(57)【要約】  チェックポイント阻害剤抗体などの免疫腫瘍（ＩＯ）剤との併用療法においてバビツキシマブを使用して、患者、特に癌患者を治療するための驚くべき新たな方法およびキットが開示される。本方法およびキットは、バビツキシマブおよびチェックポイント阻害剤抗体による治療を受けたヒト患者が、対照試験において統計的に有意な長期の生存期間を有するという驚くべき発見に基づく。
2020515637.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト対象の癌を治療する方法において使用するためのＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）であって、前記方法が、前記ＰＳ標的化抗体分子を、免疫チェックポイント抗体分子、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体と組み合わせて前記対象に投与することを含む、ＰＳ標的化抗体分子。
【請求項２】
ヒト対象の癌を治療するための方法であって、前記方法が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）標的化抗体分子および免疫チェックポイント抗体分子を、前記対象の癌を治療するのに有効な合計量で前記対象に投与することを含み、前記免疫チェックポイント抗体分子が免疫チェックポイント調節因子に結合する、方法。
【請求項３】
前記対象が、約２００μｇ／ｍｌ以上の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の治療前血中濃度を有するかまたは有すると特定され、前記機能性β２ＧＰＩが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）とバビツキシマブとの両方に結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、例えばＳｉｍｏａ免疫アッセイによって測定して、約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満のインターフェロン−γの血清濃度を有するまたは有すると特定される、請求項１〜３のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項５】
前記対象が、例えばＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、腫瘍細胞の約１％未満がＰＤ−Ｌ１を発現することを有するまたは有すると特定される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項６】
対象における癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象における機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を決定することと、
（ｉｉ）約２００μｇ／ｍｌ以上の機能性β２ＧＰＩの血中濃度に応答して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を前記対象に投与することと、を含む、方法。
【請求項７】
対象における癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象における血清インターフェロン−γ濃度を決定することと、
（ｉｉ）約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満の血清インターフェロン−γ濃度に応答して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を前記対象に投与することと、を含む、方法。
【請求項８】
対象における癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象におけるＰＤ−Ｌ１の状態を決定することと、
（ｉｉ）前記対象が、例えばＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、腫瘍細胞の約１％未満がＰＤ−Ｌ１を発現することを有すると特定されていることに応答して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を前記対象に投与することと、を含む、方法。
【請求項９】
前記ＰＳ標的化抗体分子が、バビツキシマブ、またはその抗原結合断片である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１０】
前記ＰＳ標的化抗体分子が、表Ａに記載されている抗体、またはその抗原結合断片である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１１】
前記免疫チェックポイント抗体分子が単一特異性抗体分子である、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１２】
前記免疫チェックポイント抗体分子が多重特異性抗体分子（例えば、二重特異性抗体分子または三重特異性抗体分子）である、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１３】
前記免疫チェックポイント調節因子が、抑制性免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦ−βの阻害剤を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１４】
前記免疫チェックポイント抗体分子が、ＰＤ−１に結合する遮断抗体、またはその抗原結合断片を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１５】
前記ＰＤ−１に結合する遮断抗体が、ＣＢＴ−５０１またはセミプリマブである、請求項１４に記載の方法または組成物。
【請求項１６】
前記免疫チェックポイント抗体分子が、ＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１７】
前記ＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体が、デュルバルマブ、アベルマブ、ＣＸ−０７２、ＬＹ３３０００５４、またはアテゾリズマブである、請求項１６に記載の方法または組成物。
【請求項１８】
前記免疫チェックポイント抗体分子が、ＣＴＬＡ−４に結合する遮断抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項１９】
前記ＣＴＬＡ−４に結合する遮断抗体が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、請求項１８に記載の方法または組成物。
【請求項２０】
前記免疫チェックポイント調節因子が、抑制性免疫チェックポイント分子、例えば、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、および／またはＣＤ１６０のアゴニストを含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項２１】
前記ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、前記免疫チェックポイント抗体分子の前に（例えば、約１、２、３、４、５、または６週間前に）、それと同時に、またはそれの後に（例えば、約１、２、３、４、５、または６週間後に）、前記対象に投与される、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項２２】
前記対象が、肺癌、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、大腸癌、食道癌、悪性神経膠腫、膵臓癌、前立腺癌、メルケル細胞癌、頭頸部癌、腎細胞癌、膀胱癌、肝臓癌を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項２３】
前記対象が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、請求項２２に記載の方法または組成物。
【請求項２４】
前記対象が転移性胃食道癌を有する、請求項２２に記載の方法または組成物。
【請求項２５】
前記対象が、再発性／転移性扁平上皮頭頸部癌（ＨＮＳＣＣ）を有する、請求項２２に記載の方法または組成物。
【請求項２６】
前記対象が肝細胞癌を有する、請求項２２に記載の方法または組成物。
【請求項２７】
前記対象が免疫抑制を受けている、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法または組成物。
【請求項２８】
前記ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約３ｍｇ／ｋｇの量で前記対象に投与される、および／または前記免疫チェックポイント抗体分子が約３ｍｇ／ｋｇの量で前記対象に投与される、請求項１〜２７のいずれかに記載の組成物または方法。
【請求項２９】
前記ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１００〜５００ｍｇの用量で投与される、および／または前記免疫チェックポイント抗体分子が、約１００〜５００ｍｇの用量で投与される、請求項１〜２８のいずれかに記載の組成物または方法。
【請求項３０】
前記ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、またはそれ以上の一律用量で投与される、請求項１〜２９のいずれかに記載の組成物または方法。
【請求項３１】
前記免疫チェックポイント抗体分子が、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、またはそれ以上の一律用量で投与される、請求項１〜３０のいずれかに記載の組成物または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年５月１７日に出願された同時係属中の仮出願第６２／５０７，５４５号、および２０１７年４月３日に出願された仮出願第６２／４８１，０６４号対する優先権を主張し、これらの出願の明細書、特許請求の範囲、図面、および配列全体が、権利放棄することなく参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０１８年３月３０日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、名前がＯ２０５６−７００１ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔ、サイズが４０，５２５バイトである。
【０００３】
本発明は、ヒトの治療の分野に関し、特に、患者、特に癌患者を治療するためのバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を、チェックポイント阻害剤抗体などの免疫腫瘍（ＩＯ）剤と効果的に組み合わせて、好ましくは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、もしくはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体、または任意のチェックポイント阻害剤に結合する二重特異性遮断抗体と組み合わせて、使用することに関する。
【背景技術】
【０００４】
癌およびウイルス感染症を含む全ての疾患と戦う上で、免疫系が機能していることは、治療応答の重要な部分である。したがって、癌治療のための戦略として現在認識されている免疫腫瘍学（ＩＯ）の分野を含む免疫療法に対して、盛んに研究がなされてきた。近年、免疫応答を操作する新たな標的および化合物が、研究者および臨床医によって研究されている。例えば、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ−１）およびプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）を標的とするＩＯ剤が、既に一部の進行性悪性腫瘍の治療薬として承認を受けており、同時に他のＩＯ標的と相互作用する化合物が開発中である。
【０００５】
それにも関わらず、これらの新たな免疫療法でさえ、ある特定の患者にしか有効ではない。実際に、ＩＯ剤に注目が集まっているものの、多くの患者における応答および生存期間の延長は依然として極めて不良である。したがって、旧来の治療法および新たな免疫治療法の両方に対する応答のばらつき、ならびに臨床的利益の最大化という望みを踏まえ、ＩＯ療法とのより効果的な組み合わせを含む、改善された治療選択肢が依然として必要とされている。
【０００６】
最近、膜リン脂質であるホスファチジルセリン（ＰＳ）が、宿主の免疫応答を調節する上流免疫チェックポイントとして作用する、特有かつ高度に免疫抑制性の分子として特定されている。これは、ＰＳが、癌およびウイルス感染症を含む様々な疾患において重要な役割を果たし、ＰＳを遮断するＰＳ標的化抗体の形態で免疫療法の新たな分野を切り拓くことを意味する。
【０００７】
主要なＰＳ標的化抗体は、３Ｇ４と呼ばれるマウスｍＡｂに由来するマウス−ヒトキメラモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である、バビツキシマブである（Ｒａｎら、２００５；Ｈｕａｎｇら、２００５；米国特許第７，２４７，３０３号）。３Ｇ４およびバビツキシマブは、β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）に依存した様式でＰＳを標的化する、マウス、キメラ、および完全ヒト抗体のファミリーの一部である。つまり、バビツキシマブおよび関連ＰＳ標的化抗体は、それらが高親和性抗体−β２ＧＰＩ−ＰＳ複合体を形成するように、β２ＧＰＩの存在下でＰＳに結合する（Ｌｕｓｔｅｒら、２００６）。操作上、これらのＰＳ標的化抗体はインビボでＰＳに特異性であり、このことは、療法に対する応答の測定および予測（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３、Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）を含む、多数の画像研究（Ｊｅｎｎｅｗｅｉｎら、２００８；ＭａｒｃｏｎｅｓｃｕおよびＴｈｏｒｐｅ、２００８；Ｓａｈａら、２０１０；ＳｔａｆｆｏｒｄおよびＴｈｏｒｐｅ、２０１１；Ｚｈａｏら、２０１１；Ｚｈａｎｇら、２０１４；ならびにＺｈｏｕら、２０１４；米国特許第７，７９０，８６０号）によって特に示されているとおりである。
【０００８】
バビツキシマブは、ＰＳがマーカーである幅広い疾患、特に癌およびウイルス感染症に対する前臨床モデルにおける活性だけでなく、寄生原虫であるＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓなどの細胞内寄生体（Ｗａｎｄｅｒｌｅｙら、２０１３）、ならびにそれぞれペストおよび野兎病を引き起こすＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓおよびＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓなどの細胞内細菌病原体（Ｌｏｎｓｄａｌｅら、２０１１）の感染症に対する活性も示している。ウイルス感染症に関して、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、ウイルス複製を阻害し、器官内のウイルス量を減少させ、生存期間を増大させることが示されている（Ｓｏａｒｅｓら、２００８；Ｍｏｏｄｙら、２０１０；米国特許第７，９０６，１１５号）。バビツキシマブおよび関連ＰＳ標的化抗体の抗癌活性は、膨大な数の前臨床研究およびある特定の臨床試験において実証されており、これらにおいて、効果は、腫瘍血管に対してかつＰＳの免疫抑制シグナル伝達を遮断することによって媒介される（Ｒａｎら、２００５；米国特許第７，５７２，４４８号、ＤｅＲｏｓｅら；２０１１）。
【０００９】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の抗腫瘍効果は、例えば、放射線の使用および／または化学療法の同時投与によって、これらの抗体を、腫瘍微小環境内でＰＳの曝露を増加させる薬剤または条件と併用する場合に、増強される（米国特許第７，４２２，７３８号、米国特許第８，４８６，３９１号、米国特許第７，５７２，４４８号）。例えば、ＰＳ標的化抗体のバビツキシマブファミリーを、ドセタキセルと併用して乳腺腫瘍を治療する場合（Ｈｕａｎｇら、２００５）、ゲムシタビンと併用して膵臓腫瘍を治療する場合（Ｂｅｃｋら、２００６）、放射線と併用して肺癌（Ｈｅら、２００７）および脳癌、神経膠芽腫（Ｈｅら、２００９）を治療する場合、ドセタキセルと併用して前立腺癌を治療し、抗腫瘍免疫を再活性化する場合（Ｙｉｎら、２０１３）、ならびにソラフェニブと併用して肝細胞癌を治療する場合（Ｃｈｅｎｇら、２０１６）、抗腫瘍効果の改善が前臨床的に実証されている。バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を他のＩＯ剤との併用療法で使用した場合に、抗腫瘍効果の増強が前臨床で観察されており、このことは、ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１に対する抗体の形態にあるチェックポイント阻害剤と併用して黒色腫（Ｆｒｅｉｍａｒｋら、２０１６）および三種陰性乳癌（Ｇｒａｙら、２０１６ａ）を治療した場合について前臨床で示されているとおりである。
【００１０】
バビツキシマブはまた、完了している８００人を超える患者の臨床研究でも評価されており、そのほとんどが併用療法で治療されていたが、ＩＯ剤またはチェックポイント阻害剤による併用療法ではなかった。これらの臨床試験には、慢性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などのウイルス感染症を有する患者、ならびに肺、乳房、肝臓（肝細胞癌、ＨＣＣ）、膵臓、結腸直腸、および腎臓（腎細胞癌、ＲＣＣ）を含むある数の腫瘍型を有する患者が含まれていた。バビツキシマブを、ＨＥＲ２陰性転移性乳癌を有する患者においてパクリタキセルと併用（Ｃｈａｌａｓａｎｉら、２０１５）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）においてパクリタキセル−カルボプラチンと併用（Ｄｉｇｕｍａｒｔｉら、２０１４）、肝細胞癌においてソラフェニブと併用（Ｃｈｅｎｇら、２０１６）、および治療歴のある進行性非扁平上皮ＮＳＣＬＣにおいてドセタキセルと併用（Ｇｅｒｂｅｒら、２０１６）した臨床試験から、有望な抗腫瘍効果が報告されており、これらの薬剤全てが化学療法剤である。
【００１１】
