(57)【要約】本出願は、標的細胞上の抗原に特異的に結合する標的細胞結合ドメインと、免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインとを含む、キメラ抗体免疫細胞エンゲージャーを提供する。医薬組成物、キット及び治療方法もまた、提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む標的細胞結合ドメイン；及び
（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２】
前記ｓｄＡｂが、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である、請求項１に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３】
前記ｓｄＡｂがＶＨＨフラグメントである、請求項１または請求項２に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項４】
前記標的細胞が腫瘍細胞である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項５】
前記標的細胞がＢ細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項６】
前記標的細胞結合ドメインが、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項７】
前記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂが、以下のいずれか１つを含む、請求項６に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー：
（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または
（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。
【請求項８】
前記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂが、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項９】
前記標的細胞結合ドメインが、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂが、以下のいずれか１つを含む、請求項９に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー：
（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；
（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または
（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂが、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１２】
前記標的細胞結合ドメインが、第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１３】
前記第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して前記第２のｓｄＡｂに融合させる、請求項１２に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１４】
前記第１の標的細胞及び前記第２の標的細胞が同じ細胞である、請求項１２または請求項１３に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１５】
前記第１の標的細胞及び前記第２の標的細胞が異なる細胞である、請求項１２または請求項１３に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１６】
前記第１の抗原と前記第２の抗原が同じである、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１７】
前記第１のｓｄＡｂ及び前記第２のｓｄＡｂが、同じエピトープに特異的に結合する、
請求項１６に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１８】
前記第１のｓｄＡｂ及び前記第２のｓｄＡｂが、異なるエピトープに特異的に結合する、請求項１６に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項１９】
前記標的細胞結合ドメインが、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む、請求項１７または１８に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２０】
前記第１の抗原と前記第２の抗原が異なる、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２１】
前記標的細胞結合ドメインが、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む、請求項２０に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２２】
前記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、前記抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＮ末端に融合させる、請求項２１に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２３】
前記抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、前記抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる、請求項２１に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２４】
（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む標的細胞結合ドメイン；及び
（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２５】
前記抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖが、配列番号１０１または配列番号１０２のアミノ酸配列を有する、請求項２４に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２６】
前記標的細胞結合ドメインを、前記免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２７】
前記標的細胞結合ドメインを、前記免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２８】
前記標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカーを介して前記免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項２９】
前記免疫エフェクター細胞がＴ細胞である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３０】
前記免疫エフェクター細胞がＮＫ細胞である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３１】
前記免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の前記抗原結合断片が、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３２】
前記免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の前記抗原結合断片が、マウス、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３３】
前記免疫エフェクター細胞結合ドメインが、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３４】
前記抗ＣＤ３抗原結合断片が、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する、請求項３３に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ３抗原結合断片が、以下のいずれか１つを含む、請求項３４に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ３抗原結合断片が、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項３５に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーをコードする核酸配列を有する、単離された核酸。
【請求項３８】
請求項３７に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項３９】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項４０】
有効量の請求項３９に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、前記個体の疾患の治療方法。
【請求項４１】
前記疾患がＢ細胞関連障害である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患ががんである、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記がんが多発性骨髄腫である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患が自己免疫疾患である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記疾患が全身性エリテマトーデスである、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年６月２７日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０９０３４３号の優先的利益を主張し、その各々の内容はその全体を参照として本明細書に援用する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルに関する以下の提出内容は、その全体を参照として本明細書に援用する：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７６１４２２０００４４１ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ、記録日：２０１８年６月２７日、サイズ：３８８ＫＢ）。
【０００３】
本出願の技術分野
本発明は、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー、ならびにその調製方法及び使用方法に関する。本出願はさらに、がん療法などのヒト療法に有用な組成物及び方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
本出願の背景
免疫療法は、がん研究の中でも急速に発展している分野である。抗体療法は、ヒトの病気、特にがんを治療するための重要な医学的アプローチである。高い特異性により、二重特異性抗体は２つの異なる抗原を結び付けることができるため、治療薬として大きな可能性を秘めている。二重特異性抗体は、がん免疫療法における幅広い用途に利用可能である。例えば、二重特異性抗体は、細胞傷害性細胞と、破壊対象の標的細胞、例えば腫瘍細胞に同時に結合する（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３受容体を介して）ように設計されている。
【０００５】
Ｔ細胞受容体複合体の一部として、ＣＤ３複合体は、成熟ヒトＴ細胞、胸腺、及びナチュラルキラー細胞のサブセットにおいて発現する抗原である。ヒトでは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体は、ＴＣＲα及びβ鎖を中心成分として含んでいる。ＴＣＲ複合体のアクセサリ成分には、γ鎖、δ鎖、２つのε鎖、及び２つのξ鎖からなるＣＤ３複合体が含まれる。ＣＤ３分子の細胞内尾部及びξ鎖は、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達に不可欠な免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する。例えば、ＭＨＣ提示の特定の抗原エピトープへの結合によるＴＣＲ複合体の活性化は、ＳｒｃファミリーキナーゼによるＩＴＡＭのリン酸化を引き起こし、下流のキナーゼの動員を引き起こし、Ｃａ２＋放出を含むＴ細胞の活性化を引き起こす。Ｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １１４，２４３−２４４（２００１）参照。例えば、固定化抗ＣＤ３抗体によるＴ細胞上のＣＤ３のクラスター化は、ＴＣＲのＭＨＣエンゲージメントと同様のＴ細胞活性化応答をもたらすが、ＭＨＣエピトープに対するそのクローンの典型的な特異性とは無関係である。
【０００６】
Ｔ細胞活性の調節におけるＴＣＲの中心的役割により、ヒトＣＤ３抗原に特異的な抗体の生成に多くの焦点を当てて、ＴＣＲに特異的に結合できる分子を開発する試みがなされてきた。これまでに開発されたＴ細胞に関与する二重特異性抗体は、悪性疾患の治療に大きな治療可能性を秘めているが、これらの公知の二重特異性分子のほとんどは用途が限定的である。例えば、いくつかのものは種特異的であり、別のものは望ましい安全性特性、または特定のがん抗原を標的とする高い効力を欠いている。
【０００７】
本明細書で言及するすべての刊行物、特許、特許出願、及び公開特許出願の開示は、その全体を参照として本明細書に援用する。
【発明の概要】
【０００８】
本出願は、キメラ抗体Ｔ細胞エンゲージャー（ＣＡＴＥ）及びキメラ抗体ナチュラルキラー細胞エンゲージャー（ＣＡＮＫＥ）を含むキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。また、医薬組成物、及びキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを使用した疾患（がんまたは自己免疫疾患など）の治療方法も提供する。
【０００９】
本出願の一態様は：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂはＶＨＨフラグメントである。いくつかの実施形態では、標的細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞はＢ細胞である。
【００１０】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態において、標的細胞結合ドメインは抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１１】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９
のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１２】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ、及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２のｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は同じ細胞である。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は異なる細胞である。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は同じである。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、２つ、３つ、またはそれ以上の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは、異なるエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は異なる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３８
ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる。
【００１３】
本出願の別の態様は：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号１０１または配列番号１０２のアミノ酸配列を有する。
【００１４】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。
【００１５】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつか
の実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカーを介して免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００１６】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。
【００１７】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、マウス、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。
【００１８】
上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つによるいくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００１９】
本出願により、上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つ、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物をさらに提供する。
【００２０】
本出願の別の態様は、上記の医薬組成物のいずれか１つの有効量を個体に投与することを含む、個体の疾患の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患はＢ細胞関連障害である。いくつかの実施形態では、疾患は、多発性骨髄腫などのがんである。いくつかの実施形態では、疾患は全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患である。
【００２１】
また、上記のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー、単離された核酸、またはベクターのいずれか１つを含む、使用方法、キット、及び製品も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】２９３−６Ｅ細胞による例示的なＣＡＴＥ（＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０）の発現を示す。抗６×Ｈｉｓタグ−ＨＲＰに基づくＥＬＩＳＡを使用して、細胞由来の上清中の抗体発現レベルを測定した。組換えタンパク質ＣＤ１２３−Ｈｉｓを使用して標準曲線を作成した。平均で、例示的なＣＡＴＥの発現レベルは、約１〜２μｇ／ｍＬであった。
【図２】図２Ａは、ＣＡＴＥ＃０３３のＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロットの分析結果を示す。図２Ｂは、ＣＡＴＥ＃０３８のＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロットの分析結果を示す。ＣＡＴＥ＃０３１、＃０３２、０３４、及び＃０３７のＳＤＳ−ＰＡＧＥ／ウェスタンブロット分析でも同様の結果が得られた。レーンＭ１：タンパク質マーカー；レーンＭ２：タンパク質マーカー；レーン１：還元条件；レーン２：非還元条件；レーンＰ：陽性対照としての複数タグ；一次抗体：マウス抗Ｈｉｓ  ｍＡｂ。
【図３Ａ】共培養アッセイにおける例示的なＣＡＴＥによる腫瘍細胞に対する用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。例示的なＣＡＴＥ（本明細書中で「ＣＡＴＥ−Ｌ２Ｋ．０７  ｓｃＦｖ」とも呼ばれる）は、各々が、Ｌ２Ｋ．０７由来抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む。
【図３Ｂ】共培養アッセイにおける例示的なＣＡＴＥによる腫瘍細胞に対する用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。例示的なＣＡＴＥ（本明細書中で「ＣＡＴＥ−ＯＫＴ３  ｓｃＦｖ」とも呼ばれる）は、各々が、ＯＫＴ３由来抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む。
【図４】共培養アッセイにおけるＣＡＴＥ＃０３７及び＃０３８による腫瘍細胞に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。
【図５】腫瘍細胞との共培養アッセイにおける、例示的なＣＡＴＥ（＃００１、＃００７、＃０１０、＃０１９、＃０２２、＃０２５及び＃０２８）に応答した初代Ｔ細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩＦＮγ放出を示す。
【図６】腫瘍細胞との共培養アッセイにおける、ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８に応答した初代Ｔ細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩＦＮγ放出を示す。
【図７】多発性骨髄腫のマウスモデルにおける、ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効果を示す。
【図８】ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８（ｎ＝６）で処置したマウスの生存曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本出願の詳細な説明
本出願は、標的細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを有する標的細胞結合ドメイン、例えば単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、及び免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、それぞれが標的細胞上の抗原に特異的に結合する２つ以上の単一ドメイン抗体を含み、それにより、１つ以上の標的細胞の多価または多重特異的標的化が可能である。本明細書において、ＢＣＭＡ及び／またはＣＤ３８への特異的結合を介して腫瘍細胞を標的とし、ＣＤ３εへの特異的結合を介してＴ細胞及び／またはＮＫ細胞を会合させる例示的なキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、形質細胞障害、Ｂ細胞障害、及び自己免疫疾患を含む、様々な疾患の治療に有用であり得る。
【００２４】
したがって、本出願の一態様は：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ、及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂ、ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は同じである。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は異なる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３  ｓｄＡｂを含む。
【００２６】
本出願の別の態様は：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。
【００２７】
さらに、本明細書に記載するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを使用する、医薬組成物、キット、製品、及び疾患（例えば、がんまたは自己免疫疾患）の治療方法を提供する。
【００２８】
Ｉ．定義
本発明の実施は、そうでないことが特段に示されない限り、当技術分野の範囲内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学及び組換えＤＮＡ技術の従来の方法を使用し、その多くは例示を目的として以下に記載される。そのような技術は、文献中に十分説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００９）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９５；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）；Ｍａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（１９８２）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ  ＆  ＩＩ（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ
Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）及びその他の同様の参考文献参照。
【００２９】
本明細書中で使用する用語「キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー」とは、免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞またはＮＫ細胞など）及び標的細胞（腫瘍細胞など）の両方に特異的に結合することができる多重特異性抗体（二重特異性抗体など）を指す。
【００３０】
用語「抗体」には、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する、完全長４本鎖抗体または完全長重鎖のみ抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び一本鎖分子）、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ）が含まれる。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書中では「抗体」と同じ意味で用いられる。本明細書におい
て企図する抗体には、単一ドメイン抗体、例えば重鎖のみ抗体が含まれる。
【００３１】
基本的な４本鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットとＪ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドからなり、１０個の抗原結合部位を有し、一方、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わさって重合して多価集合体を形成し得る２〜５個の基本的な４本鎖ユニットを有する。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、通常、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によってＨ鎖に結合し、一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに結合する。各Ｈ鎖及びＬ鎖はまた、鎖内ジスルフィド架橋を一定の間隔を置いて有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を、それに続いて、α及びγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）を、μ及びεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を、それに続いてもう一方の末端に定常ドメインを有する。ＶＬはＶＨに沿って整列し、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）に沿って整列する。特定のアミノ酸残基が、軽鎖と重鎖の可変ドメインの間に境界を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬの組み合わせにより、単一の抗原結合部位が形成される。様々なクラスの抗体の構造と特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ
ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ  ａｎｄ  Ｔｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．，１９９４，ｐａｇｅ  ７１  ａｎｄ  Ｃｈａｐｔｅｒ  ６参照。脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κとλと呼ばれる２つの明確に異なる型のいずれかに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する、５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがある。γ及びαクラスは、ＣＨ配列と機能の比較的わずかな違いに基づいてさらにサブクラスに分かれる。例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。
【００３２】
用語「重鎖のみ抗体」または「ＨＣＡｂ」とは、重鎖を有するが、４本鎖抗体に通常認められる軽鎖を欠く機能的抗体を指す。ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ラマ、またはアルパカ）はＨＣＡｂを産生することが知られている。
【００３３】
用語「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」とは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一の抗原結合ポリペプチドを指す。ｓｄＡｂ単体は、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドとペアリングしなくても抗原に結合することができる。いくつかの場合では、単一ドメイン抗体は、ラクダ科のＨＣＡｂを基に作出され、それらの重鎖可変ドメインは本明細書中では「ＶＨＨ」と呼ばれる。いくつかのＶＨＨは、ナノボディとしても知られ得る。ラクダ科ｓｄＡｂは、公知の最小の抗原結合抗体断片の１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−８（１９９３）；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：１６８−７３（１９９５）；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ−Ｇｈａｓｓａｂｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３−２６（２０１３）参照）。基本的なＶＨＨは、Ｎ末端からＣ末端にかけて、以下の構造：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を有し、ＦＲ１〜ＦＲ４は、それぞれフレームワーク領域１〜４を指し、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３は、相補性決定領域１〜３を指す。
【００３４】
「単離された」抗体とは、その生産環境の成分から同定、分離及び／または回収された抗体である（例えば、天然のまたは組換えの）。好ましくは、単離されたポリペプチドは
、その生産環境に由来する他のすべての成分と会合していない。組換え形質移入細胞に由来する成分などの、その生産環境の混入成分は、一般的に、抗体の研究、診断または治療用途を妨げるであろう物質であり、これには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、ポリペプチドを：（１）例えばローリー法による測定における９５重量％超の、及びいくつかの実施形態では、９９重量％超の抗体に；（１）スピニングカップシーケネーターを使用して、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルー、好ましくは銀染色を用いた非還元もしくは還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて均一となるように精製する。単離された抗体にはその抗体の自然環境の少なくとも１つの成分は存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕでの抗体は、単離された抗体に含まれる。しかしながら、一般的には、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。
【００３５】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ばれる場合がある。これらのドメインは、一般的に、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比較して）、抗原結合部位を含む。ラクダ種由来の重鎖のみ抗体は、「ＶＨＨ」と呼ばれる単一の重鎖可変領域を有する。したがって、ＶＨＨはＶＨの特殊型である。
【００３６】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントの配列が、抗体間で大幅に異なるという事実を指す。Ｖドメインは抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変ドメインのスパン全体にわたって均等に分布しているわけではない。そうではなく、可変性は、軽鎖と重鎖の両方の可変ドメインにある超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。野生型の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域を含み、これらは、主にβシートの構成をとり、３つのＨＶＲで接続され、ループを形成し、βシート構造を接続し、いくつかの場合ではその一部を形成する。各鎖のＨＶＲは、ＦＲ領域の近くに近接して一緒に保持され、他の鎖のＨＶＲとともに抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、抗体依存的な細胞毒性に抗体を関与させるなど、様々なエフェクター機能を示す。
【００３７】
本明細書中で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、個々の抗体を含む集団は、可能性のある自然発生的な突然変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）が少量存在し得ることを除けば、同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対して高度に特異的である。通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらがハイブリドーマ培養または組換えにより、他の免疫グロブリンが混入することなく合成されるという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の特性を示しており、特定の方法で抗体産生する必要があると解釈すべきではない。例えば、本出願に従って使用するモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）；Ｈｏｎｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５），Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照、ならびにヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の全部または部分を有する動物において、ヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３；ＷＯ１９９６／３４０９６；ＷＯ１９９６／３３７３５；ＷＯ１９９１／１０７４１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０７号；第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；及び第５，６６１，０１６号；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８１２−８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を含む様々な技術によって作製することができる。
【００３８】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」または「全抗体」は、抗体断片とは対照的に、実質的に無傷の形態の抗体を指すために同じ意味で使用される。具体的には、全長４本鎖抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有する抗体が含まれる。全長重鎖のみ抗体は、重鎖（ＶＨＨなど）とＦｃ領域を含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。いくつかの場合では、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。
【００３９】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域及び／または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；二特異性抗体；直鎖抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］参照）；一本鎖抗体分子；単一ドメイン抗体（ＶＨＨなど）、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映する名称である残留「Ｆｃ」フラグメントを生成させた。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）に加えてＬ鎖全体、及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成し、これは、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィドで連結されたＦａｂフラグメントにほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’フラグ
メントは、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にいくつかの追加の残基を有することにより、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書中での呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントのペアとして生成された。抗体断片の他の化学的結合もまた知られている。
【００４０】
Ｆｃフラグメントは、ジスルフィドにより一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、特定のタイプの細胞に認められるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識されるＦｃ領域の配列によって測定する。
【００４１】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、非共有結合で緊密に会合した１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体に比べて低い親和性ではあるものの、抗原を認識して結合する能力を有する。
【００４２】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これによりｓＦｖは、抗原結合のための所望の構造を形成することができる。ｓＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００４３】
本明細書に記載する抗体の「機能的断片」は、一般的に、インタクトな抗体の抗原結合領域もしくは可変領域、または改変されたＦｃＲ結合能力を保持もしくは有する抗体のＦｃ領域を含む、インタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例として、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００４４】
本明細書のモノクローナル抗体は、望ましい生物学的活性を示す限り、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、鎖（複数可）の残りの部分が、別の種に由来する抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、及びそのような抗体の断片を特に含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本明細書の対象のキメラ抗体には、ＰＲＩＭＡＴＴＺＦＤ（登録商標）抗体が含まれ、この抗体の抗原結合領域は、例えば、対象の抗原でマカクザルを免疫することによって産生される抗体に由来する。本明細書中で使用する場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００４５】
非ヒト（例えば、ラクダ科）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（以下に定義）由来の残基を、所望の特異性、親和性、及び／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基で置き換えたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合
では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基を、対応する非ヒト残基に置き換える。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含む場合がある。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに改善するために行われる場合がある。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常は２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、その場合、非ヒト免疫グロブリン配列の超可変ループに対応するすべてまたは実質的にすべての超可変ループ、及びすべてまたは実質的にすべてのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改善する１つ以上の個々のＦＲ残基置換を含む場合がある。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、通常、Ｈ鎖では６以下、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体はまた、場合により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのものを含む。詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）参照。また、例えば、Ｖａｓｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ  ａｎｄ  Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び第７，０８７，４０９号参照。
【００４６】
「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び／または本明細書に開示するヒト抗体を作製するための技術のいずれかを用いて作製した抗体である。ヒト抗体のこの定義からは、特に、非ヒト抗原結合残基を有するヒト化抗体が除外される。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリを含む、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ
ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製には、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載されている方法も利用可能である。また、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応じてそのような抗体を産生するように改変されている一方でその内在性遺伝子座が無効化されたトランスジェニック動物、例えば免疫化ゼノマウスに、抗原を投与することにより、調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号参照）。また、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成したヒト抗体に関するＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）参照。
【００４７】
本明細書中で使用する場合の用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」とは、配列が超可変であり、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、単一ドメイン抗体は、３つのＨＶＲ（またはＣＤＲ）：ＨＶＲ１（またはＣＤＲ１）、ＨＶＲ２（またはＣＤＲ２）、及びＨＶＲ３（またはＣＤＲ３）を含む。ＨＶＲ３は３つのＨＶＲの中で最も多様性を示し、抗体に優れた特異性を付与するうえでユニークな役割を果たすと考えられている。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）参照。
【００４８】
用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔシステムによって定義される超可変領域を指すために使用される。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照。
【００４９】
多くのＨＶＲ描写が用いられており、これらは本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列の多様性に基づいており、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。一方、Ｃｏｔｈｉａは構造ループの位置を参照する（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ  ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の折衷案であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用可能な複雑な結晶構造解析に基づいている。これらの各ＨＶＲ由来の残基を、以下の表１に示す。
【表１】
2020525032.tif 000002
【００５０】
ＨＶＲは、以下のような「拡張ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬにおいて、２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）ならびにＶＨにおいて２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）及び９３〜１０２、９４〜１０２、または９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基には、これらの定義のそれぞれについて、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．に従って付番されている。
【００５１】
単一ドメイン抗体（ＶＨＨなど）のアミノ酸残基は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０００  Ｊｕｎ．２３；２４０（１−２）：１８５−１９５の文献におけるラクダ科由来ＶＨＨドメインへの適用と同様に、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．によって与えられたＶＨドメインの一般的なナンバリングに従って付番される（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，ＵＳ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ
．９１）。このナンバリングによると、ＶＨＨのＦＲ１は位置１〜３０のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ１は位置３１〜３５のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ２は位置３６〜４９のアミノ酸を含み、ＶＨＨのＣＤＲ２は位置５０〜６５のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ３は位置６６〜９４のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ３は位置９５〜１０２のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ４は位置１０３〜１１３のアミノ酸残基を含む。この点において、ＶＨドメイン及びＶＨＨドメインについて当技術分野で周知のように、各ＣＤＲのアミノ酸残基の総数は変動する場合があり、Ｋａｂａｔナンバリングで示されるアミノ酸残基の総数に対応しない場合があることに留意すべきである（つまり、Ｋａｂａｔナンバリングによる１つ以上の位置が実際の配列で占有されない場合があるか、またはＫａｂａｔナンバリングで許可されている数よりも多くのアミノ酸残基が実際の配列に含まれる可能性がある）。
【００５２】
表現「Ｋａｂａｔのような可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置ナンバリング」及びその変形は、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．における抗体の編集物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮物または挿入物に対応する、より少ないかまたは追加のアミノ酸を含む場合がある。例えば、重鎖可変ドメインには、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）が含まれ得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、所与の抗体について、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同性領域でのアラインメントにより決定してもよい。
【００５３】
本明細書中で別段の指示がない限り、免疫グロブリン重鎖中の残基のナンバリングは、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．のようなＥＵインデックスのナンバリングである。「ＫａｂａｔのようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基のナンバリングを指す。
【００５４】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５５】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」または「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンのＶＬまたはＶＨ配列は、可変ドメイン配列のサブグループから選択される。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）におけるようなサブグループである。例を挙げると、ＶＬの場合、サブグループは、前出のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．におけるようなサブグループκＩ、κＩＩ、κＩＩＩまたはκＩＶであってもよい。さらに、ＶＨの場合、サブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．におけるようなサブグループＩ、サブグループＩＩ、またはサブグループＩＩＩであってもよい。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、ドナーフレームワーク配列を様々なヒトフレームワーク配列の集合とアラインメントすることにより、ドナーフレームワークとの相同性に基づいてヒトフレームワーク残基を選択する場合など、上記の特定の残基に由来するものとすることができる。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を有してもよく、または既存のアミノ酸配列変化を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、既存のア
ミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。
【００５６】
例えばＦｃ領域の、特定の位置での「アミノ酸修飾」とは、特定の残基の置換もしくは欠失、または特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入とは、特定の残基への１〜２残基以内の挿入を意味する。挿入は、特定の残基のＮ末側でもＣ末側でもよい。本明細書における好ましいアミノ酸修飾は置換である。
【００５７】
「親和性成熟」抗体は、その１つ以上のＨＶＲに１つ以上の改変を有し、その結果、それらの改変（複数可）を有さない親抗体に比べて、抗原に対する抗体の親和性が向上した抗体である。いくつかの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモルの親和性またはピコモルの親和性さえ有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨ及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば：Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．
Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されている。
【００５８】
本明細書中で使用する場合、用語「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、または「〜に特異的」とは、生体分子を含む不均一な分子集団の存在下において標的の存在を決定づける、標的と抗原結合タンパク質との間の結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、他の標的に結合する場合に比べて、より大きな親和性、結合力、より早急に、及び／またはより長い持続時間でこの標的に結合する抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、無関係な標的への抗原結合タンパク質の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定される抗原結合タンパク質の標的への結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗原結合タンパク質は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、異なる種のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は排他的結合を含み得るが、しかし必須ではない。
【００５９】
用語「特異性」とは、抗原の特定のエピトープに対する抗原結合タンパク質の選択的認識を指す。例えば、天然の抗体は単一特異性である。本明細書中で使用する用語「多重特異性」とは、抗原結合タンパク質が２つ以上の抗原結合部位を有し、そのうちの少なくとも２つが異なる抗原または同じ抗原の異なるエピトープに結合することを示す。本明細書中で使用する「二重特異性」とは、抗原結合タンパク質が２つの異なる抗原結合特異性を有することを示す。本明細書中で使用する用語「単一特異性」とは、１つ以上の結合部位を有し、それらのそれぞれが同じ抗原の同じエピトープに結合する抗原結合タンパク質を指す。
【００６０】
本明細書中で使用する用語「価」は、抗原結合タンパク質中の特定の数の結合部位の存在を示す。例えば、天然抗体または全長抗体は、２つの結合部位を有し、また、二価である。同様に、用語「三価」、「四価」、「五価」及び「六価」は、抗原結合タンパク質内
に、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、４つの結合部位、５つの結合部位、及び６つの結合部位が存在することを示す。
【００６１】
「結合親和性」とは、一般的に、分子の単一結合部位（例えば、抗体またはキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書中で使用する場合、「結合親和性」とは、結合ペアのメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は一般的に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、一方、高親和性抗体は一般的に、抗原により速く結合し、より長く結合したままでいる傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で公知であり、そのいずれも本出願の目的に使用することができる。結合親和性を測定するための特定の説明的及び例示的な実施形態を以下に記載する。
【００６２】
ペプチド、ポリペプチドまたは抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して最大パーセント配列同一性を達成した後、保存的置換を配列同一性の一部として考慮しない場合の、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当業者の範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。
