(57)【要約】  アブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法。本発明は、アブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法に関する。アブシジン酸の抽出物が、アブシジン酸を含む植物材料から高収率で得られる。本発明はまた、前記方法に従って得ることができる抽出物、アブシジン酸の精製植物抽出物、前記抽出物を含む組成物、栄養組成物、医薬組成物又は化粧用組成物におけるその使用、及び医薬品として使用するための前記抽出物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物材料からアブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法であって、
a)水性溶媒を使用してアブシジン酸を含む植物材料を抽出し、固体植物材料を液体画分から分離する工程と、
b)前記液体画分を濃縮する工程と、
c)工程b)で得られた前記液体画分を、水に混和性の有機溶媒を溶離剤として使用する吸着カラムでのクロマトグラフィー分離によって、又は水に混和性でない溶媒を使用する液液抽出によって、又は濾過によって精製する工程と、
d)工程c)で得られた有機相を蒸発させる工程と
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２】
アブシジン酸を含む前記植物材料が、イチジク、クランベリー/ブルーベリー、アプリコット、バナナ、ダイダイ、オレンジの皮、マンダリンの皮、レモンの皮、及びグレープフルーツの皮からなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
アブシジン酸を含む前記植物材料が、イチジク及びダイダイからなる群から選択されることを特徴とする、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
アブシジン酸を含む前記植物材料が、イチジクであることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
前記植物材料が乾燥していることを特徴とする、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記水性溶媒が、a)水、及びb)水とエタノールとの混合物、から選択されることを特徴とする、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抽出を、唯一の溶媒として水を用いて実施することを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出を、エタノールと水との混合物を用いて実施することを特徴とする、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
エタノールの割合が、50容量%〜85容量%の間であることを特徴とする、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
抽出される前記植物材料の質量の3〜6倍の間に相当する容量の溶媒を使用することを特徴とする、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抽出を、50℃〜75℃の間の温度で実施することを特徴とする、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
精製を、水に混和性の有機溶媒を溶離剤として使用する吸着カラムでのクロマトグラフィー分離によって実施することを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
水に混和性の前記有機溶媒が、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコール、ケトン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル及びそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
水に混和性の前記有機溶媒が、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールであることを特徴とする、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
前記溶離剤が、メタノール及びエタノールからなる群から選択されることを特徴とする、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
前記溶離剤がエタノールであることを特徴とする、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
前記液液抽出において、ブタノール及び酢酸エチルからなる群から選択される、水に混和性でない有機溶媒を使用することを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶媒が酢酸エチルであることを特徴とする、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
工程c)の前記濾過が接線流濾過であることを特徴とする、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記濾過がナノ濾過であることを特徴とする、請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
前記濾過の圧力が4〜20バールの間であることを特徴とする、請求項19に記載の方法。
【請求項２２】
前記抽出工程a)がパーコレーションにより行われることを特徴とする、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記パーコレーション工程における前記抽出溶媒の流量が、毎時500〜1200リットルの範囲内であることを特徴とする、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
原料の量が500〜2000kgの間であることを特徴とする、請求項22又は23に記載の方法。
【請求項２５】
工程a)で得られた前記抽出物を、低温殺菌にかけることを特徴とする、請求項1から24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記低温殺菌を、少なくとも92℃で少なくとも78秒間実施することを特徴とする、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
請求項1から26のいずれか一項に規定のアブシジン酸の植物抽出物であって、5ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含むことを特徴とする、抽出物。
【請求項２８】
1000ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含むことを特徴とする、アブシジン酸の精製植物抽出物である、請求項27に記載の抽出物。
【請求項２９】
99:1〜1:99の割合の未精製抽出物を含み、前記未精製抽出物が、請求項1の方法の工程a)に従って、前記水性溶媒を使用して前記植物材料から抽出された後に、及びいずれの場合でも、前記液体画分を乾燥させた後に、得られる前記抽出物に相当することを特徴とする、請求項27又は28に記載の抽出物。
【請求項３０】
5ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含むことを特徴とする、請求項29に記載の抽出物。
【請求項３１】
請求項27から30のいずれか一項に記載の抽出物と、少なくとも1つの追加成分とを含むことを特徴とする、組成物。
【請求項３２】
前記追加成分が、コロイドシリカ、タルク、リン酸三カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、炭水化物、マルトデキストリン、水、多価アルコール、セルロース、デンプン及びそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項31に記載の組成物。
【請求項３３】
0.5質量%〜35質量%の追加成分を含むことを特徴とする、請求項32に記載の組成物。
【請求項３４】
約20質量%のマルトデキストリンを含むことを特徴とする、請求項33に記載の組成物。
【請求項３５】
約5質量%の二酸化ケイ素又はリン酸三カルシウムを含むことを特徴とする、請求項34に記載の組成物。
【請求項３６】
栄養組成物、医薬組成物、又は化粧用組成物における、請求項29又は30に記載の抽出物の使用。
【請求項３７】
医薬品として使用するための、請求項9から30のいずれか一項に記載の抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物、栄養組成物及び化粧用組成物において使用することができる、アブシジン酸の抽出物を植物材料から調製するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アブシジン酸(以下ABA)は、1960年代の初めに発見された植物ホルモンである。前記酸は、植物の重要な機能、例えば、水及び栄養不足、紫外線放射、種子の休眠及び発芽、並びに根の成長に対する応答を調節する。
【０００３】
天然ABAは、2つの異性体の混合物からなり、この2つの異性体は、以下の構造
【０００４】
【化１】
2020534815.tif 000002
【０００５】
を有する。
【０００６】
ABAは、葉、茎、根、及び未熟な果実において合成される。しかし、動物細胞におけるABAの生合成が発見されてはじめて、植物系と動物におけるその役割の考えられる類似点を解明することに関心が高まった。
【０００７】
