製され得る。例えば、固相合成技術が使用され得る。適切な技術は、当該分野で周知であり、これには、Merrifield  (1973),  Chem.  Polypeptides,  pp.  335-61  (Katsoyannis  and  Panayotis  eds.)；Merrifield  (1963),  J.  Am.  Chem.  Soc.  85:  2149；Davis  et  al.  (1985),  Biochem.  Intl.  10:  394-414；Stewart  and  Young  (1969),  Solid  Phase  Peptide  Synthesis；米国特許第３，９４１，７６３号；Finn  et  al.  (1976),  The  Proteins  (3rd  ed.)  2:  105-253；およびErickson  et  al.  (1976),  The  Proteins  (3rd  ed.)  2:  257-527に記載されるものが含まれる。固相合成は、小さいペプチドを作製するための最もコスト効率の良い方法であるので、個々のペプチドを作製する好ましい技術である。誘導体化されたペプチドを含むまたは非ペプチド基を含む化合物は、周知の有機化学技術によって合成され得る。
【０２８２】
他の方法は、分子発現／合成の方法であり、これは、当該分野で当業者に一般に公知である。
【０２８３】
上記核酸分子は、例えば、そのベクターを形質導入した細胞においてそれらの発現を指示することが可能なベクター内に含まれ得る。したがって、ポリペプチド変異体に加えて、変異体をコードする核酸分子を含む発現ベクター、およびこれらのベクターをトランスフェクトした細胞は、ある特定の実施形態内にある。
【０２８４】
使用に適切なベクターには、細菌における使用のためのＴ７ベースのベクター（例えば、Rosenberg  et  al.,  Gene  56:  125,  1987を参照のこと）、哺乳動物細胞における使用のためのｐＭＳＸＮＤ発現ベクター（Lee  and  Nathans,  J.  Biol.  Chem.  263:3521,  1988）、および昆虫細胞における使用のためのバキュロウイルス由来ベクター（例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆ．の発現ベクターｐＢａｃＰＡＫＳ）が含まれる。かかるベクター中の、目的のポリペプチドをコードする核酸挿入物は、例えば、その中での発現が求められる細胞型に基づいて選択されるプロモーターに作動可能に連結し得る。例えば、Ｔ７プロモーターは、細菌において使用され得、ポリヘドリンプロモーターは、昆虫細胞において使用され得、サイトメガロウイルスまたはメタロチオネインプロモーターは、哺乳動物細胞において使用され得る。また、高等真核生物の場合、組織特異的および細胞型特異的プロモーターが、広く利用可能である。これらのプロモーターは、身体内の所与の組織または細胞型における核酸分子の発現を方向付けるそれらの能力にちなんでそのように名づけられた。当業者は、核酸の発現を方向付けるために使用され得る多数のプロモーターおよび他の調節エレメントを十分承知している。
【０２８５】
挿入された核酸分子の転写を促進する配列に加えて、ベクターは、複製起点、および選択可能なマーカーをコードする他の遺伝子を含み得る。例えば、ネオマイシン耐性（ｎｅｏｒ）遺伝子は、それが発現される細胞にＧ４１８耐性を付与し、したがって、トランスフェクトされた細胞の表現型選択を可能にする。当業者は、所与の調節エレメントまたは選択可能なマーカーが、特定の実験的環境における使用に適切かどうかを容易に決定できる。
【０２８６】
使用に適切なウイルスベクターには、例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ベクター、ヘルペスウイルスベクター、サルウイルス４０（ＳＶ４０）ベクターおよびウシパピローマウイルスベクターが含まれる（例えば、Gluzman  (Ed.),  Eukaryotic  Viral  Vectors,  CSH  Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.を参照のこと）。
【０２８７】
ポリペプチド変異体をコードする核酸分子を含みそれを発現する原核細胞または真核細胞もまた、使用に適切である。細胞は、トランスフェクトされた細胞、即ち、核酸分子、例えば、変異体ポリペプチドをコードする核酸分子が組換えＤＮＡ技術によってその中に導入された細胞である。かかる細胞の子孫もまた、本明細書で開示される方法における使用に適切とみなされる。
【０２８８】
発現系の正確な構成成分は、重要ではない。例えば、ポリペプチド変異体は、原核生物宿主、例えば、細菌Ｅ．ｃｏｌｉ中で、または真核生物宿主、例えば、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ２１細胞）もしくは哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞またはＨｅＬａ細胞）中で産生され得る。これらの細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．）を含む多くの供給源から入手可能である。発現系を選択する際には、構成成分が互いに適合性であることのみが重要である。当業者は、かかる決定を行うことができる。さらに、発現系を選択する際にガイダンスが必要とされる場合、当業者は、Ausubel  et  al.  (Current  Protocols  in  Molecular  Biology,  John  Wiley  and  Sons,  New  York,  N.Y.,  1993)およびPouwels  et  al.  (Cloning  Vectors:  A  Laboratory  Manual,  1985  Suppl.  1987)を参考にできる。
【０２８９】
発現されたポリペプチドは、日常的な生化学的手順を使用して発現系から精製され得、本明細書に記載されるように使用され得る、例えば、脂質にコンジュゲートされ得る。
医薬組成物および投与の様式
【０２９０】
一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、一緒に（同時にまたは逐次）投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバント（例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、一緒に（同時にまたは逐次）投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲート、アジュバント（例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲート）およびＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、一緒に（同時にまたは逐次）投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、別々に投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバント（例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲート）は、別々に投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲート、アジュバント（例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲート）およびＣＡＲ発現細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）は、別々に投与される。
【０２９１】
一部の実施形態では、本開示は、薬学的に許容される賦形剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤および／またはアジュバントと共に両親媒性リガンドコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、アジュバントは、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニスト（例えば、ＣＤＧ）である。一部の実施形態では、アジュバントは、別々の医薬組成物中で製剤化される。
【０２９２】
一部の実施形態では、許容される製剤材料は、好ましくは、使用される投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性である。ある特定の実施形態では、製剤材料（複数可）は、ｓ．ｃ．および／またはＩ．Ｖ．投与用のものである。一部の実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、重量オスモル濃度、粘度、透明性、色、等張性、臭い、無菌性、安定性、溶解または放出の速度、吸着または透過を改変、維持または保全するための製剤材料を含む。一部の実施形態では、適切な製剤材料には、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン）；抗菌薬；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウム）；バッファ（例えば、ボレート、ビカーボネート、トリス−ＨＣｌ、シトレート、ホスフェートまたは他の有機酸）；増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン）；フィラー；単糖；二糖；および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；着色剤、香味剤および希釈剤（diluting  agent）；乳化剤；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成性対イオン（例えば、ナトリウム）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポール（tyloxapal））；安定性増強剤（例えば、スクロースまたはソルビトール）；張度増強剤（例えば、アルカリ金属ハライド、好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム、マンニトールソルビトール）；送達ビヒクル；賦形剤（diluent）；添加剤（excipient）および／または医薬品アジュバントが含まれるがこれらに限定されない（Remington's  Pharmaceutical  Sciences,  18th  Edition,  A.  R.  Gennaro,  ed.,  Mack  Publishing  Company  (1995)）。ある特定の実施形態では、製剤は、ＰＢＳ；２０ｍＭ  ＮａＯＡＣ、ｐＨ５．２、５０ｍＭ  ＮａＣｌ；および／または１０ｍＭ  ＮＡＯＡＣ、ｐＨ５．２、９％スクロースを含む。一部の実施形態では、最適な医薬組成物は、例えば、投与の意図した経路、送達形式および所望の投薬量に依存して、当業者によって決定される。例えば、上記Remington's  Pharmaceutical  Sciencesを参照のこと。一部の実施形態では、かかる組成物は、両親媒性コンジュゲートの物理的状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出の速度およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスの速度に影響し得る。
【０２９３】
一部の実施形態では、医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、性質が水性または非水性のいずれかであり得る。例えば、一部の実施形態では、適切なビヒクルまたは担体は、非経口投与のための組成物において一般的な他の材料が場合により補充された、注射用水、生理学的食塩水溶液または人工脳脊髄液である。一部の実施形態では、食塩水は、等張リン酸緩衝食塩水を含む。ある特定の実施形態では、中性緩衝食塩水または血清アルブミンと混合された食塩水が、さらなる例示的なビヒクルである。一部の実施形態では、医薬組成物は、ソルビトールまたはその適切な代用品をさらに含み得る、約ｐＨ７．０〜８．５のトリス緩衝液、または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含む。一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートを含む組成物は、凍結乾燥ケークまたは水溶液の形態で、所望の程度の純度を有する選択された組成物を、必要に応じた製剤化剤と混合することによって、貯蔵のために調製され得る（Remington's  Pharmaceutical  Sciences、上記）。さらに、一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートを含む組成物は、スクロースなどの適切な添加剤を使用して、凍結乾燥物として製剤化され得る。
【０２９４】
一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口送達のために選択され得る。一部の実施形態では、組成物は、吸入のため、または消化管を介した送達のため、例えば経口送達のために選択され得る。かかる薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の技能の範囲内である。
【０２９５】
