(57)【要約】ポリ核酸を含むリポソーム構造体が提供される。ポリ核酸によりコードされるポリペプチド、リポソーム構造体の医薬組成物、およびそれらを作製し、使用する方法も開示されている。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。リポソーム構造体は、表面修飾を含み得る。表面修飾は、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、同等のリポソーム構造体と比較して増強することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）胃腸管において活性なタンパク質の少なくとも断片をコードする単離および精製された環状ポリ核酸；ならびに
ｂ）外表面がポリマーと接触している、脂質二重層を含むリポソーム
を含み、前記単離および精製された環状ポリ核酸が前記リポソーム内に少なくとも部分的に包被されている、構造体。
【請求項２】
ナノ構造体である、請求項１に記載の構造体。
【請求項３】
動的光散乱によって測定して、約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有する、請求項１から２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４】
動的光散乱によって測定して、約１００ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有する、請求項３に記載の構造体。
【請求項５】
外部コーティングをさらに含む、請求項１から４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６】
前記外部コーティングが、腸溶コーティングである、請求項５に記載の構造体。
【請求項７】
前記外部コーティングが、前記構造体の表面を完全にコーティングしている、請求項５から６までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８】
前記外部コーティングが、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メチルメタクリル酸）、ポリ（アクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリアクリレート（カルボマー）、アルギネート、キトサン、セルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される材料を含む、請求項５から７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項９】
前記外部コーティングが、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）を含む、請求項８に記載の構造体。
【請求項１０】
前記外部コーティングが、粘膜接着性ハイドロゲルである、請求項５から９までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項１１】
前記外部コーティングが、ｐＨ感受性である、請求項５から１０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項１２】
前記ｐＨ感受性外部コーティングが、水１Ｌ中に、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して約５．５から約１４のｐＨで、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて入れると少なくとも部分的に溶解する、請求項１１に記載の構造体。
【請求項１３】
前記ｐＨ感受性外部コーティングが、水１Ｌ中に、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して約６から約１４のｐＨで、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて入れると少なくとも部分的に溶解する、請求項１１に記載の構造体。
【請求項１４】
前記ｐＨ感受性外部コーティングが、水１Ｌ中に、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して約７から約１４のｐＨで、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて入れると少なくとも部分的に溶解する、請求項１１に記載の構造体。
【請求項１５】
霊長類に経口投与されると、十二指腸、空腸、腸骨、結腸、またはこれらの任意の組合せにおいて少なくとも部分的に溶解する、請求項１から１４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項１６】
霊長類に経口投与されると、腸陰窩細胞に隣接して少なくとも部分的に溶解する、請求項１５に記載の構造体。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのポリマーが、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、前記構造体が、前記少なくとも１つのポリマーを含まない、他の点では同等の構造体よりもさらに粘液を横断することを可能にする、請求項１から１６までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項１８】
前記ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）含有ポリマー、ＰＥＧ−ポリプロピレンオキシドのトリブロック共重合体、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルエーテル）、ポリ（Ｎ−［２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ（２−メタクリル酸ジメチルアミノエチル）（ｐＤＭＡＥＭＡ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１から１７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項１９】
前記ポリマーが、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）を含む、請求項１８に記載の構造体。
【請求項２０】
前記ポリマーが、ＰＥＧを含む、請求項１８に記載の構造体。
【請求項２１】
前記ポリマーが、リンカーを介して前記脂質二重層と結び付いている、請求項１から２０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項２２】
前記リンカーが、酸不安定リンカーである、請求項２１に記載の構造体。
【請求項２３】
前記リンカーが、ジスルフィド結合、アシルヒドラゾン、ビニルエーテル、オルトエステル、またはＮ−ＰＯ３基のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項２１から２２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項２４】
前記脂質二重層がリポソームを形成している、請求項１から２３までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項２５】
前記ポリマーが、前記リポソームの表面の少なくとも一部に実質的に均一に分散している、請求項２４に記載の構造体。
【請求項２６】
前記リポソームが外表面および内表面を有し、前記ポリマーが前記外表面上に実質的に均一に分散している、請求項２５に記載の構造体。
【請求項２７】
前記ポリマーが前記リポソームに均一に分散していない、請求項１から２４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項２８】
前記リポソームが外表面および内表面を有し、前記ポリマーが前記外表面上に均一に分散していない、請求項２７に記載の構造体。
【請求項２９】
前記ポリマーが、約１９００ｇ／ｍｏｌから約２２００ｇ／ｍｏｌまでの範囲である重量平均分子量を含むＰＥＧ含有ポリマーである、請求項１から２８までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３０】
前記ポリマーが、約１９００ｇ／ｍｏｌから約２２００ｇ／ｍｏｌまでの重量平均分子量を有するＰＥＧ含有ポリマーである場合、前記ポリマーが、前記脂質二重層と、脂質ＰＥＧの実際のモル比および前記リポソームの算出された重量平均表面積の相対比較によって測定して前記脂質二重層１００ｎｍ２当たり約１０本の鎖から前記脂質二重層１００ｎｍ２当たり約２０本の鎖までの比で結び付いている、請求項２９に記載の構造体。
【請求項３１】
前記ポリマーが、少なくとも一部がマッシュルーム立体配置にある、請求項１から３０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３２】
前記ポリマーが、少なくとも一部がブラシ立体配置にある、請求項１から３０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３３】
前記脂質二重層が、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される材料を含む、請求項１から３２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３４】
前記材料が、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質を含む、請求項３３に記載の構造体。
【請求項３５】
前記材料が、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含む、請求項３３または３４に記載の構造体。
【請求項３６】
ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比が、約１：１０から約１：１までの範囲である、請求項３５に記載の構造体。
【請求項３７】
ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧのモル比が、約５０ｍｏｌ／４５ｍｏｌ／５ｍｏｌ、約５０ｍｏｌ／４４ｍｏｌ／６ｍｏｌ、約５０ｍｏｌ／４３ｍｏｌ／７ｍｏｌ、約５０ｍｏｌ／４２ｍｏｌ／８ｍｏｌ、約５０ｍｏｌ／４１ｍｏｌ／９ｍｏｌ、および約５０ｍｏｌ／４０ｍｏｌ／１０ｍｏｌまでからなる群から選択される、請求項３５から３６までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３８】
前記脂質二重層が前記ＭＶＬ５を含む場合、前記ＭＶＬ５が、前記単離および精製された環状ポリ核酸と水素結合している、請求項３５から３７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項３９】
ＰＥＧ複合体をさらに含む、請求項１８から３８までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４０】
前記環状ポリ核酸が前記リポソーム内に完全に包被されている、請求項２４から３９までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４１】
リンカーをさらに含む、請求項１から４０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４２】
前記リンカーが、前記ポリマーと共有結合により結び付いている、請求項４１に記載の構造体。
【請求項４３】
前記リンカーが酸感受性リンカーである、請求項４１から４２に記載の構造体。
【請求項４４】
ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含む、請求項１から４３までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４５】
前記ポリマーと接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体をさらに含む、請求項４４に記載の構造体。
【請求項４６】
前記構造体が前記ペプチドを含む場合、前記ペプチドが細胞透過性ペプチドである、請求項４５に記載の構造体。
【請求項４７】
前記構造体が前記抗体またはその断片を含む場合、前記抗体またはその断片がロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とする、請求項４４に記載の構造体。
【請求項４８】
前記外部コーティングがカチオン性である、請求項５から４７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項４９】
前記外部コーティングがアニオン性である、請求項５から４７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５０】
前記外部コーティングが中性である、請求項５から４７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５１】
前記外部コーティングの電荷が、レーザードップラー流速測定によって測定される、請求項５から５０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５２】
前記電荷が、高抵抗性水１ｍＬ中、約５から約１５までのＤＮＡ電荷比の構造体について、２角度粒子および分子サイズ分析機器によって測定して、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでである、請求項５１に記載の構造体。
【請求項５３】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１から５２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５４】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、一本鎖である、請求項１から５３までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５５】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、二本鎖である、請求項１から５３までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５６】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、ＤＮＡである、請求項５３から５５までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５７】
前記ＤＮＡがミニサークルＤＮＡである、請求項５６に記載の構造体。
【請求項５８】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、少なくとも部分的に水溶性である、請求項１から５７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項５９】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、前記脂質二重層内に封入された水溶液中に存在する、請求項５８に記載の構造体。
【請求項６０】
前記胃腸管において活性なタンパク質の少なくとも断片が、大腸腺腫症（ＡＰＣ）の少なくとも一部分、Ｂ−ガラクトシダーゼ（Ｂ−Ｇａｌ）の少なくとも一部分、またはこれらの任意の組合せである、請求項１から５９までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６１】
前記胃腸管において活性なタンパク質の少なくとも断片が、大腸腺腫症（ＡＰＣ）の少なくとも一部分である、請求項６０に記載の構造体。
【請求項６２】
前記胃腸管において活性なタンパク質の少なくとも断片が、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）の少なくとも一部分、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）の少なくとも一部分、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項１から６１までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６３】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、少なくとも１つのプロモーターを含む、請求項１から６２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６４】
前記プロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せを含むリストから選択される、請求項６３に記載の構造体。
【請求項６５】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、前記構造体と少なくとも部分的に接触している、前記構造体の少なくとも１つの構成成分と接触している、またはこれらの組合せである、請求項１から６４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６６】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、カチオン性脂質と接触している、請求項６５に記載の構造体。
【請求項６７】
タンパク質またはペプチドをさらに含む、請求項１から６６までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項６８】
前記タンパク質またはペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、請求項６７に記載の構造体。
【請求項６９】
前記タンパク質またはペプチドが、前記単離および精製された環状ポリ核酸と接触している、請求項６７から６８までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７０】
前記タンパク質またはペプチドが、前記単離および精製された環状ポリ核酸と接触していない、請求項６７から６９までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７１】
ヌクレアーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１から７０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７２】
前記ヌクレアーゼ阻害剤が、アウリントリカルボン酸（ＡＴＡ）、Ｚｎ２＋、ＤＭＩ−２、またはこれらの組合せからなる群から選択される、請求項７１に記載の構造体。
【請求項７３】
前記構造体内に封入されたＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターをさらに含む、請求項１から７２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７４】
前記ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターが、ＣＥＱ５０８またはその塩である、請求項７３に記載の構造体。
【請求項７５】
前記塩がカチオン性金属である、請求項１から７４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７６】
前記緩衝剤が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）トリス−（ヒドロキシメチル）−アミノメタン塩酸塩（ＴＲＩＳ）緩衝剤、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、グリシン緩衝剤、グルタミン酸、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される緩衝剤である、請求項１から７５までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７７】
前記緩衝剤がＰＢＳである、請求項７６に記載の構造体。
【請求項７８】
前記構造体が、粘液透過性粒子（ＭＰＰ）である、請求項１から７７までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項７９】
前記ＭＰＰが、レーザードップラー流速測定によって測定して、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでの中性付近のゼータ電位を有する、請求項７８に記載の構造体。
【請求項８０】
前記ＭＰＰが、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、１μｍから２００μｍまでの厚さの粘液を透過することができる、請求項７８から７９までに記載の構造体。
【請求項８１】
球状である、請求項１から８０までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８２】
少なくとも部分的に生分解性である、請求項１から８１までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８３】
フリーズドライされている、請求項１から８２までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８４】
ピル、ハイドロゲル、またはこれらの任意の組合せに含まれている、請求項１から８３までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８５】
前記単離および精製された環状ポリ核酸が、腫瘍抑制因子タンパク質またはその前駆物質をコードする、請求項１から８４までのいずれか一項に記載の構造体。
【請求項８６】
請求項１から８５までのいずれか一項に記載の構造体を含む医薬組成物。
【請求項８７】
単位剤形である、請求項８６に記載の医薬組成物。
【請求項８８】
薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項８６から８７までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８９】
請求項１から８８までのいずれか一項に記載の構造体または医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項９０】
前記方法が前記対象における疾患または状態を処置し、前記構造体または医薬組成物が治療有効量で投与される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記疾患または状態が、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患、回腸クローン病またはこれらの任意の組合せである、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記構造体または医薬組成物が、ＦＡＰを処置するために使用される、請求項８９から９１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象が、胃腸管内にポリープを有する、請求項８９から９２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記対象が、前記構造体または前記医薬組成物の投与の前、その後、またはそれと同時にポリープの外科的除去を受ける、請求項８９から９３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記構造体または医薬組成物を、経口的に、直腸に、または経口的にかつ直腸に投与する、請求項８９から９４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記構造体または医薬組成物を日常的に投与する、請求項８９から９５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記構造体または医薬組成物を予防的に投与する、請求項８９から９６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記構造体または医薬組成物を１日１回、１日２回、１日３回、毎日、週に１回、年に１回またはこれらの任意の組合せで投与する、請求項８９から９７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象に追加的な治療薬を治療有効量で投与する、請求項８９から９８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記追加的な治療薬が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、グアイフェネシン、Ｂ−カテニンに対するｍｉＲＮＡ、粘液破壊剤、または塩、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記追加的な治療薬が前記ＮＳＡＩＤを含み、前記ＮＳＡＩＤがセレコキシブである、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記対象が、疾患に関して遺伝子スクリーニングされる、請求項８９から１０１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
請求項１から８５までのいずれか一項に記載の構造体を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ−Ｓｎａｐｗｅｌｌ拡散チャンバーアッセイによって測定して少なくとも３０％の前記構造体の胃腸細胞への送達効率で投与するステップを含む方法。
【請求項１０４】
配列番号５に対して少なくとも５０％の相同性を有するポリ核酸。
【請求項１０５】
前記ポリ核酸が、配列番号５に対する少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％までの相同性からなる、請求項１０４に記載のポリ核酸。
【請求項１０６】
配列番号５を含むポリ核酸。
【請求項１０７】
単離および精製されている、請求項１０４から１０６までのいずれか一項に記載のポリ核酸。
【請求項１０８】
構造体を作製する方法であって、腫瘍抑制因子タンパク質またはその一部をコードする環状ポリ核酸の周囲にリポソームを形成するステップを含む方法。
【請求項１０９】
構造体を作製する方法であって、胃腸管において活性なタンパク質またはその一部をコードする環状ポリ核酸の周囲にリポソームを形成するステップを含む方法。
【請求項１１０】
溶媒を導入するステップをさらに含む、請求項１０８から１０９までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記溶媒がクロロホルムを含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
前記溶媒を乾燥するステップをさらに含む、請求項１０８から１１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１３】
前記溶媒を乾燥する前記ステップを、乾燥窒素流、アルゴン流、回転蒸発、真空引き、またはこれらの任意の組合せを含む方法によって実施する、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
乾燥窒素流を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
真空引きを含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１６】
乾燥する前記ステップを、乾燥窒素流、続いて真空引きによって実施する、請求項１１３から１１５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
乾燥する前記ステップが、水溶液の添加によって水和する脂質フィルムを形成する、請求項１１２から１１６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
水溶液をさらに含む、請求項１０８から１１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記環状ポリ核酸が、ＤＮＡまたはＲＮＡを含む、請求項１０８から１１８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２０】
前記環状ポリ核酸がＤＮＡを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
前記環状ポリ核酸がミニサークルＤＮＡを含む、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
請求項１から８５までのいずれか一項に記載の構造体およびその使用に関する指示を含むキット。
【請求項１２３】
請求項１０６から１０７までに記載のポリ核酸およびその使用に関する指示を含むキット。
【請求項１２４】
請求項１２２または請求項１２３に記載のキットを作製する方法。
【請求項１２５】
医薬組成物を作製する方法であって、請求項１から８５までのいずれか一項に記載の構造体および薬学的に許容される賦形剤を接触させるステップを含む方法。
【請求項１２６】
ａ）単離および精製された環状ポリ核酸を含むリポソーム構造体であって、前記リポソーム構造体がポリマーで表面修飾されており、前記ポリマーが、前記リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、同等のリポソーム構造体と比較して増強し、前記同等のリポソーム構造体が、約２０００Ｄａから約３０００Ｄａまでの範囲である平均分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で表面修飾されている、リポソーム構造体。
【請求項１２７】
前記同等のリポソーム構造体と比較して親水性が増大している、請求項１２６に記載のリポソーム構造体。
【請求項１２８】
単離および精製されたポリ核酸を含むリポソーム構造体であって、
前記ポリ核酸が、細菌複製開始点を含まず、前記リポソーム構造体が、ポリマーで表面修飾されている、リポソーム構造体。
【請求項１２９】
前記ポリ核酸が環状である、請求項１２８に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３０】
リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスを含む群から選択される、請求項１２６から１２９までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３１】
式Ｉ：
【化１２】
2020500218.tif 000030
（式中、
Ｒ１は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ２は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ３は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ４は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ５は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ６は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
Ｒ７は、独立に、結合；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルケニル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択され、水素および重水素以外は、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；
＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択され；Ｙは、独立に、重水素または水素から選択され；Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは約１から約１００までである）
のポリマーで表面修飾されている、請求項１２６から１３０までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３２】
Ｒ１がＣ１〜６アルキルである、請求項１３１に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３３】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つが、重水素および水素からなる群から選択される、請求項１３１から１３２までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３４】
Ｘが酸素である、請求項１３１から１３３までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３５】
式Ｉが約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有する、請求項１３１から１３４までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３６】
前記ポリマーが、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含む、請求項１２６または１２８に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３７】
前記ポリマーが、密度が約０．０５ｕｇ／ｎｍ２から約０．２５ｕｇ／ｎｍ２までである、請求項１２６から１３６までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３８】
前記リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度が、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までである、請求項１２６から１３７までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１３９】
前記ポリ核酸が、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡを含む、請求項１３８に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４０】
ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含む、請求項１２６から１３９までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４１】
外部コーティングをさらに含む、請求項１２６から１４０までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４２】
前記外部コーティングが、重合形態のアクリル酸エチルを含む、請求項１４１に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４３】
前記外部コーティングが、レーザードップラー流速測定によって測定して、中性付近のゼータ電位を有する、請求項１４１から１４２までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４４】
脂質二重層を含む、請求項１２６から１４３までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４５】
前記脂質二重層が、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、その塩、またはこれらの任意の組合せの１つまたは複数を含む、請求項１４４に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４６】
前記脂質二重層が、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含む、請求項１４５に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４７】
ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比が、約１０：１から約１：１０まで、または１０：１から約１：２５までの範囲である、請求項１４６に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４８】
第２の脂質二重層をさらに含む、請求項１４４から１４７までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１４９】
酸感受性リンカーをさらに含む、請求項１２６から１４８までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５０】
前記酸感受性リンカーが、前記リポソーム構造体の前記ポリマーに結び付いている、請求項１４９に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５１】
前記ポリ核酸が、タンパク質の少なくとも生物活性断片をコードする、請求項１２６から１５０までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５２】
前記タンパク質の前記生物活性断片が、粘膜を含む体の領域において活性である、請求項１５１に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５３】
前記ポリ核酸が、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも生物活性断片をコードする、請求項１２６から１５２までに記載のリポソーム構造体。
【請求項１５４】
動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有する、請求項１２６から１５３までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５５】
少なくとも２つのポリ核酸を含む、請求項１２６から１５４までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５６】
前記ポリ核酸が、少なくとも１つのプロモーターを含む、請求項１２６から１５５までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５７】
前記少なくとも１つのプロモーターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せから選択される、請求項１５６に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５８】
ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含む、請求項１２６から１５７までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体。
【請求項１５９】
ａ．請求項１２６から１５８までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体；および
ｂ．賦形剤、希釈剤、または担体のうちの少なくとも１つ
を含む医薬組成物。
【請求項１６０】
単位剤形である、請求項１５９に記載の医薬組成物。
【請求項１６１】
錠剤、液剤、シロップ剤、経口用製剤、静脈内製剤、鼻腔内製剤、皮下製剤、吸入可能な呼吸器製剤、坐薬、およびこれらの任意の組合せの形態である、請求項１５９から１６０までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６２】
それを必要とする対象を処置する方法であって、前記それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１２６から１５８までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体または請求項１５９から１６１までのいずれか一項に記載の医薬組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１６３】
前記リポソーム構造体または前記医薬組成物を投与する前記ステップが、前記それを必要とする対象における疾患または状態を少なくとも部分的に好転させる、請求項１６２に記載の方法。
【請求項１６４】
前記疾患または状態が、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、結腸直腸がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患、回腸クローン病またはこれらの任意の組合せを含む、請求項１６３に記載の方法。
【請求項１６５】
前記リポソーム構造体または前記医薬組成物を経口的に、直腸に、または経口的にかつ直腸に投与する、請求項１６２から１６４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６６】
前記リポソーム構造体または前記医薬組成物を、日常的に、予防的に、またはこれらの組合せで投与する、請求項１６２から１６５までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６７】
前記リポソーム構造体または前記医薬組成物を、１日１回、１日２回、１日３回、毎日、週に１回、年に１回またはこれらの任意の組合せで投与する、請求項１６２から１６６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６８】
前記対象に、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはその塩、β−カテニンに対するｍｉＲＮＡ、粘液破壊剤もしくはその塩、またはこれらの任意の組合せを含む追加的な治療薬を治療有効量で投与する、請求項１６２から１６７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６９】
ａ．請求項１２６から１５８までのいずれか一項に記載のリポソーム構造体または請求項１５９から１６１までのいずれか一項に記載の医薬組成物；
ｂ.およびその使用に関する指示
を含むキット。
【請求項１７０】
容器をさらに含む、請求項１６９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１６年１１月１１日に出願された米国仮出願第６２／４２１，１０３号、および２０１７年４月１４日に出願された米国仮出願第６２／４８５，４９３号の利益を主張し、これらの両方は、本明細書においてその全体が参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
ここ５０年にわたる遺伝子治療の進歩にもかかわらず、特に遺伝子治療の標的の場所によって送達に関する難題がもたらされ得る場合に、従来の方法に対して不応性の疾患が多く残っている。
【０００３】
本明細書において開示される組成物および方法は、遺伝子治療のためのナノ粒子を生成するために使用することができる。ナノ粒子は、治療用遺伝子を疾患の部位に非侵襲的に供給することができる。
参照による組み込み
【０００４】
本明細書における全ての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的にかつ個別に参照により組み込まれることが示されたのと同程度に、それらの全体が参照により組み込まれる。本明細書における用語と組み込まれた参考文献における用語が矛盾する場合には、本明細書における用語が優先される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。リポソーム構造体は、表面修飾を含み得る。表面修飾は、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、同等のリポソーム構造体と比較して増強することができる。同等のリポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってよい。ＰＥＧは、約２０００から約３０００ダルトン（Ｄａ）までの範囲の平均分子量を有し得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。一部の場合では、リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、表面修飾は、式Ｉ：
【０００６】
【化１】
2020500218.tif 000003
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３およびＲ４が同一でない場合、＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が同一でない場合、＊＊は、ＲまたはＳであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは、１〜１００である）のポリマーを含み得る。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。一部の場合では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。一部の場合では、Ｘは酸素であってよい。式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。表面修飾は、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。表面修飾は、密度が約０．０５ｕｇ／ｎｍ２から約０．２５ｕｇ／ｎｍ２までであってよい。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。一部の場合では、ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、ＲＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、表面修飾と接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、ペプチドを含み得る。ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得る。リポソーム構造体は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる抗体またはその断片を含み得る。リポソーム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。一部の場合では、中性付近のゼータ電位は、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。一部の場合では、ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲である。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。一部の場合では、リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と結び付いている。リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と直接結び付いていてよい。一部の場合では、リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と間接的に結び付いていてよい。ポリ核酸は、タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。タンパク質の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。一部の場合では、タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、動的光���乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。
【０００７】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。ポリ核酸は、細菌複製開始点を含まなくてよい。リポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。リポソーム構造体は、式Ｉ
【０００８】
【化２】
2020500218.tif 000004
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）を含むポリマーを含み得る。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６は、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、ポリマーは、約０．０５ｕｇ／ｎｍ２から約０．２５ｕｇ／ｎｍ２までの密度を有し得る。ポリマーは、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、他の点では同等のリポソーム構造体と比較して増強することができ、ここで、同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で表面修飾されている。一部の場合では、ＰＥＧは、２０００Ｄａから３０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも部分的に水溶性であってよい。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含み得る。少なくとも１つのプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せから選択することができる。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーと接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチドを含んでよく、ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、ペプチドは、ポリ核酸と接触していてよい。ペプチドは、ポリ核酸と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得、抗体またはその断片は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる。一部の場合では、リポソーム構造体は、ヌクレアーゼ阻害剤をさらに含み得る。ヌクレアーゼ阻害剤は、アウリントリカルボン酸（ＡＴＡ）、Ｚｎ２＋、ＤＭＩ−２、その塩、またはこれらの組合せからなる群から選択することができる。リポソーム構造体は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターをさらに含み得る。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターは、ＣＥＱ５０８またはその塩であってよい。リポソーム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。一部の場合では、外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。中性付近のゼータ電位は、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層内に封入された水溶液中に存在してよい。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステ��ロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、ポリマーと結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと直接結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと間接的に結び付いていてよい。ポリ核酸は、タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、タンパク質
