(57)【要約】本開示は、ＳＳＥＡ４分子およびＳＳＥＡ４関連を発現する腫瘍細胞、たとえば、乳がん細胞、膵臓がん細胞、および腎臓がん細胞に高い親和性で結合することができる特異的相補性決定領域を含む、抗ＳＳＥＡ４抗体およびその結合性断片に関する。抗ＳＳＥＡ４抗体および結合性断片は、標的とされる腫瘍細胞においてＡＤＣＣまたはＣＤＣ作用を誘導し、がん／腫瘍の増殖を阻害および／または低減する。本開示はまた、がんを処置するための医薬組成物としての抗ＳＳＥＡ４抗体およびその結合性断片を提供する。加えて、抗ＳＳＥＡ４抗体および結合性断片は、がんの診断に有用である。
2020500003.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、または（ｉ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｉ）配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、または（ｉｉ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｉｉ）配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、または（ｉｉｉ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｖ）配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、または（ｉｖ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｖ）配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、または（ｖ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体、ならびに
（ｖｉ）配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、または（ｖｉ）の８０％またはそれより高く保存された配列相同体
をそれぞれ含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
（ｉ）配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、または（ｉ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｉｉ）配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、または（ｉｉ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｉｉｉ）配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、または（ｉｉｉ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｉｖ）配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、または（ｉｖ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｖ）配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、または（ｖ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに
（ｖｉ）配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、または（ｖｉ）の５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体
をそれぞれ含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
重鎖におけるＡ１００Ｒ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ６２Ａのうちの１つもしくは複数、および／または軽鎖におけるＳ５２Ｙから選択される、ＣＤＲにおけるアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
重鎖におけるＶ５０Ａ、Ｇ５３Ａ、Ｓ３５Ｔのうちの１つもしくは複数、および／または軽鎖におけるＶ３０Ｉ／Ａ、Ｇ９１Ａ、Ｙ９４Ｆのうちの１つもしくは複数から選択される、ＣＤＲにおけるアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメイン
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメイン
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメイン
をさらに含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン
をさらに含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
表２Ａ〜２Ｄにおいてそれぞれのバリアントで記載された、それぞれの対応するＶＨ、ＶＬ、ならびにそれぞれのＨ−ＣＤＲおよびＬ−ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記抗体または抗原結合性断片が、
ａ）キメラ抗体もしくはその断片であるか、または
ｂ）ヒト化抗体もしくはその断片であるか、または
ｃ）ヒト抗体もしくはその断片であるか、または
ｄ）Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、およびダイアボディからなる群から選択される抗原結合性断片である、請求項１から１１のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項１３】
前記抗体が、ＩｇＧである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項１４】
前記抗体が結合する標的または前記結合性断片の標的が、構造Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１を有する炭水化物抗原ＳＳＥＡ４である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
前記抗体が、標的細胞に結合すると、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ誘導活性を有する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項１６】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
１つまたは複数の治療剤をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記治療剤が、治療用抗体、化学療法剤、またはサイトカインから選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体と、細胞毒性剤とを含む、イムノコンジュゲート。
【請求項２０】
式ＡＢ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）ＡＢが、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体であり、
（ｂ）Ｌが、リンカーであり、
（ｃ）Ｄが、好適な細胞毒性薬物であり、
（ｄ）ｐが、１から８の範囲である、請求項１９に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項２１】
前記薬物が、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである、請求項２０に記載のイムノコンジュゲート（ＡＤＣ）。
【請求項２２】
前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項２０に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項２３】
前記切断可能なリンカーが、アルコキシアミン切断性リンカーである、請求項２２に記載のＡＤＣ。
【請求項２４】
請求項に記載のイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
【請求項２５】
追加の治療剤をさらに含む、請求項２４に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸（ｃＤＮＡ）。
【請求項２７】
請求項２６に記載の核酸を含む、宿主細胞。
【請求項２８】
抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように、請求項２７に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項２９】
（ａ）配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、またはそれぞれのＬ−ＣＤＲの５個またはそれより少ない保存されたアミノ酸置換を有する保存された配列相同体の配列を有する、３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする、核酸を提供するステップと、
（ｂ）配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、またはそれぞれのＨ−ＣＤＲの５個またはそれより少ない保存されたアミノ酸置換を有する保存された配列相同体の配列を有する、３つのＶＨドメインＣＤＲをコードする核酸のレパートリーを、
前記３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする前記核酸と組み合わせて、前記３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする核酸および前記３つのＶＨドメインＣＤＲのレパートリーの産生物レパートリーを提供するステップと、
（ｃ）前記産生物レパートリーの核酸を発現させるステップと、
（ｄ）ＳＳＥＡ４に特異的に結合し、前記産生物レパートリーの前記核酸から発現される、可変ドメインを含む、抗原結合性断片を選択するステップと、
（ｅ）前記抗原結合性断片を含む抗体を産生するステップと
によって産生される、抗体。
【請求項３０】
ＳＳＥＡ４陽性がんを有する対象を処置する方法であって、それを必要とする前記対象に、有効量の、請求項１６、１７、１８、２４、および２５のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３１】
前記ＳＳＥＡ４陽性がんが、脳、肺、乳房、口腔、食道、胃、肝臓、胆管、膵臓、結腸、腎臓、子宮頸、卵巣、および前立腺のがんから選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
１つまたは複数の追加の治療モダリティまたは薬剤を組み合わせて、個体に投与することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
組み合わされた処置モダリティが、治療用抗体、細胞療法、放射線、サイトカイン、または化学療法剤から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ＳＳＥＡ４陽性細胞の増殖を阻害する方法であって、前記細胞を、請求項１６、１７、１８、２４、および２５のいずれか一項に記載の医薬製剤に、前記抗体／断片／ＡＤＣが、炭水化物抗原を発現する前記細胞の表面上のＳＳＥＡ４に結合するのを許容する条件下において曝露し、それによって前記細胞の増殖を阻害することを含む、方法。
【請求項３５】
ＳＳＥＡ４陽性がんを有する対象を処置する方法であって、前記ＳＳＥＡ４陽性がんが、第１の治療剤に対して耐性であり、前記方法が、個体に、有効量の、請求項１６、１７、１８、２４、および２５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項３６】
前記ＳＳＥＡ４陽性がんが、脳、肺、乳房、口腔、食道、胃、肝臓、胆管、膵臓、結腸、腎臓、子宮頸、卵巣、および／または前立腺のがんである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記第１の治療剤が、ＳＳＥＡ４以外の抗原に結合する第１の抗体／結合性断片／ＡＤＣ、および／または放射線、および／または化学療法剤を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
生物学的試料においてＳＳＥＡ４を検出する方法であって、前記生物学的試料を、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗ＳＳＥＡ４抗体と、前記抗ＳＳＥＡ４抗体が、天然に存在するＳＳＥＡ４に結合するのを許容する条件下において接触させることと、前記生物学的試料において、前記抗ＳＳＥＡ４抗体と天然に存在するＳＳＥＡ４との間で複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む、方法。
【請求項３９】
前記生物学的試料が、がん試料である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＳＳＥＡ４陽性がんを検出するための方法であって、（ｉ）標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を、炭水化物抗原を発現する腫瘍を有するかまたはそれを有する疑いのある対象に投与するステップであって、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体が、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗ＳＳＥＡ４抗体を含む、ステップと、（ｉｉ）前記対象において、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を検出するステップであって、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体の検出が、前記対象におけるＳＳＥＡ４陽性がんを示す、ステップとを含む、方法。
【請求項４１】
ＳＳＥＡ４陽性がんを検出するための方法であって、（ｉ）標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を、炭水化物抗原を発現する腫瘍を有するかまたはそれを有する疑いのある対象に由来する試料と接触させるステップであって、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体が、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗ＳＳＥＡ４抗体を含む、ステップと、（ｉｉ）前記試料において、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を検出するステップであって、前記標識した抗ＳＳＥＡ４抗体の検出が、前記試料におけるＳＳＥＡ４陽性がんを示す、ステップとを含む、方法。
【請求項４２】
１０−７Ｍより低い親和性定数で、ＳＳＥＡ４に特異的に結合する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
ＩｇＧ１λまたはＩｇＧ１κである、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分が、１×１０−７Ｍまたはそれより低いＫＤで、ＳＳＥＡ４に結合し、前記ＫＤが、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）分析によって測定される、請求項１から１４のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４６】
結合親和性が、５０ｎＭより低い、請求項４５に記載の単離された抗ＳＳＥＡ４抗体またはその結合性断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年８月２２日に出願された米国仮出願番号第６２／３７８，１０２号に基づく優先権の利益を主張しており、その内容は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本開示は、がんを含む増殖性障害の処置における免疫療法のための抗体および結合性断片、ならびにその診断の方法を対象とする。具体的には、本開示は、免疫原性オリゴ糖ＳＳＥＡ４に対する抗体および／または結合性断片、ならびに医薬組成物を含む、炭水化物関連の免疫療法に関する。さらに、本開示は、過剰増殖性状態、および異常な細胞に発現される腫瘍学関連または特異的な炭水化物の検出および／または診断に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
ステージ特異的胎児抗原４（ＳＳＥＡ４）は、グロボ系列スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）に属する六糖であり、Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１の構造を含む。ＳＳＥＡ４は、１９８３年に、ヒト奇形癌腫細胞から初めて単離され（Ｋａｎｎａｇｉ  Ｒら、１９８３年）、現在のところ、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）を定義するための表面マーカーとして広く使用されている。過去数十年間で、ますます多くの研究が、中核的な構造Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１（ＳＳＥＡ３）がＳＳＥＡ４と共通しているＧＳＬであるＧｌｏｂｏＨが、卵巣がん、胃がん、前立腺がん、肺がん、乳がん、および膵臓がんを含む、多数の上皮がんにおいて過剰発現されることを示している（Ｚｈａｎｇ  Ｓら、１９９７年）。高いレベルのＳＳＥＡ４の発現は、腎細胞癌（Ｓａｉｔｏ  Ｓら、１９９７年）および多型膠芽細胞腫（Ｌｏｕ  ＹＷら、２０１４年）において観察されている。さらに興味深いことに、ＳＳＥＡ３およびＧｌｏｂｏＨとともに、ＳＳＥＡ４の発現は、乳房腫瘍細胞だけでなく、乳がん幹細胞においても見出されている（Ｃｈａｎｇ  ＷＷら、２００８年、Ｈｕａｎｇ  ＹＬら、２０１３年）。
【０００４】
しかしながら炭水化物抗原はしばしば免疫系に耐容性であるため、結果として誘導される免疫応答は、弱いかまたは非特異的である（Ｓｔｅｉｎ  ＫＥら、１９９２年、Ｓｎａｐｐｅｒ  ＣＭら、１９９６年）。炭水化物抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、たとえば、マクロファージ、Ｂ細胞、または樹状細胞による内部移行および消化が不可能であり、したがって、ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞に提示できないことが提唱されている。ＡＰＣからＴ細胞への刺激が欠如しているため、結果として、抗体の成熟およびアイソタイプスイッチが存在しない。したがって、炭水化物抗原に対しては、主として、親和性が低く、クラススイッチが生じないＩｇＭ抗体が産生される（Ｍｕｓｈｅｒ  ＤＭら、１９９０年、Ｌｏｒｔａｎ  ＪＥら、１９９３年）。この欠陥に対処するために、様々なアプローチが、開発されている。炭水化物抗原を、担体タンパク質にコンジュゲートして、免疫原性を改善することは、１９５０年代から開発されている（Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  ＡＡら、１９９９年）。そのような種類の高度に免疫原性のタンパク質としては、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性バリアント）、ならびにＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の複合体外膜タンパク質（ＯＭＰ）混合物が挙げられる（Ａｄａ  Ｇ．ら、１９９９年）。これらのタンパク質の本質的な免疫原性特性に加えて、レシピエントが、これらのトキソイドで以前に免疫処置されている場合には、追加免疫作用が期待される。担体タンパク質−炭水化物抗原コンジュゲートは、ある特定の炭水化物抗原とコンジュゲートしたペプチドをもたらし、これが、ＭＨＣ  ＩＩ分子を通じてＡＰＣによって処理され提示される。Ｔｈ細胞からの共刺激により、ある特定の炭水化物抗原に対するＴ細胞およびＢ細胞が、次いで、活性化される。抗体のアイソタイプスイッチおよび成熟の後に、高い親和性および特異性を有するある特定の炭水化物抗原に対するＩｇＧ抗体が、さらに生成され得る（Ｂａｚｅｎｄａｌｅ  ＨＥら、２０００年）。国際公開第２０１６０２９０７１号は、免疫原性担体ジフテリア毒素交差反応性材料１９７（ＣＲＭ  １９７）にリンカーを介して化学的にコンジュゲートされた合成ＳＳＥＡ４類似体を含む、炭水化物に基づくワクチンを提供している。
【０００５】
炭水化物ワクチン接種では担体タンパク質により、免疫原性を改善するための解決策がもたらされるが、この戦略には、いくつかの新規および既存の問題がある（Ｉｎｇａｌｅ  Ｓら、２００７年）。第１に、外来の担体タンパク質および結合リンカーは、強力な免疫応答を誘起し得、それによって、炭水化物抗原に対する抗体応答の抑制を引き起こし得る。第２に、化学的コンジュゲーションは、基本的に、タンパク質表面のリシンにおけるものである。実験プロセスは、制御が困難であり、結果として、組成物および最終的な構造が不均質となる。不確かな組成物は、様々な免疫応答を引き起こす可能性が高い。第３に、細胞表面上の炭水化物の発現を模倣するコンジュゲーションは、理想的ではなく、それによって、誘導される抗体は、何らかの理由で、炭水化物クラスターを認識できない。代替的なアプローチ、たとえば、炭水化物のペグ化（Ｇｉｏｒｇｉ  ＭＥら、２０１４年）が、残っている問題を克服するために調査されている。
【０００６】
いずれにせよ、上述の能動免疫処置療法は、低免疫の状態にあるがん患者においては十分に機能しない。特に、化学療法および放射線療法を受ける患者、ならびに末期がん患者に関して、能動免疫介入の有効性は、多くの場合、限られている。
前述の点を考慮すると、ワクチン接種の代わりに、受動免疫を適応するように、がん炭水化物エピトープに対する治療用抗体を開発する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１６／０２９０７１号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
要旨
本開示は、例示的な単離された抗ＳＳＥＡ４モノクローナル抗体、その結合性断片、それをコードする核酸、ならびにそのような抗体およびその断片を含む組成物、ならびに腫瘍成長を阻害および／または低減するため、ならびにがんの処置のためのそれらの使用方法を提供する。本明細書において提供される例示的なモノクローナル抗ＳＳＥＡ４抗体および結合性断片は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性を媒介して、ＳＳＥＡ４を発現する腫瘍細胞を標的とし、殺滅させることができる。加えて、本明細書において提供されるモノクローナル抗ＳＳＥＡ４抗体は、例示的な診断適用において、腫瘍試料および／または切片内のＳＳＥＡ４を発現する腫瘍細胞を検出するために使用することができる。
【０００９】
したがって、ＳＳＥＡ４またはその誘導体および断片に特異的に結合する新規な組換え抗ＳＳＥＡ４抗体、ならびに抗腫瘍免疫療法、たとえば、がんの処置におけるそれらの使用方法が、本明細書において提供される。がん抗原に結合すると、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を誘導し、補体系を活性化し、腫瘍の成長を阻害することができる。
【００１０】
一実施形態では、ＳＳＥＡ４は、脳腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、口腔腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、胆管腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞、子宮頸腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞を含む、様々な腫瘍細胞に高度に発現される。
【００１１】
一実施形態では、モノクローナル抗ＳＳＥＡ４抗体は、ＳＳＥＡ４分子および誘導体に特異的に結合する。
【００１２】
一実施形態では、本明細書において記載される抗ＳＳＥＡ４抗体を含む組成物は、抗がん療法において有用である。具体的には、本実施形態は、様々な抗ＳＳＥＡ４結合部分において使用することができる、特定の抗ＳＳＥＡ４抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を提供する。具体的には、本発明は、ＳＳＥＡ４またはその誘導体に結合することができる、ヒト化もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１３】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの方法によって規定される。
【００１４】
ある特定の実施形態では、抗ＳＳＥＡ４抗体は、ＳＳＥＡ４陽性細胞またはＳＳＥＡ４を発現する細胞に結合すると、腫瘍成長を阻害する活性を有する。
【００１５】
ある特定の実施形態では、単離された抗ＳＳＥＡ４抗体は、モノクローナル抗体である。ＳＳＥＡ４に対するモノクローナル抗体は、当技術分野における知識および技能に従って、作製することができる。たとえば、それは、試験対象に、ヒト胚性癌腫細胞を注射し、次いで、所望される配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離することによって、作製することができる。
【００１６】
一実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、標的に結合すると、抗体が、ＣＤＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【００１７】
一実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、標的に結合すると、抗体が、ＡＤＣＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【００１８】
一態様では、本開示は、
（ｉ）配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｉ）配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｉｉ）配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｉｖ）配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、
（ｖ）配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、ならびに
（ｖｉ）それぞれ、配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００１９】
一態様では、本開示は、
（ｉ）配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｉｉ）配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｉｉｉ）配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに
（ｉｖ）配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、
（ｖ）配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに
（ｖｉ）配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、またはその５個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体
を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２０】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖におけるＡ１００Ｒ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ６２Ａのうちの１つもしくは複数、および／または軽鎖におけるＳ５２Ｙから選択される、ＣＤＲにおけるアミノ酸置換をさらに含む。
【００２１】
ある特定の実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖におけるＶ５０Ａ、Ｇ５３Ａ、Ｓ３５Ｔのうちの１つもしくは複数、および／または軽鎖におけるＶ３０Ｉ／Ａ、Ｇ９１Ａ、Ｙ９４Ｆのうちの１つもしくは複数から選択される、ＣＤＲにおけるアミノ酸置換をさらに含む。
【００２２】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２３】
一実施形態では、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメインをさらに含む。
【００２４】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２５】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメインをさらに含む。
【００２６】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８、または１０個未満の保存されたアミノ酸置換を含むその配列相同体から選択され、さらに、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変ドメインをさらに含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２７】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変ドメイン、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体をさらに含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２８】
