(57)【要約】本開示は、パエニバチルス属（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する細菌分離株を含む農業用組成物を適用することにより、植物病を治療、予防、及び／又は制御する方法を提供する。また、本開示は、農業用組成物を植物種子に適用することにより植物種子の耐病性を高める方法、及び細菌分離株を含む農業用組成物を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物に有効量の農業用組成物を適用することを含む植物病を制御する方法であって、農業用組成物は、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、あるいはそれらの変異体の細菌分離株を含む方法。
【請求項２】
細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
農業用組成物は植物の種子、未熟な苗、及び／又は植物の組織に適用される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
植物病は真菌病、細菌病、ウイルス病、又は寄生虫病を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
植物病は、真菌、卵菌、細菌、ウイルス、ウイロイド、ウイルス様生物、フィトプラズマ、原生動物、線虫、寄生植物、又はそれらの組合せを含む病原体によって引き起こされるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
植物病は真菌病である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
真菌病は、白さび病、べと病、うどんこ病、根こぶ病、菌核病、フザリウム萎ちょう病及び腐敗病、ボトリチス腐敗病、炭疽病、リゾクトニア腐敗病、苗立枯病、しみ腐病（ｃａｖｉｔｙ  ｓｐｏｔ）、塊茎の病気、さび病、黒根腐病、輪紋病、アファノマイセス根腐病、アスコキタ襟腐病、グミ茎枯病、アルテルナリア斑点病、根朽病、リングスポット病、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）、セルコスポラ、葉枯病、セプトリア斑点病、葉枯病、又はそれらの組合せを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
真菌病は、マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、フザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、ピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）、及びピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）によって引き起こされるものである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
農業用組成物はバイオコントロール製剤をさらに含み、バイオコントロール製剤は微生物を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
農業用組成物は、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、又は土壌改良剤をさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
殺真菌剤は、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、又はＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標）からの有効成分を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のコロニー形成単位（ｃｆｕ）比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、５０：１〜１：５０、又は１０：１〜１：１０の範囲にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｃｆｕ比は１００：１〜１：１である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ｃｆｕ比は５０：１〜１０：１である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
細菌分離株の濃度は、１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は５×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０８ｃｆｕ／ｍｌである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
細菌分離株を含む培養物の発酵プロセスをさらに含み、発酵プロセスは、
（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び
（２）生産培地で培養物を拡大すること
を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
シード培地は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、及び／又はそれらの組合せを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
農業用組成物は、細菌分離株の濾液を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
農業用組成物は、防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤を含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
植物に有効量の農業用組成物を適用することを含む植物の病害抵抗性を高める方法であって、前記組成物は、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）に属する細菌分離株を含む方法。
【請求項２４】
細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４である、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
植物は植物の種子、未熟な苗、及び／又は植物の組織である、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
植物は、真菌病、細菌病、ウイルス病、又は寄生虫病を含む植物病に感受性である、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
植物病は、真菌、卵菌、細菌、ウイルス、ウイロイド、ウイルス様生物、フィトプラズマ、原生動物、線虫、寄生植物、又はそれらの組合せを含む病原体によって引き起こされるものである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
植物病は真菌病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
真菌病は、白さび病、べと病、うどんこ病、根こぶ病、菌核病、フザリウム萎ちょう病及び腐敗病、ボトリチス腐敗病、炭疽病、リゾクトニア腐敗病、苗立枯病、しみ腐病（ｃａｖｉｔｙ  ｓｐｏｔ）、塊茎の病気、さび病、黒根腐病、輪紋病、アファノマイセス根腐病、アスコキタ襟腐病、グミ茎枯病、アルテルナリア斑点病、根朽病、リングスポット病、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）、セルコスポラ、葉枯病、セプトリア斑点病、葉枯病、又はそれらの組合せを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
真菌病は、マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、フザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、ピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）、ピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、又はそれらの組合せによって引き起こされるものである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
農業用組成物はバイオコントロール製剤をさらに含み、バイオコントロール製剤は微生物を含む、請求項２３〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
バイオコントロール製剤は、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、土壌改良剤、又はそれらの組合せをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
殺真菌剤は、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、又はＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標）からの有効成分を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のｃｆｕ比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、５０：１〜１：５０、又は１０：１〜１：１０の範囲にある、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記ｃｆｕ比は１００：１〜１：１である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ｃｆｕ比は５０：１〜１０：１である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである、請求項２３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
細菌分離株の濃度は、１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は５×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０８ｃｆｕ／ｍｌである、請求項２３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
細菌分離株を含む培養物の発酵プロセスをさらに含み、発酵プロセスは、
（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び
（２）生産培地で培養物を拡大すること
を含む、請求項２３〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
シード培地は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
農業用組成物は、細菌分離株の濾液を含む、請求項２３〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
農業用組成物は、防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤を含む、請求項２３〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、あるいはそれらの変異体の細菌分離株を含む農業用組成物。
【請求項４６】
細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含む、請求項４５に記載の農業用組成物。
【請求項４７】
細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む、請求項４５に記載の農業用組成物。
【請求項４８】
細菌分離株は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で培養される、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項４９】
細菌分離株は、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で培養される、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項５０】
細菌分離株は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４を含む培地で培養される、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項５１】
バイオコントロール製剤をさらに含み、バイオコントロール製剤は微生物を含む、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項５２】
バイオコントロール製剤は、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、土壌改良剤、又はそれらの組合せをさらに含む、請求項５１に記載の農業用組成物。
【請求項５３】
殺真菌剤は、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、又はＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標）からの有効成分を含む、請求項５２に記載の農業用組成物。
【請求項５４】
バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のｃｆｕ比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、５０：１〜１：５０、又は１０：１〜１：１０の範囲にある、請求項５１に記載の農業用組成物。
【請求項５５】
前記ｃｆｕ比は１００：１〜１：１である、請求項５４に記載の農業用組成物。
【請求項５６】
前記ｃｆｕ比は５０：１〜１０：１である、請求項５４に記載の農業用組成物。
【請求項５７】
細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである、請求項４５〜５６のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項５８】
細菌分離株の濃度は、１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は５×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０８ｃｆｕ／ｍｌである、請求項４５〜５７のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項５９】
農業用組成物は、農業上許容される担体、湿潤剤、結合剤、充填剤、有機添加剤、及び界面活性剤のうちの１つ以上を含む、請求項４５〜５８のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項６０】
農業用組成物は、防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤を含む、請求項４５〜５９のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項６１】
農業用組成物でコーティングされた植物種子であって、前記組成物はパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、あるいはそれらの変異体の細菌分離株を含む、植物種子。
【請求項６２】
細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含む、請求項６１に記載の植物種子。
【請求項６３】
細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む、請求項６１又は６２に記載の植物種子。
【請求項６４】
農業用組成物は１×１０３〜１×１０９コロニー形成単位（ｃｆｕ）／種子の範囲の細菌を含む、請求項６１〜６３のいずれか一項に記載の植物種子。
【請求項６５】
農業用組成物は、殺真菌剤、バイオコントロール剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤解毒剤、除草剤、殺虫剤、生物刺激剤、植物成長調節剤、液体肥料、ウイルス阻害剤、又はそれらの組合せを含む、請求項６１〜６４のいずれか一項に記載の植物種子。
【請求項６６】
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、あるいはそれらの変異体の細菌分離株を含む農業用組成物であって、細菌分離株は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で発酵及び／又は培養される、農業用組成物。
【請求項６７】
細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含む、請求項６６に記載の農業用組成物。
【請求項６８】
細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む、請求項６６に記載の農業用組成物。
【請求項６９】
培養培地はＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項６６〜６８のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項７０】
培養培地はＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項６６〜６９のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項７１】
細菌分離株は、
（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び
（２）生産培地で培養物を拡大すること
を含むプロセスにより発酵される、請求項６６に記載の農業用組成物。
【請求項７２】
シード培地は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項７１に記載の農業用組成物。
【請求項７３】
生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項７１に記載の農業用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、又はそれらの変異体に属する細菌分離株を含む農業用組成物を適用することにより、植物の病気又は病原体を予防又は制御する新規な方法に関する。本開示はまた、細菌分離株を植物種子に適用することにより植物の耐病性を増強する方法に関する。さらに、細菌分離株を、単独で又は他の殺真菌剤及び殺細菌剤と組み合わせて、例えば種子処理、畝内施用、葉面施用で、あるいは噴霧制御をローテーションさせる統合管理プログラムで使用する方法が提供される。さらに、本開示は、バチルス属、パエニバチルス属に属する細菌分離株、又はそれらの変異株を含む農業用組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
植物の病気は、農業における食料生産量を大幅に減少させる。植物の病気によって引き起こされる食料生産量の減少は、深刻な社会的及び経済的課題をもたらし、急速に増加する世界人口にとって壊滅的ですらある。毎年、世界の食料生産高の損失の１０％以上は、様々な植物病原体、例えば細菌、真菌、ウイルス、線虫に起因している。
【０００３】
特に、土壌及び葉の病原体は、農業及び食品産業に重大な脅威を引き起こし得る。２００６〜２００９年の土壌由来の菌類及び卵菌に起因する米国の推定ダイズ収量損失は、約５億ブッシェルであった。土壌由来の病原体は、根の腐敗、組織の変色、クラウン腐れ、又は感染した植物の葉の萎れを引き起こし得る。しかし、土壌由来の病原体に対する複雑な土壌環境と条件により、土壌由来の病原体によって引き起こされる病気の特徴を理解することはさらに難しくなる。土壌由来の病原体は、ダイズなどの感染しやすい野菜作物に感染するまでに長年にわたって土壌中に存在し、生き残ることができるため、土壌由来の病原体を制御又は予防することも困難である。
【０００４】
ダイズ病原体には、例えば、フザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）（ダイズ突然死症候群（「ＳＤＳ」）の原因）、マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）（炭腐病の原因）、ピシウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）属及びリゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）（苗の立枯れ及び根腐病の原因）などの多くの種類がある。ダイズの病原体を制御するには、病原体の脅威を防ぎ、実際に広く使用されている殺真菌剤に対する潜在的な病原体抵抗性を管理するために、様々な作用機構（病害抵抗性の植物栽培品種、効果的な殺真菌剤、及び実証済みの栽培管理手法）が必要になることが多い。
【０００５】
しかし、現在の化学殺真菌剤は、土壌由来の病原体や葉の病原体に対してあまり効果的ではない。ダイズＳＤＳ病に対し高い効果を持つ化学的管理の選択肢はなかった。ＳＤＳに対し、量的形質遺伝子座によって制御される部分的な耐性は存在するものの、ダイズ品種への組み込みは、遺伝率が低く、圃場での効力が弱いために遅れている。連邦政府は依然として、殺真菌剤の過剰使用を減らし、環境の持続可能性を高め、殺真菌剤耐性病原体が発生するリスクを下げるために、植物病原体防除のための合成化学物質の代替策を特定することを国の優先事項と考えている。
【０００６】
したがって、当分野において、真菌性の病気及び土壌由来の及び葉の病原体によって引き起こされる病気を含む植物病に対する有効な農業用組成物又は方法を開発する必要性が残されている。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、植物及び／又は植物の種子に有効量の農業用組成物を適用することを含む、又は本質的にそれからなる、又はそれからなる植物病を制御する方法に関し、前記組成物は、バチルス又はパエニバチルス又はそれらの変異体に属する細菌分離株を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。一実施形態において、変異体は野生型細菌分離株の重要な特徴を有する。一態様では、細菌分離株は、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、パエニバチルス属、又はパエニバチルス・ポリミキサ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）に属する。一実施形態では、細菌株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含むか、又は本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。各細菌株のサンプルは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）に寄託されている。本開示の細菌分離株又はそれらの変異体は、遺伝子的に改変されていても遺伝子的に改変されていなくてもよい。植物の遺伝子改変の方法は、当業者に知られている。非限定的な遺伝子改変には、遺伝子工学、選択、ＣＲＩＳＰＲ、及び自然進化が含まれる。
【０００８】
別の実施形態では、農業用組成物は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、及びＧＢ６−Ｍ３４を含む群から選択される培地を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。さらなる実施形態において、農業用組成物は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９又はＢＳ３−Ｍ１０を含む培地を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにそれからなる。別の実施形態では、農業用組成物は、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４を含む培地を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はさらにそれからなる。
【０００９】
