(57)【要約】  配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５および４７からなる群から選択される１つもしくは複数の重鎖ＣＤＲ配列ならびに／または配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６および４８からなる群から選択される１つもしくは複数のカッパ軽鎖ＣＤＲ配列を含む、単離されたモノクローナル抗ＣＤ３ε抗体またはその抗原結合断片が提供される。それをコードする単離されたポリヌクレオチド、それを含む医薬組成物およびその使用がさらに提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５および４７からなる群から選択される１、２もしくは３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ならびに／または配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６および４８からなる群から選択される１、２もしくは３つのカッパ軽鎖ＣＤＲ配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
ａ）配列番号１、配列番号３および配列番号５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１５および配列番号１７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２１および配列番号２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号３１、配列番号３３および配列番号３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号３７、配列番号３９および配列番号４１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ｈ）配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
ａ）配列番号２、配列番号４および配列番号６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号８、配列番号１０および配列番号１２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２０、配列番号２２および配列番号２４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２６、配列番号２８および配列番号３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号３８、配列番号４０および配列番号４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、ならびに
ｈ）配列番号４４、配列番号４６および配列番号４８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
ａ）配列番号１、配列番号３および配列番号５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２、配列番号４および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８、配列番号１０および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１５および配列番号１７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２１および配列番号２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０、配列番号２２および配列番号２４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６、配列番号２８および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号３１、配列番号３３および配列番号３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号３７、配列番号３９および配列番号４１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３８、配列番号４０および配列番号４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｈ）配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４４、配列番号４６および配列番号４８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項５】
配列番号５７、５９、６１、６３、７３、７５、７７および７９からなる群から選択される１、２、３もしくは４つの重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列ならびに／または配列番号５８、６０、６２、６４、７４、７６、７８および８０から選択される１、２、３もしくは４つの軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項６】
配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７およびそれらの少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項７】
配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９およびそれらの少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項８】
ａ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８３を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８７を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号８９を含む重鎖可変領域および配列番号９１を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号９３を含む重鎖可変領域および配列番号９５を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号９７を含む重鎖可変領域および配列番号９９を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１０１を含む重鎖可変領域および配列番号１０３を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１０５を含む重鎖可変領域および配列番号１０７を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域および配列番号１１１を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１１３を含む重鎖可変領域および配列番号１１５を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｊ）配列番号１１７を含む重鎖可変領域および配列番号１１９を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９】
１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含むが、ＣＤ３εに対する特異的結合親和性を保持する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１０】
置換が、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中、一方もしくは両方の可変領域配列中、および／またはＦｃ領域中にある、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１１】
置換が、
ａ）ＣＤ３εに対する結合親和性の改善、
ｂ）グリコシル化部位の導入または除去、
ｃ）遊離システイン残基の導入、
ｄ）ＡＤＣＣまたはＣＤＣの増強または低減、
ｅ）血清半減期の増大、および
ｆ）ＦｃＲｎ結合の増大
から選択される１つまたは複数の望ましい特性を付与する、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１２】
免疫グロブリン定常領域、任意選択で、ＩｇＧの定常領域、任意選択で、ヒトＩｇＧ１の定常領域をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１３】
ヒト化抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４】
ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１５】
二重特異性である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１６】
ＣＤ３εに対する第１の特異性、および第２の特異性を有する、請求項１５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１７】
第２の特異性が、ＣＤ３εとは異なる第２の抗原に対するものであり、ＣＤ３εを発現するＴ細胞に近接した第２の抗原の存在が、第２の抗原が免疫系によって認識されるために望ましい、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１８】
第１の抗原特異性が、ＣＤ３εに対するものであり、第２の抗原特異性が、腫瘍関連抗原に対するものである、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１９】
１つまたは複数のコンジュゲートと連結している、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２０】
コンジュゲートが、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素基質標識を含む、請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２１】
ＣＤ３εと特異的に結合可能であり、任意選択で、ＣＤ３εが、マウス、ラット、サルまたはヒトに由来し、任意選択で、ＣＤ３εが、組換えＣＤ３εまたは細胞表面上に発現されたＣＤ３εである、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２２】
フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下、４×１０−９Ｍ以下、３×１０−９Ｍ以下、２×１０−９Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、５×１０−１１Ｍ以下、４×１０−１１Ｍ以下、３×１０−１１Ｍ以下、２×１０−１１Ｍ以下、または１０−１１Ｍ以下のＫＤ値で、細胞表面上に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２３】
ＥＬＩＳＡによって測定されるものとして、０．００１ｎＭ以下、０．００５ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下または０．０５ｎＭ以下のＥＣ５０で組換えカニクイザルＣＤ３εと特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２４】
ＥＬＩＳＡによって測定されるものとして、０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下または０．０８ｎＭ以下のＥＣ５０で組換えヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２５】
同一エピトープについて、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２６】
先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２７】
請求項１〜２５に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２８】
配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８および１２０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項２７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項２７または２８に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項３０】
請求項２９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項３１】
請求項１〜２４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、請求項３０に記載の宿主細胞を、請求項２９に記載のベクターが発現される条件下で培養することを含む、方法。
【請求項３２】
ＣＤ３ε活性の調節から恩恵を受けるであろう対象における疾患または状態を処置する方法であって、対象に、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片あるいは請求項２６に記載の医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む、方法。
【請求項３３】
疾患または状態が、ＣＤ３関連疾患または状態である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
疾患または状態が、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
抗体またはその抗原結合断片が二重特異性であり、疾患または状態が癌である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
対象がヒトである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
ＣＤ３εを発現するＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法。
【請求項３８】
ＣＤ３εを発現する細胞においてＣＤ３活性を調節する方法であって、ＣＤ３εを発現する細胞を、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む、方法。
【請求項３９】
ＣＤ３εを発現するＴ細胞による第２の抗原のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏプロセシングを促進する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、請求項１５〜１８のいずれかに記載の二重特異性抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含み、二重特異性抗体または抗原結合断片が、ＣＤ３εを発現するＴ細胞および第２の抗原の両方と特異的に結合可能であり、それによって、両者を近接させる、方法。
【請求項４０】
サンプル中のＣＤ３εの存在または量を検出する方法であって、サンプルを、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することとを含む、方法。
【請求項４１】
対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ３εの存在または量を、対象におけるＣＤ関連疾患または状態の存在または状況と相関させることとを含む、方法。
【請求項４２】
対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項４３】
ＣＤ３関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。
【請求項４４】
ＣＤ３ε、任意選択で、組換えＣＤ３ε、細胞表面に発現されたＣＤ３εまたはＣＤ３εを発現する細胞の検出において有用な、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、概して、新規抗ヒトＣＤ３ε抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ３（分化抗原群３）Ｔ細胞共受容体は、タンパク質複合体であり、４つの別個の鎖、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖および２つのＣＤ３ε鎖から構成されている。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）およびζ鎖として知られる分子と会合して、Ｔリンパ球において活性化シグナルを生成する。ＴＣＲ、ζ鎖およびＣＤ３分子は一緒になって、ＴＣＲ複合体を構成し、ここでは、ＴＣＲが、サブユニットとして、抗原を認識し、結合し、ＣＤ３が、サブユニットとして、シグナル伝達経路に抗原刺激を伝達し、運搬し、最終的にＴ細胞活性を制御する。ＣＤ３タンパク質は、すべてのＴ細胞において実質的に存在する。
【０００３】
ＣＤ３は、ＴＣＲと一緒にＣＤ３−ＴＣＲ複合体を形成し、これは、自然および養子免疫応答ならびに細胞性および体液性免疫機能のＴ細胞の広大な機能の調節において極めて重要な役割を果たす。これらとして、広範な細胞傷害性効果による病原生物の排除および腫瘍成長の制御が挙げられる。
【０００４】
ＯＫＴ３などのヒトＣＤ３に特異的なマウスモノクローナル抗体（Ｋｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０６：３４７−９）は、処置のための第１世代ＣＤ３抗体であった。ＯＫＴ３は、強力な免疫抑制力を有するが、臨床使用は、その免疫学的可能性および有糸分裂促進的可能性と関係する重篤な副作用によって妨げられた（Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ３：１２３−１３２）。ＯＫＴ３は、抗グロブリン応答を誘導し、その自身の急速なクリアランスおよび中和を促進した（Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：８３０−８）。さらに、ＯＫＴ３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖およびサイトカイン産生を誘導し、ｉｎ  ｖｉｖｏでサイトカインの大規模放出につながった（Ｈｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４２：７３７−４３，１９８９）。サイトカイン放出（「サイトカインストーム」とも呼ばれる）は、次に、発熱、悪寒、頭痛、悪心、嘔吐、下痢、呼吸困難、敗血性髄膜炎および低血圧を特徴とする「インフルエンザ様」症候群につながった（Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ，２００３）。このような重篤な副作用は、移植におけるＯＫＴ３のより広い使用ならびに自己免疫などの他の臨床の分野へのその使用の拡大を制限した（同文献）。
【０００５】
新規抗ＣＤ３抗体が大いに必要である。
【発明の概要】
【０００６】
本開示を通じて、冠詞「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、本明細書において、冠詞の文法的対象の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「１種の抗体」は、１種の抗体または１種より多い抗体を意味する。
【０００７】
本開示は、新規モノクローナル抗ＣＤ３ε抗体、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列ならびにその使用を提供する。
【０００８】
一態様では、本開示は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５および４７からなる群から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＣＤＲ配列ならびに／または配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６および４８からなる群から選択される１、２もしくは３つのカッパ軽鎖ＣＤＲ配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０００９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５または４７の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つの重鎖ＣＤＲ配列を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６または４８の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００１０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号３および配列番号５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１５および配列番号１７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２１および配列番号２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号３１、配列番号３３および配列番号３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号３７、配列番号３９および配列番号４１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ｈ）配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【００１１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号２、配列番号４および配列番号６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号８、配列番号１０および配列番号１２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２０、配列番号２２および配列番号２４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２６、配列番号２８および配列番号３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号３８、配列番号４０および配列番号４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、ならびに
ｈ）配列番号４４、配列番号４６および配列番号４８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
からなる群から選択されるカッパ軽鎖可変領域を含む。
【００１２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５、１１、１７、２３、２９、３５、４１および４７からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【００１３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７および配列番号４３から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、
ｃ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１および配列番号４７から選択される重鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８および配列番号４４から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０および配列番号４６から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、
