(57)【要約】本発明は、それを必要とする対象におけるがんの治療方法であって、上記対象に、（ａ）式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒは水素もしくはアシル基である上記化合物またはその薬学的に許容される塩と、（ｂ）ＢＣＬ−２阻害剤とを投与することを含み、上記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩とＢＣＬ−２阻害剤とが、併用において治療上有効な量で投与される上記方法を提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、ＢＣＬ−２阻害剤と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を更に提供する。
2020500175.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象におけるがんの治療方法であって、前記対象に、
（ａ）式Ｉ：
【化１】
2020500175.tif 000016
の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、Ｒは水素もしくはアシル基であり、
Ａは、任意選択で置換されたフェニル、ピリジル、もしくはピリミジルである
前記化合物またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）ＢＣＬ−２阻害剤と
を投与することを含み、
前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と前記ＢＣＬ−２阻害剤とが、併用において治療上有効な量で投与される前記方法。
【請求項２】
ＲがＲ１Ｃ（Ｏ）−であり、
但し、
Ｒ１は、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ２４アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒが水素またはアセチルである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒが水素である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
Ａが以下の群：
【化２】
2020500175.tif 000017
から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記式Ｉの化合物が、
【化３】
2020500175.tif 000018
またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記式Ｉの化合物が、式：
【化４】
2020500175.tif 000019
またはその薬学的に許容される塩によって表される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＢＣＬ−２阻害剤が、ベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、サブトクラクス、ガンボギン酸、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、ＴＷ−３７、ＡＴ１０１、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が、前記対象に別個の組成物として同時に投与される、または
（ｂ）前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が、前記対象に別個の組成物として逐次的に投与される、
請求項１〜７及び１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が単一の組成物で投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが血液がんである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんが白血病またはリンパ腫である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記リンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんが血液がんである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記がんが白血病またはリンパ腫である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記リンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）式Ｉ：
【化５】
2020500175.tif 000020
の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒは水素もしくはアシル基であり、
Ａは、任意選択で置換されたフェニル、ピリジル、もしくはピリミジルである
前記化合物またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）ＢＣＬ−２阻害剤と、
（ｃ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を含む医薬組成物。
【請求項２２】
ＲがＲ１Ｃ（Ｏ）−であり、
但し、
Ｒ１は、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ２４アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
Ｒが水素またはアセチルである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
Ｒが水素である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
Ａが以下の群：
【化６】
2020500175.tif 000021
から選択される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記式Ｉの化合物が、
【化７】
2020500175.tif 000022
またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記式Ｉの化合物が、式：
【化８】
2020500175.tif 000023
またはその薬学的に許容される塩によって表される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記ＢＣＬ−２阻害剤が、ベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、サブトクラクス、ガンボギン酸、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、ＴＷ−３７、ＡＴ１０１、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は２０１６年１１月２日出願の米国仮出願第６２／４１６，３２９号の利益を主張する。上記出願の全体の教示が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
がんの治療のための治療レジメンは、多くの場合２種以上の薬剤を用いる併用療法を含む。特に、標的療法剤を併用して、様々な種類のがんをより効果的に治療し、且つ治療薬に耐性をもったがん細胞の発生を抑制することができる場合がある。制がん剤開発の分野において、特定の種類のがんの治療用の、特に効果的な薬物の併用が必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
2020500175.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ｒは水素もしくはアシル基である上記化合物またはその薬学的に許容される塩を用いる併用療法に関する。上記アシル基は、好ましくはＲ１Ｃ（Ｏ）−（但し、Ｒ１は、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ２４アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ１０アルキル、より好ましくはＣ１〜Ｃ６アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルキニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換もしくは非置換アリール、好ましくは置換もしくは非置換フェニル、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである）であり、Ａは、任意選択で置換されたフェニル、任意選択で置換されたピリジル、または任意選択で置換されたピリミジル、及びがんの治療用のＢＣＬ−２阻害剤である。例えば、一実施形態において、本発明は、がんの予防または治療方法を必要とする対象におけるがんの予防または治療方法を提供する。上記方法は、上記対象に、式Ｉの化合物とＢＣＬ−２阻害剤とを投与することを含み、上記式Ｉの化合物と上記ＢＣＬ−２阻害剤とが、併用において治療上有効な量で投与される。上記式Ｉの化合物またはその塩と上記ＢＣＬ−２阻害剤とは、上記対象に相乗的な量で投与されることが好ましい。
【０００４】
本発明はまた、ＢＣＬ−２阻害剤と組み合わされた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物に関する。
【０００５】
式Ｉの化合物及び、特に、Ｒが水素であり且つＡが２−メトキシ−５−ピリジルである、本明細書において化合物１とも呼ぶ式Ｉの化合物は、ＰＩ３キナーゼ活性及び／またはＨＤＡＣ活性に関連する、がんならびに他の疾患及び障害の治療用などの治療薬として使用するのに有利な特性を有する。例えば化合物１は、インビトロで、分子標的ＰＩ３Ｋ及びＨＤＡＣに対する強力な阻害活性ならびに種々のがん細胞株に対する強力な抗増殖活性を有する。化合物１は、動物モデルにおいて観測された、経口投与による顕著な生物学的利用能を有する。上記化合物は、腫瘍を異種移植したマウスに経口投与または静脈内投与のいずれかを行うと、上記腫瘍組織による顕著な取り込み及び腫瘍組織における薬力学的活性を示す。化合物１はまた、マウス異種移植腫瘍モデルにおいて、経口投与または静脈内投与のいずれかの後に、実質的な抗腫瘍活性を示す。上記化合物はまた、例えばエイムス試験を用いた遺伝毒性試験によって明らかになった、好ましい安全性プロファイルを有する。
【０００６】
本発明の方法及び組成物において用いられるＢＣＬ−２阻害剤は、好ましくはベネトクラクスである。
【０００７】
前述の及び他の本発明の目的、特徴、及び利点は、添付の図面に示すように、以下の本発明の好ましい実施形態のより詳細な説明から明らかになろう。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】以下の細胞株、すなわち、（ａ）ＫＡＲＰＡＳ４２２、（ｂ）ＯＣＩＬＹ３、（ｃ）ＳＵＤＨＬ４、（ｄ）ＷＳＵＤＬＣＬ２、（ｅ）ＤＯＨＨ２、及び（ｆ）Ｕ２３９２に対する、細胞増殖へのベネトクラクスの濃度の増加の効果、ベネトクラクスと化合物１との併用の予測される相加効果、及びベネトクラクスと化合物１との併用の観測された効果を示すグラフである。
【図２】ＤＯＨＨ２びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、ベネトクラクス及び化合物１の（Ａ）５０ｍｇ／ｋｇまたは（Ｂ）１００／７５ｍｇ／ｋｇのいずれかの一定用量での、ベネトクラクス及び化合物１の個別及び併用での効果を示すグラフである。
【図３】ＳＵＤＨＬ４びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、５０ｍｇ／ｍＬ経口投与のベネトクラクスの用量及び１００ｍｇ／ｋｇ静脈内投与の化合物１の用量での、ベネトクラクス及び化合物１の個別及び併用での効果を示すグラフである。
【図４】ＳＵＤＨＬ４びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルにおける、５０ｍｇ／ｍＬ経口投与のベネトクラクスの用量及び７５ｍｇ／ｋｇ経口投与の化合物１の用量での、ベネトクラクス及び化合物１の個別及び併用での効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩とＢＣＬ−２阻害剤とを含むがんの併用療法に関する方法及び組成物に関する。上記式Ｉの化合物の好ましい実施形態において、Ａは、メトキシ、アミノ、もしくはＮ−メチルアミノで置換されたフェニル、ピリジル、またはピリミジルである。Ａは、以下に示す基：
【化２】
2020500175.tif 000004
の１種であることがより好ましい。
【００１０】
上記式Ｉの化合物の好ましい実施形態において、Ａは上記に示した基の１種であり、且つＲは水素である。
【００１１】
好ましい実施形態において、上記式Ｉの化合物は、以下の化合物１、２、及び３：
【化３】
2020500175.tif 000005
ならびにそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００１２】
本発明は、がんの予防または治療方法を必要とする対象におけるがんの予防または治療方法を提供する。上記方法は、上記対象に上記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩とＢＣＬ−２阻害剤とを投与するステップを含み、上記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と上記ＢＣＬ−２阻害剤とが、併用において治療上有効な量で投与される。上記ＢＣＬ−２阻害剤は、ＢＣＬ−２タンパク質の抗アポトーシス活性を阻害する任意の化合物またはかかる化合物の薬学的に許容される塩であってよい。好適なＢＣＬ−２阻害剤としては、ベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、サブトクラクス、ガンボギン酸、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、ＴＷ−３７、ＡＰＧ−１２５２、ＡＺＤ−４３２０、ユビデカレノン、ＣＮＤＯ−１１３、ＣＮＤＯ−１２３、ＢＣＬ−２０１、ＡＴＳＰ−１１３５、ＡＴＳＰ−１４０７、ＡＴＳＰ−１５０５、ＡＴＳＰ−１６４５、ＡＴＳＰ−１９２１、及びＡＴ１０１が挙げられるが、これらに限定はされない。特定の実施形態において、上記ＢＣＬ−２阻害剤は、以下に記載の化合物：
【化４】
2020500175.tif 000006
及びそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００１３】
好ましい実施形態において、上記ＢＣＬ−２阻害剤は、以下の構造：
【化５】
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を有するベネトクラクス（ＡＢＴ−１９９）またはその薬学的に許容される塩である。
【００１４】
治療を受ける対象は、イヌ、ネコ、ウシ、またはヒツジなどの哺乳動物である。上記対象はヒトであることが好ましい。
【００１５】
本発明の方法及び組成物の特に好ましい実施形態において、上記式Ｉの化合物は化合物１またはその薬学的に許容される塩であり、且つ上記ＢＣＬ−２阻害剤はベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である。
【００１６】
本発明の方法の特定の実施形態において、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、別個の組成物として上記対象に同時に投与される。特定の実施形態において、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、同一または異なる投与経路によって上記対象に同時に投与される。
【００１７】
特定の実施形態において、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、別個の組成物として上記対象に逐次的に投与される。特定の実施形態において、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、同一または異なる投与経路によって上記対象に逐次的に投与される。一実施態様において、上記ＢＣＬ−２阻害剤は、上記式Ｉの化合物を上記対象に投与した後に上記対象に投与される。別の実施形態において、上記ＢＣＬ−２阻害剤は、上記式Ｉの化合物を上記対象に投与する前に上記対象に投与される。
【００１８】
上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が別個の組成物として投与される特定の実施形態において、それぞれの組成物は独立に、経粘膜投与、経口投与、経直腸投与、経膣投与、舌下投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口腔内投与、鼻腔内投与、大槽内投与、腹腔内投与、または耳内投与される。特定の実施形態において、一方または両方の組成物が坐剤またはヒドロゲルで投与される。好ましい実施形態において、両方の組成物が経口投与される。
【００１９】
上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が別個の組成物として投与される特定の実施形態において、それらの投与のタイミングは、当該薬剤の薬理学的活性が時間的に重複し、それによって組み合わされた治療効果を発揮するようなタイミングである。例えば、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、約６０分を超える時間間隔で逐次的に投与されてもよい。例えば、上記式Ｉの化合物とＢＣＬ−２阻害剤との逐次的な投与の間の時間は、６０分超、２時間超、５時間超、１０時間超、１日超、２日超、３日超、または１週間超の間隔であってよい。最適な投与時間は、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤の吸収、分散、代謝、及び／または排泄の速度に依存することとなる。
【００２０】
上記式Ｉの化合物またはＢＣＬ−２阻害剤は、いずれを先に投与してもよい。例えば、上記ＢＣＬ−２阻害剤を、上記式Ｉの化合物が投与される時点の後に当該の対象に投与してもよい。この場合、当該の対象によって上記式Ｉの化合物の約５０％が代謝または排泄される時点の前に（例えば、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％、または約５％の時点の前に）、上記ＢＣＬ−２阻害剤を投与することが望ましい場合がある。別の例において、最初に上記式Ｉの化合物が上記対象に投与され、次にＢＣＬ−２阻害剤が１回投与され、それに次いで更に上記式Ｉの化合物の組成物が投与される。
【００２１】
特定の実施形態において、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、経粘膜投与、経口投与、経直腸投与、経膣投与、舌下投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口腔投与、鼻腔内投与、大槽内投与、または耳内投与される、単回用量の形態で投与される。上記単回用量の形態は経口投与されることが好ましい。
【００２２】
上記式Ｉの化合物は、週当たり約１回、１日当たり約１回、または１日に複数回投与されてもよい。一実施形態において、上記式Ｉの化合物は経口投与される。別の実施形態において、上記式Ｉの化合物は非経口投与、例えば静脈内投与される。上記式Ｉの化合物は、約１ｍｇ〜約１，５００ｍｇの日用量で投与されてもよい。例えば、上記式Ｉの化合物は、約２００ｍｇの日用量で投与されてもよい。一実施形態において、上記式Ｉの化合物は、体重ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約２５０ｍｇの用量で投与される。
【００２３】
但し、上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤の投与頻度及び１日の総用量は、個々の患者に対して、当業者により、例えば担当医により、健全な医学的判断の範囲内で決定することができることが理解されよう。任意の特定の患者に対する具体的な用量または複数の用量は、治療の対象となっている障害及び該障害の重症度；用いる特定の化合物の活性；用いる特定の組成物；当該患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、及び食事；用いる特定の化合物の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療期間；用いる特定の化合物と併用されるまたは同時に用いられる薬物；ならびに医学分野で周知の類似の因子を含む様々な因子に依拠することとなる。