【００６３】
本明細書に記載する「単離された」核酸分子は、それが産生された環境において通常付随する少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、生産環境に付随するすべての成分と関連していない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、自然界に見出される形態または設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に自然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
【００６４】
用語「制御配列」とは、特定の宿主生物において作動可能に連結したコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。例えば、原核生物に適した制御配列として、プロモーター、場合によりオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、エンハンサーを利用することが知られている。
【００６５】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれる場合に「作動可能に連結する」。例えば、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現させる場合、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡを、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結し；配列の転写に影響を与える場合、プロモーターまたはエンハンサーをコード配列に作動可能に連結し；または、翻訳を促進するように配置する場合、リボソーム結合部位をコード配列に作動可能に連結する。一般的に、「作動可能に連結する」とは、連結されるＤＮＡ配列が連続的であり、分泌リーダーの場合、連続的でリーディングフェイズにあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、簡便な制限酵素部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、従来の慣例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを使用する。
【００６６】
本明細書中で使用する用語「ベクター」とは、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、及びそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。特定のベクターは、それらに作動可能に連結された核酸の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書中では「発現ベクター」と呼ばれる。
【００６７】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は同じ意味で用いられ、そのような細胞の子孫を含む、外来性核酸が導入された細胞を指す。
【００６８】
本明細書中で使用する場合、「治療」または「治療すること」は、臨床結果を含む有益または望ましい結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益なまたは望ましい臨床結果には、以下のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない：疾患に起因する１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の軽減、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の予防または遅延）、疾患の蔓延（例えば転移）の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患の進行の遅延または緩徐化、疾患状態の改善、疾患の寛解（部分的または全体的）の提供、疾患の治療に必要な１つ以上の他の薬物の用量の低減、疾患の進行の遅延、生活の質の向上、及び／または生存期間の延長。疾患の病理学的結果の軽減もまた、「治療」に包含される。本出願の方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。
【００６９】
本明細書中で使用する場合、「個体」または「被験体」とは、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類、または霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳類を指す。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
【００７０】
本明細書中で使用する用語「有効量」とは、特定の障害、病態または疾患を治療する、例えば、その症状の１つ以上を改善、緩和、軽減、及び／または遅延させるのに十分な、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーなどの薬剤またはその医薬組成物の量を指す。がんの場合、有効量は、腫瘍を縮小させる及び／または腫瘍の成長速度を低下させる（例えば、腫瘍成長を抑制する）、または他の望ましくない細胞増殖を予防または遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、発症を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、再発を予防または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。薬剤または組成物の有効量は：（ｉ）がん細胞の数を低減し；（ｉｉ）腫瘍のサイズを縮小させ；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を、ある程度、抑制、遅延、緩徐化し、好ましくは停止させ；（ｉｖ）腫瘍の転移を抑制し（すなわち、ある程度遅延させ、好ましくは停止させ）；（ｖ）腫瘍の成長を抑制し；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を予防または遅延させ；及び／または（ｖｉｉ）がんに関連する１つ以上の症状をある程度軽減し得る。
【００７１】
本明細書中で使用する場合、がんの発症を「遅延させる」とは、疾患の発症を、延期、妨害、緩徐化、遅延、安定化、及び／または順延することを意味する。この遅延は、病歴及び／または治療対象の個体に応じて、様々な時間の長さであり得る。当業者には明らかなように、十分なまたは有意な遅延は、実際には、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。がんの発症を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合に比べて、特定の時間枠での疾患発症の可能性を低減する、及び／または特定の時間枠での疾患の程度を軽減する方法である。そのような比較は、通常、統計的に有意な数の個体を使用した臨床研究に基づく。がんの発生は、コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝血検査、動脈造影法、または生検などを含むが、これらに限定されない標準的な方法を使用して検出することができる。発症はまた、最初は検出できない場合があり、発生、再発、及び発症を含む、がんの進行を指す場合もある。
【００７２】
用語「医薬製剤」とは、有効成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、製剤を投与する被験体に対して容認できないほどの毒性を示す追加成分を含まない製剤を指す。そのような製剤は無菌である。「無菌」製剤は無菌的であるか、またはすべての生きている微生物とその胞子を含まない。
【００７３】
本明細書に記載する本出願の実施形態は、実施形態「からなる」及び／または実施形態「から本質的になる」を含むことが理解される。
【００７４】
本明細書の「約」の値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変動を含む（及び記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述には「Ｘ」の記述が含まれる。
【００７５】
本明細書中で使用する場合、「ｎｏｔ」の値またはパラメータへの言及は、一般的に、値またはパラメータ「以外」を意味し、記述する。例えば、本方法はタイプＸのがんの治療には使用されないとは、本方法がＸ以外のタイプのがんの治療に使用されることを意味する。
【００７６】
本明細書中で使用する用語「約Ｘ〜Ｙ」は、「約Ｘ〜約Ｙ」と同じ意味を有する。
【００７７】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈からそうでないことが明確に示されない限り、複数の指示対象を含む。
【００７８】
ＩＩ．キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャー
本出願は、標的細胞上の抗原に特異的に結合する標的細胞結合ドメインと、免疫エフェクター細胞の抗原に特異的に結合する免疫エフェクター細胞とを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、ＶＨＨなどの単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）に由来する１つ以上の抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、ｓｃＦｖなどの４本鎖抗体に由来する１つ以上の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む。
【００７９】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合するｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞であり、キメラ抗体Ｔ細胞エンゲージャーは、本明細書中ではＣＡＴＥとも呼ばれる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞であり、キメラ抗体ＮＫ細胞エンゲージャーは、本明細書中ではＣＡＮＫＥとも呼ばれる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、ＣＤ３εなどのＣＤ３に特異的に結合する抗原結合断片を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合するｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）Ｔ細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含むＴ細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８２】
いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合するｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）ＮＫ細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含むＮＫ細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体ＮＫ細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８３】
いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合するｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配
列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、ヒトＢＣＭＡなどのＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂ（本明細書中では「抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ」とも呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨを含む。抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡに特異的に結合する、重鎖のみ抗体などの単一ドメイン抗体に由来し得る。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｃ１１Ｄ５．３またはＪ２２．９−ｘｉに由来する。
【００８５】
ＣＤ２６９としても知られるＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバー、すなわち、ＴＮＦＲＳＦ１７（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９２（１）：１２９−１３５，２０００）である。ヒトＢＣＭＡは、ほぼ独占的に、形質細胞及び多発性骨髄腫細胞で発現する（例えば、Ｎｏｖａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０３（２）：６８９−６９４，２００４；Ｎｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７３（１９）：５９０３−５９０９；Ｆｅｌｉｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，９（７）：１３４８−５８，２０１５参照）。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘発性リガンド（ＡＰＲＩＬ）に結合することができる（例えば、Ｍａｃｋａｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３  ａｎｄ  Ｋａｌｌｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，２０４：４３−５４，２００５参照）。ＢＣＭＡは、多発性骨髄腫に対する免疫療法薬の適切な腫瘍抗原標的であり得る。高親和性の抗体は、ＢＣＭＡとその天然リガンドＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬとの結合をブロックすることができる。
【００８６】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有
するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８７】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１、または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有
するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８８】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメイン中の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｃ１１Ｄ５．３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｊ２２．９−ｘｉに由来する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｎ末端−ＶＨ−ＶＬ−Ｃ末端の形式を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｎ末端−ＶＬ−ＶＨ−Ｃ末端の形式を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、配列番号１０１または配列番号１０２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００８９】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、ヒトＣＤ３８などのＣＤ３８（本明細書中では「抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ」とも呼ばれる）に特異的に結合するｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３８  ＶＨＨを含む。抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８に特異的に結合する、重鎖のみ抗体などの任意の単一ドメイン抗体に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。
【００９０】
ＣＤ３８は、細胞表面受容体と会合し、細胞質Ｃａ２＋フラックスを調節し、リンパ系及び骨髄系におけるシグナル伝達を媒介するＩＩ型膜貫通糖タンパク質である（Ｋｏｎｏｐｌｅｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６１：４７０２−８，１９９８；Ｄ
ｅａｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１０９：５３９０−８，２００７）。ヒトＣＤ３８は、骨髄腫細胞で高度かつ均一に発現し、正常リンパ球及び骨髄細胞、ならびに非造血系起源のいくつかの組織において、比較的低レベルで発現するため、骨髄腫の治療における潜在的な標的となる（例えば、Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ，２００４，１２１：４８２；Ｈ．Ｍ．Ｌｏｋｈｏｒｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，２０１５，３７３：１３参照）。
【００９１】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選���されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９２】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片はＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１また
は１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤ���３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９３】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは単一特異性である。いくつかの実施
形態では、標的細胞結合ドメインは一価である。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、二価または三価などの多価である。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、二重特異性または三重特異性などの多重特異性である。
【００９４】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は同じ細胞である。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は異なる細胞である。いくつかの実施形態では、第１の細胞と第２の細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２のｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９５】
いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）及び標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は同じである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは、同じエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１のｓ
ｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは、異なるエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は異なる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２のｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、第１の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、第１の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる。
【００９７】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄ
Ａｂを、ペプチドリンカーを介して第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配���を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及
び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９８】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片（例えば、抗ＣＤ３  ＶＨＨまたは抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ）を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、抗ＣＤ３  ＶＨＨなどの抗ＣＤ３  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ＶＨＨは、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は抗ＣＤ３  ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、またはＵＣＨＴ１に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及���配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２
；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【００９９】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ
ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗
ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有する��ＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配
列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０１００】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）抗ＣＤ３  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３  ＶＨＨなど）を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は：（１）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（２）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１８２または１８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号２０６または２０７のアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、配列番号１０６〜１６３及び１８４〜２０７のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１０６〜１６３及び１８４〜２０７のいずれか１つのアミノ酸を有するポリペプチドを提供する。
【０１０２】
標的細胞結合ドメイン
本明細書に記載するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、標的細胞結合ドメインを含む。標的細胞結合ドメインは、単一ドメイン抗体または４本鎖抗体に由来する１つ以上の抗原結合断片を含む。
【０１０３】
１．単一ドメイン抗体
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、１つ以上（１、２、３、４個、またはそれ以上のいずれか）の単一ドメイン抗体を含む。ｓｄＡｂは、同じまたは異なる起源であってもよく、同じまたは異なるサイズであってもよい。例示的なｓｄＡｂとして、重鎖のみ抗体由来の重鎖可変ドメイン（例えば、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ）、軽鎖を天然に欠く結合分子、従来の４本鎖抗体由来の単一ドメイン（ＶＨまたはＶＬなど）、ヒト化重鎖のみ抗体、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットによって産生されるヒト単一ドメイン抗体、ならびに抗体由来ではない改変ドメイン及び単一ドメイン骨格が挙げられるが、これらに限定されない。標的細胞（腫瘍細胞など）上の抗原を標的とする当技術分野で公知のまたは本明細書に記載の任意のｓｄＡｂを使用して、本明細書に記載のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを構築してもよい。ｓｄＡｂは、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚類、サメ、ヤギ、ウ
サギ、及びウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来するものであってもよい。本明細書において企図する単一ドメイン抗体には、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ及びサメ以外の種由来の天然の単一ドメイン抗体分子も含まれる。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軽鎖を欠く重鎖抗体（本明細書では「重鎖のみ抗体」とも呼ばれる）として知られる天然の単一ドメイン抗原結合分子に由来する。そのような単一ドメイン分子は、例えば、ＷＯ９４／０４６７８及びＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８に記載される。明確にするために、天然に軽鎖を欠く重鎖分子に由来する可変ドメインは、４本鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、本明細書中ではＶＨＨとして知られる。そのようなＶＨＨ分子は、Ｃａｍｅｌｉｄａｅ種、例えば、ラクダ、ラマ、ビクーナ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びグアナコで生じた抗体に由来し得る。Ｃａｍｅｌｉｄａｅ以外の他の種が、天然に軽鎖を欠く重鎖分子を産生してもよく、そのようなＶＨＨは本出願の範囲内である。
【０１０５】
ラクダ科動物由来のＶＨＨ分子は、ＩｇＧ分子よりも約１０倍小さい。それらは単一のポリペプチドであり、非常に安定であることができ、極端なｐＨ及び温度条件に耐え得る。さらに、それらはプロテアーゼの作用に対して耐性であることができ、これは従来の４本鎖抗体の場合にはないものである。さらに、ＶＨＨのｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現により、高収率で適切に折り畳まれた機能的ＶＨＨが生成される。さらに、ラクダ科動物で生成された抗体は、抗体ライブラリの使用またはラクダ科動物以外の哺乳類の免疫化により、ｉｎ
