(57)【要約】  本開示は、がんの処置のための、ある特定の抗ＩＧＦ抗体分子のＰＤ１アンタゴニストとの組み合わせ使用に関する。本発明は、このような抗ＩＧＦ抗体分子およびアンタゴニストを含む、医薬組成物およびキットにさらに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置または予防する方法であって、処置または予防を必要とする患者に、
ａ）治療有効量の化合物Ａ、および
ｂ）治療有効量の化合物Ｂ
を投与することを含み、
ここで、
化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記方法。
【請求項２】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患が、がんまたは腫瘍疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患が、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がんまたは肺がんである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
化合物Ａが、ヒトＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２に結合する抗体分子である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
化合物Ａが、配列番号４０（ＨＣＤＲ１）、配列番号４１（ＨＣＤＲ２）および配列番号４２（ＨＣＤＲ３）の重鎖相補性決定領域、ならびに配列番号４３（ＬＣＤＲ１）、配列番号４４（ＬＣＤＲ２）および配列番号４５（ＬＣＤＲ３）の軽鎖決定領域を含む抗体分子であり、好ましくは、化合物Ａが、配列番号４６の重鎖可変領域および配列番号４７の軽鎖可変領域を含む抗体分子であり、より好ましくは、化合物Ａが、配列番号４８の重鎖および配列番号４９の軽鎖を含む抗体分子である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤＲ−００１、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患を処置または予防する方法における使用のための、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される化合物Ａであって、前記方法が、処置または予防を必要とする患者に、化合物Ａを化合物Ｂと組み合わせて投与することを含み、化合物Ｂが、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される、化合物Ａ。
【請求項１１】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１０に記載の使用のための化合物Ａ。
【請求項１２】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患を処置または予防する方法における使用のための、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される化合物Ｂであって、前記方法が、処置または予防を必要とする患者に、化合物Ｂを化合物Ａと組み合わせて投与することを含み、化合物Ａが、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される、化合物Ｂ。
【請求項１３】
化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１２に記載の使用のための化合物Ｂ。
【請求項１４】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患を処置または予防するための医薬組成物を調製するための、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される化合物Ａの使用であって、化合物Ａが、化合物Ｂと組み合わせて使用され、化合物Ｂが、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される、使用。
【請求項１５】
化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１４に記載の化合物Ａの使用。
【請求項１６】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患を処置または予防するための医薬組成物を調製するための、請求項１および６から８のいずれか１項に定義される化合物Ｂの使用であって、化合物Ｂが、化合物Ａと組み合わせて使用され、化合物Ａが、請求項１、４または５のいずれか１項に定義される、使用。
【請求項１７】
化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、請求項１６に記載の化合物Ｂの使用。
【請求項１８】
ａ）化合物Ａ、および
ｂ）化合物Ｂ
を含む医薬組成物であって、
ここで、
化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記医薬組成物。
【請求項１９】
化合物Ａが、ヒトＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２に結合する抗体分子である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
化合物Ａが、配列番号４０（ＨＣＤＲ１）、配列番号４１（ＨＣＤＲ２）および配列番号４２（ＨＣＤＲ３）の重鎖相補性決定領域、ならびに配列番号４３（ＬＣＤＲ１）、配列番号４４（ＬＣＤＲ２）および配列番号４５（ＬＣＤＲ３）の軽鎖決定領域を含む抗体分子であり、好ましくは、化合物Ａが、配列番号４６の重鎖可変領域および配列番号４７の軽鎖可変領域を含むヒト抗体分子であり、より好ましくは、化合物Ａが、配列番号４８の重鎖および配列番号４９の軽鎖を含むヒト抗体分子である、請求項１８または１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１８から２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤＲ−００１、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
１つまたは複数の薬学的に許容される、担体、賦形剤および／またはビヒクルをさらに含む、請求項１８から２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患を処置および予防する方法における使用のための、請求項１８から２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
ａ）化合物Ａを含む第１の医薬組成物または剤形、および
ｂ）化合物Ｂを含む第２の医薬組成物または剤形
を含むキットであって、
ここで、
化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
前記キット。
【請求項２７】
化合物Ａが、ヒトＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２に結合する抗体分子である、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
化合物Ａが、配列番号４０（ＨＣＤＲ１）、配列番号４１（ＨＣＤＲ２）および配列番号４２（ＨＣＤＲ３）の重鎖相補性決定領域、ならびに配列番号４３（ＬＣＤＲ１）、配列番号４４（ＬＣＤＲ２）および配列番号４５（ＬＣＤＲ３）の軽鎖決定領域を含む抗体分子であり、好ましくは、化合物Ａが、配列番号４６の重鎖可変領域および配列番号４７の軽鎖可変領域を含む抗体分子であり、より好ましくは、化合物Ａが、配列番号４８の重鎖および配列番号４９の軽鎖を含む抗体分子である、請求項２６または２７に記載のキット。
【請求項２９】
ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項２６から２８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３０】
抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤＲ−００１、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される、請求項２９に記載のキット。
【請求項３１】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される、請求項２９に記載のキット。
【請求項３２】
処置または予防を必要とする患者における、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患の処置または予防における、同時の、同時的な、順次の、連続的な、交互の、または別々の、患者への投与のための、可読の説明書を含む添付文書をさらに含む、請求項２６から３１のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３３】
処置される腫瘍学的疾患が、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、神経膠芽腫、腎臓がんからなる群から選択されるがん、好ましくは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がんまたは肺がん、特に、ＮＳＣＬＣである、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法、請求項１０から１１のいずれか１項に記載の使用のための化合物Ａ、請求項１２から１３のいずれか１項に記載の使用のための化合物Ｂ、請求項１４から１５のいずれか１項に記載の化合物Ａの使用、請求項１６から１７のいずれか１項に記載の化合物Ｂの使用、請求項１８から２５のいずれか１項に記載の医薬組成物、または請求項２６から３２のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの処置における組み合わせ治療、およびこのような組み合わせ治療における使用のための化合物に関する。組み合わせのための化合物は、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）アンタゴニストおよびＰＤ−１アンタゴニストである。
【背景技術】
【０００２】
多くの異なるがんの種類の発生、進行および転移におけるＩＧＦの役割を示唆する非常に多くの科学的、疫学的および臨床文献がある（Jerome et al., End. Rel. Cancer 10: 561 - 578, 2003；およびPollak et al., Nature Rev. Can. 4: 505-518, 2004によって概説）。
抗受容体モノクローナル抗体（ガニツマブ、シズツムマブおよびダロツズマブを含む）、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ、二重ＩＧＦ−１ＲおよびＩｎｓＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＢＭＳ−７５４８０７、ＫＷ２４５０およびリンシチニブを含む）、および抗ＩＧＦリガンド抗体（ドゥシギツマブ＝ＭＥＤＩ−５７３、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ／Ｍｅｄ  Ｉｍｍｕｎｅ）などのＩＧＦ経路を阻害する各種の戦略が利用されている。これらの薬剤は、単独療法として、または細胞毒性剤および／もしくは他の分子標的剤との組み合わせのいずれかで、診療所で試験されている。
ほとんどのがんは、ＩＧＦ−１受容体を発現するが、リガンド、特に、ＩＧＦ−２の過剰発現が新生物中で生じる証拠がある。ＩＧＦ−２は、ＩＧＦ−１受容体およびインスリン受容体Ａ（ＩｎｓＲ−Ａ）への結合によってがん細胞中でその増殖／生存シグナル伝達を働かせることが示されている。ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２の両方に対する中和抗体の主要な利点は、リガンドの隔絶が、ＩＧＦ−１またはＩＧＦ−２による受容体活性化を生じさせないことを確実にし、かつＩＧＦ−２によるＩｎｓＲ−Ａの活性化の可能性を排除する点である。加えて、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２遮断抗体は、ＩｎｓＲ−Ｂによるインスリンの代謝シグナル伝達を妨げない。そのため、これは、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはＴＫＩによるＩＧＦ−１Ｒの標的化の潜在的な危険性を回避する、さまざまながんの治療可能性を有するバランスのとれたアプローチを提供する。
【０００３】
