(57)【要約】  本開示は、ＨＳＰ９０阻害剤、ＭＰＣ−０７６７を単剤療法として、ならびにＢｃｌ−２の阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、チェックポイント阻害剤、ＤＮＭＴ阻害剤、ＡＴＯおよび化学療法剤を含むがこれらに限定されない追加の活性剤との併用療法として使用して、造血器がんおよび肺がんを含むがこれらに限定されない、がんを治療するための方法を提供する。本開示は、関連する組成物および使用の方法も提供する。【選択図】図２５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんの治療を、それを必要とする対象においてするための方法であって、前記対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記がんが、少なくとも１つの治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記医薬組成物が、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つの治療剤が、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６からなる群から選択される、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１つの治療剤が、ギルテリチニブ、クレノラニブ、タンデュチニブ、ソラフェニブ、ミドスタウリンおよびキザルチニブからなる群から選択される、請求項２または３に記載の方法。
【請求項６】
前記がんが、上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮性増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）から選択される少なくとも１つのプロテインキナーゼに１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１つまたは複数の活性化突然変異が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異（ｉｎｓ２０）である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記１つまたは複数の活性化突然変異が、ＦＬＴ３内部タンデム重複（ＩＴＤ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、胃がん、結腸がん、前立腺がん、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、腎細胞癌、消化管間質腫瘍、慢性骨髄性白血病、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、黒色腫、乳がんおよび膵臓がんから選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記がんが、ＮＳＣＬＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記がんが、ＡＭＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記がんが、ＣＬＬである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、ヒトである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記医薬組成物が、経口、バッカルまたは非経口投与に適合される、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、化学療法剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、Ｂｃｌ−２経路阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、チェックポイント阻害剤、抗腫瘍免疫を強化する治療剤、またはＥＺＨ２阻害剤である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＰＫＩが、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２を標的とするＰＫＩである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＰＫＩが、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記化学療法剤が、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチンおよびペメトレキセドから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＦＬＴ３阻害剤が、クレノラニブ、タンデュチニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２６】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２７】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ベネトクラックスである、請求項１５に記載の方法。
【請求項２８】
前記がんが、ＮＳＣＬＣである、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記がんが、ＡＭＬである、請求項２０から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記がんが、ＣＬＬである、請求項２４または２７に記載の方法。
【請求項３１】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療を、それを必要とする対象においてするための方法であって、前記対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項３２】
前記医薬組成物が、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＡＭＬが、少なくとも１つのプロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＡＭＬが、ミドスタウリン、キザルチニブ、タンデュチニブおよびソラフェニブの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＡＭＬが、ギルテリチニブ、クレノラニブ、ソラフェニブ、ミドスタウリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＡＭＬが、ＦＬＴ３に１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられる、請求項３１から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異が、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異、ＦＬＴ３  Ｄ８３５での点突然変異、ＦＬＴ３  Ｉ８３６での点突然変異、ＦＬＴ３  Ｎ６７６Ｋでの点突然変異およびＦ６９１Ｌでの点突然変異から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異が、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む、請求項３１から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、化学療法剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、Ｂｃｌ−２経路阻害剤、チェックポイント阻害剤、抗腫瘍免疫を強化する治療剤、またはＥＺＨ２阻害剤である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＦＬＴ３阻害剤が、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４７】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４８】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ベネトクラックスである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４９】
ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項５０】
請求項３１から４８のいずれか一項に記載の方法に従って、ＡＭＬを治療する際に使用するための、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
ＭＰＣ−０７６７と、１つまたは複数の追加のＡＰＩとを含む医薬組成物。
【請求項５２】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスからなる群から選択される、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ベネトクラックスである、請求項５３に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記ＡＭＬが、Ｂｃｌ−２経路阻害剤を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項５６】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ベネトクラックスである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む、請求項５５または５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、化学療法剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤またはＢｃｌ−２経路阻害剤である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＦＬＴ３阻害剤が、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記Ｂｃｌ−２経路阻害剤が、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６４】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンからなる群から選択される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される、請求項５７に記載の方法。
【請求項６６】
前記１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ベネトクラックスである、請求項５７に記載の方法。
【請求項６７】
Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項６８】
前記ＲＡＳ経路阻害剤が、ベムラフェニブ、ソラフェニブまたはダブラフェニブ等のＲａｆ阻害剤；ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ０３２５９０１、ＧＳＫ１１２０２１２（トラメチニブ）、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＰＤ１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９（ラファメチニブ）、ＰＤ９８０５９、ＢＩＸ  ０２１８９、ＭＥＫ１６２（ビニメチニブ）、ＡＳ−７０３０２６（ピマセルチブ）、ＳＬ−３２７、ＢＩＸ０２１８８、ＡＺＤ８３３０、ＴＡＫ−７３３、コビメチニブまたはＰＤ３１８０８８等のＭＥＫ阻害剤；およびＬＹ３２１４９９６、ＢＶＤ−５２３またはＧＤＣ−０９９４等のＥＲＫ阻害剤から選択される、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
請求項５５から６８のいずれか一項に記載の方法に従って、ＡＭＬを治療する際に使用するための、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項７０】
ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、前記対象から得られたＡＭＬがん細胞の試料中のＦＬＴ３およびＲＡＳの状態を決定するステップを含み、ＦＬＴ３正常／非ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＲＡＳ突然変異体の状態が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に抵抗性であり、ＭＰＣ−０７６７およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を用いる併用療法に応答性であると予測されることを示し；ＦＬＴ３−ＩＴＤの状態が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に応答性であると予測されることを示す、方法。
【請求項７１】
ＡＭＬの治療を、その治療を必要とする対象においてするための方法であって、前記対象からのＡＭＬがん細胞の試料中のＦＬＴ３およびＲＡＳ突然変異体の状態を決定するステップと、ＭＰＣ−０７６７およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を含む併用療法を用いて前記対象を治療するステップとを含み、前記状態が、ＦＬＴ３正常／非ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＲＡＳ突然変異体である、方法。
【請求項７２】
ＲＡＳ突然変異体の状態が、ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳにおける１つもしくは複数の活性化突然変異の存在によって定義される、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳにおける１つもしくは複数の活性化突然変異が、ＫＲＡＳのＡ１４６ＴおよびＧ１３Ｄ；またはＮＲＡＳのＱ６１Ｌ、Ｑ６１ＨおよびＧ１２Ｄからなる群から選択されるアミノ酸変化をもたらす、ＲＡＳタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列における突然変異である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
ＥＺＨ２阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項７５】
ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、前記対象からのＡＭＬがん細胞の試料中のＥＺＨ２の状態を決定または受信するステップを含み、ＥＺＨ２の機能喪失突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７療法に応答性であると予測されることを示すが、ＥＺＨ２の機能獲得突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７療法に抵抗性であると予測されることを示す、方法。
【請求項７６】
ＡＭＬの治療を、当該治療を必要とする対象においてするための方法であって、前記対象からのＡＭＬの生物学的試料中のＡＭＬのＥＺＨ２の状態を決定または受信するステップと、ＭＰＣ−０７６７療法を用いて前記対象を治療するステップとを含み、前記状態が、ＥＺＨ２の機能喪失突然変異である、あるいは当該決定または受信するステップと、ＭＰＣ−０７６７およびＥＺＨ２阻害剤を含む併用療法を用いて前記対象を治療するステップとを含み、前記ＥＺＨ２の状態が、正常またはＥＺＨ２の機能獲得突然変異である、方法。
【請求項７７】
ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、前記対象から得られたＡＭＬがん細胞の試料中のＫＤＭ６Ａの状態を決定または受信するステップを含み、ＫＤＭ６Ａの機能喪失突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７療法に抵抗性であると予測されることを示す、方法。
【請求項７８】
ＥＺＨ２阻害剤を投与するステップをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。
【請求項７９】
前記ＥＺＨ２阻害剤が、ＧＳＫ３４３、ＥＰＺ６４３８（タゼメトスタット）、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ２８１６１２６およびＰＦ−０６８２１４９７から選択される、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
がんを治療する際に使用するための、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項８１】
前記がんが、血液悪性腫瘍または固形腫瘍である、請求項８０に記載の医薬組成物。
【請求項８２】
化学療法剤、抗腫瘍免疫を強化する薬剤、チェックポイント阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤から選択される追加の治療剤と組み合わせて使用するための、請求項８０または８１に記載の医薬組成物。
【請求項８３】
前記化学療法剤が、三酸化ヒ素またはアザシチジンから選択される、請求項８２に記載の医薬組成物。
【請求項８４】
前記Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤が、トラメチニブである、請求項８２に記載の医薬組成物。
【請求項８５】
前記チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１シグナリングの阻害剤またはＣＴＬＡ−４阻害剤である、請求項８２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[01]本発明は、がんの治療のためのＨＳＰ９０阻害剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
[02]熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、温度の上昇、外界からのストレスおよび栄養枯渇等の多様な細胞プロセスに関与する、シャペロンタンパク質のクラスである。シャペロンタンパク質としてのそれらの基本的役割は、そのようなストレス下でタンパク質を安定させることだけでなく、クライアントタンパク質の正しいフォールディングを容易にすることでもある。
【０００３】
[03]ＨＳＰ９０は、翻訳後のフォールディング、安定性および細胞タンパク質（しばしば「クライアントタンパク質」と称される）の機能の調節において、特にストレスへの応答において、重要な役割を果たす、高度に保存された、遍在的に発現する分子シャペロンである（ＷｈｉｔｅｓｅｌｌおよびＬｉｎｄｑｕｉｓｔ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２００５  ５：７６１）。クライアントタンパク質のフォールディングは、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性に依存し、ＡＴＰ部位に結合するＨＳＰ９０の阻害剤は、ユビキチン−プロテアソーム経路を通してクライアントタンパク質の分解をもたらすことができる。
【０００４】
[04]ＨＳＰ９０は、種々の発癌遺伝子を含むそのクライアントタンパク質により、がんに著しく関与する（例えば、Ｓｈｒｅｓｔｈａら、２０１６を参照されたい）。一部のクライアントタンパク質は、特に、ＨＳＰ９０阻害剤に応答性であり、迅速な分解を受ける（Ｂｉａｍｏｎｔｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ２０１０  ５３、３〜１７）。最も感受性のクライアントタンパク質は、ＨＥＲ２、野生型ＥＧＦＲおよび突然変異体ＥＧＦＲ、ＲＡＦ−１、ＡＫＴ、突然変異体ＢＲＡＦ、ＦＬＴ３および突然変異体ＦＬＴ３を含む。
【０００５】
[05]ＨＳＰ９０の発現は、多くの場合、腫瘍中で上昇し（Ｖａｌｂｕｅｎａら、Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００５  １８：１３４３；Ｇｕｏら、２０１７）、予後不良に関連している（Ｐｉｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００７；Ｗａｎｇ，Ｊ．ら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１３  ８：ｅ６２８７６）。多くの腫瘍細胞は、腫瘍成長を駆動することが公知の突然変異または別の形態のタンパク質も発現し、これらのタンパク質は、ＨＳＰ９０に関連して安定化され、機能についてのこの関連に依存する。この関連は、細胞内での巨大タンパク質複合体の形成につながり、これは、ＨＳＰ９０阻害剤に対する親和性を強化する（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．  ２０１５  １２５（１２）：４５５９〜７１；Ｒｏｄｉｎａら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１６  ５３８：３９７）。その結果として、腫瘍細胞は、より高いレベルのＨＳＰ９０阻害剤を保持し、ＨＳＰ９０阻害剤の投与は、強力なクライアントタンパク質の分解、ならびに正常細胞におけるより限定された活性による増殖および生存率の減少をもたらす（ＢａｒｒｏｔｔおよびＨａｙｓｔｅａｄ、ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２０１３  ２８０：１３８１）。
【０００６】
[06]ＨＳＰ９０阻害剤は、乳、結腸直腸、胃腸、白血病、リンパ腫、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣、膵臓、前立腺および腎を含む種々のがんに関係する前臨床および初期臨床研究において試験されてきた。ＢＩＩＢ０２１、ＩＰＩ−４９３、ＭＰＣ−３１００、Ｄｅｂｉｏ０９３２、ＤＳ−２２４８、ＨＳＰ９９０、ＸＬ８８８、ＳＮＸ５４２２、ＴＡＳ−１１６、ＢＩＩＢ０２８、ＩＰＩ−５０４、ＫＷ−２４７８、アルベスピマイシン、タネスピマイシン、ＡＴ１３３８７、ＡＵＹ９２２、ＰＵ−Ｈ７１およびガネテスピブを含む少なくとも１８のＨＳＰ９０阻害剤が、臨床試験において調査されてきた。Ｂｈａｔらによる総説、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ２０１４  ５７：８７１８〜８７２８；ＮｅｃｋｅｒｓおよびＷｏｒｋｍａｎ  Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０１２、１８、６４を参照されたい。これまでに、これらの化合物は、ヒトにおける使用のために承認されておらず、ＨＳＰ９０阻害剤は、遺伝子学的に定義された集団において試験されていない。
【０００７】
[07]新たな証拠が、ＨＳＰ９０は腫瘍免疫にも影響を与え得ることを示唆している。一部の非臨床研究は、高いＨＳＰ９０阻害剤用量が、腫瘍クリアランスのために重要となり得る免疫系の種々の成分を阻害し得ることを示唆した（Ｂａｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７  １７８：７７３０；Ｂａｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３  １９０：１３６０；Ｔｕｋａｊら、Ｊ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ２０１４  １１：１０）。加えて、多くの腫瘍細胞は、それらの表面においてチェックポイント阻害剤タンパク質死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を発現し、これは、局所細胞毒性Ｔ細胞活性を抑制することができる。例えば、ＰＤ−Ｌ１発現は、患者のＡＭＬ細胞において見られ、疾患進行とともにおよび再発中に増大し（Ｓａｌｉｈら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２００６  ３４：８８８；Ｃｈｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００８  ７：６２２；Ｂｅｒｔｈｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２０１０  ５９：１８３９）、より劣る全生存率に関連する（Ｂｒｏｄｓｋａら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１６  １２８：５２２９）。ＡＭＬ腫瘍細胞におけるＰＤ−Ｌ１細胞表面発現は、免疫学的に活性な腫瘍微小環境において発現されることが公知であるＩＦＮ−γによって誘発され得る（Ｂｅｒｔｈｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ２０１０  ５９：１８３９；Ｋｒｏｎｉｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１３  ９２：１９５）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
[08]がんを治療するための、特に、タンパク質のチロシンキナーゼ阻害剤に基づく治療等の現在の療法に対して不応性であるがんまたはそれでの治療後に再発したがんの治療において、治療および薬物組合せの改善が継続して必要である。本発明は、ＨＳＰ９０阻害剤の使用により、この必要性に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
[09]本開示は、その治療を必要とする対象、好ましくはヒト対象におけるがんを治療するための、ＨＳＰ９０阻害剤の使用に関係する組成物および方法を提供する。方法は、概して、がんの治療における、より詳細には、細胞成長および／もしくは生存率が活性化されたプロテインキナーゼシグナリング経路によるかまたは依存する駆動によって特徴付けられるがん、ならびに／あるいは治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したがんの治療における、ＭＰＣ−０７６７の使用に関する。下記でさらに詳細に記載される通り、ＭＰＣ−０７６７は、単独で使用される場合にある特定のがんに対する強力な抗がん活性を実証し、他の治療剤と組み合わせる際の驚くべき効能も実証する。
【００１０】
[10]本開示は、それを必要とする対象におけるがんを治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。実施形態において、医薬組成物は、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩を含む。実施形態において、医薬組成物は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩またはマレイン酸塩から選択されるＭＰＣ−０７６７の塩を含む。実施形態において、治療を必要とする対象は、がんが、少なくとも１つの治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発した対象である。実施形態において、がんは、少なくとも１つの治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、治療剤は、プロテインキナーゼ阻害剤である。実施形態において、治療剤は、Ｂｃｌ−２阻害剤またはＢｃｌ−２経路阻害剤である。実施形態において、治療剤は、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６から選択される。他の実施形態において、治療剤は、ギルテリチニブ、タンデュチニブ、クレノラニブ、ソラフェニブ、ミドスタウリンおよびキザルチニブから選択される。実施形態において、治療剤は、ギルテリチニブである。実施形態において、治療剤は、ミドスタウリンである。実施形態において、治療剤は、ソラフェニブである。実施形態において、治療剤は、タンデュチニブである。
【００１１】
[11]実施形態において、がんは、上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮性増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）から選択される少なくとも１つのプロテインキナーゼに１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられる。実施形態において、１つまたは複数の活性化突然変異は、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２のエクソン２０挿入突然変異（ｉｎｓ２０）である。実施形態において、１つまたは複数の活性化突然変異は、ＦＬＴ３内部タンデム重複（ＩＴＤ）である。
【００１２】
[12]実施形態において、がんは、血液悪性腫瘍または固形腫瘍である。
[13]実施形態において、がんは、胃がん、結腸がん、前立腺がん、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、腎細胞癌、消化管間質腫瘍、慢性骨髄性白血病、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、黒色腫、乳がんおよび膵臓がんから選択される。実施形態において、がんは、ＮＳＣＬＣである。実施形態において、がんは、ＡＭＬである。実施形態において、がんは、ＣＬＬである。実施形態において、がんは、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２から選択される少なくとも１つのプロテインキナーゼに１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられ、がんは、ＮＳＣＬＣである。実施形態において、がんは、ＦＬＴ３に１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられ、がんは、ＡＭＬである。
【００１３】
[14]先行する実施形態のいずれかに従って、対象は、ヒトである。
[15]先行する実施形態のいずれかに従って、医薬組成物は、経口、バッカルまたは非経口投与に適合される。
【００１４】
[16]先行する実施形態のいずれかに従って、方法は、対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む。
[17]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、Ｂｃｌ−２経路阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤である。
【００１５】
[18]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ＰＫＩである。実施形態において、ＰＫＩは、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２を標的とするＰＫＩである。実施形態において、ＰＫＩは、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６から選択される。ＡＰＩがＰＫＩである実施形態のいずれかに従って、別の実施形態において、がんは、ＮＳＣＬＣである。
【００１６】
[19]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ＦＬＴ３阻害剤である。実施形態において、ＦＬＴ３阻害剤は、タンデュチニブ、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される。ＡＰＩがＦＬＴ３阻害剤である実施形態のいずれかに従って、別の実施形態において、がんは、ＡＭＬである。
【００１７】
