(57)【要約】  本発明は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ジグルコン酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジン塩酸塩及びポリヘキサメチレンビグアニド塩から選択されるさらなる化合物とを含有する抗菌性混合物、並びにさらにこのような混合物を含有する化粧用組成物に関する。ケラチン物質のケア、メイクアップ及びクレンジングにおける使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、
ｉ）ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物；
ｉｉ）ポリヘキサメチレンビグアニド塩
から選択されるさらなる化合物とを含む抗菌性混合物。
【請求項２】
ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物を含むことを特徴とする、請求項１に記載の混合物。
【請求項３】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン化合物質量比が、２〜３５００の範囲であり、好ましくは、２〜２５０の範囲であり、優先的に、２〜２２０の範囲であるような量で、前記４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物とを含むことを特徴とする、請求項２に記載の混合物。
【請求項４】
前記クロルヘキシジン化合物がジグルコン酸クロルヘキシジンであることを特徴とする、請求項２又は３に記載の抗菌性混合物。
【請求項５】
２５〜１５０の範囲、好ましくは、３０〜１３０の範囲、優先的に、４５〜９０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ジグルコン酸クロルヘキシジン質量比を有することを特徴とする、請求項４に記載の混合物。
【請求項６】
１０〜７５の範囲、好ましくは、１０〜６０の範囲、優先的に、１０〜４０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ジグルコン酸クロルヘキシジン質量比を有することを特徴とする、請求項４に記載の混合物。
【請求項７】
前記クロルヘキシジン化合物がクロルヘキシジン塩酸塩であることを特徴とする、請求項２又は３に記載の抗菌性混合物。
【請求項８】
６０〜３５０の範囲、好ましくは、８０〜２５０の範囲、優先的に、９０〜２２０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン塩酸塩質量比を有することを特徴とする、請求項７に記載の混合物。
【請求項９】
２〜１２０の範囲、好ましくは、２〜１００の範囲、優先的に、２〜８５の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン塩酸塩質量比を有することを特徴とする、請求項７に記載の混合物。
【請求項１０】
ポリヘキサメチレンビグアニド塩を含むことを特徴とする、請求項１に記載の抗菌性混合物。
【請求項１１】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ポリヘキサメチレンビグアニド塩質量比が、５〜７５の範囲であり、好ましくは、１５〜６０、優先的に、２０〜５５の範囲であるような量で前記４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン及びポリヘキサメチレンビグアニド塩を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の混合物。
【請求項１２】
前記ポリヘキサメチレンビグアニド塩が、塩酸塩、ボレート、アセテート、グルコネート、スルホネート、タートレート及びシトレートから選択されることを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の抗菌性混合物。
【請求項１３】
前記ポリヘキサメチレンビグアニド塩が塩酸塩であることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の抗菌性混合物。
【請求項１４】
生理学的に許容可能な媒体中に、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗菌性混合物を含む組成物。
【請求項１５】
水、油、２〜１０個の炭素原子を含有するポリオール、ゲル化剤、界面活性剤、塗膜形成ポリマー、染料、香料、充填剤、紫外線遮断剤、植物抽出物、化粧用及び皮膚用活性薬剤、及び塩から選択される少なくとも１つのさらなる成分を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンが、前記組成物の総質量に対して０．０１質量％〜５質量％の範囲、好ましくは、０．０１質量％〜３質量％の範囲、優先的に、０．０１質量％〜２．５質量％の範囲の含量で存在することを特徴とする、請求項１４又は１５に記載の組成物。
【請求項１７】