の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１００ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し得る。
【０００９】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。リポソーム構造体は、式Ｉ
【００１０】
【化３】
2020500218.tif 000005
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）のポリマーで表面修飾されていてよい。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６は、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、ポリマーは、約０．０５ｕｇ／ｎｍ２から約０．２５ｕｇ／ｎｍ２までの密度を有し得る。ポリマーは、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、他の点では同等のリポソーム構造体と比較して増強することができ、ここで、同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で表面修飾されている。一部の場合では、ＰＥＧは、２０００Ｄａから３０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも部分的に水溶性であってよい。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含み得る。少なくとも１つのプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せから選択することができる。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーと接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチドを含んでよく、ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、ペプチドは、ポリ核酸と接触していてよい。ペプチドは、ポリ核酸と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得、抗体またはその断片は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる。一部の場合では、リポソーム構造体は、ヌクレアーゼ阻害剤をさらに含み得る。ヌクレアーゼ阻害剤は、アウリントリカルボン酸（ＡＴＡ）、Ｚｎ２＋、ＤＭＩ−２、その塩、またはこれらの組合せからなる群から選択することができる。リポソーム構造体は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターをさらに含み得る。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターは、ＣＥＱ５０８またはその塩であってよい。リポソーム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。一部の場合では、外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。中性付近のゼータ電位は、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでであってよい。中性付近のゼータ電位はまた、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってもよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層内に封入された水溶液中に存在してよい。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジ��テアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、ポリマーと結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと直接結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと間接的に結び付いていてよ
い。ポリ核酸は、タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、タンパク質の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１００ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し得る。
【００１１】
医薬組成物が本明細書において開示される。医薬組成物は、リポソーム構造体を含み得る。医薬組成物は、賦形剤を含み得る。医薬組成物は、希釈剤を含み得る。医薬組成物は、担体を含み得る。医薬組成物は単位剤形であってよい。医薬組成物は錠剤の形態であってよい。医薬組成物は液剤の形態であってよい。医薬組成物はシロップ剤の形態であってよい。医薬組成物は経口用製剤の形態であってよい。医薬組成物は静脈内製剤の形態であってよい。医薬組成物は鼻腔内製剤の形態であってよい。医薬組成物は皮下製剤の形態であってよい。医薬組成物は吸入可能な呼吸器製剤の形態であってよい。医薬組成物は坐薬の形態であってよい。医薬組成物は錠剤、液剤、シロップ剤、経口用製剤、静脈内製剤、鼻腔内製剤、皮下製剤、吸入可能な呼吸器製剤、坐薬、およびこれらの任意の組合せの形態であってよい。
【００１２】
それを必要とする対象を処置する方法が本明細書において開示される。一部の場合では、対象を処置する方法は、それを必要とする対象に治療有効量のリポソーム構造体を投与するステップを含み得る。一部の場合では、対象を処置する方法は、それを必要とする対象に医薬組成物を投与するステップを含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体または医薬組成物の投与は、それを必要とする対象における疾患または状態を少なくとも部分的に好転させることができる。疾患または状態は、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患、回腸クローン病またはこれらの任意の組合せを含み得る。疾患または状態は、ＦＡＰであり得る。対象は、胃腸管内にポリープを有し得る。それを必要とする対象は、リポソーム構造体または医薬組成物の投与の前、その後、またはそれと同時にポリープの外科的除去を受けてよい。リポソーム構造体または医薬組成物は、経口的に、直腸に、または経口的にかつ直腸に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物を日常的に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物は、予防的に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、毎日、週に１回、年に１回またはこれらの任意の組合せで投与することができる。対象に追加的な治療薬（ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ）を治療有効量で投与することができる。追加的な治療薬は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはその塩、β−カテニンに対するｍｉＲＮＡ、粘液破壊剤もしくはその塩、またはこれらの任意の組合せを含み得る。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、セレコキシブを含み得る。粘液破壊剤は、グアイフェネシンを含み得る。それを必要とする対象を、疾患または状態に関して遺伝子スクリーニングすることができる。
【００１３】
本明細書に記載のリポソーム構造体または医薬組成物をキット中に含めることができる。キットは、本明細書に記載の医薬組成物およびその使用に関する指示を含み得る。キットは、容器をさらに含み得る。キットを作製する方法も本明細書において開示される。キットを作製する方法は、本明細書に記載のリポソーム構造体または本明細書に記載の医薬組成物を容器に入れるステップを含み得る。キットまたはキットを作製する方法は、使用に関する指示をさらに含み得る。
【００１４】
リポソーム構造体を作製する方法が本明細書において開示される。医薬組成物を作製する方法も本明細書において開示される。リポソーム構造体または医薬組成物を作製する方法は、ポリ核酸の周囲にリポソームを形成するステップを含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。ポリ核酸は、胃腸管において活性であり得るタンパク質もしくはその一部または腫瘍抑制因子タンパク質もしくはその一部をコードし得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。ポリマーは、式Ｉ：
【００１５】
【化４】
2020500218.tif 000006
（式中、Ｒ１は、独立に水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）を含み得る。Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。方法は、溶媒を導入するステップをさらに含み得る。溶媒は、クロロホルムを含み得る。方法は、溶媒を乾燥するステップをさらに含み得る。乾燥するステップは、溶媒を、乾燥窒素、アルゴン流、回転蒸発、真空、またはこれらの任意の組合せに曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、溶媒を乾燥窒素に曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、溶媒を真空に曝露させることを含み得る。一部の場合では、乾燥するステップは、溶媒を乾燥窒素流、続いて真空に曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、水溶液の添加によって水和することができる脂質フィルムを形成することができる。方法は、水溶液をさらに含み得る。方法は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せを含むポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。
【００１６】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。精製されたポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）表面修飾を含み得る。一部の場合では、親水性の増大は、非ＰＥＧ表面修飾によって引き起こすことができる。非ＰＥＧ表面修飾は、式Ｉ：
【００１７】
【化５】
2020500218.tif 000007
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３およびＲ４が同一でない場合、＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が同一でない場合、＊＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）のポリマーを含み得る。Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。表面修飾は、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。
【００１８】
ナノ構造体が本明細書において開示される。一部の実施形態では、ナノ構造体は、少なくとも１つのタンパク質またはその一部をコードする少なくとも１つのポリ核酸；少なくとも１つのポリマーと接触している少なくとも１つの脂質二重層；および少なくとも１つの外部コーティングを含んでよく、ポリ核酸は、脂質二重層内に少なくとも部分的に包被されていてよく、外部コーティングはナノ構造体を少なくとも部分的にコーティングしていてよく、以下のうちの少なくとも１つが含まれていてよい：外部コーティングは腸溶コーティングであってよく、少なくとも１つのポリマーは、ポリグリコールポリマー、またはこれらの任意の組合せを含む。一部の場合では、ポリ核酸は、単離され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離および精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、環状であってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、約５００ｎｍまたはそれ未満の直径を有し得る。他の場合では、ナノ構造体は、約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、または約４００ｎｍから約５００ｎｍまでを含むリストから選択される直径を有し得る。少なくとも１つの外部コーティングは、部分コーティングであってよい。少なくとも１つの外部コーティングは、完全コーティングであってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、またはポリ（アクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸）７：３：１を含むリストから選択することができる少なくとも１つの外部コーティングを含み得る。少なくとも１つの外部コーティングは、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１であってよい。少なくとも１つの外部コーティングは、粘膜接着性ハイドロゲルであってよい。粘膜接着性ハイドロゲルは、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリアクリレート（カルボマー）、アルギネート、キトサン、およびセルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースからなる群から選択することができる。一部の場合では、少なくとも１つの外部コーティングは、ｐＨ感受性であってよい。ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して５．５を上回るｐＨで溶解し得る。ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して７を上回るｐＨで溶解し得る。他の場合では、ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して６を上回るｐＨで溶解し得る。溶解は、腸で起こり得る。他の場合では、溶解は、十二指腸、空腸、腸骨、および結腸からなる群から選択される器官において起こり得る。一部の場合では、溶解は、腸陰窩細胞の近傍で起こり得る。近傍でとは、腸陰窩細胞に隣接して、を指し得る。例えば、隣接とは、すぐに隣を意味し得る。他の場合では、隣接とは、腸の同じ区画内を意味し得る。例えば、溶解が小腸の十二指腸において起こる場合、十二指腸において見出される腸陰窩細胞に隣接するとみなされ得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのポリマーを、脂質二重層に直接、共有結合により、非共有結合により、リンカーを介して、またはこれらの任意の組合せで付着させることができる。ポリマーは、脂質二重層に共有結合により付着させることができる。少なくとも１つのポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ−ポリプロピレンオキシドのトリブロック共重合体、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルエーテル）、ポリ（Ｎ−［２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ（２−メタクリル酸ジメチルアミノエチル）（ｐＤＭＡＥＭＡ）、およびポリ−Ｌ−リシン（ｐＬＬ）、その修飾型または誘導体であってよい。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはＰＥＧを含む。一部の場合では、少なくとも１つのポリマーは粘液と相互作用しないものであり得、これは、ポリマーを含有しないものであり得るナノ構造体と比較した、粘液と相互作用しないものであり得る少なくとも１つのポリマーを含むナノ構造体が横断する粘液の距離の増大として測定される。一部の場合では、ＰＥＧは、平均１９００ｇ／ｍｏｌから２２００ｇ／ｍｏｌまでの分子量を含むＰＥＧ２０００であってよい。ＰＥＧは、脂質二重層に、１００ｎｍ２当たり約１０本から２０本の鎖で付着させることができる。ＰＥＧ表面密度は、リポソーム中の脂質−ＰＥＧの実際のモル比およびリポソームの算出された重み付けされた平均表面積を使用して推定することができる。決定することができる脂質−ＰＥＧの実際のモル比は、１％ｗ／ｗＤＳＳを参照として用いてＤ２Ｏ中に調製した１ＨＮＭＲであってよい。５００ＭＨｚ、１０ｓ緩和時間および９０度に設定したＺＧパルス。ＰＥＧピークは３．３〜４．１ｐｐｍで生じ、それらの積分値を標準物質と比較することができる。一部の場合では、ＰＥＧは、マッシュルーム立体配置にあってよい。他の場合では、ＰＥＧは、ブラシ立体配置にあってよい。他の場合では、ＰＥＧは、パンケーキ立体配置にあってよい。脂質二重層は、リポソームの形態であってよい。一部の場合では、脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルア���ドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、その誘導体、およびこれらの組合せからなる群から選択される脂質のリストから生成することができる。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥで構成され得る。一部の場合では、ＤＯＧＳとＤＯＰＥは、８０Ｍｏｌ対２０Ｍｏｌの比であってよい。一部の場合では、ＰＥＧを少なくとも１つの脂質と５Ｍｏｌ〜１０Ｍｏｌの濃度で組み合わせることができる。一部の場合では、ＰＥＧ濃度は、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／５ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／６ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／７ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／８ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／９ｍｏｌ、または８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／１０ｍｏｌのＤＯＧＳ／ＤＯＰＥ／ＰＥＧを含むリストから選択することができる。一部の場合では、ＭＶＬ５およびＧＭＯをリポソーム構造体中の脂質として使用することができる。ＭＶＬ５およびＧＭＯのモル濃度は、約１０：１から１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。他の場合では、ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約５０：１から１：１までの範囲であってよい。例えば、モル比は、約５０：１から１：１まで、４０：１から１：１まで、３０：１から１：１まで、２０：１から１：１まで、１０：１から１：１までまたは約５：１から１：１までであってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。一部の場合では、ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧのモル比は、約５０ｍｏｌ／４５ｍｏｌ／５ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４４ｍｏｌ／６ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４３ｍｏｌ／７ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４２ｍｏｌ／８ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４１ｍｏｌ／９ｍｏｌから、約５０ｍｏｌ／４０ｍｏｌ／１０ｍｏｌまでであってよい。一部の場合では、ＭＶＬ５などの脂質は、ミニサークルポリ核酸などのポリ核酸と水素結合し得る。一部の場合では、ポリマーは、ペプチド、抗体、炭水化物、またはこれらの組合せをさらに含み得る。ペプチドまたは抗体は、抗体、単鎖可変性断片（ＳｃＦｖ）、細胞受容体、バーコード、リンカーまたはこれらの任意の組合せを含むリストから選択することができる。ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、抗体は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）であってよい。ナノ構造体は、カチオン性、アニオン性、中性、またはこれらの任意の組合せであってよい。ナノ構造体は中性であってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。一部の場合では、電荷は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ  ＺＳによって測定して、高抵抗性水１ｍＬ中、ＤＮＡ電荷比１０のナノ構造体について−２０ｍＶから２０ｍＶまでであってよい。一部の場合では、電荷は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ  ＺＳによって測定して、高抵抗性水１ｍＬ中、ＤＮＡ電荷比１０のナノ構造体について−１００ｍＶから約２０ｍＶまでであってよい。ＤＮＡ電荷比は０から２０までであってよい。一部の場合では、ナノ粒子を形成することができるポリマーは、「電荷比」を含み得る。電荷比とは、ポリマーの第２のブロックを含むカチオン性単量体の正電荷の数（カチオン性）（Ｎ）のナノ構造体に組み入れられるポリヌクレオチド上の負電荷の数（アニオン性）（Ｐ）に対する比を指し得る。一部の実施形態では、カチオン性電荷は、カチオン性単量体のカチオン性アミンである。一部の実施形態では、アニオン性電荷は、骨格ポリ核酸（例えば、ミニサークルＤＮＡ）上のリン酸基のアニオン性電荷である。一部の実施形態では、比を生理的ｐＨ、中性ｐＨ、またはこれらの組合せで算出することができる。さらなる実施形態では、Ｎ：Ｐ比を算出するために、カチオン性単量体のカチオン性種（例えば、アミン）の約半分（５０％）が中性かつ／または生理的ｐＨにおいて荷電していると仮定する。例示的なナノ構造体を、ナノ粒子内のポリヌクレオチドの適量を決定または推定するために特定のＮ：Ｐ比で形成することができる。例示的なナノ粒子はまた、ナノ粒子に関して、サイズ、安定性、表面電荷などを含めた所望の特性を実現するＮ：Ｐ比で作製することもできる。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約０．５から約２０の間の値であってよい。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約１．０から約３０の間の値であってよい。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．０から約１５の間の値または約１０から１０の間の値であってよい。さらなる実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約１から、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０までの値であってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せであってよい。ポリ核酸は、ＤＮＡであってよい。ＤＮＡは、ミニサークルＤＮＡであってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、水溶性であってよい。ポリ核酸を脂質二重層内の水溶液に懸濁させることができる。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質またはその一部は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、Ｂ−ガラクトシダーゼ、（Ｂ−Ｇａｌ）、またはこれらの任意の組合せであってよい。一部の場合では、少なく
とも１つのタンパク質またはその一部は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）であってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含み得る。プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せを含むリストから選択することができる。タンパク質またはペプチドをさらに含むナノ構造体を本明細書において開示することができる。タンパク質またはペプチドは、核局在化シグナルを含み得る。一部の場合では、タンパク質またはペプチドは、ポリ核酸に結合し得る。一部の場合では、ナノ構造体は、ＤＮａｓｅ阻害剤をさらに含み得る。ナノ構造体は、粘液透過性粒子（ＭＰＰ）であってよい。ＭＰＰは、１から２００マイクロメートルまでの厚さの粘液を透過することが可能であり得る。ＭＰＰは、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでの、中性付近のゼータ電位を有し得る。ナノ構造体は、少なくとも部分的に生分解性であってよい。ナノ構造体をフリーズドライすることができる。ナノ構造体は、ピルとして、ハイドロゲルとして、またはこれらの任意の組合せで投与することができる。本明細書において開示されるナノ構造体を含む医薬組成物を本明細書において開示することができる。医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含み得る。
【００１９】
ある場合では、本明細書において開示される医薬組成物を、単位剤形で患者に投与することができる。一部の場合では、本明細書において開示される方法は、患者における少なくとも１つの状態を処置または防止することができる。一部の場合では、ナノ構造体を使用して、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、結腸直腸がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患またはこれらの任意の組合せを処置することができる。ナノ構造体を使用してＦＡＰを処置することができる。ナノ構造体を経口的にまたは直腸に投与することができる。ナノ構造体を日常的に投与することができる。ナノ構造体を防止的に投与することができる。一部の場合では、患者に少なくとも１つの追加的な治療薬を投与することができる。１種の追加的な治療薬は、非ステロイド性抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、Ｂ−カテニンに対するｍｉＲＮＡまたは粘液を破壊する任意の薬剤であってよい。一部の場合では、非ステロイド性抗炎症薬はセレコキシブであってよい。配列番号５のポリ核酸を含むナノ構造体を本明細書において開示することができる。
【００２０】
遺伝子治療のためのナノ構造体を作製する方法が本明細書において開示される。ナノ構造体を作製する方法は、少なくとも１つの脂質を少なくとも１つのポリマーと少なくとも１つの溶媒の存在下で接触させて混合物を形成するステップ；混合物を水溶液中に再懸濁させるステップ；混合物をインキュベートして少なくとも１つのリポソームを形成するステップ；リポソームを少なくとも１つのタンパク質またはその一部をコードする少なくとも１つのポリ核酸と接触させるステップ；および、少なくとも１つのポリマーを含む少なくとも部分的なコーティングを適用するステップを含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離および精製され得る。一部の場合では、少なくとも１つの脂質は、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）、ＤＯＰＥ（ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン）、またはこれらの組合せであってよい。一部の場合では、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥをＭｏｌ／Ｍｏｌ比８０／２０で混合することができる。一部の場合では、少なくとも１つのポリマーをＤＯＧＳおよびＤＯＰＥと混合することができる。一部の場合では、ポリマーをＭｏｌ比５〜１０の濃度で混合することができる。ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってよい。ＰＥＧはＰＥＧ２０００であってよい。一部の場合では、ＤＯＧｓ、ＤＯＰＥ、ＰＥＧ２０００を８０／２０／８Ｍｏｌ／Ｍｏｌ／ｍｏｌで混合することができる。一部の場合では、方法は、脂質の少なくとも１つの修飾をさらに含み得る。修飾は、ペプチド、抗体、単鎖可変性断片（ＳｃＦｖ）、細胞受容体、バーコード、リンカーまたはこれらの任意の組合せの付加を含むリストから選択することができる。溶媒は有機溶媒であってよい。溶媒はクロロホルムであってよい。方法は、溶媒を乾燥するステップをさらに含み得る。一部の場合では、溶媒を乾燥するステップは、乾燥窒素、アルゴン流、回転蒸発、真空、またはこれらの任意の組合せを含む。乾燥するステップは、乾燥窒素による乾燥であってよい。他の場合では、乾燥するステップは、真空引きであってよい。一部の場合では、乾燥するステップは、乾燥窒素流、続いて真空引きであってよい。乾燥するステップは、水溶液の添加によって水和することができる脂質フィルムを形成することができる。水溶液は高抵抗性水であってよい。一部の場合では、方法は、摂氏３７度で行われるインキュベーションを有してよい。ポリ核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せであってよい。ポリ核酸はＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡであってよい。一部の場合では、ミニサークルＤＮＡをリポソームと４対１の比で混合することができる。一部の場合では、少なくとも１つのコーティングは、ｐＨ感受性であってよい。ｐＨ感受性コーティングは、５．５を上回るｐＨで溶解し得る。ｐＨ感受性コーティングは、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１であってよい。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、Ｂ−ガラクトシダーゼ、（Ｂ−Ｇａｌ）、またはこれらの任意の組合せであってよい。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質はＡＰＣであってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、粘液透過性粒子（ＭＰＰ）であってよい。ＭＰＰは、１から２００マイクロメートルまでの厚さの粘液を透過することが可能であり得る。ＭＰＰは、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでの、中性付近のゼータ電位を有し得る。
【００２１】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。リポソーム構造体は、表面修飾を含み得る。表面修飾は、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、同等のリポソーム構造体と比較して増強することができる。同等のリポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってよい。ＰＥＧは、約２０００から約３０００ダルトン（Ｄａ）までの範囲の平均分子量を有し得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。一部の場合では、リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、表面修飾は、式Ｉ：
【００２２】
【化６】
2020500218.tif 000008
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３およびＲ４が同一でない場合、＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が同一でない場合、＊＊は、ＲまたはＳであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは、１〜１００である）のポリマーを含み得る。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。一部の場合では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。一部の場合では、Ｘは酸素であってよい。式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。表面修飾は、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。表面修飾は、密度が約０．０５μｇ／ｎｍ２から約０．２５μｇ／ｎｍ２までであってよい。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。一部の場合では、ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、ＲＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、表面修飾と接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、ペプチドを含み得る。ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得る。リポソーム構造体は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる抗体またはその断片を含み得る。リポソ��ム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。一部の場合では、中性付近のゼータ電位は、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでであってよい。一部の場合では、中性付近のゼータ電位は、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。一部の場合では、ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲である。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。一部の場合では、リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と結び付いている。リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と直接結び付いていてよい。一部の場合では、リンカーは、リポソーム構造体の表面修飾と間接的に結び付いていてよい。ポリ核酸は、タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。タンパク質の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。一部の場合では、タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。
【００２３】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。ポリ核酸は、細菌複製開始点を含まなくてよい。リポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。リポソーム構造体は、式Ｉ
【００２４】
【化７】
2020500218.tif 000009
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）を含むポリマーを含み得る。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６は、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、ポリマーは、約０．０５μｇ／ｎｍ２から約０．２５μｇ／ｎｍ２までの密度を有し得る。ポリマーは、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、他の点では同等のリポソーム構造体と比較して増強することができ、ここで、同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で表面修飾されている。一部の場合では、ＰＥＧは、２０００Ｄａから３０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも部分的に水溶性であってよい。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含み得る。少��くとも１つのプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せから選択することができる。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーと接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチドを含んでよく、ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、ペプチドは、ポリ核酸と接触していてよい。ペプチドは、ポリ核酸と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得、抗体またはその断片は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる。一部の場合では、リポソーム構造体は、ヌクレアーゼ阻害剤をさらに含み得る。ヌクレアーゼ阻害剤は、アウリントリカルボン酸（ＡＴＡ）、Ｚｎ２＋、ＤＭＩ−２、その塩、またはこれらの組合せからなる群から選択することができる。リポソーム構造体は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターをさらに含み得る。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターは、ＣＥＱ５０８またはその塩であってよい。リポソーム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。一部の場合では、外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。中性付近のゼータ電位は、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでであってよい。中性付近のゼータ電位は、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層内に封入された水溶液中に存在してよい。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ���グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、ポリマーと結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと直接結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと間接的に結び付いていてよい。ポリ核酸は、
タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、タンパク質の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１００ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し得る。
【００２５】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。リポソーム構造体は、式Ｉ
【００２６】
【化８】
2020500218.tif 000010
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）のポリマーで表面修飾されていてよい。一部の場合では、Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６は、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。リポソーム構造体は、リポプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポポリプレックスであってよい。一部の場合では、ポリマーは、約０．０５μｇ／ｎｍ２から約０．２５μｇ／ｎｍ２までの密度を有し得る。ポリマーは、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、他の点では同等のリポソーム構造体と比較して増強することができ、ここで、同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で表面修飾されている。一部の場合では、ＰＥＧは、２０００Ｄａから３０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、同等のリポソーム構造体の平均速度の約２倍から約５倍までになり得る。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖状ＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも部分的に水溶性であってよい。ポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、少なくとも２つのポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含��得る。少なくとも１つのプロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモーター、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せから選択することができる。リポソーム構造体は、ペプチド、抗体もしくはその断片、炭水化物、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、細胞受容体、またはこれらの任意の組合せをさらに含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーと接触したペプチド、抗体もしくはその断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または細胞受容体を含み得る。リポソーム構造体は、ペプチドを含んでよく、ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、ペプチドは、ポリ核酸と接触していてよい。ペプチドは、ポリ核酸と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、抗体またはその断片を含み得、抗体またはその断片は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）を標的とすることができる。一部の場合では、リポソーム構造体は、ヌクレアーゼ阻害剤をさらに含み得る。ヌクレアーゼ阻害剤は、アウリントリカルボン酸（ＡＴＡ）、Ｚｎ２＋、ＤＭＩ−２、その塩、またはこれらの組合せからなる群から選択することができる。リポソーム構造体は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターをさらに含み得る。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）のエフェクターは、ＣＥＱ５０８またはその塩であってよい。リポソーム構造体は、外部コーティングをさらに含み得る。外部コーティングは、カチオン性であってよい。外部コーティングは、アニオン性であってよい。外部コーティングは中性であってよい。外部コーティングは、重合形態のアクリル酸エチルを含み得る。一部の場合では、外部コーティングは、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。中性付近のゼータ電位は、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまでであってよい。中性付近のゼータ電位は、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでであってよい。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、脂質二重層内に封入された水溶液中に存在してよい。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロ���ル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５を含み得る。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥを含み得る。ポリ核酸は、脂質二重層内に完全に包被されていてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していてよい。ポリ核酸は、脂質二重層と接触していなくてよい。リポソーム構造体は、第２の脂質二重層をさらに含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体は、リンカーをさらに含み得る。リンカーは、酸感受性リンカーであってよい。リンカーは、ポリマーと結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと直接結び付いていてよい。リンカーは、ポリマーと間接的に結び付いていてよい。ポ
リ核酸は、タンパク質の少なくとも断片をコードし得る。一部の場合では、タンパク質の少なくとも断片は、胃腸（ＧＩ）管において活性であってよい。タンパク質の少なくとも断片は、粘膜を含む体の領域において活性であってよい。ポリ核酸は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、デフェンシンアルファ５（ＨＤ−５）、デフェンシンアルファ６（ＨＤ−６）、またはこれらの任意の組合せの少なくとも断片をコードし得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、および約４００ｎｍから約５００ｎｍまでからなる群から選択される直径を有し得る。リポソーム構造体は、動的光散乱によって測定して約１００ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し得る。
【００２７】
医薬組成物が本明細書において開示される。医薬組成物は、リポソーム構造体を含み得る。医薬組成物は、賦形剤を含み得る。医薬組成物は、希釈剤を含み得る。医薬組成物は、担体を含み得る。医薬組成物は単位剤形であってよい。医薬組成物は錠剤の形態であってよい。医薬組成物は液剤の形態であってよい。医薬組成物はシロップ剤の形態であってよい。医薬組成物は経口用製剤の形態であってよい。医薬組成物は静脈内製剤の形態であってよい。医薬組成物は鼻腔内製剤の形態であってよい。医薬組成物は皮下製剤の形態であってよい。医薬組成物は吸入可能な呼吸器製剤の形態であってよい。医薬組成物は坐薬の形態であってよい。医薬組成物は錠剤、液剤、シロップ剤、経口用製剤、静脈内製剤、鼻腔内製剤、皮下製剤、吸入可能な呼吸器製剤、坐薬、およびこれらの任意の組合せの形態であってよい。
【００２８】
それを必要とする対象を処置する方法が本明細書において開示される。一部の場合では、対象を処置する方法は、それを必要とする対象に治療有効量のリポソーム構造体を投与するステップを含み得る。一部の場合では、対象を処置する方法は、それを必要とする対象に医薬組成物を投与するステップを含み得る。一部の場合では、リポソーム構造体または医薬組成物の投与は、それを必要とする対象における疾患または状態を少なくとも部分的に好転させることができる。疾患または状態は、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患、回腸クローン病またはこれらの任意の組合せを含み得る。疾患または状態は、ＦＡＰであり得る。対象は、胃腸管内にポリープを有し得る。それを必要とする対象は、リポソーム構造体または医薬組成物の投与の前、その後、またはそれと同時にポリープの外科的除去を受けてよい。リポソーム構造体または医薬組成物は、経口的に、直腸に、または経口的にかつ直腸に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物を日常的に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物は、予防的に投与することができる。リポソーム構造体または医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、毎日、週に１回、年に１回またはこれらの任意の組合せで投与することができる。対象に追加的な治療薬を治療有効量で投与することができる。追加的な治療薬は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはその塩、β−カテニンに対するｍｉＲＮＡ、粘液破壊剤もしくはその塩、またはこれらの任意の組合せを含み得る。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）は、セレコキシブを含み得る。粘液破壊剤は、グアイフェネシンを含み得る。それを必要とする対象を、疾患または状態に関して遺伝子スクリーニングすることができる。
