(57)【要約】  本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４機能をアンタゴナイズする、抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。
2020500538.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＳＹＳＭＮ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＸＳＶＫＧ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＥまたはＤであり、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＶＧＬＸＧＰＦＤＩ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＦまたはＭであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＧ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含み、
前記抗体の前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列がそれぞれ、配列番号１０、１１、および１３ではない、単離された抗体。
【請求項２】
ＣＤＲＨ２が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
ＣＤＲＨ３が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３がそれぞれ、配列番号１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号２および４〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記重鎖可変領域が、配列番号２および４〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記重鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体。
【請求項１２】
前記重鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号２３〜２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１２に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域がそれぞれ、配列番号２および９、３および９、４および９、５および９、６および９、７および９、または８および９に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
【請求項１５】
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域がそれぞれ、配列番号８および９に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体。
【請求項１７】
前記抗体が、ヒトＩＧＫＶ３−２０生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体。
【請求項１９】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体。
【請求項２０】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体。
【請求項２１】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む、請求項１〜１２または１４〜１７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１〜１２または１４〜１７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項２４】
前記抗体が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列が、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ変異を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域が、脱フコシル化ＩｇＧ１である、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントであるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含み、前記バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、前記野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がＦｃγＲＩＩＩＡに結合するよりも高い親和性をもってＦｃγＲＩＩＩＡに結合する、請求項１〜１２または１４〜１７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
前記バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域が、バリアントヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である、請求項３２に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、ヒトＩｇκおよびＩｇλからなる群から選択される軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１７または２２〜３３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、Ｉｇκ軽鎖定常領域を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、請求項３５に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と同じヒトＣＴＬＡ−４のエピトープに結合する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
前記抗体が、配列番号３４〜３９からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する、請求項１〜３７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、ヒトＣＴＬＡ−４に対してアンタゴニスト性である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
前記抗体が、ヒトＣＴＬＡ−４の活性を非活性化、低減、または阻害する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、ヒトＣＴＬＡ−４のヒトＣＤ８０またはヒトＣＤ８６への結合を阻害する、請求項４２に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−２産生を誘導する、請求項４２に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
細胞傷害性剤、細胞分裂阻害剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識に共役されている、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４６】
前記抗体の前記重鎖可変領域および／または前記軽鎖可変領域のＮ末端アミノ酸残基が、ピログルタミン酸に変換されている、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項４７】
請求項１〜４６のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項４８】
請求項１〜４５のいずれか１項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４９】
請求項４８に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項５０】
請求項４８に記載のポリヌクレオチドまたは請求項４９に記載のベクターを含む、組み換え宿主細胞。
【請求項５１】
ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体を産生する方法であって、前記ポリヌクレオチドが発現され、前記抗体が産生されるように、請求項５０に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
【請求項５２】
対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させる方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５３】
対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項５４】
前記がんが、転移性または局所進行性腫瘍である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記がんが、固形腫瘍である、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記がんが、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌である、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記がんに利用可能な標準的治療法が存在しない、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
前記がんが、標準的治療法に対して難治性である、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記がんが、標準的治療法後に再発している、請求項５３〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記標準的治療法が、プラチナ含有化学療法を含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記標準的治療法が、プラチナ含有ダブレットを含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記がんが、ＨＰＶ陽性である、請求項５３〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記がんが、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記がんが、転移性ＮＳＣＬＣである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム腫瘍異常を有しない、請求項６３または６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＮＳＣＬＣが、ＥＧＦＲ感作変異またはＡＬＫ転座を有しない、請求項６３〜６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象が、前記ＮＳＣＬＣに対する事前の全身化学療法治療を受けていない、請求項６３〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記がんが、皮膚扁平上皮細胞癌（ｃＳＣＣ）である、請求項５３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記がんが、ＩＶ期ｃＳＣＣである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記ｃＳＣＣが、米国がん合同委員会病期分類マニュアルの第８版に従って組織学的または細胞学的に診断されている、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記ｃＳＣＣが、放射線療法で治癒可能ではない、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現を呈する前記がんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージが、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％である、請求項５３〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
前記抗体が、前記がんの診断後に第１のがん療法として投与される、請求項５３〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体が、
（ａ）前記がんを異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断、または
（ｂ）異なるがん療法の毒性の診断
後に前記第１のがん療法として投与され、任意で、前記抗体が、前記対象に投与される第２のがん療法である、請求項５３〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記抗体または薬学的組成物が、静脈内投与される、請求項５２〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で２週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で４週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で６週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で１２週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体または薬学的組成物が、皮下投与される、請求項５２〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗体または薬学的組成物が、腫瘍内投与される、請求項５３〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗体または薬学的組成物が、任意で３週間に１回の間隔で、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．３ｍｇ／ｋｇで腫瘍内投与される、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記抗体または薬学的組成物が、腫瘍流入領域リンパ節に送達される、請求項５２〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記抗体が、請求項２５〜３３のいずれか１項に記載の抗体である、請求項８１〜８４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８６】
前記抗体が、単独療法として投与される、請求項５２〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８７】
前記対象に追加の治療剤を投与することを更に含む、請求項５２〜８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
前記追加の治療剤が、全身投与される、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記追加の治療剤が、抗ＰＤ−１抗体であり、任意で、前記抗ＰＤ−１抗体が、ペムブロリズマブまたはニボルマブである、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記追加の治療剤が、２００ｍｇで３週間に１回投与されるペムブロリズマブである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記対象が、頭頸部扁平上皮細胞癌を有し、前記追加の治療剤が、抗ＥＧＦＲ抗体であり、任意で、前記抗ＥＧＦＲ抗体が、セツキシマブであり、
任意で、前記方法が、前記対象に化学療法剤を投与することを更に含み、任意で、前記化学療法剤が、全身投与され、任意で、前記化学療法剤が、ゲムシタビンである、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９２】
前記対象が、ＨＥＲ２＋乳癌を有し、前記追加の治療剤が、抗ＨＥＲ２抗体であり、任意で、前記抗ＨＥＲ２抗体が、トラスツズマブであり、
任意で、前記方法が、前記対象に化学療法剤を投与することを更に含み、任意で、前記化学療法剤が、全身投与され、任意で、前記化学療法剤が、ゲムシタビンである、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９３】
前記追加の治療剤が、化学療法剤またはチェックポイント標的剤である、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９４】
前記チェックポイント標的剤が、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、およびアゴニスト抗ＣＤ１３７抗体からなる群から選択される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記追加の治療剤が、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９６】
前記阻害剤が、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記追加の治療剤が、ワクチンである、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９８】
前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記熱ショックタンパク質が、ｈｓｃ７０であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化される、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記熱ショックタンパク質が、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化され、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍に由来する、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
対象における感染症を治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜４７のいずれか１項に記載の抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１６年１２月７日出願の米国特許仮出願第６２／４３１，２７２号の利益を主張し、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する抗体およびそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｔリンパ球は、抗原に対する適応性免疫応答にとって中心的である。ナイーブＴ細胞の完全な活性化には、少なくとも２つのシグナルが必要とされる（Ｂｒｅｔｓｃｈｅｒ１９９９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ９６：１８５−９０）。第１に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣ／ペプチド複合体との相互作用によって抗原特異的シグナルが提供される。第２に、Ｔ細胞上の受容体と抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のそれらのリガンドとの間の相互作用によって共刺激シグナルが提供される。ＴＣＲ／ＭＨＣ相互作用および共刺激相互作用の両方の関与は、カルシウム−カルシニューリンおよびＲＡＳマイトジェン−活性化タンパク質キナーゼを含むいくつかの細胞内経路を介したＴ細胞活性化、ならびにその後ＩＬ−２などのサイトカインを含むいくつかのエフェクター化合物の転写因子の活性化をもたらす。これらの事象は、Ｔ細胞増殖、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）プールの生成、および活性化ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞の増殖をもたらす。共刺激は、完全なＴ細胞活性化にとって重要であるだけでなく、ＴＣＲ／ＭＨＣ関与中のその不在は、アネルギーおよび／またはアポトーシスももたらす。
【０００４】
複数の正および負の共刺激経路がＴ細胞制御に関与しているが、最も重要なのは、Ｔ細胞上のＣＤ２８ならびにＡＰＣ上のＢ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）である。ＣＤ２８は、ＴＨ１表現型細胞へのＴ細胞分化を促進し、Ｂ細胞による抗体産生およびＴ細胞による活性化を増強する。樹状細胞（ＤＣ）およびＢ細胞などのＡＰＣ上で発現されるＢ７−１およびＢ７−２は、重複するがはっきりと異なる機能を有する。Ｂ７−２は構成的に発現され、ＴＣＲ／ＭＨＣ関与（シグナル１）と同時にＡＰＣ上で急速に上方制御される。静止細胞上のＢ７−１発現は非常に低いが、典型的には延長したＴ細胞刺激後に誘導される。これらの差異は、Ｂ７−２がＴ細胞活性化の初期化において重要であり得る一方で、Ｂ７−１が免疫応答の永続化においてより重要な役割を果たし得ることを示唆する。
【０００５】
Ｔ細胞活性化後、負制御性の受容体細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）が、Ｔ細胞上で上方制御される（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１：２２０−８）。ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８と構造的に相同であるが、Ｂ７−１およびＢ７−２リガンドの両方により緊密に結合する。ＣＴＬＡ−４は、いくつかの方法で免疫応答を阻害し、それはＢ７リガンドについてＣＤ２８と競合することで共刺激を遮断し、それは負のシグナル伝達してＴ細胞活性化を阻害し、かつそれはトランスエンドサイトーシスによって対抗する細胞からＣＤ８０およびＣＤ８６を捕捉し、ＣＤ２８を介して共刺激障害をもたらし得る（Ｋｒｕｍｍｅｌ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，１９９５，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ１８２：４５９−４６５、Ｗａｌｕｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１：４０５−４１３、Ｑｕｒｅｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｓｃｉｅｎｃｅ３３２：６００−６０３）。
【０００６】
免疫応答を促進および維持する上でのＢ７共刺激経路の重要な役割を考慮すると、この経路をアンタゴナイズするように設計される治療剤は、自己免疫疾患および障害の治療にとって有望である。
【発明の概要】
【０００７】
本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４機能（例えば、ＣＴＬＡ−４媒介性免疫抑制）をアンタゴナイズする抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。本明細書に記載の抗体は、抗原（例えば、腫瘍抗原もしくは感染症抗原）に応答したＴ細胞活性化を増加させるのに、かつ／またはＴｒｅｇ媒介性免疫抑制を減少させるのに特に有用であり、それ故に、対象におけるがんの治療または対象における感染症の治療もしくは予防に特に有用である。
【０００８】
したがって、一態様では、本開示は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗体であって、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＳＹＳＭＮ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＸＳＶＫＧ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＥまたはＤであり、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＶＧＬＸＧＰＦＤＩ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＦまたはＭであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＧ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含み、
抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列がそれぞれ、配列番号１０、１１、および１３ではない、単離された抗体を提供する。
【０００９】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３はそれぞれ、配列番号１０、１１、および１４；１０、１２、および１３；または１０、１２、および１４に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３はそれぞれ、配列番号１０、１２、および１４に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３はそれぞれ、配列番号１０、１１、１４、１５、１６、および１７；１０、１２、１３、１５、１６、および１７；または１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３はそれぞれ、配列番号１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、
（ａ）ＣＤＲＨ１が、ＳＹＳＭＮ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＣＤＲＨ２が、ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＸＳＶＫＧ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＥまたはＤであり、
（ｃ）ＣＤＲＨ３が、ＶＧＬＸＧＰＦＤＩ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＦまたはＭであり、
（ｄ）ＣＤＲＬ１が、ＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＧ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＣＤＲＬ２が、ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＣＤＲＬ３が、ＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含み、
抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列がそれぞれ、配列番号１０、１１、および１３ではない、単離された抗体を提供する。
【００１１】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３はそれぞれ、配列番号１０、１１、および１４；１０、１２、および１３；または１０、１２、および１４に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３はそれぞれ、配列番号１０、１２、および１４に示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３はそれぞれ、配列番号１０、１１、１４、１５、１６、および１７；１０、１２、１３、１５、１６、および１７；または１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３はそれぞれ、配列番号１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。
【００１２】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域、ならびに相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３がそれぞれ、配列番号１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体を提供する。
【００１３】
特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２および４〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２および４〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＧＫＶ３−２０生殖系列配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１５】
特定の実施形態では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、抗体が、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＧＫＶ３−２０生殖系列配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２〜８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３〜２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００１７】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域および軽鎖可変領域がそれぞれ、配列番号２および９、３および９、４および９、５および９、６および９、７および９、または８および９に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００１８】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する単離された抗体であって、ヒトＩＧＨＶ３−２１＊０１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ヒトＩＧＫＶ３−２０＊０１生殖系列配列（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、単離された抗体を提供する。
【００１９】
特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１である。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ２である。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩｇκおよびＩｇλからなる群から選択される軽鎖定常領域を含む。
【００２０】
特定の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ変異を含む。特定の実施形態では、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、脱フコシル化ＩｇＧ１である。
【００２１】
特定の実施形態では、本抗体は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントであるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含み、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がＦｃγＲＩＩＩＡに結合するよりも高い親和性をもってＦｃγＲＩＩＩＡに結合する。特定の実施形態では、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、バリアントヒトＩｇＧ１重鎖定常領域である。
【００２２】
特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＩｇκおよびＩｇλからなる群から選択される軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、Ｉｇκ軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【００２３】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４への結合について本明細書に記載の抗体と交差競合する、単離された抗体を提供する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４への結合について、それぞれ配列番号８および９に示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と交差競合する、単離された抗体を提供する。
【００２４】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体と同じヒトＣＴＬＡ−４上のエピトープに結合する、単離された抗体を提供する。別の態様では、本開示は、それぞれ配列番号８および９に示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と同じヒトＣＴＬＡ−４上のエピトープに結合する、単離された抗体を提供する。
【００２５】
別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４のエピトープに結合する、例えば、特異的に結合する、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３４〜３９からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００２６】
別の態様では、本開示は、本発明の任意の抗体と同じヒトＣＴＬＡ−４のエピトープに特異的に結合する、抗体または単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３４〜３９からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列からなるヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープに結合する。
【００２７】
別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３４に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３４に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３６に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３６に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３７に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３７に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３８に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３８に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。別の態様では、本開示は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３９に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３９に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。
【００２８】
別の態様では、本開示は、本発明の任意の抗体と同じヒトＣＴＬＡ−４のエピトープに特異的に結合する、抗体または単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３４に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３４に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３５に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３６に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３６に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３７に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３７に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３８に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３８に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、例えば、配列番号３３の残基３７〜１６２のアミノ酸配列を含むヒトＣＴＬＡ−４タンパク質またはその断片への結合時に、水素／重水素アッセイによって決定して、抗体の不在下での配列番号３９に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換と比較して、配列番号３９に示されるアミノ酸配列からなる領域内の水素／重水素交換を低減させる、抗体を提供する。
【００２９】
特定の実施形態では、本抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、本抗体は、二重特異性抗体である。
【００３０】
特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４に対してアンタゴニスト性である。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４の活性を非活性化、低減、または阻害する。特定の実施形態では、本抗体は、ヒトＣＴＬＡ−４のヒトＣＤ８０またはヒトＣＤ８６への結合を阻害する。特定の実施形態では、本抗体は、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−２産生を誘導する。
【００３１】
特定の実施形態では、本抗体は、細胞傷害性剤、細胞分裂阻害剤、毒素、放射性核種、または検出可能な標識に共役されている。
【００３２】
特定の実施形態では、本抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のＮ末端アミノ酸残基は、ピログルタミン酸に変換されている。
【００３３】
一実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための本発明の抗体に関する。
【００３４】
一実施形態では、本発明は、免疫療法のための薬学的組成物または薬剤を調製するための本発明の抗体の使用に関する。特定の実施形態では、免疫療法は、任意でがんを治療するため、または感染症を治療もしくは予防するために、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるためのものである。
【００３５】
一実施形態では、本発明は、診断剤として使用するための本発明の抗体に関する。
【００３６】
一実施形態では、本発明は、生体試料中のヒトＣＴＬＡ−４のインビトロ検出のための本発明の抗体の使用に関する。
【００３７】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物を提供する。
【００３８】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。別の態様では、本開示は、ポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。別の態様では、本開示は、ポリヌクレオチドまたはベクターを含む、組み換え宿主細胞を提供する。別の態様では、本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４に結合する抗体を産生する方法であって、ポリヌクレオチドが発現され、本抗体が産生されるように、宿主細胞を培養することを含む、方法を提供する。
【００３９】
別の態様では、本開示は、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させる方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象におけるがんを治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００４０】
特定の実施形態では、対象は、がんを有する。特定の実施形態では、対象は、転移性または局所進行性腫瘍（例えば、固形腫瘍）を有する。特定の実施形態では、がんは、転移性または局所進行性腫瘍の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療される。特定の実施形態では、がんは、腫瘍を異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断後（例えば、腫瘍進行の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、がんは、異なるがん療法の毒性の診断後（例えば、異なるがん療法の毒性の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、利用可能な標準的治療法が存在しない転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）である。他の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、標準的治療法が失敗している（すなわち、標準的治療法後にがんが進行している）転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）である。特定の実施形態では、がんが治療法に対して難治性である場合、治療法は失敗している。特定の実施形態では、治療法に完全または部分的に応答した後にがんが再発する場合、治療法は失敗している。特定の実施形態では、転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）は、組織学的または細胞学的に確認されている。
【００４１】
特定の実施形態では、がんは、ＰＤ−Ｌ１を発現する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがんの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。
【００４２】
特定の実施形態では、転移性または局所進行性腫瘍は、ＰＤ−Ｌ１を発現する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性腫瘍の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性腫瘍の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性腫瘍の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性腫瘍の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性腫瘍の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。
【００４３】
特定の実施形態では、がんは、子宮頸癌である。特定の実施形態では、がんは、転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）は、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌である。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）または転移性もしくは局所進行性腫瘍（例えば、固形腫瘍）には、利用可能な標準的治療法が存在しない。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）または転移性もしくは局所進行性腫瘍（例えば、固形腫瘍）は、標準的治療法に対して難治性である。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）または転移性もしくは局所進行性腫瘍（例えば、固形腫瘍）は、標準的治療法後に再発している。特定の実施形態では、標準的治療法は、プラチナ含有化学療法を含む。特定の実施形態では、標準的治療法は、プラチナ含有ダブレットである。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）は、進行性（再発性、切除不能、または転移性）疾患の治療のためにプラチナ含有ダブレットが投与された後に再発している、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌である。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）または転移性もしくは局所進行性腫瘍は、ＨＰＶ陽性である。特定の実施形態では、がんまたは転移性もしくは局所進行性固形腫瘍は、頭頸部癌、黒色腫、腎細胞癌、尿路上皮癌、または子宮内膜癌である。特定の実施形態では、がん（例えば、子宮頸癌）または転移性もしくは局所進行性固形腫瘍は、マイクロサテライト不安定性に関連している。
【００４４】