【００２４】
用語「がん」とは、腫瘍、新生物、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫などの悪性新生物細胞の増殖によって引き起こされる任意のがんをいう。例えば、がんとしては、中皮腫；皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、非皮膚性の末梢性Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）などのＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）に関連するリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）などのＢ細胞リンパ腫、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、成人Ｔ細胞白血病・リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）などの白血病及びリンパ腫；または肝細胞癌が挙げられるが、これらに限定はされない。更なる例としては、骨髄異形成症候群、脳腫瘍、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、骨腫瘍、及び軟部組織肉腫などの小児固形腫瘍；頭頸部癌（例えば、口腔癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、及び食道癌）、泌尿生殖器癌（例えば、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌）、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、乳癌、膵臓癌、黒色腫及び他の皮膚癌、胃癌、脳腫瘍、ゴーリン症候群に関連する腫瘍（例、髄芽腫、髄膜腫等）、ならびに肝臓癌などの一般的な成人の固形腫瘍が挙げられる。本主題の化合物によって治療することができる場合がある更なる例示的ながんの形態としては、骨格筋または平滑筋の癌、胃癌、小腸の癌、直腸癌（ｒｅｃｔｕｍ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、唾液腺の癌、子宮内膜癌、副腎癌、肛門癌、直腸癌（ｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、副甲状腺癌、及び下垂体癌が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２５】
本明細書に記載の化合物が予防、治療、及び研究において有用である場合がある更なるがんは、例えば、結腸癌、家族性大腸腺腫症及び遺伝性非ポリポーシス大腸癌、または黒色腫である。更に、がんとしては、口唇癌；喉頭癌；下咽頭癌；舌癌；唾液腺癌；胃癌；腺癌；甲状腺癌（髄様及び乳頭状甲状腺癌）；腎臓癌；腎実質癌；子宮頸癌；子宮体癌；子宮内膜癌；絨毛癌；精巣癌；泌尿器癌；黒色腫；膠芽腫、星状細胞腫、髄膜腫、髄芽腫、及び末梢性神経外胚葉性腫瘍などの脳腫瘍；胆嚢癌；気管支癌；多発性骨髄腫；基底細胞腫；奇形腫；網膜芽細胞腫；脈絡膜黒色腫；精上皮腫；横紋筋肉腫；頭蓋咽頭腫；骨肉腫；軟骨肉腫；筋肉腫；脂肪肉腫；線維肉腫；ユーイング肉腫；及び形質細胞腫が挙げられるが、これらに限定はされない。本発明の一態様において、本発明は、がんの治療用の医薬の製造における本発明の１種または複数種の化合物の使用を提供する。
【００２６】
一実施形態において、治療の対象となるがんは血液がんである。血液がんとしては、白血病、リンパ腫、及び多発性骨髄腫が挙げられる。例としては、リンパ球性白血病、例えば、前駆Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、前駆Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、バーキット白血病、及び急性混合型白血病を含む急性リンパ性白血病；及びＢ細胞前リンパ球性白血病を含む慢性リンパ性白血病などのリンパ性白血病；ならびに急性前骨髄球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、及び急性巨核芽球性白血病を含む急性骨髄性白血病；及び慢性単球性白血病を含む慢性骨髄性白血病などの骨髄性白血病；急性単球性白血病が挙げられる。その他の白血病としては、有毛細胞白血病；Ｔ細胞前リンパ球性白血病；大顆粒リンパ球性白血病；及び成人Ｔ細胞白血病が挙げられる。
【００２７】
リンパ腫としては、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫が挙げられ、非ホジキンリンパ腫としては、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ細胞リンパ腫、及び前駆リンパ性新生物が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫としては、バーキットリンパ腫／白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小細胞リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症など）、脾臓辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫（多発性骨髄腫としても知られる）、形質細胞腫、モノクローナル免疫グロブリン沈着症、重鎖病、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫とも呼ばれる）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、原発性皮膚ろ胞性中心リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、形質芽球性リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、及びＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に生じる大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が挙げられる。
【００２８】
Ｔ細胞リンパ腫及びＮＫ細胞リンパ腫としては、皮膚Ｔ細胞リンパ腫；Ｔ細胞前リンパ球性白血病；Ｔ細胞大顆粒リンパ球性白血病；侵攻性ＮＫ細胞白血病；成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫；節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫；鼻型リンパ腫；腸管症関連Ｔ細胞リンパ腫；肝脾Ｔ細胞リンパ腫；芽球性ＮＫ細胞リンパ腫；菌状息肉腫／セザリー症候群；原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、及び未分化大細胞型リンパ腫などの原発性皮膚ＣＤ３０陽性Ｔ細胞リンパ増殖性疾患が挙げられる。
【００２９】
一実施形態において、治療の対象となるがんは上記ＢＣＬ−２阻害薬に対して治療抵抗性である。特定の実施形態において、上記がんはベネトクラクスに対して治療抵抗性である。
【００３０】
好ましい実施形態において、治療の対象となるがんは非ホジキンリンパ腫、より好ましくはＢ細胞リンパ腫である。特に好ましい実施形態において、治療の対象となるがんは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、例えば、ＡＢＣ亜型のＤＬＢＣＬ、ＧＣＢ亜型のＤＬＢＣＬ、ダブルヒットＤＬＢＣＬ、またはｄｏｕｂｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｒ  ＤＬＢＣＬ（Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ，  Ｌ．，  Ｈｅｍａｔｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２０１５，  ３３：５０−５５）である。特定の実施形態において、上記がんは再発ＤＬＢＣＬまたは難治性ＤＬＢＣＬである。
【００３１】
一実施形態において、本発明は、ＢＣＬ−２阻害剤との組み合わせでの、がんの治療用の医薬の製造における式Ｉの化合物の使用を提供する。別の実施形態において、本発明は、がんの治療用の医薬の製造における、式Ｉの化合物とＢＣＬ−２阻害剤との使用を提供する。好ましい実施形態において、上記式Ｉの化合物は化合物１またはその薬学的に許容される塩であり、且つ上記ＢＣＬ−２阻害剤はベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である。
【００３２】
本発明は更に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と、ＢＣＬ−２阻害剤とを含む医薬組成物を包含する。一実施形態において、上記式Ｉの化合物は、化合物１、化合物２、もしくは化合物３、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、上記ＢＣＬ−２阻害剤は、ベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である。
【００３３】
上記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤は、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、移植、経口投与、舌下投与、経口腔投与、経鼻腔投与、経肺投与、経皮投与、局所投与、経膣投与、経直腸投与、及び経粘膜投与などを含む、但し限定はされない、任意且つ適宜の手段によって投与してもよい。局所投与はまた、経皮貼付剤またはイオン導入装置などの経皮投与の使用を伴っていてもよい。医薬製剤としては、選択された投与様式に適した、式Ｉの化合物、ＢＣＬ−２阻害薬、もしくはそれらの両方を含有する固体製剤、半固体製剤、または液体製剤（錠剤、小丸剤、トローチ剤、カプセル剤、座剤、クリーム剤、軟膏、エアゾール剤、散剤、液体剤、乳液剤、懸濁液剤、シロップ剤、注射剤等）が挙げられる。一実施形態において、上記医薬組成物は経口投与され、したがって経口投与に適した形態に、すなわち固体製剤または液体製剤として製剤化される。好適な固体経口投与用製剤としては、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、小丸剤、サシェ剤及び発泡剤、散剤などが挙げられる。好適な液体経口投与用製剤としては、溶液剤、懸濁液剤、分散液剤、乳液剤、油剤などが挙げられる。本発明の一実施形態において、上記組成物はカプセル中に製剤化される。この実施形態によれば、本発明の組成物は、上記活性化合物及び不活性担体または希釈剤に加えて、硬質ゼラチンカプセルを含む。
【００３４】
担体または希釈剤として通常使用される任意の不活性な賦形剤、例えば、ガム、デンプン、糖、セルロース系材料、アクリル酸エステル、またはそれらの混合物などを本発明の製剤に用いてもよい。好ましい希釈剤は微結晶性セルロースである。上記組成物は、崩壊剤（例えばクロスカルメロースナトリウム）及び滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム）を更に含んでいてもよく、且つ結合剤、緩衝剤、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤、可溶化剤、可塑剤、乳化剤、安定剤、増粘剤、甘味料、フィルム形成剤、またはそれらの任意の組み合わせから選択される１種または複数種の添加剤を更に含んでいてもよい。更に、本発明の組成物は、制御放出製剤または即時放出製剤の形態であってもよい。
【００３５】
液体製剤に関しては、薬学的に許容される担体は、水溶液もしくは非水溶液、懸濁液、乳化液、または油分であってよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及びオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルである。水性担体としては、水、アルコール性溶液／水溶液、乳化液、または懸濁液（生理学的食塩水及び緩衝媒体を含む）が挙げられる。油分の例としては、石油、動物、植物、または合成起源の油分、例えば、ラッカセイ油、ダイズ油、鉱油、オリーブ油、ヒマワリ油、及び魚肝油がある。溶液剤または懸濁剤はまた、以下の成分、すなわち、無菌希釈剤、例えば注射用水、生理学的食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸、クエン酸、またはリン酸などの緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度調整剤を含んでいてもよい。ｐＨは、塩酸もしくは水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整してもよい。
【００３６】
更に、上記組成物は、結合剤（例えば、アラビアガム、トウモロコシデンプン、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアーガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン）、崩壊剤（例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアーガム、デンプングリコール酸ナトリウム、プリモゲル）、種々のｐＨ及びイオン強度の緩衝剤（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸、リン酸）、表面への吸収を防止するアルブミンまたはゼラチンなどの添加剤、界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、胆汁酸塩）、プロテアーゼ阻害剤、界面活性剤（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、浸透促進剤、可溶化剤（例えば、グリセリン、ポリエチレングリセロール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、ポリエチレングリコール）、滑剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール）、安定剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、増粘剤（例えば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム）、甘味料（例えば、スクロース、アスパルテーム、クエン酸）、香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、流動助剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）、可塑剤（例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル）、乳化剤（例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム）、ポリマー被覆剤（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）、被覆及びフィルム形成剤（例えば、エチルセルロース、アクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル）及び／またはアジュバントを更に含んでいてもよい。
【００３７】
一実施形態において、上記活性化合物は、植込剤及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤などの、当該化合物が身体から急速に排泄されるのを防ぐこととなる担体と共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを用いてもよい。当業者にとっては、かかる製剤の製造方法は明らかであろう。これらの材料は、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．から市販品として入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する、感染細胞を標的とするリポソームを含む）も、薬学的に許容される担体として用いることができる。これらは、当業者に公知の、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載される方法に従って製造することができる。
【００３８】
投与を容易にするため及び用量を均一にするためには、経口投与用組成物を単位剤形に製剤化することが特に好都合である。本明細書では、単位剤形とは、治療を受ける対象に対する単位用量として適した、物理的に他と区分された単位をいい、それぞれの単位は、所望の治療効果が生じるように計算された所定量の活性化合物を所要の医薬担体と共に含有する。本発明の単位剤形の規格は、当該活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体の治療のためのかかる活性化合物を調合する技術分野に特有な制限によって規定され、且つそれらに直接依存する。
【００３９】
経口投与を意図する本発明の製剤は、デカン酸及びデカン酸ナトリウムなどの長鎖脂肪酸またはそれらの塩を始めとする、１種または複数種の浸透促進剤を含んでいてもよい。
【００４０】
好ましい一実施形態において、上記化合物は静脈内注射用の水溶液に製剤化してもよい。一実施形態において、可溶化剤を好適に用いることができる。特に好ましい可溶化剤としては、ＣｙＤｅｘ，  Ｉｎｃ．によりＣＡＰＴＩＳＯＬ（登録商標）の商品名で販売されているスルホブチルエーテル−７−β−シクロデキストリンなどのスルホブチル誘導体化β−シクロデキストリンを始めとする、スルホン酸置換β−シクロデキストリン誘導体またはその塩などの、シクロデキストリン及び修飾シクロデキストリンが挙げられる。
【００４１】
上記医薬組成物は、投与のための説明書と共に、容器、パック、またはディスペンサー中に収納されていてもよい。
【００４２】
毎日の投与を数日〜数年の期間連続して繰り返してもよい。経口投与による治療を１週間〜当該患者の生涯の期間継続してもよい。投与を５日間連続して行い、その後当該患者を評価して、更に投与が必要かどうかを判定することが好ましい。上記投与は連続的または断続的（例えば、何日間か連続して治療し、その後を休止期間とする）であってよい。本発明の化合物を、治療の初日に静脈内投与し、二日目以降の全ての日に連続して経口投与してもよい。
【００４３】
活性成分を含有する医薬組成物の調製は当技術分野において周知であり、例えば混合、造粒、または錠剤形成工程による。多くの場合、活性治療成分は薬学的に許容され且つ当該活性成分と適合する賦形剤と混合される。経口投与向けには、当該活性薬剤が、ビヒクル、安定剤、または不活性希釈剤などの経口投与用に慣用の添加剤と混合され、慣用の方法により、上記に詳述した、錠剤、被覆錠剤、硬質または軟質ゼラチンカプセル剤、水性、アルコール性、または油性の溶液剤などの投与に適した形態に変換される。
【００４４】
当該患者に投与される上記化合物の量は、該患者に毒性が生じることとなる量未満である。特定の実施形態において、当該患者に投与される上記化合物の量は、該患者の血漿中の当該化合物の濃度が該化合物の毒性レベルと同等以上になる量未満である。当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約１０ｎＭに維持されることが好ましい。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約２５ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約５０ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約１００ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約５００ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約１０００ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約２５００ｎＭに維持される。一実施形態において、当該患者の血漿中の上記化合物の濃度は約５０００ｎＭに維持される。本発明の実施において当該患者に投与されるべき上記化合物の最適量は、用いられる特定の化合物及び治療の対象であるがんの種類に依存することとなる。