したがって、Bassaganya-Rieraらによる論文、Abscisic acid regulates inflammation via ligand-binding domain-independent activation of peroxisome proliferator-activated receptor, J. Biol. Chem.、2011年、286(4)、2504〜2516頁によると、ABAはその医療応用の結果として注目を集めた。前記論文では、ABAの経口投与が、糖尿病、炎症性腸愁訴及びアテローム性動脈硬化症のマウスモデルにおいてどのように予防的及び治療的に有効であるとわかっているかについて記載されている。
【０００８】
Bassaganya-Rieraらによる論文、Mechanisms of action and medicinal applications of abscisic acid、Curr. Med. Chem.、2010年17(5), 467〜478頁では、癌治療におけるABAの使用がどのように必要とされているかについて記載されている。前記使用は、中国特許出願CN-A-1748674及び米国特許出願公開第2006/0292215号にも開示されている。
【０００９】
国際特許出願WO-A-2007/092556には、とりわけ、インスリン抵抗性、高血糖、耐糖能異常、空腹時の高グルコース濃度、2型糖尿病、前糖尿病若しくは炎症等の疾患又は障害を有するか、或いは発症する素因を有する対象の治療におけるABAの使用が記載されている。
【００１０】
国際特許出願WO-A-2011/150160には、リポ多糖への曝露又は呼吸器炎症によって引き起こされる炎症を治療するか又は予防するためのABAの使用が記載されている。
【００１１】
国際特許出願WO-A-2016/009399には、インスリン血症の実質的な増加を伴わない高血糖の予防、制御又は治療的処置のためのABAの使用が記載されている。
【００１２】
ABAの発見及び医学におけるABAの使用可能性により、例えば、Constantinoら、A novel synthesis of (+-)-abscisic acid, J. Org. Chem.、1989年、54(3)、681〜683頁、又はSmithら、Concise enantioselective synthesis of abscisic acid and a new analogue、Org. Biomol. Chem.、2006年、4(22)、4186〜4192頁に記載されているように、種々の合成経路の開発が促進されている。
【００１３】
従来技術では、例えば、とりわけ、中国特許出願CN-1749401、CN-A-1944385、CN-A-101041837又はCN-A-105541603に記載されているような、微生物から発酵によりABAを得るための工業的方法も提案されている。前記方法には、例えば、発酵に使用される量により大きな設備を使用すること、汚染又は不活化に対する微生物の感受性等の欠点がある。この方法で得られた生成物は、これが植物材料からの抽出により得られた生成物に関するということを除いて、合成的に得られた生成物と実質的に同等である。
【００１４】
ABAへの関心は、発酵スターター培地であろうと植物材料の試料であろうと、その定量化のための分析方法の開発も必要としている。
【００１５】
したがって、例えば、中国特許出願CN-103529156には、イチゴ中のABAを抽出し、定量する方法であって、50:50:1の割合のメタノール、酢酸エチル及びギ酸の混合物を使用した凍結粉砕イチゴ果肉からの試料の抽出、濾過、蒸発及びUHPLC分析を含む、方法が記載されている。
【００１６】
Loveysらによる論文、Improved extraction of abscisic acid from plant tissue、Aus. J. Plant Physiol.、1988年、15、421〜427頁では、質量が0.7〜1.0gの間の植物組織の小さな試料のABAを定量する方法が記載されている。前記方法では、アプリコットの木、ルピナス、アボカド、ヒマワリ及びブドウ等の植物の葉からABAを抽出するための溶媒としてメタノール、冷水又は温水が使用される。同じ論文では、過去に主にメタノールを溶媒として使用して、前記組織内のABAの定量的推定値を生成する方法についても記載されているが、クロロホルムとメタノール;クロロホルムとエタノール;クロロホルムとエチルエーテルの組合せの使用、並びにメタノール、酢酸エチル、及び酢酸の組合せの使用等の代替案も提案されている。
【００１７】
実験室規模の抽出法を含む植物試料中のABAを定量する分析法に関する他の論文は、例えば、Caiら、Sequential solvent induced phase transition extraction for profiling of endogenous phytohormones in plants by liquid chromatography-mass spectrometry、J. Chromat. B: Anal. Technol. Biomed. Life Sci.、2015年、1004、23〜29頁; Caiら、Profiling of phytohormones in rice under elevated cadmium concentration、J. Chromat. A、2015年、1406、78〜86頁;又はZhangら、Analysis of phytohormones in vermicompost using a novel combinative sample preparation strategy of ultrasound-assisted extraction and solid-phase extraction coupled with liquid chromatography-tandem mass spectrometry levels by magnetic solid-phase extraction coupled with liquid chromatography tandem mass spectrometry、Talanta、2015年、139、189〜197頁である。
【００１８】
前述の国際特許出願WO-A-2016/009399には、乾燥プロセスを以前に経た植物マトリックス(350g)から比較的少量のABAを抽出する方法が記載されており、この方法は、超臨界条件において二酸化炭素を使用した抽出及びそれに続く水を使用した抽出を必要とする。また、ABA及びグルコースエステル(ABB-GE)も含む乾燥植物マトリックスからの水を使用した抽出についても記載されている。Leeら、Activation of Glucosidase via Stress Induced Polymerization Rapidly Increases Active Pools of Abscisic Acid、Cell、2006年、126、1109〜1120頁に記載されているように、これは、例えば、アルカリ加水分解によりABAに転換することができる不活性ABAコンジュゲートである。前記特許出願には、西洋の食生活における一般的な果実及び野菜中のABA含有量が記載されている。したがって、イチジク中では2812.3pmol/gが、アプリコット中では2583.4pmol/gが、クランベリー/ブルーベリー中では1444.2pmol/gが、バナナ中では835.4pmol/gが、ジャガイモ中では119.2pmol/gが、豆乳中では117.4pmol/gが、リンゴ(スミス品種)中では90.2pmol/gが、オリーブ中では52pmol/gが見出されている。
【００１９】
したがって、アブシジン酸の抽出物の工業的調製は、植物材料中のアブシジン酸の含有量が低いため、実施が困難であることが判明し、このことにより、経済的な抽出と経済的に許容される条件下で製品の市販を行うのは困難になっている。したがって、工業的規模でABAに富む抽出物を得るのに好適であり、かつ医薬組成物、栄養組成物又は化粧用組成物に組み込むのに好適である、植物材料からABAを抽出する方法が記載されていないことは、驚くべきことではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】中国特許出願CN-A-1748674
【特許文献２】米国特許出願公開第2006/0292215号
【特許文献３】国際特許出願WO-A-2007/092556
【特許文献４】国際特許出願WO-A-2011/150160
【特許文献５】国際特許出願WO-A-2016/009399
【特許文献６】中国特許出願CN-1749401
【特許文献７】中国特許出願CN-A-1944385
【特許文献８】中国特許出願CN-A-101041837
【特許文献９】中国特許出願CN-A-105541603
【特許文献１０】中国特許出願CN-103529156
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Bassaganya-Rieraら、Abscisic acid regulates inflammation via ligand-binding domain-independent activation of peroxisome proliferator-activated receptor, J. Biol. Chem.、2011年、286(4)、2504〜2516頁
【非特許文献２】Bassaganya-Rieraら、Mechanisms of action and medicinal applications of abscisic acid、Curr. Med. Chem.、2010年17(5), 467〜478頁
【非特許文献３】Constantinoら、A novel synthesis of (+-)-abscisic acid, J. Org. Chem.、1989年、54(3)、681〜683頁
