(57)【要約】  本発明は、ＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチドおよびタンパク質ならびにそれらによる組成物に関する。本発明は、炎症、特に体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害の治療ならびに／あるいは予防にも関する。本発明は、飽満を誘導する、満腹を延長する、食事量を減少させる、摂食量を減少させる、体重増加を制御する、および体重減少を刺激する方法にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
負荷電残基と２つの連続するＡｒｇ残基およびＴｒｐ残基とを含むＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含む、少なくとも１５アミノ酸のポリペプチドまたはタンパク質であって、完全長のＣｌｐＢタンパク質ではない、ポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項２】
配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項３】
配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項４】
配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項５】
配列ＧＫＰＶと少なくとも７５％の配列相同性を有する配列をさらに含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項６】
配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む、組成物。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質と、少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と、を含む医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む、医薬。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む、栄養補助食品。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む、食用組成物。
【請求項１２】
必要とする対象の肥満、体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害の治療あるいは予防における使用のための、請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質、請求項８に記載の医薬組成物、請求項９に記載の医薬。
【請求項１３】
対象の体重を減少させるための、請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質、請求項１０に記載の栄養補助食品あるいは請求項１１に記載の食用組成物の使用。
【請求項１４】
前記対象が肥満ではない、請求項１２または１３に記載の使用のためのポリペプチドまたはタンパク質、医薬組成物、医薬、栄養補助食品あるいは食用組成物。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチドまたはタンパク質、請求項７に記載の組成物、請求項８に記載の医薬組成物、請求項９に記載の医薬、請求項１０に記載の栄養補助食品あるいは請求項１１に記載の食用組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症、例えば肥満、体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害などの治療あるいは予防に関する。本発明は、飽満を誘導する、満腹を延長する、摂食量を減少させる、体重増加を制御する、および体重減少を刺激する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、多数の共存症を伴い、極めて治療可能性に乏しい慢性病態の１つである。肥満および体重過多は通常、摂食量の増加およびエネルギー消費量の減少を特徴とし、エネルギーバランスを調節するペプチド作動性システムの役割が変化したことを示唆するものである。実際、食欲および摂食行動の調節には、腸の飢餓ペプチドホルモンと満腹ペプチドホルモンの間の相互作用に加え、食欲促進神経ペプチドと食欲抑制神経ペプチドを含む脳神経回路が関与している（Ｓｃｈｗａｒｔｚら，２０００．Ｎａｔｕｒｅ．４０４（６７７８）：６６１−７１）。
【０００３】
現在の摂食制御に関するモデルでは、腸由来の飢餓ホルモンと満腹ホルモンが複数の脳回路にシグナルを伝達し、摂食の恒常性に関する側面と快不快に関する側面を調節することが示されている（Ｂｅｒｔｈｏｕｄ  Ｈ．−Ｒ．，２０１１．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２１（６）：８８８−８９６；Ｍｕｒｐｈｙら，２００６．Ｎａｔｕｒｅ．４４４（７１２１）：８５４−８５９）。そのなかでも重要なのが、視床下部弓状核（ＡＲＣ）に由来し、室傍核（ＰＶＮ）で中継されるプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ニューロンおよび神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）／アグーチ関連タンパク質（ＡｇＲＰ）ニューロンをそれぞれ含む食欲抑制経路および食欲促進経路である（Ａｔａｓｏｙら，２０１２．Ｎａｔｕｒｅ．４８８（７４１０）：１７２−１７７；Ｇａｒｆｉｅｌｄら，２０１５．Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１８（６）：８６３−７１；Ｓｈｉら，２０１３．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．１７（２）：２３６−２４８）。
【０００４】
前駆体のプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）に由来し４型ＭＣ受容体（ＭＣ４Ｒ）に作用するαメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）を含めたメラノコルチンペプチドからなる中枢メラノコルチン（ＭＣ）系はエネルギーバランスの調節に決定的に関与している（Ｃｏｎｅ，２００６．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．２７（７）：７３６−４９）。実際、ヒトおよび遺伝子改変げっ歯類ともに、ＰＯＭＣ発現およびＭＣ４Ｒシグナル伝達がともに欠損すると過食症および肥満を引き起こす（Ｈｕｓｚａｒら，１９９７．Ｃｅｌｌ．８８（１）：１３１−４１；Ｋｒｕｄｅら，１９９８．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１９（２）：１５５−７；Ｆａｒｏｏｑｉら，２００３．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８（１２）：１０８５−９５）。したがって、中枢ＭＣ４Ｒの選択的刺激が過食症および肥満の治療に極めて魅力的な標的であるように思われ、これまでにα−ＭＳＨペプチド類似体、例えばＰＯＭＣ欠損時の補充療法としての、またプラダー・ウィリー症候群の過食症の治療のためのセトメラノチドなどが開発され、臨床試験が実施されてきた（Ｃｈｅｎら，２０１５．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．１００（４）：１６３９−４５；Ｋｕｅｈｎｅｎら，２０１６．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７５（３）：２４０−６）。しかし、高親和性α−ＭＳＨ様薬物が脳内に侵入することにより、血圧上昇などの望ましくない副作用のリスクが発生する。
【０００５】
最近、腸内共生大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（Ｅ．ｃｏｌｉ）カゼイン分解性プロテアーゼＢ（ＣｌｐＢ）タンパク質がα−ＭＳＨの立体配座模倣体であることが明らかにされており、特定の細菌タンパク質を新たなタイプのペプチド様薬物として使用できる可能性が示唆されている（Ｔｅｎｎｏｕｎｅら，２０１４．Ｔｒａｎｓｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．４：ｅ４５８）。ＣｌｐＢタンパク質は分子量が９５ｋＤａを上回り、このことがいくつかの難題（例えば、生産、安定性など）を生み出している。
【０００６】
腸の腸内分泌細胞にあるＭＣ４Ｒが活性化されると、満腹ホルモンのグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）およびペプチドＹＹ（ＰＹＹ）の放出が刺激されることが明らかにされている（Ｐａｎａｒｏら，２０１４．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２０（６）：１０１８−１０２９）。
【０００７】
最近の研究で、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＣｌｐＢ配列のアミノ酸残基５３４〜５４８に相当するＣｌｐＢフラグメントが、ＭＣ３ＲおよびＭＣ５Ｒに対して部分活性を示すがＭＣ４Ｒには活性を示さないマイクロモルレベルの完全ＭＣ１Ｒアゴニストであることが明らかにされている（Ｅｒｉｃｓｏｎら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１５，２５：５３０６−５３０８）。しかし、α−ＭＳＨ様エピトープを含む完全ＣｌｐＢフラグメントまたはそれより大きいフラグメントのＭＣＲに対する活性は、Ｅｒｉｃｓｏｎらが試験した短い改変フラグメントとは異なるものであり得る。
【０００８】
ホルモンであるα−ＭＳＨは、ＭＣ１ＲおよびＭＣ３Ｒなどのメラノコルチン受容体を発現する免疫系の細胞および末梢非免疫細胞型に対して強力な抗炎症作用および保護作用を示すこともわかっている（Ｂｒｚｏｓｋａら，２００８．Ｅｎｄｒｏｃｒ．Ｒｅｖ．２９（５）：５８１−６０２）。さらに、最近の研究で、α−ＭＳＨが乾癬、アレルギー性鼻炎、変形性関節症および神経炎症性疾患の治療に関して興味深い標的となることが明らかにされている（Ａｕｒｉｅｍｍａら，２０１２．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１３２（７）：１８１４−２４；Ｋｌｅｉｎｅｒら，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ．４６（８）：１０６６−７４；Ｂｏｈｍら，２０１６．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１６：８９−９９；Ｍｙｋｉｃｋｉら，２０１６．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．８（３６２）：３６２ｒａ１４６）。
【０００９】
したがって、α−ＭＳＨの生物活性、特にメラノコルチン受容体との結合を保持する新たなポリペプチドまたはタンパク質を特定することが依然として必要とされている。
【００１０】
本発明者らは驚くべきことに、α−ＭＳＨエピトープと配列相同性を有するＣｌｐＢフラグメントが腸粘膜細胞に対して直接作用してＰＹＹの分泌を刺激することを明らかにした。
【００１１】
したがって、本発明は、ＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むポリペプチドおよびタンパク質ならびにその使用に関する。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、負荷電残基と２つの連続するＡｒｇ残基およびＴｒｐ残基とを含むＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含む、少なくとも１５アミノ酸のポリペプチドまたはタンパク質であって、完全長のＣｌｐＢタンパク質ではない、ポリペプチドまたはタンパク質に関する。
【００１３】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列ＧＫＰＶと少なくとも７５％の配列相同性を有する配列をさらに含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
本発明はまた、本明細書に記載されるポリペプチドまたはタンパク質を含む、組成物にも関する。
【００１６】
本発明はさらに、本明細書に記載されるポリペプチドまたはタンパク質と、少なくとも１種の薬学的に許容される添加剤と、を含む医薬組成物に関する。
【００１７】
本発明の別の目的は、本発明によるポリペプチドまたはタンパク質を含む、医薬である。
【００１８】
本発明はまた、本明細書に記載されるポリペプチドまたはタンパク質を含む、栄養補助食品にも関する。本発明はさらに、本明細書に記載されるポリペプチドまたはタンパク質を含む、食用組成物に関する。
【００１９】
本発明はさらに、必要とする対象の肥満、体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害の治療あるいは予防に使用するための、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、医薬組成物または医薬に関する。
【００２０】
本発明の別の目的は、対象の体重を減少させるための、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、栄養補助食品または食用組成物の使用である。一実施形態では、対象は肥満ではない。
【００２１】
本発明はさらに、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、組成物、医薬組成物、医薬、栄養補助食品または食用組成物を含む、キットに関する。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（定義）
本発明では、以下の用語は以下の意味を有する：
【００２３】
数字の前にある「約」は、前記数字の値のプラスマイナス１０％を意味する。
【００２４】
本明細書で使用される「アミノ酸」は、当該技術分野で周知のその完全名、３文字コードまたは１文字コードによって表される。ペプチド中のアミノ酸残基は以下の通りに略記される：フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦであり；ロイシンはＬｅｕまたはＬであり；イソロイシンはＩｌｅまたはＩであり；メチオニンはＭｅｔまたはＭであり；バリンはＶａｌまたはＶであり；セリンはＳｅｒまたはＳであり；プロリンはＰｒｏまたはＰであり；トレオニンはＴｈｒまたはＴであり；アラニンはＡｌａまたはＡであり；チロシンはＴｙｒまたはＹであり；ヒスチジンはＨｉｓまたはＨであり；グルタミンはＧｌｎまたはＱであり；アスパラギンはＡｓｎまたはＮであり；リジンはＬｙｓまたはＫであり；アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤであり；グルタミン酸はＧｌｕまたはＥであり；システインはＣｙｓまたはＣであり；トリプトファンはＴｒｐまたはＷであり；アルギニンはＡｒｇまたはＲであり；グリシンはＧｌｙまたはＧである。
【００２５】
「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸と合成アミノ酸の両方およびＤアミノ酸とＬアミノ酸の両方を包含する。「標準アミノ酸」または「天然のアミノ酸」は、天然のペプチドに通常みられる２０種類の標準Ｌ−アミノ酸のうちのいずれかを意味する。「非標準アミノ酸残基」は、合成により調製されたものであるか、天然源に由来するものであるかに関係なく、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を意味する。例えば、合成しやすくするためトリプトファンをナフトリルアラニン（ｎａｐｈｔｌｙｌａｌａｎｉｎｅ）で置換することができる。置換することが可能なその他の合成アミノ酸としては、特に限定されないが、Ｌ−ヒドロキシプロピル、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニル、α−アミノ酸、例えばＬ−α−ヒドロキシリシルおよびＤ−α−メチルアラニル、Ｌ−α−メチルアラニルなど、β−アミノ酸およびイソキノリルが挙げられる。
【００２６】
「アミノ酸」という用語は、特に限定されないが、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）および置換体を含めた化学修飾アミノ酸も包含する。本発明のポリペプチドの範囲内に含まれるアミノ酸は、特にそのカルボキシ末端またはアミノ末端を、その活性に悪影響を及ぼさずにポリペプチドの循環血中半減期を変化させることができる他の化学基によるメチル化、アミド化、アセチル化または置換によって修飾することができる。さらに、本発明のポリペプチド内にジスルフィド結合が存在していても、存在していなくてもよい。
【００２７】
「抗体」および「免疫グロブリン」（「Ｉｇ」）は互換的なものであり、所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）および抗体フラグメントを包含する。
【００２８】
「むちゃ食い」、「過食」、「むちゃ食い障害」および「過食障害」は、制御不能な摂食エピソードからなるが、それに続くパージングエピソード（例えば、嘔吐）を伴わない摂食障害を指す。「むちゃ食い者」は、むちゃ食い尺度チェックリスト（Ｇｏｒｍａｌｌｙら，１９８２．Ａｄｄｉｃｔ  Ｂｅｈａｖ．７（１）：４７−５５）またはそれと同等の診断尺度（例えば、専門家による評価）に基づきむちゃ食いまたは過食が認められる者として特定される。むちゃ食いまたは過食の重症度は、個々の事象の重症度によって、かつ／またはそのような事象の頻度によって測定される。
【００２９】
「立体配座模倣体」は、別のタンパク質と少なくとも部分的に同じ立体配座を共有するポリペプチドまたはタンパク質を指す。一実施形態では、「α−ＭＳＨペプチドの立体配座模倣体」は、α−ＭＳＨペプチド（配列番号２０）と少なくとも部分的に同じ立体配座を共有するポリペプチドまたはタンパク質を意味する。特定の実施形態では、α−ＭＳＨペプチドの立体配座模倣体は、連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基、配列ＧＫＰＶと少なくとも７５％の配列相同性を有する配列および／または連続するＡｒｇとＴｒｐの上流にある負荷電残基を有する。
【００３０】
「保存的置換」とは、あるアミノ酸を、それと類似した特性を有するため、ペプチド化学の当業者にポリペプチドの二次構造および疎水・親水性が実質的に変化しないことが予想される別のアミノ酸で置換する置換のことである。したがって、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、その疎水性、親水性、電荷、大きさなどに基づくものである。上記の様々な特性を考慮に入れた例示的置換は当業者に周知であり、アルギニンとリジン；グルタミン酸とアスパラギン酸；セリンとトレオニン；グルタミンとアスパラギン；およびバリンとロイシンとイソロイシンがこれに含まれる。さらに、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の類似性に基づいてアミノ酸置換を実施し得る。例えば、負荷電アミノ酸としては、アスパラギン酸とグルタミン酸が挙げられ；正荷電アミノ酸としては、ヒスチジンとリジンとアルギニンが挙げられ；親水性値が同程度の非荷電極性頭部基を有するアミノ酸としては、ロイシンとイソロイシンとバリン；グリシンとアラニン；アスパラギンとグルタミン；およびセリンとトレオニンとフェニルアラニンとチロシンが挙げられる。保存的変化を示し得るその他のアミノ酸のグループとしては、
（１）Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（２）Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ；
（３）Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｐｈｅ；
（４）Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ；および
（５）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ
が挙げられる。
【００３１】
「保存的アミノ酸置換」という用語はさらに、以下の５つのグループ：
（ｉ）非極性の、またはわずかに極性のある小さい脂肪族残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
（ｉｉ）極性負荷電残基およびそのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；
（ｉｉｉ）極性正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；
（ｉｖ）大きい脂肪族非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；