【００４５】
定義
本発明を説明するために用いる種々の用語の定義を以下に列挙する。これらの定義は、特定の場合において別段の限定がなされない限り、個々にまたはより大きな群の一部としてのいずれかで、本明細書及び特許請求の範囲の全体を通して用いられる用語に適用される。
【００４６】
用語「アシル」とは、水素、アルキル、部分的に飽和のまたは完全に飽和のシクロアルキル、部分的に飽和のまたは完全に飽和のヘテロ環、アリール、及びヘテロアリールで置換されたカルボニル基をいう。例えば、アシルとしては、（Ｃ１〜Ｃ６）アルカノイル（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、カプロイル、ｔ−ブチルアセチル等）、（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキルカルボニル（例えば、シクロプロピルカルボニル、シクロブチルカルボニル、シクロペンチルカルボニル、シクロヘキシルカルボニル等）、ヘテロ環状カルボニル（例えば、ピロリジニルカルボニル、ピロリジン−２−オン−５−カルボニル、ピペリジニルカルボニル、ピペラジニルカルボニル、テトラヒドロフラニルカルボニル等）、アロイル（例えばベンゾイル）、及びヘテロアロイル（例えば、チオフェニル−２−カルボニル、チオフェニル−３−カルボニル、フラニル−２−カルボニル、フラニル−３−カルボニル、１Ｈ−ピロリル−２−カルボニル、１Ｈ−ピロリル−３−カルボニル、ベンゾ［ｂ］チオフェニル−２−カルボニル等）などの基が挙げられる。更に、上記アシル基のアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリール、及びヘテロアリール部分は、それぞれの定義において記載された基のうちのいずれか１種であってよい。「任意選択で置換されている」と示される場合、上記アシル基は、非置換であるか、もしくは任意選択で、以下の「置換された」の定義において列挙される置換基の群から独立して選択される１または複数の置換基（一般的には１〜３の置換基）で置換されていてもよく、または上記アシル基のアルキル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリール、及びヘテロアリール部分が、それぞれ、好ましい及びより好ましい置換基の列挙中で上述のように置換されていてもよい。
【００４７】
用語「アルキル」は、１〜約２０の炭素原子、もしくは、好ましくは１〜約１２の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状の基を包含する。より好ましいアルキル基は、１〜約１０個の炭素原子を有する「低級アルキル」基である。１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基が最も好ましい。かかる基の例にとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソ−アミル、ヘキシルなどが挙げられる。
【００４８】
用語「アルケニル」は、少なくとも１の炭素−炭素二重結合を有する、２〜約２０の炭素原子もしくは、好ましくは２〜約１２の炭素原子の、直鎖状または分枝鎖状の基を包含する。より好ましいアルケニル基は、２〜約１０の炭素原子、より好ましくは約２〜約８の炭素原子を有する「低級アルケニル」基である。アルケニル基の例としては、エテニル、アリル、プロペニル、ブテニル、及び４−メチルブテニルが挙げられる。用語「アルケニル」及び「低級アルケニル」は、「ｃｉｓ」及び「ｔｒａｎｓ」配向、あるいは「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を包含する。
【００４９】
用語「アルキニル」は、少なくとも１の炭素−炭素三重結合を有する、２〜約２０の炭素原子もしくは、好ましくは２〜約１２の炭素原子の、直鎖状または分枝鎖状の基を包含する。より好ましいアルキニル基は、２〜約１０の炭素原子、より好ましくは約２〜約８の炭素原子を有する「低級アルキニル」基である。アルキニル基の例としては、プロパルギル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチン、２−ブチニル、及び１−ペンチニルが挙げられる。
【００５０】
用語「アリール」は、単独でまたは組み合わせで、１、２、または３の環を含有する炭素環式芳香族系を意味し、かかる複数の環はペンダントの形態で互いに結合していてもよく、または縮合していてもよい。用語「アリール」は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダン、及びビフェニルなどの芳香族基を包含する。
【００５１】
用語「ヘテロアリール」は不飽和ヘテロシクリル基を包含する。ヘテロアリール基の例としては、１〜４の窒素原子を含有する不飽和３〜６員、好ましくは５または６員のヘテロ単環式基、例えばピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル（例えば、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル、１Ｈ−１，２，３−トリアゾリル、２Ｈ−１，２，３−トリアゾリル等）、テトラゾリル（例えば、１Ｈ−テトラゾリル、２Ｈ−テトラゾリル等）など；１〜５の窒素原子を含有する不飽和縮合ヘテロシクリル基、例えば、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾロピリダジニル（例えば、テトラゾロ［１，５−ｂ］ピリダジニル等）など；酸素原子を含有する不飽和３〜６員、好ましくは５または６員のヘテロ単環式基、例えばピラニル、フリルなど；イオウ原子を含有する不飽和３〜６員複素単環式基、例えばチエニルなど；１〜２の酸素原子及び１〜３の窒素原子を含有する不飽和３〜６員、好ましくは５または６員のヘテロ単環式基、例えば、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル（例えば、１，２，４−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル等）など；１〜２の酸素原子及び１〜３の窒素原子を含有する不飽和縮合ヘテロシクリル基（例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル等）；１〜２のイオウ原子及び１〜３の窒素原子を含有する不飽和３〜６員、好ましくは５または６員のヘテロ単環式基、例えばチアゾリル、チアジアゾリル（例えば、１，２，４−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル等）など；１〜２のイオウ原子及び１〜３の窒素原子を含有する不飽和縮合ヘテロシクリル基（例えば、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル等）などが挙げられる。
【００５２】
用語「置換された」とは、所与の構造中の１または複数の水素基の、ハロ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルチオアルキル、アリールチオアルキル、アルキルスルホニル、アルキルスルホニルアルキル、アリールスルホニルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ハロアルキル、アミノ、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルアミノアルキル、アリールアミノアルキル、アミノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アシル、アラルコキシカルボニル、カルボン酸、スルホン酸、スルホニル、ホスホン酸、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び脂肪族を含む、但しこれらに限定はされない指定された置換基による置換をいう。上記置換基は更に置換されていてもよいことを理解されたい。
【００５３】
新生物、腫瘍増殖、または腫瘍細胞増殖の文脈における用語「阻害」とは、原発性または続発性腫瘍の出現の遅延、原発性または続発性腫瘍の発生の減速、原発性または続発性腫瘍の発生の減少、疾患の二次的影響の重症度の減速または減少、とりわけ、腫瘍増殖の阻止及び腫瘍の退縮によって評価することができる。極端な場合、完全な阻害は、本明細書において予防または化学予防と呼ばれる。
【００５４】
本明細書では、用語「転移」とは、他の組織にがんを発生させる、原発腫瘍部位からの血管及びリンパ管を通じたがん細胞の遊走をいう。転移はまた、遠位部位における続発性がんの増殖に対して用いられる用語でもある。
【００５５】
本明細書では、用語「新生物」とは、過剰な細胞分裂に起因する異常な組織塊をいう。新生物は良性（がん性ではない）、または悪性（がん性）であってよく、腫瘍とも呼ばれる場合がある。用語「新形成」とは、腫瘍形成に繋がる病理学的過程である。
【００５６】
本明細書では、用語「前がん性」とは、悪性ではないが、治療しないまま放置すると悪性になる可能性が高い状態をいう。
【００５７】
用語「増殖」とは、有糸分裂する細胞をいう。
【００５８】
用語「治療」とは、ヒトを始めとする哺乳動物が、当該哺乳動物の状態を改善する目的で、直接的または間接的に医学的援助を受ける、いずれかの過程、作用、適用、療法などをいう。
【００５９】
本明細書では、用語「薬学的に許容される塩」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴うことがない、ヒト及び下等動物の組織と接触する使用に適し、合理的なベネフィット／リスク比に見合う塩をいう。薬学的に許容される塩は当技術分野において周知である。例えば、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅ，  ｅｔ  ａｌ．は、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ６６：  １−１９  （１９７７）に薬学的に許容される塩を詳細に説明している。上記塩は、本発明の化合物の最終的な単離及び精製の間にインサイチュで、または当該の遊離塩基官能基を適宜の有機酸または無機酸と反応させることによって別途に調製することができる。薬学的に許容される無毒性の酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸などの無機酸により、または酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、ラクトビオン酸、もしくはマロン酸などの有機酸により、あるいはイオン交換などの当技術分野で使用される他の方法を用いることにより形成される、アミノ基の塩が挙げられるが、これらに限定はされない。他の薬学的に許容される塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフル酸塩、カンフルスルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられるが、これらに限定はされない。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。更なる薬学的に許容される塩としては、適当である場合、ハロゲン化物、水酸化、カルボン酸、硫酸、リン酸、硝酸、１〜６個の炭素原子を有するアルキルスルホン酸、スルホン酸、及びアリールスルホン酸などの対イオンを用いて形成される無毒性のアンモニウムカチオン、四級アンモニウムカチオン、及びアミンカチオンが挙げられる。ナトリウム塩、カリウム塩、及びコリン塩基塩などの特定の塩ならびに硫酸塩及びメタンスルホン酸塩などの酸性塩は、薬学的に許容される水性媒体中における式Ｉの化合物の溶解度を向上させることが判っている。一実施形態において、化合物１の薬学的に許容される塩はコリン塩である。化合物１の好ましい塩としてはナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられる。他の好ましい塩としては、硫酸塩及びメタンスルホン酸塩が挙げられる。化合物１の特に好ましい塩はメタンスルホン酸塩及びベンゼンスルホン酸塩である。化合物２の特に好ましい塩は塩酸塩である。
【００６０】
本明細書では、「薬学的に許容される担体」は、無菌の発熱因子を含まない水などの、医薬投与に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを包含することを意図する。好適な担体は、本分野の標準的な参考書であり、参照により本明細書に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。かかる担体または希釈剤の好ましい例としては、水、生理学的食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定はされない。リポソーム及び不揮発性油などの非水性ビヒクルを用いてもよい。薬学的に活性な物質に対してかかる媒体及び薬剤を用いることは当技術分野において周知である。何れかの従来の媒体または薬剤が当該活性化合物に適合しない場合を除いて、上記組成物におけるそれらの使用が企図される。補助的な活性化合物を上記組成物に組み込んでもよい。
【００６１】
本明細書では、用語「前がん性」とは、悪性ではないが、治療しないまま放置すると悪性になる可能性が高い状態をいう。
【００６２】
本明細書では、用語「対象」とは動物をいう。上記動物は哺乳動物であることが好ましい。上記哺乳動物はヒトであることがより好ましい。対象はまた、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、モルモット、魚、鳥なども指す。
【００６３】
適当な官能基を付加することによって本発明の化合物を修飾して、選択的な生物学的特性を向上させてもよい。かかる修飾は当技術分野において公知であり、該修飾としては、所与の生物学的系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透を増大させる、経口投与での利用能を増大させ、溶解度を増大させて注射による投与を可能にする、代謝を変化させる、及び排泄速度を変化させる修飾を挙げることができる。
【００６４】
医薬組成物
本発明の医薬組成物は、１種または複数種の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に製剤化された、ベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩などのＢｃｌ阻害剤との組み合わせで、治療有効量の式Ｉの化合物、例えば化合物１またはその薬学的に許容される塩を含む。
【００６５】
上記薬学的に許容される担体または賦形剤は、無毒性であり、不活性な固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材または任意の種類の製剤補助剤であることが好ましい。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例としては、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖；アルファ（α）−、ベータ（β）−、及びガンマ（γ）−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロースならびにその誘導体；粉化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバター及び座剤用ワックスなどの賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及びダイズ油などの油分；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱因子を含まない水；等張生理学的食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール、及びリン酸緩衝液、ならびにラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの他の非毒性で適合性のある滑沢剤、ならびに着色剤、離型剤、被覆剤、甘味料、香味料及び芳香剤、防腐剤、及び抗酸化剤があり、これらもまた、調合者の判断に従って上記組成物中に存在していてもよい。
【００６６】
本発明の医薬組成物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレー、局所投与、経直腸投与、経鼻腔投与、経口腔投与、経膣投与、または移植リザーバによって、好ましくは経口投与または注射による投与によって投与されてもよい。本発明の医薬組成物は、任意の従来の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含有していてもよい。いくつかの場合には、上記製剤のｐＨを、薬学的に許容される酸、塩基、または緩衝液で調整し、製剤化された化合物またはその送達形態の安定性を高めてもよい。本明細書では、用語非経口は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、髄腔内、病巣内、及び頭蓋内注射または注入技法を包含する。
【００６７】
経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容される乳液剤、マイクロエマルション剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。上記液体剤形は、上記活性化合物に加えて、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油分（特に綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセリン、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物などの、当技術分野で通常使用される不活性希釈剤を含有していてもよい。不活性希釈剤の他に、上記経口投与用組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料、及び芳香剤などのアジュバントを含んでいてもよい。
【００６８】
注射用製剤、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液剤は、適宜の分散剤または湿潤剤及び懸濁剤を用いた公知の技術に従って製剤化されてもよい。上記無菌注射用製剤はまた、無毒性の非経口投与に許容される希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液剤、懸濁液剤、または乳液剤、例えば、１，３−ブタンジオール溶液などであってもよい。用いてもよい許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液、及び米国薬局方等張塩化ナトリウム溶液がある。更に、無菌の不揮発性油も、溶媒または懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のためには、合成モノまたはジグリセリドを始めとする任意の無刺激性不揮発性油を用いることができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の製剤に用いられる。
【００６９】
上記注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルタを通すろ過によって、あるいは使用前に無菌水もしくは他の無菌注射用媒体に溶解または分散することができる無菌固体組成物の形態で無菌剤を組み込むことによって無菌化することができる。
【００７０】
薬物の効果を長期間持続させるために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を減速させることが望ましい場合が多々ある。これは、水溶性に乏しい結晶性または非晶性物質の懸濁液を用いることによって実現することができる。その場合、当該薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、次に溶解速度は結晶の大きさ及び結晶形態に依存する場合がある。あるいは、非経口投与された薬物形態の吸収は、当該薬物を油性ビヒクル中に溶解または懸濁させることによって遅延させることができる。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に当該薬物のマイクロカプセル型マトリクスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（酸無水物）が挙げられる。デポー注射製剤はまた、身体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルション中に当該薬物を封入することによっても調製される。