【非特許文献４】Smithら、Concise enantioselective synthesis of abscisic acid and a new analogue、Org. Biomol. Chem.、2006年、4(22)、4186〜4192頁
【非特許文献５】Loveysら、Improved extraction of abscisic acid from plant tissue、Aus. J. Plant Physiol.、1988年、15、421〜427頁
【非特許文献６】Caiら、Sequential solvent induced phase transition extraction for profiling of endogenous phytohormones in plants by liquid chromatography-mass spectrometry、J. Chromat. B: Anal. Technol. Biomed. Life Sci.、2015年、1004、23〜29頁
【非特許文献７】Caiら、Profiling of phytohormones in rice under elevated cadmium concentration、J. Chromat. A、2015年、1406、78〜86頁
【非特許文献８】Zhangら、Analysis of phytohormones in vermicompost using a novel combinative sample preparation strategy of ultrasound-assisted extraction and solid-phase extraction coupled with liquid chromatography-tandem mass spectrometry levels by magnetic solid-phase extraction coupled with liquid chromatography tandem mass spectrometry、Talanta、2015年、139、189〜197頁
【非特許文献９】Leeら、Activation of Glucosidase via Stress Induced Polymerization Rapidly Increases Active Pools of Abscisic Acid、Cell、2006年、126、1109〜1120頁
【非特許文献１０】Remington The Science and Practice of Pharmacy、20th edition、A. R. Gennaro編、Lippincott Williams and Wilikins、2000年
【非特許文献１１】Handbook of Pharmaceutical Excipients、4th edition、R. C. Crove、P. J. Sheskey及びP. J. Weller編、Pharmaceutical Press、2003年
【非特許文献１２】Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets、第1巻、H. Lieberman, L. Lachman、J.B. Schwartzによる(2nd edition、Marcel Dekker、New York、1989年)
【非特許文献１３】Kelenら、Separation of Abscisic Acid, Indole-3-Acetic Acid, Gibberellic Acid in 99 R (Vitis berlandieri x Vitis rupestris) and Rose Oil (Rosa damascena Mill.) by Reversed Phase Liquid Chromatography、Turk J. Chem、2004年、29、603〜610頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
したがって、植物材料からアブシジン酸を抽出するための方法であって、良好な収率を提供し、工業規模で容易に適用される方法が依然として必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は、アブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法に関する。特に、本発明の一態様は、アブシジン酸の植物抽出物を調製するための、大規模で費用対効果の高い方法に関する。
【００２４】
本発明はまた、前記方法を使用して得ることができる抽出物に関する。
【００２５】
本発明はまた、アブシジン酸の精製植物抽出物に関する。
【００２６】
本発明はまた、前記抽出物及び追加成分を含む組成物に関する。
【００２７】
本発明はまた、栄養組成物、医薬組成物又は化粧用組成物における前記抽出物の使用に関する。
【００２８】
本発明は、医薬品として使用するための前記抽出物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、植物材料からアブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法であって、
a)水性溶媒を使用してアブシジン酸を含む植物材料を抽出し、固体植物材料を液体画分から分離する工程と、
b)液体画分を濃縮する工程と、
c)工程b)で得られた液体画分を、水に混和性の有機溶媒を溶離剤として使用する吸着カラムでのクロマトグラフィー分離によって、又は水に混和性でない溶媒を使用する液液抽出によって、又は濾過によって精製する工程と、
d)工程c)で得られた有機相を蒸発させる工程と
を含む、方法に関する。
【００３０】
本発明者らは、1000ppm〜4000ppmの間のABA含有量を有する精製抽出物を驚くべきことに得ることができる、植物材料からABAを抽出するための方法を開発した。開発された方法により、これらの高ABA含有量を有する植物抽出物を、この生成物の天然含有量が非常に少なく、含水量が約10質量%の乾燥製品では約5ppmのレベルで、未乾燥製品ではABAは約10分の1である、原料から出発して工業規模で調製することができる。開発された方法には、化学合成や修飾プロセスが実施されない抽出及び精製プロセスが含まれる。初期植物物質中のABAの量に対して80%超のABA回収が通常得られることを考えると、開発されたプロセスの追加の利点は、その効率である。前記方法は、広範囲の植物材料に適用することができ、工業規模に容易にスケールアップすることができ、医薬組成物、栄養組成物、又は化粧用組成物として処方するのに好適な抽出物を調製するのに、経済的に実行可能である。
【００３１】
本明細書全体を通して、特に明記しない限り、百分率として表される濃度は、常に質量パーセント(質量%)、すなわち、組成物100gあたりの特定の成分のグラムを指し、かつ組成物の種々の成分の百分率は、その合計が100%になるように調整される。
【００３２】
本明細書及びまた特許請求の範囲においては、単数形「a」、及び「the」は、文脈上別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。前置詞「between」によって定義される範囲は、その極値を含む。
【００３３】
植物材料
本発明による方法において使用される植物材料は、遊離形態又は例えばグルコースとのエステル等のエステルの形態のいずれかで、その成分中にABAを含む材料から選択される。これらの植物材料は、好ましくは、イチジク、クランベリー/ブルーベリー、アプリコット、バナナ、ダイダイ(bitter orange)、オレンジの皮、マンダリンの皮、レモンの皮、及びグレープフルーツの皮からなる群から選択される。好ましくは、イチジク又はダイダイを使用し、より好ましくは、イチジクを使用する。本発明による方法では、天然に見られるような、すなわち、天然含水量の植物材料を使用してもよく、或いは乾燥植物材料を使用してもよい。好ましくは、通常20質量%以下、好ましくは15質量%以下、更により好ましくは10質量%以下の含水量の乾燥植物材料を使用する。
【００３４】
抽出方法において、前記植物材料は、「そのままで」、すなわち全形を、又は抽出前の段階として機械的に刻んで使用してもよい。この場合、植物材料を細断又は切断するための当業者が利用可能な任意の方法が好適である。
【００３５】
溶媒
本発明による方法で使用される溶媒は水性溶媒であり、すなわち、水を含む。溶媒は、a)水、及びb)水と、好ましくはメタノール、エタノール、イソプロパノール及びそれらの混合物から選択される、1〜4個の炭素原子を有する少なくとも1種の低級脂肪族アルコールとの混合物、から選択され、より好ましくは、低級脂肪族アルコールはエタノールである。
【００３６】
好ましい実施形態では、抽出は、水を唯一の溶媒として使用して実施される。別の好ましい実施形態では、抽出は、エタノールと水との混合物を使用して実施される。エタノールと水との混合物を使用する場合、好ましくは50容量%〜85容量%の間、より好ましくは60容量%〜80容量%の間、更により好ましくは65容量%〜75容量の間、なお更により好ましくは70容量%の割合のエタノールを使用する。
【００３７】
一般に、抽出される植物材料の質量の3〜6倍の間に相当する容量の溶媒を使用する。
【００３８】
抽出、濾過及び濃縮
抽出方法は、当業者に周知の方法に従って実施してもよい。すなわち、全形の、又は小さな塊に、好ましくは2cm未満のサイズに切断された植物材料を、水単独、又は水と、1〜4個の炭素原子を有する少なくとも1種の低級脂肪族アルコールとの混合物であるかどうかにかかわらず、水性溶媒の作用にかけることによる。
【００３９】
抽出を実施するには、例えば、冷浸、温浸、撹拌を伴う冷浸、流動層抽出、超音波抽出、向流抽出、パーコレーション(percolation)、再パーコレーション、低圧抽出、又は連続還流を伴う固液抽出等の従来の固液抽出方法が好適である。
【００４０】