一態様では、本開示は、表２Ａ〜２Ｄにおいてそれぞれのバリアントで記載された、それぞれの対応するＶＨ、ＶＬ、ならびにそれぞれのＨ−ＣＤＲおよびＬ−ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００２９】
ある特定の実施形態では、単離された抗体または抗原結合性断片は、
ａ．キメラ抗体もしくはその断片であるか、または
ｂ．ヒト化抗体もしくはその断片であるか、または
ｃ．ヒト抗体もしくはその断片であるか、または
ｄ．Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、およびダイアボディからなる群から選択される抗原結合性断片である。
【００３０】
ある特定の実施形態では、単離された抗体または抗原結合性断片は、ＩｇＧである。
【００３１】
ある特定の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、構造Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→３ＧａｌＮＡｃβ１→３Ｇａｌα１→４Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１を有する炭水化物抗原ＳＳＥＡ４を標的とする。
【００３２】
ある特定の実施形態では、単離された抗体または抗原結合性断片は、標的細胞に結合すると、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ誘導活性を有する。
【００３３】
ある特定の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【００３４】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の抗腫瘍剤をさらに含む。
【００３５】
ある特定の実施形態では、抗腫瘍剤が、化学療法剤である、医薬組成物。
【００３６】
ある特定の実施形態では、抗体と、細胞毒性剤とを含む、イムノコンジュゲート。
【００３７】
ある特定の実施形態では、式ＡＢ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）ＡＢが、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体であり、（ｂ）Ｌが、リンカーであり、（ｃ）Ｄが、好適な細胞毒性薬物であり、（ｄ）ｐが、１〜８の範囲である、イムノコンジュゲート。
【００３８】
ある特定の実施形態では、薬物が、ＭＭＡＥである、イムノコンジュゲート。
【００３９】
ある特定の実施形態では、リンカーが、切断可能なリンカーである、イムノコンジュゲート。
【００４０】
ある特定の実施形態では、リンカーが、アルコキシアミン切断性リンカーである、ＡＤＣ。
【００４１】
ある特定の実施形態では、請求項に記載のイムノコンジュゲートと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬製剤。
【００４２】
ある特定の実施形態では、医薬製剤は、追加の治療剤をさらに含む。
【００４３】
ある特定の実施形態では、抗体または結合性断片をコードする単離された核酸（ｃＤＮＡ）が本明細書において開示される。
【００４４】
ある特定の実施形態では、抗体または結合性断片をコードする核酸を含む、宿主細胞が本明細書において開示される。
【００４５】
ある特定の実施形態では、本開示は、抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように、宿主細胞を培養することを含む、方法を提供する。
【００４６】
ある特定の実施形態では、本開示は、
（ａ）それぞれ、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３の配列を有する、３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする核酸を提供するステップと、
（ｂ）それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３の配列を有する、３つのＶＨドメインＣＤＲをコードする核酸のレパートリーを、３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする核酸と組み合わせて、３つのＶＬドメインＣＤＲをコードする核酸および３つのＶＨドメインＣＤＲのレパートリーの産生物レパートリーを提供するステップと、
（ｃ）産生物レパートリーの核酸を発現させるステップと、
（ｄ）ＳＳＥＡ４に特異的に結合し、産生物レパートリーの核酸から発現される、可変ドメインを含む、抗原結合性断片を選択するステップと、
（ｅ）抗原結合性断片を含む抗体を産生するステップと、
によって産生される、抗体を提供する。
【００４７】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４陽性がんを有する対象を処置する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、本明細書において開示される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００４８】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４陽性がんが、脳、肺、乳房、口腔、食道、胃、肝臓、胆管、膵臓、結腸、腎臓、子宮頸、卵巣、および前立腺のがんから選択される、方法を提供する。
【００４９】
ある特定の実施形態では、本開示は、追加の治療モダリティまたは薬剤を組み合わせて、個体に投与することをさらに含む、方法を提供する。
【００５０】
ある特定の実施形態では、本開示は、組み合わされた処置モダリティが、治療用抗体、細胞療法、放射線、サイトカイン、および／または化学療法剤から選択される、方法を提供する。
【００５１】
ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４陽性細胞の増殖を阻害する方法であって、細胞を、本明細書において開示される医薬製剤に、抗体／断片／ＡＤＣが、炭水化物抗原を発現する細胞の表面上のＳＳＥＡ４に結合するのを許容する条件下において曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む、方法を提供する。
【００５２】
ある特定の実施形態では、ＳＳＥＡ４陽性がんを有する対象を処置する方法であって、本方法は、ＳＳＥＡ４陽性がんが、第１の治療剤に対して耐性であり、方法が、個体に、有効量の、本明細書において開示される医薬製剤を投与することを含む。
【００５３】
ある特定の実施形態では、ＳＳＥＡ４陽性がんが、脳、肺、乳房、口腔、食道、胃、肝臓、胆管、膵臓、結腸、腎臓、子宮頸、卵巣、および／または前立腺のがんである、方法。
【００５４】
ある特定の実施形態では、第１の治療剤が、ＳＳＥＡ４以外の抗原に結合する第１の抗体／結合性断片／ＡＤＣ、および／または放射線、および／または化学療法剤を含む、方法。
【００５５】
ある特定の実施形態では、生物学的試料においてＳＳＥＡ４を検出する方法であって、生物学的試料を、本明細書において開示される抗ＳＳＥＡ４抗体と、抗ＳＳＥＡ４抗体が、天然に存在するＳＳＥＡ４に結合するのを許容する条件下において接触させることと、生物学的試料において、抗ＳＳＥＡ４抗体と天然に存在するＳＳＥＡ４との間で複合体が形成されるかどうかを検出することとを含む、方法。
【００５６】
ある特定の実施形態では、生物学的試料が、がん試料である、方法。
【００５７】
ある特定の態様では、本開示は、ＳＳＥＡ４陽性がんを検出するための方法であって、（ｉ）標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を、炭水化物抗原を発現する腫瘍を有するかまたはそれを有する疑いのある対象に投与するステップであって、標識した抗ＳＳＥＡ４抗体が、本明細書において開示される抗ＳＳＥＡ４抗体を含む、ステップと、（ｉｉ）対象において、標識した抗ＳＳＥＡ４抗体を検出するステップであって、標識した抗ＳＳＥＡ４抗体の検出が、対象におけるＳＳＥＡ４陽性がんを示す、ステップとを含む、方法を提供する。
【００５８】
ある特定の実施形態では、１０−７Ｍより低い親和性定数で、ＳＳＥＡ４に特異的に結合する、単離された抗体。
【００５９】
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、単離された抗体。
【００６０】
ある特定の実施形態では、ＩｇＧ１λまたはＩｇＧ１κである、単離された抗体。
【００６１】
ある特定の実施形態では、１×１０−７Ｍまたはそれより低いＫＤで、ＳＳＥＡ４に結合し、ＫＤが、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）分析によって測定される、モノクローナル抗体または抗原結合性部分。
【００６２】
ある特定の実施形態では、結合親和性が、５０ｎＭより低い、単離された抗ＳＳＥＡ４抗体またはその結合性断片。
【００６３】
本開示は、本発明の態様／実施形態のいずれかによる、ＳＳＥＡ４に特異的に結合する抗体およびその結合性断片を対象とする。一態様では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその結合性断片であって、標的に結合すると、抗体が、ＡＤＣＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその結合性断片を提供する。
【００６４】
ある特定の実施形態によると、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００６５】
ある特定の実施形態によると、抗体は、キメラまたはヒト化抗体である。
【００６６】
ある特定の実施形態によると、抗体は、二重特異性抗体である。
【００６７】
ある特定の実施形態によると、本発明により、ＳＳＥＡ４に選択的に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開示された。この実施形態では、ＣＡＲは、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を有する、抗原結合性ドメインを含み得る。
【００６８】
一態様では、抗体またはその結合性断片は、ＥＬＩＳＡ結合アッセイによると、約５、１０、１５、２０、１５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０ナノグラム／ｍＬ、または本明細書において列挙された任意の２つの値の間の値のＥＣ５０で、ＳＳＥＡ４への半最大結合を有する。
【００６９】
一態様では、結合親和性が、５０ｎＭより低い（５０ｎＭに満たない）、単離された抗ＳＳＥＡ４抗体またはその結合性断片。ある特定の実施形態では、結合親和性は、５ｎＭより低い、１０ｎＭより低い、１５ｎＭより低い、２０ｎＭより低い、２５ｎＭより低い、３０ｎＭより低い、３５ｎＭより低い、４０ｎＭより低い、４５ｎＭより低い、または５０ｎＭより低い範囲であり得る。
【００７０】
本開示の一実施形態によると、医薬組成物は、（１）治療有効量の、本開示の態様／実施形態のいずれかによる抗体または抗原結合性断片と、任意選択で、（２）薬学的に許容される担体とを含む。
【００７１】
一態様では、本発明は、がんの処置を、それを必要とする対象において行うための医薬組成物であって、本明細書において開示される例示的なＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含む単離された抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を対象とする。
【００７２】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、過剰増殖性疾患、たとえば、がんに対する処置において、有用である。例示的な過剰増殖性疾患としては、たとえば、表４に列挙されている腫瘍のうちの１つまたは複数を挙げることができる。
【表４】
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【００７３】
表４．腫瘍細胞株におけるグロボ系列スフィンゴ糖脂質の発現の一覧。グロボ系列スフィンゴ糖脂質を高度に発現する様々な腫瘍細胞、たとえば、脳腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、口腔腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、胆管腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞、子宮頸腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞。
【００７４】
ある特定の態様では、本開示は、がんの処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に、治療有効量の代表的な医薬組成物を投与し、それによって投与された抗体が、前記対象においてＡＤＣＣまたはＣＤＣ活性を強化することを含む、方法を提供する。
【００７５】
ある特定の実施形態では、提供される方法は、脳がん、肺がん、乳がん、口腔がん、食道がん、胃がん、肝臓がん、胆管がん、膵臓がん、結腸がん、腎臓がん、骨がん、皮膚がん、子宮頸がん、卵巣がん、および前立腺がんからなる群から選択されるがんを処置する。
【００７６】
本開示の実施形態によると、本方法は、対象に、有効量の、抗体を含む医薬組成物および／または本開示の態様／実施形態のいずれかによる医薬組成物を投与することを含む。
【００７７】
ある特定の実施形態では、本開示は、がんを診断するための方法を提供する。
【００７８】
本明細書において使用されるとき、グリカンおよび関連する構造を説明するための記号、図、および文字の命名法は、たとえば、Ａｊｉｔ  Ｖａｒｋｉらによる「Ｓｙｍｂｏｌｓ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｇｌｙｃａｎ  Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ」、Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．、２００９年１２月、９巻（２４号）：５３９８〜５３９９頁を含め、当技術分野において十分に確立されており、理解されている。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１Ａ】図１Ａは、代表的なＡｂ６抗体および／または結合性断片のＣＤＲ配列である。ＣＤＲ配列は、それぞれ、Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、およびＩＭＧＴの方法によって規定される。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＣＤＲ修飾を有する抗ＳＳＥＡ４抗体を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、可変ドメイン修飾を有する抗ＳＳＥＡ４抗体を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ｈＡｂ６−３、ｈＡｂ６−３．１／２／３／４の配列アライメントであり、非保存的ＣＤＲ修飾を有する抗ＳＳＥＡ４抗体を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、ｈＡｂ６−３、およびｈＡｂ６−３．１０１／１０３／１０５／１０６／１０７／１０８／１１０の配列アライメントであり、保存的ＣＤＲ修飾を有する抗ＳＳＥＡ４抗体を示す。
【００８０】
【図２】図２は、可変ドメインに６個または１０個のアミノ酸置換を有する代表的なヒト化Ａｂ６配列である。ＣＤＲ領域を下線で示し、置換されたアミノ酸を枠で示す。
【００８１】
【図３】図３は、ｃｈＡｂ６重鎖可変ドメインのＫａｂａｔ番号である。
【００８２】
【図４】図４は、ｃｈＡｂ６軽鎖可変ドメインのＫａｂａｔ番号である。
【００８３】
【図５】図５は、表面プラズモン共鳴による、例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の動態結合アッセイである。ｈＡｂ６−３．１、ｈＡｂ６−３、およびｃｈＡｂ６の抗原結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅシステムを使用して判定した。ｈＡｂ６−３．１、ｈＡｂ６−３、およびｃｈＡｂ６の計算されたＫｄ値は、それぞれ、２３．１、１７．８、および１０．１１ｎＭである。
【００８４】
【図６Ａ】図６Ａは、ＥＬＩＳＡによる、１つの例示的なｃｈＡｂ６の、ＳＳＥＡ４への結合親和性の判定である。例示的なキメラＡｂ６（ｃｈＡｂ６）は、用量依存性様式で、ＳＳＥＡ４に結合する。ｃｈＡｂ６のＳＳＥＡ４への結合のＥＣ５０は、約５０ｎｇ／ｍＬである。
【００８５】
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＥＬＩＳＡによる、他の例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の、ＳＳＥＡ４への結合親和性の判定である。例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６は、用量依存性様式で、ＳＳＥＡ４に結合する。ｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６−３、およびｈＡｂ６−３．１の、ＳＳＥＡ４への結合のＥＣ５０は、それぞれ、約１０６、１２５、および９８ｎｇ／ｍＬである。
【００８６】
【図６Ｃ】図６Ｃは、非保存的に修飾されたアミノ酸置換の結合親和性の実証を表す。
【図６Ｄ】図６Ｄは、保存的に修飾されたアミノ酸置換の結合親和性の実証を表す。
【００８７】
【図７】図７は、グリカンアレイ分析による、例示的なｃｈＡｂ６のＳＳＥＡ４への結合特異性である。様々なオリゴ糖に対するｃｈＡｂ６の結合特異性を試験し、結果として、ｃｈＡｂ６が、ＳＳＥＡ４（スポットＡ）およびＳＳＥＡ４類似体ＳＳＥＡ４  Ｇｃ（ＳＳＥＡ４のアミン基にＧｃ置換されたシアル酸、スポットＢ）に結合することが示された。
【００８８】
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、ｃｈＡｂ６およびヒト化Ａｂ６の乳がん細胞株への結合である。フローサイトメトリー分析による、ｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６（ｈＡｂ６−２、ｈＡｂ６−３）の、（図８Ａ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１および（図８Ｂ）ＭＣＦ−７への結合の特徴付けである。
【００８９】
【図９】図９Ａ〜９Ｂは、例示的なｃｈＡｂ６およびヒト化Ａｂ６の乳がん細胞株への結合である。ｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６−２、およびｈＡｂ６−３の、（図９Ａ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞および（図９Ｂ）ＭＣＦ７細胞への結合を、フローサイトメトリー分析によって試験した。染色に使用した抗体の濃度は、１ミリリットル当たり１マイクログラムであった。
【００９０】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｂは、フローサイトメトリー分析による、例示的なｃｈＡｂ６の、膵臓がん細胞株ＨＰＡＣへの結合親和性の判定である。（図１０Ａ）例示的なキメラＡｂ６（ｃｈＡｂ６、２０μｇ／ｍＬ）は、（図１０Ｂに示されるように）用量依存性様式で、高い発現レベルのＳＳＥＡ４を有する例示的な膵臓腫瘍細胞株であるＨＰＡＣに結合する。ＨＰＡＣ細胞への結合のＥＣ５０は、約４μｇ／ｍＬである。
【００９１】
【図１１Ａ】図１１Ａ〜１１Ｂは、例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の乳がん細胞株および膵臓がん細胞株への結合である。ｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６−３、およびｈＡｂ６−３．１の、（１１Ａ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞および（１１Ｂ）ＨＰＡＣ細胞への結合を、フローサイトメトリー分析によって試験した。染色に使用した抗体の濃度は、１ミリリットル当たり５マイクログラムであった。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｂは、例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の乳がん細胞株および膵臓がん細胞株への結合である。ｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６−３、およびｈＡｂ６−３．１の、（１１Ａ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞および（１１Ｂ）ＨＰＡＣ細胞への結合を、フローサイトメトリー分析によって試験した。染色に使用した抗体の濃度は、１ミリリットル当たり５マイクログラムであった。
【００９２】
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、非保存的ＣＤＲ修飾を有する例示的なヒト化Ａｂ６の、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株への結合を示す。
【図１１Ｄ】図１１Ｄは、非保存的ＣＤＲ修飾を有する例示的なヒト化Ａｂ６の、ＭＣＦ７細胞株への結合を示す。
【００９３】
【図１１Ｅ】図１１Ｅは、保存的ＣＤＲ修飾を有する例示的なヒト化Ａｂ６の、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株への結合を示す。
【図１１Ｆ】図１１Ｆは、保存的ＣＤＲ修飾を有する例示的なヒト化Ａｂ６の、ＭＣＦ７細胞株への結合を示す。
【００９４】
【図１２】図１２は、例示的なｃｈＡｂ６の、膵臓腫瘍細胞株ＨＰＡＣに対するＡＤＣＣ活性を示す。代表的なｃｈＡｂ６は、用量依存性様式で、ＡＤＣＣを誘導して、ＨＰＡＣ細胞を殺滅させる。ＥＣ５０は、５ｎｇ／ｍＬである。ヒトＩｇＧ１カッパ（ｈＩｇＧ１、カッパ）を、対照として使用する。
【００９５】
【図１３】図１３は、例示的なｃｈＡｂ６およびヒト化Ａｂ６の、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対するＡＤＣＣ活性である。例示的なｃｈＡｂ６、ｈＡｂ６は、用量依存性様式で、ＡＤＣＣを媒介して、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を殺滅させる。ＥＣ５０は、ｃｈＡｂ６およびｈＡｂ６について、それぞれ、約５ｎｇ／ｍＬおよび１０ｎｇ／ｍＬである。
【００９６】
【図１４】図１４Ａ〜１４Ｂは、例示的なヒト化Ａｂ６の、乳がん細胞株に対するＡＤＣＣ活性である。例示的なｈＡｂ６−３および例示的なｈＡｂ６−３．１の両方が、用量依存性様式で、ＡＤＣＣを媒介して、（図１４Ａ）ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞および（図１４Ｂ）ＭＣＦ７細胞を殺滅させた。この研究では、ｈＡｂ６−３によって媒介される、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＣＦ７を殺滅させるＡＤＣＣのＥＣ５０は、それぞれ、３９．２および３９．５ｎｇ／ｍＬである。ｈＡｂ６−３．１によって媒介される、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＣＦ７を殺滅させるＡＤＣＣについては、それぞれ、３２．６および３８．９ｎｇ／ｍＬである。
【００９７】
【図１５Ａ】図１５Ａは、例示的なｃｈＡｂ６の、ＨＰＡＣ細胞に対するＣＤＣ活性を示す。代表的なｃｈＡｂ６は、用量依存性様式で、ＣＤＣを誘導して、ＨＰＡＣ細胞を殺滅させる。ＥＣ５０は、３μｇ／ｍＬである。ヒトＩｇＧ１、カッパ（ｈＩｇＧ１、ｋ）を、この研究において陰性対照として使用する。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、例示的なヒト化Ａｂ６の、乳がん細胞株に対するＣＤＣ活性を示す。例示的なヒト化抗ＳＳＥＡ４抗体ｈＡｂ６−３およびｈＡｂ６−３．１は、用量依存性様式で、ＣＤＣを誘導して、ＭＣＦ７細胞を殺滅させた。ＥＣ５０は、ｈＡｂ６−３およびｈＡｂ６−３．１について、それぞれ、約４．４および約２．６μｇ／ｍＬである。
【００９８】
【図１６】図１６Ａ〜１６Ｂは、ＨＰＡＣ異種移植片モデルにおける代表的な抗ＳＳＥＡ４抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ビヒクル対照群と比較して、腫瘍の成長は、抗ＳＳＥＡ４抗体で処置したマウスでは、有意に抑制される。さらに、図に示されるように、ｃｈＡｂ６で処置したマウスにおける平均腫瘍体積（図１６Ａ）および重量（図１６Ｂ）は、ｈＭＣ４１で処置したものよりも有意に小さく、この例示的なｃｈＡｂ６が、予想外に驚くべきｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を有することを示す。
【００９９】
【図１７】図１７は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１同所性モデルにおける例示的なヒト化Ａｂ６のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍成長は、腫瘍保持マウスを、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体ｈＡｂ６−３およびｈＡｂ６−３．１で処置することによって、対照群（ビヒクルおよびハーセプチン）と比較して、有意に抑制された。ハーセプチンは、この研究において、対照抗体として使用した。
【０１００】
【図１８】図１８は、ＭＣＦ７同所性モデルにおける例示的なヒト化Ａｂ６のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示す。ビヒクル対照処置と比較すると、腫瘍の成長は、ｈＡｂ６−３．１の処置下では、用量依存性様式で、有意に抑制された。
【０１０１】
【図１９】図１９は、診断上の有用性、例示的なｃｈＡｂ６を使用した腫瘍組織におけるＳＳＥＡ４発現の検出を示す。免疫組織化学的染色の結果は、ｃｈＡｂ６が、腫瘍試料におけるＳＳＥＡ４発現を検出するために適用することができることを示した。
【０１０２】
【図２０】図２０は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の特徴付けである。レーン１は、哺乳動物細胞から産生された天然の抗体であり、レーン２は、モノ−ＧｌｃＮＡｃを有する抗体であり、レーン３〜４は、３０分および６０分で産生された糖鎖操作（Ｇｌｙｏ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）ｈＡｂ６−３．１であり、レーン５は、精製された糖鎖操作抗体である。
【０１０３】
【図２１】図２１は、細胞フローサイトメトリーによる、糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の結合特性である。糖鎖操作抗体（赤色の線）は、ＳＳＥＡ４を発現する細胞株であるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対して、天然の抗体（青色の線）に類似の結合特性を呈する。結果として、糖鎖操作は、ｈＡｂ６−３．１の抗原結合特性に影響を及ぼさないことが示された。
【０１０４】
【図２２】図２２は、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ結合である。ｈＡｂ６−３．１のＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡへの結合（ＥＣ５０）は、糖鎖操作により劇的に強化された。天然の抗体および糖鎖操作抗体のＥＣ５０は、それぞれ、０．８４および０．０４７μｇ（マイクログラム）／ｍＬである。
【０１０５】
【図２３】図２３は、天然のｈＡｂ６−３．１および糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対するＡＤＣＣ活性である。天然のｈＡｂ６−３．１および糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の両方が、用量依存性様式で、ＡＤＣＣを媒介して、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を殺滅させた。ｈＡｂ６−３．１のＡＤＣＣ活性は、糖鎖操作によって有意に改善された。天然のｈＡｂ６−３．１および糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１のＥＣ５０は、それぞれ、約５０．２９および約６．０２ｎｇ／ｍｌである。
【０１０６】
【図２４Ａ】図２４Ａは、ＡＤＣ形成のためのＦｃグリカンへの薬物のオキシム（ｏｘｍｉｎｅ）ライゲーションである。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、ＡＤＣ複合体形成のＳＤＳ−ＰＡＧＥプロファイルである。レーン１：マーカー、レーン２：ケトンタグしたｈＡｂ６−３．１、レーン３：ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１。
【０１０７】
【図２５Ａ】図２５Ａは、フローサイトメトリーによる、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の、ＳＳＥＡ４を発現する細胞への結合能力である。ＳＳＥＡ４を発現する細胞株であるＭＣＦ７およびＳＫＯＶ３を、ＰＢＳで洗浄し、１×１０５個の細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳおよび０．１％ＮａＮ３を含有するＰＢＳ）中、１０ｕｇ／ｍＬのｈＡｂ６−３．１またはｈＡｂ６−３．１−Ａ０１とともに、氷上で１時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ４８８で標識した抗ヒトＩｇＧ抗体で染色し、氷上で０．５時間インキュベートした。抗体の細胞結合のシグナルを、フローサイトメトリーによって検出した（図ＸＸ１１ＡＢ）。結果として、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の、ＳＳＥＡ４を発現する細胞への結合特性は、親抗体ｈＡｂ６−３．１と類似であることが示された。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、ｈＡｂ６−３．１およびｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の細胞結合特性の比較である。
