(57)【要約】  本発明は、獣医学の分野で有用な組成物であって、より具体的には、ネコ慢性呼吸器障害及びその合併症並びに/又はネコの慢性的な感染性障害若しくは感染状態を治療するためのフェロモンを含む組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネコの慢性的な感染性障害の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項２】
ネコ慢性呼吸器障害、より具体的には、上気道障害の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項３】
ネコの慢性的な感染性障害又はネコ慢性呼吸器障害が、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症に起因する、請求項1又は2に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
感染症に起因する、より具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症に起因する、ネコ慢性呼吸器障害の臨床症状の治療及び/又はその再発若しくは再燃の予防に使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項５】
ネコ慢性上気道障害の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項６】
前記治療が、くしゃみを減少又は軽減する、請求項5に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
ネコのくしゃみ及びより具体的には、感染症に伴うくしゃみの治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項８】
感染性障害及び/又は呼吸器障害を有するネコの睡眠期間が延長したことによって証明されたように、よりくつろげるように使用するフェロモンを含む動物用組成物。
【請求項９】
FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等のネコ慢性感染症に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用。
【請求項１０】
ネコ慢性感染症に起因する前記臨床症状が、咳嗽、くしゃみ、鼻汁、鼻閉、眼脂、眼うっ血、及び/又は眼瞼痙攣、好ましくは、くしゃみである、請求項9に記載の使用。
【請求項１１】
ネコ慢性呼吸器障害、具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症によるネコ慢性上気道障害に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用。
【請求項１２】
感染症によるネコ慢性呼吸器障害に起因する前記臨床症状が、咳嗽、くしゃみ、鼻汁、及び/又は鼻閉、好ましくは、くしゃみである、請求項11に記載の使用。
【請求項１３】
前記動物用組成物が、オレイン酸、アゼライン酸、ピメリン酸、及びパルミチン酸、又はその誘導体の混合物を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は請求項9から12のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
前記組成物が、少なくとも治療有効量の活性な脂肪酸又はそのエステル誘導体若しくはメチルエステル誘導体を含むその誘導体であって、より具体的には、オレイン酸、アゼライン酸、ピメリン酸、及びパルミチン酸、又はその誘導体からなる群から選択される活性な脂肪酸又はその誘導体を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は請求項9から12のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
前記組成物が、脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、少なくとも約45〜60%のオレイン酸、6〜10%のアゼライン酸、8〜12%のピメリン酸、及び13〜18%のパルミチン酸を含む脂肪酸の混合物、又は脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、約45〜65%の間のオレイン酸メチル、約6〜10%の間のアゼライン酸ジメチル、約8〜12%の間のピメリン酸ジメチル、及び約13〜18%の間のパルミチン酸メチルを含む混合物、又は脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、およそ47〜51%のオレイン酸メチル、およそ7〜9%のアゼライン酸ジメチル、9〜11%の間のピメリン酸ジメチル、及びおよそ14〜16%のパルミチン酸メチルを含む脂肪酸のエステルの混合物を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の使用のための組成物又は請求項9から12のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、獣医学の分野で有用な組成物であって、より具体的には、ネコ慢性呼吸器障害及びその合併症並びに/又はネコの慢性的な感染性障害若しくは感染状態を治療するためのフェロモンを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ネコの感染症の発症頻度は極めて高い。ネコ感染症の主な誘発因子は、ネコの気道に感染するウイルスであるとみなされており、ウイルスに感染したネコは、上気道の炎症、咳嗽、くしゃみ、結膜炎、鼻漏、鼻汁、よだれ、熱、肺炎、口内炎、舌炎、粒状腺炎(granular adenitis)、舌潰瘍、鼻末端の潰瘍、全身的皮膚潰瘍、鼻甲介潰瘍、下痢症、嘔吐、食欲不振、及び活力の低下等の一般的な感冒様症状を主に示す。より具体的には、ネコがネコヘルペスウイルスに感染した場合、上記の症状を示す可能性はいっそう高まる。
【０００３】
ネコヘルペスウイルス1(FHV-1)は、感染が生じる集団環境で飼育されたネコの90%を上回るネコにおいて最も一般的なネコ感染症である。生体は、感染症の急性期(上部呼吸器疾患、結膜炎、及び角膜炎)に、重度の病的状態を伴い、感染したネコの多くは、疾患の慢性及び再発性の臨床徴候を発症する。