ｖｉｔｒｏで生成させた抗体によって認識されるエピトープ以外のエピトープを認識することができる（例えば、ＷＯ９７４９８０５参照）。そのため、１つ以上のＶＨＨドメインを含む多重特異性または多価キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、従来の４本鎖抗体に由来する抗原結合断片を含む多重特異性または多価キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーよりも、標的と効率的に相互作用し得る。ＶＨＨは、空洞や溝などの「異常な」エピトープに結合することが知られているため、そのようなＶＨＨを含むキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの親和性は、従来の多重特異性ポリペプチドよりも治療に適している可能性がある。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軟骨魚に見出される免疫グロブリンの可変領域に由来する。例えば、ｓｄＡｂは、サメの血清に見出される新規抗原受容体（ＮＡＲ）として知られる免疫グロブリンアイソタイプに由来する。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン分子（「ＩｇＮＡＲ」）を生成する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ（２００５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．１４：２９０１−２９０９に記載されている。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、組換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化及び／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成（例えば、ファージディスプレイにより選択される）である。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域のアミノ酸配列を、フレームワーク領域内の特定のアミノ酸残基の「ラクダ化」により変更してもよい。ラクダ化とは、従来の４本鎖抗体由来の（天然）ＶＨドメインのアミノ酸配列内の１つ以上のアミノ酸残基を、重鎖抗体のＶＨＨドメイン内の対応する位置（複数可）に存在する１つ以上のアミノ酸残基に置き換える、すなわち置換することを指す。これは、それ自体公知の方法で実行することができ、そうした方法は、例えば本明細書のさらなる説明に基づいて、当業者には明らかであろう。そのような「ラクダ化」置換は、好ましくは、ＶＨ−ＶＬ界面を形成するアミノ酸位置、及び／またはその界面に存在するアミノ酸位置、及び／または本明細書で定義するように、いわゆるＣａｍｅｌｉｄａｅホールマーク残基において挿入する（例えば、ＷＯ９４／０４６７８、Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３３９：２８５−２９０，１９９４；Ｄａｖｉｅｓ  ａｎｄ  Ｒ
ｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ９（６）：５３１−５３７，１９９６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５９：９５７−９６９，１９９６；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５−３８，１９９９参照）。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットによって産生されるヒト単一ドメイン抗体である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、及びＷＯ２００４０４９７９４参照。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、親和性成熟している。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、特定の抗原または標的に対する天然ＶＨＨドメインは、ラクダ科動物ＶＨＨ配列の（ナイーブまたは免疫）ライブラリから得ることができる。そのような方法は、それ自体公知の１つ以上のスクリーニング技術を使用して、前記抗原または標的、またはその少なくとも一部、断片、抗原決定基もしくはエピトープを使用して、そのようなライブラリをスクリーニングすることを含んでも含まなくてもよい。そのようなライブラリ及び技術は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０及びＷＯ０３／０３５６９４に記載されている。あるいは、例えばＷＯ００／４３５０７に記載されているように、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨライブラリから、例えば、ランダム突然変異誘発及び／またはＣＤＲシャッフリングなどの技術により得られたＶＨＨライブラリなどの、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨライブラリに由来する改善された合成または半合成ライブラリを使用してもよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体を、従来の４本鎖抗体から生成する。例えば、ＥＰ０３６８６８４、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  １９８９  Ｏｃｔ．１２；３４１（６２４２）：５４４−６），Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００３，２１（１１）：４８４−４９０；ＷＯ０６／０３０２２０；及びＷＯ０６／００３３８８参照。
【０１１１】
２．抗原
標的細胞結合ドメイン中の各ｓｄＡｂは、標的細胞上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原は細胞表面分子である。単一ドメイン抗体を、特定の疾患状態に関連する標的細胞の細胞表面マーカーとして機能する抗原を認識するように選択してもよい。いくつかの実施形態では、抗原、例えば、標的細胞（複数可）上の第１の抗原及び／または第２の抗原は、腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは単一の腫瘍抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、２つ以上の腫瘍抗原を標的とする。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍に関連している。腫瘍は、免疫応答、特にＴ細胞性免疫応答の標的抗原として機能する多くのタンパク質を発現する。キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーが標的とする抗原は、単一の疾患細胞上の抗原、またはそれぞれが疾患に寄与する異なる細胞上で発現する抗原であってもよい。キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの標的抗原は、疾患に直接または間接的に関与するものであってもよい。
【０１１２】
腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞性免疫応答を誘発できる腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。本発明の標的抗原の選択は、治療するがんの特定のタイプに依存するであろう。例示的な腫瘍抗原として、例えば、神経膠腫関連抗原、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、β−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ−１、ＭＮ−ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸内カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ  ｈｓｐ７０−
２、Ｍ−ＣＳＦ、プロスターゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−ｌａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原−１（ＰＣＴＡ−１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、ｅｐｈｒｉｎＢ２、ＣＤ２２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＧＦ−Ｉ受容体及びメソセリンが挙げられる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する１つ以上の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃の標的抗原として機能することができる多くのタンパク質を発現する。これらの分子には、黒色腫におけるＭＡＲＴ−１、チロシナーゼ、及びｇｐ１００、ならびに前立腺癌における前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）などの組織特異的抗原が含まれるが、これらに限定されない。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ−２などの形質転換関連分子の群に属する。標的抗原のさらに別の群は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）などの腫瘍胎児性抗原である。Ｂ細胞リンパ腫では、腫瘍特異的イディオタイプ免疫グロブリンは、個々の腫瘍に固有の真の腫瘍特異的免疫グロブリン抗原を構成する。ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３７などのＢ細胞分化抗原は、Ｂ細胞リンパ腫の標的抗原のその他の候補である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に特有であり、体内の他の細胞に生じない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に特有ではなく、その代わりに、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導できない条件下で正常細胞上にも発現する。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答可能な条件下で生じ得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟で応答できない胎児の発達中に正常細胞で発現する抗原であり得るか、または正常細胞では通常、非常に低レベルで存在するが、腫瘍細胞上では遥かに高いレベルで発現する抗原であり得る。
【０１１５】
ＴＳＡまたはＴＡＡ抗原の非限定的な例として、以下が挙げられる：分化抗原、例えば、ＭＡＲＴ−１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ−１）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２及びＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ｐ１５などの腫瘍特異的多系統抗原；ＣＥＡなどの過剰発現胚抗原；ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕなどの過剰発現がん遺伝子及び変異腫瘍抑制遺伝子；染色体転座から生じるユニークな腫瘍抗原；例えば、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ；ならびにエプスタインバーウイルス抗原ＥＢＶＡ及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７などのウイルス抗原。他の大きなタンパク質ベースの抗原として、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ＲＡＧＥ、ＮＹ−ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、β−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１５、ｐ１６、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、αフェトプロテイン、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３＼ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０＼Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、及びＴＰＳが挙げられる。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、抗原（第１の抗原及び／または第２の抗原など）は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＲＯＲ１、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＩＬ−１３Ｒ、ＣＤ１３８、ｃ−Ｍｅｔ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ−２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ  Ａ３、及び糖脂質Ｆ７７からなる群から選択される。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、抗原はＢ細胞上で発現する。いくつかの実施形態では、抗原（第１の抗原及び／または第２の抗原など）はＢＣＭＡである。いくつかの実施形態では、抗原（第１の抗原及び／または第２の抗原など）はＣＤ３８である。いくつかの実施形態では、第１の抗原はＢＣＭＡであり、第２の抗原はＣＤ３８である。
【０１１８】
３．例示的なｓｄＡｂ
標的細胞結合ドメインでの使用に適した例示的な単一ドメイン抗体の配列として、以下の表２に挙げる単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【表２−１】
2020525032.tif 000003
【表２−２】
2020525032.tif 000004
【表２−３】
2020525032.tif 000005
【０１１９】
抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなどの１つ以上の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは親和性成熟している。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂはラクダ科である。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂはヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ活性を調節する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂはアンタゴニスト抗体である。例示的な抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、例えばＷＯ２０１８／０２８６４７に記載されており、その内容はその全体を参照として本明細書に援用する。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓ
ｄＡｂは、配列番号８１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ
ｓｄＡｂは、配列番号２９２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３００のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または���つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗Ｂ
ＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号１〜１１及び２０９〜２３５から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１２〜２２及び２３６〜２６２から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２３〜３３及び２６３〜２８９から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号１〜１１及び２０９〜２３５から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１２〜２２及び２３６〜２６２から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ２；ならびに（ｃ）配列番号２３〜３３及び２６３〜２８９から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のいずれか１つを有するＣＤＲは、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡに結合する能力を保持している。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、本明細書に記載するＣＤＲのいずれか１つに、１、２、３個またはそれ以上のアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡに結合する能力を保持している。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号５のアミノ酸配列
を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２０９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１２のアミノ酸
配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４６】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２２のアミノ酸
配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３２のアミノ酸
配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号２３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号２６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号２８９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を有するその変異体を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のいずれか１つを有するＶＨＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を有するが、その配列を含む抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡに結合する能力を保持している。いくつかの実施形態では、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６から選択されるアミノ酸配列において、合計１〜１０個のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失している。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で生じる。場合により、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６から選択されるアミノ酸配列を有し、また、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含むことを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態
では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３００のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ
ｓｄＡｂは、配列番号３１５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、機能的エピトープを、コンビナトリアルアラニンスキャニングによりマッピングすることができる。このプロセスでは、コンビナトリアルアラニンスキャン戦略を使用して、抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体との相互作用に必要なＢＣＭＡタンパク質のアミノ酸を特定することができる。いくつかの実施形態では、エピトープは立体構造的であり、ＢＣＭＡに結合した抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体の結晶構造を使用して、エピトープを同定してもよい。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、本明細書において提供する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体のいずれかと同じエピトープ（実質的に同じエピトープを含む）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメ
イン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８４のアミノ酸を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３００のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメ��ン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエ
ピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、本明細書に記載する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体のいずれか１つと競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、競合結合を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異
的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号２９９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３００のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０７のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３０９のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１１のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１３のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１４のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１５のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列を有する抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体と競合的に、ＢＣＭＡに特異的に結合する。
【０１６４】
抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３８  ＶＨＨなどの１つ以上の抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、親和性成熟している。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂはラクダ科である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂはヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８活性を調節する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂはアンタゴニスト抗体である。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓ
ｄＡｂは、配列番号９２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号１００のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。
【０１６６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３４〜４５から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６〜５７から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号５８〜６９から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３４〜４５から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６〜５７から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号５８〜６９から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のいずれか１つを有するＣＤＲは、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８に結合する能力を保持している。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、本明細書に記載するＣＤＲのいずれか１つに、１、２、３個またはそれ以上のアミノ酸の置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８に結合する能力を保持している。
【０１６７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）
配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは：（ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；（ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、３つのＣＤＲ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のいずれか１つを有するＶＨＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含むが、その配列を含む抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、ＣＤ３８に結合する能力を保持している。いくつかの実施形態では、配列番号８９〜１００から選択されるアミノ酸配列において、合計１〜１０個のアミノ酸が、置換、挿入、及び／または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で生じる。場合により、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００から選択されるアミノ酸配列を有し、また、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号１００のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、機能的エピトープを、コンビナトリアルアラニンスキャンニングによりマッピングすることができる。このプロセスでは、コンビナトリアルアラニンスキャン戦略を使用して、抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体との相互作用に必要なＣＤ３８タンパク質のアミノ酸を特定することができる。いくつかの実施形態では、エピトープは立体構造的であり、ＣＤ３８に結合した抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体の結晶構造を使用して、エピトープを同定してもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、本明細書において提供する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体のいずれかと同じエピトープ（実質的に同じエピトープを含む）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９０のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９１のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９２のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９４のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９５のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８
ｓｄＡｂは、配列番号９６のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じ
エピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９７のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９８のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９９のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号１００のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本出願は、本明細書に記載する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体のいずれか１つと競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する、抗ＣＤ３８抗体、またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、競合結合を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定してもよい。例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９０のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９１のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９２のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９４のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９５のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９６のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９７のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９８のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９９のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号１００のアミノ酸配列を有する抗ＣＤ３８単一ドメイン抗体と競合的に、ＣＤ３８に特異的に結合する。
【０１８３】
４．その他の抗原結合断片
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、標的細胞上の抗原に特異的に結合する４本鎖抗体に由来する抗原結合断片を含む。例示的な抗原結合断片として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体断片のレビューについては、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）参照。ｓｃＦｖフラグメントのレビューについては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）参照；ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察については、米国特許第５，８６９，０４６号参照。いくつかの実施形態では、抗体断片はＦｃ領域を含まない。
【０１８４】
二重特異性抗体は、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）参照。Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）には、三重特異性抗体及び四重特異性抗体も記載されている。
【０１８５】
抗体断片は、本明細書に記載するように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化及び組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む。抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖは、Ｃ１１Ｄ５．３及びＪ２２．９−ｘｉを含むがこれらに限定されない任意の公知の抗ＢＣＭＡ４本鎖抗体に由来してもよい。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡは、配列番号１０１、または配列番号１０１に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡは、配列番号１０２、または配列番号１０２に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３由来の抗ＣＤ３  ＶＨＨを含む、免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、配列番号２０４または２０５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、Ｈｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０１８７】
５．多価標的細胞結合ドメイン
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、単一ドメイン抗体などの２つ以上（例えば、約２、３、４、５、６、またはそれ以上のいずれか１つ）の抗原結合断片を有する。いくつかの実施形態では、多価標的細胞結合ドメインは、単一の抗原を標的とし、単一の抗原に対する２つ以上の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、多価標的細胞結合ドメインは、複数の抗原を標的とし、多価標的細胞結合ドメインは、少なくとも１つの抗原の２つ以上の抗原結合断片を含む。同じ抗原に特異的な抗原結合断片は、抗原の同じエピトープに結合するか、または抗原の異なるエピトープに結合し得る。同じ抗原に特異的な抗原結合断片は、同じまたは異なる単一ドメイン抗体を含み得る。
【０１８８】
本明細書に記載する多価標的細胞結合ドメインを含むキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、異なる抗原結合部位による相乗的結合を介した多量体抗原の標的化、または抗原に対する結合親和性または結合力の向上に特に適している場合がある。本明細書に記載する単一ドメイン抗体のいずれか、及び抗ＢＣＭＡまたは抗ＣＤ３８抗体などの他の抗原結合断片（例えばｓｃＦｖ）を使用して、多価標的細胞結合ドメインを提供してもよい。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、複数の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを含む。いくつかの実施形態では、複数の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチド結合またはペプチドリンカーを介して互いに融合させる。いくつかの実施形態では、各ペプチドリンカーは、約５０以下（例えば、約３５、２５、２０、１５、１０、または５以下のいずれか１
つ）のアミノ酸長である。
【０１９０】
６．多重特異性標的細胞結合ドメイン
いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、２つ以上（例えば、約２、３、４、５、６、またはそれ以上のいずれか１つ）の異なる抗原に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、多重特異性標的細胞結合ドメインは、各抗原に対して１つの抗原結合断片を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性標的細胞結合ドメインは、少なくとも１つの抗原に対して２つより多くの抗原結合断片を有する。各抗原結合断片は、単一ドメイン抗体を含み得る。
【０１９１】
標的とする所望の抗原に応じて、所望の抗原に特異的な適切な単一ドメイン抗体を含むように標的細胞結合ドメインを設計することができる。本明細書に記載する抗ＢＣＭＡまたは抗ＣＤ３８抗体のいずれか１つ以上を、本出願のキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーの標的細胞結合ドメインにおいて使用してもよい。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインは、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ−３８  ｓｄＡｂを含む。抗原結合断片（ｓｄＡｂｓなど）は、任意の適切な順序で配置することができる。例えば、第１のｓｄＡｂを第２のｓｄＡｂのＮ末端またはＣ末端に融合させる。適切なペプチドリンカーを異なるｓｄＡｂｓの間に配置して、ｓｄＡｂｓ間の立体障害を回避してもよい。
【０１９２】
免疫エフェクター細胞結合ドメイン
本明細書に記載するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む。免疫エフェクター細胞結合ドメインは、免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む。免疫エフェクター細胞には、Ｔ細胞及びＮＫ細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、ＣＤ３、例えばヒトＣＤ３に特異的に結合する。「ＣＤ３」は、６本鎖の多タンパク質複合体として当技術分野で公知である（Ａｂｂａｓ  ａｎｄ  Ｌｉｃｈｔｍａｎ，２００３；Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｐ１７２  ａｎｄ  １７８，１９９９参照）。哺乳類では、複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２本のＣＤ３ε鎖、及びＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含む。本明細書中で使用するＣＤ３は、ヒト、霊長類、マウス、ラット、または他の哺乳類を含む様々な動物種に由来し得る。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、またはＣＤ３ε鎖などの個々のＣＤ３鎖に特異的に結合する抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、２つ以上の個々のＣＤ３鎖から形成される複合体（例えば、２つ以上のＣＤ３ε鎖の複合体、ＣＤ３γ鎖とＣＤ３ε鎖の複合体、ＣＤ３δ鎖とＣＤ３ε鎖の複合体）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合断片はＣＤ３ε鎖に特異的に結合する。
【０１９４】
ＣＤ３を標的とする抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、及びｓｄＡｂ（例えば、ＶＨＨ）を含むがこれらに限定されない任意の適切な抗原結合断片であり得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、マウス、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。抗原結合断片は、ＳＰ３４マウスモノクローナル抗体（例えば、Ｐｒｅｓｓａｎｏ，Ｓ．  Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊ．４：３３７−３４４，１９８５；Ａｌａｒｃｏｎ，Ｂ．ＥＭＢＯ
Ｊ．１０：９０３−９１２，１９９１；Ｓａｌｍｅｒｏｎ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３０４７−５２，１９９１；Ｙｏｓｈｉｎｏ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ａｎｉｍ  ４９：９７−１１０，２０００；Ｃｏｎｒａｄ  Ｍ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  ７１Ａ：９２５−３３，２００７；及びＹａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：１０９７−１１００：１９８６）、Ｃｒｉｓ−７モノクローナル抗体（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ，Ｅ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，
（１９８６）参照）、ＢＣ３モノクローナル抗体（Ａｎａｓｅｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１６９１）、ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３：３３７）及びその誘導体、例えばＯＫＴ３  ａｌａ−ａｌａ（Ｈｅｒｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１：４０９）、ビジリズマブ（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９：２７１２）、１４５−２Ｃ１１モノクローナル抗体（Ｈｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３７６６）、ＵＣＨＴ−１（Ｂｅｖｅｒｌｅｙ，Ｐ  Ｃ  ａｎｄ  Ｃａｌｌａｒｄ，Ｒ．Ｅ．（１９８１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：３２９−３３４）、ＷＯ２０１６１８０９８２に記載されている抗ＣＤ３  ｓｄＡｂ（例えば、６０Ｅ１１及び１１７Ｇ０３）、ならびにＷＯ２００４／１０６３８０；ＷＯ２００４／１０６３８１；ＷＯ２０１０／０３７８３８；ＷＯ２００８／１１９５６７；ＷＯ２００７／０４２２６１；ＷＯ２０１０／０１５０９１８に記載されているＣＤ３結合分子を含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の任意のＣＤ３抗体に基づいて設計することができ；各参考文献の内容は、その全体を参照として本明細書に援用する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２ＫまたはＵＣＨＴに由来するｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来するＶＨＨである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３と同じエピトープに結合する抗体に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３と競合的に、ＣＤ３に特異的に結合する抗体に由来する。例示的な抗ＣＤ３抗原結合断片の配列を、以下の表３に示す。
【表３】
2020525032.tif 000006
【０１９５】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片はＯＫＴ３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１
；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体；及び／または配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ、または配列番号１０３に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体である。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片はＬ２Ｋに由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体；及び／または配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ、または配列番号１０４に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体である。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片はＵＣＨＴに由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体；及び／または配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有するｓｃＦｖ、または配列番号１０５に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体である。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＶＨＨなどのｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は６０Ｅ１１に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１８２のアミノ酸配列を有するＶＨＨ、または配列番号１８２に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体である。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ、または約５個までのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１８３のアミノ酸
配列を有するＶＨＨ、または配列番号１８３に対して少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するその変異体である。
【０２００】
ペプチドリンカー
標的細胞結合ドメイン及び免疫エフェクター細胞結合ドメインは、ペプチドリンカーを介して互いに融合させてもよい。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメイン及び免疫エフェクター細胞結合ドメインを、ペプチドリンカーを用いずに互いに直接融合させる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、多重特異性または多価標的細胞結合ドメイン中の様々な抗原結合断片（ｓｄＡｂなど）を、ペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合させる。いくつかの実施形態では、抗原結合断片（ｓｄＡｂなど）を、ペプチドリンカーを用いずに互いに直接融合させる。異なる抗原結合断片（ｓｄＡｂなど）を接続するペプチドリンカーは、同じであっても異なっていてもよい。
【０２０２】
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの各ペプチドリンカーは、抗原結合断片（ｓｄＡｂなど）及び／または様々なドメインの構造的及び／または機能的特徴に応じて、同じかまたは異なる長さ及び／または配列を有し得る。各ペプチドリンカーは、独立して選択及び最適化してもよい。キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーに使用するペプチドリンカー（複数可）の長さ、可撓性の程度及び／または他の特性は、１つ以上の特定の抗原またはエピトープの、親和性、特異性または結合力を含むがこれらに限定されない特性に何らかの影響を与える可能性がある。例えば、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないように、より長いペプチドリンカーを選択してもよい。例えば、多量体抗原に対するｓｄＡｂを含む多価または多重特異性標的細胞結合ドメインでは、ペプチドリンカーの長さ及び可撓性は、各抗原結合断片（ｓｄＡｂなど）が、多量体の各サブユニットの抗原決定因子に結合できるようにすることが好ましい。
【０２０３】
いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、可撓性残基（例えば、グリシン及びセリン）を含むため、隣接ドメインは互いに対して自由に移動する。例えば、（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号７４）は、標的細胞結合ドメインと免疫エフェクター細胞結合ドメインとの間の適切なペプチドリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約５０以下（例えば、約３５、２５、２０、１５、１０、または５以下のいずれか１つ）のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２０４】
ペプチドリンカーは、任意の適切な長さにすることができる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００以上のアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、またはそれ以下のアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸〜約１０アミノ酸、約１アミノ酸〜約２０アミノ酸、約１アミノ酸〜約３０アミノ酸、約５アミノ酸〜約１５アミノ酸、約１０アミノ酸〜約２５アミノ酸、約５アミノ酸〜約３０アミノ酸、約１０アミノ酸〜約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸、約５０アミノ酸〜約１００アミノ酸、または約１アミノ酸〜約１００アミノ酸のいずれかである。
【０２０５】
ペプチドリンカーは、天然の配列、または非天然の配列を有し得る。例えば、重鎖のみ抗体のヒンジ領域に由来する配列をリンカーとして使用してもよい。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３参照。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは可撓性リンカーである。例示的な可撓性リンカーとして、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシンセリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎが挙げられ、式中、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及び当技術分野で公知の他の可撓性リンカーが挙げられる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳ（配列番号７２）、（ＧＧＧＧＳ）２（配列番号７３）、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号７４）、（ＧＧＧＳ）２（配列番号７５）、（ＧＧＧＳ）４（配列番号７６）、またはＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号７７）である。
【０２０６】
シグナルペプチド
本出願のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、ポリペプチドのＮ末端にシグナルペプチド（シグナル配列としても知られる）を含み得る。一般的に、シグナルペプチドは、細胞内の所望の部位にポリペプチドを標的化するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを細胞の分泌経路に対して標的化し、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを細胞培養培地へ分泌させることができる。シグナルペプチドには、天然タンパク質のシグナル配列または合成による非天然のシグナル配列が含まれる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ヒトアルブミンシグナルペプチド（例えば、ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ、配列番号７０）に由来する。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ヒトアズロシジン分泌シグナル（例えば、ＭＴＲＬＴＶＬＡＬＬＡＧＬＬＡＳＳＲＡ、配列番号７１）に由来する。
【０２０７】
例示的なキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャー
本明細書において、例示的なキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーを提供する。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含むキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーを提供する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメイン及びＬ２Ｋ．０７  ｓｃＦｖ（「ＢＣＭＡ−Ｌ２Ｋ．０７  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１０６〜１１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１５２、１５４、１８９、１９４、１９８、２０２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ及びＯＫＴ３  ｓｃＦｖ（「ＢＣＭＡ−ＯＫＴ３  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１１７〜１２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは
、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１５３、１５５、１８８、１９３、１９７、または２０１のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメイン及びＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ（「ＢＣＭＡ−ＵＣＨＴ１
ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１９０、１９５、１９９、または２０３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ及び抗ＣＤ３  ＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメイン及び６０Ｅ１１  ＶＨＨ（「ＢＣＭＡ−６０Ｅ１１  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１８４のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１８６、１９１、または１９６のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメイン及び１１７Ｇ０３  ＶＨＨ（「ＢＣＭＡ−１１７Ｇ０３  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１８５のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１８７、１９２、または２００のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＣＤ３８  ＶＨＨ及び抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＣＤ３８  ＶＨＨ及びＬ２Ｋ．０７  ｓｃＦｖ（「ＣＤ３８−Ｌ２Ｋ．０７  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＣＤ３８  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャ
ーは、配列番号１２８〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＣＤ３８  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１５６または１５８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＣＤ３８  ＶＨＨ及びＯＫＴ３  ｓｃＦｖ（「ＣＤ３８−ＯＫＴ３  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、単一の抗ＣＤ３８  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１４０〜１５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、２つ、３つまたはそれ以上の抗ＣＤ３８  ＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１５７または１５９のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＣＤ３８  ＶＨＨ及びＵＣＨＴ１  ｓｃＦｖ（「ＣＤ３８−ＵＣＨＴ１  ＣＡＴＥ」）を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、少なくとも１つの抗ＣＤ３８  ＶＨＨ及び抗ＣＤ３  ＶＨＨを含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、抗ＢＣＭＡ
ＶＨＨ、抗ＣＤ３８  ＶＨＨ、及び抗ＣＤ３抗原結合断片（「ＢＣＭＡ  ＊ＣＤ３８−ＣＤ３  ＣＡＴＥ」）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ラクダ科、キメラ、ヒトまたはヒト化である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーは、配列番号１６０〜１６３及び２０６〜２０７から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、さらにＨｉｓタグ（例えば、配列番号２０８）をＮ末端またはＣ末端に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＴＥは、シグナルペプチド（例えば、配列番号７０または７１）をＮ末端に含む。
