(57)【要約】本開示は、ＲＮＡｉ剤、例えばアンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＬ３、アンジオポエチン様タンパク質３とも呼ばれる）遺伝子発現を阻害することができる二本鎖ＲＮＡｉ剤、およびＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物に関する。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および組成物の使用方法も開示される。本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、肝細胞を含む細胞への送達を容易にするために標的化リガンドにコンジュゲートされ得る。必要に応じて１つまたは複数のさらなる治療剤と共に、１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物も記載される。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの送達は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現の阻害を提供し、対象においてより低いトリグリセリドおよび／またはコレステロールレベルをもたらし得る。
2020534268.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２または表３に提供される配列のいずれか１つと０または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖；および
前記アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＲＮＡｉ剤。
【請求項２】
前記アンチセンス鎖が、表２または表３に提供される配列のいずれか１つのヌクレオチド２〜１８を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３】
前記センス鎖が、表２または表４に提供されるセンス鎖配列のいずれか１つと０または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖の１７個の連続するヌクレオチドにわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有する、請求項１または請求項２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４】
前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１個のヌクレオチドが、改変ヌクレオチドであるか、または改変ヌクレオシド間結合を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項５】
前記ＲＮＡｉ剤の前記センスおよび／またはアンチセンス鎖の前記ヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項１から３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項６】
前記改変ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体、ロックドヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド、２’−メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、反転ヌクレオチド、反転２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、反転２’−デオキシヌクレオチド、２’−アミノ改変ヌクレオチド、２’−アルキル改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド、および３’−Ｏ−メチルヌクレオチドからなる群から選択される、請求項４または５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項７】
前記改変ヌクレオチドの全部または実質的に全部が、２’−Ｏ−メチルヌクレオチドおよび２’−フルオロヌクレオチドである、請求項５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖が、表３に提供される改変アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項９】
前記センス鎖が、表４に提供される改変センス鎖配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１０】
前記アンチセンス鎖が、表３に提供される改変配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、表４に提供される改変配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１１】
標的化リガンドに連結されている、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１２】
前記標的化リガンドが、ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項１１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１３】
前記標的化リガンドが、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓからなる群から選択される構造を含む、請求項１１または請求項１２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１４】
前記標的化リガンドが、（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓの構造を含む、請求項１３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１５】
前記標的化リガンドが前記センス鎖に連結されている、請求項１１から１４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１６】
前記標的化リガンドが、前記センス鎖の５’末端に連結されている、請求項１５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１７】
前記センス鎖が、１８〜３０ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８〜３０ヌクレオチド長である、請求項１から１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１８】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ１８〜２７ヌクレオチド長である、請求項１７に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１９】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ１８〜２４ヌクレオチド長である、請求項１８に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２０】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、それぞれ２１ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２１】
２個の平滑末端を有する、請求項１７から２０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２２】
前記センス鎖が、１つまたは２つの末端キャップを含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２３】
前記センス鎖が、１つまたは２つの反転脱塩基残基を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２４】
表５の二本鎖のいずれか１つの構造を有する二本鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２５】
以下のヌクレオチド配列（５’→３’）
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２６】
前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）
ＧＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１７）；
ＧＣＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１９）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデノシンヌクレオチドを表す）
ＧＣＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２１）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデノシンヌクレオチドを表す）
ＡＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２４）；
ＧＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２６）；
ＡＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２８）；
ＵＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号３０）；または
ＧＧＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号３２）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含む、請求項２５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２７】
前記ヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項２５または２６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２８】
前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、または両方に反転脱塩基残基をさらに含む、請求項２５または２６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２９】
以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）；
ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）；
ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）；
ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）；または
ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列を含む、からなる、またはから本質的になるアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖上のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３０】
前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）；
ｇｃｕｃａａｃａＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１８）；
ｇｃｕｃａａｃａ＿２ＮＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２０）；
ｇｃＵｆｃＡｆａＣｆａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２２）；
ａｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２３）；
ｇｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２５）；
ａｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２７）；
ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）；または
ｇｇｕｕｇｃｕａＵｆＧｆＵｆｕａｇａｃｇａｕｇｕ（配列番号３１）
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表す）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列を含む、からなる、またはから本質的になり、前記センス鎖上のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである、請求項３２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３１】
前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、または両方に反転脱塩基残基をさらに含む、請求項２５から３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３２】
前記ＲＮＡｉ剤の前記センス鎖が、標的化リガンドに連結されている、請求項２５から３１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３３】
前記標的化リガンドが、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する、請求項３２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３４】
前記標的化リガンドがＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３５】
ＡＤ０５４８８（配列番号２および３００）およびＡＤ０５７７５（配列番号２および３３４）；ＡＤ０５７９１（配列番号４および３００）；ＡＤ０５７７７（配列番号２および３３６）；ＡＤ０５７４３（配列番号２および３２６）；ＡＤ０５４８７（配列番号５および２９９）；ＡＤ０５３０７（配列番号７および２７８）；ＡＤ０５４１８（配列番号９および２９２）；ＡＤ０５５７７（配列番号１１および２７９）；ＡＤ０５３０８（配列番号１３および２７９）；およびＡＤ０５８４０（配列番号１５および３５７）からなる群から選択される二本鎖構造を有する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３６】
ＡＤ０５４８８（配列番号２および３００）およびＡＤ０５７７５（配列番号２および３３４）からなる群から選択される二本鎖構造を有する、請求項３５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３７】
薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項１から３６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物。
【請求項３８】
ＡＮＧＰＴＬ３の発現を阻害するための第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
１つまたは複数のさらなる治療剤をさらに含む、請求項３７または３８に記載の組成物。
【請求項４０】
細胞中でのＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞中に、請求項１から３６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３７から３９のいずれか一項に記載の組成物の有効量を導入するステップを含む、方法。
【請求項４１】
前記細胞が対象内にある、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記対象がヒト対象である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現が少なくとも約３０％阻害される、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ＡＮＧＰＴＬ３関連疾患または障害を処置する方法であって、それを必要とするヒト対象に、治療有効量の請求項３７から３９のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４５】
前記疾患が、心血管代謝疾患である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
疾患が、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、またはスタチン抵抗性高コレステロール血症である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＲＮＡｉ剤が、約０．０５ｍｇ／ｋｇヒト対象体重〜約５．０ｍｇ／ｋｇヒト対象体重の用量で投与される、請求項４０から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＲＮＡｉ剤が、２つまたはそれより多い用量で投与される、請求項４０から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
対象におけるトリグリセリドレベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項３７から３９のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項５０】
対象におけるコレステロールレベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項３７から３９のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項５１】
対象における低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルを低下させる方法であって、前記対象に、有効量の請求項３７から３９のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項５２】
スタチンの投与をさらに含む、請求項４４から５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、およびシンバスタチンからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、または症状の処置のための、請求項１から３６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項３７から３９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項５５】
前記症状が、上昇したトリグリセリドレベルおよび／または上昇したコレステロールレベルである、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、または症状を処置するための医薬組成物の調製のための、請求項１から３６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤、または請求項３７から３９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項５７】
前記疾患が、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、またはスタチン抵抗性高コレステロール血症である、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５８】
前記疾患が、心血管代謝疾患である、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５９】
前記ＲＮＡｉ剤が、約０．０５ｍｇ／ｋｇヒト対象体重〜約５．０ｍｇ／ｋｇヒト対象体重の用量で投与される、請求項５４から５８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６０】
対象における前記トリグリセリドレベル、コレステロールレベル、および／または低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レベルが低下する、請求項５４から５９のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月７日に出願された米国仮特許出願第６２／６９４，９７６号、２０１８年４月２日に出願された米国仮特許出願第６２／６５１，２８４号、２０１７年１１月９日に出願された米国仮特許出願第６２／５８３，９１９号、および２０１７年９月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５５８，８１９号に基づく優先権を主張し、そのそれぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含有し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＡＳＣＩＩのコピーは、３０６５８＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇという名称であり、１１１ｋｂのサイズである。
【０００３】
発明の分野
本開示は、アンジオポエチン様３遺伝子発現の阻害のためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤、アンジオポエチン様３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
アンジオポエチン様３（ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＬ３、ＡＮＧ３、またはアンジオポエチン様タンパク質３とも呼ばれる）は、脂質代謝の調節に関与することが報告されているヒトアンジオポエチン様３遺伝子によってコードされるアンジオポエチンタンパク質である。ＡＮＧＰＴＬ３は、シグナルペプチド、Ｎ末端コイルドコイルドメイン、およびＣ末端フィブリノゲン（ＦＢＮ）様ドメインからなる４６０アミノ酸のポリペプチドである。ＡＮＧＰＴＬ３は、ヒトでは肝細胞において主に産生されることが知られており、合成後、循環中に分泌される。ＡＮＧＰＴＬ３は、トリグリセリドの加水分解を触媒するリポタンパク質リパーゼのインヒビターとして、およびリポタンパク質リン脂質を加水分解する内皮リパーゼのインヒビターとして作用する。これらの酵素の阻害は、血漿中のトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、およびリン脂質レベルの増加を引き起こし得る。さらに、ＡＮＧＰＴＬ３の機能喪失突然変異によって、血漿中のトリグリセリドおよび低密度リポタンパク質（ＬＤＬ−Ｃ）が低レベルであることを特徴とする家族性低ベータリポタンパク質血症が起こる。ヒトでは、ＡＮＧＰＴＬ３の機能喪失突然変異はまた、アテローム性動脈硬化性心血管疾患のリスクの減少にも相関している。
ＡＮＧＰＴＬ３を標的とする有効な治療剤は、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、スタチン抵抗性高コレステロール血症、ならびに他の代謝関連障害および疾患などの心血管代謝疾患の処置（予防的処置を含む）において有益な影響を提供することができる。ある特定の二本鎖ＲＮＡに基づく化合物が、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害することができるとして同定されているが（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／１７７７８４、第ＷＯ２０１６／１６８２８６、および第ＷＯ２０１６／１５４１２７を参照されたい）、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以前に開示されておらず、公知でもなく、ＡＮＧＴＰＬ３遺伝子の発現の非常に強力かつ非常に効率的なＡＮＧＰＴＬ３特異的阻害を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１２／１７７７８４号
【特許文献２】国際公開第２０１６／１６８２８６号
【特許文献３】国際公開第２０１６／１５４１２７号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に阻害することができる新規ＡＮＧＰＴＬ３特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書において、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー、またはトリガーとも呼ばれる）、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤が必要である。さらに、特に、トリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇と関連する疾患の処置のために、新規ＡＮＧＰＴＬ３特異的ＲＮＡｉ剤を含む組成物が必要である。
【０００７】
一般に、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物、ならびにＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏでＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法を特徴とする。本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させるかまたは阻害し、それによって、対象、例えば、ヒトもしくは動物対象におけるＴＧレベルおよび／またはコレステロールレベルを低下させることができる。
【０００８】
記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、限定されるものではないが、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、スタチン抵抗性高コレステロール血症、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含む、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇と関連する症状および疾患の治療的処置（予防的および防止的処置を含む）のための方法において使用することができる。本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現を選択的に低下させることができ、それによって特に、対象におけるＴＧレベルおよび／またはコレステロールレベルの低下をもたらすことができる。本明細書に開示される方法は、皮下注射または静脈内投与などの、当業界で公知の任意の好適な方法を使用する、対象、例えば、ヒトまたは動物対象への１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の投与を含む。
【０００９】
一態様では、本開示は、ヒトＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を特徴とする。
【００１０】
また、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害することができるＲＮＡｉ剤を含むか、またはそれからなる組成物であって、ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含むか、またはそれからなり、組成物が少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、組成物も本明細書で記載される。開示されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数を含む本明細書に記載の組成物は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができる。１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を、ＴＧの上昇、コレステロールの上昇および／またはＡＮＧＰＴＬ３発現の増強と関連する症状および疾患の処置（予防的処置または阻害を含む）のために、ヒトまたは動物対象などの対象に投与することができる。
【００１１】
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）およびアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、または完全に相補的であってもよい。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖の長さは、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に１７〜２６ヌクレオチド長である。センスおよびアンチセンス鎖は、同じ長さであるか、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に２１〜２６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、独立に２１〜２４ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよび／またはアンチセンス鎖は、独立に１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ３を発現する細胞への送達の際に、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害する。
【００１２】
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチ配列（本明細書では「コアストレッチ」または「コア配列」とも呼ばれる）に対して少なくとも８５％の同一性を有する少なくとも１６個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは１７ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは１９ヌクレオチド長である。
【００１３】
本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチおよび対応するセンス鎖中の同じ数のヌクレオチドのコアストレッチと少なくとも８５％の相補性を有する少なくとも１６個の連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。
【００１４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表１に開示される配列のいずれかの配列を有するＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の部分を標的とする。
【００１５】
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の中に含まれ得るＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖の例を、表３および表４に提供する。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤二本鎖の例を、表５に提供する。本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖からなるか、またはその中に含まれている１９ヌクレオチドのコアストレッチ配列の例を、表２に提供する。
【００１６】
別の態様では、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、哺乳動物などの対象中の肝臓の細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで送達するための方法を特徴とする。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、当業界で公知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して標的細胞または組織に送達することができる。核酸送達法としては、限定されるものではないが、リポソームへの封入、イオントフォレシス、またはヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体接着性ミクロスフェア、タンパク質性ベクター、またはＤｙｎａｍｉｃ  Ｐｏｌｙｃｏｎｊｕｇａｔｅ（商標）（ＤＰＣ）などの他のビヒクルへの組込みが挙げられる（例えば、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５を参照されたい）。
