(57)【要約】  本発明は医薬研究開発分野に属し、抗ウィルス漢方薬組成物の調製方法及び使用に関する。組成物は、ホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビを主な原薬とし、任意でジコッピ及びソウハクヒをさらに含み、必要に応じて適切な薬学的に許容される剤形に調製することができる。本発明に係る医薬の有益な薬力学的効能は、本発明の医薬が抗多重急性感染性ウイルス活性を有すると同時に、良好な医薬安全性を有することである。生体外（細胞）薬力学的試験及び生体内実験の結果により、医薬はＡ型インフルエンザＨ１Ｎ１、Ｈ７Ｎ７及びＨ９Ｎ２ウイルス、ジカウイルス、デング熱Ｉ型及びデング熱ＩＩ型ウイルス、チクングニヤウイルス等に効果のある顕著な広域スペクトル抗ウィルス作用を有することが証明される。本発明の医薬は、広域スペクトルの、抗多重感染性ウイルス性径口投与用植物複合薬を開発可能であり、これは本疾患分野の臨床治療における革新的且つ重大な飛躍である。
2020519701.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ウィルス性の漢方薬組成物であって、
原薬であるホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ及びビャクビの抽出物を含み、各原薬の相対的な比率は、ホコウエイ  ３０〜７０重量部、ビャクブ  ２０〜４０重量部、サンジコ  ２０〜４０重量部、ビャクビ２０〜５０  重量部、カッコン  ２０〜５０重量部、ビャクジュツ  ２０〜６０重量部である、
ことを特徴とする漢方薬組成物。
【請求項２】
前記抽出物は原薬の水抽出物及び／又はエタノール抽出物である、
ことを特徴とする請求項１に記載の漢方薬組成物。
【請求項３】
前記ホコウエイは３０〜６０重量部、好ましくは３５〜５５重量部、さらに好ましくは４０〜５０重量部であり、
前記ビャクブは２５〜３５重量部、好ましくは２５〜３０重量部であり、
前記サンジコは２５〜３５重量部、好ましくは２５〜３０重量部であり、
前記ビャクビは２０〜４５重量部、好ましくは２０〜４０重量部、さらに好ましくは２５〜３５重量部であり、
前記カッコンは２０〜４５重量部、好ましくは２０〜４０重量部、さらに好ましくは２５〜３５重量部であり、
前記ビャクジュツは２０〜５５重量部、好ましくは２０〜５０重量部、さらに好ましくは３０〜４０重量部である、
ことを特徴とする請求項１又は２に記載の漢方薬組成物。
【請求項４】
前記漢方薬組成物は、ジコッピ及びソウハクヒの抽出物をさらに含み、ジコッピの用量は２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部であり、ソウハクヒの用量は２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは２５〜４０重量部である、
ことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の漢方薬組成物。
【請求項５】
明細書の実施例７に記載のクロマトグラフィー操作条件下で測定する場合、そのＵＨＰＬＣフィンガープリントが示す保持時間はそれぞれ１４．５±０．１分、１５．３±０．１分、１５．５±０．１分、１７．２±０．１分、１８．２±０．１分の５つの特徴的なピークである、
ことを特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項に記載の漢方薬組成物。
【請求項６】
抗ウィルス漢方薬組成物の調製方法であって、
生薬であるホコウエイ、ビャクブ、ビャクビ及び任意のその他の生薬を取り、アルコールを添加してて抽出させて、アルコール抽出物を得る工程１）と、
工程１）のアルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣と、生薬であるカッコン、ビャクジュツ、サンジコ及び任意のその他の生薬と、を合わせ、水を添加して抽出し、得られる水抽出液を濃縮した後にアルコールを添加して沈殿させ、上清液を取って、水抽出物を得る工程２）と、
工程１）で得られるアルコール抽出物と工程２）で得られる水抽出物とを合わせ、任意の後処理工程により前記抗ウィルス漢方薬組成物を得る工程３）と、
を含み、
各生薬の用量は、ホコウエイ  ３０〜７０重量部、ビャクブ  ２０〜４０重量部、サンジコ  ２０〜４０重量部、ビャクビ  ２０〜５０重量部、カッコン  ２０〜５０重量部、ビャクジュツ  ２０〜６０重量部である、
ことを特徴とする調製方法。
【請求項７】
前記アルコールは４０〜９５％のエタノール水溶液である、
ことを特徴とする請求項６に記載の調製方法。
【請求項８】
前記ホコウエイは３０〜６０重量部、好ましくは３５〜５５重量部、さらに好ましくは４０〜５０重量部であり、
前記ビャクブは２５〜３５重量部、好ましくは２５〜３０重量部であり、
前記サンジコは２５〜３５重量部、好ましくは２５〜３０重量部であり、
前記ビャクビは２０〜４５重量部、好ましくは２０〜４０重量部、さらに好ましくは２５〜３５重量部であり、
前記カッコンは２０〜４５重量部、好ましくは２０〜４０重量部、さらに好ましくは２５〜３５重量部であり、
前記ビャクジュツは２０〜５５重量部、好ましくは２０〜５０重量部、さらに好ましくは３０〜４０重量部である、
ことを特徴とする請求項６又は７に記載の調製方法。
【請求項９】
工程１）において、生薬であるホコウエイ、ビャクブ、ビャクビ、ソウハクヒ及び任意のその他の生薬を取り、アルコールを添加して抽出させて、アルコール抽出物を取得し、ここで、ソウハクヒの用量は２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは２５〜４０重量部であり、
工程２）において、工程１）のアルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣と、生薬であるカッコン、ビャクジュツ、サンジコ、ジコッピ及び任意のその他の生薬と、を合わせ、水を添加して抽出し、得られる水抽出液を濃縮した後にアルコールを添加して沈殿させ、上清液を取って、水抽出物を取得し、ここで、ジコッピの使用量は２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部である、
ことを特徴とする請求項６乃至８のいずれか１項に記載の調製方法。
【請求項１０】
請求項６乃至９のいずれか１項に記載の抗ウィルス漢方薬組成物の調製方法により得られる、抗ウィルス漢方薬組成物。
【請求項１１】
請求項１乃至５のいずれか１項又は請求項１０に記載の漢方薬組成物と、
薬学的に許容される担体又はアジュバントと、
を含むことを特徴とする径口投与薬剤。
【請求項１２】
請求項１乃至５のいずれか１項又は請求項１０に記載の漢方薬組成物の、ウイルス感染性疾患又はその病状を治療又は予防する医薬の調製における使用。
【請求項１３】
前記ウイルス感染性疾患又はその病状は、オルトミクソウイルス科、フラビウイルス科又はトガウイルス科のウイルスによる疾患又は病状或いはその組み合わせから選ばれる、
ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記ウイルス感染性疾患又は病状は、Ａ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス、又はチクングニヤウイルスによる疾患又は病状或いはその組み合わせから選ばれる、
ことを特徴とする請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記医薬は、径口投与医薬である、
ことを特徴とする請求項１２乃至１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
治療を必要とする患者のためのウイルス感染性疾患又は病状の治療方法であって、
該方法は、有効量の請求項１乃至５のいずれか１項又は請求項１０に記載の漢方薬組成物を、患者に径口投与することを含み、ここで、前記患者は哺乳類であり、好ましくははヒトである、
ことを特徴とする方法。
【請求項１７】
前記ウイルス感染性疾患又は病状は、Ａ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス、又はチクングニヤウイルスによる疾患又は病状或いはその組み合わせから選ばれる、
ことを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１７年５月１６日に提出された中国特許願第２０１７１０３４６９４６．７号の優先権を主張し、当該中国特許出願の全ての内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
本発明は医薬研究開発分野に属し、抗多重急性感染性ウイルス活性を有する漢方薬組成物に関し、特にＡ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス及びチクングニヤウイルス等のウイルスに効果のある漢方薬組成物及びその調製並びに使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ａ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス（ＺＩＫＶ）、デング熱ウイルス（ＤＥＮ）、チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫＶ）は伝播経路が広範であり、蚊媒介又は気道を通して伝播するためウイルスが急速に広がり、感染性が高く、死亡率が極めて高く、人間の健康を大きく脅威している。人々はこれらのウイルスに対して広い研究を行っている。分類学の観点から、Ａ型インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）に属し、ジカウイルス及びデング熱ウイルスは、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）フラビウイルス属（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）に属し、チクングニヤウイルスは、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）アルファウイルス属（ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）に属する。ところが、Ａ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス及びチクングニヤウイルスの予防と治療は世界的な問題である。現在、これらの急性感染性ウイルスの予防と治療に対して有効な医薬及び満足できる臨床治療計画がない。
【０００４】
１．臨床的にＡ型インフルエンザウイルスの予防と治療に用いられる医薬は、主に、Ｍ２イオンチャネル阻害剤とノイラミニダーゼ阻害剤の２種類を含み、アマンタジンとリマンタジンの副作用は神経毒性等を含むが、同時に、一般的に治療を開始する２日〜３日後に薬剤耐性株が現われる。オセルタミビルの副作用は主に消化器の不快感、呼吸器系及び中枢神経系の副作用であり、同時に世界インフルエンザサーベイランスネットワークはＷＨＯ協力センターとその他の研究室の協力下でシステム監視を行い、Ａ型Ｈ１Ｎ１インフルエンザウイルスに対する薬剤耐性を確認している。ザナミビルは臨床で経口吸入を採用し、粉末薬剤はウイルスの複製部位（気道内）に直接吸入されて作用を果たし、局所投与は臨床患者に極めて大きな不便をもたらし、気管支痙攣を誘発する可能性があるため、潜在的な肺疾患患者に推薦しない。Ａ型インフルエンザウイルスは高い変異性があることによって、これに対する予防と治療の難易度を増加させるため、高効率と低毒性の新たな治療方法を開発する必要がある。
【０００５】
２．ジカウイルスはＲＮＡウイルスであり、現在、有効なワクチンと特異性の抗ウィルス薬及び治療方法が開発されていない。
【０００６】
３．デング熱ウイルスとチクングニヤウイルスの感染に対して、いずれも有効な抗ウィルス薬が開発されていない。
【０００７】
漢方薬（ＴＣＭ）は中国で数千年も使用されている。漢方薬は主に、植物製剤中の様々な化学成分に基づいて、複数の分子標的と細胞メカニズムにより相互作用し、同時に作用を果たしている。上記複数の成分は異なる機能を有し、治療の有効性を発揮するものもあるし、毒性を減らし、又は生物学的利用率を高めるものもある。現在、植物抽出物の混合物は疾患を制御するために世界中で広く使用されており、西洋諸国でますます受け入れられている。
【０００８】
漢方薬組成物に基づく抗ウィルス薬の開発について、数人が試みたが、現在の研究はまだ調査の初期段階にあり、説得力のある実験データが不足している。
【０００９】
発明の名称が「フラビウイルス科に感染した血球を修復するための治療用漢方薬」である中国特許出願２０１６１０２２６６４８．Ｘは、フラビウイルス科に感染した血球を修復するための治療用の漢方薬を開示しており、デング熱ウイルス、ジカウイルス等による疾患に対して治癒作用があると言われているが、明細書において、具体的な実験データ、特に抗ウィルスデータは提供されていない。
【００１０】
発明の名称が「デング熱を治療する漢方薬組成物」である中国特許出願２０１６１０４２４０４９．９は、デング熱を治療する漢方薬組成物を開示しているが、何の治療効果データも提供されていない。
【００１１】
発明の名称が「デング熱を治療する漢方薬製剤及びその調製方法」である中国特許出願２０１５１０４０８８２６．６は、デング熱を治療する漢方薬製剤を開示しており、明細書では比較試験を提供して、当該漢方薬製剤が特定の治療効果を有することを証明したが、直接的な抗ウィルス活性データがない。
【００１２】
発明の名称が「デング熱を治療する漢方薬製剤の調製方法」である中国特許出願２０１４１０６０７２０４．１は、デング熱を治療する漢方薬製剤及びその調製方法を開示しており、明細書では医薬毒性データ及び臨床データを提供して、当該漢方薬製剤が特定の治療効果を有することを証明したが、直接な抗ウィルス活性データがない。
【発明の概要】
【００１３】
よって、抗ウィルス活性を有する医薬組成物を提供することは期待されている。特に、効果的なＡ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス、チクングニヤウイルス等の急性感染性ウイルスに効果的な医薬組成物の開発が求められている。
【００１４】
