(57)【要約】本開示は、ポリマー性スキャフォールド、例えば、タンパク質ベースの認識分子(PBRM)とコンジュゲートしてPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを形成するのに有用なもの、およびそれらのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの、合成の方法を提供する。本開示に係る方法は、高純度のポリマー性スキャフォールドの大規模な調製を可能にする。いくつかの態様において、本開示に係る方法はまた、スキャフォールドおよびそれらのコンジュゲートを、これらを調整するための従来使用されてきた方法よりも良好な収率で調製することを可能にする。ポリマー性スキャフォールドを精製する方法も開示する。2020525441.tif 000146
2020525441.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(A)
2020525441.tif 000139
のポリマー性スキャフォールドまたはその塩を製造する方法であって、
(1)第1の反応混合物を形成する条件下で
2020525441.tif 000140
および
2020525441.tif 000141
を反応させる工程；ならびに
(2)
2020525441.tif 000142
またはその塩を第1の反応混合物に加えて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含む第2の反応混合物を形成する工程
より選択される1つまたは複数の工程を含み、
ここで、
化合物Bまたは式(A)のスキャフォールドは、約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有するポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)(PHF)を含み；
mは約20〜約75の整数であり、
nは約7〜約40の整数であり、かつmとnの比は約2:1〜約3:1であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3は約1〜約5の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は約40〜約75の範囲である、
前記方法。
【請求項２】
PHFが約6kDa〜約8kDaの範囲の分子量を有する、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
化合物Bが約6kDa〜約13kDaの範囲の分子量を有し、かつnがmとnの合計の約26〜34％である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
化合物Bが約7kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有し、かつnがmとnの合計の約28〜32％である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
化合物Bが約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
式(A)のスキャフォールドまたはその塩を単離する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
式(A)のスキャフォールドまたはその塩が逆相HPLC分離で単離される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
逆相HPLC分離が、酢酸ナトリウム緩衝液とアセトニトリルとを含む移動相を用いて実施される、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
逆相HPLC分離の前に、第2の反応混合物が、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはそれらの組み合わせに供される、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１０】
逆相HPLC分離の後に、第2の反応混合物が、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはそれらの組み合わせに供される、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１１】
逆相HPLC分離の前に、第2の反応混合物が1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離に供される、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１２】
逆相HPLC分離の後に、第2の反応混合物が1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離に供される、請求項7または8に記載の方法。
【請求項１３】
式(A)のスキャフォールドが、約4kDa〜約18kDa、約5kDa〜約17kDa、約6kDa〜約16kDa、または約7kDa〜約14.5kDaの範囲の分子量を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
m2が、m、m1、m2およびm3の合計の約5％〜約13％、約6％〜約12％、約7％〜約11％、または約7.5％〜約10.5％である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
m2が、m、m1、m2およびm3の合計の約8％〜約10％である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
m3が、m、m1、m2およびm3の合計の約2％〜約4％である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
化合物Cまたはその塩が第1の反応混合物に加えられる前には化合物Aの少なくとも80％が消費されている、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
化合物Cまたはその塩が加えられる前には第1の反応混合物が単離されていない、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
化合物Aと化合物Bの反応が、カルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第1の温度で実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
第1の反応混合物と化合物Cまたはその塩の反応が、カルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第2の温度で実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
活性化試薬がN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)である、請求項19または20に記載の方法。
【請求項２２】
カップリング試薬がエチル(ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC.HCl)である、請求項19〜21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
第1の温度が約0℃と約15℃の間である、請求項19〜22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
第2の温度が約5℃と約15℃の間である、請求項19〜23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
化合物Aの保護形態を脱保護することによって化合物Aを準備する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
化合物Aの保護形態が
2020525441.tif 000143
である、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
約0℃と約25℃の間の温度で3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イルを(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチルと反応させることによって化合物AAを準備する工程をさらに含む、請求項26に記載の方法。
【請求項２８】
PHFを3-イソシアナトプロパン酸メチルと反応させて化合物Bのメチルエステルを形成することおよび該メチルエステルを化合物Bに変換することによって化合物Bを準備する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
PHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する、請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
PHFが約6kDa〜約8kDaの範囲の分子量を有する、請求項28または29に記載の方法。
【請求項３１】
精製された化合物Bが約6kDa〜約13kDaの範囲の分子量を有するようにかつnがmとnの合計の約26〜34％であるように化合物Bを精製する工程をさらに含む、請求項28〜30のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
精製された化合物Bが約7kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有し、かつnがmとnの合計の約28〜32％である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
精製された化合物Bが約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する、請求項31または32に記載の方法。
【請求項３４】
化合物Bが弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離で精製される、請求項31〜33のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
弱陰イオン交換カラム分離が、リン酸ナトリウム緩衝液を含む移動相を用いて実施される、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離の前に、化合物Bが、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはそれらの組み合わせで精製される、請求項31〜35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離の前に、化合物Bが1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離で精製される、請求項31〜35のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
化合物Cの保護形態を脱保護することによって化合物Cまたはその塩を準備する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
化合物Cの保護形態が
2020525441.tif 000144
である、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
化合物Cの塩がトリフルオロ酢酸塩である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
非吸着クロマトグラフィー分離のうちの少なくとも1つが、架橋デキストランを含むカラムを用いて実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
非吸着クロマトグラフィー分離のうちの少なくとも1つが、セファデックスカラムを用いて実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
接線流ろ過のうちの少なくとも1つが、約650Daと1000Daの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記膜が約650Daの分子量カットオフを有する、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
ナノろ過のうちの少なくとも1つが、約1000Daと4000Daの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記膜が約3500Daの分子量カットオフを有する、請求項45に記載の方法。
【請求項４７】
ろ過のうちの少なくとも1つが、約50kDaと100kDaの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施されて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含有する透過液が得られる、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩が、少なくとも75％、80％、85％、90％、約95％、約98％、または約99％の純度を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
式(A)のスキャフォールドまたはその塩が大規模に生成される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
少なくとも100gの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される、請求項49に記載の方法。
【請求項５１】
少なくとも200g、500g、1kg、1.5kg、2kg、または2.5kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される、請求項49または50に記載の方法。
【請求項５２】
PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを製造する方法であって、
(1)式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩と還元PBRMとを準備する工程；
(2)還元PBRMを式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩に加えて、式(B)
2020525441.tif 000145
のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む第3の反応混合物を形成する工程
を含み、
ここで、
XaおよびXbの一方はHであり、他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、またはXaおよびXbはそれらが結合する炭素原子と一緒になって炭素-炭素二重結合を形成し；
PHFは約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有し；
mは20〜75の整数であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3aは0〜約4の整数であり、
m3bは1〜約5の整数であり、
m、m1、m2、m3a、およびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、かつ
m5は2〜約10の整数である、
前記方法。
【請求項５３】
式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩が、請求項1〜51のいずれか一項に記載の方法を実施することによって調製される、請求項52に記載の方法。
【請求項５４】
還元PBRMが、PBRMを還元剤と反応させることによって調製される、請求項52または53に記載の方法。
【請求項５５】
PBRMが還元剤と約1:2〜約1:4の範囲のモル比、任意で約1:2.4、約1:2.5、約1:3.0、または約1:3.5のモル比で反応される、請求項54に記載の方法。
【請求項５６】
PBRMの1つまたは複数のジスルフィド結合が還元剤によって1つまたは複数のチオール基まで還元される、請求項54または55に記載の方法。
【請求項５７】
還元剤がトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)またはその塩である、請求項54〜56のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
還元剤がトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TECP)塩酸塩である、請求項54〜57のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩が還元PBRMと約0.5:1〜約1.2:1の範囲の重量比で反応される、請求項52〜58のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩が還元PBRMと約0.7:1〜約0.95:1の重量比で反応される、請求項59に記載の方法。
【請求項６１】
式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩と還元PBRMの反応がマレイミドブロッキング化合物を加えることによって停止される、請求項52〜60のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
マレイミドブロッキング化合物が、システイン、N-アセチルシステイン、システインメチルエステル、N-メチルシステイン、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパン酸、2-メルカプト酢酸、メルカプトメタノール、ベンジルチオール、およびそれらの塩からなる群より選択される、請求項61に記載の方法。
【請求項６３】
マレイミドブロッキング化合物がシステインである、請求項62に記載の方法。
【請求項６４】
第3の反応混合物から式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを単離する工程をさらに含む、請求項52〜63のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートがクロマトグラフィー分離で単離される、請求項64に記載の方法。
【請求項６６】
式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートがイオン交換クロマトグラフィー分離で単離される、請求項64または65に記載の方法。
【請求項６７】
式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが強陽イオン交換(SCX)クロマトグラフィー分離で単離される、請求項64〜66のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
強陽イオン交換クロマトグラフィー分離が、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含む移動相を用いて実施される、請求項67に記載の方法。
【請求項６９】
移動相が約5〜約7の範囲のpH値を有する、請求項67または68に記載の方法。
【請求項７０】
移動相が約5.5〜約6.5の範囲のpH値を有する、請求項67〜69のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
移動相が約5.8〜約5.9のpH値を有する、請求項67〜70のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
強陽イオン交換クロマトグラフィー分離が、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される、PBRMに対するAF HPAの比が高い1つまたは複数の酸性フラクションを、第3の反応混合物から除去する、請求項67〜71のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
強陽イオン交換クロマトグラフィー分離が、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される、PBRMに対するAF HPAの比が低い1つまたは複数の塩基性フラクションを、第3の反応混合物から除去する、請求項67〜72のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
強陽イオン交換クロマトグラフィー分離が、1つまたは複数の凝集種およびあらゆる未反応のPBRMを、第3の反応混合物から除去する、請求項67〜73のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される酸性と塩基性のフラクション間に溶出する、PBRMに対するAF HPAの比が所望のものである1つまたは複数のメインフラクションが、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離中に収集され、これによって、精製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが提供される、請求項67〜74のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが、アウリスタチンFヒドロキシルプロピルアミド(AF HPA)およびPBRMを約20:1〜約6:1の範囲の比で含む、請求項52〜75のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
AF HPAとPBRMの比が、約20:1、約19:1、約18:1、約17:1、約16:1、約15:1、約14:1、約13:1、約12:1、約11:1、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、または約6:1である、請求項76に記載の方法。
【請求項７８】
AF HPAとPBRMの比が約10:1〜約15:1である、請求項76または77に記載の方法。
【請求項７９】
生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートがAF HPAおよびPHFを約6:1〜約2:1の範囲の比で含む、請求項52〜78のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
AF HPAとPHFの比が、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、または約2:1である、請求項79に記載の方法。
【請求項８１】
AF HPAとPHFの比が約4:1または約3:1である、請求項79または80に記載の方法。
【請求項８２】
生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートがPHFおよびPBRMを約6:1〜約2:1の範囲の比で含む、請求項52〜81のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
PHFとPBRMの比が、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、または約2:1である、請求項82に記載の方法。
【請求項８４】
PHFとPBRMの比が約4:1または約3:1である、請求項82または83に記載の方法。
【請求項８５】
生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが、少なくとも約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約98％、または約99％の純度を有する、請求項52〜84のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが大規模に生成される、請求項52〜85のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
少なくとも200g、500g、1kg、1.5kg、2kg、または2.5kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される、請求項86に記載の方法。
【請求項８８】
請求項1〜51のいずれか一項に記載の方法によって調製された、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩。
【請求項８９】
請求項52〜87のいずれか一項に記載の方法によって調製された、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート。
【請求項９０】
(1)式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを準備する工程；および
(2)1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートに加えて薬学的組成物を形成する工程
を含む、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む薬学的組成物を製造する方法。
【請求項９１】
式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが請求項52〜87のいずれか一項に記載の方法を実施することによって調製される、請求項90に記載の方法。
【請求項９２】
前記請求項のいずれか一項に記載の方法によって調製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、35 U.S.C. § 119(e)の下で、2017年6月22日に出願された米国仮出願第62/523,378号、2017年8月14日に出願された同第62/545,296号、および2018年1月29日に出願された同第62/623,275号の優先権および恩典を主張する。これらの出願の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
背景
伝統的に、医薬品は主に、経口的に（固体剤形および液剤として）または注射剤として投薬される小分子からなっている。過去30年間で、製剤（即ち、薬物送達の経路および／または速度を制御し、治療剤の必要とされる部位における送達を可能にする組成物）が、ますます普及し複雑化している。それにもかかわらず、新たな処置の開発、ならびにそれらを施すための機構に関する多くの問題および課題は対処されないままである。例えば、多くの薬物は一般的に、それらが体内の望ましい標的に到達する前に部分的分解にさらされるか、もしくは標的以外の組織中に蓄積するかのいずれかのために、または両方のために、限定された、さもなければ低減された効力および治療効果を示す。
【０００３】
従って、薬物送達システムの分野における一つの目的は、生理学的もしくは化学的機構のいずれか、または両方を利用して、薬物を安定させ、治療剤のインビボ移送を制御することができるシステムを通じて、体の特異的に標的とされる領域へ医薬を完全な状態で送達することである。
【０００４】
抗体-薬物コンジュゲートが、標的特異的治療剤として開発されている。様々ながん細胞表面抗原に対する抗体が、微小管（マイタンシノイド類、アウリスタチン類、およびタキサン類；米国特許第5,208,020号（特許文献1）；同第5,416,064号（特許文献2）；同第6,333,410号（特許文献3）；同第6,441,163号（特許文献4）；同第6,340,701号（特許文献5）；同第6,372,738号（特許文献6）；同第6,436,931号（特許文献7）；同第6,596,757号（特許文献8）；および同第7,276,497号（特許文献9）を参照のこと）；DNA（カリケアマイシン、ドキソルビシン、CC-1065アナログ；米国特許第5,475,092号（特許文献10）；同第5,585,499号（特許文献11）；同第5,846,545号（特許文献12）；同第6,534,660号（特許文献13）；同第6,756,397号（特許文献14）；および同第6,630,579号（特許文献15）を参照のこと）のような様々な必須の細胞標的を阻害する種々の細胞傷害剤とコンジュゲートされた。これらの細胞傷害性薬物のいくつかとの抗体コンジュゲートは、がん療法のために病院において積極的に研究されている（Ricart, A. D., and Tolcher, A. W., 2007, Nature Clinical Practice, 4, 245-255（非特許文献1）; Krop et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28, 2698-2704（非特許文献2）を参照のこと）。しかし、既存の抗体-薬物コンジュゲートはいくつかの制限を示した。主要な制限は、標的とする抗原の数が限定されていること、ならびにメトトレキサート、ダウノルビシン、マイタンシノイド類、タキサン類、およびビンクリスチンのようながん薬物の細胞傷害性が比較的穏やかであることに起因して、標的部位へ十分な濃度の薬物を送達することができないことである。有意な細胞傷害性の達成への一つのアプローチは、大量の薬物分子を抗体へ直接的または間接的に連結することである。しかし、そのような大きく修飾された抗体はしばしば、標的抗原への結合が損なわれ、血流からの速いインビボクリアランスを示す。上述のことを考えると、改善された抗体-薬物コンジュゲートおよびそれらを調製する方法を開発する必要性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第5,208,020号
【特許文献２】米国特許第5,416,064号
【特許文献３】米国特許第6,333,410号
【特許文献４】米国特許第6,441,163号
【特許文献５】米国特許第6,340,701号
【特許文献６】米国特許第6,372,738号
【特許文献７】米国特許第6,436,931号
【特許文献８】米国特許第6,596,757号
【特許文献９】米国特許第7,276,497号
【特許文献１０】米国特許第5,475,092号
【特許文献１１】米国特許第5,585,499号
【特許文献１２】米国特許第5,846,545号
【特許文献１３】米国特許第6,534,660号
【特許文献１４】米国特許第6,756,397号
【特許文献１５】米国特許第6,630,579号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ricart, A. D., and Tolcher, A. W., 2007, Nature Clinical Practice, 4, 245-255
【非特許文献２】Krop et al., 2010, J. Clin. Oncol., 28, 2698-2704
【発明の概要】
【０００７】
概要
本開示は、少なくとも部分的には、薬物担持ポリマースキャフォールドを調製する改善された方法の発見に基づいている。
【０００８】
本開示は、タンパク質ベースの認識分子(PBRM)とコンジュゲートするのに有用なポリマー性スキャフォールドを調製しかつ/または精製する方法に関する。本開示はまた、ポリマー性スキャフォールドおよびPBRMを含むそのようなコンジュゲートを調製しかつ/または精製する方法に関する。さらに、本開示は、実質的に高純度でありかつ、煩雑な工程を回避することによって時間およびコストを削減して調製することができるタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)に関する。
【０００９】
一局面において、本開示は、式(A)
2020525441.tif 000003
のポリマー性スキャフォールドまたはその塩を製造する方法であって、
(1)第1の反応混合物を形成する条件下で
2020525441.tif 000004
および
2020525441.tif 000005
を反応させる工程；ならびに
(2)
2020525441.tif 000006
またはその塩を第1の反応混合物に加えて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含む第2の反応混合物を形成する工程
より選択される1つまたは複数の工程を含む方法に関しており、
ここで、
化合物Bまたは式(A)のスキャフォールドは、約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有するポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)(PHF)を含み；
mは約20〜約75の整数であり、
nは約7〜約40の整数であり、かつmとnの比は約2:1〜約3:1であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3は約1〜約5の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は約40〜約75の範囲である。
【００１０】
いくつかの態様において、PHFは約6kDa〜約8kDaの範囲の分子量を有する。
【００１１】
いくつかの態様において、PHFは約6kDa〜約7kDaの範囲の分子量を有する。
【００１２】
いくつかの態様において、化合物Bは約6kDa〜約13kDaの範囲の分子量を有し、かつnはmとnの合計の約26〜34%である。いくつかの態様において、化合物Bは約7kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有し、かつnはmとnの合計の約28〜32%である。いくつかの態様において、化合物Bは約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する。
【００１３】
いくつかの態様において、方法は、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を単離する工程をさらに含む。いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドまたはその塩は逆相HPLC分離で単離される。いくつかの態様において、逆相HPLC分離は、酢酸ナトリウム緩衝液とアセトニトリルとを含む移動相を用いて実施される。いくつかの態様において、逆相HPLC分離の前に、第2の反応混合物は、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはこれらの組み合わせに供される。いくつかの態様において、逆相HPLC分離の前に、第2の反応混合物は1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離に供される。いくつかの態様において、逆相HPLC分離の後に、第2の反応混合物は、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはこれらの組み合わせに供される。いくつかの態様において、逆相HPLC分離の後に、第2の反応混合物は1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離に供される。
【００１４】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドは、約4kDa〜約18kDa、約5kDa〜約17kDa、約6kDa〜約16kDa、または約7kDa〜約14.5kDaの範囲の分子量を有する。
【００１５】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドは約7kDa〜約14.5kDaの範囲の分子量を有する。
【００１６】
いくつかの態様において、m2は、m、m1、m2およびm3の合計の約5%〜約13%、約6%〜約12%、約7%〜約11%、または約7.5%〜約10.5%である。
【００１７】
いくつかの態様において、m2は、m、m1、m2およびm3の合計の約8%〜約10%である。
【００１８】
いくつかの態様において、m3は、m、m1、m2およびm3の合計の約2%〜約4%である。
【００１９】
いくつかの態様において、化合物Cまたはその塩が第1の反応混合物に加えられる前には化合物Aの少なくとも80％が消費されている。
【００２０】
いくつかの態様において、化合物Cまたはその塩が加えられる前には第1の反応混合物は単離されていない。
【００２１】
いくつかの態様において、化合物Aと化合物Bの反応は、カルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第1の温度で実施される。
【００２２】
いくつかの態様において、第1の反応混合物と化合物Cまたはその塩の反応は、カルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第2の温度で実施される。
【００２３】
いくつかの態様において、活性化試薬はN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)である。いくつかの態様において、カップリング試薬はエチル(ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC.HCl)である。いくつかの態様において、第1の温度は約0℃と約15℃の間である。いくつかの態様において、第2の温度は約5℃と約15℃の間である。