多くの証拠は、ＩＧＦシグナル伝達系が、真正の腫瘍形成ドライバー（変異もしくは変化したＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＡＬＫ、ＢＲＡＦまたはＫＲＡＳなど）ではないが、むしろ、確立された治療による処置の際に活性化された抵抗機構であることを示唆する。例えば、ＩＧＦ軸は、ＥＧＦＲ阻害剤、およびｍＴＯＲまたはＭＥＫなどの下流経路の分子の阻害剤に対する抵抗性を付与するバイパス経路として関与している。細胞増殖および生存を推進する経路の重複性に関連する、ＩＧＦ軸および他の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）シグナル伝達ネットワーク（ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＰＧＤＦＲ、ｃＭＥＴおよびＡＬＫを含む）の間の広範囲に及ぶ相互作用に基づいて、ＩＧＦ標的化剤と他のＲＴＫおよび下流のエフェクターを組み込む組み合わせが検討されている。前臨床の証拠は、ＩＧＦシグナル伝達が化学療法剤または放射線治療が誘発する細胞死から腫瘍細胞を保護し得ることをさらに示し、そのため、ＩＧＦ軸阻害剤の標準的な細胞毒性剤との組み合わせが検討されている（Ireland et al., Cancer Res. 76(23): 6851-6863, 2016）。
【０００４】
説得力のある前臨床の論拠にもかかわらず、ＩＧＦ−１Ｒ阻害性薬物および化学療法または他の標的治療による組み合わせの治験の結果は、限定的な臨床的利益を示した（Langer et al., J Clin Oncol. 2014;32(19):2059-66；Fuchs et al., Ann Oncol. 2015;26(5):921-7；Sclafani et al., J Natl Cancer Inst. 2015;107(12):djv258；Van Cutsemet al., Clin Cancer Res. 2014;20(16):4240-50）。
がん免疫療法は、免疫系を使用してがんを処置する腫瘍学の分野であり、これは、腫瘍が直接切除されるかまたは処置される既存の一般的な処置の方法とは著しく対照的である。この治療概念は、これらの細胞の免疫機能を阻害するように作用するＴ細胞の表面上の多くのタンパク質の識別に基づく。これらのタンパク質の中で列挙されるものは、ＰＤ−１（プログラム細胞死−１）である。ＰＤ１は、Ｔ細胞活性の重要な調節因子である。近年、異なるがんの状況の範囲内において、アンタゴニストのＰＤ−１抗体分子を使用して免疫系を刺激し、それによってがんを処置することができることが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
治療アプローチの増加にもかかわらず、依然として、がん患者のための改善された処置の選択肢についての必要性が存在する。治療薬剤の有効性は、他の化合物との組み合わせ治療（特に、腫瘍学）を使用すること、および／または投薬スケジュールを改善することによって、改善することができる。いくつかの治療薬剤を組み合わせる概念がすでに提案されているとしても、かつ各種の組み合わせ治療が研究および臨床試験中であるが、例えば、より良好な処置の結果、有益な効果、優れた有効性、および／または、例えば、組み合わせ処置の副作用の低減などの改善された耐容性などの標準的治療を上回る利点を示す、がん疾患、例えば、固形腫瘍の処置のための新しく有効な治療概念についての必要性が依然として存在する。
したがって、本発明の目的は、改善された治療有効性および適用性のためのがん治療における医薬組成物および方法を提供すること、特に、現在使用されているか、および／または当技術分野において公知の処置／処置の方法と比較して、ある特定の利点を提供する組み合わせ処置／組み合わせ処置の方法を提供することである。これらの利点としては、インビボの有効性（例えば、臨床反応の改善、反応の延長、反応速度の増加、反応の持続時間、疾患安定化の速度、安定化の持続時間、疾患の進行までの時間、無増悪生存期間（ＰＦＳ）および／または全生存期間（ＯＳ）、より遅い抵抗性の発生など）、安全性、ならびに良好な耐容性を示す、投与ならびに有害事象の頻度および重症度の低減を含み得る。
【０００６】
本発明は、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）アンタゴニスト、好ましくは、抗ＩＧＦ抗体、最も好ましくは、抗ＩＧＦ−１−ＩＧＦ−２抗体と、プログラム細胞死１（ＰＤ−１）シグナル伝達経路のアンタゴニスト（ＰＤ−１は、Ｔ細胞受容体シグナルを負に調節する免疫阻害性タンパク質である）とを一緒に、患者に処置するための方法を提供する。この処置は、腫瘍の増殖の低減、またはさらに腫瘍の縮小をもたらすと予想される。したがって、本発明は、抗ＩＧＦ抗体（例えば、抗ＩＧＦ−１−ＩＧＦ−２抗体）およびＰＤ−１アンタゴニストを含む組み合わせ治療を提供する。
詳細な態様において、本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患を処置および／または予防する方法であって、処置または予防を必要とする患者に、
ａ）治療有効量の化合物Ａ、および
ｂ）治療有効量の化合物Ｂ
を投与することを含み、
ここで、
・化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
方法に関する。
【０００７】
関連する態様において、本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置および／または予防する方法におけるそれぞれの使用のための、化合物Ａおよび化合物Ｂであって、前記方法が、化合物Ａおよび化合物Ｂを処置または予防を必要とする患者に投与することを含み、ここで、
・化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
化合物Ａおよび化合物Ｂを提供する。
本発明は、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患を処置および／または予防するための医薬組成物をそれぞれ調製するための、化合物Ａおよび化合物Ｂの使用であって、化合物Ａおよび化合物Ｂが、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ投与を意図するか、または化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ投与を提供し、化合物Ａおよび化合物Ｂが上記に定義される通りである、化合物Ａおよび化合物Ｂの使用にさらに関する。
【０００８】
別の態様において、本発明は、
ａ）化合物Ａ、および
ｂ）化合物Ｂ
を含む医薬組成物であって、
ここで、
・化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
医薬組成物を開示する。
さらなる態様において、本発明は、
ａ）化合物Ａを含む第１の医薬組成物、および
ｂ）化合物Ｂを含む第２の医薬組成物
を含むキットであって、化合物Ａおよび化合物Ｂが上記に定義される通りである、キットに関する。
【０００９】
本発明のいくつかの実施形態において、化合物Ａは、配列番号４０（ＨＣＤＲ１）、配列番号４１（ＨＣＤＲ２）および配列番号４２（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域、ならびに配列番号４３（ＬＣＤＲ１）、配列番号４４（ＬＣＤＲ２）および配列番号４５（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖決定領域を含む抗ＩＧＦ抗体分子である。
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗ＩＧＦ抗体分子である。
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗ＩＧＦ抗体分子（本明細書において「ＢＩ−ＩＧＦ」と称する）である。本発明のいくつかの実施形態において、化合物Ｂは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤＲ−００１、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ、ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される。
本発明のいくつかの実施形態において、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】（Ａ）化合物Ｂによる単一薬剤処置は、７１％の中央値ＴＧＩで、腫瘍増殖を遅延させた。組み合わせによる処置は、より有効であり、８３％のＴＧＩをもたらした。（Ｂ）すべての処置レジメンは、著しい体重喪失なく十分に耐容性であった。
【図２】本明細書において定義される抗ＩＧＦ（ＢＩ−ＩＧＦ）抗体の可変ドメインのアミノ酸配列。ＣＤＲ配列は下線が付されている：（Ａ）ＶＬ  ＢＩ−ＩＧＦ（配列番号４７）；（Ｂ）ＶＨ  ＢＩ−ＩＧＦ（配列番号４６）。
【図３】抗ＰＤ１抗体分子（本明細書において定義される抗−ＰＤ１抗体である、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５）の可変ドメインのアミノ酸配列。ＣＤＲ配列は下線が付されている。（Ａ）ＶＬ  ＰＤ１−１（配列番号２０）；ＶＬ  ＰＤ１−２；（配列番号２２）；ＶＬ  ＰＤ１−３（配列番号２４）；ＶＬ  ＰＤ１−４（配列番号２６）；ＶＬ  ＰＤ１−５（配列番号２８）；（Ｂ）ＶＨ  ＰＤ１−１（配列番号１９）；ＶＨ  ＰＤ１−２；（配列番号２１）；ＶＨ  ＰＤ１−３（配列番号２３）；ＶＨ  ＰＤ１−４（配列番号２５）；ＶＨ  ＰＤ１−５（配列番号２７）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、
・化合物Ａが、抗ＩＧＦ抗体であり、
・化合物Ｂが、ＰＤ−１アンタゴニストである、
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせ治療または組み合わせ提供にすべて言及する、方法、使用のための化合物、化合物の使用、医薬組成物およびキットに関する。
本発明者らは、驚くべきことに、化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせが、化合物Ａのみ、または化合物Ｂのみによる治療と比較して、腫瘍増殖の低減、またはさらに縮小などのがん治療における治療効果をもたらすことが可能であることを見出した。化合物Ａおよび化合物Ｂは、相乗的に一緒に作用し、がんの低減をもたらすことができる。
本発明による化合物Ａは、抗ＩＧＦ抗体、特に、ヒトＩＧＦ−１および／またはＩＧＦ−２に好ましく結合する抗ＩＧＦ抗体分子である。
【００１２】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１；７０アミノ酸ポリペプチド）およびインスリン様増殖因子−２（ＩＧＦ−２；６７アミノ酸ポリペプチド）は、多くの哺乳動物細胞の増殖を強力に刺激することができる、血清中に存在する７．５ｋＤの可溶性因子である（Pollak et al., Nature Rev. Can. 4: 505-518, 2004）。血流への分泌において、ＩＧＦは、その標的組織に向かう途中の血清中でタンパク分解からＩＧＦを保護し、かつＩＧＦがＩＧＦ受容体と結合するのを妨げる、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）と複合体を形成する。ＩＧＦはまた、標的組織それ自身において、自己分泌または傍分泌の様式で分泌されることが知られている。これは、ＩＧＦが組織、骨および臓器の成長において重要な役割を果たす正常な胎児発達の間に生じることが知られている。これは、腫瘍細胞および間質細胞の間の傍分泌シグナル伝達であるか、または腫瘍細胞それ自身による自己分泌ＩＧＦ産生であると考えられる、多くのがん組織においても見られる（LeRoith D et al, Cancer Lett 195(2):127-37, 2003）。
【００１３】
ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２は、機能的に、類似の親和性を有する二量体化したアルファおよびベータサブユニットからなる４６０ｋＤのヘテロ四量体である、多くの正常組織で発現するＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）と結合することが可能である（Rubin R et al, Lab Invest 73(3):311-31), 1995）。ＩＧＦ−２は、ＩＧＦ−２受容体とも結合することができ、これは、ＩＧＦ−２がＩＧＦ−１Ｒによる結合およびシグナル伝達を妨げると考えられる。これに関して、ＩＧＦ−２Ｒは、腫瘍抑制タンパク質であることが実証されている。ＩＧＦ−１Ｒは、構造的にインスリン受容体と類似し、これらは、ＩＲ−ＡおよびＩＲ−Ｂの２つの形態で存在し、ＩＲ−Ａの細胞外ドメインの選択的スプライシングされた１２アミノ酸のエクソン欠失によって相違する。ＩＲ−Ｂは、代謝におけるインスリンの効果を媒介するために作用する、ほとんどの正常な成人の組織で発現する優勢なＩＲアイソフォームである。他方で、ＩＲ−Ａは、発達中の胎児の組織で高度に発現するが、成人の正常組織ではそうではないことが知られている。最近の研究は、ＩＲ−ＢではなくＩＲ−Ａが、いくつかのがんにおいて高度に発現することも示している。ＩＲ−Ａにおけるエクソン欠失は、インスリン結合に影響を与えないが、ＩＲ−Ｂに対するよりもはるかに高い親和性でＩＧＦ−２が結合することを可能にする小さな立体構造の変化を引き起こす（Frasca F et al, Mol Cell Biol 19(5):3278-88, 1999；Pandini G et al, J Biol Chem 277(42):39684-95, 2002）。このように、がん組織におけるその発現およびＩＧＦ−２結合に対する傾向の増加のために、ＩＲ−Ａは、がんにおけるＩＧＦ−２の有糸分裂効果の媒介において、ＩＧＦ−１Ｒと同じように重要であり得る。