特定の実施形態では、対象は、子宮頸癌（例えば、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌）を有し、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を投与することを含み、任意で、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与される。特定の実施形態では、対象は、子宮頸癌（例えば、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌）を有し、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物とペムブロリズマブとを含む有効量の治療的組み合わせを投与することを含み、任意で、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与され、ペムブロリズマブは、２００ｍｇで３週間に１回投与される。
【００４５】
特定の実施形態では、がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＩＶ期ＮＳＣＬＣである。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。特定の実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム腫瘍異常を有しない。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲ感作変異（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはアファタニブ（ａｆａｔａｎｉｂ）を含むチロシンキナーゼ阻害剤での治療に適している変異）またはＡＬＫ転座を有しない。特定の実施形態では、対象は、ＮＳＣＬＣに対する事前の全身化学療法治療を受けていない。
【００４６】
特定の実施形態では、転移性または局所進行性固形腫瘍は、転移性または局所進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性固形腫瘍は、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性固形腫瘍は、ＩＶ期転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣである。特定の実施形態では、転移性または局所進行性固形腫瘍は、ＩＶ期転移性ＮＳＣＬＣである。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム腫瘍異常を有しない。特定の実施形態では、対象は、転移性もしくは局所進行性ＮＳＣＬＣに対する事前の全身化学療法治療を受けていない。
【００４７】
特定の実施形態では、対象は、ＮＳＣＬＣ（例えば、ＩＶ期、転移性、または局所進行性ＮＳＣＬＣ）を有し、任意で、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、膜発現、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％であり、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を投与することを含み、任意で、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与される。特定の実施形態では、対象は、ＮＳＣＬＣ（例えば、ＩＶ期、転移性、または局所進行性ＮＳＣＬＣ）を有し、任意で、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、膜発現、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％であり、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物とペムブロリズマブとを含む有効量の治療的組み合わせを投与することを含み、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与され、ペムブロリズマブは、２００ｍｇで３週間に１回投与される。
【００４８】
特定の実施形態では、がんは、皮膚扁平上皮細胞癌（ｃＳＣＣ）である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性固形腫瘍は、ＩＶ期皮膚扁平上皮細胞癌（ｃＳＣＣ）である。特定の実施形態では、ｃＳＣＣは、米国がん合同委員会病期分類マニュアルの第８版に従って組織学的または細胞学的に診断されている。特定の実施形態では、ｃＳＣＣは、放射線療法で治癒可能ではない。特定の実施形態では、対象は、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）を有し、本方法は、ｃＳＣＣの診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を投与することを含み、任意で、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与される。特定の実施形態では、対象は、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）を有し、本方法は、ｃＳＣＣの診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として、対象に本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物とペムブロリズマブとを含む有効量の治療的組み合わせを投与することを含み、任意で、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで４週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、３ｍｇ／ｋｇで６週間に１回、０．３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、１ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回、および３ｍｇ／ｋｇで１２週間に１回からなる群から選択される投薬量および頻度で投与され、ペムブロリズマブは、２００ｍｇで３週間に１回投与される。
【００４９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で２週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で４週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で６週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で１２週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、３週間に１回の間隔で、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、または０．３ｍｇ／ｋｇで腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、または２００倍低い用量で腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大１０倍低い用量で腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大１００倍低い用量で腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、単独療法として（例えば、腫瘍内または全身）投与される。腫瘍内特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍内投与され、本方法は、対象に追加の治療剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、追加の治療剤は、全身投与される。特定の実施形態では、対象は、固形腫瘍を有し、追加の治療剤は、抗ＰＤ−１抗体である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ペムブロリズマブまたはニボルマブである。特定の実施形態では、ペムブロリズマブは、２００ｍｇの用量で３週間に１回投与される。特定の実施形態では、対象は、頭頸部扁平上皮細胞癌を有し、追加の治療剤は、抗ＥＧＦＲ抗体である。特定の実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体は、セツキシマブである。特定の実施形態では、対象は、ＨＥＲ２＋乳癌を有し、追加の治療剤は、抗ＨＥＲ２抗体である。特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブである。特定の実施形態では、これらの方法は、対象に化学療法剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、化学療法剤は、全身投与される。特定の実施形態では、化学療法剤は、ゲムシタビンである。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍内投与され、対象は、進行性または転移性固形腫瘍を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍内投与され、対象は、頭頸部癌（例えば、再発性／難治性頭頸部扁平上皮細胞癌）を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍内投与され、対象は、乳癌（例えば、再発性／難治性ＨＥＲ２＋乳癌）を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、または２００倍低い用量で局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大１０倍低い用量で局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身投与によって与えられる用量よりも最大１００倍低い用量で局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達され、本方法は、対象に追加の治療剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、追加の治療剤は、ワクチンである。特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。一実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化され、ＨＳＰＰＣは、対象から得られた腫瘍に由来する。特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、それらの変異体、およびそれらの２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｈｓｃ７０である。特定の実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｈｓｐ７０である。特定の実施形態では、抗原ペプチドは、合成である。特定の実施形態では、対象は、がんを有する。特定の実施形態では、対象は、感染症を有する。特定の実施形態では、これらの方法は、対象に追加の治療剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤である。特定の実施形態では、チェックポイント標的剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、およびアゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＤＲ３抗体、アゴニスト抗ＴＮＦＳＦ１４抗体、およびアゴニスト抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される。特定の実施形態では、追加の治療剤は、放射線療法である。特定の実施形態では、追加の治療剤は、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤である。好適なＩＤＯ阻害剤としては、エパカドスタット、Ｆ００１２８７、インドキシモド、およびＮＬＧ９１９が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、追加の治療剤は、ワクチンである。特定の実施形態では、ワクチンは、抗原ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む。一実施形態では、熱ショックタンパク質は、ｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体化され、ＨＳＰＰＣは、対象から得られた腫瘍に由来する。
【００５０】
別の態様では、本開示は、対象における感染症を治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。別の態様では、本開示は、対象における感染症を予防する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための、本発明の抗体、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、および／または本発明の組み換え宿主細胞に関する。
【００５２】
一実施形態では、本発明は、診断剤として使用するための、本発明の抗体、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、および／または本発明の組み換え宿主細胞に関する。
【００５３】
一実施形態では、本発明は、生体試料中のヒトＣＴＬＡ−４をインビトロ検出するための、本発明の抗体、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、および／または本発明の組み換え宿主細胞に関する。
【００５４】
一態様では、薬剤として使用するための、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
【００５５】
一態様では、診断剤として使用するための、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
【００５６】
一態様では、本発明は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、本発明のポリヌクレオチド、本発明のベクター、および／または本発明の組み換え宿主細胞と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物が本明細書に提供される。一態様では、薬学的組成物は、薬剤および／または診断剤として使用するためのものである。
【００５７】
一態様では、本発明は、抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００５８】
一態様では、本発明は、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００５９】
一態様では、本発明は、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるための方法であって、対象に有効量の本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物を投与することを含む、方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００６０】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００６１】
一態様では、本発明は、対象におけるがんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００６２】
一態様では、本発明は、対象におけるがんを治療するための方法であって、対象に有効量の本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物を投与することを含む、方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関する。
【００６３】
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤、好ましくは抗ＰＤ−１抗体に関する。
【００６４】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤、好ましくは抗ＰＤ−１抗体に関する。好ましい一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。別の好ましい実施形態では、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内投与され、好ましくは任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで対象に腫瘍内投与される。
【００６５】
一態様では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤、好ましくは抗ＰＤ−１抗体を含む、薬学的組成物、キット、またはパーツのキットに関する。
【００６６】
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＥＧＦＲ抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤に関する。
【００６７】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＥＧＦＲ抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤に関する。好ましい一実施形態では、がんは、頭頸部扁平上皮細胞癌である。別の好ましい実施形態では、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内投与され、好ましくは任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで対象に腫瘍内投与される。
【００６８】
一態様では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物と、（ｂ）抗ＥＧＦＲ抗体と、任意で（ｃ）化学療法剤とを含む、薬学的組成物、キット、またはパーツのキットに関する。
【００６９】
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤に関する。
【００７０】
一態様では、本発明は、ＨＥＲ２＋乳癌を治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤に関する。別の好ましい実施形態では、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内投与され、好ましくは任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで対象に腫瘍内投与される。
【００７１】
一態様では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物と、（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体と、任意で（ｃ）化学療法剤とを含む、薬学的組成物、キット、またはパーツのキットに関する。
【００７２】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内投与され、好ましくは任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇで対象に腫瘍内投与される。
【００７３】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、対象に皮下または静脈内投与され、好ましくは任意で３週間に１回の間隔で、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで対象に静脈内投与される。
【００７４】
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤に関する。好ましい一実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤またはインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤またはワクチンである。
【００７５】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤に関する。好ましい一実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤またはインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤またはワクチンである。
【００７６】
一態様では、本発明は、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物と、（ｂ）追加の治療剤とを含む、薬学的組成物、キット、またはパーツのキットに関する。好ましい一実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤またはインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の阻害剤またはワクチンである。
【００７７】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するため、および／または抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるための方法において使用するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【００７８】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法における、および／または対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるための方法における、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物の使用に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【００７９】
一態様では、本発明は、例えば、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるため、がんを治療するため、または感染症を治療もしくは予防するための免疫療法のための薬剤を調製するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物の使用に関する。
【００８０】
一態様では、本発明は、例えば、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるため、がんを治療するため、または感染症を治療もしくは予防するための免疫療法のための免疫療法のための薬剤を調製するための、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物の使用に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【００８１】
一態様では、本発明は、例えば、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるため、がんを治療するため、または感染症を治療もしくは予防するための免疫療法のための免疫療法のための薬剤を調製するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤の使用に関する。
【００８２】
一態様では、本発明は、例えば、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるため、がんを治療するため、または感染症を治療もしくは予防するための免疫療法のための免疫療法のための薬剤を調製するための、（ａ）本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物、ならびに（ｂ）抗ＨＥＲ２抗体、ならびに任意で（ｃ）化学療法剤の使用に関し、本発明の抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、組み換え宿主細胞、および／または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】抗ＣＴＬＡ−４抗体またはＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体の、細胞表面上にヒトＣＴＬＡ−４を発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞への結合を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。試験される抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ１．１（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ１．２（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ１．３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ２．１（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ２．２（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ２．３（ＩｇＧ１）、およびＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）である。
【図２】抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の不在下または存在下、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）超抗原での最適以下の刺激下でインキュベートした後の初代ヒトＰＢＭＣのＩＬ−２産生を示すグラフである。各群について８つの複製を実行し、８つの複製物の平均値を黒色のバーで示した。
【図３】ＣＴＬＡ−４の遮断がＴ細胞活性化をもたらすことを実証するＩＬ−２−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。ＩＬ−２遺伝子活性化の代替マーカーであるルシフェラーゼ発現の反応倍率を、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の様々な抗体濃度にわたってプロットする。
【図４】ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）の（ＣＴＬＡ−４結合を介した）標的細胞および（ＦｃγＲＩＩＩＡ結合を介した）エフェクター細胞への同時関与が、エフェクター細胞株によるルシフェラーゼの発現を引き起こす、レポーターアッセイの結果を示すグラフである。ルシフェラーゼ活性は、ＦｃγＲＩＩＩＡシグナル伝達の代替マーカーである。ＲＬＵ値の反応倍率を、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）およびアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の様々な抗体濃度に対してプロットする。
【図５】抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、もしくはＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ）、またはアイソタイプ対照抗体とともにインキュベートしたＣＴＬＡ−４発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。抗体結合は、蛍光色素共役二次抗体を使用して検出した。
【図６】ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）による、ヒトＣＴＬＡ−４とそのリガンド（それぞれＣＤ８０およびＣＤ８６）との間の結合の遮断を示すグラフである。ヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞を、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）、基準抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）とともにインキュベートし、その後示される蛍光標識リガンドで染色した。その後、フローサイトメトリーによってリガンド結合を評価した。
【図７】アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体の不在下または存在下、ＳＥＡ超抗原での最適以下の刺激で培養した初代ヒトＰＢＭＣのＩＬ−２産生を示すグラフである。図７Ａおよび７Ｂは、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ）の単回用量または用量漸増のいずれかによって刺激されたＩＬ−２産生を示すグラフである。図７Ｂに示される研究では、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体に加えて、各試料中の細胞はまた、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐアイソタイプ対照抗体とともにもインキュベートした。図７Ｃは、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、および脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１）の用量漸増によって刺激されたＩＬ−２産生を示すグラフである。
【図８Ａ】５０ｎｇ／ｍｌのＳＥＡ超抗原および１０μｇ／ｍｌのアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、もしくはＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ）での刺激後の、ヒトＰＢＭＣにおけるリン酸化ＺＡＰ７０（Ｙ４９３）の免疫ブロット分析である。
【図８Ｂ】図８Ａに示されるデータの正規化した濃度測定分析を示す図表である。
【図９】マウス抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃバリアントによって誘導される、抗腫瘍有効性および腫瘍内制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）枯渇を示すグラフである。図９Ａは、マウス抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）での単回用量治療後のＣＴ２６マウスにおける腫瘍成長を示す。上部パネルは、各治療群についての経時的な腫瘍体積中央値を示す。残りのパネルは、各治療群の個々の動物の経時的な腫瘍体積を示す。図９Ｂは、単回用量の抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）で治療したマウスから収集した腫瘍浸潤物由来のＴ細胞集団に対する、抗ＣＴＬＡ−４抗体治療の効果を示す。腫瘍浸潤物は、抗体注射後の示される時点でフローサイトメトリーによって回収および分析した。分析した細胞集団には、ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇｓ（左上パネル）、ＣＤ４５＋白血球（右上パネル）、およびＣＤ４＋非Ｔｒｅｇｓ（左下パネル）が含まれる。右下パネルは、腫瘍浸潤物中に観察されたＣＤ８＋Ｔ細胞対Ｔｒｅｇの比率を示す。図９Ｃは、図９Ｂについて記載のように治療したマウスから回収した腫瘍流入領域リンパ節内の経時的なＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ集団を示す。図９Ｄは、図９Ｂに記載の治療の７２時間後の脾臓ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ内の倍率変化を示す。
【図１０】ＨＰＶ＋腫瘍（ウイルス抗原Ｅ６／Ｅ７）由来の腫瘍ワクチンと組み合わせた場合のマウス抗ＣＴＬＡ−４抗体の抗腫瘍有効性を示す一連のグラフである。治療を受けていない個々のマウス、アイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、または抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）を受けている個々のマウスの経時的な腫瘍体積を示す。上の行のグラフは、示される抗体治療のみを投与した動物の結果を示す。下の行のグラフは、腫瘍ワクチンと組み合わせて示される抗体治療を投与した動物の結果を示す。
【図１１】ヒトＴ細胞集団の遺伝子発現およびＣｐＧメチル化を示すグラフである。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋／−ＦＯＸＰ３−非制御Ｔ細胞（Ｔｅｆｆ）およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を、健康なドナーの末梢血から単離し、増殖させ、活性化した。図１１Ａは、フローサイトメトリーによって決定した、各活性化Ｔ細胞集団内のＦＯＸＰ３、細胞内ＣＴＬＡ−４、および膜ＣＴＬＡ−４レベルを示す。図１１Ｂは、それぞれ同じドナーに由来する、ナイーブＴ細胞内、活性化エフェクターＴ細胞内、および活性化制御性Ｔ細胞内の、ＦＯＸＰ３（上パネル）およびＣＴＬＡ４（下パネル）遺伝子座におけるＣｐＧ領域内のＣｐＧメチル化のレベルを示す。
【図１２】抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはそのＦｃバリアントとともにインキュベートした後の、ヒトＣＴＬＡ−４＋標的細胞の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の時間経過を示すグラフである。ＮＫ−９２細胞（ＦｃγＲＩＩＩＡ  Ｖ１５８発現）を、抗ＣＴＬＡ−４抗体の異なるＦｃバリアントまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照（１０μｇ／ｍｌ）とともにインキュベートしたＣＴＬＡ−４＋標的細胞とともに共培養した。その後、カスパーゼ３／７活性化のハイコンテンツ顕微鏡観察を使用して、ＡＤＣＣ活性を定量化した。図１２Ａは、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）とともにインキュベートした場合の、細胞表面上でＣＴＬＡ−４を発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞のＡＤＣＣ活性を示す。図１２Ｂは、これらの抗体とともにインキュベートした場合の、初代ヒト活性化エフェクターＴ細胞（左パネル）または制御性Ｔ細胞（右パネル）内のＡＤＣＣ活性を示す。
【図１３】単独または抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与した場合の、Ｔ細胞機能に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体バリアントの影響を示すグラフである。ヒトＰＢＭＣを２人のドナーから単離し、示されるように基準抗ＰＤ−１抗体またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）と組み合わせて、刺激培養条件下で抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）とともにインキュベートした。列挙される各治療条件について、第１に列挙される抗体には投薬量漸増を使用し、第２に列挙される抗体には固定濃度（５μｇ／ｍｌ）を使用した。この実験を２回実行して、１人のドナー当たり合計２つの複製物になるようにした。第１のドナーから収集したＰＢＭＣ上の、各抗体の組み合わせによって誘導されるＩＬ−２産生のレベルを図１３Ａ（複製物１）および図１３Ｂ（複製物２）に示す。第２のドナーから収集したＰＢＭＣ上の、各抗体の組み合わせによって誘導されるＩＬ−２産生のレベルを図１３Ｃ（複製物１）および図１３Ｄ（複製物２）に示す。
【図１４】一連の配列アライメントである。図１４Ａは、ヒトＣＴＬＡ−４（配列番号３３）、カニクイザルＣＴＬＡ−４（配列番号４０）、マウスＣＴＬＡ−４（配列番号４１）、およびラットＣＴＬＡ−４（配列番号４２）の配列アライメントである。ドットは、対応するヒト残基と同一の残基を表す。「＊」（アステリスク）は、単一の完全に保存された残基を有する位置を示す。「：」（コロン）は、特性の類似度が強い群間の保存を示す。「．」（ピリオド）は、特性の類似度が低い群間の保存を示す。図１４Ｂおよび１４Ｃは、ヒトＣＴＬＡ−４（それぞれ配列番号３３の残基１〜１４４および残基１４５〜２２３）、カニクイザルＣＴＬＡ−４（それぞれ配列番号４０の残基１〜１４４および残基１４５〜２２３）、ヒトＣＤ２８（それぞれ配列番号４３の残基１〜１２７および残基１２８〜２２０）、ヒトＩＣＯＳ（それぞれ配列番号４４の残基１〜１２４および残基１２５〜１９９）、ヒトＢＴＬＡ（それぞれ配列番号４５の残基１〜１２５および残基１２６〜２８９）、ならびにヒトＰＤ−１（それぞれ配列番号４６の残基１〜１４３および残基１４４〜２８８）の配列アライメントである。図１４Ａ〜１４Ｃにおいて、ヒトＣＴＬＡ−４のＡＧＥＮ１８８４−Ｆａｂへの結合時に重水素取り込みの強い減少を示す２つの領域、配列番号３３に従って番号付けされた残基８０〜８２（ＱＶＴ、配列番号３９）および残基１３５〜１４９（ＹＰＰＰＹＹＬＧＩＧＮＧＴＱＩ、配列番号３７）に下線を付す。
【発明を実施するための形態】
【００８４】
本開示は、ヒトＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４機能（例えば、ＣＴＬＡ−４媒介性免疫抑制）をアンタゴナイズする、抗体を提供する。これらの抗体を含む薬学的組成物、これらの抗体をコードする核酸、これらの抗体を作製するための発現ベクターおよび宿主細胞、ならびにこれらの抗体を使用して対象を治療する方法もまた提供される。本明細書に記載の抗体は、抗原（例えば、腫瘍抗原もしくは感染症抗原）に応答したＴ細胞活性化を増加させるのに特に有用であり、それ故に、対象におけるがんの治療または対象における感染症の治療もしくは予防に特に有用である。本明細書に記載の「単離された抗体」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はない抗体として、追加的に企図される。本明細書に記載の「単離されたポリヌクレオチド」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして、追加的に企図される。本明細書に記載の「抗体」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はない抗体として、追加的に企図される。本明細書に記載の「ポリヌクレオチド」の全ての例が、単離することができるが、単離される必要はないポリヌクレオチドとして、追加的に企図される。
【００８５】
当業者であれば、本明細書に記載の抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体）のうちのいずれか１つの重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のＮ末端のグルタミン酸（Ｅ）またはグルタミン（Ｑ）アミノ酸残基が、特定の条件下で、遊離アミノ基の翻訳後環化によってピログルタミン酸に自発的に変換されて、ラクタムが形成され得ることを理解するであろう。したがって、本明細書に記載の方法、使用、薬学的組成物、またはキットのうちの１つ１つの特定の実施形態では、抗体の１つ以上の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のＮ末端アミノ酸残基は、（例えば、Ｎ末端ＥまたはＱ残基の遊離アミノ基の翻訳後環化の結果として）ピログルタミン酸に変換されている。
【００８６】
６．１  定義
本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用される場合、その値または範囲を５％〜１０％上回り（例えば、最大５％〜１０％上回り）、かつ５％〜１０％下回る（例えば、最大５％〜１０％下回る）偏差が、列挙される値または範囲の意図される意味に留まることを示す。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「ＣＴＬＡ−４」という用語は、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４を指す。本明細書で使用される場合、「ヒトＣＴＬＡ−４」という用語は、野生型ヒトＣＴＬＡ−４遺伝子によってコードされるヒトＣＴＬＡ−４タンパク質、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＭ＿００５２１４．４またはＮＭ＿００１０３７６３１．２を指す。ヒトＣＴＬＡ−４の例示的な未成熟アミノ酸配列は、配列番号３３として提供される。
【００８８】
本明細書で使用される場合、「抗体」および「抗体（複数）」という用語は、完全長抗体、完全長抗体の抗原結合断片、および抗体ＣＤＲ、ＶＨ領域、またはＶＬ領域を含む分子を含む。抗体の例としては、モノクローナル抗体、組み換え産生された抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロ共役抗体、抗体−薬物共役体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗Ｉｄ抗体を含む）、ならびに上記のいずれかの抗原結合断片を挙げることができる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）の免疫グロブリン分子のものであり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそれらのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）もしくはサブクラスである。具体的な一実施形態では、本抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の具体的な実施形態では、本抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。
【００８９】
本明細書で使用される場合、「ＶＨ領域」および「ＶＬ領域」という用語はそれぞれ、ＦＲ（フレームワーク領域）１、２、３、および４、ならびにＣＤＲ（相補性決定領域）１、２、および３を含む、単一の抗体重鎖および軽鎖可変領域を指す（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ）を参照されたい）。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見出される非隣接の抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって、ならびにＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）によって記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれ、定義は、互いに比較した場合、重複するアミノ酸残基またはそれらのサブセットを含む。特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（１９９１）によって定義されるＣＤＲである。特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって定義されるＣＤＲである。特定の実施形態では、「ＣＤＲ」という用語は、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６）およびＭａｒｔｉｎ  Ａ．“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）によって定義されるＣＤＲである。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「フレームワーク（ＦＲ）アミノ酸残基」という用語は、免疫グロブリン鎖のフレームワーク領域内のアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ領域」という用語は、可変領域の一部であるが、（例えば、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの定義を使用して）ＣＤＲの一部ではないアミノ酸残基を含む。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「可変領域」および「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当該技術分野において共通のものである。可変領域は、典型的には抗体の一部分、一般に軽鎖または重鎖の一部分、典型的にはアミノ末端から成熟重鎖の約１１０〜１２５個のアミノ酸および成熟軽鎖の約９０〜１１５個のアミノ酸を指し、それらは、抗体間で配列が広範囲にわたって異なり、かつその特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性において使用される。配列の可変性が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域内で凝縮されている一方で、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論によっても束縛されることを望むものではないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲが、抗原に対する抗体の相互作用および特異性に主に関与すると考えられる。特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲおよび霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００９３】
「ＶＬ」および「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために互換的に使用される。
【００９４】