【００２９】
本明細書に記載のリポソーム構造体または医薬組成物をキット中に含めることができる。キットは、本明細書に記載の医薬組成物およびその使用に関する指示を含み得る。キットは、容器をさらに含み得る。キットを作製する方法も本明細書において開示される。キットを作製する方法は、本明細書に記載のリポソーム構造体または本明細書に記載の医薬組成物を容器に入れるステップを含み得る。キットまたはキットを作製する方法は、使用に関する指示をさらに含み得る。
【００３０】
リポソーム構造体を作製する方法が本明細書において開示される。医薬組成物を作製する方法も本明細書において開示される。リポソーム構造体または医薬組成物を作製する方法は、ポリ核酸の周囲にリポソームを形成するステップを含み得る。リポソーム構造体は、ポリマーで表面修飾されていてよい。ポリ核酸は、胃腸管において活性であり得るタンパク質もしくはその一部または腫瘍抑制因子タンパク質もしくはその一部をコードし得る。リポソーム構造体は、リポソーム、リポプレックス、またはリポポリプレックスであってよい。リポソーム構造体は、リポソームであってよい。ポリマーは、式Ｉ：
【００３１】
【化９】
2020500218.tif 000011
（式中、Ｒ１は、独立に水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）を含み得る。Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。方法は、溶媒を導入するステップをさらに含み得る。溶媒は、クロロホルムを含み得る。方法は、溶媒を乾燥するステップをさらに含み得る。乾燥するステップは、溶媒を、乾燥窒素、アルゴン流、回転蒸発、真空、またはこれらの任意の組合せに曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、溶媒を乾燥窒素に曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、溶媒を真空に曝露させることを含み得る。一部の場合では、乾燥するステップは、溶媒を乾燥窒素流、続いて真空に曝露させることを含み得る。乾燥するステップは、水溶液の添加によって水和することができる脂質フィルムを形成することができる。方法は、水溶液をさらに含み得る。方法は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せを含むポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、ＤＮＡを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。
【００３２】
リポソーム構造体が本明細書において開示される。リポソーム構造体は、ポリ核酸を含み得る。ポリ核酸は、単離され得る。ポリ核酸は、精製され得る。ポリ核酸は、単離および精製され得る。精製されたポリ核酸は、リポソーム構造体内に少なくとも部分的に封入されていてよい。リポソーム構造体は、同等のリポソーム構造体と比較して増大した親水性を有し得る。同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）表面修飾を含み得る。一部の場合では、親水性の増大は、非ＰＥＧ表面修飾によって引き起こすことができる。非ＰＥＧ表面修飾は、式Ｉ：
【００３３】
【化１０】
2020500218.tif 000012
（式中、Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；Ｒ３およびＲ４が同一でない場合、＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が同一でない場合、＊＊は、独立に、ＲまたはＳであってよく、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択することができ、Ｙは、独立に、重水素または水素から選択することができ、Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであってよく、ｎは、約１から約１００までであってよい）のポリマーを含み得る。Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキルであってよい。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、またはＲ６のいずれか１つは、重水素および水素からなる群から選択することができる。Ｘは酸素であってよい。式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。表面修飾は、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、その塩、そのジブロックポリマー、そのトリブロックポリマー、またはこれらの組合せを含み得る。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡを含み得る。リポソーム構造体は、脂質二重層を含み得る。脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、これらのいずれかの塩、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数を含み得る。一部の場合では、材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であってよい。脂質二重層は、ＭＶＬ５およびＧＭＯを含み得る。
【００３４】
ナノ構造体が本明細書において開示される。一部の実施形態では、ナノ構造体は、少なくとも１つのタンパク質またはその一部をコードする少なくとも１つのポリ核酸；少なくとも１つのポリマーと接触している少なくとも１つの脂質二重層；および少なくとも１つの外部コーティングを含んでよく、ポリ核酸は、脂質二重層内に少なくとも部分的に包被されていてよく、外部コーティングはナノ構造体を少なくとも部分的にコーティングしていてよく、以下のうちの少なくとも１つが含まれていてよい：外部コーティングは腸溶コーティングであってよく、少なくとも１つのポリマーは、ポリグリコールポリマー、またはこれらの任意の組合せを含む。一部の場合では、ポリ核酸は、単離され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離および精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、環状であってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、約５００ｎｍまたはそれ未満の直径を有し得る。他の場合では、ナノ構造体は、約１０ｎｍから約１００ｎｍまで、約１００ｎｍから約２００ｎｍまで、約２００ｎｍから約３００ｎｍまで、約３００ｎｍから約４００ｎｍまで、または約４００ｎｍから約５００ｎｍまでを含むリストから選択される直径を有し得る。少なくとも１つの外部コーティングは、部分コーティングであってよい。少なくとも１つの外部コーティングは、完全コーティングであってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、またはポリ（アクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸）７：３：１を含むリストから選択することができる少なくとも１つの外部コーティングを含み得る。少なくとも１つの外部コーティングは、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１であってよい。少なくとも１つの外部コーティングは、粘膜接着性ハイドロゲルであってよい。粘膜接着性ハイドロゲルは、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリアクリレート（カルボマー）、アルギネート、キトサン、およびセルロース誘導体（ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースからなる群から選択することができる。一部の場合では、少なくとも１つの外部コーティングは、ｐＨ感受性であってよい。ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して５．５を上回るｐＨで溶解し得る。ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して７を上回るｐＨで溶解し得る。他の場合では、ｐＨ感受性コーティングは、水１Ｌ中に、撹拌棒を毎分２００回転で回転させて溶解させると、摂氏３７度でｐＨメーターを用いて測定して６を上回るｐＨで溶解し得る。溶解は、腸で起こり得る。他の場合では、溶解は、十二指腸、空腸、腸骨、および結腸からなる群から選択される器官において起こり得る。一部の場合では、溶解は、腸陰窩細胞の近傍で起こり得る。近傍でとは、腸陰窩細胞に隣接して、を指し得る。例えば、隣接とは、すぐに隣を意味し得る。他の場合では、隣接とは、腸の同じ区画内を意味し得る。例えば、溶解が小腸の十二指腸において起こる場合、十二指腸において見出される腸陰窩細胞に隣接するとみなされ得る。一部の実施形態では、少なくとも１つのポリマーを、脂質二重層に直接、共有結合により、非共有結合により、リンカーを介して、またはこれらの任意の組合せで付着させることができる。ポリマーは、脂質二重層に共有結合により付着させることができる。少なくとも１つのポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧ−ポリプロピレンオキシドのトリブロック共重合体、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルエーテル）、ポリ（Ｎ−［２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ（２−メタクリル酸ジメチルアミノエチル）（ｐＤＭＡＥＭＡ）、およびポリ−Ｌ−リシン（ｐＬＬ）、その修飾型または誘導体であってよい。一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはＰＥＧを含む。一部の場合では、少なくとも１つのポリマーは粘液と相互作用しないものであり得、これは、ポリマーを含有しないものであり得るナノ構造体と比較した、粘液と相互作用しないものであり得る少なくとも１つのポリマーを含むナノ構造体が横断する粘液の距離の増大として測定される。一部の場合では、ＰＥＧは、平均１９００ｇ／ｍｏｌから２２００ｇ／ｍｏｌまでの分子量を含むＰＥＧ２０００であってよい。ＰＥＧは、脂質二重層に、１００ｎｍ２当たり約１０本から２０本の鎖で付着させることができる。ＰＥＧ表面密度は、リポソーム中の脂質−ＰＥＧの実際のモル比およびリポソームの算出された重み付けされた平均表面積を使用して推定することができる。決定することができる脂質−ＰＥＧの実際のモル比は、１％ｗ／ｗＤＳＳを参照として用いてＤ２Ｏ中に調製した１ＨＮＭＲであってよい。５００ＭＨｚ、１０ｓ緩和時間および９０度に設定したＺＧパルス。ＰＥＧピークは３．３〜４．１ｐｐｍで生じ、それらの積分値を標準物質と比較することができる。一部の場合では、ＰＥＧは、マッシュルーム立体配置にあってよい。他の場合では、ＰＥＧは、ブラシ立体配置にあってよい。他の場合では、ＰＥＧは、パンケーキ立体配置にあってよい。脂質二重層は、リポソームの形態であってよい。一部の場合では、脂質二重層は、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルア���ドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、その誘導体、およびこれらの組合せからなる群から選択される脂質のリストから生成することができる。脂質二重層は、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥで構成され得る。一部の場合では、ＤＯＧＳとＤＯＰＥは、８０Ｍｏｌ対２０Ｍｏｌの比であってよい。一部の場合では、ＰＥＧを少なくとも１つの脂質と５Ｍｏｌ〜１０Ｍｏｌの濃度で組み合わせることができる。一部の場合では、ＰＥＧ濃度は、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／５ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／６ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／７ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／８ｍｏｌ、８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／９ｍｏｌ、または８０ｍｏｌ／２０ｍｏｌ／１０ｍｏｌのＤＯＧＳ／ＤＯＰＥ／ＰＥＧを含むリストから選択することができる。一部の場合では、ＭＶＬ５およびＧＭＯをリポソーム構造体中の脂質として使用することができる。ＭＶＬ５およびＧＭＯのモル濃度は、約１０：１から１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。他の場合では、ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約５０：１から１：１までの範囲であってよい。例えば、モル比は、約５０：１から１：１まで、４０：１から１：１まで、３０：１から１：１まで、２０：１から１：１まで、１０：１から１：１までまたは約５：１から１：１までであってよい。一部の場合では、ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧのモル比は、約５０ｍｏｌ／４５ｍｏｌ／５ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４４ｍｏｌ／６ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４３ｍｏｌ／７ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４２ｍｏｌ／８ｍｏｌ、５０ｍｏｌ／４１ｍｏｌ／９ｍｏｌから、約５０ｍｏｌ／４０ｍｏｌ／１０ｍｏｌまでであってよい。一部の場合では、ＭＶＬ５などの脂質は、ミニサークルポリ核酸などのポリ核酸と水素結合し得る。一部の場合では、ポリマーは、ペプチド、抗体、炭水化物、またはこれらの組合せをさらに含み得る。ペプチドまたは抗体は、抗体、単鎖可変性断片（ＳｃＦｖ）、細胞受容体、バーコード、リンカーまたはこれらの任意の組合せを含むリストから選択することができる。ペプチドは、細胞透過性ペプチドであってよい。一部の場合では、抗体は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）であってよい。ナノ構造体は、カチオン性、アニオン性、中性、またはこれらの任意の組合せであってよい。ナノ構造体は中性であってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、レーザードップラー流速測定によって測定して中性付近のゼータ電位を有してよい。一部の場合では、非中性電荷は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ  ＺＳによって測定して、高抵抗性水１ｍＬ中、ＤＮＡ電荷比１０のナノ構造体について−１００ｍＶから１００ｍＶまでであってよい。ＤＮＡ電荷比は０から２０までであってよい。一部の場合では、ナノ粒子を形成することができるポリマーは、「電荷比」を含み得る。電荷比とは、ポリマーの第２のブロックを含むカチオン性単量体の正電荷の数（カチオン性）（Ｎ）のナノ構造体に組み入れられるポリヌクレオチド上の負電荷の数（アニオン性）（Ｐ）に対する比を指し得る。一部の実施形態では、カチオン性電荷は、カチオン性単量体のカチオン性アミンである。一部の実施形態では、アニオン性電荷は、骨格ポリ核酸（例えば、ミニサークルＤＮＡ）上のリン酸基のアニオン性電荷である。一部の実施形態では、比を生理的ｐＨ、中性ｐＨ、またはこれらの組合せで算出することができる。さらなる実施形態では、Ｎ：Ｐ比を算出するために、カチオン性単量体のカチオン性種（例えば、アミン）の約半分（５０％）が中性かつ／または生理的ｐＨにおいて荷電していると仮定する。例示的なナノ構造体を、ナノ粒子内のポリヌクレオチドの適量を決定または推定するために特定のＮ：Ｐ比で形成することができる。例示的なナノ粒子はまた、ナノ粒子に関して、サイズ、安定性、表面電荷などを含めた所望の特性を実現するＮ：Ｐ比で作製することもできる。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約０．５から約２０の間の値であってよい。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約１．０から約３０の間の値であってよい。一部の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．０から約１５の間の値または約１０から１０の間の値であってよい。さらなる実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約１から、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０までの値であってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せであってよい。ポリ核酸は、ＤＮＡであってよい。ＤＮＡは、ミニサークルＤＮＡであってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、水溶性であってよい。ポリ核酸を脂質二重層内の水溶液に懸濁させることができる。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質またはその一部は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、Ｂ−ガラクトシダーゼ、（Ｂ−Ｇａｌ）、またはこれらの任意の組合せであってよい。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質またはその一部は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）であってよい。一部の場合では、ポリ核酸は、少なくとも１つのプロモーターを含み得る。プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来プロモーター、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＭ）由来プロモータ
ー、大腸腺腫症（ＡＰＣ）由来プロモーター、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）、ＣＡＧプロモーター、ベータアクチンプロモーター、伸長因子−１（ＥＦ１）プロモーター、初期増殖応答１（ＥＧＲ−１）プロモーター、真核生物開始因子４Ａ（ＥＩＦ４Ａ１）プロモーター、またはこれらの任意の組合せを含むリストから選択することができる。タンパク質またはペプチドをさらに含むナノ構造体を本明細書において開示することができる。タンパク質またはペプチドは、核局在化シグナルを含み得る。一部の場合では、タンパク質またはペプチドは、ポリ核酸に結合し得る。一部の場合では、ナノ構造体は、ＤＮａｓｅ阻害剤をさらに含み得る。ナノ構造体は、粘液透過性粒子（ＭＰＰ）であってよい。ＭＰＰは、１から２００マイクロメートルまでの厚さの粘液を透過することが可能であり得る。ナノ構造体は、少なくとも部分的に生分解性であってよい。ナノ構造体をフリーズドライすることができる。ナノ構造体は、ピルとして、ハイドロゲルとして、またはこれらの任意の組合せで投与することができる。本明細書において開示されるナノ構造体を含む医薬組成物を本明細書において開示することができる。医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含み得る。
【００３５】
ある場合では、本明細書において開示される医薬組成物を、単位剤形で患者に投与することができる。一部の場合では、本明細書において開示される方法は、患者における少なくとも１つの状態を処置または防止することができる。一部の場合では、ナノ構造体を使用して、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、結腸直腸がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患またはこれらの任意の組合せを処置することができる。ナノ構造体を使用してＦＡＰを処置することができる。ナノ構造体を経口的にまたは直腸に投与することができる。ナノ構造体を日常的に投与することができる。ナノ構造体を防止的に投与することができる。一部の場合では、患者に少なくとも１つの追加的な治療薬を投与することができる。１種の追加的な治療薬は、非ステロイド性抗炎症薬、ＮＳＡＩＤ、Ｂ−カテニンに対するｍｉＲＮＡまたは粘液を破壊する任意の薬剤であってよい。一部の場合では、非ステロイド性抗炎症薬はセレコキシブであってよい。配列番号５のポリ核酸を含むナノ構造体を本明細書において開示することができる。
【００３６】
遺伝子治療のためのナノ構造体を作製する方法が本明細書において開示される。ナノ構造体を作製する方法は、少なくとも１つの脂質を少なくとも１つのポリマーと少なくとも１つの溶媒の存在下で接触させて混合物を形成するステップ；混合物を水溶液中に再懸濁させるステップ；混合物をインキュベートして少なくとも１つのリポソームを形成するステップ；リポソームを少なくとも１つのタンパク質またはその一部をコードする少なくとも１つのポリ核酸と接触させるステップ；および、少なくとも１つのポリマーを含む少なくとも部分的なコーティングを適用するステップを含み得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、精製され得る。一部の場合では、ポリ核酸は、単離および精製され得る。一部の場合では、少なくとも１つの脂質は、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）、ＤＯＰＥ（ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン）、またはこれらの組合せであってよい。一部の場合では、ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥをＭｏｌ／Ｍｏｌ比８０／２０で混合することができる。一部の場合では、少なくとも１つのポリマーをＤＯＧＳおよびＤＯＰＥと混合することができる。一部の場合では、ポリマーをＭｏｌ比５〜１０の濃度で混合することができる。ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってよい。ＰＥＧはＰＥＧ２０００であってよい。一部の場合では、ＤＯＧｓ、ＤＯＰＥ、ＰＥＧ２０００を８０／２０／８Ｍｏｌ／Ｍｏｌ／ｍｏｌで混合することができる。一部の場合では、方法は、脂質の少なくとも１つの修飾をさらに含み得る。修飾は、ペプチド、抗体、単鎖可変性断片（ＳｃＦｖ）、細胞受容体、バーコード、リンカーまたはこれらの任意の組合せの付加を含むリストから選択することができる。溶媒は有機溶媒であってよい。溶媒はクロロホルムであってよい。方法は、溶媒を乾燥するステップをさらに含み得る。一部の場合では、溶媒を乾燥するステップは、乾燥窒素、アルゴン流、回転蒸発、真空引き、またはこれらの任意の組合せを含む。乾燥するステップは、乾燥窒素による乾燥であってよい。他の場合では、乾燥するステップは、真空引きであってよい。一部の場合では、乾燥するステップは、乾燥窒素流、続いて真空引きであってよい。乾燥するステップは、水溶液の添加によって水和することができる脂質フィルムを形成することができる。水溶液は高抵抗性水であってよい。一部の場合では、方法は、摂氏３７度で行われるインキュベーションを有してよい。ポリ核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せであってよい。ポリ核酸はＤＮＡであってよい。ポリ核酸は、ミニサークルＤＮＡであってよい。一部の場合では、ミニサークルＤＮＡをリポソームと４対１の比で混合することができる。一部の場合では、少なくとも１つのコーティングは、ｐＨ感受性であってよい。ｐＨ感受性コーティングは、５．５を上回るｐＨで溶解し得る。ｐＨ感受性コーティングは、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１であってよい。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）、Ｂ−ガラクトシダーゼ、（Ｂ−Ｇａｌ）、またはこれらの任意の組合せであってよい。一部の場合では、少なくとも１つのタンパク質はＡＰＣであってよい。一部の場合では、ナノ構造体は、粘液透過性粒子（ＭＰＰ）であってよい。ＭＰＰは、１から２００マイクロメートルまでの厚さの粘液を透過することが可能であり得る。
【００３７】
本開示の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において詳細に記載されている。本開示の原理を利用することができる例示的な実施形態を記載している以下の詳細な説明およびその付属図を参照することにより、本開示の特徴および利点のよりよい理解が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】図１は、ＡＰＣベクターを示す。
【００３９】
【図２】図２は、ＡＰＣタンパク質をコードするミニサークルＤＮＡベクターを示す。
【００４０】
【図３】図３は、リポソーム生成のための脂質を示す。
【００４１】
【図４】図４は、例示的な脂質−ＨＰＥＧの化学構造を示す。
【００４２】
【図５】図５は、リポソーム複合体内に封入された例示的なポリ核酸を示す。
【００４３】
【図６】図６Ａは、例示的なリポプレックス構造を示す。図６Ｂは、例示的なリポポリプレックス構造を示す。
【００４４】
【図７】図７は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を使用したＨＰＥＧ２Ｋ−脂質分析を示す。ヨウ素蒸気およびＵＶ吸収を使用してスポットを検出した。ＰＬは中性ｐＨにおけるＨＰＥＧ２ｋ−脂質を表し、ｐＨ４で２０分インキュベートしたＨＰＥＧ−２Ｋ−脂質と比較した。ｐＨ４では、ＨＰＥＧ２ｋ−脂質は、エンドソームからの脱出を増強するために生じるであろう事象を刺激する形で、崩壊した。
【００４５】
【図８】図８Ａは、ＭＶＬ５／ＧＭＯ／ＨＰＥＧリポソームをトランスフェクトされた形質転換細胞株を示す。図８Ｂは、陰性対照をトランスフェクトされた形質転換細胞株を示す。
【００４６】
【図９】図９は、陽性および陰性対照と比較して低電荷比および高電荷比でリポソーム構造体をトランスフェクトされたパーセント緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）陽性細胞のフローサイトメトリーデータを示す。
【００４７】
【図１０】図１０は、分子量が５ｋＤａであり、Ｎ＝５０であるポリ（２−メチル−２−オキサゾリン（oxazaline））（ＰＭＯＺ）を合成し、ヒドラゾンリンカーを用いて脂質に付着させたものを示す。
【００４８】
【図１１】図１１は、ＤＮＡを伴うＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＭＯＺ複合体を示す。左から右に：ＤＮＡ単独（ＮＴＣ−ｅＧＦＰ）、０％ｍｏｌの脂質ＨＰＭＯＺ、２％ｍｏｌの脂質−ＨＰＭＯＺ、４％ｍｏｌの脂質−ＨＰＭＯＺ、６％ｍｏｌの脂質−ＨＰＭＯＺ、８％ｍｏｌの脂質−ＨＰＭＯＺ、１０％ｍｏｌの脂質−ＨＰＭＯＺ。複合体のいずれでも遊離のＤＮＡは見出されず、これにより、脂質−ＨＰＭＯＺがＤＮＡ複合体形成効率に影響を及ぼさず、電荷比５でわずかな遊離のＤＮＡが存在することが実証される。
【００４９】
【図１２】図１２は、リポフェクタミン２０００をトランスフェクトされたＣａｃｏ−２細胞を示す。
【００５０】
【図１３】図１３は、ＰＭＯＺ  ４％をトランスフェクトされたＣａｃｏ−２細胞を示す。
【００５１】
【図１４】図１４は、Ｃａｃｏ−２細胞におけるＰＭＯＺトランスフェクション効率を示す。
【００５２】
【図１５】図１５Ａは、ブタ上皮層切片の染色を示す。白い枠は、ＰＭＯＺ  ４％について画素強度のために選択された上皮領域を示す。図１５Ｂは、ブタ上皮層切片の染色を示す。白い枠は、リポフェクタミン２０００について画素強度のために選択された上皮領域を示す。
【００５３】
【図１６】図１６は、１００分時点でのｅｘ  ｖｉｖｏにおける粘液透過を示す。
【００５４】
【図１７】図１７は、トランスフェクトされたラット結腸直腸細胞に存在するＡＰＣのウエスタンブロットを示す。
【００５５】
【図１８】図１８は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける内視鏡サーベイランスを示す。この図は、４週間の投薬後に、ＲＡＴ細胞の上皮およびポリープのどちらにおいてもＧＦＰを観察することができたことを示す。
【００５６】
【図１９】図１９は、ＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰ動物においてのみ４週間後に上皮およびポリープの両方において内視鏡サーベイランスによって観察されたＧＦＰ発現を示す。
【００５７】
【図２０】図２０は、ＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰ対照群（７週間の投薬）における腫瘍の組織学的検査から、腫瘍断面で観察することができる通り、腫瘍全体を通して発現が見出されたことが示されたことを示す。腫瘍サイズを、内視鏡検査中に使用したプローブと比べて測定した。次いで、腫瘍サイズを縦方向に追跡することができた。
【００５８】
【図２１ＡＢ】図２１Ａは、リポフェクタミンで処置した動物における腫瘍サイズを示し、図２１Ｂは、リポフェクタミンで処置した動物における第２の腫瘍の腫瘍サイズを示す。図２１Ｃは、ＬｉｔｅＡ１で処置した動物における腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。図２１Ｄは、ＬｉｔｅＡ１で処置した動物における第２の腫瘍の腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。図２１Ｅは、ＬｉｔｅＡ１で処置した動物における第３の腫瘍の腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。図２１Ｆは、ＬｉｔｅＡ１で処置した動物における第４の腫瘍の腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。図２１Ｇは、ＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰで処置した動物における腫瘍の腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。図２１Ｈは、ＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰで処置した動物における第２の腫瘍の腫瘍サイズをｍｍ単位で示す。
【図２１ＣＤ】同上。
【図２１ＥＦ】同上。
【図２１ＧＨ】同上。
【００５９】
【図２２】図２２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける粘液透過分析のアガロースゲル電気泳動を示す。右から左に（＋５、＋３、＋２、ＤＮＡ単独および＋１）。
【００６０】
【図２３】図２３は、電荷比＋２、＋３、および＋５のＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質０ＨＰＥＧならびにリポフェクタミン２０００対照についてのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける粘液透過アッセイの蛍光寄与を示す。
【００６１】
【図２４】図２４Ａは、電荷比２でのＨＥＫ２９３Ｔのトランスフェクションを示し、図２４Ｂは、電荷比３でのＨＥＫ２９３Ｔのトランスフェクションを示し、図２４Ｃは、電荷比５でのＨＥＫ２９３Ｔのトランスフェクションを示す。
【００６２】
【図２５】図２５Ａは、Ｃｙ５を用いた対照の５分時点の代表的な画像を示し、図２５Ｂは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の５分時点の明視野を示す。図２５Ｃは、Ｃｙ５を用いた対照の６０分時点の代表的な画像を示し、図２５Ｄは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の６０分時点の明視野を示す。図２５Ｅは、Ｃｙ５を用いた対照の１００分時点の代表的な画像を示し、図２５Ｆは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の１００分時点の明視野を示す。
【００６３】
【図２６】図２６Ａは、ビヒクル＋６０ｂｐ−Ｃｙ５の５分時点の代表的な画像を左側に示し、図２６Ｂは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の５分時点の明視野を示す。図２６Ｃは、ビヒクル＋６０ｂｐ−Ｃｙ５の６０分時点の代表的な画像を示し、図２６Ｄは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の６０分時点の明視野を示す。図２６Ｅは、ビヒクル＋６０ｂｐ−Ｃｙ５の６０分時点の腸陰窩の代表的な画像を示し、図２６Ｆは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の６０分時点の明視野を示す。
【００６４】
【図２７】図２７Ａは、ビヒクル＋６０ｂｐ−Ｃｙ５の１００分時点の代表的な画像を左側に示し、図２７Ｂは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の１００分時点の明視野を示す。図２７Ｃは、ビヒクル＋６０ｂｐ−Ｃｙ５の１００分時点の腸陰窩の代表的な画像を示し、図２７Ｄは、ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液実験の１００分時点の腸陰窩の明視野を示す。
【００６５】
【図２８】図２８Ａは、リポソーム送達ビヒクル（Ｌｉｔｅ）−ＡＰＣ（陰性対照）からの腸上皮を示す。図２８Ｂは、ＬｉｔｅおよびＧＦＰ（陽性対照）からの腸上皮を示す。
【００６６】
【図２９】図２９は、リポソーム送達ビヒクル（Ｌｉｔｅ）を用いて処置したＰｉｒｃラットの腸陰窩細胞におけるＧＦＰ発現を介したトランスフェクションを示す。
【００６７】
【図３０】図３０Ａは、リポソーム送達ビヒクル（Ｌｉｔｅ）−ＡＰＣを用いて処置したＰｉｒｃラットの抗ＧＦＰ染色された腫瘍組織試料を示す。図３０Ｂは、リポソーム送達ビヒクル（Ｌｉｔｅ）−ＧＦＰを用いて処置したＰｉｒｃラットの抗ＧＦＰ腫瘍組織試料を示す。図３０Ｃは、ＧＦＰを発現するＰｉｒｃラット腫瘍の高分解能画像を示す。
【００６８】
【図３１ＡＢ】図３１Ａは、リポソームビヒクルで処置したＰｉｒｃラットの正常な結腸上皮のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。図３１Ｂは、リポソームビヒクルで処置したＰｉｒｃラットの結腸腫瘍のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。図３１Ｃは、リポソームビヒクルで処置したＰｉｒｃラットの肝組織のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。図３１Ｄは、リポソームビヒクルで処置したＰｉｒｃラットの脾臓のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。図３１Ｅは、リポソームビヒクルで処置したＰｉｒｃラットの血清（無細胞ＤＮＡ）のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。図３１Ｆは、無処置のＰｉｒｃラットの正常な結腸上皮のＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子に対する４つの異なる振幅のＨＴＬＶのオーバーレイを示す。
【図３１ＣＤ】同上。
【図３１ＥＦ】同上。
【００６９】
【図３２】図３２は、（Ｌｉｐｏ）−ＡＰＣ、（Ｌｉｔｅ）−ＡＰＣ、および（Ｌｉｔｅ）−ＧＦＰを用いて処置したＰｉｒｃラットの平均腫瘍重量（ｍｇ）を示す。Ｌｉｔｅ−ＧＦＰについての平均腫瘍重量は、組織学的検査のために秤量するのではなく最も大きなＬｉｔｅ−ＧＦＰ腫瘍に固定したので、示されているよりも低いことに留意されたい。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
以下の説明および実施例は、本開示の実施形態を詳細に例示するものである。本開示は本明細書に記載されている特定の実施形態に限定されず、したがって、変化し得ることが理解されるべきである。本開示の変形形態および改変が多数存在し、それらは本開示の範囲内に包含されることを当業者は認識するであろう。
定義
【００７１】
「約」という用語およびその文法上の同義語は、参照数値およびその文法上の同義語との関連で本明細書において使用される場合、その値プラスまたはマイナス１０％の値の範囲を含み得る。例えば、「約１０」という量は、９から１１までの量を含む。「約」という用語は、参照数値との関連で、その値プラスまたはマイナス１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％の値の範囲も含み得る。
【００７２】
「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書に記載の構造体を対象に提供する任意の方法を指し得る。そのような方法は、当業者には周知であり、これらに限定されないが、経口投与、経皮投与、吸入による投与、経鼻投与、局所投与、膣内投与、点眼投与、耳内投与、脳内投与、直腸内投与、ならびに静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、および皮下投与などの注射を含めた非経口投与を含む。投与は連続的または断続的であり得る。種々の態様では、本明細書において開示される構造体を治療的に投与することができる。一部の例では、構造体を、既存の疾患または状態を処置するために投与することができる。さらなる種々の態様では、構造体を、疾患または状態を防止するために予防的に投与することができる。
【００７３】
「生分解性」という用語およびその文法上の同義語は、使用中に分解することが意図された、本明細書に記載のものなどのポリマー、組成物および製剤を指し得る。「生分解性」という用語は、「生物侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）」とも称される材料およびプロセスを包含するものとする。
【００７４】
「がん」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、その独特の形質−正常な制御の喪失により、調節されない成長、分化の欠如、局部的な組織浸潤、および転移が生じた細胞の過剰増殖を指し得る。本発明の方法に関して、がんは、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、膀胱がん（ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管、直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢、もしくは胸膜のがん、鼻、鼻腔、もしくは中耳のがん、口腔のがん、外陰部のがん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性がん、結腸がん、食道がん、子宮頸がん、線維肉腫、消化管カルチノイド腫瘍、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎がん（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）、喉頭がん、白血病、液性腫瘍、肝がん、肺がん、リンパ腫、悪性中皮腫、肥満細胞腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、膵がん、腹膜、網、および腸間膜がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎がん（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、皮膚がん、小腸がん、軟部組織がん、固形腫瘍、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、尿管がん、および／または膀胱がん（ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）のいずれかを含めたあらゆるがんであり得る。本明細書で使用される場合、「腫瘍」という用語は、例えば悪性型または良性型の細胞または組織の異常な成長を指す。
【００７５】
「細胞」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、生物体の構造的かつ機能的単位を指し得る。細胞は、顕微鏡レベルのサイズであり得、細胞質および膜に封入された核からなり得る。細胞は、腸陰窩細胞を指し得る。陰窩細胞は、腸内の絨毛の底部を囲む小窩様構造であるリーベルキューン腺小窩を指し得る。細胞は、ヒトまたは非ヒト起源のものであり得る。
【００７６】
「化学療法剤」または「化学療法化合物」およびこれらの文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、疾患、例えばがんの処置において有用な化学化合物であり得る。
【００７７】
「機能」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、意図された目的を行う、有するまたは果たす能力を指し得る。機能的とは、意図された目的のベースラインから１００％までの任意のパーセントを含み得る。例えば、機能的とは、意図された目的の５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは約１００％までを含み得るまたは約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは約１００％までを含み得る。一部の場合では、機能的という用語は、通常の機能の１００％を超えるまたは約１００％を超える、例えば、意図された目的の１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％または約１０００％までを意味し得る。
【００７８】
「親水性」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、水と容易に相互作用する極性基を有する物質または構造を指す。
【００７９】
「疎水性」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、水と容易に相互作用しない極性基を有する物質または構造を指す。
【００８０】
「粘液」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、これらに限定されないが、呼吸器、鼻、頸腟部、胃腸、直腸、視覚および聴覚系を含めた種々の器官／組織の上皮表面を保護する、主にムチン糖タンパク質および他の物質を含有する粘弾性の天然物質を指し得る。
【００８１】
「構造体」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、ナノ粒子またはナノ構造体を指し得る。構造体は、リポソーム構造体であり得る。構造体は、粒子も指し得る。構造体または粒子は、ナノ粒子またはナノ構造体であり得る。粒子または構造体は、約１ｎｍから約１ミクロンまでの直径を有する任意の形状のものであり得る。ナノ粒子またはナノ構造体は、１００〜２００ｎｍであり得る、または約１００〜２００ｎｍであり得る。ナノ粒子またはナノ構造体は、５００ｎｍまでに至ってもよい。球状を有するナノ粒子またはナノ構造体は、「ナノスフェア」と称され得る。
【００８２】
「核酸」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語ならびにこれらの文法上の同義語は、互換的に使用することができ、直鎖状または環状コンフォメーションであり一本鎖または二本鎖のいずれかの形態であるデオキシリボヌクレオチドおよび／またはリボヌクレオチドポリマーを指し得る。本開示の目的に関して、これらの用語は、長さに関して限定すると解釈されるべきでない。この用語は、天然のヌクレオチドの公知の類似体、ならびに塩基、糖および／またはリン酸部分（例えば、ホスホロチオエート骨格）が修飾されているヌクレオチドも包含し得る。一般に、特定のヌクレオチドの類似体は同じ塩基対合特異性を有し得る、すなわち、アデニン「Ａ」の類似体は、チミン「Ｔ」と塩基対合することができる。
【００８３】
「薬学的に許容される担体」という用語およびこれらの文法上の同義語は、滅菌水溶液または非水溶液、分散、懸濁液またはエマルション、ならびに使用する直前に滅菌注射用溶液または分散に復元するための滅菌粉末を指し得る。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散の場合では必要な粒子サイズを維持することによっておよび界面活性物質を使用することによって維持することができる。これらの溶液、分散、懸濁液またはエマルションは、防腐剤、湿潤剤、乳化用薬剤および分散剤などのアジュバントも含有し得る。微生物の作用の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの種々の抗細菌剤および抗真菌剤を含めることによって確実にすることができる。例えば糖、塩化ナトリウムなどの等張化剤を含めることも望ましいことがある。注射可能な医薬形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらすことができる。注射可能なデポ剤の形態は、薬物のポリ乳酸−ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）およびポリ（酸無水物）などの生分解性ポリマー中の微小封入マトリックス（ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌｅ  ｍａｔｒｉｃｅｓ）を形成することによって製造される。
【００８４】
「かかりやすい」という用語は、本明細書で使用される場合、対象が疾患または状態に罹患する確率の上昇（例えば、少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、またはそれよりも大きな確率の上昇）を意味するものと理解することができる。
【００８５】
「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の遺伝子またはその一部の転写を開始するＤＮＡの領域であり得る。
【００８６】
「レシピエント」という用語およびこれらの文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、対象を指し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト動物であり得る。レシピエントは、それを必要とする、例えば、がんなどの疾患に対する処置を必要とする場合もある。一部の場合では、レシピエントは、防止的治療を必要とする場合がある。他の場合では、レシピエントは、それを必要としない場合がある。
【００８７】
「リスク」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、特定の期間にわたって事象が起こる確率を指し得、対象の「絶対的」リスクまたは「相対的」リスクを意味し得る。絶対的リスクは、関連性のある時間コホートについての測定後の実際の観察を参照して、または関連性のある期間にわたって追跡されている統計学的に有効な歴史的コホートから生じる指数値を参照してのいずれかで測定することができる。相対的リスクとは、比較される対象の絶対的リスクの、低リスクコホートの絶対的リスクまたは平均集団リスクのいずれかに対する比を指し、これは、臨床的リスクファクターをどのように評価するかによって変動し得る。
【００８８】
「対象」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、ヒトまたは非ヒトを指し得る。対象は、哺乳動物であり得る。対象は、男性または女性のヒト哺乳動物であり得る。対象はあらゆる年齢であり得る。対象は胚であり得る。対象は新生児または最高で約１００歳であり得る。対象はそれを必要とし得る。対象はがんなどの疾患を有し得る。
【００８９】
「配列」という用語およびその文法上の同義語は、本明細書で使用される場合、ヌクレオチド配列を指し得、これは、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡであり得、直鎖状、環状または分枝であり得、一本鎖または二本鎖のいずれであってもよい。配列は任意の長さ、例えば、長さが２から１，０００，０００またはそれを超えるヌクレオチド（またはその間もしくはそれを超える任意の整数値）、例えば、約１００から約１０，０００ヌクレオチドの間または約２００から約５００ヌクレオチドの間であり得る。
【００９０】
「表面変質剤（surface-alternating  agent）」とは、本明細書で使用される場合、これらに限定されないが、親水性（例えば、表面をほぼ親水性にすることができる）、表面電荷（例えば、表面を中性もしくは中性付近またはより負もしくは正にする）、ならびに／または粘液などの体液および／もしくは組織中へのもしくはそれを通った輸送を増強することを含めた、構造体の表面の１つまたは複数の性質を改変する薬剤または材料を指し得る。表面変質剤はポリマーであり得る。
【００９１】
「幹細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、同じ型の細胞を無制限により多く生じさせることができる多細胞性生物体の未分化細胞を指し得る。幹細胞はまた、分化によって他の種類の細胞を生じさせることもできる。幹細胞は、陰窩において見出すことができる。幹細胞は、腸絨毛表面上に見出される上皮細胞の前駆体であり得る。幹細胞は、がん性であり得る。幹細胞は、全能性、単能性または多能性であり得る。幹細胞は、誘導された幹細胞であり得る。
【００９２】
「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語およびこれらの文法上の同義語は、疾患、状態または障害を治癒させる、好転させる、安定化する、または防止することが意図された、対象の医学的管理を指し得る。処置は、積極的処置、すなわち、疾患、状態または障害の改善を特に対象とする処置を含み得る。処置は、原因処置、すなわち、関連する疾患、状態または障害の原因を取り除くことを対象とする処置を含み得る。さらに、この処置は、待期的処置、すなわち、疾患、状態または障害を治癒させるのではなく症状を軽減するために設計された処置を含み得る。処置は、防止的処置、すなわち、疾患、状態または障害の発生を最小化するまたは部分的にもしくは完全に阻害することを対象とする処置を含み得る。処置は、支持的処置、すなわち、疾患、状態または障害の改善を対象とする別の特定の治療を補うために使用される処置を含み得る。一部の例では、状態は、病理学的であり得る。一部の例では、処置は、疾患、状態または障害を完全に治癒させる、好転させる、安定化するまたは防止するものでなくてよい。
