(57)【要約】  本発明は、豆タンパク質材料を処理する方法であって、豆タンパク質材料の加水分解を引き起こすステップと、任意選択でｐＨを調節するステップと、次いで分離させて可溶性画分を形成するステップと、可溶性画分を処理して、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物と、固体残渣とを生成するステップと、固体残渣を処理して、基質豆タンパク質材料と比較して改善されている、改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成するステップとを含む方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
豆タンパク質材料を処理する方法であって、豆タンパク質材料の加水分解を引き起こすステップと、任意選択でｐＨを調節するステップと、次いで分離させて可溶性画分を形成するステップと、可溶性画分を処理して、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物と、固体残渣とを生成するステップと、固体残渣を処理して、基質豆タンパク質材料と比較して改善されている、改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成するステップとを含む方法。
【請求項２】
豆タンパク質材料が、乾燥重量基準（ｄ．ｂ．）で少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量、および水溶液中で約６．０〜約８．０の自然ｐＨを有する中性乾燥粉末である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
中性乾燥粉末を再水和させてタンパク質溶液を生成し、タンパク質溶液を任意選択で約６．０〜約８．０の範囲内にｐＨ調節し、タンパク質溶液をタンパク質分解酵素で処理して豆タンパク質材料の加水分解を引き起こし、酵素処理された豆タンパク質を熱処理して酵素を不活性化し、得られた溶液のｐＨを酸性ｐＨ値に調節し、酸性化された溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、乾燥重量基準（ｄ．ｂ．）で少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成し、または、代替的に、酸性化ステップの後および遠心分離ステップの前に、熱処理ステップを行う、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
遠心分離物から分離された残留固体を、乾燥により処理し、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質材料と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
遠心分離物から分離された残留固体を約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、次いで乾燥させ、または、残留固体を、乾燥ステップの前に洗浄し、次いで約６．０〜約８．０のｐＨにｐＨ調節し、または、残留固体を、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和し、次いで遠心分離により固体を回収し、乾燥させ、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
中性乾燥粉末豆タンパク質生成物を再水和させて豆タンパク質溶液を調製し、タンパク質溶液を任意選択で約６．０〜約８．０の範囲内にｐＨ調節し、タンパク質溶液をタンパク質分解酵素で処理し、酵素処理された豆タンパク質生成物を加熱して酵素を不活性化し、得られた溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
遠心分離物から分離された残留固体を直接乾燥させ、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
豆タンパク質材料が、少なくとも約６０ｗｔ％ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および水溶液中で約１．５〜約４．０の自然ｐＨを有する低ｐＨ乾燥粉末である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
低ｐＨ乾燥粉末を際水和させてタンパク質溶液を生成し、タンパク質溶液を約６．０〜約８．０の範囲にｐＨ調節し、タンパク質溶液をタンパク質分解酵素で処理して豆タンパク質溶液の加水分解を引き起こし、酵素処理された豆タンパク質を熱処理して酵素を不活性化し、得られた溶液のｐＨを酸性ｐＨ値に調節し、酸性化された溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成し、または、代替的に、酸性化ステップの後および遠心分離ステップの前に、熱処理ステップを行う、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
遠心分離物から分離された残留固体を、乾燥により処理し、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質材料と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
遠心分離物から分離された残留固体を、約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、次いで乾燥させ、または、残留固体を、乾燥ステップの前に洗浄し、次いで約６．０〜約８．０のｐＨにｐＨ調節し、または、残留固体を、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和し、次いで遠心分離により固体を回収し、乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
低ｐＨ乾燥粉末を再水和してタンパク質溶液を生成し、タンパク質溶液を約６．０〜約８．０の範囲にｐＨ調節し、タンパク質溶液をタンパク質分解酵素で処理して豆タンパク質溶液の加水分解を引き起こし、酵素処理された豆タンパク質を熱処理して酵素を不活性化し、熱処理された溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
遠心分離物から分離された残留固体を、直接乾燥させ、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
低ｐＨ乾燥粉末を再水和して豆タンパク質溶液を調製し、タンパク質溶液を任意選択で約１．５〜約４．０の範囲内にｐＨ調節し、タンパク質溶液をタンパク質分解酵素で処理し、酵素処理された豆タンパク質生成物を加熱して酵素を不活性化し、得られた溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
遠心分離物から分離された残留固体を、直接乾燥させ、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
遠心分離物から分離された残留固体を、約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、次いで乾燥させ、または、残留固体を、乾燥ステップの前に洗浄し、次いで約６．０〜約８．０のｐＨにｐＨ調節し、または、残留固体を、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和し、次いで遠心分離により固体を回収し、乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
豆タンパク質材料が、豆８１０Ａまたは豆８１０Ｎである、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
豆タンパク質材料が、豆タンパク質源を水で抽出して豆タンパク質水溶液を形成し、残留豆タンパク質源から豆タンパク質水溶液を少なくとも部分的に分離し、豆タンパク質水溶液のｐＨを約１．５〜約３．４のｐＨに調節して、タンパク質のバルクを可溶化して酸性化豆タンパク質溶液を形成し、酸不溶性固体材料から酸性化豆タンパク質溶液を分離し、任意選択で濃縮し、ダイアフィルトレーションし、酸性化豆タンパク質溶液を希釈することにより形成される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
任意選択で希釈された豆タンパク質溶液を約６．０〜約８．０のｐＨに調節し、次いでタンパク質分解酵素で処理して豆タンパク質材料の加水分解を引き起こし、酵素処理された豆タンパク質溶液を熱処理して酵素を不活性化し、得られた溶液のｐＨを酸性ｐＨ値に調節し、酸性化された溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、乾燥重量基準（ｄ．ｂ．）で少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成し、または、代替的に、酸性化ステップの後および遠心分離ステップの前に、熱処理ステップを行う、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
遠心分離物から分離された残留固体を、乾燥により処理し、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
遠心分離物から分離された残留固体を、約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、次いで乾燥させ、または、残留固体を、乾燥ステップの前に洗浄し、次いで約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、または、残留固体を、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和し、次いで遠心分離により固体を回収し、乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
任意選択で希釈された豆タンパク質溶液を約６．０〜約８．０のｐＨに調節し、次いでタンパク質分解酵素で処理して豆タンパク質材料の加水分解を引き起こし、酵素処理された豆タンパク質溶液を加熱して酵素を不活性化し、得られた溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する酸可溶性低渋味豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
遠心分離物から分離された残留固体を、直接乾燥させ、または洗浄し次いで乾燥させて、約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
任意選択で希釈されたタンパク質溶液を、初期低ｐＨ値で、または任意選択で約１．５〜約４．０の範囲にｐＨ調節した後に、タンパク質分解酵素での処理により処理し、酵素処理された豆タンパク質溶液を加熱して酵素を不活性化し、得られた溶液を遠心分離して残留固体から可溶性画分（遠心分離物）を分離し、遠心分離物を膜濾過システムで濃縮および任意選択でダイアフィルトレーションして遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減し、保持液を乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
遠心分離物から分離された残留固体を、直接乾燥させ、または洗浄し次いで乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
遠心分離物から分離された残留固体を、約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、次いで乾燥させ、または、残留固体を、乾燥ステップの前に洗浄し、次いで約６．０〜約８．０にｐＨ調節し、または、残留固体を、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和し、次いで遠心分離により固体を回収し、乾燥させて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量、および基質豆タンパク質源と比較して改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない、豆タンパク質加水分解物。
【請求項２８】
約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で約６〜約８の自然ｐＨを有する、市販の乾燥粉末豆タンパク質生成物を原料とし、市販の乾燥粉末豆タンパク質生成物が、約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で約１．５〜約４．０の自然ｐＨを有し、豆８１０Ａまたは豆８１０Ｎである、請求項２７に記載の豆タンパク質加水分解物。
【請求項２９】
豆タンパク質加水分解物であって、加水分解物の原料となる基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する、豆タンパク質加水分解物。
【請求項３０】
約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で約６〜約８の自然ｐＨを有する、市販の乾燥粉末豆タンパク質生成物を原料とし、市販の乾燥粉末豆タンパク質生成物が、約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で約１．５〜約４．０の自然ｐＨを有し、豆８１０Ａまたは豆８１０Ｎである、請求項２９に記載の豆タンパク質加水分解物。