[20]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤である。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される。ＡＰＩがＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤である実施形態のいずれかに従って、別の実施形態において、がんは、ＡＭＬである。
【００１８】
[21]実施形態において、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤は、トラメチニブである。
[22]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、Ｂｃｌ−２経路阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５からなる群から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、ＢＣＬ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックス、好ましくはベネトクラックスから選択される。ＡＰＩがＢｃｌ−２経路阻害剤である実施形態のいずれかに従って、別の実施形態において、がんは、ＡＭＬまたはＣＬＬである。
【００１９】
[23]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ＥＺＨ２阻害剤である。実施形態において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＥＰＺ６４３８、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ３４３、ＧＳＫ２８１６１２６、ＭＡＫ−６８３およびＰＦ−０６８２１４９７から選択される。
【００２０】
[24]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、化学療法剤である。実施形態において、化学療法剤は、三酸化ヒ素またはアザシチジンから選択される。
[25]実施形態において、化学療法剤は、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチンおよびペメトレキセドから選択される。ＡＰＩが化学療法剤である実施形態において、がんは、ＮＳＣＬＣである。
【００２１】
[26]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンから選択される。１つまたは複数の追加のＡＰＩが、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンから選択される実施形態において、がんは、ＡＭＬである。
【００２２】
[27]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される。１つまたは複数の追加のＡＰＩが、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される実施形態において、がんは、ＡＭＬである。
【００２３】
[28]本開示は、それを必要とする対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法も提供する。実施形態において、医薬組成物は、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩を含む。実施形態において、医薬組成物は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩またはマレイン酸塩から選択されるＭＰＣ−０７６７の塩を含む。実施形態において、ＡＭＬは、少なくとも１つのプロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、ＡＭＬは、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、ＡＭＬは、ギルテリチニブ、クレノラニブ、ソラフェニブ、ミドスタウリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、ＡＭＬは、ＦＬＴ３に１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられる。実施形態において、ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異は、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異、ＦＬＴ３  Ｄ８３５での点突然変異、ＦＬＴ３  Ｉ８３６での点突然変異、ＦＬＴ３  Ｎ６７６Ｋでの点突然変異およびＦ６９１Ｌでの点突然変異から選択される。実施形態において、ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異は、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異である。
【００２４】
[29]実施形態において、ＡＭＬは、ＦＬＴ３に対する野生型として、および活性化ＲＡＳ突然変異なしとして特徴付けられる。
[30]実施形態において、ＡＭＬを治療するための方法は、対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、化学療法剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、Ｂｃｌ−２経路阻害剤またはＥＺＨ２阻害剤である。実施形態において、ＦＬＴ３阻害剤は、タンデュチニブ、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＥＰＺ６４３８、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ３４３、ＧＳＫ２８１６１２６、ＭＡＫ−６８３またはＰＦ−０６８２１４９７から選択される。
【００２５】
[31]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンから選択される。
【００２６】
[32]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される。
【００２７】
[33]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ベネトクラックスである。
[34]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、Ｒａｆ／Ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路阻害剤である。
【００２８】
[35]実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）、アザシチジンおよびデシタビンから選択される化学療法剤である。
[36]本開示は、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物も提供する。
【００２９】
[37]本開示は、本明細書に記載される方法に従ってＡＭＬを治療する際に使用するための、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物も提供する。
【００３０】
[38]本開示は、ＭＰＣ−０７６７と、１つまたは複数の追加のＡＰＩとを含む医薬組成物も提供する。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ベネトクラックスである。
【００３１】
[39]実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を投与するステップを含み、ＡＭＬが、Ｂｃｌ−２経路阻害剤を用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発したものである、方法を提供する。実施形態において、ＡＭＬは、ベネトクラックスを用いる治療後に再発している。実施形態において、方法は、対象に、１つまたは複数の追加の活性医薬成分（ＡＰＩ）を投与するステップをさらに含む。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、化学療法剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤およびＢｃｌ−２経路阻害剤から選択される。実施形態において、ＦＬＴ３阻害剤は、クレノラニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、デュルバルマブ、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６、ＷＥＨＩ−５３９、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５からなる群から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビンからなる群から選択される。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、１つまたは複数の追加のＡＰＩは、ベネトクラックスである。
【００３２】
[40]実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を投与するステップをさらに含む治療レジメンと組み合わせて、投与するステップを含む、方法を提供する。実施形態において、Ｒａｓ経路阻害剤は、ベムラフェニブ、ソラフェニブまたはダブラフェニブ等のＲａｆ阻害剤、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ０３２５９０１、ＧＳＫ１１２０２１２（トラメチニブ）、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＰＤ１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９（ラファメチニブ）、ＰＤ９８０５９、ＢＩＸ  ０２１８９、ＭＥＫ１６２（ビニメチニブ）、ＡＳ−７０３０２６（ピマセルチブ）、ＳＬ−３２７、ＢＩＸ０２１８８、ＡＺＤ８３３０、ＴＡＫ−７３３、コビメチニブまたはＰＤ３１８０８８等のＭＥＫ阻害剤、およびＬＹ３２１４９９６、ＢＶＤ−５２３またはＧＤＣ−０９９４等のＥＲＫ阻害剤から選択される。
【００３３】
[41]実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、ＥＰＺ６４３８、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ３４３、ＧＳＫ２８１６１２６、ＭＡＫ−６８３またはＰＦ−０６８２１４９７等のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップをさらに含む治療レジメンと組み合わせて、投与するステップを含む、方法を提供する。
【００３４】
[42]実施形態において、本開示は、それを必要とする対象における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための方法であって、対象に、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）、アザシチジンおよびデシタビンから選択される化学療法剤を投与するステップをさらに含む治療レジメンと組み合わせて、投与するステップを含む、方法を提供する。
【００３５】
[43]実施形態において、本開示は、本明細書に記載されるＭＰＣ−０７６７単剤療法または併用療法の方法のいずれかに従ってＡＭＬを治療する際に使用するための、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩と、場合により、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００３６】
[44]本開示は、ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、対象から得られたＡＭＬがん細胞の試料中のＦＬＴ３およびＲＡＳの状態を決定するステップを含み、ＦＬＴ３正常／非ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＲＡＳ突然変異体の状態が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に抵抗性であり、ＭＰＣ−０７６７およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を用いる併用療法に応答性であると予測されることを示し；ＦＬＴ３−ＩＴＤの状態が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に応答性であると予測されることを示す、方法も提供する。
【００３７】
[45]本開示は、その治療を必要とする対象におけるＡＭＬを治療するための方法であって、対象からのＡＭＬがん細胞の試料中のＦＬＴ３およびＲＡＳ突然変異体の状態を決定するステップと、ＭＰＣ−０７６７およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を含む併用療法を用いて対象を治療するステップとを含み、状態が、ＦＬＴ３正常または非ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＲＡＳ突然変異体である、方法も提供する。
【００３８】
[46]先述の方法に従って、Ｒａｓ突然変異体の状態は、ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳにおける１つもしくは複数の活性化突然変異の存在によって定義されてもよい。実施形態において、ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳにおける１つもしくは複数の活性化突然変異は、ＫＲＡＳのＡ１４６ＴおよびＧ１３Ｄからなる群から選択されるか；またはＮＲＡＳのＱ６１Ｌ、Ｑ６１ＨおよびＧ１２Ｄから選択される、アミノ酸変化をもたらす、ＲＡＳタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列における突然変異である。
【００３９】
[47]本開示は、ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、対象からのＡＭＬがん細胞の試料中のＥＺＨ２の状態を決定または受信するステップを含み、ＥＺＨ２の機能喪失突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に応答性であると予測されることを示すが、ＥＺＨ２の機能獲得突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７単剤療法に抵抗性であると予測されることを示す、方法も提供する。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７療法は、単剤療法または併用療法である。
【００４０】
[48]本開示は、その治療を必要とする対象におけるＡＭＬを治療するための方法であって、対象からのＡＭＬの生物学的試料中のＡＭＬにおけるＥＺＨ２の状態を決定または受信するステップと、ＭＰＣ−０７６７療法を用いて対象を治療するステップであって、状態が、ＥＺＨ２の機能喪失突然変異であるステップ、あるいはＭＰＣ−０７６７およびＥＺＨ２阻害剤を含む併用療法を用いて対象を治療するステップであって、ＥＺＨ２の状態が、正常またはＥＺＨ２の機能獲得突然変異であるステップを含む、方法も提供する。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７療法は、単剤療法または併用療法である。
【００４１】
[49]本開示は、ＡＭＬの治療を必要とする対象におけるＭＰＣ−０７６７に対する治療応答を予測するための方法であって、対象から得られたＡＭＬがん細胞の試料中のＫＤＭ６Ａの状態を決定または受信するステップを含み、ＫＤＭ６Ａの機能喪失突然変異が、がん細胞がＭＰＣ−０７６７療法に抵抗性であると予測されることを示す、方法も提供する。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７療法は、単剤療法または併用療法である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１Ａ】[50]図１Ａ〜１Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２に突然変異を有する非小細胞肺がん細胞株の生存率を阻害することを示す図である。図１Ａ：ＨＣＣ−８２７。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２に突然変異を有する非小細胞肺がん細胞株の生存率を阻害することを示す図である。図１Ｂ：Ｈ１９７５。
【図１Ｃ】図１Ａ〜１Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２に突然変異を有する非小細胞肺がん細胞株の生存率を阻害することを示す図である。図１Ｃ：ＰＣ−９。
【図１Ｄ】図１Ａ〜１Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２に突然変異を有する非小細胞肺がん細胞株の生存率を阻害することを示す図である。図１Ｄ：Ｈ１７８１。
【図２】[51]図２は、ＭＰＣ−０７６７が、Ｈ１９７５細胞において細胞死を誘発することを示す図である。
【図３】[51]図３Ａは、ＭＰＣ−０７６７が、Ｈ１９７５細胞における細胞表面ＥＧＦＲ発現を低減させることを示す図である。細胞を、収穫する前にＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で２４時間にわたって処理し、ＥＧＦＲの細胞発現をフローサイトメトリーによって決定した。図３Ｂは、ＭＰＣ−０７６７が、ＰＣ−９細胞における細胞表面ＥＧＦＲ発現を低減させることを示す図である。細胞を、収穫する前にＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で２４時間にわたって処理し、ＥＧＦＲの細胞発現をフローサイトメトリーによって決定した。
【図４】[53]図４Ａは、ＭＰＣ−０７６７が、処理２４時間後に、ＢａＦ３細胞におけるＥＧＦＲ  ＷＴおよびＥＧＦＲエクソン２０突然変異体（Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ）の細胞表面発現を、用量依存的に低減させることを示す図である。図４Ｂは、ＭＰＣ−０７６７が、処理７２時間後に、親ＢａＦ３またはＥＧＦＲエクソン２０突然変異体（Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ）を発現するＢａＦ３の細胞生存率を、用量依存的に低減させることを示す図である。
【図５】[54]ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞における細胞毒性活性を有する。図５Ａは、ＦＬＴ−３野生型細胞のＭＥ−１の細胞生存率を示す図である。図５Ｂは、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＭＶ−４−１１細胞の細胞生存率を示す図である。図５Ｃは、７２時間にわたって処理されたＡＭＬ細胞株および原発性ＡＭＬ細胞からのＥＣ５０値を示す要約データを示す図である。
【図６】[55]図６は、ＭＰＣ−０７６７が、７２時間にわたる処理後に、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える原発性ＡＭＬ細胞における用量依存的な細胞死を誘発することを示す図である。試料Ｙ１２６５は、ＡＭＬがギルテリチニブを用いる処置後に再発した患者から得た。
【図７】[56]ＭＰＣ−０７６７は、ＡＭＬ  ＦＬＴ３−ＩＴＤのマウス異種移植モデル（ＭＶ−４−１１細胞）において抗腫瘍活性を実証する。腫瘍接種の７日後、マウス（群あたりｎ＝１０）に、ビヒクル単独、またはＭＰＣ−０７６７を２００ｍｇ／ｋｇ  ＱＤで２日間、次いで、１５０ｍｇ／Ｋｇ  ＱＤに低減して１５日間、経口投与した。図７Ａは、腫瘍サイズ（ｍｍ３）を示す。５つの腫瘍退縮が、ＭＰＣ−０７６７処置群において見られ、有意性が、処置によってＰ＜０．０００１（スチューデントのｔ検定）で見られた。図７Ｂは、体重変化を示す図である。
【図８】[57]図８Ａは、ミドスタウリン細胞毒性（ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２、それぞれのグラフにおいて黒線）に抵抗性であるように発生させたＡＭＬ  ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞が、２〜１００ｎＭのミドスタウリンに抵抗性であることを示す図である。それぞれのグラフの灰色線は、ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣである。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。図８Ｂは、ミドスタウリン細胞毒性（ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２、それぞれのグラフにおいて黒線）に抵抗性であるように発生させたＡＭＬ  ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞が、０．２〜１００ｎＭのクレノラニブに抵抗性であることを示す図である。それぞれのグラフの灰色線は、ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣである。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。図８Ｃは、ミドスタウリン細胞毒性（ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２、それぞれのグラフにおいて黒線）に抵抗性であるように発生させたＡＭＬ  ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞が、２０〜１００００ｎＭのＭＰＣ−０７６７に抵抗性ではないことを示す図である。それぞれのグラフの灰色線は、ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣである。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。
【図９】[58]ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３阻害剤に抵抗性を付与する間質条件下、細胞毒性活性を保持する。図９Ａは、ＭＯＬＭ−１４細胞を、非間質培地中（それぞれのグラフにおいて黒線）または間質培地中（それぞれのグラフにおいて灰色線）のいずれかで、ギルテリチニブで処理した。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。図９Ｂは、ＭＯＬＭ−１４細胞を、非間質培地中（それぞれのグラフにおいて黒線）または間質培地中（それぞれのグラフにおいて灰色線）のいずれかで、クレノラニブで処理した。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。図９Ｃは、ＭＯＬＭ−１４細胞を、非間質培地中（それぞれのグラフにおいて黒線）または間質培地中（それぞれのグラフにおいて灰色線）のいずれかで、ＭＰＣ−０７６７で処理した。細胞を７２時間にわたって処理した後、生存率を評価した。
【図１０Ａ】[59]図１０Ａ〜１０Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３の細胞表面発現を低減させ（Ａ、Ｂ）、その後下流の標的Ｓ６のリン酸化を低減させる（１０Ｃ、１０Ｄ）ことを示す。ＭＶ−４−１１細胞（Ａ、Ｃ）またはＭＯＬＭ−１３細胞（Ｂ、Ｄ）を、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７で２４時間にわたって処理した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３の細胞表面発現を低減させ（Ａ、Ｂ）、その後下流の標的Ｓ６のリン酸化を低減させる（１０Ｃ、１０Ｄ）ことを示す。ＭＶ−４−１１細胞（Ａ、Ｃ）またはＭＯＬＭ−１３細胞（Ｂ、Ｄ）を、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７で２４時間にわたって処理した。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３の細胞表面発現を低減させ（Ａ、Ｂ）、その後下流の標的Ｓ６のリン酸化を低減させる（１０Ｃ、１０Ｄ）ことを示す。ＭＶ−４−１１細胞（Ａ、Ｃ）またはＭＯＬＭ−１３細胞（Ｂ、Ｄ）を、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７で２４時間にわたって処理した。
【図１０Ｄ】図１０Ａ〜１０Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３の細胞表面発現を低減させ（Ａ、Ｂ）、その後下流の標的Ｓ６のリン酸化を低減させる（１０Ｃ、１０Ｄ）ことを示す。ＭＶ−４−１１細胞（Ａ、Ｃ）またはＭＯＬＭ−１３細胞（Ｂ、Ｄ）を、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７で２４時間にわたって処理した。
【図１１】[60]図１１Ａは、ＭＰＣ−０７６７が、ＢａＦ３細胞にトランスフェクトされた野生型および突然変異体のＦＬＴ３の細胞表面発現を取り除くことを示す図である。図１１Ｂは、細胞毒性アッセイにおいて、ＦＬＴ３−ＩＴＤを発現する遺伝子操作されたＢａＦ３細胞株（それぞれのグラフにおいて灰色線）およびＦ６９１Ｌ突然変異を有する遺伝子操作されたＢａＦ３細胞株（それぞれのグラフにおいて黒線）が、クレノラニブに対して抵抗性であることを示す図である。図１１Ｃは、細胞毒性アッセイにおいて、ＦＬＴ３−ＩＴＤを発現する遺伝子操作されたＢａＦ３細胞株（それぞれのグラフにおいて灰色線）およびＦ６９１Ｌ突然変異を有する遺伝子操作されたＢａＦ３細胞株（それぞれのグラフにおいて黒線）が、ＭＰＣ−０７６７に対して感受性のままであることを示す図である。
【図１２】[61]図１２は、ＭＰＣ−０７６７が、６つの原発性ＡＭＬ患者試料中で、インターフェロン−ガンマが誘発するＰＤ−Ｌ１細胞表面発現を低減させることを示す図である。細胞を、ヒトＩＦＮ−γ（５０ｎｇ／ｍｌ）および／またはＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で２４時間にわたって処理した。
【図１３Ａ】[62]図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＰＣ−０７６７が、ＭＶ−４−１１細胞中、ダウノルビシン（Ａ）、シタラビン（Ｂ）、クレノラニブ（Ｃ）、ソラフェニブ（Ｄ）およびベネトクラックス（Ｅ）と組み合わせて、相乗的な細胞毒性活性を示す図である。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＰＣ−０７６７が、ＭＶ−４−１１細胞中、ダウノルビシン（Ａ）、シタラビン（Ｂ）、クレノラニブ（Ｃ）、ソラフェニブ（Ｄ）およびベネトクラックス（Ｅ）と組み合わせて、相乗的な細胞毒性活性を示す図である。
【図１３Ｃ】図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＰＣ−０７６７が、ＭＶ−４−１１細胞中、ダウノルビシン（Ａ）、シタラビン（Ｂ）、クレノラニブ（Ｃ）、ソラフェニブ（Ｄ）およびベネトクラックス（Ｅ）と組み合わせて、相乗的な細胞毒性活性を示す図である。
【図１３Ｄ】図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＰＣ−０７６７が、ＭＶ−４−１１細胞中、ダウノルビシン（Ａ）、シタラビン（Ｂ）、クレノラニブ（Ｃ）、ソラフェニブ（Ｄ）およびベネトクラックス（Ｅ）と組み合わせて、相乗的な細胞毒性活性を示す図である。
【図１３Ｅ】図１３Ａ〜１３Ｅは、ＭＰＣ−０７６７が、ＭＶ−４−１１細胞中、ダウノルビシン（Ａ）、シタラビン（Ｂ）、クレノラニブ（Ｃ）、ソラフェニブ（Ｄ）およびベネトクラックス（Ｅ）と組み合わせて、相乗的な細胞毒性活性を示す図である。
【図１４】[63]図１４は、ＭＰＣ−０７６７が、ベネトクラックスと組み合わせて、強力な抗腫瘍活性を示す図である。全身性生存異種移植研究を、ＭＯＬＭ−１３  ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞株を使用して実施した。ビヒクル（灰色線）、１００〜６０ｍｇ／ｋｇ  ＱＤのＭＰＣ−０７６７（破線）、４５〜３３．８４ｍｇ／ｋｇ  ＱＤのベネトクラックス（点線）またはＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せ（実線）で処置されたマウスについて、生存率曲線を示す。組合せ、対ＭＰＣ−０７６７単独、ベネトクラックス単独、または対ビヒクル単独  Ｐ＜０．００１、ログランク（マンテル・コックス）検定。
【図１５】[64]図１５は、親およびベネトクラックス抵抗性（Ｖｅｎ−Ｒ）のＭＯＬＭ−１３およびＭＶ−４−１１細胞におけるＭＰＣ−０７６７（左４つのバー）またはベネトクラックス（右４つのバー）のＥＣ５０値を示す図である。細胞を、ＭＰＣ−０７６７またはベネトクラックスで７２時間にわたって処理し、細胞生存率を、ＣＴＧアッセイを使用して決定した。実験は、最低２回の独立した時間で、二連で実施され、平均データ±ＳＤを示す。
【図１６】[65]図１６Ａは、ＭＰＣ−０７６７（５８０ｎＭ）、ベネトクラックス（２５００ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理されたＭＶ−４−１１ベネトクラックス抵抗性細胞のウエスタンブロット分析を示す図である。溶解物をＰＡＲＰに対する抗体で探索し、ビンキュリンをローディング対照として使用した。上および下の矢印は、それぞれ、全長ＰＡＲＰおよび切断ＰＡＲＰを表す。代表的なデータを２つの独立した実験から示す。図１６Ｂは、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して生存率をアッセイする前に７２時間にわたってＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せで処理された２つのベネトクラックス抵抗性細胞株のＥＤ７５で正規化されたアイソボログラムを示す図である。各データポイントは、各細胞株について二連で実施された２つの独立した実験の平均である。
【図１７】[66]図１７Ａは、ＭＰＣ−０７６７（１μＭ）、ベネトクラックス（２０ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理されたＭＯＬＭ−１４細胞のウエスタンブロット分析を示す図である。溶解物を指示された抗体で探索した。ビンキュリンをローディング対照として使用した。代表的なブロットを２つの独立した実験から示す。図１７Ｂは、ＭＰＣ−０７６７（５８０ｎＭ）、ベネトクラックス（２５００ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理されたＭＶ−４−１１ベネトクラックス抵抗性細胞のウエスタンブロット分析を示す図である。溶解物をＡＫＴおよびＭＣＬ−１に対する抗体で探索した。ビンキュリンをローディング対照として使用した。代表的なデータを２つの独立した実験から示す。
【図１８】[67]図１８は、野生型ＦＬＴ３を抱えるＡＭＬ細胞のＭＰＣ−０７６７感受性を示す図である。ＭＰＣ−０７６７で７２時間にわたって処理され、続いて、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して生存率が決定されたＡＭＬ細胞株および原発性ＡＭＬ試料からのＥＣ５０値のドットプロット。細胞株を使用する実験は、２回の独立した時間で、それぞれ二連で実施されたが、原発性ＡＭＬ芽細胞は、１回、二連でアッセイした。幾何平均を横線で示す。
【図１９】[68]ＣＲＩＳＰＲは、ＭＰＣ−０７６７感受性の重要な決定因子としてエピジェネティック調節を同定する。図１９Ａは、上位２０ｓｇＲＮＡの遺伝子オントロジー解析を示す図である。図１９Ｂは、ＡおよびＢを組み合わせたＧｅＣＫＯサブライブラリーからのビヒクルおよびＭＰＣ−０７６７処理ＣＲＩＳＰＲプール中のＫＤＭ６Ａの正規化ｓｇＲＮＡ読み取りカウントの集積を示す散布図である。ＫＤＭ６Ａを標的とするために使用した６つの個々のｓｇＲＮＡを黒丸で示す。
