(57)【要約】  本発明は、結核等の、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグに関する。2020519592.tif 000048
2020519592.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ：
【化１】
2020519592.tif 000033
【請求項２】
疾患が結核である、請求項１に記載の使用のための化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ。
【請求項３】
マイコバクテリア感染の処置において使用するための、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ：
【化２】
2020519592.tif 000034
【請求項４】
マイコバクテリア感染がMycobacterium tuberculosis感染である、請求項３に記載の使用のための化合物、薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ。
【請求項５】
結核の処置において使用するための、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ：
【化３】
2020519592.tif 000035
【請求項６】
前記化合物が下記のエステルプロドラッグである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用のための化合物：
【化４】
2020519592.tif 000036
【請求項７】
エステルプロドラッグが下記である、請求項６に記載の使用のための化合物：
【化５】
2020519592.tif 000037
【請求項８】
前記プロドラッグが経口投与されるものである、請求項６または７に記載の使用のための化合物。
【請求項９】
下記がそのナトリウム塩の形態である、請求項１〜５に記載のいずれか一項に記載の使用のための化合物：
【化６】
2020519592.tif 000038
【請求項１０】
それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置のための方法であって、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグの治療上有効量を前記患者へ投与することを含む、方法：
【化７】
2020519592.tif 000039
【請求項１１】
前記疾患が結核である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染の処置のための方法であって、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグの治療上有効量を前記患者へ投与することを含む、方法：
【化８】
2020519592.tif 000040
【請求項１３】
前記マイコバクテリア感染がMycobacterium tuberculosis感染である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
それを必要としている患者における結核の処置のための方法であって、下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグの治療上有効量を前記患者へ投与することを含む、方法：
【化９】
2020519592.tif 000041
【請求項１５】
下記のエステルプロドラッグを投与することを含む、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法：
【化１０】
2020519592.tif 000042
【請求項１６】
前記エステルプロドラッグが下記である、請求項１５に記載の方法：
【化１１】
2020519592.tif 000043
【請求項１７】
下記がそのナトリウム塩の形態である、請求項１０〜１４に記載のいずれか一項に記載の方法：
【化１２】
2020519592.tif 000044
【請求項１８】
前記患者がヒトである、請求項１０〜１７に記載のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
結核、マイコバクテリア感染、またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置における使用のための薬剤の製造における下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグの使用：
【化１３】
2020519592.tif 000045
【請求項２０】
結核、マイコバクテリア感染、またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置に使用するのための、（ａ）下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグと、（ｂ）薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物：
【化１４】
2020519592.tif 000046
【請求項２１】
マイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患、または結核の処置における使用のための、（ａ）下記化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはエステルプロドラッグと、（ｂ）追加の抗結核薬との組合せ：
【化１５】
2020519592.tif 000047
【請求項２２】
前記組合せにおけるさらに追加の抗結核薬（ｂ）が、イソニアジド、リファンピン、ピラジナミド、エタンブトール、モキシフロキサシン、リファペンチン、クロファジミン、エチオナミド、プロチオンアミド、チオカルリド、チオアセタゾン、リファブチン、ベダキリン（ＴＭＣ２０７）またはＴＢＡＪ−５８７等のジアリルキノリン、ニトロイミダゾ−オキサジンＰＡ−８２４、デラマニド（ＯＰＣ−６７６８３）、リネゾリド、テジゾリド、ラデゾリド、ステゾリド（ＰＮＵ−１００４８０）、ポジゾリド（ＡＺＤ−５８４７）またはＴＢＩ−２２３等のオキサゾリジノン、ＥＭＢアナログＳＱ１０９、ＯＰＣ−１６７８３２、ＧＳＫ３０３６６５６（ＧＳＫ０７０としてもまた知られる）、ＧＳＫ２５５６２８６、ＧＳＫ３２１１８３０、ＢＴＺ０４３またはＰＢＴＺ１６９等のベンゾチアジノン、ＴＢＡ−７３７１等のアザインドール、ジニトロベンズアミド、またはメロペネム、ファロペネム、エルタペネム、テビペネム等のβ−ラクタム、またはＡＵＧＭＥＮＴＩＮ（アモキシシリン／クラブラン酸塩）等のβ−ラクタムの組合せから選択される、請求項２１に記載の使用のための組合せ。
【請求項２３】
追加の抗結核薬（ｂ）が、ＡＵＧＭＥＮＴＩＮ（アモキシシリン／クラブラン酸塩）である、請求項２１または２２に記載の使用のための組合せ。
【請求項２４】
抗レトロウィルス薬を含む抗ウィルス薬をさらに含む、請求項２１または２２に記載の使用のための組合せ。
【請求項２５】
前記組合せにおける抗レトロウィルス薬が、ジドブジン、ジダノシン、ラミブジン、ザルシタビン、アバカビル、スタブジン、アデフォビル、アデフォビル  ジピボキシル、フォジブジン、トドキシル、エントリシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、ロビリド、イムノカル、オルチプラズ、カプラビリン、レルシビリン、ＧＳＫ２２４８７６１、ＴＭＣ−２７８、ＴＭＣ−１２５、エトラビリン、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホサンプレナビル、ブレカナビル、ダルナビル、アタザナビル、チプラナビル、パリナビル、ラシナビル、エンフビルチド、Ｔ−２０、Ｔ−１２４９、ＰＲＯ−５４２、ＰＲＯ−１４０、ＴＮＸ−３５５、ＢＭＳ−８０６、ＢＭＳ−６６３０６８及びＢＭＳ−６２６５２９、５−ヘリックス、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ＧＳＫ１３４９５７２、ＧＳＫ１２６５７４４、ビクリビロク（Ｓｃｈ−Ｃ）、Ｓｃｈ−Ｄ、ＴＡＫ７７９、マラビロク、ＴＡＫ４４９、ジダノシン、テノホビル、ロピナビル、またはダルナビルから選択される、請求項２４に記載の使用のための組合せ。
【請求項２６】
（ａ）請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグと、（ｂ）β−ラクタマーゼ阻害薬との組合せ。
【請求項２７】
前記β−ラクタマーゼ阻害薬がクラブラン酸塩またはクラブラン酸である、請求項２６に記載の組合せ。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明に至った研究は、ＲＥＡ助成合意書ｎｏ．２９１７９９の下、第七次ＥＵフレームワーク計画（ＦＰ７／２００７−２０１３）の人材計画（マリー・キュリー・アクション）より財政的支援を受けた。
【０００２】
発明の分野
本発明は、サンフェトリネム、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ、およびマイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置におけるその使用に関する。さらに具体的には、本発明は、結核の処置における、サンフェトリネム、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ（ester prodrug）の使用に関する。特に、本発明は、プロドラッグ、サンフェトリネムシレキセチル及び結核の処置におけるその使用に関する。
【０００３】
発明の背景
２０１４年に世界保健機関が公表した報告書によると、年間、１，０００万人に近い人が結核に罹患し、年間１５０万人の死亡原因になっている。結核への有効な処置にもかかわらず、結核の原因菌であるMycobacterium tuberculosisが多くの処置に対して抵抗性を示すようになっていることが原因であり、世界的な疾病負荷は主要な問題のままである。
【０００４】
結核は細菌感染により引き起こされるが、最も有名な抗生物質の類であるβ−ラクタムの使用は広く無視されている。多数の承認されているβ−ラクタム薬は世界の抗生物質市場の推定３分の２を構成しているという事実にもかかわらず、臨床試験の早期の失敗及び親油性のマイクロバクテリウム細菌の細胞壁は極性の高い分子を透過させないという予測により、それらの結核に対する評価は限られる。