（ｖ）大きい芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
のうちの１つのグループ内でのアミノ酸交換として定義され得る。
【００３２】
「エピトープ」は、抗体が結合する１つまたは複数のタンパク質上にある特定のアミノ酸配置を指す。エピトープは多くの場合、アミノ酸または糖側鎖などの化学的に活性な表面分子集団からなり、特定の三次元構造特性および特定の電荷特性を有する。エピトープは、直線状であり、かつ／または立体配座的なもの、すなわち、抗原の様々な領域に必ずしも連続するとは限らない２つ以上のアミノ酸配列を含むものであり得る。
【００３３】
「フラグメント」は、タンパク質、例えばＣｌｐＢタンパク質の一部分または領域であって、インタクトのタンパク質または完全なタンパク質、例えばＣｌｐＢタンパク質より少ないアミノ酸残基を含むものを指す。「フラグメント」という用語はさらに、例えば、アミノ酸配列、例えば配列番号１のアミノ酸配列の少なくとも約５個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、３０個のアミノ酸、４０個のアミノ酸、５０個のアミノ酸、７５個のアミノ酸、１００個のアミノ酸、１５０個のアミノ酸、２００個のアミノ酸、２５０個のアミノ酸、３００個のアミノ酸、４００個のアミノ酸、５００個のアミノ酸、６００個のアミノ酸、７００個のアミノ酸、８００個のアミノ酸またはそれ以上の部分であって、少なくとも１つのプロテアーゼによるタンパク質分解切断によって天然のアミノ酸配列から切断したもの、または当業者に公知の化学的方法によって、もしくは組換えＤＮＡ技術を用いて（例えば、天然のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の一部分から発現させて）合成した天然のアミノ酸配列の一部分であるものを指す。「フラグメント」は、特定のアミノ酸配列、例えば配列番号１のアミノ酸配列の一部分、例えば、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％を指すこともある。
【００３４】
「同一性」または「同一の」は、２つ以上のアミノ酸配列の配列間の関係で使用される場合、一続きの２つ以上のアミノ酸残基の間のマッチ数によって求められるアミノ酸配列間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により処理したギャップアライメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列の小さい方の間の同一マッチのパーセントを測定するものである。２つ以上の配列の同一性を比較する方法は当該技術分野で周知である。このような方法としては、特に限定されないが、Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．Ｌｅｓｋ，Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｓｏｕｒｃｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８）；Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｗ．Ｓｍｉｔｈ，Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９３）；Ｈｕｇｈ  Ｇ．ＧｒｉｆｆｉｎおよびＡｎｎｅｔｔｅ  Ｍ．Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４）；Ｇｕｎｎａｒ  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｒｅａｓｕｒｅ  Ｔｒｏｖｅ  ｏｒ  Ｔｒｉｖｉａｌ  Ｐｕｒｓｕｉｔ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７）；Ｍｉｃｈａｅｌ  ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＪｏｈｎ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）；ならびにＣａｒｉｌｌｏら，１９８８．ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．４８（５）：１０７３−１０８２に記載されている方法が挙げられる。同一性を求めるのに好ましい方法は、被験列間の最大マッチが得られるよう設計されたものである。同一性を求める方法については、公開されているコンピュータプログラムに記載されている。コンピュータプログラムにより２配列間の同一性を求める方法としては、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，１９８４．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２（１  Ｐｔ  １）：３８７−３９５；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、ウィスコンシン大学バイオテクノロジーセンター、マディソン、ウィスコンシン州）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＴＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０）が挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは米国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）およびその他の入手源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌら，ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨベセスダ、メリーランド州２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５（３）：４０３−４１０）が公開している。ニードルマン・ブンシュグローバルアライメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  Ｓ．Ｂ．およびＷｕｎｓｃｈ  Ｃ．Ｄ．，���９７０．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）を用いて、２つの配列の全長を考慮に入れたときのその最適アライメント（ギャップを含む）を明らかにする「ｎｅｅｄｌｅ」プログラムを用いるのが好ましい場合もある。ｎｅｅｄｌｅプログラムは、例えば、ワールドワイドウェブサイトｅｂｉ．ａｃ．ｕｋで入手可能である。本発明による同一性の割合は、「Ｇａｐ  Ｏｐｅｎ」パラメータが１０．０であり、「Ｇａｐ  Ｅｘｔｅｎｄ」パラメータが０．５であり、Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックスを用いるＥＭＢＯＳＳ：ｎｅｅｄｌｅ（グローバル）プログラムを用いて算出するのが好ましい。よく知られたスミス・ウォーターマンアルゴリズムを用いて同一性を求めてもよい。
【００３５】
「肥満」は、対象のＢＭＩが好ましくは３０を上回る医学的状態を指す。「ＢＭＩ」または「体格指数」は、対象の体重を対象の身長の２乗で除したものと定義される。医学で広く用いられている公式により測定単位ｋｇ／ｍ２が得られる。「中程度肥満」の対象は、ＢＭＩが３０〜３５の対象を指す。「非肥満」の対象とは、ＢＭＩが３０未満の対象のことである。したがって、「非肥満」の対象は、正常体重または体重過多であり得る。「正常体重」は、本明細書ではＢＭＩが１８．５〜２５となる体重を指す。
【００３６】
「体重過多」は、ＢＭＩが２５〜３０となる体重を指す。いくつかの実施形態では、対象は、健康な体重過多または合併症のない体重過多の対象である。「健康な体重過多」または「合併症のない体重過多」の対象は、本明細書では、対象の体重と直接関係のある疾患も病態も一切みられない体重過多の対象を意味する。
【００３７】
「薬学的に」または「薬学的に許容される」は、必要に応じて対象、特にヒトに投与したとき、有害反応もアレルギー反応もその他の望ましく反応も引き起こすことのない分子的実体および組成物を指す。薬学的に許容される担体または添加剤は、任意のタイプの無毒性の固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料または製剤助剤を指す。本発明の組成物に使用し得る薬学的に許容される添加剤としては、特に限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウムなど、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリエチレングリコール、ポリアクリラート、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられる。本発明の医薬組成物では、以下の有効成分を単独で、または別の有効成分と組み合わせて、従来の医薬担体との混合物として単位投与形態で動物およびヒトに投与することができる。適切な単位投与形態は、経口経路形態、例えば錠剤、ゲルカプセル剤、散剤、顆粒剤および経口懸濁剤または液剤など、舌下および頬側投与形態、エアゾール剤、埋植物、皮下、経皮、局所、腹腔内、筋肉内、静脈内、皮下、髄腔内および鼻腔内投与形態ならびに直腸内投与形態を含む。好ましくは、医薬組成物は、注射可能な製剤に薬学的に許容される媒体を含有する。これらは具体的には、等張で無菌の生理食塩水溶液（リン酸一ナトリウムもしくはリン酸二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムもしくは塩化マグネシウムなど、またはこのような塩の混合物）、または場合に応じて滅菌した水もしくは生理食塩水を添加して注射用液剤を構成することができる乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物であり得る。注射可能な用途に適した医薬形態としては、無菌水溶液剤または分散液剤；ゴマ油、ラッカセイ油または水性プロピレングリコールを含む製剤；および無菌注射用液剤または分散液剤を即時調製する無菌粉末が挙げられる。いずれの場合も、形態は無菌でなければならず、注射針を容易に通過する性質がみられる程度に流動性があるものでなければならない。それは、製造および保管の条件下で安定なものでなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されたものでなければならない。本発明の化合物を遊離塩基または薬理学的に許容される塩として液剤は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合した水で調製することができる。分散液剤もグリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびその混合物ならびに油で調製することができる。通常の保管および使用の条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を防止する保存剤を含有する。有効成分は中性形態または塩形態の組成物に製剤化することができる。薬学的に許容される塩としては、（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）酸付加塩および無機酸、例えば塩酸もしくはリン酸など、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と形成される塩が挙げられる。遊離カルボキシル基と形成される塩は、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄など、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することもできる。担体は、例えば，水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、その適切な混合物および植物油を含有する溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液剤の場合は必要とされる粒子径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば糖または塩化ナトリウムを含むのが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物に使用することにより、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。無菌注射用液剤は、必要量の活性なポリペプチドを、必要に応じて上に列挙した様々な他の成分と適切な溶媒中で組み合わせた後、ろ過滅菌することにより調製する。分散液剤は一般に、様々な滅菌有効成分を、基礎となる分散媒と、上に列挙した他の成分のうち必要なものとを含有する無菌媒体に組み込むことにより調製する。無菌注射用液剤を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法として、予め滅菌ろ過した有効成分の溶液から有効成分と任意の追加の所望成分の粉末が得られる真空乾燥技術および凍結乾燥技術がある。製剤化した後、液剤を投与製剤と適合性のある方法で、治療効果のある量で投与する。製剤は、上記の注射用液剤のタイプなどの様々な剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセル剤などを用いてもよい。水溶液での非経口投与には、例えば、溶液を必要に応じて適切に緩衝し、液体希釈剤を最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にしておくべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に特に適したものである。これと関連して、用いることができる無菌水性媒体については、本開示を踏まえれば当業者にはわかるであろう。例えば、１用量を等張ＮａＣｌ溶液１ｍＬに溶かし、皮下注入液１０００ｍＬに加えるか、または考えられる注入部位に注射し得る。治療する対象の状態によっては、用量にある程度の変化が必然的に生じるであろう。いずれにしても、投与を担当する者が個々の対象に適した用量を決定することになる。
【００３８】
「ポリペプチド」は、その従来の意味で、すなわち、１００個未満の一続きのアミノ酸として使用される。ポリペプチドは通常、単量体の実体を指す。「タンパク質」という用語は、１００個を超える一続きのアミノ酸および／または多量体の実体を指す。本発明のタンパク質は特定の長さの生成物に限定されない。この用語は、天然のものも非天然のものも含め、タンパク質の発現後修飾、例えばグリコシル化、アセチル化、リン酸化などおよび当該技術分野で公知の他の修飾を指すものでも除外するものでもない。タンパク質はタンパク質全体またはその配列であり得る。「単離タンパク質」とは、その天然環境の構成成分から同定および分離され、かつ／または回収されたタンパク質のことである。好ましい実施形態では、単離タンパク質を、
（１）ローリー方法による測定で８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％を超えるまで、最も好ましくは９６重量％、９７重量％、９８重量％または９９重量％を超えるまで、
（２）スピニングカップ配列決定装置の使用により少なくとも１５残基のＮ末端または内部のアミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、あるいは
（３）還元性条件下または非還元性条件下でクーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一になるまで、
精製する。単離タンパク質は、タンパク質の天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないことから、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕのタンパク質を包含する。しかし、少なくとも１つの精製段階により単離タンパク質を調製するのが通常である。
【００３９】
「ポリペプチド誘導体」または「タンパク質誘導体」は、アミノ基（−−ＮＨ−−）、より具体的にはペプチド結合を有する化合物を指す。ポリペプチドおよびタンパク質を置換アミドと考えることができる。アミド基と同じように、ペプチド結合は高度の共鳴安定化を示す。ペプチド結合内のＣ−−Ｎ単結合は通常、二重結合性が約４０パーセントであり、Ｃ＝Ｏ二重結合は単結合性が約４０パーセントである。「保護基」とは、保護されていない官能基に関わる望ましくない反応（タンパク質分解など）を防止する基のことである。アミノ保護基の具体例としては、ホルミル；トリフルオロアセチル；ベンジルオキシカルボニル；（オルト−またはパラ−）クロロベンジルオキシカルボニルおよび（オルト−またはパラ−）ブロモベンジルオキシカルボニルなどの置換ベンジルオキシカルボニル；ならびにｔ−ブトキシカルボニルおよびｔ−アミロキシカルボニルなどの脂肪族オキシカルボニルが挙げられる。アミノ酸のカルボキシル基は、エステル基への変換により保護することができる。エステル基としては、ベンジルエステル、置換ベンジルエステル、例えばメトキシベンジルエステルなど；アルキルエステル、例えばシクロヘキシルエステル、シクロヘプチルエステルまたはｔ−ブチルエステルなどが挙げられる。グアニジノ部分は保護基を必要としないものの、ニトロ；またはアリールスルホニル、例えばトシル、メトキシベンゼンスルホニルまたはメシチレンスルホニルなどによって保護してもよい。イミダゾールの保護基としては、トシル、ベンジルおよびジニトロフェニルが挙げられる。トリプトファンのインドール基は、ホルミルによって保護しても、保護しなくてもよい。
【００４０】
少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質の修飾は、特にそのｉｎ  ｖｉｖｏの寿命を改善することを目的とする。修飾の１つのタイプに、ポリペプチドまたはタンパク質のＮ末端またはＣ末端へのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の付加がある。ＰＥＧは、ポリペプチドの理想的な担体になるための多数の特性、例えば高い水溶性、溶液中での高い移動性および低い免疫原性などを有することが当業者に知られている。この修飾により、ポリペプチドおよびタンパク質がエキソペプチダーゼから保護され、したがって、その全体的なｉｎ  ｖｉｖｏ安定性も増大する。
【００４１】
エンドペプチダーゼまたはエキソペプチダーゼによるポリペプチドおよびタンパク質の分解を防ぐのに用いられるその他の修飾としては、アセチル化またはグリコシル化などのＮ末端修飾、アミド化などのＣ末端修飾およびポリペプチドまたはタンパク質内の特定部位での非天然アミノ酸（β−アミノおよびα−トリフルオロメチルアミノ酸）の使用が挙げられる。
【００４２】
ポリペプチドおよびタンパク質の分子の大きさを増大させるまた別の方法として、ポリペプチドとヒト免疫グロブリン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＧを含む）のＦｃドメインとの遺伝子融合またはポリペプチドとアルブミンとの融合がある。
【００４３】
「満腹」は、個体がその欲求が満たされている、または最小限に抑えられていると感じる実質的にホメオスタシスの状態を指す。多数の生理学的因子が個体の満腹に影響を及ぼすと考えられている。例えば、味覚、すなわち味、嗅覚、すなわち匂いおよび胃部膨満感はいずれも、個体が「満腹である」と感じるかどうかに寄与すると思われる。より具体的には、「満腹」はそれ以上食べることが抑えられた状態であり、食間の時間および次の食事で摂取する食事の量を決定する。「満腹感の増大」などは、対照状況に比して満腹感が強く、かつ／または持続するという意味を有する。
【００４４】
「飽満」は、食事中に食べることを停止する状態を指し、この状態は通常、食事の摂取を開始してから一定時間（例えば、２０〜３０分）以内に起こる／観察される。したがって、本明細書で「飽満の誘導」などと言う場合、それは常に、対象が食事中に食事の摂取を止める傾向が生じることという意味を有する。飽満に対する効果は、食事停止の時点、すなわち、食事開始から食事停止までに経過した時間をスコア化することにより判定することができる。食事停止時点での摂取カロリー量が対照より有意に少ない場合、例えば少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％またはそれ以上少ない場合などに、飽満効果が認められたことになる。それより長い期間（１週間、２週間、３週間、４週間、５週間またはそれ以上など）にわたって、体重減少または体重変化を対照食と比較してスコア化することもできる。一定量の被験組成物（例えば、１日１回、１日２回またはそれ以上）投与する対象の体重は、対照対象より有意に制御される（減少する、または増加が少ない）のが好ましい。本明細書で使用される「対照対象」は、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤およびワクチンのいずれも投与していない対象を指す。
【００４５】