一部の実施形態では、製剤構成成分は、投与の部位にとって許容される濃度で存在する。一部の実施形態では、緩衝液は、組成物を、生理学的ｐＨに、またはわずかに低いｐＨに、典型的には、約５〜約８のｐＨ範囲内に維持するために使用される。
【０２９６】
一部の実施形態では、非経口投与が企図される場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中の、両親媒性コンジュゲートを含む、発熱物質を含まない非経口的に許容される水溶液の形態であり得る。一部の実施形態では、非経口注射のためのビヒクルは、無菌蒸留水であり、その中に、両親媒性コンジュゲートが、適切に防腐された無菌等張溶液として製剤化される。一部の実施形態では、調製は、デポー注射を介して次いで送達され得る生成物の制御または持続放出を提供できる、注射可能なミクロスフェア、生体侵食性（bio-erodible）粒子、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソームなどの剤とともに、所望の分子の製剤化を含み得る。一部の実施形態では、ヒアルロン酸もまた使用され得、循環における持続性の持続時間を促進する効果を有し得る。一部の実施形態では、移植可能な薬物送達デバイスが、所望の分子を導入するために使用され得る。
【０２９７】
一部の実施形態では、医薬組成物は、吸入のために製剤化され得る。一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートは、吸入用の乾燥粉末として製剤化され得る。一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートを含む吸入溶液は、エアロゾル送達のための噴霧剤とともに製剤化され得る。一部の実施形態では、溶液は噴霧され得る。肺投与が、化学的に改変されたタンパク質の肺送達を記載するＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５号にさらに記載されている。
【０２９８】
一部の実施形態では、製剤は、経口投与され得ることが企図される。一部の実施形態では、この様式で投与される両親媒性コンジュゲートは、錠剤およびカプセル剤などの固体投薬形態の調合において習慣的に使用される担体ありまたはなしで製剤化され得る。一部の実施形態では、カプセル剤は、胃腸管において、バイオアベイラビリティが最大化され、全身循環前の（pre-systemic）分解が最小化される時点で製剤の活性部分を放出するように設計され得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのさらなる剤が、両親媒性コンジュゲートの吸収を促進するために含まれ得る。ある特定の実施形態では、賦形剤、香味料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤（lubricant）、懸濁化剤、錠剤崩壊剤およびバインダーもまた使用され得る。
【０２９９】
一部の実施形態では、医薬組成物は、錠剤の製造に適切な非毒性添加剤との混合物中に、有効量の両親媒性コンジュゲートを含み得る。一部の実施形態では、錠剤を無菌水または別の適切なビヒクル中に溶解させることによって、溶液は、単位用量形態で調製され得る。一部の実施形態では、適切な添加剤には、不活性賦形剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム、ラクトースまたはリン酸カルシウム；あるいは結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；あるいは滑沢剤（lubricating  agent）、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクが含まれるがこれらに限定されない。
【０３００】
持続送達または制御送達製剤中に両親媒性コンジュゲートを含む製剤を含む、さらなる医薬組成物が、当業者に明らかである。一部の実施形態では、種々の他の持続送達または制御送達手段、例えば、リポソーム担体、生体侵食性マイクロ粒子または多孔性ビーズおよびデポー注射剤を製剤化するための技術もまた、当業者に公知である。例えば、医薬組成物の送達のための多孔性ポリマーマイクロ粒子の制御放出を記載するＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９号を参照のこと。一部の実施形態では、持続放出調製物は、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態の、半透性ポリマーマトリックスを含み得る。持続放出マトリックスは、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号およびＥＰ０５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸およびガンマエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー（Sidman  et  al.,  Biopolymers,  22:547-556  (1983)）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Langer  et  al.,  J.  Biomed.  Mater.  Res.,  15:  167-277  (1981)およびLanger,  Chem.  Tech.,  12:98-  105  (1982)）、エチレン酢酸ビニル（Langer  et  al.、上記）またはポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）を含み得る。一部の実施形態では、持続放出組成物には、当該分野で公知のいくつかの方法のいずれかによって調製され得るリポソームもまた含まれ得る。例えば、Eppstein  et  al,  Proc.  Natl.  Acad.  Sci.  USA,  82:3688-3692  (1985)；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６およびＥＰ１４３，９４９を参照のこと。
【０３０１】
一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用される医薬組成物は、無菌である。一部の実施形態では、無菌性は、無菌濾過膜を介した濾過によって達成される。組成物が凍結乾燥されるある特定の実施形態では、この方法を使用した無菌化は、凍結乾燥および復元の前または後のいずれかに実施される。一部の実施形態では、非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態でまたは溶液で貯蔵される。一部の実施形態では、非経口組成物は、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアル中に入れる。
【０３０２】
一部の実施形態では、医薬組成物は、製剤化されると、溶液、懸濁物、ゲル、エマルジョン、固体として、または脱水もしくは凍結乾燥された粉末として、無菌バイアル中に貯蔵される。一部の実施形態では、かかる製剤は、使用準備済の形態で、または投与の前に復元される形態（例えば、凍結乾燥形態）のいずれかで、貯蔵される。
【０３０３】
一部の実施形態では、単一用量投与単位を産生するためのキットが提供される。一部の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含み得る。一部の実施形態では、単一のおよびマルチチャンバーのプレフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（lyosyringe））を含むキットが含まれる。
【０３０４】
一部の実施形態では、治療的に使用される両親媒性コンジュゲートを含む医薬組成物の有効量は、例えば、治療状況および目的に依存する。したがって、当業者は、ある特定の実施形態に従う処置に適切な投薬量レベルが、送達される分子、両親媒性コンジュゲートが使用される適応症、投与の経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面または臓器のサイズ）および／または状態（年齢および一般的健康）に一部依存して変動することを理解する。一部の実施形態では、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投薬量を力価決定し、投与の経路を改変することができる。
【０３０５】
一部の実施形態では、投薬の頻度は、使用される製剤中の両親媒性コンジュゲートの薬物動態学的パラメーターを考慮する。一部の実施形態では、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に達するまで、組成物を投与する。したがって、一部の実施形態では、組成物は、単一用量として、または２つもしくはそれよりも多くの用量（これは、同じ量の所望の分子を含んでいてもいなくてもよい）として経時的に、または、移植デバイスもしくはカテーテルを介した連続的注入として、投与され得る。適切な投薬量のさらなる精密化は、当業者によって日常的に行われ、当業者が日常的に実施する作業の範囲内である。一部の実施形態では、適切な投薬量は、適切な用量−応答データの使用を介して確認され得る。
【０３０６】
一部の実施形態では、医薬組成物の投与の経路は、公知の方法に従う、例えば、経口で、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、皮下、眼内、動脈内、門脈内もしくは病巣内経路による注射を介する；持続放出系または移植デバイスによる。ある特定の実施形態では、組成物は、ボーラス注射によって、もしくは注入によって連続的に、または移植デバイスによって投与され得る。ある特定の実施形態では、併用療法の個々の要素は、異なる経路によって投与され得る。
【０３０７】
一部の実施形態では、組成物は、所望の分子がその上で吸収されたかまたは封入されたメンブレン、スポンジまたは別の適切な材料の移植を介して、局所投与され得る。移植デバイスが使用される一部の実施形態では、デバイスは、任意の適切な組織または臓器中に移植され得、所望の分子の送達は、拡散、時限放出（timed-release）ボーラスまたは連続的投与を介してであり得る。一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートを含む医薬組成物をｅｘ  ｖｉｖｏ様式で使用することが望まれ得る。かかる例では、患者から取り出された細胞、組織および／または臓器は、両親媒性コンジュゲートを含む医薬組成物に曝露され、その後、この細胞、組織および／または臓器は、患者中に引き続いて移植して戻される。
【０３０８】
一部の実施形態では、両親媒性コンジュゲートは、コンジュゲートを発現させ分泌するように、本明細書に記載される方法などの方法を使用して遺伝子操作されたある特定の細胞を移植することによって送達され得る。一部の実施形態では、かかる細胞は、動物またはヒトの細胞であり得、自家、異種（heterologous）または異種（xenogeneic）であり得る。一部の実施形態では、細胞は不死化され得る。一部の実施形態では、免疫学的応答の機会を減少させるために、細胞は、周辺組織の浸潤を回避するためにカプセル封入され得る。一部の実施形態では、カプセル封入材料は、典型的には、タンパク質産物（複数可）の放出を可能にするが、患者の免疫系によるまたは周辺組織からの他の有害因子による細胞の破壊を防止する、生体適合性の半透性ポリマー封入体またはメンブレンである。
使用の方法
【０３０９】
一部の実施形態では、本開示は、対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）を拡大または活性化する方法であって、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０３１０】
一部の実施形態では、本開示は、対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の増殖を刺激する方法であって、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０３１１】
細胞の拡大、活性化および増殖を決定するための方法は、当業者に公知である。例えば、特定の位置（例えば、リンパ節、血液、腫瘍）における細胞の数は、細胞を単離し、フローサイトメトリーを介してそれらを解析することによって決定され得る。一部の実施形態では、細胞は、適切なマーカー、例えば、活性化マーカー（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬまたはＯＸ４０Ｌ）および／または増殖マーカー（例えば、Ｋｉ６７）で染色される。一部の実施形態では、細胞の数は、色素（例えば、クリスタルバイオレット）を細胞中に導入し、色素の希釈度を経時的に測定することによって測定され、ここで、希釈度は、細胞増殖を示す。
【０３１２】
一部の実施形態では、本開示は、抗原の発現または発現の上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を処置するための方法であって、対象に、抗原に標的化されたＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）および両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含む、方法を提供する。
【０３１３】