【０００５】
サンフェトリネムシレキセチルは、１９９０年代から、マイクロバクテリウム細菌以外の様々な細菌種により引き起こされる感染と連動する試験的な抗生物質である。
【０００６】
増え続ける多剤耐性Mycobacterium tuberculosis菌の出現及び持続している結核の高い発生率のために、結核の処置のためのさらなる薬剤化合物の提供に対する緊急の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の第一の態様において、マイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグが提供される。
【化１】
2020519592.tif 000003
【０００８】
本発明の第二の態様において、マイコバクテリア感染の処置において使用するための、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグが提供される。
【化２】
2020519592.tif 000004
【０００９】
本発明の第三の態様において、結核の処置において使用するための、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグが提供される。
【化３】
2020519592.tif 000005
【００１０】
本発明の第四の態様において、それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【化４】
2020519592.tif 000006
【００１１】
本発明の第五の態様において、それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【化５】
2020519592.tif 000007
【００１２】
本発明の第六の態様において、それを必要としている患者における結核の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【化６】
2020519592.tif 000008
【００１３】
本発明の第七の態様において、結核、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための薬剤の製造における、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの使用、が提供される。
【化７】
2020519592.tif 000009
【００１４】
本発明の第八の態様において、医薬組成物が提供され、前記医薬組成物は、結核、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、(a) (1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ、(b) 薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【化８】
2020519592.tif 000010
【００１５】
本発明の第九の態様において、結核、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、(a) (1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ、(b)追加の抗結核薬の組合せが提供される。
【化９】
2020519592.tif 000011
【００１６】
本発明の第十の態様において、(a)(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と命名された化合物、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ、(b)β-ラクタマーゼ阻害薬の組合せが提供される。
【化１０】
2020519592.tif 000012
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】サンフェトリネム及びサンフェトリネムシレキセチルの生体内の抗結核活性を評価するために使用されたモデルマウスの結果を示す。
【図２】実験室株及び臨床分離株パネルに対するサンフェトリネム（ナトリウム塩）のＭＩＣ分布のプロットである。
【図３】サンフェトリネム単独、及びアモキシシリンとの併用、及びアモキシシリン／クラブラン酸塩（アモキシシリンの濃度値はμｇ／ｍＬである）併用時の用量反応曲線、濃度に対する生育率％を示す。
【図４】アモキシシリン単独、及びアモキシシリン／クラブラン酸塩併用時の用量反応曲線、濃度に対する生育率％を示す。
【図５】サンフェトリネム単独、及びデラマニド併用時の用量反応曲線を示す。
【図６】サンフェトリネム単独、及びリファンピシン併用時の用量反応曲線を示す。
【図７】サンフェトリネム単独、及びエタンブトール併用時の用量反応曲線を示す。
【図８】サンフェトリネム単独、及びアモキシシリン併用時の用量反応曲線を示す。
【発明の具体的説明】
【００１８】
本発明は、マイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための、下記の構造を有する化合物（以後、化合物Ａとも呼ばれる）、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグに関連する。マイコバクテリア感染とは、マイコバクテリウム属の感染に起因する感染症の一種である。
【化１１】
2020519592.tif 000013
【００１９】
化合物Ａの名称は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸である。
【００２０】
マイコバクテリウム属は、以下の群のマイコバクテリウム属の１つのメンバーであってもよい：Mycobacterium tuberculosis complex (MTC)（マイコバクテリウム・チュベルクロシス・コンプレックス）、Mycobacterium avium complex (MAC)（マイコバクテリウム・アビウム・コンプレックス）、Mycobacterium gordonae clade（マイコバクテリウム・ゴルドネ分岐群）、Mycobacterium kansasii clade（マイコバクテリウム・カンサシ分岐群）、Mycobacterium chelonae clade（マイコバクテリウム・ケロネー分岐群）、Mycobacterium fortuitum clade（マイコバクテリウム・フォーチュイタム分岐群）、Mycobacterium parafortuitum clade（マイコバクテリウム・パラフォーチュイタム分岐群）またはMycobacterium vaccae clade（マイコバクテリウム・ヴァッカエ分岐群）。マイコバクテリウム属はまた、Mycobacterium ulcerans（マイコバクテリウム・ウルセランス）またはMycobacterium leprae（マイコバクテリウム・レプラエ）であってもよい。
【００２１】
Mycobacterium tuberculosis complex (MTC)のメンバーには、Mycobacterium tuberculosis（マイコバクテリウム・チュベルクロシス）、Mycobacterium africanum（マイコバクテリウム・アフリカナム）、Mycobacterium bovis（マイコバクテリウム・ボビス）、Mycobacterium bovis BCG（マイコバクテリウム・ボビス・BCG）、Mycobacterium canetti（マイコバクテリウム・カネッティ）、Mycobacterium caprae（マイコバクテリウム・カプラエ）、Mycobacterium microti（マイコバクテリウム・ミクロティ）及びMycobacterium pinnipedii（マイコバクテリウム・ピンニペディ）が含まれる。これらのマイコバクテリウム属はヒト及び動物の結核の原因菌である。Mycobacterium tuberculosisはヒトの結核の主要な原因となっている。
【００２２】
一つの実施態様において、感染症はマイコバクテリウム属がMycobacterium tuberculosis complex (MTC)の一つのメンバーの感染によって引き起こされる感染症である。
【００２３】
一つの実施態様において、感染症がMycobacterium tuberculosis感染症である。言い換えると、マイコバクテリア感染症がMycobacterium tuberculosisの感染により引き起こされる。
【００２４】
Mycobacterium avium complex (MAC)のメンバーには、Mycobacterium avium（マイコバクテリウム・アビウム）、Mycobacterium avium paratuberculosis（マイコバクテリウム・アビウム・パラチュベルクロシス）、Mycobacterium avium silaticum（マイコバクテリウム・アビウム・シラティクム）、Mycobacterium avium hominissuis（マイコバクテリウム・アビウム・ホミニススイス）、Mycobacterium columbiense（マイコバクテリウム・コロムビエンセ）及びMycobacterium indicus pranii（マイコバクテリウム・インディクスプラニイ）が含まれる。
【００２５】
Mycobacterium gordonae cladeのメンバーには、Mycobacterium asiaticum（マイコバクテリウム・アシアティカム）及びMycobacterium gordonae（マイコバクテリウム・ゴルドネ）が含まれる。
【００２６】
Mycobacterium kansasii cladeのメンバーにはMycobacterium gastri（マイコバクテリウム・ガストリ）及びMycobacterium kansasii（マイコバクテリウム・カンサシ）が含まれる。
【００２７】
Mycobacterium chelonae cladeのメンバーにはMycobacterium abscessus（マイコバクテリウム・アブスセッスス）、Mycobacterium bolletii（マイコバクテリウム・ボルレティイ）及びMycobacterium chelonae（マイコバクテリウム・ケロネー）が含まれる。
【００２８】