【図２０】[69]ＭＯＬＭ−１４およびＭＶ−４−１１細胞株における３つの独立したｓｇＲＮＡを用いるＣＲＩＳＰＲ媒介性のＫＤＭ６Ａの標的化は、ＭＰＣ−０７６７に対する抵抗性を付与する。図２０Ａは、ＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で処理された指示された非標的化ｓｇＲＮＡまたはＫＤＭ６Ａ  ｓｇＲＮＡによるＭＯＬＭ−１４細胞の生存率を示す図である。処理７２時間後、細胞生存率を、ＣＴＧを使用して評価した。提示されるデータは、２回、二連で実施された、各細胞株±ＳＤについての個々のｓｇＲＮＡの平均である。図２０Ｂは、ＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で処理された指示された非標的化ｓｇＲＮＡまたはＫＤＭ６Ａ  ｓｇＲＮＡによるＭＶ−４−１１細胞の生存率を示す図である。処理７２時間後、細胞生存率を、ＣＴＧを使用して評価した。提示されるデータは、２回、二連で実施された、各細胞株±ＳＤについての個々のｓｇＲＮＡの平均である。
【図２１】[70]図２１は、ＥＺＨ２阻害剤のＥＰＺ６４３８またはＣＰＩ−１２０５で４日間にわたって処理され、続いて、生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用してアッセイするさらに７２時間前にＥＺＨ２阻害剤およびＭＰＣ−０７６７の組合せで処理されたＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える細胞株（ＭＶ−４−１１）のＥＣ７５で正規化されたアイソボログラムを示す図である。各データポイントは、各細胞株について二連でそれぞれ実施された３つの独立した実験の平均である。
【図２２】[71]図２２は、ＭＰＣ−０７６７（５２７ｍＭ）、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）（１２５０ｎＭ）または組合せで７２時間にわたって処理されたＭＯＬＭ−１４細胞の生存率を示す棒グラフである。Ｃｌ値の決定により、組合せが相乗的（すなわち、＜１）であったことを確認した。
【図２３】[72]図２３は、ＭＰＣ−０７６７（８００ｎＭ）、ＡＴＯ（６２５ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理されたＭＯＬＭ−１３細胞におけるＦＬＴ３、ｐＥＲＫ、ｐＳ６レベルの定量化を示す図である。
【図２４】[73]図２４は、さらにＩＬ−３で補充されるか、または補充なしで、ＦＬＴ３阻害剤のクレノラニブおよびギルテリチニブで、またはＭＰＣ−０７６７で７２時間にわたって処理された、ＦＬＴ３−ＩＴＤを発現するＢａＦ３細胞のＥＣ５０値を示す図である。この時間の後、細胞生存率を、ＣＴＧを使用して決定し、ＥＣ５０値を決定した。グラフは、２つの独立した研究の平均±ＳＤであり、それぞれ二連で実施された。
【図２５】[74]図２５は、ＭＰＣ−０７６７が、５’アザシチジンと組み合わせて、抗腫瘍活性の強化を呈することを示す図である。全身性生存異種移植研究を、ＭＯＬＭ−１３  ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞株を使用して実施した。ビヒクル（灰色線）、７５ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ×５；１日オフ；ＱＤ×２６）のＭＰＣ−０７６７（破線）、２ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ×４）の５’アザシチジン（点線）またはＭＰＣ−０７６７および５’アザシチジンの組合せ（実線）で処置されたマウスについて、生存率曲線を示す。組合せ、対ＭＰＣ−０７６７単独、５’アザシチジン単独、または対ビヒクル単独  Ｐ＜０．００１、ログランク（マンテル・コックス）検定。
【図２６】[75]図２６は、ＭＰＣ−０７６７であらかじめ処理されたＯＣＩ−ＡＭＬ２細胞が、Ｔ細胞媒介性死滅に対してより感受性であることを示す図である。ＤＭＳＯをビヒクル対照として使用した。バーは、２つの独立した実験の平均±ＳＤを提示する。
【図２７Ａ】[76]図２７Ａ〜２７Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、マウス同系モデル（ＭＣ３８細胞）における抗腫瘍活性を実証することを示す図である。腫瘍接種の１１日後、マウス（群あたりｎ＝６）に、ビヒクル単独、または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７をＱＤ×１７で、経口投与した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）、Ｐ＝０．０１（スチューデントのｔ検定）（Ａ）および体重変化パーセント（Ｂ）を示す。（Ｃ）１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７投薬の７日後のＭＣ３８腫瘍浸潤白血球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−）において測定したＰＤ−Ｌ１レベル、Ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍におけるＣＤ４：ＴＲＥＧ（左）およびＣＤ８：ＴＲＥＧ（右）の比率、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。ＣＤ４  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋として定義し；ＣＤ８  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−として定義し、ＴＲＥＧを、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋として定義した。
【図２７Ｂ】図２７Ａ〜２７Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、マウス同系モデル（ＭＣ３８細胞）における抗腫瘍活性を実証することを示す図である。腫瘍接種の１１日後、マウス（群あたりｎ＝６）に、ビヒクル単独、または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７をＱＤ×１７で、経口投与した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）、Ｐ＝０．０１（スチューデントのｔ検定）（Ａ）および体重変化パーセント（Ｂ）を示す。（Ｃ）１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７投薬の７日後のＭＣ３８腫瘍浸潤白血球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−）において測定したＰＤ−Ｌ１レベル、Ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍におけるＣＤ４：ＴＲＥＧ（左）およびＣＤ８：ＴＲＥＧ（右）の比率、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。ＣＤ４  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋として定義し；ＣＤ８  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−として定義し、ＴＲＥＧを、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋として定義した。
【図２７Ｃ】図２７Ａ〜２７Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、マウス同系モデル（ＭＣ３８細胞）における抗腫瘍活性を実証することを示す図である。腫瘍接種の１１日後、マウス（群あたりｎ＝６）に、ビヒクル単独、または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７をＱＤ×１７で、経口投与した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）、Ｐ＝０．０１（スチューデントのｔ検定）（Ａ）および体重変化パーセント（Ｂ）を示す。（Ｃ）１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７投薬の７日後のＭＣ３８腫瘍浸潤白血球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−）において測定したＰＤ−Ｌ１レベル、Ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍におけるＣＤ４：ＴＲＥＧ（左）およびＣＤ８：ＴＲＥＧ（右）の比率、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。ＣＤ４  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋として定義し；ＣＤ８  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−として定義し、ＴＲＥＧを、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋として定義した。
【図２７Ｄ】図２７Ａ〜２７Ｄは、ＭＰＣ−０７６７が、マウス同系モデル（ＭＣ３８細胞）における抗腫瘍活性を実証することを示す図である。腫瘍接種の１１日後、マウス（群あたりｎ＝６）に、ビヒクル単独、または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７をＱＤ×１７で、経口投与した。腫瘍サイズ（ｍｍ３）、Ｐ＝０．０１（スチューデントのｔ検定）（Ａ）および体重変化パーセント（Ｂ）を示す。（Ｃ）１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７投薬の７日後のＭＣ３８腫瘍浸潤白血球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−）において測定したＰＤ−Ｌ１レベル、Ｐ＜０．０５（スチューデントのｔ検定）。（Ｄ）ＭＣ３８腫瘍におけるＣＤ４：ＴＲＥＧ（左）およびＣＤ８：ＴＲＥＧ（右）の比率、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１（スチューデントのｔ検定）。ＣＤ４  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋として定義し；ＣＤ８  Ｔ細胞を、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−として定義し、ＴＲＥＧを、ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋として定義した。
【図２８】[77]図２８は、ＭＰＣ−０７６７（３５１ｎＭ）、トラメチニブ（２５ｎＭ）または組合せで７２時間にわたって処理されたＭＯＬＭ−１３細胞の生存率を示す棒グラフである。ＣＩ値の決定により、組合せが相乗的（すなわち、＜１）であったことを確認した。
【図２９】[78]ＰＤ−Ｌ１発現のＭＰＣ−０７６７抑制は、Ｔ細胞活性化を増大させる。図２９Ａの棒グラフは、抗ＣＤ３によるジャーカットレポーター細胞の活性化を示す。図２９Ａのバーは、三連ウェルの平均±ＳＤを提示し、３つの独立した実験の代表である。図２９Ｂの棒グラフは、ＩＦＮγ処理後のＴ細胞活性化のＰＤ−Ｌ１依存性阻害を示す。図２９Ｂのバーは、三連ウェルの平均±ＳＤを提示し、３つの独立した実験の代表である。図２９Ｃの棒グラフは、ＭＰＣ−０７６７がＰＤ−Ｌ１の細胞表面発現を低減させることを実証する（ＩＦＮγ単独と比較して、１μＭでｐ＝０．０１１３、２μＭでｐ＜０．０００１）。図２９Ｃのバーは、３の独立した実験の平均±ＳＤを提示する。図２９Ｄの棒グラフは、Ｔ細胞活性化の阻害も低減させることを実証する（ＩＦＮγ単独と比較して、１μＭでｐ＝０．０１９８、２μＭでｐ＝０．０３２３）。図２９Ｄのバーは、３の独立した実験の平均±ＳＤを提示する。
【図３０】[79]図３０は、ＭＰＣ−０７６７が、インビボＡＭＬモデルにおける全身性の抗腫瘍活性を実証することを示す図である。マウスが、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７（７５または１５０ｍｇ／ｋｇ、毎日）を経口投薬されたＭＯＬＭ−１３全身モデルのカプラン・マイヤー生存率解析。統計学的有意性をログランク（マンテル・コックス）検定を使用して算出した。７５ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７対ビヒクルについて、ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
[80]本開示は、その治療を必要とする対象、好ましくはヒト対象におけるがんを治療するための、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩の使用に関係する組成物および方法を提供する。
【００４４】
[81]ＷＯ２０１１／０６０２５３号は、ヒトにおけるその経口生物学的利用率を含む、ＭＰＣ−０７６７、ＭＰＣ−３１００の親化合物を記載している。ＭＰＣ−３１００は、（２Ｓ）−１−［４−（２−｛６−アミノ−８−［（６−ブロモ−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）スルファニル］−９Ｈ−プリン−９−イル｝エチル）ピペリジン−１−イル］−２−ヒドロキシプロパン−１−オンとして同定されることができ、Ｋｉｍら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ２０１２  ５５，７４８０〜７５０１に記載されている。２０１４の概説において指摘されている通り、ＭＰＣ−３１００は、もう活発に開発されていない（Ｂｈａｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  ２０１４  ５７：８７１８〜８７２４）。ＭＰＣ−３１００は、フェーズＩ臨床試験を成功裏に終了したが、そのさらなる臨床開発は、不十分な溶解性によって妨げられた（Ｋｉｍら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．  ２５：５２５４〜５２５７）（２０１５）。ＭＰＣ−０７６７は、親化合物によるこの問題に対処するために開発されたＭＰＣ−３１００のプロドラッグである。ＭＰＣ−０７６７は、改善された水溶解性、適切な化学的安定性および迅速な生物変換を示した。同上。ＭＰＣ−０７６７および関連化合物は、ＷＯ２０１２／１４８５５０号に開示されており、これは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。ＭＰＣ−０７６７は、酵素が媒介する切断プロセスによって主にその親化合物に変換される、２％カルボキシメチルセルロースに製剤化された場合、その経口生物学的利用率は、親化合物の経口生物学的利用率と同様であった（４０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（商標））。ＭＰＣ−０７６７は、Ｎ−８７異種移植腫瘍モデルにおいて、親化合物と同様の効能も示した。Ｎ−８７細胞は、ヒトＨＥＲ２陽性胃がん細胞である。ＭＰＣ−０７６７の構造を以下に示す。
【００４５】
【化１】
2020535173.tif 000003
【００４６】
[82]本明細書に記載される組成物および方法の実施形態において、ＭＰＣ−０７６７の薬学的に許容される塩は、メシル酸塩である。したがって、実施形態において、本開示は、その治療を必要とする対象、好ましくはヒト対象におけるがんを治療する方法であって、対象に、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩の有効量を投与するステップを含む、方法を提供する。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７のメシル酸塩は、医薬組成物の形態である。実施形態において、医薬組成物は、シクロデキストリンを含まない。ＭＰＣ−０７６７およびその塩を含む医薬組成物および製剤は、下記でさらに詳細に記載される。
【００４７】
[83]ＭＰＣ−０７６７を用いてがんを治療する単剤療法および併用療法の方法の両方が、本開示によって企図される。併用療法については、下記で論じられる。ＭＰＣ−０７６７単剤療法の文脈において、すべてではないがいくつかの実施形態において、治療を必要とする対象は、「標準ケア」もしくは第１選択治療剤を用いる治療に対して非応答性もしくは不応性であるか、それでの治療の後に再発したがんを有する対象である。この文脈において、用語「非応答性」および「不応性」は、本明細書において交換可能に使用され、例えば、１つまたは複数の固形腫瘍のサイズを安定させるまたは低減させるため、腫瘍進行を減速させるため、新たな腫瘍転移の発生率を予防する、低減させるまたは減少させるため、あるいはがんに関連する１つまたは複数の症状を軽減させるために、臨床的に適正ではないような、療法に対する対象の応答を指す。特定の薬物療法に対して不応性であるがんは、薬剤抵抗性がんとして記載されることもある。がんのための標準療法において、不応性がんは、能動的治療にもかかわらず進行中の疾患を含むのに対し、「再発性」がんは、任意の現在の療法の非存在下であるが初期療法の成功後に進行するがんを含む。
【００４８】
[84]したがって、実施形態において、対象は、１つまたは複数の「標準ケア」治療剤を用いる療法の１つまたは複数の以前のレジメンを受けた対象である。そのような事例において、対象のがんは、不応性または再発性とみなされ得る。実施形態において、がんは、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、下記のキナーゼの内の１つまたは複数に対して標的とされるＰＫＩを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している：ブレークポイントクラスター領域−アベルソン（ＢＣＲ−ＡＢＬ）、Ｂ急速加速線維肉腫（Ｂ−ＲＡＦ）、上皮性増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮性増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、ヤヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２）、間葉上皮転移因子（ＭＥＴ）、および未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）。実施形態において、がんは、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＦＬＴ３の内の１つまたは複数に対して標的とされるＰＫＩを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｂ−ＲＡＦ、ＪＡＫ２、ＭＥＴおよびＡＬＫの内の１つまたは複数に対して標的とされるＰＫＩを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。
【００４９】
[85]実施形態において、がんは、ＦＬＴ３に対して標的とされるＰＫＩを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２に対して標的とされるＰＫＩを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６からなる群から選択される治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、ギルテリチニブ、タンデュチニブ、クレノラニブ、ソラフェニブ、ミドスタウリンおよびキザルチニブからなる群から選択される治療剤を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発するものである。実施形態において、がんは、ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異によって特徴付けられる急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。実施形態において、ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異は、エクソン１４またはエクソン１５におけるＦＬＴ３内部タンデム重複（ＩＴＤ）突然変異、ＦＬＴ３  Ｄ８３５での点突然変異、Ｉ８３６での点突然変異、ＦＬＴ３  Ｎ６７６Ｋでの点突然変異およびゲートキーパー残基における点突然変異Ｆ６９１Ｌから選択される。実施形態において、ＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異は、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異である。実施形態において、ＡＭＬは、シタラビン、ダウノルビシンおよびミドスタウリンの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。ＡＭＬに関係する追加の実施形態を下記で記載する。
【００５０】
[86]実施形態において、がんは、５’アザシチジンまたはデシタビンを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。実施形態において、がんは、シタラビン単独またはアントラサイクリンと組み合わせたシタラビンを用いる治療に対して不応性であるか、または治療後に再発している。
【００５１】
[87]実施形態において、治療を必要とする対象は、がんが、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２から選択されるプロテインキナーゼに１つまたは複数の活性化突然変異を有するとして特徴付けられる対象である。実施形態において、本明細書に記載される方法によって治療されるがんは、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２の過剰発現によって特徴付けられる。実施形態において、がんは、１つもしくは複数のＥＧＦＲｉｎｓ２０突然変異、または１つもしくは複数のＨＥＲ２ｉｎｓ２０突然変異、あるいは両方によって特徴付けられる非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。
【００５２】
[88]実施形態において、ＥＧＦＲにおける１つまたは複数の活性化突然変異は、ゲートキーパー突然変異Ｔ７９０Ｍを含有し得るか、または含有し得ないＬ８５８Ｒからなる群から選択される。実施形態において、ＥＧＦＲ突然変異は、エクソン２０挿入突然変異（ｉｎｓ２０）から選択される。実施形態において、ＥＦＧＲｉｎｓ２０突然変異は、Ｅ７４６＿Ａ７５０ｄｅｌ、Ｄ７６１＿Ｅ７６２ｉｎｓＥＡＦＱ、  Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｙ７６４＿Ｖ７６５ｉｎｓＨＨ、Ｍ７６６＿Ａ７６７ｉｎｓＡＩ、Ａ７６７＿Ｖ７６９ｄｕｐＡＳＶ、Ａ７６７＿Ｓ７６８ｉｎｓＴＬＡ、Ｓ７６８＿Ｄ７７０ｄｕｐＳＶＤ、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ｉｎｓＶＡＳ、Ｓ７６８＿Ｖ７６９ｉｎｓＡＷＴ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＣＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＤＮＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＳＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＧＶＶ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＭＡＳＶＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＡＰＷ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＤ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＤＧ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＧＬ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＤＰＨ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＰ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＧ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＭＡＴＰ、ｄｅｌＮ７７０ｉｎｓＧＹ、Ｎ７７１＿ＰｉｎｓＨ、Ｎ７７１＿Ｐ７７２ｉｎｓＮ、Ａ７７１＿Ｈ７７３ｄｕｐＮＰＨ、ｄｅｌＮ７７１ｉｎｓＧＷ、ｄｅｌＮ７７１ｉｎｓＧＦ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＲ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＹＮＰ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＸ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＤＰＨ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＤＮＰ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＧＶ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＮ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＶ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧＮＰＨ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓｄｕｐＨＶ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧ、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＧＨおよびＶ７７４＿Ｃ７７５ｉｎｓＨＶの内の１つまたは複数から選択される。
【００５３】
[89]実施形態において、ＨＥＲ２における１つまたは複数の活性化突然変異は、ｉｎｓ２０突然変異から選択される。実施形態において、ＨＥＲ２ｉｎｓ２０突然変異は、Ａ７７５＿Ｇ７７６ｉｎｓＹＶＭＡ、Ｇ７７６＞ＶＣ、Ｇ７７６＿Ｖ７７７ｉｎｓＣＧおよびＰ７８１＿Ｙ７８２ｉｎｓＧＳＰから選択される。
【００５４】
[90]実施形態において、対象は、胃がん、結腸がん、前立腺がん、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、リンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、腎細胞癌、消化管間質腫瘍、慢性骨髄性白血病、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、髄芽腫、黒色腫、乳がんおよび膵臓がんからなる群から選択されるがんに対する不応性またはその再発を有する対象である。
【００５５】
[91]実施形態において、対象は、急性顆粒球性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、副腎腫瘍、虫垂がん、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱癌、脳腫瘍、乳癌、子宮頸癌、子宮頸部過形成、絨毛癌、慢性顆粒球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、本態性血小板増加症、胆嚢がん、胃がん、胃腸がん、尿生殖器癌、神経膠腫、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、白血病、肺癌、悪性カルチノイド癌、悪性高カルシウム血症、悪性黒色腫、悪性膵臓インスリノーマ、マントル細胞リンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄増殖性新生物、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、骨肉腫、卵巣がん、卵巣癌、膵臓癌、陰茎がん、下垂体腫瘍、真性赤血球増加症、原発性マクログロブリン血症、原発性骨髄線維症、前立腺癌、腎細胞癌、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚がん、小細胞肺癌、軟部肉腫、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、精巣癌、甲状腺癌、甲状腺腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されるがんに対する不応性またはその再発を有する対象である。
【００５６】
[92]本明細書に記載される方法に従って、「対象」は、哺乳動物を含む。哺乳動物は、例えば、任意の哺乳動物、例えば、ヒト、霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタであることができる。好ましくは、対象は、ヒトである。用語「患者」は、ヒト対象を指す。
併用療法
[93]本開示は、併用療法を含む方法も提供する。本明細書において使用される場合、「併用療法」または「共同療法」は、ＭＰＣ−０７６７および追加の活性剤の共同作用からの有益な効果を提供するように意図された治療レジメンの一部として、治療有効量のＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩と、本明細書において「活性医薬成分」（「ＡＰＩ」）とも称される、少なくとも１つの追加の活性剤との投与を含む。以下に記載される実施形態に従って、「追加のＡＰＩ」は、ＭＰＣ−０７６７との併用療法レジメンで投与される少なくとも１つの追加のＡＰＩを称すると理解される。加えて、以下に記載される２つ以上の追加のＡＰＩを、レジメンにおいて利用し得ることが理解される。用語「併用療法」または「併用療法レジメン」は、意図または予測されなかった有益な効果を偶然におよび恣意的にもたらす別個の単剤療法レジメンの一部として、２つ以上の治療用化合物の投与を包括するように意図されていない。
【００５７】
[94]好ましくは、１つまたは複数の追加のＡＰＩと組み合わせたＭＰＣ−０７６７を含む組成物の投与は、本明細書において論じられる通り、治療されている対象において相乗的な応答を提供する。この文脈において、用語「相乗的な」は、いずれかの単一療法単独の相加効果よりもさらに有効である組合せの効能を指す。
【００５８】
[95]相乗効果は、以下でさらに詳細に論じられる通り、インビトロ腫瘍細胞株に対して、および全身性生存異種移植研究においての両方で、ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せによって例示される。他の例は、例えば、以下の実施例１０の表１（ダウノルビシン、シタラビン、クレノラニブ、ソラフェニブ、ギルテリニブおよびベネトクラックス）、実施例１５（三酸化ヒ素）、実施例１７（５’アザシチジン）ならびに実施例２０（トラメチニブ）において示されるように、５’アザシチジン、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）、シタラビン、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン）、ＦＬＴ３チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、クレノラニブおよびギルテリニブ）、ＥＺＨ２阻害剤およびＲａｓ／ＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤（例えば、トラメチニブ）と組み合わせるＭＰＣ−０７６７の相乗的活性を含む。
【００５９】