【０００４】
ネコヘルペスウイルス1(FHV-1)は、ネコにおいて最も一般的なネコ感染症であると考えられている;感染症は無症状であるか、又はくしゃみ、咳嗽、結膜炎、発熱、角膜炎、息切れ、食欲欠乏、嗜眠、並びに時に、肺炎及び死を含む、疾患の臨床徴候を引き起こすことがある。保護施設等の密集した又はストレスの多い環境における罹患率及び死亡率は高いことがある。上気道障害は、くしゃみ、咳嗽、及び/又は結膜炎を含む。
【０００５】
急性曝露後、大半のネコは、三叉神経節をウイルス潜伏の主な部位とする、持続感染を起こす。潜伏FHV-1の再活性化は、臨床徴候の再発を伴って生じることがあり、FHV-1排出が増加する。ストレスのかかる事象は、最初の1週間以内にFHV-1の再活性化を引き起こすと考えられている。試験では、上部呼吸器感染(URI)の徴候が発症するまでの平均期間は8.3日間であり、保護施設における最初の1週間に最も高いストレススコアを持つネコは、URIを起こす可能性がより高かった(Tanaka A、Wagner DC、Kass PH他、Associations among weight loss, stress, and upper respiratory tract infection in shelter cats. J Am Vet Med Assoc 2012; 240: 570〜576頁)。
【０００６】
現在のところ、ネコ呼吸器疾患と同様にネコウイルス性疾患の言及に値する治療は存在せず、実際に、これらの疾患は、治療するネコに、身体的活力及び/又は脱水症状を回復して安心させるための栄養含有飼料を与えることによる栄養療法、加えて、多重感染又は二次感染を予防するために抗生剤を投与すること、及び物理的に粘性分泌物を取り除くこと等の対症療法で治療するのみである。
【０００７】
このため、ネコ慢性呼吸器障害及びその合併症並びに/又はネコの感染性障害若しくは感染状態、特に、感染症に伴うネコのくしゃみを治療するための新規の治療を開発する必要性がある。
【０００８】
フェロモン療法、「フェロモン療法(pheromonatherapy)」、又は「フェロモン療法(pheromonotherapy)」は、フェロモンの性質を有する化学物質を使用することによって、非ヒト哺乳動物における行動的問題を管理する方法である。これは、家庭用動物種、より具体的には、ネコ及びイヌ、並びに非ペット動物種を含む、非ヒト哺乳動物のストレスに関連する問題に対する画期的な治療である。このフェロモン療法は、イヌ及びネコにおいて最も詳細に研究されている。
【０００９】
フェロモンは、同じ動物種の個体間でのコミュニケーションのために使用される化学的な物質である。種間コミュニケーションをもたらすいくつかの化学物質は、アレロケミカルと呼ばれている。いくつかの化合物は、ある動物種においてはフェロモンであるが、他の動物種に対する行動的作用を有することが観察されていることが知られている。本明細書において、フェロモンは、非ヒト哺乳動物に対する行動的影響を有する、任意の天然又は非天然(合成)起源の化合物といった、広い意味で使用されるであろう。大半のフェロモンの正確な作用機序は、依然として不明であるが、これらは、辺縁系及び視床下部のどちらにもいくらかの変化を誘導する。
【００１０】
フェロモン療法は、非ヒト哺乳動物の福祉、より具体的には、イヌ及びネコ等の家庭用哺乳動物における、一般的なストレスに関連するいくつかの行動的障害を管理する、優れた方法である。
【００１１】
フェロモンの組成物によって、感染症に起因するネコ慢性呼吸器障害の臨床症状を軽減することが可能であることが見出された。より具体的には、フェロモンへの曝露によって、FHV-1に伴うくしゃみを減少し、睡眠期間中によりくつろげるようになったことが、本明細書に示されている。フェロモンの同じ組成物は、これらの呼吸器障害の再発又は再燃の予防に役立つ可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国意匠特許第D752,730S号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Tanaka A、Wagner DC、Kass PH他、Associations among weight loss, stress, and upper respiratory tract infection in shelter cats. J Am Vet Med Assoc 2012; 240: 570〜576頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、本発明は、ネコ慢性呼吸器障害若しくはその合併症及び/又はネコの慢性的な感染性障害若しくは感染状態の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、ネコ慢性呼吸器障害若しくはその合併症及び/又はネコの慢性的な感染性障害若しくはその合併症を治療する方法であって、それを必要とするネコに、フェロモンを含む動物用組成物を投与する工程を含む方法にも関する。
【００１６】
本発明は、更に、ネコ慢性呼吸器障害若しくはその合併症及び/又はネコの慢性的な感染性障害若しくは感染状態を治療する医薬の製造のためのフェロモンの動物用組成物の使用を取り扱う。
【００１７】
本発明は、更に、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等のネコ慢性感染症に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用に関する。本発明は、更に、ネコ慢性呼吸器障害、具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症によるネコ慢性上気道障害に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】試験スケジュールの図である。
【図２】群及び期間別のくしゃみ観察時点の割合の図である。*群間の統計的差異を示す
【発明を実施するための形態】
【００１９】
特定の実施形態において、本発明は、ネコ呼吸器障害、より具体的には、慢性上気道障害の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。より具体的には、ネコ慢性呼吸器障害は、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症に起因する。より具体的には、本発明は、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症に伴うネコのくしゃみの治療において、特に有用なフェロモンを含む動物用組成物を提供する。