【請求項３１】
以下の分子量プロファイル：
１００，０００Ｄａ超  −  ０〜１４ｗｔ％
１５，０００〜１００，０００Ｄａ  −  ４〜３０ｗｔ％
５，０００〜１５，０００Ｄａ  −  ２０〜２９ｗｔ％
１，０００〜５，０００Ｄａ  −  ２７〜５４ｗｔ％
１，０００Ｄａ未満  −  ８〜２３ｗｔ％
を有する、豆タンパク質加水分解物。
【請求項３２】
豆タンパク質材料を処理する方法であって、豆タンパク質材料の加水分解を引き起こすステップと、任意選択でｐＨを調節するステップと、次いで分離させて可溶性画分を形成するステップと、可溶性画分を処理して、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するステップとを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
・関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年３月３日に出願された米国仮特許出願第62/466581号の３５ＵＳＣ１１９（ｅ）に基づく優先権を主張する。
【０００２】
・技術分野
本発明は、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全く有さない豆タンパク質（ｐｕｌｓｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）加水分解物を生成するための酵素加水分解の利用、およびより高いアミノ酸価を提供する変更されたアミノ酸プロファイルを有する豆タンパク質加水分解物に関する。
【背景技術】
【０００３】
・発明の背景
豆タンパク質を含有する酸性飲料の調製に、大きな商業的関心が持たれている。理想的には、豆タンパク質生成物は、溶液中にタンパク質を懸濁させるために安定剤が必要とされないように、飲料中に完全に可溶であるべきである。豆タンパク質はまた、商業的な飲料処理（例えば高温充填処理）を容易にするために、酸性飲料中で熱安定性であるべきである。溶液中の豆タンパク質生成物の透明度もまた望ましいが、これは、飲料の濁りレベルの設計において最大限の柔軟性が可能となるためである。すなわち、飲料は透明であってもよく、または適切なレベルの曇りを提供するために白濁剤が添加されてもよい。
【０００４】
本発明の譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年５月９日に出願された米国特許出願第13/103,528号（２０１１年１１月１０日に公開された米国特許出願公開第2011/0274797号）、２０１２年７月２４日に出願された米国特許出願第13/556,357号（２０１３年７月２５日に公開された米国特許出願公開第2013/00189408号）、２０１３年１月７日に出願された米国特許出願第13/642,003号（２０１３年５月２３日に公開された米国特許出願公開第2013/0129901号）、および２０１６年２月１１日に出願された米国特許出願第15/041,193号（２０１６年８月１１日に公開された米国特許出願公開第2016/0227833号（「ＹＰ７０１」））は、低ｐＨで水溶性であり、熱安定性溶液を生成する豆タンパク質生成物を説明しているが、その使用は、消費される際に口内に導入される渋味感覚によって制限される。渋味感覚は不快であり、酸性飲料中に配合され得るタンパク質生成物の量を不必要に制限する。
【０００５】
本発明の譲受人に譲渡され、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、２０１４年５月２９日に出願された米国特許出願第14/290,415号（２０１４年１２月４日に公開された米国特許出願公開第2014/0356510号）、名称「Production of Pulse Protein Product with Reduced Astringency」は、低ｐＨで水溶性であり、熱安定性溶液を生成し、消費された際の低減された渋味感覚を提供する豆タンパク質生成物の調製を可能にする沈殿および膜技術を説明している。しかしながら、そのような低渋味生成物は、低い収率で生成される。
【０００６】
豆（または他の）タンパク質を含有する酸性飲料の渋味は、口内で不溶となるタンパク質に関連すると考えられる。この不溶性の原因の１つの可能な説明は、唾液タンパク質が、酸性飲料中に溶解していたタンパク質に結合しそれを沈殿させ得ることである。別の理論は、タンパク質が難溶性となる口内ｐＨをもたらす酸性タンパク質溶液および唾液の組合せから、タンパク質の不溶性が生じ得ることである。タンパク質溶解度は、酵素を使用してタンパク質をより小さい単位に加水分解することにより増加され得ることが知られている。
【０００７】
タンパク質は、アミノ酸を含む。必須アミノ酸として知られるこれらのアミノ酸のいくつかは、人間の身体の要求量に見合うように合成することができず、したがって食事から獲得されなければならない。タンパク質品質への大きな寄与因子は、タンパク質中の必須アミノ酸の含量である。これらのアミノ酸のバイオアベイラビリティは、別の重要な因子である。タンパク質中の必須アミノ酸の含量は、アミノ酸価（ＡＡＳ）として知られる測定値の基礎を成すものである。アミノ酸価は、所与のタンパク質の必須アミノ酸含量を、必須アミノ酸の参照パターンと比較することにより評価される。各必須アミノ酸の含量（ｍｇ／ｇタンパク質）を、参照パターンにおける同じ必須アミノ酸の含量（ｍｇ／ｇタンパク質）で割る。最も制限的な必須アミノ酸に対して得られた最も低い最終的な値が、アミノ酸価（ＡＡＳ）とみなされる（Report of Joint FAO/WHO Expert Consultation(1991) Protein Quality Evaluation、FAO Food and Nutrition Paper 51;Schaarfsma, G. 2000. J. Nutr., 130:1865S）。参照パターンと同じ割合で全ての必須アミノ酸を供給するタンパク質は、１．０のアミノ酸価を有する。高いアミノ酸価を有するタンパク質が食品製造業者により評価される。従来、エンドウタンパク質のアミノ酸価は、硫黄含有アミノ酸の濃度により制限されていた。改善されたアミノ酸価を有するエンドウタンパク質生成物が、商業的に価値があるだローターンパク質のアミノ酸価はしばしばＰＤＣＡＡＳ値に考慮され、ＡＡＳは、バイオアベイラビリティを説明するためにタンパク質消化性因子により補正されることが留意されるべきである。本発明は、アミノ酸価にのみ関係している。
【発明の概要】
【０００８】
・発明の概要
本発明によれば、豆タンパク質が加水分解され、得られた溶液は、任意選択でｐＨ調節され、次いで可溶性画分および残留固体画分に分画される。可溶性画分は、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を提供するようにさらに処理される。加水分解処理の不溶性残渣は、基質タンパク質と比較して改善された、好ましくは１．０を超える、１．０である、または１．０に近いアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成するようにさらに処理される。「タンパク質加水分解物」という用語は、本明細書において、タンパク質加水分解ステップを含むプロセスの生成物を説明するために使用され、最終生成物中の加水分解の程度に関して暗示する意図はないことに留意されたい。
【０００９】
本発明の一態様によれば、豆タンパク質材料を処理する方法であって、豆タンパク質材料のタンパク質加水分解を引き起こすステップと、任意選択でｐＨを調節するステップと、次いで分離させて可溶性画分を形成するステップと、可溶性画分を処理して、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全く導入しない豆タンパク質加水分解物と、固体残渣とを生成するステップと、固体残渣を処理して、基質豆タンパク質材料と比較して改善されている、改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成するステップとを含む方法が提供される。
【００１０】
本発明の別の態様によれば、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全く導入しない、豆タンパク質加水分解物が提供される。
【００１１】
本発明のさらなる態様によれば、豆タンパク質加水分解物であって、加水分解物の原料となる基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する豆タンパク質加水分解物が提供される。
【００１２】
本発明のさらなる態様によれば、豆タンパク質材料を処理する方法であって、豆タンパク質材料のタンパク質加水分解を引き起こすステップと、任意選択でｐＨを調節するステップと、次いで分離を行って可溶性画分を形成するステップと、可溶性画分を処理して、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に完全に可溶であり、豆タンパク質加水分解物を含有する酸性飲料が消費された際に渋味をほとんどまたは全く導入しない豆タンパク質加水分解物を生成するステップとを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明のさらに別の態様によれば、以下の分子量プロファイル：
１００，０００Ｄａ超  −  ０〜１４ｗｔ％
１５，０００〜１００，０００Ｄａ  −  ４〜３０ｗｔ％
５０００〜１５，０００Ｄａ  −  ２０〜２９ｗｔ％
１，０００〜５，０００Ｄａ  −  ２７〜５４ｗｔ％
１，０００Ｄａ未満  −  ８〜２３ｗｔ％
を有する、豆タンパク質加水分解物が提供される。
【００１４】
当業者に知られているように、タンパク質加水分解物のタンパク質含量は、加水分解物中の窒素の含量に変換係数（一般に６．２５）を乗じることにより決定され得、乾燥重量基準でのパーセンテージとして表現され得る。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
・発明の概説
豆タンパク質基質のタンパク質加水分解と、酸性溶液中で渋味をほとんどまたは全く有さない第１の豆タンパク質加水分解物を生成するための加水分解物の可溶性部分のさらなる処理と、改善されたアミノ酸価を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成するための加水分解物の不溶性部分のさらなる処理とを含む手順の利用は、いくつかの豆タンパク質基質に対して行うことができる。
【００１６】
１）乾燥粉末（中性）からの出発  −  使用され得る乾燥粉末豆タンパク質生成物は、本発明の譲受人に譲渡され、参照により本明細書に組み込まれる、２０１５年７月２８日に出願された同時係属の米国特許出願第14/811,052号（２０１６年２月２５日に公開された米国特許出願公開第2016/0050956号）に記載の８１０Ｎ豆タンパク質生成物である。この生成物は、約６０ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で中性または中性付近である自然ｐＨ（約６．０〜約８．０のｐＨ）を有する。代替的に、約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で中性または中性付近である自然ｐＨ（約６．０〜約８．０のｐＨ）を有する乾燥粉末の市販の豆タンパク質生成物が使用され得る。
【００１７】
中性乾燥粉末生成物の処理のための手順は、タンパク質溶液を生成するためのタンパク質粉末の再水和と、約６．０〜約８．０の範囲内の溶液ｐＨの任意選択の調節と、タンパク質分解酵素によるタンパク質溶液の処理と、酵素を不活性化するための酵素処理された材料の熱処理と、得られた溶液のｐＨの、約ｐＨ２〜約ｐＨ４等の酸性値への調節と、残留固体から遠心分離物（ｃｅｎｔｒａｔｅ）（可溶性画分）を分離するための遠心分離と、遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減するための膜濾過システムでの遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーションと、乾燥重量基準で約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）の乾燥とを含む。この豆タンパク質加水分解物は、溶液中で酸性の自然ｐＨを有し、これは、酸性飲料生成物の形成を容易にする。代替的に、酸性化ステップの後であるが遠心分離ステップの前に、熱処理ステップが行われてもよい。
【００１８】
可溶性画分から分離された残留固体は、基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有し、第２の豆タンパク質加水分解物を生成するためにさらに処理され得る。酸性ｐＨを有する分離された残留固体は、直接乾燥され、または洗浄され次いで乾燥されて、約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成し得る。代替的に、残留固体は、約６．０〜約８．０にｐＨ調節され、次いで乾燥されてもよい。さらなる代替として、残留固体は、乾燥ステップの前に洗浄され、次いで約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよい。さらなる代替として、固体は、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和され、次いで遠心分離により固体が回収され、固体が乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００１９】