発明者は、意外なことに、ホコウエイ（蒲公英）、ビャクブ（百部）、サンジコ（山慈姑）、カッコン（葛根）、ビャクジュツ（白朮）及びビャクビ（白薇）を主な原薬として調製される漢方薬組成物は、顕著な抗ウィルス効能を有し、特にＡ型インフルエンザウイルス、ジカウイルス、デング熱ウイルス、チクングニヤウイルス等の多重急性感染性ウイルスに対して広域スペクトルの、効率的な抗ウィルス活性を有することを見出している。
【００１５】
発明者は大量の生体内・生体外実験によって、ホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ及びビャクビを主な原薬として調製される漢方薬組成物は、オルトミクソウイルス科、フラビウイルス科及びトガウイルス科のウイルスに対して顕著な抗ウィルス活性を有し、特にフラビウイルス科フラビウイルス属、トガウイルス科アルファウイルス属及びオルトミクソウイルス科Ａ型インフルエンザウイルス属のウイルス、例えばＡ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１、Ｈ７Ｎ７及びＨ９Ｎ２ウイルス等を含む）、ジカウイルス、デング熱ウイルス（デング熱Ｉ型とデング熱ＩＩ型ウイルスを含む）、チクングニヤウイルス等に対して顕著な抗ウィルス活性を有することを見出している。
【００１６】
よって、いくつかの具体的な実施形態において、本発明は抗ウィルス漢方薬組成物を提供しており、それはホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ及びビャクビ生薬を原薬として調製されている。
【００１７】
本発明の組成物における各原料の漢方薬はいずれも一般的な漢方薬であり、『中国薬典』及び『中華本草』等のいずれにも詳細に記載されており、いずれも商業的な入手経路により容易に得ることができる。本発明はこれらの生薬の原産地及び由来等に対して特に制限しておらず、関連する国家標準又は規定に適合してよい。
【００１８】
本明細書において、用語「ホコウエイ」（Ｈｅｒｂａ  Ｔａｒａｘａｃｉ）はキク科植物ホコウエイはＴａｒａｘａｃｕｍ  ｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ  Ｈａｎｄ．−Ｍａｚｚ．であり、アルカリホコウエイはＴａｒａｘａｃｕｍ  ｓｉｎｉｃｕｍ  Ｋｉｔａｇ．又は同じ属の数種類の植物の乾燥全草である。
【００１９】
本明細書において、用語「ビャクブ」（Ｒａｄｉｘ  Ｓｔｅｍｏｎａｅ）はビャクブ科植物である直立ビャクブＳｔｅｍｏｎａ  ｓｅｓｓｉｌｉｆｏｌｉａ（Ｍｉｑ．）Ｍｉｑ．であり、蔓生ビャクブＳｔｅｍｏｎａ  ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｂｌ．）Ｍｉｑ．又は対葉ビャクブＳｔｅｍｏｎａ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌｏｕｒ．の乾燥根部である。
【００２０】
本明細書において、用語「サンジコ」は蘭科植物サイハイラン（杜鵑蘭）Ｃｒｅｍａｓｔｒａ  ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔａ（Ｄ．Ｄｏｎ）Ｍａｋｉｎｏ乾燥偽鱗茎であり、「毛慈姑」とも呼ばれる。
【００２１】
本明細書において、用語「カッコン」（Ｒａｄｉｘ  Ｐｕｅｒａｒｉａｅ）はマメ科植物であるクズＰｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ（Ｗｉｌｌｄ．）Ｏｈｗｉ又は甘葛藤Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ  Ｂｅｎｔｈ．の乾燥根である。
【００２２】
本明細書において、用語「ビャクジュツ」（Ｒｈｉｚｏｍａ  Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ  Ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａｅ）はキク科植物であるビャクジュツＡｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ  ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ  Ｋｏｉｄｚ．の乾燥根茎である。
【００２３】
本明細書において、用語「ビャクビ」（Ｒａｄｉｘ  Ｃｙｎａｎｃｈｉ  Ａｔｒａｔｉ）はガガイモ科植物であるビャクビＣｙｎａｎｃｈｕｍ  ａｔｒａｔｕｍ  Ｂｇｅ．又は蔓生ビャクビＣｙｎａｎｃｈｕｍ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ  Ｂｇｅ．の乾燥根及び根茎である。
【００２４】
ホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ及びビャクビの重量比が以下の範囲内にある場合、得られる漢方薬組成物の抗ウィルス薬力学的効能が特に好ましい。ホコウエイ生薬の重量は３０〜７０部、ビャクブ生薬の重量は２０〜４０部、サンジコ生薬の重量は２０〜４０部、ビャクビ生薬の重量は２０〜５０部、カッコン生薬の重量は２０〜５０部、ビャクジュツ生薬の重量は２０〜６０部であることを見出している。
【００２５】
よって、いくつかの具体的な実施形態において、本発明は抗ウィルス漢方薬組成物を提供しており、３０〜７０重量部のホコウエイ、２０〜４０重量部のビャクブ、２０〜４０重量部のサンジコ、２０〜５０重量部のビャクビ、２０〜５０重量部のカッコン、２０〜６０重量部のビャクジュツである配合比の原薬を含み、ここで、各原薬の好ましい相対的な比率は以下の通りである。
【００２６】
ホコウエイは、好ましくは３０〜６０重量部、さらに好ましくは３５〜５５重量部、最も好ましくは４０〜５０重量部であり、
ビャクブは、好ましくは２５〜３５重量部、最も好ましくは２５〜３０重量部であり、
サンジコは、好ましくは２５〜３５重量部、最も好ましくは２５〜３０重量部であり、
ビャクビは、好ましくは２０〜４５重量部、さらに好ましくは２０〜４０重量部、最も好ましくは２５〜３５重量部であり、
カッコンは、好ましくは２０〜４５重量部、さらに好ましくは２０〜４０重量部、最も好ましくは２５〜３５重量部であり、
ビャクジュツは、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部である。
【００２７】
当業者であれば、上記各原薬の任意の好ましい使用量範囲をその他の原薬の任意の好ましい使用量の範囲と任意に組み合わせることができ、得られる各組み合わせ方式がいずれも本発明の特定の実施形態を構成していることは、理解すべきである。そのため、本発明は以下のいくつかの実施形態を提供する。
【００２８】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０重量部のホコウエイ、２０〜４０重量部のビャクブ、２０〜４０重量部のサンジコ、２０〜５０重量部のビャクビ、２０〜５０重量部のカッコン、２０〜６０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００２９】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４５重量部のビャクビ、２０〜４５重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３０】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４０重量部のビャクビ、２０〜４０重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３１】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２５〜３５重量部のビャクビ、２５〜３５重量部のカッコン、３０〜４０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３２】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３５〜５５重量部のホコウエイ、２０〜４０重量部のビャクブ、２０〜４０重量部のサンジコ、２０〜５０重量部のビャクビ、２０〜５０重量部のカッコン、２０〜６０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３３】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３５〜５５重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４５重量部のビャクビ、２０〜４５重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３４】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３５〜５５重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４０重量部のビャクビ、２０〜４０重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３５】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、３５〜５５重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２５〜３５重量部のビャクビ、２５〜３５重量部のカッコン、３０〜４０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３６】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、４０〜５０重量部のホコウエイ、２０〜４０重量部のビャクブ、２０〜４０重量部のサンジコ、２０〜５０重量部のビャクビ、２０〜５０重量部のカッコン、２０〜６０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３７】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、４０〜５０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４５重量部のビャクビ、２０〜４５重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３８】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、４０〜５０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２０〜４０重量部のビャクビ、２０〜４０重量部のカッコン、２０〜５０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００３９】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、４０〜５０重量部のホコウエイ、２５〜３５重量部のビャクブ、２５〜３５重量部のサンジコ、２５〜３５重量部のビャクビ、２５〜３５重量部のカッコン、３０〜４０重量部のビャクジュツの配合比の原薬を含む抗ウィルス漢方薬組成物を提供する。
【００４０】
別のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は抗ウィルス漢方薬組成物を提供しており、各原薬の使用量の比率は本明細書で提供する各具体的な実施例に記載されており、各生薬の使用量は実施例における具体的な使用量に対して、約±１６％の範囲内で変動でき、さらに好ましくは、各生薬の使用量は実施例における具体的な使用量に対して、約±１５％、±１２％、±１０％、±８％、±５％、±４％、±３％又は±２％の範囲内で変動できる。
【００４１】
各生薬の重量比が以上の好ましい範囲内である場合、本発明の漢方薬組成物の抗ウィルス活性が特に顕著であることを見出している。
【００４２】
本発明の抗ウィルス漢方薬組成物は、各原薬の組み合わせ方式（例えば漢方薬パック）により直接提供でき、患者が薬を取った後に伝統的な漢方薬手法に従って直接水を加えて煎じ薬を飲むことができる。但し、好ましくは、本発明の抗ウィルス漢方薬組成物は現代の漢方薬加工処理方法を用い、漢方薬抽出物組成物（例えばプリミックス）の形式に調製でき、このようにして、患者はより便利かつ迅速に服用できる。
【００４３】
よって、いくつかの具体的な実施形態において、本発明は抗ウィルス漢方薬組成物を提供し、それは、原薬であるホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビの抽出物を含み、各原薬の相対的な比率は、ホコウエイ  ３０〜７０重量部、ビャクブ  ２０〜４０重量部、サンジコ  ２０〜４０重量部、ビャクビ  ２０〜５０重量部、カッコン  ２０〜５０重量部、ビャクジュツ  ２０〜６０重量部であり、各原薬の好ましい相対的な比率は前述の通りである。
【００４４】
本明細書において、用語「抽出物」とは、水又は有機溶媒を用いることによって漢方薬原料を抽出して得られる抽出物である。好ましくは、抽出溶媒として、例えば水、Ｃ１〜Ｃ６アルコール、ヘキサン、クロロホルム、酢酸メチル、エチルエーテル等を使用して得られる抽出物を用いることができ、さらに好ましくは、抽出溶媒が水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール又はその組み合わせであり、最も好ましくは、抽出溶媒が水、エタノール又はその組み合わせから選ばれる。
【００４５】
最も好ましくは、本発明に記載の漢方薬組成物における抽出物は各原薬の水抽出物とエタノール抽出物との組み合わせである。ここで、「水抽出物」とは、水（冷水、温水又は熱水を含む）を用いて漢方薬を抽出して得られる抽出物である。ここで、「エタノール抽出物」とは、純エタノール又はエタノール水溶液を用いて漢方薬を抽出して得られる抽出物である。
【００４６】
好ましくは、本発明に記載の漢方薬組成物中の抽出物は乾燥されたものである。最も好ましくは、本発明に記載の漢方薬組成物中の抽出物は乾燥された粉末又は粒子の形態である。
【００４７】