一実施形態では、農業用組成物は、５〜２０ｇ／Ｌの大豆ペプトン、２〜１０ｇ／Ｌの尿素、１〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌのスクロースを含む。別の実施形態において、農業用組成物は、５〜２０ｇ／Ｌの大豆ペプトン、２〜１０ｇ／Ｌの尿素、０〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌのスクロースを含む。さらなる実施形態では、農業用組成物は、５〜２０ｇ／Ｌの大豆ペプトン、２〜１０ｇ／Ｌの尿素、０〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌのスクロースを含む。別の実施形態では、農業用組成物は、１０〜３０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌのスクロースを含む。一実施形態では、農業用組成物は、１０〜３０ｇ／Ｌのマルトリン（Ｍａｌｔｒｉｎ、商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、２〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、及び０．１〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含む。本開示の一態様では、農業用組成物は、５〜３０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、０．１〜５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、及び０．２〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含む。一実施形態では、農業用組成物は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、２〜１５ｇ／Ｌの酵母エキス、２〜１５ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．２〜１．５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、及び０．５〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含む。別の実施形態では、農業用組成物は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、５〜２０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、及び０．２〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含む。さらなる実施形態において、農業用組成物は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．２〜１．５ｇ／Ｌの硫酸アンモニア、０．２〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含む。さらに別の実施形態では、農業用組成物は、５〜２０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．５〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、１０〜３０ｇ／Ｌのスクロース、及び０．１〜５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウムを含む。さらなる実施形態において、農業用組成物は、３０〜７０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、５〜１５ｇ／Ｌの不活性乾燥酵母、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．５〜３ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、０．５〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．２〜１．５ｍｌの消泡剤を含む。さらなる実施形態において、農業用組成物は、５０〜１００ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１０〜２０ｇ／Ｌの酵母、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜４ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、１〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．２〜１．５ｍｌの消泡剤を含む。
【００１０】
一態様では、農業用組成物は、殺真菌剤、バイオコントロール剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤解毒剤、除草剤、殺虫剤、生物刺激剤、植物成長調節剤、液体肥料、又はウイルス阻害剤を含む。一実施形態では、殺真菌剤は、キャプタン、チラム（ｔｈｉｒａｍ）、メタラキシル、フルジオキソニル、オキサジキシル、フサリシジン、又はこれらの材料のそれぞれの異性体を含む。別の実施形態では、農業用組成物は溶解酵素を含む。
【００１１】
別の態様において、植物病は卵菌病、真菌病、ウイルス病、又は細菌病を含む。一実施形態において、植物病は、ピシウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）種又はフィトフトラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）種の卵菌によって、及び／又は、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）種、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）種、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）種、バーティシリウム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）種、マクロフォミナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ）種、ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）種、レプトスファリア（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）種、ポドスファエラ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ）種、又はスクレロチニア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）種の真菌によって引き起こされる。
【００１２】
一実施形態では、農業用組成物が種子に適用される場合、農業用組成物は１×１０３〜１×１０９コロニー形成単位（ｃｆｕ）／種子の範囲の細菌を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。別の実施形態において、農業用組成物が種子に適用される場合、農業用組成物は１×１０４〜１×１０８ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。さらなる実施形態において、農業用組成物が種子に適用される場合、農業用組成物は１×１０５〜１×１０７ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。別の実施形態において、農業用組成物が種子に適用される場合、農業用組成物は１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。一態様では、ｃｆｕ／種子は、ｃｆｕ回収により評価される。別の態様では、種子はポリマーでコーティングされている。農業用組成物を担体に付着させることも考えられる。
【００１３】
別の態様において、農業用組成物が植え付け前又は植え付け中の植物又は種子に適用される場合、農業用組成物は畝内に適用される。別の態様では、農業用組成物は種子又は植物の近傍に適用される。一態様では、農業用組成物は植物に直接適用される。別の実施形態において、農業用組成物は植物の茎及び葉に適用される（例えば葉面施用）。さらなる実施形態において、農業用組成物は、芽、花、及び果実及び種子鞘などの種子を含む発育構造を含むがこれらに限定されない生殖組織に適用される。
【００１４】
別の態様では、本開示は、植物病を予防及び／又は制御する方法に関し、この方法は有効量の農業用組成物を植物の種子又は地上部に適用することを含み、前記組成物は、バチルス属又はパエニバチルス属に属する細菌分離株を含む。一態様では、細菌分離株はバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、パエニバチルス属、又はパエニバチルス・ポリミキサ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）に属する。一態様において、農業用組成物は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。細菌単離物は、当技術分野で公知の培地（例えば、ＬＢ及びＴＳＢ）又は本開示の特別な培地で発酵又は増殖させることができる。特別な培地は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組み合わせを含む。したがって、さらなる実施形態では、農業用組成物は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４の培地、又はそれらの組み合わせを含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１５】
一実施形態では、種を植え付ける前に乾燥させる。さらなる実施形態において、種子を、植え付ける前に安定条件下で保存する。一実施形態では、安定条件は室温であり、１５℃〜３０℃の範囲である。別の実施形態では、安定条件は、種子が植えられるまでは水分が吸収されない密閉状態を含む。多数の種子を保存するには、密閉状態がより望ましい。種子から空気と酸素を排除すると、種子の栄養素の酸化を防ぐことができる。別の態様では、種子は、培地でコーティングされ、種子を植え付ける前に乾燥させる。一実施形態では、培養培地は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組み合わせを含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる。別の態様において、種子を植え付ける前に、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組み合わせを含むか、又は本質的にそれからなるか、又はそれからなる培地で種子をコーティングする。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ＴＳＢ（「トリプチックソイブロス」−Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ２２０９２）、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、又はＧＢ６−Ｍ３培地のいずれかでの様々な希釈率（希釈なし（１×）、１０倍希釈（１／１０×）、及び５０倍希釈（１／５０×））のＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０の全ブロス（ＷＢ）発酵を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ試験でのピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）の空間（クリアリング）（ｍｍ）の直径を示す。
【図２−１】ＧＢ６−Ｍ３培地で培養した経過発酵時間（ＥＦＴ）にわたるＭＳ１４７９及びＭＳ２４１４の発酵プロファイルを示す。プロファイルには、ｐＨ、ｍｌあたりのコロニー形成単位（ｃｆｕ）、及びＭＳ１４７９の総炭水化物（ｇ／Ｌ）（図２Ａ）、粘度（ｃＰ）、グルコース（ｇ／ｍｌ）、スクロース（ｇ／ｍｌ）、及びＭＳ１４７９のＣＯ２（％）（図２Ｂ）、ｐＨ、総炭水化物（ｇ／Ｌ）、ＭＳ２４１４のｃｆｕ／ｍｌ（図２Ｃ）、及び粘度（ｃＰ）、ｐＨ、スクロース（ｇ／Ｌ）、及びＭＳ２４１４のグルコース（ｇ／Ｌ）（図２Ｄ）が含まれる。
【図２−２】同上。
【図３】ＴＳＢ、ＢＳ３、ＧＢ６−Ｍ、又はＬＢ培地のいずれかで増殖させたＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０のＷＢのｃｆｕ／ｍｌと、０．１ｍｌのＷＢサンプルのうちの１つで処理した直後（ｃｆｕ処理後）及び２ヵ月の保管後（ｃｆｕ２ヵ月の保管後）に測定したダイズ種子から回復したｃｆｕ／ｍｌの比較を示す。
【図４】ＭＳ１４７９で処理したか又は処理しなかった８日齢の発芽ダイズ種子の根からのｃｆｕ回収を示す。左のプレート：未処理のダイズの種子のもの。右プレート：パエニバチルス（ＭＳ１４７９）で処理したダイズ種子。パエニバチルスに典型的な多数の小さく均一なコロニーが右プレートに存在していた。
【図５−１】ＳＦサンプルの説明表に示されている様々なサンプルによる、マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、ピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）、及びピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抑制（クリアリングのゾーンとして明らか）を示す。各分離株は４つの培地のそれぞれで増殖させ、病原体プレートごとにそれぞれのＷＢをスポットした。各プレートで各サンプルをスポットする場所には、特定のサンプル番号のラベルを付している。
【図５−２】同上。
【図６】フルジオキソニル（０．０２ｍｇ／種子）、メタラキシル（０．０４６ｍｇ／種）で処理した発芽ダイズ種子、又はリゾクトニア・ソラニを接種したポッティングミックスに種子を植えた後、ＧＢ６−Ｍ８で増殖させたＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４の全ブロスの病気の評価（０〜５の評価尺度、０は目に見える病気症状なし、５は高レベルの病気症状）を示す。
【図７】ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２の全ブロス培養物によるＦ．ビルグリフォルメ（ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す。全てＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた。
【図８】ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２の培養物からの無菌濾液によるＦ．ビルグリフォルメのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す。全てＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた。
【図９】ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２の全ブロス培養物によるＲ．ソラニのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す。全てＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた。
【図１０】ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２の培養物からの無菌濾液によるＲ．ソラニのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す。全てＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた。
【図１１】ポットアッセイにおいてＲ．ソラニの存在下で出芽したダイズ実生の数（５個中）を示す。
【図１２】ポットアッセイにおいてＲ．ソラニの存在下で発芽したダイズ実生の成長スコア評価（１〜１２）を示す。
【図１３】ポットアッセイにおいてＲ．ソラニの存在下で発芽したダイズ実生の病害重症度評価（０〜５）を示す。
【図１４−１】２０Ｌ発酵槽内においてＧＢ６−Ｍ８で増殖させた細菌分離株による、様々な発酵経過時間での真菌種のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す：ＷＢ（１×）又はＭＳ２３７９の無菌濾液によるＰ．イレギュラーレコロニーの阻害直径（図１４Ａ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２４１４の無菌濾液によるＰ．イレギュラーレコロニーの阻害直径（図１４Ｂ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２３７９の無菌濾液によるＲ．ソラニコロニーの阻害直径（図１４Ｃ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２４１４の無菌濾液によるＲ．ソラニコロニーの阻害直径（図１４Ｄ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２３７９の無菌濾液によるＦ．ビルグリフォルメコロニーの阻害直径（図１４Ｅ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２４１４の無菌濾液によるＦ．ビルグリフォルメコロニーの阻害直径（図１４Ｆ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２３７９の無菌濾液によるＢ．シネレアコロニーの阻害直径（図１４Ｇ）；ＷＢ（１×）又はＭＳ２４１４の無菌濾液によるＢ．シネレアコロニーの阻害直径（図１４Ｈ）。
【図１４−２】同上。
【図１５】３０分間のＵＶ照射の前後における、ＬＢ培地で増殖させた大腸菌、ＧＢ６−Ｍ８培地のＭＳ２３７９、及びＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させたＭＳ２４１４のｍｌ当たりのｃｆｕを示す。
【図１６−１】ＧＢ６−Ｍ１０培地で増殖させたＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４の非照射及びＵＶ照射（３０分）全ブロスのンビトロアッセイにより測定したバイオコントロール活性を、Ｂ．シネレア（図１６Ａ）、Ｐ．イレギュラーレ（図１６Ｂ）、Ｒ．ソラニ（図１６Ｃ）、及びＦ．ビルグリフォルメ（図１６Ｄ）に対して示す。
【図１６−２】同上。
【図１７】ピシウム・イレギュラーレの存在下での苗の出芽（図１７Ａ）及び成長スコア（図１７Ｂ）を示す。種子をメタラキシル（０．０４６ｍｇＡＩ／種）、Ｓｕｂｔｉｌｅｘ（１ｇ／１００ｍｌの再構成粉末を２０μ／種）、２０μｌの全ブロス（ＷＢ）、及びＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させたＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０の無菌濾液で処理した。
【図１８】市販のバイオコントロール基準であるＤｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）５５及びＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）ＷＧ及び殺真菌剤Ｄｙｎａ−Ｓｈｉｅｌｄ（商標）メタラキシル１４ｄと比較した、殺真菌剤Ｓａｔｏｒｉ（商標）あり又はなしでＧＢ６−Ｍ３１で発酵させたＭＳ２３７９で処理したダイズ植物の、植え付け及び接種後のフィトフトラ・ソジャエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｏｊａｅ）根病スコアを示す。バーの上にある共通する文字は、最小有意差検定を使用してΡ＝０．０５で有意な差がないことを示す。
【図１９】野外研究におけるトウモロコシへのＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４の畝内散布の結果を示す。ＬＰＩ６５６８＝ＭＳ２３７９；ＬＰＩ６５６９＝ＭＳ２４１４。
【図２０】ＧＢ６−Ｍ３１培地で発酵させたＭＳ２３７９による４種類の芝生の病気に対する未処理対照に対する病気制御の割合を示す。発酵物は、芝生の病気に感染した確立された区画に９．３５、２３．４、及び４６．８Ｌ／ｈａ（１、２．５、及び５ガロン／エーカー）を散布することによって適用した。
【図２１】バイオコントロールサンプル及び対照で処理された、接種７日後の分離されたキャノーラの葉上のボトリチス・シネレアに起因する灰色かび病の直径を示す。
【図２２Ａ】中空繊維フィルターを使用した限外濾過後の発酵全ブロス、保持液及び透過液中のｃｆｕ濃度の比較を示す。
【図２２Ｂ】中空繊維フィルターを使用した限外濾過後の発酵全ブロス、保持液及び透過液におけるプロテアーゼ活性の比較を示す。
【図２３Ａ】室温（２５℃）で２か月保管した後のＧＢ６−Ｍ３１中のＭＳ２３７９のｃｆｕを示す。
【図２３Ｂ】４０℃で２か月保管した後のＧＢ６−Ｍ３１中のＭＳ２３７９のｃｆｕを示す。
【図２３Ｃ】発酵全体を通じて２６℃での発酵物、及び２５℃及び４０℃での保管中、４８時間の時点で２６℃から３５℃への温度上昇を伴う発酵物からのＷＢの安定性の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
この説明を読めば、様々な代替実施形態及び代替用途で本開示を実施する方法が当業者には明らかになるであろう。しかしながら、本開示の全ての実施形態が本明細書に記載されているわけではない。本明細書に提示される実施形態は、限定ではなく例示としてのみ示されていることが理解されるであろう。したがって、様々な代替実施形態のこの詳細な説明は、以下に記載される本開示の範囲又は広さを制限するものと解釈されるべきではない。
【００１８】
本開示を開示及び説明する前に、以下に説明する態様は、特定の組成物、そのような組成物の調製方法、又はその使用に限定されず、したがって当然ながら変更され得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明するためだけのものであり、限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【００１９】
この開示を通して、様々な刊行物、特許、及び公開された特許明細書が、書誌の引用によって参照される。これらの刊行物、特許、及び公開された特許明細書の開示は、参照によりその全体が本開示に組み込まれる。
【００２０】
定義
別様に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。
【００２１】
本明細書及び添付の特許請求の範囲における多くの用語については、以下の意味を持つものとして定義する。
ここで使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本開示を限定することを意図するものではない。本明細書で使用される単数形「１つ」及び「その」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数形も含むことを意図している。
【００２２】
全ての数値表示、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、量、及び分子量は、範囲も含めて、必要に応じて（＋）又は（−）に１０％、１％、又は０．１％変化する近似値である。常に明示的に述べられているわけではないが、全ての数値表示の前に「約」という用語が伴ってもよいことを理解されたい。常に明示的に述べられているわけではないが、本明細書に記載の試薬は単に例示であり、その均等物が当技術分野で知られていることも理解されたい。
【００２３】
「約」という用語は、例えば温度、時間、量、濃度など（範囲も含む）の数値表示の前に使用される場合、（＋）又は（−）に１０％、５％、１％、又はその間の部分範囲又は部分値だけ変化し得る近似値を示す。好ましくは、投与量に関して使用される場合の用語「約」は、投与量が＋／−１０％変動し得ることを意味する。
【００２４】
用語「含む」は、農業用組成物及び方法が列挙された要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味することを意図している。「本質的に〜からなる」は、組成物及び方法を定義するために使用される場合、その組合せにとって本質的に重要な他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書で定義される要素から本質的になる農業用組成物は、請求の範囲に係る基本的かつ新規の特性に実質的に影響を及ぼさない他の要素を除外しない。「〜からなる」とは、微量を超える他の成分及び記載されている実質的な方法ステップを除外することを意味する。これらの移行句のそれぞれによって定義される実施形態は、本開示の範囲内にある。
【００２５】
「治療する」又は「治療」という用語は、植物における本明細書に記載の病気の治療を包含し、以下を含む：（ｉ）病気を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること；（ｉｉ）病気を緩和すること；（ｉｉｉ）病気の進行を遅らせること；（ｉｖ）病気又は障害の１つ又は複数の症状の進行を阻害、軽減、又は遅らせること；及び／又は（ｖ）病気を引き起こす生物の成長を低下させること。例えば、土壌伝染性又は葉の病原体に関連する病気の治療には、根腐れ、組織の変色、クラウン腐れ、及び／又は葉の萎れなどの軽減が含まれるが、これらに限定されない。
【００２６】
植物への組成物、阻害剤、又は薬物の「投与」という用語には、意図する機能を果たすために農業用組成物を植物に導入又は送達する任意の経路が含まれる。投与は、植物の近くの畝内を含む、葉及び生殖組織を含む植物の栄養組織への任意の適切な経路によって、又は植え付け前に植物の種子を前処理することによって実施することができる。
【００２７】
また、記載されている医学的病気及び状態の治療又は予防の様々な様式は、「実質的」を意味することを意図しており、これには完全な治療だけでなく、完全な治療又は完全な予防に満たない、いくつかの生物学的又は医学的に関連する結果が達成されるような場合も含まれることも理解されたい。
【００２８】
本願で使用する「有効量」という用語は、植物病を阻害、緩和、及び／又は抑制することができる組成物の量を指す。正確な有効量は、植物の種類、病気、感染レベル、及び／又は植物の病気を引き起こす病原体の種類によって異なる。
【００２９】
本願で使用する「植物」という用語は、広い意味で、作物、野菜、花卉、観葉植物、芝草、果物を含むがこれらに限定されない草本品種だけでなく、木、低木なども含む。作物の非限定的な例には、トウモロコシ、米、小麦、大麦、ライ麦、エンバク、モロコシ、綿、大豆、落花生、ソバ、ビート、ナタネ、ヒマワリ、サトウキビ、大麻、及びタバコが含まれる。野菜又は果物の非限定的な例には、ナス科の野菜（ナス、トマト、ピメント、コショウ、ジャガイモなど）、ウリ科の野菜（キュウリ、カボチャ、ズッキーニ、スイカ、メロン、スカッシュなど）、アブラナ科の野菜（ダイコン、カブ、セイヨウワサビ、コールラビ、ハクサイ、キャベツ、カラシナ、ブロッコリー、カリフラワーなど）、キク科の野菜（ゴボウ、シュンギク、アーティチョーク、レタスなど）、ユリ科の野菜（ネギ、タマネギ、ニンニク、及びアスパラガス）、セリ科の野菜（ニンジン、パセリ、セロリ、パースニップなど）、アカザ科の野菜（ホウレンソウ、フダンソウなど）、シソ科の野菜（シソ、ミント、バジルなど）、イチゴ、サツマイモ、ヤマノイモ、コロカシアが含まれる。果物の非限定的な例には、仁果類（リンゴ、セイヨウナシ、ナシ、カリン、マルメロなど）、核果類（モモ、プラム、ネクタリン、ウメ、サクランボ、アプリコット、プルーンなど）、柑橘類（ウンシュウミカン、オレンジ、レモン、ライム、グレープフルーツなど）、殻果類（クリ、クルミ、ヘーゼルナッツ、アーモンド、ピスタチオ、カシューナッツ、マカダミアナッツなど）、液果類（ブルーベリー、クランベリー、ブラックベリー、ラズベリーなど）、ブドウ、カキ、オリーブ、スモモ、バナナ、コーヒー、ナツメヤシ、ココナッツが含まれる。木の非限定的な例には、果樹、茶、桑、顕花植物、及び街路樹（アッシュ、カバノキ、ハナミズキ、ユーカリ、イチョウ、ライラック、メープル、コナラ、ポプラ、ユダの木、フウ、プラタナス、ケヤキ、クロベ、モミの木、ツガ、セイヨウネズ、マツ、アカエゾマツ、イチイ）が含まれる。植物は、上記の品種の天然種及び遺伝子操作された品種の両方を指す。
【００３０】