「ＶＨ」および「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために互換的に使用される。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「定常領域」および「定常ドメイン」という用語は、互換的であり、当該技術分野において共通のものである。定常領域は、抗体部分、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体（例えば、Ｆｃガンマ受容体）との相互作用などの様々なエフェクター機能を呈することができる、軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリンの可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
【００９６】
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合、「重鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、例えば、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭクラスの抗体（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）をもたらす、任意のはっきりと異なる種類、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）を指し得る。
【００９７】
本明細書で使用される場合、抗体に関して使用される場合、「軽鎖」という用語は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意のはっきりと異なる種類、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「ＥＵ番号付けシステム」という用語は、Ｇ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８−８５（１９６９）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１に記載の抗体の定常領域のＥＵ番号付けの慣習を指し、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００９９】
「結合親和性」は一般に、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含むが、これらに限定されない、当該技術分野において既知であるいくつかの方法で測定および／または表現することができる。ＫＤが、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算される一方で、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗体の抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆは、例えば、抗体の抗原への解離速度定数を指す。ｋｏｎおよびｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者にとって既知の技術によって決定することができる。本明細書で使用される場合、「より低い親和性」は、より大きなＫＤを指す。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「に特異的に結合する」、「を特異的に認識する」、「に免疫特異的に結合する」、および「を免疫特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、そのような結合が当業者によって理解されるように、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する分子を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）、または当該技術分野において既知である他のアッセイによって決定して、一般により低い親和性を有する他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。具体的な一実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、少なくとも２対数（すなわち、１０の因数）、２．５対数、３対数、４対数であるか、またはこの分子が別の抗原に非特異的に結合する時のＫＡよりも大きなＫＡをもって、抗原に結合する。
【０１０１】
別の具体的な実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、類似した結合条件下で他のタンパク質とは交差反応しない。別の具体的な実施形態では、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する分子は、他の非ＣＴＬＡ−４タンパク質とは交差反応しない。具体的な一実施形態では、別の非関連抗原に結合する時よりも高い親和性をもって、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に結合する抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または動態排除アッセイによって決定して、別の非関連抗原に結合する時よりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い親和性をもって、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に結合する抗体が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体の非関連非ＣＴＬＡ−４タンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイによって測定して、その抗体のＣＴＬＡ−４タンパク質への結合の１０％、１５％、または２０％未満である。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、Ｆｃの文脈における「脱フコシル化」または「脱フコシル化した」という用語は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域の残基２９７、または非ＩｇＧ１もしくは非ヒトＩｇＧ１免疫グロブリンにおける対応する残基に直接的または間接的に共有結合したフコースの実質的な欠如を指す。したがって、複数の脱フコシル化抗体を含む組成物中では、少なくとも７０％の抗体が、抗体のＦｃ領域の残基２９７で直接的または間接的に（例えば、介在する糖類を介して）フコシル化されておらず、いくつかの実施形態では、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｆｃ領域の残基２９７で直接的または間接的にフコシル化されていない。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形もしくは隣接エピトープ）であってもよく、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数可）の２つ以上の非隣接領域が一体となったもの（立体構造、非線形、非連続、もしくは非隣接エピトープ）であってもよい。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴ−ペプチド走査アッセイ（例えば、ＣＬＩＰＳ（ペプチドの足場上への化学結合）を使用してペプチドを拘束して、非連続もしくは立体構造エピトープをマッピングすること）、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野において既知である方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ１８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２５１：６３００−６３０３、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。抗体：抗原結晶は、周知であるＸ線回折技術を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ１１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，、ＵＳ２００４／００１４１９４を参照されたい）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５６（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。変異誘発マッピング研究は、当業者にとって既知である任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技術を含む変異誘発技術の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７０：１３８８−１３９４およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１０８１−１０８５を参照されたく、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。��ＬＩＰＳ（ペプチドの足場上への化学結合）は、構造的に拘束された立体配置にある１つ以上のペプチドを、複合タンパク質ドメインの機能的な模倣物として挙動するように提示する技術である。例えば、米国公開第ＵＳ２００８／０１３９４０７（Ａ１）号および同第ＵＳ２００７／０９９２４０（Ａ１）号、ならびに米国特許第７，９７２，９９３号を参照されたく、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、アラニン走査変異誘発研究を使用して決定される。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換を使用して決定される。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープは、Ｐｅｐｓｃａｎ  ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＣＬＩＰＳエピトープマッピング技術を使用して決定される。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、特定のアミノ酸配列または一組のアミノ酸残基からなる「ヒトＣＴＬＡ−４の領域内に位置するエピトープ」という用語は、特定の領域のアミノ酸残基のうちの１つ以上を含むエピトープを指し、特定の領域は、ヒトＣＴＬＡ−４の領域の最初の特定のアミノ酸残基および最後の特定のアミノ酸残基を含む。特定の実施形態では、エピトープは、特定の領域内に位置するアミノ酸残基の１つ１つを含む。特定の実施形態では、特定の領域外のヒトＣＴＬＡ−４の１つ以上の追加のアミノ酸残基は、特定の領域内に位置するエピトープと一緒に抗体に結合する。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体」および「ＴＣＲ」という用語は、互換的に使用され、完全長ヘテロ二量体αβまたはγδ  ＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、およびＴＣＲ  ＣＤＲまたは可変領域を含む分子を指す。ＴＣＲの例としては、完全長ＴＣＲ、完全長ＴＣＲの抗原結合断片、膜貫通領域および細胞質領域を欠如する可溶性ＴＣＲ、可動性リンカーによって結合したＴＣＲの可変領域を含有する一本鎖ＴＣＲ、操作されたジスルフィド結合によって結合したＴＣＲ鎖、単一特異性抗体ＴＣＲ、多重特異性ＴＣＲ（二重特異ＴＣＲを含む）、ＴＣＲ融合体、ヒトＴＣＲ、ヒト化ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、組み換え産生されたＴＣＲ、ならびに合成ＴＣＲが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、野生型ＴＣＲおよび遺伝子操作されたＴＣＲ（例えば、第１の種のＴＣＲ由来の第１の部分および第２の種のＴＣＲ由来の第２の部分を含むキメラＴＣＲ鎖を含む、キメラＴＣＲ）を包含する。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「主要組織適合複合体」および「ＭＨＣ」という用語は、互換的に使用され、ＭＨＣクラスＩ分子および／またはＭＨＣクラスＩＩ分子を指す。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「ペプチド−ＭＨＣ複合体」という用語は、ＭＨＣの当該技術分野において認識されているペプチド結合ポケット内で結合したペプチドを有するＭＨＣ分子（ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ）を指す。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、および「治療」は、本明細書に記載の治療的または予防的処置を指す。「治療」方法は、疾患もしくは障害を有するか、またはそのような疾患もしくは障害に罹りやすい対象に対する抗体の投与を用いて、疾患もしくは障害または疾患もしくは障害の再発を予防、治癒、遅延、その重症度を低減、またはその１つ以上の症状を寛解させるか、あるいはそのような治療の不在下で予想される生存期間を超えて対象の生存期間を延長させる。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、対象への治療法の投与の文脈における「有効量」という用語は、所望の予防的または治療的効果を達成する治療法の量を指す。
【０１１０】
ある治療法に対するがんの応答に関して本明細書で使用される場合、「難治性」および「抵抗性」という用語は、それらの当該技術分野において認識されている意味を有し、互換的に使用される。
【０１１１】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。一実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。一実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１１２】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の「同一性パーセント」の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの具体的で非限定的な一例は、Ｋａｒｌｉｎ  Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ９０：５８７３−５８７７にあるように修正されたＫａｒｌｉｎ  Ｓ＆Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ８７：２２６４−２２６８のアルゴリズムであり、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれ、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、例えば、スコア＝１００、文字長＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで実行して、本明細書に記載の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、例えば、スコア＝５０、文字長＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで実行して、本明細書に記載のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のギャップ有りのアラインメントを得るために、ギャップ有りのＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ２５：３３８９−３４０２に記載のように利用することができ、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係（Ｉｄ．）を検出する反復検索を実行することができる。ＢＬＡＳＴ、ギャップ有りのＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用してもよい（例えば、ワールドウェブのｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ上のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の具体的で非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ４：１１−１７のアルゴリズムであり、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用することができる。
【０１１３】
２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容して、または許容することなく、上記の技術に類似した技術を使用して決定することができる。同一性パーセントの計算では、典型的には完全一致のみを計数する。
【０１１４】
６．２  抗ＣＴＬＡ−４抗体
一態様では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４機能をアンタゴナイズする、抗体を提供する。例示的な抗体のアミノ酸配列を、本明細書の表１〜４に示す。
【表１】
2020500538.tif 000003
2020500538.tif 000004
2020500538.tif 000005
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【表２】
2020500538.tif 000010
【表３】
2020500538.tif 000011
【表４】
2020500538.tif 000012
【表５】
2020500538.tif 000013
【表６】
2020500538.tif 000014
2020500538.tif 000015
2020500538.tif 000016
【０１１５】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、本明細書の表１に示されるＶＨドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＨドメインを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ１を含む。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ２を含む。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＨドメインのうちの１つのＣＤＲＨ３を含む。
【０１１６】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、本明細書の表１に開示されるＶＬドメインのＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ全てを含むＶＬドメインを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ１を含む。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ２を含む。特定の実施形態では、本抗体は、表１に示されるＶＬドメインのうちの１つのＣＤＲＬ３を含む。
【０１１７】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，６６０９−６６１６（１９７７）およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９９１）に従って決定することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１８】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を参照するＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ＆Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ１９６：９０１−９１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ２７３：９２７−９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ２２７：７９９−８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ２１５（１）：１７５−８２、および米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。典型的には、Ｋａｂａｔ番号付けの慣習を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループは、重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ２ループは、重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ３ループは、重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在する一方で、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ１ループは、軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ２ループは、軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＬ３ループは、軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲＨ１ループの末端は、Ｋａｂａｔ番号付けの慣習を使用して番号付けされる場合、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａまたは３５Ｂのいずれも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合、このループは３３で終わり、３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在する場合、このループは３４で終わる）。
【０１１９】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、本明細書の表１に開示されるＶＨのＣｈｏｔｈｉａ  ＶＨ  ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、本明細書の表１に開示されるＶＬのＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、本明細書の表１に開示される抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＶＨ  ＣＤＲおよびＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲを含む、抗体を提供する。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する抗体は、１つ以上のＣＤＲを含み、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲおよびＫａｂａｔ  ＣＤＲは、同じアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲとの組み合わせを含む、単離された抗体を提供する。
【０１２０】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ７：１３２−１３６およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ２７：２０９−２１２に記載のＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定することができ、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１２１】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）（上記）およびＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐら（１９９９）（上記）に記載のＩＭＧＴ番号付けシステムによって決定して、本明細書の表１に開示される抗体のＣＤＲを含む、抗体を提供する。
【０１２２】
特定の実施形態では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されている、ＡｂＭ超可変領域を参照するＡｂＭ番号付けスキームに従って決定することができる。特定の一実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、ＡｂＭ番号付けスキームによって決定して、明細書の表１に開示される抗体のＣＤＲを含む、抗体を提供する。
【０１２３】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、配列番号２、４、５、６、７、または８に示されるＶＨドメインのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９に示されるＶＬドメインのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、各ＣＤＲは、ＣＤＲについてのＭａｃＣａｌｌｕｍの定義、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、Ｋａｂａｔの定義とＣｈｏｔｈｉａの定義との組み合わせ、ＩＭＧＴ番号付けシステム、またはＡｂＭの定義に従って定義される。
【０１２４】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、
（ａ）ＣＤＲＨ１は、ＳＹＳＭＮ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
（ｂ）ＣＤＲＨ２は、ＳＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＸＳＶＫＧ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＥもしくはＤであり、かつ／または
（ｃ）ＣＤＲＨ３は、ＶＧＬＸＧＰＦＤＩ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含み、式中、Ｘが、ＦもしくはＭであり、かつ／または
（ｄ）ＣＤＲＬ１は、ＲＡＳＱＳＶＳＲＹＬＧ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
（ｅ）ＣＤＲＬ２は、ＧＡＳＴＲＡＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含み、かつ／または
（ｆ）ＣＤＲＬ３は、ＱＱＹＧＳＳＰＷＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含み、
を含み、抗体のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列はそれぞれ、配列番号１０、１１、および１３ではない。
【０１２５】
特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲＨ３は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
【０１２６】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、配列番号１０、１１、および１４；１０、１２、および１３；または１０、１２、および１４にそれぞれ示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、配列番号１０、１２、および１４にそれぞれ示されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。
【０１２７】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域とを含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域はそれぞれ、配列番号１０、１１、１４、１５、１６、および１７；１０、１２、１３、１５、１６、および１７；または１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体を提供し、本抗体は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３領域を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域を含む軽鎖可変領域とを含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３領域はそれぞれ、配列番号１０、１２、１４、１５、１６、および１７に示されるアミノ酸配列を含む。
【０１２８】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２、４、５、６、７、または８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号３に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２、４、５、６、７、または８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。
【０１２９】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【０１３０】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２、４、５、６、７、または８に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号３に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％（例えば、少なくとも８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２および９；４および９；５および９；６および９；７および９；または８および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号４および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号５および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号６および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号７および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８および９にそれぞれ示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【０１３１】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＨ１、およびＣＤＲＨ２から選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）に由来し得る。一実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＨ１、およびＣＤＲＨ２は全て、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）に由来する。
【０１３２】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）からなる群から選択されるヒト生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、単離された抗体を提供する。フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＬ１、およびＣＤＲＬ２から選択される１つ以上の領域（例えば、これらの領域のうちの２つ、３つ、４つ、または５つ）は、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）からなる群から選択されるヒト生殖系列配列に由来し得る。一実施形態では、フレームワーク１、フレームワーク２、フレームワーク３、ＣＤＲＬ１、およびＣＤＲＬ２は全て、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）からなる群から選択されるヒト生殖系列配列に由来する。
【０１３３】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ヒトＩＧＨＶ３−２１生殖系列配列（例えば、配列番号２１のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＨＶ３−２１＊０１）由来のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ＩＧＫＶ３−２０（例えば、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）からなる群から選択されるヒト生殖系列配列由来のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、単離された抗体を提供する。
【０１３４】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）への結合について、配列番号２および９；４および９；５および９；６および９；７および９；または８および９にそれぞれ示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と交差競合する、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）への結合について、それぞれ配列番号３および９に示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と交差競合する、単離された抗体を提供する。
【０１３５】
特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体、例えば、配列番号２および９；４および９；５および９；６および９；７および９；または８および９にそれぞれ示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と同じか、またはそれと重複するＣＴＬＡ−４のエピトープ（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４のエピトープ）に結合する、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗体、例えば、配列番号３および９にそれぞれ示される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む抗体と同じか、またはそれと重複するＣＴＬＡ−４のエピトープ（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４のエピトープ）に結合する、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴ−ペプチド走査アッセイ、および／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野において既知である方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５０（Ｐｔ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ１８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２５１：６３００−６３０３、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。抗体：抗原結晶は、周知であるＸ線回折技術を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ１１４＆１１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許出願第２００４／００１４１９４号を参照されたい）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ４９（Ｐｔ１）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ５６（Ｐｔ１０）：１３１６−１３２３）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。変異誘発マッピング研究は、当業者にとって既知である任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技術を含む変異誘発技術の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍら（１９９５）（上記）およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ＆Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）（上記）を参照されたい。具体的���一実施形態では、抗体のエピトープは、アラニン走査変異誘発研究を使用して決定される。加えて、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）の同じか、またはそれと重複するエピトープを認識および結合する抗体は、例えば、１つの抗体が別の抗体の標的抗原への結合を遮断する能力を示すことによる免疫アッセイ、すなわち、競合的結合アッセイなどの通例の技術を使用して特定することができる。競合結合アッセイを使用して、２つの抗体があるエピトープに対して類似した結合特異性を有するかを決定することもできる。競合的結合は、試験用の免疫グロブリンがＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）などの共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。多数の種類の競合的結合アッセイ、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ９：２４２−２５３を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１３７：３６１４−９を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ、（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）、Ｉ−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２５（１）：７−１５を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：５４６−５２を参照されたい）、および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ３２：７７−８２を参照されたい）が既知であり、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。典型的には、そのようなアッセイは、これらの未標識試験免疫グロブリンおよび標識基準免疫グロブリンのいずれかを担持する固体表面または細胞に結合した精製された抗原（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４などのＣＴＬＡ−４）の使用を伴う。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在している。通常、競合抗体が過剰に存在している場合、それは、基準抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害するであろう。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレート上に固定する。その後、非標識抗体が標識抗体の抗原への結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を使用して測定する。更なる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１３０：２３０��−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ６８：２６９−２７４、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ５０：４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ２１：５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１１：３９１−４０７、およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ（上記），ｐｐ．３８６−３８９を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１３６】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２３、２４、２５、または２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１３７】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体を提供する。
【０１３８】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、単離された抗体を提供する。
【０１３９】
本明細書に記載の抗体中では、任意のＩｇ定常領域を使用することができる。特定の実施形態では、Ｉｇ領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）である。
【０１４０】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号２８、２９、３０、または３１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、単離された抗体を提供する。
【０１４１】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅ変異を含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【０１４２】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を含む重鎖定常領域（ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ変異を含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【０１４３】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する単離された抗体であって、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｐ３９６Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を含む重鎖定常領域（ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、およびＰ３９６Ｌ変異を含むＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【０１４４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＧ領域は、例えば、野生型Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡに対して増加した親和性を有する。ＦｃγＲＩＩＩＡに対する増加した親和性をもたらす配列改変は、当該技術分野において、例えば、Ｋｅｌｌｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ６５：１０５−１１３（２０１４）、Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ１０３：４００５−４０１０（２００６）、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４（２００１）において既知であり、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＧ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ、およびＰ３９６Ｌ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＴ２５６Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＫ２９０Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２９８Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＥ３３３Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＫ３３４Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＡ３３９Ｔを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９ＤおよびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、およびＫ３３４Ａを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施��態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＧ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、およびＩ３３２Ｅを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。特定の実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＦ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、およびＰ３９６Ｌを含む重鎖定常領域（例えば、ＩｇＧ１定常領域）またはその断片を含む。
