(57)【要約】  本発明は、IL-37、IL-37に結合するための抗体およびその関連する断片、前記抗体および断片の製造、ならびに様々な状態の検出および治療のための前記抗体および断片の使用に関する。例えば、本発明は、IL-37に結合するまたはそれに特異的に結合し、およびIL-37活性を阻害する抗原結合部位に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
IL-37に結合または特異的に結合し、およびIL-37活性を阻害する、抗原結合部位。
【請求項２】
前記抗原結合部位が抗体の抗原結合ドメインを含み、前記抗原結合ドメインがIL-37に結合または特異的に結合し、およびIL-37活性を阻害する、請求項１に記載の抗原結合部位。
【請求項３】
阻害される前記IL-37活性が、IL-18受容体α（IL-18Rα）、IL-1受容体8、またはIL-18受容体α(IL-18Rα)およびIL-1受容体8を含むそれらの複合体へのIL-37の結合である、請求項１または２に記載の抗原結合部位。
【請求項４】
阻害される前記IL-37活性が、IL-37媒介性細胞シグナル伝達である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項５】
阻害される前記IL-37活性が、インビトロまたはインビボでのIL-37媒介性抗炎症反応である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項６】
阻害される前記IL-37活性が、インビトロまたはインビボでのIL-37媒介性先天性免疫応答である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項７】
阻害される前記IL-37活性が、インビトロまたはインビボでのIL-37媒介性適応免疫応答である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項８】
阻害される前記IL-37活性が、サイトカイン産生または分泌におけるIL-37媒介性の減少である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項９】
前記サイトカインが、sICAM-1、IFN-ガンマ、I-TAC、G-SCF、IL-16、IL-10、IL-13、TNF、I-309、IL-2、IL-7、M-CSF、TIMP-1、IL-1アルファ、MIP-1アルファ、RANTES、MIG、IL-1Ra、sTREM-1、MCP-5、IP-10、MCP-1、IL-23、KC、IL-1ベータ、MIP-2、IL-17、IL-17F、IL-4、IL-5、IL-33、IL-25、IL-21、IL-22 エオタキシンおよびIL-6からなる群から選択されるいずれか１以上である、請求項８に記載の抗原結合部位。
【請求項１０】
前記サイトカインが、IL-1β、IL-6およびTNFから選択される炎症促進性サイトカインである、請求項９に記載の抗原結合部位。
【請求項１１】
前記サイトカイン産生または分泌におけるIL-37媒介性の減少が、単球、マクロファージ、末梢血単核細胞（PBMC）、がん細胞、内皮細胞、上皮細胞もしくは樹状細胞またはそれらに由来する細胞からのものである、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項１２】
前記抗原結合部位が、ヒトIL-37に結合するまたは特異的に結合する、請求項1〜11のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項１３】
前記ヒトIL-37が二量体形態である、請求項12に記載の抗原結合部位。
【請求項１４】
前記ヒトIL-37が単量体形態である、請求項12に記載の抗原結合部位。
【請求項１５】
前記抗原結合部位が、配列番号1に示されるアミノ酸配列を含み、本質的にそれからなり、またはそれからなるヒトIL-37分子に、結合または特異的に結合する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項１６】
前記抗原結合部位が、IL-18および／またはIL-1βに、検出可能な程度に結合しないか、または有意に結合しない、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項１７】
前記抗原結合部位が、
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4 - リンカー - FR1a - CDR1a - FR2a - CDR2a - FR3a - CDR3a - FR4aを含み、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
FR1a、FR2a、FR3aおよびFR4aは、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1a、CDR2aおよびCDR3aは、それぞれ相補性決定領域であり;
フレームワーク領域または相補性決定領域のいずれかの配列が、本明細書に記載の通りである、
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項１８】
前記相補性決定領域のいずれかの配列が、本明細書の表１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の抗原結合部位。
【請求項１９】
前記フレームワーク領域のいずれかの配列が、本明細書の表３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１７または１８に記載の抗原結合部位。
【請求項２０】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号5に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号6に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号9に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii)配列番号2に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号8に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号5に記載の配列を含むCDR1、配列番号6の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号9に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号2に記載の配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号8に記載の配列を含むVL;
(ix)配列番号5に記載の配列を含むCDR1、配列番号6の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号2に記載の配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号9に記載の配列を含むVH、および配列番号8に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位。
【請求項２１】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号15に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号16に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号19に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii)配列番号12に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号18に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号15に記載の配列を含むCDR1、配列番号16の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号19に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号12に記載の配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号18に記載の配列を含むVL;
(ix)配列番号15に記載の配列を含むCDR1、配列番号16の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号12に記載の配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号19に記載の配列を含むVH、および配列番号18に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位。
【請求項２２】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号41に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号42に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号51に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号52に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(iii)配列番号45または55に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iv)配列番号38に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(v)配列番号58に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(vi)配列番号44または64に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(vii)配列番号41に記載の配列を含むCDR1、配列番号42の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(viii)配列番号51に記載の配列を含むCDR1、配列番号52の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(ix)配列番号45または55に記載の配列を含むVH;
(x)配列番号38に記載の配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(xi)配列番号58に記載の配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(xii)配列番号44または64に記載の配列を含むVL;
(xiii)配列番号41に記載の配列を含むCDR1、配列番号42の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号38に記載の配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(xiv)配列番号51に記載の配列を含むCDR1、配列番号52の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号48に記載の配列を含むCDR1、配列番号49に記載の配列を含むCDR2、および配列番号50に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(xv)配列番号61に記載の配列を含むCDR1、配列番号62の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号63に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号58に記載の配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(xvi)配列番号71に記載の配列を含むCDR1、配列番号72の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号73に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号68に記載の配列を含むCDR1、配列番号69に記載の配列を含むCDR2、および配列番号70に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(xvii)配列番号44に記載の配列を含むVH、および配列番号45に記載の配列を含むVL;
(xviii)配列番号54に記載の配列を含むVH、および配列番号55に記載の配列を含むVL;
(xix)配列番号64に記載の配列を含むVH、および配列番号65に記載の配列を含むVL;
(xx)配列番号74に記載の配列を含むVH、および配列番号75に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位。
【請求項２３】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号141に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号142に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号145に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii)配列番号138に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号144に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号141に記載の配列を含むCDR1、配列番号142の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号145に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号138に記載の配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号144に記載の配列を含むVL;
(ix)配列番号141に記載の配列を含むCDR1、配列番号142の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号138に記載の配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号145に記載の配列を含むVH、および配列番号144に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位。
【請求項２４】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号151に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号152に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号155に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii)配列番号148に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号154に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号151に記載の配列を含むCDR1、配列番号152の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号155に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号148に記載の配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号154に記載の配列を含むVL;
(ix)配列番号151に記載の配列を含むCDR1、配列番号152の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号148に記載の配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号155に記載の配列を含むVH、および配列番号154に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位。
【請求項２５】
抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、
前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)以下、
- 各々配列番号5、6および7;
- 各々配列番号15、16および17;
- 各々配列番号41、42および43;
- 各々配列番号51、52および53;
- 各々配列番号61、62および63;
- 各々配列番号71、72および73;
- 各々配列番号81、82および83;
- 各々配列番号91、92および93;
- 各々配列番号101、102および103;
- 各々配列番号111、112および113;
- 各々配列番号121、122および123;
- 各々配列番号131、132および133; 
- 各々配列番号141、142および143;
- 各々配列番号151、152および153;
- 各々配列番号161、162および163;
- 各々配列番号171、172および173;
- 各々配列番号181、182および183;
- 各々配列番号191、192および193;
- 各々配列番号201、202および203
に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む、相補性決定領域 (CDR) 1、CDR2およびCDR3を含む、VH;
(ii)配列番号9、配列番号19、配列番号45、配列番号55、配列番号65、配列番号75、配列番号85、配列番号95、配列番号105、配列番号115、配列番号125、配列番号135、配列番号145、配列番号155、配列番号165、配列番号175、配列番号185、配列番号195または配列番号205に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii)以下:
- 各々配列番号2、3および4;
- 各々配列番号12、13および14;
- 各々配列番号38、39および40;
- 各々配列番号48、49および50;
- 各々配列番号58、59および60;
- 各々配列番号68、69および70;
- 各々配列番号78、79および80;
- 各々配列番号88、89および90;
- 各々配列番号98、99および100;
- 各々配列番号108、109および110;
- 各々配列番号118、119および120;
- 各々配列番号128、129および130; 
- 各々配列番号138、139および140;
- 各々配列番号148、149および150;
- 各々配列番号158、159および160;
- 各々配列番号168、169および170;
- 各々配列番号178、179および180;
- 各々配列番号188、189および190; または
- 各々配列番号198、199および200
に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、CDR2およびCDR3を含むVL;
(iv)配列番号8、配列番号18、配列番号44、配列番号54、配列番号64、配列番号74、配列番号84、配列番号94、配列番号104、配列番号114、配列番号124、配列番号134、配列番号144、配列番号154、配列番号164、配列番号174、配列番号184、配列番号194、または配列番号204に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVL;
(v)以下:
- 各々配列番号5、6および7;
- 各々配列番号15、16および17;
- 各々配列番号41、42および43;
- 各々配列番号51、52および53;
- 各々配列番号61、62および63;
- 各々配列番号71、72および73;
- 各々配列番号81、82および83;
- 各々配列番号91、92および93;
- 各々配列番号101、102および103;
- 各々配列番号111、112および113;
- 各々配列番号121、122および123;
- 各々配列番号131、132および133; 
- 各々配列番号141、142および143;
- 各々配列番号151、152および153;
- 各々配列番号161、162および163;
- 各々配列番号171、172および173;
- 各々配列番号181、182および183;
- 各々配列番号191、192および193; または
- 各々配列番号201、202および203
のいずれか１つに記載の配列を含む、CDR1、CDR2およびCDR3を含むVH;
(vi)配列番号9、配列番号19、配列番号45、配列番号55、配列番号65、配列番号75、配列番号85、配列番号95、配列番号105、配列番号115、配列番号125、配列番号135、配列番号145、配列番号155、配列番号165、配列番号175、配列番号185、配列番号195、または配列番号205に記載の配列を含むVH;
(vii)以下:
- 各々配列番号2、3および4;
- 各々配列番号12、13および14;
- 各々配列番号38、39および40;
- 各々配列番号48、49および50;
- 各々配列番号58、59および60;
- 各々配列番号68、69および70;
- 各々配列番号78、79および80;
- 各々配列番号88、89および90;
- 各々配列番号98、99および100;
- 各々配列番号108、109および110;
- 各々配列番号118、119および120;
- 各々配列番号128、129および130; 
- 各々配列番号138、139および140;
- 各々配列番号148、149および150;
- 各々配列番号158、159および160;
- 各々配列番号168、169および170;
- 各々配列番号178、179および180;
- 各々配列番号188、189および190;または
- 各々配列番号198、199および200
のいずれか1つに記載の配列を含む、CDR1、CDR2およびCDR3を含むVL;
(viii)配列番号8、配列番号18、配列番号44、配列番号54、配列番号64、配列番号74、配列番号84、配列番号94、配列番号104、配列番号114、配列番号124、配列番号134、配列番号144、配列番号154、配列番号164、配列番号174、配列番号184、配列番号194、または配列番号204に記載の配列を含むVL;
(ix)以下:
- 各々配列番号5、6、7、ならびに2、3および4;
- 各々配列番号15、16、17、ならびに12、13および14;
- 各々配列番号41、42、43、ならびに38、39および40;
- 各々配列番号51、52、53、ならびに48、49および50;
- 各々配列番号61、62、63、ならびに58、59および60;
- 各々配列番号71、72、73、ならびに68、69および70;
- 各々配列番号81、82、83、ならびに78、79および80;
- 各々配列番号91、92、93、ならびに88、89および90;
- 各々配列番号101、102、103、ならびに98、99および100;
- 各々配列番号111、112、113、ならびに108、109および110;
- 各々配列番号121、122、123、ならびに118、119および120;
- 各々配列番号131、132、133、ならびに128、129および130; 
- 各々配列番号141、142、143、ならびに138、139および140;
- 各々配列番号151、152、153、ならびに148、149および150;
- 各々配列番号161、162、163、ならびに158、159および160;
- 各々配列番号171、172、173、ならびに168、169および170;
- 各々配列番号181、182、183、178、179および180;
- 各々配列番号191、192、193、ならびに188、189および190; または
- 各々配列番号201、202、203、ならびに198、199および200;
に記載の配列を含むCDR1、CDR2およびCDR3を含むVH、ならびにCDR1、CDR2およびCDR3を含むVL、
(x)以下:
- 各々配列番号9および8;
- 各々配列番号19および18;
- 各々配列番号45および44;
- 各々配列番号55および54;
- 各々配列番号65および64;
- 各々配列番号75および74; 
- 各々配列番号85および84;
- 各々配列番号95および94;
- 各々配列番号105および104;
- 各々配列番号115および114;
- 各々配列番号125および124;
- 各々配列番号135および134;
- 各々配列番号145および144;
- 各々配列番号155および154;
- 各々配列番号165および164;
- 各々配列番号175および174;
- 各々配列番号185および184;
- 各々配列番号195および194; または
- 各々配列番号205および204
のいずれか1つに記載の配列を含むVHおよびVL;
のうちの少なくとも１つを含む、抗原結合部位。
【請求項２６】
前記抗原結合部位が、以下:
(i)一本鎖Fv断片(scFv);
(ii)二量体scFv(di-scFv); 
(iii)抗体の定常領域、Fcもしくは重鎖定常ドメイン(CH) 2および／またはCH3に連結した(i)または(ii)のうちの１つ;あるいは