「農業用組成物」という用語は、植物の成長速度又は健康状態を改善し、植物又はその果実の収量を増加させ、かつ／又は植物が成長する環境を改善又は変化させることができる材料又は材料の組合せを指す。一実施形態において、農業用組成物は、植物の健康、成長、及び／又は収穫高に影響を及ぼす植物病を予防、阻害、又は緩和することができる。別の実施形態では、農業用組成物は、植物の成長のために土壌に様々な栄養素を補充し、植物から栄養応答を生み出す。別の実施形態では、農業用組成物は、植物病を阻害することができる微生物種を含む。微生物種は、農業用組成物で使用される場合、微生物種がその天然の対応物とは大きく異なる特性を与えられるように、培地で発酵又は培養されてもよい。例えば、微生物種は、本開示の農業用組成物で使用される場合、同じ数のコロニー形成単位を使用した場合でも、自然から直接得られる同じ種よりも特定の植物病原体に対して著しく効果的になり得る。明確な特性は、農業用組成物の自然種からは期待されていない。農業用組成物中の他の成分は、自然界の微生物種と必ずしも共存する必要はない。一実施形態では、農業用組成物は、湿潤剤、結合剤、充填剤、防腐剤、ミネラル、アジュバント、増粘剤、生物保護剤、浸透圧保護剤、又は有機添加剤を含む他の成分のうちの少なくとも１つ又は複数を含む。
【００３１】
本明細書で使用される場合、ＭＳ１４７９は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０１として寄託された細菌株を指す。
本明細書で使用される場合、ＭＳ２３７９は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０３として寄託された細菌株を指す。
【００３２】
本明細書で使用される場合、ＭＳ２４１４は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０４として寄託された細菌株を指す。
本明細書で使用される場合、ＭＳ２８２０は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７１０として寄託された細菌株を指す。
【００３３】
本明細書で使用される場合、ＭＳ０６３３は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７００として寄託された細菌株を指す。
本明細書で使用される場合、ＭＳ２３３５は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０２として寄託された細菌株を指す。
【００３４】
本明細書で使用される場合、ＭＳ２６５２は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０５として寄託された細菌株を指す。
本明細書で使用される場合、ＭＳ２６５８は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０６として寄託された細菌株を指す。
【００３５】
本明細書で使用される場合、ＭＳ２６８１は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０７として寄託された細菌株を指す。
本明細書で使用される場合、ＭＳ２６９７は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０８として寄託された細菌株を指す。
【００３６】
本明細書で使用される場合、ＭＳ２７１２は、ＡＴＣＣ特許寄託指定番号ＰＴＡ−１２４７０９として寄託された細菌株を指す。
湿潤剤の非限定的な例には、フェニルナフタレンスルホネート、アルキルナフタレンスルホネート、アルキルナフタレンスルホン酸ナトリウム、スルホン化アルキルカルボキシレートのナトリウム塩、ポリオキシアルキル化エチルフェノール、ポリオキシエトキシ化脂肪アルコール、ポリオキシエトキシ化脂肪アミン、リグニン誘導体、アルカンスルホネート、アルキルベンゼンスルホネート、ポリカルボン酸の塩、スルホコハク酸のエステルの塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルポリグリコールエーテルスルホン酸塩、アルキルエーテルリン酸塩、アルキルエーテル硫酸塩、及びアルキルスルホコハク酸モノエステルが挙げられる。
【００３７】
湿潤剤の非限定的な例には、ポリビニルアルコール、フェニルナフタレンスルホン酸、リグニン誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリアルキルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、ポリエトキシ化脂肪酸、ポリエトキシ化脂肪アルコール、エチレンオキシドコポリマー、プロピレンオキシドコポリマー、ポリエチレングリコール及びポリエチレンオキシドが挙げられる。
【００３８】
充填剤の非限定的な例には、ベントナイト、サブベントナイト、アタパルジャイト、カオリナイト、モンモリロナイト、ボーキサイト、水和アルミナ、焼成アルミナ、珪藻土、チョーク、フラー土、ドロマイト、キースラガー、黄土、プロフィライト、タルク、バーミキュライト、石灰、天然の及び合成のケイ酸塩、シリカ、及び陶土。
【００３９】
添加物の湿潤剤の非限定的な例には、主要栄養素、微量栄養素堆肥、天然元素、天然生物、トリコデルマ、フミン酸抽出物、バチルス・チューリンゲンシス、ウイルス、天然菌類、植物抽出物、除虫菊、生物的防除製品、天然油、天然抽出物、ミネラル及び尿素群が挙げられる。
【００４０】
本願で使用される「殺虫剤」という用語は、昆虫を殺す物質だけでなく、昆虫、カイガラムシ、及びダニに有害な物質を意味するように広い意味で使用される。
本明細書で使用される「殺真菌剤」という用語は、真菌及び卵菌（疫病菌、胞子などを含む）を殺す物質だけでなく、真菌及び卵菌に有害な物質を意味するように広い意味で使用される。
【００４１】
「除草剤」という用語は、植物の成長を制御又は変化させる化合物を意味するように本願で使用される。制御又は変化させる効果には、自然な発育からのあらゆる逸脱、例えば、枯らすこと、遅延させること、葉焼け、矮化などが含まれる。除草剤の非限定的な例には、アミド除草剤、芳香族酸除草剤、ヒ素系除草剤、ベンゾフラニルアルキルスルホネート除草剤、ベンゾチアゾール除草剤、ベンゾイルシクロヘキサンジオン除草剤、カルバメート除草剤、カルバニレート除草剤、シクロヘキセンオキシム除草剤、シクロプロピルイソオキサゾール除草剤、ジカルボキシイミド除草剤、ジニトロアニリン除草剤、ジニトロフェノール除草剤、ジフェニルエーテル除草剤、ジチオカルバメート除草剤、ハロゲン化脂肪族除草剤、イミダゾリノン（ｉｍｉｄａｚｏｌｉｎｏｎｅ）除草剤、無機除草剤、ニトリル除草剤、有機リン除草剤、オキサジアゾロン除草剤、オキサゾール除草剤、フェノキシ除草剤、フェニレンジアミン除草剤、ピラゾール除草剤、ピリダジン除草剤、ピリダジノン除草剤、ピリジン除草剤、ピリミジンジアミン除草剤、ピリミジニルオキシベンジルアミン除草剤、四級アンモニウム除草剤、チオカルバメート除草剤、チオ炭酸塩除草剤、チオ尿素除草剤、トリアジン除草剤、トリアジノン除草剤、トリアゾール除草剤、トリアゾロン除草剤、トリアゾロピリミジン除草剤、未分類除草剤、ウラシル除草剤、及び尿素除草剤が挙げられる。
【００４２】
本願で使用される「除草剤解毒剤」という用語は、標的とする雑草種における活性を著しく低下させることなく、除草剤による損傷から植物を選択的に保護する化合物を指す。
本願で使用される「殺線虫剤」という用語は、植物を線虫から保護することができる化合物を指す。殺線虫剤の非限定的な例には、アベルメクチン殺線虫剤、植物性殺線虫剤、カルバメート殺線虫剤、薫蒸殺線虫剤、有機リン殺線虫剤、未分類殺線虫剤などが含まれる。
【００４３】
本願で使用される「殺細菌剤」という用語は、細菌種の機能、増殖、又は病原性活性を阻害、抑制、及び／又は制限できる任意の作用剤、組成物、化合物、生物製剤、及び化学物質を意味する。
【００４４】
本願で使用される場合、本出願で互換的に使用される用語「分離株」及び「株」は、単一の微生物コロニーを培養することにより得られる分離株など、その天然起源から分離した純粋な微生物培養物を指す。一実施形態では、分離株は、異種の野生の微生物集団に由来する純粋な培養物である。
【００４５】
本願で使用される「株」という用語は、同じ系統の他の分離株又は株とは異なる、同じ系統に属する表現型及び／又は遺伝子型特性を示す分離株又は分離株のグループを指す。
本願で使用される「ウイルス阻害剤」という用語は、ウイルスの機能、増殖、又は病原性活性を阻害、抑制、及び／又は制限できる任意の作用剤、組成物、化合物、生物製剤、及び化学物質を意味する。
【００４６】
本明細書で使用する場合、「培地」という用語は、液体ブロス及び培地で増殖した細胞が除去される場合の残りの培地、例えば、液体ブロスで増殖した細胞が遠心分離、ろ過、沈降、又は当技術分野で周知の他の手段によって除去されるときに残る上清を含むがこれらに限定されない、微生物の培養に使用されるあらゆる種類の培地を指す。
【００４７】
本願で使用する場合、「全培養ブロス」、「全ブロス」、又は「ＷＢ」という用語は、培地中の微生物の液体培養物を指す。
本願で使用する場合、「全ブロス無菌濾液」、「無菌濾液」、又は「ＳＦ」という用語は、０．２２μｍフィルターなどのサイズ排除フィルターの使用により無傷の細菌細胞が除去された、全培養ブロスから分離された液体を指す。
【００４８】
本願で使用する場合、「ＢＳ３」という用語は、５〜２０ｇ／Ｌの大豆ペプトン、２〜１０ｇ／Ｌの尿素、１〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌのスクロースを含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００４９】
本願で使用する場合、「ＢＳ３−Ｍ２」という用語は、５〜２０ｇ／Ｌの大豆ペプトン、２〜１０ｇ／Ｌの尿素、１〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、及び１０〜３０ｇ／Ｌスクロースを含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５０】
本願で使用する場合、「ＢＳ３−Ｍ９」という用語は、５〜２０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．５〜５ｇ／ＬのＣａＣｌ２、４ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、３．５ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、１０〜３０ｇ／Ｌのスクロース、及び０．１〜５ｇ／Ｌ硫酸アンモニウムを含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５１】
本願で使用する場合、「ＢＳ３−Ｍ１０」という用語は、５〜１５ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、２〜１０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２〜１０ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、１０〜３０ｇ／Ｌのスクロース、及び０．１〜５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウムを含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５２】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ」という用語は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、１〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、１〜１０ｇ／Ｌのカゼイン加水分解物、及び０〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５３】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ３」という用語は、１０〜３０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、２〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、及び０．１〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５４】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ７」という用語は、１０〜３０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、２〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、０．１〜５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、及び０．２〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５５】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ８」という用語は、１０〜３０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、２〜１５ｇ／Ｌの酵母エキス、５〜２０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．２〜１．５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、及び０．２〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５６】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ９」という用語は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、５〜２０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、及び０．２〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５７】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ１０」という用語は、５〜４０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１〜１０ｇ／Ｌの酵母エキス、１〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．２〜２ｇ／Ｌのアンモニア硫酸塩、及び０〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５８】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ２２」という用語は、５０〜１００ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、１０〜２０ｇ／Ｌ酵母エキス、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜４ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、１〜４ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．１〜１．５ｍｌ／Ｌの消泡剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００５９】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ２３」という用語は、５０〜１００ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２０ｇ／Ｌのデキストロース、１０〜２０ｇ／Ｌの酵母エキス、５〜１５ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜３ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、１〜４ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．１〜１．２ｍｌ／Ｌの消泡剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００６０】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ３１」という用語は、３０〜７０ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、５〜１５ｇ／Ｌの酵母、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、０．５〜３ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、０．５〜３ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．２〜１．５ｍｌ／Ｌの消泡剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００６１】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ３３」という用語は、５０〜１００ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、５〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１０〜２０ｇ／Ｌの酵母、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜４ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、１〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．２〜１．５ｍｌ／Ｌの消泡剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００６２】
本願で使用する場合、「ＧＢ６−Ｍ３４」という用語は、５０〜１００ｇ／Ｌのマルトリン（商標）（Ｍ−２５０又はＭ−１８０）、１０〜２５ｇ／Ｌのデキストロース、１〜１０ｇ／Ｌの酵母、２〜１０ｇ／Ｌの低脂肪大豆粉、１〜４ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、２〜５ｇ／ＬのＣａＣＯ３、及び０．２〜１ｍｌ／Ｌの消泡剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる培地を意味する。
【００６３】
本開示における「担体」という用語は、植物、種子、又は土壌への農業用組成物の適用を促進するために、農業用組成物と組み合わされる天然又は合成の有機又は無機物質を意味する。したがって、この担体は一般に不活性かつ生分解性であり、食品の安全性にとって許容できるものでなければならない。担体は固体であってよく、これには、限定するものではないが、粘土、泥炭、無機土壌、天然又は合成ケイ酸塩、シリカ、樹脂、ワックス、固体肥料、植物廃棄物（廐肥、堆肥、大豆ミール、大豆油及び落花生油、小麦ふすま、キノコ廃菌床、バガス、植物の残骸など）、バーミキュライト  パーライト、粉砕した岩石リン酸塩、硫酸カルシウム、ポリアクリルアミドゲル、アルギン酸塩ビーズ、珪藻土などが含まれ、あるいは液体（水、アルコール、特にブタノール）、炭水化物、グルコース、栄養添加物など）であってもよい。
【００６４】
本願で使用する場合、「種子処理」、「種子コーティング」、又は「種子処理製剤」という用語は、種子を植える前又は植え付け中に材料を種子に適用することを指す。一実施形態では、種子は、土壌、液体、又は種子発芽に適した培地に植えられる。適用された材料は、種子の取り扱い特性を改善し、発芽前及び／又は発芽中の種子を保護し、発芽を助け、及び／又は生じる植物の成長を促進することができる。いくつかの実施形態では、種子の取り扱い特性又は他の物理的特性を改善し、他の農学的に活性な成分を含めないために、種子処理が採用される。別の実施形態では、種子処理において、１つ以上の活性成分を種子に適用する。この１つ以上の活性成分は、土壌伝染性の（又は葉の）病気及び昆虫を予防し又はそれらに対処することにより、均一な苗立ちを促進する。
【００６５】
本願で使用する場合、「シード培地」という用語は、発酵プロセスの開始を助ける調製物を指す。一実施形態では、シード培地は微生物の接種又は培養に使用される微生物培養物である。
【００６６】
本願で使用する場合、「生産培地」という用語は、生物又は細胞が必要とする栄養素を供給する培地を指す。いくつかの実施形態では、生産培地は、炭素源、窒素源、成長因子、微量栄養素、又はそれらの組合せを含む。
【００６７】
さらなる実施形態において、処理（例えば、種子又は葉の処理）は、少なくとも１つの農学的に活性な成分（しばしば複数の活性成分）と組み合わせた複数成分のバインダー製剤（互換的に「種子処理製剤」と呼ばれる）を用いて、所望の量の有効成分が結合したコーティングを種子に提供する。バインダー製剤は、種子に適用される前に、有効成分と水希釈剤と混合される。例えば、種子処理製剤に有益な微生物と共にポリマーを使用して、微生物の種子への付着を改善し、粉塵を減らし、種子の流れと取り扱いを改善し、保存された種子の微生物含量の寿命を改善し、及び／又は種まき時に生物学的成分からの急速な活動を改善することができる。
【００６８】
パエニバチルス及びバチルス分離株
パエニバチルス種は、以前はバチルス属に含まれていた通性嫌気性、内生胞子形成、グラム陽性生物である。バチルスもグラム陽性の属である。本開示において、パエニバチルス及びバチルスの分離株は、植物の成長を促進し、真菌及び卵菌類（Ｆ．オキシスポルム（ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、Ｒ．ソラニ、又はＰ．アルティマムを含むがこれらに限定されない）によって引き起こされる苗の立枯れを抑制するために使用される。一実施形態では、パエニバチルス及びバチルスの分離株は、より成熟した植物において病原体に感染した根、栄養組織、及び／又は生殖組織を制御する。
【００６９】
本開示は、広範囲の土壌伝染性及び葉の植物病原体を防除する複数の作用様式を示すことのできるバチルス及びパエニバチルスの分離株を提供する。パエニバチルスの新たに同定された菌株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０として指定されている。バチルスの菌株は、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２として指定されている。全ての分離株は、最初に分離されて以来、テキサス州パイロット・ポイントにあるＡｇｒｉｃｅｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ所有の微生物株保存施設で維持されている。各細菌のサンプルは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に寄託される予定であるか、寄託されている。７つのバチルス分離株は、１６Ｓ  ｒＲＮＡ分析に基づきバチルス・アミロリケファシエンスの種に属する。細菌分離株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子配列は、配列番号１〜１１に示されており、ｇｙｒＢ遺伝子配列は配列番号１２〜２１に示されており、ｒｐｏＢ遺伝子配列は配列番号２２〜３２に示されている。
【００７０】
本開示は、植物及び／又は植物の種子に有効量の農業用組成物を適用することを含む、植物病を制御及び／又は予防する方法に関し、農業用組成物は、バチルス又はパエニバチルスに属する細菌分離株を含む。一態様では、細菌分離株はバチルス・アミロリケファシエンス、パエニバチルス属、又はパエニバチルス・ポリミキサに属する。農業用組成物は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含むか、又は本質的にそれらからなるか、又はそれらからなることがさらに企図される。一実施形態では、組成物は細菌株の胞子を含む。
【００７１】
表１に示すように、これらの菌株を、国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ＮＣＢＩ）の公開データベースに登録されている全てのＰ．ポリミキサ（及びＰ．テラエ（ｔｅｒｒａｅ））ゲノムと比較すると、ＭＳ２３７９のＡＮＩ（平均ヌクレオチド同一性）値は＜９５％であり、パエニバチルスの新種である可能性が高い。細菌系統学の一般的な規則は、９５％を超えるＡＮＩを持つ株が同じ種であることを示唆している。Ｇｏｒｉｓら、ＩＪＳＥＭ  ５７：８１−９１（２００７）を参照。ＭＳ２４１４株（及びＭＳ２４１４と非常に類似したＭＳ１４７９株）及びＭＳ２８２０株は、この種に含まれるいくつかのパエニバチルス・ポリミキサ株ゲノムと十分に重複している。
【００７２】
【表１】
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【００７３】
パエニバチルス分離株の全ゲノム配列を比較すると、ＭＳ１４７９とＭＳ２４１４は非常に類似しており（ＡＮＩ＝９９．８％）、ＭＳ２３７９（８９．７％）及びＭＳ２８２０（ＡＮＩ＝９５．７％）とはあまり類似していない。ＭＳ２４１４とＭＳ２８２０はＰ．ポリミキサＣＲ１株に最も類似している（それぞれ９６．８％及び９５．８％ＡＮＩ）。ＭＳ２３７９に最も近い株はＰ．ポリミキサＭｌであるが、それでもＭＳ２３７９とは９３．４％のＡＮＩしかない。これらのパエニバチルス分離株のうち、ＭＳ２３７９はＭＳ１４７９（ＡＮＩ＝８９．７％）、ＭＳ２４１４（ＡＮＩ＝８９．７％）、及びＭＳ２８２０（ＡＮＩ＝８９．９％）とは低いＡＮＩを有する。
【００７４】
分離株の効力を最大にするために、異なる培地を使用して、本開示の細菌分離株、例えばＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２の胞子形成効率、ｃｆｕカウント、及びバイオコントロール活性への効果を測定した。表２に要約されているように、ＧＢ６及びＢＳ３培地は、パエニバチルス分離株のｃｆｕ、胞子形成効率、及び生物活性をトリプチックソイブロス（「ＴＳＢ」）培地よりも向上させた。特に、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０の無菌濾液ブロスは、ＴＳＢ培地で培養するとピシウム種に対する阻害活性が全くないか又は最小限であったが、ＧＢ６及びＢＳ３で培養するとそうした活性が得られた。したがって、最適化された発酵培地は、本開示の培地で培養される前の天然に存在する細菌に耐性のある植物病原性真菌種に対し、抗病原性（例えば、抗真菌）活性を獲得するなど、天然の対応種には欠けている細菌特有の特性を提供することができる。さらに、培地での培養は、標的とする植物病又は病原体に対する抗病原性機能を長続きさせることもできる。したがって、一態様では、本開示はパエニバチルス又はバチルスの細菌分離株、又はその突然変異体を含む農業用組成物を提供し、その分離株は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で発酵及び／又は培養される。一実施形態では、細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組み合わせを含む。別の実施形態では、細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む。一実施形態では、培地は、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む。別の実施形態において、培養培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む。