【００２４】
いくつかの態様において、方法は、化合物Aの保護形態を脱保護することによって化合物Aを準備する工程をさらに含む。いくつかの態様において、化合物Aの保護形態は
2020525441.tif 000007
である。
【００２５】
いくつかの態様において、方法は、約0℃と約25℃の間の温度で3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イルを(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチルと反応させることによって化合物AAを準備する工程をさらに含む。
【００２６】
いくつかの態様において、方法は、PHFを3-イソシアナトプロパン酸メチルと反応させて化合物Bのメチルエステルを形成することおよび該メチルエステルを化合物Bに変換することによって化合物Bを準備する工程をさらに含む。
【００２７】
いくつかの態様において、PHFは約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する。いくつかの態様において、PHFは約6kDa〜約8kDaの範囲の分子量を有する。
【００２８】
いくつかの態様において、PHFは約6kDa〜約7kDaの範囲の分子量を有する。
【００２９】
いくつかの態様において、方法は、精製された化合物Bが約6kDa〜約13kDaの範囲の分子量を有するようにかつnがmとnの合計の約26〜34%であるように化合物Bを精製する工程をさらに含む。いくつかの態様において、精製された化合物Bは約7kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有し、かつnはmとnの合計の約29〜33%である。いくつかの態様において、精製された化合物Bは約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する。
【００３０】
いくつかの態様において、化合物Bは、弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離で精製される。いくつかの態様において、弱陰イオン交換カラム分離は、リン酸ナトリウム緩衝液を含む移動相を用いて実施される。いくつかの態様において、弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離の前に、化合物Bは、1つまたは複数のろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはそれらの組み合わせで精製される。いくつかの態様において、弱陰イオン交換クロマトグラフィー分離の前に、化合物Bは、1つまたは複数の非吸着クロマトグラフィー分離で精製される。
【００３１】
いくつかの態様において、方法は、化合物Cの保護形態を脱保護することによって化合物Cまたはその塩を準備する工程をさらに含む。いくつかの態様において、化合物Cの保護形態は
2020525441.tif 000008
である。いくつかの態様において、化合物Cの塩はトリフルオロ酢酸塩である。
【００３２】
いくつかの態様において、非吸着クロマトグラフィー分離のうちの少なくとも1つは、架橋デキストランを含むカラムを用いて実施される。いくつかの態様において、非吸着クロマトグラフィー分離のうちの少なくとも1つは、セファデックスカラムを用いて実施される。いくつかの態様において、非吸着クロマトグラフィー分離のうちの少なくとも1つは、セファデックスG-25カラムを用いて実施される。
【００３３】
いくつかの態様において、接線流ろ過の少なくとも1つは、約650Daと1000Daの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施される。いくつかの態様において、膜は約650Daの分子量カットオフを有する。いくつかの態様において、ろ過のうちの少なくとも1つは、約50kDaと100kDaの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施されて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含有する透過液が得られる。
【００３４】
いくつかの態様において、ナノろ過のうちの少なくとも1つは、分子量カットオフが1000Da〜4000Daの間である膜を用いて実施される。いくつかの態様において、膜は約3500Daの分子量カットオフを有する。
【００３５】
いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は、少なくとも75％、80％、85％、90％、約95％、約98％、または約99％の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも75％の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも80%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも85%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも90%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも95%の純度を有する、いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも98%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも99%の純度を有する。
【００３６】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドまたはその塩は大規模に生成される。いくつかの態様において、少なくとも100gの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも200g、500g、1kg、1.5kg、2kg、または2.5kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも200gの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも500gの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも1kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも1.5kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも2kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも2.5kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。
【００３７】
別の局面において、本開示は、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを製造する方法であって、
(1)式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩と還元PBRMとを準備する工程；
(2)還元PBRMを式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩に加えて、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート
2020525441.tif 000009
を含む第3の反応混合物を形成する工程
を含む方法に関しており、
ここで、
XaおよびXbの一方はHであり、他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、またはXaおよびXbはそれらが結合する炭素原子と一緒になって炭素-炭素二重結合を形成し；
PHFは約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有し；
mは20〜75の整数であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3aは0〜約4の整数であり、
m3bは1〜約5の整数であり、
m、m1、m2、m3a、およびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、かつ
m5は2〜約4の整数である。
【００３８】
いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩は本開示の方法を実施することによって調製される。
【００３９】
いくつかの態様において、還元PBRMはPBRMを還元剤と反応させることによって調製される。いくつかの態様において、PBRMは還元剤と約1:2〜約1:4の範囲のモル比、任意で約1:2.4、約1:2.5、約1:3.0、または約1:3.5のモル比で反応される。
【００４０】
いくつかの態様において、PBRMの1つまたは複数のジスルフィド結合は還元剤によって1つまたは複数のチオール基まで還元される。
【００４１】
いくつかの態様において、還元剤はトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)またはその塩である。いくつかの態様において、還元剤はトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)塩酸塩である。
【００４２】
いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩は還元PBRMと約0.5:1〜約1.2:1の範囲の重量比で反応される。いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩は還元PBRMと約0.7:1〜約0.95:1の重量比で反応される。
【００４３】
いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩と還元PBRMの反応はマレイミドブロッキング化合物を加えることによって停止される。いくつかの態様において、マレイミドブロッキング化合物はシステイン、N-アセチルシステイン、システインメチルエステル、N-メチルシステイン、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパン酸、2-メルカプト酢酸、メルカプトメタノール、ベンジルチオール、およびそれらの塩からなる群より選択される。いくつかの態様において、マレイミドブロッキング化合物はシステインである。
【００４４】
いくつかの態様において、方法は、第3の反応混合物から式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを単離する工程をさらに含む。いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはクロマトグラフィー分離で単離される。いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはイオン交換クロマトグラフィー分離で単離される。
【００４５】
いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは強陽イオン交換(SCX)クロマトグラフィー分離で単離される。いくつかの態様において、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離は酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含む移動相を用いて実施される。いくつかの態様において、移動相は約5〜約7の範囲のpH値を有する。いくつかの態様において、移動相は約5.5〜約6.5の範囲のpH値を有する。いくつかの態様において、移動相は約5.8〜約5.9のpH値を有する。
【００４６】
いくつかの態様において、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離は、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される、PBRMに対するAF HPAの比が高い1つまたは複数の酸性フラクションを、第3の反応混合物から除去する。いくつかの態様において、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離は、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される、PBRMに対するAF HPAの比が低い1つまたは複数の塩基性フラクションを、第3の反応混合物から除去する。いくつかの態様において、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離は、1つまたは複数の凝集種を、第3の反応混合物から除去する。いくつかの態様において、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離は、未反応のPBRM種を、第3の反応混合物から除去する。
【００４７】
いくつかの態様において、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される酸性(例えば、早期溶出)と塩基性(例えば、後期溶出)のフラクション間に溶出する、PBRMに対するAF HPAの比が所望のものである1つまたは複数のメインフラクションが、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離中に収集され、これによって、精製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが提供される。
【００４８】
いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはアウリスタチンFヒドロキシルプロピルアミド(AF HPA)およびPBRMを約20:1〜約6:1の範囲の比で含む。いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約20:1、約19:1、約18:1、約17:1、約16:1、約15:1、約14:1、約13:1、約12:1、約11:1、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、または約6:1である。いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約10:1〜約15:1である。いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約10:1〜約12:1である。いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約12:1〜約15:1である。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはAF HPAおよびPHFを約6:1〜約2:1の範囲の比で含む。いくつかの態様において、AF HPAとPHFの比は約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、または約2:1である。いくつかの態様において、AF HPAとPHFの比は約4:1である。
【００４９】
いくつかの態様において、製造された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはPHFおよびPBRMを約6:1〜約2:1の範囲の比で含む。いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、または約2:1である。いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約4:1である。いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約3:1である。
【００５０】
いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約98％、または約99％の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約80％の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約85%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約90%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約95%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約98%の純度を有する。いくつかの態様において、生成された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは少なくとも約99%の純度を有する。
【００５１】
いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは大規模に生成される。いくつかの態様において、少なくとも200g、500g、1kg、1.5kg、2kg、または2.5kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも200gの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも500gの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも1kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも1.5kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも2kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。いくつかの態様において、少なくとも2.5kgの式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが単一のバッチにおいて生成される。
【００５２】
さらに別の局面において、本開示は、本開示の方法によって調製された式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩に関する。
【００５３】
さらに別の局面において、本開示は、本開示の方法によって調製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートに関する。
【００５４】
さらに別の局面において、本開示は、
(1)式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを準備する工程；および
(2)1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートに加えて薬学的組成物を形成する工程
を含む、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む薬学的組成物を製造する方法に関する。
【００５５】
いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは開示の方法を実施することによって調製される。
【００５６】
さらに別の局面において、本開示は、本開示の方法によって調製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む薬学的組成物に関する。
【００５７】
別途定義した場合を除き、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に解釈されるのと同じ意味を有する。本明細書において、単数形は文脈上明らかにそうでない場合を除き複数形も含む。本明細書において記載されるものと同様のまたは等価な方法および材料が本発明の実施または試験に使用され得るが、好適な方法および材料を下に記載する。本明細書において言及される全て刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は参照により組み入れられる。本明細書において援用される参考文献はクレームの発明に対する先行技術であると認めるものではない。矛盾がある場合には、定義を含めて本明細書が優先される。さらに、材料、方法、および例は単なる例示であり、限定することを意図していない。
【００５８】
本明細書において記載される方法の利点の1つは、煩雑な精製工程を伴わない、薬物担持ポリマー性スキャフォールドおよびそれらのコンジュゲートの収率および純度の向上である。例えば、化合物AおよびBからの反応生成物は化合物Cまたはその塩を加える前にワークアップする必要がない。別の利点は、薬物担持ポリマー性スキャフォールドを生成する方法が、少なくとも100gの単一バッチを生成するように容易に拡大可能なことである。さらに別の利点は、本明細書において記載される方法によって製造されたタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)または薬物担持ポリマー性スキャフォールドはエンドトキシンを実質的に含まず、かつ実質的に均質なことである。本明細書において記載される方法、スキャフォールドおよびコンジュゲートの他の特徴および利点は、以下の詳細な説明およびクレームから明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
詳細な説明
本開示は、薬物担持ポリマー性スキャフォールドおよびそれらのPBRMコンジュゲートを製造するための新規な合成方法を提供する。
【００６０】
本開示はまた、本明細書において記載される合成方法によって生成される薬物担持ポリマー性スキャフォールドおよびそれらのコンジュゲートを提供する。
【００６１】
本開示はまた、タンパク質ベースの認識分子(PBRM)とコンジュゲートするのに有用なポリマー性スキャフォールドを調製しかつ/または精製する方法を提供する。
【００６２】
本開示はまた、ポリマー性スキャフォールドおよびPBRMを含むそのようなコンジュゲートを調製しかつ/または精製する方法を提供する。
【００６３】
さらに、本開示はまた、実質的に高純度でありかつ、煩雑な工程を回避することによって、時間およびコストを削減して調製することができるタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)を提供する。
【００６４】
定義/用語
本開示の一部の化合物および特定の官能基の定義も、本明細書においてより詳細に記載する。本開示の目的のため、化学元素は、Periodic Table of the Elements, CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed., 内表紙に従って同定され、特定の官能基は概して、本明細書において記載されるように定義される。さらに、有機化学の一般的な原理だけでなく、特定の官能部分および反応性は、“Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999に記載されており、その全内容は参照により本明細書に組み入れられる。さらに、本明細書に記載されるような合成方法は様々な保護基を利用することが、当業者によって認識されるであろう。
【００６５】
以下の説明および特許請求の範囲の両方における冠詞「1つの（a）」、「1つの（an）」、および「その（the）」の使用は、本明細書において特に示されるかまたは文脈によって明確に否定されない限り、単数形および複数形の両方を包含するように解釈されるものとする。用語「含む」、「有する」、「化学式のものである」におけるような「のものである」、「包含する」、および「含有する」は、特に断りのない限り、非限定用語（即ち、「包含するが限定されない」を意味する）として解釈されるものとする。例えば、ある式のポリマー性スキャフォールドは、その式に示される全てのモノマーユニットを含み、かつ、その式に示されない追加のモノマーユニットも含みうる。さらに、「含む」または別の非限定的な用語がある態様において使用される場合は常に、同じ態様が、中間の用語「から本質的になる」または限定用語「からなる」を使用してより狭く特許請求され得ることが理解されるべきである。
【００６６】
用語「約」、「およそ」、または「おおよその」は、数値に関して使用される場合、値の集合または範囲が含まれることを意味する。例えば、「約X」は、Xの±20%、±10%、±5%、±2%、±1%、±0.5%、±0.2%、または±0.1%である値の範囲を含み、ここで、Xは数値である。一態様において、用語「約」は、指定の値と比べて5%より多いまたはより少ない値の範囲を指す。別の態様において、用語「約」は、指定の値と比べて2%より多いまたはより少ない値の範囲を指す。別の態様において、用語「約」は、指定の値と比べて1%より多いまたはより少ない値の範囲を指す。
【００６７】
値の範囲の記載は、本明細書中で特に示されていない限り、範囲内に入るそれぞれ別々の値を個々に言及することの簡便な方法として役立てることが単に意図されており、本明細書中に個々に記載されているかのように、それぞれ別々の値が、本明細書中に組み入れられる。本明細書において使用される範囲は、特別の定めのない限り、範囲の2つの限界値を含む。例えば、表現「xは1と6との間の整数である」および「xは1〜6の整数である」は両方とも「xは1、2、3、4、5、または6である」を意味し、即ち、用語「XとYとの間」および「X〜Yの範囲」は、XおよびYならびにそれらの間の整数を含む。
【００６８】
本明細書に記載される全ての方法は、本明細書中で特に示されていない限り、または文脈によって特に明確に否定されていない限り、任意の好適な順序で行うことができる。本明細書に提供されるありとあらゆる例、または例示的な記載（例えば、「など」）の使用は、単に本発明をよりよく説明するように意図され、特に明示して請求されていない限り、特許請求の範囲に対する限定として解釈されるべきではない。本明細書中のいかなる記載も、何らかの請求されていない要素が、請求されていることの必須要素であることを示していると解釈されるべきではない。
【００６９】
「抗体」は、免疫グロブリンを含む抗体の全長抗体または機能的断片を指す。「機能的断片」とは、免疫グロブリンまたは抗体の十分な部分が提供されることを意味し、その部分は、その標的細胞集団に関する細胞表面分子、例えばヒト胎児性がん抗原に効果的に結合するかまたはこれと複合体形成する。
【００７０】
本明細書において使用される場合、ヒト胎児性がん抗原としては、例えば、アルファフェトタンパク質などの腫瘍関連タンパク質、がん胎児性抗原、前立腺特異抗原、および胎児性がん抗原タンパク質(未熟ラミニン受容体タンパク質としても公知であり、これは、例えば、大腸がんおよび腎がんと関連付けられてきた)が挙げられる。
【００７１】
免疫グロブリンは、当業者に公知の技術を使用して、精製、組換えによる作製、合成による作製、またはそれらの組み合わせが行われ得る。IgG抗体内のまたはIgG抗体由来の免疫グロブリンが本開示における使用に特によく適しているが、任意のクラスまたはサブクラス由来の免疫グロブリン、例えば、IgG、IgA、IgM、IgD、およびIgEが選択されてもよい。好適には、免疫グロブリンは、抗原の特定のエピトープへ特異的に結合することができる、IgGサブクラス(IgG1、2、3、および4)を含むがこれらに限定されないクラスIgG、またはクラスIgMのものである。抗体は、天然の供給源または組換え供給源由来のインタクトな免疫グロブリンであり得、インタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。抗体は、以下を含む様々な形態で存在し得る：例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、細胞内抗体（「イントラボディ」）、組換え抗体、抗イディオタイプ抗体、ドメイン抗体、直鎖抗体、多重特異性抗体、抗体断片、例えば、Fv、Fab、F(ab)2、F(ab)3、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、単鎖可変断片抗体(scFv)、タンデム/bis-scFv、Fc、pFc’、scFvFc (またはscFv-Fc)、ジスルフィドFv (dsfv)、二重特異性抗体(bc-scFv)、例えばBiTE抗体；ラクダ科抗体、再表面化抗体（resurfaced antibody）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、単一ドメイン抗体(sdAb、NANOBODY（登録商標）としても公知)、キメラ抗体、少なくとも1つのヒト定常領域を含むキメラ抗体、デュアル-アフィニティー抗体、例えば、デュアル・アフィニティー・リターゲティング・プロテイン(DART（商標）)、二価（divalent）(または二価（bivalent）)単鎖可変断片(di-scFv、bi-scFv)、例えばこれらに限定されないが、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディまたはトリボディ、テトラボディなど、および多価抗体。「抗体断片」は、その標的へ結合する免疫グロブリン分子の可変領域の少なくとも一部分、即ち、抗原結合領域を指す。本明細書において使用される場合、用語「抗体」は、特別の定めのない限り、全長抗体および抗体断片の両方を指す。
【００７２】
「タンパク質ベースの認識分子」または「PBRM」は、細胞表面マーカーまたは受容体、例えば、膜貫通タンパク質、表面固定化タンパク質、またはプロトグリカンを認識して、それに結合する分子を指す。PBRMの例としては、抗体（例えば、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズマブ、ラベツズマブ、B7-H4、B7-H3、CA125、CD33、CXCR2、EGFR、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、HER2、NaPi2b、c-Met、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PD-L1、c-Kit、MUC1、および抗5T4）またはペプチド（LHRH受容体ターゲティングペプチド、EC-1ペプチド）、リポカリン、例えば、アンチカリン、タンパク質、例えば、インターフェロン、リンフォカイン、増殖因子、コロニー刺激因子など、ペプチドまたはペプチド模倣物などが挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質ベースの認識分子は、修飾ポリマーコンジュゲートに特定の細胞、組織、または場所をターゲティングさせることに加えて、標的細胞または経路に対する抗増殖性（細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性）活性のような特定の治療効果も有し得る。タンパク質ベースの認識分子は、少なくとも1つの化学反応性基、例えば、-COOH、第一級アミン、第二級アミン、-NHR、-SH、または化学反応性アミノ酸部分もしくは側鎖、例えば、チロシン、ヒスチジン、システイン、もしくはリジンを含むかまたは含むように改変操作され得る。一態様において、PBRMは、所与の標的細胞集団について、細胞表面受容体または抗原のような細胞表面分子に特異的に結合するかまたはこれと複合体形成するリガンド(LG)またはターゲティング部分であり得る。リガンドとその受容体との特異的結合または複合体形成後、細胞は、リガンドまたはリガンド-薬物-コンジュゲートの取込みを許容し、これは次いで、細胞中へ内部移行される。本明細書において使用される場合、細胞表面分子「に特異的に結合するかまたはこれと複合体形成する」または「をターゲティングする」リガンドは、分子間力を介して細胞表面分子と優先的に会合する。例えば、リガンドは、約50nM未満、約5nM未満、または500pM未満のKdで細胞表面分子と優先的に会合することができる。細胞表面分子へのリガンドの結合親和性を測定するための技術は周知であり；例えば、一つの好適な技術は、表面プラズモン共鳴(SPR)と称される。一態様において、リガンドは、ターゲティングに使用され、それが送達する薬物から分離している場合には検出可能な治療効果を有さない。別の態様において、リガンドは、ターゲティング部分、および治療剤または免疫調節剤（例えば、活性薬物またはプロドラッグの活性を高めるため）の両方として機能する。
【００７３】
「生体適合性」は、本明細書において使用される場合、体液または生きている細胞もしくは組織と接触している間に最小限の破壊的なまたはホストの応答作用しか生じない化合物を記述することが意図されている。従って、生体適合性基は、本明細書において使用される場合、上記および本明細書で定義した生体適合性という用語の定義内に入る脂肪族、シクロアルキル、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール部分を指す。用語「生体適合性」はまた、本明細書において使用される場合、化合物が、認識タンパク質、例えば天然に生じる抗体、細胞タンパク質、細胞および生物系の他の成分との最小の相互作用を、そのような相互作用が特に望まれない限り、生じることを意味すると見なされる。従って、上記の最小の相互作用をもたらすことが特に意図されている物質および官能基、例えば薬物およびプロドラッグは、生体適合性であると解釈される。好ましくは（例えば抗新生物薬などの細胞傷害性であることが意図されている化合物を除いて）、意図されている全身インビボ濃度と同様の濃度でのインビトロでの正常細胞へのその添加が、インビボでの化合物の半減期（例えばインビボ投与された化合物のうちの50%が除去／クリアランスされるために必要な期間）と同等の時間の間に1%以下の細胞死をもたらし、そのインビボ投与が、最小限かつ医学的に許容される炎症、異物反応、免疫毒性、化学的毒性、および／または他のそのような有害作用を誘発するならば、化合物は「生体適合性」である。上記の文章において、「正常細胞」という用語は、試験される化合物によって破壊されたり、そうでなければ有意な影響を受けたりすることが意図されていない細胞を指す。
【００７４】
「生分解性」：本明細書において使用される場合、「生分解性」ポリマーとはインビボにおける生物学的プロセスの影響を受けやすいポリマーのことである。本明細書において使用される場合、「生分解性」の化合物または部分は、細胞によって取り込まれると、リソソームもしくは他の化学的機序によって、または加水分解によって、細胞に対する有意な毒性作用無く細胞が再利用できるかまたは処分することができる成分へと解体され得る化合物である。「生体切断性」という用語は、本明細書において使用される場合、「生分解性」と同じ意味を有する。分解フラグメントは、好ましくは、臓器もしくは細胞の過負荷またはそのような過負荷もしくは他の有害作用が原因である病的プロセスをインビボで誘発しないか、またはほとんど誘発しない。生分解プロセスの例としては、酵素的および非酵素的な加水分解、酸化、ならびに還元が挙げられる。本明細書において記載される生分解性タンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)またはそれらのコンポーネント(例えば、生分解性ポリマー性担体、および担体と抗体または薬物分子との間のリンカー)の非酵素的加水分解の好適な条件としては、例えば、リソソームの細胞内区画の温度およびpHにおける生分解性コンジュゲートの水への曝露が挙げられる。一部のタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)またはそれらのコンポーネント(例えば、生分解性ポリマー性担体、および担体と抗体または薬物分子との間のリンカー)の生分解はまた、細胞外で、例えば動物の身体の低pH領域、例えば炎症部位において、分解促進因子を放出する活性化マクロファージまたは他の細胞の近傍で増大し得る。特定の好ましい態様において、pHが約7.5ではポリマー担体の有効な大きさは1〜7日間にわたっては検出可能には変化せず、少なくとも数週間はポリマーの元の大きさの50％以内を維持する。他方、pHが約5ではポリマー担体は好ましくは1〜5日間にわたって検出可能に分解し、2週間〜数ヶ月の時間枠内で低分子量フラグメントへと完全に変換される。そのような試験におけるポリマーの完全性は、例えば、サイズ排除HPLCによって測定することができる。場合によってはより早急な分解が好ましいこともあるが、ポリマーは、通常は、細胞によるフラグメントの代謝または排出の速度を超えない速度で細胞内で分解することがより望ましいであろう。好ましい態様において、ポリマーおよびポリマーの生分解副産物は生体適合性である。
【００７５】
「生物学的利用能」:「生物学的利用能」という用語は、対象に投与された所定量の薬物または化合物の全身的利用能(即ち、血液/血漿レベル)を指す。生物学的利用能は、投与された剤形から体循環に達する薬物または化合物の時間(速度)と総量(程度)の両方の尺度を示す絶対項である。
【００７６】