ＩＧＦとＩＧＦ−１Ｒの結合は、増殖および生存を刺激するタンパク質の活性化をもたらす複雑な細胞内シグナル伝達カスケードを作動させる（Pollak et al., Nature Rev. Can. 4: 505-518, 2004）。ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２ｎｅｕ受容体とは違い、受容体の活性化が活性リガンドの存在によって制御されることを示す、がんにおけるＩＧＦ−１ＲまたはＩＲ  Ａ受容体の公知の増幅は存在しない。
【００１４】
受容体−リガンド結合を遮断することによって、受容体のチロシンキナーゼ活性によるリガンドが誘発する受容体シグナル伝達は、低減されるか、または妨げられる。受容体−リガンド結合を遮断する能力がある抗体は、一般に、中和抗体と称される。
本発明による化合物Ｂは、ＰＤ−１それ自体に対するまたはそのリガンドの１つであるＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に対するなどのタンパク質プログラム死１（ＰＤ−１）ファミリーのメンバーに対するアンタゴニストである。ＰＤ−１は、ＴＣＲシグナルを負に調節する免疫阻害性タンパク質として知られている（Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (2006) Immunol. Immunother. 56(6):739-745）。ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の間の相互作用は、免疫チェックポイントとしての機能を果たし得、これは、例えば、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体が媒介する増殖の減少、および／またはがん細胞による免疫回避をもたらし得る（Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100）。免疫抑制は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２の局所の相互作用を阻害することによって反転させることができ、この効果は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ２の相互作用が同様に遮断される場合に、相加的である（Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66）。
【００１５】
ＰＤ−１は、Ｔ細胞制御因子の拡張ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーの阻害性メンバーである。ＣＤ２８ファミリーの他のメンバーとしては、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳおよびＢＴＬＡが挙げられる。ＰＤ−１は、単量体として存在することが示唆されており、他のＣＤ２８ファミリーのメンバーの不対のシステイン残基の特徴が欠如している。ＰＤ−１は、活性化したＢ細胞、Ｔ細胞および単球上で発現される（Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14:391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8）。ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）のＰＤ−１のための２つのリガンドが特定されており、これは、ＰＤ−１に結合する際に、Ｔ細胞の活性化を下方制御することが示されている（Freeman et al. (2000) J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:634-43）。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２は両方とも、ＰＤ−１と結合するＢ７ホモログである。ＰＤ−Ｌ１は、さまざまなヒトのがんにおいて豊富である（Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9）。
ＰＤ−１遺伝子は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの部分である、５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質をコードする（Agata et al. (1996) Int Immunol. 8:765-72）。完全ＰＤ−１配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｕ６４８６３で見出すことができる。ＣＴＬＡ−４と構造的に類似するが、ＰＤ−１は、Ｂ７−１およびＢ７−２結合のために重要なＭＹＰＰＹモチーフ（配列番号：３９）を欠いている。
【００１６】
上記の観点から、ＰＤ−１アンタゴニストとしてのモノクローナル抗体は、近年、治療における使用のため、より正確には、がんおよび感染性疾患を含む各種の疾患を処置するために開発されている（例えば、国際公開第２００６／１２１１６８号；国際公開第２０１５／１１２９００号）。このような抗体のいずれか１つを本発明に従って使用することができる。
本発明の意味の範囲内のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１とその受容体またはリガンドの相互作用を阻害する化合物である。
好ましくは、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１の阻害剤またはＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。ＰＤ−１アンタゴニストは、好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体、より好ましくは、ヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−１抗体、またはヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体であってもよい。これらの抗体のいずれか１つは、組換えヒト抗体であってもよい。
【００１７】
「抗体分子」と互換可能に使用され得る「抗体」という用語は、各種の抗体構造を包含し、限定されるものではないが、これらが所望の抗原結合活性を示す限り、ポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、一重、二重もしくは多重特異性抗体、単鎖抗体、シングルドメイン抗体、および断片化抗体（抗体断片とも称する）、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）または抗体の抗原結合ドメインが挙げられる。「抗体」という用語は、リンパ球によって産生され、例えば、血清中に存在する完全な免疫グロブリン、ハイブリドーマ細胞株によって分泌されるモノクローナル抗体、免疫グロブリンまたはモノクローナル抗体の結合特異性を有する、宿主細胞中での組換え発現によって産生されるポリペプチド、およびこれらの結合特異性を保持しながら、さらなるプロセシングによってこのような免疫グロブリン、モノクローナル抗体またはポリペプチドから誘導される分子を包含するものとする。特に、「抗体」という用語は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む完全な免疫グロブリンを含む。この用語は、Ｆａｂ断片のような免疫グロブリンの断片、および単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、シングルドメイン抗体などのような免疫グロブリンから誘導される１つまたは複数の可変ドメインを有するポリペプチドをさらに包含する。
【００１８】
抗体は、抗体のＦｃ部分（抗体の定常領域）によって通常媒介される、ＡＤＣＣまたはＣＤＣなどのエフェクター機能を有していてもよく、あるいは抗体は、例えば、ＦＣ部分が欠如することによって、または遮断され、マスクされたＦｃ部分、本質的に、免疫細胞もしくは補体系のような免疫系成分によって認識されないか、または不十分に認識されるＦｃ部分を有することによって、エフェクター機能を有していなくてもよい。
抗体またはその断片は、任意の種類、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭのものであってもよい。好ましくは、ＩｇＧである。
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を指す。
「組換え抗体」は、組換え操作された宿主細胞によって産生された抗体である。これは、単離または精製されていてもよい。
「ヒト抗体」は、ヒト細胞によって産生された抗体、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除く。
【００１９】
「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ＮＳ０細胞もしくはＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離された抗体、またはヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、あるいは宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体などの組換え手段によって、調製、発現、作製または単離されたすべてのヒト抗体を含むことを意図する。このような組換えヒト抗体は、再編成された形態中に可変領域および定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体は、インビボで体細胞高頻度突然変異に付されている。したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体の生殖細胞系レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
「ヒト化」抗体とは、非ヒト超可変領域（ＨＶＲ）からのアミノ酸残基、およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、すべてまたは実質的にすべてのＨＶＲ（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））が非ヒト抗体のものに対応し、すべてまたは実質的に全体のフレームワーク領域（ＦＲ）がヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体に由来する抗体の定常領域の少なくとも１部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
ポリペプチド（免疫グロブリン、抗体、または一般に抗原結合分子もしくはその断片など）の「結合する」は、ある特定のエピトープ、抗原またはタンパク質（またはこれらの少なくとも１つの部分、断片もしくはエピトープ）に「親和性を有すること」または「特異性を有すること」を意味する。
【００２０】
一般に、「特異性」という用語は、特定の抗原結合分子（本明細書に記載の抗体など）が結合することができる、異なる種類の抗原またはエピトープの数を指す。抗原結合分子の特異性は、その親和性および／またはアビディティーに基づいて決定することができる。抗原と抗原結合タンパク質の解離の平衡定数（ＫＤ）によって表される親和性は、エピトープおよび抗原結合タンパク質上の抗原結合部位の間の結合の強度の測定値であり、ＫＤ値が小さければ小さいほど、エピトープおよび抗原結合分子の間の結合強度は強くなる（あるいは、親和性は、親和性定数（ＫＡ）としても表すことができ、これは、１／ＫＤである）。当業者に明らかであるように、親和性は、対象の特異的な抗原に応じて、当技術分野において公知の方法で決定することができる。アビディティーは、それを含有する抗原結合分子（免疫グロブリン、抗体、または一般に抗原結合分子もしくはその断片など）および関連する抗原の間の結合強度の測定値である。アビディティーは、エピトープおよび抗原結合分子上のその抗原結合部位の間の親和性、ならびに抗原結合分子上に存在する関連する結合部位の数の両方に関係する。
【００２１】
エピトープは、抗原結合分子（本明細書に記載の抗体など）によって結合される、抗原の領域である。「エピトープ」という用語は、抗体または抗原結合部分と特異的に結合する能力がある任意のポリペプチド決定基を含む。ある特定の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、グリカン側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的活性表面基を含み、ある特定の実施形態において、特異的な三次元構造の特徴および／または特異的な電荷特徴を有し得る。立体構造エピトープまたは非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在中で、前者への結合は喪失し、後者への結合は喪失しないという点で区別される。本明細書で使用される場合、「結合する」および「特異的に結合する」という用語は、インビトロアッセイにおいて、好ましくは、精製された野生型抗原を用いるプラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）において、抗体または抗原結合部分が抗原のエピトープに結合することを指す。
