(57)【要約】  ＭＣＬ−１阻害剤を用いた、対象におけるＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を治療する方法、並びにそれに関連する組成物が開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要な対象において癌を治療する方法であって、アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを投与し、それによって対象の癌を治療することを含む方法であって、ここで、癌はＢＣＬ−２阻害剤耐性であって、対象はＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性であるか、または耐性がある、方法。
【請求項２】
必要な対象において癌を治療する方法であって、
癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であることを決定すること；および
アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを対象に投与し、それによって癌を治療すること
を含む方法。
【請求項３】
必要な対象において癌を治療する方法であって、
癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であって、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性がある場合、対象がアルボシジブ、またはそのプロドラッグに応答する見込みがあると特定すること；および
有効量のアルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与すること
を含む方法。
【請求項４】
必要な対象において癌を治療する方法であって、
アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与することを含む方法であり、ここで癌は
対象から癌細胞を取得すること；および
ｉ）癌細胞におけるＢＣＬ−２およびＭＣＬ−１の発現を定量化すること、ここで、ＢＣＬ−２発現に対してＭＣＬ−１発現が増加することは、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；
ｉｉ）癌細胞においてＢＣＬ−２依存性を決定すること、ここで、低いＢＣＬ−２依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；または
ｉｉｉ）癌細胞においてＭＣＬ−１依存性を決定すること、ここで、高いＭＣＬ−１依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す
を含むインビトロ方法によって、ＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定される、方法。
【請求項５】
癌が血液癌である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
血液癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＡＭＬが再発性または難治性ＡＭＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＡＭＬがフロントラインＡＭＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
血液癌が多発性骨髄腫である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
血液癌が骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
ＭＤＳが高リスクＭＤＳである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
血液癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項５に記載の方法。
【請求項１３】
癌が固形癌である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
治療レジメンがさらに、シタラビンおよびミトキサントロンを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
治療レジメンがアルボシジブを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
アルボシジブのプロドラッグがリン酸プロドラッグである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
アルボシジブのリン酸プロドラッグが以下の構造：
【化１】
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を有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療を受けたことがあり、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性または耐性がある、請求項２または４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
対象が少なくとも１５％のＭＣＬ−１依存率を有する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法であって、ここで、ＭＣＬ−１依存率は、対象からの複数の癌細胞の第一の部分を、配列番号：１または配列番号：２の配列を有するプロファイリングペプチドと接触させることを含むインビトロ方法によって得られる、方法。
【請求項２０】
対象が少なくとも４０％のＭＣＬ−１依存率を有する、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表に関する言及
本願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、引用により本明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名前は910208_431WO_SEQUENCE_LISTING.txtである。テキストファイルは１．２４ＫＢであり、２０１８年９月１１日に作成され、EFS-Webによって電子的に作成される。
【背景技術】
【０００２】
技術分野
本発明は一般に、ＭＣＬ−１阻害剤およびそれに関連する組成物を用いて、ＢＣＬ−２阻害剤非感受性の対象を治療するための方法に関する。
【０００３】
関連する分野の説明
Ｂ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ−２）阻害剤ベネトクラックス（ＡＢＴ−１９９、ベネクレクスタ）は、染色体１７ｐ欠失を有する患者の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療、および少なくともその前治療のために、２０１６年にＦＤＡによって承認された。ベネトクラックスは、生存促進ＢＣＬ−２タンパク質と、細胞死（ＢＩＭ）のＢＣＬ−２相互作用メディエーターおよびＢＣＬ−２関連死プロモーター（ＢＡＤ）などの抗生存アポトーシス促進タンパク質との間の相互関係を阻害することによって機能する。ベネトクラックスは、ＣＬＬの単剤療法として第Ｉ相および第ＩＩ相臨床試験で高い全奏効率を示した(70-79%; Zhu, H., Almasan, A. Drug Des Devel Ther 2017, 11, 685-94)。
【０００４】
ＣＬＬにおけるベネトクラックスの成功に反して、約２０〜３０％の患者が応答を示さず、少数の患者が完全寛解（８−２０％）を示し、約５０％の患者が１８ヶ月後に疾患の進行を示した(Huber, H., et al. Oncotargets and Therapy, 2017, 10, 645−56)。
【０００５】
さらなる生存促進性タンパク質、巨大Ｂ細胞性リンパ腫（ＢＣＬ−ｘＬ）および骨髄細胞性白血病１（ＭＣＬ−１）はまた、ＢＩＭおよびＢＡＤを抑制することによって細胞死を阻害し、ベネトクラックスに対する可能性のある耐性メカニズムを表す (Choudhary, G.S. et al. Cell Death and Disease Jan 2015, 6 (1), e1593 and Oppermann, S. et al., Blood 2016 128 (7) 934−47)。ＢＣＬ−２およびＢＣＬ−ｘＬを阻害する、第一世代のＢＣＬ−２阻害剤、ナビトクラックス（ＡＢＴ−２６３）は、血小板減少のために毒性であり、血小板の生存におけるＢＣＬ−ｘＬの重要な役割を示すことが、他の報告と共に実証された(Zhang, H. et al. Cell Death and Differentiation, 2007 14, 943−51; Debrincat, M.A. et al., Cell Death & Disease 2015, 6, 1721)。
【０００６】
そのため、ＢＣＬ−２阻害剤を用いた治療に耐性を有する患者、並びに完全な応答および／または治療後の疾患の進行を示さない患者に治療を提供するために、現在の治療上のニーズが存在する。本発明はこれらのニーズを満たし、他の関連する利点を提供する。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の実施態様は一般に、癌、例えば、ＢＣＬ−２阻害剤耐性癌の治療方法に関する。いくつかの実施態様は、必要な対象における癌の治療方法を提供し、ここで、当該方法は、アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを投与し、それによって対象における癌が治療することを含み、ここで、癌はＢＣＬ−２阻害剤耐性であり、対象はＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性である。
【０００８】
ある実施態様は、必要な対象における癌を治療する方法を提供し、ここで、当該方法は、癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定すること、およびアルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを患者に投与し、それによって癌を治療することを含む。
【０００９】
ある別の実施態様は、必要な対象における癌を治療する方法を提供し、当該方法は、癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であって、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性である場合、対象がアルボシジブ、またはそのプロドラッグによる治療に応答する見込みがあると特定すること、および有効量のアルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与することを含む。
【００１０】
さらに別の実施態様は、必要な対象における癌を治療する方法を提供し、当該方法は、アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与することを含み、ここで、癌は、
対象から癌細胞を取得すること；および
ｉ）癌細胞におけるＢＣＬ−２およびＭＣＬ−１の発現を定量化すること、ここで、ＢＣＬ−２発現に対してＭＣＬ−１発現が増加することは、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；
ｉｉ）癌細胞においてＢＣＬ−２依存性を決定すること、ここで、低いＢＣＬ−２依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；または
ｉｉｉ）癌細胞においてＭＣＬ−１依存性を決定すること、ここで、高いＭＣＬ−１依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す
を含むインビトロ方法によって、ＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定される。
【００１１】
そのため、これら、および他の実施態様は、ＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性である、および／または非応答性である癌（例えば、白血病）患者の治療に対して有用性を提供する。これら、および他の局面は、以下の詳細な説明、および付属の図を参照することにより明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
図において、同一の参照番号は同様の要素を特定する。図における要素の大きさおよび相対的な位置は、必ずしも正確な縮尺率で描かれているわけではなく、これらの要素のいくつかは図の読みやすさを向上するために、拡大および配置される。さらに、描かれた要素の特定の形状は、特定の要素の実際の形状に関する情報を伝えることを意図したものではなく、図の認識を容易にするために単に選択されている。
【図１】図１は、アルボシジブによって処理されたＭＶ−４−１１細胞における、ＭＣＬ−１  タンパク質の発現の用量依存性減少を示す。
【図２】図２は、アルボシジブ、パルボシクリブおよびディナシクリブによって処理されたＭＶ−４−１１細胞における、ＭＣＬ−１の発現の用量依存性減少を示す。
【図３】図３は、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９による治療と比較して、アルボシジブで処理したＯＣＩ−ＡＭＬ３腫瘍細胞におけるインビボでの腫瘍成長を示す。
【図４】図４は、アルボシジブで処理したＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞について、ＭＣＬ−１タンパク質の発現のインビトロにおける減少を示す。
【図５】図５は、ベネトクラックスによる治療と比較して、アルボシジブで処理したＨＥＬ細胞における細胞生存のインビトロ阻害を示す。
【図６】図６は、ベネトクラックスによる治療と比較して、アルボシジブで処理したＯＰＭ２細胞における細胞生存のインビトロ阻害を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
詳細な説明
以下の説明において、本発明の様々な実施態様の完全な理解を提供するために、いくつかの特定の詳細が記載される。しかしながら、本発明がこれらの詳細がなくても実施されうることを当業者は理解するであろう。
【００１４】
文脈から明らかにそうでない場合を除いて、本明細書および特許請求の範囲を通して、用語「含む」、並びに「含む」および「含んでいる」などのそのバリエーションは、「限定されないが、〜など」と同様に、オープンな包括的な意味において解釈されるべきである。
【００１５】
