(57)【要約】  本発明は、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位と、腫瘍抗原（「ＴＡ」）のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位とを有する、結合分子（例えば「ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子」）を対象とする。一実施形態では、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性４価ダイアボディとなり、これは、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位とを有する。あるいは、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性３価ダイアボディとなり、これは３つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位とを有する。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる。本発明は、いずれのこのようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を含有する医薬組成物を対象とする。本発明は更に、癌並びに他の疾患及び状態の治療における、このような分子の使用方法を対象とする。本発明はまた、新規のＣＤ１３７‐結合分子及びＨＥＲ２／ｎｅｕ‐結合分子、並びにその誘導体及びその使用を提供する。【選択図】図２９
2020508334.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子であって、前記結合分子は、ＣＤ１３７のエピトープ及び腫瘍抗原（ＴＡ）のエピトープに結合でき、また前記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第１の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み：
（Ａ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項２】
前記第１の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；又は
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、請求項２に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項３】
前記第１の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、請求項１又は２に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項４】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）は：１９．９；癌胎児性タンパク質５Ｔ４；抗原４．２；Ａ３３；ＡＦＰ；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；βカテニン；ＣＡ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；Ｂ１；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ３０；ＣＤ３３；ＣＤ３６；ＣＤ４６；ＣＤ５２；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ；ＣＤ１２３；ＣＤ３１７；ＣＥＡ；ＣＥＡＣＡＭ５；ＣＥＡＣＡＭ６；ＣＯ‐４３；ＣＯ‐５１４；ＣＴＬＡ‐１；ＣＴＬＡ‐４；サイトケラチン８；Ｅ１シリーズ；ＥＧＦ‐Ｒ；エフリン受容体；Ｅｒｂ；Ｆ３；ＦＣ１０．２；ＧＡＧＥ  ＧＤ２；ＧＤ３；ＧＤ４９；ＧＭ２；ＧＭ３；ＧＩＣＡ１９‐９；ｇｐ３７；ｇｐ７５；ｇｐ１００；ＨＥＲ‐２／ｎｅｕ；ヒトＢ‐リンパ腫抗原‐ＣＤ２０；ヒト乳脂肪球抗原；ヒトパピローマウイルス‐Ｅ６／ヒトパピローマウイルス‐Ｅ７；ＨＭＷ‐ＭＡＡ；Ｉ抗原；ＩＴＧＢ６；ＩＬ１３Ｒα２；ＪＡＭ‐３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳ１／４汎癌抗原；ＫＳ１／４；ＫＳＡ；Ｌ６；Ｌ２０；ＬＥＡ；ＬＵＣＡ‐２；Ｍ１：２２：２５：８；Ｍ１８；Ｍ３９；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；Ｍｙｌ；ＭＵＣ‐１；ＭＵＭ‐１；Ｎ‐アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；ネオ糖タンパク質；ＮＳ‐１０；ＯＦＡ‐１；ＯＦＡ‐２；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＰＥＭＡ；ＰＩＰＡ；前立腺酸性ホスファターゼ；Ｒ２４；ＲＯＲ１；ＳＳＥＡ‐１；ＳＳＥＡ‐３；ＳＳＥＡ‐４；ｓＴｎ；Ｔ細胞受容体由来ペプチド；ＴＡＧ‐７２；ＴＬ５；ＴＮＦ‐α受容体；ＴＮＦ‐β受容体；ＴＮＦ‐γ受容体；ＴＲＡ‐１‐８５；トランスフェリン受容体；ＴＳＴＡ；及びＶＥＧＦ‐Ｒからなる、腫瘍抗原の群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項５】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり、前記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ａ）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲである、請求項４に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項６】
（Ａ）（１）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（３）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；及び
（Ｂ）（１）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（３）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、請求項５に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項７】
前記第２の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、請求項６に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項８】
前記第２の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、請求項６又は７に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項９】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）は５Ｔ４であり、前記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ｉ）（Ａ）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号１３５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号１３４）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（ＩＩ）（Ａ）前記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＬ（配列番号１３７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）前記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＨ（配列番号１３６）の重鎖ＣＤＲである、請求項４に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１０】
前記第２の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３５）を含む、請求項９に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１１】
前記第２の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３６）を含む、請求項９又は１０に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１２】
前記分子は、第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性４価Ｆｃ担持ダイアボディであり、前記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１３】
前記分子は二重特異性かつ４価であり、また第１、第２、第３、第４及び第５のポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１４】
前記分子は二重特異性かつ３価であり、また第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１５】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ａ）前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、若しくは配列番号２２９のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号１６３、若しくは配列番号２３０のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する、請求項１４に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１６】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）は５Ｔ４であり：
（Ａ）前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、若しくは配列番号２２９のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、若しくは配列番号２３０のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号２３１のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号２３２のアミノ酸配列を有する、請求項１４に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【請求項１８】
前記腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又は請求項１７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１９】
腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする前記疾患又は状態は、癌である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、ＣＤ１３７結合分子であって；
（Ａ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）前記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）前記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである、ＣＤ１３７結合分子。
【請求項２１】
前記重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；又は
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、請求項２０に記載のＣＤ１３７結合分子。
【請求項２２】
前記軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、請求項２０又は２１に記載のＣＤ１３７結合分子。
【請求項２３】
前記分子は、抗体又は前記抗体の抗原結合断片である、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載のＣＤ１３７結合分子。
【請求項２４】
請求項２０〜２３のいずれか１項に記載のＣＤ１３７結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【請求項２５】
抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載のＣＤ１３７結合分子又は請求項２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２６】
抑制免疫系に関連する又は前記腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする前記状態は、癌である、請求項２５の使用。
【請求項２７】
ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子であって：
（Ａ）（１）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（３）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（４）前記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；
かつ
（Ｂ）（１）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（３）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（４）前記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【請求項２８】
前記重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｄ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、請求項２７に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【請求項２９】
前記軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｄ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、請求項２７又は２８のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【請求項３０】
前記分子は、抗体又は前記抗体の抗原結合断片である、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【請求項３１】
請求項２７〜３０のいずれか１項に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【請求項３２】
ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子又は請求項３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３３】
ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする前記状態は、癌である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記癌は、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膠芽腫、腎臓癌、肺癌、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、膵臓癌、咽頭癌、前立腺癌、腎細胞癌、横紋筋肉腫、及び頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）からなる群から選択される、請求項１９、２６及び３３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
腫瘍標的化剤の活性を強化する方法であって、前記方法は、前記腫瘍標的化剤を、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又は請求項１７に記載の医薬組成物と組み合わせて投与するステップを含む、方法。
【請求項３６】
抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態を治療する方法であって、前記方法は、投与を必要とする被験者に、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又は請求項１７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項３７】
抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする前記状態は、癌である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
腫瘍標的化剤を投与するステップを更に含む、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤を投与するステップを更に含む、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記腫瘍標的化剤は、抗体、抗体のエピトープ結合断片、又は標的細胞のＴ細胞標的転換殺滅を仲介する作用剤である、請求項３５又は３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ‐１抗体又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体である、請求項３９又は４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、米国特許出願第６２／４６３，３５３号（２０１７年２月２４日出願；係属中）及び米国特許出願第６２／５９７，５９４号（２０１７年１２月１２日出願；係属中）に対する優先権を主張するものであり、これらの特許出願はそれぞれ、参照によりその全体が本出願に援用される。
【０００２】
［配列表の参照］
本出願は、連邦規則法典第３７巻第１．８２１節以下による１つ又は複数の配列表を含み、これらの配列表は、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１３０１＿０１４９ＰＣＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、２０１８年２月１１日作成、サイズ：３０９，０９４バイト）において開示されており、上記ファイルは、参照によりその全体が本出願に援用される。
【０００３】
本発明は、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位と、腫瘍抗原（「ＴＡ」）のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位とを有する、結合分子（例えば「ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子」）を対象とする。一実施形態では、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性４価ダイアボディとなり、これは、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位とを有する。あるいは、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性３価ダイアボディとなり、これは３つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位とを有する。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる。本発明は、いずれのこのようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を含有する医薬組成物を対象とする。本発明は更に、癌並びに他の疾患及び状態の治療における、このような分子の使用方法を対象とする。本発明はまた、新規のＣＤ１３７‐結合分子及びＨＥＲ２／ｎｅｕ‐結合分子、並びにその誘導体及びその使用を提供する。
【背景技術】
【０００４】
ＣＤ１３７（４‐１ＢＢ及び「ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９」（「ＴＮＦＲＳＦ９」）としても公知）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーの共刺激受容体メンバーであり、ＣＤ２８依存性及びＣＤ２８非依存性Ｔ細胞共刺激を仲介する（非特許文献１〜１１）。
【０００５】
ＣＤ１３７は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、及び免疫系の他の細胞によって誘導的に発現される（非特許文献１２〜１６）。このタンパク質は、短いＮ末端細胞質部分、膜透過領域、及び３つの富システインモチーフを有する、２５５アミノ酸タンパク質からなる（非特許文献１７）。
【０００６】
ＣＤ１３７の、必ずではないが主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現されるそのリガンドＣＤ１３７Ｌ（４‐１ＢＢＬ；ＴＮＦＳＦ９）による、ライゲーションは、細胞の膨張、サイトカイン分泌の増大、及び活性化によって誘発される細胞死の防止といった様々なＴ細胞の応答を誘起する（非特許文献１８、１４、１９、２０、１３、２１）。よって、このようなライゲーションは免疫系を活性化する役割を果たす。しかしながら、ＣＤ１３７とＣＤ１３７Ｌとの間のシス相互作用は、ＣＤ１３７Ｌの発現を強力に下方制御する（非特許文献２２）。従ってＣＤ１３７リガンドは、ＣＤ１３７仲介型免疫系活性化の程度及び動態を制御する機能を果たす（非特許文献２２、２３）。
【０００７】
意義深いことに、ヒトＮＫ細胞上で発現するＣＤ１３７は、腫瘍細胞に結合した状態となっている抗腫瘍抗体（即ち腫瘍抗原（「ＴＡ」）に結合する抗体）への結合時に上方制御される（非特許文献８、２４〜２９）。
【０００８】
このような認識は、ＣＤ１３７に対して免疫特異的な抗体を用いて免疫系を活性化でき、これによって癌の療法を提供できるという提案につながった（非特許文献３０〜４１）。抗ＣＤ１３７抗体は、特許文献１〜１３に開示されている。
【０００９】
しかしながら、全てのこのような従来の進歩にもかかわらず、癌細胞又は病原体感染細胞を攻撃するように、特により低い治療濃度で、身体の免疫系をより強く方向づけることができる、改良された組成物に対しての需要が存在し続けている。適応免疫系は、癌及び疾患に対する強力な防御機序とすることができるが、これは多くの場合、ＣＤ１３７の共刺激活性の低減／不在によって仲介される、腫瘍の微小環境における免疫抑制／回避機序によって妨げられる。更に、腫瘍環境内の腫瘍細胞、免疫細胞、及び間質細胞によって発現される共阻害分子は、癌細胞に対するＴ細胞応答を支配的に減衰させ得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国公開特許第２０１４／０２７４９０９号
【特許文献２】米国公開特許第２０１３／０２８０２６５号
【特許文献３】米国公開特許第２０１３／０２７３０７８号
【特許文献４】米国公開特許第２０１３／００７１４０３号
【特許文献５】米国公開特許第２０１２／００５８０４７号
【特許文献６】米国公開特許第２０１１／０１０４０４９号
【特許文献７】米国公開特許第２０１１／００９７３１３号
【特許文献８】米国公開特許第２００８／０１６６３３６号
【特許文献９】米国公開特許第２００８／００１９９０５号
【特許文献１０】米国公開特許第２００６／０１８８４３９号
【特許文献１１】米国公開特許第２００６／０１８２７４４号
【特許文献１２】米国公開特許第２００６／０１２１０３０号
【特許文献１３】米国公開特許第２００３／０２２３９８９号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Vinay, D.S. and Kwon, B.S. (1998) “Role of 4-1BB in immune responses,” Semin Immunol. 10:481-489
【非特許文献２】Bartkowiak, T. et al. (2015) “4-1BB Agonists: Multi-Potent Potentiators Of Tumor Immunity,” Frontiers Oncol. 5:117, pp. 1-16
【非特許文献３】So, T., et al. (2008) “Immune Regulation And Control Of Regulatory T Cells By OX40 And 4-1BB,” Cytokine & Growth Factor Rev. 19:253-262
【非特許文献４】Croft, M. (2009) “The Role Of TNF Superfamily Members In T-Cell Function And Diseases,” Nat. Rev. Immunol. 9:271-285
【非特許文献５】Yonezawa, A. et al. (2015) “Boosting cancer immunotherapy with Anti-CD137 antibody therapy,” Clin. Cancer Res. 21(14):3113-3120
【非特許文献６】Li, S.Y. et al. (2013) “Immunotherapy Of Melanoma With The Immunecostimulatory Monoclonal Antibodies Targeting CD137,” Clin. Pharmacol. 5:47-53
【非特許文献７】Vinay, D.S. et al. (2012) “Immunotherapy Of Cancer With 4-1BB,” Mol. Cancer Ther. 11:1062-1070
【非特許文献８】Houot, R. et al. (2012) “Boosting Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Against Tumor Cells With A CD137 Stimulatory Antibody,” Oncoimmunology. 1:957-958
【非特許文献９】Kwon, B.S. et al. (1989) “cDNA Sequences Of Two Inducible T-Cell Genes,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:1963-1967
【非特許文献１０】Chen, L. et al. (2013) “Molecular Mechanisms Of T Cell Co-Stimulation And Coinhibition,” Nat. Rev. Immunol. 13:227-242
【非特許文献１１】Yao S. et al. “Advances In Targeting Cell Surface Signaling Molecules For Immune Modulation,” Nat. Rev. Drug Discov. 12:130-146
【非特許文献１２】Vinay, D.S. et al. (2015) “Therapeutic Potential Of Anti-CD137 (4-1BB) Monoclonal Antibodies, Expert Opinion On Therapeutic Targets,” DOI:10.1517/14728222.2016.1091448, pp.1-14
【非特許文献１３】Wang, C. et al. (2009) “Immune Regulation By 4-1BB And 4-1BBL: Complexities And Challenges,” Immunol. Rev. 229:192-215
【非特許文献１４】Sallin, M.A. et al. (2014) “The Anti-Lymphoma Activities Of Anti-CD137 Monoclonal Antibodies Are Enhanced In FcγRIII-/- Mice,” Cancer Immunol. Immunother. 63:947-958
【非特許文献１５】Melero, I. et al. (2008) “Multilayered Action Mechanisms Of CD137 (4-1BB)-Targeted Immunotherapies,” Trends Pharmacol Sci. 29:383-390
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【非特許文献２２】Kwon, B. (2015) “Is CD137 Ligand (CD137L) Signaling a Fine Tuner of Immune Responses?,” Immune Network. 15(3): 121-124
【非特許文献２３】Shuford WW et al. (1997) “4-1BB Costimulatory Signals Preferentially Induce CD8+ T Cell Proliferation And Lead To The Amplification In Vivo Of Cytotoxic T Cell Responses,” J. Exp. Med. 186:47-55
【非特許文献２４】Kohrt, H.E. et al. (2014) “Targeting CD137 Enhances The Efficacy Of Cetuximab,” J. Clin. Invest. 124(4):2668-2682
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【非特許文献２６】Mittal, P. et al. (2015) “Tumor-Unrelated CD4 T Cell Help Augments CD134 Plus CD137 Dual Costimulation Tumor Therapy,” J. Immunol.  Nov 11. pii: 1502032; pp.1-14
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【非特許文献３１】Sun, Y. et al. (2002) “Costimulatory Molecule-Targeted Antibody Therapy Of A Spontaneous Autoimmune Disease,” Nature Med. 8:1405-1413
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【非特許文献３４】Mittler, R.S. et al. (2004) “Anti-CD137 Antibodies In The Treatment Of Autoimmune Disease And Cancer,” Immunol. Res. 29(1-3):197-208
【非特許文献３５】Foell, J.L. et al. (2004) “Engagement of The CD137 (4-1BB) Costimulatory Molecule Inhibits And Reverses The Autoimmune Process In Collagen-Induced Arthritis And Establishes Lasting Disease Resistance,” Immunology 113(1):89-98
【非特許文献３６】Sytwu, H.K. et al. (2003) “Anti-4-1BB-Based Immunotherapy For Autoimmune Diabetes: Lessons From A Transgenic Non-Obese Diabetic (NOD) Model,” J. Autoimmun. 21(3):247-254
【非特許文献３７】Hernandez-Chacon JA et al. (2011) “Costimulation Through The CD137/4-1BB Pathway Protects Human Melanoma Tumor-Infiltrating Lymphocytes From Activation Induced Cell Death And Enhances Antitumor Effector Function,” J. Immunother. 34:236-250
【非特許文献３８】Morales-Kastresana, A. et al. (2014) “Combinations Of Immunostimulatory Antibodies With Synergistic Effects Against Spontaneous Cancer,” OncoImmunology 3:2, e27812, pp.1-4
【非特許文献３９】Sanmamed, M.F. et al. (2015) “Agonists of Co-stimulation in Cancer Immunotherapy Directed Against CD137, OX40, GITR, CD27, CD28, and ICOS,” Seminars Oncol. 42(4):640-655
【非特許文献４０】Tongu, M. et al. (2015) “Intermittent Chemotherapy Can Retain The Therapeutic Potential Of Anti-CD137 Antibody During The Late Tumor-Bearing State,” Cancer Sci. 106(1):9-17
【非特許文献４１】Takeda, K. et al. (2007) “Combination Antibody-Based Cancer Immunotherapy,” Cancer Sci. 98(9):1297-1302
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
以下に詳細に記載するように、本発明は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供することによって、上述の需要に対処する。このような二重特異性分子は、腫瘍細胞の表面上に発現される腫瘍抗原に結合でき、またＣＤ１３７発現性ＮＫ細胞をこのような腫瘍細胞に対して共局在化できる。このような共局在化により、ＮＫ細胞を上方制御して、免疫系の活性化又は継続的な活性化を促進する（例えば腫瘍細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞応答を刺激する）。これらの属性により、上記二重特異性分子を、免疫系の刺激において、並びに特に癌並びに病原体関連疾患及び状態の治療において、有用とすることができる。本発明はこれらの目標及び他の目標を対象とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位と、腫瘍抗原（「ＴＡ」）のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位とを有する、結合分子（例えば「ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子」）を対象とする。一実施形態では、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性４価ダイアボディとなり、これは、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位とを有する。あるいは、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性３価ダイアボディとなり、これは３つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位とを有する。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる。本発明は、いずれのこのようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を含有する医薬組成物を対象とする。本発明は更に、癌並びに他の疾患及び状態の治療における、このような分子の使用方法を対象とする。本発明はまた、新規のＣＤ１３７‐結合分子及びＨＥＲ２／ｎｅｕ‐結合分子、並びにその誘導体及びその使用を提供する。
【００１４】
本発明は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供し、これは、ＣＤ１３７のエピトープのただ１つの複製、及びＴＡのエピトープのただ１つの複製に結合できるという点で１価であるものの、単一の上記ダイアボディがＣＤ１３７の上記エピトープ及びＴＡの上記エピトープに同時に結合できるという点で二重特異性である。しかしながら、本発明は特に、ヘテロ二量体として互いに結合することにより、ＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つの結合部位、及びＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な２つの結合部位を形成するポリペプチド鎖からなる、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を対象とする。本発明のこのような好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、「二重特異性４価」と呼ばれる。また本発明は特に、ヘテロ二量体として互いに結合することにより、ＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つの結合部位、及びＴＡのエピトープに対して特異的な１つの結合部位を形成するポリペプチド鎖からなる、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を対象とする。本発明のこのような好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、「二重特異性３価」と呼ばれる。
【００１５】
本発明は、３つのポリペプチド鎖（「第１の」、「第２の」及び「第３の」ポリペプチド鎖）を含むＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供し、上記第１及び第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、第１及び第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合する。本発明の好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、４つのポリペプチド鎖（「第１の」、「第２の」、「第３の」及び「第４の」ポリペプチド鎖）を含み、上記第１及び第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、上記第３及び第４のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、上記第１及び第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合する。また、好ましいのは、５つのポリペプチド鎖（「第１の」、「第２の」、「第３の」、「第４の」及び「第５の」ポリペプチド鎖）を含む、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子であり、上記第１及び第２のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、上記第３及び第４のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、上記第３及び第５のポリペプチド鎖は互いに共有結合し、上記第１及び第３のポリペプチド鎖は互いに共有結合する。
【００１６】
詳細には、本発明はＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供し、上記結合分子は、ＣＤ１３７のエピトープ及び腫瘍抗原（ＴＡ）のエピトープに結合でき、また上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第１の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み：
（Ａ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである。
【００１７】
本発明は更に、上記第１の重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；若しくは
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９２）；
を含み、及び／又は上記第１の軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；若しくは
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９３）
を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００１８】
本発明は更に、上記第１の重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ（配列番号２０９）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ（配列番号２１０）；又は
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００１９】
本発明は更に、上記第１の軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５（配列番号２１２）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）；
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７（配列番号２１４）；
（Ｊ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８（配列番号２１５）；
（Ｋ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９（配列番号２１６）；
（Ｌ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）；
（Ｍ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）；
（Ｎ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２（配列番号２１９）；
（Ｏ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３（配列番号２２０）；
（Ｐ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｑ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２０】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）が：１９．９；癌胎児性タンパク質５Ｔ４；抗原４．２；Ａ３３；ＡＦＰ；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；βカテニン；ＣＡ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；Ｂ１；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ３０；ＣＤ３３；ＣＤ３６；ＣＤ４６；ＣＤ５２；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ；ＣＤ１２３；ＣＤ３１７；ＣＥＡ；ＣＥＡＣＡＭ５；ＣＥＡＣＡＭ６；ＣＯ‐４３；ＣＯ‐５１４；ＣＴＬＡ‐１；ＣＴＬＡ‐４；サイトケラチン８；Ｅ１シリーズ；ＥＧＦ‐Ｒ；エフリン受容体；Ｅｒｂ；Ｆ３；ＦＣ１０．２；ＧＡＧＥ  ＧＤ２；ＧＤ３；ＧＤ４９；ＧＭ２；ＧＭ３；ＧＩＣＡ１９‐９；ｇｐ３７；ｇｐ７５；ｇｐ１００；ＨＥＲ‐２／ｎｅｕ；ヒトＢ‐リンパ腫抗原‐ＣＤ２０；ヒト乳脂肪球抗原；ヒトパピローマウイルス‐Ｅ６／ヒトパピローマウイルス‐Ｅ７；ＨＭＷ‐ＭＡＡ；Ｉ抗原；ＩＴＧＢ６；ＩＬ１３Ｒα２；ＪＡＭ‐３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳ１／４汎癌抗原；ＫＳ１／４；ＫＳＡ；Ｌ６；Ｌ２０；ＬＥＡ；ＬＵＣＡ‐２；Ｍ１：２２：２５：８；Ｍ１８；Ｍ３９；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；Ｍｙｌ；ＭＵＣ‐１；ＭＵＭ‐１；Ｎ‐アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；ネオ糖タンパク質；ＮＳ‐１０；ＯＦＡ‐１；ＯＦＡ‐２；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＰＥＭＡ；ＰＩＰＡ；前立腺酸性ホスファターゼ；Ｒ２４；ＲＯＲ１；ＳＳＥＡ‐１；ＳＳＥＡ‐３；ＳＳＥＡ‐４；ｓＴｎ；Ｔ細胞受容体由来ペプチド；ＴＡＧ‐７２；ＴＬ５；ＴＮＦ‐α受容体；ＴＮＦ‐β受容体；ＴＮＦ‐γ受容体；ＴＲＡ‐１‐８５；トランスフェリン受容体；ＴＳＴＡ；及びＶＥＧＦ‐Ｒからなる、腫瘍抗原の群から選択される、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２１】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）が表１の腫瘍抗原から選択され、特に上記腫瘍抗原（ＴＡ）が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ２、又は５Ｔ４である、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２２】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）がＨＥＲ２／ｎｅｕであり、上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲである、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２３】
本発明は更に：
（Ａ）（１）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；及び
（Ｂ）（１）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２４】
本発明は更に、上記第２の重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２５】
本発明は更に、上記第２の軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２６】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）が５Ｔ４であり、上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ｉ）（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号１３５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号１３４）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＬ（配列番号１３７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＨ（配列番号１３６）の重鎖ＣＤＲである、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２７】
本発明は更に、上記第２の重鎖可変ドメインがアミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３５）を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２８】
本発明は更に、上記第２の軽鎖可変ドメインがアミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３６）を含む、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００２９】
本発明は更に、上記分子が、第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性４価Ｆｃ担持ダイアボディであり、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３０】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）がＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ｉ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖及び上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；
又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖及び上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号１０２のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３１】
本発明は更に、上記分子が二重特異性かつ４価であり、また第１、第２、第３、第４及び第５のポリペプチド鎖を含み、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３２】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）がＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ｉ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第５のポリペプチド鎖が、配列番号１０５のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し；
又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第５のポリペプチド鎖が、配列番号１０５のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、若しくは配列番号１１８のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、若しくは配列番号１２３のアミノ酸配列を有する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３３】
本発明は更に、上記分子が二重特異性かつ３価であり、また第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含み、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３４】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）がＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、若しくは配列番号１９６のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、若しくは配列番号２０１のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３５】
本発明は更に、上記腫瘍抗原（ＴＡ）が５Ｔ４であり：
（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖が、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、若しくは配列番号２２９のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖が、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、若しくは配列番号２３０のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖が、配列番号２３１のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖が、配列番号２３２のアミノ酸配列を有する、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関する。
【００３６】
本発明は更に、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のうちのいずれと、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物に関する。
【００３７】
本発明は更に、腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のうちのいずれ又は上述の医薬組成物の使用に関し、特に、腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする上記疾患又は状態は、癌である。
【００３８】
本発明は更に、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、ＣＤ１３７結合分子に関し；
（Ａ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである。
【００３９】
本発明は更に、上記重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；又は
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９２）
を含む、上述のＣＤ１３７結合分子の実施形態に関する。
【００４０】
本発明は更に、上記軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；又は
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９３）
を含む、上述のＣＤ１３７結合分子の実施形態に関する。
【００４１】
本発明は更に、上記重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ（配列番号２０９）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ（配列番号２１０）；又は
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、上述のＣＤ１３７結合分子の実施形態に関する。
【００４２】
本発明は更に、上記軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５（配列番号２１２）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）；
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７（配列番号２１４）；
（Ｊ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８（配列番号２１５）；
（Ｋ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９（配列番号２１６）；
（Ｌ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）；
（Ｍ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）；
（Ｎ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２（配列番号２１９）；
（Ｏ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３（配列番号２２０）；
（Ｐ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｑ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、上述のＣＤ１３７結合分子の実施形態に関する。
【００４３】
本発明は更に、上記分子が、抗体又は上記抗体の抗原結合断片である、上述のＣＤ１３７結合分子の実施形態に関する。
【００４４】
本発明は更に、上述のＣＤ１３７結合分子のうちのいずれと、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物に関する。
【００４５】
本発明は更に、抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、上述のＣＤ１３７結合分子のうちのいずれ又は上述の医薬組成物の使用に関する。
【００４６】
本発明は更に、抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする上記状態が癌である、上述の使用に関する。
【００４７】
本発明は更に、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子に関し：
（Ａ）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲである。
【００４８】
本発明は更に：
（Ａ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；
かつ
（Ｂ）（１）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子の実施形態に関する。
【００４９】
本発明は更に、上記重鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子の実施形態に関する。
【００５０】
本発明は更に、上記軽鎖可変ドメインが、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子の実施形態に関する。
【００５１】
本発明は更に、上記分子が、抗体又は上記抗体の抗原結合断片である、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子の実施形態に関する。
【００５２】
本発明は更に、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子のうちのいずれと、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物に関する。
【００５３】
本発明は更に、ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、上述のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子のうちのいずれ又は上述の医薬組成物の使用に関し、特に、ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする上記状態は、癌である。
【００５４】
本発明は更に、腫瘍標的化剤の活性を強化する方法に関し、上記方法は、上記腫瘍標的化剤を、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のうちのいずれ又はこれを含む医薬組成物と組み合わせて投与するステップを含む。本発明は更に、ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤を投与するステップを更に含み、特に上記チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ‐１抗体又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体である、上述の方法に関する。本発明は特に、上記腫瘍標的化剤が、抗体、抗体のエピトープ結合断片、又は標的細胞のＴ細胞標的転換殺滅を仲介する作用剤である、上述の方法に関する。
【００５５】
本発明は更に、抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態を治療する方法に関し、上記方法は、それを必要とする被験者に、上述のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のうちのいずれ又はこれを含む医薬組成物を投与するステップを含む。本発明は特に、抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする上記状態が癌である、上述の方法に関する。本発明はまた、腫瘍標的化剤を投与するステップを更に含み、上記腫瘍標的化剤が、抗体、抗体のエピトープ結合断片、又は標的細胞のＴ細胞標的転換殺滅を仲介する作用剤である、上述の方法に関する。本発明は更に、ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤を投与するステップを更に含み、特に上記チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ‐１抗体又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体である、上述の方法に関する。
【００５６】
本発明は更に、上記癌が：急性骨髄性白血病；副腎腫瘍；ＡＩＤＳ関連癌；胞巣状軟部肉腫；星状細胞腫瘍；膀胱癌；骨癌；脳及び脊髄の癌；転移性脳腫瘍；乳癌；頸動脈球腫瘍；子宮頸癌；軟骨肉腫；脊索腫；嫌色素性腎細胞癌；明細胞癌；大腸癌；結腸直腸癌；皮膚の良性線維性組織球腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；上衣腫；ユーイング腫瘍；骨外性粘液型軟骨肉腫；骨性線維形成不全症；線維性骨異形成；胆嚢又は胆管癌；胃癌；妊娠性絨毛性疾患；胚細胞腫瘍；頭頸部癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；膵島細胞腫瘍；カポジ肉腫；腎癌；白血病；脂肪腫／良性脂肪腫；脂肪肉腫／悪性脂肪腫；肝癌；リンパ腫；肺癌；髄芽腫；黒色腫；髄膜腫；多発性中皮腫；多発性内分泌腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；神経内分泌腫瘍；非小細胞肺癌；卵巣癌；膵臓癌；咽頭癌；甲状腺乳頭癌；副甲状腺腫瘍；小児癌；末梢神経鞘腫瘍；褐色細胞腫；下垂体腫瘍；前立腺癌；後部ブドウ膜黒色腫；希少な血液学的障害；腎細胞癌；腎転移性癌；ラブドイド腫瘍；横紋筋肉腫；肉腫；皮膚癌；軟組織肉腫；扁平上皮癌；胃癌；滑膜肉腫；精巣癌；胸腺癌；胸腺腫；甲状腺転移癌；並びに子宮癌からなる群から選択される、上述の使用及び方法に関する。
【００５７】
本発明は特に、上記癌が、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膠芽腫、腎臓癌、肺癌、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、膵臓癌、咽頭癌、前立腺癌、腎細胞癌、横紋筋肉腫、及び頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）からなる群から選択される、上述の使用及び方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１Ａ−１Ｂ】図１Ａ〜１Ｂは、それぞれＥコイル又はＫコイルヘテロ二量体促進ドメイン（選択できるヘテロ二量体促進ドメインは以下で提示する）を有する２つのポリペプチド鎖からなる２つのエピトープ結合ドメインを有する、代表的な共有結合ダイアボディの概略図を提供する。システイン残基は、リンカー中（図１Ａ）及び／又はヘテロ二量体促進ドメイン中（図１Ｂ）に存在してよい。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。この図、及び結合分子ドメインの概略図を提供する全ての図における、波状の線（ＷＷＷ）は、１つ以上の任意のヘテロ二量体促進ドメインを表し、これは存在することが好ましい。
【図２】図２は、連結した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を形成するように、それぞれＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有する２つのポリペプチド鎖からなる２つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合ダイアボディ分子の概略図である。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。
【図３Ａ−３Ｅ】図３Ａ〜３Ｅは、２ペアのポリペプチド鎖（即ち合計４つのポリペプチド鎖）からなる４つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合した４価ダイアボディの概略図である。各ペアのうちの１つのポリペプチド鎖は、連結した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を形成するように、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有する。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。上記２ペアのポリペプチド鎖は、同一であってよい。（図３Ａ〜３Ｂに示すように）２ペアのポリペプチド鎖が同一であり、かつＶＬ及びＶＨドメインが異なるエピトープを認識する実施形態では、得られた分子は４つのエピトープ結合部位を有し、二重特異性であり、結合する各エピトープに対して２価である。ＶＬ及びＶＨドメインが同一のエピトープを認識する（例えば同一のＶＬドメインＣＤＲ及び同一のＶＨドメインＣＤＲを両方の鎖に対して使用する）実施形態では、得られた分子は４つのエピトープ結合部位を有し、単一特異性であり、単一のエピトープに対して４価である。あるいは、上記２ペアのポリペプチドは異なっていてよい。（図３Ｃにおいて様々な陰影及びパターンで示すように）ポリペプチドの各ペアのＶＬ及びＶＨドメインが異なるエピトープを認識する実施形態では、得られた分子は４つのエピトープ結合部位を有し、四重特異性であり、結合する各エピトープに対して１価である。図３Ａは、システイン残基を含むペプチドヘテロ二量体促進ドメインを含有するＦｃ領域含有ダイアボディを示す。図３ＢはＦｃ領域含有ダイアボディを示し、これは、システイン残基及び（任意のシステイン残基を有する）リンカーを含む、Ｅコイル及びＫコイルヘテロ二量体促進ドメインを含有する。図３Ｃは、抗体ＣＨ１及びＣＬドメインを含有するＦｃ領域含有ダイアボディを示す。図３Ｄ〜３Ｅは、図３Ｂに示した結合ドメインの選択によって、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な２つの結合部位及びＴＡのエピトープに対して特異的な２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子をどのようにもたらすことができるかを示す。図３Ｄ〜３Ｅは、異なる配向を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために、ドメインをどのように選択できるかを示す（即ち、図３Ｄは、上記結合分子のＶＬ１ドメインとしてＶＬ  ＣＤ１３７ドメインを、上記結合分子のＶＨ１ドメインとしてＶＨ  ＣＤ１３７ドメインを、上記結合分子のＶＬ２ドメインとしてＶＬ  ＴＡドメインを、及び上記結合分子のＶＨ２ドメインとしてＶＨ  ＴＡドメインを採用する。対照的に、図３Ｅは、上記結合分子のＶＬ１ドメインとしてＶＬ  ＴＡドメインを、上記結合分子のＶＨ１ドメインとしてＶＨ  ＴＡドメインを、上記結合分子のＶＬ２ドメインとしてＶＬ  ＣＤ１３７ドメインを、及び上記結合分子のＶＨ２ドメインとしてＶＨ  ＣＤ１３７ドメインを採用する）。以下で提示されるように、ポリペプチド鎖の集合によって形成されるＶＬ／ＶＨ結合部位は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、又は四重特異性の４価結合を可能とするために、同一であっても異なっていてもよい。
【図４Ａ−４Ｂ】図４Ａ及び４Ｂは、３つのポリペプチド鎖からなる２つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合ダイアボディ分子の概略図である。上記ポリペプチド鎖のうちの２つは、連結した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を形成するように、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有する。ＶＬ及びＶＨドメインを含むポリペプチド鎖は、ヘテロ二量体促進ドメインを更に含む。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。
【図５Ａ−５Ｄ】図５Ａ〜５Ｄは、５つのポリペプチド鎖からなる４つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合型結合分子の概略図である。図５Ａは、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の一般構造を示す。上記ポリペプチド鎖のうちの２つは、連結した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を含むＦｃ領域を形成するように、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有する。ＶＬ及びＶＨドメインを含むポリペプチド鎖は、ヘテロ二量体促進ドメインを更に含む。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。図５Ｂは、代替的な好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造を示し、ここでは、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに対して特異的な２つの非ダイアボディ型結合ドメインと、ＣＤ１３７に対して特異的な２つのダイアボディ型結合ドメインとを有する、結果的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために、図５Ａに示されている可変ドメインが選択されている。図５Ｃは、代替的な好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造を示し、ここでは、ＣＤ１３７に対して特異的な２つの非ダイアボディ型結合ドメインと、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対して特異的な２つのダイアボディ型結合ドメインとを有する、結果的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために、図５Ａに示されている可変ドメインが選択されている。図５Ｄは、代替的な好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造を示し、ここでは、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な２つの非ダイアボディ型結合ドメインと、ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに対して特異的な１つのダイアボディ型結合ドメインと、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な第２のダイアボディ型結合ドメインとを有する、結果的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために、図５Ａに示されている可変ドメインが選択されている。このようなＣＤ１３７エピトープは、同一であっても異なっていてもよい。理解されるように、図５Ａに示されている結合ドメインを適切に選択することによって、ＣＤ１３７のエピトープに結合するために、これらの結合ドメインのうちのいずれの３つを選択して、ＣＤ１３７のエピトープに結合させることができる。また同様に、これらの結合ドメインのうちのいずれの３つを選択して、ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに結合させることができる。以下で提示するように、ポリペプチド鎖の集合によって形成されるＶＬ／ＶＨ結合部位は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、又は四重特異性の４価結合を可能とするために、同一であっても異なっていてもよい。