【００２２】
本明細書において使用される「可変ドメイン」または「可変領域」またはＦｖの表現は、抗体の抗原への結合に直接関与する軽鎖および重鎖のそれぞれの対を意味する。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と略され、重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と略される。可変の軽鎖および重鎖のドメインは、同じ一般構造を有し、それぞれのドメインは、配列が、幅広く保存され、３つのＨＶＲ（またはＣＤＲ）によって連結されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、ベータ−シート高次構造の形をとり、ＣＤＲは、ベータ−シート構造を連結するループを形成し得る。それぞれの鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域によってそれらの三次元構造中で保持され、他の鎖の抗原結合部位からのＣＤＲと一緒に形成する。抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ領域は、本発明による抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし、したがって、本発明のさらなる目的を提供する。
この発明の文脈内で、ＣＤＲへの参照は、Kabat（E.A. Kabat, T.T. Wu, H. Bilofsky, M. Reid-Miller and H. Perry, Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983)）と一緒に、Chothia（ and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196: 901-917）の定義に基づく。
【００２３】
本出願内で使用される「定常ドメイン」または「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体のドメインの合計を意味する。定常領域は、抗原の結合に直接関与しないが、各種のエフェクター機能を示す。
本明細書に開示される抗体において使用される「定常ドメイン」は、好ましくは、ヒト起源であり、これは、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のヒト抗体の定常重鎖領域および／または定常軽鎖カッパ領域もしくはラムダ領域に由来する。このような定常ドメインおよび領域は、当技術分野の技術水準において周知であり、例えば、Kabat et al.（"Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91）によって記載されている。
【００２４】
抗体の「Ｆｃ部分」は、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、各種のエフェクター機能を示す。「抗体のＦｃ部分」は、当業者に周知の用語であり、抗体のパパイン切断に基づいて定義される。これらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、抗体または免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのクラスに分けられ、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられ得る。重鎖定常領域によれば、異なる免疫グロブリンのクラスは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。抗体のＦｃ部分は、補体活性化、Ｃ１ｑ結合およびＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性傷害）およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）に直接関与する。補体活性化（ＣＤＣ）は、ほとんどのＩｇＧ抗体サブクラスのＦｃ部分への補体因子Ｃ１ｑの結合によって惹起される。補体系における抗体の影響は、ある特定の条件に依存するが、Ｃ１ｑへの結合は、定義されたＦｃ部分中の結合部位によって引き起こされる。このような結合部位は、当技術分野の技術水準において公知であり、例えば、Boackle, R.J., et al, Nature 282 (1979) 742-743；Lukas, T.J., et al, J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560；Brunhouse, R., and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917；Burton, D.R., et al, Nature 288 (1980) 338-344；Thommesen, J.E., et al, Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004；Idusogie, E.E., et al, J. Immunol.164 (2000) 4178-4184；Hezareh, M., et al, J. Virology 75 (2001) 12161-12168；Morgan, A., et al, Immunology 86 (1995) 319-324；欧州特許出願第０３０７４３４号によって記載されている。このような結合部位は、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１およびＰ３２９（Kabat, E.A.のＥＵインデックスに従って番号付け；下記を参照のこと）である。サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ３の抗体は、通常、補体活性化ならびにＣ１ｑおよびＣ３結合を示すのに対して、ＩｇＧ４は、補体系を活性化せず、Ｃ１ｑおよびＣ３と結合しない。
【００２５】
本明細書で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」などのその変形は、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語で置き換えることができる。
１つの態様において、本明細書に記載の化合物Ａは、ａ）ｉ）ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２のＩＧＦ−Ｉ受容体への結合が妨げられ、ならびにｉｉ）ＩＧＦ−Ｉ受容体によって媒介されるシグナル伝達が阻害されるように、ヒトＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２に結合し、ｂ）マウスおよびラットＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ−２に結合し、ｃ）ヒトインスリンに結合しない、単離された抗体分子（例えば、ヒトまたはヒト化抗体分子）に関する。好ましくは、本発明およびそのすべての実施形態内の抗ＩＧＦ抗体分子は、配列番号４０（ＨＣＤＲ１）、配列番号４１（ＨＣＤＲ２）および配列番号４２（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域、ならびに配列番号４３（ＬＣＤＲ１）、配列番号４４（ＬＣＤＲ２）および配列番号４５（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖決定領域を有する。
【００２６】
別の実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗ＩＧＦ抗体分子を指す。
別の実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗ＩＧＦ抗体分子（本明細書において「ＢＩ−ＩＧＦ」と称する）を指す。
【００２７】
好ましくは、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、ヒト抗ＩＧＦ抗体である。
具体的には、抗ＩＧＦ抗体は、配列番号および代表的なアミノ酸配列により表１に示される配列によって定義される抗体分子であり、ここで、ＨＣＤＲは、重鎖可変ドメインのＣＤＲ配列を意味し、ＬＣＤＲは、軽鎖可変ドメインのＣＤＲ配列を意味し、ＶＨは、重鎖可変ドメインを意味し、ＶＬは、軽鎖可変ドメインを意味し、ＨＣは、（全長）重鎖を意味し、ＬＣは、（全長）軽鎖を意味する。
【００２８】
【表１】
2020535180.tif 000002
【００２９】
１つの態様において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、ヒトＩＧＦ−ＩまたはＩＧＦ−２に結合するために必要な最低濃度よりも少なくとも１００倍高い濃度で、ヒトインスリンに結合しない。
別の態様において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体分子の特性は、抗ＩＧＦ抗体分子のＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２への親和性が、それぞれ、インスリンへのその親和性と比較して、少なくとも１００倍、さらに１０００倍を超えるという事実によって特徴付けられる。非常に高用量、例えば、１００ｍｇ／ｋｇを超える用量でさえ、弱い結合は完全に排除されない場合があり、抗ＩＧＦ抗体分子は、治療用量でインスリンと結合しない。
【００３０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体分子は、インスリン受容体へのその結合によって媒介されるヒトインスリンの有糸分裂促進特性に影響を及ぼさない。（一般に、有糸分裂促進特性は、細胞分裂を開始させ有糸分裂を引き起こすように細胞に働きかける化合物の能力、例えば、インスリンの場合において、細胞増殖を促進する能力として定義される）。
いくつかの実施形態において、ＩＧＦ受容体を介して媒介されるＩＧＦシグナル伝達を阻害する能力に加えて、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、インスリン受容体ＩＲ−Ａを介して媒介されるＩＧＦ−２シグナル伝達を阻害する能力も有する。
本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２に対して驚くほど高い中和効力を有する。さらにまた、これらは、ＩＧＦ−２に対してよりもＩＧＦ−１に対して予想外に高い効力および結合親和性を有する。これらは高い溶解度および安定性を有し、これらは、可変ドメインにおいて望ましくないグリコシル化または加水分解モチーフがなく、血液循環中で長い半減期を有する。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、例えば、制御性Ｔ細胞の数を低減させることによって、腫瘍における免疫抑制環境を低減する。腫瘍において、ＰＤ−１遮断は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＴＬ）の活性化による抗腫瘍免疫応答の誘導をもたらす。任意の科学理論によって拘束されることを望まないが、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体は、腫瘍微小環境における免疫抑制の低減をもたらす制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の欠乏による抗腫瘍免疫応答をさらに増大させ得る。
前述の抗ＩＧＦ抗体の製造および治療的使用は、国際公開第２０１０／０６６８６８号、国際公開第２０１３／０６０８７２号および国際公開第２０１４／１３５６１１号に開示されている。特に、これらの文献は、本発明において使用される抗ＩＧＦ抗体分子を調製する方法の十分な開示を提供する。
さらなる態様において、本発明内では、これは、医薬としての使用のための本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体分子を指す。
さらなる態様において、本発明内では、これは、活性成分として、抗ＩＧＦ抗体分子、好ましくは、表１に示されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣおよびＬＣ配列によって定義される完全抗体を含む医薬組成物を指す。
【００３２】