[96]本開示に従う併用療法の相乗効果は、より低い投薬量、ならびに／または組合せ外のその用量および／もしくは頻度と比較した、組合せ内の少なくとも１つの作用物質の頻度の少ない投与の使用を可能にすることができる。組合せの追加の有益な効果は、単独で組み合わせたいずれかの療法（単剤療法とも称される）の使用に関連する有害なまたは望ましくない副作用の忌避または低減において現れることができる。
【００６０】
[97]併用療法の文脈において、ＭＰＣ−０７６７組成物の投与は、１つまたは複数の追加の活性剤またはＡＰＩの投与と同時または連続であってよい。別の実施形態において、併用療法の異なる成分の投与は、異なる頻度であってよい。
【００６１】
[98]いくつかの態様において、併用療法は、患者の内因性免疫系の抗腫瘍細胞毒性活性を強化する治療剤と組み合わせたＭＰＣ−０７６７組成物の投与を包括する。そのような薬剤は、例えば、ナチュラルキラー細胞および／または細胞毒性Ｔ細胞の抗腫瘍活性を強化することによって、作用し得る。任意の特定の理論によって拘束されないが、下記に提示されるデータは、ＭＰＣ−０７６７が、がん細胞株および原発性がん細胞の両方における細胞表面のＰＤ−Ｌ１発現を低減させ、がん細胞に対するＴ細胞活性化の増大につながることを示す。さらに、ＭＰＣ−０７６７治療は、がん細胞をＴ細胞媒介性細胞毒性に対して感受性にする。したがって、実施形態において、本開示は、抗腫瘍免疫を強化する治療剤、例えば、プログラム死１（ＰＤ−１）受容体および／またはそのリガンド（ＰＤ−Ｌ１／２）が関与するチェックポイントシグナリング経路の阻害剤と組み合わせたＭＰＣ−０７６７組成物を投与することによってがんを治療するための方法を提供し、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞を会合する多重特異性を有する治療抗体またはそのフラグメントを含み得る。実施形態において、これらは、二重特異性抗体、ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞会合剤）、ｓｃＢｓＴａＦｖ（単鎖二重特異性タンデムフラグメント可変）、ｂｓｓｃＦｖ（二重特異性単鎖Ｆｖ）、ＢｉＫＥ（二重特異性キラー細胞会合剤）、ＤＡＲＴ（二重親和性再標的化）、ＴａｎｄＡｂ（タンデムダイアボディ）、ｓｃｔｂ（単鎖Ｆｖトリプルボディ）、ＢＩｆ（二重特異性ｓｃＦｖ免疫拡散）、およびＤＶＤ−Ｉｇ（二重可変ドメイン免疫グロブリン）を含み得る。
【００６２】
[99]実施形態において、本開示は、抗腫瘍免疫を強化する治療剤、例えば、ＣＤ３およびＣＤ１９（ブリンサイト、ＭＧＤ０１１）、ＣＤ３およびＢＣＭＡ（ＥＭ８０１）またはＣＤ３およびＣＤ２０（ＲＥＧＮ１９７９）に対する二重特異性治療抗体またはそのフラグメントと組み合わせたＭＰＣ−０７６７組成物を投与することによって血液がんを治療するための方法を提供する。がんがＡＭＬである実施形態において、二重特異性治療抗体またはそのフラグメントは、ＣＤ３およびＣＤ３３（ＡＭＧ−３３０、ＡＭＧ−６７３、ＡＭＶ−６５４）、ＣＤ３およびＣＤ１２３（ＭＧＤ００６／Ｓ８０８８０、ＪＮＪ−６３７０９１７８）、ＣＤ３およびＣＬＬ−１、またはＣＤ３およびＷＴ１を標的とするものを包括し得る。非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および乳がんを含む固形腫瘍の文脈において、二重特異性治療抗体またはそのフラグメントは、ＣＤ３およびＥＧＦＲ（ＥＧＦＲＢｉ−ａＡＴＣ）、ＣＤ３およびＨＥＲ２（エルツマキソマブ）、またはＣＤ３およびＥｐＣＡＭ（カツマキソマブ、ＭＴ１１０／ＡＭＧ  １１０／ソリトマブ）を標的とするものを包括し得る。
【００６３】
[100]実施形態において、追加のＡＰＩは、ＭＰＣ−０７６７組成物との共投与のために、単一剤形で製剤化され得る。追加のＡＰＩはまた、ＭＰＣ−０７６７を含む剤形とは別個に投与されてもよい。追加の活性剤がＭＰＣ−０７６７とは別個に投与される場合、これは、同じもしくは異なる投与ルートによって、および／または同じもしくは異なる時間であることができる。
【００６４】
[101]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で使用するための追加のＡＰＩは、化学療法剤、プロテインキナーゼ阻害剤（ＰＫＩ）、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤、ＣＴＬＡ−４阻害剤、Ｂｃｌ−２経路阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（ＤＮＭＴ）から選択される。
【００６５】
[102]実施形態において、化学療法剤は、白金ベースの抗新生物剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ヌクレオシド代謝阻害剤、アルキル化剤、挿入剤、チューブリン結合剤、ＤＮＡ修復の阻害剤、およびそれらの組合せである。実施形態において、化学療法剤は、ドセタキセル、カルボプラチン、シスプラチンおよびペメトレキセドから選択される。
【００６６】
[103]実施形態において、ＰＫＩは、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２を標的とするＰＫＩである。実施形態において、ＰＫＩは、エルロチニブ、アファチニブ、ラパチニブ、ダコミチニブ、ゲフィチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブおよびＥＧＦ８１６、ならびにそれらの組合せから選択される。
【００６７】
[104]実施形態において、ＦＬＴ３阻害剤は、クレノラニブ、タンデュチニブ、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブから選択される。
[105]実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＤ−１およびそのリガンドのＰＤ−Ｌ１／２のシグナリングを阻害する薬剤であり、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ（Ｔｅｎｅｃｔｒｉｑ（登録商標）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ−４７３６）、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）、ＢＭＳ−９３６５５８）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）、ＭＫ−３４７５）およびＳＨＲ−１２１０から選択される。
【００６８】
[106]実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））である。
[107]実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６およびＷＥＨＩ−５３９から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ベネトクラックスである。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＴＷ−３７（Ｗａｎｇら、Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２００６年１０月１９日；４９（２１）：６１３９〜４２）およびＨＡ１４−１（Ｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ２０００年１月２０日；９７（１３）：７１２４〜９）から選択される。
【００６９】
[108]実施形態において、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤は、ベムラフェニブ、ソラフェニブまたはダブラフェニブ等のＲａｆ阻害剤、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ０３２５９０１、ＧＳＫ１１２０２１２（トラメチニブ）、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＰＤ１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９（ラファメチニブ）、ＰＤ９８０５９、ＢＩＸ  ０２１８９、ＭＥＫ１６２（ビニメチニブ）、ＡＳ−７０３０２６（ピマセルチブ）、ＳＬ−３２７、ＢＩＸ０２１８８、ＡＺＤ８３３０、ＴＡＫ−７３３、コビメチニブまたはＰＤ３１８０８８等のＭＥＫ阻害剤、およびＬＹ３２１４９９６、ＢＶＤ−５２３またはＧＤＣ−０９９４等のＥＲＫ阻害剤から選択される。
【００７０】
[109]実施形態において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＥＰＺ６４３８、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ３４３、ＧＳＫ２８１６１２６、ＭＡＫ−６８３およびＰＦ−０６８２１４９７から選択される。
【００７１】
[110]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で使用するための追加のＡＰＩは、三酸化ヒ素（ＡＴＯ）である。
[111]実施形態において、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（ＤＮＭＴ）は、５’アザシチジンである。
【００７２】
[112]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で使用するための追加のＡＰＩは、ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＩｍｉＤ、抗ＶＥＧＦＲ抗体等のＶＥＧＦ阻害剤、エベロリムスまたはテムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ＤＮＡメチル化阻害剤、ステロイドホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト、代謝酵素阻害剤、プロテアソーム阻害剤、抗ＣＤ２０抗体、アデノシン受容体２Ａアンタゴニスト、ｔｏｌｌ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、および免疫賦活性サイトカインから選択される。
【００７３】
[113]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で使用するための追加のＡＰＩは、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロン、イダルビシンおよびシタラビン、ならびにそれらの組合せから選択される。実施形態において、追加のＡＰＩは、クレノラニブ、シタラビン、ダウノルビシン、ギルテリチニブ、ソラフェニブおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、追加のＡＰＩは、ベネトクラックスである。
【００７４】
[114]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で使用するための追加のＡＰＩは、ｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、デュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＳＲＣ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ｅｒｋ阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤、Ａｋｔ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ｃ−ＭＥＴ阻害剤、ヒストン調節阻害剤、抗有糸分裂剤、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、ポリエーテル抗生物質、ＣＴＬＡ−４阻害剤、多剤耐性排出阻害剤、多剤耐性排出阻害剤、およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）等の治療サイトカインから選択される。
【００７５】
[115]実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ラパマイシン（シロリムスとも称される）、エベロリムス、テムシロリムス、リダフォロリムス、ウミロリムス、ゾタロリムス、ＡＺＤ８０５５、ＩＮＫ１２８、ＷＹＥ−１３２、Ｔｏｒｉｎ−１、ピラゾロピリミジンアナログのＰＰ２４２、ＰＰ３０、ＰＰ４８７、ＰＰ１２１、ＫＵ００６３７９４、ＫＵ−ＢＭＣＬ−２００９０８０６９−１、Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００７５−９ｂ、ＩＮＫ−１２８、ＸＬ３８８、ＡＺＤ８０５５、Ｐ２２８１およびＰ５２９からなる群から選択される。例えば、Ｌｉｕら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ  Ｔｈｅｒ．Ｓｔｒａｔｅｇ．，６（２）：４７〜５５（２００９）を参照されたい。
【００７６】
[116]実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、トランス−４−［４−アミノ−５−（７−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−７−イル］シクロヘキサンカルボン酸（ＯＳＩ−０２７としても公知）、ならびにそれらの任意の塩、溶媒和物、水和物および他の物理的形状、結晶またはアモルファスである。ＵＳ２００７／０１１２００５号を参照されたい。ＯＳＩ−０２７は、参照によって本明細書に組み込まれるＵＳ２００７／０１１２００５号に従って調製されることができる。一実施形態において、ｍＴＯＲ阻害剤は、ＯＸＡ−０１である。例えば、ＷＯ２０１３／１５２３４２Ａ１号を参照されたい。
【００７７】
[117]実施形態において、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＧＳ−１１０１（イデラリシブ）、ＧＤＣ０９４１（ピクチリシブ）、ＬＹ２９４００２、ＢＫＭ１２０（ブパリシブ）、ＰＩ−１０３、ＴＧＸ−２２１、ＩＣ−８７１１４、ＸＬ  １４７、ＺＳＴＫ４７４、ＢＹＬ７１９、ＡＳ−６０５２４０、ＰＩＫ−７５、３−メチルアデニン、Ａ６６、ＰＩＫ−９３、ＰＩＫ−９０、ＡＺＤ６４８２、ＩＰＩ−１４５（デュベリシブ）、ＴＧ１００−１１５、ＡＳ−２５２４２４、ＰＩＫ２９４、ＡＳ−６０４８５０、ＧＳＫ２６３６７７１、ＢＡＹ  ８０−６９４６（コパンリシブ）、ＣＨ５１３２７９９、ＣＡＹ１０５０５、ＰＩＫ−２９３、ＴＧ１００７１３、ＣＺＣ２４８３２およびＨＳ−１７３からなる群から選択される。
【００７８】
[118]実施形態において、デュアルＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤は、ＧＤＣ−０９４、ＷＡＹ−００１、ＷＹＥ−３５４、ＷＡＹ−６００、ＷＹＥ−６８７、Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００７５−１６ｂ、Ｗｙｅｔｈ−ＢＭＣＬ−２００９１００９６−２７、ＫＵ００６３７９４およびＫＵＢＭＣＬ−２００９０８０６９−５、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５、ＸＬ−７６５、ＰＦ−０４６９１５０２、ＧＤＣ−０９８０（アピトリシブ）、ＧＳＫ１０５９６１５、ＰＦ−０５２１２３８４、ＢＧＴ２２６、ＰＫＩ−４０２、ＶＳ−５５８ならびにＧＳＫ２１２６４５８からなる群から選択される。例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｌｉｕら、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．Ｔｏｄａｙ  Ｔｈｅｒ．Ｓｔｒａｔｅｇ．，６（２）：４７〜５５（２００９）を参照されたい。
【００７９】
[119]実施形態において、ｍＴＯＲ経路阻害剤は、ｍＴＯＲ経路における発現レベルもしくは活性またはタンパク質（またはタンパク質をコードする核酸）に結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ロックド核酸またはアプタマー）である。例えば、ポリペプチドまたは核酸は、ｍＴＯＲ複合体１（ｍＴＯＲＣ１）、ｍＴＯＲの調節関連タンパク質（Ｒａｐｔｏｒ）、ＳＥＣ１３タンパク質８による哺乳動物致死（ＭＬＳＴ８）、４０ｋＤａのプロリンリッチＡｋｔ基質（ＰＲＡＳ４０）、ＤＥＰドメイン含有ｍＴＯＲ−相互作用タンパク質（ＤＥＰＴＯＲ）、ｍＴＯＲ複合体２（ｍＴＯＲＣ２）、ラパマイシン非感受性ｍＴＯＲコンパニオン（ＲＩＣＴＯＲ）、Ｇタンパク質ベータサブユニット様（ＧβＬ）、哺乳動物ストレス活性化プロテインキナーゼ相互作用タンパク質１（ｍＳＩＮ１）、パキシリン、ＲｈｏＡ、Ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス毒素基質１（Ｒａｃ１）、細胞分裂制御タンパク質４２ホモログ（Ｃｄｃ４２）、プロテインキナーゼＣα（ＰＫＣα）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼＡｋｔ、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｒａｓ、および／もしくは真核性翻訳開始因子４Ｅ（ｅＩＦ４Ｅ）結合タンパク質（４ＥＢＰｓ）、またはこれらのタンパク質の１つをコードする核酸を阻害する。
【００８０】
[120]実施形態において、ＳＲＣ阻害剤は、ボスチニブ、サラカチニブ、ダサチニブ、ポナチニブ、ＫＸ２−３９１、ＸＬ−２２８、ＴＧ１００４３５／ＴＧ１００８５５およびＤＣＣ２０３６からなる群から選択される。例えば、Ｐｕｌｓら、Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ．  ２０１１年５月；１６（５）：５６６〜５７８を参照されたい。一実施形態において、ＳＲＣ阻害剤は、ＳＲＣタンパク質の発現レベルもしくは活性またはＳＲＣタンパク質をコードする核酸に結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）あるいは核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８１】
[121]実施形態において、ＶＥＧＦ阻害剤は、アキシチニブ、ベバシズマブ、カボザンチニブ、レンバチニブ、モテサニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ソラフェニブおよびスニチニブから選択される。実施形態において、ＶＥＧＦ阻害剤は、ＶＥＧＦタンパク質、ＶＥＧＦレポータータンパク質もしくはこれらのタンパク質の１つをコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。例えば、ＶＥＧＦ阻害剤は、可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、可溶性ＶＥＧＦ−Ｃ／Ｄ受容体（ｓＶＥＧＦＲ−３））である。
【００８２】
[122]実施形態において、ＪＡＫ阻害剤は、ファシチニブ、ルキソリチニブ、バリシチニブ、ＣＹＴ３８７（ＣＡＳ番号１０５６６３４−６８−４）、レスタウルチニブ、パクリチニブおよびＴＧ１０１３４８（ＣＡＳ番号９３６０９１−２６−８）から選択される。一実施形態において、ＪＡＫ阻害剤は、ＪＡＫ（例えば、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３またはＴＹＫ２）もしくはＪＡＫタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８３】
[123]実施形態において、Ｒａｆ阻害剤は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、ＧＳＫ２１１８４３６（ダブラフェニブ）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＡＺ  ６２８、ＮＶＰ−ＢＨＧ７１２、ＳＢ９０８８５、ＺＭ３３６３７２、ＧＷ５０７４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６およびＬＧＸ８１８（エンコラフェニブ）から選択される。実施形態において、Ｒａｆ阻害剤は、Ｒａｆ（例えば、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆまたはＣ−Ｒａｆ）もしくはＲａｆタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８４】
[124]実施形態において、ＥＲＫ阻害剤は、ＬＹ３２１４９９６、ＢＶＤ−５２３およびＧＤＣ−０９９４から選択される。
[125]実施形態において、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤は、上述したＲａｆ阻害剤またはＥｒＫ阻害剤である。実施形態において、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤は、ＡＺＤ６２４４（セルメチニブ）、ＰＤ０３２５９０１、ＧＳＫ１１２０２１２（トラメチニブ）、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＰＤ１８４３５２、ＲＤＥＡ１１９（ラファメチニブ）、ＰＤ９８０５９、ＢＩＸ  ０２１８９、ＭＥＫ１６２（ビニメチニブ）、ＡＳ−７０３０２６（ピマセルチブ）、ＳＬ−３２７、ＢＩＸ０２１８８、ＡＺＤ８３３０、ＴＡＫ−７３３、コビメチニブおよびＰＤ３１８０８８から選択されるＭＥＫ阻害剤である。実施形態において、ＭＥＫ阻害剤は、ＭＥＫ（例えば、ＭＥＫ−１、ＭＥＫ−２）もしくはＭＥＫタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８５】
[126]実施形態において、Ａｋｔ阻害剤は、ＭＫ−２２０６、ＫＲＸ−０４０１（ペリフォシン）、ＧＳＫ６９０６９３、ＧＤＣ−００６８（イパタセルチブ）、ＡＺＤ５３６３、ＣＣＴ１２８９３０、Ａ−６７４５６３、ＰＨＴ−４２７から選択される。実施形態において、Ａｋｔ阻害剤は、Ａｋｔ（例えば、Ａｋｔ−１、Ａｋｔ−２、Ａｋｔ−３）もしくはＡｋｔタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８６】
[127]実施形態において、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、ＬＢ４２７０８またはティピファニブから選択される。一実施形態において、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、ファルネシルトランスフェラーゼもしくはファルネシルトランスフェラーゼタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）あるいは核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【００８７】
[128]実施形態において、ｃ−ＭＥＴ阻害剤は、クリゾチニブ、チバンチニブ、カボザンチニブ、フォレチニブから選択される。一実施形態において、ｃ−ＭＥＴ阻害剤は、ｃ−ＭＥＴもしくはｃ−ＭＥＴタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント、オナルツズマブによって例示される）あるいは核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）あるいはフィクラツズマブもしくはリロツムマブ等のＨＧＦリガンドである。
【００８８】
[129]実施形態において、ヒストン調節阻害剤は、アナカルド酸、Ｃ６４６、ＭＧ１４９（ヒストンアセチルトランスフェラーゼ）、ＧＳＫ  Ｊ４  Ｈｃｌ（ヒストンデメチラーゼ）、ＭＡＫ−６８３（ＰＲＣ２阻害剤）、ＢＩＸ  ０１２９４（ヒストンメチルトランスフェラーゼ）、ＭＫ０６８３（ボリノスタット）、ＭＳ２７５（エンチノスタット）、ＬＢＨ５８９（パノビノスタット）、トリコスタチンＡ、ＭＧＣＤ０１０３（モセチノスタット）、タスキニモド、ＴＭＰ２６９、ネクスツラスタットＡ、ＲＧ２８３３およびＰＤＸ１０１（ベリノスタット）から選択される。実施形態において、ヒストン調節阻害剤は、ＧＳＫ３４３、ＥＰＺ６４３８（タゼメトスタット）、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ２８１６１２６およびＰＦ−０６８２１４９７から選択されるＥＺＨ２阻害剤である。
【００８９】
[130]実施形態において、抗有糸分裂剤は、グリセオフルビン、酒石酸ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、ＡＢＴ−７５１、ＣＹＴ９９７（レキシブリン）、酒石酸ビンフルニン、フォスブレタブリン、ＧＳＫ４６１３６４、ＯＮ−０１９１０（リゴサチブ）、Ｒｏ３２８０、ＢＩ２５３６、ＮＭＳ−Ｐ９３７、ＢＩ  ６７２７（ボラセルチブ）、ＨＭＮ−２１４およびＭＬＮ０９０５から選択される。
【００９０】
[131]実施形態において、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）は、ヴォトリエント、アキシチニブ、ボルテゾミブ、ボスチニブ、カーフィルゾミブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、トラメチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブおよびビスモデギブから選択される。
【００９１】
[132]一実施形態において、ポリエーテル抗生物質は、モネンシンナトリウム、ナイジェリシン、バリノマイシン、サリノマイシンから選択される。
[133]実施形態において、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、トレメリムマブおよびイピリムマブから選択される。
【００９２】
[134]実施形態において、少なくとも１つの追加のＡＰＩは、チェックポイント阻害剤である。これらの化合物を用いる治療は、免疫応答に対するチェックおよびバランスとして役立つ分子を標的とすることによって動作する。これらの阻害分子をブロックすること、または代替として、刺激分子を活性化することにより、これらの治療は、既存の抗がん免疫応答を引き出すまたは強化するように設計される。実施形態において、チェックポイント阻害剤は、抗ＣＤ２７抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗４−１ＢＢ／ＣＤ１３７抗体、抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ−４１６６）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ（商標）、ＰＤ−１抗体）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＰＤ−Ｌ１抗体）、バルリルマブ（ＣＤＸ−１１２７、抗ＣＤ２７抗体）、ＭＧＡ２１７（Ｂ７−Ｈ３を標的とする抗体）、リリルマブ（ＫＩＲ抗体）、ＢＭＳ−９８６０１６（ＬＡＧ−３抗体）、ウレルマブ（４−１ＢＢ／ＣＤ１３７抗体）、抗ＴＩＭ３抗体、ＭＥＤＩ−０５６２（ＯＸ４０抗体）、ＳＥＡ−ＣＤ４０（抗ＣＤ４０抗体）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ４抗体）、抗ＯＸ４０抗体および抗ＣＤ７３抗体等の抗体から選択されてよい。実施形態において、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ７３の小分子阻害剤から選択される（例えば、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ  ２０１６；４（１１  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ＰＲ１０に記載される通り）。実施形態において、チェックポイント阻害剤は、バルリルマブ、ＭＧＡ２１７、リリルマブ、ＢＭＳ−９８６０１６、ウレルマブ、ＭＥＤＩ−０５６２、ＳＥＡ−ＣＤ４０、ＴＲＸ５１８またはＭＫ−４１６６から選択される。
【００９３】
[135]実施形態において、追加のＡＰＩは、オラパリブ、ルカパリブ、ニラパリブ、タラゾパリブ、ベリパリブ、ＣＥＰ−９７２２およびＣＥＰ−８９８３から選択される、ＤＮＡ修復阻害剤である。
【００９４】
[136]実施形態において、追加のＡＰＩは、ｄｄＡＣ、パノビノスタット、エキセメスタン、レトロゾール、エサーチニブ、メレスチニブ、モセチノスタット、エンチノスタット、モトリモッド、イブルチニブ、レナリドマイド、イデラリシブ、エンザルタミド、プレドニゾン、デキサメタゾン、ビンフルニン、ボリノスタット、ガルニセルチブ、ベンダムスチン、オキサリプラチン、ロイコボリン、グアデシタビン、トラメチニブ、ベムラフェニブ、ダカルバジン、アパチニブ、ポマリドマイド、カーフィルゾミブ、ソラフェニブ、５−フルオロウラシル、ＣＢ−８３９、ＣＢ−１１５８、ＧＤＣ−０９１９、ＬＸＨ２５４、ＡＺＤ４６３５、ＡＺＤ９１５０、ＰＬＸ３３９７、ＬＣＬ１６１、ＰＢＦ−５０９、Ｓｙｍ００４、トラスツズマブ、オビヌツズマブ、Ｂ−７０１、ウトミルマブ、リツキシマブ、ＮＫＴＲ−２１４、ＰＥＧインターフェロン２Ａ、ＲＯ７００９７８９、ＭＥＤＩ９４４７、ＭＫ−１２４８、ＬＹ２５１０９２４、ＡＲＲＹ−３８２、ＭＥＤＩ０５６２、ＬＡＧ５２５、ＮＩＳ７９３、ＧＷＮ３２３、ＪＴＸ−２０１１、ＴＳＲ−０２２およびＲＥＧＮ３７６７から選択される。
【００９５】
[137]実施形態において、追加のＡＰＩは、治療が、がんの特異的遺伝子、タンパク質、またはがんの成長および生存に寄与する組織環境を標的とする、標的療法に向けられる。この種類の治療は、健康な細胞への損傷を限定しながら、がん細胞の成長および広がりをブロックする。実施形態において、少なくとも１つの追加のＡＰＩは、治療が、新たな血管を作製するプロセスである血管新生を停止することに焦点を当てる、抗血管新生療法に向けられる。腫瘍は、成長し広がるために血管によって送達される栄養素を必要とするため、抗血管新生療法の目標は、腫瘍を「飢えさせる」ことである。１つの抗血管新生薬、ベバシズマブ（アバスチン）は、転移性腎癌を持つ人々について腫瘍成長を減速させることが示された。インターフェロンと組み合わせたベバシズマブは、腫瘍成長および広がりを減速させる。
【００９６】
[138]実施形態において、追加のＡＰＩは、がんと闘うための体の自然な防衛を引き上げるように設計される、生物学的療法とも呼ばれる免疫療法に向けられる。これは、免疫系機能を、改善させる、標的とするまたは修復するために、体によってまたは実験室でのいずれかで作製された材料を使用する。例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、腎臓がんを治療するために使用された薬物、ならびにＡＭ００１０およびインターロイキン−１５である。これらは、白血球によって生成され、腫瘍細胞の破壊を含む免疫系機能において重要な、サイトカインと呼ばれる細胞ホルモンである。アルファ−インターフェロンは、広がった腎臓がんを治療するために使用される別の種類の免疫療法である。インターフェロンは、がん細胞の表面上のタンパク質を変化させ、それらの成長を減速させると思われる。進行性腎臓がんを持つ患者のための、化学療法と組み合わせたＩＬ−２およびアルファ−インターフェロンの多くの併用療法は、ＩＬ−２またはインターフェロン単独よりも有効である。
【００９７】
[139]実施形態において、追加のＡＰＩは、腫瘍特異的または腫瘍関連抗原に対する免疫応答を導出して、これらの抗原を担持するがん細胞を免疫系が攻撃するのを促すように設計される、がんワクチンである。実施形態において、がんワクチンは、ＡＧＳ−００３、ＤＣＶａｘ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、または患者のがん細胞に由来する個別化ワクチンである。
【００９８】
[140]実施形態において、追加のＡＰＩは、がん細胞を攻撃するように免疫系を活性化するために使用される、組換えタンパク質等の免疫刺激剤である。実施形態において、免疫刺激剤は、デネニコキン（組換えＩＬ−２１）である。
【００９９】
[141]実施形態において、追加のＡＰＩは、がん細胞の排除を促すように免疫系を変調する小分子である。実施形態において、小分子は、エパカドスタットもしくはナボキシモド（いずれもＩＤＯ阻害剤）、またはＰＬＸ３３９７（ＣＳＦ−１Ｒの阻害剤）である。
