(57)【要約】  本発明は、特に、糖および／または脂質代謝の病理学的障害の予防および／または治療における、薬物または獣医学製品として使用するための、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの組み合わせのみからなる医薬有効成分に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬物または獣医学製品としての使用のための、次記の組み合わせのみにより構成される医薬有効成分：
−（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、および
−メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート。
【請求項２】
２型糖尿病、非アルコール性脂肪性肝疾患、心臓血管病態、脂質異常症、肥満症および代謝症候群から選択される少なくとも１つの疾患の予防および／または治療における、請求項１に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項３】
前記心臓血管病態が、冠状動脈性心疾患、脳血管疾患、末梢動脈疾患および深部静脈血栓症から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項４】
前記非アルコール性脂肪性肝疾患が非アルコール性脂肪性肝疾患であることを特徴とする、請求項２に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項５】
メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートに対する（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の重量比率が、１／４０〜１／１であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項６】
前記（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの分子が、天然の分子であるかまたは化学的および／または生物工学的方法による合成分子であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項７】
液体形態であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項８】
経口、経腸、非経口または皮下による、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項９】
医薬組成物中の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための医薬有効成分。
【請求項１０】
錠剤、カプセル、ジェルカプセル、粉末、アンプル、ドロッパー用溶液または注射溶液の形態であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬有効成分を含む医薬組成物。
【請求項１１】
０．５〜１００重量％の医薬有効成分の乾燥物を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２種の分子からなる医薬有効成分、および特に、糖および／または脂質代謝の病理学的障害の予防および／または治療における、その薬物としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性代謝障害および疾患は、ますますよく見られるようになっている。これは２型糖尿病の場合に言えることであり、２型糖尿病は、世界中で大きな医学的難題になっている（非特許文献１）。国際糖尿病連合（ＩＤＦ）によると、２型糖尿病の患者の数は、２０１５年には、４億１５００万人で、２０４０年までに５５％増加し、６億４２００万人に達すると予想される（非特許文献２）。２０１５年では、糖尿病は、５００万人の死亡を引き起こし、これは、すなわち、６秒毎に１人の死亡であり、この疾患による世界医療支出は６７３０億ドルであった。
【０００３】
２型糖尿病は、異常に高い血糖値および炭水化物不耐性を特徴とする。この慢性高血糖の主な原因は、インスリン抵抗性ならびに所与の代謝状態に応答した不適切な分泌である（非特許文献３）。この病態を治療するには、主に、血糖レベルを減らし、成人で７．０％以下の比率まで糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）を減らすことが必要である（妊婦を除く、非特許文献４）。診断された大多数の患者は、人生の残りの期間、薬物治療を受ける（非特許文献５）。さらに、現在の治療法は、２型糖尿病の原因、特に、インスリン抵抗性および増加した血糖に対してインスリンを分泌する膵臓の能力の低下を治すのに効果的でなない（非特許文献６）。したがって、ほとんどの患者は、現在の治療薬に対し抵抗性になる（非特許文献７；非特許文献８）。新規薬物開発、特に、増加した血糖に応答したインスリン分泌をより良好に維持できる薬物の開発は、２型糖尿病およびその合併症の発症との闘いにおける優先課題である。これらの効果により、このような薬物は、インスリン療法の実施を遅らせる、というよりその実施を回避することになるであろう。