【０１４５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性を呈する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ナチュラルキラー細胞媒介性細胞枯渇を開始する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ナチュラルキラー細胞で浸潤した腫瘍の治療に使用される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）活性を呈する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、マクロファージ媒介性細胞枯渇を開始する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、マクロファージで浸潤した腫瘍の治療に使用される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、腫瘍内制御性Ｔ細胞を選択的に枯渇させる。
【０１４６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、活性化状態においてヒトＣＴＬＡ−４タンパク質に結合する、活性化可能な抗体である。特定の実施形態では、活性化可能な抗体は、非切断状態にある抗体のヒトＣＴＬＡ−４タンパク質への結合を阻害するマスキング部分と、抗体に結合した少なくとも１つの切断可能な部分とを含み、例えば、切断可能な部分は、腫瘍微小環境において濃縮されるプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドである。例示的な活性化可能な抗体は、例えば、米国特許第８，５１３，３９０号および同第８，５１８，４０４号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２５５３１３号、同第ＵＳ２０１４／００１０８１０号、同第ＵＳ２０１４／００２３６６４号に記載されており、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、活性化可能な抗体は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のバリアントであるヒトＩｇＧ重鎖定常領域を含み、バリアントヒトＩｇＧ重鎖定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ重鎖定常領域がヒトＦｃγＲＩＩＩＡに結合するよりも高い親和性をもってヒトＦｃγＲＩＩＩＡに結合する。
【０１４７】
特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域（例えば、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）および／もしくはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７））ならびに／またはヒンジ領域に導入して、血中半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つ以上の機能的特性を改変する。
【０１４８】
特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に導入して、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，６７７，４２５号に記載のように、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変する（例えば、増加または減少させる）。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域内のシステイン残基の数を改変して、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリを促進しても、または抗体の安定性を改変しても（例えば、増加もしくは減少させても）よい。
【０１４９】
具体的な一実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボで抗体の半減期を改変しても（例えば、減少もしくは増加させても）よい。例えば、インビボで抗体の半減期を改変する（例えば、減少または増加させる）変異の例については、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、および同第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第６，２７７，３７５号、および同第６，１６５，７４５号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボで抗体の半減期を減少させてもよい。他の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、置換、挿入、または欠失）を、ＩｇＧ定常ドメインまたはそのＦｃＲｎ結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入して、インビボで抗体の半減期を増加させてもよい。具体的な一実施形態では、本抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）および／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）内の１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有してもよい。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体のＩｇＧ１の定常領域は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２５２位のメチオニン（Ｍ）からチロシン（Ｙ）への置換、２５４位のセリン（Ｓ）からトレオニン（Ｔ）への置換、および２５６位のトレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を含む。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７，６５８，９２１号を参照されたい。「ＹＴＥ変異体」と称される、この種類の変異体ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して、４倍増加した半減期を示すことが示されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２８１：２３５１４−２４を参照されたい）。特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２５１〜２５７、２８５〜２９０、３０８〜３１４、３８５〜３８９、および４２８〜４３６位のアミノ酸残基の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）を、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域（例えば、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）および／もしくはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７））ならびに／またはヒンジ領域に導入して、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を増加または減少させる抗体のＦｃ領域内の変異、およびそのような変異をＦｃ受容体またはその断片に導入するための技術は、当業者にとって既知である。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を改変するように行われ得る抗体のＦｃ受容体の変異の例は、例えば、Ｓｍｉｔｈ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ１０９：６１８１−６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、および同第ＷＯ９７／３４６３１号に記載されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５１】
更なる一実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸置換をＩｇＧ定常ドメインＦｃ領域に導入して、抗体のエフェクター機能（複数可）を改変する。例えば、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換して、エフェクターリガンドに対する抗体の親和性は改変されるが、親抗体の抗原結合能は保持するようにすることができる。親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１構成成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号に更に詳細に記載されており、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、（点変異または他の手段を通した）定常領域ドメインの欠失または不活性化は、循環抗体のＦｃ受容体結合を低減させ、それにより腫瘍の局在化を増加させ得る。例えば、米国特許第５，５８５，０９７号および同第８，５９１，８８６号を参照されたく、これらの各々は、定常ドメインを欠失または不活性化させ、それにより腫瘍の局在化を増加させる変異の説明について、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を本明細書に記載の抗体のＦｃ領域に導入して、Ｆｃ受容体結合を減少し得るＦｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去することができる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７６：６５９１−６０４を参照されたい）。様々な実施形態では、本明細書に記載の抗体の定常領域内で、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｎ２９７Ａの置換、Ｎ２９７Ｑの置換、Ｌ２３５Ａの置換およびＬ２３７Ａの置換、Ｌ２３４Ａの置換およびＬ２３５Ａの置換、Ｅ２３３Ｐの置換、Ｌ２３４Ｖの置換、Ｌ２３５Ａの置換、Ｃ２３６の欠失、Ｐ２３８Ａの置換、Ｄ２６５Ａの置換、Ａ３２７Ｑの置換、またはＰ３２９Ａの置換の変異のうちの１つ以上が行われ得る。特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異が、本明細書に記載の抗体の定常領域内で行われ得る。
【０１５２】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＮ２９７ＱまたはＮ２９７Ａのアミノ酸置換を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。別の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される変異を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ヒトＩｇＧ１重鎖内のＬ２３４位、Ｌ２３５位、およびＤ２６５位に対応する位置における、本明細書に記載の抗体の定常領域内のアミノ酸残基はそれぞれ、Ｌ、Ｌ、およびＤではない。このアプローチは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ１４／１０８４８３号に詳細に記載されている。特定の一実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、ヒトＩｇＧ１重鎖内のＬ２３４位、Ｌ２３５位、およびＤ２６５位に対応するアミノ酸はそれぞれ、Ｆ、Ｅ、およびＡ；またはＡ、Ａ、およびＡである。
【０１５３】
特定の実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、本明細書に記載の抗体の定常領域内のアミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換して、抗体が改変されたＣ１ｑ結合および／または低減もしくは停止した補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有するようにすることができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）に更に詳細に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、本明細書に記載の抗体のＣＨ２ドメインのＮ末端領域内のアミノ酸位置２３１〜２３８における１つ以上のアミノ酸残基を改変して、それにより抗体が補体を固定する能力を改変する。このアプローチは、国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号に更に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域を修飾して、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、または４３９位で１つ以上のアミノ酸を変異させる（例えば、アミノ酸置換を導入する）ことによって、抗体が抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する能力を増加させる、かつ／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加させる。このアプローチは、国際公開第ＷＯ００／４２０７２号に更に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域を含み、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされた、重鎖のアミノ酸残基２２８のセリンが、プロリンに置換される。
【０１５５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の定常領域変異または修飾のいずれかが、２つの重鎖定常領域を有する本明細書に記載の抗体の一方または両方の重鎖定常領域に導入されてもよい。
【０１５６】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、アンタゴニストとして機能する、単離された抗体を提供する。
【０１５７】
特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の方法および／または当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性と比較して、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性を少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％減少させる、単離された抗体を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の方法および／または当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性と比較して、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍減少させる、単離された抗体を提供する。ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性の非限定的な例としては、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）シグナル伝達、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）リガンド（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）に対するＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）結合、およびサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−α）の阻害を挙げることができる。特定の実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性を非活性化、低減、または阻害する、単離された抗体を提供する。具体的な実施形態では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）活性の減少は、以下の実施例に記載のように評価される。
【０１５８】
具体的な実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のそのリガンド（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）への結合と比較して、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のそのリガンド（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）への結合を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％低減させる、単離された抗体を提供する。具体的な実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のそのリガンド（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）への結合と比較して、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のそのリガンド（例えば、ＣＤ８０またはＣＤ８６）への結合を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍低減させる、単離された抗体を提供する。
【０１５９】
具体的な実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたサイトカイン産生と比較して、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−α）を少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる、単離された抗体を提供する。具体的な実施形態では、本開示は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたサイトカイン産生と比較して、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−α）を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる、単離された抗体を提供する。
【０１６０】
特定の実施形態では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する、本明細書に記載の抗体の存在下で、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）で刺激したヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、本明細書に記載の方法（以下の実施例を参照されたい）または当業者にとって既知である方法によって評価して、いかなる抗体も用いないか、または非関連抗体（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合しない抗体）を用いたＳＥＡのみで刺激したＰＢＭＣと比較して、ＩＬ−２産生を少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させた。
【０１６１】
６．３  薬学的組成物
生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤中で所望の純度を有する本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む組成物が本明細書に提供される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量および濃度で受容者に対して非毒性であり、これらには、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が含まれる。
【０１６２】
具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、任意で１つ以上の追加の予防剤または治療剤とを含む。具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に、有効量の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と、任意で１つ以上の追加の予防剤または治療剤とを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、薬学的組成物中に含まれる唯一の活性成分である。本明細書に記載の薬学的組成物は、ＣＴＬＡ−４活性の阻害、およびがんまたは感染症などの病態の治療に有用であり得る。
【０１６３】
一態様では、薬剤として使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
【０１６４】
一態様では、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む薬学的組成物が本明細書に提供される。
【０１６５】
非経口調製物中に使用される薬学的に許容される担体としては、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張剤、緩衝液、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁剤および分散剤、乳化剤、封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が挙げられる。水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射剤、リンガー注射剤、等張デキストロース注射剤、滅菌水注射剤、デキストロース、および乳酸化リンガー注射剤が挙げられる。非水性非経口ビヒクルとしては、植物由来の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、およびピーナツ油が挙げられる。静菌性または静真菌性濃縮物中の抗菌剤が、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、ならびに塩化ベンゼトニウムを含む複数回用量容器内にパッケージ化された非経口調製物に添加され得る。等張剤としては、塩化ナトリウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝液としては、リン酸およびクエン酸が挙げられる。抗酸化剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁剤および分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が挙げられる。金属イオンの封鎖剤またはキレ−ト化剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。薬学的担体としてはまた、水混和性ビヒクルのためのエチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコール、ならびにｐＨ調節のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が挙げられる。
【０１６６】
薬学的組成物は、対象への任意の投与経路のために製剤化されてもよい。投与経路の具体的な例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、および非経口が挙げられる。皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与もまた、本明細書で企図される。注射物質は、液体溶液または懸濁液のいずれかの従来の形態で、注射前の液体中の溶液または懸濁液に好適な固体形態で、またはエマルジョンとして調製することができる。注射物質、溶液、およびエマルジョンはまた、１つ以上の賦形剤を含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。加えて、所望される場合、投与される薬学的組成物はまた、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度増強剤、ならびに他のそのような薬剤（酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、およびシクロデキストリンなど）を含有してもよい。
【０１６７】
抗体の非経口投与のための調製物としては、注射可能な滅菌溶液、使用直前に溶媒と組み合わせることができる、皮下注射錠剤を含む凍結乾燥粉末などの滅菌乾燥可溶性生成物、注射可能な滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと組み合わせることができる滅菌乾燥不溶性生成物、および滅菌エマルジョンが挙げられる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。
【０１６８】
静脈内投与される場合、好適な担体としては、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤および可溶化剤（グルコース、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコール、ならびにそれらの混合物など）を含有する溶液が挙げられる。
【０１６９】
抗体を含む外用混合物は、局所および全身投与について記載のように調製される。結果として生じる混合物は、溶液、懸濁液、またはエマルジョンなどであり得、クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、泡沫、エアロゾル、潅注、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ、または外用投与に好適な任意の他の製剤として製剤化され得る。
【０１７０】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、外用適用のための（例えば、吸入による）エアロゾルとして製剤化され得る（例えば、米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、および同第４，３６４，９２３号を参照されたく、これらは、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達のためのエアロゾルを記述しており、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせた、噴霧器用のエアロゾルまたは溶液の形態であっても、吹送法のための超微粒粉末としてあってもよい。そのような場合、製剤の粒子は、一実施形態では５０ミクロン未満、一実施形態では１０ミクロン未満の直径を有するであろう。
【０１７１】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、局所または外用適用のため（皮膚および粘膜（眼内など）への外用適用のためなど）に、ゲル、クリーム、およびローションの形態で、ならびに目への適用または嚢内もしくは脊髄内への適用のために製剤化され得る。外用投与は、経皮送達およびまた目もしくは粘膜への投与のため、または吸入療法のためにも企図される。単独または他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、この抗体の点鼻薬もまた、投与され得る。
【０１７２】
イオン泳動装置および電気泳動装置を含む経皮パッチは、当業者にとって周知であり、抗体を投与するために使用することができる。例えば、そのようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、および同第５，８６０，９５７号に開示されており、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１７３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む薬学的組成物は、凍結乾燥粉末であり、これは、投与のために溶液、エマルジョン、および他の混合物として再構成することができる。それはまた、固体またはゲルとして再構成および製剤化してもよい。凍結乾燥粉末は、好適な溶媒中に、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはその薬学的に許容される誘導体を溶解することによって調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥粉末は、滅菌である。溶媒は、粉末または粉末から調製した再構成溶液の安定性または他の薬理学的構成成分を改善する賦形剤を含有してもよい。使用され得る賦形剤としては、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒はまた、クエン酸、ナトリウム、もしくはリン酸カリウムなどの緩衝液、または当業者にとって既知である他のそのような緩衝液を、一実施形態では、およそ中性のｐＨで含有してもよい。その後溶液を滅菌濾過し、その後当業者にとって既知である標準的な条件下で凍結乾燥させることにより、所望の製剤が得られる。一実施形態では、結果として生じる溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配されるであろう。各バイアルは、単回投薬量または複数回投薬量の化合物を含有するであろう。凍結乾燥粉末は、約４℃〜室温などの適切な条件下で保存することができる。凍結乾燥粉末の注射用水での再構成により、非経口投与に使用するための製剤が得られる。再構成のために、凍結乾燥粉末を滅菌水または他の好適な担体に添加する。正確な量は、選択される化合物に依存する。そのような量は、経験的に決定することができる。
【０１７４】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体および本明細書に提供される他の組成物はまた、特定の組織、受容体、または治療される対象の身体の他の領域を標的とするように製剤化され得る。多くのそのような標的方法は、当業者にとって周知である。全てのそのような標的方法は、本組成物中での使用のために本明細書で企図される。標的方法の非限定的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、および同第５，７０９，８７４号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍を標的とする。
【０１７５】
インビボ投与のために使用される組成物は、滅菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
【０１７６】
６．４  使用（複数可）方法
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して対象を治療する方法を提供する。本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して、ＣＴＬＡ−４機能の阻害から利益を得るであろう対象における任意の疾患または障害を治療することができる。本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、腫瘍に対する免疫系耐性を阻害するのに特に有用であり、したがって、がんを有する対象のための免疫療法として使用することができる。例えば、特定の実施形態では、本開示は、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させる方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、対象におけるがんを治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１７７】
本明細書に記載の抗体、治療的組み合わせ、または薬学的組成物で治療することができるがんとしては、固形癌（例えば、再発性または難治性固形癌、進行性または転移性固形癌）、癌腫、肉腫、黒色腫（例えば、ＩＩＩ期またはＩＶ期黒色腫）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、尿路上皮癌、卵巣癌、前立腺癌（例えば、転移性ホルモン不応性前立腺癌および進行性転移性前立腺癌）、膵臓癌、乳癌（例えば、ＨＥＲ２＋乳癌（例えば、再発性／難治性ＨＥＲ２＋乳癌））、頭頸部癌（例えば、再発性／難治性頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ））、神経膠腫、悪性神経膠腫、多形性膠芽腫、脳転移、メルケル癌、胃癌、胃食道癌、腎細胞癌、ブドウ膜黒色腫、結腸癌、子宮頸癌、リンパ腫（例えば、再発性または難治性リンパ腫）、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、ならびに多発性骨髄腫が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、がんは、本明細書に記載の抗体、治療的組み合わせ、または薬学的組成物の腫瘍内投与で治療される。本明細書に記載の抗体、治療的組み合わせ、または薬学的組成物の腫瘍内投与で治療することができるがんとしては、固形腫瘍（例えば、進行性または転移性固形腫瘍）、頭頸部癌（例えば、再発性／難治性頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ））、および乳癌（例えば、ＨＥＲ２＋乳癌（例えば、再発性／難治性ＨＥＲ２＋乳癌））が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、固形腫瘍である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性または局所進行性癌（例えば、転移性または局所進行性固形腫瘍）である。特定の実施形態では、がんは、転移性または局所進行性腫瘍の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療される。特定の実施形態では、がんは、腫瘍を異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断後（例えば、腫瘍進行の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、がんは、異なるがん療法の毒性の診断後（例えば、異なるがん療法の毒性の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、利用可能な標準的治療法が存在しない転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）である。他の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、標準的治療法が失敗している（すなわち、標準的治療法後にがんが進行している）転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）である。特定の実施形態では、がんが治療法に対して難治性である場合、治療法は失敗している。特定の実施形態では、治療法に完全または部分的に応答した後にがんが再発する場合、治療法は失敗している。特定の実施形態では、転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）は、組織学的または細胞学的に確認されている。
【０１７９】
特定の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。特定の実施形態では、がん（例えば、固形腫瘍）は、ＰＤ−Ｌ１を発現する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、部分的または完全な発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するがん（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。
【０１８０】
特定の実施形態では、転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）は、ＰＤ−Ｌ１を発現する。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、部分的または完全な発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％（例えば、少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性癌（例えば、固形腫瘍）の試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。
【０１８１】
ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、膜発現、部分的または完全な膜発現）を呈する試料中の細胞の特定のパーセンテージを必要とする、本明細書に記載の方法のうちの１つ１つについて、ＰＤ−Ｌ１の発現は、免疫組織化学を含むが、これらに限定されない、当該技術分野において周知である任意の方法によって検出され得る。腫瘍細胞内のＰＤ−Ｌ１発現を測定するための例示的な免疫組織化学アッセイは、Ｈｉｒｓｃｈら（２０１７，Ｊ．Ｔｈｏｒａｃｉｃ  Ｏｎｃｏｌ．１２（２）：２０８−２２２）、Ｒｉｍｍら（２０１７，ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌ．３（８）：１０５１−１０５８）、およびＤｉｇｇｓ  ａｎｄ  Ｈｓｕｅｈ（２０１７，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｒｅｓ．５：１２）に提供され、これらは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１８２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性または局所進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、ＩＶ期転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣである。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、ＩＶ期転移性ＮＳＣＬＣである。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な発現（例えば、部分的または完全な発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも２５％である。特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈する転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも５０％である。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲまたはＡＬＫゲノム腫瘍異常を有しない。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣは、ＥＧＦＲ感作変異（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、またはアファタニブ（ａｆａｔａｎｉｂ）を含むチロシンキナーゼ阻害剤での治療に適している変異）またはＡＬＫ転座を有しない。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣを有する対象は、転移性もしくは局所進行性ＮＳＣＬＣに対する事前の全身化学療法治療を受けていない。特定の実施形態では、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣは、転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣの診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療される。特定の実施形態では、本方法は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０���／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を使用して、ＮＳＣＬＣ（例えば、ＩＶ期転移性または局所進行性ＮＳＣＬＣ）を有する対象を治療することを含み、ＰＤ−Ｌ１の検出可能な膜発現（例えば、部分的または完全な膜発現）を呈するＮＳＣＬＣの試料中の腫瘍細胞のパーセンテージは、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％であり、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として提供される。
【０１８３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、子宮頸癌である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、切除不能または転移性の子宮頸癌である。特定の実施形態では、子宮頸癌は、標準的治療法後に進行している（例えば、標準的治療法後に再発しているか、または標準的治療法に対して難治性である）。特定の実施形態では、標準的治療法は、プラチナ含有化学療法を含む。特定の実施形態では、プラチナ含有化学療法は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、トリプラチン、フェナントリプラチン、イプロプラチン、ロバパチン（ｌｏｂａｐａｔｉｎ）、ヘプタプラチン、リポプラチン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、標準的治療法は、第２の化学療法を更に含む。特定の実施形態では、第２の化学療法は、ヌクレオチド類似体（例えば、ゲムシタビン）、葉酸抗代謝剤（例えば、ペメトレキセド）、およびタキサン（例えば、パクリタキセル）からなる群から選択される。特定の実施形態では、標準的治療法は、当該技術分野において既知である任意のプラチナ系ダブレット化学療法（ＰＴ−ＤＣ）（プラチナ含有ダブレットとしても知られる）である。特定の実施形態では、ＰＴ−ＤＣは、シスプラチンおよびゲムシタビン、シスプラチンおよびペメトレキセド、シスプラチンおよびパクリタキセル、カルボプラチンおよびパクリタキセル、またはシスプラチンおよびトポテカンを含む。標準的治療法（例えば、ＰＴ−ＤＣを含むもの）は、任意で１つ以上の追加の治療法（ベバシズマブなど）を更に含み得る。特定の実施形態では、標準的治療法は、パクリタキセルおよびトポテカンを含む。特定の実施形態では、子宮頸癌は、ＨＰＶ陽性である。特定の実施形態では、子宮頸癌は、マイクロサテライト不安定性に関連している。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、進行性（再発性、切除不能、または転移性）疾患の治療のためにプラチナ含有ダブレットが投与された後に再発している、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌である。特定の実施形態では、子宮頸癌は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療される。特定の実施形態では、子宮頸癌は、子宮頸癌を異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断後（例えば、腫瘍進行の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、子宮頸癌は、異なるがん療法の毒性の診断後（例えば、異なるがん療法の毒性の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、本方法は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を使用して、子宮頸癌（例えば、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌）を有する対象を治療することを含み、本方法は、子宮頸癌の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法として提供される。特定の実施形態では、本方法は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはそのような抗ＣＴＬＡ−４抗体を含む薬学的組成物を使用して、子宮頸癌（例えば、転移性または局所進行性の切除不能な扁平上皮細胞癌、腺扁平上皮癌、または子宮頸部腺癌）を有する対象を治療することを含み、本方法は、子宮頸癌を異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断後（例えば、腫瘍進行の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に提供されるか、または異なるがん療法の毒性の診断後（例えば、異なるがん療法の毒性の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に提供され、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。