本明細書を通して、「１つの実施態様」または「ある実施態様」についての言及は、その実施態様との関連で記載される、特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも１つの実施態様において含まれることを意味する。そのため、本明細書を通して、様々な場所における語句「１つの実施態様において」または「ある実施態様において」の出現は、必ずしも全てが同じ実施態様をいうものではない。さらに、特定の特徴、構造、または特性は、１つ以上の実施態様において、任意の適切な方法で組み合わせられうる。
【００１６】
他に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術における当業者によって、通常理解されるものと同様の意味を有する。明細書および特許請求の範囲において用いられる、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでないことが示されていない限り、複数の言及を含む。
【００１７】
アルボシジブ（フラボピリドールとしても知られている）は、以下の構造：
【化１】
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を有する化合物をいう。
【００１８】
アルボシジブの薬学的に許容可能な塩は、いくつかの実施態様において、アルボシジブの定義に含まれる。
【００１９】
「プロドラッグ」は、生理学的条件下で、または加溶媒分解によって、アルボシジブに変換される化合物を指すことが意図される。いくつかの局面において、プロドラッグは対象に投与される時に不活性であるが、インビボで、例えば、加水分解によって、アルボシジブに変換される。プロドラッグ化合物はしばしば、哺乳動物において、溶解度、組織適合性、または遅延放出の利点を提供する（例えば、Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7 9, 21 24 (Elsevier, Amsterdam)を参照されたい）。プロドラッグについての議論は Higuchi, T., et al., 「Pro drugs as Novel Delivery Systems」, A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, および Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987において提供され、これらはいずれも、引用によってその全体が本明細書に援用される。アルボシジブのプロドラッグは一般に、修飾がインビボで切断されてアルボシジブを生じるように、アルボシジブに存在する官能基を修飾することによって製造される。アルボシジブのプロドラッグの例としては、ヒドロキシ基が、化合物が哺乳動物対象に投与された時に、官能基が切断されて、遊離のヒドロキシ化合物（すなわち、アルボシジブ）を生じるような官能基で保護された化合物が挙げられる。プロドラッグの特定の例としては、本明細書に開示される、アルボシジブのリン酸プロドラッグが挙げられる。プロドラッグの薬学的に許容可能な塩は、いくつかの実施態様の範囲内に含まれる。
【００２０】
用語「有効量」または「治療上の有効量」は、以下に定義されるように、限定されないが、疾患の治療等の意図される用途をもたらすのに十分な、本明細書に記載される組成物における化合物の分量をいう。治療上の有効量は、意図される治療用途（インビボ）、または治療される対象および疾患状態、例えば、対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、投与方法などに応じて変化する場合があり、これは当業者によって容易に決定することができる。当該用語はまた、標的細胞において特定の応答、例えば、血小板接着の減少、および／または細胞移動などを誘導する用量に適用される。特定の用量は、選択される組成物の特定の化合物、従うべき用量レジメン、他の化合物との組み合わせで投与されるかどうか、投与のタイミング、投与される組織、およびそれが送達される物理的な送達系に応じて変化するであろう。
【００２１】
本明細書で用いられる「治療」または「治療すること」は、限定されないが、治療上の便益および／または予防上の便益などの、疾患、障害、または病状に関して、有益なまたは望ましい結果を得るためのアプローチをいう。治療上の便益とは、治療されている根本的な障害の根絶または改善を意味する。また、対象が根本的な障害に未だ苦しんでいても、対象において改善が観察されるように、治療上の便益は、根本的な障害に関連する、１つ以上の生理学的症状の根絶または改善によって達成される。いくつかの実施態様において、疾患の診断がなされていなくても、予防上の便益のために、組成物は、特定の疾患が進行するリスクのある対象、または疾患の生理学的症状の１つ以上が報告されている対象に投与される。
【００２２】
本明細書で用いられる「治療上の効果」は、前記の治療上の便益および／または予防上の便益を含む。予防上の効果としては、疾患もしくは病状の出現の遅延もしくは排除、疾患もしくは病状の症状の発現の遅延もしくは排除、疾患もしくは病状の進行の遅延、停止、もしくは回復、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００２３】
本明細書で用いられる用語「共投与」、「組み合わせで投与した」、およびそれらの文法上の等価物は、両方の薬剤および／またはその代謝物が、対象において同時に存在するように、ヒトなどの動物に対して２つ以上の薬剤を投与することを含む。共投与としては、別個の組成物における同時投与、別個の組成物における異なる時間における投与、またはいずれの薬剤も存在する組成物における投与が挙げられる。
【００２４】
「薬学的に許容可能な塩」としては、酸および塩基付加塩の両方が挙げられる。
「薬学的に許容可能な酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的な有効性および性質を有し、生物学的またはその他の面で望ましくないものではなく、限定はされないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、および、限定はされないが、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、カンファー酸、カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、サイクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２−オキソ−グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などの有機酸によって形成される塩をいう。
【００２５】
「薬学的に許容可能な塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的な有効性および性質を有し、生物学的またはその他の面で望ましくないものではない塩をいう。これらの塩は、遊離酸に無機塩基または有機塩基を付加して製造される。無機塩基に由来する塩としては、限定はされないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などが挙げられる。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。有機塩基に由来する塩としては、限定はされないが、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの、一級、二級、および三級アミン、天然に存在する置換アミンなどの置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられる。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。
【００２６】
いくつかの実施態様において、薬学的に許容可能な塩としては、４級アミンアルキルハライド塩（例えば、メチルブロマイド）などの、４級アンモニウム塩が挙げられる。
【００２７】
用語「アンタゴニスト」および「阻害剤」は同義で用いられ、それらはＭＣＬ−１などのタンパク質の活性または発現を阻害することによって、標的タンパク質の生物学的機能を阻害する能力を有する化合物をいう。そのため、用語「アンタゴニスト」および「阻害剤」は、標的タンパク質の生物学的役割との関連において定義される。アンタゴニストによって阻害される、好ましい生物学的活性は、腫瘍の進行、成長、または拡大に関連する。
【００２８】
本明細書で用いられる用語「アゴニスト」は、標的タンパク質の活性または発現を阻害することのいずれかによって、標的タンパク質の生物学的機能を引き起こす、または増強する能力を有する化合物をいう。そのため、用語「アゴニスト」は、標的ポリペプチドの生物学的役割との関連において定義される。本明細書における好ましいアゴニストは、標的と特異的に相互作用（例えば、結合）するが、標的ポリペプチドがメンバーであるシグナル伝達経路の他のメンバーと相互作用することによって、標的プリペプチドの生物学的活性を引き起こす、または増強する化合物もまた、特にこの定義の範囲内に含まれる。
【００２９】
本明細書で用いられる「薬剤」または「生物学的に活性な薬剤」は、生物学的、薬学的、または化学的な化合物、または他の部分をいう。限定されない例としては、単一のまたは複合体の有機または無機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭水化物、毒素、または化学療法化合物が挙げられる。様々な化合物、例えば、小分子およびオリゴマー（例えば、オリゴペプチドおよびオリゴヌクレオチド）、並びに合成有機化合物を、様々なコア構造に基づいて合成することができる。さらに、様々な天然源は、植物または動物抽出物などの、スクリーニングのための化合物を提供しうる。
【００３０】
「抗癌剤」、「抗腫瘍剤」、または「化学療法剤」は、腫瘍性疾患の治療に有用な任意の薬剤をいう。抗癌剤の１つのクラスは、化学療法剤を含む。「化学療法」は、静脈内、経口、筋肉内、腹腔内、膀胱内、皮下、経皮、バッカル、または吸入、または座薬の形態などの様々な方法によって、１つ以上の化学療法剤および／または他の薬剤を癌患者に投与することを意味する。
【００３１】
用語「細胞増殖」は、分裂の結果、細胞の数が変化する現象をいう。この用語はまた、増殖性シグナルと一致して、細胞形態（例えば、大きさの増加）が変化する細胞増殖を含む。
【００３２】
用語「選択的阻害」または「選択的に阻害する」は、標的と直接的または間接的に相互作用することによって、生物学的に活性な薬剤が、非特異的なシグナル伝達活性と比較して、標的シグナル伝達活性を選択的に減少させる薬剤の能力をいう。
【００３３】
「対象」は、哺乳動物などの動物、例えばヒトをいう。本明細書に記載される方法は、ヒトの治療および獣医学的応用のいずれにおいても有用でありうる。いくつかの実施態様において、対象は哺乳動物であり、いくつかの実施態様において、対象はヒトである。
【００３４】
「哺乳動物」としては、ヒト、並びに実験動物および家庭用ペット（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）などの飼育動物、および野生動物などの非飼育動物の両方が挙げられる。
【００３５】
「放射線治療」は、医師に知られている通例の方法および組成物を用いて、アルファ粒子放出放射性核種（例えば、アクチニウムおよびトリウム放射性核種）、低い線エネルギー付与（ＬＥＴ）放射線放出体（すなわち、ベータ放出体）、転換電子放出体（例えば、ストロンチウム−８９およびサマリウム−１５３−ＥＤＴＭＰ）、または高エネルギー放射線、限定されないが、ｘ線、ガンマ線、および中性子などの放射線放出体に対象を曝露することを意味する。
【００３６】
用語「インビボ」は、対象の体内で生じる事象をいう。
【００３７】
「医薬組成物」は、哺乳動物、例えばヒトに、生物学的に活性な化合物を送達するために、一般に当技術分野において受け入れられている化合物および媒体の製剤をいう。そのような媒体としては、そのための全ての薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤が挙げられる。
【００３８】
「薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤」としては、限定はされないが、ヒトまたは飼育動物における使用について許容可能であると、米国食品医薬品局によって承認された、任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、調味料、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁化剤、安定化剤、等張剤、溶媒、または乳化剤が挙げられる。
【００３９】
治療方法
染色体１７ｐ欠失を伴うＣＬＬを有する患者の治療のために、現在承認されている治療レジメン（すなわち、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９）は、良好な全体的な応答、および初期疾患の無進行を示す；しかしながら、患者のごく一部のみが完全奏功を示し、患者の少なくとも５０％は、１８ヶ月後に疾患の進行を示す。そのため、本開示は、ＣＤＫ９／ＭＣＬ−１阻害剤は、ＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性を示す（例えば、ＣＬＬを有する）癌患者に、有用な治療上の選択肢を提供するという事実に、少なくとも部分的に基づく。
【００４０】
そのため、本開示の実施態様は、ＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性がある、および／または非応答性である、白血病患者の治療に有用である。さらに、いくつかの実施態様は、患者がＣＤＫ９／ＭＣＬ−１阻害剤に応答するかどうかを決定する、ＢＨ３プロファイリングアッセイなどのコンパニオン診断アッセイと共に、またはそれを行わずに用いられうる。
【００４１】
ある実施態様は、必要な対象において、ＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を治療するための方法を提供し、ここで、当該方法は、アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを、ＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性を有する対象に投与すること、およびそれによって対象における癌を治療することを含む。
【００４２】
実施態様において、治療レジメンは、ＵＳ２０１６／０３４０３７６において記載されるものなどの、アルボシジブのプロドラッグを含み、これはその全体が引用によって本明細書に援用される。実施態様において、アルボシジブのプロドラッグは、アルボシジブのリン酸プロドラッグである。いくつかの実施態様において、アルボシジブのリン酸プロドラッグは、以下の構造（Ｉ）：
【化２】
2020535122.tif 000004