【０２１８】
配列変異体
いくつかの実施形態では、本明細書において提供するキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーのアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、ｓｄＡｂまたは抗原結合断片のいずれか１つの結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗原結合断片のアミノ酸配列変異体は、抗原結合断片をコードする核酸配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成により調製してもよい。そのような改変には、例えば、抗原結合断片のアミノ酸配列内の残基の欠失、挿入、及び／または置換が含まれる。最終構築物が、例えば、抗原結合及び免疫エフェクター細胞活性化などの所望の特性を保有する限り、最終構築物に到達させるために、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有するキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャー変異体を提供する。置換突然変異誘発の対象部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換を、表４の「好ましい置換」の見出しの下に示す。より実質的な変更を、表４の「例示的な置換」の見出しの下に提供し、アミノ酸側鎖クラスに関して、以下でさらに説明する。
【表４】
2020525032.tif 000007
【０２２０】
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類してもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２２１】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴うだろう。
【０２２２】
置換変異体の１つのタイプは、親抗体またはその断片（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般的に、さらなる研究のために選択した結果として生じる変異体（複数可）は、親抗体に比べて特定の生物学的特性に改変（例えば、向上）（例えば、親和性の増加、免疫原性の減少）を有し、及び／または親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持している。例示的な置換変異体は、親和性
成熟抗体であり、これは、例えば当技術分野で公知のファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る。簡潔に述べると、１つ以上のＨＶＲ残基に変異導入し、変異抗体をファージ上に提示し、特定の生物学的活性（結合親和性など）についてスクリーニングする。
【０２２３】
ＨＶＲに改変（例えば置換）を実施し、例えば抗原結合親和性を向上させてもよい。そのような改変を、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において実施し、同時に、結果として生じる変異型ＶＨまたはＶＬを結合親和性について試験してもよい（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）参照）。二次ライブラリの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、チェーンシャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指定突然変異）のいずれかによって、成熟のために選択した可変遺伝子に多様性を導入する。次いで、二次ライブラリを作成する。次いで、ライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体変異体を同定する。多様性を導入する別の方法には、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）を無作為化させるＨＶＲ指定的なアプローチが含まれる。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、具体的に同定してもよい。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３は、多くの場合に標的とされる。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のＨＶＲ内で、置換、挿入、または欠失を、そのような改変が抗体またはその抗原結合断片の抗原結合能力を実質的に低下させない限り、生じさせてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書において提供する保存的置換）を、ＨＶＲにおいて実施してもよい。そのような改変は、ＨＶＲの「ホットスポット」またはＣＤＲの外側であってもよい。上記で提供した変異型ＶＨＨ配列のいくつかの実施形態では、各ＨＶＲは、未改変であるか、または１つ、２つ、または３つ以下のアミノ酸置換を含む。
【０２２５】
突然変異誘発の標的となり得る抗体の残基または領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基または群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えて、抗体と抗原の相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に、さらなる置換を導入してもよい。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点を特定する。そのような接触残基及び隣接残基を、置換の候補として標的化するか、または排除してもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を有しているかどうかを判定してもよい。
【０２２６】
アミノ酸配列挿入には、１残基〜１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基が挙げられる。キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーの他の挿入変異体として、酵素（例えばＡＤＥＰＴ用）またはキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーの血清半減期を増加させるポリペプチドへの、キメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーのＮ末端またはＣ末端
融合が挙げられる。Ｈｉｓｘ６タグなどのペプチドタグをキメラ抗体免疫エフェクターエンゲージャーに（例えば、Ｃ末端に）付加して、精製及び検出を促進してもよい。
【０２２７】
ＩＩＩ．調製方法
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、抗体の組換え体調製のために当技術分野で公知の任意の方法を使用して、または本明細書に記載するように調製してもよい。
【０２２８】
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーをコードする核酸分子
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーが単一のポリペプチドを含むいくつかの実施形態では、免疫細胞結合ドメインに融合させた標的細胞結合ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーをコードするポリヌクレオチドは、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含み、このリーダー配列は、翻訳時には、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのＮ末端に位置する。リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖リーダー配列であっても、別の異種リーダー配列であってもよい。
【０２３０】
核酸分子は、当技術分野における従来の組換えＤＮＡ技術を使用して構築してもよい。いくつかの実施形態では、核酸分子は、選択した宿主細胞での発現に適した発現ベクターである。
【０２３１】
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。そのようなベクターとして、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３２】
いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞、または他の哺乳類細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターを選択する。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９（２００４）に記載されている。
【０２３３】
宿主細胞
様々な実施形態において、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、細菌細胞などの原核細胞内で；または真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞などの真核細胞内で発現させてもよい。そのような発現は、例えば、当技術分野で公知の手順に従って実施してもよい。ポリペプチドを発現させるために使用してもよい例示的な真核細胞として、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ−Ｓ、ＤＧ４４．Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、及びＦＵＴ８  ＣＨＯ細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；及びＮＳＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを酵母で発現させてもよい。例えば、米国公開第ＵＳ２００６／０２７００４５Ａ１号参照。いくつかの実施形態では、特定の真核生物宿主細胞を、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーに所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択する。
【０２３４】
所望の宿主細胞への１つ以上の核酸の導入は、リン酸カルシウム形質移入法、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介形質移入法、カチオン性脂質媒介形質移入法、電気穿孔法、形質導入
、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成してもよい。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一時的または安定的に形質移入してもよい。
【０２３５】
本出願はまた、本明細書に記載するポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本出願は、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを含む宿主細胞を提供する。目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離するために、異種ＤＮＡを過剰発現可能な宿主細胞を使用することができる。哺乳類宿主細胞の非限定的な例として、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、及びＣＨＯ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４４６２号も参照されたい。適切な非哺乳類宿主細胞として、原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）及び酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ；またはＫ．ｌａｃｔｉｓ）が挙げられる。
【０２３６】
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの精製
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーは、任意の適切な方法により精製してもよい。そのような方法として、親和性マトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられるが、これらに限定されない。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルまたはフェニルカラムは、いくつかのキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの精製に適している場合がある。イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー及び／または陽イオン交換クロマトグラフィー）も、いくつかのキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの精製に適している場合がある。ミックスモードクロマトグラフィー（例えば、逆相／陰イオン交換、逆相／陽イオン交換、親水性相互作用／陰イオン交換、親水性相互作用／陽イオン交換など）も、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの精製に適している場合がある。ポリペプチドを精製する多くの方法が当技術分野で公知である。
【０２３７】
キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーの無細胞産生
いくつかの実施形態では、キメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、無細胞系で産生する。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９−４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８−４５（２００４）；Ｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５−７１３（２００３）に記載されている。
【０２３８】
ＩＶ．医薬組成物
本出願により、本明細書に記載するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つ、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。医薬組成物は、所望の純度を有するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、任意の医薬的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態に調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。
【０２３９】
許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用する用量及び濃度においてレシピエントに対して無毒であり、緩衝液、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤；防腐剤、等張化剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タ
ンパク質錯体）；ＥＤＴＡなどのキレート剤及び／または非イオン性界面活性剤を含む。
【０２４０】
特に安定性がｐＨ依存性である場合、治療効果を最適化する範囲でｐＨを制御するために緩衝液を使用する。緩衝液は、好ましくは約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本発明で使用するのに適した緩衝剤には、有機酸及び無機酸の両方ならびにそれらの塩が含まれる。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。さらに、緩衝液は、ヒスチジン及びトリスなどのトリメチルアミン塩を含む場合がある。
【０２４１】
防腐剤は、微生物の増殖を遅延させるために添加され、通常、０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本発明での使用に適した防腐剤として、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールが挙げられる。
【０２４２】
組成物中の液体の張度を調整または維持するために、時折「安定剤」として知られる等張化剤を存在させる。タンパク質や抗体などの大きな荷電生体分子と併用すると、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それにより、分子間及び分子内相互作用の可能性を低くすることができるため、それらは多くの場合に「安定剤」と呼ばれる。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮して、０．１重量％〜２５重量％、好ましくは１〜５％の任意の量で存在することができる。好ましい等張化剤として、多価糖アルコール、好ましくはグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールなどの三価以上の糖アルコールが挙げられる。
【０２４３】
追加の賦形剤には、以下のうちの１つ以上として機能することができる薬剤が含まれる：（１）充填剤、（２）溶解度向上剤、（３）安定剤、及び（４）変性または容器の壁への付着を防止する薬剤。そのような賦形剤として：多価糖アルコール（上記に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなどのアミノ酸；ショ糖、乳糖、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなどの硫黄含有還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノースなどの三糖類；及びデキストリンまたはデキストランなどの多糖類が挙げられる。
【０２４４】
非イオン性界面活性剤または洗浄剤（「湿潤剤」としても知られる）は、治療薬の可溶化を補助するために、及び撹拌により誘発される凝集から治療用タンパク質を保護するために存在し、それはまた、活性な治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こさずに、製剤をせん断表面応力にさらすこともできる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在させる。
【０２４５】
適切な非イオン性界面活性剤として、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０
など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０及び６０、モノステアリン酸グリセロール、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロースならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用できる陰イオン洗浄剤として、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウムが挙げられる。カチオン性洗浄剤として、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
【０２４６】
医薬組成物をｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するためには、それらは無菌でなければならない。医薬組成物は、滅菌濾過膜を通した濾過により滅菌してもよい。本明細書の医薬組成物は、一般的に、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
【０２４７】
投与経路は、適切な方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路、局所投与、吸入、または徐放もしくは持続放出手段による注射または注入で、公知かつ受け入れられている方法、例えば、長期間にわたる単回または複数回のボーラスまたは注入により行う。
【０２４８】
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の適切な例として、アンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、例えば、成形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例として、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸共重合体、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体と酢酸リュープロリドからなる注射可能なミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０２４９】
本明細書に記載する医薬組成物には、治療する特定の適応症に必要な複数の活性化合物または薬剤、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものも含有させてよい。あるいは、またはさらに、組成物には、細胞傷害剤、化学療法剤、サイトカイン、免疫抑制剤、または成長阻害剤を含ませてもよい。そのような分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて適切に存在させる。
【０２５０】
有効成分はまた、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）において、またはマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタシレート）マイクロカプセルに捕捉してもよい。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎに開示されている。
【０２５１】
Ｖ．治療方法
本出願はさらに、本明細書に記載する医薬組成物またはキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つの有効量を個体に投与することを含む、個体の疾患（例えば、がんまたは自己免疫疾患）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患はＢ細胞関連障害である。いくつかの実施形態では、疾患はがんである。いくつかの実施形態では、疾患は自己免疫疾患である。
【０２５２】
いくつかの実施形態では：（ａ）標的細胞上の抗原に特異的に結合するｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）の疾患（Ｂ細胞関連障害など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞またはＢ細胞である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２５３】
本明細書に記載する方法は、形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、地域性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節外性粘膜関連リンパ組織リンパ腫、結節性単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肺Ｂ細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、悪性化の可能性を持つＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス１病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、及び急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性もしくは免疫細胞関連性アミロイドーシス、または良性単クローン性γグロブリン血症を含むがこれらに限定されない、様々なＢ細胞関連障害の治療に適している。いくつかの実施形態では、形質細胞悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は全身性エリテマトーデスである。
【０２５４】
本明細書に記載する方法は、固形癌及び液性癌（ｌｉｑｕｉｄ  ｃａｎｃｅｒ）を含む
様々ながんの治療に適している。例示的ながんとして、形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、地域性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節外性粘膜関連リンパ組織リンパ腫、結節性単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肺Ｂ細胞血管中心性リンパ腫、及び小リンパ球性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本方法は、早期、進行期及び／または転移性癌などの特定の段階のがんに適用可能である。いくつかの実施形態では、本方法を、第一療法、第二療法、第三療法、または、例えば、化学療法、手術、放射線、遺伝子治療、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、寒冷療法、超音波療法、光線力学療法、ラジオ波焼灼療法などの当技術分野で公知の他の種類のがん療法との併用療法として、アジュバント療法またはネオアジュバント療法において使用する。いくつかの実施形態では、本方法を、多発性骨髄腫、形質細胞腫または形質細胞白血病などの形質細胞障害を治療するために使用する。いくつかの実施形態では、本方法を、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）などのＢ細胞障害を治療するために使用する。
【０２５５】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）のがん（多発性骨髄腫など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配
列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２５６】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）のがん（多発性骨髄腫など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のうちのいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的���胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２５７】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片（例えば、抗ＣＤ３  ＶＨＨまたは抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ）を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）のがん（多発性骨髄腫など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ
３抗原結合断片は、抗ＣＤ３  ＶＨＨなどの抗ＣＤ３  ｓｄＡｂである。いくつか実施形態では、抗ＣＤ３  ＶＨＨは、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は抗ＣＤ３  ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、またはＵＣＨＴ１に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、
ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２５８】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１  のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２の  ｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）のがん（多発性骨髄腫など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は同じ細胞である。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は異なる細胞である。いくつかの実施形態では、第１の細胞及び第２の細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２のｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標��細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂであり、第２のｓｄＡｂは抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。