【００７１】
経直腸または経膣投与用の組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、周囲温度では固体であるが体温では液体であり、そのため直腸または膣腔内で融解して上記活性化合物を放出する、カカオバター、ポリエチレングリコール、もしくは座剤用ワックスなどの、適宜の非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製することができる座剤である。
【００７２】
経口投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤が挙げられる。かかる固体剤形においては、上記活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１種の不活性な、薬学的に許容される賦形剤または担体及び／または、ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアラビアガムなどの結合剤、ｃ）グリセリンなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコール及びグリセリンモノステアラートなどの湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイトクレーなどの吸収剤、ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの混合物などの滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、上記剤形は緩衝剤も含んでいてよい。
【００７３】
ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いた同様の種類の固体組成物は、軟質及び硬質の充填されたゼラチンカプセルの充填物としても用いてよい。
【００７４】
錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤の上記固体剤形は、腸溶性被覆及び医薬製剤分野で周知の他の被覆などの被覆及びシェルを用いて調製してもよい。上記剤形は、任意選択で乳白剤を含有してもよく、また上記活性成分（複数可）を腸管の特定の部分のみにおいて、または特定の部分で優先的に、任意選択で遅延形態で放出する組成物であってもよい。使用することができる包埋組成物の例としては高分子物質及びワックスが挙げられる。
【００７５】
本発明の化合物の局所投与または経皮投与用の剤形としては、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ジェル剤、散剤、溶液剤、スプレー剤、吸入剤、または貼付剤が挙げられる。上記活性成分は、無菌条件下で薬学的に許容される担体及び必要に応じて任意の必要な防腐剤または緩衝剤と混合される。眼科用製剤、点耳剤、眼軟膏、散剤、及び溶液剤も本発明の範囲内であることが企図される。
【００７６】
上記軟膏、ペースト剤、クリーム剤、及びジェル剤は、本発明の活性化合物に加えて、動物性及び植物性脂肪、油分、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、及び酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの賦形剤を含有していてもよい。
【００７７】
散剤及びスプレー剤は、本発明の化合物に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、及びポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの賦形剤を含有していてもよい。スプレー剤はクロロフルオロ炭化水素などの慣用の噴射剤を更に含有していてもよい。
【００７８】
経皮貼付剤は、化合物を身体に制御送達するという更なる利点を有する。かかる剤形は、化合物を適宜の媒体に溶解または配合することによって製造することができる。吸収促進剤を用いて、当該化合物が皮膚を通して流動する量を増加させてもよい。その速度は、速度制御膜を設けることによって、または当該化合物をポリマーマトリクスもしくはゲル中に分散させることによって制御することができる。
【００７９】
肺へ送達するには、本発明の治療用組成物は、固体または液体の粒子状の形態に製剤化され、該形態で直接投与（例えば呼吸器系への吸入）により患者に投与される。本発明を実施するために調製される上記活性化合物の固体または液体の粒子状の形態は、呼吸可能な径の粒子、すなわち吸入時に口及び喉頭を通過し、且つ肺の気管支及び肺胞に入るのに十分小さい径の粒子を含む。エアロゾル化した治療薬、特にエアロゾル化した抗生物質の送達は当技術分野において公知である（例えば、Ｖａｎ  Ｄｅｖａｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，７６７，０６８号、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，５０８，２６９号、及びＭｏｎｔｇｏｍｅｒｙによるＷＯ９８／４３６５０を参照されたく、上記特許文献の全ては参照により本明細書に援用される）。抗生物質の肺への送達についての議論はまた、米国特許第６，０１４，９６９号にも記載され、該特許文献は参照により本明細書に援用される。
【００８０】
上記式Ｉの化合物とＢＣＬ−２阻害剤との併用の「治療有効量」とは、併用において、任意の医学的処置に適用可能な妥当なベネフィット／リスク比で、治療対象に治療効果を与えるそれぞれの化合物の量を意味する。上記治療効果は、客観的（すなわち、何らかの検査またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち、対象が効果の兆候を示すまたは効果を感じる）であってよい。有効用量はまた、投与経路、ならびに他の薬剤との併用の可能性に応じて変化することにもなる。但し、本発明の化合物及び組成物の１日当たりの総使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で、担当医によって決定されることとなることが理解されよう。任意の特定の患者に対する具体的な治療有効用量レベルは、治療の対象である障害及び該障害の重症度；用いられる特定の化合物の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、及び食事；用いられる特定の化合物の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療の継続期間；用いられる特定の化合物と併用されるまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の同様の因子を含む種々の因子に依存することとなる。好ましい実施形態において、上記治療有効量の上記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と上記ＢＣＬ−２阻害剤との併用は、治療の対象であるがんの種類において相乗性を示す。
【００８１】
ヒトもしくは他の動物に、１回でまたは複数回で投与される本発明の併用療法における各化合物の１日当たりの総量は、例えば、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ−体重、または、より一般的には、０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ−体重の量であってよい。単回投与用の組成物は、上記の量を含有するか、または上記の量の分量であって、それらの合計が当該日用量を構成する上記分量を含有していてもよい。一般に、本発明にかかる治療レジメンは、かかる治療を必要とする患者に対する、１回または複数回での、１日当たり約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇの本発明の化合物（複数可）の投与を含む。
【００８２】
本発明の併用療法における各化合物は、４〜１２０時間毎に、約０．１〜約５００ｍｇ／ｋｇ−体重の範囲の用量で、これに代えて１ｍｇ〜１０００ｍｇ／投与の用量で、あるいは特定の薬物の要件に応じて、例えば、注射により、静脈内投与、動脈内投与、真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌｌｙ）投与、腹腔内投与、筋肉内投与、もしくは皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）投与しても；または経口投与、経口腔投与、経鼻腔投与、経粘膜投与、局所投与、眼用の製剤により投与、もしくは吸入により投与してもよい。本明細書の方法は、所望のまたは明示した効果を達成するための有効量の化合物または化合物の組成物の投与を企図する。一般的には、本発明の医薬組成物は１日当たり約１〜約６回、あるいは連続注入として投与されることとなる。かかる投与は、慢性治療または急性治療として用いることができる。薬学的に許容される賦形剤または担体と組み合わせて単回の剤形を製造してもよい有効成分の量は、被治療者及び特定の投与様式に応じて変化することとなる。一般的な製剤は約５％〜約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有することとなる。あるいは、かかる製剤は、約２０％〜約８０％の活性化合物を含有していてもよい。
【００８３】
上記に挙げた用量よりも低いまたは高い用量が求められる場合もある。任意の特定の患者に対する具体的な用量及び治療レジメンは、用いられる具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬物の併用、疾患、状態、または症状の重症度及び経過、当該患者の当該疾患、状態、または症状に対する素因、及び治療あたっている医師の判断を含む種々の因子に依存することとなる。
【００８４】
患者の状態が改善した際には、必要であれば、維持用量の本発明の化合物、組成物、または組み合せを投与してもよい。その後、症状が所望のレベルに緩和されたときに、症状に応じて、改善された状態が維持されるレベルまで、用量もしく投与頻度、またはそれらの両方を低減してもよい。但し、患者は、いずれかの疾患の症状の再発があった場合には、長期的に断続的な治療を必要とする場合がある。
【実施例】
【００８５】
本発明の化合物及び方法は、以下の実施例と関連付けることにより、より深く理解されることとなろうが、これらの実施例は例示のみを意図するものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。開示される実施形態に対する種々の変更及び改変は当業者には明らかであろうし、本発明の化学構造、置換基、誘導体、配合物、及び／または方法に関する変更及び改変を含む、但しこれらに限定はされないかかる変更及び改変は、本発明の趣旨及び添付の特許請求の範囲から逸脱することなくなし得る。
【００８６】
化合物１ならびにそのメタンスルホン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、及びコリン塩の合成を以下のスキームに例示する。
【化６】
2020500175.tif 000008
【化７】
2020500175.tif 000009
中間体１０７−１または１０７−２は、１０６をそれぞれＲ−２−１またはＲ−２−２のいずれかと反応させることによって調製することができる。Ｒ−２−１及びＲ−２−２の合成スキームは以下：
【化８】
2020500175.tif 000010
またはこれに代わる方法：
【化９】
2020500175.tif 000011
により例示される。中間体１０８−１及び１０８−２は、１０７−１または１０７−２のＲ−３−１またはＲ−３−２のいずれかとのカップリング反応によって調製することができ、Ｒ−３−１及びＲ−３−２は以下のスキーム：
【化１０】
2020500175.tif 000012
に従って調製することができる。
【００８７】
実施例１：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物１）の調製
ステップａ：（Ｚ）−２−（エトキシメチル）−３−メトキシアクリル酸エチル（化合物２０２）
エタノール（７５０ｍＬ）にナトリウム（４０．９ｇ、１．７８ｍｏｌ）を少しずつ慎重に加え、全てのナトリウム金属が消失した後にこの溶液を濃縮して、ＮａＯＥｔ粉末を得た。撹拌下でヘキサン（１．０Ｌ）を加え、この混合物を氷水浴で冷却した。０〜５℃で２０１（１３０ｇ、０．８９ｍｏｌ）とギ酸エチル（１３１ｇ、１．７８ｍｏｌ）の混合物を滴加した。この反応混合物を室温で終夜撹拌した。氷水浴で冷却しながら硫酸ジメチル（２２４ｇ、１．７８ｍｏｌ）を滴加した。得られた混合物を５０℃で２時間加熱した。この混合物に塩化トリエチルアンモニウム（１２２ｇ）及び水酸化ナトリウム（２０ｇ）を添加した。次いでこの混合物を室温で４時間撹拌し、ろ過した。ろ液を水洗し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水した。これを濃縮して標記化合物（１４０ｇ、３７％）を無色油状物として得て、これを更に精製することなく次のステップに用いた。
【００８８】
ステップｂ：２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物２０３）
エタノール（５００ｍＬ）中の化合物２０２（１４０ｇ、０．７４５ｍｏｌ）、尿素（４０．０ｇ、０．６９７ｍｏｌ）、及び濃塩酸（３４ｍＬ）の混合物を終夜加熱還流した。反応物の約５０容量％を留去した後、得られた懸濁液をろ過し、少量のエタノールで洗浄し、乾燥して化合物２０３（４７ｇ、３７％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ： １７１ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ１．１９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．０ （ｓ， １Ｈ）， ７．０８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８３ （ｄ， ｂｒ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， １Ｈ）。
【００８９】
ステップｃ：２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物２０４）
化合物２０３（４７ｇ、２８０ｍｍｏｌ）の酢酸（５００ｍＬ）溶液に、臭素（４９．０ｇ、３０７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２時間加熱還流し、室温に冷却し、更に０〜５℃に冷却し、ろ過して、標記化合物２０４を黄色固体として得た（３８ｇ、５４％）。ＬＣＭＳ： １６９ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．３２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ９．００ （ｂｒ， ｓ， ２Ｈ）。
【００９０】
ステップｄ：２−クロロピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物Ｒ−２−１）
化合物２０４（３８．０ｇ、１５３ｍｍｏｌ）及び三塩化ホスホリル（３００ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（３ｍＬ）の混合物を２時間加熱還流し、室温に冷却し、濃縮した。残渣を氷水で慎重にクエンチし、炭酸ナトリウムでｐＨを７〜８に調整し、ＥｔＯＡｃで抽出した。１つにまとめた有機分を氷水及び飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、留去し、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１０％で溶離）により精製して、化合物Ｒ−２−１（１５ｇ、５２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ： １８７ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １．３６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， ４．３９ （ｑ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ９．０８ （ｓ， ２Ｈ）。
【００９１】
ステップｅ：ナトリウム（Ｚ）−２−（ジメトキシメチル）−３−メトキシ−３−オキソプロパ−１−エン−１−オラート（化合物２０６）
無水１，２−ジメトキシエタン（３００ｍＬ）中のＮａＨ（２７ｇ、鉱油中６０％、０．６７５ｍｏｌ）の混合物を４０〜５０℃に加熱し、３，３−ジメトキシプロピオン酸メチル（２０５）（１００ｇ、０．６７５ｍｏｌ）を滴加した。得られた混合物を０．５時間撹拌し、４０〜５０℃で無水ギ酸メチル（８１ｇ、１．３５ｍｏｌ）を滴加した。得られた混合物を４０〜５０℃（内部温度）で２時間撹拌した後、これを０℃に冷却した。この反応混合物をゆっくりと２５℃まで加温し、終夜撹拌した。Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）を加え、３０分間撹拌した。得られた懸濁液をろ過した。固体をＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）で洗浄し、回収し、乾燥して、標記化合物２０６（８２ｇ、６１％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １３０．８ ［Ｍ＋１］＋。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ３．３６ （ｓ， ６Ｈ）， ３．６０ （ｓ， ３Ｈ）， ５．３４ （ｓ， １Ｈ）， ８．９２ （ｓ， １Ｈ）。
【００９２】
ステップｆ：２−アミノ−ピリミジン−５−カルボン酸メチルエステル（化合物２０７）
ＤＭＦ（３００ｍＬ）中のグアニジン塩酸塩（４２．２ｇ、０．４４ｍｏｌ）の混合物に、化合物２０６（８０ｇ、０．４０ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１００℃で１時間加熱した。この反応混合物をろ過した後に冷却した。ろ過ケーキを５０ｍＬのＤＭＦで洗浄し、１つにまとめたろ液を濃縮して残渣を得、これを冷ＥｔＯＨ中に懸濁させ、冷ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）で洗浄して、化合物２０７（３８ｇ、６１．５％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １５４．２ ［Ｍ＋１］＋， １９５．１［Ｍ＋４２］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ３．８８ （ｓ， ３Ｈ）， ８．７７ （ｓ， ２Ｈ）。
【００９３】
ステップｇ：２−クロロピリミジン−５−カルボン酸メチル（化合物Ｒ−２−２）
濃塩酸（１５．２ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）の混合物に化合物２０７（７ｇ、０．０４６ｍｏｌ）を添加した。冷却後、１５〜２０℃でＺｎＣｌ２（１８．６ｇ、０．１３８ｍｏｌ）を添加した。この混合物を１５〜２０℃で０．５時間撹拌し、５〜１０℃に冷却した。内部温度を５〜１０℃に維持しながら、ＮａＮＯ２（９．５ｇ、０．１３８ｍｏｌ）を少しずつ添加した。反応を約２時間継続した。この反応混合物を氷水（５０ｍＬ）に注ぎ込んだ。有機層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ×２）で抽出した。１つにまとめた有機抽出液を濃縮して粗生成物（４．２ｇ）を得た。この粗化合物をヘキサン（２０ｍＬ）中に懸濁させ、６０℃で３０分間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮して、標記化合物Ｒ−２−２（３．５ｇ、４４．４％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ２１４．１［Ｍ＋４２］＋。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ４．００ （ｓ， ３Ｈ）， ９．１５ （ｓ， ２Ｈ）。
