(57)【要約】  ペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する抗体およびその断片を記載する。特に、ｐ５３のペプチド、およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する抗体を請求する。こうした抗体および断片を含む組成物、ならびに該抗体および断片を用いて、癌を治療し、予防し、そして診断するための使用および方法もまた開示する。
2020509745.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能である、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片。
【請求項２】
ＭＨＣクラスＩ分子が、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含む、請求項１記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項３】
ｐ５３のペプチドが、配列番号７５のアミノ酸配列、あるいは該アミノ酸配列中に１つまたは２つまたは３つのアミノ酸置換を有するその変異体、を含むか、または、からなる、請求項１または請求項２記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項４】
アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【化１】
2020509745.tif 000008
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１つまたはそれより多くにおいて、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体；
式中、Ｘ１＝ＴまたはＡ、Ｘ２＝ＳまたはＹ、Ｘ３＝ＡまたはＤ、Ｘ４＝ＧまたはＤ、Ｘ５＝ＤまたはＥ、Ｘ６＝ＶまたはＴ、Ｘ７＝ＨまたはＮ、Ｘ８＝ＮまたはＴ、Ｘ９＝ＮまたはＳ、Ｘ１０＝非存在またはＤ、Ｘ１１＝ＡまたはＴ、Ｘ１２＝ＳまたはＡ、Ｘ１３＝ＧまたはＤ、Ｘ１４＝ＭまたはＩ、Ｘ１５＝ＳまたはＴ、Ｘ１６＝ＩまたはＭ、Ｘ１７＝ＮまたはＳ、Ｘ１８＝ＮまたはＤ、Ｘ１９＝ＡまたはＧ、Ｘ２０＝ＧまたはＡ、Ｘ２１＝ＮまたはＹ、Ｘ２２＝ＡまたはＳ、Ｘ２３＝ＦまたはＹ、およびＸ２４＝ＨまたはＹである
を含む、請求項１〜３のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項５】
ＬＣ−ＣＤＲ１が、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＤＹＥＴＨ（配列番号１７）、ＡＧＳＹＳＮＩＧＤＤＹＥＴＨ（配列番号２０）、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号２４）、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＮ（配列番号２７）、ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２９）またはＲＡＳＱＳＩＧＴＤＬＡ（配列番号２１）の１つである、請求項４記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
ＬＣ−ＣＤＲ２が、ＧＮＴＮＲＰＳ（配列番号１８）、ＧＮＮＮＲＰＳ（配列番号２５）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２２）またはＤＶＳＳＲＰＳ（配列番号３０）の１つである、請求項４または請求項５記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
ＬＣ−ＣＤＲ３が、ＱＳＹＤＳＮＬＳＡＷＶ（配列番号１９）、ＱＳＹＤＳＮＬＳＤＴＷＶ（配列番号２６）、ＱＳＹＤＳＳＬＳＡＷＶ（配列番号２８）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＴ（配列番号２３）またはＳＳＹＴＶＦＳＴＬＶ（配列番号３１）の１つである、請求項４〜６のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項８】
ＨＣ−ＣＤＲ１が、ＳＧＧＹＹＷＳ（配列番号３２）、ＳＧＧＹＹＷＡ（配列番号３５）、ＳＧＧＹＹＷＳ（配列番号４０）、ＧＹＹＭＨ（配列番号３７）、またはＤＹＹＩＨ（配列番号４３）の１つである、請求項４〜７のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項９】
ＨＣ−ＣＤＲ２が、ＹＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３３）、ＹＩＹＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４１）、ＷＩＮＰＮＳＡＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３８）またはＷＭＳＰＤＳＧＡＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）の１つである、請求項４〜８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１０】
ＨＣ−ＣＤＲ３が、ＥＮＦＧＡＦＤＨ（配列番号３４）、ＥＮＦＧＳＹＤＹ（配列番号３６）、ＥＧＡＤＧＩＹＹＦＤＹ（配列番号３９）、またはＤＴＹＧＨＤＹ（配列番号４５）の１つである、請求項４〜９のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１１】
以下のＣＤＲ：
【化２】
2020509745.tif 000009
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する、請求項１〜１０のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１２】
以下のＣＤＲ：
【化３】
2020509745.tif 000010
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する、請求項１〜１１のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１３】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能であり、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：Ｘ１ＧＳＸ２ＳＮＩＧＸ３Ｘ４ＹＸ５Ｘ６Ｘ７（配列番号４６）、ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２９）またはＲＡＳＱＳＩＧＴＤＬＡ（配列番号２１）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＮＸ８ＮＲＰＳ（配列番号４７）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２２）またはＤＶＳＳＲＰＳ（配列番号３０）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＳＹＤＳＸ９ＬＳＸ１０Ｘ１１ＷＶ（配列番号４８）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＴ（配列番号２３）またはＳＳＹＴＶＦＳＴＬＶ（配列番号３１）の１つ、に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み；そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＧＧＹＹＷＸ１２（配列番号４９）またはＸ１３ＹＹＸ１４Ｈ（配列番号５０）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＹＳＧＸ１５ＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号５１）またはＷＸ１６Ｘ１７ＰＸ１８ＳＸ１９Ｘ２０ＴＸ２ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５２）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：ＥＮＦＧＸ２２Ｘ２３ＤＸ２４（配列番号５３）、ＥＧＡＤＧＩＹＹＦＤＹ（配列番号３９）またはＤＴＹＧＨＤＹ（配列番号４５）の１つ、に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Ｘ１＝ＴまたはＡ、Ｘ２＝ＳまたはＹ、Ｘ３＝ＡまたはＤ、Ｘ４＝ＧまたはＤ、Ｘ５＝ＤまたはＥ、Ｘ６＝ＶまたはＴ、Ｘ７＝ＨまたはＮ、Ｘ８＝ＮまたはＴ、Ｘ９＝ＮまたはＳ、Ｘ１０＝非存在またはＤ、Ｘ１１＝ＡまたはＴ、Ｘ１２＝ＳまたはＡ、Ｘ１３＝ＧまたはＤ、Ｘ１４＝ＭまたはＩ、Ｘ１５＝ＳまたはＴ、Ｘ１６＝ＩまたはＭ、Ｘ１７＝ＮまたはＳ、Ｘ１８＝ＮまたはＤ、Ｘ１９＝ＡまたはＧ、Ｘ２０＝ＧまたはＡ、Ｘ２１＝ＮまたはＹ、Ｘ２２＝ＡまたはＳ、Ｘ２３＝ＦまたはＹ、およびＸ２４＝ＨまたはＹである、
前記抗体または抗原結合断片。
【請求項１４】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能であり、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、配列番号１〜７の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号８〜１６の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片。
【請求項１５】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含むかまたは発現する細胞に対する、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す、請求項１〜１４のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１６】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含むかまたは発現する細胞によって内在化される、請求項１〜１５のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１７】
完全ヒト抗体または完全ヒト抗体断片である、請求項１〜１６のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１８】
薬剤部分または検出可能部分にコンジュゲート化されている、請求項１〜１７のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項１９】
ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに特異的な抗体または抗原結合断片をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２０】
ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットが、免疫細胞表面分子である、請求項１９記載の抗体または抗原結合断片。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項記載の抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項２２】
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合している、請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを含む、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体。
【請求項２３】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲ、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲをコードする、単離核酸。
【請求項２５】
請求項２４の核酸を含む、ベクター。
【請求項２６】
請求項２４記載の核酸または請求項２５記載のベクターを含む、細胞。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体または抗原結合断片またはＣＡＲの発現に適した条件下で、請求項２６の細胞を培養する工程を含む、前記方法。
【請求項２８】
療法において、または医学的治療法において、使用するための、請求項１〜２１または２３〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞。
【請求項２９】
癌の治療または予防において使用するための、請求項１〜２１または２３〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞。
【請求項３０】
癌の治療または予防のための薬剤製造における、請求項１〜２１または２３〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞の使用。
【請求項３１】
癌を治療するかまたは予防する方法であって、請求項１〜２１または２３〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞の療法的または予防的に有効な量を、被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項３２】
被験体において、癌を治療するかまたは予防する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）請求項１〜２１または２４〜２６のいずれか一項記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項３３】
被験体において、癌を治療するかまたは予防する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）請求項２４記載の核酸または請求項２５記載のベクターを、少なくとも１つの細胞内に導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法。
【請求項３４】
請求項１〜２１または２３〜２６のいずれか一項記載の抗体、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞のあらかじめ決定した量を含む、部分のキット。
【請求項３５】
被験体において、疾患または状態を診断する方法であって、ペプチド−ＭＨＣ複合体を含有するかまたは含有すると推定される試料を、請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片と接触させ、そして抗体または抗原結合断片およびペプチド−ＭＨＣ複合体の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１７年３月８日提出のＳＧ出願第１０２０１７０１８８３Ｒ号より優先権を請求し、該出願の内容および要素は、すべての目的のため、本明細書に援用される。
技術分野
本発明は、ペプチド−ＭＨＣ複合体、特にｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍抑制因子ｐ５３は、悪性腫瘍において見られる、最も一般的に突然変異している遺伝子の１つである。ｐ５３転写因子は、アポトーシス、老化、細胞周期抑制およびゲノム安定性に関与する遺伝子を制御することによって、腫瘍抑制において重要な役割を果たす。したがって、機能喪失を生じるｐ５３の突然変異は、発癌に対する感受性を増加させる。
【０００３】
抗腫瘍免疫における免疫系の非常に重要な構成要素は、腫瘍細胞に対するＣＤ８＋  Ｔ細胞反応の細胞傷害性である。細胞傷害性ＣＤ８＋  Ｔ細胞は、細胞内プロセシングによって得られ、ＭＨＣクラスＩ分子、例えばＨＬＡ＊Ａ２４によって細胞表面上に提示されるペプチドを認識することによって、正常健康細胞から腫瘍細胞を区別する。
【０００４】
しかし、有効な免疫反応が、ＣＤ８＋  Ｔ細胞によって開始されるためには、寛容を破壊するために、ペプチド−ＭＨＣ複合体が、外来性（ｆｏｒｅｉｇｎ）であるか、または「非自己」でなければならない。ｐ５３の突然変異は、正常健康細胞とは異なり、そしてしたがってＴ細胞によって認識されて、ロバストな抗腫瘍免疫反応を誘発しうるこうした異なるペプチドの生成を、潜在的に生じうる。さらに、腫瘍細胞における突然変異体ｐ５３の集積は、ｐ５３の分解におけるプロセスに変化を生じる可能性もあり、これは次に、腫瘍細胞を正常細胞から区別する抗原性ペプチドの異なるレパートリーの生成を導く可能性もある。
【０００５】
療法モノクローナル抗体は、癌治療分野における成功が証明されてきているが、癌細胞表面上のターゲット分子の利用可能性によって制限されている。細胞内タンパク質、例えばｐ５３は、古典的抗体アプローチによってはアクセス不能である。細胞表面上に発現されるペプチド−ＭＨＣ複合体としての細胞内タンパク質由来の抗原性エピトープの提示は、こうした抗原をモノクローナル抗体でターゲティングする機会を提供する。
【０００６】
癌の際、ＭＨＣクラスＩ分子によって異常に発現される細胞内ターゲットをターゲティングする抗体が、異なるグループによって開発されてきている。しかし、これらの抗体は、大部分、白人における優勢アレルであるＨＬＡ＊Ａ０２に焦点を当てており、例えば欧州における１４の最も一般的なＨＬＡ＊Ａ型の中で、ＨＬＡ＊Ａ０２は、〜３０％に相当する。アジアにおけるＨＬＡ−Ａ分布はより分散しており、そしてＨＬＡ＊Ａ２４およびＨＬＡ＊Ａ１１もまた一般的なアレルである。
【発明の概要】
【０００７】
１つの側面において、本発明は、細胞内タンパク質のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子の複合体に結合可能である、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片を提供する。いくつかの態様において、細胞内タンパク質はｐ５３である。
【０００８】
別の側面において、本発明は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能である、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片を提供する。
【０００９】
いくつかの態様において、本発明の多様な側面にしたがって、ＭＨＣクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含む。いくつかの態様において、ｐ５３のペプチドは、配列番号７５のアミノ酸配列、あるいは該アミノ酸配列中に１つまたは２つまたは３つのアミノ酸置換を有するその変異体、を含むか、または、からなる。いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、アミノ酸配列ｉ）〜ｖｉ）：
【００１０】
【化１】
2020509745.tif 000003
【００１１】
あるいは配列ｉ）〜ｖｉ）の１つまたはそれより多くにおいて、１つまたは２つまたは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体；
式中、Ｘ１＝ＴまたはＡ、Ｘ２＝ＳまたはＹ、Ｘ３＝ＡまたはＤ、Ｘ４＝ＧまたはＤ、Ｘ５＝ＤまたはＥ、Ｘ６＝ＶまたはＴ、Ｘ７＝ＨまたはＮ、Ｘ８＝ＮまたはＴ、Ｘ９＝ＮまたはＳ、Ｘ１０＝非存在またはＤ、Ｘ１１＝ＡまたはＴ、Ｘ１２＝ＳまたはＡ、Ｘ１３＝ＧまたはＤ、Ｘ１４＝ＭまたはＩ、Ｘ１５＝ＳまたはＴ、Ｘ１６＝ＩまたはＭ、Ｘ１７＝ＮまたはＳ、Ｘ１８＝ＮまたはＤ、Ｘ１９＝ＡまたはＧ、Ｘ２０＝ＧまたはＡ、Ｘ２１＝ＮまたはＹ、Ｘ２２＝ＡまたはＳ、Ｘ２３＝ＦまたはＹ、およびＸ２４＝ＨまたはＹである
を含む。
【００１２】
いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ１は、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＤＹＥＴＨ（配列番号１７）、ＡＧＳＹＳＮＩＧＤＤＹＥＴＨ（配列番号２０）、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨ（配列番号２４）、ＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＮ（配列番号２７）、ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２９）またはＲＡＳＱＳＩＧＴＤＬＡ（配列番号２１）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ２は、ＧＮＴＮＲＰＳ（配列番号１８）、ＧＮＮＮＲＰＳ（配列番号２５）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２２）またはＤＶＳＳＲＰＳ（配列番号３０）の１つである。いくつかの態様において、ＬＣ−ＣＤＲ３は、ＱＳＹＤＳＮＬＳＡＷＶ（配列番号１９）、ＱＳＹＤＳＮＬＳＤＴＷＶ（配列番号２６）、ＱＳＹＤＳＳＬＳＡＷＶ（配列番号２８）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＴ（配列番号２３）またはＳＳＹＴＶＦＳＴＬＶ（配列番号３１）の１つである。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ１は、ＳＧＧＹＹＷＳ（配列番号３２）、ＳＧＧＹＹＷＡ（配列番号３５）、ＳＧＧＹＹＷＳ（配列番号４０）、ＧＹＹＭＨ（配列番号３７）、またはＤＹＹＩＨ（配列番号４３）の１つである。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ２は、ＹＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号３３）、ＹＩＹＹＳＧＴＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号４１）、ＷＩＮＰＮＳＡＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３８）またはＷＭＳＰＤＳＧＡＴＹＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号４４）の１つである。いくつかの態様において、ＨＣ−ＣＤＲ３は、ＥＮＦＧＡＦＤＨ（配列番号３４）、ＥＮＦＧＳＹＤＹ（配列番号３６）、ＥＧＡＤＧＩＹＹＦＤＹ（配列番号３９）、またはＤＴＹＧＨＤＹ（配列番号４５）の１つである。
【００１３】
いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、以下のＣＤＲ：
【００１４】
【化２】
2020509745.tif 000004
【００１５】
を取り込む少なくとも１つの軽鎖可変領域を有する。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、以下のＣＤＲ：
【００１６】
【化３】
2020509745.tif 000005
【００１７】
を取り込む少なくとも１つの重鎖可変領域を有する。