【００２０】
より特定の実施形態において、本発明は、感染症に起因する、より具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症に起因する、くしゃみ等のネコ慢性呼吸器障害の臨床症状の治療及び/又はその再発若しくは再燃の予防に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。
【００２１】
別の実施形態において、本発明は、感染症に起因する、より具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症に起因する、くしゃみ等のネコ慢性呼吸器障害の臨床症状の治療及び/又はその再発若しくは再燃の予防に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。
【００２２】
本発明のさらなる目的は、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等のネコ慢性感染症に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用である。
【００２３】
本発明の別の目的は、ネコ慢性呼吸器障害、具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症によるネコ慢性上気道障害に起因する、臨床症状を軽減するフェロモンを含む動物用組成物の使用である。
【００２４】
概してFHV-1感染症に起因する、ネコ慢性呼吸器障害の臨床症状は、より具体的には、上気道の炎症、咳嗽、くしゃみ、結膜炎、鼻漏、鼻汁、又は鼻閉である。これは、よだれ、眼脂、眼瞼痙攣、熱、喘息、肺炎、口内炎、過敏性腸症候群等の消化器疾患、舌炎、粒状腺炎、舌潰瘍、鼻末端の潰瘍、全身的皮膚潰瘍、鼻甲介潰瘍、下痢症、嘔吐、食欲不振、及び/又は活力の低下に進展することもある。ネコ慢性上気道障害は、概して、上気道の炎症、咳嗽、くしゃみ、結膜炎、鼻漏、鼻汁、鼻閉、又はその混合である。
【００２５】
特定の実施形態において、感染症によるネコ慢性呼吸器障害に起因する臨床症状は、咳嗽、くしゃみ、鼻汁、及び/又は鼻閉であり、好ましくは、くしゃみである。
【００２６】
ネコの慢性的な感染性障害の臨床症状は、概してネコの気道に感染するため、上気道の炎症、咳嗽、くしゃみ、結膜炎、鼻漏、鼻汁、又は鼻閉を含む。前記症状は、よだれ、眼脂、眼うっ血、眼瞼痙攣、熱、喘息、肺炎、口内炎、過敏性腸症候群等の消化器疾患、舌炎、粒状腺炎、舌潰瘍、鼻末端の潰瘍、全身的皮膚潰瘍、鼻甲介潰瘍、下痢症、嘔吐、食欲不振、及び/又は活力の低下も含むことがある。
【００２７】
特定の実施形態において、ネコ慢性感染症に起因する臨床症状は、咳嗽、くしゃみ、鼻汁、鼻閉、眼脂、眼うっ血、及び/又は眼瞼痙攣であり、好ましくは、くしゃみである。
【００２８】
感染症に起因する、より具体的には、FHV-1に起因するネコ呼吸器障害の再発又は再燃は、生じることが多く、これは、このような障害が慢性とみなされている理由である。ネコ呼吸器障害のこうした再発又は再燃、また特に、感染症によるくしゃみは、活力の欠乏、くつろぎの不足、免疫防御の欠如、及び/又は睡眠の不足に起因すると思われる。フェロモンを含む組成物を投与することによって、具体的には、ネコが睡眠期間中によりくつろげるようになることで、このような再発又は再燃を予防又は軽減し得ることが、本明細書で見出された。
【００２９】
別の実施形態において、本発明は、感染症に起因する、より具体的には、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症に起因するネコ慢性呼吸器障害の、臨床症状の治療及び/又はその再発若しくは再燃の予防に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。
【００３０】
より好ましくは、ネコ慢性上気道障害は、概して、上気道の炎症、咳嗽、くしゃみ、結膜炎、鼻漏、鼻汁、鼻閉、又はその混合である。
【００３１】
別の実施形態において、本発明は、ネコ上気道障害の治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。より具体的には、ネコ慢性呼吸器障害は、FHV-1感染症を含むヘルペス感染症等の感染症に起因する。特定の実施形態によると、本発明は、くしゃみ、より好ましくは、感染症に伴うくしゃみの治療に使用するフェロモンを含む動物用組成物に関する。
【００３２】
特定の実施形態において、本発明に記載の組成物は、くしゃみ、より具体的には、ヘルペスウイルス、より具体的には、FHV-1を含むヘルペスウイルス等の感染症に伴うくしゃみを減少又は軽減する。
【００３３】
別の特定の実施形態において、本発明に記載の組成物は、感染性障害及び/又は呼吸器障害を有するネコの睡眠期間が延長したことによって証明されたように、よりくつろげるようにする。
【００３４】
本発明は、フェロモンを含む組成物又は混合物に関する。前記フェロモンは、有効成分としての、1種若しくは複数の脂肪酸及び/又はそのエステル、より具体的には、そのエチルエステル若しくはメチルエステルである。このため、組成物は、脂肪酸のエステル又は脂肪酸のメチルエステル誘導体の一部又は混合物からなる。これらは、周囲空気中に拡散することで、ネコに投与することができる。
【００３５】
組成物中の脂肪酸、エステル誘導体、又はメチルエステル誘導体の量は、広い範囲で変更し得る。これらは、動物用組成物の総量に対して、およそ0.5〜95%の間、好ましくは、1〜70%の間、又は1;5〜50%の間で変動し得る。
【００３６】
本発明に記載の「脂肪酸」は、モノカルボン酸又はジカルボン酸を有し、飽和又は不飽和で、直鎖状又は分枝状の、活性な炭化水素鎖であって、非ヒト哺乳動物における行動変化を誘導する能力のある炭化水素鎖を意味する。これらの脂肪酸は、概してC4〜C22を有する。これらは、オレイン酸、パルミチン酸、アゼライン酸、ピメリン酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミトレイン酸、リノール酸、ステアリン酸、アラキドン酸、n-酪酸、イソ酪酸、α-メチル酪酸、カプリン酸、ピバル酸、y-リノール酸、エイコサペンタエン酸、ペンタデカン酸、トリデカン酸、又はドコサヘキサエン酸の中から選択される。