抽出物組成物形態の本発明の漢方薬組成物を得るために、例えば、水を用いて各漢方薬を抽出して、水抽出物を得ることができ、各濃度（例えば４０〜９５％）のエタノール水溶液を用いて各生薬を抽出して、エタノール抽出物を得ることもでき、水抽出物とエタノール抽出物の両者を組み合わせて、水抽出物とエタノール抽出物との組み合わせを得ることもできる。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の漢方薬組成物は、水抽出物とエタノール抽出物との組み合わせを含む。
【００４８】
当業者は必要に応じて、具体的な抽出工程及び抽出順位を決定することができ、例えば各生薬を個別に抽出した後抽出物を組み合わせるか、或いは一部又は全ての生薬を先に組み合わて一括に抽出してもよい。異なる抽出プロセスと操作工程は抽出効率とプロセス効率に影響を与える。迅速且つ効果的な抽出方式は以下の通りである：抽出予定の漢方薬をＡ、Ｂ二組に分け、一組は水で抽出して、水抽出物を取得する；第一組の抽出残留物と第二組とを組み合わせた後アルコール（又はアルコール水溶液）で抽出して、アルコール抽出物を取得する；さらに得られる水抽出物とアルコール抽出物との両者を組み合わせる。或いは、逆に、抽出予定の漢方薬をＡ、Ｂの二組に分け、一組はアルコール（又はアルコール水溶液）で抽出して、アルコール抽出物を取得する；第一組の抽出残留物と第二組とを組み合わせた後水で抽出して、水抽出物を取得する；さらに得られるアルコール抽出物と水抽出物との両者を組み合わせる。
【００４９】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は、さらに、以下の工程を含む抗ウィルス漢方薬組成物の調製方法を提供する。
【００５０】
１）ホコウエイ、ビャクブ、ビャクビの生薬及び任意のその他の生薬を取り、アルコールを添加して抽出させて、アルコール抽出物を得る。
【００５１】
２）工程１）のアルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣とカッコン、ビャクジュツ、サンジコの生薬及び任意のその他の生薬とを組み合わせ、水を添加して抽出し、得られる水抽出液を濃縮した後アルコールを添加して沈殿させ、上清液を取って、水抽出物を得る。
【００５２】
３）工程１）で得られるアルコール抽出物と工程２）で得られる水抽出物とを組み合わせ、任意の後処理により上記抗ウィルス漢方薬組成物を得る。
【００５３】
各生薬の使用量は、ホコウエイ  ３０〜７０重量部、ビャクブ  ２０〜４０重量部、サンジコ  ２０〜４０重量部、ビャクビ  ２０〜５０重量部、カッコン  ２０〜５０重量部、ビャクジュツ  ２０〜６０重量部である（各生薬の好ましい使用量は前述の通りである）。
【００５４】
好ましくは、以上の工程に記載のアルコールはエタノール水溶液であり、例えば４０〜９５％のエタノール水溶液、又は４０〜８０％のエタノール水溶液である。具体的な実施形態により、６０％、６５％、７０％、７５％及び９０％等の様々な濃度のエタノール水溶液を用いることができる。
【００５５】
工程３）に記載の「後処理」は当該分野の公知の一般的な後処理工程であり、当業者は最終的に期待される組成物形態に基づいて、適切に必要な後処理操作を決定することができる。例えば、溶液形態の組成物のみを中間製品とする場合、何の後処理工程も必要としない。一方では、固体形態の組成物を必要とする場合、後処理工程は濃縮、その後の乾燥を含んでもよく、それにより固体形態の組成物が得られる。上記乾燥は製薬分野における一般的な任意の乾燥方法、例えば噴霧乾燥、マイクロ波乾燥、真空乾燥等を用いることができる。
【００５６】
上記工程１）、工程２）、工程３）の前、後又は工程の途中において、いずれも追加の操作を含んでもよく、例えば操作しやすくするために、工程１）により得られるアルコール抽出物に対して濃縮することができ、工程２）により得られる水抽出物に対して濃縮することもできる。必要に応じて、滅菌操作を行うこともできる。
【００５７】
本明細書において、「任意」で修飾した生薬、成分等は、当該生薬又は成分が必要に応じていくつかの実施形態において存在してもよく、別のいくつかの実施形態において存在しなくもてよいことを表す。類似的に、「任意」又は「任意選択」で修飾した操作又は工程は、当該工程又は操作が必要に応じていくつかの実施形態の方法において存在してもよく、別のいくつかの実施形態の方法において存在しなくてもよいことを表す。
【００５８】
発明者は、以上の工程１）から工程３）の抽出方法を用いて抽出効率を向上させることができ、経済的な観点から、費用対効果がより高いことを見出している。
【００５９】
各工程における具体的な抽出時間、繰り返し回数、エタノール溶液の濃度、抽出溶媒の使用量等の操作パラメータは必要に応じて適切に調整することができる。
【００６０】
いくつかの実施形態において、工程１）に記載のアルコール抽出物の調製方法は、以下の通りである：ホコウエイ、ビャクブ、ビャクビの生薬を取り、６〜１０倍量のエタノールを加えて１〜３回還流抽出し、毎回１〜２時間であり、濾過し、抽出液を組み合わせ、減圧し濃縮して、上記アルコール抽出物を得る。例えば、８倍量の４０〜９５％のエタノール（例えば６０％、７５％又は９０％のエタノール水溶液）を添加して１時間半抽出し、濾過する；その後、さらに８倍量の４０〜９５％のエタノール（例えば６０％、７５％又は９０％のエタノール水溶液）を添加して１時間半抽出し、濾過する；２回で得られる濾液を組み合わせて、アルコール抽出物を得る。
【００６１】
いくつかの実施形態において、工程２）に記載の水抽出物の調製方法は、以下の通りである：上記アルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣とカッコン、サンジコ、ビャクジュツの生薬とを組み合わせ、６〜１２倍量の水を添加して１〜３回還流抽出し、毎回１〜４時間であり、濾過し、得られる濾液を組み合わせ、濃厚なペーストに濃縮する；その後、エタノールの最終濃度が６０〜８０％になるまで濃厚なペーストにエタノール水溶液（例えば７０〜９５％のエタノール水溶液）を添加し、１２〜４８時間静置して沈殿させ、濾過して残留物を除去させて、上記水抽出物を得る。例えば、上記アルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣を取り、カッコン、ビャクジュツ、サンジコの生薬を組み合わせ、１０倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過する；その後、さらに１０倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせて、水抽出液を取得する；濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約７０％になるまで７５％又は９０％のエタノール水溶液を添加し、３６時間静置して沈殿させ、濾過して残留物を除去させると、水抽出物が得られる。
【００６２】
いくつかの実施形態において、工程３）に記載の操作とは、工程１）で得られるアルコール抽出物と工程２）で得られる水抽出物とを組み合わせ、濃縮して噴霧乾燥させて、上記抗ウィルス漢方薬組成物を得ることである。
【００６３】
本発明の抗ウィルス漢方薬組成物は、ホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビの生薬を原薬として調製される。必要とする場合、本発明に記載の漢方薬組成物はその他の漢方薬（又は漢方薬抽出物）を含んでもよい。
【００６４】
例えば、発明者は、本発明の抗ウィルス漢方薬組成物にジコッピ（地骨皮）及びソウハクヒ（桑白皮）をさらに添加した後、本発明の漢方薬組成物は生体内応用により適することを見出している。例えば本発明の抗ウィルス漢方薬組成物にジコッピ及びソウハクヒをさらに添加した後、それはさらに優れた解熱作用を有し、解熱作用がウイルスに対する患者自体の抵抗力を強化することに役に立つため、本発明の漢方薬組成物の抗ウィルス効能をさらに強化することに役に立っている。
【００６５】
本明細書において、用語「ジコッピ」（Ｃｏｒｔｅｘ  Ｌｙｃｉｉ）はナス科植物であるクコＬｙｃｉｕｍ  ｃｈｉｎｅｎｓｅ  Ｍｉｌｌ．又は寧夏クコ（枸杞）Ｌｙｃｉｕｍ  ｂａｒｂａｒｕｍ  Ｌ．の乾燥根皮である。
【００６６】
本明細書において、用語「ソウハクヒ」（Ｃｏｒｔｅｘ  Ｍｏｒｉ）はクワ（桑）科植物であるクワＭｏｒｕｓａｌｂａＬ．の乾燥根皮である。
【００６７】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明の抗ウィルス漢方薬組成物はジコッピ及びソウハクヒをさらに含み、ここで、ソウハクヒが２０〜６０重量部（好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは２５〜４０重量部）で、ジコッピが２０〜６０重量部（好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部）である。
【００６８】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は抗ウィルス漢方薬組成物を提供し、それは原薬であるホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビ、ジコッピ及びソウハクヒの抽出物を含み、各原薬の相対的な比率（各原薬の任意の好ましい使用量の範囲はその他の原薬の任意の好ましい使用量の範囲と任意に組み合わせることができる）は、
ホコウエイが３０〜７０重量部、好ましくは３０〜６０重量部、さらに好ましくは３５〜５５重量部、最も好ましくは４０〜５０重量部であり、
ビャクブが２０〜４０重量部、好ましくは２５〜３５重量部、最も好ましくは２５〜３０重量部であり、
サンジコが２０〜４０重量部、好ましくは２５〜３５重量部、最も好ましくは２５〜３０重量部であり、
ビャクビが２０〜５０重量部、好ましくは２０〜４５重量部、さらに好ましくは２０〜４０重量部、最も好ましくは２５〜３５重量部であり、
カッコンが２０〜５０重量部、好ましくは２０〜４５重量部、さらに好ましくは２０〜４０重量部、最も好ましくは２５〜３５重量部であり、
ビャクジュツが２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部であり、
ソウハクヒが２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは２５〜４０重量部であり、
ジコッピが２０〜６０重量部、好ましくは２０〜５５重量部、さらに好ましくは２０〜５０重量部、最も好ましくは３０〜４０重量部である。
【００６９】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明の漢方薬組成物は、上記で規定された比率の原薬であるホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビ、ジコッピ及びソウハクヒの抽出物で構成されている。
【００７０】
別のいくつかの具体的な実施形態において、本発明の漢方薬組成物は、ホコウエイ、ビャクブ、サンジコ、カッコン、ビャクジュツ、ビャクビ、ジコッピ及びソウハクヒに加え、さらに、必要に応じて、又はその他の目的のためにその他の漢方薬を含んでもよい。
【００７１】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明はさらに抗ウィルス漢方薬組成物の調製方法を提供し、それは、以下の工程を含む。
【００７２】
１）ホコウエイ、ビャクブ、ビャクビ、ソウハクヒの生薬及び任意のその他の生薬を取り、アルコールを添加して抽出させて、アルコール抽出物を得る。
【００７３】
２）工程１）のアルコール抽出物の調製で生成される生薬の残渣とカッコン、ビャクジュツ、サンジコ、ジコッピの生薬及び任意のその他の生薬とを組み合わせ、水を添加して抽出し、得られる水抽出液を濃縮した後アルコールを添加して沈殿させ、上清液を取って、水抽出物を得る。
【００７４】
３）工程１）で得られるアルコール抽出物と工程２）で得られる水抽出物とを組み合わせ、任意の後処理により上記抗ウィルス漢方薬組成物を得る。
【００７５】
各生薬の使用量は、ホコウエイ  ３０〜７０重量部、ビャクブ  ２０〜４０重量部、サンジコ  ２０〜４０重量部、ビャクビ  ２０〜５０重量部、カッコン  ２０〜５０重量部、ビャクジュツ  ２０〜６０重量部、ソウハクヒ  ２０〜６０重量部、ジコッピ  ２０〜６０重量部である（各生薬の好ましい使用量は前述の通りである）。
【００７６】
好ましくは、以上の工程に記載のアルコールはエタノールの水溶液、例えば４０〜９５％のエタノール水溶液、又は４０〜８０％のエタノール水溶液である。具体的な実施形態により、６０％、６５％、７０％、７５％及び９０％等の様々な濃度のエタノール水溶液を用いることができる。工程３）に記載の「後処理」は、当業者が最終的に期待される組成物形態に基づいて、適切に決定できるものである。
【００７７】
本発明の漢方薬組成物は、医薬の活性物質として、必要な場合、薬学的に許容される担体又はアジュバントを添加し、製剤学の一般的な技術に従って必要な製剤を調製することができる。製剤における医薬の活性物質は、０．１〜９９．９％（例えば１〜９９％又は５０〜９８％又は５０〜９５％等）であってもよく、残部は薬学的に許容される担体又はアジュバントとする。
【００７８】
本発明の製剤は任意の薬学的に許容される剤形であってもよく、顆粒剤、錠剤、糖衣錠、フィルムコーティング錠、腸溶錠、カプセル剤、経口液剤、滴状丸薬（Ｇｕｔｔａｔｅ  Ｐｉｌｌｓ）、冲剤、丸剤、散剤、懸濁剤及び粉剤等を含む。
【００７９】
好ましくは、本発明にかかる製剤は経口剤形、例えば、顆粒剤、錠剤、カプセル剤及び丸剤等である。
【００８０】
好ましくは、本発明のる薬剤は、単位剤量形式で存在し、上記単位剤量形式とは、製剤の単位、例えば錠剤の錠、顆粒剤の袋、カプセルの粒等を指す。
【００８１】
単位剤量形式の製剤において、好ましくは１％程度から９０％程度（例えば２０％〜８０％又は３０〜６０％）の活性成分を含む。例えば、カプセル、錠剤又は糖衣丸等は、一回投与の単位剤形が約１ｍｇから約１００ｇ（例えば１０ｍｇから８０ｇ、５０ｍｇから５０ｇ、１ｇ〜２０ｇ等）の活性成分を含むことができる。
【００８２】