別の側面において、本発明は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能であり、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖が、ＬＣ−ＣＤＲ１：Ｘ１ＧＳＸ２ＳＮＩＧＸ３Ｘ４ＹＸ５Ｘ６Ｘ７（配列番号４６）、ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２９）またはＲＡＳＱＳＩＧＴＤＬＡ（配列番号２１）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ２：ＧＮＸ８ＮＲＰＳ（配列番号４７）、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号２２）またはＤＶＳＳＲＰＳ（配列番号３０）の１つ；  ＬＣ−ＣＤＲ３：ＱＳＹＤＳＸ９ＬＳＸ１０Ｘ１１ＷＶ（配列番号４８）、ＱＱＲＳＮＷＰＰＴ（配列番号２３）またはＳＳＹＴＶＦＳＴＬＶ（配列番号３１）の１つ、に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２、ＬＣ−ＣＤＲ３を含み；そして
重鎖が、ＨＣ−ＣＤＲ１：ＳＧＧＹＹＷＸ１２（配列番号４９）またはＸ１３ＹＹＸ１４Ｈ（配列番号５０）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：ＹＩＹＹＳＧＸ１５ＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号５１）またはＷＸ１６Ｘ１７ＰＸ１８ＳＸ１９Ｘ２０ＴＸ２ＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号５２）の１つ；  ＨＣ−ＣＤＲ２：ＥＮＦＧＸ２２Ｘ２３ＤＸ２４（配列番号５３）、ＥＧＡＤＧＩＹＹＦＤＹ（配列番号３９）またはＤＴＹＧＨＤＹ（配列番号４５）の１つ、に少なくとも８５％の全体の配列同一性を有する、ＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２、ＨＣ−ＣＤＲ３を含む；
式中、Ｘ１＝ＴまたはＡ、Ｘ２＝ＳまたはＹ、Ｘ３＝ＡまたはＤ、Ｘ４＝ＧまたはＤ、Ｘ５＝ＤまたはＥ、Ｘ６＝ＶまたはＴ、Ｘ７＝ＨまたはＮ、Ｘ８＝ＮまたはＴ、Ｘ９＝ＮまたはＳ、Ｘ１０＝非存在またはＤ、Ｘ１１＝ＡまたはＴ、Ｘ１２＝ＳまたはＡ、Ｘ１３＝ＧまたはＤ、Ｘ１４＝ＭまたはＩ、Ｘ１５＝ＳまたはＴ、Ｘ１６＝ＩまたはＭ、Ｘ１７＝ＮまたはＳ、Ｘ１８＝ＮまたはＤ、Ｘ１９＝ＡまたはＧ、Ｘ２０＝ＧまたはＡ、Ｘ２１＝ＮまたはＹ、Ｘ２２＝ＡまたはＳ、Ｘ２３＝ＦまたはＹ、およびＸ２４＝ＨまたはＹである、
前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００１８】
別の側面において、本発明は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能であり、軽鎖および重鎖可変領域配列を含む、場合によって単離された、抗体または抗原結合断片であって：
軽鎖配列が、配列番号１〜７の１つの軽鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有し、そして；
重鎖配列が、配列番号８〜１６の１つの重鎖配列に少なくとも８５％の配列同一性を有する
前記抗体または抗原結合断片を提供する。
【００１９】
いくつかの態様において、本発明の多様な側面にしたがって、抗体または抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含むかまたは発現する細胞に対する、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す。いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含むかまたは発現する細胞によって内在化される。いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、完全ヒト抗体または完全ヒト抗体断片である。いくつかの態様において、抗体または抗原結合断片は、薬剤部分または検出可能部分にコンジュゲート化されている。
【００２０】
いくつかの態様において、本発明の多様な側面にしたがって、抗体または抗原結合断片は、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに特異的な抗体または抗原結合断片をさらに含む。いくつかの態様において、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに特異的な抗体または抗原結合断片は、免疫細胞表面分子に結合可能な抗体または抗原結合断片であり、すなわち、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットは、免疫細胞表面分子である。
【００２１】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
別の側面において、本発明は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合している、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを含む、場合によって単離された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ複合体を提供する。
【００２２】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲ、および少なくとも１つの薬学的に許容されうるキャリアーを含む、組成物を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲをコードする、単離核酸を提供する。
【００２３】
別の側面において、本発明は、本発明記載の核酸を含む、ベクターを提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載の核酸または本発明記載のベクターを含む、細胞を提供する。
【００２４】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを作製するための方法であって、抗体、抗原結合断片またはＣＡＲの発現に適した条件下で、本発明の細胞を培養する工程を含む、前記方法を提供する。
【００２５】
別の側面において、本発明は、療法において、または医学的治療法において、使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を提供する。
【００２６】
別の側面において、本発明は、癌の治療または予防において使用するための、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、癌の治療または予防のための薬剤製造における、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞の使用を提供する。
【００２７】
別の側面において、本発明は、癌を治療するかまたは予防する方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞の療法的または予防的に有効な量を、被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【００２８】
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは予防する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように、少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【００２９】
別の側面において、本発明は、被験体において、癌を治療するかまたは予防する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）本発明記載の核酸または本発明記載のベクターを、少なくとも１つの細胞内に導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾し、そして；
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【００３０】
別の側面において、本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞のあらかじめ決定した量を含む、部分のキットを提供する。
別の側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を診断する方法であって、ペプチド−ＭＨＣ複合体を含有するかまたは含有すると推定される試料を、請求項１〜２１のいずれか一項記載の抗体または抗原結合断片と接触させ、そして抗体または抗原結合断片およびペプチド−ＭＨＣ複合体の複合体の形成を検出する工程を含む、前記方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
本発明の原理を例示する態様および実験を、ここで、付随する図に言及しながら論じる。
【図１−１】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図１−２】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの軽鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−１】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−２】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図２−３】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの重鎖可変ドメイン配列。ＣＤＲに下線を引き、そして別個に示す。
【図３】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図４】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図５】（Ａ）ＬＣ−ＣＤＲ１、（Ｂ）ＬＣ−ＣＤＲ２および（Ｃ）ＬＣ−ＣＤＲ３に関する、抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンおよびコンセンサス配列の軽鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図６】（Ａ）ＨＣ−ＣＤＲ１、（Ｂ）ＨＣ−ＣＤＲ２および（Ｃ）ＨＣ−ＣＤＲ３に関する、抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンおよびコンセンサス配列の重鎖ＣＤＲ配列を示す表。
【図７−１】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンのＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列。
【図７−２】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンのＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列。
【図８−１】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンのＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列。
【図８−２】抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンのＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列。
【図９】（Ａ）ｐ５３１２５−１３４−Ａ２４単量体および（Ｂ）陰性対照抗原に対する抗ｐ５３−Ａ２４抗体クローンの結合のＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフ。
【図１０−１】非パルス処理（１）、関連しないペプチドｈＴＥＲＴ３２４−３３２、ｈＴＥＲＴ４６１−４６９、ＷＴ１２３５−２４３、ＷＴ１４１７−４２５またはｐ５３２０４−２１２でパルス処理された（２〜６）、あるいはｐ５３１２５−１３４でパルス処理された（７）、ＨＬＡ＊Ａ２４発現ＨＴ２９細胞に対する、（Ａ）Ｐ１Ｃ１、（Ｂ）Ｐ１Ｈ４および（Ｃ）Ｐ２Ｂ４の結合を示すグラフ。
【図１０−２】非パルス処理（１）、関連しないペプチドｈＴＥＲＴ３２４−３３２、ｈＴＥＲＴ４６１−４６９、ＷＴ１２３５−２４３、ＷＴ１４１７−４２５またはｐ５３２０４−２１２でパルス処理された（２〜６）、あるいはｐ５３１２５−１３４でパルス処理された（７）、ＨＬＡ＊Ａ２４発現ＨＴ２９細胞に対する、（Ａ）Ｐ１Ｃ１、（Ｂ）Ｐ１Ｈ４および（Ｃ）Ｐ２Ｂ４の結合を示すグラフ。
【図１１−１】（Ａ）ｐ５３ペプチドでパルス処理されたか（上部パネル）またはパルス処理されないか（下部パネル）いずれかの、野生型ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（左パネル）またはＨＬＡ＊Ａ２４形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（右パネル）、および（Ｂ）多様なｈＴＥＲＴ、ＷＴ１またはｐ５３ペプチドでパルス処理される前または処理された後のＨＬＡ＊Ａ２４＋  ＳｏａＳ２細胞に対する、Ｐ１Ｃ１の結合を示すグラフ。ＭＦＩヒストグラムを示す。
【図１１−２】（Ａ）ｐ５３ペプチドでパルス処理されたか（上部パネル）またはパルス処理されないか（下部パネル）いずれかの、野生型ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（左パネル）またはＨＬＡ＊Ａ２４形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（右パネル）、および（Ｂ）多様なｈＴＥＲＴ、ＷＴ１またはｐ５３ペプチドでパルス処理される前または処理された後のＨＬＡ＊Ａ２４＋  ＳｏａＳ２細胞に対する、Ｐ１Ｃ１の結合を示すグラフ。ＭＦＩヒストグラムを示す。
【図１２】ｐ５３−Ａ２４に対する抗体Ｐ１Ｃ１由来抗体クローンの結合アフィニティを示す表。
【図１３】非パルス処理ＨＴ２９細胞に対する、Ｐ１Ｃ１由来クローン、生殖系列型（Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ）および２つのアフィニティ成熟クローン（Ｐ１Ｃ１＿ｄｍおよびＰ１Ｃ１＿ｔｍ）の結合を示すグラフ。ＭＦＩヒストグラムを示す；左側の狭く鋭いピークは陰性対照（二次抗体のみ）に相当し、そして右側のより広いピークは試験クローンに相当する。
【図１４】Ｐ１Ｃ１＿ｇｌまたはＰ１Ｃ１＿ｔｍの存在下のＡＤＣＣアッセイにおけるＨＬＡ＊Ａ２４陽性細胞の特異的殺細胞を示す棒グラフ。３つ組の平均細胞傷害性±ＳＤを示す。
【図１５−１】ＨＴ２９パルス処理細胞による、ｐ５３−Ａ２４に複合体化した抗体の内在化を示すグラフおよび棒グラフ。（Ａ）氷上（上部パネル）または３７℃（下部パネル）でｐＨ感受性色素標識Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ（左パネル）または標識アイソタイプ対照抗体（右パネル）とインキュベーションしたＨＴ２９細胞のＭＦＩ曲線。
【図１５−２】ＨＴ２９パルス処理細胞による、ｐ５３−Ａ２４に複合体化した抗体の内在化を示すグラフおよび棒グラフ。（Ｂ）ｐＨ感受性色素標識Ｐ１Ｃ１＿ｔｍまたは標識アイソタイプ対照抗体とインキュベーションした細胞に関する、異なる時点での細胞のＭＦＩ値。
【図１６】Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体の非存在下（ＰＮＵ／ＰＢＤ二次抗体のみ）または存在下（ＰＮＵ／ＰＢＤ）でのＨＴ２９細胞に対するＰＮＵおよびＰＢＤの細胞傷害性効果の増加を示す棒グラフ。細胞を、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍおよび抗Ｆｃ抗体にコンジュゲート化されたＰＮＵまたはＰＢＤ細胞傷害性薬剤とインキュベーションした。３つの濃度の抗体を試験し、これらの各々に関して、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ／抗Ｆｃ抗体の比は１：１であった。未処理のまま放置されたウェル中の細胞数に比較した、インキュベーション７２時間後に生存した細胞の比率を示す。
【図１７−１】Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ特異性を示す写真。該抗体を用いて、ＮＳＧマウスにおいて、注入したヒト腫瘍細胞株を追跡した。（Ａ）ｐ５３およびＨＬＡ＊Ａ２４を発現しているＨＴ２９細胞を動物の右脇腹に植え付け、そしてＨＬＡ＊Ａ２４−／ｐ５３＋対照細胞を左脇腹に植え付けた。
【図１７−２】Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ特異性を示す写真。該抗体を用いて、ＮＳＧマウスにおける注入したヒト腫瘍細胞株を追跡した。（Ｂ）ｐ５３およびＨＬＡ＊Ａ２４を発現しているＨＴ２９細胞を動物の右脇腹に植え付け、そしてＨＬＡ＊Ａ２４＋／ｐ５３−対照細胞を左脇腹に植え付けた。蛍光標識Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体の注入後の示す時間数で、確立された腫瘍のｉｎ  ｖｉｖｏ画像化からの代表的な画像を示す。
【図１８】ｐ５３  ＣＡＲ  Ｔ細胞、対照Ｔ細胞による、またはＴ細胞なしでの、ＨＴ２９腫瘍細胞の細胞溶解％を示すグラフ。インピーダンスに基づくＴ細胞仲介性細胞傷害性アッセイ（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）を用いて、４０時間に渡り、細胞溶解％を測定した。
【図１９】抗ｐ５３−Ａ２４／ＣＤ３二重特異性抗体を、ヒト初代Ｔ細胞を通じた腫瘍細胞殺傷を誘導する能力に関して評価した。（Ａ）２つの異なる形式の二重特異性抗体：ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２を試験した。（Ｂ）ＢｓＡｂ１およびＢｓＡｂ２のターゲット特異的細胞傷害性を、ＨＬＡ−Ａ２４＋／ｐ５３突然変異体＋細胞株ＨＴ２９（ＢｓＡｂ１：右側の曲線、ＢｓＡｂ２：左側の曲線）およびＨＬＡ−Ａ２４＋／ｐ５３ヌル細胞株ＳａＯＳ２に対して試験した。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、ペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する抗体および抗原結合断片、特にＭＨＣクラスＩ分子に結合している（すなわち該分子によって提示されている）ｐ５３ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体、に結合可能である抗体に関する。
【００３３】
腫瘍関連ペプチド−ＭＨＣ複合体、例えばｐ５３／ＨＬＡ＊Ａ２４に対するＴＣＲの特異性を模倣する抗体／断片は、腫瘍特異的ターゲティング剤として有用である。こうした種は、それ自体、療法剤として、または薬剤および毒素などのペイロードの特異的送達のためのターゲティングツールとして、そしてまた診断ツールとしても有用である。
【００３４】
ペプチド−ＭＨＣ複合体
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）はＭＨＣ分子によって提示される抗原ペプチドを認識する。抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の分子機構によって、ペプチドへとプロセシングされ、次いで、該ペプチドがＭＨＣ分子と会合し、そして細胞表面で、ペプチド−ＭＨＣ複合体として提示される。異なるＴＣＲは、異なるペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する異なる能力、そしてしたがって該複合体に対する異なる反応性を示す。抗原プロセシング、装填およびＭＨＣ上での提示は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，  第５版  Ｊａｎｅｗａｙ  ＣＡ  Ｊｒ，  Ｔｒａｖｅｒｓ  Ｐ，  Ｗａｌｐｏｒｔ  Ｍら  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （２００１），  第５章に詳細に記載される。
【００３５】
本発明は、特に、ペプチド−ＭＨＣ複合体に特異的に結合可能である、ＴＣＲ様抗体に関する。特に、本発明は、ＭＨＣクラスＩ分子によって提示される細胞内タンパク質のペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能な抗体に関する。
【００３６】
「細胞内タンパク質」は、該タンパク質を発現している細胞の表面で、有意な度合いには発現していないタンパク質でありうる。細胞内タンパク質の細胞内局在は、主に、該タンパク質を発現している細胞の細胞質または核に対してであってもよいし、あるいは該タンパク質を発現している細胞の細胞内小器官、例えば小胞体、ゴルジ体等に対してであってもよい。
【００３７】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＭＨＣクラスＩによる提示が、疾患、例えば癌において上方制御されている、細胞内タンパク質のペプチドを含む、ペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能である。いくつかの態様において、本発明の抗体は、癌関連ペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能である。
【００３８】
いくつかの態様において、本発明の抗体は、ｐ５３のペプチドを含むペプチド−ＭＨＣ複合体に結合可能である。
ｐ５３腫瘍抑制因子は、ヒトにおいて、ＴＰ５３遺伝子によってコードされるタンパク質である。Ｐ５３は、ＤＮＡ損傷および他のゲノム異常に対する細胞反応において、非常に重要な役割を果たす。ｐ５３の活性化は、細胞周期抑止、ＤＮＡ修復またはアポトーシスを導く。本明細書において、「ｐ５３」は、任意の種由来のｐ５３を指し、そしてこれには、任意の種由来のｐ５３のアイソフォーム、断片、変異体または相同体が含まれる。いくつかの態様において、ｐ５３は、ヒトｐ５３、霊長類ｐ５３、非ヒト霊長類ｐ５３、齧歯類ｐ５３、ネズミｐ５３、または哺乳動物ｐ５３である。
【００３９】
いくつかの態様において、ｐ５３は、ＵｎｉＰｒｏＫＢ−Ｐ０４６３７（Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ）のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなってもよい：
【００４０】
【化４】
2020509745.tif 000006
【００４１】
いくつかの態様において、ｐ５３は、配列番号７０のアミノ酸配列に、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなってもよい。
【００４２】
ｐ５３をコードする遺伝子の突然変異は、多様な癌の発展および進行において関連付けられてきている（ＭｕｌｌｅｒおよびＶｏｕｓｄｅｎ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ（２０１４）  ２５：３０４−３１７）。例えば、Ｓａｋａｋｕｒａら  ２００７，  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２５（１）：４３−５１に説明されるように、ｐ５３機能喪失は、ヒト癌において、最も一般的な異常であり、そして８０％を超える腫瘍がｐ５３の欠陥を示し、そしてこれらの異常は、ＨＬＡクラスＩ制限Ｔ細胞による認識のため、腫瘍細胞上のＨＬＡクラスＩ分子によって、野生型ｐ５３エピトープ（ｐ５３タンパク質由来の非突然変異ペプチド配列）の提示増加を導く。
