(57)【要約】  本発明は、非晶質の葉酸塩に関する。塩はフォラートアニオンと有機カチオンからなる。フォラートアニオンは、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体であるＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択され、カチオンは、アルギニン、コリン、アセチルコリン、１，１−ジメチル−ビグアニジン、フェニルエチルビグアニジン、ベタイン−メチルエステルおよびジメチルアンニノエタノールからなる群から選択される有機化合物である。カチオンは、補完的な薬理活性を持つ有機化合物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなる非晶質の葉酸塩であって、前記アニオンが、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体であるＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択され、前記カチオンが、アルギニン、コリン、アセチルコリン、１，１−ジメチル−ビグアニジン、フェニルエチルビグアニジン、ベタイン−メチルエステルおよびジメチルアミノエタノールからなる群から選択される有機化合物であり、前記葉酸塩が、無極性溶媒で高い溶解性を有し、前記無極性溶媒が、水と比較して０．８２である相対極性を有することを特徴とする、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなる非晶質の葉酸塩。
【請求項２】
前記アニオンが、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体であるＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択され、前記カチオンが、ジ−アルギニン、ジ−コリン、ジ−アセチルコリン、ジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）、ジ−ジメチルアミノエタノール、ジ−ベタイン−メチルエステルおよびジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる群から選択されることを特徴とする、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなる請求項１に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項３】
前記アニオンが、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体であるＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択され、前記カチオンが、モノ−アルギニン、モノ−コリン、モノ−アセチルコリン、モノ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）、モノ−ジメチルアミノエタノール、モノ−ベタイン−メチルエステルおよびモノ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる群から選択されることを特徴とする、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなる請求項１に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項４】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−アルギニンであることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表１】
2020535211.tif 000047
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項５】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−コリンであることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表２】
2020535211.tif 000048
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項６】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）であることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表３】
2020535211.tif 000049
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項７】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）であることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表４】
2020535211.tif 000050
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項８】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−アルギニンであることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表５】
2020535211.tif 000051
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項９】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−コリンであることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表６】
2020535211.tif 000052
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項１０】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）であることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表７】
2020535211.tif 000053
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項１１】
前記テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸であり、前記有機カチオンがジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）であることを特徴とし、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、