「親水性」:「親水性」という用語は、例えば、ポリマーのモノマー性ユニット上またはマレイミドブロッキング部分上の、それらを親水性または水溶性にする置換基に関連して、当技術分野におけるこの用語の一般的な意味と本質的に異ならず、イオン性、極性もしくは分極性原子を含有するか、またはそうでなければ水分子によって溶媒和され得る化学部分を表す。従って、親水性基は、本明細書において使用される場合、上に定義した親水性という用語の定義内に入る脂肪族、シクロアルキル、ヘテロ脂肪族、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール部分を指す。好適な特定の親水性有機部分の例としては、原子が約1〜12個の間の範囲の原子鎖を含む脂肪族またはヘテロ脂肪族基、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アミン、カルボキシル、アミド、カルボン酸エステル、チオエステル、アルデヒド、ニトリル、イソニトリル、ニトロソ、ヒドロキシルアミン、メルカプトアルキル、ヘテロ環、カルバメート、カルボン酸およびそれらの塩、スルホン酸およびそれらの塩、スルホン酸エステル、リン酸およびそれら塩、リン酸エステル、ポリグリコールエーテル、ポリアミン、ポリカルボキシレート、ポリエステル、ならびにポリチオエステルが挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において、親水性置換基は、カルボキシル基(COOH)、アルデヒド基(CHO)、ケトン基(COC1〜4アルキル)、メチロール(CH2OH)またはグリコール(例えば、CHOH-CH2OHまたはCH-(CH2OH)2)、NH2、F、シアノ、SO3H、PO3Hなどを含む。
【００７７】
「親水性」という用語は、本開示のポリマーに関連して、通常は当技術分野におけるこの用語の用法と異ならず、上に定義した親水性官能基を含むポリマーを表す。好ましい態様において、親水性ポリマーは水溶性ポリマーである。ポリマーの親水性は水和エネルギーの決定を通じて直接的に測定できるか、または2つの液相間の調査を通じて、もしくは、例えばC4またはC18などの疎水性が公知の固相に対するクロマトグラフィーによって決定できる。
【００７８】
「ポリマー性担体」または「ポリマー性スキャフォールド」：「ポリマー性担体」または「ポリマー性スキャフォールド」という用語は、本明細書において使用される場合、指定されたリンカーを介した1つもしくは複数の薬物分子および/または指定されたリンカーを介した1つもしくは複数のPBRMと共有結合するのに好適であるかまたはそれらと共有結合され得るポリマーまたは修飾ポリマーを指す。いくつかの態様において、ポリマーまたは修飾ポリマーは1つもしくは複数の薬物分子および/または1つもしくは複数のPBRMに共有結合される。
【００７９】
「生理学的条件」：句「生理学的条件」は、本明細書において使用される場合、生体組織の細胞外液体中で遭遇するであろう化学的（例えばpH、イオン強度）および生化学（例えば酵素濃度）条件の範囲に関する。大抵の正常な組織では、生理学的pHは、約7.0から7.4である。循環血漿および正常な間隙液が、正常な生理学的条件の典型的な例を代表する。
【００８０】
「多糖」、「炭水化物」、または「オリゴ糖」：用語「多糖」、「炭水化物」、または「オリゴ糖」は、当技術分野において公知であり、一般に、化学式(CH2O)nを有する物質およびそれらの誘導体を指し、ここで、一般に、n>2である。炭水化物とは、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトン、または簡単な化学変換（例えば、加水分解、酸化、または還元）でのこのような物質への変化である。典型的には、炭水化物は、環状アセタールまたはケタール（例えば、グルコースまたはフルクトース）の形状で存在している。これらの環状ユニット（単糖）は、互いに連結され得、少数（オリゴ糖）または多数（多糖）の単糖ユニットを備えた分子を形成する。しばしば、はっきりと規定された数、種類、および配置の単糖ユニットを備えた炭水化物はオリゴ糖と呼ばれ、一方、可変の数および／または配置の単糖ユニットの分子の混合物からなる炭水化物は、多糖と呼ばれている。「多糖」、「炭水化物」、または「オリゴ糖」という用語は、本明細書中では交換可能に使用される。多糖は、天然の糖（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、リボース、およびキシロース）および／または天然の糖の誘導体（例えば、2’-フルオロリボース、2’-デオキシリボースおよびヘキソース）を含み得る。
【００８１】
「薬物」：本明細書において使用される場合、用語「薬物」は、生物学的に活性であり、その必要がある対象への投与後に所望の生理効果を提供する化合物（例えば、活性な薬学的成分）を指す。
【００８２】
「プロドラッグ」：本明細書において使用される場合、用語「プロドラッグ」は、活性薬物の前駆体、即ち、活性薬物へ変換され得る化合物を指す。典型的に、そのようなプロドラッグは、インビボでプロセッシングへ供され、これは薬物を生理学的活性形態へ変換する。場合によっては、プロドラッグ自体が所望の生理学的効果を有し得る。所望の生理学的効果は、例えば、治療効果、細胞傷害効果、免疫調節効果などであり得る。
【００８３】
「細胞傷害性」：本明細書において使用される場合、用語「細胞傷害性」は、細胞または選択された細胞集団（例えば、がん細胞）に毒性であることを意味する。毒性効果は細胞死および／または溶解を生じさせ得る。ある場合において、毒性効果は、細胞を死には至らしめない破壊的な効果、例えば、細胞増殖の減速または阻止であり得る。細胞傷害効果を達成するために、薬物またはプロドラッグは、特に、DNA損傷剤、微小管破壊剤、または細胞傷害性タンパク質もしくはポリペプチドからなる群より選択され得る。
【００８４】
「細胞増殖抑制性」：本明細書において使用される場合、用語「細胞増殖抑制性」は、細胞成長および／または増殖を阻害または停止する薬物または他の化合物を指す。
【００８５】
「小分子」：本明細書において使用される場合、用語「小分子」は、天然に存在しようと人工的に作り出され（例えば、化学合成により）ようと、比較的に低い分子量を有する分子を指す。好ましい小分子は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトにおいて局所効果または全身効果を生じる点で、生物学的に活性である。ある好ましい態様において、小分子は薬物であり、小分子は、「薬物分子」または「薬物」または「治療剤」と呼ばれる。ある態様において、薬物分子は、約5kDa以下のMWを有する。他の態様において、薬物分子は、約1.5kDa以下のMWを有する。複数の態様において、薬物分子は、ビンカアルカロイド類、アウリスタチン類、デュオカルマイシン類、キナーゼ阻害剤、MEK阻害剤、KSP阻害剤、PI3キナーゼ阻害剤、カリケアマイシン類、SN38、カンプトテシン、トポイソメラーゼ阻害剤、非天然カンプトテシン類、タンパク質合成阻害剤、RNAポリメラーゼ阻害剤、ピロロベンゾジアゼピン類、マイタンシノイド類、DNA結合薬、DNAインターカレーション薬、およびそれらのアナログより選択される。好ましくは、必須ではないものの、この薬剤は、適当な政府機関または行政体、例えばFDAにより既に使用に安全かつ有効であると見なされたものである。例えば、参照により本明細書に組み入れられる、21 C.F.R. §§ 330.5, 331〜361および440〜460にてFDAが挙げたヒトに使用する薬剤；21 C.F.R. §§ 500〜589にてFDAが挙げた動物に使用する薬剤は、全て、本親水性ポリマーとの使用に適していると見なされる。本発明を実施する際に使用できる種類の薬物分子には、抗がん物質、放射性核種、ビタミン、抗エイズ物質、抗生物質、免疫抑制薬、抗ウイルス物質、酵素阻害剤、神経トキシン、オピオイド、催眠薬、抗ヒスタミン剤、潤滑剤、精神安定薬、抗痙攣薬、筋肉弛緩薬および抗パーキンソン物質、鎮痙薬および筋肉収縮薬（チャネル遮断薬、縮瞳薬、および抗コリン薬を含めて）、抗緑内障化合物、抗寄生虫および／または抗原生動物化合物、細胞-細胞外マトリックス相互作用のモジュレーター（細胞成長阻害剤および抗接着分子を含めて）、血管拡張薬、DNA、RNA、またはタンパク質合成の阻害剤、抗高血圧薬、鎮痛薬、解熱薬、ステロイド性および非ステロイド性抗炎症薬、抗血管新生因子、抗分泌因子、抗凝血薬および／または抗血栓薬、局所麻酔薬、眼薬、プロスタグランジン、抗うつ薬、抗精神病物質、制吐薬、造影剤が挙げられるが、これらに限定されない。多くの大分子もまた薬物であり、そのような大分子が、本明細書に記載されるコンジュゲートおよび他の構築物において使用されてもよい。好適な大分子の例としては、例えば、アミノ酸ベースの分子が挙げられる。アミノ酸ベースの分子は、特に、例えば、ペプチド、ポリペプチド、酵素、抗体、免疫グロブリン、またはそれらの機能的断片を包含し得る。
【００８６】
本開示で使用するのに適当なさらに完全な（全てを網羅するものではないが）クラスおよび特定の薬物のリストは、“Pharmaceutical Substances: Syntheses, Patents, Applications” by Axel Kleemann and Jurgen Engel, Thieme Medical Publishing, 1999およびthe “Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs, and Biologicals”, Edited by Susan Budavari et al., CRC Press, 1996に見出すことができ、これらは両方とも参照により本明細書に組み入れられる。好ましい態様において、本開示において使用される薬物は、標的細胞または経路に対して抗増殖性（細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性）活性を有する治療剤である。薬物は、化学反応性基、例えば、-COOH、第一級アミン、第二級アミン、-NHR、-OH、-SH、-C(O)H、-C(O)R、-C(O)NHR2b、C(S)OH、-S(O)2OR2b、-P(O)2OR2b、-CN、-NC、または-ONOを有し得、ここで、Rは、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式またはヘテロシクロアルキル部分であり、R2bは、水素、脂肪族、ヘテロ脂肪族、炭素環式、またはヘテロ環式部分である。
【００８７】
本明細書において使用される場合、「薬物誘導体」または「修飾薬物」などは、本開示のコンジュゲートによって送達されることを意図した薬物分子と、薬物分子をポリマー性担体に結合することができる官能基とを含む化合物を指す。
【００８８】
「活性形態」は、本明細書において使用される場合、インビボまたはインビトロにおいて意図した薬学的有効性を示す化合物の形態を指す。特に、本開示のコンジュゲートによって送達されるように意図される薬物分子がコンジュゲートから放出される場合、活性形態は、意図される治療特性を発揮する薬物自体またはその誘導体であり得る。コンジュゲートからの薬物の放出は、薬物をポリマー担体に結合させているリンカーの生分解性結合の開裂によって達成できる。従って、活性薬物誘導体は、リンカーの一部分を含み得る。
【００８９】
「診断標識」：本明細書において使用される場合、診断標識という用語は、原子、原子群、部分または官能基、ナノ結晶、または他の個別の物質組成物の要素であって、インビボまたはエクスビボで、当業界で公知の分析方法を使用して検出できるものを指す。本発明のコンジュゲートと結び付けられる場合、そのような診断標識は、インビボでのコンジュゲートのモニタリングを可能にする。あるいはまたは加えて、診断標識を含む構築物および組成物は、生物学的機能または構造をモニターするために使用することができる。診断標識の例として、限定されないが、医療診断処置で使用できる標識、例えば、γ-シンチグラフィーおよびポジトロン放射断層撮影（PET）用の放射性アイソトープ（放射性核物質）、磁気共鳴画像法（MRI）用の造影剤（例えば、常磁性原子および超常磁性ナノ結晶）、コンピューター断層撮影および他のX線に基づく画像検査法用の造影剤、超音波に基づく診断方法（超音波検査）用の薬剤、中性子活性化用の薬剤（例えば、ホウ素、ガドリニウム）、種々の光学処置用の蛍光体、ならびに、一般に、放射、反射、吸収、散乱できる、またはそうでなければ電磁界もしくは電磁波に影響を与えることのできる部分（例えば、γ線、X線、電波、マイクロ波、光）、粒子（例えば、α粒子、電子、陽電子、中性子、陽子）、または他の放射形態、例えば超音波が挙げられる。
【００９０】
「コンジュゲート」：「コンジュゲート」という用語は、本明細書において使用される場合、指定されたリンカーを介して1つもしくは複数の薬物分子および/または指定されたリンカーを介して1つもしくは複数のPBRMと共有結合したかまたはそれらに共有結合されたポリマーまたは修飾ポリマーを指す。
【００９１】
以下は、本出願全体にわたって使用される、より一般的な用語である。
【００９２】
「動物」：動物という用語は、本明細書において使用される場合、例えば、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、虫類、および単細胞など、どのような発達段階のものも含む、ヒトおよび非ヒト動物を指す。細胞培養物および生組織サンプルは、複数の動物であると見なされる。好ましくは、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、霊長動物、またはブタ）である。動物は、トランスジェニック動物であってもヒトクローンであってもよい。用語「対象」は動物を包含する。
【００９３】
「有効量」：一般に、活性薬剤または薬物送達デバイスに関して言う場合、用語「有効量」は、所望の生物学的反応を発現させるのに必要な量を言う。当業者には認識されるように、薬剤またはデバイスの有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達されるべき薬剤、封入しているマトリックスの組成、標的組織などの因子に依存して、変動し得る。例えば、個体を免疫するために送達されるべき抗原を含有する微粒子の有効量は、投与された抗原を有する生物の感染を予防するのに十分な免疫応答を生じさせる量である。
【００９４】
「PHF」はポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)を指す。
【００９５】
本明細書において使用される場合、「ポリマーユニット」、「モノマー性ユニット」、「モノマー」、「モノマーユニット」、「ユニット」という用語はすべてポリマー内の繰り返し可能な構造ユニットを指す。
【００９６】
本明細書において使用される場合、ポリマーもしくはポリマー性担体/スキャフォールドまたはポリマーコンジュゲートの「分子量」または「MW」は、特に明記しない限り、重量平均分子量を指す。
【００９７】
「非吸着クロマトグラフィー」は、限定するものではないがセファデックスG-25、G-50、G-100、セファクリル樹脂(例えば、S-200およびS-300)、スーパーデックス樹脂(例えば、スーパーデックス75およびスーパーデックス200)、バイオゲル樹脂(例えば、P-6、P-10、P-30、P-60およびP-100)、および当業者には公知の他のものを包含する非吸着性樹脂を使用したクロマトグラフィーを指す。
【００９８】
本開示は本化合物において生じる原子の全ての同位体を含むように意図されている。同位体には同じ原子番号を有するが質量数が異なる原子が含まれる。一般的な例であって限定ではないが、水素の同位体にはトリチウムおよび重水素が含まれる。炭素の同位体にはC-13およびC-14が含まれる。
【００９９】
本開示は化合物の全ての異性体を含むように意図され、これは光学異性体および互変異性体を指しかつこれらを含み、ここで、光学異性体としては、鏡像異性体とジアステレオマー、キラル異性体、および非キラル異性体が挙げられ、光学異性体には、単離された光学異性体、ならびにラセミおよび非ラセミ混合物を含めた光学異性体の混合物が含まれ；ここで、異性体は、単離された形態かまたは1つもしくは複数の他の異性体との混合物の状態で存在し得る。
【０１００】
ポリマー性担体
特定の例示的な態様において、本開示のコンジュゲートは薬物送達および組織工学などの生物医学用途で使用され、担体は生体適合性および生分解性である。特定の態様において、担体は可溶性ポリマー、ナノ粒子、ゲル、リポソーム、ミセル、縫合糸、インプラントなどである。特定の態様において、「可溶性ポリマー」という用語はポリアール(例えば、親水性ポリアセタールまたはポリケタール)などの生分解性生体適合性ポリマーを包含する。特定の別の態様において、担体は完全合成、半合成または天然のポリマーである。特定の別の態様において、担体は親水性である。
【０１０１】
特定の例示的な態様において、本開示で使用される担体は、主鎖内に位置する各モノマーユニット中に少なくとも1つの加水分解性結合を含む生分解性生体適合性ポリアールである。これは、分解プロセス(モノマーユニットの加水分解/切断を介した)がモノマー性コンポーネントへのポリマーコンジュゲートのフラグメント化(即ち、分解)を確実にもたらし、本開示のポリマーコンジュゲートにそれらの生分解特性を与える。生分解性生体適合性ポリマーコンジュゲートの特性(例えば、溶解性、生体接着性および親水性)は、追加の親水性または疎水性基を後から置換して修飾することができる。本発明を実施するために好適な生分解性生体適合性ポリマーの例は、特に、米国特許第5,811,510号、5,863,990号、5,958,398号、7,838,619号および7,790,150号に見出すことができ、上記の特許文献はそれぞれその全体において参照により本書に組み入れられる。このタイプのポリマーの有意性、調製、および用途に関する手引きは上に引用した文献に見出し得る。特定の態様では、本発明は、上に参照した特許文献や米国特許第5,582,172号および6,822,086号と組み合わせて特に有用であることが見込まれ、上記の特許文献はそれぞれその全体において参照により本書に組み入れられる。
【０１０２】
本開示のコンジュゲートは親水性および加水分解性であり、1つまたは複数の生分解性結合を含有する結合を介してポリマー性担体に共有結合した薬物分子(例えば、ビンカアルカロイドまたは誘導体、トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、SN38、カンプトテシン、トポテカン、エキテカン、非天然カンプトテシン化合物または誘導体；アウリスタチン、ドラスタチン、ネモルビシンおよびその誘導体、PNU-159682、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、キナーゼ阻害剤(例えば、PI3キナーゼ阻害剤またはMEK阻害剤)、KSP阻害剤、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、メイタンシノイド、エリナフィド、DNA結合薬、DNA挿入薬、ならびにそれらの立体異性体、同配体、類似体および誘導体)と、抗体(例えば、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズマブ、ラベツズマブ、B7-H4、B7-H3、CA125、CD33、CXCR2、EGFR、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、HER2、NaPi2b、c-Met、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PD-L1、NaPi2b、c-Kit、MUC1、および抗5T4)またはペプチド(LHRH受容体ターゲティングペプチド、EC-1ペプチド)とを含む。よって、特定の例示的な態様において、本発明を実施するために好適な担体は、主鎖内に位置する各モノマーユニット中に少なくとも1つのアセタール/ケタール酸素原子を有するポリアールである。上に説明したように、これは、分解プロセス(ポリマーアセタール/ケタール基の加水分解/切断を介して)が低分子量コンポーネントへのポリアールコンジュゲートのフラグメント化(即ち、分解)を確実にもたらす。特定の態様において、本開示のポリマーコンジュゲートの調製に使用される生分解性生体適合性ポリマー担体は、天然に存在する多糖類、糖多糖類、ならびにポリグリコシド、ポリアセタール、ポリアミド、ポリエーテル、およびポリエステル由来の合成ポリマー、ならびにそれらの酸化、官能基化(fictionalization)、修飾、架橋、およびコンジュゲーションの生成物である。
【０１０３】
特定の別の態様において、担体は炭水化物、糖多糖類、糖脂質、糖コンジュゲート、ポリアセタール、ポリケタール、およびそれらの誘導体からなる群より選択される親水性生分解性ポリマーである。
【０１０４】
特定の例示的な態様において、担体はセルロース、アミロース、デキストラン、レバン、フコイダン、カラギーナン、イヌリン、ペクチン、アミロペクチン、グリコーゲンおよびリキセナンからなる群より選択される天然に存在する直鎖および/または分岐鎖生分解性生体適合性ホモ多糖類である。
【０１０５】
特定の他の例示的な態様において、担体はアガロース、ヒアルロナン(hyluronan)、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、アルギン酸およびヘパリンからなる群より選択される天然に存在する直鎖および分岐鎖生分解性生体適合性ヘテロ多糖類である。
【０１０６】
さらに別の例示的な態様において、ポリマー性担体はポリアセタール/ポリケタールと、ポリアクリレート、ポリビニルポリマー、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリペプチド、およびそれらの誘導体からなる群より選択される親水性ポリマーとのコポリマーを含む。
【０１０７】
さらに別の態様において、ポリマー性担体は、例えば、コムギ、コメ、トウモロコシおよびタピオカなどの様々な天然物から得られるデンプンの加水分解によって生成されるデキストランである。デンプン出発物質の構造に応じて、各デキストランはα-1,4結合およびα-1,6結合の特有の分布を含む。α-1,6結合の生分解の速度は典型的にはα-1,4結合よりも遅いので、好ましくはα-1,4結合の割合は10％未満、より好ましくは5％未満である。一態様において、デキストランの分子量は約2kDa〜約40kDa、より好ましくは約2kDa〜約20kDa、または約3kDa〜約15kDaまたは約5kDa〜約10kDaもしくは約6.6kDaの範囲である。
【０１０８】
特定の態様において、担体は、薬物分子またはPBRMとのコンジュゲーション前に、1,2-、1,4-、1,6-、および2,6-ピラノシド、ならびに1,2-、1,5-、1,6-フラノシドの環状ビシナルジオールの選択的酸化によって、またはラテラル6-ヒドロキシおよび5,6-ジオール含有多糖類の酸化によって活性化された多糖類を含む。
【０１０９】
また別の態様において、ポリマー性担体は、ポリアセタール繰り返し構造ユニットの少なくともサブセットが以下の化学構造を有する生分解性生体適合性ポリアセタールを含み、
2020525441.tif 000010
式中、nで囲まれたの構造の各出現に関して、R1およびR2の一方は水素であり、他方は生体適合性基であり、C1に共有結合した炭素原子を含み；RxはC2に共有結合した炭素原子であり；n''は整数であり；R3、R4、R5およびR6の各出現は生体適合性基であり、独立して水素または有機部分であり；かつ囲まれた構造nの各出現に関して、R1、R2、R3、R4、R5およびR6の少なくとも1つがカップリングに好適な官能基を含む。特定の態様において、官能基はヒドロキシル部分である。
【０１１０】
一態様において、ポリマー性担体は、骨格が以下の化学構造によって表されるポリアセタール部分を0.1％〜100％含む活性化親水性生分解性生体適合性ポリマーを含み、
(-CH2-CHR7-O-CHR8-O-)o
式中
R7およびR8は、独立して、水素、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル(例えば、-CH2OH、-CH(OH)-CH2OH)、-CHO、-CH(OH)-CHOまたは-カルボニルであり；かつ
oは20〜2000の整数である。
【０１１１】
さらに別の態様において、ポリマー性担体は、ポリケタール繰り返し構造ユニットの少なくともサブセットが以下の化学構造を有する生分解性生体適合性ポリケタールを含み、
2020525441.tif 000011
式中、R1およびR2の各出現は生体適合性基であり、Rx、R3、R4、R5、R6およびは本明細書に定義された通りである。
【０１１２】
特定の態様において、ケタールユニットは式(IIa)または(IIb)のモノマーである。
2020525441.tif 000012
【０１１３】
生分解性生体適合性ポリケタールポリマーおよびそれらの製造方法は米国特許第5,811,510号、7,790,150号および7,838,619号に記載されており、これらは、それらの全体において参照により本書に組み入れられる。
【０１１４】
一態様において、ポリマー性担体は、部分的に酸化したデキストラン(□1→6)-D-グルコース)とそれに続く還元から得ることができる。この態様において、ポリマーは、以下の構造の非修飾デキストラン(A)と、部分的に酸化したデキストランアセタールユニット(B)と、完全なデキストランアセタールユニット(C)とのランダム混合物を含む。
2020525441.tif 000013
【０１１５】
別の態様において、ポリマー性担体は非修飾アセタールユニット、即ちポリアセタールセグメントを含む。いくつかの態様において、ポリアセタールは完全に酸化したデキストランとそれに続く還元から誘導することができる。これらのポリマーは文献に記載されており、例えば、米国特許第5,811,510号を参照されたく、これは、第2欄第65行〜第8欄第55行におけるそのポリアセタールの記載および第10欄第45行目〜第11欄第14行におけるそれらの合成に関して参照により本書に組み入れられる。一態様において、未修飾ポリアセタールポリマーはポリ(ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)ポリマー(PHF)である。
【０１１６】
ポリ(ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)ポリマーに加えて、ポリマー性担体の骨格はポリ(ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール)ブロックと他のアセタールまたは非アセタールモノマーまたはポリマーとの共重合体も含み得る。例えば、ポリエチレングリコールポリマーは、付加された官能基のポリマー側鎖間の相互作用を低減し得るので、ポリマー骨格内のステルス剤として有用である。そのような基は、血清因子と修飾ポリマーの間などの相互作用を制限する際にも有用であり得る。ポリマー骨格に含まれるための他のステルス剤モノマーとしては、例えば、エチレンイミン、メタクリル酸、アクリルアミド、グルタミン酸、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【０１１７】
アセタールまたはケタールユニットは生体適合性を促進するのに有効な量で修飾ポリマー内に存在する。非修飾アセタールまたはケタールユニットは、修飾ポリマーに生体適合性および溶解性を提供する「ステルス剤」として記載され得る。さらに、ポリアセタールまたはポリケタールポリマーへのコンジュゲーションは、それに結合する部分の代謝および分解に対する感受性を修飾し、かつ生体内分布、クリアランスおよび分解に影響を与え得る。
【０１１８】
未修飾アセタールユニットは式(III)のモノマーである。
2020525441.tif 000014
【０１１９】
未修飾ポリアセタールユニットのモル分率nは、修飾ポリマー内のポリマーユニットの総数に対する、生体適合性、溶解性を促進しかつ半減期を延ばすために利用可能なモル分率である。モル分率nは、生体適合性、溶解性、安定性、または特定の半減期を提供するために必要な未修飾モノマーアセタールユニットの最小分率であってもよいし、またはより大きな分率であり得る。最も望ましい細胞毒性の程度は実質的にゼロである、即ち、修飾ポリマーは対象に対して実質的に不活性である。しかしながら、当業者には理解されるように、治療される疾患または症状の重症度、治療の有効性、免疫応答の種類および程度、ならびに同様の考慮事項に応じてある程度の細胞毒性が許容され得る。
【０１２０】
一態様において、修飾ポリマー骨格は式(IV)のユニットを含み、
2020525441.tif 000015
式中、X'はポリマー骨格のヒドロキシル基の置換基を示す。本明細書において記載される式(IV)および他の式に示されるように、各ポリアセタールユニットは、ユニットのグリセロール部分に結合した単一のヒドロキシル基と、ユニットのグリコールアルデヒド部分に結合したX'基(または-LD-Dなどの別の置換基)を有する。これは単に利便性のためであり、本明細書において記載される式(IV)および別の式のユニットを有するポリマーは、ユニットのグリコールアルデヒド部分に結合したX'基(またはマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基)を有するユニット、ユニットのグリセロール部分に結合した単一のX'基(またはマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基)を有するものや、一方がユニットのグリコールアルデヒド部分に結合し他方がグリセロール部分に結合した2つのX'基(またはマレイミド末端を含むリンカーなどの別の置換基)を有するユニットのランダムな分布を含み得ると解釈されたい。
【０１２１】
一態様において、本発明を実施するために好適な生分解性生体適合性ポリアールは約0.5と約300kDaの間の分子量を有する。例えば、生分解性生体適合性ポリアールは約1と約300kDaの間(例えば、約1と約200kDaの間、約2と約300kDaの間、約2と約200kDaの間、約5と約100kDaの間、約10と約70kDaの間、約20と約50kDaの間、約20と約300kDaの間、約40と約150kDaの間、約50と約100kDaの間、約2と約40kDaの間、約6と約20kDaの間、または約8と約15kDaの間)の分子量を有する。例えば、本開示のポリマースキャフォールドまたはコンジュゲートに使用される生分解性生体適合性ポリアールは約2〜約40kDaの間(例えば、約2〜20kDa、3〜15kDa、5〜10kDa、6〜8kDa、または約7〜8kDa)の分子量を有するPHFである。
【０１２２】
一態様において、本発明を実施するために好適な生分解性生体適合性ポリアールは薬物またはPBRMとコンジュゲートする前に修飾される。例えば、ポリアールは、XがCH2、O、またはNHであり、vが1〜6の整数である-C(=O)-X-(CH2)v-C(=O)-を含有する。下の表Aは、薬物またはPBRMもしくはその誘導体とコンジュゲートするために好適な修飾ポリアールのいくつかの例を提供する。
【０１２３】
治療剤
ある態様において、本発明の実施に適した治療剤は、好ましくは≦約5kDa、より好ましくは≦約4kDa、より好ましくは≦約3kDa、最も好ましくは≦約1.5kDaまたは≦約1kDaの分子量を有する小分子である。
【０１２４】
ある態様において、治療剤は約1nM未満のIC50を有する。
【０１２５】
別の態様において、治療剤は約1nMより大きいIC50を有し、例えば、治療剤は約1〜50nMのIC50を有する。
【０１２６】
約1nMより大きいIC50を有するいくつかの治療剤（例えば、「低効力薬物」）は、当技術分野において認識されているコンジュゲーション技術を使用してのPBRMとのコンジュゲーションに不適当である。理論によって束縛されることを望まないが、そのような治療剤は、十分なコピーの薬物（即ち、8個を超える）が、コンジュゲートの薬物動態学的および生理化学的特性を損なうことなく、当技術分野において認識されている技術を使用してコンジュゲートすることができないため、従来の技術を使用しての標的指向型PBRM-薬物コンジュゲートにおける使用に不十分な効力を有する。しかし、本明細書に記載されるコンジュゲーション戦略を使用して、これらの低効力薬物の十分に高いローディングを達成することができ、それによって、望ましい薬物動態学的および生理化学的特性を維持しながら治療剤の高ローディングをもたらすことができる。従って、本開示はまた、PBRM、PHF、および少なくとも8個の治療剤部分を含むPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートに関し、ここで、治療剤は約1nMより大きいIC50を有する。
【０１２７】
ある態様において、約0.3〜約15％、より好ましくは約2〜約12％、さらにより好ましくは約5〜約10％のモノマーが、治療剤を含む。
【０１２８】
本開示において使用される小分子治療剤（例えば、ポリマー担体へ連結され得る抗増殖性（細胞傷害性および細胞増殖抑制性）薬剤）としては、細胞傷害性化合物（例えば、広域）、血管新生阻害剤、細胞周期進行阻害剤、PI3K/m-TOR/AKT経路阻害剤、MAPKシグナル伝達経路阻害剤、キナーゼ阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、HDAC阻害剤、PARP阻害剤、Wnt/ヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤、およびRNAポリメラーゼ阻害剤が挙げられる。
【０１２９】
広域細胞毒としては、DNA結合性インターカレーティングまたはアルキル化薬物、微小管安定化および不安定化剤、白金化合物、トポイソメラーゼI阻害剤、およびタンパク質合成阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３０】
例示的なDNA結合性インターカレーションまたはアルキル化薬としては、CC-1065およびそのアナログ、アントラサイクリン類（ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ネモルビシン、およびその誘導体、PNU-159682）、ビスナフタルイミド（bisnapththalimide）化合物、例えば、エリナフィド(LU79553)およびそのアナログ、アルキル化剤、例えば、カリケアマイシン類、ダクチノマイシン類、ミトロマイシン類、ピロロベンゾジアゼピン類などが挙げられる。例示的なCC-1065アナログとしては、デュオカルマイシンSA、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンC1、デュオカルマイシンC2、デュオカルマイシンB1、デュオカルマイシンB2、デュオカルマイシンD、DU-86、KW-2189、アドゼレシン、ビゼレシン、カルゼレシン、セコ-アドゼレシン、ならびに関連するアナログおよびプロドラッグ形態が挙げられ、これらの例は、米国特許第5,475,092号；同第5,595,499号；同第5,846,545号；同第6,534,660号；同第6,586,618号；同第6,756,397号および同第7,049,316号に記載されている。ドキソルビシンおよびそのアナログとしては、米国特許第6,630,579号に記載されるものが挙げられる。カリケアマイシン類としては、例えば、エンジイン類、例えば、エスペラマイシン、ならびに米国特許第5,714,586号および同第5,739,116号に記載されるものが挙げられる。デュオカルマイシン類としては、米国特許第5,070,092号；同第5,101,038号；同第5,187,186号；同第6,548,530号；同第6,660,742号；および同第7,553,816 B2号；ならびにLi et al., Tet Letts., 50:2932 - 2935 (2009)に記載されるものが挙げられる。
【０１３１】
ピロロベンゾジアゼピン類(PBD)およびそれらのアナログとしては、Denny, Exp. Opin. Ther. Patents., 10(4):459-474 (2000)およびAntonow and Thurston, Chem Rev., 2815-2864 (2010)に記載されるものが挙げられる。
【０１３２】
例示的な微小管安定化および不安定化剤としては、タキサン化合物、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、テセタキセル、およびカバジタキセル；マイタンシノイド類、アウリスタチン類、およびそれらのアナログ、ビンカアルカロイド誘導体、エポチロン類、ならびにクリプトフィシン類が挙げられる。
【０１３３】
例示的なマイタンシノイド類またはマイタンシノイドアナログとしては、マイタンシノールおよびマイタンシノールアナログ、マイタンシンまたはDM-1およびDM-4、ならびに米国特許第5,208,020号；同第5,416,064号；同第6,333.410号；同第6,441,163号；同第6,716,821号；同第RE39,151号および同第7,276,497号に記載されるものが挙げられる。ある態様において、細胞傷害剤は、マイタンシノイド、抗チューブリン剤の別の群（ImmunoGen, Inc.；Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131も参照のこと）、マイタンシノイド類、またはマイタンシノイドアナログである。好適なマイタンシノイドの例としては、マイタンシノールおよびマイタンシノールアナログが挙げられる。好適なマイタンシノイド類は、米国特許第4,424,219号；同第4,256,746号；同第4,294,757号；同第4,307,016号；同第4,313,946号；同第4,315,929号；同第4,331,598号；同第4,361,650号；同第4,362,663号；同第4,364,866号；同第4,450,254号；同第4,322,348号；同第4,371,533号；同第6,333,410号；同第5,475,092号；同第5,585,499号；および同第5,846,545号に開示されている。
【０１３４】