全体として、第Ｉ相および第ＩＩ相臨床研究の結果により、バビツキシマブの臨床的に意義のある治療効果が実証された。それにも関わらず、バビツキシマブ療法は未だ承認されていないため、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体による治療を最適化するための効果的な方法が依然として必要とされている。一方、ＩＯ剤およびチェックポイント阻害剤の治療的利益を最大化する試みは、多くの癌患者において残念ながら欠けている既存の抗腫瘍免疫応答の必要性によって妨げられてきた。したがって、チェックポイント阻害剤を用いたより広範かつ／または最適化された治療を含む、改善された患者治療方法が必要とされている。患者の治療においてバビツキシマブと効果的に併用するための１つ以上のチェックポイント阻害剤を特定することは重要な進歩であり、多くの患者の免疫「風邪」状態に関連する困難を克服するであろう。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、チェックポイント阻害抗体などの免疫腫瘍（ＩＯ）剤と組み合わせたバビツキシマブなどのホスファチジルセリン（ＰＳ）標的化抗体による改善された治療のための新たな方法、組成物、およびキットを提供することによって、先行技術の前述および他の必要性に対処する。本発明は、特に、癌を有するヒト患者を治療するためのＰＳ（例えば、バビツキシマブ）に結合する抗体を、免疫チェックポイント調節因子の１つ以上の阻害剤（例えば、チェックポイント阻害剤抗体）と組み合わせて、好ましくは、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、もしくはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体、または任意の免疫チェックポイント阻害剤に結合する多重特異性（例えば、二重特異性）遮断抗体と組み合わせて、使用することに関する。
【００１３】
好適なＩＯ剤は、免疫チェックポイント抗体であり、ＣＤ２８、ＯＸ４０、および／またはＧＩＴＲなどの、活性化免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合するアゴニスト（活性化）抗体、ならびに好ましくは、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦ−βなどの免疫チェックポイント調節因子（例えば、抑制性または刺激性の受容体または分子）に結合するアンタゴニスト（遮断）抗体である。抑制性免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合するアンタゴニスト（遮断）抗体は、本明細書では「免疫チェックポイント阻害剤」または「ＩＣＩ」とも称される。免疫チェックポイント抗体（または免疫チェックポイント阻害剤）の例は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に対する遮断抗体、例えば、アベルマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ピジリズマブ、ＸｍＡｂ２０７１７、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、ＣＸ−１８８、およびＬＹ３３０００５４、好ましくはアベルマブ、トレメリムマブ、ニボルマブもしくはアテゾリズマブ、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、またはＬＹ３３０００５４、ならびに最も好ましくはセミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、またはＬＹ３３０００５４である。
【００１４】
実施形態の列挙
１．対象（例えば、ヒト患者）の癌を治療する方法において使用するためのＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）であって、本方法が、ＰＳ標的化抗体分子を、免疫チェックポイント抗体分子、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体と組み合わせて対象に投与することを含む、ＰＳ標的化抗体分子。
【００１５】
２．ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブ）と、対象、例えば、ヒト患者の癌を治療する方法において使用するための免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント抗体分子）の活性を変化させることができる薬剤と、を含む、組成物。
【００１６】
３．ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブ）と、本明細書に記載される方法において使用するための免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント抗体分子）の活性を変化させることができる薬剤と、を含む、組成物。
【００１７】
４．対象（例えば、ヒト患者）の癌を治療するための方法であって、本方法が、ホスファチジルセリン（ＰＳ）標的化抗体分子（例えば、本明細書に記載されるもの）と、免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント抗体分子）の活性を変化させることができる薬剤とを、該対象の癌を治療するのに有効な合計量で該対象に投与することを含み、該免疫チェックポイント抗体分子が免疫チェックポイント調節因子、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤に結合する、方法。
【００１８】
５．該対象が、約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の治療前血中濃度を有するかまたは有すると特定され、該機能性β２ＧＰＩが、ホスファチジルセリン（ＰＳ）とバビツキシマブとの両方に結合する、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００１９】
６．該対象が、低い治療前血清インターフェロン−γ濃度を有するかまたは有すると特定され、例えば、該低い治療前血清インターフェロン−γ濃度が、約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満（例えば、約０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．００９１、０．００９２、０．００９３、０．００９４、０．００９５、０．００９６、０．００９７、０．００９８、０．００９９、または０．０１ｐｇ／ｍＬ未満）のインターフェロン−γの血清濃度である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００２０】
７．該インターフェロン−γの血清濃度が、Ｓｉｍｏａ免疫アッセイによって測定される、実施形態６に記載の組成物または方法。
【００２１】
８．該対象が、治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態を有するかまたは有すると特定され、例えば、該治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態がＴＣ０と特定され、ＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、治療前腫瘍細胞の約１％未満（例えば、約０．０１％、０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、２％、３％、４％、または５％未満）がＰＤ−Ｌ１を発現する、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００２２】
９．対象の癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象における機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を決定することと、
（ｉｉ）約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２ＧＰＩの血中濃度に対応して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を対象に投与することと、を含む、方法。
【００２３】
１０．対象の癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象における血清インターフェロン−γ濃度を、例えばＳｉｍｏａ免疫アッセイによって決定することと、
（ｉｉ）約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満（例えば、約０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．００９１、０．００９２、０．００９３、０．００９４、０．００９５、０．００９６、０．００９７、０．００９８、０．００９９、または０．０１ｐｇ／ｍＬ未満）の血清インターフェロン−γ濃度に対応して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を対象に投与することと、を含む、方法。
【００２４】
１１．対象の癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象における血清インターフェロン−γ濃度を、例えばＳｉｍｏａ免疫アッセイによって決定することと、
（ｉｉ）約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満（例えば、約０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．００９１、０．００９２、０．００９３、０．００９４、０．００９５、０．００９６、０．００９７、０．００９８、０．００９９、または０．０１ｐｇ／ｍＬ未満）の血清インターフェロン−γ濃度に対応して、免疫チェックポイント抗体分子を対象に投与することと、を含み、
対象が、以前にＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）の投与を受けている、方法。
【００２５】
１２．対象の癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象におけるＰＤ−Ｌ１の状態を決定することと、
（ｉｉ）対象が、ＰＤ−Ｌ１陰性状態（例えば、該治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態がＴＣ０と特定され、ＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、治療前腫瘍細胞の約１％未満（例えば、約０．０１％、０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、２％、３％、４％、または５％未満）がＰＤ−Ｌ１を発現する）に対応して、免疫チェックポイント抗体分子およびＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）を対象に投与することと、を含む、方法。
【００２６】
１３．対象の癌を治療するための方法であって、
（ｉ）任意選択で、癌を有する対象におけるＰＤ−Ｌ１の状態を決定することと、
（ｉｉ）ＰＤ−Ｌ１陰性状態（例えば、該治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態がＴＣ０と特定され、ＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、治療前腫瘍細胞の約１％未満（例えば、約０．０１％、０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、２％、３％、４％、または５％未満）がＰＤ−Ｌ１を発現する）に対応して、免疫チェックポイント抗体分子を対象に投与することと、を含み、
対象が、以前にＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）の投与を受けている、方法。
【００２７】
１４．対象の癌を治療するための方法であって、ＰＳ標的化抗体分子および免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００２８】
１５．対象の癌を治療するための方法であって、免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、以前にＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）の投与を受けており、
対象が、約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００２９】
１６．対象が、ＰＳ標的化抗体分子の投与前に、約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を有すると特定されるかまたは決定された、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３０】
１７．対象が、ＰＳ標的化抗体分子の投与後に、約２００μｇ／ｍｌ以上（例えば、約５０、１００、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、３００、または４００μｇ／ｍｌ）の機能性β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）の血中濃度を有すると特定されるかまたは決定された、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３１】
１８．対象の癌を治療するための方法であって、ＰＳ標的化抗体分子および免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、例えばＳｉｍｏａ免疫アッセイによって測定して、低い血清インターフェロン−γ濃度、例えば、約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満（例えば、約０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．００９１、０．００９２、０．００９３、０．００９４、０．００９５、０．００９６、０．００９７、０．００９８、０．００９９、または０．０１ｐｇ／ｍＬ未満）のインターフェロン−γの血清濃度を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００３２】
１９．対象の癌を治療するための方法であって、免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、以前にＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）の投与を受けており、
対象が、例えばＳｉｍｏａ免疫アッセイによって測定して、低い血清インターフェロン−γ濃度、例えば、約０．０９３ｐｇ／ｍＬ未満（例えば、約０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．００９１、０．００９２、０．００９３、０．００９４、０．００９５、０．００９６、０．００９７、０．００９８、０．００９９、または０．０１ｐｇ／ｍＬ未満）のインターフェロン−γの血清濃度を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００３３】
２０．対象が、ＰＳ標的化抗体分子の投与前に、低い血清インターフェロン−γ濃度を有すると特定されるかまたは決定された、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３４】
２１．対象が、ＰＳ標的化抗体分子の投与後に、低い血清インターフェロン−γ濃度を有すると特定されるかまたは決定された、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３５】
２２．対象の癌を治療するための方法であって、ＰＳ標的化抗体分子および免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態（例えば、該治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態がＴＣ０と特定され、例えばＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、治療前腫瘍細胞の約１％未満（例えば、約０．０１％、０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、２％、３％、４％、または５％未満）がＰＤ−Ｌ１を発現する）を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００３６】
２３．対象の癌を治療するための方法であって、免疫チェックポイント抗体分子を、癌を有する対象に投与することを含み、
対象が、以前にＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）の投与を受けており、
対象が、治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態（例えば、該治療前ＰＤ−Ｌ１陰性状態がＴＣ０と特定され、例えばＯＰＡＬ免疫組織化学アッセイによって測定して、治療前腫瘍細胞の約１％未満（例えば、約０．０１％、０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、２％、３％、４％、または５％未満）がＰＤ−Ｌ１を発現する）を有すると特定されるかまたは決定された、方法。
【００３７】
２４．ＰＳ標的化抗体分子が、バビツキシマブ、またはその抗原結合断片である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３８】
２５．ＰＳ標的化抗体分子が、表Ａに記載の抗体またはその抗原結合断片である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００３９】
２６．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、実施形態２５に記載の組成物または方法。
【００４０】
２７．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号１の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、実施形態２５または２６に記載の組成物または方法。
【００４１】