「対象」は、温血動物、好ましくはヒト、ペットまたは家畜を指す。本明細書で使用される「ペット」および「家畜」という用語は、特に限定されないが、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマおよび家禽を包含する。いくつかの実施形態では、対象は雄または雌の対象である。いくつかの実施形態では、対象は成体（例えば、［ヒトの年齢で］１８歳超の対象または生殖能力獲得後の対象）である。別の実施形態では、対象は子供（例えば、［ヒトの年齢で］１８歳未満の対象または生殖能力獲得前の対象）である。いくつかの実施形態では、対象は「患者」、すなわち、医療を受けるのを待っている、もしくは医療を受けている対象、または本発明の方法による医学的処置などの医学的処置の対象であった／対象である／対象となる予定である対象、または疾患の発症をモニターしている対象であってよい。
【００４６】
「徐放」は、治療活性物質が、（薬剤の毒性レベル未満にとどまっている）血中レベルが長時間（例えば、２４時間以上、それにより、１日投与量の単回投与製剤となる）にわたって治療上有益なレベルに維持され得るように、制御された速度で組成物から放出され得ることを表す。
【００４７】
「治療有効量」は、
・少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質；または
・少なくとも本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはそのタンパク質をコードするポリヌクレオチド；または
・少なくとも本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質をコードするベクター；
の量であって、対象に重大な負の副作用も有害な副作用も引き起こさずに有益な効果（例えば、満腹の刺激、飽満の延長、摂食量の減少、体重増加の制御、特に減少、体重減少の刺激および／または除脂肪量に対する脂肪量の比の減少）を得るのに十分な量を指す。本発明においては、対象に投与するポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドまたはベクターの量は、個体の特徴、例えば全般的健康状態、年齢、性別、体重などによって決まる。当業者であれば、これらの因子およびその他の因子に応じて適切な用量を決定することが可能であろう。
【００４８】
「治療すること」、「治療」または「緩和」は、治療的治療および予防手段の両方を指し、ここでは、その目的は標的とする病態または障害を予防する、または遅らせる（軽減する）ことである。治療を必要とする者としては、既に障害を有する者および障害を有する傾向がある者または障害を予防するべき者が挙げられる。治療量の本発明による薬剤を投与した後、対象に観察可能かつ／または測定可能な飽満、満腹の延長、摂食量の減少、体重増加の制御、体重減少の刺激および／または除脂肪量に対する脂肪量の比の減少がみられる場合、その対象または哺乳動物は標的とする病態または障害が良好に「治療された」ことになる。病態または障害の良好な治療および改善を評価するためのこれらのパラメータは、医師がよく知る日常的な方法によって容易に測定できるものである。
【００４９】
「バリアント」および「変異体」は互換可能な用語であり、１つまたは複数の置換、欠失、付加および／または挿入がある点で、本明細書に具体的に開示されるポリペプチドまたはタンパク質とは通常異なるポリペプチドまたはタンパク質を指す。このようなバリアントは、天然に存在するものであっても、例えば、ポリペプチドまたはタンパク質の配列を修飾し、本明細書に記載されるポリペプチドもしくはタンパク質の１つもしくは複数の生物活性を評価し、かつ／または多数ある当該技術分野で周知の技術のうちのいずれかを用いることによって合成により作製したものであってもよい。ポリペプチドまたはタンパク質の構造に修飾を施し、それでもなお所望の特徴を有するバリアントまたは誘導体のポリペプチドまたはタンパク質をコードする機能的分子を得ることができる。
【００５０】
ポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列を変化させて、同等の、または場合によっては改善された本発明のポリペプチドまたはタンパク質のバリアントまたは一部分を作製することが望まれる場合、当業者は通常、コードＤＮＡ配列のコドンのうち１つまたは複数のものを変化させる。例えば、野生型タンパク質、例えばＣｌｐＢタンパク質と比較してそれほど機能を失わせずに、タンパク質構造内の特定のアミノ酸を他のアミノ酸で置換し得る。
【００５１】
ポリペプチド配列またはタンパク質配列および当然のことながらその基礎となるＤＮＡコード配列に特定のアミノ酸配列置換、欠失、付加および／または挿入を施し、それにより様々な特性を有するポリペプチドまたはタンパク質を得ることができる。したがって、ポリペプチドもしくはタンパク質の配列または前記ポリペプチドもしくはタンパク質をコードする対応するＤＮＡ配列に、その生物学的な有用性または活性を大幅に調節（すなわち、活性化／増強または阻害／喪失）して様々な改変を施し得ることが考えられる。このような変異としては、特に限定されないが、ナンセンス変異、フレームシフト変異および非保存的ミスセンス変異が挙げられる。
【００５２】
ポリペプチド配列またはタンパク質配列および当然のことながらその基礎となるＤＮＡコード配列に特定のアミノ酸配列置換、欠失、付加および／または挿入を施し、それでもなお同じ特性を有するポリペプチドまたはタンパク質を得ることができる。したがって、ポリペプチドもしくはタンパク質の配列または前記ポリペプチドもしくはタンパク質をコードする対応するＤＮＡ配列に、その生物学的な有用性も活性もそれほど失わせずに様々な改変を施し得ることが考えられる。このような変異としては、特に限定されないが、サイレント変異、サイレントミスセンス変異および保存的変異が挙げられる。
【００５３】
「バリアント」および「変異体」という用語は、以下の修飾のうち１つまたは複数のものを有するポリペプチド：
ｉ）ペプチジル−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−結合のうち１つまたは複数のものが、非ペプチジル結合、例えば、ＲがＣ１〜Ｃ４アルキルである−ＣＨ２−カルバマート結合（−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−）、ホスホナート結合、−ＣＨ２−スルホンアミド（−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ−）結合、尿素（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）結合、−ＣＨ２−第二級アミン結合またはアルキル化ペプチジル結合（−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−）などに置き換わったポリペプチド；
ｉｉ）Ｎ末端が、ＲおよびＲ１が水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ただし、ＲおよびＲ１はともに水素ではない−ＮＲＲ１基、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ基、−ＮＲＳ（Ｏ）２Ｒ基、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ基に誘導体化されたポリペプチド；
ｉｉｉ）Ｃ末端が、Ｒ２がＣ１〜Ｃ４アルコキシからなる群より選択される−Ｃ（Ｏ）Ｒ２ならびにＲ３およびＲ４が独立に水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群より選択される−ＮＲ３Ｒ４に誘導体化されたポリペプチド
も包含する。
【００５４】
「野生型」は、天然の入手源から単離された遺伝子またはタンパク質の特徴を有するその遺伝子またはタンパク質を指す。野生型の遺伝子またはタンパク質は、集団内で最も頻繁に観察され、したがって、「バリアント」または「変異体」に対して任意に「野生型」の遺伝子またはタンパク質と呼ばれるものである。
【００５５】
（詳細な説明）
したがって、本発明は、少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質に関する。
【００５６】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、長さで少なくとも１５個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、少なくとも１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７５個、１００個またはそれ以上のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、長さで１００個、７５個、６０個、５０個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１９個、１８個、１７個または１６個未満のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００５７】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、４〜１００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１０〜８０個のアミノ酸、１５〜７０個のアミノ酸、２０〜６０個のアミノ酸、２５〜５０個のアミノ酸、３０〜４５個のアミノ酸または３５〜４０個のアミノ酸を含む。
【００５８】
別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、１０〜１００個のアミノ酸または１０〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個もしくは１５個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、１５〜１００個のアミノ酸または１５〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個もしくは２０個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、２０〜１００個のアミノ酸または２０〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個もしくは２５個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、２５〜１００個のアミノ酸または２５〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個もしくは３０個のアミノ酸を含む。
【００５９】
一実施形態では、本発明のポリペプチドは、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個または２４個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個または１００個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００６０】
一実施形態では、本発明のポリペプチドは１５個未満のアミノ酸は含まない。一実施形態では、本発明のポリペプチドは少なくとも１５個のアミノ酸を含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドは２０個未満のアミノ酸は含まない。一実施形態では、本発明のポリペプチドは少なくとも２０個のアミノ酸を含む。
【００６１】
別の実施形態では、本発明のタンパク質は、長さで少なくとも１００個、１２５個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５５０個、６００個またはそれ以上のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００６２】
一実施形態では、本発明のタンパク質は、１００〜１５００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１００〜１０００個のアミノ酸、１００〜９００個のアミノ酸、１００〜８５０個のアミノ酸、１００〜８００個のアミノ酸、１００〜７５０個のアミノ酸または１００〜７００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のタンパク質は、１５０〜１５００個、１０００個、９００個、８５０個、８００個、７５０個または７００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のタンパク質は、２００〜１５００個、１０００個、９００個、８５０個、８００個、７５０個または７００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のタンパク質は、３００〜１５００個、１０００個、９００個、８５０個、８００個、７５０個または７００個のアミノ酸を含む。
【００６３】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、１５〜１５００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１５〜１０００個のアミノ酸、１５〜９００個のアミノ酸、１５〜８００個のアミノ酸、１５〜７００個のアミノ酸、１５〜６００個のアミノ酸または１５〜５００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、２０〜１５００個、１０００個、９００個、８００個、７００個、６００個または５００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、２５〜１５００個、１０００個、９００個、８００個、７００個、６００個または５００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、３０〜１５００個、１０００個、９００個、８００個、７００個、６００個または５００個のアミノ酸を含む。
【００６４】
本発明によるＣｌｐＢタンパク質は、六量体ＡＡＡ＋−ＡＴＰアーゼのＨｓｐ１００／ＣｌｐＢファミリーのメンバーであるカゼイン分解性プロテアーゼＢタンパク質を指す。
【００６５】
一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢタンパク質は細菌のＣｌｐＢタンパク質である。一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢタンパク質は腸内細菌科のタンパク質である。腸内細菌科としては、特に限定されないが、アルセノフォナス（Ａｒｓｅｎｏｐｈｏｎｕｓ）、ブレネリア（Ｂｒｅｎｎｅｒｉａ）、ブフネラ（Ｂｕｃｈｎｅｒａ）、ブドビシア（Ｂｕｄｖｉｃｉａ）、ブティアウクセラ（Ｂｕｔｔｉａｕｘｅｌｌａ）、セデセア（Ｃｅｄｅｃｅａ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、コセンゼア（Ｃｏｓｅｎｚａｅａ）、クロノバクター（Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ）、ディケヤー（Ｄｉｃｋｅｙａ）、エドワードシエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）、エンテロバチルス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、エウィンゲラ（Ｅｗｉｎｇｅｌｌａ）、フランコニバクター（Ｆｒａｎｃｏｎｉｂａｃｔｅｒ）、ギッブシエラ（Ｇｉｂｂｓｉｅｌｌａ）、ハフニア（Ｈａｆｎｉａ）、イズハキエラ（Ｉｚｈａｋｉｅｌｌａ）、コサコニア（Ｋｏｓａｋｏｎｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、クライベラ（Ｋｌｕｙｖｅｒａ）、レクレルシア（Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ）、レリオッチア（Ｌｅｌｌｉｏｔｔｉａ）、レミノレラ（Ｌｅｍｉｎｏｒｅｌｌａ）、レビネア（Ｌｅｖｉｎｅａ）、ロンスダレア（Ｌｏｎｓｄａｌｅａ）、マングロビバクター（Ｍａｎｇｒｏｖｉｂａｃｔｅｒ）、モエレレラ（Ｍｏｅｌｌｅｒｅｌｌａ）、モーガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）、オベサムバクテリウム（Ｏｂｅｓｕｍｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）、ペクトバクテリウム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ファセオリバクター（Ｐｈａｓｅｏｌｉｂａｃｔｅｒ）、フォトラブダス（Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ）、プレシオモナス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ）、プルラリバクター（Ｐｌｕｒａｌｉｂａｃｔｅｒ）、プラジア（Ｐｒａｇｉａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）、シュードシトロバクター（Ｐｓｅｕｄｏｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、ラーネラ（Ｒａｈｎｅｌｌａ）、ラオウルテラ（Ｒａｏｕｌｔｅｌｌａ）、ローゼンベルギエラ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉｅｌｌａ）、ロウシエラ（Ｒｏｕｘｉｅｌｌａ）、サッカロバクター（Ｓａｃｃｈａｒｏｂａｃｔｅｒ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、サムソニア（Ｓａｍｓｏｎｉａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、シムウェリア（Ｓｈｉｍｗｅｌｌｉａ）、シッキバクター（Ｓｉｃｃｉｂａｃｔｅｒ）、ソーダリス（Ｓｏｄａｌｉｓ）、テイタメラ（Ｔａｔｕｍｅｌｌａ）、ソルセリア（Ｔｈｏｒｓｅｌｌｉａ）、トラブルシエラ（Ｔｒａｂｕｌｓｉｅｌｌａ）、ウィグレスウォルシア（Ｗｉｇｇｌｅｓｗｏｒｔｈｉａ）、ゼノラブダス（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ）、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）およびヨケネラ（Ｙｏｋｅｎｅｌｌａ）が挙げられる。
【００６６】
一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢタンパク質は、ハフニア（Ｈａｆｎｉａ）由来ＣｌｐＢ、好ましくはハフニア・アルベイ（Ｈａｆｎｉａ  ａｌｖｅｉ）由来ＣｌｐＢ（配列番号１）である。一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢタンパク質は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来ＣｌｐＢ、好ましくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２由来ＣｌｐＢ（配列番号２１）である。
【００６７】
ハフニア・アルベイ（Ｈａｆｎｉａ  ａｌｖｅｉ）では、シャペロンタンパク質ＣｌｐＢは８５７アミノ酸のタンパク質である。一実施形態では、ＣｌｐＢタンパク質は、配列番号１で示されるハフニア・アルベイ（Ｈａｆｎｉａ  ａｌｖｅｉ）由来シャペロンタンパク質ＣｌｐＢのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ参照番号：ＫＩＣ９９５４５．２）を有する。一実施形態では、ＣｌｐＢのアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも約９５〜約１００％同一であるアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。本願においては、同一性の割合は、グローバルアライメント（すなわち、２つの配列をその全長にわたって比較する）を用いて算出されるものである。
【００６８】
配列番号１
ＭＲＬＤＲＬＴＳＫＦＱＬＡＬＡＤＡＱＳＬＡＬＧＲＤＮＱＦＩＥＰＶＨＬＭＳＡＬＬＮＱＤＧＧＴＶＲＰＬＬＴＳＡＧＶＮＴＡＳＬＲＱＥＬＥＱＡＩＳＲＬＰＱＶＥＧＡＧＧＤＶＱＰＳＮＥＬＩＲＶＬＮＬＣＤＫＬＡＱＫＲＮＤＴＦＩＳＳＥＬＦＶＬＡＶＬＥＤＲＧＮＬＧＤＩＬＫＡＡＧＡＮＶＱＫＶＳＴＡＩＥＱＭＲＧＧＥＫＶＤＤＡＮＡＥＤＱＲＱＡＬＫＫＹＴＶＤＬＴＥＲＡＥＱＧＫＬＤＰＶＩＧＲＤＥＥＩＲＲＴＩＱＶＬＱＲＲＴＫＮＮＰＶＬＩＧＥＰＧＶＧＫＴＡＩＶＥＧＬＡＱＲＩＩＮＧＥＶＰＥＧＬＫＮＫＲＶＬＳＬＤＭＧＳＬＩＡＧＡＫＦＲＧＥＦＥＥＲＬＫＡＶＬＳＤＬＳＫＱＥＧＮＶＩＬＦＩＤＥＬＨＴＭＶＧＡＧＫＧＤＧＡＭＤＡＧＮＭＬＫＰＡＬＡＲＧＥＬＨＣＶＧＡＴＴＬＤＥＹＲＱＹＩＥＫＤＡＡＬＥＲＲＦＱＫＶＦＶＡＥＰＴＶＥＤＴＩＡＩＬＲＧＬＫＥＲＹＥＬＨＨＨＶＱＩＴＤＰＡＩＶＡＡＡＮＬＳＨＲＹＩＡＤＲＱＬＰＤＫＡＩＤＬＩＤＥＡＡＳＳＩＲＭＱＭＤＳＫＰＥＳＬＤＲＬＥＲＲＩＩＱＬＫＬＥＱＱＡＬＮＫＥＳＤＥＡＳＫＫＲＬＥＭＬＮＥＥＬＥＨＫＥＲＥＹＳＥＬＥＥＥＷＫＡＥＫＡＳＬＳＧＴＱＮＩＫＡＥＩＥＱＡＫＩＡＬＥＱＡＲＲＶＧＤＬＡＫＭＳＥＩＱＹＧＫＬＰＧＬＥＫＱＬＥＡＡＴＱＳＥＧＫＴＭＫＬＬＲＮＫＶＴＤＶＥＩＡＥＶＬＡＲＷＴＧＩＰＶＳＲＭＬＥＳＥＲＡＫＬＬＲＭＥＤＤＬＨＥＲＶＩＧＱＮＥＡＶＥＡＶＳＮＡＩＲＲＳＲＡＧＬＳＤＰＮＲＰＩＧＳＦＬＦＬＧＰＴＧＶＧＫＴＥＬＣＫＡＬＡＮＦＬＦＤＳＤＤＡＭＶＲＩＤＭＳＥＦＭＥＫＨＳＶＳＲＬＶＧＡＰＰＧＹＶＧＹＥＥＧＧＹＬＴＥＡＶＲＲＲＰＹＳＶＩＬＬＤＥＶＥＫＡＨＰＤＶＦＮＩＬＬＱＶＬＤＤＧＲＬＴＤＧＱＧＲＴＶＤＦＲＮＴＶＶＩＭＴＳＮＬＧＳＤＬＩＱＤＲＦＧＱＬＤＹＧＥＭＫＥＬＶＭＳＶＶＳＨＨＦＲＰＥＦＩＮＲＩＤＥＴＶＶＦＨＰＬＤＱＫＮＩＫＡＩＡＲＩＱＬＥＲＬＹＱＲＬＥＥＫＧＹＳＶＴＩＴＤＡＡＬＥＱＬＳＫＡＧＦＤＰＶＹＧＡＲＰＬＫＲＡＩＱＱＥＩＥＮＰＬＡＱＱＩＬＳＧＫＬＩＰＧＫＤＩＴＬＤＶＡＤＥＱＩＶＡＫＱ