【００４３】
異なるｐ５３エピトープを提示するＭＨＣクラスＩを認識するＣＤ８＋  Ｔ細胞が同定されてきている。これらには、ＨＬＡ−Ａ＊０２（ＨＬＡ−Ａ２）制限エピトープｐ５３６５−７３、ｐ５３１４９−１５７、ｐ５３２６４−２７２およびｐ５３２１７−２２５、ならびにＨＬＡ−Ａ＊２４（ＨＬＡ−Ａ２４）制限エピトープｐ５３１２５−１３４、ｐ５３１６１−１６９、およびｐ５３２０４−２１２（例えば、Ｃｈｉｋａｍａｔｓｕら，  Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００８  ４４（９）：  ８７０−８７７を参照されたい）が含まれる。ｐ５３のこれらのペプチドのアミノ酸配列を以下に示す。
【００４４】
【化５】
2020509745.tif 000007
【００４５】
本明細書において、「ペプチド」は、ペプチド結合によって連結された、２つまたはそれより多いアミノ酸単量体の鎖を指す。いくつかの態様において、ペプチドは、長さ５０アミノ酸またはそれ未満であってもよい。「ポリペプチド」は、本明細書において、ペプチド結合によって連結される２またはそれより多いペプチドの鎖を指す。
【００４６】
いくつかの態様において、ｐ５３のペプチドは、５〜２０、５〜１８、５〜１５、５〜１４、５〜１３、５〜１２、５〜１１、または５〜１０アミノ酸の連続配列を含むかまたは該配列からなってもよい。いくつかの態様において、ペプチドは、長さ５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸の１つであってもよい。
【００４７】
いくつかの態様において、ｐ５３ペプチドは、配列番号７１〜７７の１つの配列、あるいは該アミノ酸配列中に１つまたは２つまたは３つのアミノ酸置換を有するその変異体、を含むか、または、からなる。いくつかの態様において、ペプチドは、アミノ酸配列の一端または両端に、１、２、３、４、５のアミノ酸をさらに含む。いくつかの態様において、ペプチドは、アミノ酸配列の一端または両端に、１〜２、１〜３、１〜４、または１〜５のアミノ酸をさらに含む。
【００４８】
いくつかの態様において、ｐ５３ペプチドは、配列番号７３からならない。
いくつかの態様において、ｐ５３ペプチドは、配列番号７５の配列、あるいは該アミノ酸配列中に１つまたは２つまたは３つのアミノ酸置換を有するその変異体、を含むか、または、からなる。
【００４９】
ペプチドは、ＭＨＣ分子、例えばＭＨＣクラスＩ分子によって提示される。ＭＨＣクラスＩ分子は、α鎖およびβ２−ミクログロブリンのヘテロ二量体である。α鎖は、α１、α２およびα３と称される３つのドメインを有する。α１およびα２ドメインは、ともに、溝を形成し、この溝に、ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるペプチドが結合して、ペプチド−ＭＨＣ複合体を形成する。ＭＨＣクラスＩ  α鎖は多型性であり、そして異なるα鎖が異なるペプチドに結合し、そして提示することが可能である。ヒトにおいて、ＭＨＣクラスＩ  α鎖は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子によってコードされる。
【００５０】
本明細書において、ＭＨＣクラスＩ  α／ＨＬＡは、任意の種由来であってもよく、そしてこれには、任意の種由来のアイソフォーム、断片、変異体または相同体が含まれる。いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩ  α／ＨＬＡは、ヒト、霊長類、非ヒト霊長類、齧歯類、ネズミ、または哺乳動物である。
【００５１】
いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ遺伝子座にコードされるα鎖を含む。いくつかの態様において、α鎖は、アレル群ＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ａ２４のメンバーである、ＨＬＡ−Ａアレルによってコードされる。いくつかの態様において、α鎖は、アレル群ＨＬＡ−Ａ２４のメンバー（例えばＨＬＡ−Ａ２４０２またはＨＬＡ−Ａ２４０３）であるＨＬＡ−Ａアレルによってコードされる。いくつかの態様において、α鎖はＨＬＡ−Ａ２４０２によってコードされる。
【００５２】
いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ２０１によってコードされないα鎖である。いくつかの態様において、ＭＨＣクラスＩ分子は、アレル群ＨＬＡ−Ａ２のメンバーによってコードされないα鎖を含む。
【００５３】
特定の態様において、本発明は、配列番号７５のアミノ酸配列を含むか、または、該配列からなるペプチド、およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含む、ペプチド：ＭＨＣ複合体、に結合可能である抗体または抗原結合断片に関する。
【００５４】
抗体／抗原結合断片
本発明記載の抗体および抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子のペプチド−ＭＨＣ複合体に結合する。
【００５５】
「抗体」によって、本発明者らは、断片およびその誘導体、あるいは合成抗体または合成抗体断片を含める。本明細書において、抗体は、関連ターゲット分子（すなわち抗体が特異的である抗原）に特異的に結合可能なポリペプチドである。本発明記載の抗体は、単離型で提供されてもよい。
【００５６】
モノクローナル抗体技術に関連した今日の技術を考慮すると、抗体は、大部分の抗原に対して調製可能である。抗原結合部分は、抗体の部分（例えばＦａｂ断片）または合成抗体断片（例えば一本鎖Ｆｖ断片［ＳｃＦｖ］）であってもよい。選択した抗原に対する適切なモノクローナル抗体は、既知の技術、例えば、“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，  Ｈ  Ｚｏｌａ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８８）に、そして“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，  Ｊ  Ｇ  Ｒ  Ｈｕｒｒｅｌｌ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８２）に開示されるものによって調製可能である。キメラ抗体は、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら（１９８８，  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｐａｒｔ  ２，  ７９２−７９９）によって論じられる。
【００５７】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、本発明の方法において有用であり、そして抗原上の単一のエピトープを特異的にターゲティングする抗体の均質な集団である。
ＦａｂおよびＦａｂ２断片などの、抗体の抗原結合断片もまた使用／提供してもよく、抗体および抗体断片を遺伝子操作してもよい。抗体の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインは、抗原認識に関与し、この事実は、初期のプロテアーゼ消化実験によって最初に認識された。さらなる確認は、齧歯類抗体の「ヒト化」によって見出された。齧歯類起源の可変ドメインを、ヒト起源の定常ドメインに融合させて、生じる抗体が、齧歯類親抗体の抗原特異性を保持するようにしてもよい（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１，  ６８５１−６８５５）。
【００５８】
いくつかの態様において、抗体／断片は、完全ヒト抗体／断片である。完全ヒト抗体／断片は、ヒト核酸配列（単数または複数）によってコードされる。完全ヒト抗体／断片は、非ヒトアミノ酸配列を欠く。
【００５９】
完全ヒト抗体の産生に対して、２つの最も一般的に使用される技術は、（ｉ）ヒト抗体遺伝子がファージディスプレイライブラリーにおいて発現される、ファージディスプレイ、および（ｉｉ）ヒト抗体遺伝子を有するように操作されたトランスジェニックマウスにおける抗体の産生（ＰａｒｋおよびＳｍｏｌｅｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）５６：３６９−４２１に記載される）である。簡潔には、ヒト抗体遺伝子−ファージディスプレイ技術において、ＶＨおよびＶＬ鎖をコードする遺伝子を、「ナイーブ（ｎａｉｖｅ）」ヒトリンパ球からのＰＣＲ増幅およびクローニングによって生成し、そしてジスルフィド連結Ｆａｂ断片としてまたは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片としてのいずれかで発現されうるライブラリーに組み立てる。糸状バクテリオファージの表面コートタンパク質にＦａｂまたはｓｃＦｖコード遺伝子を融合させ、そして次いで、関心対象のターゲットに結合可能なＦａｂまたはｓｃＦｖは、抗原でライブラリーをスクリーニングすることによって同定されうる。分子進化またはアフィニティ成熟法を使用して、Ｆａｂ／ｓｃＦｖ断片のアフィニティを増進してもよい。トランスジェニックマウス技術においては、内因性ネズミＩｇ遺伝子遺伝子座が、相同組み換えによって、そのヒト相同体で置き換えられているマウスを、抗原で免疫し、そして慣用的なハイブリドーマ技術によってモノクローナル抗体を調製して、完全ヒトモノクローナル抗体を生じる。
【００６０】
抗原特異性は可変ドメインによって与えられ、そして定常ドメインからは独立であることは、すべて１つまたはそれより多くの可変ドメインを含有する抗体断片の細菌発現を伴う実験から知られる。これらの分子には、Ｆａｂ様分子（Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）；  Ｆｖ分子（Ｓｋｅｒｒａら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０３８）；  ＶＨおよびＶＬパートナードメインが柔軟なオリゴペプチドを通じて連結される、一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）分子（Ｂｉｒｄら（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，  ４２３；  Ｈｕｓｔｏｎら（１９８８）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５，  ５８７９）；ならびに単離Ｖドメインを含む単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄら（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，  ５４４）が含まれる。特異的結合部位を保持する抗体断片合成に関与する技術の一般的な概説は、Ｗｉｎｔｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４９，  ２９３−２９９中に見出されるはずである。
【００６１】
「ＳｃＦｖ分子」によって、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬパートナードメインが、例えば柔軟なオリゴペプチドによって共有結合されている分子を意味する。
Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ抗体断片は、すべて大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）において発現可能であり、そして大腸菌から分泌可能であり、したがって、多量の前記断片の容易な産生が可能になる。
【００６２】
全抗体、およびＦ（ａｂ’）２断片は「二価」である。「二価」によって、本発明者らは、前記抗体およびＦ（ａｂ’）２断片が２つの抗原結合部位を有することを意味する。対照的に、Ｆａｂ、Ｆｖ、ＳｃＦｖおよびｄＡｂ断片は一価であり、１つの抗原結合部位しか持たない。
【００６３】
本発明記載の抗原結合断片は、ターゲット抗原に結合可能なポリペプチドの任意の断片であってもよい。
いくつかの態様において、抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片の抗原結合領域を一緒に定義する少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわちＬＣ−ＣＤＲ１、ＬＣ−ＣＤＲ２およびＬＣ−ＣＤＲ３；本明細書において、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３ともまた称される）および３つの重鎖ＣＤＲ（すなわちＨＣ−ＣＤＲ１、ＨＣ−ＣＤＲ２およびＨＣ−ＣＤＲ３；本明細書において、ＨＣ−ＣＤＲ１〜３ともまた称される）を含む。いくつかの態様において、抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインを含んでもよい。いくつかの態様において、抗原結合断片は、抗体または抗原結合断片の軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドを含んでもよい。
【００６４】
本発明はまた、本発明記載の１つまたはそれより多い抗原結合断片またはポリペプチドを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合およびＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体である。ＣＡＲ構造および操作は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｄｏｔｔｉら，  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説される。ＣＡＲは、典型的には、細胞膜アンカー領域、例えば膜貫通領域、およびシグナル伝達領域に連結された細胞外抗原結合領域を含む。場合によるヒンジまたはスペーサー領域は、抗原結合領域および細胞膜アンカー領域間に分離を提供することも可能であり、そして柔軟性リンカーとして作用することも可能である。
【００６５】
本発明記載の抗原結合断片またはポリペプチドは、本明細書において、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の抗原結合ドメインとして提供される。いくつかの態様において、ＣＡＲは、本明細書記載の抗体、抗原結合断片またはポリペプチドの任意の態様にしたがって、ＶＬドメインおよびＶＨドメインを含む。本発明記載のＣＡＲの抗原結合領域は、任意の適切な形式、例えばｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ等で提供されてもよい。
【００６６】
細胞膜アンカー領域または膜貫通領域を、ＣＡＲの抗原結合領域およびシグナル伝達領域の間に提供し、そして該領域は、抗原結合領域が細胞外空間にあり、そしてシグナル伝達領域が細胞内部にあるように、ＣＡＲを発現している細胞の細胞膜へのＣＡＲのアンカーリングを提供する。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３−ζ、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の１つの膜貫通領域アミノ酸配列を含むか、該配列からなるか、あるいは、該配列に由来するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる細胞膜アンカー領域を含む。本明細書において、参照アミノ酸配列「に由来する」領域は、参照配列に、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【００６７】
細胞膜アンカー領域または膜貫通領域は、細胞膜に渡る、疎水性アルファらせんであってもよい。シグナル伝達領域と会合する膜貫通領域は共通して用いられるか、あるいは、膜貫通領域は、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのこうしたドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限にするように、選択されるかまたはアミノ酸置換によって修飾されてもよい。
【００６８】
ＣＡＲは、Ｔ細胞強度、特異性および安全性をさらに増進させるため、共刺激性リガンド、キメラ共刺激性受容体またはサイトカインと組み合わされてもよい（本明細書に特に援用される、Ｓａｄｅｌａｉｎら，  キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）設計の基本原理。  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ２０１３  Ａｐｒｉｌ；  ３（４）：  ３８８−３９８．  ｄｏｉ：１０．１１５８／２１５９−８２９０．ＣＤ−１２−０５４８）。
【００６９】
本発明記載のＣＡＲを含む細胞もまた提供する。本発明記載のＣＡＲを用いて、ＣＡＲ発現免疫細胞、例えばＴ細胞を生成することも可能である。これらの細胞は、ＣＡＲが特異的である抗原（単数または複数）を発現する癌細胞、例えば腫瘍細胞をターゲティングすることも可能である。Ｔ細胞内へのＣＡＲの操作は、形質導入および拡大のためのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養中に実行可能であり、例えば養子Ｔ細胞療法のためのＴ細胞の拡大中に起こる。
【００７０】
また、本発明において、本発明記載の抗体または抗原結合断片を含む二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片も提供する。二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片は、（ｉ）本発明記載の抗体または抗原結合断片、および（ｉｉ）ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに対して特異的な抗体または抗原結合断片を含んでもよい。
【００７１】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片は、本発明記載の抗原または抗原結合断片、および免疫細胞表面分子に結合可能な抗体または抗原結合断片を含む。本明細書において、免疫細胞表面分子は、免疫細胞の細胞表面で発現される分子であり、そして任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、またはその断片であってもよい。
【００７２】
免疫細胞表面分子は、任意の免疫細胞の細胞表面で発現されてもよい。いくつかの態様において、免疫細胞は、造血起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、またはその前駆体（例えば胸腺細胞またはプレＢ細胞）であってもよい。細胞は、１つまたはそれより多いＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζおよび／またはＣＤ３η）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγおよび／またはＴＣＲδ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＰＤ−１、および／またはＣＴＬＡ４を発現してもよい。
【００７３】
いくつかの態様において、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ４＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））、Ｔヘルパー細胞（例えばＴｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ９、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２またはＴｆｈ細胞）、制御Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、またはエフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）である。
【００７４】
いくつかの態様において、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ１６＋  ＮＫ細胞である。
いくつかの態様において、免疫細胞表面分子は、１つまたはそれより多いＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζまたはＣＤ３η）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγおよびＴＣＲδ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ５、ＣＣＲ７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＰＤ−１、およびＣＴＬＡ４より選択される。
【００７５】
ＣＤ３は、Ｔリンパ球細胞表面で発現されるポリペプチドの複合体である。哺乳動物において、ＣＤ３複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖および２つのＣＤ３ε鎖を含有する。これらの鎖は、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαおよびＴＣＲβ）およびＣＤ３ζ／ＣＤ３η鎖と会合して、ＣＤ３−ＴＣＲ複合体を形成し、これは、Ｔリンパ球において、活性化シグナルを生じる。
【００７６】
いくつかの態様において、免疫細胞表面分子は、Ｔ細胞の細胞表面で発現される分子である。いくつかの態様において、免疫細胞表面分子は、ＣＤ３−ＴＣＲ複合体のポリペプチドである。いくつかの態様において、免疫細胞表面分子は、ＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζまたはＣＤ３η）、ＣＤ３ポリペプチドを含有する複合体、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγまたはＴＣＲδ）またはＴＣＲポリペプチドを含有する複合体である。
【００７７】
いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片は、本発明記載の抗体または抗原結合断片、およびＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの態様において、二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片は、本発明記載の抗体または抗原結合断片、およびＣＤ３−ＴＣＲ複合体ポリペプチド結合ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＤ３−ＴＣＲ複合体ポリペプチド結合ドメインは、ＣＤ３ポリペプチド結合ドメインである。いくつかの態様において、ＣＤ３−ＴＣＲ複合体ポリペプチド結合ドメインは、ＣＤ３ε結合ドメインである。
【００７８】