例示的なアウリスタチン類としては、アウリスタチンE (ドラスタチン-10の誘導体としても公知)、アウリスタチンEB (AEB)、アウリスタチンEFP (AEFP)、モノメチルアウリスタチンE (MMAE)、モノメチルアウリスタチンF (MMAF)、アウリスタチンF、アウリスタチンFフェニレンジアミン(AFP)、アウリスタチンF HPA、およびドラスタチンが挙げられる。好適なアウリスタチン類はまた、米国特許出願公開第2003/0083263号、同第2011/0020343号、および同第2011/0070248号；PCT出願公開番号WO 09/117531、WO 2005/081711、WO 04/010957；WO 02/088172およびWO 01/24763、ならびに米国特許第7,498,298号；同第6,884,869号；同第6,323,315号；同第6,239,104号；同第6,124,431号；同第6,034,065号；同第5,780,588号；同第5,767,237号；同第5,665,860号；同第5,663,149号；同第5,635,483号；同第5,599,902号；同第5,554,725号；同第5,530,097号；同第5,521,284号；同第5,504,191号；同第5,410,024号；同第5,138,036号；同第5,076,973号；同第4,986,988号；同第4,978,744号；同第4,879,278号；同第4,816,444号；および同第4,486,414号に記載されており、これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
【０１３５】
例示的なビンカアルカロイドとしては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびナベルビン（ビノレルビン）が挙げられる。本開示において使用され得る好適なビンカアルカロイドはまた、米国特許出願公開第2002/0103136号および同第2010/0305149号、ならびに米国特許第7,303,749 B1号に開示されており、これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
【０１３６】
例示的なエポチロン化合物としては、エポチロンA、B、C、D、E、およびF、ならびにそれらの誘導体が挙げられる。好適なエポチロン化合物およびそれらの誘導体は、例えば、米国特許第6,956,036号；同第6,989,450号；同第6,121,029号；同第6,117,659号；同第6,096,757号；同第6,043,372号；同第5,969,145号；および同第5,886,026号；ならびにWO 97/19086；WO 98/08849；WO 98/22461；WO 98/25929；WO 98/38192；WO 99/01124；WO 99/02514；WO 99/03848；WO 99/07692；WO 99/27890；およびWO 99/28324に記載されており；これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
【０１３７】
例示的なクリプトフィシン化合物は、米国特許第6,680,311号および同第6,747,021号に記載されている。
【０１３８】
例示的な白金化合物としては、シスプラチン(PLATINOL（登録商標）)、カルボプラチン(PARAPLATIN（登録商標）)、オキサリプラチン(ELOXATINE（登録商標）)、イプロプラチン、オルマプラチン、およびテトラプラチンが挙げられる。
【０１３９】
さらに他のクラスの化合物またはこれらのもしくは他の細胞傷害性作用様式を有する化合物が選択されてもよく、これらとしては、例えば、マイトマイシンC、マイトマイシンA、ダウノルビシン、ドキソルビシン、モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、アミノプテリン、ブレオマイシン、1-(クロロメチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ベンゾ[e]インドール-5-オール、ピロロベンゾジアゼピン(PBD)ポリアミドおよびその二量体が挙げられる。他の好適な細胞傷害剤としては、例えば、ピューロマイシン類、トポテカン、リゾキシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エストラムスチン、クリプトフィシン類、セマドチン、ジスコデルモリド、エロイテロビン、およびミトキサントロンが挙げられる。
【０１４０】
例示的なトポイソメラーゼI阻害剤としては、カンプトテシン、カンプトテシン誘導体、カンプトテシンアナログ、および非天然カンプトテシン類、例えば、CPT-11 (イリノテカン)、SN-38、GI-147211C、トポテカン、9-アミノカンプトテシン、7-ヒドロキシメチルカンプトテシン、7-アミノメチルカンプトテシン、10-ヒドロキシカンプトテシン、(20S)-カンプトテシン、ルビテカン、ギマテカン、カレニテシン、シラテカン、ルルトテカン、イクザテカン、ジフロモテカン、ベロテカン、ルルトテカン、およびS39625が挙げられる。本開示において使用され得る他のカンプトテシン化合物としては、例えば、J. Med. Chem., 29:2358-2363 (1986); J. Med. Chem., 23:554 (1980); J. Med. Chem., 30:1774 (1987)に記載されるものが挙げられる。
【０１４１】
血管新生阻害剤としては、MetAP2阻害剤、VEGF阻害剤、PIGF阻害剤、VGFR阻害剤、PDGFR阻害剤、MetAP2阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なVGFRおよびPDGFR阻害剤としては、ソラフェニブ(Nexavar)、スニチニブ(Sutent)、およびバタラニブが挙げられる。例示的なMetAP2阻害剤としては、フマギルアミンを含む、フマギリンコア構造を含む任意の化合物を意味する、フマギロールアナログが挙げられ、これは、Rodeschini et al., J. Org. Chem., 69, 357-373, 2004およびLiu, et al., Science 282, 1324-1327, 1998に記載されるように、タンパク質からNH2末端メチオニンを除去するMetAP-2の能力を阻害する。「フマギロールアナログ」の非限定的な例は、J. Org. Chem., 69, 357, 2004; J.Org. Chem., 70, 6870, 2005; European Patent Application 0 354 787; J. Med. Chem., 49, 5645, 2006; Bioorg. Med. Chem., 11, 5051, 2003; Bioorg. Med. Chem., 14, 91, 2004; Tet. Lett. 40, 4797, 1999; WO99/61432; 米国特許第6,603,812号；同第5,789,405号；同第5,767,293号；同第6,566,541号；および同第6,207,704号に開示されている。
【０１４２】
例示的な細胞周期進行阻害剤としては、CDK阻害剤、例えば、BMS-387032およびPD0332991；Rho-キナーゼ阻害剤、例えば、GSK429286；チェックポイントキナーゼ阻害剤、例えば、AZD7762；オーロラキナーゼ阻害剤、例えば、AZD1152、MLN8054、およびMLN8237；PLK阻害剤、例えば、BI 2536、BI6727 (ボラセルチブ)、GSK461364、ON-01910 (エスチボン（Estybon）)；ならびにKSP阻害剤、例えば、SB 743921、SB 715992 (イスピネシブ)、MK-0731、AZD8477、AZ3146、およびARRY-520が挙げられる。
【０１４３】
例示的なPI3K/m-TOR/AKTシグナル伝達経路阻害剤としては、ホスホイノシチド3キナーゼ(PI3K)阻害剤、GSK-3阻害剤、ATM阻害剤、DNA-PK阻害剤、およびPDK-1阻害剤が挙げられる。
【０１４４】
例示的なPI3キナーゼ阻害剤は、米国特許第6,608,053号に開示されており、BEZ235、BGT226、BKM120、CAL101、CAL263、デメトキシビリジン、GDC-0941、GSK615、IC87114、LY294002、Palomid 529、ペリホシン、PI-103、PF-04691502、PX-866、SAR245408、SAR245409、SF1126、ウォルトマンニン、XL147、およびXL765を含む。
【０１４５】
例示的なAKT阻害剤としては、AT7867が挙げられるが、これに限定されない。
【０１４６】
例示的なMAPKシグナル伝達経路阻害剤としては、MEK、Ras、JNK、B-Raf、およびp38 MAPK阻害剤が挙げられる。
【０１４７】
例示的なMEK阻害剤は、米国特許第7,517,994号に開示されており、GDC-0973、GSK1120212、MSC1936369B、AS703026、RO5126766およびRO4987655、PD0325901、AZD6244、AZD 8330、ならびにGDC-0973を含む。
【０１４８】
例示的なB-raf阻害剤としては、CDC-0879、PLX-4032、およびSB590885が挙げられる。
【０１４９】
例示的なB p38 MAPK阻害剤としては、BIRB 796、LY2228820、およびSB 202190が挙げられる。
【０１５０】
受容体チロシンキナーゼ(RTK)は、がん細胞の無制限増殖および血管新生を刺激するシグナル伝達経路に関連付けられることが多い細胞表面受容体である。過剰発現するか、または受容体の構成的活性化を導く変異を有する、多くのRTKが同定されており、これらとしては、VEGFR、EGFR、FGFR、PDGFR、EphR、およびRET受容体ファミリー受容体が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な特定のRTK標的としては、ErbB2、FLT-3、c-Kit、およびc-Metが挙げられる。
【０１５１】
ErbB2受容体(EGFRファミリー)の例示的な阻害剤としては、AEE788 (NVP-AEE 788)、BIBW2992、(アファチニブ)、ラパチニブ、エルロチニブ(Tarceva)、およびゲフィチニブ(Iressa)が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
2つ以上のシグナル伝達経路を標的とする例示的なRTK阻害剤（多標的キナーゼ阻害剤）としては、FGFR、FLT-3、VEGFR-PDGFR、およびBcr-Abl受容体を標的とするAP24534 (ポナチニブ)；FLT-3およびVEGFR-PDGFR受容体を標的とするABT-869 (リニファニブ)；VEGFR-PDGFR、Flt-1、およびVEGF受容体を標的とするAZD2171；VEGFR-PDGFR、FGFR、Flt-3、およびc-Kit受容体を標的とするCHR-258 (ドビチニブ)；VEGFR、PDGFR、KIT、FLT-3、およびCSF-IRを標的とするスニチニブ(Sutent)；VEGFR、PDGFR、およびRaf/Mek/Erk経路中の細胞内セリン／トレオニンキナーゼを標的とするソラフェニブ(Nexavar)およびバタラニブが挙げられる。
【０１５３】
例示的なタンパク質シャペロン阻害剤としては、HSP90阻害剤が挙げられる。例示的なHSP90阻害剤としては、17AAG誘導体、BIIB021、BIIB028、SNX-5422、NVP-AUY-922、およびKW-2478が挙げられる。
【０１５４】
例示的なHDAC阻害剤としては、ベリノスタット(PXD101)、CUDC-101、ドロキシノスタット、ITF2357 (ギビノスタット、ガビノスタット)、JNJ-26481585、LAQ824 (NVP-LAQ824、ダシノスタット)、LBH-589 (パノビノスタット)、MC1568、MGCD0103 (モセチノスタット)、MS-275 (エンチノスタット)、PCI-24781、ピロキサミド(NSC 696085)、SB939、トリコスタチンA、およびボリノスタット(SAHA)が挙げられる。
【０１５５】
例示的なPARP阻害剤としては、イニパリブ(BSI 201)、オラパリブ(AZD-2281)、ABT-888 (ベリパリブ)、AG014699、CEP 9722、MK 4827、KU-0059436 (AZD2281)、LT-673、3-アミノベンズアミド、A-966492、およびAZD2461が挙げられる。
【０１５６】
例示的なWnt/ヘッジホッグシグナル伝達経路阻害剤としては、ビスモデギブ(RG3616/GDC-0449)、シクロパミン(11-デオキソジェルビン) (ヘッジホッグ経路阻害剤)、およびXAV-939 (Wnt経路阻害剤)が挙げられる。
【０１５７】
例示的なRNAポリメラーゼ阻害剤としてはアマトキシン類が挙げられる。例示的なアマトキシン類としては、α-アマニチン類、β-アマニチン類、γ-アマニチン類、ε-アマニチン類、アマヌリン、アマヌリン酸、アマニンアミド、アマニン、およびプロアマヌリンが挙げられる。
【０１５８】
例示的なタンパク質合成阻害剤としてはトリコテセン化合物が挙げられる。
【０１５９】
一態様において、本開示の薬物は、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、非天然カンプトテシン化合物）、ビンカアルカロイド、キナーゼ阻害剤（例えば、PI3キナーゼ阻害剤(GDC-0941およびPI-103)）、MEK阻害剤、KSP阻害剤、RNAポリメラーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、PARP阻害剤、ドセタキセル、パクリタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カリケアマイシン類、トポテカン、SN38、カンプトテシン、イクザテカン、ネモルビシンおよびその誘導体、PNU-159682、CC1065、エリナフィド、トリコテセン、ピロロベンゾジアゼピン類、マイタンシノイド類、DNA結合薬または白金化合物、およびそれらのアナログである。特定の態様において、薬物は、SN-38の誘導体、カンプトテシン、トポテカン、イクザテカン、カリケアマイシン、イクザテカン、ネモルビシン、PNU-159682、アントラサイクリン、マイタンシノイド、タキサン、トリコテセン、CC1065、エリナフィド、ビンデシン、ビンブラスチン、PI-103、AZD 8330、ドラスタチン、アウリスタチンE、アウリスタチンF、デュオカルマイシン化合物、イスピネシブ、ピロロベンゾジアゼピン、ARRY-520、ならびにそれらの立体異性体、アイソスター、およびアナログである。
【０１６０】
別の態様において、本開示において使用される薬物は、例えば、PI3キナーゼ阻害剤およびMEK阻害剤；広域細胞傷害性化合物および白金化合物；PARP阻害剤、および白金化合物；広域細胞傷害性化合物およびPARP阻害剤のような、2個以上の薬物の組み合わせである。
【０１６１】
さらに別の態様において、本開示において使用される薬物は、アウリスタチンF-ヒドロキシプロピルアミド-L-アラニンである。
【０１６２】
一態様において、ビンカアルカロイドは、式(V)の化合物
2020525441.tif 000016
であり、
式中、
R14は、水素、-C(O)-C1〜3アルキル、または-C(O)-クロロ置換C1〜3アルキルであり；
R15は、水素、-CH3、または-CHOであり；
R17およびR18が独立して選ばれる場合、R18は水素であり、かつ、R16およびR17のいずれかはエチルであり、かつ、他方はヒドロキシルであり；
R17およびR18が、それらが結合されている炭素と一緒になってオキシラン環を形成する場合、R16はエチルであり；
R19は、水素、OH、アミノ基、アルキルアミノ、または-[C(R20R21)]a-R22であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有ヘテロ環式部分を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１６３】
ビンカアルカロイド類のさらなる例は、US8524214B2およびUS 2002/0103136に記載されている。
【０１６４】
一態様において、式(V)のビンカアルカロイドは、式(VI)の化合物：
2020525441.tif 000017
であり、
式中、
R40は、水素、-OH、-NH2、または以下の構造：
2020525441.tif 000018
2020525441.tif 000019
2020525441.tif 000020
のいずれかであり、ここで、
aは、1〜6の整数であり；
gは、2〜6の整数であり；かつ
cは、0〜3の整数である。
【０１６５】
一態様において、式(VI)において、R40は、
2020525441.tif 000021
である。
【０１６６】
別の態様において、R40は、
2020525441.tif 000022
である。
【０１６７】
別の態様において、式(VI)の化合物は、式(VIa)、(VIb)、(VIc)、または(VId)の化合物：
2020525441.tif 000023
2020525441.tif 000024
2020525441.tif 000025
である。
【０１６８】
別の態様において、トポイソメラーゼ阻害剤は、式(VII)のカンプトテシン化合物：
2020525441.tif 000026
であり、
式中、
R24は、-H、-Cl、-F、-OH、もしくはアルキルであり；または、R24およびR25は、一緒になって、置換されてもよい五もしくは六員環を形成してもよく；
R25は、-H、-F、-OH、-CH3、-CH=N-O-t-ブチル、-CH2CH2Si(CH3)3、-Si((CH3)2)-t-ブチル、-O-C(O)-R29であり；
R29は、-NH2、-R28-C1〜6アルキル-R22、5〜12員ヘテロシクロアルキル、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22、もしくは-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；または、R29は、本明細書に定義される通りのR47であり；
R26は、-H、-CH2-N(CH3)2、NH2、またはNO2であり；
R27は、-H、エチル、N-メチルピペリジン、シクロアルキル、-CH2OH、-CH2CH2NHCH(CH3)2、または-N-4-メチルシクロヘキシルアミンであり；
R79は、-Hまたは-C(O)-R28-[C(R20R21)]a-R22であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
あるいは、R26およびR27は、それらが結合する2つの炭素原子、およびこれらの2つの炭素原子を連結する第3の炭素原子と一緒になる場合、置換されてもよい六員環を形成し；
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；
fは、1〜12の整数であり；
uは、整数0または1であり；
wは、整数0または1であり；かつ、
但し、式(VII)の化合物は、R29およびR79のうちの少なくとも1つを含有しなければならない。
【０１６９】
一態様において、式(VII)のカンプトテシン化合物は、式(VIII)、(VIIIa)、もしくは(VIIIb)、または式(XXV)もしくは(XXVa)の化合物：
2020525441.tif 000027
2020525441.tif 000028
であり、
式中、
R30は、-NH2、-R28-[C(R20R21)]a-R22、-R28-C1〜6アルキル-R22、5〜12員ヘテロシクロアルキル、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22または-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１７０】
いくつかの態様において、R30は、以下の構造：
2020525441.tif 000029
のいずれか1つであり、ここで、
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；かつ
gは、2〜6の整数である。
【０１７１】
一態様において、式(VII)において、R30は、
2020525441.tif 000030
である。
【０１７２】
別の態様において、式(VII)の化合物は、式(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、(VIId)、(VIIe)、または(VIIf)の化合物：
2020525441.tif 000031
2020525441.tif 000032
2020525441.tif 000033
である。
【０１７３】
別の態様において、PI3キナーゼ阻害剤は、式(IX)の化合物：
2020525441.tif 000034
であり、
式中、
R47は、アミノ基、-R9-[C(R20R21)]a-R10、-R9-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R10、5〜12員ヘテロシクロアルキル、または-R9-C6〜10アリールであり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R10は、-OH、-NHR83、-N-(R83)R11、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77、または-R82-C(O)-[C(R20R21)]a-R82-R83であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
R9は、非存在、N-(R83)または酸素であり；
R83は、水素またはCH3であり；
R11は以下：
2020525441.tif 000035
であり、各R12は、独立して、水素、クロリド、-CH3、または-OCH3であり；
R13は、水素または-C(O)-(CH2)d-(O-CH2-CH2)f-NH2であり；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり、
X4は、リジン、アルギニン、シトルリン、アラニン、またはグリシンの側鎖であり；
X5は、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、またはトリプトファンの側鎖であり；
X6およびX7の各々は、独立して、グリシン、アラニン、セリン、バリン、またはプロリンの側鎖であり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；
fは、1〜12の整数であり；かつ
各uは、独立して、整数0または1であり；
あるいは、R11は-Yu-Wq-R88であり、
ここで、
Yは、以下の構造：
2020525441.tif 000036
のいずれか1つであり；これらの各々において、Yの末端NR83基はR88の近位にあり；
R83は、水素またはCH3であり；
各Wは、アミノ酸ユニットであり；
各R12’は、独立して、ハロゲン、-C1〜8アルキル、-O-C1〜8アルキル、ニトロ、またはシアノであり；
R88は、水素または-C(O)-(CH2)ff-(NH-C(O))aa-Ej-(CH2)bb-R85であり、
R85は、NH2またはOHであり；
Eは、-CH2-または-CH2CH2O-であり；
uは、整数0または1であり；
qは、0〜12の整数であり；
aaは、整数0または1であり；
bbは、整数0または2であり；
ffは、0〜10の整数であり；
hは、0〜4の整数であり；
jは、0〜12の整数であり；かつ
Eが-CH2-である場合、bbは0でありかつjは0〜10の整数であり；かつ、Eが-CH2CH2-O-である場合、bbは2でありかつjは1〜12の整数であり；
あるいは、R11は、
2020525441.tif 000037
であり；ここで、
R83は、水素またはCH3であり；
R84は、C1〜6アルキルまたはC6〜10アリールであり；
各R12’は、独立して、ハロゲン、-C1〜8アルキル、-O-C1〜8アルキル、ニトロ、またはシアノであり；
hは、0〜4の整数であり；かつ
uは、整数0または1である。
【０１７４】
いくつかの態様において、R11は、
2020525441.tif 000038
であり、ここで、
各R12’は、独立して、クロリド、-CH3、または-OCH3であり；
R88は、水素または-C(O)-(CH2)ff-(CH2-CH2O)j-CH2-CH2-NH2であり；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり、
X4は、リジン、アルギニン、シトルリン、アラニン、またはグリシンの側鎖であり；
X5は、フェニルアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、またはトリプトファンの側鎖であり；
X6およびX7の各々は、独立して、グリシン、アラニン、セリン、バリン、またはプロリンの側鎖であり；
ffは、1〜3の整数であり；
jは、1〜12の整数であり、
hは、0〜4の整数であり；かつ
各uは、独立して、整数0または1である。
【０１７５】
いくつかの態様において、
2020525441.tif 000039
は、シトルリン-バリン；リジン-フェニルアラニン；シトルリン-フェニルアラニン；シトルリン-ロイシン；シトルリン-バリン-グリシン-グリシン；グリシン-フェニルアラニン-グリシン-グリシン；バリン；プロリン；ロイシンまたはイソロイシンである。
【０１７６】
別の態様において、R11は、以下の構造：
2020525441.tif 000040
2020525441.tif 000041
2020525441.tif 000042
のいずれか1つである。
【０１７７】
いくつかの態様において、R47は、以下の構造：
2020525441.tif 000043
2020525441.tif 000044
2020525441.tif 000045
のいずれか1つであり；
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；かつ
gは、2〜6の整数である。
【０１７８】
別の態様において、アウリスタチンは、式(X)の化合物：
2020525441.tif 000046
であり、
式中、
R31およびR32の各々は、独立して、水素またはC1〜8アルキルであり、かつ、R31およびR32のうちの多くとも1つは水素であり；
R33は、水素、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、C6〜10アリール、C1〜8アルキル-C6〜10アリール、X1-(C3〜8炭素環)、C3〜8ヘテロ環、またはX1-(C3〜8ヘテロ環)であり；
R34は、水素、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、C6〜10アリール、X1-C6〜10アリール、X1-(C3〜8炭素環)、C3〜8ヘテロ環、またはX1-(C3〜8ヘテロ環)であり；
R35は、水素またはメチルであり；
あるいは、R34およびR35は、それらが結合する炭素原子と一緒に、式-(CR55R41)b-を有する炭素環式環を形成し、式中、R55およびR41の各々は、独立して、水素またはC1〜8アルキルであり、かつ、bは3〜7の整数であり；
R36は、水素またはC1〜8アルキルであり；
R37は、水素、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、C6〜10アリール、-X1-C6〜10アリール、-X1-(C3〜8炭素環)、C3〜8ヘテロ環、または-X1-(C3〜8ヘテロ環)であり；
各R38は、独立して、水素、OH、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、またはO-(C1〜8アルキル)であり；
R53は、
2020525441.tif 000047
またはR54であり；
R39は、H、C1〜8アルキル、C6〜10アリール、-X1-C6〜10アリール、C3〜8炭素環、C3〜8ヘテロ環、-X1-C3〜8ヘテロ環、-C1〜8アルキレン-NH2、または(CH2)2SCH3であり；
各X1は、独立して、C1〜10アルキレンまたはC3-10シクロアルキレンであり；
R44は、水素またはC1〜8アルキルであり；
R45は、X3-R42またはNH-R19であり；
X3は、OまたはSであり；
R19は、水素、OH、アミノ基、アルキルアミノ、または-[C(R20R21)]a-R22であり；
R42は、アミノ基、C1〜6アルキルアミノ、または-[C(R20R21)]a-R22であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
R54は、-C(R56)2--C(R56)2-C6〜10アリール、-C(R56)2--C(R56)2-C3〜8ヘテロ環、または-C(R56)2--C(R56)2-C3〜8炭素環であり；
R56は、独立して、H、OH、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、-O-C1〜8アルキル、-O-C(O)-R29、および-O-R23-O-C1〜6アルキル-NH2より選択され；
R29は、アミノ基、5〜12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1〜6アルキル-R22、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22、-[C(R20R21)]a-R22、または-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；または、R29は、本明細書に定義される通りのR47であり；
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１７９】
いくつかの態様において、式(X)のアウリスタチン化合物において、
R39は、ベンジルまたは
2020525441.tif 000048
であり；かつ
R44は、水素である。
【０１８０】
別の態様において、アウリスタチンは式(Xa)の化合物：
2020525441.tif 000049
であり、
式中、
R33〜R38およびR44は、本明細書に定義される通りであり、
R31およびR32の一方は、水素またはC1〜8アルキルであり、かつ、他方は、
2020525441.tif 000050
であり、ここで、
R83は、水素またはCH3であり；
R84は、C1〜6アルキルまたはC6〜10アリールであり；
各R12’は、独立して、ハロゲン、-C1〜8アルキル、-O-C1〜8アルキル、ニトロ、またはシアノであり；
hは、0〜4の整数であり；かつ
uは、整数0または1であり；
R53は、
2020525441.tif 000051
またはR54であり、
R39は、H、C1〜8アルキル、C6〜10アリール、-X1-C6〜10アリール、C3〜8炭素環、C3〜8ヘテロ環、-X1-C3〜8ヘテロ環、-C1〜8アルキレン-NH2、または(CH2)2SCH3であり、
各X1は、独立して、C1〜10アルキレンまたはC3-10シクロアルキレンであり；
R45は、X3-R42またはNH-R19であり；
X3は、OまたはSであり；
R19は、水素、OH、アミノ基、アルキルアミノ、または-[C(R20R21)]a-R22であり；
R42は、H、アミノ基、C1〜6アルキルアミノ、または-[C(R20R21)]a-R22であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O-CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
R54は、-C(R56)2--C(R56)2-C6〜10アリール、-C(R56)2--C(R56)2-C3〜8ヘテロ環、または-C(R56)2--C(R56)2-C3〜8炭素環であり；
R56は、独立して、H、OH、C1〜8アルキル、C3〜8炭素環、-O-C1〜8アルキル、-O-C(O)-R29、および-O-R23-O-C1〜6アルキル-NH2より選択され；
R29は、アミノ基、5〜12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1〜6アルキル-R22、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22、-[C(R20R21)]a-R22、または-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；あるいは、R29は、本明細書に定義される通りのR47であり；
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１８１】
一態様において、式(Xa)のアウリスタチン化合物は、式(XIa)または式(XIb)の化合物：
2020525441.tif 000052
であり、
式中、
R92は、
2020525441.tif 000053
であり、かつ、
R83は、水素またはCH3である。
【０１８２】
一態様において、式(X)のアウリスタチンは、式(XI)、式(XII)、または式(XIII)の化合物であり、
ここで、式(XI)の化合物は、
2020525441.tif 000054
であり、
式中、R42は、-CH3または以下の構造：
2020525441.tif 000055
2020525441.tif 000056
のいずれか1つであり；
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；かつ
gは、2〜6の整数であり；
ここで、式(XII)の化合物は、
2020525441.tif 000057
であり、
式中、R40は、水素、-OH、-NH2、または以下の構造：
2020525441.tif 000058
2020525441.tif 000059
のいずれかであり；
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
gは、2〜6の整数であり；かつ
cは、0〜3の整数であり；
ここで、式(XIII)の化合物は、
2020525441.tif 000060
であり、
ここで、
R29は、アミノ基、5〜12員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1〜6アルキル-R22、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22、-R28-[C(R20R21)]a-R22、または-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；あるいは、R29は、本明細書に定義される通りのR47であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１８３】
一態様において、式(XII)中、R40は、
2020525441.tif 000061
である。
【０１８４】
別の態様において、式(XII)の化合物は、式(XIIb)または(XIIc)の化合物：
2020525441.tif 000062
である。
【０１８５】
一態様において、式(XIII)の化合物中、R29は、-NH2、5員ヘテロシクロアルキル、-R28-C1〜6アルキル-R22、R28-C5〜12ヘテロシクロアルキル-C1〜6アルキル-R22、または-R28-C1〜6アルキル-C6〜12アリール-C1〜6アルキル-R22であり；あるいは、R29は、本明細書に定義される通りのR47であり；
R28は、非存在、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり；
R22は、-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１８６】
さらに別の態様において、R29は、以下の構造：
2020525441.tif 000063
2020525441.tif 000064
2020525441.tif 000065
のいずれか1つであり；
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；かつ
gは、2〜6の整数である。
【０１８７】
一態様において、MEK阻害剤は、式(XIV)の化合物：
2020525441.tif 000066
であり、
式中、
R43は、Hまたは-R46-R47であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
R46は、-C(O)-；-C(O)-O-；-C(O)-NH-、または非存在であり；
R47は、本明細書に定義される通りであり；
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１８８】
MEK阻害剤のさらなる例はUS 7,517,994 B2に開示されている。
【０１８９】
いくつかの態様において、R43は、-C(O)-(CH2)a-NH2または-C(O)-C(H)(CH3)-(CH2)c-NH2であり；ここで、aは1〜6の整数であり；かつ、cは0〜3の整数である。
【０１９０】
別の態様において、デュオカルマイシン化合物は、式(XV)の化合物：
2020525441.tif 000067
であり、
式中、
R47は、本明細書に定義される通りであり；
R48は、水素、-COOC1〜6アルキル、-COOH、-NH2、または-CH3であり；
R49は、Cl、Br、または-OHであり；
R50は、水素、-OCH3、
2020525441.tif 000068
であり；
R51およびR52の各々は、独立して、水素または-OCH3であり；かつ、