【００６９】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２では、シャペロンタンパク質ＣｌｐＢは８５７アミノ酸のタンパク質である。一実施形態では、ＣｌｐＢタンパク質は、配列番号２１で示される大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２由来シャペロンタンパク質ＣｌｐＢのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ参照番号：ＢＡＡ１６４７６．１）を有する。一実施形態では、ＣｌｐＢのアミノ酸配列は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも約９５〜約１００％同一であるアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。本願においては、同一性の割合は、グローバルアライメント（すなわち、２つの配列をその全長にわたって比較する）を用いて算出されるものである。
【００７０】
一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢタンパク質はＣｌｐＢバリアントである。
【００７１】
一実施形態では、本明細書で使用されるＣｌｐＢバリアントは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示す配列を含むかこれよりなるものである。
【００７２】
ＣｌｐＢバリアントは、上記のものに加えて、またはこれに代えて、非保存的変化を含み得る。一実施形態では、バリアントポリペプチドは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加により天然の配列とは異なるものである。バリアントは、上記のものに加えて（またはこれに代えて）、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造および疎水・親水性に対する影響が最小限になるアミノ酸の欠失または付加によって改変されていてよい。
【００７３】
一実施形態では、配列番号１のバリアントは、配列番号１のものと少なくとも同等の効率で、必要とする対象の飽満を誘導すること、満腹を延長すること、摂食量を減少させること、体重増加を制御すること、体重減少を刺激することおよび／または除脂肪量に対する脂肪量の比を減少させることが可能である。
【００７４】
一実施形態では、配列番号１のバリアントは、配列番号１の配列と比較して保存的アミノ酸置換、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはそれ以上の保存的アミノ酸置換などを含む。
【００７５】
別の実施形態では、配列番号１のバリアントは、配列番号１の配列の１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個もしくはそれ以上のアミノ酸が存在しないか、任意のアミノ酸によって置換されている、または１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個もしくはそれ以上のアミノ酸（連続するものであるかどうかを問わない）が付加されている、ポリペプチドである。
【００７６】
一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、少なくともＣｌｐＢのフラグメント、好ましくは、少なくとも配列番号１のアミノ酸配列を有するＣｌｐＢのフラグメントを含むかこれよりなるものである。
【００７７】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、ＣｌｐＢタンパク質、好ましくは配列番号１のアミノ酸配列を有するＣｌｐＢの少なくとも４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７５個、１００個またはそれ以上のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００７８】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、長さで１００個、７５個、６０個、５０個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、１０個未満またはそれ以下のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００７９】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、４〜１００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１０〜８０個のアミノ酸、１５〜７０個のアミノ酸、２０〜６０個のアミノ酸、２５〜５０個のアミノ酸、３０〜４５個のアミノ酸または３５〜４０個のアミノ酸を含む。
【００８０】
別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、４〜８０個のアミノ酸または４〜７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１５個もしくは１０個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、６〜１００個のアミノ酸または６〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１５個もしくは１０個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、８〜１００個のアミノ酸もしくは８〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個、１５個もしくは１０個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、１０〜１００個のアミノ酸または１０〜８０個、７０個、６０個、５０個、４５個、４０個、３５個、３０個、２５個、２０個もしくは１５個のアミノ酸を含む。
【００８１】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個または２０個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、８０個、９０個または１００個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００８２】
別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、１００〜５００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１００〜４００個のアミノ酸、１００〜３００個のアミノ酸、１００〜２００個のアミノ酸または１００〜１５０個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、１５０〜５００個もしくはそれ以上のアミノ酸、１５０〜４００個のアミノ酸、１５０〜３００個のアミノ酸または１５０〜２００個のアミノ酸を含む。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、１００〜３５０個のアミノ酸、１５０〜３００個のアミノ酸または２００〜２５０個のアミノ酸を含む。
【００８３】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２５０個または３００個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。別の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、２２０個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、２１０個、２１１個、２１２個、２１３個、２１４個、２１５個、２１６個、２１７個、２１８個、２１９個、２２０個、２２１個、２２２個、２２３個、２２４個、２２５個、２２６個、２２７個、２２８個、２２９個または２３０個のアミノ酸を含むかこれよりなるものである。
【００８４】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１またはそのバリアントの少なくとも４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７５個、１００個またはそれ以上のアミノ酸残基を含むかこれよりなるものである。
【００８５】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１の少なくとも４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７５個、１００個またはそれ以上の連続するアミノ酸残基を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１またはそのバリアントの少なくとも４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７５個、１００個またはそれ以上の不連続のアミノ酸残基を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１またはそのバリアントの少なくとも５個の不連続のアミノ酸残基を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１またはそのバリアントの少なくとも６個の不連続のアミノ酸残基を含むかこれよりなるものである。
【００８６】
一実施形態では、本発明のＣｌｐＢフラグメントは、負荷電残基と、２つの連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基とを含む。一実施形態では、本発明のＣｌｐＢフラグメントは、連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基と、連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基の上流にある負荷電残基とを含む。
【００８７】
一実施形態では、本発明のＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基の上流にある負荷電残基を含む。本明細書で使用される「連続するＡｒｇ残基とＴｒｐ残基の上流」という用語は、Ａｒｇ残基から−１、−２、−３、−４または−５の位置を意味する。換言すれば、一実施形態では、連続するＡｒｇとＴｒｐの配列のＡｒｇ残基は、負荷電残基から＋１、＋２、＋３、＋４または＋５の位置にある。
【００８８】
一実施形態では、負荷電残基はＧｌｕ残基またはＡｓｐ残基である。特定の実施形態では、負荷電残基はＧｌｕ残基である。
【００８９】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｅ５３８を含む。
【００９０】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｒ５４２および／またはＷ５４３を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１またはそのバリアントの少なくともアミノ酸残基Ｒ５４２およびＷ５４３を含むかこれよりなるものである。
【００９１】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１のアミノ酸残基Ｅ５３８、Ｒ５４２およびＷ５４３を含むかこれよりなるものである。
【００９２】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【００９３】
配列番号２
Ｅ／Ｄ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸であり、好ましくはＥ／ＤはＥである。
【００９４】
別の特定の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号３のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【００９５】
配列番号３
Ｅ／Ｄ−Ｖ−Ｘ−Ｘ−Ｒ−Ｗ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、好ましくはＥ／ＤはＥである。
【００９６】
別の特定の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号４のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【００９７】
配列番号４
Ｅ／Ｄ−Ｖ−Ｌ−Ａ−Ｒ−Ｗ
【００９８】
好ましい実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号５のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【００９９】
配列番号５
Ｅ−Ｖ−Ｌ−Ａ−Ｒ−Ｗ
【０１００】
特定の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号２、３、４または５のアミノ酸配列を含み、長さが少なくとも１５アミノ酸、好ましくは少なくとも２０アミノ酸である。
【０１０１】
一実施形態では、本発明のＣｌｐＢフラグメントは、配列ＧＫＰＶと少なくとも７５％の配列相同性を有する配列をさらに含む。
【０１０２】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｇ５４５、Ｐ５４７および／またはＶ５４８をさらに含む。特定の実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｇ５４５、Ｉ５４６、Ｐ５４７および／またはＶ５４８を含む。好ましい実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｇ５４５、Ｉ５４６、Ｐ５４７およびＶ５４８を含む。
【０１０３】
一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｅ５３８、Ｒ５４２、Ｗ５４３、Ｇ５４５、Ｐ５４７およびＶ５４８を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、本発明によるＣｌｐＢフラグメントは、少なくとも配列番号１またはそのバリアントのアミノ酸残基Ｅ５３８、Ｒ５４２、Ｗ５４３、Ｇ５４５、Ｉ５４６、Ｐ５４７およびＶ５４８を含むかこれよりなるものである。
【０１０４】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号６のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１０５】
配列番号６
Ｅ／Ｄ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｘ−Ｇ−Ｘ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸であり、好ましくはＥ／ＤはＥである。
【０１０６】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号７のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１０７】
配列番号７
Ｅ／Ｄ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｘ−Ｇ−Ｉ／Ｋ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸である。
【０１０８】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号８のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１０９】
配列番号８
Ｅ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｘ−Ｇ−Ｉ／Ｋ−Ｐ−Ｖ
【０１１０】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１１１】
配列番号９
Ｅ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｘ−Ｇ−Ｉ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸である。
【０１１２】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１０のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１１３】
配列番号１０
Ｅ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｉ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸である。
【０１１４】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１１５】
配列番号１１
Ｅ−Ｖ−Ｘ−Ｘ−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｉ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸である。
【０１１６】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１１７】
配列番号１２
Ｅ−Ｖ−Ｌ−Ａ−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｉ−Ｐ−Ｖ
【０１１８】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１１９】
配列番号１３
Ｅ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｘ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸であり、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸である。
【０１２０】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１２１】
配列番号１４
Ｅ−Ｘ２〜４−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘ２〜４は２個、３個または４個の任意のアミノ酸である。
【０１２２】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１５のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１２３】
配列番号１５
Ｅ−Ｖ−Ｘ−Ｘ−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｖ
式中、Ｘは任意のアミノ酸である。
【０１２４】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１２５】
配列番号１６
Ｅ−Ｖ−Ｌ−Ａ−Ｒ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｋ−Ｐ−Ｖ
【０１２６】
特定の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６のアミノ酸配列を含み、長さが少なくとも１５アミノ酸、好ましくは少なくとも２０アミノ酸である。
【０１２７】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列５３８〜５４８（ＥＶＬＡＲＷＴＧＩＰＶ、配列番号１２）と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１２のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１２８】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列５３６〜５４８（ＩＡＥＶＬＡＲＷＴＧＩＰＶ、配列番号１８）と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１２９】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号２１のアミノ酸配列５３４〜５４８（ＡＥＩＡＥＶＬＡＲＷＴＧＩＰＶ、配列番号１９）と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１３０】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列５３４〜５４８（ＶＥＩＡＥＶＬＡＲＷＴＧＩＰＶ、配列番号１７）と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１３１】