工業規模では、好ましい方法は、再パーコレーションとも称される、溶媒再利用によるパーコレーションである。前記方法では、抽出が完了するまで、溶媒は植物材料を連続的に通過する。一般に、パーコレーションには、植物材料をパーコレーターの外側で湿らせることからなる前工程が含まれる。この操作により、溶媒と抽出される植物材料との接触が促進され、細胞壁の多孔性が高まり、抽出可能な物質の細胞外への拡散が促進される。
【００４１】
本発明による方法では、抽出は通常、50℃〜75℃の間、好ましくは55℃〜70℃の間、より好ましくは60℃〜65℃の間の温度で実施される。水と、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールとの混合物を使用する場合、抽出温度は使用するアルコール及びその沸点に適合する。
【００４２】
抽出に必要な時間は、通常、初期植物材料、抽出方法、抽出温度、溶媒と植物材料との間の比率等に適合する。
【００４３】
抽出後、ミセル(溶媒が植物材料に接触し、可溶性化合物の抽出を開始した後に形成される、溶媒と抽出化合物との混合物)を、通常、工業プロセスにおいて確立している方法で、植物性材料の固液濾過によって分離させる。
【００４４】
大量の抽出物が得られ、前記抽出物中の糖濃度が高い工業規模では、前記抽出物が、微生物分解に対して非常に敏感になる。これを避けるために、濃縮及び精製工程中に微生物学的完全性(microbiological integrity)を維持するために、得られた抽出物を低温殺菌することが好ましい。
【００４５】
植物材料の分離後に得られる液体画分(ミセル)を、好ましくは真空下で、たとえば約80mバールの圧力で、一般的には70℃以下、好ましくは65℃以下の温度で濃縮する。前記濃縮プロセスを、通常、後続の精製工程に好適な乾燥残留物を有する生成物が得られるまで継続し、この乾燥残余部分は、好ましくは5質量%〜20質量%の間、より好ましくは7質量%〜15質量%の間、更により好ましくは約10質量%の間である。
【００４６】
任意に、ミセルは、例えば活性炭又は漂白土で処理することによる、その色を消すための脱色工程にかけてもよい。
【００４７】
本発明による抽出方法では、通常、真空下で、一般に70℃以下、好ましくは65℃以下の温度で乾燥させると、5〜25ppmの間の、好ましくは10ppm〜20ppmの間のABAを含み、一般に(DER)(得られた抽出物に対する初期植物材料の比率)は2〜3である、抽出物が得られる。
【００４８】
精製
本発明による方法は、水性溶媒を使用して抽出した後に得られた生成物を精製する工程を含む。
【００４９】
驚くべきことに、i)水に混和性の有機溶媒、たとえばエタノールを溶離剤として使用するクロマトグラフィー吸着カラムでのクロマトグラフィー分離、又はii)例えば酢酸エチル等の水に混和性でない溶媒を使用した液液抽出、を使用することによって、200:1〜1000:1のDERを特徴とする、1000〜4000ppmの間のABA含有量を有する抽出物を得ることができたことに留意すべきである。
【００５０】
好ましくは、溶離剤は、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコール、ケトン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、及びそれらの混合物から選択され、より好ましくは、水に混和性の溶媒は、好ましくはメタノール、エタノール及びイソプロパノールから選択される、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールであり、より好ましくは、低級脂肪族アルコールはエタノールである。
【００５１】
クロマトグラフィー分離については、当業者に周知の方法に従う。前記操作において、水性溶媒を用いて抽出した後に得られた液体画分を使用し、濾過して植物材料を分離し、濃縮して、吸着樹脂を充填したクロマトグラフィーカラムに装填するのに好適な、乾燥残留物を有する溶液を得て、水に混和性の有機溶媒、好ましくは1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールを溶離剤として使用し、より好ましくは、溶離剤はメタノール及びエタノールからなる群から選択され、更により好ましくは、溶離剤はエタノールである。
【００５２】
吸着クロマトグラフィーに好適な樹脂は、市場でよく知られている。前記精製を実施するのに好適な吸着樹脂の中には、例えば、シリーズAmberlite(登録商標)(Dow社)、Resindion(登録商標)(Mitsubishi社)、又はMacronet(登録商標)(Purolite社)の樹脂がある。
【００５３】
液液抽出では、また水性溶媒を用いて抽出した後に得られた液体画分を使用し、濾過して植物材料を分離し、濃縮して、好適な乾燥残留物を有する溶液を得て、ブタノール又は酢酸エチル、好ましくは酢酸エチル等の、水に混和性でない有機溶媒も使用される。この抽出は通常、最低温度25℃で実施され、上限は有機溶媒の沸点である。好ましくは、液液抽出は、40℃〜60℃の間、より好ましくは45℃〜55℃の間、更により好ましくは50℃で実施される。
【００５４】
抽出物
本発明は、本発明による方法に従って得ることができる抽出物に関する。
【００５５】
固体形態の本発明の精製抽出物は、1000ppm〜4000ppmの間のABA含有量を有し、200:1〜1000:1のDER(初期植物材料と得られた抽出物との比)を特徴とする。得られた抽出物のこのレベルの精製及びそのDERは、前記プロセスの高い効率を示している。このことは、本発明による方法において原料として使用される乾燥植物材料が約5ppmのABA含有量を有し、実施される精製によりこの値が1000ppm〜4000ppmの間のレベルに濃縮され、このレベルは、200:1〜1000:1のDERと組み合わせると、ABA回収率に関し少なくとも80%の総収率に相当する、という事実によって実証される。
【００５６】
したがって、本発明は、1000ppm〜4000ppmの間のABAを有する、アブシジン酸の精製植物抽出物に関する。
【００５７】
好ましい実施形態では、固体形態の本発明による抽出物は、10:1〜50:1のDER、好ましくは10:1のDER又は50:1のDERを特徴とする。
【００５８】
別の好ましい実施形態では、水溶液としての液体形態の本発明による抽出物は、3:1のDERを特徴とする。
【００５９】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による精製抽出物は、99:1〜1:99の間の割合の未精製抽出物も含む。未精製抽出物は、5ppm〜25ppmの間、好ましくは10ppm〜20ppmの間のABA含有量を有する抽出物であり、これは、本発明による方法の工程a)に従って、水性溶媒を使用して植物材料から抽出した後に、及び上記のように、任意に液体画分を乾燥させた後に、得られる。したがって、各抽出物の割合に応じて、5ppm〜4000ppmの間のABA含有量を有する抽出物を得ることができる。精製抽出物及び未精製抽出物は、固体及び/又は液体の形態で組み合わせることができる。両方の抽出物が固体形態で組み合わせられる場合、前記抽出物の組合せにおけるABA含有量は、好ましくは10ppm〜300ppmの間、20ppm〜300ppmの間、30ppm〜300ppmの間、40ppm〜300ppmの間、50ppm〜300ppmの間、60ppm〜300ppmの間、70ppm〜300ppmの間、80ppm〜300ppmの間、90ppm〜300ppmの間、100ppm〜300ppmの間、150ppm〜300ppmの間、200ppm〜300ppmの間、又は250〜300ppmの間、の値を有する。両方が液体形態で組み合わせられる場合、前記抽出物の組合せにおけるABA含有量は、好ましくは20ppm〜100ppmの間、30ppm〜100ppmの間、40ppm〜100ppmの間、50ppm〜100ppmの間、60ppm〜100ppmの間、70ppm〜100ppmの間、80ppm〜100ppmの間、又は90ppm〜100ppmの間、の値を有する。固体形態の一方の抽出物と液体形態のもう一方の抽出物との組合せにより、異なるABA含有量を有する抽出物を調製することが可能になる。本発明による精製抽出物と未精製抽出物との組合せにより、追加成分を使用する必要がなく、抽出用の初期製品として使用された植物材料マトリックスを維持して、5ppm〜4000ppmの間の広い範囲内の特定のABA濃度を有する抽出物を調製することが可能になる。
【００６０】
組成物
本発明はまた、本発明の抽出物及び少なくとも1つの追加成分を含む組成物に関する。
【００６１】
組成物は、医薬組成物、栄養組成物又は化粧用組成物であり得る。
【００６２】
本発明の一実施形態では、抽出物は、コロイドシリカ、タルク、リン酸三カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、炭水化物(例えば、デンプン)、マルトデキストリン、水、多価アルコール(例えば、グリセリン又はプロピレングリコール)、セルロース(例えば、微結晶セルロース)、デンプン及びそれらの混合物からなる群から選択される追加成分と組み合わせられる。好ましい実施形態では、本発明による抽出物は、例えばタガトース等の低グリセミック指数を有する追加成分と組み合わせられる。
【００６３】
好ましい実施形態では、組成物は、0.5質量%〜35質量%の間、好ましくは5質量%〜20質量%の間の追加成分を含む。より好ましい実施形態では、追加成分として約20質量%のマルトデキストリンを含み、別のより好ましい実施形態では、組成物は、追加成分として約5質量%の二酸化ケイ素又はリン酸三カルシウムを含む。
【００６４】
本発明はまた、栄養組成物、医薬組成物又は化粧用組成物における前記抽出物の使用に関する。
【００６５】
本発明は、医薬品として使用するための前記抽出物に関する。特に、本発明による抽出物は、例えば、糖尿病、炎症性腸疾患、アテローム性動脈硬化症、インスリン抵抗性、高血糖症及び耐糖能異常等、上述の先行技術に記載されている疾患の治療において、より好ましくは、糖尿病及び高血糖の治療において使用することができる。