【００７５】
別の実施形態では、細菌分離株は、（１）シード培地に細菌分離株を接種し、（２）生産培地で培養物を拡大培養することを含む方法によって発酵される。一実施形態では、シード培地は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む。別の実施形態では、生産媒体は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む。
【００７６】
別の態様では、本開示は、細菌分離株の最適化された発酵培地及び方法を提供する。本開示の一態様では、農業用組成物は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４培地を含むか、本質的にそれらからなるか、それらからなる。別の態様では、農業用組成物は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４培地又はその組合せを含む。
【００７７】
【表２】
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【００７８】
本開示は、同定されたパエニバチルス種及び／又はバチルス種を使用することによる種子処理方法も提供し、真菌及び卵菌の病原体を含む様々な土壌伝染性又は葉の植物病原体の広範囲な防除を提供する。一実施形態では、病原体は、真菌、卵菌、細菌、ウイルス、ウイロイド、ウイルス様生物、フィトプラズマ、原生動物、線虫、及び寄生植物を含む。種子を処理する方法には、農業用組成物を用いた種子処理としての種子の直接処理、植え付けの前又は後の種子の処理、又は種子の畝内又は種子の近傍での、スプレー、浸漬、縞状、又は全面塗布による処理が含まれるが、これらに限定されない。本開示の方法が対象とする植物病は、真菌病、細菌病、ウイルス病、寄生虫病、又はそれらの任意の組合せを含む。
【００７９】
一実施形態では、植物病は真菌病であり、これには、白さび病、べと病、うどんこ病、根こぶ病、菌核病、フザリウム萎ちょう病及び腐敗病、ボトリチス腐敗病、炭疽病、リゾクトニア腐敗病、苗立枯病、しみ腐病（ｃａｖｉｔｙ  ｓｐｏｔ）、塊茎の病気、さび病、黒根腐病、輪紋病、アファノマイセス根腐病、アスコキタ襟腐病、グミ茎枯病、アルテルナリア斑点病、根朽病、リングスポット病、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）、セルコスポラ、葉枯病、セプトリア斑点病、葉枯病、又はそれらの組合せが含まれる。真菌病は、様々な真菌種によって引き起こされ得る。一実施形態において、この方法は、マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、フザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ）、ピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）、ピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、アルブゴ・カンジダ（Ａｌｂｕｇｏ  ｃａｎｄｉｄａ）、プラスモジオフォラ・ブラシカエ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）、Ｓ．スクレロチオルム（Ｓ．ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、Ｓ．ミノル（Ｓ．ｍｉｎｏｒ）、スクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉ）、Ｓ．セピボルム（Ｓ．ｃｅｐｉｖｏｒｕｍ）、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｏｌａｎｉ）、Ｆ．オキシスポルム（Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、コレトトリカム属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｓｐｐ．）、ミクロドキウム・パナトニアヌム（Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ  ｐａｎａｔｔｏｎｉａｎｕｍ）、ピシウム・スルカツム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｓｕｌｃａｔｕｍ）、ウロマイセス・アペンディクラツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ  ａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ）、プクシニア・ソルギ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｏｒｇｈｉ）、プクシニア・アリイ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ａｌｌｉｉ）、アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｏｌａｎｉ）、アファノマイセス・ユーテイチェスｐｖ．ファセオリ（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ  ｅｕｔｅｉｃｈｅｓ  ｐｖ．Ｐｈａｓｅｏｌｉ）、ディジメラ・ブリオニア（Ｄｉｄｙｍｅｌｌａ  ｂｒｙｏｎｉａｅ）、アルテルナリア・ククメリナ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｃｕｃｕｍｅｒｉｎａ）、Ａ．アルテルナーテ（Ａ．ａｌｔｅｒｎａｔｅ）、レプトスフェリア・マキュランス（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｍａｃｕｌａｎｓ）、マイコスフェレラ・ブラッシキコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、セプトリア・アピイコラ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ａｐｉｉｃｏｌａ）、セルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｂｅｔｉｃｏｌａ）、セプトリア・ペトロエリニ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｐｅｔｒｏｅｌｉｎｉ）、セプトリア・ラクツカエ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｌａｃｔｕｃａｅ）、アルテルナリア・ダウキ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｄａｕｃｉ）、又はそれらの組合せを含む真菌種のうちの１つ以上によって引き起こされる真菌を治療することができる。
【００８０】
別の実施形態において、真菌病は、マクロフォミナ・ファセオリナ、フザリウム・ビルグリフォルメ、リゾクトニア・ソラニ、ボトリチス・シネレア、ピシウム・アルティマム、及びピシウム・イレギュラーレのうちの１つ以上によって引き起こされる。
【００８１】
パエニバチルス及び／又はバチルスの同定された分離株は、土壌伝染性又は葉の植物病原体であるマクロフォミナ・ファセオリナ、フザリウム・ビルグリフォルメ、ボトリチス・シネレア、フィトフトラ種（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｐｐ．）、及びリゾクトニア・ソラニを含むがこれらに限定されない病原体に対する広範な作用を示す。本開示の一態様では、最適化された発酵培地及び方法により、パエニバチルス及び／又はバチルスの分離株は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で病原体に対する効力が増大し、細菌の休眠胞子の収量を増加させた。
【００８２】
病原体及び病気を抑制又は制御する方法
本開示は、病原体に感染した対象にバチルス属又はパエニバチルス属に属する細菌分離株を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる農業用組成物を適用することを含む、植物病を制御又は抑制する方法を特徴とする。一態様では、細菌分離株は、バチルス・アミロリケファシエンス、パエニバチルス・ポリミキサ、又はパエニバチルス種に属する。別の態様において、農業用組成物は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。一実施形態では、病原体を予防又は制御するために、農業用組成物が植物及び／又は植物の種子に適用される。農業用組成物を植物に適用する場合、畝内、植物の根の近く、植物の（複数箇所を含む）一部（根、枝、及び茎）、植物の葉、植物の種子、未熟な苗、植物の組織、及び／又は植物の近くの領域に適用してもよい。さらなる実施形態において、農業用組成物は、芽、花、ならびに果実及び種子鞘などの種子を含む発育構造を含むがこれらに限定されない生殖組織に適用される。別の実施形態では、農業用組成物は、種子のコーティング、種子を植えた畝内への噴霧、又は葉への噴霧によって投与される。
【００８３】
一実施形態では、農業用組成物は土壌と混合され、土壌と組成物の混合物は、発芽前又は発芽後に、土壌、植物の葉、及び／又は植物種子に適用される。一実施形態では、農業用組成物は、発芽後１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０日以内に土壌又は植物に適用される。一実施形態では、農業用組成物は、発芽後１０日以上で土壌又は植物に適用される。
【００８４】
農業用組成物は、植物の出芽から２週間以内に適用することができる。農業用組成物は、植物種子の播種から１０日以内に、任意で種子の播種から３、５、又は７日以内に適用されてもよい。別の実施形態において、農業用組成物は、葉への供給により、１回又は複数回適用することができる。葉面供給では、農業用組成物は成長期又は繁殖中に適用することができる。
【００８５】
農業用組成物は、典型的には、真菌の増殖を制御又は抑制するのに有効な量、例えば、植物における真菌病の観察可能な症状を制御又は抑制するのに十分な量で適用される。施用率は、保護される植物種、制御される病原体に対する細菌株の効力、及び病気の重症度によって異なり得る。典型的には、農業用組成物が植物に適用される場合、細菌分離株の濃度は、少なくとも約１．３×１０３ｃｆｕ／ｃｍ２〜約１．３×１０５ｃｆｕ／ｃｍ２、約１．３×１０５ｃｆｕ／ｃｍ２〜約１．３×１０１０ｃｆｕ／ｃｍ２、約１．３×１０６ｃｆｕ／ｃｍ２〜約１．３×１０９ｃｆｕ／ｃｍ２、又は約１．３×１０７ｃｆｕ／ｃｍ２〜約１．３×１０８ｃｆｕ／ｃｍ２である。いくつかの実施形態において、細菌分離株の濃度は、１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は５×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０８ｃｆｕ／ｍｌである。
【００８６】
農業用組成物の性質に基づいて、噴射、噴霧、撒紛、散布、又は灌注などの適用方法が、意図された目的及び現行の状況に従って選択される。
本開示の農業用組成物、全ブロス、上清、又は無菌濾液は、分散を促進し、栄養添加物を提供し、及び／又は接着を改善する担体又は種子処理製剤として作用する成分とともに製剤化され得る。例えば、農業用組成物は、水和剤、顆粒などとして製剤化することができ、又は適切な媒体などにマイクロカプセル化することができる。他の製剤の例には、液体、油分散液、展着性顆粒、粉剤、可溶性粉末、湿潤性顆粒、乾燥流動性物質、水性流動性物質、湿潤性分散性顆粒、懸濁濃縮物、乳化濃縮物、及び水性懸濁物が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な製剤には、葉面散布に適した製剤が挙げられる。
【００８７】
別の態様では、本開示は、農業用組成物の貯蔵寿命を延ばし又は長くする方法を提供する。この方法の結果として、農業用組成物中の細菌分離株は、保存期間の後でも高いｃｆｕ／ｍｌを維持する。ｐＨ値、温度、及びその他の作用剤などの要因は、農業用組成物の安定性又は貯蔵寿命に影響を与える可能性がある。いくつかの実施形態では、農業用組成物の貯蔵寿命を延ばし又は長くする方法は、防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤を農業用組成物に添加することをさらに含む。したがって、農業用組成物の製剤は、防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤を含む。防腐剤の非限定的な例には、メチルパラベン、ソルビン酸カリウム、ＢＩＴ（１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン）、及びＰｒｏｘｅｌ（商標）ＧＸＬ（Ａｒｃｈ）が挙げられる。一実施形態において、Ｐｒｏｘｅｌ（商標）ＧＸＬは、１８〜２０％のＢＩＴ（１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン３）を含む。増粘剤の非限定的な例には、キサンタンガム、アラビアゴム、及びアルギン酸塩が挙げられる。ミネラルの非限定的な例には、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（粘土）、カオリン、Ａｃｔｉ−ｇｅｌ（商標）２０８、及びＭｉｎｕｇｅ４００が挙げられる。生物保護剤は、いくつかの実施形態では、生物学的種子処理に使用されるアジュバントを指す。非限定的なアジュバントには、ＬＩ−７００（３５０ｇ／Ｌの大豆リン脂質及び３５０ｇ／Ｌのプロピオン酸を含む独自の混合物）、Ａｔｔａｃｈ（１００％パイン（テルペン）ポリマー、ワセリン、ａ−（ｐ−ドデシルフェニル）−オメガ−ヒドロキシポリ（オキシエチレン））、及びＬｉｂｅｒａｔｅ（１００％レシチン、脂肪酸のメチルエステル、及びアルコールエトキシレートを含む乳剤））が挙げられる。他の適切な防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、又はアジュバントも本開示の範囲内であり、当業者に知られている。
【００８８】
一実施形態では、農業用組成物中の作用剤の質量比は、約０．０００１％〜約５０％の範囲である。一実施形態では、農業用組成物は、約０．００１％〜約１％、約０．００２％〜約０．５％、約０．００２％〜約０．１％、又は約０．００２％〜約０．００５％の防腐剤を含む。別の実施形態では、農業用組成物は、約０．００２％〜約０．００５％の防腐剤を含む。別の実施形態では、農業用組成物は約０．００３％の防腐剤を含む。一実施形態では、防腐剤はＢＩＴである。
【００８９】
一実施形態では、農業用組成物は、約０．０１％〜約１０％、約０．０２％〜約５％、約０．０２％〜約１％、又は約０．２％〜約０．５％の没食子酸プロピルを含む。一実施形態において、農業用組成物は、約０．３％の没食子酸プロピルを含む。
【００９０】
一実施形態では、農業用組成物は、約０．０１％〜約１０％、約０．０２％〜約５％、約０．２％〜約１％、又は約０．３％〜約０．７％のプロピレングリコールを含む。一実施形態では、農業用組成物は約０．５％のプロピレングリコールを含む。
【００９１】
一実施形態では、農業用組成物は、約０．０１％〜約１０％、約０．０２％〜約５％、約０．０２％〜約１％、又は約０．２％〜約０．５％のミネラルを含む。一実施形態において、農業用組成物は約０．２％のミネラルを含む。一実施形態では、ミネラルはＡｃｔｉ−ｇｅｌ（商標）２０８である。
【００９２】
一実施形態では、農業用組成物は、約０．０１％〜約１０％、約０．０２％〜約５％、約０．０２％〜約１％、又は約０．２％〜約０．５％のＭｉｎｕｇｅ４００を含む。一実施形態では、農業用組成物は約０．２％のＭｉｎｕｇｅ４００を含む。
【００９３】
一実施形態において、農業用組成物は、約１％〜約４０％、約５％〜約３０％、又は約１０％〜約２５％のアジュバントを含む。一実施形態では、農業用組成物は約２０％のアジュバントを含む。別の実施形態では、アジュバントはバイオプロテクター（Ｌａｌｌｅｍａｎｄ社製）である。
【００９４】
貯蔵後の農業用組成物の胞子の生存率及び安定性の有利な向上は、組成物のｐＨが特定の範囲に調整されている場合に特に顕著である。したがって、農業用組成物の貯蔵寿命を延ばし又は長くする方法は、農業用組成物のｐＨを調整することをさらに含む。一実施形態では、調節されたｐＨは、３．５〜７．５、４．０〜７．０、４．５〜６．５、５．０〜６．５、又は６．０〜６．５の範囲である。別の実施形態では、調整されたｐＨは５．０〜６．５の範囲である。
【００９５】
本開示における使用に適した農業用組成物を調合する厳密な方法は重要ではなく、農業用組成物を調合する当業者は、生物によって調合上の制約が異なることを認識することができる。さらに、保管及び使用の条件は、特定の用途に応じて異なる場合がある。一般的に、農業用組成物は、液体又は固体発酵により調製でき、粘土、ふすま、ラクトース、セルロース、バーミキュライト、又はおがくずを含むがこれらに限定されない１つ以上の不活性固体担体と共に混和、噴霧、混合、及び／又は押出しすることにより組み合わせることができる。場合によっては、バイオマス担体製品を乾燥させるよりも、湿った製品を包装して保管することが好ましいことがある。
【００９６】
農業用組成物は、農業上許容される担体や、ポリマーなどの種子処理製剤をさらに含み得ると考えられる。いくつかの実施形態では、種子処理製剤ポリマーによって農業用組成物を担体又は種子に付着させることにより、植物病に対する農業用組成物の効力を高めることができる。ポリマーはまた、農業用組成物のバイオアベイラビリティに影響を与えるため、徐放効果を提供し得る。この効果は、農業用組成物の有効性の長期化をもたらす場合には望ましいものとなり得る。また、徐放性コーティングは、植物発生の初期段階で農業用組成物の放出を減らすことにより、種子の発芽を改善し得る。さらに、徐放性コーティングは、農業用組成物中の細菌分離株のｃｆｕを維持又は促進する可能性もある。徐放効果は、皮膜形成ポリマーを粘土などの不活性担体と組み合わせることで調整することができる。これらの効果は、国際公開第２００４／０４９７７８号（その全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているような多層コーティングを適用することにより、さらに微調整することができる。
【００９７】
本開示の方法は、以下を含むがそれらに限定されない病気を制御、予防、及び／又は治療するために使用できると考えられる：イネいもち病（マグナポルサ・グリセア（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ  ｇｒｉｓｅａ））、ごま葉枯病（コクリオボルス・ミヤベアヌス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ  ｍｉｙａｂｅａｎｕｓ））、紋枯病（リゾクトニア・ソラニ）、ばか苗病（ジベレラフジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａｆｕｊｉｋｕｒｏｉ））、うどんこ病（エリシフェ・グラミニス（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ  ｇｒａｍｉｎｉｓ））、赤かび病（フザリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、Ｆ．アベナセウム（Ｆ．ａｖｅｎａｃｅｕｍ）、Ｆ．クルモラム（Ｆ．ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ミクロドキウム・ニバーレ（Ｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ  ｎｉｖａｌｅ））、さび病（プクシニア・ストリイフォルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｐ．グラミニス（Ｐ．ｇｒａｍｉｎｉｓ）、Ｐ．レコンジテ（Ｐ．ｒｅｃｏｎｄｉｔｅ）、Ｐ．ホルデイ（Ｐ．ｈｏｒｄｅｉ））、雪腐病（ティフラ種（Ｔｙｐｈｕｌａ  ｓｐ．）、ミクロネクトリエラ・ニバリス（Ｍｉｃｒｏｎｅｃｔｒｉｅｌｌａ  ｎｉｖａｌｉｓ））、裸黒穂病（ウスチラゴ・トリティキ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ  ｔｒｉｔｉｃｉ）、Ｕ．ヌーデ（Ｕ  ｎｕｄｅ））、ムギ黒穂病（ティレチア・カリエス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ  ｃａｒｉｅｓ））、眼紋病（シュードサーコスポレラ・ヘルポトリコイデス（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ  ｈｅｒｐｏｔｒｉｃｈｏｉｄｅｓ））、雲形病（リンコスポリウム・セカリス（Ｒｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｓｅｃａｌｉｓ））、葉枯病（セプトリア・トリティキ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｔｒｉｔｉｃｉ））、ふ枯病（レプトスフェリア・ノドルム（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｎｏｄｏｒｕｍ））、根朽病（レプトスフェリア・マキュランス（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ  ｍａｃｕｌａｎｓ））、網斑病（ピレノフォラ・テレス・ドレクスレラ（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ  ｔｅｒｅｓ  Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒ））、黒斑病（ディアポルテ・キトリ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｃｉｔｒｉ））、赤かび病（エルシノエ・ファウセッティ（Ｅｌｓｉｎｏｅ  ｆａｗｃｅｔｔｉ））、果実腐敗病（ペニシリウム・ジギタータム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｄｉｇｉｔａｔｕｍ）、Ｐ．イタリカム（Ｐ．ｉｔａｌｉｃｕｍ））、花腐病（モニリニア・マリ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｍａｌｉ））、腐爛病（バルサ・セラトスペルマ（Ｖａｌｓａ  ｃｅｒａｔｏｓｐｅｒｍａ））、ブドウうどんこ病（エリシフェ・ネカトール（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ  ｎｅｃａｔｏｒ））、うどんこ病（ポドスファエラ・レウコトリカ（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ  ｌｅｕｃｏｔｒｉｃｈａ））、褐色斑点病（アルテルナリア・アルテルナーテ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔｅ）リンゴ病原型）、赤かび病（ベンチュリア・イナクアリス（Ｖｅｎｔｕｒｉａ  ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ））、炭疽病（コレトトリカム・アクタツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ａｃｕｔａｔｕｍ））、クラウン腐れ（フィトフトラ・カクトラム（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｃａｃｔｏｒｕｍ））、赤かび病（ベンチュリア・ナシコラ（Ｖｅｎｔ��ｒｉａ  ｎａｓｈｉｃｏｌａ）、Ｖ．ピリナ（Ｖ．ｐｉｒｉｎａ））、黒斑病（アルテルナリア・アルテルナーテ、ニホンナシ病原型）、赤星病（ギムノスポランギウム・ハラエナム（Ｇｙｍｎｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ  ｈａｒａｅａｎｕｍ））、果実腐敗（フィトフトラ・カクトラム（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｃａｃｔｏｒｕｍ））、灰星病（モニリニア・フルクチコラ（Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ  ｆｒｕｃｔｉｃｏｌａ））、黒星病（クラドスポリウム・カルポフィラム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃａｒｐｏｐｈｉｌｕｍ））、ホモプシス腐敗病（ホモプシス種（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｓｐ．））