(iv)免疫エフェクター細胞に結合するタンパク質に連結した(i)または(ii)のうちの１つ、
の形態である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の前記抗原結合部位。
【請求項２７】
前記抗原結合部位が、以下:
(i)  ダイアボディ;
(ii)  トリアボディ;
(iii)  テトラボディ;
(iv)  Fab;
(v)  F(ab’)2;
(vi)  Fv;
(vii)  抗体の定常領域、Fcもしくは重鎖定常ドメイン(CH) 2および／またはCH3に連結した(i)〜(vi)のうちの１つ;
(viii)  免疫エフェクター細胞に結合するタンパク質に連結した(i)〜(vi)のうちの１つ、
の形態である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の前記抗原結合部位。
【請求項２８】
抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の抗原結合部位。
【請求項２９】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位をコードする核酸。
【請求項３０】
請求項２９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項３１】
前記核酸が、プロモーターに作動可能に連結されている、請求項３０に記載のベクター。
【請求項３２】
前記ベクターが、５’から３’の順で以下の作動可能に連結された組成要素:
(i)  プロモーター
(ii)  第一のポリペプチドをコードする核酸;
(iii)  内部リボソーム進入部位; および
(iv)  第二のポリペプチドをコードする核酸、
を含み、第一のポリペプチドがVHを含み、および第二のポリペプチドがVLを含むか、またはその逆である、請求項３１に記載のベクター。
【請求項３３】
請求項２９〜３２のいずれか１項に記載のベクターまたは核酸を含む細胞。
【請求項３４】
細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３５】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位、および医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３６】
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位を含むキットまたは製品。
【請求項３７】
対象における内在性IL-37の発現上昇に関連する状態を治療または予防する方法であって、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位を前記対象に投与することを含み、それにより内在性IL-37の発現上昇に関連する状態を治療または予防する、方法。
【請求項３８】
対象におけるがんを治療または予防するための方法であって、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位を前記対象に投与することを含み、それによりがんを治療または予防する、方法。
【請求項３９】
対象における免疫麻痺と関連する状態を治療または予防するための方法であって、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位を前記対象に投与することを含み、それにより免疫麻痺と関係のある状態を治療または予防する方法。
【請求項４０】
免疫麻痺に関連する状態が、敗血症、急性肝不全、または慢性肝不全である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
個体から得られた生物学的試料中のIL-37のレベルを決定するための、
請求項１〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部位の使用。
【請求項４２】
生物学的試料中のIL-37のレベルを決定することにより、IL-37レベルの変化によって特徴付けられる疾患または状態についての個体の診断が可能となる、請求項４１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、IL-37、IL-37に結合する抗体およびそれに関する断片、前記抗体および断片の製造、および様々な状態の検出および治療のための前記抗体および断片の使用に関する。
【０００２】
関連出願
本出願は、オーストラリア仮出願第AU 2016905344号からの優先権を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
インターロイキン(IL)-37(以前はインターロイキン-1ファミリーメンバー7、またはIL-1F7として知られた)は、炎症促進性リガンドのIL-1α、IL-1β、IL-18、IL-33、IL-36α、IL-36β、IL-36γ、および抗炎症メンバーのIL-1受容体アンタゴニスト(IL-1Ra)、IL-36Ra、IL-37、IL-38からなる、IL-1ファミリーのメンバーである。IL-37は、IL-1β、腫瘍壊死因子(TNF)、およびインターフェロン(IFN)γといった炎症促進性のサイトカインならびにトール様受容体(TLR)を含む広範囲の炎症性攻撃の活性に対抗する機能を発揮することによって、大部分の他の抗炎症サイトカインと区別される。従って、ヒト肺上皮細胞株A549におけるIL-37の発現は、IL-1αおよびIL-6のような炎症促進性サイトカインの産生を抑制した。IL-37のマウスホモログは未だ同定されていないので、インビボでの研究では、ヒトIL-37についてのトランスジェニックマウスを使用した。これらのマウスは、リポ多糖（LPS）誘発性ショック、実験的大腸炎、虚血性肝障害および肥満誘発性炎症を含む疾患の多くの動物モデルにおいて保護された。
【０００４】
IL-37は、IL-1β、IL-18、TNF、IFNγまたはTLRアゴニストなどの様々な炎症促進性刺激によって誘導可能である。IL-37は、IL1F7遺伝子によってコードされ、IL1F7a-eと呼ばれる５つのスプライスバリアントで発現する。最長で、6つのエクソンのうち5つを持つ唯一のアイソフォームであるIL-37bは、これまで最もよく研究されているスプライスバリアントである。IL-1βおよびIL-18のような他のIL-1ファミリーリガンドと同様に、IL-37は前駆体分子として発現し、カスパーゼ-1切断部位を含む。
【０００５】
IL-37は、2つの異なるメカニズムで炎症を抑制する。一方で、IL-37は、核内に移行してSmad 3依存的様式で炎症促進性サイトカインを阻害することによって細胞内で作用する。他方、IL-37は細胞から放出され、次いでIL-18受容体α（IL-18Rα）およびIL-1受容体8（IL-1R8、以前は単一の免疫グロブリンIL-1R関連分子、SIGIRRとして知られていた）を含む、細胞表面受容体複合体に結合することによって、炎症を抑制する。
【０００６】
例えばがんの治療において、抗炎症反応の阻害が有益な状況がある。
【０００７】
本明細書において任意の先行技術を参考することは、この先行技術が任意の法域において共通の一般的知識の一部を形成すること、またはこの先行技術が理解され、妥当であると見なされ、および／または当業者によって、先行技術の他の部分を組み合わされると合理的に予想され得るということを、承認または示唆するものではない。
【発明の概要】
【０００８】
発明の要旨
本発明は、IL-37と結合または特異的に結合しおよびIL-37活性を阻害する抗原結合部位を提供する。
【０００９】
好ましくは、抗原結合部位が抗体の抗原結合ドメインを含み、抗原結合ドメインがIL-37と結合または特異的に結合しおよびIL-37活性を阻害する。
【００１０】
本発明の任意の抗原結合部位によって阻害され得るIL-37活性としては、以下：IL-37の、IL-18レセプターα(IL-18Rα)、IL-1レセプター 8、またはIL-18レセプターα(IL-18Rα)およびIL-1レセプター 8を含むそれらの複合体への結合；IL-37の、SMAD3への結合またはそれとの相互作用；IL-37の、DNAへの結合またはそれとの相互作用；IL-37媒介性の細胞シグナル伝達；インビトロまたはインビボでのIL-37媒介性の抗炎症反応；IL-37媒介性のサイトカイン産生または分泌の減少；および/または自己分泌または傍分泌のIL-37媒介性のサイトカイン産生または分泌の減少が挙げられる。好ましくは、サイトカインは、sICAM-1、IFN-ガンマ、I-TAC、G-SCF、IL-16、IL-10、IL-13、TNF、I-309、IL-2、IL-7、M-CSF、TIMP-1、IL-1アルファ、MIP-1アルファ、RANTES、MIG、IL-1Ra、sTREM-1、MCP-5、IP-10、MCP-1、IL-23、KC、IL-1ベータ、MIP-2、IL-17、IL-17F、IL-4、IL-5、IKL-33、IL-25、IL-21、IL-22、エオタキシン、およびIL-6を含む、本明細書に記載のいずれか1以上である。より好ましくは、サイトカインは、M-CSF、TIMP-1、IL-1アルファ、MIP-1アルファ、RANTES、MIG、IL-1Ra、sTREM-1、MCP-5、IP-10、MCP-1、IL-23、KC、IL-1ベータ、MIP-2、IL-17、エオタキシンおよびIL-6のうちのいずれか1以上である。最も好ましくは、炎症促進性サイトカインは、IL-1β、IL-6、および/またはTNFである。好ましくは、IL-37媒介性の活性は、単球、マクロファージ、末梢血単核球(PBMC)、がん細胞またはそれら由来の細胞を使用して決定される。好ましくは、がん細胞は、A549のような肺上皮細胞、またはTHP-1のような単球白血病細胞である。
【００１１】
本発明の任意の実施態様において、本発明の抗原結合部位は、ヒトIL-37へ結合または特異的に結合する。抗原結合部位により結合されるIL-37は、任意のホモログ、またはIL-37の配列変異体を含んでいることが理解されるであろう。さらに、ヒトIL-37は単量体または二量体形態であり得る。IL-37の単量体形態には、二量体を形成する傾向を減らすIL-37の変異体が含まれ得、D73KまたはY85Aの突然変異を持つIL-37分子、またはPCT／AU2016／050495に記載されたいずれか１以上の突然変異が含まれ得る。なおさらに、本発明の抗原結合部位に結合されたヒトIL-37は、IL-37のプロペプチドと一致するアミノ酸配列を含み得、本質的にそれから成り得、またはそれから成り得る。あるいは、IL-37は、例えば(プロペプチド配列の)N末端のアミノ酸1から46またはそれと同等の配列を除去後の、ヒトIL-37ペプチドの成熟型であり得る。IL-37は、PBMCから産生される内在性のIL-37であり得る。あるいは、IL-37は、外因性のソース由来であり得、および治療の一環として個体に投与されたものである。このような状況において、本発明の抗原結合部位は、投与された外因性のIL-37の活性を阻害またはブロックするのに有用であり得る。好ましくは、抗原結合部位は、配列番号1に示したアミノ酸配列を含み、本質的にそのアミノ酸配列からなり、またはそのアミノ酸配列からなるヒトIL-37分子と結合または特異的に結合する。
【００１２】
好ましくは、抗原結合部位は、炎症促進性の刺激によって誘導されるIL-37活性を阻害または低減するものである。炎症促進性の刺激は、例えばバクテリア感染(そこでの刺激は菌体内毒素リポ多糖LPSであり得る)、ウイルス感染、がん細胞により産生されるものを含む任意の炎症促進性の刺激、または個体における炎症促進性の反応を誘発することが知られている任意の他の生物学的、化学的、もしくは物理的な物質もしくは刺激の結果であり得る。
【００１３】
本発明の、IL-37に結合する抗原結合部位は、単球、マクロファージ、PBMC、がん細胞、内皮細胞、上皮細胞, 樹状細胞またはそれ由来の細胞からのサイトカイン産生または分泌における任意のIL-37媒介性の減少を阻害し得る。
【００１４】
例えば、抗原結合部位は、抗原結合部位が存在していない時と比較して、PBMCまたはそれ由来の細胞タイプ、またはがん細胞におけるIL-1βの産生または分泌を増加し得る。IL-37活性の減少または阻害は、実施例４、５または６に記載されるいずれかの方法によることを含む、本明細書に記載した任意の方法によって決定され得る。
【００１５】
本発明の抗原結合部位は、IL-37に結合し得、およびIL-18および／またはIL-1βおよび／またはIL-1Raおよび／またはIL-36および／またはIL-36Raおよび／またはIL-38に検出可能な程度に結合しない場合があるか、または有意に結合しない場合がある。IL-18および／またはIL-1βに対する抗原結合部位の結合は、本明細書に記載した任意の方法、特に実施例３に記載のイムノブロッティングによって決定され得る。
【００１６】
本発明は、IL-37への結合のための抗原結合部位であって、前記抗原結合部位が、以下:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4 - リンカー - FR1a - CDR1a - FR2a - CDR2a - FR3a - CDR3a - FR4a 
を含み、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
FR1a、FR2a、FR3aおよびFR4aは、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1a、CDR2aおよびCDR3aは、それぞれ相補性決定領域であり;
フレームワーク領域または相補性決定領域のいずれかの配列は、本明細書に記載している通りである。
【００１７】
本発明は、IL-37への結合のための抗原結合部位であって、前記抗原結合部位が、以下:
FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4 - リンカー - FR1a - CDR1a - FR2a - CDR2a - FR3a - CDR3a - FR4a 
を含み、
FR1、FR2、FR3およびFR4は、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1、CDR2およびCDR3は、それぞれ相補性決定領域であり;
FR1a、FR2a、FR3aおよびFR4aは、それぞれフレームワーク領域であり;
CDR1a、CDR2aおよびCDR3aは、それぞれ相補性決定領域であり;
相補性決定領域のいずれかの配列は、下記の表1に記載のアミノ酸配列を有する。好ましくは、フレームワーク領域は、下記の表3に記載のアミノ酸配列を有する。CDR1、CDR2、およびCDR3は、可変重鎖(VH)からの配列であり得; CDR1a、CDR2a、およびCDR3aは、可変軽鎖(VL)からの配列であり得る。あるいは、CDR1、CDR2、およびCDR3は、VLからの配列であり、CDR1a、CDR2a、およびCDR3aは、VHからの配列である。
【００１８】
本発明は、(NからC末端またはCからN末端の順序で)以下:
- 配列番号8 および 9; 
- 配列番号18 および 19;
- 配列番号44 および 45;
- 配列番号54 および 55;
- 配列番号64 および 65;
- 配列番号74 および 75;
- 配列番号84 および 85;
- 配列番号94 および 95;
- 配列番号104 および 105;
- 配列番号114 および 115;
- 配列番号124 および 125;
- 配列番号134 および 135;
- 配列番号144 および 145;
- 配列番号154 および 155;
- 配列番号164 および 165;
- 配列番号174 および 175;
- 配列番号184 および 185;
- 配列番号194 および 195; または
- 配列番号204 および 205;
のアミノ酸配列を含み、本質的にそれからなり、またはそれからなる抗原結合部位を提供する。
【００１９】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号5に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号6に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号9に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号2に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号8に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号5に記載の配列を含むCDR1、配列番号6の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号9に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号2に記載の配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号8に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号5に記載の配列を含むCDR1、配列番号6の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号7に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号2に記載の配列を含むCDR1、配列番号3に記載の配列を含むCDR2、および配列番号4に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号9に記載の配列を含むVH、および配列番号8に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２０】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号15に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号16に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号19に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号12に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号18に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号15に記載の配列を含むCDR1、配列番号16の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号19に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号12に記載の配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号18に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号15に記載の配列を含むCDR1、配列番号16の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号17に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号12に記載の配列を含むCDR1、配列番号13に記載の配列を含むCDR2、および配列番号14に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号19に記載の配列を含むVH、および配列番号18に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２１】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号41に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号42に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号45に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号38に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号44に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号41に記載の配列を含むCDR1、配列番号42の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号45に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号38に記載の配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号44に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号41に記載の配列を含むCDR1、配列番号42の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号43に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号38に記載の配列を含むCDR1、配列番号39に記載の配列を含むCDR2、および配列番号40に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号45に記載の配列を含むVH、および配列番号44に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２２】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号51に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号52に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号55に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号48に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号49に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号50に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号54に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号51に記載の配列を含むCDR1、配列番号52の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号55に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号48に記載の配列を含むCDR1、配列番号49に記載の配列を含むCDR2、および配列番号50に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号54に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号51に記載の配列を含むCDR1、配列番号52の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号53に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号48に記載の配列を含むCDR1、配列番号49に記載の配列を含むCDR2、および配列番号50に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号55に記載の配列を含むVH、および配列番号54に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２３】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号61に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号62に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号63に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号65に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号58に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号64に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号61に記載の配列を含むCDR1、配列番号62の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号63に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号65に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号58に記載の配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号64に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号61に記載の配列を含むCDR1、配列番号62の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号63