中性乾燥粉末豆タンパク質生成物の出発材料はまた、酸性化ステップなしで処理されてもよい。そのような手順は、タンパク質溶液を生成するためのタンパク質粉末の再水和と、約６．０〜約８．０の範囲内の溶液ｐＨの任意選択の調節と、タンパク質分解酵素によるタンパク質溶液の処理と、酵素を不活性化するための酵素処理された材料の熱処理と、残留固体から遠心分離物（可溶性画分）を分離するための遠心分離と、遠心分離物中の塩および／または他の不純物の含量を低減するための膜濾過システムでの遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーションと、乾燥重量基準で約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液の乾燥とを含む。
【００２０】
遠心分離物から分離された残留固体は、基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有し、直接乾燥され、または洗浄され次いで乾燥されて、約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有する第２の豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００２１】
２）乾燥粉末（低ｐＨ）からの出発  −  使用され得る乾燥粉末豆タンパク質生成物は、上述の米国特許出願第14/811,052号に記載の８１０Ａ豆タンパク質生成物である。この生成物は、約６０ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で低い自然ｐＨ（約１．５〜約４．０のｐＨ）を有する。代替的に、約６５ｗｔ％ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量、および溶液中で低い自然ｐＨ（約１．５〜約４．０のｐＨ）を有する乾燥した市販の豆タンパク質生成物が使用され得る。
【００２２】
低ｐＨ乾燥粉末豆タンパク質生成物の処理のための１つの手順は、タンパク質溶液を形成するためのタンパク質粉末の最初の再水和と、タンパク質溶液のｐＨの中性範囲（約６．０〜約８．０のｐＨ）への調節とを含む。これらのステップに続いて、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物から調製された溶液に対する上述のステップ、すなわち、タンパク質分解酵素による処理、酵素を不活性化するための熱処理（代替的に、熱処理は酸性化の後に行われてもよい）、約ｐＨ２〜約ｐＨ４等の酸性値へのｐＨの調節、固体／液体分離を引き起こすための遠心分離、遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーション、ならびに少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液の乾燥、または代替的に、酸性化ステップなしでの同様の処理のいずれかが行われる。酸性化ステップが使用される場合、得られた豆タンパク質加水分解物は、溶液中で酸性の自然ｐＨを有し、これは、酸性飲料生成物の形成を容易にする。中性乾燥粉末が出発材料である場合のように、基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する残留固体は、第２の豆タンパク質加水分解物を形成するためにさらに処理され得る。残留固体は、直接乾燥され、または洗浄され次いで乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成し得る。酸性化ステップを有するプロセスが使用される場合、残留固体は、約６．０〜約８．０にｐＨ調節され、次いで乾燥されてもよい。酸性化ステップを使用するプロセスのさらなる代替として、洗浄固体は、洗浄ステップの後および乾燥ステップの前に、約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよい。酸性化ステップを使用するプロセスのさらなる代替として、固体は、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和され、次いで遠心分離により固体が回収され、固体が乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００２３】
中性ｐＨ範囲で酵素処理を行う代替として、低ｐＨタンパク質粉末は、タンパク質溶液を形成するために再水和され、次いでタンパク質溶液のｐＨ調節なしで、または約１．５〜約４．０の範囲内の任意選択の溶液ｐＨの調節後にタンパク質分解酵素処理が施されてもよい。酵素処理に続いて、酵素を不活性化するための熱処理、固体／液体分離を引き起こすための遠心分離、遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーション、ならびに少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液の乾燥が行われる。この豆タンパク質加水分解物は、溶液中で酸性の自然ｐＨを有し、これは、酸性飲料生成物の形成を容易にする。基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する残留固体は、第２の豆タンパク質加水分解物を形成するようにさらに処理され得る。酸性ｐＨを有する残留固体は、直接乾燥され、または洗浄され次いで乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成し得る。代替的に、残留固体は、約６．０〜約８．０にｐＨ調節され、次いで乾燥されてもよい。さらなる代替として、洗浄固体は、洗浄ステップの後および乾燥ステップの前に、約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよい。さらなる代替として、固体は、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和され、次いで遠心分離により固体が回収され、固体が乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００２４】
３）豆８１０プロセスにおける酵素処理  −  豆８１０プロセスは、低ｐＨタンパク質溶液の膜処理を含み、低ｐＨタンパク質溶液は乾燥されて８１０Ａを形成し得るか、または中和および乾燥されて８１０Ｎを形成し得る。
【００２５】
豆８１０プロセスにおける酵素処理のための手順は、上述の豆８１０の米国特許出願に記載の手順に続く任意選択の希釈ステップによる、部分的または完全に濃縮された酸性タンパク質溶液の調製を含む。任意選択で希釈されたタンパク質溶液は、約６．０〜約８．０のｐＨに調節され、次いで酵素加水分解されてもよく、または、酵素加水分解は、初期低ｐＨ値で、もしくは任意選択で約１．５〜約４．０の範囲内にｐＨ調節した後に行われてもよい。任意選択で希釈されたタンパク質溶液が約６．０〜約８．０にｐＨ調節される場合、ｐＨ調節ステップに続いて、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物から調製されたタンパク質溶液、または上述の低ｐＨ乾燥粉末豆タンパク質生成物の中和溶液を処理するために利用されるステップ、すなわちタンパク質分解酵素による処理、酵素を不活性化するための熱処理（代替的に、熱処理はｐＨ調節の後に行われてもよい）、約ｐＨ２〜約ｐＨ４等の酸性値へのｐＨ調節、固体／液体分離を引き起こすための遠心分離、膜濾過システムでの遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーション、ならびに少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液の乾燥、または代替的に、酸性化ステップなしでの同様の処理が行われる。酸性化ステップが使用される場合、得られた豆タンパク質加水分解物は、溶液中で酸性の自然ｐＨを有し、これは、酸性飲料生成物の形成を容易にする。上述の手順と同様に、基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する残留固体は、例えば直接乾燥させて、または洗浄し次いで乾燥させて、約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成することにより、さらに処理されてもよい。酸性化ステップを有するプロセスが使用される場合、固体は、乾燥ステップの前に約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよく、または乾燥ステップの前に洗浄され、次いで約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよい。酸性化ステップを使用するプロセスのさらなる代替として、固体は、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和され、次いで遠心分離により固体が回収され、固体が乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００２６】
８１０プロセスから得られる任意選択で希釈されたタンパク質溶液が、約６．０〜約８．０の範囲への初期ｐＨ調節なしで処理される場合、酸性タンパク質溶液は、後続の中和ステップなしで低ｐＨ乾燥粉末豆タンパク質生成物から調製されたタンパク質溶液に対する上述のステップにより、すなわち、約１．５〜約４．０の範囲内の任意選択の溶液ｐＨの調節、タンパク質分解酵素による処理、酵素を不活性化するための熱処理、固体／液体分離を引き起こすための遠心分離、膜濾過システムでの遠心分離物の濃縮および任意選択のダイアフィルトレーション、ならびに少なくとも６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有し、酸可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味をほとんどまたは全くもたらさない豆タンパク質加水分解物を生成するための保持液の乾燥により処理される。この豆タンパク質加水分解物は、溶液中で酸性の自然ｐＨを有し、これは、酸性飲料生成物の形成を容易にする。基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する残留固体は、例えば直接乾燥させて、または洗浄し次いで乾燥させて、約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．を超えるタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成することにより、さらに処理されてもよい。代替的に、固体は、乾燥ステップの前に約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよく、または、乾燥ステップの前に洗浄され、次いで約６．０〜約８．０にｐＨ調節されてもよい。さらなる代替として、固体は、固体および洗浄水の混合物を食品グレードのアルカリ溶液を使用して約６．０〜約８．０のｐＨに調節することにより、洗浄ステップ中に中和され、次いで遠心分離により固体が回収され、固体が乾燥されて、少なくとも約６０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物を生成してもよい。
【００２７】
４）市販の生成物における乾燥機供給物への酵素処理。
【００２８】
手順１）および２）において、市販の豆タンパク質生成物の再水和およびそれらの酵素処理が議論されている。乾燥前の材料に酵素処理を行うことがより実用的であり、したがって、本発明は、上記１）または２）に記載の手順に従う乾燥機供給物の処理を含むが、但しタンパク質生成物を再水和することは必要ない。
【００２９】
上記手順から生じる豆タンパク質加水分解物の１つのクラスは、約２〜約７のｐＨ範囲にわたり実質的に可溶性であり、酸性溶液中で味わった際に渋味感覚をほとんどまたは全くもたらさない。本発明の生成物の酸性溶液は、好ましくは透明で熱安定性である。上記手順から生じる豆タンパク質加水分解物の第２のクラスは、基質タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する。タンパク質加水分解ステップ中にある程度の脆性が生じ得るが、理想的には、本発明の生成物は、ほとんどまたは全く脆性を有さない。異なるタンパク質分解酵素は、異なるｐＨ値で異なる活性を有する。本発明における使用のためのタンパク質分解酵素の選択は、加水分解のｐＨおよび最終生成物における脆性のレベル等の因子によって影響され得る。酵素処理の時間の長さもまた、最終生成物の特性に影響し得る。一般に、約３０分〜約６０分等の比較的短い処理時間が好ましい。
【実施例】
【００３０】
・実施例
実施例１
この例は、本発明の方法の一実施形態による、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物からの豆タンパク質加水分解物の調製を説明する。
【００３１】
３６ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．３４重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを３．０７に下げ、次いで溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。５１９Ｌの酸性化タンパク質溶液および７７．４４ｋｇの酸不溶性固体材料が回収された。