抗ＩＧＦ抗体は、患者に、１〜５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび３５ｍｇ／ｋｇのいずれか１つから、最大で４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇのいずれか１つの用量で、１回もしくはそれ以上の別々の投与によって、または持続注入、例えば、１時間にわたる注入によって、投与されてもよい。典型的な処置スケジュールは、通常、１週間毎に１回から３週間毎に１回の抗体の投与を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＩＧＦ抗体は、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび３５ｍｇ／ｋｇのいずれか１つから、最大で４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇのいずれか１つの用量で、４週間の処置サイクルにおいて、毎週、２週間毎に１回または３週間毎に１回、投与される。例えば、１５、２０、２５、３０または３５ｍｇ／ｋｇ（例えば、２５ｍｇ／ｋｇ）の用量を、毎週、２週間毎、または３週間毎に１回、投与することができる。抗体は、１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの抗体（例えば、１０ｍｇ／ｍＬ、３０、５０、６５または７５ｍｇ／ｍＬの抗体）の濃度で調製され得る。抗体は、好ましくは、患者に、少なくとも７５０ｍｇ（最大で１０００ｍｇまで）の総用量として、１時間の静脈内注入によって、疾患の進行まで週に１回繰り返し、投与され得る。
【００３３】
本発明およびすべてのその実施形態の意味の範囲内のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１とその受容体、好ましくは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の相互作用を阻害する化合物である。
好ましくは、ＰＤ−１アンタゴニスト、すなわち、本発明およびすべてのその実施形態内の抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−１抗体、またはヒト化もしくは完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。
【００３４】
ＰＤ−１アンタゴニストは、当技術分野において周知であり、例えば、Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151（参照によって本明細書に組み込まれる）によって概説されている。任意のアンタゴニスト、とりわけ、Li et al.によって開示されている抗体、ならびに本明細書の下記に開示されているさらなる抗体を、本発明に従って使用することができる。好ましくは、本発明のＰＤ−１アンタゴニストおよびそのすべての実施形態は、以下の抗体（Ｂ０）からなる群から選択される：
−  ペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ピディリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
−  ＰＤＲ−００１（抗ＰＤ−１抗体）；
−  本明細書の下記および欧州特許出願第１６１７０１７４．３号に開示された、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５（抗ＰＤ−１抗体）；
−  国際公開第２０１５／１１２９００号に（一般および／または具体的に）開示された抗ＰＤ−１抗体：
〇  国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義された抗体のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義されたヒト化抗体のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義されたＢＡＰ０４９−ｈｕｍ０１からＢＡＰ０４９−ｈｕｍ１６のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義されたＢＡＰ０４９−クローン−ＡからＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれか１つ；
−  アテゾリズマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；
−  アベルマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；
−  デュルバルマブ（抗ＰＤ−Ｌ１抗体）；
−  国際公開第２０１６／０６１１４２号に（一般および／または具体的に）開示された抗ＰＤ−Ｌ１抗体：
〇  国際公開第２０１６／０６１１４２号（２６５頁）の表１に定義された抗体のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１６／０６１１４２号（２６５頁）の表１に定義されたヒト化抗体のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１６／０６１１４２号（２６５頁）の表１に定義されたＢＡＰ０５８−ｈｕｍ０１からＢＡＰ０５８−ｈｕｍ１７のいずれか１つ
〇  国際公開第２０１６／０６１１４２号（２６５頁）の表１に定義されたＢＡＰ０５８−クローン−ＫからＢＡＰ０５８−クローン−Ｏのいずれか１つ。
【００３５】
ペムブロリズマブ（以前は、ランブロリズマブとしても公知；商品名キイトルーダ；ＭＫ−３４７５としても公知）は、例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369(2):134-44に開示されており、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、Ｆｃ媒介性細胞傷害を予防するために設計されたＣ２２８Ｐに変異を含有する。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これは、切除不可能または転移性のメラノーマを患う患者、および転移性ＮＳＣＬＣを有する患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
【００３６】
ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４；ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６ｂ）は、検出可能な抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）がない、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、例えば、米国特許第８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これは、切除不可能または転移性のメラノーマ、転移性ＮＳＣＬＣ、および進行性腎細胞癌を患う患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
ピディリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ  Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブは、例えば、国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。
ＰＤＲ−００１またはＰＤＲ００１は、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１の結合を遮断する、高親和性でリガンドを遮断するヒト化抗ＰＤ−１  ＩｇＧ４抗体である。ＰＤＲ−００１は、国際公開第２０１５／１１２９００号および国際公開第２０１７／０１９８９６号に開示されている。
【００３７】
抗体ＰＤ１−１からＰＤ１−５は、配列番号により表２に示される配列によって定義される抗体分子であり、ここで、ＶＨは、重鎖可変ドメインを意味し、ＶＬは、軽鎖可変ドメインを意味し、ＨＣは、（全長）重鎖を意味し、ＬＣは、（全長）軽鎖を意味する。
【表２】
2020535180.tif 000003
【００３８】
ここで、アミノ酸配列（および配列名）の配列番号を表３に示す。
【表３】
2020535180.tif 000004
2020535180.tif 000005
2020535180.tif 000006
2020535180.tif 000007
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【００３９】
具体的に、本明細書に記載の抗ＰＤ−１抗体分子は、（ａ）配列番号１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２（ＨＣＤＲ２）および配列番号３（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４（ＬＣＤＲ１）、配列番号５（ＬＣＤＲ２）および配列番号６（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または（ｂ）配列番号７（ＨＣＤＲ１）、配列番号８（ＨＣＤＲ２）および配列番号９（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号１０（ＬＣＤＲ１）、配列番号１１（ＬＣＤＲ２）および配列番号１２（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または（ｃ）配列番号１３（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４（ＨＣＤＲ２）および配列番号１５（ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲならびに配列番号１６（ＬＣＤＲ１）、配列番号１７（ＬＣＤＲ２）および配列番号１８（ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号１９、２１、２３、２５および２７から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する。
【００４０】
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、配列番号２０、２２、２４、２６および２８から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体分子は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、（ｄ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、または（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。
【００４１】
いくつかの実施形態において、抗ＰＤ−１抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖、（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖、（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖、（ｄ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
アテゾリズマブ（テセントリク、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても公知）は、ＰＤ−Ｌ１を標的とする、ファージ由来ヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Deng et al. mAbs 2016;8:593-603に記載されている。これは、尿路上皮癌を患う患者の処置のために、ＦＤＡによって承認されている。
アベルマブは、完全ヒト抗ＰＤ−Ｌ１  ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、例えば、Boyerinas et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1148-1157に記載されている。
デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）は、ＰＤ−Ｌ１に対する高い特異性を有するヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えば、Stewart et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1052-1062またはIbrahim et al. Semin. Oncol. 2015;42:474-483に記載されている。
【００４２】
Li et al.（上記）によって開示されているか、または臨床試験で公知のさらなるＰＤ−１抗体、例えば、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４）、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＭＳ−９３６５５９、ＪＳ００１−ＰＤ−１、ＳＨＲ−１２１０、ＢＭＳ−９３６５５９、ＴＳＲ−０４２、ＪＮＪ−６３７２３２８３、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０ＡおよびＭＳＢ００１０７１８Ｃを、上述のアンタゴニストの代替として、または上述のアンタゴニストに加えて、使用してもよい。