【表８】
2020535211.tif 000054
である、請求項２に記載の非晶質の葉酸塩。
【請求項１２】
医薬組成物であって、主要な活性化合物として請求項１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１種の葉酸塩と、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
薬物、食品添加物または栄養サプリメントの調製、テトラヒドロ葉酸塩の投与により積極的な影響を受けるような欠乏または障害のいずれかを、予防および／または治療するための、請求項１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１種の葉酸塩の使用。
【請求項１４】
テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなり、葉酸アルカリ土類金属塩の水性組成物に、シュウ酸または代替的にはフッ化物塩を加える工程を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の非晶質の葉酸塩を調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、葉酸塩、その調製およびこれを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
うつ病ならびに認知症、自閉症、ＡＤＨＤおよびアルツハイマーといった他のメンタルヘルス障害、ならびに２型糖尿病、血管疾患といった非感染性疾患（ＮＣＤｓ）ならびにがんは、特に老年人口のことを考慮すると、患者およびヘルスケアシステムにとって懸念材料として増大しつつある。こうした様々な疾患には種々の理由が存在している。しかし、共通する危険因子としては、全身または特定の組織中で葉酸状態が最適以下であることが判明している。
【０００３】
例えば、炭水化物をエネルギー生成のため代謝されるグルコースへと変換するといった、身体の代謝プロセスの多くに、ビタミンＢ複合体群が関係していることが周知である。このようなビタミンは、脂肪およびタンパク質の分解において更に必須である。また、消化管の流れに沿った筋緊張の維持ならびに神経系および例えば、眼、皮膚、毛髪、肝臓などの健康促進に重要な役割を果たす。
【０００４】
更に、葉酸は新しい細胞の生成およびその維持に必須であることが知られている。幼児期および妊娠期といった迅速な細胞分裂時および成長時には、特に重要である。葉酸はＤＮＡを複製するために必要とされる。したがって、葉酸欠乏は最も臨床的には、骨髄や迅速な細胞回転を行う部位に悪影響を及ぼし、ＤＮＡ合成および細胞分裂を妨害する。ＲＮＡおよびタンパク質合成は妨害されないことから、巨赤血球細胞、すなわち巨赤芽球が生成され、巨赤芽球性貧血といった大球性貧血を引き起こす。これはセリアック病、栄養を理由とした貧血または妊娠期、幼児期もしくは小児期に見られ得る。したがって、特に高齢者といった成人と、子供の両者が、正常な赤血球細胞を作り出し貧血を防止するため、葉酸が必要となる。葉酸はまた、がんを引き起こし得るＤＮＡへの変化を妨げる一助となる。
【０００５】
種々のテトラヒドロ葉酸誘導体といった葉酸誘導体はまた、薬物としてまたは他の誘導体を調製するための塩基性物質としても使用され得る。しかし、テトラヒドロ葉酸およびその誘導体はまた、詳細には酸化に弱い性質であるがゆえに、極度の不安定性を有することで知られている。詳細には、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸（フォリン酸、ロイコボリン（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ））は主に、メトトレキサートおよび５−フルオロウラシルによる治療に付随した療法としてのがん研究および妊娠期、抗生物質療法に関連する葉酸欠乏性貧血の治療における薬物成分として重要である。葉酸および還元葉酸に対し、最も相対的に安定した誘導体としてカルシウム塩について言及することができる。米国特許第５，８１７，６５９号明細書および米国特許第６，４４１，１６８号明細書は結晶塩、好ましくは、当該酸の当量あたり少なくとも１当量の結晶水を有する、５−メチル−（６Ｒ，Ｓ）−、（６Ｓ）−または（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩について開示している。５−メチルテトラヒドロ葉酸は、市販されている唯一の葉酸誘導体であり、これは更なる代謝なしに血液／脳関門に直接進入できる。天然の５−メチルテトラヒドロ葉酸はＳ形態のみであり、Ｒ形態は生化学的に不活性であり、腎臓を介して排出されると考えられている。加えて、葉酸および／または還元葉酸のいずれかを含む、ヒトおよび動物摂取用のいくつかの組成物が、種々の形態でビタミン、アルギニン、リジン、チアミンおよび／または他の活性成分と共に、栄養サプリメントとして、または例えば神経学的、病態生理学的な心臓血管疾患、関節炎状態または炎症状態といった種々の疾患の治療および予防用のいずれかで報告されている。
【０００６】
種々の葉酸塩が知られている。一般に、こうした塩は、葉酸、ならびにカルシウムおよびマグネシウムといった無機カチオン、またはグルコサミンもしくはガラクトサミンといった有機カチオンを含む。これらのアルカリ土類金属カチオンは、このカチオン自体がヒトにおいて薬理学的効果を何ら示さない限り、不活性である。水溶液中への該塩の溶解性が乏しいことは広く報告されてきた。国際公開第２００９／１０３３３４号パンフレットは、良好な水溶解性を有する５−メチル−テトラヒドロ葉酸グルコサミン塩（５−ＭＴＨＦ−グルコサミン）について記載している。更に、無極性溶媒中における葉酸塩の溶解性も水溶液同様、非常に制限されたものである。例えば、５−ＭＴＨＦ−グルコサミンは、水（２５℃）への溶解性が非常に高く、希酸または希アルカリに溶解し、有機溶媒には不溶である、クリーム色〜薄茶色の粉末として記載されていた（欧州食品安全機関ジャーナル、２０１３年、１１（１０）、３３５８頁（ＥＦＳＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２０１３；１１（１０）：３３５８）。溶解性および安定性を向上させた葉酸の水性組成物は、例えば米国特許第９，３０１，９２２号明細書および米国特許第９，６４２，８５３号明細書に開示されている。更に、葉酸と、ビタミン、リジン、チアミンおよび他の活性成分といった更なる化合物とを含む、多くの葉酸組成物が記載されている。ただし、更なる活性化合物を組み合わせ、水および無極性溶媒への溶解性が良好である安定した葉酸塩により、更に用途の広い医薬組成物が与えられることだろう。
【発明の概要】
【０００７】
本発明の目的は、更なる活性化合物を組み合わせ、良好な安定性、無極性溶媒への高い溶解性および良好な水溶解性を示す葉酸塩を提供することである。
【０００８】