２８．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号４または３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、実施形態２５〜２７のいずれかに記載の組成物または方法。
【００４２】
２９．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号２または３１の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、実施形態２５〜２８のいずれかに記載の組成物または方法。
【００４３】
３０．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号５〜１０および２４〜２６から選択される、１、２、３、４、５、または６つのＣＤＲ配列を含む、実施形態２５〜２９のいずれかに記載の組成物または方法。
【００４４】
３１．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号１１〜１８および２７〜３０から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上のフレームワーク領域を含む、実施形態３０に記載の組成物または方法。
【００４５】
３２．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号２１または３４のアミノ酸配列を含む、実施形態２５に記載の組成物または方法。
【００４６】
３３．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号２０または３３の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、実施形態２５に記載の組成物または方法。
【００４７】
３４．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施形態２５に記載の組成物または方法。
【００４８】
３５．ＰＳ標的化抗体分子が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施形態２５または３４に記載の組成物または方法。
【００４９】
３６．ＰＳ標的化抗体分子が、１Ｎ１１もしくは１Ｇ１５、またはその抗原結合断片である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００５０】
３７．免疫チェックポイント調節因子が、抑制性免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦ−βの阻害剤を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００５１】
３８．免疫チェックポイント抗体分子が、抑制性免疫チェックポイント分子の遮断抗体および／またはアンタゴニストである、実施形態３７に記載の組成物または方法。
【００５２】
３９．免疫チェックポイント抗体分子が、ＰＤ−１に結合する遮断抗体またはその抗原結合断片を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００５３】
４０．該ＰＤ−１に結合する遮断抗体が、ＣＢＴ−５０１またはセミプリマブである、実施形態３９に記載の組成物または方法。
【００５４】
４１．免疫チェックポイント抗体分子が、ＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体またはその抗原結合断片を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００５５】
４２．該ＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体が、デュルバルマブ、アベルマブ、ＣＸ−０７２、ＬＹ３３０００５４、またはアテゾリズマブである、実施形態４１に記載の組成物または方法。
【００５６】
４３．該ＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体がＣＸ−０７２である、実施形態４２に記載の組成物または方法。
【００５７】
４４．免疫チェックポイント抗体分子が、ＣＴＬＡ−４に結合する遮断抗体またはその抗原結合断片を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００５８】
４５．該ＣＴＬＡ−４に結合する遮断抗体が、イピリムマブまたはトレメリムマブである、実施形態４４に記載の組成物または方法。
【００５９】
４６．免疫チェックポイント調節因子が、刺激性免疫チェックポイント分子、例えば、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、および／またはＣＤ１６０のアゴニストを含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６０】
４７．免疫チェックポイント抗体分子が、例えば表ＤまたはＥに列挙されている免疫療法剤を含む、先行する実施形態いずれかに記載の組成物または方法。
【００６１】
４８．免疫チェックポイント抗体分子が表Ｆに列挙されている抗体を含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６２】
４９．免疫チェックポイント抗体分子が、アベルマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ピジリズマブ、ＸｍＡｂ２０７１７、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、ＣＸ−１８８、およびＬＹ３３０００５４からなる群から選択される、先行する実施形態のいずれかの組成物または方法。
【００６３】
５０．少なくとも第１および第２の免疫チェックポイント抗体分子が、該対象に投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６４】
５１．ＰＳ標的化抗体分子が単一特異性抗体分子である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６５】
５２．ＰＳ標的化抗体分子が多重特異性抗体分子、例えば、二重特異性抗体分子である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６６】
５３．ＰＳ標的化抗体分子が、ＰＳに結合することができる可変領域と、免疫チェックポイント調節因子、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤に結合することができる可変領域と、を含む、実施形態５２に記載の組成物または方法。
【００６７】
５４．免疫チェックポイント抗体分子が単一特異性抗体分子である、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６８】
５５．免疫チェックポイント抗体分子が、多重特異性抗体分子（例えば、二重特異性抗体分子または三重特異性抗体分子）である、例えば、抗体がさらに２つの免疫チェックポイント調節因子（例えば、２つ以上の免疫チェックポイント阻害剤または２つ以上の免疫チェックポイント刺激剤）に特異的に結合する、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００６９】
５６．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）および免疫チェックポイント抗体分子が、該対象に、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、非経口内（ｉｎｔｒａｐａｒｅｎｔｅｒａｌｌｙ）、局所、経口、経腸、皮内、または髄腔内投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００７０】
５７．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）および免疫チェックポイント抗体分子が、該対象に静脈内投与される、実施形態５６に記載の組成物または方法。
【００７１】
５８．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）および免疫チェックポイント抗体分子が、該対象に連続的にまたは同時に投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００７２】
５９．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、免疫チェックポイント抗体分子の前に投与される、例えば、ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、免疫チェックポイント抗体分子の約１、２、４、５、もしくは６週間、またはそれ以上前に投与される、実施形態５８に記載の組成物または方法。
【００７３】
６０．ＰＳ標的化抗体分子の投与により、例えば、対象が免疫抑制を受けている場合、免疫チェックポイント抗体分子に対する対象の感受性が増大する、実施形態５９に記載の組成物または方法。
【００７４】
６１．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、免疫チェックポイント抗体分子の後に投与される、例えば、ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、免疫チェックポイント抗体分子の約１、２、４、５、もしくは６週間、またはそれ以上後に投与される、実施形態５８に記載の組成物または方法。
【００７５】
６２．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、免疫チェックポイント抗体分子と同時に（例えば、同じ来診時に）投与される、実施形態５８に記載の組成物または方法。
【００７６】
６３．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、毎週、または毎週より少ない頻度で、例えば、約１、２、３、４、５、６週、もしくはそれ以上ごとに投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００７７】
６４．免疫チェックポイント抗体分子が、毎週、または毎週より少ない頻度で、例えば、約１、２、３、４、５、６週、もしくはそれ以上ごとに投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００７８】
６５．該対象が、卵巣癌、胃癌、肝細胞癌、大腸癌、乳癌、食道癌（例えば、転移性胃食道癌）、悪性神経膠腫、膵臓癌、前立腺癌、メルケル細胞癌、黒色腫、頭頸部癌（例、再発性／転移性扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ））、腎細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、または肺癌を有する、先行する実施形態に記載の組成物または方法。
【００７９】
６６．該対象が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００８０】
６７．該対象が、非扁平上皮非小細胞肺癌を有する、実施形態６６に記載の組成物または方法。
【００８１】
６８．ＰＳ標的化抗体分子がバビツキシマブであり、かつ／または免疫チェックポイント抗体分子が抗ＰＤ−１抗体分子もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である、実施形態６６または６７に記載の組成物または方法。
【００８２】
６９．免疫チェックポイント抗体分子がＣＢＴ−５０１である、実施形態６８に記載の組成物または方法。
【００８３】
７０．該対象が乳癌を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００８４】
７１．該対象が肝臓癌を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００８５】
７２．該対象が膵臓癌を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００８６】
７３．該対象が転移性胃食道癌を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００８７】
７４．ＰＳ標的化抗体分子がバビツキシマブであり、かつ／または免疫チェックポイント抗体分子が抗ＰＤ−１抗体分子もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である、実施形態７３に記載の組成物または方法。
【００８８】
７５．免疫チェックポイント抗体分子がＣＢＴ−５０１である、実施形態７４に記載の組成物または方法。
【００８９】
７６．該対象がＨＮＳＣＣを有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００９０】
７７．ＰＳ標的化抗体分子がバビツキシマブであり、かつ／または免疫チェックポイント抗体分子が抗ＰＤ−１抗体分子もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子である、実施形態７６に記載の組成物または方法。
【００９１】
７８．免疫チェックポイント抗体分子がＣＢＴ−５０１である、実施形態７７に記載の組成物または方法。
【００９２】
７９．前記対象が肝細胞癌を有する、実施形態６５に記載の組成物または方法。
【００９３】
８０．ＰＳ標的化抗体分子がバビツキシマブであり、かつ／または免疫チェックポイント抗体分子が抗ＰＤ−１抗体分子である、実施形態７９に記載の組成物または方法。
【００９４】
８１．免疫チェックポイント抗体分子がペムブロリズマブである、実施形態８０に記載の組成物または方法。
【００９５】
８２．対象が乳癌を有しない、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００９６】
８３．対象が黒色腫を有しない、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００９７】
８４．対象が免疫抑制を受けている、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００９８】
８５．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ）の量で該対象に投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【００９９】
８６．免疫チェックポイント抗体分子が、約３ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ）の量で該対象に投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１００】
８７．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１００〜５００ｍｇ（例えば、約１５０〜４００ｍｇ、１８０〜３６０ｍｇ、または２００〜３００ｍｇ）の用量で投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１０１】
８８．免疫チェックポイント抗体分子が、約１００〜５００ｍｇ（例えば、約１５０〜４００ｍｇ、１８０〜３６０ｍｇ、または２００〜３００ｍｇ）の用量で投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１０２】
８９．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、またはそれ以上の一律用量で投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１０３】
９０．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１８０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態８９に記載の組成物または方法。
【０１０４】
９１．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１９０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態８９に記載の組成物または方法。
【０１０５】
９２．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２００ｍｇの一律用量で投与される、実施形態８９に記載の組成物または方法。
【０１０６】
９３．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２１０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態８９に記載の組成物または方法。
【０１０７】
９４．ＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２２０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態８９に記載の組成物または方法。
【０１０８】
９５．免疫チェックポイント抗体分子が、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、またはそれ以上の一律用量で投与される、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１０９】
９６．免疫チェックポイント抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１８０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態９５に記載の組成物または方法。
【０１１０】
９７．免疫チェックポイント抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約１９０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態９５に記載の組成物または方法。
【０１１１】
９８．免疫チェックポイント抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２００ｍｇの一律用量で投与される、実施形態９５に記載の組成物または方法。
【０１１２】
９９．免疫チェックポイント抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２１０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態９５に記載の組成物または方法。
【０１１３】
１００．免疫チェックポイント抗体分子（例えば、バビツキシマブ）が、約２２０ｍｇの一律用量で投与される、実施形態９５に記載の組成物または方法。