Mycobacterium fortuitum cladeのメンバーには、Mycobacterium boenickei（マイコバクテリウム・ボエニケイ）、Mycobacterium brisbanense（マイコバクテリウム・ブリスバネンセ）、Mycobacterium cosmeticum（マイコバクテリウム・コスメチクム）、Mycobacterium fortuitum（マイコバクテリウム・フォーチュイタム）、Mycobacterium fortuitum subspecies acetamidolyticum（マイコバクテリウム・フォーチュイタム、マイコバクテリウム・ホルイツム亜種アセタミドリチクム）、Mycobacterium houstonense（マイコバクテリウム・ホウストネンセ）、Mycobacterium mageritense（マイコバクテリウム・マゲリテンセ）、Mycobacterium neworleansense（マイコバクテリウム・ネウォルレアンセンセ）、Mycobacterium peregrinum（マイコバクテリウム・ペレグリナム）、Mycobacterium porcinum（マイコバクテリウム・ポルキヌム）、Mycobacterium senegalense（マイコバクテリウム・セネガレンセ）及びMycobacterium septicum（マイコバクテリウム・セプチクム）が含まれる。
【００２９】
Mycobacterium parafortuitum cladeのメンバーには、Mycobacterium austroafricanum（マイコバクテリウム・アウストロアフリカヌム）、Mycobacterium diernhoferi（マイコバクテリウム・ディエルンホフェリ）、Mycobacterium frederiksbergense（マイコバクテリウム・フレデリキスベルゲンセ）、Mycobacterium hodleri（マイコバクテリウム・ホドレリ）、Mycobacterium neoaurum（マイコバクテリウム・ネオアウルム）及びMycobacterium parafortuitum（マイコバクテリウム・パラフォーチュイタム）が含まれる。
【００３０】
結果として、マイコバクテリア感染は以下から選択されるマイコバクテリウム属による感染に引き起こされるものであってもよい。：Mycobacterium tuberculosis、Mycobacterium africanum、Mycobacterium bovis、Mycobacterium bovis BCG、Mycobacterium canetti、Mycobacterium caprae、Mycobacterium microti、Mycobacterium pinnipedii、Mycobacterium avium、Mycobacterium avium paratuberculosis、Mycobacterium avium silaticum、Mycobacterium avium hominissuis、Mycobacterium columbiense、Mycobacterium indicus pranii、Mycobacterium asiaticum、Mycobacterium gordonae、Mycobacterium gastri、Mycobacterium kansasii、Mycobacterium abscessus、Mycobacterium bolletii、Mycobacterium chelonae、Mycobacterium boenickei、Mycobacterium brisbanense、Mycobacterium cosmeticum、Mycobacterium fortuitum、Mycobacterium fortuitum subspecies acetamidolyticum、Mycobacterium houstonense、Mycobacterium mageritense、Mycobacterium neworleansense、Mycobacterium peregrinum、Mycobacterium porcinum、Mycobacterium senegalense、Mycobacterium septicum、Mycobacterium austroafricanum、Mycobacterium diernhoferi、Mycobacterium frederiksbergense、Mycobacterium hodleri、Mycobacterium neoaurum、Mycobacterium parafortuitum、Mycobacterium ulcerans及びMycobacterium lepra。
【００３１】
マイコバクテリウム属の感染により引き起こされる疾病には、限定されるわけではないが、結核(例えば、Mycobacterium tuberculosis由来)、ハンセン病(例えば、Mycobacterium leprae由来)、ヨーネ病(例えば、Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis由来)、ブルーリ潰瘍(例えば、Mycobacterium ulceran由来)、クローン病（例えば、Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis由来）、嚢胞性線維症(例えば、Mycobacterium avium-intracellulare complex（マイコバクテリウム・アビウム-イントラセルラー・コンプレックス）及びMycobacterium abscessusのような非結核菌由来)、肺疾患、または肺感染症、肺炎、嚢、滑膜、腱鞘、局地的腫瘍、リンパ節炎、皮膚及び軟組織の感染、ウィンダミア夫人症候群(例えば、Mycobacterium avium complex(MAC)由来)、MAC肺疾患、播種性Mycobacterium avium complex(DMAC)、播種性Mycobacterium avium intraceullulare complex(DMAIC)、ホットタブ(hot-tub)肺(例えば、Mycobacterium avium complex由来)、ＭＡＣ乳腺炎、ＭＡＣ化膿性筋炎、または肉芽腫症が含まれる。
【００３２】
一つの実施態様において、マイコバクテリア感染に起因する疾患は結核であり、そのような実施態様において、本発明は、結核の処置において使用するための化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグに関する。
【００３３】
本発明はまた、マイコバクテリア感染の処置における使用のための、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグに関する。特定の実施態様において、マイコバクテリア感染はMycobacterium tuberculosisの感染である。
【００３４】
より具体的には、本発明は、結核の処置において使用するための、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそれらのエステルプロドラッグに関する。一つの実施態様において、結核の処置は、多剤耐性結核、広範囲の薬剤耐性または薬剤感受性結核の処置を対象としてもよい。
【００３５】
一つの実施形態において、結核の処置は多剤耐性、または広範囲の薬剤耐性結核を対象とする。
【００３６】
さらに、前記処置は肺及び／または肺外結核を対象としてもよい。前記処置はまた、潜在性結核の処置を対象としてもよい。
【００３７】
化合物Ａはまた、サンフェトリネムまたはＧＶ１０４３２６として知られる。サンフェトリネムのナトリウム塩はサンフェトリネムナトリウムとして知られている。サンフェトリネムのカリウム塩はサンフェトリネムカリウムとして知られ、その他もそのように知られている。
【００３８】
さらに具体的には、本発明は、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置において使用するための化合物Ａのエステルプロドラッグに関し、ここで前記プロドラッグは以下の構造を有する。
【化１２】
2020519592.tif 000014
【００３９】
このエステルプロドラッグの名称は(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル 1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルである。このプロドラッグはまた、サンフェトリネム  シレキセチルまたはＧＶ１１８８１９Ｘとして知られる。
【００４０】
従って、本発明はまた、結核の処置において使用するための、(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル 1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステル、つまり下記の化合物に関する。
【化１３】
2020519592.tif 000015
【００４１】
前記エステルプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル 1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステル（上記に描かれている）は、エピマーとしても知られるジアステレオマーの混合物であると理解される。前記ジアステレオマーは、等量（１：１の混合物）または等量でない混合物で存在していてもよい。あるいは、化合物は１つのジアステレオマーとして存在していてもよい。それぞれのジアステレオマーを以下に記載している。
【化１４】
2020519592.tif 000016
【００４２】
単一のジアステレオマーは、ジアステレオマーの混合物からの単離により得られたものであってもよい。
【００４３】
上述したプロドラッグは、経口で患者に投与することが可能なため、有利には結核の処置において使用されてもよい。
【００４４】
他のプロドラッグは、(1S,5S,8aS,8bR)-(S)-1-((エトキシカルボニル)オキシ)エチル 1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルで、以下の構造を有する。
【化１５】
2020519592.tif 000017
【００４５】
このプロドラッグは、例えば、ＷＯ９４／２１６３７に記載されている手順または同様の方法により製造されていてもよい。
【００４６】
全ての化学構造は、ＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  ｖｅｒｓｉｏｎ１２．０を使用して（構造の名前への変換により）、命名されている。
【００４７】