【０１８４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、皮膚扁平上皮細胞癌（ｃＳＣＣ）である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、ＩＶ期皮膚扁平上皮細胞癌（ｃＳＣＣ）である。特定の実施形態では、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）は、放射線療法で治癒可能ではない。特定の実施形態では、ＩＶ期ｃＳＣＣは、米国がん合同委員会病期分類マニュアルの第８版（ＡＪＣＣ−８）に従って組織学的または細胞学的に診断されている。特定の実施形態では、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）は、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）の診断後（例えば、診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療される。特定の実施形態では、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）は、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）を異なるがん療法で以前に治療したにも関わらず生じた腫瘍進行の診断後（例えば、腫瘍進行の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。特定の実施形態では、ｃＳＣＣ（例えば、ＩＶ期ｃＳＣＣ）は、異なるがん療法の毒性の診断後（例えば、異なるがん療法の毒性の診断後、１、２、３、４、５、もしくは６日以内、１、２、３、４、６、８、もしくは１２週間以内、または１、２、３、４、６、８、もしくは１２ヶ月以内）に第１のがん療法としての本明細書に記載の方法に従って治療され、任意で、本明細書に記載の方法は、投与される第２のがん療法として提供される。
【０１８５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、基底細胞癌、膀胱癌、芽細胞腫、脳転移、乳癌、バーキットリンパ腫、癌腫（例えば、（例えば、胃食道接合部の）腺癌）、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌（結腸癌および直腸癌）、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、胃食道接合部癌、消化管癌、膠芽腫（例えば、多形性膠芽腫、例えば、新たに診断されたか、または再発性のもの）、神経膠腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮細胞癌）、肝転移、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫、腎臓癌（例えば、腎細胞癌およびウィルムス腫瘍）、喉頭癌、白血病（例えば、慢性骨髄球性白血病、有毛細胞性白血病）、肝臓癌（例えば、肝癌および肝細胞癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、リンパ芽球性リンパ腫、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、転移性脳腫瘍、転移性癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄）、神経芽細胞腫、眼黒色腫、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌（例えば、膵管腺癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性（例えば、去勢抵抗性）、転移性、転移性ホルモン不応性（例えば、去勢抵抗性、アンドロゲン非依存性））、腎細胞癌（例えば、転移性）、唾液腺癌、肉腫（例えば、横紋筋肉腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、転移性黒色腫））、軟部組織肉腫、固形腫瘍、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、睾丸癌、甲状腺癌、移行細胞癌（尿路上皮細胞癌）、ブドウ膜黒色腫（例えば、転移性）、疣状癌、外陰癌、ならびにヴァルデンストレームマクログロブリン血症である。
【０１８６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、ヒト肉腫または癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌（例えば、転移性）、肝細胞癌、胆管癌、絨毛腫、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、睾丸腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、または網膜芽細胞腫である。
【０１８７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、血管肉腫である。
【０１８８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、急性リンパ球性白血病もしくは急性骨髄球性白血病（例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、および赤白血病）、慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病もしくは慢性リンパ球性白血病）、ホジキン病、非ホジキン病、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、眼内リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小腸リンパ腫、または脾臓辺縁帯リンパ腫である。
【０１８９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、消化管間質腫瘍、頭部癌および／もしくは頸部癌（例えば、下咽頭の扁平上皮細胞癌、喉頭の扁平上皮細胞癌、中喉頭の細胞癌、もしくは喉頭の疣状癌）、子宮内膜間質肉腫、マスト細胞肉腫、成人軟部肉腫、子宮肉腫、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、脳転移を伴う黒色腫、ブドウ膜黒色腫、肝転移を伴うブドウ膜黒色腫、非小細胞肺癌、直腸癌、または骨髄異形成症候群である。いくつかの実施形態では、本方法に従って治療されるがんは、転移性である。
【０１９０】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、黒色腫、気管支癌、膀胱癌、脳癌もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮癌もしくは子宮内膜癌、口腔癌もしくは咽頭癌、非ホジキンリンパ腫、甲状腺癌、腎臓癌、胆道癌、小腸癌もしくは虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、扁平上皮細胞癌、中皮腫、骨癌、胸腺腫（ｔｈｙｏｍａ）／胸腺癌、膠芽腫、骨髄異形成症候群、軟部組織肉腫、ＤＩＰＧ、腺癌、骨肉腫、軟骨肉腫、白血病、または膵臓癌である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、癌腫（例えば、腺癌）、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、または白血病を含む。
【０１９１】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、膠芽腫、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌（例えば、肝癌および肝細胞癌）、膀胱癌（ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、乳癌、炎症性乳癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、膀胱癌（ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺、癌腫、腎臓癌（例えば、腎細胞癌およびウィルムス腫瘍）、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、漿液性腺癌、または様々な種類の頭頸部癌である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、線維形成性黒色腫、炎症性乳癌、胸腺腫、直腸癌、肛門癌、または外科的に治療可能もしくは外科的に治療不能な脳幹神経膠腫を含む。具体的な一実施形態では、がんは、固形腫瘍である。別の具体的な実施形態では、がんは、多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、再発性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、新たに診断される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、非メチル化ＭＧＭＴプロモーターを有する対象におけるものである。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ療法に対して難治性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ療法を受けていない対象におけるものである。
【０１９２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性黒色腫（例えば、抵抗性転移性黒色腫）、転移性卵巣癌、または転移性腎細胞癌である。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、イピリムマブに抵抗性である黒色腫である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、ニボルマブまたはペムブロリズマブに抵抗性である黒色腫である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、イピリムマブ、およびニボルマブまたはペムブロリズマブに抵抗性である黒色腫である。
【０１９３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、乳癌（例えば、ハーセプチン抵抗性乳癌およびトラスツズマブ−ＤＭ１（Ｔ−ＤＭ１）抵抗性乳癌）、前立腺癌、多形性膠芽腫、結腸直腸癌、肉腫、膀胱癌、子宮頸癌、ＨＰＶ関連癌、膣癌、外陰癌、陰茎癌、肛門癌、直腸癌、中咽頭癌、多発性骨髄腫、腎細胞癌、卵巣癌、肝細胞癌、子宮内膜癌、膵臓癌、リンパ腫、ならびに白血病（例えば、老人性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および老人性ＡＭＬ）である。
【０１９４】
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療されるがんは、転移性悪性黒色腫（例えば、皮膚または眼内悪性黒色腫）腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睾丸癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性または急性白血病（急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む）、小児固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓癌または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発性癌（アスベストによって誘発されるものを含む）、食道癌、肝臓癌、難治性または再発性悪性腫瘍、転移性癌、ＰＤ−Ｌ１を発現する癌、および該がんの組み合わせである。
【０１９５】
特定の実施形態では、対象は、以前に免疫療法を受けている。特定の実施形態では、対象は、以前にいかなる免疫療法も受けていない。特定の実施形態では、がんは、進行性または転移性癌である。
【０１９６】
特定の実施形態では、本開示は、本開示は、対象における感染症を予防または治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態では、感染症（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、または寄生虫感染症）を予防および／または治療するための方法が本明細書に提供される。本方法に従って予防および／または治療される感染症は、本明細書において特定される感染病原体によって引き起こされ得る。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその組成物は、対象に投与される唯一の活性薬剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその組成物は、感染症の治療のために、抗感染性介入物（例えば、抗ウイルス性、抗菌性、抗真菌性、または抗寄生虫性）と組み合わせて使用される。
【０１９７】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物によって治療および／または予防され得る感染症は、細菌、寄生虫、真菌、原虫、およびウイルスを含むが、これらに限定されない、感染病原体によって引き起こされる。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物によって治療および／または予防される感染症は、ウイルスによって引き起こされる。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得るウイルス疾患またはウイルス感染症としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ（例えば、Ａ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ）、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス（ｅｃｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、痘瘡、エプスタイン・バーウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−ＩＩ）、およびウイルス疾患（ウイルス性髄膜炎、脳炎、デング熱、または痘瘡など）の病原体によって引き起こされるものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９８】
予防および／または治療され得る細菌感染症は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによって引き起こされる感染症を含む。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る細菌（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｖｉｒｉｄａｎｓ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって引き起こされる細菌性疾患としては、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ（炭疽）、破傷風、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、百日咳、コレラ、ペスト、ジフテリア、クラミジア感染症、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、およびｌｅｇｉｏｎｅｌｌａが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９９】
本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る原虫によって引き起こされる原虫疾患または原虫感染症としては、ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、コクシジウム症、ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ、またはマラリアが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る寄生虫によって引き起こされる寄生虫疾患または寄生虫感染症としては、クラミジア感染症およびｒｉｃｋｅｔｔｓｉａが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２００】
本明細書に記載の方法に従って予防および／または治療され得る真菌性疾患または真菌感染症としては、カンジダ感染症、接合菌症、カンジダ性乳腺炎、潜在性トリコスポロン血症を伴う進行性播種性トリコスポロン症、播種性カンジダ症、肺パラコクシジオイデス症、肺アスペルギルス症、ニューモシスチスカリニ肺炎、クリプトコッカス髄膜炎、コクシジオイデス性髄膜脳炎および脳脊髄脈管炎、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ感染症、Ｆｕｓａｒｉｕｍ角膜炎、副鼻腔真菌症、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ心内膜炎、脛骨の軟骨形成不全症、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ膣炎、中咽頭カンジダ症、Ｘ連鎖慢性肉芽腫性疾患、足白癬、皮膚カンジダ症、真菌性胎盤炎、播種性トリコスポロン症、アレルギ−性気管支肺アスペルギルス症、真菌性角膜炎、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ感染症、真菌性腹膜炎、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ  ｇｅｎｉｃｕｌａｔａ感染症、ブドウ球菌性眼内炎、スポロトリクム症、および皮膚糸状菌症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２０１】
特定の実施形態では、感染症は、急性である。特定の実施形態では、感染症は、慢性である。特定の実施形態では、感染症は、フラビウイルス、例えば、ウエストナイルウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、ポワッサンウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、デング熱ウイルス、ジカウイルス、キャサヌール森林病ウイルス、黄熱ウイルス、およびチクングニアウイルスによって引き起こされる。特定の実施形態では、感染症は、エボラウイルスによって引き起こされる。特定の実施形態では、感染症は、インフルエンザウイルスによって引き起こされる。特定の実施形態では、感染症は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、ウイルス制御を促進する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、ウイルスリザーバーを排除する。
【０２０２】
一態様では、本発明は、薬剤として使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物に関する。
【０２０３】
一態様では、本発明は、免疫療法（例えば、対象における抗原に応答したＴ細胞活性化を増加させるため、がんを治療するため、感染症を治療もしくは予防するための免疫療法）のための薬学的組成物または薬剤を調製するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または薬学的に許容される担体もしくは賦形剤と組み合わせたその使用に関する。
【０２０４】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物に関する。
【０２０５】
一態様では、本発明は、腫瘍に対する免疫系耐性を阻害するための方法において使用するため、および／またはがんを有する対象の免疫療法のための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物に関する。
【０２０６】
一態様では、本発明は、感染症を治療するための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物に関する。
【０２０７】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、単独療法として投与される。
【０２０８】
特定の実施形態では、これらの方法は、対象に追加の治療剤を投与することを更に含む。特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤である。特定の実施形態では、チェックポイント標的剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、アンタゴニスト抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７抗体、アゴニスト抗ＤＲ３抗体、アゴニスト抗ＴＮＦＳＦ１４抗体、およびアゴニスト抗ＣＤ２７抗体からなる群から選択される。特定の実施形態では、チェックポイント標的剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体である。特定の実施形態では、チェックポイント標的剤は、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。特定の実施形態では、チェックポイント標的剤は、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体である。特定の実施形態では、追加の治療剤は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーまたは腫瘍壊死因子スーパーファミリーのメンバーに対するアゴニストである。
【０２０９】
特定の実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤に関する。好ましい一実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤またはチェックポイント標的剤である。
【０２１０】
特定の実施形態では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤に関する。
【０２１１】
特定の実施形態では、本発明は、感染症を治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）追加の治療剤に関する。
【０２１２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＩＤＯ（インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ）およびＴＤＯ（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ）などの免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態では、そのような化合物は、エパカドスタット（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐ、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１０／００５９５８を参照されたい）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、およびＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、化合物は、エパカドスタットである。別の実施形態では、化合物は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、化合物は、インドキシモドである。別の実施形態では、化合物は、ＮＬＧ９１９である。
【０２１３】
特定の実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）免疫調節酵素を標的とする化合物に関する。好ましい一実施形態では、化合物は、ＩＤＯおよび／またはＴＤＯを標的とする。
【０２１４】
特定の実施形態では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）免疫調節酵素を標的とする化合物に関する。好ましい一実施形態では、化合物は、ＩＤＯおよび／またはＴＤＯを標的とする。
【０２１５】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ワクチンと組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質系病原体ワクチンである。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、全ての種にわたって遍在的に見出される高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショックまたは他のストレス形態（毒素への曝露、酸化的ストレス、もしくはグルコース除去を含む）の結果として、より一層高いレベルまで強力に誘導され得る。分子量に従って、ＨＳＰ−１１０、−９０、−７０、−６０、および−２８の５つのファミリーに分類されている。ＨＳＰは、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）内の交差提示経路を通して免疫原性ペプチドを送達し、Ｔ細胞の活性化をもたらす。ＨＳＰは、腫瘍特異的な免疫を誘導することができる複合体を形成する腫瘍関連抗原ペプチドのシャペロン担体として機能する。瀕死の腫瘍細胞からの放出時、ＨＳＰ−抗原複合体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって取り込まれ、抗原は、抗腫瘍ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化をもたらすＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子に結合するペプチドへと処理される。腫瘍調製物由来のＨＳＰ複合体によって誘発される免疫は、各対象のがんによって発現される独自の抗原ペプチドレパートリーに対して特異的に指向される。
【０２１６】
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的に複合体化した熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは、自然免疫応答および適応免疫応答の両方を誘発する。具体的な一実施形態では、抗原ペプチド（複数可）は、治療されるがんに対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主にＣＤ９１）を介するＡＰＣによって、またはＴｏｌｌ様受容体への結合によって効率的に獲得される。ＨＳＰＰＣの内部移行は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、ならびにＴｈ１およびＴｈ２媒介性免疫応答の活性化をもたらす、ケモカインおよびサイトカイン産生によるＡＰＣの機能的成熟をもたらす。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法において使用されるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体化したストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリーからの１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはそれらの２つ以上の組み合わせを含む。
【０２１７】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、がんを治療するために、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば、熱ショックタンパク質ペプチド複合体−９６（ＨＳＰＰＣ−９６）と組み合わせて対象に投与される。ＨＳＰＰＣ−９６は、抗原ペプチドと複合体化した９６ｋＤａの熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍から製造されるがん免疫療法であり、がん抗原性「フィンガープリント」を含有する。特定の実施形態では、このフィンガープリントは、その特定の対象の特定のがん細胞内にのみ存在する独自の抗原を含有し、ワクチンの注射は、対象の免疫系を刺激して、特定のがんのフィンガープリントを有するあらゆる細胞を認識し、攻撃するように意図されている。
【０２１８】
特定の実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍組織から産生される。具体的な一実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される種類のがんの腫瘍またはその転移から産生される。別の具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される対象に対して自家性である。特定の実施形態では、腫瘍組織は、非壊死性腫瘍組織である。特定の実施形態では、少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）の非壊死性腫瘍組織が、ワクチンレジメンを作成するために使用される。特定の実施形態では、外科的切除後、非壊死性腫瘍組織は、ワクチン調製物中での使用前に凍結される。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、精製技術によって腫瘍組織から単離され、濾過され、注射可能なワクチン用に調製される。特定の実施形態では、対象には、６〜１２用量のＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＣＣ−９６が投与される。そのような実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６用量は、最初の４回の用量が１週間に１回投与され、その後、２〜８回の追加の用量が隔週で投与され得る。
【０２１９】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣの更なる例は、それらの全体が本明細書における参照により本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願、米国特許第６，３９１，３０６号、同第６，３８３，４９２号、同第６，４０３，０９５号、同第６，４１０，０２６号、同第６，４３６，４０４号、同第６，４４７，７８０号、同第６，４４７，７８１号、および同第６，６１０，６５９号に開示され、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２０】
特定の実施形態では、本発明は、薬剤として使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）ワクチンに関する。好ましい一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質系病原体ワクチンである。好ましい一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系ウイルスワクチンである。
【０２２１】
特定の実施形態では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、（ａ）本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体、および／または本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体と、薬学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む本発明の薬学的組成物、ならびに（ｂ）ワクチンに関する。好ましい一実施形態では、ワクチンは、熱ショックタンパク質系腫瘍ワクチンである。
【０２２２】
抗ＣＴＬＡ−４抗体および追加の治療剤（例えば、化学療法剤、チェックポイント標的剤、ＩＤＯ阻害剤、および／またはワクチン）は、別個の剤形として、別個、連続的、または同時に投与され得る。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は非経口投与され、ＩＤＯ阻害剤は経口投与される。
【０２２３】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、対象に腫瘍内投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、追加の治療剤と組み合わせて対象に腫瘍内投与される。特定の実施形態では、追加の治療剤は、全身投与される。特定の実施形態では、対象は、固形腫瘍を有する。特定の実施形態では、対象は、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有する。特定の実施形態では、対象は、ＨＥＲ２＋乳癌を有する。特定の実施形態では、全身投与される追加の治療剤は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）である。特定の実施形態では、全身投与される追加の治療剤は、抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、セツキシマブ）である。特定の実施形態では、全身投与される追加の治療剤は、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）である。特定の実施形態では、全身投与される追加の治療剤は、化学療法剤（例えば、ゲムシタビン）である。特定の実施形態では、対象は、固形腫瘍を有し、全身投与される追加の治療剤は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペムブロリズマブまたはニボルマブ）である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、２００ｍｇで３週間に１回投与されるペムブロリズマブである。特定の実施形態では、対象は、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）を有し、全身投与される追加の治療剤は、抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、セツキシマブ）である。特定の実施形態では、対象は、ＨＥＲ２＋乳癌を有し、全身投与される追加の治療剤は、抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）である。特定の実施形態では、対象は、化学療法剤（例えば、ゲムシタビン）を更に受けた。一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物、ならびに任意で追加の治療剤に関し、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内投与される。好ましい一実施形態では、追加の治療剤が、対象に投与され、より好ましくは追加の治療剤は、対象に全身投与される。
【０２２４】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体が、本明細書に記載の方法において使用される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６としても知られるニボルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏによって開発されたランブロリズマブまたはＭＫ−３４７５としても知られるペムブロリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＣｕｒｅＴｅｃｈによって開発されたＣＴ−０１１としても知られるピジリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたＡＭＰ−５１４としても知られるＭＥＤＩ０６８０である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＰＤＲ００１である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されたＲＥＧＮ２８１０である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｐｆｉｚｅｒによって開発されたＰＦ−０６８０１５９１である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＢｅｉＧｅｎｅによって開発されたＢＧＢ−Ａ３１７である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏおよびＴｅｓａｒｏによって開発されたＴＳＲ−０４２である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、Ｈｅｎｇｒｕｉによって開発されたＳＨＲ−１２１０である。
【０２２５】
本明細書に記載の治療方法において使用され得る抗ＰＤ−１抗体の更なる非限定的な例は、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願、米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第７，３３２，５８２号、米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１１４，８４５号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許第８，３５４，５０９号、米国特許第８，６８６，１１９号、米国特許第８，７３５，５５３号、米国特許第８，７４７，８４７号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第８，９２７，６９７号、米国特許第８，９９３，７３１号、米国特許第９，１０２，７２７号、米国特許第９，２０５，１４８号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２０２６２３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０２９１１３６Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３５６３６３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１６／００７５７８３Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３０９１Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０３６３９４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１７９６６４Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０９８０４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／２０６１０７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０５８５７３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０８５８４７Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／２００１１９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０１５６８５Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０２０８５６Ａ１号に開示されている。
【０２２６】
特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、本明細書に記載の方法において使用される。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたアテゾリズマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、Ｃｅｌｇｅｎｅ、およびＭｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたデュルバルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｍｅｒｃｋ  ＳｅｒｏｎｏおよびＰｆｉｚｅｒによって開発されたＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られるアベルマブである。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＭＤＸ−１１０５である。特定の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＡｍｐｌｉｍｍｕｎｅおよびＧＳＫによって開発されたＡＭＰ−２２４である。
【０２２７】
本明細書に記載の治療方法において使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体の非限定的な例は、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願、米国特許第７，９４３，７４３号、米国特許第８，１６８，１７９号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許第８，５５２，１５４号、米国特許第８，７７９，１０８号、米国特許第８，９８１，０６３号、米国特許第９，１７５，０８２号、米国公開第ＵＳ２０１０／０２０３０５６Ａ１号、米国公開第ＵＳ２００３／０２３２３２３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１３／０３２３２４９Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００４４７３８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２０３５８０Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２２５４８３Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３４６２０８Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０３５５１８４Ａ１、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／１０００７９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０２２７５８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０５５８９７Ａ２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０６１６６８Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１０９１２４Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１９５１６３Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０００６１９Ａ１、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０３０３５０Ａ１号に開示されている。
【０２２８】
特定の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体が、本明細書に記載の方法において使用される。特定の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂによって開発されたＢＭＳ−９８６０１６である。特定の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓによって開発されたＬＡＧ５２５である。特定の実施形態では、抗ＬＡＧ−３抗体は、ＧＳＫによって開発されたＧＳＫ２８３１７８１である。
【０２２９】
本明細書に記載の治療方法において使用され得る抗ＬＡＧ−３抗体の非限定的な例は、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、以下の特許および特許出願、米国特許第９，２４４，０５９号、米国公開第ＵＳ２０１１／０１５０８９２Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／００９３５１１Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１４／０２８６９３５Ａ１号、米国公開第ＵＳ２０１５／０２５９４２０Ａ１、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０４２２４６Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１１６５３９Ａ１号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／２００１１９Ａ１号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／０２８６７２Ａ１号に開示されている。
【０２３０】