【０１０８】
【図２６】図２６は、ＳＳＥＡ４を発現する乳房細胞株であるＭＣＦ７に対する細胞毒性におけるｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の有効性の、抗体ｈＡｂ６−３．１との比較である。
【０１０９】
【図２７】図２７は、ＳＳＥＡ４を発現する卵巣細胞株ＳＫＯＶ３に対する細胞毒性におけるｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の有効性の、抗体ｈＡｂ６−３．１との比較である。
【発明を実施するための形態】
【０１１０】
詳細な説明
したがって、広範なスペクトルのがんを診断および処置するときに使用するためのマーカーを対象とする抗体の方法および組成物が、提供される。抗ＳＳＥＡ４抗体を、開発し、本明細書において開示した。使用の方法としては、限定されないが、がんの治療および診断が含まれる。本明細書において記載される抗体は、ＳＳＥＡ４を発現する広範なスペクトルの腫瘍細胞に結合することができ、それによって、がんの診断および処置を促進することができる。抗体によって標的とされ得る細胞としては、癌腫、たとえば、脳、肺、乳房、口腔、食道、胃、肝臓、胆管、膵臓、結腸、腎臓、子宮頸、卵巣、前立腺などのがんにおけるものが含まれる。
定義
【０１１１】
本明細書において別途定義されない限り、本開示において用いられる科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解され、使用されている意味を有するものとする。文脈によって別途必要とされない限り、単数形の用語は、その複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとすることが理解されよう。具体的には、本明細書および特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、文脈により別途明確に示されない限り、複数形の参照物を含む。さらに、本明細書および特許請求の範囲において使用されるとき、「少なくとも１つ」および「１つまたは複数」という用語は、同じ意味を有し、１つ、２つ、３つ、またはそれより多くを含む。
【０１１２】
本発明の広範な範囲について記載する数値範囲およびパラメーターは、近似値ではあるが、特定の実施例において記載される数値は、可能な限り正確に報告されている。任意の数値は、しかしながら、それぞれの試験測定において見出される標準偏差から必然的に生じるある特定の誤差を本質的に含む。さらに、本明細書において使用されるとき、「約」という用語は、一般に、示された値または範囲の１０％、５％、１％、または０．５％以内を意味する。あるいは、「約」という用語は、当業者が考慮した場合に、許容可能な平均の標準誤差の範囲内を意味する。作業例／実施例におけるもの以外、または別途明確に示されない限り、本明細書において開示される材料の量、時間の期間、温度、操作条件、量の比に関するものなど、数値範囲、量、値、および割合はすべて、いずれの事例においても、「約」という用語によって修飾されていると理解されるものとする。したがって、別途示されない限り、本開示および添付の特許請求の範囲において記載される数値パラメーターは、所望に応じて変動し得る近似値である。最後に、それぞれの数値パラメーターは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮し、通常の端数処理技法を適用することによって、解釈されるべきである。
【０１１３】
別途指定されない限り、標準的な使用法および慣例に従い、本明細書において使用されるポリヌクレオチドの表記では、左手側が、５’末端側であり、右手側が、３’末端側であり、本明細書において使用されるペプチドの表記では、左手側が、アミノ末端（Ｎ末端）側であり、右手側が、カルボキシル末端（Ｃ末端）側である。
【０１１４】
本明細書において互換可能に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって、または合成反応によって、ポリマーに組み込まれ得る任意の基質であり得る。
【０１１５】
「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書において使用されるとき、一般に、短い、一般的には長さが約２００ヌクレオチド未満であるが必ずしもそうとは限らない、一般的には一本鎖で一般的には合成のポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」という用語は、相互に排他的ではない。ポリヌクレオチドに関する上述の記述は、オリゴヌクレオチドにも同等かつ完全に適用可能である。
【０１１６】
本明細書において使用されるとき、「ベクター」という用語は、それに連結している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことを意図する。ベクターの１つの種類には、「プラスミド」があり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターには、ウイルスベクターがあり、ここで、追加のＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自己複製することができる（たとえば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（たとえば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ得、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単純に「組換えベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も広く使用されるベクターの形態であるため、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、互換可能に使用され得る。
【０１１７】
「グリカン」という用語は、多糖またはオリゴ糖を指す。グリカンはまた、グリココンジュゲート、たとえば、糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、グリコプロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖、またはプロテオグリカンなどの炭水化物部分を指して、本明細書において使用される。グリカンは、通常、単糖間のＯ−グリコシド結合のみからなる。グリカンは、単糖残基のホモポリマーまたはヘテロポリマーであり得、直鎖または分岐鎖であり得る。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンにあるように、タンパク質に結合して見出され得る。それらは、通常、細胞の外表面上に見出される。Ｏ結合型およびＮ結合型グリカンは、真核生物では非常に一般的であるだけでなく、原核生物においても、あまり一般的ではないが、見出され得る。Ｎ結合型グリカンは、シークオンにおいて、アスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に結合して見出される。シークオンは、Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である。
【０１１８】
「ユニバーサルグリカン」という用語は、グリカン配列Ｓｉａ２（α２−６）Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２を指す。
構造は、以下であり、
【化１】
2020500003.tif 000004
式中、
【化２】
2020500003.tif 000005
は、シアル酸（Ｓｉａ）であり、
【化３】
2020500003.tif 000006
は、ガラクトース（Ｇａｌ）であり、
【化４】
2020500003.tif 000007
は、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）であり、
【化５】
2020500003.tif 000008
は、マンノース（Ｍａｎ）である。
【０１１９】
「抗原」という用語は、本明細書において使用されるとき、免疫応答を誘起することができる物質として定義される。前記免疫応答は、抗体の産生もしくは免疫学的に適合性のある特定の細胞の活性化のいずれか、またはその両方を伴い得る。
【０１２０】
「エピトープ」という用語は、従来的に、免疫グロブリンＶＨ／ＶＬペアによって結合される構造の単位を指す。エピトープは、抗体に対する最小限の結合部位を定めるものであり、したがって、抗体の特異性の標的を表す。
【０１２１】
本明細書において使用されるとき、「免疫原」という用語は、抗体の産生を誘導することができる抗原を指す。
【０１２２】
本明細書において使用されるとき、「免疫原性」という用語は、一般に、免疫原または抗原が免疫応答を刺激する能力を指す。
【０１２３】
「ワクチン」という用語は、疾患を引き起こす生物全体（死滅もしくは弱毒化されている）またはそのような生物の成分からなり、その生物が引き起こす疾患に対する免疫を付与するために使用される、抗原を含む調製物、たとえば、タンパク質、ペプチド、または多糖を指す。ワクチン調製物は、天然であってもよく、合成であってもよく、または組換えＤＮＡ技術によって誘導されてもよい。
【０１２４】
本明細書において使用されるとき、「抗原特異的」という用語は、特定の抗原または抗原の断片の供給により、特定の細胞の増殖が生じる、細胞集団の特性を指す。
【０１２５】
本明細書において使用されるとき、「特異的に結合する」という用語は、結合ペア（たとえば、抗体および抗原）の間の相互作用を指す。様々な事例では、特異的に結合するとは、約１０−６モル／リットル、約１０−７モル／リットル、または約１０−８モル／リットル、またはそれより低い親和性定数によって具現化され得る。追加または代替的な実施形態では、抗体の、そのそれぞれの抗原への結合は、抗体特異性の点で、特異的と称される。本明細書において、「特異的」という用語は、一般に、結合ペアの一方のメンバーが、その特定の結合パートナー以外の分子に対して有意な結合を全く示さない、たとえば、本明細書において示されるもの以外の任意の他の分子とは、約３０％より低い、好ましくは２０％、１５％、１０％、５％、または１％より低い交差反応性しか有さない状況を指して、使用される。
【０１２６】
「結合親和性」という用語は、一般に、分子（たとえば、抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（たとえば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書において使用されるとき、「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（たとえば、抗体および抗原）間での１：１の相互作用を反映する、本質的な結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書において記載されるものを含め、当技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性の抗体は、一般に、抗原に結合するのが遅く、解離するのが容易な傾向があり、一方で、高親和性の抗体は、一般に、抗原に結合するのが早く、より長く結合したままとどまる傾向にある。結合親和性を測定する様々な方法が、当技術分野において公知であり、それらのうちのいずれかを、本発明の目的で使用することができる。
【０１２７】
本明細書において使用されるとき、「解離定数（Ｋｄ）」という用語は、複合体が、その構成要素である分子に分解されるとき、大きな物体が、より小さな構成要素へと可逆的に解離する傾向を測定する、特定の種類の平衡定数である。反応ＡｘＢｙ⇔ｘＡ＋ｙＢに関して、解離定数は、Ｋｄ＝［Ａ］ｘ［Ｂ］ｙ／［ＡｘＢｙ］と定義され、ここで、［Ａ］、［Ｂ］、および［ＡｘＢｙ］は、それぞれ、Ａ、Ｂ、およびＡｘＢｙの濃度である。具体的には、Ｋｄ値は、Ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴システムまたは酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によって判定される。
【０１２８】
本明細書において使用されるとき、ＳＳＥＡ４に「特異的に結合する」抗体は、１×１０−７Ｍもしくはそれより低い、より好ましくは５×１０−８Ｍもしくはそれより低い、より好ましくは１×１０−８Ｍもしくはそれより低い、より好ましくは５×１０−９Ｍもしくはそれより低いＫＤでＳＳＥＡ４に結合するか、または１×１０−８Ｍ〜１×１０−１０Ｍもしくはそれより低い範囲のＫＤでＳＳＥＡ−４に結合する、抗体を指すことを意図する。
【０１２９】
「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語は、本明細書において使用されるとき、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度を指すことを意図し、一方で、「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、本明細書において使用されるとき、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すことを意図する。「ＫＤ」という用語は、本明細書において使用されるとき、ＫｄのＫａに対する比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される、解離定数を指すことを意図する。抗体のＫＤ値は、当技術分野において十分に確立された方法を使用して、判定することができる。抗体のＫＤを判定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、好ましくは、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。
【０１３０】
本明細書において使用されるとき、ＩｇＧ抗体に対する「高い親和性」という用語は、標的抗原に対して、１０−８Ｍまたはそれより低い、より好ましくは１０−９Ｍまたはそれより低い、さらにより好ましくは１０−１０Ｍまたはそれより低いＫＤを有する抗体を指す。しかしながら、「高い親和性」の結合は、他の抗体アイソタイプに対しては変動し得る。たとえば、ＩｇＭアイソタイプに対する「高い親和性」の結合は、１０−７Ｍまたはそれより低い、より好ましくは１０−８Ｍまたはそれより低い、さらにより好ましくは１０−９Ｍまたはそれより低いＫＤを有する抗体を指す。
【０１３１】
「半数効果濃度（ＥＣ５０）」という用語は、指定された曝露時間の後に、ベースラインと最大値との中間の応答を誘導する、薬物、抗体、または毒物の濃度を指す。これは、薬物の強度の尺度として使用される。
【０１３２】
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、広義では互換可能に使用され、モノクローナル抗体（たとえば、全長またはインタクトなモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、一価、多価抗体、多重特異性抗体（たとえば、二重特異性抗体）が含まれ、また、ある特定の抗体断片も含まれ得る。ほとんどの抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖がジスルフィド結合によって互いに連結されているという、同じ構造上の特徴を有する糖タンパク質である。軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）および１つの定常ドメイン（ＣＬ）を含み、一方で、重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３、集合的にＣＨと称される）を含む。軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域が、抗原に対する結合の認識および特異性を決定する。ＶＨおよびＶＬ領域は、超可変領域（ＨＶＲ）と称される超可変性の領域にさらに分割することができ、そこには、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される保存性の高い領域が点在している。軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、抗体鎖の結合、分泌、胎盤を通した移動性、補体結合、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合など、重要な生物学的特性を付与する。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体には、異なるクラスが割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭの５つの主要なクラスが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、たとえば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニットの構造および三次元立体配置は、周知であり、概して、たとえば、Ａｂｂａｓら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、（２０００年）に記載されている。抗体は、抗体と、１つまたは複数の他のタンパク質またはペプチドとの共有結合または非共有結合によって形成される、より大きな融合分子の一部であってもよい。抗体は、キメラ、ヒト、ヒト化、および／または親和性成熟であり得る。
【０１３３】
任意の脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」には、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と称される２つの異なる種類のうちの１つが割り当てられる。一実施形態では、鎖は、カッパ型である。別の実施形態では、鎖は、ラムダ型である。
【０１３４】
本明細書において使用されるとき、「可変ドメイン」とは、超可変領域（ＨＶＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体分子の軽鎖および重鎖の部分を指す。本明細書において使用される方法によると、ＨＶＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位は、Ｋａｂａｔに従って定義され得る（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７年および１９９１年）。抗体または抗原結合性断片のアミノ酸の番号付けもまた、Ｋａｂａｔのものに従う。
【０１３５】
本明細書において使用されるとき、「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位の番号付け」という用語、およびそれらの変化形は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、（１９９１年）において、抗体のコンピレーションの重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されている番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮形に相当する、より少ないアミノ酸を含み得るか、またはそれへの挿入に相当する、追加のアミノ酸を含み得る。たとえば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に、単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に、挿入された残基（たとえば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃなど）を含み得る。所与の抗体に関するＫａｂａｔの残基番号付けは、その抗体の配列の相同性の領域における、標準的なＫａｂａｔで番号付けした配列とのアライメントによって、決定され得る。
【０１３６】
本明細書において使用されるとき、「フレームワーク領域」（ＦＲ）残基という用語は、本明細書において定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１３７】
本明細書において使用されるとき、「超可変領域」（ＨＶＲまたはＨＶ）および「相補性決定領域」（ＣＤＲ）という用語は、互換可能に使用され、本明細書において使用される場合、配列が超可変であり、および／または構造的に定義されるループを形成する、抗体の可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つの超可変領域を含み、３つがＶＨにあり（Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３）、３つがＶＬ（Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＣＤＲ３）にある。いくつかの超可変領域の表記が使用されており、本明細書において包含される。Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造的ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。ＡｂＭの超可変領域は、ＫａｂａｔのＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの折衷案を表し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。「Ｃｏｎｔａｃｔ」超可変領域は、利用可能な複合体の結晶構造の分析に基づくものである。「ＩＭＧＴ」（国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム）は、免疫グロブリンおよびＴ細胞受容体可変ドメインならびにＩｇスーパーファミリーＶ様ドメインに関する固有の番号付けを提供する。Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＣｏｎｔａｃｔによって定義されるこれらの超可変領域のそれぞれに由来する残基を、以下に示し、ＩＭＧＴは、ウェブサイト：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／で予測される。
【表Ａ】
2020500003.tif 000009
【０１３８】
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「完全抗体」という用語は、本明細書において互換可能に使用され、以下に定義される抗体断片ではなく、実質的にインタクトな形態である抗体を指す。これらの用語は、具体的に、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【０１３９】
「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部分のみを含み、ここで、この一部分は、インタクトな抗体に存在する場合にその部分と通常関連付けられている機能のうちの少なくとも１つ、およびほとんど、またはすべてを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体の抗原結合性部位を含み、したがって、抗原に結合する能力を保持する。別の実施形態では、抗体断片、たとえば、Ｆｃ領域を含むものは、Ｆｃ領域がインタクトな抗体に存在する場合にＦｃ領域と通常関連付けられている生物学的機能、たとえば、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期の調整、ＡＤＣＣ機能、および補体結合のうちの少なくとも１つを保持する。一実施形態では、抗体断片は、インタクトな抗体に実質的に類似するｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する一価抗体である。たとえば、そのような抗体断片は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性をその断片に付与することができるＦｃ配列と連結された抗原結合アームを含み得る。
【０１４０】
本明細書において使用されるとき、「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、天然配列のＦｃ領域およびバリアントのＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は、多様であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基から、そのカルボキシル末端までの一片として定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵ番号付けシステムによると残基４４７）は、たとえば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去されてもよい。したがって、インタクトな抗体の組成物は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基ありおよびなしの抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本発明の抗体において使用するのに好適な天然配列のＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が含まれる。
【０１４１】
本明細書において使用されるとき、「Ｆｖ領域」という用語は、完全な抗原認識および結合部位を含む、最小限の抗体断片である。二本鎖Ｆｖ種の場合、この領域は、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインの緊密な非共有結合での結合による二量体からなる。一本鎖Ｆｖ種の場合、軽鎖および重鎖が、二本鎖Ｆｖ種のものと類似の「二量体」構造で結合し得るように、１つの重鎖および１つの軽鎖可変ドメインが、可動性ペプチドリンカーによって共有結合で連結され得る。この構成において、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合性部位が定まる。これらの６つのＣＤＲが集合的に、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合性部位全体より低い親和性ではあるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
【０１４２】
本明細書において使用されるとき、「Ｆａｂ断片」という用語は、Ｆｖ領域、軽鎖の定常ドメイン、および重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域に由来する１つまたは複数のシステインを含め、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端にいくつかの残基の付加があることが、Ｆａｂ断片とは異なる。
【０１４３】
「抗原結合性断片」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１つもしくは複数の断片を指す。抗体の抗原結合性機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。「抗原結合性断片」という用語に包含される結合性断片の例としては、Ｆａｂ断片；Ｆｖ断片；一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片；ダイアボディ；定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’の表記である、Ｆａｂ’−ＳＨ断片；ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ）２断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、１９８９年、Ｎａｔｕｒｅ、３４１巻：５４４〜５４６頁）；可動性リンカーペプチドによって接続された２つの異なるジスルフィド安定化Ｆｖ抗体断片である、ｄｓＦｖ断片；ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；またはそのような抗原結合性断片を含む、任意の融合タンパク質が挙げられる。
【０１４４】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片という用語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖で存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望される構造を形成するのを可能にする、ポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの考察に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【０１４５】
「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合性部位を有する小さな抗体断片を指し、これらの断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）で、接続されたものを含む。同じ鎖の２つのドメイン間でのペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは、強制的に、別の鎖の相補性ドメインとペア形成することになり、２つの抗原結合性部位が作製される。ダイアボディは、たとえば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第９３／１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）に、より詳細に記載されている。
【０１４６】
