(57)【要約】  本発明は、植物抽出物組成物を、神経新生プロセスを促進するのに有効な量で経口投与することによって脳の健康を改善するための方法全般に関する。より詳細には、本発明は、神経新生の速度を高めるためのスペアミント（メンタ・スピカタＬ．（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａ  Ｌ．））抽出物の使用に関する。【選択図】図１
2020508962.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スペアミント抽出物を、神経新生の速度を上昇させるのに有効な量でヒトに経口投与することを含む、神経新生プロセスを促進するための方法。
【請求項２】
前記スペアミント抽出物が、１２００ｍｇまでの用量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記スペアミント抽出物が、３００〜１２００ｍｇの範囲内の量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記スペアミント抽出物が、４５０〜９００ｍｇの範囲内の量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記スペアミント抽出物が、本質的に溶媒を含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記スペアミント抽出物が、ＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５２の受託番号が割り当てられたメンタ・スピカタＬ．（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａ  Ｌ．）系統ＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記スペアミント抽出物が、ＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５１の受託番号が割り当てられたメンタ・スピカタＬ．系統ＫＩ−ＭｓＥＭ００４２由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記スペアミント抽出物が、カプセル、錠剤、又はソフトジェルとして投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記スペアミント抽出物が、食品又は飲料に添加することができる乾燥粉末である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全内容が参照により本明細書に援用される２０１６年１１月１０日に出願された米国特許出願第６２／４２０，９９４号の利益を主張するものである。
【０００２】
本発明は、植物抽出物組成物、及び神経新生の促進を通して脳の健康を改善するためのこれらの組成物の使用方法全般に関する。より詳細には、本発明は、神経新生の速度を高めるためのスペアミント（メンタ・スピカタＬ．（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａ  Ｌ．））抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
歯状回として知られる海馬の領域は、生涯にわたって新しい神経細胞を産生することができる成人の脳における数少ない領域のうちの１つである。新しい神経細胞を産生するこのプロセスは、神経新生として知られる。Ｇａｇｅ，ＦＨ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１４３３−１４３８（２０００），Ｓｐａｌｄｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １５３：１２１９−１２２７（２０１３）。新しいシナプス（別の神経細胞と情報伝達する神経細胞の部分）の増殖であるシナプス新生（synapotogenesis）とは対照的に、神経新生は、新しい神経細胞の増殖に関する。研究者らによると、老化、ストレス、及び／又は睡眠不足は、歯状回の活性を低下させることによって神経新生の速度を低下させる可能性があり、その結果として、健康な成人の認知能力の低下をもたらすことが示唆されている。Ａｒｔｅｇｉａｎｉ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ａｇｉｎｇ  ４：１７６−１８６（２０１２），Ｖｅｅｎａ  Ｊ  Ｊ，Ｎａｔ  Ｓｃｉ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２：２６−３７（２０１１）。これが、老年期が始まるかなり前の中年期の非常に初期に起こり得ることを示唆する証拠がある。例えば、動物モデルでの研究から、神経新生のための経路の劣化が、中年期までに既に存在していることが見出された  Ｈａｍｉｌｔｏｎ  ＬＫ，Ｅｕｒ  Ｊ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏ  ３７：１９７８−１９８６。加えて、Ｍａｔｈｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｇｉｎｇ  Ｃｅｌｌ  １６：１１９５−１１９９（２０１７）は、神経新生の増殖及び成熟初期に関与する遺伝子の発現低下が、２０歳以降のある特定の個人に発生し得ることを見出した。