特定の実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体が、本明細書に記載の方法において使用される。特定の実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂおよびＩｍＣｌｏｎｅによって開発されたセツキシマブ、ＡｂｇｅｎｉｘおよびＡｍｇｅｎによって開発されたパニツムマブ、ＣＭＩ  ＣｕｂａおよびＹＭ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたパニツムマブ、ＩｍＣｌｏｎｅによって開発されたネシツムマブ、Ｇｅｎｍａｂによって開発されたザルツムマブ、Ｔａｋｅｄａによって開発されたマツズマブ、Ｍｅｒｃｋ  ＳｅｒｏｎｏおよびＳｙｍｐｈｏｇｅｎによって開発されたＳｙｍ００４、ＧｌｙｃａｒｔおよびＲｏｃｈｅによって開発されたイムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＲｏｃｈｅによって開発されたデュリゴツマブ、Ａｂｂｏｔｔによって開発されたデパツキシズマブ、Ａｂｂｖｉｅによって開発されたデパツキシズマブマホドチン、ＡｄｉｍａｂおよびＭｅｒｒｉｍａｃｋによって開発されたＭＭ−１５１、Ｇｒｅｅｎ  Ｃｒｏｓｓによって開発されたＧＣ１１１８、ＡｍｇｅｎおよびＩｍｍｕｎｏＧｅｎによって開発されたＡＭＧ５９５、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅによって開発されたＣｅｔｕＧＥＸ、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎによって開発されたラプリツキシマブ（ｌａｐｒｉｔｕｘｉｍａｂ）エムタンシン、ＧｅｎｍａｂおよびＪａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈによって開発されたＪＮＪ−６１１８６３７２、Ｓｉｎｏｃｅｌｌｔｅｃｈによって開発されたＳＣＴ２００、Ｌｉｌｌｙによって開発されたＬＹ３１６４５３０、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｈｅｎｌｉｕｓによって開発されたＨＬＸ０７、Ｓｙｎｅｒｍｏｒｅによって開発されたＳＹＮ００４である。
【０２３１】
特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体が、本明細書に記載の方法において使用される。特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＲｏｃｈｅによって開発されたトラスツズマブ、ＧｅｎｅｎｔｅｃｈおよびＲｏｃｈｅによって開発されたトラスツズマブエムタンシン、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されたペルツズマブ、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓによって開発されたエルツマキソマブ、ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓによって開発されたマルゲツキシマブ、Ｍｅｒｒｉｍａｃｋによって開発されたＭＭ−１１１、Ｃｅｌｌｔｒｉｏｎによって開発されたＣＴ−Ｐ０６、Ｐｆｉｚｅｒによって開発されたＰＦ−０５２８００１４、Ｍｅｒｒｉｍａｃｋによって開発されたＭＭ−３０２、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏによって開発されたＳＢ３、Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＣＰ  Ｇｕｏｊｉａｎによって開発されたＣＭＡＢ３０２、Ｇｌｙｃｏｔｏｐｅによって開発されたＴｒａｓＧＥＸ、ＡｍｂｒｘおよびＺｈｅｊｉａｎｇ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅによって開発されたＡＲＸ７８８、Ｓｙｎｔｈｏｎによって開発されたＳＹＤ９８５、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂおよびｆ−ｓｔａｒによって開発されたＦＳ１０２、Ｂｉｏｃａｄによって開発されたＢＣＤ−０２２、Ａｍｇｅｎによって開発されたＡＢＰ９８０、Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏによって開発されたＤＳ−８２０１ａ、Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｈｅｎｌｉｕｓによって開発されたＨＬＸ０２、またはＢｉｏｃｏｎまたはＭｙｌａｎによって開発されたＣＡＮＭＡｂである。
【０２３２】
本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、様々な経路によって対象に送達され得る。これらには、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、および皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。肺投与は、例えば、吸入器または噴霧器、およびスプレーとして使用するためのエアロゾル化剤を有する製剤の使用によっても用いられ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、皮下または静脈内送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、腫瘍内送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、腫瘍流入領域リンパ節に送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体または薬学的組成物は、局所投与（例えば、皮下投与）を介して送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、全身送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、局所送達される。
【０２３３】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物、ならびに任意で追加の治療剤に関し、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物は、対象に腫瘍内送達されるか、対象の腫瘍流入領域リンパ節に送達されるか、または局所投与（例えば、皮下投与）を介して対象に送達される。
【０２３４】
ある病態の治療および／または予防に有効である抗体または組成物の量は、その疾患の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。
【０２３５】
ある組成物中で用いられる正確な用量はまた、投与経路、および感染症またはそれによって引き起こされる疾患の重症度にも依存し、臨床医の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重、および健康を含む）、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬品、または治療が予防的であるか治療的であるかに応じて異なり得る。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた治療され得る。治療投薬量は、安全性および有効性を最適化するように最適に滴定される。
【０２３６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇで（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、例えば、上記の用量で、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、８ヶ月に１回、および１年に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、上記の用量で、３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。
【０２３７】
一態様では、本発明は、がんを治療するための方法において使用するための本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物、ならびに任意で追加の治療剤に関し、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇで、より好ましくは２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回対象に投与される。
【０２３８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．１ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、１ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、３ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、６ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、１０ｍｇ／ｋｇで２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、または１２週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。
【０２３９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．１ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、１ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、３ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、６ｍｇ／ｋｇまたは約６ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、１０ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇで３週間に１回（例えば、静脈内注射を介して）対象に投与される。
【０２４０】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇで腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、例えば、上記の用量で、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、８ヶ月に１回、および１年に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、上記の用量で、３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。
【０２４１】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇまたは約０．０１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０３ｍｇ／ｋｇまたは約０．０３ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．１ｍｇ／ｋｇまたは約０．１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇまたは約０．３ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、１ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、３ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、腫瘍内注射を介して対象に投与される。
【０２４２】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇで局所投与（例えば、皮下投与）を介して対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物は、例えば、上記の用量で、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、６週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、４ヶ月に１回、５ヶ月に１回、６ヶ月に１回、８ヶ月に１回、および１年に１回、局所投与（例えば、皮下投与）を介して対象に投与される。
【０２４３】
特定の実施形態では、治療的組み合わせは、少なくとも３、６、９、１２、１８、または２４ヶ月間、対象に投与される。特定の実施形態では、治療的組み合わせは、最大３、６、９、１２、１８、または２４ヶ月間、対象に投与される。
【０２４４】
特定の実施形態では、本開示は、血管肉腫を有する対象を治療する方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または薬学的組成物を（例えば、静脈内、腫瘍内、または皮下）投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、血管肉腫を有する対象を治療する方法であって、対象に、任意で１、２、または３週間に１回、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇでヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体を静脈内投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本開示は、血管肉腫を有する対象を治療する方法であって、対象に、０．１ｍｇ／ｋｇで３週間に１回、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗体を静脈内投与することを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、本抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２４５】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体を使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、またはウェスタンブロット法などの免疫アッセイを含む、当業者にとって既知である古典的な免疫組織学的方法を使用して、生体試料中のＣＴＬＡ−４タンパク質レベルをアッセイすることもできる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野において既知であり、それらには、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９Ｔｃ）などの放射性同位体；ルミノールなどの発光標識；ならびにフルオレセインおよびローダミンなどの蛍光標識、ならびにビオチンが含まれる。そのような標識を使用して、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を標識することができる。あるいは、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片を認識する第２の抗体を標識し、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用して、ＣＴＬＡ−４タンパク質レベルを検出することができる。一実施形態では、本発明は、インビトロで生体試料中のＣＴＬＡ−４タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体の使用に関する。
【０２４６】
ＣＴＬＡ−４タンパク質の発現レベルのアッセイは、直接的（例えば、絶対的なタンパク質レベルを決定または推定することによって）または相対的に（例えば、第２の生体試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによって）のいずれかで、第１の生体試料中のＣＴＬＡ−４タンパク質のレベルを定性的または定量的に測定または推定することを含むように意図されている。第１の生体試料中のＣＴＬＡ−４ポリペプチド発現レベルを測定または推定し、標準的なＣＴＬＡ−４タンパク質レベルと比較することができ、この標準物は、障害を有しない個体から得た第２の生体試料から採取されるか、または障害を有しない個体の集団からのレベルを平均することによって決定される。当該技術分野において理解されているように、「標準的な」ＣＴＬＡ−４ポリペプチドレベルを知れば、それを比較のための標準物として繰り返し使用することができる。
【０２４７】
本明細書で使用される場合、「生体試料」という用語は、対象から得られた任意の生体試料、細胞株、組織、またはＣＴＬＡ−４を潜在的に発現する他の細胞源を指す。動物（例えば、ヒト）から組織生検および体液を得るための方法は、当該技術分野において周知である。生体試料は、末梢血単核球を含む。
【０２４８】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片を使用して、当業者にとって周知で標準的であり、かつ本説明に基づいたインビトロおよびインビボでの用途を含む、予後的、診断的、監視、およびスクリーニング用途に使用することができる。免疫系状態および／または免疫応答のインビトロ査定および評価のための予後的、診断的、監視、およびスクリーニングアッセイおよびキットを利用して、免疫系機能不全を有することが知られているか、もしくは疑われるものを含む患者試料、または所望の免疫系応答に関して抗原応答もしくはワクチン応答を評価するために、予測、診断、および監視することができる。免疫系状態および／または免疫応答の査定および評価はまた、異なる薬剤または抗体もしくはその抗原結合断片に対して、薬物の臨床試験への、あるいは特定の化学療法剤または抗体もしくはその抗原結合断片（それらの組み合わせを含む）の投与への患者の適合性を決定するのに有用である。この種類の予後的および診断的監視および評価は既に、乳癌におけるＨＥＲ２タンパク質（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、Ｄａｋｏ）に対する抗体を利用して実際に使用されており、ここでは、このアッセイを使用して、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を使用する抗体療法について患者を評価している。インビボ用途には、指向性細胞療法および免疫系調節、ならびに免疫応答の放射線撮像が含まれる。
【０２４９】
一態様では、本発明は、診断剤として使用するための本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物に関する。
【０２５０】
一態様では、本発明は、免疫系機能不全および／またはがんの予測、診断、および／または監視のための方法において使用するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体および／または薬学的組成物に関する。
【０２５１】
一実施形態では、本発明は、インビトロの対象の生体試料中のＣＴＬＡ−４タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出することによって、対象における免疫系機能不全および／またはがんを予測、診断、および／または監視するための、本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体の使用に関する。
【０２５２】
一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、生検試料の免疫組織化学において使用することができる。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片を使用して、ＣＴＬＡ−４のレベル、またはそれらの膜表面上にＣＴＬＡ−４を含有する細胞のレベルを検出することができ、これらのレベルは、特定の疾患の症状に関連付けられ得る。本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはそれらの抗原結合断片は、検出可能または機能的な標識を保有し得る。蛍光標識が使用される場合、現在入手可能な顕微鏡および蛍光活性化細胞分取装置分析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野において既知である方法手順の両方の組み合わせを利用して、特異的結合メンバーを特定および定量化することができる。本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはそれらの抗原結合断片は、蛍光標識を保有し得る。例示的な蛍光標識には、例えば、反応性および共役プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、およびテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素、ならびにＤｙＬｉｇｈｔ色素が含まれる。抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、および１８６Ｒｅなどの放射性標識を保有し得る。放射性標識が使用される場合、当該技術分野において既知である現在利用可能な計数手順を利用して、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片のＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）への特異的結合を特定および定量化することができる。標識が酵素である場合には、検出は、当該技術分野において既知である現在利用される比色分析法、分光光度法、蛍光分光光度法、電流測定技術、または気体定量技術のいずれかによって達成され得る。これは、本抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ−４との間に複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片と接触させることによって達成され得る。本抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ−４との間に形成された任意の複合体が、試料および対照において検出され、比較される。本明細書に記載の抗体のＣＴＬＡ−４への特異的結合を考慮して、本抗体またはそれらの抗原結合断片を使用して、細胞の表面上でのＣＴＬＡ−４発現を特異的に検出することができる。本明細書に記載の抗体またはそれらの抗原結合断片を使用して、免疫親和性精製を介してＣＴＬＡ−４を精製することもできる。例えば、ＣＴＬＡ−４またはＣＴＬＡ−４／ＣＴＬＡ−４リガンド複合体の存在の程度の定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムもまた本明細書に含まれる。このシステムまたは試験キットは、標識構成成分、例えば、標識抗体と、１つ以上の追加の免疫化学試薬とを含み得る。
【０２５３】
一実施形態では、本発明は、生体試料中のＣＴＬＡ−４タンパク質レベルをアッセイおよび／または検出するためのインビトロ方法であって、（１）本抗体またはその抗原結合断片とＣＴＬＡ−４との間に複合体の形成を可能にする条件下で、試料および任意で対照試料を本発明の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、（２）試料および任意で対照において形成された複合体を検出および比較することとを含む、方法に関する。
【０２５４】
６．５  抗ＣＴＬＡ−４抗体を産生するポリヌクレオチド、ベクター、および方法
別の態様では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）抗原に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳動物細胞）内での組み換え発現のためのそのようなポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。本明細書に提供される抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、宿主細胞、例えば、哺乳動物細胞内でのそれらの効率的な発現のための発現ベクターが本明細書に提供される。
【０２５５】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の（例えば、マウスまたはヒトにおける）天然源に存在する他の核酸分子から分離されたものである。更に、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、他の細胞材料、もしくは組み換え技術によって産生される場合、培養培地を実質的に含み得ないか、または化学的に合成される場合、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含み得ない。例えば、「実質的に含まない」という用語は、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に約１０％未満）の他の物質、例えば、細胞材料、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体、および／または他の化学物質を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする核酸分子（複数可）は、単離または精製される。
【０２５６】
特定の態様では、抗体またはそれらの抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供され、これらは、ＣＴＬＡ−４ポリペプチド（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列、およびＣＴＬＡ−４ポリペプチドへの結合についてそのような抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合するか、またはそのような抗体のエピトープと同じエピトープに結合する抗体を含む。
【０２５７】
特定の態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ  ＦＲおよびＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み得る（例えば、表１を参照されたい）。
【０２５８】
例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置換、およびｍＲＮＡ不安定性要素の排除によって最適化された抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードするポリヌクレオチドもまた本明細書に提供される。したがって、ｍＲＮＡにおいて、コドン変化を導入することおよび／または阻害性領域を排除することによって、組み換え発現のための抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片（例えば、軽鎖、重鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を生成するための方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、および同第６，７９４，４９８号に記載の最適化方法を適応させることによって実行することができ、適宜、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位および不安定性要素（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕの豊富な要素）は、核酸配列によってコードされるアミノ酸を改変せずに変異させて、組み換え発現のためにＲＮＡの安定性を増加させることができる。改変は、例えば、同一のアミノ酸についての代替的なコドンを使用して、遺伝コードの縮重を利用する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコドンを改変して、保存的変異、例えば、元のアミノ酸と類似した化学構造および特性ならびに／または機能を有する類似したアミノ酸をコードすることが望ましくあり得る。そのような方法は、抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片の発現を、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされる抗ＣＴＬＡ−４抗体の発現と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、もしくは１００倍、またはそれ以上増加させることができる。
【０２５９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメインおよび／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的）ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体または断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高厳密性条件下でハイブリダイズする。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報が記載されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２〜７３）を参照されたい。
【０２６０】
当該技術分野において既知である任意の方法によって、ポリヌクレオチドを得、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。本明細書に記載の抗体、例えば、表１に記載の抗体およびこれらの抗体の修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野において周知である方法を使用して決定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、その抗体をコードする核酸を生成するような方法でアセンブリされる。抗体をコードするそのようなポリヌクレオチドは、（例えば、その全体が参照により組み込まれる、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１７：２４２−６に記載のように）化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブリすることができ、これは、簡潔には、抗体をコードする配列の一部分を含有する重複ポリヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結、ならびにその後ＰＣＲによる連結されたオリゴヌクレオチドの増幅を伴う。
【０２６１】
あるいは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野において周知である方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング方法）を使用して、好適な供給源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成され得る。例えば、既知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅は、対象となる抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られるゲノムＤＮＡを使用して実行され得る。そのようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅方法を使用して、抗体の可変軽鎖領域および／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。宿主細胞内での発現および更なるクローニングのために、増幅核酸をベクターにクローニングして、例えば、キメラ抗体およびヒト化抗体を生成することができる。
【０２６２】
特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンは入手不可能であるが、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学的に合成することができるか、あるいは好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリ、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（本明細書に記載の抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞など）から生成されたｃＤＮＡライブラリ、もしくはそれから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリ由来のｃＤＮＡクローンを特定するために、その配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用したＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用したクローニングによって得ることができる。その後、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当該技術分野において周知である任意の方法を使用して、複製可能なクローニングベクターにクリーニングされ得る。
【０２６３】
本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗ＣＴＬＡ−４抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離および配列決定することができる。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの供給源として機能し得る。単離された後、ＤＮＡは発現ベクター中に置かれ得、その後これは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞）、またはさもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組み換え宿主細胞内で抗ＣＴＬＡ−４抗体の合成が得られる。
【０２６４】
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者にとって既知であるクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現させるためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変領域に対するクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカー（ネオマイシンなど）を含む。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。その後、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技術を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する、安定した細胞株または一過性型細胞株を生成するように細胞株に同時トランスフェクトされる。
【０２６５】
例えば、マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を共有結合させることによって、このＤＮＡを修飾することもできる。
【０２６６】
本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドもまた提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードするポリヌクレオチドに高厳密性、中厳密性、または低厳密性ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。
【０２６７】
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野において説明されており、当業者にとって既知である。例えば、低厳密性条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、その後約５０〜６５℃で０．２×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳ中での１回以上の洗浄を伴ってもよく、高低厳密性条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×ＳＳＣ中でのフィルター結合核酸とのハイブリダイゼーション、その後約６８℃で０．１×ＳＳＣ／０．２％のＳＤＳ中での１回以上の洗浄を伴ってもよい。他の厳密性のハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者にとって既知であり、記載されており、例えば、その全体が参照により組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの６．３．１〜６．３．６および２．１０．３頁を参照されたい。
【０２６８】
特定の態様では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）ならびに関連ポリヌクレオチドおよび発現ベクターに特異的に結合する本明細書に記載の抗体（またはその抗原結合断片）を（例えば、組み換え）発現する細胞（例えば、宿主細胞）が本明細書に提供される。宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞内での組み換え発現のための抗ＣＴＬＡ−４抗体または断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組み換え発現させるためのそのようなベクターを含む宿主細胞もまた本明細書に提供される。特定の一態様では、本明細書に記載の抗体を産生するための方法であって、宿主細胞からそのような抗体を発現させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【０２６９】
ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、完全長抗体、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、または本明細書に記載の一本鎖抗体）の組み換え発現は、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を伴う。本明細書に記載の抗体分子をコードするポリヌクレオチド、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、またはその断片（例えば、重鎖および／もしくは軽鎖可変領域）が得られた後、抗体分子の産生のためのベクターが、当該技術分野において周知である技術を使用して組み換えＤＮＡ技術によって産生され得る。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによって、タンパク質を調製するための方法が本明細書に記載されている。当業者にとって周知である方法を使用して、配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖もしくは重鎖）ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組み換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体もしくはその断片の重鎖もしくは軽鎖可変領域、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む、複製可能なベクターもまた提供される。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号および同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、その抗体の可変領域は、全重鎖、全軽鎖、または全重鎖および全軽鎖の両方の発現のためにそのようなベクターにクローニングされ得る。
【０２７０】
発現ベクターは、従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に導入されてもよく、その後結果として生じる細胞を従来の技術によって培養して、本明細書に記載の抗体またはその断片を産生することができる。したがって、宿主細胞内でのそのような配列の発現のためにプロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体もしくはその断片、あるいはその重鎖もしくは軽鎖またはその断片、あるいは本明細書に記載の一本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する、宿主細胞が本明細書に提供される。特定の実施形態では、二本鎖抗体の発現のために、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターを宿主細胞内で同時発現させて、個別に、以下に詳述される全免疫グロブリン分子の発現させることができる。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体、またはその断片の重鎖および軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な実施形態では、宿主細胞は、２つの異なるベクターを含有し、第１のベクターは、本明細書に記載の抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、本明細書に記載の抗体またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。具体的な実施形態では、第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合した第１の細胞によって発現される重鎖／重鎖可変領域は、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片を形成する。特定の実施形態では、そのような第１の宿主細胞およびそのような第２の宿主細胞を含む宿主細胞の集団が本明細書に提供される。
【０２７１】
特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含む、ベクターの集団が本明細書に提供される。
【０２７２】
様々な宿主発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体分子を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。そのような宿主発現系は、対象となるコード配列を産生およびその後精製することができるビヒクルであるが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、原位置で本明細書に記載の抗体分子を発現し得る細胞でもある。これらには、抗体コード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体コード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体コード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）、タバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染しているか、もしくは組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻類）；または哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組み換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、およびＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞である。特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な一実施形態では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の一実施形態では、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなどの細菌細胞、または特に全組み換え抗体分子の発現のための真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が、組み換え抗体分子の発現に使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーター要素などのベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞は、抗体の効果的な発現系である（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ＆Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ４５：１０１−５およびＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ８（７）：６６２−７）。特定の実���形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な一実施形態では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより制御されている。
【０２７３】
細菌系では、抗体分子を発現させることを目的とした使用に応じて、いくつかの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、大量のそのような抗体が産生される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指向するベクターが望ましくあり得る。そのようなベクターには、融合タンパク質が産生されるように抗体コード配列がｌａｃ  Ｚコード領域とインフレームでベクターに個々に連結され得る、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ＆Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ２：１７９１−１７９４）、およびｐＩＮベクター（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ＆Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ１３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２４：５５０３−５５０９）などが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合、その後遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