【０１００】
[142]実施形態において、追加のＡＰＩは、患者から取り出され、遺伝的に修飾または化学物質で処理されてその活性を強化し、次いで、免疫系の抗がん応答を改善させるという目標で患者に再導入された、患者自身の免疫細胞であってよい。
【０１０１】
[143]「併用療法」は、非薬物療法（例えば、手術または放射線治療）とさらに組み合わせた、ＭＰＣ−０７６７の投与も内包する。併用療法が非薬物治療をさらに含む場合、非薬物治療は、治療用化合物および非薬物治療の組合せの共同作用からの有益な効果が達成される限り、任意の好適な時間に行われてよい。例えば、適切な事例において、有益な効果は、非薬物治療が治療用化合物の投与から一時的に、おそらく数日間またはさらには数週間、除去される場合、依然として達成される。
【０１０２】
[144]非薬物治療は、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、抗エストロゲン療法、遺伝子療法、手術（例えば、根治的腎摘出術、部分的腎摘出術、腹腔鏡およびロボット手術）、高周波アブレーションおよび冷凍アブレーションから選択され得る。例えば、非薬物療法は、卵巣の除去（例えば、体内のエストロゲンのレベルを低減させるため）、胸腔穿刺（例えば、胸部から流体を除去するため）、穿刺（例えば、腹部から流体を除去するため）、血管筋腫を除去するもしくは収縮させるための手術、肺移植（および場合により移植による感染症を予防するために抗生物質を用いる）、または酸素療法（例えば、両方の鼻孔に置かれた２つの小型プラスチックチューブもしくはプロングを含有する鼻カニューレを通して、鼻および口に被せて取り付けたフェイスマスクを通して、または経気管酸素療法とも呼ばれる首の前面を通って気管に挿入される小型チューブを通して）である。
診断および治療のためのバイオマーカーアッセイ
[145]実施形態において、本開示は、ＨＳＰ９０阻害剤を用いる処置に対するがんの感受性、特にＭＰＣ−０７６７に対する感受性を予測するために使用することができるバイオマーカーを提供する。この文脈において、「感受性」は、例えば、「がんの治療」という表題の以下の項に記載される、治療に対する応答、またはがんの治療に関連する治療応答性を指す。ＭＰＣ−０７６７などの抗がん療法に対する応答の文脈における用語「応答性」、およびＭＰＣ−０７６７などの抗がん療法を用いる治療に対する感受性の文脈における用語「感受性」は、本明細書において交換可能に使用される。
【０１０３】
[146]実施形態において、本開示は、がんを処置するため、またはＨＳＰ９０阻害剤を用いる処置に対するがんの応答性、特にＭＰＣ−０７６７に対する感受性を予測するための方法であって、ＭＰＣ−０７６７抵抗性または感受性の１つもしくは複数のバイオマーカーの状態を決定または受信するステップを含む、方法を提供する。例えば、本明細書に開示される通り、ＦＬＴ３に活性化突然変異、特にＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異を抱えるＡＭＬがん細胞は、ＭＰＣ−０７６７の細胞毒性活性に非常に感受性である。したがって、本開示は、ＡＭＬを処置するための方法、およびＨＳＰ９０阻害剤を用いる処置に対する応答性、特にＭＰＣ−０７６７に対しする感受性を予測するための方法であって、ＡＭＬのＦＬＴ３の状態を決定または受信するステップを含む、方法を提供する。
【０１０４】
[147]さらなる実施形態において、ＭＰＣ−０７６７抵抗性または感受性の１つもしくは複数のバイオマーカーは、正常もしくは野生型のＦＬＴ３の状態を有するＡＭＬ細胞におけるＮＲＡＳまたはＫＲＡＳの活性化突然変異である。この文脈において、用語「正常」および「野生型」は、正常な活性を有するタンパク質を産生する遺伝子の野生型アレルを指すために交換可能に使用される。本明細書に記載される通り、正常なＦＬＴ３の状態を有するＡＭＬ細胞におけるＮＲＡＳまたはＫＲＡＳの活性化突然変異は、がん細胞が、ＭＰＣ−０７６７を用いる処置に抵抗性である可能性があるが、ＭＰＣ−０７６７およびＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路阻害剤を含む併用療法を用いる処置に応答性である可能性があることを示す。
【０１０５】
[148]さらなる実施形態において、ＭＰＣ−０７６７抵抗性または感受性の１つもしくは複数のバイオマーカーは、ＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異またはＦＬＴ３チロシンキナーゼドメイン（ＦＬＴ３−ＴＫＤ）突然変異である。
【０１０６】
[149]さらなる実施形態において、ＭＰＣ−０７６７抵抗性または感受性の１つもしくは複数のバイオマーカーは、ＫＤＭ６ＡまたはＥＺＨ２である。本明細書に記載される通り、ＫＤＭ６Ａの機能喪失突然変異は、がん細胞が、ＭＰＣ−０７６７を用いる処置に抵抗性である可能性があるが、ＭＰＣ−０７６７およびＥＺＨ２阻害剤を含む併用療法を用いる処置に応答性である可能性があることを示す。実施形態において、ＥＺＨ２機能喪失突然変異は、ＭＰＣ−０７６７単剤療法に応答性であるがんにおいてもたらされると予測され、ＥＺＨ２機能獲得突然変異は、ＭＰＣ−０７６７単剤療法に抵抗性であるがんにおいてもたらされると予測される。
【０１０７】
[150]本開示は、ＭＰＣ−０７６７の細胞毒性活性へのがん細胞の高い感受性を示すバイオマーカーを提供する。実施形態において、本開示は、遺伝子をコードするポリヌクレオチド配列、例えば、ＦＬＴ３、ＮＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＫＤＭ６ＡおよびＥＺＨ２における１つまたは複数のバリアントの形態の遺伝子バイオマーカーを提供する。実施形態において、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされるタンパク質におけるアミノ酸変化をもたらし得る。実施形態において、バイオマーカーは、遺伝子発現、例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質存在量、例えば、ＫＲＡＳまたはＮＲＡＳの発現レベルのマーカーである。
【０１０８】
[151]実施形態において、ＮＲＡＳまたはＫＲＡＳにおける１つもしくは複数の活性化突然変異は、ＫＲＡＳのＡ１４６ＴおよびＧ１３Ｄ；またはＮＲＡＳのＱ６１Ｌ、Ｑ６１ＨおよびＧ１２Ｄからなる群から選択されるアミノ酸変化をもたらす、Ｒａｓタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列における突然変異である。実施形態において、ＫＲＡＳにおける１つまたは複数の活性化突然変異は、ＫＲＡＳ  Ｇ１２（Ｖ、Ｃ、Ｓ、Ｒ、Ｄ、Ｎ、Ａ）、Ｇ１３（Ｄ、Ｃ）、Ｑ２２Ｋ、Ｑ６１（Ｈ、Ｌ、Ｒ）およびＫ１１７ＮＡ１４６（Ｔ／Ｖ）から選択され、ここで、文字の意味は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名法委員会によって推奨される１文字アミノ酸記号を指す。
【０１０９】
[152]実施形態において、１つまたは複数のバリアントは、分子シグナリングまたは合成経路、例えば、Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路、Ｂｃｌ−２経路またはヒストンメチルトランスフェラーゼ／デメチラーゼ経路の部分である遺伝子のポリヌクレオチド配列におけるバリアントである。
【０１１０】
[153]実施形態において、本明細書に記載される方法は、対象からのがん細胞の生物学的試料中における、本明細書において開示される１つまたは複数のバイオマーカーの存在を決定するステップを含み得る。上記で指摘されている通り、バイオマーカーは、ポリヌクレオチド配列における１つまたは複数のバリアントの形態の遺伝子バイオマーカーであり得、これは、コードされるタンパク質におけるアミノ酸変化をもたらし得る。したがって、本明細書に記載される方法は、ポリヌクレオチド配列における１つまたは複数のバリアントを検出するステップを含み得る。バリアントがタンパク質をコードする遺伝子のエクソンにある場合、バリアントは、がん細胞のゲノムＤＮＡ中またはＲＮＡ中のいずれかで検出され得る。
【０１１１】
[154]実施形態において、方法は、１つまたは複数の遺伝子バイオマーカーの存在を検出するために対象の遺伝子型を決定するステップを含み得る。遺伝子型は、当技術分野で公知の技法、例えば、ＰＣＲに基づく方法、ＤＮＡシークエンシング、５’エキソヌクレアーゼ蛍光アッセイ、プローブハイブリダイゼーションによるシークエンシング、ドットブロット法、およびオリゴヌクレオチドアレイハイブリダイゼーション解析、例えば、ハイスループットまたは低密度アレイ技術（マイクロアレイおよび遺伝子チップとも称される）、ならびにそれらの組合せによって決定され得る。他の特異的な技法は、動的アレル特異的ハイブリダイゼーション、分子ビーコン、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）に基づく方法、フラップエンドヌクレアーゼに基づく方法、プライマー伸長法、５’−ヌクレアーゼに基づく方法、オリゴヌクレオチドリガーゼアッセイ、一本鎖高次構造多型アッセイ（ＳＳＣＰ）、温度勾配ゲル電気泳動、変性高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高分解能融解分析、ＤＮＡミスマッチ結合法、キャピラリー電気泳動および次世代シークエンシング（ＮＧＳ）法を含み得る。ＳＮＰを検出するために使用することができるリアルタイムＰＣＲ法は、例えば、Ｔａｑｍａｎまたは分子ビーコンに基づくアッセイ（米国特許第５，２１０，０１５号、同第５，４８７，９７２号、およびＰＣＴ  ＷＯ９５／１３３９９号）を含む。ジェノタイピング技術はまた、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）等の会社から市販されている。
【０１１２】
[155]実施形態において、遺伝子型は、直接手動シークエンシング、自動蛍光シークエンシング、一本鎖高次構造多型アッセイ（ＳＳＣＰ）、クランプ変性ゲル電気泳動（ＣＤＧＥ）、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）、移動度シフト解析、制限酵素解析、ヘテロ二本鎖分析、化学的ミスマッチ切断（ＣＭＣ）およびＲＮａｓｅ保護アッセイから選択される方法によって決定され得る。
【０１１３】
[156]実施形態において、バイオマーカーの存在を検出する方法は、ＳＮＰ特異的プライマーのセットを対象からのがん細胞の試料から抽出されたＤＮＡと接触させるステップ、プライマーをＤＮＡに結合させるステップ、およびポリメラーゼ連鎖反応を使用してＤＮＡの領域を含有するＳＮＰを増幅するステップを含み得る。
【０１１４】
[157]実施形態において、本明細書に記載される方法は、コンピューターシステムにおいて、本明細書に記載される１つまたは複数のバイオマーカーについての患者の遺伝子型を受信するステップを含み得る。一実施形態において、使用者は、コンピューターシステムに患者の遺伝子型を入力する。一実施形態において、患者の遺伝子型は、患者の遺伝子型の決定に使用される装置から直接受信される。
【０１１５】
[158]さらなる実施形態において、バイオマーカーは、遺伝子発現、例えば、ｍＲＮＡまたはタンパク質存在量のマーカーであり得る。本明細書に記載されるバイオマーカーの遺伝子発現を検出するための適切な方法は、マイクロアレイ発現解析を含む方法、ＰＣＲに基づく方法、インサイチュハイブリダイゼーション、ノーザン免疫ブロット法および関連するプローブハイブリダイゼーション技法、ｎＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標）等の単一分子イメージング技術、またはＲＮＡ−ｓｅｑ（商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）およびＳＡＧＥ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）等の次世代シーケンシング方法、ならびに先述の組合せを含む。実施形態において、方法は、免疫組織化学的検査、質量分光光度法、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着測定法、ウエスタン免疫ブロット法および関連プローブハイブリダイゼーション技法、マルチプレックスイムノアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ（商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、ＳＩＭＯＡ（商標））、ｎＣｏｕｎｔｅｒ（登録商標）等の単一分子イメージング技術、ならびにＳＯＭＡｓｃａｎ（登録商標）等のアプタマーに基づくマルチプレックスプロテオミクス技術の内の１つまたは複数を含む適切な方法を使用するタンパク質発現の検出を含み得る。
【０１１６】
[159]実施形態において、方法は、例えば生検の手順によって、治療を必要とする対象からがん細胞の生物学的試料を得るステップをさらに含み得る。この文脈において、生検の手順は、対象からのがん細胞またはがん細胞を含む組織の試料を抽出するステップを含む。生検は、例えば、切開生検、コア生検、または吸引生検、例えば、穿刺吸引として実施されてよい。
【０１１７】
[160]実施形態において、方法は、全血からがん細胞の生物学的試料を得るステップをさらに含み得る。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）
[161]ＡＭＬは、重大な満たされていない医学的必要性および限定的な治療の選択肢を伴う造血器がんである。ＡＭＬにおける疾患の多様性に寄与し、新たな標的療法の開発における歴史的な困難さを説明する可能性がある、複数の遺伝子病変が同定されている。例えば、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｔｌａｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｅｔｗｏｒｋ，ＮＥＪＭ  ２０１３  ３６８：２０５９；Ｇｒｉｍｗａｄｅら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１６  １２９：２９；Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌら、ＮＥＪＭ  ２０１６；３７４：２２０９；Ｂｒｅｉｔｅｎｂｕｅｃｈｅｒら、Ｂｌｏｏｄ  ２００９  １１３：４０７４；Ｋｉｎｄｌｅｒら、Ｂｌｏｏｄ  ２００５  １０５：３３５を参照されたい。細胞表面受容体のｆｍｓ様チロシンキナーゼ（ＦＬＴ３）の突然変異は、約３０％のＡＭＬ患者において見られ、著しい予後不良に関連する（Ｐａｐａｅｍｍａｎｕｉｌら、ＮＥＪＭ  ２０１６；３７４：２２０９）。ＦＬＴ３突然変異は、２つの一般的なカテゴリーにある。第１は、構成的活性化につながるチロシンキナーゼドメインの活性化ループ内、例えばＤ８３５で出現する点突然変異である。構成的に活性なＦＬＴ３につながる特異的な点突然変異は、Ｆ６９１、Ｄ８３５、Ｎ６７６、Ｉ８３６およびＹ８４２の残基での突然変異を含む（Ｋｉｎｄｌｅｒら、Ｂｌｏｏｄ  ２００５）。第２は、受容体の膜近傍ドメインにおいてまたは隣接して出現する内部タンデム重複（ＦＬＴ３−ＩＴＤ）である。これらの突然変異は、３から４００を超える塩基対の範囲のサイズにおいて変動することができる。これらは常に３の多重度で出現するので、リーディングフレームは維持される。これらの重複は、通常、ＦＬＴの５９０〜６００の残基に近いエクソン１４内に含有される。ＩＴＤは、キナーゼドメイン内でも観察されている（Ｂｒｅｉｔｅｎｂｕｅｃｈｅｒら、Ｂｌｏｏｄ  ２００９）。ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異を持つ受容体は、構造的に自己リン酸化され、したがって構成的に活性である。ＦＬＴ３経路は、細胞の生存、ならびにＪＡＫ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ５、ＰＩ３−ＫおよびＡＫＴを含む細胞増殖に関与する下流のキナーゼを活性化する。ＰＫＩのミドスタウリンは、ＡＭＬを治療するためにＦＤＡで承認されている。ＦＬＴ３は、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質であり、ＨＳＰ９０は、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異体タンパク質を安定化する。より高いＨＳＰ９０レベルは、導入療法後のＡＭＬ患者の予後不良に関連する。
【０１１８】
[162]ＡＭＬに対する標準ケア治療は、シタラビンおよびダウノルビシン等のアントラサイクリンを用いる初期導入療法、続いて、シタラビン、ミトキサントロン（mitxantrone）および／またはエトポシド等の追加の細胞毒性剤を用いる地固め療法の組合せである。Ｒａｍｏｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．  ２０１５  ６：６６５；ＰｒａｔｚおよびＬｅｖｉｓ、Ｂｌｏｏｄ  ２０１７  １２９：５６５を参照されたい。最近、ミドスタウリンが、「標準ケア」のシタラビンおよびアントラサイクリンの導入と組み合わせた第１選択療法として、米国食品医薬品局によって承認された。追加のＦＬＴ３阻害剤は、概してタンパク質のチロシンキナーゼ阻害剤と一緒にとしてではあるが、臨床開発中であり（Ｓｔｏｎｅら、ＮＥＪＭ  ２０１７  ３７７：４５４）、ＦＬＴ３阻害剤に対する抵抗性の発達は依然として懸念されているままである。例えば、Ｗｅｉｓｂｅｒｇら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０１０  １９：５１２０を参照されたい。薬物抵抗性の１つの重要な機序は、阻害剤の結合を低減させるＦＬＴ３において獲得された突然変異である。例えば、ミドスタウリンを用いて治療されたＦＬＴ３  ＩＴＤの患者は、キナーゼドメイン内のＮ６７６Ｋの位置での突然変異により抵抗性が発達し（Ｈｅｉｄｅｌら、Ｂｌｏｏｄ．２００６）、ＦＬＴ３  Ｄ８３５およびゲートキーパーのＦ６９１Ｌ突然変異は、キザルチニブおよびソラフェニブに対する抵抗性を付与する。加えて、クレノラニブに対して不応性の患者からのＡＭＬ芽細胞は、Ｆ６９１Ｌ突然変異を含有しており、これらの芽細胞のエクスビボのアッセイにより、クレノラニブおよびギルテリチニブに対する抵抗性を確認した（Ｌｅｅら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１７）。これらの所見は、Ｆ６９１Ｌ突然変異が、クレノラニブおよびギルテリチニブの効力を低減させるという意見を裏付ける。薬物抵抗性の発達のための別の機序は、例えば細胞内微小環境における間質因子に対する応答において、他のシグナリング経路の活性化による。
【０１１９】
[163]下記の実施例でさらに詳細に記載される通り、ＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異を有するＡＭＬ細胞は、予想外に、インビトロおよびインビボの両方で、ＭＰＣ−０７６７を用いる治療に対して感受性である。注目すべきことに、複数の異なる機序を介して（例えば、ＦＬＴ３における突然変異の獲得および間質シグナリングを介して）他のタンパク質のチロシンキナーゼ阻害剤に対する抵抗性が発達したＡＭＬ細胞もＭＰＣ−０７６７に対して感受性のままである。加えて、ＭＰＣ−０７６７は、原発性ＡＭＬ細胞においてＰＤ−Ｌ１発現を誘発するインターフェロンガンマを無効にする。さらに、ＭＰＣ−０７６７は、ダウノルビシン、ベネトクラックス、シタラビン、クレノラニブ、ギルテリチニブおよびソラフェニブを含むＡＭＬを治療するために使用される若干数の他の活性剤と相乗的に作用する。ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞を使用する全身性異種移植研究においてベネトクラックスと相乗作用する驚くべき能力および動物の生存の有意な改善も示した。これらを基に、本明細書で提示される結果は、単剤療法および他のＡＰＩとの組合せの両方で、ＡＭＬおよび他のがんを治療するための魅力的な新たな療法として、ＭＰＣ−０７６７を裏付ける。
【０１２０】
[164]したがって、本開示は、対象に治療有効量のＭＰＣ−０７６７を投与することによる、それを必要とする対象におけるＡＭＬを治療する方法を提供する。実施形態において、必要とする対象は、対象のＡＭＬが、ＦＬＴ３  ＩＴＤ突然変異、ＦＬＴ３  Ｄ８３５、ＦＬＴ３  Ｉ８３６およびＦＬＴ３  Ｎ６７６Ｋ、またはゲートキーパー残基のＦ６９１から選択されるＦＬＴ３における１つまたは複数の活性化突然変異を有することによって特徴付けられる対象である。実施形態において、ＡＭＬは、再発／プロテインキナーゼ阻害剤を用いる治療に対して不応性である。実施形態において、ＡＭＬは、再発／ＦＬＴ３プロテインキナーゼ阻害剤を用いる治療に対して不応性である。実施形態において、ＡＭＬは、再発／ギルテリチニブ、クレノラニブ、タンデュチニブ、ミドスタウリン、キザルチニブおよびソラフェニブの内の１つもしくは複数を用いる治療に対して不応性である。
【０１２１】
[165]実施形態において、本開示は、ＡＭＬの標準ケア治療と組み合わせたＭＰＣ−０７６７を含む併用療法の方法も提供する。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７は、シタラビンおよびアントラサイクリンを用いる初期導入療法の後に投与される。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７は、初期導入療法の後に単独で、またはミドスタウリン、キザルチニブ、ギルテリチニブ、クレノラニブ、タンデュチニブ、ベネトクラックスおよびソラフェニブの内の１つもしくは複数との組合せで投与される。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７は、ベネトクラックスともに投与される。
【０１２２】
[166]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７は、５’アザシチジンまたはデシタビン等のＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤を含む初期療法の後に投与される。実施形態において、ＭＰＣ−０７６７は、単独、またはＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤と組み合わせてのいずれかで投与される。
【０１２３】
[167]実施形態において、本開示は、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびイダルビシン等のアントラサイクリン；シタラビン；ミドスタウリン、ソラフェニブ（ｓｏｒｅｆｅｎｉｂ）、クレノラニブ、キザルチニブ、タンデュチニブ、ギルテリチニブ、レスタウルチニブ、ドビチニブ、パクリチニブおよびＸＬ９９９等のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）；エトポシド、フルダラビン、Ｇ−ＣＳＦ、アザシチジン、デシタビン、ベネトクラックス、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、Ｓ５５７４６、ＡＴ−１０１（ゴシポール）およびＡＰＧ−１２５２、ならびに先述のいずれかの組合せから選択される１つまたは複数の追加のＡＰＩと組み合わせたＭＰＣ−０７６７を含む併用療法の方法も提供する。
【０１２４】
[168]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７との併用療法で投与するための追加のＡＰＩは、三酸化ヒ素（トリセノックス）、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、クラフェン（シクロホスファミド）、シクロホスファミド、シタラビン（タラビンＰＦＳ）、サイトサール−Ｕ（シタラビン）、サイトキサン（シクロホスファミド）、ダウノルビシン塩酸塩（ルビドマイシン）、ドキソルビシン塩酸塩、エナシデニブメシル酸塩、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩ｉｄｈｉｆａ（エナシデニブメシル酸塩）、ミドスタウリン（Ｒｙｄａｐｔ）、ミトキサントロン塩酸塩、ネオサール（シクロホスファミド）、チオグアニン（タブロイド）、硫酸ビンクリスチン（ビンカサールＰＦＳ）、アザシチジンおよびデシタビン、ならびに先述のいずれかの組合せから選択される。
【０１２５】
[169]実施形態において、追加のＡＰＩは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤またはＢｃｌ−２経路阻害剤である。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ−４７３６）、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ＭＫ−３４７５）およびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択される。
【０１２６】
[170]実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６およびＷＥＨＩ−５３９からなる群から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ベネトクラックスである。
【０１２７】
[171]実施形態において、Ｒａｆ阻害剤は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、ＧＳＫ２１１８４３６（ダブラフェニブ）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＡＺ  ６２８、ＮＶＰ−ＢＨＧ７１２、ＳＢ９０８８５、ＺＭ３３６３７２、ＧＷ５０７４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６およびＬＧＸ８１８（エンコラフェニブ）から選択される。実施形態において、Ｒａｆ阻害剤は、Ｒａｆ（例えば、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−ＲａｆまたはＣ−Ｒａｆ）もしくはＲａｆタンパク質をコードする核酸の発現レベルまたは活性を結合および阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体またはそのフラグメント）または核酸（例えば、二本鎖低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、モルホリノ、ロックド核酸またはアプタマー）である。
【０１２８】
[172]実施形態において、ＥＺＨ２阻害剤は、ＧＳＫ３４３、ＥＰＺ６４３８（タゼメトスタット）、ＣＰＩ−１２０５、ＧＳＫ２８１６１２６およびＰＦ−０６８２１４９７から選択される。
【０１２９】
[173]実施形態において、ＡＭＬは、ＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異によって特徴付けられ、方法は、追加のＡＰＩとしてベネトクラックスを含む。
[174]実施形態において、治療を必要とする対象は、がんが、ギルテリチニブ、ミドスタウリンまたはソラフェニブを用いる治療に対して不応性であるか、またはそれでの治療後に再発した対象である。
慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）
[175]ＣＬＬは、成人における最も一般的な種類の白血病の１つである。ＣＬＬは、異常なリンパ球の進行性の蓄積によって特徴付けられる。未治療のＣＬＬ患者の約１０％は、腫瘍抑制活性を取り除く１７ｐ染色体の欠失を持つ。この突然変異は、再発したＣＬＬを有する患者の約２０％で出現する。経口ベネトクラックスは、再発または不応性がんを有し、１７ｐ突然変異を持つ患者におけるＣＬＬの治療のために、米国食品医薬品局によって承認されている。
【０１３０】
[176]上記で論じられ、下記でさらに詳細に示される通り、ベネトクラックスと組み合わせたＭＰＣ−０７６７は、顕著な相乗的活性を示した。これらの結果は、ＭＰＣ−０７６７が、Ｂｃｌ−２阻害剤と組み合わせて投与される場合、特に有効であり得ることを示唆する。上記で指摘され、実施例でさらに記載される通り、ＭＰＣ−０７６７は、原発性ＡＭＬ細胞におけるＰＤ−１発現を誘発するインターフェロンガンマも無効化し、ＭＰＣ−０７６７が、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤との組合せにおいても特に有効であり得ることを示唆する。したがって、本開示は、対象に１つまたは複数の追加のＡＰＩと組み合わせた治療有効量のＭＰＣ−０７６７を投与することによる、それを必要とする対象におけるＣＬＬを治療する方法も提供する。実施形態において、追加のＡＰＩは、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤またはＢｃｌ−２経路阻害剤である。実施形態において、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＡＭＰ−２２４、ＡＭＰ−５１４／ＭＥＤＩ−０６８０、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＢＭＳ９３６５５９、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ−４７３６）、ＪＴＸ−４０１４、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ＭＫ−３４７５）およびＳＨＲ−１２１０からなる群から選択した。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ＡＴ−１０１（ゴシポール）、ＡＰＧ−１２５２、Ａ１１５５４６３、Ａ１２１０４７７、ナビトクラックス、オバトクラックス、サブトクラックス、ベネトクラックス、Ｓ５５７４６およびＷＥＨＩ−５３９からなる群から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＢＣＬ２、ＢＣＬＸＬまたはＭＣＬ１の阻害剤である。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＭＧ−１７６、ＭＩＫ６６５およびＳ６４１３１５から選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ＡＢＴ−７３７、ナビトクラックスおよびベネトクラックスから選択される。実施形態において、Ｂｃｌ−２経路阻害剤は、ベネトクラックスである。
非小細胞性肺がん（ＮＳＣＬＣ）
[177]ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２は、細胞分化、増殖、運動性および生存率を調節する細胞内シグナル伝達経路を開始する膜貫通プロテインキナーゼ受容体である。これらの受容体の異常活性化は、受容体による構成的シグナリングおよび付随経路の活性化をもたらす、点突然変異、欠失または挿入によって生じることができる。これらの受容体の異常活性化は、ＮＳＣＬＣを含む種々の種類のがんの発癌に直接関連する。
【０１３１】
[178]ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２は両方とも、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質でもある。ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２は、ＨＳＰ９０阻害剤を用いる治療の際に、プロテアソーム依存性の方式で分解することがそれぞれ示されている。
【０１３２】
[179]ＮＳＣＬＣの約４〜２０％は、ＥＧＦＲｉｎｓ２０突然変異によって特徴付けられる。これらの突然変異を有するがんはまた、概して、ＥＧＦＲ標的療法に不能性であるか、またはＥＧＦＲ標的化ＰＫＩを含むこのような療法後に再発している。
【０１３３】
[180]したがって、本開示は、ＨＳＰ９０の薬理学的阻害の使用による、ＥＧＦＲおよびＨＥＲの突然変異体を安定化するＨＳＰ９０におけるある特定のＮＳＣＬＣがんの依存性を活用するために探索された方法を提供する。特に、方法は、ＥＧＦＲおよび／またはＨＥＲ２のエクソン２０における突然変異を抱えるＮＳＣＬＣがんの敏感性を活用する。
【０１３４】