【００６６】
医薬組成物
本発明による抽出物を投与するための好適な医薬組成物及びその調製方法は、当業者には極めて明確であろう。前記組成物及びその調製方法は、例えば、Remington The Science and Practice of Pharmacy、20th edition、A. R. Gennaro編、Lippincott Williams and Wilikins、2000年、に見出すことができる。
【００６７】
前記医薬組成物の調製のための好適な賦形剤及びビヒクルは、当業者に知られており、Handbook of Pharmaceutical Excipients、4th edition、R. C. Crove、P. J. Sheskey及びP. J. Weller編、Pharmaceutical Press、2003年に見出すことができる。
【００６８】
哺乳動物、特にヒトへの好適な投与のために、ABAの有効用量を、好ましくは経口経路(頬側及び舌下投与を含む)及び非経口経路(直腸投与又は注射を含む)によって与えることができるが、局所経路(眼及び鼻投与を含む)及び肺経路もまた使用することができる。送達剤形には、錠剤、分散体、懸濁剤、液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、エアロゾル剤等が含まれる。好ましくは、本発明による抽出物は、経口又は非経口経路により投与される。
【００６９】
既に述べたように、本発明による抽出物は、経口経路により投与され得る。経口投与としては、活性成分が胃腸管に入るように嚥下すること、及び/又は活性成分が口から直接血流に入る頬側、舌側又は舌下投与を挙げることができる。
【００７０】
経口投与に好適な製剤としては、固体、半固体、及び液体系、例えば、錠剤;多粒子(multiples)又はナノ粒子、液体又は粉末を含む軟カプセル剤又は硬カプセル剤;丸剤(液体を充填したものを含む);チューインガム;高速分散送達剤形(rapid dispersion dosage delivery form);フィルム剤;腔座剤(ovule);エアロゾル剤;及び頬/粘膜接着パッチ剤が挙げられる。
【００７１】
液体製剤としては、懸濁剤、液剤、シロップ剤及びエリキシル剤が挙げられる。これらのタイプの製剤は、軟カプセル又は硬カプセル(例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース製)の充填剤として使用することができ、典型的には、ビヒクル、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、メチルセルロース又は好適な油、並びに1種若しくは複数の乳化剤及び/又は懸濁化剤を含む。液体製剤はまた、例えばサッシェからの固体の再構成によって調製してもよい。
【００７２】
錠剤送達剤形に関し、錠剤は通常、活性剤に加えて、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプン又はアルギン酸ナトリウム等の崩壊剤を含む。
【００７３】
凝集剤は一般に、錠剤製剤に粘着性を付与するために使用される。適切な凝集剤としては、例えば、ゼラチン、微結晶セルロース、糖、ポリエチレングリコール、天然及び合成ゴム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられる。錠剤は、例えば、ラクトース(一水和物、スプレードライ一水和物、無水等)、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、デキストロース、微結晶セルロース、デンプン、又はリン酸水素カルシウム二水和物等の希釈剤を含んでもよい。
【００７４】
錠剤は、例えば、ポリソルベート80、又はラウリル硫酸ナトリウム等の界面活性剤、及び、例えば、二酸化ケイ素又はタルク等の滑剤を任意に含んでもよい。
【００７５】
錠剤は通常、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウム、又はステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムとの混合物等の潤滑剤も含む。
【００７６】
他の考えられる成分としては、抗酸化剤、着色剤、香味剤及び香味増強剤、保存剤、唾液腺刺激剤、冷却剤、共溶媒(油を含む)、皮膚軟化剤、増量剤、消泡剤、界面活性剤、矯味剤、又はそれらの混合物が挙げられる。
【００７７】
本発明による抽出物と賦形剤との混合物を、直接又はローラーにより圧縮して、錠剤を形成してもよい。或いは、前記混合物又はその一部は、錠剤処方の前に、湿式造粒、乾式造粒又は溶融造粒、溶融凍結、又は押出されてもよい。最終製剤は、1つ又は複数の層を含んでもよく、コーティングされていてもコーティングされていなくてもよく、カプセル化されていてもよい。
【００７８】
錠剤の製剤は、例えば、Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets、第1巻、H. Lieberman, L. Lachman、J.B. Schwartzによる(2nd edition、Marcel Dekker、New York、1989年)において論じられている。
【００７９】
経口投与用の固体製剤を、即時及び/又は調節放出用に処方してもよい。調節放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、指向性放出(directed release)及びプログラム放出が含まれる。
【００８０】
経口使用のための制御放出組成物は、例えば、その溶解及び/又は拡散を制御することにより活性剤を放出するように構築され得る。
【００８１】
溶解又は拡散による制御放出は、錠剤、カプセル、顆粒又は顆粒化活性剤配合物を適切にコーティングすることにより、又は活性剤を適切なマトリックスに組み込むことにより達成され得る。放出制御型コーティングは、例えば、シェラック、ビーズワックス、キャスターワックス、カルナウバワックス、ステアリルアルコール、グリセリルモノステアレート、グリセリルジステアレート、グリセリルパルミトステアレート、エチルセルロース、dl-ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、メタクリレートヒドロゲル、1,3-ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート及び/又はポリエチレングリコール等の1つ又は複数の物質を含んでもよい。放出制御型マトリックス製剤では、マトリックス材料としては更に、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバワックス、及びステアリルアルコール、Carbopol(登録商標)934、シリコン、グリセリルトリステアレート、メチルアクリレート-メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン及び/又はハロゲン化フルオロカーボンも挙げられる。
【００８２】
本発明による抽出物を含む放出制御型組成物は、浮遊錠剤又はカプセル剤(すなわち、経口投与後に一定期間胃内容物上に浮遊する錠剤又はカプセル剤)の形態であってもよい。1種又は複数の活性剤の浮遊錠剤製剤は、抽出物と、賦形剤及び親水コロイド、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロキシプロピルメチルセルロースとの混合物を顆粒化することにより調製してもよい。次に、得られた顆粒を錠剤に圧縮してもよい。胃液と接触すると、錠剤はその表面の周りの水を実質的に透過しないゲルバリアを形成する。このゲルバリアは、1未満の比重を維持するのに役立ち、したがって、錠剤が胃液に浮いたままになる。
【００８３】
本発明による抽出物はまた、非経口経路により、血流、筋肉又は内臓に直接投与することができる。非経口投与に好適な手段としては、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、滑液嚢内及び皮下投与が挙げられる。非経口投与に好適なデバイスとしては、針注射器(マイクロニードルを含む)、無針注射器及び注入技術が挙げられる。
【００８４】
非経口製剤は、典型的には、例えば、塩、炭水化物及び緩衝剤(好ましくは3〜9のpHを有する)等の賦形剤を含み得る水溶液であるが、一部の用途では、前記製剤は無菌非水溶液として、又は発熱物質を含まない滅菌水等の適切なビヒクルとともに使用される乾燥形態として、より適切に処方され得る。
【００８５】
例えば凍結乾燥による無菌条件下での非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準的な製薬技術を使用して容易に実施することができる。
【００８６】
非経口投与用の製剤を、即時及び/又は調節放出用に処方してもよい。放出調節型製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、指向性放出及び計画放出が含まれる。したがって、本発明によるABA抽出物は、活性成分の放出を調節する埋め込みデポ(deposit)として投与するための懸濁剤として、又は液体、固体、半固体又はチキソトロープ(thixotropic)として処方することができる。そのような製剤の例としては、活性剤でコーティングされたステント、及び活性剤が装填されたポリ(乳酸-co-グリコール酸)(PGLA)のマイクロスフェアを含む半固体及び懸濁剤が挙げられる。
【００８７】
ABA抽出物は、皮膚又は粘膜に局所的、皮内に又は経皮的に投与することもできる。この目的のための典型的な製剤としては、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤、サシェ用散剤、ドレッシング剤、フォーム剤、フィルム剤、皮膚パッチ剤、ウエファー、インプラント、スポンジ、繊維、包帯及びマイクロエマルジョンが挙げられる。リポソームも使用することができる。典型的なビヒクルとしては、アルコール、水、鉱油、液体ワセリン(liquid petroleum jelly)、白色ワセリン(white petroleum jelly)、グリセリン、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールが挙げられる。