【図６Ａ−６Ｆ】図６Ａ〜６Ｆは、３つのエピトープ結合部位を有する、代表的なＦｃ領域含有３価結合分子の概略図である。図６Ａは、ダイアボディ型結合ドメインがＦｃ領域に対するＣ末端となる異なるドメイン配向を有する、２つのダイアボディ型結合ドメイン及びＦａｂ型結合ドメインを含む３価結合分子のドメインの概略図を示す。図６Ｂ〜６Ｃは、例示的な好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造を示し、ここでは、ＣＤ１３７に対して特異的な非ダイアボディ型結合ドメインと、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに対して特異的なダイアボディ型結合ドメインと、ＣＤ１３７に対して特異的な第２のダイアボディ型結合ドメインとを有する、結果的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために、図６Ａに示されている可変ドメインが選択されている。図６Ｄは、ダイアボディ型結合ドメインがＦｃ領域に対するＣ末端となる異なるドメイン配向を有する、２つのダイアボディ型結合ドメイン及びＦａｂ型結合ドメインを含む３価結合分子のドメインを概略図で示す。図６Ａ〜６Ｄの分子は４つの鎖を含む。図６Ｅ及び６Ｆはそれぞれ、Ｆｃ領域のＮ末端に２つのダイアボディ型結合ドメインと、軽鎖及び重鎖がポリペプチドスペーサを介して連結されたＦａｂ型結合ドメイン、又はｓｃＦｖ型結合ドメインとを含む、３価結合分子のドメインの概略図を示す。図６Ｇ及び６Ｈの３価結合分子はそれぞれ、Ｆｃ領域のＣ末端に２つのダイアボディ型結合ドメインと、軽鎖及び重鎖がポリペプチドスペーサを介して連結されたＦａｂ型結合ドメイン、又はｓｃＦｖ型結合ドメインとを含む、３価結合分子のドメインの概略図を示す。図６Ｅ〜６Ｈの３価結合分子は、３つの鎖を含む。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の陰影又は塗り潰しパターンを用いて示される。
【図７】図７は、抗ＣＤ１３７抗体ウレルマブ及びウトミルマブ（それぞれＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２）と、いくつかの新規のキメラＣＤ１３７  ｍＡｂ（ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３；ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４及びｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５）との、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞に対する結合曲線を示す。
【図８】図８は、４×ｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’2と架橋させた、抗ＣＤ１３７抗体ウレルマブ若しくはウトミルマブ（それぞれＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１若しくはＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２）又は新規のキメラ抗ＣＤ１３７  抗体（ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３；ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４若しくはｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５）の存在下において、ドライコーティングされた抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬ）で刺激したときの、ｐａｎ  Ｔ細胞によるＩＬ‐２分泌の７２時間後誘発を示す。架橋された抗体（Ａｂ＋αｈＦｃ）は、０．１、１．０又は１０μｇ／ｍＬの量で使用した。以下の対照もプロットされている：アイソタイプ対照抗体で処理された刺激ｐａｎ  Ｔ細胞、ｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’２のみ、又は未処理の細胞。
【図９】図９は、リガンド（１μｇ／ｍＬのＣＤ‐１３７Ｌ‐Ｈｉｓ）の存在下又は不在下で、架橋されたキメラ抗ＣＤ１３７抗体（ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３又はｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５）（１μｇ／ｍＬのＣＤ‐１３７抗体＋４μｇ／ｍＬのｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’2）±ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２／ｎｅｕ++）標的細胞の存在下において、抗ＣＤ３ビーズで刺激したときの、ｐａｎ  Ｔ細胞によるＩＦＮ‐γ分泌の７２時間後誘発を示す。以下の対照試料もプロットされている：刺激ｐａｎ  Ｔ細胞±ＪＩＭＴ‐１細胞、±ｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’2、並びに未処理／未刺激ｐａｎ  Ｔ細胞及びＪＩＭＴ‐１細胞。
【図１０Ａ−１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｂは、ＦＩＴＣ標識ＣＤ８及びαｈＦｃ  ＡＰＣを用いたＦＡＣＳによって測定された、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞のＣＤ１３７に結合する能力を示す。図１０Ａ：ＤＡＲＴ‐Ｂ及びＤＡＲＴ‐Ｃ（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、ＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｅ（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１及び変異型パリビズマブドメインを含む）及びＤＡＲＴ‐６（変異型パリビズマブ及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメインを含む）。図１０Ｂ：ＤＡＲＴ‐Ｄ（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、ＤＡＲＴ‐Ｆ（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、ＤＡＲＴ‐１及びＤＡＲＴ‐４（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、ＤＡＲＴ‐２及びＤＡＲＴ‐５（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含む）、並びに対照結合分子ＤＡＲＴ‐６（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及び変異型パリビズマブドメインを含む）。
【図１１Ａ−１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｂは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定された、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、標的Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）胃癌細胞の表面上の例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する能力を示す。図１１Ａ：ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｃ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｅ、並びに対照結合分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６。図１１Ｂ：ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｆ、ＤＡＲＴ‐１、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐４、ＤＡＲＴ‐５、及びＤＡＲＴ‐６。
【図１２Ａ−１２Ｂ】図１２Ａ〜１２Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６の、操作されたＣＨＯ細胞によって発現されたＣＤ１３７（図１２Ａ）、及び活性化ＣＤ８+Ｔ細胞によって発現されたＣＤ１３７（図１２Ｂ）に結合する能力を示す。
【図１３Ａ−１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６の、標的Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）胃癌細胞（図１３Ａ）及び標的ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２++）細胞（図１３Ｂ）によって発現された例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する能力を示す。
【図１４Ａ−１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）の第１の代表的なアッセイの結果を提供する。この図は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）（図１４Ａ）又はＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２++）標的細胞（図１４Ｂ）の存在下で試験した、ＤＡＲＴ‐１、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐４、ＤＡＲＴ‐５、ＤＡＲＴ‐Ａ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｅ及びＤＡＲＴ‐Ｆ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６に関する結果を示しており、ＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＨｓ７００Ｔ標的細胞を使用した場合、又は標的細胞を使用しなかった場合、共刺激活性は見られなかった。
【図１５Ａ−１５Ｂ】図１５Ａ〜１５Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）の第２の代表的なアッセイの結果を提供する。この図は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）（図１５Ａ）又はＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２++）標的細胞（図１５Ｂ）の存在下で試験した、ＤＡＲＴ‐１、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐４、ＤＡＲＴ‐５、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６に関する結果を示しており、ＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＨｓ７００Ｔ標的細胞を使用した場合、又は標的細胞が存在しない場合、共刺激活性は見られなかった。
【図１６Ａ−１６Ｂ】図１６Ａ及び１６Ｂは、ルシフェラーゼ発現の増大によって示される、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、ＣＤ１３７発現性レポーター細胞株（Ｊｕｒｋａｔ‐ＮＦ‐κＢ‐Ｌｕｃ）におけるＮＦ／ｋＢ経路の用量及び標的依存性信号伝達を仲介する能力を示す。この図は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性ＪＩＭＴ‐１細胞（図１６Ａ）又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＫＧ‐１細胞（図１６Ｂ）と共培養されたＣＤ１３７発現性Ｊｕｒｋａｔ‐ＮＦ‐κＢ‐Ｌｕｃ細胞に対する、ＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照結合分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６に関する結果を示す。
【図１７】図１７、パネルＡ〜Ｏは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、ＴＡ発現性標的細胞との共培養においてＴ細胞増殖を強化する能力を示す。ＨＥＲ２／ｎｅｕ‐ｈｉｇｈ  Ｎ８７標的細胞と共培養した場合（図１７、パネルＡ〜Ｃ及びＪ〜Ｋ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ‐ｌｏｗ  ＭＣＦ‐７標的細胞と共培養した場合（図１７、パネルＤ〜Ｆ及びＬ〜Ｍ）、又は標的細胞が存在しない場合（図１７、パネルＧ〜Ｉ及びＮ〜Ｏ）の、ＤＡＲＴ‐Ａの存在下（図１７、パネルＡ、Ｄ及びＧ）、ＤＡＲＴ‐３の存在下（図１７、パネルＢ、Ｅ及びＨ）、ＤＡＲＴ‐６の存在下（図１７、パネルＣ、Ｆ及びＩ）、又は分子の不在下（図１７、パネルＪ、Ｌ及びＮ）における、Ｔ細胞増殖に関して監視された、ＣＦＳＥ標識ヒトＴ細胞±準最適αＣＤ３／αＣＤ２８刺激。
【図１８Ａ−１８Ｂ】図１８Ａ〜１８Ｂは、細胞関連ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐１の、Ｎ８７標的細胞の抗ＴＡ抗体マルゲツキシマブ仲介型ＡＤＣＣ殺滅を強化する能力（図１８Ａ）、及びＣＤ６９発現によって測定される、マルゲツキシマブ仲介型ＮＫ細胞活性化を強化する能力（図１８Ｂ）を示す。
【図１９Ａ−１９Ｂ】図１９Ａ〜１９Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐７、及び対照分子ＤＡＲＴ‐８の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）の代表的なアッセイの結果を示す。サイトカイン放出は、ＥｐｈＡ２発現性Ｈｓ７００Ｔ標的細胞の存在下（図１９Ａ）、又はＥｐｈＡ２ネガティブＨｓ７００Ｔ（ＥｐｈＡ２．ＫＯ）標的細胞の存在下（図１９Ｂ）、又は標的細胞の不在下で測定された。以下の対照試料もプロットされている：刺激ｐａｎ  Ｔ細胞＋標的細胞、及び未処理／未刺激ｐａｎ  Ｔ細胞。
【図２０Ａ−２０Ｂ】図２０Ａ〜２０Ｂは、最適化されたＣＤＲH３を有するＤＡＲＴ‐Ｇ誘導体の、操作されたＣＨＯ細胞（図２０Ａ）又はＣＤ８+Ｔ細胞（図２０Ｂ）の表面上で発現されたＣＤ１３７に結合する能力を示す。
【図２１Ａ−２１Ｃ】図２１Ａ〜２１Ｃは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３及びＤＡＲＴ‐Ｇ４、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３、ＤＡＲＴ‐６の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）の代表的なアッセイの結果を示す。サイトカイン放出は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７標的細胞の存在下（図２１Ａ）、ＪＩＭＴ‐１標的細胞の存在下（図２１Ｂ）、若しくはＭＤＡ‐２３１の存在下（図２１Ｃ）標的細胞、又は標的細胞の不在下で測定された。
【図２２】図２２は、細胞関連ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ１、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３及びＤＡＲＴ‐Ｇ４、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３、ＤＡＲＴ‐６の、Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）標的細胞の標的転換細胞殺滅を仲介する能力の代表的なアッセイの結果を示す。
【図２３Ａ−２３Ｃ】図２３Ａ〜２３Ｃは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって測定される、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する異なる細胞に結合する能力を示す。図２３Ａ：Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）胃癌細胞への結合。図２３Ｂ：ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２＋＋）乳房腫瘍細胞への結合。図２３Ｃ：ＭＣＦ‐７（ＨＥＲ２＋）乳癌細胞への結合。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、ＤＡＲＴ‐Ｇ４、並びに対照結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２に関する結合が、両方のパネルに示されている。
【図２４Ａ−２４Ｂ】図２４Ａ〜２４Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞によって発現されたＣＤ１３７に結合する能力を示す。図２４Ａ：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４、並びに対照結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２。図２４Ｂ：ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、ＤＡＲＴ‐Ｇ４、並びに対照結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２。
【図２５Ａ−２５Ｃ】図２５Ａ〜２５Ｃは、ＦＡＣＳによって測定された、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、ＣＤ１３７を発現するＣＨＯ細胞と、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する細胞との間の細胞間コンジュゲーションを仲介する能力を示す。図２５Ａ：Ｎ８７（ＨＥＲ２+++）胃癌細胞との細胞間コンジュゲーション。図２５Ｂ：ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２＋＋）乳房腫瘍細胞との細胞間コンジュゲーション。図２５Ｃ：ＭＣＦ‐７（ＨＥＲ２＋）乳癌細胞との細胞間コンジュゲーション。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４、ＤＡＲＴ‐Ｇ４、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２対照結合分子の活性が、両方のパネルに示されている。
【図２６Ａ−２６Ｃ】図２６Ａ〜２６Ｃは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、ＤＡＲＴ‐Ｇ４、並びに対照結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）の代表的なアッセイの結果を示す。サイトカイン放出は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７標的細胞の存在下（図２６Ａ）、ＪＩＭＴ‐１標的細胞の存在下（図２６Ｂ）、又は標的細胞の不在下（図２６Ｃ）で測定された。
【図２７】図２７は、対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐１）と比較した細胞関連ルシフェラーゼによって測定される、例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２）の、Ｃｏｌｏ２０５／Ｌｕｃ標的細胞のＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ仲介型標的転換Ｔ細胞殺滅を強化する能力を示す。
【図２８Ａ−２８Ｃ】図２８Ａ〜２８Ｃは：ビヒクル対照（●）；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（逆黒三角）；ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ（■）；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２とＴＡ×ＣＤ３ダイアボディとの組み合わせ（◆）；抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（逆黒三角）；又はＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２と、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディと、抗ＰＤ‐１  ｍＡｂとの組み合わせによる処理後に試料採取された１ｍｇの腫瘍中に存在するＴ細胞マーカーの発現を示す。図２８Ａ：ＣＤ４の発現、図２８Ｂ：ＣＤ８の発現、図２８Ｃ：ＣＤ６９の発現、図２８Ｄ：ＰＤ‐１の発現。
【図２９】図２９は：ビヒクル対照（●）；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（逆黒三角）；ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ（■）；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２とＴＡ×ＣＤ３ダイアボディとの組み合わせ（◆）；抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（逆黒三角）；及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２と、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディと、抗ＰＤ‐１  ｍＡｂとの組み合わせの、ＰＢＭＣ再構成マウス異種移植片モデルにおいて腫瘍の成長又は卵巣癌細胞の発生を阻害する能力を示す。
【図３０】図３０は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、並びに対照結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２の、カニクイザルＴ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）を示す。サイトカイン放出は、５Ｔ４及びＨＥＲ２／ｎｅｕを発現するＪＩＭＴ‐１標的細胞の存在下で測定された。
【図３１Ａ−３１Ｂ】図３１Ａ〜３１Ｂは、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（図３０Ａ、配列番号８４）及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（図３０Ｂ、配列番号８９）のアミノ酸配列を示し、下線はＣＤＲ残基を示す。置換の位置は線で囲まれ、Ｋａｂａｔ番号は矢印で示されており；アミノ酸残基の連続的な番号は、配列の上に示されている。
【図３２Ａ−３２Ｂ】図３２Ａ〜３２Ｂは、Ｖ５１０標識ＣＤ４+及びαｈＦｃＡＰＣ（図３２Ｂ）、又はＦＩＴＣ標識ＣＤ８及びαｈＦｃＡＰＣ（図３２Ｂ）を用いたＦＡＣＳによって測定される、脱免疫化されたＶＨ及びＶＬドメインを含む抗ＣＤ１３７抗体の、活性化ＣＤ４+Ｔ細胞又はＣＤ８+Ｔ細胞のＣＤ１３７に結合する能力を示す。
【図３３Ａ−３３Ｂ】図３３Ａ〜３３Ｂは、架橋の不在下の（図３３Ａ）、又は４×ｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’2と架橋された（図３３Ｂ）、最適化／脱免疫化された抗ＣＤ１３７抗体ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１ｂ．３）、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｇ．１５）の存在下において、ドライコーティングされた抗ＣＤ３抗体（３μｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬ）で刺激したときの、ｐａｎ  Ｔ細胞によるＩＦＮ‐γ分泌の７２時間後誘発を示す。
【図３４Ａ−３４Ｃ】図３４Ａ〜３４Ｃは、ＦＩＴＣ標識ＣＤ８及びαｈＦｃＡＰＣ（図３４Ａ）を用いた、並びにＪＩＭＴ‐１（５Ｔ４hi）（図３４Ｂ）又はＳＫＯＶ‐３（５Ｔ４lo）標的細胞（図３４Ｃ）の表面上の例示的なＴＡである５Ｔ４を用いた、ＦＡＣＳによって測定される、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、並びに対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐３、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４の、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞の表面上のＣＤ１３７に結合する能力を示す。
【図３５Ａ−３５Ｃ】図３５Ａ〜３５Ｃは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力（ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）を示す。この図は、５Ｔ４発現性ＪＩＭＴ‐１（５Ｔ４hi）（図３５Ａ）又はＳＫＯＶ‐３（５Ｔ４lo）（図３５Ｂ）標的細胞の存在下で試験した、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、並びに対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐３、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４に関する結果を示しており、標的細胞の不在下（図３５Ｃ）では共刺激活性は見られなかった。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本発明は、ＣＤ１３７のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位と、腫瘍抗原（「ＴＡ」）のエピトープに対して特異的な１つ以上のエピトープ結合部位とを有する、結合分子（例えば「ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子」）を対象とする。一実施形態では、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性４価ダイアボディとなり、これは、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な２つのエピトープ結合部位とを有する。あるいは、このようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性分子、特に二重特異性３価ダイアボディとなり、これは３つ以上のポリペプチド鎖からなり、かつＣＤ１３７のエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位と、ＴＡのエピトープに対してそれぞれ特異的な１つ又は２つのエピトープ結合部位とを有する。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる。本発明は、いずれのこのようなＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を含有する医薬組成物を対象とする。本発明は更に、癌並びに他の疾患及び状態の治療における、このような分子の使用方法を対象とする。本発明はまた、新規のＣＤ１３７‐結合分子及びＨＥＲ２／ｎｅｕ‐結合分子、並びにその誘導体及びその使用を提供する。
【００６０】
Ｉ．抗体及び他の結合分子
抗体は、当該免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの「エピトープ結合部位（epitope-binding site）」によって、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等の分子（「抗原（antigen）」）の標的領域に特異的に結合できる、免疫グロブリン分子である。本明細書において使用される場合、用語「抗体（antibody及びantibodies）」は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、ラクダ化抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合二重特異性Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、細胞内抗体、及び以上のうちのいずれかのエピトープ結合断片を包含する。特に、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性の断片、即ちエピトープ結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いずれのタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＡ1及びＩｇＡ2）又はサブクラスのものとすることができる。抗体は、ポリペプチド又はタンパク質又は非タンパク質分子に免疫特異的に結合できる。というのは、このような分子上に特定のドメイン又は部分又は形態（「エピトープ（epitope）」）が存在するためである。本明細書中で使用される場合、「抗体のエピトープ結合断片（epitope-binding fragment of an antibody）」は、あるエピトープに免疫特異的に結合できる抗体の一部分を指すことを意図している。本明細書中で使用される場合、この用語は、ダイアボディの断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2Ｆｖ）及び単鎖（ｓｃＦｖ）、並びにエピトープ結合ドメインを包含する。本明細書中で使用される場合、抗体又はそのエピトープ結合断片は、代替的なエピトープに比べて、より頻繁に、より迅速に、より長期間、及び／又はより高い親和性若しくは結合活性で当該エピトープと反応又は連結する場合、別の分子のある領域（即ちエピトープ）に「免疫特異的に（immunospecifically）」結合する、と言い表される。この定義を読めば、例えば第１の標的に免疫特異的に結合する抗体又はそのエピトープ結合断片は、第２の標的に特異的又は優先的に結合してもしなくてもよいことも理解される。エピトープ含有分子は、免疫学的活性を有することができ、これにより、動物における抗体産生応答を誘発する。このような分子を「抗原（antigen）」と呼ぶ。天然抗体は、１つのエピトープ種のみに結合できる（即ちこれらは「単一特異性」である）が、上記種の複数の複製に結合できる（即ち「２価性」又は「多価性」を示す）。
【００６１】
用語「モノクローナル抗体（monoclonal antibody）」は均質な抗体の集団を指し、上記モノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関わる（自然に発生する又は自然に発生しない）アミノ酸から構成される。モノクローナル抗体は特異性が高く、単一のエピトープ（又は抗原部位）に対して指向性を有する。用語「モノクローナル抗体」は、完全なモノクローナル抗体及び全長モノクローナル抗体だけでなく、これらの断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｖ等）、単鎖（ｓｃＦｖ）、その突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、並びに必要な特異性及び抗原への結合能力を有する抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他のいずれの修飾構成を包含する。抗原の源又は抗原を作製する方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、遺伝子導入動物等による）に関して、限定は意図されていない。この用語は、免疫グロブリン全体、及び「抗体」の定義において上述した断片等を含む。モノクローナル抗体の作製方法は当該技術分野において公知である。採用してよい１つの方法は、Kohler, G. et al. (1975) “Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity,” Nature 256:495-497の方法又はその修正例である。典型的には、モノクローナル抗体はマウス、ラット又はウサギにおいて発現する。上記抗体は、動物を、所望のエピトープを含有する免疫原性量の細胞、細胞抽出物又はタンパク製剤で免疫化することによって産生される。免疫原は、一次細胞、培養された細胞株、癌細胞、タンパク質、ペプチド、核酸又は組織とすることができるが、これらに限定されない。免疫化に使用してよい細胞は、これらを免疫原として使用するよりもある期間（例えば少なくとも２４時間）だけ前に、培養してよい。細胞は単独で、又はＲｉｂｉ等の非変性アジュバントと組み合わせて、免疫原として使用してよい（Jennings, V.M. (1995) “Review of Selected Adjuvants Used in Antibody Production,” ILAR J. 37(3):119-125を参照）。一般に細胞は、免疫原として使用される際、完全な状態、及び好ましくは生存できる状態に維持しなければならない。完全な細胞は、破裂した細胞よりも、免疫性を与えられた動物が抗原をより良好に検出できるようにすることができる。変性又は強いアジュバント、例えばフロイントアジュバントの使用は、細胞を破裂させる場合があり、従って推奨されない。免疫原は、２週間に１回若しくは１週間に１回等、周期的な間隔で複数回投与してよく、又は動物中（例えば組織組み換え中）に生存能力を維持できるように投与してよい。あるいは、所望の病原性エピトープに対する免疫特異性を有する既存のモノクローナル抗体及び他の同等の抗体は、当該技術分野で公知のいずれの手段によって、組み換え配列及び産生できる。一実施形態では、このような抗体を配列し、続いてポリヌクレオチド配列を発現又は繁殖のためのベクターにクローン化する。関心対象の抗体をエンコードする配列は、宿主細胞中のベクター中に保持され、続いて上記宿主細胞を、将来使用するために膨張させて冷凍できる。このような抗体のポリヌクレオチド配列は、本発明の単一特異性又は多重特異性（例えば二重特異性、三重特異性及び四重特異性）分子、並びに親���性最適化済み、キメラ抗体、ヒト化抗体及び／又はイヌ化抗体を生成することによって、抗体の親和性又は他の特徴を改善するための、遺伝子操作のために使用してよい。抗体をヒト化する際の一般原理は、抗体のエピトープ結合部分の塩基配列を保持しながら、抗体の非ヒト残部をヒト抗体配列と交換するステップを伴う。モノクローナル抗体をヒト化するためには、４つの一般的なステップが存在する。上記ステップは以下の通りである：（１）開始抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び／又は予測されるアミノ酸配列を決定するステップ；（２）ヒト化抗体又はイヌ化抗体を設計するステップ、即ちヒト化又はイヌ化プロセス中に使用される抗体フレームワーク領域を決定するステップ；（３）実際のヒト化又はイヌ化法／技術を適用するステップ；並びに（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現ステップ（例えば米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，８０７，７１５号；米国特許第５，８６６，６９２号；及び米国特許第６，３３１，４１５号を参照）。
【００６２】
この数十年、抗体の治療能力に対する関心が再燃しており、抗体は、バイオテクノロジー由来薬物の主要な分類の１つとなっている（Chan, C.E. et al. (2009) “The Use Of Antibodies In The Treatment Of Infectious Diseases,” Singapore Med. J. 50(7):663-666）。２００を超える抗体ベースの薬物について、その使用が承認されているか、又は開発中である。
【００６３】
Ａ．抗体の一般的な構造的属性
自然発生した免疫グロブリン（例えばＩｇＧ）の基本的な構造単位は、２つの長い「重鎖」と複合体化した２つの短い「軽鎖」からなる四量体であり、通常約１５０，０００Ｄａの糖タンパク質として表される。各鎖は、「可変ドメイン」を含むアミノ末端（「Ｎ末端」）部分と、少なくとも１つの「定常ドメイン」を含むカルボキシ末端（「Ｃ末端」）部分とからなる。ＩｇＧ軽鎖は、単一の「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬ」）と、単一の「軽鎖定常ドメイン」（「ＣＬ」）とからなる。よって、ＩｇＧ分子の軽鎖の構造は、ｎ‐ＶＬ‐ＣＬ‐ｃである（ここでｎ及びｃはそれぞれ、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を表す）。ＩｇＧ重鎖は、単一の「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨ」）、３つの「重鎖定常ドメイン」（「ＣＨ１」、「ＣＨ２」及び「ＣＨ３」）、並びにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に位置する「ヒンジ」領域（「Ｈ」）からなる。よって、ＩｇＧ重鎖の構造は、ｎ‐ＶＨ‐ＣＨ１‐Ｈ‐ＣＨ２‐ＣＨ３‐ｃである（ここでｎ及びｃはそれぞれ、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を表す）。無傷の修飾されていない抗体（例えばＩｇＧ抗体）の、抗原のエピトープに結合する能力は、可変ドメインの存在及びその配列に左右される。
【００６４】
１．定常ドメイン
（ａ）軽鎖定常ドメイン
好ましいＣＬドメインは、ヒトＩｇＧ  ＣＬκドメインである。例示的なヒトＣＬκドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１）：
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG 
NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK 
SFNRGEC
である。
【００６５】
あるいは、例示的なＣＬドメインは、ヒトＩｇＧ  ＣＬλドメインである。例示的なヒトＣＬλドメインのアミノ酸配列は、（配列番号２）：
QPKAAPSVTL FPPSSEELQA NKATLVCLIS DFYPGAVTVA WKADSSPVKA 
GVETTPSKQS NNKYAASSYL SLTPEQWKSH RSYSCQVTHE GSTVEKTVAP 
TECS
である。
【００６６】
（ｂ）重鎖ＣＨ１ドメイン
例示的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインである。例示的なヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号３）：
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV 
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRV
である。
【００６７】
例示的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ２  ＣＨ１ドメインである。例示的なヒトＩｇＧ２  ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号４）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV 
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTV
である。
【００６８】
例示的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ３  ＣＨ１ドメインである。例示的なヒトＩｇＧ３  ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV 
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YTCNVNHKPS NTKVDKRV
である。
【００６９】
例示的なＣＨ１ドメインは、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ１ドメインである。例示的なヒトＩｇＧ４  ＣＨ１ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号６）：
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV 
HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRV
である。
【００７０】
（ｃ）重鎖ヒンジ領域
例示的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域である。例示的なヒトＩｇＧ１ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号７）：
EPKSCDKTHT CPPCP
である。
【００７１】
別の例示的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域である。例示的なヒトＩｇＧ２ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号８）：
ERKCCVECPP CP
である。
【００７２】
別の例示的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ３ヒンジ領域である。例示的なヒトＩｇＧ３ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号９）：
ELKTPLGDTT HTCPRCPEPK SCDTPPPCPR CPEPKSCDTP PPCPRCPEPK 
SCDTPPPCPR CP
である。
【００７３】
別の例示的なヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域である。例示的なヒトＩｇＧ４ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号１０）：
ESKYGPPCPS CP
である。
【００７４】
本明細書中で記載されるように、ＩｇＧ４ヒンジ領域は、（Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付与した場合）Ｓ２２８Ｐ置換等の安定化突然変異を含んでよい。例示的な安定化ＩｇＧ４ヒンジ領域のアミノ酸配列は、（配列番号１１）：
ESKYGPPCPP CP
である。
【００７５】
（ｄ）重鎖ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン
２つの重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、相互作用してＩｇＧ抗体の「Ｆｃ領域（Fc region）」を形成し、これは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）を含むがこれに受容されない細胞Ｆｃ受容体によって認識されるドメインである。本明細書中で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」は、ＩｇＧ重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。Ｆｃ領域の一部分（Ｆｃ領域全体を包含する一部分を含む）を、本明細書では「Ｆｃドメイン」と呼ぶ。Ｆｃ領域は、そのアミノ酸配列が、他のＩｇＧアイソタイプに対してよりも、あるＩｇＧアイソタイプに対して最も相同性が高い場合に、この特定のＩｇＧアイソタイプ、クラス又はサブクラスのものであると表現される。抗体は、診断学におけるその公知の使用法に加えて、治療剤として有用であることが示されている。
【００７６】
例示的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１２）：
231     240          250          260          270          280
APELLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVKFNWYVD
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQYNSTY   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKALPA
340          350          360          370          380
PIEKTISKAK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPVLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NVFSCSVMHE
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSPGX
であり、これはＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【００７７】
例示的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３）：
231     240          250          260          270          280
APPVA-GPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVQFNWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQFNSTF   RVVSVLTVVH   QDWLNGKEYK   CKVSNKGLPA 
340          350          360          370          380
PIEKTISKTK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDISVE
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPMLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NVFSCSVMHE 
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSPGX
であり、これはＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【００７８】
例示的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４）：
231     240          250          260          270          280
APELLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSHED   PEVQFKWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQYNSTF   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKALPA
340          350          360          370          380
PIEKTISKTK   GQPREPQVYT   LPPSREEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE
390          400          410          420          430
WESSGQPENN   YNTTPPMLDS   DGSFFLYSKL   TVDKSRWQQG   NIFSCSVMHE
440       447
ALHNRFTQKS   LSLSPGX
であり、これはＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【００７９】
例示的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５）：
231     240          250          260          270          280
APEFLGGPSV   FLFPPKPKDT   LMISRTPEVT   CVVVDVSQED   PEVQFNWYVD 
290          300          310          320          330
GVEVHNAKTK   PREEQFNSTY   RVVSVLTVLH   QDWLNGKEYK   CKVSNKGLPS 
340          350          360          370          380
SIEKTISKAK   GQPREPQVYT   LPPSQEEMTK   NQVSLTCLVK   GFYPSDIAVE 
390          400          410          420          430
WESNGQPENN   YKTTPPVLDS   DGSFFLYSRL   TVDKSRWQEG   NVFSCSVMHE 
440       447
ALHNHYTQKS   LSLSLGX
であり、これはＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによって番号付与されており、Ｘはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【００８０】
本明細書全体を通して、ＩｇＧ重鎖の定常領域の残基の番号付与は、Kabat et al.、Sequences of Proteins of Immunological Interest、5thEd. Public Health Service、NH1、MD (1991)（「Ｋａｂａｔ」、これは参照により明示的に本明細書に援用される）によるＥＵインデックスの番号付与である。用語「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス（EU index as in Kabat）」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の定常ドメインの番号付与を指す。
【００８１】
多型は、抗体定常領域内の多数の異なる位置（例えばＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによる番号付与で２７０位、２７２位、３１２位、３１５位、３５６位及び３５８位を含むがこれらに限定されないＦｃ位置）において観察されており、従ってここで提示される配列と従来技術の配列との間にはわずかな差異が存在し得る。ヒト免疫グロブリンの多型形態は、十分に特性決定されている。現在、１８個のＧｍアロタイプが公知である：Ｇ１ｍ（１，２，３，１７）又はＧ１ｍ（ａ，ｘ，ｆ，ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）又はＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５，６，１０，１１，１３，１４，１５，１６，２１，２４，２６，２７，２８）又はＧ３ｍ（ｂ１，ｃ３，ｂ３，ｂ０，ｂ３，ｂ４，ｓ，ｔ，ｇ１，ｃ５，ｕ，ｖ，ｇ５）（Lefranc, et al., The human IgG subclasses: molecular analysis of structure, function and regulation. Pergamon, Oxford, pp. 43-78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet.: 50, 199-211）。特に、本発明の抗体が、いずれの免疫グロブリン遺伝子のいずれのアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプを組み込むことができ、本明細書中で提示される配列のアロタイプ、アイソアロタイプ又はハプロタイプに限定されないと考えられる。更に、発現系によっては、ＣＨ３ドメインのＣ末端アミノ酸残基（上記太字）は、翻訳後に除去できる。従ってＣＨ３ドメインのＣ末端残基は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の任意のアミノ酸残基である。本発明によって具体的に包含されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端残基が欠けたＣＤ１３７×ＴＡ結合分子である。また本発明によって具体的に包含されるのは、ＣＨ３ドメインのＣ末端リシン残基を含む構造である。
【００８２】
２．可変ドメイン
ＩｇＧ分子の可変ドメインは、エピトープと接触することになる抗体のアミノ酸残基を含有する３つの相補性決定領域（「ＣＤＲ」）、及びフレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれる介在性非ＣＤＲセグメントからなり、上記フレームワークセグメントは、一般にＣＤＲループの構造を維持してＣＤＲの位置を決定することにより、このような接触を可能とする（ただし特定のフレームワーク残基もエピトープに接触し得る）。従って、ＶＬ及びＶＨドメインは、構造ｎ‐ＦＲ１‐ＣＤＲ１‐ＦＲ２‐ＣＤＲ２‐ＦＲ３‐ＣＤＲ３‐ＦＲ４‐ｃを有する。ＣＤＲのアミノ酸配列は、ある抗体がある特定のエピトープに結合できるかどうかを決定する。抗体軽鎖と抗体重鎖との相互作用、特に、それぞれ別個のポリペプチド上に存在するこれらのＶＬドメインとＶＨドメインとの相互作用は、抗体のエピトープ結合部位を形成する。
【００８３】
免疫グロブリンの成熟した重鎖及び軽鎖の可変ドメインからのアミノ酸は、鎖内でのアミノ酸の位置によって指定される。Ｋａｂａｔ（SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991)）は、抗体に関する多数のアミノ酸配列を記載し、各サブグループに関するアミノ酸コンセンサス配列を同定し、残基番号を各アミノ酸に割り当てており、またＣＤＲ及びＦＲは、Ｋａｂａｔによって定義されるように同定される（Chothia, C. & Lesk, A. M.(1987) “Canonical Structures For The Hypervariable Regions Of Immunoglobulins,” J. Mol. Biol. 196:901-917）によって定義されるＣＤＲH１は、残基５個分前から始まることが理解されるだろう）。Ｋａｂａｔの番号付与スキームは、その大要に含まれていない抗体に対して、保存されたアミノ酸を参照して上記抗体をＫａｂａｔのコンセンサス配列のうちの１つと整列させることにより、拡張可能である。残基番号を割り当てるこの方法は、当該技術分野において標準的なものとなっており、キメラ変異型又はヒト化変異型を含む異なる抗体の同一の位置のアミノ酸が容易に同定される。例えば、ヒト抗体軽鎖の５０位のアミノ酸は、マウス抗体軽鎖の５０位のアミノ酸と同一位置を占める。
【００８４】
抗体の軽鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲL１ドメイン、ＣＤＲL２ドメイン及びＣＤＲL３ドメインと呼ばれる。同様に、抗体の重鎖の第１、第２及び第３のＣＤＲである（又は第１、第２及び第３のＣＤＲとして機能し得る）ポリペプチドは、本明細書ではそれぞれＣＤＲH１ドメイン、ＣＤＲH２ドメイン及びＣＤＲH３ドメインと呼ばれる。よって、ＣＤＲL１ドメイン、ＣＤＲL２ドメイン、ＣＤＲL３ドメイン、ＣＤＲH１ドメイン、ＣＤＲH２ドメイン、及びＣＤＲH３ドメインという用語は、あるタンパク質に組み込まれた場合に、当該タンパク質が、軽鎖及び重鎖若しくはダイアボディ若しくは単鎖結合分子（例えばｓｃＦｖ、ＢｉＴｅ等）を有する抗体であるか、又は別のタイプのタンパク質であるかにかかわらず、当該タンパク質を、特定のエピトープに結合できるようにする、ポリペプチドを対象としている。従って本明細書中で使用される場合、用語「エピトープ結合断片（epitope-binding fragment）」は、あるエピトープに免疫特異的に結合できる分子の断片を指す。エピトープ結合断片は、抗体のＣＤＲドメインのうちの１、２、３、４若しくは５個を含有してよく、又は抗体のＣＤＲドメインのうちの６個全てを含有してよく、このようなエピトープに免疫特異的に結合できるものの、このような抗体のエピトープとは異なるエピトープに対する免疫特異性、親和性又は選択性を呈してもよい。しかしながら好ましくは、エピトープ結合断片は、このような抗体のＣＤＲドメインのうちの６個全てを含有することになる。ある抗体のエピトープ結合断片は、単一のポリペプチド鎖（例えばｓｃＦｖ）であってよく、又はそれぞれがアミノ末端及びカルボキシ末端を有する２つ以上のポリペプチド鎖（例えばダイアボディ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ2断片等）を含んでよい。明記されていない場合、本明細書に記載のタンパク質分子のドメインの順序は、「Ｎ末端からＣ末端への（N-terminal to C-terminal）」方向である。
【００８５】
エピトープ結合部位は、定常ドメインに融合する完全可変ドメイン、又は適切なフレームワーク領域にグラフトされたこのような可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）のみを含んでよい。エピトープ結合部位は野生型であってよく、又は１つ若しくは複数のアミノ酸置換によって修飾してよい。これにより、ヒト個体の免疫原である定常領域が排除されるが、外来可変ドメインの可能性は残る（LoBuglio, A.F. et al. (1989) “Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224）。別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、上記可変ドメインをヒト形態に可能な限り近くなるように変形させるために上記可変ドメインを修飾することにも、焦点を当てている。重鎖及び軽鎖両方の可変ドメインは、問題となる抗原に応答して変化して結合能力を決定する、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を内包することが知られており、上記フレームワーク領域は、ある所与の種において相対的に保存され、またＣＤＲのための足場を提供するものと推定される。ある特定の抗原に対して非ヒト抗体を調製する際、非ヒト抗体由来のＣＤＲを、修飾されるヒト抗体内に存在するＦＲに移植することによって、可変ドメインを「再成形」又は「ヒト化」できる。様々な抗体に対するこのアプローチの適用は、Sato, K. et al. (1993) “Reshaping A Human Antibody To Inhibit The Interleukin 6-Dependent Tumor Cell Growth,” Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies for Therapy,” Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity,” Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) “Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of FrameworkResidues On Loop Conformation,” Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) “Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity,” Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) “Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) “Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo,” Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) “Humanized Antibodies For Antiviral Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. et al. (1992) “Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; 及びCo, M.S. et al. (1992) “Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen,” J. Immunol. 148:1149-1154によって報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は全てのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体からの６つのＣＤＲ全てを含有するヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、オリジナルの抗体に対して配列が異なる改変された１つ又は複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）を有する。
【００８６】
Ｂ．抗体のヒト化
本発明は特に、ヒト化抗体のＶＬ及び／又はＶＨドメインを含む結合分子（抗体及びダイアボディを含む）を包含する。用語「ヒト化抗体（humanized antibody）」は、キメラ分子であって、一般に組み換え技術を用いて調製され、非ヒト種からの免疫グロブリンのエピトープ結合部位と、残りの、ヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の免疫グロブリン構造とを有する、キメラ分子を指す。本発明の抗ヒトＰＤ‐１抗体は、抗体ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ２、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ３、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ４、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ５、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ６、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ７、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ８、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  ９、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １０、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １１、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １２、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １３、ＰＤ‐１  ｍＡｂ  １４又はＰＤ‐１  ｍＡｂ  １５の、ヒト化、キメラ又はイヌ化変異体を含む。このような抗体の可変ドメインのポリヌクレオチド配列は、上記誘導体を生成するため及び上記抗体の親和性又は他の特徴を改善するための遺伝子操作のために使用できる。抗体をヒト化する際の一般原理は、抗体のエピトープ結合部分の塩基配列を保持しながら、抗体の非ヒト残部をヒト抗体配列と交換するステップを伴う。モノクローナル抗体をヒト化するためには、４つの一般的なステップが存在する。上記ステップは以下の通りである：（１）開始抗体の軽鎖及び重鎖可変ドメインのヌクレオチド及び予測されるアミノ酸配列を決定するステップ；（２）ヒト化抗体又はイヌ化抗体を設計するステップ、即ちヒト化又はイヌ化プロセス中に使用する抗体フレームワーク領域を決定するステップ；（３）実際のヒト化又はイヌ化法／技術；並びに（４）ヒト化抗体のトランスフェクション及び発現。例えば米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，８０７，７１５号；米国特許第５，８６６，６９２号；及び米国特許第６，３３１，４１５号を参照。
【００８７】
非ヒト免疫グロブリン由来の抗原結合部位を含む多数のヒト化抗体分子が説明されており、これらは、げっ歯類又は修飾げっ歯類可変ドメインと、ヒト定常ドメインに融合した、これらに関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを有するキメラ抗体を含む（例えばWinter et al. (1991) “Man-made Antibodies,” Nature 349:293-299; Lobuglio et al. (1989) “Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989); Shaw et al. (1987) “Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To A Colon Cancer Tumor-Associated Antigen,” J. Immunol. 138:4534-4538;及びBrown et al. (1987) “Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody,” Cancer Res. 47:3577-3583を参照）。他の参照文献は、適切なヒト抗体定常ドメインと融合する前にヒト支持性フレームワーク領域（ＦＲ）にグラフと重合される、げっ歯類ＣＤＲについて説明している（例えば、Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies for Therapy,” Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity,” Science 239:1534-1536;及びJones et al. (1986) “Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse,” Nature 321:522-525を参照）。別の参照文献は、組み換えによってベニアリングされたげっ歯類フレームワーク領域によって支持されたげっ歯類ＣＤＲについて説明している。例えば欧州公開特許第５１９，５９６号を参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエントのこれらの部分の治療的応用の期間及び効果を制限する、げっ歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫学的応答を最小化するよう設計される。抗体をヒト化するために利用してよい他の方法は、Daugherty et al. (1991) “Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins,” Nucl. Acids Res. 19:2471-2476並びに米国特許第６，１８０，３７７号；米国特許第６，０５４，２９７号；米国特許第５，９９７，８６７号；及び米国特許第５，８６６，６９２号によって開示されている。
【００８８】
このような成功にもかかわらず、治療用途に最適化された、安定した官能性ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディの生産は、ポリペプチド鎖で採用するドメインを注意深く考察し配置することによって、更に改善できる。よって本発明は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる、安定した治療に有用なヘテロ二量体ダイアボディ及びヘテロ二量体Ｆｃダイアボディを、共有結合によって形成するよう特に設計された、特定のポリペプチドの提供を対象とする。
【００８９】
Ｃ．二重特異性抗体、多重特異性ダイアボディ、及びＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ
上述のように、天然抗体は１つのエピトープ種にしか結合できないが、上記種の複数の複製に結合できる。当該技術分野では、二重特異性抗体の生産が望まれていることが認識されており、このような二重特異性抗体の生産のために、広範な組み換え二重特異性抗体フォーマットが開発されてきた（例えば国際公開第２００８／００３１１６号、国際公開第２００９／１３２８７６号、国際公開第２００８／００３１０３号、国際公開第２００７／１４６９６８号、国際公開第２００９／０１８３８６号、国際公開第２０１２／００９５４４号、国際公開第２０１３／０７０５６５号を参照）。このようなアプローチの大半は、更なる結合ドメイン（例えばｓｃＦｖ、ＶＬ、ＶＨ等）を抗体コア（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ若しくはＩｇＭ）へ若しくは上記抗体コア内に融合させるため、又は複数の抗原結合部分（例えば２つのＦａｂ断片若しくはｓｃＦｖ）を互いに融合させるために、リンカーペプチドを使用する。代替的なフォーマットは、結合タンパク質（例えばｓｃＦｖ、ＶＬ、ＶＨ等）を、ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン又は代替となるポリペプチド等の二量体化ドメインに融合させるために、リンカーペプチドを使用する（国際公開第２００５／０７０９６６号、国際公開第２００６／１０７７８６Ａ号、国際公開第２００６／１０７６１７Ａ号、国際公開第２００７／０４６８９３号）。典型的には、このようなアプローチは妥協及びトレードオフを伴う。例えば国際公開第２０１３／１７４８７３号、国際公開第２０１１／１３３８８６号、及び国際公開第２０１０／１３６１７２号は、リンカーの使用によって、治療的設定に問題が生じる場合があることを開示しており、２つ以上の抗原に結合できるように、ＣＬ及びＣＨ１ドメインがそれぞれの自然位置から切り替わり、かつＶＬ及びＶＨドメインが多様化されている、三重特異性抗体を教示している（国際公開第２００８／０２７２３６号；国際公開第２０１０／１０８１２７号）。従って、これらの文書に開示されている分子は、結合特異性を、追加の抗原種に結合できる能力と交換している。国際公開第２０１３／１６３４２７号及び国際公開第２０１３／１１９９０３号は、ＣＨ２ドメインを修飾して、結合ドメインを含む融合タンパク付加物を含有させるステップを開示している。この文書は、ＣＨ２が、エフェクタ機能の仲介において最低限の役割しか果たさないらしいことを記載している。国際公開第２０１０／０２８７９７号、国際公開第２０１００２８７９６号、及び国際公開第２０１０／０２８７９５号は、Ｆｃ領域が追加のＶＬ及びＶＨドメインで置換されて、３価結合分子を形成している、組み換え抗体を開示している。国際公開第２００３／０２５０１８号及び国際公開第２００３０１２０６９号は、個々の鎖がｓｃＦｖドメインを含有する組み換えダイアボディを開示している。国際公開第２０１３／００６５４４号は、単一のポリペプチド鎖として合成された後、タンパク質分解に供されることによってヘテロ二量体構造が得られる、多価ｆａｂ分子を開示している。従って、これらの文書に開示されている分子は、エフェクタ機能を仲介する能力の全て又はある程度を、追加の抗原種に結合できる能力と交換している。国際公開第２０１４／０２２５４０号、国際公開第２０１３／００３６５２号、国際公開第２０１２／１６２５８３号、国際公開第２０１２／１５６４３０号、国際公開第２０１１／０８６０９１号、国際公開第２００８／０２４１８８号、国際公開第２００７／０２４７１５号、国際公開第２００７／０７５２７０号、国際公開第１９９８／００２４６３号、国際公開第１９９２／０２２５８３号、及び国際公開第１９９１／００３４９３号は、追加の結合ドメイン又は官能基を抗体又は抗体部分に付加するステップ（例えば抗体の軽鎖にダイアボディを付加するステップ、又は抗体の軽鎖及び重鎖に追加のＶＬ及びＶＨドメインを付加するステップ、又は異種融合タンパク質を互いに対して付加するステップ若しくは複数のＦａｂドメインを互いに対して連鎖させるステップ）を開示している。従って、これらの文書に開示されている分子は、ナイーブ抗体構造を、追加の抗原種に結合できる能力と交換している。
【００９０】