[181]実施形態において、本開示は、その治療を必要とする対象においてＮＳＣＬＣを治療する方法であって、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩を対象に投与するステップを含む、方法を提供する。実施形態において、対象は、ＮＳＣＬＣに対する「標準ケア」もしくは第１選択治療剤を用いる治療に対して非応答性もしくは不応性であるか、それでの治療後に再発したがんを有する対象である。
【０１３５】
[182]実施形態において、本開示は、上記で論じられた通り、ＭＰＣ−０７６７および１つまたは複数の追加のＡＰＩを用いる併用療法に基づいてＮＳＣＬＣを治療する方法も提供する。実施形態において、追加のＡＰＩは、アファチニブ、ＡＰ３２７８８、ポジオチニブ、オシメルチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ブラガチニブ（ｂｒａｇａｔｉｎｉｂ）、ダコミチニブ、ラパチニブ、ＡＰ３２７８８、クリゾチニブ、ブリガチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ＡＰ２６１１３、ＰＦ−０６４６３９２２、Ｘ−３９６、ＲＸＤＸ−１０１、ダブラフェニブ、トレメチニブ、ニンテダニブ、アベマシクリブ、ＡＢＰ２１５、ベバシズマブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、イピリムマブ、デノスマブ、トレメリムマブ、バビツキシマブ、ニボルマブ（nivulomab）、アテゾリズマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、カルボプラチン、シスプラチン、ドセタキセル、ゲムシタビン、Ｎａｂ−パクリタキセル、パクリタキセル（タキソール）、ペメトレキセド、ビノレルビン、エトポシド、アルドキソルビシン、トポテカン、イリノテカン、および先述のいずれかの組合せから選択される。
ＭＰＣ−０７６７の治療有効量
[183]本明細書に記載される方法の文脈において、対象に投与されるＭＰＣ−０７６７の量は、治療有効量である。用語「治療有効量」は、治療されている疾患もしくは障害を治療する、その症状を改善する、その重症度を低減させる、もしくはその持続期間を低減させるために十分な量を指すか、あるいは併用療法の文脈において、別の療法または活性医薬成分の治療効果を改善することができる量も含み得る。本開示の文脈において、治療有効量は、本明細書に記載される通り、その治療を必要とする対象におけるがんを治療するために十分な量である。
【０１３６】
[184]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩の治療有効量は、単一用量または分割用量で、ヒト対象の総体重に基づいて、１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。実施形態において、範囲は、１日に１回、２回または３回に分割された、１０〜１０００ｍｇ、または５０〜５００ｍｇである。
【０１３７】
[185]実施形態において、治療有効量は、１日に１回、２回または３回に分割された、約１０ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約７５０ｍｇまたは約１０００ｍｇである。
【０１３８】
[186]実施形態において、治療有効量は、１日に１回、２回または３回に分割された、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇまたは約５００ｍｇである。
【０１３９】
[187]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩の治療有効量は、１，５００ｎｇ／ｍｌ〜３０，０００ｎｇ／ｍｌ、好ましくは、６，０００ｎｇ／ｍｌ〜３０，０００ｎｇ／ｍｌまたは６，０００ｎｇ／ｍｌ〜１５，０００ｎｇ／ｍｌの範囲の１日用量で対象の血漿Ｃｍａｘを達成するのに十分な量である。
がんの治療
[188]本明細書において使用される場合、「治療」、「治療すること」または「治療する」は、疾患、状態または障害に対抗する目的のための患者の管理およびケアを記載するものであり、疾患、状態もしくは障害の症状または合併症を軽減するため、あるいは疾患、状態または障害を排除するための、ＭＰＣ−０７６７の投与を含む。
【０１４０】
[189]ＭＰＣ−０７６７を用いる単剤療法および１つまたは複数の追加のＡＰＩとの併用療法の両方を含む、本明細書に記載される方法のいずれかの実施形態において、ＭＰＣ−０７６７またはその組合せの投与は、治療されているがんの症状または合併症の排除につながるが、がんの排除は要求されない。一実施形態において、症状の重症度は、減少する。がんの文脈において、そのような症状は、腫瘍が、成長因子を分泌する、細胞外マトリックスを分解する、血管新生される、並列する組織との接着を喪失するまたは転移する程度、ならびに転移の数、および腫瘍サイズおよび／または体積における低減を含む、重症度または進行の臨床マーカーを含んでよい。
【０１４１】
[190]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、腫瘍のサイズにおける低減をもたらすことができる。腫瘍のサイズにおける低減は、「腫瘍退縮」とも称され得る。好ましくは、治療後、腫瘍サイズは、治療前のそのサイズと比べて、５％以上低減される；より好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上低減される；より好ましくは、２０％以上低減される；より好ましくは、３０％以上低減される；より好ましくは、４０％以上低減される；さらに一層好ましくは、５０％以上低減される；最も好ましくは、７５％以上を超えて低減される。腫瘍のサイズは、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。腫瘍のサイズは、腫瘍の直径として測定されてよい。
【０１４２】
[191]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、腫瘍体積における低減をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍体積は、治療前のそのサイズと比べて、５％以上低減される；より好ましくは、腫瘍体積は、１０％以上低減される；より好ましくは、２０％以上低減される；より好ましくは、３０％以上低減される；より好ましくは、４０％以上低減される；さらに一層好ましくは、５０％以上低減される；最も好ましくは、７５％以上を超えて低減される。腫瘍体積は、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。
【０１４３】
[192]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、腫瘍の数における減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍数は、治療前の数と比べて、５％以上低減される；より好ましくは、腫瘍数は、１０％以上低減される；より好ましくは、２０％以上低減される；より好ましくは、３０％以上低減される；より好ましくは、４０％以上低減される；さらに一層好ましくは、５０％以上低減される；最も好ましくは、７５％を超えて低減される。腫瘍の数は、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。腫瘍の数は、肉眼でまたは指定倍率で見える腫瘍をカウントすることによって、測定されてよい。好ましくは、指定倍率は、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍または５０倍である。血液がんでは、カウントは、血液試料中のがんに関係する細胞（例えば、リンパ腫または白血病細胞）の数であってよい。
【０１４４】
[193]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、原発腫瘍部位から遠い他の組織または臓器内の転移病変の数における減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、転移病変の数は、治療前の数と比べて、５％以上低減される；より好ましくは、転移病変の数は、１０％以上低減される；より好ましくは、２０％以上低減される；より好ましくは、３０％以上低減される；より好ましくは、４０％以上低減される；さらに一層好ましくは、５０％以上低減される；最も好ましくは、７５％を超えて低減される。転移病変の数は、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。転移病変の数は、肉眼でまたは指定倍率で見える転移病変をカウントすることによって、測定されてよい。好ましくは、指定倍率は、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍または５０倍である。
【０１４５】
[194]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、担体単独を受けている集団と比較した、治療された対象の集団の平均生存時間における増大をもたらすことができる。好ましくは、平均生存時間は、３０日を超えて；より好ましくは、６０日を超えて；より好ましくは、９０日を超えて；最も好ましくは、１２０日を超えて増大する。集団の平均生存時間における増大は、任意の再現可能な手段によって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について治療開始後の平均生存長さを算出することによって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について第１回治療の完了後の平均生存長さを算出することによって測定されてもよい。
【０１４６】
[195]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、未治療対象の集団と比較した、治療された対象の集団の平均生存時間における増大をもたらすことができる。好ましくは、平均生存時間は、３０日を超えて；より好ましくは、６０日を超えて；より好ましくは、９０日を超えて；最も好ましくは、１２０日を超えて増大する。集団の平均生存時間における増大は、任意の再現可能な手段によって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について治療開始後の平均生存長さを算出することによって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について第１回治療の完了後の平均生存長さを算出することによって測定されてもよい。
【０１４７】
[196]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、ＭＰＣ−０７６７ではない薬物を用いる単剤療法を受けている集団と比較した、治療された対象の集団の平均生存時間における増大をもたらすことができる。好ましくは、平均生存時間は、３０日を超えて；より好ましくは、６０日を超えて；より好ましくは、９０日を超えて；最も好ましくは、１２０日を超えて増大する。集団の平均生存時間における増大は、任意の再現可能な手段によって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について治療開始後の平均生存長さを算出することによって測定されてよい。集団の平均生存時間における増大は、例えば、集団について第１回治療の完了後の平均生存長さを算出することによって測定されてもよい。
【０１４８】
[197]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、担体単独を受けている集団と比較した、治療された対象の集団の死亡率における減少をもたらすことができる。本明細書に記載される方法に従って障害、疾患または状態を治療することは、未治療集団と比較した、治療された対象の集団の死亡率における減少をもたらすことができる。本明細書に記載される方法に従って障害、疾患または状態を治療することは、ＭＰＣ−０７６７ではない薬物を用いる単剤療法を受けている集団と比較した、治療された対象の集団の死亡率における減少をもたらすことができる。好ましくは、死亡率は、２％を超えて；より好ましくは、５％を超えて；より好ましくは、１０％を超えて；最も好ましくは、２５％を超えて減少する。治療された対象の集団の死亡率における減少は、任意の再現可能な手段によって測定されてよい。集団の死亡率における減少は、例えば、集団について治療開始後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を算出することによって測定されてよい。集団の死亡率における減少は、例えば、集団について第１回治療の完了後の単位時間当たりの疾患関連死の平均数を算出することによって測定されてもよい。
【０１４９】
[198]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、腫瘍成長率における減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍成長率は、治療前の数と比べて、少なくとも５％低減される；より好ましくは、腫瘍成長率は、少なくとも１０％低減される；より好ましくは、少なくとも２０％低減される；より好ましくは、少なくとも３０％低減される；より好ましくは、少なくとも４０％低減される；より好ましくは、少なくとも５０％低減される；さらに一層好ましくは、少なくとも５０％低減される；最も好ましくは、少なくとも７５％低減される。腫瘍成長率は、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。腫瘍成長率は、単位時間当たりの腫瘍直径の変化に従って測定されることができる。一実施形態において、治療後、腫瘍成長率は、約ゼロであってよく、例えば、腫瘍が成長を停止した、同じサイズを維持することが決定される。
【０１５０】
[199]本明細書に記載される方法に従ってがんを治療することは、腫瘍再成長における減少をもたらすことができる。好ましくは、治療後、腫瘍再成長は、５％未満であり；より好ましくは、腫瘍再成長は、１０％未満；より好ましくは、２０％未満；より好ましくは、３０％未満；より好ましくは、４０％未満；より好ましくは、５０％未満；さらに一層好ましくは、５０％未満；最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再成長は、任意の再現可能な測定手段によって測定されてよい。腫瘍再成長は、例えば、治療に続く事前の腫瘍縮小後の腫瘍の直径における増大を測定することによって測定される。腫瘍再成長における減少は、治療が停止した後に腫瘍が再発に失敗することによって示される。
医薬組成物および製剤
[200]本開示は、ＭＰＣ−０７６７もしくは薬学的に許容されるその塩、好ましくはメシル酸塩の量を、単独でまたは追加のＡＰＩと組み合わせてのいずれかで含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載される実施形態のいずれかに従って、医薬組成物は、経口、バッカルまたは非経口投与に適合されてよい。実施形態において、医薬組成物は、例えば吸入による経肺投与に適合されてよい。実施形態において、医薬組成物は、経口投与に適合される。実施形態において、医薬組成物は、非経口投与に適合される。
【０１５１】
[201]実施形態において、ＭＰＣ−０７６７または薬学的に許容されるその塩、好ましくは、メシル酸塩は、少なくとも１つの追加のＡＰＩと、単一剤形で組み合わせられる。実施形態において、少なくとも１つの追加のＡＰＩは、併用療法を使用する治療の方法と関連付けて上で記載した作用物質から選択される。
【０１５２】
[202]「医薬組成物」は、本明細書に記載される化合物を、対象への投与に好適な薬学的に許容される形態で含有する製剤である。本明細書において使用される場合、語句「薬学的に許容される」は、妥当な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症なしに、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用に好適であり、合理的なベネフィット／リスク比に見合った、化合物、材料、組成物、担体および／または液体剤形を指す。
【０１５３】
[203]「薬学的に許容される賦形剤」は、概して安全、非毒性であり、生物学的にも別様にも望ましくないものではない医薬組成物を調製する際に有用である賦形剤を意味し、獣医学への使用およびヒトの薬学への使用に許容される賦形剤を含む。薬学的に許容される賦形剤の例は、限定されないが、滅菌液、水、緩衝生理食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、油、洗剤、懸濁化剤、炭水化物（例えば、グルコース、ラクトース、スクロースまたはデキストラン）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸またはグルタチオン）、キレート化剤、低分子量タンパク質、またはそれらの好適な混合物を含む。
【０１５４】
[204]医薬組成物は、バルクでまたは投薬量単位形態で提供されることができる。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、医薬組成物を投薬量単位形態で製剤化することがとりわけ有利である。用語「投薬量単位形態」は、本明細書において使用される場合、治療される対象への単位投薬量として適した物理的に不連続な単位を指し、各単位は、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果を生成するように算出された、所定分量の活性化合物を含有する。本開示の投薬量単位形態についての仕様は、活性化合物の独自の特徴および達成される特定の治療効果によって決定付けられ、これらに直接的に依存する。投薬量単位形態は、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣錠剤、錠剤、カプセル剤、点滴バッグ、またはエアゾール吸入器上の単一ポンプであることができる。
【０１５５】
[205]治療用途において、投薬量は、選択される投薬量に影響を与える他の要因の中でも、作用物質、レシピエント患者の年齢、体重および臨床状態、ならびに療法を施す臨床医または実務家の経験および判断に応じて変動する。概して、用量は、治療有効量であるべきである。投薬量は、ｍｇ／ｋｇ／日測定単位で提供されることができる（その用量は、患者の体重（ｋｇ）、体表面積（ｍ２）および年齢（歳）に応じて調整されてよい）。有効量の医薬組成物は、臨床医または他の有資格観察者によって指摘されている通りの客観的に同定可能な改善を提供するものである。例えば、障害、疾患または状態の症状を軽減することである。本明細書において使用される場合、用語「投薬量有効方式（ｄｏｓａｇｅ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｍａｎｎｅｒ）」は、対象または細胞において所望の生物学的効果を生成するための医薬組成物の量を指す。
【０１５６】
[206]例えば、投薬量単位形態は、１ナノグラムから２ミリグラム、または０．１ミリグラムから２グラム、または１０ミリグラムから１グラムまで、または５０ミリグラムから５００ミリグラムまで、または１マイクログラムから２０ミリグラムまで、または１マイクログラムから１０ミリグラムまで、または０．１ミリグラムから２ミリグラムまでを含むことができる。
【０１５７】
[207]医薬組成物は、任意の所望のルート（例えば、経肺、吸入、鼻腔内、経口、バッカル、舌下、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸膜内、くも膜下腔内、経皮、経粘膜、経直腸等）による投与のために、任意の好適な形態（例えば、液体、エアゾール剤、液剤、吸入剤、ミスト、スプレー剤；または固体、散剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、パッチ剤等）をとることができる。例えば、本開示の医薬組成物は、吸入または吹送（口または鼻のいずれかを経由する）によるエアゾール投与のための水溶液または散剤の形態、経口投与のための錠剤またはカプセル剤の形態；直接注射または静脈内注入のための滅菌注入液への添加のいずれかによる投与に好適な滅菌水溶液または分散液の形態；あるいは、経皮または経粘膜投与のための、ローション剤、クリーム剤、フォーム剤、パッチ剤、懸濁剤、液剤または坐剤の形態であってよい。
【０１５８】
[208]医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、バッカル形態、トローチ剤、キャンディー剤、および乳剤、水性懸濁剤、分散液または液剤の形態の経口液体を含むがこれらに限定されない、経口的に許容される投薬の形態であることができる。カプセル剤は、本開示の化合物と、薬学的に許容されるデンプン（例えば、コーン、バレイショまたはタピオカデンプン）、砂糖、人工甘味剤、粉末セルロース、例えば結晶性および微結晶性セルロース、小麦粉、ゼラチン、ガム等の不活性充填剤および／または希釈剤との混合物を含有してよい。経口使用のための錠剤の事例において、一般的に使用される担体は、ラクトースおよびコーンスターチを含む。ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤が添加されてもよい。カプセル剤形態での経口投与のために、有用な希釈剤は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを含む。水性懸濁剤および／または乳剤が経口的に投与される場合、本開示の化合物は、乳化および／または懸濁化剤と組み合わせられた油性相に懸濁または溶解されてよい。所望ならば、ある特定の甘味および／または香味および／または着色剤が添加されてよい。
【０１５９】
[209]医薬組成物は、錠剤の形態であることができる。錠剤は、本開示の化合物の剤形を、砂糖または糖アルコール、例えばラクトース、スクロース、ソルビトールまたはマンニトール等の不活性希釈剤または担体と一緒に含むことができる。錠剤は、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウムまたはセルロースもしくはその誘導体、例えばメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびコーンスターチ等のデンプン等、非糖由来希釈剤をさらに含むことができる。錠剤は、ポリビニルピロリドン等の結合および造粒剤、崩壊剤（例えば、架橋カルボキシメチルセルロース等の膨潤性架橋ポリマー）、滑沢剤（例えば、ステアレート）、保存剤（例えば、パラベン）、抗酸化剤（例えば、ＢＨＴ）、緩衝剤（例えば、リン酸またはクエン酸緩衝液）、ならびにクエン酸塩／重炭酸塩混合物等の発泡剤をさらに含むことができる。
【０１６０】
[210]錠剤は、コーティング錠であることができる。コーティングは、保護フィルムコーティング（例えば、ワックスまたはワニス）、または活性剤の放出、例えば遅延放出（摂取してから所定の時間差の後の活性物の放出）もしくは胃腸管内の特定の場所での放出を制御するように設計されたコーティングであることができる。後者は、例えば、商標名Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）で販売されているもの等の腸溶性フィルムコーティングを使用して、達成され得る。
【０１６１】
[211]錠剤製剤は、従来の圧縮、湿式造粒または乾式造粒法によって作製されてよく、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、アルギン酸、アカシアガム、キサンタンガム、クエン酸ナトリウム、複合ケイ酸塩、炭酸カルシウム、グリシン、デキストリン、スクロース、ソルビトール、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、タルク、乾燥デンプンおよび粉砂糖を含むがこれらに限定されない、薬学的に許容される希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、表面変性剤（界面活性剤を含む）、懸濁化または安定化剤を利用してよい。好ましい表面変性剤は、非イオン性およびアニオン性表面変性剤を含む。表面変性剤の代表例は、ポロキサマー１８８、塩化ベンザルコニウム、ステアリン酸カルシウム、セトステアリルアルコール、セトマクロゴール乳化ワックス、ソルビタンエステル、コロイド状二酸化ケイ素、ホスフェート、ドデシル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウムおよびトリエタノールアミンを含むがこれらに限定されない。
【０１６２】
[212]医薬組成物は、硬または軟ゼラチンカプセル剤の形態であることができる。この製剤に従って、本開示の化合物は、固体、半固体または液体形態であってよい。
[213]医薬組成物は、非経口投与に好適な滅菌水溶液または分散液の形態であることができる。非経口という用語は、本明細書において使用される場合、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を含む。
【０１６３】
[214]医薬組成物は、直接注射または静脈内注入のための滅菌注入液への添加のいずれかによる投与に好適な滅菌水溶液または分散液の形態であることができ、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール）、それらの好適な混合物、または１つもしくは複数の植物油を含有する、溶媒または分散媒を含む。本開示の化合物の溶液または懸濁液は、遊離塩基または薬理学的に許容される塩として、界面活性剤と好適に混合された水中で調製されることができる。好適な界面活性剤の例が以下で記載される。分散液は、例えば、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびその油中混合物中で調製されることもできる。
【０１６４】
[215]本開示の方法において使用するための医薬組成物は、製剤中に存在する任意の担体または希釈剤（ラクトースまたはマンニトール等）に加えて、１つまたは複数の添加物をさらに含むことができる。１つまたは複数の添加物は、１つまたは複数の界面活性剤を含むまたはそれらからなることができる。界面活性剤は、典型的には、細胞の脂質構造にそれらを直接挿入させて、薬物浸透および吸収を強化する、脂肪酸等の１つまたは複数の長鎖脂肪族鎖を有する。界面活性剤の相対疎水性および疎水性を特徴付けるために一般的に使用される経験的パラメータは、親水性親油性バランス（「ＨＬＢ」値）である。より低いＨＬＢ値を持つ界面活性剤ほど疎水性が高く、より大きい油への溶解度を有するのに対し、より高いＨＬＢ値を持つ界面活性剤ほど疎水性が高く、より大きい水溶液への溶解度を有する。故に、親水性界面活性剤は、概して、約１０より大きいＨＬＢ値を有する化合物であるとみなされ、疎水性界面活性剤は、概して、約１０未満のＨＬＢ値を有するものである。しかしながら、これらのＨＬＢ値は、多くの界面活性剤について、ＨＬＢ値を決定するために選択される経験的方法に応じてＨＬＢ値が約８ＨＬＢ単位ほども異なり得ることから、指針にすぎない。
【０１６５】
[216]中でも、本開示の組成物において使用するための界面活性剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）−脂肪酸およびＰＥＧ−脂肪酸モノおよびジエステル、ＰＥＧグリセロールエステル、アルコール−油エステル交換生成物、ポリグリセリル脂肪酸、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ステロールおよびステロール誘導体、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、砂糖およびその誘導体、ポリエチレングリコールアルキルフェノール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン（ＰＯＥ−ＰＯＰ）ブロックコポリマー、ソルビタン脂肪酸エステル、イオン性界面活性剤、脂溶性ビタミンおよびそれらの塩、水溶性ビタミンおよびそれらの両親媒性誘導体、アミノ酸およびそれらの塩、ならびに有機酸およびそれらのエステルおよび無水物である。
【０１６６】
[217]本開示は、本開示の方法において使用するための、医薬組成物を含む包装およびキットも提供する。キットは、ボトル、バイアル、アンプル、ブリスターパックおよびシリンジからなる群から選択される、１つまたは複数の容器を含むことができる。キットは、本開示の疾患、状態または障害を治療するおよび／または予防する際に使用するための指示書の１つまたは複数、１つまたは複数のシリンジ、１つまたは複数のアプリケーター、あるいは本開示の医薬組成物を再構成するために好適な滅菌溶液をさらに含むことができる。
【０１６７】
[218]本明細書において使用されるすべてのパーセンテージおよび比率は、別段の指示がない限り、重量によるものである。本開示の他の特色および利点は、異なる例から明らかである。提供される例は、本開示を実践する際に有用な異なる成分および方法論を例証する。例は、特許請求されている開示を限定しない。本開示に基づき、当業者は、本開示を実践するために有用な他の成分および方法論を同定し用いることができる。
【実施例】
【０１６８】
[219]下記に記載される実施例において示される通り、ＭＰＣ−０７６７を用いるＡＭＬ細胞または肺がん細胞の処理は、細胞生存率の減少および重要な発癌受容体の不安定化につながる。ＭＰＣ−０７６７は、インビトロおよびマウス異種移植モデルの両方で、活性化突然変異を有さない細胞と比較して、ＡＭＬ細胞株およびＦＬＴ３において活性化突然変異を発現する原発性細胞に向けられた優先的な細胞毒性を実証する。加えて、下記の実験は、間質細胞からの条件培地を用いて培養されたＡＭＬ細胞は種々のＦＬＴ３阻害剤に対して抵抗性になるが、それらはＭＰＣ−０７６７に対して感受性のままであることを示す。薬物抵抗性の発達は、概して、プロテインキナーゼ阻害剤療法、および特にＦＬＴ３阻害剤療法の重大な限界であるので、抵抗性ＡＭＬ細胞のＭＰＣ−０７６７に対する感受性は、ＭＰＣ−０７６７がＡＭＬの治療のためのエキサイティングな新たな選択肢であることを示す。本明細書で提供されるデータは、ＭＰＣ−０７６７等のＨＳＰ９０阻害剤が、ＦＬＴ３に活性化突然変異を抱えるＡＭＬの患者において臨床的効能を有することができることを示す。その上、ＦＬＴ３自身における二次突然変異、または異なるシグナリング経路の活性化によりＦＬＴ３阻害剤に対して抵抗性であるＡＭＬ細胞において、ＭＰＣ−０７６７は、細胞毒性活性を維持する。これは、ＭＰＣ−０７６７等のＨＳＰ９０阻害剤が、ＦＬＴ３阻害剤を用いる治療後に再発したか、またはＦＬＴ３阻害剤に対して不応性のＡＭＬの患者において臨床的効能を有することができることを示す。ＭＰＣ−０７６７は、ＡＭＬの治療のために既に確立されたかまたは依然として調査されているいずれかの療法との相乗効果も示す。ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞を使用する全身性生存異種移植研究において、インビトロの複数の細胞株にわたるベネトクラックスとの驚くべき高い相乗活性、および強力な組合せ活性も示した。これらを基に、これらの結果は、単剤療法および他のＡＰＩとの組合せの両方で、ＡＭＬおよび他のがんを治療するための魅力的な新たな療法として、ＭＰＣ−０７６７を裏付ける。
【０１６９】
実施例１
ＭＰＣ−０７６７はＥＧＦＲおよびＨＥＲ２において突然変異を持つＮＳＣＬＣ細胞株における細胞生存率を阻害する
[220]ＮＳＣＬＣ細胞株のＨＣＣ−８２７（ＥＧＦＲ  Ｌ８５８Ｒ）、Ｈ１９７５（ＥＧＦＲ  Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ）、ＰＣ−９（ＥＧＦＲ  Ｄｅｌ  Ｅ７４６＿Ａ７５０）およびＨ１７８１（ＨＥＲ２  Ｇ７７７６ｉｎｓＶ  Ｇ／Ｃ）を、９８〜５００００ｎＭの濃度範囲のＭＰＣ−０７６７で３日間にわたって処理し、この時間の後、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を使用して決定した。図１は、ＨＣＣ−８２７（図１Ａ）、Ｈ１９７５（図１Ｂ）、ＰＣ−９（図１Ｃ）およびＨ１７８１（図１Ｄ）細胞株の用量応答曲線を示す。すべてのＥＣ５０値は、臨床的に達成可能な濃度内であった。
【０１７０】
[221]細胞生存率の喪失の機序を立証するために、Ｈ１９７５細胞を、ＭＰＣ−０７６７（０．７μＭ）で７２時間にわたって処理した。この時間の後、細胞を、それぞれ、細胞膜の完全性およびアポトーシスのマーカーである、７−アミノ−アクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）およびアネキシンＶで染色した。図２に示される通り、ＭＰＣ−０７６７（０．７μＭ）を用いるＨ１９７５細胞の処理は、生存細胞（７−ＡＡＤ陰性およびアネキシンＶ陰性）のパーセンテージの減少、および細胞死、特に、死滅（７−ＡＡＤのみ陽性）、早期アポトーシス（アネキシンＶのみ陽性）または後期アポトーシス／壊死（７−ＡＤＤおよびアネキシンＶ陽性）のマーカーを表す細胞のパーセンテージの増加をもたらした。