【０００４】
糖尿病患者ではまた、５０〜７０％の範囲の大きなＮＡＦＬＤの有病率が存在する（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１）。ＮＡＦＬＤまたは非アルコール性脂肪性肝疾患は、単純な脂肪性肝疾患から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および肝硬変までの範囲の領域を含む（非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。ＮＡＦＬＤは、脂肪の過剰肝内蓄積（脂肪症）を特徴とし、これは、非特異的肝炎とは孤立する場合、または、関連する場合がある。ＮＡＳＨは、進行型のＮＡＦＬＤであり、肝細胞の５％超の脂肪症と、小葉炎症および肝細胞障害（バルーン化）が組み合わさったものと定義される（非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）。肝細胞の１〜５％に影響を与える単純な脂肪症は、生理学的なものであると考えられ、良性の進展であり、一方、ＮＡＳＨは、肝細胞損傷、炎症および／または線維化により定義され、これは、肝硬変、肝不全および肝細胞癌に繋がる場合がある（非特許文献１９）。
【０００５】
さらに、２型糖尿病の患者は、心臓血管系の罹患率および死亡率のリスクが高い。したがって、血中脂質および体重の管理などの従来の心臓血管系のリスク因子を管理することも必要となる。この必要性のため、現時点では、異なる薬効分類にあるいくつかの薬物を同時に摂取することになる。薬物の組み合わせは、例えば、筋疾患のリスクを高めるフィブラート系薬剤およびスタチン系薬剤の同時投与などの深刻な副反応を招くことが起こり得る（非特許文献２０）。
【０００６】
したがって、服薬遵守、耐性および効率の面で有利な「マルチターゲット」の作用機序を有する薬物に対する差し迫った必要性がある。このような薬物であれば、心血管代謝疾患の全体的リスクを減らし、それぞれの機能障害および／またはその結果を単独で予防および治療可能になるであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Boyle JP et al., Popul Health Metr 2010; 8. 29
【非特許文献２】IDF Diabetes Atlas, 7th edition
【非特許文献３】Beigi FI, N Eng J Med 2012; 366: 1319-27
【非特許文献４】ADA, Diabetes Care 2015; 38 (1): S33-S40
【非特許文献５】Qaseem A et al., Ann Intern Med 2012;156:218-31
【非特許文献６】Tao H et al., Nat Med 2014;20 (11):1263-69
【非特許文献７】Qaseem A et al., Ann Intern Med 2012;156:218-31
【非特許文献８】D Nathan et al., Diabetes Care 2009; 32:193-203)
【非特許文献９】Anstee Q et al., Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2013;10:330-44
【非特許文献１０】Targher G et al., Diabetes Care 2007;30:1212-8
【非特許文献１１】Williamson R et al., Diabetes Care 2011;34:1139-44
【非特許文献１２】Angulo PN Eng J Med 2002;346:1221-31
【非特許文献１３】Neuschwander-Tetri B et al., Hepatology 2003;37:1202-19
【非特許文献１４】Adams L et al., Gastroenterology 2005;129:113-21
【非特許文献１５】Kotronen A et al. J Clin Endocrinol Metab 2007; 92: 3490-7
【非特許文献１６】Adams L et al., Cmaj 2005;172:899-905
【非特許文献１７】Kleiner D et al., Hepatology 2005;41:1313-21
【非特許文献１８】Brunt E Nat Rev Gastroenterol Hepatol 2010;7:195-203
【非特許文献１９】Vanni E et al Dig liver Dis 2010;42:320-30
【非特許文献２０】Denke MJ Manag Care Pharm 2003;9:17-9