【０００４】
神経栄養、抗酸化、神経保護、及び抗コリンエステラーゼ活性の能力を有する植物ベースの栄養補助食品が、健康な志願被験者における認知機能を向上させる可能性についての臨床試験で研究された。Ｓｎｉｔｚ  ＢＥ，ｅｔ  ａｌ．ＪＡＭＡ．３０２：２６６３−２６７０（２００９）；Ｒｅａｙ  ＪＬ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９：３５７−３６５（２００５）；Ｋｅｎｎｅｄｙ  ＤＯ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｅｈａｖ．７９：４０１−４１１（２００４）；Ｐｅｎｇｅｌｌｙ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｅｄ  Ｆｏｏｄ．１５：１０−１７（２０１２）。しかし、先行技術の研究は、主として、合成ロスマリン酸などの合成化合物の投与の効果に焦点が当てられてきた。これらの研究の結果は、ほとんど決定的なものではなく、さらに、活性代謝物に加えて数多くの活性化合物を有する植物抽出物が、同様に挙動するかどうかも明らかではない。Ｉｔｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．３１：１３６７−１３８０（２００８）；Ｎｉｅ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｇ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｍ  ＆  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈ．５１：１６−２２（２０１４）；Ｊｉｎ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．３８：１８２８−１８３７（２０１３）；Ｇｈａｆｆａｒｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１１３：７−１３（２０１４）；Ｆｏｎｔｅｌｅｓ  ＡＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｅｈ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２９７：９１−１０３（２０１６）。例えば、いくつかの研究では、合成ロスマリン酸がストレスを受けた動物に投与された場合だけに神経新生の効果がみられ、コントロール、ストレスを受けていない動物、又は培養条件では効果は見られなかった。例えば、Ｇｈａｆｆａｒｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１１３：７−１３（２０１４）；Ｊｉｎ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．３８：１８２８−１８３７（２０１３）；Ｎｉｅ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｇ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｍ  ＆  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈ．５１：１６−２２（２０１４）を参照されたい。
【０００５】
スペアミント抽出物は、数ある中でもロスマリン酸、サルビアノリン酸Ａ、サルビアノリン酸Ｂ、リトスペルミン酸、及びカフタル酸を含む６０を超えるポリフェノール系化合物を含有するポリフェノールに富む植物抽出物である。Ｃｉｒｌｉｎｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１６；２１：１００７。例えば、ある特定の種類のスペアミント抽出物は、高いレベルのロスマリン酸（ＲＡ）を含有し、これは、カフェ酸と３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸とのエステルである。それはまた、シソ科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）を含む様々な植物種の二次代謝物でもある。ロスマリン酸は、最初にローズマリー（ロスマリウス・オフィシナリスＬ．（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  Ｌ．））から抽出されたものであり、ローズマリーの他の豊富な抗酸化化合物とは異なり（カルノシン酸及びカルノソール）、ロスマリン酸は、より極性が高く、他の食料製品に用いるのに適している。飲料、ソース、及びエマルジョンにおいてより高い抗酸化効果を有する可能性が高い、より高い極性のロスマリン酸をベースとする製品の開発に関心が集まっている。加えて、この分子は、抗ウィルス、抗菌、及び抗炎症活性を含む独特の特性を有することが知られている（Ｍａｚｕｍｄｅｒ  Ａ，Ｎｅａｍａｔｉ  Ｎ，Ｓｕｎｄｅｒ  Ｓ，Ｓｃｈｕｌｚ  Ｊ，Ｐｅｒｔｚ  Ｈ，Ｅｉｃｈ  Ｅ，ａｎｄ  Ｐｏｍｍｉｅｒ  Ｙ．１９９７．Ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ａｎａｌｏｇｓ  ｗｉｔｈ  ａｌｔｅｒｅｄ  ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ＨＩＶ−１  ｉｎｔｅｇｒａｓｅ  ａｓ  ｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｃｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４０：３０５７−３０６３；Ｓｚａｂｏ  Ｅ，Ｔｈｅｌｅｎ  Ａ  ａｎｄ  Ｐａｔｅｒｓｏｎ  Ｍ．１９９９．Ｆｕｎｇａｌ  ｅｌｉｃｉｔｏｒ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｙｌ  ｊａｓｍｏｎａｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｒｏｓｍａｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｃｏｌｅｕｓ  Ｂｌｕｍｅｉ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １８：４８５−４８９；Ｈｏｏｋｅｒ  ＣＷ，Ｌｏｔｔ  ＷＢ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｃｈ  Ｄ．２００１．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  Ｔｙｐｅ  １  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  ｔａｒｇｅｔ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｐｈａｓｅｓ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．７５：３０９５−３１０４）。
【発明の概要】
【０００６】
過去の研究から、ミント抽出物などの植物抽出物の投与によって、健康な成人の認知能力を改善することができることが示されている。したがって、本研究の目的は、ミント抽出物などの植物抽出物が、神経新生を促進することができるか、又は新しい神経細胞の増殖速度を高めることができるかどうかを特定することであった。なおさらに、本研究の目的は、高いレベルのポリフェノール、非常に優れた成長力、及び全体としての農学的堅牢性を有するＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０及びＫＩ−ＭｓＥＭ００４２を含む独自開発のメンタ・スピカタＬ．からの植物抽出物を評価することであった。
【０００７】
スペアミント抽出物が、ロスマリン酸単独とは異なる機能を示したことは特筆に値する。例えば、ロスマリン酸は、独自開発のメンタ・スピカタＬ．系統であるＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０及びＫＩ−ＭｓＥＭ００４２において最も高濃度のポリフェノール化合物であるが、最近の研究では、スペアミント抽出物が、分離された同等量のロスマリン酸とは大きく異なって機能したことが示された。Ｆｏｎｓｅｃａ  ＢＡ，ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．３１：ｌｂ３６７（２０１７）。
【０００８】
したがって、当業者であれば、ポリフェノールの複雑な混合物を含有する植物抽出物が、相互に作用し、単一分子が単独で作用する場合には得ることのできない相乗効果をもたらし得ることが理解されるであろう。例えば、異なる投与量での相互作用の一部は、ロスマリン酸を多かれ少なかれ有効とし得る。ここで、本研究者らは、予想外なことに、スペアミント抽出物の経口投与が、神経新生の速度の統計的に有意な上昇を通して、脳の健康の改善に繋がることを特定した。
【０００９】
本発明は、ポリフェノールに富む植物抽出物組成物、及び神経新生の促進を通して脳の健康を改善するためのこれらの組成物の使用方法全般に関する。本発明の別の態様は、神経新生促進のためのスペアミント（メンタ・スピカタ）抽出物の使用方法に関する。
【００１０】
なおさらに、本発明の別の態様は、神経新生の促進を通して脳の健康を改善するための、Ｋｅｍｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．の独自開発スペアミント（ＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０及びＫＩ−ＭｓＥＭ００４２と称する系統を含むメンタ・スピカタＬ．、米国特許第９，５４５，０７５号及び同第９，５４５，０７６号に詳細に記載）からの植物抽出物の使用に関する。例えば、Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘ（商標）Ｐｈｅｎｏｌｉｃ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｋ１１０−４２（Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘ）は、６０を超えるフェノール系構成成分を含有するスペアミント由来の天然抽出物であり（Ｃｉｒｌｉｎｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１６；２１：１００７）、記憶障害を伴う年齢の健康な成人における９０日間の補給療法の後、作業記憶の改善を示した。Ｆｏｎｓｅｃａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｅｒ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｎｅｕｒ．Ｃｏｎｆ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．（２０１５）。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘの投与後のロスマリン酸の血漿中レベルを示す図である。