【００９４】
ステップｈ：５−ブロモ−２−メトキシピリジン（化合物３０３）
２−メトキシ−ピリジン（１００ｇ、０．９２ｍｏｌ）、ＮＢＳ（１８０ｇ、１．０ｍｏｌ）のアセトニトリル（１．０Ｌ）溶液を還流下で２１時間撹拌した。ＴＬＣにより反応が完結したことが明らかになった。この反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。約９００ｍｌの溶媒を回収した。得られた懸濁液をろ過し、ｎ−ヘキサン（約４００ｍＬ）で洗浄した。ろ液を再度濃縮して粗生成物を得た。この粗生成物を減圧下で蒸留して（３０℃／約０．３ｍｍＨｇ）、標記化合物を透明な油状物として得た（１４６ｇ、８４％）。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １９０．０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ３．９０ （ｓ， ３Ｈ）， ６．６５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１９ （ｓ， １Ｈ）。
【００９５】
ステップｉ：６−メトキシピリジン−３−イルボロン酸（Ｒ−３−１）
化合物３０３（２０ｇ、０．１１ｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１８０ｍｌ）溶液に、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（５９ｍＬ、２ＭのＴＨＦ溶液）を滴加し、得られた混合物を１時間撹拌した。−７８℃でホウ酸トリイソプロピル（３７ｍＬ）を添加し、この反応混合物を室温に加温し、終夜撹拌を継続した。ＴＬＣ（ヘキサン／酢酸エチル＝５：１）により反応が完結したことが明らかになった。この混合物を４Ｎ  ＨＣｌ（９０ｍｌ）でｐＨ３〜４に調整した。沈殿物をろ過により回収して、粗化合物Ｒ−３−１（２１ｇ、１２８％）を得た。この粗化合物Ｒ−３−１（２１ｇ）を水（２００ｍｌ）に溶解し、この溶液を濃アンモニア溶液でｐＨ８〜９に調整し、沈殿物をろ過により回収して、純粋な標記化合物Ｒ−３−１を白色固体として得た（１１ｇ、６７％）。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １５４．１ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ３．８６ （ｓ， ３Ｈ）， ６．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｂｒ， ２Ｈ）， ８．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）。
【００９６】
ステップｊ：２−メトキシ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン（化合物Ｒ−３−２）
無水ジオキサン（５００ｍＬ）中の化合物３０３（５５ｇ、０．２９ｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（９０ｇ、０．３５ｍｏｌ）、酢酸カリウム（５７ｇ、０．５８ｍｏｌ）、及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（２．２ｇ、３ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２雰囲気下、１０８℃で終夜加熱した。この反応混合物を濃縮し、ヘキサン／酢酸エチルで溶離させるカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記化合物Ｒ−３−２（５８ｇ、８４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ １．３０ （ｓ， １２Ｈ）， ３．８８ （ｓ， ３Ｈ）， ６．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．４１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０Ｈｚ， １Ｈ）。
【００９７】
ステップｋ：チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−２，４（１Ｈ、３Ｈ）−ジオン（化合物１０２）
尿素法：３−アミノチオフェン−２−カルボン酸メチル（１０１）（９０．０ｇ、５７３ｍｍｏｌ、１．０当量）及び尿素（２７７．６ｇ、４．６ｍｏｌ、８．０当量）の混合物を１９０℃で３〜４時間加熱し、室温に冷却した。この反応混合物にＮａＯＨ水溶液（１０％、８００ｍＬ）を添加した。周囲温度で１時間撹拌した後、固体をろ過により除去した。ろ液をＨＣｌでｐＨ３〜４に酸性化し、沈殿した固体をろ過により回収し、水洗し、減圧下で乾燥して、所望の生成物である化合物１０２を灰白色固体として得た（８７ｇ、８９％）。融点：２８０〜２８５℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １６９．０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ６．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， １１．０−１１．５ （ｂｒ， ２Ｈ）。
【００９８】
ＫＯＣＮ法：３−アミノチオフェン−２−カルボン酸（１０１）（１００．０ｇ、６３６．９ｍｍｏｌ、１．０当量）、酢酸（７０５ｍＬ）、及び水（６００ｍＬ）の混合物に、シアン酸カリウム（１５４．８ｇ、１．９１ｍｏｌ、３．０当量）の水（３２６ｍＬ）溶液を１時間かけてゆっくりと添加した。得られた混合物を室温で２０時間撹拌し、ろ過し、水（５００ｍＬ）ですすいだ。このケーキを適宜の大きさの反応器に仕込み、２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（１．６５Ｌ）を添加し、このスラリーを２時間撹拌し、ＬＣＭＳにより所望の生成物の生成を確認した。この混合物を１０℃に冷却し、３Ｍの塩酸水溶液（１．２９Ｌ）をｐＨ＝５．０〜６．０となるまで添加した。このスラリーをろ過し、水（７００ｍＬ）ですすぎ、真空オーブン中５０℃で２４時間乾燥して、化合物１０２（１００ｇ、９４％）を灰白色固体として得た。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： １６９．１ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ６．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０４ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， １１．１４ （ｓ， １Ｈ）， １１．５１ （ｓ， １Ｈ）。
【００９９】
ステップｌ：２，４−ジクロロチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン（化合物１０３）
化合物１０２（４０ｇ、２３８ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＮ，Ｎ−ジメチルアニリン（２２．５ｍＬ、１７９ｍｍｏｌ、０．７５当量）の冷却したアセトニトリル（２５０ｍＬ）溶液に、温度を２０℃より低温に維持しながら、オキシ塩化リン（１５２ｍＬ、１．６７ｍｏｌ、７．０当量）をゆっくりと添加した。次いでこの混合物を８５℃に加熱し、２４時間撹拌した。この反応混合物を１５℃に冷却し、次いで氷と冷水の混合物（３６０ｍＬ）上にゆっくりと注ぎ込んだ。得られたスラリーをろ過し、冷水（２００ｍＬ）ですすいだ。ケーキを真空オーブン中４０℃で２４時間乾燥し、化合物１０３（４０．５ｇ、８３％）を灰白色固体として得た。融点：２４５〜２５０℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ２０５．０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ７．７５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１００】
ステップｍ：２−クロロ−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン（化合物１０４）
化合物１０３（３４．２ｇ、１６７ｍｍｏｌ、１．０当量）及びメタノール（５００ｍＬ）の混合物にモルホリン（３１．２ｍＬ、３６７ｍｍｏｌ、２．２当量）をゆっくりと添加した。この反応混合物を室温で終夜撹拌した。沈殿物をろ過により回収し、メタノールで洗浄し、減圧下で乾燥して、所望の生成物である化合物１０４を淡黄色固体として得た（３９ｇ、９１％）。融点：２５０〜２５５℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ２５６．０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ７．４２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１０１】
ステップｎ：２−クロロ−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−カルバルデヒド（化合物１０５）
窒素下で、−７８℃の化合物１０４（２０ｇ、７８．４ｍｍｏｌ、１．０当量）のＴＨＦ（無水、３２０ｍＬ）懸濁液に、ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン溶液、２．４Ｍ、４０．８ｍＬ、１０２ｍｍｏｌ、１．３当量）をゆっくりと添加した。得られたスラリーを−６０℃まで加温したところ、透明な褐色の溶液に変化した。次いでこの反応混合物を再度−７８℃に冷却し、ＤＭＦ（無水、９．１ｍＬ、１１８ｍｍｏｌ、１．５当量）をゆっくりと添加した。得られた溶液を−７８℃で０．５時間撹拌し、１時間かけて０℃まで加温し、ＨＣｌ水溶液（０．２５Ｍ、６６０ｍＬ）と氷水（３２０ｍＬ）の混合物にゆっくりと注ぎ込んだ。得られたスラリーを０〜１０℃で０．５時間撹拌し、ろ過し、冷水で洗浄し、減圧下で乾燥して、化合物１０５を黄色固体として得た（２２ｇ、９８％）。融点：２６０〜２６５℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ２８４．０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ８．３０ （ｓ， １Ｈ）， １０．２１ （ｓ， １Ｈ）。
【０１０２】
ステップｏ：（２−クロロ−４−モルホリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イルメチル）−メチル−アミン（化合物１０６）
窒素雰囲気下で、化合物１０５（２０．０ｇ、７０．４ｍｍｏｌ、１．０当量）のメタノール（１２５ｍＬ）溶液に、メチルアミンのメタノール溶液（２７％ｖ／ｖ、７５ｍＬ、５６３．２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で終夜撹拌し、溶媒を減圧下で除去して、粗固体生成物を得、これを窒素下でメタノール（５５０ｍＬ）及びＴＨＦ（２２０ｍＬ）に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム（８ｇ、２１１．２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、この反応混合物を室温で終夜撹拌した。この反応混合物を減圧下で留去し、水（３００ｍＬ）を加えた。この水性混合物を塩化メチレンで抽出し、１つにまとめた抽出液をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣を６Ｍ  ＨＣｌ（２３０ｍＬ）に溶解し、３０分間撹拌した。この水溶液を塩化メチレンで数回洗浄し、ＮａＯＨ（４Ｎ）でｐＨ９〜１０に調整した。沈殿した固体をろ過により回収し、乾燥して（６０℃、６時間）、淡黄色固体を得た（１８ｇ、８５％）。融点：２４０〜２４５℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ２９９ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ２Ｈ）， ７．２４ （ｓ， １Ｈ）。
【０１０３】
ステップｐ（ａ）：２−［（２−クロロ−４−モルホリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イルメチル）−メチル−アミノ］−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル（化合物１０７−１）
室温のＣＨ３ＣＮ（４００ｍＬ）中の１０６（１０ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）及びＲ−２−１（６．８ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）の混合物に、ジイソプロピルエチルアミン（２２０ｍＬ、１．２６ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。次いでこの混合物を留去し、続いて塩化メチレン（３００ｍＬ）を加えた。有機相を水洗し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、減圧下で濃縮して残渣を得た。この残渣に酢酸エチルを加え、得られた混合物を氷／水浴温度で５０分間撹拌した。得られた固体をろ過により回収して、標記生成物１０７−１を白色固体として得た（１０．６ｇ、７０％）。ＬＣＭＳ： ４４９ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ １．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．８７ （ｓ， ２Ｈ）。
【０１０４】
ステップｐ（ｂ）：２−［（２−クロロ−４−モルホリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イルメチル）−メチル−アミノ］−ピリミジン−５−カルボン酸メチルエステル（化合物１０７−２）
化合物１０６（２５ｇ、８４ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＣＮ（５００ｍＬ）、及びＲ−２−２（１６ｇ、９２ｍｍｏｌ）の混合物を室温で撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５００ｍＬ、２．９ｍｏｌ）を添加した。この溶液を終夜撹拌し、留去した。塩化メチレン（５００ｍＬ）を加えた後、有機相を水洗し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。残渣に酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、この混合物を氷／水浴中で５０分間撹拌した。標記生成物を白色固体として回収した（２９．４ｇ、８１％）。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ４３５．２ ［Ｍ＋１］＋。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： ３．２５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８２−３．８４ （ｍ， ７Ｈ）， ５．２１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．８７ （ｓ， ２Ｈ）。
【０１０５】
ステップｑ（ａ）：２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物１０８−１）
方法Ａ：トルエン（８０ｍｌ）、エタノール（５０ｍｌ）、及び水（１０ｍｌ）の混合溶媒中の化合物１０７−１（１２ｇ、２６．７ｍｍｏｌ）、Ｒ−３−１（４．９ｇ、３２ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（６．７ｇ、８０．１ｍｍｏｌ）、及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（１８８ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２雰囲気下、１０８℃で４．５時間加熱した。ＴＬＣにより反応が完結したことが明らかになった。次いでこの反応混合物を室温に冷却し、水（２０ｍｌ）を加えた。得られた固体をろ過により回収し、次いでこれをエタノール（１００ｍＬ）中に懸濁させた。この懸濁液を室温で３０分間撹拌し、ろ過した。回収した固体をエタノールで洗浄し、減圧下で乾燥して、標記化合物１０８−１を白色固体として得た（１０ｇ、７２％）。
【０１０６】
方法Ｂ：トルエン（２４ｍｌ）、エタノール（１５ｍｌ）、及び水（３ｍｌ）の混合溶媒中の化合物１０７−１（１．５ｇ、３．３４ｍｍｏｌ）、Ｒ−３−２（１．６ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（０．８４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（１１８ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２雰囲気下、１０８℃で終夜加熱した。この反応混合物をジクロロメタンと水との間で分配させた。有機層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、ろ過し、減圧下で留去して残渣を得、これをヘキサン／酢酸エチルで溶離させるカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物１０８−１を白色固体として得た（１．７ｇ、９８％）。
【０１０７】
融点：１９８〜２０２℃。ＬＣＭＳ： ５２２．３０ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ １．３１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９４ （ｓ， ３Ｈ）， ４．３０ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２４ （ｓ， ２Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２．０Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８８ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１０８】
ステップｑ（ｂ）：２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボン酸メチル（化合物１０８−２）
室温のジオキサン（５４０ｍＬ）中の化合物１０７−２（２０ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）、Ｂ−３−１（９．２ｇ、６０．２ｍｍｏｌ、１．３当量）の混合物に、固体のＮａＨＣＯ３（１１．６ｇ、１３８．１ｍｍｏｌ、３当量）を添加し、続いて水（４０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を、溶液の表面を通してＮ２を流すことによって脱気した。次いでビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（３２３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、０．０１当量）を添加し、得られた混合物を１０８℃で１５時間加熱した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳにより反応が完結したことが明らかになった。この反応混合物がまだ熱い（＞９０℃）うちにセライトを通してろ過し、ジオキサン（７０ｍＬ）で洗浄した。ろ液を徐々に室温に冷却すると、冷却期間中に白色の微細結晶が生成した。この懸濁液をろ過し、ジオキサン（８０ｍＬ）で洗浄して、標記化合物１０８−２を白色固体として得た（１８ｇ、７８％）。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ５０８．３ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ３．２８ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８２ （ｓ， ３Ｈ）；３．９２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９３ （ｓ， ３Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８８ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１５ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１０９】