本明細書において使用されるＩＮＮは、限定されるものではないが、米国において合衆国法律集第４２編§２６２のサブセクション（ｋ）および他の管轄の同等の規制の下で認可されたバイオシミラー抗体を含む、創製者の抗体と同じまたは実質的に同じアミノ酸配列を有するすべてのバイオシミラー抗体を包含することも意味する。
上記に列挙されたＰＤ−１アンタゴニストは、それらのそれぞれの製造、治療的使用および特性により、当技術分野において公知である。
１つの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ペムブロリズマブ（Ｂ１）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ニボルマブ（Ｂ２）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ピディリズマブ（Ｂ３）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、アテゾリズマブ（Ｂ４）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、アベルマブ（Ｂ５）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、デュルバルマブ（Ｂ６）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤＲ−００１（Ｂ７）である。
【００４３】
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義されたＢＡＰ０４９−クローン−Ｂ（Ｂ８）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、国際公開第２０１５／１１２９００号（１７１頁）の表１に定義されたＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ（Ｂ９）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、国際公開第２０１６／０６１１４２号（２６５頁）の表１に定義されたＢＡＰ０５８−クローン−ＫからＢＡＰ０５８−クローン−Ｏ（Ｂ１０）からなる群から選択される。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−１（Ｂ１１）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−２（Ｂ１２）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−３（Ｂ１３）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−４（Ｂ１４）である。
別の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−５（Ｂ１５）である。
【００４４】
本明細書に記載の化合物ＢであるＰＤ−１アンタゴニストの投与は、例えば、約０．１〜３０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、例えば、約０．５〜２５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、約１〜２０ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、約２〜５ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、または約３ｍｇ／患者の体重１ｋｇの用量での、例えば、注射（例えば、皮下または静脈内）によるものであり得る。
ＰＤ−１アンタゴニストの投薬量および治療レジメンは、当業者によって決定することができる。本発明のＰＤ−１アンタゴニストのための好ましい投薬レジメンは、静脈内投与による１ｍｇ／宿主の体重１ｋｇまたは３ｍｇ／宿主体重の１ｋｇを含み、抗体は、以下の投与スケジュールの１つを使用して投与される：（ｉ）４週間ごとに６回の投薬、その後は３か月ごと；（ｉｉ）３週間ごと；（ｉｉｉ）３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇを１回、続いて、１ｍｇ／宿主の体重１ｋｇを３週間ごと。ある特定の実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、約１〜４０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、例えば、１〜３０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、例えば、約５〜２５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、約１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、約１〜５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１〜１０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、５〜１５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、１５〜２５ｍｇ／宿主の体重１ｋｇ、または約３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇの用量で、注射（例えば、皮下または静脈内）によって投与される。投与スケジュールは、例えば、１週間に１回から、２週間、３週間または４週間に１回で変更することができる。１つの実施形態において、ＰＤ−１アンタゴニストは、隔週で、約１０〜２０ｍｇ／宿主の体重１ｋｇの用量で投与される。抗体分子は、約３５〜４００ｍｇ／ｍ2、典型的には、約７０〜３１０ｍｇ／ｍ2、より典型的には、約１００〜１３０ｍｇ／ｍ2の用量に達するように、２０ｍｇ／分よりも速い速度、例えば、２０〜４０ｍｇ／分の速度、典型的には、４０ｍｇ／分以上の速度での静脈内注入によって投与することができる。実施形態において、約１１０〜１３０ｍｇ／ｍ2の注入速度は、約３ｍｇ／宿主の体重１ｋｇのレベルに達する。他の実施形態において、抗体分子は、約１〜１００ｍｇ／ｍ2、例えば、約５〜５０ｍｇ／ｍ2、約７〜２５ｍｇ／ｍ2または約１０ｍｇ／ｍ2の用量に達するように、１０ｍｇ／分未満、例えば、５ｍｇ／分以下の速度での静脈内注入によって投与することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、約３０分の時間にわたって注入される。投薬量の値は、緩和される状態の種類および重症度によって変更し得ることに留意すべきである。任意の特定の対象について、特定の投薬レジメンは、個々の必要性および組成物の投与を投与または監督する人の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであること、ならびに本明細書おいて説明される投薬量の範囲が、例示のみであって、特許請求に係る組成物の範囲または実施を制限することを意図するものではないことがさらに理解されるべきである。
【００４５】
治療において使用するために、本明細書において定義される１つもしくは複数の他の活性成分（例えば、本明細書に記載のＰＤ１アンタゴニスト）と組み合わされてもよい、本明細書に記載の抗体、例えば、本明細書において定義される抗ＩＦＧ抗体分子、または１つもしくは複数の他の活性成分（例えば、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体）と組み合わされてもよい、本明細書において定義される抗ＰＤ１抗体分子は、動物またはヒトへの投与を容易にするために適した医薬組成物に含まれる。
【００４６】
抗ＩＧＦおよび／またはＰＤ１および／または抗ＰＤＬ１抗体分子の典型的な製剤は、抗体分子を生理学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤と混合することによって、凍結乾燥もしくはそうでなければ乾燥製剤、または水性溶液、または水性もしくは非水性懸濁液の形態に調製することができる。担体、賦形剤、改変剤または安定化剤は、利用される投薬量および濃度で非毒性である。これらとしては、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩ならびに他の無機酸または有機酸およびこれらの塩などの緩衝液系；アスコルビン酸およびメチオニンを含む、抗酸化剤；ポリビニルピロリドンまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジンを含む、安定化アミノ酸；グルコース、マンノース、スクロース、トレハロース、デキストリンもしくはデキストランを含む、単糖、二糖、オリゴ糖または多糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／あるいは例えばＴＷＥＥＮ（商標）（ポリソルベート）、プルロニック（商標）または脂肪酸エステル、脂肪酸エーテルもしくは糖エステルなどの、イオン性または非イオン性界面活性剤が挙げられる。賦形剤はまた、放出改変機能または吸収改変機能を有していてもよい。
【００４７】
抗体分子はまた、乾燥（凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥、近臨界または超臨界ガスによる乾燥、真空乾燥、風乾）されていてもよい。
当然ながら、インビボ投与のために使用される製剤は、無菌でなければならず；滅菌は、従来の技術、例えば、滅菌ろ過膜を通したろ過によって、達成され得る。
【００４８】
特定の実施形態において、抗ＩＧＦ抗体は、１０ｍｇ／ｍｌの抗体濃度で、非経口（静脈内）注入または注射用の水性緩衝組成物に製剤化され、前記緩衝液は、ｐＨ６．０で、２４．２ｍＭのヒスチジン、３．８８％のマンニトール、０．９７％のスクロース、０．０２％のポリソルベート２０を含む。静脈内注入のために、医薬組成物は、生理学的溶液で、例えば、０．９％の塩化ナトリウムまたはＧ５溶液で希釈されてもよい。
本発明内では、本発明による使用のための、組み合わせ、組成物、キット、方法、使用または化合物は、活性薬剤または活性成分の、同時、同時的、順次、連続的、交互、または別々の投与が構想され得ることが理解されるべきである。抗ＩＧＦ抗体およびＰＤ−１アンタゴニストは、独立せず、または独立してのいずれかで製剤化して投与することができ、例えば、抗ＩＧＦ抗体およびＰＤ−１アンタゴニストを、同じ医薬組成物／剤形の部分として、または好ましくは、別々の医薬組成物／剤形のいずれかで投与され得ることが認識される。
【００４９】
この文脈において、本発明の意味内の「組み合わせ」または「組み合わされた」とは、限定されるものではないが、２つ以上の活性薬剤の混合または組み合わせから生じる生成物を含み、例えば、成分もしくは薬剤の、同時、同時的、順次、連続的、交互、または別々の使用などの、固定された組み合わせおよび固定されていない（例えば、自由な）組み合わせ（キットを含む）の両方ならびに使用を含む。「固定された組み合わせ」という用語は、活性薬剤が、単一のものまたは単回投薬量の形態で、患者に、同時に、両方とも投与されることを意味する。「固定されていない組み合わせ」という用語は、活性薬剤が、別々のものとして、患者に、同時に（simultaneously）、同時的に（concurrently）、または特定の時間制限を伴わない順次のいずれかで、両方とも投与されることを意味し、このような投与は、患者の体内で、２つの化合物の治療的に有効なレベルを提供する。後者は、カクテル治療、例えば、３つ以上の活性薬剤の投与にも適用される。
抗ＩＧＦ抗体／化合物ＡおよびＰＤ−１アンタゴニスト／化合物Ｂの投与は、活性成分または活性薬剤の共投与によって、例えば、１つの単一の製剤もしくは剤形、または２つの別々の製剤もしくは剤形で、これらを同時または同時的に投与することによって、行われてもよい。あるいは、抗ＩＧＦ抗体およびＰＤ−１アンタゴニストの投与は、例えば、２つの別々の製剤または剤形などで、順次または交互に、活性成分または活性薬剤を投与することによって、行われてもよい。
【００５０】
例えば、同時投与は、実質的に同じ時点での投与を含む。この投与の形態は、「併用」投与とも称し得る。同時的投与は、同じ一般的な期間、例えば、必ずしも同じ時点ではないが同じ日に、活性薬剤を投与することを含む。交互投与は、期間の間、例えば、数日または１週間の治療単位にわたって、１つの薬剤の投与、続いて、その後の期間の間、例えば、数日または１週間の治療単位にわたって、他の薬剤の投与、次いで、１回または複数回のサイクルでこのパターンを繰り返すことを含む。順次投与または連続的投与は、１つまたは複数の用量を使用して、第１の期間の間（例えば、数日または１週間の治療単位にわたって）、１つの薬剤を投与し、続いて１つまたは複数の用量を使用して、第２の期間の間（例えば、数日または１週間の治療単位にわたって）、他の薬剤を投与することを含む。重複するスケジュールも使用してよく、これは、必ずしも規則的な順番に従わず、処置の期間にわたって、異なる日に活性薬剤を投与することを含む。例えば、使用される薬剤および対象の状態により、これらの一般的な指針に対する変更も用いられてよい。