【図２】図２は、実験設計及び時系列を示す図である。
【図３】図３は、標識した海馬神経細胞を示す図である。
【図４】図４Ａ及び図４Ｂは、神経新生又はラットの一次海馬神経細胞に対するＮｅｕｍｅｎｔｉｘの効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本明細書においてより詳細に開示されるように、本発明は、植物抽出物組成物、及び神経新生の促進を通して脳の健康を改善するためのこれらの組成物の使用方法に関する。本発明の別の態様は、神経新生促進のためのスペアミント（メンタ・スピカタＬ．）抽出物の使用方法に関する。
【００１３】
認知能力は、老化、ストレス、及び／又は睡眠不足に起因して低下し得る。Ａｌｈｏｌａ，Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈ  Ｄｉｓ  ＆  Ｔｒｅａｔ．３：５５３−５６７（２００７）；ｄｅ  Ｋｌｏｅｔ  ＥＲ，ｅｔ  ａｌ．ＴＩＮＳ  ２２：４２２−４２４（１９９９）；Ｖｅｒｈａｅｇｈｅｎ  Ｐ，Ｐｓｙｃｈ  Ｂｕｌｌ．１２２：２３１−２４９（１９９７）。この認知能力の低下に対する１つの考え得る説明としては、新しい神経細胞を産生するプロセスである神経新生が、これらの条件下で低下することである  Ａｒｔｅｇｉａｎｉ  Ｂ，ｅｔ  ａｌ．Ａｇｉｎｇ  ４：１７６−１８６（２０１２），Ｖｅｅｎａ  Ｊ  Ｊ，Ｎａｔ  Ｓｃｉ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  ２：２６−３７（２０１１）。本発明の少なくとも１つの実施形態によると、６６を超えるフェノール系構成成分を含有するスペアミント抽出物などの植物抽出物は、作業記憶を含む認知を改善することが臨床的に示された。
【００１４】
背景として、ＳＡＭＰ８動物実験から、スペアミント抽出物が、Ｔ迷路の習得及び記憶と共に、新規な物体認知課題に対する成績の向上に繋がることが見出された（Ｆａｒｒ，ＳＡ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏ  ＆  Ｂｅｈ．１６５：３２８−３３８（２０１６））。これらの課題は、海馬依存課題であると見なされる。加えて、この実験から、スペアミント抽出物を与えられた動物の海馬において、いくつかの酸化ストレスマーカーのレベルが低下したことが明らかとなった。これらの知見はいずれも、スペアミント抽出物が、神経新生速度の上昇を１つの考え得る作用機構として、海馬の機能／能力を高める潜在的役割を果たしている可能性を示唆している。
【００１５】
フォローアップの単一群ヒト臨床試験において、研究者らは、同様の（ヒトにおいて同等の）用量の投与により、同じく海馬の能力に強く依存することが知られている多角形マッチング課題を含むいくつかの認知課題に対して、対象がより良好に実行することができるようになることを見出した。Ｎｉｅｍａｎ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ｆｕｎｃｔ  Ｆｏｏｄｓ  Ｈｅａｌｔｈ  ＆  Ｄｉｓｅａｓｅ．５（５）：１６５−１８７（２０１５）。例えば、単一群試験において、９００ｍｇのＮｅｕｍｅｎｔｉｘを毎日摂取することによる急性（補給療法の約２〜４時間後）及び慢性（補給療法の３０日後）での認知の改善が測定され、図１に示されるように、血漿中ロスマリン酸レベルの上昇も同時に見られた。
【００１６】
より大規模な無作為二重盲検プラセボ対照試験では、研究者らは、スペアミント抽出物を９０日間にわたって摂取した個人が、プラセボ摂取の個人と比較して、空間的作業記憶課題を非常に良好に実行することを見出した。Ｆｏｎｓｅｃａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｅｒ．Ａｃａｄ．ｏｆ  Ｎｅｕｒ．Ｃｏｎｆ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．（２０１５）。これもやはり、海馬依存課題である。Ｓｐｅｌｌｍａｎ，Ｔ．Ｎａｔｕｒｅ．５２２．３０９−３１４（２０１５）；Ｗｉｒｔ，ＲＡ．Ｂｒａｉｎ  Ｓｃｉ．７（４３）：１−２１（２０１７）。
【００１７】
そして、別の無作為二重盲検プラセボ対照試験では、若年の健康な男女が、スペアミント抽出物による補給療法を毎日受け、スペアミント抽出物を摂取した個人は、プラセボ摂取の個人と比較して、単純なＮバック作業記憶課題でより高い数値のスコアを得た。（Ｆａｌｃｏｎｅ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．ＩＳＳＮ（２０１７）。
【００１８】