【０１１４】
１０１．対象がヒトである、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１１５】
１０２．対象に追加の治療剤を投与することをさらに含む、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１１６】
１０３．追加の治療剤が、抗癌剤、例えば、ＴＧＦβＲ１キナーゼ阻害剤ＩＩ  ＬＹ３２００８８２である、実施形態１０２に記載の組成物または方法。
【０１１７】
１０４．追加の治療剤が、化学療法剤、例えば、表Ｃに列挙されている化学療法剤である、実施形態１０２に記載の組成物または方法。
【０１１８】
１０５．化学療法剤が、ドセタキセル、パクリタキセル、カルボプラチン、ソラフェニブ、ゲムシタビン、レンバンチニブ（ｌｅｎｖａｎｔｉｎｉｂ）、メレスチニブ、またはこれらの任意の組み合わせである、実施形態１０４に記載の組成物または方法。
【０１１９】
１０６．ＰＳ標的化抗体分子および／または免疫チェックポイント抗体分子が、同じまたは異なる組成物（例えば、薬学的組成物）中に含まれる、先行する実施形態のいずれかに記載の組成物または方法。
【０１２０】
１０７．先行する実施形態のいずれかに記載の方法に従って使用するためのＰＳ標的化抗体分子（例えば、バビツキシマブ）。
【０１２１】
１０８．先行する実施形態のいずれかに記載の組成物を含む、薬学的組成物。
【０１２２】
１０９．先行する実施形態のいずれかに記載の組成物を含む、キット。
【０１２３】
定義
本明細書で使用される場合、「抗体分子」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。「抗体分子」という用語は、例えば、モノクローナル抗体（例えば、免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）を含む。実施形態では、抗体分子は、全長抗体、または全長免疫グロブリン鎖を含む。実施形態では、抗体分子は、全長抗体の抗原結合断片もしくは機能性断片、または全長免疫グロブリン鎖、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、またはダイアボディを含む。実施形態では、抗体分子は、単一特異性であり、例えば、単一のエピトープに結合する。実施形態では、抗体分子は、多重特異性、例えば、二重特異性である。実施形態では、抗体分子は、多価（例えば、二価）である。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含むがこれらに限定されない任意のクラスの抗体、ならびに任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）の抗体に由来し得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される重鎖定常領域を有し得る。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択される軽鎖を有し得る。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント調節因子」とは、免疫応答を調節することができる、例えば、阻害または刺激することができる分子（例えば、タンパク質）を指す。免疫チェックポイント調節因子は、免疫応答を阻害または刺激する活性を有する細胞によって発現されるタンパク質、例えば、細胞表面受容体であってもよい。抑制性免疫チェックポイント分子（本明細書では「免疫チェックポイント阻害剤」とも称される）の例には、非限定的に、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、およびＴＧＦ−βが挙げられる。刺激性免疫チェックポイント分子（本明細書では「免疫チェックポイント刺激剤」または「免疫チェックポイント活性化剤」とも称される）の例には、非限定的に、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、および／またはＣＤ１６０が挙げられる。
【０１２５】
本明細書で使用される「免疫チェックポイント抗体分子」は、免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤）の活性を改変することができる抗体分子を指す。「免疫チェックポイント抗体」は、免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤）の活性を改変することができる抗体を指す。一般に、免疫チェックポイント抗体分子は、免疫チェックポイント調節剤に結合することができ、この結合活性により、免疫チェックポイント調節剤の活性の改変が生じる。免疫チェックポイント抗体分子は、免疫チェックポイント調節因子への結合に寄与する１つ以上の可変領域を含んでもよい。免疫チェックポイント抗体分子は、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、本明細書に記載のとおり）の活性を阻害する（例えば、拮抗する）ことにより、および／または免疫チェックポイント活性化剤の活性を促進する（例えば、作動させる）ことにより、免疫応答を刺激することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント抗体分子は、特定の免疫チェックポイント調節因子に対して単一特異性である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント抗体分子は、多重特異性、例えば、複数の免疫チェックポイント調節因子に結合することができるものである。例えば、免疫チェックポイント抗体分子は、二重特異性、例えば、２つの異なる免疫チェックポイント調節因子に同時に結合することができるものであり得る。
【０１２６】
「プログラム死１」または「ＰＤ−１」という用語は、既知のリガンドとしてＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２を有する共抑制性受容体として機能する免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーのメンバーを指す。ＰＤ−１は、アポトーシス細胞死に関与するタンパク質を選択するためのサブトラクションクローニングに基づくアプローチを使用して過去に特定された。ＰＤ−１は、ＰＤ−Ｌ１に結合するその能力に基づいて、分子のＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ−４と同様に、ＰＤ−１は、抗ＣＤ３に応答してＴ細胞の表面上で急速に誘導される（Ａｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．２５（１９９６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７６５）。しかしながら、ＣＴＬＡ−４とは対照的に、ＰＤ−１は、（抗ＩｇＭに応答して）Ｂ細胞の表面上でも誘導される。ＰＤ−１はまた、胸腺細胞および骨髄性細胞のサブセット上で発現される（既出のＡｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：７７３）。「ＰＤ−１」という用語は、哺乳動物のアイソフォーム、例えば、ヒトＰＤ−１、ヒトＰＤ−１の種相同体、およびＰＤ−１と共通するエピトープを少なくとも１つ含む類似体を含み得ることが企図される。ＰＤ−１、例えば、ヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、既知である。例えば、Ｓｈｉｎｏｈａｒａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２３（３）：７０４−６；Ｆｉｎｇｅｒ  ＬＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ（１９９７）１９７（１−２）：１７７−８７。
【０１２７】
ＰＤ−１ポリペプチドは、抑制性シグナルを免疫細胞に伝達することによって免疫細胞エフェクター機能を阻害することができる、または例えば可溶性の単量体形態で存在する場合には、免疫細胞の副刺激（例えば、競合的阻害）を促進することができる、抑制性受容体である。好ましいＰＤ−１ファミリーメンバーは、ＰＤ−１と配列同一性を共有し、かつ１つ以上のＢ７ファミリーメンバー、例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＰＤ−１リガンド、および／または抗原提示細胞上の他のポリペプチドに結合する。
【０１２８】
「ＰＤ−１活性」という用語は、ＰＤ−１ポリペプチドが、例えば、抗原提示細胞上の天然のＰＤ−１リガンドを結合させることによって、活性化された免疫細胞において抑制性シグナルを調節する能力を含む。ＰＤ−１は、ＣＴＬＡ４と類似した様式で抑制性シグナルを免疫細胞に伝達する。免疫細胞における抑制性シグナルの調節により、免疫細胞の増殖および／または免疫細胞によるサイトカイン分泌の調節がもたらされる。このため、「ＰＤ−１活性」という用語は、ＰＤ−１ポリペプチドがその天然のリガンド（複数可）に結合する能力、免疫細胞の副刺激性または抑制性のシグナルを調節する能力、および免疫応答を調節する能力を含む。
【０１２９】
「ＰＤ−１リガンド」という用語は、ＰＤ−１受容体の結合パートナーを指し、ＰＤ−Ｌ１（Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１０２７）およびＰＤ−Ｌ２（Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６１）の両方を含む。少なくとも２種類のヒトＰＤ−１リガンドポリペプチドが存在する。ＰＤ−１リガンドタンパク質は、シグナル配列、ならびにＩｇＶドメイン、ＩｇＣドメイン、膜貫通ドメイン、および短い細胞質尾部を含む。ＰＤ−Ｌ１（配列データについては、Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．１９２：１０２７を参照）およびＰＤ−Ｌ２（配列データについては、Ｌａｔｃｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６１を参照）の両方は、ポリペプチドのＢ７ファミリーのメンバーである。ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方とも、胎盤、脾臓、リンパ節、胸腺、および心臓において発現される。ＰＤ−Ｌ２のみ、膵臓、肺、および肝臓において発現される一方、ＰＤ−Ｌ１のみ、胎児肝臓において発現される。両方のＰＤ−１リガンドは活性化単球および樹状細胞上で上方調節されるが、ＰＤ−Ｌ１発現はより広範である。例えば、ＰＤ−Ｌ１は、マウス造血細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、および骨髄由来肥満細胞）および非造血細胞（例えば、内皮細胞、上皮細胞、および筋細胞）上で構成的に発現され、より高いレベルに上方調節されることが知られているが、ＰＤ−Ｌ２は、ＤＣ、マクロファージ、および骨髄由来肥満細胞上で誘導的に発現される（Ｂｕｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２７：１１１を参照されたい）。
【０１３０】
ＰＤ−１リガンドは、ある特定の保存された構造的および機能的特徴を有するポリペプチドのファミリーを構成する。タンパク質または核酸分子を指すために使用される場合の「ファミリー」という用語は、本明細書で定義されるように、共通の構造ドメインまたはモチーフを有し、かつ十分なアミノ酸またはヌクレオチド配列相同性を有する、２つ以上のタンパク質または核酸分子を意味する。そのようなファミリーメンバーは、天然に存在するものでも天然に存在しないものでもよく、同じ種に由来しても異なる種に由来してもよい。例えば、ファミリーは、ヒト起源の第１のタンパク質を含有しても、ヒト起源の他の異なるタンパク質を含有してもよく、あるいは非ヒト起源の相同体を含有することもできる。ファミリーのメンバーはまた共通の機能的特徴を有してもよい。ＰＤ−１リガンドは、Ｂ７ポリペプチドファミリーのメンバーである。本明細書で使用される「Ｂ７ファミリー」または「Ｂ７ポリペプチド」という用語は、Ｂ７ポリペプチド、例えば、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、誘導性副刺激性リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７ｈ（Ｓｗａｌｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １１：４２３）、および／またはＰＤ−１リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２）と配列相同性を共有する、副刺激性ポリペプチドを含む。例えば、ヒトＢ７−１およびＢ７−２は、ＮＣＢＩのＢＬＡＳＴプログラムを既定のパラメータ（ギャップペナルティをＥｘｉｓｔｅｎｃｅ  １１およびＥｘｔｅｎｓｉｏｎ  １に設定したＢｌｏｓｕｍ６２マトリックス）を使用して比較した場合（ＮＣＢＩウェブサイトを参照されたい）、約２６％のアミノ酸配列同一性を共有する。Ｂ７ファミリーという用語はまた、免疫細胞機能を調節することができるポリペプチドの変異体も含む。分子のＢ７ファミリーは、シグナルドメインであるＩｇＶドメインおよびＩｇＣドメインを含む、ある数の保存された領域を共有する。ＩｇＶドメインおよびＩｇＣドメインは、当該分野で認識されているＩｇスーパーファミリーメンバードメインである。これらのドメインは、Ｉｇ折り畳みと呼ばれる個別の折り畳みパターンを有する構造単位に対応する。Ｉｇ折り畳みは、２つのβシートのサンドイッチで構成され、各々は、５〜１０個のアミノ酸の逆平行β鎖からなり、全てではないが大部分において、保存されたジスルフィド結合が２つのシートの間にあり、Ｉｇ、ＴＣＲ、およびＭＨＣ分子のＩｇＣドメインは、同じ種類の配列パターンを共有し、Ｉｇスーパーファミリー内のＣ１セットと呼ばれる。他のＩｇＣドメインは他のセットに含まれる。ＩｇＶドメインはまた、配列パターンを共有し、Ｖセットドメインと呼ばれる。ＩｇＶドメインは、ＩｇＣドメインよりも長く、追加のβ鎖対を含有する。
【０１３１】
本明細書で使用される「ＣＴＬＡ−４」は、マウス細胞溶解性Ｔ細胞ｃＤＮＡライブラリーの示差的スクリーニングによって特定されたＴ細胞表面分子を指す（Ｂｒｕｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２８：２６７−２７０）。Ｂ７に対する第２の受容体としてのＣＴＬＡ−４の役割は、例えば、Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：５６１−５６９で考察されている。Ｆｒｅｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６２：９０７−９０９では、Ｂ７欠損マウスにおけるＣＴＬＡ−４が考察されている。ＣＴＬＡ−４に対するリガンドは、Ｌｅｎｓｃｈｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９０：１１０５４−１１０５８に記載されている。Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：７９２−７９５には、可溶型のＣＴＬＡ−４によるインビボでの免疫抑制が記載されている。Ｌｅｎｓｃｈｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：７８９−７９２では、ＣＴＬＡ−４ｌｇによって誘導される膵島移植片の長期生存が考察されている。Ｗａｌｕｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １：４０５−４１３では、ＣＴＬＡ−４がＴ細胞活性化の負の調節因子として機能し得ることが提案されている。ＣＴＬＡ−４（例えば、ヒトＣＴＬＡ−４）のアミノ酸およびヌクレオチド配列は既知である（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８１１，０９７号および米国特許第５，４３４，１３１号に記載されているとおり）。
【０１３２】
追加の用語は、以下および本明細書全体で定義されている。
【０１３３】
本明細書で使用される場合、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは２つ以上（例えば、少なくとも１つ）を指す。
【０１３４】
「または」という用語は、文脈上明らかにそうでないことを示さない限り、本明細書では「および／または」という用語を意味するために使用され、またそれと互換的に使用される。
【０１３５】
「約」および「およそ」は、一般に、測定の性質または精度を所与として、測定された量について許容可能な程度の誤差を意味するものとする。例示的な誤差の程度は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。
【０１３６】
「と組み合わせて」または「組み合わせた量で」という句は、療法または治療剤を同時に投与しなければならないことおよび／または一緒に送達するために製剤化しなければならないことを暗示するようには意図されていない（しかし、これらの送達方法は本明細書に記載されている範囲に含まれる）。抗ＰＳ抗体分子は、１つ以上の他の追加の療法または治療剤と同時に、その前に、またはその後に、投与することができる。抗ＰＳ抗体分子および他の薬剤または治療プロトコルは、任意の順序で投与することができる。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量および／またはタイムスケジュールで投与されることになる。この組み合わせで用いられる追加の治療剤は、単一の組成物中で一緒に投与されてもよく、または異なる組成物中で別々に投与されてもよいことがさらに理解されるであろう。一般に、組み合わせで用いられる追加の治療剤は、それらが個々に用いられるレベルを超えないレベルで用いられることが期待される。いくつかの実施形態では、組み合わせで用いられるレベルは、個別に用いられるレベルよりも低くなる。
【０１３７】
「機能性変異体」という用語は、天然に存在する配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一のヌクレオチド配列によってコードされ、かつ天然に存在する配列の１つ以上の活性を有することができるポリペプチドを指す。
【０１３８】