一部の実施形態では、対象には、両親媒性脂質コンジュゲートを受ける前にＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）が投与される。一部の実施形態では、対象には、両親媒性脂質コンジュゲートを受けた後にＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）が投与される。一部の実施形態では、対象には、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）および両親媒性脂質コンジュゲートが、逐次または同時に投与される。
【０３１４】
ＣＡＲがタグ結合ドメインを含む一部の実施形態では、本明細書で開示される方法は、タグ化タンパク質の製剤を投与することをさらに含み、タグ結合ドメインは、タグ化タンパク質に結合する。一部の実施形態では、タグ化タンパク質のタンパク質は、抗体または抗原結合性断片である。一部の実施形態では、タグ結合ドメインは、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）および両親媒性リガンドコンジュゲートの投与の前に対象に投与される。一部の実施形態では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）および両親媒性リガンドコンジュゲートと併せて（同時にまたは逐次）、対象に投与される。一部の実施形態では、タグ化タンパク質の製剤は、ＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ  Ｔ細胞）および両親媒性リガンドコンジュゲートの投与の後に対象に投与される。
がんおよびがん免疫療法
【０３１５】
一部の実施形態では、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲートは、異常なアポトーシスまたは分化プロセスに関連する障害（例えば、細胞増殖障害（例えば、過剰増殖障害（hyperproliferaetive  disorder））または細胞分化障害、例えば、がん）を処置するのに有用である。本発明の方法による処置に適したがんの非限定的な例は、以下に記載される。
【０３１６】
細胞増殖および／または分化障害の例には、がん（例えば、癌、肉腫、転移性障害または造血新生物性障害、例えば、白血病）が含まれる。転移性腫瘍は、前立腺、結腸、肺、乳房および肝臓のものが含まれるがこれらに限定されない多数の原発性腫瘍型から生じ得る。したがって、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む本明細書で使用される組成物は、がんを有する患者に投与され得る。
【０３１７】
本明細書で使用される場合、本発明者らは、自律的成長の能力を有する細胞（即ち、迅速に増殖している細胞成長によって特徴付けられる異常な状態（state）または状態（condition））を指すために、用語「がん」（または「がん性」）、「過剰増殖」および「新生物性」を使用する場合がある。過剰増殖および新生物性疾患状態は、病的（即ち、疾患状態を特徴付けるまたは構成する）として分類され得る、または非病的（即ち、疾患状態に関連しない正常からの逸脱として）として分類され得る。これらの用語は、組織病理学的型または侵襲性の段階にかかわらず、全ての型のがん性成長もしくは発癌プロセス、転移性組織、または悪性形質転換した細胞、組織もしくは臓器を含むことを意味する。「病的過剰増殖」細胞は、悪性腫瘍成長によって特徴付けられる疾患状態において生じる。非病的過剰増殖細胞の例には、創傷修復に関連する細胞の増殖が含まれる。
【０３１８】
用語「がん」または「新生物」は、肺、乳房、甲状腺、リンパ腺およびリンパ系組織、胃腸臓器ならびに泌尿生殖器に影響するものを含む種々の臓器系の悪性腫瘍、ならびに悪性腫瘍、例えば、ほとんどの結腸がん、腎細胞癌、前立腺がんおよび／または精巣腫瘍、肺の非小細胞癌、小腸のがんおよび食道のがんを含むと一般に見なされる腺癌を指すために使用される。
【０３１９】
用語「癌」は、当該分野で認識されており、呼吸器系癌、胃腸系癌、泌尿生殖器系癌、精巣癌、乳癌、前立腺癌、内分泌系癌および黒色腫を含む上皮または内分泌組織の悪性腫瘍を指す。両親媒性リガンドコンジュゲートは、腎癌もしくは黒色腫を含む任意の型のがん、または任意のウイルス疾患を有する患者、それを有すると疑われる患者、またはそれを発生させる高いリスクがあり得る患者を処置するために使用され得る。例示的な癌には、子宮頸部、肺、前立腺、乳房、頭頸部、結腸および卵巣の組織から形成されるものが含まれる。この用語は、癌性および肉腫性組織から構成される悪性腫瘍を含む癌肉腫もまた含む。「腺癌」は、腺性組織に由来する癌または腫瘍細胞が認識可能な腺性構造を形成する癌を指す。
【０３２０】
増殖障害のさらなる例には、造血新生物性障害が含まれる。本明細書で使用される場合、用語「造血新生物性障害」は、例えば、骨髄系系統、リンパ系系統もしくは赤血球系系統、またはそれらの前駆体細胞から生じる、造血起源の過形成性／新生物性細胞が関与する疾患を含む。好ましくは、これらの疾患は、低分化急性白血病（例えば、赤芽球性白血病および急性巨核芽球性白血病）から生じる。さらなる例示的な骨髄性障害には、急性前骨髄性白血病（ＡＰＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が含まれるがこれらに限定されず（Vaickus,  L.  (1991)  Crit.  Rev.  in  Oncol./Hemotol.  11:267-97において概説される）；リンパ系悪性腫瘍には、Ｂ系統ＡＬＬおよびＴ系統ＡＬＬを含む急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＬＬ）ならびにワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）が含まれるがこれらに限定されない。悪性リンパ腫のさらなる形態には、非ホジキンリンパ腫およびそのバリアント、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＦ）、ホジキン病およびリード・シュテルンベルク病（Reed-Sternberg  disease）が含まれるがこれらに限定されない。
【０３２１】
腫瘍の成長およびサイズを低減させるのに十分な両親媒性コンジュゲートの量、即ち治療有効量は、選択された特定の化合物または組成物だけでなく、投与の経路、処置されている状態の性質、ならびに患者の年齢および状態によっても変動し、最終的には、患者の医師または薬剤師の裁量であることが、当業者によって理解される。本方法において使用される化合物が与えられる時間の長さは、個体によって変動する。
【０３２２】
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍のサイズを低減もしくは減少させるまたは腫瘍成長を阻害する方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含み、対象が、ＣＡＲエフェクター細胞治療（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療）を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、がんを有する対象において抗腫瘍応答を誘導するための方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含み、対象が、ＣＡＲエフェクター細胞治療（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療）を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。
【０３２３】
一部の実施形態では、本開示は、対象において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答を刺激するための方法であって、抗原に標的化されたエフェクターＣＡＲ細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）および両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫応答は、Ｔ細胞媒介性免疫応答である。一部の実施形態では、免疫応答は、抗腫瘍免疫応答である。一部の実施形態では、標的細胞集団または標的組織は、腫瘍細胞または腫瘍組織である。
【０３２４】
処置に対する本明細書の言及は、注目したがんおよび症状の予防および処置に及ぶことが、当業者によって理解される。
感染性疾患
【０３２５】
一部の実施形態では、本明細書で開示される両親媒性脂質コンジュゲートは、急性または慢性の感染性疾患を処置するのに有用である。ウイルス感染症は、Ｔ細胞によって主に排除されるので、Ｔ細胞活性における増加は、感染性ウイルス病原体のより迅速なまたは徹底的なクリアランスが動物またはヒト対象にとって有益である状況において、治療的に有用である。
最近、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０７７７８９号；Hale  et  al.,  (2017)  Engineering  HIV-Resistant,  Anti-HIV  Chimeric  Antigen  Receptor  T  Cells.  Molecular  Therapy,  Vol.  25(3):  570-579；Liu  et  al.,  (2016).  ABSTRACT.  Journal  of  Virology,  90(21),  9712-9724；Liu  et  al.,  (2015).  ABSTRACT.  Journal  of  Virology,  89(13),  6685-6694；Sahu  et  al.,  (2013).  Virology,  446(1-2),  268-275に記載されるように、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などのウイルス感染症を処置する際のその有用性について調査されている。
【０３２６】
したがって、一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、免疫不全（例えば、ＨＩＶ）、パピローマ（例えば、ＨＰＶ）、ヘルペス（例えば、ＨＳＶ）、脳炎、インフルエンザ（例えば、ヒトインフルエンザウイルスＡ）および風邪（例えば、ヒトライノウイルス）ウイルス感染症が含まれるがこれらに限定されない局所または全身ウイルス感染症の処置のために投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む医薬製剤は、ウイルス皮膚疾患、例えば、ヘルペス病変もしくは帯状疱疹、または性器疣贅を処置するために、外用投与される。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートは、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、風邪または脳炎が含まれるがこれらに限定されない全身ウイルス疾患を処置するために投与される。
【０３２７】
一部の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症を有する対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）の増殖を増加させるための方法であって、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物を投与することを含み、ＣＡＲが、ウイルスペプチド結合ドメイン（例えば、ＨＩＶ  Ｅｎｖ結合ドメイン）を含み、両親媒性リガンドコンジュゲートが、ウイルスペプチド（例えば、ＨＩＶ  Ｅｎｖ）を含む、方法を提供する。
【０３２８】
一部の実施形態では、本開示は、ウイルス感染症を有する対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞）を拡大させるための方法であって、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物を投与することを含み、ＣＡＲが、ウイルスペプチド結合ドメイン（例えば、ＨＩＶ  Ｅｎｖ結合ドメイン）を含み、両親媒性リガンドコンジュゲートが、ウイルスペプチド（例えば、ＨＩＶ  Ｅｎｖ）を含む、方法を提供する。
【０３２９】
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象においてウイルス感染症を低減させる方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含み、対象が、ＣＡＲエフェクター細胞治療（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療）を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、がんを有する対象において抗ウイルス応答を誘導するための方法であって、対象に、本明細書に記載される両親媒性脂質コンジュゲートを投与することを含み、対象が、ＣＡＲエフェクター細胞治療（例えば、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療）を受けているまたは受けたことがある、方法を提供する。
【０３３０】
処置に対する本明細書の言及は、注目した感染症および症状の予防および処置に及ぶことが、当業者によって理解される。
キット
【０３３１】