ｃ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２および配列番号４８から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号７、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２５、配列番号３１、配列番号３７および配列番号４３から選択される重鎖ＣＤＲ１配列、
ｂ）配列番号３、配列番号９、配列番号１５、配列番号２１、配列番号２７、配列番号３３、配列番号３９および配列番号４５から選択される重鎖ＣＤＲ２配列、
ｃ）配列番号５、配列番号１１、配列番号１７、配列番号２３、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４１および配列番号４７から選択される重鎖ＣＤＲ３配列、
ｄ）配列番号２、配列番号８、配列番号１４、配列番号２０、配列番号２６、配列番号３２、配列番号３８および配列番号４４から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列、
ｅ）配列番号４、配列番号１０、配列番号１６、配列番号２２、配列番号２８、配列番号３４、配列番号４０および配列番号４６から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列、
ｆ）配列番号６、配列番号１２、配列番号１８、配列番号２４、配列番号３０、配列番号３６、配列番号４２および配列番号４８から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号３および配列番号５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２、配列番号４および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号７、配列番号９および配列番号１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８、配列番号１０および配列番号１２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１３、配列番号１５および配列番号１７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４、配列番号１６および配列番号１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号１９、配列番号２１および配列番号２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０、配列番号２２および配列番号２４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号２５、配列番号２７および配列番号２９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６、配列番号２８および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号３１、配列番号３３および配列番号３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３２、配列番号３４および配列番号３６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号３７、配列番号３９および配列番号４１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３８、配列番号４０および配列番号４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｈ）配列番号４３、配列番号４５および配列番号４７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４４、配列番号４６および配列番号４８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む。
【００１７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５７、５９、６１、６３、７３、７５、７７および７９からなる群から選択される１、２、３もしくは４つの重鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列ならびに／または配列番号５８、６０、６２、６４、７４、７６、７８および８０から選択される１、２、３もしくは４つの軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）配列をさらに含む。
【００１８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５７および７３から選択される重鎖ＦＲ１配列、配列番号５９および７５から選択される重鎖ＦＲ２配列、配列番号６１および７７から選択される重鎖ＦＲ３配列ならびに配列番号６３および７９から選択される重鎖ＦＲ４配列をさらに含む。
【００１９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５８および７４から選択される軽鎖ＦＲ１配列、配列番号６０および７６から選択される軽鎖ＦＲ２配列、配列番号６２および７８から選択される軽鎖ＦＲ３配列ならびに配列番号６４および８０から選択される軽鎖ＦＲ４配列をさらに含む。
【００２０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７および少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）の配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。
【００２１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９および少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）の配列同一性を有するその相同配列からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。
【００２２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３および１１７からなる群から選択される重鎖可変領域配列のすべてもしくは一部および／または配列番号８３、８７、９１、９５、９９、１０３、１０７、１１１、１１５および１１９からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のすべてもしくは一部を含む。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３および１１７からなる群から選択される重鎖可変領域のすべてまたは一部からなる単一ドメイン抗体である。
【００２３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号８１を含む重鎖可変領域および配列番号８３を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号８５を含む重鎖可変領域および配列番号８７を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号８９を含む重鎖可変領域および配列番号９１を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号９３を含む重鎖可変領域および配列番号９５を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号９７を含む重鎖可変領域および配列番号９９を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号１０１を含む重鎖可変領域および配列番号１０３を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号１０５を含む重鎖可変領域および配列番号１０７を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号１０９を含む重鎖可変領域および配列番号１１１を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号１１３を含む重鎖可変領域および配列番号１１５を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｊ）配列番号１１７を含む重鎖可変領域および配列番号１１９を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む。
【００２４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含むが、ＣＤ３εに対する特異的結合親和性を保持する。
【００２５】
特定の実施形態では、置換は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、または１つもしくは複数のＦＲ配列中、または一方もしくは両方の可変領域配列中、またはＦｃ領域中にある。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列中、ＦＲ配列中、可変領域配列中またはＦｃ領域中の置換のうち少なくとも１つ（またはすべて）は、保存的置換を含む。
【００２６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１〜４８から選択される１つまたは複数のＣＤＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５７〜８０から選択される１つまたは複数のＦＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８１、８５、８９、９３、９７、１０１、１０５、１０９、１１３および１１７から選択される重鎖可変領域配列のＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列中に合計１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下の置換を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８３、８７、９１、９５、９９、１０３、１０７、１１１、１１５および１１９から選択される軽鎖可変領域配列のＦＲ中に合計で１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。
【００２７】
特定の実施形態では、置換は、ａ）ＣＤ３εに対する結合親和性の改善、ｂ）グリコシル化部位の導入または除去、ｃ）遊離システイン残基の導入、ｄ）ＡＤＣＣまたはＣＤＣの増強または低減、ｅ）血清半減期の増大およびｆ）ＦｃＲｎ結合の増大から選択される１つまたは複数の望ましい特性を付与する。
【００２８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧの定常領域を含む。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１の定常領域を含む。
【００２９】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マウス抗体またはヒト化抗体である。
【００３０】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。
【００３１】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、二重特異性である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３εに対する第１の抗原特異性、および第２の抗原特異性を有する。特定の実施形態では、第２の抗原特異性は、ＣＤ３εとは異なる第２の抗原に対するものであり、ＣＤ３εを発現するＴ細胞に近接した第２の抗原の存在が、第２の抗原が免疫系によって認識されるために望ましい。特定の実施形態では、第１の抗原特異性は、ＣＤ３εに対するものであり、第２の抗原特異性は、腫瘍関連抗原に対するものである。
【００３２】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のコンジュゲートと連結している。特定の実施形態では、コンジュゲートは、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素基質標識であり得る。
【００３３】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３εと特異的に結合可能である。特定の実施形態では、ＣＤ３εは、マウス、ラット、サルまたはヒトに由来する。特定の実施形態では、ＣＤ３εは、組換えＣＤ３εまたは細胞表面上に発現されたＣＤ３εである。
【００３４】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下、４×１０−９Ｍ以下、３×１０−９Ｍ以下、２×１０−９Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、５×１０−１１Ｍ以下、４×１０−１１Ｍ以下、３×１０−１１Ｍ以下、２×１０−１１Ｍ以下、または１０−１１Ｍ以下のＫＤ値で、細胞表面上に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって０．５０ｎＭ以下または１．１０ｎＭ以下のＥＣ５０で細胞の表面に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。
【００３５】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＥＬＩＳＡによって測定されるものとして、０．００１ｎＭ以下、０．００５ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下または０．０５ｎＭ以下のＥＣ５０で組換えカニクイザルＣＤ３εと特異的に結合可能である。
【００３６】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＥＬＩＳＡによって測定されるものとして、０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下または０．０８ｎＭ以下のＥＣ５０で組換えヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。
【００３７】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、０．５ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、１ｎＭ以下、２ｎＭ以下、３ｎＭ以下、４ｎＭ以下、５ｎＭ以下、６ｎＭ以下、７ｎＭ以下、８ｎＭ以下、９ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＣＤ３を発現する細胞表面上に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。
【００３８】
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、０．５０ｎＭ以下または１．１０ｎＭ以下のＥＣ５０で、ＣＤ４を発現する細胞表面上に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能であるヒト化抗体である。
【００３９】
一態様では、本開示は、同一エピトープについて本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００４０】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片の治療効果を増強可能である、および／または抗体またはその抗原結合断片の副作用を低減可能である、第２の薬剤をさらに含む。
【００４１】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドをさらに提供する。特定の実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８および１２０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
【００４２】
一態様では、本開示は、前記の単離されたポリヌクレオチドを含むベクターをさらに提供する。
【００４３】
一態様では、本開示は、前記ベクターを含む宿主細胞をさらに提供する。
【００４４】
一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、前記宿主細胞を、前記ポリヌクレオチドが発現される条件下で培養することを含む方法をさらに提供する。
【００４５】
一態様では、本開示は、ＣＤ３ε活性の調節から恩恵を受けるであろう対象における疾患または状態を処置する方法であって、対象に、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片あるいは本明細書において提供される医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む方法をさらに提供する。特定の実施形態では、前記対象は、ヒトである。特定の実施形態では、前記疾患または状態は、ＣＤ３関連疾患または状態である。特定の実施形態では、前記疾患または状態は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患である。
【００４６】
一態様では、本開示は、ＣＤ３εを発現するＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法をさらに提供する。
【００４７】
一態様では、本開示は、ＣＤ３εを発現する細胞においてＣＤ３活性を調節する方法であって、ＣＤ３εを発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法をさらに提供する。
【００４８】
一態様では、本開示は、ＣＤ３εを発現するＴ細胞による第２の抗原のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏプロセシングを促進する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、本明細書において提供される二重特異性抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法をさらに提供し、二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ３εを発現するＴ細胞および第２の抗原の両方と特異的に結合可能であり、それによって、両者を近接させる。
【００４９】
一態様では、本開示は、サンプル中のＣＤ３εの存在または量を検出する方法であって、サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することとを含む方法をさらに提供する。
【００５０】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ３εの存在または量を、対象における疾患または状態と相関させることとを含む方法をさらに提供する。
【００５１】
一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用をさらに提供する。
【００５２】
一態様では、本開示は、ＣＤ３関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用をさらに提供する。
【００５３】
一態様では、本開示は、ＣＤ３εの検出において有用な、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を含むキットをさらに提供する。特定の実施形態では、キットは、組換えＣＤ３ε、細胞表面上に発現されたＣＤ３εまたはＣＤ３εを発現する細胞の検出において有用な抗体またはその抗原結合断片を含む。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定されるものとして、モノクローナル抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｕＩｇＧ１Ｋ、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｕＩｇＧ１ＫおよびＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８の、組換えカニクイザルＣＤ３εタンパク質との結合を示す図である。
【図２】図２は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、モノクローナル抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｕＩｇＧ１Ｋ、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｕＩｇＧ１Ｋ、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８およびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４の、ヒトＣＤ４Ｔ細胞との結合を示す図である。
【図３】図３は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、８種のマウス抗体（Ｗ３３１１−２．１６６．４８、Ｗ３３１１−２．３０６．４、Ｗ３３１１−２．３８３．４７、Ｗ３３１１−２．４００．５、Ｗ３３１１−２．４８２．５、Ｗ３３１１−２．４８８．３３、Ｗ３３１１−２．６１５．８およびＷ３３１１−２．８４４．８）の、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）との結合親和性を示す図である。
【図４Ａ】図４Ａは、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、ヒト化抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋの、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）との結合親和性を示す図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、ヒト化抗体ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋの、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）との結合親和性を示す図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、陽性対照ＯＫＴ３の、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）との結合親和性の結果を示す図である。
【図５】図５は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、８種のマウス抗体（Ｗ３３１１−２．１６６．４８、Ｗ３３１１−２．３０６．４、Ｗ３３１１−２．３８３．４７、Ｗ３３１１−２．４００．５、Ｗ３３１１−２．４８２．５、Ｗ３３１１−２．４８８．３３、Ｗ３３１１−２．６１５．８およびＷ３３１１−２．８４４．８）の、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）への細胞内部移行率を示す図である。
【図６】図６は、細胞内サイトカインＴＮＦαおよびＩＦＮγ染色によって測定されるものとして、８種のマウス抗体（Ｗ３３１１−２．１６６．４８、Ｗ３３１１−２．３０６．４、Ｗ３３１１−２．３８３．４７、Ｗ３３１１−２．４００．５、Ｗ３３１１−２．４８２．５、Ｗ３３１１−２．４８８．３３、Ｗ３３１１−２．６１５．８およびＷ３３１１−２．８４４．８）によるヒトＴ細胞活性化の結果を示す図である。
【図７】図７は、細胞内サイトカインＴＮＦαおよびＩＦＮγ染色によって測定されるものとして、２種のヒト化抗体（ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１−ｕＩｇＧ１ＫおよびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１−ｕＩｇＧ１Ｋ）によるヒトＴ細胞活性化の結果を示す図である。