これらの結果は、Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘの投与後のこれまでの臨床試験で示されるように、作業記憶の改善が、海馬における神経新生の速度の上昇に起因し得るものであることを示唆している。
【００１９】
本発明は、スペアミント抽出物の投与、並びに新しい神経細胞の増殖を統計的に有意な量で増加させることを例とする神経新生の速度の上昇によって海馬の機能及び能力に影響を与えるその能力に関する。より具体的には、研究者らは、１日あたり３００〜１２００ｍｇを例とする１２００ｍｇまでの一日量でスペアミント抽出物を経口投与することで、神経新生の速度を上昇させることができることを特定した。少なくとも１つの実施形態によると、スペアミント抽出物は、４５０〜１０００ｍｇの用量で投与される。別の実施形態では、スペアミント抽出物は、６００又は９００ｍｇの用量で投与される。
【００２０】
本発明の少なくとも１つの実施形態では、スペアミント抽出物は、少なくとも３０日間にわたって毎日投与された。別の実施形態では、抽出物は、少なくとも９０日間にわたって毎日投与された。さらなる実施形態では、抽出物は、９０日を超える期間にわたって慢性的に投与された。
【００２１】
本発明の少なくとも１つの実施形態では、経口投与は、１日１回行われるが、投与は、１日の間に、より少ない複数の用量で行われてもよい。当業者であれば、カプセル、錠剤、ソフトジェル、グミ、ドリンクスティック、ショット、そのまま飲める飲料、チョコレートバイツ、コーヒー一杯分用の「ｋ−カップ」、茶、発泡性ウェハ、グミ、及び食品バーが挙げられるがこれらに限定されないスペアミント抽出物を経口投与する様々な方法を認識するであろう。
【００２２】
本発明の別の態様は、高いポリフェノール及びロスマリン酸のレベル、非常に優れた成長力、並びに全体としての農学的堅牢性を有するＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０及びＫＩ−ＭｓＥＭ００４２を含む独自開発のメンタ・スピカタＬ．からの植物抽出物を投与する方法に関する。Ｎａｒａｓｉｍｈａｍｏｏｒｔｈｙ  Ｂ．Ｉｎｄ  Ｃｒｏｐｓ  ＆  Ｐｒｏｄ．６３：８７−９１（２０１５）。これらの独自開発の系統は、その全開示内容が参照により本明細書に明確に援用される米国特許第９，５４５，０７５号及び同第９，５４５，０７６号に記載されている。
【００２３】
少なくとも１つの実施形態では、植物ＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０は、８％を超える乾燥重量のロスマリン酸を、好ましくは１０％を超える乾燥重量のロスマリン酸を含むロスマリン酸を産生する。スペアミント系統によって作出されＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０と命名された植物メンタ・スピカタＬ．は、ブタペスト条約の規定に基づき、２０１５年１１月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５２の受託番号が割り当てられた。
【００２４】
別の実施形態では、植物ＫＩ−ＭｓＥＭ００４２は、８％を超える乾燥重量のロスマリン酸を、好ましくは１０％を超える乾燥重量のロスマリン酸を含むロスマリン酸を産生する。スペアミント系統によって作出されＫＩ−ＭｓＥＭ００４２と命名された植物メンタ・スピカタＬ．は、ブタペスト条約の規定に基づき、２０１５年１１月５日にＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５１の受託番号が割り当てられた。
【００２５】
実施例
スペアミント抽出物などの植物抽出物が神経新生を促進することができるかどうかを特定するために、研究者らは、細胞培養アッセイにおいて生理学的に適切な濃度でラットの海馬細胞を調べる試験を行った。この実験は、ＱＰＳ  Ａｕｓｔｒｉａ  ＧｍｂＨ，Ｐａｒｋｒｉｎｇ  １２，８０７４  Ｇｒａｍｂａｃｈ，Ａｕｓｔｒｉａにおいて、実験番号Ｃ０２１３４０で行った。
【００２６】
物質：粉末形態で入手可能なスペアミント抽出物であるＮｅｕｍｅｎｔｉｘ（Ｋｅｍｉｎ  Ｆｏｏｄｓ，Ｌ．Ｃ．，Ｄｅｓ  Ｍｏｉｎｅｓ，ＩＡ）を、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μΜ、及び１０μΜの最終濃度のロスマリン酸（ＲＡ）となるように培地に溶解した。
【００２７】
スペアミント抽出物は、従来の栽培手法による２種類の独自開発のスペアミント植物ＫＩ−１１０及びＫＩ−４２から得た（Ｎａｒａｓｉｍｈａｍｏｏｒｔｈｙ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｄｕｓｔ  Ｃｒｏｐｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄ  ６３：８７−９１（２０１５））。独自開発のスペアミント作物は、適正農業規範（ＧＡＰ）に従って米国で栽培した。収穫した葉は、抽出の前に乾燥させ、粉砕した。抽出工程では、乾燥粉砕した葉を、水及びリン酸（フェノール系構成成分を植物組織から抽出する際の補助となる加工助剤）と混合し、加熱し、ろ過し、乾燥して、乾燥スペアミント抽出物を得た。乾燥スペアミント抽出物は、食品のための適正製造規範（ｃＧＭＰ）（連邦規則集第２１巻、第１１０章）に準拠して製造され、実質的に溶媒を含まない。Ｌａｓｒａｄｏ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｇ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａ  ７１：２１３−２２４（２０１５）。