環AAは、フェニルまたはピロリル環のいずれかである。
【０１９１】
デュオカルマイシン化合物のさらなる例はUS 7,553,816に開示されている。
【０１９２】
一態様において、式(XV)のデュオカルマイシン化合物は、式(XVI)、(XVII)、(XVIII)、または(XIX)の化合物：
2020525441.tif 000069
2020525441.tif 000070
であり；
式中、
R49は、Cl、Br、または-OHであり；かつ
R47は、本明細書に定義される通りである。
【０１９３】
別の態様において、デュオカルマイシン化合物は、式(XX): US 5101038；または(XXI)のデュオカルマイシンSA化合物：
2020525441.tif 000071
であり、
式中、
R42は、C1〜6アルキルアミノまたは-[C(R20R21)]a-R22であり；
R20およびR21の各々は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、ヒドロキシル化C6〜10アリール、ポリヒドロキシル化C6〜10アリール、5〜12員ヘテロ環、C3〜8シクロアルキル、ヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、ポリヒドロキシル化C3〜8シクロアルキル、または天然もしくは非天然アミノ酸の側鎖であり；
R22は、-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(O CH2-CH2)f-N(H)(R23)、または-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77であり；
各R23は、独立して、水素、C1〜6アルキル、C6〜10アリール、C3〜8シクロアルキル、-COOH、または-COO-C1〜6アルキルであり；
X2は、天然または非天然アミノ酸の側鎖であり；
R77は水素であるか、またはX2およびNR77は窒素含有環状化合物を形成し；
R82は、-NH、-N(C1〜6アルキル)、または酸素であり;
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；
dは、1〜3の整数であり；かつ
fは、1〜12の整数である。
【０１９４】
いくつかの態様において、R42は、以下の構造：
2020525441.tif 000072
2020525441.tif 000073
2020525441.tif 000074
のいずれか1つであり、
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
gは、2〜6の整数であり；かつ
cは、0〜3の整数である。
【０１９５】
別の態様において、KSP阻害剤化合物は、式(XXVI)の化合物：
2020525441.tif 000075
であり、式中、R30は本明細書に定義される通りである。
【０１９６】
いくつかの態様において、R30は、
2020525441.tif 000076
であり、
ここで、
aは、1〜6の整数であり；
cは、0〜3の整数であり；かつ
gは、2〜6の整数である。
【０１９７】
別の態様において、デュオカルマイシン化合物は、デュオカルマイシンA、デュオカルマイシンB1、デュオカルマイシンB2、デュオカルマイシンC1、デュオカルマイシンC2、デュオカルマイシンD、CC-1065、アドゼレシン、ビゼレシン、またはカルゼレシンである。
【０１９８】
別の態様において、KSP阻害剤化合物は、式(XXVII)、(XXVIII)、または(XXIX)の化合物：
2020525441.tif 000077
であり、
式中、
R11は本明細書に定義される通りである。
【０１９９】
治療剤分野の当業者は、本明細書に記載される治療剤の各々は、結果として生じる化合物が元の化合物の特異性および／または活性を依然として保持するような方法で、修飾され得ることを容易に理解するであろう。当業者はまた、これらの化合物の多くが、本明細書に記載される治療剤の代わりに使用され得ることを理解するであろう。従って、本開示の治療剤は、本明細書に記載される化合物のアナログおよび誘導体を包含する。
【０２００】
下記表Aは、本開示のポリマー-薬物スキャフォールドまたはポリマー-薬物-タンパク質コンジュゲートを形成するためのコンジュゲーションに適した治療剤およびそれらの誘導体のさらなる例を提供する。特定の化合物のスペクトルデータも提供する（表中のNDは「決定されず」を意味する）。これらの例はまた、インビトロまたはインビボでコンジュゲートから放出される場合の、薬物の活性形態であり得る。
【０２０１】
（表Ａ）
2020525441.tif 000078
2020525441.tif 000079
2020525441.tif 000080
2020525441.tif 000081
2020525441.tif 000082
2020525441.tif 000083
2020525441.tif 000084
2020525441.tif 000085
【０２０２】
タンパク質ベースの認識分子（PBRM）
タンパク質ベースの認識分子は、薬物-ポリマー-担体コンジュゲートを特定の組織、細胞、または細胞中の場所へ向かわせる。タンパク質ベースの認識分子は、修飾ポリマーを培養物へ、または生物全体へ、またはそれら両方へ向かわせることができる。いずれの場合も、タンパク質ベースの認識分子には、標的とする細胞の細胞表面上に存在するリガンドがあり、それへ、有効な特異性、親和性、およびアビディティで結合する。いくつかの態様において、タンパク質ベースの認識分子は、修飾ポリマーを肝臓以外の組織へターゲティングさせる。他の態様において、タンパク質ベースの認識分子は、修飾ポリマーを肝臓、腎臓、肺、または膵臓などの特定の組織へターゲティングさせる。タンパク質ベースの認識分子は、修飾ポリマーを、がん細胞などの標的細胞、例えば、がん細胞などの細胞上に発現される受容体、マトリックス組織、または腫瘍抗原などのがんに関連するタンパク質などへターゲティングさせることができる。あるいは、腫瘍血管系を含む細胞へターゲティングさせ得る。タンパク質ベースの認識分子は、クッパー細胞ではなく肝臓中の肝細胞への特異的ターゲティングなど、ポリマーを特異的な種類の細胞へ向かわせることができる。他の場合において、タンパク質ベースの認識分子は、ポリマーを細網内皮もしくはリンパ系の細胞へ、またはマクロファージもしくは好酸球などの専門の食細胞へ向かわせることができる。（そのような場合、ポリマー自体もまた、特異的ターゲティングを必要としない有効な送達系であり得る）。
【０２０３】
さらに他の態様において、タンパク質ベースの認識分子は、例えば、核、細胞質、またはエンドソームなどの細胞内のある場所へ修飾ポリマーをターゲティングさせることができる。特定の態様において、タンパク質ベースの認識分子は、受容体への細胞結合、または核への細胞質輸送、および核進入またはエンドソームもしくは他の細胞内小胞からの放出を増大させ得る。
【０２０４】
特定の態様において、タンパク質ベースの認識分子としては、抗体、タンパク質、およびペプチドまたはペプチド模倣物が挙げられる。
【０２０５】
好ましい態様において、タンパク質ベースの認識分子はスルフヒドリル基を含み、タンパク質ベースの認識分子は、スルフヒドリル基およびポリマーの官能基を介して共有結合を形成することによって、ポリマー-薬物コンジュゲートへコンジュゲートされる。
【０２０６】
細胞表面マーカーに対して特異的なFab、Fab2、scFv、またはラクダ抗体重鎖フラグメントから得られた例示的な抗体は、5T4、AOC3、ALK、AXL、C242、CA-125、CCL11、CCR 5、CD2、CD3、CD4、CD5、CD15、CA15-3、CD18、CD19、CA19-9、CD20、CD22、CD23、CD25、CD28、CD30、CD31、CD33、CD37、CD38、CD40、CD41、CD44、CD44 v6、CD51、CD52、CD54、CD56、CD62E、CD62P、CD62L、CD70、CD74、CD79-B、CD80、CD125、CD138、CD141、CD147、CD152、CD 154、CD326、CEA、クランピング因子、CTLA-4、CXCR2、EGFR (HER1)、ErbB2、ErbB3、EpCAM、EPHA2、EPHB2、EPHB4、FGFR (即ち、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4)、FLT3、葉酸受容体、FAP、GD2、GD3、GPNMB、HGF、HER2、HER3、HMI.24、ICAM、ICOS-L、IGF-1受容体、VEGFR1、EphA2、TRPV1、CFTR、gpNMB、CA9、Cripto、c-KIT、c-MET、ACE、APP、アドレナリン受容体-β2、クローディン3、メソテリン、MUC1、NaPi2b、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、RON、ROR1、PD-L1、PD-L2、B7-H3、B7-B4、IL-2受容体、IL-4受容体、IL-13受容体、インテグリン(α4、αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、α5β1、α6β4、αIIbβ3インテグリンを含む)、IFN-α、IFN-γ、IgE、IgE、IGF-1受容体、IL-1、IL-12、IL-23、IL-13、IL-22、IL-4、IL-5、IL-6、インターフェロン受容体、ITGB2 (CD18)、LFA-1 (CD11a)、L-セレクチン(CD62L)、ムチン、MUC1、ミオスタチン、NCA-90、NGF、PDGFRα、ホスファチジルセリン、前立腺がん細胞、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、狂犬病、RANKL、呼吸器合胞体ウイルス、アカゲザル因子、SLAMF7、スフィンゴシン-1-ホスファート、TAG-72、T細胞受容体、テネイシンC、TGF-1、TGF-β2、TGF-β、TNF-α、TRAIL-R1、TRAIL-R2、腫瘍抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR2、ビメンチンなどを含むが、これらに限定されない。
【０２０７】
一態様において、細胞表面マーカーに対して特異的なFab、Fab2、scFv、またはラクダ抗体重鎖フラグメントから得られた抗体は、CA-125、C242、CD3、CD19、CD22、CD25、CD30、CD31、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD54、CD56、CD62E、CD62P、CD62L、CD70、CD138、CD141、CD326、CEA、CTLA-4、EGFR (HER1)、ErbB2、ErbB3、FAP、葉酸受容体、IGF-1受容体、GD3、GPNMB、HGF、HER2、VEGF-A、VEGFR2、VEGFR1、EphA2、EpCAM、5T4、TAG-72、テネイシンC、TRPV1、CFTR、gpNMB、CA9、Cripto、ACE、APP、PDGFR α、ホスファチジルセリン、前立腺がん細胞、アドレナリン受容体-β2、クローディン3、ムチン、MUC1、メソテリン、IL-2受容体、IL-4受容体、IL-13受容体およびインテグリン(αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α5β1、α6β4インテグリンを含む)、テネイシンC、TRAIL-R2、およびビメンチンを含む。
【０２０８】
例示的な抗体としては、3F8、アバゴボマブ、アブシキシマブ（REOPRO）、アダリムマブ（HUMIRA）、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ、ALD518、アレムツズマブ（CAMPATH）、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ（CEA-SCAN）、アセリズマブ、アトリズマブ（トシリズマブ、アクテムラ、ロアクテムラ）、アトロリムマブ、バピノイズマブ、バシリキシマブ（シムレクト）、バビツキシマブ、ベクツモマブ（LYMPHOSCAN）、ベリムマブ（BENLYSTA）、ベンラリズマブ、ベルチリムマブ、ベシレソマブ（SCINITIMUN）、ベバシズマブ（AVASTIN）、ビシロマブ（FIBRISCINT）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、ブリアキヌマブ、カナキヌマブ（ILARIS）、カンツズマブ、カプロマブ、カツマキソマブ（REMOVAB）、CC49、セデリズマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ（ERBITUX）、シタツズマブ、シキスツムマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、CR6261、ダセツズマブ、ダクリズマブ（ZENAPAX）、ダラツムマブ、デノスマブ（PROLIA）、デツモマブ、ドルリモマブ、ドルリキシズマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（SOLIRIS）、エドバコマブ、エドレコロマブ（PANOREX）、エファリズマブ（RAPTIVA）、エフングマブ（MYCOGRAB）、エロツズマブ、エルシリモマブ、エンリモマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ（REXOMUN）、エタラシズマブ（ABEGRIN）、エキスビビルマブ、ファノレソマブ（NEUTROSPEC）、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、フィギツムマブ、ホントリズマブ（HuZAF）、ホラビルマブ、フレソリムマブ、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブ、ゴリムマブ（SIMPONI）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ（INDIMACIS-125）、イムシロマブ（MYOSCINT）、インフリキシマブ（REMICADE）、インテツムマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ（CEA-CIDE）、レブリキズマブ、レマレソマブ、レルデリムマブ、レキサツムマブ、リビビルマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ、マスリモマブ、マツズマブ、メポリズマブ（BOSATRIA）、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モロリムマブ、モタビズマブ（NUMAX）、ムロモナブ-CD3（ORTHOCLONE OKT3）、ナコロマブ、ナプツモマブ、ナタリズマブ（TYSABRI）、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネレリモマブ、ニモツズマブ（THERACIM）、ノフェツモマブ、オクレリズマブ、オズリモマブ、オファツムマブ（ARZERRA）、オララツマブ、オマリズマブ（XOLAIR）、オンテシズマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ（OVAREX）、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（SYNAGIS）、パニツムマブ（VECTIBIX）、パノバクマブ、パスコリズマブ、ペムツモマブ（THERAGYN）、ペルツズマブ（OMNITARG）、ペキセリズマブ、ピンツモマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、PRO140、ラフィビルマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ（LUCENTIS）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リツキシマブ（RITUXAN）、ロバツムマブ、ロンタリズマブ、ロベリズ���ブ（LEUKARREST）、ルプリズマブ（ANTOVA）、サツモマブペンデチド、セビルマブ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シプリズマブ、ソラネズマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ（LEUKOSCAN）、タカツズマブ（AFP-CIDE）、テトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトキス、テフィバズマブ（AUREXIS）、テリモマブ、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、TGN1412、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、TNX-650、トシリズマブ（アトリズマブ、ACTEMRA）、トラリズマブ、トシツモマブ（BEXXAR）、トラスツズマブ（HERCEPTIN）、トレメリムマブ、ツコツズマブ、ツビルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（STELERA）、バパリキシマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ビシリズマブ（NUVION）、ボロシキシマブ（HUMASPECT）、ボツムマブ、ザルツムマブ（HuMEX-EGFr）、ザノリムマブ（HuMAX-CD4）、ジラリムマブ、およびゾリモマブが挙げられる。
【０２０９】
いくつかの態様において、抗体は、5T4、CA-125、CEA、CD3、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD40、CD44、CD51、CTLA-4、EpCAM、HER2、EGFR (HER1)、FAP、葉酸受容体、HGF、インテグリンαvβ3、インテグリンα5β1、IGF-1受容体、GD3、GPNMB、ムチン、MUC1、ホスファチジルセリン、前立腺がん細胞、PDGFR α、TAG-72、テネイシンC、TRAIL-R2、VEGF-A、およびVEGFR2についての細胞表面マーカーへ向けられる。この態様において、抗体は、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アラシズマブ、アルツモマブ、アナツモマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベバシズマブ（AVASTIN）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カンツズマブ、カツマキソマブ、カプロマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、ダセツズマブ、エドレコロマブ、エプラツズマブ、エルツマキソマブ、エタラシズマブ、ファルレツズマブ、フィギツムマブ、ゲムツズマブ、グレンバツムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、インテツムマブ、イノツズマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、マツズマブ、ミツモマブ、ナプツモマブ、エスタフェナトキス、ネシツムマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、パニツムマブ、ペムツモマブ、ペルツズマブ、プリツムマブ、リツキシマブ（RITUXAN）、リロツムマブ、ロバツムマブ、サツモマブ、シブロツズマブ、タプリツモマブ、テナツモマブ、テナツモマブ、チシリムマブ（トレメリムマブ）、チガツズマブ、トラスツズマブ（HERCEPTIN）、トシツモマブ、トレメリムマブ、ツコツズマブ、セルモロイキン、ボロシキシマブ、およびザルツムマブである。
【０２１０】
特定の態様において、HER2について、細胞表面マーカーに対する抗体は、ペルツズマブまたはトラスツズマブであり、EGFR (HER1)について、抗体はセツキシマブまたはパニツムマブであり；CD20について、抗体はリツキシマブであり、VEGF-Aについて、抗体はベバシズマブであり、CD-22について、抗体はエプラツズマブまたはベルツズマブであり、CEAについて、抗体はラベツズマブである。
【０２１１】
例示的なペプチドまたはペプチド模倣物としては、インテグリンターゲティングペプチド(RGDペプチド)、LHRH受容体ターゲティングペプチド、ErbB2 (HER2)受容体ターゲティングペプチド、前立腺特異的膜結合抗原(PSMA)ターゲティングペプチド、リポタンパク質受容体LRP1ターゲティングApoEタンパク質由来ペプチド、ApoAタンパク質ペプチド、ソマトスタチン受容体ターゲティングペプチド、クロロトキシン由来ペプチド、およびボンベシンが挙げられる。
【０２１２】
特定の態様において、ペプチドまたはペプチド模倣物は、LHRH受容体ターゲティングペプチドおよびErbB2 (HER2)受容体ターゲティングペプチドである。
【０２１３】
例示的なタンパク質には、インスリン、トランスフェリン、フィブリノーゲンγ断片、トロンボスポンジン、クローディン、アポタンパク質E、アフィボディ分子、例えばABY-025、アンキリン反復タンパク質、アンキリン様反復タンパク質、および合成ペプチドが含まれる。
【０２１４】
いくつかの態様において、タンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート（例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート）は、以下の細胞表面マーカーとの組み合わせで、広域細胞毒を含む：HER2について、例えばペルツズマブまたはトラスツズマブ；EGFRについて、例えばセツキシマブおよびパニツムマブ；CEAについて、例えばラベツズマブ；CD20について、例えばリツキシマブ；VEGF-Aについて、例えばベバシズマブ；CD-22について、例えばエプラツズマブまたはベルツズマブ。
【０２１５】
他の態様において、本開示において使用されるタンパク質-薬物-ポリマーコンジュゲートまたはタンパク質-ポリマーコンジュゲート（例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート）は、2個以上のタンパク質ベースの認識分子の組み合わせ、例えば、腫瘍細胞上のEGF受容体（EGFR）ならびにT細胞上のCD3およびCD28に対する二重特異性抗体の組み合わせ；Fab、Fab2、scFv、またはラクダ抗体重鎖フラグメント由来の抗体と、ペプチドまたはペプチド模倣物との組み合わせ；Fab、Fab2、scFv、またはラクダ抗体重鎖フラグメント由来の抗体と、タンパク質との組み合わせ；2つの二重特異性抗体の組み合わせ、例えば、CD3xCD19およびCD28xCD22二重特異性抗体を含む。
【０２１６】
他の態様において、本開示において使用されるタンパク質-薬物-ポリマーコンジュゲートまたはタンパク質-ポリマーコンジュゲート（例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート）は、抗原に対する抗体であるタンパク質ベースの認識分子を含む：例えば、トラスツズマブ、セツキシマブ、リツキシマブ、ベバシズマブ、エプラツズマブ、ベルツズマブ、ラベツズマブ、B7-H4、B7-H3、CA125、CD33、CXCR2、EGFR、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、HER2、NaPi2b、c-Met、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PD-L1、c-Kit、MUC1、および5T4。
【０２１７】
本明細書において記載されるこれらのターゲティングリガンド、リンカー、および薬物またはプロドラッグフラグメントは、例えば、開示した技術および方法に従って、本開示の治療薬およびターゲティングコンジュゲートにすることができる。本開示の治療的およびターゲティングコンジュゲートならびにそれらを製造するための方法は非限定的な例によって下に説明している。
【０２１８】
コンジュゲートまたはポリマー性スキャフォールド
本開示のコンジュゲートは、治療剤、例えば薬物である、Dの、1つまたは複数の出現を含み、ここで、Dの1つまたは複数の出現は、同一または異なってもよい。
【０２１９】
特定の別の態様において、PBRMの1つまたは複数の出現はポリマー性担体に結合しており、ここで、PBRMの1つまたは複数の出現は同一または異なってもよい。特定の別の態様において、Dの1つまたは複数の出現を含む1つまたは複数のポリマー性担体は、PBRM(例えば、抗体)に結合している。
【０２２０】
上により概略的に説明したように、特定の態様において、各ポリマー性担体は、独立して、Dを含むモノマーを約0.1％〜約25％、より好ましくは約0.5％〜約20％、より好ましくは約1％〜約15％、さらにより好ましくは約2％〜約10％有する。いくつかの態様において、ポリマー性担体は約2kDa〜約40kDaの分子量を有するPHFであり、アウリスタチンFを含むモノマーを約0.3％〜約15％、より好ましくは約2％〜12％、より好ましくは約5％〜10％有する。
【０２２１】
特定の態様において、Dが広範な細胞株における抗増殖活性がIC50＜10pMである薬物である場合、ポリマー性担体は約2kDa〜約40kDaの分子量を有するPHFであり、Dを含むモノマーを約0.1％〜約25％、より好ましくは約2％〜10％、より好ましくは約2％〜5％有する。
【０２２２】
特定の態様において、本開示の方法を使用して合成することができるスキャフォールドは式(Id)のものであり、
2020525441.tif 000086
式中
Dの各出現は、独立して、≦5kDaの分子量を有する治療剤であり、かつDとカルボニル基の間の
2020525441.tif 000087
はカルボニル基へのDの直接的または間接的な結合を表し、
m1は1〜約140の整数であり、かつ
m7は1〜約40の整数であり、ここで、m1とm7の合計はm6(即ち、2〜約180)である。
【０２２３】
一態様において、Dはa)アウリスタチン化合物；(b)カリケアマイシン化合物；(c)デュオカルマイシン化合物；(d)トポイソメラーゼ阻害剤；(e)ピロロベンゾジアゼピン化合物；(f)ビンカ化合物；(g)タンパク質合成阻害剤；(h)RNAポリメラーゼ阻害剤；(i)チューブリン結合化合物；またはそれらの類似体である。
【０２２４】
特定の態様において、Dは(a)アウリスタチン化合物；(b)カリケアマイシン化合物；(c)デュオカルマイシン化合物；(d)カンプトテシン化合物；(e)ピロロベンゾジアゼピン化合物；(f)ビンカ化合物；またはそれらの類似体である。
【０２２５】
いくつかの態様において、アウリスタチン化合物はアウリスタチン、ドラスタチン、モノメチルアウリスタチンE(MMAE)、モノメチルアウリスタチンF(MMAF)、アウリスタチンF、AF HPA、フェニレンジアミン(AFP)である。
【０２２６】
いくつかの態様において、デュオカルマイシンまたはその類似体はデュオカルマイシンA、デュオカルマイシンB1、デュオカルマイシンB2、デュオカルマイシンC1、デュオカルマイシンC2、デュオカルマイシンD、デュオカルマイシンSA、CC-1065、アドゼレシン、ビゼレシン、またはカルゼレシンである。
【０２２７】
いくつかの態様において、カンプトテシン化合物はカンプトテシン、CPT-11(イリノテカン)、SN-38、またはトポテカンである。
【０２２８】
いくつかの態様において、ピロロベンゾジアゼピン化合物はピロロベンゾジアゼピン単量体、対称ピロロベンゾジアゼピン二量体、または非対称ピロロベンゾジアゼピン二量体である。
【０２２９】
式(Id)のポリマー-薬物スキャフォールドは、約40kDa以上(例えば、60kDa以上；80kDa以上；100kDa以上；120kDa以上；140kDa以上；160kDa以上；180kDa以上；もしくは200kDa以上、または約40〜200kDa、40〜180kDa、40〜140kDa、60〜200kDa、60〜180kDa、60〜140kDa、80〜200kDa、80〜180kDa、80〜140kDa、100〜200kDa、100〜180kDa、もしくは100〜140kDa)の分子量を有するPBRMとのコンジュゲーションに有用である。
【０２３０】
いくつかの態様において、40kDa以上(例えば、60kDa以上、80kDa以上、100kDa以上、120kDa以上、140kDa以上、160kDa以上または180kDa以上)の分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。
【０２３１】
いくつかの態様において、40kDa〜200kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。
【０２３２】
いくつかの態様において、40kDa〜80kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約5kDa、10kDaまたは15kDaの分子量を有する。
【０２３３】
この分子量範囲のPBRMとしては、例えば、Fabなどの抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３４】
いくつかの態様において、60kDa〜120kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約5kDa、10kDaまたは15kDaの分子量を有する。
【０２３５】
この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば、ラクダ科のもの、Fab2、scFvFcなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３６】
いくつかの態様において、140kDa〜180kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約5kDa、10kDaまたは15kDaの分子量を有する。この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば、IgG、IgMなどの全長抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３７】
いくつかの態様において、PHFが2kDa〜40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、約7〜8kDa)の分子量を有する場合、PHF当たりの薬物数(例えば、m2)は1〜約40(例えば、約1:20または約2〜15または約3:10)の整数である。このスキャフォールドは、例えば、140kDa〜180kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするために使用することができる。この態様において、PHF当たりのPBRMの比は約1:1と約1:10の間、約1:1と約1:9の間、約1:1と約1:8の間、約1:1と約1:7の間、約1:1と約1:6の間、約1:1と約1:5の間、約1:1と約1:4の間、約1:1と約1:3の間、約1:1と約1:2の間、約1:2と約1:6の間、約1:2と約1:5の間、約1:2と約1:4の間、または約1:2と約1:3の間である。この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば、IgG、IgMなどの全長抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３８】
いくつかの態様において、PHFが2kDa〜40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の分子量を有する場合、PHFあたりの薬物数(例えば、m2)は1〜約40(例えば、約1:20または約2:15または約3:10)の整数である。このスキャフォールドは、例えば、60kDa〜120kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするために使用することができる。この態様において、PHF当たりのPBRMの比は約1:1と約1:10の間、約1:1と約1:9の間、約1:1と約1:8の間、約1:1と約1:7の間、約1:1と約1:6の間、約1:1と約1:5の間、約1:1と約1:4の間、約1:1と約1:3の間、約1:1と約1:2の間、約1:2と約1:6の間、約1:2と約1:5の間、約1:2と約1:4の間、または約1:2と約1:3の間である。この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば抗体断片、例えばFab2、scFcFvおよびラクダ科のものなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３９】
いくつかの態様において、PHFが2kDa〜40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の分子量を有する場合、PHFあたりの薬物数(例えば、m2)は1〜約40(例えば、約1:20または約2〜15または約3:10)の整数である。このスキャフォールドは、例えば、40kDa〜80kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするために使用することができる。この態様において、PHF当たりのPBRMの比は約1:1と約1:10の間、約1:1と約1:9の間、約1:1と約1:8の間、約1:1と約1:7の間、約1:1と約1:6の間、約1:1と約1:5の間、約1:1と約1:4の間、約1:1と約1:3の間、約1:1と約1:2の間、約1:2と約1:6の間、約1:2と約1:5の間、約1:2と約1:4の間、または約1:2と約1:3の間である。この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば、Fabなどの抗体断片が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４０】
特定の態様において、本開示の方法を使用して合成することができるスキャフォールドは式(A)のものまたはその塩であり、
2020525441.tif 000088
ここで
式(A)のスキャフォールドは、約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有するポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)(PHF)を含み；
mは約20〜約75の整数であり、m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3は約1〜約5の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は約40〜約75の範囲である。
【０２４１】
特定の態様において、本開示の方法を使用して合成することができるPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは式(Ie)のものであり、
2020525441.tif 000089
式中
Dの各出現は、独立して、≦5kDaの分子量を有する治療剤であり、かつDとカルボニル基の間の
2020525441.tif 000090
はカルボニル基へのDの直接的または間接的な結合を表し、
XaおよびXbの一方はHであり、他方はマレイミドブロッキング部分であるか、またはXaおよびXbはそれらが結合している炭素原子と一緒になって炭素-炭素二重結合を形成し；
m3aは0〜約17の整数であり、
m3bは1〜約8の整数であり、ここでm3aとm3bの合計はm3であり、
m、m1、m7、m3a、およびm3bの合計は約15〜約300の範囲であり、かつ
m5は1〜約10の整数である。
【０２４２】
いくつかの態様において、PBRMは約40kDa以上(例えば、60kDa以上；80kDa以上；100kDa以上；120kDa以上；140kDa以上；160kDa以上；180kDa以上；もしくは200kDa以上、または約40〜200kDa、40〜180kDa、40〜140kDa、60〜200kDa、60〜180kDa、60〜140kDa、80〜200kDa、80〜180kDa、80〜140kDa、100〜200kDa、100〜180kDa、もしくは100〜140kDa)の分子量を有する。
【０２４３】
いくつかの態様において、PBRMは約40kDa以上(例えば、60kDa以上；80kDa以上；100kDa以上；120kDa以上；140kDa以上；160kDa以上；180kDa以上；もしくは200kDa以上、または約40〜200kDa、40〜180kDa、40〜140kDa、60〜200kDa、60〜180kDa、60〜140kDa、80〜200kDa、80〜180kDa、80〜140kDa、100〜200kDa、100〜180kDa、もしくは100〜140kDa)の分子量を有し、かつ、スルフヒドリル(即ち、-SHまたはチオール)基を有する。
【０２４４】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数(または結合点の総数)は約10以下である。
【０２４５】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約1:1より大きく、約10:1以下である。
【０２４６】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1である。