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうち１つは、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）２であり、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のうち他の２つは、それぞれＨである。］
またはその立体異性体、互変異性体、または薬学的に許容可能な塩を有する。
【００４３】
いくつかの実施態様において、アルボシジブのリン酸プロドラッグは、以下の構造：
【化３】
2020535122.tif 000005
を有する。
【００４４】
他の実施態様は、必要な対象における癌の治療方法を提供し、ここで、当該方法は、癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定すること、およびアルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを対象に投与し、それによって癌を治療することを含む。特定の実施態様において、癌はＢＣＬ−２阻害剤による前治療に対して耐性がある。
【００４５】
関連する実施態様は、必要な対象において癌を治療するための方法を提供し、ここで、当該方法は、癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であって、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性を有する場合に、対象がアルボシジブまたはそのプロドラッグによる治療に応答する見込みがあると特定すること、および有効量のアルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与することを含む。
【００４６】
ある実施態様は、必要な対象において癌を治療するための方法を提供し、ここで、当該方法は、アルボシジブ、またはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与することを含み、癌は、
対象から癌細胞を取得すること；および
ｉ）癌細胞におけるＢＣＬ−２およびＭＣＬ−１の発現を定量化すること、ここで、ＢＣＬ−２発現に対してＭＣＬ−１発現が増加することは、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；
ｉｉ）癌細胞においてＢＣＬ−２依存性を決定すること、ここで、低いＢＣＬ−２依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；または
ｉｉｉ）癌細胞においてＭＣＬ−１依存性を決定すること、ここで、高いＭＣＬ−１依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す
を含むインビトロ方法によって、ＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定される。
【００４７】
いくつかの実施態様において、対象は、ベネトクラックスなどのＢＣＬ−２阻害剤による前治療を受けている。
【００４８】
ＭＣＬ−１およびＢＣＬ−２依存性は、米国特許第７，８６８，１３３号；８，２２１，９６６号；および８，１６８，７５５号、および米国特許公報第２０１１／０１３０３０９号、２０１６／０３０３１０１号、および２０１８／０１７２６７３号において記載される、ＢＨ３プロファイリングなどの、当技術分野において既知の方法に基づいて決定することができ、これら全ての内容は、引用によってその全体が本明細書に援用される。
【００４９】
いくつかの実施態様において、ＭＣＬ−１依存性は、米国特許公報第２０１８／０１７２６７３号において記載されるものなどの、１つ以上の任意のプロファイリングペプチドと、対象の癌細胞を接触させることによって決定され、これは引用によってその全体が本明細書に援用される。いくつかの実施態様において、プロファイリングペプチドは、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧＧＧＲＰＥＩＷＭＴＱＧＬＲＲＬＧＤＥＩＮＡＹＹＡＲ（配列番号：１）またはＲＰＥＩＷＭＴＱＧＬＲＲＬＧＤＥＩＮＡＹＹＡＲＧＧＧＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号：２）の配列を含む。いくつかの実施態様において、プロファイリングペプチドは、配列番号：１または配列番号：２の配列から成る。別の実施態様において、プロファイリングペプチドは、ＮＯＸＡの少なくとも１部である。
【００５０】
そのようなペプチドは、癌細胞または複数の癌細胞の感受性プロファイルを作成するために用いられうる。いくつかの実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、腫瘍から単離される。いくつかの実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、非固形腫瘍の生検に由来する。いくつかの実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、対象の末梢血管から取得する。他の実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、対象の骨髄から取得する。
【００５１】
実施態様において、癌細胞は固形癌からである。いくつかの実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、固形腫瘍に由来する。いくつかの実施態様において、癌細胞および複数の癌細胞は、循環腫瘍細胞である。実施態様において、癌細胞は非固形癌からである。様々な実施態様において、癌細胞は前移転癌からである。様々な実施態様において、癌細胞は移転癌からである。
【００５２】
特定の実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、固体マトリックスまたはビーズに結合した抗ＣＤ１３８抗体によって、生検サンプルから選択することによって濃縮された、多発性骨髄腫細胞である。特定の実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、ＣＤ４５配向抗体に結合することによって濃縮された、ＡＭＬ細胞である。特定の実施態様において、癌細胞または複数の癌細胞は、非Ｂ細胞枯渇によって濃縮された、慢性リンパ性白血病またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からである。
【００５３】
様々な実施態様において、複数の癌細胞は、冷凍されていたサンプルからである。そのような実施態様において、サンプルは急速解凍プロセスを用いて加熱されうる。サンプルは次いで、培地に加えられ、インキュベートされうる。
【００５４】
別の実施態様において、複数の癌細胞は、冷凍されてない、すなわち新たに採取されたサンプルからである。そのような実施態様において、サンプルは単離した後に、培地に加えられ、インキュベートされる。
【００５５】
実施態様において、癌細胞、複数の癌細胞、またはその一部は、本明細書に開示される１つ以上のプロファイリングペプチドと接触され、分極率が決定される。実施態様において、癌細胞、複数の癌細胞、またはその一部は、本明細書に開示される１つ以上のプロファイリングペプチドと接触され、細胞のミトコンドリア完全性における変化を検出する。様々な実施態様において、１つ以上のプロファイリングペプチドが同時に用いられうる。そのような実施態様において、プロファイリングペプチドのパネル（例えば、２、３、４、５、１０などのプロファイリングペプチド）が、単一の対象の検体においてスクリーニングされうる。
【００５６】
いくつかの実施態様において、癌細胞、複数の癌細胞、またはその一部は、プロファイリングペプチドを含む組成物と接触される。そのような実施態様において、組成物は、約１．５μＭから約２．５μＭの範囲の濃度においてプロファイリングペプチドを含みうる。実施態様において、組成物は、約１．７５μＭから約２．２５μＭの範囲の濃度においてプロファイリングペプチドを含む。いくつかの実施態様において、組成物は約２．０μＭの濃度においてプロファイリングペプチドを含む。
【００５７】
実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約１５分から約４５分にわたって、１つ以上のプロファイリングペプチドと接触される。いくつかの実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約２０分から約４０分にわたって、１つ以上のプロファイリングペプチドと触される。いくつかの実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約３０分にわたって、１つ以上のプロファイリングペプチドと接触される。
【００５８】
分極率は、細胞または複数の細胞のミトコンドリア完全性の変化に関連しうる。ミトコンドリア完全性における変化は、例えば、ミトコンドリア膜電位の変化、染色体凝集、生存率低下、ミトコンドリア膜間腔からサイトゾルへのシトクロムＣの輸送、ミトコンドリアの腫脹、ミトコンドリア分裂、形態変化（例えば、細胞収縮、膜ブレブなど）、ホスファチジルセリン外在化（例えば、アネキシンＶ染色によって測定される）、または反応性酵素中間体の増加などの任意の適切な方法において検出することができる。当業者によって理解されるように、ミトコンドリア完全性の変化の指標のそれぞれについて、様々な検出方法が用いられうる。
【００５９】
実施態様において、ミトコンドリア完全性の変化は、ミトコンドリア完全性の減少であるだろう。いくつかの実施態様において、ミトコンドリア完全性の減少は、ミトコンドリア膜電位の減少によって測定される。ミトコンドリア電位の減少は、当技術分野において既知の方法を用いて決定されうる。いくつかの実施態様において、ミトコンドリア完全性の減少は、シトクロムＣの漏出によって測定される。いくつかの実施態様において、減少は統計的に有意、臨床的に有意、または生物学的に有意な減少であるだろう。いくつかの実施態様において、本明細書に記載されるミトコンドリア完全性の測定において、減少は、対象と比較して、２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の違いである。
【００６０】
ミトコンドリア膜電位の変化は、任意の適切な検出剤を用いて測定されうる。検出剤は、蛍光色素、蛍光色素に変換することができる非蛍光色素、抗体などの、任意の適切な薬剤でありうる。蛍光色素としては、例えば、５，５’，６，６’−テトラクロロ−１，１’，３，３’−テトラエチル−イミダカルボシアニン アイオダイド（ＪＣ−１）、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、１，１’，３，３，３’，３’−ヘキサメチルインドジカルボ−シアニン アイオダイド（ＤｉｌＣ１）、および３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン アイオダイド（ＤｉＯＣ６）が挙げられる。いくつかの実施態様において、蛍光色素は電位差測定色素である。適切な電位差測定色素としては、例えば、ＤｉｌＣ１、ＪＣ−１、およびローダミン１２３が挙げられる。いくつかの実施態様において、電位差測定色素としては、ＪＣ−１またはローダミン１２３が挙げられる。別の実施態様において、色素はジヒドロローダミン１２３であり、これは酸化によって変換されてローダミン１２３の蛍光色素を生じることができる非蛍光色素である。
【００６１】
実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約０．５ｎＭから約１．５ｎＭの範囲の濃度において色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約０．７５ｎＭから約１．２５ｎＭの範囲の濃度において色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約１．０μＭの濃度において色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約６０分から約１２０分にわたって色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約７５分から約１０５分にわたって色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約８０分から約１００分にわたって色素と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約９０分にわたって色素と接触される。
【００６２】
別の実施例において、シトクロムＣの輸送は、免疫蛍光染色を用いて測定することができる。さらなる実施態様において、反応性酸素中間体の増加は、カルボキシ−ジクロロフルオレセインジアセテートによる染色の後、フローサイトメトリー分析によって測定することができる。
【００６３】
様々な実施態様において、複数の癌細胞は、プロファイリングの目的のために、２つ以上の部分（例えば、３つの部分）に分けられる。実施態様において、１つの部分は陰性対照によって処理され、１つの部分は、本明細書において開示される１つ以上のプロファイリングペプチド、または１つ以上のプロファイリングペプチドを含む組成物と接触される。任意の適切な陰性対照が用いられうる。陰性対照の例としては、水、並びにＤＭＳＯ、エタノール、およびメタノールなどの水溶性有機溶媒が挙げられる。いくつかの実施態様において、陰性対照は水である。
【００６４】
そのため、本開示の方法は、複数の癌細胞の第一の部分を、プロファイリングペプチドと接触させること；複数の癌細胞の第二の部分を、陰性対照と接触させること；並びに、複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分の分極率を決定することを含む。
【００６５】
いくつかの実施態様において、複数の癌細胞の１つの部分は、陽性対照と接触される。実施態様において、１つの部分は陰性対照によって処理され、１つの部分は陽性対照によって処理され、１つの部分は、本明細書に開示される１つ以上のプロファイリングペプチド、または１つ以上のプロファイリングペプチドを含む組成物と接触される。そのような実施態様において、本開示の方法はさらに、複数の癌細胞の第三の部分を陽性対照と接触させることを含む。任意の適切な陽性対照が用いられうる。陽性対照の例としては、カルボニル シアニド−４−（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）、カルボニル シアニド ｍ−クロロフェニルヒドラゾン（ＣＣＣＰ）、Ｎ５，Ｎ６−ビス（２−フルオロフェニル）−［１，２，５］オキサジアゾロ［３，４−ｂ］ピラジン−５，６−ジアミン（ＢＡＭ−１５）などが挙げられる。特定の実施態様において、用いられる陽性対照はＣＣＣＰである。
【００６６】