適切な剤形を調製するために、医薬の活性物質とする本発明の漢方薬組成物は、任意選択的に投与される無機又は有機、固体又は液体の薬学的に許容される担体又はアジュバントと混合されるか、或いは組み合わせることができる。例えば、適切な担体は特に、例えば糖（例えば乳糖）、マンニトール又はソルビトール、セルロース製品及び／又はリン酸カルシウム（リン酸三カルシウム又はリン酸水素カルシウム）のような充填剤、例えば澱粉ペースト、ゼラチン、メチルセルロース及び／又はポリビニルビニルピロリドンのような接着剤、例えば澱粉、カルボキシメチル澱粉、架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸又はその塩（例えばアルギン酸ナトリウム）のような崩壊剤を含む。
【００８３】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は、治療を必要とする患者のためのウイルス感染性疾患又は病状の治療方法をさらに提供し、該方法は有効量の本発明のいずれかの実施形態による漢方薬組成物を患者に投与することをを含む。ここで、上記患者は好ましくは哺乳類であり、特に好ましくはヒトである。上記投与は好ましくは経口投与である。
【００８４】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は、本発明のいずれかの実施形態による漢方薬組成物が、患者のウイルスによる疾患又は病状の治療上の使用をさらに提供する。ここで、上記患者は好ましくは哺乳類であり、特に好ましくはヒトである。
【００８５】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は、本発明のいずれかの実施形態による漢方薬組成物が、ウイルス感染性疾患又は病状を治療する医薬の調製における使用をさらに提供する。ここで、上記疾患又は病状は好ましくは哺乳類、特にヒトの疾患又は病状である。上記医薬は好ましくは経口投与医薬である。
【００８６】
いくつかの具体的な実施形態において、本発明は、ウイルス感染性疾患又は病状を治療するための本発明のいずれかの実施形態による漢方薬組成物をさらに提供する。ここで、上記疾患又は病状は好ましくは哺乳類、特にヒトの疾患又は病状である。上記漢方薬組成物は好ましくは経口投与に用いられる。
【００８７】
本明細書において、用語「治療」はウイルス感染性疾患又は病状に対する予防性又は防止性の治療、及び治癒性又は緩和性治療である。
【００８８】
本明細書において、用語「ウイルス感染性疾患又は病状」及び「ウイルスによる疾患又は病状」は同じ意味を有し、交換可能に使用でき、ウイルスの伝播及び感染による疾患又は病状である。
【００８９】
特に、本発明の漢方薬組成物を用いて治療するウイルス感染性疾患又は病状は、オルトミクソウイルス科、フラビウイルス科及びトガウイルス科のウイルスによる疾患又は病状、特にフラビウイルス科フラビウイルス属、トガウイルス科アルファウイルス属及びオルトミクソウイルス科Ａ型インフルエンザウイルス属のウイルスによる疾患又は病状、例えばインフルエンザ、東部馬脳炎（ＥＥＥ）、西部馬脳炎（ＷＥＥ）、ベネズエラ馬脳炎（ＶＥＥ）、日本脳炎（ＪＥ）、森林脳炎（ＲＳＳＥ）、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）及びデング熱等に適する。最も好ましくは、本発明の漢方薬組成物は特に、Ａ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１、Ｈ７Ｎ７及びＨ９Ｎ２ウイルス等を含む）、ジカウイルス、デング熱ウイルス（デング熱Ｉ型とデング熱ＩＩ型ウイルスを含む）、チクングニヤウイルスによる疾患の治療又は予防に適し、インフルエンザ、チクングニヤ熱、デング熱（Ｄｅｎｇｕｅ  Ｆｅｖｅｒ、ＤＦ）、デング出血熱（Ｄｅｎｇｕｅ  Ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  Ｆｅｖｅｒ、ＤＨＦ）、デングショック症候群（Ｄｅｎｇｕｅ  Ｓｈｏｃｋ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＤＳＳ）、ジカウイルス病及び小頭症（Ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ）等を含む。
【００９０】
治療における投与の具体的な方法及び投与量は、主治医が患者の具体的な状況、特に年齢、体重、ライフスタイル、活動レベル及び疾患の重症度等の条件によって選択することができる。
【００９１】
一般的に、哺乳類の一回の投与量は約１〜２０，０００ｍｇ／ｋｇ範囲内である。例えば、好ましいヒト患者の治療について、漢方薬抽出物のプリミックス形態で投与する場合、適切な投与量は１〜２，０００ｍｇ／ｋｇ、２〜１，０００ｍｇ／ｋｇ、５〜５００ｍｇ／ｋｇ又は１０〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。必要であれば、この投与量を任意選択的に平均に分割して服用することもできる。以上に言及された投与量は、一定の間隔をおいて繰り返し投与でき、例えば、一日三回、一日一回、週に一回等である。
【００９２】
本明細書において、「ｍｇ／ｋｇ」又は「ｍｇ・ｋｇ−１」の意味は、治療予定の哺乳類（ヒトを含む）の１キログラム当たりの体重に投与するミリグラムの量であり、「ｇ／ｋｇ」又は「ｇ・ｋｇ−１」の意味は治療予定の哺乳類（ヒトを含む）の１キログラム当たりの体重に投与するグラムの量である。
【００９３】
以上に言及された本発明の各具体的な実施形態及び各特徴の好ましいレベルと好ましい態様は任意に組み合わせることができ、その組み合わせにより得られた各技術的解決手段はいずれも本発明の範囲内にある。
【００９４】
本発明の有益な効果は以下の通りである。
【００９５】
本発明の漢方薬組成物は抗多重急性感染性ウイルス活性を有し、安全性が良好である。生体内と生体外の薬力学的試験結果により、本発明の漢方薬組成物が、顕著な抗ウィルス作用、特にＡ型インフルエンザＨ１Ｎ１、Ｈ７Ｎ７及びＨ９Ｎ２ウイルス、ジカウイルス、デング熱Ｉ型とデング熱ＩＩ型ウイルス、チクングニヤウイルス等に耐性がある広域スペクトル抗ウィルス作用を有し、同時に生体の免疫力を向上させる作用を有し、抗ウィルスに対して補助な治療作用を有することが証明され、毒性学の試験結果により、当該漢方薬組成物の安全性が良好であることが証明され、サルの１カ月の毒性の無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は臨床提案された投与量の１５倍に相当する。
【００９６】
本発明の漢方薬組成物は経口投与の広域スペクトル、抗多重感染性ウイルス植物複合薬に開発される可能性があり、様々なウイルス感染性疾患の予防と治療に用いることができ、ウイルスの頻繁な突然変異による薬剤耐性の問題を解決することができ、同時に安全性が良好であり、使用しやすく、この疾患分野の臨床治療の革新的な、大きな飛躍である。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】図１は、実施例１に係る漢方薬組成物がＶｅｒｏ細胞におけるデング熱ＩＩ型ウイルス複製を阻止し阻害する実験結果図である。ここで、縦軸における「Ｄｅｎ２  Ｅ１／１０００  β−ａｃｔｉｎ」はＶｅｒｏ細胞におけるデング熱ＩＩ型ウイルスの複製結果を表し、１０００個当たりのβアクチンに対するデング熱ＩＩ型ウイルスのＥ１遺伝子コピー数を算出し、横軸における「Ｍｏｃｋ」はウイルス対照群（細胞＋培養液）を表し、「０」はウイルス対照群（細胞＋ウイルス＋培養液）を表し、「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。「＊＊」はｐ＜０．０１を表し、「＊＊＊」はｐ＜０．００１を表す。
【図２】図２は、ＬＤＨ法により実施例１に係る漢方薬組成物のＶｅｒｏ細胞毒性を検出する実験曲線である。縦軸における「％  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ」は細胞毒性百分率を表し、横軸における「Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ」は細胞溶解物を表し、「Ｃｅｌｌｓ  ｏｎｌｙ」は細胞のみが存在することを表し、「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。
【図３】図３は、実施例２に係る漢方薬組成物がジカウイルスとＶｅｒｏ細胞との組み合わせを阻止する実験結果図である。ここで、縦軸における「ＺＩＫＶ  Ｅ１／β−ａｃｔｉｎ」はジカウイルスとＶｅｒｏ細胞との組み合わせ結果を表し、各βアクチンに対するジカウイルスのＥ１遺伝子コピー数を算出し、横軸における「Ｍｏｃｋ」はウイルス対照群（細胞＋培養液）を表し、「０」はウイルス対照群（細胞＋ウイルス＋培養液）を表し、「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。「＊」はｐ＜０．０５を表す。
【図４】図４は、実施例４に係る漢方薬組成物がチクングニヤウイルスプラークの形成を阻害する実験曲線である。縦軸における「Ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｐｌａｑｕｅ」はプラークの数を表し、「Ｐｌａｑｕｅ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ（％）」はプラークの中和百分率を表し、横軸における「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。
【図５】図５は、実施例５に係る漢方薬組成物がチクングニヤウイルスと細胞受容体との生体外組み合わせを阻害する実験結果図である。ここで、縦軸における「ＣＨＩＫＶ  Ｅ１／β−ａｃｔｉｎ」はチクングニヤウイルスとＶｅｒｏ細胞との組み合わせ結果を表し、各βアクチンに対するチクングニヤウイルスのＥ１遺伝子コピー数を算出し、横軸における「Ｍｏｃｋ」はウイルス対照群（細胞＋培養液）を表し、「０」はウイルス対照群（細胞＋ウイルス＋培養液）を表し、「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。「＊」はｐ＜０．０５を表す。
【図６】図６は、実施例６に係る漢方薬組成物がジカウイルスプラークの形成を阻害する実験曲線である。縦軸における「Ｐｌａｑｕｅ  ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ（％）」はプラークの中和百分率を表し、横軸における「Ｄｒｕｇ」は被験薬を表す。
【図７】図７は、血液中のジカウイルスレベルに対する実施例６に係る漢方薬組成物の削減作用を示す実験結果図である。ここで、縦軸における「ＺＩＫＶ  Ｅ１／１００β−ａｃｔｉｎ」はマウス血液におけるジカウイルスの複製結果を表し、１００個当たりのβアクチンに対するジカウイルスのＥ１遺伝子コピー数を算出し、横軸における「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は対照群を表し、「Ｍｅｄｉｕｍ」は中投与量医薬群を表し、「Ｈｉｇｈ」は高投与量医薬群を表し、「ｄ２」は二日目を表し、「ｄ４」は四日目を表す。
【図８】図８は、脾臓、脳及び子宮内ジカウイルス複製に対する実施例６に係る漢方薬組成物の阻害作用を示す実験結果図である。ここで、縦軸における「ＺＩＫＶ  Ｅ１／１００β−ａｃｔｉｎ」はマウス血液におけるジカウイルスの複製結果を表し、１００個当たりのβアクチンに対するジカウイルスのＥ１遺伝子コピー数を算出し、横軸における「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は対照群を表し、「Ｍｅｄｉｕｍ」は中投与量医薬群を表し、「Ｈｉｇｈ」は高投与量医薬群を表し、「Ｓｐｌｅｅｎ」は脾臓を表し、「Ｂｒａｉｎ」は脳を表し、「Ｕｔｅｒｕｓ」は子宮を表す。
【図９】図９は、マウス体重に対する実施例６に係る漢方薬組成物の影響を示す実験結果図である。ここで、縦軸における「ｗｔ  ｉｎ  ｇｒａｍｓ」はマウス体重（単位：グラム）を表し、横軸における「Ｂｅｆｏｒｅ」は投与前を表し、「Ａｆｔｅｒ」は投与後を表し、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は対照群を表し、「Ｍｅｄｉｕｍ」は中投与量医薬群を表し、「Ｈｉｇｈ」は高投与量医薬群を表す。
【図１０】図１０は、発熱モデル動物における実施例６に係る漢方薬組成物の解熱作用を示すテストスケジュールである。ここで、「ＢＷ」は体重を表し、「Ａｎａｌ  ＴＥＭＰ」は肛門の温度を表す。
【図１１】図１１は、実施例６に係る漢方薬組成物のアカゲザル毒性実験を示すテストスケジュールである。
【図１２】図１２は、実施例１から実施例６の漢方薬組成物を示すフィンガープリントである。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
以下、実施例の具体的な実施形態によって、本発明の上記内容をさらに詳細に説明する。ここで説明する具体的な実施例は本発明を解釈するものに過ぎず、本発明を限定するものではないことを、理解すべきである。本発明の精神及び原則を逸脱せずに行われる如何なる修正、及び当該分野の一般的な技術常識と慣用手段に基づいて行われる同等置換又は改善は、いずれも本発明の保護範囲内に含まれる。
【００９９】
以下の実施例で報告される数値は可能な限り正確であるが、不可避的な測定誤差及び実験操作上の問題があるため、全ての数値は近似の数値と理解すべきであり、絶対に正確な数値ではないことは、当業者であれば理解すべきである。例えば、計量装置に誤差があるため、各実施例の組成物における各医薬の重量値は、±２％又は±１％の誤差があると理解すべきである。
【実施例１】
【０１００】
実施例１の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：４７０ｇ
ビャクブ：２８０ｇ
サンジコ：２８０ｇ
ビャクビ：３１５ｇ
カッコン：３１５ｇ
ビャクジュツ：３８０ｇ
【０１０１】
用いられる原薬において、ホコウエイは中国河北省から収集され、ビャクビは中国河南省から収集され、カッコンは中国河北省から収集され、ビャクブは中国広西省から収集され、サンジコは中国四川省から収集され、ビャクジュツは中国浙江省から収集される。
【０１０２】
実施例１の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１０３】
（１）４７０ｇのホコウエイ、２８０ｇのビャクブ、３１５ｇのビャクビの生薬を取り、８倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに８倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせ、アルコール抽出液を得る。