【図８】図８は、７種のマウス抗体（Ｗ３３１１−２．１６６．４８、Ｗ３３１１−２．３０６．４、Ｗ３３１１−２．４００．５、Ｗ３３１１−２．４８２．５、Ｗ３３１１−２．４８８．３３、Ｗ３３１１−２．６１５．８およびＷ３３１１−２．８４４．８）の、クローンＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７に対するエピトープビニングの結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本開示の以下の説明は、単に、本開示の種々の実施形態を例示するよう意図される。そのようなものとして、論じられる特定の改変は、本開示の範囲に対する制限と解釈されてはならない。本開示の範囲から逸脱することなく、種々の等価物、変法および改変が行われ得ることは当業者には明らかであり、また、このような同等な実施形態は、本明細書に含まれるべきであるということが理解される。刊行物、特許および特許出願を含む本明細書において引用されたすべての参考文献は、参照によりその全文で本明細書に組み込まれる。
【００５６】
定義
用語「抗体」は、本明細書において、特異的抗原と結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価特異性、一価抗体、多重特異的抗体または二重特異的抗体を含む。天然の無傷の抗体は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物重鎖は、α、δ、ε、γおよびμとして分類され、各重鎖は、可変領域（ＶＨ）および第１の、第２の、および第３の定常領域（それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）からなり、哺乳動物軽鎖は、λまたはκとして分類され、各軽鎖は、可変領域（それぞれ、λ軽鎖についてＶＬまたはκ軽鎖についてＶＫ）および定常領域（それぞれ、λ軽鎖についてＣＬまたはκ軽鎖についてＣＫ）からなる。抗体は、「Ｙ」型を有し、Ｙのステムは、ジスルフィド結合を介して一緒に結合している２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙの各アームは、単一軽鎖の可変および定常領域と結合している単一重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合に関与している。両鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度可変ループを含有する。本明細書において開示される抗体および抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ  ５；１８６（３）：６５１−６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ  ２１−２８；３４２（６２５２）：８７７−８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ  Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））によって定義または同定され得る。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりもより高度に保存され、超可変ループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として知られる、両端に位置するストレッチの間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５種の主要なクラスまたはアイソタイプとして、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらは、α、δ、ε、γおよびμ重鎖それぞれの存在を特徴とする。主要な抗体クラスのうちいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分割される。
【００５７】
用語「二価」とは、本明細書において、２つの抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指し、用語「一価」とは、１つのみの単一抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指し、用語「多価」とは、複数の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合断片を指す。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、二価である。
【００５８】
本明細書において、「二重特異性」抗体とは、２種の異なるモノクローナル抗体に由来する断片を有し、２種の異なるエピトープと結合可能である人工抗体を指す。２種のエピトープは、同一抗原上に存在する場合も、２種の異なる抗原上に存在する場合もある。
【００５９】
用語「抗原結合断片」とは、本明細書において、１、２または３つのＣＤＲを含む、抗体の一部から形成される抗体断片、または抗原と結合するが無傷の天然抗体構造を含まない任意のその他の抗体断片を指す。抗原結合断片の例として、制限するものではないが、ダイアボディー、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディー（ｄｓダイアボディー）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディー）、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディー、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体が挙げられる。抗原結合断片は、親抗体が結合する同一抗原と結合可能である。
【００６０】
抗体に関して「Ｆａｂ」とは、ジスルフィド結合によって単一重鎖の可変領域および第１の定常領域と結合している単一軽鎖（可変および定常領域の両方）からなる抗体の部分を指す。
【００６１】
「Ｆａｂ’」とは、ヒンジ領域の部分を含むＦａｂ断片を指す。
【００６２】
「Ｆ（ａｂ’）２」とは、Ｆａｂ’の二量体を指す。抗体に関して「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合部位を有する抗体の最小断片を指す。Ｆｖ断片は、単一重鎖の可変領域と結合している単一軽鎖の可変領域からなる。
【００６３】
「ｄｓＦｖ」とは、単一軽鎖の可変領域と単一重鎖の可変領域との間の連結がジスルフィド結合である、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片を指す。いくつかの実施形態では、「（ｄｓＦｖ）２」または「（ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖：ジスルフィド橋を介して、ペプチドリンカー（例えば、長い可動性リンカー）によって連結され、それぞれ２つのＶＬ部分と結合している２つのＶＨ部分を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’は、各ジスルフィド対形成された重鎖および軽鎖が、異なる抗原特異性を有する二重特異性である。
【００６４】
「一本鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」とは、互いに直接またはペプチドリンカー配列を介して接続している軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる遺伝子操作された抗体を指す（Ｈｕｓｔｏｎ  ＪＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８５：５８７９（１９８８））。
【００６５】
抗体に関して「Ｆｃ」とは、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常領域と結合している、第１の重鎖の第２および第３の定常領域からなる抗体の部分を指す。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの種々のエフェクター機能に関与するが、抗原結合における機能に関与しない。
【００６６】
「一本鎖Ｆｖ−Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」とは、抗体のＦｃ領域に接続されたｓｃＦｖからなる遺伝子操作された抗体を指す。
【００６７】
「ラクダ化された単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶＨドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ．ａｎｄ  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ  １０；２３１（１−２）：２５−３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ．，Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７−３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、元々、ラクダ科〔Camelidae〕（ラクダ、ヒトコブラクダおよびラマ）に由来していた。ラクダ化抗体は、軽鎖を欠くが、信頼のおける抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ  ３；３６３（６４２８）：４４６−８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．ｅｔ  ａｌ．“Ｈｅａｖｙ−ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９−４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ  ＶＫ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３−１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生じた最小の既知抗原結合単位に相当する（Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０−８．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊｕｎ  １５  （２００７））。
【００６８】
「ナノボディー」とは、重鎖抗体に由来するＶＨＨドメインおよび２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片を指す。
【００６９】
「ダイアボディー」または「ｄＡｂ」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を含み、この断片は、同一ポリペプチド鎖中でＶＬドメインと接続しているＶＨドメイン（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）を含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．Ｊｕｌ  １５；９０（１４）：６４４４−８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照のこと）。同一鎖上の２つのドメイン間で対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインが、別の鎖の相補的ドメインと対を形成するようにされ、それによって、２つの抗原結合部位を作製する。抗原結合部位は、同一または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る。特定の実施形態では、「二重特異性ｄｓダイアボディー」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的とするダイアボディーである。特定の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」とは、別のＶＨ−ＶＬ部分と二量体化されたＶＨ−ＶＬ（ペプチドリンカーによって連結されている）を含み、その結果、一方の部分のＶＨが、もう一方の部分のＶＬと協調し、同一抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る２つの結合部位を形成する、二価ダイアボディーまたは二価ＳｃＦｖ（ＢｓＦｖ）である。その他の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」は、ＶＬ１−ＶＨ２（ペプチドリンカーによって連結された）と会合しているＶＨ１−ＶＬ２（同様にペプチドリンカーによって連結されている）を含み、その結果、ＶＨ１およびＶＬ１が協調し、ＶＨ２およびＶＬ２が協調し、各協調対が異なる抗原特異性を有する二重特異性ダイアボディーである。
【００７０】
「ドメイン抗体」とは、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。特定の例では、２つまたはそれ以上のＶＨドメインは、ペプチドリンカーと共有結合によって結合されて、二価または多価ドメイン抗体を作製する。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同一または異なる抗原を標的とし得る。
【００７１】
用語「キメラ」とは、本明細書において、ある種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部ならびに別の種に由来する重鎖および／または軽鎖の残りを有する抗体または抗原結合断片を意味する。例示的例では、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域および非ヒト種に由来する、例えばマウスに由来する可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモットまたはハムスターである。
【００７２】
用語「ヒト化」とは、本明細書において、抗体または抗原結合断片が、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、および適用可能な場合には、ヒトに由来する定常領域、を含むことを意味する。
【００７３】
本明細書において「ＣＤ３」とは、霊長類（例えば、ヒト、サル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物供給源に由来する分化抗原群３タンパク質を指す。哺乳動物では、ＣＤ３分子は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖およびＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含む６つの鎖の多タンパク質複合体であり、ＣＤ３ζ鎖は、ＣＤ３分子の細胞内テールであり、ＣＤ３γ、ＣＤ３δおよびＣＤ３ε鎖はすべて、Ｔ細胞の表面で発現される細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含有する。ヒトＣＤ３の例示的配列として、ヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２４）、ヒトＣＤ３δタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２３）およびヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００００６４）が挙げられる。非ヒトＣＤ３の例示的配列として、カニクイザル〔Macaca fascicularis〕（サル）ＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１２７０５４４）、カニクイザル（サル）ＣＤ３δタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１２７４６１７）、カニクイザル（サル）ＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１２７０８３９）、マウスＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０３１６７４）、マウスＣＤ３δタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０３８５１５）、マウスＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＡＡＡ３７４００）、ラット〔Rattus norvegicus〕（ラット）ＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１１０１６１０）、ラット（ラット）ＣＤ３δタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０３７３０１）、ラット（ラット）ＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１０７１１１４）が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書において使用されるＣＤ３はまた、例えば、組換えＣＤ３εタンパク質、組換えＣＤ３δタンパク質および組換えＣＤ３γタンパク質を含む組換えＣＤ３である場合もあり、これらは、任意選択で、組換えＣＤ３複合体として発現されることもある。組換えＣＤ３複合体は、細胞表面上で発現され得る、あるいは、細胞表面上で会合していない可溶性形態として発現され得る。
【００７４】
用語「ＣＤ３ε」は、本明細書において、任意の形態のＣＤ３ε、例えば、１）天然の非プロセシングＣＤ３ε分子、「全長」ＣＤ３ε鎖、または、例えばスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体を含む、ＣＤ３εの天然に存在する変異体、２）細胞におけるプロセシングに起因する任意の形態のＣＤ３ε、または３）組換え法によって作製されたＣＤ３εサブユニットの全長、断片（例えば、末端切断形態、細胞外／膜貫通型ドメイン）または修飾された形態（例えば、変異形態、グリコシル化／ＰＥＧ化、Ｈｉｓタグ／免疫蛍光融合された形態）を包含するものとする。
【００７５】
用語「抗ＣＤ３ε抗体」とは、ＣＤ３ε（例えば、ヒトまたはサルＣＤ３ε）と特異的結合可能である抗体を指す。
【００７６】
用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、本明細書において、例えば、抗体および抗原の間などの２つの分子間の非ランダム結合反応を指す。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片は、ヒトおよび／またはＣＤ３εと、≦１０−６Ｍ（例えば、≦５×１０−７Ｍ、≦２×１０−７Ｍ、≦１０−７Ｍ、≦５×１０−８Ｍ、≦２×１０−８Ｍ、≦１０−８Ｍ、≦５×１０−９Ｍ、≦４×１０−９Ｍ、≦３×１０−９Ｍ、≦２×１０−９Ｍまたは≦１０−９Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）で特異的に結合する。本明細書において使用されるＫＤとは、会合速度に対する解離速度の割合（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を指し、これは、それだけには限らないが、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケール熱泳動法、ＨＰＬＣ−ＭＳ法およびフローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）法を含む当技術分野で公知の任意の従来法を使用することによって決定することができる。特定の実施形態では、ＫＤ値は、フローサイトメトリーを使用することによって適宜決定できる。
【００７７】
「結合を遮断する」または「同一エピトープについて競合する」能力とは、本明細書において、抗体または抗原結合断片の、２つの分子（例えば、ヒトＣＤ３εおよび抗ＣＤ３ε抗体）の間の結合相互作用を、任意の検出可能な程度に阻害する能力を指す。特定の実施形態では、２つの分子間の結合を遮断する抗体または抗原結合断片は、２つの分子間の結合相互作用を少なくとも８５％または少なくとも９０％阻害する。特定の実施形態では、この阻害は、８５％超または９０％超であり得る。
【００７８】
用語「エピトープ」は、本明細書において、抗体が結合する、抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２種の抗体は、抗原について競合結合を示す場合には、抗原内の同一または密接に関連するエピトープと結合し得る。例えば、抗体または抗原結合断片が、参照抗体の、抗原（例えば、組換えヒト／サルＣＤ３εまたは本開示における細胞の表面に発現されるＣＤ３ε）との結合を少なくとも８５％、少なくとも８０％遮断する場合には、抗体または抗原結合断片は、参照抗体と同一の／密接に関連するエピトープと結合すると考えられ得る。
【００７９】
当業者ならば、ヒトモノクローナル抗体が、本開示の抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８、ＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８およびヒト化抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１およびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１）と同一のエピトープと結合するか否かを、前者が後者をＣＤ３ε抗原ポリペプチドとの結合から妨げるか否かを確認することによって過度に実験することなく決定することが可能であるということを認識するであろう。本開示の抗体によるＣＤ３ε抗原ポリペプチドとの結合が減少することによって示されるように、試験抗体が本開示の抗体と競合する場合には、その２種の抗体は、同一または密接に関連するエピトープと結合する。または、試験抗体のＣＤ３ε抗原ポリペプチドとの結合が、本開示の抗体によって阻害される場合には、その２種の抗体は、同一または密接に関連するエピトープと結合する。
【００８０】
本明細書において提供されるような抗体名において使用される種々の記号は、種々の表現のものである：「ｍＩｇＧ２」とは、ＩｇＧ２アイソタイプのマウス定常領域を有する抗体を指し、「ｕＩｇＧ１」とは、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト定常領域を有する抗体を指し、「Ｋ」または「Ｌ」とは、カッパまたはλ軽鎖を使用する抗体を指す。
【００８１】
「保存的置換」とは、アミノ酸配列に関して、アミノ酸残基を、同様の生理化学的特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基と置換することを指す。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ）の間で、中性親水性側鎖を有する残基（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）の間で、酸性側鎖を有する残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間で、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＡｒｇ）の間で、または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅ）の間で行われ得る。当技術分野で公知であるように、保存的置換は、通常、タンパク質のコンホメーション構造において重大な変化を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を保持し得る。
【００８２】
用語「相同体」および「相同な」とは、本明細書において、互換的であり、最適にアラインされた場合に別の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補鎖）またはアミノ酸配列を指す。
【００８３】