本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲートおよび使用に関する指示を少なくとも含むキットが、本明細書に提供される。一部の実施形態では、キットは、適切な容器中に、両親媒性リガンドコンジュゲート、１つまたは複数の対照、ならびに種々のバッファ、試薬、酵素および当該分野で周知の他の標準的な成分を含む。一部の実施形態では、キットは、アジュバント（例えば、両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたはＳＴＩＮＧアゴニスト（例えば、ＣＤＧ））をさらに含む。したがって、一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバントは、同じバイアル中にある。一部の実施形態では、両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバントは、別々のバイアル中にある。
【０３３２】
一部の実施形態では、容器は、両親媒性リガンドコンジュゲートがその中に入れられ得、一部の場合にはその中に適切にアリコート化され得る、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ビン、シリンジまたは他の容器手段である。さらなる構成成分が提供される場合、キットは、この化合物がその中に入れられ得るさらなる容器を含み得る。キットは、市販のために、両親媒性リガンドコンジュゲートを含むための手段、および密閉された任意の他の試薬容器もまた含み得る。かかる容器には、所望のバイアルがその中に保持される射出成形またはブロー成形されたプラスチック容器が含まれ得る。容器および／またはキットは、使用に関する指示および／または警告を有するラベルを含み得る。
【０３３３】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣＤＧである。
【０３３４】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。
【０３３５】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞を拡大させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物ワクチンの投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞を拡大させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣＤＧである。
【０３３６】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞を拡大させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣＤＧである。
【０３３７】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を増加させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の態様では、キットは、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を増加させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣＤＧである。
【０３３８】
一部の実施形態では、本開示は、ＣＡＲ−Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ−Ｔ細胞の増殖を増加させるための、本明細書に記載される両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットを提供する。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載される両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＳＴＩＮＧアゴニストである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣＤＧである。
【０３３９】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるキットのいずれかは、両親媒性リガンドコンジュゲート中に存在するＣＡＲリガンドに結合するＣＡＲを含むＣＡＲ−Ｔ細胞をさらに含む。
本開示の他の実施形態
【０３４０】
このセクションを通じて、実施形態という用語は、「Ｅ」とその後ろの序数として略される。例えば、Ｅ１は、実施形態１と等価である。
【０３４１】
Ｅ１．対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を拡大させるまたはＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させる方法であって、対象においてＣＡＲ  Ｔ細胞を拡大させるのに十分な量で組成物を投与することを含み、組成物が、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む両親媒性リガンドコンジュゲートを含む、方法。
【０３４２】
Ｅ２．両親媒性リガンドコンジュゲートが、生理的条件下でアルブミンに結合する、実施形態１に記載の方法。
【０３４３】
Ｅ３．ＣＡＲ（−）Ｔ細胞の増殖が、対象において増加されない、実施形態２に記載の方法。
【０３４４】
Ｅ４．それを必要とする対象において腫瘍のサイズを低減もしくは減少させるまたは腫瘍成長を阻害する方法であって、対象に組成物を投与することを含み、対象が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがあり、組成物が、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む両親媒性リガンドコンジュゲートを含む、方法。
【０３４５】
Ｅ５．がんを有する対象において抗腫瘍応答を誘導する方法であって、対象に組成物を投与することを含み、対象が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けているまたは受けたことがあり、組成物が、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む両親媒性リガンドコンジュゲートを含む、方法。
【０３４６】
Ｅ６．対象において抗原を発現する標的細胞集団または標的組織に対する免疫応答を刺激する方法であって、対象に、抗原に標的化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞および組成物を投与することを含み、組成物が、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む両親媒性リガンドコンジュゲートを含む、方法。
【０３４７】
Ｅ７．免疫応答が、Ｔ細胞媒介性免疫応答または抗腫瘍免疫応答である、実施形態６に記載の方法。
【０３４８】
Ｅ８．標的細胞集団または標的組織が、腫瘍細胞または腫瘍組織である、実施形態６または７に記載の方法。
【０３４９】
Ｅ９．抗原の発現または発現の上昇に関連する疾患、障害または状態を有する対象を処置する方法であって、対象に、抗原に標的化されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞および組成物を投与することを含み、組成物が、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む両親媒性リガンドコンジュゲートを含む、方法。
【０３５０】
Ｅ１０．ＣＡＲ  Ｔ細胞を受ける前に、対象に組成物が投与される、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
【０３５１】
Ｅ１１．ＣＡＲ  Ｔ細胞を受けた後に、対象に組成物が投与される、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
【０３５２】
Ｅ１２．組成物およびＣＡＲ  Ｔ細胞が同時に投与される、実施形態１から３のいずれか１つに記載の方法。
【０３５３】
Ｅ１３．ＣＡＲ  Ｔ細胞が、１つの共刺激ドメインを含む、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
【０３５４】
Ｅ１４．１つの共刺激ドメインが、ＣＤ２８または４−１ＢＢである、実施形態１３に記載の方法。
【０３５５】
Ｅ１５．両親媒性リガンドコンジュゲートが、リンパ節に輸送される、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の方法。
【０３５６】
Ｅ１６．両親媒性リガンドコンジュゲートが、鼠径リンパ節および補助リンパ節に輸送される、実施形態１から１４のいずれか１つに記載の方法。
【０３５７】
Ｅ１７．両親媒性リガンドコンジュゲートが、リンパ節に輸送されると、抗原提示細胞の膜中に挿入される、実施形態１から１６のいずれか１つに記載の方法。
【０３５８】
Ｅ１８．抗原提示細胞が、髄質マクロファージ、ＣＤ８＋樹状細胞および／またはＣＤｌｌｂ＋樹状細胞である、実施形態１７に記載の方法。
【０３５９】
Ｅ１９．ＣＡＲリガンドが、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間または少なくとも２５日間にわたって、リンパ節中で保持される、実施形態１から１８のいずれか１つに記載の方法。
【０３６０】
Ｅ２０．組成物が、アジュバントをさらに含む、実施形態１から１９のいずれか１つに記載の方法。
【０３６１】
Ｅ２１．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態２０に記載の方法。
【０３６２】
Ｅ２２．免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、パターン認識受容体に結合する、実施形態２１に記載の方法。
【０３６３】
Ｅ２３．免疫賦活性オリゴヌクレオチドがＣｐＧを含む、実施形態２２に記載の方法。
【０３６４】
Ｅ２４．免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ｔｏｌｌ様受容体に対するリガンドである、実施形態２１に記載の方法。
【０３６５】
Ｅ２５．リンカーが、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択される、実施形態１から２０のいずれか１つに記載の方法。
【０３６６】
Ｅ２６．リンカーが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎが２５〜５０の間である、実施形態１から２０のいずれか１つに記載の方法。
【０３６７】
Ｅ２７．脂質がジアシル脂質である、実施形態１から２６のいずれか１つに記載の方法。
【０３６８】
Ｅ２８．リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、実施形態２１から２４のいずれか１つに記載の方法。
【０３６９】
Ｅ２９．オリゴヌクレオチドリンカーが、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎが０〜２の間である、実施形態２８に記載の方法。
【０３７０】
Ｅ３０．脂質がジアシル脂質である、実施形態２１から２４および２８から２９のいずれか１つに記載の方法。
【０３７１】
Ｅ３１．ＣＡＲリガンドが腫瘍関連抗原であり、ＣＡＲが腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、実施形態１から３０のいずれか１つに記載の方法。
【０３７２】
Ｅ３２．ＣＡＲリガンドがタグであり、ＣＡＲがタグ結合ドメインを含む、実施形態１から３０のいずれか１つに記載の方法。
【０３７３】
Ｅ３３．タグが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態３２に記載の方法。
【０３７４】
Ｅ３４．タグ化タンパク質の製剤を投与することをさらに含む方法であって、タグ結合ドメインが、タグ化タンパク質に結合する、実施形態３２または３３に記載の方法。
【０３７５】
Ｅ３５．タグ化タンパク質のタンパク質が、抗体またはその抗原結合性断片である、実施形態３４に記載の方法。
【０３７６】
Ｅ３６．タグ結合ドメインが、抗体またはその抗原結合性断片である、実施形態３４または３５に記載の方法。
【０３７７】
Ｅ３７．タグ化タンパク質の製剤が、ＣＡＲ  Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与の前に対象に投与される、実施形態３４から３６のいずれか１つに記載の方法。
【０３７８】
Ｅ３８．タグ化タンパク質の製剤が、ＣＡＲ  Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与と併せて対象に投与される、実施形態３４から３６のいずれか１つに記載の方法。
【０３７９】
Ｅ３９．タグ化タンパク質の製剤が、ＣＡＲ  Ｔ細胞、および両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与の後に対象に投与される、実施形態３４から３６のいずれか１つに記載の方法。
【０３８０】
Ｅ４０．ＣＡＲ  Ｔ細胞が、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与の前に投与される、実施形態３７から３９のいずれか１つに記載の方法。
【０３８１】
Ｅ４１．ＣＡＲ  Ｔ細胞が、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与の後に投与される、実施形態３７から３９のいずれか１つに記載の方法。