【００１７】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド（すなわち、アシアロ糖タンパク質受容体に対して親和性を有する化合物を含むリガンド）などの標的化基に共有結合により連結することによって、または標的化基にコンジュゲートすることによって、標的細胞または組織に送達される。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトースまたはガラクトース誘導体クラスターを含む、からなる、またはから本質的になる。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ガラクトース誘導体Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されている。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体を含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体である。一部の実施形態では、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、受容体媒介エンドサイトーシスまたは他の手段のいずれかによって、肝臓の細胞、特に肝細胞により選択的に内在化される。ＲＮＡｉ剤を送達するのに有用な標的化基の例は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０および同第ＷＯ２０１７／１５６０１２に開示されており、それぞれの内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
標的化基を、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’または５’末端に連結することができる。一部の実施形態では、標的化基を、センス鎖の３’または５’末端に連結する。一部の実施形態では、標的化基を、センス鎖の５’末端に連結する。一部の実施形態では、標的化基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖上のヌクレオチドに内部的に連結する。一部の実施形態では、標的化基を、リンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結する。
【００１９】
リンカーを含むか、または含まない、標的化基を、表２、３、および４に開示されるセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端に連結することができる。標的化基を含むか、または含まない、リンカーを、表２、３、および４に開示されるセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端に結合することができる。
【００２０】
一部の実施形態では、表５に開示される二本鎖構造を有する１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が本明細書に記載される。
【００２１】
さらなる態様では、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２、第３の、など）治療剤と組み合わせた、１つまたは複数の記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物が本明細書に記載される。一部の実施形態では、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２、第３の、など）治療剤と組み合わせた、１つまたは複数の記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、薬学的に許容される担体または希釈剤中で製剤化することができる。一部の実施形態では、これらの組成物を、哺乳動物などの対象に投与することができる。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００２２】
一部の実施形態では、異なるヌクレオチド配列を有する少なくとも２つのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の組合せまたはカクテルを含む組成物が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれ別々に、かつ独立に、標的化基に連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アシアロ糖タンパク質受容体を標的とする１つまたは複数の部分を含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。一部の実施形態では、２つまたはそれより多い異なるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドを含むか、またはそれからなる標的化基にそれぞれ連結されている。
【００２３】
別の態様では、本開示は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、対象または対象の細胞に、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害することができるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の量を投与するステップを含み、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が表２または表３のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの配列を含む、方法を特徴とする。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、対象または細胞に、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害することができるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の量を投与するステップを含み、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖が表２または４のセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれか１つの配列を含む、方法が本明細書に開示される。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。
【００２４】
さらなる態様では、本開示は、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（防止的または予防的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２または３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法を特徴とする。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２または４中の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に記載される。また、そのような方法における使用のための組成物も本明細書に記載される。
【００２５】
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される病的状態（例えば、状態または疾患）を有する、または病的状態を発症するリスクがあるヒト対象を処置する方法であって、対象に、治療有効量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および／またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤含有組成物を投与するステップを含む方法も記載される。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および／またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤含有組成物によって対象を処置する方法は、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる（すなわち、第２の、第３の、など）治療剤または処置を投与する１つまたは複数のステップと組み合わせることができる。さらなる治療剤は、別のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子内の異なる配列を標的とするＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤）であってもよい。さらなる治療剤は、低分子薬物、抗体、抗体断片、および／またはアプタマーであってもよい。一部の実施形態では、１つまたは複数のさらなる治療剤は、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、またはシンバスタチンなどのスタチンである。
【００２６】
一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせる。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤およびさらなる治療剤を、単一の組成物で投与することができ、またはそれらを別々に投与することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数のさらなる治療剤は、ＲＮＡｉ剤とは別々の投与剤形で別々に投与される（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、皮下注射によって投与されるが、処置の投薬レジメンの方法に関係するさらなる治療剤は経口投与される）。一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に皮下注射を介して投与され、１つまたは複数の必要に応じたさらなる治療剤は経口投与され、それらは共に、ＴＧおよび／またはコレステロールレベルの上昇と関連する疾患および状態の処置レジメンを提供する。一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする対象に、皮下注射を介して投与され、１つまたは複数の必要に応じたさらなる治療剤は、別の皮下注射を介して投与される。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および１つまたは複数のさらなる治療剤を、単一の投与剤形に組み合わせる（例えば、皮下注射のための単一の組成物に製剤化された「カクテル」）。１つまたは複数のさらなる治療剤を含むか、または含まない、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、１つまたは複数の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を形成させることができる。
【００２７】
一部の実施形態では、細胞または対象におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞または対象に、表４中の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖および表３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
【００２８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓の細胞、特に肝細胞に送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。
【００２９】
一部の実施形態では、細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表５に記載される二本鎖の二本鎖構造を有する１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
【００３０】
一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患、障害、または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表１中の配列を有するＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含む治療有効量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２または３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、およびアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２または４中の配列のいずれかを含むセンス鎖を含む治療有効量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、ＴＧレベルの上昇および／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または症状の処置（予防的または防止的処置を含む）の方法であって、それを必要とする対象に、表２または４中の配列のいずれかを含むセンス鎖、およびセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２または３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含む治療有効量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
【００３１】
一部の実施形態では、細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための方法であって、細胞に、表１中の配列を有するＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含むＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、細胞に、表２または３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、およびアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２または４中の配列のいずれかを含むセンス鎖を含むＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害する方法であって、表２または４中の配列のいずれかを含むセンス鎖、およびセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である、表２または３中の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与するステップを含む方法が、本明細書に開示される。
【００３２】
一部の実施形態では、細胞におけるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、方法が、表５に記載の二本鎖の二本鎖構造を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与するステップを含む、組成物が、本明細書に開示される。
【００３３】
一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートまたは連結されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドに連結されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。
【００３４】
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の特定の位置（配列番号１）を標的とするように設計される。本明細書で定義される場合、アンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基を、遺伝子と塩基対形成する場合に遺伝子上の位置から１９ヌクレオチド下流にある（３’末端に向かって）位置と整列させた場合、遺伝子上の所与の位置のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とするように設計される。例えば、本明細書の表１および２に例示されるように、３０４位のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とするように設計されるアンチセンス鎖配列は、遺伝子と塩基対形成する場合、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基が、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の３２２位と整列することが必要である。
【００３５】
本明細書で提供される場合、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）の核酸塩基が遺伝子と相補的であることを必要としないが、但し、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の相補性）が存在することを条件とする。例えば、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の３０４位を標的とするように設計される本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤については、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は、遺伝子の３２２位と整列しなければならない；しかしながら、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の３２２位と相補的であってもよいが、相補的である必要はなく、但し、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の相補性）が存在することを条件とする。特に、本明細書に開示される様々な例によって示されるように、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖による遺伝子の特定の結合部位（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が３０４位、９２１位、９２２位、または他の位置のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とするように設計されるかどうか）は、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤によって達成される阻害レベルにとって重要な因子である。
【００３６】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の使用は、ＴＧおよび／もしくはコレステロールレベルの上昇、ならびに／またはＡＮＧＰＴＬ３発現の増強もしくは上昇と関連する疾患／障害の治療的（予防的を含む）処置のための方法を提供する。記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉を媒介し、ＡＮＧＰＴＬ３の産生にとって必要な１つまたは複数の遺伝子の発現を阻害する。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤はまた、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、ならびに他の代謝関連障害および疾患を含む様々な疾患または障害を処置または防止するために使用することができる。さらに、肝臓の細胞への、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの送達のための組成物が記載される。
【００３７】
１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、局部または全身処置が望まれるかどうかに応じて、いくつかの方法で投与することができる。投与は、限定されるものではないが、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、真皮下（例えば、埋込みデバイスによる）、および実質内投与であってもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射によって投与される。
【００３８】
一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、標的化基にコンジュゲートまたは連結されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドである。一部の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏで肝臓の細胞にＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドに連結されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物が記載される。
【００３９】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれが本明細書において表６で定義される、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つまたは複数の標的化基を含み得る。
【００４０】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれが本明細書において表６で定義される、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有するセンス鎖の５’末端で１つの標的化基を含む。
【００４１】
記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤および／またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、ＴＧおよび／またはコレステロールレベルの上昇によって引き起こされる疾患または状態の治療的処置のための方法において使用することができる。そのような方法は、対象、例えばヒトまたは動物対象への、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の投与を含む。
【００４２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号３は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００４３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図５Ａ〜５Ｋを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００４４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図５Ａ〜５Ｋを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００４５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号５は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００４６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者であれば明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図５Ａ〜５Ｋを参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００４７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号８は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００４８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００４９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１０は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００５０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００５１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１２は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００５２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００５３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００５４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１４は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００５５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）と１個以下のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００５６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１７）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１７）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００５７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１９）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１９）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、（Ａ２Ｎ）が２−アミノアデニンヌクレオチドを表し、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００５８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２１）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖であって、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであるアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２１）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖であって、（Ａ２Ｎ）が２−アミノアデニンヌクレオチドを表し、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであるセンス鎖を含む。
【００５９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２４）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２４）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００６０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２６）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２６）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００６１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２８）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２８）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００６２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号３０）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号３０）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００６３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＧＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号３２）と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドであり、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＧＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号３２）と１個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【００６４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００６５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１８）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表し（表６を参照されたい）；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１８）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００６６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００６７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａ＿２ＮＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表し（表６を参照されたい）；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｕｃａａｃａ＿２ＮＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２０）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００６８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃＵｆｃＡｆａＣｆａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表し（表６を参照されたい）；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃＵｆｃＡｆａＣｆａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２２）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００６９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２５）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２７）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｇｕｕｇｃｕａＵｆＧｆＵｆｕａｇａｃｇａｕｇｕ（配列番号３１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖、および改変ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｃｃｕａａａａＧｆＧｆＧｆａｃａｇｕａｕｕｃｕ（配列番号３１）からなる、から本質的になる、またはそれを含むセンス鎖を含み、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結された標的化リガンドを含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖とセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