「配列同一性パーセント（％）」とは、アミノ酸配列（または核酸配列）に関して、配列をアラインし、必要に応じて、ギャップを導入して、同一アミノ酸（または核酸）の最大数を達成した後に、参照配列中のアミノ酸（または核酸）残基に対して同一である、候補配列中のアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と考えられる場合も、考えられない場合もある。アミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトで入手可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２５：３３８９−３４０２（１９９７）も参照のこと）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで入手可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｄ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３−４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７−８（２００７）も参照のこと）およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なツールを使用することによって達成できる。当業者は、ツールによって提供されたデフォルトパラメータを使用してもよく、またはアラインメントのために必要に応じて、例えば、適したアルゴリズムを選択することなどによって、パラメータをカスタマイズしてもよい。
【００８４】
「エフェクター機能」とは、本明細書において、抗体のＦｃ領域の、そのエフェクター、例えばＣ１複合体およびＦｃ受容体との結合に起因する生物活性を指す。例示的エフェクター機能として、抗体と、Ｃ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって誘導される補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域の、エフェクター細胞上のＦｃ受容体との結合によって誘導される抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および食作用が挙げられる。
【００８５】
状態の「処置すること」または「処置」とは、本明細書において、状態を予防することもしくは軽減すること、状態の発症もしくはその発生の速度を減速すること、状態の発生のリスクを低減すること、状態と関連する症状の発生を予防もしくは遅延すること、状態と関連する症状を低減もしくは終結させること、状態の完全または部分退縮をもたらすこと、状態を治癒することまたはそれらのいくつかの組合せを含む。
【００８６】
「単離された」物質は、天然状態から人の手によって変更されている。「単離された」組成物または物質が天然に生じる場合には、元の環境から変化されている、または取り出されている、または両方である。例えば、生存する動物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離されて」いないが、同一ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、実質的に純粋な状態で存在するようにその天然状態の共存する材料から十分に分離されている場合には「単離されている」。「単離された核酸配列」とは、単離された核酸分子の配列を指す。特定の実施形態では、「単離された抗体またはその抗原結合断片」は、電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動など）またはクロマトグラフィー法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣなど）によって決定されるものとして、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体または抗原結合断片を指す。
【００８７】
用語「ベクター」とは、本明細書において、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、そのタンパク質の発現を引き起こすように作動可能に挿入され得る媒体を指す。ベクターは、宿主細胞内に運ぶ遺伝要素の発現を引き起こすように、宿主細胞を形質転換、形質導入またはトランスフェクトするために使用され得る。ベクターの例として、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージおよび動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用される動物ウイルスのカテゴリーとして、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルスおよびパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能要素およびリポーター遺伝子を含む、発現を制御するための種々のエレメントを含有し得る。さらに、ベクターは、複製起点を含有し得る。ベクターはまた、限定されるものではないが、ウイルス粒子、リポソームまたはタンパク質コーティングを含む、細胞へのその侵入を補助するための材料を含み得る。ベクターは、発現ベクターまたはクローニングベクターであり得る。本開示は、抗体またはその抗原結合断片をコードする本明細書において提供される核酸配列、その核酸配列と作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ−１α）および少なくとも１つの選択マーカーを含有する、ベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。ベクターの例として、それだけには限らないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、λファージおよびＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８−Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ−Ｈｙｇ−ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ−Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ−ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ  ２．１、ｐＥＦ−１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ−Ｂｏｓなどが挙げられる。
【００８８】
語句「宿主細胞」とは、本明細書において、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターが導入されている細胞を指す。
【００８９】
「ＣＤ３関連疾患または状態」とは、本明細書において、ＣＤ３の発現または活性の増大または減少によって引き起こされる、増悪される、そうでなければ、関連している任意の疾患または状態を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ３関連状態として、免疫関連障害、例えば、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患などがある。
【００９０】
「癌」とは、本明細書において、悪性細胞成長または新生物、異常な増殖、浸潤または転移を特徴とする任意の医学的状態を指し、固形腫瘍および非固形癌（血液悪性腫瘍）、例えば白血病、の両方を含む。本明細書において、「固形腫瘍」とは、新生物および／または悪性細胞の固体塊を指す。
【００９１】
用語「医薬上許容される」は、指定された担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤（複数可）および／または塩が、一般に、製剤を含むその他の成分と化学的におよび／または物理的に適合しており、そのレシピエントと生理学的に適合していることを示す。
【００９２】
抗ＣＤ３ε抗体
本開示は、抗ＣＤ３ε抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８またはＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８の１つまたは複数の（例えば、１、２、３、４、５または６つの）ＣＤＲ配列を含む抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片を提供する。本開示を通じて、用語「ＷＢＰ３３１１」は、抗体名に関して、「Ｗ３３１１」と同義的に使用される。例えば、抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８はまた、Ｗ３３１１＿２．１６６．４８とも呼ばれ、このような名称はまた、同一抗体を指す。
【００９３】
「ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８」とは、本明細書において、配列番号８１の重鎖可変領域および配列番号８３のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９４】
「ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４」とは、本明細書において、配列番号８５の重鎖可変領域および配列番号８７のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９５】
「ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７」とは、本明細書において、配列番号８９の重鎖可変領域および配列番号９１のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９６】
「ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５」とは、本明細書において、配列番号９３の重鎖可変領域および配列番号９５のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９７】
「ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５」とは、本明細書において、配列番号９７の重鎖可変領域および配列番号９９のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９８】
「ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３」とは、本明細書において、配列番号１０１の重鎖可変領域および配列番号１０３のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【００９９】
「ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８」とは、本明細書において、配列番号１０５の重鎖可変領域および配列番号１０７のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１００】
「ＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８」とは、本明細書において、配列番号１０９の重鎖可変領域および配列番号１１１のカッパ軽鎖可変領域を有するマウスモノクローナル抗体を指す。
【０１０１】
表１は、これら８種の抗ＣＤ３ε抗体のＣＤＲ配列を示す。重鎖および軽鎖可変領域配列もまた、以下に提供する。
【０１０２】
【表１】
2020534830.tif 000003
【０１０３】
ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８およびＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８ならびにヒト化ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８およびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４抗体の重鎖またはカッパ軽鎖可変領域配列を以下に提供する。
【０１０４】
【化１】
2020534830.tif 000004
【０１０５】
【化２】
2020534830.tif 000005
【０１０６】
【化３】
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【０１０７】
【化４】
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【０１０８】
【化５】
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【０１０９】
【化６】
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【０１１０】
【化７】
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【０１１１】
【化８】
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【０１１２】
【化９】
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【０１１３】
【化１０】
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【０１１４】
【化１１】
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【０１１５】
【化１２】
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【０１１６】
【化１３】
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【０１１７】
【化１４】
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【０１１８】
【化１５】
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【０１１９】
【化１６】
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【０１２０】
ＣＤＲは、抗原結合と関与しているとわかっているが、６ＣＤＲのすべてが、不可欠である、または不変であるのではないということがわかっている。言い換えれば、抗ＣＤ３ε抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８またはＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８中の１つまたは複数のＣＤＲを置き換える、または変更する、または修飾するが、ＣＤ３εに対する特異的結合親和性を実質的に保持することが可能である。
【０１２１】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片は、抗ＣＤ３ε抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８およびＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８のうちの１種の重鎖ＣＤＲ３配列を含む。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片は、配列番号５、１１、１７、２３、２９、３５、４１および４７からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。重鎖ＣＤＲ３領域は、抗原結合部位の中心に位置し、したがって、抗原と最も接触し、抗体の抗原に対する親和性に最も自由なエネルギーを提供すると考えられる。また、重鎖ＣＤＲ３は、複数の多様化機序（Ｔｏｎｅｇａｗａ  Ｓ．Ｎａｔｕｒｅ．３０２：５７５−８１）によって長さ、アミノ酸組成およびコンホメーションの点で、抗原結合部位のうち群を抜いて最も多様なＣＤＲであると考えられる。重鎖ＣＤＲ３の多様性は、ほとんどの抗体特異性（Ｘｕ  ＪＬ，Ｄａｖｉｓ  ＭＭ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１３：３７−４５）ならびに望ましい抗原結合親和性（Ｓｃｈｉｅｒ  Ｒ，ｅｔｃ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−６７）をもたらすのに十分である。
【０１２２】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、抗体およびその抗原結合断片が、ＣＤ３εと特異的に結合できる限り、適したフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。表１に提供されるＣＤＲ配列は、マウス抗体から得られるが、それらは、当技術分野で公知の適した方法、例えば、組換え技術を使用して任意の適した種、例えば、中でもマウス、ヒト、ラット、ウサギの任意の適したＦＲ配列にグラフトできる。
【０１２３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、ヒト化される。ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトにおけるその低減された免疫原性において望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列が、ヒトまたは実質的にヒトＦＲ配列にグラフトされるので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合断片のヒト化は、ヒト免疫グロブリン遺伝子において非ヒト（マウスなど）ＣＤＲ遺伝子を、対応するヒトＣＤＲ遺伝子と置換することによって本質的に実施できる（例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６を参照のこと）。
【０１２４】
当技術分野で公知の方法を使用して、適したヒト重鎖および軽鎖可変ドメインを選択して、この目的を達成できる。例示的例では、「ベストフィット」アプローチを使用でき、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体可変ドメイン配列を、既知ヒト可変ドメイン配列のデータベースに対してスクリーニングまたはＢＬＡＳＴし、非ヒトクエリー配列に対して最も近いヒト配列を同定し、非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして使用する（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ、（１９９３）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照のこと）。あるいは、すべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークを、非ヒトＣＤＲのグラフトのために使用してもよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照のこと）。
【０１２５】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的にすべてのヒト配列から構成されている。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全に、または実質的に、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列、例えば、あるヒト抗体に由来するＦＲ配列および別のヒト抗体に由来する定常領域は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来する場合もある。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトＦＲ１〜４ならびにヒトＪＨおよびＪκを含む。
【０１２６】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体およびその抗原結合断片は、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１またはＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１のうち１つまたは複数のＦＲ配列を含む。以下の表２は、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１またはＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１のＦＲ配列を示す。表２には天然マウスＦＲ配列も列挙されている。重鎖および軽鎖可変領域配列もまた以下に提供する。
【０１２７】
「ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１」とは、本明細書において、配列番号１１３の重鎖可変領域および配列番号１１５のカッパ軽鎖可変領域を含むＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８をベースとするヒト化抗体を指す。ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１は、その親抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８と比較して、同等の抗原に対する親和性を有する。
【０１２８】
「ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１」とは、本明細書において、配列番号１１７の重鎖可変領域および配列番号１１９のカッパ軽鎖可変領域を含むＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４をベースとするヒト化抗体を指す。ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１は、その親抗体ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４と比較して、同等の抗原に対する親和性を有する。
【０１２９】
【表２】
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【０１３０】
【化１７】
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【０１３１】
【化１８】
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【０１３２】
【化１９】
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【０１３３】
【化２０】
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【０１３４】
２つの例示的ヒト化抗ＣＤ３ε抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８−ｚ１またはＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４−ｚ１は両方とも、ＣＤ３を発現する細胞（例えば、ＣＤ４Ｔ細胞）に対して特異的結合親和性を保持しており、その態様において親マウス抗体に対して少なくとも同等またはさらに良好である。２つの例示的ヒト化抗体は両方とも、両方ともヒトＴ細胞を活性化させ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのサイトカイン放出を引き起こすことができるという点で、ＣＤ３を発現する細胞とのその機能的相互作用を保持していた。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来するヒト免疫グロブリンと同一のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトＦＲの１個または複数のアミノ酸残基は、親の非ヒト抗体に由来する対応する残基で置換される。これは、特定の実施形態では、ヒト化抗体またはその断片を非ヒト親抗体構造と密接に近似させるために望ましいことであり得る。特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、各ヒトＦＲ配列中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換を含む、または重鎖もしくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲ中に１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基におけるこのような変化は、重鎖ＦＲ領域中のみに、軽鎖ＦＲ領域中のみに、または両鎖に存在し得る。