生理学的に許容可能な媒体を含む組成物の保存のための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗菌性混合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、特定のクロルヘキシジン化合物及びポリヘキサメチレンビグアニド塩から選択されるさらなる化合物とを含有する抗菌性混合物、並びにさらにこのような混合物を含有する化粧用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン（ケトン化合物）は、特許出願（特許文献１）に記載されるように、微生物汚染から組成物を保護するための、化粧用組成物用の保存剤として有用な物質である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０３９４４５号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、良好な抗菌保護性能を維持しながら、組成物、特に、化粧用又は皮膚用組成物中に低濃度の前記ケトン化合物を組み込むことができることが望ましい。したがって、ケトン化合物と、抗菌効果を有する他の化合物との組合せが、この目的のために探し求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、予想外にも、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ジグルコン酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジン塩酸塩及びポリヘキサメチレンビグアニド塩から選択されるさらなる化合物との組合せが、相乗的抗菌活性を有する抗菌性混合物を得ることを可能にすることを発見した。
【０００６】
後述される例の結果は、いくつかの混合物で取られた最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）測定で得られた相乗的抗菌活性を示す。抗菌活性は、抗菌性混合物が、２５％以下、或いは２０％以下の菌株増殖のパーセンテージを得ることを可能にする場合に相乗的であると見なされる。
【０００７】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物との組合せが、特にかび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、及び酵母、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する相乗的抗菌活性を有する抗菌性混合物を得ることを可能にする。
【０００８】
特許出願仏国特許出願公開第Ａ−２  ９６２  ３２８号明細書及び仏国特許出願公開第Ａ−２  ９７３  ２２９号明細書には、ヒトの汗に関連する体臭を処置するための化粧用組成物であって、２−アルコキシ−４−アルキルケトンフェノール化合物、及び任意選択的に、クロルヘキシジン及びその塩などのさらなるデオドラント活性薬剤を含む化粧用組成物が記載されている。
【０００９】
これらの文献は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物との組合せによって構成される抗菌性混合物を具体的に記載しておらず、このような混合物が、かび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、及び酵母、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する相乗的抗菌活性を有することも示唆していない。
【００１０】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンと、ポリヘキサメチレンビグアニド塩、特に塩酸塩との組合せが、特にかび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）に対する相乗的抗菌活性を有する抗菌性混合物を得ることを可能にする。
【００１１】
特許出願仏国特許出願公開第Ａ−２  ９６２  ３２８号明細書及び仏国特許出願公開第Ａ−２  ９７３  ２２９号明細書には、ヒトの汗に関連する体臭を処置するための化粧用組成物であって、２−アルコキシ−４−アルキルケトンフェノール化合物、及び任意選択的に、ポリヘキサメチレンビグアニド塩などのさらなるデオドラント活性薬剤を含む化粧用組成物が記載されている。
【００１２】
これらの文献は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンとポリヘキサメチレンビグアニド塩との組合せによって構成される抗菌性混合物を具体的に記載しておらず、このような混合物が、かび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）に対する相乗的抗菌活性を有することも示唆していない。
【００１３】
より正確には、本発明の主題は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン、並びにジグルコン酸クロルヘキシジン、クロルヘキシジン塩酸塩及びポリヘキサメチレンビグアニド塩から選択されるさらなる化合物を含むか、又はそれらによって構成される（又はそれらからなる）抗菌性混合物である。
【００１４】
本発明の主題はまた、生理学的に許容可能な媒体中の、上述される前記混合物を含む組成物、特に、化粧用組成物である。
【００１５】
本発明のさらなる主題は、上述される組成物のケラチン物質への適用を含む、ケラチン物質の非治療的美容的処置のための方法である。この方法は、ケラチン物質をケア又はメイクアップ又はクレンジングするための美容的方法であり得る。
【００１６】
本発明の主題はまた、生理学的に許容可能な媒体を含む組成物、特に、化粧用又は皮膚用組成物を保存するための方法であって、上述される抗菌性混合物を前記組成物中に組み込むことを含むことを特徴とする方法である。
【００１７】
本発明の主題はまた、生理学的に許容可能な媒体を含む組成物を保存するための、上述される抗菌性混合物の使用である。