本明細書で使用される「単離された」という用語は、その元のまたは自生の環境（例えば、それが天然に存在する場合は天然の環境）から取り出された物質を指す。例えば、生きている動物中にある天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されないが、自然系において共存する物質のいくつかまたは全てから人間の介入によって分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離される。そのようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であり得、かつ／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、組成物の一部であり、かつそのようなベクターまたは組成物が、それが天然に見出される環境の一部ではないという点で、やはり単離され得る。
【０１３９】
本発明のさらなる要約は、本明細書に提供される詳細な説明を考慮して特許請求の範囲を参照することによって見出すことができる。
【図面の簡単な説明】
【０１４０】
以下の図面は、本明細書の一部分を構成し、本発明のある特定の態様をさらに実証するために含まれている。本発明は、これらの図面のうちの１つ以上を、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて参照することによってより良好に理解され得る。米国特許または出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含む。カラーの図面（複数可）を有するこの米国特許または特許出願公開のコピーは、請求および必要な手数料の支払いをもって、特許局により提供される。
【０１４１】
【図１Ａ−１Ｂ】３Ｇ４抗体の可変領域のＤＮＡおよび核酸配列である。３Ｇ４抗体の重鎖（図１Ａ；配列番号３５および配列番号３６）および軽鎖（図１Ｂ；配列番号３７および配列番号３８）のＤＮＡおよびアミノ酸配列が提示され、ＤＮＡ配列中の制限部位が示されている。リーダー配列は成熟タンパク質とは区別され、成熟タンパク質は、図１Ａおよび図１Ｂの各々において第１の矢印で示されるように開始する。各可変配列にヒト定常領域をグラフトする例示的手段が示されており、ここでは、それぞれのヒト定常領域配列（配列番号３９および配列番号４０）の最初の部分が、図１Ａおよび図１Ｂの各々において第２の矢印で示されている。
【図２Ａ−２Ｂ】１Ｎ１１（ＰＧＮ６３５）抗体の配列およびＰＳ結合である。図２Ａは、ｓｃＦｖ形態の１Ｎ１１抗体の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＬ）可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列である。ＳｃＦｖを、Ｎｃｏ／ＮｏｔＩ部位を介してｐＨＯＧ２１（３．７Ｋｂ）にクローニングした。初期クローニングに使用した制限部位（ＮｃｏＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＭｌｕＩ、およびＮｏｔＩ）は、斜体になっており、下線が引かれている。ＶＨとＶＬとの間のリンカー配列は斜体である。図２Ｂでは、１Ｎ１１抗体は、血清依存的な様式でＰＳに結合する。プレーティングしたＰＳ、およびホスファチジルコリン（ＰＣ）とスフィンゴミエリン（ＳＭ）との混合物（ＰＣ／ＳＭ）に対するｓｃＦｖ形態の１Ｎ１１の結合を、ＥＬＩＳＡによって試験した。ポリスチレンプレートを、１０μｇ／ｍｌのＰＳまたは同量のＰＣ／ＳＭの混合物（各々ヘキサン中に溶解したもの）でコーティングした。ヘキサンが蒸発した後、ＰＢＳ中の１０％のヒト血清（＋１０％の血清）または１％の卵白アルブミン（＋１％のＯＶ）を添加し、１時間インキュベートした。２０μｇ／ｍｌの精製１Ｎ１１  ｓｃＦｖを、各抗原について６つのウェルのうちの第１のウェルに、１０％のヒト血清（＋１０％の血清）または１％の卵白アルブミン（＋１％のＯＶ）のいずれかで添加し、３倍希釈で滴定した。残りの結合したｓｃＦｖを、ＨＲＰ共役抗ｃ−ｍｙｃ標識マウスモノクローナル抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって検出した。
【図３】２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩレベルを有するＮＳＣＬＣ患者が、バビツキシマブおよびドセタキセル（黒色の上の線）で治療したときに、プラセボおよびドセタキセル（「プラセボ」、灰色の下の線）で治療した同じβ２ＧＰＩレベル（２００μｇ／ｍｌ以上）を有する患者とは対照的に、生存期間（ｍＯＳ）を延長させる傾向があることを示す、第ＩＩＩ相試験のカプランマイヤー生存曲線である。
【図４】２００μｇ／ｍｌ〜２４０μｇ／ｍｌの範囲の機能性β２ＧＰＩレベルを有するＮＳＣＬＣ患者が、バビツキシマブおよびドセタキセル（黒色の上の線）で治療したときに、プラセボおよびドセタキセル（「プラセボ」、灰色の下の線）で治療した同じβ２ＧＰＩレベル（２００〜２４０μｇ／ｍｌ）を有する患者とは対照的に、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有することを示す、第ＩＩＩ相試験のカプランマイヤー生存曲線である。
【図５】前臨床研究における３Ｇ４抗体のＰＳに結合する機能的活性および抗腫瘍活性を支持するβ２ＧＰＩレベルと、第ＩＩＩ相試験の患者におけるβ２ＧＰＩレベルとの比較である。第ＩＩＩ相試験における５９２人の評価可能な患者の治療前の機能性β２ＧＰＩレベルの分布は、実施例ＸＩＩＩに記載されている。２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩレベル（水平方向の縞模様の棒および右に向かって下方を指している斜めの縞模様の棒）は、バビツキシマブで治療された患者の生存期間が延長する傾向を提供する（図３）。２００μｇ／ｍｌ〜２４０μｇ／ｍｌの範囲の機能性β２ＧＰＩレベル（水平方向の縞模様の棒）は、バビツキシマブで治療した患者についての統計的に有意なより良好なｍＯＳを提供する（図４）。約１０μｇ／ｍＬ以上（→、長い矢印）または約６０μｇ／ｍＬ以上（＞、短い矢印）の機能性β２ＧＰＩレベルは、前臨床研究におけるバビツキシマブのＰＳに結合する機能的活性および抗腫瘍活性に十分である（実施例Ｉ、Ｅ）。
【図６】バビツキシマブおよびドセタキセル、その後に後続免疫療法（「ＳＡＣＴ−ＩＯ」）で治療した患者（黒色の実線）が、ドセタキセル単独、その後に後続免疫療法で治療した患者（灰色の実線）とは対照的に、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有することを示す、カプランマイヤー生存曲線である。治療群、ｍＯＳ、および統計的分析を、これらの生存曲線について表１１に作表する（実施例ＸＶＩ）。
【図７Ａ−７Ｂ】２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩレベルを有するＮＳＣＬＣ患者が、バビツキシマブ、その後に後続免疫療法（「ＳＡＣＴ−ＩＯ」）で治療したときに統計的に有意なより良好なｍＯＳを有することを示す、カプランマイヤー生存曲線である。図７Ａでは、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する患者において、ドセタキセルおよびバビツキシマブで治療した患者（黒色の線）は、ＳＡＣＴ−ＩＯを受けている患者（「ＳＡＣＴ  ＩＯあり」、実線）およびＳＡＣＴ−ＩＯを受けていない患者（「ＳＡＣＴ  ＩＯなし」、破線）を含むドセタキセルおよびプラセボで治療した対照患者（灰色の線）とは対照的に、生存期間を延長させる。図７Ｂは同じ治療群を示すが、全ての患者は、機能性β２ＧＰＩが２００μｇ／ｍＬ未満であった。
【図８Ａ−８Ｂ】カプランマイヤー生存曲線は、バビツキシマブで治療したＮＳＣＬＣ患者が、治療前ＰＤ−Ｌ１発現が陰性である場合（ＴＣ０、１％未満）、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有することを示す。図８Ａでは、ドセタキセルおよびバビツキシマブで治療した患者において、ＴＣ０、１％未満の治療前ＰＤ−Ｌ１発現が陰性である患者（「ＣＫ＋＜１％」、灰色の線）は、ＴＣ１／２／３、１％以上のＰＤ−Ｌ１発現が陽性である患者（「ＣＫ＋≧１％」、黒色の線）とは対照的に、生存期間を延長させる。図８Ｂは、同じＰＤ−Ｌ１陰性群（「ＣＫ＋＜１％」、灰色の線）および陽性群（「ＣＫ＋≧１％」、黒色の線）を示すが、患者はドセタキセルおよびプラセボによる治療を受けた。
【発明を実施するための形態】
【０１４２】
現代では、患者の疾患リスクおよび／または予測される奏効などの要因に基づいて、個々の患者に合わせて治療を調整することにますます重点が置かれている。この概念は一般に、「個別化医療」として説明することができる。特定の治療法の有効性に寄与する異なる構成要素についてのより深い理解は、患者を層別化するための基礎を提供し、それによって後に続く患者集団の治療結果を改善することができる。本発明は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体またはその抗原結合断片を使用して免疫療法を最適化するための新たなバイオマーカーを提供することによる、そのような方針に沿った進歩となる。
【０１４３】
抗体分子
本発明は、例えばＰＳまたは免疫チェックポイント調節因子に結合することができる抗体分子を特徴とする。本明細書中で使用される場合、「抗体分子」という用語は、一般に、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン配列、例えば、抗体またはその抗原結合断片を含む、タンパク質、例えば、免疫グロブリン鎖またはその断片を指す。一実施形態では、抗体分子は、全長抗体、または全長免疫グロブリン鎖を含む。一実施形態では、抗体分子は、全長抗体の抗原結合断片もしくは機能性断片、または全長免疫グロブリン鎖を含む。
【０１４４】
一実施形態では、抗体分子は、単一特異性抗体分子であり、単一のエピトープに結合する。例えば、それぞれが同じエピトープに結合する複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を有する単一特異性抗体分子。
【０１４５】
一実施形態では、抗体分子は、多重特異性抗体分子であり、例えば、これは複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含み、これら複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第１のエピトープに対して結合特異性を有し、これら複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は、第２のエピトープに対して結合特異性を有する。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは重複する。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは重複しない。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、第３、第４、または第５の免疫グロブリン可変ドメインを含む。一実施形態では、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、または四重特異性抗体分子である。
一実施形態では、多重特異性抗体分子は二重特異性抗体分子である。二重特異性抗体は、２つ以下の抗原に対して特異性を有する。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって特徴付けられる。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは重複する。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは重複しない。一実施形態では、第１のエピトープと第２のエピトープとは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列とを含む。一実施形態において、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片と、第２のエピトープに対して結合特異性を有する半抗体またはその断片とを含む。一実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片と、第２のエピトープに対して結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片とを含む。一実施形態では、第１のエピトープは、ＰＤ−１上に位置し、第２のエピトープは、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２上に位置する。
【０１４６】
一実施形態では、抗体分子は、ダイアボディ、および一本鎖分子、ならびに抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。例えば、抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＨと略記する）および軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列（本明細書ではＶＬと略記する）を含み得る。一実施形態では、抗体分子は、重鎖および軽鎖（本明細書では半抗体と称する）を含むかまたはそれらからなる。別の例では、抗体分子は、２つの重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列および２つの軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列を含み、それによって２つの抗原結合部位を形成し、これは、例えば、全抗体または組み換えＤＮＡ技術を使用してデノボ合成された抗体の修飾によって産生されてもよい、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価および二重特性）、およびキメラ（例えば、ヒト化）抗体である。これらの機能性抗体断片は、それらのそれぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持している。抗体および抗体断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含むがこれらに限定されない任意のクラスの抗体、ならびに任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）の抗体に由来し得る。抗体分子の調製物はモノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体分子はまた、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはインビトロで生成された抗体であり得る。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４から選択される、重鎖定常領域を有し得る。抗体はまた、例えばカッパまたはラムダから選択される軽鎖を有し得る。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」という用語と互換的に使用される。
【０１４７】
抗体分子の抗原結合断片の例には以下が含まれる：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダ科動物またはラクダ化可変ドメイン、（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）、（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。
【０１４８】
「抗体」という用語は、インタクトな分子およびその機能性断片を含む。抗体の定常領域は、抗体の特性を修正するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させるために）、改変する、例えば、突然変異させることができる。
【０１４９】
抗体分子は単一ドメイン抗体でもあり得る。単一ドメイン抗体は、相補性決定領域が単一ドメインポリペプチドの一部である抗体を含み得る。例としては、重鎖抗体、軽鎖を天然に含まない抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、および抗体に由来するもの以外の単一ドメイン足場が挙げられるが、これらに限定されない。単一ドメイン抗体は、当該技術分野の単一ドメイン抗体のうちのいずれかであっても、いずれかの将来の単一ドメイン抗体であってもよい。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、魚類、サメ、ヤギ、ウサギ、およびウシを含むがこれらに限定されない任意の種に由来し得る。本発明の別の態様によれば、単一ドメイン抗体は、軽鎖を欠く重鎖抗体として知られる天然に存在する単一ドメイン抗体である。そのような単一ドメイン抗体は、例えば、ＷＯ９４０４６７８に開示されている。明確化を理由に、軽鎖を天然に含まない重鎖抗体に由来するこの可変ドメインは、本明細書では、それを四本鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、ＶＨＨまたはナノボディとする。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科動物種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびグアナコにおいて作られた抗体から誘導することができる。ラクダ科動物以外の他の種は、軽鎖を天然に含まない重鎖抗体を産生し得る。そのようなＶＨＨは本発明の範囲内である。
【０１５０】
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と呼ばれるより保存されている領域が散在する「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に細分することができる。
【０１５１】
フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、いくつかの方法（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照されたい）、およびＯｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用されているＡｂＭ定義によって、正確に定義されている。概して、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。
【０１５２】
本明細書で使用される「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を授ける抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域に３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。
【０１５３】