【００３２】
０．８２ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液を１．９２にｐＨ調節し、次いで、約５１℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、体積を５２０Ｌから７０Ｌに低減した。次いで、５．３２ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した６３０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１５０ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５１℃で行った。次いで、４．６４ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションしたタンパク質溶液を、８．１１ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。３４．５ｋｇの濃縮およびダイアフィルトレーションしたタンパク質溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。２８．３８ｋｇの低温殺菌されたタンパク質溶液を、１２．５ｗｔ％のＮａＯＨおよび１２．５ｗｔ％のＫＯＨを含有する溶液（これ以降ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液と称される）で７．１２にｐＨ調節し、次いで噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは９１．７５％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ２９−Ｅ０２−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎ−０２と称した。
【００３３】
３６ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．４０重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを３．００に下げ、次いで溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。５０８Ｌの酸性化タンパク質溶液および６９．３９ｋｇの酸不溶性固体材料が回収された。
【００３４】
１．０４ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液を２．０７にｐＨ調節し、次いで、約５０℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、体積を５１０Ｌから７０Ｌに低減した。次いで、６．２１ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した６３０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１４５ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５０℃で行った。次いで、５．７３ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、９．５０ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。３１．７ｋｇの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。低温殺菌された溶液を、３８．４４ｋｇに希釈した。１８ｋｇのこの溶液を、ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液で６．９３にｐＨ調節し、３ＬのＲＯ水で希釈し、次いで噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは９１．４２％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ２９−Ｅ０４−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎ−０２と称した。
【００３５】
１．６２５ｋｇのＹＰ２９−Ｅ０２−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎ−０２および０．６６７ｋｇのＹＰ２９−Ｅ０４−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎ−０２を、２０ＬのＲＯ水と混合して、２ｋｇの基質タンパク質を含有するタンパク質溶液を形成した。この溶液は、６．５９のｐＨを有していた。ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液を添加して、試料のｐＨを６．９５に上げた。次いで試料を約５０℃に温め、２０ｍｌのタンパク質分解酵素Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、１時間混合した。溶液を約９０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いで処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。この試料は、６．８９のｐＨおよび９．８７ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。次いで、等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、試料のｐＨを３．０２に下げた。酸性化された試料を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−３遠心分離機のＨＧ−４Ｌローター内でバッチ形式で６，０００ｒｐｍで９または１０分間遠心分離すると、１５．９４ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および５．０５ｋｇの残留固体が得られた。
【００３６】
１５．９Ｌの遠心分離物を同体積のｐＨ３  ＲＯ水と合わせ、試料を周囲温度で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ−２５４０ナノ濾過膜で元の体積まで濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに９回繰り返した。次いで、試料の体積を同じ膜での濃縮により５．４ｋｇに低減した。ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、９．６２ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。このタンパク質加水分解物溶液を、約７２℃で５分未満で低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、９４．３１（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ２９−Ｈ１１−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａと称した。
【００３７】
３ｋｇの残留固体を４倍体積のＲＯ水と混合し、次いでＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液により試料のｐＨを約７に上げた。次いで、試料を遠心分離すると、２．９５５ｋｇの洗浄固体が得られた。２．９５５ｋｇの洗浄固体を２．９５５ｋｇのＲＯ水と合わせ（噴霧乾燥を容易にするため）、次いで噴霧乾燥すると、９２．３１％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ２９−Ｈ１１−１６Ａ  ＹＰ８２０ＰＮと称した。
【００３８】
実施例２
この例は、本発明の方法の一実施形態による、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物からの豆タンパク質加水分解物の調製の別の例を説明する。
【００３９】
３６ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．７２重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを約３のｐＨに下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。４７４．８Ｌの酸性化タンパク質溶液および８５．８５ｋｇの酸不溶性固体材料が回収された。
【００４０】
１．６６ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化されたタンパク質溶液を、２５Ｌの水で希釈し、次いで、０．８０μｍの分子量カットオフを有し、約５２℃で動作する精密濾過膜での濃縮により、体積を１４５Ｌに低減した。次いで、タンパク質溶液をさらに濃縮すると同時に、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節されたＲＯ水でダイアフィルトレーションしたが、濃縮およびダイアフィルトレーションは、約５２℃の温度で行った。１．２８ｗｔ％のタンパク質含量を有する全部で５８０Ｌの精密濾過透過物（清澄な酸性化されたタンパク質溶液）が回収された。約４７℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、この溶液の体積を１２５Ｌに低減した。次いで、５．１７ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した１１２５ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１２５ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５０℃で行った。次いで、４．５０ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、１０．０１ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。４７Ｌの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、約７４℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。５６．５６ｋｇの低温殺菌されたタンパク質溶液を、１３．２５ｋｇのＲＯ水および十分なＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液と合わせて、ｐＨを６．９４に調節し、次いで混合物を噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは９０．３７％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ３５−Ｇ１９−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎと称した。
【００４１】
２．３２２ｋｇのＹＰ３５−Ｇ１９−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎを２０ＬのＲＯ水と混合して、２ｋｇの基質タンパク質を含有するタンパク質溶液を形成した。この溶液は、６．８７のｐＨを有していた。試料を約５０℃に温め、５ｇのタンパク質分解酵素（Ｅｎｚｅｃｏ  Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、３０分間混合した。溶液を約８０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いで処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。この試料は、６．４７のｐＨおよび９．７９％のタンパク質含量を有していた。次いで、等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、試料のｐＨを１．９３に下げた。酸性化された試料を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−３遠心分離機のＨＧ−４Ｌローター内でバッチ形式で６，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離すると、１６．４６ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および４．５８ｋｇの残留固体が得られた。
【００４２】