【０１３６】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片は、重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部および／または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む。一実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片は、本明細書において提供される重鎖可変ドメインのすべてまたは一部からなる単一ドメイン抗体である。このような単一ドメイン抗体のさらなる情報は、当技術分野で入手可能である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照のこと）。
【０１３８】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体およびその断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、重鎖および／または軽鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジおよび／またはＣＨ２−ＣＨ３領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、Ｃκを含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣなどのエフェクター機能が低減している、または枯渇しているＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａアイソタイプの定常領域を有し、これは、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイおよび細胞溶解アッセイなどの種々のアッセイを使用して評価できる。
【０１４０】
本明細書において提供される抗体および抗原結合断片の結合親和性は、抗原と抗原結合分子間の結合が平衡に達する時の会合速度に対する解離速度の割合（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を表すＫＤ値によって表すことができる。抗原結合親和性（例えば、ＫＤ）は、例えば、フローサイトメトリーアッセイを含む当技術分野で公知の適した方法を使用して適切に決定できる。いくつかの実施形態では、抗体の、種々の濃度の抗原との結合を、フローサイトメトリーによって決定でき、決定された平均蛍光強度（ＭＦＩ）をまず、抗体濃度に対してプロットすることができ、次いで、Ｐｒｉｓｍバージョン５（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア、カリフォルニア州、サンディエゴ）を使用して、特異的結合蛍光強度（Ｙ）および抗体の濃度（Ｘ）の依存関係を１サイト飽和方程式：Ｙ＝Ｂｍａｘ＊Ｘ／（ＫＤ＋Ｘ）に適合させることによって、ＫＤ値を算出でき、式中、Ｂｍａｘは、試験抗体の、抗原との最大特異的結合を指す。
【０１４１】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、細胞表面上に発現されたヒトＣＤ３または組換えヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。ＣＤ３εは、細胞上に発現された受容体である。組換えＣＤ３εは、組換えによって発現され、細胞膜と会合していない可溶性ＣＤ３εである。組換えＣＤ３εは、種々の組換え技術によって調製できる。一例では、発現ベクターにおいて、ヒトＣＤ３εの細胞外ドメインをコードするＣＤ３εＤＮＡ配列（ＮＰ＿０００７２４．１）（Ｍｅｔ１−Ａｓｐ１２６）を、Ｃ末端でポリヒスチジンタグと融合し、次いで、２９３Ｅ細胞にトランスフェクトし、発現させ、Ｎｉ−アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、フローサイトメトリーアッセイによって測定されるものとして、５×１０−９Ｍ以下、４×１０−９Ｍ以下、３×１０−９Ｍ以下、２×１０−９Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、５×１０−１１Ｍ以下、４×１０−１１Ｍ以下、３×１０−１１Ｍ以下、２×１０−１１Ｍ以下、または１０−１１Ｍ以下のＫＤ値で、細胞の表面に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合可能である。
【０１４３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、カニクイザルＣＤ３ε、例えば、細胞表面上に発現されたカニクイザルＣＤ３εまたは可溶性組換えカニクイザルＣＤ３εと交差反応する。
【０１４４】
抗体の組換えＣＤ３εまたは細胞の表面に発現されたＣＤ３εとの結合は、その最大効果（例えば、結合または阻害など）の５０％が観察される抗体の濃度を指す「半数最大効果濃度」（ＥＣ５０）値によって表すことができる。ＥＣ５０値は、当技術分野で公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどのサンドイッチアッセイ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリーアッセイおよびその他の結合アッセイによって測定できる。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、ＥＬＩＳＡによる０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下または０．０８ｎＭ以下のＥＣ５０（すなわち、５０％結合濃度）で、組換えヒトＣＤ３εと特異的に結合する。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、フローサイトメトリーアッセイによる０．５ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、１ｎＭ以下、２ｎＭ以下、３ｎＭ以下、４ｎＭ以下、５ｎＭ以下、６ｎＭ以下、７ｎＭ以下、８ｎＭ以下、９ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のＥＣ５０で、細胞の表面に発現されたヒトＣＤ３εと特異的に結合する。
【０１４５】
特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合断片は、ヒトＣＤ３εのものと同様の結合親和性でカニクイザルＣＤ３εと結合する。例えば、例示的抗体ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８、ＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８の、カニクイザルＣＤ３εとの結合は、ヒトＣＤ３εのものと同様の親和性またはＥＣ５０値である。
【０１４６】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、ＥＬＩＳＡによる０．００１ｎＭ以下、０．００５ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、０．０２ｎＭ以下、０．０３ｎＭ以下、０．０４ｎＭ以下または０．０５ｎＭ以下のＥＣ５０で組換えカニクイザルＣＤ３εと特異的に結合する。
【０１４７】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、診断的および／または治療的使用のために提供するのに十分である、ヒトＣＤ３εとの特異的結合親和性を有する。いくつかの治療戦略が、特に、臨床使用される抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体によってＴＣＲシグナル伝達を標的化することによって、Ｔ細胞免疫性を調節する。
【０１４８】
本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、標識化抗体、二価抗体または抗イディオタイプ抗体であり得る。組換え抗体は、動物においてではなく組換え法を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製された抗体である。
【０１４９】
抗体変異体
本開示はまた、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片の種々の変異体を包含する。特定の実施形態では、本開示は、本明細書において提供される例示的抗体の種々の種類の変異体、すなわち、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８、ＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４、ＷＢＰ３３１１＿２．３８３．４７、ＷＢＰ３３１１＿２．４００．５、ＷＢＰ３３１１＿２．４８２．５、ＷＢＰ３３１＿２．４８８．３３、ＷＢＰ３３１１＿２．６１５．８およびＷＢＰ３３１１＿２．８４４．８を包含する。
【０１５０】
特定の実施形態では、抗体変異体は、表１に提供されるような１つまたは複数のＣＤＲ配列中の１つまたは複数の修飾または置換、表２に提供される１つまたは複数のＦＲ配列、本明細書において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列および／または定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。このような変異体は、その親抗体のＣＤ３εに対する特異的結合親和性を保持するが、修飾（複数可）または置換（複数可）によって付与される１つまたは複数の望ましい特性を有する。例えば、抗体変異体は、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、低減されたグリコシル化のリスク、低減された脱アミノ化、低減されたまたは枯渇したエフェクター機能（複数可）、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増大された薬物動態半減期、ｐＨ感受性および／またはコンジュゲーション（例えば、１個または複数の導入されたシステイン残基）に対する適合性を有し得る。
【０１５１】
当技術分野で公知の方法、例えば、「アラニンスキャニング突然変異誘発」を使用して、親抗体配列を、スクリーニングして、修飾または置換される適したまたは好ましい残基を同定してもよい（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５を参照のこと）。手短には、標的残基（例えば、電荷を有する残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕ）を同定し、中性または負電荷を有するアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えることができ、修飾された抗体を製造し、興味深い特性についてスクリーニングする。特定のアミノ酸位置の置換が、興味深い機能的変化を実証する場合には、その位置を修飾または置換にとって有望な残基と同定できる。同定された有望な残基を、異なる種類の残基（例えば、システイン残基、正電荷を有する残基等）と置換することによってさらに評価してもよい。
【０１５２】
親和性変異体
親和性変異体は、表１に提供されるような１つまたは複数のＣＤＲ配列中の修飾または置換、表２に提供される１つまたは複数のＦＲ配列または本明細書において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列を含有し得る。親和性変異体は、その親抗体のＣＤ３εに対する特異的結合親和性を保持する、または親抗体を上回る．改善されたＣＤ３ε特異的結合親和性をさらに有する。特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列または可変領域配列中の少なくとも１つの（またはすべて）の置換は、保存的置換を含む。
【０１５３】
当業者ならば、表１および表２に提供されるＣＤＲ配列およびＦＲ配列において、１個または複数のアミノ酸残基が置換されてもよいが、得られた抗体または抗原結合断片は、ＣＤ３εとの結合親和性を依然として保持する、または改善された結合親和性をさらに有するということは理解するであろう。当技術分野で公知の種々の方法を使用して、この目的を達成できる。例えば、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体変異体（ＦａｂまたはｓｃＦｖ変異体など）のライブラリーを作製し、発現させ、次いで、ヒトＣＤ３εとの結合親和性についてスクリーニングできる。別の例のために、コンピュータソフトウェアを使用して、抗体のヒトＣＤ３εとの結合を実質的にシミュレートし、結合面を形成する抗体上のアミノ酸残基を同定できる。このような残基は、結合親和性の低減を防ぐために置換において避けられる場合もあり、より強い結合を提供するために置換の標的とされる場合もある。
【０１５４】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中に１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、親和性変異体は、ＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列中に合計１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下の置換を含む。
【０１５５】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、表１に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つのＣＤＲ配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ３εに対する結合親和性を保持する。
【０１５６】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、表２に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数のＦＲ配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ３εに対する結合親和性を保持する。
【０１５７】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ３εに対する結合親和性を保持する。いくつかの実施形態では、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、および配列番号１１９から選択される配列において、合計で、１〜１０個のアミノ酸が置換、挿入または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。
【０１５８】
グリコシル化変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片はまた、グリコシル化変異体を包含し、これは、抗体または抗原結合断片のグリコシル化の程度を増大または減少するために得ることができる。
【０１５９】
抗体またはその抗原結合断片は、炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造）が結合され得る側鎖を有する、１個または複数のアミノ酸残基を含み得る。抗体のグリコシル化は、通常、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、炭水化物部分の、アスパラギン残基、例えば、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）などのトリペプチド配列中のアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースのうち１種の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはトレオニンとの結合を指す。天然グリコシル化部位の除去は、例えば、配列中に存在する、上記のトリペプチド配列のうち１種（Ｎ結合型グリコシル化部位について）またはセリンもしくはトレオニン残基（Ｏ結合型グリコシル化部位について）が置換されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成できる。新規グリコシル化部位は、このようなトリペプチド配列またはセリンもしくはトレオニン残基を導入することによって同様の方法で作製できる。
【０１６０】
システインが遺伝子操作された変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片はまた、システインが遺伝子操作された変異体を包含し、これは、１個または複数の導入された遊離システインアミノ酸残基を含む。
【０１６１】
遊離システイン残基は、ジスルフィド橋の一部ではないものである。システインが遺伝子操作された変異体は、例えば、マレイミドまたはハロアセチルを介した、例えば、中でも、遺伝子操作されたシステインの部位での細胞傷害性および／またはイメージング化合物、標識または放射性同位体とのコンジュゲーションにとって有用である。遊離システイン残基を導入するために抗体または抗原結合断片を遺伝子操作する方法は、当技術分野で公知である、例えば、ＷＯ２００６／０３４４８８を参照のこと。
【０１６２】
Ｆｃ変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体および抗原結合断片はまた、そのＦｃ領域および／またはヒンジ領域に１個または複数のアミノ酸残基修飾または置換を含むＦｃ変異体を包含する。
【０１６３】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体または抗原結合断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。このような変異体は、リソソームにおける分解から逃れ、次いで、移動され、細胞の外に放出されることを可能にする、酸性ｐＨでＦｃＲｎと結合するので、薬物動態半減期の拡大を有し得る。抗体およびその抗原結合断片を遺伝子操作して、ＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は、当技術分野で周知である、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３−７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ  １，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｒｅｇｉｏｎ  ｆｏｒ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｂｙ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９−３２７７（２０１０）；ａｎｄ  Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６−３５６（２００６）を参照のこと。
【０１６４】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を変更する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのある特定のアミノ酸残基を、置換して、増強されたＡＤＣＣ活性を提供できる。あるいは、またはさらに、抗体上の炭水化物構造を変更して、ＡＤＣＣ活性を増強できる。抗体エンジニアリングによってＡＤＣＣ活性を変更する方法は、当技術分野で記載されている、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１−６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８−８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５−７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ＥＥ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１−５；Ｌａｚａｒ  ＧＡ．ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５−４０１０；Ｒｙａｎ  ＭＣ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９−３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ＪＯ，．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７−２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ  Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３−２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６−３４７３を参照のこと。
【０１６５】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体または抗原結合断片は、例えば、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善または減少することによって補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更する、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む（例えば、ＷＯ９９／５１６４２；Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ  Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）およびＦｃ領域変異体のその他の例に関するＷＯ９４／２９３５１。
【０１６６】
特定の実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体または抗原結合断片は、ヘテロ二量体化を容易にするおよび／または促進するためにＦｃ領域の界面における１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。これらの修飾は、第１のＦｃポリペプチドへの隆起および第２のＦｃポリペプチドへの空洞の導入を含み、ここでは、第１および第２のＦｃポリペプチドの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するために、隆起を空洞中に位置付けることができる。これらの修飾を有する抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。
【０１６７】
抗原結合断片
抗ＣＤ３ε抗原結合断片も本明細書において提供される。種々の種類の抗原結合断片が、当技術分野で公知であり、例えば、そのＣＤＲおよびＦＲ配列が表１および２に示されている例示的抗体、その種々の変異体（例えば、親和性変異体、グリコシル化変異体、Ｆｃ変異体、システインが遺伝子操作された変異体など）を含む、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗体をベースとして開発することができる。
【０１６８】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ３ε抗原結合断片は、ラクダ化された単一ドメイン抗体、ダイアボディー、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｄｓＦｖ−ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、ｄｓダイアボディー、ナノボディー、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。
【０１６９】