所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ  ２７３，９２７−９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番スキーム）に記載されているスキームを含むある数の周知のスキームのうちのいずれかを使用して決定され得る。本明細書で使用される場合、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号スキームに従って定義されるＣＤＲは、「超可変ループ」とも称されることがある。
【０１５４】
例えば、Ｋａｂａｔのもとでは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）と付番される。Ｃｈｏｔｈｉａのもとでは、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）と付番され、ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）、および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）と付番される。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ両方のＣＤＲ定義を組み合わせると、ＣＤＲは、ヒトＶＨのアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）、および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）、ならびにヒトＶＬのアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）、および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）からなる。
【０１５５】
一般に、特に示されない限り、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば表１に記載されるように、１つ以上のＫａｂａｔ  ＣＤＲおよび／またはＣｈｏｔｈｉａ超可変ループの任意の組み合わせを含み得る。一実施形態では、表１に記載されている抗ＰＤ−１抗体分子に対して以下の定義が使用される：ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ両方を組み合わせたＣＤＲ定義に従うＨＣＤＲ１、ＫａｂａｔのＣＤＲ定義に従うＨＣＣＤＲ２〜３およびＬＣＣＤＲ１〜３。全ての定義のもと、各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含み、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端へと、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列される。
【０１５６】
本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成し得るアミノ酸配列を指す。例えば、この配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列の全部または一部を含んでもよい。例えば、この配列は、１つ、２つ、またはそれ以上のＮ末端アミノ酸またはＣ末端アミノ酸を含む場合も含まない場合もあり、あるいはタンパク質構造の形成と適合する他の改変を含んでもよい。
【０１５７】
「抗原結合部位」という用語は、ＰＤ−１ポリペプチドまたはそのエピトープに結合する界面を形成する決定基を含む抗体分子の部分を指す。タンパク質（またはタンパク質模倣物）に関して、抗原結合部位は、典型的には、ＰＤ−１ポリペプチドに結合する界面を形成する（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸模倣物の）１つ以上のループを含む。典型的には、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１つまたは２つのＣＤＲおよび／または超可変ループ、またはより典型的には少なくとも３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲおよび／または超可変ループを含む。
【０１５８】
「競合する」または「交差競合する」という用語は、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば本明細書で提供される抗ＰＤ−１抗体分子の、標的、例えばヒトＰＤ−１への結合に干渉する抗体分子の能力を指すために、本明細書で互換的に用いられる。結合への干渉は、直接的または間接的（例えば、抗体分子または標的のアロステリック調節を通して）であり得る。抗体分子が別の抗体分子の標的への結合に干渉することができる程度、したがってそれが競合すると言えるかどうかは、競合結合アッセイ、例えば、ＦＡＣＳアッセイ、ＥＬＩＳＡ、またはＢＩＡＣＯＲＥアッセイを使用して決定することができる。いくつかの実施形態では、競合結合アッセイは定量的競合アッセイである。いくつかの実施形態では、第１の抗ＰＤ−１抗体分子は、第１の抗体分子の標的への結合が、競合結合アッセイ（例えば、本明細書に記載の競合結合アッセイ）において、１０％以上、例えば、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、９９％以上減少するときに、標的への結合について第２の抗ＰＤ−１抗体分子と競合すると言える。
【０１５９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組み換え方法）によって作製することができる。
【０１６０】
「事実上ヒトの」タンパク質は、中和抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を引き起こさないタンパク質である。ＨＡＭＡは、ある数の状況、例えば、抗体分子が繰り返し投与される場合、例えば、慢性または再発性の疾患状態の治療において、問題となり得る。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスの増大により（例えば、Ｓａｌｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３２：１８０−１９０（１９９０）を参照されたい）、またアレルギー反応の可能性により（例えば、ＬｏＢｕｇｌｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，５：５１１７−５１２３（１９８６）を参照されたい）、繰り返しの抗体投与を無効にする可能性がある。
【０１６１】
抗体分子は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。他の実施形態では、抗体は、組み換えによって、例えば、ファージディスプレイによってまたはコンビナトリアル法によって産生させることができる。
【０１６２】
抗体を生成するためのファージディスプレイおよびコンビナトリアル法は当該技術分野において既知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号、Ｋａｎｇらの国際公開第ＷＯ９２／１８６１９号、Ｄｏｗｅｒらの国際公開第ＷＯ９１／１７２７１号、Ｗｉｎｔｅｒらの国際公開第ＷＯ９２／２０７９１号、Ｍａｒｋｌａｎｄらの国際公開第ＷＯ９２／１５６７９号、Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇらの国際公開第ＷＯ９３／０１２８８号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの国際公開第ＷＯ９２／０１０４７号、Ｇａｒｒａｒｄらの国際公開第ＷＯ９２／０９６９０号、Ｌａｄｎｅｒらの国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１、Ｇｒｉｆｆｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４、Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８、Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０、Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７、およびＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２に記載されているとおりであり、これら全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１６３】
一実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子操作されたマウスで作製された抗体）、または非ヒト抗体、例えば、齧歯類（マウスまたはマウス）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。好ましくは、非ヒト抗体は齧歯類（マウスまたはラット抗体）である。齧歯類抗体を産生する方法は当該技術分野において既知である。
【０１６４】
ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を保有するトランスジェニックマウスを使用して生成することができる。目的の抗原で免疫したこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞を使用して、ヒトタンパク質由来のエピトープに特異的な親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生させる（例えば、Ｗｏｏｄらの国際出願第ＷＯ９１／００９０６号、ＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらのＰＣＴ公開第ＷＯ９１／１０７４１号、Ｌｏｎｂｅｒｇらの国際出願第ＷＯ９２／０３９１８号、Ｋａｙらの国際出願第９２／０３９１７号、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：３３−４０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９３  ＰＮＡＳ  ９０：３７２０−３７２４、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１３２３−１３２６を参照されたい）。
【０１６５】
抗体は、可変領域、またはその一部、例えばＣＤＲが、非ヒト生物、例えばラットまたはマウスにおいて生成される抗体であり得る。キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、およびヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラットまたはマウスにおいて生成され、次いで例えば可変フレームワークまたは定常領域において修飾されて、ヒトにおける抗原性を減少させる抗体は、本発明の範囲内である。
【０１６６】
キメラ抗体は、当該技術分野で既知の組み換えＤＮＡ技法によって産生させることができる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの国際特許公開第ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９、Ａｋｉｒａらの欧州特許出願第１８４，１８７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．の欧州特許出願第１７１，４９６号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎらの欧州特許出願第１７３，４９４号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒらの国際出願第ＷＯ８６／０１５３３号、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙらの欧州特許出願第１２５，０２３号、Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３）、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９−３４４３、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４−２１８、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５、Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９、およびＳｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照されたい）。
【０１６７】
ヒト化またはＣＤＲ移植抗体は、ドナーＣＤＲで代置された少なくとも１つまたは２つ、しかし一般的には３つ全てのレシピエントＣＤＲ（重および／または軽免疫グロブリン鎖）を有することになる。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で代置されてもよく、またはＣＤＲの一部のみが非ヒトＣＤＲで代置されてもよい。ＰＤ−１へのヒト化抗体の結合に必要とされるＣＤＲの数を代置するだけでよい。好ましくは、ドナーは、齧歯類抗体、例えば、ラットまたはマウス抗体となり、レシピエントは、ヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークとなる。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供する免疫グロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナー免疫グロブリンは非ヒト（例えば、齧歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に存在する（例えば、ヒト）フレームワークもしくはコンセンサスフレームワーク、またはそれと約８５％以上、好ましくは９０％、９５％、９９％、もしくはそれ以上同一の配列である。
【０１６８】
本明細書で使用される場合、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリー中で最も頻繁に存在するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ  １９８７を参照されたい）。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列中の各位置は、ファミリー中のその位置で最も頻繁に存在するアミノ酸によって占められている。２つのアミノ酸が同じ頻度で存在する場合、どちらもコンセンサス配列に含めることができる。「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。
【０１６９】
抗体は、当該技術分野で既知の方法によってヒト化することができる（例えば、以下全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４、およびＱｕｅｅｎらのＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１、およびＵＳ５，６９３，７６２を参照されたい）。
【０１７０】
ヒト化抗体またはＣＤＲ移植抗体は、ＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって産生させることができ、免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、または全てのＣＤＲを代置することができる。例えば、以下全ての内容が参照により本明細書に明示的に組み込まれる、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４、Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８８Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０、ＷｉｎｔｅｒのＵＳ５，２２５，５３９を参照されたい。Ｗｉｎｔｅｒは、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得るＣＤＲ移植法について記載している（内容が参照により明示的に組み込まれる、１９８７年３月２６日に出願された英国特許出願第ＧＢ２１８８６３８（Ａ）号、ＷｉｎｔｅｒのＵＳ５，２２５，５３９）。
【０１７１】
特定のアミノ酸が、置換、欠失、または付加されているヒト化抗体も、本発明の範囲内である。ドナーからアミノ酸を選択するための基準は、ＵＳ５，５８５，０８９、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９の第１２〜１６欄、例えば、ＵＳ５，５８５，０８９の第１２〜１６欄に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。抗体をヒト化するための他の技法は、１９９２年１２月２３日に公開されたＰａｄｌａｎらのＥＰ５１９５９６（Ａ１）に記載されている。
【０１７２】
抗体分子は一本鎖抗体であり得る。一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）は操作されてもよい（例えば、Ｃｏｌｃｈｅｒ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８８０：２６３−８０、およびＲｅｉｔｅｒ，Ｙ．（１９９６）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２：２４５−５２を参照されたい）。一本鎖抗体を二量体化または多量体化して、同じ標的タンパク質の異なるエピトープに対して特異性を有する多価抗体を生成することができる。
【０１７３】
さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥの重鎖定常領域から選択される、特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選択される、重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、例えばカッパまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選択される軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を修正するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、および／または補体機能のうちの１つ以上を増加または減少させるために）、改変する、例えば、突然変異させることができる。一実施形態では、抗体はエフェクター機能を有し、補体結合することができる。他の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞を動員せず、また補体結合もしない。別の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているか、または全く有しない。例えば、抗体は、Ｆｃ受容体への結合を支持しない、アイソタイプもしくはサブタイプ、断片、または他の変異体であり、例えば、抗体は変異誘発されたまたは欠失したＦｃ受容体結合領域を有する。