「モノクローナル抗体（ｍＡｂ）」という用語は、本明細書において使用されるとき、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指し、たとえば、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る可能性のある天然の変異を除き、同一である。たとえば、「モノクローナル」という修飾語は、異なる抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。そのようなモノクローナル抗体は、典型的に、標的に結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、ここで、この標的に結合するポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から、単一の標的に結合するポリペプチド配列を選択することを含むプロセスによって得られたものである。たとえば、選択のプロセスは、複数のクローン、たとえば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプールから、固有のクローンを選択することであり得る。この選択された、標的に結合する配列を、たとえば、標的に対する親和性の向上、標的結合配列のヒト化、細胞培養におけるその産生の改善、ｉｎ  ｖｉｖｏでのその免疫原性の低減、多重特異性抗体の作製などを行うようにさらに改変してもよいこと、ならびに改変された、標的に結合する配列を含む抗体もまた、本発明のモノクローナル抗体であることを理解されたい。典型的には異なるエピトープを対象とする異なる抗体を含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体のそれぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープを対象とする。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、それらには、典型的に他の免疫グロブリンが混入していないという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が、実質的に同種の抗体集団から得られているという特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。たとえば、本発明により使用されるモノクローナル抗体は、たとえば、ハイブリドーマ法（たとえば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁（１９７５年）、Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８年）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ、５６３〜６８１頁（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１年））、組換えＤＮＡ法（たとえば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、ファージディスプレイ技術（たとえば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９２年）、Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、３３８巻（２号）：２９９〜３１０頁（２００４年）、Ｌｅｅら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、３４０巻（５号）：１０７３〜１０９３頁（２００４年）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、１０１巻（３４号）：１２４６７〜１２４７２頁（２００４年）、およびＬｅｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８４巻（１〜２号）：１１９〜１３２頁（２００４年）を参照されたい）、ならびにヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子のうちの一部またはすべてを有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（たとえば、国際公開第９８／２４８９３号、同第９６／３４０９６号、同第９６／３３７３５号、同第９１／１０７４１号、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ．  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）、Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８５６〜８５９頁（１９９４年）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８１２〜８１３頁（１９９４年）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４巻：８４５〜８５１頁（１９９６年）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１４巻：８２６頁（１９９６年）、ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３巻：６５〜９３頁（１９９５年）を参照されたい）を含む、様々な技法によって、作製され得る。
【０１４７】
「キメラ抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であり、一方で鎖の残りの部分が、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であるものである。具体的には、本発明では、キメラ抗体は、非ヒト抗体の抗原結合性配列／可変ドメインが、ヒト抗体フレームワーク領域にグラフトされている、ヒト化抗体であり得る。そのような抗体は、所望される生物学的活性を呈していさえすればよい（米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。
【０１４８】
本明細書において使用されるとき、「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、キメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域に由来する残基が、所望される特異性、親和性、および／または能力を有する、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基で置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域の残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに洗練するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、実質的にすべて、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインを含むことになり、ここで、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含み得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）、およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．、２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照されたい。また、以下の総説論文およびそこに引用されている参考文献を参照されたい：ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ，  Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）、Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）、ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．、５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）。
【０１４９】
「ヒト抗体」という用語は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するものを有するもの、および／または本明細書において開示されるヒト抗体を作製する技法のうちのいずれかを使用して作製されたものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合性残基を含むヒト化抗体を除外する。
【０１５０】
「親和性成熟抗体」は、その１つまたは複数のＨＶＲに、改変を有さない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性の改善をもたらす、１つまたは複数の改変を有するものである。一実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモルまたはさらにはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野において公知の手順によって産生される。Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年）は、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異生成は、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９１巻：３８０９〜３８１３頁（１９９４年）、Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９巻：１４７〜１５５頁（１９９５年）、Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５巻：１９９４〜２００４頁（１９９５年）、Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４巻（７号）：３３１０〜９頁（１９９５年）、およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２６巻：８８９〜８９６頁（１９９２年）によって説明されている。
【０１５１】
「単離された抗体」は、特定され、その天然の環境の成分から分離および／または回収されているものである。その天然の環境の混入成分は、抗体の研究、診断、または治療上の使用を妨害するであろう材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を挙げることができる。一実施形態では、抗体は、（１）たとえば、ローリー法によって判定される場合に、抗体の９０重量％を上回って、また一部の実施形態では、９５重量％を上回って、（２）たとえば、スピニングカップシークエネーターの使用によって、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度に、または（３）たとえば、クーマシーブルー染色もしくは銀染色を使用して還元もしくは非還元条件下において、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質性となるまで、精製されることになる。単離された抗体は、その抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないことになるため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体を含む。通常は、しかしながら、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップによって調製されることになる。
【０１５２】
「遮断抗体」または「アンタゴニスト抗体」は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減するものである。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【０１５３】
「アゴニスト」抗体は、本明細書において使用されるとき、目的のポリペプチドの機能的活性のうちの少なくとも１つを模倣する、抗体である。
【０１５４】
「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」という用語は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結された、抗体の抗原結合性ドメイン（たとえば、ｓｃＦｖ）を含む、人工的に構築されたハイブリッドタンパク質またはポリペプチドである。ＣＡＲの特徴としては、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用し、非ＭＨＣ制限型の様式で、Ｔ細胞特異性と再活性を、選択された標的へと再指向する能力が挙げられる。非ＭＨＣ制限型の抗原認識は、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングから独立して抗原を認識する能力を付与し、したがって、腫瘍エスケープの主要な機序をバイパスする。さらに、Ｔ細胞に発現される場合、ＣＡＲは、有利なことに、内在性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ鎖およびベータ鎖と二量体を形成しない。
【０１５５】
「障害」は、本発明の抗体を用いた処置が有益であろう任意の状態である。これには、哺乳動物が問題の障害を罹患する素因となる病態を含め、慢性および急性の障害または疾患が含まれる。本明細書において処置しようとする障害の非限定的な例としては、がんが挙げられる。
【０１５６】
「細胞増殖性障害」または「増殖性障害」という用語は、何らかの程度の異常な細胞増殖と関連付けられた障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、がんである。
【０１５７】
「腫瘍」という用語は、本明細書において使用されるとき、悪性であるか良性であるかにかかわらず、すべての腫瘍性細胞成長および増殖、ならびにすべての前がん性およびがん性細胞および組織を指す。「がん」、「がん性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、および「腫瘍」という用語は、本明細書において言及される場合、相互に排他的ではない。
【０１５８】
「がん」または「がん性」という用語は、典型的には無制御な細胞成長／増殖によって特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すか、またはそれを説明する。がんの例としては、癌腫、リンパ腫（たとえば、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのようながんのより具体的な例としては、脳がん、口腔がん、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、胃がん、胆管がん、膀胱がん、肝細胞癌、乳がん、結腸がん、骨がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓癌、白血病および他のリンパ増殖性障害、ならびに様々な種類の頭頸部がんが挙げられる。
【０１５９】
本明細書において使用されるとき、「個体」または「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒト動物を含むことを意図する。好ましい対象としては、免疫および／または抗増殖性および／または抗がん治療応答の強化を必要とするヒト患者が挙げられる。本方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのがん細胞の処置に好適なヒト患者を処置するのに特に好適である。
【０１６０】
本明細書において使用されるとき、「治療剤」という用語は、過剰増殖性疾患を低減および／または阻害することができる任意の薬剤により特徴付けられる。例示的な治療剤としては、細胞毒性剤、化学療法剤、抗増殖剤、免疫調節剤、ホルモン調節剤、サイトカイン、ならびに他の抗がん物質および／またはモダリティを挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１６１】
「細胞毒性剤」という用語は、本明細書において使用されるとき、細胞の機能を阻害もしくは予防する、および／または細胞の破壊を引き起こす、物質を指す。この用語は、放射性同位体（たとえば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤（たとえば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤、酵素およびその断片、たとえば、核酸分解酵素、抗生物質、ならびに毒素、たとえば、小分子毒素、または細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素（その断片および／もしくはバリアントを含む）、ならびに以下に開示される様々な抗腫瘍剤および抗がん剤を含むことが意図される。他の細胞毒性剤を、以下に記載する。本明細書において使用されるとき、殺腫瘍剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。細胞毒性剤および化学療法剤は、相互に排他的ではない。
【０１６２】
追加または代替として、細胞毒素または細胞毒性剤には、細胞にとって有害な（たとえば、細胞を殺滅させる）任意の薬剤が含まれ得る。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそれらの類似体または相同体が挙げられる。治療剤としてはまた、たとえば、抗代謝剤（たとえば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）  シスプラチン）、アントラサイクリン（たとえば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（たとえば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗有糸分裂剤（たとえば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。
【０１６３】
「化学療法剤」という用語は、がんの処置において有用な化学的化合物である。化学療法剤の例としては、アルキル化剤、たとえば、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド；スルホン酸アルキル、たとえば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、たとえば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、たとえば、クロラムブシル、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、たとえば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、たとえば、エンジイン抗生物質（たとえば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１Ｉ、およびカリケアマイシンオメガＩ１（たとえば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔｌ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．、３３巻：１８３〜１８６頁（１９９４年）を参照されたい）；ダイネミシンＡを含む、ダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、たとえば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝剤、たとえば、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、たとえば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、たとえば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン；ピリミジン類似体、たとえば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、たとえば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、たとえば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補液（ｆｏｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、たとえば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、たとえば、マイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド（２−ｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）；チオテパ；タキソイド、たとえば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ不含、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、たとえば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、たとえば、レチノイン酸；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つまたはそれより多くの組合せ、たとえば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの組合せ療法の略語であるＣＨＯＰ、ならびに５−ＦＵおよびロイコボビンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた処置レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸが挙げられる。
【０１６４】
本明細書において使用されるとき、「サイトカイン」という用語には、Ｋｉｅｆｅｒら、２０１６年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖｓ．、２７０巻：１７８〜１９２頁に列挙されている例が含まれるが、それらに限定されない。例示的な好適なサイトカインとしては、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＦＳ、ＩＦＮγ、ＩＦＮα、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、およびＴＮＦが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６５】
一実施形態では、サイトカインは、リシン残基間の架橋を介して結合性ドメインに連結される。
【０１６６】
「治療用抗体」という用語は、疾患の処置において有用な抗体である。治療用抗体の例としては、エタラシズマブ、アトリズマブ、トシリズマブ、タカツズマブテトラキセタン（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、オファツムマブ、テフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、ベバシズマブ、ベリムマブ、トシツモマブ、ブロンツベトマブ（ｂｌｏｎｔｕｖｅｔｍａｂ）、メポリズマブ、ラベツズマブ、アルシツモマブ、セルトリズマブペゴール、ラムシルマブ、ＴＲＢＳ０７、セツキシマブ、ビシロマブ、オビヌツズマブ、トラスツズマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ボツムバブ、ザノリムマブ、ザルツムマブ、アダリムマブ、フォントリズマブ、アルツモマブペンテテート、カナキヌマブ、イゴボマブ（ｉｇｏｖｏｍａｂ）、トラスツズマブエムタンシン、アレムツズマブ、ロベリズマブ（ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、スレソマブ、ラニビズマブ、ＦＢＴＡ０５、ベクツモマブ、リツキシマブ、エフングマブ（ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン、イムシロマブ、ファノレソマブ、モタビズマブ、ビジリズマブ、ペルツズマブ、ニボルマブ、ムロモナブ−ｃｄ３、オレゴボマブ、エドレコロマブ、デノスマブ、カプロマブペンデチド、エファリズマブ、インフリキシマブ、カツマキソマブ、ギレンツキシマブ、アブシキシマブ、エルツマキソマブ、ベシレソマブ、ゴリムマブ、バシリキシマブ、エクリズマブ、ウステキヌマブ、パリビズマブ、タムツベツマブ（ｔａｍｔｕｖｅｔｍａｂ）、ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、ペムツモマブ、ナタリズマブ、パニツムマブ、ノフェツモマブメルペンタン、オマリズマブ、イピリムマブ、ダクリズマブ、イブリツモマブチウキセタンがある。
【０１６７】
本明細書において使用されるとき、「処置」は、処置されている個体または細胞の自然な経過を改変するよう試みる、臨床介入を指し、予防のため、または臨床病理の過程の間のいずれかで行われ得る。処置の所望される効果としては、疾患の発症または再発を予防すること、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理結果の減少、炎症および／または組織／器官の損傷の予防または減少、疾患進行の速度の減少、疾患状態の軽減または緩和、ならびに寛解または予後の改善が挙げられる。一部の実施形態では、本発明の抗体は、疾患または障害の発症を遅延させるために使用される。
【０１６８】
処置の目的で、「哺乳動物」という用語は、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園の動物、競技動物、または愛玩動物、たとえば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。ある特定の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【０１６９】
「有効量」という用語は、必要とされる投薬量および期間で、所望される治療的または予防的結果を達成するのに有効な量を指す。
【０１７０】
本明細書において使用されるとき、本発明の物質／分子の「治療有効量」という用語は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重などの因子、ならびにその物質／分子が個体において所望される応答を誘起する能力に応じて、変動し得る。治療有効量はまた、物質／分子の任意の毒性または有害な作用を、治療上有益な作用が上回るものである。「予防有効量」は、必要とされる投薬量および期間で、所望される予防的結果を達成するのに有効な量を指す。予防的用量は、疾患の前または早期段階で、対象に使用されるため、典型的には、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなるが、必ずしもそうとは限らない。
【０１７１】
本明細書において使用されるとき、「予防有効量」という用語は、必要とされる投薬量および期間で、所望される予防的結果を達成するのに有効な量を指す。予防的用量は、疾患の前または早期段階で、対象に使用されるため、典型的には、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなるが、必ずしもそうとは限らない。
【０１７２】
「薬学的に許容される担体」という用語は、過度の副作用（たとえば、毒性、刺激、およびアレルギー応答）を伴うことなく、妥当な利益／危険性比に合った、対象に使用するのに好適なものである。また、それぞれの担体は、医薬組成物の他の成分と適合性があるという点で、「許容される」必要がある。担体は、固体、半固体、または液体希釈剤、クリーム、またはカプセルの形態であり得る。担体は、製剤の他の成分と適合性であるという点で、「許容される」必要があり、対象において、活性剤の任意の分解を最小限に抑え、任意の副作用を最小限に抑えるように選択される。
【０１７３】
「実質的に類似」、「実質的に同じ」、「同等」、または「実質的に同等」という語句は、本明細書において使用されるとき、２つの数値（たとえば、一方が、ある分子に関連するものであり、他方が参照／比較分子に関連するものである）間における十分に高い程度の類似性を指し、結果として、当業者であれば、２つの値の間の差に関して、前記値によって測定される生物学的特徴（たとえば、Ｋｄ値、抗ウイルス効果など）の文脈において、生物学的および／または統計学的有意性がほとんどないか全くないとみなされよう。前記２つの値の間の差は、例えば、参照／比較分子の値の関数として、約５０％より低い、約４０％より低い、約３０％より低い、約２０％より低い、および／または約１０％より低い。
【０１７４】
「実質的に低減された」または「実質的に異なる」という語句は、本明細書において使用されるとき、２つの数値（一般に、一方がある分子に関連するものであり、他方が、参照／比較分子に関連するものである）の間における十分に高い程度の差を示し、結果として、当業者であれば、２つの値の間の差に関して、前記値によって測定される生物学的特徴（たとえば、Ｋｄ値）の文脈において、統計学的有意性があるとみなされよう。前記２つの値の間の差は、例えば、参照／比較分子の値の関数として、約１０％を上回る、約２０％を上回る、約３０％を上回る、約４０％を上回る、および／または約５０％を上回る。
【０１７５】
本明細書において特定されるアミノ酸配列に関する「アミノ酸配列同一性の割合（％）」という用語は、配列をアライメントし、最大の配列同一性パーセントが達成されるように、必要に応じてギャップを導入した後に、特定のポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義され、いずれの保存的置換も配列同一性の一部とは考えない。配列同一性の割合を決定する目的のアライメントは、当業者の技能の範囲内である様々な手段で、たとえば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。本明細書の目的で、２つのアミノ酸配列間の配列比較は、Ｎａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によってオンラインで提供されているコンピュータプログラムＢｌａｓｔｐ（タンパク質−タンパク質ＢＬＡＳＴ）を使用して行った。具体的には、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性の割合（これは、代替として、所与のアミノ酸配列Ａが、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するとして表記され得る）は、以下の式によって計算される。