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目標は、これらの未充足の医療ニーズに対応する有効成分を提供することであり、特に、この有効成分は２型糖尿病の発症時の血糖の増加に応答して十分なインスリン分泌を維持できる。
【０００９】
成人の患者の大部分の症例で、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨはインスリン抵抗性およびその表現型の合併症、主として代謝症候群：２型糖尿病、肥満症、動脈性高血圧症、高コレステロール血症および高トリグリセリド血症の一部である状態に関連していることに留意することは重要である（Ｍａｒｃｈｅｓｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００１；５０：１８４４−５０；Ｒａｔｚｉｕ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２０１０；５３：３７２−８４；Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ−Ｔｅｔｒｉ  ＢＡ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００３；３７：１２０２−１９）。
【００１０】
したがって、本発明の別の目的は、以下を可能とする有効成分を提供することである：
・インスリン抵抗性を低減すること；
・酸化ストレスおよび炎症を減少させること；
・脂肪細胞の発生を制限すること；
・血中トリグリセリドのレベルを低下させること。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
これらの目的を達成するために、本発明は、下記の組み合わせのみからなる医薬有効成分の使用を提供する：
−（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸、および
−メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート）。
【００１２】
これらの分子を含む植物抽出物は、栄養製品および医薬組成物への用途として、文献に既に記載されているが、驚くべきことに、本発明による有効成分を用いて得られた結果は、これらの２種の分子を含む植物抽出物で得られると思われる結果とは異なっている。有効成分は、特に、空腹時血糖を減らし、血糖の増加に伴う膵臓のインスリン分泌能力の低下を制限するように、相乗的に作用するこれら２種の分子のみからなる。好都合にも、本発明による有効成分はまた、もっと後でのインスリン療法の導入を想定することができ、これにより、患者の生活の質のかなりの向上がもたらされる（インスリン注射を遅らせるまたはさらには回避される）。
【００１３】
好都合にも、このような有効成分は、２型糖尿病発症の重要な機序であるインスリン抵抗性を制限、あるいは回避することを可能とする。
【００１４】
さらに、本発明による有効成分は、特に、脂肪細胞および血清トリグリセリドの発生を低減することにより、酸化ストレス、炎症、および脂質代謝に作用することができる。
【００１５】
したがって、本発明は、特に、ヒトまたは動物の糖および／または脂質代謝の病理学的障害を予防および／または治療用の薬物または獣医学製品として使用するための、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの組み合わせのみからなる医薬有効成分に関する。
【００１６】
本発明はまた、上述と同じ使用のための、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの組み合わせのみからなる有効成分を含む医薬組成物に関する。
【００１７】
本発明は、以降で、以下に説明する添付図を参照して詳細に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】マウスにおける２型糖尿病の発症の説明図である。
【図２】ポイントＩＩで示された、５週間の治療後の食物摂取量に関連する試験の結果（平均値）であり、これらの結果は、表１の結果に対応する。
【図３】６週間の治療後の空腹時血糖（平均値）に関連するポイントＩＩでの試験の結果であり、これらの結果は、表２の結果に対応する。
【図４】６週間の治療後で相乗効果係数に関連する、ポイントＩＩで示された試験の結果である。
【図５】セクションＩＩの、６週間の治療後の空腹時血中インスリンに関連する試験の結果（中央値）であり、これらの結果は、表３の結果に対応する。
【図６】セクションＩＩの、６週間の治療後の空腹時血清トリグリセリドに関連する試験の結果（平均値）であり、これらの結果は、表４の結果に対応する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明はまた、薬物または獣医学製品として使用するための、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの組み合わせのみからなる医薬有効成分に関する。
【００２０】