【００８８】
ABA抽出物は、鼻腔内に又は吸入により、典型的には乾燥粉末吸入器の乾燥粉末の形態で(単独で、混合物として、例えば、ラクトースとの乾燥混合物で、若しくは、例えばホスファチジルコリン等のリン脂質と混合させた混合成分粒子として、)又は、1,1,1,2-テトラフルオロエタン若しくは1,1,1,2,3,3,3-ヘプタフルオロプロパン等の好適な噴射剤を使用して、若しくは使用せずに、加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー(好ましくは電気流体力学を使用して微細なミストを生成するアトマイザー)若しくはネブライザーからのエアロゾルスプレー剤として、又は点鼻剤として、投与してもよい。鼻腔内使用の場合、粉末は、生体接着剤、例えばキトサン又はシクロデキストリンを含んでもよい。
【００８９】
加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー、又はネブライザーには、ABA抽出物、好適な溶媒、及び場合によっては界面活性剤が含まれている。
【００９０】
乾燥粉末製剤又は懸濁剤において使用する前に、ABA抽出物を乾燥させて粉砕する。これは、スパイラルジェットミリング、流動層ジェットミリング、ナノ粒子を形成するための超臨界流体処理、高圧均質化又は噴霧乾燥等の任意の好適な粉砕方法によって達成し得る。
【００９１】
吸入器又はパファー(puffer)で使用する、カプセル(例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース製の)、アンプル及びカートリッジは、ABA抽出物の粉末混合物、ラクトース又はデンプン等の好適な粉末基剤、及びロイシン、マンニトール、ステアリン酸マグネシウム等の性能改質剤を含むように処方されてもよい。ラクトースは、無水又は一水和物の形態、好ましくは後者であり得る。他の好適な賦形剤としては、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、フルクトース、サッカロース及びトレハロースが挙げられる。
【００９２】
吸入による/鼻腔内投与用の製剤は、例えばPGLAを使用して即時放出及び/又は調節放出になるように処方することができる。
【００９３】
ABA抽出物はまた、例えば坐剤、ペッサリー、又は浣腸剤の形態で、直腸又は膣に投与してもよい。ココアバターは従来の坐剤基剤であるが、適宜、種々の代替品を使用してもよい。
【００９４】
栄養組成物
ABA抽出物は、例えば栄養補助食品等の栄養組成物の一部を形成してもよい。これらのタイプの補助食品において、ABAは、毎日(又はより頻繁に)投与するのに好適な投与量で存在し得る。通常、健康補助食品の場合、ABAは、例えば丸剤、カプセル剤、錠剤、散剤、液剤等によって、経口摂取に好適な形態で存在する。医薬組成物と同様に、崩壊剤、凝集剤、ガム、着色剤、又は香味剤等の典型的な添加剤を含めることができる。
【００９５】
化粧用組成物
本発明によるABA抽出物を含む化粧用組成物は、通常、例えば、界面活性剤、乳化剤、脂質化合物、皮膚軟化剤、稠度因子(consistency factor)、増粘剤、ヒドロトロープ、及び保存剤を含む群から選択される追加成分を含む。
【００９６】
本発明による組成物は、化粧品成分の溶解、乳濁、分散又は懸濁を促進するための界面活性剤を含んでもよい。
【００９７】
界面活性剤は、アニオン性、非イオン性、カチオン性及び/又は両性であってもよい。好ましくは、非イオン性界面活性剤を使用する。アニオン性界面活性剤の中で、以下のもの、例えば、石鹸、スルホン化アルカン、スルホン化オレフィン、アルキルスルフェート、脂肪アルコールエーテルスルフェート、グリセリンエーテルスルフェート、脂肪酸エーテルスルフェート、モノ及びジアルキルスルホスクシネート、モノ及びジ-アルキルスルホスクシナメート、エーテルカルボン酸及びその塩、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、N-アシルアミノ酸、を挙げることができる。非イオン性界面活性剤の中で、以下のもの、例えば、ポリアルコキシル化脂肪アルコール、ポリアルコキシル化脂肪酸、ポリアルコキシル化脂肪酸アミド、ポリアルコキシル化脂肪アミン、アルコキシル化トリグリセリド、混合エーテル、アルキルポリグリコシド、N-アルキル脂肪酸グルカミド、ソルビタンエステル、ポリエトキシレート化ソルビタンエステル、及びアミンオキシド、を挙げることができる。カチオン性界面活性剤の中で、以下のもの、例えば、第四級アンモニウム化合物、及びトリアルカノールアミンエステル及び脂肪酸の第四級塩、例えばエステルクワット、を挙げることができる。両性界面活性剤の中で、以下のもの、例えば、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミノプロピオネート、アミノグリシネート、イミダゾリンベタイン及びスルホベタイン、を挙げることができる。
【００９８】
本発明による化粧用組成物は、通常、一連の追加の脂質化合物及び皮膚軟化剤を含み、これらは、その感覚受容性及び皮膚科学的特性を最適化するのに役立つ。以下の脂質化合物、すなわち、6〜18個の炭素原子を有する脂肪アルコール系ゲルベアルコール、6〜22個の炭素原子を有する直鎖状アルコールを含む6〜22個の炭素原子を有する直鎖状脂肪酸エステル、6〜22個の炭素原子を有する直鎖状アルコールを含む6〜13個の炭素原子を有する分岐鎖状カルボン酸エステル、例えば、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸ミリスチル、ステアリン酸ミリスチル、ステアリン酸ベヘニル、イソステアリン酸ベヘニル、オレイン酸ベヘニル、ベヘン酸ベヘニル、エルカ酸ベヘニル、又はミリスチン酸エルシル等、が考えられる。以下のもの、すなわち、分岐鎖状アルコールを含む6〜22個の炭素原子を有する直鎖状脂肪酸エステル;6〜22個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐鎖状脂肪アルコールを含む18〜38個の炭素原子を有するアルキルヒドロキシカルボン酸エステル、特にジオクチルマレート;多価アルコール及び/又はゲルベアルコールを含む直鎖状及び/又は分岐鎖状脂肪酸エステル;6〜10個の炭素原子を有する脂肪酸系トリグリセリド;6〜18個の炭素原子を有する脂肪酸系モノ/ジ/トリグリセリドの液体混合物;6〜22個の炭素原子を有する脂肪アルコールエステル、及び/又は芳香族カルボン酸、特に安息香酸を有するゲルベアルコール;1〜22個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐鎖状アルコール又は2〜10個の炭素原子及び2〜6個のヒドロキシル基を有するポリオールを含む2〜12個の炭素原子を有するジカルボン酸エステル;植物油;分岐鎖状第一級アルコール;置換シクロヘキサン;6〜22個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐鎖状脂肪アルコールカーボネート、例えば、ジカプリリルカーボネート等;アルキル基あたり6〜22個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐鎖状、対称又は非対称ジアルキルエーテル、例えば、ジカプリリルエーテル等;脂肪族炭化水素、或いはナフテン系炭化水素、例えばスクアラン、スクアレン又はジアルキルシクロヘキサン、及びそれらの混合物も、好適である。
【００９９】
本発明による化粧用組成物においては、粘度及びそのレオロジー挙動を調整するために、稠度因子及び増粘剤を使用する。第一に、考慮し得る可能な稠度因子は、12〜22個の炭素原子、好ましくは16〜18個の炭素原子の鎖を有する脂肪アルコールであり、更に部分グリセリド、脂肪酸又はヒドロキシル化脂肪酸である。好適な増粘剤は、例として、無水親水性シリコン;多糖類、特にキサンタンガム、グアーガム、寒天、アルギン酸塩及びチロース、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシエチルセルロース、並びに高分子量の脂肪酸のポリエチレングリコールモノ及びジエステル;ポリアクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンである。
【０１００】
本発明による化粧用組成物の流動性を改善するために、例えばエタノール、イソプロピルアルコール又はポリオール等のヒドロトロープも使用することができる。この場合に考慮されるポリオールは、好ましくは2〜15個の炭素原子、及び少なくとも2つのヒドロキシル基を有する。ポリオールはまた、他の官能基、特にアミノ基を含んでもよく、或いは窒素で修飾されていてもよい。典型的な例は、グリセリン;エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール等のアルキレングリコール、及び平均分子量100〜1000ダルトンのポリエチレングリコール;1.5〜10の典型的な縮合レベルを有するオリゴグリセリンの技術的混合物、例えば、40〜50質量%のジグリセリン含有量を有するジグリセリンの技術的混合物;特に、トリメチロールメタン、トリメチロールプロパン、トリメチロールブタン、ペンタエリスリトール及びジペンタエリスリトール等のメチロール化合物;アルキル残基に1〜8個の炭素原子の鎖を有するアルキルグルコシド;例えば、ソルビトール又はマンニトール等の、5〜12個の炭素原子を有する糖アルコール;例えば、グルコース又はサッカロース等の、5〜12個の炭素原子を有する糖;例えば、グルカミン等のアミノ糖;ジエタノールアミン又は2-アミノ-1,3-プロパンジオール等のジアルコールアミン、である。