このような抗原結合断片の製造のために種々の技術を使用できる。例示的方法として、無傷の抗体の酵素的消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）；ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、大腸菌〔E.Coli〕などの宿主細胞による組換え発現（例えば、Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片のため）、上記で論じられるようなファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖのための）およびＦ（ａｂ’）２断片を形成するための２つのＦａｂ’−ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））が挙げられる。抗体断片の製造のためのその他の技術は、当業者には明らかであろう。
【０１７０】
特定の実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの作製は、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および同５，５８７，４５８号に記載されている。ｓｃＦｖを、アミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質と融合して、融合タンパク質を提供してもよい（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照のこと）。
【０１７１】
二重特異性抗体、多価抗体
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、二価、四価、六価または多価である。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、単一特異性または二重特異性である。
【０１７２】
用語「価」とは、本明細書において、所与の分子中の指定された数の抗原結合部位の存在を指す。そのようなものとして、用語「二価」、「四価」および「六価」は、抗原結合分子中の、それぞれ、２つの結合部位、４つの結合部位および６つの結合部位の存在を示す。二価分子は、２つの結合部位が両方とも、同一抗原または同一エピトープの特異的結合のためのものである場合に、単一特異性であり得る。同様に、三価分子は、例えば、２つの結合部位が第１の抗原（またはエピトープ）について単一特異性であり、第３の結合部位が、第２の抗原（またはエピトープ）について特異的である場合に二重特異性であり得る。
【０１７３】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、単一特異性であるが、同一抗原またはエピトープに対して特異的である少なくとも２つの結合部位を有する、二価、三価または四価であり得る。これは、特定の実施形態では、一価対応物よりも強力な、抗原またはエピトープとの結合を提供する。特定の実施形態では、二価抗原結合部分では、結合部位の第１の価および結合部位の第２の価は構造的に同一である（すなわち、同一配列を有する）、または構造的に異なっている（すなわち、同一特異性であるが異なる配列を有する）。
【０１７４】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、二重特異性である。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される二重特異性抗体およびその抗原結合断片は、ＣＤ３εに対する第１の特異性、および第２の特異性を有する。いくつかの実施形態では、第２の特異性は、ＣＤ３εに対してであるが、異なるエピトープに対してである。いくつかの実施形態では、第２の特異性は、ＣＤ３εとは異なる第２の抗原に対するものであり、ＣＤ３εを発現するＴ細胞と近接したその存在が、第２の抗原が免疫系によって認識されるために望ましい。例えば、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、腫瘍抗原または病原体抗原と近接させることは、したがって、免疫系によるこのような抗原の認識または排出を促進する。
【０１７５】
特定の実施形態では、第２の特異性は、腫瘍関連抗原またはそのエピトープに対してである。用語「腫瘍関連抗原」とは、腫瘍細胞表面上に提示されるまたは提示され得る、腫瘍細胞上に、または内に位置する抗原を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞によってのみ提示されることができ、正常な、すなわち、非腫瘍細胞によって提示されない。いくつかのその他の実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞上でもっぱら発現されることができ、または非腫瘍細胞と比較して腫瘍特異的変異を表し得る。いくつかのその他の実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞および非腫瘍細胞の両方で見られ得るが、非腫瘍細胞と比較した場合に腫瘍細胞で過剰発現されるか、または非腫瘍組織と比較して腫瘍組織のあまり緻密ではない構造のために腫瘍細胞において抗体結合にとって近づきやすい。いくつかの実施形態では、腫瘍関連抗原は、腫瘍の脈管構造に位置する。
【０１７６】
腫瘍関連抗原の例示的例として、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ１３３、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ−３、ＣＤ１３５）、硫酸コンドロイチンプロテオグリカン４（ＣＳＰＧ４、黒色腫関連硫酸コンドロイチンプロテオグリカン）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、ＩＧＦＲ、ＩＬ３Ｒ、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ＣＤＣＰ１、Ｄｅｒｌｉｎ１、テネイシン、ｆｒｉｚｚｌｅｄ  １−１０、血管性抗原ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ／ＦＬＫ１）、ＶＥＧＦＲ３（ＦＬＴ４、ＣＤ３０９）、ＰＤＧＦＲ−α（ＣＤ１４０ａ）、ＰＤＧＦＲ−β（ＣＤ１４０ｂ）、エンドグリン、ＣＬＥＣ１４、Ｔｅｍ１−８およびＴｉｅ２が挙げられる。さらなる例として、Ａ３３、キャンパス−１（ＣＤｗ５２）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カルボアンヒドラーゼ〔Carboanhydrase〕ＩＸ（ＭＮ／ＣＡ  ＩＸ）、ｄｅ２−７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｐＣＡＭ、Ｅｐ−ＣＡＭ、葉酸結合タンパク質、Ｇ２５０、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ−３、ＣＤ１３５）、ｃ−Ｋｉｔ（ＣＤ１１７）、ＣＳＦ１Ｒ（ＣＤ１１５）、ＨＬＡ−ＤＲ、ＩＧＦＲ、ＩＬ−２受容体、ＩＬ３Ｒ、ＭＣＳＰ（黒色腫関連細胞表面硫酸コンドロイチンプロテオグリカン）、Ｍｕｃ−１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）およびタグ−７２を挙げることができる。
【０１７７】
本明細書において提供される二重特異性抗体および抗原結合断片は、当技術分野で公知の任意の適した方法で作製できる。従来のアプローチでは、異なる抗原特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対を、宿主細胞において同時発現させ、組換え法で二重特異性抗体を製造し（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７（１９８３）を参照のこと）、続いて、アフィニティークロマトグラフィーによって精製できる。
【０１７８】
また、組換えアプローチを使用してもよく、ここでは、２つの特異性の抗体重鎖可変ドメインをコードする配列を、それぞれ免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合し、続いて、発現ベクターに挿入し、それを、二重特異性抗体の組換え発現のために適した宿主細胞に軽鎖配列の発現ベクターとともに同時トランスフェクトする（例えば、ＷＯ９４／０４６９０；Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと）。同様に、ｓｃＦｖ二量体もまた、組換え構築し、宿主細胞から発現させることができる（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）。
【０１７９】
別の方法では、遺伝子融合によって、ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを、２種の異なる抗体のＦａｂ’タンパク質に連結することができる。連結された抗体は、ヒンジ領域で４つの半抗体（すなわち、モノマー）に還元され、次いで、再酸化されてヘテロ二量体を形成する（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２））。
【０１８０】
２つの抗原結合ドメインをコンジュゲートまたは架橋して、二重特異性抗体または抗原結合断片形成してもよい。例えば、１つの抗体をビオチンと、一方で、もう一方の抗体をアビジンとカップリングでき、ビオチンおよびアビジン間の強力な会合は、２つの抗体を一緒にして複合体を形成し、二重特異性抗体を形成する（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／００３７３およびＥＰ０３０８９を参照のこと）。別の例のために、２つの抗体または抗原結合断片を、例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されるような当技術分野で公知の従来法によって架橋することができる。
【０１８１】
二重特異性抗原結合断片は、二重特異性抗体から、例えば、タンパク質分解による切断によって、または化学的連結によって作製してもよい。例えば、抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ’）を調製し、Ｆａｂ’−チオール誘導体に変換し、次いで、異なる抗原特異性を有する別の変換されたＦａｂ’誘導体と混合し、反応させて、二重特異性抗原結合断片を形成してもよい（例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。
【０１８２】
特定の実施形態では、二重特異性抗体または抗原結合断片を、ノブ・イントゥ・ホール〔knob-into-hole〕会合が形成されて、２つの異なる抗原結合部位のヘテロ二量体化を促進できるように界面で遺伝子操作してもよい。「ノブ・イントゥ・ホール」とは、本明細書において、一方のポリペプチドが、嵩高い側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、チロシンまたはトリプトファン）の存在のために隆起（すなわち、「ノブ」）を有し、もう一方のポリペプチドが、空洞（すなわち、「ホール」）を有し、２種のポリペプチドの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するように、小さい側鎖アミノ酸残基残基（例えば、アラニンまたはトレオニン）および隆起が、空洞中に配置することができるポリペプチド（ＣＨ３ドメインなど）間の相互作用を指す。ノブ・イントゥ・ホールを用いてポリペプチドを作製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載される。
【０１８３】
コンジュゲート
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、コンジュゲートをさらに含む。コンジュゲートは、抗体およびその抗原結合断片と連結することができる。コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合断片と結合することができる非タンパク質性部分である。種々のコンジュゲートを、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片と連結してもよいということが考慮される（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ  ｔｏ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ  ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと）。これらのコンジュゲートを、その他の方法の中でも、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、ブレンドまたは付加によって抗体または抗原結合断片と連結してもよい。
【０１８４】
特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体および抗原結合断片を、１つまたは複数のコンジュゲートとの結合に利用され得る特定の部位をエピトープ結合部分の外側に含有するように、遺伝子操作してもよい。例えば、このような部位は、コンジュゲートとの共有結合を容易にするために、１つまたは複数の反応性アミノ酸残基、例えば、システインまたはヒスチジン残基などを含み得る。
【０１８５】
特定の実施形態では、抗体を、コンジュゲートと間接的に、または別のコンジュゲートを介して連結してもよい。例えば、抗体または抗原結合断片を、ビオチンにコンジュゲートしてもよく、次いで、アビジンにコンジュゲートされている第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートしてもよい。コンジュゲートは、毒素（例えば、化学療法剤）、検出可能な標識（例えば、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素−基質標識）であり得る。
【０１８６】
「毒素」は、細胞にとって有害である、または細胞に損傷を与え得る、もしくは死滅させ得る任意の薬剤であり得る。毒素の例として、制限するものではないが、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシンおよびその類似体、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカププリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。
【０１８７】
検出可能な標識の例として、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリンまたはテキサスレッド）、酵素基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼまたはβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉおよび３２Ｐ、その他のランタニド、発光標識）、発色団部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子または検出用金を挙げることができる。
【０１８８】
特定の実施形態では、コンジュゲートは、抗体の半減期を増大するのに役立つ薬物動態修飾部分であり得る。例示的例として、水溶性ポリマー、例えば、ＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマーなどが挙げられる。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分岐していても、非分岐であってもよい。抗体と結合しているポリマーの数は、変わることがあり、１つより多いポリマーが結合される場合には、同一分子である場合も、異なる分子である場合もある。
【０１８９】
特定の実施形態では、コンジュゲートは、磁性ビーズなどの精製部分であり得る。
【０１９０】
特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその抗原結合断片は、コンジュゲートの基材として使用される。
【０１９１】
ポリヌクレオチドおよび組換え法
本開示は、抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態では、本明細書において提供される例示的抗体の可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８および／または１２０で示されるような、１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、シーケンシングされる。コードするＤＮＡはまた、合成法によって得ることもできる。
【０１９２】
抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド（例えば、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８および／または１２０に示されるような配列を含む）を、当技術分野で公知の組換え技術を使用して、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のために、または発現のために、ベクター中に挿入できる。多数のベクターが入手可能である。ベクター構成成分は、一般に、それだけには限らないが、以下のうち１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１種または複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ−１α）および転写終結配列。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、ベクター系として、哺乳動物、細菌、酵母系などが挙げられ、それだけには限らないが、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ，ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＤ１８−Ｔ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ−Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ４２０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２などといったプラスミドならびにその他の実験室および市販のベクターを含む。適したベクターとして、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を挙げることができる。
【０１９４】
抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入できる。本明細書においてベクター中のＤＮＡをクローニングまたは発現させるための適した宿主細胞として、上記の原核生物、酵母またはより高度の真核生物細胞がある。この目的のために適した原核生物として、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、エシェリキア属〔Escherichia〕、例えば、大腸菌〔E.coli〕、エンテロバクター属〔Enterobacter〕、エルウィニア属〔Erwinia〕、クレブシエラ属〔Klebsiella〕、プロテウス属〔Proteus〕、サルモネラ属〔Salmonella〕、例えば、サルモネラ・チフィリウム〔Salmonella typhimurium〕、セラチア属〔Serratia〕、例えば、セラチア・マルセッセンス〔Serratia marcescans〕および赤痢菌属〔Shigella〕ならびにＢ．スブチリス〔subtilis〕およびＢ．リケニフォルミス〔licheniformis〕などのバチルス属〔Bacilli〕、Ｐ．エルジノーサ〔aeruginosa〕などのシュードモナス属〔Pseudomonas〕およびストレプトマイセス属〔Streptomyces〕などの腸内細菌科〔Enterobacteriaceae〕が挙げられる。
【０１９５】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核細胞微生物は、抗ＣＤ３ε抗体をコードするベクターの適したクローニングまたは発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ〔Saccharomyces cerevisiae〕または一般的なパン酵母は、下等真核細胞宿主微生物の中で最もよく使用されている。しかし、シゾサッカロミセス・ポンベ〔Schizosaccharomyces pombe〕；例えば、Ｋ．ラクチス〔lactis〕、Ｋ．フラギリス〔fragilis〕（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス〔bulgaricus〕（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィッカーアミー〔wickeramii〕（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチー〔waltii〕（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム〔drosophilarum〕（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス〔thermotolerans〕およびＫ．マーキシアヌス〔marxianus〕などのクリベロミセス属〔Kluyveromyces〕宿主；ヤロウイア属〔yarrowia〕（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス〔Pichia pastoris〕（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ属〔Candida〕；トリコデルマ・リーゼイ〔Trichoderma reesia〕（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ〔Neurospora crassa〕；シュワニオミセス・オクシデンタリス〔Schwanniomyces occidentalis〕などのシュワニオミセス属〔Schwanniomyces〕；および例えば、アカパンカビ属〔Neurospora〕、アオカビ属〔Penicillium〕、トリポクラジウム属〔Tolypocladium〕ならびにＡ．ニデュランス〔A.nidulans〕およびクロコウジカビ〔A.niger〕などのアスペルギルス属〔Aspergillus〕宿主などの糸状菌などの、いくつかのその他の属、種および株が一般に入手可能であり、本明細書において有用である。
【０１９６】
本明細書において提供されるグリコシル化抗体または抗原断片の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。脊椎動物細胞の例として、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株および変異体ならびにヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕（イモムシ）、ネッタイシマカ〔Aedes aegypti〕（蚊）、ヒトスジシマカ〔Aedes albopictus〕（蚊）、キイロショウジョウバエ〔Drosophila melanogaster〕（ショウジョウバエ）およびカイコ〔Bombyx mori〕などの宿主に由来する対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ〔Autographa californica〕ＮＰＶのＬ−１変異体およびカイコ〔Bombyx mori〕ＮＰＶのＢｍ−５株が公的に入手可能であり、このようなウイルスは、本明細書において、本発明に従って、特に、ヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕細胞のトランスフェクションのためにウイルスとして使用され得る。ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマトおよびタバコの植物細胞培養物も宿主として使用され得る。
【０１９７】
しかし、関心は、脊椎動物細胞において最大であり、培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例として、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６５１）；ヒト胚性腎臓株（２９３または懸濁培養における成長のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞腫株（Ｈｅｐ  Ｇ２）がある。いくつかの好ましい実施形態では、宿主細胞は、２９３Ｆ細胞である。
【０１９８】