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸は、次の化学式に対応する。
【００２１】
【化１】
2020509998.tif 000002
【００２２】
これは、本出願で提供される実施例および試験では、「Ｖ６３Ｘ３５」と呼ばれることもある。
【００２３】
メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートは、次の式に対応する。
【００２４】
【化２】
2020509998.tif 000003
【００２５】
これは、本出願で提供される実施例および試験では、「Ｖ６３Ｘ５４」と呼ばれることもある。
【００２６】
本発明による有効成分を構成するこれらの２種の分子は、天然の分子または化学的および／または生物工学的合成分子である。天然の分子は、８０％〜１００％の純度を有する植物性原料から抽出された分子を意味する。
【００２７】
有効成分は、これらの２種の分子のみからなり、植物性原料から抽出時に生じ得る不純物を除き、他のものを含まない。
【００２８】
好ましくは、メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートに対する（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の重量比率は、１／４０と１／１の間、さらにより好ましくは、１／１と１／１０の間であるのが有利である。実際に、これらの比率は、糖および／または脂質代謝、特に、２型糖尿病との闘いにおいて障害の予防および／または治療のために最適な有効性を得ることを可能とする。
【００２９】
本発明による有効成分は、経口摂取されるように乾燥形態であってよく、乾燥形態は、錠剤またはカプセルなどの固形製剤の作製を可能とする。本発明による有効成分はまた、経口的に、経腸的に、非経口的に、または皮下的に使用するために、液体形態であり得る。
【００３０】
本発明による有効成分は、任意の好適な方法により得ることができる。これは、特に、単純に２種の分子を所望の比率で混合することにより得ることができる。本発明による有効成分を構成する分子は、２種の分子の化学的および／または生物工学的合成法で得るのが有利である。
【００３１】
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の合成は、（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アクリレートと、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−１，３，４，５−テトラヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の化学的および／または酵素的カップリングにより達成できる。エステル化反応は、好ましくは、いわゆる特殊な媒体中で、リパーゼ型酵素触媒を用いて、実施できる。
【００３２】
（メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの合成は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１，２−ベンゼンジオールと、前もってグルコシル化された、［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−ホルミル−５−（メトキシカルボニル）−２−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］酢酸の化学および／または酵素カップリングにより達成できる。エステル化反応およびグルコシル化は、好ましくは、いわゆる特殊な媒体中で、それぞれ、リパーゼおよびβ−Ｄ−グルコシダーゼの酵素触媒を用いて、実施できる。
【００３３】
有利には、本発明による有効成分は、医薬組成物中で使用される。
【００３４】
したがって、本発明はまた、薬物または獣医学製品として使用するための、少なくとも１種の上記の有効成分を含む医薬組成物にも関する。このような組成物は、有効成分のために選択される投与経路と形態に応じて、固形または液体の形態であり得る。
【００３５】
本発明による有効成分は、好ましくは、最終組成物の乾燥分の０．０５重量％（例えば、賦形剤を用いた圧縮形態）〜１００重量％（担体を除く、例えば、カプセル中の組成物の１００％に達する有効成分）である。
【００３６】
最終組成物のパーセンテージとしての有効成分の湿重量は、使用する賦形剤の性質に依存する。
【００３７】
組成物は、これが乾燥形態であるかまたは水でもどす乾燥形態である場合、本発明による有効成分に加えて、必要に応じ、例えば、限定されないが、ステアリン酸、コーンスターチ、微結晶セルロース、シトラール、クロスカルメロースナトリウム塩、クロスポビドン、黄色酸化鉄、ゼラチン、ゲラニオール、キサンタンガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、インジゴチン、マクロゴール４００、マクロゴール８０００、ステアリン酸マグネシウム、マルトデキストリン、オパドライクリアー（ｏｐａｄｒｙ  ｃｌｅａｒ）、ポビドンＫ３０、プロピレングリコール、コロイド状無水シリカ、ナトリウムカルボキシメチルデンプン、安息香酸ナトリウム、二酸化チタンから選択される少なくとも１種のこの形態に適合する賦形剤を含み得る。