【００１８】
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンは、式：
【化１】
2020525485.tif 000002
の化合物である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
第１の実施形態によれば、本発明の主題は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン、並びにジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択されるクロルヘキシジン化合物を含むか、又はそれらによって構成される（又はそれらからなる）抗菌性混合物である。
【００２０】
クロルヘキシジン化合物は、ジグルコン酸クロルヘキシジン及びクロルヘキシジン塩酸塩から選択される。
【００２１】
有利には、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン及びデヒドロ酢酸又はその塩は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン化合物質量比が、２〜３５００の範囲であり、好ましくは、２〜２５０の範囲であり、優先的に、２〜２２０の範囲であるような含量で前記混合物中に存在する。
【００２２】
本発明に係る抗菌性混合物は、特にかび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、及び酵母、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する相乗的抗菌活性を有する。
【００２３】
本発明の第１の実施変形例によれば、抗菌性混合物中に存在するクロルヘキシジン化合物は、ジグルコン酸クロルヘキシジンである。
【００２４】
抗菌性混合物は、２５〜１５０の範囲、好ましくは、３０〜１３０の範囲、優先的に、４５〜９０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ジグルコン酸クロルヘキシジン質量比を有し得る。このような混合物は、酵母、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する相乗的抗菌活性を有する。
【００２５】
抗菌性混合物は、１０〜７５の範囲、好ましくは、１０〜６０の範囲、優先的に、１０〜４０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ジグルコン酸クロルヘキシジン質量比を有し得る。このような混合物は、かび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）に対する良好な相乗的抗菌活性を有する。
【００２６】
本発明の第２の実施変形例によれば、抗菌性混合物中に存在するクロルヘキシジン化合物は、クロルヘキシジン塩酸塩である。
【００２７】
抗菌性混合物は、６０〜３５０の範囲、好ましくは、８０〜２５０の範囲、優先的に、９０〜２２０の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン塩酸塩質量比を有し得る。このような混合物は、酵母、特にカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）に対する良好な相乗的抗菌活性を有する。
【００２８】
抗菌性混合物は、２〜１２０の範囲、好ましくは、２〜１００の範囲、優先的に、２〜８５の範囲の４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／クロルヘキシジン塩酸塩質量比を有し得る。このような混合物は、かび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）に対する良好な相乗的抗菌活性を有する。
【００２９】
第２の実施形態によれば、本発明の主題は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン及びポリヘキサメチレンビグアニド塩を含むか、又はそれらによって構成される（又はそれらからなる）抗菌性混合物である。
【００３０】
ポリヘキサメチレンビグアニド塩は、塩酸塩、ボレート、アセテート、グルコネート、スルホネート、タートレート及びシトレート、特に塩酸塩から選択される塩であり得る。
【００３１】
好ましくは、Ｌｏｎｚａ社によってＣｏｓｍｏｃｉｌ（登録商標）ＣＱの名称で販売されている製品（化合物の２０％の活性材料を含有する水溶液）などのポリヘキサメチレンビグアニド塩酸塩（ＣＴＦＡ名：ポリアミノプロピルビグアニド）が使用される。
【００３２】
有利には、ポリヘキサメチレンビグアニド塩は、１０００〜５００００、好ましくは、１０００〜２００００の範囲、優先的に、１０００〜１００００、より優先的に、１０００〜５０００の範囲であり得る質量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【００３３】
有利には、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン及びポリヘキサメチレンビグアニド塩は、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン／ポリヘキサメチレンビグアニド塩の比率が、５〜７５の範囲であり、好ましくは、１５〜６０の範囲であり、優先的に、２０〜５５の範囲であるような含量で前記混合物中に存在する。
【００３４】