一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号２１のアミノ酸配列５３７〜７５６（配列番号２２）と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。一実施形態では、ＣｌｐＢフラグメントは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むかこれよりなるものである。
【０１３２】
一実施形態では、少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質は、ＣｌｐＢタンパク質のアミノ酸配列からなるものではない。換言すれば、一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質は完全長ＣｌｐＢタンパク質ではない。したがって、一実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列は、ＣｌｐＢ配列と１００％同一というわけではない。特定の実施形態では、本発明のポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１と１００％同一というわけではなく、かつ／または配列番号２１と１００％同一というわけではない。
【０１３３】
一実施形態では、少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質は、α−ＭＳＨのアミノ酸配列からなるものではない。特定の実施形態では、少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質は、配列番号２０で示されるアミノ酸配列からなるものではない。
【０１３４】
一実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、α−ＭＳＨ（配列番号２０）と相同性を有する。一実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、α−ＭＳＨと立体配座相同性を有する。別の実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントはα−ＭＳＨと配列相同性を有する。別の実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、α−ＭＳＨと立体配座および配列相同性を有する。
【０１３５】
一実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、抗α−ＭＳＨ抗体によって認識される。換言すれば、一実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、抗α−ＭＳＨ抗体のエピトープとしての役割を果たす。一実施形態では、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、抗α−ＭＳＨ抗体の立体構造エピトープとしての役割を果たす。
【０１３６】
一実施形態では、少なくともＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質は、ポリペプチド誘導体である。
【０１３７】
一実施形態では、当該技術分野で周知の手段により、例えば、リン酸基、酢酸基、脂質基または炭水化物基などの１つもしくは複数の官能基の付加により、かつ／または１つもしくは複数の保護基の付加により、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントを修飾する。例えば、１つまたは複数のリン酸、酢酸などの官能基または様々な脂質および炭水化物の付加により、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントを修飾することができる。
【０１３８】
本明細書に記載される本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントは、当該技術分野で周知のように、化学合成または酵素合成によって合成により作製することができる。あるいは、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質または本発明のそのバリアントをコードするヌクレオチド配列をタンパク質発現ベクターに導入し、適切な宿主生物体（例えば、細菌、昆虫細胞など）に産生させた後、精製することができる。一実施形態では、例えば、当該技術分野で公知の任意の産生系、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母、バキュロウイルス−昆虫細胞またはＨＥＫもしくはＣＨＯ発現系などの哺乳動物細胞などを用いて、クローニング法により本発明のポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアントを得る。
【０１３９】
ポリペプチドを精製または同定または精製する目的で追加のポリペプチド（「タグ」）を付加することができる。タンパク質タグにより、例えば、ポリペプチドを高い親和性でマトリックスに吸着させ、次いで、複合体をほとんど溶離させずにマトリックスを適切な緩衝液でしっかりと洗浄し、次いで、吸着した複合体を選択的に溶離させることが可能になる。当業者に公知のタンパク質タグの例には、（Ｈｉｓ）６タグ、Ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、赤血球凝集素タグ、グルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、アフィニティキチン結合タグを有するインテインまたはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグがある。これらのタンパク質タグは、Ｎ末端、Ｃ末端および／または内部に位置し得る。
【０１４０】
本発明はさらに、少なくとも本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質またはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドまたはタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは核酸に関する。
【０１４１】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドまたは核酸はＤＮＡである。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドまたは核酸は、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の形態のＲＮＡである。
【０１４２】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチドまたは核酸は一本鎖である。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドまたは核酸は二本鎖である。
【０１４３】
本発明のまた別の目的は、少なくとも本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質をコードする、または少なくとも本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質をコードするポリヌクレオチドもしくは核酸を含む、ベクターである。
【０１４４】
ベクターの例としては、特に限定されないが、プラスミド、バクテリオファージ、ウイルス、カチオン小胞または他の任意のタイプのベクターが挙げられる。
【０１４５】
一実施形態では、本発明のベクターは発現ベクターである。
【０１４６】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアント、あるいは本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたは核酸、あるいは本明細書に記載されるベクターを含む、組成物である。
【０１４７】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアント、あるいは本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたは核酸、あるいは本明細書に記載されるベクターと、少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤とを含む、医薬組成物である。
【０１４８】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアント、あるいは本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたは核酸、あるいは本明細書に記載されるベクターを含む、薬剤である。
【０１４９】
一実施形態では、本発明の医薬組成物または薬剤は、治療有効量の本発明のポリペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸またはベクターを含む。
【０１５０】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるポリペプチドもしくはタンパク質またはそのバリアント、あるいは本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたは核酸、あるいは本明細書に記載されるベクターを含む、ワクチンである。
【０１５１】
一実施形態では、本発明によるワクチンは、体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害の予防に使用するためのものである。
【０１５２】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチド、好ましくは配列番号２のアミノ酸配列を含むＣｌｐＢフラグメントを含むポリペプチドを含む、栄養補助食品またはタンパク質栄養補助食品である。
【０１５３】
本発明のまた別の目的は、本明細書に記載されるＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチド、好ましくは配列番号２のアミノ酸配列を含むＣｌｐＢフラグメントを含むポリペプチドを含む、食用組成物である。
【０１５４】
一実施形態では、栄養補助食品または食用組成物は、約１重量％〜約８０重量％の本発明によるＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチドまたはタンパク質を含むか、これよりなるものである。一実施形態では、栄養補助食品または食用組成物は、約１重量％〜約５０重量％、好ましくは約２重量％〜約２５重量％の本発明によるＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチドまたはタンパク質を含むか、これよりなるものである。
【０１５５】
一実施形態では、栄養補助食品または食用組成物は、少なくとも１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％またはそれ以上の本発明によるＣｌｐＢタンパク質のフラグメントを含むポリペプチドを含むか、これよりなるものである。
【０１５６】
一実施形態では、本発明の栄養補助食品または食用組成物は、単純炭水化物および／または複合炭水化物、脂質、繊維あるいはミネラルのなかから選択される少なくとも１つの追加の成分を含む。
【０１５７】
一実施形態では、本発明の栄養補助食品または食用組成物は、少なくとも１つの必須アミノ酸を含む。好ましくは、前記少なくとも１つの必須アミノ酸は、単離されているか、遊離している、すなわち、タンパク質鎖の中で結合していない。
【０１５８】
一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物は、無水粉末または水もしくは水分を含有する粉末の形態である。
【０１５９】
一実施形態では、栄養補助食品または食用組成物は、担体または媒体をさらに含む。「担体」または「媒体」は、投与に適した材料を意味し、任意の当該技術分野で公知のこのような材料、例えば、無毒性であり、組成物のあらゆる構成成分、特に細菌株と有害な方法で相互作用することのない任意の液体、ゲル、溶媒、液体希釈剤、可溶化剤などがこれに含まれる。栄養学的に許容される担体の例としては、例えば、水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ロウ、石油ゼリー、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、リポソーム、糖、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、界面活性剤、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、ペトロエスラル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ）脂肪酸エステル、ヒドロキシメチル−セルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【０１６０】
一実施形態では、本発明の栄養補助食品または食用組成物は、一定量の食物繊維を含む。食物繊維は酵素による消化を受けずに小腸を通過し、天然の膨張性薬剤および緩下剤として機能する。食物繊維は可溶性であっても不溶性であってもよく、一般に、この２つのタイプを配合したものが好ましい。適切な食物繊維源としては、ダイズ、エンドウマメ、エンバク、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリル−ラクトースおよび動物の乳由来のオリゴ糖が挙げられる。いくつかの実施形態では、食物繊維はマンナン類のなかから選択される。マンナン類（グルコマンナンおよびガラクトマンナンなど）、例えばグアーガム、イナゴマメガム、コンニャクおよびキサンタンガムなどは、一部の植物細胞壁中に存在する。グルコマンナンは一般に、（１−４）−β結合したグルコースとマンノースの単位からなり、ガラクトマンナンは一般に、（１−６）−α−ガラクトースの単一単位で置換された（１−４）−βマンナン主鎖からなる。グアーおよびイナゴマメなどの胚乳を形成するマメ科植物の多くは、種子発生期の胚乳中にガラクトマンナンが含まれている。グルコマンナンは、穀物の微量構成成分であることも明らかにされている。
【０１６１】
一実施形態では、本発明の栄養補助食品または食用組成物は、ＵＳＲＤＡなどの政府機関の推奨に従って、微量元素およびビタミンなどのミネラルおよび微量栄養素を含有する。例えば、組成物は１日量当たり、以下の所与の範囲の微量栄養素、すなわち、３００〜５００ｍｇのカルシウム、５０〜１００ｍｇのマグネシウム、１５０〜２５０ｍｇのリン、５〜２０ｍｇの鉄、１〜７ｍｇの亜鉛、０．１〜０．３ｍｇの銅、５０〜２００μｇのヨウ素、５〜１５μｇのセレン、１０００〜３０００μｇのベータカロテン、１０〜８０ｍｇのビタミンＣ、１〜２ｍｇのビタミンＢ１、０．５〜１．５ｍｇのビタミンＢ６、０．５〜２ｍｇのビタミンＢ２、５〜１８ｍｇのナイアシン、０．５〜２．０μｇのビタミンＢ１２、１００〜８００μｇの葉酸、３０〜７０μｇのビオチン、１〜５μｇのビタミンＤ、３〜１０μｇのビタミンＥのうち１つまたは複数のものを含有し得る。
【０１６２】
一実施形態では、本発明の栄養補助食品または食用組成物は乳化剤をさらに含む。食品用乳化剤の例としては通常、ジアセチル酒石酸モノグリセリドエステル、ジアセチル酒石酸ジグリセリドエステル、レシチン、モノグリセリドおよびジグリセリドが挙げられる。同様に、適切な塩および安定剤も含まれ得る。
【０１６３】
一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物をダイエット食品の調製に使用することができる。
【０１６４】
一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物を毎日の食事への導入に使用することができる。
【０１６５】
本発明は、必要とする対象の炎症の治療に使用する上記の少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤にも関する。
【０１６６】
本発明のまた別の目的は、必要とする対象の炎症を治療する方法であって、対象に有効量の上記の少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤を投与することを含む、方法に関する。
【０１６７】
本発明の意義の範囲内では、「炎症」は、Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙで定義されるように、「組織の損傷または破壊によって引き起こされ、有害な物質および損傷組織の両方を破壊する、希釈する、または囲う役割を果たす局所的防御応答」を意味する。炎症は、毛細血管系の開窓、血液要素の間質腔内への漏出および炎症組織内への白血球に移動を特徴とする。肉眼レベルでは、これに紅斑、浮腫、痛覚過敏（圧痛）および疼痛といったよく知られた臨床徴候が伴う。
【０１６８】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤は、炎症の治療に使用するためのものであり、前記炎症は、肥満、肥満に関連する疾患または障害、神経炎症、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、アレルギー、強直性脊椎炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチまたは乾癬性関節炎）、喘息、移植片対宿主病、パーキンソン病、アルツハイマー病、クローン病、大腸炎、皮膚炎、憩室炎、線維筋痛症、肝炎、過敏性腸症候群、全身性エリテマトーデス、腎炎および潰瘍性大腸炎を含む群より選択される。
【０１６９】
一実施形態では、本発明の炎症は急性炎症である。別の実施形態では、本発明の炎症は慢性炎症である。
【０１７０】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤は、炎症の治療に使用するためのものであり、前記炎症は、肥満、肥満に関連する疾患または障害、神経炎症、多発性硬化症、乾癬、アレルギー性鼻炎、変形性関節症および神経炎症性疾患を含むかこれよりなる群から選択される。特定の実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤は、炎症の治療に使用するためのものであり、前記炎症は、肥満、神経炎症、多発性硬化症、乾癬、アレルギー性鼻炎、変形性関節症および神経炎症性疾患を含むかこれよりなる群から選択される。
【０１７１】
本発明のまた別の目的は、必要とする対象の肥満の治療または予防に使用する本発明による少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤に関する。
【０１７２】
本発明のまた別の目的は、必要とする対象の肥満を治療または予防する方法であって、対象に有効量の上記の少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤を投与することを含む、方法に関する。
【０１７３】
本発明の一態様は、体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害の治療あるいは予防に使用する上記の少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤に関する。
【０１７４】
本発明のまた別の態様は、必要とする対象の体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害を治療あるいは予防する方法であって、対象に有効量の上記の少なくともＣｌｐＢタンパク質もしくはそのバリアントのフラグメントを含むかこれよりなるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ワクチン、医薬組成物または薬剤を投与することを含む、方法に関する。
【０１７５】
体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害としては、特に限定されないが、高血圧、糖尿病（特に２型糖尿病）、グルコース不耐性、インスリン抵抗性、心血管疾患（アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、狭窄動脈、狭心症、心臓発作、血餅など）、高コレステロール、脂肪性肝疾患、肝脂肪症、胆石症、関節障害、変形性関節症、整形外科的障害、平衡障害、皮膚病態、睡眠時無呼吸、呼吸障害、喘息、重度のいびき、癌（乳癌、結腸癌、胆嚢癌、子宮がん、結腸癌および前立腺癌を含む）、メタボリック症候群、月経異常および心理社会的影響が挙げられる。