【０１０１】
本発明の組成物に使用するのに好適な保存剤は、例として、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド溶液、パラベン(メチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン及びそれらの混合物)、3-(4-クロロフェノキシ)-1,2-プロパンジオール(クロルフェネシン)、ペンタンジオール又はソルビン酸、及び化粧品規制76/768/EECの付属書VIに示されている追加の物質クラス、である。
【０１０２】
第1の態様では、本発明は、植物材料からアブシジン酸の植物抽出物を調製するための方法であって、
a)水性溶媒を使用してアブシジン酸を含む植物材料を抽出し、固体植物材料を液体画分から分離する工程と、
b)液体画分を濃縮する工程と、
c)工程b)で得られた液体画分を、水に混和性の有機溶媒を溶離剤として使用する吸着カラムでのクロマトグラフィー分離によって、又は水に混和性でない溶媒を使用する液液抽出によって、又は濾過によって精製する工程と、
d)工程c)で得られた有機相を蒸発させる工程と
を含むことを特徴とする、方法を開示する。
【０１０３】
アブシジン酸を含む前記植物材料は、イチジク、クランベリー/ブルーベリー、アプリコット、バナナ、ダイダイ、オレンジの皮、マンダリンの皮、レモンの皮、及びグレープフルーツの皮からなる群から選択される。好ましくは、アブシジン酸を含む植物材料は、イチジク及びダイダイからなる群から選択される。より好ましくは、アブシジン酸を含む植物材料はイチジクである。
【０１０４】
更に、前記植物材料は乾燥している。
【０１０５】
前記方法において、水性溶媒は、a)水、及びb)水と、1〜4個の炭素原子を有する少なくとも1種の低級脂肪族アルコールとの混合物、から選択される。
【０１０６】
前記方法において、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール及びそれらの混合物から選択される。好ましくは、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールはエタノールである。
【０１０７】
前記方法において、抽出は、水を唯一の溶媒として使用して実施される。
【０１０８】
前記方法の別の実施形態では、抽出は、エタノールと水との混合物を使用して実施される。
【０１０９】
前記方法において、エタノールの割合は、50容量%〜85容量%の間である。
【０１１０】
抽出溶媒として水のみを使用することは、前記溶媒が安全で毒性がゼロの選択肢である。
【０１１１】
水と他の溶媒との混合物の中で、水とエタノールとの混合物が好ましい。前記混合物は、食品又は医薬品が所望される場合に非常に毒性が高い、メタノール等の従来技術で使用される他の溶媒よりも毒性が低い。
【０１１２】
工業規模では、抽出工程としてパーコレーションを使用することが好ましい。前記パーコレーションは、並流(equi-current)又は向流で動作することができる工業用機器にて実施される。前記パーコレーション工程における抽出溶媒の流量は、毎時500〜1200リットルの範囲内である。
【０１１３】
各工業バッチに投入される植物原料の量は、使用される工業機器に応じて500〜2000kgである。得られた抽出物(抽出ミセル)の量は約1200リットルである。
【０１１４】
前記方法において、抽出される植物材料の質量の3〜6倍の間に相当する量の溶媒を使用する。植物材料の質量あたりの溶媒の前記範囲の容量の比により、工業規模でプロセス効率とその費用対効果のバランスを確立することが可能である。
【０１１５】
本発明の方法の抽出工程では、ABAの出発含有量の75%以上の回収を行い、これにより、工業的観点から前記プロセスが費用対効果の高いものになっている。出発植物材料中のABAの含有量が非常に低いことを考慮すると、工業規模で費用対効果の高い抽出を達成するために、原料を適切に選択することが非常に重要である。
【０１１６】
ABAの含有量がより高い植物原料の1つは、イチジク又は柑橘類の果実である。イチジクの抽出プロセスを工業化するには、1ppm超、好ましくは5ppm超のABAを含む原料から始める必要がある。前記選択は、代表的なサンプリングから適切な分析技術の適用までを含む、原料の厳密な分析を伴う。
【０１１７】
また、大量の抽出物が得られ、前記抽出物中の糖濃度が高い工業規模では、前記抽出物が、微生物分解に対して非常に敏感になる。これを避けるために、濃縮及び精製工程中に微生物学的完全性(microbiological integrity)を維持するために、得られた抽出物を低温殺菌することが好ましい。
【０１１８】
前記方法における抽出は、50℃〜75℃の間の温度で実施される。
【０１１９】
本発明のプロセスにおいて、前記抽出物を少なくとも78秒間少なくとも92℃で、より好ましくは90秒間98℃で低温殺菌することが好ましい。
【０１２０】
前記方法における精製は、水に混和性の有機溶媒を溶離剤として使用する、吸着カラムでのクロマトグラフィー分離によって実施される。
【０１２１】
前記吸着カラムで使用される水に混和性の有機溶媒は、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコール、ケトン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル及びそれらの混合物からなる群から選択される。水に混和性の前記有機溶媒は、1〜4個の炭素原子を有する低級脂肪族アルコールである。
【０１２２】
前記方法の溶離剤は、メタノール及びエタノールからなる群から選択される。より好ましくは、溶離剤はエタノールである。
【０１２３】
前記方法の液液抽出では、ブタノール及び酢酸エチルからなる群から選択される、水に混和性でない有機溶媒を使用する。前記溶媒は酢酸エチルである。
【０１２４】
一実施形態では、本発明の方法の工程c)の濾過は、接線流濾過であり、より好ましくはナノ濾過である。当業者は、ナノ濾過膜が1〜10ナノメートルの孔径を有することを知っている。好ましくは、濾過プロセスの圧力は4〜20バールの間である。
【０１２５】
本発明によって開示される別の態様は、前記方法に従って得られるアブシジン酸の植物抽出物であり、5ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含むことを特徴とする。
【０１２６】
前記アブシジン酸の植物抽出物は、1000ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含む。
【０１２７】
更に、抽出物は、99:1〜1:99の割合の未精製抽出物を含み、ここで、未精製抽出物は、本発明の方法の工程a)に従って、水性溶媒を使用して植物材料から抽出した後に、及びいずれの場合でも、液体画分を乾燥させた後に、得られる抽出物に相当する。
【０１２８】
前記抽出物は、5ppm〜4000ppmの間のアブシジン酸を含む。
【０１２９】
本発明の第3の態様では、前記抽出物と、少なくとも1つの追加成分とを含む組成物が開示される。
【０１３０】
前記組成物において、追加成分は、コロイドシリカ、タルク、リン酸三カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、炭水化物、マルトデキストリン、水、多価アルコール、セルロース、デンプン及びそれらの混合物からなる群から選択される。
【０１３１】
前記組成物は、0.5質量%〜35質量%の間の追加成分を含む。より好ましくは、前記組成物は20質量%のマルトデキストリンを含む。前記組成物は、約5質量%の二酸化ケイ素又はリン酸三カルシウムを含む。
【０１３２】
別の実施形態では、栄養組成物、医薬組成物又は化粧用組成物における抽出物の使用が開示されている。
【０１３３】
更に、医薬品としての前記抽出物の使用が開示されている。
【０１３４】
本発明の非限定的な例示的な例として、種々の実施例を以下に示す。
【実施例】
【０１３５】
ABAは、当業者に周知の方法によって定量することができ、これには、一般に、HPLC、質量分析、又は、例えば、Kelenらによる論文、Separation of Abscisic Acid, Indole-3-Acetic Acid, Gibberellic Acid in 99 R (Vitis berlandieri x Vitis rupestris) and Rose Oil (Rosa damascena Mill.) by Reversed Phase Liquid Chromatography、Turk J. Chem、2004年、29、603〜610頁に記載されているような、例えばUV分光光度計等の、より従来型の検出器が含まれる。
【０１３６】
(実施例1)
水を使用したABA抽出物の調製
2cm未満のサイズの塊に切断された乾燥イチジク50gを、55〜65℃の間の温度の温水を使用して、撹拌しながら抽出した。抽出される植物材料の質量の3〜6倍の間に相当する量の溶媒を加えることに基づいて、2つの抽出工程を実施した。
【０１３７】
植物材料を、固液濾過により、得られたミセルから分離させた。温度を65℃未満に維持しながら、ミセルを真空蒸発により濃縮し、78質量%の乾燥残留物を有する生成物を得た。生成物を、70℃以下の温度で真空乾燥した。したがって、25gの乾燥抽出物が得られ、これは50%の抽出収率、つまり2:1のDERに相当する。
【０１３８】
この抽出物のABA含有量は、19ppmであった。
【０１３９】
温水を使用した乾燥イチジクからの種々の抽出操作により、5〜25ppmのABA含有量の乾燥抽出物を得た。
【０１４０】
(実施例2)
水とエタノールとの混合物を使用したABA抽出物の調製
2cm未満のサイズの塊に切断された50.5gの乾燥イチジクを、70容量%のエタノール含有量を有する、エタノールと水との混合物500mlを使用して抽出した。抽出は、55〜65℃の間の温度で、撹拌しながら2時間実施した。
【０１４１】