したがって、好ましい実施形態において、本発明による方法では、本明細書に記載の化合物Ａは、本明細書に記載の化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。類似の好ましい実施形態において、本発明による方法における使用のための本明細書に記載の化合物Ａは、本明細書に記載の化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。関連する好ましい実施形態において、本発明による方法における使用のための本明細書に記載の化合物Ｂは、本明細書に記載の化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される。さらに好ましい実施形態において、化合物Ａが、化合物Ｂと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本明細書に記載の化合物Ａの使用が提供される。さらに関連する実施形態において、化合物Ｂが、化合物Ａと、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本明細書に記載の化合物Ｂの使用が提供される。別の実施形態において、第１の医薬組成物が、第２の医薬組成物と、同時に、同時的に、順次、連続的に、交互に、または別々に投与される、本発明によるキットが提供される。
【００５１】
別々または同時に投与される、化合物Ａ、化合物Ｂまたはその両方についての好ましい投与の経路は、限定されるものではないが、経口、腸管、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮もしくは皮下の注射、またはインプラント）、経鼻、経膣、直腸または局所投与が挙げられる。好ましい実施形態において、投与の経路は、静脈内投与、とりわけ、静脈内への注入または注射である。本発明の化合物は、単独または一緒に、それぞれの投与の経路に適した、従来の非毒性の薬学的に許容される担体、賦形剤および／またはビヒクルを含有する、適切な投薬単位の製剤に製剤化されてもよい。より好ましくは、製剤は、凍結乾燥、溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、リポソームおよび坐剤などの、固体、半固体または液体の剤形を含む。好ましい様式は、意図された投与の様式および治療適用に依存する。とりわけ好ましい実施形態としては、液体製剤および凍結乾燥が挙げられる。凍結乾燥の場合において、凍結乾燥物は、液体中、好ましくは、水中で再構成され得る。
本明細書に記載の化合物ＡおよびＢは、毎日、１週間に５回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、投与されてもよい。好ましい投与間隔としては、１週間に１回および２週間に１回が挙げられる。
好ましくは、化合物Ａおよび化合物Ｂは、静脈内注入によって、１週間に１回投与される。
【００５２】
投与レジメンは、長期の処置を含んでいてもよい。「長期」とは、少なくとも２週間、好ましくは、数週間、数カ月または数年の期間を意味する。この投薬レジメンにおける必要な改変は、本明細書における教示を考慮すると、日常的な実験のみを使用して、当業者によって決定することができる。Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin, E.W., ed. 4), Mack Publishing Co., Easton, PAを参照のこと。投薬量はまた、任意の合併症の事象において、個々の医師によって調整することができる。投与は、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、週あたり１日、週あたり２日、２週間あたり１日、３週間あたり１日などであり得る。
【００５３】
本明細書に記載の化合物ＡおよびＢは、適した時間間隔で投与される、単一用量または分割用量の治療有効量で投与され得る。治療有効量は、所望の治療結果を達成するために必要な投薬量および期間での有効な量を指し、疾患もしくは障害を予防、緩和または処置するために必要な最小量である。本明細書に記載の化合物の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する化合物の能力などの要因によって変更してもよい。治療有効量は、治療的に有益な効果が、化合物の任意の毒性効果または有害効果を上回る量でもある。治療有効用量は、好ましくは、測定可能なパラメーター、例えば、腫瘍増殖速度を、未処置の対象と比較して、または処置される同じ対象の未処置の先行期間と比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約４０％、さらにより好ましくは、少なくとも約６０％、またより好ましくは、少なくとも約８０％、阻害する。
活性化合物は、単剤治療における治療有効量であるような用量で、または単剤治療であるが、所望の（一緒の）治療有効量をもたらすように組み合わせた場合に、使用される用量よりも低いまたは高いような用量で、投与され得る。処置における使用のために必要な本明細書に記載の化合物の量は、特定の選択された化合物、投与の経路、処置される状態の本質、ならびに患者の年齢および状態に適合され得、最終的には、主治医または臨床医の裁量である。また、本明細書に記載の化合物の投薬量は、標的細胞、腫瘍、組織、移植片または臓器に応じて、適合され得る。
化合物Ａまたは化合物Ｂの所望の用量は、患者において設定された血中濃度に達するために、投与あたりの固定量として、またはボーラス投与として投与されてもよい。
【００５４】
化合物Ａおよび化合物Ｂの別々または一緒の投与スケジュールは、例えば、１週間に１回から２、３または４週間ごとに１回で変更し得る。ある特定の実施形態において、化合物Ａ、化合物Ｂもしくはその両方の投与量または投薬量は、より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。他の実施形態において、所望の効果をもたらす（例えば、過剰増殖性疾患または腫瘍学的疾患の処置）、化合物Ａ、化合物Ｂもしくはその両方の量または投薬量は、より低い（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％低い）。
本発明に記載の、方法、化合物、使用のための化合物、化合物の使用、医薬組成物およびキットは、本明細書に記載の抗ＩＧＦ抗体分子および抗ＰＤ−１抗体分子の組み合わせを対象に投与することを含む。
【００５５】
実施形態（Ｂ０）〜（Ｂ１５）（ＰＤ−１アンタゴニストに関して）との抗ＩＧＦ抗体に関する実施形態の並べ替えは、具体的に開示され、かつ本発明ならびにその組み合わせ、組成物、キット、方法、使用および使用のための化合物のすべての実施形態であるとすべて考えられるべき具体的な組み合わせをもたらす。
処置されるがん性疾患に応じて、本明細書に定義される組み合わせ治療は、それ自体で、あるいは特に、がん細胞における血管新生、シグナル伝達経路もしくは有糸分裂チェックポイントを阻害する化学療法剤または治療的に活性な化合物から選択される、１つもしくは複数の追加の治療薬剤とさらに組み合わせて、使用してもよい。
追加の治療薬剤は、同時に投与されてもよく、これは同じ医薬調製物の成分としてであってもよく、あるいは、抗ＩＧＦ抗体および／もしくＰＤ１アンタゴニストの投与の前または後に、投与されてもよい。
【００５６】
化学療法剤は、ホルモン、ホルモンアナログおよび抗ホルモン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、フルベストラント、酢酸メゲストロール、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、酢酸シプロテロン、フィナステリド、酢酸ブセレリン、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、メドロキシプロゲステロン、オクトレオチド、アルゾキシフェン、パシレオチド、バプレオチド）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、リアロゾール、エキセメスタン、アタメスタン、フォルメスタン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド、アバレリックス、セトロレリクス、デスロレリン、ヒストレリン、トリプトレリン）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、ペメトレキセドのような抗葉酸剤、５フルオロウラシル、カペシタビン、デシタビン、ネララビンおよびゲムシタビンのようなピリミジンアナログ、メルカプトプリンチオグアニン、クラドリビンおよびペントスタチンなどのプリンおよびアデノシンアナログ、シタラビン、フルダラビン）；抗腫瘍性抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシンおよびイダルビシンのようなアントラサイクリン、マイトマイシン−Ｃ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、ストレプトゾシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ロバプラチン、サトラプラチン）；アルキル化剤（例えば、エストラムスチン、メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イホスファミド、ヒドロキシウレア、テモゾロマイド、カルムスチンおよびロムスチンなどのニトロソウレア、チオテパ）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビンフルニンおよびビンクリスチンのようなビンカアルカロイド）；パクリタキセル、ドセタキセルおよびそれらの製剤、ラロタキセルのようなタキサン；シモタキセル、およびイクサベピロンのようなエポチロン、パツピロン、ＺＫ−ＥＰＯ）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびエトポホスのようなエピポドフィロトキシン、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン）、ならびにアミホスチン、アナグレリド、インターフェロンアルファ、プロカルバジン、ミトタン、およびポルフィマー、ベキサロテン、セレコキシブなどの種々の化学療法薬から選択され得る。
【００５７】
いくつかの実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂを含む処置は、「白金ダブレット」治療、すなわち、（ｉ）シスプラチンまたはカルボプラチンなどの白金化合物と、（ｉｉ）ドセタキセル、パクリタキセル、ビノレルビンまたはゲムシタビンなどの第三世代の化学療法剤による治療をさらに含む。
いくつかの実施形態において、化合物Ａおよび化合物Ｂを含む処置は、がん細胞標的治療と組み合わされる。
いくつかの実施形態において、記載の組み合わせ治療は、任意の追加の化学療法剤なしで、化合物Ａおよび化合物Ｂを含む。
【００５８】
ある特定の実施形態において、本明細書に開示される組み合わせ治療で処置される、腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、特に、がんまたは腫瘍疾患としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）および転移性病変が挙げられる。１つの実施形態において、がんは固形腫瘍である。固形腫瘍の例としては、悪性腫瘍、例えば、肉腫および癌腫、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ系、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器および尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経細胞およびグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、メラノーマ）および膵臓に影響を及ぼすものなどの各種の臓器系の腺癌、ならびに結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、非小細胞肺がん、小腸のがんおよび食道のがんなどの悪性腫瘍を含む腺癌が挙げられる。がんは、早期、中期、後期または転移性のがんであってもよい。
本明細書で使用される場合、「過剰増殖性疾患」とは、細胞増殖が、正常なレベルを超えて増加している状態を指す。例えば、過剰増殖性疾患または障害としては、悪性疾患（例えば、食道がん、結腸がん、胆道がん）および非悪性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、良性過形成、良性前立腺肥大症）が挙げられる。
【００５９】