【０１０４】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、３１５ｇのカッコン、２８０ｇのサンジコ、３８０ｇのビャクジュツの生薬を組み合わせ、１０倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに１０倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせ、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約７５％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、２４時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１０５】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮し噴霧乾燥した後、本発明の実施例１に記載の漢方薬組成物を得る。得られる組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．３４Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１０６】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例１に記載の漢方薬組成物（該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１０７】
１．実施例１の組成物が生体外でデング熱ＩＩ型ウイルス（Ｄｅｎｇｕｅ−２）の複製を阻害する試験
Ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎細胞、アメリカン・タイプカルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から購入し、ＣＣＬ−８１）は６×１０５／ウェルで６ウェルプレート内に広げ、５％のＣＯ２において３７℃で２４時間インキュベートして、単層細胞を形成する。被験物はＰＢＳ緩衝液内に溶解し、濾過除菌し、それぞれ１．０と０．１ｍｇ／ｍｌになるまで希釈する。デング熱ＩＩ型ウイルス（アメリカン・タイプカルチャー・コレクションＡＴＣＣから購入、ＶＲ−１５８４）と０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌの被験物をそれぞれＶｅｒｏ単層細胞に添加し、３７℃で２４時間培養し、ｑＰＣＲにより細胞内ウイルス複製（デング熱ＩＩ型Ｅ遺伝子）を定量的に分析し、具体的な分析方法はＰａｕｌ  Ａ  Ｍ，Ｓｈｉ  Ｙ，Ａｃｈａｒｙａ  Ｄ，ｅｔ  ａｌ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ  ｗｉｔｈ  Ｇｏｌｄ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｄｅｎｇｕｅ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１４，９５（８）：１７１２−２２を参照。
【０１０８】
ＰＣＲ実験結果は、被験物が生体外デング熱ＩＩ型ウイルスの複製を顕著に阻害することができることを示す（図１を参照）。
【０１０９】
２．乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）法により実施例１の組成物のＶｅｒｏ細胞に対する毒性を検出する
試験はＬＤＨ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＫｉｔＰＬＵＳキット（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓから購入）を用い、操作方法の詳細はキット説明書を参照し、過程について以下のように簡単に説明する。Ｖｅｒｏ細胞（アメリカン・タイプカルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から購入したＣＣＬ−８１）は１００μＬにつき、４×１０４／ウェルで９６ウェル細胞培養プレートに広げ、２つの複製ウェル（即ち各実験は複製で実行する（一式二部））を設置する。培養プレートは５％のＣＯ２、３７℃で一晩インキュベートする。被験物はＰＢＳ緩衝液内に溶解し、濾過し除菌して、それぞれ１．０、０．２５、０．１２５、０．０６２５、０．０３１２５、０．０１５６ｍｇ／ｍｌになるまで希釈する。１０μＬの様々な濃度（２．０、１．０、０．２５、０．１２５、０．０６２５、０．０３１２５、０．０１５６ｍｇ／ｍｌ）の被験物を細胞培養プレートに添加し、１０μＬのＰＢＳをブランクコントロールとし、同じく２つの複製ウェルを設置する。培養プレートは５％のＣＯ２、３７℃で２４と４８時間インキュベートする。インキュベートした後、ＥＬｘ８０８  Ｕｌｔｒａｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ  Ｔｅｋ）を用いて４５０ｎｍの値を読み取り、培養液内のＬＤＨ濃度を測定し、キットの説明書に従って細胞毒性を算出する。
【０１１０】
実験結果に示すように、被験物が２ｍｇ／ｍｌの濃度の下で４８時間インキュベートする場合、明らかなＶｅｒｏ細胞毒性は引き起こさない（図２を参照）。これらの結果はデングウイルスに対する被験物の作用が細胞毒性によるものであるという可能性を除外し、さらに被験物が生体外でデングウイルス感染を阻害できることを確認する。
【実施例２】
【０１１１】
実施例２の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：６８０ｇ
ビャクブ：３９０ｇ
サンジコ：４００ｇ
ビャクビ：４８０ｇ
カッコン：４４０ｇ
ビャクジュツ：５４０ｇ
【０１１２】
原薬の由来は実施例１と同様である。実施例２の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１１３】
（１）６８０ｇのホコウエイ、３９０ｇのビャクブ、４８０ｇのビャクビの生薬を取り、１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせ、アルコール抽出液を得る。
【０１１４】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、４４０ｇのカッコン、４００ｇのサンジコ、５４０ｇのビャクジュツの生薬を組み合わせ、８倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに８倍量の水を加えて２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせ、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約７５％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、２４時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１１５】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮し噴霧乾燥した後、本発明に記載の漢方薬組成物を得る。得られる組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．５Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１１６】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例２に記載の漢方薬組成物（当該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１１７】
１．実施例２の組成物の生体外での抗ジカウイルス（ＺＩＫＶ）の薬力学的研究
Ｖｅｒｏ細胞の由来及び処理方法は実施例１と同様であり（実施例１の１を参照）、６×１０５／ウェルで６ウェルプレート内に広げ、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間インキュベートし、単層細胞を形成する。感染係数が１であるジカウイルス（アメリカ疾病管理センターアルボウイルス部門（ＣＤＣ  Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ  Ｂｒａｎｃｈ）により提供される）と１．０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌの被験物水溶液とを混合して、Ｖｅｒｏ単層細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートする。この温度下で、ウイルスは細胞表面の受容体と結合することができるが、細胞質に入ることができない。インキュベートした後，細胞は結合されていないウイルスを除去するために４℃の培養液で洗浄される。その後、Ｔｒｉｚｏｌで細胞を処理して収集し、総ＲＮＡを抽出し、一本鎖ｃＤＮＡを合成する。リアルタイム定量ＰＣＲ法によりジカウイルスのコートタンパク質遺伝子とハウスキーピング遺伝子β−ａｃｔｉｎを定量する。具体的な方法の詳細はＡｃｈａｒｙａ  Ｄ，Ｂａｓｔｏｌａ  Ｐ，Ｌｅ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎ  Ｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｇｅｎｅｒａｔｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｚｉｋａ  Ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１６，６：３２２２７を参照。
【０１１８】
結果により示すように、濃度１．０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌの組成物はそれぞれ約８０％と４０％のジカウイルスと受容体との結合を阻止することができる（図３を参照）。
【実施例３】
【０１１９】
実施例３の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：３１０ｇ
ビャクブ：２００ｇ
サンジコ：１９０ｇ
ビャクビ：２１０ｇ
カッコン：２１０ｇ
ビャクジュツ：２５０ｇ
【０１２０】
原薬の由来は実施例１と同様である。実施例３の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１２１】
（１）３１０ｇのホコウエイ、２００ｇのビャクブ、２１０ｇのビャクビの生薬を取り、１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに１０倍量の６０％のエタノールを加えて１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせて、アルコール抽出液を得る。
【０１２２】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、２１０ｇのカッコン、１９０ｇのサンジコ、２５０ｇのビャクジュツの生薬を組み合わせ、８倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに８倍量の水を加えて２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせて、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約８０％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、２４時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１２３】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮して噴霧乾燥した後、本発明に記載の漢方薬組成物を得る。得られる組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．２３Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１２４】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例３に記載の漢方薬組成物（該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１２５】
１．実施例３の組成物の生体外での抗鳥インフルエンザウイルスＨ７Ｎ７の薬力学的研究
１）ＣＰＥ法によりウイルスのＭＤＣＫ細胞に対する半毒性濃度（ＴＣＩＤ５０）を測定
ＭＤＣＫ細胞（イヌ腎上皮細胞は、北京市農林科学院畜産獣医学研究所畜禽生物製剤高技術研究室により提供される）を９６ウェルプレートに接種し、ウェル当たり１００μＬ中に細胞２×１０４個／ウェルを含み、３７℃で２４ｈ培養し、細胞は単層に成長させ、鳥インフルエンザウイルスＨ７Ｎ７株（北京市農林科学院畜産獣医学研究所により提供される）を培養液で１０倍をもって１０−３から１０−１２への１０個の濃度に順に希釈して細胞ウェル内に添加し、各濃度について８ウェル設け、３７℃で培養する。倒立顕微鏡で細胞病変（ＣＰＥ）を毎日観察する。細胞病変（ＣＰＥ）を記録する。Ｒｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法を用いてウイルス半数感染投与量（ＴＣＩＤ５０）を算出する。
【０１２６】
細胞はウイルスに感染すると、腫れ、引っ張られ、収縮され、凝集され、鳥インフルエンザウイルスＨ７Ｎ７のＴＣＩＤ５０は、１０−４．１９／０．１ｍｌである。
【０１２７】
２）被験物による鳥インフルエンザウイルスＨ７Ｎ７インフルエンザウイルスの直接不活性化の測定