１６．４６ｋｇの遠心分離物を２倍体積のｐＨ２  ＲＯ水と合わせ、試料を周囲温度で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ−２５４０ナノ濾過膜で元の体積まで濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに４回繰り返した。次いで、試料の体積を同じ膜での濃縮により８．９０ｋｇに低減した。ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、８．０１ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。このタンパク質加水分解物溶液を、約７３℃で２分未満で低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、９６．３３％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｉ１９−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａと称した。
【００４３】
１２６．５ｇの残留固体を５０６ｇのＲＯ水と混合し、次いでＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液により試料のｐＨを約７に上げた。試料を遠心分離し、１００．７０ｇの洗浄固体を凍結乾燥すると、８４．６９％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｉ１９−１６Ａ  ＹＰ８２０ＰＮと称した。
【００４４】
実施例３
この例は、本発明の方法の一実施形態による、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物からの豆タンパク質加水分解物の調製の別の例を説明する。
【００４５】
９６ｋｇの黄色エンドウタンパク質粉を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、３．９４重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを２．０５に下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。５２４Ｌの酸性化タンパク質溶液および８３．９８ｋｇの酸不溶性固体材料が回収された。
【００４６】
３．４６ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化されたタンパク質溶液の体積を、０．８０μｍの分子量カットオフを有し、約５４℃で動作する精密濾過膜での濃縮により、１９０Ｌに低減した。次いで、タンパク質溶液をさらに濃縮すると同時に、約５４℃でｐＨ２  ＲＯ水でダイアフィルトレーションした。２．０５ｗｔ％のタンパク質含量を有する全部で５２０Ｌの精密濾過透過物（清澄な酸性化されたタンパク質溶液）が回収された。約５０℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、この溶液の体積を１５０Ｌに低減した。次いで、５．２０ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した１３５０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１８０ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５１℃で行った。次いで、５．３０ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、９．６９ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。８０Ｌの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、２０Ｌの水で希釈し、次いで約７７℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。低温殺菌されたタンパク質溶液を、ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液でｐＨ６．９８に調節し、次いで噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは８９．３８％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ３４−Ｇ２７−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎと称した。
【００４７】
２．３２ｋｇのＹＰ３４−Ｇ２７−１６Ａ  ＹＰ８１０Ｎを２０ＬのＲＯ水と混合して、２ｋｇの基質タンパク質を含有するタンパク質溶液を形成した。この溶液は、６．７７のｐＨを有していた。ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液を添加して、試料のｐＨを７．０１に上げた。次いで、試料を約５０℃に温め、１０ＬのＲＯ水で希釈し、次いで１０ｍｌのタンパク質分解酵素（Ｌｉｑｕｉｐａｎｏｌ  Ｔ−２００、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、３０分間混合した。溶液を約８０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いで処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。この試料は、６．５７のｐＨおよび６．６１％のタンパク質含量を有していた。次いで、等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、試料のｐＨを１．９６に下げた。酸性化された試料を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−３遠心分離機のＨＧ−４Ｌローター内でバッチ形式で６，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離すると、２６．９４ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および４．８４ｋｇの残留固体が得られた。
【００４８】
２６．９４ｋｇの遠心分離物を２倍体積のｐＨ２  ＲＯ水と合わせ、試料を周囲温度で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ２５４０ナノ濾過膜で元の体積まで濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに４回繰り返した。次いで、試料の体積を同じ膜での濃縮により低減した。ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、７．３１ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。このタンパク質加水分解物溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、９５．７５％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３４−Ｉ２６−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａと称した。
【００４９】
１３９．７ｇの残留固体を５５９ｇのＲＯ水と混合し、次いでＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液により試料のｐＨを約７に上げた。試料を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−３遠心分離機のＨＧ−４Ｌローター内で６，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離すると、１１７ｇの洗浄固体が得られ、そのうち１００ｇを凍結乾燥すると、８０．３２％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３４−Ｉ２６−１６Ａ  ＹＰ８２０ＰＮと称した。
【００５０】
実施例４
この例は、本発明の方法の一実施形態による、米国特許出願第14/811,052号のプロセスに従って調製されたｐＨ調節濃縮タンパク質溶液からの豆タンパク質加水分解物の調製の例を説明する。
【００５１】
１８ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で３００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．８０重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを２．０３に下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。２４５Ｌの酸性化タンパク質溶液および未記録重量の酸不溶性固体材料が回収された。
【００５２】
約４４℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、酸性化タンパク質溶液の体積を９３Ｌに低減した。次いで、５．４１ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した８５５ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらなるＲＯ水（体積は記録されず）でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５１℃で行った。次いで、４．４８ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、１０．５２ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。
【００５３】
２３．８６ｋｇの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液でｐＨ７．２３に調節した。次いで試料を約５０℃に温め、２５ｇのタンパク質分解酵素（Ｆｌａｖｏｕｒｚｙｍｅ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、１時間混合した。溶液を約９０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いで処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。この試料は、７．１０のｐＨおよび１０．０３％のタンパク質含量を有していた。次いで、等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、試料のｐＨを３．１２に下げた。酸性化された試料を遠心分離すると、１３．３８ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および９．３６ｋｇの残留固体が得られた。
【００５４】
２．４９ｗｔ％のタンパク質含量を有する１３．３８ｋｇの遠心分離物を、ＨＣｌ溶液でｐＨ３に調節された２６．７６ｋｇのＲＯ水と合わせ、試料を周囲温度で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ−２５４０ナノ濾過膜で１３．３８ｋｇまで濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに４回繰り返した。次いで、試料の体積を同じ膜での濃縮により低減した。ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、２．８８ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。このタンパク質加水分解物溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、９１．１３％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｊ０６−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａと称した。
【００５５】
２００ｇの残留固体を８００ｇのＲＯ水と混合し、次いでＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液により試料のｐＨを約７に上げた。試料を遠心分離すると、２１６．０８ｇの洗浄固体が得られ、その一部を凍結乾燥すると、７７．７２％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｊ０６−１６Ａ  ＹＰ８２２ＰＮと称した。
【００５６】
実施例５
この例は、本発明の方法の一実施形態による、米国特許出願第14/811,052号のプロセスに従って調製されたｐＨ調節濃縮タンパク質溶液からの本発明の豆タンパク質加水分解物の調製を説明する。
【００５７】
１８ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で３００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．８５重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを２．０７に下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。２４０Ｌの酸性化タンパク質溶液および未記録重量の酸不溶性固体材料が回収された。
【００５８】