【００９３】
化学基に関して使用される場合、「水素」とは、−Ｈを意味し、「ヒドロキシ」とは、−ＯＨを意味し、「ハロゲン」とは、独立に、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを意味する。
【００９４】
本明細書に提示される構造体に関して、以下の挿入句的な下付き文字は、以下の通り、基をさらに定義する：「（Ｃｎ）」は、基内の炭素原子の正確な数（ｎ）を定義する。例えば、「（Ｃ２〜１０）アルキルは、２個から１０個の炭素原子（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、もしくは１０個、またはその中で導き出せる任意の範囲（例えば、３〜１０個の炭素原子）を有するアルキル基を示す。
【００９５】
「アルキル」という用語は、「置換」という修飾語を伴わずに使用される場合、付着点として飽和型炭素原子を有し、直鎖または分枝、シクロ、環式または非環式構造を有し、炭素−炭素二重または三重結合を有さず、炭素および水素以外の原子を有さない、非芳香族の一価の基を指す。−ＣＨ３（Ｍｅ）基、−ＣＨ２ＣＨ３（Ｅｔ）基、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｐｒ）基、−ＣＨ（ＣＨ３）２（イソ−Ｐｒ）基、−ＣＨ（ＣＨ２）２（シクロプロピル）基、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（ｎ−Ｂｕ）基、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（ｓｅｃ−ブチル）基、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２（イソブチル）基、−Ｃ（ＣＨ３）３（ｔｅｒｔ−ブチル）基、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３（ｎｅｏ−ペンチル）基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、およびシクロヘキシルメチル基がアルキル基の非限定的な例である。置換アルキルとは、付着点として飽和型炭素原子を有し、直鎖または分枝、シクロ、環式または非環式構造を有し、炭素−炭素二重または三重結合を有さず、Ｎ、Ｏ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｓｉ、Ｐ、およびＳからなる群から独立に選択される少なくとも１つの原子を有する非芳香族の一価の基を指す。以下の基が置換アルキル基の非限定的な例である：−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＮＨＣＨ３、−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、および−ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３。
【００９６】
「アルキニル」という用語は、「置換」という修飾語を伴わずに使用される場合、付着点として非芳香族炭素原子を有し、直鎖または分枝、シクロ、環式または非環式構造を有し、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有し、炭素および水素以外の原子を有さない一価の基を指す。−Ｃ≡ＣＨ基、−Ｃ≡ＣＨ３基、−Ｃ≡ＣＣ６Ｈ５基および−ＣＨ２Ｃ≡ＣＣＨ３基がアルキニル基の非限定的な例である。置換アルキニルは、付着点として非芳香族炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有し、直鎖または分枝、シクロ、環式または非環式構造体、ならびにＮ、Ｏ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｓｉ、Ｐ、およびＳからなる群から独立に選択される少なくとも１つの原子を有する一価の基を指す。−Ｃ≡ＣＳｉ（ＣＨ３）３基が置換アルキニル基の非限定的な例である。
【００９７】
「アリール」という用語は、「置換」という修飾語を伴わずに使用される場合、付着点として芳香族炭素原子を有する一価の基を指し、前記炭素原子が１つまたは複数の６員芳香族環構造の一部を形成し、ここで、環原子は全て炭素であり、当該一価の基は、炭素および水素以外の原子からはならない。アリール基の非限定的な例としては、フェニル（Ｐｈ）、メチルフェニル、（ジメチル）フェニル、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＣＨ３（エチルフェニル）、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３（プロピルフェニル）、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ（ＣＨ２）２、−Ｃ６Ｈ３（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（メチルエチルフェニル）、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ＝ＣＨ２（ビニルフェニル）、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ６Ｈ４Ｃ≡ＣＣＨ３、ナフチルが挙げられ、当該一価の基はビフェニルから誘導される。置換アリールとは、付着点として芳香族炭素原子を有する一価の基を指し、前記炭素原子が１つまたは複数の６員芳香族環構造の一部を形成し、ここで、環原子は全て炭素であり、当該一価の基は、Ｎ、Ｏ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｓｉ、Ｐ、およびＳからなる群から独立に選択される少なくとも１つの原子をさらに有する。置換アリール基の非限定的な例としては、基：−Ｃ６Ｈ４Ｆ、−Ｃ６Ｈ４Ｃｌ、−Ｃ６Ｈ４Ｂｒ、−Ｃ６Ｈ４Ｉ、−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、−Ｃ６Ｈ４ＯＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４ＮＨ２、−Ｃ６Ｈ４ＮＨＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４ＣＨ２ＮＨ２、−Ｃ６Ｈ４ＣＦ３、−Ｃ６Ｈ４ＣＮ、−Ｃ６Ｈ４ＣＨＯ、−Ｃ６Ｈ４ＣＨＯ、−Ｃ６Ｈ４Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５、−Ｃ６Ｈ４ＣＯ２Ｈ、−Ｃ６Ｈ４ＣＯ２ＣＨ３、−Ｃ６Ｈ４ＣＯＮＨ２、−Ｃ６Ｈ４ＣＯＮＨＣＨ３、および−Ｃ６Ｈ４ＣＯＮ（ＣＨ３）２が挙げられる。
【００９８】
「シクロアルキル」という用語は、３個またはそれよりも多くの炭素原子（例えば、３個から６個までの炭素原子）を有する飽和型脂環式部分を指し、これは、場合により、任意の利用可能な位置でベンゾ融合していてよい。シクロアルキル基の非限定的な例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、インダニル基およびテトラヒドロナフチル基が挙げられる。
【００９９】
「ヘテロアリール」という用語は、「置換」という修飾語を伴わずに使用される場合、付着点として芳香族炭素原子または窒素原子を有する一価の基を指し、前記炭素原子または窒素原子が芳香族環構造の一部を形成し、ここで、環原子の少なくとも１つは窒素、酸素または硫黄であり、当該一価の基は炭素、水素、芳香族窒素、芳香族酸素および芳香族硫黄以外の原子からはならない。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、アクリジニル、フラニル、イミダゾイミダゾリル、イミダゾピラゾリル、イミダゾピリジニル、イミダゾピリミジニル、インドリル、インダゾールイニル、メチルピリジル、オキサゾリル、フェニルイミダゾリル、ピリジル、ピロリル、ピリミジル、ピラジニル、キノリル、キナゾリル、キノキサリニル、テトラヒドロキノリニル、チエニル、トリアジニル、ピロロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピロロピラジニル、ピロロトリアジニル、ピロロイミダゾリル、クロメニル（付着点は芳香族原子の１つである）、およびクロマニル（付着点は芳香族原子の１つである）が挙げられる。置換ヘテロアリールは、付着点として芳香族炭素原子または窒素原子を有する一価の基を指し、前記炭素原子または窒素原子が芳香族環構造の一部を形成し、ここで、環原子の少なくとも１つは窒素、酸素または硫黄であり、当該一価の基は、非芳香族窒素、非芳香族酸素、非芳香族硫黄、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｓｉ、およびＰからなる群から独立に選択される少なくとも１つの原子をさらに有する。
【０１００】
「アルコキシ」という用語は、「置換」という修飾語を伴わずに使用される場合、−ＯＲ基を指し、Ｒはアルキルであり、この用語は上に定義されている。アルコキシ基の非限定的な例としては、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、−ＯＣＨ（ＣＨ２）２、−Ｏ−シクロペンチル、および−Ｏ−シクロヘキシルが挙げられる。置換アルコキシとは、−ＯＲ基を指し、Ｒは置換アルキルであり、この用語は上で定義されている。例えば、−ＯＣＨ２ＣＦ３は置換アルコキシ基である。
概要
【０１０１】
遺伝子治療に有用な組成物および方法が本明細書において開示される。全体を通して記載されている組成物および方法では、ポリ核酸を局部的に送達するために、構造体、例えばナノ粒子を使用することができる。有効な遺伝子送達は、疾患、例えば、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）の患者を処置するのに有用であり得る。一部の例では、腸陰窩細胞などの部位に対する局部的な遺伝子治療のために、治療用遺伝子をコードするミニサークルＤＮＡをナノ粒子内に包被することができる。
リポソーム
【０１０２】
リポソームは、エネルギー的に有利な様式で互いと相互作用する脂質の蓄積によって形成し得る小胞構造体であり得る。リポソームは、一般に、それぞれが親水性の頭部基および疎水性の尾部を含有し得る溶解した脂質分子の自己組織化によって形成し得る。リポソームは、天然または合成脂質で構成される１つまたは複数の二重層に閉じ込められた水性コアからなり得る。一部の場合では、リポソームは、高度に反応性かつ免疫原性、または不活性かつ弱く免疫原性であり得る。天然リン脂質で構成されるリポソームは、生物学的に不活性かつ弱く免疫原性であり得、リポソームは、低内因性毒性を有し得る。さらに、リポソームは、カーゴを有し得る。カーゴは、ミニサークルＤＮＡなどのポリ核酸、または薬物であってよい。薬物は、投与されると、対象における生理的変化を引き起こし得る物質であってよい。薬物は、がんなどの疾患を処置するために使用される薬であってよい。一部の例では、薬物をリポソーム脂質二重層に、水性区画に、またはリポソーム脂質二重層および水性区画の両方に完全に閉じ込めることができる。強力に親油性の薬物は、脂質二重層にほぼ完全に閉じ込めることができる。強力に親水性の薬物は、排他的に水性区画に位置させることができる。中間のｌｏｇＰを有する薬物は、二重層および水性コアのどちらにおいても脂質相と水相の間で容易に分割することができる。リポソームは、それらの層状性（単層小胞、オリゴ層小胞、および多層小胞）、サイズ（小、中、または大）ならびに調製方法（例えば、逆相蒸発小胞、ＶＥＴなど）に従って分類することができる。
【０１０３】
リポソーム構造体は、一部の場合では、小胞であってよい。小胞は、単層であってもよく、多層であってもよい。単層小胞は、脂質二重層を含んでよく、一般に、約５０ｎｍから約２５０ｎｍまでの直径を有する。単層小胞は、脂質二重層を含んでよく、一般に、約５０ｎｍから、６０ｎｍ、７０ｎｍ、８０ｎｍ、９０ｎｍ、１００ｎｍ、１１０ｎｍ、１２０ｎｍ、１３０ｎｍ、１４０ｎｍ、１５０ｎｍ、１６０ｎｍ、１７０ｎｍ、１８０ｎｍ、１９０ｎｍ、２００ｎｍ、２１０ｎｍ、２２０ｎｍ、２３０ｎｍ、２４０ｎｍ、または約２５０ｎｍまでの直径を有する。単層小胞は、大きな水性コアを含有し得、薬物を包被するために優先的に使用することができる。一部の場合では、単層小胞により薬物を部分的に包被することができる。多層小胞は、いくつかの同心性脂質二重層をタマネギ皮状配置で含み得、約１〜５μｍの直径を有する。タマネギ皮状配置は、約１μｍから、１．５μｍ、２．０μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、もしくは５．０μｍまで、またはそれよりも大きな直径を有し得る。一部の場合では、単層小胞またはリポソーム構造体は、高い脂質含有量を有し得る。高い脂質含有量により、単層小胞または多層小胞が脂質可溶性薬物を受動的に閉じ込めることが可能になる。一部の例では、単層小胞は、１ミクロン未満、一部の場合では約５００ｎｍ未満の直径を有し得る。小胞形成脂質は、少なくとも１本の炭化水素鎖を有し得る。小胞形成脂質は、１本、２本、３本、４本、５本、６本、７本、８本、９本、１０本、１１本、１２本、１３本、１４本、１５本、１６本、１７本、１８本、１９本、もしくは２０本まで、またはそれよりも多くの炭化水素鎖を有し得る。炭化水素鎖はアシル鎖であり得る。小胞形成脂質は頭部基を有し得る。頭部基は極性であっても非極性であってもよい。炭化水素鎖は飽和型であっても不飽和型であってもよい。炭化水素鎖は、種々の飽和の程度を有してよい。これらに限定されないが、スフィンゴ脂質、エーテル脂質、ステロール、リン脂質、特にホスホグリセリド、ならびに糖脂質、例えばセレブロシドおよびガングリオシドなどを含めた種々の合成小胞形成脂質および天然に存在する小胞形成脂質が存在する。
【０１０４】
リポソームは、生体適合性かつ生分解性であり得る。例えば、一部の場合では、リポソームは、対象への導入後に生分解し得る。生分解は、一部の場合では導入直後に開始し得る。生分解は、リポソームまたはリポソーム構造体の投与を受けた対象の粘膜路内で起こり得る。生分解は、ポリ核酸などのリポソームカーゴの放出をもたらし得る。他の場合では、生分解は、リポソーム構造体の構成成分、例えばポリマーなどの解体を含み得る。生分解は、約９７．６°Ｆから約９９°Ｆまでなどの標準の身体条件下で起こり得る。他の場合では、生分解は、約９５°Ｆから約１０６°Ｆまでの温度の下で起こり得る。生分解は、約９５°Ｆから、９６°Ｆ、９７°Ｆ、９８°Ｆ、９９°Ｆ、１００°Ｆ、１０１°Ｆ、１０２°Ｆ、１０３°Ｆ、１０４°Ｆ、１０５°Ｆ、または１０６°Ｆまでで起こり得る。他の態様では、生分解は、約５０°Ｆから約１５０°Ｆまでで起こり得る。
【０１０５】
他の場合では、生分解は起こらない可能性がある。生分解が起こる場合、リポソームまたは構造体が対象に投与された後、約１分から約１００年までかかる可能性がある。生分解は、約１分から、５分、３０分、１時間、３時間、７時間、１０時間、１５時間、２０時間、２５時間、２日、４日、８日、１２日、２０日、３０日、１．５カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月、１．５年、３年、５年、８年、１０年、１５年、２０年、３０年、４０年、５０年、６０年、７０年、８０年、９０年、または少なくとも約１００年かかる可能性がある。リポソームなどの構造体の脂質は、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、サッカロ脂質（ｓａｃｃｈａｒｏｌｉｐｉｄ）、ポリケチド（ケトアシルサブユニットの凝縮に由来する）；ステロール脂質、プレノール脂質（イソプレンサブユニットの凝縮に由来する）またはこれらの任意の組合せであってよいまたはそれを含んでよい。
【０１０６】
グリセロ脂質は、主に一置換、二置換、または三置換グリセロールで構成され得、トリグリセリドと称されるグリセロールの脂肪酸トリエステルが最もよく知られている。「トリアシルグリセロール」という単語は、時には、「トリグリセリド」と同義に使用され得るが、後者の脂質はヒドロキシル基を含有しない。グリセロ脂質では、グリセロールの３つのヒドロキシル基が、一般には異なる脂肪酸によってエステル化され得る。
【０１０７】
グリセロリン脂質は、通常リン脂質と称され、ジグリセリド、リン酸基、およびコリンなどの単純な有機分子を含有し得る。一部の場合では、グリセロリン脂質は、ジグリセリド、リン酸基、および単純な有機分子を含有しない可能性がある。ジグリセリド、リン酸基、および単純な有機分子を含有しない可能性があるグリセロリン脂質は、スフィンゴミエリンであり得る。スフィンゴミエリンは、グリセロールの代わりにスフィンゴシンに由来し得る。
【０１０８】
リン脂質分子の構造は、一般に、疎水性尾部および親水性頭部からなる。親水性頭部は、負に荷電したリン酸基を含有し得、他の極性基を含有し得る。疎水性尾部は、長い脂肪酸炭化水素鎖からなり得る。水中に入れると、リン脂質は、リン脂質の特定の性質に応じて種々の構造体を形成し得る。脂質二重層は、疎水性尾部が互いに対して整列し、それにより水に面して両側に親水性頭部の膜が形成されると生じ得る。グリセロリン脂質は、真核生物および真正細菌ではグリセロール骨格の−３位にある極性頭部、または古細菌の場合では−１位にある極性頭部基の性質に基づいて別個のクラスに細分することができる。生体膜において見出されるグリセロリン脂質の例は、ホスファチジルコリン（ＰＣ、ＧＰＣｈｏまたはレシチンとしても公知）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥまたはＧＰＥｔｎ）およびホスファチジルセリン（ＰＳまたはＧＰＳｅｒ）である。真核生物では、リン脂質は、一般に、２つの型：ジアシルグリセリドおよびホスフィンゴ脂質（ｐｈｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ）に分類される。ジアシルグリセリドの例としては、これらに限定されないが、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（セファリン）（ＰＥ）、ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ならびにホスホイノシチド、例えばホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルイノシトールリン酸（ＰＩＰ）、ホスファチジルイノシトール二リン酸（ＰＩＰ２）、およびホスファチジルイノシトール三リン酸（ＰＩＰ３）などが挙げられる。ホスフィンゴ脂質の例としては、これらに限定されないが、セラミドホスホリルコリン（スフィンゴミエリン）（ＳＰＨ）、セラミドホスホリルエタノールアミン（スフィンゴミエリン）（Ｃｅｒ−ＰＥ）、およびセラミドホスホリル脂質が挙げられる。
【０１０９】
ホスホグリセリドとしては、これらに限定されないが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロールおよびジホスファチジルグリセロール（カルジオリピン）などのリン脂質が挙げられる。一部の例では、ホスホグリセリドの２本の炭化水素鎖は、約１４個から約２２個の間の炭素原子の長さであり得る。一部の場合では、ホスホグリセリドの２本の炭化水素鎖は、約１個から約１００個の間の炭素原子の長さであり得る。ホスホグリセリドの２本の炭化水素鎖は、約１個から、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、または約１００個までの炭素原子の長さであり得る。一部の例では、ホスホグリセリドの２本の炭化水素鎖は、種々の不飽和の程度を有してよい。本明細書で使用される場合、「ＰＣ」という略語は、ホスファチジルコリンを指し、「ＰＳ」は、ホスファチジルセリンを指す。飽和および／または不飽和脂肪酸のいずれかを含有する脂質は、当業者に広範に入手可能である。脂肪酸、または脂質の一部の場合には脂肪酸残基は、多様な分子群であり得る。一部の例では、脂肪酸残基は、合成により調製することもでき、天然に合成させることもできる。一部の例では、脂肪酸残基は、脂肪酸合成と称されるプロセスにおけるアセチル−ＣｏＡプライマーのマロニル−ＣｏＡまたはメチルマロニル−ＣｏＡ基での鎖伸長によって天然に合成させることができる。脂肪酸は、カルボン酸基で終結し得る炭化水素鎖で構成されてよく、この配置により、分子に、極性の親水性末端、および水に不溶性であり得る非極性の疎水性末端を付与することができる。炭素鎖は、一般には、４個から２４個の間の炭素の長さであり、飽和型であってもまたは不飽和型であってもよい。一部の例では、炭素鎖を、酸素、ハロゲン、窒素、および／または硫黄を含有する官能基に付着させることができる。炭素鎖内に二重結合が存在する場合、シスまたはトランス幾何異性が存在する可能性があり、これは、分子の立体配置に有意に影響を及ぼす。シス型二重結合により、脂肪酸鎖の屈曲が引き起こされる可能性があり、これは、鎖内のより多くの二重結合と複合する影響である。大多数の天然に存在する脂肪酸はシス型立体配置のものであるが、トランス形態も一部の天然および部分的に水素化された脂肪および油に存在する。脂肪酸カテゴリー内の他の脂質は、脂肪性エステルおよび脂肪性アミドであり得る。さらに、脂質の２本の炭化水素鎖は対称的であっても非対称的であってもよい。本明細書に記載の脂質およびリン脂質は、アシル鎖を含有し得る。一部の例では、アシル鎖は、様々な長さおよび飽和の程度を有し得る。様々な長さおよび飽和の程度のアシル鎖は、商業的に得ることもでき、公開された方法に従って調製することもできる。
【０１１０】
一部の場合では、リポソーム構造体は、ホスファチジルコリンを含み得る。例示的なホスファチジルコリンとしては、これらに限定されないが、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジアラキドイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジリノレオイル−ホスファチジルコリン、ジエルコイルホスファチジルコリン、パルミトイル−オレオイル−ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルコリン、ミリストイル−パルミトイルホスファチジルコリン、パルミトイル−ミリストイル−ホスファチジルコリン、ミリストイル−ステアロイルホスファチジルコリン、パルミトイル−ステアロイル−ホスファチジルコリン、ステアロイル−パルミトイルホスファチジルコリン、ステアロイル−オレオイル−ホスファチジルコリン、ステアロイル−リノレオイルホスファチジルコリンおよびパルミトイル−リノレオイル−ホスファチジルコリンが挙げられる。非対称ホスファチジルコリンは、１−アシル，２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（1-acyl,  2-acyl-sn-glycero-3-phosphocholines）と称することができ、アシル基が互いと異なる。対称ホスファチジルコリンは、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンと称され得る。本明細書で使用される場合、「ＰＣ」という略語は、ホスファチジルコリンを指す。ホスファチジルコリン１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンは、本明細書では「ＤＭＰＣ」と省略され得る。ホスファチジルコリン１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンは、本明細書では「ＤＯＰＣ」と省略され得る。ホスファチジルコリン１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンは、本明細書では「ＤＰＰＣ」と省略され得る。一般に、種々の脂質に見出される飽和型アシル基としては、プロピオニル、ブタノイル、ペンタノイル、カプロイル、ヘプタノイル、カプリロイル、ノナノイル、カプリル、ウンデカノイル、ラウロイル、トリデカノイル、ミリストイル、ペンタデカノイル、パルミトイル、フィタノイル、ヘプタデカノイル、ステアロイル、ノナデカノイル、アラキドイル、ヘネイコサノイル、ベヘノイル、トルシサノイルおよびリグノセロイルという名称を有する基が挙げられる。飽和型アシル基に対する対応するＩＵＰＡＣ名は、トリアノイック、テトラノイック、ペンタノイック、ヘキサノイック、ヘプタノイック、オクタノイック、ノナノイック、デカノイック、ウンデカノイック、ドデカノイック、トリデカノイック、テトラデカノイック、ペンタデカノイック、ヘキサデカノイック、３，７，１１，１５−テトラメチルヘキサデカノイック、ヘプタデカノイック、オクタデカノイック、ノナデカノイック、エイコサノイック、ヘンエイコサノイック、ドコサノイック、トロコサノイックおよびテトラコサノイックである。対称および非対称ホスファチジルコリンの両方に見出される不飽和型アシル基としては、ミリストレオイル、パルミトレイル、オレオイル、エライドイル、リノレオイル、リノレノイル、エイコセノイルおよびアラキドノイルが挙げられる。不飽和型アシル基���対する対応するＩＵＰＡＣ名は、９−シス−テトラデカノイック、９−シス−ヘキサデカノイック、９−シス−オクタデカノイック、９−トランス−オクタデカノイック、９−シス−１２−シス−オクタデカジエノイック、９−シス−１２−シス−１５−シスオクタデカトリエノイック、１１−シス−エイコセノイックおよび５−シス−８−シス−１１−シス−１４−シス−エイコサテトラエノイックである。例示的なホスファチジルエタノールアミンとしては、ジミリストイル−ホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミンおよび卵ホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。ホスファチジルエタノールアミンは、ＩＵＰＡＣ命名系の下では、対称脂質であるか非対称脂質であるかに応じて、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンまたは１−アシル−２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンとも称され得る。例示的なホスファチジン酸としては、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸およびジオレオイルホスファチジン酸が挙げられる。ホスファチジン酸は、ＩＵＰＡＣ命名系の下では、対称脂質であるか非対称脂質であるかに応じて、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸または１−アシル−２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸とも称され得る。例示的なホスファチジルセリンとしては、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジオレオイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、パルミトイル−オレイルホスファチジルセリンおよび脳ホスファチジルセリンが挙げられる。ホスファチジルセリンは、ＩＵＰＡＣ命名系の下では、対称脂質であるか非対称脂質であるかに応じて、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］または１−アシル−２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］とも称され得る。本明細書で使用される場合、「ＰＳ」という略語は、ホスファチジルセリンを指す。例示的なホスファチジルグリセロールとしては、ジラウロイルホスファチジルグリセロール（dilauryloylphosphatidylglycerol）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイル−ホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、パルミトイル−オレオイル−ホスファチジルグリセロールおよび卵ホスファチジルグリセロールが挙げられる。ホスファチジルグリセロールは、ＩＵＰＡＣ命名系の下では、対称脂質であるか非対称脂質であるかに応じて、１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］または１−アシル−２−アシル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］とも称され得る。ホスファチジルグリセロール１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］は、本明細書では「ＤＭＰＧ」と省略される。ホスファチジルグリセロール１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−（ホスホ−ｒａｃ−１−グリセロール）（ナトリウム塩）は、本明細書では「ＤＰＰＧ」と省略される。適切なスフィンゴミエリンとしては、脳スフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、およびジステアロイルスフィンゴミエリンを挙げることができる。他の適切な脂質としては、糖脂質、スフィンゴ脂質、エーテル脂質、セレブロシドおよびガングリオシドなどの糖脂質、ならびにコレステロールまたはエルゴステロールなどのステロールが挙げられる。
【０１１１】
一部の場合では、リポソーム構造体は、コレステロールまたはその誘導体、リン脂質、リン脂質とコレステロールまたはその誘導体の混合物、または組合せを含み得る。コレステロール誘導体の例としては、これらに限定されないが、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル−２’−ヒドロキシエチルエーテル、コレステリル−４’−ヒドロキシブチルエーテル、およびそれらの混合物が挙げられる。リポソーム構造体がリン脂質とコレステロールまたはコレステロール誘導体の混合物を含む場合、リポソーム構造体は、約４０、５０、または６０ｍｏｌ％までの、リポソーム構造体中に存在する総脂質を含み得る。１つまたは複数のリン脂質および／またはコレステロールは、約１０ｍｏｌ％から約６０ｍｏｌ％まで、約１５ｍｏｌ％から約６０ｍｏｌ％まで、約２０ｍｏｌ％から約６０ｍｏｌ％まで、約２５ｍｏｌ％から約６０ｍｏｌ％まで、約３０ｍｏｌ％から約６０ｍｏｌ％まで、約１０ｍｏｌ％から約５５ｍｏｌ％まで、約１５ｍｏｌ％から約５５ｍｏｌ％まで、約２０ｍｏｌ％から約５５ｍｏｌ％まで、約２５ｍｏｌ％から約５５ｍｏｌ％まで、約３０ｍｏｌ％から約５５ｍｏｌ％まで、約１３ｍｏｌ％から約５０ｍｏｌ％まで、約１５ｍｏｌ％から約５０ｍｏｌ％までまたは約２０ｍｏｌ％から約５０ｍｏｌ％までの、リポソーム構造体中に存在する総脂質を含み得る。
【０１１２】
バルク溶液の構造、組成、またはこれらの組合せに応じて、リポソームにより、疎水性または親水性分子を溶液から分離することができる。一部の例では、リポソームは、小胞と称され得る。一部の例では、リポソームは、剛性または非剛性であり得る。リポソームは、剛性の編成ではなく、多用途の超分子複合体であり得る流体実体であり得る。リポソームは幅広い使用を有し得る。リポソームは、脂質組成に応じて多くの形状およびサイズに配置することができる。リポソームを使用して、ＤＮＡなどの分子カーゴを治療的利益のために送達することができる。リポソームを形成するために使用される脂質は、カチオン性、アニオン性、中性、またはこれらの混合物であり得る。リポソームは、カチオン性リポソーム、中性リポソームまたはアニオン性リポソームであり得る。
【０１１３】
特定の実施形態では、リポソーム構造体は、形成中の脂質粒子の凝集が低減するように選択された第２のアミノ脂質またはカチオン性脂質、中性脂質、ステロール、および脂質のうちの１つまたは複数を含み得る。凝集は、形成中の電荷により誘導される凝集を防止し得るリポソーム構造体の立体的な安定化に起因し得る。リポソーム構造体は、２つまたはそれよりも多くのカチオン性脂質を含み得る。脂質は、異なる有利な性質に寄与するように選択することができる。例えば、アミンｐＫａ、化学的安定性、循環中での半減期、組織中での半減期、組織における正味の蓄積、または毒性などの性質が異なるカチオン性脂質をリポソーム構造体に使用することができる。特に、混合型脂質リポソーム構造体の性質が個々の脂質の単一脂質構造の性質よりも望ましいものになるようにカチオン性脂質を選択することができる。カチオン性脂質の正味の組織蓄積および長期毒性（もしあれば）は、所与の製剤に単一のカチオン性脂質を選択する代わりにカチオン性脂質の混合物を選択することにより、有利なやり方でモジュレートすることができる。そのような混合物により、ＡＰＣなどの遺伝子の少なくとも一部分をコードするポリ核酸のより良好な包被および／または放出ももたらされ得る。カチオン性脂質の組合せは、製剤中の単一の実体と比較して、全身安定性にも影響を及ぼし得る。
【０１１４】
リポソームの各脂質は、同じまたは異なる構造的側面、例えば頭部基のサイズおよび炭化水素尾部の長さを有してもよい。一部の場合では、頭部基面積は約０．１ｎｍ２から約１０ｎｍ２までであり得る。例えば、頭部基面積は、約０．１ｎｍ２から、０．２ｎｍ２、０．３ｎｍ２、０．４ｎｍ２、０．５ｎｍ２、０．６ｎｍ２、０．６ｎｍ２、０．７ｎｍ２、０．８ｎｍ２、０．９ｎｍ２、１．０ｎｍ２、２．０ｎｍ２、３．０ｎｍ２、４．０ｎｍ２、５．０ｎｍ２、６．０ｎｍ２、７．０ｎｍ２、８．０ｎｍ２、９．０ｎｍ２、約１０．０ｎｍ２までであり得る。一部の場合では、頭部基面積は、約０．４０ｎｍ２から約５ｎｍ２までであり得る。一部の場合では、カチオン性脂質は、大体、約１．６６ｎｍ２からの頭部基面積を有し得る。
【０１１５】
一部の場合では、脂質の炭化水素尾部は、約８個から１８個までの炭素の長さであってよい。一部の場合では、炭化水素尾部は、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、または１８個の炭素を超える長さであってよい。炭化水素尾部はまた、正確に８個または正確に１８個の炭素の長さであってもよい。炭化水素尾部は飽和型であってよい。一部の場合では、炭化水素尾部は飽和型でなくてよい。他の場合では、飽和炭化水素尾部は、単一の二重結合を有し得る。一部の場合では、炭化水素鎖の組合せは、対称、非対称、または任意の組合せであってよい。一部の場合では、トランスフェクション効率を改善するために炭化水素尾部の対称性をモジュレートすることができる。例えば、より短い飽和型炭素鎖および長い不飽和型炭素鎖の両方を有する非対称炭化水素尾部により、対称炭化水素尾部の混合製剤と比較して高いトランスフェクション効率がもたらされ得る。
【０１１６】
リポソームは、任意の手段によって形成することができる。一部の場合では、リポソームは、溶解した脂質分子の自己組織化によって形成することができる。一部の場合では、親水性脂質頭部基および疎水性脂質尾部が自己組織化に関与する可能性がある。親水性脂質は、低自由エネルギーのエントロピー的に有利な状態をもたらし得、一部の場合では、２分子の脂質リーフレットを形成する結び付きを持ち得る。リーフレットは、疎水性脂質の炭化水素尾部が互いに向かい合い、親水性脂質頭部基が外側に向いて水溶液と関連することを特徴とし得る。この時点では、脂質分子の疎水性部分がなお水と接触しているので、二重層形成はなおエネルギー的に好ましくない可能性があり、これは、それ自体の上で二重層膜を形成して縁が閉じた小胞を形成することにおける曲率を通じて克服することができる。一部の場合では、リポソームは小胞を形成し得る。リポソームは、外表面および内部の区画を含み得る。リポソームを生成するために使用される脂質分子は、骨格リンカーによって接続された頭部基および疎水性炭化水素尾部を有する保存された実体であり得る。骨格リンカーは、グリセロールであり得る。使用することができるリンカーのクラスの例としては、これらに限定されないが、アミド、アルキルアミン、チオールエーテル、アルキル、シクロアルキル、および／またはアリール連結が挙げられる。
【０１１７】
ある特定の適用では、ポリ核酸などの薬物が細胞に進入したら部分を放出させることが望ましい場合がある。部分を利用して、ポリ核酸を受けた細胞の数を同定することができる。部分は、２、３挙げると、抗体、色素、ｓｃＦｖ、ペプチド、糖タンパク質、炭水化物、リガンド、ポリマーであってよい。部分はリンカーと接触していてよい。リンカーは切断不可能なものであり得る。したがって、一部の場合では、リンカーは、切断可能なリンカーであり得る。これにより、標的細胞への接触がなされたら部分をリポソーム構造体から放出させることが可能になり得る。これは、部分が、リポソーム構造体から分離された場合により大きな治療効果を有する場合に望ましい可能性がある。一部の場合では、部分は、リポソーム構造体から分離された場合に、腸陰窩細胞または腸陰窩幹細胞などの細胞の細胞内構成成分によって吸収されるより良好な能力を有し得る。一部の場合では、リンカーは、ジスルフィド結合、アシルヒドラゾン、ビニルエーテル、オルトエステル、またはＮ−ＰＯ３を含み得る。
【０１１８】
したがって、部分が細胞内区画に進入することができるように部分をリポソーム構造体から分離させることが必要であるまたは望ましい場合がある。部分を放出するリンカーの切断は、例えば細胞内のｐＨの変化に起因して細胞内の条件が細胞の外側と比較して変化した結果であり得る。ポリ核酸などの薬物が細胞に進入したら、リンカーを切断する酵素が細胞内に存在することに起因してリンカーの切断が起こり得る。あるいは、リンカーの切断は、細胞に適用されるエネルギーまたは化学物質に応答して起こり得る。リンカーの切断をもたらすために使用することができるエネルギーの型の例としては、これらに限定されないが、光、超音波、マイクロ波および高周波エネルギーが挙げられる。一部の場合では、リンカーは、感光性リンカーであってよい。複合体を連結するために使用されるリンカーは、酸不安定リンカーであってもよい。酸不安定リンカーの例としては、シス−アコニット酸、シス−カルボキシアルカトリエン、ポリマレイン酸無水物を使用することによって形成されるリンカー、および他の酸不安定リンカーが挙げられる。
【０１１９】
一部の場合では、カチオン性脂質により、極性頭部基に存在する１つまたは複数のアミンを通じた正電荷を実現することができる。一部の場合では、リポソームは、カチオン性リポソームであり得る。一部の場合では、リポソームは、ＤＮＡなどの負に荷電したポリ核酸を運搬するために使用されるカチオン性リポソームであり得る。正に荷電したアミンが存在することにより、ＤＮＡに見出されるものなどのアニオンとの結合が容易になり得る。したがって形成されるリポソームは、リポソーム形状に部分的に寄与し得るＤＮＡカーゴへのファンデルワールス力および静電気による結合によるエネルギー寄与の結果であり得る。一部の場合では、カチオン性（および中性）脂質を遺伝子送達のために使用することができる。他の場合では、他の治療剤を送達するためにアニオン性リポソームを使用することができる。
【０１２０】
一部の場合では、アニオン性リポソーム構造体を利用してＤＮＡなどのポリ核酸を送達することができる。アニオン性脂質を使用したＤＮＡ含有リポソームの形成は、相互の静電気的反発を打ち消し、リポプレックス集合を容易にするために二価カチオンを使用することによってもたらすことができる。アニオン性リポプレックスは、アニオン性脂質、カチオン、およびＤＮＡを含めた生理的に安全な構成成分で構成され得る。このカテゴリー内で一般に使用される脂質は、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、およびホスファチジルセリンなどの、細胞膜に天然に見出すことができるリン脂質である。
【０１２１】
アニオン性脂質は、疎水性領域に広範囲の脂肪酸鎖のいずれかを含有し得る。組み入れられる特定の脂肪酸は、相挙動および弾性に関してリポソームの流体特性に関与する。宿主細胞膜内に特定のリン脂質が天然に存在することにおそらく起因して、正味の負の表面電位を有するリポプレックスを介した遺伝子送達は、より低いクリアランスおよびマクロファージによる食作用に関連づけられ、これは、有利な生体適合性と一致する。アニオン性脂質で包む前に、二価カチオンをアニオン性リポソーム系に組み入れて、核酸の凝縮を可能にすることができる。Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、およびＢａ２＋などのいくつかの二価カチオンをアニオン性リポプレックスに使用することができる。一部の場合では、Ｃａ２＋をアニオン性リポソーム系に利用することができる。
【０１２２】
カチオン性脂質を使用してリポソームを形成することができる。カチオン性脂質は、一般に、極性頭部基に存在する１つまたは複数のアミンを通じて正電荷を実現することができる。正に荷電したアミンが存在することにより、ＤＮＡに見出されるものなどのアニオンとの結合が容易になる。形成されるリポソームは、リポソーム形状を部分的に規定し得る、ＤＮＡへのファンデルワールス力および静電気による結合によるエネルギー寄与の結果であり得る。ＤＮＡのポリアニオン性が原因で、一般にはカチオン性（および中性）脂質が遺伝子送達のために使用され、一方、アニオン性リポソームの使用は他の治療用巨大分子の送達にかなり制限されている。
【０１２３】
多くの場合に中性ヘルパー脂質を用いて形成されるカチオン性脂質の溶液をＤＮＡと混合してリポプレックスと称される正に荷電した複合体を形成することができる。カチオン性脂質トランスフェクション用の試薬としては、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、およびジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）を挙げることができる。中性脂質であるジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）は、リソソーム内脱出の助けになり得る低ｐＨでの膜不安定化効果があるので、多くの場合にカチオン性脂質と併せて使用することができる。
【０１２４】
中性ヘルパー脂質を用いてリポソームを形成することができる。リポソームは、コレステロール、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（ＤＯＴＭＡ）、［１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３（トリメチルアンモニオ）プロパン］（ＤＯＴＡＰ）、３β［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、Ｎ１−［２−（（１Ｓ）−１−［（３−アミノプロピル）アミノ］−４−［ジ（３−アミノ−プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］−３，４−ジ［オレイルオキシ］−ベンズアミド（ＭＶＬ５）、グリセリルモノオレエート（ＧＭＯ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、その塩、およびこれらの任意の組合せを使用して生成することができる。
【０１２５】
一部の場合では、リポソーム構造体は、ＭＶＬ５およびＧＭＯで構成され得る。ＭＶＬ５およびＧＭＯのモル濃度は、約１０：１から１：２５までの範囲であってよい。ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約１０：１から約１：１０までの範囲であってよい。他の場合では、ＭＶＬ５とＧＭＯのモル比は、約５０：１から１：１までの範囲であってよい。例えば、モル比は、約５０：１から１：１まで、４０：１から１：１まで、３０：１から１：１まで、２０：１から１：１まで、１０：１から１：１まで、または約５：１から１：１までであり得る。ＭＶＬ５のＧＭＯに対するモル比は、約１０：１から約１：１まで、または１０：１から約１：２５までの範囲であってよい。
【０１２６】
一部の場合では、中性脂質であるジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）をカチオン性脂質と併せて使用することができ、これは、当該脂質に、リソソーム内脱出の助けになり得る低ｐＨでの膜不安定化効果があるからである。一部の場合では、他の試薬を使用してカチオン性リポソームを生成することができる。一部の場合では、ＤＯＧＳとＤＯＰＥの組合せを使用することができる。ＤＯＧＳおよびＤＯＰＥは、製造プロセスにおいてＰＥＧなどの少なくとも１つのポリマーと組み合わせることができる。ＤＯＧＳは、カチオン性であり得、ＤＮＡなどのアニオン性ポリ核酸と水素結合することができる。一部の場合では、ポリ核酸ＤＮＡは分枝ＰＥＩと塩を形成し得、中性リポソームで包被することができる。
【０１２７】
ＤＯＴＭＡは、グリセロールの３つの炭素骨格にエーテル結合によって結合し、カチオン性頭部基として四級アミンを有する２つの不飽和型オレオイル鎖（Ｃ１８：Δ９）からなり得る。一部の場合では、修飾を行うことができる。例えば、ＤＯＴＭＡに対する修飾は、側鎖と頭部基へのアルキル付着の異なる組合せ、ＤＯＴＭＡの四級アミン上のメチル基のヒドロキシルでの置き換え、またはこれらの任意の組合せであり得る。｛２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキシアミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロ酢酸｝またはＤＯＳＰＡは、ＤＯＴＭＡの誘導体として合成された別のカチオン性脂質であり得る。その構造は、疎水性鎖にペプチド結合によって結合し得るスペルミン基以外はＤＯＴＭＡと同様であり得る。一般に、スペルミン官能基の付加により、リポソームサイズの観点で、ＤＮＡのより効率的なパッキングが可能になり得る。
【０１２８】
ＤＯＴＡＰは、２本のオレオイル鎖を有するグリセロール骨格とカップリングした四級アミン頭部基からなり得る。ＤＣ−Ｃｈｏｌは、加水分解性ジメチルエチレンジアミンにエステル結合によって付着したコレステロール部分からなり得る。ＤＯＧＳは、ＤＯＳＰＡと同様の構造を有し得る。一部の場合では、どちらの分子も多価スペルミン頭部基および２本の１８炭素アルキル鎖を有し得る。しかし、ＤＯＧＳの鎖は飽和型であり得、ペプチド結合によって頭部基に連結し得、かつ、四級アミンを欠き得る。
【０１２９】
ある特定の場合では、脂質二重層は、リン脂質、ホスファチジル−コリン、ホスファチジル−セリン、ホスファチジル−ジエタノールアミン、ホスファチジルイノシット、スフィンゴ脂質、およびエトキシ化ステロール、またはそれらの混合物からなる群から選択される１つまたは複数の組成物で生成されていてよい。そのような実施形態の実例では、リン脂質はレシチンであり得、ホスファチジルイノシットはダイズ、セイヨウアブラナ、綿実、卵およびそれらの混合物に由来し得、スフィンゴ脂質はセラミド、セレブロシド、スフィンゴシン、およびスフィンゴミエリン、ならびにこれらの混合物であり得、エトキシ化ステロールは植物ステロール、ＰＥＧ−（ポリエチレングリコール）−５ナタネステロールであり得る。ある特定の実施形態では、植物ステロールは、以下の組成物：シストステロール、カンポステロールおよびスチグマステロールのうちの少なくとも２つの混合物を含む。さらに他の実施形態では、脂質層は、ホスファチジルコリン、ホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジル−セリン、ホスファチジル−イノシトール、リゾ−ホスファチジル−コリン、リゾ−ホスファチジル−エタノールアミン、リゾ−ホスファチジル−イノシトールまたはリゾ−ホスファチジル−イノシトールを含む群から選択される１つまたは複数のホスファチジル基で構成され得る。他の場合では、脂質二重層は、モノアシルまたはジアシルホスホグリセリドから選択されるリン脂質で構成され得る。さらに他の場合では、脂質二重層は、ホスファチジル−イノシトール−３−リン酸（ＰＩ−３−Ｐ）、ホスファチジル−イノシトール−４−リン酸（ＰＩ−４−Ｐ）、ホスファチジル−イノシトール−５−リン酸（ＰＩ−５−Ｐ）、ホスファチジル−イノシトール−３，４−二リン酸（ＰＩ−３，４−Ｐ２）、ホスファチジル−イノシトール−３，５−二リン酸（ＰＩ−３，５−Ｐ２）、ホスファチジル−イノシトール−４，５−二リン酸（ＰＩ−４，５−Ｐ２）、ホスファチジル−イノシトール−３，４，５−三リン酸（ＰＩ−３，４，５−Ｐ３）、リゾホスファチジル−イノシトール−３−リン酸（ＬＰＩ−３−Ｐ）、リゾホスファチジル−イノシトール−４−リン酸（ＬＰＩ−４−Ｐ）、リゾホスファチジル−イノシトール−５−リン酸（ＬＰＩ−５−Ｐ）、リゾホスファチジル−イノシトール−３，４−二リン酸（ＬＰＩ−３，４−Ｐ２）、リゾホスファチジル−イノシトール−３，５−二リン酸（ＬＰＩ−３，５−Ｐ２）、リゾホスファチジル−イノシトール−４，５−二リン酸（ＬＰＩ−４，５−Ｐ２）、およびリゾホスファチジル−イノシトール−３，４，５−三リン酸（ＬＰＩ−３，４，５−Ｐ３）、ホスファチジル−イノシトール（ＰＩ）、またはリゾホスファチジル−イノシトール（ＬＰＩ）を含む群から選択される１つまたは複数のホスホイノシチドで構成され得る。
【０１３０】
本開示の脂質またはリポソームを修飾することができる。修飾は、表面修飾であってよい。表面修飾は、リポソーム構造体が粘液中を移動する平均速度を、同等のリポソーム構造体と比較して増強することができる。同等のリポソーム構造体は、表面修飾されていなくてもよく、または同等のリポソーム構造体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーで修飾されていてもよい。修飾は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける分解からの保護を容易にすることができる。修飾は、リポソームの輸送を補助することもできる。例えば、修飾は、ｐＨ感受性修飾に起因してリポソームを酸性ｐＨの胃腸（ＧＩ）管内に輸送することを可能にし得る。表面修飾は、リポソームが粘液中を移動する平均速度も改善し得る。例えば、修飾は、修飾を伴わない同等のリポソーム構造体またはＰＥＧを含む修飾を伴うリポソーム構造体と比較して、速度を１×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、２０×、３０×、４０×、５０×、６０×、７０×、８０×、９０×、１００×、３００×、５００×、７００×、９００×、または約１０００×まで増強することができる。一部の場合では、リポソームに対する修飾は、結合によって生じる。結合は、共有結合、非共有結合、極性結合、イオン結合、水素結合、またはこれらの任意の組合せであり得る。結合は、２つの基または基の一部の結び付きとみなすことができる。例えば、リポソーム構造体をＰＥＧに共有結合を含むリンカーを介して結合させることができる。一部の場合では、結合は、２つの隣接した基の間で生じ得る。結合は動的であり得る。動的結合は、１つの基が第２の基と一時的に結び付く場合に生じ得る。例えば、リポソーム内の懸濁液中のポリ核酸は、それが懸濁している間、脂質二重層の一部と結合し得る。
【０１３１】
一部の場合では、修飾は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の付加であり得る。リポソーム表面をＰＥＧで修飾する方法は、リポソーム表面へのＰＥＧの物理吸着、リポソームへのＰＥＧの共有結合による付着、リポソームへのＰＥＧのコーティング、またはこれらの任意の組合せを含み得る。一部の場合では、ＰＥＧを、リポソームが形成され得る前に脂質粒子に共有結合により付着させることができる。