本明細書において、化合物Ａまたはその塩には、遊離酸としての、またはその薬学的に許容可能な塩としての化合物Ａが含まれると理解される。したがって、一つの実施態様において、本発明は化合物Ａを対象としている。他の実施態様において、本発明は化合物Ａの薬学的に許容可能な塩を対象としている。他の実施態様において、本発明は化合物Ａのエステルプロドラッグを対象としている。
【００４８】
用語「エステルプロドラッグ」は化合物Ａを示し、化合物中、エステルは存在する遊離カルボン酸部分を用いて／存在する遊離カルボン酸部分上に、形成される。言い換えると、「エステルプロドラッグ」は以下の構造式において、エステルが利用可能な遊離酸を用いて形成されていることを意味している。
【化１６】
2020519592.tif 000018
【００４９】
前記エステルプロドラッグの例として、以下の構造を有する化合物がある。
【化１７】
2020519592.tif 000019
【００５０】
「薬学的に許容可能な」との用語は、医療上健全な判断の範囲において、ヒト及び動物の組織との接触において、過度の毒性、刺激または他の問題または合併症もなく、合理的なリスク・ベネフィット比に見合った使用のために適している、それらの化合物（塩を含む）、原料、組成物、剤形を示す。
【００５１】
薬学的に許容可能な塩には、とりわけ、Berge, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19, or those listed in P H Stahl and C G Wermuth, editors, Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection and Use, Second Edition Stahl/Wermuth: Wiley- VCH/VHCA, 2011 (http://www.wiley.com/WileyCDA/WileyTitle/productCd-3906390519.html参照)に記載されているものが含まれる。
【００５２】
薬学的に許容可能な塩に適したものには、塩基付加塩を含むことができる。
【００５３】
前記塩基付加塩は、晶析及び濾過を含む多様な方法により単離できる塩を与えるために、任意に有機溶媒のような適切な溶媒において、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸と、適切な塩基との反応により形成される。
【００５４】
代表的な薬学的に許容可能な塩基付加塩には、限定されるわけではないが、アルミニウム、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（ＴＲＩＳ、トロメタミン）、アルギニン、ベネタミン（Ｎ−ベンゾイルフェネチルアミン）、ベンザシン（Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン）、ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、ビスマス、カルシウム、クロロプロカイン、コリン、クレミゾール（１−ｐクロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イルメチルベンゾイミダゾール）、シクロヘキシルアミン、ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエチルトリアミン、ジメチルアミン、ジメチルエタノールアミン、ドパミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｌ−ヒスチジン、鉄、イソキノリン、レピジン、リチウム、リジン、マグネシウム、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、ピペラジン、ピペリジン、カリウム、プロカイン、キニーネ、キノリン、ナトリウム、ストロンチウム、ｔ−ブチルアミン及び亜鉛が含まれる。
【００５５】
本発明によれば、薬学的に許容可能な塩は、特に化合物Ａのナトリウム塩及びカリウム塩であり、処置のために患者に投与する化合物は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸カリウムまたは(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸ナトリウムであって、それぞれ以下のように記載される。
【化１８】
2020519592.tif 000020
【００５６】
一つの実施態様において、化合物Ａの薬学的に許容可能な塩はナトリウム塩である。
【００５７】
化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグ (1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルは、そのいかなる適切なその溶媒和形態（例えば、水和形態）及び／またはその多形体において存在できると理解される。
【００５８】
化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルは、ＥＰ０４１６９５３及びＷＯ９４／２１６３７に記載されている手順または同様の方法により製造されていてもよい。
【００５９】
具体的には、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸またはその塩は、ＷＯ９４／２１６３７の例４及び５に記載されている手順により製造されていてもよい。
【００６０】
具体的には、プロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルは、ＷＯ９２／０３４３７の例１に記載されている手順により製造されていてもよい。他のエステルプロドラッグは同様の方法及び当業者に知られている方法により製造されていてもよい。
【００６１】
本発明のさらに別の態様において、それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染に起因する疾患の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【００６２】
マイコバクテリア感染は、Mycobacterium tuberculosisのように、上に記載しているリストから選択されるマイコバクテリウム属の１つにより引き起こされてもよい。
【００６３】
一つの実施態様において、処置される疾患は結核である。したがって、一つの実施態様において、本発明はまた、それを必要としている患者における結核の処置の方法に関連し、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【００６４】
別の態様において、それを必要としている患者におけるマイコバクテリア感染の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【００６５】
マイコバクテリア感染は、上記のリストから選択されるマイコバクテリウム属の１つにより引き起こされてもよい。一つの実施態様において、マイコバクテリア感染は、Mycobacterium tuberculosis感染であり、本発明はMycobacterium tuberculosis感染の処置の方法に関する。
【００６６】
別の態様において、それを必要としている患者における結核の処置のための方法が提供され、前記方法は、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。
【００６７】
一つの実施態様において、それを必要としている患者における結核の処置のための方法が提供され、前記方法は、化合物Ａのエステルプロドラッグの前記患者への治療上有効量の投与を含む。具体的には、エステルプロドラッグは、(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルであり、上記の構造を有する。
【００６８】
他の実施態様において、それを必要としている患者における結核の処置のための方法が提供され、前記方法は、化合物Ａの薬学的に許容可能な塩の前記患者への治療上有効量の投与を含む。具体的には、薬学的に許容可能な塩はナトリウム塩であり、患者に投与される薬剤は(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸ナトリウムである。
【００６９】
一つの実施態様において、それを必要としている患者とはヒト患者である。「患者」との用語は、マイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患または結核を患っている、またはそれらに感染しているヒトを示すことを意図する。
【００７０】
さらに、マイコバクテリア感染を原因とする疾患の処置、またはマイコバクテリア感染の処置において使用するための薬剤の製造における、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの使用、が提供される。具体的には、本発明は、結核の処置において使用するための薬剤の製造における、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの使用、に関する。
【００７１】
具体的には、結核の処置において使用するための薬剤の製造における、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸ナトリウム、または(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルの使用もまた提供される。
【００７２】
ここで使用されるように、用語「治療上有効量」とは、そのような量を受けていない対照となる対象と比較して、改善された処置、治癒、予防、または疾患、不調、または副作用の改善、疾患または不調の進行速度を遅らせる、という結果をもたらすいかなる量も意味している。
【００７３】
適切な「治療上有効量」は、例えば、対象の年齢及び体重、必要な処置の正確な条件及びその厳格性、製剤の性質、及び投与経路、を含む多くの要因に依存し、最終的には主治医の判断基準となるだろう。
【００７４】
当業者にとって、ここで処置が参照しているものは、例えば、マイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患及び／または結核を含んでいる、規定の条件の処置を示すと理解されるだろう。しかし、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸は、その薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグも同様に、条件に依存して、マイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患及び／または結核の予防においても有用であってもよい。したがって、一つの実施態様において、疾患の処置または予防が提供される。他の実施態様において、疾患の処置が提供される。別の実施態様において、疾患の予防が提供される。