【０１７４】
抗体定常領域を改変するための方法は、当該技術分野において既知である。機能が改変された、例えば、細胞上のＦｃＲなどのエフェクターリガンドまたは補体のＣ１成分に対する親和性が改変された抗体は、抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で代置することによって産生させることができる（例えば、以下全ての内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＥＰ３８８，１５１（Ａ１）、米国特許第５，６２４，８２１号、および米国特許第５，６４８，２６０号を参照されたい）。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用された場合にこれらの機能を低下させるかまたは排除し得る、類似の種類の変化が記載され得る。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗体分子は、多重特異性（例えば、二重特異性または三重特異性）抗体分子である。二重特異性またはヘテロ二量体抗体分子を生成するためのプロトコルは、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第５７３１１６８号に記載されている「ノブ・イン・ホール」手法；例えば、ＷＯ０９／０８９００４、ＷＯ０６／１０６９０５、およびＷＯ２０１０／１２９３０４に記載されている静電ステアリングＦｃペアリング；例えば、ＷＯ０７／１１０２０５に記載されている鎖交換操作ドメイン（ＳＥＥＤ）ヘテロ二量体形成；例えば、ＷＯ０８／１１９３５３、ＷＯ２０１１／１３１７４６、およびＷＯ２０１３／０６０８６７に記載されているＦａｂアーム交換を含むが、これらに限定されない。
【０１７６】
ホスファチジルセリン標的化抗体
Ａ．治療標的としてのホスファチジルセリン
ホスファチジルセリン（ＰＳ）は、上流免疫チェックポイントとして機能し、宿主の免疫応答を調節する、高度に免疫抑制性の分子である。したがって、ＰＳは、癌およびウイルス感染症を含む様々な疾患に関与している。このため、ＰＳ標的化抗体の形態にある免疫療法剤は、癌を含むこれらの疾患に対する新たな治療の選択肢を提供する。
【０１７７】
より詳細には、正常細胞において、ＰＳは、原形質膜の内側リーフレットに分離されるが、様々な病態において、特に癌およびウイルス感染症においては、罹患した異常細胞内で原形質膜の外側リーフレットに対して外在化される。癌の背景において、ＰＳの外在化を引き起こす環境ストレス要因のいくつかは、低酸素／再酸素負荷、酸化ストレス、およびある特定のサイトカインへの曝露である。ＰＳの外在化はまた、細胞死および免疫食細胞クリアランスの条件下でも生じる（Ｂｉｒｇｅら、２０１６）。その後、ＰＳが、免疫細胞上のＰＳ受容体（例えば、ＴＩＭ３およびＴＩＭ４、および他のＴＩＭファミリーメンバー、ＴＡＭファミリー（Ｄａｖｒａら、２０１６）、ＢＡＩ１、スタビリン（ｓｔａｂｉｌｉｎ）２、ならびにＲＡＧＥ）によって、任意でいくつかの架橋タンパク質のうちの１つ以上を介して認識および結合されることで、ＰＳは、免疫抑制を誘導および維持する。腫瘍微小環境内では、ＰＳは、腫瘍血管内皮細胞、腫瘍細胞、および腫瘍由来のエキソソームの表面上に曝露され、免疫抑制のプロセスが重複しているため、抗腫瘍および炎症反応の発生が予防されている。
【０１７８】
曝露されたＰＳは、瀕死の細胞の認識およびクリアランスを促進し、免疫抑制性サイトカイン（例えば、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０）の放出を引き起こし、炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２）の産生を阻害する、食作用シグナルである。ＰＳはまた、マクロファージを免疫抑制性Ｍ２表現型に偏らせ、樹状細胞（ＤＣ）の成熟およびＤＣが抗原を提示する能力を阻害する一方で、ＤＣを刺激して、Ｔ細胞耐性を促進する免疫抑制性メディエーターを分泌させる。要約すると、ＰＳは、免疫抑制された腫瘍微小環境の誘導および維持における中心的要因である。
【０１７９】
Ｂ．ＰＳ標的化抗体
腫瘍微小環境内におけるＰＳ曝露が腫瘍進行を促進する傾向のために、ＰＳ標的化抗体を使用して、免疫細胞上の特定の受容体へのＰＳの結合を遮断することによって、効果的な癌療法を提供することができる（Ｙｉｎら、２０１３）。下記に例証されるように、いくつかのそのようなＰＳ標的化抗体が、治療薬として開発されている。
【０１８０】
Ｂ１．バビツキシマブ
ＰＳ標的化抗体の前臨床的可能性を評価するために生成された初期のモノクローナル抗体は、３Ｇ４と呼ばれる抗体、マウスＩｇＧ３  ｍＡｂである（実施例Ｉ；Ｒａｎら、２００５；Ｈｕａｎｇら、２００５）。３Ｇ４抗体を分泌するハイブリドーマ細胞株の試料は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託され、ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ４５４５を付与されている。寄託したハイブリドーマの入手可能性は、いかなる政府の権限の下でもその特許法に従って供与された権利に違反して本発明を実施するための認可として解釈されるべきではない。
【０１８１】
バビツキシマブは、マウス可変（抗原結合）領域がヒト抗体定常領域に作動可能に結合している、３Ｇ４マウス抗体のヒトキメラバージョンである（実施例Ｉ、Ｃ）。抗体のバビツキシマブファミリーは、多数の米国特許、例えば、米国特許第７，２４７，３０３号および米国特許第７，５７２，４４８号に詳細に記載されている。抗体のかなりの部分がヒト起源のものであるため、バビツキシマブは、患者に投与したときの免疫原性が低い。
【０１８２】
３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体は、血清の存在下で、アニオン性リン脂質、特にＰＳに強く結合するが、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、およびカルジオリピン（ＣＬ）にも強く結合する（Ｒａｎら、２００５）。これらのアニオン性リン脂質のうち、ＰＳは、生理学的および病理学的に最も関連性がある。３Ｇ４およびバビツキシマブは、血清の存在に関わらず、中性リン脂質、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）に対して検出可能な結合を呈さない。
【０１８３】
当初、３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体は、ＰＳに直接結合すると考えられていたが、ＰＳ結合は、β２−糖タンパク質１（β２ＧＰＩ）として特定される血清タンパク質によって媒介されることが後に決定された（実施例Ｉ；Ｌｕｓｔｅｒら、２００６）。実際に、精製β２ＧＰＩ、およびＥＬＩＳＡに典型的に使用される１０％の血清中に単に存在することによって提供されるβ２ＧＰＩを含む、β２ＧＰＩの存在下で実施される酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）において、３Ｇ４およびバビツキシマブはＰＳに強く結合する。
【０１８４】
アポリポタンパク質Ｈとしても知られるβ２ＧＰＩは、５つのドメインであるＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶを有し、ドメイン構造は、哺乳動物にわたって保存されている。β２ＧＰＩは、三次構造としてそれら５つの識別可能なドメイン内に折り畳まれ、閉じた円形構造または開いたＪ字形もしくはフック構造を有してもよい。β２ＧＰＩは、酵素プラスミンでの切断などによって、Ｌｙｓ３１７／Ｔｈｒ３１８切断部位で、ドメインＶが「ニック」されていない限り（これは、ＰＳ結合を破壊する）、そのＣ末端ドメインであるドメインＶ内の正電荷領域を通して、アニオン性リン脂質、特にＰＳに結合する（Ｈｕｎｔら、１９９３；Ｈｕｎｔ＆Ｋｒｉｌｉｓ、１９９４）。３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体は、β２ＧＰＩのドメインＩＩに結合する。このことにより治療抗体としての３Ｇ４およびバビツキシマブの安全性が強化され、これは、β２ＧＰＩに結合するある特定の他の抗体が病理学に関連付けられているが、それらの抗体はβ２ＧＰＩのドメインＩに結合するためである。
【０１８５】
ＰＳへの３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体の高親和性結合は、抗体とβ２ＧＰＩとの二価相互作用を必要とする（実施例Ｉ；Ｌｕｓｔｅｒら、２００６）。そのような抗体が存在しない場合、β２ＧＰＩは、アニオン性リン脂質、特にＰＳに低い親和性をもってしか結合しない。これは、３Ｇ４およびバビツキシマブが、高親和性複合体としてβ２ＧＰＩの存在下でＰＳに結合し、ＰＳへのβ２ＧＰＩの結合を１μＭから１ｎＭへと調節することを示す研究において定量化されている。
【０１８６】
ＰＳへの３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体のβ２ＧＰＩ依存性結合は、β２ＧＰＩのドメインＩＩへの抗体結合に依存する。述べたとおり、バビツキシマブはβ２ＧＰＩのドメインＩＩに結合するため、それは、β２ＧＰＩのドメインＩに結合する抗体が存在する抗リン脂質抗体症候群に関連するものなどの副作用とは無関係である（ｄｅ  Ｌａａｔら、２００５；ｄｅ  Ｌａａｔら、２００６；Ｉｏａｎｎｏｕら、２００７）。抗体とβ２ＧＰＩとの高親和性二価相互作用は、ＰＳが細胞表面上および細胞膜上で外在化される場合を含む、ＰＳへの結果として生じる高親和性結合を調和させる。
【０１８７】
３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体はβ２ＧＰＩに結合するが、それらは、インビボで疾患状態時に曝露されるＰＳを特異的に局在化させ、それに結合するので、「ＰＳ標的化抗体」と称される。ＰＳは、健康な正常細胞の内側で維持され、疾患状態時にのみ細胞表面上に曝露されるため、インビボでの抗体局在化は、ＰＳに特異的であるだけでなく、ＰＳがマーカーである疾患、特に癌、ならびにウイルス感染症およびある特定の他の病変にも特異的である。
【０１８８】
ＰＳに結合するβ２ＧＰＩ依存性抗体が、インビトロでもインビボと同じであるため、ＥＬＩＳＡが治療法の正確なモデルである。特に、プレートがＰＳでコーティングされ、ＥＬＩＳＡが血清の存在下で実行されるＥＬＩＳＡにおいて、３Ｇ４、バビツキシマブなどの抗体は、ＰＳと安定した結合複合体を形成することができる。したがって、ＥＬＩＳＡアッセイは、治療中のインビボの状態を模倣し、ここで、ＰＳは、腫瘍微小環境内の細胞またはウイルス感染細胞などの疾患環境内の細胞上にのみ特有に曝露される。ＥＬＩＳＡと同様に、３Ｇ４およびバビツキシマブ抗体が曝露されたＰＳに遭遇すると、それらは血液中に存在するβ２ＧＰＩと安定した結合複合体を形成することができる。ＰＳがＥＬＩＳＡウェル上にあるか、または罹患した細胞上にあるかに関わらず、抗体−β２ＧＰＩ複合体は、モノマーβ２ＧＰＩ、すなわち、ＰＳ標的化抗体を有しないβ２ＧＰＩに対する親和性よりも、ＰＳに対する親和性が１，０００倍超高い。
【０１８９】
Ｂ２．１１．３１などの直接ＰＳ結合抗体
バビツキシマブなどの間接ＰＳ結合抗体に加えて、ＰＳ標的化抗体のファミリー全体は、ＰＳに直接結合する抗体、すなわち、直接ＰＳ結合抗体を含む。そのような「直接ＰＳ結合抗体」は、ＰＳに対して機能的に特異性であるだけでなく、（間接結合抗体と同様に）インビボでＰＳを標的化し、それに結合もする抗体であるが、インビトロ結合アッセイにおいてすら、ＰＳと強固な結合複合体を形成するのにβ２ＧＰＩなどの血清タンパク質は必要としない抗体である。
【０１９０】
そのような抗体の特定の一例は、９Ｄ２と呼ばれるマウスモノクローナル抗体である（Ｒａｎら、２００２）。９Ｄ２抗体は、腫瘍血管を局在化させ、インビボで抗腫瘍効果を発揮することが示されている（Ｒａｎら、２００２）。直接ＰＳ結合抗体の別の例は、１１．３１と呼ばれる完全ヒト抗体（ＰＧＮ６３２）である。１１．３１抗体もまた、インビボで（例えば、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌異種移植片を保有するマウスにおいて）抗腫瘍効果を発揮することが示されており、印象的な抗ウイルス効果を示す（Ｍｏｏｄｙら、２０１０；米国特許第７，４５５，８３３号）。
【０１９１】
したがって、直接ＰＳ結合抗体は、ＰＳがマーカーである様々な疾患、特に癌およびウイルス感染症を治療する上での使用が企図される。そのような直接結合ＰＳ標的化抗体での治療を最適化するためのバイオマーカーは、典型的には、β２ＧＰＩなどの血清タンパク質には依存せず、他の要因に依存することになる。直接結合抗体に有用なバイオマーカーには、本明細書に開示されるＰＳ標的化抗体のための免疫バイオマーカー、およびその特定の態様、例えば、低インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および「陰性」ＰＤ−Ｌ１発現、すなわち、ＴＣ０（ＴＣ０＜１％）が含まれる。
【０１９２】
Ｂ３．１Ｎ１１などの他のβ２ＧＰＩ依存性ＰＳ結合抗体
本発明の好ましい実施形態は、ＰＳ結合抗体ファミリーの他の部分、つまり間接ＰＳ結合抗体に関する。本明細書で使用される場合、「間接ＰＳ結合抗体」は、ＰＳに対して機能的に特異性であり、インビボでＰＳを標的化し、それに結合する抗体であるが、ＰＳと強固な結合複合体を形成するのに血清タンパク質を必要とする抗体である。本発明は、特に、間接ＰＳ結合抗体、すなわち、β２ＧＰＩ依存性ＰＳ結合抗体のサブセットに関する。本明細書で使用される場合、「β２ＧＰＩ依存性ＰＳ結合抗体」は、ＰＳに対して機能的に特異性であり、インビボでＰＳを標的化し、それに結合する抗体であるが、ＰＳと強固な結合複合体を形成するのに血清タンパク質β２ＧＰＩを必要とする抗体である。上記のように、そのような抗体の例には、マウス抗体３Ｇ４およびキメラ抗体バビツキシマブが含まれる。
【０１９３】
β２ＧＰＩ依存性ＰＳ結合抗体の現在のところ好ましい他の例は、１Ｎ１１（ＰＧＮ６３５）および１Ｇ１５と呼ばれる完全ヒト抗体、好ましくは１Ｎ１１抗体である。撮像および治療法を含む、１Ｎ１１抗体、およびそのマウスキメラバージョンを使用するいくつかの研究が記載されている（Ｇｏｎｇら、２０１３；Ｆｒｅｉｍａｒｋら、２０１６；Ｇｒａｙら、２０１６ａ）。１Ｎ１１抗体の配列およびＰＳ結合特性を図２Ａおよび図２Ｂに示す。加えて、１Ｎ１１抗体および１Ｇ１５抗体についてのさらなる配列情報を表Ａならびに（１Ｎ１１）配列番号２２および（１Ｎ１１）配列番号２３に提供する。ここで、各「配列番号」は１Ｎ１１抗体を一意に指すものであり、図１Ａおよび図１Ｂの３Ｇ４またはバビツキシマブ抗体配列とは無関係である（実施例Ｉ）。
【表１】
2020515637.tif 000003
【表１−２】
2020515637.tif 000004
【表１−３】
2020515637.tif 000005
【表１−４】
2020515637.tif 000006
【表１−５】
2020515637.tif 000007
【表１−６】
2020515637.tif 000008
【０１９４】
ＩｇＧ抗体の完全な重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を以下に示す。
１Ｎ１１  ＩｇＧ重鎖（アミノ酸配列）
【表２】
2020515637.tif 000009
定常領域は太字／斜体である。
（１Ｎ１１）配列番号２２
１Ｎ１１  ＩｇＧ軽鎖（アミノ酸配列）
【表３】
2020515637.tif 000010
定常領域は太字／斜体である。
（１Ｎ１１）配列番号２３
【０１９５】
Ｃ．治療的使用
上で考察されるＰＳ生物学から予測されるように、ＰＳからのシグナルは、免疫細胞が腫瘍を認識し、それと戦う能力を阻害する。バビツキシマブおよび関連抗体は、ＰＳとその受容体との結合を遮断することによって、および代替免疫活性化シグナルを送ることによって、このＰＳ媒介免疫抑制シグナル伝達を無効化する。したがって、ＰＳ標的化抗体は、腫瘍内での免疫細胞の機能を転換させ、免疫活性化および抗腫瘍免疫応答の複数の徴候をもたらすことが示されている。
【０１９６】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、腫瘍微小環境内の免疫細胞を多発的に再プログラミングして、免疫活性化を支持することによって、ＰＳ媒介免疫抑制のこの遮断を達成する（Ｙｉｎら、２０１３）。このように、バビツキシマブおよび関連抗体は、腫瘍微小環境内の免疫耐性を破壊する。抗体媒介ＰＳ遮断は、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦβ）、およびインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）のレベルを低減させ、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦα）、およびインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）などの炎症誘発性サイトカインのレベルを増加させる。このＰＳ遮断はまた、ＭＤＳＣおよび腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を優勢なＭ２から優勢なＭ１表現型へと再び偏らせ、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を促進し、細胞傷害性Ｔ細胞を活性化し、強力な適応抗腫瘍Ｔ細胞免疫を誘導する（Ｙｉｎら、２０１３）。
【０１９７】
バビツキシマブおよび関連抗体はまた、自然免疫、すなわち、ＮＫ細胞およびＭ１マクロファージも活性化する。重要なことに、これらの抗体はまた、ＰＳを特有に曝露する既存の腫瘍血管の選択的停止も引き起こし（Ｒａｎら、２００５；米国特許第７，５７２，４４８号）、この活性は、腫瘍浸潤性Ｍ１マクロファージおよびＮＫ細胞によって媒介される抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む。このような腫瘍血管の破壊により、腫瘍細胞の破壊が生じる。免疫療法および血管標的化のこれらの二重機序、特にＡＤＣＣ作用は、バビツキシマブが免疫活性化または従来の抗増殖化学療法に耐性のある腫瘍に対して有効であり得ることを意味する。