【００３８】
組成物は、これが液体形態である場合、本発明による有効成分に加えて、必要に応じ、例えば、限定されないが、ベンジルアルコール、カルメロースナトリウム、塩化セチルピリジニウム、注射用蒸留水（ＷＦＩ）、グリセロール、メタクレゾール、フェノール、リン酸一ナトリウム二水和物、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二ナトリウム十二水和物、プロピレングリコール、ポリソルベート８０、大腸菌タンパク質、塩化ナトリウム、水酸化ナトリウム、塩化亜鉛から選択される少なくとも１種のこの形態に適合する賦形剤を含み得る。
【００３９】
本発明による医薬有効成分および組成物は、特に、ヒトまたは動物の糖および／または脂質代謝の病理学的障害の予防および／または治療に使用され得る。
【００４０】
本発明の意味における病理学的代謝障害は、代謝の病態を促進するおよび／または悪化させるおよび／またはその起源での何らかの障害を意味する。代謝異常状態は、多かれ少なかれ、起源、代謝標的または共通機序により関連付けられた多因子障害を集める病理学的環境を形成する。
【００４１】
本発明の意味における糖代謝のアンバランスは、病態に繋がり得るおよび／または病態を促進させ得るおよび／または病態を悪化させ得る炭水化物の細胞代謝の何らかの障害を意味する。例えば、２型糖尿病は、特に、増加した肝臓グルコース産生を含む糖代謝のアンバランスに関連する。
【００４２】
本発明の意味における脂質代謝のアンバランスは、病態に繋がり得るおよび／または病態に有利に働き得るおよび／または病態を悪化させ得る脂質の細胞代謝の変化を意味する。例えば、ＮＡＦＬＤは、特に、過剰の肝内脂肪蓄積を伴う脂質代謝アンバランスに関連する。
【００４３】
本発明による有効成分および組成物は、下記から選択される少なくとも１つの疾患の予防および／または治療に特に効果的である：
−疾患発症中の増大した血糖に応答した十分なインスリン分泌を維持することによる、２型糖尿病；
−インスリン抵抗性、酸化ストレスおよび炎症に作用することによる、非アルコール性脂肪性肝疾患、特に、ＮＡＦＬＤおよびＮＡＳＨ；
−特に、血清トリグリセリドの低減による、脂質異常症；
−脂肪細胞の発生を低減することによる、肥満症；
−代謝症候群；
−心臓血管病態、特に、２型糖尿病および／またはＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨおよび／または脂質異常症および／または肥満症および／または代謝症候群の合併症から生じた心臓血管病態、特に、冠状動脈性心疾患、脳血管疾患、末梢動脈疾患および深部静脈血栓症から選択される病態。
【００４４】
これらの効果に関し、本発明による有効成分を構成する２種の分子は、相乗的に作用する。
【００４５】
ヒト、特に、２型糖尿病に罹患している患者に経口投与する場合、本発明による有効成分は、好ましくは、５〜５０００ｍｇ／日、さらにより好ましくは１００〜３０００ｍｇ／日の量で投与される。腸内、非経口または腹腔内投与量は、好ましくは、少なくとも５倍少ない。
【００４６】
イヌまたはネコ、特に、２型糖尿病に罹患しているイヌまたはネコに経口投与する場合、本発明による有効成分は、好ましくは、１〜５０００ｍｇ／日、さらにより好ましくは１０〜２０００ｍｇ／日の量で投与される。腸内、非経口または腹腔内投与量は、好ましくは、少なくとも５倍少ない。
【００４７】
好都合にも、本発明による有効成分および組成物は、血糖を減らす、２型糖尿病の発症中の血糖の増加に応答した十分なインスリン分泌を維持する、インスリン感受性を改善する、炎症および酸化ストレスを低減する、血清トリグリセリドを低減する、および脂肪細胞の有益な発生を調節することを可能とする。特に、本発明による有効成分のインスリン代謝に対する効果は、２型糖尿病の治療における基準薬物、メトホルミンの効果より大きい（図５）。
【００４８】
さらに、本発明による有効成分および組成物の経口摂取の実現可能性は、注射によってのみ投与可能な多くの抗糖尿病分子（例：デュラグルチド、リラグルチド、インスリングラルギン／リキシセナチドの組み合わせ）に対して、明確な利点である。
【００４９】
本発明はここで、有効成分および組成物の実施例、ならびに、本発明の有効性を示す試験結果により例証されるが、これらの実施例および試験は限定を意図するものではない。
【００５０】
Ｉ．実施例
実施例１：本発明による有効成分の実施例
実施例１の本発明による有効成分は、乾燥形態の（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの１／４．６の比率の組み合わせから構成される。
【００５１】