に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号58に記載の配列を含むCDR1、配列番号59に記載の配列を含むCDR2、および配列番号60に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号65に記載の配列を含むVH、および配列番号64に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２４】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号71に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号72に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号73に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号75に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号68に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号69に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号70に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号74に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号71に記載の配列を含むCDR1、配列番号72の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号73に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号75に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号68に記載の配列を含むCDR1、配列番号69に記載の配列を含むCDR2、および配列番号70に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号74に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号71に記載の配列を含むCDR1、配列番号72の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号73に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号68に記載の配列を含むCDR1、配列番号69に記載の配列を含むCDR2、および配列番号70に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号75に記載の配列を含むVH、および配列番号74に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２５】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号81に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号82に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号83に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号85に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号78に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号79に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号80に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号84に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号81に記載の配列を含むCDR1、配列番号82の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号83に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号85に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号78に記載の配列を含むCDR1、配列番号79に記載の配列を含むCDR2、および配列番号80に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号84に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号81に記載の配列を含むCDR1、配列番号82の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号83に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号78に記載の配列を含むCDR1、配列番号79に記載の配列を含むCDR2、および配列番号80に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号85に記載の配列を含むVH、および配列番号84に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２６】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号91に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号92に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号93に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号95に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号88に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号89に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号90に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号94に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号91に記載の配列を含むCDR1、配列番号92の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号93に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号95に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号88に記載の配列を含むCDR1、配列番号89に記載の配列を含むCDR2、および配列番号90に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号94に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号91に記載の配列を含むCDR1、配列番号92の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号93に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号88に記載の配列を含むCDR1、配列番号89に記載の配列を含むCDR2、および配列番号90に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号95に記載の配列を含むVH、および配列番号94に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２７】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号101に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号102に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号103に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号105に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号98に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号99に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号100に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号104に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号101に記載の配列を含むCDR1、配列番号102の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号103に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号105に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号98に記載の配列を含むCDR1、配列番号99に記載の配列を含むCDR2、および配列番号100に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号104に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号101に記載の配列を含むCDR1、配列番号102の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号103に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号98に記載の配列を含むCDR1、配列番号99に記載の配列を含むCDR2、および配列番号100に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号105に記載の配列を含むVH、および配列番号104に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２８】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号111に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号112に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号113に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号115に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号108に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号109に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号110に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号114に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号111に記載の配列を含むCDR1、配列番号112の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号113に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号115に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号108に記載の配列を含むCDR1、配列番号109に記載の配列を含むCDR2、および配列番号110に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号114に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号111に記載の配列を含むCDR1、配列番号112の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号113に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号108に記載の配列を含むCDR1、配列番号109に記載の配列を含むCDR2、および配列番号110に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号115に記載の配列を含むVH、および配列番号114に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００２９】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号121に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号122に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号123に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号125に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号118に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号119に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号120に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号124に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号121に記載の配列を含むCDR1、配列番号122の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号123に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号125に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号118に記載の配列を含むCDR1、配列番号119に記載の配列を含むCDR2、および配列番号120に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号124に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号121に記載の配列を含むCDR1、配列番号122の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号123に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号118に記載の配列を含むCDR1、配列番号119に記載の配列を含むCDR2、および配列番号120に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号125に記載の配列を含むVH、および配列番号124に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３０】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号131に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号132に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号133に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号135に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号128に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号129に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号130に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号134に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号131に記載の配列を含むCDR1、配列番号132の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号133に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号135に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号128に記載の配列を含むCDR1、配列番号129に記載の配列を含むCDR2、および配列番号130に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号134に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号131に記載の配列を含むCDR1、配列番号132の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号133に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号128に記載の配列を含むCDR1、配列番号129に記載の配列を含むCDR2、および配列番号130に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号135に記載の配列を含むVH、および配列番号134に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３１】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号141に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号142に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号145に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号138に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号144に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号141に記載の配列を含むCDR1、配列番号142の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号145に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号138に記載の配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号144に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号141に記載の配列を含むCDR1、配列番号142の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号143に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号138に記載の配列を含むCDR1、配列番号139に記載の配列を含むCDR2、および配列番号140に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号145に記載の配列を含むVH、および配列番号144に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３２】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号151に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号152に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号155に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号148に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号154に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号151に記載の配列を含むCDR1、配列番号152の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号155に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号1482に記載の配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号154に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号151に記載の配列を含むCDR1、配列番号152の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号153に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号148に記載の配列を含むCDR1、配列番号149に記載の配列を含むCDR2、および配列番号150に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号155に記載の配列を含むVH、および配列番号154に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３３】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号161に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号162に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号163に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号165に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号158に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号159に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号160に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号164に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号161に記載の配列を含むCDR1、配列番号162の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号163に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号165に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号158に記載の配列を含むCDR1、配列番号159に記載の配列を含むCDR2、および配列番号160に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号164に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号161に記載の配列を含むCDR1、配列番号162の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号163に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号158に記載の配列を含むCDR1、配列番号159に記載の配列を含むCDR2、および配列番号160に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号165に記載の配列を含むVH、および配列番号164に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３４】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号171に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