宿主細胞は、抗ＣＤ３ε抗体生成のために上記の発現またはクローニングベクターを用いて形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択するか、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地で培養される。別の実施形態では、抗体は、当技術分野で公知の相同組換えによって生成され得る。
【０１９９】
本明細書において提供される抗体または抗原結合断片を生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地で培養され得る。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．第５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同４，６５７，８６６号；同４，９２７，７６２号；同４，５６０，６５５号；または同５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または再発行米国特許第３０，９８５号に記載される培地のいずれも、宿主細胞のための培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモンおよび／またはその他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸など）、バッファー（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）およびグルコースまたは同等のエネルギー供給源を用いて補給され得る。任意のその他の必要な栄養補助剤もまた、当業者に公知であろう適当な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨなどといった培養状態は、発現のために選択された宿主細胞とともにこれまでに使用されたものであり、当業者には明らかとなろう。
【０２００】
組換え技術を使用する場合には、抗体は、細胞膜周辺腔において細胞内で生成され得る、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で生成される場合には、第１のステップとして、微粒子状細片、宿主細胞または溶解した断片のいずれかが例えば、遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）には、大腸菌〔E.coli〕の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順が記載されている。手短には、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡおよびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分かけて解凍される。細胞細片は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地中に分泌される場合には、このような発現系から得られた上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用してまず濃縮される。タンパク質分解を阻害するために、ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が前記のステップのいずれにも含まれることがあり、外来性の混入物質の成長を防ぐために、抗生物質が含まれることがある。
【０２０１】
細胞から調製される抗ＣＤ３ε抗体およびその抗原結合断片は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥ−セルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、塩析およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。
【０２０２】
特定の実施形態では、固層で固定化されたプロテインＡは、抗体およびその抗原結合断片の免疫親和性精製のために使用される。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに応じて変わる。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖をベースとする抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１−１３（１９８３））。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプに対して、およびヒトγ３に対して推奨される（Ｇｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．５：１５６７  １５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、最も多くはアガロースであるが、その他のマトリックスが利用可能である。コントロールドポアガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースを用いて達成され得るものよりも迅速な流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合には、精製にはＢａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ．ＴＭ．樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ニュージャージー州、フィリップスバーグ）が有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のためのその他の技術も、回収されるべき抗体に応じて利用可能である。
【０２０３】
任意の予備的精製ステップ（単数または複数）後に、対象の抗体および混入物質を含む混合物は、約２．５〜４．５の間のｐＨの溶出バッファーを使用する、好ましくは、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍの塩）で実施される低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに付され得る。
【０２０４】
医薬組成物
本開示は、抗ＣＤ３ε抗体またはその抗原結合断片および１種または複数の医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
【０２０５】
本明細書において開示される医薬組成物において使用するための医薬上許容される担体として、例えば、医薬上許容される液体、ゲルまたは固体担体、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張化剤、バッファー、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁剤／分配剤、封鎖剤またはキレート化剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤または非毒性補助物質、当技術分野で公知のその他の成分またはそれらの種々の組合せを挙げることができる。
【０２０６】
適した成分として、例えば、抗酸化剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、保存料、滑沢剤、香味料、増粘剤、着色剤、乳化剤または糖およびシクロデキストリンなどの安定化剤を挙げることができる。適した抗酸化剤として、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンおよび／または没食子酸プロピルを挙げることができる。本明細書において開示されるように、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片およびコンジュゲートを含む組成物中に、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含めることによって、抗体または抗原結合断片の酸化が減少される。この酸化の低減は、結合親和性の喪失を防ぐまたは低減し、それによって、抗体安定性を改善し、有効期間を最大化する。したがって、特定の実施形態では、本明細書において開示されるような１種または複数の抗体または抗原結合断片およびメチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含む組成物が提供される。抗体または抗原結合断片を、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤と混合することによって、酸化を防ぐための、有効期間を延長するための、および／または本明細書において提供されるような抗体もしくは抗原結合断片の有効性を改善するための方法がさらに提供される。
【０２０７】
さらに例示するために、医薬上許容される担体として、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、等張性デキストロース注射、滅菌水注射またはデキストロースおよび乳酸リンゲル注射などの水性ビヒクル、植物起源の硬化油、綿実油、トウモロコシオイル、ゴマ油またはピーナッツオイルなどの非水性ビヒクル、静菌性または静真菌性濃度の抗菌剤、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性剤、リン酸またはクエン酸バッファーなどのバッファー、重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、塩酸プロカインなどの局所麻酔、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリビニルピロリドンなどの懸濁剤および分散剤、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０）などの乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）などの封鎖剤またはキレート化剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸を挙げることができる。担体として利用される抗菌剤を、複数回用量容器中の医薬組成物に添加してもよく、これとして、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンズアルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムが挙げられる。適した賦形剤として、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールを挙げることができる。適した非毒性補助物質として、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解促進剤、または酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンもしくはシクロデキストリンなどの薬剤を挙げることができる。
【０２０８】
医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、丸剤、カプセル剤、錠剤、持続放出製剤または散剤であり得る。経口製剤はとして、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどといった標準担体を挙げることができる。
【０２０９】
特定の実施形態では、医薬組成物は、注射用組成物に製剤化される。注射用医薬組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、エマルジョンまたは液体溶液、懸濁液またはエマルジョンを作製するのに適した固体形態などの任意の従来の形態で調製され得る。注射のための調製物として、注射用に準備された滅菌および／または非発熱性溶液、皮下錠剤を含む、使用直前に溶媒と組み合わされるべく準備された凍結乾燥散剤などの滅菌乾燥可溶性製剤、注射用に準備された滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと組み合わされるべく準備された滅菌乾燥不溶性製剤、ならびに滅菌および／または非発熱性エマルジョンを挙げることができる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。
【０２１０】
特定の実施形態では、単位用量非経口調製物は、アンプル、バイアルまたはニードルを備えたシリンジ中にパッケージングされる。非経口投与用のすべての調製物は、当技術分野で公知であり、実施されるように滅菌および非発熱性でなくてはならない。
【０２１１】
特定の実施形態では、滅菌、凍結乾燥散剤は、適した溶媒中に本明細書において開示されるような抗体または抗原結合断片を溶解することによって調製される。溶媒は、散剤または散剤から調製された再構成された溶液の安定性またはその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有し得る。使用され得る賦形剤として、それだけには限らないが、水、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロースまたはその他の適した薬剤が挙げられる。溶媒は、クエン酸、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムなどのバッファーまたは、一実施形態ではおよそ中性のｐＨの、当業者に公知のその他のこのようなバッファーを含有し得る。当業者に公知の溶液のその後の滅菌濾過と、それに続く標準状態下での凍結乾燥によって、望ましい製剤が提供される。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥のためにバイアル中に配分される。各バイアルは、抗ＣＤ３ε抗体またはその抗原結合断片またはその組成物の単一投与量または複数回投与量を含有し得る。バイアルに用量または用量のセットに必要なものを上回る少量（例えば、約１０％）を過剰充填することは、正確なサンプル引き出しおよび正確な投薬を促進するために許容される。凍結乾燥散剤は、約４℃〜室温などの適当な状態下で保存され得る。
【０２１２】
注射水を用いる凍結乾燥散剤の再構成は、非経口投与において使用するための製剤を提供する。一実施形態では、再構成のために滅菌および／または非発熱性水またはその他の液体の適した担体が、凍結乾燥散剤に付加される。正確な量は、与えられている選択された療法に応じて変わり、経験的に決定され得る。
【０２１３】
使用方法
本開示は、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片の治療上有効な量を、それを必要とする対象に投与し、それによって、ＣＤ３関連状態または障害を処置または予防することを含む、治療方法もまた提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３関連状態または障害は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患である。
【０２１４】
癌の例として、それだけには限らないが、非小細胞肺癌（扁平上皮／非扁平上皮）、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、卵巣癌、乳癌（基底乳癌腫、乳管癌腫および小葉乳癌腫を含む）、膵臓癌、胃癌腫、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌腫、黒色腫、骨髄腫、菌状息肉腫〔mycoses fungoids〕、メルケル細胞癌、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫およびその他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ系腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌腫、甲状腺髄様癌腫、乳頭様甲状腺癌腫、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞／組織球に富むＢ細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、真性赤血球増加症、肥満細胞由来腫瘍、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、上咽頭癌腫、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫〔craniopharyogioma〕、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫〔menangioma〕、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【０２１５】
自己免疫疾患として、それだけには限らないが、後天性免疫不全症候群（自己免疫成分を有するウイルス疾患であるＡＩＤＳ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルーヘルペス状皮膚炎；慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素病、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎−若年性、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症−線維筋炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スチル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合型結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性〔pemacious〕貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無γグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬の関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られる）、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨大細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑およびウェジナー肉芽腫症が挙げられる。炎症性障害として、例えば、慢性および急性炎症性障害が挙げられる。炎症性障害の例として、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、卒中、組織および臓器の移植、脈管炎、糖尿病性網膜症および人工呼吸器誘発肺損傷が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３関連状態は、炎症性疾患、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腸管粘膜炎症、大腸炎と関連する消耗性疾患、多発性硬化症、ウイルス感染、関節リウマチ、変形性関節症、クローン病〔Cohn's disease〕および炎症性腸疾患、乾癬、全身性強皮症、自己免疫性糖尿病などである。
【０２１６】
感染性疾患として、それだけには限らないが、真菌感染、寄生虫／原虫感染または慢性ウイルス感染、例えば、マラリア、コクシジオイオドマイコシスイミティス〔coccidioiodmycosis immitis〕、ヒストプラスマ症、爪真菌症、アスペルギルス症〔aspergilosis〕、ブラストミセス症、カンジジアシスアルビカンス〔candidiasis albicans〕、パラコクシジオイデス症〔paracoccidioiomycosis〕、微胞子虫症、アカントアメーバ角膜炎、アメーバ症、回虫症、バベシア症、バランチジウム症、バイリサスカリアシス〔Baylisascariasis〕、シャーガス病、肝吸虫症、コクリオミイヤ属〔Cochliomyia〕、クリプトスポリジウム症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコッカス症、象皮症、腸蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア症、ジアルジア症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポーラ症、片山熱、リーシュマニア症、ライム病、横川吸虫症、ハエ幼虫症、オンコセルカ症、シラミ寄生症、疥癬、住血吸虫症、睡眠病、糞線中症、条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫症、鞭虫症、トリパノソーマ症、蠕虫感染、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、ＩＩ型単純ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ、カポジウエスト肉腫関連ヘルペスウイルス伝染病、シンリングウイルス（トルクテノウイルス〔Torquetenovirus〕）、ヒトＴリンパ増殖性ウイルスＩ、ヒトＴリンパ増殖性ウイルスＩＩ、水痘帯状疱疹、ＪＣウイルスまたはＢＫウイルスの感染が挙げられる。
【０２１７】
別の態様では、免疫応答の上方制御から恩恵を受けるであろう対象における状態を処置するための方法であって、それを必要とする対象に本明細書において提供される抗体または抗原結合断片の治療上有効な量を投与することを含む方法が提供される。
【０２１８】
本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片の治療上有効な量は、当技術分野で公知の種々の因子、例えば、対象の体重、年齢、過去の病歴、現在の薬物適用、健康の状態および交差反応の可能性、アレルギー、感受性および有害な副作用、ならびに投与経路および疾患発達の程度などに応じて変わる。投与量は、これらおよびその他の状況または必要条件によって示されるように、当業者（例えば、医師または獣医師）によって比例的に低減または増大され得る。
【０２１９】
特定の実施形態では、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ）の治療上有効な投与量で投与され得る。これらの実施形態のうち特定のものでは、抗体または抗原結合断片は、約５０ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で投与され、これらの実施形態のうち特定のものでは、投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下または０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。特定の実施形態では、投薬量は、治療過程にわたって変化し得る。例えば、特定の実施形態では、初期投薬量は、その後の投薬量よりも高い場合がある。特定の実施形態では、投薬量は、対象の反応に応じて処置過程にわたって変わり得る。
【０２２０】
投与計画は、最適な望ましい応答（例えば、治療的応答）を提供するように調整され得る。例えば、単回用量が投与される場合も、または数回の分割用量が経時的に投与される場合もある。
【０２２１】
本明細書において開示される抗体および抗原結合断片は、例えば、非経口（例えば、皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内または皮内注射）または非経口ではない（例えば、経口、鼻腔内、眼球内、舌下、直腸内または局所）経路などの当技術分野で公知の任意の経路によって投与され得る。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片は、単独で、または１種もしくは複数のさらなる治療手段または薬剤と組み合わせて投与され得る。例えば、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片は、別の治療薬、例えば、化学療法剤または抗癌剤と組み合わせて投与され得る。
【０２２３】