本技術分野は更に、２つ以上の異なるエピトープ種と結合できる（即ち２価性又は多価性に加えて二重特異性又は多重特異性を呈することができる）という点でこのような天然抗体とは異なるダイアボディを産生できる可能性に注目している（例えばHolliger et al. (1993) “’Diabodies’: Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 90:6444-6448; 米国公開特許第２００４／００５８４００号（Hollinger et al.）；米国公開特許第２００４／０２２０３８８号（Mertens et al.）；Alt et al. (1999) FEBS Lett. 454(1-2):90-94；Lu, D. et al. (2005) “A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity,” J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672；国際公開第０２／０２７８１号（Mertens et al.）；Olafsen, T. et al. (2004) “Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications,” Protein Eng Des Sel. 17(1):21-27；Wu, A. et al. (2001) “Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20 Single Chain Fv-Fv Fusion Protein Is Mediated Through Variable Domain Exchange,” Protein Engineering 14(2):1025-1033；Asano et al. (2004) “A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain,” Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992；Takemura, S. et al. (2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System,” Protein Eng. 13(8):583-588；Baeuerle, P.A. et al. (2009) “Bispecific T cell Engaging Antibodies For Cancer Therapy,” Cancer Res. 69(12):4941-4944を参照）。
【００９１】
非単一特異性「ダイアボディ（diabody）」の提供は、異なるエピトープを発現する細胞を共連結（co-ligate）して共存させることができる能力という、抗体を上回る有意な利点を提供する。従って二重特異性ダイアボディは、療法及び免疫診断を含む広範な用途を有する。二重特異性は、様々な用途におけるダイアボディの設計及び操作の大幅な柔軟性を可能とし、これにより、多量体抗原の結合活性の上昇、異なる複数の抗原の架橋、及び両標的抗原の存在に基づく特定の細胞タイプに対する指向性標的化を提供する。当該技術分野において公知のダイアボディ分子は、（〜５０ｋＤａ以下の小さいサイズのダイアボディに関して）その２価性、低い解離率及び循環からの迅速な排除により、腫瘍撮像の分野での特定の使用も示している（Fitzgerald et al. (1997) “Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris,” Protein Eng. 10:1221）。特に重要なのは、異なる細胞の共結紮、例えば細胞毒性Ｔ細胞と腫瘍細胞との架橋（Staerz et al. (1985) “Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T-Cells,” Nature 314:628-631、及びHolliger et al. (1996) “Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody,” Protein Eng. 9:299-305）によって、Ｔ細胞を腫瘍細胞の部位に共存させることである。
【００９２】
このようなダイアボディを、Ｔ細胞に結合するよう標的化する代わりに、ダイアボディエピトープ結合ドメインを、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４０及びＣＤ７４といったＢ細胞の表面決定因子に対して配向してよい（Moore, P.A. et al. (2011) “Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T cell Killing Of B-Cell Lymphoma,” Blood 117(17):4542-4551; Cheson, B.D. et al. (2008) “Monoclonal Antibody Therapy For B-Cell Non-Hodgkin’s Lymphoma,” N. Engl. J. Med. 359(6):613-626; Castillo, J. et al. (2008) “Newer Monoclonal Antibodies For Hematological Malignancies,” Exp. Hematol. 36(7):755-768）。多くの研究において、エフェクタ細胞決定因子、例えばＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合するダイアボディは、エフェクタ細胞を活性化させることも分かった（Holliger et al. (1996) “Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T cells Mediated By A Bispecific Diabody,” Protein Eng. 9:299-305; Holliger et al. (1999) “Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3 x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7 x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins,” Cancer Res. 59:2909-2916；国際公開第２００６／１１３６６５号；国際公開第２００８／１５７３７９号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１２／１６２０６８号）。通常、エフェクタ細胞の活性化は、Ｆｃドメイン‐ＦｃγＲ相互作用によるエフェクタ細胞への抗原結合抗体の結合によってトリガされる。従ってこれに関して、ダイアボディ分子は、Ｆｃドメインを含むかどうかとは無関係に、（例えば当該技術分野において公知の、又は本明細書に例示されているいずれのエフェクタ機能アッセイ（例えばＡＤＣＣアッセイ）においてアッセイされるように）Ｉｇ様官能性を示し得る。腫瘍とエフェクタ細胞とを架橋させることによって、ダイアボディは腫瘍細胞近傍にエフェクタ細胞を移動させるだけではなく、効果的な腫瘍殺滅をもたらす（例えばCao et al. (2003) "Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics, "Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197を参照）。
【００９３】
しかしながら、上述の利点は顕著なコストにつながる。このような非単一特異性ダイアボディの形成は、２つ以上の別個の異なるポリペプチドの良好な集合を必要とする（即ち上記形成は、ダイアボディが、異なるポリペプチド鎖種のヘテロ二量体形成によって形成されることを必要とする）。この事実は、同一のポリペプチド鎖のホモ二量体形成によって形成される単一特異性ダイアボディとは対照的である。非単一特異性ダイアボディを形成するために少なくとも２つの異なるポリペプチド（即ち２つのポリペプチド種）を提供しなければならないため、及びこのようなポリペプチドのホモ二量体形成は不活性分子をもたらす（Takemura, S. et al. (2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System,” Protein Eng. 13(8):583-588）ため、このようなポリペプチドの産生は、同一種のポリペプチド間での共有結合に対処できる（即ちこれらのホモ二量体化を最小化できる）ような方法で達成しなければならない（Takemura, S. et al. (2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System,” Protein Eng. 13(8):583-588）。従って本技術分野は、このようなポリペプチドの非共有結合的連結を教示している（例えばOlafsen et al. (2004) “Covalent Disulfide-Linked 抗CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications,” Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Asano et al. (2004) “A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain,” Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) “Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System,” Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005) “A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity,” J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672を参照）。
【００９４】
しかしながら、本技術分野は、非共有結合的に連結したポリペプチドで構成される二重特異性ダイアボディが不安定であり、非官能性単一ポリペプチド鎖モノマーへと容易に分解することを認識している（例えばLu, D. et al. (2005) “A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity,” J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672を参照）。
【００９５】
この課題をものともせず、本技術分野は、ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディと呼ばれる、安定した共有結合ヘテロ二量体性非単一特異性ダイアボディの開発に成功した。例えばChichili, G.R. et al. (2015) “A CD3xCD123 Bispecific DART For Redirecting Host T Cells To Myelogenous Leukemia: Preclinical Activity And Safety In Nonhuman Primates,” Sci. Transl. Med. 7(289):289ra82; Johnson, S. et al. (2010) “Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion,” J. Molec. Biol. 399(3):436-449; Veri, M.C. et al. (2010) “Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIB (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold,” Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011) “Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T cell Killing Of B-Cell Lymphoma,” Blood 117(17):4542-4551；米国特許第８，０４４，１８０号；米国特許第８，１３３，９８２号；米国特許第８，１８７，５９３号；米国特許第８，１９３，３１８号；米国特許第８，５３０，６２７号；米国特許第８，６６９，３４９号；米国特許第８，７７８，３３９号；米国特許第８，７８４，８０８号；米国特許第８，７９５，６６７号；米国特許第８，８０２，０９１号；米国特許第８，８０２，０９３号；米国特許第８，９４６，３８７号；米国特許第８，９６８，７３０号；及び米国特許第８，９９３，７３０号；米国公開特許第２００９／００６０９１０号；米国公開特許第２０１０／０１７４０５３号；米国公開特許第２０１１／００８１３４７号；米国公開特許第２０１１／００９７３２３号；米国公開特許第２０１１／０１１７０８９号；米国公開特許第２０１２／０００９１８６号；米国公開特許第２０１２／００３４２２１号；米国公開特許第２０１２／０１４１４７６号；米国公開特許第２０１２／０２９４７９６号；米国公開特許第２０１３／０１４９２３６号；米国公開特許第２０１３／０２９５１２１号；米国公開特許第２０１４／００１７２３７号；及び米国公開特許第２０１４／００９９３１８号；欧州特許第１８６８６５０号；欧州特許第２１５８２２１号；欧州特許第２２４７３０４号；欧州特許第２２５２６３１号；欧州特許第２２８２７７０号；欧州特許第２３２８９３４号；欧州特許第２３７６１０９号；欧州特許第２５４２２５６号；欧州特許第２６０１２１６号；欧州特許第２７１４０７９号；欧州特許第２７１４７３３号；欧州特許第２７８６７６２号；欧州特許第２８３９８４２号；欧州特許第２８４００９１号；並びに国際公開第２００６／１１３６６５号；国際公開第２００８／１５７３７９号；国際公開第２０１０／０２７７９７号；国際公開第２０１０／０３３２７９号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２０１１／１０９４００号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１２／１６２０６７号；国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１４／１５９９４０号；国際公開第２０１５／０２１０８９号；国際公開第２０１５／０２６８９２号；及び国際公開第２０１５／０２６８９４号を参照。このようなダイアボディは、２つ以上の共有結合的に複合体化したポリペプチドを含み、１つ又は複数のシステイン残基を、ジスルフィド結合を形成でき、これによって２つ���ポリペプチド鎖を共有結合させる、採用したポリペプチド種それぞれの中へと加工するステップを伴う。例えば、このような構造のＣ末端へのシステイン残基の追加は、ポリペプチド鎖間のジスルフィド結合を可能とすることが分かっており、これは、２価分子の結合特性に干渉することなく、得られるヘテロ二量体を安定化させる。
【００９６】
最も単純なＤＡＲＴ（登録商標）は、２つのポリペプチド鎖を含み、これらはそれぞれ３つのドメインを含む（図１）。第１のポリペプチド鎖は：（ｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン；（ｉｉ）第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含む、第２のドメイン；並びに（ｉｉｉ）上記第２のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化を促進する役割、及びダイアボディの第２のポリペプチド鎖に対する第１のポリペプチド鎖の共有結合を促進する役割を果たす、第３のドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン（Heterodimer-Promoting Domain）を含む。第２のポリペプチド鎖は：相補的な第１のドメイン（ＶＬ２ドメイン）；相補的な第２のドメイン（ＶＨ１ドメイン）；並びに第１のポリペプチド鎖の第３のドメインと複合体化して、第１のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進する、第３のドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン」）を含有する。このような分子は、安定かつ強力であり、２つ以上の抗原を同時に結合する能力を有する。一実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖の第３のドメインはそれぞれ、システイン（「Ｃマーク（Ｃを丸で囲んだマーク）」）残基を含有し、このシステイン残基は、ジスルフィド結合を介してポリペプチドを一体に結合させる役割を果たす。上記ポリペプチド鎖のうちの一方又は両方の第３のドメインは更に、ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインの配列を有してよく、これにより、ダイアボディポリペプチドの複合体化によって、細胞（Ｂリンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球及び肥満細胞等）のＦｃ受容体に結合できるＦｃドメインが形成される）。このような分子の多数の変形例が記載されており（例えば米国公開特許第２０１３‐０２９５１２１号；米国公開特許第２０１０‐０１７４０５３号；米国公開特許第２００７‐０００４９０９号；米国公開特許第２００９‐００６０９１０号；欧州公開特許第２７１４０７９号；欧州公開特許第２６０１２１６号；欧州公開特許第２３７６１０９号；欧州公開特許第２１５８２２１号；及び国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２００６／１１３６６５号を参照）、また本明細書中で提供される。
【００９７】
ＩＩ．本発明の好ましいＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構成要素
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子はポリペプチドからなり、２つ、３つ、４つ又は５つ以上のポリペプチド鎖からなってよい。本明細書中で使用される場合、用語「…からなる（composed of）」は、非制限的なものであることが意図されており、従って、２つのポリペプチド鎖からなる本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、更なるポリペプチド鎖を有してよい。このような鎖は、上記結合分子の別のポリペプチド鎖と同一の配列を有してよく、又は上記結合分子の他のいずれのポリペプチド鎖と異なる配列を有してよい。
【００９８】
Ａ．好ましい「リンカー」ペプチド
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のポリペプチドは、リンカー１、リンカー２、リンカー３等といった「リンカー」ペプチドが先行する、「リンカー」ペプチドが後ろに続く、及び／又は「リンカー」ペプチドによって互いに連結された、ドメインを含む。本発明は、特定の好ましい「リンカー」ペプチドを利用するが、本明細書で提供される教示に照らして、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を得るために代替的なリンカーを容易に識別及び採用できる。
【００９９】
最も好ましくは、ポリペプチド鎖の上記ＶＬドメインと上記ＶＨドメインとを隔てるリンカー１の長さは、上記ＶＬ及びＶＨドメインが互いに対して結合するのを実質的に又は完全に防止するよう選択される（例えば１２アミノ酸残基以下の長さ）。従って、第１のポリペプチド鎖のＶＬ１及びＶＨ２ドメインは、互いに対して結合することが実質的に又は完全に不可能であり、第１又は第２の抗原に実質的に結合できるエピトープ結合部位を形成しない。同様に、第２のポリペプチド鎖のＶＬ２及びＶＨ１ドメインは、互いに対して結合することが実質的に又は完全に不可能であり、第１又は第２の抗原に実質的に結合できるエピトープ結合部位を形成しない。好ましい介在スペーサペプチド（リンカー１）は、配列（配列番号１６）：GGGSGGGGを有し、これは、ｓｃＦｖ分子の生成に採用される長い介在スペーサペプチド（例えばGGGGSGGGGSGGGGS（配列番号１７）とは対照的に）同一のポリペプチド鎖のＶＬドメインとＶＨドメインとを一体に複合体化するには短すぎる。
【０１００】
リンカー２の目的は、ポリペプチド鎖のＶＨドメインを、当該ポリペプチド鎖の、任意に存在するヘテロ二量体促進ドメインから隔てることである。様々なリンカーのうちのいずれを、リンカー２の目的のために使用できる。このようなリンカー２の好ましい配列は、ジスルフィド結合によって第１及び第２のポリペプチド鎖を互いに対して共有結合させるために使用できるアミノ酸配列：GGCGGG（配列番号１８）、又はＩｇＧ  ＣＨ１ドメインに由来するASTKG（配列番号１９）を有する。リンカー２：ASTKG（配列番号１９）は、上述のようなシステインを有しないため、このようなリンカー２の使用は好ましくは、配列番号３８のＥコイル又は配列番号３９のＫコイル等の、システイン含有ヘテロ二量体促進ドメインと関連する（以下を参照）。
【０１０１】
リンカー３の１つの目的は、ポリペプチド鎖のヘテロ二量体促進ドメインを、当該ポリペプチド鎖のＦｃドメインから隔てることである。第２の目的は、システイン含有ポリペプチドドメインを提供することである。様々なリンカーのうちのいずれを、リンカー３の目的のために使用できる。このようなリンカー３の好ましい配列は、アミノ酸配列：DKTHTCPPCP（配列番号２０）を有する。リンカー３に関する別の好ましい配列は、アミノ酸配列：GGGDKTHTCPPCP（配列番号２１）を有する。
【０１０２】
リンカー４の目的は、Ｆｃ領域のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（「Ｆｃドメイン」）のＣ末端をＶＬドメインのＮ末端から隔てることである。様々なリンカーのうちのいずれを、リンカー４の目的のために使用できる。このようなリンカー４の好ましい配列は、アミノ酸配列：APSSS（配列番号２２）、又はアミノ酸配列APSSSPME（配列番号２３）、又はアミノ酸配列GGGSGGGSGGG（配列番号２４）を有する。
【０１０３】
本発明のＦｃ領域含有分子は、更なる介在スペーサペプチド（リンカー）を含んでよく、このようなリンカーは一般に、ヘテロ二量体促進ドメイン（例えばＥコイル若しくはＫコイル）とＣＨ２‐ＣＨ３ドメインとの間、及び／又はＣＨ２‐ＣＨ３ドメインと可変ドメイン（即ちＶＨ若しくはＶＬ）との間に組み込まれる。典型的には、この追加のリンカーは３〜２０個のアミノ酸残基を含み、任意にＩｇＧヒンジ領域の全体又は一部分（好ましくはＩｇＧヒンジ領域のシステイン含有部分）を含有してよい。本発明の二重特異性Ｆｃ領域含有ダイアボディ分子において採用できるリンカーとしては：GGC、GGG、ASTKG（配列番号１９）、DKTHTCPPCP（配列番号２０）、APSSS（配列番号２２）、APSSSPME（配列番号２３）、GGGSGGGSGGG（配列番号２４）、LGGGSG（配列番号２５）、GGGS（配列番号２６）、LEPKSS（配列番号２７）、VEPKSADKTHTCPPCP（配列番号２８）、LEPKSADKTHTCPPCP（配列番号２９）が挙げられる。クローニングを容易にするために、GGG又はGGCの代わりにLEPKSS（配列番号２７）を使用してよい。更に、アミノ酸GGG又はLEPKSS（配列番号２７）の直後にDKTHTCPPCP（配列番号２０）を続けることによって、代替リンカー：GGGDKTHTCPPCP（配列番号２１）；及びLEPKSSDKTHTCPPCP（配列番号３０）を形成してよい。本発明の二重特異性Ｆｃ領域含有分子は、リンカーに加えて又はリンカーに代えて、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３若しくはＩｇＧ４抗体のＩｇＧヒンジ領域等のＩｇＧヒンジ領域、又はその一部分を組み込んでよい。
【０１０４】
Ｂ．好ましいヘテロ二量体促進ドメイン
上述のように、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、２つ以上の異なるポリペプチド鎖の集合（即ちヘテロ二量体化）を伴う。第１及び第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体の形成は、「ヘテロ二量体促進ドメイン」を含めることによって推進できる。ヘテロ二量体促進ドメインは、一方のポリペプチド鎖のＩｇＧのヒンジ領域のドメイン（又はヒンジ領域に由来するポリペプチド、例えばGVEPKSC（配列番号３１）、VEPKSC（配列番号３２）若しくはAEPKSC（配列番号３３））、及び他方のポリペプチド鎖のＣＬドメイン（又はＣＬドメインに由来するポリペプチド、例えばGFNRGEC（配列番号３４）若しくはFNRGEC（配列番号３５））である（米国公開特許第２００７／０００４９０９号）。
【０１０５】
しかしながらより好ましくは、本発明のヘテロ二量体促進ドメインは、反対の極のタンデム反復コイルドメイン、例えば「Ｅコイル」螺旋ドメイン（配列番号３６：EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK）を含み、そのグルタミン酸残基は、ｐＨ７において負の電荷を形成し、またその一方で、ヘテロ二量体促進ドメインのうちのもう一方は、４つのタンデム「Ｋコイル」ドメイン（配列番号３７：KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE）を含み、そのリジン残基は、ｐＨ７において正の電荷を形成する。このような荷電ドメインの存在により、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の連結が促進され、従ってヘテロ二量体化が促進される。別の好ましい実施形態では、配列番号３６の上記４つのタンデム「Ｅコイル」螺旋ドメインのうちの１つが、システイン残基：EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８）を含有するように修飾されている、ヘテロ二量体促進ドメインが利用される。同様に、別の好ましい実施形態では、配列番号３７の上記４つのタンデム「Ｋコイル」螺旋ドメインのうちの１つが、システイン残基：KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９）を含有するように修飾されている、ヘテロ二量体促進ドメインが利用される。
【０１０６】
Ｃ．ポリペプチド鎖の共有結合
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、そのポリペプチド鎖のペアが、その長さに沿って位置決めされた１つ又は複数のシステイン残基を介して互いに対して共有結合して、共有結合分子複合体が生成されるよう、操作される。このようなシステイン残基は、上記ポリペプチドのＶＬドメインとＶＨドメインとを隔てる介在リンカーに導入できる。あるいは、リンカー２又はリンカー３又は別のリンカーがシステイン残基を含有してよい。最も好ましくは、コイル含有ヘテロ二量体促進ドメインの１つ又は複数のコイルドメインが、配列番号３８又は配列番号３９のようなシステイン残基を組み込んだアミノ酸置換を含む。
【０１０７】
Ｄ．好ましいＦｃドメイン
本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のＦｃドメインは、完全なＦｃ領域（例えば完全ＩｇＧ  Ｆｃ領域）、又は完全なＦｃ領域の断片のみを含んでよい。従って、本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のＦｃドメインは、完全Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのうちのある程度若しくは全体及び／若しくはＣＨ３ドメインのうちのある程度若しくは全体を含んでよく、又は（例えば完全Ｆｃ領域のＣＨ２若しくはＣＨ３ドメインに対する１つ若しくは複数の挿入及び／若しくは１つ若しくは複数の欠失を含んでよい）変異型ＣＨ２及び／若しくは変異型ＣＨ３配列を含んでよい。本発明の二重特異性ＦｃダイアボディのＦｃドメインは、非Ｆｃポリペプチド部分を含んでよく、又は自然に発生しない完全Ｆｃ領域の部分を含んでよく、又はＣＨ２及び／若しくはＣＨ３ドメインの自然に発生しない配向を含んでよい（例えば２つのＣＨ２ドメイン若しくは２つのＣＨ３領域、若しくはＮ末端からＣ末端への方向においてＣＨ２ドメインが連結されたＣＨ３ドメイン等）。
【０１０８】
本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のＦｃドメインは、自然発生したＦｃドメインを含んでよいが、このようなＦｃドメインを形成するＣＨ２‐ＣＨ３ドメインが１つ以上の置換を含み、これにより、結果として得られるＦｃドメインが、（野生型Ｆｃ領域が示す結合に比べて）低下した（例えば、このような分子が、自然発生したＦｃ領域のアミノ酸配列を有するＦｃドメインを有する場合に示す結合の、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、若しくは１０％未満）、又は略検出できない、ＦｃγＲＩＡ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）又はＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への結合を示すことが好ましい。このような変化した結合を仲介できるＦｃ変異型及び突然変異形態は、当該技術分野において公知であり、２３４位、２３５位、２６５位、及び２９７位からなる群から選択される１つ以上の位置のアミノ酸置換を含み、これらの番号付与は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスの番号付与である（例えば、参照により本出願に援用される米国特許第５，６２４，８２１号を参照）。一実施形態では、本発明のＦｃ担持分子の第１の及び／又は第３のポリペプチド鎖のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは、置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｑ、及びＮ２９７Ｇのうちのいずれの１つ、２つ、３つ又は４つを含む。あるいは、（野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ領域（配列番号１２）が示す結合及びエフェクタ機能に対して）ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への低下した（若しくは略ゼロの）結合、及び／又は低下したエフェクタ機能を本来的に示す、自然発生したＦｃ領域のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインが利用される。ある具体的実施形態では、本発明のＦｃ担持分子は、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域（配列番号１３）又はＩｇＧ４  Ｆｃ領域（配列番号１５）を含む。ＩｇＧ４  Ｆｃ領域を利用する場合、本発明は、上述のヒンジ領域Ｓ２２８Ｐ置換（例えば配列番号１１を参照）等の、安定化のための突然変異の導入も包含する。
【０１０９】
ある好ましい実施形態では、本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、採用されるＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは、アラニンによる２３４位の置換、及びアラニンによる２３５位の置換を含み、上記番号付与は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである（配列番号４０）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０１１０】
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに関するＦｃ領域の結合親和性を増大させることによって増大させることができる。本明細書において使用される場合、用語「半減期（half-life）」は、投与後の分子の平均生存時間の尺度となる、分子の薬物動態特性を意味する。半減期は、血清中で（即ち循環半減期）又は他の組織中で測定した場合に、分子の既知の量の５０パーセント（５０％）が被検体の身体（例えばヒト患者若しくは他の哺乳類）又はその特定の体腔から排除されるために必要な時間として表すことができる。一般に、半減期の増大は、投与される分子の循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増大につながる。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、変異型Ｆｃ領域を含み、上記変異型Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、これにより上記分子は、（野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて）増大した半減期を有する。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、変異型ＩｇＧ  Ｆｃ領域を含み、上記変異型Ｆｃ領域は、半減期を延長するアミノ酸置換を含む。Ｆｃ担持分子の半減期を増大させることができる多数のアミノ酸置換が、当該技術分野において公知である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号、米国特許第７，０８３，７８４号、米国特許第７，２１７，７９７号、米国特許第８，０８８，３７６号、米国公開特許第２００２／０１４７３１１号、米国公開特許第２００７／０１４８１６４号、国際公開第９８／２３２８９号、国際公開第２００９／０５８４９２号、国際公開第２０１０／０３３２７９号（これらの文献はその全体が参照により本出願に援用される）に記載のアミノ酸置換を参照されたい。増強された半減期を有するＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は：Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｋ２８８Ｄ、Ｔ３０７Ｑ、Ｖ３０８Ｐ、Ａ３７８Ｖ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、Ｈ４３５Ｋ、及びＹ４３６Ｉから選択された２つ以上の置換を含んでよく、上記番号付与は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである。
【０１１２】
特に、採用されるＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは、以下の置換：
（Ａ）Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ；
（Ｂ）Ｍ２５２Ｙ及びＳ２５４Ｔ；
（Ｃ）Ｍ２５２Ｙ及びＴ２５６Ｅ；
（Ｄ）Ｔ２５０Ｑ及びＭ４２８Ｌ；
（Ｅ）Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ａ；
（Ｆ）Ａ３７８Ｖ及びＮ４３４Ａ；
（Ｇ）Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｉ；
（Ｈ）Ｖ３０８Ｐ及びＮ４３４Ａ；又は
（Ｉ）Ｋ２８８Ｄ及びＨ４３５Ｋ
を含んでよく、上記番号付与は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである。
【０１１３】
ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する好ましい配列は、ＩｇＧ１  ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインの変異型である配列番号４１若しくは配列番号４２、又はＩｇＧ４  ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインの変異型である配列番号４３におけるように、三重アミノ酸置換：Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＹＴＥ）を含み、これは血清半減期を大幅に増強する（Dall’Acqua, W.F. et al. (2006) “Properties of Human IgGs Engineered for Enhanced Binding to the Neonatal Fc Receptor (FcRn),” J. Biol. Chem. 281(33):23514-23524）：
配列番号４１：
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４２：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４３：
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS 
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSLGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０１１４】
本発明はまた、変化したエフェクタ機能、変化した血清半減期、変化した安定性、細胞酵素に対する変化した感受性、又はＮＫ依存若しくはマクロファージ依存アッセイにおいてアッセイされる変化したエフェクタ機能等を示す、変異型Ｆｃドメインを含むＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子も包含する。変化したエフェクタ機能として表されるＦｃドメイン修飾は当該技術分野において公知であり、活性化型受容体に対する結合を増大させる修飾（例えばＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））、及び阻害型受容体に対する結合を低下させる修飾（例えばＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ））が含まれる（例えばStavenhagen, J.B. et al. (2007) “Fc Optimization Of Therapeutic Antibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And Controls Tumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors,” Cancer Res. 57(18):8882-8890を参照）。ＣＤ３２Ｂへの結合が低下した、及び／又はＣＤ１６Ａへの結合が増大した、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの例示的な変異型は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ又はＰ２９６Ｌ置換を含有する。これらのアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン内にいずれの組み合わせで存在してよい。一実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異型は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ及びＹ３００Ｌ置換を含有し、上記番号付与は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである。別の実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異型は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ２９６Ｌ置換を含有し、上記番号付与は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスのものである。
【０１１５】
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインは、配列において同一である必要はなく、有利には２つのＣＨ２‐ＣＨ３担持ポリペプチド鎖間のヘテロ二量体化を促進するために修飾される。例えば、ＣＨ２又はＣＨ３ドメインにアミノ酸置換（好ましくは「ノブ（knob）」を形成する嵩高な側鎖基、例えばトリプトファンを含むアミノ酸による置換）を導入して、立体障害により、同様に変異させたドメインとの相互作用を防止し、上記変化させたドメインを、相補的な又は適応した変異（例えばグリシンによる置換）を施されたドメイン、即ち「ホール（hole）」対合させることができる。このような一連の突然変異は、上記二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディを含むポリペプチドのいずれのペアに施すことができ、更に上記ペアのポリペプチド鎖のいずれの部分に施すことができる。ホモ二量体化を抑えてヘテロ二量体化を促進するためのタンパク質加工の方法は、特に免疫グロブリン様分子の加工に関して当該技術分野で公知であり、本明細書に包含される（例えばRidgway et al. (1996) “‘Knobs-Into-Holes’ Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization,” Protein Engr. 9:617-621; Atwell et al. (1997) “Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library,” J. Mol. Biol. 270: 26-35;及びXie et al. (2005) “A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis,” J. Immunol. Methods 296:95-101を参照（これらの文書はそれぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される））。一実施形態では、ノブは第１のポリペプチド鎖のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに加工され、ホールは、第３のポリペプチド鎖のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに加工される。従ってノブは、第１のポリペプチド鎖の２つの分子がそのＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインを介してホモ二量体化するのを防止する役割を果たすことになる。この実施形態の第３のポリペプチド鎖は好ましくは「ホール」置換基を含有するため、これは、第１のポリペプチド鎖とヘテロ二量体化し、かつそれ自体とホモ二量体化する能力を有することになる（しかしながらこのような二量体化は、エピトープ結合部位を有する分子を形成しない）。好ましいノブは、天然ＩｇＧ  Ｆｃドメインを修飾して修飾基Ｔ３６６Ｗを含有させることによって生成される。好ましいホールは、天然ＩｇＧ  Ｆｃドメインを修飾して修飾基Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含有させることによって生成される。第３のポリペプチド鎖ホモ二量体を、第１及び第３のポリペプチド鎖のヘテロ二量体を含む最終的な二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディから精製するのを補助するために、好ましくは、第３のポリペプチド鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインのタンパク質Ａ結合部位を、位置４３５（Ｈ４３５Ｒ）におけるアミノ酸置換によって変異させる。このようにして、第３のポリペプチド鎖ホモ二量体はタンパク質Ａに結合せず、その一方で適切に集合した二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディは、第１のポリペプチド鎖のタンパク質Ａ結合部位を介してタンパク質Ａに結合する能力を有したままとなる。
【０１１６】
配列番号４４、配列番号４５及び配列番号４６は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子において使用できる「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する例示的な好ましい配列を提供する：
配列番号４４：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４５：
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS 
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSLGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４６：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０１１７】
配列番号４７、配列番号４８及び配列番号４９は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子において使用できる「ホール担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する例示的な好ましい配列を提供する：
配列番号４７：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNRYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４８：
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS 
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE 
ALHNRYTQKS LSLSLGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
配列番号４９：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD 
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA 
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE 
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE 
ALHNRYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
【０１１８】
上述のように、配列番号４５及び４８のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインはＩｇＧ４ドメインであり、配列番号４４、４６、４７及び４９のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインはＩｇＧ１ドメインである。配列番号４４、４６、４７及び４９は、アラニンによる２３４位の置換及びアラニンによる２３５位の置換を含み、従って、（野生型Ｆｃ領域（配列番号１２）が示す結合と比べて）ＦｃγＲＩＡ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）又はＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）への結合が低下した（又は結合を実質的に示さない）Ｆｃドメインを形成する。更に、本発明は具体的には、上述のＣ末端リシン残基を有しないＣＤ１３７×ＴＡ結合分子構造を包含する。
【０１１９】
上述の実施形態では、第１のポリペプチド鎖が、配列番号４４のもの等の「ノブ担持」ＣＨ２‐ＣＨ３配列を有する。しかしながら、理解されるように、第１のポリペプチド鎖中に「ホール担持」ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（例えば配列番号４７）を採用でき、この場合「ノブ担持」ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（例えば配列番号４４）は、第３のポリペプチド鎖中に採用される。
【０１２０】
Ｅ．アルブミン結合ドメイン
国際公開第２０１２／０１８６８７号に開示されているように、ダイアボディのインビボ薬物動態特性を改善するために、ダイアボディを、ダイアボディの末端のうちの１つ又は複数に血清結合タンパク質のポリペプチド部分を含有するように修飾してよい。このような考察は、本発明の三重特異性結合分子にも適用可能である。最も好ましくは、血清結合タンパク質のポリペプチド部分を、本発明の三重特異性結合分子に組み込むことが望ましい場合、このようなポリペプチド部分は、三重特異性結合分子のポリペプチド鎖のうちの１つのＣ末端に配置されることになる。
【０１２１】
アルブミンは、血漿中に最も豊富なタンパク質であり、ヒトにおいて１９日の半減期を有する。アルブミンは複数の小さな分子結合部位を有し、これによりアルブミンは他のタンパク質に非共有結合して血清半減期を延長できる。連鎖球菌株Ｇ１４８のタンパク質Ｇのアルブミン結合ドメイン３（ＡＢＤ３）は、安定した３重螺旋束を形成する４６個のアミノ酸残基からなり、広範なアルブミン結合特異性を有する（Johansson, M.U. et al. (2002) “Structure, Specificity, And Mode Of Interaction For Bacterial Albumin-Binding Modules,” J. Biol. Chem. 277(10):8114-8120）。従って、ダイアボディのインビボ薬物動態特性を改善するための、血清結合タンパク質の特に好ましいポリペプチド部分は、連鎖球菌タンパク質Ｇからのアルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）、及びより好ましくは、連鎖球菌株Ｇ１４８のタンパク質Ｇのアルブミン結合ドメイン３（ＡＢＤ３）（配列番号５０）：LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKS AEGVKALIDE ILAALPである。
【０１２２】
国際公開第２０１２／１６２０６８号（参照により本出願に援用される）に開示されているように、配列番号５０の「脱免疫化（deimmunized）」変異型は、ＭＨＣクラスＩＩ結合を減衰させる又は排除する能力を有する。組み合わさった突然変異の結果に基づいて、以下の置換の組み合わせが、このような脱免疫化アルブミン結合ドメインを形成するための好ましい置換であると考えられる：６６Ｓ／７０Ｓ＋７１Ａ；６６Ｓ／７０Ｓ＋７９Ａ；６４Ａ／６５Ａ／７１Ａ＋６６Ｓ；６４Ａ／６５Ａ／７１Ａ＋６６Ｄ；６４Ａ／６５Ａ／７１Ａ＋６６Ｅ；６４Ａ／６５Ａ／７９Ａ＋６６Ｓ；６４Ａ／６５Ａ／７９Ａ＋６６Ｄ；６４Ａ／６５Ａ／７９Ａ＋６６Ｅ。修飾Ｌ６４Ａ、Ｉ６５Ａ及びＤ７９Ａ、又は修飾Ｎ６６Ｓ、Ｔ７０Ｓ及びＤ７９Ａを有する変異型ＡＢＤ。配列番号５１、５２又は５３のアミノ酸配列を有する変異型脱免疫化ＡＢＤは特に好ましい。というのは、このような脱免疫化アルブミン結合ドメインは、減衰したＭＨＣクラスＩＩ結合を提供しながら、略野生型の結合を示すためである：
配列番号５１：
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLID66NAKS70 A71EGVKALIDE ILAALP
配列番号５２：
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNA64A65NNAKT VEGVKALIA79E ILAALP
配列番号５３：
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIS66NAKS70 VEGVKALIA79E ILAALP
【０１２３】
このようなアルブミン結合ドメインは、本発明の三重特異性結合分子のポリペプチド鎖のうちのいずれに組み込んでよいが、このようなドメインを、第１又は第３のポリペプチド鎖のＥコイル（又はＫコイル）ドメインに対して、（Ｅコイル（又はＫコイル）ドメインと（好ましくは脱免疫化アルブミン結合ドメインである）アルブミン結合ドメインとの間に介在するリンカーを介して）Ｃ末端に位置決めすることが好ましい。このようなリンカーに関する好ましい配列は：配列番号２６：GGGSである。
【０１２４】
Ｆ．好ましい腫瘍抗原（ＴＡ）及び例示的な可変ドメイン
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、腫瘍抗原のエピトープに対して特異的な少なくとも１つのエピトープ結合部位を含む。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が結合できる例示的な腫瘍抗原（「ＴＡ」）としては、限定するものではないが：結腸癌抗原１９．９；癌胎児性タンパク質５Ｔ４；胃癌ムチン抗原４．２；結腸直腸癌抗原Ａ３３（Almqvist, Y. 2006, Nucl Med Biol. Nov;33(8):991-998）；ＡＤＡＭ‐９（米国公開特許第２００６／０１７２３５０号；国際公開第０６／０８４０７５号）；ＡＦＰ癌胎児性抗原‐アルファ‐フェトプロテイン（Malaguarnera, G. et al. (2010) "Serum markers of hepatocellular carcinoma," Dig. Dis. Sci. 55(10):2744-2755）；ＡＬＣＡＭ（国際公開第０３／０９３４４３号）；ＢＡＧＥ（Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84）；ベータ‐カテニン（Prange W. et al. 2003 J Pathol. 201(2):250-9）；ＣＡ１２５（Bast, R.C. Jr. et al. 2005 Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81）；カルボキシペプチダーゼＭ（米国公開特許第２００６／０１６６２９１号）；Ｂ１（Egloff, A.M. et al. 2006, Cancer Res. 66(l):6-9）；ＣＤ５（Calin, G.A. et al. 2006 Semin Oncol. 33(2): 167-73）；ＣＤ１９（Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4): 139-48）；ＣＤ２０（Thomas, D.A. et al. 2006 Hematol Oncol Clin North Am. 20(5): 1125-36）；ＣＤ２０（Cang, S. et al. (2012) "Novel CD20 Monoclonal Antibodies For Lymphoma Therapy " J. Hematol. Oncol. 5 :64 pp.1-9）；ＣＤ２２（Kreitman, R.J. 2006 AAPS J. 18;8(3):E532-51）；ＣＤ２３（Rosati, S. et al. 2005 Curr Top Microbiol Immunol. 5;294:91-107）；ＣＤ２５（Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4): 139-48）；ＣＤ２７（Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9): 1234-40）；ＣＤ２８（Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9): 1234-40）；ＣＤ３０（Muta, H. et al. (2013) "CD10: From Basic Research To Cancer Therapy," Immunol. Res. 57(1-3): 151-158）；ＣＤ３３（Walter, R.B. et al. (2012) "Acute myeloid leukemia stem cells and CD33-targeted immunotherapy," Blood 119(26):6198-6208）；ＣＤ３６（Ge, Y. 2005 Lab Hematol. ll(l):31-7）；ＣＤ４０／ＣＤ１５４（Messmer, D. et al. 2005 Ann N Y Acad Sci. 1062:51-60）；ＣＤ４５（Jurcic, J.G. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):339-46）；ＣＤ５６（Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9): 1234-40）；ＣＤ４６（米国特許第７，１４８，０３８号；国際公開第０３／０３２８１４号；Russell, S. et al. (2004) "CD46: A Complement Regulator And Pathogen Receptor That Mediates Links Between Innate And Acquired Immune Function " Tissue Antigens 64(2): 111-118）；ＣＤ５２（Hoelzer, D. et al. (2013) "Targeted therapy with monoclonal antibodies in acute lymphoblastic leukemia," Curr. Opin. Oncol. 25(6):701-706）；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ（Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4): 139-48；Chu, P.G. et al. 2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol. 9(2):97-106）；ＣＤ１０３（Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4): 139-48）；ＣＤ１２３（Taussig, D. et al. (2005) “Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia,” Blood 106:4086-4092）；ＣＤ３１７（Palma, G. et al. (2012) "Plasmacytoids Dendritic Cells Are A Therapeutic Target In Anticancer Immunity " Biochim. Biophys. Acta. 1826(2):407-414）；ＣＤＫ４（Lee, Y.M. et al. 2006 Cell Cycle 5(18):2110-4）；ＣＥＡ（癌胎児性抗原；Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil. 34(7-8):638-46；Tellez-Avila, F.I. et al. 2005 Rev Invest Clin. 57(6):814-9）；ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６（国際公開第２０１１／０３４６６０号；Zheng, C. et al. (2011) "A Novel Anti-CEACAM5 Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity " PLoS One 6(6):e21146, pp. 1-11）；ＣＯ１７-１Ａ（Adkins, J.C. et al. (1998) "Edrecolomab (Monoclonal Antibody 17-1 A)," Drugs 56(4):619-626）；ＣＯ‐４３（血液型Ｌｅｂ）及びＣＯ‐５１４（血液型Ｌｅａ）（Garratty, G. (1995) "Blood Group Antigens As Tumor Markers, Parasitic/Bacterial/Viral Receptors, And Their Association With Immunologically Important Proteins" Immunol. Invest. 24(l-2):213-232；ＣＴＬＡ‐１及びＣＴＬＡ‐４（Peggs, K.S. et al. 2006 Curr Opin Immunol. 18(2):206-13）；サイトケラチン８（国際公開第０３／０２４１９１号）；抗原Ｄ１．１（Dao, T. et al. (2009) Identification Of A Human Cyclin Dl -Derived Peptide That Induces Human Cytotoxic CD4 T Cells," PLoS One. 4(8):e6730）；ＤＲ５（Abdulghani, J. et al. (2010) "TRAIL Receptor Signaling And Therapeutics," Expert Opin. Ther. Targets 14(10): 1091-1108; Andera, L. (2009) "Signaling Activated By The Death Receptors Of The TNFR Family," Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech. Repub. 153(3): 173-180; Carlo-Stella, C. et al. (2007) "Targeting TRAIL Agonistic Receptors for Cancer Therapy," Clin, Cancer 13(8):2313-2317; Chaudhari, B.R. et al. (2006) "Following the TRAIL to Apoptosis," Immunologic Res. 35(3):249-262）；Ｅ１シリーズ（血液型Ｂ）；ＥＧＦ‐Ｒ（表皮成長因子受容体；Adenis, A. et al. 2003 Bull Cancer. 90 Spec No:S228-32）；エフリン受容体（及び特にＥｐｈＡ２（米国特許第７，５６９，６７２号；国際公開第０６／０８４２２６号）；Ｅｒｂ（ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；ＥｒｂＢ４；Zhou, H. et al. 2002 Oncogene 21(57):8732-40；Rimon, E. et al. 2004 Int J Oncol. 24(5): 1325-38）；肺腺癌抗原Ｆ３（Greulich, H. et al. (2012) "Functional analysis of receptor tyrosine kinase mutations in lung cancer identifies oncogenic extracellular domain mutations of ERBB2," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 109(36): 14476-14481）；抗原ＦＣ１０．２（Loveless, W. et al. (1990) "Developmental Patterning Of The Carbohydrate Antigen FC10.2 During Early Embryogenesis In The Chick " Development 108(1):97-106）；ＧＡＧＥ（ＧＡＧＥ‐１；ＧＡＧＥ‐２；Akcakanat, A. et al. 2006 Int J Cancer. 118(1): 123-8）；
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【０１２５】
このような腫瘍抗原を認識する抗体は、当該技術分野において公知であり、又は国際公開第２００２／０１４８７０号に記載されている方法を含む公知の方法を用いて生成できる。腫瘍抗原に結合できるＶＬ及びＶＨドメインを含み、従ってその配列又はポリペプチド鎖を本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構成に採用できる、例示的な抗体を、表１に列挙する。複数の腫瘍抗原に結合する抗体に関する例示的なＶＨ及びＶＬドメインを以下に提示する。
【０１２６】
【表１】
2020508334.tif 000003
2020508334.tif 000004
2020508334.tif 000005
2020508334.tif 000006
2020508334.tif 000007
【０１２７】
１．ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する抗体
ＨＥＲ２／ｎｅｕは、化学的に処置されたラットの神経芽細胞腫からの形質転換遺伝子の産生として元来同定された、１８５ｋＤａ受容体である。ＨＥＲ２／ｎｅｕは、複数のヒト癌腫及び哺乳類の発生において機能するため、広く研究されてきた（Hynes et al. (1994) “The Biology of erbB-2/neu/HER-2 and its Role in Cancer,” Biochim. Biophys. Acta 1198:165-184; Dougall et al. (1994) “The neu-Oncogene: Signal Transduction Pathways, Transformation Mechanisms and Evolving Therapies,” Oncogene 9:2109-2123; Lee et al. (1995) “Requirement for Neuregulin Receptor erbB2 in Neural and Cardiac Development,” Nature 378:394-398）。
【０１２８】
いずれの抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のエピトープ結合部位を本発明に従って使用してよく、本発明の原理は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ腫瘍抗原に関して説明される。ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する例示的な抗体としては、「マルゲツキシマブ」、「トラスツズマブ」及び「ペルツズマブ」が挙げられる。マルゲツキシマブ（ＭＧＡＨ２２としても公知；ＣＡＳ登録番号：１３５０６２４‐７５‐７、例えば米国特許第８，８０２，０９３号を参照）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合してＡＤＣＣ活性の強化を仲介する、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体である。トラスツズマブ（ｒｈｕＭＡＢ４Ｄ５としても公知、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）として市販；ＣＡＳ登録番号：１８０２８８‐６９‐１；米国特許第５，８２１，３３７号を参照）は、ＩｇＧ１／κ定常領域を有する、抗体４Ｄ５のヒト化バージョンである。ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡＢ２Ｃ４としても公知、Ｐｅｒｊｅｔａ（商標）として市販；ＣＡＳ登録番号：３８０６１０‐２７‐５；例えば国際公開第２００１／０００２４５号を参照）は、ＩｇＧ１／κ定常領域を有する、抗体２Ｃ４のヒト化バージョンである。更なる抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体も提供される。
【０１２９】
（ａ）マルゲツキシマブ
マルゲツキシマブのＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５４）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIHWVKQR PEQGLEWIGR
IYPTNGYTRY DPKFQDKATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGASVTVSS
である。
【０１３０】
マルゲツキシマブのＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５５）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVN TAVAWYQQKP GHSPKLLIYS
ASFRYTGVPD RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYCQQ HYTTPPTFGG 
GTKVEIK
である。
【０１３１】
マルゲツキシマブの完全重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、当該技術分野において公知である（例えばWHO Drug Information、2014、Recommended INN: List 71、28(1):93-94を参照）。
【０１３２】
（ｂ）トラスツズマブ
トラスツズマブのＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DTYIHWVRQA PGKGLEWVAR
IYPTNGYTRY ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSRWG
GDGFYAMDYW GQGTLVTVSS
である。
【０１３３】
トラスツズマブのＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５７）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVN TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS 
ASFLYSGVPS RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPPTFGQ
GTKVEIK
である。
【０１３４】
（ｃ）ペルツズマブ
ペルツズマブのＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５８）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT DYTMDWVRQA PGKGLEWVAD
VNPNSGGSIY NQRFKGRFTL SVDRSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARNL
GPSFYFDYWG QGTLVTVSS
である。
【０１３５】
ペルツズマブのＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号５９）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDVS IGVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YYIYPYTFGQ 
GTKVEIK
である。
【０１３６】
（ｄ）ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１
抗体ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１は、マルゲツキシマブ、トラスツズマブ及びペルツズマブによって認識されるエピトープから区別される、ＨＥＲ２／ｎｅｕのエピトープに結合する、マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体である。ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン（本明細書ではＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨと呼ばれる）のアミノ酸配列は、（配列番号６０）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLQESGPE LKKPGETVKI SCKASGYTFT NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRFAF SLGTSASTAF LQINNLKNED TATYFCARDD
GYGNRVSYWG QGTLVTVSA
である。
【０１３７】
ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨのＣＤＲHのアミノ酸配列は：
ＣＤＲH１（配列番号１７７）：NYGMN
ＣＤＲH２（配列番号１７８）：WINTNIGEPTYTEEFKG
ＣＤＲH３（配列番号１７９）：DDGYGNRVSY
である。
【０１３８】
ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン（本明細書中ではＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬと呼ばれる）のアミノ酸配列は、（配列番号６１）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DILMTQSPLS MYTSLGERVT ITCKASQDIN SYLSWFQQKP GKSPKTLIYR 
ANRLVDGVPS RFSGSGSGQD YSLTISSLEY EDMGIYYCLQ HDEFPWTFGG 
GTKLEIK
である。
【０１３９】
ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬのＣＤＲLのアミノ酸配列は：