【００７５】
マイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患及び／または結核の処置において使用するために、(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸は、その薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグも同様に、単独で投与することも可能だが、有効成分を、一つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物として提示することが通常である。
【００７６】
したがって、一つの実施態様において、また、医薬組成物が提供され、前記医薬組成物はマイコバクテリア感染、マイコバクテリア感染に起因する疾患または結核の処置において使用するための、(a) (1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸ナトリウムまたはプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステル、及び(b)薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
【００７７】
医薬組成物はいかなる適切な経路、例えば、経口（バッカルもしくは舌下を含む）、吸入、鼻腔、局所（バッカル、舌下もしくは経皮を含む）または非経口（皮下、筋肉内、静脈内もしくは皮内）経路で投与されてもよい。
【００７８】
一つの実施態様において、医薬組成物は経口投与経路により投与される。経口投与のための医薬組成物であるときは、具体的には、エステルプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルが医薬有効成分として使用される。
【００７９】
一つの実施態様において、医薬組成物は静脈内投与経路により投与される。静脈内投与のための医薬組成物であるときは、具体的には、化合物Ａのナトリウム塩またはカリウム塩が医薬有効成分として使用される。
【００８０】
薬学的に許容可能な賦形剤として適したものには以下の賦形剤の種類が含まれる：担体(carriers)、希釈剤(diluents)、充填剤(fillers)、結合剤(binders)、崩壊剤(disintegrants)、滑沢剤(lubricants)、流動化剤(glidants)、造粒剤(granulating agents)、コーティング剤(coating agents)、湿潤剤(wetting agents)、溶解剤(solvents)、助溶剤(co-solvents)、懸濁化剤(suspending agents)、乳化剤(emulsifiers)、甘味料(sweeteners)、香味料(flavouring agents)、香味マスキング料(flavour-masking agents)、着色剤(colouring agents)、固化防止剤(anti-caking agents)、保湿剤(humectants)、キレート化剤(chelating agents)、可塑剤(plasticisers)、増粘剤(viscosity increasing agents)、抗酸化剤(antioxidants)、保存剤(preservatives)、安定化剤(stabilisers)、界面活性剤(surfactants)及び緩衝剤(buffering agents)。
【００８１】
(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグの製剤化のために適した方法には、当業者に公知の方法、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版 2006に記載されているものが含まれる。
【００８２】
医薬組成物は、単位用量あたりあらかじめ決められた量の有効成分を含んでいる単位剤形で提示されてもよい。好ましい単位用量組成物は、有効成分を1日量または1日量より少ない量、またはその適切な分数含んでいる組成物である。前記単位用量は、したがって、1日1回以上投与されてもよい。好ましい単位用量組成物は、有効成分を1日量または1日量より少ない量（1日1回以上の投与のための）、ここで上に記載されているように、またはその適切な分数含んでいる組成物である。
【００８３】
有効成分、例えば、エステルプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステルの投与のために、投薬量は１００ｍｇから２０００ｍｇまたは１００ｍｇから１０００ｍｇであってもよい。例えば、投薬量は２５０ｍｇから５００ｍｇであってもよい。具体的には、経口の投薬量は２５０ｍｇから１０００ｍｇを１日２回投与してもよく、したがって、５００ｍｇから２０００ｍｇの１日の合計投薬量が提供される。経口の投薬頻度は１日１回の投薬でもよい。１日に投与される有効成分の合計量は５００、１０００または２０００ｍｇであってもよい。
【００８４】
(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩の静脈内投与のために、投薬量は１日あたり１ｇを３回まででもよく、１日合計３ｇの投与量が提供される。あるいは、１日合計投与量は１．５ｇまたは２ｇでもよい。
【００８５】
化合物は１日あたりの投与量を１回で、または１日量より少ない量を１日の合計量が同じになるように複数回（２、３、４、５または６のような）で与えられてもよい。その薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグの有効量は、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩それ自体の有効量との比率で決定されてもよい。
【００８６】
使用されていてもよい経口用錠剤の処方例がＥＰ５０２４６５に記載されており、以下の通りである。
【表１】
2020519592.tif 000021
【００８７】
有効成分と乳糖は一緒に混合してもよく、それから、造粒液として水を使用して造粒してもよい。乾燥させた顆粒は、それからエチルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムと混合してもよく、適切な金型を使用して錠剤コアが形成される。錠剤は、それから、従来技術及びコーティング剤を使用して、（例えば、腸溶コーティングとして）コーティングされていてもよい。
【００８８】
本発明における使用のため、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグは単独で、または追加の治療薬と組合せて使用してもよい。具体的には、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグは、追加の抗結核薬及び／または抗レトロウィルス薬を含む抗ウィルス薬と組合せて使用してもよい。
【００８９】
例えば、本明細書において、(a)化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグと、(b)追加の抗結核薬との組合せも開示される。
【００９０】
したがって、本発明はまた、マイコバクテリア感染またはマイコバクテリア感染に起因する疾患または結核の処置において使用するための、(a)化合物Ａまたはその薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグと。(b)追加の抗結核薬との組合せを含む。一つの実施態様において、組合せは結核の処置において使用するためである。
【００９１】
一つの実施態様において、組合せには、２、３、４、５、６または７つの追加の抗結核薬が含まれていてもよい。例えば、多剤耐性結核の処置において、４つまたはそれ以上の数の薬剤を組合せて患者に投与することが通常である。例えば、薬剤感受性結核の処置において、３または４つの薬剤を組合せて患者に通常投与される。
【００９２】
追加の抗結核薬は、開発中、承認済または結核の処置のために推奨される薬剤であってもよい。
【００９３】
一つの実施態様において、抗結核薬は、イソニアジド、リファンピン、ピラジナミド、エタンブトール、モキシフロキサシン、リファペンチン、クロファジミン、エチオナミド、プロチオンアミド、チオカルリド（ｉｓｏｘｙｌ）、チオアセタゾン、リファブチン、ベダキリン（ＴＭＣ２０７）またはＴＢＡＪ−５８７等のジアリルキノリン、ニトロイミダゾ−オキサジン  ＰＡ−８２４  （プレトマニド）、デラマニド（ＯＰＣ−６７６８３）、リネゾリド、テジゾリド、ラデゾリド、ステゾリド（ＰＮＵ−１００４８０）、ポジゾリド（ＡＺＤ−５８４７）またはＴＢＩ−２２３等のオキサゾリジノン、ＥＭＢアナログＳＱ１０９、ＯＰＣ−１６７８３２、ＧＳＫ３０３６６５６Ａ（ＧＳＫ０７０としてもまた知られる）、ＧＳＫ２５５６２８６、ＧＳＫ３２１１８３０、ＢＴＺ０４３またはＰＢＴＺ１６９等のベンゾチアジノン、ＴＢＡ−７３７１等のアザインドール、ジニトロベンズアミド、またはメロペネム、ファロペネム、エルタペネム、テビペネム等のβ−ラクタム、またはＡＵＧＭＥＮＴＩＮ（アモキシシリン／クラブラン酸塩）等のβ−ラクタムの組合せから選択されてもよい。
【００９４】
一つの実施態様において、抗結核薬はＡＵＧＭＥＮＴＩＮ、つまりアモキシシリン−クラブラン酸塩であってもよい。したがって、本明細書において、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ及びＡＵＧＭＥＮＴＩＮの組合せも開示される。
【００９５】
他の実施形態において、抗結核薬は、デラマニド、リファンピシン及びエタンブトールから選択されてもよい。したがって、本明細書において、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ及び、少なくともデラマニド、リファンピシン及びエタンブトールの1つの組合せも開示される。
【００９６】
本発明による使用のための組合せには、抗レトロウィルス薬を含む抗ウィルス薬がさらに含まれていてもよい。
【００９７】