これらの実施形態の特定のものでは、１種または複数のさらなる治療薬と組み合わせて投与される本明細書において開示される抗体または抗原結合断片は、１種または複数のさらなる治療薬と同時に投与されてもよく、これらの実施形態の特定のものでは、抗体または抗原結合断片およびさらなる治療薬（複数可）は、同一医薬組成物の一部として投与されてもよい。しかし、別の治療薬と「組み合わせて」投与される抗体または抗原結合断片は、薬剤と同時に、または薬剤と同一組成物中で投与されなくてもよい。別の薬剤に先立って、またはその後に投与される抗体または抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片および第２の薬剤が、異なる経路によって投与される場合でさえ、その語句が本明細書において使用される場合、その薬剤と「組み合わせて」投与されると考えられる。可能であれば、本明細書において開示される抗体または抗原結合断片と組み合わせて投与されるさらなる治療薬は、さらなる治療薬の添付文書に列挙されるスケジュールに従って、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３年（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２））もしくは当技術分野で周知のプロトコールに従って投与される。
【０２２４】
本開示は、抗ＣＤ３ε抗体またはその抗原結合断片を使用する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ３εを発現するＴ細胞をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ３εを発現する細胞においてＣＤ３活性を調節する方法であって、ＣＤ３εを発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法をさらに提供する。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本開示は、第２の抗原の、ＣＤ３εを発現するＴ細胞によるｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理を促進する方法であって、ＣＤ３εを発現するＴ細胞を、本明細書において提供される二重特異性抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む方法をさらに提供し、二重特異性抗体または抗原結合断片は、ＣＤ３εを発現するＴ細胞および第２の抗原の両方と特異的に結合可能であり、それによって、両者を近接させる。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、本開示は、サンプル中のＣＤ３εの存在または量を検出する方法であって、サンプルを、抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することとを含む方法をさらに提供する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ３εの存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ３εの存在を、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態と相関させることとを含む方法をさらに提供する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ３関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ＣＤ３関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。
【０２２９】
以下の実施例は、特許請求された本発明をより良好に例示するために提供され、本発明の範囲を制限すると解釈されてはならない。以下に記載されるすべての特定の組成物、材料および方法は、全体で、または一部で本発明の範囲内に入る。これらの特定の組成物、材料および方法は、本発明を制限するものではなく、単に、本発明の範囲内に入る特定の実施形態を例示するものである。当業者は、発明の能力を行使することなく、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の組成物、材料および方法を開発し得る。本発明の範囲内にとどまりながら本明細書に記載される手順において多数の変法を行うことができるということが理解されよう。このような変法が本発明の範囲内に含まれることは本発明者らの意図である。
【実施例】
【０２３０】
［実施例１］ハイブリドーマ抗体の作製
１．１  動物免疫処置：
Ｈｉｓタグを有するヒトＣＤ３ε（ＣＤ３ε）（カタログ番号：１０９７７−Ｈ０８Ｈ；Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．中国、北京）、ヒトＣＤ３γ（ＣＤ３γ）（カタログ番号：ａｂ１４０５６３；Ａｂｃａｍ  Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｃｈｉｎａ）およびＨｉｓタグを有するヒトＣＤ３δ（ＣＤ３δ）（カタログ番号：１０９７７−Ｈ０８Ｈ；Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｃ．中国、北京）を含むヒトＣＤ３の組換え細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質を、動物免疫処置のための免疫原として使用した。Ｂａｌｂ／ｃマウスは、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ，Ｌｔｄ．から購入し、ＩＡＣＵＣ承認動物施設に収容した。マウスを、２週間毎の皮下および足蹠注射によって、ＣＤ３ε、ＣＤ３γおよびＣＤ３δのＥＣＤタンパク質混合物を用いて免疫処置するか、またはＴｉｔｅｒｍａｘアジュバントと混合された、各マウスについて７×１０６個の新たに単離されたヒトＴ細胞を用いて免疫処置した。
【０２３１】
免疫処置の前後にマウスから血液を採取し、ＥＬＩＳＡによって標的タンパク質に対する血清力価をモニタリングした。
【０２３２】
１．２  ハイブリドーマ作製
最高血清力価を有するマウスを細胞融合のために選択した。マウス脾臓およびリンパ節から得たＢ細胞を、一般的な電気融合手順に従って電気融合によってＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合した。細胞融合後、細胞を、２０％ＦＢＳおよび１％ＨＡＴ選択試薬を補給したＤＭＥＭ培地を有する９６ウェルプレートにプレーティングした。
【０２３３】
ハイブリドーマ培地の上清中に存在する抗体を、フローサイトメーターアッセイ（ＦＡＣＳ）によってＣＤ３を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を使用してスクリーニングし、ＦＡＣＳによってＣＤ３陰性ＭＯＬＴ−４Ｔ細胞を使用してカウンタースクリーニングした。Ｊｕｒｋａｔ細胞に対して結合活性を有するが、ＭＯＬＴ−４細胞と交差結合しないハイブリドーマ細胞を、陽性ハイブリドーマ細胞株として採取し、次いで、半固体培地アプローチを使用してサブクローニング段階に進行した。
【０２３４】
シングルコロニーを、１０％ＦＢＳを補給したＤＭＥＭ培地を有する９６ウェルプレート中に２〜３日間選び取り、フローサイトメーターアッセイ（ＦＡＣＳ）によってＣＤ３を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を使用してＣＤ３の標的に対して再スクリーニングし、ＦＡＣＳアッセイによってＣＤ３陰性ＭＯＬＴ−４Ｔ細胞を使用してカウンタースクリーニングした。
【０２３５】
１．３  ハイブリドーマシーケンシング
ハイブリドーマ細胞からＲＮＡを抽出し、５’−ＲＡＣＥキットを使用することによってｃＤＮＡを増幅させ、続いて、３’縮重プライマーを使用してＰＣＲ増幅を行った。次いで、ＰＣＲ産物をｐＭＤ１８−Ｔベクターにクローニングし、形質転換し、増幅し、シーケンシングした。
【０２３６】
８種のマウスモノクローナル抗体を作製し、そのＣＤＲ配列が上記の表１に示されている。
【０２３７】
［実施例２］ヒト化抗体の作製
２．１  ＩｇＧ変換およびヒト化
マウス由来ｍＡｂからのキメラ抗体の作製：ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８およびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４およびＷＢＰ３３１２＿３．１７９．１６  ＶＨおよびＶＬ遺伝子を、適当な制限部位を含有するクローニングプライマーを用いて再増幅し、ＷｕＸｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの専売発現ベクターにクローニングして、ヒトＩｇＧ１の定常領域を有するキメラ抗体の対応するクローンを作出した。
【０２３８】
ヒト化およびヒト化Ｖ遺伝子の合成：「ベストフィット」アプローチを使用して、ＷＢＰ３３１１＿２．１６６．４８およびＷＢＰ３３１１＿２．３０６．４軽鎖および重鎖をヒト化した。軽鎖について、対応するＶ遺伝子のアミノ酸配列を、インハウスヒト生殖系列Ｖ遺伝子データベースに対してブラストした。ヒト化ＶＬ遺伝子の配列は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ定義を使用して上位ヒットにあるヒトＣＤＲ配列を、マウスＣＤＲ配列と置き換えることによって導かれた。フレームワークは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ１がＮ末端の５個のアミノ酸によって拡張された、拡張されたＣＤＲを使用して定義された。ヒト生殖系列免疫グロブリンデータベースに対してマウスフレームワークをブラストすることによって、各重鎖および軽鎖について複数のヒト化配列を作出した。種々のＦＲ組合せを作出し、結合親和性について解析し、上位３ヒットを使用して、ヒト化ＶＨ遺伝子の配列を導いた。ヒト化遺伝子を戻し翻訳し、哺乳動物発現のためにコドン最適化し、ＧｅｎｅＡｒｔ  Ｃｏｓｔｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって合成した。合成遺伝子をＩｇＧ発現ベクターに再クローニングし、発現し、精製した。２種のヒト化抗体およびその親マウス抗体のＦＲは、上記の表２に示されている。
【０２３９】
キメラおよびヒト化抗体の一過性発現および精製：上記のキメラおよびヒト化抗体をＷｕＸｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの専売発現ベクターに構築し、２９３Ｆ細胞から発現させた。対応する抗体を含有する培養上清を回収し、プロテインＡクロマトグラフィーを使用して精製した。
【０２４０】
［実施例３］ｉｎ  ｖｉｔｒｏ特性決定
３．１  ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳによる抗体結合
上記のＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳにおいて使用される抗原、抗体および細胞が表３に列挙されている。
【０２４１】
【表３】
2020534830.tif 000025
【０２４２】
ＥＬＩＳＡおよびＥＣ５０による、抗体のタンパク質との結合：ヒトＣＤ３ε、ＣＤ３δおよびＣＤ３γタンパク質を、それぞれ、９６ウェルプレートにおいてプレコーティングした。これら３種の異なるＣＤ３タンパク質細胞外ドメインに対する種々の濃度の８種のｍＡｂの結合親和性を、対応するＨＲＰ標識された二次抗体によって検出した。結合ＥＣ５０（半最大結合に達した時の試験抗体の濃度）を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア方程式：非線形回帰（曲線フィット）−ｌｏｇ（アゴニスト）対応答−可変傾斜を使用して解析した。
【０２４３】
ＥＬＩＳＡによる、抗体のヒトＣＤ３εタンパク質との特異的結合：８種のマウスｍＡｂは、ヒトＣＤ３εに対して高度に特異的な結合活性を示し、ＣＤ３γおよびＣＤ３δとの結合は伴わず、データは表５に示された。
【０２４４】
【表５】
2020534830.tif 000026
【０２４５】
ＦＡＣＳおよびＥＣ５０による抗体の細胞性結合：種々の濃度の試験ｍＡｂを、Ｊｕｒｋａｔ細胞に添加し、次いで、細胞の表面でのｍＡｂの結合活性を二次抗体−ＦＩＴＣによって検出した。陽性対照としてＯＫＴ３を使用した。染色された細胞をＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ機器およびＦｌｏｗ  Ｊｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎソフトウェアを使用することによって解析した。結合ＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア方程式：非線形回帰（曲線フィット）−ｌｏｇ（アゴニスト）対応答−可変傾斜を使用することによって算出した。
【０２４６】
Ｔ細胞表面上のヒトＣＤ３受容体に対する特異的結合：表６において、８種のｍＡｂは、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）に対して高度に特異的な結合活性を示し、ＣＤ３陰性細胞（ＭＯＴＬ−４細胞および２９３Ｆ細胞）との結合は伴わなかった。
【０２４７】
【表６】
2020534830.tif 000027
【０２４８】
３．２  ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳによる、抗体の交差種標的タンパク質結合
試験抗体の、異なる種に由来するＣＤ３に対する結合親和性を解析した。ヒト、サル、ラットおよびマウスＣＤ３参照配列の相同性が以下に示されている。
【０２４９】
【表４】
2020534830.tif 000028
【０２５０】
ＥＬＩＳＡによる抗体のカニクイザルＣＤ３εおよびマウスＣＤ３εに対する交差結合：カニクイザルＣＤ３εタンパク質およびマウスＣＤ３εを用いてプレコーティングされた９６ウェルプレートに、種々の濃度の試験抗体、陽性および陰性対照を添加した。抗体の、カニクイザルＣＤ３εタンパク質およびマウスＣＤ３εタンパク質との結合を、対応するＨＲＰ標識二次抗体（ＢＥＴＨＹＬ、Ａ９０−２３１Ｐ）によって検出した。ＥＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用することによって算出した。
【０２５１】
データは、８種のｍＡｂすべてが、カニクイザルＣＤ３εに対して強力な交差結合活性を示したが、マウスＣＤ３εとは結合しなかったことを示した。陽性対照ＯＫＴ３は、カニクイザルＣＤ３εとも、マウスＣＤ３εとも交差結合活性を示さなかった、表７。
【０２５２】
【表７】
2020534830.tif 000029
【０２５３】
ＦＡＣＳによる抗体のカニクイザルＣＤ３εとの交差結合：Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ勾配遠心分離および１００ｇ遠心分離ステップを使用することによって健常なＣｙｎｏ全血からＣｙｎｏ  ＰＢＭＣを単離し、血小板を除去した。使用の準備が整うまで、ＰＢＭＣを完全ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。種々の濃度の試験抗体をＣｙｎｏ  ＰＢＭＣに添加し、次いで、細胞の表面上の抗体の結合活性を、二次抗体−ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ、１１５−０９５−００８）によって検出した。ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩおよびＦｌｏｗＪｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎソフトウェアを使用することによって染色された細胞を解析した。結合ＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア方程式：非線形回帰（曲線フィット）を使用することによって算出した。
【０２５４】
ＦＡＣＳによる抗体のエピトープビニング：種々の濃度の試験抗体を、それぞれ、特定の量のＷ３３１１−２．３８３．４７のビオチン化抗体と混合した。次いで、９６ウェルプレートにおいてＣＤ３を発現する細胞に混合物を添加し、４℃で１時間インキュベートした。ＣＤ３を発現する細胞上の標的抗体の結合を、ＰＥがコンジュゲートした抗ビオチンＡｂを使用して検出した。サンプルをフローサイトメトリーによって試験し、ＦｌｏｗＪｏによってデータを解析した。
【０２５５】
ヒトＣＤ３εおよびカニクイザルＣＤ３εタンパク質に対する結合およびＥＬＩＳＡによるＥＣ５０算出：表８において、８種のｍＡｂは、ヒトＣＤ３εとの強い結合活性およびカニクイザルＣＤ３εタンパク質との交差結合を示し、ヒトＣＤ３εとカニクイザルＣＤ３εとの間で低ｎＭ範囲において同等のＥＣ５０を示した。
【０２５６】
【表８】
2020534830.tif 000030
【０２５７】
４．３  ヒト化抗体の交差種結合の検出
２種のヒト化ｍＡｂ、のカニクイザルＣＤ３εタンパク質結合およびＥＣ５０値：表９において、すべてのデータは、両ヒト化ｍＡｂが、カニクイザルＣＤ３εタンパク質に対するその高い結合活性を保持しており（図１を参照のこと）、両ヒト化抗体について０．０４３ｎＭのＥＣ５０値を有していることを示した。
【０２５８】
【表９】
2020534830.tif 000031
【０２５９】
ＦＡＣＳによる抗体の親和性：５×１０４個のＪｕｒｋａｔ細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、続いて、種々の濃度の精製試験リード抗体を一次抗体として４℃で１時間添加した。ヤギ抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ−ＦＩＴＣの二次抗体を４℃で３０分間添加し、次いで、ＦＩＴＣによって染色された細胞を、ＦＡＣＳによって検出した。ＫＤ値を上記の方法に従って算出した。
【０２６０】
２種のヒト化ｍＡｂをヒトＣＤ４Ｔ細胞での結合活性を試験した：表１０において、データは、両ヒト化抗体が、ＣＤ４Ｔ細胞に対して高い結合活性を保持し（図２を参照のこと）、ＷＢＰ３３１１−２．１６６．４８−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋおよびＷＢＰ３３１１−２．３０６．４−ｚ１−ｕＩｇＧ１ｋについて、それぞれ１．０１および０．４６ｎＭの低いＥＣ５０値を有し、これはそれぞれの親抗体のものよりも０．５〜１倍小さかったことを示した。
【０２６１】
【表１０】
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【０２６２】
４．５  ＦＡＣＳによる抗体の親和性およびＥＣ５０
８種のｍＡｂを、ＦＡＣＳによってそのＥＣ５０について試験し、ヒトＣＤ３を発現する細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）に対する親和性を試験した。表１２において、８種のｍＡｂのＥＣ５０は、０．５７ｎＭ〜６．９１ｎＭの範囲であり（表１１を参照のこと）、親和性は、１．３×１０−９〜９．３×１０−１０Ｍの範囲であった。
【０２６３】
【表１１】
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【０２６４】
【表１２】
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【０２６５】
４．６  ＦＡＣＳによる２種のヒト化ｍＡｂの親和性および動態ＫＤ測定
２種のヒト化ｍＡｂを、ＦＡＣＳにより、Ｊｕｒｋａｔ細胞での親和性測定について試験した。データは、図４および表１３において、両ヒト化ｍＡｂが、それぞれの親ｍＡｂと同様のＫＤ値でもって、Ｊｕｒｋａｔ細胞でその高い親和性活性を保持していることを示した。
【０２６６】
【表１３】
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【０２６７】
３．３  細胞ベースの機能アッセイ
ＦＡＣＳによる抗体の細胞内部移行：Ｊｕｒｋａｔ細胞を、９６ウェルプレートにおいて１×１０５個／ウェルで播種した。試験抗体（１μｇ／ｍＬ）を細胞に添加し、４℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、結合していない抗体を洗浄し、次いで、細胞を４℃または３７℃で３時間、５％  ＣＯ２でインキュベートした。インキュベート後、二次抗体（Ａｂｃａｍ、ａｂ９８７４２）によって細胞表面上での抗体の存在を検出した。ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩおよびＦｌｏｗＪｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎソフトウェアを使用することによって染色された細胞を解析した。内部移行率を以下のように算出した：［（ＭＦＩ０時間−ＭＦＩ３時間）／ＭＦＩ０時間］＊１００％。
【０２６８】
４．７  細胞内部移行率測定
ＦＡＣＳによってＪｕｒｋａｔ細胞を使用して内部移行率を試験した。データは、図５において、８種のｍＡｂすべてが、３時間の研究期間後に８６〜９４％の範囲の抗体が内部移行するという高い内部移行率を示すことを示したが、ＯＫＴ３は約７２％の内部移行率を示した。
【０２６９】
細胞内サイトカイン染色アッセイを用いる抗体のＴ細胞活性化：細胞内サイトカイン染色は、細胞表面マーカーと組み合わせて免疫細胞によるサイトカイン産生を検出できるフローサイトメトリーベースのアッセイである。ヒトＰＢＭＣを健常ドナーから単離した。手短には、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ勾配遠心分離を使用し、その後の１００ｇ遠心分離ステップにより血小板を除去した。ＰＢＭＣを、完全ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。ＰＢＭＣをＧｏｌｇｉ  Ｓｔｏｐを補給した細胞培養培地に再懸濁し、２×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートにおいて分配した。種々の濃度の試験抗体、陽性および陰性対照を添加し、次いで、細胞とともに３７℃で４．５時間インキュベートした。インキュベート後、細胞を１％  ＢＳＡで２回洗浄し、次いで、抗ヒトＣＤ４−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤ、５５０６２８）および抗ヒトＣＤ８−ＰＥ抗体（ＢＤ、５６０９５９）を使用してその表面マーカーについて染色し、続いて、Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ細胞染色キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、８８−８９９９）を使用して固定し、透過処理した。固定／透過処理後、抗ヒトＴＮＦ−ＡＰＣ抗体（ＢＤ、５５４５１４）および抗ヒトＩＦＮ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、４５−７３１９−４２）を使用することによってサイトカイン産生について細胞を検出した。ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩおよびＦｌｏｗＪｏ  Ｖｅｒｓｉｏｎソフトウェアを使用することによって、染色された細胞を解析した。
【０２７０】
Ｔ細胞活性化：  細胞内サイトカイン染色法によってヒトＰＢＭＣを使用してＴ細胞活性化を評価し、ＴＮＦαおよびＩＮＦγのサイトカインをモニタリングした。データは、８種の試験ｍＡｂの中でも、２．３０６．４および２．８４４．８が、有意なＴＮＦαおよびＩＮＦγのサイトカインの放出がモニタリングされなかったので、有意なＴ細胞活性化事象を示さなかったが、ＯＫＴ３と比較してより弱いＴ細胞活性化を示したクローン２．３８３．４７を除いて、その他の６種の試験ｍＡｂはすべて、ＯＫＴ３のものと同様の程度までＴ細胞活性化を示すことを示した、データは、図６に示されている。
【０２７１】
２種のヒト化ｍＡｂのヒトＴ細胞活性化：２種のヒト化ｍＡｂを、細胞内サイトカイン染色法によってヒトＰＢＭＣでのＴ細胞活性化活性を試験し、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのサイトカインをモニタリングした。データは、両ヒト化抗体が、ＣＤ８＋Ｔ細胞でＯＫＴ３陽性対照に対して同様の程度のＴ細胞活性化を示すが、両ヒト化ｍＡｂが、ＣＤ４＋Ｔ細胞では、ＯＫＴ３に対してより低い程度の活性化を示すことを示した。クローン２．３０６．４の親のマウス抗体は、Ｔ細胞活性化がないことを反復して示したことも留意される。データは、図７に示された。
【０２７２】
３．４  ＦＡＣＳによる抗体のエピトープビニング
エピトープビニング：図８において、８種のｍＡｂのうち７種が、クローン２．３８３．４７に対してビニングされ、結果は、８種のｍＡｂすべてが同一エピトープビンを共有することを示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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