、東部黒痘病（ｅａｓｔｅｒｎ  ｂｌａｃｋ  ｄｉｓｅａｓｅ）（エルシノエ・アンペリナ（Ｅｌｓｉｎｏｅ  ａｍｐｅｌｉｎａ））、ｎｉｇｈｔｓ  ｇｒａｐｅｓ  ｒｏｔ（グロメレラ・シングラータ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ  ｃｉｎｇｕｌａｔａ））、うどんこ病（ウンキヌラ・ネカトル（Ｕｎｃｉｎｕｌａ  ｎｅｃａｔｏｒ））、さび病（ファコプソラ・アンペロプシディス（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ａｍｐｅｌｏｐｓｉｄｉｓ））、黒腐病（グイグナルジア・ビドウェリイ（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ  ｂｉｄｗｅｌｌｉｉ））、べと病（プラズモパラ・ビチコラ（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ  ｖｉｔｉｃｏｌａ））、炭疽病（グロエオスポリウム・カキ（Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｋａｋｉ））、茎腐病（セルコスポラ・カキ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｋａｋｉ）、マイコスフェレラ・ナワエ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｎａｗａｅ））、炭疽病（コレトトリカム・ラゲナリウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｌａｇｅｎａｒｉｕｍ））、うどんこ病（スファエロセカフリギネア（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａｆｕｌｉｇｉｎｅａ））、つる枯病（マイコスフェレラ・メロニス（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｍｅｌｏｎｉｓ））、黄つる枯病（ｙｅｌｌｏｗ  ｖｅｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）（フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ））、かび病（シュードペロノスポラ・クベンシス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ））、フィトフトラ腐敗病（フィトフトラ種）、苗立枯れ病（ピシウム種）、リングスポット病（アルテルナリア・ソラニ）、葉かび病（クラドスポリウムフルブム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｆｕｌｖｕｍ））、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）（フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ））、褐斑病（ホモプシス・ベクサンス（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ  ｖｅｘａｎｓ））、うどんこ病（エリシフェ・シコラセアラム（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ  ｃｉｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍ））、黒斑病（アルテルナリア・ジャポニカ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａ））、白斑病（サーコスポレラ・ブラシカエ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ））、根こぶ病（プラスモジオフォラ・ブラシカエ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ））、かび病（ペロノスポラ・パラシティカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｐａｒａｓｉｔｉｃａ））、リーキさび病（プクシニア・アリイ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ａｌｌｉｉ））、ダイズ紫斑病（セルコスポラ・キクチイ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｋｉｋｕｃｈｉｉ））、東部黒痘病（ｅａｓｔｅｒｎ  ｂｌａｃｋ  ｄｉｓｅａｓｅ）（エルシノエ・グリシネス（Ｅｌｓｉｎｏｅ  ｇｌｙｃｉｎｅｓ））、黒斑病（ジアポルテ・ファセオロルム変種ソジャエ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ  ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ  ｖａｒ．  ｓｏｊａｅ））、さび病（ファコプソラ・パチリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ  ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ））、茎疫病（フィトフトラ・ソジャエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｏｊａｅ））、マメ炭疽病（コレトトリカム・リンデムチアヌム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ））、ラッカセイ黒渋病（セルコスポラ・ペルソナータ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｐｅｒｓｏｎａｔａ））、褐斑病（セルコスポラ・アラキドコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ａｒａｃｈｉｄｉｃｏｌａ））、枯れ病（スクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ  ｒｏｌｆｓｉｉ））、うどんこ病（エリシフェ・ピシ（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ  ｐｉｓｉ））、夏疫病（アルテルナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｓｏｌａｎｉ））、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）（フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ））、粉状そうか病（スポンゴスポラ・スブテラネア（Ｓｐｏｎｇｏｓｐｏｒａ  ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ  ｆ．ｓｐ．ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ））、うどんこ病（スファエロセカ・フムリ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｈｕｍｕｌｉ））、ネットライス病（ｎｅｔ  ｒｉｃｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）（エキソバシジウム・レティクラツム（Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｍ））、ｄｉｓｅａｓｅ  ｖｉｃｔｏｒｙ（エルシノエ・レウコスピラ（Ｅｌｓｉｎｏｅ  ｌｅｕｃｏｓｐｉｌａ））、葉のリングスポット病（ペスタロチオプシス種（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ  ｓｐ．））、炭疽病（コレトトリカム・テアエシネンシス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｔｈｅａｅ−ｓｉｎｅｎｓｉｓ））、赤星病（アルテルナリア・ロンギペス（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｌｏｎｇｉｐｅｓ））、うどんこ病（エリシフェ・シコラセアラム（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ  ｃｉｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍ））、炭疽病（コレトトリカム・タバクム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｔａｂａｃｕｍ））、かび病（ペロノスポラ・タバキナ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｔａｂａｃｉｎａ））、茎の黒変（ｂｌａｃｋ  ｓｈａｎｋ）（フィトフトラ・ニコチアナエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ））、褐斑病（セルコスポラ・ベチコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｂｅｔｉｃｏｌａ））、葉腐病（タナテフォルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ  ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ））、根腐病（タナテフォルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ  ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ））、黒色根腐病（アファニデルマツム・コクリオイデス（（Ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ  ｃｏｃｈｌｉｏｉｄｅｓ））、黒斑病（ディプロカルポン・ローザエ（Ｄｉｐｌｏｃａｒｐｏｎ  ｒｏｓａｅ））、うどんこ病（スファエロセカ・パンノサ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ  ｐａｎｎｏｓａ））、褐斑病（セプトリア・クリサンセミ−インジシ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ−ｉｎｄｉｃｉ））、白さび病（プクシニア・ホリアナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｈｏｒｉａｎａ））、様々な作物のピシウム属に起因する病気であって、限定するものではないが、ピシウム・アファニデルマツム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、ピシウム・デバリアヌム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）、ピシウム・グラミニコラ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、ピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、ピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）を含む病気、灰色かび病（ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａ））、白かび病、菌核病、茎腐病、クラウン腐れ（スクレロチニア・スクレロチオルム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、スクレロチニア・ミノル（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｍｉｎｏｒ））、黒斑病（アルテルナリア・ブラッシキコラ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ））、ダラースポット病（スクレロチニア・ホモエオカルパ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ  ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ））、ブラウンパッチ病及びラージパッチ病（リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎｉ））、炭腐病（マクロフォミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ  ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ））、ＳＤＳ（フザリウム・ビルグリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｖｉｒｇｕｌｉｆｏｒｍｅ））、及びシガトカ病（マイコスフェレラ・フィジエンシス（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ）、マイコスフェレラ・ムシコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｍｕｓｉｃｏｌａ）、シュードサーコスポラ・ムサエ（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ  ｍｕｓａｅ））。
【００９８】
一態様では、本開示の方法によって制御、予防、又は治療することができる卵菌によって引き起こされる植物病は、前述の生物によって引き起こされ、特に、以下によって引き起こされる病気である：ピシウム・アファニデルマツム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、ピシウム・デバリアヌム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）、ピシウム・グラミニコラ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、ピシウム・イレギュラーレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、及びピシウム・アルティマム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｕｌｔｉｍｕｍ）を含むがそれらに限定されないピシウム属；フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）、フィトフトラ・ソジャエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｓｏｊａｅ）、及びフィトフトラ・カプシキ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｃａｐｓｉｃｉ）を含むがそれらに限定されないフィトフトラ属；ペロノスポラ・パラシティカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）（ヒアロペロノスポラ・ブラッシカエ（Ｈｙａｌｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）と新たに命名）及び、ペロノスポラ・ファリノサ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｆａｒｉｎｏｓａ）を含むがそれらに限定されないペロノスポラ属を含むがそれらに限定されないペロノスポラ科（べと病菌科）；シュードペロノスポラ・クベンシス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｃｕｂｅｎｓｉｓ）及びシュードペロノスポラ・カンナビナ（Ｐｓｅｄｕｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｃａｎｎａｂｉｎａ）を含むがそれらに限定されないシュードペロノスポラ属；ならびにヒアロペロノスポラ・ブラッシカエ（Ｈｙａｌｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ）を含むがそれらに限定されないヒアロペロノスポラ属。
【００９９】
本開示の方法によって制御、予防、又は治療することができる植物病は、前述の細菌及び以下の細菌によって引き起こされることも想定される：キサントモナス・カンペストリスｐｖ．シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．Ｃｉｔｒｉ）、ラルストニア・ソラナケアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、キサントモナス・カンペストリスｐｖ．ビティアンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．  ｖｉｔｉａｎｓ）、エルウィニア・カロトボラ亜種カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ  ｓｕｂｓｐ．  Ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、キサントモナス・カンペストリスｐｖ．カンペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ  ｐｖ．  Ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、シュードモナス・シリンガエｐｖ．ラクリマンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ  ｐｖ．  ｌａｃｈｒｙｍａｎｓ）、シュードモナス・フスコバギナエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｕｓｃｏｖａｇｉｎａｅ）、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、Ａ．リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、Ａ．ラジオバクター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、ペクトバクテリウム・カロトボルム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ）、エルウィニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ  ａｍｙｌｏｖｏｒａ）、シュードモナス・サバスタノイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）、キサントモナス・オリゼｐｖ．オリゼ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｏｒｙｚａｅ  ｐｖ．Ｏｒｙｚａｅ）、キサキソノポディスｐｖ．マニホティス（Ｘａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ  ｐｖ．Ｍａｎｉｈｏｔｉｓ）、カンジダツス・リベリバクター・アシアティクス（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ）、パントエア種（Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｐｐ．）、バークホルデリア種（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐｐ．）、アシドボラックス種（Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｓｐｐ．）、クラビバクター種（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）、ストレプトマイセス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐｐ．）、キシレラ種（Ｘｙｌｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、スピロプラズマ・シトリ（Ｓｐｉｒｏｐｌａｓｍａ  ｃｉｔｒｉ）、Ｓ．フォエニセウム（Ｓ．ｐｈｏｅｎｉｃｅｕｍ）、Ｓ．クンケリイ（Ｓ．ｋｕｎｋｅｌｉｉ）、及びファイトプラズマ種（Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ．）。
【０１００】
本開示の方法によって制御、予防、又は治療され得る植物病は、以下を含むがそれらに限定されないウイルスによって引き起こされるとものであることがさらに企図される：キュウリモザイク（キュウリモザイクククモウイルス、スイカモザイクポティウイルス２、ズッキーニ黄色モザイクポティウイルス）、トマトウイルス病（タバコ壊死ネクロウイルス）、イチゴウイルス病（イチゴクリンクルサイトラブドウイルス、イチゴ潜伏Ｃウイルス、ダイズ萎縮ルテオウイルス、イチゴモットルウイルス、イチゴシュードマイルドイエローエッジウイルス、イチゴベインバンディングカリモウイルス、タバコモザイクトバモウイルス、タバコ壊死ネクロウイルス）、キャベツモザイク（カリフラワーモザイクカリモウイルス、キュウリモザイクククモウイルス、カブモザイクポティウイルス）、ダイズウイルス病（サザンビーンモザイクソベモウイルス、ラッカセイ発育阻害ククモウイルス、マメモザイクポティウイルス、ソラマメ矮化ファバウイルス）、トマト黄化壊疽トスポウイルス（ＴＳＷＶ）、トマト葉巻ベゴモウイルス（ＴＹＬＣＶ）、ポテトウイルスＹ（ＰＶＹ）、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、アフリカキャッサバモザイクベゴモウイルス（ＡＣＭＶ）、プラムポックスポティウイルス（ＰＰＶ）、ブロムモザイクウイルス（ＢＭＶ）、ポテトウイルスＸ（ＰＶＸ）、カンキツトリステザウイルス、オオムギ黄萎ウイルス（ＢＹＤＶ）、ポテトリーフロールウイルス及びトマトブッシースタントウイルス、ダイズベインネクローシストスパウイルス（ＳＶＮＶ）、マメ鞘モザイクウイルス（ＢＰＭＶ）、カブモザイクウイルス（ＴｕＭＶ）、及びポテトリーフロール葉巻（ポテト葉巻ルテオウイルス）。
【０１０１】
本開示の方法によって制御、予防、又は治療され得る植物病は、以下を含むがそれらに限定されない寄生線虫によって引き起こされるとものであることがさらに企図される：ネコブセンチュウ（メロイドジン種（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ  ｓｐｐ．））、ダイズシストセンチュウ（ヘテロデラ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ））及びグロボデラ種（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ  ｓｐｐ．））、ネグサレセンチュウ（プラティレンクス種（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｓｐｐ．））、ネモグリセンチュウ（ラドフォルス・シミリス（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ  ｓｉｍｉｌｉｓ）、ジチレンクス・ジスパシ（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ  ｄｉｐｓａｃｉ））、マツノザイセンチュウ（ブルサフェレンクス・キシロフィルス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ  ｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ））、レニホルム（ｒｅｎｉｆｏｒｍ）センチュウ（ロチレンチュルス・レニホルミス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ  ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、キシフィネマ（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ））、ナコブス・アベランス（Ｎａｃｏｂｂｕｓ  ａｂｅｒｒａｎｓ）、及びアフェレンコイデス・ベッセイ（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ  ｂｅｓｓｅｙｉ）。
【０１０２】
この方法は、細菌分離株を含む培養物の発酵プロセスをさらに含み、発酵プロセスは、（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び（２）生産培地で培養物を拡大することを含む。一実施形態では、シード培地は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む。別の実施形態では、生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ２２又はＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４及び／又はそれらの組合せを含む。
【０１０３】
農業用組成物又は細菌全ブロスは、適用前、例えば種子処理や葉面適用の前は濃縮されていてもよい。全ブロスを濃縮又は富化する方法には、懸濁、遠心分離、濾過、限外濾過、分離、又は当技術分野で知られている任意の機械的又は化学的方法が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、濾過又は限外濾過後の非透過物及び／又は濾液は、本開示における適用に使用される。
【０１０４】
種子処理の方法
植物の種子の処理に使用する場合、細菌の分離株は、長期保存後でも生物活性を維持することができる。これに関して、本開示は、植物の病害抵抗性を高める方法も提供し、この方法は、有効量の農業用組成物を植物の種子に適用することを含み、前記組成物は、バチルス又はパエニバチルスに属する細菌分離株に適用することを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。一態様では、細菌分離株はバチルス・アミロリケファシエンス、パエニバチルス種、又はパエニバチルス・ポリミキサに属する。別の態様では、細菌株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、ＭＳ２７１２、又はそれらの組合せを含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる。さらなる実施形態において、農業用組成物は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【０１０５】
種子は、処理後、播種前に適切な条件で乾燥させ又は保存することができる。処理後に種子を乾燥させる方法は、当技術分野で周知である。例えば、種子に風を通すことで種子を乾燥させることができる。一態様では、種子は室温で保存される。
【０１０６】
種子処理の比率は、農業用組成物中の細菌のコロニー形成単位（「ｃｆｕ」）に基づいている。種子あたりの最適ｃｆｕは、ｉｎ  ｐｌａｎｔａアッセイからその有効性を調査することによって決定する必要がある。一態様では、細菌は、種子に適用される場合、１×１０３〜１×１０９ｃｆｕ／種子の範囲である。別の態様において、細菌は、種子に適用される場合、１×１０４〜１×１０８ｃｆｕ／種子の範囲である。さらなる態様において、細菌は、種子に適用される場合、１×１０５〜１×１０７ｃｆｕ／種子の範囲である。別の態様では、細菌は、種子に適用される場合、１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ／種子の範囲である。
【０１０７】
一態様では、種子は、農業用組成物を含む湿潤ブロスとのインキュベーションにより処理される。湿潤ブロスと種子の比率は、１０ｍｌ／種子〜０．０００１ｍｌ／種子、１ｍｌ／種子〜０．００１ｍｌ／種子、及び／又は０．１ｍｌ／種子〜０．０１ｍｌ／種子の範囲である。インキュベーション時間は、湿潤ブロスの種類、病原体の種類、及び種子によって異なる。結果を最適化するために、インキュベーション時間及び温度を調整することは、当業者に周知である。
【０１０８】