本発明に係る抗菌性混合物は、特にかび、特にアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）に対する相乗的抗菌活性を有する。
【００３５】
本発明の好ましい実施形態によれば、抗菌性混合物中に存在するポリヘキサメチレンビグアニド塩は、ポリヘキサメチレンビグアニド塩酸塩である。
【００３６】
化合物４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オンは、組成物の総質量に対して０．０１質量％〜５質量％の範囲、好ましくは、０．０１質量％〜３質量％の範囲、優先的に、０．０１質量％〜２．５質量％の範囲、より優先的に、０．０１質量％〜２質量％の範囲の含量で、本発明に係る組成物中に存在し得る。
【００３７】
本発明の主題はまた、生理学的に許容可能な媒体中に、上述される抗菌性混合物を含む組成物である。
【００３８】
「生理学的に許容可能な媒体」という用語は、皮膚、頭皮、毛髪及び爪などのヒトケラチン物質と適合する媒体を意味する。前記媒体は、ケトン化合物及び前記さらなる混合物以外の１つ以上のさらなる成分を含み得る。
【００３９】
本組成物は、水、油、２〜１０個の炭素原子を含有するポリオール、ゲル化剤、界面活性剤、塗膜形成ポリマー、染料、香料、充填剤、紫外線遮断剤、植物抽出物、化粧用及び皮膚用活性薬剤、及び塩から選択される少なくとも１つのさらなる成分を含み得る。
【００４０】
本発明に係る組成物は、水性相を含み得る。
【００４１】
本組成物は、組成物の総質量に対して５質量％〜９０質量％の範囲、好ましくは、３５質量％〜７５質量％の範囲の含量で存在し得る水を含み得る。
【００４２】
本組成物は、特に、グリセロール、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、ヘキシレングリコール、ジプロピレングリコール、ジエチレングリコール又はジグリセロールなどの、特に２〜１０個の炭素原子を含有する、好ましくは、２〜６個の炭素原子を含有するポリオールから選択される、室温（２５℃）で水混和性のポリオールも含み得る。
【００４３】
本発明に係る組成物は、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルション、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルション又は多重エマルション（トリプル：Ｗ／Ｏ／Ｗ又はＯ／Ｗ／Ｏ）、油性溶液、油性ゲル、水溶液、水性ゲル、固体組成物の形態であり得る。これらの組成物は、通常の方法にしたがって調製される。
【００４４】
本発明に係る組成物は、程度の差はあるが流体であり得、白色若しくは有色のクリーム、軟膏、乳液、ローション、セラム、ペースト又はフォームの外観を有し得る。それらは、任意選択的に、エアロゾル形態で皮膚に適用され得る。それらはまた、固体形態、例えば、スティック又はコンパクトパウダーの形態であり得る。
【００４５】
本発明に係る組成物は、特に以下の形態であり得る：
−特に、顔、身体の皮膚、又は唇若しくはまつげをメイクアップするためのメイクアップ製品；
−アフターシェーブジェル又はローション；シェービング製品；
−デオドラント（スティック、ロールオン又はエアロゾル）；
−脱毛クリーム；
−シャワージェル又はシャンプーなどの身体衛生組成物；
−医薬組成物；
−石鹸又はクレンジングバーなどの固体組成物；
−加圧噴射剤も含むエアロゾル組成物；
−ヘアセット用ローション、ヘアスタイリング用クリーム若しくはジェル、染料組成物、パーマネントウェーブ用組成物、抜け毛を防ぐためのローション若しくはジェル、又はヘアコンディショナー；
−皮膚をケア又はクレンジングするための組成物。
【００４６】
本発明の主題はまた、組成物、特に、化粧用又は皮膚用組成物を調製するための方法であって、４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン、前記さらなる化合物、及び１つ以上のさらなる成分、特に、上述されるものなどの化粧用又は皮膚用成分を混合する工程を含む方法である。
【００４７】
本発明は、以下に続く実施例においてより詳細に例示される。成分の量は、質量パーセンテージとして表される。
【実施例】
【００４８】
実施例１：ＭＩＣとしての相乗的抗菌活性の決定
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン（物質Ａと呼ばれる）とさらなる化合物（物質Ｂと呼ばれる）との混合物、及び４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン（物質Ａと呼ばれる）とクロルヘキシジン塩酸塩（物質Ｃと呼ばれる）との混合物による相乗的抗菌活性効果の実証が、下式にしたがって相乗効果指数（又はＦＩＣ指数）を計算することによって行われる：
ＦＩＣ指数＝（Ｂと合わせたＭＩＣａ／ＭＩＣａ）＋（Ａと合わせたＭＩＣｂ／ＭＩＣｂ）
ここで：
−Ｂと合わせたＭＩＣａ：阻害効果を得ることを可能にする組合せＡ＋Ｂにおける生成物Ａの最小濃度
−Ａと合わせたＭＩＣｂ：阻害効果を得ることを可能にする組合せＡ＋Ｂにおける生成物Ｂの最小濃度。
−ＭＩＣａ：生成物Ａ単独の最小発育阻止濃度。
−ＭＩＣｂ：生成物Ｂ単独の最小発育阻止濃度。
【００４９】
この式は、Ｆ．Ｃ．Ｋｕｌｌ、Ｐ．Ｃ．Ｅｉｓｍａｎ、Ｈ．Ｄ．Ｓｙｌｗｅｓｔｒｏｗｋａ、及びＲ．Ｌ．Ｍａｙｅｒによる論文、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ９：５３８−５４１，１９６１において初めて記載された。
【００５０】