【００２８】
乾燥スペアミント抽出物は、ポリフェノールのブレンドから成り、重要な分子であるロスマリン酸及びその誘導体を、より少ない量のサルビアノリン酸類、カフェオイルキナ酸類、ヒドロキシ安息香酸類、ヒドロキシケイ皮酸類、フラボン類、及びフラバノン類と共に含む。スペアミント抽出物のフェノール系画分は、超高速液体クロマトグラフィ−エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ）によって完全に同定されており、抽出物中に合計で６６の化合物が明らかとされている。ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳに基づいて分析したスペアミント抽出物中のポリフェノールブレンドの合計量は、２６３ｍｇ／ｇであった。表１に示すように、抽出物による特定のポリフェノールのパーセントの分析から、ロスマリン酸が、検出されたポリフェノールの合計量の約８８％を成し、続いて６％のサルビアノリン酸類、及び１％のカフェオイルキナ酸類が、やはり約１％のヒドロキシケイ皮酸類（カフタル酸を含む）と共に存在することが示される。
【００２９】
【表１】
2020508962.tif 000003
方法：一次海馬神経細胞は、胎生１８日齢の計画交配した（time mated）スプラーグドーリーラットから調製した。海馬を胎仔から単離し、調製し、培地中に懸濁し、１．２５×１０４細胞を別々のカバーガラスに播種し、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。接着後、細胞をＮｅｕｍｅｎｔｉｘ、媒体（培地）、又は線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）（ポジティブコントロール）で処理し、以下の表２に挙げる略語で図２に記載した通りにインキュベートした。
【００３０】
【表２】
2020508962.tif 000004
ラットの一次海馬細胞を、以下の用量（ロスマリン酸濃度に基づいて）、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１ｕＭ、若しくは１０ｕＭのＮｅｕｍｅｎｔｉｘ、媒体、又は線維芽細胞増殖因子で生体外で処理した。増殖性神経細胞（ブロムデスオキシウリジン（Bromdesoxyuridine）（ＢｒｄＵ）、ＮｅｕＮ、及び４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（Ｄａｐｉ）に対する陽性染色によって定められる）の、神経細胞の合計数（ＮｅｕＮ及びＤａｐｉ陽性細胞として定められる）と比較した割合について画像を分析した。
【００３１】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４及び６を用い、一元配置ＡＮＯＶＡ分析、及び続いてフィッシャーのＬＳＤ事後検定によってデータを分析した。ＦＧＦは統計による評価に含めなかった。データは、平均±ＳＥＭで表した。
【００３２】
カバーガラスの中央近辺のモザイク画像（６．１ｍｍ×４．７ｍｍ）を、Ｚｅｉｓｓ  ＡｘｉｏＩｍａｇｅｒ  Ｚ１顕微鏡で記録した。条件あたり１１〜１２のカバーガラスを評価した。
【００３３】
増殖性神経細胞の数（ＢｒｄＵ、ＮｅｕＮ、及びＤＡＰＩ陽性）を、神経細胞の合計数（ＮｅｕＮ及びＤＡＰＩ陽性）のパーセントとして、ＩｍａｇｅＰｒｏ  Ｐｌｕｓ（ｖ６．２）ソフトウェアを用いた評価者に依存しないマクロベースの画像解析によって特定した。
【００３４】
結果：全体として統計的に有意な処理の効果（ｐ＝０．０１７）が識別された。さらに、一対比較から、Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘの１０ｎＭ用量群（０．０２０８３ｍｇ／Ｌ  Ｎｅｕｍｅｎｔｉｘ）が、媒体処理の培養物よりも有意に高い（ｐ＝０．０２３）レベルの神経新生を有することが示された。
【００３５】
より具体的には、胎仔一次海馬神経細胞は、細胞に適用されたＮｅｕｍｅｎｔｉｘの濃度に基づいて異なる応答を示し、統計的に有意な全体としての効果、Ｆ（４，５３）＝３．３１７、ｐ＝０．０１６９（図４Ａ）、を有していた。
【００３６】
一対比較から、１０ｎＭ  ＲＡの条件のＮｅｕｍｅｎｔｉｘが、媒体コントロールと比較して、有意に多い量、ｐ＝０．０２２８（図４Ａ）、の神経新生を示したことが示された。当業者による予想とは対照的に、１００ｎＭ〜１０μＭ濃度のより高いＲＡレベルは、有益性の増加を示さなかった（ｐ＞０．０５で媒体コントロールと比較した場合に、統計的に有意ではなかった）。
【００３７】
１０ｎＭ又は１００ｎＭ  ＲＡの濃度でＮｅｕｍｅｎｔｉｘで処理した神経細胞から得られた結果は、他のすべての群と比較して個々のデータ点が大きく分散していることを示し、それは、統計的に有意、ｐ＜０．０００１（図４Ｂ）、であることが見出された。
【００３８】