【０１３２】
種々の分子量のＰＥＧを使用することができる。ＰＥＧは、約１０から約１００単位までのエチレンＰＥＧ構成成分の範囲であってよく、これは、リン脂質と、脂質二重層に含まれる脂質の１重量％〜２０重量％、好ましくは５重量％〜１５重量％、１０重量％、または約１重量％〜約２０重量％、好ましくは約５重量％〜約１５重量％、約１０重量％を構成するアミン基を通じてコンジュゲートすることができる。
【０１３３】
ある特定の場合では、ナノ構造体は、少なくとも１つの標的化剤をさらに含み得る。標的化剤という用語は、特定の型またはカテゴリーの細胞および／または他の特定の型の化合物（例えば、特定の細胞または細胞型を標的とする部分）に特異的に結合する部分、化合物、抗体などを指し得る。標的化剤は、ある特定の標的細胞の表面、標的細胞表面抗原、標的細胞受容体、またはこれらの組合せに対して特異的であってよい（例えば、親和性を有してよい）。一部の場合では、標的化剤は、特定の型またはカテゴリーの物質および／または細胞に曝露した場合に特定の作用を有する（例えば、切断する）薬剤を指し得、この作用により、ナノ構造体を特定の型またはカテゴリーの細胞を標的とするように駆動することができる。したがって、標的化剤という用語は、ナノ構造体の一部であり得、ナノ構造体の標的化機構において役割を果たす薬剤を指し得るが、薬剤自体は特定の型またはカテゴリーの細胞自体に特異的であっても特異的でなくてもよい。ある特定の例では、標的化剤を本ナノ構造体に組み入れることにより、ナノ構造体によって送達されるポリ核酸の細胞内取り込みの効率を増強することおよび／またはより特異的なものにすることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のナノ構造体は、１つまたは複数の小分子標的化剤（例えば、炭水化物部分）を含み得る。適切な標的化剤としては、非限定的な例として、抗体、抗体様分子、またはペプチド、例えばインテグリン結合性ペプチドなど、例えばＲＧＤ含有ペプチドなど、または小分子、例えばビタミン、例えば葉酸、ラクトースおよびガラクトースなどの糖、もしくは他の小分子なども挙げられる。細胞表面抗原としては、細胞表面上のタンパク質、糖、脂質または他の抗原などの細胞表面分子が挙げられる。特定の実施形態では、細胞表面抗原は、内部移行を受ける。本ナノ粒子の実施形態の標的化剤によって標的とされる細胞表面抗原の例としては、これらに限定されないが、トランスフェリン受容体１型および２型、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、インテグリン、ＮＧＦ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤＩ９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４３、ι１）３８、ＣＤ５６、ＣＤ６９、およびロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役型受容体５（ＬＧＲ５）が挙げられる。標的化剤は、人工的な親和性分子、例えば、ペプチド模倣体またはアプタマーも含み得る。ペプチド模倣体は、治療用ペプチドなどのペプチドの少なくとも一部分が修飾されており、ペプチド模倣体の三次元構造がペプチドの三次元構造と実質的に同じままである化合物を指し得る。ペプチド模倣体（ペプチドおよび非ペプチジル類似体の両方）は、改善された性質（例えば、タンパク質分解の低減、保持の増大または生物学的利用能の増大）を有し得る。ペプチド模倣体は、一般に、改善された経口利用可能性を有し、これにより、ヒトまたは動物における障害の処置に特に適するものになる。ペプチド模倣体は同様の二次元化学構造体を有してよく有さなくてもよいが、共通する３次元の構造的特徴および幾何学的形状を共有することに留意するべきである。
【０１３４】
一部の実施形態では、標的化剤は、タンパク質性標的化剤（例えば、ペプチド、および抗体、抗体断片）であり得る。一部の特定の実施形態では、ナノ構造体は、複数の異なる標的化剤を含み得る。
【０１３５】
一部の実施形態では、１つまたは複数の標的化剤を、ナノ構造体を形成するポリマーにカップリングすることができる。一部の場合では、標的化剤を、ナノ構造体をコーティングするポリマーに結合させることができる。一部の例では、標的化剤をポリマーに共有結合によりカップリングすることができる。一部の場合では、標的化剤を、ポリマーに、標的化剤が得られるナノ構造体の実質的に表面または表面近くになり得るように結合させることができる。ある特定の実施形態では、標的化剤残基（例えば、ペプチドの（アルキル）アクリル酸誘導体などの標的化剤の重合可能な誘導体）を含む単量体を共重合させて、本明細書に提示されるナノ構造体を形成する共重合体を形成することができる。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の標的化剤を本ナノ粒子のポリマーに連結性部分を通じてカップリングすることができる。一部の実施形態では、標的化剤を膜不安定化ポリマーにカップリングする連結性部分は、切断可能な連結性部分であり得る（例えば、切断可能な結合を含む）。一部の実施形態では、連結性部分は、切断可能であり得、かつ／または、エンドソーム条件で切断可能であり得る結合を含む。一部の実施形態では、連結性部分は、切断可能であり得、かつ／または、特定の酵素（例えば、ホスファターゼまたはプロテアーゼ）によって切断することが可能な結合を含み得る。一部の実施形態では、連結性部分は、切断可能であり得、かつ／または、細胞内パラメータ（例えば、ｐＨ、酸化還元電位）の変化で切断可能であり得る結合を含み得、一部の実施形態では、連結性部分は、切断可能であり得、かつ／または、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）（例えば、ＭＭＰにより切断可能なペプチド連結性部分）に曝露させると切断することが可能な結合を含み得る。
【０１３６】
ある特定の場合では、ナノ粒子の標的化機構は、ポリマー内の切断可能なセグメントの切断に依存し得る。例えば、本ポリマーは、切断するとナノ粒子および／またはナノ粒子のコアが露出する切断可能なセグメントを含み得る。一部の実施形態では、切断可能なセグメントは、本ポリマーの末端のいずれかまたは両方に位置していてよい。一部の実施形態では、切断可能なセグメントは、ポリマーの長さに沿って位置し、場合により、ポリマーのブロック間に位置していてよい。例えば、ある特定の実施形態では、切断可能なセグメントは、ポリマーの第１のブロッと第２のブロックの間に位置していてよく、ナノ粒子を特定の切断物質に曝露させることができる場合に、第１のブロックを第２のブロックから切断することができる。特定の実施形態では、切断可能なセグメントは、ＭＭＰに曝露させると切断することが可能である、ＭＭＰにより切断可能なペプチドであり得る。
【０１３７】
抗体などの標的化剤のポリマーへの付着は、任意の適切な様式で、例えば、これらに限定されないが、アミン−カルボキシルリンカー、アミン−スルフヒドリルリンカー、アミン−炭水化物リンカー、アミン−ヒドロキシルリンカー、アミン−アミンリンカー、カルボキシル−スルフヒドリルリンカー、カルボキシル−炭水化物リンカー、カルボキシル−ヒドロキシルリンカー、カルボキシル−カルボキシルリンカー、スルフヒドリル−炭水化物リンカー、スルフヒドリル−ヒドロキシルリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルリンカー、炭水化物−ヒドロキシルリンカー、炭水化物−炭水化物リンカー、およびヒドロキシル−ヒドロキシルリンカーを含めた、いくつかのコンジュゲーション化学手法のいずれか１つによって実現することができる。特定の実施形態では、標的化剤を本明細書に提示されるナノ粒子のポリマーに付着させるために、「クリック」化学を使用することができる。多種多様なコンジュゲーション化学反応が場合によって利用され、一部の実施形態では、標的化剤を単量体に付着させることができ、次いで、得られた化合物を、本明細書に記載のナノ粒子に利用するポリマー（例えば、共重合体）の重合合成に使用することができる。一部の実施形態では、標的化剤を、ナノ粒子のポリマーに結合したｓｉＲＮＡのセンスまたはアンチセンス鎖に付着させることができる。ある特定の実施形態では、標的化剤を、センスまたはアンチセンス鎖の５’または３’末端に付着させることができる。
【０１３８】
化合物を連結するための方法は、これらに限定されないが、ヌクレオチドに対する、タンパク質、標識、および他の化学実体を含み得る。ｎ−マレイミドブチリルオキシ−スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）およびスルホ−ＧＭＢＳなどの架橋試薬は、免疫原性が低減している。予め構築されたオリゴヌクレオチドの５’末端には、アミダイトまたはＨ−ホスホン酸化学を使用して置換基が付着されている。置換基は、オリゴマーの３’末端に付着させることもできる。この最後の方法では、アクリジン部分を有する３’ホスホン酸からジイソプロピルアミンを外すために固体支持体に付着させ、その後、リンの酸化後に欠失させる２，２’−ジチオエタノールを利用する。あるいは、オリゴヌクレオチドは、リンカーアームを介して塩基に付着した基を有する１つまたは複数の修飾ヌクレオチドを含み得る。例えば、ｄＵＴＰのＣ−５位へのビオチンのアリルアミンリンカーアームによる付着を利用することができる。ピリミジンの５位へのビオチンおよび他の基のリンカーアームを介した付着を行うこともできる。
【０１３９】
化学的架橋は、スペーサーアーム、すなわち、リンカーまたはテザーの使用を含み得る。スペーサーアームにより、分子内柔軟性がもたらされるまたはコンジュゲートした部分間の分子内距離が調整され、それにより、生物活性の保存に役立ち得る。スペーサーアームは、スペーサーアミノ酸を含むペプチド部分の形態であってよい。あるいは、スペーサーアームは、「長鎖ＳＰＤＰ」などの架橋試薬の一部であってよい。
【０１４０】
プロテインＡ、カルボジイミド、ジマレイミド、ジチオ−ビス−ニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−５−アセチル−チオ酢酸（ＳＡＴＡ）、およびＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ（pyrid-yldithio））プロピオン酸（ＳＰＤＰ）、６−ヒドラジノニコチミド（ＨＹＮＩＣ）、Ｎ３ＳおよびＮ２Ｓ２などの種々のカップリング剤または架橋剤を、標的化構築物を合成するための周知の手順において使用することができる。例えば、ビオチンをオリゴヌクレオチドに、二環式無水物方法を使用してＤＴＰＡを介してコンジュゲートすることができる。さらに、スルホサクシニミジル６−（ビオチンアミド）ヘキサン酸（ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．から購入することができる）、「ビオシチン」、ビオチンのリシンコンジュゲートは、第一級アミンの利用可能性に起因して、ビオチン化合物を作製するのに有用であり得る。さらに、対応するビオチン酸塩化物または酸前駆物質を治療剤のアミノ誘導体と公知の方法によってカップリングすることができる。ビオチン部分を粒子の表面にカップリングすることにより、別の部分をアビジンにカップリングし、次いで、粒子に強力なアビジン−ビオチン親和性によってカップリングすることができる、または逆もまた同じである。ポリマー粒子が粒子の表面にＰＥＧ部分を含むある特定の実施形態では、ＰＥＧの遊離のヒドロキシル基を、追加的な分子または部分を粒子に連結または付着（例えば、共有結合による付着）させるために使用することができる。
【０１４１】
実施形態では、リポソーム修飾は、生体適合性をもたらすことができ、また、例えば、抗体、アプタマー、ポリエチレン、またはこれらの組合せを含めた標的化ペプチドを含めた標的化種を有するように修飾することができる。標的化種は受容体であってもよい。一部の場合では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはこれらの組合せが使用される。
【０１４２】
リポソームは、任意のサイズおよび形態のものであってよい。形態は、単層小胞であってよい。単層小胞は、内部の水溶液を包被することが可能な単一の二重層膜を特徴とし得る。カチオン性アミン頭部基およびアニオン性リン脂質頭部基のどちらも単一壁の小胞を形成し得る。リポソームは多層であってもよい。多層リポソームは、多数の同心二重層を含有し得る。オリゴ層リポソームは、２つの同心二重層を含有し得る。多胞体リポソームは、１つの巨大な小胞の内側に多数のより小さな単層小胞を含有し得る。
【０１４３】
小胞サイズは、ナノメートル〜マイクロメーターの範囲に入る：小さな単層小胞は２０〜２００ｎｍであり、大きな単層小胞は２００ｎｍ〜１μｍであり、巨大な単層小胞は、１μｍよりも大きい。一部の場合では、小胞は、１μｍから１００μｍを超えるまでのサイズの範囲であり得る。一部の場合では、ポリ核酸を、リポソーム構造体によって適正に包被されるように凝縮することができる。ＤＮＡの凝縮は、ＤＮＡ骨格のリン酸基の中和および塩基との水素結合を通じたＢ−ＤＮＡ構造の歪みによってＤＮＡを凝縮させ、それにより、ＤＮＡの局部的な屈曲およびヘリックス間の結び付きを可能にすることができるＭｎ２＋、Ｎｉ２＋、Ｃｏ２＋、およびＣｕ２＋などの二価金属イオンによって実施することができる。一部の場合では、凝縮に利用する金属イオンの濃度は、凝縮に使用される媒体の比誘電率に依存し得る。エタノールまたはメタノールの添加により、凝縮に必要な金属イオンの濃度を低下させることもできる。一部の場合では、ＤＮＡを凝縮させるためにエタノールを体積で約０．５％から約６０％までの濃度で使用することができる。一部の場合では、ＤＮＡを凝縮させるためにエタノールを体積で約０．５％から、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％までの濃度で使用することができる。一部の場合では、Ｃａ２＋を凝縮に使用することもできる。Ｃａ２＋はＤＮＡリン酸に結合するだけでなく、グアニンの窒素（７）および酸素（６）と複合体を形成し、塩基対合を妨害することもできる。
【０１４４】
一部の場合では、リポソームの外表面をポリマーでコーティングすることができる。他の場合では、外表面をコーティングしなくてよい。リポソームは、治療用遺伝子を保有してよい。リポソームは、治療剤を包被するために使用することができるナノ粒子またはリポソームなどのナノ容器の形態であってよい。リポソームは、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロール−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、ジホスファチジルホスホコリン（diphosphatidy  phosphocholine）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、またはコレステロールなどの中性リン脂質で、ジドデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）などの少量（１％）のカチオン性脂質を伴って構成され得る。一部の場合では、脂質二重層にできる材料は、正味の正電荷を持つ脂質または中性電荷を持つ脂質であり得る。一部の場合では、リポソーム内に包被される治療剤、例えばＤＮＡなどを安定化するために、カチオン性脂質を使用することができる。
【０１４５】
一部の場合では、ミニサークルなどのポリ核酸はリポソーム構造体で完全に包被されていてよい。完全な包被とは、リポソーム構造体内のポリ核酸が、遊離のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質を有意に分解する血清またはヌクレアーゼまたはプロテアーゼアッセイに曝露された後に有意に分解されない可能性があることを示し得る。完全包被系では、通常は遊離のポリ核酸の１００％を分解する処理でリポソーム構造体内のポリ核酸の約２５％未満が分解され得ることが好ましく、より好ましくはリポソーム構造体内のポリ核酸の約１０％未満、最も好ましくは約５％未満が分解され得る。ポリ核酸に関しては、完全包被は、Ｏｌｉｇｒｅｅｎ（登録商標）アッセイによって決定することができる。Ｏｌｉｇｒｅｅｎ（登録商標）は、溶液中のオリゴヌクレオチドおよび一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡを定量化するための超高感度蛍光核酸染色である（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．から入手可能）。「完全に包被された」とは、リポソーム構造体が血清安定であり得ること、すなわち、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与された際にそれらの構成部分に急速に解体しないことも指し得る。
【０１４６】
粘液透過性粒子またはＭＰＰは、本明細書で使用される場合、粘膜透過増強性コーティングでコーティングされた粒子を指し得る。一部の場合では、粒子は、粘膜透過増強性コーティングでコーティングすることができる治療剤、診断剤、予防剤、および／または栄養補助剤（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｇｅｎｔ）などの活性薬剤の粒子（すなわち、薬物粒子）であり得るまたはそれを送達することができる。他の場合では、粒子は、ポリマー材料などのマトリックス材料で形成されてよく、その中に治療剤、診断剤、予防剤、および／または栄養補助剤を包被する、分散させる、および／または結び付けることができる。コーティング材料は、薬物粒子またはポリマー粒子ＩＩに共有結合により、または非共有結合により結び付けることができる。
【０１４７】
さらに、他のリポソーム構造体、例えば修飾されていないリポソーム構造体よりも高速度で、粘膜関門を通過することができるリポソーム構造体を本明細書に提示することができる。リポソーム構造体は、例えば、同様のサイズの修飾されていないリポソーム構造体の少なくとも２倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍またはそれよりも大きな倍数の速度で粘膜関門を通過することができる。一部の場合では、非ＰＥＧで修飾されたリポソーム構造体は、トランスウェル遊走アッセイによって測定して、ＰＥＧで修飾されたリポソーム構造体よりも効率的に粘膜関門を透過することができる。
【０１４８】
粘液透過性ナノ粒子（ＭＰＰ）またはナノ粒子は、ポリマーを含有し得る。ポリマーは、任意のポリマー粒子であってよい。任意の数の生体適合性ポリマーを使用してナノ粒子を調製することができる。一実施形態では、生体適合性ポリマーは生分解性であってよい。別の実施形態では、粒子は非分解性でなくてよい。他の実施形態では、粒子は、分解性粒子と非分解性粒子の混合物であってよい。
【０１４９】
ＭＰＰは、約−１００ｍＶから約１００ｍＶまでの中性付近のゼータ電位を有し得る。ＭＰＰは、約−５０ｍＶから約５０ｍＶまで、約−３０ｍＶから約３０ｍＶまで、約−２０ｍＶから約２０ｍＶまで、約−１０ｍＶから約１０ｍＶまで、約−５ｍＶから約５ｍＶまでのゼータ電位を有し得る。
【０１５０】
生分解性ポリマーは、一般には、使用中に分解し得るという点で非生分解性ポリマーとは異なる。ある特定の実施形態では、そのような使用は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける治療などのｉｎ  ｖｉｖｏにおける使用を伴い、他のある特定の実施形態では、そのような使用は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける使用を伴う。一般に、生分解性に起因する分解は、生分解性ポリマーのその構成成分サブユニットへの分解、または、例えば生化学的プロセスによる、ポリマーのより小さな非ポリマーサブユニットへの消化を伴う。ある特定の実施形態では、２つの異なる型の生分解を一般に識別することができる。例えば、１つの型の生分解は、ポリマー骨格内の結合（共有結合性であるかそうでないかにかかわらず）の切断を伴い得る。そのような生分解では、一般には単量体およびオリゴマーが結果として生じ、さらにより一般的には、そのような生分解は、ポリマーのサブユニットのうちの１つまたは複数を接続している結合の切断によって起こる。対照的に、別の型の生分解は、側鎖の内部の、または側鎖をポリマー骨格に接続する結合（共有結合性であるかそうでないかにかかわらず）の切断を伴い得る。例えば、ポリマー骨格に側鎖として付着した治療剤または他の化学的部分を生分解によって放出させることができる。ある特定の実施形態では、一般的な型の生分解の一方または他方または両方がポリマーの使用中に起こり得る。生分解性ポリマーの分解速度は、多くの場合、任意の分解に関与する連結の化学的同一性、分子量、結晶化度、生体内安定性、およびそのようなポリマーの架橋の程度、埋込物の物理的特性（例えば、形状およびサイズ）、ならびに投与の様式および場所を含めた種々の因子に一部依存する。例えば、分子量が大きいほど、結晶化度の程度が大きいほど、かつ／または生体内安定性が高いほど、任意の生分解性ポリマーの生分解が、通常、遅くなる。
【０１５１】
ある特定の実施形態では、生分解性ポリマーは、治療剤またはそれに結び付いた他の材料も有し得、そのようなポリマーの生分解速度は、そのような材料の放出速度によって特徴付けることができる。例えば、生分解速度は、ポリマーの化学的同一性および物理的特性だけでなく、それに組み入れられている材料（複数可）の同一性にも依存し得る。一部の場合では、本発明のポリマー製剤は、所望の適用において許容される期間内に生分解する。ｉｎ  ｖｉｖｏにおける治療などのある特定の実施形態では、そのような分解は、通常、２５から３７℃の間の温度を有し、ｐＨ６から８の間の生理溶液に曝露して約５年、１年、６カ月、３カ月、１カ月、１５日、５日、３日未満、またはさらには１日もしくはそれ未満（例えば、４〜８時間）の期間で起こる。他の実施形態では、ポリマーは、所望の適用に応じて約１時間から数週間の間の期間で分解する。
ポリマー
【０１５２】
ポリマーとしては、これらに限定しなくてよいが、シクロデキストリン含有ポリマー、特に、米国特許第６，５０９，３２３号に記載されているものなどのカチオン性シクロデキストリン含有ポリマー；ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）などのラクトンから調製されるポリマー；ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｗａｃｔｉｄｅ）（ＰＤＬＡ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）、およびポリ（２−ｎ−プロピル−２−オキサゾリン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、およびその混和物、ポリアルキルシアノアクリレート（polyalkyl  cyanoacralate）、ポリウレタン、ポリアミノ酸、例えばポリ−Ｌ−リシン（ＰＬＬ）など、ポリ（吉草酸）、およびポリ−Ｌ−グルタミン酸などのポリヒドロキシ酸およびその共重合体；ヒドロキシプロピルメタクリル酸（ＨＰＭＡ）；ポリ酸無水物；ポリエステル；ポリオルトエステル；ポリ（エステルアミド）；ポリアミド；ポリ（エステルエーテル）；ポリカーボネート；ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン；ポリエチレングリコール）（ＰＥＧ）およびポリアルキレン酸化物（ＰＥＯ）、およびポリオキシアルキレン酸化物（「ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）」）などのそのブロック共重合体などのポリアルキレングリコール；ポリエチレンテレフタレートなどのポリアルキレンテレフタレート；エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）；ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）；ポリビニルエーテル；ポリ（酢酸ビニル）などのポリビニルエステル；ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）などのポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン；ポリシロキサン；ポリスチレン（ＰＳ；アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースなどの誘導体化セルロースを含めたセルロース；ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）（共同で本明細書では、「ポリアクリル酸」と称される）などのアクリル酸のポリマー；ポリジオキサノンおよびその共重合体；ポリヒドロキシアルカン酸；ポリプロピレンフマル酸塩；ポリオキシメチレン；ポロキサマー；ポリ（酪酸）；炭酸トリメチレン；ポリホスファゼン、またはこれらの任意の組合せを挙げることができる。天然のポリマーの例としては、アルブミン、コラーゲン、ゼラチンおよびプロラミン、例えば、ゼインなどのタンパク質、ならびにアルギン酸などの多糖を挙げることができる。ランダム共重合体、ブロック共重合体、もしくはグラフト共重合体などの上記の共重合体、または上に列挙されているポリマーの混和物も使用することができる。ポリマーは、ＰＥＧであり得る。ポリマーは、ＰＥＧ２０００であり得る。ポリマーは、ポリ（２−アルキル−２−オキサゾリン）などの非ＰＥＧポリマーであってもよい。一部の場合では、ポリマー内の側鎖の変動が、構造体の粘膜関門を通じた拡散の一因となり得る。一部の場合では、非ＰＥＧは、Ｌ−アミノ酸修飾された複合体を含み得る。
【０１５３】
ポリマーは、ＰＥＧとしても公知のポリ（エチレングリコール）であってよい。ＰＥＧを使用して、例えば表面から伸びるＰＥＧ鎖の長さが制御される（ＥＣＭに浸透する長い非分枝鎖が減少するまたは排除されるように）、ある特定の立体配置で粘液における接着を低減することができる。例えば、粒子の調製に直鎖状の高ＭＷ  ＰＥＧを、直鎖の一部分（例えば、低ＭＷ  ＰＥＧ分子と長さが等しい部分）のみが粒子の表面から伸長するように使用することができる。あるいは、分枝の高ＭＷ  ＰＥＧを使用することができる。そのような実施形態では、ＰＥＧ分子の分子量は高いが、粒子の表面から伸びる分子の任意の個々の鎖の直線的な長さは低ＭＷ  ＰＥＧ分子の直鎖に対応する。一部の態様では、ＰＥＧの平均分子量は、少なくとも２００Ｄａ、５００Ｄａ、９５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１５００Ｄａ、２０００Ｄａ、２５００Ｄａ、３０００Ｄａ、３５００Ｄａ、４０００Ｄａ、４５００Ｄａ、５０００Ｄａ、５５００Ｄａ、６０００Ｄａ、６５００Ｄａ、７０００Ｄａ、７５００Ｄａ、８０００Ｄａ、８５００Ｄａ、９０００Ｄａ、９５００Ｄａ、または１００００Ｄａであり得る。
【０１５４】
代替の実施形態では、ポリマーは、ＰＬＵＯＲＯＮＩＣｓ（登録商標）として販売されているポリエチレングリコール−ポリエチレンオキシドブロック共重合体などのポロキサマーであってよい。ＰＥＧ代替ポリマーは、可溶性であり得、親水性であり得、高度に柔軟な主鎖を有し得、高生体適合性を有し得る。ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）およびポリ（アクリルアミド）（ＰＡＡ）などの合成ポリマーが他の潜在的に保護的なポリマーの最も顕著な例である。一部の場合では、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）に共有結合により連結したＤＳＰＥを含有するリポソームは、血液循環時間の延長も示し得る。一部の場合では、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）またはポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）に共有結合により連結したＤＳＰＥを含有するリポソームは、肝臓および／または脾臓による取り込みの低減も示し得る。ポリマーは、ポリ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］、両親媒性ポリ−Ｎ−ビニルピロリドン、Ｌ−アミノ酸に基づく生分解性ポリマー−脂質コンジュゲート、およびポリビニルアルコールであってもよい。Ｌ−アミノ酸に基づくポリマーを使用することもできる。
【０１５５】
一部の場合では、チオール化ナノ粒子は、非チオール化ナノ粒子と比較して、胃粘膜へのわずかな透過を示し得る。一部の場合では、ＰＥＧ化およびＰＯＺ化粒子は、より大きな、粘膜中への透過および粘膜を通った浸透を有し得る。一部の場合では、チオ化はナノ粒子の粘膜透過に関してＰＥＧ化およびＰＯＺ化よりも劣る可能性がある。他の場合では、ＰＥＧ化はナノ粒子の粘膜透過に関してＰＯＺ化よりも劣る可能性がある。一部の場合では、ＰＯＺ化を含むナノ粒子は、非ＰＯＺ化粒子と比較して約２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、９×、１０×、１１×、１２×、１３×、１４×、１５×、または２０×よりも大きな粘膜透過の増大を有し得る。粘膜透過は、１つまたは複数のアッセイによって測定することができる。一部の場合では、粘膜透過をトランスウェル遊走アッセイによって測定する。他の場合では、粘膜透過をナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）によって測定することができる。他の場合では、粘膜透過を多粒子追跡（ＭＰＴ）によって測定することができる。
【０１５６】
ＰＯＺ化は、式Ｉを含み得る。例えば、ＰＯＺ化（ＰＯＺ）ポリマーは、式Ｉ：
【０１５７】
【化１１】
2020500218.tif 000013
（Ｒ１は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい）
を含み得る。
【０１５８】
一部の場合では、Ｒ２は、独立に、リンカーまたは基体とカップリングすることができるカップリング基；水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい。
【０１５９】
一部の場合では、Ｒ３は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい。
【０１６０】
Ｒ４は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい。
【０１６１】
Ｒ５は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい。
【０１６２】
Ｒ６は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよい。
【０１６３】
Ｒ７は、独立に、水素；重水素；Ｃ１〜６アルキル；Ｃ２〜６アルキニル；Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル；ヘテロアリール、シクロアルキル；Ｃ１〜６アルキルヘテロアリール；Ｃ１〜６アルキルアリール；およびアルキルシクロアルキルからなる群から選択することができ、そのそれぞれが、個別にかつ独立に、ＸＡ；ハロゲン；ＮＹ２；ＣＸＸＹ；ＸＣＹ３；アルキル；水素；重水素；カルボン酸；エーテル；アミン；ＸＸ２ＮＹ２；＝Ｘ；ＸＣＹ２Ｘまたはこれらの任意の組合せで１回または複数回置換されていてもよく；＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであり得、＊＊は、独立に、Ｒ、Ｓまたはアキラルであり得、Ｘは、独立に、酸素または硫黄から選択され；Ｙは、独立に、重水素または水素から選択され；Ａは、水素、重水素、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは、約１から約１００までであり得る。他の場合では、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００までであり得る。
【０１６４】
一部の場合では、ポリマーは、式Ｉの少なくとも一部分を含み得る。例えば、一部の場合では、ポリマーは、式Ｉの少なくとも５０％を含み得る。他の場合では、ポリマーは、式Ｉの５０％から約１００％までを含み得る。ポリマーは、式Ｉに対して、式Ｉの５０％から、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％までのパーセント類似性を有する。
【０１６５】
ポリ−２−オキサゾリンのリン酸塩は、固有粘度−汎用較正曲線によって決定して、少なくとも約１０００の重量平均分子量を有し得る。他の場合では、ポリ−２−オキサゾリンは、少なくとも約１０，０００の重量平均分子量を有し得る。他の場合では、ポリ−２−オキサゾリンは、少なくとも約２５０，０００の重量平均分子量を有し得る。他の場合では、ポリ−２−オキサゾリンは、少なくとも約１，０００，０００の重量平均分子量を有し得ることが好ましい。他の場合では、ポリ−２−オキサゾリンは、少なくとも約５００，０００の重量平均分子量を有し得る。ポリ−２−オキサゾリンは、約１０００から、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１００００００、２０００００、３０００００、４０００００、もしくは約５０００００Ｄａまで、またはそれよりも大きな平均分子量を有し得る。ある特定の例では、ポリマーは、アルキル、アルコキシ、アシル、またはアリール基によって置換されていてよい。一部の場合では、ＰＯＺまたはＰＥＧなどのポリマーは、リポソームの脂質と直接コンジュゲートしていてもよく、またはリポソームの脂質にリンカー部分を介して連結していてもよい。例えば、エステル非含有リンカー部分およびエステル含有リンカー部分を含めた、ポリマーを脂質にカップリングするのに適した任意のリンカー部分を使用することができる。リンカー部分は、エステル非含有リンカー部分であり得る。本明細書で使用される場合、「エステル非含有リンカー部分」という用語は、カルボキシエステル結合（−ＯＣ（Ｏ）−）を含有しないリンカー部分を指し得る。適切なエステル非含有リンカー部分としては、これらに限定されないが、アミノ（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、アミノ（−ＮＲ−）、カルボニル（−Ｃ（Ｏ）−）、カルバミン酸（−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−）、尿素（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）、ジスルフィド（−Ｓ−Ｓ−）、エーテル（−Ｏ−）、サクシニル（−（Ｏ）ＣＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、スクシンアミジル（−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、エーテル、ジスルフィド、ならびにこれらの組合せ（例えば、カルバミン酸リンカー部分およびアミノリンカー部分の両方を含有するリンカーなど）が挙げられる。ＰＥＧを脂質にカップリングするためにカルバミン酸リンカーを使用することができる。他の実施形態では、ＰＥＧを脂質にカップリングするためにエステル含有リンカー部分を使用することができる。適切なエステル含有リンカー部分としては、これらに限定されないが、例えば、炭酸エステル（−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−）、サクシノイル、リン酸エステル（−Ｏ−（Ｏ）ＰＯＨ−Ｏ−）、スルホン酸エステル、およびこれらの組合せが挙げられる。
【０１６６】
一部の場合では、式Ｉは、約１０００Ｄａから約８０００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。式Ｉは、約５００Ｄａから約１００００Ｄａまでの平均分子量を有し得る。式Ｉは、約５００Ｄａから、５５０Ｄａ、６００Ｄａ、６５０Ｄａ、７００Ｄａ、７５０Ｄａ、８００Ｄａ、８５０Ｄａ、９００Ｄａ、９５０Ｄａ、１０００Ｄａ、１５００Ｄａ、２０００Ｄａ、２５００Ｄａ、３０００Ｄａ、３５００Ｄａ、４０００Ｄａ、４５００Ｄａ、５０００Ｄａ、５５００Ｄａ、６０００Ｄａ、６５００Ｄａ、７０００Ｄａ、７５００Ｄａ、８０００Ｄａ、８５００Ｄａ、９０００Ｄａ、９５００Ｄａ、もしくは１００００Ｄａまで、またはそれよりも大きな平均分子量を有し得る。
【０１６７】
一部の場合では、チオール基を遮蔽することにより、粘膜透過の増大が導かれ得る。例えば、ＰＯＺ化によりチオール基を遮蔽することができる。一部の場合では、ポリ２−オキサゾリン化合物の使用により、ＰＥＧ化リポソーム構造体と比べて粘膜透過の増大が導かれ得る。ＰＯＺはまた、ＰＥＧと比較してより容易に腎臓経路で排泄され得る。例えば、ＰＯＺ基は、ＰＥＧと比較して１％から１００％まで高い腎排泄を有し得る。ＰＯＺは、ＰＥＧよりも、約１％から、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％まで高い腎排泄を有し得る。一部の場合では、ＰＯＺ基は、ＰＥＧ基と比較してより生分解性であり得る。一部の場合では、生分解は、酸化的分解によって測定することができる。
【０１６８】
一部の場合では、ＰＯＺはまた、ＰＥＧと比較して腎臓経路によってより容易に排泄され得る。例えば、ＰＯＺ基は、ＰＥＧと比較して１％から１００％まで高い腎排泄を有し得る。ＰＯＺは、ＰＥＧよりも、約１％から、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％まで高い腎排泄を有し得る。一部の場合では、ＰＯＺ基は、ＰＥＧ基と比較してより生分解性であり得る。生分解は、一部の場合では酸化的分解によって測定することができる。
【０１６９】
一部の場合では、ポリマーを修飾することができる。ポリマー上の官能基にキャップ形成してポリマーの性質を変更することおよび／または官能基の反応性を改変する（例えば、低下させるまたは増大させる）ことができる。例えば、ラクチド含有ポリマーおよびグリコリド含有ポリマーなどのカルボン酸含有ポリマーのカルボキシル末端に、場合により、例えばエステル化によってキャップ形成することができ、ヒドロキシル末端に、場合により、例えばエーテル化またはエステル化によってキャップ形成することができる。ＰＥＧまたはその誘導体と上記の任意のポリマーの共重合体を使用してポリマー粒子を作製することができる。ある特定の実施形態では、ＰＥＧまたは誘導体は、共重合体の内部の位置に位置していてよい。あるいは、ＰＥＧまたは誘導体は、共重合体の末端部の付近または末端部に位置していてよい。例えば、上記の１つまたは複数のポリマーは、ポリエチレングリコールのブロックで終結していてよい。一部の実施形態では、コアポリマーは、ＰＥＧ化ポリマーと非ＰＥＧ化ポリマーの混和物であり得、ここで、ベースのポリマーは同じであってもよく（例えば、ＰＬＧＡおよびＰＬＧＡ−ＰＥＧ）、異なってもよい（例えば、ＰＬＧＡ−ＰＥＧおよびＰＬＡ）。ある特定の場合では、ナノ粒子を、ＰＥＧの領域が分相するか、でなければナノ粒子の表面に位置する条件下で形成することができる。表面局在化したＰＥＧ領域は、単独で表面変質剤の機能を発揮し得るまたは表面変質剤を含み得る。一部の場合では、ナノ粒子は、表面変質材料としてポリエチレングリコールのブロックで終結する１つまたは複数のポリマーから調製することができる。一部の場合では、ナノ粒子をＰＥＧでコーティングすることができる。一部の場合では、リポソームをＰＥＧでコーティングすることができる。一部の場合では、リポソームが形成され得る前にＰＥＧを脂質に結びつけることができる。
【０１７０】
ポリマーは、任意のサイズおよび重量のものであり得る。一部の場合では、ポリマーの重量は、所与のポリマーに関して変動し得るが、約２５ダルトンから、５０ダルトン、１００ダルトン、２００ダルトン、３００ダルトン、４００ダルトン、５００ダルトン、６００ダルトン、７００ダルトン、８００ダルトン、９００ダルトン、１０００ダルトン〜１，０００，０００ダルトン、１０００ダルトン〜５００，０００ダルトン、１０００ダルトン〜２５０，０００ダルトン、１０００ダルトン〜１００，０００ダルトン、５，０００ダルトン〜１００，０００ダルトン、５，０００ダルトン〜７５，０００ダルトン、５，０００ダルトン〜５０，０００ダルトン、または５，０００ダルトン〜２５，０００ダルトンであり得る。
【０１７１】
一部の場合では、ナノ粒子を遺伝子担体として使用することができる。一部の実施形態では、ナノ粒子を、負に荷電していてよい１つまたは複数の核酸と複合体を形成する１つまたは複数のポリカチオンポリマーで形成することができる。カチオン性ポリマーは、分子当たり少なくとも２つの正電荷を持ち、生理的条件（すなわち、体内または細胞内で生じるｐＨおよび塩条件）下で核酸に結合するのに十分な電荷密度および分子サイズを有する任意の合成または天然ポリマーであり得る。ある特定の実施形態では、ポリカチオンポリマーは、１つまたは複数のアミン残基を含有する。
【０１７２】
一部の場合では、治療剤、診断剤、予防剤、および／または栄養補助剤を含有するナノ粒子を粘膜透過増強性コーティングでコーティングすることができる。ナノ粒子は、微小粒子またはナノ粒子であり得る。コーティングは、任意の手段、技法、供給品、またはこれらの組合せを使用して適用することができる。粘膜透過増強性コーティングは、脂質、ポリマー、または任意の組合せと、共有結合により、または非共有結合により結びつけることができる。一部の実施形態では、粘膜透過増強性コーティングを非共有結合により結び付けることができる。他の実施形態では、脂質またはポリマーは、反応性官能基を含有し得る、または粘膜透過増強性コーティングを共有結合させることができる反応性官能基を組み入れることができる。
【０１７３】
ナノ粒子は、１つまたは複数の表面変質剤でコーティングされていてよいまたはそれを含有してよい。一部の場合では、表面変質剤により、直接的な治療効果、例えば、炎症の低減などをもたらすことができる。ナノ粒子を、ナノ粒子に中性付近のゼータ電位をもたらすコーティングなどでコーティングすることができる。コーティングは、ＰＥＧ化であり得る。コーティングは、部分コーティングであっても完全コーティングであってもよい。表面変質剤の例としては、これらに限定されないが、アニオン性タンパク質（例えば、アルブミン）を含めたタンパク質、界面活性物質、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、治療剤、およびポリマーが挙げられる。ポリマーは、ヘパリン、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）およびポロキサマー（poloxomer）（ポリエチレンオキシドブロック共重合体）も含み得る。ポリマーは、ＰＥＧ、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ１２７（登録商標）、ＰＥＧ２０００、または任意の誘導体、その改変バージョン、またはこれらの組合せであり得る。
【０１７４】
表面変質剤により、リポソーム構造体もしくはリポソーム粒子の電荷もしくは親水性を増大させること、または代わりに粒子と粘液の相互作用を低減し、それにより、粘液を通る運動性を促進することができる。表面変質剤により、ポリマー粒子またはリポソーム粒子、または粒子の画分が粘液中に移動するまたは粘液を通って移動する平均速度を増強することができる。適切な表面変質剤の例としては、これらに限定されないが、アニオン性タンパク質（例えば、血清アルブミン）、核酸、カチオン性界面活性物質（例えば、ジメチルジオクタデシル−臭化アンモニウム）などの界面活性物質、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、粘液溶解剤、または他の非粘膜接着剤が挙げられる。ある特定の薬剤、例えば、シクロデキストリンは、他の分子と包接錯体を形成することができ、追加的な部分への付着を形成するため、ならびに粒子表面および／または付着した分子もしくは部分の官能化を容易にするために使用することができる。一部の場合では、表面変質剤により、表面修飾を引き起こすことができる。表面変質剤はＰＥＧであり得、ＰＥＧは、リポソーム構造体に使用されるポリマーであり得る。表面修飾は修飾と交換可能である。一部の場合では、修飾とは、表面修飾を指し得る。他の場合では、修飾とは、表面修飾を指さない可能性がある。
【０１７５】
一部の場合では、粘液破壊剤を粒子に送達することができるまたは粒子に見出すことができる。粘液は、気道、ＧＩ管、眼および生殖器系などの外部環境に通常曝露される組織表面をコーティングする生物学的ゲルであり得る。粘液は、異物および病原性細菌を捕捉するまたは基礎をなす細胞に到達し、損傷または疾患を引き起こすことから遮断する防御的な関門を形成し得る。粘液は、水（約９５％）、糖タンパク質（２〜５％）、脂質、および塩から主に構成される。グリコシル化タンパク質は、ＭＵＣファミリーに由来し得る。経口、経鼻、経肺または膣内などの薬物投与の一部の経路では粘液が関門として作用し得る。ポリ核酸または他のカーゴを有するリポソーム構造体を、それらが粘液クリアランスによって除去される前に粘膜層を透過するように特別に設計する必要があり得る。したがって、捕捉および粘膜関門からの排泄を回避するため、ならびにナノ粒子に基づく薬物送達の利益を十分に活用するためには、粘膜透過および浸透を増強することが必須である。
【０１７６】
粘液破壊剤は、ＮＳＡＩＤ、Ｂ−カテニンに対するｍｉＲＮＡまたは粘液を破壊することが分かっている可能性がある薬剤であってよい。粘液破壊剤は、表面変質剤であってよい。一部の場合では、粘液を破壊することとは、粘液産生の排除であってよい。他の場合では、粘液を破壊することとは、粘液産生の低減であってよい。例えば、粘液の減少とは、粘液を生成する細胞を標的とすることによって粘液産生を低減することを意味し得る。粘液の破壊とは、粘液の粘性を調整することも意味し得る。例えば、粘液の破壊は、粘液の粘性を緩めることを意味し得る。
【０１７７】
一部の場合では、リポソーム構造体は、ＮＳＡＩＤを含み得る。ＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、アスピリン、ケトプロフェン、ナプロキセン、エトドラク、フェノプロフェン、ジクロフェナク、フルルビプロフェン、ケトロラク、ピロキシカム、インドメタシン、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、オキサプロジン、ケトプロフェン、ファモチジン、メクロフェナム酸、トルメチン、サルサレート、またはこれらの組合せであり得る。
【０１７８】
一部の場合では、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）を処置するためのＲＮＡｉ治療薬であるＣＥＱ５０８を、リポソーム複合体に封入して、それを必要とする対象に送達することができる。ＣＥＱ５０８は、ＲＮＡ干渉（ｔｋＲＮＡｉ）プラットフォームを利用することによって作用し得る。ＣＥＱ５０８は、形成異常組織に進入し、ＲＮＡｉ経路におけるメディエーターである低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）のペイロードを放出するように工学的に操作された弱毒化細菌を含み得る。ｓｈＲＮＡは、古典的ＦＡＰにおいて調節不全になることが公知であるベータカテニンのｍＲＮＡを標的とする。ＣＥＱ５０８は、小腸および大腸の上皮細胞におけるベータカテニンタンパク質のレベルを低下させるために投与される処置であり得る。
【０１７９】
一部の場合では、ナノ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）でコーティングされていてよいまたはそれを含有してよい。あるいは、ＰＥＧはナノ粒子を形成するために使用された脂質と共有結合した（例えば、内部でまたは一方もしくは両方の末端で）ブロックの形態であり得る。特定の実施形態では、ナノ粒子は、ＰＥＧを含有するブロック共重合体から形成することができる。ナノ粒子は、ＰＥＧを含有するブロック共重合体から調製することもでき、ここで、ＰＥＧは、ベースの脂質の末端に共有結合していてよい。代表的なＰＥＧ分子量は、３００Ｄａ、６００Ｄａ、１ｋＤａ、２ｋＤａ、３ｋＤａ、４ｋＤａ、６ｋＤａ、８ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａ、５０ｋＤａ、１００ｋＤａ、２００ｋＤａ、５００ｋＤａ、および１ＭＤａおよび３００ダルトン〜１ＭＤａの範囲内の全ての値を含み得る。一部の場合では、ＰＥＧは、約２ｋＤａであり得る。任意の所与の分子量のＰＥＧは、長さ、密度、および分枝などの他の特性が変動し得る。
【０１８０】
ＰＥＧコーティングは、任意の濃度で適用することができる。一部の場合では、脂質とＰＥＧの間の濃度は、５〜１０％であり得る。濃度は、少なくとも５％または最大で１０％であり得る。一部の場合では、濃度は、１０％を上回ってよい。濃度は、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％であってよいもしくは１０％を上回ってよい、または約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％であってよいもしくは１０％を上回ってよい。一部の実施形態では、ナノ粒子をＰＥＧ化粒子と非ＰＥＧ化粒子の混合物から調製することにより、ＰＥＧ表面密度を制御することができる。例えば、粒子をポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）とポリ（エチレングリコール）（ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）の混合物から調製することにより、ナノ粒子上のＰＥＧの表面密度を正確に制御することができる。
【０１８１】
一部の場合では、ＰＥＧコーティングを、ナノ粒子上の密度について測定することができる。定量的１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）を使用して、ナノ粒子上の表面ＰＥＧ密度を測定することができる。一部の場合では、密度は、１００ｎｍ２当たり１０〜１６本のＰＥＧ鎖であってよいまたは１００ｎｍ２当たり約１０〜１６本のＰＥＧ鎖であってよい。一部の場合では、密度は、１００ｎｍ２当たり１０〜１６本のＰＥＧ鎖を上回ってよい。この密度閾値は、ナノ粒子のリポソーム、粒子サイズ、および／またはＰＥＧの分子量を含めた種々の因子に応じて変動し得る。リポソームに適用することができるコーティングの密度は、表面変質材料および粒子の組成を含めた種々の因子に基づいて変動し得る。一実施形態では、１Ｈ  ＮＭＲによって測定される、ＰＥＧなどの表面変質材料の密度は、１ｎｍ２当たり０．１本、０．２本、０．５本、０．８本、１本、２本、５本、８本、１０本、１５本、２０本、２５本、４０本、５０本、６０本、７５本、８０本、９０本、もしくは１００本の鎖であってよい、または１ｎｍ２当たり約０．１本、０．２本、０．５本、０．８本、１本、２本、５本、８本、１０本、１５本、２０本、２５本、４０本、５０本、６０本、７５本、８０本、９０本、もしくは１００本の鎖であってよい。上記の範囲は、１ｎｍ２当たり０．１から１００単位までの全ての値を含み得る。一部の場合では、ＰＥＧなどの表面変質材料の密度は、１ｎｍ２当たり１〜２５本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約１〜約２５本の鎖であってよい、１ｎｍ２当たり１〜２０本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約１〜約２０本の鎖であってよい、１ｎｍ２当たり５〜２０本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約５〜約２０本の鎖であってよい、１ｎｍ２当たり５〜１８本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約５〜約１８本の鎖であってよい、１ｎｍ２当たり５〜１５本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約５〜約１５本の鎖であってよい、または１ｎｍ２当たり１０〜１５本の鎖であってよいもしくは１ｎｍ２当たり約１０〜約１５本の鎖であってよい。他の場合では、密度は、１ｎｍ２当たり０．０５〜０．５本のＰＥＧ鎖であってよいまたは１ｎｍ２当たり約０．０５〜約０．５本のＰＥＧ鎖であってよい。ＰＥＧは、１００ｎｍ２当たり１０〜２０本の鎖であってよい。