この目的は、請求項１で定義される本発明による葉酸塩によって達成される。更に好ましい実施形態は、従属請求項に準拠する。
【０００９】
本発明による非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなり、このアニオンは、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−ジホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−１０−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体であるＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択される。更に、カチオンは、アルギニン、コリン、アセチルコリン、１，１−ジメチル−ビグアニジン、フェニルエチルビグアニジン、ベタイン−メチルエステルおよびジメチルアミノエタノールの群から選択される有機化合物である。葉酸塩は、無極性溶媒中で高い溶解度を有し、当該無極性溶媒は、水と比較して０．８２である相対極性を有する。
【００１０】
特定の無極性溶媒中、５質量パーセント（ｍ／ｍ）である特定の葉酸塩の溶解度よりも高いものが、無極性溶媒中の高い溶解度として見なされる。溶解度は２０℃で測定されていた。
【００１１】
Ｍｅｆｏｘの構造を以下に示す。
【化１】
2020535211.tif 000002
【００１２】
ＪＫ１２Ａの構造を以下に示す。
【化２】
2020535211.tif 000003
【００１３】
ＭｅｆｏｘとＪＫ１２Ａといった化合物は、両方とも５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸の酸化誘導体である。
【００１４】
好ましい実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなる。アニオンは、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸ならびにその酸化誘導体ＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択される。カチオンは、ジ−アルギニン、ジ−コリン、ジ−アセチルコリン、ジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）、ジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）、ジ−ベタイン−メチルエステルおよびジ−ジメチル−アミノ−エタノールからなる群から選択される。
【００１５】
別の実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンおよび有機カチオンからなり、このアニオンは、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、１０−ホルミル−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸、５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレン−（６Ｒ）−テトラヒドロ葉酸およびその酸化誘導体ＪＫ１２ＡおよびＭｅｆｏｘからなる群から選択され、このカチオンはモノ−アルギニン、モノ−コリン、モノ−アセチルコリン、モノ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）、モノ−（フェニルエチル−ビグアニジン））、モノ−ベタイン−メチルエステルおよびモノ−ジメチル−アミノ−エタノールからなる群から選択される。
【００１６】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−アルギニンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１】
2020535211.tif 000004
【００１７】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表２】
2020535211.tif 000005
【００１８】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表３】
2020535211.tif 000006
【００１９】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−コリンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表４】
2020535211.tif 000007
【００２０】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表５】
2020535211.tif 000008
【００２１】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表６】
2020535211.tif 000009
【００２２】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−コリンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表７】
2020535211.tif 000010
【００２３】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−２−ジメチルアミノエタノールからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表８】
2020535211.tif 000011
【００２４】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−アルギニンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表９】
2020535211.tif 000012
【００２５】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−アセチルコリンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１０】
2020535211.tif 000013
【００２６】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがモノ−アセチルコリンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１１】
2020535211.tif 000014
【００２７】
更なる実施形態では、非晶質のテトラヒドロ葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−アルギニンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１２】