【００７６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００７７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含み、それぞれのアンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の１〜２１位に位置する。
【００７８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１７）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡ  ＵＣＡＧＵＡ（配列番号１９）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２１）（ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）およびＡＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２４）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）およびＧＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）およびＡＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２８）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）およびＵＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号３０）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）およびＧＧＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号３２）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
【００７９】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１７）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１９）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＣ（配列番号３）およびＧＣＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２１）（ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡＧＵ（配列番号６）およびＡＣＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号２４）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＣ（配列番号８）およびＧＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２６）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＧＵ（配列番号１０）およびＡＣＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号２８）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧＡ（配列番号１２）およびＵＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号３０）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡＣＣ（配列番号１５）およびＧＧＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号３２）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含み、ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００８０】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）；
ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）；
ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）；
ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）；
ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖上のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
【００８１】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）；
ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）；
ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）；
ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）；
ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）
の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖を含み、ここで、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；センス鎖のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方のヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり；センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み；センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み；標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００８２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１８）；
ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａ＿２ＮＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２０）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃＵｆｃＡｆａＣｆａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２２）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）および
ａｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２３）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）および
ｇｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２５）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）および
ａｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２７）；
ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）および
ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）；
ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）および
ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）；または
ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）および
ｇｇｕｕｇｃｕａＵｆＧｆＵｆｕａｇａｃｇａｕｇｕ（配列番号３１）
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表し（表６を参照されたい）；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つと０または１個のヌクレオチドが異なる改変ヌクレオチド配列からなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【００８３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１８）；
ｕｓＡｆｓｃＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａｓＧｆｓｃ（配列番号４）および
ｇｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号１６）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃｕｃａａｃａ＿２ＮＵｆａ＿２ＮＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２０）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｃ（配列番号２）および
ｇｃＵｆｃＡｆａＣｆａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２２）；
ｕｓＡｆｓｃｓＵｆｇＡｆｕＣｆａＡｆａＵｆａＵｆｇＵｆｕＧｆａＧｆｓｕ（配列番号５）および
ａｃｕｃａａｃａＵｆＡｆＵｆｕｕｇａｕｃａｇｕａ（配列番号２３）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇｇｓｃ（配列番号７）および
ｇｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２５）；
ｕｓＵｆｓｕｓＧｆａＡｆｕＵｆａＡｆｕＧｆｕＣｆｃＡｆｕＧｆｇＧｆｓｕ（配列番号９）および
ａｃｃｃａｕｇｇＡｆＣｆＡｆｕｕａａｕｕｃａａａ（配列番号２７）；
ｕｓＧｆｓｕｓｕｇａａｕｕａａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１１）および
ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）；
ｕｓＧｆｓｕｓＵｆｇＡｆａＵｆｕＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆａＵｆｇＧｆｓａ（配列番号１３）および
ｕｃｃａｕｇｇａＣｆＡｆＵｆｕａａｕｕｃａａｃａ（配列番号２９）；または
ａｓＣｆｓａｓＵｆｃＧｆｕｃｕａａＣｆａＵｆａＧｆｃＡｆａＣｆｓｃ（配列番号１４）および
ｇｇｕｕｇｃｕａＵｆＧｆＵｆｕａｇａｃｇａｕｇｕ（配列番号３１）
（ここで、ａ、ｃ、ｇおよびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシンを表し（表６を参照されたい）；ｓは、ホスホロチオエート結合を表す）の１つからなる、から本質的になる、またはそれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ここで、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端および５’末端で反転脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合により連結した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００８４】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧ（配列番号５５）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧ（配列番号６０）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡ（配列番号６４）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含む。
【００８５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧ（配列番号５５）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧ（配列番号６０）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡ（配列番号６４）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
【００８６】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧ（配列番号５５）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧ（配列番号６０）；または
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡ（配列番号６４）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドであり、配列番号５０、配列番号５５、配列番号６０、または配列番号６４はそれぞれ、アンチセンス鎖のヌクレオチド１〜１９位（５’→３’）に位置する。
【００８７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれが、（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３０）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３１）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３２）（ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧ（配列番号５５）およびＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号１４５）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧ（配列番号６０）およびＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号１５０）；
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡ（配列番号６４）およびＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号１５４）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【００８８】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれが、（５’→３’）：
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣＡＵＡＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３０）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣＡＵ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３１）（ここで、（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＡＣＵＧＡＵＣＡＡＡＵＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号５０）およびＵＣＡＡＣ（Ａ２Ｎ）Ｕ（Ａ２Ｎ）ＵＵＵＧＡＵＣＡＧＵＡ（配列番号１３２）（ここで（Ａ２Ｎ）は、２−アミノアデニンヌクレオチドを表す）；
ＵＧＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧ（配列番号５５）およびＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＣＡ（配列番号１４５）；
ＵＵＵＧＡＡＵＵＡＡＵＧＵＣＣＡＵＧＧ（配列番号６０）およびＣＣＡＵＧＧＡＣＡＵＵＡＡＵＵＣＡＡＡ（配列番号１５０）；
ＡＣＡＵＣＧＵＣＵＡＡＣＡＵＡＧＣＡＡ（配列番号６４）およびＵＵＧＣＵＡＵＧＵＵＡＧＡＣＧＡＵＧＵ（配列番号１５４）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全部または実質的に全部は改変ヌクレオチドである。
【００８９】
一部の実施形態では、１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載の組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、予め充填された注射筒、またはバイアル中に包装される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、非経口投与される。
【００９０】
本明細書で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、それぞれ独立に改変されていてもよいか、または改変されていなくてもよい、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味する。
【００９１】
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉ剤」（「ＲＮＡｉトリガー」とも呼ばれる）は、配列特異的様式で標的ｍＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物の翻訳物を分解する、または阻害することができる（例えば、適切な条件下で分解する、または阻害する）ＲＮＡまたはＲＮＡ様（例えば、化学的に改変されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含有する組成物を意味する。本明細書で使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機構（すなわち、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体もしくはＲＩＳＣ）との相互作用によってＲＮＡ干渉を誘導すること）によって、または任意の代替的な機構もしくは経路によって動作することができる。ＲＮＡｉ剤は、本明細書でその用語が使用される場合、主にＲＮＡ干渉機構によって動作すると考えられるが、開示されるＲＮＡｉ剤は、いかなる特定の経路または作用機構によっても束縛されず、それに限定もされない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、限定されるものではないが、短い（または小さい）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびダイサー基質を含む。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的化されるｍＲＮＡ（すなわち、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ）と少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は、１つもしくは複数の改変ヌクレオチドおよび／または１つもしくは複数の非ホスホジエステル結合を含んでもよい。
【００９２】
本明細書で使用される場合、所与の遺伝子の発現に言及する場合の用語「サイレンシングする」、「減少させる」、「阻害する」、「下方調節する」、または「ノックダウンする」とは、遺伝子が転写される細胞、細胞群、組織、臓器、または対象中で、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベルまたはｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質サブユニットのレベルにより測定された場合、遺伝子の発現が、細胞、細胞群、組織、臓器、または対象が本明細書に記載のＲＮＡｉ剤で処置される場合に、そのように処置されていない第２の細胞、細胞群、組織、臓器、または対象と比較して減少することを意味する。
【００９３】
本明細書で使用される場合、用語「配列」および「ヌクレオチド配列」とは、標準的な命名法を使用して文字の連続と共に記載される、核酸塩基またはヌクレオチドの連続または順序を意味する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、「塩基」、「ヌクレオチド塩基」または「核酸塩基」は、ヌクレオチドの成分である複素環ピリミジンまたはプリン化合物であり、一次プリン塩基アデニンおよびグアニン、ならびに一次ピリミジン塩基シトシン、チミン、およびウラシルを含む。核酸塩基は、限定されるものではないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基を含むようにさらに改変することができる（例えば、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，  Ｐ．  ｅｄ．  Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，  ２００８を参照されたい）。そのような改変核酸塩基（改変核酸塩基を含むホスホロアミダイト化合物を含む）の合成は、当業界で公知である。
【００９５】
本明細書で使用される場合、また、別途指摘しない限り、第２の核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖または一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）との関連で第１の核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤センス鎖または標的ｍＲＮＡ）を記述するために使用される場合の用語「相補的」とは、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと、ある特定の標準的な条件下でハイブリダイズし（哺乳動物の生理学的条件（またはｉｎ  ｖｉｔｒｏの類似する条件）下で塩基対水素結合を形成し）、二本鎖または二重らせん構造を形成する能力を意味する。相補配列は、ワトソン−クリック塩基対または非ワトソン−クリック塩基対を含み、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が満たされる程度で、天然または改変ヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣体を含む。配列同一性または相補性は、改変とは無関係である。例えば、本明細書で定義される、ａおよびＡｆは、同一性または相補性を決定する目的では、Ｕ（またはＴ）と相補的であり、Ａと同一である。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「完璧に相補的」または「完全に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部（１００％）が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「部分的に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部ではないが、少なくとも７０％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「実質的に相補的」とは、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全部ではないが、少なくとも８５％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１または第２のヌクレオチド配列の全部または一部を含んでもよい。
【００９９】
本明細書で使用される場合、用語「相補的」、「完全に相補的」、「部分的に相補的」および「実質的に相補的」は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの配列との間の核酸塩基またはヌクレオチドの一致に関して使用される。
【０１００】
本明細書で使用される場合、核酸配列に適用される用語「実質的に同一」または「実質的な同一性」は、ヌクレオチド配列（またはヌクレオチド配列の一部）が、参照配列と比較して、少なくとも約８５％の配列同一性またはそれより高い、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の同一性を有することを意味する。配列同一性のパーセンテージは、２つの最適に整列された配列を、比較ウィンドウにわたって比較することによって決定される。パーセンテージは、同じ型の核酸塩基が両配列内に存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を、比較ウィンドウ中の位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。本明細書に開示される発明は、本明細書に開示されるものと実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置」などは、対象における疾患の１つまたは複数の症状の数、重症度、および／または頻度からの緩和またはその軽減を提供するために取られる方法またはステップを意味する。本明細書で使用される場合、「処置する」および「処置」は、防止的処置、管理、予防的処置、ならびに／または対象における疾患の１つもしくは複数の症状の数、重症度、および／もしくは頻度の阻害もしくは減少を含んでもよい。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、ＲＮＡｉ剤に言及する場合の語句「細胞中に導入すること」は、ＲＮＡｉ剤を細胞中に機能的に送達することを意味する。語句「機能的送達」は、ＲＮＡｉ剤が、予想される生物活性、例えば、遺伝子発現の配列特異的阻害を有することを可能とする様式で、ＲＮＡｉ剤を細胞中に送達することを意味する。
【０１０３】
別途記述しない限り、本明細書で使用される記号
【化１】
2020534268.tif 000003
の使用は、任意の基または複数の基を、本明細書に記載の発明の範囲に従ってそれに連結することができることを意味する。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、用語「異性体」とは、同一の分子式を有するが、性質またはその原子の結合の配列または空間中のその原子の配置が異なる化合物を指す。空間中のその原子の配置が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像ではない立体異性体は、「ジアステレオ異性体」と呼ばれ、重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は、「エナンチオマー」または時には光学異性体と呼ばれる。４個の非同一の置換基に結合した炭素原子は、「キラル中心」と呼ばれる。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、特定のコンフォメーションを有するものとして構造中で具体的に同定されない限り、非対称中心が存在し、かくして、エナンチオマー、ジアステレオマー、または他の立体異性配置を生じるそれぞれの構造について、本明細書に開示されるそれぞれの構造は、その光学的に純粋な形態およびラセミ形態を含む、全てのそのような可能な異性体を表すことが意図される。例えば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物および単一の立体異性体を包含することが意図される。
【０１０６】
本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、語句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、特許請求の範囲で特定されない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、語句「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、特許請求の範囲を、特定された材料またはステップおよび特許請求された発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響しないものに限定する。
【０１０７】
当業者であれば、本明細書に開示される化合物および組成物が、その化合物または組成物が置かれる環境に応じて、プロトン化または脱プロトン化された状態のある特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）を有してもよいことを容易に理解および認識するであろう。したがって、本明細書で使用される場合、本明細書に開示される構造は、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどのある特定の官能基がプロトン化または脱プロトン化されていてもよいことを想定する。本明細書の開示は、当業者であれば容易に理解するように、開示される化合物および組成物を、環境（ｐＨなど）に基づくそれらのプロトン化の状態に関係なく包含することが意図される。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、２つの化合物または分子の間の接続に言及する場合の用語「連結された」または「コンジュゲートされた」は、２つの化合物または分子が共有結合によって繋がれていることを意味する。記述しない限り、本明細書で使用される用語「連結された」および「コンジュゲートされた」は、任意の介在する原子または原子群を用いる、または用いない、第１の化合物と第２の化合物との間の接続を指してもよい。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、語句「限定されるものではないが、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」を意味するように本明細書で使用され、それと互換的に使用される。用語「または」は、文脈が別途明確に示さない限り、用語「および／または」を意味するように本明細書で使用され、それと互換的に使用される。
【０１１０】
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似するか、または等価である方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料を以下で説明する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定を意図するものではない。
【０１１１】
本発明の他の目的、特徴、態様、および利点は、以下の詳細な説明、添付の図面、および特許請求の範囲から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１Ａ】図１Ａ〜１Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【図１Ｃ】図１Ａ〜１Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【０１１３】
【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５４８８の化学構造表示である。
【０１１４】