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸の合成は、（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アクリレートと、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−１，３，４，５−テトラヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸のカップリングにより達成された。このエステル化反応は、好ましくは、２種の分子の化学的および／または生物工学的カップリング法により実施される。有利には、カップリングは、いわゆる特殊な媒体中で、酵素リパーゼ型触媒により達成される。２０ｇ／Ｌの濃度のカンジダアンタークティカのリパーゼＢを用いて、２−メチルブタン−２−オール／ｎ−ヘキサンの４０／６０（ｖ／ｖ）混合物中、５５℃で、１５０ｍＭの（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）アクリレートと、１５０ｍＭの１Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−１，３，４，５−テトラヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸とのカップリングを１２時間にわたり触媒することが有利である。
【００５２】
（メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートの合成は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１，２−ベンゼンジオールと、前もってグルコシル化された［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−ホルミル−５−（メトキシカルボニル）−２−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］酢酸の化学的および／または酵素的カップリングにより達成された。エステル化反応およびグルコシル化は、いわゆる特殊な媒体中で、それぞれ、リパーゼおよびβ−Ｄ−グルコシダーゼの酵素触媒を用いて、実施された。
【００５３】
２０ｇ／Ｌの濃度のカンジダアンタークティカのリパーゼＢを用いて、２−メチルブタン−２−オール／ｎ−ヘキサンの９０／１０（ｖ／ｖ）混合物中、５５℃で、１５０ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−１，２−ベンゼンジオールと、前もってグリコシル化した７５ｍＭの［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−ホルミル−５−（メトキシカルボニル）−２−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］酢酸とのカップリングを２４時間にわたり触媒することが有利である。
【００５４】
３０Ｕ／ｍｌの濃度の菌核病菌のグルコシダーゼを用いて、３０／７０（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ／アセトン混合物中、４０℃で、５０ｍＭの［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ）−３−ホルミル−５−（メトキシカルボニル）−２−メチル−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル］酢酸と、１００ｍＭのｐＮＰ−β−Ｄ−グルコピラノシドとのグルコシル化を１０時間にわたり触媒することが有利である。
【００５５】
実施例２：本発明による組成物の実施例
実施例２の本発明による組成物は、１日投与量として乾燥形態の１００ｍｇの（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸および４６０ｍｇのメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートを含む。
【００５６】
本発明による組成物は、１２００ｍｇの白色分割錠剤の形態である。これは、次の賦形剤：ヒプロメロース、ステアリン酸マグネシウム、ポビドンＫ３０を含む。したがって、賦形剤は６４０ｍｇである。本発明による有効成分は、錠剤の総重量の５３．３％であり、賦形剤は４６．７％である。錠剤は、当業者に既知の方法により作製される。
【００５７】
実施例３：本発明による組成物の実施例
本発明による組成物は、１日投与量として液体形態の１ｍｇの（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸および６ｍｇのメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレートを含む。本発明による組成物は、賦形剤として：ベンジルアルコール、カルメロースナトリウム、塩化セチルピリジニウム、ＷＦＩ、ポリソルベート８０、塩化ナトリウムを有する注射可能形態である。注射可能溶液は、当業者に既知の方法により作製される。