前記抗レトロウィルス薬は、ジドブジン、ジダノシン、ラミブジン、ザルシタビン、アバカビル、スタブジン、アデフォビル、アデフォビル  ジピボキシル、フォジブジン、トドキシル、エントリシタビン、アロブジン、アムドキソビル、エルブシタビン、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、ロビリド、イムノカル、オルチプラズ、カプラビリン、レルシビリン、ＧＳＫ２２４８７６１、ＴＭＣ−２７８、ＴＭＣ−１２５、エトラビリン、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ホサンプレナビル、ブレカナビル、ダルナビル、アタザナビル、チプラナビル、パリナビル、ラシナビル、エンフビルチド、Ｔ−２０、Ｔ−１２４９、ＰＲＯ−５４２、ＰＲＯ−１４０、ＴＮＸ−３５５、ＢＭＳ−８０６、ＢＭＳ−６６３０６８及びＢＭＳ−６２６５２９、５−ヘリックス、ラルテグラビル、エルビテグラビル、ＧＳＫ１３４９５７２、ＧＳＫ１２６５７４４、ビクリビロク（Ｓｃｈ−Ｃ）、Ｓｃｈ−Ｄ、ＴＡＫ７７９、マラビロク、ＴＡＫ４４９、ジダノシン、テノホビル、ロピナビル、またはダルナビルから選択されてもよい。
【００９８】
組合せは、好都合には、医薬組成物または製剤の型において使用するために、提供されてもよい。したがって、本明細書において、(a)化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ、ここで記載されているように、(b)追加の他の抗結核薬、及び(c)場合により、抗レトロウィルス薬を含む抗ウィルス薬、及び(d)１つまたは２以上の薬学的に許容可能な賦形剤を一緒に含む医薬組成物が意図されている
【００９９】
化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ及び追加の治療上の活性薬剤（抗結核薬及び抗ウィルス薬のような）は同時に、または別々に投与されてもよく、別々に投与するときは、別々に、または任意の順で（同じもしくは異なる投与経路により）順次生じてもよい。
【０１００】
一つの実施態様において、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグは、追加の抗結核薬と同時投与される。用語「同時投与」は、化合物Ａ、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグとマイコバクテリア感染マイコバクテリア感染に起因する疾患、または結核、特に結核の処置において有用であると知られている追加の抗結核薬との同時の投与または別々の投与の任意の様式も意味する。
【０１０１】
組合せの要求される治療効果を達成するために、化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩、またはそのエステルプロドラッグ及び追加の治療上の活性薬剤の量、及び投与の相対的なタイミングが選択される。
【０１０２】
化合物(1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸、その薬学的に許容可能な塩またはそのエステルプロドラッグは、β-ラクタマーゼ阻害薬と組合せて投与されてもよい。
【０１０３】
したがって、本発明はまた、サンフェトリネムのエステルプロドラッグ(1S,5S,8aS,8bR)-1-(((シクロヘキシルオキシ)カルボニル)オキシ)エチル1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸エステル及びβ-ラクタマーゼ阻害薬の組合せに関する。
【０１０４】
本発明は、さらに、サンフェトリネムのナトリウム塩、 (1S,5S,8aS,8bR)-1-((R)-1-ヒドロキシエチル)-5-メトキシ-2-オキソ-1,2,5,6,7,8,8a,8b-オクタヒドロアゼト[2,1-a]イソインドール-4-カルボン酸ナトリウム及びβ-ラクタマーゼ阻害薬の組合せに関する。
【０１０５】
一つの実施態様において、β-ラクタマーゼ阻害薬は、クラブラン酸またはその水溶性塩（クラブラン酸カリウム等）、タゾバクタム、アビバクタム及びスルバクタムから選択される。
【０１０６】
一つの実施態様において、β-ラクタマーゼ阻害薬は、クラブラン酸またはクラブラン酸カリウム等のその水溶性塩である。
【０１０７】
一つの実施態様において、β−ラクタマーゼ阻害薬は、コアモキシクラブとしても知られる（例えば、ＡＵＧＭＥＮＴＩＮとしても知られる）アモキシシリンとクラブラン酸カリウムの組合せとして提供されてもよい。コアモキシクラブは３７５ｍｇまたは６２５ｍｇの錠剤として投与されてもよく、錠剤中、クラブラン酸カリウムは１２５ｍｇのクラブラン酸に相当する量が存在している。さらに、コアモキシクラブは１０００ｍｇの錠剤として投与されてもよく、錠剤中、クラブラン酸カリウムは１２５ｍｇのクラブラン酸に相当する量が存在している。あるいは、コアモキシクラブは、アモキシシリンの１日あたりの合計量が４０００  ｍｇになるように投与されてもよく、ここで、クラブラン酸カリウムは２５０  ｍｇのクラブラン酸に相当する量が存在している、すなわち、１０００ｍｇの錠剤の投与であって、錠剤中、クラブラン酸カリウム６２．５ｍｇの量が存在しており、１日あたり２錠が２回投与される。
【０１０８】
本発明は以下の実施例が参照される。
【実施例】
【０１０９】
サンフェトリネムのナトリウム塩は、以下の細胞外及び細胞内生存率評価法において試験された。いくつかの他のβ-ラクタム薬、メロペネム、テビペネム、エルタペネム及びファロペネムもまた同じ試験法において試験された。
【０１１０】
サンフェトリネムはＥＰ０４１６９５３及びＷＯ９４／２１６３７（例えば、例４及び５参照）に記載された方法の一つにより製造された。以下に記載された評価法においては、サンフェトリネムのナトリウム塩が使用された。
【０１１１】
ファロペネムナトリウムはＡＯＫＣｈｅｍ−中国（Ａ６０３０参照）から購入した。
【０１１２】
メロペネムはＣｏｍｂｉ  Ｂｌｏｃｋｓ，米国（ＳＴ−９２２９参照）から購入した。
【０１１３】
テビペネムはＣｈｅｍｅｘｐｒｅｓｓ（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｈａｏｙｕａｎ）株式会社（ＨＹ−Ａ００７６参照）から購入した。
【０１１４】
エルタペネムはＡｍａｔｅｋ（ＤＭ−０００４参照）から購入した。
【０１１５】
クラブラン酸カリウムはクラブラン酸源として使用され、以下表において「ｃｌａｖ」として表される。
【０１１６】
略語表
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＡＤＣ：アルブミン／デキストロース／カタラーゼ
ＣＦＵ：コロニー形成単位
ＦＢＳ：ウシ胎児血清
Ｍｔｂ：マイコバクテリウム  ツベルクロシス
ＲＰＭＩ：ロズウェルパーク記念研究所
ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
【０１１７】
ＭＩＣ定量
それぞれの試験化合物のM. tuberculosis H37Rvに対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）測定を、９６ウェルの平底ポリスチレンマイクロタイタープレートで、最終容量２００μＬで実施した。
【０１１８】
適切なＤＭＳＯで８０μＭのスタート濃度とした試験化合物の２倍希釈を１０回、カラム１〜１０で実施した。モキシフロキサシン（ＭＸ）が、用量反応化合物対照として、カラム１１で１μｇ／ｍｌのスタート濃度としたＭＸの２倍希釈液で使用された。Ｇ−１２及びＨ−１２において、非生育対照として、リファンピシンが１μｇ／ｍｌ分注された。Ａ１２〜Ｆ１２には、生育対照としてＤＭＳＯが分注された。
【０１１９】
同じ設計の追加のプレートもまた、β−ラクタマーゼ阻害薬の存在下でのＭＩＣの推移を試験するため、４μｇ／ｍｌのクラブラン酸カリウム（Ｆｌｕｋａ  ３３４５４参照）を全てのプレートに添加して、製造された。
【０１２０】
菌液は約１ｘ１０７ｃｆｕ／ｍｌに標準化され、ＡＤＣ（Ｄｉｆｃｏ）を補完したミドルブルック  ７Ｈ９ブロスで２００倍に希釈された。この菌液（２００μＬ及び１０４ｃｆｕ／ウェル）はプレート全体に添加された。
【０１２１】
全てのプレートは、周辺のウェルが乾燥するのを防ぐために、密封された容器の中に静置され、振とうすることなく６日間３７℃でインキュベートされた。
【０１２２】
レサズリン液はレサズリン錠（牛乳試験のためのレサズリン錠；３３０８８４Ｙ’  ＶＷＲ  インターナショナルリミテッド参照）を１錠、無菌のＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）３０ｍＬで溶解することにより製造された。この溶液中、２５μＬがそれぞれのウェルに添加された。
【０１２３】
４８時間後にＭＩＣ値を決定するために、蛍光（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５  モレキュラーデバイス励起波長５３０ｎｍ、蛍光波長５９０ｎｍ、カットオフ５７０ｎｍ）が測定された。
【０１２４】
サンフェトリネムシレキセチルを含むサンフェトリネム並びに他の代表的なβ−ラクタム（メロペネム、テビペネム、ファロペネム及びエルタペネム）の細胞外ＭＩＣ値を以下の表１に報告する。表で確認できるように、生データはＭＩＣ値の平均値とともに報告されている。２回のＭＩＣ値の違いは誤差の範囲内であると考える。報告されているそれぞれの値は、カンマにより区切られており、ＭＩＣ値を独立して読み取った代表的な値である。
【０１２５】
【表２】
2020519592.tif 000022
【０１２６】
細胞内生存率評価法
化合物の、ヒトＴＨＰ−１単球内で生育するMycobacterium tuberculosisに対する抗結核活性は、ホタルルシフェラーゼ遺伝子を含むM. tuberculosis H37Rvを使用して、決定された。
【０１２７】
ＴＨＰ−１単球は、１０％ＦＢＳ、１ｍＭのピルベート、２ｍＭのＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁されて維持され、５％ＣＯ２の存在下、３７℃でインキュベートされた。
【０１２８】
単球はサブコンフルエント（５ｘ１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ）まで生育させ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ８０を含むＲＰＭＩ−１６４０で懸濁させた細菌液が播種され、細菌ローラーボトルで、ＭＯＩ（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）が１となるように、無菌ガラスビーズと共に４時間感染させた。過剰な細菌はＲＰＭＩ培地で５回洗浄することにより（１５００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）取り除いた。