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図３Ｃ】図３Ａ〜３Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図３Ｄ】図３Ａ〜３Ｄは、ナトリウム塩型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【０１１５】
【図４Ａ】図４Ａ〜４Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４Ｄは、遊離の酸型で示される、センス鎖の５’末端で（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤  ＡＤ０５７７５の化学構造表示である。
【０１１６】
【図５Ａ】図５Ａは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ａは、配列番号２および３００を開示する。図３Ａ〜３Ｂにおいては、以下の省略形が使用される：ａ、ｃ、ｇおよびｕは、２’−Ｏ−メチル改変ヌクレオチドであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、２’−フルオロ改変ヌクレオチドであり；ｐは、ホスホジエステル結合であり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；ｉｎｖＡｂは、反転脱塩基残基であり；ａ＿２Ｎは、２’−Ｏ−メチル−２−アミノアデノシン改変ヌクレオチドであり（表６を参照されたい）；（ＮＡＧ３７）ｓは、表６に示す構造を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドである。
【０１１７】
【図５Ｂ】図５Ｂは、（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５７７５（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｂは、配列番号２および３３４を開示する。
【０１１８】
【図５Ｃ】図５Ｃは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５７９１（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｃは、配列番号４および３００を開示する。
【０１１９】
【図５Ｄ】図５Ｄは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５７７７（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｄは、配列番号２および３３６を開示する。
【０１２０】
【図５Ｅ】図５Ｅは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５７４３（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｅは、配列番号２および３２６を開示する。
【０１２１】
【図５Ｆ】図５Ｆは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８７（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｆは、配列番号５および２９９を開示する。
【０１２２】
【図５Ｇ】図５Ｇは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０７（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｇは、配列番号７および２７８を開示する。
【０１２３】
【図５Ｈ】図５Ｈは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４１８（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｈは、配列番号９および２９２を開示する。
【０１２４】
【図５Ｉ】図５Ｉは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５５７７（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｉは、配列番号１１および２７９を開示する。
【０１２５】
【図５Ｊ】図５Ｊは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０８（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｊは、配列番号１３および２７９を開示する。
【０１２６】
【図５Ｋ】図５Ｋは、（ＮＡＧ３７）ｓ構造（表６を参照されたい）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８４０（表３〜５を参照されたい）の改変されたセンスおよびアンチセンス鎖の模式図である。図５Ｋは、配列番号１５および３５７を開示する。
【発明を実施するための形態】
【０１２７】
詳細な説明
ＲＮＡｉ剤
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書ではＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉトリガーと呼ばれる）が本明細書に記載される。それぞれのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチド長であってもよい。センスおよびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１７〜２７ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１７〜２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、それぞれ２１〜２６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ２１〜２４ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は、約１９ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は、約２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は、約２１ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は、約２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖は２３ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、それぞれ２１ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、それぞれ独立に１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの二本鎖の長さを有する。
【０１２８】
一部の実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の完璧な、実質的な、または部分的な相補性の領域は、１６〜２６（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６）ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖の５’末端に、またはその近傍に存在する（例えば、この領域は、完璧に、実質的に、または部分的に相補的ではない０、１、２、３、または４個のヌクレオチドによって、アンチセンス鎖の５’末端から分離していてもよい）。
【０１２９】
センス鎖およびアンチセンス鎖はそれぞれ、１６〜２３ヌクレオチド長であるコアストレッチ（本明細書では「コア配列」または「コアストレッチ配列」とも呼ばれる）を含有する。アンチセンス鎖コアストレッチは、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ標的中に存在するヌクレオチド配列（例えば、標的配列と呼ばれることもある）と１００％（完璧に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖中のコアストレッチ配列と１００％（完璧に）相補的であるか、または少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、かくして、センス鎖コアストレッチ配列は、典型的には、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ標的中に存在するヌクレオチド配列（標的配列）と完璧に同一であるか、または少なくとも約８５％同一である。センス鎖コアストレッチ配列は、対応するアンチセンスコア配列と同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。
【０１３０】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を形成する際に使用されるヌクレオチド配列の例を、表２、３および４に提供する。表２、３および４中のセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を含むＲＮＡｉ剤二本鎖の例を、表５に示す。
【０１３１】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、アニーリングして二本鎖を形成する。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、または完全に相補的であってもよい。相補的二本鎖領域内で、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンスコアストレッチ配列と少なくとも８５％相補的であるか、または１００％相補的である。一部の実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチドの配列と少なくとも８５％または１００％相補的である、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの配列を含有する（すなわち、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンスコアストレッチ配列は、少なくとも８５％塩基対形成する、または１００％塩基対形成する少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの領域を有する）。
【０１３２】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
【０１３３】
センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、必要に応じて、また、独立に、コアストレッチ配列の３’末端、５’末端、または３’と５’末端の両方に、追加の１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチド（伸長）を含有してもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ中の対応する配列と相補的であっても、なくてもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ中の対応する配列と同一であっても、なくてもよい。存在する場合、アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、対応するセンス鎖の追加のヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。
【０１３４】
本明細書で使用される場合、伸長は、センス鎖コアストレッチ配列および／またはアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５’および／または３’末端に１、２、３、４、５、または６個のヌクレオチドを含む。センス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖中の、コアストレッチ配列ヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。逆に、アンチセンス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖中の、コアストレッチヌクレオチドまたは伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドと相補的であっても、なくてもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも、３’および５’伸長を含有する。一部の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対を形成する。他の実施形態では、一方の鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、他方の鎖の１つまたは複数の５’伸長ヌクレオチドと塩基対を形成しない。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、３’伸長を有するアンチセンス鎖および５’伸長を有するセンス鎖を有する。一部の実施形態では、伸長ヌクレオチドは、対形成せず、突出部を形成する。本明細書で使用される場合、「突出部」とは、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤のハイブリダイズした、または二本鎖を形成した部分の一部を形成しないセンス鎖またはアンチセンス鎖の末端に位置する１つまたは複数の対形成しないヌクレオチドのストレッチを指す。
【０１３５】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、または３ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、ウラシルもしくはチミジンヌクレオチドまたは対応するＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチドを含む。
【０１３６】
一部の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端は、脱塩基残基（Ａｂ）を含み、これは「脱塩基部位」または「脱塩基ヌクレオチド」とも呼ぶことができる。脱塩基残基（Ａｂ）は、糖部分の１’位の核酸塩基を欠くヌクレオチドまたはヌクレオシドである（例えば、米国特許第５，９９８，２０３号を参照されたい）。一部の実施形態では、ＡｂまたはＡｂＡｂを、アンチセンス鎖の３’末端に付加することができる。
【０１３７】
一部の実施形態では、センス鎖またはアンチセンス鎖は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の鎖の１つまたは複数の末端に組み込むことができる非ヌクレオチド化合物または他の部分であり、一部の例では、例えば、エキソヌクレアーゼ分解に対する保護などのある特定の有益な特性を有するＲＮＡｉ剤を提供することができる、「末端キャップ」を含んでもよい。一部の実施形態では、反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）は、末端のキャップに付加される（表６を参照されたい）。（例えば、Ｆ．  Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２００３，  ３１（１１），  ２７０５−１６を参照されたい）。末端キャップは、当業界で一般に公知であり、例えば、反転脱塩基残基、および末端Ｃ３、Ｃ６、またはＣ１２基などの炭素鎖を含む。一部の実施形態では、末端キャップは、センス鎖の５’末端、３’末端、または５’と３’末端の両方に存在する。
【０１３８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、または５ヌクレオチド長の３’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、アデノシン、ウラシル、またはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、またはＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、３’センス鎖伸長は、限定されるものではないが、以下の配列：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴ（それぞれ５’から３’に向かって列挙される）の１つを含むか、またはそれからなる。
【０１３９】
一部の実施形態では、センス鎖の３’末端は、追加の脱塩基残基または反転脱塩基末端キャップを含んでもよい。一部の実施形態では、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、またはＡｂを、センス鎖の３’末端に付加する。
【０１４０】
一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の３’末端に付加する。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）は、センス鎖の５’末端に付加される。部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位を、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または複数の末端での、またはその近傍での１つまたは複数の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位の含有は、ＲＮＡｉ剤の活性または他の望ましい特性の増強を可能にする。
【０１４１】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の５’伸長を有するセンス鎖を含む。一部の実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つまたは複数は、ウラシルまたはアデノシンヌクレオチドまたはＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、センス鎖５’伸長は、限定されるものではないが、以下の配列：ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５’から３’に向かって列挙される）の１つである。センス鎖は、３’伸長および／または５’伸長を有してもよい。
【０１４２】
一部の実施形態では、センス鎖の５’末端は、１つまたは複数の追加の脱塩基残基（例えば、（Ａｂ）または（ＡｂＡｂ））を含んでもよい。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の５’末端に付加する。一部の実施形態では、１つまたは複数の反転脱塩基残基を、標的化リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入することができる。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または複数の末端での、またはその近傍での１つまたは複数の反転脱塩基残基の含有は、ＲＮＡｉ剤の活性または他の望ましい特性の増強を可能にすることができる。一部の実施形態では、脱塩基（デオキシリボース）残基を、リビトール（脱塩基リボース）残基と置き換えることができる。
【０１４３】
一部の実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の３’末端またはアンチセンス鎖配列の３’末端は、反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ（表６を参照されたい））を含んでもよい。
【０１４４】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を形成する際に使用される配列の例を、表２、３および４に提供する。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または３中の配列のいずれかの配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３中の改変配列のいずれか１つを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または３中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１５、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、または２〜２４の配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または４中の配列のいずれかの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または４中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、１〜２２、１〜２３、１〜２４、１〜２５、１〜２６、２〜１９、２〜２０、２〜２１、２〜２２、２〜２３、２〜２４、３〜２０、３〜２１、３〜２２、３〜２３、３〜２４、４〜２１、４〜２２、４〜２３、４〜２４、５〜２２、５〜２３または５〜２４の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
【０１４５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含有する。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドを含有する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両方の末端は、平滑末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、平滑末端ではない。本明細書で使用される場合、「平滑末端」とは、２つのアニーリングした鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補的塩基対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。
【０１４６】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、フレイド末端（ｆｒａｙｅｄ  ｅｎｄ）を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、フレイド末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両方の末端は、フレイド末端を形成する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も、フレイド末端ではない。本明細書で使用される場合、フレイド末端とは、２つのアニーリングした鎖の末端ヌクレオチドが対を形成する（すなわち、突出部を形成しない）が、相補的ではない（すなわち、非相補的対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤の一方の鎖の末端の１つまたは複数の対形成しないヌクレオチドは、突出部を形成する。対形成しないヌクレオチドは、センス鎖またはアンチセンス鎖にあり、３’または５’突出部を作出してもよい。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端とフレイド末端、平滑末端と５’突出末端、平滑末端と３’突出末端、フレイド末端と５’突出末端、フレイド末端と３’突出末端、２つの５’突出末端、２つの３’突出末端、５’突出末端と３’突出末端、２つのフレイド末端、または２つの平滑末端を含有する。典型的には、存在する場合、突出部は、センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置する。
【０１４７】
改変ヌクレオチドは、様々なポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物において使用される場合、細胞中の化合物の血清安定性を同時に増加させながら、これらの化合物の活性を保持することができ、また、ポリヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド構築物の投与時にヒトにおけるインターフェロン活性を活性化する可能性を最小化することもできる。
【０１４８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、ナトリウム塩として調製される。当業界で周知であるそのような形態は、本明細書に開示される発明の範囲内にある。
【０１４９】
改変ヌクレオチド
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の改変ヌクレオチドを含有する。本明細書で使用される場合、「改変ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。一部の実施形態では、ヌクレオチドの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）が改変ヌクレオチドである。本明細書で使用される場合、改変ヌクレオチドは、限定されるものではないが、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、脱塩基ヌクレオチド（本明細書ではＡｂと表される）、２’−改変ヌクレオチド、３’−３’結合（反転）ヌクレオチド（本明細書ではｉｎｖｄＮ、ｉｎｖＮ、ｉｎｖｎと表される）、改変核酸塩基を含むヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基アナログ、本明細書ではＮＵＮＡまたはＮＵＮＡと表される）、ロックドヌクレオチド（本明細書ではＮＬＮＡまたはＮＬＮＡと表される）、３’−Ｏ−メトキシ（２’ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド（本明細書では３’−ＯＭｅｎと表される）、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド（本明細書ではＮｆＡＮＡまたはＮｆＡＮＡと表される）、５’−Ｍｅ、２’−フルオロヌクレオチド（本明細書では５Ｍｅ−Ｎｆと表される）、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド（本明細書ではｖｐｄＮと表される）、ビニルホスホン酸含有ヌクレオチド、およびシクロプロピルホスホン酸含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）を含んでもよい。２’−改変ヌクレオチド（すなわち、５員糖環の２’位にヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）としては、限定されるものではないが、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド（本明細書では、ヌクレオチド配列中で小文字の「ｎ」と表される）、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド（本明細書では、２’−フルオロヌクレオチドとも呼ばれ、本明細書ではＮｆと表される）、２’−デオキシヌクレオチド（本明細書ではｄＮと表される）、２’−メトキシエチル（２’−Ｏ−２−メトキシルエチル）ヌクレオチド（本明細書では２’−ＭＯＥとも呼ばれ、本明細書ではＮＭと表される）、２’−アミノヌクレオチド、および２’−アルキルヌクレオチドが挙げられる。所与の化合物中の全ての位置が均一に改変される必要はない。逆に、１つより多い改変を、単一のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤に、またはさらにはその単一のヌクレオチドに組み込むことができる。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を、当業界で公知の方法によって合成および／または改変することができる。あるヌクレオチドでの改変は、別のヌクレオチドでの改変とは無関係である。
【０１５０】
改変核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、または５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−アルキル（例えば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、または６−ｎ−ブチル）誘導体、アデニンおよびグアニンの２−アルキル（例えば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、または２−ｎ−ブチル）および他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ（例えば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、ならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、ならびに３−デアザアデニンなどの、合成および天然の核酸塩基を含む。
【０１５１】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの全部または実質的に全部が、改変ヌクレオチドである。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、リボヌクレオチド（すなわち、非改変）であるセンス鎖とアンチセンス鎖の両方において４個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１、２、３または４個）ヌクレオチドを有するＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるセンス鎖は、非改変リボヌクレオチドであるセンス鎖において２個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１または２個）ヌクレオチドを有するセンス鎖である。本明細書で使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全部が改変ヌクレオチドであるアンチセンス鎖は、非改変リボヌクレオチドであるセンス鎖において２個の、またはそれより少ない（すなわち、０、１または２個）ヌクレオチドを有するアンチセンス鎖である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、非改変リボヌクレオチドである。
【０１５２】
改変ヌクレオシド間結合
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の１つまたは複数のヌクレオチドは、非標準的な結合または骨格（すなわち、改変ヌクレオシド間結合または改変骨格）によって連結されている。改変ヌクレオシド間結合または骨格としては、限定されるものではないが、ホスホロチオエート基（本明細書では、小文字の「ｓ」と表される）、キラルホスホロチオエート、チオホスホン酸、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、アルキルホスホン酸（例えば、メチルホスホン酸または３’−アルキレンホスホン酸）、キラルホスホン酸、ホスフィン酸、ホスホロアミデート（例えば、３’−アミノホスホロアミデート、アミノアルキルホスホロアミデート、またはチオノホスホロアミデート）、チオノアルキル−ホスホン酸、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常の３’−５’結合を有するボラノリン酸、ボラノリン酸の２’−５’結合アナログ、またはヌクレオシド単位の隣接する対が３’−５’から５’−３’に、または２’−５’から５’−２’に連結された反転極性を有するボラノリン酸が挙げられる。一部の実施形態では、改変ヌクレオシド間結合または骨格は、リン原子を欠く。リン原子を欠く改変ヌクレオシド間結合としては、限定されるものではないが、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、または１つもしくは複数の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式糖間結合が挙げられる。一部の実施形態では、改変ヌクレオシド間骨格としては、限定されるものではないが、シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホン酸およびスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分を有する他の骨格が挙げられる。