実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約２５μＭから約２５０μＭの範囲の濃度において陽性対照と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約２５μＭから約２００μＭの範囲の濃度において陽性対照と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約５０μＭから約１５０μＭの範囲の濃度において陽性対照と接触される。実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、約１００μＭの濃度において陽性対照と接触される。
【００６７】
実施態様において、複数の癌細胞の少なくとも一部は、抗体（すなわち、ＦＣ受容体）の結晶化フラグメント（ＦＣ）領域に結合する細胞上の受容体を遮断する、ブロッキング緩衝液と接触される。実施態様において、複数の癌細胞は、部分に分離される前に、ブロッキング緩衝液と接触される。実施態様において、ブロッキング緩衝液は、室温において複数の癌細胞とインキュベートされる。
【００６８】
いくつかの実施態様において、複数の癌細胞は、１つ以上の標識と接触される。実施態様において、複数の癌細胞は、部分に分離される前に、標識と接触される。フローサイトメトリーを用いるいくつかの実施態様において、標識は抗体、または細胞膜構造、もしくは他の細胞構造に親和性を有する化学物質に結合したフルオロフォアである。フローサイトメトリーを用いる別の実施態様において、標識は抗体、または細胞膜構造、もしくは他の細胞構造に親和性を有する化学物質に結合した量子ドットである。これらの任意の実施態様において、抗体または化学物質は、ＣＤ３、ＣＤ１３、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ３４、またはＣＤ４５などの、任意の適切な細胞表面マーカーに認識されうる。様々な実施態様において、標識の組み合わせが用いられる。
【００６９】
実施態様において、標識は少なくとも１つのモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施態様において、少なくとも１つのモノクローナル抗体は、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３４抗体、抗ＣＤ１１７抗体、抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体、またはそれらの組み合わせを含む。特定の実施態様において、少なくとも１つのモノクローナル抗体は、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１３抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ３４抗体、またはそれらの組み合わせを含む。
【００７０】
いくつかの実施態様において、カルシウムチャネルに高い親和性を有する添加剤が、複数の癌細胞、またはその一部に加えられる。そのようないくつかの実施態様において、添加剤はジテルペノイドである。特定の実施態様において、添加剤はリアノジンである。実施態様において、添加剤は非特異的な色素の取り込みを有意に減少させる、または防止するのに十分な濃度において加えられる。いくつかの実施態様において、添加剤は少なくとも約２０μＭの濃度で加えられる。いくつかの実施態様において、添加剤は少なくとも３０μＭの濃度で加えられる。実施態様において、ジテルペノイドは約１０μＭから約５０μＭの範囲の濃度で加えられる。実施態様において、ジテルペノイドは約２０μＭから約４０μＭの範囲の濃度で加えられる。実施態様において、ジテルペノイドは約３０μＭの濃度で加えられる。
【００７１】
いくつかの実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤が、複数の癌細胞、またはその一部に加えられる。そのようないくつかの実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤はオリゴマイシンである。特定の実施態様において、オリゴマイシンはオリゴマイシンＡである。いくつかの実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は少なくとも０．２５ｕｍの濃度で加えられる。いくつかの実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は、少なくとも約０．５ｕｍの濃度で加えられる。いくつかの実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は、約１．０ｕｍ未満の濃度で加えられる。実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は約０．２５μＭから約０．７５μＭの範囲の濃度で加えられる。実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は約０．４μＭから約０．６μＭの範囲の濃度で加えられる。実施態様において、ＡＴＰ合成酵素阻害剤は約０．５μＭの濃度で加えられる。
【００７２】
実施態様において、複数の癌細胞は次いで、前記の検出剤と接触される。いくつかの実施態様において、検出剤は色素である。いくつかの実施態様において、検出剤は蛍光色素である。いくつかの実施態様において、検出剤は電位差測定色素である。いくつかの実施態様において、色素はＪＣ−１、ＤｉＯＣ６、またはローダミン１２３である。いくつかの実施態様において、色素はＪＣ−１またはローダミン１２３である。特定の実施態様において、色素はＤｉＯＣ６である。
【００７３】
いくつかの実施態様において、複数の癌細胞、またはその一部は、検出剤と接触される前に洗浄される。
【００７４】
そのような実施態様において、複数の癌細胞は次いで、フローサイトメトリーを用いて解析されうる。実施態様において、複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分の分極率の決定は、複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分を、フローサイトメトリーによって解析することを含む。いくつかの実施態様において、複数の癌細胞の第三の部分はまた、フローサイトメトリーによって解析される。
【００７５】
任意の適切なゲーティングがフローサイトメトリー解析において用いられうる。実施態様において、複数の癌細胞の第一、第二、および第三の部分の解析は、陽性対照におけるゲーティングを含む。いくつかの実施態様において、そのようなゲーティングは、芽球細胞のＣＤ４５ 弱陽性（dim）、ＣＤ１３、ＣＤ３３、およびＣＤ３４高密度において存在する。他の実施態様において、そのようなゲーティングはＣＤ３４ 弱陽性（dim）、ＣＤ３およびＣＤ２０高密度である。
【００７６】
本開示の方法は、対象サンプルから複数の癌細胞を単離すること；細胞を次いで標識すること；陰性対照、陽性対照、または本開示のプロファイリングペプチドによって処理すること；色素と接触させること；およびフローサイトメトリーで解析することを含む。
【００７７】
本明細書に記載されるいくつかの実施態様はさらに、複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分の分極率に少なくとも基づいて、複数の癌細胞の第一の部分について、Ｍｃｌ−１依存率を決定することを含む。
【００７８】
実施態様において、分極した、および脱分極した細胞を計測する。分極率は次いで、分極した細胞の数を、全体の細胞数で割り、１００をかけることによって計算することができる。そのような実施態様において、芽球は前記のようにゲーティングされる。次いで、薬剤シグナルの検出のために、芽球ゲートをヒストグラムにプロットする。次いで、特に分極した細胞においてゲートを作成し、プロファイリングペプチドによる処理に応答した細胞の割合を、以下の式で求めることができる：
【化４】
2020535122.tif 000006
ＮＣは複数の癌細胞の第二の部分の平均的な分極率であり、ＰＰは複数の癌細胞の第一の部分の分極率である。
【００７９】
実施態様において、Ｍｃｌ−１依存率（ＭＤＰ）は、以下の式によって定義される：
【化５】
2020535122.tif 000007
Ｃは校正係数であり、Avg[プライミング率]は１つ以上の複製についてのプライミング率の平均である。
【００８０】
実施態様において、校正係数は約０．１から約３．０の範囲である。いくつかの実施態様において、校正係数は約０．５から約２．５の範囲である。いくつかの実施態様において、校正係数は約１．０から約２．０の範囲である。いくつかの実施態様において、校正係数は約１．４から約１．８の範囲である。いくつかの実施態様において、校正係数は約１．５である。
【００８１】
特に言及されない限り、本明細書において計算されるＭｃｌ−１依存率は、陽性対照としてＣＣＣＰ、および陰性対照として水またはＤＭＳＯを含む、１μＭのプロファイリングペプチド濃度に対応する。いくつかの実施態様において、時間は約０から約３００分の間から、約０から約３０分の幅において生じる。
【００８２】
本開示の例示的な方法において、複数の癌細胞が調製され、サンプルの品質が確認される。凍結サンプルの場合、例えば、約６０〜７０秒間、３７℃の水浴に置かれることによって、サンプルはすぐに解凍される。サンプルを解凍した後、暖かい培地を含むフラスコに細胞を移す。インキュベーション後、品質（例えば、生存率、細胞数など）を確認する。新鮮なサンプルの場合、標準的な実験プロトコル（例えば、フィコール・パケ分離）によって、単核細胞が骨髄液から単離される。細胞を計測し、単離した細胞の生存率を決定する。次いで、暖かい培地を含むフラスコに細胞を移す。次いで、細胞をペレット状にし、ＦＣ受容体を阻害する緩衝液中に再懸濁させる。次いで、モノクローナル抗体の混合物を加え、インキュベートする。標識と共にインキュベートした後、細胞を再びペレット状にする。細胞を再び、約７．４から約７．６の範囲のｐＨを有するアッセイ緩衝液、ジテルペノイド（例えば、リアノジン）、およびＡＴＰ合成酵素阻害剤（例えば、オリゴマイシンＡ）の混合物中に再懸濁する。次いで懸濁した細胞を、３つに分割する。第一の部分を陰性対照（例えば、ヌクレアーゼ・フリーの水）と混合し、第二の部分を陽性対照（例えば、ＣＣＣＰ）と混合し、第三の部分をプロファイリングペプチド（例えば、配列番号：１の配列を有する）と混合する。３つの部分を次いでインキュベートする。インキュベーション後、細胞をペレット状にし、アッセイ緩衝液中に再懸濁する。色素（例えば、ＤｉＯＣ６）を次いで、それぞれの部分の細胞に加える。
【００８３】
例示的な方法において、細胞はフローサイトメトリーによって解析する。対象細胞株は、ライブゲートを用いて解析する。サンプルは、前方散乱対側方散乱をプロットすることによって、単一の生細胞をゲーティングすることによって解析した。高い前方および側方散乱値を含む外れ値はそれぞれ、重複と死細胞であると推定される場合があり、最終的な分析からは除外される場合がある。前方および側方散乱のいずれにおいても非常に低い事象もまた、細胞デブリとして除外されうる。側方散乱に対して、チャンネルＦＬ５（ＰＣ７標識した抗ＣＤ４５抗体）のドットプロットを作成し、ＣＤ４５ 弱陽性（dim）集団を特定する。「ＣＤ４５ 弱陽性(dim)」ゲート内の事象のみを用いて、チャンネルＦＬ３（ＥＣＤ／ＰＥ−テキサスレッド標識抗ＣＤ３および抗ＣＤ２０抗体）に対して、チャンネルＦＬ４（ＰＣ５標識抗ＣＤ１３、抗ＣＤ３３および抗ＣＤ３４抗体）のドットプロットを作成する。ＡＭＬ芽球のみをゲートするために、チャンネルＦＬ４において高く、チャンネルＦＬ３において低い（生細胞集団）細胞をゲートする。「芽球」集団内の事象のみを用いて、ＦＬ１のヒストグラムを作成する。チャンネルＦＬ１において高い細胞を決定する。作成したゲートを、同じサンプルの全ての処理の全ての分量について適用する。
【００８４】
本明細書に記載されるいくつかの方法は、ミトコンドリア完全性の変化に少なくとも基づいて、複数の癌細胞の第一の部分についてＭＣＬ−１依存率を決定することをさらに含む。
【００８５】
実施態様において、ＭＤＰは以下の式によって定義される：
【化６】
2020535122.tif 000008
ＰＣは陽性対照のＡＵＣであり、ＮＣは陰性対照のＡＵＣであり、ＰｅｐはプロファイリングペプチドのＡＵＣである。特に言及されない限り、ＭＣＬ−１依存率は、陽性対照としてＣＣＣＰ、および陰性対照として水またはＤＭＳＯを含む、１μＭの濃度のプロファイリングペプチドに対応するこの式を用いて計算される。ＡＵＣは曲線下の面積またはシグナル強度のいずれかである。実施態様において、ＡＵＣは平均蛍光強度（ＭＦＩ）である。いくつかの実施態様において、曲線下の面積は、均一系時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によって確立される。いくつかの実施態様において、時間は約０から約３００分から、約０から約３０分の間の幅において生じる。いくつかの実施態様において、曲線下の面積は、当技術分野において既知の、または本明細書に記載される、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）またはマイクロプレートアッセイによって確立される。いくつかの実施態様において、シグナル強度は約５分から約３００分の間に生じる単一の時点における測定である。
【００８６】
１つより多いプロファイリングペプチドが用いられる実施態様において、ＭＣＬ−１依存率（ＰＰ）は以下の式によって定義される：
【化７】
2020535122.tif 000009
【００８７】
本開示の例示的な方法において、複数の癌細胞が対象サンプルから単離され、サンプルの品質が確認される。細胞を次いでペレット状にし、ＢＳＡでブロッキングし、標識する。染色後、細胞をペレット状にし、３つの部分に分け、水またはジメチルスルホキシドのいずれか（ＤＭＳＯ）（陰性対照）、ＣＣＣＰ（陽性対照）、または本開示のプロファイリングペプチド（対象依存性）によって処理する。ＤｉＯＣ６、カチオン性ミトコンドリア色素を加える。その後、細胞をフローサイトメトリーによって解析する。
【００８８】
いくつかの実施態様において、複数の癌細胞は、原発性骨髄液から単離され、サンプルの品質が決定される。細胞を次いでペレット状にし、ＢＳＡにおいてブロッキングし、ＢおよびＴ細胞に特異的なマーカー、並びに単球分化マーカーおよび芽球特異的マーカーについて標識する。染色後、細胞をペレット状にし、３つに分け、水（陰性対照）、ＣＣＣＰ（陽性対照）、または配列番号１（対象依存性）のいずれかによって処理する。ＤｉＯＣ６、カチオン性ミトコンドリア色素を加える。細胞をフローサイトメトリーによって解析する。それぞれのサンプルのＣＤ４５ 弱陽性(dim)、ＣＤ１３、ＣＤ３３、およびＣＤ３４高集団におけるゲーティングによって、芽球細胞を単離する。
【００８９】