【０３８２】
Ｅ４２．ＣＡＲ  Ｔ細胞が、両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物の投与と併せて投与される、実施形態３７から３９のいずれか１つに記載の方法。
【０３８３】
Ｅ４３．対象ががんを有する、実施形態１から３および６から４２のいずれか１つに記載の方法。
【０３８４】
Ｅ４４．対象がヒトである、実施形態１から４３のいずれか１つに記載の方法。
【０３８５】
Ｅ４５．両親媒性リガンドコンジュゲートおよび薬学的に許容される担体を含む組成物であって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）リガンド、脂質および必要に応じてリンカーを含む、組成物。
【０３８６】
Ｅ４６．リンカーが、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択される、実施形態４５に記載の組成物。
【０３８７】
Ｅ４７．リンカーが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含み、Ｎが２５〜５０の間である、実施形態４５に記載の組成物。
【０３８８】
Ｅ４８．脂質がジアシル脂質である、実施形態４５から４７のいずれか１つに記載の組成物。
【０３８９】
Ｅ４９．ＣＡＲリガンドがタグである、実施形態４５から４８のいずれか１つに記載の組成物。
【０３９０】
Ｅ５０．タグが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態４９に記載の組成物。
【０３９１】
Ｅ５１．実施形態４５から５０のいずれか１つに記載の組成物およびアジュバントを含む免疫原性組成物。
【０３９２】
Ｅ５２．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態５１に記載の免疫原性組成物。
【０３９３】
Ｅ５３．免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、パターン認識受容体に結合する、実施形態５２に記載の免疫原性組成物。
【０３９４】
Ｅ５４．免疫賦活性オリゴヌクレオチドがＣｐＧを含む、実施形態５３に記載の免疫原性組成物。
【０３９５】
Ｅ５５．免疫賦活性オリゴヌクレオチドが、ｔｏｌｌ様受容体に対するリガンドである、実施形態５２に記載の免疫原性組成物。
【０３９６】
Ｅ５６．脂質がジアシル脂質である、実施形態５２から５５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
【０３９７】
Ｅ５７．リンカーが、オリゴヌクレオチドリンカーである、実施形態５２から５６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
【０３９８】
Ｅ５８．オリゴヌクレオチドリンカーが、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎが０〜２の間である、実施形態５７に記載の免疫原性組成物。
【０３９９】
Ｅ５９．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４００】
Ｅ６０．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む、実施形態５９に記載のキット。
【０４０１】
Ｅ６１．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態６０に記載のキット。
【０４０２】
Ｅ６２．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けている個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４０３】
Ｅ６３．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞を拡大させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物ワクチンの投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４０４】
Ｅ６４．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞を拡大させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む、実施形態６３に記載のキット。
【０４０５】
Ｅ６５．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態６４に記載のキット。
【０４０６】
Ｅ６６．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞を拡大させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４０７】
Ｅ６７．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４０８】
Ｅ６８．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む、実施形態６７に記載のキット。
【０４０９】
Ｅ６９．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態６６または６８に記載のキット。
【０４１０】
Ｅ７０．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む医薬、ならびにその医薬単独で、またはアジュバントおよび必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせての投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４１１】
Ｅ７１．対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲ  Ｔ細胞を拡大させる際の使用のための、実施形態４５から５０のいずれか１つに記載の組成物、実施形態５１から５８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物または実施形態５９から７０のいずれか１つに記載のキットの使用。
【０４１２】
Ｅ７２．対象においてｉｎ  ｖｉｖｏでＣＡＲ  Ｔ細胞の増殖を増加させる際の使用のための、実施形態４５から５０のいずれか１つに記載の組成物、実施形態５１から５８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物または実施形態５９から７０のいずれか１つに記載のキットの使用。
【０４１３】
Ｅ７３．個体においてがんを処置するまたはその進行を遅延させる際の使用のための、実施形態４５から５０のいずれか１つに記載の組成物、実施形態５１から５８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物または実施形態５９から７０のいずれか１つに記載のキットの使用。
【０４１４】
Ｅ７４．個体においてがんを処置するためまたはその進行を遅延させるための医薬の製造における、実施形態４５から５０のいずれか１つに記載の組成物の使用であって、医薬が、組成物および必要に応じた薬学的に許容される担体を含む、使用。
【０４１５】
Ｅ７５．両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物であって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、ポリエチレングリコール部分を介してフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）にコンジュゲートされた脂質を含む、組成物。
【０４１６】
Ｅ７６．脂質が、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）であり、ポリエチレングリコール部分がＰＥＧ−２０００である、実施形態７５に記載の組成物。
【０４１７】
Ｅ７７．両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバントを含む免疫原性組成物であって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含み、アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、免疫原性組成物。
【０４１８】
Ｅ７８．両親媒性リガンドコンジュゲートおよびアジュバントを含む免疫原性組成物であって、両親媒性リガンドコンジュゲートが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含み、ＣＡＲリガンドがタグであり、アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、免疫原性組成物。
【０４１９】
Ｅ７９．両親媒性リガンドコンジュゲートが、生理的条件下でアルブミンに結合する、実施形態４から４４のいずれか１つに記載の方法。
【０４２０】
Ｅ８０．両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートが、生理的条件下でアルブミンに結合する、実施形態２１から２４および２７から４４のいずれか１つに記載の方法。
【０４２１】
Ｅ８１．両親媒性リガンドコンジュゲートを含む組成物を、非腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、腫瘍流入領域リンパ節において非経口で、または腫瘍内に投与することを含む、実施形態１から４４のいずれか１つに記載の方法。
【０４２２】
Ｅ８２．標的細胞集団または標的組織が、ウイルスに感染した細胞の集団または組織である、実施形態６に記載の方法。
【０４２３】
Ｅ８３．ウイルスがヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、実施形態８２に記載の方法。
【０４２４】
Ｅ８４．免疫応答がＴ細胞媒介性免疫応答である、実施形態８２または８３に記載の方法。
【０４２５】
Ｅ８５．抗原が、ウイルス抗原またはがん抗原である、実施形態９に記載の方法。
【０４２６】
Ｅ８６．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、両親媒性リガンドコンジュゲート、必要に応じた薬学的に許容される担体を含む組成物を含む容器、および組成物の投与に関する指示を含む添付文書を含むキットであって、両親媒性リガンドが、脂質、ＣＡＲリガンドおよび必要に応じてリンカーを含む、キット。
【０４２７】
Ｅ８７．ＣＡＲ  Ｔ細胞治療を受けている個体においてウイルス感染症を処置するためまたはその進行を遅延させるための、アジュバント、およびアジュバントの投与に関する指示をさらに含む、実施形態８６に記載のキット。
【０４２８】
Ｅ８８．アジュバントが、リンカーおよび必要に応じて極性化合物を用いてまたは用いずに脂質にコンジュゲートされた免疫賦活性オリゴヌクレオチドを含む両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートである、実施形態８７に記載のキット。
【０４２９】
Ｅ８９．両親媒性リガンドコンジュゲートが、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択されるリンカーを含む、実施形態５９から７０および８６から８８のいずれか１つに記載のキット。
【０４３０】
Ｅ９０．両親媒性リガンドコンジュゲートが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含むリンカーを含み、Ｎが２５〜５０の間である、実施形態５９から７０および８６から８８のいずれか１つに記載のキット。
【０４３１】
Ｅ９１．脂質がジアシル脂質である、実施形態５９から７０および８６から９０のいずれか１つに記載のキット。
【０４３２】
Ｅ９２．両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートが、オリゴヌクレオチドリンカーを含む、実施形態６１、６５、６９または８８のいずれか１つに記載のキット。
【０４３３】
Ｅ９３．オリゴヌクレオチドリンカーが、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎが０〜２の間である、実施形態９２に記載のキット。
【０４３４】
Ｅ９４．ＣＡＲリガンドが腫瘍関連抗原であり、ＣＡＲが腫瘍関連抗原結合ドメインを含む、実施形態５９から７０および８９から９３のいずれか１つに記載のキット。
【０４３５】
Ｅ９５．ＣＡＲリガンドがタグであり、ＣＡＲがタグ結合ドメインを含む、実施形態５９から７０および８９から９３のいずれか１つに記載のキット。
【０４３６】
Ｅ９６．タグが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態９５に記載のキット。
【０４３７】
Ｅ９７．キットが、タグ化タンパク質の製剤、およびタグ化タンパク質の製剤の投与に関する指示をさらに含み、タグ結合ドメインが、タグ化タンパク質に結合する、実施形態９５または９６に記載のキット。
【０４３８】
Ｅ９８．タグ化タンパク質のタンパク質が、抗体またはその抗原結合性断片である、実施形態９７に記載のキット。
【０４３９】