号172に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号173に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号175に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号168に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号169に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号170に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号174に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号171に記載の配列を含むCDR1、配列番号172の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号173に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号175に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号168に記載の配列を含むCDR1、配列番号169に記載の配列を含むCDR2、および配列番号170に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号174に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号171に記載の配列を含むCDR1、配列番号172の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号173に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号168に記載の配列を含むCDR1、配列番号169に記載の配列を含むCDR2、および配列番号170に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号175に記載の配列を含むVH、および配列番号174に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３５】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号181に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号182に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号183に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号185に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号178に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号179に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号180に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号184に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号181に記載の配列を含むCDR1、配列番号182の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号183に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号185に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号178に記載の配列を含むCDR1、配列番号179に記載の配列を含むCDR2、および配列番号180に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号184に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号181に記載の配列を含むCDR1、配列番号182の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号183に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号178に記載の配列を含むCDR1、配列番号179に記載の配列を含むCDR2、および配列番号180に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号185に記載の配列を含むVH、および配列番号184に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３６】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号191に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号192に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号193に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号195に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号188に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号189に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号190に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号194に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号191に記載の配列を含むCDR1、配列番号192の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号193に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号195に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号188に記載の配列を含むCDR1、配列番号189に記載の配列を含むCDR2、および配列番号190に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号194に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号191に記載の配列を含むCDR1、配列番号192の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号193に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号188に記載の配列を含むCDR1、配列番号189に記載の配列を含むCDR2、および配列番号190に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号195に記載の配列を含むVH、および配列番号194に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３７】
本発明はまた、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位であって、前記抗原結合ドメインが、IL-37に結合または特異的に結合し、前記抗原結合ドメインが、以下:
(i)配列番号201に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含む相補性決定領域 (CDR) 1、配列番号202に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号203に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVH;
(ii)配列番号205に記載の配列と少なくとも約95%または96%または97%または98%または99%同一である配列を含むVH;
(iii) 配列番号198に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR1、配列番号199に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR2、および配列番号200に記載の配列と少なくとも約80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも92%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも99%同一である配列を含むCDR3を含むVL;
(iv)配列番号204に記載の配列と少なくとも約95%同一である配列を含むVL;
(v)配列番号201に記載の配列を含むCDR1、配列番号202の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号203に記載の配列を含むCDR3を含むVH;
(vi)配列番号205に記載の配列を含むVH;
(vii)配列番号198に記載の配列を含むCDR1、配列番号199に記載の配列を含むCDR2、および配列番号200に記載の配列を含むCDR3を含むVL;
(viii)配列番号204に記載の配列を含むVL;
(ix) 配列番号201に記載の配列を含むCDR1、配列番号202の間に記載の配列を含むCDR2、および配列番号203に記載の配列を含むCDR3を含むVH ; ならびに配列番号198に記載の配列を含むCDR1、配列番号199に記載の配列を含むCDR2、および配列番号200に記載の配列を含むCDR3を含むVL; そして
(x)配列番号205に記載の配列を含むVH、および配列番号204に記載の配列を含むVL、
のうちの少なくとも1つを含む、抗原結合部位を提供する。
【００３８】
本明細書に記載のように、抗原結合部位は、以下:
(i)一本鎖Fv断片(scFv);
(ii)二量体scFv(di-scFv); 
(iii)抗体の定常領域、Fc、または重鎖定常ドメイン(CH)2および／もしくはCH3と連結した(i)または(ii)のうちの1つ;あるいは
(iv)免疫エフェクター細胞と結合するタンパク質と連結した(i)または(ii)のうちの1つ;
の形態であり得る。
【００３９】
さらに、本明細書に記載の通り、抗原結合部位は以下:
(i)ダイアボディ;
(ii)トリアボディ;
(iii)テトラボディ; 
(iv)Fab;
(v)F(ab’)2;
(vi)Fv; 
(vii)抗体の定常領域、Fc、または重鎖定常ドメイン(CH)2および／もしくはCH3と連結した(i)から(vi)のうちの1つ;
(viii)免疫エフェクター細胞と結合するタンパク質と連結した(i)から(vi)のうちの1つ;
の形態であり得る。
前記の抗原結合部位もまた、抗体の抗原結合ドメインとして参照され得る。
【００４０】
本明細書に記載した抗原結合部位は、抗体またはその抗原結合断片であり得る。典型的には、抗原結合部位は、抗体、例えばモノクローナル抗体である。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、抗原結合部位は、可変ドメインであり得る。
【００４２】
任意の態様または実施形態において、抗体はネイキッド抗体である。特に、抗体は非結合体形態でありおよび結合体を形成するよう適合されていない。
【００４３】
１つの例では、本発明の抗原結合部位の相補性決定領域配列(CDR)は、カバットナンバリングシステムに従って定義される。
【００４４】
別の例では、CDRはIMGTナンバリングシステムに従って定義される。
【００４５】
本明細書におけるIL-37に「結合する(binds to)」タンパク質または抗体への言及は、IL-37「に特異的に結合する(binds specifically to)」または「に特異的に結合する(specifically binds to)」タンパク質または抗体についての文字通りの支持を提供する。
【００４６】
本発明は、前記の抗体の抗原結合ドメインまたは抗原結合断片もまた提供する。
【００４７】
本発明は、本明細書に記載した抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab(単一ドメイン抗体)、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、または多重特異性抗体を含む融合タンパク質もまた提供する。
【００４８】
本発明は、標識または細胞毒性薬と結合した、本明細書に記載した抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、または多重特異性抗体または融合タンパク質の形態で結合体もまた提供する。
【００４９】
本発明は、本明細書に記載した抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、または多重特異性抗体、融合タンパク質または結合体への結合のための抗体もまた提供する。
【００５０】
本発明は、本明細書に記載した抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、または多重特異性抗体、融合タンパク質または結合体をコードする核酸もまた提供する。そうであるから、本発明は、表2で提供されるヌクレオチド配列のいずれか一つを含み、本質的にそれからなり、またはそれからなる核酸もまた提供する。
【００５１】
1つの例では、そのような核酸は、その核酸がプロモーターに作動可能に連結されている発現構築物に含められる。そのような発現構築物は、ベクター、例えば、プラスミドの中に存在し得る。
【００５２】
単一ポリペプチド鎖の抗原結合部位を対象とする本発明の例では、発現構築物は、ポリペプチド鎖をコードする核酸に連結されたプロモーターを含み得る。
【００５３】
抗原結合部位を形成する多重ポリペプチド鎖を対象にする例では、発現構築物は、例えばプロモーターに作動可能に連結したVHを含むポリペプチドをコードする核酸および例えばプロモーターに作動可能に連結したVLを含むポリペプチドをコードする核酸を含む。
【００５４】
別の例では、発現構築物は、バイシストロニックな、例えば5’から3’の順で以下:
(i)プロモーター
(ii)第一のポリペプチドをコードする核酸;
(iii)配列内リボソーム進入部位;および
(iv)第二のポリペプチドをコードする核酸,
の作動可能に連結された構成要素を含む、発現構築物であり、第一のポリペプチドがVHを含み、および第二のポリペプチドがVLを含み、またはその逆である。
【００５５】
本発明は、別々の発現構築物であって、そのうちの一方がVHを含む第一のポリペプチドをコードし、およびそのうちの他方がVLを含む第二のポリペプチドをコードしている構築物も企図される。例えば、本発明は以下:
(i)プロモーターに作動可能に連結されたVHを含むポリペプチドをコードする核酸を含む第一の発現構築物;および
(ii)プロモーターに作動可能に連結されたVLを含むポリペプチドをコードする核酸を含む第二の発現構築物
を含む組成物も提供する。
【００５６】
本発明は、本明細書に記載したベクターまたは核酸を含む細胞を提供する。好ましくは、細胞は単離されたか、実質的に精製されたか、または組み換え体である。1つの例では、細胞は本発明の発現構築物または以下:
(i)プロモーターに作動可能に連結したVHを含むポリペプチドをコードする核酸を含む第一の発現構築物;および
(ii)プロモーターに作動可能に連結したVLを含むポリペプチドをコードする核酸を含む第二の発現構築物、
を含み、第一および第二のポリペプチドが結合し本発明の抗原結合部位を形成する。
【００５７】
本発明の細胞の例としては、バクテリア細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳動物細胞が挙げられる。
【００５８】
本発明は、抗原結合部位を含むか、あるいは本明細書に記載したCDRおよび／もしくはFR配列、または本明細書に記載した免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、もしくは多重特異性抗体、融合タンパク質、もしくは結合体ならびに医薬的に許容しうる担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物も提供する。
【００５９】
本発明は、抗原結合部位を含むか、あるいは本明細書に記載したCDRおよび／もしくはFR配列、または本明細書に記載した抗原結合部位、免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、もしくは多重特異性抗体、融合タンパク質もしくは結合体、希釈剤または必要に応じて標識を含む、診断組成物も提供する。
【００６０】
本発明は、抗原結合部位を含むか、あるいは本明細書に記載したCDRおよび／もしくはFR配列または本明細書に記載した免疫グロブリン可変ドメイン、抗体、dab、di-scFv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、リニア抗体、短鎖抗体分子、もしくは多重特異性抗体、融合タンパク質もしくは結合体を含む、キットまたは製造品も提供する。
【００６１】
本明細書に記載した抗原結合部位、タンパク質または抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4の定常領域またはそれらの混合物のような、例えばIgG定常領域といったヒト定常領域を含み得る。抗体またはタンパク質がVHおよびVL含む場合、VHが重鎖定常領域と連結し得、およびVLが軽鎖定常領域と連結し得る。
【００６２】
１つの例では、本明細書に記載したタンパク質または抗体は、IgG4抗体の定常領域またはIgG4抗体の安定化した定常領域を含む。１つの例では、タンパク質または抗体は、241位(Kabatのナンバリング方法に従って(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 および／または 1991))にプロリンを伴うIgG4定常領域を含む。
【００６３】
１つの例では、本明細書に記載したタンパク質もしくは抗体、または本明細書に記載したタンパク質もしくは抗体の組成物は、安定化した重鎖定常領域を含み、C末端のリジン残基を伴うまたは伴わない、全体または部分的な配列の混成物を含む、重鎖定常領域を含む。
【００６４】
１つの例では、本発明の抗体は、IgG4定常領域または安定化したIgG4定常領域(例えば、上記のもの)と連結または融合された、本明細書で開示されるVHを含み、およびVLはカッパ軽鎖定常領域と連結または融合される。
【００６５】
本発明の抗原結合部位の機能特性は、本発明の抗体へ準用されると解釈されるであろう。
本明細書で記載した抗原結合部位は、精製され得、実質的に精製され得、単離され得および／または組み換えであり得る。
【００６６】
本発明の抗原結合部位は、本発明の抗原結合部位を発現するハイブリドーマが増殖した培地から得られる上清の一部であり得る。
【００６７】
本発明は、対象における内在性のIL-37の上昇した発現、産生、活性化および／または分泌と関係する状態の治療または予防のための方法であって、対象へ本発明の抗原結合部位を投与することを含み、それにより内在性のIL-37の上昇した発現、産生、活性化および／または分泌と関係する状態の治療または予防する、方法もまた提供する。
【００６８】
本発明は、対象におけるがんの治療または予防のための方法であって、対象へ本発明の抗原結合部位を投与することを含み、それによりがんの治療または予防する、方法もまた提供する。この点については、抗原結合部位は、状態の再発を予防することに使われ得、およびこれが状態を予防すると考えられる。
【００６９】
例示的ながんとしては、血液がん、上皮由来のがん、肝臓がん、膵臓がん、胃がん、骨肉腫、子宮内膜がんおよび卵巣がん、または本明細書に記載されているその他の任意のがんまたは腫瘍の種類が挙げられる。
【００７０】
本発明は、対象における免疫麻痺に関連する状態の治療または予防のための方法であって、対象へ本発明の抗原結合部位を投与することを含み、それにより免疫麻痺に関係する状態を治療または予防する、方法も提供する。免疫麻痺に関連する例示的な状態としては、敗血症、および急性および慢性の肝不全が挙げられる。
【００７１】
本発明は、本明細書に記載のベクターまたは核酸分子を含む細胞もまた提供する。
本発明は、本明細書に記載の細胞を含む、動物またはそれ由来の組織もまた提供する。
【００７２】
本明細書中で用いられる場合、文脈上別段の要求がない限り、用語「comprise」ならびに「comprising」、「comprises」、および「comprised」のような、該用語の変形は、さらなる付加、成分、整数、工程を除外することを意図するものではない。
【００７３】
前の段落で説明した本発明のさらなる態様およびその態様のさらなる実施形態は、例の目的で与えられる以下の説明から、添付の図面を参照して明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】融合後の上清のヒトIL-37 ELISAの結果。マイクロアレイによる標的抗原への抗体の結合を評価した後、ポジティブクローンがELISAによりさらに試験された。示された結果は、ELISAによる組換えヒトIL-37およびネガティブコントロールとしてのGSTへの結合についての吸光度の読み取り（未加工の吸光度の読み取り）である。記載したポジティブ:ネガティブ比を計算しおよびポジティブクローンをC3、D3およびA3と同定した。
【図２】特異性および交差反応性の検出のための、組み換え(rec) IL-18、rec IL-1β、rec IL-37に対するハイブリドーマの上清の免疫ブロット法。ブロットは、クローンD3からの抗-IL-37ハイブリドーマの上清を使ってされた。試験したタンパク質との交差反応性は観察されなかった-レーン 1: rec IL-18、レーン 2: IL-1β、レーン 3: マーカー (強調された25KDaマーカー)、およびレーン 4: rec ヒト IL-37。
【図３】IL-1βのELISAの読み出しによる、LPSにより誘導された、内在性のIL-37のブロッキング。健康な被験者から新しく単離したPBMCは、表示濃度の、ハイブリドーマクローン D3の上清で培養された。その30分後、培養物はLPS (500pg／ml)またはビヒクルにより刺激された。上清は、LPS添加後0、1、3、6時間目で回収され、IL-1βがELISAで測定された。グラフは、pg／ml ±SEM (n=3 ドナー)での上清のIL-1βを示す。LPS単独と比べ、**, P < 0.01、***, P < 0.001。###、t0の1時間後のLPS +37bl1と比べて、P < 0.001。
【図４】IL-37-ブロッキング抗体の特性。新しく単離したPBMCは、表示された希釈のIL-37-ブロッキング抗体(クローンD3)またはコントロールでまず処理され、30分後D73K46-218またはビヒクルを表示された濃度で次に添加し、さらに30分後50 pg／ml LPSを添加した。LPSの添加後20時間で、培養上清中のIL-1βタンパク質量がELISAにより測定され、IL-37-ブロッキング抗体の存在下または非存在下におけるIL-37b変異体での処理によって提供されるパーセント変化が、計算されおよび± SEMでグラフにされた; n = 2、１の例示的ドナーからの生物学的レプリケート。
【図５】天然または単量体IL-37のブロッキング。天然1-218、D73K1-218、Y85A1-218を発現させる構築物が、THP-1細胞にトランスフェクトされた。24時間PMA (50 ng／ml)による分化および培地交換の後に、培養物はIL-37-ブロッキング抗体(1:50 希釈; クローン D3)またはコントロールで前処理され、次に250 ng／ml LPSまたはビヒクルで刺激された。IL-37-ブロッキング抗体で処理された培養物およびビヒクルで処理された培養物のペア(同一の構築物、すなわち、コントロール、天然、D73K、またはY85Aのペアでトランスフェクトされ、LPSにより刺激された)間のIL-1βタンパク質量の倍数変化が、計算されおよび平均値± SEMとしてグラフにされ；、それぞれのLPS刺激条件についてn = 4の生物学的リピートであり; 統計学的有意性は、順位に基づく分散分析およびStudent-Newman-Keuls事後分析を用いて評価されて; *, コントロールとIL-37bトランスフェクションとの比較について*, P < 0.05であり; #, for 天然1-218とD73K1-218またはY85A1-218との比較についてP < 0.05である。破線は、コントロール(すなわちIL-37bではない)でトランスフェクトされた培養物におけるIL-37-ブロッキング抗体によるIL-1β誘導のバックグランドを示している。
【図６】IL-37-ブロッキング抗体の特性。健康な被験者(n = 2)からのPBMCは、単離されおよび30分間ハイブリドーマの上清の様々な希釈(1:5から1:500のクローンC3)により前処理され、続いてLPS 刺激(500 pg／mL)の前に1時間様々な濃度(1 pg／mLから10 ng／mL)で天然組み換え体IL-37 (rIL-37)で処理された。１晩培養の後、上清が回収されIL-1βがELISAにより測定された。