ＭＤＣＫ細胞を９６ウェルプレートに接種し、ウェル当たり１００μＬ中に細胞２×１０４個／ウェルを含み、３７℃、５％のＣＯ２で２４ｈ培養し、細胞を単層に成長させる。上清液を捨て、様々な濃度の医薬水溶液と等体積の１００ＴＣＩＤ５０インフルエンザウイルスとを管内で均一に混合し、６ｈ作用後にさらに混合液を細胞プレートに接種する。正常な細胞対照群、陽性医薬対照群（アマンタジン塩酸塩は、Ｓｉｇｍａ社から購入する）及びウイルス対照を設定する。２ｈ吸着後、上清液を捨て、細胞維持液を添加し、３７℃で５％のＣＯ２培養箱で培養し続ける。細胞病変結果を記録し、ＭＴＴ染色法により細胞活性を測定する。試験を２回繰り返す。統計ソフトウェアＳＰＳＳ１３．０を用いてデータに対してＰｒｏｂｉｔ回帰分析を行い、医薬の半数有効濃度（ＩＣ５０）を算出する。
【０１２８】
結果は表３−１に示し、被験薬の半数阻害濃度（ＩＣ５０）はそれぞれ４１０μｇ／ｍＬと４４７μｇ／ｍＬに測定され、被験物は鳥インフルエンザウイルスＨ７Ｎ７を直接不活性化する作用を有することを示す。
【０１２９】
【表１】
2020519701.tif 000003
【実施例４】
【０１３０】
実施例４の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：５６０ｇ
ビャクブ：３２０ｇ
サンジコ：３５０ｇ
ビャクビ：３６０ｇ
カッコン：３８０ｇ
ビャクジュツ：４６０ｇ
【０１３１】
原薬の由来は実施例１と同様である。実施例４の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１３２】
（１）５６０ｇのホコウエイ、３２０ｇのビャクブ、３６０ｇのビャクビの生薬を取り、１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに１０倍量の６０％のエタノールを加えて１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせて、アルコール抽出液を得る。
【０１３３】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、３８０ｇのカッコン、３５０ｇのサンジコ、４６０ｇのビャクジュツの生薬を組み合わせ、８倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに８倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせて、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約８０％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、２４時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１３４】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮して噴霧乾燥した後、本発明に記載の漢方薬組成物を得る。得られる組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．４Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１３５】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例４に記載の漢方薬組成物（該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１３６】
１．実施例４の漢方薬組成物の生体外での抗チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫＶ）活性の薬力学的研究
Ｖｅｒｏ細胞の由来及び処理は実施例１と同様であり、チクングニヤウイルスはアメリカコネチカット農業試験局により提供される。室温下で新しく配合した、濃度がそれぞれ２．０、１．０、０．５、０．２５、０．１２５ｍｇ／ｍｌである被験物水溶液を用いて、チクングニヤウイルス（約１５０  ＰＦＵ）を１時間インキュベートし、その後、溶液をＶｅｒｏ細胞単層に添加し、３７℃でインキュベートし続け、１時間後にプラークの形成状況を評価する。具体的な方法は、Ａｃｈａｒｙａ  Ｄ，Ｐａｕｌ  Ａ  Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｊ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  Ｍｏｓｑｕｉｔｏ  Ｃｅｌｌ  Ｐａｓｓａｇｅ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ．［Ｊ］．Ｐｌｏｓ  Ｎｅｇｌｅｃｔｅｄ  Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２０１５，９（１０）：ｅ０００４１３９を参照。
【０１３７】
プラークの中和結果に示すように、被験物はチクングニヤウイルスを阻害することができ、被験物のチクングニヤウイルスに対する阻害は投与量依存性を有し、半阻害濃度ＥＣ５０値は２８２．６ｕｇ／ｍｌ（図４）である。
【実施例５】
【０１３８】
実施例５の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：３７０ｇ
ビャクブ：２２０ｇ
サンジコ：２３０ｇ
ビャクビ：２７０ｇ
カッコン：２７０ｇ
ビャクジュツ：２８０ｇ
【０１３９】
原薬の由来は実施例１と同様である。実施例５の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１４０】
（１）３７０ｇのホコウエイ、２２０ｇのビャクブ、２７０ｇのビャクビの生薬を取り、１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに１０倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせて、アルコール抽出液を得る。
【０１４１】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、２７０ｇのカッコン、２３０ｇのサンジコ、２８０ｇのビャクジュツの生薬を組み合わせ、８倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに８倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせて、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約８０％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、２４時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１４２】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮して噴霧乾燥した後、本発明に記載の漢方薬組成物を得る。得られた組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．２８Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１４３】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例５に記載の漢方薬組成物（当該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１４４】
１．実施例５の漢方薬組成物の生体外での抗チクングニヤウイルス（ＣＨＩＫＶ）活性の薬力学的研究
Ｖｅｒｏ細胞の由来及び処理は実施例１と同様であり、チクングニヤウイルスの由来は実施例４と同様である。Ｖｅｒｏ細胞は６×１０５／ウェルで６ウェルプレート内に広げ、３７℃、５％のＣＯ２で２４時間インキュベートし、単層細胞を形成する。チクングニヤウイルスと１．０ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌの被験物水溶液とを混合して、単層細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートする。この温度下で、ウイルスは細胞表面の受容体と結合することができるが、細胞質に入ることができない。インキュベートした後、細胞は結合されていないウイルスを除去するために４℃の培養液を用いて洗浄する。その後、Ｔｒｉｚｏｌで細胞を処理して収集し、総ＲＮＡを抽出し、一本鎖ｃＤＮＡを合成し、リアルタイム定量ＰＣＲ法によりチクングニヤウイルスのコートタンパク質遺伝子とハウスキーピング遺伝子であるβ−ａｃｔｉｎを定量し、リアルタイム定量ＰＣＲ検出法の詳細はＡｃｈａｒｙａ  Ｄ，Ｐａｕｌ  Ａ  Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｊ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｌｏｓｓ  ｏｆ  Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  Ｍｏｓｑｕｉｔｏ  Ｃｅｌｌ  Ｐａｓｓａｇｅ  Ｒｅｄｕｃｅｓ  Ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ．［Ｊ］．Ｐｌｏｓ  Ｎｅｇｌｅｃｔｅｄ  Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２０１５，９（１０）：ｅ０００４１３９を参照。
【０１４５】
実験結果に示すように、被験物は０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ下でＣＨＩＫＶとＶｅｒｏ細胞受容体との結合を一部阻害することができる（図５を参照）。
【実施例６】
【０１４６】
実施例６の漢方薬組成物の配合は以下の通りである。
ホコウエイ：４８０ｇ
ビャクブ：２９０ｇ
サンジコ：２９０ｇ
ビャクビ：３２０ｇ
カッコン：３２０ｇ
ビャクジュツ：３８５ｇ
ソウハクヒ：３２０ｇ
ジコッピ：３８５ｇ
【０１４７】
用いられる原薬において、ホコウエイは中国河北省から収集され、ビャクビは中国河南省から収集され、カッコンは中国河北省から収集され、ビャクブは中国広西省から収集され、サンジコは中国四川省から収集され、ビャクジュツは中国浙江省から収集され、ソウハクヒは中国山東省から収集され、ジコッピは中国寧夏回族自治区から収集される。
【０１４８】
実施例６の漢方薬組成物の調製プロセスは以下の通りである。
【０１４９】
（１）４８０ｇのホコウエイ、２９０ｇのビャクブ、３２０ｇのビャクビ、３２０ｇのソウハクヒの生薬を取り、８倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。その後、さらに８倍量の６０％のエタノールを添加して１時間半抽出し、濾過する。２回で得られる濾液を組み合わせて、アルコール抽出液を得る。
【０１５０】
（２）上記アルコール抽出液の調製で生成される生薬の残渣を取り、３２０ｇのカッコン、２９０ｇのサンジコ、３８５ｇのビャクジュツ、３８５ｇのジコッピの生薬を組み合わせ、１０倍量の水を添加して２時間抽出し、その後、さらに１０倍量の水を添加して２時間抽出し、濾過し、２回で得られる濾液を組み合わせて、濃厚なペーストに濃縮し、エタノールの最終濃度が約７０％になるまで９０％のエタノールを添加して撹拌し、３６時間静置し、上清液を取って、水抽出液を得る。
【０１５１】
（３）工程１により得られるアルコール抽出液と工程２により得られる水抽出液とを組み合わせ、濃縮して噴霧乾燥した後、本発明に記載の漢方薬組成物を得る。得られた組成物は褐色粉末状であり、重量は約０．４８Ｋｇであり、以下の生体外と生体内実験に直接用いられる。
【０１５２】
以下、その薬力学的効能を検証するために、実施例６に記載の漢方薬組成物（該組成物は実験において「被験薬」又は「被験物」と呼ばれる）に対し、様々な薬力学的研究を行う。
【０１５３】
１．実施例６の組成物の生体外での抗鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２活性の薬力学的研究
１．１  ＣＰＥ法によりウイルスのＭＤＣＫ細胞に対する半毒性濃度（ＴＣＩＤ５０）を測定する
ＭＤＣＫ細胞（イヌ腎上皮細胞は、北京市農林科学院畜産獣医学研究所により提供される）を９６ウェルプレートに接種し、ウェル当たり１００μＬ中に細胞２×１０４個／ウェルを含み、３７℃で２４ｈ培養し、細胞を単層に成長させる。鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２のインフルエンザウイルス（北京市農林科学院畜産獣医学研究所により提供される）を原液用培養液で１０倍をもって１０−３から１０−１２への合計１０種の濃度に段階希釈して、細胞ウェル内に添加した。各濃度ごとに８ウェルを設け、３７℃で培養する。倒立顕微鏡で毎日観察し、細胞病変（ＣＰＥ）を記録し、Ｒｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ法を用いてウイルス半数感染投与量（ＴＣＩＤ５０）を算出する。
【０１５４】
実験結果に示すように、細胞はウイルスに感染すると、腫れ、引っ張られ、収縮され、凝集され、鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２のＴＣＩＤ５０は、１０−３．５／０．１ｍｌである。
【０１５５】
１．２  ＭＴＴ法によりＭＤＣＫ細胞に対する被験薬の半数阻害濃度（ＴＣ５０）をそれぞれ測定する
ＭＤＣＫ細胞をそれぞれ９６ウェルプレートに接種し、ウェル当たり１００μＬ中に細胞２×１０４個／ウェルを含み、３７℃、５％のＣＯ２で２４ｈ培養し、細胞は単層に成長させる。上清液を吸い取り、それぞれ１００００、５０００、２５００、１２５０、６２５、３１２．５、１５６．２５、７８．１２、３９．０６μｇ／ｍＬの被験薬水溶液を添加し、各濃度について４ウェルを設け、細胞対照（細胞＋培養基）を設定する。アマンタジン（Ｓｉｇｍａ公司から購入）を陽性対照薬に設定し、濃度勾配は３１２．５、１５６．２５、７８．１２、３９．０６μｇ／ｍＬであり、各濃度について４ウェル設け、３日間観察した後ＭＴＴを添加して４時間染色し、上清液を吸い取り、ＤＭＳＯを添加して０．５時間溶解し、酵素結合検出器を用いてＯＤ５７０ｎｍ吸収値を測定する（結果は表６−１を参照する）。統計ソフトウェアＳＰＳＳ１３．０を用いてデータに対してＰｒｏｂｉｔ回帰分析を行い、医薬の半数細胞毒性濃度（ＴＣ５０）を算出する。
【０１５６】
【数１】