【０１７６】
本発明の一態様は、必要とする対象に飽満を誘導する方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを投与することを含む、方法に関する。
【０１７７】
本発明の一態様は、必要とする対象に飽満を誘導するのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンに関する。
【０１７８】
本発明の一態様は、対象に飽満を誘導することへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１７９】
本発明の一態様は、必要とする対象の満腹を延長する方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法に関する。
【０１８０】
本発明の一態様は、必要とする対象の満腹を延長するのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０１８１】
本発明の一態様は、対象の満腹を延長することへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１８２】
一実施形態では、満腹の延長は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の延長である。特定の実施形態では、満腹の延長は、食間に経過した時間、好ましくは本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の食間に経過した時間の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の延長である。一実施形態では、満腹の延長は、少なくとも１５％、２０％または２５％の延長である。特定の実施形態では、満腹の延長は、食間に経過した時間、好ましくは本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の食間に経過した時間の少なくとも１５％、２０％または２５％の延長である。
【０１８３】
本発明の一態様は、必要とする対象の食事量を減少させる方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法に関する。
【０１８４】
本発明の一態様は、必要とする対象の食事量を減少させるのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０１８５】
本発明の一態様は、対象の食事量を減少させることへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１８６】
一実施形態では、食事量の減少は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。特定の実施形態では、食事量の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の食事量の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。一実施形態では、食事量の減少は、少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。特定の実施形態では、食事量の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の食事量の少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。
【０１８７】
本発明の一態様は、必要とする対象の摂食量を減少させる方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法に関する。
【０１８８】
本発明の一態様は、必要とする対象の摂食量を減少させるのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０１８９】
本発明の一態様は、対象の摂食量を減少させることへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１９０】
一実施形態では、摂食量の減少は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。特定の実施形態では、摂食量の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の摂食量の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。一実施形態では、摂食量の減少は、少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。特定の実施形態では、摂食量の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の摂食量の少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。
【０１９１】
本発明の一態様は、必要とする対象の体重増加を制御する、特に減少させる方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法にも関する。
【０１９２】
本発明の一態様は、必要とする対象の体重増加を制御する、特に減少させるのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０１９３】
本発明の一態様は、対象の体重増加を制御する、特に減少させることへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１９４】
本発明のさらなる一態様は、必要とする対象の体重減少を刺激する方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法にも関する。
【０１９５】
本発明の一態様は、必要とする対象の体重減少を刺激するのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０１９６】
本発明の一態様は、対象の体重減少を刺激することへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０１９７】
一実施形態では、体重減少の刺激は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の刺激である。特定の実施形態では、体重減少の刺激は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の体重減少の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の刺激である。一実施形態では、体重減少の刺激は、少なくとも１５％、２０％または２５％の刺激である。特定の実施形態では、体重減少の刺激は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の体重減少の少なくとも１５％、２０％または２５％の刺激である。
【０１９８】
本発明のさらなる一態様は、必要とする対象の体重を減少させる方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法にも関する。
【０１９９】
本発明の一態様は、必要とする対象の体重を減少させるのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０２００】
本発明の一態様は、対象の体重を減少させることへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０２０１】
一実施形態では、体重の減少は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。特定の実施形態では、体重の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の体重の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。一実施形態では、体重の減少は、少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。特定の実施形態では、体重の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の体重の少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。
【０２０２】
本発明の一態様は、必要とする対象の除脂肪量に対する脂肪量の比を減少させる方法であって、対象に有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与することを含む、方法に関する。
【０２０３】
本発明の一態様は、必要とする対象、特に肥満の対象の除脂肪量に対する脂肪量の比を減少させるのに使用する本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物に関する。
【０２０４】
本発明の一態様は、対象、特に正常体重または合併症のない体重過多の対象の除脂肪量に対する脂肪量の比を減少させることへの本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の非治療的使用に関する。
【０２０５】
一実施形態では、除脂肪量に対する脂肪量の比の減少は、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。特定の実施形態では、除脂肪量に対する脂肪量の比の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の除脂肪量に対する脂肪量の比の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％または１０％の減少である。一実施形態では、除脂肪量に対する脂肪量の比の減少は、少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。特定の実施形態では、除脂肪量に対する脂肪量の比の減少は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する前の対象の除脂肪量に対する脂肪量の比の少なくとも１５％、２０％または２５％の減少である。
【０２０６】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、栄養補助食品または食用組成物の使用は、美容的使用である。
【０２０７】
一実施形態では、対象は雌である。いくつかの実施形態では、対象は雄である。
【０２０８】
一実施形態では、対象は子供、例えば（ヒトの年齢で）１８歳未満の個体などである。別の実施形態では、対象は成体、例えば（ヒトの年齢で）１８歳以上の個体などである。
【０２０９】
一実施形態では、対象は肥満である。一実施形態では、対象は体格指数（ＢＭＩ）が３０超である。
【０２１０】
一実施形態では、対象は中程度の肥満である。一実施形態では、対象は、ＢＭＩが約３０〜約３５の範囲内にある。一実施形態では、対象は重度の肥満である。一実施形態では、対象は、ＢＭＩが約３５〜約４０の範囲内にある。一実施形態では、対象は病的に肥満である。一実施形態では、対象は、ＢＭＩが約４０〜約５０以上の範囲内にある。
【０２１１】
一実施形態では、対象は肥満ではない。一実施形態では、対象はＢＭＩが３０未満である。一実施形態では、対象は体重過多である。したがって、一実施形態では、対象は、ＢＭＩが約２５〜約３０の範囲内にある。
【０２１２】
一実施形態では、対象は健康な体重過多対象である。一実施形態では、対象は健康ではない体重過多対象である。
【０２１３】
一実施形態では、対象は正常体重である。一実施形態では、対象は、ＢＭＩが約１８．５〜２５の範囲内にある。
【０２１４】
一実施形態では、対象は、減量のための食事療法を実施中であり、かつ／または体重減少を望んでいる。別の実施形態では、対象は、減量のための食事療法を実施中ではなく、かつ／または体重減少を望んでいない。
【０２１５】
一実施形態では、対象に体重が増加するリスクがある。いくつかの実施形態では、対象に過剰な脂肪が蓄積するリスクがある。
【０２１６】
一実施形態では、対象に体重過多および／または肥満が発現するリスクがある。一実施形態では、対象に体重過多ならびに／あるいは肥満に関連する疾患および障害が発現するリスクがある。
【０２１７】
一実施形態では、対象はむちゃ食い者である。一実施形態では、対象にむちゃ食い障害または過食障害が認められる。
【０２１８】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸またはベクターを組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンの形態で対象に投与する。一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸またはベクターを薬学的に許容される添加剤および任意選択で生分解性ポリマーなどの徐放マトリックスと組み合せて医薬組成物を形成する。
【０２１９】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを経口的に、注射により、局所的に、経鼻的に、頬側的に、直腸内に、経膣的に、気管内に、内視鏡により、経粘膜的に、または経皮投与により投与することができる。
【０２２０】
本発明による開示のポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンは、様々な方法で標的細胞に送達することができる。選択する送達機序は、部分的には、標的とする細胞のタイプおよび送達を例えばｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれで実施するかによって決まる。当業者であれば、本発明のポリペプチドまたは核酸配列の送達を適合させることが可能であろう。
【０２２１】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを経口的に投与することができる。経口投与に適した製剤の例としては、特に限定されないが、固体形態、液体形態およびゲルが挙げられる。経口投与に適した固体形態の例としては、特に限定されないが、丸剤、錠剤、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、圧縮錠剤、カシェ剤、オブラート剤、糖衣丸剤、糖衣錠または分散／もしくは崩壊錠剤、粉末、経口投与前に液体に溶解もしくは懸濁させるのに適した固体形態および発泡錠が挙げられる。経口投与に適した液体形態の例としては、特に限定されないが、液剤、懸濁剤、飲用液剤、エリキシル剤、密閉バイアル、頓服水薬、水薬、シロップおよび濃縮溶液が挙げられる。
【０２２２】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンは、注射により投与する、好ましくは全身注射することができる。全身注射に適した製剤の例としては、特に限定されないが、液体の液剤または懸濁剤、使用前に液体に溶解または懸濁させるのに適した固体形態が挙げられる。全身注射の例としては、特に限定されないが、静脈内注射、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射、硝子体内注射および腹腔内注射または灌流が挙げられる。別の実施形態では、注射する場合、本発明の組成物、医薬組成物または薬剤は無菌である。無菌医薬組成物を得る方法としては、特に限定されないが、ＧＭＰ合成（ＧＭＰは「Ｇｏｏｄ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  ｐｒａｃｔｉｃｅ」の略語である）が挙げられる。
【０２２３】
別の実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを局所的に投与することができる。局所投与に適した製剤の例としては、特に限定されないが、スティック剤、ワックス剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、バーム剤、ゲル剤、マスク剤、リーブオンウォッシュ（ｌｅａｖｅ−ｏｎ  ｗａｓｈ）などが挙げられる。
【０２２４】
本発明の一実施形態では、軟膏は、油性軟膏；乳化軟膏、例えば水中油型もしくは油中水型軟膏など；または水溶性軟膏であり、好ましくは油性軟膏である。
【０２２５】
本発明の一実施形態では、油性軟膏は基剤、例えば植物油および動物油など；植物性脂肪および動物性脂肪；ロウ；ワセリン、例えば白ワセリンまたはワセリン油など；ならびにパラフィン、例えば流動パラフィンまたはパラフィン油などを用いるものである。
【０２２６】
別の実施形態では、経皮システム、例えば組成物を染み込ませ不浸透性の裏地に積層した樹脂性架橋剤を有するアクリル系ポリマー粘着剤の１つなどを用いて、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを局所的に塗布することもできる。経皮投与に適した製剤の例としては、特に限定されないが、軟膏、ペースト、クリーム、フィルム、バーム、パッチ、例えば経皮パッチなど、ゲル、リポソームの形態などが挙げられる。
【０２２７】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを経皮パッチ、より具体的には徐放経皮パッチとして局所的に投与することができる。経皮パッチとしては、任意の従来の形態、例えば粘着性マトリックス、ポリマーマトリックス、リザーバーパッチ、マトリックスまたは一体型の層状構造物などが挙げられ、一般に、１つまたは複数の裏地層、粘着剤、浸透促進剤、任意選択の速度制御膜および適用前に取り外して粘着剤を露出させる剥離ライナーからなるものである。ポリマーマトリックスパッチはポリマーマトリックス形成材料も含む。適切な経皮パッチについては当該技術分野で十分に記載されている［例えば、米国特許第５２６２１６５号、同第５９４８４３３号、同第６０１０７１５号および同第６０７１５３１号を参照されたい］。
【０２２８】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを制御放出、遅延放出、持続放出、長時間作用型放出、調節放出、徐放または時間放出の形態で投与する。したがって、一実施形態では、本発明による組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンは、生分解性ポリマーなどの徐放マトリックスをさらに含む。
【０２２９】
一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物を経口的に投与することができる。経口投与に適した製剤の例としては、特に限定されないが、固体形態、液体形態およびゲルが挙げられる。経口投与に適した固体形態の例としては、特に限定されないが、丸剤、錠剤、カプセル、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチンカプセル、カプレット、圧縮錠剤、カシェ剤、オブラート剤、糖衣丸剤、糖衣錠または分散／もしくは崩壊錠剤、粉末、経口投与前に液体に溶解もしくは懸濁させるのに適した固体形態および発泡錠が挙げられる。経口投与に適した液体形態の例としては、特に限定されないが、液剤、懸濁剤、飲用液剤、エリキシル剤、密閉バイアル、頓服水薬、水薬、シロップおよび濃縮溶液が挙げられる。
【０２３０】
一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物を、例えばミルク、ジュース、水などの消費可能な液体と混合する粉末、または他の食事用の液体もしくは食品に混ぜる消費可能なゲルもしくはシロップとして製剤化する。一実施形態では、本発明による栄養補助食品または食用組成物を他の食品または液体とともに製剤化して、例えば一食用のバーなどの予め計量した補助食品にする。必要に応じて香味剤、結合剤、タンパク質、複合炭水化物などを添加し得る。
【０２３１】
一実施形態では、任意の薬学的に許容される形態のビタミン、ミネラルおよび上記のその他の栄養素ならびその塩を用いて、本発明による栄養補助食品または食用組成物を製剤化する。好ましい形態には、炭酸カルシウム、水酸化マグネシウムまたは硫酸マグネシウム、四ホウ酸ナトリウム、酸化第二銅、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、コレカルシフェロール、フマル酸第一鉄、ピリドキシン塩酸塩、ピコリン酸クロム、ｄ−アルファトコフェロールおよびアスコルビン酸がある。
【０２３２】
一実施形態では、治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを少なくとも１日１回、１日２回または少なくとも１日３回投与する。別の実施形態では、治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを毎日、隔日、２日置きに、３日置きに、４日置きに、５日置きに、または６日置きに投与する。
【０２３３】
別の実施形態では、治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを毎週、週２回、２週間ごとに、または月１回投与する。別の実施形態では、治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを毎月、少なくとも２か月、３か月、４か月、５か月または６か月の期間にわたって投与する。