被覆種子の実際のｃｆｕ／種子は、当該技術分野で周知の任意の方法、例えばｃｆｕ回収により評価することができる。ｃｆｕ回収では、１ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を遠心分離管内の１つの種子に加える。種子を浸し、５分間超音波処理する。ボルテックス後、リン酸緩衝液はわずかに異なる色に変わり、これは種子の表面からのｃｆｕの放出を示す。次に、この緩衝液の懸濁液をｃｆｕについて試験する。
【０１０９】
一実施形態において、農業用組成物は、種子処理、葉面適用、畝内適用、又は他の農業用途に関係なく、１つ又は複数の殺真菌剤、バイオコントロール剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤解毒剤、除草剤、殺虫剤、生物刺激剤、植物成長調整剤、液体肥料、及び／又はウイルス阻害剤と組み合わせて使用することができる。適切な殺真菌剤には、キャプタン、チラム、メタラキシル、フサリシジン、フルジオキソニル、ナタマイシン、オキサジキシル、及びこれらの物質のそれぞれの異性体などが挙げられるが、これらに限定されない。適切な除草剤には、カルバメート、チオカルバメート、アセトアミド、トリアジン、ジニトロアニリン、グリセロールエーテル、ピリダジノン、ウラシル、フェノキシ、尿素、及び安息香酸が挙げられるが、これらに限定されない。適切な除草剤解毒剤には、ベンゾオキサジン、ベンズヒドリル誘導体、Ｎ，Ｎ−ジアリルジクロロアセトアミド、種々のジハロアシル、オキサゾリジニル及びチアゾリジニル化合物、エタノン、無水ナフタル酸化合物、及びオキシム誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。適切なバイオコントロール剤には、リゾビウム、バチルス、シュードモナス、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、グロムス（Ｇｌｏｍｕｓ）、グリオクラジウム（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ）、及び菌根菌由来の天然又は組換え細菌及び真菌が挙げられるが、これらに限定されない。適切な殺細菌剤には、８−ヒドロキシキノリン硫酸塩、ブロノポール、水酸化銅、クレゾール、ジクロロフェン、ジピリチオン、ドジシン、フェナミノスルフ、ホルムアルデヒド、ヘキサクロロフェン、カスガマイシン、ニトラピリン、オクチリノン、オキシテトラサイクリン、プロベナゾール、ストレプトマイシン、テクロフタラム、及びチオメルサールが挙げられるが、これらに限定されない。これらの成分は、種子上の別個の層として添加されてもよく、あるいは農業用組成物の一部として添加されてもよい。
【０１１０】
一実施形態では、農業用組成物は、植物用の市販の作用剤と組み合わせて使用される。市販の作用剤には、限定するものではないが、以下が挙げられる：Ａｗａｋｅｎ（商標）ＳＴ（酢酸亜鉛アンモニウムとカリウムの複合体、ならびに植物の微量栄養素である亜鉛、ホウ素、銅、鉄、マンガン、及びモリブデンを含有する栄養性種子処理剤）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）（有効成分アゾキシストロビンを含有する殺真菌剤）、Ｐｒｉｓｔｉｎｅ（商標）（有効成分ピラクロストロビン及びボスカリドを含有する殺真菌剤）、Ｄｙｎａ−Ｓｈｉｅｌｄ（商標）フルジオキソニル（有効成分フルジオキソニルを含有する殺真菌剤）、Ｄｙｎａ−Ｓｈｉｅｌｄ（商標）メタラキシル（有効成分メタラキシルを含有する殺真菌剤）、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）ＡＳＯ（有効成分の枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＱＳＴ−７１３株を含有するバイオコントロール製品）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）５５（有効成分バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）Ｄ７４７株を含有するバイオ殺真菌剤）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）ＷＧ（有効成分バチルス・マイコイデス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｙｃｏｉｄｅｓ）単離株Ｊを含有する生物学的植物活性化剤）、Ｓｕｂｔｉｌｅｘ（商標）ＮＧ（有効成分の枯草菌ＭＢＩ−６００株を含有するバイオ殺真菌剤）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）（有効成分の枯草菌ＭＢＩ−６００株（成分Ａ）及びピラクロストロビン（成分Ｂ）を含有する殺真菌剤）。いくつかの実施形態では、農業用製剤は、酢酸亜鉛アンモニウム、アゾキシストロビン、ピラクロストロビン、ボスカリド、メタラキシル、枯草菌ＱＳＴ−７１３株、バチルス・アミロリケファシエンスＤ７４７株、バチルス・マイコイデス分離株、枯草菌ＭＢＩ−６００、又はピラクロストロビンを含むがこれらに限定されない市販の薬剤の１つ以上の活性成分と組み合わせて使用される。
【０１１１】
農業用組成物は、植物の病気又は病原体を制御、予防、及び／又は治療することができるバイオコントロール製剤を含む。いくつかの実施形態では、バイオコントロール製剤は、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、又は土壌改良剤を含む。一実施形態では、製剤は生物ベースのものであり、したがって微生物を含む。生物ベースの製剤には、市販のバイオコントロール製剤（例えば、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、及びＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標））が挙げられるが、これらに限定されない。バイオコントロール製剤を含む農業用組成物は、細菌分離株を含むものでも含まないものでも、植物病を治療する方法又は植物の病害抵抗性を高める方法にも使用することができる。
【０１１２】
この方法は、細菌分離株を含む培養物の発酵プロセスをさらに含み、発酵プロセスは、（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び（２）生産培地で培養物を拡大することを含む。一実施形態では、シード培地は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、及び／又はＧＢ６−Ｍ３４を含む。別の実施形態では、生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、ＧＢ６−Ｍ２２、又はＧＢ６−Ｍ２３を含む。
【０１１３】
別の態様では、本開示は、農業用組成物でコーティングされた植物種子を提供し、組成物は、パエニバチルス又はバチルスの細菌分離株、又はその変異体を含む。一実施形態では、細菌分離株は生物培養物中にある。一実施形態において、変異体は、野生型細菌分離株の重要な特徴を有する。一実施形態では、細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含む。別の実施形態では、細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む。
【０１１４】
一実施形態では、農業用組成物は、１×１０３〜１×１０９コロニー形成単位（ｃｆｕ）／種子の範囲の量の細菌を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。別の実施形態では、農業用組成物は、１×１０４〜１×１０８ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。さらなる実施形態において、農業用組成物は、１×１０５〜１×１０７ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。別の実施形態では、農業用組成物は、１×１０５〜１×１０６ｃｆｕ／種子の範囲の細菌を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。一態様では、ｃｆｕ／種子は、ｃｆｕ回収により評価される。別の態様では、種子はポリマーでコーティングされている。農業用組成物を担体に付着させることも考えられる。
【０１１５】
別の実施形態において、農業用組成物は、殺真菌剤、バイオコントロール剤、殺線虫剤、殺細菌剤、除草剤解毒剤、除草剤、殺虫剤、生物刺激剤、植物成長調節剤、液体肥料、又はウイルス阻害剤を含む。
【０１１６】
植物病原体を防除するための農業用組成物
別の態様では、本開示は、パエニバチルス又はバチルスの細菌分離株、あるいはその変異体を含む農業用組成物を提供する。一実施形態では、細菌分離株は生物培養物中にある。一実施形態において、変異体は、野生型細菌分離株の重要な特徴を有する。一実施形態では、細菌分離株は、ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０、ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、又はＭＳ２７１２を含む。別の実施形態では、細菌分離株はＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４を含む。
【０１１７】
本開示の細菌分離株は、従来の培地（例えば、ＬＢ又はＴＳＢ）のような異なる培地で培養又は拡大され得る。しかし、上記のように、本開示の特別な培養培地で細菌分離株を培養すると、細菌分離株を含む培養物は、従来のブロス（例えばＴＳＢ）から培養した同じ細菌分離株では観察されない機能であるピシウム種に対する抗病原体活性を獲得する。そのため、この特別な培地における細菌培養物は、その天然の対応物又は従来のブロスで培養された対応物から予期されなかった新しい属性を提供する。さらに、この特別な培地は設計された人工のものであり、自然界には存在しない。したがって、パエニバチルス又はバチルスの細菌分離株、又は特別なブロスで培養されたその突然変異体を含む農業用組成物は、その天然の対応物とは著しく異なる機能を果たすことができる。別の実施形態では、農業用組成物は、湿潤剤、結合剤、充填剤、及び有機添加剤のうちの１つ又は複数をさらに含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、農業用組成物は、農業上許容される担体をさらに含んでもよい。農業上許容される担体には、化学式の適用に有益なアジュバント、ミキサー、エンハンサーなどが挙げられる。農業上許容される担体は、固体又は液体の担体であり得る。液体担体の非限定的な例には、水、トルエン、キシレン、石油ナフサ、作物油、アセトン、メチルエチルケトン、シクロヘキサノン、トリクロロエチレン、ペルクロロエチレン、酢酸エチル、酢酸アミル、酢酸ブチル、プロピレングリコールモノメチルエーテル及びジエチレングリコールモノメチルエーテル、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アミルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどが挙げられる。固体担体の非限定的な例には、タルク、パイロフィライト粘土、シリカ、アタパルガス粘土、珪藻土（ｋｉｅｓｅｌｇｕｈｒ）、チョーク、珪藻土（ｄｉａｔｏｍａｃｅｏｕｓ  ｅａｒｔｈ）、石灰、炭酸カルシウム、ベントナイト粘土、フラー土、綿実殻、小麦粉、大豆粉、軽石、木粉、クルミの殻の粉、リグニンなどが挙げられる。アジュバントが担体に使用される場合、アジュバントの非限定的な例には、消泡剤、相溶化剤、金属イオン封鎖剤、中和剤及び緩衝剤、腐食防止剤、染料、着臭剤、浸透助剤、展着剤、粘着剤、分散剤、増粘剤、凍結点降下剤、抗菌剤などが挙げられる。
【０１１９】
農業用組成物は、固体組成物及び液体組成物のいずれも界面活性剤を含むことができる。界面活性剤は陰イオン性、陽イオン性、又は非イオン性であり得、これらには、アルキル硫酸塩（例えば、ラウリル硫酸ジエタノールアンモニウム）、アルキルアリールスルホン酸塩（例えば、ドデシルベンゼンスルホン酸カルシウム）、アルキルフェノールのアルキレンオキシ付加物、アルコールのアルキレンオキシド付加物、石鹸、アルキルナフタレンスルホン酸塩、スルホコハク酸塩のジアルキルエステル、ソルビトールエステル、四級アミン、脂肪酸のポリエチレングリコールエステル、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロック共重合体、モノ及びジアルキルリン酸エステルの塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２０】
一実施形態では、細菌分離株は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はＧＢ６−Ｍ１０を含む培地で培養される。細菌分離株は、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む本開示の特別な培地で培養することもできる。いくつかの実施形態では、細菌分離株は、ＧＢ６−Ｍ１０を含む培地で培養される。一実施形態では、農業用組成物は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、ＧＢ６−Ｍ１０を含むがこれらに限定されない細菌分離株用の培地を含む。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、農業用組成物はバイオコントロール製剤をさらに含み、これには殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、又は土壌改良剤が挙げられる。一実施形態では、製剤は生物ベースであり、したがって微生物を含む。生物ベースの製剤には、市販のバイオコントロール製剤（例えば、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、及びＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標））が挙げられるが、これらに限定されない。農業用組成物において、バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のコロニー形成単位（ｃｆｕ）比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、５０：１〜１：５０、又は１０：１〜１：１０の範囲にある。一実施形態では、ｃｆｕ比は１００：１〜１：１の範囲にある。別の実施形態では、ｃｆｕ比は５０：１〜１０：１の範囲にある。農業用組成物では、Ｓａｔｏｒｉ（商標）中の微生物に対する細菌分離株のｃｆｕ比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、５０：１〜１：５０又は１０：１〜１：１０の範囲にある。
【０１２２】
一実施形態では、細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである。別の実施形態では、細菌分離株の濃度は、１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０６ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は５×１０７ｃｆｕ／ｍｌ〜５×１０８ｃｆｕ／ｍｌである。
【０１２３】
実施例
実施例１  リゾクトニア及びピシウムのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害
４つの分離株ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０を、真菌病原体に対して、４つの生産培地であるＴＳＢ培地（３０ｇ／Ｌのトリプチックソイブロス（ＴＳＢ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  ７８９０７））、ＢＳ３培地、ＢＳ３−Ｍ２、及びＧＢ６−Ｍ３で試験した。
【０１２４】
実験では、それぞれ２５０ｍｌの生産培地を含む１リットルのバッフル付きフラスコ１６個に、ＬＢ培地からの２％（５ｍｌ）の種菌を接種し、２８℃、２００ｒｐｍで７２時間培養した。結果を表３に示す。ＧＢ６−Ｍ３は、４つの分離株全てで高いｃｆｕ（約１Ｅ＋０９）及び胞子形成（９０〜１００％）をもたらした。ＢＳ３−Ｍ２は、増殖及び胞子形成の助長に関してＢＳ３よりも大幅な改善を示した。ＭＳ２４１４はＢＳ３で比較的良好に増殖できた唯一の分離株であり、これはこの株が尿素を利用できることを示しているのかもしれない。概して、ＴＳＢ培地でのＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０の胞子形成率は低かった。
【０１２５】
【表３】
2020515569.tif 000005
【０１２６】
回収した全ブロス（ＷＢ）サンプルを全て、１倍、１０倍及び５０倍希釈でＰ．イレギュラーレのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害について試験した（図１）。上記のように、細菌分離株（ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０）は、特別な培地（すなわち、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、及びＧＢ６−Ｍ３）で培養すると、Ｐ．イレギュラーレに対する抗生作用の強化を示した。他の培地（ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、及びＧＢ６−Ｍ９）でも、Ｐ．アルティマム、Ｒ．ソラニ、及びＦ．ビルグリフォルメに対して同様の強化された抗生作用の結果が見られた（データは省略）。これらの真菌種に対する阻害は、それらの分離株の用量に依存した。
【０１２７】
直上に記載したＷＢからの無菌濾液についても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで試験した。無菌濾液を得る方法は、当技術分野で周知であると考えられる。一部の細菌分離株については、無菌濾液は、ＷＢとは異なるｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害プロファイルを示した。例えば、試験した細菌分離株の中で、ＭＳ２３７９の全ブロスは最も高いリゾクトニア阻害活性を示したが、その濾液は最も低い活性を示した。
【０１２８】
実施例２  細菌分離株の発酵プロファイル
４つのパエニバチルス分離株の生物活性に対するＧＢ６培地における窒素源の影響を調査するために、ＧＢ６−Ｍベースの培地を、窒素源を変更して抗生物質の活性を高めることによりさらに改変した。それぞれ２５０ｍｌの生産培地を含む１６個の１Ｌバッフル付きフラスコに、ＬＢ培地からの２％（５ｍｌ）の種菌を接種した。これらを２６℃、２００ｒｐｍで７２時間培養した。４つの生産培地には、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９が含まれる。
【０１２９】
【表４】
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【０１３０】
表４に示すように、ＧＢ６−Ｍ９はＭＳ１４７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０に高い粘度をもたらしたが、大豆粉を含まないＧＢ６−Ｍ７培地ではＭＳ２３７９の増殖が比較的不十分であった。
【０１３１】
ＭＳ１４７９及びＭＳ２４１４は、表１に示すように、Ｐ．ポリミキサの非常に近縁にある株である。種菌は、ＭＳ１４７９及びＭＳ２４１４をＬＢ培地で２８℃、２００ｒｐｍで一晩培養することにより調製した。生産培地は、０．５ｇ／Ｌの消泡剤Ｂを含むＧＢ６−Ｍ３（ｇ／Ｌ）であった。接種量は、各分離株につき６０ｍｌの種培養物とした。発酵条件には、２６℃、ｐＨ制御なし、ＤＯ＞２０％、気流１．３Ｌ／分、目標発酵時間４８〜５４時間、泡制御（１０％消泡剤Ｂ）が含まれていた。
【０１３２】
ＧＢ６−Ｍ３培地では、ＭＳ１４７９及びＭＳ２４１４は同様の発酵プロファイルを示した（図２Ａと図２Ｃを比較）。発酵の終わりに、両方の分離株について高いｃｆｕ（１×１０９）及び高い胞子形成率（＞９０％）が達成された。
【０１３３】
２４時間の経過発酵時間（ｅｌａｐｓｅｄ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）（ＥＴ又はＥＦＴ）の後、ＭＳ１４７９の粘度は急速に低下した（図２Ｂ）。一方、ＭＳ２４１４の粘度はより長い間高かった（図２Ｄ）。スクロース濃度はＥＴ１２時間から増加し、両方の発酵物について発酵の終わりまで増加し続けた。理論に縛られるものではないが、スクロースは、発酵中に分離株によって生成される多糖の加水分解生成物であり得る。
【０１３４】
実施例３  種子処理
３０個の種子を５０ｍｌの遠心チューブ内で、０．１ｍｌ／種子のＷＢ量で処理した。処理した種子（０．１ｍｌ／種子）を室温で２ヵ月保存した。各処理から３個の種子をｃｆｕアッセイに使用した。
【０１３５】
被覆種子の実際のｃｆｕ／種子は、ｃｆｕ回収により評価した。１ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を遠心チューブ内の１つの種子に添加した。種子を浸し、５分間超音波処理した。ボルテックス後、リン酸緩衝液はわずかに異なる色に変わり、種子の表面からのｃｆｕの放出を示した。次に、この緩衝液の懸濁液をｃｆｕについて試験した。
【０１３６】
表５は、ダイズ種子の処理に使用した全ブロス（ＷＢ）のｃｆｕ、種子処理後の初期ｃｆｕ、及び種子処理の保管から２ヵ月後のｃｆｕカウントを示す。各ＷＢは、単独で、又はグリセロール又はスクロースを添加して種子に適用された。２ヵ月の保管後、ｃｆｕに大きな変化はなかった。グリセロールもスクロースも安定性に有意な効果を示さなかった。
【０１３７】
【表５】
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【０１３８】
種子処理の１週間後の、ＷＢサンプルで処理したダイズ種子からの種子処理で使用したＷＢからのｃｆｕと、室温で２ヵ月保存した後の処理された種子からのｃｆｕとの比較。
図３は、全ブロス（ＷＢ）で処理したダイズ種子の結果を示し、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＧＢ６−Ｍ、又はＬＢ培地で培養したＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２３７９、及びＭＳ２４１４は比較的安定しており、２ヵ月の保管後も、種子処理直後に採取した初期ｃｆｕと同様のｃｆｕ／ｍｌを含む。処理された種子は、畑に播種する前に、合理的な期間、例えば、少なくとも２ヵ月間保存できると考えられる。
【０１３９】
別の実験で、ＭＳ２３７９のバイオコントロール効果を、ダイズ種子とピシウム・イレギュラーレを用いた種子アッセイでの種子処理として評価した。ピシウム・イレギュラーレは、幅広い作物や他の植物種に苗立枯れ病を発症させる原因となる。結果は、わずか１．９５ｍｌ／ｋｇ（３液用オンス／ＣＷＴ）のダイズ種子で、Ｐ．イレギュラーレの存在下、未処理の対照と比較して、種子の発芽と実生の成長が４０％以上有意に増加した。処理後の種子の発芽は、ピシウムや他の卵菌病を防除するために使用される一般的な種子処理である化学殺真菌剤メタラキシルによって生成されるレベルに匹敵した。
【０１４０】
実施例４  根コロニー形成アッセイ
パエニバチルス処理及び未処理のダイズ種子を滅菌土壌で発芽させ、８日後に根を洗浄し、滅菌水中で５分間高出力で超音波処理した。次に、スパイラルプレーターを使用してこの水を塗抹した。図４に示すように、未処理のダイズ種子からの根は、細菌コロニーの数が少なく形態も様々であり、処理された種子は、均一で優勢なコロニー型のパエニバチルスのコロニーを多数生成した。この結果から、処理された種子ではパエニバチルスが持続し、土壌環境において苗の根で増殖したことが示唆された。
【０１４１】
別の実験では、各種子処理からの６個の種子を滅菌土壌ミックス（１．５時間オートクレーブしたもの）に植えた。種子を室温で適度な水分レベルで発芽させた。８日後、３個の発芽種子をｉｎ  ｖｉｔｒｏでのコロニー形成アッセイのために回収した。種子処理方法と、３つの実生からの根の平均合計ｃｆｕ及びパエニバチルスｃｆｕを表６に示す。ＭＳ２４１４又はＭＳ２３７９で処理した全てのサンプルは、パエニバチルス形態を優勢に示す細菌コロニーを生成した。
【０１４２】
【表６】
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【０１４３】
実施例５  植物病原体防除のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ。
全ブロスを、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、又はＧＢ６−Ｍ３培地で増殖させたＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、及びＭＳ２８２０から無菌的に収集し、９つの真菌病原体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ防除について試験した。各分離株について２μｌの全ブロスを、プレート上に細菌又は真菌病原体を有するプレート上に、又はプレートの中央に置かれた病原体コロニー化寒天キューブ上にスポットした。全てのプレートを適切な条件でインキュベートした：３０℃インキュベーター（キサントモナス・ペルフォランス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｐｅｒｆｏｒａｎｓ）（“Ｘｐ”）及びシュードモナス・シリンガエトマト病原型（“Ｐｓ”））；２５℃インキュベーター（マクロフォミナ・ファセオリナ（“Ｍｐ”）、リゾクトニア・ソラニ（“Ｒｓ”）、ボトリチス・シネレア（“Ｂｅ”））；２５℃グロースチャンバ（シュードモナス・シリンガエ（“Ｐｓ”）、ピシウム・アルティマム（“Ｐｕ”）、ピシウム・イレギュラーレ（“Ｐｉ”）、及びフザリウム・ビルグリフォルメ（“Ｆｖ”）。次に、プレートを、抗生作用により引き起こされた透明帯の直径について測定した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害データを表７に示す。
【０１４４】
Ｆ．ビルグリフォルメ、Ｍ．ファセオリナ、Ｒ．ソラニ、Ｂ．シネレア、Ｐ．アルティマム、及びＰ．イレギュラーレに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗真菌活性を図１６に示す。ＴＳＢ培地と比較して、ＢＳ３−Ｍ又はＧＢ６−Ｍ培地で分離株を増殖させた場合、４つの分離株の胞子形成及びバイオコントロール効力が改善されたことが示されている。ＧＢ６−Ｍ培地には、炭素源としてデキストロースとマルトデキストリンが、窒素源として酵母エキスと大豆粉が含まれている。ＢＳ３−Ｍ培地は、炭素源及び窒素源としてそれぞれスクロース及びカゼイン加水分解物を用いている。
【０１４５】