試験される各化合物単独では、ＭＩＣは、２５％以下の微生物増殖パーセンテージを得ることを可能にする最初の濃度と見なされる。
【００５１】
試験される組合せに関しては、ｂと合わせたＭＩＣａ及びａと合わせたＭＩＣｂは、２５％以下の微生物増殖パーセンテージを得ることを可能にする組合せにおけるＡ及びＢのそれぞれの濃度である。
【００５２】
ＦＩＣ指数の解釈：
ＦＩＣ指数値が、１以下である場合、試験化合物の組合せが相乗効果を有するものと見なされる。
【００５３】
得られた結果が、以下の表に示されている。
【００５４】
化合物Ａ及びＢの組合せを、以下の菌株：アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）及びカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）について試験した。
【００５５】
微生物菌株アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）ＡＴＣＣ  ６２７５、並びにポリオキシエチレン化（２０  ＯＥ）ソルビタンモノパルミテート（Ｃｒｏｄａ製のＴｗｅｅｎ  ４０）及びＰｈｙｔａｇｅｌ（著作権）ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔを補充した２倍濃度サブローブロス液体培養培地を使用した。
【００５６】
微生物菌株カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）ＡＴＣＣ  １０２３１及び２倍濃度サブローブロス液体培養培地を使用した（すなわち、５ｇのＰｈｙｔａｇｅｌ＋０．６ｇのＴｗｅｅｎ  ４０＋６０ｇのサブローブロスの混合物）。
【００５７】
９６ウェルマイクロプレート及び３２．５℃のインキュベーション温度を使用する。
【００５８】
マイクロプレートのインキュベーション時間は、以下のとおりである：
−アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）については好気的に２４時間〜４８時間；
−カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）については好気的に１８時間〜２４時間。
【００５９】
試験
各化合物について：
Ａ＝４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン化合物
Ｂ＝特に以下を含むさらなる化合物：
Ｂ１＝ジグルコン酸クロルヘキシジン化合物（２０％の活性材料を含有する水溶液として）
Ｂ２＝クロルヘキシジン塩酸塩化合物
１０％（質量／体積）のストック溶液を、１ｇの化合物を９ｍｌの水性１％ｏ寒天溶液中で混合することによって調製した。連続希釈を、１％ｏ寒天溶液を用いて行った。
【００６０】
・化合物Ａ、Ｂ１及びＢ２単独の試験
化合物Ａ又はＢ１又はＢ２を含有する得られた娘溶液のそれぞれ５０μｌを、マイクロプレートウェルに加える。菌株アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）を接種した１００μｌのサブロー液体栄養ブロス及び５０μｌの水性１％ｏ寒天溶液もそれに加える。
【００６１】
・混合物としての化合物Ａ＋Ｂ１又はＡ＋Ｂ２の試験
化合物Ａを含有する得られた娘溶液のそれぞれ５０μｌ及び化合物Ｂ１又はＢ２を含有する得られた娘溶液のそれぞれ５０μｌを、マイクロプレートウェルに加える。菌株アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）を２倍濃度で接種した１００μｌのサブロー液体栄養ブロスもそれに加える。
【００６２】
微生物増殖対照
陽性微生物増殖対照も調製した。陽性微生物増殖対照は、化合物Ａ、Ｂ１及びＢ２の非存在下での、１００μｌの水性１％ｏ寒天溶液と、菌株アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）を２倍濃度で播種した１００μｌのサブロー液体栄養ブロスとの混合物に相当する。
【００６３】
化合物Ａ、Ｂ１及びＢ２単独の吸光度対照
並行して、吸光度対照を、化合物Ａ、Ｂ１及びＢ２単独について行った。この対照は、１００μｌの２倍濃度滅菌サブロー液体栄養ブロス＋１００μｌの２倍濃度化合物Ａ、Ｂ１又はＢ２に相当する。
【００６４】
３つの場合（吸光度対照、増殖対照及び試験）において、マイクロプレートウェルのそれぞれに存在する最終体積は、２００μｌである。
【００６５】
２つの場合（試験及び対照）において、接種材料は、ウェルの最終体積（２００μｌ）で存在する菌株アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）の濃度を示し、２〜６×１０５ｃｆｕ／ｍｌのアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）である。
【００６６】
各化合物Ａ、Ｂ１及びＢ２単独並びに組合せの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を、６２０ｎｍの波長での光学密度測定によって決定した。
【００６７】
上述される試験（試験、吸光度対照及び増殖対照）を、菌株カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）について組合せＡ＋Ｂ１及びＡ＋Ｂ２を試験するために再度行った。
【００６８】
以下の結果が得られた：（活性材料の質量パーセンテージ）
【００６９】
Ａ）化合物Ｂ１：ジグルコン酸クロルヘキシジンとの混合物
【００７０】
【表１】
2020525485.tif 000003
【００７１】