【０１８２】
ＰＥＧなどの表面変質材料の濃度も変動し得る。特定の実施形態では、表面変質材料の密度（例えば、ＰＥＧ）は、表面変質材料（例えば、ＰＥＧ）が伸長したブラシ立体配置をとるようなものであってよい。他の実施形態では、表面変質部分の質量は、ナノ粒子の質量の少なくとも１／１０，０００、１／７５００、１／５０００、１／４０００、１／３４００、１／２５００、１／２０００、１／１５００、１／１０００、１／７５０、１／５００、１／２５０、１／２００、１／１５０、１／１００、１／７５、１／５０、１／２５、１／２０、１／５、１／２、もしくは９／１０であってよい、または少なくとも約１／１０，０００、１／７５００、１／５０００、１／４０００、１／３４００、１／２５００、１／２０００、１／１５００、１／１０００、１／７５０、１／５００、１／２５０、１／２００、１／１５０、１／１００、１／７５、１／５０、１／２５、１／２０、１／５、１／２、もしくは９／１０であってよい。上記の範囲は、１／１０，０００から９／１０までの全ての値を含み得る。
【０１８３】
ＰＥＧまたはＰＯＺなどのポリマーは、密度が約０．０５μｇ／ｎｍ２から約０．２５μｇ／ｎｍ２までであってよい。ポリマーは、密度が約０．０１μｇ／ｎｍ２から、０．０２μｇ／ｎｍ２、０．０３μｇ／ｎｍ２、０．０４μｇ／ｎｍ２、０．０５μｇ／ｎｍ２、０．０６μｇ／ｎｍ２、０．０７μｇ／ｎｍ２、０．０８μｇ／ｎｍ２、０．０９μｇ／ｎｍ２、０．１μｇ／ｎｍ２、０．１５μｇ／ｎｍ２、０．２μｇ／ｎｍ２、０．２５μｇ／ｎｍ２、０．３μｇ／ｎｍ２、０．３５μｇ／ｎｍ２、０．４μｇ／ｎｍ２、０．４５μｇ／ｎｍ２、０．５μｇ／ｎｍ２、０．５５μｇ／ｎｍ２、０．６μｇ／ｎｍ２、０．６５μｇ／ｎｍ２、０．７μｇ／ｎｍ２、０．７５μｇ／ｎｍ２、０．８μｇ／ｎｍ２、０．８５μｇ／ｎｍ２、０．９μｇ／ｎｍ２、０．９５μｇ／ｎｍ２、または１μｇ／ｎｍ２までであってもよい。一部の実施形態では、μｇ／ｎｍ２は、密度に関しては、リポソーム構造体またはリポソーム構造体表面１ｎｍ２当たりのポリマーのμｇ数を指し得る。一部の実施形態では、μｇは、マイクログラムを指す。一部の実施形態では、ｎｍは、ナノメートルを指す。
【０１８４】
一部の場合では、ポリマーは、ポリ（２−アルキル−２−オキサゾリン）付加であってよい。ＰＥＧと同様に、ポリ（２−アルキル−２−オキサゾリン）は、「ステルス」性を有し、無毒性かつ生体適合性であり、さらなる官能化のためのペンダント基を有し、腎クリアランスの程度が高く生体内蓄積が少ない。ポリ（２−アルキル−２−オキサゾリン）により、構造体の粘膜透過を増大させることができる。一部の場合では、非ＰＥＧでコーティングされた構造体は、ＰＥＧでコーティングされた構造体に対して粘膜透過の増大を有し得る。粘膜透過の増大は、トランスウェル遊走アッセイによって測定することができる。粘膜透過を測定するために利用することができる追加的なアッセイは、多粒子追跡（ＭＰＴ）、チャンバーの使用、またはこれらの組合せを含み得る。一部の場合では、光退色（ＦＲＡＰ）後の蛍光回収および多粒子追跡（ＭＰＴ）など、粘膜透過アッセイにより、蛍光顕微鏡法を使用して粘液中のリポソーム構造体の動的移行を記録することができる。ＦＲＡＰは、蛍光標識されたリポソーム構造体をレーザー光に曝露させて浮遊白色スポットを形成するものであり得る。蛍光強度の回収によって拡散係数を得ることができ、これは、リポソーム構造体の流れがある領域への蛍光標識された分子の拡散後に生じ得る。
【０１８５】
粒子の最終結果およびヒトではどのように結果が変換されるかをよりよく理解するために、粘膜透過試験に動物モデルを採用してリポソーム構造体の治療効果または薬物動態学を調査することができ、これは、単離された腸の実験、ｉｎ  ｓｉｔｕ実験およびｉｎ  ｖｉｖｏ実験を主に含む。例えば、粘膜透過のｉｎ  ｓｉｔｕ実験では、小腸の一部を腹腔から切除し、その後、両端で結紮して隔離された「ループ」を作製することができ、リポソーム構造体をループ中に直接注射することができる。選択された期間後、動物を屠殺することができ、腸ループをさらなる形態または定量的分析のために体腔から取り出すことができる。
【０１８６】
一部の場合では、コーティングは、腸溶コーティングであってよい。腸溶コーティングを利用して、胃内での溶解は防止するまたは最小限にするが、小腸での溶解は可能にすることができる。一部の実施形態では、コーティングは、腸溶コーティングを含み得る。腸溶コーティングは、薬が小腸に到達する前に放出されることを防止する、経口薬に適用される関門であり得る。腸溶コーティングなどの遅延放出製剤によって、医薬形態の投与による胃に対する刺激的影響を、医薬形態が胃内で溶解するのを防ぐことにより低減することができる。そのようなコーティングはまた、酸不安定薬物を胃の酸性曝露から保護し、その代わりに、それらが分解しない可能性がある塩基性ｐＨ環境（腸のｐＨ５．５およびそれを上回る）に送達するために使用することもできる。
【０１８７】
溶解は、器官内で起こり得る。例えば、溶解は、十二指腸、空腸、腸骨、および／もしくは結腸内、またはこれらの任意の組合せで起こり得る。一部の場合では、溶解は、十二指腸、空腸、腸骨、および／または結腸の近傍で起こり得る。一部の腸溶コーティングは、胃内で見出される高度に酸性のｐＨでは安定であるが、より酸性度が低い（比較的より塩基性の）ｐＨでは急速に壊れる表面をもたらすことによって作用する。したがって、腸溶コーティングされたピルは、胃の酸性環境では溶解しない可能性があるが、小腸に存在するアルカリ性環境では溶解し得る。腸溶コーティング材料の例としては、これらに限定されないが、メチルアクリレート−メタクリル酸共重合体、酢酸コハク酸セルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（酢酸コハク酸ヒプロメロース）、酢酸フタル酸ポリビニル（ＰＶＡＰ）、メタクリル酸メチル−メタクリル酸共重合体、アルギン酸ナトリウムおよびステアリン酸が挙げられる。
【０１８８】
腸溶コーティングは、機能的濃度で適用することができる。腸溶コーティングは、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−アクリル酸エチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：１、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メタクリル酸−ｃｏ−メタクリル酸メチル）１：２、ポリ（メチルアクリレート−ｃｏ−メタクリル酸メチル−ｃｏ−メタクリル酸）７：３：１、またはこれらの任意の組合せであってよい。腸溶コーティングは、約６ｍｇ／（ｃｍ２）から約１２ｍｇ／（ｃｍ２）まで適用することができる。腸溶コーティングは、構造体に、約１ｍｇ／（ｃｍ２）から、２ｍｇ／（ｃｍ２）、３ｍｇ／（ｃｍ２）、４ｍｇ／（ｃｍ２）、５ｍｇ／（ｃｍ２）、６ｍｇ／（ｃｍ２）、７ｍｇ／（ｃｍ２）、８ｍｇ／（ｃｍ２）、９ｍｇ／（ｃｍ２）、１０ｍｇ／（ｃｍ２）、１１ｍｇ／（ｃｍ２）、１２ｍｇ／（ｃｍ２）、１３ｍｇ／（ｃｍ２）、１４ｍｇ／（ｃｍ２）、１５ｍｇ／（ｃｍ２）、１６ｍｇ／（ｃｍ２）、１７ｍｇ／（ｃｍ２）、１８ｍｇ／（ｃｍ２）、１９ｍｇ／（ｃｍ２）、約２０ｍｇ／（ｃｍ２）まで適用することもできる。
【０１８９】
一部の実施形態では、医薬組成物を、遅延放出をもたらすように設計された種々の薬物製剤から経口投与することができる。遅延経口剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、カプレットが挙げられ、また、包被されていてもされていなくてもよい複数の顆粒剤、ビーズ、粉末またはペレットも含み得る。錠剤およびカプセル剤は、経口剤形であり得、その場合、固体医薬担体を使用することができる。遅延放出製剤では、１つまたは複数の関門コーティングをペレット、錠剤、またはカプセル剤に適用して、薬物の遅い溶解および腸への付随的放出を容易にすることができる。一般には、関門コーティングは、治療用組成物または活性コア周囲の層または膜を包む、囲む、または形成する１つまたは複数のポリマーを含有し得る。一部の実施形態では、ポリ核酸などの活性薬剤を、投与後所定の時間で遅延放出をもたらすための製剤として送達することができる。遅延は、約１０分、約２０分、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間まで、または１週間までの長さであり得る。一部の場合では、粒子をコーティングするために腸溶コーティングを使用しなくてもよい。
【０１９０】
腸内放出を実現するために使用することができるポリマーまたはコーティングは、一部の場合では、アニオン性ポリメタクリレート（メタクリル酸とメチル−メタクリル酸またはアクリル酸エチルのいずれかの共重合生成物（ｃｏｐｏｌｙ−ｍｅｒｉｓａｔｅ）（Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標））、セルロースベースのポリマー、例えば、酢酸フタル酸セルロース（Ａｑｕａｔｅｒｉｃ（登録商標））またはポリビニル誘導体、例えば、酢酸フタル酸ポリビニル（Ｃｏａｔｅｒｉｃ（登録商標））であり得る。
【０１９１】
ポリ核酸のポリマーに対する比および使用する特定のポリマーの性質に応じて、ミニサークルＤＮＡなどのポリ核酸の放出の速度を制御することができる。一部の場合では、デポ注射製剤を、ポリ核酸を体組織と適合性のリポソームまたはマイクロエマルションに閉じ込めることによって調製することができる。注射製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通して濾過することによってまたは使用する直前に滅菌水もしくは他の滅菌注射媒体に溶解もしくは分散させることが可能な滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌することができる。
【０１９２】
ナノ粒子は、種々の形状および断面の幾何学的形状を有してよく、これは、ナノ粒子を作出するために使用されるプロセスに一部依存し得る。ある場合では、ナノ粒子は、球体、棒、管、薄片、繊維、プレート、針金、立方体、またはひげであり得る形状を有してよい。ナノ粒子は、上述の形状のうちの２つまたはそれよりも多くを有する粒子を含み得る。別の場合には、粒子の断面の幾何学的形状は、環状、楕円体、三角形、長方形、または多角形のうちの１つまたは複数であり得る。一実施形態では、ナノ粒子は、非球状粒子であり得る。例えば、ナノ粒子は、長さが異なる主要な軸を全部で３つ有し得る楕円体の形態を有し得る、または扁球もしくは回転長軸楕円体であり得る。あるいは、非球状ナノ粒子は、層状の形態であり得、層状とは、１つの軸に沿った最大寸法が他の２つの軸のそれぞれに沿った最大の寸法よりも実質的に小さい可能性がある粒子を指す。非球状ナノ粒子は、角錐台もしくは錐台、または長い棒の形状を有してもよい。一実施形態では、ナノ粒子は、形状が不規則であり得る。一実施形態では、複数のナノ粒子は、球状ナノ粒子から本質的になり得る。
細胞透過性ペプチド
【０１９３】
表１：細胞透過性ペプチド：１文字コードを使用。Ｌ−アミノ酸は大文字、Ｄ−アミノ酸は小文字。反復は括弧内に書かれている。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【０１９４】
本明細書に記載の細胞透過性ペプチドは、表１に記載されている１つまたは複数の配列を含み得る。一部の場合では、細胞透過性ペプチドは、高い相対的存在量のリシンまたはアルギニンなどの正に荷電したアミノ酸を含有し得るアミノ酸組成を有し得る。他の場合では、細胞透過性ペプチドは、極性／荷電アミノ酸と非極性、疎水性アミノ酸の交互パターンを含有する配列を有し得る。細胞透過性ペプチドは、ポリカチオン性またはカチオン性であり得る。細胞透過性ペプチドは、両親媒性であり得る。細胞透過性ペプチドは、原形質膜に移行し、標的細胞の細胞質または細胞小器官への種々の分子カーゴの送達を容易にする能力を有し得る。細胞透過性ペプチドは、細胞膜を直接透過し得る。細胞透過性ペプチドは、細胞へのエンドサイトーシスに媒介される進入を使用し得る。一部の場合では、細胞透過性ペプチドは、一過性の構造体の形成を通じた転座を使用し得る。細胞透過性ペプチドは、約５アミノ酸から約１０アミノ酸まで、約１０アミノ酸から約２０アミノ酸まで、約２０アミノ酸から約３０アミノ酸まで、約３０アミノ酸から約４０アミノ酸まで、約４０アミノ酸から約６０アミノ酸までを有するアミノ酸配列を有し得る。一部の場合では、細胞透過性ペプチドは、約１から、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、もしくは約９９アミノ酸まで、またはそれよりも多くのアミノ酸を有し得る。細胞透過性ペプチドは、天然アミノ酸、アミノ酸誘導体、Ｄ−アミノ酸、修飾アミノ酸、β−アミノ酸誘導体、α，α−二置換アミノ酸誘導体、Ｎ置換ａ−アミノ酸誘導体、脂肪族のまたは環状アミン、アミノ置換シクロアルキル誘導体およびカルボキシ置換シクロアルキル誘導体、アミノ置換芳香族誘導体およびカルボキシ置換芳香族誘導体、γ−アミノ酸誘導体、脂肪族ａ−アミノ酸誘導体、ジアミンおよびポリアミンを含み得ることが好ましい。さらなる修飾アミノ酸は当業者には公知である。
【０１９５】
一部の場合では、細胞透過性ペプチドは、そのそれぞれの一次アミノ酸配列内に、少なくとも２５％、少なくとも３０％の正に荷電したアミノ酸残基を有し得る。「正に荷電したアミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、特定のペプチド内に存在するリシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、およびアルギニン（Ｒ）残基全体を示し得る。ある特定の場合では、使用されるペプチドは、そのアミノ酸配列内に、約２５％から、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％または約３５％までの正に荷電したアミノ酸残基を含み得る。他の場合では、本明細書で使用されるペプチドは、アミノ酸配列内に、少なくとも約３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、または少なくとも６０％の正に荷電したアミノ酸残基を含み得る。
ポリ核酸カーゴ
【０１９６】
ポリ核酸を有するリポソームを本明細書において開示することができる。ポリ核酸は、ベクターであり得る。ポリ核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡに基づくものであり得る。ＤＮＡに基づくベクターは、非ウイルス性であり得、プラスミド、ミニサークル、閉鎖型直鎖ＤＮＡ（ｄｏｇｇｙｂｏｎｅ）、直鎖ＤＮＡ、および一本鎖ＤＮＡなどの分子を含む。脂質−核酸粒子中に存在し得る核酸は、公知である任意の形態の核酸を含む。本明細書で使用される核酸は、一本鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、または二本鎖ＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドであり得る。二本鎖ＤＮＡの例としては、構造遺伝子、制御および終結領域を含む遺伝子、ならびにウイルスまたはプラスミドＤＮＡなどの自己複製系が挙げられる。二本鎖ＲＮＡの例としては、ｓｉＲＮＡおよび他のＲＮＡ干渉試薬が挙げられる。一本鎖核酸としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、マイクロＲＮＡ、および三重鎖形成オリゴヌクレオチドが挙げられる。脂質−核酸粒子中に存在する核酸は、下記のオリゴヌクレオチド修飾のうちの１つまたは複数を含み得る。核酸は、一般に、核酸の特定の形態に応じて、種々の長さのものであり得る。例えば、特定の実施形態では、プラスミドまたは遺伝子は、約１，０００から１００，０００ヌクレオチド残基までの長さであり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１０から１００ヌクレオチドまでの長さの範囲であり得る。種々の関連する実施形態では、一本鎖、二本鎖、および三本鎖のオリゴヌクレオチドは、約１０から約５０ヌクレオチドまでの長さ、約２０から約５０ヌクレオチドまで、約１５から約３０ヌクレオチドまで、約２０から約３０ヌクレオチドまでの長さの範囲であり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２ヌクレオチドから１０ヌクレオチドまでの長さの範囲であり得る。
【０１９７】
ＤＮＡに基づくベクターは、ウイルス性であってもよく、それらとして、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、およびその他が挙げられる。ベクターは、ＲＮＡであってもよい。ＲＮＡベクターは、修飾されていないＲＮＡの直鎖形態であっても環状形態であってもよい。ＲＮＡベクターは、半減期が増大するように、免疫原性が低下するように、および／または翻訳のレベルが上昇するように設計された種々のヌクレオチド修飾を含んでもよい。ベクターは、本明細書で使用される場合、ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれかで構成されてよい。一部の実施形態では、ベクターは、ＤＮＡで構成されてよい。ベクターは、成長のために使用するＥ．ｃｏｌｉなどの原核生物において自律複製することが可能であってよい。一部の実施形態では、ベクターを生物体のゲノム中に安定に組み込むことができる。他の場合では、ベクターは、細胞質または核のいずれかに分離したままにすることができる。一部の実施形態では、ベクターは、標的化配列を含有し得る。一部の実施形態では、ベクターは、抗生物質耐性遺伝子を含有し得る。ベクターは、遺伝子発現を調節するための調節エレメントを含有し得る。一部の場合では、ミニサークルをリポソーム内に封入することができる。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、リポソーム構造体を送達するための方法および組成物を本明細書に記載することができる。リポソーム構造体は、治療用ポリ核酸を含有し得る。ポリ核酸は、遺伝子、高分子量ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド、ペプチド模倣体、リボザイム、ペプチド核酸、化学療法用分子などの化学薬剤、または、これらに限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ウイルス粒子、増殖因子サイトカイン、免疫モジュレート剤、および発現すると免疫系を刺激するまたは抑制する抗原を提示するタンパク質を含めた他のタンパク質を含めた任意の大きな分子であり得る。一部の場合では、遺伝子の一部をポリ核酸によって発現させることができる。遺伝子の一部は、３ヌクレオチドから全ゲノム配列全体までであり得る。例えば、遺伝子の一部は、内在性ゲノム配列の約１％から約１００％までであり得る。遺伝子の一部は、遺伝子の全ゲノム配列の約１％から、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または約１００％までであり得る。
【０１９９】
プラスミドベクターからの導入遺伝子の発現持続時間は、ベクターの細菌領域（すなわち、細菌の複製開始点をコードする領域およびスペーサー領域内にコードされ得る選択マーカー）によって媒介されるプロモーター不活化に起因して短縮する可能性がある。これにより、導入遺伝子発現の短い持続時間がもたらされ得る。導入遺伝子の発現持続時間を改善するための戦略は、プラスミドの細菌領域の除去を伴い得る。例えば、細菌領域を含有しない、ミニサークルベクターおよび「ｌｉｎｅａｒ  Ｍｉｎｉｍａｌｉｓｔｉｃ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」（ＭＩＤＧＥ）ベクターが開発された。ミニサークルベクターにおける細菌領域の除去により、導入遺伝子の発現持続時間が改善された。ミニサークルベクターでは、真核生物領域ポリアデニル化シグナルを真核生物領域プロモーターに共有結合により連結することができる。この連結（スペーサー領域）は、細菌領域を除去することまたは５００ｂｐまでの長さのスペーサー配列（スペーサー領域）で置き換えることができるプラスミドベクターを用いてｉｎ  ｖｉｖｏにおける発現持続時間を改善することができるので、少なくとも５００ｂｐのスペーサー配列を許容し得る。一部の場合では、ポリ核酸は、ミニサークルベクターであり得る、表３。
【０２００】
ミニサークル（ＭＣ）ＤＮＡとプラスミドＤＮＡは、どちらも、送達の直後に導入遺伝子産物が高レベルで産生されることを可能にし得る発現カセットを含有し得るので、ミニサークル（ＭＣ）ＤＮＡは、プラスミドＤＮＡと同様であり得る。一部の場合では、ＭＣは、ＭＣ  ＤＮＡが原核生物配列エレメント（例えば、細菌複製開始点および抗生物質耐性遺伝子）を欠き得るという点で異なり得る。骨格プラスミドＤＮＡからの原核生物配列エレメントの除去は、エピソームＤＮＡ単離前にＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおける部位特異的組換えによって実現することができる。原核生物配列エレメントの欠如により、ＭＣサイズがその親の全長（ＦＬ）プラスミドＤＮＡよりも縮小し得、これにより、トランスフェクション効率の増強が導かれ得る。結果は、それらのＦＬプラスミドＤＮＡ対応物と比較した場合に、ＭＣの方が多くの細胞にトランスフェクトすることができ、送達された際の高レベルの導入遺伝子発現の持続を可能にすることができるというものであり得る。
【０２０１】
一部の場合では、ミニサークルＤＮＡは、細菌複製開始点を含まなくてよい。例えば、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖ＤＮＡは、細菌複製開始点配列の約５０％から細菌複製開始点の１００％までの細菌複製開始点を含まなくてよい。一部の場合では、細菌複製開始点は短縮型または不活性である。ポリ核酸は、細菌複製開始点を最初にコードしたベクターに由来し得る。細菌複製開始点全体またはその一部を除去し、細菌複製開始点を含まないポリ核酸を残すための方法を利用することができる。一部の場合では、細菌複製開始点は、アデニンおよびチミン含有量が高いことによって同定することができる。
【０２０２】
ミニサークルＤＮＡベクターは、従来のプラスミドＤＮＡから、非ウイルス遺伝子治療およびワクチン接種のために使用されるｉｎ  ｖｉｖｏでのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおける部位特異的組換えによって導き出される高次コイルの最小発現カセットであり得る。ミニサークルＤＮＡは、抗生物質耐性遺伝子、複製開始点、および／または細菌ＤＮＡに固有の炎症性配列などの細菌の骨格配列を欠くまたはそれが減少している可能性がある。ミニサークルは、それらの改善された安全性プロファイルに加えて、導入遺伝子発現の効率を大きく上昇させ得る。
【０２０３】
リポソームは、（カーゴ重量／リポソームの重量）×１００で定義して、１００重量％を上回るまでの容量を有し得る。カーゴの最適なローディングは、リポソーム構造体の約１重量％から１００重量％までであり得る。例えば、リポソーム構造体は、構造体の約１重量％から約１０％まで、構造体の約１０％から約２０％まで、約２０％から約３０％まで、約３０％から約４０％まで、約４０％から約５０％まで、約５０％から約６０％まで、約６０％から約７０％まで、約７０％から約８０％まで、約８０％から約９０％まで、約９０％から約１００％まで、約１００％から約２００％まで、約２００％から約３００％まで、約３００％から約４００％まで、約４００％から約５００％までまたはそれよりも大きな重量のポリ核酸カーゴを含有し得る。
【０２０４】
カーゴは、例えば、小分子薬物、ペプチド、タンパク質、抗体、ＤＮＡ（例えばミニサークルＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡおよびｓｉＲＮＡを含む（リポソーム内にカーゴとして組み入れられたプラスミドＤＮＡによって発現させることもできる）、リポソーム内に組み入れられたＤＮＡによって発現させることができる蛍光色素ペプチドを含めた蛍光色素、またはこれらの任意の組合せを含み得る。
【０２０５】
一部の場合では、ポリ核酸は、異種配列をコードし得る。異種配列により、細胞内局在化がもたらされ得る（例えば、核を標的とするための核局在化シグナル（ＮＬＳ）；ミトコンドリアを標的とするためのミトコンドリア局在化シグナル；葉緑体を標的とするための葉緑体局在化シグナル；ＥＲ保持シグナルなど）。一部の場合には、ミニサークルＤＮＡまたは閉鎖型直鎖ＤＮＡなどのポリ核酸は、核局在化配列（ＮＬＳ）を含み得る。
【０２０６】
一部の実施形態では、ベクターは、ＡＰＣなどのタンパク質をコードする。ベクターは、１つまたは複数の核局在化配列（ＮＬＳ）を含み得る。いくつかのＮＬＳ配列は、約１から、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれよりも多くのＮＬＳであり得る。一部の実施形態では、ベクターは、アミノ末端またはアミノ末端付近に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれよりも多くのＮＬＳまたは約１よりも多く、約２よりも多く、約３よりも多く、約４よりも多く、約５よりも多く、約６よりも多く、約７よりも多く、約８よりも多く、約９よりも多く、約１０よりも多く、もしくはそれよりも多くのＮＬＳを含む、カルボキシ末端またはカルボキシ末端付近に、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれよりも多くのＮＬＳまたは約１よりも多く、約２よりも多く、約３よりも多く、約４よりも多く、約５よりも多く、約６よりも多く、約７よりも多く、約８よりも多く、約９よりも多く、約１０よりも多く、もしくはそれよりも多くのＮＬＳを含む、あるいはこれらの組合せを含む（例えば、アミノ末端に１つまたは複数のＮＬＳを含み、カルボキシ末端に１つまたは複数のＮＬＳを含む）。１つよりも多くのＮＬＳが存在する場合、それぞれを他とは独立して選択することができ、したがって、単一のＮＬＳが１コピーよりも多くに存在し得る、かつ／または１つもしくは複数のコピーに存在する１つもしくは複数の他のＮＬＳと組み合わせて存在し得る。
【０２０７】
ＮＬＳの非限定的な例としては、アミノ酸配列ＰＫＫＫＲＫＶを有するＳＶ４０ウイルスラージＴ抗原のＮＬＳ；ヌクレオプラスミン由来のＮＬＳ（例えば、配列ＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫＫを有する、２つの部分からなるヌクレオプラスミンＮＬＳ）；アミノ酸配列ＰＡＡＫＲＶＫＬＤまたはＲＱＲＲＮＥＬＫＲＳＰを有するｃ−ｍｙｃ  ＮＬＳ；配列ＮＱＳＳＮＦＧＰＭＫＧＧＮＦＧＧＲＳＳＧＰＹＧＧＧＧＱＹＦＡＫＰＲＮＱＧＧＹを有するｈＲＮＰＡ１  Ｍ９  ＮＬＳ；インポーチン−アルファ由来のＩＢＢドメインの配列ＲＭＲＩＺＦＫＮＫＧＫＤＴＡＥＬＲＲＲＲＶＥＶＳＶＥＬＲＫＡＫＫＤＥＱＩＬＫＲＲＮＶ；筋腫Ｔタンパク質の配列ＶＳＲＫＲＰＲＰおよびＰＰＫＫＡＲＥＤ；ヒトｐ５３の配列ＰＯＰＫＫＫＰＬ；マウスｃ−ａｂｌ  ＩＶの配列ＳＡＬＩＫＫＫＫＫＭＡＰ；インフルエンザウイルスＮＳ１の配列ＤＲＬＲＲおよびＰＫＱＫＫＲＫ；肝炎ウイルスデルタ抗原の配列ＲＫＬＫＫＫＩＫＫＬ；マウスＭｘ１タンパク質の配列ＲＥＫＫＫＦＬＫＲＲ；ヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼの配列ＫＲＫＧＤＥＶＤＧＶＤＥＶＡＫＫＫＳＫＫ；およびステロイドホルモン受容体（ヒト）グルココルチコイドの配列ＲＫＣＬＱＡＧＭＮＬＥＡＲＫＴＫＫに由来するＮＬＳ配列を挙げることができる。一般に、１つまたは複数のＮＬＳは、真核細胞の核内におけるミニサークルＤＮＡベクターまたは短い直鎖ＤＮＡベクターの検出可能な量での蓄積を駆動するのに十分な強度のものであり得る。真核細胞は、ヒト腸陰窩細胞であり得る。
【０２０８】
核内の蓄積の検出は、任意の適切な技法によって実施することができる。例えば、検出可能なマーカーをベクターに融合することができ、その結果、例えば、核の場所を検出するための手段（例えば、ＤＡＰＩなどの核に特異的な染色）と組み合わせて、細胞内の場所を可視化することができる。細胞核を細胞から単離することもでき、次いで、その内容物を、免疫組織化学的検査、ウエスタンブロット、または酵素活性アッセイなどの、タンパク質を検出するための任意の適切なプロセスによって分析することができる。本明細書のある実施形態は、リポソームカーゴの標的部位への時間依存的なｐＨにより誘発される放出を示し得る。本明細書のある実施形態は、複雑な多数のカーゴの細胞への送達を含有および提供し得る。追加的なカーゴは、小分子、抗体、ＤＮＡｓｅ阻害剤またはＲＮＡｓｅ阻害剤などの阻害剤であり得る。
【０２０９】
一部の場合では、粒子は、ＤＮＡｓｅ阻害剤を含有し得る。ＤＮＡｓｅ阻害剤は、粒子内または粒子上に局在していてよい。他の場合では、阻害剤をコードするポリ核酸を粒子内に封入することができる。他の場合では、阻害剤は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤−２（ＤＭＩ−２）などのＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤であってよい。ＤＭＩ−２は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．株番号５６０により産生させることができる。ＤＭＩ−２の構造は、４’’’Ｒ，６ａＲ，１０Ｓ，１０ａＳ−８−アセチル−６ａ，１０ａ−ジヒドロキシ−２−メトキシ−１２−メチル（mefhyl）−１０−［４’−［３’’−ヒドロキシ−３’’，５’’−ジメチル−４’’（Ｚ−２’’’，４’’’−ジメチル−２’’’−ヘプテノイルオキシ）テトラヒドロピラン−１’’−イルオキシ］−５’−メチルシクロヘキサン−１’−イルオキシ］−１，４，６，７，９−ペンタオキソ−１，４，６，６ａ，７，８，９，１０，１０ａ，１１−デカヒドロナフタセンであってよい。クロロキンなどの他の阻害剤も粒子内または粒子上、例えば粒子の表面上に封入することができる。
【０２１０】
ポリ核酸を腸管の細胞に送達することができる。例えば、ポリ核酸をリポソームによって腸陰窩幹細胞に送達することができる。例えば、送達されるポリ核酸は、（１）腸上皮幹細胞において通常は見出されないもの；（２）腸上皮幹細胞において通常見出されるが、生理的に有意なレベルでは発現しないもの；（３）腸上皮幹細胞において通常見出され、通常、幹細胞またはそれらの後代において所望の生理的レベルで発現するもの；（４）腸上皮幹細胞において発現するように改変することができる任意の他のＤＮＡ；および（５）上記の任意の組合せであってよい。
【０２１１】
代謝障害および内分泌障害を処置するためのタンパク質を含めた種々のタンパク質およびポリペプチドを腸陰窩幹細胞に送達することができる。タンパク質の例は、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、インスリン、抗利尿ホルモンおよび成長ホルモンである。障害としては、フェニルケトン尿症、糖尿病、有機酸性尿症、チロシン血症、尿素サイクル異常症、家族性抗コレステロール血症が挙げられる。フェニルケトン尿症、糖尿病、有機酸性尿症、チロシン血症、尿素サイクル異常症、家族性抗コレステロール血症における欠陥を補正することができるタンパク質またはペプチドのいずれかの遺伝子を幹細胞に導入し、その結果、タンパク質またはペプチド産物は腸上皮によって発現される。抗血友病因子（第８因子）、クリスマス因子（第９因子）および第７因子などの凝固因子も同様に腸上皮において産生させることができる。循環タンパク質の欠損を処置するために使用することができるタンパク質を腸上皮において発現させることもできる。循環タンパク質の欠損を処置するために使用することができるタンパク質は、例えば、アルブミン血症を処置するためのアルブミン、アルファ−１−抗トリプシン、ホルモン結合性タンパク質であり得る。さらに、正常な嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子の遺伝子を腸上皮の幹細胞に挿入することにより、嚢胞性線維症の腸の症状を処置することができる。アポリポタンパク質Ｂを挿入することにより、無ベータリポ蛋白血症を処置することができる。スクラーゼ−イソマルトース、ラクターゼ−フロリジンヒドロラーゼおよびマルターゼ−グルコアミラーゼを挿入することにより、二糖分解酵素不耐性を処置することができる。ビタミンＢ１２の吸収のための内因子またはビタミンＢ１２の吸収のための内因子／コバラミン複合体の受容体、ならびに胆汁酸の輸送体の挿入を腸上皮に挿入することができる。さらに、がんの処置のために、核酸によりコードされ得る任意の薬物を、局在化され、高濃度で分泌されるように腸上皮の幹細胞に挿入することができる。この点において、がんの処置のために、アンチセンスＲＮＡを幹細胞にコードさせることができ、アンチセンスの産生後、それをがん性細胞に組み入れることができることを当業者は容易に認識するであろう。
【０２１２】
一部の場合では、リポソーム構造体内に含まれるポリ核酸によりコードされるタンパク質を測定し、数量化することができる。一部の場合では、改変された細胞を単離し、改変された細胞に対してウエスタンブロットを実施して、タンパク質産生の存在および相対量を改変されていない細胞と比較して決定することができる。他の場合では、フローサイトメトリーを利用するタンパク質の細胞内染色を実施して、タンパク質産生の存在および相対量を決定することができる。追加的なアッセイを実施して、ＡＰＣなどのタンパク質が機能的であるかどうかを決定することもできる。例えば、ＡＰＣ導入遺伝子を発現する改変された細胞を細胞質基質β−カテニン発現について測定し、改変されていない細胞と比較することができる。改変された細胞の細胞質基質において改変されていない細胞と比較してβ−カテニンの発現が低減することにより、機能的なＡＰＣ導入遺伝子が示され得る。他の場合では、ＦＡＰのマウスモデルを利用して、ＡＰＣタンパク質をコードする導入遺伝子の機能性を決定することができる。例えば、ＦＡＰを有するマウスを、ＡＰＣをコードする改変された細胞を用いて処置することができ、無処置のマウスに対してＦＡＰ疾患の低減を測定することができる。
【０２１３】
一部の場合では、リポソームカーゴは、ポリ核酸に限定しなくてよい。１つまたは複数の治療剤または薬物が包被された、分散した、かつ／または共有結合もしくは非共有結合により結び付いたナノ粒子を本明細書において開示することができる。治療剤または薬物は、小分子、タンパク質、多糖または糖類、核酸分子、脂質、ペプチド模倣体、またはこれらの組合せであり得る。リポソーム構造体は、細胞、組織、器官、または対象に対して所望の効果を発揮することができる任意の分子または化合物を含み得る。そのような効果は、例えば、生物学的、生理的、または美容的であり得る。分子または化合物としては、例えば、核酸、例えば、抗体、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体断片；ヒト化抗体、組換え抗体、組換えヒト抗体、およびＰｒｉｍａｔｉｚｅｄ（商標）抗体など、サイトカイン、増殖因子、アポトーシス因子、分化−誘導因子、細胞表面受容体およびそれらのリガンドを含めたペプチドおよびポリペプチド；ホルモン；および小有機分子または化合物を含めた小分子を挙げることができる。一実施形態では、分子または化合物は、治療剤、またはその塩もしくは誘導体であり得る。治療剤誘導体は、それ自体が治療的に活性であってもよく、さらなる修飾で活性になるプロドラッグであってもよい。したがって、一実施形態では、分子または化合物誘導体は、修飾されていない薬剤と比較して治療的活性の一部または全部を保持し得、一方、別の実施形態では、治療用誘導体は治療的活性を欠く。
【０２１４】
種々の実施形態では、治療剤は、抗炎症性化合物、抗うつ薬、刺激薬、鎮痛薬、抗生物質、受胎調節薬、解熱薬、血管拡張薬、抗血管新生薬、細胞血管作用剤（ｃｙｔｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｇｅｎｔ）、シグナルトランスダクション阻害剤、心血管薬、例えば、抗不整脈剤、血管収縮剤、ホルモン、およびステロイドなどの任意の治療的に有効な薬剤または薬物を含む。ある特定の実施形態では、分子または化合物は、抗腫瘍薬、抗がん薬、腫瘍薬、抗新生物剤などとも称することができる腫瘍学的薬物であり得る。使用することができる腫瘍学的薬物の例としては、これらに限定されないが、アドリアマイシン、アルケラン、アロプリナール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎａｌ）、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、ａｒａＣ、三酸化ヒ素、アザチオプリン、ベキサロテン、ｂｉＣＮＵ、ブレオマイシン、静注用ブスルファン、経口ブスルファン、カペシタビン（ゼローダ）、カルボプラチン、カルムスチン、ＣＣＮＵ、セレコキシブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、シクロスポリンＡ、シタラビン、シトシンアラビノシド、ダウノルビシン、シトキサン、ダウノルビシン、デキサメタゾン、デクスラゾキサン、ドセタキセル（dodetaxel）、ドキソルビシン、ドキソルビシン、ＤＴＩＣ、エピルビシン、エストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシドおよびＶＰ−１６、エキセメスタン、ＦＫ５０６、フルダラビン、フルオロウラシル、５−ＦＵ、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）、ゲムツズマブ−オゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、ハイドレア、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓｔａｒ、ＣＰＴ−１１１）、レトロゾール、ロイコボリン、ロイスタチン、ロイプロリド、レバミソール、リトレチノイン、メガストロール、メルファラン、Ｌ−ＰＡＭ、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ナイトロジェンマスタード、パクリタキセル、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペントスタチン、ポルフィマーナトリウム、プレドニゾン、リツキサン、ストレプトゾシン、ＳＴＩ−５７１、タモキシフェン、タキソテレ、テモゾラミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）、テニポシド、ＶＭ−２６、トポテカン（Ｈｙｃａｒｎｔｉｎ）、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ベルバン（ｖｅｌｂａｎ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ＶＰ１６、およびビノレルビンが挙げられる。使用することができる腫瘍学的薬物の他の例は、エリプチシンおよびエリプチシン類似体または誘導体、エポチロン、細胞内キナーゼ阻害剤およびカンプトテシンである。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、リポソーム構造体は、検出可能な標識（例えば、標識は、放射性同位元素、蛍光化合物、酵素または酵素の補因子であり得る）にさらに付着させることができるイメージング剤を含み得る。活性部分は、鉄キレート、ガドリニウムまたはマンガンの放射性キレート、酸素、窒素、鉄、炭素、またはガリウムの陽電子放射体、４３Ｋ、５２Ｆｅ、５７Ｃｏ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３２Ｉ、または９９Ｔｃなどの放射性重金属などの放射性薬剤であり得る。そのような部分を含むリポソーム構造体をイメージング剤として使用し、ヒトなどの哺乳動物における診断への使用に有効な量で投与することができる。このように、イメージング剤の局在化および蓄積を検出することができる。イメージング剤の局在化および蓄積は、放射性シンチグラフィ、核磁気共鳴イメージング、コンピュータ断層撮影法、または陽電子放出断層撮影法によって検出することができる。当業者には明らかになる通り、投与される放射性同位元素の量は、放射性同位元素に依存する。当業者は、活性部分として使用される所与の放射性核種の特異的活性およびエネルギーに基づいて、投与されるイメージング剤の量を容易に処方することができる。一般には、用量当たり０．１〜１００ミリキュリーのイメージング剤、１〜１０ミリキュリー、および２〜５ミリキュリーを投与することができる。したがって、イメージング剤として有用な組成物は、０．１〜１００ミリキュリー、一部の実施形態では、好ましくは１〜１０ミリキュリー、一部の実施形態では、好ましくは２〜５ミリキュリー、一部の実施形態では、より好ましくは１〜５ミリキュリーを含み得る放射性部分とコンジュゲートした標的化部分を含み得る。標識を検出するために使用される検出の手段は、使用される標識の性質および使用される生体試料の性質に依存し、蛍光偏光、高速液体クロマトグラフィー、抗体捕捉、ゲル電気泳動、示差沈殿、有機抽出、サイズ排除クロマトグラフィー、蛍光顕微鏡法、または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイも含み得る。標的化部分とは、タンパク質、核酸、核酸類似体、炭水化物、または小分子も指し得る。実体は、例えば、小分子などの治療用化合物、または検出可能な標識などの診断用実体であり得る。場所は、組織、特定の細胞型、または細胞内区画であり得る。一実施形態では、標的化部分により、活性な実体の局在化を方向付けることができる。活性な実体は、小分子、タンパク質、ポリマー、または金属であり得る。核酸を含むリポソームなどの活性な実体は、治療、予防、または診断目的で有用であり得る。一部の場合では、部分により、リポソーム構造体が血液脳関門を透過することが可能になり得る。
【０２１６】
他の場合では、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）をとることができる。ＣＴは、５ｍｍまたはそれ未満のスライス厚で撮ることができる。ＣＴスキャンが５ｍｍを超えるスライス厚を有する場合、測定可能な病変の最小サイズはスライス厚の２倍になるはずである。一部の場合では、ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンを使用することができる。ＦＤＧ−ＰＥＴは、新しい病変を評価するために使用することができる。ベースライン時にＦＤＧ−ＰＥＴ陰性であり、経過観察時にＦＤＧ−ＰＥＴ陽性であることは、新しい病変に基づいて、進行性疾患（ＰＤ）の徴候である。ベースライン時にＦＤＧ−ＰＥＴを行っておらず経過観察時にＦＤＧ−ＰＥＴ陽性の場合：経過観察時のＦＤＧ−ＰＥＴ陽性がＣＴによって確認された新しい疾患部位に対応する場合、これはＰＤである。経過観察時のＰＤＧ−ＰＥＴ陽性がＣＴでの既存の疾患部位に対応する場合、これは解剖学的推測に基づいて進行していない可能性があり、これは、ＰＤではない可能性がある。一部の場合では、残留Ｘ線検査異常が線維症または瘢痕を示すと考えられる場合に生検と同様の様式で応答をＣＲにアップグレードするためにＦＤＧ−ＰＥＴを使用することができる。ＦＤＧ−ＰＥＴ陽性スキャン病変は、ＦＤＧ要求性が高く、減衰補正画像において取り込みが周囲組織の２倍を超えて大きい病変を意味する。
【０２１７】
一部の場合では、病変の評価を実施することができる。完全奏効（ＣＲ）は、全ての標的病変の消失であり得る。任意の病理学的リンパ節（標的または非標的）は、短軸に１０ｍｍ未満までの縮小を有し得る。部分奏効（ＰＲ）は、ベースラインの径和を参照として、標的病変の径和の少なくとも３０％の減少であり得る。進行性疾患（ＰＤ）は、最小の合計を参照として、標的病変の径和の少なくとも２０％の増大であり得る。２０％の相対的増大に加えて、合計から少なくとも５ｍｍの絶対的増大も実証されなければならない。安定疾患（ＳＤ）は、最小の径和を参照として、ＰＲの質への十分な縮小もなくＰＤの質への十分な増大もない場合がある。
【０２１８】
一部の場合では、非標的病変を評価することができる。非標的病変の完全奏効は、腫瘍マーカーレベルの消失および正常化であり得る。全てのリンパ節が非病理学的サイズ（短軸が１０ｍｍ未満）でなければならない。腫瘍マーカーが最初に正常な上限を超えている場合、完全な臨床応答とみなされる患者についてはそれらが正常化しなければならない。非ＣＲ／非ＰＤは、１つまたは複数の非標的病変の持続および／または正常の限界を超えた腫瘍マーカーレベルの維持である。進行性疾患は、１つもしくは複数の新しい病変の出現および／または既存の非標的病変の明らかな進行であり得る。通常、明らかな進行を標的病変の状態より優先すべきではない。
【０２１９】
一部の場合では、最良の全体的な応答は、処置の開始から疾患の進行／再発までに記録された最良の応答であり得る。
医薬組成物および製剤
【０２２０】
全体を通して記載されている組成物を医薬品に製剤し、疾患、例えば家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）を有すると診断された、それを必要とするヒトまたは哺乳動物を処置するために使用することができる。医薬品は、任意の追加的な治療薬と同時投与することができる。
【０２２１】
リポソーム構造体を用いて処置することができる疾患は、がん性または非がん性であり得る。疾患は、家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）、軽症型ＦＡＰ、がん、慢性炎症性腸疾患、慢性炎症性腸疾患、回腸クローン病またはこれらの任意の組合せであり得る。一部の場合では、疾患は、遺伝子スクリーニングによって同定することができる。例えば、遺伝子スクリーニングにより、対象において当該対象を乳がんにかかりやすくする可能性があるＢＣＲＡ突然変異を同定することができる。他の場合では、遺伝子スクリーニングにより、ＦＡＰをもたらす可能性があるＡＰＣ遺伝子の突然変異を同定することができる。疾患はまた、２、３挙げると、心血管疾患、神経変性疾患、眼の疾患、生殖器系疾患、胃腸疾患、脳疾患、皮膚疾患、骨格疾患、筋骨格疾患、肺疾患、胸部疾患であり得る。疾患は、嚢胞性線維症、テイ・サックス病、脆弱Ｘ症候群、ハンチントン病、神経線維腫症、鎌状赤血球、サラセミア、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、またはこれらの組合せなどの遺伝子疾患であり得る。疾患は、胃腸管内にポリープを生じさせ得る。一部の場合では、疾患は、ＦＡＰである。ＦＡＰはがんに進行する可能性がある。胃腸疾患は遺伝性であり得る。例えば、遺伝性胃腸疾患は、ジルベール症候群、毛細血管拡張症、ムコ多糖症（mucopolysaccaride）、オースラー・ウェーバー・ランデュ病、膵炎、角化棘細胞腫、胆道閉鎖症、モルキオ症候群、ハーラー症候群、ハンター症候群、クリグラー・ナジャー、ローター、ポイツ・ジェガース症候群、デュビン・ジョンソン、骨軟骨症、骨軟骨異形成症、ポリポーシス、またはこれらの組合せであり得る。
【０２２２】
経口投与に関しては、賦形剤として、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなどを挙げることができる。所望であれば、リポソーム組成物は、微量の無毒性の補助物質、例えば、湿潤剤、乳化用薬剤、または緩衝剤も含有してよい。
【０２２３】
組成物は、経口的に、皮下注射もしくは他の注射によって、静脈内に、脳内に、筋肉内に、非経口的に、経皮的に、経鼻的にまたは直腸に投与することができる。化合物または組成物が投与される形態は、化合物が投与される経路に少なくとも一部依存する。一部の場合では、リポソーム組成物を経口投与用の固体調製物の形態で使用することができる；調製物は、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などであり得る。錠剤製剤では、組成物は、一般には、添加剤、例えば、糖類またはセルロース調製物などの賦形剤、デンプンペーストまたはメチルセルロースなどの結合剤、充填剤、崩壊剤、および医療用調製物の製造に一般に使用される他の添加剤を用いて製剤化される。そのような剤形を調製するための方法は当業者には明らかであり得る。投与されるリポソーム組成物は、患者または対象を含めた生物系における治療的使用のための薬学的有効量の数量のナノ粒子を含有し得る。医薬組成物は、毎日投与することもでき、必要に応じて投与することもできる。ある特定の実施形態では、医薬組成物を対象に就寝前に投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物を就寝の直前に投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物を就寝前の約２時間以内、好ましくは就寝前の約１時間以内に投与することができる。別の実施形態では、医薬組成物を就寝の約２時間前に投与することができる。さらなる実施形態では、医薬組成物を就寝の少なくとも２時間前に投与することができる。別の実施形態では、医薬組成物を就寝の約１時間前に投与することができる。さらなる実施形態では、医薬組成物を就寝の少なくとも１時間前に投与することができる。またさらなる実施形態では、医薬組成物を就寝の１時間未満前に投与することができる。さらに別の実施形態では、医薬組成物を就寝の直前に投与することができる。医薬組成物は経口的にまたは直腸に投与される。
【０２２４】
組成物中の活性薬剤（複数可）の妥当な投与量（「治療有効量」）は、例えば、状態の重症度および経過、投与形式、特定の薬剤（複数可）の生物学的利用能、対象の年齢および体重、対象の臨床歴および活性薬剤（複数可）への応答、医師の自由裁量、またはこれらの任意の組合せに依存し得る。対象に投与される組成物中の活性薬剤（複数可）の治療有効量は、１回の投与によるか複数回の投与によるかにかかわらず、１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１０００ｍｇの範囲内であり得る。一部の実施形態では、１日に投与される各活性薬剤の範囲は、１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇまで、１日当たり体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり５００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり５００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり５００μｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ、体重１ｋｇ当たり５ｍｇ／用量〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり５ｍｇ／用量〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇ、１日当たり体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ、および１日当たり体重１ｋｇ当たり１０ｍｇ〜１日当たり体重１ｋｇ当たり約５０ｍｇであり得る。