特定の実施態様において、複数の癌細胞は、密度勾配遠心分離を用いて、原発性骨髄液から単離する。サンプル品質は、トリパンブルー排除を用いて決定する。細胞を次いでペレット状にし、ＢＳＡにおいてブロッキングし、ＢおよびＴ細胞に特異的なマーカー、並びに単球分化マーカー、および芽球特異的マーカーについて標識する。染色後、細胞をペレット状にし、蛍光活性化細胞ソーティングチューブにおいて分離し、水（陰性対照）、ＣＣＣＰ（陽性対照）、または配列番号：１（対象依存性）のいずれかによって処理する。ＤｉＯＣ６、カチオン性ミトコンドリア色素を加える。細胞を次いで、フローサイトメトリーによって分析する。それぞれのサンプルのＣＤ４５ 弱陽性(dim)、ＣＤ１３、ＣＤ３３、およびＣＤ３４高集団においてゲーティングを行い、芽球細胞を単離する。
【００９０】
前記の任意の実施態様において、癌細胞、複数の癌細胞、またはその一部は、例えば、ジギトニンなどの細胞透過性試薬によって、透過処理されない。
【００９１】
実施態様において、対象は少なくとも５％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも１０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも２０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも３０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも４０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも５０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも６０％のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも７０％のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は７０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は６０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は５０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は４０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は３０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は２０％未満のＭＣＬ−１依存率を有する。
【００９２】
実施態様において、対象は少なくとも５％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも１０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも２０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも３０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも４０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも５０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも６０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、対象は少なくとも７０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は７０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は６０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は５０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は４０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は３０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、対象は２０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。
【００９３】
そのため、特定の実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも１５％の所定のＭＣＬ−１依存率を有し、所定のＭＣＬ−１依存率は、複数の癌細胞の第一の部分を、細胞取り込み部位および所定のＭＣＬ−１結合ドメインを含むプロファイリングペプチドと接触させることを含むインビトロ方法によって得られ、所定のＭＣＬ−１結合ドメインは、配列番号：１または２の配列を有する。実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも２０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも３０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも４０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも５０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、少なくとも６０％の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。
【００９４】
いくつかの実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、７５％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、５０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、３０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、２５％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。いくつかの実施態様において、本明細書に開示される方法を用いて治療される対象は、２０％未満の所定のＭＣＬ−１依存率を有する。さらなる実施態様において、本開示の方法は、ミトコンドリア完全性および／またはＭＣＬ−１依存データに関わらず、本明細書に記載される治療剤を対象に投与することを含む。
【００９５】
さらなるプロファイリングペプチドおよび使用方法は、ＵＳ２０１６／０３０３１０１およびＵＳ２０１８／０１７２６７３において開示され、これらは同様の教示について、引用によって本明細書に援用される。
【００９６】
前記の実施態様のいくつかにおいて、対象は染色体１７ｐ欠失を有する。
【００９７】
前記の他のいくつかの実施態様において、ＢＣＬ−２阻害剤はベネトクラックス（すなわち、ＡＢＴ−１９９）である。他のいくつかの実施態様において、ＢＣＬ−阻害剤はアンチセンスオリゴヌクレオチド薬（例えば、オブリメルセン）、ＢＨ３ミメティック（例えば、ＡＢＴ−７３７、ＡＢＴ−７３７−ｄ８またはナビトクラックス／ＡＢＴ−２６３またはＡＢＴ−２６３−ｄ８）、新規非ペプチド阻害剤（例えば、ＴＷ−３７）、汎ＢＣＬ−２阻害剤（例えば、サブトクラックス、オバトクラックス）、ＢＣＬ−ｘｌ／ＢＨ３ドメイン相互作用阻害剤（例えば、ＢＨ３Ｉ−１）、ＢＣＬ−ｘｌ阻害剤（例えば、Ａ−１３３１８５２またはＡ−１１５５４６３）、ＢＣＬ−２の非ペプチド性リガンド（例えば、ＨＡ１４−１）、Ｂａｘアクティベーター（例えば、ＢＡＭ７）、小分子ＢＣＬ−２／ＢＨ４ドメインアンタゴニスト（例えば、ＢＤＡ−３６６）、フラボノイド（例えば、リコカルコンＡ）である。いくつかの特定の実施態様において、ＢＣＬ−２阻害剤は、ＦＸ１、ＡＴ−１０１、Ａ−１２１０４７７、ガンボグ酸、ＵＭＩ−７７、ゴシポール、（−）−エピガロカテキンガラート、ＥＭ２０−２５、ニロチニブまたはニロチニブ−ｄ３、ＹＣ１３７、ＡＧ１０２４、３−ブロモピルビン酸、フルバスタチン、ピペルロンミン、２，３−ＤＣＰＥ、２−メトキシ−アンチマイシンＡ３またはマリノピロールＡ（すなわち、マリトクラックス）である。
【００９８】
前記の実施態様のいくつかにおいて、当該方法は、必要な対象における癌の治療を提供し、ただし、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９は、アルボシジブまたはそのプロドラッグと共投与されない。いくつかの特定の実施態様は、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９が、治療レジメンの間、ＭＣＬ−１阻害剤（例えば、アルボシジブまたはそのプロドラッグ）との組み合わせで投与されない、治療レジメンを提供する。例えば、いくつかの実施態様において、患者は最初にベネトクラックスなどのＢＣＬ−２阻害剤を受け、ＢＣＬ−２阻害剤に耐性がある、または非応答性であると分かった後、患者は次いでアルボシジブまたはそのプロドラッグなどの、ＭＣＬ−１阻害剤を含むレジメンによって治療される。
【００９９】
いくつかの特定の実施態様において、治療レジメンは、アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩、シタラビン、およびミトキサントロン（ＡＣＭ）を含む。いくつかの特定の実施態様において、治療レジメンは、アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩、シタラビン、およびダウノルビシン（ＡＣＤ）を含む。
【０１００】
実施態様において、癌は固形癌である。いくつかの実施態様において、癌は固形腫瘍を含む。実施態様において、癌は大腸、乳房、前立腺、肺、膵臓、腎臓、または卵巣癌を含む。実施態様において、癌は非固形癌である。様々な実施態様において、癌は前移転癌である。様々な実施態様において、癌は移転癌である。
【０１０１】
前記のいくつかの実施態様において、癌は血液癌である。いくつかの関連する実施態様において、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病、および非ホジキンリンパ腫から成る群から選択される。特定の実施態様において、血液癌は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。特定の実施態様において、ＡＭＬは再発性または難治性ＡＭＬである。いくつかの実施態様において、ＡＭＬはフロントラインＡＭＬである。別の特定の実施態様において、血液癌は多発性骨髄腫である。いくつかの実施態様において、血液癌は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。特定の実施態様において、血液癌はＭＤＳである。特定の実施態様において、血液癌は高リスクＭＤＳである。特定の実施態様において、血液癌はＣＬＬである。
【０１０２】
別のいくつかの実施態様において、本発明は以下の１つ以上の癌に関する：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、肛門癌、虫垂癌、星状細胞腫（例えば、小児小脳または脳）、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨腫瘍（例えば、骨肉腫、悪性線維性組織球腫）、脳幹グリオーマ、脳癌、脳腫瘍（例えば、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚経路および視床下部神経膠腫）、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、頸部癌、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性障害、大腸癌、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、線維形成性小細胞腫瘍、子宮内膜癌、上衣腫、食道癌、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞性腫瘍、性腺外胚細胞性腫瘍、肝外胆管癌、眼腫瘍、胆嚢癌、胃（胃）癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞性腫瘍（例えば、頭蓋外、性腺外、卵巣）、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫（例えば、脳幹、脳星状細胞腫、視覚経路および視床下部）、胃カルチノイド、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞（肝臓）癌、下咽頭癌、視床下部および視覚経路神経膠腫、眼球内黒色腫、島細胞癌（膵島）、腎癌（腎細胞癌）、喉頭癌、白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄白血病、有毛細胞）、口唇および口腔癌、脂肪肉腫、肝癌、肺癌（例えば、非小細胞、小細胞）、リンパ腫（例えば、ＡＩＤＳ関連、バーキット、皮膚Ｔ細胞ホジキン、非ホジキン、原発性中枢神経系）、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性扁平頸部癌、口腔癌、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、骨髄白血病、骨髄白血病、骨髄増殖性障害、慢性、鼻腔および副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞性肺癌、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵臓癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、松果体星状細胞腫および／または胚細胞腫、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞異常増殖／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌（腎癌）、腎盂および輸尿管、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫（例えば、ユーイングファミリー、カポジ、軟組織、子宮）、セザリー症候群、皮膚癌（例えば、非黒色腫、黒色腫、メルケル細胞）、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、扁平上皮頸部癌、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺癌、栄養芽細胞腫瘍、輸尿管および腎盂癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、視覚経路および視床下部神経膠腫、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、およびウィルムス腫瘍。いくつかの実施態様において癌は乳癌である。いくつかの実施態様において、癌は前立腺癌である。いくつかの実施態様において、癌は肺癌である。