【図７】ヒト末梢血細胞における、ハイブリドーマ上清による組み換えIL-37の抗炎症活性のブロッキング。2人のドナーからの新鮮なヒトPBMCが単離され、96穴プレートに2.5×105 細胞／ウェルで播種した。表示された希釈でクローンRD1のハイブリドーマ上清を加える前に、細胞を1時間静置させた。30分の培養後、10 pg／mlの組み換えIL-37 (Y85A 変異体)が加えられ、1時間培養した。細胞は次に200 pg／ml LPSで1晩刺激された。上清中のIL-1βは、ELISAによって測定され、IL-1βの変化は、必要に応じてLPS + ビヒクルまたはLPS + RD1と比較することで計算された。それぞれのグラフにはパーセントの平均値± s.e.mとして1人のドナーからのデータが示されている。
【図８】マウス脾細胞におけるハイブリドーマの上清による抗炎症IL-37活性のブロッキング。マウス脾細胞は、野生型(WT)およびIL-37トランスジェニック(IL-37tg)マウス(WTはn = 2、IL-37tgはn = 1)から単離され、96穴プレートに2.5×105 細胞／wellで播種した。生物学的トリプリケートで表示された濃度でのハイブリドーマクローンRF1 (左)およびRF3 (右)を添加する前に、細胞を1時間静置させた。30分のインキュベーションの後、細胞はLPS（200 pg／ml）で1晩刺激された。上清中のIL-6は、ELISAによって測定され、IL-6の変化は、LPS +ビヒクルに対してLPS + ハイブリドーマ上清を比較することで計算した。データはパーセントの平均値± s.e.mとして示されている。
【発明を実施するための形態】
【００７５】
発明の詳細な説明
本明細書において開示されおよび定義される本発明は、触れられたかまたは本文もしくは図から明らかな2以上の個々の特徴のすべての代替の組み合わせにまで及ぶことが理解される。これらの異なった組み合わせのすべてが、本発明の様々な代替的態様を構成する。
【００７６】
本発明のさらなる態様および前段落で記載した態様のさらなる実施形態は、例の目的で与えられる以下の説明から、添付の図面を参照し、明らかとなる。
【００７７】
これより、本発明の特定の実施形態について詳細に言及する。本発明を実施形態と併せて説明するが、その意図は、本発明をそれらの実施形態に限定することではないことが理解されるであろう。それどころか、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得るすべての代替物、修正物、および均等物をカバーすることが意図されている。
【００７８】
本発明者は、IL-37に結合しおよびIL-37の活性を阻害しまたは少なくする抗原結合部位、例えば抗体を開発した。IL-37は、抗炎症シグナル伝達を通じたヒト血球を含む様々な細胞タイプにおける炎症促進性のサイトカインの放出を抑制する。本明細書中に記載された抗原結合部位は、IL-37によって仲介される抗炎症活性の1以上の特性（aspect）を阻害するか、または低減する能力を有する。
【００７９】
一般
本明細書を通して、他に何か特に明記しない限りまたは文脈が他に何か必要としない限り、単一の工程、組成物、工程群または組成物群への言及は、１つおよび複数（すなわち１以上）のこれらの工程、組成物、工程群または組成物群を含むと解釈されるべきである。したがって、本明細書中で使用される場合、文脈が特に明示しない限り、単数形の「a」、「an」および「the」は、複数の態様を含み、逆もまた同様である。例えば、「a」への言及は、1つだけでなく2またはそれ以上を含み;「an」への言及は、1つだけでなく2またはそれ以上を含み;「the」への言及は、1つだけでなく2またはそれ以上を含むなどである。
【００８０】
当業者は、本発明が、具体的に記載されたもの以外の変形及び変更の影響を受けやすいことを理解する。本発明は、すべてのそのような変形および変更を含むことが理解されるべきである。本発明は、本明細書において個別的にまたは集合的に言及されたかまたは示されたすべての工程、特徴、組成物および化合物、ならびに前記工程もしくは特徴の任意および全ての組み合わせまたはいずれか2つ以上もまた含んでいる。
【００８１】
当業者は、本明細書中に記載されたのと同様または均等の多くの方法および材料を認識し、それらは本発明の実施に使用され得る。本発明は、記載された方法及び材料に決して限定されない。
【００８２】
本明細書で参照された特許および出版物のすべては、それら全体が、参照により組み込まれる。
【００８３】
本発明は、例示のみの目的が意図される、本明細書中に記載された特定の例により範囲が限定されるべきものではない。機能的に同等の生産物、組成物および方法は、明らかに本発明の範囲内である。
【００８４】
本明細書中で本発明の任意の例または実施形態は、特に明示しない限り本発明の任意の他の例または実施形態を準用すると解釈すべきである。
【００８５】
特に具体的に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者(例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、および生化学における)によって共通して理解されるものと同様の意味を持つと解釈されるべきである。
【００８６】
特に表示されていない限り、本開示で利用される組み換えタンパク質、細胞培養、および免疫学的技術は、当業者に周知の標準的な手順である。そのような技術は、以下、J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984)、J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)、T.A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991)、D.M. Glover and B.D. Hames (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 and 1996)、およびF.M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley- -Interscience (1988, 現在までのすべてのアップデートを含む)、Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988)、およびJ.E. Coligan et al. (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (現在までのすべてのアップデートを含む)のような出典の文献を通して述べられおよび説明される。
【００８７】
本明細書中の可変領域およびそれの一部、免疫グロブリン、抗体およびその断片についての記述および定義は、以下、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991、Bork et al., J Mol. Biol. 242, 309-320, 1994、Chothia and Lesk J. Mol Biol. 196:901 -917, 1987、Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989 および／またはAl-Lazikani et al., J Mol Biol 273, 927-948, 1997で考察されることにより、さらに明らかになり得る。
【００８８】
用語「および／または」、例えば、「Xおよび／またはY」は、「XおよびY」あるいは「XまたはY」の両方を意味し、両方の意味またはそのどちらかの意味に対する明確な支持を提供すると解釈されるべきである。
【００８９】
本明細書中で用いられる場合、用語「derived from」は、必ずしもその出典から直接的なものではないのだが、特定の出典から得られ得る特定の整数を示すと解釈されるべきである。
【００９０】
本明細書における、例えば残基の、範囲への言及は、包括的であると理解される。例えば、「アミノ酸56から65を含む領域」への言及は、包括的な様式で、すなわち、特定の配列内の56、57、58、59、60、61、62、63、64および65と番号付けられたアミノ酸の配列を含む領域と理解される。
【００９１】
選択された定義
本明細書中で使用される場合、IL-37の言及は、例えばインターロイキン18レセプターアルファ(IL-18R1／IL-1Rrp)に結合し、それに対するリガンドとなり得るものでおよび結合し得るといった、IL-37の生化学的または生物物理学的活性の少なくとも一つを持つ分子への言及である。それは、インターロイキン18 (IL-18)の抑制性の結合タンパク質、インターロイキン18結合タンパク質(IL-18BP)にも結合し得、そしてその後IL-18レセプターベータ鎖と複合体を形成し、そしてそれを通じIL-18の活性を阻害し得る。他のIL-37の生化学的または生物物理学的な活性としては、IL-1R8 (SIGIRR)への結合、SMAD3への結合、DNAへの結合、ヒトまたはマウスの免疫細胞における、TLRリガンド、IFNγ、TNF、IL-1βを含む、広範囲の免疫性攻撃により誘発される、炎症促進性であるが、抗炎症性ではない、サイトカイン産生の阻止樹状細胞の活性阻害(CD86およびMHC IIの細胞表面発現の減少)、mTOR、MAPKおよびNF-κB経路の封鎖を含む、細胞内キナーゼの特定パターンの調節の誘発、ならびにMerおよびPTENのような抗炎症キナーゼの誘導が挙げられる。
【００９２】
IL-37は、インターロイキン-37(FIL1 ゼータ; IL-1 ゼータ; IL-1F7b (IL-1H4, IL-1H, IL-1RP1); IL-1Xタンパク質; IL1F7 (標準的な生産物IL-1F7b);インターロイキン 1 ファミリーメンバー 7; インターロイキン 1 ゼータ; インターロイキン-1 ホモログ 4; インターロイキン-1 スーパーファミリー z; インターロイキン-1-関連タンパク質)としても知られている。ヒトIL-37には、5つの アイソフォーム、a、b、c、d、eがあり、特に明記しない限り、本明細書中でIL-37を参照するとき、それらのすべてが含まれる。ヒトIL-37ポリペプチドの任意のアイソフォームまたはオルソログもまた、本発明内で企図される。例えば、本発明は、ヒトIL-37アイソフォーム a、b、c、dまたはeのいずれかと同一性を有するポリペプチドを含む。
【００９３】
命名法のみを目的とし、本発明の抗原結合部位により結合されるIL-37の形の範囲を何ら制限するものではないが、例となるヒトIL-37分子の配列は、配列番号1に書かれている。
【００９４】
表現「IL-37活性を阻害する（inhibits IL-37 activity）」は、本発明の抗原結合部位が、IL-37のIL-18レセプター α（IL-18Rα）への、IL-1レセプター8への、またはIL-18 レセプターα（IL-18Rα）およびIL-1レセプター8を含むその複合体への結合; IL-37のSMAD3への結合またはそれとの相互作用; IL-37のDNAへの結合またはそれとの相互作用; IL-37を介した細胞シグナル伝達; IL-37を介したインビトロまたはインビボでの抗炎症反応; IL-37を介したサイトカイン産生または分泌の減少; および／あるいは自己分泌もしくは傍分泌のIL-37を介したサイトカインの産生または分泌の減少を含むがこれらに限定されない、IL-37の活性のいずれか１以上を阻害し、拮抗し、妨げ、低減することを意味すると理解される。
【００９５】
好ましくは、IL-37によって産生または分泌が減少するサイトカインは、炎症促進性のサイトカインである。好ましくは、サイトカインは、例えばsICAM-1、IFN-ガンマ、I-TAC、G-SCF、IL-16、IL-10、IL-13、TNF、I-309、IL-2、IL-7、M-CSF、TIMP-1、IL-1アルファ、MIP-1アルファ、RANTES、MIG、IL-1Ra、sTREM-1、MCP-5、IP-10、MCP-1、IL-23、KC、IL-1ベータ、MIP-2、IL-17、エオタキシンおよびIL-6のようにNold et al. (2010) Nature Immunology 11(11):1014-22に記載されたものを含んだ、IL-37によって調整されるものとして記載されたいずれか１以上のものである。より好ましくは、サイトカインは、M-CSF、TIMP-1、IL-1アルファ、MIP-1アルファ、RANTES、MIG、IL-1Ra、sTREM-1、MCP-5、IP-10、MCP-1、IL-23、KC、IL-1ベータ、MIP-2、IL-17、エオタキシンおよびIL-6のいずれか１以上である。もっとも好ましくは、炎症促進性のサイトカインは、IL-1β、IL-6、および／またはTNFである。IL-37によって産生または分泌が減少するサイトカインの例および細胞内の経路に対するIL-37の他の効果は、Nold-Petry et al., (2015) Nature Immunology 16, 354-365に要約されている。本発明の抗原結合部位を使用してIL-37の仲介するどの経路が改変され得るのかを決定できることは、十分に当業者の理解の範囲内である。
【００９６】
好ましくは、IL-37の仲介する活性は、単球、マクロファージ、末梢血単核球(PBMC)、がん細胞、またはそれら由来の細胞を使用して決定される。好ましくは、がん細胞は、A549のような肺上皮細胞、またはTHP-1のような単球白血病細胞である。本明細書に記載の抗原結合部位は、単球、マクロファージ、末梢血単核球(PBMC)、がん細胞、またはそれら由来の細胞を含む、本明細書に記載の任意の細胞タイプに対するIL-37の効果を阻害し得る。
【００９７】
用語「単離されたタンパク質（isolated protein）」または「単離されたポリペプチド（isolated polypeptide）」は、その由来の元または起源のために、その天然の状態でそれに付随する天然で結合した成分と結合していないタンパク質またはポリペプチドであって、実質的に同じ由来元からの他のタンパク質を含まない。タンパク質は、実質的に天然に結合した成分を含まない状態にされ得るものであるか、または当該分野において知られるタンパク質精製技術を使用して、単離によって実質的に精製され得る。「実質的に精製された（substantially purified）」は、タンパク質が、例えば少なくとも約70%または75%または80%または85%または90%または95%または96%または97%または98%または99%混入の物質を含まないというような、実質的に混入の物質を含まないことを意味する。
【００９８】
用語「組み換え（recombinant）」は、人為的な遺伝子組み換えの生産物を意味すると理解されるべきである。従って、抗体抗原結合ドメインを含む組み換えタンパク質の文脈において、この用語は、B細胞成熟の間に起こる自然の再構成の産物である、対象の生体内で天然に生じる抗体を含まない。しかしながら、そのような抗体が単離された場合、それは抗体抗原結合ドメインを含む単離されたタンパク質と考えられる。同様に、タンパク質をコードする核酸が組み換え手段を使用して単離されおよび発現させられる場合、結果的に得られたタンパク質は抗体抗原結合ドメインを含む組み換えタンパク質である。組み換えタンパク質は、人為的な組み換え手段により発現するタンパク質が、例えばそれが発現する、細胞、組織または対象内にある場合、それも含む。
【００９９】
用語「タンパク質（protein）」は、一本のポリペプチド鎖、即ちペプチド結合によって連結された一連の連続したアミノ酸、または互いに共有結合的もしくは非共有結合的に連結された一連のポリペプチド鎖（例えばポリペプチド複合体）を含むという意味で解釈される。例えば、一連のポリペプチド鎖は、適切な化学結合またはジスルフィド結合を使用して共有結合され得る。非共有結合の例としては、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力および疎水性相互作用が挙げられる。
【０１００】
用語「ポリペプチド（polypeptide）」または「ポリペプチド鎖（polypeptide chain）」は、ペプチド結合によって連結された一連の連続したアミノ酸を意味することが前段落から理解される。
【０１０１】
本明細書中で使用される場合、用語「抗原結合部位（antigen binding site）」は、「抗原結合ドメイン」と互換的に使われ、例えば、VHもしくはVLまたはVHおよびVLの両方を含むFvといった抗原に特異的に結合し得る抗体の領域を意味すると解釈されるべきである。抗原結合ドメインは、抗体全体の文脈にある必要はなく、例えばそれは分離しているか（例、ドメイン抗体）、または、例えば、本明細書中に記載された、一本鎖Fv断片（scFv）等の他の形態であり得る。
本開示の目的のために、用語「抗体（antibody）」は、Fv内に含まれている抗原結合ドメインの効力により1つまたは数個の密接に関連した抗原（例えば、IL-37）と特異的に結合できるタンパク質を含む。この用語は、4つの鎖（例えば、２つの軽鎖および２つの重鎖）の抗体、組み換えまたは修飾された抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、CDR移植抗体、霊長類化抗体、脱免疫化抗体、合成ヒト化抗体、半抗体、二重特異性抗体）を含む。抗体は、一般的に定常ドメインを含み、それは、定常領域または定常断片または結晶化可能断片（Fc）に配置され得る。抗体の形態の例としては、基本単位として4つの鎖の構造を含む。全長の抗体は、共有結合している2つの重鎖（〜50から70 kD）および2つの軽鎖（それぞれ〜23 kDa）を含む。軽鎖は一般的に、可変領域（存在する場合）および定常領域を含み、哺乳類では、κ軽鎖またはλ軽鎖のどちらかである。重鎖は一般的に、可変領域およびヒンジ領域によって付加的な定常ドメイン（複数可）に連結している１つまたは２つの定常ドメイン（複数可）を含む。哺乳類の重鎖は、次のα、δ、ε、γ、μのタイプの1つである。各軽鎖も、重鎖の1つと共有結合している。例えば、２つの重鎖、ならびに重鎖および軽鎖は、鎖間ジスルフィド結合によっておよび非共有結合によってともに保たれる。鎖間ジスルフィド結合の数は、抗体の異なるタイプの間で様々であり得る。各鎖は、N末端に可変領域（それぞれが〜110アミノ酸の長さであるVHまたはVL）、およびC末端に１以上の定常ドメインがある。軽鎖の定常ドメイン（〜110アミノ酸の長さであるCL）は、重鎖の始めの定常ドメイン（330から440アミノ酸の長さであるCH1）と並列しおよびジスルフィド結合される。軽鎖の可変領域は、重鎖の可変領域と並列している。抗体の重鎖は、付加的なCHドメイン（CH2、CH3など等）の2つ以上を含み得、またCH1およびCH2定常ドメインの間にヒンジ領域を含み得る。抗体は任意のタイプ（例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、IgY）、クラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）またはサブクラスであり得る。１つの例では、抗体はマウス（マウスまたはラット）抗体または霊長類（ヒトのような）抗体である。１つの例において、抗体重鎖はC末端リジン残基を欠いている。１つの例では、抗体はヒト化、合成ヒト化、キメラ、CDR移植または脱免疫化のものである。
【０１０２】
用語「全長抗体（full-length antibody）」、「インタクト抗体（intact antibody）」、「全抗体（whole antibody）」は、抗体の抗原結合断片と反対のものとして、実質的にインタクトの形態の抗体に言及するために互換的に使用される。特に、全抗体は、Fc領域を含む重鎖および軽鎖を伴ったものを含んでいる。定常ドメインは、野生型配列の定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列の定常ドメイン)またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。
【０１０３】
本明細書中で使用される場合、「可変領域」は、抗原に特異的に結合することができる本明細書に記載されている抗体の軽鎖および／または重鎖の部分を指し、相補性決定領域（CDR）；すなわちCDR1、CDR2、CDR3およびフレームワーク領域（FR）のアミノ酸配列を含む。例えば、可変領域は、3つのCDRとともに3または4つのFR（例えば、FR1、FR2、FR3、必要に応じてFR4）を含む。VHは、重鎖の可変領域を指す。VLは、軽鎖の可変領域を指す。
【０１０４】
本明細書中で使用される場合、用語「相補性決定領域（complementarity determining regions）」（CDR、すなわちCDR1、CDR2、CDR3）は、存在が特異的な抗原結合に主に貢献する抗体の可変領域のアミノ酸残基を指す。それぞれの典型的な可変領域ドメイン（VHまたはVL）には、CDR1、CDR2、CDR3として同定される3つのCDRがある。1つの例では、CDRおよびFRに割り当てられたアミノ酸配置は、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987および1991（本明細書ではまた「カバットナンバリングシステム（the Kabat numbering system）」として言及される）に従って定義される。別の例では、CDRおよびFRに割り当てられたアミノ酸配置は、Enhanced Chothia Numbering Scheme (http:／／www.bioinfo.org.uk／mdex.html) に従って定義される。本発明は、カバットナンバリングシステムによって定義されるものとしてのFRsおよびCDRsに制限をするものではなく、標準的なナンバリングシステムまたはChothia and Lesk J. Mol. Biol. 196: 901-917, 1987、Chothia et al., Nature 342: 877-883, 1989、および／またはAl-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273: 927-948, 1997、 the numbering system of Honnegher and Plukthun J. Mol. Biol. 309: 657-670, 2001、またはthe IMGT system discussed in Giudicelli et al., Nucleic Acids Res. 25: 206-211 1997、のものを含む、すべてのナンバリングシステムを含んでいる。一つの例では、CDRsはカバットナンバリングシステムに従って定義される。必要に応じて、カバットナンバリングシステムに従った重鎖のCDR2は、本明細書に列記されている５つのC末端のアミノ酸または別の天然に生じるアミノ酸と置換されたいずれか１以上のそれらのアミノ酸を含んでいない。この点については、Padlan et al., FASEB J., 9: 133-139, 1995で、重鎖CDR2の5つのC末端のアミノ酸は、一般的に抗原結合に関与しないことが実証された。
【０１０５】
「フレームワーク領域（Framework region）」（FR）は、CDR残基以外の可変領域の残基である。
【０１０６】
本明細書中で使用される場合、用語「Fv」は、複数のポリペプチドから構成されるか、または単一のポリペプチドから構成されるかに関わらず、その中においてVLおよびVHが結びつき、および抗原結合ドメインを有する、すなわち抗原に特異的に結合することができる複合体を形成する任意のタンパク質を意味すると解釈されるべきである。抗原結合ドメインを形成するVHおよびVLは、単一のポリペプチド鎖の中または異なったポリペプチド鎖の中にあり得る。さらに、本発明のFv(および本発明の任意のタンパク質)には、同じ抗原に結合するかまたは結合しない場合がある複数の抗原結合ドメインがあり得る。この用語は、組み換え手段を使用して生み出されたそのような断片に対応するタンパク質も、直接的な抗体由来の断片も含むと理解されるべきである。いくつかの実施例では、VHは重鎖定常ドメイン(CH) 1と連結せず、および／またはVLは軽鎖定常ドメイン(CL)と連結しない。例示的なFvは、Fab断片、Fab’断片、F(ab’)断片、scFv、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディもしくは高次複合体、またはそれらの定常領域またはドメイン、例えばCH2またはCH3ドメイン、と連結した前記のいずれか、例えばミニボディを含めたポリペプチドまたはタンパク質を含む。「Fab断片」は、免疫グロブリンの1価の抗原結合断片からなり、酵素パパインによる全抗体の消化によって、完全な軽鎖および重鎖の一部からなる断片を産生して産み出され得、または組み換え手段を使用して産み出され得る。抗体の「Fab'断片」は、ペプシンによって全抗体を処理し、続いて還元し、完全な軽鎖ならびにVHおよび単一の定常ドメインを含む重鎖の部分からなる分子を産生することによって得られ得る。このようにして処理される抗体1つあたりに2つのFab'断片が得られる。Fab'断片は、組み換え手段によってもまた産生され得る。抗体の「F(ab')2断片」は、2つのジスルフィド結合によって結合している2つのFab'断片である2量体からなり、および、その後の還元なしで、酵素ペプシンにより全抗体の分子を処理することによって得られる。「Fab2」断片は、例えばロイシンジッパーまたはCH3ドメインを使用して連結された2つのFab断片を含む組み換え断片である。「短鎖Fv」または「scFv」は、軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域が、適切で、柔軟なポリペプチドリンカーによって共有結合される抗体の可変領域断片(Fv)を含む組み換え分子である。
【０１０７】
本明細書中で使用される場合、抗原結合部位またはその抗原結合ドメインと抗原との相互作用に関する、用語「結合する(binds)」は、相互作用が抗原における特定構造(例えば、抗原決定基またはエピトープ)の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、タンパク質一般よりもむしろ特定のタンパク質構造を認識しおよび結合する。抗体がエピトープ「A」に結合する場合、標識された「A」とタンパク質を含む反応において、エピトープ「A」(または遊離、未標識「A」)を含んだ分子が存在することにより、抗体に結合した、標識された「A」の量が減少する。