【００３７】
「脂肪酸の誘導体」は、全て活性な、脂肪酸の揮発性誘導体を意味する。好ましくは、前記誘導体は、エステル又はメチルエステル若しくはエチルエステルの形態である。
【００３８】
前記混合物は、オレイン酸、オレイン酸の誘導体、そのエステル誘導体、又はそのメチルエステル誘導体等、少なくとも1種の脂肪酸を含む。
【００３９】
例として、我々は:
オレイン酸及びパルミチン酸の混合物、
オレイン酸及びn-酪酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、及びリノール酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、及びパルミトレイン酸の混合物、
カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミトレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、及びオレイン酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ミリスチン酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ラウリン酸、及びミリスチン酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ミリスチン酸、及びペンタデカン酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、及びステアリン酸の混合物、
オレイン酸、パルミチン酸、リノール酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、及びペンタデカン酸の混合物、
ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸の混合物、又はより好ましくは、
オレイン酸、アゼライン酸、ピメリン酸、及びパルミチン酸の混合物
等、脂肪酸混合物又はそのエステル若しくはメチルエステルを含むそれらの誘導体を引用することができる。
【００４０】
本発明の組成物は、当業者によく知られている適切な割合で、上記の脂肪酸を含んでよい。例として、前記混合物は、脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して:
約55〜65%のオレイン酸及び45〜35%のパルミチン酸、それらの誘導体、並びにそのエステル誘導体若しくはメチルエステル誘導体、
約45%のオレイン酸、16%のアゼライン酸、18%のピメリン酸、及び21%のパルミチン酸、それらの誘導体、そのエステル誘導体若しくはメチルエステル誘導体、
約30%のパルミチン酸、30%のオレイン酸、並びに40%のリノール酸、それらの誘導体、そのエステル誘導体及びメチルエステル誘導体、又は
約30%のパルミチン酸、40%のリノール酸、10%のパルミトレイン酸、並びに20%のオレイン酸、それらの誘導体、そのエステル誘導体及びメチルエステル誘導体
を含有してよい。
【００４１】
百分率は、別段の指定がない限り、質量に対して表記される。
【００４２】
本明細書で使用する場合、「約」又は「およそ」という用語は、当業者には理解され、使用される文脈において、ある程度変化するであろう。この用語が使用される特定の文脈で、当業者には不明瞭な用語の使用がある場合、「約」又は「およそ」は、特定の用語のプラスマイナス10%までを意味するであろう。
【００４３】
本発明のある実施形態によると、前記組成物は、少なくとも治療有効量の活性な脂肪酸、そのエステル誘導体又はメチルエステル誘導体を含むその誘導体であって、より具体的には、オレイン酸、アゼライン酸、ピメリン酸、及びパルミチン酸からなる群から選択される活性な脂肪酸、その誘導体を含む。好ましくは、脂肪酸の混合物は、脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、少なくとも約45〜60%のオレイン酸、6〜10%のアゼライン酸、8〜12%のピメリン酸、及び13〜18%のパルミチン酸を含む。エステル及びメチルエステルの形態が使用される場合、前記混合物は、脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、約45〜65%の間のオレイン酸メチル、約6〜10%の間のアゼライン酸ジメチル、約8〜12%の間のピメリン酸ジメチル、及び約13〜18%の間のパルミチン酸メチルを含む。好ましくは、脂肪酸のエステルの混合物は、脂肪酸及びその誘導体の総質量に対して、およそ47〜51%のオレイン酸メチル、およそ7〜9%のアゼライン酸ジメチル、9〜11%の間のピメリン酸ジメチル、及びおよそ14〜16%のパルミチン酸メチルからなる。
【００４４】
本発明の組成物は、上記のようなフェロモンを含む。この組成物は、溶媒、添加物、植物抽出物、又は水性相でさえ含まなくてよい。代替方法として、この組成物は、溶媒、添加物、植物抽出物を含んでよい。これらは、イソアルカン及びシクロアルカンを含む溶媒を含んでよい。これらは、通常、温度に依存して油相及び液相の形態で存在し、脂肪酸及びそれらの誘導体、そのエステル誘導体又はメチルエステル誘導体を、空気中に拡散するために、任意の適切な手段によって加熱されてよい。
【００４５】
そのため、本発明に記載の脂肪酸混合物は、周囲空気中への拡散によって、ネコに投与されることがある。ネコへの投与は、加熱又は非加熱によって行うことができる。周囲空気中への組成物の拡散は、6〜30日間連続である。
【００４６】
特定の実施形態において、本明細書に開示された組成物は、経口、経鼻、皮内、皮膚、吸入、又は非経口投与を意図した形態である。好ましくは、この組成物は、周囲空気中への拡散を意図した形態である。
【００４７】
さらなる特定の実施形態において、本発明で使用する組成物は、液剤、懸濁剤、固形又は半固形剤、散剤、ペレット剤、カプセル剤、顆粒剤、糖衣丸剤、カプセル剤、噴霧剤、丸剤、錠剤、ペースト剤、インプラント、又はゲル剤の形態である。
【００４８】
室温では、本発明の組成物に含有される化合物、具体的には、溶媒又は添加物及びフェロモンの長さ及び構造に応じて、したがって、化合物の炭素鎖の長さ及び構造に応じて、前記組成物は、液体形態又は固形形態であり得る。