二重特異性抗体／断片は、任意の適切な形式、例えば本明細書にその全体が援用されるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９７に記載される形式で提供されてもよい。例えば、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片は、二重特異性抗体コンジュゲート（例えばＩｇＧ２、Ｆ（ａｂ’）２またはＣｏｖＸ−Ｂｏｄｙ）、二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばＩｇＧ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＩｇＧ−ｓＶＤ、ｓＶＤ−ＩｇＧ、２イン１−ＩｇＧ、ｍＡｂ２、またはＴａｎｄｅｍａｂ共通ＬＣ）、非対称二重特異性ＩｇＧまたはＩｇＧ様分子（例えばｋｉｈ  ＩｇＧ、ｋｉｈ  ＩｇＧ共通ＬＣ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ｋｉｈ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、ｍＡｂ−Ｆｖ、電荷対（ｃｈａｒｇｅ  ｐａｉｒ）またはＳＥＥＤ−ｂｏｄｙ）、小分子二重特異性抗体分子（例えばＤｉａｂｏｄｙ（Ｄｂ）、ｄｓＤｂ、ＤＡＲＴ、ｓｃＤｂ、ｔａｎｄＡｂｓ、タンデムｓｃＦｖ（ｔａＦｖ）、タンデムｄＡｂ／ＶＨＨ、三重ボディ、三重ヘッド、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ２）、二重特異性ＦｃおよびＣＨ３融合タンパク質（例えばｔａＦｖ−Ｆｃ、Ｄｉ−ディアボディ、ｓｃＤｂ−ＣＨ３、ｓｃＦｖ−Ｆｃ−ｓｃＦｖ、ＨＣＡｂ−ＶＨＨ、ｓｃＦｖ−ｋｉｈ−Ｆｃ、またはｓｃＦｖ−ｋｉｈ−ＣＨ３）、または二重特異性融合タンパク質（例えばｓｃＦｖ２−アルブミン、ｓｃＤｂ−アルブミン、ｔａＦｖ−毒素、ＤＮＬ−Ｆａｂ３、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ、ＤＮＬ−Ｆａｂ４−ＩｇＧ−サイトカイン２）であってもよい。特に、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ＭＡｂｓ  ２０１２，  ４（２）：  １８２−１９の図２を参照されたい。二重特異性抗体または抗原結合断片は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）であってもよい。
【００７９】
いくつかの態様において、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに対して特異的な抗体または抗原結合断片は、本明細書記載の二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片の断片結晶化可能領域（Ｆｃ領域）上に位置する。いくつかの態様において、二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片のＦａｂ領域は、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに対して特異的な抗体または抗原結合断片を含む。いくつかの態様において、ペプチド−ＭＨＣ複合体以外のターゲットに対して特異的な抗体または抗原結合断片は、本明細書記載の二重特異性抗体または二重特異性抗原結合断片のＦａｂ領域に置き換わる。
【００８０】
二重特異性抗体を産生するための方法には、例えば還元可能ジスルフィドまたは還元不能チオエーテル結合を用いた、例えば本明細書にその全体が援用されるＳｅｇａｌおよびＢａｓｔ，  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような、抗体または抗体断片の化学的架橋が含まれる。例えば、Ｎ−スクシニミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）を用いて、例えばヒンジ領域ＳＨ基を通じてＦａｂ断片を化学的に架橋して、ジスルフィド連結二重特異性Ｆ（ａｂ）２ヘテロ二量体を生成してもよい。他の方法には、抗体産生ハイブリドーマを、例えばポリエチレングリコールで融合させて、例えばＤ．  Ｍ．およびＢａｓｔ，  Ｂ．  Ｊ．  ２００１．  二重特異性抗体の産生。  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  １４：ＩＶ：２．１３：２．１３．１−２．１３．１６に記載されるような二重特異性抗体を分泌可能なクアドローマ細胞を産生することが含まれる。二重特異性抗体および二重特異性抗原結合断片はまた、組換え的に、例えばどちらも本明細書にその全内容が援用される、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  第２版（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  ２０１２），  第４０章：  二重特異性抗体の産生：ディアボディおよびタンデムｓｃＦｖ（ＨｏｒｎｉｇおよびＦａｒｂｅｒ−Ｓｃｈｗａｒｚ）、または  Ｆｒｅｎｃｈ，  二重特異性抗体作製法，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ２０００；  ４０：３３３−３３９に記載されるような、抗原結合分子のポリペプチドをコードする核酸構築物からの発現によって産生可能である。
【００８１】
非修飾親抗体に比較して、抗原に対する抗体のアフィニティが改善されている修飾抗体を生成する、アフィニティ成熟プロセスによって抗体を産生してもよい。当該技術分野に知られる方法、例えばＭａｒｋｓら，  Ｒｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；  Ｂａｒｂａｓら  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；  Ｓｃｈｉｅｒら  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；  Ｙｅｌｔｏｎら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５５：１９９４−２００４（１９９５）；  Ｊａｃｋｓｏｎら，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５４（７）：３３１  ０−１５  ９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２６：８８９−８９６（１９９２）によって、アフィニティ成熟抗体を産生してもよい。
【００８２】
本発明は、鎖シャフリング、例えば軽鎖シャフリングおよび／または重鎖シャフリングのプロセスをさらに経ている、本明細書記載の抗体を提供する。抗体アフィニティを改善するための鎖シャフリングは、Ｍａｒｋｓ，  鎖シャフリングによる抗体アフィニティの成熟，  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（２００４）Ｖｏｌ．２４８，  ｐｐ３２７−３４３に詳細に記載されており、該文献は、その全体が本明細書に援用され、特に、軽鎖シャフリングは、そのセクション３．１および３．２に詳細に記載される。軽鎖シャフリングにおいて、抗体の重鎖可変領域を軽鎖可変領域パートナーのレパートリーと組み合わせて、関心対象のターゲットタンパク質に高アフィニティを有する新規ＶＬ／ＶＨの組み合わせを同定する。この方式で、非常に高い結合アフィニティを持つように、抗体／断片を最適化する。
【００８３】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＶＨおよび／またはＶＬドメインのＣＤＲ（すなわちＣＤＲ１〜３）またはその変異体を含む。いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＨＣ−ＣＤＲ  １〜３またはその変異体を含む。いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＬＣ−ＣＤＲ  １〜３またはその変異体を含む。
【００８４】
本開示の抗体クローンのＨＣ−ＣＤＲ１〜３およびＬＣ−ＣＤＲ１〜３は、Ｋａｂａｔの定義にしたがって定義される（本明細書にその全体が援用されるＫａｂａｔら，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  ９１−３２４２（１９９１））。
【００８５】
本明細書において、ＣＤＲの変異体は、ＣＤＲのアミノ酸配列中に、例えば１つまたは２つまたは３つの置換を含んでもよい。本明細書において、ＶＬまたはＶＨドメインの変異体は、ドメインのアミノ酸配列中に、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の置換を含んでもよい。
【００８６】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＨＣ−ＣＤＲ１〜３またはその変異体、および本明細書記載の抗体クローンのＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはその変異体を含む。
【００８７】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＶＨおよび／またはＶＬドメインのＣＤＲ、またはその変異体を含む。いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＶＨおよび／またはＶＬドメイン、またはその変異体を含む。
【００８８】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４より選択されるクローンのＶＨおよび／またはＶＬドメインのＣＤＲまたはその変異体を含む。
【００８９】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４より選択されるクローンのＶＨおよび／またはＶＬドメインまたはその変異体を含む。
【００９０】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＶＨドメインのＨＣ−ＣＤＲ１〜３またはその変異体を含む。いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、クローンのＶＨドメインまたはその変異体を含む。
【００９１】
いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、本明細書記載の抗体クローンのＶＬドメインのＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはその変異体を含む。いくつかの側面において、本発明の抗体／断片は、クローンのＶＬドメインまたはその変異体を含む。
【００９２】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４より選択される抗体クローンのＶＨドメインのＨＣ−ＣＤＲ１〜３またはＶＨドメインを含む。
【００９３】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４より選択される抗体クローンのＶＬドメインのＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＶＬドメインを含む。
【００９４】
抗体クローンＰ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４のＶＬドメインのアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ系（Ｋａｂａｔら，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，  ９１−３２４２（１９９１））にしたがって定義される、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３のように、図１に示される。Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌ、Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、１Ｇ７、２Ｅ３、１Ｅ１１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ｂ１１、Ｐ１Ａ８またはＰ２Ｂ４のＶＨドメインのアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔ系にしたがって定義される、ＨＣ−ＣＤＲ１〜３のように、図２に示される。
【００９５】
本発明記載の抗体／断片は、本明細書記載のＶＬおよび／またはＶＨアミノ酸配列の１つまたはそれより多くに対して、高い割合の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＶＬおよび／またはＶＨ鎖を含んでもよい。例えば、本発明記載の抗体には、配列番号１〜７の１つのＶＬ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ鎖を有する抗体が含まれる。本発明記載の抗体／断片には、配列番号８〜１６の１つのＶＨ鎖アミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ鎖を有する抗体が含まれる。
【００９６】
本発明記載の抗体／断片は、本明細書記載のＶＬおよび／またはＶＨ核酸配列の１つまたはそれより多くに対して、高い割合の配列同一性を有する核酸配列、あるいはコドン縮重の結果として同じアミノ酸配列をコードする核酸配列にコードされる、ＶＬおよび／またはＶＨ鎖を含んでもよい。例えば、本発明記載の抗体には、配列番号５４〜６０の１つのＶＬ鎖核酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有する核酸配列、あるいはコドン縮重の結果として配列番号５４〜６０の１つと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列にコードされる、ＶＬ鎖を有する抗体が含まれる。本発明記載の抗体／断片には、配列番号６１〜６９の１つのＶＨ鎖核酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有する核酸配列、あるいはコドン縮重の結果として配列番号６１〜６９の１つと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列にコードされる、ＶＨ鎖を有する抗体が含まれる。
【００９７】
本明細書に開示する軽鎖および重鎖ＣＤＲはまた、いくつかの異なるフレームワーク領域と組み合わせて特に有用でありうる。したがって、ＬＣ−ＣＤＲ１〜３またはＨＣ−ＣＤＲ１〜３を有する軽鎖および／または重鎖は、代替フレームワーク領域を所持しうる。適切なフレームワーク領域が当該技術分野に周知であり、そして例えば、本明細書に援用されるＭ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  ＆  Ｇ．  Ｌｅｆｒａｎｃ  （２００１）  ”Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋ”，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓに記載される。
【００９８】
本発明記載の抗体／断片は、検出可能に標識されていてもよいし、または少なくとも検出可能であってもよい。例えば、抗体は、放射性原子または着色分子または蛍光分子または任意の他の方法で容易に検出可能な分子で標識されていてもよい。適切な検出可能分子には、蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、酵素基質、放射標識および結合部分が含まれる。標識は、抗体／断片へのコンジュゲート化によってもよい。抗原結合分子は、検出可能標識で直接標識されていてもよいし、または間接的に標識されていてもよい。いくつかの態様において、標識は：放射性ヌクレオチド（ｒａｄｉｏ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、陽電子放出核種（例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）のため）、ＭＲＩ造影剤または蛍光標識より選択されてもよい。
【００９９】
本発明記載の抗体および抗原結合断片を、エフェクター部分、例えば薬剤部分、例えば細胞傷害性小分子にコンジュゲート化してもよい。こうしたコンジュゲートは、エフェクター部分のターゲティング化送達を通じて、抗体／抗原結合断片が特異的であるターゲットを発現している細胞のターゲティング化殺傷に有用である。
【０１００】
あるいは、いくつかの態様において、本発明記載の抗体および抗原結合断片は、抗体／断片への結合が可能な二次結合剤（例えば二次抗体）と組み合わせて有用である可能性もあり、こうした結合剤は、薬剤、例えば細胞傷害性小分子にコンジュゲート化している。
【０１０１】
いくつかの態様において、部分は、例えばどちらもその全体が本明細書に援用される、ＶａｎｋｅｍｍｅｌｖｅｋｅおよびＤｕｒｒａｎｔ  Ｔｈｅｒ．  Ｄｅｌｉｖ．  （２０１６）７（３），  １４１−１４４またはＤｉａｍａｎｔｉｓおよびＢａｎｊｅｒｉ，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２０１６）１１４，  ３６２−３６７に記載される部分より選択される。いくつかの態様において、薬剤部分は、ＰＮＵ１５９６８２（ＰＮＵ）およびピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）より選択される。いくつかの態様において、薬剤部分はアントラサイクリン誘導体である。
【０１０２】
本発明によって、また、単離重鎖可変領域ポリペプチド、および単離軽鎖可変領域ポリペプチドも提供される。
いくつかの側面において、本明細書記載の抗体クローンの任意の１つのＬＣ−ＣＤＲ１〜３を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの側面において、本明細書記載の抗体クローンの任意の１つの軽鎖可変領域のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離軽鎖可変領域ポリペプチドを提供する。
【０１０３】
いくつかの側面において、本明細書記載の抗体クローンの任意の１つのＨＣ−ＣＤＲ１〜３を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供する。いくつかの側面において、本明細書記載の抗体クローンの任意の１つの重鎖可変領域のアミノ酸配列に、少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離重鎖可変領域ポリペプチドを提供する。
【０１０４】
抗体／断片の機能特性
本発明の抗体および断片は、特定の機能特性を参照することにより特徴づけることも可能である。特に、本発明記載の抗体または抗原結合断片は、以下の特性の１つまたはそれより多くを所持してもよい：
ａ）ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体、例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体に特異的に結合する；
ｂ）ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されるように、≦５μＭの結合アフィニティで結合する；
ｃ）ｐ５３のペプチドの非存在下（例えばｐ５３１２５−１３４の非存在下）で、ＭＨＣクラスＩ分子（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子）に特異的に結合しない；
ｄ）ｐ５３のペプチド（例えばｐ５３１２５−１３４）を含まない、ペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含む）に特異的に結合しない；
ｅ）ＭＨＣクラスＩ分子の非存在下（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子の非存在下）で、ｐ５３のペプチド（例えばｐ５３１２５−１３４）に特異的に結合しない；
ｆ）ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞に対して、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す；
ｇ）ｐ５３のペプチドの非存在下（例えばｐ５３１２５−１３４の非存在下）で、ＭＨＣクラスＩ分子（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子）を含む／発現する細胞に対して、ＡＤＣＣを示さない；
ｈ）ｐ５３のペプチド（例えばｐ５３１２５−１３４）を含まない、ペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含む）を含む／発現する細胞に対して、ＡＤＣＣを示さない；
ｉ）ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞による内在化を示す；
ｊ）ｐ５３のペプチドの非存在下（例えばｐ５３１２５−１３４の非存在下）で、ＭＨＣクラスＩ分子（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子）を含む／発現する細胞による内在化を示さない；
ｋ）ｐ５３のペプチド（例えばｐ５３１２５−１３４）を含まない、ペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含む）を含む／発現する細胞による内在化を示さない；
ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に特異的に結合する抗体／断片は、他の非ターゲット分子／複合体に結合するよりも、より高いアフィニティで、そして／またはより長い期間結合する。
【０１０５】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に、ｐ５３のペプチドの非存在下（例えばｐ５３１２５−１３４の非存在下）で、ＭＨＣクラスＩ分子（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子）に結合するアフィニティよりも高いアフィニティで、そして／またはｐ５３のペプチド（例えばｐ５３１２５−１３４）を含まない、ペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含む）に結合するアフィニティよりも高いアフィニティで、結合しうる。
【０１０６】
いくつかの態様において、非ターゲットに対する抗体の結合の度合いは、例えばＥＬＩＳＡ、ＳＰＲ、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（ＢＬＩ）、マイクロスケールサーモフォレシス（ＭｉｃｒｏＳｃａｌｅ  Ｔｈｅｒｍｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）（ＭＳＴ）によって、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるような、ターゲットに対する抗体の結合の約１０％未満である。あるいは、結合特異性は、本発明の抗体／断片が、非ターゲット分子／複合体に対するＫＤよりも少なくとも０．１桁分（すなわち０．１ｘ１０ｎ、式中、ｎは桁を示す整数である）高いＫＤで、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に結合する結合アフィニティの観点から、反映されうる。これは、場合によって、少なくとも０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、または２．０の１つであってもよい。