約４７℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、２．３７ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化タンパク質溶液の体積を１１０Ｌに低減した。次いで、４．９６ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した９９０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１１０ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５１℃で行った。次いで、４．６４ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液をさらに濃縮すると、７．７６ｗｔ％のタンパク質含量を有する５３．３６ｋｇの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液が得られた。
【００５９】
４０．１８ｋｇの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、ＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液でｐＨ７．０７に調節した。次いで、試料を約５０℃に温め、３．３５ｇのタンパク質分解酵素（Ｌｉｑｕｉｐａｎｏｌ  Ｔ−２００、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、３０分間混合した。溶液を約９０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いで処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。この試料は、６．７７のｐＨおよび８．０２ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。次いで、等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、試料のｐＨを２．９１に下げた。酸性化された試料を遠心分離すると、２８．２６ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および１１．２６ｋｇの残留固体が得られた。
【００６０】
３．２６ｗｔ％のタンパク質含量を有する２８．２６ｋｇの遠心分離物を６０ＬのｐＨ３  ＲＯ水と合わせ、試料を周囲温度で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ−２５４０ナノ濾過膜で元の体積まで濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに３回繰り返した。次いで、５０ＬのｐＨ３  ＲＯ水を添加し、試料を元の体積まで濃縮するさらなるバッチ式のダイアフィルトレーションステップを行った。次いで、試料の体積を同じ膜での濃縮により１０．４８ｋｇに低減した。ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、８．２６ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。このタンパク質加水分解物溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、１００．１４％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｊ１１−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａと称した。
【００６１】
１１．２６ｋｇの残留固体を４５．０２ｋｇのＲＯ水と混合し、次いでＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液により試料のｐＨを約７に上げた。試料をディスクスタック遠心分離機で遠心分離すると、１７．７５ｋｇの洗浄固体が得られた。これらの洗浄固体を５ＬのＲＯ水で希釈し、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。乾燥を容易にするために低温殺菌された試料を５ＬのＲＯ水で希釈し、次いで噴霧乾燥すると、８０．３３％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｊ１１−１６Ａ  ＹＰ８２２ＰＮと称した。
【００６２】
実施例６
この例は、本発明の方法の一実施形態による、米国特許出願第14/811,052号のプロセスに従って調製された酸性濃縮タンパク質溶液からの豆タンパク質加水分解物の調製を説明する。
【００６３】
３６ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．５４重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを２．０２に下げ、次いで溶液を約５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。２．１０のｐＨおよび２．３０ｗｔ％のタンパク質含量を有する５３５Ｌの酸性化タンパク質溶液が回収された。
【００６４】
約４８℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、酸性化タンパク質溶液の体積を１７０Ｌに低減した。次いで、５．９８ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した１５３０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに２７０ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５０℃で行った。次いで、５．６７ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、９．６８ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。８５Ｌの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。
【００６５】
５５．５ｋｇの低温殺菌、濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、３４．５ＬのＲＯ水と混合して、タンパク質溶液を形成した。この溶液は、２．９８のｐＨおよび４．７３ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。試料を約５０℃に温め、２２．５ｇのタンパク質分解酵素（Ｅｎｚｅｃｏ  Ｆｕｎｇａｌ  Ａｃｉｄ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、１時間混合した。溶液を約７０℃で１０分間熱処理することにより酵素を不活性化し、次いでそれを室温まで冷却した。熱処理された試料は、３．７０のｐＨおよび４．４６ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。次いで、この試料をディスクスタック遠心分離機で遠心分離すると、８４Ｌの遠心分離物（可溶性画分）および１８．５４ｋｇの残留固体が得られた。
【００６６】
８４Ｌの遠心分離物を、約２６℃で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃ  ＮＦ−２５４０ナノ濾過膜で１０．０４ｋｇまで濃縮した。濃縮されたタンパク質加水分解物溶液は、１３．６４％のタンパク質含量を有していた。濃縮されたタンパク質加水分解物溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、１０１．０８（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｌ０７−１６Ａ  ＹＰ８２３Ａと称した。
【００６７】
残留固体をＨＣｌ溶液でｐＨ３に調節した４０ＬのＲＯ水で洗浄し、次いでスラリーをディスクスタック遠心分離機で遠心分離して、２７．３ｋｇの洗浄固体を回収した。次いで、洗浄固体を６０ＬのＲＯ水および十分なＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液と合わせて、ｐＨを約７に調節した。このスラリーをディスクスタック遠心分離機で遠心分離すると、１９．２４ｋｇの中和された洗浄固体が得られた。これらの固体を約７２℃で３０秒間低温殺菌し、次いで噴霧乾燥すると、８１．１６％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３５−Ｌ０７−１６Ａ  ＹＰ８２３ＰＮと称した。
【００６８】
実施例７
この例は、例１〜６の方法により生成された豆タンパク質加水分解物の水に対する溶解度の評価を含む。溶解度は、タンパク質溶解度（タンパク質法と称される、Morrら、J. Food Sci. 50:1715-1718の手順の修正版）に基づいて試験した。
【００６９】
０．５ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質加水分解物粉末をビーカー内に量り入れ、次いで少量の逆浸透（ＲＯ）精製水を添加し、滑らかなペーストが形成されるまで混合物を撹拌した。次いで追加の水を添加し、体積を約４５ｍｌにした。次いで、磁気撹拌器を使用して、ビーカーの中身を６０分間ゆっくり撹拌した。タンパク質を分散させた直後にｐＨを決定し、希ＮａＯＨまたはＨＣｌで適切なレベル（２、３、４、５、６または７）まで調節した。また、自然ｐＨでも試料を調製した。ｐＨ調節試料の場合、６０分の撹拌の間、定期的にｐＨを測定および補正した。６０分の撹拌後、試料をＲＯ水で５０ｍｌの全体積とし、１％ｗ／ｖのタンパク質分散液を生成した。分散液のタンパク質含量を、Ｌｅｃｏ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ（Ｎ×６．２５）を使用した燃焼分析により測定した。次いで、分散液のアリコートを７，８００ｇで１０分間遠心分離すると、不溶性材料が沈降し、上澄みが得られた。上澄みのタンパク質含量を燃焼分析（Ｎ×６．２５）により測定し、生成物のタンパク質溶解度を以下のように計算した。
【００７０】
タンパク質溶解度（％）＝（上澄み中のタンパク質％／初期分散液中のタンパク質％）×１００
【００７１】
１００％を超える値として計算された値は、１００％として報告された。
【００７２】
水中の例１〜６の加水分解タンパク質生成物（１％タンパク質）の自然ｐＨ値を、表１に示す。
【表１】
2020508690.tif 000002
【００７３】
得られたタンパク質溶解度結果を、以下の表２に記載する。
【表２】
2020508690.tif 000003
【００７４】
表２に示される結果から分かるように、豆タンパク質加水分解物は、試験したｐＨ範囲にわたり高いタンパク質溶解度を有していた。
【００７５】
実施例８
この例は、２０１１年５月９日に出願された米国特許出願第13/103,528号（２０１１年１１月１０日に公開された米国特許出願公開第2011/0274797号）、２０１２年７月２４日に出願された米国特許出願第13/556,357号（２０１３年７月２５日に公開された米国特許出願公開第2013/00189408号）、２０１３年１月７日に出願された米国特許出願第13/642,003号（２０１３年５月２３日に公開された米国特許出願公開第2013/0129901号）、および２０１６年２月１１日に出願された米国特許出願第15/041,193号（２０１６年８月１１日に公開された米国特許出願公開第2016/0227833号（「ＹＰ７０１」））の手順に従う豆タンパク質単離物の生成を例示する。以前に言及されたように、この方法により調製された豆タンパク質単離物は、酸性溶液中で消費された際に口内に渋味感覚をもたらす。この例に従って調製された生成物を、例９〜１４、１８および１９に記載のように、渋味の官能評価に使用した。
【００７６】
３０ｋｇの黄色エンドウタンパク質濃縮物を、周囲温度で３００Ｌの０．１５Ｍ  ＣａＣｌ２溶液と合わせ、３０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。残留固体を遠心分離により除去し、２．６８重量％のタンパク質含量を有する遠心分離物を生成した。２６２Ｌの遠心分離物を２７４ＬのＲＯ水に添加し、試料のｐＨをＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）で２．８５に下げた。希釈および酸性化された遠心分離物を、濾過によりさらに清澄化すると、１．１５重量％のタンパク質含量および３．２３のｐＨを有する透明タンパク質溶液が得られた。
【００７７】
濾過されたタンパク質溶液を温め、次いで約４９℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、体積を６６２Ｌから５７Ｌに低減した。９．３３重量％のタンパク質含量を有する濃縮および酸性化されたタンパク質溶液を、２８５ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションしたが、ダイアフィルトレーション操作は約５２℃で行った。７．９１ｗｔ％のタンパク質含量を有する５０．２０ｋｇの酸性化、ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質溶液が得られた。次いで、酸性化、ダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質溶液を、約７６℃で１６秒間加熱し、次いで乾燥させると生成物が得られ、これは１０１．５０ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１と称した。