2020535211.tif 000015
【００２８】
更なる実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−コリンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１３】
2020535211.tif 000016
【００２９】
別の実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１４】
2020535211.tif 000017
【００３０】
更なる実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１５】
2020535211.tif 000018
【００３１】
別の実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−アルギニンからなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１６】
2020535211.tif 000019
【００３２】
別の実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−（１，１−ジメチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１７】
2020535211.tif 000020
【００３３】
更なる実施形態では、非晶質の葉酸塩は、テトラヒドロ葉酸アニオンが５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸、有機カチオンがジ−（フェニルエチル−ビグアニジン）からなる。この場合、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ−ＮＭＲシフトは、以下の通りである。
【表１８】
2020535211.tif 000021
【００３４】
更に好ましい実施形態では、医薬組成物は、主要な活性化合物として本発明による少なくとも１種の葉酸塩を含む。組成物は、少なくとも薬学的に許容される賦形剤を更に含む。組成物は、例えば、緩衝剤化合物を含んでよい。好適かつ好ましい緩衝剤化合物は、トロメタモールおよびＨＥＰＥＳである。更に、抗酸化化合物が組成物中に存在してよい。好ましい抗酸化化合物は、チオグリセロール、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）およびシステインである。
【００３５】
更に、本発明による少なくとも１種の葉酸塩は、薬物、食品添加物または栄養サプリメントの調製のため、また葉酸塩の投与により積極的な影響を受けるような欠乏または障害のいずれかを予防および／または治療するために使用される。葉酸塩を含む組成物により積極的な影響を受ける疾患症状は多い。そのような疾患は、例えば病態生理学的、神経学的および炎症性疾患である。
【００３６】
更に、本発明による非晶質の葉酸塩を調製するための方法は、当該テトラヒドロ葉酸塩が葉酸アニオンおよび有機カチオンからなり、葉酸アルカリ土類金属塩の水性組成物に、シュウ酸または代替的にはフッ化物塩を加える工程を含む。
例
例１
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジＬ−アルギニン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸カルシウム五水和物１０．０ｇ（１６．６２ｍｍｏｌ）を、７０℃の水２３０ｍｌに溶解した。次にＬ−アルギニン５．７９ｇ（３３．２４ｍｍｏｌ）を加え、続いてシュウ酸二水和物２．０９ｇ（１６．６２ｍｍｏｌ）を加えた。室温（ＲＴ）に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をメタノールを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物１３．６３ｇを得た。分析データ：
【表１９】
2020535211.tif 000022
旋光度：α２０Ｄ＋１．７５°（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例２
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジメトホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸カルシウム五水和物１．８６ｇ（３．０９ｍｍｏｌ）を、７０℃の水４３ｍｌに溶解した。次に、メトホルミン遊離塩基０．８０ｇ（６．１８ｍｍｏｌ）を加え、続いてシュウ酸二水和物０．３９ｇ（３．０９ｍｍｏｌ）を加えた。室温に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をエタノールを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物２．１３ｇを得た。分析データ：
【表２０】
2020535211.tif 000023
旋光度：α２０Ｄ−２．８４゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例３
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ−フェンホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸カルシウム五水和物１．２１ｇ（２．０２ｍｍｏｌ）を、７０℃の水４３ｍｌに溶解した。次に、フェンホルミン遊離塩基０．８３ｇ（４．０４ｍｍｏｌ）を加え、続いてシュウ酸二水和物０．２５ｇ（２．０２ｍｍｏｌ）を加えた。室温に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ５．５）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物１．８０ｇを得た。分析データ：
【表２１】
2020535211.tif 000024
旋光度：α２０Ｄ＋１．３９゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例４
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ−コリン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸カルシウム五水和物１．９２ｇ（３．１９ｍｍｏｌ）を、７０℃の水４０ｍｌに溶解した。次に、濾過されたフッ化コリン（塩化コリンおよびフッ化銀から得られる）０．７９ｇ（６．３８ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。０℃に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６．５）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物１．８９ｇを得た。分析データ：