【０１０７】
抗体または抗原結合断片のそのターゲットに対する結合アフィニティは、しばしば、解離定数（ＫＤ）の観点で記載される。結合アフィニティは、当該技術分野に知られる方法によって、抗体のＦａｂ型および抗原分子で行われる、例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えばＨｅａｒｔｙら，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  （２０１２）  ９０７：４１１−４４２；またはＲｉｃｈら，  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２００８  Ｆｅｂ；３７３（１）：１１２−２０を参照されたい）、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒインターフェロメトリー（例えばＬａｄら，  （２０１５）  Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ  ２０（４）：  ４９８−５０７；またはＣｏｎｃｅｐｃｉｏｎら，  Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．  ２００９Ｓｅｐ；１２（８）：７９１−８００を参照されたい）、マイクロスケールサーモフォレシス（ＭＳＴ）分析（例えばＪｅｒａｂｅｋ−Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら，  Ａｓｓａｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．  ２０１１  Ａｕｇ；９（４）：３４２−３５３）、または放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、測定可能である。
【０１０８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／断片は、例えばＳＰＲによる分析によって決定した際、１０μＭまたはそれ未満、好ましくは≦５μＭ、≦１μＭ、≦９００ｎＭ、≦８００ｎＭ、≦７００ｎＭ、≦６００ｎＭ、≦５００ｎＭ、≦４００ｎＭ、≦３００ｎＭ、≦２００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦４０ｎＭ、≦３０ｎＭ、≦２０ｎＭ、≦１５ｎＭ、≦１２．５ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦９ｎＭ、≦８ｎＭ、≦７ｎＭ、≦６ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦５００ｐＭの１つのＫＤで、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に結合する。
【０１０９】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／断片は、（例えばＥＬＩＳＡによって決定した際）ＥＣ５０＝１０００ｎｇまたはそれ未満、好ましくは、≦９００ｎｇ／ｍｌ、≦８００ｎｇ／ｍｌ、≦７００ｎｇ／ｍｌ、≦６００ｎｇ／ｍｌ、≦５００ｎｇ／ｍｌ、≦４００ｎｇ／ｍｌ、≦３００ｎｇ／ｍｌ、≦２００ｎｇ／ｍｌ、≦１００ｎｇ／ｍｌ、≦９０ｎｇ／ｍｌ、≦８０ｎｇ／ｍｌ、≦７０ｎｇ／ｍｌ、≦６０ｎｇ／ｍｌ、≦５０ｎｇ／ｍｌ、≦４０ｎｇ／ｍｌ、≦３０ｎｇ／ｍｌ、≦２０ｎｇ／ｍｌ、≦１５ｎｇ／ｍｌ、≦１０ｎｇ／ｍｌ、≦７．５ｎｇ／ｍｌ、≦５ｎｇ／ｍｌ、≦２．５ｎｇ／ｍｌ、または≦１ｎｇ／ｍｌの１つの結合アフィニティで、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）に結合する。
【０１１０】
抗体／断片による結合のアフィニティを、ＥＬＩＳＡアッセイによって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分析してもよい。適切なアッセイは当該技術分野に周知であり、そして例えばＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  ｖｏｌ．１（第２版），  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２０１０），  第５部，  ｐｐ６５７−６６５に記載されるように、当業者によって実行可能である。
【０１１１】
いくつかの態様において、抗体／抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞に対して抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を示す。ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞に対してＡＤＣＣを示す抗体／抗原結合断片は、典型的にはＦｃ領域を含む。
【０１１２】
抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、エフェクター免疫細胞が、ターゲット細胞によって発現される抗原に結合した抗体でコーティングされたターゲット細胞を溶解する、細胞仲介性免疫反応を指す。例えばＮＫ細胞を含むエフェクター免疫細胞は、典型的には、エフェクター細胞によって発現されるＦｃ受容体に対する抗体のＦｃ領域の結合を通じて、抗体でコーティングされた細胞を認識する。Ｆｃ受容体の架橋は、エフェクター細胞からの、パーフォリンおよびグランザイムなどの細胞傷害性因子の放出を生じ、ターゲット細胞の溶解を引き起こす。
【０１１３】
所定の抗体／抗原結合断片がＡＤＣＣを誘発する能力を、例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞殺傷アッセイを用いた分析によって、測定してもよい。こうしたアッセイは、通常、抗体およびエフェクター免疫細胞の存在下での、ターゲット抗原を発現している細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養、および一定期間後の細胞殺傷量の測定を含む。ＡＤＣＣアッセイには、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｎｅｌｓｏｎら，  ２００１，  Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  第７章：単元７．２７に記載されるように、例えば５１Ｃｒ放出アッセイが含まれる。簡潔には、ターゲット細胞を５１Ｃｒで処理し、これを細胞は内在化する。ＡＤＣＣによるターゲット細胞の溶解は、放射性５１Ｃｒの細胞培養上清への放出を生じ、これを検出し、そして定量化可能である。所定のターゲット細胞に対してＡＤＣＣを示す抗体／抗原結合断片は、該抗体／抗原結合断片の非存在下で、または細胞によって発現されていないターゲット抗原に特異的な抗体／断片の存在下で観察される細胞溶解のレベルよりも、より多くの細胞溶解を引き起こす。
【０１１４】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／抗原結合断片は、匹敵するアッセイにおいて、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞の、該抗体／抗原結合断片の非存在下で、または細胞によって発現されていないターゲット抗原に特異的な抗体／断片の存在下での細胞殺傷のレベルの１倍より多い、例えば≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍の細胞殺傷レベルを生じる。
【０１１５】
いくつかの態様において、本発明記載の抗原／抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞による内在化を示す。
【０１１６】
「内在化」は、例えば、細胞表面で発現される抗原に結合した抗体のエンドサイトーシスによる、細胞内への抗体の取り込みを指す。抗体内在化は、例えば検出可能部分で標識された抗体の、抗体局在／輸送の分析を含む、当業者に周知の方法によって分析可能である。例えば、エンドソームに輸送される際、検出可能シグナルを生じるｐＨ感受性色素で標識された抗体を用いて、本明細書の実験実施例に記載するように、抗体内在化を測定してもよい。抗体内在化の分析のためのアッセイは、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、Ｎａｔｈら，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．  ２０１６；  ４３１：１１−２１、およびＬｉａｏ−Ｃｈａｎら，  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．  ２０１５；  １０（４）：  ｅ０１２４７０８に記載される。
【０１１７】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／抗原結合断片は、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞によって、匹敵するアッセイにおいて、適切な対照抗体／断片（例えばアイソタイプ対照）のこれらの細胞による内在化のレベルの１倍より多い、例えば≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍の度合いまで、内在化される。
【０１１８】
いくつかの態様において、本発明記載の抗体／抗原結合断片の、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体）を含む／発現する細胞による内在化は、匹敵するアッセイにおいて、ｐ５３のペプチドおよびＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含まない／発現しない細胞（例えばｐ５３１２５−１３４およびＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるＭＨＣクラスＩ  α鎖を含むＭＨＣクラスＩ分子を含むペプチド−ＭＨＣ複合体を含まない／発現しない細胞）による内在化のレベルの１倍より多い、例えば≧１．０１倍、≧１．０２倍、≧１．０３倍、≧１．０４倍、≧１．０５倍、≧１．１倍、≧１．２倍、≧１．３倍、≧１．４倍、≧１．５倍、≧１．６倍、≧１．７倍、≧１．８倍、≧１．９倍、≧２倍、≧３倍、≧４倍、≧５倍、≧６倍、≧７倍、≧８倍、≧９倍、または≧１０倍多い。
【０１１９】
核酸／ベクター
本発明は、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、核酸は、例えば他の核酸または天然存在生物学的材料から精製されるかまたは単離されている。
【０１２０】
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲをコードする核酸を含むベクターも提供する。
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性核酸をトランスファーするためのビヒクルとして用いられる核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞において、核酸を発現させるための発現ベクターであってもよい。こうしたベクターには、発現しようとする配列をコードする核酸に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれてもよい。ベクターにはまた、終結コドンおよび発現エンハンサーも含まれてもよい。当該技術分野に知られる任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターから本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを発現させてもよい。
【０１２１】
本明細書において、用語「機能可能であるように連結される」には、選択された核酸配列および制御核酸配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、制御配列の影響または調節下で、ヌクレオチド配列の発現を達成するような方式で、共有連結される（それによって発現カセットを形成する）状況が含まれうる。したがって、制御配列が核酸配列の転写を達成可能であるならば、制御配列は、選択された核酸配列に、機能可能であるように連結されている。適切な場合、生じた転写物は、次いで、望ましいタンパク質またはポリペプチドに翻訳されることも可能である。
【０１２２】
本発明記載の核酸および／またはベクターは、細胞、例えば初代ヒト免疫細胞内に導入するために提供されることも可能である。適切なベクターには、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えばガンマレトロウイルスベクター（例えばネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば酵母人工染色体）、例えばどちらも本明細書にその全体が援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ，  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ２０１６  ４，  ９に記載されるようなものが含まれる。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、または単純ヘルペスウイルスベクターであってもよい。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターはｐＥＬＮＳであってもよいし、またはｐＥＬＮＳに由来してもよい。いくつかの態様において、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をコードするベクターであってもよい。
【０１２３】
抗体／断片／ＣＡＲを含む／発現する細胞
本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを含むかまたは発現する細胞も提供する。本発明記載の核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞もまた提供する。
【０１２４】
細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、または非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯類目（ｏｒｄｅｒ  Ｒｏｄｅｎｔｉａ）の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目（ｏｒｄｅｒ  Ｂｏｓ）の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目（ｏｒｄｅｒ  Ｅｑｕｉｄａｅ）の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。
【０１２５】
いくつかの態様において、細胞は、ヒト被験体由来であってもよいし、またはヒト被験体から得られていてもよい。
細胞は免疫細胞であってもよい。細胞は、造血起源の細胞、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ  ＣＤ３ε  ＣＤ３ζまたはＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲαまたはＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４またはＣＤ８を発現してもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
【０１２６】
いくつかの態様において、細胞は抗原特異的Ｔ細胞である。本明細書のいくつかの態様において、「抗原特異的」Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的である抗原または前記抗原を発現する細胞に反応してＴ細胞の特定の機能特性を示す細胞である。いくつかの態様において、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞と関連する機能特性である。いくつかの態様において、抗原特異的Ｔ細胞は、以下の特性の１つまたはそれより多くを示してもよい：例えばＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に対する、細胞傷害性；例えばＴ細胞が特異的である抗原またはＴ細胞が特異的である抗原を含む／発現する細胞に反応した、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ−２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュリシン発現、および／またはＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現。いくつかの態様において、Ｔ細胞が特異的である抗原は、ウイルス、例えばエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）またはヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。
【０１２７】
本発明はまた、本発明記載の核酸またはベクターを含む細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。本発明はまた、本発明記載の抗体、抗原結合断片またはＣＡＲを発現する細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞に導入する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に適した条件下で、細胞を培養する工程をさらに含む。いくつかの態様において、方法をｉｎ  ｖｉｔｒｏで行う。
【０１２８】
いくつかの態様において、本発明記載の単離核酸またはベクターの細胞内への導入は、形質導入、例えばレトロウイルス形質導入を含む。したがって、いくつかの態様において、単離核酸またはベクターは、ウイルスベクターに含まれるか、またはベクターはウイルスベクターである。いくつかの態様において、方法は、本発明記載の核酸またはベクターを、エレクトロポレーションによって、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｋｏｈら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  −  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  （２０１３）  ２，  ｅ１１４に記載されるように、導入する工程を含む。
【０１２９】
本発明はまた、本発明記載の細胞を産生するための方法によって得られるかまたは得られうる細胞も提供する。
療法適用
本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞および組成物を、疾患／状態の医学的治療または予防の方法において使用するために、あるいは疾患／状態の症状の軽減のために、提供してもよい。これらを、治療の必要がある疾患／状態を有する被験体に、そして／または疾患／状態を発展させるかまたはこれらに罹患するリスクがある被験体に、投与してもよい。
【０１３０】
被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は治療が必要な疾患または状態を有すると診断されていてもよいし、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。
【０１３１】
疾患／障害の治療または軽減は、疾患／障害の進行を予防し、例えば状態の悪化を予防するかまたは発展速度を遅延させるために有効であってもよい。いくつかの態様において、治療または軽減は、疾患／障害の改善、例えば疾患／障害の症状の減少、あるいは疾患／障害の重症度／活性の何らかの他の相関物の減少を導いてもよい。
【０１３２】
疾患／障害の予防は、状態の悪化の予防、または疾患／障害の発展の予防、例えば疾患／障害がより後期の慢性段階に発展することの予防を指してもよい。例えば、癌において、予防は、例えば、癌の発展の予防または転移の予防であってもよい。
【０１３３】
いくつかの態様において、疾患／状態は、ｐ５３に関連する疾患／状態、例えばＴＰ５３における突然変異に関連する疾患／状態であってもよい。いくつかの態様において、ＴＰ５３における突然変異に関連する疾患／状態は、ＴＰ５３における突然変異が、疾患／状態の発展または進行に関するリスク要因である、疾患／状態であってもよい。
【０１３４】
疾患／状態は、ＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３のペプチドの発現に関連していてもよい。いくつかの態様において、疾患／状態のエフェクター細胞（例えば疾患／状態の病理と直接または間接的に関連している細胞）は、ＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３のペプチドを発現する。いくつかの態様において、疾患／状態は、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３のペプチドの発現に関連する。いくつかの態様において、疾患／状態は、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３１２５−１３４の発現に関連する。
【０１３５】
本明細書に論じるように、そして例えばＲｏｙｄら  ２００６；，  Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．  １３（６）：１０１７−２６、ならびにＶｏｕｓｄｅｎおよびＬａｎｅ  ２００７，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ８，  ２７５−２８３に概説されるように、ｐ５３は、腫瘍抑制因子であり、そしてＴＰ５３における突然変異は、非常に多様な癌の発展／進行に関与する。突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドをコードするかまたは発現する癌性細胞は、しばしば、細胞表面でＭＨＣクラスＩと複合体を形成しているｐ５３のペプチドを提示する。
【０１３６】
いくつかの態様において、本発明にしたがって治療／予防すべき疾患／状態は、癌である。いくつかの態様において、癌はＴＰ５３における突然変異と関連する。いくつかの態様において、癌は、突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドをコードする／発現する細胞を含む。
【０１３７】
当業者に周知の、例えば生物学的試料の分析に基づく、任意の適切な手段によって、突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドをコードするかまたは発現する癌を決定してもよい。突然変異をコードする核酸の検出に基づいて、例えばＤＮＡ配列決定等によって、突然変異体ｐ５３ポリペプチドをコードする癌を同定してもよい。突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドの発現を検出することによって、突然変異体ｐ５３ポリペプチドを発現する癌を同定してもよい。発現は遺伝子発現またはタンパク質発現であってもよい。例えば、突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの検出によって、例えば定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって、遺伝子発現を決定してもよい。例えば突然変異体ｐ５３ペプチド／ポリペプチドの検出によって、例えば抗体に基づく方法によって、例えばウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡによって、タンパク質発現を決定してもよい。