【０１０３】
用量の例
有効量は、疾患の症状を予防、軽減、または改善する、または治療される対象の生存を延長するのに有効な量を意味する。有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１０４】
例えば、本明細書に記載される治療のための任意の方法について、有効量または用量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。次いで、細胞培養において決定したＩＣ５０（すなわち、ＭＣＬ−１発現の最大阻害の半分を達成するアルボシジブの濃度）を含む、循環濃度範囲を達成するように、動物モデルにおける使用のために用量を製剤化することができる。そのような情報を次いで、ヒトにおける有効な用量をさらに正確に決定するために用いることができる。
【０１０５】
本明細書に記載される方法の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物において標準的な薬学的方法によって、例えば、ＩＣ５０およびＬＤ５０を決定することによって、決定することができる。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを用いて、ヒトにおける使用のための用量の範囲を策定することができる。用量は、用いられる剤形、および用いられる投与経路に応じて変化しうる。正確な製剤、投与経路、および用量は、患者の病状を考慮して、個々の医師によって選択されうる。（例えば、GOODMAN & GILMAN’S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Ch. 3, 9th ed., Ed. by Hardman, J., and Limbard, L., McGraw−Hill, New York City, 1996, p.46を参照されたい。）
【０１０６】
用量および間隔は、タンパク質阻害効果を維持するのに十分な活性種の血漿量を提供するように、個々に調整されうる。これらの血漿量は、最小有効濃度（ＭＥＣ）と称される。ＭＥＣはそれぞれの組成物について変化するが、インビトロデータ、例えば、ＭＣＬ−１の５０−９０％阻害を達成するのに必要な濃度から推定することができる。投与されるアルボシジブまたはそのプロドラッグの分量は当然ながら、治療される対象、苦痛の重症度、投与方法、処方医の判断などに依存するであろう。ＨＰＬＣアッセイまたはバイオアッセイを用いて、血漿濃度を決定することができる。
【０１０７】
投与間隔もまた、ＭＥＣ値を用いて決定することができる。いくつかの実施態様において、治療方法は、血漿量が時間の約１０〜９０％、好ましくは時間の約３０〜９０％、および最も好ましくは時間の約５０〜９０％にわたって、ＭＥＣより上で維持されるように行われるべきである。
【０１０８】
前記のいくつかの実施態様において、有効量は１日あたり約２．５から１５００ｍｇ／ｍ２の範囲でありうる。さらに例示的な用量は、０．２から１０００ｍｇ／ｑｉｄ、２から５００ｍｇ／ｑｉｄ、および２０から２５０ｍｇ／ｑｉｄの範囲である。
【０１０９】
局所投与または選択的取り込みに関連する実施態様において、アルボシジブの有効な局所濃度は血漿濃度に関係しない場合があり、当技術分野において既知の他の方法を用いて、正しい用量および間隔が決定されうる。
【０１１０】
いくつかの特定の実施態様において、本発明の方法の一部として投与される化合物は、必要に応じて、ＦＤＡに認可されたキットなどの、活性成分を含む１つ以上の単位剤形を含みうる、パックまたは分配装置において提供されうる。パックは、例えば、ブリスターパックなどの、金属またはプラスチックホイルを含みうる。パックまたは分配装置は、投与の説明書が添付されうる。パックまたは分配装置はまた、医薬品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定された形式における、容器に付された表示が添付される場合があり、この表示は、組成物の形態、またはヒトもしくは獣医学的投与の、当局による承認を反映している。そのような表示は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局によって承認されたラベル、または認可された製品の添付文書でありうる。いくつかの実施態様において、化合物（例えば、アルボシジブまたはそのプロドラッグ）は、適宜、適合性のある薬学的な担体中で製剤化され、また適切な容器において製造、保管され、適応する症状の治療について表示されうる。ラベル上に示される適切な症状としては、ＢＣＬ−２阻害剤耐性癌、ＢＣＬ−２耐性腫瘍などが挙げられる。
【０１１１】
さらなる実施態様において、本明細書に記載される化合物および治療方法は、１つ以上の他の化学療法剤との組み合わせにおいて用いることができる。用量は、任意の薬物間反応について調整されうる。ある実施態様において、さらなる化学療法剤は、チオテパおよびシトキサン シクロホスファミドなどの、アルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどの、アルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドパなどの、アジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホロアミド、トリエチレンチオホスホロアミドおよびトリメチロールメラミンなどの、エチレンイミンおよびメチルメラミン；アセトゲニン（例えば、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンなど）；ブリオスタチン；カリー・スタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体など）；クリプトフィシン（例えば、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ズオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１など）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン オキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの、ナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどの、ニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケミシン・ガムマールおよびカリケミシン・オメガール（例えば、Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183−186 (1994)を参照されたい）などの、抗生物質；ダイネミシンＡなどの、ダイネミシン；クロドロネートなどの、ビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン・クロモフォアおよび関連するクロモプロテイン系エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンなど）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クェラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの、代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの、葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどの、プリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどの、ピリミジン類似体；カルステロン、ドロモスタノロン プロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどの、アンドロゲン；ミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの、抗副腎；フロリン酸などの、葉酸補液（replenisher）；アセグラトン；アルドホスファミド グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトレキサート；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルミチン；エリプチニウム アセテート；エポチロン；エトグルシド；ガリウム ニトレート；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシンおよびアンサミトシンなどの、メイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラミン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（JHS Natural Products、Eugene，Oreg.）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（例えば、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ara−C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール パクリタキセル（Bristol−Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.）、アブラキサン カンファー・フリー、パクリタキセルのナノ粒子設計アルブミン製剤（American Pharmaceutical Partners、Schaumberg，111.）、およびタキソテール ドキセタキセル（doxetaxel）（Rhone−Poulenc Rorer，Antony，France）；クロラムブシル；ジェムザール ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチンなどの、白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ナベルビン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ−１１）（５−ＦＵおよびロイコボリンと共に、イリノテカンの治療レジメンなど）；トポイソメラーゼ阻害剤 ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などの、レチノイド；カペシタビン コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチンの治療レジメン（フォルフォックス）などの、オキサリプラチン；ラパチニブ（タイケルブ）；細胞増殖を減少させる、ＰＫＣ−Ｉ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（タルセバ））およびＶＥＧＦ−Ａの阻害剤、デコゲン、ベルケイド、並びに前記の任意の薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体から成る群から選択される。
【０１１２】
さらに、前記の方法のいくつかの実施態様は、放射線治療と組み合わせて実施することができ、ここで、放射線治療は前記疾患の治療に有効である。放射線治療を行うための技術は、当技術分野において既知であり、これらの技術は本明細書に記載される組み合わせ治療において用いることができる。
【０１１３】
当該方法の実施態様は、広い用量範囲にわたって有効である化合物を投与することを含む。例えば、成人の治療において、０．０１から１０００ｍｇ、０．５から１００ｍｇ、１から５０ｍｇ／日、および５から４０ｍｇ／日の用量が、用量の例である。例示的な用量は、１０から３０ｍｇ／日である。正確な用量は、投与経路、組成物が投与される形態、治療される対象、治療される対象の体重、担当医の優先傾向および経験に応じて変化する。
【０１１４】
実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約１０ｍｇ／ｍ２から約１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量において投与される。実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約５０ｍｇ／ｍ２から約１３０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約３０ｍｇ／ｍ２から約５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約３５ｍｇ／ｍ２から約４５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約５５０ｍｇ／ｍ２から約７５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約６５０ｍｇ／ｍ２から約６７５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグの用量は、約３０ｍｇ／ｍ２から約１２０ｍｇ／ｍ２／日の範囲である。そのようないくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグの用量は、２つ以上の投与経路を介して投与される。いくつかの実施態様において、当該方法は単一用量の投与を含む。一般に、そのような投与は、有効量の化合物（例えば、アルボシジブ）を素早く導入するために、注入、例えば、静脈内注入によって行われる。しかしながら、必要に応じて、他の経路が用いられる。例えば、いくつかの実施態様において、アルボシジブのプロドラッグは経口投与される。いくつかの実施態様において、単一用量もまた、急性症状の治療のために用いられうる。
【０１１６】