【００４９】
拡散のためのディスペンサーは、組成物の形態(固形又は液体)に応じて、当業者によって選択され得る。それは、例として、米国意匠特許第D752,730S号に記載されるディスペンサーであってよい。
【００５０】
好ましい実施形態において、ネコの居住場所の周囲空気中に拡散することができるフェロモンの組成物の投与は、ネコが吸入することによって行われる。
【００５１】
ネコは、ネコ及びネコ科動物の全て、家庭用ネコ、並びにより一般的に、全ての種類のネコを含む。これらは、家庭用、農場用、又は動物園用ネコ、及び具体的には、子ネコ等の任意の年齢のネコを含む。
【００５２】
本発明の別の目的は、空気中への拡散が認められているネコに、上記で定義された本発明の組成物の拡散のためのキット又は投薬装置である。
【００５３】
これらの装置は、具体的には、気化又は拡散する電気装置であって、拡散が行われるように、上記で定義された本発明の組成物の十分な量を適用する、セラミックプレート及びポリマーマトリックスを有する固体支持体を備える電気装置であってよい。これらの装置は、加熱に適しており、本発明に記載の脂肪酸の組成物を含浸した小さなプレートを置くことができる、支持セラミックプレートからなるコンパートメントに取り付けられる電気ピンの形態であってよい。この装置は、電源に繋ぐことによって起動する。本発明の組成物の一部は、加熱の作用下で、小さなプレートのコンパートメントにある開口部から拡散される。これらは、蚊忌避剤を拡散するために使用されるものに相当する。これらの装置は、米国意匠特許第D752,730S号に記載されるディスペンサーであってもよい。
【００５４】
本発明のさらなる態様及び利点は、以下の実験の項で開示されるであろう。
【実施例】
【００５５】
(実施例1)
動物用組成物の調製
動物用組成物(Feliway(登録商標))は、下のTable 1(表1)に示される以下の成分を混合することによって調製した。
【００５６】
【表１】
2020509091.tif 000002
【００５７】
使用された拡散器は、米国意匠特許第D752'730S号に記載されるものである。
【００５８】
この拡散器は、面積が20〜70m2までの室内で使用可能である。詰め替え品は、Feliway製品48mlを含有し、20〜30日間で製品を放出するであろう。
【００５９】
(実施例2)
本明細書に記載される試験は、実験的にFHV-1感染症を誘発した子ネコを、Feliway(登録商標)拡散器又はプラセボ拡散器のいずれかを備えた同等の室内で飼育し、飼育環境の変更により誘発されるストレスに曝して、行動スコア、臨床スコア、FHV-1排出、又は血清コルチゾール濃度に差異があるかどうかを判定するように設計した。
【００６０】
材料及び方法
ネコ。生後5ヵ月の去勢した雄6匹及び卵巣除去した雌6匹の、目的繁殖された子ネコを、この12週間パイロット試験に使用した。本明細書に記載される試験の8週間前に、この子ネコ12匹が対照群であった試験において、この子ネコ12匹を、鼻腔内滴下によってそれぞれFHV-1に感染させた。この新規試験の目的のために、これらの子ネコを再使用することは、他のネコを実験的に再度接種させる必要性を省いた。その試験では、FHV-1感染症は、全ての子ネコで確認し、それぞれ、熱、くしゃみ、眼脂及び/若しくは鼻汁、鼻閉、結膜炎、並びに/又は眼瞼痙攣からなる臨床徴候を発症した。本試験の時点で、いずれの子ネコもURIの治療を受けておらず、時折のくしゃみ、漿液性鼻汁、又は漿液性眼脂は、子ネコに間欠的に存在するFHV-1の潜在的徴候に過ぎなかった。本明細書に記載される試験は、Institutional Animal Care and Use Committeeによって承認した。
【００６１】
前記子ネコを、フェロモン群(Feliway(登録商標)拡散器)又はプラセボ群(プラセボ拡散器)に無作為に割り付けた。各群は、雄3匹及び雌3匹からなる。これらの群を、2つに分かれているが、研究設備の同様の広さの室内(フェロモン群=8フィート6インチ幅×10フィート3インチ長さ×9フィート高さ、プラセボ群=9フィート7インチ幅×9フィート長さ×9フィート高さ)であって、2つの個別の空気交換器を備えた室内で飼育した。全ての子ネコに、自由に乾燥餌及び水を与え、同一の止まり木及び環境富化用具(enrichment devices)を提供した。
【００６２】
臨床採点。他のFHV-1予防接種又は治療試験から応用した臨床スコア表を、本試験で使用した(Table 1(表2))。いくつかの比較として、各子ネコに対し、毎日、その日に記録された個別の臨床スコアパラメータを加算し、総臨床スコアを算出した。体温は、マイクロチップによって推定した。
体温の上昇は、102.5°Fを上回る場合と定義した。心拍数及び呼吸数は、大きなゴロゴロと喉を鳴らす音で聴診が不明瞭にならない時に、毎日測定した。体重は、週1回測定した。
【００６３】
【表２】
2020509091.tif 000003
【００６４】
行動採点。前述の保護施設及び他の試験で使用された多くの異なる行動評価尺度を、子ネコのストレス及び行動を評価する手段として検討した。子ネコがFHV-1を接種された試験中の子ネコの観察及び本明細書で試験された子ネコは、目的繁殖された研究用子ネコであり、すでに研究設備、飼育環境、お互い、ヒトとの交流に慣れているという事実に基づき、修正した尺度を設計した(Table 2(表3))。容易さ及び効率を踏まえ、FHV-1の臨床採点から逸脱しないように、行動観察測定基準も設計した。前記規定には、観察し、客観的に採点し得る正常行動、くつろぎ-落ち着き行動、又はストレスに関連する行動のいずれかを表現する、典型的なネコの体勢、発声、及び動作の一覧を含む(Table 2(表3))。本試験における特定の群の子ネコが全体的に愛嬌のある性格及び気質であるため、平衡期間前及び平衡期間中に、この規定を更に適応させた。拡散器を室内に導入した際に適用した最終的な規定は、毎朝、室毎の45分間の採点期間に、5つの異なる所定の時点で記録される、28の個別の行動を含んだ。「寸見(Snapshot)」観察を、以下の4つの時点で、子ネコ毎に15秒間実施した:入室時(「SS1」時点)、臨床採点作業中(「SS2」時点)、臨床採点作業直後(「SS3」時点)、及び45分経過時(「SS4」時点)。SS3とSS4の間の20〜30分間を通しての行動も記録した(「長期」時点)(Table 2(表3))。
【００６５】
【表３】
2020509091.tif 000004
【００６６】