【０２４７】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約2:1と約8:1の間である。
【０２４８】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1である。
【０２４９】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約2:1と約5:1の間である。
【０２５０】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約5:1、4:1、3:1、または2:1である。
【０２５１】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約2:1〜約4:1の範囲である。
【０２５２】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約4:1、3:1、または2:1である。
【０２５３】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約4:1または3:1である。
【０２５４】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約4:1である。
【０２５５】
いくつかの態様において、m7とm3bの比は約3:1である。
【０２５６】
いくつかの態様において、DとPBRMの比は約2:1〜約40:1、約4:1〜約30:1、約6:1〜約20:1、約8:1〜約18:1、または10:1〜約15:1の範囲であり得る。
【０２５７】
いくつかの態様において、式(Ie)におけるPHFが約2kDa〜約20kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m1、m7、m3aおよびm3bの合計は約15〜約150の範囲であり、m1は1〜約70の整数であり、m7は1〜約20の整数であり、m3aは0〜約9の整数であり、m3bは1〜約8の整数であり、かつm5は2〜約8の整数である。
【０２５８】
いくつかの態様において、式(Ie)におけるPHFが約3kDa〜約15kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m1、m7、m3aおよびm3bの合計は約20〜約110の範囲であり、m1は2〜約50の整数であり、m7は2〜約15の整数であり、m3aは0〜約7の整数であり、m3bは1〜約8の整数であり、かつm5は2〜約4の整数である。
【０２５９】
いくつかの態様において、式(Ie)におけるPHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m1、m7、m3aおよびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、m1は約5〜約35の整数であり、m7は約3〜約10の整数であり、m3aは0〜約4の整数であり、m3bは1〜約5の整数であり、かつm5は2〜約4の整数である。
【０２６０】
いくつかの態様において、本開示の方法を使用して合成することができるPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは式(B)のものであり、
2020525441.tif 000091
ここで
XaおよびXbの一方はHであり、他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、またはXaおよびXbはそれらが結合している炭素原子と一緒になって炭素-炭素二重結合を形成し；
PHFは約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有し；
mは20〜75の整数であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3aは約0〜約4の整数であり、
m3bは約1〜約5の整数であり、
m、m1、m2、m3a、およびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、かつ
m5は2〜約5の整数である。
【０２６１】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約30:1、29:1、28:1、27:1、26:1、25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1または6:1であり得る。
【０２６２】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２６３】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1または12:1であり得る。
【０２６４】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２６５】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約15:1、14:1、13:1、12:1、11:1または10:1であり得る。
【０２６６】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約15:1、14:1、13:1または12:1であり得る。
【０２６７】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約14:1、13:1、12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２６８】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約13:1、12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２６９】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２７０】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約11:1、10:1または9:1であり得る。
【０２７１】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1であり得る。
【０２７２】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約10:1〜約1:1、約7:1〜約2:1、または約5:1〜約3:1の範囲であり得る。
【０２７３】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1であり得る。
【０２７４】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約5:1、4:1、3:1、または2:1であり得る。
【０２７５】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約5:1、4:1または3:1であり得る。
【０２７６】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約4:1または3:1であり得る。
【０２７７】
いくつかの態様において、PBRMは約40kDa以上(例えば、60kDa以上；80kDa以上；100kDa以上；120kDa以上；140kDa以上；160kDa以上；180kDa以上；もしくは200kDa以上、または約40〜200kDa、40〜180kDa、40〜140kDa、60〜200kDa、60〜180kDa、60〜140kDa、80〜200kDa、80〜180kDa、80〜140kDa、100〜200kDa、100〜180kDa、もしくは100〜140kDa)の分子量を有する。
【０２７８】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数(または接続点の総数)は10以下である。
【０２７９】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数は約3〜約10の範囲である。
【０２８０】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数は約3、4、5、6、7、8、9、または10である。
【０２８１】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数は約3、4、5、6、7または8である。
【０２８２】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの間に形成されるスルフィド結合の総数は約3、4または5である。
【０２８３】
いくつかの態様において、mは約20〜約60、約25〜約45、約30〜約40、または約33〜約37の整数である。いくつかの態様において、mは約33、34、35、36、または37である。
【０２８４】
いくつかの態様において、m1は約5〜約20、約6〜約15、約7〜約10、または約8〜約10の整数である。
【０２８５】
いくつかの態様において、m2は約3〜約8、約3〜約6、または約3もしくは約5の整数である。いくつかの態様において、m2は約3、4、または5である。
【０２８６】
いくつかの態様において、m3aは約0〜約3、約0〜約2、または約0〜約1の整数である。
【０２８７】
いくつかの態様において、m3bは約1〜約4、約1〜約3、または約1〜約2の整数である。
【０２８８】
いくつかの態様において、m5は約2〜約8、約2〜約6、または約3〜約5の整数である。
【０２８９】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約1:1〜約10:1の範囲である。
【０２９０】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1である。
【０２９１】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約2:1と約8:1の間である。
【０２９２】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、または2:1である。
【０２９３】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約2:1と約4:1の間である。
【０２９４】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約4:1、3:1、または2:1である。
【０２９５】
いくつかの態様において、m2とm3bの比は約4:1または3:1である。
【０２９６】
いくつかの態様において、式(B)におけるPHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m1、m2、m3aおよびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、m1は約5〜約35の整数であり、m2は約3〜約10の整数であり、m3aは0〜約4の整数であり、m3bは1〜約5の整数であり、かつm5は2〜約4の整数である。
【０２９７】
式BにおけるPHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m1、m2、m3aおよびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、m1は約2〜約35の整数であり、m2は約2〜約10の整数であり、m3aは0〜約4の整数であり、m3bは1〜約5の整数であり、m3aとm3bの合計は1〜約5の範囲であり；かつPHFと抗体の比は2〜約8(例えば、約2〜約6または約2〜約4)の整数である。
【０２９８】
いくつかの態様において、アウリスタチンFヒドロキシルプロピルアミド(「AF HPA」)とPBRMの比は約30:1、29:1、28:1、27:1、26:1、25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1または6:1であり得る。
【０２９９】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約25:1、24:1、23:1、22:1、21:1、20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1または6:1であり得る。
【０３００】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約20:1、19:1、18:1、17:1、16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1、10:1、9:1、8:1、7:1または6:1であり得る。
【０３０１】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約16:1、15:1、14:1、13:1、12:1、11:1または10:1であり得る。
【０３０２】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約15:1、14:1、13:1、12:1、11:1または10:1であり得る。
【０３０３】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約15:1、14:1、13:1または12:1であり得る。
【０３０４】
いくつかの態様において、AF HPAとPBRMの比は約12:1、11:1、10:1または9:1であり得る。
【０３０５】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1または1:1であり得る。
【０３０６】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1または2:1であり得る。
【０３０７】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約6:1、5:1、4:1、3:1、2:1または1:1であり得る。
【０３０８】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約6:1、5:1、4:1、3:1または2:1であり得る。
【０３０９】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約6:1、5:1、4:1または3:1であり得る。
【０３１０】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約5:1、4:1または3:1であり得る。
【０３１１】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約4:1、3:1または2:1であり得る。
【０３１２】
いくつかの態様において、PHFとPBRMの比は約4:1または3:1であり得る。
【０３１３】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング部分は、マレイミド基と式(II)のチオール含有化合物との反応時に2つのオレフィン炭素原子のうちの一方に共有結合し得る部分であり、
R90-(CH2)d-SH
(II)
式中
R90はNHR91、OH、COOR93、CH(NHR91)COOR93または置換フェニル基であり；
R93は水素またはC1〜4アルキルであり；
R91は水素、CH3またはCH3COであり、かつ
dは1〜3の整数である。
【０３１４】
いくつかの態様において、式(II)のマレイミドブロッキング化合物はシステイン、N-アセチルシステイン、システインメチルエステル、N-メチルシステイン、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパン酸、2-メルカプト酢酸、メルカプトメタノール(即ち、HOCH2SH)、フェニルが1つまたは複数の親水性置換基で置換されたベンジルチオール、または3-アミノプロパン-1-チオールであり得る。フェニル上の1つまたは複数の親水性置換基はOH、SH、メトキシ、エトキシ、COOH、CHO、COC1〜4アルキル、NH2、F、シアノ、SO3H、PO3Hなどを含む。
【０３１５】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング基は-S-(CH2)d-R90であり、ここで
R90はOH、COOH、またはCH(NHR91)COOR93であり；
R93は水素またはCH3であり；
R91は水素またはCH3COであり；かつ
dは1または2である。
【０３１６】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング基は-S-CH2-CH(NH2)COOHである。
【０３１７】
特定の態様において、コンジュゲートまたはスキャフォールドはいくつかの工程で形成される。これらの工程は、(1)薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマーを修飾する工程；(2)薬物がポリマーに結合するように、修飾されたポリマーを薬物またはその誘導体と反応させる工程；(3)ポリマーがPBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマー-薬物コンジュゲートを修飾する工程；および(4)修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートをPBRMまたはその誘導体と反応させて本開示のコンジュゲートを形成する工程を含む。工程(1)によって生成した修飾されたポリマーがPBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有する場合、工程(3)は省略してもよい。工程(3)と工程(1)〜(2)の順序は逆にできる、すなわち工程(3)は工程(1)および(2)の前に実施してもよい。
【０３１８】
別の態様において、コンジュゲートまたはスキャフォールドはいくつかの工程で形成される：(1)第1の薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマーを修飾する工程；(2)第1の薬物がポリマーに結合するように、修飾されたポリマーを第1の薬物またはその誘導体と反応させる工程；(3)第2の薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る異なる官能基を含有するようにポリマー-薬物コンジュゲートを修飾する工程；(4)第2の薬物がポリマー-薬物コンジュゲートに結合するように、修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートを第2の薬物またはその誘導体と反応させる工程；(5)ポリマーがPBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するように、2つの異なる薬物を含有するポリマー-薬物コンジュゲートを修飾する工程；および(6)工程(5)の修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートをPBRMまたはその誘導体と反応させて本開示のコンジュゲートを形成する工程。2つの異なるPBRMまたはそれらの誘導体をコンジュゲートして2つの異なる薬物と2つの異なるPBRMとを含むポリマー-薬物コンジュゲートを形成する場合には工程(5)および(6)は繰り返してもよい。工程(5)と工程(1)〜(4)の順序は逆にできる、すなわち工程(5)は工程(1)〜(4)の前に実施してもよい。
【０３１９】
さらに別の態様では、コンジュゲートまたはスキャフォールドはいくつかの工程で形成される。これらの工程は、(1)薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマーを修飾する工程；(2)PBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基も含有するようにポリマーをさらに修飾する工程；(3)薬物がポリマーに結合するように、修飾されたポリマーを薬物またはその誘導体と反応させる工程；および(4)修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートをPBRMまたはその誘導体と反応させて本開示のコンジュゲートを形成する工程を含む。工程(1)と(2)の順序または工程(3)と(4)の順序は逆にし得る。さらに、修飾されたポリマーが、薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る官能基と、PBRMまたはその誘導体の官能基との両方と反応し得る官能基を含有する場合、工程(1)または(2)のいずれかは省略してもよい。工程(2)と工程(1)の順序は逆にし得る、すなわち工程(2)は工程(1)の前に実施してもよい。
【０３２０】
別の態様において、コンジュゲートまたはスキャフォールドはいくつかの工程で形成される：(1)第1の薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマーを修飾する工程；(2)PBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにポリマーをさらに修飾する工程；(3)第1の薬物がポリマーに結合するように、修飾されたポリマーを第1の薬物またはその誘導体と反応させる工程；(4)第2の薬物またはその誘導体の官能基と反応し得る異なる官能基を含有するようにポリマー-薬物コンジュゲートを修飾する工程；(5)第2の薬物がポリマー-薬物コンジュゲートに結合するように、修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートを第2の薬物またはその誘導体と反応させる工程；(6)2つの異なる薬物を含有する修飾されたポリマー-薬物コンジュゲートをPBRMまたはその誘導体と反応させて本開示のコンジュゲートを形成する工程。2つの異なるPBRMまたはその誘導体をコンジュゲートして2つの異なる薬物と2つの異なるPBRMとを含むポリマー-薬物コンジュゲートを形成する場合には工程(6)は繰り返してもよい。工程(4)は、2つの異なる薬物またはそれらの誘導体と反応し得る2つの異なる官能基を修飾ポリマーが含有するように工程(1)の後に実施してもよい。この態様において、2つの異なる薬物またはそれらの誘導体と反応し得る2つの異なる官能基を含有する修飾されたポリマーは、修飾されたポリマーと2つの異なる薬物(工程(3)および工程(5)またはPBRM(工程(6)のいずれかとの反応前に、PBRMまたはその誘導体の官能基と反応し得る官能基を含有するようにさらに修飾し得る。工程(2)と工程(1)の順序は逆にし得る、すなわち工程(2)は工程(1)の前に実施してもよい。
【０３２１】
本開示の生分解性生体適合性コンジュゲートまたはスキャフォールドは生分解性および親水性の所望の要件を満たすように調製することができる。例えば、生理的条件下で、生分解性と安定性のバランスを達成することができる。例を挙げると、特定の閾値を超える分子量(分子の物理的形状に応じて、通常は40〜100kDaより高い)を有する分子は小分子のようには腎臓から排出されず、細胞による取り込みおよび細胞内コンパートメント、特にリソソームにおける分解を介してのみ身体から排除できることが公知である。この所見は、どの程度機能的に安定であり生分解性である材料が、通常の生理的条件下(pH=7.5±0.5)およびリソソームのpH(pH5付近)でのそれらの安定性を調節することによって設計され得るかを例示している。例えば、アセタールおよびケタール基の加水分解は酸によって触媒されることが公知であり、したがってポリアールは、例えば血漿においてよりも、酸性のリソソーム環境では安定性が通常は低くなる。水性媒体中、例えばpH=5およびpH=7.5、37℃でのポリマー分解プロファイルを比較するための、ひいては、通常の生理的環境におけるおよび細胞による取り込み後の「消化的」リソソームコンパートメントにおけるポリマー安定性について予想されるバランスを判断するための試験を設計できる。そのような試験におけるポリマーの完全性は、例えば、サイズ排除HPLCによって測定できる。当業者であれば、本開示の分解したコンジュゲートの様々なフラグメントを検査するための他の好適な方法を選択することができる。
【０３２２】
多くの場合、pH=7.5ではポリマーの有効な大きさは1〜7日間にわたっては検出可能な変化がなく、少なくとも数週間は元の大きさの50%以内を維持することが好ましいであろう。他方、pH=5では、ポリマーは好ましくは1〜5日間にわたって検出可能な分解があり、2週間〜数ヶ月の時間枠内に低分子量フラグメントへと完全に変換されるのがよい。より早急な分解が場合によっては好ましいこともあるが、通常は、細胞によるポリマーフラグメントの代謝または排出の速度を超えない速度でポリマーが細胞内で分解することがより望ましいであろう。したがって、特定の態様においては、本開示のコンジュゲートは、特に細胞による取り込み時には生分解性であり、生体システムに関しては比較的「不活性」であると予測される。担体分解の生成物は好ましくは電荷を有しておらず、かつ周囲のpHを著しく改変させない。アルコール基が豊富にあることで、細胞受容体、特に食細胞のものによるポリマー認識率が低くなる場合があると提唱されている。本開示のポリマー骨格は、抗原決定基(例えば、いくつかの多糖類およびポリペプチドに特徴的である)を、存在したとしても、わずかしか通常は含有しておらず、インビボにおける「キー・アンド・ロック」タイプの相互作用に関与できる剛性の構造を、後者が望ましい場合を除いて通常は含んでいない。よって、本開示の可溶性であり架橋されかつ固形のコンジュゲートは毒性および生体接着性が低いと予測され、これがそれらをいくつかの生物医学用途に好適にさせている。
【０３２３】
特定の態様において、生分解性生体適合性コンジュゲートまたはスキャフォールドは直鎖または分岐鎖構造を形成し得る。いくつかの態様において、本開示の生分解性生体適合性ポリアールコンジュゲートまたはスキャフォールドはキラル(光学的に活性)であり得る。任意で、本開示の生分解性生体適合性ポリアールコンジュゲートまたはスキャフォールドは非ラセミ体(scalemic)であり得る。
【０３２４】
特定の態様において、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドは水溶性である。特定の態様において、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドは水不溶性である。特定の態様において、コンジュゲートまたはスキャフォールドは固体状である。特定の態様において、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドはコロイドである。特定の態様において、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドは粒子状である。特定の態様において、本開示のコンジュゲートまたはスキャフォールドはゲル状である。
【０３２５】
本開示はまた、PBRMとコンジュゲートして本明細書において記載されるポリマー-薬物-PBRMコンジュゲートを形成するために有用なポリマー性スキャフォールドおよび該スキャフォールドを合成する方法を特徴とする。スキャフォールドはPBRM、例えば、分子量が約40kDa以上のPBRMとコンジュゲートするのに有用な式(Ia)のポリマー性担体を含み、
2020525441.tif 000092
スキャフォールドは、約2kDa〜約40kDaの範囲の分子量を有するポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)(PHF)を含み；
XはCH2、O、またはNHであり；
mは1〜約300の整数であり、
m1は1〜約140の整数であり、
m2は1〜約40の整数であり、
m3は1〜約18の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は約15〜約300の範囲である。
【０３２６】
いくつかの態様において、式(Ia)の「m3」ユニットにおけるマレイミド部分の各出現はPBRMの官能基とはまだ共有結合を形成していない。
【０３２７】
いくつかの態様において、40kDa以上(例えば、60kDa以上、80kDa以上、100kDa以上、120kDa以上、140kDa以上、160kDa以上もしくは180kDa以上、または約40〜200kDa、40〜180kDa、40〜140kDa、60〜200kDa、60〜180kDa、60〜140kDa、80〜200kDa、80〜180kDa、80〜140kDa、100〜200kDa、100〜180kDa、もしくは100〜140kDa)の分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。
【０３２８】
いくつかの態様において、40kDa〜200kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。
【０３２９】
いくつかの態様において、40kDa〜80kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約5kDa、6kDa、7kDa、8kDa、10kDa、13KDaまたは15kDaの分子量を有する。
【０３３０】
この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば抗体断片、例えばFabが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３１】
いくつかの態様において、60kDa〜120kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約5kDa〜約40kDa(例えば、約5〜30kDa、約5〜20kDa、約5〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約10kDa、20kDa、30kDaまたは40kDaの分子量を有する。
【０３３２】
この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば、ラクダ科のもの、Fab2、scFcFvなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３３】
いくつかの態様において、140kDa〜180kDaの分子量を有するPBRMとコンジュゲートするためには、本開示のスキャフォールドのポリマー性担体はポリアセタール、例えば、約2kDa〜約40kDa(例えば、約2〜20kDa、約3〜15kDa、約5〜10kDa、約6〜8kDa、または約7〜8kDa)の範囲の分子量を有するPHF(即ち、未修飾のPHFのMW)である。例えば、PHFは約5kDa、8kDa、10kDa、13KDaまたは15kDaの分子量を有する。
【０３３４】
この分子量範囲内のPBRMとしては、例えば全長抗体、例えばIgG、IgMが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３５】
いくつかの態様において、式(Ia)におけるPHFが約2kDa〜約40kDaの範囲の分子量(即ち、m、m1、m2、およびm3の合計が約1〜約300の範囲)を有する場合、m2は1〜約40の整数であり、m3は1〜約18の整数であり、かつ/またはm1は1〜約140の整数である(例えば、m1は約1〜90である)。
【０３３６】
いくつかの態様において、式(Ia)におけるPHFが約2kDa〜約20kDaの範囲の分子量(即ち、m、m1、m2、およびm3の合計が約1〜約150の範囲)を有する場合、m2は1〜約20の整数であり、m3は1〜約10の整数であり、かつ/またはm1は1〜約70の整数である(例えば、m1は約4〜45である)。
【０３３７】
いくつかの態様において、式(Ia)におけるPHFが約3kDa〜約15kDaの範囲の分子量(即ち、m、m1、m2、およびm3の合計が約1〜約110の範囲)を有する場合、m2は2〜約15の整数であり、m3は1〜約8の整数であり、かつ/またはm1は2〜約50の整数である(例えば、m1は約4〜30である)。
【０３３８】
いくつかの態様において、式(Ia)におけるPHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する場合(即ち、m、m1、m2、およびm3の合計が約1〜約75の範囲)、m2は3〜約10の整数であり、m3は1〜約5の整数であり、かつ/またはm1は5〜約35の整数である(例えば、m1は約10〜25である)。
【０３３９】
いくつかの態様において、1つまたは複数の薬物担持ポリマー性担体が1つのPBRMに結合している。いくつかの態様において、スキャフォールド(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)は分子量が約40kDa以上のPBRMと、PBRMに結合した1つまたは複数のD担持ポリマー性担体とを含む。
【０３４０】
いくつかの態様において、スキャフォールドはマレイミド基を介してポリマー性担体に結合したPBRMをさらに含む。
【０３４１】
いくつかの態様において、式(Ia)のスキャフォールドを合成する方法は、
2020525441.tif 000093
を
2020525441.tif 000094
と反応させて第1の混合物を形成する工程；および
(2)
2020525441.tif 000095
またはその塩を加えて、第1の混合物と反応させ、式(Ia)のスキャフォールドまたはその塩を生成する工程を含み、ここで、nはm1、m2およびm3の合計である。いくつかの態様において、nは約7〜約40の整数である。いくつかの態様において、mとnの比は約2:1〜約3:1である。
【０３４２】
いくつかの態様において、XはNHである。
【０３４３】
いくつかの態様において、式(Ia)のスキャフォールドは式(A)のものまたはその塩であり、
2020525441.tif 000096
式中
mは20〜約75の整数であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3は1〜約5の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は40〜約75の範囲である。
【０３４４】
いくつかの態様において、化合物AおよびB1を反応させることによる第1の混合物は分子量が約2kDa〜約40kDaの範囲の式(Ic)のポリマー性スキャフォールドを含み、
2020525441.tif 000097
式中
XはCH2、O、またはNHであり；
mは1〜約300の整数であり、
m6は2〜約180の整数であり、
m3は1〜約18の整数であり、かつ
m、m6およびm3の合計は約15〜約300の範囲である。
【０３４５】
いくつかの態様において、式(Ic)の「m3」ユニットにおけるマレイミド部分の各出現はPBRMの官能基とはまだ共有結合を形成していない。
【０３４６】
いくつかの態様において、式(Ic)におけるPHFが約2kDa〜約20kDaの範囲の分子量(即ち、m、m6およびm3の合計が約15〜約150の範囲)を有する場合、m3は1〜約9の整数であり、かつ/またはm6は2〜約90の整数である(例えば、m6は約6〜60である)。
【０３４７】
いくつかの態様において、式(Ic)におけるPHFが約3kDa〜約15kDaの範囲の分子量(即ち、m、m6およびm3の合計が約20〜約110の範囲)を有する場合、m3は1〜約8の整数であり、かつ/またはm6は4〜約65の整数である(例えば、m6は約6〜45である)。
【０３４８】
いくつかの態様において、式(Ic)におけるPHFが約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有する場合、m、m6およびm3の合計は約40〜約75の範囲、m6は約8〜約45の整数であり、かつm3は1〜約5の整数である。
【０３４９】
いくつかの態様において、ポリマー性スキャフォールド(例えば、PHFなどのポリアセタールポリマー)はシステインベースのバイオコンジュゲーション手法を利用してPBRMとコンジュゲートされる。例えば、内容がそれら全体において参照により本書に組み入れられるWO2010100430およびUS7,595,292を参照されたい。一態様において、ポリマー性スキャフォールド(例えば、PHFなどのポリアセタールポリマー)は抗体ヒンジ領域においてシステインを介してPBRM(例えば、抗体)とコンジュゲートする。理論に拘束されるものではないが、得られるコンジュゲートは鎖間架橋構造の形成を通じて安定化される。
【０３５０】
したがって、本開示はまた、ポリマー性スキャフォールド(例えば、ポリアールポリマー)に結合した少なくとも2つの部分を含むポリマー性スキャフォールドに関連しており、各部分はタンパク質-ポリマーコンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)を形成するようにPBRM中のアミノ酸(例えば、システイン)からのチオール基にコンジュゲーションできる。一態様において、ポリマー性スキャフォールドに結合した少なくとも2つの部分はマレイミド基である。
【０３５１】
合成方法
本開示によれば、任意の利用可能な技術を使用してコンジュゲート、ポリマー性スキャフォールド、またはそれらを含む組成物、ならびにそれらを製造するために有用な中間体およびコンポーネント(例えば、担体および修飾物質)を製造することができる。いくつかの態様において、半合成および完全合成法を使用し得る。
【０３５２】
担体