ＣＤＲL１（配列番号１８０）：KASQDINSYLS
ＣＤＲL２（配列番号１８１）：RANRLVD
ＣＤＲL３（配列番号１８２）：LQHDEFPWT
である。
【０１４０】
（ｅ）ヒト化ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１
抗体ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１をヒト化して、抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１を形成した。このようなヒト化抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列（ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＨ）は、（配列番号６２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDX1
X2YGNRVSYWG QGTLVTVSS
であり、ここでＸ1はＤ又はＥであり、Ｘ2はＧ又はＩである。
【０１４１】
このようなヒト化抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ）は、（配列番号６３）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIX3 X4YLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLX5X6GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIK
であり、ここでＸ3はＮ又はＳであり；Ｘ4はＳ、Ｔ又はＮであり；Ｘ5はＶ又はＱであり；Ｘ6はＤ、Ｅ又はＳである。
【０１４２】
３つの変異型ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＨドメイン：ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２、及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３を単離した。このような変異型ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨドメインのアミノ酸配列を以下に提示する。
【０１４３】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１のアミノ酸配列は、（配列番号６４）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲH３の第２及び第３の残基はそれぞれＤ及びＧであることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD
GYGNRVSYWG QGTLVTVSS
である。
【０１４４】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２のアミノ酸配列は、（配列番号６５）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲH３の第２及び第３の残基はそれぞれＥ及びＧであることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDE
GYGNRVSYWG QGTLVTVSS
である。
【０１４５】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３のアミノ酸配列は、（配列番号６６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲH３の第２及び第３の残基はそれぞれＤ及びＩであることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD
IYGNRVSYWG QGTLVTVSS
である。
【０１４６】
よって、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３のＣＤＲH１のアミノ酸配列は同一であり（NYGMN；配列番号１７７）、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３のＣＤＲH２のアミノ酸配列は同一である（配列番号１７８）。しかしながら、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３のＣＤＲH３のアミノ酸配列は異なる：
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１  ＣＤＲH３（配列番号１８３）：DDGYGNRVSY
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２  ＣＤＲH３（配列番号１８４）：DEGYGNRVSY
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３  ＣＤＲH３（配列番号１８５）：DDIYGNRVSY
【０１４７】
３つの変異型ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＬドメイン：ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２、及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３を単離した。このような変異型ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬドメインのアミノ酸配列を以下に提示する。
【０１４８】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１のアミノ酸配列は、（配列番号６７）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；ＣＤＲL１の第７及び第８の残基はそれぞれＮ及びＳであること、並びにＣＤＲL２の第６及び第７の残基はそれぞれＶ及びＤであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIN SYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLVDGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０１４９】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２のアミノ酸配列は、（配列番号６８）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；ＣＤＲL１の第７及び第８の残基はそれぞれＮ及びＴであること、並びにＣＤＲL２の第６及び第７の残基はそれぞれＶ及びＥであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIN TYLSWFQQKP GKAPKTLIYR
ANRLVEGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０１５０】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３のアミノ酸配列は、（配列番号６９）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；ＣＤＲL１の第７及び第８の残基はそれぞれＳ及びＮであること、並びにＣＤＲL２の第６及び第７の残基はそれぞれＱ及びＳであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０１５１】
よって、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３のＣＤＲL３のアミノ酸配列は同一である（LQHDEFPWT；配列番号１８２）。しかしながら、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３のＣＤＲL１及びＣＤＲL２のアミノ酸配列は異なる：
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１  ＣＤＲL１（配列番号１８６）：KASQDINSYLS
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２  ＣＤＲL１（配列番号１８７）：KASQDINTYLS
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３  ＣＤＲL１（配列番号１８８）：KASQDISNYLS
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１  ＣＤＲL２（配列番号１８９）：RANRLVD
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２  ＣＤＲL２（配列番号１９０）：RANRLVE
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３  ＣＤＲL２（配列番号１９１）：RANRLQS
【０１５２】
上で提示されているｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＨ及び／又はＶＬドメインの１つ以上の一般的な配列に包含されるいずれのものを含む、このようなヒト化ＶＨ及びＶＬ  ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１ドメインのうちのいずれを用いて、Ｈｅｒ２／ｎｅｕに結合できる抗体、ダイアボディ又は結合分子を形成してよい。
【０１５３】
（ｆ）他の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体
上で同定された好ましい抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子に加えて、本発明は、以下の抗Ｈｅｒ‐２結合分子：１．４４．１；１．１４０；１．４３；１．１４．１；１．１００．１；１．９６；１．１８．１；１．２０；１．３９；１．２４；及び１．７１．３（米国特許第８，３５０，０１１号；米国特許第８，８５８，９４２号；及び国際公開第２００８／０１９２９０号）；Ｆ５及びＣ１（米国特許第７，８９２，５５４号；米国特許第８，１７３，４２４号；米国特許第８，９７４，７９２号；及び国際公開第９９／５５３６７号）；並びに米国公開特許第２０１１／００９７３２３号、米国公開特許第２０１３／０１７１１４号、米国公開特許第２０１４／０３２８８３６号、米国公開特許第２０１６／０１３０３６０号、米国公開特許第２０１６／０２５７７６１号、及び国際公開第２０１１／１４７９８６号の抗Ｈｅｒ‐２結合分子のうちのいずれの使用を考える（これらの公報は全て、その抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子の開示に関して、参照により本出願に援用される）。
【０１５４】
本発明は具体的には：マルゲツキシマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１、又は本明細書で提供されている他の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て、並びに／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む；更に好ましくは、このような抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体のＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て、並びに／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを有する、ＣＤ１３７×ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子を含み、またこのようなＣＤ１３７×ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子を包含する。
【０１５５】
４．ＥｐｈＡ２に結合する抗体
受容体チロシンキナーゼ、エフリンタイプＡ受容体２（ＥｐｈＡ２）は通常、成体の上皮組織の細胞間接触部位に発現するが、最近の研究により、ＥｐｈＡ２が様々なタイプの上皮癌においても、転移性病変において観察される最も高いレベルのＥｐｈＡ２発現で過剰発現することが分かった。高発現レベルのＥｐｈＡ２は、前立腺癌、乳癌、非小細胞肺癌及び黒色腫を含む、広範な癌及び多数の腫瘍細胞株において確認されている（Xu, J. et al. (2014) “High EphA2 Protein Expression In Renal Cell Carcinoma Is Associated With A Poor Disease Outcome,” Oncol. Lett. Aug 2014; 8(2): 687-692; Miao, B. et al. (2014) “EphA2 is a Mediator of Vemurafenib Resistance and a Novel Therapeutic Target in Melanoma,” Cancer Discov. pii: CD-14-0295）。ＥｐｈＡ２は単なる癌のマーカーとは思われないが、多数のヒト癌において持続的に過剰発現し、機能的に変化するようである（Chen, P. et al. (2014) “EphA2 Enhances The Proliferation And Invasion Ability Of LnCap Prostate Cancer Cells,” Oncol. Lett. 8(1):41-46）。いずれの抗ＥｐｈＡ２抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。以下に提示されるのは、いくつかの例示的なマウス抗ＥｐｈＡ２抗体であり、このような抗体のヒト化誘導体が特に好ましい。
【０１５６】
（ａ）ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１
抗体ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１は、マウス抗ＥｐｈＡ２モノクローナル抗体である。ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１２８）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
QVQLKESGPG LVAPSQSLSI TCTVSGFSLS RYSVHWVRQP PGKGLEWLGM
IWGGGSTDYN SALKSRLSIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT AMYYCARKHG
NYYTMDYWGQ GTSVTVSS
である。
【０１５７】
ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１２９）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRIT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY 
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GYTLYTFGGG 
TKLEIK
である。
【０１５８】
（ｂ）ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２
抗体ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２は、マウス抗ＥｐｈＡ２モノクローナル抗体である。ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３０）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
QIQLVQSGPE LKKPGETVKI SCKASGFTFT NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW
INTYIGEPTY ADDFKGRFVF SLETSASTAY LQINNLKNED MATYFCAREL
GPYYFDYWGQ GTTLTVSS
である。
【０１５９】
ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３１）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSSGNTYLHW YLQKPGQSPK 
LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVP 
TFGSGTKLEI K
である。
【０１６０】
（ｃ）ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３
抗体ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３は、マウス抗ＥｐｈＡ２モノクローナル抗体である。ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３２）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
EVQLVESGGG SVKPGGSLKL SCAASGFTFT DHYMYWVRQT PEKRLEWVAT
ISDGGSFTSY PDSVKGRFTI SRDIAKNNLY LQMSSLKSED TAMYYCTRDE
SDRPFPYWGQ GTLVTVSS
である。
【０１６１】
ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３３）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DIVLTQSHRS MSTSVGDRVN ITCKASQDVT TAVAWYQQKP GQSPKLLIFW
ASTRHAGVPD RFTGSGSGTD FTLTISSVQA GDLALYYCQQ HYSTPYTFGG 
GTKLEIK
である。
【０１６２】
（ｄ）他のＥｐｈＡ２抗体
上で同定した抗ＥｐｈＡ２抗体に加えて、本発明は、以下の抗ＥｐｈＡ２抗体：ＳＰＬ１、ＬＵＣＡ１９、ＳＧ５、又はＬＵＣＡ４０（国際公開第２００６／０８４２２６号を参照）；Ｂ１３（米国特許第７，１０１，９７６号を参照）；Ｄ７（米国特許第７，１９２，６９８号を参照）；Ｂ‐２３３、及びＥＡ２（国際公開第２００３／０９４８５９号を参照）のうちのいずれの使用を考える。
【０１６３】
本発明は具体的には、抗ＥｐｈＡ２モノクローナル抗体ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１、ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２及びＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３の、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲＬのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×ＥｐｈＡ２結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０１６４】
３．５Ｔ４に結合する抗体
癌胎児性タンパク質５Ｔ４は、腎臓癌、結腸癌、前立腺癌、肺癌を含む多くの癌腫の細胞膜上、及び急性リンパ芽球性白血病において発現する、腫瘍関連タンパク質である（Boghaert, E.R. et al. (2008) “The Oncofetal Protein, 5T4, Is A Suitable Target For Antibody-Guided Anti-Cancer Chemotherapy With Calicheamicin,” Int. J. Oncol. 32(1):221-234; Eisen, T. et al. (2014) “Naptumomab Estafenatox: Targeted Immunotherapy with a Novel Immunotoxin,” Curr. Oncol. Rep. 16:370, pp. 1-6を参照）。いずれの抗５Ｔ４抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。以下に提示されるのは、２つの例示的な抗５Ｔ４抗体「５Ｔ４  ＭＡＢ‐１」及び「５Ｔ４  ＭＡＢ‐２」である。更なる抗５Ｔ４抗体が先行技術において記述されている（例えば米国特許第８，０８４，２４９号；米国特許第８，４０９，５７７号；米国特許第８，７５９，４９５号；米国特許第８，４０９，５７７号；国際公開第２０１３／０４１６８７号；国際公開第２０１４／１３７９３１号；国際公開第２０１６／０２２９３９号を参照）。
【０１６５】
（ａ）５Ｔ４  ＭＡＢ‐１
５Ｔ４  ＭＡＢ‐１のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３４）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SFWMHWVRQA PGQGLEWMGR 
IDPNRGGTEY NEKAKSRVTM TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAGGN
PYYPMDYWGQ GTTVTVSS
である。
【０１６６】
５Ｔ４  ＭＡＢ‐１のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３５）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS NYLAWFQQKP GKAPKSLIYR
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCLQ YDDFPWTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０１６７】
（ｂ）５Ｔ４  ＭＡＢ‐２
５Ｔ４  ＭＡＢ‐２のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３６）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）:
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYTFT SYWITWVKQR PGQGLEWIGD 
IYPGSGRANY NEKFKSKATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYNCARYG
PLFTTVVDPN SYAMDYWGQG TSVTVSS
である。
【０１６８】
５Ｔ４  ＭＡＢ‐２のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３７）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）:
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSIV YSNGNTYLEW YLQKPGQSPK 
LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYCFQGSHVP 
FTFGSGTKLE IK
である。
【０１６９】
本発明は具体的には、抗５Ｔ４モノクローナル抗体５Ｔ４  ＭＡＢ‐１若しくは５Ｔ４  ＭＡＢ‐２の、又は国際公開第２００７／１０６７４４号；国際公開第２０１３／０４１６８７号若しくは国際公開第２０１５／１８４２０３号で提供されている抗５Ｔ４抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲＬのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲＨのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×５Ｔ４結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０１７０】
４．Ｂ７‐Ｈ３に結合する抗体
Ｂ７‐Ｈ３は、多種多様な固形腫瘍に過剰発現する癌抗原であり、免疫調節に関与する分子のＢ７ファミリーのメンバーである（米国特許第８，８０２，０９１号；米国特許第２０１４／０３２８７５０号；米国特許第２０１３／０１４９２３６号；Loo, D. et al. (2012) “Development Of An Fc-Enhanced Anti-B7-H3 Monoclonal Antibody With Potent Antitumor Activity,” Clin. Cancer Res. 18(14):3834-3845を参照）。特に、ヒト悪性腫瘍細胞（例えば神経芽細胞腫並びに胃癌、卵巣癌及び非小細胞肺癌の腫瘍細胞）が、Ｂ７‐Ｈ３タンパク質の発現の顕著な増大を示すこと、並びにこの発現の増大が、疾患の重篤度の上昇に関連することが、複数の独立した研究によって示されており（Zang, X. et al. (2007) “The B7 Family And Cancer Therapy: Costimulation And Coinhibition,” Clin. Cancer Res. 13:5271-5279）、これは、Ｂ７‐Ｈ３が免疫回避経路として腫瘍に利用されることを示唆している（Hofmeyer, K. et al. (2008) “The Contrasting Role Of B7-H3,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 105(30):10277-10278）。
【０１７１】
いずれの抗Ｂ７‐Ｈ３抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。ヒトＢ７‐Ｈ３に結合する１つの例示的な抗体は、「エノブリツズマブ（Enoblituzumab）」である。エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１としても公知；ＣＡＳ登録番号１３５３４８５‐３８‐７；例えば米国特許第８，８０２，０９１号を参照）は、Ｂ７‐Ｈ３に結合して強化されたＡＤＣＣ活性を仲介する、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体である。更なる例示的な抗Ｂ７‐Ｈ３抗体も提示される。
【０１７２】
（ａ）エノブリツズマブ
エノブリツズマブのＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３８）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS  
である。
【０１７３】
エノブリツズマブのＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１３９）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ 
GTKLEIK 
である。
【０１７４】
（ｂ）ＢＲＣＡ６９Ｄ
抗体ＢＲＣＡ６９Ｄは、マウス抗Ｂ７‐Ｈ３モノクローナル抗体である。ＢＲＣＡ６９ＤのＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号１４０）を以下に示す（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）。
QVQLQQSGAE LARPGASVKL SCKASGYTFT SYWMQWVKQR PGQGLEWIGT 
IYPGDGDTRY TQKFKGKATL TADKSSSTAY MQLSSLASED SAVYYCARRG 
IPRLWYFDVW GAGTTVTVSS
【０１７５】
ＢＲＣＡ６９ＤのＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号１４１）を以下に示す（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）。
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIDNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPPTFGG 
GTKLEIK
【０１７６】
（ｃ）ヒト化ＢＲＣＡ６９Ｄ
抗体ＢＲＣＡ６９Ｄをヒト化して、２つの変異型ＶＨドメイン、ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ１及びｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ２；並びに２つの変異型ＶＬドメインｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ１及びｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ２を得た。これらをＶＨ／ＶＬのいずれの組み合わせで用いて、機能性ヒト化結合ドメインを得ることができる。このようなヒト化変異型のアミノ酸配列を以下に提供する。
【０１７７】
ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ１のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMQWVRQA PGQGLEWMGT
IYPGDGDTRY TQKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARRG
IPRLWYFDVW GQGTTVTVSS 
である。
【０１７８】
ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ２のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４３）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMQWVRQA PGQGLEWMGT
IYPGGGDTRY TQKFQGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARRG
IPRLWYFDVW GQGTTVTVSS
である。
【０１７９】
ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ１のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４４）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP GKAPKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ GNTLPPTFGG 
GTKLEIK
である。
【０１８０】
ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ２のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４５）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSIS SYLNWYQQKP GKAPKLLIYY 
TSRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYCQQ GNTLPPTFGG 
GTKLEIK
である。
【０１８１】
（ｄ）ＰＲＣＡ１５７
抗体ＰＲＣＡ１５７は、マウス抗Ｂ７‐Ｈ３モノクローナル抗体である。ＰＲＣＡ１５７のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQQVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT
INSGGSNTYY PDSLKGRFTI SRDNAKNTLY LQMRSLKSED TAMYYCARHD
GGAMDYWGQG TSVTVSS
である。
【０１８２】
ＰＲＣＡ１５７のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４６）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPAS LSVSVGETVT ITCRASESIY SYLAWYQQKQ GKSPQLLVYN
TKTLPEGVPS RFSGSGSGTQ FSLKINSLQP EDFGRYYCQH HYGTPPWTFG 
GGTNLEIK
である。
【０１８３】
（ｅ）ヒト化ＰＲＣＡ１５７
抗体ＰＲＣＡ１５７をヒト化して、１つのヒト化ＶＨドメインｈＰＲＣＡ１５７  ＶＨ１及び１つのヒト化ＶＬドメインｈＰＲＣＡ１５７  ＶＬ１を得、これによって機能性ヒト化結合ドメインを得た。ヒト化ＰＲＣＡ１５７のアミノ酸配列を以下に提供する。
【０１８４】
ｈＰＲＣＡ１５７  ＶＨ１のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号２０２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS SYGMSWVRQA PGKGLEWVAT
INSGGSNTYY PDSLKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARHD
GGAMDYWGQG TTVTVSS
である。
【０１８５】
ｈＰＲＣＡ１５７  ＶＬ１のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号２０３）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASESIY SYLAWYQQKP GKAPKLLVYN
TKTLPEGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQHHYGTPPWTFG 
QGTRLEIK
である。
【０１８６】
（ｆ）他の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体
上で同定した好ましい抗Ｂ７‐Ｈ３結合分子に加えて、本発明は、以下の抗Ｂ７‐Ｈ３結合分子：ＬＵＣＡ１；ＢＬＡ８；ＰＡ２０；又はＳＫＮ２（米国特許第７，５２７，９６９号；米国特許第８，７７９，０９８号及び国際公開第２００４／００１３８１号を参照）；Ｍ３０；ｃＭ３０；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ１；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ２；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ３；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ４；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ５；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ６；Ｍ３０‐Ｈ１‐Ｌ７；Ｍ３０‐Ｈ４‐Ｌ１；Ｍ３０‐Ｈ４‐Ｌ２；Ｍ３０‐Ｈ４‐Ｌ３；及びＭ３０‐Ｈ４‐Ｌ４（米国特許出願公開第２０１３／００７８２３４号及び国際公開第２０１２／１４７７１３号を参照）；並びに８Ｈ９（米国特許第７，６６６，４２４号；米国特許第７，７３７，２５８号；米国特許第７，７４０，８４５号；米国特許第８，１４８，１５４号；米国特許第８，４１４，８９２号；米国特許第８，５０１，４７１号；米国特許第９，０６２，１１０号；米国特許出願公開第２０１０／０１４３２４５号、及び国際公開第２００８／１１６２１９号を参照）のうちのいずれの使用も考える。
【０１８７】
本発明は具体的には：ＢＲＣＡ６９Ｄ、ヒト化ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ヒト化ＰＲＣＡ１５７、又はエノブリツズマブ、又は本明細書中で提供されている他の抗Ｂ７‐Ｈ３抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て、並びに／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む；更に好ましくは、このような抗Ｂ７‐Ｈ３モノクローナル抗体のＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て、並びに／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを有する、ＣＤ１３７×Ｂ７‐Ｈ３結合分子を含み、またこのようなＣＤ１３７×Ｂ７‐Ｈ３結合分子を包含する。
【０１８８】
５．ｇｐＡ３３に結合する抗体
４３ｋＤ膜貫通糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）は、全ての結腸直腸癌の＞９５％において発現する（Heath, J.K. et al. (1997) “The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 94(2):469-474; Ritter, G. et al. (1997) “Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen, A Novel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human Gastrointestinal Epithelium,” Biochem. Biophys. Res. Commun. 236(3):682-686; Wong, N.A. et al. (2006) “EpCAM and gpA33 Are Markers Of Barrett's Metaplasia,” J. Clin. Pathol. 59(3):260-263）。いずれの抗ｇｐＡ３３抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。例示的な抗ｇｐＡ３３抗体（「ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１」）を以下に提示する。
【０１８９】
ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４８）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT GSWMNWVRQA PGQGLEWIGR
IYPGDGETNY NGKFKDRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARIY
GNNVYFDVWG QGTTVTVSS
である。
【０１９０】
ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１４９）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCSARSSIS FMYWYQQKPG KAPKLLIYDT
SNLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLEAE DAATYYCQQW SSYPLTFGQG 
TKLEIK
である。
【０１９１】
本発明は具体的には、抗ｇｐＡ３３モノクローナル抗体ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１、又は国際公開第２０１５／０２６８９４号において提供された抗ｇｐＡ３３モノクローナル抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×ｇｐＡ３３結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０１９２】
６．ＣＥＡＣＡＭ５及びＣＥＡＣＡＭ６に結合する抗体
癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）及び６（ＣＥＡＣＡＭ６）は、甲状腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝細胞癌、胃癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮体癌、乳癌、造血癌、白血病及び卵巣癌（国際公開第２０１１／０３４６６０号）、並びに特に、結腸直腸癌、胃腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬ）、乳癌、甲状腺癌、胃癌、卵巣癌及び子宮癌腫（Zheng, C. et al. (2011) “A Novel Anti-CEACAM5 Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity,” PLoS One 6(6):e21146, pp. 1-11）を含む様々なタイプの癌に関連していることが分かっている。ＣＥＡＣＡＭ５は、胃腸癌、結腸直腸癌及び膵臓癌の９０％、非小細胞肺癌細胞の７０％並びに乳癌の５０％において過剰発現することが分かっている（Thompson, J.A. et al. (1991) “Carcinoembryonic Antigen Gene Family: Molecular Biology And Clinical Perspectives,” J. Clin. Lab. Anal. 5:344-366）。過剰発現した癌胎児性抗原関連細胞接着分子６（ＣＥＡＣＡＭ６）は、甲状腺髄様癌、結腸直腸癌、膵臓癌、肝細胞癌、胃癌、肺癌、頭頸部癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮体癌、乳癌、造血癌、白血病及び卵巣癌を含む多様なヒト癌の侵襲及び転位において重要な役割を果たす（国際公開第２０１１／０３４６６０号；Deng, X. et al. (2014) “Expression Profiling Of CEACAM6 Associated With The Tumorigenesis And Progression In Gastric Adenocarcinoma,” Genet. Mol. Res. 13(3):7686-7697; Cameron, S. et al. (2012) “Focal Overexpression Of CEACAM6 Contributes To Enhanced Tumourigenesis In Head And Neck Cancer Via Suppression Of Apoptosis,” Mol. Cancer 11:74, pp. 1-11; Chapin, C. et al. (2012) “Distribution And Surfactant Association Of Carcinoembryonic Cell Adhesion Molecule 6 In Human Lung,” Amer. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 302(2):L216-L25; Riley, C.J. et al. (2009) “Design And Activity Of A Murine And Humanized Anti-CEACAM6 Single-Chain Variable Fragment In The Treatment Of Pancreatic Cancer,” Cancer Res. 69(5):1933-1940; Lewis-Wambi, J.S. et al. (2008) “Overexpression Of CEACAM6 Promotes Migration And Invasion Of Oestrogen-Deprived Breast Cancer Cells,” Eur. J. Cancer 44(12):1770-1779; Blumenthal, R.D. et al. (2007) “Expression Patterns Of CEACAM5 And CEACAM6 In Primary And Metastatic Cancers,” BMC Cancer. 7:2, pp. 1-15）。いずれの抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。例示的な抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体を以下に提供する。
【０１９３】
（ａ）１６Ｃ３
ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体１６Ｃ３（欧州特許第２５８５４７６号）のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５０）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
QVQLQQSGPE VVRPGVSVKI SCKGSGYTFT DYAMHWVKQS HAKSLEWIGL 
ISTYSGDTKY NQNFKGKATM TVDKSASTAY MELSSLRSED TAVYYCARGD 
YSGSRYWFAY WGQGTLVTVS S
である。
【０１９４】
ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／抗ＣＥＡＣＡＭ６抗体１６Ｃ３（欧州特許第２５８５４７６号）のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５１）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCGASENIY GALNWYQRKP GKSPKLLIWG 
ASNLADGMPS RFSGSGSGRQ YTLTISSLQP EDVATYYCQN VLSSPYTFGG 
GTKLEIK
である。
【０１９５】
（ｂ）ｈＭＮ１５
ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体ｈＭＮ１５（国際公開第２０１１／０３４６６０号）のＶＨドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５２）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCSSSGFALT DYYMSWVRQA PGKGLEWLGF 
IANKANGHTT DYSPSVKGRF TISRDNSKNT LFLQMDSLRP EDTGVYFCAR 
DMGIRWNFDV WGQGTPVTVS S
である。
【０１９６】
ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体ｈＭＮ１５（国際公開第２０１１／０３４６６０号）のＶＬドメインのアミノ酸配列は、（配列番号１５３）（ＣＤＲ残基は下線を付して示されている）：
DIQLTQSPSS LSASVGDRVT MTCSASSRVS YIHWYQQKPG KAPKRWIYGT
STLASGVPAR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYYCQQW SYNPPTFGQG 
TKVEIKR
である。
【０１９７】
本発明は具体的には、抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６モノクローナル抗体１６Ｃ３又はｈＭＮ１５の、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０１９８】
７．ＣＤ１９に結合する抗体
ＣＤ１９（Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：Ｍ２８１７０）は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）複合体の構成要素であり、Ｂ細胞活性化及び体液性免疫に関する閾値を変調するＢ細胞シグナリングの正の調節因子である。ＣＤ１９は、Ｂ細胞系統中に最も偏在的に発現される抗原の１つであり、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含むＢ細胞悪性腫瘍の＞９５％において発現される。特に、ＣＤ１９発現は、抗ＣＤ２０療法に対する耐性を示すようになったＢ細胞リンパ腫において維持される（Davis et al. (1999) “Therapy of B-cell Lymphoma With Anti-CD20 Antibodies Can Result In The Loss Of CD20 Antigen Expression.” Clin Cancer Res, 5:611-615, 1999）。ＣＤ１９はまた、自己免疫疾患を治療するための標的としても示唆されている（Tedder (2009) “CD19: A Promising B Cell Target For Rheumatoid Arthritis,” Nat. Rev. Rheumatol. 5:572-577）。
【０１９９】
ヒトＣＤ１９に結合し、本発明において採用してよい例示的な抗体は、国際公開第２０１６／０４８９３８号で開示されている抗ＣＤ１９抗体（本明細書では「ＣＤ１９  ＭＡＢ‐１」と呼ばれる）である。
【０２００】
ＣＤ１９  ＭＡＢ‐１のＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号２０４）を以下に示す（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVTLRESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS TSGMGVGWIR QPPGKALEWL 
AHIWWDDDKR YNPALKSRLT ISKDTSKNQV FLTMTNMDPV DTATYYCARM
ELWSYYFDYW GQGTTVTVSS
【０２０１】
ＣＤ１９  ＭＡＢ‐１のＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号２０５）を以下に示す（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
ENVLTQSPAT LSVTPGEKAT ITCRASQSVS YMHWYQQKPG QAPRLLIYDA
SNRASGVPSR FSGSGSGTDH TLTISSLEAE DAATYYCFQG SVYPFTFGQG 
TKLEIK
【０２０２】
本発明は具体的には、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体ＣＤ１９  ｍＡｂ  １、又は米国特許第７，１１２，３２４号で開示されている抗ＣＤ１９抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×ＣＤ１９結合分子、あるいはブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）；WHO Drug Information、2009, Recommended INN: List 62, 23(3):240-241に見られるアミノ酸配列）及びドゥボルツキシズマブ（ＭＧＤ０１１としても公知；WHO Drug Information, 2016, Proposed INN: List 116, 30(4):627-629に見られるアミノ酸配列）中に存在するＣＤ１３７×ＣＤ１９結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０２０３】
８．ＣＤ１２３に結合する抗体
ＣＤ１２３（インターロイキン３受容体α、ＩＬ‐３Ｒａ）は４０ｋＤａ分子であり、インターロイキン３受容体複合体の一部である（Stomski, F.C. et al. (1996) “Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding,” Mol. Cell. Biol. 16(6):3035-3046）。インターロイキン３（ＩＬ‐３）は、多能性幹細胞の、赤血球細胞、骨髄細胞及びリンパ球系前駆細胞への早期分化を促進する。ＣＤ１２３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含む幅広い血液悪性腫瘍中の悪性細胞上で過剰発現していることが報告されている（Munoz, L. et al. (2001) “Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies,” Haematologica 86(12):1261-1269）。ＣＤ１２３の過剰発現は、ＡＭＬの不良な予後に関連する（Tettamanti, M.S. et al. (2013) “Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor,” Br. J. Haematol. 161:389-401）。
【０２０４】
ヒトＣＤ１２３に結合し、本発明で採用できる例示的抗体は、「ＣＤ１２３  ＭＡＢ‐１」である（例えば国際公開第２０１５／０２６８９２号を参照）。
【０２０５】
ＣＤ１２３  ＭＡＢ‐１のＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号２０６）を以下に示す（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMKWVRQA PGQGLEWIGD
IIPSNGATFY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSH
LLRASWFAYW GQGTLVTVSS
【０２０６】
ＣＤ１２３  ＭＡＢ‐１のＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号２０７）を以下に示す（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP 
KLLIYWASTR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY
PYTFGQGTKL EIK
【０２０７】
本発明は具体的には、抗ＣＤ１２３モノクローナル抗体ＣＤ１２３  ｍＡｂ  １並びに米国特許第２０１７／０８１４２４号及び国際公開第２０１６／０３６９３７号で開示されている抗ＣＤ１２３抗体のうちのいずれの、ＶＬ及び／若しくはＶＨドメイン、並びに／又はＶＬ領域のＣＤＲLのうちの１つ、２つ若しくは３つ全て及び／又はＶＨドメインのＣＤＲHのうちの１つ、２つ若しくは３つ全てを含む、ＣＤ１３７×ＣＤ１２３結合分子、あるいはＪＮＪ‐６３７０９１７８（Johnson & Johnson、国際公開第２０１６／０３６９３７号も参照）及びＸｍＡｂ１４０４５（Xencor、米国特許第２０１７／０８１４２４号も参照）中に存在するＣＤ１３７×ＣＤ１２３結合分子を含み、またこれらを包含する。
【０２０８】
Ｇ．好ましいＣＤ１３７可変ドメイン
いずれの抗ＣＤ１３７抗体のエピトープ結合部位を、本発明に従って使用してよい。ヒトＣＤ１３７に結合する例示的な抗体としては、現在ヒト臨床試験で評価されている「ウレルマブ（urelumab）」及び「ウトミルマブ（utomilumab）」が挙げられる。ウレルマブ（ＢＭＳ‐６６３５１３としても公知であり、本明細書中では「ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１」と称される）は、ＩｇＧ４／κ定常領域を有する完全ヒトモノクローナル抗体である（米国特許第８，１３７，６６７号を参照）。ウトミルマブ（ＰＦ‐０５０８２５６６としても公知であり、本明細書中では「ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２」と称される）は、ＩｇＧ２／λ定常領域を有する完全ヒトモノクローナル抗体である（米国特許第８，３３７，８５０号を参照）。ヒトＣＤ１３７に対して免疫特異的な更なる抗体（「ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３」、「ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４」及び「ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５」と称する）を以下に提供する。
【０２０９】
１．ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１  ＶＨ）のアミノ酸配列は、（配列番号７０）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLQQWGAG LLKPSETLSL TCAVYGGSFS GYYWSWIRQS PEKGLEWIGE
INHGGYVTYN PSLESRVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCARDYG
PGNYDWYFDL WGRGTLVTVS S
である。
【０２１０】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１  ＶＬ）のアミノ酸配列は、（配列番号７１）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD
ASNRATGIPA RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPPALTF 
GGGTKVEIK
である。
【０２１１】
２．ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２  ＶＨ）のアミノ酸配列は、（配列番号７２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVQLVQSGAE VKKPGESLRI SCKGSGYSFS TYWISWVRQM PGKGLEWMGK
IYPGDSYTNY SPSFQGQVTI SADKSISTAY LQWSSLKASD TAMYYCARGY
GIFDYWGQGT LVTVSS
である。
【０２１２】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２  ＶＬ）のアミノ酸配列は、（配列番号７３）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
SYELTQPPSV SVSPGQTASI TCSGDNIGDQ YAHWYQQKPG QSPVLVIYQD
KNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAM DEADYYCATY TGFGSLAVFG 
GGTKLTVL
【０２１３】
３．ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３は、新規のマウスモノクローナル抗体である。ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ）のアミノ酸配列は、（配列番号７４）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN 
IYPSDSYTNY NQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTRDY
GSSYSFDYWG QGTTLTVSS
である。
【０２１４】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨのＣＤＲHのアミノ酸配列は：
ＣＤＲH１（配列番号１５４）：SYWIN
ＣＤＲH２（配列番号１５５）：NIYPSDSYTNYNQKFKD
ＣＤＲH３（配列番号１５６）：DYGSSYSFDY
である。
【０２１５】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）のアミノ酸配列は、（配列番号７５）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG 
GTKLEIK
である。
【０２１６】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬのＣＤＲLのアミノ酸配列は：
ＣＤＲL１（配列番号１５７）：RPSQDISNYLN
ＣＤＲL２（配列番号１５８）：YTSRLRS
ＣＤＲL３（配列番号１５９）：QQGDTLPYT
である。
【０２１７】
４．ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３
抗体ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３をヒト化して、抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３を形成した。このようなヒト化抗体のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１）のアミノ酸配列は、（配列番号７６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSSYSFDYWG QGTTVTVSS
である。
【０２１８】
ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１）を最適化して、配列番号７７のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを得た：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA
PGQGLEWIGN IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY
MELSSLRSED TAVYYCTRDY GSX10X11X12X13X14X15WG QGTTVTVSS
ここでＸ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14Ｘ15は：
AYSFHP（１Ａ；配列番号７８）、又は
AYSMST（１Ｂ；配列番号７９）、又は
AYSYSL（１Ｃ；配列番号８０）、又は
SYSYNV（１Ｄ；配列番号８１）である。
【０２１９】
上述のように、対応する親配列（配列番号７４に提示）は、ＳＹＳＦＤＹ（配列番号１６０）である。
【０２２０】
ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）を最適化して、配列番号８２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを得た：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP X7X8TVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
ここで：Ｘ7はＤ又はＧであり；Ｘ8はＧ又はＫである。
【０２２１】
４つの変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ドメイン：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄを単離した。このような変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ドメインのアミノ酸配列を以下に提示する。
【０２２２】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａのアミノ酸配列は、（配列番号８３）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲ3Ｈの残基５〜１０は、AYSFHP（配列番号７８）であることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWIGN 
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSFHPWG QGTTVTVSS
である。
【０２２３】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂのアミノ酸配列は、（配列番号８４）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲ3Ｈの残基５〜１０は、AYSMST（配列番号７９）であることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSMSTWG QGTTVTVSS
である。
【０２２４】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃのアミノ酸配列は、（配列番号８５）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲ3Ｈの残基５〜１０は、AYSYSL（配列番号８０）であることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSYSLWG QGTTVTVSS
である。
【０２２５】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄのアミノ酸配列は、（配列番号８６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；ＣＤＲ3Ｈの残基５〜１０は、SYSYNV （配列番号８１）であることに留意されたい）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSSYSYNVWG QGTTVTVSS
である。
【０２２６】
よって、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＤのＣＤＲH１のアミノ酸配列は同一であり（配列番号１５４）、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＤのＣＤＲH２のアミノ酸配列は同一である（配列番号１５５）。しかしながら、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＤのＣＤＲH３のアミノ酸配列は異なる：
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ  ＣＤＲH３（配列番号１６１）：DYGSAYSFHP
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ  ＣＤＲH３（配列番号１６２）：DYGSAYSMST
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ  ＣＤＲH３（配列番号１６３）：DYGSAYSYSL
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ  ＣＤＲH３（配列番号１６４）：DYGSSYSYNV
【０２２７】
３つの変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬドメイン：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３を単離した。このような変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬドメインのアミノ酸配列を以下に提示する。
【０２２８】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１のアミノ酸配列は、（配列番号８７）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；残基４１及び４２はそれぞれＤ及びＧであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２２９】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２のアミノ酸配列は、（配列番号８８）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；残基４１及び４２はいずれもＧであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP GGTVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２３０】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３のアミノ酸配列は、（配列番号８９）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；残基４１及び４２はそれぞれＤ及びＫであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２３１】
ＶＨドメインｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂを、以下の実施例で記述するように脱免疫化した。ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇと称される、Ｋａｂａｔ残基３８及び／又は４８におけるアミノ酸置換を有する３つの得られた脱免疫化ＶＨドメインのアミノ酸配列を以下に提供する。特に、同定された置換Ｒ３８Ｋ及び／又はＩ４８Ａは、本開示のｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨドメインのうちのいずれに組み込んでよいと考えられる。ある具体的な実施形態では、Ｋ３８Ｒアミノ酸置換が、配列番号７６、配列番号７７、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、又は配列番号８６に組み込まれる。
【０２３２】
Ｋ３８Ｒを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅのアミノ酸配列は、（配列番号２０８）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSMSTWG QGTTVTVSS
である。
【０２３３】
Ｉ４８Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆのアミノ酸配列は、（配列番号２０９）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVKQA PGQGLEWAGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSMSTWG QGTTVTVSS
である。
【０２３４】
Ｋ３８Ｒ／Ｉ４８Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇのアミノ酸配列は、（配列番号２１０）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWAGN
IYPSDSYTNY NQKFKDKATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRDY
GSAYSMSTWG QGTTVTVSS
である。
【０２３５】
ＶＬドメインｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３を、以下の実施例で記述するように脱免疫化した。ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４〜ＶＬ１５と称される、Ｋａｂａｔ残基２４、２５、４４、４８、５２、及び／又は５４におけるアミノ酸置換を有する１２個の得られた脱免疫化ＶＬドメインのアミノ酸配列を以下に提供する。特に、同定された置換Ｒ２４Ｑ、Ｐ２５Ａ、Ｖ４４Ａ、Ｉ４８Ａ、Ｓ５２Ｔ、Ｓ５２Ｇ、及び／又はＬ５４Ａは、脱免疫化ＶＬドメインを得るために、上で提供されている本開示のｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬドメインのうちのいずれに組み込んでよいと考えられる。ある具体的な実施形態では、Ｒ２４Ｑ、Ｐ２５Ａ、Ｉ４８Ａ、Ｓ５２Ｇ、及びＬ５４Ａアミノ酸が、配列番号８２、配列番号８７、配列番号８８、又は配列番号８９に組み込まれる。別の具体的な実施形態では、Ｒ２４Ｑ、Ｐ２５Ａ、Ｉ４８Ａ、Ｓ５２Ｔ、及びＬ５４Ａアミノ酸が、配列番号８２、配列番号８７、配列番号８８、又は配列番号８９に組み込まれる。
【０２３６】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４のアミノ酸配列は、（配列番号２１１）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ
GTKLEIK
である。
【０２３７】
Ｖ４４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５のアミノ酸配列は、（配列番号２１２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTAKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２３８】
Ｌ５４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６のアミノ酸配列は、（配列番号２１３）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２３９】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａ／Ｖ４４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７のアミノ酸配列は、（配列番号２１４）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTAKLLIYY
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４０】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａ／Ｖ４４Ａ／Ｌ５４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８のアミノ酸配列は、（配列番号２１５）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTAKLLIYY
TSRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４１】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａ／Ｌ５４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９のアミノ酸配列は、（配列番号２１６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４２】
Ｓ５２Ｔを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０のアミノ酸配列は、（配列番号２１７）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TTRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４３】
Ｓ５２Ｇを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１のアミノ酸配列は、（配列番号２１８）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TGRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４４】
Ｉ４８Ａ／Ｓ５２Ｔを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２のアミノ酸配列は、（配列番号２１９）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLAYY
TTRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４５】
Ｉ４８Ａ／Ｓ５２Ｇを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３のアミノ酸配列は、（配列番号２２０）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLAYY
TGRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４６】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａ／Ｓ５２Ｔ／Ｌ５４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４のアミノ酸配列は、（配列番号２２１）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TTRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４７】
Ｒ２４Ｑ／Ｐ２５Ａ／Ｓ５２Ｇ／Ｌ５４Ａを含むｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５のアミノ酸配列は、（配列番号２２２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている；置換には二重下線が付されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TGRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２４８】
よって、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３‐ＶＬ１５のＣＤＲL３のアミノ酸配列は同一である（QQGDTLPYT；配列番号１５９）。しかしながら、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６‐ＶＬ１５のＣＤＲL１及び／又はＣＤＲL２のアミノ酸配列は異なる：
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４、ＶＬ７、ＶＬ８、ＶＬ９、ＶＬ１４、及びＶＬ１５  ＣＤＲL１（配列番号２２３）：QASQDISNYLN
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６、ＶＬ８、及びＶＬ９  ＣＤＲL２（配列番号２２４）：YTSRARS
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０、及びＶＬ１２  ＣＤＲL２（配列番号２２５）：YTTRLRS
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１、及びＶＬ１３  ＣＤＲL２（配列番号２２６）：YTGRLRS
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４  ＣＤＲL２（配列番号２２７）：YTTRARS
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５  ＣＤＲL２（配列番号２２８）：YTGRARS
【０２４９】
上で提示されているｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ及び／又はＶＬドメインの１つ以上の一般的な配列に包含されるいずれのものを含む、ヒト化、最適化及び／又は脱免疫化ＶＨ及びＶＬ  ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメインのＣＤＲ、ＶＬドメイン、及び／又はＶＨドメインを用いて、ＣＤ１３７に結合できる抗体、ダイアボディ又は結合分子を形成してよい。
【０２５０】
５．ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４は、新規のマウスモノクローナル抗体である。ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ）のアミノ酸配列は、（配列番号９０）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN
IYPSDSYTNY DQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTKSG
EYGKIGYYAM DYWGQGTSVT VSS
である。
【０２５１】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４ＶＨのＣＤＲHのアミノ酸配列は：
ＣＤＲH１（配列番号１６５）：SYWIN
ＣＤＲH２（配列番号１６６）：NIYPSDSYTNYDQKFKD
ＣＤＲH３（配列番号１６７）：SGEYGKIGYYAMDY
である。
【０２５２】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ）のアミノ酸配列は、（配列番号９１）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPYTFGG 
GTKLEIK
である。
【０２５３】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬのＣＤＲLのアミノ酸配列は：
ＣＤＲL１（配列番号１６８）：RASQDISNYLN
ＣＤＲL２（配列番号１６９）：YTSRLHS
ＣＤＲL３（配列番号１７０）：QQGNTLPYT
である。
【０２５４】
６．ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４
抗体ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４をヒト化して、抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４を形成した。ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１）のアミノ酸配列は、（配列番号９２）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN
IYPSDSYTNY DQKFKDRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCTKSG
EYGKIGYYAM DYWGQGTTVT VSS
である。
【０２５５】
ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメインをヒト化及び最適化して、配列番号９３（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYX9CQQ GNTLPYTFGQ 
GTKLEIK
（ここでＸ9はＦ又はＹである）のアミノ酸配列を有するＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）を得た。
【０２５６】
２つの変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬドメイン：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２を単離した。このような変異型ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬドメインのアミノ酸配列を以下に提示する。
【０２５７】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１のアミノ酸配列は、（配列番号９４）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；残基８７はＦであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYFCQQ GNTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２５８】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２のアミノ酸配列は、（配列番号９５）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている；残基８７はＹであることに留意されたい）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYYCQQ GNTLPYTFGQ 
GTKLEIK
である。
【０２５９】
７．ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、新規のマウスモノクローナル抗体である。
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ）のアミノ酸配列は、（配列番号９６）（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVQLKESGPG LVAPSQSLSI TCTVSGFSLT SYDISWIRQP PGKGLEWLGV
VWTGGGTNYN SAFMSRLSIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT AIYYCERVDY
WGQGTSVTVS S
である。
【０２６０】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨのＣＤＲHのアミノ酸配列は：
ＣＤＲH１（配列番号１７１）：SYDIS
ＣＤＲH２（配列番号１７２）：VVWTGGGTNYNSAFMS
ＣＤＲH３（配列番号１７３）：VDY
である。
【０２６１】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ）のアミノ酸配列は、（配列番号９７）（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLHW YLQKPGQSPK 
LLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVP
WTFGGGTKLE IK
である。
【０２６２】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬのＣＤＲLのアミノ酸配列は：
ＣＤＲL１（配列番号１７４）：RSSQSLVHSNGNTYLH
ＣＤＲL２（配列番号１７５）：KVSNRFS
ＣＤＲL３（配列番号１７６）：SQSTHVPWT
である。
【０２６３】
ＩＩＩ．本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子
本発明は特に、Ｆｃドメインを含む３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できるＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ  ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ、並びにＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる他のＦｃ担持ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を対象とする。本発明は更に、癌並びに他の疾患及び状態の治療における、このような分子の使用を対象とする。コドン最適化による遺伝子発現において得られる改善と同様、最適化されていないＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は完全な官能性を有する（例えばGrosjean, H. et al. (1982) "Preferential Codon Usage In Prokaryotic Genes: The Optimal Codon‐Anticodon Interaction Energy And The Selective Codon Usage In Efficiently Expressed Genes" Gene 18(3):199‐209を参照）が、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の配列を修飾又は改良することにより、その安定性及び／又は機能を更に強化できる。
【０２６４】
Ａ．ＣＤ１３７×ＴＡ  Ｆｃ担持ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ
本発明は特に、ＣＤ１３７及びＴＡに同時に結合できる広範なＦｃ担持ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディを包含する。例示的なＣＤ１３７×ＴＡ  Ｆｃ担持ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディについて以下に説明する。
【０２６５】
一実施形態では、このようなＦｃ担持ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含むことになる。図２に示すように、上記ポリペプチド鎖のうちの第１のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；「第１の」抗原のエピトープ（ＣＤ１３７又はＴＡ）に結合できる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＬ１）；「第２の」抗原のエピトープ（ＶＬ１がＣＤ１３７のエピトープに結合するよう選択されている場合にはＴＡ；ＶＬ１がＴＡのエピトープに結合するよう選択されている場合にはＣＤ１３７）に結合できる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ２）；システイン含有リンカー；ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；及びＣ末端を含有してよい。上記ポリペプチド鎖のうちの第２のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；「第２の」抗原のエピトープ（第１の抗原がＣＤ１３７である場合にはＴＡ；第１の抗原がＴＡである場合にはＣＤ１３７）に結合できる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＬ２）；「第２の」抗原のエピトープ（ＶＬ２がＣＤ１３７のエピトープに結合するよう選択されている場合にはＴＡ；ＶＬ２がＴＡのエピトープに結合するよう選択されている場合にはＣＤ１３７）に結合できる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ２）；システイン含有リンカー；ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；及びＣ末端を含有してよい。介在リンカーペプチド（リンカー１）は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１又はＶＬ２）を重鎖可変ドメイン（ＶＨ１又はＶＨ２）から隔てる。
【０２６６】
別の実施形態では、本発明のＦｃ担持ダイアボディは３つのポリペプチド鎖を含み、これらは図４Ａ〜４Ｂに図示されている。このようなダイアボディの第１のポリペプチド鎖は、４つのドメイン：（ｉ）ＶＬ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ２含有ドメイン；（ｉｉｉ）ダイアボディの第２のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進する、ドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン」）；及び（ｉＶ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメインを含有する。このようなＦｃ担持ダイアボディの第２のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＬ２含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ１含有ドメイン；並びに（ｉｉｉ）ダイアボディの第１のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進するドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン」）を含有する。このようなＦｃ担持ダイアボディの第３のポリペプチド鎖は、ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含む。従って、このようなＦｃ担持ダイアボディの第１及び第２のポリペプチド鎖は、一体として複合体化して、エピトープに結合可能なＶＬ１／ＶＨ１結合部位、及び第２のエピトープに結合可能なＶＬ２／ＶＨ２結合部位を形成する。本発明の好ましいＦｃ担持ダイアボディは、ＣＤ１３７又はＴＡであってよい「第１のエピトープ」と、第１のエピトープがＣＤ１３７である場合にはＴＡであり、第１のエピトープがＴＡである場合にはＣＤ１３７である「第２のエピトープ」とに結合できる、ＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性ダイアボディである。第１及び第２のポリペプチドは、それぞれのリンカー及び／又は第３のドメイン内のシステイン残基が関与する１つ又は複数のジスルフィド結合を介して、互いに結合される。特に、第１及び第３のポリペプチド鎖は互いと複合体化して、ジスルフィド結合によって安定化されたＦｃドメインを形成する。このようなダイアボディは、強化された強度を有する。本発明の好ましいＦｃ担持ダイアボディは、２つの配向（表２）のうちのいずれを有してよい：
【０２６７】
【表２】
2020508334.tif 000008
【０２６８】
図４Ａに示すように、第１の実施形態では、上記３つのポリペプチド鎖のうち第１のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；「第１の」抗原のエピトープ（ＣＤ１３７又はＴＡ）に結合できる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＬ１）；「第２の」抗原のエピトープ（第１の抗原がＣＤ１３７である場合にはＴＡ；第１の抗原がＴＡである場合にはＣＤ１３７）に結合できる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ２）；システイン含有ドメイン；ヘテロ二量体促進ドメイン：第２のシステイン含有ドメイン；ＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；及びＣ末端を含有してよい。介在リンカーペプチド（リンカー１）は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）から隔てる。好ましくは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）は、介在リンカーペプチド（リンカー２）によってヘテロ二量体促進ドメインに連結される。ある好ましいＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディの実施形態では、ヘテロ二量体促進ドメインのＣ末端は、介在リンカーペプチド（リンカー３）によって、又は介在スペーサペプチド（リンカー３）によって、Ｆｃ領域のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに連結される。従って最も好ましくは、上記３つのポリペプチド鎖のうち第１のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：ＶＬ１‐リンカー１‐ＶＨ２‐リンカー２‐ヘテロ二量体促進ドメイン‐リンカー３‐Ｆｃドメインを含有することになる。
【０２６９】
このような３つのポリペプチド鎖のうちの第２のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；「第２の」抗原のエピトープに結合できる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＬ２）；「第１の」抗原のエピトープに結合できる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ１）；システイン含有ドメイン；ヘテロ二量体促進ドメイン；及びＣ末端を含有することになる。介在リンカーペプチド（リンカー１）は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）を重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）から隔てる。好ましくは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）は、介在リンカーペプチド（リンカー２）によってヘテロ二量体促進に連結される。従って最も好ましくは、上記３つのポリペプチド鎖のうち第２のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：ＶＬ２‐リンカー１‐ＶＨ１‐リンカー２‐ヘテロ二量体促進ドメインを含有することになる。
【０２７０】
このような３つのポリペプチド鎖のうちの第３のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：システイン含有ペプチド（例えばリンカー３）：及びＦｃ領域のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（「Ｆｃドメイン」）を含有することになる。第３のポリペプチド鎖はＶＬドメイン又はＶＨドメインを含まないため、この第３のポリペプチド鎖は、２つ以上の本発明のＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性Ｆｃダイアボディの間で同一となり得る。
【０２７１】
あるいは図４Ｂに示すように、第２の実施形態では、上記３つのポリペプチド鎖のうち第１のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；システイン含有ペプチド（例えばリンカー３）；Ｆｃ領域のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（「Ｆｃドメイン」）；介在スペーサペプチド（リンカー４）；「第１の」抗原のエピトープに結合できる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（ＶＬ１）（ＣＤ１３７又はＴＡ）；「第２の」抗原に結合できる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ２）（第１の抗原がＣＤ１３７である場合にはＴＡ；第１の抗原がＴＡである場合にはＣＤ１３７）；システイン含有リンカー；ヘテロ二量体促進ドメイン；及びＣ末端を含有することになる。介在リンカーペプチド（リンカー１）は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）を重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）から隔てる。好ましくは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）は、介在リンカーペプチド（リンカー２）によってヘテロ二量体促進に連結される。従って最も好ましくは、上記３つのポリペプチド鎖のうち第２のものは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：リンカー３‐Ｆｃドメイン-リンカー４‐ＶＬ１‐リンカー１‐ＶＨ２‐リンカー２‐ヘテロ二量体促進ドメインを含有することになる。このような代替的なダイアボディの第２及び第３のポリペプチド鎖は、第１の実施形態の第２及び第３のポリペプチド鎖と同一であってよい。
【０２７２】
上述の実施形態それぞれにおいて、第１のポリペプチド鎖の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）は、第２のポリペプチド鎖の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）と相互作用することによって、第１の抗原のエピトープ（即ちＴＡ又はＣＤ１３７）に免疫特異的に結合できる官能性エピトープ結合部位を形成できるよう、協調的に選択される。同様に、第２のポリペプチド鎖の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）は、第１のポリペプチド鎖の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）と相互作用することによって、第２の抗原のエピトープ（即ちＴＡ又はＣＤ１３７）に免疫特異的に結合できる官能性エピトープ結合部位を形成できるよう、協調的に選択される。従って、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの選択は、これら２つのポリペプチド鎖が合わせて、ＣＤ１３７及びＴＡに結合できるエピトープ結合部位を含むよう、協調される。
【０２７３】
本発明の好ましいＦｃ担持ダイアボディは、４つのポリペプチド鎖を含む４つのエピトープ結合部位を有する、共有結合した４価ダイアボディであり、これらは図３Ａ〜３Ｃに図示されている。このようなダイアボディの第１及び第３のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＬ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ２含有ドメイン；（ｉｉｉ）ヘテロ二量体促進ドメイン；及び（ｉｖ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメインを含有する。第２及び第４のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＬ２含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ１含有ドメイン；及び（ｉｉｉ）ヘテロ二量体促進ドメインを含有し、上記ヘテロ二量体促進ドメインは、第１／第３のポリペプチド鎖と第２／第４のポリペプチド鎖との二量体化及び共有結合を促進する。好ましくは、ＶＨドメインは、介在リンカーペプチド（リンカー２）によって、ヘテロ二量体促進ドメインに連結される。ある好ましいＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディの実施形態では、第１のポリペプチド鎖のヘテロ二量体促進ドメインのＣ末端は、介在リンカーペプチド（リンカー３）によって、又は介在スペーサペプチド（リンカー３）によって、ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに連結される。第３及び第４のポリペプチド鎖のＶＬ及び／又はＶＨドメインと、第１及び第２のポリペプチド鎖のＶＬ及び／又はＶＨドメインとは、同一であっても異なっていてもよく、従って単一特異性、二重特異性又は四重特異性の４価結合が可能となる。「ＶＬ３」及び「ＶＨ３」という表記法はそれぞれ、このようなダイアボディの「第３の」エピトープに結合する軽鎖可変ドメイン及び可変重鎖ドメインを表す。同様に、「ＶＬ４」及び「ＶＨ４」という表記法はそれぞれ、このようなダイアボディの「第４の」エピトープに結合する軽鎖可変ドメイン及び可変重鎖ドメインを表す。本発明の代表的な４鎖二重特異性Ｆｃ領域含有ダイアボディポリペプチド鎖の一般構造を、表３で提供する。
【０２７４】
【表３】
2020508334.tif 000009
【０２７５】
好ましい実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性、４価（即ち４つのエピトープ結合部位を有する）、Ｆｃ担持ダイアボディであり、合計４つのポリペプチド鎖からなる（図３Ａ〜３Ｃ）。本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、二重特異性、４価、Ｆｃ担持ダイアボディであり、ＣＤ１３７に対して免疫特異的な２つのエピトープ結合部位（これらは、ＣＤ１３７の同一のエピトープ又はＣＤ１３７の異なるエピトープに結合できるものであってよい）と、腫瘍抗原に対して免疫特異的な２つのエピトープ結合部位（これらは、あるＴＡの同一のエピトープ又はあるＴＡの異なるエピトープ又は異なる複数のＴＡの異なるエピトープに結合できるものであってよい）とを含む。
【０２７６】
本発明の更なる好ましいＦｃ担持ダイアボディは、５つのポリペプチド鎖を含み、図５Ａ〜５Ｄに示されている。このようなダイアボディの第１のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＨ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＣＨ１含有ドメイン；及び（ｉｉｉ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメインを含有する。第１のポリペプチド鎖は、ＶＨ１及び重鎖定常領域を含有する抗体の重鎖であってよい。このようなダイアボディの第２及び第５のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＬ１含有ドメイン；及び（ｉｉ）ＣＬ含有ドメインを含有する。このようなダイアボディの第２及び／又は第５のポリペプチド鎖は、第１の／第３のポリペプチド鎖のＶＨ１に対して相補的なＶＬ１を含有する抗体の軽鎖であってよい。第１、第２及び／又は第５のポリペプチド鎖は、自然発生した抗体から単離してよい。あるいはこれらを組み換えによって構成してよい。ある好ましい実施形態では、第２及び第５のポリペプチド鎖は、同一のアミノ酸配列を有する。このようなダイアボディの第３のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＨ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＣＨ１含有ドメイン；（ｉｉｉ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメイン；（ｉｖ）ＶＬ２含有ドメイン；（ｖ）ＶＨ３含有ドメイン；及び（ｖｉ）ヘテロ二量体促進ドメインを含有し、上記ヘテロ二量体促進ドメインは、第３の鎖と第４の鎖との二量体化を促進する。このようなダイアボディの第４のポリペプチドは：（ｉ）ＶＬ３含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ２含有ドメイン；並びに（ｉｉｉ）このダイアボディの第３のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進するドメインを含有する。好ましくは、第３及び第４のポリペプチド鎖のＶＨ３及びＶＨ２含有ドメインのＣ末端は、介在リンカーペプチド（リンカー２）によってヘテロ二量体促進ドメインに連結され、第３のポリペプチド鎖のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインのＣ末端は、介在リンカーペプチド（リンカー４）によってＶＬ２含有ドメインに連結される。
【０２７７】
よって、このようなダイアボディの第１のポリペプチド鎖と第２のポリペプチド鎖、及び第３のポリペプチド鎖と第５のポリペプチド鎖は、１つに集合して、第１のエピトープに結合できる２つのＶＬ１／ＶＨ１結合部位を形成する。このようなダイアボディの第３のポリペプチド鎖と第４のポリペプチド鎖は、１つに集合して、第２のエピトープに結合できるＶＬ２／ＶＨ２結合部位、及び第３のエピトープに結合できるＶＬ３／ＶＨ３結合部位を形成する。第１及び第３のポリペプチドは、それぞれの定常領域中のシステイン残基が関与するジスルフィド結合によって、互いに結合する。特に、第１及び第３のポリペプチド鎖は互いに複合体化して、Ｆｃ領域を形成する。このような二重特異性ダイアボディは強化された有効性を有する。図５Ａ〜５Ｄは、このようなダイアボディの構造を示す。単一特異性、二重特異性又は三重特異性の結合を可能とするために、ＶＬ１／ＶＨ１、ＶＬ２／ＶＨ２、及びＶＬ３／ＶＨ３ドメインは同一であっても異なっていてもよいことが理解されるだろう。しかしながら、本明細書中で提供されるように、これらのドメインは好ましくは、ＣＤ１３７及びＴＡに結合するように選択される。
【０２７８】
ポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、所望のエピトープに対して特異的なＶＬ／ＶＨ結合部位を形成するように選択される。ポリペプチド鎖の集合によって形成されるＶＬ／ＶＨ結合部位は、単一特異性、二重特異性、三重特異性又は四重特異性の４価結合を可能とするために、同一であっても異なっていてもよい。特に、ＶＬ及びＶＨドメインは、（図５Ａ〜５Ｄに示すように）二重特異性ダイアボディが：第１のエピトープに対する２つの結合部位及び第２のエピトープに対する２つの結合部位；又は第１のエピトープに対する３つの結合部位及び第２のエピトープに対する１つの結合部位；又は第１のエピトープに対する２つの結合部位、第２のエピトープに対する１つの結合部位及び第３のエピトープに対する１つの結合部位を含むことができるように、選択してよい。本発明の代表的な５鎖Ｆｃ領域含有ダイアボディのポリペプチド鎖の一般構造を、表４で提供する：
【０２７９】
【表４】
2020508334.tif 000010
【０２８０】
ある好ましい実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７に対して免疫特異的な２つのエピトープ結合部位（これらはＣＤ１３７の同一のエピトープ又はＣＤ１３７の異なる複数のエピトープに結合できるものであってよい）及びＴＡに対して免疫特異的な２つのエピトープ結合部位（これらはあるＴＡの同一のエピトープ、又はあるＴＡの異なるエピトープ、又は異なる複数のＴＡの異なる複数のエピトープに結合できるものであってよい）を有する合計５つのポリペプチド鎖からなる、二重特異性、４価（即ち４つのエピトープ結合部位を有する）、Ｆｃ担持ダイアボディである。別の実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤ１３７に対して免疫特異的な３つのエピトープ結合部位（これらはＣＤ１３７の同一のエピトープ又はＣＤ１３７の異なる２つ若しくは３つのエピトープに結合できるものであってよい）及びＴＡに対して特異的な１つのエピトープ結合部位を含む、二重特異性、４価、Ｆｃ担持ダイアボディである。
【０２８１】
Ｂ．３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子
一実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は３価であり、第１のエピトープ結合部位（例えばＶＬ１及びＶＨ１）、第２のエピトープ結合部位（例えばＶＬ２及びＶＨ２）、並びに第３のエピトープ結合部位（例えばＶＬ３及びＶＨ３）を含み、従ってＴＡのエピトープ、ＣＤ１３７のエピトープ、及び第３のエピトープに結合でき、上記第３のエピトープは：
（ａ）上記ＴＡの、同一の若しくは異なるエピトープ；
（ｂ）上記ＣＤ１３７の、同一の若しくは異なるエピトープ；又は
（ｃ）異なるＴＡのエピトープ
であってよい。
【０２８２】
好ましくは、本発明のこのような「３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子」は、ＣＤ１３７のエピトープに対する２つのエピトープ結合部位（上記エピトープは同一であっても異なっていてもよい）、及びＴＡのエピトープに対する１つのエピトープ結合部位を含む。
【０２８３】
一般に、本発明のこのような３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、３つ、４つ、５つ又は６つ以上のポリペプチド鎖からなり、上記ポリペプチド鎖は、これらのポリペプチドのペアの間の１つ以上のジスルフィド結合により、「ダイアボディ型結合ドメイン」及び「非ダイアボディ型結合ドメイン」を含む共有結合分子複合体を形成する。
【０２８４】
「ダイアボディ型結合ドメイン」は、ダイアボディ、特にＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディのエピトープ結合ドメインである。用語「ダイアボディ」及び「ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディ」については上述した。「非ダイアボディ型」結合ドメインは、ダイアボディ型結合ドメインの構造を有しない結合ドメインを指すことを意図している。好ましくは、非ダイアボディ型結合ドメインは、Ｆａｂ型結合ドメイン又はＳｃＦｖ型結合ドメインである。本明細書中で使用される場合、用語「Ｆａｂ型結合ドメイン」は、免疫グロブリン軽鎖のＶＬドメインと、免疫グロブリン重鎖の相補的なＶＨドメインとの相互作用によって形成されるエピトープ結合ドメインを指す。Ｆａｂ型結合ドメインは、Ｆａｂ型結合ドメインを形成する２つのポリペプチド鎖が単一のエピトープ結合ドメインのみを含み、その一方でダイアボディ型結合ドメインを形成する２つのポリペプチド鎖が少なくとも２つのエピトープ結合ドメインを含むという点で、ダイアボディ型結合ドメインとは異なる。ＳｃＦｖ型結合ドメインは、同一のポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインが相互作用してエピトープ結合ドメインを形成するという点で、ダイアボディ型結合ドメインとは異なる。よって、本明細書中で使用される場合、Ｆａｂ型結合ドメイン及びＳｃＦｖ型結合ドメインはダイアボディ型結合ドメインとは異なる。
【０２８５】
よって、本発明の３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は好ましくは：
（Ｉ）「第１の」エピトープに免疫特異的に結合できる「第１の」エピトープ結合ドメイン；
（ＩＩ）「第２の」エピトープに免疫特異的に結合できる「第２の」エピトープ結合ドメイン；
（ＩＩＩ）「第３の」エピトープに免疫特異的に結合できる「第３の」エピトープ結合ドメイン；及び
（ＩＶ）２つのＣＨ２‐ＣＨ３ドメインの互いに対する集合によって形成されるＦｃドメイン
を含み、ここで：
（Ａ）「第１の」エピトープ結合ドメイン及び「第２の」エピトープ結合ドメインは、いずれもダイアボディ型結合ドメインであり；
（Ｂ）「第３の」エピトープ結合ドメインは、非ダイアボディ型結合ドメインであり；
（Ｃ）上記「第１」、「第２」又は「第３の」エピトープ結合ドメインのうちの１つは、ＴＡのエピトープに結合し、上記「第１」、「第２」又は「第３の」エピトープ結合ドメインのうちの別の１つは、ＣＤ１３７のエピトープに結合する。
【０２８６】
残ったエピトープ結合ドメインが結合するエピトープは、いずれの所望のエピトープ、好ましくはＣＤ１３７のエピトープであってよい。このようなエピトープは、この分子の他のエピトープ結合ドメインが結合するＣＤ１３７エピトープと同一であっても異なっていてもよい。
【０２８７】
図６Ａ〜６Ｈは、好ましい３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のドメインの模式図を提供する。図６Ａ〜６Ｄは、４つのポリペプチド鎖の共有結合複合体化によって構成され、１つの非ダイアボディ型結合部位（ＶＬ３／ＶＨ３、従ってこのようなエピトープに対して１価である）、並びに２つのダイアボディ型結合部位（ＶＬ１／ＶＨ１及びＶＬ２／ＶＨ２、従ってこのようなエピトープそれぞれに対して１価である）を有する、好ましい３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のドメインの概略図を示す。図６Ｅ〜６Ｈは、３つのポリペプチド鎖の共有結合複合体化によって構成され、１つの非ダイアボディ型結合部位（ＶＬ３／ＶＨ３、従ってこのようなエピトープに対して１価である）、並びに２つのダイアボディ型結合部位（ＶＬ１／ＶＨ１及びＶＬ２／ＶＨ２、従ってこのようなエピトープそれぞれに対して１価である）を有する、好ましい３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のドメインの概略図を示す。図６Ａ〜６Ｈに示されている非ダイアボディ型結合部位は、図６Ａ〜６ＤではＦａｂ型結合ドメインであり、図６Ｅ〜６ＨではｓｃＦｖ型結合ドメインである。以下に提供するように、ポリペプチド鎖の集合によって形成されるＶＬ／ＶＨ結合部位は、単一特異性、二重特異性、又は三重特異性の３価結合を可能とするために、同一であっても異なっていてもよい。
【０２８８】
ＩＶ．例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子
本発明は、ＣＤ１３７及びＴＡに同時かつ特異的に結合できる二重特異性４価Ｆｃダイアボディである、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供する。上述のように、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、４つ又は５つのポリペプチド鎖を含んでよい。ＣＤ１３７、及びＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できる、７つの例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のポリペプチド鎖を、以下に提供する（それぞれ「ＤＡＲＴ‐Ａ」、「ＤＡＲＴ‐Ｂ」、「ＤＡＲＴ‐Ｃ」、「ＤＡＲＴ‐Ｄ」、「ＤＡＲＴ‐Ｅ」、「ＤＡＲＴ‐Ｆ」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ１」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ２」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ３」、及び「ＤＡＲＴ‐Ｇ４」と称される）。本発明は更に、ＣＤ１３７及びＴＡに同時かつ特異的に結合できる二重特異性３価Ｆｃダイアボディである、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を提供する。上述のように、本発明の３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、４つのポリペプチド鎖を含んでよい。ＣＤ１３７、及びＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できる、例示的なＣＤ１３７×ＴＡ三重特異性結合分子のポリペプチド鎖を、以下に提供する（それぞれ「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２」、及び「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５」と称される）。
【０２８９】
Ａ．ＤＡＲＴ‐Ａ
ＤＡＲＴ‐Ａは４つのポリペプチド鎖からなり、第１及び第３のポリペプチド鎖が同一であり、また第２及び第４のポリペプチド鎖が同一である（図３Ｂを参照）。
【０２９０】
ＤＡＲＴ‐Ａの第１及び第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８））；リンカー（LEPKSADKTHTCPPCP（配列番号３０））；エフェクタ機能を略有しない例示的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（配列番号４０）；及びＣ末端を含む。
【０２９１】
ＤＡＲＴ‐Ａの第１及び第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号９８）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIN TYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLVEGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG EVAACEKEVA 
ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK 
PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY 
NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP 
QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP 
VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
である。
【０２９２】
よって、ＤＡＲＴ‐Ａの第１及び第３のポリペプチド鎖は：配列番号６８‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１８‐配列番号３８‐配列番号３０‐配列番号４０からなる。
【０２９３】
ＤＡＲＴ‐Ａの第２及び第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、配列番号６４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９））；及びＣ末端を含む
【０２９４】
よって、ＤＡＲＴ‐Ａの第２及び第４のポリペプチド鎖は：配列番号８７‐配列番号１６‐配列番号６４‐配列番号１８‐配列番号３９からなる。
【０２９５】
ＤＡＲＴ‐Ａの第２及び第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号９９）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN 
WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK GRVTMTRDTS ISTAYMELSR 
LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG KVAACKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０２９６】
Ｂ．ＤＡＲＴ‐Ｂ
ＤＡＲＴ‐Ｂは４つのポリペプチド鎖からなり、第１及び第３のポリペプチド鎖が同一であり、また第２及び第４のポリペプチド鎖が同一である（図３Ｂを参照）。
【０２９７】
ＤＡＲＴ‐Ｂの第１及び第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８））；リンカー（LEPKSADKTHTCPPCP（配列番号３０））；エフェクタ機能を略有しない例示的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（配列番号４０）；及びＣ末端を含む。
【０２９８】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｂの第１及び第３のポリペプチド鎖は：配列番号６９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１８‐配列番号３８‐配列番号３０‐配列番号４０からなる。
【０２９９】
ＤＡＲＴ‐Ｂの第１及び第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１００）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG EVAACEKEVA 
ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK P
KDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY 
NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP 
QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP 
VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
である。
【０３００】
ＤＡＲＴ‐Ｂの第２及び第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、配列番号６４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９））；及びＣ末端を含む。
【０３０１】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｂの第２及び第４のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号６４‐配列番号１８‐配列番号３９からなる。
【０３０２】
ＤＡＲＴ‐Ｂの第２及び第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０１）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN 
WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK GRVTMTRDTS ISTAYMELSR 
LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG KVAACKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３０３】
Ｃ．ＤＡＲＴ‐Ｃ
ＤＡＲＴ‐Ｃは４つのポリペプチド鎖からなり、第１及び第３のポリペプチド鎖が同一であり、また第２及び第４のポリペプチド鎖が同一である（図３Ｂを参照）。
【０３０４】
ＤＡＲＴ‐Ｃの第１及び第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８））；リンカー（LEPKSADKTHTCPPCP（配列番号３０））；エフェクタ機能を略有しない例示的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン（配列番号４０）；及びＣ末端を含む。
【０３０５】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｃの第１及び第３のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号６４‐配列番号１８‐配列番号３８‐配列番号３０‐配列番号４０からなる。
【０３０６】
ＤＡＲＴ‐Ｃの第１及び第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０２）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN 
WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK GRVTMTRDTS ISTAYMELSR 
LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG EVAACEKEVA 
ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK 
PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY 
NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP 
QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP 
VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
である。
【０３０７】
ＤＡＲＴ‐Ｃの第２及び第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３、配列番号６９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９））；及びＣ末端である。
【０３０８】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｃの第２及び第４のポリペプチド鎖は：配列番号６９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１８‐配列番号３９からなる。
【０３０９】
ＤＡＲＴ‐Ｃの第２及び第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０３）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAACKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３１０】
Ｄ．ＤＡＲＴ‐Ｄ
ＤＡＲＴ‐Ｄは５つのポリペプチド鎖からなり、そのうち第２及び第５のポリペプチド鎖が同一である（ＶＬ２／ＶＨ２がＶＬ３／ＶＨ３と同一である図５Ａ、及び図５Ｂを参照）。
【０３１１】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号７）；並びに「ホール担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４７）を含む。
【０３１２】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖は：配列番号６４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４７からなる。
【０３１３】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０４）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLSCA VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLVS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNRYTQ KSLSLSPGK
である。
【０３１４】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９））；ヒトＩｇＧ  ＣＬ  κドメイン（配列番号１）；及びＣ末端を含む。
【０３１５】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖は：配列番号６９‐配列番号１からなる。
【０３１６】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０５）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV 
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG 
LSSPVTKSFN RGEC
である。
【０３１７】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１、配列番号６４））；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号７）；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；介在リンカーペプチド（GGGSGGGSGGG（配列番号２４））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３６））；並びにＣ末端を含む。
【０３１８】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｄの第３のポリペプチド鎖は：配列番号６４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４４‐配列番号２４‐配列番号７５‐配列番号１６‐配列番号７４‐配列番号１８‐配列番号３６からなる。
【０３１９】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０６）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI SCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
GTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDY SLTISNLEQE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGGG TKLEIKGGGS GGGGQVQLQQ PGAELVRPGA SVKLSCKASG 
YTFTSYWINW VKQRPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYNQKFKD KATLTVDKSS 
STAYMQLSSP TSEDSAVYYC TRDYGSSYSF DYWGQGTTLT VSSGGCGGGE 
VAALEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEK
である。
【０３２０】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE）（配列番号３７）；及びＣ末端を含む。
【０３２１】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｄの第４のポリペプチド鎖は：配列番号７５‐配列番号１６‐配列番号７４‐配列番号１８‐配列番号３７からなる。
【０３２２】
ＤＡＲＴ‐Ｄの第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０７）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLQ QPGAELVRPG ASVKLSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQRPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATLTVDKS SSTAYMQLSS 
PTSEDSAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTL TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３２３】
Ｅ．ＤＡＲＴ‐Ｅ
ＤＡＲＴ‐Ｅは５つのポリペプチド鎖からなり、そのうち第２及び第５のポリペプチド鎖が同一である（ＶＬ２／ＶＨ２がＶＬ３／ＶＨ３と同一である図５Ａ、及び図５Ｃを参照）。
【０３２４】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４））；ＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ＩｇＧ１ヒンジドメイン（配列番号７）；「ホール担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４７）；並びにＣ末端を含む。
【０３２５】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｅの第１のポリペプチド鎖は：配列番号７４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４７からなる。
【０３２６】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０８）：
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN 
IYPSDSYTNY NQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTRDY 
GSSYSFDYWG QGTTLTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLSCA VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLVS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNRYTQ KSLSLSPGK
である。
【０３２７】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第２及び第５のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137u）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５））；ヒトＩｇＧ  ＣＬκドメイン（配列番号１）；及びＣ末端を含む。
【０３２８】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｅの第２及び第５のポリペプチド鎖は：配列番号７５‐配列番号１からなる。
【０３２９】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第２及び第５のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１０９）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG 
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV 
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG 
LSSPVTKSFN RGEC
である。
【０３３０】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ、配列番号７４））；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号７）；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；介在リンカーペプチド（GGGSGGGSGGG（配列番号２４））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３６））；並びにＣ末端を含む。
【０３３１】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｅの第３のポリペプチド鎖は：配列番号７４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４４‐配列番号２４‐配列番号６９‐配列番号１６‐配列番号６４‐配列番号１８‐配列番号３６からなる。
【０３３２】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１０）：
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN 
IYPSDSYTNY NQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTRDY 
GSSYSFDYWG QGTTLTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCKASQDISN YLSWFQQKPG 
KAPKTLIYRA NRLQSGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE DFATYYCLQH 
DEFPWTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQLVQ SGAEVKKPGA SVKVSCKASG 
YTFTNYGMNW VRQAPGQGLE WMGWINTNIG EPTYTEEFKG RVTMTRDTSI 
STAYMELSRL RSDDTAVYYC ARDDGYGNRV SYWGQGTLVT VSSGGCGGGE 
VAALEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEK
である。
【０３３３】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE）（配列番号３７）；及びＣ末端を含む。
【０３３４】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｅの第４のポリペプチド鎖は：配列番号６９‐配列番号１６‐配列番号６４‐配列番号１８‐配列番号３７からなる。
【０３３５】
ＤＡＲＴ‐Ｅの第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１１）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR 
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN 
WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK GRVTMTRDTS ISTAYMELSR 
LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３３６】
Ｆ．ＤＡＲＴ‐Ｆ
ＤＡＲＴ‐Ｆは５つのポリペプチド鎖からなり、そのうち第２及び第５のポリペプチド鎖が同一である（ＶＬ２／ＶＨ２がＶＬ３／ＶＨ３と同一である図５Ａ、及び図５Ｂを参照）。
【０３３７】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第１のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一である。
【０３３８】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第２及び第５のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５）と同一である。
【０３３９】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；ＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ＩｇＧ１ヒンジドメイン（配列番号７）；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；介在リンカーペプチド（GGGSGGGSGGG（配列番号２４））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３６））；並びにＣ末端を含む。
【０３４０】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｆの第３のポリペプチド鎖は：配列番号６４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４４‐配列番号２４‐配列番号９１‐配列番号１６‐配列番号９０‐配列番号１８‐配列番号３６からなる。
【０３４１】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１２）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI SCRASQDISN YLNWYQQKPD 
GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY SLTISNLEQE DIATYFCQQG 
NTLPYTFGGG TKLEIKGGGS GGGGQVQLQQ PGAELVRPGA SVKLSCKASG 
YTFTSYWINW VKQRPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYDQKFKD KATLTVDKSS 
STAYMQLSSP TSEDSAVYYC TKSGEYGKIG YYAMDYWGQG TSVTVSSGGC 
GGGEVAALEK EVAALEKEVA ALEKEVAALE K
である。
【０３４２】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE）（配列番号３７）；及びＣ末端を含む。
【０３４３】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｆの第４のポリペプチド鎖は：配列番号９１‐配列番号１６‐配列番号９０‐配列番号１８‐配列番号３７からなる。
【０３４４】
ＤＡＲＴ‐Ｆの第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１３）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY 
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPYTFGG 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLQ QPGAELVRPG ASVKLSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQRPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYDQKFK DKATLTVDKS SSTAYMQLSS 
PTSEDSAVYY CTKSGEYGKI GYYAMDYWGQ GTSVTVSSGG CGGGKVAALK 
EKVAALKEKV AALKEKVAAL KE
である。
【０３４５】
Ｇ．ＤＡＲＴ‐Ｇ
ＤＡＲＴ‐Ｇは５つのポリペプチド鎖からなり、そのうち第２及び第５のポリペプチド鎖が同一である（ＶＬ２／ＶＨ２がＶＬ３／ＶＨ３と同一である図５Ａ、及び図５Ｂを参照）。
【０３４６】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第１のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一である。
【０３４７】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第２及び第５のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５）と同一である。
【０３４８】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；ＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ＩｇＧ１ヒンジドメイン（配列番号７）；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；介在リンカーペプチド（GGGSGGGSGGG（配列番号２４））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３６））；並びにＣ末端を含む。
【０３４９】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｇの第３のポリペプチド鎖は：配列番号６４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４４‐配列番号２４‐配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１８‐配列番号３６からなる。
【０３５０】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１４）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQLVQ SGAEVKKPGA SVKVSCKASG 