【０２２５】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤、甘味料、塩、緩衝剤などを含む。薬学的に許容される担体は、これらに限定されないが、香味剤、甘味剤ならびに特定の治療用組成物を調製するために必要になり得る緩衝剤および吸収剤などの種々雑多な材料を含めた広範囲の材料から調製することができる。
【０２２６】
リポソーム複合体は、投与前の妥当な時間内に滅菌条件下で製剤化することができる。一部の場合では、二次治療を施行することもできる。例えば、化学療法または放射線療法などの別の治療を、複合体の投与前または投与後、例えば、１２時間〜７日以内に施行することができる。化学療法および放射線療法の両方などの治療の組合せを複合体の投与に加えて使用することができる。
【０２２７】
開示される構造体と組み合わせて使用することができる化学療法剤としては、これに限定されないが、有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）が挙げられる。化学療法剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびＮａｖｅｌｂｉｎｅ（商標）（ビノレルビン、５’−ノルアンヒドロブラスチン）も挙げることができる。さらに他の場合では、化学療法剤として、カンプトテシン化合物などのトポイソメラーゼＩ阻害剤が挙げられる。本明細書で使用される場合、「カンプトテシン化合物」は、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（商標）（イリノテカンＨＣＬ）、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（商標）（トポテカンＨＣＬ）ならびにカンプトテシンに由来する他の化合物およびその類似体を含む。本明細書において開示される方法および組成物に使用することができる化学療法剤の別のカテゴリーは、ポドフィロトキシン誘導体、例えば、エトポシド、テニポシドおよびミトポドジドなどであり得る。本開示は、腫瘍細胞中の遺伝子材料をアルキル化する、アルキル化剤として公知の他の化学療法剤をさらに包含する。化学療法剤としては、限定することなく、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホラミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロマファジン、およびダカルバジンが挙げられる。本開示は、代謝拮抗薬を化学療法剤として包含する。化学療法剤の例としては、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン（azathioprime）、およびプロカルバジンが挙げられる。本明細書において開示される方法および組成物に使用することができるがん化学療法剤の追加的なカテゴリーとしては、抗生物質が挙げられる。例としては、限定することなく、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシンが挙げられる。本開示は、限定することなく、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、イホスファミドおよびミトキサントロンを含めた、他のがん化学療法剤または疾患を処置するための薬剤をさらに包含する。化学療法剤は、がんまたは非がん疾患などの疾患を処置するために使用され得る。非がん疾患は、ＦＡＰであり得る。がんは、結腸直腸がんであり得る。
【０２２８】
本明細書に開示される構造体は、細胞傷害性薬剤／抗新生物剤および抗血管新生剤を含めた他の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、がん細胞を攻撃し、死滅させる薬剤と定義することができる。一部の細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、腫瘍細胞中の遺伝子材料をアルキル化するアルキル化剤、例えば、シスプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、トリメチレンチオホスホラミド、カルムスチン、ブスルファン、クロラムブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロマファジン、およびダカルバジン（dacabazine）であり得る。他の細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、腫瘍細胞に対する代謝拮抗薬、例えば、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン、およびプロカルバジンであり得る。他の細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、抗生物質、例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、およびダウノマイシンであり得る。これらの化合物に関して多数のリポソーム製剤が市販されている。さらに他の細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、有糸分裂阻害剤（ビンカアルカロイド）であり得る。これらとしては、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびエトポシドが挙げられる。種々雑多な細胞傷害性薬剤／抗新生物剤は、タキソールおよびその誘導体、Ｌ−アスパラギナーゼ、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、ＶＭ−２６、イホスファミド、ミトキサントロン、およびビンデシンを含む。
【０２２９】
抗血管新生剤も使用することができる。開示される方法および組成物に使用するための適切な抗血管新生剤としては、ヒト化およびキメラ抗体を含めた抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦアプタマーおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。他の血管新生の阻害剤としては、アンジオスタチン、エンドスタチン、インターフェロン、インターロイキン１（αおよびβを含む）、インターロイキン１２、レチノイン酸、ならびにメタロプロテイナーゼ−１およびメタロプロテイナーゼ−２の組織阻害剤（ＴＩＭＰ−１およびＴＩＭＰ−２）が挙げられる。抗血管新生活性を有するトポイソメラーゼＩＩ阻害剤であるラゾキサンなどのトポイソメラーゼを含めた小分子も使用することができる。
【０２３０】
開示される構造体と組み合わせて使用することができる他の薬剤としては、これらに限定されないが、アシビシン；アクラルビシン；アコダゾール塩酸塩；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アバスチン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸塩；メシル酸ビスナフィド；ビゼレシン；ブレオマイシン硫酸塩；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸塩；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノマイシン；ダウノルビシン塩酸塩；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；ドキソルビシン塩酸塩；ドロロキシフェン；ドロロキシフェンクエン酸塩；プロピオン酸ドロモスタノロン；デュアゾマイシン；エダトレキサート；塩酸エフロルニチン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；エピルビシン塩酸塩；エルブロゾール；エソルビシン塩酸塩；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸エステルナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸塩；ヒドロキシウレア；イダルビシン塩酸塩；イホスファミド；イルモホシン；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩまたはｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロンアルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−Ｉ  ａ；インターフェロンガンマ−Ｉ  ｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；ランレオチド酢酸塩；レトロゾール；酢酸リュープロリド；リアロゾール塩酸塩；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸塩；マソプロコール；マイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；ミトキサントロン塩酸塩；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン；ペプロマイシン硫酸塩；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；ピロキサントロン塩酸塩；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニ��スチン；プロカルバジン塩酸塩；ピューロマイシン；ピューロマイシン塩酸塩；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；サフィンゴール塩酸塩；セムスチン；シムトラゼン；スパルフォセート二ナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸塩；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；テロキサントロン塩酸塩；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；トレミフェンクエン酸塩；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；ツブロゾール塩酸塩；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；ビンクリスチン硫酸塩；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンロイロシン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸塩が挙げられる。他の抗がん薬としては、これらに限定されないが、２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側化形態形成タンパク質−１；抗アントロゲン薬、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；グリシン酸アフィディコリン；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス調節因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；ベータラクタム誘導体；ベータ−アレチン；ベータクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビサジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフレート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリアポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシ���Ａ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クランベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタントラキノン；シクロプラタム；シペマイシン；シタラビンオクホスフェート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール、９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフール；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルニシン；ホルフェニメックス；ホルメスタン；フォストリエシン；フォテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活ペプチド；インスリン様増殖因子１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール、４−；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセテート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病抑制因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミソール；リアロゾール；直鎖ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リソクリンアミド７；ロバプラチン；ロムブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ラルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解性のペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド；ミトトキシン線維芽細胞増殖因子−サ���リン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多数の腫瘍抑制第１因子に基づく治療；マスタード抗がん剤；ミカペルオキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；窒素酸化物抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導因子；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパラガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリ硫酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害因剤；白金複合体；白金化合物；白金−トリアミン複合体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡに基づく免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ  １８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチンアミド；ログレチミ
ド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメックス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ  １模倣体；セムスチン；セネッセンス由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナルトランスダクション阻害剤；シグナルトランスダクションモジュレーター；単鎖抗原結合性タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプト酸ナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合性タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；超活性血管作用性小腸ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣体；チマルファシン；チモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンスズ；チラパザミン；二塩化物チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性の幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チロホスチン；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子治療薬；ベラレソール；ベラミン；バーディン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；ビタキシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマーが挙げられる。一実施形態では、抗がん薬は、５−フルオロウラシル、タキソール、またはロイコボリンであり得る。さらなる実施形態では、構造体を、化学療法、放射線、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸、およびＦＫ５０６など、抗体、またはＣＡＭ  ＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体もしくは他の抗体治療などの他の免疫除去剤（ｉｍｍｕｎｏａｂｌａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、サイトトキシン（cytoxin）、フルダラビン（fludaribine）、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、および照射と組み合わせて使用することができる。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリンを阻害し得る（シクロスポリンおよびＦ５０６）または増殖因子により誘導されるシグナル伝達に重要であり得るｐ７０Ｓ６キナーゼを阻害し得る（ラパマイシン）。
使用方法
【０２３１】
診断方法の代替を使用して、患者における家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）または他の病態に対する治療をモニタリングすることができる。患者に、有効量のナノ粒子を投与することができ、診断方法は、細胞ゲノム中に組み入れられたＡＰＣのレベルを決定するステップを含んでよく、そこで、患者における治療の開始前および治療中および／または治療後のＡＰＣレベルの差異により、患者が治療を完了したがどうかまたは病態が阻害もしくは排除されたかどうかを含めた、患者における治療の効果が証明される。他の場合では、リポソームによって送達する遺伝子は、対象に防止措置として投与することができる。例えば、対象は、診断された疾患を有さなくてもよく、がんなどの疾患にかかりやすいと思われてもよい。一部の場合では、がんは結腸がんであり得る。
【０２３２】
一部の場合では、ポリ核酸を含む構造体を用いて標的化することができる細胞は、上皮細胞、線維芽細胞、神経系細胞、ケラチノサイト、造血細胞、メラニン細胞、軟骨細胞、リンパ球（ＢおよびＴ）、マクロファージ、単球、単核細胞、心筋細胞（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ）、他の筋肉細胞、顆粒膜細胞、卵丘細胞、表皮細胞、内皮細胞、膵島細胞、血液細胞、血液前駆細胞、骨細胞、骨前駆細胞、神経幹細胞、始原幹細胞、肝細胞、ケラチノサイト、臍帯静脈内皮細胞、大動脈の内皮細胞、微小血管内皮細胞、線維芽細胞、肝臓星細胞、大動脈平滑筋細胞、心筋細胞（ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅ）、ニューロン、クッパー細胞、平滑筋細胞、シュワン細胞、および上皮細胞、赤血球、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、好塩基球、脂肪細胞、軟骨細胞、膵島細胞、甲状腺細胞、副甲状腺細胞、耳下腺の細胞、腫瘍細胞、グリア細胞、アストロサイト、赤血球、白血球、マクロファージ、上皮細胞、体細胞、下垂体細胞、副腎細胞、毛髪細胞、膀胱細胞、腎臓細胞、網膜細胞、桿体細胞、錐体細胞、心臓細胞、ペースメーカー細胞、脾臓細胞、抗原提示細胞、記憶細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、筋肉細胞、卵巣細胞、子宮の細胞、前立腺細胞、膣上皮細胞、精子細胞、精巣の細胞、生殖細胞、卵細胞、ライディッヒ細胞、管周細胞、セルトリ細胞、ルテイン細胞、子宮頸部細胞、子宮内膜細胞、乳房細胞、濾胞細胞、粘液の細胞、線毛細胞、非ケラチン化上皮細胞、ケラチン化上皮細胞、肺細胞、杯細胞、円柱上皮細胞、ドパミン作動性細胞、扁平上皮細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、ドパミン作動性細胞、胚性幹細胞、線維芽細胞および胎児線維芽細胞であり得る。さらに、１つまたは複数の細胞は、これらに限定されないが、膵α細胞、膵β細胞、膵δ細胞、膵Ｆ細胞（例えば、ＰＰ細胞）、または膵ε細胞を含めた膵島細胞および／または細胞クラスターなどであり得る。細胞は、膵α細胞であり得る。別の例では、細胞は、腸陰窩細胞であり得る。
【０２３３】
一部の場合では、構造体によって送達することができるポリ核酸と接触させる細胞を遺伝子改変することができる。例えば、ポリ核酸により、それと接触させた細胞に形質導入することができる。本明細書に記載のポリ核酸を用いた形質導入の効率は、例えば、接触させた細胞の総数の２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、もしくは９９．９％よりも多くであり得る、または約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、もしくは９９．９％よりも多くであり得る。
【０２３４】
例えば、リポソームなどの構造体は、それを必要とする対象への導入後少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは１００日または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは１００日にわたって機能的であり得る。構造体は、対象への導入後、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２カ月または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２カ月にわたって機能的であり得る。リポソームなどの構造体は、対象への導入後、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、もしくは３０年または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、もしくは３０年にわたって機能的であり得る。一部の場合では、リポソームは、最大、レシピエントの寿命まで機能的であり得る。さらに、リポソームなどの構造体は、その正常な意図された働きの１００％で機能し得る。リポソームはまた、それらの正常な意図された働きの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％で機能し得る。リポソームの機能は、送達の効率、リポソームの持続性、リポソームの安定性、またはこれらの任意の組合せを指し得る。
【０２３５】
リポソームまたはリポソーム構造体はまた、それらの正常な意図された働きの１００％を超えて機能し得る。例えば、リポソームは、それらの正常な意図された働きの１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００またはそれを超える％で機能し得る。機能は、意図された使用を含み得る。例えば、機能的なリポソームは、ミニサークルＤＮＡベクターなどのカーゴを標的細胞に送達することができる。一部の場合では、機能は、リポソームからミニサークルＤＮＡベクターを受けた細胞のパーセントを含み得る。他の場合では、機能は、ポリ核酸からのタンパク質生成の頻度または効率を指し得る。例えば、リポソームにより、ＡＰＣなどの遺伝子の少なくとも一部分をコードするベクターを細胞に送達することができる。ベクターからのＡＰＣ生成の頻度または効率により、ベクターまたはリポソームの機能性について記述することができる。
【０２３６】
ミニサークルベクター濃度は、０．５ナノグラムから５０マイクログラムまでであり得る。ミニサークルベクター濃度は、約０．５ｎｇから、１ｎｇ、２ｎｇ、５ｎｇ、１０ｎｇ、５０ｎｇ、１００ｎｇ、１５０ｎｇ、２００ｎｇ、３００ｎｇ、４００ｎｇ、５００ｎｇ、６００ｎｇ、７００ｎｇ、８００ｎｇ、９００ｎｇ、１０００ｎｇ、１μｇ、２μｇ、５μｇ、１０μｇ、２０μｇ、３０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、または５０μｇまでであり得るもしくはそれを超え得る。一部の場合では、構造体によって細胞に導入することができる核酸（例えば、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ＲＮＡ）の量を変動させて、トランスフェクション効率および／または細胞生存能力を最適化することができる。一部の場合では、約１００ピコグラム未満の核酸を対象に導入することができる。一部の場合では、少なくとも約１００ピコグラム、少なくとも約２００ピコグラム、少なくとも約３００ピコグラム、少なくとも約４００ピコグラム、少なくとも約５００ピコグラム、少なくとも約６００ピコグラム、少なくとも約７００ピコグラム、少なくとも約８００ピコグラム、少なくとも約９００ピコグラム、少なくとも約１マイクログラム、少なくとも約１．５マイクログラム、少なくとも約２マイクログラム、少なくとも約２．５マイクログラム、少なくとも約３マイクログラム、少なくとも約３．５マイクログラム、少なくとも約４マイクログラム、少なくとも約４．５マイクログラム、少なくとも約５マイクログラム、少なくとも約５．５マイクログラム、少なくとも約６マイクログラム、少なくとも約６．５マイクログラム、少なくとも約７マイクログラム、少なくとも約７．５マイクログラム、少なくとも約８マイクログラム、少なくとも約８．５マイクログラム、少なくとも約９マイクログラム、少なくとも約９．５マイクログラム、少なくとも約１０マイクログラム、少なくとも約１１マイクログラム、少なくとも約１２マイクログラム、少なくとも約１３マイクログラム、少なくとも約１４マイクログラム、少なくとも約１５マイクログラム、少なくとも約２０マイクログラム、少なくとも約２５マイクログラム、少なくとも約３０マイクログラム、少なくとも約３５マイクログラム、少なくとも約４０マイクログラム、少なくとも約４５マイクログラム、または少なくとも約５０マイクログラムの核酸を各細胞試料に添加することができる（例えば、１つまたは複数の細胞に電気穿孔する）。一部の場合では、最適なトランスフェクション効率および／または細胞生存能力に必要な核酸（例えば、ｄｓＤＮＡ）の量は細胞型に特異的であり得る。
【０２３７】
一部の場合では、構造体の有効量とは、処置前の対象では低下している可能性がある少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを上昇させるのに十分な量またはがんの１つもしくは複数の症状を緩和するのに十分な量を意味し得る。例えば、有効量は、胃腸分化遺伝子、細胞周期阻害遺伝子、および腫瘍抑制因子遺伝子からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを、いかなる化合物での処置も伴わない参照値または発現レベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％、１５００％、またはそれよりも大きく上昇させるのに十分な量であり得る。
【０２３８】
一部の実施形態では、有効量とは、処置前の対象では上昇している可能性がある少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを低下させるのに十分な量またはがんの１つもしくは複数の症状を緩和するのに十分な量を意味する。例えば、有効量は、ヘッジホッグ経路遺伝子、ＭＹＣおよびＥＺＨ２からなる群から選択される少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを、いかなる化合物での処置も伴わない参照値または発現レベルと比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、１０００％、１５００％、またはそれよりも大きく低下させるのに十分な量であり得る。
【０２３９】
それを必要とする対象におけるがん処置の有効性を、（ａ）対象から得た試料中の少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを測定するステップ、（ｂ）ステップ（ａ）の少なくとも１つの遺伝子の発現レベルを参照値または以前の測定値と比較するステップ、および（ｃ）比較ステップに基づいてがん処置の有効性を決定するステップによって決定する方法を本明細書において開示することができる。例えば、試験された対象が、１）参照値もしくは以前の測定値と比較して；または２）モニタリングされている期間、例えば、１、２、３、４、５、６、もしくは７日、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２カ月もしくはそれよりも長くにわたって、少なくとも１つの遺伝子の発現の上昇を有する場合、処置は有効であり得る。既存の処置が有効でない可能性がある場合、試験された対象に対して新しい処置または既存の処置の投与量の増加（例えば、対象に投与する構造体の投与量を増加させる）を模索すべきである。他の場合では、より頻繁な投与を実施することができる。
【０２４０】
対象に対する有効量は、対象の体重、サイズ、および健康；状態の性質および程度；ならびに投与のために選択される治療薬に依存する。所与の状況に対する有効量は、臨床医の技能および判断の範囲内に入り得る常套的な実験によって決定することができる。有効量とは、本明細書で使用される場合、測定可能な生物学的応答（例えば、細胞内のＡＰＣの存在）を生じさせるのに十分なナノ構造体の量を指し得る。ナノ構造体の実際の投与量レベルは、特定の対象および／または適用に関する所望の応答を実現するために有効であり得る量の抗酸化剤分子が投与されるように変動させることができる。選択される投与量レベルは、対処される組織の型、使用される細胞およびゲルビーズの型、他の薬物または処置との組合せ、処置される状態の重症度、ならびに処置される対象の健康状態および以前の病歴を含めた種々の因子に依存する。最小の用量を投与することができ、用量制限毒性がない場合、最小限有効な量まで用量を漸増させることができることが好ましい。
【０２４１】
一部の場合では、構造体を日常的に投与することができる。日常的投与は、１時間ごと、毎日、月に１回、または年に１回、構造体を対象に投与することを包含し得る。例えば、一部の場合では、対象に構造体を対象の生涯全体にわたって毎日投与することができる。他の場合では、構造体を対象における疾患の存在の持続時間にわたって毎日投与することができる。対象に、ポリ核酸を含む構造体を、疾患または障害を処置するために、疾患または障害が低減、制御、または排除されるまで投与することができる。疾患制御は、疾患の安定化を包含し得る。例えば、制御されているがんは、ＣＴスキャンによって測定して、成長または拡散が止まっている場合がある。がんは、結腸がんであり得る。他の場合では、構造体を予防的に投与することができる。一部の場合では、対象は、対象が結腸がんなどのがんにかかりやすいことを同定する遺伝子スクリーニングを受けていてよい。この場合、かかりやすい対象は、ポリ核酸を含む構造体を受けることによって予防的処置を開始することができる。対象が、対象が結腸がんにかかりやすくなる遺伝子突然変異を含有する場合では、その対象は、ＡＰＣ遺伝子の少なくとも一部分をコードするポリ核酸を含む構造体を用いた予防的処置を開始することができる。
【０２４２】
一部の場合では、予防的処置により、がんなどの疾患を防止することができる。局部的な再発（例えば、疼痛）、がんなどの疾患、心不全などの複合症候群または任意の他の医学的状態などの状態との関連で防止を使用することができる場合、防止は、組成物を受けていない対象と比べて対象における医学的状態の症状の頻度を低減する、またはその発症を遅延させる組成物を投与することを含み得る。したがって、がんの防止は、例えば、例えば統計学的かつ／または臨床的に有意な量で、予防的処置を受けている患者の集団において無処置の対照集団と比べて検出可能ながん性成長の数を減少させること、および／または処置集団において無処置の対照集団と比べて検出可能ながん性成長の出現を遅延させることを含む。感染の防止は、例えば、処置集団において無処置の対照集団と比べて感染の診断数を減少させること、および／または処置集団において無処置の対照集団と比べて感染の症状の発症を遅延させることを含む。疼痛の防止は、例えば、無処置の対照集団と比べて処置集団の対象が経験する痛覚の大きさを低減すること、あるいは痛覚を遅延させることを含む。
【０２４３】
ポリ核酸は、腫瘍抑制因子遺伝子をコードし得る。腫瘍抑制因子遺伝子は、一般に、何らかのやり方で細胞増殖を阻害することができるタンパク質をコードし得る。これらの「ブレーキ」の１つまたは複数の喪失が、がんの発生の一因となり得る。５つの広範なクラスのタンパク質が、腫瘍抑制因子遺伝子によりコードされると一般に認識され得る：細胞内タンパク質、例えば、細胞周期の特定の段階を通じた進行を調節するまたは阻害することができるｐ１６サイクリン−キナーゼ阻害剤など、細胞増殖を阻害するように機能し得る分泌型ホルモンの受容体（例えば、腫瘍由来増殖因子β）、ＤＮＡが損傷され得るまたは染色体が異常である場合に細胞周期を静止させるチェックポイント制御タンパク質、アポトーシスを促進し得るタンパク質、ＤＮＡ修復に関与する酵素、またはこれらの組合せ。ＤＮＡ修復酵素は細胞増殖を阻害するのに直接機能しない可能性があるが、ＤＮＡのエラー、ギャップ、または切断端を修復する能力を失った細胞には、細胞の成長および増殖の制御に極めて重要である遺伝子を含めた多くの遺伝子の突然変異が蓄積する。したがって、ＤＮＡ修復酵素をコードする遺伝子の機能喪失型突然変異により、他の腫瘍抑制因子遺伝子の不活化ならびに癌遺伝子の活性化が促進される可能性がある。一般に、細胞増殖の制御には１コピーの腫瘍抑制因子遺伝子で十分であるので、腫瘍発達を促進するためには腫瘍抑制因子遺伝子の両方の対立遺伝子が喪失または不活化されなければならない。したがって、腫瘍抑制因子遺伝子の腫瘍形成性の機能喪失型突然変異は劣性に作用する。腫瘍抑制因子遺伝子は、多くのがんにおいて、任意のタンパク質の産生を防止するまたは非機能的タンパク質の産生を導く欠失または点突然変異を有する。一部の場合では、タンパク質をコードする腫瘍抑制因子遺伝子を導入することにより、対象における疾患を好転させる、疾患を防止する、または疾患を処置することができる。
【０２４４】
一部の場合では、腫瘍抑制因子遺伝子であるＡＰＣの突然変異対立遺伝子を遺伝によって受け継ぐ対象は、結腸がんが発生する高いリスクを有する可能性がある。別の腫瘍抑制因子遺伝子の突然変異対立遺伝子を１つ遺伝によって受け継ぐことにより、対象に特定の腫瘍が発生する確率がほぼ１００パーセントまで上昇する。一部の場合では、ＡＰＣの突然変異対立遺伝子、または腫瘍抑制因子遺伝子を遺伝によって受け継いだ対象は、本明細書に記載の構造体を受けることができる。一部の場合では、構造体は、対象に遺伝によって受け継がれた突然変異対立遺伝子によって産生されるタンパク質をコードするポリ核酸を含有し得る。突然変異対立遺伝子は、ＡＰＣなどの腫瘍抑制因子タンパク質であり得る。タンパク質は、ＧＬＢ１、ＤＥＦＡ５、ＷＡＣ、ＤＥＦＡ６、またはこれらの組合せであってもよい。追加的な腫瘍抑制因子遺伝子を送達することができる。一部の場合では、腫瘍抑制因子は、コイルドコイル（ＷＡＣ）遺伝子を有するＷＷドメイン含有アダプターであり得る。
【０２４５】
機能喪失型突然変異を有する遺伝子のリストは大きく、百単位である。一部の場合では、the  Bioinformatics  and  Systems  Medicine  Laboratory  of  Vanderbilt  University  Medical  Center、the  TS  GENE  TUMOR.  SUPPRESSOR  GENE  DATABASE、http://bioinfb.mc.vanderbiit.edu/TSGene/index.htmlなどのウェブサイトを使用することができる。７１６種のヒト遺伝子（６３７種のコード遺伝子および７９種の非コード遺伝子）、６２８種のマウス遺伝子、および５６７種のラット遺伝子を含むデータベースを使用して、本明細書に記載の構造体によって導入する遺伝子を同定することができる。本開示の構造体は、記載されている遺伝子を含み得る。一部の場合では、構造体を利用して、機能喪失型突然変異（複数可）により新生物または腫瘍成長またはがんが導かれる可能性がある遺伝子を輸送することができ、当業者は、がんの機能喪失型突然変異（複数可）（ならびにがんの機能獲得型突然変異、本開示はそのような突然変異にも類似して適用可能であり得る）を十分に理解している。「腫瘍抑制因子」という用語は、本明細書では当技術分野において理解されている通り使用される、すなわち、腫瘍形成および／または拡散および／または過形成（変化した細胞が制御されていない様式で分裂し、それにより、組織のその領域内に過剰な細胞が導かれる）および／または異形成（過形成性細胞における追加的な遺伝子変化はますます異常な成長を導く；細胞および組織はもはや正常に見えない；細胞および組織は組織破壊する可能性がある）および／または上皮内癌（追加的な変化により細胞および組織がいっそう異常に見え、細胞がより大きな領域および変化した細胞を主に含有する関与する組織の領域に拡散する；細胞は、多くの場合、「退行する」またはより初期の能力のものになる、例えば、もはや肝臓特異的タンパク質を産生しない肝細胞；細胞は脱分化または退形成し得るおよび／または「良性腫瘍（複数可）」および／またはがんであり得る（悪性腫瘍（複数可）を含む）を含めた、新生物または腫瘍成長またはがんにおけるまたはそれに関与するまたはそれを導くまたはそれに寄与するまたはその因子である機能喪失型突然変異（複数可）を含むように使用される。標的とすることができる遺伝子の例は、その用語が本明細書で使用される場合、腫瘍抑制に関与するタンパク質をコードする遺伝子または任意の腫瘍抑制因子遺伝子（複数可）を含み（例えばＴＳ  ＧＥＮＥ  ＴＵＭＯＲ  ＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ  ＧＥＮＥ  ＤＡＴＡＢＡＳＥの任意の遺伝子を含む）、または「機能喪失」に関与するもしくは本開示における用語の使用と一致した腫瘍抑制因子遺伝子であり得る。
【０２４６】
リポソームなどの構造体によって送達することができる腫瘍抑制因子遺伝子は、ＡＰＣ、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＡＴＭ、ＢＣＬ１１Ｂ、ＢＬＭ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＡＲＳ、ＣＢＦＡ２Ｔ３、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１１、ＣＤＫ６、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＥＢＰＡ、ＣＨＥＫ２、ＣＲＥＢ１、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＹＬＤ、ＤＤＸ５、ＥＸＴ１、ＥＸＴ２、ＦＢＸＷ７、ＦＨ、ＦＬＴ３、ＦＯＸＰ１、ＧＰＣ３、ＩＤＨ１、ＩＬ２、ＪＡＫ２、ＭＡＰ２Ｋ４、ＭＤＭ４、ＭＥＮ１、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＮＦ１、ＮＦ２、ＮＯＴＣＨ１、ＮＰＭ１、ＮＲ４Ａ３、ＮＵＰ９８、ＰＡＬＢ２、ＰＭＬ、ＰＴＥＮ、ＲＢ１、ＲＵＮＸ１、ＳＤＨＢ、ＳＤＨＤ、ＳＭＡＲＣＡ４、ＳＭＡＲＣＢ１、ＳＯＣＳ１、ＳＴＫ１１、ＳＵＦＵ、ＳＵＺ１２、ＳＹＫ、ＴＣＦ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＰ５３、ＴＳＣ１、ＴＳＣ２、ＶＨＬ、ＷＲＮ、ＷＴ１、およびこれらの任意の組合せであり得る。送達することができる遺伝子は、配列番号７６１〜配列番号７６４のいずれか１つと約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは約１００％相同であり得るまたは約５０％から、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％まで相同であり得る。
表２：送達用遺伝子の要約
【表２−１】
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【表２−２】
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【表２−３】
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【０２４７】
適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、殺菌性抗生物質および製剤を意図されたレシピエントの体液と等張にする溶質を含有し得る水性および非水性滅菌注射液；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液を含み得る。適切な不活性担体は、ラクトースなどの糖を含み得る。一部の場合では、組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションのような形態をとってよく、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化用薬剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）を含有し得る。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水を用いて構成するための散剤の形態であり得る。
【０２４８】
担体は、例えば、水、エタノール、１つまたは複数のポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、植物油（例えば、ピーナッツ油、トウモロコシ油、ゴマ油など）などの油、およびこれらの組合せを含有する溶媒または分散媒であり得る。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散の場合では必要な粒子サイズを維持することによっておよび／または界面活性物質を使用することによって維持することができる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。遊離酸または塩基または薬理学的に許容されるその塩としての活性化合物の溶液および分散を、これらに限定されないが、界面活性物質、分散剤、乳化剤、ｐＨ変更剤、およびこれらの組合せを含めた１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と適切に混合した水または別の溶媒または分散媒中に調製することができる。適切な界面活性物質は、アニオン性、カチオン性、両性または非イオン性表面活性剤であり得る。適切なアニオン性界面活性物質としては、これらに限定されないが、カルボン酸イオン、スルホン酸イオンおよび硫酸イオンを含有するものが挙げられる。アニオン性界面活性物質の例としては、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどの長鎖スルホン酸アルキルおよびスルホン酸アルキルアリール；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどのスルホコハク酸ジアルキルナトリウム；スルホコハク酸ビス−（２−エチルチオキシル）ナトリウムなどのスルホコハク酸ジアルキルナトリウム；およびラウリル硫酸ナトリウムなどの硫酸アルキルのナトリウム、カリウム、アンモニウムが挙げられる。カチオン性界面活性物質としては、これらに限定されないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム（cetrimoniuni  bromide）、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、ポリオキシエチレンおよびココナッツアミンなどの四級アンモニウム化合物が挙げられる。非イオン性界面活性物質の例としては、モノステアリン酸エチレングリコール、ミリスチン酸プロピレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、ステアリン酸グリセリル、ポリグリセリル−４−オレイン酸、アシル化ソルビタン、アシル化スクロース、ＰＥＧ−１５０ラウレート、ＰＥＧ−４００モノラウレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、ステアロイルモノイソプロパノールアミド、およびポリオキシエチレン水素化獣脂アミドが挙げられる。両性界面活性物質の例としては、Ｎ−ドデシル−ベータ−アラニンナトリウム、Ｎ−ラウリル−ベータ−イミノジプロピオン酸ナトリウム、ミリストアンフォアセテート、ラウリルベタインおよびラウリルスルホベタインが挙げられる。製剤は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含有し得る。適切な防腐剤としては、これらに限定されないが、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールが挙げられる。製剤は、活性薬剤（複数可）の分解を防止するための抗酸化剤も含有し得る。製剤は、一般には、復元時に非経口投与用にｐＨ３〜８に緩衝処理される。適切な緩衝剤としては、これらに限定されないが、リン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、およびクエン酸緩衝剤が挙げられる。多くの場合、非経口投与用の製剤には水溶性ポリマーを使用することができる。適切な水溶性ポリマーとしては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０２４９】
滅菌注射液は、必要量の活性化合物を妥当な溶媒または分散媒中に、必要に応じて上に列挙されている賦形剤のうちの１つまたは複数と共に組み入れ、その後、濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散は、種々の滅菌活性成分を、基本的な分散媒および上に列挙されているものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製することができる。滅菌注射液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製の方法は活性成分とそれに加えて任意の追加的な所望の成分の粉末が予め滅菌濾過したその溶液から得られる、真空乾燥およびフリーズドライ技法であってよい。粉末は、粒子が、粒子の溶解を増大させ得る多孔質の性質になるような様式で調製することができる。多孔質粒子を作製するための方法は当技術分野で周知である。
【０２５０】
製剤は、眼用製剤または局所用形態であってよい。眼内投与のための医薬製剤は、１つまたは複数のポリマー−薬物コンジュゲートから形成された粒子の滅菌水溶液または懸濁液の形態であってよい。許容される溶媒としては、例えば、水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、および等張食塩水が挙げられる。製剤は、１，３−ブタンジオールなどの非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌溶液、懸濁剤、またはエマルションであってもよい。さらに他の実施形態では、リポソームを粘膜への局所投与用に製剤化することができる。局所投与用の適切な剤形としては、クリーム剤、軟膏剤、膏薬、噴霧剤、ゲル、ローション剤、エマルション、液体、および経皮吸収パッチが挙げられる。製剤を経粘膜、経上皮、経内皮、または経皮投与用に製剤化することができる。組成物は、１つまたは複数の化学的透過エンハンサー、膜透過性剤、膜輸送剤、皮膚軟化剤、界面活性物質、安定剤、およびこれらの組合せを含有する。一部の実施形態では、リポソームを溶液もしくは懸濁剤などの液体製剤として、ローション剤もしくは軟膏剤などの半固形製剤として、または固形製剤として投与することができる。一部の実施形態では、リポソームを、眼内または膣内または直腸内などの粘膜への局所的適用のために、点眼剤などの溶液および懸濁剤を含めた液剤として、または軟膏剤もしくはローション剤などの半固形製剤として製剤化することができる。製剤は、皮膚軟化剤、界面活性物質、乳化剤、および透過エンハンサーなどの１つまたは複数の賦形剤を含有し得る。
【０２５１】
一部の場合では、製剤は、単位用量または複数用量容器、例えば、密閉アンプルおよびバイアル中に入れて提供することができ、使用する直前に滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結またはフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保管することができる。経口投与に関しては、組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、結晶セルロースもしくはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクもしくはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンもしくはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤を用い、従来の技法によって調製された錠剤またはカプセル剤の形態をとってよい。一部の場合では、錠剤をコーティングすることができる。経口投与用の液体調製物は、例えば、溶液、シロップ剤もしくは懸濁剤の形態をとってよい、または、使用前に水または他の適切なビヒクルを用いて構成するための乾燥品として提供することができる。そのような液体調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ剤、セルロース誘導体または水素化された食用脂肪）；乳化用薬剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性のエステル、エチルアルコールまたは精留植物油）；および防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸またはソルビン酸）などの薬学的に許容される添加剤を用い、従来の技法によって調製することができる。調製物は、必要に応じて、緩衝塩、香味料、着色剤および甘味剤も含有し得る。経口投与用の調製物は、活性化合物の徐放がもたらされるように適切に製剤化することができる。頬側投与に関しては、組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤またはロゼンジの形態をとってよい。一部の場合では、組成物を埋め込みまたは注射用の調製物として製剤化することもできる。したがって、例えば、構造体を、適切なポリマー材料、水性材料、および／もしくは親水性材料、または樹脂と共に、あるいはやや難溶性の誘導体として（例えば、やや難溶性の塩として）製剤化することができる。化合物は、直腸組成物、クリーム剤またはローション剤、または経皮吸収パッチに製剤化することもできる。