【表２２】
2020535211.tif 000025
旋光度：α２０Ｄ＋１．１４゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例５
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジＬ−アルギニン塩の調製
アルゴン下で、１０．０ｇ（１７．６７ｍｍｏｌ）のレボメ葉酸カルシウム３．８水和物を、７０℃の水１００ｍｌに懸濁させた。次に、シュウ酸二水和物２．２３ｇ（１７．６７ｍｍｏｌ）、続いてＬ−アルギニン６．１５ｇ（３５．３３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をメタノールを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物１３．９８ｇを得た。分析データ：
【表２３】
2020535211.tif 000026
旋光度：α２０Ｄ＋３０．０゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例６
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ−メトホルミン塩の調製
アルゴン下で、１．４９ｇ（２．６３ｍｍｏｌ）のレボメ葉酸カルシウム３．８水和物を、７０℃の水３８ｍｌに懸濁させた。次に、水に溶解させたシュウ酸二水和物０．３３２ｇ（２．６３ｍｍｏｌ）を加え、続いて水に溶解させたメトホルミン遊離塩基０．６８ｇ（５．２６ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物１．８９ｇを得た。分析データ：
【表２４】
2020535211.tif 000027
旋光度：α２０Ｄ＋１７．９５゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例７
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジフェンホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボメ葉酸カルシウム３．８水和物１．６４ｇ（２．９０ｍｍｏｌ）を、７０℃の水３５ｍｌに懸濁させた。次に、水に溶解させたシュウ酸二水和物０．３６６ｇ（２．９０ｍｍｏｌ）を加え、続いて水に溶解させたフェンホルミン遊離塩基０．６８ｇ（５．２６ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ５．５）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０℃で乾燥させて、表題化合物２．５４ｇを得た。分析データ：
【表２５】
2020535211.tif 000028
旋光度：α２０Ｄ＋１６．０６゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例８
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノＬ−アルギニン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸カルシウム五水和物０．２５８ｇ（０．４２９ｍｍｏｌ）を、７０゜の水６ｍｌに溶解した。次に、Ｌ−アルギニン０．０７４７ｇ（０．４２９ｍｍｏｌ）を加え、続いて水に溶解させたシュウ酸二水和物０．０５４１ｇ（０．４２９ｍｍｏｌ）を加えた。室温に冷却させた後、沈殿したシュウ酸カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ４）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をメタノールを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０゜で乾燥させて、表題化合物０．２７４ｇを得た。分析データ：
【表２６】
2020535211.tif 000029
旋光度：α２０Ｄ＋０．６２゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例９
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノメトホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸１００．０ｍｇ（０．２１１２ｍｍｏｌ）およびメトホルミン遊離塩基２８．１ｍｇ（０．２１７５ｍｍｏｌ）を、水２ｍｌおよびメタノール４ｍｌに懸濁させた。１５分間撹拌させ、超音波処理の後、得られた溶液（ｐＨ５）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０゜で乾燥させて、表題化合物１２２ｍｇを得た。分析データ：
【表２７】
2020535211.tif 000030
旋光度：α２０Ｄ−１５．３゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１０
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノフェンホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸１００．１ｍｇ（０．２１１４ｍｍｏｌ）およびフェンホルミン遊離塩基４４．７ｍｇ（０．２１７８ｍｍｏｌ）を、水４ｍｌおよびメタノール４ｍｌに懸濁させた。１０分間の撹拌と超音波処理の後、得られた溶液（ｐＨ５）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０゜で乾燥させて、表題化合物１３７ｍｇを得た。分析データ：
【表２８】
2020535211.tif 000031
旋光度：α２０Ｄ＋１３．５０゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１１
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノコリン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸１００．０ｍｇ（０．２１１２ｍｍｏｌ）および水酸化コリンの４５％メタノール溶液６２．５ｕｌ（０．２２１８ｍｍｏｌ）を、水２ｍｌおよびメタノール４ｍｌに懸濁させた。５分間撹拌し、超音波処理し、加熱還流した後、得られたわずかに混濁した溶液（ｐＨ５）をシリンジフィルタを用いて温めながら濾過し、蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、６０゜で乾燥させて、表題化合物１１８ｍｇを得た。分析データ：
【表２９】
2020535211.tif 000032
旋光度：α２０Ｄ−１６．３゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１２