2020519701.tif 000004
【０１５７】
ＳＰＳＳ１３．０によってデータに対するＰｒｏｂｉｔ回帰分析を行い、ＭＤＣＫ細胞に対する医薬の半数阻害濃度ＴＣ５０は１５９６μｇ／ｍＬである。ＭＤＣＫ細胞に対する該医薬の最大無毒濃度は１２５０μｇ／ｍＬであり、この濃度下で細胞形態は対照細胞と同じである。比較として、アマンタジンの最大無毒濃度は３１２．５μｇ／ｍＬより大きい。
【０１５８】
【表２】
2020519701.tif 000005
【０１５９】
１．３  被験物による鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２インフルエンザウイルスの直接不活性化の測定
ＭＤＣＫ細胞を９６ウェルプレートに接種し、ウェル当たり１００μＬ中に細胞２×１０４個／ウェルを含み、３７℃で５％のＣＯ２で２４ｈ培養し、細胞を単層に成長させる。上清液を捨て、様々な濃度の医薬水溶液と等体積の１００ＴＣＩＤ５０インフルエンザウイルスとを管内で均一に混合し、６ｈ作用後にさらに混合液を細胞プレートに接種する。正常な細胞対照群、陽性医薬（アマンタジンは、Ｓｉｇｍａ公司から購入）対照及びウイルス対照を設定する。２ｈ吸着後、上清液を捨て、細胞維持液を添加し、３７℃で５％のＣＯ２培養箱で培養し続ける。細胞病変結果を記録し、ＭＴＴ染色法により細胞活性を測定する。試験を２回繰り返す。統計ソフトウェアＳＰＳＳ１３．０を用いてデータに対してＰｒｏｂｉｔ回帰分析を行い、医薬の半数有効濃度（ＩＣ５０）を算出する。
【０１６０】
結果を表６−２に示し、被験物の半数阻害濃度（ＩＣ５０）の平均値は３８０．５μｇ／ｍＬであり、被験物は明らかに鳥インフルエンザウイルスＨ９Ｎ２インフルエンザウイルスを直接不活性化する作用を有することを示す。
【０１６１】
【表３】
2020519701.tif 000006
【０１６２】
２．実施例６の組成物の生体外での抗ジカウイルス（ＺＩＫＶ）活性の薬力学的研究
Ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎細胞は、アメリカン・タイプカルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から購入される、ＣＣＬ〜８１）は６×１０５／ウェルで６ウェルプレート内に広げ、５％のＣＯ２で３７℃で２４時間インキュベートし、単層細胞を形成する。被験物をＰＢＳ緩衝液に溶解し、濾過除菌し、それぞれ１．０、０．２５、０．１２５、０．０６２５、０．０３１２５、０．０１５６ｍｇ／ｍｌに希釈する。ジカウイルス（アメリカ疾病管理センターアルボウイルス部門（ＣＤＣ Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ Ｂｒａｎｃｈ）により提供される）と、ＤＭＥＭ細胞培養液（１％のＬ−グルタミン、１％のペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％のＦＢＳ）で様々な濃度に希釈した被験物とを室温で事前に混合し、１時間インキュベートする。その後、混合物を単層のＶｅｒｏ細胞ウェル内に添加し、３７℃で５％のＣＯ２で１時間インキュベートして、ウイルスを細胞に浸透させるか、或いは細胞に吸収させる。ウイルスを除去した後、さらに細胞を１％のアガロースゲルで被覆し、３７℃で５％のＣＯ２で４日間インキュベートする。０．３％の中性レッドで生細胞を染色した後、細胞培養プレートを取り出して染色培地を取り除く。さらに培養プレートをインキュベータに１〜２ｈ戻し、その後、ホワイト基板上で赤色の背景における着色されていないプラークが見られる。各希釈度の平均プラーク数を記録する。
【０１６３】
生体外の実験結果に示すように、被験物は効果的にジカウイルスを阻害することができ、被験物がジカウイルスプラークの形成を阻害する半数有効投与量は１９３．１μｇ／ｍｌである（図６を参照）。
【０１６４】
３．ジカウイルス（ＺＩＫＶ）に感染した雌性マウスの生体内における、実施例６の組成物の薬力学的研究
被験物の、ジカウイルスに感染したマウスにおける阻害作用を研究するために、本実験は、１日目にＣ５７ＢＬ／６雌性マウス（週齢５週、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から購入する）の体重を秤量し、同時に各マウスに２ｍｇのＩＦＮＲ１抗体（ＭＡＲ１−５Ａ３）を腹腔内注射する。２日目に各マウスに１ｘ１０４ＰＦＵのジカウイルス（アメリカ疾病管理センターアルボウイルス部門（ＣＤＣ  Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ  Ｂｒａｎｃｈ）により提供される）を腹腔内注射して感染させ、マウスを、プラセボ群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、中投与量群（Ｍｅｄｉｕｍ）及び高投与量群（Ｈｉｇｈ）の３群に分ける（各群１０匹）。感染後の４時間目、プラセボ群に対して滅菌水１００μｌを胃に経口投与し、中投与量群に対して１００μｌの被験物水溶液を胃に経口投与し、投与量は０．７５ｇ／ｋｇであり、高投与量群に対して１００μｌの被験物水溶液を胃に経口投与し、投与量は１．５０ｇ／ｋｇであり、各群に毎日一回投与し、６日投与続ける。
【０１６５】
ジカウイルス感染後の２日目と４日目、マウスの眼窩血を取って、ジカウイルスとマウスβ−アクチンのＲＮＡ抽出、ｃＤＮＡ合成及びｍＲＮＡのｑＰＣＲ分析（分析方法は実施例２と同様）に用いる。ｑＰＣＲ結果に示すように、高投与量の被験物は感染後の２日目に顕著にジカウイルスのマウス血液内の複製（ｐ＜０．０５）を阻害することができ、感染後の４日目に阻害の傾向がある（図７を参照）。
【０１６６】
試験中、マウスの発症率と死亡率を毎日観察する。プラセボ群の１匹の動物が３日目と４日目との間に死亡する以外、全ての動物はいずれも異常がなかった。ジカウイルス感染後の６日目、全てのマウスの体重を秤量し、屠殺する。マウスの脾臓、脳及び子宮を取り、脾臓、脳及び子宮内の総ＲＮＡを分離して抽出した後、ジカウイルスとマウスβ−アクチンのｃＤＮＡ合成及びｍＲＮＡのｑＰＣＲ分析を行う（分析方法は実施例２と同じである）。結果に示すように（図８を参照）、被験物の高投与量（１．５ｇ／ｋｇ）は脾臓でのジカウイルスの感染を顕著に阻害することができ、同時に脳と子宮でのジカウイルスの感染に対して阻害の傾向があるが、差異が顕著ではない（分析及び研究によると、実験異常値によるものである可能性がある）。
【０１６７】
マウスに対する被験物の潜在的な毒性作用を評価するために、試験前後の体重を比較し、結果によると、被験物は体重に顕著な影響を与えていない。これは、被験物がマウスに対して副作用がないことを示す（図９を参照）。
【０１６８】
４．実施例６の組成物を経口投与することによるラットに対する解熱作用の試験研究
４．１  試験動物
ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ Ｒａｔ）は中国成都達碩実験動物有限会社から購入され、生産ライセンス番号はＳＣＸＫ（川）２０１３−２４で、動物合格証番号は００１８４０９である。実験中、合計１５匹の雌性と１５匹の雄性のラットを用いる。購入時の体重は１５０〜１７０ｇ、年齢は８〜９週、実験時の体重は１８０〜２００ｇである。
【０１６９】
動物の選択基準：
１）動物の体重：試験期間に体重範囲が０．１８〜０．２０ｋｇの動物を選択する。
２）実験開始の３日前から、毎日同じ時間に動物の肛門温度を１回測定し、３回の肛門温度が３７．５〜３８．５℃の間であるものを選択し、肛門温度差の変化が０．５℃を超えない動物をモデルラットとする。
【０１７０】
４．２  試験設計及び周期
適応期間は３日で、投与観察期間は１日である。投与当日はＤ１で表す。詳細なスケジュールは図１０を参照。
【０１７１】
４．３  試験
今回の試験において、ＳＤラットに２０％の乾燥酵母懸濁液  ５ｍｌ・ｋｇ−１を皮下注射して発熱源とし、これにより発熱モデルを確立し、薬力学的効能評価を行う。３０匹の健康なＳＤラットを選択し、ランダムに、被験物４ｇ・ｋｇ−１群、被験物２ｇ・ｋｇ−１群、被験物１ｇ・ｋｇ−１群、陽性対照アスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群、発熱モデル群、ブランク対照群の合計６群に分け、各群は５匹の動物である。アスピリンの製造機構はＢＡＹＥＲ社のものである。発熱源を注射した後、それぞれ０．５ｈと４．５ｈに１回胃に投与する（合計２回）。発熱源を注射する前の１ｈ及び発熱源を注射した後の１、２、３、４、５、６、７、８、９ｈにそれぞれ動物の直腸温度を一回測定し（測定方法：動物の覚醒状態において、手でラットを固定し、オムロン電子体温計ＭＣ−３４７にパラフィンを塗布してラット直腸の４ｃｍ箇所に挿入し、肛門温度を測定する）、動物の肛門温度の変化を記録する。動物の症状と徴候を観察する。
【０１７２】
データ処理：発熱源を注射する前の１ｈに測定された肛門温度データを基準値とし、対応のあるＴ検定を用いて投与前と投与後の各群の動物の肛門温度変化に対する統計学的分析を行い、同時に一元配置分散分析を用いて各投与群と発熱モデル群に対する統計学的分析を行い、Ｐ＜０．０５は差が統計的に有意であることを示す。
【０１７３】
４．４  結果と分析
試験期間全体において、各群の動物の糞便、行動と活動、精神状態及び体表面の毛色等は、投与に関する異常な状況が見られない。
【０１７４】
ラットの肛門温度変化の状況は表６−３に示し、以下のとおりまとめる。
ブランク対照群：各時点の体温はいずれも正常な範囲内で変動する。
【０１７５】
発熱モデル群（５匹）：基準値の体温と比べると、ラットに発熱源を注射した後の１〜４時間に体温は正常な範囲内に維持され、５時間から肛門温度は顕著に上昇する傾向があり（Ｐ＜０．０１）、６時間、７時間、８時間及び９時間にいずれも顕著に上昇し（Ｐ＜０．０１）、そのため、発熱源を注射した後の５時間、６時間、７時間、８時間及び９時間の動物の直腸温度の変化を分析することを治療効果の終点とする。
【０１７６】
アスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群（５匹、臨床投与量２〜４倍に相当、０．３ｇ〜０．６ｇ／人／回）：基準値と比べると、発熱源を注射した後にラットの肛門温度は５時間〜８時間（４つの時点）にいずれも正常な体温範囲内に制御され、９時間に体温は顕著に上昇する（Ｐ＜０．０５）。発熱モデル群と比べると、発熱源を注射した後の５時間、６時間、７時間及び８時間にラットの肛門温度が顕著に低下し（Ｐ＜０．０１）、９時間にラットの肛門温度は上昇する。以上の結果から、発熱源を注射した後の４．５ｈに投与し、アスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群の解熱及び体温低下の治療効果は４時間維持できることを示す。
【０１７７】
被験物４ｇ・ｋｇ−１群（５匹）：基準値の肛門温度と比べると、発熱源を注射した後にラットの肛門温度は５時間〜９時間（５つの時点）にいずれも上昇せず、正常な体温範囲内に制御される。発熱モデル群と比べると、発熱源を注射した後の５時間、６時間、７時間、８時間及び９時間に動物の肛門温度は顕著に低下する（Ｐ＜０．０１）。以上の結果から、発熱源を注射した後の４．５ｈに投与し、解熱及び体温低下の効果の発揮が速く、治療効果は５時間維持でき、その解熱作用の強度はアスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群に相当し、治療効果の維持時間はアスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群より長い（１時間延長された）ことを示す。
【０１７８】
被験物２ｇ・ｋｇ−１群（５匹）：基準値と比べると、ラットに発熱源を注射した後の５時間に体温は制御され、基準値に相当するが、６時間目、７時間目、８時間目及び９時間目にいずれも顕著又は極めて顕著に上昇する（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）。発熱モデル群と比べると、発熱源を注射した後の５時間、６時間、８時間及び９時間に体温は低下の傾向があり、７時間目に極めて低下する（Ｐ＜０．０１）。
【０１７９】
被験物１ｇ・ｋｇ−１群組：基準値と比べると、発熱源を注射した後の５時間目、６時間目、７時間目、８時間目及び９時間目に体温はいずれも顕著又は極めて顕著に上昇する（Ｐ＜０．０５又はＰ＜０．０１）。発熱モデル群と比べると、発熱源を注射した後の５時間、６時間、７時間、８時間及び９時間の動物の肛門温度に相当する。
【０１８０】
【表４】
2020519701.tif 000007
【０１８１】
４．５  結論
アスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群（ヒト臨床投与量の２〜４倍に相当、０．３ｇ〜０．６ｇ／人／回）は体温を顕著に低下させることができ（発熱源を注射した後の５〜８時間）、治療効果は４時間維持できる。
【０１８２】
被験物４ｇ・ｋｇ−１群は体温を顕著に低下させることができ（発熱源を注射した後の５〜９時間）、その解熱作用の強度はアスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群に相当し、効果の発揮が速く、治療効果は５時間維持でき、アスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群より１時間延長された。被験物２ｇ・ｋｇ−１は体温を顕著に低下させることができ、その作用強度と維持時間はアスピリン１００ｍｇ・ｋｇ−１群より弱い。要するに、被験物の解熱及び体温低下の作用は明確に投与量に関連し、投与に関連すると考えられる。
【０１８３】
一方では、本発明の漢方薬組成物の解熱作用は患者自身のウイルスに対する抵抗力を強化することに役立ち、それにより本発明の漢方薬組成物の抗ウィルス効能をさらに強化する。一方では、ウイルス感染は一般的に発熱を伴うため、本発明の漢方薬組成物の解熱作用は抗ウィルスと同時にウイルスに感染した患者の臨床症状を顕著に改善できることを示す。
【０１８４】
５．実施例６の組成物を３０日繰り返し経口投与することによる、正常なアカゲザルに対する毒性試験
５．１  実験動物
種別／属別：アカゲザル
レベル：普通レベル。試験前に検疫に合格し、内容は健診、結核菌試験、寄生虫、サルモネラ、赤痢菌及びＢウイルス検査を含む
使用の数及び性別：雄３匹、雌５匹
体重：２．２〜３．５ｋｇ