【０２３４】
別の実施形態では、治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドまたはベクターは、約１μｇ〜５ｇの範囲内にある。別の実施形態では、投与する治療有効量の本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくはベクターは、約０．１μｇ／ｋｇ〜１ｇ／ｋｇ、すなわち、体重１キロ当たり０．１μｇ〜体重１キロ当たり１ｇの範囲内にある。
【０２３５】
一実施形態では、本発明の方法は慢性治療のためのものである、すなわち、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを長期間にわたって、例えば少なくとも約１週間、１か月間、１年間またはそれ以上などにわたって投与する。
【０２３６】
別の実施形態では、本発明の方法は急性治療、例えば本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤またはワクチンを１回、２回または３回のみ投与する治療などのためのものである。
【０２３７】
一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物の投与を例えば、１日２〜３回、１日間またはそれ以上にわたって、一般には、必要に応じて１つまたは複数の中断期間を設けて、少なくとも４日、または場合によっては４〜１５週間の長期間にわたって反復する。一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を対象の食事と同時に、または逐次的に投与する。一実施形態では、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、ベクター、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を対象の食事の前に投与する。
【０２３８】
本発明は、本発明によるポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、組成物、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を含む、キットにも関する。
【０２３９】
一実施形態では、本発明のキットは、必要とする対象にポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する手段をさらに含む。
【０２４０】
ポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する手段としては、特に限定されないが、シリンジ、針およびその他の器具が挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与する手段は、本発明のポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、医薬組成物、薬剤またはワクチンを予め充填したシリンジを含む。
【０２４１】
一実施形態では、本発明のキットは、前記対象にポリペプチドもしくはタンパク質、ポリヌクレオチドもしくは核酸、医薬組成物、薬剤、ワクチン、栄養補助食品または食用組成物を投与するための指示書をさらに含む。
【０２４２】
一実施形態では、本発明のキットは、必要とする対象の肥満の治療または予防に使用するためのものである。一実施形態では、本発明のキットは、必要とする対象の体重過多および／または肥満に関連する疾患もしくは障害の治療または予防に使用するためのものである。
【０２４３】
一実施形態では、本発明のキットは、必要とする対象の飽満の誘導する、満腹の延長、食事量の減少、摂食量の減少、体重増加の制御、体重増加の減少、体重減少の刺激、体重の減少および／または除脂肪量に対する脂肪量の比の減少に使用するためのものである。
【０２４４】
本発明を実施例によってさらに説明する。ただし、これらの実施例は、決して本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０２４５】
【図１】ＣｌｐＢ（スポット１、２、３および４）のプロテオミクス同定で二次元ゲル電気泳動（ａ）および抗α−ＭＳＨ抗体を用いた免疫ブロット（ｂおよびｃ、α−ＭＳＨによる前吸着）を用いた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２の細胞質タンパク質の分離を示す写真である。スポット５、６、７および８はタンパク質ＧｒｏＥＬ（Ｔｅｎｎｏｕｎｅら，２０１４によるもの）に対応する。
【図２】ヒトα−ＭＳＨペプチドと大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびＨ．アルベイ（Ｈ．ａｌｖｅｉ）由来ＣｌｐＢタンパク質との間（Ａ）ならびにα−ＭＳＨペプチドとカゼイ菌（Ｌ．カゼイ）、Ｂ．アニマリス（Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ）、フェカリス菌（Ｅ．ｆｅｃａｌｉｓ）およびＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）由来ＣｌｐＢタンパク質ホモログとの間（Ｂ）の相同性を示す配列アライメントである。
【図３】抗α−ＭＳＨ抗体で明らかにしたＣｌｐＢタンパク質（左側の列）および０．０１％トリプシン処理後のＣｌｐＢタンパク質のフラグメント（右側の列）のウエスタンブロットを示す写真である。
【図４】抗α−ＭＳＨ抗体（ａ）および抗ＣｌｐＢ抗体（ｂ）で明らかにしたマウス（Ａ）およびラット（Ｂ）の血漿、視床下部および結腸粘膜のウエスタンブロットを示す写真である。
【図５】大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）野生型由来（中央の列）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ΔＣｌｐＢ由来（右側の列）の全タンパク質とインキュベートした初代培養腸細胞のＰＹＹ分泌を示す写真であり、両細胞とも０．０１％トリプシンとプレインキュベートし、プレインキュベートしていない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）野生型由来の全タンパク質に正規化したものである。＊＊：対応のないｔ検定ｐ＝０．００７８；＄：対応のないｔ検定ｐ＝０．０５７１（傾向）。
【図６】ＣｌｐＢタンパク質および約２５ｋＤａのＣｌｐＢフラグメントと濃度１０ｎＭでインキュベートした後のラット結腸および回腸でのＰＹＹ分泌を示すヒストグラムである。結果は対照（ＰＢＳとのインキュベーション）に対する比で表したものである。
【図７】体積２００μＬ中２ｐｍｏｌの完全長ＣｌｐＢタンパク質（Ａ）または約２５ｋＤａのフラグメント（Ｂ）を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により投与したマウスの累積摂食量を、それぞれの対照緩衝液を投与した対照マウスと比較したものを示すグラフである。
【図８】体積２００μＬ中６０ｐｍｏｌの完全長ＣｌｐＢタンパク質（Ａ）または約２５ｋＤａのフラグメント（Ｂ）を経口投与により投与したマウスの累積摂食量を、それぞれの対照緩衝液を投与した対照マウスと比較したものを示すグラフである。
【実施例】
【０２４６】
以下の実施例によって本発明をさらに説明する。
【０２４７】
実施例１：α−ＭＳＨと相同性を有する細菌タンパク質の同定
これまでのコンピュータ解析から、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）および一部のその他の微生物の数種類のタンパク質にはα−ＭＳＨとアミノ酸配列の相同性があることが明らかにされており、これらのタンパク質がα−ＭＳＨ反応性自己抗体の産生を担っている可能性が示唆されている（Ｆｅｔｉｓｓｏｖ，ｉｎ：Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，Ｆａｔｅｍｉ，Ｓ．Ｈ．（編），Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ  Ｂｏｏｋｓ  Ｌｄｔ，２００４，ｐｐ  ２５３−２６２；Ｆｅｔｉｓｓｏｖら，２００８．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．２４：３４８−３５９）。
【０２４８】
いずれの細菌タンパク質が理論的のみならず機能的にもα−ＭＳＨ抗原模倣体である可能性があるのかを明らかにするため、これまで大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株Ｋ１２を用いた新規なプロテオミクスアプローチに取り組んできた。この方法の新規性は、ウエスタンブロットなどの免疫検出プロトコルにみられるいわゆる一次抗体による非特異的染色という周知の現象を利用する点にあった。この方法では、α−ＭＳＨペプチドと細菌タンパク質の間の構造的立体配座相同性の基盤として、抗体の産生に用いられる抗原ペプチド以外のタンパク質の「非特異的染色」を調べた。
【０２４９】
材料および方法
ここで概説するプロテオミクスアプローチは、最初の研究（Ｔｅｎｎｏｕｎｅら，２０１４，Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，４：ｅ４５８）で用いられたものであり、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２の全タンパク質を分離する二次元ゲル電気泳動にある。
【０２５０】
二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動
二次元（２Ｄ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２タンパク質抽出物４００μｇを等電点フォーカシング緩衝液（７Ｍ尿素、２Ｍチオウレアおよび０．５％両性電解質、ｐＨ４〜７、２０ｍＭジチオスレイトール、２ｍＭトリブチルホスフィン、２％ＣＨＡＰＳおよび０．００５％ブロモフェノールブルー）に加え、軽く振盪しながら室温で６０分間可溶化した。ＲｅａｄｙＳｔｒｉｐ  ＩＰＧ  Ｓｔｒｉｐ（１８ｃｍ、ｐＨ４〜７  ＮＬ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社、マルヌ＝ラ＝コケット、フランス）を用いて一次元のゲル分離を実施した。等電点フォーカシング緩衝液でストリップの受動的再水和を２４時間実施した後、タンパク質試料を陰極から１．５ｃｍの位置に設置されたローディングカップからストリップに加えた。Ｅｔｔａｎ  ＩＰＧｐｈｏｒ  ３  Ｓｙｓｔｅｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて等電点フォーカシングを４段階（３１５００Ｖｈ）、すなわち、５００Ｖを１時間、１０００Ｖの勾配、１００００Ｖの勾配および１００００Ｖを２時間で実施した。２％ジチオスレイトールおよび２．５％ヨードアセトアミドをそれぞれ用いた２つの平衡化段階の後、Ｅｔｔａｎ  Ｄａｌｔｓｉｘ垂直電気泳動システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用い、１ゲル当たり１２ｍＡで二次元、すなわち、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１０％ポリアクリルアミドゲル、２０ｃｍ×１８ｃｍ×１ｍｍ）を実施した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後、２Ｄゲルを２％（体積：体積）オルトリン酸中および５０％（体積：体積）メタノール中、室温で２時間固定した。
【０２５１】
次いで、ゲルを水ですすぎ、タンパク質のスポットをＣＢＢ  Ｇ−２５０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ハーキュリーズ、カリフォルニア州、米国）染色（３４％（体積：体積）メタノール、１７％（重量：体積）硫酸アンモニウム、２％（体積：体積）オルトリン酸および１リットル当たり０．６６ｇのＣＢＢ  Ｇ−２５０）により可視化した。
【０２５２】
イムノブロッティング
２Ｄ−ＰＡＧＥののち、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞質タンパク質を乾燥転写法（Ｔｒａｎｓ  Ｂｌｏｔ  Ｃｅｌｌ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）および０．８ｍＡ／ｃｍ２膜サイズの一定電流により２時間、Ｈｙｂｏｎｄ−ＥＣＬポリビニリデンジフルオリド膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に転写した。転写後、０．０５％（体積：体積）Ｔｗｅｅｎ  ２０を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；１０ｍｍｏｌ／Ｌトリス、ｐＨ８および１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ）中５％（重量：体積）のミルク（Ｒｅｇｉｌａｉｔ社、マコン、フランス）で膜をブロックした。洗浄後、膜をポリクローナルウサギ抗α−ＭＳＨ  ＩｇＧ（１：１０００、Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、サンカルロス、カリフォルニア州、米国）と４℃で一晩インキュベートした後、洗浄し、ポリクローナルブタ抗ウサギ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲートＩｇ（１：３０００；Ｄａｋｏ社、トラップ、フランス）とインキュベートした。ＥＣＬ検出システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）により免疫ブロットを明らかにし、ＩｍａｇｅＳｃａｎｎｅｒ  ＩＩ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）でスキャンし、Ｌａｂｓｃａｎ  ６．００ソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）でデジタル化した。
【０２５３】
１０６Ｍのα−ＭＳＨペプチド（Ｂａｃｈｅｍ  ＡＧ社、ブーベンドルフ、スイス）を用い、ウサギ抗α−ＭＳＨ  ＩｇＧを４℃で一晩吸着させた後、同じ手順を実施した。
【０２５４】
タンパク質同定
Ｅｔｔａｎ  Ｓｐｏｔ  Ｐｉｃｋｅｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて、目的とするタンパク質のスポットをＣＢＢ  Ｇ−２５０染色２Ｄゲルから切り出し、自動化されたタンパク質のゲル中消化をＥｔｔａｎ  Ｄｉｇｅｓｔｅｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で実施した。次いで、タンパク質抽出物を５％（体積：体積）アセトニトリル／０．１％（体積：体積）ギ酸１０μｌに再懸濁させ、次いで、ナノスプレー源およびＨＰＬＣチップキューブインターフェースを備えた６３４０イオントラップ質量分析計と連結したナノＬＣ１２００システム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、クールタブフ、フランス）で分析した。簡潔に述べれば、ペプチドを４０ｎｌのＲＰＣ１８トラップカラムで濃縮および脱塩し、Ｚｏｒｂａｘ（細孔径３０ｎｍ、粒子径５μｍ）Ｃ１８カラム（長さ４３ｍｍ×内径７５μｍ；Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）で分離した。流速４００ｎｌ／分で９分の直線勾配（０．１％ギ酸中アセトニトリル３〜８０％）を用い、溶離液をイオントラップ質量分析計で分析した。タンパク質同定には、ＭＳ／ＭＳピークリストを抽出し、ＭＡＳＣＯＴ  Ｄａｅｍｏｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．２．２（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社、ボストン、マサチューセッツ州、米国）検索エンジンを用いることによりタンパク質データベースと比較した。検索は以下の具体的パラメータ：酵素特異性、トリプシン；切断ミスを１つ許容；固定修飾無し；可変修飾、メチオニンの酸化、システインのカルバミドメチル化、セリン、チロシンおよびトレオニンのリン酸化；モノアイソトピック；ペプチド電荷、２＋および３＋；前駆体イオンの質量許容差、１．５Ｄａ；断片化の質量許容差、０．６Ｄａ；機器としてエレクトロスプレーイオン化トラップ；分類、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；米国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）データベース（ＮＣＢＩ  Ｎｒ２０１２０５３１（１８２８０２１５配列、６２６５２７５２３３残基）；ベセスダ、メリーランド州、米国）を用いて実施した。タンパク質のヒットが以下の基準、すなわち、それぞれＭＡＳＣＯＴスコア４５４（Ｐｏ０．０１）の少なくとも２つの上位ペプチド（太字および赤色）と同一またはそれぞれＭＡＳＣＯＴスコア４４７（Ｐｏ０．０５）の少なくとも２つの上位ペプチドと同一のうち１つのものを満たすかどうかを自動的に検証した。偽陽性率を評価するため、最初のデータベース検索はいずれもＭＡＳＣＯＴの「デコイ」オプションを用いて実施した。偽陽性率が１％を超えることがない場合、結果を適切であるとした。
【０２５５】
結果
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２の全タンパク質を分離する二次元ゲル電気泳動の結果を図１ａに示す。膜に転写した後、ポリクローナル抗α−ＭＳＨ  ＩｇＧを加えてα−ＭＳＨ様エピトープを含むタンパク質の存在を確認したところ、陽性スポットがいくつか明らかになった（図１ｂ）。一方、α−ＭＳＨペプチドを前吸着させた後に抗α−ＭＳＨ  ＩｇＧを加えたところ、いくつかの陽性スポットのみが消失し（図１ｃ）、消失したスポット（矢印）にのみα−ＭＳＨ様エピトープが含まれることが示唆された。α−ＭＳＨ特異的に染色されたスポットのうち最も強く染色されたスポットを質量分析により同定したところ、それらが熱ショックファミリーの９６ｋＤａタンパク質であるカゼイン分解性プロテアーゼＢ（ＣｌｐＢ）ホモログに対応することが明らかになった（図１ａのスポット１、２、３、４）。
【０２５６】
実施例２：ＣｌｐＢとα−ＭＳＨとの間の配列アライメント
腸内細菌のＣｌｐＢタンパク質は、α−ＭＳＨ交差反応性抗体の産生を刺激することが明らかにされている。そこで本発明者らは、腸内細菌のＣｌｐＢタンパク質内にα−ＭＳＨ様エピトープが存在するとする仮説を立てた。
【０２５７】
ＣｌｐＢとα−ＭＳＨとの間の配列アライメントから、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）とＨ．アルベイ（Ｈ．ａｌｖｅｉ）のＣｌｐＢの中央部分（配列番号１のアミノ酸残基５３４〜５４８）に不連続な６アミノ酸配列の相同性があることが明らかになった（図２Ａ）。このような配列は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のタンパク質データベース、Ｈ．アルベイ（Ｈ．ａｌｖｅｉ）のタンパク質データベースともに、α−ＭＳＨの連続する配列の相同性に対する検索アルゴリズムを用いてα−ＭＳＨとの相同性をコンピュータで解析しても予測されなかった。さらに、このような連続する配列を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびＨ．アルベイ（Ｈ．ａｌｖｅｉ）のタンパク質はプロテオミクスアプローチ（Ｆｅｔｉｓｓｏｖら，２００８．Ｔｒａｎｓｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１４，４：ｅ４５８）では同定することはできず、コンピュータによる方法を用いて機能的重要性を有する大きいタンパク質にペプチド様エピトープの存在を予測することの困難さが浮き彫りになった。さらに、このような配列相同性はカゼイ菌（Ｌ．ｃａｓｅｉ）、Ｂ．アニマリス（Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ）、フェカリス菌（Ｅ．ｆｅｃａｌｉｓ）およびＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの他の細菌にも酵母にもみられなかった（図２Ｂ）。
【０２５８】