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノメトホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸７２．７ｍｇ（０．１５８２ｍｍｏｌ）およびメトホルミン遊離塩基２１．５ｍｇ（０．１６６１ｍｍｏｌ）を、水１０ｍｌおよびメタノール２０ｍｌに懸濁させた。撹拌し、超音波処理し、還流した後、得られた溶液を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、５０゜で乾燥させて、表題化合物９４．６ｍｇを得た。分析データ：
【表３０】
2020535211.tif 000033
例１３
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノフェンホルミン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸９０．４ｍｇ（０．１９６７ｍｍｏｌ）およびフェンホルミン遊離塩基４２．４ｍｇ（０．２０６６ｍｍｏｌ）を、水５ｍｌおよびメタノール１０ｍｌに懸濁させた。撹拌し、超音波処理し、しばらくの間還流した後、得られた溶液を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、５０゜で乾燥させて、表題化合物１３３ｍｇを得た。分析データ：
【表３１】
2020535211.tif 000034
旋光度：α２０Ｄ−５．９０゜（ｃ＝０．２３５Ｈ２Ｏ）
例１４
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノコリン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸カルシウム３．８水和物２．６１ｇ（４．６１１ｍｍｏｌ）を、９５゜の水６０ｍｌに懸濁させた。次に、濾過されたフッ化コリン（塩化コリンとフッ化銀から得られる）５６８ｍｇ（４．６１１ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。９５゜で１０分間撹拌し続け、室温まで冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをハイフロパッドを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６．５）を蒸発乾固させ、２．５６８ｇの表題化合物を得た。粗生成物を５０゜のエタノールを用いて全体的に温浸させ、次に氷浴で冷却させて濾過し、真空下、６０゜で乾燥して、表題化合物１．６７ｇを得た。分析データ：
【表３２】
2020535211.tif 000035
旋光度：α２０Ｄ＋０．１゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１５
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジアセチルコリン塩の調製
アルゴン下で、カルシウムレボフォリナットペンタヒドラット３３０．６ｍｇ（０．５４９６ｍｍｏｌ）を、７０゜の水６ｍｌに溶解した。次に、濾過された、３０℃のフッ化アセチルコリン（塩化アセチルコリンおよびフッ化銀から得られる）１８１．６ｍｇ（１．０９９ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。０゜に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをシリンジフィルタを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させ、表題化合物４０７ｍｇを得た。分析データ：
【表３３】
2020535211.tif 000036
旋光度：α２０Ｄ−３．４゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１６
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジアセチルコリン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸カルシウム３．８水和物３３１．８ｍｇ（０．５８６２ｍｍｏｌ）を、７０゜の水８ｍｌに懸濁させた。次に、濾過された、５０℃のフッ化アセチルコリン（塩化アセチルコリンおよびフッ化銀から得られる）１９３．６ｍｇ（１．１７２ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。０゜に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをシリンジフィルタを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６．５）を蒸発乾固させ、表題化合物４３３ｍｇを得た。分析データ：
【表３４】
2020535211.tif 000037
旋光度：α２０Ｄ１７．０４゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１７
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジベタメチルエステル塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸銀５０．６ｍｇ（０．０７３６ｍｍｏｌ）を水２ｍｌに懸濁させた。次に、水１ｍｌに、ベタイン−メチルエステルヨージド３８．１ｍｇ（０．１４７３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を撹拌しながら９０℃に加熱した。冷却後、懸濁液をシリンジフィルタを用いて濾過し、得られた透明溶液を蒸発させ、真空下、５０℃で乾燥して、表題化合物５６ｍｇを得た。分析データ：
【表３５】
2020535211.tif 000038
例１８
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジベタメチルエステル塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸カルシウム３．８水和物５２０．１ｍｇ（０．９１９ｍｍｏｌ）を７０゜の水６ｍｌに懸濁させた。次に、濾過された、２０゜のベタインメチルエステルフルオリド（ベタインメチルエステルヨージドおよびフッ化銀から得られる）２９１．８ｍｇ（１．９３０ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。０℃に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをシリンジフィルタで濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６．５）を蒸発させ、真空下、４０゜で乾燥して、表題化合物６８２ｍｇを得た。分析データ：
【表３６】