Ｅ９９．両親媒性リガンドコンジュゲートが、親水性ポリマー、一連の親水性アミノ酸、多糖、またはそれらの組合せからなる群から選択されるリンカーを含む、実施形態７７または７８に記載の免疫原性組成物。
【０４４０】
Ｅ１００．両親媒性リガンドコンジュゲートが、「Ｎ」個連続するポリエチレングリコール単位を含むリンカーを含み、Ｎが２５〜５０の間である、実施形態７７または７８に記載の免疫原性組成物。
【０４４１】
Ｅ１０１．脂質がジアシル脂質である、実施形態７７、７８、９９または１００に記載の免疫原性組成物。
【０４４２】
Ｅ１０２．ＣＡＲリガンドが、腫瘍関連抗原またはウイルス抗原である、実施形態７７または９９から１０１に記載の免疫原性組成物。
【０４４３】
Ｅ１０３．両親媒性オリゴヌクレオチドコンジュゲートが、オリゴヌクレオチドリンカーを含む、実施形態７７、７８または９９から１０２に記載の免疫原性組成物。
【０４４４】
Ｅ１０４．オリゴヌクレオチドリンカーが、「Ｎ」個連続するグアニンを含み、Ｎが０〜２の間である、実施形態１０３に記載の免疫原性組成物。
【０４４５】
Ｅ１０５．タグが、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ストレプトアビジン、ビオチン、ジニトロフェノール、ペリジニンクロロフィルタンパク質複合体、緑色蛍光タンパク質、フィコエリトリン（ＰＥ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ、パルミトイル化、ニトロシル化、アルカリホスファターゼ、グルコースオキシダーゼおよびマルトース結合タンパク質からなる群から選択される、実施形態７８、９９から１０１および１０３から１０４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
【０４４６】
本開示は、以下の実施例によってさらに例示され、これらの実施例はさらなる限定として解釈すべきではない。本出願を通じて引用された全ての図面ならびに全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０４４７】
以下は、本明細書に記載される方法を実施するための具体的な実施形態の実施例である。これらの実施例は、例示目的のためにのみ提供され、本発明の範囲を限定する意図では決してない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して正確さを確実にするための努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差が当然許容されるべきである。
（実施例１）
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ペプチド／タンパク質リガンドの生成
【０４４８】
一部の患者集団におけるＣＡＲ−Ｔ細胞の不十分な持続、および固形腫瘍においてＣＡＲ−Ｔ治療が最適な応答を誘導できないことに起因して、より強力なＣＡＲ−Ｔ細胞拡大および増強された機能性が、ＣＡＲ自体を介した刺激によって達成され得ると仮説を立てた。これを達成するために、アルブミン結合リン脂質ポリマーを、以前に記載されたように利用した（Liu,  H.,  Moynihan,  K.  D.,  Zheng,  Y.,  Szeto,  G.  L.,  Li,  A.  V.,  Huang,  B.,  Irvine,  D.  J.  (2014).  Structure-based  programming  of  lymph-node  targeting  in  molecular  vaccines.  Nature,  507(7493),  519-522.）。具体的には、ＣＡＲに対する小分子、ペプチドまたはタンパク質リガンドを、図１Ａに示されるようにポリマー−脂質テイルに結合させて、両親媒性物質ワクチンを形成する。
【０４４９】
最初に、再標的化可能なＣＡＲを使用したが、このキメラ抗原受容体は、ＦＩＴＣコンジュゲートした抗腫瘍抗体を介して腫瘍に対して標的化される小分子フルオレセイン（ＦＩＴＣ）を認識する（Ma,  J.  S.,  Kim,  J.  Y.,  Kazane,  S.  A.,  Choi,  S.  H.,  Yun,  H.  Y.,  Kim,  M.  S.,  Cao,  Y.  (2016).  Versatile  strategy  for  controlling  the  specificity  and  activity  of  engineered  T  cells.  Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A,  113(4),  E450-458）。同族リガンドは、ＦＩＴＣ−ポリ（エチレングリコール（ＰＥＧ）−ＤＳＰＥ（「ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ」）である。図１Ｂは、対応する両親媒性物質ワクチンでコーティングされた抗原提示細胞によるＣＡＲ  Ｔ細胞の刺激を示す概略図を提供する。
【０４５０】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチンを生成するために、ＰＥ（ホスホエタノールアミン）脂質（例えば、ＤＳＰＥ）を、５００μＬのＣＨＣｌ３および５００μＬのＤＭＦ中に溶解させ、３当量のトリエチルアミンおよび１．２当量のフルオレセイン−ＰＥＧ２０００−ＮＨＳ（Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧ  Ｗｏｒｋｓ  Ｉｎｃ．）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。両親媒性フルオレセインＰＥＧ両親媒性物質を、Ｃ４カラム（ＢｉｏＢａｓｉｃ−４、２００ｍｍ×４．６ｍｍ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用し、溶出剤として１００ｍＭトリエチルアミン−酢酸緩衝液（ＴＥＡＡ、ｐＨ７．５）−メタノール（０〜３０分、１０〜１００％）を使用する逆相ＨＰＬＣによって精製した。最終産物を、Ｈ２Ｏ中に溶解させ、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法（フルオレセイン、吸光係数は４９０ｎｍ、ｐＨ９で７０，０００Ｍ−１ｃｍ−１）によって定量し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって特徴付けた。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ペプチド／タンパク質リガンドを生成するために、Ｎ末端システインが改変されたペプチドまたはタンパク質リガンドを、ＤＭＦ中に溶解させ、２当量のマレイミド−ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ（Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．）と混合し、混合物を、２５℃で２４時間撹拌した。バイオコンジュゲーションは、ＨＰＬＣ解析によって本質的に完全であると判定された。ペプチド両親媒性物質を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって特徴付けた。次いで、ペプチドコンジュゲートを、１０×ｄｄＨ２Ｏ中に希釈し、凍結乾燥して粉末にし、Ｈ２Ｏ中に再溶解させ、−８０℃で貯蔵した。
（実施例２）
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣコーティングされた細胞による抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化
【０４５１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対する両親媒性リガンドコンジュゲートの効果を決定するために、ＣＡＲ−Ｔ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ刺激を、両親媒性リガンドコンジュゲートを提供する抗原提示細胞（ＡＰＣ）との共培養後に評価した。具体的には、抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲを発現するモデルＣＡＲ−Ｔ細胞を、Ｍｙｃエピトープタグコード領域に、ならびにＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲコード領域にインフレームで融合された抗ＦＩＴＣ（フルオレセイン）ｓｃＦＶ（４ｍ５．３）コード領域を含むＤＮＡベクターの、初代マウスＴ細胞中へのレトロウイルス形質導入によって生成した。Ｍｙｃタグ化抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲのドメイン構造および配向は、図２Ａに示される。初代マウスＴ細胞におけるＭｙｃタグ化抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲの表面発現を、形質導入された細胞を、蛍光標識された抗Ｍｙｃ抗体と共にインキュベートし、フローサイトメトリーによって蛍光細胞を定量することによって定量した（図２Ｂ）。
【０４５２】
次に、モデル標的細胞Ｋ５６２細胞を、ＰＥＧ−２０００リンカーを介してＦＩＴＣに共有結合的に連結された親油性部分（即ち、ＤＳＰＥ）を含む両親媒性リガンドコンジュゲートの効率的な膜挿入について試験した。低用量（即ち、２５ｎＭ）のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣでは、血清濃度の増加が、表面挿入をほぼ完全に消失させた。しかし、高用量（５００ｎＭ）では、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣは、高レベルの細胞表面装飾を保持した（データ示さず）。
【０４５３】
リンパ節中の抗原提示細胞を模倣するために、樹状細胞（ＤＣ２．４）を、漸増濃度のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣで装飾し、次いで、０時間、４８時間および９６時間にわたって、抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞と共に共培養した。ＦＩＴＣ装飾されたＤＣ２．４細胞が抗ＦＩＴＣ  ＣＡＲ  Ｔ細胞を刺激する能力を、ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＩＦＮγ分泌によってモニタリングした。ほとんどのＦＩＴＣ分子が２４時間以内に内部移行されたように見えたが、ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＩＦＮγの強い誘導が、０時間および４８時間の時点で観察され、次いで、９６時間の時点では減退し（データ示さず）、用量依存的活性化が観察された（図２Ｃ）。さらに、ＦＩＴＣ装飾されたＤＣ２．４細胞を、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ細胞と共に１０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で６時間にわたって共培養した場合、ＤＣ２．４細胞は、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ細胞にＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣを投与したときには死滅させられた（図２Ｄ）。さらに、以前に報告されたように（Ma  et  al.,  2016）、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ  Ｔ細胞を、対照抗体ではなくＦＩＴＣコンジュゲートした抗ＣＤ１９抗体の存在下でＣＤ１９＋標的細胞と共に共培養することは、ＩＦＮγ分泌によって決定される強力なＣＡＲ−Ｔ活性化をもたらした（データ示さず）。全体として、これらの結果は、両親媒性リガンドコンジュゲートがＣＡＲ−Ｔ細胞を活性化することが可能であることを示している。
（実施例３）
リンパ節（ＬＮ）へのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ輸送、ＡＰＣによる保持および取込み
【０４５４】
実施例２の結果に基づいて、次に、両親媒性リガンドコンジュゲートＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣが、リンパ節（ＬＮ）中の抗原提示細胞をコーティングして、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでプライムできるかどうかを決定した。リンパ節へのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ輸送ならびにＡＰＣによる保持および取込みを評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、様々な用量のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣを与えた。具体的には、鼠径ＬＮ、補助ＬＮおよび腸骨（lilac）ＬＮを、マウスの尾静脈中への２ｎｍｏｌ、５ｎｍｏｌまたは１０ｎｍｏｌ用量のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの投与の２４時間後に回収した。遊離ＦＩＴＣを対照として使用した。マウスを屠殺し、ＬＮを、ＩＶＩＳイメージング（励起４６５ｎｍ、発光５２０ｎｍ）のために異なる時点において取り出して、ＦＩＴＣシグナルのＬＮ保持をモニタリングした。最も効率的な排出は、鼠径ＬＮ中へであり、次が補助ＬＮへの排出であった（データ示さず）。高用量では、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣは、腸骨ＬＮ中に流れ込むことも観察された。