いくつかの実施形態において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ（例えば、扁平上皮および／もしくは非扁平上皮組織を有するＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺癌））、メラノーマ（例えば、進行性メラノーマ）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌）、肝臓がん、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体またはＨＥＲ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つまたはすべてを発現しない乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん）、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、肛門がん、胃食道がん、甲状腺がん、子宮頸がん、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、または血液がん、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫もしくは白血病（例えば、骨髄性白血病またはリンパ性白血病）から選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、癌腫（例えば、進行性または転移性の癌腫）、メラノーマ、または肺癌、例えば、ＮＳＣＬＣから選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、神経膠芽腫、腎臓がん、好ましくは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がんまたは肺がんから選択される。
【００６０】
いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がん、肺がん、乳がん、メラノーマ、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がんまたは前立腺がんである。
いくつかの実施形態において、本発明は、化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）および化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）を投与するがんの処置の方法、化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）との組み合わせにおけるがんの処置における使用のための化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）、化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）との組み合わせにおけるがんの処置における使用のための化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）、化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）との組み合わせにおけるがんの処置のための医薬の製造における化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）の使用、化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）との組み合わせにおけるがんの処置のための医薬の製造における化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）の使用、化合物Ａ（例えば、ＢＩ−ＩＧＦ）および化合物Ｂ（例えば、Ｂ０〜Ｂ１５のいずれか１つ）を含む医薬組成物に関し、ここで、処置されるがんは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、神経膠芽腫、腎臓がん、好ましくは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がんまたは肺がん、特に、ＮＳＣＬＣからなる群から選択されるがんである。
上記で概要を述べたように、本発明は、本明細書において定義される化合物Ａおよび化合物Ｂを含む医薬組成物、ならびに本明細書に定義される化合物Ａを含む第１の医薬組成物、および本明細書に定義される化合物Ｂを含む第２の医薬組成物を含むキットに関する。
【００６１】
本明細書において定義される「医薬組成物」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性を有効にすることが可能であるような、そのような形態であって、組成物が投与される対象に対して容認しがたい毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。本発明の医薬組成物は、当技術分野において公知のさまざまな方法によって投与することができる。当業者には明らかであるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて、変更される。
選択された投与の経路にかかわらず、本発明の組み合わせ治療、ならびに／または本発明の医薬組成物、第１の医薬組成物および第２の医薬組成物において使用される化合物は、当業者に公知の慣用の方法によって、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
本明細書において定義されるキットは、第１の医薬組成物および／または第２の医薬組成物を含む、適切な１つの容器またはいくつかの適切な容器を含んでいてもよく、ここで、第１および第２の医薬組成物は、同じ容器、または異なる容器に含有されていてもよい。キットは、本発明の任意の方法または任意の使用において使用され得る。
【００６２】
好ましくは、本発明によるキットは、処置または予防を必要とする患者における腫瘍学的疾患または過剰増殖性疾患、好ましくは、がんまたは腫瘍疾患の処置および／または予防において化合物Ａおよび／または化合物Ｂを使用するための可読の指示を含む添付文書をさらに含む。指示は、本発明の方法およびその好ましい実施形態のいずれかに関する上記の記載のように、さらなる詳述を提供し得る。
特許請求の範囲および／または明細書において「含む」という用語と組み合わせて使用される場合の「ａ」または「ａｎ」という語の使用は、「１つ」を意味してもよいが、これは、「１つまたは複数」、「少なくとも１つ」および「１つまたは２つ以上」の意味とも一致する。
本明細書において使用される「約」は、測定の精度の性質を考慮した、測定された量について許容可能な程度の誤差を意味する。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０％以内、典型的には、１０％以内、より典型的には、５％以内である。
【００６３】
本明細書において使用される「処置する」または「処置」という用語は、すでに存在する、疾患状態もしくは状態を治癒させること、または疾患状態もしくは状態からの回復の可能性を増加させることを意味する。処置することには、阻害すること、すなわち、疾患状態もしくは状態の進行を抑止すること、および緩和すること、すなわち、疾患の進行の退縮を引き起こすことまたは遅延させることも含み得る。処置は、患者を治癒させず、疾患の症状を緩和させるためであり得る。
本明細書において使用される「予防する」または「予防」という用語は、患者または対象に疾患状態または状態が完全に発生するのを止めることを意味しないが、疾患状態または状態が進行する危険性を低減させることも指す。
本発明を、本発明のこれらの実施形態に必ずしも限定されることなく、以下の実施例によってさらに例証する。化合物、用量および投与経路、ならびに処置の組み合わせを含む、例またはその一部は、それぞれそのままで、または上記の詳細な記載と組み合わせて、本発明の一部を形成する。
【実施例】
【００６４】
（実施例１）
結腸癌モデルにおける化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせのインビボ抗腫瘍有効性
材料および方法
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせの抗腫瘍有効性を、マウス結腸癌細胞株ＭＣ−３８に由来する同系マウス腫瘍モデルにおいて検討した。腫瘍細胞を、免疫適格性の同系Ｃ５７Ｂｌ／６の６〜８週齢の雌マウスの皮下に埋め込み（３０μｌのＭａｔｒｉｇｅｌ中に１×１０6腫瘍細胞）、腫瘍を、処置を開始する３日前に確立した。マウスに、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）および化合物Ａ（ＢＩ−ＩＧＦ、２００ｍｇ／Ｋｇ、ｑ７ｄ）の組み合わせ、またはＩｇＧアイソタイプ対照抗体（１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）を、１５〜３２日間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。腫瘍体積を、キャリパーを使用して週に３回測定した。それぞれの腫瘍の体積［ｍｍ3］を、式「腫瘍体積＝長さ×直径２×π／６」に従って計算した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）値の百分率は、以下の通り計算した：
ＴＧＩ＝１００×｛１−［（処置最終日−処置1日目）／（対照最終日−対照1日目）］｝
中央値ＴＧＩを１５日目に決定した。体重を、処置の耐容性の指標として毎日測定した。
【００６５】
結果
化合物Ｂによる単一薬剤処置は、７１％の中央値ＴＧＩで、腫瘍増殖を遅延させた。組み合わせによる処置は、より有効であり、８３％のＴＧＩをもたらした（図１Ａ）。すべての処置レジメンは、著しい体重喪失なく十分に耐容性であった（図１Ｂ）。
結論
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせは、化合物Ｂ単独の有効性と比較して、優れた抗腫瘍有効性を示す。
【００６６】
（実施例２）
乳癌モデルにおける化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせのインビボ抗腫瘍有効性
材料および方法
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせの抗腫瘍有効性を、乳癌細胞株ＥＭＴ−６に由来する同系マウス腫瘍モデルにおいて検討する。腫瘍細胞を、免疫適格性の同系ＢＡＬＢ／ｃの６〜８週齢の雌マウスの皮下に埋め込み（３０μｌのＭａｔｒｉｇｅｌ中に１×１０6腫瘍細胞）、腫瘍を、処置を開始する６日〜１０日前に確立する。マウスに、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）および化合物Ａ（ＢＩ−ＩＧＦ、２００ｍｇ／Ｋｇ、ｑ７ｄ）の組み合わせ、またはＩｇＧアイソタイプ対照抗体（１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）を、１０〜３５日間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与する。腫瘍体積を、キャリパーを使用して週に３回測定する。それぞれの腫瘍の体積［ｍｍ3］を、式「腫瘍体積＝長さ×直径２×π／６」に従って計算する。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）値の百分率は、以下の通り計算される：
ＴＧＩ＝１００×｛１−［（処置最終日−処置1日目）／（対照最終日−対照1日目）］｝
中央値ＴＧＩを処置の１０日〜１５日後に決定する。体重を処置の耐容性の指標として毎日測定する。
【００６７】
（実施例３）
結腸癌モデルにおける腫瘍内制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に対する化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせの効果
【００６８】
材料および方法
化合物Ａおよび化合物Ｂの組み合わせによる処置の際の腫瘍内Ｔｒｅｇの低減を、結腸癌細胞株ＭＣ−３８に由来する同系マウス腫瘍モデルにおいて検討する。腫瘍細胞を、免疫適格性の同系Ｃ５７Ｂｌ／６の６〜８週齢の雌マウスの皮下に埋め込み（３０μｌのＭａｔｒｉｇｅｌ中に１×１０6腫瘍細胞）、腫瘍を、処置を開始する３日〜６日前に確立する。マウスに、化合物Ａ（ＢＩ−ＩＧＦ、２００ｍｇ／Ｋｇ、ｑ７ｄ）、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）、化合物Ｂ（ＰＤ−１に対するマウス抗体、１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）および化合物Ａ（ＢＩ−ＩＧＦ、２００ｍｇ／Ｋｇ、ｑ７ｄ）の組み合わせ、またはＩｇＧアイソタイプ対照抗体（１０ｍｇ／Ｋｇ、ｑ３ｏｒ４ｄ）を、１０〜３５日間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与する。腫瘍体積を、キャリパーを使用して週に３回測定する。それぞれの腫瘍の体積［ｍｍ3］を、式「腫瘍体積＝長さ×直径２×π／６」に従って計算する。実験の最終日に、腫瘍体積がおよそ５００〜６００ｍｍ3に達したら、腫瘍を収集する。腫瘍の半分を瞬間凍結し、他の半分をホルマリン固定およびパラフィン包埋（ＦＦＰＥ）する。腫瘍内Ｔｒｅｇの評価のために、凍結試料を、溶解し、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）によって分析し、ＦＦＰＥ試料を、切片化し、免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）によって分析する。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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