（Ｘ÷Ｙ）×１００％
【０１７６】
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＢＬＡＳＴによるＡおよびＢのアライメントにおいて同一なマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、ＡまたはＢのいずれか短い方のアミノ酸残基の総数である。
【０１７７】
指定されたアミノ酸配列に関する配列同一性または相同性は、本明細書において、配列をアライメントし、最大の相同性パーセントが達成されるように、必要に応じてギャップを導入した後に、指定された残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義され、いずれの保存的置換も、配列同一性の一部とは考えない。指定された配列に対するＮ末端、Ｃ末端、または内部における伸長、欠失、または挿入のいずれも、相同性に影響を及ぼすと解釈しないものとする。本発明において行われるすべての配列アライメントは、そのような最大の相同性のアライメントである。本明細書において考察されるように、タンパク質／ポリペプチドのアミノ酸配列におけるわずかな変動は、ここに開示され特許請求される発明の概念によって包含されることが企図されるが、アミノ酸配列における変動により、少なくとも８０％、たとえば、少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、および９９％が維持されることを条件とする。
【０１７８】
「保存的に修飾されたアミノ酸置換」が、企図される。保存的に修飾されたアミノ酸置換は、その側鎖に関連して、あるファミリーのアミノ酸内で行われるものである。遺伝子的にコードされるアミノ酸は、一般に、次のファミリーに分類される：
（１）酸性：アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
（２）塩基性：リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、
（３）非極性：グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、メチオニン（Ｍ）、トリプトファン（Ｗ）、ならびに
（４）非荷電極性：アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、システイン（Ｃ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）。
【０１７９】
より好ましいファミリーには、次のものがある：
（３−１）脂肪族：アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン、
（３−２）芳香族：フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシン、
（４−１）脂肪族−ヒドロキシル：セリンおよびスレオニン、
（４−２）アミド含有：アスパラギンおよびグルタミン。
【０１８０】
たとえば、ロイシンとイソロイシンもしくはバリンとの単独置換、アスパラギン酸とグルタミン酸との単独置換、スレオニンとセリンとの単独置換、またはあるアミノ酸と構造的に関連したアミノ酸との類似の置換は、特に、置換がフレームワーク部位内のアミノ酸に関係しない場合に、結果として得られる分子の結合または特性に大きな影響を有さないと予測することは、妥当である。アミノ酸の変化が、機能的ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特定の活性をアッセイすることによって、容易に判定することができる。タンパク質／ポリペプチドの断片または類似体は、当業者によって容易に調製することができる。断片または類似体の好ましいアミノ末端およびカルボキシル末端は、機能的ドメインの境界付近に生じる。さらなる群のアミノ酸はまた、たとえば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、（１９８４年）、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、（第２版、１９９３年）、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙに記載されている原理を使用して製剤化することもできる。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換は、参照配列（たとえば、ＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、フレームワーク、全長など）とは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、または３０個、またはそれより多くの置換されたアミノ酸残基が異なる、配列相同体を含み得る。
誘導体
【０１８２】
本開示はまた、ＳＳＥＡ４に特異的な抗体を得るための方法を提供する。そのような抗体のＣＤＲは、表２および本明細書の他の箇所において特定されるＶＨおよびＶＬの特定の配列に限定されず、ＳＳＥＡ４に特異的に結合する能力を保持するこれらの配列のバリアントを含み得る。そのようなバリアントは、当業者によって、当技術分野において周知の技法を使用して、以下に列挙される配列およびその保存的置換から導出され得る。
【表Ｂ−１】
2020500003.tif 000010
【表Ｂ−２】
2020500003.tif 000011
【０１８３】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数は、本明細書において記載される好ましい抗体に基づく特定のアミノ酸配列またはその保存的修飾形態を含み、それらの抗体は、本発明の抗ＳＳＥＡ４抗体の所望される機能的特性を保持する。したがって、本発明は、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換バリアント、ならびに３つすべての重鎖および／または軽鎖ＣＤＲを含むそれらの全長配列および相同体を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
操作および修飾された抗体
【０１８４】
本発明の抗体は、さらに、本明細書において開示されるＶＨ配列および／またはＶＬ配列のうちの１つまたは複数を有する抗体を、修飾された抗体を操作するための出発材料として使用して、調製することができ、この修飾された抗体は、出発抗体から改変された特性を有し得る。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内の、たとえば、１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の、および／または１つもしくは複数のフレームワーク領域内の、１個または複数の残基を修飾することによって、操作され得る。追加または代替として、抗体は、たとえば、抗体のエフェクター機能を改変するために、定常領域内の残基を修飾することによって、操作することができる。
【０１８５】
行われ得る可変領域操作の１つの種類としては、ＣＤＲグラフトがある。抗体は、主として、６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）に位置するアミノ酸残基を通じて、標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも個々の抗体間での多様性が高い。ＣＤＲ配列は、ほとんどの抗体−抗原相互作用を担うため、異なる特性を有する異なる抗体に由来するフレームワーク配列にグラフトされた特定の天然に存在する抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（たとえば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  Ｌら、（１９９８年）、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２７頁、Ｊｏｎｅｓ，  Ｐ．ら、（１９８６年）、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁、Ｑｕｅｅｎ，  Ｃ．ら、（１９８９年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．，  Ｕ．Ｓ．Ａ．、８６巻：１００２９〜１００３３頁、Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号、ならびにＱｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号を参照されたい）。
【０１８６】
したがって、本発明の別の実施形態は、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびにＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。したがって、そのような抗体は、本明細書において記載されるモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ  ＣＤＲ配列を含み、さらに、これらの抗体とは異なるフレームワーク配列を含んでもよい。
【０１８７】
そのようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列の抗体遺伝子配列を含む公的なＤＮＡデータベースまたは公開されている参考文献から得ることができる。たとえば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列配列データベース（インターネット上でｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにおいて利用可能）に、ならびにＫａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．ら、（１９９１年）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ｉ．  Ｍ．ら、（１９９２年）、「Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｂｏｕｔ  Ｆｉｆｔｙ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｌｏｏｐｓ」、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：７７６〜７９８頁；およびＣｏｘ，  Ｊ．  Ｐ．  Ｌ．ら、（１９９４年）、「Ａ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｓｔｒｏｎｇ  Ｂｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓａｇｅ」、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：８２７〜８３６頁に見出すことができ、それらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。別の例として、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて見出すことができる。たとえば、ＨＣｏ７  ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される以下の重鎖生殖細胞系列配列は、付随するＧｅｎＢａｎｋ受託番号において利用可能である：１〜６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７、およびＢＣ０７０３３３）、３〜３３（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、および３〜７（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）。別の例として、ＨＣｏ１２  ＨｕＭＡｂマウスにおいて見出される以下の重鎖生殖細胞系列配列は、付随するＧｅｎＢａｎｋ受託番号において利用可能である：１〜６９（ＮＧ＿００１０１０９、ＮＴ＿０２４６３７、およびＢＣ０７０３３３）、５〜５１（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、４〜３４（ＮＧ＿００１０１０９およびＮＴ＿０２４６３７）、３〜３０．３（ＡＪ５５６６４４）、ならびに３〜２３（ＡＪ４０６６７８）。
【０１８８】
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子において見出されるものと同一の配列を有するフレームワーク領域にグラフトされてもよく、またはＣＤＲ配列は、生殖細胞系列配列と比較して、１つもしくは複数の変異を含むフレームワーク領域にグラフトされてもよい。たとえば、ある特定の事例では、抗体の抗原結合性能力を維持または強化するために、フレームワーク領域内の残基を変異させることが有益であることが見出されている（たとえば、Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６２号、および同第６，１８０，３７０号を参照されたい）。
【０１８９】
別の種類の可変領域修飾は、それぞれの重鎖または軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それによって、目的の抗体の１つまたは複数の結合特性（たとえば、親和性）を改善することである。部位特異的変異生成またはＰＣＲ媒介性変異生成を行って、変異を導入することができ、抗体結合または目的とされる他の機能的特性に対する効果を、本明細書において記載され実施例に提供されているｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて評価することができる。好ましくは、保存的修飾（上記で考察されたような）が導入される。変異は、アミノ酸の置換、付加、または欠失であり得るが、好ましくは、置換である。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下の残基が、改変される。
【０１９０】
本発明の操作された抗体には、たとえば、抗体の特性を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＫ内のフレームワーク残基に修飾が行われているものが含まれる。典型的には、そのようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を減少させるために行われる。たとえば、１つのアプローチは、１個または複数のフレームワーク残基を、対応する生殖細胞系列配列に「復帰変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、その抗体が由来する生殖細胞系列配列とは異なるフレームワーク残基を含み得る。そのような残基は、抗体のフレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することによって、特定することができる。
【０１９１】
フレームワーク領域またはＣＤＲ領域内において行われる修飾に加えて、またはその代替として、本発明の抗体は、典型的には、抗体の１つまたは複数の機能的特性、たとえば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞毒性を改変するように、Ｆｃ領域内における修飾を含むように操作され得る。さらに、本発明の抗体は、ここでも、抗体の１つまたは複数の機能的特性を改変するように、化学的に修飾され得るか（たとえば、１つもしくは複数の化学的部分が抗体に結合され得る）、またはそのグリコシル化を改変するように修飾され得る。
【０１９２】
さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化が、修飾される。たとえば、非グリコシル化抗体を、作製することができる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠いている）。グリコシル化は、たとえば、抗体の抗原に対する親和性を増加させるように改変され得る。追加または代替として、改変型のグリコシル化を有する抗体、たとえば、フコシル残基の量が低減された低フコシル化抗体、または二分枝型ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体を、作製することができる。このような改変されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。
【０１９３】
本発明によって企図される本明細書における抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体は、たとえば、抗体の生物学的（たとえば、血清）半減期を増加させるように、ペグ化することができる。抗体をペグ化するために、抗体またはその断片を、典型的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、たとえば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と、１個または複数のＰＥＧ基が、抗体または抗体断片に結合した状態となるような条件下において、反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を通じて行われる。本明細書において使用されるとき、「ポリエチレングリコール」という用語は、他のタンパク質、たとえば、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを誘導体化するために使用されているＰＥＧのあらゆる形態を包含することが意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化しようとする抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は、当技術分野において公知であり、本発明の抗体に適用することができる。たとえば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａらによる欧州特許第０１５４３１６号およびＩｓｈｉｋａｗａらによる欧州特許第０４０１３８４号を参照されたい。
【０１９４】
本発明の抗体を操作する方法のある特定の実施形態では、変異を、抗ＰＤ−１抗体をコードする配列のすべてまたは一部に、ランダムまたは選択的に導入することができ、結果として得られる修飾された抗ＳＳＥＡ４抗体を、結合活性および／または本明細書において記載される他の機能的特性に関して、スクリーニングすることができる。変異方法は、当技術分野において説明されている。たとえば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ国際公開第０２／０９２７８０号は、飽和変異生成、合成ライゲーションアセンブリ、またはそれらの組合せを使用して、抗体の変異形態を作製し、スクリーニングする方法について記載している。あるいは、ＬａｚａｒらによるＰＣＴ国際公開第０３／０７４６７９号は、抗体の物理化学的特性を最適化するためにコンピュータによるスクリーニング方法を使用する方法について記載している。
本発明の抗体をコードする核酸分子
【０１９５】
本発明の別の態様は、本発明の抗体をコードする核酸分子に関する。核酸は、全細胞、細胞ライセート、または部分的に精製されたかもしくは実質的に純粋な形態で、存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野において周知の他のものを含む、標準的な技法によって、他の細胞成分または他の混入物、たとえば、他の細胞内核酸もしくはタンパク質から精製される場合、「単離」されているまたは「実質的に純粋」となっている。Ｆ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編、（１９８７年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。本発明の核酸は、たとえば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含む場合も含まない場合もある。好ましい実施形態では、核酸は、ｃＤＮＡ分子である。ある特定の実施形態では、核酸は、ベクターによって発現される。
【０１９６】
本発明の核酸は、標準的な分子生物学技法を使用して得ることができる。ハイブリドーマ（たとえば、以下にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）によって発現される抗体については、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技法によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから（たとえば、ファージディスプレイ技法を使用して）得られる抗体については、抗体をコードする核酸は、ライブラリーから回収され得る。
【０１９７】
本発明の例示的な核酸分子は、例示的なＡｂ６モノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列をコードするものである（表２Ａ〜２Ｄを参照されたい）。
【０１９８】
フレームワーク領域（ＦＲ）に例示的なアミノ酸置換を有する配列を、表２Ｂに示す。ＳＳＥＡ４およびＳＳＥＡ４を発現する細胞に対する結合活性の確認は、実施例の節において例証される結合アッセイによって示される。本発明者らは、結合親和性機能が、それぞれの例示的な軽鎖および重鎖のフレームワークに最大３／５個のアミノ酸置換を有する例示的なバリアントにおいてさえも、保存および保持されていることを確認した。
【０１９９】
ＣＤＲに例示的な非保存的に修飾されたアミノ酸置換を有する配列を、表２Ｃに示す。ＳＳＥＡ４およびＳＳＥＡ４を発現する細胞に対する結合活性の確認は、実施例の節において例証される結合アッセイによって示される。本発明者らは、結合親和性および機能が、軽鎖および重鎖のＣＤＲに以下の非限定的な例示的アミノ酸置換を有する例示的なバリアントにおいて、保存および保持されていることを確認した：たとえば、限定されないが、重鎖：Ａ１００Ｒ、Ｎ３１Ｓ、Ｔ６２Ａ。軽鎖：Ｓ５２Ｙ。
【０２００】
ＣＤＲに例示的な保存的に修飾されたアミノ酸置換を有する配列を、表２Ｄに示す。ＳＳＥＡ４およびＳＳＥＡ４を発現する細胞に対する結合活性の確認は、実施例の節において例証される結合アッセイによって示される。本発明者らは、結合親和性および機能が、軽鎖および重鎖のＣＤＲに非限定的な例示的アミノ酸置換を有する例示的なバリアントにおいて、保存および保持されていることを確認した：たとえば、限定されないが、重鎖：Ｖ５０Ａ、Ｇ５３Ａ、Ｓ３５Ｔ。軽鎖：Ｖ３０Ｉ／Ａ、Ｇ９１Ａ、Ｙ９４Ｆ
表２Ａ：  例示的な親抗体
【０２０１】
【表２Ａ−１】
2020500003.tif 000012
【表２Ａ−２】
2020500003.tif 000013
表２Ｂ：フレームワーク領域に修飾を有する例示的な抗体の実施形態
【０２０２】
【表２Ｂ−１】
2020500003.tif 000014
【０２０３】
【表２Ｂ−２−１】
2020500003.tif 000015
【表２Ｂ−２−２】
2020500003.tif 000016
表２Ｃ：  ＣＤＲに非保存的修飾を有する例示的な抗体の実施形態
【０２０４】
【表２Ｃ−１−１】
2020500003.tif 000017
【表２Ｃ−１−２】
2020500003.tif 000018
【０２０５】
【表２Ｃ−２】
2020500003.tif 000019
【０２０６】
【表２Ｃ−３】
2020500003.tif 000020
【０２０７】
【表２Ｃ−４】
2020500003.tif 000021
表２Ｄ：  ＣＤＲに保存的修飾を有する例示的な抗体の実施形態
【０２０８】
【表２Ｄ−１】
2020500003.tif 000022
【０２０９】
【表２Ｄ−２】
2020500003.tif 000023
【０２１０】
【表２Ｄ−３】
2020500003.tif 000024
【０２１１】
【表２Ｄ−４−１】
2020500003.tif 000025
【表２Ｄ−４−２】
2020500003.tif 000026
【０２１２】
【表２Ｄ−５】
2020500003.tif 000027
【０２１３】
【表２Ｄ−６−１】
2020500003.tif 000028
【表２Ｄ−６−２】
2020500003.tif 000029
【０２１４】
【表２Ｄ−７】
2020500003.tif 000030
【０２１５】
本発明の抗体またはその抗原結合性部分をコードする核酸分子もまた、本発明に包含され、同様に、そのような核酸を含む発現ベクターおよびそのような発現ベクターを含む宿主細胞もまた、本発明に包含される。さらに、本発明は、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖導入遺伝子を含み、本発明の抗体を発現する、トランスジェニックマウスを提供し、同様に、そのようなマウスから調製され、本発明の抗体を産生する、ハイブリドーマもまた、提供する。
本発明のモノクローナル抗体の産生
【０２１６】
本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来的なモノクローナル抗体手法、たとえば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、（１９７５年）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技法を含む、様々な技法によって産生され得る。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原理上、モノクローナル抗体を産生するための他の技法、たとえば、Ｂリンパ球のウイルス性または発がん性形質転換を利用してもよい。
【０２１７】
ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、非常に十分に確立された手順である。融合のために免疫処置した脾細胞を単離するための免疫処置プロトコールおよび技法は、当技術分野において公知である。融合パートナー（たとえば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順もまた、公知である。
【０２１８】
本発明のキメラまたはヒト化抗体は、上述のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技法を使用して、非マウス（たとえば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作することができる。たとえば、キメラ抗体を作製するために、マウス可変領域を、当技術分野において公知の方法を使用して、ヒト定常領域に連結させることができる（たとえば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ領域を、当技術分野において公知の方法を使用して、ヒトフレームワークに挿入することができる（たとえば、Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号、ならびにＱｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号、同５，５８５，０８９号、同５，６９３，７６２号、および同６，１８０，３７０号を参照されたい）。
【０２１９】
ある実施形態では、本発明の抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。ＳＳＥＡ４を対象とするそのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなく、ヒト免疫系の部分を有するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソームマウスを使用して、生成することができる。これらのトランスジェニックマウスおよびトランスクロモソームマウスには、それぞれ、本明細書においてＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭ  Ｍｉｃｅ（商標）と称されるマウスが含まれ、これらは、本明細書において集合的に「ヒトＩｇマウス」と称される。
【０２２０】
ＨｕＭＡｂマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、再編成されていないヒト重鎖（μおよびγ）ならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を、内在性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された変異とともに含む（たとえば、Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９４年）、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁を参照されたい）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはＫの低減された発現を示し、免疫処置に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子が、クラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧＫモノクローナルが生成される（Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．ら、（１９９４年）、上記；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．、（１９９４年）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１１３巻：４９〜１０１頁；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，  Ｄ．、（１９９５年）、Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３巻：６５〜９３頁、ならびにＨａｒｄｉｎｇ，  Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．、（１９９５年）、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、７６４巻：５３６〜５４６頁にて概観される）。ＨｕＭａｂマウスの調製および使用、ならびにそのようなマウスによって保持されるゲノム修飾は、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．ら、（１９９２年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０巻：６２８７〜６２９５頁；Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら、（１９９３年）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、５巻：６４７〜６５６頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：３７２０〜３７２４頁；Ｃｈｏｉら、（１９９３年）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、４巻：１１７〜１２３頁；Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら、（１９９３年）、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１２巻：８２１〜８３０頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、（１９９４年）、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２巻：２９１２〜２９２０頁；Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．ら、（１９９４年）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６巻：５７９〜５９１頁；およびＦｉｓｈｗｉｌｄ，  Ｄ．ら、（１９９６年）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８４５〜８５１頁にさらに記載されており、これらのすべての内容は、参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる。さらに、すべてＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８７７，３９７号、同第５，６６１，０１６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８７４，２９９号、および同第５，７７０，４２９号、Ｓｕｒａｎｉらに対する米国特許第５，５４５，８０７号、すべてＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対するＰＣＴ国際公開第９２／０３９１８号、同第９３／１２２２７号、同第９４／２５５８５号、同第９７／１３８５２号、同第９８／２４８８４号、および同第９９／４５９６２号、ならびにＫｏｒｍａｎらに対するＰＣＴ国際公開第０１／１４４２４号を参照されたい。
【０２２１】
別の実施形態では、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体にヒト免疫グロブリン配列を保有するマウス、たとえば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保有するマウスを使用して、作製することができる。本明細書において「ＫＭ  Ｍｉｃｅ（商標）」と称されるそのようなマウスは、Ｉｓｈｉｄａらに対するＰＣＴ国際公開第０２／４３４７８号に詳細に記載されている。
【０２２２】
なおもさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスジェニック動物系が、当技術分野において入手可能であり、本発明の抗ＰＤ−１抗体を作製するために使用することができる。たとえば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称される代替的なトランスジェニック系を使用することができ、そのようなマウスは、たとえば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらに対する米国特許第５，９３９，５９８号、同第６，０７５，１８１号、同第６，１１４，５９８号、同第６，１５０，５８４号、および同第６，１６２，９６３号に記載されている。
【０２２３】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的なトランスクロモソーム動物系が、当技術分野において入手可能であり、本発明の抗ＳＳＥＡ４抗体を惹起するために使用することができる。たとえば、「ＴＣマウス」と称される、ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両方を保有するマウスを使用することができ、そのようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａら、（２０００年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９７巻：７２２〜７２７頁に記載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を保有するウシが、当技術分野において説明されており（Ｋｕｒｏｉｗａら、（２００２年）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２０巻：８８９〜８９４頁）、本発明の抗ＰＤ−１抗体を作製するために使用することができる。
【０２２４】
本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して、調製することもできる。ヒト抗体を単離するためのそのようなファージディスプレイ法は、当技術分野において確立されている。たとえば、Ｌａｄｎｅｒらに対する米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、および同第５，５７１，６９８号、Ｄｏｗｅｒらに対する米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらに対する米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号、ならびにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらに対する米国特許第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、および同第６，５９３，０８１号を参照されたい。
【０２２５】
本発明のヒトモノクローナル抗体はまた、免疫処置したときにヒト抗体応答が生じ得るように、ヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを使用して、調製することもできる。そのようなマウスは、たとえば、Ｗｉｌｓｏｎらに対する米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号に記載されている。
本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
【０２２６】
本発明のヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫処置したマウスに由来する脾細胞および／またはリンパ節細胞を、単離し、適切に不死化した細胞株、たとえば、マウス骨髄腫細胞株と融合することができる。得られたハイブリドーマを、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングすることができる。
本発明のモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
【０２２７】
本発明の抗体はまた、当技術分野において周知なように、たとえば、組換えＤＮＡ技法および遺伝子トランスフェクション法の組合せを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマにおいて、産生することもできる（たとえば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．、（１９８５年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：１２０２頁）。
【０２２８】
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」という用語は、分泌されたＩｇが、ある特定の細胞毒性細胞（たとえば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合することにより、これらの細胞毒性エフェクター細胞が、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合し、続いて細胞毒素により標的細胞を殺滅させることを可能にする、細胞毒性の形態を指す。抗体は、細胞毒性細胞を「装備（ａｒｍ）」し、この機序による標的細胞の殺滅に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血系細胞におけるＦｃの発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイ、たとえば、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものを、行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば、例として、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ、９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているものなど、動物モデルにおいて、評価することができる。
【０２２９】
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」という用語は、補体の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、同種抗原に結合した抗体（適切なサブクラスのもの）への結合によって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ、たとえば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２巻：１６３頁（１９９６年）に記載されているものを、行うことができる。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加もしくは減少したＣ１ｑ結合能力を有する抗体バリアントは、米国特許第６，１９４，５５１号Ｂ１および国際公開第９９／５１６４２号に記載されている。それらの特許公開の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）もまた、参照されたい。
【０２３０】
「成長を阻害する」という用語（たとえば、細胞、たとえば、腫瘍細胞に言及して）は、抗ＳＳＥＡ４抗体と接触した場合の、抗ＳＳＥＡ４抗体と接触していない同じ細胞の成長と比較して、細胞成長における任意の測定可能な減少、たとえば、細胞培養物の成長の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％の阻害を含むことが意図される。細胞成長におけるそのような減少は、様々な機序、たとえば、エフェクター細胞ファゴサイトーシス、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、および／またはアポトーシスによって生じ得る。
【０２３１】
別の態様では、本発明は、治療用部分、たとえば、細胞毒素、薬物（たとえば、免疫抑制剤）、または放射性毒素にコンジュゲートした、抗ＳＳＥＡ４抗体またはその断片を特徴とする。
【０２３２】
本発明の抗体にコンジュゲートすることができる治療用細胞毒素の他の例としては、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、マイタンシン、およびオーリスタチン、ならびにそれらの誘導体が挙げられる。カリケアマイシン抗体コンジュゲートの例は、市販され入手可能である（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（商標）、Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ）。
【０２３３】
細胞毒素は、リンカー技術を使用して、本発明の抗体にコンジュゲートすることができる。細胞毒素にコンジュゲートするために使用されているリンカー種の例としては、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド、およびペプチド含有リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。たとえば、リソソームコンパートメント内で低ｐＨによって切断されやすいか、またはプロテアーゼ、たとえば、カテプシン（たとえば、カテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）など、腫瘍組織において優先的に発現されるプロテアーゼによって切断されやすい、リンカーを選択することができる。
【０２３４】
治療剤を抗体にコンジュゲートするための細胞毒素、リンカー、および方法の種類に関するさらなる考察については、Ｓａｉｔｏ，  Ｇ．ら、（２００３年）、Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．、５５巻：１９９〜２１５頁、Ｔｒａｉｌ，  Ｐ．  Ａ．ら、（２００３年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、５２巻：３２８〜３３７頁、Ｐａｙｎｅ，  Ｇ．、（２００３年）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、３巻：２０７〜２１２頁、Ａｌｌｅｎ，  Ｔ．  Ｍ．、（２００２年）、Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ、２巻：７５０〜７６３頁、Ｐａｓｔａｎ，  Ｉ．およびＫｒｅｉｔｍａｎ，  Ｒ．  Ｊ．、（２００２年）、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ、３巻：１０８９〜１０９１頁、Ｓｅｎｔｅｒ，  Ｐ．  Ｄ．およびＳｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｃ．  Ｊ．、（２００１年）、Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．、５３巻：２４７〜２６４頁もまた、参照されたい。
【０２３５】
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）には、抗原を発現する腫瘍細胞に強力な細胞毒性薬物を標的付けることによって（Ｔｅｉｃｈｅｒ，  Ｂ．  Ａ．、（２００９年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ、９巻：９８２〜１００４頁）、抗体および細胞毒性薬物の両方の特性を組み合わせ、それによって、有効性を最大限にし、標的外毒性を最小限に抑えることにより治療指数を強化する（Ｃａｒｔｅｒ，  Ｐ．  Ｊ．およびＳｅｎｔｅｒ  Ｐ．  Ｄ．、（２００８年）、Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．、１４巻（３号）：１５４〜１６９頁、Ｃｈａｒｉ，  Ｒ．  Ｖ．、（２００８年）Ａｃｃ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．、４１巻：９８〜１０７頁、標的化された化学療法分子が含まれ得る。
【０２３６】
本発明のＡＤＣ化合物には、抗がん活性を有するものが含まれる。一部の実施形態では、ＡＤＣ化合物には、薬物部分にコンジュゲートされた、すなわち、共有結合で結合された、抗体が含まれる。一部の実施形態では、抗体は、リンカーを介して薬物部分に共有結合で結合される。本発明の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、より高い選択性、すなわち、より低い有効用量を達成し、同時に治療指数（「治療ウインドウ」）を増加させることができる。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、ＡＤＣは、式ＡＢ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、ＡＢは、本明細書において記載される抗体またはその結合性断片であり、Ｌは、リンカーであり、Ｄは、好適な細胞毒性薬物であり、ｐは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれを上回る範囲であり得る。
【０２３８】
ＡＤＣの構築に好適な例示的なリンカー「Ｌ」としては、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノ安息香酸（ＳＴＡＢ）、グルクロニダーゼ基質、およびＰＥＧからなる群から選択される「Ｌ」を挙げることができる。
【０２３９】
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞毒性作用または細胞静止作用を有する任意の化合物、部分、または基を挙げることができる。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合もしくはインターカレーション、およびＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、および／またはトポイソメラーゼの阻害を含むがこれらに限定されない、機序によって、細胞毒性作用および細胞静止作用を付与し得る。例示的な薬物部分としては、マイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、ネモルビシンおよびその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、ならびに細胞毒性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体、および誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４０】
また、本発明の抗体を、放射性同位体にコンジュゲートして、放射性イムノコンジュゲートとも称される、細胞毒性放射性医薬を生成することもできる。
二重特異性分子
【０２４１】
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＳＳＥＡ４抗体またはその断片を含む、二重特異性分子を特徴とする。本発明の抗体またはその抗原結合性部分は、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成するように、誘導体化することができるか、または別の機能性分子、たとえば、別のペプチドもしくはタンパク質（たとえば、別の抗体もしくは受容体のリガンド）に連結させることができる。本発明の抗体は、実際に、誘導体化されるか、１つを上回る他の機能性分子に連結されて、２つを上回る異なる結合部位および／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成し得る。そのような多重特異性分子もまた、本明細書において使用されるとき、「二重特異性分子」という用語に包含されることが意図される。本発明の二重特異性分子を作製するために、本発明の抗体を、二重特異性分子が得られるように、１つまたは複数の他の結合性分子、たとえば、別の抗体、抗体断片、ペプチド、または結合性模倣体に機能的に連結させる（たとえば、化学的結合、遺伝子融合、非共有結合、またはその他の方法によって）ことができる。
医薬組成物
【０２４２】
別の態様では、本発明は、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のうちの１つまたは組合せを含む、組成物、たとえば、医薬組成物を、提供する。そのような組成物は、（たとえば、２つまたはそれより多くの異なる）本発明の抗体、またはイムノコンジュゲート、または二重特異性分子のうちの１つまたは組合せを含み得る。たとえば、本発明の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合するか、または補完的活性を有する、抗体（またはイムノコンジュゲートまたは二重特異性）の組合せを含み得る。
【０２４３】
本発明の医薬組成物はまた、組合せ療法において投与することができる、すなわち、他の薬剤と組み合わせることができる。たとえば、組合せ療法は、少なくとも１つの他の抗炎症剤または免疫抑制剤と組み合わせた、本発明の抗ＳＳＥＡ４抗体を含み得る。組合せ療法において使用することができる治療剤の例は、本発明の抗体の使用に関する節において、以下により詳細に記載されている。
【０２４４】
本明細書において使用されるとき、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性のある、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または上皮投与（たとえば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、イムノコンジュゲート（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕａｇｅ）、または二重特異性分子は、酸および化合物を不活性化し得る他の天然条件の作用から保護するために、それらの化合物に、材料がコーティングされてもよい。
【０２４５】
本発明の医薬化合物は、１つまたは複数の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望される生物学的活性を保持し、いずれの望ましくない毒物学的作用も付与しない塩を指す（たとえば、Ｂｅｒｇｅ，  Ｓ．  Ｍ．ら、（１９７７年）、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、６６巻：１〜１９頁を参照されたい）。そのような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、非毒性無機酸、たとえば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などに由来するもの、ならびに非毒性有機酸、たとえば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などに由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、アルカリ土類金属、たとえば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどに由来するもの、ならびに非毒性有機アミン、たとえば、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものが挙げられる。
【０２４６】
本発明の医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤を含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、たとえば、アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど、（２）油溶性抗酸化剤、たとえば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど、および（３）金属キレート化剤、たとえば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
【０２４７】
本発明の医薬組成物において用いられ得る、好適な水溶性および非水溶性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油、たとえば、オリーブ油、ならびに注射用有機エステル、たとえば、オレイン酸エチルが、挙げられる。適切な流動性は、たとえば、コーティング材料、たとえば、レシチンの使用によって、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。
【０２４８】
これらの組成物はまた、アジュバント、たとえば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤も含有し得る。微生物の存在の防止は、上記の滅菌手順によって、また様々な抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることの両方によって、確実にすることができる。等張剤、たとえば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、吸収を遅延する薬剤、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによって、注射用医薬品形態の長期吸収をもたらすことができる。
【０２４９】
薬学的に許容される担体としては、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質にそのような媒体および薬剤を使用することは、当技術分野において公知である。任意の従来的な媒体または薬剤は、活性化合物と不適合である場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるその使用が企図される。補助的な活性化合物もまた、組成物中に組み込まれ得る。
【０２５０】
治療用組成物は、典型的に、製造および保管の条件下において、無菌かつ安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の秩序構造として、製剤化され得る。担体は、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には、必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持することができる。多くの場合、組成物中に、等張剤、たとえば、糖、多価アルコール、たとえば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましいであろう。吸収を遅延する薬剤、たとえば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを、組成物中に含めることによって、注射用組成物の長期吸収をもたらすことができる。
【０２５１】
滅菌注射溶液は、必要に応じて、上記で列挙された成分のうち１つまたは組合せとともに、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を組み込み、続いて、滅菌精密濾過することによって、調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基礎分散媒および上記に列挙されたものから必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、調製される。滅菌注射溶液を調製するための滅菌粉末の場合には、調製の好ましい方法として、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）があり、これは、事前に滅菌濾過されたその溶液から、活性成分に加えて、任意のさらなる所望される成分の粉末が得られるものである。
【０２５２】
単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される対象および特定の投与様式に応じて変わるであろう。単一剤形を製造するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は一般に、治療効果をもたらす組成物の量であろう。一般に、１００％のうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせる活性成分約０．０１％から約９９％、好ましくは約０．１％から約７０％、最も好ましくは約１％から約３０％の範囲であろう。
投薬および投薬量
【０２５３】
投薬レジメンは、最適な所望される応答（たとえば、治療応答）をもたらすように調節される。たとえば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を、経時的に投与してもよく、または用量を、治療状況の緊急性によって示されるように比例的に低減もしくは増加させてもよい。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、非経口組成物を、投薬単位形態で製剤化することが、特に有利である。本明細書において使用されるとき、投薬単位形態とは、治療しようとする対象の単位投薬量として好適な物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望される治療効果をもたらすように計算された、所定の量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成しようとする特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体において感受性のそのような処置のための活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接左右される。
【０２５４】
抗体の投与のために、投薬量は、約０．０００１〜１００ｍｇ／宿主体重１ｋｇ、より通例的には、０．０１〜５ｍｇ／宿主体重１ｋｇの範囲である。たとえば、投薬量は、０．３ｍｇ／体重１ｋｇ、１ｍｇ／体重１ｋｇ、３ｍｇ／体重１ｋｇ、５ｍｇ／体重１ｋｇ、もしくは１０ｍｇ／体重１ｋｇ、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な処置レジメンは、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、または３〜６ヶ月に１回の投与を必要とする。本発明の抗ＰＤ−１抗体の好ましい投薬レジメンとしては、静脈内投与を介した１ｍｇ／体重１ｋｇまたは３ｍｇ／体重１ｋｇが挙げられ、抗体は、以下の投薬スケジュールのうちの１つを使用して与えられる：（ｉ）４週間に１回で、６回の投薬の後は、３ヶ月に１回、（ｉｉ）３週間に１回、（ｉｉｉ）３ｍｇ／体重１ｋｇで１回の後は、１ｍｇ／体重１ｋｇで３週間に１回。