【０１５３】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、またはセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも独立に、１、２、３、４、５、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含有してもよい。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよく、またはセンス鎖とアンチセンス鎖は両方とも独立に、１、２、３、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含有してもよい。
【０１５４】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、少なくとも２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の３’末端から１〜３位のヌクレオチド間にある。一部の実施形態では、１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の５’末端にあり、別のホスホロチオエート結合は、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合が、センス鎖の５’末端に位置し、別のホスホロチオエート結合が、センス鎖の３’末端にある。一部の実施形態では、センス鎖は、ヌクレオチド間にいかなるホスホロチオエートヌクレオシド間結合も含まないが、５’および３’末端の両方の末端ヌクレオチド間に１、２、または３個のホスホロチオエート結合、および必要に応じて存在する反転脱塩基残基末端キャップを含有する。一部の実施形態では、標的化リガンドは、ホスホロチオエート結合を介してセンス鎖に連結されている。
【０１５５】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜３位のヌクレオチドの間、および５’末端から１９〜２１、２０〜２２、２１〜２３、２２〜２４、２３〜２５、または２４〜２６位のヌクレオチドの間にある。一部の実施形態では、３個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜４位の間に位置し、第４のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から２０〜２１位に位置する。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖に少なくとも３個または４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含有する。
【０１５６】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、１つまたは複数の改変ヌクレオチドおよび１つまたは複数の改変ヌクレオシド間結合を含有する。一部の実施形態では、２’−改変ヌクレオシドは、改変ヌクレオシド間結合と組み合わされる。
【０１５７】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表１に示されるＡＮＧＰＴＬ３配列の位置の、またはその近傍のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とする。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＡＮＧＰＴＬ３の１９マーの配列と完全に、実質的に、または少なくとも部分的に相補的であるコアストレッチ配列を含む。
【表１−１】
2020534268.tif 000004
【表１−２】
2020534268.tif 000005
【０１５８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の１９位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の１位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１９位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の２位が、表１に開示される１９マーの標的配列の１８位と塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖（５’→３’）の２位から１８位までが、表１に開示される１９マーの標的配列の１８位から２位までに位置するそれぞれの相補的塩基のそれぞれと塩基対を形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１６０】
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子と完璧に相補的であってもよく、またはＡＮＧＰＴＬ３遺伝子と非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴである。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対を形成する。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉのセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表４中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７、１〜１８、または２〜１８のヌクレオチドの配列を含む。
【０１６２】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）（５’末端→３’末端に）表２または表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含むアンチセンス鎖、および（ｉｉ）（５’末端→３’末端に）表２または表４中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含む。
【０１６３】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、以下の表２に示される１９マーのコアヌクレオチド配列を含む。
【表２−１】
2020534268.tif 000006
【表２−２】
2020534268.tif 000007
【表２−３】
2020534268.tif 000008
【表２−４】
2020534268.tif 000009
【０１６４】
表２中の配列を含むか、またはそれからなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、改変ヌクレオチドまたは非改変ヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態では、表２中の配列を含むか、またはそれからなるセンスおよびアンチセンス鎖配列を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、全部または実質的に全部が改変ヌクレオチドである。
【０１６５】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、表２中に開示された配列中に列挙されたそれぞれのＮは、ありとあらゆる核酸塩基（改変と非改変ヌクレオチドの両方に見出されるものを含む）から独立に選択することができる。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと相補的である核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと相補的ではない核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドと同じである核酸塩基を有する。一部の実施形態では、表２に開示された配列中に列挙されたＮヌクレオチドは、他方の鎖上の対応する位置のＮヌクレオチドとは異なる核酸塩基を有する。
【０１６７】
ある特定の改変ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖、ならびにその基礎となる非改変核酸塩基配列を、表３に提供する。ある特定の改変ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびその基礎となる非改変核酸塩基配列を、表４に提供する。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の形成において、表３および４、ならびに上記の表２に列挙される基礎となる塩基配列のそれぞれにおけるヌクレオチドのそれぞれは、改変ヌクレオチドであってもよい。
【０１６８】
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とをアニーリングさせることによって形成される。２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２または表４に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２または表３に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。
【０１６９】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。
【０１７０】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表２、表３または表４中の配列のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖の核酸塩基配列を有する二本鎖を含むか、またはそれからなる。
【０１７１】
改変ヌクレオチドを含有するアンチセンス鎖の例を、表３に提供する。改変ヌクレオチドを含有するセンス鎖の例を、表４に提供する。
【０１７２】
表３および４で使用される場合、改変ヌクレオチド、標的化基、および連結基を示すために、以下の表記を使用する：
Ａ＝アデノシン−３’−リン酸
Ｃ＝シチジン−３’−リン酸
Ｇ＝グアノシン−３’−リン酸
Ｕ＝ウリジン−３’−リン酸
Ｉ＝イノシン−３’−リン酸
ｎ＝任意の２’−ＯＭｅ改変ヌクレオチド
ａ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−リン酸
ａｓ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｃ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−リン酸
ｃｓ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｇ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−リン酸
ｇｓ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｔ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−リン酸
ｔｓ＝２’−Ｏ−メチルシ−５−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｕ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−リン酸
ｕｓ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｉ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−リン酸
ｉｓ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｎｆ＝任意の２’−フルオロ改変ヌクレオチド
Ａｆ＝２’−フルオロアデノシン−３’−リン酸
Ａｆｓ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｃｆ＝２’−フルオロシチジン−３’−リン酸
Ｃｆｓ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスホロチオエート
Ｇｆ＝２’−フルオログアノシン−３’−リン酸
Ｇｆｓ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｔｆ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−リン酸
Ｔｆｓ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
Ｕｆ＝２’−フルオロウリジン−３’−リン酸
Ｕｆｓ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＮ＝任意の２’−デオキシリボヌクレオチド
ｄＡ＝２’−デオキシアデノシン−３’−リン酸
ｄＡｓ＝２’−デオキシアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｄＣ＝２’−デオキシシチジン−３’−リン酸
ｄＣｓ＝２’−デオキシシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＧ＝２’−デオキシグアノシン−３’−リン酸
ｄＧｓ＝２’−デオキシグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｄＴ＝２’−デオキシチミジン−３’−リン酸
ｄＴｓ＝２’−デオキシチミジン−３’−ホスホロチオエート
ｄＵ＝２’−デオキシウリジン−３’−リン酸
ｄＵｓ＝２’−デオキシウリジン−３’−ホスホロチオエート
ＮＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基アナログ）−３’−リン酸
ＮＵＮＡｓ＝２’，３’−ｓｅｃｏヌクレオチド模倣体（アンロックド核酸塩基アナログ）−３’−ホスホロチオエート
ＡＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−アデノシン−３’−リン酸
ＡＵＮＡｓ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−アデノシン−３’−ホスホロチオエート
ＣＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−シチジン−３’−リン酸
ＣＵＮＡｓ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−シチジン−３’−ホスホロチオエート
ＧＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−グアノシン−３’−リン酸
ＧＵＮＡｓ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−グアノシン−３’−ホスホロチオエート
ＵＵＮＡ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−ウリジン−３’−リン酸
ＵＵＮＡｓ＝２’，３’−ｓｅｃｏ−ウリジン−３’−ホスホロチオエート
ａ＿２Ｎ＝表６を参照されたい
ａ＿２Ｎｓ＝表６を参照されたい
ｐｕ＿２Ｎ＝表６を参照されたい
ｐｕ＿２Ｎｓ＝表６を参照されたい
ＮＬＮＡ＝ロックドヌクレオチド
ＮｆＡＮＡ＝２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド
ＮＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド
ＡＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルアデノシン−３’−リン酸
ＡＭｓ＝２’−Ｏ−メトキシエチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ＧＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルグアノシン−３’−リン酸
ＧＭｓ＝２’−Ｏ−メトキシエチルグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ＴＭ＝２’−Ｏ−メトキシエチルチミジン−３’−リン酸
ＴＭｓ＝２’−Ｏ−メトキシエチルチミジン−３’−ホスホロチオエート
ｍＣＭ＝表６を参照されたい
ｍＣＭｓ＝表６を参照されたい
Ｒ＝リビトール
（ｉｎｖｄＮ）＝任意の反転デオキシリボヌクレオチド（３’−３’結合ヌクレオチド）
（ｉｎｖＡｂ）＝反転（３’−３’結合）脱塩基デオキシリボヌクレオチド、表６を参照されたい
（ｉｎｖＡｂ）ｓ＝反転（３’−３’結合）脱塩基デオキシリボヌクレオチド−５’−ホスホロチオエート、表６を参照されたい
（ｉｎｖｎ）＝任意の反転２’−ＯＭｅヌクレオチド（３’−３’結合ヌクレオチド）
ｓ＝ホスホロチオエート結合
ｓｐ＝表６を参照されたい
Ｄ２ｕ＝表６を参照されたい
ｐＤ２ｕ＝表６を参照されたい
ｖｐｄＮ＝ビニルホスホン酸デオキシリボヌクレオチド
（５Ｍｅ−Ｎｆ）＝５’−Ｍｅ，２’−フルオロヌクレオチド
ｃＰｒｐ＝シクロプロピルホスホン酸、表６を参照されたい
ｅｐＴｃＰｒ＝表６を参照されたい
ｅｐＴＭ＝表６を参照されたい
【０１７３】
当業者であれば、配列によって別途指摘されない限り（例えば、ホスホロチオエート結合「ｓ」によるなど）、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、ヌクレオチドモノマーは５’−３’−ホスホジエステル結合によって相互に連結されていることを容易に理解する。当業者であれば、明確に理解するように、本明細書に開示される改変ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図５Ａ〜５Ｋを参照されたい）。さらに、当業者であれば、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端の末端ヌクレオチドは、典型的には、ｅｘ  ｖｉｖｏでリン酸部分の代わりに所与のモノマーのそれぞれの３’位にヒドロキシル（−ＯＨ）基を有することを容易に理解する。さらに、当業者であれば容易に理解および認識するように、本明細書に示されるホスホロチオエート化学構造は、典型的には硫黄原子上のアニオンを示すが、本明細書に開示される発明は、全てのホスホロチオエート互変異性体および／またはジアステレオマー（例えば、硫黄原子が二重結合を有し、アニオンが酸素原子である場合）を包含する。本明細書で別途明示的に指摘されない限り、当業者のそのような理解は、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤およびＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の組成物を説明する時に使用される。
【０１７４】
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤と共に使用される標的化基および連結基のある特定の例は、以下の表６に提供される。より具体的には、標的化基および連結基は以下：（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓを含み、その化学構造を以下の表６に提供する。それぞれのセンス鎖および／またはアンチセンス鎖は、本明細書に列挙される任意の標的化基または連結基、ならびに配列の５’および／または３’末端にコンジュゲートされた他の標的化または連結基を有してもよい。
【表３−１】
2020534268.tif 000010
【表３−２】
2020534268.tif 000011
【表３−３】
2020534268.tif 000012
【０１７５】
【表４−１】
2020534268.tif 000013
【表４−２】
2020534268.tif 000014
【表４−３】
2020534268.tif 000015
【表４−４】
2020534268.tif 000016
【表４−５】
2020534268.tif 000017
【０１７６】
本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖とセンス鎖とをアニーリングさせることによって形成される。２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２または表４に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２または表３に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。
【０１７７】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４中のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、または３ヌクレオチドが異なる。
【０１７８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、２〜２１、１〜２２、２〜２２、１〜２３、２〜２３、１〜２４、または２〜２４の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
【０１７９】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４中の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４中の配列のいずれかのヌクレオチド（５’末端→３’末端に）１〜１７、２〜１７、３〜１７、４〜１７、１〜１８、２〜１８、３〜１８、４〜１８、１〜１９、２〜１９、３〜１９、４〜１９、１〜２０、２〜２０、３〜２０、４〜２０、１〜２１、２〜２１、３〜２１、４〜２１、１〜２２、２〜２２、３〜２２、４〜２２、１〜２３、２〜２３、３〜２３、４〜２３、１〜２４、２〜２４、３〜２４、または４〜２４の配列を含む。ある特定の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４中の改変配列のいずれか１つの改変配列を含む、またはそれからなる。
【０１８０】
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤について、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子と完璧に相補的であってもよく、またはＡＮＧＰＴＬ３遺伝子と非相補的であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、もしくはｄＴ（またはその改変バージョン）である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端に）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対を形成する。
【０１８１】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉのセンス鎖は、（５’末端→３’末端に）表２または表４中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含む。
【０１８２】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）（５’末端→３’末端に）表２または表３中のアンチセンス鎖配列のいずれかの２〜１８または２〜１９のヌクレオチドの配列を含むアンチセンス鎖、および（ｉｉ）（５’末端→３’末端に）表２または表４中のセンス鎖配列のいずれかの１〜１７または１〜１８のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含む。
【０１８３】
２つの配列が、連続する１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補的な領域を有するという条件で、表２または表４に列挙される配列を含有するセンス鎖を、表２または表３に列挙される配列を含有する任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズさせることができる。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表４中の改変配列のいずれかの改変配列からなるセンス鎖、および表３中の改変配列のいずれかの改変配列からなるアンチセンス鎖を有する。ある特定の代表的な配列対を、表５に示される二本鎖ＩＤ番号によって例示する。
【０１８４】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれか１つによって表される二本鎖を含む、それからなる、または本質的にそれからなる。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかによって表される二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列、ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結（すなわち、コンジュゲート）されている。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖改変ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二本鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖改変ヌクレオチド配列ならびに標的化基および／または連結基を含み、ここで、標的化基および／または連結基は、センス鎖またはアンチセンス鎖に共有結合により連結されている。
【０１８５】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、標的化基をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基をさらに含む。
【０１８６】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、表６にそれぞれ定義されるように（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓからなる群から選択される標的化基をさらに含む。一部の実施形態では、標的化基は表６に定義されるように（ＮＡＧ２５）または（ＮＡＧ２５）ｓである。他の実施形態では、標的化基は表６に定義されるように（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓである。
【０１８７】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は表３または表４のアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの改変ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【０１８８】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は表５の二本鎖のいずれかのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの改変ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基をさらに含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、表５の二本鎖のいずれかを含む、それからなる、または本質的にそれからなる。
【表５−１】
2020534268.tif 000018
【表５−２】
2020534268.tif 000019
【０１９０】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を発現する細胞への送達の際に、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害またはノックダウンする。
【０１９１】
標的化基、連結基、および送達ビヒクル
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、限定されるものではないが、標的化基、連結基、送達ポリマー、または送達ビヒクルを含む１つまたは複数の非ヌクレオチド基にコンジュゲートされている。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達、または結合を増強することができる。標的化基および連結基の例を、表６に提供する。非ヌクレオチド基は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のいずれかの３’および／または５’末端に共有結合により連結されていてもよい。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’および／または５’末端に連結された非ヌクレオチド基を含有する。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結されている。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基を介してＲＮＡｉ剤に直接的または間接的に連結されていてもよい。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、不安定、切断性、または可逆性結合またはリンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結されている。
【０１９２】
一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、それが結合されているＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの薬物動態または生体分布特性を増強して、ＲＮＡｉ剤またはコンジュゲートの細胞または組織特異的分布および細胞特異的取込みを改善する。一部の実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
【０１９３】
標的化基または標的化部分は、それが結合されているコンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の薬物動態または生体分布特性を増強して、コンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の細胞特異的（一部の場合、臓器特異的を含む）分布および細胞特異的（または臓器特異的）取込みを改善する。標的化基は、それが指向する標的について一価、二価、三価、四価であり得るか、またはより高い価数を有してもよい。代表的な標的化基としては、限定されるものではないが、細胞表面分子に対する親和性を有する化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、および細胞表面分子に対する親和性を有する抗体模倣体が挙げられる。一部の実施形態では、標的化基は、ＰＥＧリンカー、または一部の例では、リンカーとして働くことができる、１つ、２つ、もしくは３つの脱塩基性および／もしくはリビトール（脱塩基性リボース）残基などのリンカーを使用してＲＮＡｉ剤に連結されている。一部の実施形態では、標的化基は、ガラクトース誘導体クラスターを含む。
【０１９４】
５’末端および／または３’末端に、アミノ基（本明細書ではアミンとも呼ばれる）などの反応基を有する、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を合成することができる。その後、反応基を使用して、当業界で典型的な方法を使用して標的化部分に結合することができる。
【０１９５】
一部の実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。本明細書で使用される場合、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体に対して親和性を有する化合物を含有するリガンドである。本明細書で指摘されるように、アシアロ糖タンパク質受容体は、肝細胞において高度に発現される。一部の実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つまたは複数のガラクトース誘導体を含む、またはそれからなる。本明細書で使用される場合、用語ガラクトース誘導体は、ガラクトース、およびガラクトースの親和性と等しいまたはそれより高い、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有するガラクトースの誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体には、限定されるものではないが、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイル−ガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイルガラクトース−アミン（例えば、Ｓ．Ｔ．  Ｉｏｂｓｔ  ａｎｄ  Ｋ．  Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，  Ｊ．Ｂ．Ｃ．，  １９９６，  ２７１，  ６６８６を参照されたい）が挙げられる。オリゴヌクレオチドおよび他の分子の肝臓へのｉｎ  ｖｉｖｏ標的化にとって有用であるガラクトース誘導体、およびガラクトース誘導体のクラスターは、当業界で公知である（例えば、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｔｅ，  １９８０，  Ｃｅｌｌ，  ２２，  ６１１−６２０；  Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８２，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２５７，  ９３９−９４５を参照されたい）。