YTFTSYWINW VKQAPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYNQKFKD KATITADKST 
STAYMELSSL RSEDTAVYYC TRDYGSSYSF DYWGQGTTVT VSSGGCGGGE 
VAALEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEK
である。
【０３５１】
配列番号７６のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）、配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）、配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）、又は配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）のアミノ酸残基で置換された、代替的なＤＡＲＴ‐Ｇの第３のポリペプチド鎖を使用してよい。このようなポリペプチド鎖を含む最適化された分子について、以下で説明する。
【０３５２】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；GGCGGG（配列番号１８））；ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE）（配列番号３７）；及びＣ末端を含む。
【０３５３】
よって、ＤＡＲＴ‐Ｇの第４のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１８‐配列番号３７からなる。
【０３５４】
ＤＡＲＴ‐Ｇの第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１１９）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３５５】
配列番号７６のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）、配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）、配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）、又は配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）のアミノ酸残基で置換された、代替的なＤＡＲＴ‐Ｇの第４のポリペプチド鎖を使用してよい。このようなポリペプチド鎖を含む最適化された分子について、以下で説明する。
【０３５６】
Ｈ．最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ
「ＤＡＲＴ‐Ｇ１」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ２」、「ＤＡＲＴ‐Ｇ３」、及び「ＤＡＲＴ‐Ｇ４」と称される、ＤＡＲＴ‐Ｇの最適化変異型は、５つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメインと、抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ａ．３）〜（１Ｄ．３）のうちのいずれのＣＤ１３７結合ドメインとを含有する。
【０３５７】
このようなＤＡＲＴ‐Ｇの最適化変異型の第１のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｇの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３５８】
このようなＤＡＲＴ‐Ｇの最適化変異型の第２及び第５のポリペプチド鎖は、ＤＡＲＴ‐Ｇの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３５９】
このようなＤＡＲＴ‐Ｇの最適化変異型の第３及び第４のポリペプチド鎖は、以下で提供されるように：配列番号１１５及び配列番号１２０（ＤＡＲＴ‐Ｇ１）；配列番号１１６及び配列番号１２１（ＤＡＲＴ‐Ｇ２）；配列番号１１７及び配列番号１２２（ＤＡＲＴ‐Ｇ３）；又は配列番号１１８及び配列番号１２３（ＤＡＲＴ‐Ｇ４）のアミノ酸配列を有する。
【０３６０】
配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ１の第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１５：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA 
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK 
STSTAYMELS SLRSEDTAVY YCTRDYGSAY SFHPWGQGTT VTVSSGGCGG 
GEVAALEKEV AALEKEVAAL EKEVAALEK
である。
【０３６１】
配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ２の第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１６：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA 
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK 
STSTAYMELS SLRSEDTAVY YCTRDYGSAY SMSTWGQGTT VTVSSGGCGG 
GEVAALEKEV AALEKEVAAL EKEVAALEK
である。
【０３６２】
配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ３の第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１７：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA 
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK 
STSTAYMELS SLRSEDTAVY YCTRDYGSAY SYSLWGQGTT VTVSSGGCGG 
GEVAALEKEV AALEKEVAAL EKEVAALEK
である。
【０３６３】
配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ４の第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１１８：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW 
INTNIGEPTY TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD 
GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 
ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP SVFLFPPKPK 
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 
YTLPPSREEM TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG 
GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI TCRPSQDISN YLNWYQQKPD 
KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYFCQQG 
DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA 
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK 
STSTAYMELS SLRSEDTAVY YCTRDYGSSY SYNVWGQGTT VTVSSGGCGG 
GEVAALEKEV AALEKEVAAL EKEVAALEK
である。
【０３６４】
配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ１の第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２０：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS FHPWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３６５】
配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ２の第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２１：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３６６】
配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ３の第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２２：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS YSLWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３６７】
配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）を含む最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ４の第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１２３：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS YNVWGQGTTV TVSSGGCGGG KVAALKEKVA 
ALKEKVAALK EKVAALKE
である。
【０３６８】
Ｉ．ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａは、２つのＣＤ１３７結合部位と、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つの結合部位とを有する、３価ＣＤ１３７×ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子である。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａは４つのポリペプチド鎖からなる（ＶＬ１／ＶＨ１（部位Ａ）がＶＬ２／ＶＨ２（部位Ｂ）と同一であり、かつＣＤ１３７に結合し、またＶＬ３／ＶＨ３（部位Ｃ）がＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する、図６Ａを参照）。
【０３６９】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；ASTKG（配列番号１９））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８））；介在リンカーペプチド（GGGDKTHTCPPCP（配列番号２１））；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；並びにＣ末端を含む。
【０３７０】
よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１９‐配列番号３８‐配列番号２１‐配列番号４４からなる。
【０３７１】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１９２）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３７２】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；ASTKG（配列番号１９））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９））；及びＣ末端を含む。
【０３７３】
よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１９‐配列番号３９からなる。
【０３７４】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号１９７）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３７５】
配列番号７６のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）、配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）、配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）、配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）、配列番号２０８（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ）、配列番号２０９（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ）、若しくは配列番号２１０（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ）のアミノ酸残基で置換された、及び／又は配列番号８９のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号２１１（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４）、配列番号２１２（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５）、配列番号２１３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６）、配列番号２１４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７）、配列番号２１５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８）、配列番号２１６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９）、配列番号２１７（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０）、配列番号２１８（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１）、配列番号２１９（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２）、配列番号２２０（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３）、配列番号２２１（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４）、若しくは配列番号２２２（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５）のアミノ酸残基で置換された、代替的なＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１及び第２のポリペプチド鎖を採用してもよい。このようなポリペプチド鎖の多くを含む最適化/脱免疫化された分子について、以下で説明する。
【０３７６】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４））；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号７）；並びに「ホール担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４７）を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第３のポリペプチド鎖は：配列番号６４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４７からなり、上で提供したＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３７７】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬHER2/neu）（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９））；ヒトＩｇＧ  ＣＬκドメイン（配列番号１）；及びＣ末端を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第４のポリペプチド鎖は：配列番号６９‐配列番号１からなり、上で提供したＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３７８】
１．ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの最適化変異型
「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３」、及び「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４」と称されるＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの最適化変異型は、４つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメイと、抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ａ．３）〜（１Ｄ．３）のうちのいずれのＣＤ１３７結合ドメインとを含有する。
【０３７９】
このような最適化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第３のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第３のポリペプチド鎖と同一のアミノ酸配列を有し、これは上述のように、ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一である。
【０３８０】
このような最適化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第４のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第４のポリペプチド鎖と同一のアミノ酸配列を有し、これは上述のように、ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５）と同一である。
【０３８１】
このような最適化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１及び第２のポリペプチド鎖は、以下で提供されるように：配列番号１９３及び配列番号１９８（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１）；配列番号１９４及び配列番号１９９（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２）；配列番号１９５及び配列番号２００（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３）；又は配列番号１９６及び配列番号２０１（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４）のアミノ酸配列を有する。
【０３８２】
配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１の第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９３：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS FHPWGQGTTV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３８３】
配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９４：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３８４】
配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３の第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９５：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS YSLWGQGTTV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３８５】
配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９６：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS YNVWGQGTTV TVSSASTKGE VAACEKEVAA
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３８６】
配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１の第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９８：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS FHPWGQGTTV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３８７】
配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号１９９：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３８８】
配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３の第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号２００：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS YSLWGQGTTV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３８９】
配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）を含む、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、配列番号２０１：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY 
TSRLRSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS YNVWGQGTTV TVSSASTKGK VAACKEKVAA
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３９０】
２．ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの脱免疫化変異型
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの脱免疫化変異型は、４つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメインと、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ〜ＶＨ１ＧのうちのいずれのＣＤ１３７  ＶＨドメインと、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４〜ＶＬ１５のうちのいずれのＣＤ１３７  ＶＬドメインとを含有する。
【０３９１】
「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５」と称される、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの例示的な脱免疫化変異型は、４つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメインと、抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）のうちのいずれのＣＤ１３７結合ドメインとを含有する。
【０３９２】
（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５を含む）ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第１のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号２２９）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TGRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVRQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGEVAACEKEVAA 
LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT 
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY 
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 
LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS 
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
である。
【０３９３】
（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５を含む）ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第２のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号２３０）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY
TGRARSGVPS RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ 
GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN 
WVRQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK DKATITADKS TSTAYMELSS 
LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGKVAACKEKVAA 
LKEKVAALKE KVAALKE
である。
【０３９４】
このような脱免疫化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第３のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第３のポリペプチド鎖と同一のアミノ酸配列を有し、これは上述のように、ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖（配列番号１０４）と同一である。
【０３９５】
このような脱免疫化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第４のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第４のポリペプチド鎖と同一のアミノ酸配列を有し、これは上述のように、ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖（配列番号１０５）と同一である。
【０３９６】
Ｊ．ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂは、２つのＣＤ１３７結合部位と、例示的なＴＡである５Ｔ４に対する１つの結合部位とを有する、３価ＣＤ１３７×ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子である。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂは４つのポリペプチド鎖からなる（ＶＬ１／ＶＨ１（部位Ａ）がＶＬ２／ＶＨ２（部位Ｂ）と同一であり、かつＣＤ１３７に結合し、またＶＬ３／ＶＨ３（部位Ｃ）が５Ｔ４に結合する、図６Ａを参照）。
【０３９７】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；ASTKG（配列番号１９））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｅコイル）ドメイン（EVAACEK-EVAALEK-EVAALEK-EVAALEK（配列番号３８））；介在リンカーペプチド（GGGDKTHTCPPCP（配列番号２１））；「ノブ担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４４）；並びにＣ末端を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第１のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１９‐配列番号３８‐配列番号２１‐配列番号４４からなり、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１のポリペプチド鎖（配列番号１９２）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３９８】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９））；介在リンカーペプチド（リンカー１；GGGSGGGG（配列番号１６））；ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137）（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６））；介在リンカーペプチド（リンカー２；ASTKG（配列番号１９））；システイン含有ヘテロ二量体促進（Ｋコイル）ドメイン（KVAACKE-KVAALKE-KVAALKE-KVAALKE（配列番号３９））；及びＣ末端を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第２のポリペプチド鎖は：配列番号８９‐配列番号１６‐配列番号７６‐配列番号１９‐配列番号３９からなり、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖（配列番号１９７）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０３９９】
配列番号７６のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号８３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ）、配列番号８４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ）、配列番号８５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ）、配列番号８６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ）、配列番号２０８（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ）、配列番号２０９（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ）、若しくは配列番号２１０（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ）のアミノ酸残基で置換された、及び／又は配列番号８９のアミノ酸残基（ＣＤ１３７に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＨCD137））が、配列番号２１１（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４）、配列番号２１２（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５）、配列番号２１３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６）、配列番号２１４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７）、配列番号２１５（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８）、配列番号２１６（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９）、配列番号２１７（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０）、配列番号２１８（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１）、配列番号２１９（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２）、配列番号２２０（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３）、配列番号２２１（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４）、若しくは配列番号２２２（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５）のアミノ酸残基で置換された、代替的なＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第１及び第２のポリペプチド鎖を採用してもよい。このようなポリペプチド鎖の多くを含む最適化／脱免疫化された分子が本明細書に記載され、これらは、最適化／脱免疫化ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ分子（例えばＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１〜ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５）の第１及び第２のポリペプチド鎖と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４００】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第３のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；５Ｔ４に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨ5t4）（ｈ５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３４））；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン（配列番号３）；ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（配列番号７）；並びに「ホール担持」ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（配列番号４７）を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第３のポリペプチド鎖は：配列番号１３４‐配列番号３‐配列番号７‐配列番号４７からなる。
【０４０１】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号２３１）：
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SFWMHWVRQA PGQGLEWMGR
IDPNRGGTEY NEKAKSRVTM TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAGGN
PYYPMDYWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY
FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI
CNVNHKPSNT KVDKRVEPKS CDKTHTCPPC PAPEAAGGPS VFLFPPKPKD
TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST
YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY
TLPPSREEMT KNQVSLSCAV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD
SDGSFFLVSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNRYTQK SLSLSPGK
である。
【０４０２】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第４のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；５Ｔ４に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬ5T4）（ｈ５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号１３５））；ヒトＩｇＧ  ＣＬκドメイン（配列番号１）；及びＣ末端を含む。よって、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第４のポリペプチド鎖は：配列番号１３５‐配列番号１からなる。
【０４０３】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第４のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、（配列番号２３２）：
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS NYLAWFQQKP GKAPKSLIYR
ANRLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCLQ YDDFPWTFGQ
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
である。
【０４０４】
１．ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの最適化及び脱免疫化変異型
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの最適化及び脱免疫化変異型は、４つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈ５Ｔ４  ＭＡＢ‐１の５Ｔ４結合ドメインと、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ〜ＶＨ１ＧのうちのいずれのＣＤ１３７  ＶＨドメインと、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３〜ＶＬ１５のうちのいずれのＣＤ１３７  ＶＬドメインとを含有する。
【０４０５】
「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２」、及び「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５」と称される、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの例示的な最適化及び脱免疫化変異型は、４つのポリペプチド鎖からなり、抗体ｈ５Ｔ４  ＭＡＢ‐１の５Ｔ４結合ドメインと、それぞれ抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）のＣＤ１３７結合ドメインとを含有する。
【０４０６】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２の第１のポリペプチド鎖は、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第１のポリペプチド鎖（配列番号１９４）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４０７】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２の第２のポリペプチド鎖は、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第２のポリペプチド鎖（配列番号１９９）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４０８】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５の第１のポリペプチド鎖は、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第１のポリペプチド鎖（配列番号２２９）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４０９】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５の第２のポリペプチド鎖は、上で提供されているＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第２のポリペプチド鎖（配列番号２３０）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４１０】
これら両方のＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの例示的な最適化及び脱免疫化変異型の第３のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第３のポリペプチド鎖（配列番号２３１）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４１１】
これら両方のＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの例示的な最適化及び脱免疫化変異型の第４のポリペプチド鎖は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第４のポリペプチド鎖（配列番号２３２）と同一のアミノ酸配列を有する。
【０４１２】
Ｋ．代替的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子
本開示に鑑みて認識されるように、上述の例示的な分子のうちのいずれの一般構造を有し、かつ代替的な腫瘍抗原に対する結合部位を含む、及び／又は最適化／脱免疫化ＣＤ１３７結合部位を有する、更なるＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ若しくは抗５Ｔ４抗体のＶＬ及びＶＨドメイン、並びに／又は本明細書に開示された最適化／脱免疫化ＣＤ１３７抗体のうちのいずれのＶＬ及びＶＨドメインの代わりに、代替的な腫瘍抗原抗体のＶＬ及びＶＨドメインを採用することによって、構成してよい。同様に、本明細書中で提供されているように、代替的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、代替的なリンカー及び／又はヘテロ二量体促進ドメインを同様に組み込んで構成してよい。
【０４１３】
Ｖ．対照分子
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の特性を更に有意義に実証するために、対照Ｆｃ担持ダイアボディ及び他の対照結合分子の生成にＶＬ及びＶＨドメインを使用できる対照抗体を、以下に提示する。
【０４１４】
抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０（Gruber, M. et al. (1994) “Efficient Tumor Cell Lysis Mediated By A Bispecific Single Chain Antibody Expressed In Escherichia coli,” J. Immunol. 152(11):5368-5374; Bedzyk, W.D. et al. (1989) “Comparison Of Variable Region Primary Structures Within An Anti-Fluorescein Idiotype Family,” J. Biol. Chem. 264(3): 1565-1569）は、好適な対照抗体、ダイアボディである。抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０の可変軽鎖及び可変重鎖ドメインのアミノ酸配列は、以下の通りである：
【０４１５】
抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０のＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号１２４）を以下に示す（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
EVKLDETGGG LVQPGRPMKL SCVASGFTFS DYWMNWVRQS PEKGLEWVAQ 
IRNKPYNYET YYSDSVKGRF TISRDDSKSS VYLQMNNLRV EDMGIYYCTG 
SYYGMDYWGQ GTSVTVSS
【０４１６】
抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０のＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号１２５）を以下に示す（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DVVMTQTPFS LPVSLGDQAS ISCRSSQSLV HSNGNTYLRW YLQKPGQSPK 
VLIYKVSNRF SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFCSQSTHVP 
WTFGGGTKLE IK
【０４１７】
パリビズマブ（例えばタンパク質構造データバンク（ＰＤＢ）識別番号２ＨＷＺを参照）は、ＲＳＶのＦタンパク質のＡ抗原部位のエピトープに対して配向されたヒト化モノクローナル抗体（ＩｇＧ）であり、対照ダイアボディ及び他の対照結合分子の生成にＶＬ及びＶＨドメインを使用できる好適な対照抗体である。代替的な抗ＲＳＶ糖タンパク質Ｆ抗体としては、モタビズマブ（例えばＰＤＢ識別番号３ＩＸＴを参照）、及び軽鎖のＣＤＲ１からシステイン残基を除去するよう操作されたパリビズマブの変異型が挙げられる。パリビズマブの上記変異型を、以下の対照分子の生成に使用した。
【０４１８】
パリビズマブ及び上記変異型のＶＨドメインのアミノ酸配列（配列番号１２６）を以下に示す（ＣＤＲH残基は下線を付して示されている）：
QVTLRESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS TSGMSVGWIR QPPGKALEWL 
ADIWWDDKKD YNPSLKSRLT ISKDTSKNQV VLKVTNMDPA DTATYYCARS
MITNWYFDVW GAGTTVTVSS
【０４１９】
パリビズマブの上記変異型のＶＬドメインのアミノ酸配列（配列番号１２７）を以下に示す（ＣＤＲL残基は下線を付して示されている）：
DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITCRASQSVG YMHWYQQKPG KAPKLLIYDT
SKLASGVPSR FSGSGSGTEF TLTISSLQPD DFATYYCFQG SGYPFTFGGG 
TKLEIK
【０４２０】
ＶＩ．ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子及び対照分子の概要
表５は、ＤＡＲＴ‐Ａ〜ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ〜Ａ５のドメイン属性をまとめたものである：
【０４２１】
【表５】
2020508334.tif 000011
2020508334.tif 000012
【０４２２】
表６は、調製された追加のＤＡＲＴ及びＴＲＩＤＥＮＴ分子の属性を示す。
【０４２３】
【表６】
2020508334.tif 000013
【０４２４】
ＶＩＩ．医薬組成物
本発明の組成物は、医薬組成物の製造に使用できるバルク薬剤組成物（例えば不純又は非滅菌組成物）、及び単位剤形の調製に使用できる医薬組成物（即ち被験者又は患者への投与に好適な組成物）を含む。これらの組成物は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子、又はこのような作用剤と薬学的に許容可能なキャリアとの組み合わせを含む。好ましくは、本発明の組成物は、予防的又は治療的有効量の本発明のＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性Ｆｃ担持ダイアボディと、薬学的に許容可能なキャリアとを含む。
【０４２５】
本発明はまた、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を、免疫応答の刺激に有効な１つ以上の追加の分子（例えば免疫チェックポイント阻害剤）と共に、並びに／又は少なくとも１つの特定の腫瘍抗原（上述のようにＴＡ）に対して特異的な、腫瘍抗原に特異的に結合する１つ以上の追加の分子（例えば腫瘍特異性モノクローナル抗体若しくはダイアボディ）、及び薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせて含む、医薬組成物を包含する。
【０４２６】
ある具体的実施形態では、用語「薬学的に許容可能な（pharmaceutically acceptable）」は、動物、より詳細にはヒトにおける使用に関して、連邦規制当局若しくは州政府によって承認されている、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められた薬局方に記載されていることを意味する。用語「キャリア（carrier）」は、希釈剤、アジュバント（例えばフロイントアジュバント（完全及び不完全））、賦形剤、又は治療薬の投与に用いられるビヒクルを指す。これらの薬学的キャリアは、無菌液体とすることができる。医薬組成物を静脈投与する場合、生理食塩水、水性デキストロース及びグリセロール溶液といった水性キャリアが好ましい。
【０４２７】
一般に、本発明の組成物の成分は、例えば活性作用剤の量を示すアンプル又はサシェ等の気密性コンテナ中の凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として、別個に、又は単位剤形にまとめて混合された状態で供給される。組成物を点滴によって投与する場合、組成物は、滅菌された薬学的グレードの水又は食塩水を内包する点滴ボトルを用いて吐出できる。組成物を注射によって投与する場合、投与前に成分を混合できるように、注射用無菌水又は食塩水のアンプルを提供できる。
【０４２８】
本発明はまた、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を単独で、又は他の作用剤、特に薬学的に許容可能なキャリアと共に内包する１つ又は複数のコンテナを含む、医薬パック又はキットも提供する。更に、疾患の治療に有用な１つ又は複数の他の予防剤又は治療剤も、上記医薬パック又はキットに含めることができる。本発明はまた、本発明の医薬組成物の成分のうちの１つ又は複数で充填された１つ又は複数のコンテナを含む、医薬パック又はキットも提供する。任意に、このような１つ又は複数のコンテナは、医薬製品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知と関連するものとすることができ、上記通知は、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売の機関による承認を反映したものである。
【０４２９】
キットは、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を含むことができる。このキットは更に、癌の治療に有用な１つ若しくは複数の他の予防剤及び／若しくは治療剤を、１つ若しくは複数のコンテナ内に含むことができ；並びに／又はこのキットは更に、１つ若しくは複数の腫瘍抗原（ＴＡ）に結合する１つ若しくは複数の細胞毒性抗体を含むことができる。特定の実施形態では、他の予防剤又は治療剤は、化学療法剤である。他の実施形態では、予防剤又は治療剤は生物学的治療剤又はホルモン療法剤である。
【０４３０】
ＶＩＩＩ．投与方法
本発明の組成物は、有効量の本発明の分子又は本発明の分子を含む医薬組成物を被験者に投与することによる、癌又は他の疾患若しくは障害に関連する１つ又は複数の症状の治療、予防及び改善のために提供できる。好ましい態様では、上記組成物は実質的に精製される（即ち上記組成物の効果を制限する、又は望ましくない副作用を生成する物質を実質的に含まない）。ある具体的実施形態では、被験者は動物、好ましくは非霊長類（例えばウシ属、ウマ科、ネコ科、イヌ科、げっ歯類等）又は霊長類（例えばカニクイザル等のサル、ヒト等）といった哺乳類である。ある好ましい実施形態では、被験者はヒトである。
【０４３１】
例えば抗体又は融合タンパク質を発現できるリポソーム、微粒子マイクロカプセル、組み換え細胞内へのカプセル化；受容体媒介性エンドサイトーシス（例えばWu et al. (1987) “Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System,” J. Biol. Chem. 262:4429-4432を参照）；レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築等、様々な送達系が公知であり、本発明の分子及び組成物の投与に使用できる。
【０４３２】
本発明の分子を投与する方法としては：非経口投与（例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）；硬膜外；並びに粘膜（例えば鼻腔内及び経口経路）が挙げられるがこれらに限定されない。ある具体的実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、筋肉内、静脈内又は皮下投与される。組成物は、いずれの便利な経路によって、例えば点滴又はボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮膚層（例えば口腔粘膜、直腸及び腸粘膜等）を通した吸収によって投与してよく、他の生物学的活性作用剤と共に投与してよい。投与は全身性又は局所性とすることができる。
【０４３３】
本発明はまた、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を、この分子の量を示すアンプル又はサシェ等の気密性コンテナ内に包装することも提供する。一実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、気密性コンテナ内の滅菌凍結乾燥粉末又は無水濃縮物として供給され、例えば水又は食塩水を用いて、被験者への投与に適切な濃度へと再構成できる。好ましくは、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、気密性コンテナ内の滅菌凍結乾燥粉末として供給される。
【０４３４】
凍結乾燥された本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、その元々のコンテナ内において２℃〜８℃で保管するべきであり、またこの分子は、再構成後１２時間以内、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内又は１時間以内に投与するべきである。ある代替実施形態では、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、この分子、融合タンパク質又はコンジュゲート分子の量及び濃度を示す気密性コンテナ内に、液体形態で供給される。好ましくは、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の液体形態を、気密性コンテナ内に入れて供給する。
【０４３５】
障害に関連する１つ又は複数の症状の治療、予防及び改善に効果的な本発明の組成物の量は、標準的な臨床技術によって決定できる。処方において採用するべき正確な用量は、投与経路及び状態の重篤度にも左右され、施術者の判断及び各患者の状況に従って決定するべきである。効果的な用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から得られた用量‐応答曲線から外挿できる。
【０４３６】
本明細書中で使用される場合、医薬組成物の「有効量（effective amount）」は、一実施形態において：疾患によってもたらされる症状の低減；疾患の症状（例えば癌細胞の増殖、腫瘍の存在、腫瘍転移等）を減弱させる疾患に起因する症状の減弱；これによる、疾患に罹患したヒトのＱＯＬの上昇；疾患を治療するために必要な他の投薬量の低減；標的化及び／若しくは内在化等による別の投薬の効果の強化；疾患の進行の遅延；並びに／又は個体の生存期間の延長を含むがこれらに限定されない、有益な又は所望の結果を得るために十分な量である。
【０４３７】
上述のような有効量は、１回又は複数回の投与で投与できる。本発明の目的のために、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、直接的又は間接的な、ウイルスの存在（又はその影響）の増殖の低減、並びに疾患（例えば癌）の進展の低減及び／又は遅延に十分な量である。いくつかの実施形態では、薬剤、化合物又は医薬組成物の有効量は、別の薬剤、化合物又は医薬組成物と組み合わせて達成してもしなくてもよい。従って「有効量」は、１つ又は複数の化学療法剤を投与する文脈で考えることができ、また単一の作用剤が、１つ又は複数の他の作用剤と組み合わせて所望の結果を達成できる又は所望の結果を達成する場合に、有効量で与えられているものと考えることができる。個別の必要量は異なるが、各成分の有効量の最適な範囲の決定は当業者の能力の範囲内である。
【０４３８】
本発明に包含されるＣＤ１３７×ＴＡ結合分子に関して、患者に投与される投薬量は好ましくは、レシピエント被験者の体重（ｋｇ）に基づいて決定される。投与される投薬量は典型的には、被験者の体重の少なくとも約０．０１μｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上である。
【０４３９】
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の投与の用量及び頻度は、例えば脂質化等の改質によってＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の取り込み及び組織貫通を強化することによって低減又は変更できる。
【０４４０】
患者に投与される本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の投薬量は、単一作用剤による治療としての使用のために計算してよい。あるいは、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は他の治療用組成物と併用され、従って患者に投与される投薬量は、上記分子を単一作用剤による治療として使用する場合よりも小さくなる。
【０４４１】
治療的又は予防的有効量の本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を用いた被験者の治療は、単回治療を含むことができ、又は好ましくは一連の複数回の治療を含むことができる。ある好ましい例では、被験者は、上述のようなダイアボディを用いて、約１〜５２週間にわたって、週１回、２週間に１回（即ち１週間おきに）、又は３週間に１回処置される。本発明の医薬組成物は、１日１回、１日２回又は１日３回投与できる。あるいはこの医薬組成物は、１週間に１回、１週間に２回、２週間に１回、１ヶ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１年に２回又は１年に１回投与できる。治療に使用される上記分子の有効な用量設定は、特定の治療の期間にわたって増減させてよいことも理解されるだろう。
【０４４２】
ＩＸ．本発明の組成物の使用
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、（例えばＴ細胞（ＡＰＣ）の表面上に発現されるＣＤ１３７に結合することによって）上記Ｔ細胞に結合する能力、及び（例えばＴＡ発現性腫瘍細胞の表面上に発現されるＴＡに結合することによって）上記腫瘍細胞に結合する能力を有する。従って、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、Ｔ細胞をＴＡ発現腫瘍細胞と共存させる能力を有し、従って、ＴＡの発現に関連する、又はＴＡの発現を特徴とする、いずれの疾患又は状態の治療に使用できる。よってこのような分子を含む医薬組成物は、限定するものではないが、以下を含むがこれらに限定されない癌細胞の存在を特徴とする癌を含む、ＴＡを発現する癌の診断又は治療に採用できる：急性骨髄性白血病；副腎腫瘍；ＡＩＤＳ関連癌；胞巣状軟部肉腫；星状細胞腫瘍；膀胱癌；骨癌；脳及び脊髄の癌；転移性脳腫瘍；乳癌；頸動脈球腫瘍；子宮頸癌；軟骨肉腫；脊索腫；嫌色素性腎細胞癌；明細胞癌；大腸癌；結腸直腸癌；皮膚の良性線維性組織球腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；上衣腫；ユーイング腫瘍；骨外性粘液型軟骨肉腫；骨性線維形成不全症；線維性骨異形成；胆嚢又は胆管癌；胃癌；妊娠性絨毛性疾患；胚細胞腫瘍；頭頸部癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；膵島細胞腫瘍；カポジ肉腫；腎癌；白血病；脂肪腫／良性脂肪腫；脂肪肉腫／悪性脂肪腫；肝癌；リンパ腫；肺癌；髄芽腫；黒色腫；髄膜腫；多発性中皮腫；多発性内分泌腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；神経内分泌腫瘍；非小細胞肺癌；卵巣癌；膵臓癌；咽頭癌；甲状腺乳頭癌；副甲状腺腫瘍；小児癌；末梢神経鞘腫瘍；褐色細胞腫；下垂体腫瘍；前立腺癌；後部ブドウ膜黒色腫；希少な血液学的障害；腎細胞癌；腎転移性癌；ラブドイド腫瘍；横紋筋肉腫；肉腫；皮膚癌；軟組織肉腫；扁平上皮癌；胃癌；滑膜肉腫；精巣癌；胸腺癌；胸腺腫；甲状腺転移癌；又は子宮癌の癌細胞。
【０４４３】
特に、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、それぞれＴＡを高発現する、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、神経膠芽細胞腫、腎臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、咽頭癌、前立腺癌、腎細胞癌、並びに神経芽細胞腫及び横紋筋肉腫を含む小児期のメルケル細胞癌の治療に有用である。
【０４４４】
本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は更に、上述の状態の治療のための医薬品の製造に使用できる。
【０４４５】
本明細書において実証されるように、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、腫瘍標的化剤の活性を強化する。従って、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は更に、抗体、抗体の抗原結合断片（例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、ＴａｎｄＡｂ等）、所望のＴＡに結合できる多重特異性結合分子（例えばダイアボディ、二重特異性抗体、３価結合分子等）を含むがこれらに限定されない他の腫瘍標的化剤と組み合わせて使用してよい。具体的には、上記腫瘍標的化剤は、このような組み合わせで使用されるＣＤ１３７×ＴＡ結合分子と同一の又は異なるＴＡに結合できると考えられる。特定の実施形態では、上記腫瘍標的化剤は、ＴＡ、並びに例えばＣＤ３、及び／又はＣＤ８を含むＴ細胞上に発現されるエピトープに結合する、多重特異性分子である。例示的な腫瘍標的化剤としては、限定するものではないが、ＴＡ及びＣＤ３に結合する分子（「ＴＡ×ＣＤ３」）が挙げられる。上述のような組み合わせで使用できる例示的なＴＡ×ＣＤ３結合分子（例えば二重特異性抗体、ＤＡＲＴ（登録商標）分子、ＢｉＴｅ（登録商標）分子、ＴａｎｄＡｂ等）及びその作製方法は、当該技術分野において公知である（例えば国際公開第２０１３０２６８３５号；国際公開第２０１３１５８８５６号；国際公開第２０１４０４７２３１号；国際公開第２０１４１１０６０１号；国際公開第２０１４１３１７１１号；国際公開第２０１５／０２６８９４号；国際公開第２０１５０２６８９２号；国際公開第２０１５／１８４２０３号；国際公開第２０１６／０３６９３７号；国際公開第２０１６１８２７５１号；国際公開第２０１７０９１６５６号；国際公開第２０１７／１４２９２８号；国際公開第２０１７１１８６７５号を参照）。
【０４４６】
本明細書において提供されるように、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、腫瘍標的化剤（例えばＴＡ×ＣＤ３結合分子）との併用により、阻害性免疫変調因子であるプログラム死‐１（「ＰＤ‐１」、「ＣＤ２７９」としても公知）の上方制御をもたらすことができる。ＰＤ‐１は、ＰＤ‐Ｌ１及びＰＤ‐Ｌ２（Ｂ７‐Ｈ１及びＢ７‐ＤＣとしても公知）に結合することによって、その免疫系の阻害を仲介する（Flies, D.B. et al. (2007) “The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity,” J. Immunother. 30(3):251-260；米国特許第６，８０３，１９２号；米国特許第７，７９４，７１０号；米国公開特許第２００５／００５９０５１号；米国公開特許第２００９／００５５９４４号；米国公開特許第２００９／０２７４６６６号；米国公開特許第２００９／０３１３６８７号；国際公開第０１／３９７２２号；国際公開第０２／０８６０８３号）。しかしながら、本明細書において実証されるように、ＰＤ‐１の阻害活性を阻害する作用剤（「ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤」）を更に追加することにより、ＰＤ‐１の発現が下方制御され、ＣＤ１３７×ＴＡ、及びＴＡ×ＣＤ３結合分子等の腫瘍標的化剤の活性が更に強化される。本発明は特に、ＰＤ‐１に結合する抗体のエピトープ結合部位を含むＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤を包含する。
【０４４７】
従って、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は更に、他の腫瘍標的化剤と組み合わせ、更にＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用できる。ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤としては、限定するものではないが、抗体、抗体の抗原結合断片（例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、ＴａｎｄＡｂ等）、ＰＤ‐１及び／又はＰＤ‐Ｌ１に結合できる多重特異性結合分子（例えばダイアボディ、二重特異性抗体、３価結合分子等）が挙げられる。このような組み合わせで使用できる例示的なＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤及びその作製方法は、当該技術分野において公知である（例えば米国特許第９，６１７，３３８号；米国特許第９，２７３，１３５号；米国特許第９，０６２，１１２号；米国特許第８，９８１，０６３号；米国特許第８，７７９，１０８号；米国特許第８，６０９，０８９号；米国特許第８，５５２，１５４号；米国特許第８，４６０，９２７号；米国特許第８，００８，４４９号；米国公開特許第２０１５／０１９７５７１号；２０１６／００７５７８２号；２０１６／０１５９９０５号；２０１６／０３１９０１９号；２０１７／００４４２５９号；国際公開第２００４／０５６８７５号；国際公開第２００６／１２１１６８号；国際公開第２００８／１５６７１２号；国際公開第２０１２／１３５４０８号；国際公開第２０１２／１４５５４９号；国際公開第２０１３／０１４６６８号；国際公開第２０１４／０５５８９７号；国際公開第２０１３／０７９１７４号；国際公開第２０１４／１７９６６４号；国際公開第２０１４／１９４３０２号；国際公開第２０１５／１０９１２４号；国際公開第２０１５／１１２８００号；国際公開第２０１５／１１２８０５号；国際公開第２０１６／０００６１９号；国際公開第２０１６００７２３５号；国際公開第２０１６／０６１１４２号；国際公開第２０１６／１１１６４５号；国際公開第２０１６／２１０２６２号；国際公開第２０１６／０１４６８８号；国際公開第２０１６／０７７３９７号；国際公開第２０１７／０１９８４６号；国際公開第２０１７／０７９１１２号；国際公開第２０１７／０８７５４７号；及び国際公開第２０１７／１０６６５６号を参照）。
【０４４８】
このような組み合わせを採用する場合、具体的には、上記分子のうちの１つ以上を被験者に「同時に（concurrently）」投与できる（例えばＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を、ＴＡ×ＣＤ３結合分子及び／若しくはＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤が投与される際に同時に投与する）こと、並びに／又は上記分子のうちの１つ以上を、「順次（sequentially）」投与できる（例えばＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を投与し、その後でＴＡ×ＣＤ３結合分子及び／若しくはＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤が投与される際に同時に投与する、若しくはその逆）ことが考えられる。
【０４４９】
Ｘ．本発明の特定の実施形態
ここまで本発明を概説してきたが、以下の番号付き実施形態（「Ｅ」）を参照することにより、本発明は更に容易に理解されるだろう。これらの実施形態は例示として提供されており、そうでないことが明記されていない限り本発明を制限することを意図したものではない。
【０４５０】
Ｅ１．ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子であって、上記結合分子は、ＣＤ１３７のエピトープ及び腫瘍抗原（ＴＡ）のエピトープに結合でき、また上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第１の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み：
（Ａ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５１】
Ｅ２．上記第１の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；若しくは
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９２）；
を含む、Ｅ１のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５２】
Ｅ３．上記第１の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；若しくは
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９３）