【０２５５】
いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つまたはそれより多くのモノクローナル抗体が、同時に投与され、その場合には、投与されるそれぞれの抗体の投薬量は、示される範囲内に入る。抗体は、通常、複数の機会で投与される。単回投薬の間の間隔は、たとえば、週ごと、月ごと、３ヶ月ごと、または年ごとであり得る。間隔はまた、患者における標的抗原に対する抗体の血中レベルを測定することによって示されるように、不規則であってもよい。いくつかの方法では、投薬量は、約１〜１０００μｇ／ｍｌ、いくつかの方法では、約２５〜３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するよう調節される。
【０２５６】
あるいは、抗体は、持続放出製剤として投与されてもよく、その場合、必要とされる投与の頻度は、より低くなる。投薬量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変動する。一般に、ヒト抗体が、最も長い半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。投薬量および投与の頻度は、処置が予防的であるか治療的であるかに応じて変動し得る。予防的適用では、比較的低い投薬量が、比較的低い頻度間隔で、長期間にわたって投与される。一部の患者は、生涯、処置を受け続ける。治療的適用では、疾患の進行が低減または停止されるまで、好ましくは、患者が、疾患の症状の部分的または完全な緩和を示すまで、比較的短い間隔で、比較的高い投薬量が、必要とされることもある。その後、患者には、予防的レジメンが投与されてもよい。
【０２５７】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、患者にとって毒性とはならず、特定の患者、組成物、および投与様式に所望される治療応答を達成するのに有効な活性成分の量が得られるように、変動し得る。選択される投薬量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与の経路、投与の時間、用いられる特定の化合物の排出速度、処置の期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、処置を受けている患者の年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態、およびこれまでの病歴、ならびに医薬品の分野において周知の同等の因子を含む、様々な薬物動態因子に依存するであろう。
【０２５８】
本発明の抗ＳＳＥＡ４抗体の「治療有効投薬量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、または疾患苦痛による機能障害もしくは能力障害の予防をもたらす。たとえば、腫瘍の処置に関して、「治療有効投薬量」は、未処置の対象と比べて、好ましくは、細胞成長または腫瘍成長を、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約４０％、さらにより好ましくは、少なくとも約６０％、なおもさらにより好ましくは、少なくとも約８０％阻害する。化合物が腫瘍成長を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価することができる。あるいは、組成物のこの特性は、化合物が阻害する能力、そのような阻害を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、当業者に公知のアッセイによって試験することにより、評価することができる。治療有効量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させ得るか、またはそれ以外では対象における症状を緩和し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択された特定の組成物または投与経路などの因子に基づいて、そのような量を決定することができよう。
【０２５９】
別の態様では、本開示は、本明細書において記載されるように、抗ＳＳＥＡ４抗体を含む部分の薬学的キットを提供する。キットはまた、過剰増殖性疾患（たとえば、本明細書において記載されるがん）の処置において使用するための説明書をさらに含み得る。別の実施形態では、抗ＳＳＥＡ４抗体は、たとえば、ＰＤ−１調整剤および／またはＣＡＲ−Ｔ治療剤などとともに、単位剤形に共パッケージングされ得る。
【０２６０】
別の態様では、本開示は、任意の他の「細胞療法」または獲得免疫療法モダリティと組み合わせて投与することができる治療方法および組成物を提供する。例示的な獲得免疫療法モダリティは、たとえば、Ｍａｕｓら、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１４年、３２巻：１８９〜２２５頁に記載されており、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ−Ｔ）療法、抗ＰＤ−１療法、抗ＰＤ−Ｌ１療法、および抗ＣＴＬ４療法などを挙げることができる。
【０２６１】
本発明の組成物は、当技術分野において公知の様々な方法のうちの１つまたは複数を使用して、１つまたは複数の投与経路を介して投与することができる。当業者には明らかであろうが、投与経路および／または投与様式は、所望される結果に応じて変わるであろう。本発明の抗体の好ましい投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路、たとえば、注射もしくは注入によるものが挙げられる。「非経口投与」という語句は、本明細書において使用されるとき、経腸および局所投与以外の、通常、注射による投与様式を意味し、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内の注射および注入が挙げられる。
【０２６２】
あるいは、本発明の抗体は、非経口ではない経路、たとえば、局所、上皮、または粘膜投与経路を介して、たとえば、鼻腔内、経口、経膣、経直腸、舌下、または局所的に、投与することができる。
【０２６３】
インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤など、化合物を急速な放出から保護する担体を用いて、活性化合物を調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸など、生体分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多数の方法に、特許が付与されているか、またはそれらは、一般に、当業者に公知である。たとえば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．  Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照されたい。
【０２６４】
治療用組成物は、当技術分野において公知の医療デバイスを用いて投与することができる。たとえば、好ましい実施形態では、本発明の治療用組成物は、ニードルレス皮下注射デバイス、たとえば、米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスを用いて投与することができる。本発明において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で医薬を分配するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号、皮膚を通じて医薬を投与するための治療用デバイスを開示する米国特許第４，４８６，１９４号、正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号、連続的な薬物送達のための可変流動埋め込み可能注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号、マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号、および浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，１９６号が挙げられる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。多数の他のこのようなインプラント、送達システム、およびモジュールが、当業者に公知である。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な分布を確実にするように製剤化することができる。たとえば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多数の高度に親水性の化合物を排除する。本発明の治療用化合物が、ＢＢＢを通過することを確実にするために（所望される場合）、それらを、たとえば、リポソームに製剤化することができる。リポソームを製造する方法については、たとえば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号、および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に輸送され、したがって、標的化された薬物送達を強化する、１つまたは複数の部分を含み得る（たとえば、Ｖ．  Ｖ．  Ｒａｎａｄｅ、（１９８９年）、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２９巻：６８５頁を参照されたい）。例示的な標的化部分としては、葉酸またはビオチン（たとえば、Ｌｏｗらに対する米国特許第５，４１６，０１６号を参照されたい）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａら、（１９８８年）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．、１５３巻：１０３８頁）、抗体（Ｐ．  Ｇ．  Ｂｌｏｅｍａｎら、（１９９５年）、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、３５７巻：１４０頁、Ｍ．  Ｏｗａｉｓら、（１９９５年）、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、３９巻：１８０頁）、界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅら、（１９９５年）、Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１２３３巻：１３４頁）、ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒら、（１９９４年）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６９巻：９０９０頁）が挙げられ、Ｋ．  Ｋｅｉｎａｎｅｎ、Ｍ．Ｌ．  Ｌａｕｋｋａｎｅｎ、（１９９４年）、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、３４６巻：１２３頁、Ｊ．Ｊ．  Ｋｉｌｌｉｏｎ、Ｉ．Ｊ．  Ｆｉｄｌｅｒ、（１９９４年）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４巻：２７３頁も参照されたい。
本発明の使用および方法
【０２６６】
本発明の抗体、抗体組成物、および方法は、多数のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ関連での有用性を有する。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体である。たとえば、これらの分子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ  ｖｉｖｏで培養細胞に投与してもよく、または様々な状況において免疫性を強化するために、たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ヒト対象に投与してもよい。したがって、一態様では、本発明は、対象におけるＡＤＣＣ応答が修飾されるように、対象に、本発明の抗体またはその抗原結合性部分を投与することを含む、対象におけるＡＤＣＣ応答を修飾する方法を提供する。好ましくは、応答は、強化、刺激、または上方制御される。
【０２６７】
したがって、一実施形態では、本発明は、対象において腫瘍細胞の成長を阻害する方法であって、対象に、治療有効量の抗ＳＳＥＡ４抗体またはその抗原結合性部分を投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、抗体は、ヒト抗ＳＳＥＡ４抗体（たとえば、本明細書において記載されるヒト抗ＳＳＥＡ４抗体のうちのいずれか）である。追加または代替として、抗体は、キメラまたはヒト化抗ＳＳＥＡ４抗体であってもよい。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、本明細書において考察される治療用抗体の組合せは、薬学的に許容される担体中の単一の組成物として同時に、または薬学的に許容される担体中にそれぞれの抗体を有する別個の組成物として同時に、投与され得る。
腫瘍成長を阻害する抗体
【０２６９】
ＳＳＥＡ４またはその誘導体に特異的に結合する新規な組換え抗ＳＳＥＡ４抗体、および抗腫瘍免疫療法、たとえば、がんの処置におけるそれらの使用方法が、本明細書において提供される。がん抗原に結合すると、抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を誘導し、補体系を活性化し、腫瘍の成長を阻害することができる。
【０２７０】
一実施形態では、ＳＳＥＡ４は、脳腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、口腔腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、胆管腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞、子宮頸腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞を含む、様々な腫瘍細胞に高度に発現される。
【０２７１】
一実施形態では、モノクローナル抗ＳＳＥＡ４抗体は、ＳＳＥＡ４分子に特異的に結合する。
【０２７２】
一実施形態では、本明細書において記載される抗ＳＳＥＡ４抗体を含む組成物は、抗がん療法において有用である。具体的には、本実施形態は、様々な抗ＳＳＥＡ４結合部分において使用することができる、特定の抗ＳＳＥＡ４抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を提供する。具体的には、本発明は、ＳＳＥＡ４またはその誘導体に結合することができる、ヒト化もしくはキメラ抗体、またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２７３】
ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの方法によって規定される。
【０２７４】
ある特定の実施形態では、抗ＳＳＥＡ４抗体は、腫瘍成長を阻害する活性を有する。
【０２７５】
ある特定の実施形態では、単離された抗ＳＳＥＡ４抗体は、モノクローナル抗体である。ＳＳＥＡ４に対するモノクローナル抗体は、当技術分野における知識および技能に従って、作製することができる。たとえば、それは、試験対象に、ヒト胚性癌腫細胞を注射し、次いで、所望される配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離することによって、作製することができる。
【０２７６】
一実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、標的に結合すると、抗体が、ＣＤＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０２７７】
一実施形態では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、標的に結合すると、抗体が、ＡＤＣＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０２７８】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、またはその少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性の保存された配列相同体、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域、またはその少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性の保存された配列相同体を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２７９】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、またはその１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域、またはその１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２８０】
一実施形態では、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体を含む、重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域、またはその８０％またはそれより高く保存された配列相同体であって、さらに、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３、またはその５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を含む保存された配列相同体を含む、軽鎖可変領域をさらに含む。
【０２８１】
一実施形態では、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片。
【０２８２】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、配列番号１５、４５、５５、６５、７５、８５、１０５、１２５、１３５、１４５、１５５、および１７５から選択されるＬ−ＣＤＲ１、ならびに配列番号１６、４６、５６、６６、７６、８６、１０６、１２６、１３６、１４６、１５６、および１７６から選択されるＬ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号１７、４７、５７、６７、７７、８７、１０７、１２７、１３７、１４７、１５７、および１７７から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む、軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２８３】
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１３、２３、３３、４３、５３、６３、７３、８３、１０３、１２３、１３３、１４３、１５３、および１７３から選択される重鎖可変領域、またはその１０個未満のアミノ酸置換を含む保存された配列相同体であって、さらに、それぞれ、配列番号１０、４０、５０、６０、７０、８０、１００、１２０、１３０、１４０、１５０、および１７０から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号１１、４１、５１、６１、７１、８１、１０１、１２１、１３１、１４１、１５１、および１７１から選択されるＨ−ＣＤＲ２、配列番号１２、４２、５２、６２、７２、８２、１０２、１２２、１３２、１４２、１５２、および１７２から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域、ならびに（ｉｉ）配列番号１８、２８、３８、４８、５８、６８、７８、８８、１０８、１２８、１３８、１４８、１５８、および１７８から選択される軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２８４】
一態様では、本開示は、表２Ａ〜２Ｄにおいてそれぞれのバリアントで記載されるように、それぞれの対応するＶＨ、ＶＬ、ならびにそれぞれのＨ−ＣＤＲおよびＬ−ＣＤＲを含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【０２８５】
本明細書において使用されるとき、相同体または保存された配列相同体は、本明細書において開示される参照配列と比較して、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する、かつ／または参照配列と比較して、４０個、３９個、３８個、３７個、３６個、３５個、３４個、３３個、３２個、３１個、３０個、２９個、２８個、２７個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、もしくは１個未満またはそれに等しいアミノ酸置換を有する、それぞれの対応するＶＨ、ＶＬ、ならびにそれぞれのＨ−ＣＤＲおよびＬ−ＣＤＲを含む、ＳＳＥＡ４を標的とする単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を含み得る。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、抗ＳＳＥＡ４抗体は、モノクローナル抗体である。
【０２８７】
ある特定の実施形態では、抗ＳＳＥＡ４抗体は、キメラまたはヒト化抗体である。
【０２８８】
一態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列またはヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
【０２８９】
さらなる態様では、重鎖可変ドメイン、抗体、または抗原結合性断片は、少なくともＣＨ１ドメインをさらに含む。
【０２９０】
さらなる態様では、重鎖可変ドメイン、抗体、または抗原結合性断片は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインをさらに含む。
【０２９１】
さらなる態様では、可変領域軽鎖、抗体、または抗体断片は、ＣＬドメインをさらに含む。
【０２９２】
さらなる態様では、抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＬドメインをさらに含む。
【０２９３】
さらなる特定の態様では、抗体は、ヒトまたはマウス定常ドメインをさらに含む。
【０２９４】
なおもさらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
【０２９５】
さらなる態様では、核酸は、前述の抗ＳＳＥＡ４抗体のいずれかをコードする核酸の発現に好適なベクターをさらに含む。なおもさらなる特定の態様では、ベクターは、核酸の発現に好適な宿主細胞をさらに含む。なおもさらなる特定の態様では、宿主細胞は、真核生物細胞または原核生物細胞である。特定の態様では、真核生物細胞は、哺乳動物細胞、たとえば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）である。別の態様では、細胞は、酵母細胞である。
【０２９６】
ある実施形態では、本発明は、抗ＳＳＥＡ４抗体またはその抗原結合性断片を作製するプロセスであって、発現に好適な形態で、前述の抗ＳＳＥＡ４抗体または抗原結合性断片のいずれかをコードする核酸を含む宿主細胞を、そのような抗体または断片を産生するのに好適な条件下において、培養すること、ならびに抗体または断片を回収することを含む、プロセスを提供する。
【０２９７】
ある実施形態では、本発明は、本明細書において提供される抗ＳＳＥＡ４抗体またはその抗原結合性断片と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む、組成物を提供する。
【０２９８】
一態様では、本開示は、ＳＳＥＡ４に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、標的に結合すると、抗体が、ＡＤＣＣおよびＣＤＣ誘導活性を有する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０２９９】
本明細書において記載される抗体のいずれかは、全長抗体またはその抗原結合性断片であり得る。一部の例では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、または一本鎖Ｆｖ断片である。一部の例では、抗原結合性断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、または一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。一部の例では、単離された抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体である。
【０３００】
本明細書において記載される抗体のいずれかは、
ａ）組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体断片、二重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、ＩｇＧ抗体、もしくは抗体の誘導体であること、
ｂ）ヒト、マウス、ヒト化、もしくはキメラ抗体、抗体の抗原結合性断片、もしくは誘導体であること、
ｃ）一本鎖抗体断片、マルチボディ、Ｆａｂ断片、ならびに／またはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤアイソタイプ、および／もしくはそのサブクラスの免疫グロブリンであること、
ｄ）以下の特徴：（ｉ）がん細胞のＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを媒介すること、（ｉｉ）がん細胞のアポトーシスを誘導および／もしくは促進すること、（ｉｉｉ）がん細胞の標的細胞の増殖を阻害すること、（ｉｖ）がん細胞のファゴサイトーシスを誘導および／もしくは促進すること、ならびに／または（ｖ）細胞毒性剤の放出を誘導および／もしくは促進することのうちの１つまたは複数を有すること、
ｅ）腫瘍特異的炭水化物抗原である、腫瘍関連炭水化物抗原に特異的に結合すること、
ｆ）非がん細胞、非腫瘍細胞、良性がん細胞、および／もしくは良性腫瘍細胞に発現される抗原には結合しないこと、ならびに／または
ｇ）がん幹細胞および通常のがん細胞に発現される腫瘍関連炭水化物抗原に特異的に結合すること、のうちの１つまたは複数の特徴を有する。
【０３０１】
抗体は、好適には、高い親和性（低いＫＤ値）でその標的エピトープに結合し、好ましくは、ＫＤは、ナノモル範囲またはそれより低い。親和性は、当技術分野において公知の方法、たとえば、表面プラズモン共鳴などによって、測定することができる。
【０３０２】
ある特定の実施形態では、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体または抗原結合性断片は、１つまたは複数の細胞毒性剤、化学療法剤、または治療用抗体との組合せによって、腫瘍成長を阻害または低減させる。
【０３０３】
ある実施形態では、本発明は、スペーサーによって、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合性断片を含むがこれに限定されないＴ細胞結合分子に融合または連結された、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体またはその抗原結合性断片を含む、二重特異性抗体の組成物を提供する。
【０３０４】
別の実施形態では、本発明は、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体またはその抗原結合性断片を含む細胞外ドメイン、ＣＡＲを細胞膜に固定する膜貫通ドメイン、およびＣＡＲがＳＳＥＡ４に結合すると、免疫細胞に活性化シグナルを伝送する細胞内ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の組成物を提供する。ＣＡＲは、ＳＳＥＡ４を発現するがん細胞を標的とし、それらを殺滅させるように、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびＮＫＴ細胞を含むがこれらに限定されない免疫細胞に、遺伝的／人工的に発現させることができる。
【０３０５】
本発明を、以下の実施例によってさらに例証するが、これらは、さらなる制限と解釈されるものではない。本出願を通じて引用される、すべての図面、ならびにすべての参考文献、特許、および公開特許出願の内容は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０３０６】
（実施例１）
様々ながん細胞株におけるグロボ系列スフィンゴ糖脂質の発現の検出
脳腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、口腔腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、胆管腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、腎臓腫瘍細胞、子宮頸腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞を含む、様々ながん細胞株（表４）の細胞（１×１０５個）を、氷上で３０分間、５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液（１％ＦＢＳを含むＰＢＳ溶液）中、０．５μｇのＡｌｅｘａ  Ｆｌｏｕｒ  ４８８にコンジュゲートした抗ＳＳＥＡ３  ｍＡｂ抗体（ＭＣ−６３１）、抗ＳＳＥＡ４  ｍＡｂ抗体（ＭＣ８１３−７０）、またはアロフィコシアニン（ＡＰＣ）にコンジュゲートした抗ＧｌｏｂｏＨ  ｍＡｂ抗体（ＶＫ９、Ｐｈｉｌｉｐ  Ｏ．  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋより寄贈）で、染色した。レクチン染色のために、細胞を、氷上で３０分間、ビオチン化したレクチンを含有するレクチン結合緩衝液［１％ＢＳＡ、０．５×Ｃａｒｂｏ−Ｆｒｅｅブロッキング緩衝液（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＣａＣｌ２］中でインキュベートした。レクチン結合緩衝液で２回洗浄した後、細胞を、ストレプトアビジン−ＡＰＣ（ＦＡＣＳ緩衝液中で１：５００希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともにインキュベートした。２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を、１μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁させ、分析に供した。データ取得は、ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてＦＡＣＳＣａｎｔｏ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で行い、データ分析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用して行った。ＰＩ−生細胞を、分析のためにゲーティングした。メタノール洗浄のために、細胞を、室温で１５分間、ＰＢＳ中４％（重量／体積）パラホルムアルデヒドで洗浄し、固定した後、１０分間メタノール中でインキュベートし、その後に特異的抗体で染色した。