【０１７１】
[222]図３は、ＭＰＣ−０７６７（１μＭ）が、２４時間にわたって処理された場合に、Ｈ１９７５（Ａ）およびＰＣ−９（Ｂ）細胞の細胞表面における突然変異体ＥＧＦＲを減少させたことを示す。これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７が肺がん細胞株におけるＥＧＦＲを標的とし、分解することを確認する。
【０１７２】
[223]ＭＰＣ−０７６７がＥＧＦＲエクソン２０ｉｎｓ突然変異体の分解も促進できるか否かを決定するために、ＢａＦ３ネズミ細胞株を使用した（Ｗａｒｍｕｔｈら、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，２００７１９：５５〜６０）。この細胞株は、生存／成長について外因性ＩＬ−３に依存するが、癌遺伝子の導入の際には、細胞は、もはや外因性ＩＬ−３に依存せず、代わりに生存は導入された癌遺伝子によって駆動される。故に、導入された癌遺伝子を標的とする薬物は、ＢａＦ３細胞生存率を低減させ、診療所で生じる関連性がある癌遺伝子の突然変異に対して小分子をスクリーニングするための機序を提供する。
【０１７３】
[224]ＥＧＦＲ野生型（ＷＴ）またはＥＧＦＲエクソン２０Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ突然変異体を抱えるＢａＦ３細胞を、漸増濃度のＭＰＣ−０７６７で２４時間にわたって処理した。この時間の後、細胞を、細胞表面ＥＧＦＲ発現を評価するためのフローサイトメトリーのために収穫した（ＷＴおよび突然変異体タンパク質の両方を認識する決定のための抗体）。図４Ａに示される通り、ＭＰＣ−０７６７は、ＥＧＦＲ  ＷＴを低減させることが可能であったが（ＥＣ５０＝１μＭ）、ＥＧＦＲエクソン２０  Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ突然変異体に対してより強力であった（ＥＣ５０＝０．２μＭ）。本発明者らは、この所見がＥＧＦＲ突然変異体を発現するＢａＦ３細胞の生存率の低減に言い換えられるか否かをさらに試験した。親ＢａＦ３細胞（突然変異体ではない）またはＥＧＦＲエクソン２０  Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶを抱える細胞を、漸増濃度のＭＰＣ−０７６７で７２時間にわたって処理し、その後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して決定した。図４Ｂは、ＥＧＦＲエクソン２０  Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ突然変異体を抱えるＢａＦ３細胞が、それらが親細胞よりもＭＰＣ−０７６７に対しておよそ３倍感受性であるので、ＨＳＰ９０においてより依存していることを示す（親のＥＣ５０＝７５３ｎＭ、ＥＧＦＲエクソン２０  Ｖ７６９＿Ｄ７７０ｉｎｓＡＳＶ突然変異体のＥＣ５０＝２３６ｎＭ）。
【０１７４】
[225]まとめると、データは、ＭＰＣ−０７６７が、重要な発癌ドライバーの分解によって、ＥＧＦＲまたはＨＥＲ２の異常活性化によって駆動されるＮＳＣＬＣに対して効果的であることを示唆する。その上、ＨＳＰ９０への突然変異体タンパク質の依存の増大を考慮すると、ＭＰＣ−０７６７は、分解および抗腫瘍活性の強化をもたらす突然変異体ＥＧＦＲよりも活性である。
【０１７５】
実施例２
ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞において強力な抗白血病活性を表す
[226]指数関数的に成長する細胞株をカウントし、最終体積がウェルあたり９０μＬで、９６ウェルの透明な平底のポリスチレンマイクロタイタープレートに播種した。原発性ＡＭＬ試料について、細胞を、最終体積がウェルあたり２７μＬで、２×１０４細胞の密度で、３８４ウェルプレートに播種した。それぞれ１０μＬまたは３μＬの細胞株または原発性試料を処理するために、次いで、１０倍の濃度のＭＰＣ−０７６７を細胞に添加して、１００００ｎＭ、５０００ｎＭ、２５００ｎＭ、１２５０ｎＭ、６２５ｎＭ、３１３ｎＭ、１５６ｎＭ、７８ｎＭ、３９ｎＭおよび２０ｎＭの最終濃度を与えた。比較のために、細胞をＦＬＴ３阻害剤のギルテリチニブ（１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．３ｎＭ、３．１ｎＭ、１．６ｎＭ、０．８ｎＭ、０．４ｎＭおよび０．２ｎＭ）で処理した。細胞を播種し、二連で処理した。３日間にわたるインキュベーションの後、細胞生存率を、９６ウェルプレートについて１００μＬ、または３８４ウェルプレートについて３０μＬのいずれかをそれぞれのウェルに添加することによって、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ系を使用して、細胞内ＡＴＰレベルを測定することによって決定した。発光を、プレートリーダーを使用して検出した。
【０１７６】
[227]細胞生存率に対する薬物の効果を、試験化合物に曝露された細胞のＡＴＰレベル（秒あたりの発光カウント）をビヒクル（ＤＭＳＯ）単独に曝露された細胞のＡＴＰレベルと比較することによって算出した。各細胞株についての半最大有効濃度（ＥＣ５０）を、Ｒ  ＤＲＣパッケージ（Ｒ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ、２０１７）を使用して決定した。簡潔には、用量応答曲線は、（式−１）に従う４つのパラメータのロジスティック回帰モデル（ＬＬ．４）にフィットし、絶対ＥＣ５０を０．９５の信頼区間を使用して推定した。
【０１７７】
[228]図５Ａは、野生型（ＷＴ）ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）タンパク質を発現する細胞株（ＭＥ１）からの代表的な用量応答曲線を示すが、図５Ｂは、ＦＬＴ内部タンデム重複（ＦＬＴ３  ＩＴＤ）を抱える細胞株（ＭＶ−４−１１）からの代表的な用量応答曲線を示す。ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３  ＷＴにおけるよりもＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞においてより高い効能を有することをさらに例証するために、細胞株（ｎ＝１０）および原発性試料（ｎ＝９）に由来するＭＰＣ−０７６７の抗白血病活性（ＥＣ５０値）をアッセイした。図５Ｃは、幾何平均のＥＣ５０値が、ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞についての５７６ｎＭ（ｎ＝８）と比較して、ＦＬＴ３  ＷＴ細胞について１５２５ｍＭ（ｎ＝１１）であったこの分析のアウトプットを示す。これらのデータは、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞およびＷＴ  ＦＬＴ３を有するＡＭＬ細胞のサブセットに対する強化された活性を表すことを示唆する。
【０１７８】
実施例３
ＭＰＣ−０７６７はＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える原発性ＡＭＬ細胞において細胞毒性である
[229]ＭＰＣ−０７６７の抗白血病効果が細胞死の誘発によるものか否かを試験するために、４つの原発性ＡＭＬ試料（すべてＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える）を漸増濃度のＭＰＣ−０７６７で７２時間にわたって試験した。次いで、試料をアネキシンＶおよび７ＡＡＦに対して陽性の細胞のフローサイトメトリーによる定量化のためにプロセシングした。これらのマーカーは細胞死の検出を可能にし、特に、死滅（７−ＡＡＤのみ陽性）、早期アポトーシス（アネキシンＶのみ陽性）または後期アポトーシス／壊死（７−ＡＤＤおよびアネキシンＶ陽性）の集団を、細胞死の読み取りを得るために組み合わせた。
【０１７９】
[230]図６に示される通り、ＭＰＣ−０７６７で処理された原発性ＳＭＬ試料は、用量依存的な細胞死の増大を示す。指摘すべきは、試料の１つ（Ｙ１２６５）は、ギルテリチニブにおいて再発した患者から得られた。
【０１８０】
[231]これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える原発性ＡＭＬ試料において、アポトーシスの誘発によって細胞死を誘発することを実証する。その上、ＭＰＣ−０７６７は、患者の腫瘍がギルテリチニブ治療で再発した事例において活性である。
【０１８１】
実施例４
ＭＰＣ−０７６７はインビボの効能を実証する
[232]ＭＰＣ−０７６７の効能をインビボで実証するために、異種移植研究を、ＭＶ−４−１１細胞株を使用して実施した。各マウスに、０．１ｍｌのＰＢＳ／マトリゲル（１：１）中の５×１０６腫瘍細胞を、右脇腹に皮下接種した。平均腫瘍体積が９１ｍｍ３のサイズに到達したら、マウスを１０頭の２群にランダム化した。次いで、マウスに、ビヒクル、またはＭＰＣ−０７６７が２００ｍｇ／ｋｇをＱＤ×２日、次いで１５０ｍｇ／ｋｇをＱＤ×１５日に低減してのいずれかを経口投与した。腫瘍の測定（キャリパー）を指示された日に行った。図７に示される通り、ＭＰＣ−０７６７は、体重に対する有意な効果なく（図７Ｂ）、５／１０の動物で完全な腫瘍退縮とともに、８４％の腫瘍退縮を誘発した（図７Ａ）。スチューデントのｔ検定を使用して、これらの群の間の相違の統計学的有意性をＰ＜０．０００１で評価した。
【０１８２】
[233]このデータは、ＭＰＣ−０７６７がインビボで強力な抗腫瘍活性を表すことを確認する。
実施例５
ＭＰＣ−０７６７はＦＬＴ３阻害剤（ミドスタウリン）抵抗性細胞株において効果的である
[234]診療所において、ＦＬＴ３を標的とするチロシンキナーゼ阻害剤は、最初は陽性の応答を示すが、患者は、上記で論じられた通り、各種の機序による薬物抵抗性の発達により不可避的に再発する。ＭＰＣ−０７６７が薬物抵抗性のこの文脈において有効であり得るか否かに対処するために、本発明者らは、これまでに記載された通りに（Ｗｅｉｓｂｅｒｇら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，２０１１）、ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２と指定された、ミドスタウリンで継続的に処理されて、ミドスタウリン抵抗性細胞株を発生させた細胞株（ＭＯＬＭ−１３）を利用した。対照プラスミドでトランスフェクトされた親ＭＯＬＭ−１３細胞（ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣ）およびＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２細胞を、抵抗性を立証するために使用されるミドスタウリン（２〜１００ｎＭ）、別のＦＬＴ３阻害剤のクレノラニブ（０．２〜１００ｎＭ）またはＭＰＣ−０７６７（２０〜１００００ｎＭ）で７２時間にわたって処理した。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して評価し、ＥＣ５０値を、ミドスタウリン、クレノラニブおよびＭＰＣ−０７６７について、式１を使用して（上記に記載される通り）、変化させた濃度の薬物の存在下での細胞生存率を、１００％に設定したビヒクル（ＤＭＳＯ）の存在下での生存率のパーセンテージと比較することによって決定した。図８Ａに示される通り、ミドスタウリン抵抗性細胞は、対照細胞株と比較して、ミドスタウリンに対する抵抗性の増大を示した（約２．５倍、ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣのＥＣ５０＝４４ｎＭ、対ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２のＥＣ５０＝１１２ｎＭ）。その上、図８Ｂに示される通り、ミドスタウリン抵抗性細胞は、別のＦＬＴ３阻害剤のクレノラニブに対する交差抵抗性も表した（およそ３倍、ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣのＥＣ５０＝９ｎＭ、対ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２のＥＣ５０＝２５ｎＭ） 対照的に、図８Ｃに示される通り、対照細胞およびミドスタウリン抵抗性細胞の間のＭＰＣ−０７６７のＥＣ５０値は、１．５倍未満であった（ＭＯＬＭ−１３−ＬＵＣのＥＣ５０＝４９６ｎＭ、対ＭＯＬＭ−１３−Ｒ−ＰＫＣ４１２のＥＣ５０＝７２７ｎＭ）。
【０１８３】
[235]これらを基に、これらのデータは、ＭＰＣ−０７６７がＦＬＴ３阻害剤に対する抵抗性を獲得した細胞において抗白血病活性を保持することを実証する。
実施例６
ＭＰＣ−０７６７はＦＬＴ３阻害剤に対して抵抗性を付与する条件下で効果的である
[236]ＭＰＣ−０７６７が、間質誘発シグナリング等の他の機序（非突然変異）を介して抵抗性を獲得したＡＭＬ細胞に対する効能を実証したか否かを決定するために、ＭＯＬＭ−１４細胞株（ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える）を、通常培地（ＲＰＭＩ；非間質）またはＨＳ−５細胞株条件培地のいずれかに播種した。ＨＳ−５は、造血前駆細胞の成長を支援するために十分な各種の成長因子を分泌するヒト骨髄間質細胞株であり（Ｒｏｅｃｋｌｅｉｎら、Ｂｌｏｏｄ，１９９５）、それにより、間質状態を模倣する。次いで、細胞を、ＦＬＴ３阻害剤のギルテリチニブ（０．２〜１００ｎＭ）またはクレノラニブ（０．２〜１００ｎＭ）で、またはＭＰＣ−０７６７（２０〜１００００ｎＭ）で７２時間にわたって処理した。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して評価し、ＥＣ５０値を、非間質培地または間質条件培地のいずれかにおけるギルテリチニブ、クレノラニブおよびＭＰＣ−０７６７について、式１を使用して（上記に記載される通り）、変化させた濃度の薬物の存在下での細胞生存率を、１００％に設定したビヒクル（ＤＭＳＯ）の存在下での生存率と比較することによって決定した。
【０１８４】
[237]図９に示される通り、ＭＯＬＭ−１４細胞は、非間質培地と比較して間質培地中で成長させた場合、ＦＬＴ３阻害剤のギルテリチニブ（図９Ａ）およびクレノラニブ（図９Ｂ）に対して抵抗性であった（ギルテリチニブ：間質培地のＥＣ５０＞１００ｎＭ、対非間質培地のＥＣ５０＝６ｎＭ、クレノラニブ：間質培地のＥＣ５０＞１００ｎＭ、対非間質培地のＥＣ５０＝３ｎＭ）。対照的に、図９Ｃに示される通り、ＭＰＣ−０７６７は、間質および非間質条件下の両方で、抗増殖活性を保持していた（間質培地のＥＣ５０＝６２７ｎＭ、対非間質培地のＥＣ５０＝４２３ｎＭ）。
【０１８５】
[238]これらのデータは、ＡＭＬ  ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞が、ＦＬＴ３阻害剤を、効果を失わせる間質条件下で成長させた場合に、ＭＰＣ−０７６７に対する感受性を保持することを実証する。
【０１８６】
実施例７
ＭＰＣ−０７６７はＡＭＬ細胞株におけるＦＬＴ３−ＩＴＤを分解する
[239]ＭＰＣ−０７６７がＦＬＴ３−ＩＴＤの分解を促進し、下流のシグナリングを消滅させることができるか否かを決定するために、ＭＶ−４−１１およびＭＯＬＭ−１３細胞を、ビヒクルまたはＭＰＣ−０７６７（１μＭ）で２４時間にわたって処理した。細胞をフローサイトメトリーのために収穫して、細胞表面ＦＬＴ３タンパク質の存在度を評価した。加えて、Ｓ６（ホスホ−Ｓ６）の重要なリン酸化部位の測定を、癌遺伝子のＦＬＴ３−ＩＴＤシグナリングのためのマーカーとして使用した（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎら、Ｂｌｏｏｄ．２０１３  １２２（２２）：３６０７〜３６１５）。実際に、ＭＰＣ−０７６７で処理されたＭＶ−４−１１およびＭＯＬＭ−１３細胞の両方において、細胞表面ＦＬＴ３において＞６５％の低減（それぞれ、図１０Ａおよび１０Ｂ）、およびホスホ−Ｓ６において＞７０％の低減（それぞれ、図１０Ｃおよび１０Ｄ）があった。
【０１８７】
[240]これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７が、ＦＬＴ３−ＩＴＤを分解し、その後、ホスホ−Ｓ６シグナルの低減によって証明されるように、発癌シグナリングを減弱させることを確認する。
【０１８８】
実施例８
ＭＰＣ−０７６７はＦＬＴ３突然変異体の分解を誘発する
[241]本発明者らは、次に、ＭＰＣ−０７６７がＦＬＴ３阻害剤に対して抵抗性を付与すると報告されている他のＦＬＴ３突然変異体の分解も促進することができるか否かを決定することを試みた。これをするために、本発明者らは、ここでも、下記のＦＬＴ３突然変異体にトランスフェクトされたＢａＦ３ネズミ細胞株を利用した：ＦＬＴ３野生型、ＦＬＴ３−ＩＴＤ、Ｄ８３５Ｖ、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｄ８３５Ｖ、Ｄ８３５Ｙ、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ｈ、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｄ８３５Ｈ、Ｆ６９１ＬまたはＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｆ６９１Ｌ。
【０１８９】
[242]ピューロマイシン選択の後、細胞を、漸増濃度のＭＰＣ−０７６７（２０〜１００００ｎＭ）で２４時間にわたって処理し、次いで、ＦＬＴ３（および突然変異体）の細胞表面発現について染色し、シグナル発現中央値を、フローサイトメトリーによって定量化した。
【０１９０】
[243]図１１Ａに示される通り、ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３  ＷＴの細胞表面発現を低減させた。その上、ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３突然変異体に対してより高い効力を有し（ＦＬＴ３  ＷＴと比較して、およそ５倍）、ＨＳＰ９０におけるこれらの突然変異体タンパク質のより高い依存を実証する。
【０１９１】
[244]次のステップは、ＭＰＣ−０７６７が、任意の機能的関連性を有するＢａＦ３細胞における各種の突然変異体ＦＬＴ３タンパク質の分解を誘発するかを決定することであった。クレノラニブが、ＦＬＴ３−ＩＴＤを有効に阻害するが、ゲートキーパー残基のＦ６９１Ｌ残基の突然変異がクレノラニブの効能を低減させることが以前に示されている（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎら、Ｂｌｏｏｄ，２０１３  １２２（２２）：３６０７〜３６１５）。そのため、ＭＰＣ−０７６７を、ＴＫＩ抵抗性ＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｆ６９１Ｌ突然変異体に対する効能について試験した。ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＦＬＴ３−ＩＴＤ  Ｆ６９１Ｌを抱えるＢａＦ３細胞を播種し、クレノラニブ（０．２〜１００ｎＭ）、またはＭＰＣ−０７６７（２０〜１００００ｎＭ）で７２時間にわたって処理した後、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して評価した。ＥＣ５０値を、式１（上記に記載される通り）を使用して算出した。図１１Ｂは、ＦＬＴ３−ＩＴＤ−Ｆ６９１Ｌ突然変異体を抱える細胞が、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える細胞と比較して、クレノラニブに対しておよそ２３倍の抵抗性を付与したことを示す（ＦＬＴ３−ＩＴＤのＥＣ５０＝４ｎＭ、対ＦＬＴ３−ＩＴＤ−Ｆ６９１ＬのＥＣ５０＝９０ｎＭ）。対照的に、図１１Ｃは、ＭＰＣ−０７６７が、２つのＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異体細胞株に対して、同様の抗白血病活性を有していたことを示す（ＦＬＴ３−ＩＴＤのＥＣ５０＝４９７ｎＭ、対ＦＬＴ３−ＩＴＤ−Ｆ６９１ＬのＥＣ５０＝３９１ｎＭ）。
【０１９２】
[245]これらを基に、これらのデータは、ＭＰＣ−０７６７がＦＬＴ３のキナーゼ抵抗性突然変異体の標的化に有効であることを実証する。
実施例９
ＭＰＣ−０７６７は原発性ＡＭＬ試料においてＩＦＮ−γ誘発ＰＤ−Ｌ１発現をブロックする
[246]インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）は、種々のがん細胞の種類においてプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）のタンパク質発現を誘発することを示し、それにより、腫瘍細胞が免疫系を回避することができることによる別の機序を提供する。
【０１９３】
[247]ＭＰＣ−０７６７がＩＦＮ−γ誘発性ＰＤ−Ｌ１発現をブロックすることができるか否かを研究するために、ＦＬＴ３  ＷＴ（ｎ＝２）またはＦＬＴ３−ＩＴＤ（ｎ＝２）を抱える６つのＡＭＬ患者試料を、ヒトＩＦＮ−γ（５０ｎｇ／ｍｌ）単独、ＭＰＣ−０７６７（２μＭ）単独、または２つの組合せで２４時間にわたって処理した。次いで、細胞を収穫して、フローサイトメトリーによってＰＤ−Ｌ１細胞表面発現を評価した。また、細胞を、ＡＭＬ芽細胞マーカーのＣＤ３４またはＣＤ４５（芽細胞集団に対してゲート開閉するため）、および生存細胞においてゲート開閉する生存染色で染色した。図１２において示される通り、すべての患者試料は、それらの細胞表面のＰＤ−Ｌ１の量の増大に従ってＩＦＮ−γ処理に応答した（５〜２５倍）。ＭＰＣ−０７６７単独は基礎ＰＤ−Ｌ１細胞表面発現を有意に低減させなかったが、ＩＦＮ−γと組み合わせると、ＭＰＣ−０７６７は、ＩＦＮ−γ誘発性ＰＤ−Ｌ１細胞表面発現を有意に低減させた（Ｐ＝０．０４）。
【０１９４】
[248]このデータは、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬに対する細胞毒性活性を保有するＭＰＣ−０７６７に加えて（上記を参照されたい）、ＭＰＣ−０７６７が、原発性ＡＭＬ試料におけるＩＦＮ−γ誘発性ＰＤ−Ｌ１発現の無効による免疫調節活性も保有することを示す。
【０１９５】
実施例１０
ＭＰＣ−０７６７は相乗的な細胞毒性活性を呈する
[249]ＭＰＣ−０７６７が、追加の薬物との相乗的な抗増殖活性を呈するか否かを決定するために、本発明者らは、ＭＰＣ−０７６７を、ＡＭＬの治療のために承認されたか、または臨床的に評価されたいずれかの薬物と組み合わせて試験した。
【０１９６】
[250]ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える３つの細胞株を薬物併用研究のために使用した（ＭＶ−４−１１、ＭＯＬＭ−１３およびＭＯＬＭ−１４）。細胞を、８濃度のＭＰＣ−０７６７（７８〜１００００ｎＭ）単独、８濃度のＡＭＬ薬物単独（濃度範囲は下記）、または２つの組合せ（８×８）で処理した。試験したＡＭＬ併用薬物は、ダウノルビシン（０．８〜１００ｎＭ）；シタラビン（７８〜１００００ｎＭ）；ギルテリチニブ（０．８〜１００ｎＭ）；クレノラニブ（０．８〜１００ｎＭ）；ソラフェニブ（０．８〜１００ｎＭ）；ミドスタウリン（０．８〜１００ｎＭ）；またはベネトクラックス（０．８〜１００ｎＭ）であった。
【０１９７】
[251]細胞を、薬物（単一剤または組合せ）で７２時間にわたって処理した。薬物組合せの活性を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を用いて最初に細胞生存率を測定し、続いて、Ｒ  ＤＲＣパッケージ（Ｒ  Ｃｏｒｅ  Ｔｅａｍ、２０１７）を使用して、単一剤の活性に対応するＥＣ５０の算出により、決定した。組合せ指標（ＣＩ）値を、試験されたすべての濃度にわたる各薬物単独および組合せの生存率に基づいて、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ法（Ｃｈｏｕ  Ｔ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，２０１０  ７０（２）：４４０〜６）を使用して計算した。簡潔には、ＣＩは、
【０１９８】
【数１】
2020535173.tif 000004
【０１９９】
として定義され、
ここで、
−  Ｄ１およびＤ２は、生存率Ｖを与える組合せ治療（それぞれ）における薬物１および薬物２の用量であり、
−  Ｄ１単独およびＤ２単独は、併用の生存率と同じ生存率Ｖを与えるであろう単一剤としての薬物１および薬物２（それぞれ）の用量である。
【０２００】
Ｄ１単独およびＤ２単独は、Ｈｉｌｌの式：
【０２０１】
【数２】
2020535173.tif 000005
【０２０２】
から推定され、
ここで、ＥＣ５０およびＨｉｌｌは、生存率曲線にフィットする薬物１または薬物２に相当するＥＣ５０およびＨｉｌｌの傾きである。
【０２０３】
[252]＞１のＣＩ値を有する薬物組合せは、拮抗的と考えられ、ＣＩ値＝１は、相加的と考えられるが、＜０．９のＣＩ値は相乗的と考えられる。追加の基準として、０．２５以下の生存率を有するＣＩ値のみを考慮に入れた。次いで、相乗作用を呈する最良の組合せ治療を、予測された生存率、対、観察された生存率および最低のＣＩ値の最大の相違に基づいて選択した。
【０２０４】
[253]図１３は、ダウノルビシン（図１３Ａ）、シタラビン（図  １３Ｂ）、クレノラニブ（図１３Ｃ）、ソラフェニブ（図１３Ｄ）およびベネトクラックス（図１３Ｅ）と組み合わせたＭＰＣ−０７６７で処理されたＭＶ−４−１１細胞株における代表的な相乗効果のデータを示す。各グラフは、ビヒクル（ＤＭＳＯ、１００％に設定）、ＭＰＣ−０７６７単独、ＡＭＬ薬物単独およびＭＰＣ−０７６７＋ＡＭＬ薬物の組合せで処理された細胞の生存率を示す。
【０２０５】
[254]表１は、ＭＶ−４−１１、ＭＯＬＭ−１３およびＭＯＬＭ−１４細胞株におけるＭＰＣ−０７６７（平均ＣＩ値）の相乗的活性を示す（ｎ＝１のアスタリスクによって示されている場合を除き、各細胞株についてｎ＝２の独立した実験）。ＭＶ−４−１１細胞において、ＭＰＣ−０７６７は、ダウノルビシン（ＣＩ＝０．６）およびベネトクラックス（ＣＩ＝０．７）と非常に相乗的であり、シタラビン、クレノラニブおよびソラフェニブと相乗的である。ＭＯＬＭ−１３細胞において、ＭＰＣ−０７６７は、ベネトクラックス（ＣＩ＝０．３）と非常に相乗的であり、ダウノルビシン、クレノラニブおよびギルテリチニブと相乗性が低い。ＭＰＣ−０７６７は、ＭＯＬＭ−１４細胞において、ベネトクラックス、ダウノルビシンおよびシタラビンと相乗性である。
【０２０６】
【表１】
2020535173.tif 000006
【０２０７】
[255]これらを基に、これらのデータは、ＨＳＰ９０阻害剤のＭＰＣ−０７６７がＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異を抱えるＡＭＬ細胞において細胞毒性活性を呈することを実証する。その上、ＭＰＣ−０７６７は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異を抱えるＡＭＬ細胞においてＦＬＴ３阻害剤との相乗活性を示す。そのため、ＭＰＣ−０７６７単独または組合せ等のＨＳＰ９０阻害剤は、ＦＬＴ３に活性化突然変異を抱えるＡＭＬの患者において臨床的効能を有し得る。
【０２０８】
実施例１１
ＭＰＣ−０７６７は、ベネトクラックスと組み合わせて、強力な抗腫瘍活性を呈する。
[256]インビボでベネトクラックスとのＭＰＣ−０７６７の組合せ活性を試験するために、全身性生存異種移植研究を、ＭＯＬＭ−１３  ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞株を使用して実施した。腫瘍細胞の接種の前に、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞の生着を容易にするために、１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの毎日の腹腔内注射で２日間にわたってあらかじめ処理した。シクロホスファミドの注射の後、動物を、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞での接種の前に２４時間にわたって正常状態に戻した。次いで、各マウスに、静脈内尾静脈注射を介して、１００μＬのＰＢＳ中の１×１０７のＭＯＬＭ−１３細胞を接種した。次に、マウスを６頭の４群にランダム化した。腫瘍の接種の３日後、マウスに、ビヒクル、ＭＰＣ−０７６７が１００〜６０ｍｇ／ｋｇをＱＤ×２４（１００ｍｇ／ｋｇをＱＤ×６、８７．５ｍｇ／ｋｇをＱＤ×４、７５ｍｇ／ｋｇをＱＤ×３、６７．５ｍｇ／ｋｇをＱＤ×１、６０ｍｇ／ｋｇをＱＤ×１０）、ベネトクラックスが４５〜３３．８ｍｇ／ｋｇをＱＤ×２４（４５ｍｇ／ｋｇをＱＤ×６、３９．４ｍｇ／ｋｇをＱＤ×４、３３．８ｍｇ／ｋｇをＱＤ×１４）またはＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せを投与し、生存について監視した。生存率および体重減少を毎日監視した。平均体重減少は、研究の期間中、組合せ群で１１％を超えなかった。図１４に示される通り、単一剤としてのＭＰＣ−０７６７は、３．５日までに生存期間中央値を有意に増大させた（Ｐ＜０．０１、ログランク（マンテル・コックス）検定）。重要なことには、ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せは、１００％の生存をもたらし、それにより、ビヒクルおよび単一剤の両方の腕と比較して、有意な生存期間中央値の増大を提供する（Ｐ＜０．００１、ログランク（マンテル・コックス）検定）。一緒に、このデータは、ＭＰＣ−０７６７がインビボでベネトクラックスと強く結びつくことを実証する。
【０２０９】
実施例１２
ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞におけるベネトクラックスに対して獲得抵抗性は、ＭＰＣ−０７６７に対する感受性を損なわない
[257]Ｂｃｌ−２特異的阻害剤のベネトクラックスに対する抵抗性は、ＭＣＬ−１タンパク質発現の増大により出現し得（Ｐａｎら、２０１７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３２（６）：ｐ．７４８〜７６０  ｅ６）、それにより、その臨床的効能を制限する。ＭＰＣ−０７６７感受性においてベネトクラックスに対する獲得抵抗性の効果を試験するために、本発明者らは、Ｐａｎら、２０１７に記載される通りに、２つの親ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞株から生じたベネトクラックス抵抗性細胞株を試験した。親細胞株は、ＭＯＬＭ−１３およびＭＶ−４−１１細胞であった。ベネトクラックス抵抗性細胞株は、図１５において、ＭＯＬＭ−１３  Ｖｅｎ−ＲおよびＭＶ−４−１１  Ｖｅｎ−Ｒと指定される。図に示される通り、ＭＯＬＭ−１３  Ｖｅｎ−ＲおよびＭＶ−４−１１  Ｖｅｎ−Ｒ細胞は、処理の７２時間後の生存率アッセイにおけるそれらの増大したＥＣ５０値によって証明されるように、親細胞と比較して、ベネトクラックスに対してより高い抵抗性であった。対照的に、親およびベネトクラックス抵抗性細胞は両方とも、ＭＰＣ−０７６７に対して同様の感受性を有していた。これらの結果は、ベネトクラックスに対する抵抗性を付与する因子が、ＭＰＣ−０７６７の細胞毒性活性に対する細胞の感受性を損なわないことを示した。
【０２１０】
[258]本発明者らは、次に、ＭＶ−４−１１  Ｖｅｎ−Ｒ細胞において、アポトーシス、ＰＡＲＰ切断の分子マーカーを調べた。細胞を、ＭＰＣ−０７６７、ベネトクラックス、またはＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せのいずれかで２４時間にわたって処理し、次いで、溶解物を、全長ＰＡＲＰおよび切断ＰＡＲＰ、アポトーシスのマーカーについてのウエスタン分析によって検査した。図１６Ａに示される通り、ウエスタンブロット分析は、ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せで処理された細胞においてのみ、完全なＰＡＲＰ切断を検出した。これらのデータは、組合せが、これらのベネトクラックス抵抗性細胞においてアポトーシスを誘発するのに有効であったことを示した。