α−ＭＳＨは、Ｎ末端ペプチドがアシル化された１３アミノ酸である。中央部分ＨＦＲＷ（配列番号２のアミノ酸残基６〜９）は中枢メラノコルチン（ＭＣ）系の全ペプチドに共通のファルマコフォアであり、ＭＣ受容体活性化に必要とされ、Ａｒｇ（８）とＴｒｐ（９）が最も重要なアミノ酸であり、Ｎ末端とＣ末端はともに異なる方法でＭＣＲ結合に関与する（Ｈｒｕｂｙら，１９８７，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：２１２６−２１３０；Ｓｃｈｉｏｅｔｈら，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９８，３４９：３５９−３６６；Ｈａｓｋｅｌｌ−Ｌｕｅｖａｎｏら，２００１，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４４：２２４７−２２５２）。酸性アミノ酸Ｇｌｕ（５）（配列番号２のアミノ酸残基５）の存在が塩基性のＡｒｇ（８）（配列番号２のアミノ酸残基８）との塩橋形成を介してα−ＭＳＨの空間的立体配座に関与しているものと思われる。このようなα−ＭＳＨのフォールディングがβターンを形成し、ＭＣＲ活性化に必要なペプチドコア配列を露出させている（Ｌｉら，１９９９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６５：４３０−４４０）。
【０２５９】
腸内細菌のＣｌｐＢ配列は、α−ＭＳＨペプチドに関して以下のような特性を共通にもつ：
１．ＭＣ受容体の活性化に必要なα−ＭＳＨファルマコフォアの２つの極めて重要なアミノ酸（配列番号２のＲ８Ｗ９）である連続するＡｒｇ（配列番号１のＲ５４２）とＴｒｐ（配列番号１のＷ５４３）の存在；
２．タンパク質／ペプチドのフォールディングおよびβターンでの中央ＲＷ配列の露出に重要であると考えられるＧｌｕ（配列番号２のＥ５）と相同な負荷電Ｇｌｕ（配列番号１のＥ５３８）の存在；
３．（配列番号１の）ＧＩＰＶ５４５〜５４８の（配列番号２の）ＧＫＰＶ１０〜１３、すなわち、α−ＭＳＨのＣ末端（側）との配列相同性（７５％）存在。
【０２６０】
抗原性相互作用およびα−ＭＳＨ様リガンド相互作用をともに含めたＣｌｐＢのα−ＭＳＨ様エピトープ（配列番号１のアミノ酸残基５３４〜５４８）に特有の機能には、最初の２つの特性の組合せが必要である可能性が考えられる。
【０２６１】
あらゆる共生性および病原性の腸内細菌科に同一のＣｌｐＢのα−ＭＳＨ様エピトープが含まれており、この科に属する細菌がα−ＭＳＨシグナル伝達に干渉することができることが示唆された。このような細菌としては、特に限定されないが、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属、クロノバクター（Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ）属およびハフニア（Ｈａｆｎｉａ）属が挙げられる。
【０２６２】
実施例３：ＣｌｐＢフラグメントの同定
材料および方法
ＣｌｐＢ断片化
最初に、異なる条件、すなわち、（５ｍｇ／ｍＬのストックから）１０分の１に希釈したＣｌｐＢおよび０．００２５％トリプシンを含む１０分の１ＣｌｐＢで断片化を実施した。これらの条件を３７℃で２０分間置いた。インキュベーション後、直ちにチューブを氷上に置いて断片化を停止させ、ウエスタンブロットを実施した。
【０２６３】
ウエスタンブロット法
断片化の後、βメルカプトエタノールを含まないＬｅａｍｌｉ溶液をチューブに加え、トリス−グリシン緩衝液（ＢｉｏＲａｄ社、ハーキュリーズ、米国）中２０％のアクリルアミドＳＤＳゲルでウエスタンブロットを実施し、ニトロセルロース膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、オルセー、フランス）に転写した。次いで、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ  ２０を加えたＴＢＳ（１０ｍｍｏｌ／Ｌトリス、ｐＨ８；１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ）中５％（ｗ／ｖ）の無脂肪粉乳で膜を室温で少なくとも１時間ブロックした。ブロッキング後、膜を抗ａ−ＭＳＨ抗体と４℃で一晩インキュベートした。膜をウサギポリクローナル抗α−ＭＳＨ抗体（１：１０００、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）と４℃で一晩インキュベートした。ＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ  ２０中５％（ｗ／ｖ）の無脂肪粉乳のブロッキング溶液で３回洗浄した後、膜をペルオキシダーゼコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ（１：１０００、ＳａｎｔａＣｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）と１時間インキュベートした。３回洗浄した後、ＥＣＬ検出キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いてペルオキシダーゼ反応を明らかにした。タンパク質バンドを分子量標準物質（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｌｕｓ、ＢｉｏＲａｄ社）と比較し、ＩｍａｇｅＳｃａｎｎｅｒ  ＩＩＩ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いてフィルムをスキャンした。
【０２６４】
血漿、視床下部および結腸粘膜を用いたウエスタンブロット
動物の管理および実験はいずれも、米国国立衛生研究所によって確立されたガイドラインに従い、フランスの規則および欧州共同体の規則（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  Ｌ３５８，１８，１８／１２／１９８６）を順守するものとした。雄のＳｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットまたはマウスＣ５７Ｂｌ６（Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ社、ジュネスト＝サン＝ティスル、フランス）を飼育ケージ中、制御された環境条件下（２２℃±１℃、午前７：３０点灯の１２時間の明暗周期）で飼育した。馴化期間中、水およびＲＭ１標準固形飼料（ＲＭ１飼料；Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｄｉｅｔ  Ｓｅｒｖｉｃｅ社、ウィザム、エセックス、英国）を自由摂取させた。
【０２６５】
上記のラットおよびマウスから結腸の粘膜を採取し、ＰＢＳで洗浄した。これらの同じ動物から血漿および視床下部も採取し、−８０℃で保管した。
【０２６６】
組織を抽出緩衝液（ＰＢＳ＋プロテアーゼ阻害剤）（１％））とインキュベートした。加えた体積は試料の量によって異なる。ポッターを用いて試料をホモジナイズした。次いで、試料を遠心分離した（１２０００ｇ、２０分、４℃）。上清は、直ちに分析しない場合、−８０℃で保管した。
【０２６７】
用いたプロトコルは、Ｌａｅｍｌｉ溶液にβメルカプトエタノール１０％（ｗ／ｖ）を加えた以外は先に記載したものと同じである。次いで、試料を８５℃で２分間加熱した後、ゲル上で泳動させた。２種類の一次抗体、すなわち、ウサギポリクローナル抗大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＣｌｐＢ抗体（１：５０００、Ｄｅｌｐｈｉ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ社）および抗アルファＭＳＨ抗体（１：３０００、Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）を試験した。使用する二次抗体はともにペルオキシダーゼコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ（１：５０００、Ｄａｋｏ社）とした。
【０２６８】
結果
トリプシンとプレインキュベートしたＣｌｐＢタンパク質で実施したウエスタンブロットでは、抗α−ＭＳＨ抗体で明らかにしたときバンドが数本みられた（図３）。したがって、トリプシン処理の段階ではＣｌｐＢのフラグメントがいくつか得られる。特に、約２５ｋＤａのものが他のフラグメントより多く得られるように思われる。さらに、これらの結果は、フラグメントが抗α−ＭＳＨ抗体によって認識されることから、フラグメントにはα−ＭＳＨペプチドと類似性を有する配列が含まれていることを示している。
【０２６９】
さらに、ウエスタンブロットでは、トリプシン処理後の溶液中には完全長ＣｌｐＢ（約９６ｋＤａ）が全く存在しないことが明らかになった。
【０２７０】
さらに、図４の結果から、約２５ｋＤａのフラグメントがマウス（Ａ）およびラット（Ｂ）の結腸粘膜、視床下部および血漿に検出されることがわかる。さらに、このフラグメントはポリクローナル抗α−ＭＳＨ（ａ）および抗ＣｌｐＢ抗体（ｂ）で明らかになるものである。
【０２７１】
この約２５ｋＤａのフラグメントのシークエンシングを実施したところ、このフラグメントはＣｌｐＢ配列のアミノ酸５３７〜アミノ酸７５６（配列番号２２）に対応するように思われる。
【０２７２】
実施例４：ＰＹＹおよびＧＬＰ−１放出に対する本発明のポリペプチドの効果
ラット結腸を用いたＰＹＹ分泌実験
細胞培養
ラットを安楽死させた後、結腸の試料を採取し、新鮮なリン酸緩衝生理食塩水液（ＰＢＳ）で洗浄した。次いで、生理的ｐＨを維持しながら腸組織をＬ−１５培地（リーボビッツ１５培地；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、ミズーリ州、米国）で洗浄した。結腸粘膜をかき取り、高グルコースＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｏｍｉｎｉｑｕｅ  Ｄｕｔｓｃｈｅｒ社、フランス）に５．５ｍｍｏｌ／ＬのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、０．１ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび非必須アミノ酸を添加したもの）中、３７℃で５〜１０分間、０．４ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＩＸ（Ｐｓｉｃｈａｓら，２０１５．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｂｅｓ（Ｌｏｎｄ）．３９（３）：４２４−９）で消化した。細胞懸濁液を７５０ｒｐｍで８分間遠心分離し、腸細胞を１０％のウシ胎児血清を添加した同じ添加ＤＭＥＭ培地に懸濁させた。細胞懸濁液を１００μｍ（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、マサチューセッツ州、米国）でろ過し、１％マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、ニューヨーク州、米国）でコートした２４ウェルプレートで培養した。最後に、プレートを９５％Ｏ２／５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で一晩インキュベートした。
【０２７３】
細胞溶解物の調製
事前に野生型（ＷＴ）およびＣｌｐＢ欠失型（ΔＣｌｐＢ）の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２の細菌培養を実施し、全タンパク質抽出に進んだ。タンパク質抽出は、１％プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、ミズーリ州、米国）を含有するＰＢＳ中、３０秒間の超音波処理により実施した。次いで、１００００ｒｐｍ、４℃での遠心分離を３０分間実施した。次いで、タンパク質を含有する上清を０．００２５％トリプシンと３７℃で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、直ちにチューブを氷上に置いて断片化を停止させた。タンパク質を含有する溶液の試料を採取し投与して、各条件の総タンパク質濃度を求めた。
【０２７４】
これと同時に、腸細胞をｐＨ７．４の分泌緩衝液（４．５ｍＭのＫＣｌ、１３８ｍＭのＮａＣｌ、４．２ｍＭのＮａＨＣＯ３、１．２ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４，２．６ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ＭｍのＭｇＣｌ２および１０ｍＭのＨＥＰＥＳ）中でインキュベートした。次いで、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２  ＷＴおよび大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ１２ΔＣｌｐＢ由来のタンパク質のトリプシン処理フラグメントを０．０１５μｇ／μＬで含む分泌緩衝液中、細胞を３７℃で２０分間インキュベートした（Ｂｒｅｔｏｎら，２０１５．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅａｔｉｎｇ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．４９：８０５−８０８；各条件につきｎ＝４）。対照として、細胞をＰＢＳでもインキュベートした。
【０２７５】
インキュベーション後、上清の試料を採取し、遠心分離し（１００００ｒｐｍで３分間）、直ちに−８０℃で保管した。次いで、細胞を溶解緩衝液（５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス−ＨＣｌ、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１％ＩＧＥＰＡＬ−ＣＡ６３０、０．５％デスオキシコール酸および無ＥＤＴＡプロテアーゼインヒビターカクテル）で処理して細胞内のペプチドを抽出した。ＰＹＹ測定を目的として直ちに細胞溶解物を−８０℃で保管した。
【０２７６】
ＰＹＹ投与
細胞培地および細胞溶解物にＰＹＹ投与を実施して、ＰＹＹの（培地中への）遊離、（溶解物中での）産生および相対総ＰＹＹ産生量（培地および溶解物）を測定した。この投与は、Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（登録商標）（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）を製造業者の指示通りに用いて実施した。
【０２７７】
簡潔に述べると、全試薬を再構成した後、１×アッセイ緩衝液５０μｌ（総結合として２つのウェルに）、調製ペプチド標準物質５０μｌ（２点測定で）、再水和した陽性対照５０μｌ（２点測定で）および調製試料５０μｌ（２点測定で）をイムノプレートに入れた。次いで、再水和した一次抗体２５μｌおよび再水和したビオチン化ペプチド２５μｌをブランクウェル以外の各ウェルに加えた。マイクロプレートを３００〜４００ｒｐｍの軌道振盪下、室温（２０〜２３℃）で２時間インキュベートした。インキュベーション後、各ウェルを１×アッセイ緩衝液３５０μｌで４回洗浄し、事前にＳＡ−ＨＲＰ  １２μｌを１×アッセイ緩衝液１２ｍｌで希釈して調製したＳＡ−ＨＲＰ抗体溶液１００μｌを加えた。イムノプレートを３００〜４００ｒｐｍの軌道振盪下、室温（２０〜２３℃）で１時間、再びインキュベートした。インキュベーション後、各ウェルを前の場合と同様に洗浄し、ＴＭＢ基質溶液１００μｌを加えた。プレートを３００〜４００ｒｐｍの軌道振盪下、室温（２０〜２３℃）で１時間インキュベートし光から保護した。
【０２７８】
最後に、２Ｎ  ＨＣｌ  １００μｌを各ウェルに加えて反応を停止させ（ウェル内の色が青色から黄色に変化した）、イムノプレートをマイクロタイタープレートリーダーで読み取った。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
【０２７９】
ラットの結腸および回腸を用いたＰＹＹ分泌実験
雄ラット（Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ社、ジュネスト＝サン＝ティスル、フランス）から結腸および回腸を取り出した。それを氷冷ＰＢＳ、次いで氷冷Ｌ−１５（リーボビッツ）培地（ＰＡＡ社、ヨービル、英国）で洗浄した。次いで、高グルコースＤＭＥＭ（＋１％Ｌ−グルタミン＋１％ペニシリン＋１％ストレプトマイシン＋１％非必須アミノ酸）中０．４ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼＸＩ（Ｓｉｇｍａ社、プール、英国）で１０分間、３７℃で消化した。細胞懸濁液を遠心分離し（４００ｇで１０分間）、ペレットを高グルコースＤＭＥＭ（１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むこと以外は前のものと同じ）に再懸濁させた。細胞懸濁液をナイロンメッシュ（細孔径１００μｍ）（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、マサチューセッツ州、米国）でろ過し、２４ウェルの１％マトリゲルコートプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社、ニューヨーク州、米国）上に播いた。プレートを９５％Ｏ２および５％ＣＯ２の雰囲気下、３７℃で一晩インキュベートした。
【０２８０】
２４時間の培養後、細胞を水浴中、ｐＨ７．４に調整した分泌緩衝液（４ｍＭ  ＫＣｌ、１３８ｍＭ  ＮａＣｌ、１．２ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１．２ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、２．６ｍＭ  ＣａＣｌ２、１．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）および濃度１０ｎＭの完全長ＣｌｐＢまたは約２５ｋＤａのフラグメントと２０分間インキュベートした。対照として、細胞を分泌緩衝液およびＰＢＳとインキュベートした。
【０２８１】
インキュベーション後、細胞を溶解緩衝液（５０ｍｍｏｌ／Ｌトリス−ＨＣｌ、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮａＣｌ、１％ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０、０．５％デオキシコール酸＋ＥＤＴＡを全く含まないプロテアーゼ阻害剤タブレットのカクテル）で処理して細胞内のペプチドを抽出した。セルスクレーパーで細胞を収集し、溶解物を遠心分離した（１２０００ｇで２０分間）。溶解物は、直ちに分析しない場合、−８０℃で保管した。
【０２８２】
ＰＹＹ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（登録商標）（Ｐｈｏｅｎｉｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社）を上記の通りに用いて腸ホルモンの分泌をアッセイした。
【０２８３】
結果
ラット結腸でのＰＹＹ放出
トリプシンとプレインキュベートしてＣｌｐＢフラグメントを得た上記と同じ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質をラット結腸由来の初代培養腸細胞での実験に用いた。結果から、ＰＹＹ放出が対照と比較して増大しているのがわかる（図５）。これとは対照的に、ＣｌｐＢ枯渇菌株では全く効果が観察されなかった（図５）。
【０２８４】
以上の結果は、ＣｌｐＢのフラグメントの方が効率的にＰＹＹの放出を引き起こすことを示しており、それによりＭＣ４Ｒの活性化を示している（Ｐａｎａｒｏら，２０１４．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２０（６）：１０１８−１０２９を参照されたい）。
【０２８５】
ラットの結腸および回腸でのＰＹＹ放出
結果から、ラット由来の腸組織を完全長ＣｌｐＢとインキュベートしても約２５ｋＤａのフラグメントとインキュベートしても、ＰＹＹ分泌が対照と比較して増大することがわかる（図６）。
【０２８６】
実施例５：摂食量に対する本発明のポリペプチドの効果
材料および方法
雄Ｃ５７／Ｂｌ６マウスをＢｉｏＤＡＱマウスケージ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ社、ニューブランズウィック、ニュージャージー州）に単独で入れて摂食量を測定した。各マウスに生理的血清（ｎ＝６）、完全長ＣｌｐＢまたは約２５ｋＤａのフラグメントを投与した。
【０２８７】
２種類の投与様式、すなわち、体積２００μＬ中２ｐｍｏｌの濃度での腹腔内（ｉ．ｐ．）注射（ｎ＝８）および体積２００μＬ中６０ｐｍｏｌの濃度での経口投与（ｎ＝１０）を試験した。
【０２８８】
結果
図７および８に示す結果から、約２５ｋＤａのフラグメントの投与により、少なくとも９０分の間にマウスの摂食量が少なくとも完全長ＣｌｐＢタンパク質と同程度に減少することがわかる。
【０２８９】
特に、約２５ｋＤａのフラグメントの経口投与では摂食量が減少するが、完全長ＣｌｐＢタンパク質の経口投与ではそのような効果は全くみられない（図８）。
【図１】
2020515647.tif 000002
【図２】
2020515647.tif 000003
【図３】
2020515647.tif 000004
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】令和1年12月10日(2019.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020515647000001.app
【国際調査報告】
2020515647.tif 000010
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