ステップｒ：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物１）
ヒドロキシルアミンメタノール溶液の調製
ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）中のＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ（８０ｇ、１．１２ｍｏｌ）の混合物を６０〜６５℃で１時間加熱して、透明な溶液を生成させた。次いでこの溶液を氷水浴中で冷却した。冷却したこの混合物に、反応温度を０〜１０℃に維持しながら、ＫＯＨ（９６ｇ、１．６８ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２４０ｍＬ）溶液を滴加した。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで無水Ｎａ２ＳＯ４（７００ｇ）を充填した定圧ロートを通してろ過した。ろ液を氷浴下で回収し、使用するまで冷蔵庫に保存した。
【０１１０】
化合物１０８−１からの化合物１の調製
上記調製してすぐのヒドロキシルアミンメタノール溶液（１．７９Ｍ、３５０ｍｌ）に化合物１０８−１（１０ｇ、１９ｍｍｏｌ）を懸濁させた。この混合物にジクロロメタン（１００ｍＬ）を加えた。反応フラスコを密封し、この混合物を室温で５時間撹拌したところ、該混合物は透明な溶液に変化した。反応混合物を更に９時間撹拌し、ろ過して不溶な固体を全て除去した。酢酸を添加してろ液をｐＨ６〜７に調整し、固体の沈殿物を生成させた。この固体をろ過により回収し、水及び最小限の量のメタノールで洗浄し、減圧下、６０℃で５時間乾燥して、化合物１を白色固体として得た（９．２ｇ、９６％）。融点：１７７〜１８０℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．２４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｔ， Ｊ ＝ ５ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ），  ６．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４４ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７５ （ｓ， ２Ｈ）， ９．０１ （ｓ， １Ｈ）， ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １１．０８ （ｓ，１Ｈ）。
【０１１１】
化合物１０８−２からの化合物１の調製
室温の化合物１０８−２（３１ｇ、６１．１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３１０ｍＬ）懸濁液に、上記調製してすぐのヒドロキシルアミンメタノール溶液（１．７９Ｍ、７４４ｍｌ）を添加した。反応フラスコを密封し、この反応混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物は透明な溶液に変化した。この反応溶液をろ過して不溶な固体を全て除去した。次いでろ液に水（３１０ｍＬ）を加えたところ、添加中に固体は生成しなかった。撹拌しながら酢酸（１８．５ｍＬ）を加えてｐＨを１０．２０に調整した（ｐＨ計で連続的に監視した）。酢酸添加中に内部温度の変化はなかった。得られた反応混合物を更に４時間撹拌し続けた。白色固体が徐々に生成した。この懸濁液をろ過し、最小限の量のメタノール（１００ｍＬ×３）で洗浄した。回収した白色固体をメタノール（６２０ｍＬ）及び水（１２４ｍＬ）中に再懸濁させて懸濁液を形成した。上記懸濁液に更に酢酸（１１ｇ）を添加してｐＨを５〜６に調整した。固体の形態の変化が観察された。この懸濁液を更に２時間撹拌し続け、ろ紙を通してろ過し、最小限の量のメタノール（１００ｍＬ×３）で洗浄した。回収した白色固体をオーブン（５０℃）中で１２時間乾燥して、標記化合物１を白色固体として得た（２３．６ｇ、７６．０％）。融点：２５５〜２５９℃。ＬＣＭＳ （ｍ／ｚ）： ５０９．３ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ３．２４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ３Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ），  ６．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．４Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７５ （ｓ， ２Ｈ）， ９．０７ （ｓ， １Ｈ）， ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， １１．１４ （ｓ，１Ｈ）。
【０１１２】
実施例２：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミドメタンスルホン酸塩（化合物１のメタンスルホン酸塩）の調製
方法Ａ：０℃で、化合物１（３００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）とＭｅＯＨ／Ｅｔ２Ｏ（３／１、４０ｍＬ）の混合物に、メタンスルホン酸（１１４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。得られた混合物を０℃で３時間撹拌した。沈殿物をろ過により回収し、Ｅｔ２Ｏで洗浄して、化合物２を白色固体として得た（２６０ｍｇ、７３％）。
【０１１３】
方法Ｂ：室温（１５℃）で、化合物１（１．５ｇ、２．９５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン／ＭｅＯＨ（４０ｍＬ／１０ｍＬ）懸濁液に、メタンスルホン酸（３４１ｍｇ、３．５５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加して、透明な溶液を形成した。この反応混合物を室温で終夜撹拌した。反応混合物は依然として透明であった。酢酸エチル（４０ｍＬ）をこの混合物に加え、室温で３時間撹拌し続けた。得られた沈殿物をろ過により回収し、化合物２を白色固体として得た（１．４５ｇ、８３％）。
【０１１４】
融点：１７９〜１８５℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３ ［Ｍ＋１］ ＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ ２．３５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．２６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ，  ４Ｈ）， ３．９５ （ｓ， ３Ｈ）， ４．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ９．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ５．２４ （ｓ， ２Ｈ）， ６．９９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．５４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７６ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， １１．１１ （ｂｒ， １Ｈ）。
【０１１５】
実施例３：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミドナトリウム塩（化合物１のナトリウム塩）の調製
０℃の化合物１（３００ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）懸濁液に、ｔ−ＢｕＯＮａ（８５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。得られた混合物を室温に加温し、２時間撹拌を継続した。この反応物を濃縮し、残渣をエタノールで粉体化及び洗浄し、続いてろ過して、化合物３を白色固体として得た（２３０ｍｇ、７３％）。融点：１７８〜１８３℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３ ［Ｍ＋１］ ＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ３．１７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７５ （ｓ， ４Ｈ）， ３．９２ （ｓ， ７Ｈ）， ５．１６ （ｓ， ２Ｈ）， ６．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４２ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６５ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１４ （ｓ， １Ｈ）。
【０１１６】
実施例４：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミドカリウム塩（化合物１のカリウム塩）の調製
Ｎ２下、０℃で、メタノール（５０ｍＬ）中の化合物１（４００ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）の混合物に、ｔ−ＢｕＯＫ（１３２ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃で１時間撹拌し、室温で１．５時間撹拌を継続した。ろ過により不溶な固体を除去し、ろ液を−２０℃に冷却した。このろ液にＥｔ２Ｏ（１００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を−２０℃で１時間撹拌した。ヘキサン（７０ｍＬ）を加え、この混合物を−２０℃で２時間撹拌し続けた。固体をろ過により回収し、減圧下で乾燥して、化合物４を白色固体として得た（１５０ｍｇ、３５％）。融点：１７４〜１７９℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．１６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７４−３．７６ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９０−３．９３ （ｍ， ７Ｈ）， ５．１５ （ｓ， ２Ｈ）， ６．９０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４３ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｂｒ， １Ｈ）， ８．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６２ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１５ （ｓ， １Ｈ）。
【０１１７】
実施例５：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミドコリン塩（化合物１のコリン塩）の調製
化合物１（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（６０ｍＬ／１２ｍＬ）溶液に、水酸化コリン（１０６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、ＭｅＯＨ中４５％）を添加した。この混合物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮して約３０ｍＬの溶媒を除去した。酢酸エチル（６０ｍＬ）を加え、この混合物を室温で２時間撹拌した。少量の沈殿物が生じた後、この混合物を濃縮して約４０ｍＬの溶媒を除去し、更に酢酸エチル（６０ｍＬ）を加えた。この混合物を室温で２時間撹拌し、ろ過して、化合物５を白色固体として得た（１８０ｍｇ、７６％）。融点：１８１〜１８５℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．１１ （ｓ， ９Ｈ）， ３．１７ （ｓ， ３Ｈ）， ３．４０ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７５ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８４ （ｂｒ， ２Ｈ）， ３．９０−３．９３ （ｍ， ７Ｈ）， ５．１５ （ｓ， ２Ｈ）， ６．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４１ （ｓ， １Ｈ）， ８．５７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８Ｈｚ， ２．４Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６４ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１１８】
実施例６：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（（２−（６−メトキシピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド硫酸塩（化合物１の硫酸塩）の調製
化合物１（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（３０ｍＬ／７．５ｍＬ）懸濁液に、硫酸（７７ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、１ｍＬのＭｅＯＨ溶液）を添加して、透明な溶液を形成した。この反応混合物を室温で終夜撹拌した。沈殿が生じ、次いでｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（６０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌し続けた。固体をろ過により回収して、化合物６を白色固体として得た（１８０ｍｇ、７６％）。融点：２４３〜２４６℃。ＬＣＭＳ： ５０９．３ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ３．２６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ３Ｈ）， ４．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ５．２４ （ｓ， ３Ｈ）， ６．９８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｓ， １Ｈ）， ８．５４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７６ （ｓ， ２Ｈ）， ９．１２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， １１．０６ （ｂｒ， １Ｈ）。
【０１１９】
実施例７：Ｎ−ヒドロキシ−２−（メチル（（２−（６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物２）
ステップ７ａ：（２−クロロ−４−モルホリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イルメチル）−メチル−アミン（化合物０５０３）
窒素雰囲気下で、０１１２（２０．０ｇ、７０．４ｍｍｏｌ）のメタノール（１２５ｍＬ）溶液にメチルアミンのメタノール溶液（２７％ｖ／ｖ、７５ｍＬ、５６３．２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で終夜撹拌し、溶媒を減圧下で除去して粗固体生成物を得、これを窒素下でメタノール（５５０ｍＬ）及びＴＨＦ（２２０ｍＬ）に溶解した。水素化ホウ素ナトリウム（８ｇ、２１１．２ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、反応混合物を室温で終夜撹拌した。この反応混合物を減圧下で留去し、水（３００ｍＬ）を加えた。この水性混合物を塩化メチレンで抽出し、１つにまとめた抽出液をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣を６Ｍ  ＨＣｌ（２３０ｍＬ）に溶解し、３０分間撹拌した。この水溶液を塩化メチレンで数回洗浄し、ＮａＯＨ（４Ｎ）でｐＨ＝９〜１０に調整した。沈殿した固体をろ過により回収し、乾燥して（６０℃、６時間）、淡黄色固体を得た（１８ｇ、８５％）。ＬＣＭＳ： ２９９ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ ２．３２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．９６ （ｓ， ２Ｈ）， ７．２４ （ｓ， １Ｈ）。
【０１２０】
ステップ７ｂ：２−［（２−クロロ−４−モルホリン−４−イル−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イルメチル）−メチル−アミノ］−ピリミジン−５−カルボン酸エチルエステル（化合物０５０４）
０５０３（１０ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＣＮ（４００ｍＬ）、及び０３０５（６．８ｇ、３６．４ｍｍｏｌ）の混合物を室温で撹拌した。次いでジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２２０ｍＬ、１．２６ｍｏｌ）を添加し、この溶液を終夜撹拌し、留去した。塩化メチレン（３００ｍＬ）を加えた後、有機相を水洗し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、減圧下で濃縮して残渣を得た。この残渣に酢酸エチルを加え、この混合物を氷／水浴中で５０分間撹拌した。標記生成物０５０４を白色固体として回収した（１０．６ｇ、７０％）。ＬＣＭＳ： ４４９ ［Ｍ＋１］＋。１ＨＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ１．３０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２  Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２５ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７１ （ｔ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８３ （ｔ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．２１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．８７ （ｓ， ２Ｈ）。
【０１２１】
ステップ７ｃ：２−（メチル（（２−（６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物０６０３−１１１）