【０２５２】
一部の場合では、医薬組成物は、塩を含み得る。塩は、比較的無毒性であってよい。薬学的に許容される塩の例としては、塩酸および硫酸などの鉱酸に由来するもの、ならびに、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸に由来するものが挙げられる。塩を形成するための適切な無機塩基の例としては、アンモニア、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、亜鉛などの水酸化物、炭酸塩、および炭酸水素塩が挙げられる。塩は、無毒性かつそのような塩を形成するのに十分強力であるものを含めた適切な有機塩基と形成することもできる。例示目的で、そのような有機塩基のクラスとして、モノアルキルアミン、ジアルキルアミン、およびトリアルキルアミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、およびトリエチルアミンなど；モノヒドロキシアルキルアミン、ジヒドロキシアルキルアミンまたはトリヒドロキシアルキルアミン、例えば、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンなど；アミノ酸、例えば、アルギニンおよびリシンなど；グアニジン；Ｎ−メチルグルコサミン；Ｎ−メチルグルカミン；Ｌ−グルタミン；Ｎ−メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；Ｎ−ベンジルフェネチルアミン；（トリヒドロキシメチル）アミノエタンなどを挙げることができる。
【０２５３】
一部の場合では、ナノ構造体は、約６時間、１２時間、１８時間、２４時間、３０時間、３６時間、４２時間、または４８時間の対象における循環半減期を有し得る。一部の実施形態では、ナノ粒子は、約４８時間よりも長い循環半減期を含み得る。一部の実施形態では、ポリマーの疎水性単量体の濃度を上昇させ、それによってナノ構造体を脱集合させるために必要な力を増大させることにより、循環半減期を増強することができる。
【０２５４】
一部の実施形態では、ナノ構造体を、比較的低いｐＨを有する環境に送達することにより、ナノ構造体の少なくとも部分的な脱集合が引き起こされる可能性がある。特に、一部のナノ構造体はｐＨ応答性を有し、低ｐＨに曝露すると、ナノ構造体は、少なくとも部分的に脱集合してナノ構造体のコアが露出する。理論または機構に束縛されることなく、一部の実施形態では、低ｐＨではナノ粒子のコアに存在するカチオン性単量体のカチオン性電荷が増大する可能性があり、カチオン性電荷の増大に起因する斥力により、ナノ構造体の少なくとも部分的な脱集合が引き起こされ得る。ナノ構造体の少なくとも部分的な脱集合により、ナノ構造体のコア内の結合しているポリ核酸が周囲の環境に曝露され得る。したがって、ナノ構造体の少なくとも部分的な脱集合により、ポリ核酸をそれらの最終的な標的に送達することが可能になり得る。少なくとも部分的な脱集合により、カチオン性単量体および疎水性単量体も周囲の環境に曝露され得、また、カチオン性単量体および／または疎水性単量体は膜破壊特性を有し得る。より詳細には、ナノ構造体を含むポリマーの第２のブロック内の単量体の曝露により、ナノ構造体を含有するあらゆる膜の破壊が誘導され得る。したがって、一部の実施形態では、ナノ構造体が細胞に取り込まれた後、ナノ構造体が少なくとも部分的に脱集合して、ポリ核酸がｐＨ応答性の様式で送達され得る。一部の実施形態では、ナノ構造体は、およそエンドソームｐＨまたはそれ未満で少なくとも部分的に脱集合し、したがって、ナノ構造体がエンドソームに取り込まれた後、エンドソームｐＨにより、ナノ構造体の脱集合が駆動され得る。次いで、少なくとも部分的に脱集合されたナノ構造体によりエンドソーム膜またはリポソーム膜が破壊され得、その結果、ポリヌクレオチドが特定の細胞の細胞質基質に送達され得る。
【０２５５】
一部の場合では、疾患のレベルをリポソーム処置レジームと順番にまたはそれと同時に決定することができる。標的病変に関する疾患のレベルは完全奏効（ＣＲ）：全ての標的病変の消失、部分奏効（ＰＲ）：ベースラインの合計ＬＤを参照として、標的病変の最長直径（ＬＤ）の合計の少なくとも３０％の減少、進行（ＰＤ）：処置が開始されてからまたは１つもしくは複数の新しい病変が出現してから記録された最小の合計ＬＤを参照として、標的病変のＬＤの合計の少なくとも２０％の増大、安定疾患（ＳＤ）：最小の合計ＬＤを参照として、ＰＲと定性化するのに十分な縮小もなくＰＤと定性化するのに十分な増大もない、として測定され得る。他の場合では、非標的病変を測定することができる。非標的病変の疾患のレベルは、完全奏効（ＣＲ）：全ての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正常化、非完全奏効：１つまたは複数の非標的病変の持続、進行（ＰＤ）：１つまたは複数の新しい病変の出現であり得る。既存の非標的病変の明らかな進行。
キット
【０２５６】
リポソーム組成物を含むキットを本明細書において開示することができる。本明細書において開示されるがん、病原体感染、免疫障害または疾患または状態を処置または防止するためのキットも本明細書において開示することができる。一部の場合では、キットは、核酸を含有する有効量のリポソームを単位剤形で含有する治療用または予防用リポソーム組成物を含み得る。一部の場合では、キットは、リポソームの治療用組成物を含み得る滅菌容器を含み、そのような容器は、箱、アンプル、ビン、バイアル、チューブ、袋、パウチ、ブリスター包装、または当技術分野で公知の他の適切な容器形態であり得る。そのような容器は、プラスチック製、ガラス製、ラミネート紙製、金属箔製、または医薬品の保持に適した他の材料製であり得る。
【実施例】
【０２５７】
（実施例１）
リポソーム調製
粘液透過性粒子（ＭＰＰ）を生成するために、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）／ＤＯＰＥ（ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン）／ＰＥＧ２０００をクロロホルム中、８０／２０／８％比で組み合わせることができる。脂質溶液をクロロホルム中で混合した後、混合物をまず窒素流によって、次いで真空中で、１２時間にわたって乾燥させることができる。適量の滅菌高抵抗力（１８．２ＭΩｃｍ）水を使用して、１ｍＭの脂質の最終濃度を実現することができる。得られた混合物を摂氏３７度で１６時間インキュベートしてリポソームを形成することができる。インキュベーション後、チップソニケーターを使用してリポソーム溶液を超音波処理して、小さな単層小胞を形成させることができる。
【０２５８】
動的光散乱を使用して、ナノ粒子サイズを決定することができ、表面を十分にＰＥＧ化できていることを示す理想的な中性付近のゼータ電位を、レーザードップラー流速測定によって測定することができる。
（実施例２）
親ベクターの構築およびトランスフェクション
【０２５９】
ｐＳＡＲ−ＭＴ誘導性発現プラスミドを以下の通り構築することができる。２つのオリゴヌクレオチド（５’−ＧＡＴＣＴＣＧＡＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡ−３’および５’−ＧＧＧＡＧＣＴＣＧＡ−３’）をアニーリングすることができ、得られる断片を、足場付着領域（ＳＡＲ）含有プラスミドのＢａｍＨＩおよびＰｓｔＩ部位にクローニングすることができる。得られたプラスミド、ｐＪＭ７は、ＸｈｏｌおよびＰｓｔＩに対する制限部位を含有する短いポリリンカーを挟む２つのＳＡＲ配列からなり得る。突然変異メタロチオネイン（ＭＴ）プロモーターをＰＣＲによって増幅し、ＢｇｌＩＩおよびＮｏｔＩを用いて直線化されたｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、それによりｐＣＥＰ−ＭＴを得ることができる。次いで、グロビン遺伝子由来のイントロンを含有するＳａｌＩ−ＢａｍＨＩ断片をｐＣＥＰ−ＭＴのＸｈｏＩおよびＢａｍＨＩ部位に挿入し、それにより、ｐＣＥＰ−ＭＴｉを得ることができる。図１に示されている通り、ＭＴプロモーター／イントロン／ポリ（Ａ）領域を、Ｓａｌｌで消化することによってｐＣＥＰ−ＭＴｉから取り出し、ｐＪＭ７のＸｈｏＩ部位にクローニングし、それによりｐＳＡＲ−ＭＴを得ることができる。
（実施例３）
ＮＴＣ９３８５Ｒ−ＡＰＣベクターの構築
【０２６０】
ＰｓｔＩ  ＢａｍＨＩ適合ベクターを、以下のオリゴをＳａｌＩ／ＢｇｌＩＩ消化したＮＴＣ９３８５Ｒ親ベクターにクローニングすることによって生成することができる「ＴＣＧＡＣＧＣＣＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＡ」および「ＧＡＴＣＴＧＧＡＴＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＡＧＣＣＡＴＧＧＣＧＧＣＧ」。その後、ＡＰＣ断片は、ベクターにクローニングすることができる（ＰｓｔＩ−ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ−ＢｇｌＩ（１５３７ｂｐ）およびＢｇｌＩ  ＢａｍＨＩ（６９８７ｂｐ）として）。ベクターを図２に示す。
（実施例４）
リポソームトランスフェクション
【０２６１】
ＡＰＣをコードするミニサークルＤＮＡおよびリポソーム溶液を電荷比４：１で希釈し、６時間インキュベートすることにより、ＡＰＣ−リポソーム複合体を形成することができる。カチオン性脂質はミニサークルＤＮＡと自然発生的に結び付く。
（実施例５）
動的光散乱およびゼータ電位
【０２６２】
ＡＰＣ−ＰＥＧ２Ｋナノ粒子のサイズおよび有効な電荷測定値を、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｎａｎｏｓｉｚｅｒ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して測定することができる。ナノ粒子を、光散乱バイアル中、電荷比１０で調製し、妥当な緩衝剤１ｍＬに懸濁させ、室温で２０分インキュベートすることができる。動的光散乱を高抵抗性水中で実施することができる。プロットはｚ−平均直径を示す。動的光散乱およびゼータ電位についてのデータ点は、同じ試料に対して実施した２回の測定の平均である。
（実施例６）
Ｃａｃｏ−２細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクション
【０２６３】
ヒト結腸直腸腺癌、Ｃａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−３７）を、２０％ウシ胎仔血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Streptomyocin）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充した、ＡＴＣＣにより調合されたＥａｇｌｅ’ｓ  Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ中で培養することができる。細胞を、５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中、３７℃で保持することができ、半集密度を維持するために７２時間毎に再播種することができる。トランスフェクション試験のために、細胞を２４ウェルプレートにトランスフェクショ時に集密度を６０〜８０％にすることが可能なように播種することができる。ＤＮＡ  １μｇおよび適量のリポソーム溶液を、Ｏｐｔｉｍｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてそれぞれ２５０μＬまで希釈し、混合することにより、ＡＰＣ−ルシフェラーゼ−ＤＮＡナノ構造体を形成することができる。ナノ構造体を室温で２０分インキュベートした後、細胞に添加することができる。その後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、次いで、複合体懸濁液（ウェル当たり０．４μｇのＤＮＡ）２００μＬと一緒に６時間インキュベートすることができる。６時間後に、トランスフェクション培地を取り除くことができ、細胞をＰＢＳで１回すすぎ、次いで、補充されたＤＭＥＭ中で１８時間インキュベートすることができる。細胞をＰａｓｓｉｖｅ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）１５０μＬ中に回収し、１回の凍結融解サイクルに供することができる。Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  １４２０  Ｖｉｃｔｏｒ３  Ｖ多ラベル計数器をアッセイ製造者（Ｐｒｏｍｅｇａ）の指示に従って使用してルシフェラーゼ発現を測定することができる。ＴＥ結果を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって測定される総細胞タンパク質に対して正規化することができる。データ点は、２つの測定値の平均を表し、エラーバーは標準偏差を示す。
（実施例７）
ｉｎ  ｖｉｖｏマウスモデル
【０２６４】
ＡＰＣベクター（表３）が疾患をレスキューすることができるものであり得るかどうかを決定するために、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＡｐｃＭｉｎ／Ｊ（Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）突然変異マウスモデルにおいてマウス試験を実施することができる。このマウスモデルのＡＰＣ遺伝子は、ヒト遺伝子との９０％の相同性を維持し、１００個よりも多くの腸ポリープが生じる。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ＡｐｃＭｉｎ／Ｊマウスに経口強制飼養を行い、１つのコホートはＡＰＣナノ構造体を受け、１つのコホートはＧＦＰ陰性対照ナノ構造体を受ける。ナノ構造体を週に１回、合計６週間与えることができる。その後、マウスを屠殺することができ、ポリープ計数を実施し、腫瘍退縮を評価するために使用することができる。ＬＧＲ５＋細胞におけるＡＰＣ発現を決定するために免疫組織化学的検査も実施することができる。免疫組織化学的検査を使用して、ナノ構造体またはＡＰＣタンパク質のいずれかに対する免疫応答を測定するためのＣＤ３＋またはＣＤ１１ｂ＋細胞集団の増加が存在するかどうかを決定することができる。
表３：ＡＰＣミニサークルベクター配列
【表３−１】
2020500218.tif 000025
【表３−２】
2020500218.tif 000026
【表３−３】
2020500218.tif 000027
（実施例８）
ＨＰＥＧ２Ｋ−脂質の合成
【０２６５】
酸不安定ＰＥＧ−脂質を合成するために使用することができるスキームを以下に提示する（図４）。ＰＥＧの酸化を（Masson  C、Scherman  D、Bessodes  M.、2,2,6,6-Tetramethyl-1-piperidiny1-oxyl/  [bis  (acetoxy)-iodo]  benzene-mediated  oxidation:  a  versatile  and  convenient  route  to  poly  (ethylene  glycol)  aldehyde  or  carboxylic  acid  derivatives.、J  Polym  Sci  A、２００１年；３９巻：４０２２〜４頁）に記載されている通り実施することができる。疎水性構成単位ＤＯＢ（３，４−ジ（オレイルオキシ）安息香酸）のβ−アラニンエチルエステルへのカップリングは高収率で進行して産物が得られ、これを最小量のクロロホルム／メタノール溶媒中、大過剰なヒドラジン水和物で処理してＤＯＢ−β−Ａｌａ−ヒドラジドを得ることができる。ＭＷ２０００（ｎ約４４）のモノメチル化ＰＥＧを、（ビス（アセトキシ）−ヨード］ベンゼンおよび触媒ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジニル−オキシル）を用いて対応するアルデヒドに酸化することができる。この２つの構成成分を、モレキュラーシーブを添加した無水ジクロロメタン／メタノール混合物中でカップリングすることができる。得られたＰＥＧ−脂質を分取薄層クロマトグラフィーによって精製することができる。
（実施例９）
変動するｐＨでのＨＰＥＧ２Ｋ−脂質の安定性に関するＴＬＣ分析
【０２６６】
緩衝溶液をｐＨ４、５、６（クエン酸（０．１Ｍ）／リン酸（０．２Ｍ））およびｐＨ７．４（０．１ＭのＨＥＰＥＳ）で調製することができる。試験する各ｐＨについて、試料を、小さなガラスバイアル中、ＨＰＥＧ２Ｋ−脂質約１ｍｇをジクロロメタン／メタノール１：１中に溶解させ、溶媒をまず窒素流下で、次いで真空中で１４時間にわたって蒸発させることにより、調製することができる。バイアルを３７℃に３０分温めることができ、所望のｐＨの温かい（３７℃）緩衝剤１００μｌを添加することができる。得られた混合物を５分インキュベートし、２．５分超音波処理し、さらにインキュベートすることができる（インキュベートは全て３７℃で実施することができる）。指定の時点で、１０μｌの一定分量を取り出し、メタノール２０μｌと混合し、すぐにＴＬＣによって分析することができる。ＮＨ４ＯＨ（１００：１５：１）のクロロホルム／メタノール／濃度を移動相として使用することができる。ＴＬＣプレート（Ｍｅｒｃｋ、シリカ６０、背面ガラス）は、試料を伴わずにプレランを行い、簡単な空気乾燥後に使用することができる。スポットは、ＵＶ吸収によって（この状況ではＤＯＢ誘導体特異的）、ヨウ素蒸気の吸収（非特異的染色）、およびＰＥＧに特異的な噴霧試薬（改変Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆｆ試薬）を使用することによって検出することができる。
（実施例１０）
中性リポソーム複合体の調製
【０２６７】
脂質のクロロホルム溶液を混合し、回転蒸発によって乾燥させて薄膜にすることができる。残留する溶媒を高真空下で少なくとも４時間にわたってまたは終夜取り除くことができる。乾燥した脂質を１０ｍＭのトリス緩衝剤、ｐＨ７．４（ＴＢ７．４）に、１から５ｍｌまでの範囲である体積中８０ｍＭの総脂質の濃度まで分散させることができる。小さな単層小胞（ＳＵＶ）をプローブ超音波処理（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって形成させることができる。超音波処理プログラム（３分間パルス、１分間オフを５サイクル）およびプロセス全体を通した試料チューブの氷浴への浸漬を使用して、試料の加熱を最小限にすることができる。次いで、リポソームをＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ５４１５Ｃ遠心分離機において１２，０００ｒｐｍで５分遠心分離してデブリを除去し、０．２μｍの滅菌膜を通して濾過することができる。
【０２６８】
プラスミド（ｐＣＭＶ−ＡＰＣ）を、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉから単離し、精製することができる。プラスミド調製物の純度を１％アガロースゲル電気泳動、その後、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ蛍光染色によって決定することができる。ＤＮＡ濃度を２６０ｎｍにおけるＵＶ吸収によって測定することができる。高次コイルｐＤＮＡのパーセンテージは８０〜９５％の範囲内であってよく、ＯＤ２６０／２８０比は１．８５から１．９の間であってよい。ｐＤＮＡの内毒素レベルを発色性カブトガニ血球抽出成分アッセイ（ＬＡＬ  ＢｉｏＷｈｉｔａｋｅｒ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用して決定することができる。値は２０ＥＵ／ｍｇ未満であってよい。
【０２６９】
中性リポソーム複合体（ＮＬＣ）を、まず、ＳＵＶ（２５０μｌ、２０μｍｏｌ）、プラスミド（０．１ｍｇ）、およびＴＢ７．４を混合して総体積４００μｌを得ることによって形成させることができる。これに、無水エタノール、塩化カルシウム（５００ｍＭのストックから）およびＴＢ７．４の所与の混合物６００μｌを添加することができる。添加は、滴下で最大ボルテックス混合を伴っておよそ３０秒にわたって実施することができる。得られた凝集複合体を５００体積のＴＢ７．４に対して、２４時間にわたり、緩衝剤を２回交換して透析することができる。生理的張度が必要な実験については、試料を５００体積のＰＢＳに対して２４時間にわたってさらに透析することができる。所与の脂質組成について、２つの因子（エタノールおよびカルシウム濃度）および４つの中心点を有する中心複合実験計画を使用してプラスミドの閉じ込めおよび粒子サイズを最適化することができる。計画および分析は、必須の実験計画、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌのアドインマクロを使用して実施することができる。因子の範囲は予備トラップ実験から推定することができ、これらは、各脂質組成について異なり得る：ＤＯＰＣ、３５〜５０％エタノール、０〜５ｍＭのＣａ２＋；ＤＯＰＣ／ＤＯＰＥ、２０〜４０％エタノール、０〜１０ｍＭのＣａ２＋；ＤＯＰＣ／ＤＯＰＥ／Ｃｈｏｌ、３５〜４５％エタノール、５〜１５ｍＭのＣａ２＋。最大６つの項を有する二次モデルを各計画から測定された閉じ込めデータにフィッティングすることができるが、フィッティングに有意に寄与した（Ｐ＜０．０５）項のみを最適な製剤の予測に使用することができる。最適化の基準は、閉じ込めが最大化されていること、および平均粒子サイズが２００ｎｍ未満であることであり得る。各脂質製剤を最適化するために単一の計画が必要であり得るが、それぞれを繰り返して得られたモデルおよび項を検証することができる。
（実施例１１）
中性リポソーム複合体のサイズ分析
【０２７０】
平均粒子直径は、ＢＩ−９０００ＡＴ  ｃｏｒｒｅｌａｔｏｒ（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ、ＮＹ）を使用し、準弾性光散乱法（ＱＥＬＳ）によって決定することができる。試料を、最小のピンホール（１００μｍ）で十分な散乱強度をもたらすために、必要に応じて、水またはＰＢＳ中１．０ｍＭの脂質まで希釈することができる。５×１０４計数／秒の最小散乱強度を有する、それぞれ１分にわたって収集した３つの自己相関の平均をガウス分布に変換することができ、そこから、製造者によって供給されるソフトウェアを使用して平均直径および標準偏差を導き出すことができる。多分散が認められる可能性もある。
（実施例１２）
閉じ込めアッセイ
【０２７１】
複合体形成手順によって閉じ込められるプラスミドの分率は、蛍光ＤＮＡプローブＴＯ−ＰＲＯ−１を使用して決定することができる。複合体を、ＴＢ７．４を用いて１００倍希釈して総体積を２．０ｍｌにすることができ、１ｍＭのＴＯ−ＰＲＯ−１、１μｌをＤＭＳＯストック溶液から添加することができる。蛍光を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＬＳ  ５０Ｂ分光蛍光光度計において励起および放出波長それぞれ５１４および５３１ｎｍ、スリット幅２．５ｎｍを用い、光電子倍増管の電圧を９００Ｖに設定して測定することができる。ＴＯ−ＰＲＯ−１の添加前の散乱に起因するシグナルをゼロ蛍光に設定することができる。パーセント閉じ込めは、ＴＯ−ＰＲＯ−１の蛍光シグナルを、１００ｍＭのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２０μｌを添加してＤＮＡを脂質から放出させた後の蛍光で割り、体積の１％増加に対して補正したものとして算出することができる。指定の濃度において、遊離のＤＮＡプラスミドの存在下で中性脂質およびＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００がＴＯ−ＰＲＯ−１蛍光に影響を及ぼさないことを決定することができる。ＴＯ−ＰＲＯ−１の濃度の上昇により蛍光は増大せず、これにより、ＴＯ−ＰＲＯ−１が十分過剰に存在している可能性があることが示される。
（実施例１３）
ナノ粒子のＰＯＺ化
【０２７２】
アルキンで終結するＰＯＺ（１００ｍｇ）を、反応の前にＤＭＳＯ、５ｍＬで希釈した蛍光ナノ粒子の懸濁液（１９±３ｍｇ  ｍＬ−１）５ｍＬに添加することができる。この後、トリエチルアミン（ＴＥＡ）２００μＬを添加することができ、反応物を暗闇中、一定の撹拌下で２４時間放置した。
（実施例１４）
ＮＴＡを使用したブタ胃ムチン分散におけるナノ粒子の拡散の評価
【０２７３】
拡散測定は全てＮａｎｏ−Ｓｉｇｈｔ  ＬＭ１０を使用し、ＬＭ１４トッププレートおよびシリンジポンプを用いて行うことができる。蛍光ナノ粒子を脱イオン水中に１０，０００分の１に希釈することができる。次いで、この希釈物１０μＬを１％ｗ／ｖ胃粘液の懸濁液９９０μＬに添加し、それにより１：１，０００，０００の最終的な希釈物を形成させることができる。試料をＮａｎｏＳｉｇｈｔシステムに注入することができ、分析中のナノ粒子の蛍光退色を最小限にするために流速を７０ＡＵに設定することができる。全てのビデオを、ロングパスフィルターを通して、カットオン波長５５０ｎｍ（Ｔｈｏｒｌａｂｓ、ＵＫ）で記録することができる。６×６０秒のビデオを２５および３７℃で記録することができる。ムチンのそれぞれ独立したストック分散を各ナノ粒子型を用いて３回分析することができ、その結果、各温度について合計９×６６０秒のビデオがもたらされ、粘度は２５℃では２５ｃＰであり、３７℃では２８ｃＰである（流体力学的分析から決定して）。
（実施例１５）
粒子追跡分析
【０２７４】
粘液を透過する粒子の動画を、ＭＡＴＬＡＢ（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ）において特別に書かれた自動化粒子追跡ソフトウェアを使用して解析することができる。粒子の経時的なｘ位およびｙ位を決定するために、画像を、まず、空間的な帯域フィルターを用いてコンボリューションすることによって加工して、ノイズおよび非均一なバックグラウンドを低減することができる。画素強度の局部的な極大を候補粒子位置として同定することができる。これらの位置を、明るいスポットの強度で重み付けした重心を算出してサブピクセル分解能をもたらすことによって精密にすることができる。粒子の輝度、サイズ、および偏心を検討することにより、真の粒子を保持し、偽の粒子（ノイズ）を廃棄することができる。その後のフレーム内で同定された粒子の位置を最近隣法により連結することによって軌道を構築することができる。１秒よりも短い軌道を廃棄することができる。各軌道の時間平均平均二乗変位（ＭＳＤ）をＭＳＤ（τ）＝〈［ｘ（ｔ＋τ）−ｘ（ｔ）］２〉＋〈［ｙ（ｔ＋τ）−ｙ（ｔ）］２〉（式中、τは時間尺度であり得、角括弧は、多くの出発時間ｔの平均を示す）として算出することができる。
【０２７５】
まず実験動画から信号対ノイズ比を算出することによって追跡分解能を推定することができる。これらを、信号対ノイズ比の関数としての静誤差の標準曲線と比較して、実験動画の静誤差を推定することができる。標準曲線は、粒子をガラススライドに貼り、それらを異なる照明強度下で追跡することによって作成することができる；これらの固定した粒子の見かけの動きは静誤差に起因する可能性がある。
（実施例１６）
前駆物質合成
【０２７６】
アシルヒドラゾンに基づくＰＥＧ−２０００脂質（ＨＰＥＧ２Ｋ−脂質）を合成することができる。簡単に述べると、３，４−ジ（オレイルオキシ）安息香酸（ＤＯＢ）を、臭化オレイル（過剰）とプロトカテク酸エチルエステル（制限）をシクロヘキサノン中、炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムの存在下、窒素下、１００℃で撹拌しながら反応させることによって合成することができる。反応混合物を濾過し、残留物を、水酸化カリウムを含有するエタノール中に溶解させ、還流させることができる。反応混合物の酸性化により、白色沈殿物（ＤＯＢ）がもたらされ、これは濾過時に残留物として収集することができる。ＤＯＢをＢ−アラニンエチルエステルとＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）の存在下でカップリングすることができる。クロロホルム／メタノール溶媒中ヒドラジン水和物を生成物に添加して、ＤＯＢ−Ｂ−Ａｌａ−ヒドラジドをもたらすことができる。ＤＯＢ−Ｂ−Ａｌａ−ヒドラジドを酸化モノメチル化ＰＥＧ（ＭＷ：２０００）と無水ジクロロメタン／メタノール混合物中、モレキュラーシーブの存在下でカップリングすることができる。生成物を、分取ＴＬＣを使用して精製することができ（ＤＯＢカップリングからの収率約５０％）、生成物をｐＨ４および中性ｐＨでインキュベートした後、ＴＬＣを使用してその酸感受性を確認することができる。データを図７に示す。
（実施例１７）
ナノ粒子製剤
【０２７７】
組成物ＭＶＬ５（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ）／グリセリルモノオレエート（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  ＬＬＣ）／ＨＰＥＧ−２Ｋ−ＬＩＰＤを５０／４３／７％ｍｏｌの比で用いてリポソームを形成した。個々の脂質ストックをＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９：１）中に作製し、組成物に応じて妥当な体積のストックを小さな丸底フラスコ中で混合した。脂質薄膜をｒｏｔａ−ｖａｐによって作製し、真空下で５時間さらに乾燥させることができる。次いで、脂質を、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水５ｍｌを用い、３７℃で４〜５時間振とう機上でインキュベートすることによって水和させた。次いで、リポソームを、小プローブソニケーターを使用して５〜１０分間隔で多数回超音波処理した。各超音波処理の最後に粒子サイズをモニタリングすることができる。粒子サイズは、１０〜１５分の超音波処理後に１５０ｎｍであり得る。次いで、リポソームを１ｍＭまで希釈し、ＢＳＣフード内で０．４５ｕｍのフィルターを通して濾過することができる。リポソーム−ＤＮＡ複合体を、完全なプロトン化を有すると仮定されたＭＶＬ５を用いて電荷比５で製剤化した（すなわち、頭部基の電荷＋５ｅ）。１μｇ／ｍＬのＤＮＡ２０ｕＬを１ｍＬまで希釈し、０．１２５ｍＭ（総脂質）溶液１ｍＬに添加し、上下にピペッティングすることによって即座に混合することができる。次いで１０〜２０分インキュベートした後、Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  ＺｅｔａＰＡＬＳ粒径分析計を使用して粒子サイズおよびゼータ電位を測定した。表４に示されている通り、ＤＮＡ複合体では出発リポソームと比較して粒子サイズおよびゼータ電位値の両方の低減が観察された。
表４：ナノ粒子サイズおよびゼータ電位
【表４】
2020500218.tif 000028
（実施例１８）
ｉｎ−ｖｉｔｒｏトランスフェクション
【０２７８】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏトランスフェクション試験を、Ｃａｃｏ−２およびＨＴ２９細胞を使用し、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターによって駆動されるｅＧＦＰ発現プラスミド（ＮＴＣ９３８５−ｅＧＦＰベクター）を用いて行った。ＮＴＣ９３８５プラスミドは、細菌骨格の低減および抗生物質を用いない選択（消化管細菌に抗生物質耐性を付与しないため）を有するように設計することができる。
リポソーム−ＤＮＡ製剤
【０２７９】
リポソーム−ＤＮＡは、電荷比＋５または＋１０（ＭＶＬ５上の＋５電荷を仮定する）のいずれかで製剤化することができる。１ｍＭのＭＶＬ５／ＧＭＯ／ＨＰＥＧリポソームのストックを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地中に希釈したプラスミドに添加し、ピペッティングにより混合し、室温で２０分間カップリングさせ、次いで、細胞に適用することができる。
トランスフェクト
【０２８０】
１００ｎｇから２ｕｇの範囲のＤＮＡ濃度を８０％集密の細胞を伴う１２ウェルプレートにトランスフェクトした。次いで、トランスフェクトの４８時間後に、プレートを、Ｚｅｉｓｓ  ＡｘｉｏＯｂｓｅｒｖｅｒ落射蛍光顕微鏡を使用して蛍光について撮像した。図８Ａおよび図８Ｂ。
フローサイトメトリー
４８時間のトランスフェクション後、細胞約４×１０５個をＰＢＳで１回洗浄し、次いで、細胞を各ウェルから取り出しＰＢＳ５００ｕＬに入れた。試料を、４８８ｎｍのレーザー励起波長を利用するＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｇｕａｖａ  ＨＴ６ベンチトップフローサイトメーターを使用して蛍光についてアッセイした。各アッセイ試料について、１０，０００事象を収集した。細胞のみを用いた陰性対照を使用してゲーティング閾値を設定することができ、また、陽性リポフェクタミン対照も評価することができる（図１０）。
（実施例１９）
ＰＭＯＺ製剤
【０２８１】
ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＭＯＺを異なる比（５０／５０−ｘ／ｘ％ｍｏｌ）で製剤化した。簡単に述べると、各脂質のクロロホルム：メタノール（９：１）中溶液を妥当な比で混合した。薄膜が形成されるまで溶液を真空引きし、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を添加して脂質を懸濁させることによって薄膜水和法を使用した。次いで、脂質を室温で終夜振とうした。次いで、脂質を、プローブソニケーターを使用して１０〜１５分、３０秒の中断を伴って超音波処理した。脂質はＤＮＡとほぼ１００％の効率で複合体を形成することが見出された（図２）。簡単に述べると、脂質をＮＴＣ−ｅＧＦＰ  ＤＮＡに電荷比５で（ＭＶＬ５が＋５電荷を有すると仮定する）添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。複合体を室温で２０分静置した。ＤＮＡを臭化エチジウムと最終濃度０．５μｇ／ｍｌでプレカップリングした。複合体を１％アガロースゲルにローディングし、８０ｍＶで流した（図１１）。
（実施例２０）
ＰＭＯＺトランスフェクション
【０２８２】
１日目に、２４ウェルプレートにＣａｃｏ−２細胞を８０％集密まで播種した。２４時間後に、以下の試料各６μＬをＮＴＣ９３８５Ｒ−ＧＦＰプラスミド各１μｇとカップリングし、穏やかにピペッティングして混合し、室温で１５分置いた後、細胞に適用した。これを各試料について３連で実施した。４８時間後に、Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７００を４×倍率で用いてウェルをＧＦＰ発現について撮像した。Ｉｍａｇｅ  Ｊを使用して、各ウェルの平均画素強度を決定し、プロットした。ＰＭＯＺ  ４％により、試験したＰＭＯＺ試料のうちで最も強力なＧＦＰ発現が実証された。
【０２８３】
試料：（ａ）ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＭＯＺ（５０：５０−ｘ：ｘ）。ＰＭＯＺを２〜１０％の間で分析した、図１３および図１４。（ｂ）ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧ（５０：４３：７）（ｃ）ＭＶＬ５：ＧＭＯ（ｄ）リポフェクタミン２０００対照（図１２）。
（実施例２１）
ｅｘ  ｖｉｖｏにおける粘液透過
【０２８４】
地域の屠殺場から得た新鮮なブタ結腸を収集し、氷上で保持した。結腸を縦方向に切り、次いで平らに置いた。２ｍｍ×４ｍｍサイズの切片を切り取り、６ウェルプレートに粘液層を上にして入れた。前日に、１ｍＭのビヒクル（ＭＶＬ５、ＰＭＯＺ  ２％、ＰＭＯＺ  ４％、ＰＭＯＺ  ６％、ＰＭＯＺ  ８％、またはＰＭＯＺ  １０％）５０ｕＬをＣｙ５で標識された６０ｂｐオリゴヌクレオチド８μｇと３０分にわたってカップリングし、次いで、４℃で終夜保管した。次いで、これらのビヒクルを粘液層に直接適用し、３７℃、５％ＣＯ２で１００分インキュベートした。これを各試料について３連で実施した。組織をＯＣＴ培地に包埋し、ドライアイス／エタノールスラリーで凍結させた。次いで、試料を、凍結切片作製により３０μｍの切片にし、ガラススライド上に置いた。次いで、スライドを、Ｋｅｙｅｎｃｅ  ＢＺ−Ｘ７００を４×倍率、１／３ｓ露出で用いて撮像した。次いで、ＩｍａｇｅＪを使用し画像を解析し、上皮層の上に直接置いた１６０×２６０画素の四角形の平均画素強度を使用して、１００分後に透過する色素の相対レベルを決定した。ＰＭＯＺ  ４％が最大の粘液透過度を有することが見出された（図１５Ａ、図１５Ｂ、および図１６）。
（実施例２２）
Ｐｉｒｃラット結腸直腸がんモデル
【０２８５】
Ｆ３４４−Ａｐｃａｍ１１３７／＋ＰＩＲＣラット（４〜７カ月齢）を家族性大腸腺腫症（ＦＡＰ）の動物モデルとして使用した。送達した治療用導入遺伝子は、ヒト大腸腺腫症（ＡＰＣ）の野生型コピーであり、対照としてＧＦＰを与え、どちらもＣＭＶプロモーターによって駆動されるものであった。それぞれ動物５匹（雌３匹および雄２匹）である３つの異なるコホートを試験した。コホート１はリポフェクタミン２０００＋ＡＰＣを用いて処置し、コホート２はＬｉｔｅＡ１＋ＡＰＣを用いて処置し、コホート３は、陰性対照として機能するように、ならびにビヒクル局在化が可能になるようにＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰを用いて処置した。各動物に、ＤＮＡ３０μｇを１週間に３回、合計７週間にわたって直腸内投薬した。送達ビヒクルおよびＤＮＡを投与の直前に以下の通りカップリングした。ＬｉｔｅＡ１ビヒクルについては、１μｇ／μＬのＤＮＡ（ＣＭＶ−ＡＰＣまたはＣＭＶ−ＧＦＰのいずれか）３０μＬを１ｍＭのＬｉｔｅＡ１  １８７．５μＬと、ＯＰＴＩ−ＭＥＭを用いて７５０μＬの体積までカップリングした。リポフェクタミン基については、１μｇ／μＬのＤＮＡ（ＣＭＶ−ＡＰＣ）３０μＬをリポフェクタミン２０００、３０μＬとカップリングした。構成成分を添加したら、チューブを２０回穏やかに反転させ、室温で３０分、カップリングが起こるようにした。
【０２８６】
動物を、イソフルランで麻酔し、直腸内投薬した。投薬前に、ＰＢＳ浣腸を投与し、手動の蠕動を実施してあらゆる遮断物を取り除き、結腸をきれいにした。次いで、薬物（ビヒクルとカップリングしたＤＮＡ３０μｇ）を結腸の下部３分の２に沿って同等の分布で送達した。肛門を物理的につまんで２分間保持して漏出を防止した。常套的な内視鏡サーベイランスを投薬前、２週間時点、４週間時点、６週間時点、および７週間時点での剖検前に実施した。ＮＴＣ９３８５Ｒ−ＡＰＣプラスミドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施して、タンパク質発現を検証した。ＤＮＡ（ＮＴＣ９３８５Ｒ−ＡＰＣまたは対照としてＮＴＣ９３８５Ｒ−ＧＦＰ）４μｇを１ｍＭのＬｉｔｅＡ１  ２５μＬとカップリングし、６ウェルプレートの単一のウェルにトランスフェクトした。これを３連で実施した。これを４８時間にわたって発現させた。次いで、細胞をＲＩＰＡ緩衝剤に懸濁させ、１時間振とうすることによって溶解させた。溶解物を遠心分離によってペレット化し、上清中のタンパク質濃度を測定した。次いで、上清４０μｇを４×ＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳ試料緩衝剤に添加した。次いで、タンパク質を９５℃の水浴中、５分にわたって変性させた。次いで、試料を４〜２０％Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ  ＴＧ成形済ゲル上、１５０Ｖで２．５時間流した。次いで、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写した。次いで、これをＡｂｃａｍからの１：２０００一次Ａｎｔｉ−ＡＰＣ抗体（ａｂ１５２７０）と一緒に４℃で終夜インキュベートした。膜を洗浄し、次いで、Ａｂｃａｍからの二次Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  Ｈ＆Ｌ（ＨＲＰ）（ａｂ２０５７１８）と一緒に室温で１時間インキュベートした。次いで、膜を洗浄し、１−Ｓｔｅｐ  Ｕｌｔｒａ  ＴＭＢ−Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎを３０分にわたって使用して可視化を実現した（図１７）。死後、腸上皮に対して腸陰窩染色を実施した。図２８Ａおよび図２８Ｂ。腸陰窩内のＧＦＰ発現を検出した（図２９）。
【０２８７】
ＦＡＰの処置および防止の両方のために、腫瘍に対するトランスフェクト能力を測定した。結腸直腸腫瘍を有するＰｉｒｃラットをＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰまたはＬｉｔｅＡ１＋ＡＰＣ（対照）を用いて処置した。死後、腫瘍を収集し、顕微鏡法によってＧＦＰを測定した。Ｐｉｒｃラットの腫瘍ではＬｉｔｅ＋ＧＦＰが検出されたが（図３０Ｂおよび図３０Ｃ）、ＧＦＰ陰性対照ではＧＦＰの発現はほとんど〜全く測定されなかった（図３０Ａ）。死後の腫瘍重量を測定した（図３２）。Ｌｉｔｅ−ＧＦＰについての最も大きな腫瘍は組織学的検査を行うために取り出し、秤量することができなかったので、Ｌｉｔｅ−ＧＦＰ平均は実際よりも低い値を示している。
デジタルドロップレットＰＣＲ
【０２８８】
ＬｉｔｅＡ１＋ＧＦＰコホートからの動物に対してデジタルドロップレットＰＣＲを実施した。各ｄｄＰＣＲに添加されたＤＮＡは動物および組織の間で変動した：肝臓（２００ｎｇ）、脾臓（約８００ｎｇ〜１ｕｇ）、血清（＜１ｎｇ）、正常な上皮（５００ｎｇ）、腫瘍（１００ｎｇ〜１ｕｇ）。グラフは、オーバーレイした４匹の別々の動物を示す（図３１Ａ、図３１Ｂ、図３１Ｃ、図３１Ｄ、図３１Ｅ、および図３１Ｆ）。全ての動物が大体同じベクタープローブを表した。チャネル１はＦＡＭで標識したＨＴＬＶプライマーおよびプローブであった。チャネル２は、ＤＮＡ添加を示すためのＨＰＲＴハウスキーピング遺伝子（ＨＥＸで標識したもの）であった。
（実施例２３）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける粘液透過分析
Ｉ．トランスフェクション効率
【０２８９】
ｉｎ−ｖｉｔｒｏにおける粘液アッセイを使用して、ＤＮＡと異なる電荷比（＋５、＋３、＋２および＋１）で複合体を形成したＬｉｔｅ送達系（ＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧ  ５０：４３：７）の粘液透過を測定した。リポフェクタミン２０００を粘膜接着対照として使用した。比はＤＮＡ結合性効率、トランスフェクション効率および粘液透過に基づいて決定した。複合体の結合効率および全体的な電荷を評価するために、Ｌｉｔｅ送達系をＤＮＡと複合体形成させ、アガロースゲル電気泳動を実施した。簡単に述べると、ＤＮＡを臭化エチジウムと０．５μｇ／ｍｌで複合体形成させ、次いで、妥当な比のＬｉｔｅ送達系と混合した。アガロースゲル（１％）電気泳動を８０ｍＶの一定電圧で実施した。電荷比＋５、＋３および＋２について遊離のＤＮＡは検出されなかった。電荷比＋１ではＤＮＡのわずかな結合が示された。ＮＴＣ−ｅＧＦＰプラスミドと異なる電荷比で複合体形成させたＬｉｔｅを使用してＨＥＫ細胞にトランスフェクトすることによってトランスフェクション効率を決定した（表５）。
ＩＩ．粘液収集
【０２９０】
粘液透過を評価するために、生理的に関連性のある接着性粘液をブタ結腸から収集した。地域の屠殺場から得た新鮮なブタ結腸を収集し、氷上で保持した。糜粥を物理的に除去し、腸を生理食塩水（ＮａＣｌ  ０．９％）で慎重にすすいで残留する物質を除去した。側方切開を行い、腸を平らに置いた。ガラススライドを用いて膜から粘液層をこすり取ることによって粘液収集を行った。粘液１ｇに、０．１Ｍの塩化ナトリウム５ｍＬを添加し、１時間撹拌し（５０ｒｐｍでの振とう）、その後、懸濁液を２時間遠心分離した（１３０００ｒｐｍ）。大きなデブリを物理的に除去し、ペレットのきれいな部分のみを保持した。粘液を−２０℃で保管し、使用前に３７℃まで温めた。
ＩＩＩ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける粘液アッセイ
【０２９１】
上記の通り調製した希釈していないきれいな粘液をこのアッセイに使用した。一方の末端が閉じた薄い円柱状ポリプロピレンチューブ（約４ｍｍ）に粘液を１０ｍｍまで満たした。各電荷比および脂質の型を３連で分析した。Ｃｙ５で標識したＤＮＡ４μｇを妥当な比の脂質と複合体形成させた。３連の陰性対照もＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧおよびＯＰＴＩ−ＭＥＭだけを用いて実施した。リポプレックス−ＤＮＡ複合体をＯＰＴＩ−ＭＥＭで最終体積５０ｕｌまで希釈し、粘液の頂部にピペットで載せた。試料を３７℃、５０ｒｐｍで４時間インキュベートし、その後、−８０℃で終夜凍結させた。各チューブを、０ｍｍ点を粘液メニスカスの頂部として２ｍｍの長さに切った。切断による物理的な力によって引き起こされる粘液の人工的透過を防止するためにチューブを末端から頂部まで切った。水性部分も保管し、分析した。収集した試料からポリプロピレンチューブ小片を取り出し、抽出緩衝剤（０．１Ｍの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．４、２０％ＤＭＳＯおよび１％ＳＤＳ）１２０ｕＬをチューブに添加して粘液を破壊し、Ｃｙ５タグが付いたＤＮＡを放出させた。試料を３０秒ボルテックスし、３７℃、３００ｒｐｍで１時間振とうした。粘液を１３，２００ｇで５分遠心分離することによってペレット化し、上清をマイクロプレートリーダーを使用して分析した（ｅｘ：６３３ｎｍ、ｅｍ：６７０ｎｍ、カットオフ：６６５ｎｍ）。それぞれ２ｍｍの小片を、陰性対照の平均蛍光強度を引き算することによってバックグラウンドについて調整した。各チューブについての各小片のパーセンテージ蛍光寄与を算出し、分析した（図２３）。
【０２９２】
あるいは、同じ結腸に由来する粘液においても観察された不均一性により、変動が導入される可能性がある。しかし、電荷比２で他の粒子よりも高い粘膜透過が示されることが見出された。Ｃｙ５−ＤＮＡ単独は優勢に水層にあり、示された粒子と同様の特性は示さなかったことが見出された。
表５：トランスフェクション
【表５】
2020500218.tif 000029
【０２９３】
Ｌｉｔｅ送達系を以下の通りカップリングして、ｐＣＭＶ−ＧＦＰ２μｇを送達するベクターを作出し、室温で１０分インキュベートした。次いで、各ベクターを８０％集密度のＨＥＫ２９３Ｔ細胞の６ウェルプレートにトランスフェクトした。次いで、各ウェルを４８時間後にＥＶＯＳ  ＦＬｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｓｔａｔｉｏｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、２０％の緑色光を用いて撮像した（図２４Ａ、図２４Ｂ、および図２４Ｃ）。
（実施例２４）
ｅｘ  ｖｉｖｏにおけるブタ粘液アッセイ
【０２９４】
薄膜水和法を使用してビヒクルをＭＶＬ５／ＧＭＯ／脂質−ＨＰＥＧ（５０：４３：７）として製剤化した。およそ４フィートの大きなブタ腸をＰｅｔａｌｕｍａ、ＣＡにあるＭａｒｉｎ  Ｓｕｎ  Ｆａｒｍｓ屠殺場から収集した。腸に沿って縦切開を行い、糜粥が最小の領域で２ｍｍ×４ｍｍの切片を切り取った。２つの条件を試験した；Ｃｙ５と連結した６０ｂｐのｓｓＤＮＡオリゴヌクレオチドを送達ビヒクルまたはビヒクル単独とカップリングした。各条件１００μＬを結腸切片にピペットで載せ、３７℃、５％ＣＯ２で異なる時点までインキュベートした：５分、６０分、１００分。これを各条件および時点について３連で実施した。次いで、切片をＯＣＴ包埋培地に包埋し、ドライアイススラリーで急速冷凍した。次いで、試料を−８０℃で凍結切片になるまで保管した。およそ４０μｍの切片をいくつか各試料の中心部から取得した（図２５Ａ、図２５Ｂ、図２５Ｃ、図２５Ｄ、図２５Ｅ、図２５Ｆ、図２７Ａ、図２７Ｂ、図２７Ａ、図２７Ｂ、図２７Ｃ、図２７Ｄ、および図２７Ｅ）。
【０２９５】
一部の実施形態が本明細書において示され、記載されているが、そのような実施形態は、単に例として提供されている。当業者は、本発明から逸脱することなく多数の変形、変化および置換をすぐに思いつくであろう。本明細書に記載の発明の実施形態に対する種々の代替を本発明の実施に使用することができることが理解されるべきである。
【図１】
2020500218.tif 000031
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
2020500218.tif 000038
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１ＡＢ】
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【図２１ＣＤ】
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【図２１ＥＦ】
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【図２１ＧＨ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
2020500218.tif 000060
【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２５Ｄ】
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【図２５Ｅ】
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【図２５Ｆ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２６Ｅ】
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【図２６Ｆ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２７Ｄ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３１ＡＢ】
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【図３１ＣＤ】
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【図３１ＥＦ】
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【図３２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2020500218.tif 000089
2020500218.tif 000090