【０１０８】
本明細書中で使用される場合、用語「特異的に結合(specifically binds)する」または「特異的に結合する(binds specifically)」は、別の抗原または細胞よりも、特定の抗原またはそれを発現する細胞に、より長い期間および／またはより高いアフィニティーで、より頻繁に、より迅速に、本発明の抗原結合部位が反応しまたは結合することを意味すると解釈されるべきである。例えば、多反応性天然抗体により（すなわち、ヒトに天然に見出される様々な抗原に結合することが知られている天然に存在する抗体により）一般的に認識される他のインターロイキンまたは抗原への結合と比較して、抗原結合部位は、かなり高いアフィニティー(例えば、1.5倍または2倍または5倍または10倍または20倍または40倍または60倍または80倍〜100倍または150倍または200倍)でIL-37(例えばhIL-37)と結合する。本発明の例では、抗原結合部位は、hIL-37へ、IL-18および／またはIl-1βのような、別のインターロイキンへの結合よりも、少なくとも1.5倍または2倍またはそれ以上(例えば、5倍または10倍または20倍または50倍または100倍または200倍)のアフィニティーで「特異的に結合」する。一般的に、必ずしもそうとは限らないが、結合の言及は、特異的な結合を意味し、およびそれぞれの用語は、他の用語に対して明確な支持を与えると理解されるべきである。
【０１０９】
本明細書中で使用される場合、用語「検出可能な程度に結合しない(does not detectably bind)」は、抗原結合部位(例えば抗体)が、バックグランドより上の10%または8%または6%または5%未満のレベルでの候補抗原に結合することを意味すると理解されるべきである。バックグランドは、タンパク質の非存在下、および／もしくはネガティブコントロールのタンパク質(例えば、アイソタイプコントロール抗体)存在下で検出される結合シグナルのレベル、ならびに／またはネガティブコントロール抗原の存在下で検出される結合のレベルであり得る。結合のレベルは、抗原結合部位が固定化されて抗原と接触するバイオセンサー解析(例えば、Biacore)を使用して検出され得る。
【０１１０】
本明細書中で使用される場合、用語「有意に結合しない(does not significantly bind)」は、例えば、抗原結合部位の非存在下および／もしくはネガティブコントロールのタンパク質(例えば、アイソタイプコントロール抗体)存在下で検出される結合シグナルのレベル、ならびに／またはネガティブコントロールのポリペプチドの存在下で検出される結合のレベルといった、バックグランドよりも統計的に有意に高くないというポリペプチドへの本発明の抗原結合部位の結合のレベルを意味すると理解されるべきである。結合のレベルは、抗原結合部位が固定化されて抗原と接触するバイオセンサー解析(例えば、Biacore)を使用して検出され得る。
【０１１１】
明確化の目的のためにおよび本明細書中に例示された主題に基づいて当業者に明らかであるように、本明細書中の「アフィニティー」への言及はタンパク質または抗体のKDへの言及である。
【０１１２】
明確化の目的のためにおよび本明細書の記載に基づいて当業者には明らかであるように、「少なくとも約  のアフィニティー(affinity of at least about)」への言及は、アフィニティー(またはKD)が、列挙された値以上(すなわちアフィニティーとして列挙された値はより小さい)、すなわち2nMのアフィニティーは、3nMのアフィニティーより大きいということを意味していると理解される。言い換えれば、この用語は「Ｘ以下のアフィニティー」であり得、ここでＸは本明細書中に列挙される値である。
【０１１３】
本明細書中で使用される場合、用語「エピトープ(epitope)」(または「抗原決定基(antigenic determinant)」)は、抗体の抗原結合ドメインを含む抗原結合部位が結合するIL-３７の領域を意味すると理解されるべきである。この用語は、抗原結合部位が接触する特定の残基または構造に必ずしも限定されない。例えば、この用語は、抗原結合部位によって接触されるアミノ酸にわたる領域およびこの領域の外側の5〜10（もしくはそれ以上）または2〜5または1〜3のアミノ酸の領域を含む。いくつかの例では、そのエピトープは、抗原結合部位が折り畳まれると、互いに近くに位置する、一連の不連続なアミノ酸を含み、すなわち「立体構造エピトープ」である。当業者は、用語の「エピトープ」は、ペプチドまたはポリペプチドに制限されないということも承知している。例えば、用語「エピトープ」は、糖側鎖、ホスホリル側鎖、スルホニル側鎖のような化学的に活性な分子の表面基を含み、および、ある例では、特定の三次元構造特性、および／または特定の電荷特性を有し得る。
【０１１４】
本明細書中で使用される場合、用語「状態(condition)」は、正常な機能の中断または妨害を意味し、そしていかなる特定の状態にも限定されるべきではなく、および疾患または障害を含む。
【０１１５】
本明細書中で使用される場合、用語「予防する(preventing)」、「予防する(prevent)」、または「予防(prevention)」は、本発明の抗原結合部位を投与して、それによって状態の少なくとも1つの症状の発症を停止または妨げることを含む。この用語はまた、再発を防止または妨げるために寛解している対象者の治療も包含する。
【０１１６】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する(treating)」、「治療する(treat)」、または「治療(treatment)」は、本明細書に記載の抗原結合部位を投与して、それによって特定の疾患または状態の少なくとも1つの症状を軽減または排除することを含む。
【０１１７】
本明細書中で使用される場合、用語「対象(subject)」は、ヒトを含む任意の動物、例えば哺乳類を意味すると解釈されるべきである。例示的な対象としては、ヒトおよび非ヒトの霊長類、イヌおよびネコのようなコンパニオンアニマル、およびウマ、ヒツジ、およびウシのような家畜が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、対象はヒトである。
【０１１８】
抗体
１つの例では、任意の例による本明細書に記載の抗原結合部位またはIL-37結合タンパク質は抗体である。
【０１１９】
抗体を産生するための方法は、当該分野において公知であり、および／またはHarlow and Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)に記載されている。一般に、そのような方法では、必要に応じて、任意の適切なまたは所望の担体、アジュバントまたは医薬的に許容される賦形剤を伴って製剤化されたIL-37（例えば、hIL-37）もしくはその領域（例えば、細胞外領域）またはその免疫原性断片もしくはそのエピトープ、またはそれを発現および提示する細胞（すなわち、免疫原）は、非ヒト動物、例えば、マウス、ニワトリ、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ウマ、ウシ、ヤギまたはブタに投与される。免疫原は、鼻腔内に、筋肉内に、皮下に、静脈内に、皮内に、腹腔内に、または他の公知の経路によって投与し得る。
【０１２０】
ポリクローナル抗体の産生は、免疫後の様々な時点で免疫動物の血液をサンプリングすることによってモニターし得る。所望の抗体力価を達成する必要がある場合は、１回以上のさらなる免疫が与えられ得る。強化または力価測定のプロセスは、適切な力価が達成されるまで繰り返される。免疫原性の所望のレベルが得られると、免疫された動物から採血しおよび血清を単離しておよび保存する、および／またはその動物を用いてモノクローナル抗体(mAbs)を生成する。
【０１２１】
モノクローナル抗体は、本発明によって企図される抗体の１つの例示的形態である。用語「モノクローナル抗体(monoclonal antibody)」または「mAb」は、例えば、抗原内における同じエピトープといった、同じ抗原（複数可）に結合することができる均一な抗体の集団を指す。この用語は、抗体の供給源またはそれが作製される様式に関して限定されることを意図しない。
【０１２２】
mAbsの産生のためには、例えば上記の米国特許第4196265号またはHarlow and Lane (1988)に例示されている手順のような多数の既知の技術のいずれか１つを使用し得る。
【０１２３】
例えば、適切な動物が、抗体産生細胞を刺激するのに十分な条件下において免疫原で免疫される。ウサギ、マウスおよびラットのようなげっ歯類は、例示的な動物である。例えばマウス抗体を発現しない、ヒト抗体を発現するように遺伝子操作されたマウスもまた、本発明の抗体を作製するために使用され得る(例えば、WO2002／066630に記載されているように)。
【０１２４】
免疫後、抗体を産生する可能性のある体細胞、具体的にはBリンパ球(B細胞)が、mAb生成のプロトコールにおける使用のために選択される。これらの細胞は、脾臓、扁桃腺またはリンパ節の生検から、あるいは末梢血試料から取得し得る。免疫された動物からのB細胞は、次いで、一般的に、免疫原で免疫された動物と同じ種に由来する不死骨髄腫細胞の細胞と融合される。
【０１２５】
ハイブリッドは、組織培養培地中のヌクレオチドのデノボ合成を阻止する薬剤を含む選択培地中での培養により増幅される。例示的な薬剤は、アミノプテリン、メトトレキサートおよびアザセリンである。
【０１２６】
増幅されたハイブリドーマは、例えばフローサイトメトリーおよび／または免疫組織化学および／またはイムノアッセイ（例えばラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、細胞毒性アッセイ、プラークアッセイ、ドットイムノアッセイなど）による抗体特異性および／または力価についての機能選択に供される。
【０１２７】
あるいは、ABL-MYC技術(NeoClone, Madison WI 53713, USA)を用いて、MAbを分泌する細胞株を作製する（例えば、Largaespada et al, J. Immunol. Methods. 197: 85-95, 1996に記載されているように行われる）。
【０１２８】
抗体はまた、例えば米国特許第6300064号および／または米国特許第5885793号に記載されているように、例えばファージディスプレイライブラリーといったディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって産生または単離し得る。例えば、本発明者らはファージディスプレイライブラリーから完全ヒト抗体を分離した。
【０１２９】
本発明の抗体は、合成抗体であり得る。例えば、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、合成ヒト化抗体、霊長類化抗体または脱免疫化抗体である。
【０１３０】
タンパク質を含む抗体結合ドメイン
単一ドメイン抗体
いくつかの例では、本発明のタンパク質は、単一ドメイン抗体（用語「ドメイン抗体(domain antibody)」または「dAb」と互換的に使用される）であるかまたはそれを含む。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖の可変領域の全部または一部を含む単一のポリペプチド鎖である。特定の例では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA; 例えば、米国特許第6248516号参照）。
【０１３１】
ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ
いくつかの例では、本発明のタンパク質は、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはWO98／044001および／もしくはWO94／007921に記載されているもののような高次タンパク質複合体であるかまたはそれらを含む。
【０１３２】
例えば、ダイアボディは２つの結合したポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、各ポリペプチド鎖は構造VL-X-VHまたはVH-X-VLを含み、ここでVLは抗体の軽鎖可変領域であって、VHは抗体の重鎖可変領域であって、Xは、単一のポリペプチド鎖中のVHおよびVLが会合する（またはFvを形成する）のを可能にするのに不十分な残基を含むリンカーであるかまたは存在せず、ここで一方のポリペプチド鎖のVHは他方のポリペプチド鎖のVLに結合して抗原結合ドメインを形成して、すなわち、１以上の抗原に特異的に結合することができるFv分子を形成する。二重特異性ダイアボディ（すなわち、異なる特異性を有する２つのFvを含む）を形成するために、VLおよびVHは各ポリペプチド鎖において同じであり得るか、またはVLおよびVHは各ポリペプチド鎖において異なり得る。
【０１３３】
短鎖Fv(scFv)
当業者は、scFvsが単一のポリペプチド鎖中にVHおよびVL領域を含むこと、ならびにscFvが抗原結合のため（すなわち、単一のポリペプチド鎖のVHおよびVLが互いに会合してFvを形成するため）に所望の構造を形成することを可能にする、VHおよびVLの間のポリペプチドリンカーを含むということを承知する。例えば、リンカーは12個を超えるアミノ酸残基を含み、(Gly4Ser)3はscFvにとってより好ましいリンカーの１つである。
【０１３４】
本発明はまた、単一のシステイン残基がVHのFRおよびVLのFRに導入され、およびシステイン残基がジスルフィド結合によって連結されて安定なFvを生じる、ジスルフィド安定化Fv（またはdiFvまたはdsFv）をも企図する。
【０１３５】
あるいは、またはさらに、本発明は、二量体scFv、すなわち、非共有結合または共有結合、例えばロイシンジッパードメイン（例えば、FosまたはJun由来）によって連結された２つのscFv分子を含むタンパク質を包含する。あるいは、例えば米国特許出願公開第20060263367号に記載されているように、２つのscFvが、scFvが形成しおよび抗原に結合するのを両方可能にするのに十分な長さのペプチドリンカーによって連結される。
【０１３６】
重鎖の抗体
重鎖の抗体は、それらが重鎖を含むが軽鎖を含まない限りにおいて、多くの他の抗体の形態とは構造的に異なる。したがって、これらの抗体は「重鎖のみの抗体」とも呼ばれる。重鎖抗体は、例えば、ラクダ科動物および軟骨魚類（IgNARとも呼ばれる）に見られる。
【０１３７】
天然に存在する重鎖抗体に存在する可変領域は、ラクダ科動物の抗体では「VHHドメイン」およびIgNARではV-NARと一般に呼ばれ、それは従来の４鎖抗体に存在する重鎖の可変領域（これらは「ＶＨドメイン」と呼ばれる）、および従来の４鎖抗体に存在する軽鎖の可変領域（「ＶＬドメイン」と呼ばれる）と区別するためである。
【０１３８】
ラクダ科動物由来の重鎖抗体およびその可変領域、ならびにそれらの産生および／または単離および／または使用のための方法の一般的な記載は、とりわけ以下の参考文献WO94／04678、WO97／49805、WO 97／49805に見出される。
【０１３９】
軟骨魚由来の重鎖抗体およびその可変領域、ならびにそれらの産生および／または単離および／または使用のための方法の一般的な記載は、とりわけWO2005／118629に見出される。
【０１４０】
他の抗体およびその抗原結合ドメインを含むタンパク質
本発明はまた、以下:
(i)米国特許第5731168号に記載の「鍵および穴」の二重特異性タンパク質; 
(ii)例えば、米国特許第4676980号に記載されているような、ヘテロコンジュゲートタンパク質;
(iii)例えば米国特許第4676980号に記載されているように、化学架橋剤を使用して製造されたヘテロコンジュゲートタンパク質;および
(iv)Fab3(例えば、EP19930302894に記載されているような);
のような、他の抗体およびその抗原結合ドメインを含むタンパク質を企図する。
【０１４１】
タンパク質に対する突然変異
本発明はまた、本明細書中に開示される配列に少なくとも80％同一の抗原結合部位またはそれをコードする核酸を提供する。一例では、本発明の抗原結合部位または核酸は、本明細書に開示されている配列と少なくとも約85％または90％または92％または95％または97％または98％または99％同一の配列を含む。
【０１４２】
あるいは、またはさらに、抗原結合部位は、任意の例による本明細書に記載のVHまたはVLのCDRと少なくとも約80％または85％または90％または92％または95％または97％または98％または99％同一の、CDR（例えば、3つのCDR）を含む。
【０１４３】
別の例では、本発明の核酸は、任意の例による本明細書に記載の機能を持つ抗原結合部位をコードする配列と少なくとも約80％または85％または90％または92％または95％または97％または98％または99％同一の配列を含む。本発明はまた、遺伝コードの縮重の結果として本明細書に例示される配列とは異なる、本発明の抗原結合部位をコードする核酸を包含する。
【０１４４】
核酸またはポリペプチドの同一性％は、ギャップ生成ペナルティー=5、およびギャップ伸長ペナルティー=0.3でGAP（Needleman and Wunsch. Mol. Biol. 48, 443-453, 1970）分析（GCG program）によって決定される。問い合わせ配列は少なくとも50残基の長さであり、およびGAP分析は少なくとも50残基の領域にわたって２つの配列を整列させる。例えば、問い合わせ配列は少なくとも100残基の長さであり、およびGAP分析は少なくとも100残基の領域にわたって２つの配列を整列させる。例えば、２つの配列はそれらの全長にわたって整列している。
【０１４５】
本発明はまた、本明細書に記載の抗原結合部位をコードする核酸とストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸を企図する。「中程度のストリンジェンシー（moderate stringency）」は、本明細書では、2 x SSC緩衝液、0.1%（w／v）SDS中、45℃〜65℃の範囲の温度、または同等の条件で行われるハイブリダイゼーションおよび／または洗浄として定義される。「高ストリンジェンシー（high stringency）」は、本明細書では、0.1×SSC緩衝液、0.1% (w／v) SDS中、またはより低い塩濃度、および少なくとも６５℃の温度、または同等の条件で行われるハイブリダイゼーションおよび／または洗浄として定義される。本明細書における特定のストリンジェンシーレベルへの言及は、当業者に知られているＳＳＣ以外の洗浄／ハイブリダイゼーション溶液を用いた同等の条件を包含する。例えば、二本鎖核酸の鎖が解離する温度（融解温度、またはTmとしても知られる）を計算するための方法は当技術分野において公知である。核酸のTmに類似する（例えば、5℃以内または10℃以内）またはTmに等しい温度は、高ストリンジェンシーであると考えられる。中ストリンジェンシーは、核酸の計算されたTmの10℃から20℃、または10℃から15℃以内であると見なされる。
【０１４６】
本発明はまた、本明細書に記載の配列と比較して１以上の保存的アミノ酸置換を含む本発明の抗原結合部位の変異型を企図する。いくつかの例では、抗原結合部位は、10個以下、例えば9個または8個または7個または6個または5個または4個または3個または2個または1個の保存的アミノ酸置換を含む。「保存的アミノ酸置換（conservative amino acid substitution）」は、アミノ酸残基が類似の側鎖および／またはハイドロパシーの性質および／または親水性を有するアミノ酸残基で置換されているものである。
【０１４７】
類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。ハイドロパシー（Hydropathic）インデックスは、例えば、Kyte and Doolittle J. Mol. Biol., 157: 105-132, 1982に記載され、および親水性（hydrophylic）インデックスは、例えば米国特許第4554101号に記載されている。
【０１４８】
本発明はまた、非保存的アミノ酸の変化を企図する。例えば、特に興味深いのは、別の荷電アミノ酸および中性または正荷電アミノ酸による、荷電アミノ酸の置換である。いくつかの例では、抗原結合部位は、10個以下、例えば9個または8個または7個または6個または5個または4個または3個または2個または1個の非保存的アミノ酸置換を含む。
【０１４９】
一例では、突然変異（複数可）は、本発明の抗原結合部位の抗原結合ドメインのFR内で生じる。別の例では、変異（複数可）は、本発明の抗原結合部位のCDR内で発生する。
【０１５０】
抗原結合部位の変異型を作製するための例示的な方法として、以下:
・DNA（Thie et al., Methods Mol. Biol. 525: 309-322, 2009）またはRNA（Kopsidas et al., Immunol. Lett. 107:163-168, 2006; Kopsidas et al. BMC Biotechnology, 7: 18, 2007; and WO1999／058661）の突然変異誘発;
・ポリペプチドをコードする核酸を、ミューテーター細胞、例えばXL-1Red、XL-mutSおよびXL-mutS-Kanrバクテリア細胞（Stratagene）、に導入すること;
・例えば、Stemmer, Nature 370: 389-91, 1994に開示されているようなＤＮＡシャフリング;および
・例えば、Dieffenbach (ed) and Dveksler (ed) (In: PCR Primer: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, NY, 1995)に記載されているような部位特異的突然変異誘発;
が挙げられる。
【０１５１】
本発明の変異型抗原結合部位の生物学的活性を決定するための例示的な方法は、当業者に明らかであり、および／または本明細書に記載されており、例えば、抗原結合である。例えば、抗原結合、結合の競合的阻害、親和性、会合、解離および治療効果を決定するための方法が本明細書に記載されている。
【０１５２】
定常領域
本発明は、抗体の定常領域を含む本明細書に記載の抗原結合部位および／または抗体を包含する。これは、Fcと融合した、抗体の抗原結合断片を含む。
【０１５３】
本発明のタンパク質を産生するのに有用な定常領域の配列は、多くの異なる供給源から得ることができる。いくつかの例では、タンパク質の定常領域またはその一部は、ヒト抗体に由来する。定常領域またはその一部は、IgM、IgG、IgD、IgAおよびIgEを含む任意の抗体クラス、およびIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4を含む任意の抗体アイソタイプに由来し得る。一例では、定常領域は、ヒトアイソタイプIgG4または安定化IgG4の定常領域である。
【０１５４】
一例では、定常領域のＦｃ領域は、例えば、天然型または野生型のヒトIgG1またはIgG3のFc領域と比較して、エフェクター機能を誘導する能力が低下している。一例では、エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）および／または抗体依存性細胞媒介食作用（ADCP）および／または補体依存性細胞傷害（CDC）である。タンパク質を含むFc領域のエフェクター機能のレベルを評価するための方法は、当該分野で公知であり、および／または本明細書中に記載されている。
【０１５５】
一例では、Fc領域は、IgG4 Fc領域（すなわち、IgG4定常領域由来）、例えば、ヒトIgG4 Fc領域である。適切なIgG4 Fc領域の配列は、当業者に明らかであり、および／または公的に利用可能なデータベースで利用可能（例えば、National Center for Biotechnology Informationから入手可能）である。
【０１５６】
一例では、定常領域は、安定化IgG4定常領域である。「安定化IgG4定常領域（stabilized IgG4 constant region）」という用語は、Fabアーム交換もしくはFabアーム交換を受ける傾向、または半抗体の形成もしくは半抗体を形成する傾向を低減するように修飾されているIgG4定常領域を意味すると理解されるであろう。「Ｆａｂアーム交換（Fab arm exchange）」とは、IgG4重鎖および付着された軽鎖（半分子）が別のIgG4分子からの重軽鎖対と交換されている、ヒトIgG4に対するタンパク質修飾の一種を指す。このように、IgG4分子は、２つの異なる抗原を認識する２つの異なるFabアームを獲得し得る（その結果、二重特異性分子を生じる）。Fabアーム交換は、インビボで天然に起こり、および精製された血球または還元型グルタチオンなどの還元剤によってインビトロで誘導され得る。「半抗体（half antibody）」は、IgG4抗体が解離して、それぞれが単一の重鎖および単一の軽鎖を含む２つの分子を形成するときに形成される。
【０１５７】
一例では、安定化されたIgG4定常領域は、Kabatのシステム（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987および／または1991）に従ってヒンジ領域の241位にプロリンを含む。この位置は、EUナンバリングシステムによるヒンジ領域の228位に対応する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 2001およびEdelman et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85, 1969）。ヒトIgG4では、この残基は一般的にセリンである。セリンをプロリンに置換した後、IgG4ヒンジ領域は配列CPPCを含む。これに関して、当業者は、「ヒンジ領域」が、抗体の２つのFabアームに可動性を付与するFc領域とFab領域とを連結する抗体の重鎖定常領域のプロリンリッチ部分であることを承知しているであろう。ヒンジ領域は、重鎖間のジスルフィド結合に関与するシステイン残基を含む。それは一般的に、Kabatのナンバリングシステムに従ってヒトIgG1のGlu226からPro243までに及ぶと定義される。他のIgGアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間ジスルフィド（S-S）結合を形成する最初と最後のシステイン残基を同じ位置に置くことによって、IgG1配列と整列され得る（例えば、WO2010／080538を参照）。