実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約約１５ｍｇ／ｍ２から約３５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、ボーラス注入によって投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約２０ｍｇ／ｍ２から約３０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、ボーラス注入によって投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約３０ｍｇ／ｍ２から約６０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、静脈内点滴によって投与される。実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約４５ｍｇ／ｍ２から約９０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、ボーラス注入によって投与される。実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約９０ｍｇ／ｍ２から約１１０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、静脈内点滴によって投与される。
【０１１７】
いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約２０ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、ボーラス注入によって投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約４０ｍｇ／ｍ２から約８０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、静脈内点滴によって投与される。
【０１１８】
いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約２０ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、ボーラス注入によって投与される。いくつかの実施態様において、アルボシジブまたはそのプロドラッグは、約４０ｍｇ／ｍ２から約８０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で、静脈内点滴によって投与される。
【０１１９】
いくつかの実施態様において、当該方法は、複数回投与における化合物の投与を含む。いくつかの実施態様において、投与は１日あたり約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または６回より多い。他の実施態様において、投与は約月１回、２週に１回、週に１回
、または１日おきに１回である。さらに別の実施態様において、投与は約６、１０、１４、２８日、２ヶ月、６ヶ月、または１年より長く継続する。いくつかの場合において、必要な限り、継続的な投与が行われ、維持される。
【０１２０】
治療は必要な限り継続されうる。いくつかの実施態様において、治療方法は、１、２、３、４、５、６、７、１４、または２８日より長く維持される。いくつかの実施態様において、治療方法は２８、１４、７、６、５、４、３、２、または１日未満にわたり継続される。いくつかの実施態様において、治療方法は、例えば、慢性的な効果の治療のために、継続的に慢性化する。
【０１２１】
組成物
特定の実施態様において、治療剤（例えば、アルボシジブまたはそのプロドラッグ）は、化合物を薬学的に使用することのできる製剤に処理するのを容易にする、賦形剤および補助剤などの、１つ以上の生理学的に許容可能な担体と共に、従来の方法において製剤化される。適切な製剤は、選択された投与経路によって変わる。
【０１２２】
任意のさらなる薬学的に許容可能な技術、担体、および賦形剤は、本明細書に記載される医薬組成物の製剤化に適切なものとして用いられる：Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; および Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)。
【０１２３】
さらに、遊離塩基または酸の形態で存在する、本発明の化合物（例えば、アルボシジブまたはそのプロドラッグ）は、当業者に既知の方法によって、適切な無機または有機塩基または酸による処理によって、薬学的に許容可能な塩に変換することができる。本明細書で用いられる化合物の塩は、通常の技術によって、遊離塩基または酸の形態に変換することができる。
【０１２４】
適切な投与経路としては、限定はされないが、経口、静脈内、直腸、エアロゾル、非経口、眼、経肺、経粘膜、経皮、膣、経耳、経鼻、および局所投与が挙げられる。さらに、あくまで例として、非経口送達としては、筋肉内、皮下、静脈内、脊髄内注入、並びに髄腔内、直接脳室内、腹腔内、リンパ管内、および鼻腔内注入が挙げられる。
【０１２５】
いくつかの実施態様において、投与は、例えば、しばしばデポ剤または持続放出製剤において、臓器への直接注入によって、全身ではなく局所的である。特定の実施態様において、長期活性製剤は、インプラント（例えば、皮下または筋肉内）、または筋肉内注入によって投与される。さらに、別の実施態様において、投与は、標的化薬物送達系において、例えば、臓器特異的抗体でコーティングされたリポソーム中において、化合物を送達することを含む。そのような実施態様において、リポソームは、臓器を標的とし、臓器に選択的に取り込まれる。さらに別の実施態様において、投与は持続放出製剤の形態において、または中間放出製剤の形態において、即放性製剤を送達することを含む。さらに別の実施態様において、投与は局所投与を含む。いくつかの実施態様において、当該方法は、懸濁液、溶液、および／またはエマルジョンの投与を含む。いくつかの実施態様において、治療方法は、担体、安定化剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、濃化剤、および／または賦形剤などの化学成分の混合物の投与を含む。
【０１２６】
ある実施態様において、当該方法は、水溶液中に製剤化された組成物の投与を含む。特定の実施態様において、水溶液は、あくまで例として、ハンクス溶液、リンガー溶液、または生理食塩緩衝液などの、生理学的に適合性のある緩衝液から選択される。別の実施態様において、組成物は経粘膜投与のために製剤化される。特定の実施態様において、経粘膜投与のために製剤化された組成物は、浸透するバリアに適切な浸透剤を含む。さらに別の実施態様において、組成物は他の非経口注入方法のために製剤化され、ここで、適切な製剤は水溶液または非水溶液を含む。特定の実施態様において、そのような組成物は、生理学的に適合性のある緩衝液および／または賦形剤を含む。
【０１２７】
いくつかの実施態様において、組成物は経口投与されうる。そのため、これらの実施態様において、組成物は、あくまで例として、錠剤、散剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁液などを含む経口剤形において製剤化される。
【０１２８】
関連する実施態様において、糖衣錠コアおよび錠剤などの投与形態は、１つ以上の適切なコーティングとともに提供される。特定の実施態様において、濃縮糖溶液が剤形のコーティングのために用いられる。糖溶液は適宜、あくまで例として、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／またはチタンジオキシド、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物などのさらなる成分を含む。染料および／または色素もまた、特定の目的のためにコーティングに適宜加えられる。さらに、染料および／または色素は適宜、活性組成物用量の異なる組み合わせを特徴付けるために用いられる。
【０１２９】
経口剤形としては、ゼラチンで作られた押し込み型カプセル、並びにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作られた密封軟カプセルが挙げられる。特定の実施態様において、押し込み型カプセルは、１つ以上の増量剤との混合物中に活性成分を含む。充填剤としては、あくまで例として、ラクトース、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および適宜、安定剤が挙げられる。別の実施態様において、軟カプセルは、適切な液体に溶解または懸濁した、１つ以上の組成物を含む。適切な液体としては、あくまで例として、１つ以上の脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールが挙げられる。さらに、安定化剤が適宜加えられる。
【０１３０】
別の実施態様において、本明細書に記載される治療上有効量の化合物は、バッカルまたは舌下投与によって、製剤化および送達される。バッカルまたは舌下投与に適切な製剤としては、あくまで例として、錠剤、ロゼンジ、またはゲルが挙げられる。さらに別の実施態様において、化合物は、ボーラス注入または持続点滴などの、非経口注入によって製剤化および投与される。特定の実施態様において、注入のための製剤は、単位剤形において（例えば、アンプルにおいて）、または複数回用量容器において提供される。防腐剤は適宜、注入製剤に加えられる。さらに別の実施態様において、化合物は、油性または水性ビヒクル中の無菌懸濁液、溶液、またはエマルジョンなどの非経口注入に適切な形態において製剤化および投与される。非経口注入は適宜、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤などの調合剤を含む。さらなる実施態様において、懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製および投与される。本明細書に記載される方法において用いられる、適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、あくまで例として、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。いくつかの特定の実施態様において、水性注入懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランなどの、懸濁液の粘性を上昇させる物質を含む。適宜、懸濁液は、溶解度を上昇させて、高濃度の溶液を調製することを可能にする、適切な安定化剤または薬剤を含んでもよい。あるいは、別の実施態様において、当該方法は、使用前に適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱性物質除去水によって構成するための、粉末形態を投与することを含む。
【０１３１】
さらに別の実施態様において、当該方法は局所投与を含む。局所投与は一般に、溶液、懸濁液、ローション、ゲル、ペースト、薬用スティック、バルム、クリームまたは軟膏などの、局所的に投与可能な組成物を含む。そのような組成物は適宜、可溶化剤、安定化剤、等張性増加剤、緩衝剤および防腐剤を含む。
【０１３２】
さらに別の実施態様において、当該方法は経皮投与を含む。特定の実施態様において、経皮投与は、経皮送達デバイスおよび経皮送達パッチを用い、ポリマーまたは粘着性物質に溶解した、および／または分散した、親油性エマルジョンまたは緩衝水溶液でありうる。様々な実施態様において、そのようなパッチは、薬剤の持続、パルス、またはオンデマンド送達のために設計される。さらなる実施態様において、組成物の経皮送達は、イオン泳動パッチなどによって達成される。いくつかの実施態様において、経皮パッチは、組成物の制御放出を提供する。特定の実施態様において、吸収率は、速度制御膜を用いることによって、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に組成物をトラップさせることによって、遅延化される。別の実施態様において、吸収促進剤は、吸収を向上させるために用いられる。吸収促進剤または担体は、皮膚を介した通過を助ける、吸収可能な薬学的に許容可能な溶媒を含む。例えば、ある実施態様において、経皮デバイスは、裏打ち部材、適宜担体と共に組成物を含む容器、適宜、制御された所定の速度で、長時間にわたり、対象の皮膚に組成物を送達するための、速度制御バリア、および当該デバイスを皮膚に固定するための手段を含む、バンデージの形態である。
【０１３３】
さらに別の実施態様において、当該方法は、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤、並びにポリビニルピロリドン、ＰＥＧなどの合成ポリマーを含む、浣腸、直腸ゲル、直腸泡、直腸エアロゾル、坐薬、ゼリー状坐薬、または停留浣腸などの直腸組成物を用いた、直腸投与を含む。組成物の坐薬泡において、限定されないが、適宜カカオバターとの組み合わせにおける、脂肪酸グリセリドの混合物などの低融点ワックスが最初に融解する。
【０１３４】
さらに、本明細書に記載される方法の実施態様において用いられる組成物は、適宜、他の医薬品または薬剤、担体、保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調整用塩類、緩衝液、および／または他の治療的に重要な物質などの、アジュバントを含みうる。
【０１３５】
前記のいくつかの実施態様において、有効量が組成物中に製剤化され、ここで、有効量は、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％，１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖ未満の濃度を有する。
【０１３６】
前記の別のいくつかの実施態様において、有効量が組成物中に製剤化され、ここで、有効量は、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖより大きい濃度を有する。
【０１３７】
いくつかの関連する実施態様において、有効量は、約０．０００１％から約５０％、約０．００１％から約４０％、約０．０１％から約３０％、約０．０２％から約２９％、約０．０３％から約２８％、約０．０４％から約２７％、約０．０５％から約２６％、約０．０６％から約２５％、約０．０７％から約２４％、約０．０８％から約２３％、約０．０９％から約２２％、約０．１％から約２１％、約０．２％から約２０％、約０．３％から約１９％、約０．４％から約１８％、約０．５％から約１７％、約０．６％から約１６％、約０．７％から約１５％、約０．８％から約１４％、約０．９％から約１２％、または約１％から約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの範囲の濃度を有する。
【０１３８】
別の関連するいくつかの実施態様において、有効量は、約０．００１％から約１０％、約０．０１％から約５％、約０．０２％から約４．５％、約０．０３％から約４％、約０．０４％から約３．５％、約０．０５％から約３％、約０．０６％から約２．５％、約０．０７％から約２％、約０．０８％から約１．５％、約０．０９％から約１％、または約０．１％から約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの範囲である。
【０１３９】
いくつかの実施態様において、有効量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇ以下である。
【０１４０】