【０１９６】
ガラクトース誘導体は、肝細胞の表面上に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体へのその結合を通して、分子をｉｎ  ｖｉｖｏで肝細胞に標的化するために使用されている。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドのアシアロ糖タンパク質受容体への結合は、肝細胞への細胞特異的標的化、および分子の肝細胞へのエンドサイトーシスを容易にする。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、単量体（例えば、単一のガラクトース誘導体を有する）または多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）であり得る。ガラクトース誘導体またはガラクトース誘導体クラスターを、当業界で公知の方法を使用してＲＮＡｉ剤のセンスまたはアンチセンス鎖の３’または５’末端に結合することができる。ガラクトース誘導体クラスターなどの標的化基の調製は、例えば、その両方の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０、およびＡｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．に対する国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１５６０１２に記載されている。
【０１９７】
本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体クラスターは、２から４個の末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素を通して分子に結合する。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体（３アンテナ性（ｔｒｉ−ａｎｔｅｎｎａｒｙ）ガラクトース誘導体または三価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体（４アンテナ性（ｔｅｔｒａ−ａｎｔｅｎｎａｒｙ）ガラクトース誘導体または四価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、４個のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【０１９８】
本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体三量体は、それぞれが中央の分岐点に連結された３個のガラクトース誘導体を含有する。本明細書で使用される場合、ガラクトース誘導体四量体は、それぞれが中央の分岐点に連結された４個のガラクトース誘導体を含有する。ガラクトース誘導体は、糖類のＣ−１炭素を通して中央の分岐点に結合することができる。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介して分岐点に連結されている。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、ＰＥＧ基などのフレキシブルな親水性スペーサーである（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号；Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  １９９５  Ｖｏｌ．  ３９  ｐ．  １５３８−１５４６を参照されたい）。一部の実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、３個のガラクトース誘導体の結合を可能にし、ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合をさらに可能にする任意の低分子でありうる。分岐点基の例は、ジリシンまたはジグルタメートである。ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合は、リンカーまたはスペーサーを通して起こり得る。一部の実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、限定されるものではないが、ＰＥＧスペーサーなどのフレキシブルな親水性スペーサーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、環状基などの堅固なリンカーを含む。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、またはそれからなる。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体を含み、これは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得る。
【０１９９】
本開示の実施形態は、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、肝臓の細胞にｉｎ  ｖｉｖｏで送達するための医薬組成物を含む。そのような医薬組成物は、例えばガラクトース誘導体クラスターにコンジュゲートされたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含み得る。一部の実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン三量体であり得るガラクトース誘導体三量体、または例えばＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得るガラクトース誘導体四量体を含む。
【０２００】
標的化基は、限定されるものではないが、表６に定義されるように（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、および（ＮＡＧ３９）ｓを含む。ガラクトースクラスター標的化リガンドを含む他の標的化基は、当業界で公知である。
【０２０１】
一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤にコンジュゲートする。連結基は、標的化基、送達ポリマー、または送達ビヒクルへの薬剤の共有結合による連結を容易にする。連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’および／または５’末端に連結することができる。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖に連結する。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’または３’末端にコンジュゲートする。一部の実施形態では、連結基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端にコンジュゲートする。連結基の例としては、限定されるものではないが、第一級アミンおよびアルキン、アルキル基、脱塩基ヌクレオチド、リビトール（脱塩基リボース）、ならびに／またはＰＥＧ基などの反応基が挙げられる。
【０２０２】
リンカーまたは連結基は、目的の一方の化学基（ＲＮＡｉ剤など）またはセグメントを、目的の別の化学基（標的化基または送達ポリマーなど）またはセグメントに、１つまたは複数の共有結合を介して連結する２個の原子間の接続である。不安定な連結は、不安定な結合を含有する。連結は、必要に応じて、繋がれている２つの原子間の距離を増加させるスペーサーを含んでもよい。スペーサーは、連結に可撓性および／または長さをさらに加えることができる。スペーサーとしては、限定されるものではないが、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、およびアラルキニル基が挙げられ、それぞれ、１つまたは複数のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、およびサッカリドを含有してもよい。スペーサー基は、当業界で周知であり、前記一覧は、記載の範囲を限定することを意図しない。
【０２０３】
一部の実施形態では、２つまたはそれより多いＲＮＡｉ剤が単一の組成物に含まれる場合、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、同じ標的化基または２つの異なる標的化基（すなわち、異なる化学構造を有する標的化基）に連結され得る。一部の実施形態では、標的化基は、さらなるリンカーを使用することなく、本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤に連結される。一部の実施形態では、コンジュゲーションが容易に存在するのを促進するために、標的化基そのものがリンカーまたは他の部位を有するように設計される。一部の実施形態では、２つまたはそれより多くのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が単一の組成物に含まれる場合、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、同じリンカーまたは異なるリンカー（すなわち、異なる化学構造を有するリンカー）を利用してもよい。
【０２０４】
表２、３、または４に列挙されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ヌクレオチド配列のいずれかは、改変されていようと、改変されていなかろうと、３’および／もしくは５’標的化基または連結基を含有してもよい。３’もしくは５’標的化基、または連結基を含有する、表３または４に列挙される、またはそうでなければ本明細書に記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤配列のいずれかは、あるいは、３’または５’標的化基も、連結基も含有しないか、または限定されるものではないが、表６に示されるものを含む、異なる３’もしくは５’標的化基、または連結基を含有してもよい。表５に列挙されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤二本鎖のいずれかは、改変されていようと、改変されていなかろうと、限定されるものではないが、表６に示されるものを含む標的化基または連結基をさらに含んでもよく、標的化基または連結基を、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤二本鎖のセンス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの３’または５’末端に結合することができる。
【０２０５】
標的化基および連結基の例を、表６に提供する。表４は、５’または３’末端に連結された標的化基または連結基を有するＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤センス鎖のいくつかの実施形態を提供する。
【表６−１】
2020534268.tif 000020
【表６−２】
2020534268.tif 000021
【表６−３】
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【表６−４】
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【表６−５】
2020534268.tif 000024
【表６−６】
2020534268.tif 000025
【表６−７】
2020534268.tif 000026
【表６−８】
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【表６−９】
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【表６−１０】
2020534268.tif 000029
【表６−１１】
2020534268.tif 000030
【表６−１２】
2020534268.tif 000031
【表６−１３】
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【表６−１４】
2020534268.tif 000033
【表６−１５】
2020534268.tif 000034
【表６−１６】
2020534268.tif 000035
【表６−１７】
2020534268.tif 000036
【０２０６】
表６の上記の構造のそれぞれにおいて、ＮＡＧは、上記の構造および本明細書に提供される説明を考慮して、結合されると当業者であれば理解するＮ−アセチル−ガラクトサミンまたは別のガラクトース誘導体を含む。例えば、一部の実施形態では、表６に提供される構造におけるＮＡＧは、以下の構造
【化２】
2020534268.tif 000037
によって表される。
【０２０７】
それぞれの（ＮＡＧｘ）を、リン酸基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、および（ＮＡＧ３１）の場合）、またはホスホロチオエート基（（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、または（ＮＡＧ３７）ｓの場合）、または別の連結基を介してＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤に結合してもよい。
【化３】
2020534268.tif 000038
【０２０８】
当業界で公知の他の連結基を使用してもよい。
【０２０９】
一部の実施形態では、送達ビヒクルを使用して、ＲＮＡｉ剤を細胞または組織に送達することができる。送達ビヒクルは、ＲＮＡｉ剤の細胞または組織への送達を改善する化合物である。送達ビヒクルは、限定されるものではないが、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に改変されたポリマーもしくはペプチド、または可逆的に改変された膜活性ポリアミンなどのポリマーを含んでもよく、またはそれからなってもよい。
【０２１０】
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤を、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣまたは当業界で利用可能な他の送達系と組み合わせることができる。ＲＮＡｉ剤を、標的化基、脂質（限定されるものではないが、コレステロールおよびコレステリル誘導体を含む）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例えば、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／００２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、およびＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１３／０３２８２９、ＷＯ２０１３／１５８１４１を参照されたい）、または当業界で利用可能な他の送達系に化学的にコンジュゲートすることもできる。
【０２１１】
医薬組成物および製剤
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、医薬組成物または製剤（本明細書では「医薬」とも呼ばれる）として調製することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む。これらの医薬組成物は、標的細胞、細胞群、組織、または生物中での標的ｍＲＮＡの発現の阻害において特に有用である。医薬組成物を使用して、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、または標的遺伝子の発現の阻害から利益を得る疾患、障害、または状態を有する対象を処置することができる。医薬組成物を使用して、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、または標的遺伝子の発現の阻害から利益を得る疾患、障害または状態を発症するリスクがある対象を処置することができる。一実施形態では、方法は、本明細書に記載の標的化リガンドに連結されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、処置しようとする対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤（ビヒクル、担体、希釈剤、および／または送達ポリマーを含む）を、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加することによって、ヒトを含む対象へのｉｎ  ｖｉｖｏでの送達にとって好適な医薬製剤または医薬を形成する。
【０２１２】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および本明細書に開示される方法は、対象に、治療有効量の本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与することによって対象中のＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの発現を阻害することによる場合を含め、細胞、細胞群、細胞群、組織、臓器、または対象における標的ｍＲＮＡのレベルを低下させる。一部の実施形態では、対象は、標的細胞または組織において標的遺伝子の病原性の上方調節を有すると以前に同定または診断されたことがある。一部の実施形態では、対象は、トリグリセリド（ＴＧ）レベルの上昇および／もしくはコレステロールレベルの上昇または何らかの他の脂質異常症を有すると以前に同定または診断されたことがある。一部の実施形態では、対象は、高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、スタチン抵抗性高コレステロール血症、ならびに他の代謝関連障害および疾患などの１つまたは複数の心血管代謝疾患を有すると以前に診断されたことがある。一部の実施形態では、対象は、ＴＧレベルの上昇もしくは増加、コレステロールレベルの上昇もしくは増加、または脂肪肝と関連するか、またはそれにより引き起こされる１つまたは複数の心血管代謝疾患と関連する症状に罹患したことがある。
【０２１３】
一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物は、対象におけるＴＧレベルの上昇、コレステロールレベルの上昇、脂肪肝、および／またはＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの過剰発現と関連する臨床所見を処置または管理するために使用される。一部の実施形態では、治療（予防を含む）有効量の医薬組成物の１つまたは複数を、そのような処置を必要とする対象に投与する。一部の実施形態では、開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のいずれかの投与を使用して、対象における疾患の症状の数、重症度、および／または頻度を減少させることができる。
【０２１４】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物を使用して、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの発現の低下または阻害から利益を得る疾患または障害を有する対象における少なくとも１つの症状を処置することができる。一部の実施形態では、対象に、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む治療有効量の１つまたは複数の医薬組成物を投与することによって症状を処置する。他の実施形態では、対象に、予防有効量の１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与することによって、少なくとも１つの症状を防止または阻害する。
【０２１５】
投与経路は、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が身体と接触する経路である。一般に、哺乳動物の処置のために薬物およびオリゴヌクレオチドおよび核酸を投与する方法は、当業界で周知であり、本明細書に記載の組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、特定の経路に対して適切に調整された調製物中で、任意の好適な経路によって投与することができる。かくして、本明細書に記載される医薬組成物を、注射によって、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、または腹腔内的に投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。
【０２１６】
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、当業界で公知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細胞群、組織、または対象に送達することができる。一般に、核酸分子を送達するための当業界で認識される任意の好適な方法（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで）を、本明細書に記載の組成物と共に使用するために適合させることができる。例えば、送達は、局部投与（例えば、直接的注射、埋込み、もしくは局所投与）、全身投与、または頭蓋内（例えば、脳室内、実質内および髄腔内）、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、経鼻、経口、直腸、もしくは局所（頬および舌下を含む）投与を含む、皮下、静脈内、腹腔内、もしくは非経口経路によるものであってもよい。一部の実施形態では、組成物は、皮下または静脈内注入または注射を介して投与される。
【０２１７】
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。本明細書に記載の医薬組成物は、対象への投与のために製剤化される。
【０２１８】
本明細書で使用される場合、医薬組成物または医薬は、薬理学的に有効な量の記載される治療化合物の少なくとも１つ、および１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む。薬学的に許容される賦形剤（賦形剤）は、薬物送達系に意図的に含まれる医薬品有効成分（ＡＰＩ、治療生成物、例えば、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図される投薬量で治療効果を発揮しないか、または発揮することを意図されない。賦形剤は、ａ）製造中の薬物送達系のプロセシングを補助する、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティ、もしくは患者許容性を保護する、支援する、もしくは増強する、ｃ）生成物の同定を援助する、および／またはｄ）保存もしくは使用中のＡＰＩの送達の全体的な安全性、有効性の任意の他の属性を増強するように作用することができる。薬学的に許容される賦形剤は、不活性物質であっても、またはなくてもよい。
【０２１９】
賦形剤としては、限定されるものではないが、吸収促進剤、接着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色料、送達増強剤、送達ポリマー、洗剤、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料、流動促進剤、保湿剤、潤滑剤、油、ポリマー、保存剤、塩水、塩、溶媒、糖、界面活性剤、懸濁化剤、持続放出マトリックス、甘味料、増粘剤、等張剤、ビヒクル、撥水剤、および湿潤剤が挙げられる。
【０２２０】
注入可能な使用にとって好適な医薬組成物としては、滅菌水性溶液（水溶性の場合）または分散体および滅菌注射溶液または分散体の即興的調製のための滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与については、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。好適な担体は、製造および保存の条件下で安定であるべきであり、細菌および菌類などの微生物の汚染作用に対して保存するべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、ならびにその好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒体であってもよい。例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散体の場合、必要とされる粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、および塩化ナトリウムを組成物中に含有させることが好ましい。組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含有させることによって、注射可能組成物の長期的吸収をもたらすことができる。
【０２２１】
必要に応じて、上に列挙された成分の１つまたは組合せと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を組み込んだ後、滅菌濾過を行うことによって、滅菌注射溶液を調製することができる。一般に、分散体は、活性化合物を、基本分散媒体および上に列挙されたものに由来する必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、活性成分と、その予め滅菌濾過された溶液に由来する任意のさらなる所望の成分との粉末を生成する、真空乾燥および凍結乾燥を含む。
【０２２２】
関節内投与にとって好適な製剤は、微結晶形態、例えば、水性微結晶性懸濁液の形態にあってもよい薬物の滅菌水性調製物の形態にあってもよい。リポソーム製剤または生分解性ポリマー系を使用して、関節内と眼内投与の両方のための薬物を提供することもできる。
【０２２３】
埋込み体およびマイクロカプセル送達系を含む、制御放出製剤などの、身体からの迅速な除去に対して化合物を保護する担体を用いて、活性化合物を調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの、生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者には明らかであろう。リポソーム懸濁液を、薬学的に許容される担体として使用することもできる。これらを、当業者には公知の、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載の方法に従って調製することができる。
【０２２４】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、投与の容易性および投薬量の均一性のために単位剤形で組成物に製剤化することができる。単位剤形とは、処置しようとする対象のための単一の投薬量として適した物理的に個別の単位を指す；それぞれの単位は、必要とされる薬学的担体と関連する所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。本開示の単位剤形のための明細は、活性化合物の独特の特徴および達成しようとする治療効果、ならびに個体の処置のためのそのような活性化合物を組み合わせる当業界において固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
【０２２５】
医薬組成物は、医薬組成物中に一般的に見出される他の追加成分を含有してもよい。そのような追加成分としては、限定されるものではないが、かゆみ止め薬、収斂剤、局部麻酔剤、鎮痛剤、抗ヒスタミン剤、または抗炎症剤（例えば、アセトアミノフェン、ＮＳＡＩＤ、ジフェンヒドラミンなど）が挙げられる。また、本明細書で定義されるＲＮＡｉ剤を発現する、または含む細胞、組織、または単離された臓器を、「医薬組成物」として使用することができることも想定される。本明細書で使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」または単に「有効量」とは、薬理学的、治療的、または防止的結果をもたらすＲＮＡｉ剤の量を指す。
【０２２６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を投与するステップに加えて、第２の治療剤または処置を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は、別のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤（例えば、ＡＮＧＰＴＬ３標的内の異なる配列を標的とするＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤）である。他の実施形態では、第２の治療剤は、低分子薬物、抗体、抗体断片、またはアプタマーであってもよい。
【０２２７】
一般に、活性化合物の有効量は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば、約１．０〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲にある。一部の実施形態では、活性化合物の有効量は、約０．２５〜約５ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲にある。一部の実施形態では、活性成分の有効量は、約０．５〜約４ｍｇ／ｋｇ体重／用量の範囲にある。投与される量はまた、患者の全体的な健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的効能、薬物の製剤、製剤中の賦形剤の存在および種類、ならびに投与経路などの変数に依存する可能性もある。また、投与される初期投薬量を、所望の血中レベルもしくは組織レベルを迅速に達成するために、上の上限レベルを超えて増加させてもよく、または初期投薬量は最適投薬量よりも小さくてもよい。
【０２２８】
疾患の処置のため、または疾患の処置のための医薬もしくは組成物の形成のために、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載の医薬組成物を、賦形剤と、または限定されるものではないが、第２の、もしくは他のＲＮＡｉ剤、低分子薬物、抗体、抗体断片、ペプチド、および／またはアプタマーを含む、第２の治療剤もしくは処置と組み合わせることができる。
【０２２９】
薬学的に許容される賦形剤またはアジュバントに添加される場合、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、キット、容器、パック、またはディスペンサー中に包装することができる。本明細書に記載の医薬組成物は、予め充填された注射筒またはバイアル中に包装されてもよい。
【０２３０】
処置の方法および発現の阻害
本明細書に開示されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＲＮＡｉ剤の投与から利益を得る疾患または障害を有する対象（例えば、ヒトまたは他の哺乳動物）を処置することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡおよび／またはＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの発現の低下および／または阻害から利益を得る対象（例えば、ヒト）、例えば高トリグリセリド血症、肥満、高脂血症、異常な脂質および／またはコレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、心血管疾患、冠動脈疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、ホモ接合およびヘテロ接合家族性高コレステロール血症、スタチン抵抗性高コレステロール血症、ならびに他の代謝関連障害および疾患と診断されている対象を処置することができる。
【０２３１】
一部の実施形態では、対象は、治療有効量の任意の１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与される。対象の処置は、治療的および／または予防的処置を含んでもよい。対象は、治療有効量の本明細書に記載の任意の１つまたは複数のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与される。対象は、ヒト、患者、またはヒト患者であってもよい。対象は、成人、青年、小児、または幼児であってもよい。本明細書に記載の医薬組成物の投与は、ヒトまたは動物に対するものであってもよい。