【０１３８】
本明細書の態様において、癌の単数または複数の細胞は、腫瘍のものであってもよい。
いくつかの態様において、癌は、ＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３のペプチドを発現する細胞を含む。いくつかの態様において、癌は、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩを発現する細胞を含む。いくつかの態様において、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３のペプチドを発現する細胞を含む。いくつかの態様において、癌は、ＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩと複合体を形成するｐ５３１２５−１３４を発現する細胞を含む。
【０１３９】
いくつかの態様において、本発明の抗体／断片は、ターゲットペプチド−ＭＨＣ複合体を発現している細胞に結合し、そしてＡＤＣＣを引き起こすことが可能である。いくつかの態様において、抗体／断片は、ターゲットペプチド−ＭＨＣ複合体を発現している細胞に結合し、そして該細胞によって内在化され、そしてしたがって、例えば薬剤部分、例えば細胞傷害性小分子の、ターゲットペプチド−ＭＨＣ複合体を発現している細胞へのターゲティング化送達に有用である。
【０１４０】
いくつかの態様において、治療は、本発明記載の抗体／断片／ＣＡＲに対するターゲット抗原を発現する細胞の数を減少させることを目的としてもよい。
いくつかの態様において、治療は、本発明の抗体／抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを含む／発現する細胞または細胞集団を修飾する工程を含んでもよく、これは次いで、抗体／断片／ＣＡＲに対するターゲット抗原を発現している細胞の数を減少させるために有用であってもよい。いくつかの態様において、治療は、本発明の抗体／抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを含む／発現するように修飾された細胞または細胞集団を被験体に投与する工程を含んでもよい。
【０１４１】
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（または望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物または腫瘍、あるいは望ましくない細胞増殖、新生物または腫瘍に対するリスクまたは素因の増加であってもよい。癌は、良性または悪性であってもよく、そして原発性または続発性（転移性）であってもよい。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常な成長または増殖であってもよく、そして任意の組織に位置していてもよい。組織の例には、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除く）、小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎骨、縦隔、腸間膜、子宮筋、上咽頭、網（ｏｍｅｎｔｕｍｅ）、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、柔組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、子宮、外陰部、白血球が含まれる。
【０１４２】
治療されうる腫瘍は、神経系または非神経系腫瘍であってもよい。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれから生じてもよく、例えば神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン腫、神経線維肉腫、星状細胞腫および乏突起神経膠腫であってもよい。非神経系癌／腫瘍は、任意の他の非神経組織で生じてもよく、例には、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝細胞腫、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵臓癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液学的癌および肉腫が含まれる。
【０１４３】
いくつかの態様において、方法は、癌、例えば上皮細胞癌、乳癌、胃腸癌（例えば食道癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌（例えばＨＣＣ）、胆嚢癌、結腸直腸癌、肛門癌、胃腸カルチノイド腫瘍）、および肺癌（例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または小細胞肺癌（ＳＣＬＣ））の治療／予防のためである。
【０１４４】
いくつかの態様において、治療すべき癌は、鼻咽頭癌（ＮＰＣ；例えばエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）陽性ＮＰＣ）、子宮頸癌（ＣＣ；例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性ＣＣ）、中咽頭癌（ＯＰＣ；例えばＨＰＶ陽性ＯＰＣ）、胃癌（ＧＣ；例えばＥＢＶ陽性ＧＣ）、肝細胞癌（ＨＣＣ；例えばＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）陽性ＨＣＣ）、肺癌（例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））および頭頸部癌（例えば唇、口、鼻、洞（ｓｉｎｕｓ）、咽頭または喉頭の組織から生じる癌、例えば頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）の１つまたはそれより多くである。
【０１４５】
いくつかの態様において、癌は、ｐ５３遺伝子またはタンパク質発現の増加に関連してもよい。例えば、癌細胞は、匹敵する非癌性細胞に比較した際、ｐ５３の増加した発現を有する可能性もあるし、または癌の非存在下の（例えば健康な対照被験体における）匹敵する細胞による発現レベルと比較した際、他の細胞（例えば非癌性細胞）によるｐ５３発現の増加と関連する可能性もある。
【０１４６】
本発明の１つの態様において、治療または予防の方法は、免疫細胞の養子細胞移入を含んでもよい。養子細胞移入（ＡＣＴ）は、一般的に、細胞（例えば免疫細胞）を被験体から、典型的には細胞を単離する血液試料を抜き取ることによって、得るプロセスを指す。細胞は次いで、典型的には、何らかの方式で処理されるかまたは改変されて、そして次いで、同じ被験体または異なる被験体のいずれかに投与される。治療は、典型的には、被験体に特定の望ましい特性を持つ細胞集団を提供するか、またはその被験体において、こうした特性を持つ細胞の頻度を増加させることを目的とする。Ｔ細胞の養子移入は、例えば、本明細書にその全体が援用される、ＫａｌｏｓおよびＪｕｎｅ  ２０１３，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３９（１）：  ４９−６０において記載される。
【０１４７】
本発明において、養子移入は、被験体に細胞または細胞集団を導入し、そして／または被験体において細胞または細胞集団の頻度を増加させることを目的として実行されてもよい。いくつかの態様において、養子移入は、本発明記載の抗体、断片またはＣＡＲを含む／発現する細胞の移入であってもよい。
【０１４８】
細胞は、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、または単球であってもよい。リンパ球は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞または自然リンパ球（ＩＬＣ）、あるいはその前駆体であってもよい。いくつかの態様において、細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋  Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。いくつかの態様において、Ｔ細胞はウイルス特異的Ｔ細胞である。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ＥＢＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶまたはＨＩＶに特異的である。
【０１４９】
本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは提示する方法であって、被験体から得た少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、修飾した少なくとも１つの細胞を場合によって拡大し、そして修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する工程を含む、前記方法を提供する。
【０１５０】
本発明はまた、腫瘍細胞を殺す方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクターまたは組成物の療法的有効量を細胞に投与する工程を含む、前記方法も提供する。該方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実行されてもよい。被験体において腫瘍細胞を殺す方法であって、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクターまたは組成物の療法的有効量を被験体に投与する工程を含む、前記方法もまた提供する。いくつかの態様において、腫瘍細胞を殺す方法は、本明細書に記載するような療法剤と組み合わせて、抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクターまたは組成物を投与する工程を含む。腫瘍細胞の殺傷は、例えば、膜破壊、細胞溶解、アポトーシス誘導、抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の結果として、あるいは抗体または抗原結合断片にコンジュゲート化された薬剤の作用を通じてであってもよい。
【０１５１】
いくつかの態様において、方法は：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞が、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾し、
（ｃ）修飾した少なくとも１つの細胞を場合によって拡大し、そして；
（ｄ）修飾した少なくとも１つの細胞を被験体に投与する
工程を含む。
【０１５２】
いくつかの態様において、細胞を単離する被験体は、修飾細胞を投与する被験体である（すなわち養子移入は自己細胞のものである）。いくつかの態様において、細胞を単離する被験体は、修飾した細胞を投与する被験体とは異なる被験体である（すなわち養子移入は同種細胞のものである）。
【０１５３】
本発明記載の修飾される少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法にしたがって修飾されてもよい。修飾は、トランスファーされる核酸の永続的または一過性発現のための核酸トランスファーを含んでもよい。
【０１５４】
任意の適切な遺伝子操作プラットホームを用いて、本発明記載の細胞を修飾してもよい。細胞を修飾するための適切な方法には、例えば、本明細書で上記に援用される、Ｍａｕｓら，  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２０１４）  ３２：１８９−２２５に記載されるような遺伝子操作プラットホーム、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションの使用が含まれる。
【０１５５】
いくつかの態様において、方法は、以下の工程の１つまたはそれより多くを含んでもよい：被験体から血液試料を採取する；血液試料から少なくとも１つの細胞を単離および／または拡大する；ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ細胞培養において、少なくとも１つの細胞を培養する；少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する；修飾した少なくとも１つの細胞を拡大する；修飾した少なくとも１つの細胞を収集する；修飾細胞を、アジュバント、希釈剤、またはキャリアーと混合する；修飾細胞を被験体に投与する。
【０１５６】
いくつかの態様において、方法は、細胞を処理して、抗体／断片、ＣＡＲ、核酸、またはベクターの発現を誘導／増進させる工程をさらに含んでもよい。例えば、核酸／ベクターは、特定の剤での処理に反応した、核酸／ベクターからの、抗体／断片またはＣＡＲの発現の誘導性上方制御のための制御要素を含んでもよい。いくつかの態様において、処理は、本発明記載の修飾細胞を投与されている被験体への、剤の投与によって、ｉｎ  ｖｉｖｏであってもよい。いくつかの態様において、処理は、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏの培養中の細胞への剤の投与によって、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏであってもよい。
【０１５７】
当業者は、本発明記載の細胞の養子移入のための適切な試薬および方法を決定することが可能であり、例えば本明細書にその全体が援用される、Ｄａｉら，  ２０１６  Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  １０８（７）：  ｄｊｖ４３９を参照されたい。
【０１５８】
関連する側面において、本発明は、修飾細胞を調製する方法、細胞内に、本発明記載のＣＡＲ、核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾する工程を含む方法を提供する。方法は、好ましくは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる。
【０１５９】
１つの側面において、本発明は、被験体において、疾患または状態を治療するかまたは予防する方法であって：
（ａ）被験体から少なくとも１つの細胞を単離し；
（ｂ）少なくとも１つの細胞内に、本発明記載の核酸またはベクターを導入し、それによって少なくとも１つの細胞を修飾し；そして
（ｃ）被験体に、修飾した少なくとも１つの細胞を投与する
工程を含む、前記方法を提供する。
【０１６０】
いくつかの態様において、方法は、例えば癌の治療または予防のため、療法的または予防的介入をさらに含む。いくつかの態様において、療法的または予防的介入は、化学療法、免疫療法、放射療法、手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法より選択される。
【０１６１】
本明細書記載の治療法には、場合によって、癌を治療するための剤を用いた治療（例えば化学療法）、放射線照射、または手術などの、癌を治療するための慣用的療法と組み合わせた、生物学的アジュバント（例えばインターロイキン、サイトカイン、カルメット−ゲラン細菌、モノホスホリル脂質Ａ等）の同時投与が含まれてもよい。医学的治療法はまた、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を用いたものを含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、および養子免疫療法を伴ってもよい。本明細書記載の治療法は、場合によって、例えばインターフェロン治療またはＨＤＡＣ阻害剤治療による、ＭＨＣクラスＩ発現のブーストを伴ってもよい。
【０１６２】
本発明記載の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクターおよび細胞は、臨床的使用のために薬学的組成物または薬剤として配合されてもよく、そしてこれらは、薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。該組成物を、注射または注入を含んでもよい、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋内、クモ膜下腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、クモ膜下腔内、経口または経皮投与経路のために配合してもよい。適切な配合物は、無菌または等張媒体中、抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、または細胞を含んでもよい。薬剤および薬学的組成物は、ゲルを含む液体型で配合されてもよい。液体配合物は、ヒトまたは動物の体の選択した領域への（例えばカテーテルを通じた）注射または注入による投与のために配合されてもよい。
【０１６３】
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のための方法もまた提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するような抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、または細胞を単離し；そして／または本明細書に記載するような抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、または細胞を、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される１つまたはそれより多い工程を含んでもよい。
【０１６４】
例えば、本発明のさらなる側面は、医学的治療法における使用のための薬剤または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するような抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、または細胞を、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合することによって、薬学的組成物または薬剤を配合する工程を含む。
【０１６５】
本発明記載の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物の投与は、好ましくは「療法的に有効な」または「予防的に有効な」量であり、これは、被験体に対する利益を示すために十分な量である。投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、疾患または障害の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量の決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療しようとする疾患／障害、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因が考慮されるであろう。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  第２０版，  ２０００，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。
【０１６６】
投与は、治療しようとする状態に応じて、単独で、あるいは同時にまたは連続してのいずれかで他の治療と組み合わせてであってもよい。本発明記載の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物および療法剤を、同時にまたは連続して投与してもよい。
【０１６７】
いくつかの態様において、本発明の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物での治療は、予防的介入、例えばワクチン接種の方法で用いられる。
いくつかの態様において、本発明の抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物での治療には、他の療法または予防的介入、例えば化学療法、免疫療法、放射線療法、手術、ワクチン接種および／またはホルモン療法が付随してもよい。
【０１６８】
同時投与は、抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物および療法剤の一緒の投与、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）、あるいは互いの直後の、そして任意に同じ投与経路を通じた、例えば同じ動脈、静脈または他の血管への投与を指す。連続投与は、療法剤の１つの投与に続く、所定の時間間隔後の、抗体、断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物あるいは他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路で投与される必要はないが、いくつかの態様はこれに当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。
【０１６９】
化学療法は、薬剤または電離放射線（例えばＸ線またはγ線を用いた放射療法）での癌の治療を指す。薬剤は、化学実体、例えば小分子薬剤、抗生物質、ＤＮＡ挿入剤、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、あるいは生物学的剤、例えば抗体、抗体断片、核酸またはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であってもよい。薬剤を、薬学的組成物または薬剤として配合してもよい。配合物は、１つまたはそれより多い薬剤（例えば１つまたはそれより多い活性剤）を、１つまたはそれより多い薬学的に許容されうる希釈剤、賦形剤またはキャリアーと一緒に含んでもよい。
【０１７０】
治療は、１つより多い薬剤の投与を伴ってもよい。治療しようとする状態に応じて、薬剤は、単独で、あるいは他の治療と組み合わせて、同時にまたは連続してのいずれかで投与されてもよい。例えば、化学療法は、２つの薬剤の投与を伴う併用療法であってもよく、これらの１つまたはそれより多くが、癌を治療するよう意図されてもよい。
【０１７１】
化学療法は、１つまたはそれより多い投与経路、例えば非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内または腫瘍内経路によって投与されてもよい。
化学療法は治療措置にしたがって投与されてもよい。治療措置は、医者または医師によって準備されてもよく、そして治療を必要とする患者に合わせてあつらえてもよい、化学療法投与のあらかじめ決定されたタイムテーブル、計画、スキームまたはスケジュールであってもよい。
【０１７２】
治療措置は：患者に投与する化学療法のタイプ；各薬剤または放射線の用量；投与間の時間間隔；各治療の長さ；あるとすれば任意の治療休止日の数および性質等の１つまたはそれより多くを指してもよい。併用療法に関して、各薬剤をどのように投与するかを示す単一の治療措置を提供してもよい。
【０１７３】