【０２７４】
昆虫系では、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ多核体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を、外来性遺伝子を発現させるためのベクターとして使用することができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞内で成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）内に個々にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０２７５】
哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスに基づいた発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、対象となる抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三者間リーダー配列に連結され得る。その後、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組み換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）内への挿入により、感染した宿主内で生存可能であり、かつ抗体分子を発現することができる組み換えウイルスが得られる（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｇａｎ  Ｊ＆Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ８１（１２）：３６５５−９を参照されたい）。特異的開始シグナルはまた、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列を含む。更に、開始コドンは、全挿入物の翻訳を確実にするために、所望のコード配列の読み枠と一致しなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどの包含により増強され得る（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０２７６】
加えて、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特異的な様式で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾の特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株または宿主系を選択して、発現される外来性タンパク質の正確な修飾およびプロセシングを確実にすることができる。この目的を達成するために、遺伝子産物の一次転写物の適切なプロセシング、グリコシル化、およびリン酸化のための細胞の仕組みを有する真核宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内在的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞内で産生される。
【０２７７】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはそれらの抗原結合断片は、フコース含有量が低減しているか、または一切のフコース含有量を有しない。そのような抗体は、当業者にとって既知である技術を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が欠損または欠如している細胞内で発現され得る。具体的な一例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株を使用して、フコース含有量が低減している抗体またはそれらの抗原結合断片を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、フコース含有量が低減している抗体またはそれらの抗原結合断片を産生するために使用することができるそのようなシステムの一例である。
【０２７８】
組み換えタンパク質の長期間で高収率な産生のために、安定した発現が生成され得る。例えば、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片を安定して発現する細胞株が操作され得る。具体的な実施形態では、本明細書に提供される細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を形成するように会合する軽鎖／軽鎖可変領域および重鎖／重鎖可変領域を安定して発現する。
【０２７９】
特定の態様では、ウイルスの複製起源を含有する発現ベクターを使用するよりもむしろ、宿主細胞を、適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）によって制御されたＤＮＡ、および選択可能なマーカーで形質転換することができる。外来性ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞は、栄養強化培地中で１〜２日間成長させてもよく、その後選択的培地に交換される。組み換えプラスミド内の選択可能なマーカーは、選択に対する抵抗性を付与し、細胞がその染色体中にプラスミドを安定して組み込み、焦点（これは転じてクローニングされ、細胞株へと拡張され得る）を形成するように成長することを可能にする。この方法を有利に使用して、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその断片を発現する細胞株を操作することができる。そのような操作された細胞株は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。
【０２８０】
それぞれ、ｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、またはａｐｒｔ細胞内における単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ１１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ４８（１２）：２０２６−２０３４）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ２２（３）：８１７−２３）遺伝子を含むが、これらに限定されない、いくつかの選択系を使用することができる。また、以下の遺伝子、メトレキサートに対する抵抗性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ７８：１５２７−３１）；ミコフェノール酸に対する抵抗性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ＆Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ７８（４）：２０７２−６）；アミノグリコシドＧ−４１８に対する抵抗性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ＆Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：９２６−９３２、およびＭｏｒｇａｎ  ＲＡ＆Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ＆Ｆｅｌｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１１（５）：２１１−５）、ならびにハイグロマイシンに対する抵抗性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ３０（１−３）：１４７−５６）の選択に基づいて、抗代謝剤抵抗性を使用することができ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。組み換えＤＮＡ技術の当該技術分野において一般に既知である方法を通例的に適用して、所望の組み換えクローンを選択することができ、そのような方法は、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の第１２章および１３章、Ｃｏｌｂｅｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ１５０：１−１４に記載されている。
【０２８１】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説としては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ＆Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７を参照されたい）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅領域は抗体遺伝子に関連付けられるため、抗体の産生もまた増加するであろう（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｒｏｕｓｅ  ＧＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ３：２５７−６６）。
【０２８２】
宿主細胞は、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクター、つまり重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクターで同時トランスフェクトされ得る。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含有し得る。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターで同時トランスフェクトされ得る。例えば、宿主細胞は、以下の比率、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つの第１の発現ベクター対第２の発現ベクターでトランスフェクトされ得る。
【０２８３】
あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一ベクターが使用され得る。そのような状況では、過剰量の毒性のない重鎖を回避するように、軽鎖は、重鎖の前に配置されるべきである（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２２：５６２−５６５およびＫｏｈｌｅｒ  Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ７７：２１９７−２１９９）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、もしくはそれ以上、または２〜５、５〜１０、もしくは１０〜２０個の範囲内の遺伝子／ヌクレオチド配列をコードすることができる。例えば、バイシストロン性核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の重鎖）、および第２の遺伝子および（例えば、本明細書に記載の抗体の軽鎖）を含み得る。そのような発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写がプロモーターによって駆動され得る一方で、第１の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性走査機構によるものであり得、第２の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、キャップ非依存性機構、例えば、ＩＲＥＳによるものであり得る。
【０２８４】
本明細書に記載の抗体分子が組み換え発現によって産生された後、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当該技術分野において既知である任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性（特にタンパク質Ａ後の特異的抗原に対する親和性によるもの）、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、吸収率較差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術によって精製することができる。更に、本明細書に記載の抗体を、本明細書に記載されるか、または当該技術分野において別様に既知である異種ポリペプチド配列に融合させて、精製を促進することができる。
【０２８５】
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、単離または精製される。一般に、単離された抗体は、単離された抗体とは異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。例えば、特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体の調製物は、細胞材料および／または化学的前駆体を実質的に含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、抗体が単離または組み換え産生される細胞の細胞構成成分から抗体が分離される、抗体の調製物を含む。したがって、細胞材料を実質的に含まない抗体は、（乾燥重量によって）約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の抗体の異種タンパク質（本明細書では「混入タンパク質」とも称される）および／またはバリアント、例えば、異なる翻訳後修飾形態の抗体または抗体の他の異なるバージョン（例えば、抗体断片）を有する、抗体の調製物を含む。抗体が組み換え産生される場合、それはまた一般に、培養培地を実質的に含まず、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満である。抗体が化学的合成によって産生される場合、それは一般に、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まず、すなわち、それは、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のそのような調製物は、（乾燥重量によって）約３０％、２０％、１０％、または５％未満の化学的前駆体または対象となる抗体以外の化合物を有する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単離または精製される。
【０２８６】
ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する抗体またはそれらの断片は、抗体の合成のための当該技術分野において既知である任意の方法によって、例えば、化学的合成または組み換え発現技術によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組み換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当該技術分野の範囲内である関連分野における従来の技術を用いる。これらの技術は、本明細書に引用される参考文献に記載されており、その文献で詳細に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（１９８７および年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８７】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、例えば、合成を介した作製、ＤＮＡ配列の遺伝子操作を伴う任意の手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体（例えば、組み換え抗体）である。特定の実施形態では、そのような抗体は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリーにおいて天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
【０２８８】
一態様では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含む、方法が本明細書に提供される。特定の一態様では、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して本抗体またはその抗原結合断片を発現すること（例えば、組み換え技術によって発現すること）を含む、方法が本明細書に提供される。特定の一実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の一実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の一実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られた本抗体またはその抗原結合断片を精製するステップを更に含む。好ましくは、本方法は、インビトロで実行される。
【０２８９】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
【０２９０】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換え、およびファージ提示技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当該技術分野において既知である多種多様な技術を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野において既知であるもの、および例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ＆Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されるものを含む、ハイブリドーマ技術を使用して産生され得る。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通して産生される抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載の抗体またはその断片、例えば、そのような抗体の軽鎖および／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組み換え産生され得る。
【０２９１】
具体的な実施形態では、本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、単細胞（例えば、組み換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体であり、抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野において既知であるか、もしくは本明細書に提供される実施例における他の抗原結合もしくは競合的結合アッセイによって決定して、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異性または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。本明細書に記載のモノクローナル抗体は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５に記載のハイブリドーマ方法によって作製されても、例えば、本明細書に記載の技術を使用して、例えば、ファージライブラリから単離されてもよい。クローナル細胞株およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（上記）の第１１章を参照されたい）。
【０２９２】
ハイブリドーマ技術を使用して特異性抗体を産生およびスクリーニングするための方法は、当該技術分野において通例的かつ周知である。例えば、ハイブリドーマ方法では、免疫化に使用されるタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４））に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を誘発するように、マウスまたは他の適切な宿主動物（ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、もしくはマカクザルなど）を免疫化する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化してもよい。その後、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞に融合させて、ハイブリドーマ細胞（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））を形成する。加えて、ＲＩＭＭＳ（反復免疫化多重部位）技術を使用して、動物を免疫化してもよい（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１６：３８１−９）。
【０２９３】
いくつかの実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌなどの他の動物）を抗原（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４））で免疫化してもよく、免疫応答が検出された後、例えば、マウス血清中に抗原に特異的な抗体が検出された後、マウス膵臓を回収し、膵細胞を単離する。その後、膵細胞を、周知の技術によって、任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞に融合させて、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマを、限界希釈により選択およびクローニングする。特定の実施形態では、免疫化されたマウスのリンパ節を回収し、ＮＳ０骨髄腫細胞に融合させる。
【０２９４】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地中で播種し、成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠如している場合、ハイブリドーマの培養培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を予防するであろう。
【０２９５】
具体的な実施形態は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体の産生を支援し、かつＨＡＴ培地などの培地に対して感受性がある、骨髄腫細胞を用いる。これらのうち、骨髄腫細胞株は、ＮＳ０細胞株、またはＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のもの、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞などのマウス骨髄腫株である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生に関して記載されている（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１３３：３００１−５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０２９６】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に対して指向されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野において既知である方法（例えば、免疫沈降）によって、またはインビトロの結合アッセイ（放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）など）によって決定される。
【０２９７】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定した後、そのクローンを限界希釈によってサブクローニングし、標準的な方法によって成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（上記））。この目的に好適な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで成長させることができる。
【０２９８】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水、または血清から好適に分離される。
【０２９９】
本明細書に記載の抗体は、特異的なＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）を認識する抗体断片を含み、当業者にとって既知である任意の技術によって生成され得る。例えば、本明細書に記載のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、（Ｆａｂ断片を産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）ペプシンなどの酵素を使用した、免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって産生され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一なアームのうちの一方に対応し、重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対合した完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって結合される抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０３００】
更に、本明細書に記載の抗体またはそれらの抗原結合断片は、当該技術分野において既知である様々なファージ提示方法を使用して生成することもできる。ファージ提示方法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。具体的には、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、患部組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉに電気穿孔され、Ｅ．ｃｏｌｉはヘルパーファージに感染する。これらの方法において使用されるファージは、典型的にはｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組み換え融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現しているファージは、抗原で、例えば、標識した抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して、選択または特定することができる。本明細書に記載の抗体の作製に使用することができるファージ提示方法の例としては、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ１８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ１８４：１７７−１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ１８７：９−１８、Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ＆Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ５７：１９１−２８０、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、同第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号に記載のものが挙げられ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０１】
上記の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、このファージ由来の抗体コード領域は、単離され、ヒト抗体を含む全抗体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために使用され、例えば、以下に記載の、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主内で発現され得る。ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１２（６）：８６４−９、Ｓａｗａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ３４：２６−３４、およびＢｅｔｔｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０：１０４１−１０４３に開示されるものなどの当該技術分野で既知の方法を使用して、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片を組み換え産生するための技術を用いることもでき、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０２】
特定の実施形態では、全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するための隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、鋳型、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者にとって既知であるクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。その後、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターは、当業者に既知の技術を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する、安定した細胞株または一過性型細胞株を生成するように細胞株に同時トランスフェクトされる。
【０３０３】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：１２０２−７、Ｏｉ  ＶＴ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ４：２１４−２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ１２５：１９１−２０２、および米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、および同第６，３３１，４１５号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０４】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域および非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、少なくとも免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの一部分も含む。この抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域も含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、べニアリングまたはリサーフェイシング（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号および同第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５−８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ２０（３）：２６７−７９、Ｂａｃａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７２（１６）：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ９（１０）：８９５  ９０４、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ５５（８）：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ１５０（２）：４０９−１０、およびＰｅｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ２３５（３）：９５９−７３に開示されている技術を含むが、これらに限定されない、当該技術分野において既知である様々な技術を使用して産生することができ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４（Ａ１）号（２００５年２月２４日）もまた参照されたい。
【０３０５】
多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法が記載されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、および同第８，５８６，７１３号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０６】
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠如している抗体は、当該技術分野において周知である方法によって産生することができる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ＆Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ２３１：２５−３８、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１（３）：２５３−２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４（４）：２７７−３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、および同第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０７】
更に、当業者にとって周知である技術を使用して、転じてＣＴＬＡ−４抗原に特異的に結合する抗体を利用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成することができる。（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＮＳ＆Ｂｏｎａ  ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ７（５）：４３７−４４４およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ  Ａ（１９９１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【０３０８】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＴＬＡ−４抗体と同じＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のエピトープに結合する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知である任意の方法を使用して産生することができる。例えば、機能的な内在性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することはできるトランスジェニックマウスを使用することができる。具体的には、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、または相同的組み換えによってマウス胚幹細胞内に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域をマウス胚幹細胞内に導入することができる。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同的組み換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入で、別個または同時に非機能性となり得る。具体的には、ＪＨ領域のホモ接合欠失は、内在性抗体の産生を予防する。修飾された胚幹細胞を増殖させ、胚盤胞内に微量注入して、キメラマウスを産生する。その後、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫をもたらす。トランスジェニックマウスを、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＣＴＬＡ−４）の全てまたは一部分で通常の様式で免疫化する。抗原に対して指向されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して免疫化したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再編成し、その後クラススイッチおよび体細胞変異を受ける。したがって、そのような技術を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｎ＆Ｈｕｓｚａｒ  Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することができるマウスの例としては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６��および同第５，５６９，８２５号）、Ｔｒａｎｓ  Ｃｈｒｏｍｏ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）、ならびにＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられ、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３０９】
ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリを使用した上記のファージ提示方法を含む、当該技術分野において既知である様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、および同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、および同第ＷＯ９１／１０７４１号もまた参照されたく、これらの全ては、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、マウス−ヒトハイブリドーマを使用して産生することができる。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球をマウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス−ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４））に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。そのような方法は、当該技術分野において既知であり、記載されており、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４６：１９−２３、Ｎａｇａｎａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ１４：２７−３１を参照されたい。
６．６  キット
【０３１１】
本明細書に記載の１つ以上の抗体、またはそれらの薬学的組成物もしくは共役体を含むキットもまた本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の抗体またはそれらの抗原結合断片などの本明細書に記載の薬学的組成物の成分のうちの１つ以上で充填された１つ以上の容器を含む、薬学的パックまたはキットが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の薬学的組成物と、本明細書に記載のものなどの任意の予防剤または治療剤とを含有する。特定の実施形態では、キットは、例えば、植物性血球凝集素（ＰＨＡ）および／もしくは酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、またはＴＣＲ複合体刺激抗体（抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体など）などのＴ細胞マイトジェンを含有し得る。任意で、そのような容器（複数可）には、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定された形態の注意書きが付随してもよく、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用、または販売の機関による承認を反映する。
【０３１２】
上記の方法において使用することができるキットもまた本明細書に提供される。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器内に、本明細書に記載の抗体、好ましくは精製された抗体を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照として、実質的にＣＴＬＡ−４抗原（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）を含有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＣＴＬＡ−４抗原と反応しない対照抗体を更に含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、抗体のＣＴＬＡ−４抗原への結合を検出するための１つ以上の要素を含有する（例えば、抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、もしくは発光化合物などの検出可能な基質に共役され得るか、または第１の抗体を認識する第２の抗体は、検出可能な基質に共役され得る）。具体的な実施形態では、本明細書に提供されるキットは、組み換え産生または化学的に合成されたＣＴＬＡ−４抗原を含んでもよい。キットに提供されるＣＴＬＡ−４抗原はまた、固体支持体に結合され得る。より具体的な一実施形態では、上記のキットの検出手段は、ＣＴＬＡ−４抗原が結合する固体支持体を含む。そのようなキットはまた、非結合レポーター標識抗ヒト抗体または抗マウス／ラット抗体を含んでもよい。この実施形態では、抗体のＣＴＬＡ−４抗原への結合は、該レポーター標識抗体の結合によって検出され得る。
【０３１３】
一実施形態では、本発明は、生体試料中のヒトＣＴＬＡ−４のインビトロインビトロアッセイおよび／または検出のための本発明のキットの使用に関する。
【実施例】
【０３１４】
この節（すなわち、６節）における実施例は、例証として提供されており、限定するためのものではない。
【０３１５】
７．１  実施例１：新規の抗ＣＴＬＡ−４抗体の特徴付け
この実施例は、ヒトＣＴＬＡ−４に結合するマウス抗体の特徴付けを説明する。具体的には、この実施例は、ヒトＣＴＬＡ−４に特異的に結合し、ＣＴＬＡ−４の機能を阻害する抗体の特徴付けを説明する。これらの抗体の可変領域の配列情報を、表４に提供する。全ての抗体を、ＩｇＧ１抗体として発現させ、以下に記載のアッセイにおいて分析した。
【０３１６】
７．１．１  抗ＣＴＬＡ−４抗体のＣＴＬＡ−４発現細胞への結合
ヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、抗ＣＴＬＡ−４抗体の結合を分析した。簡潔には、９６ウェルプレート中、２μｇ／ｍｌの抗体を使用して、５×１０５個の細胞／ウェルで４℃で３０分間細胞を染色した。細胞を２回洗浄し、抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３１５２９）とともに４℃で２０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、ＰＢＳ中に調製した５０μｌの２％のパラホルムアルデヒド（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、カタログ番号４３３６８）中に懸濁させた。データをＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩで収集した。
【０３１７】
図１Ａ〜１Ｇに示されるように、試験した全ての抗ＣＴＬＡ−４抗体が、ＣＴＬＡ−４発現細胞に結合した。
【０３１８】
７．１．２  ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後のヒトＰＢＭＣに対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後に、初代ヒトＰＢＭＣに対する抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）の機能的活性を評価した。簡潔には、凍結保存したＰＢＭＣを、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＴＬＡ−４抗体またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の不在下または存在下で１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡ超抗原（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ａｔ１０１ｒｅｄ）で、３７℃および５％のＣＯ２で５日間刺激した。培養上清中のＩＬ−２濃度をＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号ＡＬ２２１Ｆ）によって分析した。
【０３１９】
抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）は、ＳＥＡ超抗原で刺激したヒトＰＢＭＣにおけるＩＬ−２産生を増加させた（図２）。
【０３２０】
７．１．３  ＩＬ−２−ルシフェラーゼレポーター細胞株に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