【００７８】
実施例９
この例は、例１に記載のように調製されたＹＰ２９−Ｈ１１−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００７９】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２０Ａ溶液のｐＨは、３．６２であった。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．５６であった。７名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００８０】
７名のパネリストのうち４名はＹＰ２９−Ｈ１１−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの方が渋味が低いことを示し、３名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【００８１】
実施例１０
この例は、例２に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｉ１９−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００８２】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２０Ａ溶液のｐＨは、２．８３であった。食品グレードのＨＣｌ溶液の添加により、ＹＰ７０１溶液のｐＨを３．４５から２．８７に下げた。７名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００８３】
７名のパネリストのうち５名はＹＰ３５−Ｉ１９−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの方が渋味が低いことを示し、２名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【００８４】
実施例１１
この例は、例３に記載のように調製されたＹＰ３４−Ｉ２６−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００８５】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２０Ａ溶液のｐＨは、３．０４であった。食品グレードのＨＣｌ溶液の添加により、ＹＰ７０１溶液のｐＨを３．６９から３．０８に下げた。６名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００８６】
６名のパネリストのうち５名はＹＰ３４−Ｉ２６−１６Ａ  ＹＰ８２０Ａの方が渋味が低いことを示し、１名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【００８７】
実施例１２
この例は、例４に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｊ０６−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００８８】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２２Ａ溶液のｐＨは、３．６３であった。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．６０であった。６名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００８９】
６名のパネリスト全員が、ＹＰ３５−Ｊ０６−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａの方が渋味が低いことを示した。
【００９０】
実施例１３
この例は、例５に記載のように調製されたＹＰ２９−Ｊ１１−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００９１】
官能評価のために、３ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１５０ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２２Ａ溶液のｐＨは、３．６８であった。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．６３であった。１０名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００９２】
１０名のパネリストのうち７名は、ＹＰ２９−Ｊ１１−１６Ａ  ＹＰ８２２Ａの方が渋味が低いことを示し、２名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示し、１名のパネリストは渋味レベルの違いを見出せなった。
【００９３】
実施例１４
この例は、例６に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｌ０７−１６Ａ  ＹＰ８２３Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【００９４】
官能評価のために、３ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１５０ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２３Ａ溶液のｐＨは、３．７５であった。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．６３であった。１０名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【００９５】
１０名のパネリストのうち８名はＹＰ３５−Ｌ０７−１６Ａ  ＹＰ８２３Ａの方が渋味が低いことを示し、２名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【００９６】
実施例１５
この例は、本発明の方法の一実施形態による、中性乾燥粉末豆タンパク質生成物からの豆タンパク質加水分解物の調製の別の例を説明する。
【００９７】
９６ｋｇの黄色エンドウ粉を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．８６重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを２．０４に下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。４７７．３Ｌの酸性化タンパク質溶液および未記録重量の酸不溶性固体材料が回収された。
【００９８】
２．４６ｗｔ％のタンパク質含量を有する酸性化されたタンパク質溶液の体積を、０．８０μｍの分子量カットオフを有し、約５１℃で動作する精密濾過膜での濃縮により、１３５Ｌに低減した。次いで、タンパク質溶液をさらに濃縮すると同時に、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節された１３５ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションしたが、濃縮およびダイアフィルトレーションは、約５２℃の温度で行った。１．８５ｗｔ％のタンパク質含量を有する全部で５７６Ｌの精密濾過透過物（清澄な酸性化されたタンパク質溶液）が回収された。約４８℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、この溶液の体積を１８０Ｌに低減した。次いで、５．３１ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した１６２０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに７５ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５３℃で行った。次いで、５．２３ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、９．０１ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。９０Ｌの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、約７３℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。９０ｋｇの低温殺菌されたタンパク質溶液を、２μｍソックフィルターを通して濾過された２０ｋｇのＲＯ水と合わせ、次いでｐＨを６．９６に調節するための十分なＮａＯＨ／ＫＯＨ溶液を添加し、混合物を噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは８７．７４％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ３６−Ｂ２８−１７Ａ  ＹＰ８１０Ｎと称した。
【００９９】
６．５６５ｋｇのＹＰ３６−Ｂ２８−１７Ａ  ＹＰ８１０Ｎを７０ＬのＲＯ水と５０℃で混合して、５．４２ｋｇの基質タンパク質を含有するタンパク質溶液を形成した。この溶液は、６．８４のｐＨを有していた。試料に、２５ｇのタンパク質分解酵素（Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｐ、Ａｍａｎｏ）を添加した。試料を約５０℃に保持し、６０分間混合した。溶液を６２℃〜７２℃の間で２０分間熱処理することにより、酵素を不活性化した。次いで、処理されたタンパク質溶液を室温まで冷却した。６．２９のｐＨおよび７．４９％のタンパク質含量を有する７６．１８ｋｇの試料が得られた。
【０１００】
酵素処理された材料の１９．５６ｋｇの分量を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ−３遠心分離機のＨＧ−４Ｌローター内で遠心分離すると、１４．５６ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および５ｋｇの残留固体が得られた。遠心分離物は、４．７５ｗｔ％のタンパク質含量を有していた。遠心分離物を約７３℃に１６秒間加熱することにより低温殺菌し、次いで冷却した。低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、９０．８１ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物が得られた。この生成物を、ＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８４０Ｎと称した。残留固体を凍結乾燥すると、８２．５９ｗｔ％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物が得られた。この生成物を、ＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８４０ＰＮと称した。
【０１０１】
等体積のＲＯ水と混合した濃ＨＣｌの溶液を使用して、酵素処理された材料の４６．４４ｋｇの分量のｐＨを２．９４に下げた。スラッジ排出遠心分離機（ｄｅｓｌｕｄｇｅｒ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）を使用して、酸性化された試料を遠心分離すると、４５．２４ｋｇの遠心分離物（可溶性画分）および１０．９０ｋｇの残留固体が得られた。４５．２４ｋｇの遠心分離物を、約２６℃で動作するＤｏｗ  Ｆｉｌｍｔｅｃナノ濾過膜で約１５Ｌまで濃縮した。ＨＣｌ溶液でｐＨ３に調節された３０ＬのＲＯ水を添加し、次いで試料を同じ膜で約１５Ｌまで再び濃縮した。このバッチ式のダイアフィルトレーションをさらに４回繰り返した。ダイアフィルトレーションの温度は、第１のダイアフィルトレーションステップの約２４℃から、最後のダイアフィルトレーションステップの約３４℃まで上昇した。６．２６ｗｔ％のタンパク質含量を有する１６．９６ｋｇのダイアフィルトレーションおよび濃縮されたタンパク質加水分解物溶液が得られた。このタンパク質溶液を、約７２℃で１６秒間低温殺菌した。次いで、低温殺菌された溶液を噴霧乾燥すると、１００．０１％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有するエンドウタンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８２０Ａと称した。６３４ｇの残留固体を凍結乾燥すると、７８．３３％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有する豆タンパク質加水分解物が得られた。生成物を、ＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８２０ＰＡと称した。
【０１０２】
実施例１６
この例は、本発明の方法の一実施形態による、酸性乾燥粉末豆タンパク質生成物からの豆タンパク質加水分解物の調製を説明する。
【０１０３】