【０４５５】
ＦＩＴＣシグナルは、最も低い用量（２ｎｍｏｌ）では４日後にほぼ失われたが、シグナルは、高用量（１０ｎｍｏｌ）のＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣでは、２１日間よりも長きにわたって保持された（図３Ａ）。遊離ＦＩＴＣシグナルは、２４時間で失われた（図３Ａ）。ＬＮ細胞のフローサイトメトリー解析により、ＣＤ８＋およびＣＤ１１ｂ＋樹状細胞（ＤＣ）、ならびにマクロファージにおけるＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの実質的な取込みが明らかになったが、Ｔ細胞またはＢ細胞においては最小の蓄積であった（図３Ｂおよび３Ｃ）。ＬＮの共焦点イメージングにより、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＩＴＣが、１日後に濾胞間（interfollicular）領域において最初は蓄積したが、経時的にＴ細胞領域中のＣＤ１１ｃ＋ＤＣ上に分配し、抗ＦＩＴＣ抗体で明るく染色されたこれらのＬＮからＦＩＴＣ＋ＣＤ１１ｃ＋細胞を選別したことが示された（データ示さず）。
【０４５６】
全体として、これらの結果は、両親媒性リガンドコンジュゲートが、リンパ節中の抗原提示細胞上で発現されることを示している。
（実施例４）
ＬＮ中に保持されたＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣは、ＣＡＲ  Ｔ細胞増殖をロバストに刺激する
【０４５７】
リンパ節抗原提示細胞上に蓄積しているＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣが、ＣＡＲ  Ｔ細胞のプライミングをもたらすかどうか、およびこの刺激効果がどのくらい長く持続するかを評価するために、１日目に、マウスに、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウス中に、ＰＢＳ、ｃ−ジ−ＧＭＰ（２５ｕｇ）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ（１０ｎｍｏｌ）、またはＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ（１０ｎｍｏｌ）＋ｃ−ジ−ＧＭＰ（２５ｕｇ）を投与した。図７Ａ中のタイムラインに示されたように、種々の時点の後、２×１０６のＣＴＶ標識されたＣＡＲ−Ｔ細胞を、尾静脈注射を介して各マウス中に移入した。ＣＡＲ−Ｔ細胞を、１：１の比のＣＡＲ＋細胞およびＣＡＲ−細胞の混合物になるように用量設定した。さらに４８時間後、マウスを屠殺し、ＬＮをＦＡＣＳ解析のために取り出した。図７Ｂ中の代表的な結果で実証されるように、ワクチン接種の７日後まで、ＦＩＴＣ−ＣＡＲ−Ｔは、養子移入の４８時間後にリンパ節において効率的に刺激され、強いＴ細胞促進性アジュバントであるサイクリック−ジ−ＧＭＰ（ＣＤＧ、ＳＴＩＮＧアゴニスト）の共投与は、１４日まで、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ刺激を有意に延長させた（図７Ｂ）。ＣＡＲ−Ｔ細胞の最小の増殖が、ＰＢＳまたはアジュバント単独を受けている対照マウスにおいて観察された。これらの結果は、両親媒性リガンドコンジュゲートがＣＡＲ−Ｔ細胞増殖をｉｎ  ｖｉｖｏで誘導する能力を示している。
【０４５８】
さらに、ＣＤＧ共投与は、マクロファージおよびＣＤ１１ｃ＋ＣＤ１１ｂ＋ＤＣを含む複数のＡＰＣ細胞表面上でのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの持続時間および到達可能性を有意に増加させた（図５）。さらに、ＣＤＧ共投与は、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ単独と比較して、いくつかの共刺激分子、即ち、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４１ＢＢＬ、ＩＣＯＳＬおよびＯＸ４０Ｌの発現レベルを増加させた（図６）。発現を、ワクチン接種の２４時間後および３日後に測定した。
（実施例５）
長期ＣＡＲ−Ｔ細胞拡大に対するＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの効果
【０４５９】
ＣＡＲ−Ｔ細胞の長期ｉｎ  ｖｉｖｏ拡大に対するＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの効果を追跡するために、ＣＤ４５．１／ＣＤ４５．２コンジェニック移植モデルを利用した。具体的には、リンパ枯渇されたＣＤ４５．２レシピエントマウスに、０日目に種々の用量のＣＤ４５．１ドナーＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞（０．２５×１０６；０．０５×１０６；０．０１×１０６）を与えた。２４時間後、マウスに、ＰＢＳ、または２５ｕｇのＣＤＧありもしくはなしの１０ｎｍｏｌ  ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣによるワクチン接種を与えた。図７は、実験のタイムラインを提供する。循環ＣＡＲ−Ｔ細胞のパーセンテージを、ワクチン接種の７日後および１４日後に収集した末梢血のＦＡＣＳ解析によって決定した。ＣＡＲ  Ｔ細胞を、ＣＤ３＋ＣＤ８＋／Ｍｙｃタグ＋集団と定義した。
【０４６０】
劇的な縦軸方向のＣＤ４５．１  ＣＡＲ−Ｔ拡大が、単独またはＣＤＧと組み合わせたＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣによるワクチン接種後に観察された。具体的には、１回目のワクチン接種の７日後に、０．２５×１０６群は、末梢ＣＤ８＋Ｔ細胞の＞７０％を占め、０．０５×１０６群は＞５０％を占めたが、これは、１０×１０６のｅｘ  ｖｉｖｏで拡大されたＣＡＲ−Ｔ細胞を移入したマウスよりも有意に大きかった（図７）。２回目のブースト（boot）により、０．０１×１０６群はまた、１４日目までに５０％に達した。
【０４６１】
さらに、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣの有効性を、リンパ充満マウス（lymphreplete  mice）において評価した。リンパ枯渇レジメンは、養子細胞治療の有効性を増強するが、重篤な毒性に関連する。リンパ枯渇された状況におけるＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣによる強力なＣＡＲ−Ｔブーストを考慮して、ＤＳＰＥ−ＰＥＦ−ＦＩＴＣがリンパ充満マウスにおいてＣＡＲ−Ｔ細胞をかなりのレベルまで拡大させることができたかどうかを次に検討した。具体的には、図８に示されるように、複数用量のＣＤ４５．１  ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、リンパ充満ＣＤ４５．２レシピエントマウス中に移入し、その後同じワクチン接種スキームおよび上記の引き続く解析を行った。結果も図８に示され、これは、１０×１０６のＣＡＲ−Ｔのみを受けた対照マウスは、約５％の循環ＣＤ８＋Ｔ細胞集団を有したが、０．２５×１０６のＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣを受けたマウスは、１４日目までに約１０％に達し、約２０％が１×１０６  ＣＡＲＴ−Ｔ群において達成されたことを示している。１つの懸念は、反復ワクチン接種が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧにコンジュゲートされた場合のＦＩＴＣに対する抗体を惹起し、したがって、リンパ節におけるＣＡＲに対するその刺激を遮断し得ることであった。しかし、ＦＩＴＣをＤＳＰＥ−ＰＥＧまたは担体タンパク質ＯＶＡにコンジュゲートした場合には抗体応答は観察されなかったが（図９）、それは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧがＴ細胞の助けの供給源を提供しなかったからである。
【０４６２】
全体として、これらの結果は、アジュバント（即ち、ＣＤＧ）と組み合わせたＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチンが、ｉｎ  ｖｉｖｏで強力なＣＡＲ−Ｔブースターワクチンとして作用したことを示した。
（実施例６）
腫瘍特異的抗原を有する両親媒性物質ワクチンの有効性
【０４６３】
次に、上記実施例に記載された同じブースターワクチンの概念が、真正の腫瘍抗原特異的ＣＡＲのために使用できるかどうかを評価した。具体的には、ＥＧＦＲｖＩＩＩに由来する短い直鎖エピトープを認識するマウスＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ  １３９ｓｃＦｖを利用した（Sampson,  et  al.  (2014).  EGFRvIII  mCAR-modified  T-cell  therapy  cures  mice  with  established  intracerebral  glioma  and  generates  host  immunity  against  tumor-antigen  loss.  Clin  Cancer  Res,  20(4),  972-984）。マウスＴ細胞に、このＣＡＲを形質導入し、両親媒性物質−ＥＧＦＲｖＩＩＩペプチドワクチン分子を、以下の方法によって合成した：ジメチルホルムアミド（ＤＭＳＯ）中に溶解させたｃ末端システインが改変されたＥＧＦＲｖＩＩＩペプチドを、２．５当量の１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［マレイミド（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２ｋ）および１当量のトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩および触媒量のトリエチルアミンと混合した。混合物を、室温で２４時間撹拌し、引き続いてＨＰＬＣによって精製し、Ｈ２Ｏ中に溶解させた。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ両親媒性物質ワクチンの概略図は、図１０Ａに示され、図１０Ｂは、Ｔ細胞上での抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲの発現を示す。
【０４６４】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣと同様、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞膜中に挿入し、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩコーティングされた細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＣＡＲ−Ｔ細胞を刺激した（データ示さず）。さらに、２×１０６のｃｅｌｌ  ｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）標識されたＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＣＡＲ−Ｔ細胞の静脈内注射の２４時間後の、１０ｕｇのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩおよびアジュバント（２５ｕｇのサイクリック−ジ−ＧＭＰ）によるマウスの免疫は、４８時間後に流入領域鼠径リンパ節においてｉｎ  ｖｉｖｏで広範なＣＡＲ−Ｔ細胞増殖を誘発した（図１０Ｃ）。ワクチンブーストの治療的影響を試験するために、マウスＣＴ−２Ａグリオーマ細胞に、ＥＧＦＲｖＩＩＩを形質導入し、ＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＣＡＲ−Ｔ細胞と共に共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＥＧＦＲｖＩＩＩ発現ＣＴ−２Ａグリオーマ細胞の存在下でＩＦＮγを分泌した（図１１Ａ）。さらに、野生型ＥＧＦＲまたはＥＧＦＲｖＩＩＩを発現するＣＴ−２Ａグリオーマ細胞をＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＣＡＲ−Ｔと共に１：１０の比で６時間にわたってｉｎ  ｖｉｔｒｏで共培養することで、ＥＧＦＲｖＩＩＩ−ＣＡＲ−Ｔ細胞によるＥＧＦＲｖＩＩＩ発現ＣＴ−２Ａグリオーマ細胞の効率的な殺滅が生じたが、野生型ＥＧＦＲ発現ＣＴ−２Ａグリオーマ細胞の殺滅は生じなかった（図１１Ｂ）。