化学療法薬剤および生物製剤は以下から選択してもよい：アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド；プリンまたはピリミジン代謝拮抗剤、例えばアザチオプリンまたはメルカプトプリン；アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（タキソールＴＭ）、ドセタキセル；トポイソメラーゼ阻害剤、例えばＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド；抗腫瘍抗生物質（例えばアントラサイクリン抗生物質）、例えばダクチノマイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシンＴＭ）、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン；抗体に基づく剤、例えば抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＴＩＭ−３抗体、抗ＣＴＬＡ４、抗４−１ＢＢ、抗ＧＩＴＲ、抗ＣＤ２７、抗ＢＬＴＡ、抗ＯＸ４３、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例には：セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（マブテラ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブが含まれる；ＥＧＦＲ阻害剤、例えばエルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ；抗血管新生剤、例えばベバシズマブ（アバスチン（登録商標））；癌ワクチン、例えばシプリューセル−Ｔ（プロベンジ（登録商標））。
【０１７４】
さらなる化学療法薬剤は:１３−シス−レチノイン酸、２−クロロデオキシアデノシン、５−アザシチジン５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アブラキサン、アキュタン（登録商標）、アクチノマイシン−Ｄ、アドリアマイシン（登録商標）、アドルシル（登録商標）、アフィニトール（登録商標）、アグリリン（登録商標）、Ａｌａ−コート（登録商標）、アルデスロイキン、アレムツズマブ、ＡＬＩＭＴＡ、アリトレチノイン、アルカバン−ＡＱ（登録商標）、アルケラン（登録商標）、オールトランスレチノイン酸、アルファインターフェロン、アルトレタミン、アメトプテリン、アミフォスチン、アミノグルテチミド、アナグレリド、アナンドロン（登録商標）、アナストロゾール、アラビノシルシトシン、アラネスプ（登録商標）、アレジア（登録商標）、アリミデックス（登録商標）、アロマシン（登録商標）、アラノン（登録商標）、亜ヒ酸、アスパラギナーゼ、ＡＴＲＡ  アバスチン（登録商標）、アザシチジン、ＢＣＧ、ＢＣＮＵ、ベンダムスチン、ベバシズマス、ベキサロテン、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ、ブレノキサン（登録商標）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、ブスルフェックス（登録商標）、カルシウムロイコボリン、カンパス（登録商標）、カンプトサル（登録商標）、カンプトテシン−１１、カペシタビン、カラックＴＭ、カルボプラチン、カルムスチン、カソデックス（登録商標）、ＣＣ−５０１３、ＣＣＩ−７７９、ＣＣＮＵ、ＣＤＤＰ、ＣｅｅＮＵ、セルビジン（登録商標）、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、シトロボルム因子、クラドリビン、コルチゾン、コスメゲン（登録商標）、ＣＰＴ−１１、シクロホスファミド、シタドレン（登録商標）、シタラビン  シトサール−Ｕ（登録商標）、シトキサン（登録商標）、ダコゲン、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、ダサチニブ、ダウノマイシン、ダウノルビシン、ダウノルビシン塩酸、ダウノルビシン・リポソーマル、ダウノキソーム（登録商標）、デカドロン、デシタビン、デルタ−コルテフ（登録商標）、デルタゾン（登録商標）、デニロイキン、ディフチトックス、デポシトＴＭ、デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、デキサゾン、デクスラゾキサン、ＤＨＡＤ、ＤＩＣ、ジオデックス、ドセタキセル、ドキシル（登録商標）、ドキソルビシン、ドキソルビシン・リポソーマル、ドロキシアＴＭ、ＤＴＩＣ、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）、デュラロン（登録商標）、エリガードＴＭ、エレンスＴＭ、エロキサチンＴＭ、エルスパー（登録商標）、エンシット（登録商標）、エピルビシン、エポエチンアルファ、エルビタックス、エルロチニブ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エストラムスチン、エチヨルエトポフォス（登録商標）、エトポシド、リン酸エトポシド、ユーレキシン（登録商標）、エベロリムス、エビスタ（登録商標）、エキセメスタン、ファスロデックス（登録商標）、フェマラ（登録商標）、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラ（登録商標）、フルダラビン、フルオロプレックス（登録商標）、フルオロウラシル、フロキシメステロン、フルタミド���フォリン酸、ＦＵＤＲ（登録商標）、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツヅマブ・オゾガマイシン、グリーベックＴＭ、グリアデル（登録商標）ウェハー、ゴセレリン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ハーセプチン（登録商標）、ヘキサドロール、ヘキサレン（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、ＨＭＭ、ヒカムチン（登録商標）、ヒドレア（登録商標）、酢酸ヒドロコルト（登録商標）、ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルトン、ヒドロキシ尿素、イブリツモマブ、イブリツモマブ・チウキセタン、イダマイシン（登録商標）、イダルビシン、イフェックス（登録商標）、ＩＦＮ−アルファ、イホスファミド、ＩＬ−１１、ＩＬ−２、メシル酸イマチニブ、イミダゾールカルボキサミド、インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２ｂ（ＰＥＧコンジュゲート）、インターロイキン−２、インターロイキン−１１、イントロンＡ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ｂ）、イレッサ（登録商標）、イリノテカン、イソトレチノイン、イキサベピロン、イキセンプラＴＭ、キドロラーゼ、ラナコート（登録商標）、ラパチニブ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ＬＣＲ、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、ロイケラン、ロイカインＴＭ、リュープロリド、リューロクリスチン、リュースタチンＴＭ、リポソーマルＡｒａ−Ｃ、液体プレド（登録商標）、ロムスチン、Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシン、リュプロン（登録商標）、リュプロンデポ（登録商標）、マツラン（登録商標）、マキシデックス、メクロレタミン、メクロレタミン塩酸、メドラロン（登録商標）、メドロール（登録商標）、メゲース（登録商標）、メゲストロール、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メスネックスＴＭ、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メチルプレドニゾロン、メチコルテン（登録商標）、マイトマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトキサントロン、Ｍ−プレドニゾール（登録商標）、ＭＴＣ、ＭＴＸ、ムスターゲン（登録商標）、ムスチン、ムタマイシン（登録商標）、ミレラン（登録商標）、ミロセルＴＭ、ミロターグ（登録商標）、ナベルビン（登録商標）、ネララビン、ネオサール（登録商標）、ニューラスタＴＭ、ニューメガ（登録商標）、ニューポゲン（登録商標）、ネキサバール（登録商標）、ニランドロン（登録商標）、ニルタミド、ニペント（登録商標）、ナイトロジェンマスタード、ノバルデックス（登録商標）、ノバントロン（登録商標）、オクトレオチド、酢酸オクトレオチド、オンコスパー（登録商標）、オンコビン（登録商標）、オンタック（登録商標）、オンキサルＴＭ、オプレベルキン、オラプレッド（登録商標）、オラゾン（登録商標）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルタンパク質結合型、パミドロネート、パニツムマブ、パンレチン（登録商標）、パラプラチン（登録商標）、ペディアプレド（登録商標）、ＰＥＧインターフェロン、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスティム、ＰＥＧ−イントロンＴＭ、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ＰＥＭＥＴＲＥＸＥＤ、���ントスタチン、フェニルアラニンマスタード、プラチノール（登録商標）、プラチノール−ＡＱ（登録商標）、プレドニゾロン、プレドニゾン、プレロン（登録商標）、プロカルバジン、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）、プロロイキン（登録商標）、カルムスチンインプラントプリネトール（登録商標）を含むプロリフプロスパン２０、ラロキシフェン、レブリミド（登録商標）、リューマトレックス（登録商標）、リツキサン（登録商標）、リツキシマブ、ロフェロン−Ａ（登録商標）（インターフェロンアルファ−２ａ）、リューベックス（登録商標）、ルビドマイシン塩酸、サンドスタチン（登録商標）、サンドスタチンＬＡＲ（登録商標）、サルグラモスチン、ソリュ−コルテフ（登録商標）、ソリュ−メドロール（登録商標）、ソラフェニブ、ＳＰＲＹＣＥＬＴＭ、ＳＴＩ−５７１、ストレプトゾシン、ＳＵ１１２４８、スニチニブ、スーテント（登録商標）、タモキシフェン、タルセバ（登録商標）、タルグレチン（登録商標）、タキソール（登録商標）、タキソテール（登録商標）、テモダール（登録商標）、テモゾロミド、テムシロリムス、テニポシド、ＴＥＳＰＡ、サリドマイド、タロミド（登録商標）、テラシス（登録商標）、チオグアニン、チオグアニンタブロイド（登録商標）、チオホスホアミド、チオプレックス（登録商標）、チオテパ、ＴＩＣＥ（登録商標）、トポサール（登録商標）、トポテカン、トレミフェン、トリセル（登録商標）、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレアンダ（登録商標）、トレチノイン、トレキサールＴＭ、トリセノックス（登録商標）、ＴＳＰＡ、ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＶＣＲ、ベシチビックスＴＭ、ベルバン（登録商標）、ベルケード（登録商標）、ベペシド（登録商標）、ベサノイド（登録商標）、ビアデュルＴＭ、ビダザ（登録商標）、ビンブラスチン、硫酸ビンブラスチン、ビンカサールＰｆｓ（登録商標）、ビンクリスチン、ビノレルビン、酒石酸ビノレルビン、ＶＬＢ、ＶＭ−２６、ボリノスタット、ＶＰ−１６、ブモン（登録商標）、キセロダ（登録商標）、ザノサール（登録商標）、ゼバリンＴＭ、ジネカード（登録商標）、ゾラデックス（登録商標）、ゾレドロン酸、ゾリンザ、ゾメタ（登録商標）より選択されてもよい。
【０１７５】
多数回の用量の抗体／断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多くまたは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随していてもよい。
【０１７６】
多数回用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分かれていてもよく、これは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日、あるいは１、２、３、４、５または６ヶ月の１つであるように選択されてもよい。例えば、用量を、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）ごとに１回投与してもよい。
【０１７７】
診断適用
本明細書記載の抗体および抗原結合断片を、ターゲット抗原への抗体または抗原結合断片の結合を伴う方法において用いてもよい。こうした方法には、被験体における疾患または状態を診断する工程が含まれる。こうした方法は、抗体、または抗原結合断片、およびターゲットの結合した複合体の検出を伴ってもよい。こうしたものとして、１つの態様において、ペプチド−ＭＨＣ複合体（例えばＭＨＣクラスＩ分子と複合体化しているｐ５３のペプチドの、例えばＨＬＡ−Ａ＊２４アレルによってコードされるα鎖を含むＭＨＣクラスＩと複合体化しているｐ５３１２５−１３４の複合体）を含有するかまたは含有すると推測される試料を、本明細書に記載するような抗体または抗原結合断片と接触させ、そして抗体、または抗原結合断片、およびペプチド−ＭＨＣ複合体の複合体形成を検出する工程を含む方法を提供する。
【０１７８】
適切な方法形式は、当該技術分野に周知であり、サンドイッチアッセイ、例えばＥＬＩＳＡなどのイムノアッセイが含まれる。方法は、抗体／抗原結合断片またはペプチド−ＭＨＣ複合体、あるいはその両方の、検出可能標識、例えば蛍光、発光または放射標識での標識を伴ってもよい。ペプチド−ＭＨＣ複合体の発現は、例えば生検によって得られた組織試料の、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定されてもよい。いくつかの態様において、標識は：放射性ヌクレオチド、陽電子放出核種（例えば、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）のため）、ＭＲＩ造影剤または蛍光標識より選択されてもよい。
【０１７９】
ペプチド−ＭＨＣ複合体の分析は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏであってもよく、そして例えば蛍光画像化、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、または磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）による、適切な標識種の検出による、分析を伴ってもよい。
【０１８０】
この種の方法は、ペプチド−ＭＨＣ複合体の検出および／または定量化を要する、疾患または状態の診断法の基礎を提供しうる。こうした方法を、被験体試料に対して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または被験体試料のプロセシング後に行ってもよい。試料をひとたび収集したら、診断のｉｎ  ｖｉｔｒｏ法が実行されるために、患者が居合わせる必要はなく、そしてしたがって、方法は、ヒトまたは動物の身体に対して行わないものであってもよい。本発明は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのペプチド−ＭＨＣ複合体の検出のための、本明細書記載の抗体または抗原結合断片の使用を提供する。
【０１８１】
用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いた実験を含むよう意図され、一方、用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）多細胞生物を用いた実験および／または処理を含むよう意図される。
【０１８２】
こうした方法をまた、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば被験体に、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物を投与した後に実行してもよい。
こうした方法は、被験体または被験体試料中に存在するペプチド−ＭＨＣ複合体の存在を検出し、そして／またはその量を決定する工程を含んでもよい。該方法はさらに、診断に到達するプロセスの一部として、標準または参照値に対して、決定した量を比較する工程を含んでもよい。他の診断試験を本明細書に記載するものと組み合わせて、診断の正確性を増進するか、または本明細書に記載する試験を用いることによって得られた結果を確認してもよい。
【０１８３】
いくつかの場合、ペプチド−ＭＨＣ複合体の存在を検出するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ法は、例えばインターフェロン処理またはＨＤＡＣ阻害剤処理によって、ＭＨＣクラスＩ発現をブーストする工程を含んでもよい。
【０１８４】
被験体におけるペプチド−ＭＨＣ複合体の存在または存在するペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルは、被験体が疾患／状態、例えば本明細書記載の疾患／または状態を有する指標となりうる。（例えば被験体から得た試料中の）ペプチド−ＭＨＣ複合体の検出を、被験体における癌性状態の診断、癌性状態に対する素因の診断の目的のために、または癌性状態の予後を提供する（予後診断する）ために用いてもよい。診断または予後は、現存する（以前診断された）癌性状態に関連してもよい。
【０１８５】
被験体におけるペプチド−ＭＨＣ複合体の存在または存在するペプチド−ＭＨＣ複合体のレベルは、被験体が、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物を用いた治療に反応しうることの指標となりうる。ペプチド−ＭＨＣ複合体の存在の検出、またはペプチド−ＭＨＣ複合体の特定のレベルの検出を用いて、本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸、ベクター、細胞または組成物を用いた治療のため、被験体を選択してもよい。ペプチド−ＭＨＣ複合体の存在の検出、またはペプチド−ＭＨＣ複合体の特定のレベルの検出を用いて、疾患／状態の治療のための別の剤を用いた治療のため、被験体を選択してもよい。
【０１８６】
任意の組織または体液から試料を採取してもよい。試料は：ある量の血液；フィブリン塊および血球を除去した後に得られる、血液の液体部分を含んでもよい、個体の血液由来のある量の血清；組織試料または生検；胸水；脳脊髄液（ＣＳＦ）；あるいは前記個体から単離された細胞を含んでもよいし、またはこれらに由来してもよい。いくつかの態様において、試料は、疾患／障害によって罹患した単数または複数の組織（例えば疾患の症状を明示するか、または疾患／障害の病因形成に関与する、単数または複数の組織）から得られてもよいし、またはこうした組織に由来してもよい。いくつかの態様において、試料は、癌性細胞または腫瘍生検から得られてもよいし、またはこうした組織に由来してもよい。
【０１８７】
タンパク質発現
細胞において本発明記載のタンパク質（例えば抗体、抗原結合断片およびＣＡＲ）を産生するために適した分子生物学技術は、当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ニューヨーク：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に示されるものがある。ポリペプチドは核酸配列から発現されてもよい。核酸配列は、細胞中に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞のゲノム内に取り込まれていてもよい。
【０１８８】
本発明記載のタンパク質を産生するため、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞が使用可能である。細胞は、原核細胞または真核細胞であることも可能である。適切な原核細胞には大腸菌が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞（例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）が含まれる。いくつかの場合、ある原核細胞は、真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないため、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞では非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製することがより容易でありうる。培地へのタンパク質の分泌を増進させる特定のプラスミドもまた、利用してもよい。
【０１８９】
関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴うことも可能である。培養または発酵は、栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供され、バイオリアクター中で実行可能である。細胞から、培地／発酵ブロスを分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして個々のタンパク質を分離して、分泌されたポリペプチドを単離することによって、分泌されたタンパク質を収集することも可能である。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。
【０１９０】
バイオリアクターには、その中で細胞を培養可能である１つまたはそれより多い容器が含まれる。バイオリアクター中の培養は、連続して生じてもよく、リアクター内への反応物の連続流動、およびリアクターからの培養細胞の連続流動が伴う。あるいは、培養はバッチで生じてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞のために最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、容器内へのおよび容器外への流速、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして調節する。
【０１９１】
関心対象のポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはそのポリペプチドを単離する。当該技術分野に知られる、細胞培養からポリペプチドを分離するための任意の適切な方法を用いてもよい。培養から関心対象のポリペプチドを単離するため、まず、関心対象のポリペプチドを含有する培地から、培養された細胞を分離する必要がある可能性もある。関心対象のポリペプチドが細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチドを含有する培地から、遠心分離によって細胞を分離することも可能である。関心対象のポリペプチドが細胞内に集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊する必要があるであろう。遠心分離は、培養細胞を含有するペレット、または培養細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチドを含有する上清を生じるであろう。
【０１９２】