次に、ＩＬ−２−ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）の機能的活性を更に分析した。簡潔には、ＣＤ３およびＣＤ２８を内在的に発現するヒトＴ細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）を操作して、ＩＬ−２プロモーターによって駆動されて細胞表面ＣＴＬＡ−４およびルシフェラーゼレポーター遺伝子を構成的に発現するようにした。Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞株を、ＣＤ８０およびＣＤ８６を内在的に発現する抗原提示細胞株（Ｒａｊｉ）とともに共培養し、専売Ｔ細胞活性化剤（Ｐｒｏｍｅｇａ）を発現するように操作した。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）トリガー（シグナル１）は、Ｔ細胞活性化剤によって達成され、共刺激シグナル伝達（シグナル２）は、Ｒａｊｉ細胞上で発現されるＣＤ８０およびＣＤ８６によってトランスで提供された。Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株内のＴＣＲシグナル伝達は、ＩＬ−２発現を引き起こし、Ｔ細胞活性化の代替マーカーであるルシフェラーゼ産生をもたらした。これら２つの細胞株の共培養は、（Ｊｕｒｋａｔ細胞上に発現される）阻害性共受容体ＣＴＬＡ−４と、Ｔ細胞活性化を阻害する（Ｒａｊｉ細胞上に発現される）その天然リガンドＣＤ８０およびＣＤ８６との関与をもたらし、これは、ルシフェラーゼ発現の欠如を実証した。この阻害は、増加する濃度の抗ＣＴＬＡ−４遮断抗体の添加時に軽減された。Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（商標）試薬を使用して、ルシフェラーゼ発現を定量化し、結果として生じるデータを使用して、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１））と比較した反応倍率値（ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）での増加倍率）を決定した。
【０３２１】
図３に示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）は、このＩＬ−２−ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて、Ｔ細胞のＣＴＬＡ−４媒介性阻害を用量依存的に放出した。
【０３２２】
７．１．４  Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡレポーター細胞株に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
抗ＣＴＬＡ−４抗体がＣＴＬＡ−４に共関与し、活性化Ｆｃガンマ受容体を介してシグナル伝達する能力を、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＦｃγＲＩＩＩＡ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を発現するレポーター細胞株を使用して評価した。簡潔には、Ｊｕｒｋａｔ細胞を操作して、細胞表面上にヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現するようにした。これらの標的細胞を、ホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答配列（ＲＥ）の上流でＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８バリアント）を発現するように操作したエフェクター細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）とともに共培養した。漸増用量のＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）を共培養物に添加し、３７℃で一晩インキュベートした。標的細胞株（Ｆａｂ領域によるＣＴＬＡ−４への結合）およびエフェクター細胞株（Ｆｃ領域によるＦｃγＲＩＩＩＡへの結合）によるＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３の同時関与は、ＮＦＡＴ  ＲＥレポーター遺伝子活性化およびルシフェラーゼ発現を引き起こす。翌日、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を共培養物に添加し、ＥｎＶｉｓｏｎ  Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって蛍光を測定し、相対光単位（ＲＬＵ）を記録して、反応倍率値（アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）と比較したＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）での増加倍率）を計算した。
【０３２３】
細胞表面上にヒトＣＴＬＡ−４を発現する標的細胞への結合時、ＩｇＧ１抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３は、エフェクター細胞内のＦｃγＲＩＩＩＡシグナル伝達を活性化した（図４）。
【０３２４】
７．２  実施例２：異なるＦｃ領域を有する抗ＣＴＬＡ−４抗体の特徴付け
この実施例は、抗ＣＴＬＡ−４抗体の機能的活性に対するＦｃ／Ｆｃ受容体相互作用の影響を分析する。ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３を、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域がＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、またはＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ変異を含む抗体として発現させ、以下に記載の機能的アッセイにおいて試験した。抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ）は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。比較のために、ＡＧＥＮ１８８４を、野生型ＩｇＧ１抗体、ＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされたＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥもしくはＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を含むＩｇＧ１抗体、または脱フコシル化ＩｇＧ１抗体としても発現させ、いくつかの機能的アッセイにおいて試験した。
【０３２５】
７．２．１  抗ＣＴＬＡ−４抗体のＣＴＬＡ−４発現細胞への結合
抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ）の、ＣＴＬＡ−４発現細胞への結合を、上記と同様に特徴付けた。簡潔には、ヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をまず、５μｇ／ｍｌの抗ＣＴＬＡ−４抗体またはアイソタイプ対照抗体で染色し、その後抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３１５２９）で染色した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩを使用して、細胞を分析した。
【０３２６】
図５Ａ〜５Ｄに示されるように、異なるＦｃ領域を有するＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体は全て、ヒトＣＴＬＡ−４を発現する細胞に結合した。
【０３２７】
７．２．２  ヒトＣＴＬＡ−４へのリガンド結合に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）が、ヒトＣＴＬＡ−４とそのリガンド（ＣＤ８０およびＣＤ８６）との間の結合を遮断する能力を試験した。
【０３２８】
簡潔には、組み換えＣＤ８０−ＦｃおよびＣＤ８６−Ｆｃタンパク質を、蛍光色素Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ２０１８６）に共役させた。Ｎａｋａｓｅｋｏら（Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９９Ｓｅｐ２０；１９０（６）：７６５−７７４）に記載のように、ＥＦ１αプロモーターの制御下で、Ｊｕｒｋａｔ細胞にｔｒＣＴＬＡ４（切断型細胞内ドメイン）を形質導入することで、細胞表面上にヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現する細胞株を産生させた。ＣＴＬＡ−４発現細胞を、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）、基準抗ＣＴＬＡ−４抗体、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の用量漸増とともにインキュベートした。その後、蛍光標識ＣＤ８０−ＦｃまたはＣＤ８６−Ｆｃタンパク質で細胞を染色した。染色後、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、蛍光を分析した。ＦＡＣＳ  ＤＩＶＡとＷＥＨＩ  Ｗｅａｓｅｌソフトウェアとの組み合わせを使用して、ＦＡＣＳプロットを分析した。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、値をプロットした。
【０３２９】
図６Ａに示されるように、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）および基準抗ＣＴＬＡ−４抗体は各々、用量依存的様式でヒトＣＴＬＡ−４とＣＤ８０との間の結合を遮断した一方で、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）は、何ら影響を有しなかった。図６Ｂに示されるように、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）および基準抗ＣＴＬＡ−４抗体は各々、用量依存的様式でヒトＣＴＬＡ−４とＣＤ８６との間の結合を遮断した一方で、アイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）は、何ら影響を有しなかった。これらのデータは、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｅ／Ｉ３３２Ｅ）がＣＴＬＡ−４のリガンド遮断抗体として機能することを示す。
【０３３０】
７．２．３  ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ＳＥＡ）刺激後のヒトＰＢＭＣに対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、上記のＳＥＡ刺激アッセイを使用して、抗ＣＴＬＡ−４抗体の機能的活性に対するＦｃ領域の影響を分析した。簡潔には、ヒトＰＢＭＣを、異なるＦｃ領域を有する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはアイソタイプ対照抗体の不在下または存在下で１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡペプチド（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号ａｔ１０１ｒｅｄ）とともにインビトロで培養した。５日後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号ＡＬ２２１Ｆ）を使用して、Ｔ細胞活性化のマーカーである培養上清中のＩＬ−２の濃度を測定した。
【０３３１】
図７Ａに示されるように、ＩｇＧ１  Ｆｃ領域内に変異を含有する３つのＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体は全て、ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を増強し、野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有するＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３よりも多いＩＬ−２分泌を刺激した。
【０３３２】
類似した研究では、異なるＦｃ領域を有するＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３またはＡＧＥＮ１８８４抗体をＳＥＡ刺激アッセイにおいて試験した。ＩｇＧ１  Ｆｃ領域内へのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、またはＬ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ置換の導入は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３の機能的活性を有意に増強した（図７Ｂ）。同様に、ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、および脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４（ＩｇＧ１）は、野生型ＩｇＧ１  Ｆｃ領域を有するＡＧＥＮ１８８４と比較して実質的により低い濃度で、ＩＬ−２産生を増強した（図７Ｃ）。
【０３３３】
７．２．４  ＺＡＰ７０リン酸化に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、ＴＣＲ関与後にＴＣＲに動員され、リン酸化され下流のシグナル伝達事象を促進する、タンパク質チロシンキナーゼＺＡＰ７０のリン酸化の程度を測定するアッセイを使用して、Ｔ細胞抗原提示細胞（ＡＰＣ）シナプスにおける抗ＣＴＬＡ−４抗体の機能的活性に対するＦｃ領域の影響を分析した。
【０３３４】
簡潔には、ヒトＰＢＭＣを最適以下の濃度のＳＥＡペプチド、および１０μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）または抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、もしくはＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ）とともにインキュベートした。その後、細胞を３７℃で、０（インキュベート前）、１、５、１０、３０、または６０分間インキュベートした。インキュベーションの終了時、ホスファターゼ／プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した低温１×ＲＩＰＡ緩衝液で、細胞を溶解させた。上清清澄化後、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）分析（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用して、タンパク質濃度を定量化した。細胞溶解物（２０μｇ／レーン）を、希釈したＢｏｌｔ  ＬＤＳ試料緩衝液中に調製し、７０℃で１０分間加熱してから、４〜１２％のＢｏｌｔ  Ｂｉｓ  Ｔｒｉｓゲル（Ｎｏｖｅｘ）に充填した。タンパク質を１×Ｂｏｌｔ  ＭＯＰＳ緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で分離させ、その後ＰＶＤＦ膜にブロットした。５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、１時間）で遮断した後、試料を一次抗ヒトウサギホスホ−ＺＡＰ７０（Ｔｙｒ４９３）／Ｓｙｋ（Ｔｙｒ５２６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）とともに遮断緩衝液中、４℃で一晩インキュベートした。膜を抗ウサギ二次ＨＲＰ共役体で探索し、ＳｉｇｎａｌＦｉｒｅ  ＥＣＬ試薬（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で可視化した。Ｃｈｅｍｉｄｏｃ撮像システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、画像を撮影した。対照として、Ｒｅｓｔｏｒｅ（商標）ＰＬＵＳウェスタンブロット剥離緩衝液で膜を剥離した後に全ＺＡＰ７０タンパク質を評価した。Ｉｍａｇｅ  Ｊ（Ｗａｙｎｅ  Ｒａｓｂａｎｄ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用して、全ＺＡＰ７０の濃度測定分析に正規化したホスホ−ＺＡＰ７０の濃度測定分析を実行し、１分間インキュベートしたアイソタイプ対照で処理した試料と比較した変化倍率として表現した。
【０３３５】
図８Ａ〜８Ｂに示されるように、アイソタイプ対照抗体試料中では、ＺＡＰ７０リン酸化は刺激後１０分以内に一過的に増加し、１５分後には検出不可能なレベルで急速に低下した。対照的に、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）の添加は、検出可能なＺＡＰ７０活性化を３０分間まで延長させ、最も顕著な活性および相対存在量は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）で観察された。
【０３３６】
７．２．５  マウスモデルにおける腫瘍成長および腫瘍内制御性Ｔ細胞枯渇に対するマウス抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、結腸癌のマウスモデル（ＣＴ２６腫瘍担持マウス）を使用して、抗ＣＴＬＡ−４抗体の抗腫瘍および腫瘍内制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）枯渇活性に対するＦｃ領域の影響を分析した。
【０３３７】
簡潔には、５×１０４個のＣＴ２６腫瘍細胞を１００ｍｌのＰＢＳ中に懸濁させ、生後６〜８週間の雌のＢＡＬＢ／ｃＪマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に皮下注射した。５０〜８０ｍｍ３の腫瘍体積への生着後、マウスを１００μｇの単回用量のマウス抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）のＦｃバリアント、またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）で治療した。試験したマウス抗体のアミノ酸配列を表７に示す。
【表７】
2020500538.tif 000017
2020500538.tif 000018
【０３３８】
その後、第１の実験では、治療したマウスを腫瘍成長について隔週で測定した。図９Ａに示されるように、（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅとして示される）抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃバリアントは、全てのＣＴ２６腫瘍担持マウス（試験したマウス８匹中８匹）において完全な退縮を誘導した。対照的に、抗体９Ｄ９の他のバリアントは、同じ有効性を誘発することができす、抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）自体は、試験したマウス９匹中３匹において完全な退縮を誘導し、抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）は、試験したマウス９匹のいずれにおいても退縮を誘導することができなかった。
【０３３９】
第２の実験では、ＣＴ２６腫瘍担持マウスを上記のように治療し、その後治療の０、２４、７２、または２４０時間後に屠殺して、腫瘍組織、腫瘍流入領域リンパ節、および膵臓を収集した。収集した組織を、フローサイトメトリーによってＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ発現について評価した。機械的解離、その後濾過（７０μＭの細胞濾過器）によって、単細胞懸濁液を得た。非特異的結合を低減させるために、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％のＢＳＡ（ｐＨ７．２））中、ＦｃγＲ遮断抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともに周囲温度で１５分間インキュベートした。その後、試料をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ２５の系列パネル、ならびに固定可能な生／死マーカーについて４℃で３０分間染色した。その後、Ｔｒｅｇ描写のために、試料を２回洗浄し、固定し、透過処理し、その後抗ＦｏｘＰ３抗体（ＦＪＫ−１６ｓ）とともに４℃で３０分間インキュベートした。ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、試料を分析した。ＦＡＣＳ  ＤＩＶＡとＷＥＨＩ  Ｗｅａｓｅｌソフトウェアとの組み合わせを使用して、ＦＡＣＳプロットを分析した。図９Ｂに示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）およびＦｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は各々、アイソタイプ対照抗体と比較して、腫瘍内ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの量を低減させ、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は、腫瘍内ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの量を最も有意に減少させた。抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）は、アイソタイプ対照抗体と比較して、腫瘍内ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの量を実質的に低減させなかった。治療群のいずれも、腫瘍内ＣＤ４５＋白血球またはＣＤ４＋非Ｔｒｅｇの量の実質的な変化は示さなかった。Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）が、経時的に腫瘍内ＣＤ８／Ｔｒｅｇ比率の最大の増加を誘導し、その次が抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、その次がＦｃサイレントバリアント抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）およびアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）であった。
【０３４０】
図９Ｃに示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、および抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）は、アイソタイプ対照抗体と比較して、腫瘍流入領域リンパ節（ＴＤＬＮ）ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの量に対して実質的な効果を有しなかった。同様に、図９Ｄに示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、および抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９のＦｃサイレントバリアント（ｍＩｇＧ２ａ−Ｎ２９７Ａ）は、アイソタイプ対照抗体と比較して、脾臓ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇの量に対して実質的な効果を有しなかった。
【０３４１】
７．２．６  腫瘍成長に対する、腫瘍ワクチンと組み合わせたマウス抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、ＨＰＶ＋ＴＣ−１同系腫瘍マウスモデルにおいて、マウス抗ＣＴＬＡ−４抗体とＨＰＶ腫瘍ワクチンとの組み合わせの、腫瘍成長に対する効果を試験した。
【０３４２】
Ｌｉｎら（１９９６，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６（１）：２１−２６）に記載のように、一次肺上皮細胞（Ｃ５７ＢＬ／６）をｃ−Ｈａ−ｒａｓおよびＨＰＶ−１６（Ｅ６／Ｅ７）がん遺伝子で同時形質転換することによって、ＴＣ−１細胞株を開発した。腫瘍植え込みのために、２×１０５個のＴＣ−１細胞を、生後６〜８週間の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に皮下注射した。腫瘍植え込みの５、１０、および１５日後の各々の日に、１００μｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）を、ＨＰＶワクチン（ＨＰＶ＋腫瘍、ウイルス抗原Ｅ６／Ｅ７）の用量と組み合わせて、または追加の治療なしでマウスに投与した。ＨＰＶワクチンの各用量は、ＨＰＶプールペプチド（１．２ｎＭ）と複合体化した３０μｇのＨＳＰタンパク質（０．４ｎＭ）を含有し、１０μｇのＱＳ−２１Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（登録商標）アジュバントを補充した。治療後、マウスを腫瘍成長について隔週で評価し、腫瘍が２０００ｍｍ３に達した時または潰瘍形成時に屠殺した。
【０３４３】
図１０に示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）およびＦｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）の抗腫瘍有効性は各々、ＨＰＶ腫瘍ワクチンと組み合わせて投与した時に改善を示した。この効果は、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）についてより大きかった。具体的には、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ−Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は、抗体を単剤として投与した時と比較して、ＨＰＶ腫瘍ワクチンと組み合わせた時にＴＣ−１腫瘍成長の注目すべき追加の減少を誘導した。腫瘍成長のこの追加の減少は、抗体９Ｄ９（ｍＩｇＧ２ａ）またはアイソタイプ対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）とＨＰＶ腫瘍ワクチンとの組み合わせについて観察されたものよりも大きかった。
【０３４４】
７．２．７  増殖させ、活性化したＴ細胞集団の特徴付け
この実施例では、増殖させ、活性化したＴ細胞集団を、遺伝子発現およびＣｐＧメチル化について特徴付けた。簡潔には、天然ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋／−ＦＯＸＰ３−非制御性Ｔ細胞を健康なヒトドナーの末梢血から単離し、増殖させ、活性化した。その後、Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによってＦＯＸＰ３およびＣＴＬＡ−４の発現について特徴付け、ＦＯＸＰ３およびＣＴＬＡ４遺伝子座内のＣｐＧ領域でのＤＮＡ  ＣｐＧメチル化を試験することによって系列安定性について評価した。当該技術分野において既知であるように、これらのＣｐＧ部位での低メチル化を使用して、エフェクター系列対制御性Ｔ細胞系列を正確に描写することができる（Ｗａｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（３）：８７８−８８２）。
【０３４５】
フィコール密度勾配を介して、健康なドナーの軟膜（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＰＢＭＣを単離し、その後磁気ビーズ単離（ＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）または天然制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）について濃縮した。濃縮したＴｅｆｆまたはＴｒｅｇを、１０％の熱不活性化ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ培地中、３７℃および５％のＣＯ２で、ＣＤ３−ＣＤ２８マイクロビーズ（１：１のビーズ：細胞比率、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および組み換えヒトＩＬ−２で７日間活性化した。刺激後、フローサイトメトリーを介して、細胞をＦＯＸＰ３およびＣＴＬＡ−４発現について評価した。非特異的結合を低減させるために、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２ｍＭのＥＤＴＡ、０．５％のＢＳＡ（ｐＨ７．２））中、ＦｃγＲ遮断抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とともに周囲温度で１５分間プレインキュベートした。その後、試料をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ２５の系列パネル、ならびに固定可能な細胞死マーカーで４℃で３０分間染色した。膜ＣＴＬＡ−４発現を評価するために、３７℃でＣＴＬＡ−４染色を実行した。細胞内ＦＯＸＰ３およびＣＴＬＡ−４染色のために、試料を２回洗浄し、固定し、透過処理し、それぞれ抗ＦＯＸＰ３抗体（ＰＣＨ１０１）および抗ＣＴＬＡ−４抗体（ＢＮＩ３）とともに４℃で３０分間インキュベートした。その後、試料を２回洗浄し、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。ＦＡＣＳ  ＤＩＶＡとＷＥＨＩ  Ｗｅａｓｅｌソフトウェアとの組み合わせを使用して、ＦＡＣＳプロットを分析した。ＣｐＧメチル化分析のために、およそ１×１０５個のナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化Ｔｅｆｆ、または活性化Ｔｒｅｇから全ＤＮＡを単離し、パイロシークエンシングに供した。
【０３４６】
図１１Ａに示されるように、活性化Ｔｒｅｇ上では、高レベルのＦＯＸＰ３発現、ならびに高レベルの細胞内および膜ＣＴＬＡ−４発現の両方が検出された。対照的に、活性化Ｔｅｆｆは、活性化Ｔｒｅｇと比較して、低減したレベルのＦＯＸＰ３、細胞内ＣＴＬＡ−４、および膜ＣＴＬＡ−４を示した。具体的には、活性化Ｔｅｆｆについては、活性化Ｔｒｅｇと比較して、実質的により少ない膜ＣＴＬＡ−４発現が観察された。図１１Ｂは、活性化Ｔｒｅｇが、同じドナー由来のナイーブおよび活性化Ｔｅｆｆと比較して、低メチル化ＦＯＸＰ３およびＣＴＬＡ４  ＣｐＧ領域もまた呈することを更に示す。
【０３４７】
７．２．８  ＣＴＬＡ−４発現ヒトＴ細胞の抗体依存性細胞傷害性に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、カスパーゼ３／７活性化のハイコンテンツ顕微鏡観察を使用して、ＡＤＣＣ活性を定量化して、ヒトＣＴＬＡ−４発現Ｔ細胞の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に対する抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）またはそのＦｃバリアントの効果を評価した。
【０３４８】
簡潔には、以下に記載のように、ＣＴＬＡ−４発現標的細胞を、ＦｃγＲＩＩＩＡを発現するＮＫ−９２細胞とともに共培養し、その後１０μｇ／ｍｌの抗ＣＴＬＡ−４抗体またはそのＦｃバリアントでオプソニン化した。第１の実験では、細胞表面ヒトＣＴＬＡ−４を構成的に発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞を、標的細胞として使用した。Ｎａｋａｓｅｋｏら（１９９９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（６）：７６５−７７４）に記載のように、ＥＦ１αプロモーターの制御下で、Ｊｕｒｋａｔ細胞株にｔｒＣＴＬＡ４（細胞内ドメインは除去）を形質導入することによって、ＣＴＬＡ−４発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を生成した。第２の実験では、初代ヒト活性化エフェクターＴ細胞および制御性Ｔ細胞を、標的細胞として使用した。赤色および青色生細胞トレーサー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、ＣＴＬＡ−４発現標的細胞およびＦｃγＲＩＩＩＡ−１５８Ｖ発現ＮＫ−９２細胞を差次的に染色し、１：１の細胞比率（３８４ウェルプレート中、１．５×１０３個の細胞／ウェル）で共培養した。１０μｇ／ｍｌのＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）で試料を処理した。その後、活性化カスパーゼによる切断後に蛍光を発するカスパーゼ３／７基質のライブ共焦点撮像によって、経時的なアポトーシスの誘導について試料を評価した。試料画像を、２０分に１回、６時間にわたって取得した。ＡＤＣＣ活性パーセンテージを、各条件下での全細胞数と比較したアポトーシス細胞の数として測定する。
【０３４９】
図１２Ａに示されるように、ＦｃバリアントＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）抗体、脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体、およびＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）抗体は各々、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ａ）バリアント、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）バリアント、およびアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）と比較して、細胞表面ＣＴＬＡ−４を発現するように操作したＪｕｒｋａｔ細胞内で実質的により大きなＡＤＣＣ活性を誘導した。ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）Ｆｃバリアント抗体および脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）抗体と比較して、ＡＤＣＣ活性のより大きな増加を誘導した。図１２Ｂに示されるように、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）Ｆｃバリアント抗体は、初代ヒト活性化エフェクターＴ細胞（左パネル）内および初代ヒト活性化制御性Ｔ細胞（右パネル）内の両方で最も高いレベルのＡＤＣＣを誘導し、その次が脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体であった。ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）抗体もまた、対照と比較してわずかにより高いレベルのＡＤＣＣを誘導した。試験した残りの抗体は、エフェクターＴ細胞内または制御性Ｔ細胞内のいずれにおいても、ＡＤＣＣ活性をほとんどまたは全く誘導しなかった。注目すべきことに、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）Ｆｃバリアント抗体および脱フコシル化ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３抗体は各々、エフェクターＴ細胞と比較して、制御性Ｔ細胞内で実質的により大きなＡＤＣＣを誘導した。
【０３５０】
７．２．９  Ｔ細胞機能性に対する、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果
この実施例では、初代ヒトＴ細胞機能に対する、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた抗ＣＴＬＡ−４抗体の効果を試験した。
【０３５１】
簡潔には、フィコール密度勾配を介して、２人のヒトドナーの健康なドナーの軟膜（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）からＰＢＭＣを単離した。この実験を各ドナーから収集したＰＢＭＣに対して２回実行して、１人のドナー当たり合計２つの複製物になるようにした。各複製物について、単離されたＰＢＭＣを、固定投薬量（５μｇ／ｍｌ）の基準抗ＰＤ−１アンタゴニスト抗体またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）と組み合わせて、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ１）の投薬量漸増とともに刺激培養条件下で４日間インキュベートした。刺激培養条件は、１００ｎｇ／ｍｌのＳＥＡ超抗原（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０％の熱不活性化ＦＢＳ（３７℃）、および５％のＣＯ２を補充したＲＰＭＩ培地中に懸濁した細胞と定義された。インキュベーション後、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ免疫アッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用して、無細胞上清をＩＬ−２産生についてアッセイした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）多重標識プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用してデータを収集し、ＩＬ−２標準曲線を使用してＩＬ−２の濃度を決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、値を内挿し、プロットした。
【０３５２】
図１３Ａ〜１３Ｄに示されるように、抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）およびＦｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は各々、アイソタイプ対照または基準抗ＰＤ−１抗体単独と比較して、増加したＩＬ−２産生を誘導した。ＩＬ−２産生は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３またはＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）を基準抗ＰＤ−１抗体と組み合わせた時に更に増強された。アイソタイプ対照抗体とともに、または抗ＰＤ−１基準抗体と組み合わせて投与したかに関わらず、Ｆｃバリアント抗ＣＴＬＡ−４抗体ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１  Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は、ＡＧＥＮ１８８４．Ｈ３（ＩｇＧ１）と比較してＩＬ−２産生のより大きな増加を誘導した。この効果は、第１のドナー（図１３Ａおよび１３Ｂ）ならびに第２のドナー（図１３Ｃおよび１３Ｄ）の複製物において一貫していた。
【０３５３】
７．３  実施例３：抗ＣＴＬＡ−４抗体のエピトープマッピング
ＡＧＥＮ１８８４（ＡＧＥＮ１８８４−Ｆａｂ）のＦａｂ断片と、ヒトＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインとの相互作用を、水素−重水素交換（ＨＤＸ）質量分析によって研究した。ＣＴＬＡ−４細胞外ドメイン単独、またはリン酸緩衝食塩水溶液（ｐＨ７．４）中でのＡＧＥＮ１８８４−Ｆａｂとの組み合わせを、１０倍の体積の重水標識緩衝液で希釈し、室温で異なる時間（０、６０、３００、１８００、および７２００秒間）にわたってインキュベートした。１体積の４Ｍの塩酸グアニジン、０．８５ＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）緩衝液を添加することによって重水素と水素との交換を停止させ、最終ｐＨは２．５であった。その後、試料を、オンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ型消化およびＬＣ−ＭＳ分析に供した。質量スペクトルを、ＭＳのみモードにおいて記録した。重水素組み込みの計算のために、所与のペプチドの質量スペクトルを、抽出したイオンクロマトグラムピークにわたって組み合わせ、加重平均ｍ／ｚを計算した。天然ペプチド（０分）の質量から加重平均した質量への質量増加は、重水素組み込みのレベルに対応する。全てのペプチドの交換時間にわたる重水素蓄積曲線を、更なる分析のためにプロットし、ＨＤＥｘａｍｉｎｅｒソフトウェアで比較した。
【０３５４】
ＣＴＬＡ−４ペプチドのほとんどは、抗ヒトＣＴＬＡ−４  Ｆａｂの存在に関わらず、同一または類似した重水素レベルを示した。しかしながら、いくつかのペプチドセグメントは、Ｆａｂ結合時に重水素組み込みを有意に減少させたことが見出された。この段落における全ての残基は、配列番号３３に従って番号付けされた。２つの領域、残基８０〜８２（ＱＶＴ、配列番号３９）および残基１３５〜１４９（ＹＰＰＰＹＹＬＧＩＧＮＧＴＱＩ、配列番号３７）は、ヒトＣＴＬＡ−４がＦａｂに結合した時に強い重水素保護を経験した。重水素取り込みの最も強い減少は、残基１４０〜１４１（ＹＬ）で観察され、これはしたがって、ＣＴＬＡ−４上のＡＧＥＮ１８８４のエピトープの主要な特徴であるようであった。そのどちらにもＡＧＥＮ１８８４が強く結合する（データ示さず）、ヒトおよびカニクイザルＣＴＬＡ−４の配列の検査は、１４１位でのメチオニンのロイシンへの置換を除いて、上記の２つの領域内のほぼ完全な配列同一性ことを明らかにする（図１４Ａ）。対照的に、ＡＧＥＮ１８８４は、残基１４０〜１４３（ＹＬＧＩ、配列番号３４）の４つの位置のうち３つでヒトＣＴＬＡ−４とは異なるマウスまたはラットＣＴＬＡ−４のいずれにも、いかなる有意な程度まででも結合しない（データ示さず）（図１４Ａ）。更なる選択性データは、ＡＧＥＮ１８８４が高い特異性をもってヒトおよびカニクイザルＣＴＬＡ−４に結合するが、他の関連ＣＤ２８ファミリーメンバー（ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、およびＰＤ−１を含む）には結合しない（データ示さず）ことを示す。これらの関連タンパク質間の配列比較は、非ＣＴＬＡ−４タンパク質が全て残基１４０−１４３（ＹＬＧＩ、配列番号３４）で異なる（図１４Ｂ）ことを示し、これは、ＡＧＥＮ１８８４の結合に対するこのエピトープの重要性を更に支持する。
＊＊＊
【０３５５】
本発明の範囲は、本明細書に記載の特定の実施形態によって限定されるものではない。実際には、記載される修正に加えて本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に収まるように意図されている。
【０３５６】
本明細書に引用される全ての参考文献（例えば、出版物または特許もしくは特許出願）は、個々の各参考文献（例えば、出版物または特許もしくは特許出願）が全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示される場合と同じ程度まで、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３５７】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１Ａ】
2020500538.tif 000019
【図１Ｂ】
2020500538.tif 000020
【図１Ｃ】
2020500538.tif 000021
【図１Ｄ】
2020500538.tif 000022
【図１Ｅ】
2020500538.tif 000023
【図１Ｆ】
2020500538.tif 000024
【図１Ｇ】
2020500538.tif 000025
【図２】
2020500538.tif 000026
【図３】
2020500538.tif 000027
【図４】
2020500538.tif 000028
【図５Ａ】
2020500538.tif 000029
【図５Ｂ】
2020500538.tif 000030
【図５Ｃ】
2020500538.tif 000031
【図５Ｄ】
2020500538.tif 000032
【図６Ａ】
2020500538.tif 000033
【図６Ｂ】
2020500538.tif 000034
【図７Ａ】
2020500538.tif 000035
【図７Ｂ】
2020500538.tif 000036
【図７Ｃ】
2020500538.tif 000037
【図８Ａ】
2020500538.tif 000038
【図８Ｂ】
2020500538.tif 000039
【図９Ａ】
2020500538.tif 000040
【図９Ｂ】
2020500538.tif 000041
【図９Ｃ】
2020500538.tif 000042
【図９Ｄ】
2020500538.tif 000043
【図１０】
2020500538.tif 000044
【図１１Ａ】
2020500538.tif 000045
【図１１Ｂ】
2020500538.tif 000046
【図１２Ａ】
2020500538.tif 000047
【図１２Ｂ】
2020500538.tif 000048
【図１３Ａ】
2020500538.tif 000049
【図１３Ｂ】
2020500538.tif 000050
【図１３Ｃ】
2020500538.tif 000051
【図１３Ｄ】
2020500538.tif 000052
【図１４Ａ】
2020500538.tif 000053
【図１４Ｂ】
2020500538.tif 000054
【図１４Ｃ】
2020500538.tif 000055
【配列表】
2020500538000001.app
【国際調査報告】
2020500538.tif 000056
2020500538.tif 000057
2020500538.tif 000058
2020500538.tif 000059