９６ｋｇの黄色エンドウ粉を、周囲温度で６００Ｌの逆浸透精製水に添加し、１０分間撹拌して、タンパク質水溶液を生成した。デカンタ遠心分離機を使用した遠心分離によって懸濁固体の一部を除去し、２．８７重量％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を回収した。ＨＣｌ溶液（等体積の水で希釈した濃ＨＣｌ）の添加によりタンパク質溶液のｐＨを１．８９に下げ、溶液を５０℃に温め、１０分間保持し、次いでディスクスタック遠心分離機を使用して遠心分離した。４８２Ｌの酸性化タンパク質溶液および未記録重量の酸不溶性固体材料が回収された。
【０１０４】
約４９℃の温度で動作する１００，０００ダルトンの分子量カットオフを有するポリエーテルスルホン膜での濃縮により、２．４５ｗｔ％のタンパク質含量を有する４６２Ｌの酸性化タンパク質溶液の体積を１８０Ｌに低減した。次いで、５．６８ｗｔ％のタンパク質含量を有するタンパク質溶液を、ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節した１６２０ＬのＲＯ水で同じ膜でダイアフィルトレーションし、続いてさらに１８０ＬのＲＯ水でダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーション操作は、約５２℃で行った。次いで、５．２４ｗｔ％のタンパク質含量を有するダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、１０．２０ｗｔ％のタンパク質含量までさらに濃縮した。９０Ｌの濃縮およびダイアフィルトレーションされたタンパク質溶液を、約７３℃で１６秒間低温殺菌し、次いで冷却した。低温殺菌されたタンパク質溶液（９５Ｌ）を、約２０ＬのＲＯ水でさらに希釈し、次いで噴霧乾燥すると生成物が得られ、これは８９．５３％（Ｎ×６．２５）ｄ．ｂ．のタンパク質含量を有することが判明した。生成物を、ＹＰ３６−Ｉ１１−１７Ａ  ＹＰ８１０Ａと称した。
【０１０５】
５５．８ｇのＹＰ３６−Ｉ１１−１７Ａ  ＹＰ８１０ＡをＲＯ水と混合して、４８．１ｇの基質タンパク質を含有する１０００ｍｌのタンパク質溶液を調製した。２ＭのＮａＯＨの添加により、タンパク質溶液のｐＨを２．８３から３に上げ、次いで溶液の温度を約５０℃に上昇させた。０．２５ｇのＰｒｏｔｅａｓｅ  Ｍ（Ａｍａｎｏ）を試料に添加し、これを５０℃で６０分間混合した。次いで、試料を９０℃で１０分間加熱することにより、酵素を不活性化した。次いで、試料を室温まで冷却し、実験用遠心分離機を使用して７，０００ｇで１０分間遠心分離した。遠心分離物（可溶性画分）を廃棄した。残留固体を回収し、ＨＣｌ溶液でｐＨ３に調節された４倍体積のＲＯ水中に再懸濁させた。次いで、実験用遠心分離機を使用して試料を７，０００ｇで１０分間遠心分離し、遠心分離物を廃棄し、洗浄された残留固体を回収および凍結乾燥させた。８０．７９％（Ｎ×６．２５）ｗ．ｂ．のタンパク質含量を有する２３．４０ｇの凍結乾燥材料が回収された。生成物を、ベンチスケールＹＰ８２１ＰＡと称した。
【０１０６】
実施例１７
この例は、例１５の方法における可溶性画分から得られた豆タンパク質加水分解物の水に対する溶解度の評価を含む。溶解度は、タンパク質溶解度（タンパク質法と称される、Morrら、J. Food Sci. 50:1715-1718の手順の修正版）に基づいて試験した。
【０１０７】
０．５ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質加水分解物粉末をビーカー内に量り入れ、次いで少量の逆浸透（ＲＯ）精製水を添加し、滑らかなペーストが形成されるまで混合物を撹拌した。次いで追加の水を添加し、体積を約４５ｍｌにした。次いで、磁気撹拌器を使用して、ビーカーの中身を６０分間ゆっくり撹拌した。タンパク質を分散させた直後にｐＨを決定し、希ＮａＯＨまたはＨＣｌで適切なレベル（２、３、４、５、６または７）まで調節した。また、自然ｐＨでも試料を調製した。ｐＨ調節試料の場合、６０分の撹拌の間、定期的にｐＨを測定および補正した。６０分の撹拌後、試料をＲＯ水で５０ｍｌの全体積とし、１％ｗ／ｖのタンパク質分散液を生成した。分散液のタンパク質含量を、Ｌｅｃｏ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ（Ｎ×６．２５）を使用した燃焼分析により測定した。次いで、分散液のアリコートを７，８００ｇで１０分間遠心分離すると、不溶性材料が沈降し、上澄みが得られた。上澄みのタンパク質含量を燃焼分析（Ｎ×６．２５）により測定し、生成物のタンパク質溶解度を以下のように計算した。
【０１０８】
タンパク質溶解度（％）＝（上澄み中のタンパク質％／初期分散液中のタンパク質％）×１００
【０１０９】
１００％を超える値として計算された値は、１００％として報告された。
【０１１０】
水中の例１５の豆タンパク質加水分解物（１％タンパク質）の自然ｐＨ値を、表３に示す。
【表３】
2020508690.tif 000004
【０１１１】
得られたタンパク質溶解度結果を、以下の表４に記載する。
【表４】
2020508690.tif 000005
【０１１２】
表４に示される結果から分かるように、酵素加水分解タンパク質生成物は、試験したｐＨ範囲にわたり極めて可溶性であった。
【０１１３】
実施例１８
この例は、例１５に記載のように調製されたＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８４０Ｎの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【０１１４】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．３９であった。食品グレードのＨＣｌ溶液の添加により、ＹＰ８４０Ｎ溶液のｐＨを６．２５から３．４１に下げた。パネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【０１１５】
７名のパネリストのうち５名はＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８４０Ｎの方が渋味が低いことを示し、２名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【０１１６】
実施例１９
この例は、例１５に記載のように調製されたＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８２０Ａの渋味レベルと、例８に記載のように調製されたＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の渋味レベルとの比較を示す。
【０１１７】
官能評価のために、２ｇのタンパク質を供給するのに十分なタンパク質粉末を１００ｍｌの精製飲料水に溶解することにより試料を調製した。ＹＰ８２０Ａ溶液のｐＨは、３．２３であった。ＹＰ７０１溶液のｐＨは、３．３４であった。７名のパネリストの非公式パネルに、盲検的に試料を味わい、渋味がより低いものを示すように依頼した。
【０１１８】
７名のパネリストのうち５名はＹＰ３６−Ｄ２０−１７Ａ  ＹＰ８４０Ｎの方が渋味が低いことを示し、２名のパネリストはＹＰ３５−Ｋ２８−１６Ａ  ＹＰ７０１の方が渋味が低いことを示した。
【０１１９】
実施例２０
この例は、基質材料と比較した、酵素処理後の残留固体から得られた生成物のアミノ酸価を説明する。
【０１２０】
アミノ酸価を決定するために使用された参照アミノ酸パターンは、小児２〜５のＦＡＯ／ＷＨＯ／ＵＮＵ  １９８５（Report of Joint FAO/WHO/UNU Expert Consultation (1985) Energy and Protein Requirements、WHO Technical Report Series 724）パターンであった（Report of Joint FAO/WHO Expert Consultation (1991) Protein Quality Evaluation、FAO Food and Nutrition Paper 51）。このパターンを表５に示す。
【表５】
2020508690.tif 000006
【０１２１】
アミノ酸価は、試験タンパク質中の各必須アミノ酸の含量（ｍｇ／ｇタンパク質）を、参照パターンにおける同じ必須アミノ酸の含量（ｍｇ／ｇタンパク質）で割ることにより計算される。最も制限的な必須アミノ酸に対して得られた最も低い最終的な値が、アミノ酸価（ＡＡＳ）とみなされる（Report of Joint FAO/WHO Expert Consultation(1991) Protein Quality Evaluation、FAO Food and Nutrition Paper 51;Schaarfsma, G. 2000. J. Nutr., 130:1865S）。
【０１２２】
例２、５、６、１５および１６における残留酵素処理固体から得られた豆タンパク質加水分解物、ならびに例２、１５および１６において使用された乾燥豆タンパク質基質のアミノ酸プロファイルを、実験的に評価した。トリプトファン、システイン／メチオニンおよび残りのアミノ酸を定量化するために、完全アミノ酸プロファイル分析を行った。
【０１２３】
基質および残留固体から得られた豆タンパク質加水分解物の必須アミノ酸プロファイルおよび計算されたアミノ酸価を、以下の表６〜１０に示す。
【表６】
2020508690.tif 000007
【表７】
2020508690.tif 000008
【表８】
2020508690.tif 000009
【表９】
2020508690.tif 000010
【表１０】
2020508690.tif 000011
【０１２４】
表６〜１０の結果から分かるように、酵素処理後の残留固体から調製された豆タンパク質加水分解物は、０．９７〜１．０６の範囲内のアミノ酸価を有していた。これは、０．７７〜０．８３の範囲内である基質タンパク質のアミノ酸価からの改善であった。
【０１２５】
実施例２１
この例は、例１〜６および１５の可溶性画分から得られた豆タンパク質加水分解物の分子量プロファイルを示す。
【０１２６】
分子量プロファイルは、３００×７．８ｍｍ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｙａｒｒａ  ＳＥＣ−２０００シリーズカラムを備えるＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ＨＰＬＣシステムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーにより決定した。カラムは、直径３ミクロン、細孔サイズ１４５オングストロームの親水性結合シリカ硬質支持媒体を含んでいた。
【０１２７】
１，３５０ダルトンの低分子量マーカーとしてビタミンＢ１２を添加した１７，０００ダルトン（ミオグロブリン）〜６７０，０００ダルトン（サイログロブリン）の間の既知の分子量を有するタンパク質を含有するＢｉｏｒａｄゲル濾過標準（Ｂｉｏｒａｄ製品番号１５１−１９０１）を使用して、標準曲線を作成した。泳動用緩衝液（０．０２％ナトリウムアジドを含有する０．０５Ｍホスフェート／０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６）中でゲル濾過標準の０．９％ｗ／ｖ溶液を調製し、細孔サイズ０．４５μｍのフィルターディスクで濾過し、次いで０．０２％ナトリウムアジドを含有する０．０５Ｍホスフェート／０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６の移動相を使用して、２５μＬのアリコートをカラムに通過させた。移動相の流速は１ｍＬ／分であり、成分は２１４ｎｍにおける吸収に基づいて検出された。これらの既知の分子量の分子の保持時間に基づいて、分子量の自然対数を分単位の保持時間に関連付ける回帰式を確立した。
【０１２８】
豆タンパク質加水分解物試料の分析のために、０．０２％ナトリウムアジドを含有する０．０５Ｍホスフェート／０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ６を移動相として、また乾燥試料を溶解するために使用した。タンパク質加水分解物試料を１％ｗ／ｖの濃度まで移動相溶液と混合し、シェーカー上に少なくとも１時間置き、次いで細孔サイズ０．４５μｍのフィルターディスクを使用して濾過した。試料注入サイズは１００μＬであった。移動相の流速は１ｍＬ／分であり、成分は２１４ｎｍにおける吸収に基づいて検出された。
【０１２９】
分子量および保持時間を関連付ける回帰式を使用して、１００，０００Ｄａ、１５，０００Ｄａ、５，０００Ｄａおよび１，０００Ｄａの分子量に対応する保持時間を計算した。ＨＰＬＣ  ＰｒｏＳｔａｒシステムを使用して、これらの保持時間範囲内のピーク面積を計算し、所与の分子量範囲内の材料のパーセンテージ（（ある範囲のピーク面積／全ての範囲のピーク面積）×１００）を計算した。
【０１３０】
豆タンパク質加水分解物の分子量プロファイルを、以下の表に示す。
【表１１】
2020508690.tif 000012
【０１３１】
表１１の結果から分かるように、全ての試料のプロファイルは、ある程度のより大きい分子量の材料の存在を示した。
【０１３２】
・開示の概要
本開示の概要として、本発明は、出発豆タンパク質生成物の加水分解と、任意選択のｐＨ調節と、得られる材料の分離とを含む、豆タンパク質加水分解物の調製に関する。酵素加水分解および分離後の可溶性部分は、渋味の低い酸可溶性豆タンパク質加水分解物を生成するようにさらに処理される。酵素加水分解および分離後の残留固体は、基質豆タンパク質と比較して改善されたアミノ酸価を有する豆タンパク質加水分解物を生成するようにさらに処理される。本発明の範囲内で変更が可能である。
【国際調査報告】
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