（実施例２）
例示的なモノクローナル抗ＳＳＥＡ４抗体を生成および産生させるための代表的な手法
【０３０７】
ＳＳＥＡ４に特異的および／またはＳＳＥＡ４を標的とする、モノクローナル抗体を生成するために、ハイブリドーマ技術を利用した。たとえば、６週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｂｉｏｌａｓｃｏ、Ｔａｉｗａｎ）に、１０７個のＮＣＣＩＴ細胞を、２週間間隔で３回、腹腔内注射した。３回目の免疫処置の１週間後に、血清を採取し、抗ＳＳＥＡ４  ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ抗体の力価を、ＥＬＩＳＡによって測定した。ＥＬＩＳＡは、０．１μｇのＢＳＡにコンジュゲートしたＳＳＥＡ４でコーティングした、９６ウェルのアッセイプレートを使用することによって行った。１週間後に、融合基準を満たしたマウスには、次いで、１０７個のＮＣＣＩＴ細胞で最後の追加免疫処置を行った。最後の追加免疫処置の３日後に、マウスを、殺処分し、これらのマウスに由来する脾臓細胞を、ハイブリドーマの生成に使用した。ＢＳＡにコンジュゲートしたＳＳＥＡ４に陽性であり、ＢＳＡに陰性であったハイブリドーマクローンを、さらなるサブクローニングに選択して、すべてのハイブリドーマクローンが、単一の細胞に由来することを確実にした。１回の例示的な実行で、合計１０個のＳＳＥＡ４陽性ハイブリドーマクローンを、５，０００個を上回るクローンから選択した。これらのクローンのうち、Ａｂ６のみがＩｇＧであり、他はＩｇＭ抗体である。Ａｂ６のサブクラスを、さらに、抗体アイソタイプ判定キットによって判定し、その結果、Ａｂ６のアイソタイプが、ＩｇＧ３、カッパであることが示された。シーケンシングの後に、Ａｂ６のマウス可変領域（ＶＨおよびＶＬ）を、ＰＣＲ増幅し、ヒトＩｇＧ１の定常領域（ＣＨおよびＣＬ）を含む発現ベクターにサブクローニングして、ヒト−マウスキメラ抗体であるｃｈＡｂ６を生成した。
（実施例３）
ＥＬＩＳＡによる、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の、ＳＳＥＡ４への結合
例示的なキメラおよびヒト化抗ＳＳＥＡ４抗体のＳＳＥＡ４への結合親和性を、ＥＬＩＳＡによって判定した。簡単に述べると、抗体を、示されている濃度でＰＢＳ中に希釈し、次いで、９６ウェルのアッセイプレートにおいて、室温で１時間、ＢＳＡにコンジュゲートしたＳＳＥＡ４とともにインキュベートさせた。洗浄サイクルの後に、ＨＲＰにコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＰＢＳ中に１：１０，０００希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を、ウェルに添加し、さらに１時間、室温でインキュベートした。洗浄サイクルの後に、ＴＭＢ  ＥＬＩＳＡ基質（Ａｂｃａｍ）を、顕色のために添加し、等量の２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を添加することによって反応を停止させた。光学密度４５０ｎｍでの吸光度を読み取り、Ｍ５  ＥＬＩＳＡリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅ）によって記録した。（図６Ａ〜６Ｄ）
（実施例４）
ｃｈＡｂ６の膵臓がん細胞株ＨＰＡＣへの結合親和性
【０３０８】
フローサイトメトリー分析のために、５×１０５個のＨＰＡＣ細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中１％のＦＢＳ）中で、４℃で３０分間、示されている濃度のｃｈＡｂ６とともにインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液によって洗浄した後、細胞を、次いで、ＰＥにコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＦＡＣＳ緩衝液中に１：２５０希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）とともに、４℃で３０分間インキュベートした。抗ＳＳＥＡ４抗体の細胞への結合を、次いで、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーターによって分析した。（図１０Ａ〜１０Ｂ）
（実施例５）
例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の結合特異性
【０３０９】
例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の結合特異性を、１５２個の化学的に合成したグリカンを用いてグリカンマイクロアレイを使用することによって分析した（図７）。簡単に述べると、グリカンマイクロアレイを、３７℃で１時間、示されている濃度の抗体とともにインキュベートした。ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０）によって洗浄した後、グリカンマイクロアレイを、次いで、室温で１時間、ＦＩＴＣで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体とともにインキュベートした。さらなる洗浄サイクルの後に、グリカンマイクロアレイを空気乾燥させ、マイクロアレイ蛍光チップリーダー（４０００Ｂ、Ｇｅｎｅｐｉｘ）によって、６３５ｎｍでスキャンした。データを、次いで、ＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｒｏ−６．０（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）によって分析した。
（実施例６）
ｃｈＡｂ６の、膵臓腫瘍細胞株ＨＰＡＣに対する抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性
【０３１０】
カルセインＡＭで標識したＨＰＡＣ細胞、すなわち、高度なＳＳＥＡ４発現を有するヒト膵臓腫瘍細胞株を、まず、ＰＢＭＣと混合し、抗ＳＳＥＡ４抗体を、次いで、示されている濃度で添加し、３７℃で４時間インキュベートさせた。インキュベーションの後に、培養上清を採取し、励起４８５ｎｍ／放出５３５ｎｍで検出し、細胞の細胞毒性の割合を、（実験値−自発的溶解）／（最大溶解−自発的溶解）×１００として計算した。（図１２）
（実施例７）
ｃｈＡｂ６の、膵臓腫瘍細胞株ＨＰＡＣに対する補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性
【０３１１】
ＣＤＣアッセイのために、２×１０５個のＨＰＡＣ細胞を、３７℃で１時間、１５％のヒト血清および示される濃度の抗ＳＳＥＡ４抗体とともにインキュベートした。インキュベーションの後に、死細胞を、室温で５分間、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）によって染色し、次いで、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーターによって計数および分析した（図１５Ａ）。
（実施例８）
ＨＰＡＣ異種移植片モデルにおける例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
【０３１２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の抗腫瘍効果を評価するために、８週齢の雄ＣＢ１７．ＳＣＩＤマウス（Ｂｉｏｌａｓｃｏ、Ｔａｉｗａｎ）に、５×１０６個のＨＰＡＣ細胞を皮下注射した。腫瘍が形成され、体積が５０〜１００ｍｍ３に達する間に、ビヒクルまたは例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体（２０ｍｐｋ）を、１週間に２回、尾静脈に静脈内注射した。ノギスを用いて垂直方向の腫瘍直径、長さ（Ｌ）、および幅（Ｗ）を測定することによって、腫瘍の成長を、１週間に２回、モニタリングした。腫瘍の体積（Ｖ）を、式Ｖ＝ＬＷ２／２によって計算した。２４日目（移植の２４日後）に、マウスを、殺処分して、腫瘍の重量を測定した。すべての結果は、平均±標準偏差として示し（それぞれの群について、ｎ＝３匹）、スチューデントｔ検定を、統計学的分析に使用した。（図１６Ａ〜１６Ｂ）
（実施例９）
例示的なｃｈＡｂ６を使用することによる、腫瘍組織に発現されるＳＳＥＡ４の検出
【０３１３】
免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）を用いて、腫瘍組織におけるＳＳＥＡ４の存在を検出した（図１９）。簡単に述べると、ＨＰＡＣ異種移植片腫瘍の凍結切片を、まず、室温で１０分間、１０％中性緩衝ホルマリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で固定し、内在性ペルオキシダーゼ活性を、室温で１５分間、切片をｄｄＨ２Ｏ中０．３％過酸化水素／０．１％アジ化ナトリウムに浸漬させることによって、停止させた。洗浄サイクル（ＰＢＳ、３回、それぞれ５分間）の後に、切片を、４℃で一晩、２μｇ／ｍＬのＦＩＴＣで標識したｃｈＡｂ６またはヒトＩｇＧ１、カッパとともにインキュベートした。一晩インキュベートした後、切片を、次いで、洗浄し、室温で１時間、ＨＲＰで標識したヤギ抗ＦＩＴＣ抗体（１：２００、ＫＰＬ）とともにインキュベートした。さらなる洗浄サイクルの後に、ＤＡＢ基質（Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、顕色に使用し、ヘマトキシリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、対比染色に使用した。
（実施例１０）
障害の処置
【０３１４】
がんの危険性があるかまたはがんを罹患する対象は、免疫応答の増大を必要とし得、可溶性形態の本発明のＳＳＥＡ４抗体での処置が有益であろう。最も一般的には、抗体は、外来環境において、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で、緩徐な静脈内（ＩＶ）注入によって、週ごとの投与により投与される。アンタゴニストの適切な治療有効用量は、処置担当医師によって選択され、およそ１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、および５００μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの範囲となるであろう。本発明のＳＳＥＡ４抗体は、１ヶ月に１回またはそれより低い頻度で投与されることが想定される。処置の期間は、１ヶ月から数年間の範囲に及び得る。
【０３１５】
ヒトにおける抗体の臨床上の有効性を試験するために、がんを有する個体を特定し、ランダムに処置群に分けた。処置群には、プラセボ群、およびＳＳＥＡ４抗体（異なる用量）での処置を受ける１〜３個の群が含まれる。個体は、１〜３年間、将来的に追跡される。処置を受けている個体は、改善を示すことが想定される。
（実施例１１）
表面プラズモン共鳴による例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の動態結合アッセイ
【０３１６】
例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の動態結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００システムを使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析した。まず、ビオチン化したＳＳＥＡ４を、Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  ＳＡに固定した。代表的な抗ＳＳＥＡ４抗体ｈＡｂ６−３．１、ｈＡｂ６−３、およびｃｈＡｂ６を、泳動緩衝液（１×ＰＢＳ緩衝液、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有、ｐＨ７．４）中に連続希釈し、１００、３３．３、１１．１、３．７、１．２ｎＭの濃度にした後、単一サイクルモードを使用して、３０ｕＬ／分で５分間、注射した。パラメーターの分析を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアによって行った。（図５）
（実施例１２）
フローサイトメトリー分析による、例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体の、細胞への結合
【０３１７】
フローサイトメトリー分析のために、３×１０５個のがん細胞、たとえば、乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ７を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ中１％のＦＢＳ）中で、４℃で３０分間、示されている濃度の例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体とともにインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液によって洗浄した後、細胞を、次いで、ＰＥまたはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＦＡＣＳ緩衝液中に１：２５０〜１：４００希釈、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）とともに、４℃で３０分間インキュベートした。抗ＳＳＥＡ４抗体の細胞への結合を、次いで、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーターによって分析した。（図９Ａ〜９Ｂおよび図１１Ａ〜１１Ｆを参照されたい）
（実施例１３）
例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の、乳がん細胞株および膵臓がん細胞株に対する抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性
【０３１８】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ７、およびＨＰＡＣ細胞を、３０分間、２０ｕＭのカルセインＡＭで標識した。洗浄した後、カルセインＡＭで標識した標的細胞（１×１０４個の細胞／ウェル）を、新しく単離したヒトＰＢＭＣ（２．５×１０５個の細胞／ウェル、Ｅ／Ｔ比＝２５／１）とともにコインキュベートし、連続希釈した抗ＳＳＥＡ４抗体ありまたはなしで４時間処置した。カルセインＡＭの放出を、Ｍ５  ＥＬＩＳＡリーダー（励起４８５、放出５２０）によって検出し、相対的な細胞毒性の評価に使用した。（図１３、図１４Ａ〜１４Ｂ）
（実施例１４）
例示的なキメラおよびヒト化Ａｂ６の、乳がん細胞株および膵臓がん細胞株に対する補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性
【０３１９】
ＨＰＡＣについては、２×１０５個の細胞を、３７℃で１時間、１５％のヒト血清および示されている濃度の抗ＳＳＥＡ４抗体とともにインキュベートした。インキュベーションの後に、死細胞を、室温で５分間、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）によって染色し、次いで、ＢＤ  ＦＡＣＳＶｅｒｓｅフローサイトメーターによって計数および分析した。（図１５Ａ）
【０３２０】
ＭＣＦ７については、細胞を、まず、３０分間、２０ｕＭのカルセインＡＭで標識した。洗浄した後に、カルセインＡＭで標識した標的細胞（アッセイ当たり１×１０４個の細胞）を、１０％のヒト血清とともにコインキュベートし、３７℃で２時間、示されている濃度の抗ＳＳＥＡ４抗体ありまたはなしで、処置した。カルセインＡＭの放出を、Ｍ５  ＥＬＩＳＡリーダー（励起４８５、放出５２０）によって検出し、相対的な細胞毒性の評価に使用した。（図１５Ｂ）
（実施例１５）
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片モデルにおける抗ＳＳＥＡ４抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
【０３２１】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗ＳＳＥＡ４抗体の抗腫瘍効果を評価するために、８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（ＮＬＡＣ、Ｔａｉｗａｎ）に、５×１０６個のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、同所的に注射した。腫瘍が形成され、体積が１００〜１５０ｍｍ３に達する間に、ビヒクル、ハーセプチン、または抗ＳＳＥＡ４抗体（２０ｍｐｋ）を、１週間に２回、尾静脈に静脈内注射した。ノギスを用いて垂直方向の腫瘍直径、長さ（Ｌ）、および幅（Ｗ）を測定することによって、腫瘍の成長を、１週間に２回、モニタリングした。腫瘍の体積（Ｖ）を、式Ｖ＝ＬＷ２／２によって計算した。すべての結果は、平均±標準誤差として示し（それぞれの群について、ｎ＝８匹）、スチューデントｔ検定を、統計学的分析に使用した。（図１７）
（実施例１６）
ＭＣＦ７異種移植片モデルにおける抗ＳＳＥＡ４抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍効果
【０３２２】
ＭＣＦ７異種移植片モデルを構築するために、１日目に、雌Ｂａｌｂ／ｃヌードマウス（８週齢、Ｂｉｏｌａｓｃｏ、Ｔａｉｗａｎから購入した）に、１７−ベータ−エストラジオールペレットを皮下に埋め込んだ。５００万個のＭＣＦ７細胞を、Ｍａｔｒｉｇｅｌと混合し、次いで、乳房脂肪パッドに同所的に注射した。腫瘍が形成され、体積が１５０〜２００ｍｍ３に達する間に、ビヒクルまたはｈＡｂ６−３．１（示されている用量で）を、１週間に２回、尾静脈に静脈内注射した。ノギスを用いて垂直方向の腫瘍直径、長さ（Ｌ）、および幅（Ｗ）を測定することによって、腫瘍の成長を、１週間に２回、モニタリングした。腫瘍の体積（Ｖ）を、式Ｖ＝ＬＷ２／２によって計算した。すべての結果は、平均±標準誤差として示し（それぞれの群について、ｎ＝７匹）、スチューデントｔ検定を、統計学的分析に使用した。（図１８）
（実施例１７）
糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の開発のための例示的な手法
糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１の産生
【０３２３】
例示的な抗ＳＳＥＡ４抗体ｈＡｂ６−３．１のグリカンを、エンド−ベータ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼおよびフコシダーゼとともにコインキュベートすることにより、加水分解して、モノ−ＧｌｃＮＡｃ形態にした。糖鎖操作抗体を、エンド−ベータ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ変異体の存在下において、ユニバーサルグリカンを、モノ−ＧｌｃＮＡｃにグリコシル基転移させることによって産生させ、ｒプロテインＡクロマトグラフィーの精製を行った。糖鎖操作Ａｂ６−３．１の特徴付けを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびフローサイトメトリー分析（それぞれ、図２０および２１）によって行った。
糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１のｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能性アッセイ
【０３２４】
糖鎖操作は、抗体の、免疫細胞に発現されるＦｃガンマ受容体への結合親和性を向上させることが示されており、これは、免疫系の保護機能に寄与する。本発明者らは、糖鎖操作ｈＡｂ６−３．１のＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡ結合およびＡＤＣＣ機能（抗体依存性細胞媒介性細胞毒性）を、以下の通り示した。
Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ結合
【０３２５】
Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡを、ＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、示されている濃度の天然および糖鎖操作抗体とともにインキュベートした。結合活性を、次いで、ＨＲＰにコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ  Ｈ＋ＬおよびＴＭＢ基質を使用することによって判定した。（図２２）
ＡＤＣＣアッセイ
【０３２６】
カルセインＡＭで標識したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、すなわち、高度なＳＳＥＡ−４発現を有するヒトトリプルネガティブ乳がん細胞株を、まず、ＰＢＭＣと混合し、天然または糖鎖操作抗ＳＳＥＡ−４抗体を、次いで、示されている濃度で添加し、３７℃で４時間、インキュベートさせた。インキュベーションの後に、培養上清を採取し、励起４８５／放出５３５で検出し、細胞の細胞毒性の割合を、（実験値−自発的溶解）／（最大溶解−自発的溶解）×１００として計算した。（図２３）
【０３２７】
抗ＳＳＥＡ−４抗体の糖鎖操作は、抗体のＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡへの結合を有意に強化し、天然の抗体と比較して、改善された抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性をもたらした。
（実施例１８）
抗体−薬物コンジュゲーション複合体の開発／形成のための代表的な手法
【０３２８】
抗体−薬物のコンジュゲーションには、いくつかの化学的アプローチ、たとえば、リシンおよびシステイン残基におけるチオール−マレイミド形成（Ｌｅｗｉｓ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓら、２００８年）、セレノシステイン残基におけるセレノール−マレイミド形成（Ｈｏｆｅｒら、２００９年）、修飾Ｆｃグリカンへのオキシム（ｏｘｍｉｅ）ライゲーション（Ｚｈｏｕら、２０１４年）、クリックケミストリー（Ａｘｕｐら、２０１２年）、ホルミルグリシン（ｆｏｍｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）残基へのＨｙｄｒａｚｉｎｏ−ｉｓｏ−Ｐｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒライゲーション（Ｄｒａｋｅら、２０１４年）が、利用可能であった。本発明者らは、代表的な修飾Ｆｃグリカンへのオキシムライゲーションの使用を、例示的なＡＤＣ形成アプローチとして適用した。抗体上の修飾グリカンとペイロード化合物Ａ１（アルコキシアミン切断性リンカーを有する細胞毒性薬物であるＭＭＡＥ、分子量：１３４８．７２６５）との間のオキシムライゲーションを、２５℃で、１００ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ４．５中、抗体（８ｍｇ／ｍＬ）およびＡ０１（３ｍＭ）の存在下において行った。反応を、４８時間インキュベートし、生成物を、ｒプロテインＡ、Ｃａｐｔｏ  Ｓ、およびＣａｐｔｏ  Ｑカラムによって、逐次的に精製した。ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１複合体形成の結果を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した（図２４Ａ〜Ｂ）。
（実施例１９）
フローサイトメトリーによる、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の、ＳＳＥＡ４を発現する細胞への結合能力
【０３２９】
ＳＳＥＡ４を発現する細胞株であるＭＣＦ７およびＳＫＯＶ３を、ＰＢＳで洗浄し、１×１０５個の細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（２％ＦＢＳおよび０．１％ＮａＮ３を含有するＰＢＳ）中、１０ｕｇ／ｍＬのｈＡｂ６−３．１またはｈＡｂ６−３．１−Ａ０１とともに、氷上で１時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を、Ａｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ４８８で標識した抗ヒトＩｇＧ抗体で染色し、氷上で０．５時間インキュベートした。抗体の細胞結合のシグナルを、フローサイトメトリーによって検出した（図ＸＸ１１ＡＢ）。結果として、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の、ＳＳＥＡ４を発現する細胞への結合特性は、親抗体ｈＡｂ６−３．１と類似であることが示された（図２５Ａ〜Ｂ）。
（実施例２０）
乳がん細胞株におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
【０３３０】
ＳＳＥＡ４を発現する乳がん細胞株ＭＣＦ７を、９６ウェルの白色プレートに播種し（１×１０３個の細胞／ウェル）、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を、連続希釈したｈＡｂ６−３．１またはｈＡｂ６−３．１−Ａ０１で処置し、さらに５日間インキュベートした。処置の後に、培養培地を除去し、細胞を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）で処置した。発光シグナルを、１０分間のインキュベーションの後に、ＥＬＩＳＡリーダー（Ｍ５）によって検出し、細胞生存率を計算した（未処置細胞のシグナルを、生存率１００％として設定した）。
【０３３１】
図２６に示されるように、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１は、用量依存性様式で、細胞毒性を示した。ＡＤＣは、シグモイド曲線を示し、標的ＳＳＥＡ−４への特異的な結合を示す。対照的に、ｈＡｂ６−３．１単独では、それほどの細胞毒性は有さない。この結果は、ＡＤＣが、特異性および細胞毒性の両方の利点を達成することを示す。細胞毒性の保存により、期待される治療効果が達成され、同時に、特異性により、がん細胞が標的とされ、正常細胞には影響が及ばず、それによって副作用が最小限に抑えられるであろう。
（実施例２１）
卵巣がん細胞株におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
【０３３２】
ＳＳＥＡ４を発現する卵巣がん細胞株ＳＫＯＶ３を、ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１の有効性を示すために適用した。細胞毒性アッセイの方法は、実施例２０に記載されていた。ｈＡｂ６−３．１−Ａ０１は、ナノモルレベルで、ＳＫＯＶ３に対する細胞毒性のさらに強力な効果を示した。
【０３３３】
特定されたすべての特許および他の刊行物は、たとえば、本発明と併せて使用することができる、そのような刊行物に記載されている手法を説明および開示する目的で、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。これらの刊行物は、本出願の出願日よりも前の開示のために提供されているにすぎない。この点に関して、先行発明により、または任意の他の理由で、本発明者らがそのような開示に先立つ権利を有さないことを認めると解釈されるものは存在しない。これらの文書の日付に関する陳述または内容に関する描写は、本出願者らに利用可能な情報に基づくものであり、これらの文書の日付または内容の正確さに関して何らかの承認を構成するものではない。
【０３３４】
別途定義されない限り、本明細書に使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。いずれの公知の方法、デバイス、および材料も、本発明の実施または試験において使用することができるが、これに関する方法、デバイス、および材料が、本明細書において記載されている。
【図１Ａ】
2020500003.tif 000031
【図１Ｂ】
2020500003.tif 000032
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2020500003.tif 000039
【図６Ａ】
2020500003.tif 000040
【図６Ｂ】
2020500003.tif 000041
【図６Ｃ】
2020500003.tif 000042
【図６Ｄ】
2020500003.tif 000043
【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１２】
2020500003.tif 000054
【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
2020500003.tif 000060
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020500003.tif 000074
2020500003.tif 000075
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