【０２３２】
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＮＧＰＴＬ３関連疾患もしくは障害を有する、またはＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患もしくは障害を有する対象における少なくとも１つの症状を処置することができる。一部の実施形態では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＡＮＧＰＴＬ３関連疾患または障害を有する対象の臨床所見を処置または管理する。対象に、治療有効量の本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤含有組成物の１つまたは複数を投与する。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、処置される対象に、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与するステップを含む。一部の実施形態では、対象に、予防有効量の記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の任意の１つまたは複数を投与することによって、少なくとも１つの症状を防止または阻害することにより対象を処置する。
【０２３３】
ある特定の実施形態では、本開示は、それを必要とする患者において、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現によって少なくとも一部媒介される疾患、障害、状態、または病状の処置のための方法であって、患者に、本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のいずれかを投与するステップを含む、方法を提供する。
【０２３４】
一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与される対象のＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の遺伝子発現レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与される対象のある特定の上皮細胞中でのＥＮａＣレベルまたはＥＮａＣチャネル活性レベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象中の遺伝子発現レベル、タンパク質レベル、および／またはｍＲＮＡレベルを、対象の細胞、細胞群、および／または組織において低下させることができる。
【０２３５】
一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与された対象のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９％より多く低下する。対象中のタンパク質レベルを、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液中で低下させることができる。
【０２３６】
一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与されている対象におけるトリグリセリド（ＴＧ）レベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象におけるＴＧレベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液において低下し得る。
【０２３７】
一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与されている対象における総コレステロールレベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。一部の実施形態では、記載されるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤が投与されている対象における低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールレベルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与する前の対象、またはＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を投与されていない対象と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％より多く低下する。対象における総コレステロールレベルおよび／またはＬＤＬコレステロールレベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液において低下し得る。
【０２３８】
ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベル、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、ＴＧレベル、コレステロールレベル、およびＬＤＬ  コレステロールレベルの低下は、当業界で公知の任意の方法によって評価することができる。本明細書で使用される場合、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルおよび／またはタンパク質レベルの低下または減少を、本明細書では集合的にＡＮＧＰＴＬ３の低下もしくは減少、またはＡＮＧＰＴＬ３の発現の阻害もしくは低下と呼ぶ。本明細書に記載の実施例は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現の阻害を評価するための公知の方法を例示する。
【０２３９】
細胞、組織、臓器、および非ヒト生物
本明細書に記載のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つを含む細胞、組織、臓器、および非ヒト生物が企図される。細胞、組織、臓器、または非ヒト生物は、ＲＮＡｉ剤を細胞、組織、臓器または非ヒト生物に送達することによって作製される。
【０２４０】
上記に提供された実施形態および項目を、ここで、以下の非限定的な実施例を用いて例示する。
【実施例】
【０２４１】
（実施例１）
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の合成
上記で表５に示されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤二本鎖を、以下の一般手順に従って合成した。
【０２４２】
Ａ．合成。ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖を、オリゴヌクレオチド合成において使用される固相上でホスホロアミダイト技術に従って合成した。規模に応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、またはＯＰ  Ｐｉｌｏｔ  １００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかを使用した。合成を、制御細孔ガラス（ＣＰＧ、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡから取得）製の固相支持体上で実施した。全てのＲＮＡおよび２’−改変ＲＮＡホスホロアミダイトを、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ、ＵＳＡ）またはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ、ＰＲＣ）から購入した。２’−Ｏ−メチルホスホロアミダイトは、以下のもの：（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２’−Ｏ−メチル−アデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、５’−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２’−Ｏ−メチル−シチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノ）ホスホロアミダイト、（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２’−Ｏ−メチル−グアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイト、および５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトを含んでいた。２’−デオキシ−２’−フルオロ−ホスホロアミダイトは、２’−Ｏ−メチルアミダイトと同じ保護基を担持していた。５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’，３’−ｓｅｃｏ−ウリジン、２’−ベンゾイル−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホロアミダイトもまた、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃまたはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−イノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｖｉｒｇｉｎｉａ）またはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。脱塩基（３’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボース−５’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）またはＳＡＦＣ（Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）から購入した。５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２，Ｎ６−（フェノキシアセテート）−２’−Ｏ−メチル−ジアミノプリン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓまたはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。
【０２４３】
標的化リガンド含有ホスホロアミダイトを、無水ジクロロメタンまたは無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、他の全てのアミダイトを、無水アセトニトリル（５０ｍＭ）または無水ジメチルホルムアミドに溶解し、分子ふるい（３Å）を添加した。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中の２５０ｍＭ）または５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中の２５０ｍＭ）を、アクチベーター溶液として使用した。カップリング時間は、１２分（ＲＮＡ）、１５分（標的化リガンド）、９０秒（２’ＯＭｅ）、および６０秒（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート結合を導入するために、無水アセトニトリル中の３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．、Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ、ＭＡ、ＵＳＡから取得）の１００ｍＭ溶液を使用した。標的化リガンドが存在しない「裸の」ＲＮＡｉ剤であると具体的に特定されている場合を除き、以下の実施例において合成および試験したＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤二本鎖のそれぞれは、表６に表す標的化リガンド化学構造における「ＮＡＧ」としてＮ−アセチル−ガラクトサミンを利用した。
【０２４４】
Ｂ．支持体に結合したオリゴマーの切断および脱保護。固相合成の最終化の後、乾燥した固相支持体を、水中の４０重量％メチルアミンと２８％の水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）の１：１容量の溶液で、３０℃で１．５時間処理した。溶液を蒸発させ、固体残渣を水中で復元させた（以下を参照されたい）。
【０２４５】
Ｃ．精製。ＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＱ−５ＰＷ、１３μｍカラムおよびＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−８システムを使用する陰イオン交換ＨＰＬＣにより、粗オリゴマーを精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０であり、２０％アセトニトリルを含有し、緩衝液Ｂは、１．５Ｍ塩化ナトリウムを添加した緩衝液Ａと同じものであった。２６０ｎｍでのＵＶトレースを記録した。適切な画分をプールした後、濾過ＤＩ水または１００ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ６．７の泳動緩衝液および２０％アセトニトリルを用いて、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ｆｉｎｅを充填したＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＸＫ  ２６／４０カラムを使用するサイズ排除ＨＰＬＣ上で泳動した。
【０２４６】
Ｄ．アニーリング。１×リン酸緩衝生理食塩水（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中で等モルのＲＮＡ溶液（センスおよびアンチセンス）を合わせることによって相補鎖を混合して、ＲＮＡｉ剤を形成させた。一部のＲＮＡｉ剤を凍結乾燥し、−１５〜−２５℃で保存した。１×リン酸緩衝生理食塩水中でＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計上で溶液の吸光度を測定することにより、二本鎖濃度を決定した。次いで、２６０ｎｍでの溶液の吸光度に、変換係数および希釈係数を乗じ、二本鎖濃度を決定した。使用した変換係数は、０．０３７ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であったか、または実験によって決定された吸収係数から計算した。
【０２４７】
（実施例２）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の異なる位置を標的とするように設計されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前血清試料を、−１日目に４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の３ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）のいずれかを含有する２００μｌの単回皮下投与を、表７に記載した投薬群に従って行った。
【表７−１】
2020534268.tif 000039
【表７−２】
2020534268.tif 000040
【０２４８】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関しては、表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８、１３、２２、２９、および３６日目に血清を収集した（群１および５〜１１のみ）。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２４９】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表８〜１１に示す。
【表８】
2020534268.tif 000041
【表９】
2020534268.tif 000042
【表１０】
2020534268.tif 000043
【表１１】
2020534268.tif 000044
【０２５０】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３４２およびＡＤ０５３４３（群２および３）は、遺伝子の７４３位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３４４（群４）は、遺伝子の７４４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０６およびＡＤ０５３０７（群５および６）は、遺伝子の９２１位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０８およびＡＤ０５３０９（群７および８）は、遺伝子の９２２位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３１０およびＡＤ０５３１１（群９および１０）は、遺伝子の１３０２位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ならびにＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３１２（群１１）は、遺伝子の１３０４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ（参照されるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子配列に関しては配列番号１を参照されたい）。
【０２５１】
上記の表８に示すように、少なくとも群５、６、７、８、９、１０、および１１のＲＮＡｉ剤のそれぞれは、ＡＮＧＰＴＬ３阻害を示した。例えば、２９日目では、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の９２２位を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含む群７（ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０８）は、対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の約９１％パーセント低下（０．０８８）を示した。同様に、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の９２１位を標的とするように設計された群５（ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０６）および群６（ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０７）の両方が、２９日目でＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の７５％より大きい低下（すなわち、０．２４０および０．２０６）を示した。
【０２５２】
（実施例３）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の９２１位および９２２位を標的とするように設計されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前血清試料を、−１日目に４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）のいずれかを含有する２００μｌの単回皮下投与を、表１２に記載した投薬群に従って行った。
【表１２】
2020534268.tif 000045
【０２５３】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関しては、表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。９、１５、２２、および２９日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２５４】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表１３〜１６に示す。
【表１３−１】
2020534268.tif 000046
【表１３−２】
2020534268.tif 000047
【表１４−１】
2020534268.tif 000048
【表１４−２】
2020534268.tif 000049
【表１４−３】
2020534268.tif 000050
【表１５−１】
2020534268.tif 000051
【表１５−２】
2020534268.tif 000052
【表１５−３】
2020534268.tif 000053
【表１６−１】
2020534268.tif 000054
【表１６−２】
2020534268.tif 000055
【表１６−３】
2020534268.tif 000056
【０２５５】
群２〜１１のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、異なる配列および改変パターンを有するが、それぞれが遺伝子の９２１位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み、ならびに群１２〜１９のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、それぞれが遺伝子の９２２位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ（参照されるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子配列の配列番号１を参照されたい）。上記の表１２に示すように、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、対照と比較してＡＮＧＰＴＬ３の阻害を達成した。例えば、群１２（ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０８）は、２２日目での対照（０．２０９）と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルのほぼ８０％低下を達成した。
【０２５６】
（実施例４）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の追加の位置を標的とするように設計されたＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前血清試料を、−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）もしくは０．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）のいずれかを含有する２００μｌの単回皮下投与を、表１７に記載した投薬群に従って行った。
【表１７−１】
2020534268.tif 000057
【表１７−２】
2020534268.tif 000058
【０２５７】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関しては、表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８、１５、２２、２９、および４３日目に血清を収集した（群１〜３、９、および１１〜１３のみ）。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および総コレステロールを、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２５８】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、ＨＤＬレベル、および総コレステロールレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表１８〜２２に示す。
【表１８−１】
2020534268.tif 000059
【表１８−２】
2020534268.tif 000060
【表１９−１】
2020534268.tif 000061
【表１９−２】
2020534268.tif 000062
【表２０−１】
2020534268.tif 000063
【表２０−２】
2020534268.tif 000064
【表２１−１】
2020534268.tif 000065
【表２１−２】
2020534268.tif 000066
【表２２−１】
2020534268.tif 000067
【表２２−２】
2020534268.tif 000068
【０２５９】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８７およびＡＤ０５４８８（群２および３）は、遺伝子の３０４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８９およびＡＤ０５４９０（群４および５）は、遺伝子の１７２位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４９１およびＡＤ０５４９２（群６および７）は、遺伝子の１００８位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５９３（群８）は、遺伝子の１００９位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４９４、ＡＤ０５４９５、およびＡＤ０５３０８（群９、１０、１１、および１２）は、遺伝子の１３０２位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ；ならびにＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４１８（群１３）は、遺伝子の９２１位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んだ（参照されるＡＮＧＰＴＬ３遺伝子配列に関して配列番号１を参照されたい）。
【０２６０】
上記の表１８に示すように、ＲＮＡｉ剤のほとんどは、測定したほぼあらゆる時点でＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの低下を達成したが、それぞれが、遺伝子の３０４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含む群２（ＡＤ０５４８７）および群３（ＡＤ０５４８８）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤は、この試験における他の群より優れていた。例えば、１５および２２日目では、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８（群３）は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の９０％より多くのノックダウン（すなわち、１５日目で０．０７０および２２日目で０．０９２）を達成した。同様に、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８７（群２）は、１５および２２日目でほぼ７５％のノックダウン（すなわち、１５日目で０．１７０および２２日目で０．１３８）を達成した。その上、ＴＧ、総コレステロール、およびＬＤＬを含むさらなる測定されたパラメータに関して同じ傾向が認められ、群２（ＡＤ０５４８７）および群３（ＡＤ０５４８８）の両方が、一般的に試験した他のＲＮＡｉ剤より優れていた（表１９〜２２を参照されたい）。例えば、群２および３に関して、２９日目でトリグリセリドレベルは、少なくとも２８％低下し（すなわち、０．５５６または０．７２１）、総コレステロールは、少なくとも３１％低下し（すなわち、０．５６０または０．６８３）、ＬＤＬレベルは、ほぼ２０％低下した（０．７４４または０．８０１）。
【０２６１】
（実施例５）
カニクイザルにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（本明細書において「ｃｙｎｏｓ」とも呼ばれる）に、食塩水中で製剤化した３．０ｍｇ／ｋｇのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５３０８またはＡＤ０５４１８を含有する０．３ｍＬ／ｋｇ（容積約２〜３ｍＬ、動物の体重に応じて）の単回皮下注射液を投与した。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表３、４、および５に示すように、改変ヌクレオチドを含有し、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んだ。
【０２６２】
各群２匹のカニクイザルを試験した（ｎ＝２）。血液試料を採取し、血清試料を−３７（投与前）、−１５（投与前）、および−１（投与前）、８、１６、２３、３０、および３７日目に分析した。各収集前、カニクイザルを一晩絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、製造元の推奨に従って、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、その動物における処置前の平均発現レベル（この場合−３７、−１５、および−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
【０２６３】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表２３および２４に示す。
【表２３】
2020534268.tif 000069
【表２４】
2020534268.tif 000070
【０２６４】
ＡＤ０５３０８またはＡＤ０５４１８のいずれかを投与したカニクイザルのそれぞれは、全ての測定した時点で処置前の測定値と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の低下を示した。例えば、個々の動物に関して、１６日目に、ＡＤ０５４１８を投与したカニクイザルは、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の約６４％の低下（０．３５８正規化タンパク質レベル）または６９％の低下（０．３０９正規化タンパク質レベル）のいずれかを示した。さらに、３７日目においても、群２（ＡＤ０５４１８）のカニクイザルは、ＡＮＧＰＴＬタンパク質レベルの平均で約７３％の低下（０．２７０）を示した。
【０２６５】
（実施例６）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の３０４位を標的とするように設計されたさらなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前血清試料を、−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の０．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）を含有する２００μｌの単回皮下投与を、表２５に記載した投薬群に従って行った。
【表２５】
2020534268.tif 000071
【０２６６】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８、１５、２２、３０日目、および特定の群（すなわち、群１、２、５、および１０のみ）では４３日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２６７】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
【０２６８】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表に示す。
【表２６−１】
2020534268.tif 000072
【表２６−２】
2020534268.tif 000073
【表２７】
2020534268.tif 000074
【表２８−１】
2020534268.tif 000075
【表２８−２】
2020534268.tif 000076
【表２９】
2020534268.tif 000077
【表３０】
2020534268.tif 000078
【０２６９】