を含む、Ｅ１又はＥ２のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５３】
Ｅ４．上記第１の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ（配列番号２０９）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ（配列番号２１０）；又は
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、Ｅ１〜Ｅ３のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５４】
Ｅ５．上記第１の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５（配列番号２１２）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）；
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７（配列番号２１４）；
（Ｊ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８（配列番号２１５）；
（Ｋ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９（配列番号２１６）；
（Ｌ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）；
（Ｍ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）；
（Ｎ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２（配列番号２１９）；
（Ｏ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３（配列番号２２０）；
（Ｐ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｑ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、Ｅ１〜Ｅ４のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５５】
Ｅ６．上記腫瘍抗原（ＴＡ）は：１９．９；癌胎児性タンパク質５Ｔ４；抗原４．２；Ａ３３；ＡＦＰ；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；βカテニン；ＣＡ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；Ｂ１；ＣＤ５；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ３０；ＣＤ３３；ＣＤ３６；ＣＤ４６；ＣＤ５２；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ；ＣＤ１２３；ＣＤ３１７；ＣＥＡ；ＣＥＡＣＡＭ５；ＣＥＡＣＡＭ６；ＣＯ‐４３；ＣＯ‐５１４；ＣＴＬＡ‐１；ＣＴＬＡ‐４；サイトケラチン８；Ｅ１シリーズ；ＥＧＦ‐Ｒ；エフリン受容体；Ｅｒｂ；Ｆ３；ＦＣ１０．２；ＧＡＧＥ  ＧＤ２；ＧＤ３；ＧＤ４９；ＧＭ２；ＧＭ３；ＧＩＣＡ１９‐９；ｇｐ３７；ｇｐ７５；ｇｐ１００；ＨＥＲ‐２／ｎｅｕ；ヒトＢ‐リンパ腫抗原‐ＣＤ２０；ヒト乳脂肪球抗原；ヒトパピローマウイルス‐Ｅ６／ヒトパピローマウイルス‐Ｅ７；ＨＭＷ‐ＭＡＡ；Ｉ抗原；ＩＴＧＢ６；ＩＬ１３Ｒα２；ＪＡＭ‐３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳ１／４汎癌抗原；ＫＳ１／４；ＫＳＡ；Ｌ６；Ｌ２０；ＬＥＡ；ＬＵＣＡ‐２；Ｍ１：２２：２５：８；Ｍ１８；Ｍ３９；ＭＡＧＥ；ＭＡＲＴ；Ｍｙｌ；ＭＵＣ‐１；ＭＵＭ‐１；Ｎ‐アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ；ネオ糖タンパク質；ＮＳ‐１０；ＯＦＡ‐１；ＯＦＡ‐２；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＰＥＭＡ；ＰＩＰＡ；前立腺酸性ホスファターゼ；Ｒ２４；ＲＯＲ１；ＳＳＥＡ‐１；ＳＳＥＡ‐３；ＳＳＥＡ‐４；ｓＴｎ；Ｔ細胞受容体由来ペプチド；ＴＡＧ‐７２；ＴＬ５；ＴＮＦ‐α受容体；ＴＮＦ‐β受容体；ＴＮＦ‐γ受容体；ＴＲＡ‐１‐８５；トランスフェリン受容体；ＴＳＴＡ；及びＶＥＧＦ‐Ｒからなる、腫瘍抗原の群から選択される、Ｅ１〜Ｅ５のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５６】
Ｅ７．上記腫瘍抗原（ＴＡ）は、表１の腫瘍抗原から選択される、Ｅ１〜Ｅ５のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５７】
Ｅ８．上記腫瘍抗原（ＴＡ）は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ２、又は５Ｔ４である、Ｅ１〜Ｅ７のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５８】
Ｅ９．上記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり、上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲである、Ｅ８のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４５９】
Ｅ１０．（Ａ）（１）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；及び
（Ｂ）（１）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、Ｅ９のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６０】
Ｅ１１．上記第２の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、Ｅ１０のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６１】
Ｅ１２．上記第２の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、Ｅ１０又はＥ１１のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６２】
Ｅ１３．上記腫瘍抗原（ＴＡ）は５Ｔ４であり、上記ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む第２の軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む第１の重鎖可変ドメインとを含み；
（Ｉ）（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号１３５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号１３４）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第２の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＬ（配列番号１３７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記第２の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、５Ｔ４  ＭＡＢ‐２  ＶＨ（配列番号１３６）の重鎖ＣＤＲである、Ｅ８のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６３】
Ｅ１４．上記第２の重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３５）を含む、Ｅ１３のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６４】
Ｅ１５．上記第２の軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号１３６）を含む、Ｅ１３又はＥ１４のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６５】
Ｅ１６．上記分子は、第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含む二重特異性４価Ｆｃ担持ダイアボディであり、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６６】
Ｅ１７．上記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ｉ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖及び上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０１のアミノ酸配列を有し；
又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖及び上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０２のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列を有する、Ｅ１６のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６７】
Ｅ１８．上記分子は二重特異性かつ４価であり、また第１、第２、第３、第４及び第５のポリペプチド鎖を含み、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６８】
Ｅ１９．上記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ｉ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第５のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列を有し；
又は
（ＩＩ）（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖及び上記第５のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、若しくは配列番号１１８のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、若しくは配列番号１２３のアミノ酸配列を有する、Ｅ１５のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４６９】
Ｅ２０．上記分子は二重特異性かつ３価であり、また第１、第２、第３及び第４のポリペプチド鎖を含み、上記ポリペプチド鎖は共有結合複合体を形成する、Ｅ１〜Ｅ１５のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４７０】
Ｅ２１．上記腫瘍抗原（ＴＡ）はＨＥＲ２／ｎｅｕであり：
（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、若しくは配列番号２２９のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、若しくは配列番号２３０のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４７１】
Ｅ２３．上記腫瘍抗原（ＴＡ）は５Ｔ４であり：
（Ａ）上記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、若しくは配列番号２２９のアミノ酸配列を有し；
（Ｂ）上記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、若しくは配列番号２３０のアミノ酸配列を有し；
（Ｃ）上記第３のポリペプチド鎖は、配列番号２３１のアミノ酸配列を有し；かつ
（Ｄ）上記第４のポリペプチド鎖は、配列番号２３２のアミノ酸配列を有する、Ｅ２０のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子。
【０４７２】
Ｅ２４．Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【０４７３】
Ｅ２５．腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又はＥ２４の医薬組成物の使用。
【０４７４】
Ｅ２６．腫瘍抗原（ＴＡ）の発現に関連する又は発現を特徴とする上記疾患又は状態は、癌である、E２５の使用。
【０４７５】
Ｅ２７．ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、ＣＤ１３７結合分子であって；
（Ａ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｂ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｃ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｄ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｅ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｆ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｇ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ（配列番号７４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｈ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ（配列番号９１）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ（配列番号９０）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｉ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ（配列番号９７）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ（配列番号９６）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｊ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｋ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）の重鎖ＣＤＲであり；
（Ｌ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）の重鎖ＣＤＲであり；
又は
（Ｍ）（１）上記第１の軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ（配列番号７５）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（２）上記第１の重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）の重鎖ＣＤＲである、ＣＤ１３７結合分子。
【０４７６】
Ｅ２８．上記重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号７７）；又は
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９２）
を含む、Ｅ２７のＣＤ１３７結合分子。
【０４７７】
Ｅ２９．上記軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（配列番号８２）；又は
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４（配列番号９３）
を含む、Ｅ２７又はＥ２８のＣＤ１３７結合分子。
【０４７８】
Ｅ３０．上記重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１（配列番号７６）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ（配列番号８３）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ（配列番号８４）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ（配列番号８５）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ（配列番号８６）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｅ（配列番号２０８）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｆ（配列番号２０９）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｇ（配列番号２１０）；又は
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１（配列番号９２）
を含む、Ｅ２７〜Ｅ２９のいずれか１つのＣＤ１３７結合分子。
【０４７９】
Ｅ３１．上記軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５（配列番号２２２）；
（Ｂ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４（配列番号２２１）；
（Ｃ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１（配列番号８７）；
（Ｄ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２（配列番号８８）；
（Ｅ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３（配列番号８９）；
（Ｆ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４（配列番号２１１）；
（Ｇ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５（配列番号２１２）；
（Ｈ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６（配列番号２１３）；
（Ｉ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７（配列番号２１４）；
（Ｊ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８（配列番号２１５）；
（Ｋ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９（配列番号２１６）；
（Ｌ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０（配列番号２１７）；
（Ｍ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１（配列番号２１８）；
（Ｎ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２（配列番号２１９）；
（Ｏ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３（配列番号２２０）；
（Ｐ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１（配列番号９４）；又は
（Ｑ）ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２（配列番号９５）
を含む、Ｅ２７〜Ｅ３０のいずれか１つのＣＤ１３７結合分子。
【０４８０】
Ｅ３２．上記分子は、抗体又は上記抗体の抗原結合断片である、Ｅ２７〜Ｅ３１のいずれか１つのＣＤ１３７結合分子。
【０４８１】
Ｅ３３．Ｅ２７〜Ｅ３２のいずれか１つのＣＤ１３７結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【０４８２】
Ｅ３４．抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、Ｅ２７〜Ｅ３１のいずれか１つのＣＤ１３７結合分子又はＥ３３の医薬組成物の使用。
【０４８３】
Ｅ３５．抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする上記状態は、癌である、Ｅ３４の使用。
【０４８４】
Ｅ３６．ＣＤＲL１、ＣＤＲL２及びＣＤＲL３を含む軽鎖可変ドメインと、ＣＤＲH１、ＣＤＲH２及びＣＤＲH３を含む重鎖可変ドメインとを含む、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子であって：
（Ａ）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６３）の軽鎖ＣＤＲであり；かつ
（Ｂ）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６２）の重鎖ＣＤＲである、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【０４８５】
Ｅ３７．（Ａ）（１）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）の軽鎖ＣＤＲであり；
（２）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）の軽鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記軽鎖可変ドメインＣＤＲL１、ＣＤＲL２、及びＣＤＲL３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）の軽鎖ＣＤＲであり；
かつ
（Ｂ）（１）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）の重鎖ＣＤＲであり；
（２）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）の重鎖ＣＤＲであり；又は
（３）上記重鎖可変ドメインＣＤＲH１、ＣＤＲH２、及びＣＤＲH３は、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）の重鎖ＣＤＲである、Ｅ３６の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【０４８６】
Ｅ３８．上記重鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１（配列番号６４）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）
を含む、Ｅ３７の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【０４８７】
Ｅ３９．上記軽鎖可変ドメインは、アミノ酸配列：
（Ａ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１（配列番号６７）；
（Ｂ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）；又は
（Ｃ）ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）
を含む、Ｅ３７又はＥ３８の抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【０４８８】
Ｅ４０．上記分子は、抗体又は上記抗体の抗原結合断片である、Ｅ３６〜Ｅ３９のいずれか１つの抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子。
【０４８９】
Ｅ４１．Ｅ３６〜Ｅ４０のいずれか１つの抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子と、生理学的に許容可能なキャリアとを含む、医薬組成物。
【０４９０】
Ｅ４２．ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする疾患又は状態の治療における、Ｅ３３〜Ｅ３７のいずれか１つの抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合分子又はＥ４１の医薬組成物の使用。
【０４９１】
Ｅ４３．ＨＥＲ２／ｎｅｕの発現に関連する又は発現を特徴とする上記状態は、癌である、Ｅ４２の使用。
【０４９２】
Ｅ４４．腫瘍標的化剤の活性を強化する方法であって、上記方法は、上記腫瘍標的化剤を、Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又は実施形態Ｅ２４の医薬組成物と組み合わせて投与するステップを含む、方法。
【０４９３】
Ｅ４５．抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする疾患又は状態を治療する方法であって、上記方法は、それを必要とする被験者に、Ｅ１〜Ｅ２３のいずれか１つのＣＤ１３７×ＴＡ結合分子又はＥ２４の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【０４９４】
Ｅ４６．抑制免疫系に関連する又は腫瘍抗原（ＴＡ）の発現を特徴とする上記状態は、癌である、Ｅ４５の方法。
【０４９５】
Ｅ４７．腫瘍標的化剤を投与するステップを更に含む、Ｅ４５又はＥ４６の方法。
【０４９６】
Ｅ４８．ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤を投与するステップを更に含む、Ｅ４４〜Ｅ４７のいずれか１つの方法。
【０４９７】
Ｅ４９．上記腫瘍標的化剤は、抗体、抗体のエピトープ結合断片、又は標的細胞のＴ細胞標的転換殺滅を仲介する作用剤である、Ｅ４４又はＥ４７の方法。
【０４９８】
Ｅ５０．上記ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ‐１抗体又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体である、Ｅ４８又はＥ４９の方法。
【０４９９】
Ｅ５１．上記ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤は、表７に列挙されたものから選択される抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む、Ｅ４８〜Ｅ５０のいずれか１つの方法。
【０５００】
【表７】
2020508334.tif 000014
2020508334.tif 000015
2020508334.tif 000016
【０５０１】
Ｅ５２．上記癌は：急性骨髄性白血病；副腎腫瘍；ＡＩＤＳ関連癌；胞巣状軟部肉腫；星状細胞腫瘍；膀胱癌；骨癌；脳及び脊髄の癌；転移性脳腫瘍；乳癌；頸動脈球腫瘍；子宮頸癌；軟骨肉腫；脊索腫；嫌色素性腎細胞癌；明細胞癌；大腸癌；結腸直腸癌；皮膚の良性線維性組織球腫；線維形成性小円形細胞腫瘍；上衣腫；ユーイング腫瘍；骨外性粘液型軟骨肉腫；骨性線維形成不全症；線維性骨異形成；胆嚢又は胆管癌；胃癌；妊娠性絨毛性疾患；胚細胞腫瘍；頭頸部癌；肝細胞癌；神経膠芽腫；膵島細胞腫瘍；カポジ肉腫；腎癌；白血病；脂肪腫／良性脂肪腫；脂肪肉腫／悪性脂肪腫；肝癌；リンパ腫；肺癌；髄芽腫；黒色腫；髄膜腫；多発性中皮腫；多発性内分泌腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；神経内分泌腫瘍；非小細胞肺癌；卵巣癌；膵臓癌；咽頭癌；甲状腺乳頭癌；副甲状腺腫瘍；小児癌；末梢神経鞘腫瘍；褐色細胞腫；下垂体腫瘍；前立腺癌；後部ブドウ膜黒色腫；希少な血液学的障害；腎細胞癌；腎転移性癌；ラブドイド腫瘍；横紋筋肉腫；肉腫；皮膚癌；軟組織肉腫；扁平上皮癌；胃癌；滑膜肉腫；精巣癌；胸腺癌；胸腺腫；甲状腺転移癌；並びに子宮癌からなる群から選択される、Ｅ２６、Ｅ３５、Ｅ４２の使用又はＥ４６〜Ｅ５１のいずれか１つの方法。
【０５０２】
Ｅ５３．上記癌は、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、胃癌、膠芽腫、腎臓癌、肺癌、黒色腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、膵臓癌、咽頭癌、前立腺癌、腎細胞癌、横紋筋肉腫、及び頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）からなる群から選択される、Ｅ２６、Ｅ３５、Ｅ４２の使用又はＥ４６〜Ｅ５１のいずれか１つの方法。
【実施例】
【０５０３】
以下の実施例は、本発明の診断又は治療方法の構成に関する様々な方法を例示する。これらの実施例は、本発明の範囲を例示することを意図したものであり、限定を意図するものではない。
【０５０４】
［実施例１］  ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１のヒト化
国際公開第２００１／０３６００５号は、該文献中で「８Ｈ１１」と称される抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体を開示しているが、該文献中で提供されるＶＬ及びＶＨドメインの配列は不正確である。８Ｈ１１抗体は、トラスツズマブ、マルゲツキシマブ、及びペルツズマブが結合するエピトープとは別個のＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに結合する。
【０５０５】
抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体８Ｈ１１のＶＨ及びＶＬドメインに関する正確な配列を推測し（これによってＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＨ（配列番号６０）及びＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１  ＶＬ（配列番号６１）を提供し）、続いて複数ラウンドのヒト化を実施して、上述のヒト化ＶＨドメイン「ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１」（配列番号６４）及びヒト化ＶＬドメイン「ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１」（配列番号６７）を得た。このような努力の過程で、いくつかの潜在的な配列の欠陥がｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１ドメイン中に同定され、結合親和性を維持しながらこれらの欠陥を除去するための置換が行われた。具体的には：
（１）アスパラギン酸異性化部位が、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１ドメインのＫａｂａｔ９６位に同定され、置換Ｄ９６Ｅ又は置換Ｇ９７Ｉによって、それぞれｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２（配列番号６５）及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３（配列番号６６）のように補正され；
（２）潜在的なアスパラギン脱アミド化部位が、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１ドメインのＫａｂａｔ３０位に同定され、Ｎ３０Ｓ又は置換Ｓ３１Ｔによって、それぞれｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）のように補正され；
（３）潜在的なアスパラギン酸異性化部位が、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１ドメインのＫａｂａｔ  Ｄ５６位に同定され、置換：Ｖ５５Ｑ、Ｄ５６Ｅ又はＤ５６Ｓによって、それぞれｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３（配列番号６９）、及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２（配列番号６８）のように補正された。
【０５０６】
ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１のヒト化重鎖及び軽鎖可変ドメインは、いずれの組み合わせで使用してよく、ヒト化鎖の特定の組み合わせは、具体的なＶＨ／ＶＬドメインの参照によって表される。例えば、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１及びｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３を含むヒト化抗体は、本明細書では「ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）」と呼ばれる。
【０５０７】
親マウス抗体と比較して改善された結合親和性を有するように、ヒト化変異型を選択した。またこれを、上述のように、配列の欠陥（例えば異性化、脱アミド化部位）を排除するために操作してよい。ヒト化ＶＨ及びＶＬドメインのいくつかの組み合わせの結合親和性を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）で試験した。そして、ヒスチジン含有ペプチドに融着したヒトＨＥＲ２（「ｈｕＨＥＲ２」）の細胞外部分を、不動化された抗体でコーティングされた表面上に通過させた。簡潔に述べると、各試験分子をＦ（ａｂ）2ヤギ抗ヒトＦｃ被覆表面上に捕捉し、その後、異なる複数の濃度（６．２５ｎＭ〜５０ｎＭ）のｈｕＨＥＲ２の存在下でインキュベートした。結合の動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）結合分析（正規化された１：１ラングミュア結合モデル）で決定した。これらの研究によって計算されたｋa、ｋd及びＫDを、表８に提示する。
【０５０８】
【表８】
2020508334.tif 000017
【０５０９】
別の研究では、ＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性ダイアボディであるＤＡＲＴ‐Ｂ（上述）の結合動態を、基本的に上述のようにして、ヒトＨＥＲ２及びカニクイザルＨＥＲ２に対する結合に関して決定した。これらの研究によって計算されたｋa、ｋd及びＫDを、表９に提示する。
【０５１０】
【表９】
2020508334.tif 000018
【０５１１】
［実施例２］  マウス抗ＣＤ１３７  ｍＡｂの単離及び特性決定
ヒトＣＤ１３７に対して特異的なマウスモノクローナル抗体のパネルを、高い親和性の結合を示す抗体に関してスクリーニングした。更なる研究のために、３つの抗体を選択した。このような評価のために、精製したｐａｎ  Ｔ細胞（上記を参照）を、ＩＬ‐２（１００Ｕ／ｍＬ）の存在下で、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（細胞：ビーズ＝１：１）で７２時間刺激した。１００μＬの活性化Ｔ細胞（１．０×１０6細胞／ｍＬ）及び１００μＬの連続希釈（５倍又は１０倍希釈）試験物品（抗体又は二重特異性ダイアボディ）を、１つ以上のマイクロタイターアッセイプレートの各ウェルに添加し、混合して、ＲＴで４５分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、二次抗体（抗ヒトＦｃ領域ＡＰＣ）を各ウェルに添加し、混合して、ＲＴで３０分間インキュベートした。次に細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、Ｔ細胞表面マーカー抗体（Ｖ５１０で標識された抗ＣＤ４、及びＦＩＴＣで標識された抗ＣＤ８）を各ウェルに添加し、混合して、ＲＴで３０分間インキュベートした。細胞を洗浄して１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁し、細胞イベント収集のために、フローサイトメトリー（BD LSR Fortessa又はFACSCanto ll）によって分析した。データ分析はＦｌｏＪｏ  ｖ１０によって実施した。
【０５１２】
選択されたこのような抗体のうちの２つ、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４は、ヒトＣＤ１３７に対する強力な結合を示すことが分かり、またＣＤ１３７とその天然リガンドとの間の結合を阻害できた。このような選択された抗体のうちの第３のもの、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、ヒトＣＤ１３７に対して比較的弱い結合を示し、またＣＤ１３７とその天然リガンドとの間の結合を阻害できなかった。
【０５１３】
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域及びマウスＶＨ／ＶＬドメインを有するキメラ抗体（それぞれｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４及びｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５と称する）を生成し、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞に結合する能力に関して試験した。図７に示すように、これらの選択された抗体は、広範な結合親和性を示した。
【０５１４】
エピトープのビニングを、交差競合（cross-competition）研究によって実施した。これらの研究、及びリガンド結合競合研究の結果は：
（１）ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４は、ＣＤ１３７への結合に関してＣＤ１３７Ｌと競合するが、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５によって認識されるエピトープとは別の、ＣＤ１３７のエピトープを認識すること；
（２）ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、ＣＤ１３７への結合に関してＣＤ１３７Ｌと競合しないこと；
（３）ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１と競合するが、リガンド結合に関して競合する能力によって実証される別個のエピトープに結合すること；
（４）ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３又はＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４によって認識されるエピトープとは別個のエピトープを認識すること
を示す。
【０５１５】
キメラ抗体を、リガンドの不在下でＴ細胞からのサイトカイン（例えばＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α）放出を誘発する能力（即ちアゴニスト活性）に関しても試験した。このような評価のために、精製したｐａｎ  Ｔ細胞（上記を参照）を、アッセイ培地中に再懸濁し、組織培養インキュベータ内に一晩入れた。（ＪＩＭＴ‐１、Ｎ８７を含む）腫瘍標的細胞を、培養物から得た。洗浄後、細胞ペレットを、１．０×１０5細胞／ｍＬの細胞密度で、培地中に再懸濁した。続いて、１０4個の細胞を、組織培養インキュベータ内に一晩入れた白色平底アッセイプレートの各ウェルに添加した。翌日、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｖｉ‐Ｃｅｌｌカウンタを用いたトリパンブルー色素排除試験法によって、残りのヒトｐａｎ  Ｔ細胞を密度及び生存率に関して測定し、２×１０6細胞／ｍＬの密度に調整した。プレートに予備播種した腫瘍標的細胞を、アッセイ培地で１回洗浄した。
【０５１６】
サイトカイン放出アッセイに関して：５０μＬの連続希釈した試験物品（抗体（＋／−抗ヒトＦｃ（Ｆａｂ）’2との架橋）、ダイアボディ、３価分子等）；５０μＬ、ビーズ２×１０6個／ｍＬの予備洗浄済みＤｙｎａｂｅａｄｓ  αＣＤ３（ＲＥＦ  １１１５１Ｄ；Invitrogen by Thermo Fisher Scientific）；５０μＬ／ウェル、細胞２×１０6個／ｍＬのヒトｐａｎ  Ｔ細胞；及び単独の又は１．６μｇ／ｍＬのαＣＤ２８（Ｃａｔ：５５５７２５；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ）を含有する５０μＬのアッセイ培地を、アッセイプレートの各ウェルに添加した。プレート上の各ウェルの最終的な体積は、２００μＬであった。試験物品又はαＣＤ３ビーズを内包しない対照ウェルに関しては、アッセイ培地を合計体積が２００μＬとなるまで添加し、プレートを組織培養インキュベータ内で７２時間インキュベートした。続いて上清を各ウェルから回収し、放出されたサイトカインＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐２Ｒを、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ製のサイトカインＥＬＩＳＡキット（Human IL-2 DuoSet ELISA(Cat:DY202)、Human IFN-gamma DuoSet ELISA(Cat:DY285)、及びHuman TNF-alpha DuoSet ELISA(Cat:DY210)）、又は同様の市販の試薬を用いて測定した。ＥＬＩＳＡ法はこれらのキットによって提供された。Microsoft Excel及びSoftMax Proを、Ｐｒｉｓｍを用いてプロットしたサイトカインレベルの外挿のためのデータ分析に用いた。
【０５１７】
図８に示すように、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４はそれぞれ強力なアゴニスト活性を示し、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２は比較的弱いアゴニスト活性を示し、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、リガンドの不在下においてアゴニスト活性を示さなかった。
【０５１８】
キメラ抗体ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４を、リガンド及び／又は標的細胞の不在／存在下でｐａｎ  Ｔ細胞からのサイトカイン（例えばＩＦＮ‐γ、ＴＮＦ‐α）放出を誘発する能力に関しても試験した。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｕｎｔｏｕｃｈｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃａｔ＃  １１３４４Ｄ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ヒトｐａｎ  Ｔ細胞をドナーＰＢＭＣから精製した。ＩＦＮ‐γ放出に関する結果を図９に示す。図９は、１μｇ／ｍＬのキメラ抗ＣＤ１３７抗体（ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３又はｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５）の存在下又は不在下、並びに１μｇ／ｍＬのＣＤ‐１３７Ｌ‐Ｈｉｓ及び４μｇ／ｍＬのｈＦｃ  Ｆ（ａｂ）’2の存在下又は不在下における、ＣＤ３被覆ビーズによる刺激から７２時間後の、ｐａｎ  Ｔ細胞によるＩＦＮ‐γの誘発を示す。この図は、ＣＤ１３７‐Ｈｉｓの存在下又は不在下でＩＦＮ‐γが誘発されたこと、及びｐａｎ  Ｔ細胞単独での観察に比べて、ＪＩＭＴ‐１／ｐａｎ  Ｔ細胞を用いるとより多くの誘発が観察されたことを示している。同様の結果が、ＴＮＦ‐αに関しても観察された。
【０５１９】
Ｔ細胞及び標的細胞の両方、又はＴ細胞のみの存在下において、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３は強力なアゴニスト活性を示し、これはリガンドの存在下でも不在下でも同様であった。対照的に、ｃｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５は、リガンドの不在下において最小のアゴニスト活性を示し、リガンドの存在下において大幅に強化されたアゴニスト活性を示した。
【０５２０】
［実施例３］  マウス抗ＣＤ１３７  ｍＡｂのヒト化
抗体ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４を、ヒト化のために選択した。ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３に関して４ラウンドのヒト化が実施され、「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１」（配列番号７６）と称される１つのヒト化ＶＨドメイン、並びに「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１」（配列番号８７）、「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２」（配列番号８８）及び「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３」（配列番号８９）と称される３つのヒト化ＶＬドメインが得られた。
【０５２１】
ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４に関して３ラウンドのヒト化が実施され、「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１」（配列番号９２）と称される１つのヒト化ＶＨドメイン、並びに「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１」（配列番号９４）及び「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２」（配列番号９５）と称される２つのヒト化ＶＬドメインが得られた。
【０５２２】
ある特定の抗ＣＤ１３７抗体（例えばＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３）のヒト化重鎖及び軽鎖可変ドメインは、いずれの組み合わせで使用してよく、ヒト化鎖の特定の組み合わせは、具体的なＶＨ／ＶＬドメインの参照によって表される。例えば、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３を含むヒト化抗体は、本明細書では「ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１．３）」と呼ばれる。
【０５２３】
マウス可変ドメイン及び完全ヒト化抗体を有するキメラ抗体の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅで検査した。
【０５２４】
そして、ヒスチジン含有ペプチドに融着したヒトＣＤ１３７（「ｈｕＣＤ１３７」）の細胞外部分を、不動化された抗体でコーティングされた表面上に通過させた。簡潔に述べると、各試験分子をＦ（ａｂ）2ヤギ抗ヒトＦｃ被覆表面上に捕捉し、その後、異なる複数の濃度（２５ｎＭ及び１００ｎＭ）のｈｕＣＤ１３７の存在下でインキュベートした。結合の動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）結合分析（正規化された１：１ラングミュア結合モデル）で決定した。これらの研究によって計算されたｋa、ｋd及びＫDを、表１０に提示するが、これは、ヒト化ｍＡｂがマウス抗体に対して約２倍低下した結合親和性を示したことを示している。
【０５２５】
【表１０】
2020508334.tif 000019
【０５２６】
［実施例４］  ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の特性決定
上述のように、ＣＤ１３７及び例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できる多数の例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を生成した。特に、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３又はｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメインを含む６つの二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐Ａ」、「ＤＡＲＴ‐Ｂ」、「ＤＡＲＴ‐Ｃ」、及び「ＤＡＲＴ‐Ｄ」、「ＤＡＲＴ‐Ｅ」、及び「ＤＡＲＴ‐Ｇ」と称する）、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４ドメインを含む１つの二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐Ｆ」と称する）、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１ドメインを含む２つの二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐１」、及び「ＤＡＲＴ‐４」と称する）、並びにＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２ドメインを含む２つの二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐２」、及び「ＤＡＲＴ‐５」と称する）を生成し、これらはそれぞれ、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含んでいた。ＤＡＲＴ‐Ａ、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｃ、ＤＡＲＴ‐１、及びＤＡＲＴ‐２は、図３Ｂに示す一般構造を有する（ＤＡＲＴ‐Ａ、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐１及びＤＡＲＴ‐２は、図３Ｅに示す構造を有し；ＤＡＲＴ‐Ｃは、図３Ｄに示す構造を有する）。ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｅ、ＤＡＲＴ‐Ｆ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐４、及びＤＡＲＴ‐５は、図５Ａに示す一般構造を有する（ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｆ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐４、及びＤＡＲＴ‐５は、図５Ｂに示す構造を有し；ＤＡＲＴ‐Ｅは、図５Ｃに示す構造を有する）。
【０５２７】
ＣＤ１３７及び例示的なＴＡであるＥｐｈＡ２に結合できる別の例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（「ＤＡＲＴ‐７」と称する）を生成した。ＤＡＲＴ‐７は、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１ヒト化ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３ドメインを含む、図３Ｂで提示した構造を有する二重特異性ダイアボディである。
【０５２８】
更に、３つの対照分子、ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１及び変異型パリビズマブドメイン（ＨＥＲ２×ＲＳＶ）を含む「ＤＡＲＴ‐３」、変異型パリビズマブ及びＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメイン（ＲＳＶ×ＣＤ１３７）を含む「ＤＡＲＴ‐６」、並びにヒト化ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３及び変異型パリビズマブドメイン（ＥｐｈＡ２×ＲＳＶ）を含む「ＤＡＲＴ‐８」を生成した。
【０５２９】
ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子、並びにＣＤ１３７×ＲＳＶ対照分子（ＤＡＲＴ‐６）は、活性化Ｔ細胞の表面上に存在するＣＤ１３７に結合した。対照的に、ＨＥＲ２／ｎｅｕ×ＲＳＶ対照分子（ＤＡＲＴ‐３）は、結合を全く示さなかった。このアッセイでは、ＤＡＲＴ‐１が最高の結合を示し、ＤＡＲＴ‐５が最低の結合を示し、試験した残りの分子（ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｃ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｅ、ＤＡＲＴ‐Ｆ、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐４及びＤＡＲＴ‐６）は、相当の結合を示した（図１０）。ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＣＤ１３７結合ドメインの相対位置は、図３Ｂで提示した構造（ＤＡＲＴ‐Ｂ／ＤＡＲＴ‐Ｃを比較）、又は図５Ｂ〜５Ｃで提示した構造（ＤＡＲＴ‐Ｄ／ＤＡＲＴ‐Ｅを比較）を有する分子に関するこのアッセイにおいて、ＣＤ１３７結合に対する影響をほとんど又は全く有しなかった。
【０５３０】
同様に、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子を、標的Ｎ８７胃癌細胞の表面上に存在するＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する能力に関して評価した（図１１Ａ〜１１Ｂ）。ＲＳＶ×ＣＤ１３７対照分子（ＤＡＲＴ‐６）は結合を全く示さなかった。ＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＣＤ１３７結合ドメインの相対位置は、図３Ｂで提示した構造（ＤＡＲＴ‐Ｂ／ＤＡＲＴ‐Ｃを比較）を有する分子に関するこのアッセイにおいて、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合に対する影響をほとんど又は全く有しなかった。対照的に、ＤＡＲＴ‐ＥはＤＡＲＴ‐Ｄに比べて低下したＨＥＲ２／ｎｅｕ結合を示し、これは、図５Ｂ〜５Ｃで提示した構造を有する分子に関して、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合に対する位置の影響が存在し得ること、又はｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１（１．３）のＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメインによって仲介される結合が特に、位置の影響を示すことを示唆している。
【０５３１】
更に、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６を、ＣＨＯ細胞（図１２Ａ）及び活性化Ｔ細胞（図１２Ｂ）によって発現されたＣＤ１３７に結合する能力に関して評価した。
【０５３２】
更に、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６を、Ｎ８７細胞（図１３Ａ）及びＪＩＭＴ‐１細胞（図１３Ｂ）上で発現されたＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する能力に関して評価した。このような評価のために、１００μＬのＨＥＲ２／ｎｅｕ発現標的細胞（１．０×１０6細胞／ｍＬ）及び１００μＬの連続希釈（５倍又は１０倍希釈）試験物品（二重特異性ダイアボディ）を、１つ以上のマイクロタイターアッセイプレートの各ウェルに添加し、混合して、ＲＴで４５分間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、二次抗体（抗ヒトＦｃ領域ＡＰＣ）を各ウェルに添加し、混合して、ＲＴで３０分間インキュベートした。細胞を洗浄して１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中で再懸濁し、細胞イベント収集のために、フローサイトメトリー（BD LSR Fortessa又はFACSCanto ll）によって分析した。データ分析はＦｌｏＪｏ  ｖ１０によって実施した。図３Ｂで提示されている構造を有するＨＥＲ２×ＣＤ１３７結合分子は、図５Ａ〜５Ｃで提示されている構造を有するＨＥＲ２×ＣＤ１３７結合分子よりも、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対してわずかに良好な結合を示した（ＤＡＲＴ‐Ｂ／ＤＡＲＴ‐Ｄを比較）。ＲＳＶ×ＣＤ１３７対照分子（ＤＡＲＴ‐６）は結合を全く示さなかった。マウス又はヒト化ＣＤ１３７結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ二重特異性ダイアボディは、ＨＥＲ２／ｎｅｕに対して同様の結合を示した（ＤＡＲＴ‐Ｄ／ＤＡＲＴ‐Ｇを比較）。
【０５３３】
図１４Ａ〜１４Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する標的細胞の存在下又は不在下での（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力の、第１の代表的なアッセイの結果を提供する。この図は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７（３+）（図１４Ａ）又はＪＩＭＴ‐１（２+）標的細胞（図１４Ｂ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＨｓ７００Ｔ標的細胞の存在下、又は標的細胞の不在下で（上述のプロトコルを用いて）試験された、ＤＡＲＴ‐１、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐３、ＤＡＲＴ‐４、ＤＡＲＴ‐５、ＤＡＲＴ‐６、ＤＡＲＴ‐Ａ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｅ及びＤＡＲＴ‐Ｆに関する結果を示す。この結果は、対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６が共刺激活性を全く示さなかったことを示している。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、標的細胞の不在下において、又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブ標的細胞を用いた場合に、観察可能な共刺激活性を全く示さなかった。新規の抗ＣＤ１３７抗体（それぞれＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３及びＭＡＢ‐４）を含むＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｆは、各標的細胞株の存在下において最高の共刺激活性を示した。（交換されたＨＥＲ２／ｎｅｕ及びＣＤ１３７ドメインを含む）ＤＡＲＴ‐Ｅは、特にＮ８７標的細胞の存在下において、比較的低い共刺激活性を示した。同様のパターンが、ＩＬ‐２及びＴＮＦ‐αにおいても観察された。
【０５３４】
図１５Ａ〜１５Ｂは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力の、第２の代表的なアッセイの結果を提供する。この図は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７（図１５Ａ）又はＪＩＭＴ‐１標的細胞（図１５Ｂ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＨｓ７００Ｔ標的細胞の存在下、又は標的細胞の不在下で（上述のプロトコルを用いて）試験された、ＤＡＲＴ‐１、ＤＡＲＴ‐２、ＤＡＲＴ‐３、ＤＡＲＴ‐４、ＤＡＲＴ‐５、ＤＡＲＴ‐６、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｇに関する結果を示す。
【０５３５】
この結果は、対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６が共刺激活性を全く示さなかったことを示している。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、標的細胞の不在下において、又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブ標的細胞を用いた場合に、観察可能な共刺激活性を全く示さなかった。新規の抗ＣＤ１３７抗体ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（それぞれマウス及びヒト化）を含むＤＡＲＴ‐Ｄ及びＤＡＲＴ‐Ｇは、各標的細胞株の存在下において最高の共刺激活性を示した。ＤＡＲＴ‐Ｇは、細胞表面で発現されたＣＤ１３７に対してわずかに低い結合を示したにもかかわらず、最高の共刺激活性を示した。上述のように、ＤＡＲＴ‐Ｂ及びＤＡＲＴ‐Ｇは、同一のＨＥＲ２及びＣＤ１３７結合部位を含むものの、それぞれ図３Ｂ及び図５Ｂに示す構造を有する。ＤＡＲＴ‐Ｇは、各標的細胞株の存在下において、ＤＡＲＴ‐Ｂより高い共刺激活性を示した。
【０５３６】
更に、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ｇ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６を、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに対してポジティブ又はネガティブである標的細胞の存在下において、ＣＤ１３７発現レポーター細胞株（Ｊｕｒｋａｔ‐ＮＦ‐κＢ‐Ｌｕｃ）のＮＦ／κＢ経路の用量依存性Ｔ細胞シグナル伝達を仲介する能力に関して評価した。簡潔に述べると、ＣＤ１３７を過剰発現するＪｕｒｋａｔ‐ＮＦ‐κＢ‐Ｌｕｃレポーター細胞を、濃度を漸増させたＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐３、又はＤＡＲＴ‐６の存在下で、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現ＪＩＭＴ‐１細胞（図１６Ａ）又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブＫＧ‐１細胞（図１６Ｂ）と共培養した。インキュベーション後、シグナル伝達を、発光によって、発光の相対光量（ＲＬＵ）を読み取り値として測定した。この結果は、ＤＡＲＴ‐Ｇ等のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、ＴＡ発現性標的細胞の存在に依存する用量依存性Ｔ細胞シグナル伝達を仲介することを示す。
【０５３７】
更に、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐Ａ、並びに対照分子ＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６を、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕを異なるレベルで発現する細胞の存在下において、強化されたＴ細胞増殖を仲介する能力に関して評価した。簡潔に述べると、ＣＦＳＥ標識ヒトＴ細胞±準最適αＣＤ３／αＣＤ２８刺激を、ＤＡＲＴ‐Ａ（図１７、パネルＡ、Ｄ及びＧ）、ＤＡＲＴ‐３（図１７、Ｂ、Ｅ及びＨ）、ＤＡＲＴ‐６（図１７、パネルＣ、Ｆ及びＩ）の存在下、又は分子の不在下（図１７、パネルＪ、Ｌ及びＮ）において、ＨＥＲ２／ｎｅｕ‐ｈｉｇｈ  Ｎ８７標的細胞（図１７、パネルＡ〜Ｃ及びＪ〜Ｋ）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ‐ｌｏｗ  ＭＣＦ‐７標的細胞（図１７、パネルＤ〜Ｆ及びＬ〜Ｍ）と共培養するか、又は単独で（図１７、パネルＧ〜Ｉ及びＮ〜Ｏ）培養し、Ｔ細胞増殖に関して監視した。この結果は、ＤＡＲＴ‐Ａ等のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子がＴ細胞増殖を強化することを示す。このような強化されたＴ細胞増殖は、ＴＡ発現依存性であり、ＴＡ発現レベルと相関する。
【０５３８】
マルゲツキシマブは、標的腫瘍細胞への結合後の、強化された抗体依存細胞仲介型細胞毒性を誘発できる、Ｆｃ最適化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体である。上述のように、ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１は、マルゲツキシマブが結合するものとは別個のＨＥＲ２／ｎｅｕエピトープに結合する。抗ＴＡ抗体マルゲツキシマブの標的細胞殺滅活性を、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐１又は対照分子ＤＡＲＴ‐３（ＨＥＲ２×ＲＳＶ）との組み合わせで検査した。簡潔に述べると、ルシフェラーゼ（ｌｕｃ）レポーター遺伝子を発現するよう操作された標的Ｎ８７細胞（Ｎ８７／ＧＦＰ／Ｌｕｃ細胞）を、精製ＮＫエフェクタ細胞と共に（エフェクタ：標的（Ｅ：Ｔ）比２：１で）、固定濃度（０．１μｇ／ｍＬ）のＤＡＲＴ‐１又はＤＡＲＴ‐３と組み合わせたマルゲツキシマブの濃度を上昇させながら、７２時間インキュベートし、標的細胞の細胞ルシフェラーゼ活性を測定する発光（ＬＵＭ）アッセイによって、発光の相対光量（ＲＬＵ）を読み取り値として測定した（図１８Ａ）。更に、このアッセイからのＮＫ細胞（ＣＤ３-／ＣＤ５６+）を、活性化マーカーＣＤ６９の発現に関して評価した（図１８Ｂ）。この研究の結果は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐１が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ結合のみを有する対照分子に比べて、Ｎ８７／Ｌｕｃ標的細胞に対するマルゲツキシマブ仲介型ＡＤＣＣ活性と、ＮＫ細胞に対するマルゲツキシマブ仲介型ＣＤ６９上方制御との両方を強化したことを実証している。
【０５３９】
例示的なＴＡであるＥｐｈＡ２に結合する、「ＤＡＲＴ‐７」と称されるＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力を検査した。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐７及び対照分子ＤＡＲＴ‐８を、ＥｐｈＡ２発現性Ｈｓ７００Ｔ標的細胞（図１９Ａ）又はＥｐｈＡ２ネガティブＨｓ７００Ｔ（ＥｐｈＡ２．ＫＯ）標的細胞（図１９Ｂ）の存在下、又は標的細胞の不在下において（上述のプロトコルを用いて）試験した。この結果は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐７がＥｐｈＡ２発現性細胞の存在下において共刺激活性を示したものの、標的細胞の不在下において、又はＥｐｈＡ２ネガティブ標的細胞を用いた場合に、観察可能な共刺激活性を全く示さなかったことを示している。対照分子ＤＡＲＴ‐８は共刺激活性を全く示さなかった。
【０５４０】
Ｔ細胞集団に対するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の共刺激活性を、セントラルメモリＴ細胞（Ｔｃｍ）及びエフェクタメモリＴ細胞（Ｔｅｍ）の割合を評価することによって検査した。簡潔に述べると、ヒトＴ細胞を、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＤＡＲＴ‐７、又は対照分子ＤＡＲＴ‐８若しくはＤＡＲＴ‐６の存在下で、準最適刺激条件下において、ＥｐｈＡ２ポジティブ結腸腺癌Ｃｏｌｏ２０５標的細胞と５日間共培養した。共培養の後、ゲートＣＤ４+及びゲートＣＤ８+サブセット中で、Ｔｃｍ（ＣＣＲ７+ＣＤ４５ＲＡ-）及びＴｅｍ（ＣＣＲ７-ＣＤ４５ＲＡ-）細胞のパーセンテージを決定した。表１１にまとめた結果は、ＣＤ８+Ｔｃｍ及びＴｅｍ細胞タイプの割合が有意に増大していること、並びにこの増大が、ＣＤ１３７及びＴＡ（例えばＥｐｈＡ２）両方の結合を必要とすることを示している。これらの結果は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、適切な腫瘍抗原発現細胞の存在下において、ＣＤ８+Ｔｃｍ及びＴｅｍ細胞の割合の有意な増大を誘発することを示す。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が示す標的Ｔ細胞作動性により、腫瘍細胞に固定されたＣＤ１３７の活性化を誘発する機会を提供でき、これは全身性免疫細胞活性化、及び関連する副作用を制限する。
【０５４１】
【表１１】
2020508334.tif 000020
【０５４２】
更に、ＣＤ１３７に対する１つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つ以上の結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（例えば図４Ａ、５Ａ、及び６Ａを参照）を構築し、試験した。このような分子はＣＤ１３７に対して１価であり、その低下した結合活性に鑑みて予測されるように、活性化Ｔ細胞に対して低下した結合を示した。このような分子は、標的Ｎ８７細胞に対する広範な結合を示した。しかしながら、ＣＤ１３７に対して１価である分子のいずれも、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を全く示さなかった。この観察は、これらのアッセイにおける共刺激活性のために、少なくとも２つのＣＤ１３７結合部位が必要となり得ることを示唆している。
【０５４３】
［実施例５］  ヒト化ＣＤ１３７ＭＡＢ‐３の最適化
上述のように、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のヒト化により、結合親和性のおよそ２倍の損失がもたらされた（例えば上の表９を参照）。最適化を用いて、親マウス抗体と同等の、又はそれより良好な結合親和性を有するヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３クローンを同定した。簡潔に述べると、ランダム突然変異誘発を用いて、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１．３）の重鎖ＣＤＲH３（Ｋａｂａｔ９９〜１０２位）ドメイン内に置換を導入した。増加するストリンジェンシーを用いた３ラウンドの選択スクリーニングを用いて、ＣＤ１３７への結合が強化されたクローンを同定した。４８個のクローンをラウンド２及び３から選択し、（図５Ｂに示す構造を有する）ダイアボディとして親和性に関して評価した。表１２は、ｈＣＤ１３７への強化された結合に関して選択された４つのクローンからのＣＤＲH３  Ｋａｂａｔ残基９９〜１０２のアミノ酸配列の整列を提供する。
【０５４４】
【表１２】
2020508334.tif 000021
【０５４５】
これらのクローンのアミノ酸配列を５鎖ダイアボディＤＡＲＴ‐Ｇに組み込むことにより、最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ１、ＤＡＲＴ‐Ｇ２；ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４と称される）を得た。ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４の結合親和性をＢＩＡｃｏｒｅで評価した（表１１）。このような評価のために、（ヒスチジン含有ペプチドに融着したヒト又はカニクイザルＣＤ１３７の細胞外部分を含有する）Ｈｉｓタグ付与可溶性ヒトＣＤ１３７（ｈｕＣＤ１３７）又はカニクイザルＣＤ１３７（ｃｙｎｏＣＤ１３７）を、不動化された抗体でコーティングされた表面上に通過させた。簡潔に述べると、各試験分子をＦ（ａｂ）2ヤギ抗ヒトＦｃ被覆表面上に捕捉し、その後、異なる複数の濃度（６．２５ｎＭ〜１００ｎＭ）のｈｕＣＤ１３７又はｃｙｎｏＣＤ１３７の存在下でインキュベートした。結合の動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）結合分析（正規化された１：１ラングミュア結合モデル）で決定した。これらの研究によって計算されたｋa、ｋd及びＫDを、表１３に提示する。
【０５４６】
【表１３】
2020508334.tif 000022
【０５４７】
ダイアボディを、上記の方法と同一の方法で、ＣＤ１３７に結合する能力に関して評価した。この研究の結果を図２０Ａ〜２０Ｂに示す。上述のように、ＣＤ１３７に対するｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１．３）結合部位を有するＤＡＲＴ‐Ｇは、同一の構造を有するがマウスＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＣＤ１３７結合部位を含む構造体（ＤＡＲＴ‐６）に比べて、わずかに低い結合を示した。最適化ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨドメインを含むＨＥＲ２×ＣＤ１３７ダイアボディは、より高い結合を示し、ヒトＣＤ１３７に対するこれらの分子の相対的な結合活性は：ＤＡＲＴ‐Ｇ４＞ＤＡＲＴ‐Ｇ３＞ＤＡＲＴ‐Ｇ２≒ＤＡＲＴ‐６＞ＤＡＲＴ‐Ｇであった。ＤＡＲＴ‐Ｇ、及び最適化変異型は全て、Ｎ８７、ＪＩＭＴ‐１及びＭＤＡ‐ＭＢ２３１細胞を含む複数の標的細胞タイプの表面上のＨＥＲ２に対して、略同一の結合を示した。