【０４６５】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ両親媒性物質ワクチンの有効性をさらに調査するために、ｉｎ  ｖｉｖｏモデルを利用した。具体的には、野生型ＣＤ４５．２  Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、４×１０６のＥＧＦＲｖＩＩＩ発現ＣＴ−２Ａ細胞を移植した。７日目に、ＣＴ−２Ａ−ｍＥＧＦＲｖＩＩＩ腫瘍保有マウスに、致死量以下の照射、およびＣＤ４５．１マウスから産生された異なる用量のＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ細胞の引き続く注入を与え、その後、１０ｕｇのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩプラス２５ｕｇのＣＤＧを与えたまたは与えなかった。１０×１０６のＣＡＲ−Ｔ細胞を与えた群では、循環ＣＡＲ−Ｔ細胞は、末梢血ＣＤ８＋Ｔ細胞の約４０％を占めた（図１２）。より少ない細胞数を受けたマウスは、最小の循環ＣＡＲ−Ｔ細胞を有したが、劇的なＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ拡大が、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩプラスＣＤＧを受けた群において達成された（図１２）。
【０４６６】
ＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ機能に対する両親媒性リガンドコンジュゲートの影響を評価するために、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を、ワクチン接種の７日後に収集した末梢血を使用することによって実施した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、１×ｇｏｌｇｉｐｌｕｇの存在下で９６ウェルプレート中で６時間にわたって１：１の比でＥＧＦＲｖＩＩＩ発現ＣＴ−２Ａ細胞と混合した。次いで、細胞を表面染色し、固定し、透過処理し、次いで、抗ＩＦＮγおよび抗ＴＮＦα抗体でさらに染色して、標的細胞に応答した、ワクチンでブーストしたまたはブーストしていないＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ  Ｔ細胞のサイトカイン産生を評価した。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩでブーストしたＥＧＦＲｖＩＩＩ  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、有意に増強された機能性を有し、循環ＣＡＲ−Ｔの大部分は、標的腫瘍細胞に応答した（図１３）。さらに、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋ＣＤＧブースト群における腫瘍中への有意に増加したＣＡＲ−Ｔ浸潤が、腫瘍１ｍｇ当たりのＣＡＲ−Ｔ細胞の数をＦＡＣＳ解析することによって決定した場合、ワクチン接種の７日後に観察された（図１４）。さらに、腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ワクチン接種の７日後に、腫瘍細胞に対する増強された反応性を示した。具体的には、図１５は、腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞によるサイトカイン分泌のレベルが、ＰＢＳと比較してＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋ＣＤＧの存在下で増強されたことを示すが、図１６は、腫瘍浸潤性ＣＡＲ−Ｔ細胞において増加した、細胞傷害性の指標であるグランザイムＢのレベルを示し、増殖の指標であるＫｉ６７もまた増加した。興味深いことに、この増強された反応性は、ＰＤ１およびＴＩＭ３の表面発現にもかかわらずに生じた（図１７）。ＣＡＲ−ＴおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＥＧＦＲｖＩＩＩ＋ＣＤＧの両方を受けた動物は、有意に遅延された腫瘍成長（図１８Ａ）および長期にわたる生存（図１８Ｂ）を有した。特に、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣをワクチン接種したマウスと同様、４ラウンドの毎週のワクチン接種の後に、ＥＧＦＲｖＩＩＩに対する抗体応答は惹起されず、各ワクチン接種の後にわずかな体重減少のみが観察され、これは、毒性が管理可能なレベルであることを示している（データ示さず）。
（実施例７）
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣをワクチン接種した二特異性ＣＡＲ  Ｔ細胞の設計および有効性
【０４６７】
ＣＡＲ  Ｔ細胞に対するサロゲートペプチドリガンドの使用は有効であるが、一部のＣＡＲは、３次元構造エピトープを認識し（De  Oliveira,  et  al.  (2013).  A  CD19/Fc  fusion  protein  for  detection  of  anti-CD19  chimeric  antigen  receptors.  J  Transl  Med,  11,  23.  doi:10.1186/1479-5876-11-23）、これについて、単純なサロゲートリガンドを同定することは、困難または不可能であり得る。かかる制限を排除し、その結合ドメインの性質またはその特異性にかかわらず任意のＣＡＲをブーストするための手段を提供するために、タンデムｓｃＦｖベースの二特異性ＣＡＲを設計した。具体的には、抗ＦＩＴＣ  ｓｃＦＶ  ４ｍ５．３を、Ｎ末端シグナルペプチドの直後の（Ｇ４Ｓ）４ペプチドリンカーを介して、腫瘍標的化ＣＡＲのＮ末端細胞外ドメインに付加した（図１９）。このアプローチの実現可能性を評価するために、初代マウスＴ細胞において良好に発現される、ＦＩＴＣおよび黒色腫関連抗原ＴＲＰ１の両方を標的とする二特異性マウスＣＡＲを利用した。図２０は、Ｔ細胞上での二特異性ＣＡＲの発現を示す。この二特異性ＣＡＲの反応特異性を確認するために、ＦＩＴＣ／ＴＲＰ１−ＣＡＲ  Ｔ細胞を、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣコーティングされた標的細胞またはＴＲＰ１発現Ｂ１６Ｆ１０細胞のいずれかと共に、１０：１のエフェクター：標的比で６時間にわたってｉｎ  ｖｉｔｒｏで共培養したところ、ＦＩＴＣ／ＴＲＰ１−ＣＡＲ  Ｔは、ＩＦＮγ分泌によって示されるように、両方の抗原に対して、特異的かつ強力に応答した（図２１）。さらに、ＦＩＴＣ／ＴＲＰ１−ＣＡＲ  Ｔ細胞は、１０：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比での６時間にわたる細胞の共培養によって決定した場合、単一特異性ＴＲＰ１−ＣＡＲ  Ｔ細胞と等価に、ＴＲＰ１＋標的細胞を死滅させた（図２２）。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣワクチン接種は、ワクチン接種の４８時間後のｃｅｌｌ  ｔｒａｃｅ  ｖｉｏｌｅｔ輸送によって決定した場合、ＦＩＴＣ／ＴＲＰ１二特異性ＣＡＲ−Ｔ増殖をロバストに刺激した（図２３）。
【０４６８】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣプラスＣＤＧと併せた二特異性ＣＡＲ−Ｔの治療的潜在力を評価するために、野生型Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、５×１０５のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植した。５日後、腫瘍保有動物に、５００ｃＧｙの照射によるリンパ枯渇（lymphodepeletion）処置を与え、続いて、次の日に、１０×１０６のＦＩＴＣ／ＴＲＰ１  ＣＡＲ−Ｔ細胞の静脈内注射を与えた。ＣＡＲ−Ｔ細胞単独は、対照Ｔ細胞と比較して、腫瘍成長に対してわずかな影響を有したが、ＣＡＲ−Ｔおよびワクチン（１０ｎｍｏｌのＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ＋２５ｕｇのＣＤＧ）の両方を与えたマウスは、劇的に遅延された腫瘍成長（図２４Ａ）および有意に長期にわたる生存（図２４Ｂ）を示した。これは、増加した循環ＣＡＲ−Ｔレベル（図２５）および増強された腫瘍浸潤（図２６）と一致した。体重減少もまた、ワクチン接種を受けた動物群において制御下にあった（データ示さず）。
【０４６９】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ＋ＣＤＧブーストによる強力なＣＡＲ−Ｔ拡大および機能的増強によって動機付けされて、リンパ枯渇プレコンディショニングなしの腫瘍保有マウスにおけるＣＡＲ−ＴプラスＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ＋ＣＤＧの治療有効性を評価した。ｉｎ  ｖｉｖｏ追跡を促進するために、ＣＤ４５．１  ＦＩＴＣ／ＴＲＰ１  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、類似のワクチン接種スキームに従って、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫を有するＣＤ４５．２レシピエントマウス中に移入した。ＣＡＲ−Ｔ単独を受けたマウスは、対照Ｔ細胞を受けたマウスとほとんど識別不能な腫瘍成長を有したが、ＣＡＲ−ＴおよびＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣ＋ＣＤＧワクチン接種の両方による併用処置は、腫瘍成長を有意に遅延させ、動物生存を増加させ（図２７Ａおよび２７Ｂ）、動物の体重に対しては最小の影響を有した（データ示さず）。
【０４７０】
ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣは、リンパ節に優先的に輸送され、そこに蓄積し、リンパ節中に存在するＡＰＣ中に取り込まれるが、小さいパーセンテージの両親媒性物質が、末梢血中に漏出し得、バイスタンダー細胞中に挿入して、それらをｄｅ  ｎｏｖｏのＣＡＲ−Ｔ標的にし得る。リンパ排出を回避した両親媒性物質によって引き起こされるかかる意図しない毒性を解析するために、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ−ＦＩＴＣを、重度に欠損したリンパ管を有するＮＳＧマウス中に静脈内注射して、ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ細胞を刺激した。それにもかかわらず、ＦＩＴＣ  ＣＡＲ−Ｔ増殖の刺激は無視できるものであった（データ示さず）。
【０４７１】
全体として、これらの結果は、両親媒性物質ワクチンの使用と併せたＣＡＲ−Ｔ細胞治療が、固形腫瘍において有効であることを示した。
等価物
【０４７２】
当業者は、慣用に過ぎない実験を使用して、本明細書に記載される本明細書に記載される具体的実施形態の多くの等価物を認識する、または確認することができる。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【図１Ａ】
2020535128.tif 000004
【図１Ｂ】
2020535128.tif 000005
【図２Ａ】
2020535128.tif 000006
【図２Ｂ】
2020535128.tif 000007
【図２Ｃ】
2020535128.tif 000008
【図２Ｄ】
2020535128.tif 000009
【図３Ａ】
2020535128.tif 000010
【図３Ｂ】
2020535128.tif 000011
【図３Ｃ】
2020535128.tif 000012
【図４】
2020535128.tif 000013
【図５】
2020535128.tif 000014
【図６】
2020535128.tif 000015
【図７】
2020535128.tif 000016
【図８】
2020535128.tif 000017
【図９】
2020535128.tif 000018
【図１０Ａ】
2020535128.tif 000019
【図１０Ｂ】
2020535128.tif 000020
【図１０Ｃ】
2020535128.tif 000021
【図１１Ａ】
2020535128.tif 000022
【図１１Ｂ】
2020535128.tif 000023
【図１２】
2020535128.tif 000024
【図１３】
2020535128.tif 000025
【図１４】
2020535128.tif 000026
【図１５】
2020535128.tif 000027
【図１６】
2020535128.tif 000028
【図１７】
2020535128.tif 000029
【図１８Ａ】
2020535128.tif 000030
【図１８Ｂ】
2020535128.tif 000031
【図１９】
2020535128.tif 000032
【図２０】
2020535128.tif 000033
【図２１】
2020535128.tif 000034
【図２２】
2020535128.tif 000035
【図２３】
2020535128.tif 000036
【図２４Ａ】
2020535128.tif 000037
【図２４Ｂ】
2020535128.tif 000038
【図２５】
2020535128.tif 000039
【図２６】
2020535128.tif 000040
【図２７Ａ】
2020535128.tif 000041
【図２７Ｂ】
2020535128.tif 000042
【配列表】
2020535128000001.app
【国際調査報告】
2020535128.tif 000043
2020535128.tif 000044
2020535128.tif 000045