【０１２９】
感染細胞は、化合物の１：２の段階希釈を含んでいる９６ウェルの白プレートに播種された（５０，０００細胞／１ウェル）。ＤＭＳＯの割合は０．５％以下でなければならない。
【０１３０】
ルミネセンスは５日後に、Ｓｔｅａｄｙ−ＧｌｏプロメガキットをＶｉｃｔｏｒ１４２０システムの中で使用して、測定された。
【０１３１】
結果はＧｒａｆｉｔソフトウェアを使用して解析された。ＭＩＣ９０値は非線形回帰分析による用量反応曲線より計算された。
【０１３２】
サンフェトリネムシレキセチルを含むサンフェトリネム並びに他の代表的なβ-ラクタム（メロペネム、ファロペネム、テビペネム及びエルタペネム）の細胞内MIC50値は以下の表２に報告されている。同じ化合物の細胞内MIC90値は表３に報告されている。表で確認できるように、生データはMIC50値の平均値及びMIC90値の平均値とともに報告されている。２回のMIC値の違いは誤差の範囲内であると考える。報告されているそれぞれの値は、カンマにより区切られており、MIC値を独立して読み取った代表的な値である。
【０１３３】
【表３】
2020519592.tif 000023
【０１３４】
【表４】
2020519592.tif 000024
【０１３５】
生体内(in vivo)実験
生体内のサンフェトリネムの抗結核活性を評価するため、前に、Antimicrob Agents Chemother. 2015 Aug;59(8):4997-9に記載されている実験デザインが使用された。しかし、ＤＨＰ−１ノックアウトマウスとは異なるバックグラウンド系統が使用されていた：論文にはＣ５７ＢＩ／６バックグラウンドの代わりに１２９ｓｖバックグラウンドが記載されていた。
【０１３６】
簡潔に、特定病原体除去で、８−１０週齢のメスの１２９ｓｖのＤＨＰ−１ノックアウトマウスが購入され、１週間で馴化させられた。マウスは気管内に約１０５ＣＦＵ／１匹のM. tuberculosis H37Rvが感染された。化合物サンフェトリネムナトリウム塩（ＳＮＦ）、サンフェトリネムシレキセチル（ＳＮＦｃ）、メロペネム（ＭＲＰ）、及びクラブラン酸塩（ＣＬＶ）は、感染後、９日目〜１４日目の間１日２回投与された。ＭＲＰ及びＳＦＮは皮下に投与された。ＳＦＮｃ及びＣＬＶは経口経路により投与された。肺は、９日目または１５日目で回収した。全ての肺葉は無菌で除去され、ホモジナイズされ、かつ凍結された。ホモジネートは凍結せず、１８日間３７℃で１０％のＯＡＤＣ−７Ｈ１１培地＋０．４％の活性炭中に播種した。
【０１３７】
９日時の無処置マウスにおける肺ＣＦＵは７．４であり、１５日時では９．０ＣＦＵであった。ＳＦＮの皮下投与処置、ＳＦＮｃの経口投与処置、及びＭＲＰ−ＣＬＶ処置マウスの肺ＣＦＵはそれぞれ、７．３、７．６及び７．３であった（図１参照）。図１において、それぞれの点は１匹のマウスからのデータを表している。肺ＣＦＵ平均値は、それぞれの群の点の上方に示されている。
【０１３８】
ＳＦＮ及びＳＦＮｃはこの評価法において、ＭＲＰ−ＣＬＶに対して等しく有効であり、３つ全てが細菌の生育を阻害した。
【０１３９】
正味の致死効果は観察されなかったが、この実験はサンフェトリネム及びサンフェトリネムシレキセチルの両方が生体内においてどちらも効果を持つという証拠を提供した。
【０１４０】
全ての動物実験は倫理的に審査され、欧州指令２０１０／６３／ＥＵ及び動物の世話、福祉及び処置に関するＧＳＫの方針にしたがって実施された。
【０１４１】
結論
表１〜３で明らかなように、細胞内及び細胞外評価法の両方において、サンフェトリネムは抗細菌、具体的にはMycobacterium tuberculosisに対する活性を有する。サンフェトリネム及びサンフェトリネムシレキセチルはまた、生体内の抗結核活性を有する。
【０１４２】
M.TUBERCULOSIS臨床(clinical)分離株に対するサンフェトリネムの生体外(in vitro)活性
サンフェトリネム（ナトリウム塩）は、薬物感受性及び薬物耐性の両方を含む実験室株及び臨床分離株のパネルに対して試験がなされた。以下の表４は使用された株の耐性パターンの詳細な説明が提供される。
【０１４３】
【表５】
2020519592.tif 000025
【０１４４】
細菌株、一般生育条件及びMGIT感受性評価法
株は、３７℃で、１０％のミドルブルック  アルブミン−デキストロース−カタラーゼ（ＡＤＣ）（Ｄｉｆｃｏ）、０．２％のグリセロール、０．０５％の（ｖｏｌ／ｖｏｌ）を添加したミドルブルック  ７Ｈ９ブロスにて増殖させた。感受性評価法は、ＢＤ  ＢＬ  ＭＧＩＴ  ＯＡＤＣとともに供給されるＢＤ  ＢＬ  ＭＧＩＴチューブを使用して、ベクトン・ディッキンソン（ＢＤ）メディカル・テクノロジーからのＭＧＩＴ  ９６０システムを使用して実施された。簡潔に、７ｍＬＭＧＩＴチューブに、０．８ｍＬのＯＡＤＣサプリメント、０．１ｍＬのサンフェトリネムＤＭＳＯストック溶液、チューブ１本当たり１０５の細胞数になるような最終細胞濃度である細胞溶液０．１ｍＬ（ＭＧＩＴチューブの最終容量は８ｍＬ）が添加される。この標準菌液は、４〜５日のタイムトゥポジティブ（ＴＴＰ）を生み出す。ＴＴＰは、ＭＧＩＴ生育指標（ＧＩ）が７５より高くに到達するための細胞培養に必要な時間だと定義された。サンフェトリネムは、４つの異なる濃度、すなわち０．５、１．２５、５および２０μＭにおいて評価された。各単離株のため、少なくとも７日間の細菌生育阻止が可能（ＧＩ＜７５）な最小濃度として厳しいＭＩＣカットオフが規定された。リファンピシン、イソニアジド、モキシフロキサシン、リネゾリド、及びストレプトマイシンもまた臨床分離株に対する活性の内対照として使用された。
【０１４５】
感受性の単耐性パターンの臨床分離株を含む、２３のM. tuberculosis株のパネルに対するサンフェトリネムの活性を試験した。サンフェトリネムの４つの異なる濃度が評価された（０．５、１．２５、５及び２０μＭ）。同じＭＩＣ値を共有する株の数を図２に示した。最もありふれたＭＩＣ値は５μＭであった（２３株中１５株）。４株が５μＭよりも低いＭＩＣ値を示した、一方で、他の４株の場合では、この値は高くなった。全ての株は、試験された濃度範囲内において、サンフェトリネムへの感受性を示した。
【０１４６】
組合せ実験
サンフェトリネム（ナトリウム塩）とアモキシシリン（及びクラブラン酸）、リファンピシン、エタンブトール及びデラマニドのような他の薬剤の組合せについて、さらなる実験が実施された。
【０１４７】
実験材料及び方法−アモキシシリン及び／またはクラブラン酸塩の組合せ
チェッカーボードプレート
実験は９６ウェルプレートで実施した。サンフェトリネム（ナトリウム塩）とアモキシシリンのチェッカーボードプレートが準備された。アモキシシリンはカラム１〜９まで横軸に沿って希釈され（８０μＭ〜０．３μＭ）、サンフェトリネムは列Ａ〜Ｇまで縦軸に沿って希釈された（５μＭ〜０．０８μＭ）。
【０１４８】
１：２の段階希釈が使用され、結果のチェッカーボードには、カラム１においてアモキシシリンが最高濃度になっており、列Ａにおいてサンフェトリネムが最高濃度になっているサンフェトリネムとアモキシシリンを含有させた。
【０１４９】
それらの個別のＭＩＣを確認するために、カラム１０にサンフェトリネムを単独で含有させ、列Ｈにアモキシシリンを単独で含有させた。
【０１５０】
陽性生育対照としてＤＭＳＯを用いた菌液がＡ１２〜Ｄ１２に分注され、阻止対照として１μｇ／ｍｌのリファンピシン（Ｒ３５０１＿Ｓｉｇｍａ）を加えた菌液がＥ１２〜Ｈ１２に分注された。これらの対照とともに、評価法におけるプレートの品質管理としてＺ’値及びバックグラウンドへの信号を設定することが可能であった。
【０１５１】
カラム１１において、用量反応曲線を提供するために、モキシフロキサシンがＡ１１（１μｇ／ｍｌ）〜Ｈ１１（０．００８μｇ／ｍｌ）に評価法の対照として分注された。
【０１５２】
４つの同一のプレートが生成され、これらの２つにおいて、クラブラン酸カリウム（３３４５４−１００ＭＧ  ＳＩＧＭＡ）が、４μｇ／ｍｌの濃度で、チェッカーボードに加えられた。実験は、クラブラン酸塩あり及びなしで進められた。
【０１５３】
同じデザインだが、アモキシシリン濃度がより低い（カラム１〜９において、５μＭ〜０．０２μＭ）４つのプレートの第二のセットもまた、全ての関連薬濃度が探索されたことを保証するために準備された。
【０１５４】
菌液
使用された培地は７Ｈ９−ＡＤＣ−シロキサポールであった。４．７ｇのミドルブルック  ７Ｈ９  ブロスベースを９００ｍＬのイオン交換水に溶解させた。５ｍＬの１０％ｗ／ｖのシロキサポール及び１０％のアルブミン−デキストロース／カタラーゼ（ＡＤＣ）エンリッチメント（ベクトン・ディッキンソン）が、その後添加された。使用された菌株はM.tuberculosis H37Rvであり、培養が対数増殖期になった時、培養液は約１×１０７ＣＦＵ／ｍＬ（ＯＤ６００＝０．１２５）に標準化された。培養液は、その後、菌液は７Ｈ９−ＡＤＣ−シロキサポールで２００倍に希釈され、この菌液はそれぞれのウェルに５ｘ１０４ＣＦＵｓ／ｍｌで添加された。そのプレートは、３７℃で６日間、インキュベートされた。
【０１５５】
リードアウト
レサズリンがリードアウトとして使用された。レサズリン１錠（Ｒ／００４０／７９＿フィッシャー  サイエンティフィック参照）が、３０ｍｌのＰＢＳに溶解された。この溶液は濾過（０．２２μｍ）により無菌化された。この無菌液２５μｌがそれぞれのウェルに追加され、そのプレートは追加で４８時間、３７℃でインキュベートされた。インキュベート後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５（モレキュラーデバイス）で蛍光を決定した。設定は、励起波長５３０ｎｍ、蛍光波長５９０ｎｍ（カットオフ波長５７０ｎｍ）であった。
【０１５６】
データ解析
各評価プレートには、ＤＭＳＯを含む一連の陰性対照が含まれ、それは、１００％の細菌生育に相当し、一連の陽性対照（１μｇ／ｍｌのリファンピシン）が含まれ、そこでは、１００％の細菌生育阻止が達成される。これらの対照は、Ｚ’の決定を通して評価法の品質を観察するために、またプレートごとの基準値によるデータ（生育％）の標準化ために、使用された。
【０１５７】
異なる場合における、サンフェトリネムのそれぞれ一連の用量反応測定（サンフェトリネムに対する生育％）、すなわち単独療法及びアモキシシリン（異なる濃度における）及び／またはクラブラン酸との組合せは、４つのパラメータ（最大値、最小値、ＸＣ５０及びＨｉｌｌＳｌｏｐｅ）とともに以下のヒルの式に適合された。