植物材料を、固液濾過によりミセルから分離させた。温度を65℃未満に維持しながら、ミセルを真空蒸発により濃縮し、76質量%の乾燥残留物を有する生成物を得た。生成物を、70℃以下の温度で真空乾燥した。したがって、26.3gの乾燥抽出物が得られ、これは1.92:1のDERに相当する。この抽出物のABA含有量は、10ppmであった。
【０１４２】
(実施例3)
水とエタノールとの混合物を使用したABA抽出物の調製
20.4gの乾燥オレンジの皮を、2×200mlのエタノールと水との70容量%混合物を使用して、50℃の温度で撹拌しながら1時間抽出した。
【０１４３】
実施例2に記載されたものと実質的に同様の方法に従って、6ppmのABA含有量を有する7.4gの抽出物を得た(DER 2.76:1)。
【０１４４】
(実施例4)
水とエタノールとの混合物を使用したABA抽出物の調製
20.7gの乾燥マンダリンの皮を、2×200mlのエタノールと水との70容量%混合物を使用して、50℃の温度で撹拌しながら1時間抽出した。
【０１４５】
実施例2に記載されたものと実質的に同様の方法に従って、8ppmのABA含有量を有する8.4gの抽出物を得た(DER 2.46:1)。
【０１４６】
(実施例5)
水とエタノールとの混合物を使用したABA抽出物の調製
50.1gの乾燥ダイダイの皮を、3工程にて、350ml、250ml、及び200mlの、エタノールと水との70容量%混合物を使用して、50℃の温度で撹拌しながら1時間抽出した。
【０１４７】
実施例2に記載されたものと実質的に同様の方法に従って、16ppmのABA含有量を有する17.3gの抽出物を得た(DER 2.9:1)。
【０１４８】
(実施例6)
水とエタノールとの混合物を使用したABA抽出物の調製
50.3gの小さな、全形の乾燥ダイダイを、3工程にて、250ml、250ml、及び150mlの、エタノールと水との70容量%混合物を使用して、50℃の温度で撹拌しながら1時間抽出した。
【０１４９】
実施例2に記載されたものと実質的に同様の方法に従って、20ppmのABA含有量を有する19.4gの抽出物を得た(DER 2.59:1)。
【０１５０】
(実施例7)
ABA精製抽出物の調製
全形の乾燥イチジク500gは、2回の抽出工程を経た。各工程は2時間続き、2500mlの水を、70℃の温度で使用した。
【０１５１】
植物材料を、固液濾過によりミセルから分離させた。ミセルは質量4636gであり、5.5質量%の乾燥残留物を有していた。温度を65℃未満に維持しながら、前記ミセルを真空蒸発により濃縮し、10質量%の乾燥残留物を有する生成物を得た。
【０１５２】
この濃縮生成物を、吸着樹脂を装填したクロマトグラフィーカラム内に装填した。カラムに含まれる生成物の溶出は、溶離剤としてエタノールを使用して実施した。エタノール溶液を濃縮して75質量%の乾燥残留物を得て、真空オーブン中にて、65℃以下の温度で乾燥を続けた。
【０１５３】
最終的に、2.1gのABA精製抽出物を得て、これは、初期原料に対し0.42%の収率、つまり、240:1のDERを意味する。ABA含有量は1400ppmである。
【０１５４】
(実施例8)
ABA精製抽出物の調製
100kgの全形の乾燥イチジクを4つの30lパーコレーターに投入し、抽出する植物材料の質量に対して約6倍質量の割合で、温水を温度70℃で使用して、抽出を実施した。
【０１５５】
ミセルは1050lであり、4.9質量%の乾燥残留物を有し、温度を65℃未満に維持しながら、このミセルを真空蒸発により濃縮し、10質量%の乾燥残留物を有する生成物を得た。
【０１５６】
次に、1000lの酢酸エチルを使用して2回の抽出を実施し、各抽出において水相と比較して3倍の容量で有機相を有し、50℃の温度で、撹拌しながら実施した。
【０１５７】
合わせた有機画分を濃縮して75質量%の乾燥残留物を得て、真空オーブン中にて、65℃以下の温度で乾燥を続けた。
【０１５８】
3800ppmのABA含有量を有する120gの抽出物を得た。この精製方法による収率は0.1〜0.12質量%であり、これは約850〜1000:1のDERに相当する。
【０１５９】
(実施例9)
ABA抽出物を含む栄養組成物
12kgの全形の乾燥イチジクを30lパーコレーターに投入し、抽出する植物材料の質量に対して約11倍質量の割合で、温度70℃の温水を使用して、抽出を実施した。
【０１６０】
ミセルは、4.5質量%の乾燥残留物を有し、温度を65℃未満に維持しながら、このミセルを真空蒸発により濃縮し、79質量%の乾燥残留物を有する生成物を得た。
【０１６１】
タピオカマルトデキストリンを、最終乾燥材料の20質量%の割合で前記生成物に加え、70℃以下の温度を維持しながら、オーブン中にて組成物の乾燥を完了した。
【０１６２】
10ppmのABA含有量を有する7.5kgの粗抽出物を得た。
【０１６３】
マルトデキストリンの代わりに、5質量%の無水ケイ素及び5質量%のリン酸三カルシウムを使用して、同様の組成物を調製した。
【０１６４】
(実施例10)
ABA抽出物を含むヨーグルトの調製
1リットルの低温殺菌した牛乳を乳酸菌スターターと混合し、前記混合物を45℃の温度まで加熱した。混合物を前記温度で8時間維持して、その発酵を促進させた。この期間の終わりに、混合物を4℃まで急速冷却した。次いで、50gの砂糖を、300ppmのABA含有量を有する0.26gの抽出物に加えた。pH調整剤を加えて、乳酸菌スターターの生存率を確保した。
【０１６５】
(実施例11)
ABA抽出物を含むシリアルバーの調製
オートミール、ナツメヤシ、クランベリー/ブルーベリー、ゴマの種、及びアーモンドを粉砕した。混合を実施して、組成物を均質にした。砂糖と50ppmのABA含有量を有する1gの抽出物を、混合物に加えた。ペーストをベーキング紙上に置き、0.5cmの厚さに引き伸ばした。これを、少なくとも2時間冷蔵庫で休ませた。
【０１６６】
(実施例12)
ABA抽出物を含む栄養ドリンクの調製
100mlの絞ったレモン汁を60mlの天然蜂蜜に加え、250mlの水と混合した。2gの塩、2gの炭酸水素ナトリウム、及び20ppmのABA含有量を有する4gの抽出物を加えた。混合物を撹拌し、成分を完全に溶解させた。これを、蓋をした容器内で冷やした。
【０１６７】
(実施例13)
ABA抽出物を含むボディクリームの調製
200mlの市販クリームを、500ppmのABA含有量を有する0.2gの抽出物及び10mlのココナッツ油と混合した。
【０１６８】
(実施例14)
ABA抽出物を含む錠剤の調製
賦形剤を、300ppmのABA含有量を有する0.1gの抽出物と混合する。混合物は凝集した。毎日90マイクログラムのABAを摂取するには、1日3錠を服用する必要がある。
【０１６９】
(実施例15)
ABA抽出物を含むサッシェの調製
賦形剤を、300ppmのABA含有量を有する0.23gの抽出物と混合する。これを、防水紙のサッシェに包んだ。サッシェの内容物は、経口摂取のために水に溶解させる必要がある。
【０１７０】
(実施例16)
ABA抽出物を含むカプセルの調製
300ppmのABA含有量を有する0.15gの抽出物を、硬ゼラチンカプセル内に導入した。毎日90マイクログラムのABAを摂取するには、1日2カプセルを服用する必要がある。
【０１７１】
(実施例17)
濾過を使用したABA精製抽出物の調製
2つの抽出工程により、70℃の水100kgを使用して、10kgの全形の乾燥イチジクを抽出した。植物材料を固液濾過によりミセルから分離し、約8.6%の固形物濃度と10ppmのABA含有量を有する液体を得た。前記ミセルを、ナノ濾過膜を備えた濾過カートリッジを使用して接線流濾過にかけた。このプロセスでは、鉱酸を加えてミセルのpHを2〜5の間に調整した。濾過プロセスの圧力を、4〜20バールの間に設定した。
【０１７２】
濾過後、透過液中に得られた約20%に対して、出発ABAの約80%が回収され、出発ABA含有量の3倍の精製がなされた。
【０１７３】
(実施例18)
濾過を使用したABA精製抽出物の調製
2つの抽出工程により、70℃の水100kgを使用して、8kgの全形の乾燥イチジクを抽出した。植物材料を固液濾過によりミセルから分離し、約8.6%の固形物濃度と9.1ppmのABA含有量を有する液体を得た。前記ミセルを、ナノ濾過膜を備えた濾過カートリッジを使用して接線流濾過にかけた。このプロセスでは、鉱酸を加えてミセルのpHを5〜9の間に調整した。濾過プロセスの圧力を、4〜20バールの間に設定した。
【０１７４】
濾過後、透過液中に得られた約5%に対して、出発ABAの約95%が回収され、出発ABA含有量の5倍の精製がなされた。
【０１７５】
(実施例19)
濾過を使用したABA精製抽出物の調製
2つの抽出工程により、70℃の水100kgを使用して、5kgの全形の乾燥イチジクを抽出した。植物材料を固液濾過によりミセルから分離し、約8.0%の固形物濃度と10ppmのABA含有量を有する液体を得た。前記ミセルを、>1000Daの孔径を有するナノ濾過膜を備えた濾過カートリッジを使用して接線流濾過にかけた。このプロセスでは、鉱酸を加えてミセルのpHを5〜9の間に調整した。濾過プロセスの圧力を、4〜20バールの間に設定した。
【０１７６】
濾過後、出発ABAの約65%が回収され、出発ABA含有量の2倍の精製がなされた。
【０１７７】
(実施例20)
濾過を使用したABA精製抽出物の調製
2つの抽出工程により、70℃の水100kgを使用して、8kgの全形の乾燥イチジクを抽出した。植物材料を固液濾過によりミセルから分離し、約9.0%の固形物濃度と8.9ppmのABA含有量を有する液体を得た。前記ミセルを、>1000Daの孔径を有するナノ濾過膜を備えた濾過カートリッジを使用して接線流濾過にかけた。このプロセスでは、鉱酸を加えてミセルのpHを2〜5の間に調整した。濾過プロセスの圧力を、4〜20バールの間に設定した。
【０１７８】
濾過後、出発ABAの約60%が回収され、出発ABA含有量の2倍の精製がなされた。
【国際調査報告】
2020534815.tif 000003
2020534815.tif 000004
2020534815.tif 000005