【００５８】
ＩＩ．組成物の有効性のインビボ評価
マウスに対するインビボ実験を実施し、本発明による有効成分の、特に、空腹時血糖および空腹時血糖の慢性増加に応答したインスリン分泌能力に対する効果を実証した。組成物はまた、２型糖尿病の治療のために処方される主要な医薬分子の１つであるメトホルミンと比較した。
【００５９】
実験は、ヒトの２型糖尿病を模擬するモデルであるｄｂ／ｄｂマウスで実施した（Ｒｏｅｓｌｅｒ  ＷＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９０；９２（２）：９９−１０６）。これらのマウスはインスリン抵抗性、高トリグリセリド血症、およびグルコース不耐性である。それらは、糖尿病前症、２型糖尿病およびその後のＮＡＳＨを極めて急速に発症する。
【００６０】
図１は、このモデルにおける血中インスリンおよび血糖（グルコース）の経時的放出を示す（Ｊｏｏｓｔ  ＨＧ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）。ヒトと同様に、血糖の上昇は、最初は血中インスリンの増加に付随して起こり（インスリン抵抗性に関連する）、膵臓がまだインスリンを分泌できる証拠であるが、その後、減少し、膵臓の機能的劣化および、そのためにインスリン療法を必要とする２型糖尿病の進行を反映している（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ２０００；４９：２２−３１  Ｔａｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２０１４；２０（１１）：１２６３−１２６９）。
【００６１】
試験の実験時間は、６週間であり、１週間の導入の後６週間の治療が続いた。雄マウスは、治療開始時６週齡であった。（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸単独、メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート単独、およびこれらの２種の分子の１／４．６５の比率の混合物を試験し、メトホルミンと比較した。これらの組成物をげっ歯類の食餌中に混合して、大規模使用を確実にした。注射、例えば、静脈内の注射の場合、それらの投与方法を考慮すると、小さい回数に限定される。
【００６２】
体重と空腹時血糖で無作為化した後、動物を次の群に分けた：
・対照（ｎ＝１５）：対照（ＣＯＮＴＲＯＬ）；
・メトホルミン（ｎ＝１２、食餌の０．２％）：ＭＥＴ；
・（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸（ｎ＝１２、食餌の０．０２６％）：Ｖ６３Ｘ３５；
・メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート（ｎ＝１１、食餌の０．１２％）：Ｖ６３Ｘ５４；
・（（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸＋メチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート（ｎ＝１１、それぞれ、餌の０．０２６％および０．１２％）：Ｖ６３０００。
【００６３】
マウスには、自由に食物を摂取させ、水に対し自由にアクセスさせた。マウスはまた、個別のケージに配置した。異なる評価を行ったため、治療の終わり（６週目）を除いて、食物摂取量を毎週測定した。
【００６４】
６週間の治療後の空腹時（６時間目）に実施した実験評価は、特に、下記に関係した：
・体重の測定；
・血糖の測定；
・血中インスリンの測定；
・血清トリグリセリドの測定。
【００６５】
食物摂取量の測定結果を表１および図２に示す。
【００６６】
【表１】
2020509998.tif 000004
【００６７】
どの組成物も食物摂取量の変化を引き起こさなかったことに注意されたい。得られた結果は、したがって、食物摂取量に無関係である。Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈｏｗ  Ｓらの方法（ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２００８；２（３）：６５９−６１）によると、げっ歯類により摂取された分子の組み合わせの等価ヒト投与量は、１日当たり、１９．４ｍｇ／ｋｇ体重であった。
【００６８】
血糖測定結果を、表２および図３に示す。
【００６９】
【表２】
2020509998.tif 000005
【００７０】