実験計画。2名の訓練された採点者は、試験全体を通して、およそ同じ時間及び順序で、毎朝、室毎に45分間、治療割り当てについて盲検下で、標準化された臨床及び行動の採点システムを適用した(図1)。
【００６７】
測定。試験開始時及び6つの各期間(E、G1、K1、G2、K2、G3)後に、子ネコを鎮静させ、プロパラカインを角膜に適用し、血液、尾側の咽頭粘膜細胞、及び結膜スワブを採取した。血清、口腔咽頭スワブ、及び結膜スワブは、バッチで測定するまで-80℃で保存した。全DNAは、口腔咽頭スワブ及び結膜スワブから抽出し、FHV-1のDNA及びGAPDHの定量PCR測定(qPCR)を実施した。FHV-1のqPCR測定の結果は、FHV-1のDNA/GAPDHのDNA比で表示した。血清コルチゾール濃度は、民間研究室(内分泌学研究室、Michigan State University)で測定した。
【００６８】
統計的評価
無作為化後であるが試験開始前に、先行する試験で初感染後に発症したFHV-1に関連する総臨床スコアを、Wilcoxon順位和検定によって、フェロモン群とプラセボ群の間で比較し、両群が同等であることが判明した(p=0.9)。
【００６９】
記述統計量を算出し、分類別データは頻度として表記し、継続的データは平均値、中央値、及び範囲として表記した。総臨床スコアの群中央値の結果(Table 1(表2))、個別の臨床パラメータ、個別の行動スコア、子ネコの総ストレススコア、睡眠スコア、FHV-1/GAPDH比、体重を、Wilcoxon順位和検定によって、フェロモン群とプラセボ群の間で比較した。
【００７０】
単変量解析を用いて、関連について変数をスクリーニングした後、p値が0.25未満である場合は、変数を多変量回帰分析に含めた。マルチレベル混合効果ロジスティック回帰を用いて、臨床スコア(二項式)及び行動スコア(二項式)の結果における個別の子ネコの効果の変動を評価し、総臨床スコア及び総ストレススコアについては、マルチレベル混合効果線形回帰を用いた。群平均コルチゾール濃度を、両側Studentのt検定によって、両群間で比較した。
【００７１】
市販のソフトウエア(STATA reference)を全ての比較に使用した。有意性は、p<0.05と定義した。
【００７２】
結果
臨床所見。全ての子ネコは、試験全体を通して、健全な食欲を持ち、着実に体重が増加し、毛は毎日柔らかく毛繕いされていた。FHV-1感染症に対する医療介入を必要とするネコはいなかった。子ネコ12匹のうち1匹の温度感知マイクロチップが誤作動したため、この子ネコの体温を、腋窩で測定した。G1において、拡散器を導入する以外に子ネコに対して行われた操作はないため、群間の最終的な比較において、この期間をストレス期間として考慮しなかった:期間K1、G2、K2、及びG3からの結果のみを、個別に及び合わせて評価した。平衡期間の終了時、群間の統計的に有意な臨床的差異はなかった(p=0.58)。総臨床スコアの平均値、範囲、及び群比較の結果を、群別及び試験期間別でTable 3(表4)に記載した。
【００７３】
【表４】
2020509091.tif 000005
【００７４】
試験中、咳嗽はほぼ聴取されなかった。ストレス期間前及び期間中、重篤な眼脂が複数のネコにおいて多くの観察時点で記録されたが、結膜炎を伴うことはなかった。試験中、重篤な鼻汁が頻繁に記録されたが、鼻閉を伴う粘液性分泌物は認められなかった。このため、咳嗽、眼脂、及び鼻汁をそれ以上評価しなかった。軽度の鼻閉(スコア=1)はよく報告されたが、中等度のうっ血はほぼ報告されなかったため、このパラメータをそれ以上評価しなかった。くしゃみは、FHV-1感染症を伴う可能性が高い最も一般的な所見であった。G1中に拡散器を設置した後であるが、ストレスの誘導前に、くしゃみに関して群間の差異はなかった(プラセボ群=32.1%、フェロモン群=25.0%)。
【００７５】
個別の子ネコの効果について調整した後、期間K1(p=0.006)、期間G3(p=0.005)、及び合わせたストレス期間(p<0.001)中、くしゃみの発生頻度はフェロモン群の子ネコにおいてより低かった。
【００７６】
行動パラメータ
文献の検討及び臨床採点者の合意に基づき、試験の採点期間の終了時に、この集団において、4つの行動が、ネコのストレスの客観的指標であると考えられた(Table 4(表5))。
【００７７】
【表５】
2020509091.tif 000006
【００７８】
小屋飼育期間中、2群間に多くの差異が認められた(Table 5(表6))。個別の子ネコの効果について調整した後、SS3時点中、プラセボ群の子ネコにおいて、ケージ内を行ったり来たりする頻度がより高く、統計的有意性に近づいた(p=0.05)。
【００７９】
【表６】
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【００８０】
各子ネコの総ストレススコアを、K1及びK2ストレス期間内の4つのストレスに関連する行動のスコアを加算することによって算出した;その後、群間の総ストレススコアを比較した。フェロモン群は、総ストレススコアが、プラセボ群に比して著しく低かった(Table 6(表7))。しかし、個別の子ネコの効果について調整した後、子ネコの総ストレススコアの統計的な群間差はなかった。
【００８１】
【表７】
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【００８２】
範囲は、各群における、子ネコ6匹中の6つの総ストレススコアの最も低い(最小)スコア及び子ネコ6匹中の最も高い(最大)総ストレススコアを示す。
【００８３】
先行する45分間の活動に続いて室内が次第に静まった後、SS4時点の観察期間の終了時に観察及び記録されたため、睡眠は、「落ち着き/くつろぎ」に相互に関連する行動として用いられた。最後の時点で、子ネコがくつろいだ体勢をとり、目を閉じた場合、「睡眠」と記録した。平衡期間中、フェロモン群又はプラセボ群において、いかなる睡眠も生じた子ネコはいなかった(Table 7(表8))。
【００８４】
【表８】
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【００８５】
試験期間G1中、フェロモン群で睡眠を生じたのは2匹のみであり、プラセボ群では睡眠を生じなかった。K1及びK2のストレス期間を合わせた場合(p<0.0001)、並びに4つ全てのストレス期間(K1、G2、K2、及びG3)を合わせた場合(p<0.0001)、フェロモン群で、著しく多くの睡眠事象が生じた。マルチレベル混合効果ロジスティック回帰分析において個別の子ネコの効果について調整した後、4つ全てのストレス期間を合わせた場合(p=0.002)のみ、フェロモン群で、著しく多くの睡眠が生じた。