【０２５９】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）抗ＣＤ３  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３  ＶＨＨなど）を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投
与することを含む、個体（ヒト個体など）のがん（多発性骨髄腫など）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は：（１）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（２）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１８２または１８３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ
ｓｄＡｂは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号２０６または２０７のアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２６０】
本明細書に記載する方法はまた、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス１病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発性動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、及び急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、原発性もしくは免疫細胞関連アミロイド症、または良性単クローン性γグロブリン血症を含むがこれらに限定されない、様々な自己免疫疾患の治療にも適している。いくつかの実施形態では、本方法を、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）または多発性硬化症（ＭＳ）を治療するために使用する。
【０２６１】
したがって、いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）の自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスなど）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有する
ＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２６２】
いくつかの実施形態では：（ａ）抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂ（抗ＣＤ３８  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；及び（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）の自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスなど）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号３４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号５９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号４９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号３９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号４０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号４１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号４３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（１１）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１２）配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号５７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂは、配列番号８９〜１００からなる群か
ら選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２６３】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の標的細胞上の第１の抗原に特異的に結合する第１のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）及び第２の標的細胞上の第２の抗原に特異的に結合する第２のｓｄＡｂ（ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）免疫エフェクター細胞上の抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）の自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスなど）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は同じ細胞である。いくつかの実施形態では、第１の標的細胞と第２の標的細胞は異なる細胞である。いくつかの実施形態では、第１の細胞及び第２の細胞は腫瘍細胞である。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２のｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞はＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞の抗原結合断片は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、またはｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞結合ドメインは、抗ＣＤ３抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、ＵＣＨＴ１、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂは抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂであり、第２のｓｄＡｂは抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、第１のｓｄＡｂ及び第２のｓｄＡｂは抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂである。
【０２６４】
いくつかの実施形態では：（ａ）第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ（抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨなど）を含む標的細胞結合ドメイン；ならびに（ｂ）抗ＣＤ３抗原結合断片（例えば、抗ＣＤ３  ＶＨＨまたは抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ）を含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを含む、有効量のキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを個体に投与することを含む、個体（ヒト個体など）の自己免疫疾患（全身性エリテマトーデスなど）の治療方法を提供する。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂを、ペプチドリンカーを介して第２の抗ＢＣＭＡ
ｓｄＡｂに融合させる。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、ＢＣＭＡ上の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、抗ＣＤ３  ＶＨＨなどの抗ＣＤ３  ｓｄＡｂである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ＶＨＨは、６０Ｅ１１または１１７Ｇ０３に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は抗ＣＤ３  ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３  ｓｃＦｖは、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ、またはＵＣＨＴ１に由来する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１６４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１６９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（２）配列番号１７０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（３）配列番号１７６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１７８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号１８１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＬ；（４）配列番号３１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ；または（５）配列番号３２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号３２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含むＶＨＨ。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗原結合断片は、配列番号１０３〜１０５及び１８２〜１８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは表２に挙げる抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、以下のいずれか１つを含む：（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（２）配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（３）配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（４）配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２６のアミノ酸配��を有するＣＤＲ３；（５）配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（７）配列番号７のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（８）配列番号８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；（９）配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３１のアミノ酸配列
を有するＣＤＲ３；（１０）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３；または（１１）配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１；配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２；及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、第１の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び／または第２の抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂは、配列番号７８〜８８及び２９０〜３１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＮ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、免疫エフェクター細胞結合ドメインのＣ末端に融合させる。いくつかの実施形態では、標的細胞結合ドメインを、ペプチドリンカー、例えば、配列番号７２〜７７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドリンカーを介して、免疫エフェクター細胞結合ドメインに融合させる。
【０２６５】
医薬組成物の投与は、注射、摂取、輸血、留置または移植を含む、任意の簡便な方法で実施してもよい。組成物を患者に、経動脈、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内、または腹腔内投与してもよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物を全身投与する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を、静脈内注入などの注入によって個体に投与する。免疫療法のための注入技術は当技術分野で公知である（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３１９：１６７６（１９８８）参照）。いくつかの実施形態では、医薬組成物を、皮内または皮下注射により個体に投与する。いくつかの実施形態では、組成物を静脈内注射により投与する。いくつかの実施形態では、組成物を腫瘍またはリンパ節に直接注入する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を、腫瘍部位に局所的に、例えば、直接、腫瘍細胞内へ投与するか、または腫瘍細胞を有する組織に投与する。
【０２６６】
本発明の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の用途に応じて異なり得る。適切な用量または投与経路の決定は、十分に通常の技術の範囲内である。動物実験は、ヒトの治療に対する有効量を決定するための信頼できる指針を提供する。有効量の種間スケーリングは、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．  ａｎｄ  Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．“Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ  Ｓｃａｌｉｎｇ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，”Ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８９，ｐｐ．４２−４６によって規定された原則に従って実施することができる。異なる製剤が異なる治療及び異なる障害に効果的であること、ならびに特定の器官または組織の治療を目的とする投与が、別の器官または組織に対する投与とは異なる方式での送達を必要とする可能性があることは、本出願の範囲内である。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、医薬組成物またはキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、投与経路に応じて、１日当たり、個体の体重当たり、約１０ｎｇ／ｋｇ〜最大約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の用量、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日で投与する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を１回投与する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を複数回（例えば、２、３、４、５、６、またはそれ以上の回数）投与する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を、週１回〜年１回の頻度で投与する。いくつかの実施形態では、投与間の間隔は約１週間〜約１年である。特定の患者に対する最適な用量及び治療レジメンは、疾患の徴候について患者をモニタリングし、それに応じて治療を調整することにより、医学の当業者が容易に決定することができる。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、医薬組成物またはキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーを、１回以上の別々の投与により、または連続注入により投与する。数日以上の繰
り返し投与の場合、病態に応じて、疾患症状の望ましい抑制が起こるまで治療を持続させる。しかしながら、他の投与レジメンが有用な場合がある。この治療法の進捗は、従来技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
【０２６９】
ＶＩ．キット及び製品
本明細書に記載するキメラ抗体免疫エフェクター細胞エンゲージャーのいずれか１つを含むキット、単位用量、及び製品をさらに提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する医薬組成物のいずれか１つを含むキットを提供し、好ましくはその使用のための説明書を提供する。
【０２７０】
本出願のキットは、適切な包装に入っている。適切な包装として、バイアル、ボトル、ジャー、軟包装（例えば、密封マイラーまたはプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、場合により、緩衝液や解説情報などの追加の構成要素を提供する場合がある。したがって、本出願は、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、ジャー、軟包装などを含む製品も提供する。
【０２７１】
製品には、容器、及びその容器上または容器に貼付したラベルまたは添付文書を含めることができる。適切な容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成してもよい。一般的に、容器は、本明細書に記載する疾患または障害（がんまたは自己免疫疾患など）の治療に有効な組成物を保持し、また、滅菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針で貫通可能なストッパーを備えた静脈内輸液バッグまたはバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、個体の特定の病態の治療に組成物を使用することを示す。ラベルまたは添付文書はさらに、組成物を個体に投与するための注意書きを含む。ラベルは、再構成及び／または使用に関する指示を示すものであってもよい。医薬組成物を保持する容器は、複数回使用バイアルであってもよく、これは、再構成した製剤の反復投与（例えば、２〜６回の投与）を可能にする。添付文書とは、治療剤製品の使用に関する指示、使用法、用量、投与、禁忌及び／または警告に関する情報を含む、治療剤製品の市販パッケージに通常含まれている説明書を指す。これに加えて、製品は、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む、第２の容器をさらに有していてもよい。さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の物質を含んでいてもよい。
【０２７２】
キットまたは製品は、薬局、例えば病院薬局及び調剤薬局での保管及び使用に十分な量で包装された医薬組成物及び使用説明書の複数の単位用量を含み得る。
【実施例】
【０２７３】
以下の実施例及び例示的実施形態は、純粋に本発明の例示であることが意図されており、したがって、いかなる点でも本発明を限定するものとみなされるべきではない。以下の実施例と詳細な説明は、例示として提供するものであり、制限するものではない。
【０２７４】
実施例１．キメラ抗体免疫細胞エンゲージャーの調製
本実施例は、以前に同定された抗ＢＣＭＡ、抗ＣＤ３８及び抗ＣＤ３抗体由来の抗原結合断片を使用した例示的なキメラ抗体Ｔ細胞エンゲージャー（ＣＡＴＥ）の設計及び調製を記載する。例示的なＣＡＴＥは、本明細書中ではそれぞれ、ＢＣＭＡ  ＣＡＴＥ、ＣＤ３８  ＣＡＴＥ及びＢＣＭＡ＊ＣＤ３８  ＣＡＴＥと呼ばれる。
【０２７５】
１．単一ドメイン抗体の生成
ラマから取得し、ファージライブラリとしてクローニングされた単一ドメイン抗体また
はＶＨＨレパートリーを選択に使用した。ｓｄＡｂの生成方法は、例えばＰＣＴ／ＣＮ２０１７／０７２７２３に記載されている。簡潔に述べると、指定の抗原に対して高い結合親和性を有する単一ドメイン抗体を開発するために、ラマを免疫し、ファージディスプレイライブラリを構築してＶＨＨリードを同定した。明確なクローンをランダムに選択し、抗原結合に主要な役割を果たす領域である重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ３）の配列に従って分類した。特定の特性に対するライブラリスクリーニングにより、優れた特性を備えたいくつかの抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂが得られた。抗ＢＣＭＡ  ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ３８  ｓｄＡｂの重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列は、遺伝子配列決定により得られた。いくつかのｓｄＡｂを選択し、例示的なＣＡＴＥを設計した。
【０２７６】
２．例示的なキメラ抗体Ｔ細胞エンゲージャーの設計
それぞれがヒト抗原ＢＣＭＡ及び／またはＣＤ３８を標的とする標的細胞結合ドメイン、及びＣＤ３εを標的とするＴ細胞結合ドメインを含む、例示的なＣＡＴＥ分子を設計した。
【０２７７】
当技術分野で公知の任意の方法を使用して、免疫グロブリン軽鎖及び／または重鎖可変領域を含む、所定の抗原に対する抗体を調製することができる。全長抗体に基づいて、様々な形式の抗原結合断片を設計することができる。例えば、単一ドメイン抗体の抗原結合断片を、単一の重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）とすることができ、これは、軽鎖の補助を必要とせずに抗原に対して高い親和性を有し得る。４本鎖抗体に基づく適切な抗原結合断片として、ｓｃＦｖ及びＦａｂが挙げられる。
【０２７８】
本実施例では、例示的なＣＡＴＥ分子＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０を、公知の抗ＣＤ３抗体、ＯＫＴ３、Ｌ２Ｋ及びＵＣＨＴ１に由来する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖを含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを有するように設計した。抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬを遺伝子編集して対応するｓｃＦｖを調製し、これを抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ（ＣＡＴＥ＃００１〜００９）、２つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ（ＣＡＴＥ＃０１０〜０１２）、抗ＣＤ３８  ＶＨＨ（ＣＡＴＥ＃０２８〜０３０）、及び抗ＣＤ３８  ＶＨＨに融合させた抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ（ＣＡＴＥ＃０２５〜０２７）を含む標的細胞結合ドメインに融合して、ｓｄＡｂベースのＣＡＴＥを提供した。さらに、抗ＢＣＭＡ抗体Ｊ２２．９−ｘｉ（ＰＤＢデータベース：４ＺＦＯ；ＣＡＴＥ＃０２２〜０２４）またはＣ１１Ｄ５．３（ＷＯ２０１０１０４９４９；ＣＡＴＥ＃０１９〜０２１参照）に由来する抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含むＢＣＭＡ  ｓｃＦｖベースのＣＡＴＥを調製した。
【０２７９】
例示的なＣＡＴＥ分子＃０３１〜０３８を、抗ＣＤ３単一ドメイン抗体６０Ｅ１１（Ｔ０１７００６０Ｅ１１とも呼ばれる；配列番号１８２）または１１７Ｇ０３（Ｔ０１７０１１７Ｇ０３とも呼ばれる；配列番号１８３）に由来する抗ＣＤ３  ＶＨＨを含む免疫エフェクター細胞結合ドメインを有するように設計した。抗ＣＤ３単一ドメイン抗体は、以前にＷＯ２０１６１８０９８２に記載されている。ＣＡＴＥ＃０３１及びＣＡＴＥ＃０３２を、単一のＢＣＭＡ  ＶＨＨを含む一価の標的細胞結合ドメインを有するように設計した。ＣＡＴＥ＃０３５及びＣＡＴＥ＃０３６を、Ｊ２２．９−ｘｉに由来する単一のＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含む一価の標的細胞結合ドメインを有するように設計した。ＣＡＴＥ＃０３３及びＣＡＴＥ＃０３４を、２つの異なる抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨを含む二価の標的細胞結合ドメインを有するように設計した。ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８を、抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ及びＣＤ３８  ＶＨＨを含む二重特異性標的細胞結合ドメインを有するように設計した。
【０２８０】
３．ＣＡＴＥをコードするベクター
ＣＡＴＥ＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０について、３つの異なる抗ＣＤ３
ｓｃＦｖヌクレオチド配列を保有する３つのＣＡＴＥバックボーンプラスミドを、哺乳
類タンパク質発現ベクターｐＴＴ５（ＮＲＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）に基づいて設計した。これらの３つのＣＡＴＥバックボーンプラスミドを、それぞれ、ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ１、ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ２、及びｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ３と名付けた。ＣＡＴＥバックボーンベクターは、以下のように調製した。
【０２８１】
ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ１ベクターの構築：クローンＬ２Ｋ．０７（Ｄｒｕｇｂａｎｋアクセス番号ＤＢ０９０５２）由来のＣ末端に６×Ｈｉｓタグ（配列番号２０８）を有する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列を、ヒト及びＣＨＯ細胞系において発現させるためにコドン最適化した。コドン最適化ヌクレオチド配列を化学的に合成し、当技術分野で公知の分子クローニング技術を使用して、ＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位を介してｐＴＴ５ベクターにサブクローニングした。
【０２８２】
ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ２ベクターの構築：クローンｍＯＫＴ３（ＰＤＢアクセス番号１ＳＹ６）由来のＣ末端に６×Ｈｉｓタグ（配列番号２０８）を有する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列を、ヒト及びＣＨＯ細胞系において発現させるためにコドン最適化した。コドン最適化ヌクレオチド配列を化学的に合成し、当技術分野で公知の分子クローニング技術を使用して、ＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位を介してｐＴＴ５ベクターにサブクローニングした。
【０２８３】
ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ３ベクターの構築：クローンｍＵＣＨＴ１（ＰＤＢアクセス番号１ＸＩＷ）由来のＣ末端に６×Ｈｉｓタグ（配列番号２０８）を有する抗ＣＤ３  ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列を、ヒト及びＣＨＯ細胞系においてより良好に発現させるためにコドン最適化した。コドン最適化ヌクレオチド配列を化学的に合成し、当技術分野で公知の分子クローニング技術を使用して、ＸｂａＩ及びＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位を介してｐＴＴ５ベクターにサブクローニングした。
【０２８４】