得られた結果は、混合物について相乗的阻害活性を示す：
ｉ）０．０２５％のＡ及び０．０００５％のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝５０
ｉｉ）０．０５％のＡ及び０．０００５％のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝１００
【００７２】
【表２】
2020525485.tif 000004
【００７３】
得られた結果は、混合物について相乗的阻害活性を示す：
ｉ）０．０６２５％のＡ及び０．００５のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝１２．５
ｉｉ）０．１２５％のＡ及び０．００５のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝２５
ｉｉｉ）０．０６２５％のＡ及び０．００２５％のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝２５
ｉｖ）０．１２５％のＡ及び０．００２５％のＢ１、すなわち、比率Ａ／Ｂ１＝５０
【００７４】
Ｂ）化合物Ｂ２：クロルヘキシジン塩酸塩との混合物
【００７５】
【表３】
2020525485.tif 000005
【００７６】
得られた結果は、混合物について相乗的阻害活性を示す：
ｉ）０．０５％のＡ及び０．０００５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝１００
ｉｉ）０．１％のＡ及び０．０００５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝２００
【００７７】
【表４】
2020525485.tif 000006
【００７８】
得られた結果は、混合物について相乗的阻害活性を示す：
ｉ）０．０２５％のＡ及び０．０１％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝２．５
ｉｉ）０．０５％のＡ及び０．０１％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝５
ｉｉｉ）０．１％のＡ及び０．０１％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝１０
ｉｖ）０．２％のＡ及び０．０１％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝２０
ｖ）０．０２５％のＡ及び０．０５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝５
ｖｉ）０．０５％のＡ及び０．０５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝１０
ｖｉｉ）０．１％のＡ及び０．０５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝２０
ｖｉｉｉ）０．２％のＡ及び０．０５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝４０
ｉｘ）０．０２５％のＡ及び０．００２５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝１０
ｘ）０．０５％のＡ及び０．００２５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝２０
ｘｉ）０．１％のＡ及び０．００２５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝４０
ｘｉｉ）０．２％のＡ及び０．００２５％のＢ２、すなわち、比率Ａ／Ｂ２＝８０
【００７９】
実施例２：ＭＩＣとしての相乗的抗菌活性の決定
４−（３−エトキシ−４−ヒドロキシフェニル）ブタン−２−オン（物質Ａと呼ばれる）とポリヘキサメチレンビグアニド塩酸塩（物質Ｂ３と呼ばれる）との混合物による相乗的抗菌活性効果の実証が、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）菌株を用いて、実施例１に記載されるプロトコルにしたがって行われる。
【００８０】
以下の結果が得られた：
【００８１】
【表５】
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【００８２】
得られた結果は、混合物について相乗的阻害活性を示す：
ｉ）０．０６２５％のＡ及び０．００２５％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝２５
ｉｉ）０．１２５％のＡ及び０．００２５％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝５０
ｉｉｉ）０．０６２５％のＡ及び０．００５％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝１２．５
ｉｖ）０．１２５％のＡ及び０．００５％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝２５
ｖ）０．０６２５％のＡ及び０．０１％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝６．２５
ｖｉ）０．１２５％のＡ及び０．０１％のＢ３、すなわち、比率Ａ／Ｂ３＝１２．５
【国際調査報告】
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