修飾物質へのコンジュゲーションに好適なポリマー担体(例えば、生体適合性生分解性ポリマー担体)を調製するための方法は当技術分野で公知である。例えば、合成の指針は米国特許第5,811,510号、5,863,990号、5,958,398号、7,838,619号、7,790,150号、8,685,383号、および8,815,226号に見出すことができ、これらそれぞれの内容はそれら全体において参照により本書に組み入れられる。当業者であれば、本発明の実施における使用のためのポリマー担体を製造するためにこれらの方法をどのように適合させればよいか知っているであろう。
【０３５３】
一態様において、本開示の生分解性生体適合性ポリアールコンジュゲートを形成するための方法は、好適な多糖類を有効量のグリコール特異的酸化剤と組み合わせてアルデヒド中間体を形成するプロセスを含む。それ自体がポリアールであるアルデヒド中間体は、次いで、スクシンアミド含有結合を含む生分解性生体適合性ポリアールコンジュゲートを形成するために、対応するポリオールへと還元され、スクシニル化され、1つまたは複数の好適な修飾物質とカップリングされてもよい。
【０３５４】
別の好ましい態様において、本開示における使用のための完全合成生分解性生体適合性ポリアールは、好適な開始剤を好適な前駆体化合物と反応させることによって調製することができる。
【０３５５】
いくつかの態様において、完全合成ポリアールは保護された置換ジオールとのビニルエーテルの縮合によって調製されてもよい。開環重合などの他の方法を使用してもよく、方法の有効性は保護基の置換度および嵩高さに応じて異なり得る。
2020525441.tif 000098
【０３５６】
当業者であれば、高分子量生成物を得るために溶媒系、触媒および他の要素を最適化し得ることを理解しているであろう。
【０３５７】
いくつかの態様において、担体はPHFである。
【０３５８】
複数の態様において、ポリマー担体は、1.5未満、例えば＜1.2の多分散性指数(PDI)を有するPHFである。
【０３５９】
薬物および薬物誘導体
特定の態様において、薬物はポリマー性担体へのコンジュゲーション前に修飾されてもよい。スキーム1および2はビンカアルカロイドを修飾するための例示的な方法である。スキーム3は非天然カンプトテシン誘導体を修飾するための方法を示す。スキーム4はアウリスタチンFを修飾するための方法を示す。より多くの修飾方法がUS2010/0305149に記載されており、これは参照により本書に組み入れられる。
【０３６０】
スキーム1
2020525441.tif 000099
【０３６１】
ビンカアルカロイドのC23エステルとヒドラジンとの反応に続いてNaNO2で処理すると活性アジドエステルが得られる。プロパノールアミンまたは1-アミノプロパン-2-オールなどのアミノ化合物とのアジドエステルの反応により官能化ヒドロキシルを有するビンカアルカロイド誘導体が得られ、これは、ポリマーとのコンジュゲーションのために、例えば、アラニンまたはメチルアラニン誘導体などのアミノ含有化合物でさらに誘導体化することができる(スキーム1を参照されたい)。
【０３６２】
スキーム2
2020525441.tif 000100
【０３６３】
t-ブトキシエステル化アミノ酸などの保護アミノ含有テザーによるビンカアルカロイドのヒドロキシル誘導体の処理に続いて、エステルのTFA加水分解でビンカアルカロイドのTFA塩が得られる。(スキーム2)官能化ポリマーへのビンカアルカロイドのコンジュゲーションにより薬物-ポリマーコンジュゲートが得られ、これはPBRMまたはその誘導体とさらにコンジュゲートされてタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)を得ることができる。
【０３６４】
スキーム3
2020525441.tif 000101
【０３６５】
非天然カンプトテシン誘導体、例えばSN38、の10-ヒドロキシ基はトリエチルアミンの存在下で誘導体をtert-ブチルジフェニルシリルクロリド(TBDPSiCl)と反応させることによって選択的に保護される。20-ヒドロキシ基は、Sapra, P. et al., Clin. Cancer Res., 14: 1888-1896 (2008)に記載の手順を使用して、t-ブチルカルボニル-アラニンと反応させてアラニン誘導体を形成することができる。あるいは、他のアミノ酸、例えば、グリシンを採用することができる。トリフルオロ酢酸で処理してBoc保護基を除去し、続いてフッ化テトラブチルアンモニウムでTBDPS保護基を除去することによって、第一級アミンをアンマスクする(スキーム3を参照されたい)。得られるアミノ誘導体化SN38化合物は官能化ポリマーとコンジュゲートされて薬物-ポリマーコンジュゲートを形成することができる。
【０３６６】
スキーム4
2020525441.tif 000102
【０３６７】
t-ブトキシエステル化2-ヒドロキシプロピルアミンなどの保護アミノ含有テザーによるアウリスタチンFの処理に続いてエステルの加水分解(例えば、TFA加水分解またはHCl加水分解)により、アウリスタチンFの2-ヒドロキシルプロピルアミノ誘導体が得られる(スキーム4を参照されたい)。官能化ポリマーへのアウリスタチンF誘導体のコンジュゲーションにより薬物-ポリマーコンジュゲートが得られ、これは、PBRMまたはその誘導体とさらにコンジュゲートされてタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲートを得ることができる。
【０３６８】
コンジュゲートまたはポリマー性スキャフォールド
下のスキーム5Aおよび5Bは本開示のポリマー-薬物スキャフォールドを製造する代替的な合成経路を示す。一態様において、コンジュゲートはいくつかの工程で形成される。(1)PHFであるポリマーはCOOH部分を含有するように修飾され(例えば、-C(O)-X-(CH2)2-COOH)；(2)ポリマーは、次いで、PBRMの官能基と反応し得るマレイミド部分(例えば、EG2-MI)を含有するようにさらに修飾され；(3)2つの異なる官能基を含有する修飾されたポリマーは薬物またはその誘導体(例えば、AF-HPA-Ala)の官能基と反応させてポリマー-薬物コンジュゲートを形成し；(4)PBRMのジスルフィド結合は還元され；(5)還元されたPBRMは、次いで、ポリマー-薬物コンジュゲートと反応させてタンパク質-ポリマー-薬物コンジュゲート(例えば、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲート)を形成し；かつ(6)残りのマレイミド部分は、任意で、マレイミドブロッキング化合物(例えば、システイン)と反応させる。
【０３６９】
別の態様において、下のスキーム5Aまたは5Bにおける右側経路に示されるように、工程(2)および(3)の順序は逆にし得る。
【０３７０】
スキーム5A
2020525441.tif 000103
2020525441.tif 000104
【０３７１】
スキーム5B
2020525441.tif 000105
2020525441.tif 000106
【０３７２】
さらに別の態様において、上の工程(2)および(3)は下のスキーム6Aまたは6Bに示すように同時に実施される。
【０３７３】
スキーム6A
2020525441.tif 000107
2020525441.tif 000108
【０３７４】
スキーム6B
2020525441.tif 000109
2020525441.tif 000110
【０３７５】
一局面において、本開示は式(A)
2020525441.tif 000111
のポリマー性スキャフォールドまたはその塩を製造する方法に関する。方法は、
(1)
2020525441.tif 000112
を
2020525441.tif 000113
と反応させて第1の反応混合物を形成する工程；および
(2)
2020525441.tif 000114
またはその塩を加えて、第1の反応混合物と反応させ、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を生成する工程
より選択される1つまたは複数の工程を含み、
ここで
化合物Bまたは式(A)のスキャフォールドは、約5kDa〜約10kDa(例えば、約6kDa〜約8kDaまたは約6kDa〜約7kDa)の範囲の分子量を有するポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチル-ホルマール)(PHF)を含み；
mは20〜約75の整数であり、
nは約7〜約40の整数であり、かつmとnの比は約2:1〜約3:1であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3は1〜約5の整数であり、かつ
m、m1、m2およびm3の合計は40〜約75の範囲である。
【０３７６】
さらに、本開示はまた、本明細書において開示される化合物Bまたは式(A)のスキャフォールドなどのポリマー性スキャフォールドを精製する方法に関する。
【０３７７】
本開示はまた、式(A)のポリマー性スキャフォールドとPBRMとを含むコンジュゲートを調製する方法を提供する。方法は、式(A)のスキャフォールドをPBRMまたはその誘導体と反応させる工程を含む。
【０３７８】
複数の態様において、本開示の方法は、適用可能な場合には以下の特徴のうちの1つまたは複数を有することがある。
【０３７９】
いくつかの態様において、本開示の方法に使用される化合物Bは約6kDa〜約13kDa、例えば、約7kDa〜約12kDa、または約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する。いくつかの態様において、化合物Bでは、nはmとnの合計の約26〜34％(例えば、約29〜33％)である。
【０３８０】
いくつかの態様において、化合物Cまたはその塩を加えて第1の混合物と反応させる前に、化合物Aの少なくとも70％(例えば、少なくとも75％、80％、85％、90％、または95％)が消費される(例えば、RP-HPLCによってモニタリングされる)。
【０３８１】
いくつかの態様において、化合物Cまたはその塩を加える前に第1の混合物はワークアップされない。
【０３８２】
いくつかの態様において、化合物Aと化合物Bの間の反応はカルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第1の温度で実施される。いくつかの態様において、活性化試薬はN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)である。いくつかの態様において、カップリング試薬はエチル(ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC.HCl)である。いくつかの態様において、化合物Aと化合物Bの間の反応は約4と約6の間のpH(例えば、約4.2〜5.4または約4.2〜6)で実施される。
【０３８３】
いくつかの態様において、第1の混合物と化合物Cまたはその塩の間の反応はカルボン酸用活性化試薬およびカップリング剤の存在下において第2の温度で実施される。いくつかの態様において、活性化試薬はN-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)である。いくつかの態様において、カップリング試薬はエチル(ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC.HCl)である。いくつかの態様において、第1の混合物と化合物Cまたはその塩の間の反応は約4と約6の間のpH(例えば、5.0±0.3、約4.2〜5.4または約4.2〜6)で実施される。
【０３８４】
いくつかの態様において、第1の温度は約0℃と15℃の間である。
【０３８５】
いくつかの態様において、第2の温度は約5℃と15℃の間である。
【０３８６】
いくつかの態様において、方法は、化合物Aの保護形態、例えば、
2020525441.tif 000115
を脱保護することによって化合物Aを準備する工程をさらに含む。
【０３８７】
いくつかの態様において、方法は、3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イルを(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチルと、例えば、約0℃と25℃の間の温度で反応させることによって化合物AAを準備する工程をさらに含む。
【０３８８】
いくつかの態様において、方法は、PHF(例えば、約5kDa〜約10kDa、約6kDa〜約8kDa、約6kDa〜約7kDaの範囲の分子量を有するPHFを3-イソシアナトプロパン酸メチルと反応させて化合物Bのメチルエステルを形成することおよび該メチルエステルを化合物Bに変換することによって化合物Bを準備する工程をさらに含む。
【０３８９】
いくつかの態様において、方法は、精製された化合物Bが約6kDa〜約13kDaの範囲の分子量を有するようにかつnがmとnの合計の約26〜34％であるように化合物Bを精製する工程をさらに含む。いくつかの態様において、精製された化合物Bは約7kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有し、かつnはmとnの合計の約28〜32％(例えば、29〜34％または平均して約31％)である。いくつかの態様において、化合物Bは約10kDa〜約12kDaの範囲の分子量を有する。いくつかの態様において、化合物Bは11.3kDaの平均分子量を有する。
【０３９０】
いくつかの態様において、化合物Bは2.0未満、1.9未満、1.8未満、1.7未満、または1.6未満の多分散性指数(PDI)を有する。いくつかの態様において、化合物Bは1.5未満の多分散性指数(PDI)を有する。
【０３９１】
いくつかの態様において、化合物Bの精製は弱陰イオン交換(WAX)クロマトグラフィー精製を含む。いくつかの態様において、弱陰イオン交換クロマトグラフィー精製用の移動相はリン酸ナトリウム緩衝液を含む。いくつかの態様において、精製は1つまたは複数のろ過、例えば、1つまたは複数のゲルろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはこれらの組み合わせをさらに含む。
【０３９２】
いくつかの態様において、化合物Bの粗生成物はまずゲルろ過などの非吸着クロマトグラフィー(例えば、セファデックスG-25カラムクロマトグラフィーを使用して)を行い無機塩を除去し、続いて、pHを例えば約6〜8、約6.5〜7.5、または7.0±0.1に維持しながら、接線流ろ過(TFF)透析ろ過(例えば、1kDaのMWCO膜を用いて)することによって精製される。いくつかの態様において、化合物Bの粗生成物はまずゲルろ過などの非吸着クロマトグラフィー(例えば、セファデックスG-25カラムクロマトグラフィーを使用して)行い無機塩を除去し、続いて、pHを例えば約6〜8、約6.5〜7.5、または7.0±0.1に維持しながら、ナノろ過(例えば、3.5kDaのMWCO膜を用いて)することによって精製される。いくつかの態様において、生成物は、例えば、20mMリン酸ナトリウム、pH7.0から20mMリン酸ナトリウムおよび1M NaCl、pH7.0の勾配を使用して、WAXによって精製される。いくつかの態様において、nがmとnの合計の29〜34％(例えば、SEC分析によって決定される)である化合物Bを含有する選択されたフラクションは、化合物Aとの反応前に合わされ、例えば、TFF透析ろ過(例えば、1kDaのMWCO膜を用いて)によって濃縮される。
【０３９３】
いくつかの態様において、方法は化合物Cの保護形態、例えば、
2020525441.tif 000116
を脱保護することによって化合物Cまたはその塩を準備する工程をさらに含む。
【０３９４】
いくつかの態様において、化合物Cの塩はトリフルオロ酢酸塩である。
【０３９５】
いくつかの態様において、方法は、例えば、逆相HPLCクロマトグラフィー分離を介した、式(A)のスキャフォールドの精製をさらに含む。いくつかの態様において、酢酸ナトリウム緩衝液およびアセトニトリルが移動相として使用される。いくつかの態様において、精製は1つまたは複数のろ過、例えば、1つまたは複数のゲルろ過、1つまたは複数の接線流ろ過、1つまたは複数の透析ろ過、1つまたは複数の限外ろ過、1つまたは複数のナノろ過、またはこれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの態様において、HPLC精製の前に、第1の混合物と化合物Cまたはその塩の間の反応からの生成物はpHを5.0±0.3に維持しながら濃縮される。いくつかの態様において、得られる濃縮液は、次いで、ゲルろ過などの非吸着クロマトグラフィー(例えば、セファデックスG-25クロマトグラフィーを使用して)に供されて、例えば、塩および未反応の試薬を除去し、続いて、例えば、pHを4〜5に維持しながら、例えば、約5〜15℃で接線流ろ過(TFF)透析ろ過される(例えば、1kDaのMWCO膜)。いくつかの態様において、生成物は、酢酸ナトリウムおよびアセトニトリルを溶離液(例えば、pH値が約5〜6、例えば、pH5.8である)として使用して分取HPLC(例えば、ブチルHG、200Å、10μm、250x50mm、1,000psiカラム)によってさらに精製される。いくつかの態様において、m2がm、m1、m2およびm3の合計の約6〜10％である7〜13kDa MWの式(A)のポリマー性スキャフォールドを含有する選択されたフラクション(例えば、1H-NMRおよびSEC分析に基づく)はプールされ、濃縮されて(例えば、回転蒸発、続いてTFF 1kDa MWCO膜によって)、溶媒、緩衝液および塩が除去される。いくつかの態様において、得られる水溶液はろ過、例えば、TFF装置(50または100kDa MWCO膜を用いて)による限外ろ過に供され、透過液は収集され、例えば、続いて0.1ミクロンの無菌ろ過が行われる。いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドの精製はゲルろ過および/または回転蒸発を含まない。
【０３９６】
いくつかの態様において、本開示の方法によって生成される式(A)のスキャフォールドの収率は、少なくとも60％、65％、67％、70％、75％、80％、または少なくとも85％である。
【０３９７】
いくつかの態様において、精製時には、式(A)のスキャフォールドは、約4kDa〜約18kDa、約5kDa〜約17kDa、約6kDa〜約16kDa、または約7kDa〜約14.5kDa(例えば、約8kDa〜約14.5kDa、または約7kDa〜約13kDa)の範囲の分子量を有する。
【０３９８】
いくつかの態様において、精製時には、式(A)のスキャフォールドは7kDa〜約13kDa)の範囲の分子量を有する。
【０３９９】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドでは、m2はm、m1、m2およびm3の合計の約5%〜約13%、約6%〜約12%、約7%〜約11%、または約7.5%〜約10.5%である。
【０４００】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドでは、m2はm、m1、m2およびm3の合計の約8%〜約10%である。
【０４０１】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドでは、m3はm、m1、m2およびm3の合計の約2%〜約4%である。
【０４０２】
いくつかの態様において、生成された式(A)のスキャフォールドまたはその塩は少なくとも75%、80%、85%、90%、または少なくとも95%の純度を有する。
【０４０３】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドまたはその塩は大規模に生成される。いくつかの態様において、少なくとも100gの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。
【０４０４】
いくつかの態様において、少なくとも200g、500g、1kg、少なくとも2kg、または少なくとも2.5kgの式(A)のスキャフォールドまたはその塩が単一のバッチにおいて生成される。
【０４０５】
いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドは3.0未満、2.8未満、2.6未満、2.4未満、または2.2未満のPDIを有する。いくつかの態様において、式(A)のスキャフォールドは2.0未満のPDIを有する。
【０４０６】
いくつかの態様において、開示のどの方法についても、少なくとも1つの非吸着クロマトグラフィーが実施される。
【０４０７】
いくつかの態様において、開示のどの方法についても、非吸着クロマトグラフィーのうちの少なくとも1つはセファデックスカラムクロマトグラフィーを用いて実施される。
【０４０８】
いくつかの態様において、開示のどの方法についても、接線流ろ過のうちの少なくとも1つは約650Daと1000Daの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施される。いくつかの態様において、開示のどの方法についても、膜は約650Daの分子量カットオフを有する。いくつかの態様において、開示のどの方法についても、接線流ろ過のうちの少なくとも1つは約50kDaと100kDaの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施されて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含有する透過液が得られる。
【０４０９】
いくつかの態様において、開示のどの方法についても、ナノろ過のうちの少なくとも1つは分子量カットオフが1000Daと4000Daの間の膜を用いて実施される。
【０４１０】
いくつかの態様において、開示のどの方法についても、接線流ろ過のうちの少なくとも1つは1500Daと3500Daの間の分子量カットオフを有する膜を用いて実施されて、式(A)のスキャフォールドまたはその塩を含有する透過液が得られる。
【０４１１】
別の局面において、本開示は式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの方法に関し、
2020525441.tif 000117
ここで
XaおよびXbの一方はHであり、他方は水溶性マレイミドブロッキング部分であるか、またはXaおよびXbはそれらが結合している炭素原子と一緒になって炭素-炭素二重結合を形成し；
PHFは約5kDa〜約10kDaの範囲の分子量を有し；
mは20〜75の整数であり、
m1は約5〜約35の整数であり、
m2は約3〜約10の整数であり、
m3aは0〜約4の整数であり、
m3bは1〜約5の整数であり、
m、m1、m2、m3a、およびm3bの合計は約40〜約75の範囲であり、かつ
m5は2〜約4の整数である。
【０４１２】
方法は、
(1)式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩と還元PBRMとを準備する工程；
(2)還元PBRMを式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩に加えて、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含む第3の反応混合物を形成する工程
より選択される1つまたは複数の工程を含む。
【０４１３】
いくつかの態様において、式（A）のポリマー性スキャフォールドまたはその塩は本開示の方法を実施することによって調製される。
【０４１４】
いくつかの態様において、還元PBMはPBRMを還元剤と反応させることによって調製され、ここで、PBRMの1つまたは複数のジスルフィド結合は還元剤によって1つまたは複数のチオール基まで還元される。
【０４１５】
いくつかの態様において、ポリマー-薬物コンジュゲートとのコンジュゲーションの前に、例えば、TCEP、DTTまたはβ-メルカプトエタノールなどの還元剤を使用することによって、関連するPBRMにおける鎖間ジスルフィド基または不対ジスルフィドの部分的な選択的還元が達成される。反応は典型的には約25±2℃で約1.5時間行われる。
【０４１６】
いくつかの態様において、反応性スルフヒドリル基へのPBRMジスルフィド基の変換率はPBRMの化学量論量、還元剤、pH、温度および/または反応時間に応じて異なる。PBRM中のジスルフィド基のすべてではなく一部が還元される場合は、還元PBRMは部分還元PBRMになる。
【０４１７】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約2〜約4モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基(SH)が形成される。
【０４１８】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約2.4モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４１９】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約2.5モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４２０】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約2.7モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４２１】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約3.0モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４２２】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約3.25モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４２３】
いくつかの態様において、PBRM上のジスルフィド結合はPBRMに対して約3.4モル当量使用したTCEP・HClで部分的に還元されてチオール基が形成される。
【０４２４】
式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは、中性またはわずかに塩基性の条件下(pH5.5〜8.5)、0.5〜2.0(w/w)のポリマー-薬物コンジュゲート対PBRM濃度の比で、約60分〜約120分間、約25±2℃で行われる。
【０４２５】
いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは0.7(w/w)、0.8(w/w)、0.9(w/w)、1.0(w/w)、1.2(w/w)または1.5(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。
【０４２６】
いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは1.0(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは0.9(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは0.8(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは0.75(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。いくつかの態様において、式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩への部分還元PBRMのコンジュゲーションは0.7(w/w)の式(A)のポリマー性スキャフォールドまたはその塩対PBRMの比で行われる。PBRMがポリマー-薬物コンジュゲートのマレイミド基にコンジュゲートした後、コンジュゲーションは水溶性マレイミドブロッキング化合物、例えば、N-アセチルシステイン、システインメチルエステル、N-メチルシステイン、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパン酸、2-メルカプト酢酸、メルカプトメタノール(即ち、HOCH2SH)、ベンジルチオールなどの添加によって停止される。
【０４２７】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング化合物はシステイン、N-アセチルシステイン、システインメチルエステル、N-メチルシステイン、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパン酸、2-メルカプト酢酸、メルカプトメタノール(即ち、HOCH2SH)、フェニルが1つまたは複数の親水性置換基で置換されたベンジルチオール、または3-アミノプロパン-1-チオールであり得る。フェニル上の1つまたは複数の親水性置換基はOH、SH、メトキシ、エトキシ、COOH、CHO、COC1〜4アルキル、NH2、F、シアノ、SO3H、PO3Hなどを含む。
【０４２８】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング基は-S-(CH2)d-R90であり、ここで
R90はOH、COOHまたはCH(NHR91)COOR93であり；
R93は水素またはCH3であり；
R91は水素またはCH3COであり；かつ
dは1または2である。
【０４２９】
いくつかの態様において、マレイミドブロッキング基は-S-CH2-CH(NH2)COOHである。
【０４３０】
得られる式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは、典型的には、透析ろ過によって精製されて、あらゆるコンジュゲートされていないポリマー-薬物コンジュゲート、コンジュゲートされていない薬物および小分子不純物が除去される。代替的または付加的には、適切なクロマトグラフィー分離手順、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、例えば、WCXクロマトグラフィー、SCXクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、セラミックヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせを使用して、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを精製してもよい。
【０４３１】
いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートはクロマトグラフィー分離、例えば、イオン交換クロマトグラフィー分離で第3の反応混合物から単離される。
【０４３２】
いくつかの態様において、式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは強陽イオン交換(SCX)クロマトグラフィー分離で単離される。いくつかの態様において、SCXクロマトグラフィー分離は酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、またはそれらの組み合わせを含む移動相を用いて実施される。いくつかの態様において、移動相は約5〜約7、約5.5〜約6.5、または約5.8〜約5.9の範囲のpH値を有する。
【０４３３】
いくつかの態様において、SCXクロマトグラフィー分離は、PBRMに対するAF HPAの比が高い1つまたは複数の酸性フラクション(分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される)を、第3の反応混合物から除去する。いくつかの態様において、1つまたは複数の酸性フラクションは、抗原結合性が弱いために活性が低い。いくつかの態様において、SCXクロマトグラフィー分離は、PBRMに対するAF HPAの比が低い1つまたは複数の塩基性フラクション(分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって決定される)を、第3の反応混合物から除去する。いくつかの態様において、SCXクロマトグラフィー分離は、1つまたは複数の凝集種およびあらゆる未反応のPBRMを、第3の反応混合物から除去する。
【０４３４】
いくつかの態様において、PBRMに対するAF HPAの比が所望のものである1つまたは複数のメインフラクションが、強陽イオン交換クロマトグラフィー分離中に収集され、これによって、精製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートが提供される。
【０４３５】
得られる精製された式(B)のPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは、典型的には、pH5.0〜6.5にて1つまたは複数の緩衝液ならびに任意で1つまたは複数の安定剤、1つまたは複数の界面活性剤および/あるいは1つまたは複数の無機塩中で調合される。
【０４３６】
いくつかの態様において、1つまたは複数の安定剤は、トレハロース、ソルビトール、マンニトール、スクロース、ラクトース、グルコース、キシリトール、マルトース、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン、ラクチトール、デキストロース、グリセリン、またはマルチトールである。
【０４３７】
いくつかの態様において、安定剤は、トレハロース、ソルビトールまたはマンニトールである。
【０４３８】
いくつかの態様において、安定剤はトレハロースである。
【０４３９】
いくつかの態様において、1つまたは複数の緩衝剤はクエン酸ナトリウム、アスコルベート、サクシネート、ラクテート、クエン酸、ホウ酸、ホウ砂、塩酸、リン酸水素二ナトリウム、酢酸、ギ酸、グリシン、重炭酸塩、酒石酸、トリス-グリシン、トリス-NaCl、トリス-エチレンジアミン四酢酸(「EDTA」)、Tris-ホウ酸-EDTA、Tris-酢酸-EDTA(「TAE」)緩衝剤およびTris-緩衝生理食塩水、4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸(「HEPES」)、3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸("MOPS")、ピペラジン-1,4-ビス(2-エタンスルホン酸)("PIPES")、2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸(「MES」)、ヒスチジン、リン酸緩衝生理食塩水(「PBS」)、生理食塩水-クエン酸ナトリウム(「SSC」)、生理食塩水-トリス-EDTA(「STE」)、またはトリス-マグネシウムである。
【０４４０】
例えば、緩衝剤はクエン酸ナトリウムである。
【０４４１】
いくつかの態様において、1つまたは複数の界面活性剤はポリソルベート80、ポリソルベート20、ポロキサマー407、ソルトールHS15、ポロキサマー188、ラウリル硫酸ナトリウム、エーテル硫酸塩、硫酸化油、セトリミドBP、塩化ベンザルコニウム、レシチン、セトロマクロゲル1000BPC、またはRがC10〜C20アルキル基である式RCOOXのアルカリ金属石鹸である。
【０４４２】
本開示のコンジュゲートおよびそれに含まれる薬物化合物は、当業者にとって身近な様々な方法によって都合よく調製できる。本明細書に記載される各式を有する本開示のコンジュゲートまたは化合物は、以下の手順に従って、市販の出発物質から、または文献手順を使用して調製できる出発物質から、調製することができる。これらの手順は、本開示の代表的なコンジュゲートの調製を示す。
【０４４３】
上述した方法によって設計され、選択され、かつ／または最適化されたコンジュゲートは、製造されると、コンジュゲートが生物学的活性を有するか否かを決定するために、当業者に公知の様々なアッセイを使用して特徴付けることができる。いくつかの態様において、コンジュゲートは、それらが予測された活性、結合活性、および／または結合特異性を有するか否かを決定するために、下に記載されるアッセイを含むがこれらに限定されない従来のアッセイによって特徴付けることができる。
【０４４４】
さらに、ハイスループットスクリーニングが、そのようなアッセイを使用した分析の速度を上げるために使用できる。その結果、当技術分野で公知の技術を使用して、本明細書に記載されるコンジュゲート分子を活性について迅速にスクリーニングすることが可能であり得る。ハイスループットスクリーニングを行うための一般的な方法論は、例えば、Devlin (1998) High Throughput Screening, Marcel Dekker；および米国特許第5,763,263号に記載されている。ハイスループットアッセイは、下に記載されるものを含むがこれらに限定されない、1つまたは複数の異なるアッセイ技術を使用することができる。
【０４４５】
本明細書において援用される全ての刊行物および特許文献は、各々のそのような刊行物または文献が参照により本明細書に組み入れられるように具体的かつ個々に示されているかのように、参照により本明細書に組み入れられる。刊行物および特許文献の援用は、いずれかが妥当な先行技術であるという承認として意図されるものではなく、それらの内容または日付についてのいかなる承認も構成しない。本発明を書面による説明によってここに記載したが、当業者は、本発明は様々な態様で実施され得ること、ならびに、前述の説明および下記の実施例は以下の特許請求の範囲の限定ではなく説明のためのものであることを認識するであろう。
【実施例】
【０４４６】
以下の実施例は例示であり限定することを意図しておらず、別の試薬または方法を利用し得ることが当業者には容易に理解されるであろう。
【０４４７】