Ｎ−メチル−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ピリジン−２−アミン（０６０２−２２７）（３５１ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、０５０４（３１４ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（１７６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、及びＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（２４．６ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）の混合物をトルエン／ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（２．５ｍＬ／１．６ｍＬ／０．７ｍＬ）に溶解した。次いでこの反応物をマイクロ波中、１２０℃で２時間撹拌した。この混合物に水（８ｍＬ）を加え、酢酸エチル（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機層を脱水し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン、５％ｖ／ｖ）により精製して、標記化合物０６０３−１１１（１５０ｍｇ、４１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ： ５２１ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ１．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ３．８６ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ４Ｈ）， ４．２７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ６．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９１ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８６ （ｓ， ２Ｈ）， ８．９０ （ｓ， １Ｈ）。
【０１２２】
ステップ７ｄ：Ｎ−ヒドロキシ−２−（メチル（（２−（６−（メチルアミノ）ピリジン−３−イル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物２）
０６０３−２３６（１５０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及び調製してすぐのヒドロキシルアミンメタノール溶液（６ｍＬ）から、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて、化合物２を褐色固体として調製した（２１ｍｇ、１４％）。融点：１９３〜１９５℃。ＬＣＭＳ： ５０８ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ２．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２３ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．８９ （ｍ， ４Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ６．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．２７ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．８， ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．７５ （ｓ， ２Ｈ）， ９．０１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ９．０７ （ｂｒ， １Ｈ）。
【０１２３】
実施例８：２−（（（２−（４−アミノフェニル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物３）
ステップ８ａ：Ｎ−（４−ブロモフェニル）アセトアミド（化合物０６０１−１５０）
０℃で、４−ブロモアニリン（６．３ｇ、６３．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液に、塩化アセチル（３．７５ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（７．４ｇ、７３．４ｍｍｏｌ）を添加し、２時間撹拌した。この反応混合物を水、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、ろ過し、減圧下で濃縮して、標記化合物０６０１−１５０（３．６ｇ、４６％）を褐色固体として得た。ＬＣＭＳ： ２１４ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ２．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．５７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， １０．１２ （ｓ， １Ｈ）。
【０１２４】
ステップ８ｂ：Ｎ−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）アセトアミド（化合物０６０２−１５０）
０６０１−１５０（２．０ｇ、９．３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．４ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３．５ｇ、１４ｍｍｏｌ）、及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２（７６ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）から、化合物０６０２−１０７（実施例３４）について記載した手順と同様の手順を用いて、標記化合物０６０２−１５０を白色固体として調製した（２．３ｇ、９４％）。ＬＣＭＳ： ２６２ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ１．２７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， １２Ｈ）， ２．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ７．５８ （ｓ， ４Ｈ）， １０．０３ （ｓ， １Ｈ）。
【０１２５】
ステップ８ｃ：２−（（（２−（４−アミノフェニル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボン酸エチル（化合物０６０３−１５０）
トルエン（４ｍＬ）、エタノール（２ｍＬ）、及び水（１ｍＬ）中の、化合物０５０４−５４（２１０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、０６０２−１５０（１５９ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（１１８ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）、及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（１７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の混合物を窒素でフラッシュし、マイクロ波照射下、１２０℃で２時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルと水との間で分配させ、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で脱水し、ろ過し、減圧下で留去した。残渣をジクロロメタンで洗浄し、２−（（（２−（４−アセトアミドフェニル）−４−モルホリノチエノ−［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）ピリミジン−５−カルボン酸エチル（１３６ｍｇ、５３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ： ５４８ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６）： δ１．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， ２．０６ （ｓ， ６Ｈ）， ３．２６ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７５ （ｍ， ４Ｈ）， ３．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ７．４５ （ｓ， １Ｈ），７．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８７ （ｓ， １Ｈ）， １０．１０ （ｓ， １Ｈ）。
【０１２６】
４０℃で、上記エチルエステル（２８０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＨＣｌ水溶液（６Ｍ、１５ｍＬ）を添加し、２時間撹拌し、この反応混合物をＮａＨＣＯ３で中和し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン、２％ｖ／ｖ）により精製して、標記化合物０６０３−１５０（１８０ｍｇ、４８％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ： ５０６ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ１．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ３Ｈ）， ３．２４ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７３（ｍ， ４Ｈ）， ３．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２７ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ６．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６ （ｓ， １Ｈ）， ８．０７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．８６（ｓ， １Ｈ）。
【０１２７】
ステップ８ｄ：２−（（（２−（４−アミノフェニル）−４−モルホリノチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン−６−イル）メチル）（メチル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物３）
０６０３−１５０（１７０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）及び調製してすぐのヒドロキシルアミンメタノール溶液（４ｍＬ）から、実施例１に記載の手順と同様の手順を用いて、化合物３を黄色固体として調製した（４３ｍｇ、２６％）。融点：１８３〜１８６℃。
ＬＣＭＳ： ４９３ ［Ｍ＋１］＋。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ３．２２ （ｓ， ３Ｈ）， ３．７４ （ｍ， ４Ｈ）， ３．８７ （ｍ， ４Ｈ）， ４．２７ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２０ （ｓ， ２Ｈ）， ５．５０ （ｓ， ２Ｈ）， ６．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６ （ｓ， １Ｈ）， ８．０７ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ８．８６ （ｓ， ２Ｈ）。
【０１２８】
実施例９：ＰＩ３キナーゼ活性アッセイ
以下のアッセイを用いて、化合物１のＰＩ３Ｋの種々のアイソフォーム及び変異体を阻害する能力を測定した。
【０１２９】
ＰＩ３Ｋα
ＰＩ３Ｋα活性をＡＤＰ−Ｇｌｏ発光キナーゼアッセイを用いて測定した。Ｎ末端ＧＳＴタグ付き組換え全長ヒトｐ１１０αとタグなし組換全長ヒトｐ８５αとの複合体であるＰＩ３Ｋαを、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞発現系において同時発現させた。（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号は、ｐ１１０αがＵ７９１４３、ｐ８５αがＸＭ＿０４３８６５である）。グルタチオン−アガロースを用いたワンステップアフィニティークロマトグラフィーにより上記タンパク質を精製した。競合アッセイを行って、精製した組換えＰＩ３Ｋα（ｐ１１０α／ｐ８５α）及びＰＩＰ２の存在下でＡＴＰから生成したＡＤＰの量を測定した。ＰＩ３Ｋαを、反応緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３μＭ  オルトバナジン酸Ｎａ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  超純粋ＡＴＰ、及び０．５％  ＤＭＳＯ）中で２０μＭ  ＰＩＰ２基質と共に３０℃で３０分間インキュベートした。次いで反応中に生成したＡＤＰをＡＤＰ−Ｇｌｏアッセイにより測定した。このアッセイは２ステップで実施し、最初に等容量のＡＤＰ−ＧＬＯ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加してキナーゼ反応を停止させ、残ったＡＴＰを枯渇させた。第２のステップで、Ｋｉｎａｓｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔを添加し、これは同時にＡＤＰをＡＴＰに変換もする。ルシフェラーゼ／ルシフェリン共役反応を用いて、新たに合成されたＡＴＰを測定した。このアッセイにおいて化合物１に関して測定されたＩＣ５０は１００ｎＭ未満であった。
【０１３０】
化合物１のＰＩ３Ｋα変異体Ｈ１０４７Ｒ及びＥ５４５Ｋを阻害する能力も、上述した一般化した手順を用いて測定した。両方の変異体において測定されたＩＣ５０は１００ｎＭ未満であった。
【０１３１】
ＰＩ３Ｋβ
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）技術を利用した時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイを用いてＰＩ３Ｋβの活性を測定した。Ｎ末端ヒスチジンタグ付き組換え全長ヒトｐ１１０βとタグなし組換え全長ヒトｐ８５αとの複合体であるＰＩ３Ｋβを、バキュロウイルス感染Ｓｆ２１細胞発現系において同時発現させた。（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号は、ｐ１１０βがＮＭ＿００６２１９、ｐ８５αがＸＭ＿０４３８６５である）。グルタチオン−アガロースを用いたワンステップアフィニティークロマトグラフィーにより上記タンパク質を精製する。競合アッセイを行って、精製した組換えＰＩ３Ｋβ（ｐ１１０β／ｐ８５α）の存在下でＰＩＰ２から生成したＰＩＰ３の量を測定した。ＰＩ３Ｋβを反応緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  ＡＴＰ、及び１％  ＤＭＳＯ）中で１０μＭ  ＰＩＰ２基質と共に３０℃で３０分間インキュベートした。次いでこの反応生成物をＰＩＰ３検出タンパク質、ユーロピウム標識抗体、ビオチン標識ＰＩＰ３プローブ、及びアロフィコシアニン標識ストレプトアビジンと混合した。反応混合物中にセンサー複合体が形成され、安定なＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを発生する。このシグナル強度は、上記ＰＩＰ３検出タンパク質に結合するビオチン標識プローブが酵素活性によって産生されるＰＩＰ３によって置換され、上記混合物中の未結合ビオチン標識ＰＩＰ３プローブの量が増加するにつれて低下する。マイクロプレートリーダーを用い、バックグラウンドを差し引いてＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを測定した。
【０１３２】
このアッセイにおいて化合物１において測定されたＩＣ５０は１００〜１０００ｎＭであった。
【０１３３】
ＰＩ３Ｋδ
蛍光偏光アッセイを用いてＰＩ３Ｋδの活性を測定した。Ｎ末端ヒスチジンタグ付き組換え全長ヒトｐ１１０δとタグなし組換え全長ヒトｐ８５αとの複合体であるＰＩ３Ｋδを、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞発現系において同時発現させた。（ｐ１１０δのＧｅｎＢａｎｋ受入番号はＮＭ＿００５０２６である）。グルタチオン−アガロースを用いたワンステップアフィニティークロマトグラフィーにより上記タンパク質を精製する。競合アッセイを行って、精製した組換えＰＩ３Ｋδ（ｐ１１０δ／ｐ８５α）の存在下でＰＩＰ２から生成したＰＩＰ３の量を測定した。ＰＩ３Ｋδを反応緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  ＡＴＰ、及び１％  ＤＭＳＯ）中で１０μＭ  ＰＩＰ２基質と共に３０℃で１時間インキュベートした。次いでこの反応生成物をＰＩＰ３検出タンパク質及び上記蛍光ＰＩＰ３プローブと混合した。偏光（ｍＰ）値は、上記ＰＩＰ３検出タンパク質に結合する蛍光プローブが酵素活性によって産生されるＰＩＰ３によって置換され、上記混合物中の未結合蛍光プローブの量が増加するにつれて低下する。マイクロプレートリーダーを用い、バックグラウンドを差し引いて偏光度（ｍＰ）の値を測定した。
【０１３４】
このアッセイにおいて、化合物１において測定されたＩＣ５０は１００ｎＭ未満であった。
【０１３５】
ＰＩ３Ｋγ
均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）技術を利用した時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイを用いてＰＩ３Ｋγの活性を測定した。Ｎ末端ヒスチジンタグ付きヒトＰＩ３Ｋδを、バキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞発現系において発現させた。（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号はＡＦ３２７６５６である）。グルタチオン−アガロースを用いたワンステップアフィニティークロマトグラフィーにより上記タンパク質を精製する。競合アッセイを行って、精製した組換えＰＩ３Ｋγ（ｐ１２０γ）の存在下でＰＩＰ２から生成したＰＩＰ３の量を測定した。ＰＩ３Ｋγ（２ｎＭ）を反応緩衝液（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  ＡＴＰ、及び１％  ＤＭＳＯ）中で１０μＭ  ＰＩＰ２基質と共に３０℃で３０分間インキュベートした。次いでこの反応生成物をＰＩＰ３検出タンパク質、ユーロピウム標識抗体、ビオチン標識ＰＩＰ３プローブ、及びアロフィコシアニン標識ストレプトアビジンと混合した。反応混合物中にセンサー複合体が形成され、安定なＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを発生する。このシグナル強度は、上記ＰＩＰ３検出タンパク質に結合するビオチン標識プローブが酵素活性によって産生されるＰＩＰ３によって置換され、上記混合物中の未結合ビオチン標識ＰＩＰ３プローブの量が増加するにつれて低下する。マイクロプレートリーダーを用い、バックグラウンドを差し引いてＴＲ−ＦＲＥＴシグナルを測定した。
【０１３６】
このアッセイにおいて、化合物１において測定されたＩＣ５０は１００〜１０００ｎＭであった。
【０１３７】
実施例１０：ＨＤＡＣ活性アッセイ
Ｂｉｏｍｏｌ  Ｃｏｌｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓシステム（ＡＫ−５００，  Ｂｉｏｍｏｌ，  Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，  ＰＡ）を用いてＨＤＡＣ阻害活性を評価した。簡単に説明すると、ＨｅＬａ細胞核抽出物をＨＤＡＣの供給源として用いた。種々の濃度の被験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で段階希釈し、比色人工基質の存在下でＨｅＬａ細胞核抽出物に添加した。最終的なアッセイ条件は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／Ｃｌ、ｐＨ８．０、１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、及び１ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含有していた。反応を室温（２５℃）で１時間実施した後、停止用の現像液を添加した。相対的酵素活性を、ＷＡＬＬＡＣ  Ｖｉｃｔｏｒ  ＩＩ  １４２０マイクロプレートリーダーで蛍光強度として測定した（励起：３５０〜３８０ｎｍ、発光：４４０〜４６０ｎｍ）。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０ａ）を用い、シグモイド用量反応曲線近似によりデータを解析して、ＩＣ５０を算出した。このアッセイにおいて化合物１に関して測定されたＩＣ５０は１００ｎＭ未満であった。