次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素も含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチドを単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド構成要素を分離するための一般的なアプローチは、沈殿による。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、低濃度の沈殿剤では、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質が区別可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。
【０１９３】
異なるポリペプチド／タンパク質を区別するための他の方法が当該技術分野に知られ、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィがある。これらを沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。
【０１９４】
関心対象のポリペプチドが、ひとたび培養から単離されたら、タンパク質を濃縮する必要がある可能性もある。関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られ、例えば限外濾過または凍結乾燥がある。
【０１９５】
キット
本発明のいくつかの側面において、部分のキットを提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定した量の本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。
【０１９６】
キットは、抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を、明記する疾患／状態、例えば癌を治療するため、患者に投与するための使用説明書とともに提供してもよい。抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、組成物、核酸、ベクターまたは細胞を、腫瘍へのまたは血液への注射または注入に適切であるように配合してもよい。
【０１９７】
いくつかの態様において、キットは、本発明記載の細胞を産生するための材料を含んでもよい。例えば、キットは、細胞が本発明記載の抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾するための材料、あるいは細胞に、本発明記載の核酸またはベクターを導入するための材料を含んでもよい。
【０１９８】
いくつかの態様において、キットはさらに、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えば抗感染剤または化学療法剤）を有する少なくとも１つの容器を含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの薬剤または薬学的組成物が特定の疾患または状態に対する組み合わせ治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与可能であるように、第二の薬剤または薬学的組成物も含んでもよい。療法剤はまた、腫瘍または血液への注射または注入に適切であるように配合されてもよい。
【０１９９】
配列同一性
２つまたはそれより多いアミノ酸または核酸配列間のパーセント同一性を決定する目的のため、対のおよび多数の配列整列を、当業者に知られる多様な方法で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓоｅｄｉｎｇ，  Ｊ．  ２００５，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２１，  ９５１−９６０）、Ｔ−ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら  ２０００，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．（２０００）  ３０２，  ２０５−２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ  ２００５，  ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，  ６（２９８））およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ  ２０１３，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，  ３０（４）  ７７２−７８０）ソフトウェアを用いて、達成してもよい。こうしたソフトウェアを用いる際、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関して、好ましくはデフォルトパラメータを用いる。
【０２００】
本発明には、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれるが、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明らかに回避される場合を除く。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のみのためであり、そして記載する主題を限定するとは意図されないものとする。
【０２０１】
本発明の側面および態様はここで、例として、付随する図を参照しながら例示されるであろう。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書が本明細書に援用される。
【０２０２】
本明細書全体に渡って、続く請求項を含めて、背景が別であることを必要としない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびに変形、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程群の包含を意味するが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程群も排除しないことが理解されるであろう。
【０２０３】
本明細書および付随する請求項において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、背景が明らかに別であると示さない限り、複数の指示対象が含まれることに留意しなければならない。範囲は、本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして表されてもよい。こうした範囲を示した場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／または他の特定の値までが含まれる。同様に、値を近似値で表した場合、先行する「約」を使用することによって、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。
【実施例】
【０２０４】
以下の実施例において、本発明者らは、ｐ５３ペプチド：ＭＨＣクラスＩ複合体に結合可能な抗体の単離および特徴づけを記載する。
実施例１：抗ｐ５３：ＭＨＣクラスＩ複合体抗体の単離
ｐ５３１２５−１３４ペプチドを、可溶性ＨＬＡ＊Ａ２４０２に付着させて（ｐ５３−Ａ２４）、可溶性ペプチドＭＨＣ複合体（ｐＭＨＣ）を形成した。次いで、このｐＭＨＣ複合体に結合可能な抗体を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ選択を通じて、ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーから単離した。スクリーニングした１９０のクローンから、ＥＬＩＳＡアッセイによってｐＭＨＣに最高の結合を示す３６のクローンを単離し、そしてそのうち４つ：Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ａ８およびＰ１Ｂ１１をさらなる特徴づけのため、ＩｇＧ形式にクローニングした。
【０２０５】
軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列を、それぞれ、図１および２に示す。
実施例２：ｐ５３−Ａ２４のアビディティおよび特異性
ｐ５３−Ｐ２４単量体への結合に関して、そして非関連抗原への結合に関して、ＥＬＩＳＡアッセイによって、抗体クローンＰ１Ｃ１、Ｐ１Ｈ４、Ｐ１Ａ８およびＰ１Ｂ１１を分析して、アビディティおよび特異性を決定した。
【０２０６】
Ｐ１Ａ８を例外として、すべてのクローンは、高アフィニティでｐ５３−Ａ２４に結合することが示された（図９Ａ）。抗体はまた、ゼロかまたは限定された非特異的結合を示した（図９Ｂ）。
【０２０７】
実施例３：ＨＬＡ＊Ａ２４発現細胞上のｐ５３への特異的結合
細胞表面で発現されるｐ５３−Ａ２４  ｐＭＨＣを認識し、そしてこれに結合する能力を、ＨＴ２９細胞を用いて測定した。これらの細胞は、恒常的にＨＬＡ＊Ａ２４を発現する。
【０２０８】
簡潔には、ＨＴ２９細胞を、室温で１時間、ｐ５３１２５−１３４ペプチドか非関連ペプチドのパネルから選択したペプチドでパルス処理するか、またはパルス処理しなかった。次いで、細胞をＰ１Ｃ１、Ｐ１Ｈ４またはＰ２Ｂ４とインキュベーションし、そして二次標識抗体を用いたフローサイトメトリーによって、結合を測定した。
【０２０９】
結果を図１０Ａ〜１０Ｃに示す。Ｐ１Ｃ１、Ｐ１Ｈ４またはＰ２Ｂ４抗体は、ｐ５３１２５−１３４ペプチドでパルス処理した細胞にのみ結合し、ｐ５３１２５−１３４抗原に対する特異性を立証した（図１０Ａ〜１０Ｃ）。さらに、抗体が非パルス処理ＨＴ２９細胞に結合しないという事実は、これらがｐ５３抗原を提示するＨＬＡ＊Ａ２４にのみ結合し、そしてｐ５３を提示しないＨＬＡ＊Ａ２４には結合しないことを示唆する。
【０２１０】
実施例４：ＨＬＡ＊Ａ２４  ＭＨＣクラスＩ分子に対するおよびｐ５３−Ａ２４に対する特異性
ＨＬＡ＊Ａ２４ハプロタイプに対する特異性を確認するため、異なるＨＬＡ＊Ａ型を発現する細胞：ＨＬＡ＊Ａ０２およびｐ５３を恒常的に発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞上で結合を評価した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞はまた、ＨＬＡ＊Ａ２４を発現するように形質導入された。
【０２１１】
次いで、ｐ５３１２５−１３４ペプチドでパルス処理されるかまたはパルス処理されないかいずれかの形質導入および非形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞上で、Ｐ１Ｃ１の結合を評価した。二次標識抗体を用いたフローサイトメトリーによって、結合を測定した。
【０２１２】
結果を図１１Ａに示す。Ｐ１Ｃ１は、ＨＬＡ＊Ａ２４を発現する細胞（すなわち形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）にのみ結合し、そしてＨＬＡ＊Ａ０２を発現する非形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞上では結合はまったく観察されず、ＨＬＡ＊Ａ２４によって提示されるｐ５３１２５−１３４ペプチドに関する特異性が確認された。
【０２１３】
ｐ５３陰性であるＳａｏＳ２細胞を用いて、同様の実験を行った。これらの細胞は、ＨＬＡ＊Ａ２４を恒常的に発現する。細胞をｐ５３の多様なペプチド、ＷＴ１、ｈＴＥＲＴでパルス処理するか、またはパルス処理しなかった。細胞に対するＰ１Ｃ１抗体の結合の分析によって、ｐ５３１２５−１３４でパルス処理された細胞のみが結合し、この抗原に対する抗体の特異性が確認された（図１１Ｂ）。
【０２１４】
総合すると、これらの結果は、ＨＬＡ＊Ａ２４によって提示されるｐ５３１２５−１３４に対する抗体の特異性を立証する。
実施例５：アフィニティ成熟抗体
Ｐ１Ｃ１配列を、生殖系列フレームワークに復帰させて、クローンＰ１Ｃ１＿ｇｌを得て、これを続いて、アフィニティ成熟に供した。重鎖に関して２つのアフィニティ成熟クローンを保持し（２Ｅ３および１Ｅ１１）、そして軽鎖に関して１つのアフィニティ成熟クローンを保持した（１Ｇ７）。
【０２１５】
２Ｅ３および１Ｅ１１の両方に存在する置換を含む二重突然変異体を構築し、クローンＰ１Ｃ１＿ｄｍと名付けた。２Ｅ３、１Ｅ１１および１Ｇ７に存在する置換を含む三重突然変異体を生成し、クローンＰ１Ｃ１＿ｔｍと名付けた。
【０２１６】
ｐ５３−Ａ２４複合体に関する異なるＰ１Ｃ１由来クローンのアフィニティを、表面プラズモン共鳴分析を通じて測定した。結果を図１２に示し、そしてこの結果は、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍが、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌに比較した際、ｐ５３−Ａ２４に対して、〜１０倍高いアフィニティを有することを示す。
【０２１７】
Ｐ１Ｃ１＿ｄｍ、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍおよびＰ１Ｃ１＿ｇｌが非パルス処理ＨＴ２９細胞に結合する能力を、フローサイトメトリーによって分析した。Ｐ１Ｃ１＿ｄｍおよびＰ１Ｃ１＿ｔｍクローンは、元来の生殖系列クローンよりも、非パルス処理ＨＴ２９細胞により高い結合を示した（図１３）。
【０２１８】
実施例６：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性：抗体依存性細胞仲介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の誘導
抗体がＡＤＣＣを誘導する能力を評価するため、ＨＬＡ＊Ａ２４陽性ＨＴ２９を、１：１０の比で、ＰＢＭＣと混合し、そしてＰ１Ｃ１＿ｇｌまたはＰ１Ｃ１＿ｔｍの存在下または非存在下で一晩インキュベーションし、そして細胞殺傷を測定した。細胞をパルス処理しないか、またはｐ５３ペプチドでパルス処理するかいずれかとした。
【０２１９】
また、ＨＬＡ＊Ａ２４で形質導入されていないかまたは形質導入された、ＨＬＡ＊Ａ２４陰性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を用いて、抗体によるＡＤＣＣ誘導の特異性を評価した。
【０２２０】
結果を図１４に示す。用量依存性殺傷が、非パルス処理細胞に比較した際、ｐ５３ペプチドパルス処理ＨＬＡ＊Ａ２４陽性細胞において、より効率的であることが観察された。ＨＬＡ＊Ａ２４陰性ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では、有意なＡＤＣＣは観察されなかった。Ｐ１Ｃ１＿ｔｍは、Ｐ１Ｃ１＿ｇｌに比較した際、より強力なＡＤＣＣを示した。
【０２２１】
実施例７：ＨＴ２９細胞によるＰ１Ｃ１＿ｔｍの内在化
Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体をｐＨ感受性ｐＨｒｏｄｏ−レッド色素で標識し、そしてｐ５３ペプチドパルス処理ＨＴ２９細胞と、３７℃でまたは氷上で、多様な期間、インキュベーションした後、フローサイトメトリーによって内在化を分析した。内在化された抗体は、エンドソーム内の酸性環境のため、表面結合抗体に比較して、有意な蛍光を生じる。
【０２２２】
結果を図１５Ａおよび１５Ｂに示す。ｐ５３−Ａ２４  ｐＭＨＣに結合した際、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体の存在下で（図１５Ａ、下部左パネル）、３７℃でインキュベーションした、ｐ５３ペプチドでパルス処理したＨＴ２９細胞において、蛍光シフトがあることによって立証されるように、抗体は、複合体がリサイクルされると複合体とともに内在化する。このシフトは、非特異的対照抗体（図１５Ａ、下部右パネル）においては、または氷上でインキュベーションされ、そしてしたがってｐ５３−Ａ２４  ｐＭＨＣをリサイクルしなかった細胞（図１５Ａ、上部左パネル）においては、観察されなかった。
【０２２３】
実施例８：腫瘍細胞への薬剤送達
ｐ５３−Ａ２４複合体と抗体の内在化を、腫瘍細胞を特異的にターゲティングする薬剤送達のためのツールとして用いてもよい。Ｐ１Ｃ１＿ｔｍに対する薬剤コンジュゲート化二次抗体結合を用いて、これを試験した。簡潔には、ＨＴ２９細胞を、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ、および細胞傷害性薬剤ＰＮＵ１５９６８２（ＰＮＵ）またはピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）とコンジュゲート化した抗ヒトＦｃ特異的二次抗体とインキュベーションした。７２時間後、ＭＴＴアッセイによって、細胞生存性を分析した。対照として、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍの非存在下で、薬剤コンジュゲート化抗体とのみ、いくつかの細胞をインキュベーションした。
【０２２４】
実験の結果を図１６に示す。Ｐ１Ｃ１＿ｔｍは、ＰＮＵおよびＰＢＤの細胞傷害効果を劇的に改善することが見いだされた。増加した効果は、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ／ｐ５３−Ａ２４複合体に結合した薬剤コンジュゲート化抗Ｆｃ抗体の免疫複合体の一部としての薬剤の内在化のためである可能性が高い。
【０２２５】
これらのデータは、Ｐ１Ｃ１＿ｔｍが、腫瘍への薬剤のターゲティング化薬剤送達のため、癌治療において、使用可能であり、そしてターゲティングされた細胞内へのその内在化を強いることによって、薬剤の有効性を増加させうることを示唆する。
【０２２６】
実施例９：ＮＳＧマウスにおけるＨＴ２９のｉｎ  ｖｉｖｏ画像化
ＴＣＲ様抗体の適用の１つは、ＭＨＣクラスＩを通じて細胞内分子、この場合はｐ５３を交差提示する腫瘍細胞を同定することによって、癌の診断を補助するであろう。
【０２２７】
Ｐ１Ｃ１＿ｔｍの診断抗体としての有用性を評価するため、ＨＴ２９細胞（Ａ２４およびｐ５３の両方に関して陽性）、および非形質導入ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（ｐ５３を発現しているが、Ａ２４に関して陰性）またはＳａｏＳ２細胞（Ａ２４を発現しているが、ｐ５３を発現しない）を、図１７Ａおよび１７Ｂに模式的に示し、そして図のレジェンドに説明するように、ＮＳＧマウスの脇腹に移植した。
【０２２８】
腫瘍が確立するのを許し、そして１００〜２００ｍｍ３まで増殖させた後、５０μｇのＡＦ６８０標識Ｐ１Ｃ１＿ｔｍ抗体を静脈内投与した。ｉｎ  ｖｉｖｏ蛍光画像化によって、４８および１２０時間後に、腫瘍標識を捕捉した。
【０２２９】
図１７Ａおよび１７Ｂに示すように、抗体は、ＨＬＡ＊Ａ２４＋  ＨＴ２９細胞の検出を可能にしたが、ＨＬＡ＊Ａ０２発現腫瘍（図９Ａ）、またはｐ５３を発現していないＨＬＡ＊Ａ２４＋腫瘍細胞（図９Ｂ）を追跡しなかった。
【０２３０】
実施例１０：ＨＴ２９腫瘍細胞に対するＴ細胞仲介性細胞傷害性
ＴＣＲ様抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現しているＴ細胞を、ＨＴ２９腫瘍細胞を殺す能力に関して評価した。
【０２３１】
健康なドナー由来のＴ細胞を、ＴｒａｎｓＡｃｔＴＭ（ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト）の添加によって活性化し、そして５０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ２を補充したＴｅｘＭＡＣＳＴＭ培地中、１〜２ｘ１０６細胞／ｍｌの密度で、７２時間の期間、維持した。刺激に際して、レンチウイルスに基づくｐ５３  ＣＡＲプラスミド（１００万細胞あたり２μｇ）を含みまたは含まず、細胞にエレクトロポレーションした。プラスミドＤＮＡエレクトロポレーションによって引き起こされる細胞死がかなりの量であったため、エレクトロポレーション４８時間後の免疫磁気陰性選択によって、細胞培養からアポトーシス細胞（アネキシンＶ＋）を枯渇させた。
【０２３２】
細胞をさらに２４時間、培養中で休息させた後、Ｔ細胞仲介性細胞傷害性アッセイ（ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ）において評価した。このアッセイにおいて、腫瘍細胞の細胞指数を測定する。腫瘍細胞接着によって引き起こされる、トランジスタプレートを渡る電流インピーダンスによって、細胞指数を決定する。
【０２３３】
ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅインピーダンスに基づく系を用いて、４０時間に渡って連続腫瘍細胞殺傷を評価した。ＨＴ２９腫瘍細胞を、レジスタが底面にある９６ウェルプレート中、完全増殖培地中で、ウェルあたり１５，０００細胞でプレーティングした。１８〜２４時間後、３，７５０のエフェクターＴ細胞（１：４植え付け比）を添加し、この時点で、ＨＴ２９接着に相関する細胞指数を基準化した。基準化細胞指数のインピーダンスに基づく測定を、１０分ごとに記録し、そして細胞溶解％に変換した。データは、３つ組の平均（±標準偏差）に相当する。
【０２３４】
結果を図１８に示す。ｐ５３  ＣＡＲ  Ｔ細胞は、対照Ｔ細胞に比較して、有意により多くのＨＬＡ＊Ａ２４陽性ＨＴ２９腫瘍細胞を殺すことが可能であった。
実施例１１：ＨＴ２９腫瘍細胞に対する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの抗ｐ５３−Ａ２４／ＣＤ３二重特異性抗体細胞傷害性
抗ｐ５３−Ａ２４／ＣＤ３二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）の２つの異なる形式を、ヒト初代Ｔ細胞および腫瘍細胞と同時培養し、そして腫瘍細胞殺傷を誘導する能力に関して評価した。２つのＢｓＡｂ形式（１および２）を図１９Ａに示す。
【０２３５】
腫瘍細胞（ターゲット細胞）を、あらかじめオレゴングリーンで標識し、そして細胞を接着させるため、面積の半分が平底である９６ウェルプレート中で一晩培養した。翌日、ヒトＰＢＭＣから単離した初代Ｔ細胞を、エフェクター対ターゲット比１０対１（Ｅ：Ｔ＝１０：１）で添加した。１０倍力価で８ポイント分のＢｓＡｂもまた調製し、そして示す最終濃度に到達するように各ウェルに添加した。次いで、プレートを３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベーションした。ＦＡＣＳ読み取りのため、腫瘍細胞をアキュターゼで穏やかに剥離し、そしてヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色して、死んだ細胞を標識した。ＭＡＣＳＱｕａｎｔ分析装置を用いて、３日培養後、ＦＡＣＳ読み取りで、ＢｓＡｂ誘導性細胞傷害性を測定した。細胞傷害性％は、死亡細胞の細胞カウントをターゲット細胞の細胞カウントで割ったものに等しい。
【０２３６】
結果を図１９Ｂに示す。ＨＬＡ−Ａ２４＋／ｐ５３突然変異体＋細胞株ＨＴ２０において、ターゲット特異的細胞傷害性が、どちらの二重特異性構築物でも観察される。ＢｓＡｂ２（ＥＣ５０＝０．４８ｎＭ；左側の曲線）は、ＢｓＡｂ１（ＥＣ５０＝３．０５ｎＭ；右側の曲線）よりもより高い強度を示す。一方、ＨＬＡ−Ａ２４＋／ｐ５３ヌル細胞株ＳａＯＳ２の細胞殺傷においては、どちらの構築物でも非特異的細胞傷害性はまったく観察されず、ｐ５３−Ａ２４複合体のターゲティングに関する二重特異性構築物の特異性が示された。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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