本明細書において記載されるコンジュゲートは上に概説したスキームによっておよび下の実施例に記載の方法によって調製することができる。下の特定の例で使用される「含有量」という用語は、特に明記しない限り、リンカーまたは薬物分子などの意図した部分で置換されたポリマー構造ユニットのモル分率またはモルパーセントを意味する。したがって、下の実施例で使用される薬物担持ポリマースキャフォールドにおけるさまざまなポリマーユニットについての報告されるパーセントは、特に明記しない限り、モルパーセントである。
【０４４８】
略語
下記の略語を、下記の反応スキームおよび合成例において使用する。このリストは、本出願で使用される略語の包括的なリストであることを意図したものではなく、有機合成の分野の当業者によって容易に理解されるさらなる標準的な略語もまた合成スキームおよび実施例において使用することができる。
ACN  アセトニトリル
AF-HPA  アウリスタチンF-ヒドロキシプロピルアミド
Ala  アラニン
BA  β-アラニン
BOC  tert-ブチルオキシカルボニル
DAR  薬物対抗体/PBRM比
DCM  ジクロロメタン
DMAc  N,N-ジメチルアセトアミド
EDC.HCl  1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩
HPLC  高圧液体クロマトグラフィー
icIEF  画像化キャピラリー等電点電気泳動
MWCO  分子量カットオフ
nd  未決定
NF  ナノろ過
NHS  1-ヒドロキシピロリジン-2,5-ジオン(即ち、N-ヒドロキシ-スクシンイミド)
MI  マレイミド(maleimide)またはマレイミド(maleimido)
HPA-Ala  ヒドロキシプロピルアミド-L-アラニン
PDI  多分散性指数
PHF  ポリ(1-ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシルメチルホルマール)、またはFLEXIMER(登録商標)
RP-HPLC  逆相高速液体クロマトグラフィー
SEC  サイズ排除クロマトグラフィー
SCX  強陽イオン交換クロマトグラフィー
TCEP HCl  トリス(2-カルボキシエチル)-ホスフィン塩酸塩
TFF  接線流ろ過
TFA  トリフルオロ酢酸
WAX  弱陰イオン交換クロマトグラフィー
【０４４９】
一般情報
本明細書において記載されるポリマー-薬物コンジュゲートは、生成されたのち、当業者には公知である様々な分析技術を用いて特性決定することができる。いくつかの態様において、ポリマー-薬物コンジュゲートは、限定するものではないが、下に記載の技術を含む従来の分析技術によって特性決定することができる。
【０４５０】
RP-HPLC分析はPhenomenex Gemini 5μm 110Å、250x10mm、5ミクロン、セミ分取カラムで実施した。
【０４５１】
分取-HPLC精製はButyl HG、200Å、10μm、250x50mm、250x75mm、および250x150mm(高さx直径)≧1,000psiカラムで実施した。
【０４５２】
SEC-HPLC分析はTosoh Biosciences TSKゲルG5000カラム(7.8mm x 30cm、10um)またはSuperose 12カラムで実施した。
【０４５３】
SEC精製はRI検出器を備えたSephadex G-25(直径27cm、高さ74cmのガラスカラム)で実施した。
【０４５４】
WAXは205nmでのUV検出を用いたCAPTO DEAE(GE Healthcareおよび/またはBo Ge Long)カラム(直径8/45cm、高さ33/35cm)で実施した。
【０４５５】
HPLC精製はPhenomenex Gemini 5μm 110Å、250x10mm、5ミクロン、セミ分取カラムで実施した。
【０４５６】
ポリマーコンジュゲートにおける遊離薬物の濃度を決定するために、酸性化したサンプルをアセトニトリルで処理した。遊離薬物を抽出し、アセトニトリル上清を分析した。コンジュゲートしたAF-HPAの濃度を決定するために、サンプルを徹底的な塩基性加水分解に供した。放出されたAF-HPAおよびAFを含有するアセトニトリル上清を分析した。
【０４５７】
AFおよびAF-HPAの分析を、C-18カラム、アセトニトリル勾配、およびUV検出を使用して、RP-HPLCによって行った。ピーク面積を積分し、AFおよびAF-HPA標準物と比較する。AF-HPA法は血漿中ではAF-HPAには0.05％〜5％およびAFには最大で0.2％まで定量的であり、腫瘍および組織ホモジネートはそれぞれ0.3〜3,000ng/mLおよび10〜20,000ng/mLの濃度範囲にわたって線形であった。
【０４５８】
ポリマー性スキャフォールドのマレイミドおよび加水分解マレイミド含有量は1H-NMRによって決定した。
【０４５９】
エンドトキシンはLimulus Amebocyte Lysate(LAL)ゲルクロットアッセイまたはLimulus Amebocyte Lysate(LAL)動的発色アッセイによって決定した。
【０４６０】
ポリマーコンジュゲートの分子量(見かけの重量平均分子量またはピーク分子量として報告される)は多糖類またはタンパク質分子量標準物を用いたSECによって決定した。より具体的には、ポリマーまたはポリマー-薬物コンジュゲートには多糖類分子量標準物を使用した、そしてタンパク質・薬物-ポリマーコンジュゲートにはタンパク質標準物を使用する。特に示していない場合は、報告したポリマー担体分子量はPHFの重量平均分子量であり、ポリマー-薬物コンジュゲート分子量およびタンパク質-ポリマー薬物コンジュゲートはピーク分子量である。合成された/測定されたポリマーコンジュゲートは典型的には≦1.5の多分散性を有する。
【０４６１】
MALDI-TOF質量分析法を使用して、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートのインタクトな分子量を決定した。PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは二官能性試薬で処理してリシン残基を架橋し、これによってMALDI-TOF質量分析条件下でPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを安定化させた。架橋PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの通常の分析では、1〜3個のポリマー-薬物コンジュゲートに結合させたインタクト抗体と一致する広い質量範囲のピークを示した。
【０４６２】
PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートのタンパク質含有量は280nmでの分光測光法的にまたはELISAによって決定した。
【０４６３】
概して、PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートは、典型的には、SECによって決定されるように、凝集フラクションを＜5％(w/w、例えば、＜2％w/w)；RP-HPLCまたはLC-MS/MSによって決定されるように、遊離(コンジュゲートされていない)薬物を＜0.5％(w/w、例えば、＜0.1％w/w)；SECおよび/またはRP-HPLCによって決定されるように、遊離ポリマー-薬物コンジュゲートを＜1％(w/w)、ならびにHIC-HPLCおよび/またはWCX HPLCで決定されるように、コンジュゲートされていないPBRMを＜2％(w/w、＜1％w/w)含有していた。還元されたかまたは部分的に還元された抗体は文献に記載された手順を使用して調製した、例えば、Francisco et al., Blood 102 (4): 1458-1465 (2003)を参照されたい。全薬物(コンジュゲートされたものおよびコンジュゲートされていないもの)濃度をLC-MS/MSまたはRP-HPLCによって決定した。
【０４６４】
LC-MSまたはウェスタンブロットを使用してPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートにおけるシステインバイオコンジュゲーション部位の特異性および分布を特性決定した。ウェスタンブロットの結果からPBRMの重鎖(H)および軽鎖(L)上での薬物-ポリマーコンジュゲートの位置分布が得られた。トリプシン消化物のLC-MSは重鎖と軽鎖の鎖間システインヒンジ領域でPBRMへの結合が起きていることを示した。
【０４６５】
ウェスタンブロット分析には、DTT還元PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートをまず変性ゲル電気泳動を使用して大きさに基づいて分離し、次いで、分離したPBRMフラグメントは「ブロット」と呼ばれるポリフッ化ビニリデン(PVDF)膜への転写を行った。架橋は薬物、ヒトIgG FC(重鎖)およびヒトIgG Kappa(軽鎖)に特異性を有するモノクローナル抗体を使用してブロット上で検出した。3つの抗体すべてによって検出された50kDaを超える高分子種の存在は、ポリマー-薬物コンジュゲートによるPBRMの重鎖と軽鎖の鎖間架橋が起きたことを示唆した。
【０４６６】
PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートのトリプシン消化物のLC-MS分析には、ポリマー-薬物コンジュゲートのマレイミド含有フラグメントに結合したシステイン含有トリプシンペプチドをマレイミド残基の分子量に601Da加えたペプチドの質量によって特性決定した。結果は、PBRMのヒンジ領域システインがポリマー-薬物コンジュゲートに結合していることを示した。
【０４６７】
icIEFはpH勾配における電荷の差に基づいてPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートタンパク質種を分離する。icIEFは従来の等電点電気泳動の分解能をキャピラリー電気泳動の自動化および定量化と組み合わせたものである。サンプルは、全カラム画像化検出システムを使用して、フォーカシングプロセス中にリアルタイムでモニタリングしながら高電圧下でキャピラリーカラム内でフォーカスされる。分解された荷電種は280nmでのUV吸光度を使用して検出される電気泳動ピークとして現れる。pIマーカー内のすべてのメインピークは積分されて酸性、メイン、および塩基性の3種類に分けられる。各種類の割合は個々の種類の面積を3種類すべての合計面積と比較することによってAUCパーセンテージとして決定される。各種類の最大ピークのpI値も報告する。
【０４６８】
マルチシグナル沈降速度(MSSV)技術を使用してPBRM対ポリマー-薬物コンジュゲート比を決定した。吸光度および屈折率の同時取得によってPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの沈降速度データを取得して、PBRM対ポリマー-薬物コンジュゲート比の化学量論量の決定に必要なデータを得た。
【０４６９】
実施例1．PHF-β-アラニン(化合物B)の合成：
2020525441.tif 000118
PHF(7.5kDa、1.12kg、8.35モル、1.0eq)を窒素下でDMAc(99％、12.7kg、12体積)に溶解し、次いで60〜65℃で撹拌し、残留水を真空下でのDMAcの共沸蒸留によって除去した。溶液を約38℃まで冷却した後、ピリジン(1.3kg、16.43モル、1.97eq)、3-イソシアナトプロパン酸メチル(402.3g、3.12モル、0.37eq)およびDMAc(107g)を連続的に加えた。得られた混合物を60±5℃まで加熱し、蒸留を再開した。得られた粘稠な黄色い油状物を約30℃まで冷却し、次いで0.5N NaOH(水41.6kg中NaOH850g、21.25モル、2.5eq)を二等分して加え、温度を約25℃に調整し、得られた溶液を少なくとも12時間撹拌した。2N HClを使用してpHをpH6.1に調整し、次いで溶液を2〜8℃まで冷却して粗生成物を得た。
【０４７０】
粗生成物をまずセファデックスG-25カラムクロマトグラフィーによって精製して無機塩を除去した後、pHを7.0±0.1に維持しながらTFF透析ろ過(1kDa MWCO膜)を行った。20mMリン酸ナトリウム、pH7.0〜20mMリン酸ナトリウムおよび1M NaCl、pH7.0の多段階グラジエントシステムを使用してWAXによって生成物を精製した。表1に示すSEC分析によって決定した約29〜34％のβ-アラニン量を有するPHF-β-アラニン(化合物B)を含有する適切なフラクションを合わせ、TFF透析ろ過(1kDa MWCO膜)によって濃縮しかつ脱塩して11.9kDaの平均分子量、32.7％のβ-アラニン、PDI＜1.5を有する表題化合物(461g、収率約39％)を得た。
【０４７１】
1H-NMR(400MHz、D2O):δ4.8〜5.1(1H、m、O-CH-O、アセタールプロトン、ポリマー)、4.2〜4.3(4H、m、-O-CH2、ポリマー骨格およびリンカープロトン)、4.0ppm(1H、m、O-CH-CH2、ポリマー骨格)、3.9(2H、m、CH2、ポリマー骨格)、3.8(4H、m、CH2、ポリマー骨格、-CH2OH) 3.7(2H、m、CH2-NH-、ベータアラニンおよびリンカープロトン)、2.4(2H、m、CH2-COOH-、ベータアラニンおよびリンカープロトン)。
【０４７２】
【表１】
2020525441.tif 000119
【０４７３】
化合物Bの5つのバッチを上に記載の手順に従って合成した。表2は生成した化合物Bの分析特性を示す。
【０４７４】
【表２】
2020525441.tif 000120
【０４７５】
実施例1A．PHF-β-アラニン(化合物B)の合成：
2020525441.tif 000121
PHF(5.5kDa、1.003kg、7.48モル、1.0eq)を窒素下でDMAc(99%、10kg、10体積)に溶解し、次いで55〜60℃で撹拌し、残留水を真空下でのDMAcの共沸蒸留によって除去した。溶液を20〜30℃まで冷却した後、ピリジン(1.18kg、14.95モル、2.0eq)、3-イソシアナトプロパン酸メチル(0.175Kg、1.36モル、0.182eq)を逐次的に加えた。得られた混合物を55〜60℃まで加熱し、同じ温度で一晩撹拌した。反応系のβ-アラニン量を1HNMRでモニタリングした。3-イソシアナトプロパン酸メチルの2つ目の部分(0.135Kg、1.05モル、0.140eq)を加え、反応を一晩撹拌した。均質な溶液を55〜60℃での真空蒸留によって粘稠なシロップまで濃縮した。得られた粘稠な黄色い油状物を約20〜30℃まで冷却し、次いで0.5N NaOH(水10kg中NaOH200g、5モル、0.67eq)を一度に加え、温度を約20〜30℃に調整し、得られた溶液を少なくとも15時間撹拌した。2N HClを使用してpHをpH6.2に調整し、次いで溶液を2〜8℃まで冷却して粗生成物を得た。得られた溶液を0.22umフィルタによってろ過した。
【０４７６】
粗生成物をナノろ過(3.5kDa MWCO膜)によって4サイクルで精製してバッチの脱塩および濃縮の両方を行った。この後、20mMリン酸ナトリウム、pH7.0〜20mMリン酸ナトリウムおよび1M NaCl、pH7.0の多段階グラジエントシステムを使用してWAXによって生成物を精製した。表1Aに示す、1H-NMR分析によって決定した約27〜35％のBA量およびSECによって検出した7〜14kDaのMWを有するPHF-β-アラニン(化合物B)を含有する適切なフラクションを合わせ、次いでナノろ過(3.5kDa MWCO膜)によって再び濃縮しかつ脱塩した。得られた水溶液をTFF(50kDa MWCO膜、および生成物として収集した透過液)、続いて0.2ミクロンろ過に供し、11.9kDaの平均分子量、32.7％β-アラニン、PDI＜1.5を有する表題化合物(461g、約39％収率)を得た。
【０４７７】
1H-NMR(400MHz、D2O)：δ4.8〜5.1(1H、m、O-CH-O、アセタールプロトン、ポリマー)、4.2〜4.3(4H、m、-O-CH2、ポリマー骨格およびリンカープロトン)、4.0ppm(1H、m、O-CH-CH2、ポリマー骨格)、3.9(2H、m、CH2、ポリマー骨格)、3.8(4H、m、CH2、ポリマー骨格、-CH2OH) 3.7(2H、m、CH2-NH-、ベータアラニンおよびリンカープロトン)、2.4(2H、m、CH2-COOH-、ベータアラニンおよびリンカープロトン)。
【０４７８】
【表１Ａ】
2020525441.tif 000122
ND = 未決定
【０４７９】
化合物Bの6つのバッチを上に記載の手順に従って合成した。表2Aは生成した化合物Bの分析特性を示す。
【０４８０】
【表２Ａ】
2020525441.tif 000123
【０４８１】
実施例2：(16-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-4,14-ジオキソ-7,10-ジオキサ-3,13-ジアザヘキサデシル)カルバミン酸tert-ブチル(化合物AA)の合成
2020525441.tif 000124
無水DCM(6.4kg)中の3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(「マレイミド-PEG2-スクシンイミジルエステル」、656g、1.54モル、1.0eq)の冷却溶液に、温度を10℃未満に維持しながら、無水DCM(13.5kg、2.0w/w)中の(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチル(「N-BOC-エチレンジアミン」、272g、1.70モル、1.1eq)の溶液をゆっくりと加える。RP-HPLC分析が所望の生成物への約98％の変換を示すまで反応混合物を周囲温度で撹拌した。有機相を水、10％NaCl溶液で洗浄し、減圧下32℃でロータリーエバポレータで約6体積まで濃縮した。最終的に、表題化合物をEtOAc:ヘプタン(2:1)中で析出させ、ろ過し、ヘプタンで2回洗浄し、25℃で真空乾燥に供して575g(1.22モル、収率80％)得た。ESI-MS: C21H34N4O8 (M+1) 471.3.
2020525441.tif 000125
【０４８２】
実施例2：(16-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-4,14-ジオキソ-7,10-ジオキサ-3,13-ジアザヘキサデシル)カルバミン酸tert-ブチル(化合物AA)の合成
2020525441.tif 000126
無水DCM(1.2kg)中の3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(「マレイミド-PEG2-スクシンイミジルエステル」、140g、0.33モル、1.0eq)の冷却溶液に、温度を10℃未満に維持しながら、無水DCM(0.19kg、2.0w/w)中の(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチル(「N-BOC-エチレンジアミン」、58g、0.36モル、1.1eq)の溶液をゆっくりと加える。RP-HPLC分析が所望の生成物への約98%の変換を示すまで反応混合物を周囲温度で撹拌した。有機相を水、10%NaCl溶液で洗浄し、減圧下32℃でロータリーエバポレータで約6体積まで濃縮した。最終的に、表題化合物をEtOAc:ヘプタン(2:1)中で析出させ、ろ過し、ヘプタンで2回洗浄し、25℃で真空乾燥に供して113g(0.24モル、収率67%)得た。
ESI-MS: C21H34N4O8(M+1) 471.3.
2020525441.tif 000127
【０４８３】
実施例2A：(16-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-4,14-ジオキソ-7,10-ジオキサ-3,13-ジアザヘキサデシル)カルバミン酸tert-ブチル(化合物AA)の合成
2020525441.tif 000128
無水DCM(1.2kg)中の3-(2-(2-(3-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)プロパンアミド)エトキシ)エトキシ)プロパン酸2,5-ジオキソピロリジン-1-イル(「マレイミド-PEG2-スクシンイミジルエステル」、140g、0.33モル、1.0eq)の冷却溶液に、温度を10℃未満に維持しながら、無水DCM(0.19kg、2.0w/w)中の(2-アミノエチル)カルバミン酸tert-ブチル(「N-BOC-エチレンジアミン」、58g、0.36モル、1.1eq)の溶液をゆっくりと加える。RP-HPLC分析が所望の生成物への約98%の変換を示すまで反応混合物を周囲温度で撹拌した。有機相を水、10%NaCl溶液で洗浄し、減圧下32℃でロータリーエバポレータで約6体積まで濃縮した。最終的に、表題化合物をEtOAc:ヘプタン(2:1)中で析出させ、ろ過し、ヘプタンで2回洗浄し、25℃で真空乾燥に供して113g(0.24モル、収率67%)得た。ESI-MS: C21H34N4O8 (M+1) 471.3.
2020525441.tif 000129
【０４８４】
実施例3：アウリスタチンFヒドロキシプロピルアラニン(AF-HPA-ala)(化合物C)の合成
2020525441.tif 000130
Parr圧力反応器内のCBz保護AF-HPA-ala(即ち、化合物CC、250g、0.248モル、1.0eq)に10％パラジウム炭素、50％ウェット(37.5g、0.15w/w)、2-プロパノール(6.6kg、26w/w)、およびTFA(28g、0.248モル、1.0eq)を加えた。次いで、一定量を分析して表題化合物への98％の変換が示されるまで反応器を50PSIの水素に供した。反応器の内容物をまず追加の2-プロパノール(786g)を用いてろ過して使用済みの触媒を除去し、次いで2-プロパノール(193g)中のTFA(42g、0.368モル、1.5 eq)を加えた。反応混合物を20℃で1時間撹拌し、次いでtert-ブチルメチルエステル(1.87kg)を加え、撹拌を約20℃でさらに2時間、次いで約10℃で一晩継続した。表題化合物をろ過によって単離し、真空下で乾燥させて250g(収率80％)を得た。ESI-MS: C46H79N7O9 (M+1) 873.5.
【０４８５】
実施例3A：アウリスタチンFヒドロキシプロピルアラニン(AF-HPA-ala)(化合物C)の合成
2020525441.tif 000131
20Lガラス反応器内のCBz保護AF-HPA-ala(即ち、化合物CC、350g、0.347モル、1.0eq)に2-プロパノール(4.2kg、12w/w)およびTFA(39g、0.347モル、1.0eq)に続いて10%パラジウム炭素、50%ウェット(53g、0.15w/w)を加えた。次いで、一定量を分析して表題化合物への98%の変換が示されるまで反応器を大気圧の水素に供した。反応器の内容物をまず追加の2-プロパノール(5.5kg)を用いてろ過して使用済みの触媒を除去し次いで約3体積まで濃縮した。2-プロパノール(274g)中のTFA(60g、0.515モル、1.5eq)を加えた。反応混合物を20℃で1時間撹拌し、次いでtert-ブチルメチルエステル(2.6kg)を加え、撹拌を約20℃でさらに2時間、次いで約10℃で一晩継続した。表題化合物をろ過によって単離し、真空下で乾燥させて334g(収率85%)を得た。ESI-MS: C46H79N7O9 (M+1) 873.5.
【０４８６】
実施例4：式Aのポリマー性スキャフォールドの合成
2020525441.tif 000132
窒素下＜5℃のDCM(375g)中の実施例2の生成物(28.3g、0.06モル、0.04eq)に、温度を5℃未満に維持しながら、TFA(163g、1.43モル、0.95eq)を20分間かけて加えた。得られた混合物を周囲温度で2時間撹拌した。HPLCによる一定量の分析は脱保護反応が完了したことを示した。反応混合物を30℃のロータリーエバポレータによって濃縮して所望の生成物であるO-[N-(3-マレイミドプロピオニル)アミノエチル]-O'-[3-(N-(2-アミノエチル)アミノ)-3-オキソプロピル]エチレングリコール(「化合物A」)を油状物として得た。
【０４８７】
別途、約8℃のPHF-β-アラニン(ドライベースで257g含有する水溶液6296g、1.5モル、1.0eq、pH6.5)にACN/水(55g)中のNHS(47g、0.07モル、0.046eq)に続いてACN(594g)中の上で調製した化合物Aを加えた。得られた混合物のpHは0.1N NaHCO3を使用してpH4.2〜pH5.4に調整し、続いてACN/水(148g)中のEDC.HCl(36g、0.188モル、0.125eq)を3回に分けて加えて最終的にpHを6にした。EDC.HClの添加が完了した後、撹拌を1.5時間継続した。RP-HPLCによってモニタリングして化合物Aが約80％消費された後、ACN/水(64g)中のNHS(16g、0.139モル、0.092eq)に続いて実施例3の生成物である水(1316g)中のAF-HPA-alaつまり化合物C(132g、0.124モル、0.083eq)を加え、続いてACN/水(272g)中のEDC.HCl(71g、0.370モル、0.247eq)を1.5時間かけてバッチ式で加えた。得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌した。RP-HPLCによる一定量の分析は＜1%のAF-HPA-alaが残存していることを示した。NaCl(252ｇ)を加え、撹拌を1時間継続し、次いでpHを5.0±0.3に維持しながら混合物を約2Lまで濃縮した。濃縮液を全てセファデックスG-25クロマトグラフィーに供して塩および未反応試薬を除去し、続いてpHを4〜5に維持しながら5〜15℃でTFF透析ろ過(1kDa MWCO膜)した。
【０４８８】
未透過物は、溶離液として25mM酢酸ナトリウムおよびアセトニトリル、pH5.8を使用した分取HPLC(ブチルHG、200Å、10μm、250x50mm、1,000psiカラム)によってさらに精製した。1H-NMRおよびSEC分析に基づく、6〜10％のAF-HPA量および7〜13kDaのMWを有するポリマー性スキャフォールドを含有する選択されたフラクションをプールし、回転蒸発、続いてTFF 1kDa MWCO膜)濃縮に供して、溶媒、緩衝液および塩を除去した。得られた水溶液をTFF(100kDa MWCO膜、透過液を生成物として収集)、続いて0.1ミクロン滅菌ろ過に供した。表題のポリマー性スキャフォールドは無色〜薄琥珀色の水溶液として得られた(233g、収率約67％、11.4kDa、3.8％MI、9.0％AF-HPA)。
【０４８９】
式(A)のスキャフォールドの7つのバッチを上に記載の手順に従って合成した。表3は生成したポリマー性スキャフォールドの分析特性を示す。
【０４９０】
【表３】
2020525441.tif 000133
【０４９１】
実施例4A：式Aのポリマー性スキャフォールドの合成
2020525441.tif 000134
窒素下＜5℃のDCM(459g)中の実施例2Aの生成物(34.0g、0.072モル、0.04eq)に、温度を5℃未満に維持しながら、TFA(195g、1.71モル、0.95eq)を20分間かけて加えた。得られた混合物を周囲温度で2時間撹拌した。HPLCによる一定量の分析は脱保護反応が完了したことを示した。反応混合物を30℃のロータリーエバポレータによって濃縮して所望の生成物であるO-[N-(3-マレイミドプロピオニル)アミノエチル]-O'-[3-(N-(2-アミノエチル)アミノ)-3-オキソプロピル]エチレングリコール(「化合物A」)を油状物として得た。
【０４９２】
別途、約8℃のPHF-β-アラニン(ドライベースで310g含有する水溶液1.01kg、1.80モル、1.0eq、pH6.5)にACN/水(37g)中のNHS(8.4g、0.072モル、0.04eq)に続いてACN(704g)中の上で調製した化合物Aを加えた。得られた混合物のpHは0.1N NaHCO3を使用してpH4.2〜pH5.4に調整し、続いてACN/水(162g)中のEDC.HCl(45g、0.235モル、0.125eq)を3回に分けて加えて最終的にpHを6にした。EDC.HClの添加が完了した後、撹拌を1.5時間継続した。RP-HPLCによってモニタリングして化合物Aが約80%消費された後、ACN/水(82g)中のNHS(20g、0.170モル、0.092eq)に続いて実施例3Aの生成物である水(1605g)中のAF-HPA-alaつまり化合物C(172g、0.197モル、0.083eq)を加え、続いてACN/水(321g)中のEDC.HCl(85g、0.441モル、0.247eq)を3.5時間かけてバッチ式で加えた。得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌した。RP-HPLCによる一定量の分析は＜1%のAF-HPA-alaが残存していることを示した。NaCl(126g)を加え、撹拌を1時間継続し、次いでpHを5.0±0.3に維持しながら混合物を約32Lの水で希釈した。生成物溶液は全て、pHを4〜5に維持しながら5〜15℃でTFF透析ろ過(1kDa MWCO膜)に供した。
【０４９３】
未透過物は、溶離液として25mM酢酸ナトリウムおよびアセトニトリル、pH5.8を使用した分取HPLC(ブチルHG、200Å、10μm、250x75mm、＞1,000psiカラム)によってさらに精製した。1H-NMRおよびSEC分析に基づく、6〜10%のAF-HPA量および7〜13kDaのMWを有するポリマー性スキャフォールドを含有する選択されたフラクションをプールし、合計で約200Lの水で希釈し、続いてTFF(1kDa MWCO膜)濃縮して、溶媒、緩衝液および塩を除去した。得られた水溶液をTFF(100kDa MWCO膜、透過液を生成物として収集)、続いて0.1ミクロン滅菌ろ過に供した。表題のポリマー性スキャフォールドは無色〜薄琥珀色の水溶液として得られた(233g、収率50%、9.5kDa、3.2%MI、8.9%AF-HPA)。
【０４９４】
式(A)のスキャフォールドの4つのバッチを上に記載の手順に従って合成した。表3Aは生成したポリマー性スキャフォールドの分析特性を示す。
【０４９５】
【表３Ａ】
2020525441.tif 000135
【０４９６】
実施例5：還元PBRMの合成
50mM TEAAまたは50mM酢酸ナトリウム、1mM EDTA、pH 7.0におけるPBRM溶液(5.0mg/mL)のpHを0.5M重炭酸ナトリウム(pH8.5)を使用してpH7.0±0.5に調整した。PBRMにおけるジスルフィド結合は2.0〜4.0モル当量のトリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP・HCl)をPBRM溶液に10分間かけてゆっくりと加えることによって部分的に還元した。TCEP・HClの添加が完了した後、得られた溶液を25±2℃で1.5時間撹拌した。次いで、得られた溶液のpHを1.0M酢酸を使用して5.5と7.0の間まで調整した。
【０４９７】
還元PBRMの複数のバッチを、例えば、2.4、2.5、2.75、3.0、3.25または3.4モル当量のTCEP・HClを使用して、上の手順に従って合成した。還元に使用されたPBRMに対するTCEP・HClのモル当量とさらに生成されたPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートのDARとの間に線形の相関が観察された。抗体を還元するために必要なTCEP・HClのモル当量は、抗体の性質およびさらに生成されるPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの所望のDARを含む要因に応じて異なる。当業者であれば、必要なTCEP・HClのモル当量を通常の実験で決定しうることを理解されたい。
【０４９８】
実施例6：式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの合成
式Aのポリマー性スキャフォールドと還元PBRMとのコンジュゲーション
実施例5の還元PBRMを20分間にわたってpH7.0の緩衝液中の式Aのポリマー性スキャフォールドの溶液に加えて、0.9(w/w)または0.75(w/w)の比で式AとPBRMとの溶液を形成した。得られた溶液を25℃で約45〜60分間混合した。
【０４９９】
あるいは、pH7.0の緩衝液中の式Aのポリマー性スキャフォールドの溶液を実施例5の還元PBRMに加えて、PBRMが0.9(w/w)または0.75(w/w)の比になるように式Aの溶液を形成する。
【０５００】
コンジュゲーションの複数のバッチは、式Aのポリマー性スキャフォールドおよびPBRMを0.5:1〜1.2:1までの異なる比で使用して実施した。コンジュゲーション反応において使用する式Aのポリマー性スキャフォールドと抗体の比は、抗体の性質およびさらに生成されるPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの所望のDARを含む要因に応じて異なる。当業者であれば通常の実験で比を決定しうることを理解されたい。
【０５０１】
反応の停止
25モル当量のL-システイン(抗体に対して)を加えることによって反応を停止し、得られたPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの溶液を25℃で30分間混合した。
【０５０２】
式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの精製
式Bのコンジュゲートを含有する得られた混合物を精製して、式Aの未反応のポリマー性スキャフォールド、低および高DARの望ましくない式Bのコンジュゲート、あらゆる凝集種および未反応のPBRMを除去し、これにより、精製された所望のDARを有する式Bのコンジュゲートを提供した。PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含有する停止溶液のpHを1.0M酢酸で5.8まで調整し、得られた混合物を0.2μmフィルタでろ過した。PBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートを含有する粗混合物を、下の表4に示すように、50mM酢酸ナトリウム(NaOAc；pH5.8中)から50mM酢酸ナトリウムおよび1.0M NaCl(pH5.8)までの多段階グラジエントを使用したSCXクロマトグラフィー(POROS HS50)によって精製した。溶出プロファイルはUV吸光度によってモニタリングした。SCXクロマトグラフィーは、早く溶出する酸性フラクション(高分子量および高DAR)および後に溶出する塩基性フラクション(低DAR比、＜10、WCX分析法で決定)の両方やあらゆる凝集種および未反応のPBRMを除去するように設計される。所望のDARを有する式Bのコンジュゲートを含有するメインフラクションを収集した。
【０５０３】
【表４】
2020525441.tif 000136
【０５０４】
カラムのフラクションを分析HPLC WCXクロマトグラフィーによって分析して、式Bのコンジュゲートを酸性(早期溶出)フラクション、塩基性(後期溶出)フラクション、または酸性フラクションと塩基性フラクションの間で溶出するメインフラクションに分類した。
【０５０５】
表5に、分析HPLC WCXクロマトグラフィーによる式Bのコンジュゲートの3つのバッチの精製の分析特性を示す。
【０５０６】
【表５】
2020525441.tif 000137
【０５０７】
式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの緩衝液交換
所望のDARを有する式Bのコンジュゲートを含有する収集したフラクションを合わせ、次いで、得られた溶液を30kDa MWCO膜を使用して25mMクエン酸ナトリウムと75mM塩化ナトリウムとの溶液(pH5.5緩衝液)に対して緩衝液交換した。交換が完了した後、未透過物を0.2μmフィルタでろ過して、精製された式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの溶液を提供した。
【０５０８】
式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの調合
精製された式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの溶液を、25mMクエン酸ナトリウムと75mM塩化ナトリウムとの溶液(pH5.5)を加えることによって15mg/mLの濃度まで希釈した。次いで、得られた溶液を25mMクエン酸ナトリウムと75mM塩化ナトリウムと150g/Lトレハロースとの溶液(pH5.5)を加えることによって10mg/mLの濃度まで調合した。得られた式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの調合物を0.22μmフィルタでろ過し、≦-60℃で保存した。
【０５０９】
式BのPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの3つのバッチを上の手順に従って合成した。表6は生成したPBRM-ポリマー-薬物コンジュゲートの分析特性を示す。
【０５１０】
【表６】
2020525441.tif 000138
【０５１１】
本発明は、その精神または本質的特徴から逸脱することなく他の特定の形態で具体化され得る。従って、前述の態様は本明細書において記載される発明に対する限定というよりもむしろすべての点で例示であると見なされるべきである。よって、本発明の範囲は、前述の説明ではなくむしろ添付のクレームによって示され、クレームの均等物の意味および範囲内に入るあらゆる変更がそれに包含されるように意図されている。
【国際調査報告】
2020525441.tif 000147
2020525441.tif 000148
2020525441.tif 000149