それぞれが３０４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含む（例えば、配列番号１を参照されたい）ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤（すなわち、ＡＤ０５４８８、ＡＤ０５６５２、ＡＤ０５６５３、ＡＤ０５６５４、ＡＤ０５６５５、ＡＤ０５６５６、ＡＤ０５６５７、ＡＤ０５６５８、ＡＤ０５６６０、ＡＤ０５６６１、およびＡＤ０５６６２）を試験した。上記に示すように、ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、少なくとも２２日目までＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの実質的な低下を示した。ＴＧレベルおよび総コレステロールの低下もまた観察された。
【０２７０】
（実施例７）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の位置３０４位を標的とするように設計されたさらなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性をさらに評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前血清試料を、−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の０．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）を含有する２００μｌの単回皮下投与を、表３１に記載した投薬群に従って行った。
【表３１】
2020534268.tif 000079
【０２７１】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８、１５、２２、および２９日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２７２】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
【０２７３】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表３２〜３６に示す。
【表３２】
2020534268.tif 000080
【表３３−１】
2020534268.tif 000081
【表３３−２】
2020534268.tif 000082
【表３４】
2020534268.tif 000083
【表３５−１】
2020534268.tif 000084
【表３５−２】
2020534268.tif 000085
【表３６】
2020534268.tif 000086
【０２７４】
（実施例８）
カニクイザルにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
さらなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤をカニクイザルにおいて評価した。１日目、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（本明細書において「ｃｙｎｏｓ」とも呼ばれる）に、それぞれ食塩水中で製剤化した３．０ｍｇ／ｋｇのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５５７７、ＡＤ０５３０７、ＡＤ０５４８８、ＡＤ０５６５４、またはＡＤ０５６５９のうちの１つを含有する０．３ｍＬ／ｋｇ（容積約１〜２ｍＬ、動物の体重に応じて）の単回皮下注射液を投与した。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表３、４、および５に示すように、改変ヌクレオチドを含有し、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んだ。
【０２７５】
各群２匹のカニクイザルを試験した（ｎ＝２）。血液試料を採取し、血清試料を−８（投与前）、１（投与前）、８、１５、２２、２９、および３６日目に分析した。各収集前、カニクイザルを一晩絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、製造元の推奨に従って、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２７６】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の平均発現レベル（この場合−８および１日目（投与前））で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
【０２７７】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表３７〜４１に示す。
【表３７】
2020534268.tif 000087
【表３８−１】
2020534268.tif 000088
【表３８−２】
2020534268.tif 000089
【表３９】
2020534268.tif 000090
【表４０】
2020534268.tif 000091
【表４１】
2020534268.tif 000092
【０２７８】
ＡＤ０５５７７、ＡＤ０５３０７、ＡＤ０５４８８、ＡＤ０５６５４、またはＡＤ０５６５９のいずれかを投与したカニクイザルのそれぞれは、全ての測定した時点で処置前の測定値と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の低下を示した。
【０２７９】
（実施例９）
カニクイザルにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
さらなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を、カニクイザルにおいて評価した。１日目、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）霊長類（本明細書において「ｃｙｎｏｓ」とも呼ばれる）に、それぞれ食塩水中で製剤化したＡＤ０５４８８、ＡＤ０５７４３、ＡＤ０５７７５、またはＡＤ０５８４１のいずれかを含む、２．０ｍｇ／ｋｇのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤を含有する０．３ｍＬ／ｋｇ（容積約２〜３ｍＬ、動物の体重に応じて）の単回皮下注射液を投与した。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、表３、４、および５に示すように、改変ヌクレオチドを含有し、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んだ。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８、ＡＤ０５７４３、およびＡＤ０５７７５は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の３０４位を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含んだ。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５８４１は、ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子の１０３５位を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含んだ。
【０２８０】
各群３匹のカニクイザルを試験した（ｎ＝３）。血液試料を採取し、血清試料を−１４（投与前）、−７（投与前）、１（投与前）、８、１５、２２、２９、および３５日目に分析した。各収集前、カニクイザルを一晩絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、製造元の推奨に従って、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２８１】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の平均発現レベル（この場合−１４、−７および１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
【０２８２】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表４２〜４５に示す。
【表４２】
2020534268.tif 000093
【表４３−１】
2020534268.tif 000094
【表４３−２】
2020534268.tif 000095
【表４４】
2020534268.tif 000096
【表４５】
2020534268.tif 000097
【表４６】
2020534268.tif 000098
【０２８３】
ＡＤ０５４８８、ＡＤ０５７４３、ＡＤ０５７７５、およびＡＤ０５８４１のいずれかをそれぞれ、２．０ｍｇ／ｋｇの投薬レベルで投与したカニクイザルのそれぞれは、測定した時点のそれぞれで処置前の測定値と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の低下を示した。
【０２８４】
（実施例１０）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のさらなるｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３遺伝子上の３０４位を標的とするように設計されたさらなるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前の血清試料を、−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の０．５ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）を含有する２００μｌの単回皮下投与を、表４７に記載した投薬群に従って行った。
【表４７】
2020534268.tif 000099
【０２８５】
ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。上記で指摘したように、本試験で投与したＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、３０４位でＡＮＧＰＴＬ３遺伝子を標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含んだ。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス３匹を試験した（ｎ＝３）。８、１５、２２、２９日目、および一部の群（すなわち、群１、２、および９〜１３のみ）では３６日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２８６】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
【０２８７】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表４８〜５２に示す。
【表４８−１】
2020534268.tif 000100
【表４８−２】
2020534268.tif 000101
【表４９−１】
2020534268.tif 000102
【表４９−２】
2020534268.tif 000103
【表５０−１】
2020534268.tif 000104
【表５０−２】
2020534268.tif 000105
【表５１−１】
2020534268.tif 000106
【表５１−２】
2020534268.tif 000107
【表５２】
2020534268.tif 000108
【０２８８】
上記の表４８に示すように、試験したＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、全ての時点でＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の有意な低下を示し、類似の傾向が、ＴＧレベル、総コレステロールレベル、およびＬＤＬレベルの低下に関して認められる。
【０２８９】
（実施例１１）
マウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８の用量反応を評価するために、６〜８週齢の雌性Ｃ５７ｂｌ／６マウスを使用した。投与前の血清試料を、−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中のそれぞれのｍｇ／ｋｇ用量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、またはＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）を含有する２００μｌの単回皮下投与を、表５３に記載した投薬群に従って行った。
【表５３】
2020534268.tif 000109
【０２９０】
試験したＲＮＡｉ剤（ＡＤ０５４８８）は、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。各群のマウス４匹を試験した（ｎ＝４）。８、１５、２２、および２９日目に血清を収集した。各収集前、マウスを４時間絶食させた。血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２９１】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−１日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、Ｄ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現をＤ５Ｗ対照群に対して正規化した。これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
【０２９２】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表５４〜５８に示す。
【表５４】
2020534268.tif 000110
【表５５−１】
2020534268.tif 000111
【表５５−２】
2020534268.tif 000112
【表５６】
2020534268.tif 000113
【表５７−１】
2020534268.tif 000114
【表５７−２】
2020534268.tif 000115
【表５８】
2020534268.tif 000116
【０２９３】
さらに、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルもまた、評価した。それぞれの群の全てのマウスを、２９日目に血清の収集後屠殺し、肝臓を採取し、約１００ｍｇの肝臓試料を収集して、ＲＮＡ単離のために液体窒素中で瞬間凍結した。次いで、マウス肝臓におけるＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡのレベルをＲＴ−ｑＰＣＲによって測定し、その結果を以下の表５９に示す：
【表５９】
2020534268.tif 000117
【０２９４】
特に、表５４および５９に示すように、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８の投与は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質およびＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡの両方の低下を示した。
【０２９５】
（実施例１２）
ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）ノックアウトマウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
疾患モデルにおけるＲＮＡｉ剤投与の効果を評価するために、ＬＤＬ受容体に遺伝子突然変異を有するマウス（本明細書においてＬＤＬＲ  ＫＯマウスと呼ばれる）を購入した（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。ＬＤＬＲ  ＫＯマウスは、Ｌｄｌｒｔｍ１Ｈｅｒ突然変異に関してホモ接合であり、特に高脂肪飼料を与えた場合、上昇した血清中コレステロールレベルを有する。試験開始前３週間、３９匹のＬＤＬＲ  ＫＯマウスに、高脂肪飼料（Ｔｅｋｌａｄ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｄｉｅｔｓ  ＴＤ．８８１３７）を与えた。さらに８匹のＬＤＬＲ  ＫＯマウスに、同じ３週間の期間にわたり、通常の飼料（ｃｈｏｗ  ｄｉｅｔ）を与えた。投与前の血清試料を、−１５日目および−１日目に、４時間絶食後に採取した。１日目、各マウスに、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中のそれぞれのｍｇ／ｋｇ用量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉ剤を含まない対照（Ｄ５Ｗ）、またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ゲノムを標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含む対照ＲＮＡｉ剤を含有する、動物の体重３０ｇ毎に２００μｌの単回皮下投与を行った。同じ製剤の２回目の注射を、２９日目に動物に投与した。試験の投薬レジメンを、以下の表６０に記載する。
【表６０】
2020534268.tif 000118
【０２９６】
各マウスを、試験期間を通してそのそれぞれの飼料で維持した。試験したＲＮＡｉ剤（ＡＤ０５４８８）は、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。８、１５、２２、２９（２回目の投与前）、３６、４３、５０、および５７日目に血清を収集した。各収集前、ＬＤＬＲ  ＫＯマウスを４時間絶食させた。１５日目に、群１、２、および３の４匹のＬＤＬＲ  ＫＯマウス（すなわち高脂肪「西洋型」飼料を投与された群）を、血清収集後に屠殺し、２９日目に、群１、２、および３のさらに４匹のＬＤＬＲ  ＫＯマウスを、ｍＲＮＡ評価を実施する目的で、血清収集後に屠殺した。
【０２９７】
血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルをＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。血清中のトリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０２９８】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、ＴＧ、総コレステロール、ＨＤＬ、またはＬＤＬのそれぞれのレベルを、その動物における処置前の平均発現レベル（この場合−１５日目と−１日目の平均）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
【０２９９】
次いで、個々の動物に関する「処置前に対して正規化した」比を、それぞれの同じ飼料を与えたＤ５Ｗ対照群の全てのマウスの平均の「処置前に対して正規化した」比によって除算することにより、特定の時点での発現を、同じ飼料（すなわち、高脂肪「西洋型」飼料または通常の飼料（ｃｈｏｗ−ｆｅｄ  ｄｉｅｔ）のいずれか）を投与したＤ５Ｗ対照群に対して正規化し、これによって、対照群の発現に対して正規化された各時点での発現が得られた。
【０３００】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表６１〜６５に示す。
【表６１】
2020534268.tif 000119
【表６２】
2020534268.tif 000120
【表６３】
2020534268.tif 000121
【表６４】
2020534268.tif 000122
【表６５−１】
2020534268.tif 000123
【表６５−２】
2020534268.tif 000124
【０３０１】
表６１〜６５に示すように、３．０ｍｇ／ｋｇのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８を投与した群（すなわち、群２および５）は、このモデルにおいてＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、ＴＧレベル、および総コレステロールの有意な低下を示した。高脂肪「西洋型」飼料を与えたＬＤＬＲ  ＫＯマウスは、３ｍｇ／ｋｇ用量のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８の２回投与により、対照と比較して、特に低いレベルを示し、５７日目でＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルが約９９％低下（０．００７）した。ＨＢＶ  ｍＲＮＡを標的とするように設計されたヌクレオチド配列を含むＲＮＡｉ剤対照を含む群３は、予想された成績を示し、ＡＮＧＰＴＬ３の阻害を本質的に示さなかったことも指摘される。
【０３０２】
さらに、ＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルもまた評価した。１５日目、４匹のマウスを、群１、２、および３のそれぞれから屠殺した。２９日目に、さらに４匹のマウスを、群１、２、および３のそれぞれから屠殺した。５７日目に、全ての群の残っている全ての動物を屠殺した。屠殺時、肝臓を採取して、中葉からの肝臓試料約１００ｍｇを収集し、ＲＮＡ単離のために液体窒素中で瞬間凍結した。次いで、マウス肝臓におけるＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡのレベルを、ＲＴ−ｑＰＣＲによって測定し、群１のマウス（高脂肪「西洋型」飼料、Ｄ５Ｗ投与、１５日目に屠殺）のｍＲＮＡレベルに対して正規化し、その結果を以下の表６６に記載する。
【表６６−１】
2020534268.tif 000125
【表６６−２】
2020534268.tif 000126
【０３０３】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８の投与は、高脂肪「西洋型」飼料を与えた動物および通常の飼料（ｃｈｏｗ−ｆｅｄ  ｄｉｅｔ）を与えた動物の両方においてＡＮＧＰＴＬ３  ｍＲＮＡレベルの有意な低下を示した。
【０３０４】
（実施例１３）
高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）飼料を与えたアカゲザルにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８を、高フルクトースコーンシロップ（ＨＦＣＳ）飼料を与えたアカゲザルにおいてさらに評価した。アカゲザルに、投薬前３７日間ＨＦＣＳ飼料を与えた。これらの動物は、ＨＦＣＳ飼料によって１８０ｍｇ／ｄＬより多くの血漿中トリグリセリドの増加を生じることが公知であった。１日目および再度２９日目に、４匹のアカゲザルに、食塩水中で製剤化した４．０ｍｇ／ｋｇのＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８を含有する皮下注射液を投与した（ｎ＝４）。さらに２匹のアカゲザルに通常の食塩水対照を投与した。ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８は、表３、４、および５に示すように、改変ヌクレオチドを含有し、センス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドを含んだ。
【０３０５】
絶食後の血液試料を、分析のために採取し、血清試料を、−８（投与前）、８、１５、２１、２９、および３６日目に分析した。血清中のＡＮＧＰＴＬ３発現レベル、トリグリセリド、総コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０３０６】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、トリグリセリド、ＨＤＬ、および総コレステロールのレベルをそれぞれ、その動物における処置前の発現レベル（この場合−８日目）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。
【０３０７】
本実施例に記載の試験からのデータを以下の表６７〜７１に示す。
【表６７】
2020534268.tif 000127
【表６８】
2020534268.tif 000128
【表６９−１】
2020534268.tif 000129
【表６９−２】
2020534268.tif 000130
【表７０】
2020534268.tif 000131
【表７１】
2020534268.tif 000132
【０３０８】
４．０ｍｇ／ｋｇの投薬レベルのＡＤ０５４８８を投与したアカゲザルは、測定した時点のそれぞれで処置前の測定値と比較してＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の有意な低下を示した。さらに、トリグリセリドおよび総コレステロールレベルの低下は明白であった。
【０３０９】
（実施例１４）
ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）ノックアウトマウスにおけるＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤およびスタチンのｉｎ  ｖｉｖｏ試験
疾患モデルにおけるＲＮＡｉ剤およびスタチンの同時投与の効果を評価するために、ＬＤＬＲ  ＫＯマウスを購入した（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）。試験開始前の３週間、４１匹の雄性７〜８週齢ＬＤＬＲ  ＫＯマウスに、高脂肪（「西洋型」）飼料（Ｔｅｋｌａｄ  Ｃｕｓｔｏｍ  Ｄｉｅｔｓ  ＴＤ．８８１３７）を与え、試験期間を通してその飼料で維持した。投与前血清飼料を、試験１日目に４時間の絶食後に採取した。試験の投薬レジメンを以下の表７２に記載する。
【表７２】
2020534268.tif 000133
【０３１０】
試験の強制経口投与のために使用したビヒクルは、購入したＯｒａ−Ｐｌｕｓ（登録商標）：Ｏｒａ−Ｓｗｅｅｔ（登録商標）溶液の１：１混合物であった。アトルバスタチン強制経口投与の調製のために、アトルバスタチンのそれぞれの所望の用量を、最初に滅菌水（所望の製剤１ｍＬあたり０．３ｍＬの水）に溶解し、なめらかになるまでボルテックスした後、１：１のＯｒａ−Ｐｌｕｓ（登録商標）：Ｏｒａ−Ｓｗｅｅｔ（登録商標）溶液（所望の製剤１ｍＬあたり０．７ｍＬのビヒクル）の混合物を添加し、ボルテックスした。１日目およびその後のそれぞれの日に、強制経口投与用量を、群２を除く群のそれぞれに投与した。２３日目、群１、２、３、および４に、Ｄ５Ｗ（５％デキストロース水溶液）中の２．５ｍｇ／ｋｇ用量（３１．２５μｇ／ｍＬ溶液）のＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉ剤を含まないビヒクル対照（Ｄ５Ｗ）の単回皮下投与を行った。
【０３１１】
試験したＲＮＡｉ剤（ＡＤ０５４８８）は、改変配列およびセンス鎖の５’末端にコンジュゲートされたＮ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んだ（改変配列および標的化リガンド構造に関して表３、４、および５を参照されたい）。首および肩領域の弛緩した皮膚の皮膚と筋肉の間に注射を実施した（すなわち、皮下注射）。８、１５、２２（ＲＮＡｉ剤注射前）、２９、３６、４３、および５０日目に血清を収集した。各収集前、ＬＤＬＲ  ＫＯマウスを４時間絶食させた。
【０３１２】
血清中のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により、製造元の推奨に従って測定した。他のバイオマーカーの中でも、血清中のトリグリセリド、総コレステロール、および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を、Ｃｏｂａｓ（登録商標）Ｉｎｔｅｇｒａ  ４００（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）において製造元の推奨に従って測定した。
【０３１３】
各動物のＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベル、トリグリセリドレベル、総コレステロールレベル、ＨＤＬレベル、およびＬＤＬレベルを正規化した。正規化のために、ある時点で各動物に関するＡＮＧＰＴＬ３タンパク質、ＴＧ、総コレステロール、またはＬＤＬのそれぞれのレベルを、その動物における処置前の発現レベル（この場合１日目の投与前レベル）で除算し、「処置前に対して正規化した」発現比を決定した。本実施例に記載の試験からのデータを以下の表７３〜７６に示す。
【表７３−１】
2020534268.tif 000134
【表７３−２】
2020534268.tif 000135
【表７４−１】
2020534268.tif 000136
【表７４−２】
2020534268.tif 000137
【表７５−１】
2020534268.tif 000138
【表７５−２】
2020534268.tif 000139
【表７５−３】
2020534268.tif 000140
【表７６−１】
2020534268.tif 000141
【表７６−２】
2020534268.tif 000142
【０３１４】
アトルバスタチンを毎日投与したマウスは、トリグリセリドの約４０〜６０％の低下、総コレステロールの約２３〜４０％の低下、およびＬＤＬの約３０〜４５％の低下をそれぞれ示した。より高用量のアトルバスタチンによって処置したマウスは典型的に、より大きい低下をもたらした。
【０３１５】
ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８を、アトルバスタチンの同時投与により投与すると（すなわち、群３および４）、脂質パラメータに対して相加的効果を示した。例えば、アトルバスタチンおよびＲＮＡｉ剤の同時投与を含む群では、トリグリセリド、総コレステロール、およびＬＤＬの全体的な低下はそれぞれ、約９５％、約７０％、および約８０％であった。アトルバスタチンの同時投与による全体的な脂質パラメータプロファイルは、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８単独の投与よりわずかに良好であった。さらに、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０５４８８の群は、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質レベルの明確な低下を示したが、ＡＮＧＰＴＬ３  ＲＮＡｉ剤の投与を伴わない群では、ＡＮＧＰＴＬ３タンパク質の低下は認められなかった。
【０３１６】
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に説明してきたが、前記説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される、本発明の範囲を例示することを意図するものであり、それを限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内にある。
【図１Ａ】
2020534268.tif 000143
【図１Ｂ】
2020534268.tif 000144
【図１Ｃ】
2020534268.tif 000145
【図１Ｄ】
2020534268.tif 000146
【図２Ａ】
2020534268.tif 000147
【図２Ｂ】
2020534268.tif 000148
【図２Ｃ】
2020534268.tif 000149
【図２Ｄ】
2020534268.tif 000150
【図３Ａ】
2020534268.tif 000151
【図３Ｂ】
2020534268.tif 000152
【図３Ｃ】
2020534268.tif 000153
【図３Ｄ】
2020534268.tif 000154
【図４Ａ】
2020534268.tif 000155
【図４Ｂ】
2020534268.tif 000156
【図４Ｃ】
2020534268.tif 000157
【図４Ｄ】
2020534268.tif 000158
【図５Ａ】
2020534268.tif 000159
【図５Ｂ】
2020534268.tif 000160
【図５Ｃ】
2020534268.tif 000161
【図５Ｄ】
2020534268.tif 000162
【図５Ｅ】
2020534268.tif 000163
【図５Ｆ】
2020534268.tif 000164
【図５Ｇ】
2020534268.tif 000165
【図５Ｈ】
2020534268.tif 000166
【図５Ｉ】
2020534268.tif 000167
【図５Ｊ】
2020534268.tif 000168
【図５Ｋ】
2020534268.tif 000169
【配列表】
2020534268000001.app
【国際調査報告】
2020534268.tif 000170
2020534268.tif 000171
2020534268.tif 000172
2020534268.tif 000173