【０１５８】
安定化IgG4抗体のさらなる例は、（EUナンバリングシステムによる）ヒトIgG4の重鎖定常領域中の409位のアルギニンが、リジン、トレオニン、メチオニン、またはロイシンで置換されている抗体である（例えば、WO2006／033386に記載の通り）。定常領域のFc領域は、405位に対応する位置に（ＥＵナンバリングシステムによる）アラニン、バリン、グリシン、イソロイシンおよびロイシンからなる群から選択される残基をさらにまたは代わりに含み得る。必要に応じて、ヒンジ領域は241位にプロリン（すなわち、CPPC配列）を含む（上記の通り）。
【０１５９】
別の例では、Fc領域は、低減したエフェクター機能を有するように改変された領域、すなわち「非免疫刺激性Fc領域」である。例えば、Fc領域は、268、309、330、および331位からなる群から選択される１つ以上の位置に置換を含むIgG1 Fc領域である。別の例では、Fc領域は、以下の変化E233P、L234V、L235A、およびG236の欠失のうちの１以上および／または以下の変化A327G、A330SおよびP331Sのうちの１以上を含むIgG1 Fc領域である（Armour et al., Eur J Immunol. 29:2613-2624, 1999; Shields et al., J Biol Chem. 276(9):6591-604, 2001）。非免疫刺激性Fc領域のさらなる例は、例えば、Dall'Acqua et al., J Immunol. 177 : 1129-1138 2006および／またはHezareh J Virol; 75：12161-12168、2001で記載されている。
【０１６０】
別の例では、Fc領域は、例えば、IgG4抗体由来の少なくとも１つのCH2ドメイン、およびIgG1抗体由来の少なくとも１つのCH3ドメインを含むキメラFc領域であり、ここでFc領域は、240、262、264、266、297、299、307、309、323、399、409および427番（ＥＵナンバリング）からなる群から選択される１以上のアミノ酸位置での置換を含む（例えば、WO2010／085682に記載のように）。例示的な置換としては、240F、262L、264T、266F、297Q、299A、299K、307P、309K、309M、309P、323F、399Sおよび427Fが挙げられる。
【０１６１】
付加的な改変
本発明はまた、Fc領域または定常領域を含む抗体または抗原結合部位に対する付加的な改変を企図する。
【０１６２】
例えば、抗体は、タンパク質の半減期を増加させる１以上のアミノ酸の置換を含む。例えば、抗体は、新生児Fc領域（FcRn）に対するFc領域の親和性を増加させる１以上のアミノ酸置換を含むFc領域を含むものである。例えば、Fc領域は、例えば約pH 6.0といったより低いpHでFcRnに対する親和性が増大し、エンドソーム内でのFc／FcRnの結合を促進する。一例では、Fc領域は、約pH 7.4でのその親和性と比較して約pH 6でFcRnに対する親和性が増加しており、これは細胞のリサイクル後のFcの血液中への再放出を促進する。これらのアミノ酸置換は、血液からのクリアランスを減らすことによって、タンパク質の半減期を延ばすのに役立つ。
【０１６３】
例示的なアミノ酸置換としては、EUナンバリングシステムに従って、T250Qおよび／またはM428LまたはT252A、T254SおよびT266FまたはM252Y、S254TおよびT256EまたはH433KおよびN434Fが挙げられる。付加的または代替のアミノ酸置換は、例えば、米国特許出願公開第20070135620号または米国特許第7083784号に記載されている。
【０１６４】
タンパク質の産生
一例では、任意の例による本明細書に記載の抗原結合部位は、例えば本明細書に記載のおよび／または当技術分野で公知のように、タンパク質を産生するのに十分な条件下でハイブリドーマを培養することによって作製される。
【０１６５】
組み換え型の発現
別の例では、任意の例による本明細書に記載の抗原結合部位は、組換え型である。
【０１６６】
組換えタンパク質の場合、それをコードする核酸を発現構築物またはベクターにクローニングし得、次いでこれを、他の方法では該タンパク質を産生しない大腸菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）細胞または骨髄腫細胞のような、宿主細胞にトランスフェクトする。タンパク質を発現するために使用される例示的な細胞は、ＣＨＯ細胞、骨髄腫細胞またはHEK細胞である。これらの目的を達成するための分子クローニング技術は、当該分野で公知であり、および例えば、Ausubel et al., (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub . Associates and Wiley-Interscience (1988,現在までのすべての更新を含む)またはSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)に記載されている。多種多様なクローニング方法およびインビトロでの増幅方法が、組換え核酸の構築に適している。組換え抗体を産生する方法も当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第4816567号または米国特許第5530101号を参照。
【０１６７】
単離後、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または無細胞系内もしくは細胞内での発現のために、核酸を発現構築物または発現ベクター中のプロモーターに作動可能に連結して挿入する。
【０１６８】
本明細書中で使用される場合、用語「プロモーター」は、その最も広い文脈で解釈されるべきであり、例えば発生および／または外部刺激に応答して、あるいは組織特異的様式で核酸の発現を変える、追加の調節エレメント（例えば、上流の活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサーおよびサイレンサー）を伴うか、または伴わずに、正確な転写開始に必要であるTATAボックスまたはイニシエーターエレメントを含む、ゲノム遺伝子の転写調節配列を含む。本文脈において、用語「プロモーター」はまた、それが作動可能に連結されている核酸の発現を付与、活性化または増強する、組換え、合成または融合核酸、または誘導体を記載するために使用される。例示的なプロモーターは、該核酸の発現をさらに増強するために、ならびに／または空間的発現および／もしくは時間的発現を改変するために、１以上の特定の調節エレメントのさらなるコピーを含み得る。
【０１６９】
本明細書中で使用される場合、用語「作動可能に連結されている（operably linked to）」とは、核酸の発現がプロモーターによって制御されるように、核酸に対してプロモーターを配置することを意味する。
【０１７０】
細胞内での発現のための多くのベクターが利用可能である。ベクターの構成要素としては、一般に、以下の１以上が挙げられるが、これらに限定されない：シグナル配列、タンパク質をコードする配列（例えば、本明細書で提供される情報由来）、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列がある。当業者は、タンパク質の発現に適した配列を承知しているであろう。例示的なシグナル配列としては、原核生物の分泌シグナル（例えば、pelB、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ipp、または熱安定性エンテロトキシンII）、酵母の分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、α因子リーダー、または酸性ホスファターゼリーダー）または哺乳動物の分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスgDシグナル）が挙げられる。
【０１７１】
哺乳動物細胞において活性のある例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス即時初期プロモーター（CMV-IE）、ヒト伸長因子1-αプロモーター（EF1）、小分子核内RNAプロモーター（U1aおよびU1b）、α-ミオシン重鎖プロモーター、シミアンウイルス40プロモーター（SV40）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（RSV）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β-アクチンプロモーター、ＣＭＶエンハンサー／ β−アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターまたはそれらの活性断片を含むハイブリッド調節エレメントが挙げられる。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（COS-7、ATCC CRL 1651）；ヒト胎児腎臓株（懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた293または293細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（BHK、ATCC CCL 10）；またはチャイニーズハムスター卵巣細胞（CHO）である。
【０１７２】
例えばPichia pastoris、Saccharomyces cerevisiaeおよびS. pombeを含む群から選択される酵母細胞のような酵母細胞での発現に適した典型的なプロモーターとしては、ADH1プロモーター、GAL1プロモーター、GAL4プロモーター、CUP1プロモーター、PHO5プロモーター、nmtプロモーター、RPR1プロモーター、またはTEF1プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７３】
単離された核酸またはそれを含む発現構築物を発現のために細胞に導入するための手段は、当業者に公知である。所定の細胞に使用される技法は、既知の成功した技法に依存する。細胞に組換えＤＮＡを導入するための手段としては、マイクロインジェクション、DEAE−デキストランによって仲介されるトランスフェクション、リポフェクタミン（Gibco, MD, USA）および／またはセルフェクチン（Gibco, MD, USA）の使用によるなどのリポソームによって仲介されるトランスフェクション、PEGを仲介したDNAの取り込み、エレクトロポレーションおよびとりわけDNAで被覆したタングステンまたは金粒子（Agracetus Inc.、WI、USA）の使用によるなどの微粒子のボンバードメントによるものが含まれる。
【０１７４】
タンパク質を産生するために使用される宿主細胞は、使用される細胞型に応じて様々な培地中で培養され得る。ハムF10（Sigma）、最小必須培地（（MEM）、Sigma）、RPMI-1640（Sigma）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（DMEM）、Sigma）などの市販の培地が、哺乳動物細胞の培養に適している。本明細書で論じられる他の細胞型を培養するための培地は、当技術分野において公知である。
【０１７５】
タンパク質の単離
タンパク質を単離するための方法は、当技術分野において公知でありおよび／または本明細書に記載されている。
抗原結合部位が培養培地に分泌される場合、そのような発現系からの上清は、最初に市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばAmiconまたはMillipore Pelliconの限外濾過ユニットを用いて濃縮することができる。PMSFのようなプロテアーゼインヒビターは、タンパク質分解を阻害するために前述の工程のいずれかに含められ得、および抗生物質は、偶発的な混入物の増殖を防ぐために含められ得る。あるいは、またはさらに、例えば連続遠心分離を用いて、タンパク質を発現する細胞から上清を濾過および／または分離することができる。
【０１７６】
細胞から調製された抗原結合部位は、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインAアフィニティークロマトグラフィーまたはプロテインGクロマトグラフィー）、またはそれらの任意の組み合わせを用いて精製することができる。これらの方法は、当技術分野において公知であり、例えばWO 99／57134またはEd Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)に記載されている。
【０１７７】
当業者はまた、タンパク質が、精製または検出を容易にするためのタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ、例えば、ヘキサヒスチジンタグ、またはインフルエンザウイルス血球凝集素（HA）タグまたは、シミアンウイルス５（V5）タグ、またはFLAGタグ、またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（GST）タグを含むように修飾され得ることを承知している。次いで得られたタンパク質を、アフィニティー精製などの当技術分野において公知の方法を用いて精製する。例えば、ヘキサヒスチジンタグを含むタンパク質は、タンパク質を含む試料と、固体または半固体支持体上に固定化された、ヘキサヒスチジンタグに特異的に結合するニッケル - ニトリロ三酢酸（Ni-NTA）とを接触させて、結合していないタンパク質を除去するために試料を洗浄して、その後結合したタンパク質を溶出させることによって精製される。あるいは、またはさらに、タグに結合するリガンドまたは抗体が、アフィニティー精製方法において使用される。
【０１７８】
IL-37結合タンパク質の活性測定
IL-37およびその突然変異体への結合
本明細書の開示から、本発明のいくつかの抗原結合部位がIL-37およびIL-37の特定の変異型に結合することは当業者には明らかであろう。タンパク質への結合を評価するための方法は、例えば、Scopes（In: Protein purification: principles and practice, Third Edition, Springer Verlag, 1994）に記載されているように、当技術分野において公知である。そのような方法は一般に、抗原結合部位を固定化しおよびそれを標識抗原と接触させることを含んでいる。非特異的結合タンパク質を除去するための洗浄後、標識の量および、結果として、結合抗原が検出される。当然、抗原結合部位を標識しておよび抗原を固定化することができる。パンニングタイプアッセイもまた使用され得る。あるいは、またはさらに、表面プラズモン共鳴アッセイが使用され得る。
【０１７９】
必要に応じて、IL-37またはそのエピトープに対する固定化された抗原結合部位の解離定数（Kd）、結合定数（Ka）および／または親和定数（KD）が決定される。IL-37結合タンパク質についての「Kd」または「Ka」または「KD」は、一例において、放射標識または蛍光標識IL-37結合アッセイによって測定される。「Ｋｄ」の場合、このアッセイは、非標識IL-37の滴定系列の存在下で抗原結合部位を最小濃度の標識IL-37で平衡化する。未結合のIL-37を除去するための洗浄の後、標識の量が決定され、それはタンパク質のKdを示す。
【０１８０】
別の例によれば、Kd、KaまたはKDは、表面プラズモン共鳴アッセイを用いることにより、例えば、固定化されたIL-37またはその領域または固定化抗原結合部位とのBIAcore表面プラズモン共鳴（BIAcore, Inc., Piscataway, NJ）を用いて測定される。
【０１８１】
阻害活性の決定
本発明のいくつかの例において、抗原結合部位は、IL-37活性を阻害することができる。
受容体を介したリがんドのシグナル伝達を阻害または低下させるタンパク質の能力を評価するための様々なアッセイが、当該分野で公知である。
【０１８２】
一例では、抗原結合部位は、recIL-37（組換えIL-37）の存在下で培養され、IL-18受容体α（IL-18Rα）およびIL-1受容体8を発現する細胞（例えば、PBMC）（または代替的には、両方のタンパク質を発現するように改変された細胞）におけるIL-1βのような炎症促進性サイトカインの産生または分泌を促進する。細胞（例えば、約1x104細胞）を、recIL-37の存在下（例えば、約1 pg／mL〜約10 ng／mL（1 pg／mLまたは10 ng／mL）のような）、および試験抗原結合部位、または炎症促進性刺激および抗原結合部位の存在下または非存在下で培養する。炎症促進性サイトカインの産生または分泌を評価するための方法は、当技術分野において公知である。抗原結合部位の非存在下で観察されるレベルと比較して炎症促進性サイトカインの産生または分泌のレベルを増強する抗原結合部位は、IL-37活性、具体的にはIL-37シグナル伝達を阻害または低減すると考えられる。
【０１８３】
IL-37シグナル伝達の増強を評価するための他の方法が、実施例6に記載されるようなTHP-1細胞のアッセイを含む本開示によって企図される。
【０１８４】
治療効果の評価
治療効果を評価するためのアッセイは、抗原結合部位による中和の決定に関して上記に記載されている。
別の例では、状態を治療するためのタンパク質の有効性は、インビボアッセイを用いて評価される。
【０１８５】
例えば、抗原結合部位は、がん（例、胃がん）のモデルにおいて試験され得る。例えば、gp130のY757F突然変異体について相同なマウス（gp130Y757F／Y757F）は胃腫瘍を発症する（Jenkins et al, Blood 109: 2380-2388, 2007）。マウス（例えば、８週齢のマウス）を抗原結合部位で処理し、および胃ポリープの数および／または重量を評価する。ポリープのサイズおよび／または重量を減少させる抗原結合部位は、がんを治療するのに有用であると考えられる。同様のアッセイを用いて結腸がんに対する効果を試験することができ、それは本質的にGreten et al, Cell, 118: 285-296, 2004に記載されているように、gp130Y757F／Y757Fマウスをアゾキシメタン（AOM）、続いてデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）で処理し、抗原結合部位による治療の前に結腸がんが誘発される。
【０１８６】
抗原結合部位は、例えばLi et al., Oncol. Lett. 3: 802-806, 2012に記載されているように、追加的にまたは代替的に、がん転移またはがん関連骨疾患のモデルで試験され得る。
【０１８７】
治療または予防される状態
本発明の抗原結合部位は、「正常」レベルの発現または上昇した発現を含む、内因性IL-37の発現に関連する状態の治療または予防に有用である。内因性IL-37の発現上昇は、対象の血液循環中または対象の特定の位置（例えば、特定の組織または臓器内）におけるIL-37の量または濃度を測定することによって決定され得る。IL-37の発現は、当業者に公知の技術を用いてmRNAまたはタンパク質のレベルを測定することによって決定され得る。
【０１８８】
さらに、本発明の抗原結合部位はがんの治療または予防に有用である。広範な例としては、乳房腫瘍、結腸直腸腫瘍、腺がん、中皮腫、膀胱腫瘍、前立腺腫瘍、胚細胞腫瘍、肝細胞がん／胆管がん（cholongio）、がん腫、神経内分泌腫瘍、下垂体新生物、小円形細胞腫瘍、扁平上皮がん、黒色腫、異型線維黄色腫、精上皮腫、非精上皮腫、間質ライディッヒ細胞腫瘍、セルトリ細胞腫瘍、皮膚腫瘍、腎臓腫瘍、精巣腫瘍、脳腫瘍、卵巣腫瘍、胃腫瘍、口腔腫瘍、膀胱腫瘍、骨腫瘍、頸部腫瘍、食道腫瘍、喉頭腫瘍、肝腫瘍、肺腫瘍、膣腫瘍およびウィルムス腫瘍が挙げられる。
【０１８９】
特定のがんの例としては、腺がん、腺腫、腺線維腫、腺リンパ腫、アドントーマ、エイズ関連がん、聴神経腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、腺嚢胞がん、副腎皮質がん、原発性骨髄線維症、脱毛症、胞状軟部肉腫、エナメル上皮腫、被角血管腫、好酸球性血管リンパ球増殖症、硬化性血管腫、血管腫症、アプドーマ、肛門がん、血管肉腫、再生不良性貧血、星状細胞腫、毛細血管拡張性運動失調症、基底細胞がん（皮膚）、膀胱がん、骨がん、腸がん、脳幹グリオーマ、脳腫瘍およびCNS腫瘍、乳がん、鰓腫（branchioma）、CNS腫瘍、カルチノイド腫瘍、子宮頸がん、小児脳腫瘍、小児がん、小児白血病、小児軟部肉腫、軟骨肉腫、絨毛がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸がん、皮膚T細胞リンパ腫、がん腫（例えば、ウォーカー（Walker）、基底細胞、扁平上皮、褐色真珠、乳管、エールリッヒ腫瘍、クレブス 2、メルケル細胞、粘液性、非小細胞肺、燕麦細胞、乳頭状、スキルス状、細気管支、気管支原性（bron chogenic）、扁平上皮細胞、および移行細胞）、がん肉腫、子宮頸部異形成、葉状嚢肉腫、セメント腫、脊索腫、分離腫、軟骨肉腫、軟骨芽腫、頭蓋咽頭腫、胆管腫、真珠腫性中耳炎、円柱腫、嚢胞腺がん、嚢胞腺腫、隆起性皮膚線維肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、乳管がん、未分化胚細胞腫（dysgerminoam）、内分泌がん、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイング肉腫、肝外胆管がん、眼がん、眼：黒色腫、網膜芽細胞腫、卵管がん、ファンコニ貧血、線維腫、線維肉腫、胆嚢がん、胃がん、消化管がん、消化管カルチノイド腫瘍、尿生殖器がん、生殖細胞がん、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、婦人科がん、巨細胞腫、神経節腫、神経膠腫、血管球腫瘍、顆粒膜腫、顆粒膜細胞腫、男性胚腫、血液悪性腫瘍、有毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞がん、遺伝性乳がん、組織球増殖症、ホジキン病、ヒトパピローマウイルス、胞状奇胎、高カルシウム血症、下咽頭がん、過誤腫、血管腫、血管外皮腫、血管肉腫、血管肉腫、組織球性疾患、悪性組織球増殖症、組織球腫、肝細胞腫、汗腺腫、軟骨肉腫（hondrosarcoma）、免疫増殖性小（immunoproliferative small）、脂肪種（opoma）、眼内黒色腫（ontraocular melanoma）、膵島細胞がん、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、平滑筋肉腫、白血病、リ・フラメニ症候群（Ihfraumeni syndrome）、唇がん、脂肪肉腫、肝がん、肺がん、リンパ浮腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、平滑筋肉腫（leigomyosarcoma）、白血病（例えば、b細胞、混合細胞、ヌル細胞、t細胞、t細胞慢性、htlv-ii関連、リンパ管肉腫、リンパ性急性、リンパ性慢性、肥満細胞および骨髄性）、白血肉腫、ライディッヒ細胞腫、脂肪肉腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、リンパ管腫（lymphangioma）、リンパ管細胞腫、リンパ管腫（lymphagioma）、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫、男性乳がん、腎悪性ラブドイド腫瘍、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、転移がん、口腔がん、多発性内分泌腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄腫、骨髄増殖性疾患、悪性カルチノイド症候群カルチノイド心臓病、髄芽腫、髄膜腫、黒色腫、間葉腫、中腎腫、中皮腫、筋芽細胞腫、筋腫、筋肉腫、粘液腫、粘液肉腫、鼻腔がん、鼻咽頭がん、腎芽細胞腫、神経芽細胞腫、ナイミーヘン染色体不安定症候群、非黒色腫皮膚がん、非小細胞肺がん（nsclc）、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経上皮腫、神経線維腫症、神経線維腫、神経腫、新生物（例えば、骨、乳房、消化器系、結腸直腸、肝臓）、眼のがん、食道がん、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、副鼻腔がん、副甲状腺がん、耳下腺がん、陰茎がん、末梢性神経外胚葉性腫瘍、下垂体がん、真性多血症、前立腺がん、骨腫、骨肉腫、卵巣がん、乳頭腫、傍神経節腫、非クロム親和性傍神経節腫（paraganglioma nonchromaffin）、松果体腫、形質細胞腫、プロトオンコジーン（がん原遺伝子）、希少がんと関連する疾患（rare-cancers-and-associated- disorders）、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、ロスムンド・トムソン（Rothmund-Thomson）症候群、細網内皮症、横紋筋腫、唾液腺がん、肉腫、神経鞘腫、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん（SCLC）、小腸がん、軟部肉腫、脊髄腫瘍、扁平上皮がん（皮膚）、胃がん、滑膜肉腫、肉腫（例えば、ユーイング実験的（Ewing's experimental）、カポジ肉腫および肥満細胞肉腫）、セルトリ細胞腫、滑膜腫、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、移行細胞がん（膀胱）、移行上皮がん（腎盂／尿管）、絨毛がん、奇形腫、卵胞膜細胞腫、胸腺腫、絨毛性腫瘍、尿道がん、泌尿器系がん、ウロプラキン、子宮肉腫、子宮がん、膣がん、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症およびウィルムス腫瘍（Waldenstrom's-macroglobulinemia and Wilms' tumor）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