これらの結果は、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−３−｛［（２Ｅ）−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−２−プロペノイル］オキシ｝−１，４，５−トリヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸単独（Ｖ６３Ｘ３５群）およびメチル（２Ｓ，３Ｅ，４Ｓ）−４−｛２−［２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）エトキシ］−２−オキソエチル｝−３−エチリデン−２−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−５−カルボキシレート単独（Ｖ６３Ｘ５４群）では、６週間の治療後に、効果が認められなかったことを示す。２種の分子の組み合わせ（Ｖ６３０００）のみが、空腹時血糖の低下を引き起こした（−２６．２％、ＡＮＯＶＡ  ｐ＜０．０５、チューキーの多重比較検定：Ｖ６３０００対対照、ｐ＜０．０５）。メトホルミンは、このパラメーターに対し効果がなかった（対照、４８１ｍｇ／ｄＬ対ＭＥＴ、４５４ｍｇ／ｄＬ、ｐ＝０．５６）。
【００７１】
空腹時血糖に対する相乗効果を、”Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ”  Ｗｅｅｄｓ，１９６７，１５：２０−２２に記載のＣｏｌｂｙ  ＳＲ法に従って評価した。係数＞１は、相乗効果の存在を示す。係数＜１は、拮抗物質の存在を示す。
【００７２】
実施した計算は以下の通り：
予測効力比＝Ｖ６３Ｘ３５＋Ｖ６３Ｘ５４−（Ｖ６３Ｘ３５＊Ｖ６３Ｘ５４／１００）
相乗効果係数（ＦＳ）＝（１＊観察効力比（％、Ｖ６３０００））／予測効力比（％）
Ｖ６３Ｘ３５は、対照群と比較したＶ６３Ｘ３５治療群の血糖のパーセント変化を表す。
Ｖ６３Ｘ５４は、対照群と比較したＶ６３Ｘ５４群の血糖のパーセント変化を表す。
観察された効力比は、対照群と比較したＶ６３０００群の空腹時血糖の％変化を表す。
【００７３】
図４に示す結果は、ＦＳ＝３．５８の組み合わせによる相乗効果を示す。
【００７４】
結論として、Ｖ６３０００の組み合わせのみが、空腹時血糖に対し効果を示した。これは相乗効果であり、Ｖ６３Ｘ３５およびＶ６３Ｘ５４は、このパラメーターに対し効果を示さない。さらに、本発明による組成物の効果は、メトホルミンの効果より大きく、より低い投与量にも関わらずこの効果である（食餌の０．２％のＭＥＴ対０．１４％のＶ６３０００）。このモデルに対するメトホルミンの効果がないことは、Ｏｈｎｏ  Ｔらの研究（メトホルミン３００ｍｇ／ｋｇ／日、ＰＬｏＳＯＮＥ  ２０１５；１０（４）：ｅ０１２４０８１）からも明らかなように、既に報告されている。実際に、メトホルミンは、動物では不十分なインスリン分泌であり、効果がないといわないまでも、効果が弱いように思われる（ＧＬＵＣＯＰＨＡＧＥ（登録商標）、メトホルミン、製品モノグラフ２００９、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ，Ｃａｎａｄａ）。換言すれば、メトホルミンは、特に、膵臓のインスリン分泌機能の障害を特徴とする２型糖尿病の進行状態では、効果がなくなると考えられる。
【００７５】
空腹時インスリンの結果を表３および図５に示す。この結果は、異なる群における６週間の治療後の空腹時血中インスリン中央値を示す。
【００７６】
【表３】
2020509998.tif 000006
【００７７】
対照群より２１６％高いＶ６３０００群の中央値を除いて、全ての中央値は同じであることが明らかになった（対照、２３．０３ｎｇ／ｍＬ対ＡＣＨＯＬＥ、４９．９７ｎｇ／ｍＬ）。これらの結果はまた、分子の組み合わせの相乗効果も示したが、対照、Ｖ６３Ｘ３５およびＶ６３Ｘ５４群の中央値間では、差異が認められない。
【００７８】
血糖の慢性的増加に応答した十分なインスリン分泌の維持は、２型糖尿病およびその合併症の治療にとって主要な医学上の課題である。Ｖ６３０００群の中央値の増加は、血糖の増加に応答したより良好なインスリンレベルを示している。図１を参照すると、本発明による有効成分は、血中インスリンの放出曲線を右にシフトさせ、特に進行期の、２型糖尿病の治療または予防にとって、真の効力を実現する。これらの結果は、２型糖尿病の患者のインスリン療法を減らし、さらには、２型糖尿病の発生をも減らすという想定を可能とする。
【００７９】
最後に、血中トリグリセリドに関し得られた結果を表４および図６に示す。
【００８０】
【表４】
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【００８１】
これらの結果は、メトホルミンおよび本発明による有効成分が血中トリグリセリドレベルを、それぞれ、３５．６％および４０．４％低減したことを示す。
【００８２】
メトホルミンの血中トリグリセリドに対する効果は、従来から、この分子を組み込んだ薬物の種々の使用説明書に記載されている。本発明による有効成分はまた、脂質代謝に対し好ましい効果を有し、それにより、心臓血管のリスクに対し、総合的な作用を発揮することを可能にする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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