【００８６】
ストレスの他の潜在的な行動指標が生じることは、この子ネコ集団では稀であった。単離したシャーと鳴く事象は、新規の物と集団で遊んでいる際に子ネコ間で、期間E中に両群で4回、期間G1中に両群で2回、G2及びG3を合わせた期間中にフェロモン群で2回及びプラセボ群で6回生じた。同様に、争いは、新規の物と集団で遊んでいる際に、フェロモン群で期間E中に2回及び期間G1中に1回生じ、並びにプラセボ群で期間G2中に4回生じた。下痢は、試験期間全体を通して、子ネコ3匹に1回及び子ネコ1匹に4回報告された。グループ飼育の際、全ての子ネコは、毎日、ドアの所で採点者を出迎えた。採点期間中、隠れることは、子ネコの間で観察されず、いずれの子ネコもいかなる攻撃的行動又は恐れる行動も示さなかった。
【００８７】
コルチゾールの結果。全ての血清コルチゾール濃度は、研究室によって報告された正常範囲内であった。フェロモン群及びプラセボ群の平均値の結果は、試験の過程で異ならなかった。しかし、コルチゾール平均値の結果は、最初のストレス期間(K1)の開始時と比較した場合、フェロモン群(p=0.046)、プラセボ群(p=0.04)、及び2群の合計(p=0.007)で、最後のストレス期間(G3?)の終了時により高かった。
【００８８】
FHV-1/GAPDH比。子ネコから採取したほぼ全てのスワブから、GAPDHのDNAが増幅されたが、最初のストレス期間(K1)開始後、FHV-1のDNAは、プラセボ群の子ネコ2匹及びフェロモン群の子ネコ4匹でのみ増幅された。FHV-1/GAPDH比が検出可能なサンプル数が、非常に少なく、群間のウイルス排出規模を比較することは不可能であった。最後のストレス期間の終了時におけるコルチゾールの群平均値の結果を、ストレス期間中にFHV-1の排出があったか、又はなかった子ネコ間で比較した場合、統計的差異はなかった(p=0.125)。
【００８９】
考察
FHV-1の標準化された用量を、FHV-1未感染の繁殖期の雌ネコから生まれた子ネコに接種するために使用した場合であっても、疾患の臨床徴候に変動があった。更に、ネコの行動を評価する客観的データの収集は、困難であることがあり、個別のネコは、ストレスへの反応が異なる。ストレスへの反応で、FHV-1に関連する疾病又は障害の再活性化は、数匹のネコで生じないことがあり、再活性化が生じた場合、臨床徴候が認識されるまでの時間は、4〜11日間で変更し得る。このため、異なるストレス期間の結果を合わせることは、本試験において、群間の差異を評価する最も正確な方法であると思われる。著者らは、本パイロット試験の最大の制限は、群毎のネコの組み入れが6匹のみであったことであり、これが群間の統計的有意差を検出する機会を減少させた可能性があると考えている。しかし、個別の子ネコの効果及び4つの想定ストレス期間を合わせたものについて調整した後、フェロモン拡散器を備えた室内の子ネコは、観察期間の終了時に睡眠が増加し、プラセボ拡散器を備えた室内の子ネコと比較して、期間全体を通して、全体的にくしゃみがより少なく、このことは、治療効果を支持している。
【００９０】
FHV-1を再活性化させることを試みる本ストレスモデルが使用されたのは、想定免疫調節活性を有するプロバイオティックに関する1つの試験のみであった。現行の試験に記載の結果と同様、FHV-1の再活性化の根拠はネコによって異なるが、治療効果は証明された。先行する試験では、結膜炎は一般的であり、くしゃみは稀であったが、本明細書に記載の試験では、結膜炎は稀であったが、くしゃみは一般的であった。試験間のこうした差異は、2つの異なるFHV-1株の使用及び接種方法による可能性がある。先行する試験では、FHV-1の野外株を、結膜円蓋に投与したが、本明細書に記載の試験では、異なるFHV-1株を使用して、経鼻接種によって投与した。
【００９１】
本試験では、咳嗽は稀であり、漿液性眼脂は結膜炎を伴わず、粘液性鼻汁は生じず、中等度の鼻閉は稀にしか報告されなかったため、評価は個別に行われなかった。しかし、くしゃみは、客観的所見であり、2名の採点者を同席させていたため、観察期間中、どの子ネコがくしゃみをしたか判定することが可能であった。全ての子ネコは、本試験に組み入れる際、依然として最初のFHV-1感染症からの間欠的なくしゃみを有し、くしゃみは、拡散器を最初に設置したG1中、プラセボ群(その時点の32.1%)及びフェロモン群(25.0%)で依然として一般的であった。しかし、4つの想定ストレス期間において経時的に、フェロモン拡散器を備えた室内のネコは、概して、くしゃみの観察時点の割合が低下したが、プラセボ拡散器を備えた室内のネコは、くしゃみの観察時点の割合が、想定ストレスの誘導前の期間と同程度のままであった(図2)。これらの所見は、プラセボ室内において、恐らくストレス曝露に対する感受性がより高いことによる、FHV-1に関連するくしゃみの再活性化又は持続を示唆し得る。このような試験を今後再び実施する場合、鼻と眼の間のFHV-1接種物を分けることは、自然感染をより良く反映し、疾患の再活性化を認識することができる可能性をより高くすると思われる。
【００９２】
GAPDHは、口腔咽頭スワブ及び結膜スワブのほぼ全てから増幅され、これはサンプル採取が適切であったことを示唆する。しかし、FHV-1のDNAは、これらのサンプル部位及び時点から増幅されることはほぼなかった。接種後、FHV-1は排出されなかったことから、FHV-1のPCR測定結果の多くが偽陰性である可能性は高い。複数の試験によって、感染性微生物の数が免疫反応によって抑えられるため、FHV-1のPCR測定結果は、疾患が存在しても陰性であり得ることが示された。結膜の小さな生検試料の使用は、スワブの使用より感度が高いと思われ、今後の試験における使用を考慮するべきである。
【００９３】