結論：本実験は、水溶性スペアミント抽出物であるＮｅｕｍｅｎｔｉｘが、９００ｍｇのＮｅｕｍｅｎｔｉｘを含む経口補給療法後に対象の血漿中に検出されるレベルと同等であるロスマリン酸（１０ｎＭ）のレベルで投与されると、ラット一次海馬細胞における神経新生を有意に増加させることができることを示した。興味深いことに、研究者らは、濃度の上昇と共に神経新生の速度が低下するという反対方向の用量応答曲線を示した。
【００３９】
新しい神経細胞の増殖のマーカーに対するロスマリン酸の効果を見るために行われた実験では、本発明の実験で用いた濃度よりも数桁分高い濃度である単離された分子の濃度を用いている。例えば、Ｇｈａｆｆａｒｉ  Ｈ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１１３：７−１３（２０１４）は、５〜１００μＭの濃度のロスマリン酸単独の効果を調べたものであるが、一方本発明の実験では、ｎＭ範囲の濃度、又は１０００倍低い濃度で、神経新生の速度の上昇を示すことができた。加えて、実験の多くでは、濃度の上昇と共に神経新生速度も上昇することが観察されている。Ｉｔｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｌ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ．３１：１３６７−１３８０（２００８）；Ｎｉｅ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｇ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｍ  ＆  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈ．５１：１６−２２（２０１４）；Ｊｉｎ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．３８：１８２８−１８３７（２０１３）；Ｇｈａｆｆａｒｉ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１１３：７−１３（２０１４）。したがって、本発明は、これらの実験とは対照的な位置にあり、スペアミント抽出物などのフェノール系に富む植物抽出物を投与することで、非常により低い濃度で神経新生の速度の上昇を実現することができることを示している。
【００４０】
複数の実施形態が開示されるが、当業者であれば、本発明のなお他の実施形態は、本発明の例示的な実施形態を示し、記載する以下の詳細な記述から明らかとなるであろう。認識されるように、本発明は、すべて本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な明白な態様における変更が可能である。したがって、図面及び詳細な記述は、いかなる形であっても限定するものではなく、例示的な性質のものであると見なされるべきである。
【００４１】
本発明を好ましい実施形態を参照して記載してきたが、当業者であれば、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、形式上でも詳細にも変更が施されてよいことは認識されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年8月5日(2019.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経新生の速度を上昇させるのに有効な量でスペアミント抽出物を含有する、ヒトにおいて神経新生プロセスを促進するための経口投与組成物。
【請求項２】
前記スペアミント抽出物が、１２００ｍｇまでの用量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記スペアミント抽出物が、３００〜１２００ｍｇの範囲内の量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記スペアミント抽出物が、４５０〜９００ｍｇの範囲内の量で少なくとも１日１回投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記スペアミント抽出物が、本質的に溶媒を含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記スペアミント抽出物が、ＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５２の受託番号が割り当てられたメンタ・スピカタＬ．（Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｉｃａｔａ  Ｌ．）系統ＫＩ−ＭｓＥＭ０１１０由来である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記スペアミント抽出物が、ＡＴＣＣに寄託され、ＰＴＡ−１２２６５１の受託番号が割り当てられたメンタ・スピカタＬ．系統ＫＩ−ＭｓＥＭ００４２由来である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
カプセル、錠剤、又はソフトジェルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
食品又は飲料に添加することができる乾燥粉末である、請求項１に記載の組成物。
【国際調査報告】
2020508962.tif 000009