ＬＢ培地で増殖した微生物分離株は、各病原体に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害反応の陽性及び陰性の基準として使用された。これらの分離株は、大腸菌（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．２５９２２）；ＦＺＢ４２、市販のバイオ殺真菌剤として販売されているバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｉｆａｃｉｅｎｓ）；ＭＳ２３４１、以前に試験され、リゾクトニア阻害が陽性で、ピシウム阻害が陰性であることが実証されているＢ．アミロリケファシエンス；及びＬＢ培地で増殖させた場合、リゾクトニア及びピシウムに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏでの阻害が陽性であったＭＳ２３７９であった。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ防除活性を有するＬＢ培地で増殖させたこれらの分離株は、同じ９つの真菌病原体に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害試験で０〜５のスコアとなった（表７）。
【０１４６】
【表７】
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【０１４７】
【表８】
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【０１４８】
表８によると、一部の真菌病原体に対してＴＳＢ及びＢＳ３培地では陰性の結果が出た４つの分離株は全て、ＢＳ３−Ｍ２及びＧＢ６−Ｍ３において全ての真菌病原体に対して陽性活性を示した。ＭＳ２３７９はＢＳ３−Ｍ２及びＧＢ６−Ｍ３培地において、マクロフォミナ及びボトリチスに対して最も高い活性を示した。
【０１４９】
実施例６  リゾクトニア防除のためのポットアッセイ
ポットアッセイでは、ＷＢ又はその希釈液を、種子コーティングとして、又は病原体を接種した土壌を含むポット内の模擬畝内施用として適用した。バイオコントロール効果を評価するために、出芽率、植物成長段階、及び病気の評価の測定値を用いた。全ブロス（ＷＢ）又はＷＢ希釈液を、模擬畝内処理又はダイズ種子に適用される種子処理のいずれかとして適用した。模擬畝内施用については、病原体を接種したピートライトミックス培養土に形成した０．５ｃｍの深さの窪みに種子を置き、その上に１ｍｌのバイオコントロール処理剤又は陰性対照及び陽性対照をピペッティングして、上記培養土を被せた。種子処理は、接種した培養土に植える前のダイズ種子を、バイオコントロール処理剤及び対照処理剤でコーティングすることにより適用した。陰性対照は、接種したポットの種子に適用した逆浸透精製（ＲＯ）水とした。陽性対照は、標識された割合で適用されたＳａｔｏｒｉ（商標）（アゾキシストロビン）及びＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標）（枯草菌ＭＢＩ６００株）とした。さらに、病原体接種を行わない模擬接種治療を各試験に含めた。接種は、セメントミキサーを使用して、ＲＯ水２００ｍｌ中のリゾクトニア・ソラニコロニー化ポテトデキストロース培養物と、４Ｌのピートライトミックス（例えば、Ｓｕｎｓｈｉｎｅ  ＬＣ１ポッティングミックス）の２つを完全にブレンドすることによって作成された１Ｌのスラリーを完全に混合することによって行った。実験単位は１ポットあたり５個の種子とし、処理は完全に無作為化した配置で、４個の複製で実施した。試験は、ＬＥＤランプで照らされた照明カート（昼１６時間／夜８時間）において、２６〜２８℃で７〜１０日間実施した。ポットには、必要に応じてＲＯ水を灌注した。出芽率、植物成長段階（Ｍｕｎｇｅｒら、２００８年）、及び病気の重症度（０、病気なし〜５、枯死）の測定値を各試験の終了時に各植物から集め、実験単位の平均値をＪＭＰバージョン１１（ＳＡＳ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を用いて分析した。
【０１５０】
実施例７  種子コーティングを用いたリゾクトニア防除のためのポットアッセイ
処理された種子を、各処理からの１００個の種子とともに保持した。これらの種子は、Ｒ．ソラニ防除用の植物試験グループによって試験した。精度を高めるために、アッセイの各処理について１０個の複製を行った（各処理に４０の植物）。病気評価の統計分析を図６に示す。ＧＢ６−Ｍ培地で増殖させたＭＳ２４１４で処理した種子は、対照と比較して耐病性が大幅に向上した。
【０１５１】
別のポットアッセイでは、処理剤をドレンチ剤として直接適用した。ＢＳ３−Ｍ２培地で発酵させたＭＳ２４１４及びＭＳ２８２０での処理におけるＲ．ソラニ病の評価は、化学的防除剤のフルジオキソニル（表９）と統計的に差がなかった（Ｐ＜０．０５）。この結果は、これらの分離株がダイズのＲ．ソラニの苗の病気を防除するのに効果的であることを示した。バイオコントロール活性を試験するためのポットアッセイは、本開示の４つのパエニバチルス分離株が、発芽中のダイズ実生において、Ｒ．ソラニによって引き起こされる病気を制限する能力を有することを示している（表９）。
【０１５２】
【表９】
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【０１５３】
実施例９  圃場試験
ＧＢ６−Ｍ培地で増殖させたＭＳ２３７９又はＭＳ２４１４の発酵ＷＢをアマランスと混合して、圃場試行研究用の種子処理剤として適用される混合物を生成した（表１０）。全ての処理で、目標濃度は２０μｌ水／種子であり、これは６０ｍｌ／４６０ｇ種子に相当する。ダイズ種子４６０ｇごとに６０ｍｌの液体を合計６回添加した。毎回、４６０ｇの種子に１０ｍｌの液体を加え、１５秒間混合した。コーティングされた種子は、添加と添加の間に換気下で５〜１０分間乾燥させた。最終的なコーティング種子を、安全キャビネット内で一晩乾燥させた。
【０１５４】
【表１０】
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【０１５５】
リゾクトニア及びＳＤＳ対照の圃場試験の結果を、スタンド（畑に生えたままの作物）データとともに表１１及び１２にまとめる。リゾクトニア試験では、ＭＳ２４１４とＭＳ２３７９の両方が、未処理の作物及びフルジオキソニルで処理した作物と比較して、スタンド及び病害制御に有意なプラスの効果を示す。
【０１５６】
【表１１】
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【０１５７】
ＳＤＳ試験では、ダイズの突然死症候群（「ＳＤＳ」）に対する分離株の効果を調査するために、圃場試験の前にＷｉｎｔｅｒｓｔｅｉｇｅｒ種子処理機を使用して、ダイズ種子を２０μｌ／種子のＷＢで処理した。処理には以下が含まれた：（１）ＭＳ２４１４（ＧＢ６−Ｍ３）種子処理、種子はＳＤＳ接種材料上に植えた（Ｆ．ビルグリフォルメで１ｈａあたり３００ｋｇのソルガム穀物菌接種材料を使用；Ｆａｒｉａｓ  Ｎｅｔｏら、Ｃｒｏｐ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ４６：２５４７−２５５４（２００６））；（２）ＭＳ２８２０（ＧＢ６−Ｍ３）種子処理、種子はＳＤＳ接種材料上に植えた；（３）種子処理なし；種子はＳＤＳ接種材料上に植えた；（４）種子処理及びＳＤＳ接種なし。試験の結果を表１２に示す。
【０１５８】
北中央大豆研究プログラム（Ｎｏｒｔｈ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｇｒａｍ）の地域的ＳＤＳ検査から受け取ったＭＧ  ＩＩ  ＳＤＳ感受性基準であるダイズ栽培品種（２９００ＲＲ）を、この研究で使用した。完全乱塊法（Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｌｏｃｋ  Ｄｅｓｉｇｎ）には５個の複製を含めた。区画の寸法は、約７６ｃｍ（３０インチ）間隔の長さ３．８１ｍ（１２．５フィート）の２畝であったが、２．７４ｍ（９フィート）にトリミングした。植え付け量は、２２０種子／区画（又は約３０ｃｍ（１フィート）につき９種子）とした。ＳＤＳ処理の場合、１．５ｍｌ／フィートのＳＤＳ接種材料を植栽パケットに追加した。区画には、毎週約３８ｍｍ（１．５インチ）の水で３週間滴下灌注した。
【０１５９】
【表１２】
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【０１６０】
細菌分離株による種子処理は、ＳＤＳ制御に有意なプラスの効果を有した。ＭＳ２４１４とＭＳ２８２０ではスタンド数が低下したが、これはおそらく、種子をコーティングする過程で種子に生じた損傷によるものである。結果を表１２に示す。
【０１６１】
ＳＤＳ接種材料により処理した植物の３０％以上がＳＤＳ症状を示した。これらの処理法の間でＳＤＳ発生率に有意差はなかった。非感染処理ではＳＤＳ症状は観察されなかった。病気指数評価（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｃｎｒｅｓｅａｒｃｈ．ｉｎｆｏ／４６２．ｐｄｆ）から決定される累計病気進行度は、ＭＳ２８２０（５．８）及びＭＳ２４１４（１５．６）で処理した種子から生産された植物で、未処理のＳＤＳ接種グループ（２５．４）と比較して有意に低かった。この結果は、ＭＳ２８２０及びＭＳ２４１４がＳＤＳの発病率と重症度を低下させることを示した。
【０１６２】
実施例１０  バチルス分離株のバイオコントロール活性
７つのバチルス分離株ＭＳ０６３３、ＭＳ２３３５、ＭＳ２６５２、ＭＳ２６５８、ＭＳ２６８１、ＭＳ２６９７、及びＭＳ２７１２を、４つのパエニバチルス分離株（ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、ＭＳ２８２０）と共にバイオコントロール活性について試験した。この実験では、それぞれ５０ｍｌのＬＢ培地を含む１１個の２５０ｍｌ振盪フラスコに、０．１ｍｌの凍結バイアルの解凍物又はプレートからのコロニーを接種した。種菌を３０℃、２００ｒｐｍで約１８時間一晩培養した。それぞれ２５０ｍｌのＧＢ６−Ｍ８培地を含む１１個の１リットルのバッフル付きフラスコに２％（５ｍｌ）の種菌を接種した。バチルス分離株の培養条件には、２８℃及び７２時間の２００ｒｐｍの振盪速度が含まれていた。４つのパエニバチルス分離株の培養条件には、２６℃及び７２時間の２００ｒｐｍの振盪速度が含まれていた。
【０１６３】
【表１３】
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【０１６４】
表１３に示すように、全てのバチルス分離株（ほとんどがＢ．アミロリケファシエンス）の使用済み培地は、４つのパエニバチルス分離株よりも多くの炭水化物残留物を含んでいる。理論に縛られるものではないが、これは、バチルス分離株が培地のマルトデキストリンを利用するのに十分なアミラーゼを産生しない可能性があることを示しているのかもしれない。バチルス分離株は、１−４Ｅ０９の範囲でより高いｃｆｕ／ｍｌを示した。
【０１６５】
バチルス分離株のＷＢは、４つのパエニバチルス分離株よりもフザリウムに対して大きな阻害直径を示した。同時に、バチルス分離株のクリアリングゾーンは、パエニバチルスのクリアリングゾーンほど明確ではなかった。理論に縛られるものではないが、これは、バチルス分離株が真菌に対する異なる作用様式に依存していることを示しているのかもしれない。ＭＳ２６５２及びＭＳ２６５８は、フザリウム・ビルグリフォルメの制御において最も強い能力を示した（図７及び８）。
【０１６６】
４つのパエニバチルス分離株のＷＢもｉｎ  ｖｉｔｒｏでのピシウム防除活性を示したが、全てのバチルス分離株のＷＢ又は無菌濾液のいずれかはピシウムに対するバイオコントロール活性を示さなかった（表１４）。ピシウムに対するそれらの応答とは反対に、バチルス分離株はリゾクトニアに対してより良好な防除を示した（図９及び１０）。
【０１６７】
【表１４】
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【０１６８】
例１１  リゾクトニア・ソラニに対するポット試験
ＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた１１の分離株（４つのパエニバチルス及び７つのバチルス）の発酵全ブロスを、ポットでのＲ．ソラニ感染に対して試験した。植物の発芽、植物の発育、及び病気の重症度の点で、処理の効果は大きく異なる。種子を深さ１ｃｍの窪みに置いた後、ＷＢを各種子の上に１ｍｌずつピペットで滴下することにより、模擬畝内施用として適用した。
【０１６９】
リゾクトニア防除のポットアッセイの結果を図１１〜１３に示す。植物の出芽、植物の発育、及び病気の重症度（α＝０．１）について、処理間で有意差があった（表１５）。陰性水対照の平均は、陽性対照のＳａｔｏｒｉ（商標）殺真菌剤及び模擬接種とは有意に異なった。３つの全ての指標の検定力は０．９５以上であった。Ｂ．アミロリケファシエンス分離株であるＭＳ０６３３は、水対照よりも有意に低い病気の重症度を示し、植物の発芽と植物の発達において他の分離株よりも優れたバイオコントロール活性を示した。全体的に、ＭＳ２３７９は、試験したパエニバチルス分離株の中で最も効果的であった。
【０１７０】
【表１５−１】
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【０１７１】
【表１５−２】
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【０１７２】
【表１５−３】
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【０１７３】
ＧＢ６−Ｍ３１培地で発酵させたＭＳ２３７９のリゾクトニア・ソラニに対するバイオコントロール効力も、植物成長室内での模擬畝内施用においてダイズで評価した。結果は、１ｍｌの全ブロスを植え付け時にダイズ種子に適用すると、未処理の対照と比較して、植物の出芽及び発育が改善され、根の感染が減少することを示した。
【０１７４】
実施例１２  ポットアッセイ：ピシウム・イレギュラーレの制御のためのＧＢ６−Ｍ８培地における殺真菌剤と細菌分離株との組合せ
ダイズのピシウム病に対する細菌分離株の効果を、Ｂｒｏｄｅｒｓら、Ｐｌａｎｔ  Ｄｉｓ  ９１：７２７−７３５（２００７）の方法を変更したものを用いて試験した。１００ｍｌの漂白剤（５．２５％ＮａＯＣｌ）と３．５ｍｌのＨＣｌ（１０Ｎ）を合わせて発生させた塩素ガスを使用してダイズの種子を表面滅菌した。次いで、ダイズ種子を、種子当たり約２０μｌのバイオコントロール処理剤又は対照処理剤でコーティングし、滅菌培養フード内で完全に乾燥させた。陰性対照は、種子に適用された滅菌蒸留水であった。陽性対照は、標識された割合で適用されたメタラキシル及びＳｕｂｔｉｌｅｘ（商標）（枯草菌ＭＢＩ６００株）であった。さらに、病原体接種のない模擬接種処理が各試験に含まれていた。水寒天（０．８％寒天）プレートの中央に、Ｖ８寒天で増殖させた７日齢のＰ．イレギュラーレの培養物の縁から切り取った１０ｍｍ角の塊を接種した。次に、病原体が置かれた同じ日に、単一の処理の１０個の種子が、各接種された水寒天プレートの周囲に直ちに無菌的に置かれた。実験単位には、プレートあたり１０個の処理種子が含まれ、１つの処理につき５個の複製を行った。プレートをランダムに配置し、蛍光灯下（昼１６時間、夜８時間）、１６℃で７日間、さらに同じ照明下で２５℃でさらに７日間インキュベートした。プレートあたり１０個の種子のうち発芽した種子の数と、プレート内の各種子の植物発達段階（Ｍｕｎｇｅｒら、２００８年）を記録し、ＪＭＰバージョン１１（ＳＡＳ、Ｃａｒｙ、ＮＣ）を使用して分析した。
【０１７５】
殺真菌剤Ｓａｔｏｒｉ（商標）（有効成分はアゾキシストロビン）の存在下又は非存在下で細菌分離株の性能を試験するため、深さ１ｃｍの窪みに種子を置いた後、各種子の上に１ｍｌずつピペッティングすることにより、サンプルを模擬畝内施用として適用した。この組合せは、各細菌全ブロス（ＭＳ１４７９、ＭＳ２３７９、ＭＳ２４１４、又はＭＳ２８２０）（ＧＢ６−Ｍ８で増殖させたもの）と、等量（１：１）のＳａｔｏｒｉ（商標）を組み合わせることで調製した。２００ｍｌのＲＯ水にＰ．イレギュラーレの２つの寒天培養物をブレンドし、セメントミキサーで４Ｌのピートライト混合物と混合した後、寒天スラリー接種法を用いた。５個のダイズ種子（遺伝子型ＷＳ２６２０）を各ポットに播種し、各種子の上に１ｍｌの処理剤を施しました（畝内模擬）。次に、ポットを１６℃で１週間、次に２３℃でさらに１週間インキュベートしてから評価した。病気の重症度スケール：１＝８０〜１００％、２＝６０〜７９％、３＝４０〜５９％、４＝２０〜３９％、５＝１〜１９％、及び６＝０％の損傷した根。（表１６）。
【０１７６】
ＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた全ての分離株は、植物の出芽、植物の発育、及び病気の重症度に見られるように、ピシウム・イレギュラーレの有意な防除を示した（データは省略）。全体的に、併用処理は、ＭＳ１４７９を用いたこと以外は純粋な全ブロス処理と同様に実施され、ＭＳ１４７９は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）と組み合わせた場合の出芽率がそうでない場合よりも低くなった。全体として、増殖させたＭＳ１４７９は他の分離株よりも比較的高いピシウムバイオコントロール活性を有した。
【０１７７】
処理間での植物の出芽、植物の発育、及び病気の重症度の有意差を表１６に示した。陰性水対照の平均は、メタラキシル陽性対照とは大きく異なり、３つの指標それぞれで検定力は０．８５を超えていた。特に、ＭＳ１４７９のバイオコントロール活性は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）と組み合わせると向上した。理論に縛られるものではないが、Ｓａｔｏｒｉ（商標）の有効成分アゾキシストロビンはピシウムを制御又は治療できると考えると、ＭＳ１４７９の作用の向上を説明できる。他の３つの分離株のバイオコントロール性能は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）と組み合わせてもＭＳ１４７９ほど大きくは改善されなかった。この試験では、ＭＳ２８２０は他の分離株よりも比較的高いピシウムバイオコントロール活性を示した。
【０１７８】
【表１６−１】
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【０１７９】
【表１６−２】
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【０１８０】
実施例１３  ２０Ｌ発酵培地からの細菌分離株のバイオコントロール活性
２０Ｌ発酵槽に播種するための接種材料は、２つの１Ｌバッフル付きフラスコ内の２つの２５０ｍｌのＬＢ培地に、それぞれ１ｍｌの凍結バイアルの解凍物から０．５ｍｌを接種することにより調製し、２８℃及び２００ｒｐｍの振盪速度で一晩インキュベートした（約１６〜１８時間）。インキュベーション後、ＭＳ２３７９の種菌は７．４３のｐＨと３．２４のＯＤ６００を示し、ＭＳ２４１４の種菌は７．３０のｐＨと２．８３のＯＤ６００を示した。
【０１８１】
生産培地は１５ＬＧＢ６−Ｍ８とした。各分離株の３００ｍｌのシード培養物を、次の発酵条件により生産培地でインキュベートした：２６℃、ｐＨ制御なし、ＤＯ＞３０％、空気流７．５Ｌ／分、７０ｋＰａ（１０ｐｓｉ（０．７ｂａｒ））の背圧、及び消泡剤Ｂを使用した自動泡制御。真菌種に対する阻害アッセイの結果を図１４に示す。
【０１８２】
実施例１４  バイオコントロール活性に対するＵＶ処理の効果
この実験は、病害防除のための葉面処理のＵＶ安定性を試験するためであった。全ブロス濾液、全ブロス、ならびにＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４の画分をＵＶ光下に置いた。処理の長さは、処理するサンプルの量及び種類に応じて異なる。当業者は、ＵＶ処理の期間を決定することができる。
【０１８３】
ＧＢ６−Ｍ８におけるＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４のＵＶ光処理した発酵全ブロスは、大腸菌ほどには２つの分離株のｃｆｕカウントに影響しなかった（図１５）。細菌分離株をＬＢで増殖させた場合にも、同様の結果が観察された。ＧＢ６−Ｍ１０でのＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４のＷＢサンプルを真菌病原体に対してｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した場合、Ｂ．シネレア、Ｐ．イレギュラーレ、及びＲ．ソラニのｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害に対するＵＶ暴露の悪影響はＭＳ２３７９及びＭＳ２４１４では観察されませんでした（図１６）。
【０１８４】
実施例１５  ＷＢ及び無菌濾液で処理した後の種子の発芽
種子発芽アッセイは、ピシウム・イレギュラーレに対するＧＢ６−Ｍ８培地で増殖させた分離株の全ブロスのバイオコントロール活性を調査するために使用された。図１７に示すように、いくつかの全ブロス微生物処理（ＭＳ２３７９、ＭＳ２８２０、及びＭＳ１４７９）で、植物の発育と種子の発芽の結果は、両方のメトリックで陽性化学物質対照メタラキシルに類似しており、Ｓｕｂｔｉｌｅｘよりも優れてさえいた。
【０１８５】
各細菌培養物からの無菌濾液は、両方の指標ついて、全ブロスと比較して病原体に対して効果が低かった（図１７）。理論に縛られるものではないが、これは分離株の細胞が病気の制御にも使用できることを示している可能性がある。統計分析は、検定力＝１及びα＝０．０５のＪＭＰを使用している。同じ文字を含む処理は、統計学的に差がないことを示す。
【０１８６】
例１６  ＧＢ６−Ｍ８／ＧＢ５−Ｍ８培地でのＭＳ２３７９（ＬＰＩ−６５４３）及びＭＳ２４１４（ＬＰＩ−６５４４）を用いた圃場試験
圃場調査のプロトコルを表１７に示す。
【０１８７】
【表１７】
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【０１８８】
各圃場調査で、植物に次の処理に供した：（１）ＵＴＣ（未処理対照）、（２）ＭＳ２３７９、（３）ＭＳ２３７９及びＳａｔｏｒｉ（商標）、（４）ＭＳ２４１４、（５）ＭＳ２４１４及びＳａｔｏｒｉ（商標）、（６）Ｓｅｒｅｎａｄｅソイル、（７）Ｓｅｒｅｎａｄｅ及びＳａｔｏｒｉ（商標）、及び（８）１０×Ｐｒｉａｘｏｒ（商標）殺真菌剤。Ｓａｔｏｒｉ（商標）の正確な割合（例えば、０．４オンス／エーカーは０．４オンス／１，０００畝フィートと同じ）は、多くの要因、例えば圃場の状態や処理する植物に基づいて調整可能である。
【０１８９】
圃場試験では、１６のダイズ区画を、Ｓａｔｏｒｉ（商標）を含むものと含まないものの２つの細菌分離株を用いて細菌分離株と組み合わせて２か所で畝内処理した。対照は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）を使用した場合と使用しない場合のＳｅｒｅｎａｄｅとした。別の対照は、有効成分のフルキサピロキサド及びピラクロストロビンを含むＰｒｉａｘｏｒ（商標）とした。処理は、約３ｍ（１０フィート）×約１２ｍ（４０フィート）の畝で６回繰り返した。各分離株について、プロトコルには１６ＬのＷＢを要した。
【０１９０】
植物成長室のバイオアッセイの結果、９８％ＭＳ２３７９全ブロス（又はＬＰＩ６５９２）と２％Ｓａｔｏｒｉ（商標）とをタンクで混合した組合せを１０％に希釈したものが、フィトフトラダイズ根病の制御に相乗効果をもたらすことが判明した（図１８）。この組合せ処理は、他の市販の殺真菌剤、例えばＬｉｆｅＧａｒｄ  ＷＧ（商標）、メタラキシル、及びＤｏｕｂｌｅＮｉｃｋｅｌ（商標）よりもフィトフトラの制御において効果的であったことに注目されたい（図１８）。ＭＳ２３７９は、他の殺真菌剤（Ｓａｔｏｒｉ（商標）やＡｗａｋｅｎ（商標）など）の有無にかかわらず、他の病原体（例えば、ピシウム・イレギュラーレ、リゾクトニア・ソラニ）に対しても有効性を示した。他の殺真菌剤との組合せは、種子処理において病原体に対して相乗効果を示しました。ダイズ種子の処理に使用するＭＳ２３７９全ブロスの量を減らした場合（例えば、種子あたり０．５ｕｌの全ブロス）、相乗効果はより顕著になる（データは省略）。
【０１９１】
さらに、ダイズ植物がピシウムに重度に感染し、又は立枯れ病に感染した場合、ＭＳ２３７９は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）の有無にかかわらず、水対照と比較してダイズのスタンドを大幅に改善した（データは省略）。他のバイオ殺真菌剤（Ｓｅｒｅｎａｄｅ  ＡＳＯ（商標）、Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ５５（商標）、ＬｉｆｅＧａｒｄ  ＷＧ（商標）、Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、Ｓｕｂｔｉｌｅｘ（商標））と比較した場合でも、ＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９（ＬＰＩ  ６５９２）は、同じｃｆｕ濃度でテストした場合、ボトリチス、ピシウム、フィトフトラ、及びスクレロチニアに対し、様々なパラメーター（病変の直径、発芽、根の病気の評価）において、他のバイオ殺真菌剤と同等であるか又はそれらよりも優れていた（データは省略）。
【０１９２】
トウモロコシ圃場試験の結果、ＧＢ６−Ｍ１０でのＭＳ２３７９（ＬＰＩ  ６５６８）又はＭＳ２４１４（ＬＰＩ  ６５６９）のいずれかの畝内施用を、Ｓａｔｏｒｉ（商標）と組み合わせて使用すると、葉の病気である南方トウモロコシさび病（プクシニア・ポリソラ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ  ｐｏｌｙｓｏｒａ））に関連する感染率が大幅に低下し、かつ穀物収量が高くなることが示された（図１９）。ＭＳ２３７９及びＳａｔｏｒｉ（商標）の組合せで処理したトウモロコシ植物は、さび膿疱をほとんど含まず、Ｓａｔｏｒｉ（商標）単独での処理を含む陽性対照よりも長く緑のままでした（データは省略）。
【０１９３】
ブドウ畑の試験では、ブドウの木を以下の処理剤で処理した：ＵＴＣ、Ｓａｔｏｒｉ（商標）、Ｐｒｉｓｔｉｎｅ（商標）殺真菌剤、及びＳｅｒｅｎａｄｅ（商標）を使用した場合及び使用しない場合のＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９（ＬＰＩ  ６５９２）。ＭＳ２３７９は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）の有無にかかわらず、水対照、Ｓｅｒｅｎａｄｅ（商標）及びＳｅｒｅｎａｄｅ（商標）とＳａｔｏｒｉ（商標）の組合せと比較した場合、ブドウのうどんこ病の有意なバイオコントロールを示した（データは省略）。
【０１９４】
ＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９（ＬＰＩ  ６５９２）の真菌制御活性を、分離したキャノーラの葉でも試験した。同じ３×１０８ｃｆｕ濃度では、２０％ＭＳ２３７９は市販のバイオ殺真菌剤（６％Ｓｅｒｅｎａｄｅ  ＡＳＯ（商標）、１．５％Ｄｏｕｂｌｅ  Ｎｉｃｋｅｌ  ５５（商標）、１％ＬｉｆｅＧａｒｄ  ＷＧ（商標）、１％Ｘａｎｔｈｉｏｎ（商標）Ａ、及び２％Ｓｕｂｔｉｌｅｘ（商標））よりも、キャノーラの葉のスクレロチニアの病変の発生を抑制するのに効果的であった（データは省略）。