【０１５８】
【数１】
2020519592.tif 000026
【０１５９】
ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６において利用可能な方法に適合した非線形回帰曲線が、それぞれの場合のパラメータを計算するために使用された。
【０１６０】
この方程式において、ＸＣ５０は最高値及び最低値の間で生育％の半値に達する濃度を表していることに注意する。重要なパラメータは９０％阻止（つまり、１０％の生育）に達するサンフェトリネムの濃度であり、ここでＩＣ９０により示される。上で示した方程式を使用して、このパラメータは、以下のように、推定パラメータから直接に計算されることができる。
【０１６１】
【数２】
2020519592.tif 000027
【０１６２】
単独療法におけるアモキシシリン特性評価のため、それが９０％阻止に達しなかったため、その代わりに、ＩＣ８０が計算された。このパラメータは、類似的に、相当する用量反応測定、つまりアモキシシリンに対する生育％に適合する非線形により推定されるパラメータより計算された。
【０１６３】
結果
データは表５、図３及び４において報告される。
【０１６４】
【表６】
2020519592.tif 000028
【０１６５】
アモキシシリン単独で試験され、ＩＣ８０値（μｇ／ｍＬ）は４２が観察されたことは注意されるべきである。アモキシシリン及びクラブラン酸カリウムはまた、組合せで試験され、ＩＣ８０値（μｇ／ｍＬ）は３．９が観察された。
【０１６６】
分画阻止濃度係数（ＦＩＣＩ）（Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them. Odds, F.C. 1, s.l., Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2003, Vol. 52)には、Ｌｏｅｗｅ相加性モデルに基づくものであるが、(What is synergy? The Saariselka agreement revisited. Tang J., Wennerberg K. and Aittokallio T. 181, s.l., Frontiers in Pharmacology, 2015, Vol. 6)90%生育阻止（FICI90により示される）のため、ここで、生体外評価法における、この細胞外活性における組合せの相乗効果の評価が考慮される。０．５以下のＦＩＣＩは相乗効果を表すと考えられる。この相乗効果の特性評価／定量化は探索的であり、実際の相乗効果または拮抗作用機構を説明するものではない（Tang J., Wennerberg K及びAittokallio Tにより述べられている）。
【０１６７】
ＦＩＣＩ９０の計算は、サンフェトリネム単独のＩＣ９０、１．２２μｇ／ｍｌ、クラブラン酸塩との組合せにおける０．５５μｇ／ｍｌ、アモキシシリン（１０μｇ／ｍｌ）との組合せにおける０．３３μｇ／ｍｌ、及びアモキシシリン（５μｇ／ｍｌ）とクラブラン酸塩との組合せにおける０．１μｇ／ｍｌを伴う。クラブラン酸塩単独では活性でなく、アモキシシリン単独もクラブラン酸塩との組合せも９０％生育阻害に達しない（図７：アモキシシリン用量反応）ため、ＦＩＣ９０の計算において相当する分画項は０である。
【０１６８】
【数３】
2020519592.tif 000029
これはほとんど１つの希釈液であり、大きな相乗効果を表しているとは考えられない。
【０１６９】
【数４】
2020519592.tif 000030
この組合せは相乗効果を表していると考えられる。
【０１７０】
【数５】
2020519592.tif 000031
この組合せは相乗効果を表していると考えられる。
【０１７１】
実験材料及び方法−サンフェトリネム（ナトリウム塩）とリファンピシン（ＲＩＦ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、デラマニド（ＤＬＤ）及びアモキシシリン（ＡＭＸ）の組み合わせ
菌株及び一般的な生育条件
Ｍｔｂ  Ｈ３７Ｒｖ株は、規定通りに、３７℃で、１０％のミドルブルック  アルブミン−デキストロース−カタラーゼ（ＡＤＣ）（Ｄｉｆｃｏ）、０．２％のグリセロール及び０．０５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）のを添加したミドルブルック  ７Ｈ９  ブロス（Ｄｉｆｃｏ）において増殖させた。
【０１７２】
薬物感受性評価法
この研究において使用される化合物のストック溶液は、プレートの培養の同じ日に、常に新たに製造された。３８４ウェルプレート形式における使用のため、化合物をＤＭＳＯに溶解させ、ＨＰ  Ｄ３０００デジタルディスペンサー及びＨＰ  Ｔ８ディスペンサーヘッドカセット（ＣＶ０８１Ａ参照）を使用し、２倍希釈液で分注した。
【０１７３】
最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、７Ｈ９が基礎とされたブロス培地において決定された。これには、０．２％のグリセロール及びシロキサポールを含まない１０％のＡＤＣが添加されていた。細菌数がＯＤ６００＝０．５〜０．８になるまで生育させ、−８０℃でストック液は凍結された。解凍したらすぐに、細胞は、評価培地において、１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの最終濃度になるように希釈され、５０ｕＬ／１ウェルになるようプレートに分注された。ＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド］（５ｍｇ／ｍＬストック  Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ  １５２２４６５４参照）及びＢａｃｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏルシフェラーゼ評価システム（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）が、Ｍｔｂ  Ｈ３７Ｒｖ株の細胞生育指標として使用された。ルミネセンスは、白い不透明な３８４−プレート（７８１０７５＿Ｇｒｅｉｎｅｒ）の超高感度モードを使用して、Ｂａｃｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  システムのため１ウェル当たり０．０５秒の測定時間で、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチモードプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）において測定され、ＯＤ５８０ｎｍが、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｍ５  （モレキュラーデバイス）リーダーにおいて、ＭＴＴリードアウトのための黒い３８４−マイクロクリアプレート（７８１０９１＿Ｇｒｅｉｎｅｒ）を使用して測定された。
【０１７４】
それぞれ、ＡＴＰ産生の測定（メーカーの指標にしたがった）またはＭＴＴのホルマザンへの変換（６日目にストックから２５ｕＬ／１ウェル、及び７日目に１０％のＳＤＳの２５ｕＬ／１ウェル）の測定前に、プレートは７日間インキュベートされた。薬物未添加（ＤＭＳＯ対照）である内対照ウェルと比較してＭＴＴ変換またはＡＴＰ産生の９０％が抑制される薬の最小濃度が、ＭＩＣ値（ＩＣ９０）を定義するために使用された。
【０１７５】
チェッカーボード評価法
薬物活性は、上で説明したように、ＭＴＴまたはＡＴＰ評価法を使用して、３８４ウェルプレート型において決定された。それぞれの化合物のための分画阻止濃度（ＦＩＣ）は次のように計算された：ＦＩＣＡ  ＝  （化合物Ｂ存在下における化合物ＡのＭＩＣ）／（化合物Ａ単独のＭＩＣ）。同様に、化合物ＢのＦＩＣが計算された。ＦＩＣ係数（ＦＩＣＩ）は次のように計算された：ＦＩＣＩ＝［ＦＩＣＡ＋ＦＩＣＢ］、０．５以下のＦＩＣＩは相乗効果を表すと考えられた。
【０１７６】
サンフェトリネム（ナトリウム塩）とリファンピシンのチェッカーボードプレートが準備された。リファンピシンはカラム１２〜３（０．０８μＭ〜０．０００１５６２５μＭ）の横軸に沿って希釈された、一方で、サンフェトリネムは列Ａ〜Ｇ（１２．８μＭ〜０．４μＭ）の縦軸に沿って希釈された。
【０１７７】
カラム２及び列Ｈは個のＭＩＣ（それぞれサンフェトリネム及びリファンピシン）を計算するために使用された。四分円の同等の位置２、３及び４は、エタンブトール及びデラマニド及びアモキシシリンのために使用された。
【０１７８】
デラマニドは４０ｎＭ〜０．０７８ｎＭに希釈され、エタンブトールは３２μＭ〜０．０６μＭに希釈された。アモキシシリンは１２８μＭ〜０．２５μＭに希釈された。それらの各々は、それぞれ、四分円の同等の位置２及び３に分注された。
【０１７９】
結果
データは表６及び図５〜８において報告されている。表６の全てのＭＩＣ値はμＭで報告されている。
【０１８０】
【表７】
2020519592.tif 000032
【０１８１】
表６では次の用語が使用されている。
Ｃｏｍｐ          化合物
ＭＩＣ            μＭでの最小阻止濃度
ＭＩＣｓｙｎ      他化合物（それぞれＢまたはＡのどちらか）の存在下における、試験
される化合物（ＡまたはＢのどちらか）の相乗的ＭＩＣ
Ｆｏｌｄ          ＭＩＣ／ＭＩＣｓｙｎ
ＦＩＣ            分画阻止濃度、それぞれＢまたはＡ存在下におけるＡまたはＢのＭＩ
Ｃ／ＡまたはＢ単独のＭＩＣ
ＦＩＣＩ          分画阻止濃度係数ＦＩＣ＿Ａ＋ＦＩＣ＿Ｂ、０．５以下の値は相乗的
な相互作用の指標になると考えられる。
【図１】
2020519592.tif 000049
【図２】
2020519592.tif 000050
【図３】
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【図４】
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【図５】
2020519592.tif 000053
【図６】
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【図７】
2020519592.tif 000055
【図８】
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【国際調査報告】
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