本発明はまた、対象における免疫麻痺に関連する状態を治療または予防する方法であって、本発明の抗原結合部位を対象に投与し、それによって免疫麻痺に関連する状態を治療または予防することを含む方法を提供する。本明細書中で使用される場合、用語「免疫麻痺（immune paralysis）」は、対象の免疫系の減少した反応性または非反応性によって特徴付けられる任意の状態をいう。免疫麻痺は、敗血症または他の感染症または疾患に反応して、ある期間の過免疫反応（サイトカイン産生の急激な増加を含む）に続くことがあり得る。免疫麻痺は、免疫細胞のアポトーシスおよび／または高レベルのリンパ球およびマクロファージを阻害しおよび炎症促進性サイトカインの産生を抑制する抗炎症性サイトカインを特徴とし得る。免疫麻痺に関連する例示的な状態としては、敗血症、および急性および慢性の肝不全が挙げられる。
【０１９１】
診断／分析用試薬としての使用
本発明の抗原結合部位（抗原結合部部位を含む、または本明細書に記載のCDRまたはFR配列を含む抗体を含む）には、生物学的試料中のIL-37のレベルを決定するのに有用性があることもまた理解されるであろう。
【０１９２】
例えば、本発明の抗原結合部位のIL-37への結合（上記でさらに詳細に記載されるように）は、個体から得られた生物学的試料中のIL-37のレベルを定量または評価するための手段として使用され得る。生物学的試料は、血液試料（さらにPBMC、血清または血漿に処理され得る）、唾液、汗、組織生検等を含む、診断が決定されるべき個体から得られる任意の試料を含み得る。
【０１９３】
そうであるから、一つの実施形態では、抗原結合部位は、場合によっては増加または減少したレベルのIL-37に関連する任意の１以上の状態を診断するための診断の試薬として有用であり得る。抗原結合部位はまた、IL-37のレベルの変化に関連する状態に対する治療の進行をモニターするためにも使用され得る（例えば、抗原結合部位は、個体におけるIL-37のレベルが、異常なIL-37レベルによって特徴付けられる状態を治療または改善するために使用される任意の介入に応答して変化するかどうかを決定するために使用され得る）。
【０１９４】
診断を必要とする個体は、変化したレベルのIL-37産生または分泌によって特徴付けられる状態を有する、またはその危険性があると疑われる任意の個体であり得る。変化したレベルは、そうでなければその個体について予想されるものと比較して増加または減少したレベルであり得る。特定の状況に応じて、IL-37のレベルは、参照データセットについて知られているレベルと比較される。参照データセットは、個体が診断されている状態を有するまたは有さない個体におけるIL-37のレベルに対応し得る。あるいは、参照データセットは、より早い時点で個体から得られたデータであり得る。
【０１９５】
代替の実施形態では、抗原結合部位は、インビトロまたはインビボでの実験中に得られた試料中のIL-37レベルを決定するための、分析試薬として使用され得る。例えば、抗原結合部位は、組織培養からの上清中のIL-37のレベルを定量するために使用され得る。
【０１９６】
当業者は、診断用または分析用試薬として使用するために本明細書に記載の抗原結合部位を適合させるための方法に精通しているであろう。例えば、抗原結合部位は、間接ELISA、サンドイッチELISA、競合ELISA、マルチプルおよびポータブルELISAおよびラジオイムノアッセイ（RIA）等を含むが、これらに限定されない、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）での使用に適合され得る。
【０１９７】
組成物
いくつかの例において、本明細書に記載の抗原結合部位は、経口的に、非経口的に、吸入スプレー、吸着、吸収によって、局所的に、直腸内に、鼻腔内に、口腔内に、膣内に、脳室内に、従来の無毒の医薬的に許容される担体を含む投薬処方物に埋め込まれたリザーバーを介して、または任意の他の都合のよい剤形により、投与され得る。本明細書で使用される「非経口的」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、髄腔内、脳室内、胸骨内、および頭蓋内注射または注入技術を含む。
【０１９８】
抗原結合部位を対象への投与に適した形態（例えば、医薬組成物）に調製する方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990)およびU.S. Pharmacopeia: National Formulary (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1984)に記載された方法を含む。
【０１９９】
本発明の医薬用組成物は、静脈内投与、または体腔または臓器または関節の内腔への投与のような、非経口投与に特に有用である。投与のための組成物は、一般に、医薬的に許容される担体、例えば水性担体に溶解した抗原結合部位の溶液を含むであろう。種々の水性担体、例えば緩衝食塩水等を使用することができる。組成物は、pH調整剤および緩衝剤、毒性調整剤等、のおおよその生理学的条件に必要な医薬的に許容される補助物質、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム等を含み得る。これらの製剤中の本発明の抗原結合部位の濃度は広く変化し得、および選択された特定の投与様式および患者の必要性と調和して主に体液量、粘度、体重等に基づいて選択されるであろう。例示的な担体としては、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。混合油およびオレイン酸エチルなどの非水性のビヒクルも使用され得る。リポソームも担体として使用され得る。ビヒクルは、等張性および化学的安定性を高める少量の添加剤、例えば緩衝剤および防腐剤を含み得る。
【０２００】
処方時に、本発明の抗原結合部位は、投与製剤に適合する様式でおよび治療的／予防的に有効であるような量で投与されるであろう。製剤は、上記の注射用溶液の種類のような、様々な剤形で容易に投与されるが、他の医薬的に許容される形態、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤または経口投与用の他の固形物、坐剤、ペッサリー、経鼻剤またはスプレー、エアロゾル、吸入剤、リポソーム形態等もまた企図される。医薬的な「徐放性（slow release）」カプセル剤または組成物もまた使用され得る。徐放性の製剤は、一般に、長期間にわたって一定の薬物レベルを与えるように設計されており、本発明の抗原結合部位を送達するために使用され得る。
【０２０１】
投与量および投与のタイミング
本発明の抗原結合部位の適切な投与量は、特異的な抗原結合部位、治療されるべき状態および／または治療される対象に応じて変わるであろう。例えば最適以下の投与量で開始し、投与量を徐々に修正して最適または有用な投与量を決定することによって適切な投与量を決定することは、熟練した医師の能力の範囲内である。あるいは、治療／予防のための適切な用量を決定するために、細胞培養アッセイまたは動物実験からのデータが使用され、ここで適切な用量は、ほとんどまたは全く毒性のない活性化合物のED50を含む血中濃度の範囲内である。投与量は、採用される剤形および利用される投与経路に応じてこの範囲内で変わり得る。治療的／予防的有効量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養において決定されるIC50（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する化合物の濃度または量）を含む循環血漿濃度の範囲を達成するために処方され得る。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０２０２】
いくつかの例では、本発明の方法は、本明細書に記載の予防または治療有効量のタンパク質を投与することを含む。
【０２０３】
「治療有効量（therapeutically effective amount）」という用語は、治療を必要とする対象に投与したときに、その状態の臨床的な診断または臨床的な特徴として認められおよび許容されるより低いレベルまで、対象の予後および／もしくは状態を改善する、ならびに／または本明細書に記載の臨床状態の１以上の症状を軽減もしくは抑制する量である。対象に投与される量は、治療される状態の特定の特徴、治療される状態の種類および段階、投与の様式、および対象の、一般的な健康状態、他の疾患、年齢、性別、遺伝子型、および体重等の特徴に依存する。当業者は、これらおよび他の要因に応じて適切な投与量を決定することができるであろう。したがって、この用語は、本発明を、例えばタンパク質（複数可）の重量または量といった、特定の量に限定すると解釈されるべきではなく、むしろ本発明は、対象において所定の結果を達成するのに十分な抗原結合部位（複数可）の任意の量を包含する。
【０２０４】
本明細書中で使用される場合、用語「予防有効量（prophylactically effective amount）」は、臨床状態の１以上の検出可能な症状の発症を予防または抑制または遅延させるのに十分なタンパク質の量を意味すると解釈されるべきである。当業者は、そのような量が、例えば、投与される特異的な抗原結合部位（複数可）および／または特定の対象および／または状態のタイプもしくは重症度もしくはレベルおよび／もしくは状態に対する体質（遺伝的およびそれ以外の要因）、に応じて変わることを認識するであろう。したがって、この用語は、本発明を、例えば抗原結合部位（複数可）の重量または量といった、特定の量に限定すると解釈されるべきではなく、むしろ本発明は、対象において所定の結果を達成するのに十分な抗原結合部位（複数可）の任意の量を包含する。
【０２０５】
キット
本発明はさらに、以下:
(i)本発明の抗原結合部位またはそれをコードする発現構築物（複数可）;
(ii)本発明の細胞; 
(iii)本発明の複合体;または
(iii)本発明の医薬組成物;
の１以上を含むキットを含む。
IL-37を検出するためのキットの場合、キットは、例えば本発明の抗原結合部位に連結された、検出手段をさらに含むことができる。
治療的／予防的使用のためのキットの場合、キットは医薬的に許容される担体をさらに含むことができる。
必要に応じて本発明のキットは、任意の実施例に従って、本明細書に記載の方法で使用するための説明書と共に包装されている。
【０２０６】
【表１−１】
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【０２０７】
【表１−２】
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【０２０８】
【表２−１】
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【０２０９】
【表２−２】
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【０２１０】
【表２−３】
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【０２１１】
【表２−４】
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【０２１２】
【表２−５】
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【０２１３】
【表２−６】
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【０２１４】
【表２−７】
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【０２１５】
【表３−１】
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【０２１６】
【表３−２】
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【０２１７】
【表３−３】
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【０２１８】
本発明は、以下の非限定的な実施例を含む。
【実施例】
【０２１９】
実施例
実施例１
IL-37抑制性抗体の産生
免疫および血清力価：マウスを、メチル化CpGと組み合わせた16μgのIL-37抗原および免疫アジュバント（Sigma-Aldrich cat# S6322）の組み合わせで、２週間の間隔で３回腹腔内免疫した。免疫したマウスから血清試料を採取し、抗原に対する反応性を1:250および1:1250の希釈でELISAによって試験し、免疫前試料と比較した。最も高い力価を含むマウスを融合のために選択した。
使用したIL-37抗原は、ヒト由来のタグなし抗原、組換え（rec）IL-37（46-218）であった:
GSVHTSPKVKNLNPKKFSIHDQDHKVLVLDSGNLIAVPDKNYIRPEIFFALASSLSSASAEKGSPILLGVSKGEFCLYCDKDKGQSHPSLQLKKEKLMKLAAQKESARRPFIFYRAQVGSWNMLESAAHPGWFICTSCNCNEPVGVTDKFENRKHIEFSFQPVCKAEMSPSEVSD (配列番号 : 1)
ハイブリドーマ融合：ハイブリドーマ細胞を産生するために、マウス脾臓を摘出し、単細胞の懸濁液に分離させ、そしてポリエチレングリコールを用いてSP2／0-Ag14骨髄腫細胞に融合させた。結果として得られたハイブリドーマ細胞を、20×96ウェル組織培養プレート中のアザセリンヒポキサンチン含有培地中で増殖させた。
【０２２０】
実施例２
IL-37との結合についての抗体のスクリーニング
ハイブリドーマのコロニーを10日間増殖させ、その時点でハイブリドーマのコロニーの数を決定し、さらに3日間インキュベートした後、抗体上清の一定分量をスクリーニングのために採取した。上清を抗原および任意のスクリーニング試料に対する反応性について、最初にマイクロアレイ、続いて任意のIgGマイクロアレイ陽性クローンのELISAによってアッセイした（図1）。陽性クローンには、C3、D3、およびA3（本明細書ではそれぞれRC3、RD3、およびRA3とも呼ばれる）が含まれる。
免疫したマウスから血清試料を採取し、抗原に対する反応性を1:250および1:1250の希釈でELISAによって試験し、免疫前試料と比較した。最も高い力価を含むマウスを融合のために選択した。
図１に示された結果は、吸光度の測定値（生吸光度の測定値）および陽性：陰性比である。
配列決定の前に、ハイブリドーマ上清をIL-37ブロッキング活性についてスクリーニングした;この機能的アッセイからの結果（クローンC3およびD3に対して良好なブロッキング活性を示した）に基づいて、クローンC3およびD3を配列決定のために選択した。
次いでクローンC3およびD3を配列決定して、その配列決定の結果は、IMGT分析を用いて決定されたCDRとともに表１〜３に示す。
【０２２１】
実施例３
抗体の結合特異性
産生された抗体の特異性および交差反応性を検出するためのrec IL-18、rec IL1βおよびrec IL-37の免疫ブロット法を行った。ブロットを抗IL-37ハイブリドーマ上清でプローブした。rec IL-18やrec IL-1βとの交差反応性は観察されず、IL-37に対する産生抗体の特異性が明らかにされた（図２）。抗体（クローンD3）はIL-37を検出するが、IL-18（IL-37が重要なアミノ酸および受容体鎖を共有する、密接に関連したIL-1ファミリーメンバー）は検出されなかった。
【０２２２】
実施例４
抗体による内在性IL-37のブロッキング活性
新たに単離したヒトPBMCを、1%ヒト血清および1:500 MycoZap Plus-PRを添加したRPMI中に2.5×105 cells／mlで再懸濁し、そしてt0の時点でビヒクル（Veh）またはLPS（500 pg／ml）で処理した。t0またはその１、３または６時間後、IL-37抗体（クローンD3）を表示したように添加した。t0の２０時間後、上清をIL 1βについてELISAにより分析した。描かれているのは、平均値のIL-1β濃度± SEM; n = 3 ドナー。LPS 単独と比べ、**, P < 0.01、***, P < 0.001。###、t0の1時間後のLPS +37bl1と比べて、P < 0.001。
図３の結果より、LPSのみを受けた細胞と比較して、LPSおよびIL-37抗体での同時処理により、２０時間目でのIL-1βにおいて、有意な、ほぼ３倍の増加がもたらされることが示される。IL-1βのこの増加は、実験期間中任意の時間で細胞から放出された内因性IL-37の効果をブロックするIL-37抗体によるものである。LPS刺激の1時間後に抗体を添加する場合にIL-1βの同様の増加が観察され、これは、LPSによるPBMCの刺激後の最初の1時間に細胞外IL-37機能の増加がないことを示す。
しかし、抗体をLPSの3時間後に添加すると、IL-1β濃度が低下し、これは、IL-37抗体を添加する前にいくらかのIL-37が放出され、抗炎症効果を及ぼし得るためである（図３）。抗体がLPS刺激の6時間後に添加される場合、IL 1β濃度は、LPSのみを受けた細胞において観察されたものと等しい。この観察は、６時間の時点の後に細胞から放出されたIL-37の生物活性が、この実験におけるIL-37の抗炎症作用効果に有意な貢献をしないことを示す。
【０２２３】
実施例５
抗体による組換えIL-37のブロッキング活性
PBMCは、（Nold et al., Biochemical Pharmacology 66, 505-510 (2003)）に記載されているように、密度勾配遠心分離によって健康な被験者の末梢静脈血から単離された。PBMCを、L-グルタミン、25 mM HEPES（Thermo Fisher Scientific）、1% v／v ヒト血清（Sigma Aldrich）および1:500 MycoZap Plus-PR（Lonza）を添加したRPMI 1640培地中に播種し、示されているビヒクルまたはrec IL-37のいずれかで３０分間前処理し、その後、50 pg／ml LPS（O55:B5, Sigma Aldrich）で２０時間刺激した。IL-37ブロッキング抗体（クローンD3）をMonash Antibody Technologies Facilityにより産生し、ハイブリドーマ上清を生物活性アッセイを用いてIL-37ブロッキング能力に関して特徴付けした（図４）。新たに単離したPBMCを、最初に、示された希釈率のIL-37ブロッキング抗体またはコントロールで処理し、続いて示された濃度のD73K46-218またはビヒクルを３０分後に添加し、50 pg／ml LPSをさらに３０分後に添加した。IL-1βのタンパク質量は、LPS添加後２０時間で培養上清において決定し、IL-37ブロッキング抗体の存在下または非存在下でIL-37b変異体で処理することによってもたらされるパーセント変化を計算しおよび±ＳＥＭでグラフにした;１人の例示的なドナーからのn = 2の生物学的なレプリケート。
【０２２４】
実施例６
抗体によるトランスフェクトされた天然または単量体IL-37のブロッキング
天然1-218、D73K1-218またはY85A1-218を発現させる構築物をTHP-1細胞にトランスフェクトした。PMA（50 ng／ml）で２４時間分化させ、培地を交換した後、培養物をLI-37ブロッキング抗体クローンD3のハイブリドーマ上清（1:50希釈）またはコントロールで前処理し、次いで250 ng／ml LPSまたはビヒクルで刺激した。IL-37ブロッキング抗体で処理した培養物およびビヒクル処理の培養物（同一の構築物、すなわちコントロール、天然、D73K、またはY85A（D73K：73位にAspからLysへの変異を含むIL-37; Y85Aは85位にTyrからAlaへの変異を含む）でトランスフェクトし、およびLPSで刺激した）のペアとの間でのIL-1βのタンパク質量における変化倍数を、計算し、および平均± SEMとしてグラフ化し; 各LPS刺激状件についてn = 4の生物学的な再現をし; 統計的有意差は、順位に基づく分散分析および Student-Newman-Keuls 事後解析を使用して評価し; *, P < 0.05 コントロールとIL-37b トランスフェクションとの比較; #, P < 0.05 天然1-218とD73K1-218 または Y85A1-218との比較である。破線は、コントロール（すなわち、IL-37bではない）をトランスフェクトした培養物におけるIL-37ブロッキング抗体によるIL-1β誘導のバックグランドを示す。
本発明者らは、LPSで刺激する前にIL-37ブロッキング抗体（クローンD3）を、トランスフェクトされた培養物に添加した場合に、各変異体のトランスフェクションにおいてIL-1βの増加を観察した（図５）。しかしながら、この増加は、単量体D73K1-218およびY85A1-218変異体がトランスフェクトされた場合に、二量体の天然1-218 IL-37bと比較して、著しくより顕著であった。
【０２２５】
実施例７
抗体による組換えIL-37のブロッキング活性：IL-1β産生
健康な被験者（n = 2）からのPBMCを単離し、ハイブリドーマ上清の様々な希釈物（1:5から1:500のクローンC3）で３０分間前処理し、続いてLPS刺激（500 pg／mL）の前に１時間様々な濃度（1 pg／mLから10 ng／mL）での天然組換えIL-37（rIL-37）で処理した。一晩インキュベートした後、上清を回収し、IL-1βをELISAによって測定した。
RecIL-37はPBMCからのIL-1β放出を減少させるが、クローンC3からのハイブリドーマ上清を添加すると、この抗炎症活性は減少するかまたは失われる。
【０２２６】
実施例８
抗体による組換えIL-37のブロッキング活性：IL-1β産生
人間の血液が関係する実験は、モナッシュ大学のヒト研究倫理委員会によって承認された。製造者の説明書に従って、Leucosep Tubes（Greiner Bio-One、Germany）を用いた密度勾配遠心分離によって、健康なドナーの新鮮な末梢静脈血からPBMCを単離した。単離したPBMCを、１％ヒト血清（Sigma-Aldrich、USA）および1:500 MycoZap Plus-PR（Lonza、 Switzerland）を添加したRPMI 1640（Thermo Fisher Scientific、USA）に再懸濁し、９６ウェルプレートに播種した。次いで、ハイブリドーマクローン上清（クローンRD1）を添加する前に、細胞を１時間静置した。30分のインキュベーション後、組換えIL-37を添加し、さらに1時間インキュベートした後、200 pg／ml LPS（Sigma-Aldrich）で一晩刺激した。製造者の説明書に従って、ELISA（BD Bioscience、USA）によって上清中のIL-1βを測定した。
LPS刺激によって誘導されたIL-1β量の増加は、組換えIL-37の添加により最大４０％減少する。IL-37を添加する前にクローンRD1からの上清で前処理すると、IL-1β量によって決定されるIL-37の抗炎症活性が逆転した（図７）。
【０２２７】
実施例９
抗体による組換えIL-37のブロッキング活性：IL-6産生
すべての動物実験は、モナッシュ大学の動物倫理委員会によって承認され、およびヘルシンキ宣言の原則に従って行われた。C57BL ／ 6J野生型（WT）マウスは、Jackson Laboratories（USA）から購入し、IL-37トランスジェニック（IL-37tg）マウスは、Nold et al. (2010) Nature Immunology 11(11):1014-22に公開されたオリジナルのコロニーからのホモ接合型の子孫であった。脾細胞を単離し、１％ウシ胎児血清（Thermo Fisher Scientific）および1:500 MycoZap Plus-PR（Lonza）を添加したRPMI 1640（Thermo Fisher Scientific）に再懸濁し、９６ウェルプレートに播種した。次いで、細胞を１時間静置した後、抗IL-37ハイブリドーマクローン上清（RF1およびRF3）を添加し、３０分間インキュベートした。次いで細胞を250 ng／mL LPSで一晩刺激した。製造者の説明書に従ってELISA（BD Bioscience）により上清中のIL-6を測定した。
LPS刺激前の抗IL-37ハイブリドーマ上清（クローンRF1およびRF3）によるマウス脾細胞の前処理により、IL-37tg脾細胞においてLPS単独と比較してIL-6量の最大40％の増加をもたらし、一方抗IL-37ハイブリドーマ上清は、ＷＴマウス由来の細胞においてほとんどまたは全く効果がなかった。このように、これらのデータは、ハイブリドーマ上清が、IL-37の抗炎症活性を特異的様式でブロックすることを示している（図８）。
【０２２８】
本明細書に開示されおよび定義された本発明は、言及されているかまたは本文もしくは図面から明らかである２以上の個々の特徴のすべての代替の組み合わせに及ぶことが理解されるであろう。これらの様々な組み合わせの全てが、本発明の様々な代替の態様を構成する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2020511118.tif 000023
2020511118.tif 000024
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