２つの異なるシグナルペプチド、ヒトアルブミン分泌シグナルペプチド（例えば、配列番号７０）及びヒトアズロシジン分泌シグナル（例えば、配列番号７１）を選択した。Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．２０１３  Ａｐｒ；１１０（４）：１１６４−７３参照。
【０２８５】
ＣＡＴＥ発現プラスミドを構築するために、シグナルペプチド、少なくとも１つの抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨ及び／または抗ＣＤ３８  ＶＨＨ、ならびにペプチドリンカーをコードするヌクレオチドを順番に融合させた。ヌクレオチド配列を、ヒト及びＣＨＯ細胞系において発現させるためにコドン最適化した。５’末端にコザック配列を有するコドン最適化ヌクレオチド配列を化学合成し、当技術分野で公知の分子クローニング技術を使用して、ＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ制限エンドヌクレアーゼ部位を介して各ＣＡＴＥバックボーンベクター（ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ１、ｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ２、及びｐＴＴ５−ＬＩＢ−ＢＢ３）にサブクローニングした。ＣＡＴＥ＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０を以下の表５に示す。
【表５】
2020525032.tif 000008
【０２８６】
ＣＡＴＥ＃０３１〜ＣＡＴＥ＃０３８の場合、標的細胞結合ドメインと抗ＣＤ３単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）を連結するグリシン−セリンリンカー（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号７４）をコードするヌクレオチド配列を保有するベクターを合成し、哺乳類タンパク質発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にクローニングした。“Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＨＯ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ．２０１３  Ａｐｒ；１１０（４）：１１６４−７３）で言及されているように、ヒトアルブミン分泌シグナルペプチド（配列番号７０）をタンパク質分泌のために含めた。ポリヒスチジンタグ（６×Ｈｉｓタグ、配列番号２０８）を各ＣＡＴＥ分子のＣ’末端に配置した。通常の分子生物学技術を使用して、即時形質移入可能なプラスミドをマキシプレップした。ＣＡＴＥ＃０３１〜ＣＡＴＥ＃０３８を以下の表６に示す。
【表６】
2020525032.tif 000009
【０２８７】
実施例２．哺乳類宿主細胞における例示的なＣＡＴＥの発現及び精製
例示的なＣＡＴＥを発現する細胞株を確立した。
【０２８８】
簡潔に述べると、例示的なＣＡＴＥ＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０をコードするプラスミドをそれぞれ、２９３−６Ｅ細胞に一過性に形質移入した。簡潔に述べると、３×１０５個の２９３−６Ｅ細胞を１２ウェルプレートに播種した。各即時形質移入可能なＣＡＴＥプラスミド２μｇを事前に最適化された比率でポリエーテルイミド（ＰＥＩ）と混合し、完全に混合し、室温で５分間インキュベートした。次いで、形質移入混合液を２９３−６Ｅ細胞に滴下し、穏やかに混合した。その後、細胞を、５％ＣＯ２の細胞インキュベーター内で、３７℃、一晩インキュベートした。
【０２８９】
翌日、形質移入した細胞を含むウェルを新鮮なフリースタイル培地でリフレッシュし、その後、形質移入した細胞を細胞インキュベーターでさらに４日間増殖させた。最終日に、ウェルから上清を回収し、５００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。次いで、上清を等分し、−８０℃で保存した。ｐＭＡＸ−ＧＦＰプラスミド（Ｌｏｎｚａ）を、同一の形質移入プロトコールの下で対照として用い、各プレートの形質移入効率をモニタリングした。各形質移入におけるＧＦＰの発現レベルを、ＡＴＴＵＮＥ（商標）Ｎｘｔフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。各対照ウェルのＧＦＰ発現レベルは９５％以上であったが、これは形質移入が成功したことを示している。
【０２９０】
２９３−６Ｅ細胞の上清中の例示的なＣＡＴＥ＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０の発現レベルを、抗６×Ｈｉｓタグ−ＨＲＰベースのＥＬＩＳＡを使用して測定した。図１は、例示的なＣＡＴＥ＃００１〜＃０１２及び＃０１９〜＃０３０の発現レベルを示し、これらは平均約１〜２μｇ／ｍＬであった。
【０２９１】
ＣＡＴＥ＃０３１〜０３８抗体は、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ懸濁細胞の一過性形質移入により得られた。簡潔に述べると、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ懸濁細胞を調製し、ポリカーボネートエルレンマイヤーフラスコに播種した。１００μｇの即時形質移入可能なＣＡＴＥプラスミドとＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３形質移入キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃Ａ１４３５１）を、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ還元血清培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃３１９８５０７０）と事前に別々に混合し、室温で５分間インキュベートした。次いで、２つの混合物を穏やかに混合し、室温で２５分間インキュベートした。次いで、形質移入混合物をＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞に滴下し、穏やかに混合した。その後、細胞を、３７℃、８％ＣＯ２の細胞インキュベーター内で一晩、１００ｒｐｍの速度のシェーカー上でインキュベートした。形質移入の１６〜１８時間後、ＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３形質移入キット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃Ａ１４３５１）の５００μＬのＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３形質移入エンハンサー１及び５ｍＬのＥＸＰＩＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商標）２９３形質移入エンハンサー２を各フラスコに加えた。形質移入後、１〜２日ごとに細胞生存率をモニタリングした。形質移入の４〜５日後に、各ウェルから上清を回収した。上清を、４℃、４５００ｒｐｍで２５分間遠心分離した後、０．２２μｍフィルターで濾過して細胞と破片を除去した。その後、細胞培養上清から得られたタンパク質を、ＡＫＴＡ  Ｐｕｒｅ２５上のＨＩＴＲＡＰ（商標）ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ（ＧＥ＃１１−００３４−９３または１１−００３４−０９５）によるワンステップ精製を使用して、標的抗体精製のために処理した。最終タンパク質を保存バッファー（１×ＰＢＳ、ｐＨ  ７．２）に再懸濁し、０．２２μｍフィルターで滅菌し、無菌的に分注し、−８０℃で保存した。タンパク質濃度を、ＢＳＡを標準として使用するＢｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイにより測定した（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号２３２３６）。タンパク質の純度を、非還元条件下でのクーマシーブルー染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルのデンシトメトリー分析により推定した。ＬＡＬエンドトキシンアッセイキット（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｌ００３５０）を使用してエンドトキシンレベルを評価した。
【０２９２】
表７及び図２Ａ〜２Ｂに示すように、ＣＡＴＥタンパク質＃０３１〜０３８を、上記の手順を使用して首尾よく発現させた。
【表７】
2020525032.tif 000010
【０２９３】
実施例３．多発性骨髄腫細胞に対する例示的なＣＡＴＥのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性
１．ヒト一次Ｔ細胞の調製
白血球をアフェレーシスにより健康なドナーから収集し、Ｒ１０培地中で細胞濃度を５×１０６細胞／ｍｌに調整した。次いで、白血球を０．９％ＮａＣｌ溶液と１：１（ｖ／ｖ）比で混合した。３ｍＬのｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ培地を１５ｍＬの遠心チューブに加え、ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ培地上に６ｍｌの希釈リンパ球混合液を緩やかに積層した。リンパ球混合物を、破壊せずに２０℃、８００ｇで３０分間遠心分離した。次いで、リンパ球バフィーコートを２００μＬピペットで収集した。採取した画分を０．９％ＮａＣｌまたはＲ１０で少なくとも６倍に希釈して、溶液の密度を低下させた。次いで、採取した画分を、２０℃、２５０ｇで１０分間遠心分離した。上清を完全に吸引し、細胞ペレットを再懸濁するために１０ｍＬのＲ１０を加えた。混合物をさらに２０℃、２５０ｇで１０分間遠心分離した。上清を再び吸引した。１００ＩＵ／ｍＬ  ＩＬ−２を含む３７℃に事前に加温したＲ１０  ２ｍＬを細胞ペレットに加え、細胞ペレットを静かに再懸濁した。トリパンブルー染色後に細胞数を測定した。得られたＰＢＭＣ試料は、後の実験に即時使用可能であった。
【０２９４】
Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｐａｎ  Ｔ細胞単離キット（カタログ番号１３０−０９６−５３５）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ＰＢＭＣからヒトＴ細胞を精製した。簡潔に述べると、最初に細胞数を測定し、細胞懸濁液を３００ｇで１０分間遠心分離した。次いで、上清を完全に吸引し、細胞ペレットを全細胞１０７個あたり４０μＬの緩衝液に再懸濁した。全細胞１０７個あたり１０μＬのＰａｎ  Ｔ細胞ビオチン−抗体カクテルを加え、完全に混合し、冷蔵庫（２〜８℃）で約５分間インキュベートした。次いで、１０７細胞あたり３０μＬの緩衝液を加えた。１０７細胞あたり２０μＬのＰａｎ  Ｔ細胞ＭｉｃｒｏＢｅａｄカクテルを加えた。細胞懸濁液混合物を十分に混合し、冷蔵庫（２〜８℃）でさらに１０分間インキュベートした。磁気分離には最低５００μＬが必要である。磁気分離のために、適切なＭＡＣＳ（商標）Ｓｅｐａｒａｔｏｒの磁場中にＬＳカラムを配置した。３ｍｌの緩衝液ですすいでカラムを調製した。次いで、細胞懸濁液をカラムにアプライし、非標識細胞を含むフロースルーを収集したが、これは濃縮Ｔ細胞画分を意味している。カラムを３ｍｌの緩衝液で洗浄し、通過した非標識細胞を収集することにより、追加のＴ細胞を収集した。ここでも、これらの非標識細胞は濃縮Ｔ細胞を意味しており、これらを前工程のフロースルーと合わせた。プールした濃縮Ｔ細胞を、次いで遠心分離し、１００ＩＵ／ｍＬ  ＩＬ−２を補充したＲ１０中に再懸濁した。
【０２９５】
調製したＴ細胞を、その後、ヒトＴ細胞活性化／増殖キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＃１３０−０９１−４４１）を用いて、製造業者のプロトコールに従って、４８〜９６時間、事前に活性化し、その際、抗ＣＤ３／ＣＤ２８  ＭＡＣＳＩ（商標）ビーズを、ビーズ対細胞比１：２でＴ細胞に加えた。
【０２９６】
２．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞媒介細胞傷害性アッセイ
ホタルルシフェラーゼ遺伝子のＲＰＭＩ８２２６宿主細胞への形質導入により、ヒト多発性骨髄腫細胞株ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃを開発した。単独培養するか、または予備刺激したＴ細胞と共培養したＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞上で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞媒介細胞傷害性アッセイを実施した。
【０２９７】
腫瘍細胞に対する例示的なＣＡＴＥのＴ細胞媒介細胞傷害性を評価するために、ＯＮＥ−ＧＬＯ（商標）発光ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ６１１０）を製造業者のプロトコールに従って調製し、細胞試料に加えた（すなわち、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ単独、またはＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ＋予備刺激Ｔ細胞）。各ウェルの残存ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼはＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞でのみ発現するため、各ウェルの残存ルシフェラーゼ活性は、ウェル内の生存ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞（すなわち、標的細胞）の数と直接相関する。最大ルシフェラーゼ活性は、予備刺激したＴ細胞（すなわち、エフェクター細胞）非存在下で標的細胞に培地を添加する
ことにより取得した。最小ルシフェラーゼ活性は、細胞傷害性アッセイの開始時に終濃度１％でＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を添加し、すべての標的細胞を溶解することにより決定した。特異的な細胞傷害性％＝１００％×（１−（ＲＬＵｓａｍｐｌｅ−ＲＬＵｍｉｎ）／（ＲＬＵｍａｘ−ＲＬＵｍｉｎ））の式を使用して、特異的な細胞傷害性を計算した。データは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用い、非線形回帰「ｌｏｇ（阻害剤）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ−Ｖａｒｉａｂｌｅ  ｓｌｏｐｅ（４パラメータ）」を使用して解析及び提示した。
【０２９８】
ＣＡＴＥ＃００１〜０１２及び＃０１９〜０３０について、最初に、上記のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞媒介細胞傷害性アッセイを使用して予備スクリーニングを実施した。各例示的ＣＡＴＥを含む上清を、１：５または１：５０の希釈係数で、アッセイ培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）で希釈し、２０００個のＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞とともに、３８４ウェル形式のマイクロプレート中でインキュベートした。予備刺激Ｔ細胞をエフェクター対標的細胞比５：１で各ウェルに加え、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対するＣＡＴＥのＴ細胞媒介細胞傷害性を開始させた。ｐＭａｘ−ＧＦＰを形質移入した２９３−６Ｅ細胞由来のフリースタイル培地を陰性対照として使用した。細胞培養インキュベーター内で一晩インキュベートした後、ＯＮＥ−ＧＬＯ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系試薬を各ウェルに加え、残存ルシフェラーゼ活性を測定して、残存する生存腫瘍細胞の数を評価した。予備スクリーニングから、高いｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞媒介細胞傷害性を有するいくつかのＣＡＴＥをさらなる実験のために選択した。
【０２９９】
選択した各ＣＡＴＥの用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性曲線を決定した。選択した各ＣＡＴＥを含む上清をアッセイ培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）で希釈し、２０００個のＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞とともに、３８４ウェル形式のマイクロプレート中でインキュベートした。群１では、予備刺激Ｔ細胞をエフェクター対標的細胞比５：１で各ウェルに加え、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対するＣＡＴＥのＴ細胞媒介細胞傷害性を開始させた。群２では、例示的なＣＡＴＥ及びＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞を含む各ウェルに、予備刺激Ｔ細胞の代わりにアッセイ培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）を加え、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対するＣＡＴＥのＴ細胞非依存性細胞傷害性を決定した。一晩インキュベートした後、アッセイプレートを３００ｇで１分間、手短に遠心分離し、次いで各ウェルの上清１０μＬを回収して、分泌されたＩＦＮγのレベルを検出した。共培養アッセイの残存細胞にＯＮＥ−ＧＬＯ（商標）ルシフェラーゼアッセイ系試薬を加え、残存ルシフェラーゼ活性を測定して、残存する生存腫瘍細胞の数を評価した。
【０３００】
図３Ａは、Ｌ２Ｋ．０７由来の抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＣＡＴＥ−Ｌ２Ｋ．０７  ｓｃＦｖ）に基づくＣＡＴＥの用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。図３Ｂは、ＯＫＴ３由来抗ＣＤ３  ｓｃＦｖ（ＣＡＴＥ−ＯＫＴ３  ｓｃＦｖ）に基づくＣＡＴＥの用量依存的Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。例示的なＣＡＴＥのＥＣ５０値を、以下の表８に記載する。低いＥＣ５０値は、ＣＡＴＥによる高いＴ細胞媒介細胞傷害性に対応する。結果は、ＢＣＭＡ及び／またはＣＤ３８を標的とするＶＨＨドメインを含むＣＡＴＥが、多発性骨髄腫細胞に対して強力なＴ細胞媒介細胞傷害効果を有することを示している。さらに、抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨドメインを含むＣＡＴＥは、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖドメインを含むＣＡＴＥに比べて、多発性骨髄腫細胞に対してより高いＴ細胞媒介細胞傷害効果を有する。
【表８】
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【０３０１】
終濃度１０μｇ／ｍＬのＣＡＴＥ＃０３７、ＣＡＴＥ＃０３８、抗ＢＣＭＡ抗体（抗ＣＤ３ドメインなし）、または抗ＣＤ３抗体（抗ＢＣＭＡドメインなし）を、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞とともに、一次Ｔ細胞の存在下または非存在下で一晩、共培養した。共培養アッセイのエフェクター細胞対標的細胞の比率は５：１であった。ＣＡＴＥ分子を用いたアッセイは、１００００ｎｇ／ｍＬからの１０倍連続希釈で実施した。ＯＮＥ−ＧＬＯ（商標）ルシフェラーゼアッセイを使用して、上記のように細胞傷害性を評価した。
【０３０２】
図４及び表９に示すように、ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８は、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対する一次Ｔ細胞依存性細胞傷害性を用量依存的に媒介するのに有効であった。ＥＣ５０値は、ＣＡＴＥ＃０３７で７．７０６ｎｇ／ｍＬ、ＣＡＴＥ＃０３８で３．９４４ｎｇ／ｍＬであった。一次Ｔ細胞の非存在下では、ＣＡＴＥタンパク質は、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対する細胞傷害性を用量依存的に誘発することができなかった。さらに、抗ＢＣＭＡ単独（抗ＣＤ３ドメインなし）または抗ＣＤ３単独（抗ＢＣＭＡドメインなし）を含むタンパク質は、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞に対する細胞傷害性効果を用量依存的に誘発することができなかった。結果は、ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８が、標的腫瘍細胞に対するＴ細胞依存性細胞傷害性を、用量依存的及び抗原依存的に促進することができることを示している。
【表９】
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【０３０３】
３．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩＦＮ−γ放出アッセイ
上記の共培養アッセイにより、群２では、各ウェル由来の上清１０μＬを小容積の丸底白色壁３８４ウェルプレートに移し、各共培養における分泌ＩＦＮγレベルを、ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＩＦＮＰＥＢ）を使用して説明書に従って測定した。図５は、例示的なＣＡＴＥ＃００１、＃００７、＃０１０、＃０１９、＃０２２、＃０２５及び＃０２８に応答して、共培養したＴ細胞により放出されたＩＦＮ−γレベルを示す。ＩＦＮγ放出は、Ｔ細胞活性化の兆候である。データは、抗ＢＣＭＡ  ＶＨＨを含むＣＡＴＥが、抗ＢＣＭＡ  ｓｃＦｖを含むＣＡＴＥに比べて、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞と共培養したＴ細胞から、より高いレベルのＩＦＮγ放出を誘発したことを示している。
【０３０４】
終濃度１０μｇ／ｍＬのＣＡＴＥ＃０３７、ＣＡＴＥ＃０３８、抗ＢＣＭＡ抗体、または抗ＣＤ３抗体を、上記のように、一次Ｔ細胞の存在下または非存在下でＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞とともに一晩共培養した。インキュベーション後、アッセイプレートを１分間（３００ｇ）手短に遠心分離し、ＨＴＲＦキット（Ｃｉｓｂｉｏ、６２ＩＦＮＰＥＢ）による分泌ＩＦＮγレベルの検出のために、キットの説明書に従って、各ウェルの上清１０μＬを小容量の丸底白色壁３８４ウェルプレートに移した。
【０３０５】
図６に示すように、共培養アッセイでＣＡＴＥ＃０３７またはＣＡＴＥ＃０３８によって誘発されたＩＦＮγ放出は、一次Ｔ細胞の存在に依存的であった。抗ＢＣＭＡ抗体単独（抗ＣＤ３ドメインなし）及び抗ＣＤ３抗体単独（抗ＢＣＭＡドメインなし）によって誘発されたＩＦＮγ放出レベルは、一次Ｔ細胞の存在下でさえも、ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８で処理した細胞のレベルよりも有意に低かった。これらの結果は、ＣＡＴＥ＃０３７及び＃０３８が、標的腫瘍細胞に対するＴ細胞依存性ＩＦＮγ放出を抗原依存的に促進することができることを示している。
【０３０６】
実施例７．ＣＡＴＥのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性
ＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍有効性を、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ異種移植片を有する全身性多発性骨髄腫マウスモデルで評価した。ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞は、上記のように調製した。トリパンブルー色素排除により
、細胞生存率は≧９５％であると判定した。腫瘍移植の日に、氷上（４℃）、１０７細胞／ｍＬの濃度で細胞をＨＢＳＳ−／−に懸濁した。
【０３０７】
ＮＯＤ−Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２Ｉｌｒｇｅｇｅ２６Ｃｄ２２／Ｎｊｕ（略称：ＮＣＧ）マウスを本研究において使用した。このマウスモデルは、ＮＯＤ／ＮｊｕマウスのＰｒｋｄｃ及びＩｌ２ｒｇ遺伝子座の逐次的なＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９編集によって作成され、ＮＯＤ／Ｎｊｕマウスとコアイソジェニックなマウスを生成した。ＮＯＤ／Ｎｊｕマウスは、外来造血幹細胞の生着を可能にするＳｉｒｐａ（ＳＩＲＰα）遺伝子に変異を有する。Ｐｒｋｄｃノックアウトは、適切なＴ細胞及びＢ細胞の形成を欠くＳＣＩＤ様の表現型を生成する。Ｉｌ２ｒｇ遺伝子のノックアウトは、ＳＣＩＤ様の表現型をさらに悪化させ、その一方でさらにＮＫ細胞産生の減少をもたらす。この「三重免疫不全」マウス系統は、ＳＣＩＤ及びヌードマウスを含む一般的に使用される免疫不全マウス系統に比べて、より免疫不全性が高い。
【０３０８】
Ｐｒｋｄｃ及びＩｌ２ｒｇは、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞、より低い程度で樹状細胞の、成熟及び形成に影響を与えるＳＣＩＤ（重症複合免疫不全）ファミリーの遺伝子の一部である。ＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ酵素の触媒サブユニットをコードするＰｒｋｄｃ遺伝子を破壊すると、成熟中のＴ細胞及びＢ細胞における抗体多様性の伝播に必要なＶ（Ｄ）Ｊ組換えが減少する。ＩＬ−２及び複数のＩＬ受容体（ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５及びＩＬ−２１）に見出される共通のγサブユニットをコードするＩｌ２ｒｇを破壊すると、結合してサイトカインを介したシグナル伝達を誘導するために受容体が必要であるため、未成熟リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞）及び他の白血球が成熟に達することが妨げられる。ＮＣＧマウス系統は、異種移植細胞、組織、及びヒト免疫系成分をホストできる他の三重免疫不全モデルに類似しており、したがって、腫瘍生物学及び免疫腫瘍学、感染症、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、造血発生、及び組織移植の研究が可能である。
【０３０９】
本研究を実施する前に、動物の管理及び使用を伴う手順について、施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）による検討及び承認を受け、実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）の規則への遵守を確実なものとした。管理された施設内で、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔのＳＯＰに従って動物を適切に維持及び処置した。
【０３１０】
雌のＮＣＧマウス（５〜６週齢）を１週間ケージに入れてから、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ細胞を４×１０６細胞／動物の用量で尾静脈注射により移植した。腫瘍細胞移植の９日後、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を使用してマウスを画像化し、腫瘍の生着を評価した。マウスを無作為に各６匹のマウスを含むいくつかの群に分け、表１０に示すように、０日目（すなわち、ＣＡＴＥ処置の日）に単回投与処置（静脈内）を行った。
【表１０】
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【０３１１】
腫瘍接種後、動物の罹患率を毎日チェックした。定期的なモニタリング中に、動物を、正常な行動に及ぼす腫瘍の成長の影響、例えば、行動能力、食物と水の消費、体重の増加／減少、目／毛のつや消し、その他の異常の兆候について確認した。死亡率と観察可能な臨床徴候を記録した。動物の体重は週２回測定した。１４日ごとに生物発光イメージング（ＢＬＩ）を使用して腫瘍の成長を測定した。動物の生存もモニタリングした。
【０３１２】
図７及び図８に示すように、Ｔ細胞の存在下でＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８で処理したマウスは、Ｔ細胞の非存在下でＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８で処理したマウスまたはＴ細胞のみで処理したマウスよりも有意に高い生存率を示した。これらの結果は、ＲＰＭＩ８２２６．Ｌｕｃ異種移植片を有する全身性多発性骨髄腫マウスモデルにおけるＣＡＴＥ＃０３７及びＣＡＴＥ＃０３８のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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