【０５４８】
図２１Ａ〜２１Ｃは、ＤＡＲＴ‐３、ＤＡＲＴ‐６、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｄ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３及びＤＡＲＴ‐Ｇ４の、（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力の、代表的なアッセイの結果を示す。サイトカイン放出を、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７標的細胞（図２１Ａ）、ＪＩＭＴ‐１標的細胞（図２１Ｂ）、若しくはＭＤＡ‐２３１（図２１Ｃ）標的細胞の存在下、又は標的細胞の不在下で、上述のように測定した。
【０５４９】
この結果は、対照ダイアボディＤＡＲＴ‐３及びＤＡＲＴ‐６が共刺激活性を全く示さなかったことを示している。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、標的細胞の不在下において、又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブ標的細胞を用いた場合に、観察可能な共刺激活性を全く示さなかった。新規の抗ＣＤ１３７ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３を含むＤＡＲＴ‐Ｇは、各標的細胞株の存在下において最高の共刺激活性を示した。ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐２も同様の放出パターンを示す。
【０５５０】
最適化変異型ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３及びＤＡＲＴ‐Ｇ４の共刺激活性は、細胞表面で発現されたＣＤ１３７への結合の増大に反比例することが発見され、これは、このアッセイにおいて、より高い結合親和性が、共刺激活性と直接相関しないように思われることを示している。しかしながら、以下に示すように、これらの最適化変異型は、他の機能アッセイにおいて同等の作用を示す。これらの属性により、親和性が最適化されたこれらの変異型は、共刺激剤としての使用に加えて、ＣＤ１３７発現の検出のため、及びＣＤ１３７の発現を測定する診断アッセイのために、特に有用となる。
【０５５１】
ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、腫瘍標的細胞の標的転換細胞殺滅を仲介する能力を検査した。簡潔に述べると、基本的には共刺激アッセイに関して上述したように、（ルシフェラーゼ（ｌｕｃ）レポーター遺伝子を発現するよう操作された）Ｎ８７／ＧＦＰ／Ｌｕｃ標的細胞を、ＤＡＲＴ‐Ｂ、ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ１、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、ＤＡＲＴ‐Ｇ４、又は対照分子ＤＡＲＴ‐３若しくはＤＡＲＴ‐６（それぞれ０．００１、０．０１、０．１、及び１μｇ／ｍＬ）の不在下又は存在下で、ｐａｎ  Ｔ細胞と共に、準最適刺激条件下において、７２時間インキュベートした。インキュベーションの終わりに、細胞毒性を、標的細胞の細胞ルシフェラーゼ活性を測定する発光（ＬＵＭ）アッセイによって、発光の相対光量（ＲＬＵ）を読み取り値として決定した（図２２）。検査した各ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、ある程度の標的転換細胞殺滅活性を示し、ＤＡＲＴ‐Ｇが最高の活性を示し、ＤＡＲＴ‐Ｂが最低の活性を示した。対照的に、対照分子は、検出可能な標的転換細胞殺滅活性を全く示さなかった。この研究の結果は、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、腫瘍細胞の標的転換細胞殺滅を仲介できることを実証している。
【０５５２】
［実施例６］  ３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の特性決定
上述のように、ＣＤ１３７に対する１つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つ以上の結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて、共刺激活性を全く示さなかった。この観察は、少なくとも２つのＣＤ１３７結合部位が共刺激活性のために必要となり得ることを示唆している。この問題に対処するために、ＣＤ１３７及び例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕに結合できる例示的な３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子のセットを生成した。これらの分子はそれぞれ４つの二重特異性３価結合分子「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２」、「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３」、及び「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４」を含み、これらはそれぞれ、２つのｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメイン及び１つのｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメインを含んでいた（ＣＤ１３７×ＣＤ１３７×ＨＥＲ２）。これらの例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造及び配列は、上で詳述されている。更に、それぞれ１つの変異型パリビズマブドメイン及び２つの最適化ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３ドメインを含む２つの対照分子「ＴＲＩＤＥＮＴ‐１」（ＣＤ１３７×ＣＤ１３７×ＲＳＶ）、並びに１つのｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１ドメイン、１つの４‐４‐２０ドメイン、及び１つの変異型パリビズマブドメインを含む「ＴＲＩＤＥＮＴ‐２」（ＲＳＶ×ＦＩＴＣ×ＨＥＲ２）を生成した。これらの３価分子は、図６Ａに示されている一般構造を有し、以下で詳述するように生成され、また以下で詳述するように、標的Ｎ８７（３+）、ＪＩＭＴ‐１（２+）及びＭＣＦ‐７（１+）の表面上に存在するＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する能力に関して、基本的に上述のようなＦＡＣＳ分析によって特性決定された。ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４）も評価した。
【０５５３】
図２３Ａ〜２３Ｃに示すように、１つ又は２つのＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメインを含む分子は、これら３つの標的細胞タイプ全てに結合した。なお、２つのＨＥＲ２／ｎｅｕ結合部位を有する分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４）の結合曲線は、特に細胞表面上に高レベルのＨＥＲ２／ｎｅｕを有する細胞上で、より迅速に飽和に達する。これは、一部の分子が２価結合（即ち表面上の２つのＨＥＲ２／ｎｅｕ分子への結合）を示していることを示す。２価結合は、高濃度の標的リガンドの存在下で発生しやすい。
【０５５４】
ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４）、ＣＤ１３７×ＣＤ１３７×ＲＳＶ及びＴＡ×ＦＩＴＣ×ＲＳＶ対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２）、並びにＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４）も、活性化ＣＤ４+（図２４Ａ）及びＣＤ８+（図２４Ｂ）Ｔ細胞の表面上に存在するＣＤ１３７に結合する能力に関して、基本的に実施例２において上述したようなＦＡＣＳ分析によって評価した。２つのＣＤ１３７結合ドメインを含む分子は、活性化Ｔ細胞に対する強力な結合を示した。改善された結合が、上述の最適化ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨドメインを含む例示的なＨＥＲ２×ＣＤ１３７ダイアボディに関して観察された。ＴＡ×ＦＩＴＣ×ＲＳＶ対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐２）は、予測通りに、活性化Ｔ細胞に対する結合を全く示さなかった。
【０５５５】
別の研究では、ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４）、ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ４）、並びにＴＡ×ＦＩＴＣ×ＲＳＶ対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐２）を、ＣＤ１３７発現性細胞とＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性標的細胞との間の細胞間コンジュゲーションを仲介する能力に関して評価した。このような評価のために、ＰＫＨ２６で標識した１．５×１０4個のＣＤ１３７発現性ＣＨＯ細胞を、１：１の比の、ＣＦＳＥで標識した、１．５×１０4個のＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性標的細胞（Ｎ８７（ＨＥＲ２発現レベル：３+）、ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２発現レベル：２+）、又はＭＣＦ‐７（ＨＥＲ２発現レベル：１+））と、連続希釈（１０倍希釈）試験物品の存在下で、室温において３０分間同時にインキュベートした。次に試料をフローサイトメトリーで分析して、コンジュゲートした細胞（ＣＦＳＥ＋／ＰＫＨ２６＋）のパーセンテージを、細胞間コンジュゲーションの読み取り値として決定した。図２５Ａ〜２５Ｃに示すように、少なくとも１つのＨＥＲ２／ｎｅｕ結合ドメイン及び２つのＣＤ１３７結合ドメインを含む分子は、細胞間コンジュゲーションを仲介できたが、対照分子は不活性であった。全ての活性分子に関して、細胞間コンジュゲーション活性は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現のレベルと相関していた。
【０５５６】
別の研究では、ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４）、ＣＤ１３７×ＲＳＶ及びＴＡ×ＦＩＴＣ×ＲＳＶ対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２）、並びにＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有するＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３、及びＤＡＲＴ‐Ｇ４）を、例示的なＴＡであるＨＥＲ２／ｎｅｕを発現する標的細胞の存在下又は不在下での（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）Ｔ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力に関して評価した。サイトカイン放出は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現性Ｎ８７標的細胞（図２６Ａ）、ＪＩＭＴ‐１標的細胞（図２６Ｂ）の存在下、又は標的細胞の不在下（図２６Ｃ）において、上述のように測定した。
【０５５７】
この結果は、例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、いずれの標的細胞株の存在下において共刺激活性を示し、その活性がＨＥＲ２／ｎｅｕ発現のレベルと相関していたことを示している。（ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する１つの結合部位をそれぞれ有する）ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４は、（ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕに対する２つの結合部位を有する）ＤＡＲＴ‐Ｇ、ＤＡＲＴ‐Ｇ２、ＤＡＲＴ‐Ｇ３又はＤＡＲＴ‐Ｇ４よりも、ＪＩＭＴ‐１（ＨＥＲ２++）細胞上で高い共刺激活性を示した。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、標的細胞の不在下において、又はＨＥＲ２／ｎｅｕネガティブ標的細胞を用いた場合に、観察可能な共刺激活性を全く示さなかった。対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２は、共刺激活性を全く示さなかった。
【０５５８】
［実施例７］  ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、Ｔ細胞活性化を強化する
上述のように、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、Ｔ細胞膨張及び活性化（例えば図１７Ａ〜１７Ｏを参照）、並びに腫瘍標的化剤仲介型ＮＫエフェクタ機能（ＡＤＣＣ）（例えばマルゲツキシマブ仲介型ＡＤＣＣの強化、図１８Ａ〜１８Ｂを参照）を強化できる。ＴＡ及びＣＤ３に結合するＴＡ×ＣＤ３二重特異性分子（例えばＤＡＲＴダイアボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）分子等）は、ＴＡを発現する標的細胞のＴ細胞標的転換殺滅を仲介し、Ｔ細胞膨張及び活性化を刺激することが公知である（例えば国際公開第２０１７／０３０９２６号；国際公開第２０１６／０４８９３８号；及び国際公開第２０１５／０２６８９２号を参照）。腫瘍標的化剤によって仲介される、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の、Ｔ細胞活性化及びＴ細胞標的転換殺滅を強化する能力を、例示的なＴＡ×ＣＤ３二重特異性分子を用いたいくつかの研究で評価した。
【０５５９】
このような研究の１つにおいて、例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の、例示的なＴＡであるｇｐＡ３３に結合するＴＡ×ＣＤ３ダイアボディによって仲介されるＴ細胞標的転換細胞殺滅を強化する能力を、ルシフェラーゼベースの細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）アッセイを用いて評価した。簡潔に述べると、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ又は（ｇｐＡ３３の代わりに無関係な結合ドメイン（フルオレセインに対する４‐４‐２０）を含む）対照Ｉｒｒｅｌ×ＣＤ３二重特異性ダイアボディと組み合わせたＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４又は対照ＴＲＩＤＥＮＴ‐１の存在下で、ｐａｎ  Ｔ細胞を、ルシフェラーゼ（ｌｕｃ）レポーター遺伝子を発現するよう操作された標的細胞であるＣｏｌｏ２０５細胞（Ｃｏｌｏ２０５／ｌｕｃ）と共に、エフェクタ：標的（Ｅ：Ｔ）比３：１でインキュベートした。インキュベーションの終わりに、細胞毒性を、標的細胞の細胞ルシフェラーゼ活性を測定する発光（ＬＵＭ）アッセイによって、発光の相対光量（ＲＬＵ）を読み取り値として決定した（図２７）。この研究の結果は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、ＴＡ×ＣＤ３二重特異性分子によって仲介されるＴ細胞標的転換細胞殺滅を強化できることを実証している。
【０５６０】
別の研究では、例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の、Ｔ細胞膨張及び抗腫瘍活性をインビボで共に強化する能力を、（ＴＡとしてＨＥＲ２／ｎｅｕ及び５Ｔ４を発現する）ＳＫ‐ＯＶ３卵巣癌モデルで評価した。この研究では、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の活性を、単独で、又は例示的なＴＡである５Ｔ４（５Ｔ４×ＣＤ３）に結合するＴＡ×ＣＤ３ダイアボディと組み合わせて、また任意に、抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（ｈＰＤ‐１  ｍＡｂ  ７（１．２）ＩｇＧ４（Ρ）、例えば国際公開第２０１７／０１９８４６号の配列番号２６４及び２６６を参照）と更に組み合わせて、検査した。
【０５６１】
簡潔に述べると、研究０日目に、単離したばかりのＰＢＭＣを、ＮＳＧ．ＭＨＣＩ-/-マウス（メスのマウス、腫瘍の監視のために１グループあたり７匹；Ｔ細胞及び腫瘍のプロファイリングのために１グループあたり３匹）に、後眼窩注射した。研究０日目に、ＳＫ‐ＯＶ３細胞（５×１０6個）を、マトリゲルと１：１で混合し、皮下注射した。研究７日目、マウスを抗ＣＤ４抗体ＯＫＴ４（初期用量１０ｍｇ／ｋｇ（皮下）、その後週２回５ｍｇ／ｋｇ（ＩＰ））で処置して、ＣＤ４+Ｔ細胞を排除した。研究２２日目から、マウスを：ビヒクル対照；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（２．５ｍｇ／ｋｇ、週１回）；ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ（０．０１ｍｇ／ｋｇ、週２回）；ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（２．５ｍｇ／ｋｇ、週１回）及びＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ（０．０１ｍｇ／ｋｇ、週２回）の組み合わせ；抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（５ｍｇ／ｋｇ、週１回）；又はＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（２．５ｍｇ／ｋｇ；週１回）、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ（０．０１ｍｇ／ｋｇ、週２回）、及び抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（５ｍｇ／ｋｇ、週１回）の組み合わせの静脈内（ＩＶ）注射によって処置した。
【０５６２】
Ｔ細胞マーカーを、試験物品の投与後７日間、ＦＡＣＳ分析で評価し、腫瘍成長を研究の経過全体にわたって監視した。後処理の７日後に試料採取した腫瘍１ｍｇ中に存在するＴ細胞マーカーＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ６９、及びＰＤ‐１の発現を、それぞれ図２８Ａ、図２８Ｂ、図２８Ｃ、及び図２８Ｄにプロットする。これらのデータは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２が、（ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ６９の発現の増大によって例証されるように）ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディによって仲介されたＴ細胞活性化及び膨張を強化したことを示す。免疫チェックポイント分子ＰＤ‐１の発現は、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ単独での処置後に上方制御された。ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２及びＴＡ×ＣＤ３ダイアボディの組み合わせでの処置は、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディ単独での処置後に観察されたチェックポイント分子ＰＤ‐１の発現を更に強化したが、これは、チェックポイント阻害剤の添加によって上記組み合わせの活性が強化され得ることを示唆するものであった。実際に、抗ＰＤ‐１  ｍＡｂ（例示的なＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤）をＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２／ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディの組み合わせに添加すると、ＰＤ‐１発現の上方制御が阻害され、Ｔ細胞活性化及び増殖が更に強化された。
【０５６３】
研究の経過全体にわたる腫瘍成長を図２９にプロットするが、これは、ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２が、ＴＡ×ＣＤ３ダイアボディの抗腫瘍活性を強化したことを示す。更に、ＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ‐１  ｍＡｂを上記組み合わせに添加すると、上記組み合わせの抗腫瘍活性が更に強化された。この研究の結果は、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子、特にＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＴＡに対する１つの結合部位を有するものが、腫瘍標的化剤との組み合わせで、Ｔ細胞活性化、増殖及び標的細胞殺滅を強化することを実証している。よって、本発明のＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は有利には、腫瘍標的化剤、特にＴ細胞活性化を仲介する、ＮＫ細胞活性化を仲介する、及び／又はこのような細胞におけるＣＤ１３７発現を刺激する腫瘍標的化剤と併用できる。更に、これらの研究は、抗ＰＤ‐１又は抗ＰＤ‐Ｌ１抗体等のＰＤ‐１／ＰＤ‐Ｌ１チェックポイント阻害剤の添加により、Ｔ細胞活性化、増殖及び標的細胞殺滅を更に強化できることを実証している。
【０５６４】
［実施例８］  安定性の研究
例示的な３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１．３）を含む）、並びに最適化変異型ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ａ．３）を含む）、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）を含む）、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｃ．３）を含む）、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｄ．３）を含む）の、融点（Ｔｍ）及び他の安定性パラメータを評価した。精製した材料（高圧サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ‐ＳＥＣ）で判定した場合に＞９５％）のＴｍを、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価した。簡潔に述べると、純度レベルを、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨカラム（２００オングストローム、１．７μｍ、４．６×１５０ｍｍ）に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＩＩ  ＨＰＬＣを用いたＨＰＬＣ‐ＳＥＣで測定した。流される緩衝液は、２０ｍＭリン酸ナトリウム、０．５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０２％アジ化ナトリウム、ｐＨ７．２であった。流量は、０．４ｍｌ／分で５分間であった。％純度は、モノマーピークの２８０ｎｍにおける吸光度トレースの％面積から決定した。熱安定性の測定は、MicroCal VP‐Capillary DSC（Malvern Instruments, Inc.）で、１５〜９５℃、１℃／分の勾配で実施した。
【０５６５】
他の安定性パラメータを評価するために、精製したＣＤ１３７×ＴＡ結合分子（特段の記載が無い限り、ＰＢＳ中で１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．２）に負荷を印加し、ＨＰ‐ＳＥＣで再評価し、値を、負荷が印加されていない分子から得られた値と比較した。以下の負荷条件を使用した：３ラウンドの凍結（−８０℃で１時間）及びそれに続く解凍；２５℃又は４０℃で２及び７日間の保管後；２０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）中における２５℃で０、２、７日間の保管後；１０ｍＭヒスチジンＨＣＬ（ｐＨ６．５）中における２５℃での保管の０、２、７日目。これらの研究の結果を表１４にまとめる。
【０５６６】
【表１４】
2020508334.tif 000023
【０５６７】
Ｔｍ  ｏｎｓｅｔ及びＣＤ１３７結合領域のＴｍ（Ｔｍ１）は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２に関する最適な範囲内である。しかしながら、Ｔｍ  ｏｎｓｅｔ及びＴｍ１は、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の両方に関しては比較的低い。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２だけが、ＰＢＳ中において４０℃で安定であり（２日目及び７日目）、残りの分子はこの保管条件において繊細であった。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２はいずれも、酢酸（ｐＨ５．５）中で安定であったが、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４はいずれも、酢酸（ｐＨ５．５）中でのインキュベーションに対して繊細であった。試験した分子は全て、ｐＨ６．５のヒスチジン中で安定であった。これらの研究の結果に基づく、試験した緩衝液中での安定性に関するランク付けは、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２＞ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ＞ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３＞ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４である。
【０５６８】
［実施例９］  カニクイザルＴ細胞を用いた場合の共刺激活性
上述のように、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（又はそのヒト化、最適化変異型）の結合ドメインを含む分子は、ヒトＣＤ１３７及びカニクイザルＣＤ１３７の両方に結合する。ＣＤ１３７に対する２つの結合部位及びＨＥＲ２／ｎｅｕ又は５Ｔ４に対する１つの結合部位を有する代表的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子であるＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２を、カニクイザルＴ細胞サイトカイン放出アッセイにおいて共刺激活性を仲介する能力に関して評価した。これらの例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造及び配列は、上で詳述されている。対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２も含まれていた。サイトカイン放出アッセイは、カニクイザルｐａｎ  Ｔ細胞を使用したことを除いて、標的細胞の存在下又は不在下で、基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証された。これらの研究のために、ＨＥＲ２／ｎｅｕ及び５Ｔ４の両方を発現するＪＩＭＴ‐１標的細胞を使用した。
【０５６９】
この結果は図３０に示されており、これは、対照分子、ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐２がが共刺激活性を全く示さなかったことを示す。一方、（ヒト化／最適化抗ＣＤ１３７抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）を含む）ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２はいずれも、用量依存性共刺激活性を示した。
【０５７０】
［実施例１０］  ＣＤ１３７の脱免疫化
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）のインシリコ分析によって、ＶＨドメイン中の２つの潜在的なＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチド（Ｔ細胞エピトープ）、及びＶＬドメイン中の３つの潜在的なＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドが同定された。ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）に対するアミノ酸置換のパネルを検査して、置換（単一のアミノ酸置換又は複数の置換のセットであってよい）を同定することにより、同定されたＴ細胞エピトープの潜在的な免疫原性を排除／低減した。具体的には、アミノ酸置換を、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂの脱免疫化のために最大２つの位置（Ｋａｂａｔ残基３８及び４８）に、並びにｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３の脱免疫化のために最大６つの位置（Ｋａｂａｔ残基２４、２５、４４、４８、５２及び５４）に導入した。図３１Ａ及び３１Ｂそれぞれにおいて、ＶＨ及びＶＬドメインの置換されたアミノ酸残基は線で囲まれ、Ｋａｂａｔ番号は矢印で示されている。これらの位置における様々な置換を個別に及び／又は組み合わせて有するｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）のＶＨ及び／又はＶＬ変異型を含む（２３４Ａ／２３５Ａ  Ｆｃドメイン（配列番号４０）を有する）ＩｇＧ１抗体を生成し、ＣＤ１３７に結合する能力に関して、Ａｔｔａｎａ  Ｃｅｌｌ  Ａ２００  ＱＣＭによって特性決定した。簡潔に述べると、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）及び脱免疫化変異型を、ウサギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃポリクローナル抗体でコーティングしたＡｔｔａｎａセンサチップ上に別個に捕捉し、可溶性ヒトＣＤ１３７‐Ｈｉｓタグ付与融合タンパク質を、１１．１、３３．３、１００及び３００ｍＭで上記チップ上に通過させた。これらの脱免疫化変異型のセンサグラムを、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）のセンサグラムと比較し、スコアリングした。これらの抗体を、熱安定性に関しても、基本的に実施例８で上述したように実施されるＤＳＣによって、特性決定した。多数のこのような変異型に関する結果を表１５にまとめる。これらの変異型のアミノ酸配列は既に提供されている。
【０５７１】
【表１５】
2020508334.tif 000024
【０５７２】
ＣＤ１３７結合活性及び熱安定性を保持した多数の脱免疫化変異型が同定された。ＶＨドメインＩ４８Ａ置換を含む脱免疫化変異型の大半が、ＣＤ１３７結合及びＴｍ  ｏｎｓｅｔの両方において多少の低減を示した。
【０５７３】
脱免疫化ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｇ．１５）、並びに親ヒト化ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）を、活性化ＣＤ４+及びＣＤ８+Ｔ細胞に結合する能力に関して、基本的に上述したように試験した。図３２Ａ〜３２Ｂに示すように、脱免疫化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）の結合曲線は変化せず、その一方でｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｇ．１５）は、ＣＤ４+細胞及びＣＤ８+Ｔ細胞の両方に対して、わずかに低下した結合を示した。
【０５７４】
ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｇ．１５）の生体外アゴニスト活性を、（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）架橋の不在下での又は架橋を用いたＴ細胞サイトカイン放出アッセイで評価した。ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３をベースとした抗体はいずれも、架橋の不在下で活性を示さず（図３３Ａ）、架橋したｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）は、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）と同等のアゴニスト活性を示したが、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｇ．１５）は、ＣＤ１３７に対する結合の低下によるものと思われるアゴニスト活性のわずかな低下を示した（図３３Ｂ）。上で報告されているように、ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１は、架橋の存在下及び不在下においてアゴニスト活性を示した。
【０５７５】
［実施例１１］  脱免疫化ＣＤ１３７結合ドメインを有する３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子
上述のように、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨ及びＶＬドメインを、ヒト化し、最適化し、脱免疫化した。例示的な二重特異性４価及び／又は３価ＣＤ１３７×ＴＡ結合分子は、このようなＶＨ及びＶＬドメインを組み込むことによって生成される。ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）のＣＤ１３７結合ドメインを含む、１つのこのような二重特異性３価結合分子「ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５」を生成し、多数のアッセイで評価した。この例示的なＣＤ１３７×ＴＡ結合分子の構造及び配列は、上で詳述されている。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、及び１つ以上の対照分子：ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐３、ＴＲＩＤＥＮＴ‐４が、これらの研究に含まれていた。
【０５７６】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、並びに対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐３、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４を、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞、並びに／又は標的細胞（高発現性ＪＩＭＴ‐１乳房腫瘍細胞及び低発現性ＳＫＯＶ‐３卵巣癌細胞）の表面上に存在する５Ｔ４に結合する能力に関して、基本的に上述の通りに評価した。図３４Ａに示すように、２つのＣＤ１３７結合ドメインを含む全ての分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、並びに対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４）は、活性化ＣＤ８+Ｔ細胞に対して同様の結合を示したが、ＣＤ１３７結合ドメインを全く含まない対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐３）は結合しなかった。同様に、５Ｔ４結合ドメイン（ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、及び対照ＴＲＩＤＥＮＴ‐３）を有する全ての分子は、高レベルの５Ｔ４を発現する標的細胞（ＪＩＭＴ‐１、図３４Ｂ）に対して同様の強力な結合を示し、また低レベルの５Ｔ４を発現する標的細胞（ＳＫＯＶ‐３、図３４Ｃ）に対して比較的弱い結合を示したが、５Ｔ４結合ドメインを含まない対照分子（ＴＲＩＤＥＮＴ‐１及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４）は、５Ｔ４発現性標的細胞に結合しなかった。
【０５７７】
ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２、ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５、並びに対照分子ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐３、及びＴＲＩＤＥＮＴ‐４の生体外アゴニスト活性を、（基本的に実施例２で上述されているように実施され、ＩＦＮ‐γの放出によって例証される）異なる複数のレベルの例示的なＴＡを発現する標的細胞、５Ｔ４（ＪＩＭＴ‐１（５Ｔ４hi）細胞又はＳＫＯＶ‐３（５Ｔ４lo）細胞）の存在下又は不在下でのＴ細胞サイトカイン放出アッセイで評価した。
【０５７８】
図３５Ａ〜３５Ｃに示すように、（５Ｔ４結合ドメインを含まない）ＴＲＩＤＥＮＴ‐１、ＴＲＩＤＥＮＴ‐４は、共刺激活性を示さなかった。（ＣＤ１３７結合ドメインを含まない）ＴＲＩＤＥＮＴ‐３は、共刺激活性を全く有しないことも分かった。ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ２及びＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂ５は、高５Ｔ４発現性ＪＩＭＴ‐１標的細胞の存在下（図３５Ａ）では、同様に用量依存性の共刺激活性を示したが、低５Ｔ４発現性ＳＫＯＶ‐３標的細胞の存在下（図３５Ｂ）、又は標的細胞の不在下（図３５Ｃ）では、共刺激活性をほとんど又は全く示さなかった。
【０５７９】
これらの研究の結果は、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｅ．１５）の脱免疫化ＶＨ及びＶＬドメインを含むＣＤ１３７×ＴＡ結合分子が、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３（１Ｂ．３）の最適化されたＶＨ及びＶＬドメインを含むＣＤ１３７×ＴＡ結合分子と同等の結合及び共刺激活性を示すことを示している。
【０５８０】
本明細書において言及されている全ての公刊物及び特許は、個々の公刊物又は特許出願それぞれの全体が参照により本明細書に援用されていることが具体的かつ独立に指示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用されている。本発明をその具体的実施形態に関して説明したが、更なる修正形態が可能であり、本出願は、本発明が属する分野の公知の方法又は慣例の範囲内であるような、及びこれまでに挙げた必須の特徴に適用できるような、本開示からの逸脱を含む、本発明の原理に概ね従う本発明のいずれの変形、使用又は改変を包含することを意図していることを理解されたい。
【配列表フリーテキスト】
【０５８１】
配列表の数字見出し＜２２３＞の記載は以下のとおりである。
配列番号１：ヒトＩｇＧ  ＣＬκドメイン
配列番号２：ヒトＩｇＧ  ＣＬλドメイン
配列番号３：ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン
配列番号４：ヒトＩｇＧ２  ＣＨ１ドメイン
配列番号５：ヒトＩｇＧ３  ＣＨ１ドメイン
配列番号６：ヒトＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン
配列番号７：ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域
配列番号８：ヒトＩｇＧ２ヒンジ領域
配列番号９：ヒトＩｇＧ３ヒンジ領域
配列番号１０：ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域
配列番号１１：Ｓ２２８Ｐ置換を含むヒトＩｇＧ４ヒンジ領域変異型
配列番号１２：例示的なヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号１３：例示的なヒトＩｇＧ２のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号１４：例示的なヒトＩｇＧ３のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号１５：例示的なヒトＩｇＧ４のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号１６：好ましい介在スペーサペプチド（リンカー１）
配列番号１７：ｓｃＦｖ分子用の介在スペーサペプチド（リンカー１）
配列番号１８：好ましい介在スペーサペプチド（リンカー２）
配列番号１９：代替的な介在スペーサペプチド（リンカー２）
配列番号２０：好ましいヘテロ二量体促進ドメイン（リンカー３）
配列番号２１：代替的なヘテロ二量体促進ドメイン（リンカー３）
配列番号２２：好ましい介在スペーサペプチド（リンカー４）
配列番号２３、２４：代替的な好ましい介在スペーサペプチド（リンカー４）
配列番号２５〜３０：代替的なリンカー
配列番号３１〜３５：好ましいヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号３６：Ｅコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号３７：Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号３８：システイン含有Ｅコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号３９：システイン含有Ｋコイルヘテロ二量体促進ドメイン
配列番号４０：ＫａｂａｔにおけるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン変異体；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号４１：ＫａｂａｔにおけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ置換を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン変異体；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号４２：ＫａｂａｔにおけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ置換を含むヒトＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン変異体；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号４３：ＫａｂａｔにおけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅ置換を含むヒトＩｇＧ４のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン変異体；Ｘａａは自然発生した何れかのアミノ酸
配列番号４４〜４６：例示的な「ノブ担持」ＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号４７〜４９：例示的な「ホール担持」ＩｇＧ１のＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン；Ｘａａはリシン（Ｋ）又は不在
配列番号５０：連鎖球菌株Ｇ１４８のタンパク質Ｇのアルブミン結合ドメイン３（ＡＢＤ３）
配列番号５１〜５３：連鎖球菌株Ｇ１４８のタンパク質Ｇの脱免疫化アルブミン結合ドメイン３（ＡＢＤ３）
配列番号５４：マルゲツキシマブのＶＨドメイン
配列番号５５：マルゲツキシマブのＶＬドメイン
配列番号５６：トラスツズマブのＶＨドメイン
配列番号５７：トラスツズマブのＶＬドメイン
配列番号５８：ペルツズマブのＶＨドメイン
配列番号５９：ペルツズマブのＶＬドメイン
配列番号６０：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号６１：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号６２：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン；Ｘａａ（１００位）はアスパラギン酸（Ｄ）又はグルタミン酸（Ｅ）；Ｘａａ（１０１位）はグリシン（Ｇ）又はイソロイシン（Ｉ）
配列番号６３：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン；Ｘａａ（３０位）はアスパラギン（Ｎ）又はセリン（Ｓ）；Ｘａａ（３１位）はセリン（Ｓ）；トレオニン（Ｔ）又はアスパラギン（Ｎ）；Ｘａａ（５５位）はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）；Ｘａａ（５６位）はアスパラギン酸（Ｄ）；グルタミン酸（Ｅ）又はセリン（Ｓ）
配列番号６４：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨ１ドメイン。
配列番号６５：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨ２ドメイン。
配列番号６６：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＨ３ドメイン。
配列番号６７：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬ１ドメイン
配列番号６８：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬ２ドメイン
配列番号６９：ヒト化抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ｈＨＥＲ２‐ＭＡＢ‐１のＶＬ３ドメイン
配列番号７０：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１  ＶＨ）
配列番号７１：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐１  ＶＬ）
配列番号７２：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２  ＶＨ）
配列番号７３：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐２  ＶＬ）
配列番号７４：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ）
配列番号７５：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）
配列番号７６：ヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１）
配列番号７７：最適化ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１）；Ｘａａ（１０３位）はアラニン（Ａ）又はセリン（Ｓ）；Ｘａａ（１０４位）はチロシン（Ｙ）；Ｘａａ（１０５位）はセリン（Ｓ）；Ｘａａ（１０６位）はフェニルアラニン（Ｆ）、メチオニン（Ｍ）又はチロシン（Ｙ）；Ｘａａ（１０７位）はヒスチジン（Ｈ）、セリン（Ｓ）又はアスパラギン（Ｎ）；Ｘａａ（１０８位）はプロリン（Ｐ）、トレオニン（Ｔ）、ロイシン又はバリン（Ｖ）
配列番号７８：配列番号７７の変異体１Ａの１０３位〜１０８位の好ましい残基
配列番号７９：配列番号７７の変異体１Ｂの１０３位〜１０８位の好ましい残基
配列番号８０：配列番号７７の変異体１Ｃの１０３位〜１０８位の好ましい残基
配列番号８１：配列番号７７の変異体１Ｄの１０３位〜１０８位の好ましい残基
配列番号８２：最適化ヒト化抗体ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３のＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）；Ｘａａ（４１位）はアスパラギン酸（Ｄ）又はグリシン（Ｇ）；Ｘａａ（４２位）はグリシン（Ｇ）又はリシン（Ｋ）
配列番号８３：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ａ
配列番号８４：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｂ
配列番号８５：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｃ
配列番号８６：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１Ｄ
配列番号８７：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１
配列番号８８：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ２
配列番号８９：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ３
配列番号９０：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ）
配列番号９１：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ）
配列番号９２：ヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＨドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨ１）
配列番号９３：ヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ）；Ｘａａはフェニルアラニン（Ｆ）又はチロシン（Ｙ）
配列番号９４：ヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ１）
配列番号９５：ヒト化ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４のＶＬドメイン（ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬ２）
配列番号９６：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５のＶＨドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨ）
配列番号９７：ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５のＶＬドメイン（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬ）
配列番号９８：ＤＡＲＴ‐Ａの第１及び第３のポリペプチド鎖
配列番号９９：ＤＡＲＴ‐Ａの第２及び第４のポリペプチド鎖
配列番号１００：ＤＡＲＴ‐Ｂの第１及び第３のポリペプチド鎖
配列番号１０１：ＤＡＲＴ‐Ｂの第２及び第４のポリペプチド鎖
配列番号１０２：ＤＡＲＴ‐Ｃの第１及び第３のポリペプチド鎖
配列番号１０３：ＤＡＲＴ‐Ｃの第２及び第４のポリペプチド鎖
配列番号１０４：ＤＡＲＴ‐Ｄの第１のポリペプチド鎖
配列番号１０５：ＤＡＲＴ‐Ｄの第２及び第５のポリペプチド鎖
配列番号１０６：ＤＡＲＴ‐Ｄの第３のポリペプチド鎖
配列番号１０７：ＤＡＲＴ‐Ｄの第４のポリペプチド鎖
配列番号１０８：ＤＡＲＴ‐Ｅの第１のポリペプチド鎖
配列番号１０９：ＤＡＲＴ‐Ｅの第２及び第５のポリペプチド鎖
配列番号１１０：ＤＡＲＴ‐Ｅの第３のポリペプチド鎖
配列番号１１１：ＤＡＲＴ‐Ｅの第４のポリペプチド鎖
配列番号１１２：ＤＡＲＴ‐Ｆの第３のポリペプチド鎖
配列番号１１３：ＤＡＲＴ‐Ｆの第４のポリペプチド鎖
配列番号１１４：ＤＡＲＴ‐Ｇの第３のポリペプチド鎖
配列番号１１５：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ１の第３のポリペプチド鎖
配列番号１１６：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ２の第３のポリペプチド鎖
配列番号１１７：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ３の第３のポリペプチド鎖
配列番号１１８：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ４の第３のポリペプチド鎖
配列番号１１９：ＤＡＲＴ‐Ｇの第４のポリペプチド鎖
配列番号１２０：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ１の第４のポリペプチド鎖
配列番号１２１：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ２の第４のポリペプチド鎖
配列番号１２２：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ３の第４のポリペプチド鎖
配列番号１２３：最適化ＤＡＲＴ‐Ｇ４の第４のポリペプチド鎖
配列番号１２４：抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０のＶＨドメイン
配列番号１２５：抗フルオレセイン抗体４‐４‐２０のＶＬドメイン
配列番号１２６：パリビズマブのＶＨドメイン
配列番号１２７：パリビズマブのＶＬドメイン
配列番号１２８：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号１２９：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号１３０：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２のＶＨドメイン
配列番号１３１：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐２のＶＬドメイン
配列番号１３２：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３のＶＨドメイン
配列番号１３３：ＥｐｈＡ２  ＭＡＢ‐３のＶＬドメイン
配列番号１３４：５Ｔ４  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号１３５：５Ｔ４  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号１３６：５Ｔ４  ＭＡＢ‐２のＶＨドメイン
配列番号１３７：５Ｔ４  ＭＡＢ‐２のＶＬドメイン
配列番号１３８：Ｆｃ最適化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体エノブリツズマブのＶＨドメイン
配列番号１３９：Ｆｃ最適化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体エノブリツズマブのＶＬドメイン
配列番号１４０：抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＨドメイン
配列番号１４１：抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＬドメイン
配列番号１４２：ヒト化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＨドメイン（ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ１）
配列番号１４３：ヒト化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＨドメイン（ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＨ２）
配列番号１４４：ヒト化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＬドメイン（ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ１）
配列番号１４５：ヒト化抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６９ＤのＶＬドメイン（ｈＢＲＣＡ６９Ｄ  ＶＬ２）
配列番号１４６：抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＰＲＣＡ１５７のＶＨドメイン
配列番号１４７：抗ヒトＢ７‐Ｈ３抗体ＰＲＣＡ１５７のＶＬドメイン
配列番号１４８：抗ｇｐＡ３３抗体ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号１４９：抗ｇｐＡ３３抗体ｇｐＡ３３  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号１５０：ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体１６Ｃ３のＶＨドメイン
配列番号１５１：ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体１６Ｃ３のＶＬドメイン
配列番号１５２：ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体ｈＭＮ１５のＶＨドメイン
配列番号１５３：ヒト化抗ＣＥＡＣＡＭ５／ＣＥＡＣＡＭ６抗体ｈＭＮ１５のＶＬドメイン
配列番号１５４：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ）のＣＤＲＨ１
配列番号１５５：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ）のＣＤＲＨ２
配列番号１５６：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ）のＣＤＲＨ３
配列番号１５７：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）のＣＤＲＬ１
配列番号１５８：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）のＣＤＲＬ２
配列番号１５９：マウス抗ＣＤ１３７モノクローナル抗体（ＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ）のＣＤＲＬ３
配列番号１６０：配列番号７４の１０３位〜１０８位の残基
配列番号１６１：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＡのＣＤＲＨ３
配列番号１６２：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＢのＣＤＲＨ３
配列番号１６３：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＣのＣＤＲＨ３
配列番号１６４：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＤのＣＤＲＨ３
配列番号１６５：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨのＣＤＲＨ１
配列番号１６６：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨのＣＤＲＨ２
配列番号１６７：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＨのＣＤＲＨ３
配列番号１６８：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬのＣＤＲＬ１
配列番号１６９：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬのＣＤＲＬ２
配列番号１７０：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐４  ＶＬのＣＤＲＬ３
配列番号１７１：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨのＣＤＲＨ１
配列番号１７２：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＨのＣＤＲＨ２
配列番号１７４：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬのＣＤＲＬ１
配列番号１７５：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬのＣＤＲＬ２
配列番号１７６：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐５  ＶＬのＣＤＲＬ３
配列番号１７７：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨのＣＤＲＨ１
配列番号１７８：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨのＣＤＲＨ２
配列番号１７９：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨのＣＤＲＨ３
配列番号１８０：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬのＣＤＲＬ１
配列番号１８１：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬのＣＤＲＬ２
配列番号１８２：マウス抗ＨＥＲ２／ｎｅｕモノクローナル抗体ＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬのＣＤＲＬ３
配列番号１８３：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＨドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ１）のＣＤＲＨ３
配列番号１８４：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＨドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ２）のＣＤＲＨ３
配列番号１８５：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＨドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＨ３）のＣＤＲＨ３
配列番号１８６：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１）のＣＤＲＬ１
配列番号１８７：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２）のＣＤＲＬ１
配列番号１８８：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３）のＣＤＲＬ１
配列番号１８９：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ１）のＣＤＲＬ２
配列番号１９０：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ２）のＣＤＲＬ２
配列番号１９１：ヒト化抗ヒトＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体のＶＬドメイン（ｈＨＥＲ２  ＭＡＢ‐１  ＶＬ３）のＣＤＲＬ２
配列番号１９２：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第１のポリペプチド鎖
配列番号１９３：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１の第１のポリペプチド鎖
配列番号１９４：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第１のポリペプチド鎖
配列番号１９５：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３の第１のポリペプチド鎖
配列番号１９６：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の第１のポリペプチド鎖
配列番号１９７：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖
配列番号１９８：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ１の第２のポリペプチド鎖
配列番号１９９：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ２の第２のポリペプチド鎖
配列番号２００：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ３の第２のポリペプチド鎖
配列番号２０１：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ４の第２のポリペプチド鎖
配列番号２０２：ｈＰＲＣＡ１５７  ＶＨ１のＶＨドメイン
配列番号２０３：ｈＰＲＣＡ１５７  ＶＬ１のＶＬドメイン
配列番号２０４：ＣＤ１９  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号２０５：ＣＤ１９  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号２０６：ＣＤ１２３  ＭＡＢ‐１のＶＨドメイン
配列番号２０７：ＣＤ１２３  ＭＡＢ‐１のＶＬドメイン
配列番号２０８：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＥのＶＨドメイン
配列番号２０９：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＦのＶＨドメイン
配列番号２１０：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＨ１ＧのＶＨドメイン
配列番号２１１：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４のＶＬドメイン
配列番号２１２：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ５のＶＬドメイン
配列番号２１３：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６のＶＬドメイン
配列番号２１４：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７のＶＬドメイン
配列番号２１５：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８のＶＬドメイン
配列番号２１６：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９のＶＬドメイン
配列番号２１７：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０のＶＬドメイン
配列番号２１８：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１のＶＬドメイン
配列番号２１９：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２のＶＬドメイン
配列番号２２０：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３のＶＬドメイン
配列番号２２１：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４のＶＬドメイン
配列番号２２２：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５のＶＬドメイン
配列番号２２３：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ４、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ７、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５のＣＤＲＬ１
配列番号２２４：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ６、ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ８、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ９のＣＤＲＬ２
配列番号２２５：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１０、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１２のＣＤＲＬ２
配列番号２２６：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１１、及びｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１３のＣＤＲＬ２
配列番号２２７：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１４のＣＤＲＬ２
配列番号２２８：ｈＣＤ１３７  ＭＡＢ‐３  ＶＬ１５のＣＤＲＬ２
配列番号２２９：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第１のポリペプチド鎖
配列番号２３０：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ａ５の第２のポリペプチド鎖
配列番号２３１：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第３のポリペプチド鎖
配列番号２３２：ＴＲＩＤＥＮＴ‐Ｂの第４のポリペプチド鎖
【図１Ａ】
2020508334.tif 000025
【図１Ｂ】
2020508334.tif 000026
【図２】
2020508334.tif 000027
【図３Ａ】
2020508334.tif 000028
【図３Ｂ】
2020508334.tif 000029
【図３Ｃ】
2020508334.tif 000030
【図３Ｄ】
2020508334.tif 000031
【図３Ｅ】
2020508334.tif 000032
【図４Ａ】
2020508334.tif 000033
【図４Ｂ】
2020508334.tif 000034
【図５Ａ】
2020508334.tif 000035
【図５Ｂ】
2020508334.tif 000036
【図５Ｃ】
2020508334.tif 000037
【図５Ｄ】
2020508334.tif 000038
【図６Ａ】
2020508334.tif 000039
【図６Ｂ】
2020508334.tif 000040
【図６Ｃ】
2020508334.tif 000041
【図６Ｄ】
2020508334.tif 000042
【図６Ｅ】
2020508334.tif 000043
【図６Ｆ】
2020508334.tif 000044
【図６Ｇ】
2020508334.tif 000045
【図６Ｈ】
2020508334.tif 000046
【図７】
2020508334.tif 000047
【図８】
2020508334.tif 000048
【図９】
2020508334.tif 000049
【図１０Ａ】
2020508334.tif 000050
【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ−Ｉ】
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【図１７Ｊ−Ｏ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020508334.tif 000107
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