【０１９５】
実施例１７  芝生の病気の防除
ＧＢ６−Ｍ３１培地で発酵させたＭＳ２３７９（ＬＰＩ−６５９２）のバイオコントロール効果を、以下の４種類の芝生の病気について、芝生の病気の確立された区画において試験した：炭疽病（コレトトリカム・セレアレ（Ｃｏｌｌｅｔｒｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃｅｒｅａｌｅ））、ブラウンパッチ病（リゾクトニア・ソラニ）、ダラースポット病（スクレロチニア・ホモエオカルパ）、及びピシウム胴枯病（ピシウム種）。炭疽病の区画には人為的に接種し、他の区画は天然の接種源で感染させた。
【０１９６】
ＭＳ２３７９発酵物によるバイオコントロール処理剤は、確立された芝生区画に、１０週間にわたり１４日ごとに９．３５、２３．４、又は４６．８Ｌ／ｈａ（１、２．５、又は５ガロン／エーカー）の量で直接散布した。処理は、４つのブロックの完全乱塊法で配置した。試験中に各試験区画で病気を示した面積の割合を４回推算した。
【０１９７】
図２０に示すように、ＭＳ２３７９発酵物は、全ての量で、４種類の病気の影響から病気にかかる面積を、未処理対照と比較して減少させた。４６．８Ｌ／ｈａ（５ガロン／エーカー）の散布量は、より少ない量よりも高い病気制御率をもたらした（図２０）。４種類の病気のうち、ＭＳ２３７９発酵物はダラースポット病及びピシウム胴枯病に対して最も有効であった。比較的少ない量でも、発酵ブロスはピシウム胴枯病に対して有効であった。
【０１９８】
実施例１８  葉の病気の制御
植物の葉の病気に対する２つの新しい培地ＧＢ６−Ｍ３２及びＧＢ６−Ｍ３４でのＭＳ２３７９発酵物の有効性を、ＧＢ６−Ｍ３１培地のＭＳ２３７９（ＬＰＩ−６５９２）と比較した。細菌分離株を、発酵中のｐＨ制御（ｐＨ５．８〜６．０）あり又はなしで発酵させた。ｐＨ制御発酵では、滅菌ボトル内の滅菌１Ｎ  ＮａＯＨ又は１０％Ｈ２ＳＯ４を用いて、発酵中にｐＨを５．６〜６．０の範囲に自動的に制御した。サンプルを、分離されたキャノーラの葉に１０％（ｖ／ｖ）の有効成分の濃度で適用した。試験には４つの対照処理を含めた：未処理対照（病原体のみを用いた未処理）。化学殺真菌剤Ｄｙｎａ−Ｓｈｉｅｌｄ（商標）フルジオキソニル（Ｌｏｖｅｌ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、有効成分は０．０６％（ｖ／ｖ）のフルジオキソニル；市販のバイオコントロール剤Ｓｅｒｅｎａｄｅ  ＡＳＯ（商標）（Ｂａｙｅｒ  Ｃｒｏｐ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、有効成分は３％（ｖ／ｖ）の枯草菌ＱＳＴ７１３；模擬接種（病原体なし）。ＭＳ２３７９及びＳｅｒｅｎａｄｅ  ＡＳＯ処理のコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）を、１ｍｌあたり３×１０８内生胞子で正規化した。処理は完全乱塊法で配置し、各処理について５個の複製で実施した。温室で栽培された１０日齢のキャノーラ植物から均一サイズの本葉を使用直前に切り取り、逆浸透精製水で３０分間完全に洗浄した。
【０１９９】
実験では、キャノーラの葉を、１００ｐｐｍベンジルアミノプリンで改変した２５ｍｌの水寒天を含む１００ｍｍ×１５ｍｍのペトリ皿に、向軸側を上にして入れた。各葉の葉柄を寒天培地に押し込んだ。次いで、エアブラシ噴霧器を使用して、各葉に１００μｌの各処理剤を均一に噴霧した。ペトリ皿は、処理剤が葉の表面で完全に乾燥するまで、１〜２時間開いたままにした。次に、滅菌針を使用して各葉の中央を２回傷つけた。傷つけた直後、ボトリチス・シネレアの３日齢培養物の縁からコルクボーラーで切断した菌糸体を含む直径５ｍｍの寒天塊を各葉の中央の傷の上に置いた。プレートを覆い、１２時間の昼／夜の光サイクルで、２０℃の照明付きインキュベーターに７日間入れ、各葉に発生した灰色かび病変の最大直径（ｍｍ）を測定して記録した。模擬接種対照を除く全ての処理の病変直径データを、ＪＭＰ統計ソフトウェアを使用して分析した。
【０２００】
図２１に示すように、ＧＢ６−Ｍ３２及びＧＢ６−Ｍ３４培地及びｐＨ制御培地で発酵させたＭＳ２３７９で処理したキャノーラ葉は、ＧＢ６−Ｍ３１で発酵させたＭＳ２３７９（ＬＰＩ−６５９２）及びＳｅｒｅｎａｄｅで発酵させたＭＳ２３７９で処理した葉と比較して、灰色かび病変が有意に小さかった。
【０２０１】
ＧＢ６−Ｍ３１培地でのＭＳ２３７９発酵物（ＬＰＩ−６５９２）を、病原菌を接種した温室試験で評価した。プロトコルには次の処理が含まれていた：９．３５Ｌ／ｈａ（１ｇａｌ／Ａ）、２３．４Ｌ／ｈａ（２．５ｇａｌ／Ａ）、及び４６．８Ｌ／ｈａ（５ｇａｌ／Ａ）のＬＰＩ−６５９２；Ｓａｔｏｒｉ（商標）殺真菌剤（有効成分アゾキシストロビン）とタンク混合した、又はしていないＭＳ２３７９；Ｓａｔｏｒｉ（商標）のみ；及び模擬接種対照。病気が土壌伝染性である場合は模擬畝内施用技術を用いて処理剤を適用し、葉の病原体の場合は病原体接種の前に試験植物に処理剤を直接散布した。
【０２０２】
土壌伝染性フザリウム萎ちょう病の病原体を接種したトマト植物を使用した温室試験の結果は、全てのレベルのＭＳ２３７９単独及びＳａｔｏｒｉとの組み合わせで、トマト果実の収量が未処理対照よりも５０％〜１４０％有意に増加したことを示した。２３．４Ｌ／ｈａ（２．５ガロン／エーカー）のＬＰＩ−６５９２と２．７Ｌ／ｈａ（３７液用オンス／エーカー）のＳａｔｏｒｉ（商標）のタンク混合した組合せは、２３．４Ｌ／ｈａ（２．５ガロン／エーカー）のＬＰＩ−６５９２単独又はＳａｔｏｒｉ（商標）単独よりも大幅に高い果実収量（６４％）をもたらし、これは、タンク混合における２つの成分間の相乗効果を実証した。
【０２０３】
温室内の幼若期のダイズ植物で評価された葉の病気のダイズさび病に対する有効性は、Ｓａｔｏｒｉ（商標）なしで単独で適用されたＬＰＩ−６５９２の３つのレベル（１、２．５、５ガロン／エーカー）全てがダイズさび膿疱数を８８％〜９３％有意に減少させることを示した。ＭＳ２３７９をＳａｔｏｒｉ（商標）（１．０Ｌ／ｈａ（１４液用オンス／エーカー））とタンク混合した場合、又はＳａｔｏｒｉ（商標）を単独で使用した場合、さびの膿疱は９７％減少した。
【０２０４】
植物病に対するＭＳ２３７９発酵物の有効性を、他の植物、例えばズッキーニスクワッシュやダイズでも試験した。１つの実験では、ＧＢ６−Ｍ３２及びＧＢ６−Ｍ３３培地でｐＨ５．５で発酵させ、ＢＩＴで改変したＭＳ２３７９は、ズッキーニスクワッシュ植物のウリ科うどんこ病に対して、ＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９よりも有意に強い効力を示した。
【０２０５】
別の実験では、ＧＢ６−Ｍ３４で発酵させたＭＳ２３７９は、ＬＰＩ−６５９２（ＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９）と比較して、ダイズのスクレロチニア茎腐病に対する改善された有効性も示した。
【０２０６】
表１８に、ＭＳ２３７９が有効性を示した真菌及び卵菌の植物病に関する試験の例示的かつ部分的なリストをまとめた。
【０２０７】
【表１８】
2020515569.tif 000023
【０２０８】
実施例１９  全ブロスの濃縮
真菌の病気に対する有効性を試験するために、細菌分離株の濃縮も行った。ＧＢ６−Ｍ３４で増殖させたＭＳ２３７９（発酵中ｐＨ５．６〜６．０）の発酵全ブロス４Ｌを、ＰＭ−５００（分画分子量は５００，０００Ｄａ）中空繊維濾過カートリッジを搭載したＫＯＣＨデモ濾過ユニットの容器に注入した。限外濾過は、循環ポンプをオンにし、透過側の圧力を１００ｋＰａ（１ｂａｒ）に調整して実施した。透過液の量が２Ｌに達したときに濾過を停止し、非透過物を回収した。透過液を、非透過物が約１０倍濃縮されるまで、ＰＭ−５（分画分子量は５，０００Ｄａ）中空繊維フィルターを用いてさらに濾過した。限外濾過からの全ての非透過物及び透過液を、ＣＦＵ／ｍｌ、粘度（ｃＰ）及びプロテアーゼ活性について試験した。図２２に示すように、ＣＦＵは非透過物において約２倍に濃縮され（図２２Ａ）、ＰＭ５−非透過物は最も高いプロテアーゼ活性を示した（図２２Ｂ）。
【０２０９】
実施例２０  保存用の製剤
保存後の細菌発酵物の安定性を試験するために、事前にプロピレングリコールに溶解させた０．０３％ＢＩＴ（１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン）を発酵物（ＧＢ６−Ｍ３１でのＭＳ２３７９）に加えた。ＧＢ６−Ｍ３１培地中のＭＳ２３７９の保存されたＷＢ約８Ｌを量り取り、５０％クエン酸又は１Ｎ  ＮａＯＨで目標ｐＨ＋／−０．１となるようにｐＨ６．５、６．０、５．５、５．０、４．５に調整した。様々な製剤成分を添加した後、必要に応じてｐＨを再調整した。２００ｍｌＷＢ製剤を２５０ｍｌボトルに加えたものを、同じサイズの各ボトルで２つ作成した。１セットのサンプルを２５℃、もう１セットを４０℃に置いた。表１９に、各サンプルの製剤及びｐＨをまとめて示す。２セットのサンプルには０．５％プロピレングリコールを使用し、そのうちの１つは凍結融解試験に使用した。バイオプロテクター（Ｌａｌｌｅｍａｎｄ製）は、生物学的種子処理又は他の作用に使用できるアジュバントである。
【０２１０】
【表１９】
2020515569.tif 000024
【０２１１】
製剤化されたサンプルのＣＦＵを、保管中の０日目（製剤化直後）、３０日目、及び６０日目に測定した。図２３Ａ及び２３Ｂに示すように、室温で２ヵ月保存した後、ＣＦＵの低下は低ｐＨの製剤でより顕著であった。
【０２１２】
別の実験では、発酵全ブロスをそれぞれｐＨ５．５及び５．０に調整し、防腐剤として０．０３％ＢＩＴ（１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン３）を添加した。製剤を表２０に示す。図２３Ｃに示すように、全ての発酵からの全ブロスは、ＢＩＴ及び調整されたｐＨで良好なＣＦＵ安定性を示した。
【０２１３】
【表２０】
2020515569.tif 000025
【０２１４】
均等物
サンプル情報が示されており、本開示は特定の実施形態及び任意選択の特徴によって具体的に開示されているが、当業者は本明細書で開示される実施形態の変更、改善、及びバリエーションを用いることができ、そのような変更、改善、及びバリエーションは、本開示の範囲内であると見なされることを理解されたい。本明細書で提供される材料、方法、及び実施例は、特定の実施形態の代表であり、例示であって、本開示の範囲を限定するものとしては意図されていない。
【０２１５】
本開示は、本願において広く一般的に説明されている。一般的な開示に含まれるより狭い種及び亜属のグループ分けのそれぞれも、本開示の一部を形成する。これには、除外される事項が本明細書に具体的に記載されているか否かに関係なく、属から任意の発明特定事項を除外する但し書き又は否定的な限定を伴う開示の包括的な説明が含まれる。
【０２１６】
さらに、本開示の特徴又は態様がマーカッシュグループで説明されている場合、当業者はそのことによって、マーカッシュグループの任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループによっても本開示が説明されていることを認識するであろう。
【０２１７】
請求項における用語「又は」の使用は、本開示が選択肢ならびに「及び／又は」のみを参照する定義を支持していても、択一式選択肢のみを指すように明示的に示されていない限り、又は選択肢が相互に排他的でない限り、「及び／又は」を意味するために使用される。
【０２１８】
本明細書及び請求項で使用する場合、「含む」（及びその任意の活用形）、「有する」（及びその任意の活用形）、「含有する」（及びその任意の活用形）は、包括的又は無制限であり、追加の、記載されていない要素や方法ステップを除外しない。
【０２１９】
本開示全体にわたり、様々な出版物、特許、及び公開された特許明細書は、書誌事項の引用により参照されている。本明細書で言及される全ての出版物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それぞれを個別に参照することにより組み込まれるのと同然に、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。矛盾する場合、定義を含め、本明細書が優先される。
【０２２０】
他の実施形態は、特許請求の範囲に記載されている。
【０２２１】
【化１】
2020515569.tif 000026
【０２２２】
【化２】
2020515569.tif 000027
【０２２３】
【化３】
2020515569.tif 000028
【０２２４】
【化４】
2020515569.tif 000029
【０２２５】
【化５】
2020515569.tif 000030
【０２２６】
【化６】
2020515569.tif 000031
【０２２７】
【化７】
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【０２２８】
【化８】
2020515569.tif 000033
【０２２９】
【化９】
2020515569.tif 000034
【０２３０】
【化１０】
2020515569.tif 000035
【０２３１】
【化１１】
2020515569.tif 000036
【０２３２】
【化１２】
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【０２３３】
【化１３】
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【０２３４】
【化１４】
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【０２３５】
【化１５】
2020515569.tif 000040
【０２３６】
【化１６】
2020515569.tif 000041
【０２３７】
【化１７】
2020515569.tif 000042
【０２３８】
【化１８】
2020515569.tif 000043
【０２３９】
【化１９】
2020515569.tif 000044
【０２４０】
【化２０】
2020515569.tif 000045
【０２４１】
【化２１】
2020515569.tif 000046
【図１】
2020515569.tif 000047
【図２−１】
2020515569.tif 000048
【図２−２】
2020515569.tif 000049
【図３】
2020515569.tif 000050
【図４】
2020515569.tif 000051
【図５−１】
2020515569.tif 000052
【図５−２】
2020515569.tif 000053
【図６】
2020515569.tif 000054
【図７】
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【図８】
2020515569.tif 000056
【図９】
2020515569.tif 000057
【図１０】
2020515569.tif 000058
【図１１】
2020515569.tif 000059
【図１２】
2020515569.tif 000060
【図１３】
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【図１４−１】
2020515569.tif 000062
【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６−１】
2020515569.tif 000065
【図１６−２】
2020515569.tif 000066
【図１７】
2020515569.tif 000067
【図１８】
2020515569.tif 000068
【図１９】
2020515569.tif 000069
【図２０】
2020515569.tif 000070
【図２１】
2020515569.tif 000071
【図２２Ａ】
2020515569.tif 000072
【図２２Ｂ】
2020515569.tif 000073
【図２３Ａ】
2020515569.tif 000074
【図２３Ｂ】
2020515569.tif 000075
【図２３Ｃ】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月4日(2019.12.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物病を制御するか、植物の病害抵抗性を高めるか、又はこれらの両方のための方法であって、前記方法は、植物の種子、未熟な苗、及び／又は植物の組織に有効量の農業用組成物を適用することを含み、農業用組成物は、
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の細菌分離株であって、ＭＳ１４７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０１）、ＭＳ２３７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０３）、ＭＳ２４１４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０４）、ＭＳ２８２０（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７１０）、ＭＳ０６３３（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７００）、ＭＳ２３３５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０２）、ＭＳ２６５２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０５）、ＭＳ２６５８（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０６）、ＭＳ２６８１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０７）、ＭＳ２６９７（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０８）、ＭＳ２７１２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０９）、又はそれらの組合せを含む細菌分離株又はその変異体、あるいは
前記細菌分離株又はその変異体の濾液を含む方法。
【請求項２】
植物病は真菌病、細菌病、ウイルス病、又は寄生虫病を含み、真菌病は、任意選択で白さび病、べと病、うどんこ病、根こぶ病、菌核病、フザリウム萎ちょう病及び腐敗病、ボトリチス腐敗病、炭疽病、リゾクトニア腐敗病、苗立枯病、しみ腐病（ｃａｖｉｔｙ  ｓｐｏｔ）、塊茎の病気、さび病、黒根腐病、輪紋病、アファノマイセス根腐病、アスコキタ襟腐病、グミ茎枯病、アルテルナリア斑点病、根朽病、リングスポット病、疫病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）、セルコスポラ、葉枯病、セプトリア斑点病、葉枯病、又はそれらの組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
農業用組成物は、微生物を含むバイオコントロール製剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、土壌改良剤、農業上許容される担体、湿潤剤、結合剤、充填剤、有機添加剤、界面活性剤、及び、作用剤であって防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のコロニー形成単位（ｃｆｕ）比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、１００：１〜１：１、５０：１〜１：５０、５０：１〜１０：１、又は１０：１〜１：１０の範囲にある、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
農業用組成物中の細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
細菌分離株は、有効量の農業用組成物を適用する工程の前に発酵プロセスに供され、発酵プロセスは、
（１）シード培地に細菌分離株を接種すること、及び
（２）生産培地で培養物を拡大すること
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
シード培地は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、及び／又はそれらの組合せを含み、かつ／又は、生産培地は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
農業用組成物であって、
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の細菌分離株であって、ＭＳ１４７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０１）、ＭＳ２３７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０３）、ＭＳ２４１４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０４）、ＭＳ２８２０（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７１０）、ＭＳ０６３３（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７００）、ＭＳ２３３５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０２）、ＭＳ２６５２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０５）、ＭＳ２６５８（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０６）、ＭＳ２６８１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０７）、ＭＳ２６９７（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０８）、ＭＳ２７１２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０９）、又はそれらの組合せを含む細菌分離株又はその変異体、あるいは
前記細菌分離株又はその変異体の濾液
を含む農業用組成物。
【請求項９】
細菌分離株は、ＬＢ、ＴＳＢ、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で培養される、請求項８に記載の農業用組成物。
【請求項１０】
細菌分離株は、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、又はＧＢ６−Ｍ３４を含む培地で培養される、請求項８に記載の農業用組成物。
【請求項１１】
微生物を含むバイオコントロール製剤、殺虫剤、殺線虫剤、殺ダニ剤、殺真菌剤、殺細菌剤、除草剤、植物成長調節剤、展着剤、肥料、微生物物質、土壌改良剤、農業上許容される担体、湿潤剤、結合剤、充填剤、有機添加剤、界面活性剤、及び、作用剤であって防腐剤、ミネラル、増粘剤、安定化剤、生物保護剤、アジュバント、又はそれらの組合せを含む作用剤のうちの１つ以上をさらに含む、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項１２】
バイオコントロール製剤中の微生物に対する細菌分離株のｃｆｕ比は、１，０００：１〜１：１，０００、１００：１〜１：１００、１００：１〜１：１、５０：１〜１：５０、５０：１〜１０：１、又は１０：１〜１：１０の範囲にある、請求項１１に記載の農業用組成物。
【請求項１３】
細菌分離株の濃度は、少なくとも１．３×１０５ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０６ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０７ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×１０８ｃｆｕ／ｍｌ、１．３×ｌ０９ｃｆｕ／ｍｌ、又は１．３×１０１０ｃｆｕ／ｍｌである、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の農業用組成物。
【請求項１４】
請求項８〜１３のいずれか一項に記載の農業用組成物でコーティングされた植物種子。
【請求項１５】
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）の細菌分離株又はそれらの変異体を含む農業用組成物であって、前記細菌分離株は、ＢＳ３、ＢＳ３−Ｍ２、ＢＳ３−Ｍ９、ＢＳ３−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ、ＧＢ６−Ｍ３、ＧＢ６−Ｍ７、ＧＢ６−Ｍ８、ＧＢ６−Ｍ９、ＧＢ６−Ｍ２２、ＧＢ６−Ｍ２３、ＧＢ６−Ｍ１０、ＧＢ６−Ｍ３１、ＧＢ６−Ｍ３３、ＧＢ６−Ｍ３４、又はそれらの組合せを含む培地で発酵及び／又は培養され、任意選択で、前記細菌分離株はＭＳ１４７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０１）、ＭＳ２３７９（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０３）、ＭＳ２４１４（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０４）、ＭＳ２８２０（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７１０）、ＭＳ０６３３（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７００）、ＭＳ２３３５（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０２）、ＭＳ２６５２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０５）、ＭＳ２６５８（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０６）、ＭＳ２６８１（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０７）、ＭＳ２６９７（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０８）、ＭＳ２７１２（ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２４７０９）、又はそれらの組合せから選択される、農業用組成物。
【国際調査報告】
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