【０１３８】
ＨＤＡＣアイソタイプに対する化合物１の活性も測定した。ＨＤＡＣ特異性アッセイは、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  （Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ）において該社の標準的な操作手順に従って実施された。簡単に説明すると、精製したｆｌａｇ−（ヒトＨＤＡＣ−１）、ＮＣＯＲ２−（ヒトＨＤＡＣ３）、ＧＳＴ−（ヒトＨＤＡＣ４、６、７、１０、及び１１）、またはＨｉｓ−（ヒトＨＤＡＣ２、５、８、及び９）タグ付き酵素をＳｆ９昆虫細胞中で発現させ、使用前に精製した。ＨＤＡＣ１、２、３、６、７、８、９、及び１１に用いた基質は、ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって開発されたＨＤＡＣ基質３であった。他のＨＤＡＣ酵素については、ＨＤＡＣクラス２ａ基質を用いた。ＨＤＡＣ１１酵素アッセイを除く全ての酵素反応を３７℃で３０分間、２回の繰り返し実験で行い、ＨＤＡＣ１１酵素アッセイは室温で３時間行った。
【０１３９】
以下の表はＨＤＡＣ１〜１１のそれぞれに関する結果を示し、ＩＣ５０値は以下の通り、すなわち、Ｉ＞１０００ｎＭ、１００ｎＭ＜ＩＩ＜１０００ｎＭ、１０ｎＭ＜ＩＩＩ＜１００ｎＭ、ＩＶ＜１０ｎＭである。
【表１】
2020500175.tif 000013
【０１４０】
実施例１１：化合物１のベネトクラクスとの併用のインビトロ検討
試薬
ベネトクラクス（ＡＢＴ−１９９）はＳｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）から購入した。インビトロアッセイに関しては、化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して１０００倍のストック液を作製し、−８０℃で保存して１回のみ使用した。
【０１４１】
細胞培養
ＤＬＢＣＬ癌細胞株をアメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，  ＶＡ）及びドイツ微生物細胞培養コレクション（Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。細胞を製造上の推奨に従って維持し、５％  ＣＯ２の加湿雰囲気中、３７℃でインキュベートした。増殖培地を２〜３日毎に交換し、細胞を２×１０６〜４×１０６細胞／ｍＬの密度に維持した。指数関数的に増殖する細胞培養物を下記の全ての実験に用いた。
【０１４２】
がん細胞増殖及びアッセイ
増殖アッセイに推奨される培養培地を用いて、細胞を９６ウェル平底プレートに２×１０４の密度で播種した。次いで、細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のＦＢＳを添加した培養培地中で、種々の濃度の表示した化合物と共に、表示した時間インキュベートした。ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  （Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｍａｄｉｓｏｎ，  ＷＩ）を用いて細胞生存率を評価した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０  （Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）を用いて曲線近似及びＩＣ５０の算出を行った。各実験について、２回の独立した実験を２回繰り返しで実施した。
【０１４３】
薬物併用の検討
薬物併用の相乗作用を、処理の２４時間後の細胞増殖として得られた、用量−効果曲線に基づいて判定した。相乗性に対するそれぞれの薬剤の相対的な寄与を調べるために、ベネトクラクスの単独でのまたは固定した濃度の化合物１との併用での段階希釈液を試験した。相乗性、相加性、または拮抗を、式Ｅ（ｄ１，ｄ２）＝Ｅ（ｄ１）＋Ｅ（ｄ２）−Ｅ（ｄ１）×Ｅ（ｄ２）（式中、Ｅ（ｄ１，ｄ２）は、化合物１及びベネトクラクスの個々の効果Ｅ（ｄ１）及びＥ（ｄ２）によって予測される化合物１及びベネトクラクスの相加効果である）で定義されるＢｌｉｓｓ独立モデルによって判定した。
【０１４４】
結果
被検細胞株の増殖に対する化合物１とベネトクラクス（ＡＢＴ−１９９）の併用の結果を以下の表及び図１に示す。
【表２】
2020500175.tif 000014
【０１４５】
上記データは、細胞株ＫＡＲＰＡＳ４２２、ＯＣＩＬＹ３、ＳＵＤＨＬ４、及びＷＳＵＤＬＣＬ２が、単剤としてのベネトクラクスに対して不応であることを示している。化合物１とベネトクラクスの併用は、各細胞株において予測される相加効果に対して改善を示し、ＫＡＲＰＡＳ４２２及びＯＣＩＬＹ３細胞株において１０００倍を超えて増加し、Ｕ２９３２細胞株においては２倍の増加に低下する。特に、ベネトクラクス不応性細胞株が、化合物１／ベネトクラクス併用で処理したときに、阻害の最大の向上を示す。
【０１４６】
実施例１２：ＤＯＨＨ２びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫異種移植片モデル
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，  ＭＡ）から入手した６〜９週齢のメスの免疫不全Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ  Ｂｅｉｇｅマウスの右後側腹部領域に１００〜２００μＬの培地懸濁液中の５×１０６細胞を皮下注射した。平均の腫瘍の大きさが約１００〜２００ｍｍ３に達した時点で治療を開始した。化合物１を３０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（ビヒクル１；Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）中で製剤化した。ベネトクラクスを、６０％  Ｐｈｏｓａｌ  ５０ＰＧ、３０％  ＰＥＧ４００、１０％  エタノール（ビヒクル２；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）中で製剤化した。
【０１４７】
施設内動物管理使用委員会の指針に従って、種々の用量の化合物１単独、ベネトクラクス単独、上記２種の薬剤の併用、またはビヒクルを経口投与した。化合物１及びビヒクル１を、５日間投与、２日間休止（５／２）のスケジュールで２１日間にわたって投与した。ベネトクラクス及びビヒクル２は２１日間毎日投与した。
【０１４８】
上記マウスを以下の群、すなわち、Ａ．ビヒクル：（ｉ）ビヒクル１及び（ｉｉ）ビヒクル２；Ｂ．５０ｍｇ／ｋｇの化合物１；Ｃ：１００／７５ｍｇ／ｋｇの化合物１；Ｄ．５０ｍｇ／ｋｇのベネトクラクス；Ｅ：１００ｍｇ／ｋｇのベネトクラクス；Ｆ：５０ｍｇ／ｋｇの化合物１及び５０ｍｇ／ｋｇのベネトクラクス；Ｇ：５０ｍｇ／ｋｇの化合物１及び１００ｍｇ／ｋｇのベネトクラクス；Ｈ：１００／７５ｍｇ／ｋｇの化合物１及び５０ｍｇ／ｋｇのベネトクラクス；Ｉ：１００／７５ｍｇ／ｋｇの化合物１及び１００ｍｇ／ｋｇのベネトクラクスに分割した。群Ｃ、Ｈ、及びＩにおいては、化合物１を最初の５日間は１００ｍｇ／ｋｇで投与し、その後７５ｋｇ／ｍｇで投与した。
【０１４９】
腫瘍の大きさを週２回測定し、その体積を、式Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍の長径及び短径である）を用い、ｍｍ３で表した。次いで、上記腫瘍の大きさを用いて、腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）＝（１−（Ｔ１−Ｔ０）／（Ｃ１−Ｃ０））×１００（式中、Ｃ１＝時間ｔにおける対照マウスの平均腫瘍体積；Ｔ１＝時間ｔにおける治療したマウスの平均腫瘍体積；Ｃ０＝時間０における対照マウスの平均腫瘍体積；Ｔ０＝時間０における治療したマウスの平均腫瘍体積である）を算出した。
【０１５０】
統計的解析
異なる実験条件で治療した腫瘍において得られた値の間の差異は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）上でスチューデントｔ検定を用いて判定した。ｐ＜０．０５を統計的に有意と見なした。
【０１５１】
結果
インビボＤＯＨＨ２びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルの結果を図２に示す。グラフＡでは、ビヒクル対照、化合物１単独（５０ｍｇ／ｋｇ）、ベネトクラクス単独（１００ｍｇ／ｋｇ）、及び化合物１（５０ｍｇ／ｋｇ）とベネトクラクス（１００ｍｇ／ｋｇ）の併用を比較している。グラフＢでは、ビヒクル対照、化合物１単独（初回用量１００ｍｇ／ｋｇ、その後の用量７５ｍｇ／ｋｇ）、ベネトクラクス単独（１００ｍｇ／ｋｇ）、及び化合物１（初回用量１００ｍｇ／ｋｇ、その後の用量７５ｍｇ／ｋｇ）とベネトクラクス（１００ｍｇ／ｋｇ）の併用を比較している。両方の実験において、化合物１とベネトクラクスの併用の効果は、各薬剤による単剤療法の結果に基づいて予測される相加効果よりも顕著に大きかった。
【０１５２】
実施例１３：ＳＵ−ＤＨＬびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫異種移植片モデル
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，  ＭＡ）から入手した７〜９週齢のメスの免疫不全Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ  Ｂｅｉｇｅマウス（１５〜２４ｇ）の右後側腹部領域に１００μＬの冷ＰＢＳの培地懸濁液中の５×１０６のＳＵ−ＤＨＬ−４細胞を皮下注射した。移植の２９日後に治療を開始し、到達した平均の腫瘍の大きさは１２６ｍｍ３であった。化合物１を７．５ｍｇ／ｍＬの濃度となるようにビヒクル１（３０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ）に溶解した。ベネトクラクス（ＡＢＴ−１９９）を２０ｍｇ／ｍＬの濃度となるようにビヒクル２（６０％  Ｐｈｏｓａｌ  ５０ＰＧ、３０％  ＰＥＧ４００、１０％  エタノール）に溶解した。
【０１５３】
上記マウスを、それぞれが８匹のマウスの１１の群に分割し、以下の表に示すように投薬した。群Ｈ〜Ｋにおいては、化合物１とベネトクラクスを互いに１分以内に投与した。
【表３】
2020500175.tif 000015
【０１５４】
腫瘍の大きさを週２回測定し、その体積を式Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍の長径及び短径である）を用い、ｍｍ３で表した。次いで、上記腫瘍の大きさを用いて、腫瘍増殖阻害率（ＴＧＩ）＝（１−（Ｔ１−Ｔ０）／（Ｃ１−Ｃ０））×１００（式中、Ｃ１＝時間ｔにおける対照マウスの平均腫瘍体積；Ｔ１＝時間ｔにおける治療したマウスの平均腫瘍体積；Ｃ０＝時間０における対照マウスの平均腫瘍体積；Ｔ０＝時間０における治療したマウスの平均腫瘍体積である）を算出した。
【０１５５】
統計的解析
異なる実験条件で治療した腫瘍において得られた値の間の差異は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５．０（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）上でスチューデントｔ検定を用いて判定した。ｐ＜０．０５を統計的に有意と見なした。
【０１５６】
結果
インビボＳＵＤ−ＨＬ４びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫モデルの結果を図３及び４に示す。図３では、ビヒクル対照（群Ａ）、化合物１単独（群Ｄ）、ベネトクラクス単独（群Ｆ及びＧ）、ならびに化合物１とベネトクラクスの併用（群Ｉ及びＪ）を比較している。図４では、ビヒクル対照（群Ｂ）、化合物１単独（群Ｅ）、ベネトクラクス単独（群Ｆ）、及び化合物１とベネトクラクスの併用（群Ｋ）を比較している。両方の実験において、化合物１とベネトクラクスの併用の効果は、各薬剤による単剤療法の結果に基づいて予測される相加効果よりも顕著に大きかった。
【０１５７】
本明細書で言及される特許及び科学文献は、当業者に利用可能な知識を立証する。本明細書で引用される全ての米国特許及び公開されたまたは未公開の米国特許出願は参照により援用される。本明細書で引用される全ての公開された外国特許及び特許出願は、本記載をもって参照により援用される。本明細書中に引用される他の全ての公開された参考文献、文書、原稿、及び科学文献は、本記載をもって参照により援用される。
【０１５８】
本発明を、その好ましい実施形態を参照して詳細に示し且つ説明してきたが、当業者であれば、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなく、形式及び詳細の様々な変更を上記においてなし得ることが理解されよう。
【図１】
2020500175.tif 000024
【図２】
2020500175.tif 000025
【図３】
2020500175.tif 000026
【図４】
2020500175.tif 000027
【手続補正書】
【提出日】令和1年5月30日(2019.5.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの治療を必要とする対象におけるがんの治療用医薬組成物であって、前記医薬組成物は、式Ｉ：
【化１】
2020500175.tif 000028
の化合物またはその薬学的に許容される塩
（式中、Ｒは水素またはアシル基であり、
Ａは、任意に置換されるフェニル、ピリジル、またはピリミジルである）
を含み、ＢＣＬ−２阻害剤と組み合わせて使用されるものであり、
前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩と前記ＢＣＬ−２阻害剤とが、併用において治療上有効な量で投与される、医薬組成物。
【請求項２】
ＲがＲ１Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ２４アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒが水素またはアセチルである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｒが水素である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ａが以下の群：
【化２】
2020500175.tif 000029
から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記式Ｉの化合物が、
【化３】
2020500175.tif 000030
またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記式Ｉの化合物が、式：
【化４】
2020500175.tif 000031
またはその薬学的に許容される塩によって表される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＢＣＬ−２阻害剤が、ベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、サブトクラクス、ガンボギン酸、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、ＴＷ−３７、ＡＴ１０１、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
（ａ）前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が、前記対象に別個の組成物として同時に投与される、または
（ｂ）前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が、前記対象に別個の組成物として逐次的に投与される、
請求項１〜７及び１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記式Ｉの化合物及びＢＣＬ−２阻害剤が単一の組成物で投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記がんが血液がんである、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記がんが白血病またはリンパ腫である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記リンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記がんが血液がんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記がんが白血病またはリンパ腫である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記リンパ腫がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
（ａ）式Ｉ：
【化５】
2020500175.tif 000032
の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ｒは水素またはアシル基であり、
Ａは、任意に置換されるフェニル、ピリジル、またはピリミジルである
前記化合物またはその薬学的に許容される塩と、
（ｂ）ＢＣＬ−２阻害剤と、
（ｃ）薬学的に許容される担体または賦形剤と
を含む医薬組成物。
【請求項２２】
ＲがＲ１Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ１は、置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ２４アルキル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル、好ましくはＣ２〜Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換もしくは非置換Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである、
請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
Ｒが水素またはアセチルである、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
Ｒが水素である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
Ａが以下の群：
【化６】
2020500175.tif 000033
から選択される、請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記式Ｉの化合物が、
【化７】
2020500175.tif 000034
またはその薬学的に許容される塩から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記式Ｉの化合物が、式：
【化８】
2020500175.tif 000035
またはその薬学的に許容される塩によって表される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記ＢＣＬ−２阻害剤が、ベネトクラクス、オバトクラクス、ナビトクラクス、サブトクラクス、ガンボギン酸、ＨＡ１４−１、ＡＢＴ−７３７、ＴＷ−３７、ＡＴ１０１、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択される、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラクスまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
錠剤またはカプセル剤の形態である、請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2020500175.tif 000036
2020500175.tif 000037