いくつかの実施態様において、有効量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、、０．１５ｇ、０．２ｇ、、０．２５ｇ、０．３ｇ、、０．３５ｇ、０．４ｇ、、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇより多い。
【０１４１】
いくつかの実施態様において、有効量は、０．０００１〜１０ｇ、０．０００５〜９ｇ、０．００１〜８ｇ、０．００５〜７ｇ、０．０１〜６ｇ、０．０５〜５ｇ、０．１〜４ｇ、０．５〜４ｇ、または１〜３ｇの範囲である。
【０１４２】
以下の実施態様は、本開示の範囲内に含まれる。
１．  必要な対象において癌を治療する方法であって、アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを投与し、それによって対象における癌を治療することを含む方法であって、癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であり、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性であるか、耐性がある、方法。
２．  必要な対象において癌を治療する方法であって、
癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であることを決定すること；および
アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、有効量の治療レジメンを対象に投与し、それによって癌を治療すること
を含む方法。
３．  必要な対象において癌を治療する方法であって、
癌がＢＣＬ−２阻害剤耐性であって、対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性であるか、耐性がある場合に、対象がアルボシジブまたはそのプロドラッグによる治療に応答する見込みがあると特定すること；および
有効量のアルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを対象に投与すること
を含む方法。
４．必要な対象において癌を治療する方法であって、
アルボシジブまたはそのプロドラッグ、またはその薬学的に許容可能な塩を含む治療レジメンを、対象に投与することを含む方法であり、ここで、癌は
対象から癌細胞を取得すること；および
ｉ）癌細胞におけるＢＣＬ−２およびＭＣＬ−１の発現を定量化すること、ここで、ＢＣＬ−２発現に対してＭＣＬ−１発現が増加することは、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；
ｉｉ）癌細胞におけるＢＣＬ−２依存性を決定すること、ここで、低いＢＣＬ−２依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す；または
ｉｉｉ）癌細胞におけるＭＣＬ−１依存性を決定すること、ここで、高いＭＣＬ−１依存性は、対象がＢＣＬ−２阻害剤耐性癌を有することを示す
を含むインビトロ方法によって、ＢＣＬ−２阻害剤耐性であると決定される、方法。
５．  対象が染色体１７ｐ欠失を有する、実施態様１〜４のいずれか１つに記載の方法。
６．  癌が血液癌である、実施態様１〜５のいずれか１つに記載の方法。
７．  血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病、および非ホジキンリンパ腫から成る群から選択される、実施態様６に記載の方法。
８．  血液癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、実施態様７に記載の方法。
９．  ＡＭＬが再発性または難治性ＡＭＬである、実施態様８に記載の方法。
１０．ＡＭＬがフロントラインＡＭＬである、実施態様８に記載の方法。
１１．血液癌が多発性骨髄腫である、実施態様７に記載の方法。
１２．血液癌が骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、実施態様６に記載の方法。
１３．ＭＤＳが高リスクＭＤＳである、実施態様１０に記載の方法。
１４．血液癌が慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、実施態様６に記載の方法。
１５．癌が固形癌である、実施態様１〜５のいずれか１つに記載の方法。
１６．固形癌が前立腺癌である、実施態様１５に記載の方法。
１７．固形癌が乳癌である、実施態様１５に記載の方法。
１８．固形癌が肺癌である、実施態様１５に記載の方法。
１９．固形癌が１つ以上の固形腫瘍である、実施態様１５〜１８のいずれか１つに記載の方法。
２０．治療レジメンがさらに、シタラビンおよびミトキサントロンを含む、実施態様１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．治療レジメンがさらに、シタラビンおよびダウノルビシンを含む、実施態様１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
２２．治療レジメンがアルボシジブのプロドラッグを含む、実施態様１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．アルボシジブのプロドラッグがリン酸プロドラッグである、実施態様１〜２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．アルボシジブのリン酸プロドラッグが以下の構造：
【化８】
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を有する、実施態様２３に記載の方法。
２５．治療レジメンがアルボシジブを含む、実施態様１〜２１のいずれか１つに記載の方法。
２６．対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療を受けていた、実施例２または４〜２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．対象がＢＣＬ−２阻害剤による前治療に非応答性である、または耐性がある、実施態様２６に記載の方法。
２８．ＢＣＬ−２阻害剤がベネトクラックスである、実施態様１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．対象が少なくとも１５％のＭＣＬ−１依存率を有し、ＭＣＬ−１依存率が、複数の癌細胞の第一の部分を、細胞取り込み部位およびＭＣＬ−１結合ドメインを含むプロファイリングペプチドと接触させることを含む、インビトロ方法によって得られ、ＭＣＬ−１結合ドメインが配列番号：１または配列番号：２の配列を有する、実施態様１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．プロファイリングペプチドが、配列番号：１または配列番号：２の配列から成る、実施態様２９に記載のプロファイリングペプチド。
３１．プロファイリングペプチドが配列番号：１の配列を含む、実施態様２９に記載のプロファイリングペプチド。
３２．プロファイリングペプチドが配列番号：２の配列を含む、実施態様２９に記載のプロファイリングペプチド。
３３．対象が少なくとも２０％のＭＣＬ−１依存率を有する、実施態様２９〜３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．対象が少なくとも３０％のＭＣＬ−１依存率を有する、実施態様２９〜３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．対象が少なくとも４０％のＭＣＬ−１依存率を有する、実施態様２９〜３４のいずれか１つに記載の方法。
３６．インビトロ方法がさらに
複数の癌細胞の第二の部分を陰性対照と接触させること；および
複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分の分極率を決定すること
を含む、実施態様２９〜３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．インビトロ方法がさらに、複数の癌細胞の第一の部分および第二の部分の分極率に少なくとも基づいて、Ｍｃｌ−１依存率（ＭＤＰ）を決定することを含む、実施態様３６に記載の方法。
３８．陰性対照が水である、実施態様３６または３７に記載の方法。
３９．インビトロ方法がさらに、複数の癌細胞の第三の部分を陽性対照と接触させることを含む、実施態様３６〜３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．陽性対照がカルボニル シアニド−４−（トリフルオロメトキシ）フェニルヒドラゾン（ＦＣＣＰ）、カルボニル シアニド ｍ−クロロフェニルヒドラゾン（ＣＣＣＰ）、またはＮ５，Ｎ６−ビス（２−フルオロフェニル）−［１，２，５］オキサジアゾロ［３，４−ｂ］ピラジン−５，６−ジアミン（ＢＡＭ−１５）である、実施態様３９に記載の方法。
４１．陽性対照がＣＣＣＰである、実施態様３９または４０である方法。
４２．インビトロ方法がさらに、複数の細胞の第一の部分、第二の部分、および第三の部分を、検出剤と接触させることを含む、実施態様３９〜４１のいずれか１つに記載の方法。
４３．検出剤が色素である、実施態様４２に記載の方法。
４４．色素が３，３’−ジヘキシルオキサカルボシアニン アイオダイド（ＤｉＯＣ６）である、実施態様４３に記載の方法。
本開示の実施態様はさらに、以下の限定されない実施例によって説明される。
【実施例】
【０１４３】
実施例１
ＭＶ−４−１１細胞における、用量依存性ＭＣＬ−１タンパク質の減少
ＡＭＬ細胞株、ＭＶ−４−１１は、ＭＣＬ−１を発現する。ＭＣＬ−１は、ＭＶ−４−１１細胞における、重要な抗アポトーシスタンパク質である。アルボシジブ、ＣＤＫ９阻害剤は、ｍＲＮＡにおいてＭＣＬ−１の発現を低下させ、これはすでに文献において十分に記録されている。その結果、アルボシジブは用量依存的様式で、ＭＶ−４−１１におけるＭＣＬ−１発現を低下させる（図１）。用量依存性は、細胞が０〜８μＭの範囲の濃度において、アルボシジブを投与された時、対照と比較して、ＭＣＬ−１の相対的な発現量を追跡することによって観察される。ＭＶ−４−１１細胞は、インビトロでアルボジブによって処理され、回収され、分析されて、対照に対する相対的な変化を調べた。
【０１４４】
さらに、他の例示的なＣＤＫ９阻害剤（すなわち、パルボシクリブおよびディナシクリブ）を、アルボシジブと共に評価した。それぞれの例示的なＣＤＫ９阻害剤は、２４時間の処理の後、ＭＶ−４−１１細胞において、減少したＭＣＬ−１発現を示した。アルボシジブ、群の中で最も強力なＣＤＫ９阻害剤は、ＭＣＬ−１タンパク質量において最も強い影響を示した（図２）。
【０１４５】
実施例２
ベネトクラックスに対する耐性のあるＡＭＬ細胞における、アルボシジブのインビボおよびインビトロ活性
アルボシジブを単独で使用して、ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞におけるインビボ活性を試験した。ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞は、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９に対して非常に耐性がある（ＥＣ５０＝２３３０ｎＭ）。インビボ活性を試験するために、ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞を注入された免疫不全マウスを、２．５ｍｇ／ｋｇのアルボシジブの腹腔内注入、または１００ｍｇ／ｋｇのベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９の経口（すなわち、経口投与）によって処理した。それぞれの治療（すなわち、アルボシジブおよびベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９）は、２１日間、１日１回投与した。ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９は、ビヒクルのみの治療と比較して腫瘍体積の減少を示さなかったが、一方で、アルボシジブのみによる治療は、治療の２１日目までに、腫瘍体積の５０％の顕著な減少を示した（図３）。腫瘍増殖の大幅な減少は、ＭＣＬ−１阻害剤を用いた、ＢＣＬ−２阻害剤耐性患者の治療は、予期せず、および有利に、ベネトクラックス／ＡＢＴ−１９９を超える治療の選択肢を提供することを示す。
【０１４６】
アルボシジブはまた、ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞においてインビトロ活性を示す。ＭＣＬ−１発現は、アルボシジブによる治療後の複数の時点において、ＯＣＩ−ＡＭＬ３細胞において減少した（図４）。
【０１４７】
実施例３
ベネトクラックスに対する耐性のある赤白血病細胞における、アルボシジブのインビトロ活性
白血病細胞におけるアルボシジブまたはベネトクラックス治療の効果を評価するために、赤白血病細胞、ＨＥＬを、１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ培地で培養した。製造者のプロトコルに従って、CellTiter−Glo試薬(Promega)を用いて、処理した細胞における細胞生存率を評価した。細胞を９６ウェルプレートにおいて７２時間処理し、その後発光適合性プレートリーダーにおいて解析した。カーブフィッティングおよび解析は、Graphpad Prismソフトウェアを用いて行った。
【０１４８】
実施例４
ベネトクラックスに対する耐性のある多発性骨髄腫細胞における、アルボシジブのインビトロ活性
多発性骨髄腫細胞における、アルボシジブまたはベネトクラックス治療の効果を評価するために、ＯＰＭ２細胞を、１０％ＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ培地で培養した。製造者のプロトコルに従って、CellTiter−Glo試薬(Promega)を用いて、処理した細胞における細胞生存率を評価した。細胞を９６ウェルプレートにおいて７２時間処理し、その後発光適合性プレートリーダーにおいて解析した。カーブフィッティングおよび解析は、Graphpad Prismソフトウェアを用いて行った。
【０１４９】
上記から、本発明の特定の実施態様は、説明の目的のために本明細書において記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われうることが理解されるであろう。米国仮特許出願第６２／５５７，６３５号（２０１７年９月１２日出願）は、引用によってその全体が本明細書に援用される。そのため、本発明は付属の特許請求の範囲以外によっては限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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