【０２１１】
[259]組合せの相乗効果を、アイソボログラム分析を使用して確認した（Ｔａｌｌａｒｉｄａ、２００６  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，３１９（１）：１〜７）。抵抗性細胞株のＭＯＬＭ−１３  Ｖｅｎ−ＲおよびＭＶ−４−１１  Ｖｅｎ−Ｒを、ＭＰＣ−０７６７、ベネトクラックス、またはＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せで７２時間にわたって処理し、生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して評価した。正規化されたアイソボログラムを使用して、７５％の用量効果における異なる細胞株および条件にわたる薬物相互作用（ＥＣ７５）を描写した。簡潔には、各単一剤および薬物組合せについての絶対ＥＣ７５を、ＲパッケージＤＲＣを使用して算出した（Ｒｉｔｚ，Ｃ．ら、２０１５  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  １０（１２）：ｅ０１４６０２１；およびＴｅａｍ  Ｒ．Ｃ．  ２０１７  Ａ  ｌａｎｇｕａｇｅ  ａｎｄ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ，２０１７）。対応する単一剤のＥＣ７５値に関して薬物組合せのＥＣ７５を正規化した。単一剤治療がＥＣ７５に到達しなかった事例においては、当てはめられた薬物応答曲線の予測値に基づき、相対ＥＣ７５を使用した。相対ＥＣ７５が試験された最大濃度よりも高い場合、本発明者らは、試験された最大濃度をデフォルト値として使用して、すべての薬物および条件にわたる分析を可能にした。図１６Ｂに示される通り、両方のベネトクラックス抵抗性細胞株についてのデータポイントは、相加性の線（対角線）を下回り、＜１の組合せ指標値を示し、組合せ治療の相乗効果を確認する。
【０２１２】
[260]ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの相乗効果に内在する機序を探究するために、本発明者らは、その異常な増大がベネトクラックスに対する抵抗性を付与するので、ＭＣＬ−１に焦点を当てた。ＡＫＴは、セリン９（Ｓ９）と示される残基でのリン酸化によるＧＳＫ３βの活性を制御する。この部位がＡＫＴによってリン酸化されると、ＧＳＫ３βの活性が阻害される。しかしながら、ＡＫＴの阻害は、Ｓ９リン酸化を予防し、ＧＳＢ３β活性化およびその後のＭＣＬ−１の分解につながる（Ｌｕら、２０１５  Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ，２０１５．３２（７）：ｐ．２０６）。これらのタンパク質およびそれらのリン酸化状態を、ＭＰＣ−０７６７、ベネトクラックス、またはＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せで処理されたＭＯＬＭ−１４ならびにＭＶ−４−１１細胞株において検査した。図１７Ａは、ＭＰＣ−０７６７（１μＭ）、ベネトクラックス（２０ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理されたＭＯＬＭ−１４細胞を示す。組合せ治療のみが、ｐＡＫＴ（Ｓ４７３）の喪失、ＡＫＴの分解およびＧＳＫ３β（Ｓｅｒ９）リン酸化のその後の喪失をもたらした。これらの所見は、ＢＣＬ−２（例えば、ベネトクラックスで）の標的化、および同時にＭＣＬ−１（ＭＰＣ−０７６７で）の標的化が、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞において相乗的な細胞死をもたらすという本発明者らの提案と一致する。加えて、ＭＰＣ−０７６７単独、ベネトクラックス単独、または組合せで処理されたＭＶ−４−１１ベネトクラックス抵抗性細胞株において、ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスの組合せによって、ＡＫＴおよびＭＣＬ−１の発現も減少させ（図１７Ｂ）、ＭＰＣ−０７６７およびベネトクラックスで観察された相乗効果の一貫した作用機序を確認する。
【０２１３】
実施例１３
ＡＭＬにおけるＭＰＣ−０７６７の効能のためのバイオマーカー
[261]ＭＰＣ−０７６７が非ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞に対して効果的であるか否かを決定するために、本発明者らは、ＭＰＣ−０７６７に対する感受性について、ＦＬＴ３野生型（ＦＬＴ３−ＷＴ）ＡＭＬ細胞株および原発性ＡＭＬ芽細胞のパネルを試験した。細胞を、ＭＰＣ−０７６７で７２時間にわたって処理した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを使用して細胞生存率を決定した。ＥＣ５０値をすべての試料について決定し、図１８に示した。本発明者らは、１μＭでの感受性についてカットオフと定義し、ここで、１μＭを下回るＥＣ５０値を有する細胞株は、感受性であると考えられ、１μＭを上回るＥＣ５０値は、抵抗性と考えられた。実際に、６／１２細胞株および２／４原発性細胞株は、感受性を示した（１μＭ未満のＥＣ５０値）。
【０２１４】
[262]任意の突然変異がＭＰＣ−０７６７感受性と相関するか否かを探求するために、本発明者らは、ＦＬＴ３−ＷＴ  ＡＭＬ細胞株におけるすべての突然変異遺伝子にわたるフィッシャーの正確確率検定に基づく統計解析を実施した。プロセシングされたエクソームのシークエンシングデータを、ＣＯＳＭＩＣ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅプロジェクトのデータベースから抽出し、少なくとも１つの細胞株中で突然変異した遺伝子を含めた。フィッシャーの正確確率検定を、感受性および抵抗性ＦＬＴ３−ＷＴ  ＡＭＬ細胞株において観察された、突然変異および野生型アレルの頻度を適用した。頻度を、特異的遺伝子についての突然変異または野生型アレルのいずれかを含有する、感受性または抵抗性株の数に基づいて算出した。これは、突然変異した遺伝子が、ＦＬＴ３−ＷＴ  ＡＭＬ細胞株においてＭＰＣ−０７６７感受性に関連しているか否かの仮説を試験するために使用された４×４分割表をレンダリングした。
【０２１５】
[263]この解析からの結果は、ＲＡＳ突然変異が、統計学的有意性の方式（フィッシャー検定のｐ−値＝０．００１９）で、抵抗性ＦＬＴ３−ＷＴ  ＡＭＬ細胞株に関連していたことを示した。ＦＬＴ３−ＷＴ  ＡＭＬ細胞株は、ＭＡＰＫシグナリングを刺激することが以前に報告されている特異的突然変異を有するＮＲＡＳおよびＫＲＡＳ（表２）の両方に活性化突然変異を有していた。
【０２１６】
【表２】
2020535173.tif 000007
【０２１７】
[264]これらの所見は、ＲＡＳ等の重要なタンパク質における突然変異がＭＰＣ−０７６７に対する感受性に影響を及ぼすことを示唆し、ＭＰＣ−０７６７およびＲＡＳシグナリングの阻害剤、例えば、Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびＥＲＫ阻害剤の組合せがＡＮＬ細胞における追加の抵抗性経路を克服し得ることをさらに示す。これらの所見は、抵抗性経路を克服し、ＭＰＣ−０７６７に対する感受性を修復し得る合理的な薬物組合せを示唆する。
【０２１８】
実施例１４
ゲノム全体でのＣＲＩＳＰＲスクリーニングは、ＭＰＣ−０７６７感受性の決定因子としてエピジェネティック調節を同定する
[265]欠失の際にＭＰＣ−０７６７に対する抵抗性を付与する遺伝子を同定するために、本発明者らは、１μＭのＭＰＣ−０７６７の存在下で成長したＭＯＬＭ−１４細胞株におけるＣＲＩＳＰＲが媒介するゲノム全体での機能喪失スクリーニングを行った。本発明者らは、ＧｅＣＫＯ  Ｖ２ライブラリー（Ｓｈａｌｅｍ，Ｏ．ら、２０１４  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４３（６１６６）：８４〜８７）を使用して、この遺伝子スクリーニングを実施した。生存細胞から収穫されたゲノムＤＮＡを、両方のＧｅＣＫＯサブライブラリーにわたって強化されたシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）の同定のために解析した。両方のＧｅＣＫＯサブライブラリーにわたる上位２０の濃縮されたヒットの遺伝子オントロジー解析は、ＭＰＣ−０７６７処理で生存しているプールにおける最も高く強化された経路として、エピジェネティック調節、クロマチン生物体およびクロマチン修飾酵素を同定した（図１９Ａ）。
【０２１９】
[266]スクリーニングからの最も濃縮された遺伝子は、ＫＤＭ６Ａ、ヒストンＨ３Ｋ２７デメチラーゼであった（Ｌｅｅら、２００７  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１８（５８４９）：４４７〜５０）（図１９Ｂ）。ＫＤＭ６Ａの機能喪失突然変異は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬにおいて観察される（Ｇａｒｇら、２０１５  Ｂｌｏｏｄ  １２６（２２）：２４９１〜５０１）。３つの独立したｓｇＲＮＡを用いるＣＲＩＳＰＲ媒介性のＫＤＭ６Ａの標的化は、ＭＯＬＭ−１４およびＭＶ−４−１１細胞株においてＭＰＣ−０７６７に対する抵抗性を付与した（図２０Ａ〜Ｂ）。この所見を治療的に探究するために、本発明者らは、ＫＤＭ６Ａに機能的に対抗するＥＺＨ２のヒストンＨ３Ｋ２７メチルトランスフェラーゼの阻害が、ＭＰＣ−０７６７に対する感受性を強化するであろうという仮説を立てた。この仮説を試験するために、ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞株（ＭＶ−４−１１）を使用し、８つの異なる濃度で、２つの臨床段階のＥＺＨ２阻害剤のＥＰＺ−６４３８およびＣＰＩ−１２０５のいずれかで４日間にわたって処理した。この時間の後、細胞をカウントし、再播種し、８つの濃度のＥＺＨ２阻害剤単独、８つの濃度のＭＰＣ−０７６７単独、または２つの組合せ（合計６４の組合せ）で処理した。３日間にわたる組合せ治療の後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して決定した。アイソボログラム分析を実施し、ＥＰＺ−６４３８およびＭＰＣ−０７６７の組合せ、ならびにＣＰＩ−１２０５およびＭＰＣ−０７６７の組合せについてのデータポイントは、相加性の線（対角線）を下回り、＜１の組合せ指標値を示し、組合せ治療の相乗効果を確認する（図２１）。これらの所見は、エピジェネティック調節剤がＭＰＣ−０７６７感受性に影響を与えることができること、そのような遺伝子における機能喪失突然変異がＭＰＣ−０７６７活性のバイオマーカーとして有用であり得ること、ならびにエピジェネティック調節剤を標的とする臨床段階の化合物を治療的に使用するためにＭＰＣ−０７６７と組み合わせ得ることを実証する。
【０２２０】
実施例１５
ＡＭＬ細胞株における三酸化ヒ素とのＭＰＣ−０７６７の相乗効果
[267]急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）は、前骨髄球性白血病（ＰＭＬ）およびレチノイン酸受容体アルファ（ＲＡＲα）の融合物（ＰＭＬ−ＲＡＲα）を生じる特徴的な染色体転座ｔ（１５；１７）を抱える急性骨髄性白血病のサブタイプである。得られた融合タンパク質は、細胞分化におけるブロックにつながる代替の転写プロファイルを有する。すべてがトランスのレチノイン酸および三酸化ヒ素（ＡＴＯ）を含む異常な融合タンパク質を分解する薬剤は、ＡＰＬに対する有効性を証明した（ＭｃＣｕｌｌｏｃｈら、２０１７において概説）。興味深いことに、ＡＴＯは、ＰＭＬ−ＲＡＲαを抱えていない細胞において抗増殖活性を呈し、これが、がん細胞の死につながる追加の活性を発揮し得る（Ｍｉｌｌｅｒら、２００２）。故に、ＡＴＯは、ＰＭＬ−ＲＡＲαを抱えていない若干数のヘム適応症において上昇していた（Ｂｏｎａｔｉら、２００６）。最近の研究は、ＡＴＯおよびソラフェニブの組合せがＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞株において相乗的であることを実証している（Ｗａｎｇら、２０１８）。観察された相乗効果についての１つの機序的説明は、ＡＴＯがＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＨＳＰ９０の間の相互作用を低減させるということであった。結果として、ＦＬＴ３−ＩＴＤは、ＦＬＴ３−ＩＴＤ発癌シグナリングおよび腫瘍細胞の死を撲滅する分解を受ける（Ｗａｎｇら、２０１８）。故に、ソラフェニブ（ＦＬＴ３阻害剤）との組合せは、直接的な阻害（ソラフェニブ）および分解（ＡＴＯ）を介したＦＬＴ３シグナリングのより完全な無効をもたらすはずである。加えて、ＡＴＯおよび第一世代のＨＳＰ９０阻害剤の間の濃度関係を探求する半機序薬理学モデルを使用して、Ｗｅｔｚｌｅｒおよび同僚ら（Ｗｅｔｚｌｅｒら、２００７）は、構成的ＳＴＡＴ３を有するＡＭＬ細胞株において相乗効果を実証した。
【０２２１】
[268]ＭＰＣ−０７６７の組合せがＡＴＯと相乗的であるか否かを試験するために、本発明者らは、ＡＭＬ細胞株のパネルを試験した。細胞株は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ（ＭＯＬＭ−１３、ＭＯＬＭ−１４およびＭＶ−４−１１）またはＦＬＴ３  ＷＴ（ＭＥ−１、ＴＨＰ−１、ＯＣＩ−ＡＭＬ−２、ＨＬ６０、ＮＯＭＯ−１、ＴＵＲおよびＭＬ−２）を抱える細胞株を含む。細胞株を、８濃度のＭＰＣ−０７６７（２３４〜４０００ｎＭ；１．５倍希釈）単独、８濃度のＡＴＯ（７８〜１００００ｎＭ；２倍希釈）単独、または２つの組合せ（６４データポイント）で処理した。
【０２２２】
[269]３日間にわたる組合せ治療の後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して決定した。組合せ指標（ＣＩ）値を、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの式を使用して、各細胞株について算出し、ここで、＜１のＣＩ値は相乗性を表し、ＣＩ＝１は相加性を表し、＞１のＣＩは拮抗性を表す。例を、ＭＯＬＭ−１４細胞がＭＰＣ−０７６７（５２７ｎＭ）、ＡＴＯ（１２５０ｎＭ）または組合せ（ｃｏｍｂｏ）で処理された図２２に示す。重要なことには、組合せは、いずれかの薬剤単独の相加効果よりも高く生存率を低減し、０．５６のＣＩ値を回復し、相乗性を確認した。表３は、試験されたすべての細胞株についてのＣＩ値、およびＭＰＣ−０７６７およびＡＴＯの特異的な濃度を示す。相乗効果は、試験されたすべての細胞株で観察された。これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７の組合せが、ＡＭＬ細胞において、ＡＴＯと相乗的であることを確立する。その上、相乗効果は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ突然変異および突然変異していないＦＬＴ３−ＩＴＤを抱える細胞株の両方において、臨床的に関連する濃度のＭＰＣ−０７６７で観察された。
【０２２３】
[270]本発明者らは、次に、ＭＰＣ−０７６７およびＡＴＯの相乗活性がＦＬＴ３−ＩＴＤ癌遺伝子シグナリングのより完全な無効によるか否かを探求した。ＭＯＬＭ−１３細胞を、ＭＰＣ−０７６７（８００ｎＭ）、ＡＴＯ（６２５ｎＭ）または組合せで２４時間にわたって処理した。この時間の後、細胞を、フローサイトメトリーによる細胞表面ＦＬＴ３発現の評価のために収穫した。ＦＬＴ３を無効にする効果を追加して測定するために、本発明者らは、２つの公知の下流のエフェクターが存在するので、ホスホ−ＥＲＫ（ｐＥＲＫ）およびホスホ−Ｓ６（ｐＳ６）を評価した。図２３に示される通り、単一剤としてのＭＰＣ−０７６７およびＡＴＯは、ＦＬＴ３、ｐＳ６を低減し、ｐＥＲＫを弱く低減した。しかしながら、組合せは、いずれかの薬剤単独と比較して、各タンパク質またはリンタンパク質のより大きな低減をもたらした。これらの所見は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ細胞株において観察された相乗的な抗増殖効果が、ＦＬＴ３発癌シグナリングのより完全な阻害によって、少なくとも部分的において現れる。
【０２２４】
【表３】
2020535173.tif 000008
【０２２５】
実施例１６
ＭＰＣ−０７６７はＦＬＴ３阻害剤に対する抵抗性を付与する代替経路の活性化を克服する
[271]骨髄において間質シグナリングを模倣する条件は、代替の細胞表面受容体の活性化によりＦＬＴ３阻害剤に対する抵抗性を付与することができる（Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ  ら、２０１７）。ＢａＦ３細胞系を使用して、ＦＬＴ３阻害剤に対する抵抗性を付与する条件下、ＭＰＣ−０７６７の効能を試験した。ＢａＦ３細胞は、成長のためのＩＬ−３を活性化するためにＩＬ−３受容体の補充を必要とする。しかしながら、ＦＬＴ３−ＩＴＤでトランスフェクトされたＢａＦ３細胞において、生存が発癌ＦＬＴ３シグナリングによって単に駆動されるので、細胞は、もはやＩＬ３を必要としない。このように、ＩＬ−３の非存在下でＦＬＴ３−ＩＴＤ発現細胞は、ＦＬＴ３阻害剤のギルテリチニブまたはクレノラニブによるＦＬＴ３阻害に感受性である（図２４）。しかしながら、細胞をＦＬＴ３阻害剤に対して抵抗性にするように、ＩＬ３の添加は、代替の非ＦＬＴ３依存性の生存促進性経路を活性化する（Ｓｕｎｇら、２０１７）。対照的に、ＦＬＴ３−ＩＴＤを発現し、外因性ＩＬ３あり又はなしで処理されたＢａＦ３は、同様に、ＭＰＣ−０７６７に対して感受性である（図２４）。これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７が複数の生存促進経路を阻害することができることを実証する。
【０２２６】
実施例１７
ＭＰＣ−０７６７は、５’アザシタジンと組み合わせて、抗腫瘍活性の強化を呈する
[272]インビボで５’アザシタジンと組み合わせたＭＰＣ−０７６７を試験するために、全身性生存異種移植研究を、ＭＯＬＭ−１３  ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞株を使用して実施した。腫瘍細胞の接種の前に、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞の生着を容易にするために、１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの毎日の腹腔内注射で２日間にわたってあらかじめ処理した。シクロホスファミドの注射の後、動物を、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞での接種の前に２４時間にわたって正常状態に戻した。次いで、各マウスに、静脈内尾静脈注射を介して、１００μＬのＰＢＳ中の１×１０７のＭＯＬＭ−１３細胞を接種した。次に、マウスを６頭の４群にそれぞれランダム化した。腫瘍の接種の３日後、マウスに、ビヒクル、ＭＰＣ−０７６７を７５ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ×５；１日オフ；ＱＤ×２６、ｐ．ｏ）、５’アザシチジンを２ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ×４、ｉ．ｐ．）またはＭＰＣ−０７６７および５’アザシチジン（単一剤として処理）の組合せを投与し、生存について監視した。生存率および体重減少を毎日監視した。平均体重減少は、研究の期間中、組合せ群で１１％を超えなかった。図２５に示される通り、単一剤としてのＭＰＣ−０７６７および５’アザシチジンは、それぞれ、５．５日および８日までにマウスの生存期間中央値を有意に増大させた（それぞれ、Ｐ＜０．０１およびＰ＜０．００１、ログランク（マンテル・コックス）検定）。重要なことには、ＭＰＣ−０７６７および５’アザシチジンの組合せは、ビヒクルおよび単一剤の両方の腕と比較して、有意な生存期間中央値の増大をもたらした（Ｐ＜０．００１、ログランク（マンテル・コックス）検定）。これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７および５’アザシチジンの組合せが、抗白血病活性を有し、ＦＬＴ３−ＩＴＤ  ＡＭＬ患者のための有効な療法であり得ることを実証する。
【０２２７】
実施例１８
ＭＰＣ−０７６７はＡＭＬ細胞のＴ細胞媒介性死滅を強化する。
[273]Ｔ細胞の死滅を増大させるＭＰＣ−０７６７の能力を、インビトロのＴ細胞媒介性死滅アッセイで決定した。ＯＣＩ−ＡＭＬ２  ＡＭＬ細胞株を、細胞染色色素のＣＦＳＥで標識化し、ＭＰＣ−０７６７（２μＭ）およびヒトサイトメガロウイルスｐｐ６５４９５−５０３ペプチドで終夜処理した。ＯＣＩ−ＡＭＬ２細胞を洗浄して、ＭＰＣ−０７６７およびペプチドを除去し、次いで、ｐｐ６５特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞について濃縮されたＴ細胞株と、およそ２．５：１（Ｔ細胞：ＯＣＩ−ＡＭＬ２）の比率で共培養した。４時間の共培養の後、細胞を収穫し、固定し、透過処理し、アポトーシス細胞死の直接読み取りとして、カスパーゼ−３の活性型について染色した。すべてのＣＦＳＥ＋細胞（ＯＣＩ−ＡＭＬ−２細胞のみ）のうち活性カスパーゼ−３＋のパーセントを図２６に示す。アポトーシス細胞の相乗的な増大（０．５３の組合せ指標（ＣＩ））が、ＭＰＣ−０７６７およびＣＤ８＋Ｔ細胞が濃縮されたｐｐ６５の組合せで観察された。これらの所見は、ＭＰＣ−０７６７が、腫瘍細胞をＴ細胞媒介性死滅に対してより脆弱にするように変えることができることを実証する。
【０２２８】
[274]ＣＩは、薬物のペアの組合せ効果が、相乗的、相加的または拮抗的であるか否かを決定するために使用される定量的尺度である。ＣＩは、ＣＩ＝（Ｅ１＋Ｅ２）／Ｅ１２として算出され、ここで、Ｅ１２は、薬物Ａおよび薬物Ｂの組合せについての正規化された生物学的応答（例えば、％カスパーゼ−３＋細胞）であり、Ｅ１およびＥ２は、それぞれ、各単一薬物処理について測定された応答である。１未満のＣＩ値は相乗性を示し、効果の大きさは、１未満の相乗効果スコアがどのぐらいかによって示される。この関係のより詳細な数理処理は、Ｓｈｉｎら、２０１８に記載されている。
【０２２９】
実施例１９
ＭＰＣ−０７６７は、免疫適格性のＭＣ３８同系モデルにおいて、インビボの効能を実証する。
【０２３０】
[275]インタクトな免疫系を有するインビボモデルにおけるＭＰＣ−０７６７の効能を実証するために、同系の研究を、ネズミＭＣ３８結腸がん細胞株を使用して実施した。各Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０．１ｍｌのＰＢＳ中の２．５×１０５腫瘍細胞を、右脇腹に皮下接種した。平均腫瘍体積が７３ｍｍ３のサイズに到達したら、マウスを６頭の２群にランダム化した。次いで、マウスに、ビヒクル、または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７をＱＤ×１７のいずれかを経口投与した。腫瘍の測定（キャリパー）を指示された日に行った。図２７に使用される通り、ＭＰＣ−０７６７は、体重に対する有意な効果なく（図２７Ｂ）、６９．５％の腫瘍成長阻害を誘発した（図２７Ａ）。スチューデントのｔ検定を使用して、これらの群の間の相違の統計学的有意性をＰ＝０．００で評価した。このデータは、ＭＰＣ−０７６７がインビボ同系モデルにおいて抗腫瘍活性を表すことを確認する。
【０２３１】
[276]ＭＰＣ−０７６７が、直接的細胞毒性活性に加えて、抗腫瘍免疫応答を誘発し得るかを試験するために、ＰＤ−Ｌ１の下方制御およびエフェクター／制御性Ｔ細胞の比率を、同じＭＣ３８同系モデルにおいて測定した。２１日目に、平均腫瘍体積が３７２ｍｍ３のサイズであった時に、第２群のマウス（ｎ＝６）を、１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７でＱＤ×７で処理した。最終投与の１日後（接種２８日後）、腫瘍を、ビヒクルおよび１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７のＱＤ×７群から収穫した。分離された腫瘍内の腫瘍浸潤性白血球（ＣＤ４５＋、ＣＤ３−）を、フローサイトメトリーによってＰＤ−Ｌ１発現について分析した。ＰＤ−Ｌ１の有意な低減が観察され、ＭＰＣ−０７６７が、この免疫抑制剤リガンドをインビボで抑制することができることを示す（図２７Ｃ）。ＭＣ３８腫瘍内の免疫細胞集団におけるこの抑制の効果をアッセイするために、ＣＤ４＋（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４−）と制御性Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋）の比率もフローサイトメトリーによって評価した。ＣＤ４：ＴＲＥＧおよびＣＤ８：ＴＲＥＧ比率の有意な増大が、ＭＰＣ−０７６７処理群において観察され（図２７Ｄ）、これは、抗腫瘍免疫応答を示唆する。あわせて、このデータは、ＭＰＣ−０７６７抗腫瘍活性が抗腫瘍免疫応答の誘発に関与することを裏付ける。
【０２３２】
実施例２０
ＡＭＬ細胞株におけるＭＡＰＫ経路阻害剤とのＭＰＣ−０７６７の相乗効果
[277]マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路は、細胞の生存の際に外部刺激に関連し、分化、生存および増殖を媒介する細胞内シグナルにそれらを変換する重要な組み込みポイントである。実際に、選択的ＭＡＰＫ阻害剤によって標的にされるＡＭＬ細胞は、細胞生存の低減をもたらす（Ｍｉｌｅｌｌａら、２００１）。ＭＰＣ−０７６７と、腫瘍がＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅを抱える黒色腫の患者の処置のために承認されている臨床段階のＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとの組合せを、ＡＭＬ細胞株のパネルにおいて試験した。細胞株は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ（ＭＯＬＭ−１３、ＭＯＬＭ−１４およびＭＶ−４−１１）またはＦＬＴ３  ＷＴ＋ＲＡＳ  ＷＴ（ＯＣＩ−ＡＭＬ−２）もしくはＦＬＴ３  ＷＴ＋ＲＡＳ突然変異体（ＭＬ−２）を抱える細胞株を含む。細胞株を、８濃度のＭＰＣ−０７６７（２３４〜４０００ｎＭ；１．５倍希釈）単独、８濃度のＡＴＯ（０．８〜１００ｎＭ；２倍希釈）単独、または２つの組合せ（６４データポイント）で処理した。
【０２３３】
[278]３日間にわたる組合せ治療の後、細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して決定した。組合せ指標（ＣＩ）値を、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙの式を使用して、各細胞株について算出し、ここで、＜１のＣＩ値は相乗性を表し、ＣＩ＝１は相加性を表し、＞１のＣＩは拮抗性を表す。例を、ＭＯＬＭ−１３細胞がＭＰＣ−０７６７（３５１ｎＭ）、トラメチニブ（２５ｎＭ）または組合せ（ｃｏｍｂｏ）で処理された図２８に示す。重要なことには、組合せは、いずれかの薬剤単独の相加効果よりも高く生存率を低減し、０．５５のＣＩ値を回復し、相乗性を確認した。表４は、試験されたすべての細胞株についてのＣＩ値、ならびにＭＰＣ−０７６７およびトラメチニブの特異的な濃度を示す。その上、相乗効果は、ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるかもしくは抱えていない細胞株、またはＲＡＳ突然変異を抱える細胞株において、臨床的に関連する濃度のＭＰＣ−０７６７で観察された。
【０２３４】
【表４】
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【０２３５】
実施例２１
ＰＤ−Ｌ１発現のＭＰＣ−０７６７阻害は、Ｔ細胞活性化を増大させる。
[279]ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路をブロックする抗体の添加は、インビトロ、前臨床動物モデルおよびがん患者において、Ｔ細胞応答の増大を刺激する。これは、患者における腫瘍退縮または腫瘍排除につながり得る。ＰＤ−Ｌ１およびＴ細胞活性化におけるＭＰＣ−０７６７の効果を検査するために、本発明者らは、ＰＤ−１＋ジャーカットのＴ細胞が、ＮＦＡＴプロモーターの制御の下、ルシフェラーゼを発現するモデル系を使用した（Ｐｒｏｍｅｇａ、本明細書の以下で、ジャーカットレポーター細胞と称する）。Ｔ細胞がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）によって刺激される場合、ＮＦＡＴ経路の活性化は、ルシフェラーゼの発現を駆動する。そのため、このモデル系において、ルシフェラーゼは、Ｔ細胞活性化の代理マーカーである。
【０２３６】
[280]図２９Ａに示される通り、ジャーカットレポーター細胞および低用量の抗ＣＤ３（１０ｎｇ／ｍｌ）とのＴＨＰ−１  ＡＭＬ細胞の６時間のインキュベーションは、ジャーカットレポーター細胞の活性化を駆動するＴＣＲにより、ルシフェラーゼ発現につながる。図２９Ｂは、ＩＦＮγ（５０ｎｇ／ｍｌ）で２４時間にわたって処理されたＴＨＰ−１細胞は、Ｔ細胞を活性化する能力を低減させた（ルシフェラーゼを低減させた）ことを示す。これは、ＰＤ−Ｌ１遮断抗体（アテゾリズマブ、５μｇ／ｍｌ）の添加が、Ｔ細胞活性化を未処理のレベルに回復させるので、ＰＤ−Ｌ１のＩＦＮγ媒介性の上方制御に寄与することができる。
【０２３７】
[281]本発明者らは、次に、ＰＤ−Ｌ１のＭＰＣ−０７６７低減が、抗ＰＤ−Ｌ１遮断抗体と同様にＴ細胞の刺激を増大することができるか否かを決定した。ＴＨＰ−１細胞を、ＭＰＣ−０７６７（１μＭまたは２μＭ）の存在または非存在下で、ＩＦＮγで終夜処理した。ＴＨＰ−１細胞を洗浄し、一部をＰＤ−Ｌ１発現のフローサイトメトリー分析のために保存した。残った細胞を、ジャーカットレポーター細胞および抗ＣＤ３（１０ｎｇ／ｍｌ）とともに６時間にわたってインキュベートした。ＭＰＣ−０７６７は、ＴＨＰ−１細胞におけるＰＤ−Ｌ１発現を用量依存的に低減させた（図２９Ｃ）。ＭＰＣ−０７６７はまた、Ｔ細胞活性化の阻害を用量依存的に低減することも可能であり（図２９Ｄ）、ＭＰＣ−０７６７によるＰＤ−Ｌ１発現の調節がＴ細胞活性化における機能的結果を有することを実証する。
【０２３８】
実施例２２
ＭＰＣ−０７６７は、インビボＡＭＬモデルにおける全身性の抗腫瘍活性を実証する
[282]インビボでＭＰＣ−０７６７の活性をさらに試験するために、全身性生存異種移植研究を、ＭＯＬＭ−１３  ＦＬＴ３−ＩＴＤを抱えるＡＭＬ細胞株を使用して実施した。腫瘍細胞の接種の前に、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞の生着を容易にするために、１００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの毎日の腹腔内注射で２日間にわたってあらかじめ処理した。シクロホスファミドの注射の後、動物を、ヒトＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞での接種の前に２４時間にわたって正常状態に戻した。次いで、各マウスに、静脈内尾静脈注射を介して、１００μＬのＰＢＳ中の１×１０７のＭＯＬＭ−１３細胞を接種した。次に、マウスを６頭の３群にランダム化した。腫瘍の接種の３日後、マウスに、ビヒクル、７５ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７または１５０ｍｇ／ｋｇのＭＰＣ−０７６７を１日１回投与し、生存について監視した。生存率および体重減少を毎日監視した。有意な体重減少および／または臨床症状（麻痺、低体温または頻呼吸）は、３群すべてで病的状態の直前にのみ確認された。図３０に示される通り、ＭＰＣ−０７６７は、７５ｍｇ／ｋｇでは１．５日まで、１５０ｍｇ／ｋｇでは１０日までに生存期間中央値を有意に増大させた（Ｐ＜０．０１、ログランク（マンテル・コックス）検定）。要約すると、ＭＰＣ−０７６７は、有意な用量依存的な抗腫瘍活性を実証した。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２７Ｄ】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【国際調査報告】
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