別の制限は、本試験の開始時に、十分に適応させた研究用子ネコにおけるストレスを試験するための、これまでに公表された採点規定がなかったことである。このため、本パイロット試験では、発明者らは、治験責任医師及び観察者が、試験の開始前に把握した独自の性格及び経験を有する特定の子ネコを評価するための、我々自身の行動測定基準を設計することを試みた(Table 2(表3))。子ネコは、すでに十分社交的であり、愛情深く、ヒトの気を引こうとし、研究環境、お互い、及び観察者に慣れていた。全ての子ネコは、優しく扱われること、ヒトとの接触、なでられること、並びにお互い、観察者、及び観察者の採点道具や服装との遊びを受け入れ、しばしば求めた。したがって、隠れること、動けなくなること、硬直、伏せること、シャーと鳴くこと、瞳孔散大、及び耳を後ろに伏せること等、ストレス及び恐れの典型的指標は、このような行動が、これらの特定の子ネコによって示されなかったため、本試験で評価することができなかった。このため、複数の時点中に記録された合計28の行動において、データが収集されたものの、ケージ内を行ったり来たりすること、ケージを叩くこと、ケージ内の乱れ、及び過度に鳴くこと(Table 4(表5)及びTable 5(表6))のみが、群間の統計的比較のため、客観的に評価することができた。最終的に使用された行動採点規定では、我々が、1回の45分間の期間のみ使用し、当日の他の23時間に子ネコを観察しなかったため、全体的なストレス又はくつろぎを評価するために十分なデータが取得されなかったと思われる。したがって、ケージ-ストレス期間は、子ネコが観察されている間に、明らかに子ネコに急激なストレスをもたらす結果となったが、当日の他の23時間における子ネコの行動は不明である。観察者が室内にいない間、子ネコはストレス行動を示さず、このため、持続的なストレスを経験していなかった可能性がある。全ての子ネコは、毛が毛繕いされた状態を保ち、全ての子ネコが食事をとり、適切に体重が増加し、関連する下痢も嘔吐も観察されなかった。
【００９４】
ケージ内を行ったり来たりすること、ケージを叩くこと、ケージ内の乱れ、及び過度に鳴くことは、通常、プラセボ拡散器を備えた室内で数値的により大きいものの、個別の子ネコのばらつきを考慮した後、プラセボ拡散器群で、ケージ内を行ったり来たりすることの増加は、1つの時点でのみ統計的有意性に近づいた(Table 5(表6))。更に、単変量解析で、各小屋飼育期間及び合わせた小屋飼育期間中、プラセボ拡散器の室内にいるネコにおいて、総ストレススコアは著しく高いが、分析を個別の子ネコの変動について調整した場合、この差異は消失した。多変量解析で群間の差異を見出すことに今回失敗したのは、単に標本数が限られていたためであった可能性がある。
【００９５】
FHV-1を再活性化させるために必要なストレスの量、種類、頻度、及び期間は、依然として不明である。上気道疾患(URTD)は、保護施設で頻繁な所見であり、保護施設における滞在日数が増えると、URTDを有する可能性が次第に高まる。ある試験では、80%を超えるネコが、保護施設における14日間で、URTDを発症したことが認められた。しかし、保護施設では、ネコ及び子ネコは、同時にURTD及び臨床徴候の要因となる可能性が高い、ストレス及び集団環境を含む多くの変数に曝されている。我々の試験では、飼育環境の変更及びFHV-1再発に対する影響を評価するための静脈穿刺によってストレスを変化させることを主に試みた。
【００９６】
全てのコルチゾール濃度は、参照研究室からの正常範囲内を維持していたが、両群のネコにおいて、ストレス前の期間と試験終了時のコルチゾール濃度の間に著しい差異があり、ストレスが経時的に生じていたことを示唆した。更に、飼育環境の変更以外に、試験では、採血、採血中に苦しんでいる他の子ネコを目撃すること、及び餌を与える時間の偶発的な変動を含む、ストレスに関連する可能性の高い他の事象があった。11、23、52〜55更に、プラセボ群の子ネコは、常に最初に採点されており、フェロモン拡散器群の子ネコは、プラセボ群の子ネコとヒトとの交流を聞いており、45分間の恐らくストレスのかかる興奮が、更にもたらされた可能性がある。これらの潜在的交絡因子は、今後の試験で検討されるべきである。
【００９７】
多くの測定における群間の差異は、標本数が少ないためであり、これによって、子ネコ間のストレスへの反応における個別の差異が影響を及ぼす可能性がある。個体は、同じストレスに曝されても、ストレスへの反応において幅広い変動を経験する。動物は、ストレスに対する外見上の行動的反応だけではなく、その性格、神経生理学的反応、及び免疫反応においても違いがある。20このため、ストレスに対する今回の子ネコの反応における個別の変動は、対処機構及び対処効率が個体間で異なるため、FHV-1の再活性化及び外見上の臨床徴候における個別の変動を生じる結果にもなった可能性がある。
【００９８】
本試験の子ネコにおいて、くつろいだ状態の最も良い指標は、45分間の観察期間の終了時(SS4)に眠っていることとみなされた。他の活動に続いて室内が次第に静まった後、観察者が45分間室内にいることに子ネコが慣れた後に行動を記録しているため、SS4時点は、本当の睡眠に対する信頼性の高い指標として役立つと、著者らは考えている。平衡期間中、採点を含む室内での活動の時間中、観察者が最初に室内に入った際、又は設備の雑音が室外に聞こえる場合、睡眠は生じなかった。更に、各睡眠の発生中、子ネコはくつろいだ体勢をとり、目を閉じた。45分間の観察時間が完了した際、観察者が退室するために床から立ち上がると、全ての子ネコが目覚めて、時に手足を伸ばし、活発に再度観察者の気を引こうとした。このことは、この行動を、本当にくつろいだ状態の指標とする我々の評価を更に支持する。睡眠は、拡散器を設置した後のフェロモン拡散器を備えた室内で、観察される頻度が次第に増加した(Table 7(表8))。「偽睡眠(Feigning sleep)」は、ネコ、特に、保護施設及びケージ内のネコにおけるストレスの指標として使用され、これは、例えば、動物園に捕獲されているネコ科動物において防御的な睡眠体勢と記述されている。しかし、本明細書では、いずれの子ネコも偽睡眠(feigned sleep)を示していないようであった。
【００９９】
結論。全体として、データは、フェロモン組成物に曝露された子ネコにおける、くしゃみ発生の著しい減少とは対照的に、プラセボ拡散器の室内の子ネコにおける、FHV-1に関連するくしゃみの再活性化又は持続を支持している。プラセボ拡散器の室内と比較して、フェロモン拡散器の室内の子ネコでは、観察期間の終了時に睡眠が増加していることによって証明されるストレスの減少及びくつろぎの増加の根拠によって、フェロモンへの曝露が、ストレス及びFHV-1に関連するくしゃみを減少するという仮説が支持される。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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