動物標識：ネックリングにアラビア数字が刻まれたステンレス製マーク及びゲージマークを用いて標識する。
提供機構：雅安ＰＲＹＭＥバイオテクノロジー有限会社
生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（川）２０１４−２７
動物合格証番号：００１６９２９
【０１８５】
５．２  試験方法
５．２．１  試験設計及び周期
検疫期間は３９日で、経鼻で３０日胃内投与し、初回投与当日はＤ０で表す。試験設計は図１１を参照。
【０１８６】
５．２．２  動物の群別及び投与量の設計
群分けの根拠：体重により群分けする。
群分けの方法：層別でランダムに群分けする。
群分けの設計：被験物群とプラセボ群、合計２群であり、被験物群は動物３匹、プラセボ群は動物５匹である。
投与量の設計：試験サンプルは臨床投与量がサル同等投与量の１５倍であり、同時に薬力学的有効投与量（マウス０．７５ｍｇ／ｋｇ）はサル同等投与量の１８倍である。
【０１８７】
マウスの薬力学的効能投与量を用い、ヒト投与量の１５倍を投与して毒性実験を行い、投与量は３３７５ｍｇ／ｋｇであり、詳細について下表を参照する。
【０１８８】
【表５】
2020519701.tif 000008
【０１８９】
５．２．３  投与情報
投与経路：３０日経鼻で胃内投与する。
投与頻度：試験サンプルの各群に毎日１回、３０日投与続ける。
投与量計算：投与後の１０日毎の体重で次の１０日の投与量を計算する。
投与時間：毎日、約０８：００〜０９：００の間に投与し、採血操作の場合は、３０分後に実施する。
【０１９０】
５．２．４  観察指標
５．２．４．１  臨床症状の観察
観察回数：毎日、１回観察する。
観察方法：ゲージ外で観察する。
観察内容：皮膚、被毛、眼、耳、鼻、口腔、胸部、腹部、泌尿生殖器、四肢等の部位及び呼吸、運動、排尿、排便及び行動の変化等。
【０１９１】
５．２．４．２  摂食量の測定
観察期限：検疫期間から投与終了まで。
給餌方法：午前７：４５〜８：３０と午後２：００〜３：００にそれぞれ１回給餌し、投与の１週目は、午前に１５０ｇ、午後に１００ｇ給餌し、２週目は、午前に２００ｇ、午後に１５０ｇ給餌して、自由に摂取させ、翌日の午前０７：４０〜０８：００に残りの飼料を持ち去る。
給餌量：２００ｇ〜４００ｇ／匹／日。根拠：アカゲザルの毎日平均摂食量は約２００ｇ〜４００ｇ／匹／日であり、今回の試験では徐々に増加する方式により給餌し、１週目は、午前に１５０ｇ、午後に１００ｇ給餌し、２週目からは、午前に２００ｇ、午後に１５０ｇ給餌して、自由に摂取させる。
摂食量の測定方法：供給量、廃棄量及び容器内の残量を毎日記録する。摂食量＝供給量−廃棄量−容器内の残量。飼料量は０％，２５％，５０％，７５％及び１００％の５ウェイ半定量法を用いて推定し、毎日の供給量との積が毎日の摂食量である。
【０１９２】
５．２．４．３  体重の測定
秤量時間：秤量当日、給餌前。
測定回数：検疫期間に２回（群分け前）、１０日毎に一回、合計５回。
測定方法：動物の覚醒状態において、熟練労働者が掴み取り、大型動物秤量計（ＴＣＳ−１５０）で秤量する。
【０１９３】
５．２．４．４  血液生化学的検出
検出回数：投与前２回、投与期間１０日毎に一回、合計５回。
サンプル採集方法：動物の採血操作前、一晩絶食させ、翌日０８：００〜０８：３０に採血し、麻醉せず、前腕静脈血を１．０ｍｌ採血し、採血後に滅菌した乾燥綿球で採血部位を軽く押して止血し、血液サンプルは凝血促進チューブに入れ、５０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、４℃で血清を分離し、生化学的指標の検出に用いられる。検出指標：総コレステロール（ＣＨＯ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、ＡＬＴ／ＡＳＴ、グルコース（ＧＬＵ）、総ビリルビン（ＴＢＩＬ）、直接ビリルビン（ＤＢＩＬ）、間接ビリルビン（ＩＢＩＬ）、総タンパク質（ＴＰ）、アルブミン（ＡＬＢ）、グロブリン（ＧＬＯ）、ＡＬＢ／ＧＬＯ、トリグリセリド（ＴＧ）、グルタミルトランスフェラーゼ（γ−ＧＧＴ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ−ｃ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ−ｃ）、詳細は表６−５を参照。検出方法：各指標はいずれもロシュＣｏｂａｓ  Ｃ５０１を用いて検出する。
【０１９４】
【表６】
2020519701.tif 000009
【０１９５】
５．２．４．５  血液学的指標の検出
検出回数：投与前２回、投与期間１０日毎に一回、合計５回。
サンプル採集方法：動物の採血操作前、一晩絶食させ、翌日０８：００〜０８：３０に採血し、麻醉せず、前腕静脈血を１．０ｍｌ採血し、採血後に滅菌した乾燥綿球で採血部位を軽く押して止血し、血液サンプルはＥＤＴＡＫ２を用いて凝血を抑制し、血液学的指標の検出に用いる。検出指標は、表６−６を参照。検出方法：各指標はいずれもＡＤＶＩＡ  ２１２０ｉにより検出する。
【０１９６】
【表７】
2020519701.tif 000010
【０１９７】
５．２．５  データ処理
結果は個体データの形式により表される。体重等の計測データは「Ｍｅａｎ±ＳＤ」（「平均値±標準偏差」）で表す。
【０１９８】
５．３  結果と分析
５．３．１  一般的な行動状況及び摂食量に与える影響
溶媒プラセボ群の動物に投与続けた後、異常がない。
被験物を投与した後、該群の実験動物には明らかな異常がない。動物の行動、飲水等には異常がない。口、眼、鼻には異常な分泌物がない。毛色、呼吸等には異常がない。一般的な観察状況は良好である。
【０１９９】
５．３．２  体重に与える影響
被験物を投与した後の、アカゲザルの体重に与える影響は下記表を参照されたい。経鼻で胃内（３／３）投与した初期には、経鼻に対してストレス反応があり、投与１０日後には体重に過剰な低下傾向が表れ、後続の投与期間に体重は上昇傾向を保持する。投与に関する体重の変化が見られない。
【０２００】
【表８】
2020519701.tif 000011
【０２０１】
５．３．３  生化学的指標に与える影響
被験物を投与した後アカゲザルの生化学的指標に与える影響は、表６−８から表６−２５を参照。プラセボ群の動物の各生化学的指標には明らかな異常がない。被験物群の動物の血液の各生化学的指標には投与関連の異常がない。
【０２０２】
【表９】
2020519701.tif 000012
【０２０３】
【表１０】
2020519701.tif 000013
【０２０４】
【表１１】
2020519701.tif 000014
【０２０５】
【表１２】
2020519701.tif 000015
【０２０６】
【表１３】
2020519701.tif 000016
【０２０７】
【表１４】
2020519701.tif 000017
【０２０８】
【表１５】
2020519701.tif 000018
【０２０９】
【表１６】
2020519701.tif 000019
【０２１０】
【表１７】
2020519701.tif 000020
【０２１１】
【表１８】
2020519701.tif 000021
【０２１２】
【表１９】
2020519701.tif 000022
【０２１３】
【表２０】
2020519701.tif 000023
【０２１４】
【表２１】
2020519701.tif 000024
【０２１５】
【表２２】
2020519701.tif 000025
【０２１６】
【表２３】
2020519701.tif 000026
【０２１７】
【表２４】
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【０２１８】
【表２５】
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【０２１９】
【表２６】
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【０２２０】
５．３．４  血液学的指標に与える影響
被験物の投与を続けた後、アカゲザルの血液学的指標に与える影響は表６−２６から６−５３を参照。投与後、プラセボ群及び投与群の動物の各血液学的指標には明らかな異常がない。
【０２２１】
【表２７】
2020519701.tif 000030
【０２２２】
【表２８】
2020519701.tif 000031
【０２２３】
【表２９】
2020519701.tif 000032
【０２２４】
【表３０】
2020519701.tif 000033
【０２２５】
【表３１】
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【０２２６】
【表３２】
2020519701.tif 000035
【０２２７】
【表３３】
2020519701.tif 000036
【０２２８】
【表３４】
2020519701.tif 000037
【０２２９】
【表３５】
2020519701.tif 000038
【０２３０】
【表３６】
2020519701.tif 000039
【０２３１】
【表３７】
2020519701.tif 000040
【０２３２】
【表３８】
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【０２３３】
【表３９】
2020519701.tif 000042
【０２３４】
【表４０】
2020519701.tif 000043
【０２３５】
【表４１】
2020519701.tif 000044
【０２３６】
【表４２】
2020519701.tif 000045
【０２３７】
【表４３】
2020519701.tif 000046
【０２３８】
【表４４】
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【０２３９】
【表４５】
2020519701.tif 000048
【０２４０】
【表４６】
2020519701.tif 000049
【０２４１】
【表４７】
2020519701.tif 000050
【０２４２】
【表４８】
2020519701.tif 000051
【０２４３】
【表４９】
2020519701.tif 000052
【０２４４】
【表５０】
2020519701.tif 000053
【０２４５】
【表５１】
2020519701.tif 000054
【０２４６】
【表５２】
2020519701.tif 000055
【０２４７】
【表５３】
2020519701.tif 000056
【０２４８】
【表５４】
2020519701.tif 000057
【０２４９】
５．４  結論
今回の試験条件下での被験物の臨床投与量はサル同等投与量の１５倍であり、同時に薬力学的有効投与量（マウス０．７５ｍｇ／ｋｇ）はサル同等投与量の１８倍（３３７５ｍｇ／ｋｇ）であり、３０日連続投与後には、アカゲザルに毒性作用がなく、これは被験物が非常に安全であることを証明する。
【実施例７】
【０２５０】
本発明の漢方薬組成物を特徴付け、品質を制御するために、超高液相ＵＨＰＬＣクロマトグラフィー法により本発明の漢方薬組成物に対してフィンガープリントを作成することを発明者は複数回試みた。分析条件は以下の通りである。
【０２５１】
計測器と試薬：Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００液相クロマトグラフィーシステム（Ｔｈｅｒｍｏ）及びＣｈｒｏｍｅｌｅｏｎ７．２クロマトグラフィーワークステーション、超純水機（モル１８１０Ｄ細胞型）、超音波計測器（潔盟ＪＰ−１００ＳＴ）。
【０２５２】
アセトニトリルとメタノールはクロマトグラフィー用純度（Ｆｉｓｈｅｒ）で、ギ酸はクロマトグラフィー用純度（Ｆｉｓｈｅｒ）である。
【０２５３】
試験サンプル溶液の調製：測定予定の漢方薬組成物のサンプルを精密に秤量し、８０℃度の熱水に溶解し、超音波により６０ｍｉｎ抽出し、遠心後に上清液を取り、０．２２μｍの微多孔質フィルムを通過させ、濃度５ｍｇ／ｍＬの溶液を調製する。
【０２５４】
フィンガープリントの測定：試験サンプル溶液を１μＬを精密に吸い取り、超高速液体クロマトグラフィーに注入し、クロマトグラムを記録する。
【０２５５】
クロマトグラフィーの操作条件は以下の通りである。
クロマトグラフィーカラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  ２．１×１５０ｍｍ  １．７μｍクロマトグラフィーカラム
移動相：移動相Ａ：０．０５％のギ酸水、移動相Ｂ：アセトニトリル
勾配溶出：０〜１８ｍｉｎ，３％Ｂ〜１８％Ｂ、１８〜２３ｍｉｎ，１８％Ｂ〜４０％Ｂ、２３〜２８ｍｉｎ，４０％Ｂ〜１００％Ｂ、２８〜３０ｍｉｎ，１００％Ｂ〜１００％Ｂ、３０〜３２ｍｉｎ，１００％Ｂ〜３％Ｂ
温度：２５℃
流速：０．３ｍＬ／ｍｉｎ
クロマトグラム検出波長：２５４ｎｍ
注入容積：１ｕＬ
【０２５６】
上記クロマトグラフィー条件を用いて実施例１から実施例６に係る漢方薬組成物のサンプルに対してＵＨＰＬＣフィンガープリント分析を行い、分析クロマトグラムは図１２に表す。結果に示すように、本発明に規定される様々な原薬の相対的な比率の下で、本発明に係る漢方薬組成物のＵＨＰＬＣクロマトグラムの一致性が非常に良好であり、５つの特徴的なピークが明らかであり、具体的には以下の通りである。
【０２５７】
【表５５】
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【０２５８】
即ち、１、２、３、４、５の５つの特徴的なピークの保持時間はそれぞれ約１４．５±０．１、１５．３±０．１、１５．５±０．１、１７．２±０．１、１８．２±０．１（ｍｉｎ）である。これらの特徴的なピークに基づき、本発明に係る漢方薬組成物を簡単に同定し、品質を制御するのに用いることができる。
【０２５９】
以上の記載は具体的な実施例を具体的に説明しているが、当業者であれば、本発明の精神を逸脱しない範囲内で形式及び詳細の変更や組み合わせを行うことができることは理解すべきである。本明細書の開示内容を逸脱せず、添付された特許請求の範囲により解釈される広い範囲内で、様々な実施例の適切な説明を様々に変更できることは、理解すべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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