2020535211.tif 000039
旋光度：α２０Ｄ＋１０．５゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例１９
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ２−ジメチルアミノエタノール塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸５８．０ｍｇ（０．１２２５ｍｍｏｌ）を水０．５ｍｌに懸濁させ、２−ジメチルアミノエタノール（デアノール）２４．７μｌ（０．２４５０ｍｍｏｌ）で処理した。透明溶液が形成されるまで混合物を室温（ｒｔ）で撹拌し、蒸発させ、真空下、４５℃で乾燥させて、表題化合物７７ｍｇを得た。分析データ：
【表３７】
2020535211.tif 000040
旋光度：α２０Ｄ−８．５゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例２０
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノ２−ジメチルアミノエタノール塩の調製
アルゴン下で、レボフォリン酸７１．６ｍｇ（０．１５１２ｍｍｏｌ）を水２ｍｌとメタノール５ｍｌに懸濁させ、２−ジメチルアミノエタノール（デアノール）１５．７μｌ（０．１５５８ｍｍｏｌ）で処理した。超音波処理の後、６０℃へとすぐに加熱し、透明溶液を形成した（ｐＨ５）。この溶液を蒸発させ、真空下、４５℃で乾燥させて、表題化合物８９．６ｍｇを得た。分析データ：
【表３８】
2020535211.tif 000041
旋光度：α２０Ｄ−１３．８゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例２１
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノＬ−アルギニン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸８２．０ｍｇ（０．１７８５ｍｍｏｌ）を水１０ｍｌおよびメタノール２０ｍｌに懸濁させた。Ｌ−アルギニン３１．１ｍｇ（０．１７８５ｍｍｏｌ）を加え、溶液が形成されるまで混合物は処理した。これを蒸発させ、アセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、５０゜で乾燥させて、表題化合物１０９．７ｍｇを得た。分析データ：
【表３９】
2020535211.tif 000042
例２２
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノアセチルコリン塩の調製
アルゴン下で、レボフォリナトカルシウムペンタヒドラット６５６．０ｍｇ（１．０９０ｍｍｏｌ）を、７０゜の水１０ｍｌに溶解した。次に、濾過された、３０゜のフッ化アセチルコリン（塩化アセチルコリンおよびフッ化銀から得られる）１８０．１ｍｇ（１．０９０ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。０゜に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをシリンジフィルタを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、５０℃で乾燥させて、表題化合物６４０ｍｇを得た。分析データ：
【表４０】
2020535211.tif 000043
旋光度：α２０Ｄ−７．７゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
例２３
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸モノアセチルコリン塩の調製
アルゴン下で、レボメフォリン酸カルシウム３．８水和物６２５．６ｍｇ（１．１０５ｍｍｏｌ）を、７０゜の水１２ｍｌに懸濁させた。次に、濾過された、３０゜のフッ化アセチルコリン（塩化アセチルコリンおよびフッ化銀から得られる）１８２．６ｍｇ（１．１０５ｍｍｏｌ）の水溶液を加えた。混合物をすぐに６０℃に加熱し、再び２０℃に冷却させた後、沈殿したフッ化カルシウムをシリンジフィルタを用いて濾別し、得られた透明溶液（ｐＨ６）を蒸発乾固させた。次に、粗生成物をアセトニトリルを用いて全体的に温浸させて濾過し、真空下、５０℃で乾燥させて、表題化合物６３７ｍｇを得た。分析データ：
【表４１】
2020535211.tif 000044
旋光度：α２０Ｄ＋２９．７゜（ｃ＝１Ｈ２Ｏ）
選択した葉酸塩の溶解度測定は、一般に以下のように行われた。
予想した溶解度に対応する量の塩（１〜１００ｍｇの間）が提供され、溶液が形成されるまで各溶媒を増加させながら混合した。特に溶解性の高い塩は、粘度が極度に大きい溶液が生じ得るという点で、こうした処理により長い時間を必要とする場合がある。
５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ−アルギニン塩および５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸ジ−アルギニン塩の２つの、グリセロール中の溶解度について、より詳細に試験した。まずジ−アルギニン塩をめのう乳鉢で細かく粉砕し、次にグリセリン（１ｍｌ溶媒中５０ｍｇ（５％ｍ／ｖ）、アルゴン下）と混合させ、マグネチックスターラで撹拌した。一晩撹拌した後、透明溶液を得た。それ以前に５％（ｍ／ｖ）の溶解度であることを確認した後、同じ手順を２倍の濃度で実行し、溶液を得た。２０％（ｍ／ｖ）の濃度でも、得られた溶液は非常に粘稠であった。
比較のため、グリセリン中の５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩（Ｇｅｌｐｅｌｌ（ゲルペル））の溶解度を行った。塩は、５％（ｍ／ｖ）、２．５％（ｍ／ｖ）および１．６％（ｍ／ｖ）では明らかに不溶であった。１．２５％（ｍ／ｖ）では、最初にわずかに乳白色の溶液が得られたが、撹拌後、週末にかけて明確に溶解した。これにより、このカルシウム塩は約１％の溶解度であるという先行データが確認された。
グリセリン中のアルギニン（摺りつぶされたもの）の溶解度は、５００μｌ中１００ｍｇでは良好に溶解し、５００μｌ中２００ｍｇでは一晩撹拌した後に溶液を得て、３６時間後、透明溶液を生じたというものだった。（品質グリセリン：９９．５％、アッセイ９９．９９％、水は指定されず。（密度：１．２６ｇ／ｍｌ））
全ての溶解度データは質量％（ｍ／ｍ）で示されている。以下、溶解度は２０℃にて測定した。
【表４２】
2020535211.tif 000045
定量的ＨＰＬＣ測定（２０．００ｍｇの物質を１０．００ｍｌのＨ２Ｏに溶解させ、１．０μｌの注入量で、２８０ｎｍ）
【表４３】
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【国際調査報告】
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