【０１９８】
他の免疫療法と同様に、ＰＳ標的化抗体の抗腫瘍効果は、併用療法で使用される場合に増加する。ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブおよび関連抗体）と共に使用するための薬剤の一群は、放射線および／または化学療法剤などの、腫瘍微小環境内でのＰＳの曝露を増加させる薬剤および／または条件である（米国特許第７，４２２，７３８号、米国特許第８，４８６，３９１号、米国特許第７，５７２，４４８号）。したがって、抗腫瘍効果の増強は、ドセタキセルと組み合わせた乳腺腫瘍（Ｈｕａｎｇら、２００５）および前立腺癌（Ｙｉｎら、２０１３）の治療、ゲムシタビンと組み合わせた膵臓腫瘍の治療（Ｂｅｃｋら、２００６）、放射線と組み合わせた肺癌（Ｈｅら、２００７）および神経膠芽腫（Ｈｅら、２００９）の治療、変異腫瘍抑制因子ｐ５３を再活性化するＰＲＩＭＡ−１と組み合わせた進行性乳腺腫瘍の治療（Ｌｉａｎｇら、２０１１）、アデノウイルスと組み合わせたアデノウイルスの腫瘍脈管構造への再標的化（Ｈｏｇｇら、２０１１）、シスプラチンと組み合わせた手術後の肺癌再発の治療（Ｊｕｄｙら、２０１２）、ならびにソラフェニブと組み合わせた肝細胞癌の治療（Ｃｈｅｎｇら、２０１６）において、前臨床的に実証されている。
【０１９９】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体と共に使用するための別の薬剤の群は、他のＩＯ剤である。前臨床研究から、ＰＳは上流免疫チェックポイントであるため、バビツキシマブの作用機序は利用可能な治療剤に対して相補的であると考えられる。前臨床において、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、およびＰＤ−Ｌ１に対する抗体の形態の他のチェックポイント阻害剤と組み合わせたバビツキシマブファミリーの抗体について、優れた併用療法が示されている（Ｆｒｅｉｍａｒｋら、２０１６；Ｇｒａｙら、２０１６ａ）。生存期間の増加を含むそのような抗腫瘍活性は、ＰＤ−１遮断単独と比較した、腫瘍内活性化ＣＤ８Ｔ細胞の増加、ＰＤ−Ｌ１発現に関連したＭ２マクロファージおよびＭＤＳＣの低減、ならびに脾臓内の腫瘍反応性Ｔ細胞の増加に関連付けられた。したがって、これらのような前臨床結果により、バビツキシマブファミリーのＰＳ標的化抗体がＰＳ媒介免疫抑制を逆転させ、治療的に有効な適応抗腫瘍免疫を開始することが示される。
【０２００】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の有利な安全性プロファイルを考慮して、これらの抗体はまた、放射線、化学療法剤、および／または免疫療法との三種併用、ならび２つの免疫療法剤との三種併用を含む、三種併用療法において効果的に組み合わせることができる。近年、ＰＳ、ＰＤ−１、およびＬＡＧ−３を標的化する抗体を使用する三種併用について、目覚ましい結果が示された（Ｇｒａｙら、２０１６ｂ）。これらの技術はまた、２０１６年９月２３日に出願された米国仮特許出願第６２／３９８，６９５号および２０１６年１０月３１日に出願された第６２／４１４，８３４号にも記載されている。
【０２０１】
そのような前臨床データに立脚して、バビツキシマブは、主に他の適応症に承認された治療薬と組み合わせて、８００人超の患者を対象とした臨床研究において評価されている。様々な抗ウイルス研究および抗腫瘍研究が、治療活性を示している。広範な前臨床試験およびヒトにおける薬物動態プロファイル（実施例ＩＩ；Ｇｅｒｂｅｒら、２０１１；Ｄｉｇｕｍａｒｔｉら、２０１４も参照されたい）に基づいて、肺癌、乳癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸直腸癌、および腎臓癌を有する患者を含む腫瘍学のほとんどの臨床研究に対して、静脈内（ＩＶ）投与した３ｍｇ／ｋｇの用量のバビツキシマブが決定され、選択された。現在、バビツキシマブについて、化学療法剤：ＨＥＲ２陰性転移性乳癌を有する患者におけるパクリタキセル（Ｃｈａｌａｓａｎｉら、２０１５）、進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）におけるパクリタキセル−カルボプラチン（Ｄｉｇｕｍａｒｔｉら、２０１４）、肝細胞癌におけるソラフェニブ（Ｃｈｅｎｇら、２０１６）、および以前に治療された進行性非扁平上皮ＮＳＣＬＣにおけるドセタキセル（Ｇｅｒｂｅｒら、２０１６）と組み合わせて、有望な臨床的抗腫瘍結果が発表されている。
【０２０２】
要約すると、第Ｉ相および第ＩＩ相臨床研究からの結果により、バビツキシマブの臨床的に意義のある治療効果が実証された。今では、ＰＳ標的化抗体を使用して様々な疾患の治療に成功したことを示すかなりの量の研究があるが、現在まで、バビツキシマブはそのような療法に対して承認されていない。ＰＳ標的化抗体を用いた臨床経験は、主にバビツキシマブと化学療法剤との組み合わせに基づいている。バビツキシマブ治療を最適化するためのバイオマーカーに加えて、ヒトにおける治療結果の改善のための効果的な新しい併用療法が最も必要とされている。
【０２０３】
Ｄ．ＰＳ標的化抗体のためのバイオマーカー
癌治療薬の分野において、バイオマーカーは、治療に対する応答に影響を与える特定の患者の特徴を特定する上でますます重要な役割を果たしている。これは、標的化癌治療、ならびにより近年ではＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１阻害剤を含むチェックポイント阻害剤について歴史的に見られてきた。
【０２０４】
本発明は、バビツキシマブなどのＰＳ結合抗体による治療に重要ないくつかのバイオマーカーの分析に関する。本明細書で使用される場合、「バビツキシマブバイオマーカー」は、療法の少なくとも一部分として、ＰＳ結合抗体、好ましくはバビツキシマブを含む療法での治療による臨床的利益を改善するために、患者または患者集団を選択する上で、単独で、または２つ以上もしくは複数のバイオマーカーのうちの１つとして使用するためのバイオマーカーである。したがって、β２ＧＰＩを含むそのようなバビツキシマブバイオマーカーは、治療前に、患者、患者集団、または亜集団が、ＰＳ結合抗体（好ましくはバビツキシマブ）を含む併用療法を含む、ＰＳ結合抗体（好ましくはバビツキシマブ）を含む治療から恩恵を受ける可能性があるかどうかを予測するための方法において使用することができる。
【０２０５】
バビツキシマブを含む治療レジメンによる臨床的利益を改善するために、最も適切な患者集団を特定するための多重マーカーシグネチャーも本明細書で提供される。これらの分析において特定された第１のバイオマーカーは、β２ＧＰＩである（Ｅ節、Ｆ節）。全体として、特定されたバイオマーカーのパターンは、臨床開発および治療を誘導するためのバビツキシマブ「シグネチャー」である。
【０２０６】
バビツキシマブ免疫バイオマーカーの一部として、治療前の低レベルのＩＦＮγは、バビツキシマブ治療のより良好な転帰と相関する。「陰性」の治療前ＰＤ−Ｌ１発現、すなわち、ＴＣ０（ＴＣ０＜１％）も、バビツキシマブ治療のより良好な転帰と相関する。
【０２０７】
これらのデータは、免疫系を「プライミング」する、すなわち、抗腫瘍免疫応答を増幅するためのＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブ）の使用を支持する。これに関して、腫瘍がＴ細胞および他の免疫細胞によってどれほど深く浸潤されているかに応じて、腫瘍を「熱」から「冷」までの尺度に配置することができることが現在既知である。免疫浸潤のレベル（「熱」）は、免疫系が腫瘍を認識し、それに関与しているかどうかを反映する。「熱」である腫瘍を有する患者はより良好な予後を有し、「冷」の腫瘍では、再発の可能性がはるかに高くなる。重要なことに、バビツキシマブは、冷の腫瘍に正の影響を与え、それらを（他のチェックポイント阻害剤を含むものを用いて）より治療しやすくすることができることが決定されている。したがって、バビツキシマブ免疫バイオマーカーは、バビツキシマブ療法のために患者を選択することだけでなく、バビツキシマブおよび併用療法のための知的に選択された薬剤での治療のために患者を特定することにおいても、追加の用途を有する。
【０２０８】
Ｄ１．試料
β２ＧＰＩ以外のバイオマーカー（節Ｅ）について、本発明を使用して、バイオマーカーのうちの１つ以上を含有するか、または含有することが疑われる任意の生体試料（糞便を含む、動物、対象、または患者由来の任意の組織試料または生検を含む）を試験することができる。生物学的組織試料由来の清澄化された溶解物が使用されてもよい。しかしながら、本発明は、好ましくは天然の体液と共に使用され、したがって、「液体生検」とも呼ばれる低侵襲または非侵襲技術を使用して得られた生体試料に対して実行され得る試験を提供する。これは、典型的には結果を得るのに時間がかかり、それら自体に健康上のリスクを引き起こし得る、生検などのより厳密な技術よりも有利である。
【０２０９】
１つ以上のバイオマーカーを含有するか、または含有することが疑われる体液（生体液）の例には、血液、尿、腹水（ａｓｃｉｔｅｓ）、脳および脳脊髄液（ＣＳＦ）、痰、唾液、鼻汁、骨髄吸引液、関節液または滑液、眼房水、羊水、卵胞液、耳垢、母乳（初乳を含む）、気管支肺胞洗浄液、精液、精漿（前立腺液を含む）、カウパー液または射精前液、膣液（ｆｅｍａｌｅ  ｅｊａｃｕｌａｔｅ）、汗、涙、嚢胞液、胸水および腹水（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  ｆｌｕｉｄ）または洗浄液、心膜液、リンパ液、粥状液、乳糜、胆汁、肝臓灌流液、間質液、月経、膿、皮脂、嘔吐物、膣分泌物、粘膜分泌物、水様便（ｓｔｏｏｌ  ｗａｔｅｒ）、糞便液（ｆａｅｃａｌ  ｆｌｕｉｄ）、膵液、副鼻腔からの洗浄液、体腔、気管支肺吸引液、または他の洗浄液が含まれる。生体試料にはまた、胎児または母体起源のものであり得る、胚盤胞腔（ｂｌａｓｔｏｃｙｌ  ｃａｖｉｔｙ）、臍帯血、または母体循環も含まれ得る。
【０２１０】
試験するのに好ましい体液の例は、血液、尿、および腹水、特に卵巣癌を有するか、またはそれを有することが疑われる動物、対象、または患者由来の腹水である。尿試料が使用される場合、それは好ましくは、例えば、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、膀胱癌、精巣癌、尿道癌、および陰茎癌などの泌尿器系、泌尿生殖器系、および生殖器系の癌に関連して使用される。β２ＧＰＩと同様に、他のバイオマーカーのうちの１つ以上の検出および定量化は、好ましくは末梢血試料、好ましくは血漿、および最も好ましくは血清から実行される。
【０２１１】
Ｄ２．ＰＳ陽性エキソソーム
近年、エキソソームは癌に関連して注目を集めている。エキソソームは、インビボおよびインビトロで全ての細胞によって恒常的に放出される、４０〜５０から１００ナノメートル（ｎｍ）のサイズの膜由来小胞である。エキソソームは、細胞間の情報交換において重要な役割を果たし、多くの生理学的および病理学的プロセスに影響を与える、生物学的に活性な分子シャトルである。癌において、エキソソーム機能は、癌細胞と、転移拡散のためのいわゆる「転移ニッチ」をプライミングする腫瘍間質との間の癌遺伝子の伝達を含む（Ａｎら、２０１５）。
【０２１２】
エキソソーム形成に関与する複数の細胞内融合事象のために、細胞外に放出されたエキソソームの管腔内容物およびプロテオミクスプロファイルは、起源細胞のものに酷似している。したがって、腫瘍由来エキソソーム（「腫瘍エキソソーム」）は、それらが由来する癌細胞を反映するプロファイルを有する。実際に、起源細胞由来のサイトゾル（特に核酸）および原形質膜構成成分の存在は、循環エキソソームがバイオマーカー分析のための親細胞の特性を反映する容易に入手可能な代用物であることを意味する。
【０２１３】
正常細胞由来のエキソソームとは対照的に、腫瘍エキソソームは、それらの表面上にＰＳを有することを特徴とする。したがって、ＰＳ陽性腫瘍エキソソームを、癌の診断に使用することができる。固相アッセイを使用して、体液試料中のＰＳ陽性腫瘍エキソソームを検出および定量化することによって癌を診断するための、新たな改善された方法、組成物、およびキットが近年報告された。そのような技術は、各々２０１６年６月９日に出願された米国特許出願第１５／１７７，７４７号およびＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／０３６６２９号に記載されている（各々参照により本明細書に具体的に組み込まれる）。
【０２１４】
ＰＳは高度に免疫抑制性であるため、ＰＳ陽性腫瘍エキソソームの放出は、腫瘍が免疫抑制環境を促進する別の手段である。したがって、治療前のＰＳ陽性腫瘍エキソソームのレベルは、任意の癌治療のための治療法に対する奏効の予測マーカーとして使用することが提案されている。明らかに、ＰＳ標的化抗体は、疾患微小環境内でＰＳに結合する必要がある。したがって、治療前のＰＳ陽性腫瘍エキソソームのレベルの測定は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用する療法に対する応答の予測バイオマーカーとしての使用に特に説得力がある。
【０２１５】
したがって、米国第１５／１７７，７４７号およびＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／０３６６２９号にあるものなどの方法は、本発明のバイオマーカー試験の一部として使用することができる。β２ＧＰＩの本定量化および／または本明細書に開示される他のバイオマーカーとのそれらの併用は、例えば、全体として予測分析の感度を増強するために、ある特定の実施形態において好ましくあり得る。
【０２１６】
Ｄ３．低い治療前ＩＦＮγ
ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブ）についての１つの好適な免疫バイオマーカーは、低い治療前ＩＦＮγ、好ましくは低い治療前血清ＩＦＮγであり、これは、バビツキシマブ治療におけるより良好な生存転帰と相関する（実施例ＸＶＩＩＩ）。好ましくは、治療前血清ＩＦＮγは、Ｓｉｍｏａ（登録商標）免疫アッセイによって測定される。本明細書で使用される場合、「低い治療前血清ＩＦＮγ」は、対照試験、好ましくは臨床試験における治療前血清ＩＦＮγの中央値より低い治療前血清ＩＦＮγのレベルとして定義され、最も好ましくは臨床試験の治療群における治療前血清ＩＦＮγの中央値より低い。低い治療前血清ＩＦＮγレベルの一例は、好ましくはＳｉｍｏａ（登録商標）免疫アッセイによって測定して、０．０９３ｐｇ／ｍＬである。
【０２１７】
低い治療前ＩＦＮγ、好ましくは低い治療前血清ＩＦＮγと、バビツキシマブ治療における全生存の増加との相関関係は驚くに値し、他の免疫療法についての現在の技術とは対照的である。例えば、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１に対する抗体などのチェックポイント阻害剤による治療を受けた癌患者の生存の増加は、典型的には、より高いレベルの治療前ＩＦＮγと相関する。例えば、本バイオマーカー分析が部分的に基づいている、抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるアテゾリズマブによるＮＳＣＬＣの治療に関するＦｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６の研究では、全生存の増加はＩＦＮγレベルの増加と関連しており、すなわち、バビツキシマブについての今回の発見とは逆の動向であった。このため、バビツキシマブに対する免疫バイオマーカーとしての低い治療前ＩＦＮγの特定は、新たな治療を最も必要としている「免疫風邪」腫瘍を有する患者を治療するためのバビツキシマブの使用を支持する。
【０２１８】
Ｄ４．陰性の治療前ＰＤ−Ｌ１発現
ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブ）についての別の好適な免疫バイオマーカーは、「陰性」ＰＤ−Ｌ１発現として分類される、治療前の非常に低い治療前ＰＤ−Ｌ１発現であり、これは、バビツキシマブ治療におけるより良好な生存転帰と相関する（実施例ＸＶ）。ある特定の好ましい実施形態では、ＰＤ−Ｌ１発現は、Ｅ１Ｌ３Ｎ（登録商標）と呼ばれるウサギ抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃１３６８４；Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）を使用するＯＰＡＬ（登録商標）免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）の一部として測定される。他の好ましいさらなる好適なアッセイは、当業者に既知であり、以下に例示される。
【０２１９】
本明細書で使用される場合、「陰性」ＰＤ−Ｌ１発現は、好ましくは「ＴＣ０」として定義され、これ自体は、Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６により教示されている方法および分類に従って測定して「ＴＣ０＜１％」として定義される。当該技術分野で知られているように、ＰＤ−Ｌ１発現の背景における「ＴＣ」は腫瘍細胞を指し、陰性のＰＤ−Ｌ１発現は治療前の腫瘍細胞で測定されることが好ましい。しかしながら、陰性のＰＤ−Ｌ１発現は治療前の免疫細胞で測定されてもよく（Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６）、この形態の陰性ＰＤ−Ｌ１もバビツキシマブ治療における生存と相関していた。
【０２２０】
治療前ＰＤ−Ｌ１発現を測定するためのある特定の好適なアッセイおよび抗体は、ニボルマブに関連して使用されるもの、特に、ＦＤＡにより補完的診断検査として承認されている、２８−８（Ａｂｃａｍ、カタログ＃ａｂ２０５９２１）と呼ばれるウサギ抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体を使用する、Ｂｒａｈｍｅｒら、２０１５に記載されている実証済み自動ＩＨＣアッセイ（Ｄａｋｏ，Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ）である。他の好適なアッセイおよび抗体は、ペムブロリズマブに関連して使用されるもの、特に、ＦＤＡにより随伴診断検査として承認されている、２２Ｃ３（Ｍｅｒｃｋ）と呼ばれるマウス抗ヒトＰＤ−Ｌ１抗体クローンを使用する、Ｇａｒｏｎら、２０１５に記載されているＩＨＣアッセイである。さらなる好適なアッセイおよび抗体は、デュルバルマブに関連して使用されるもの、特に、ＳＰ２６３と呼ばれるＶｅｎｔａｎａ抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用する、Ｒｅｂｅｌａｔｔｏら、２０１６に記載されている、自動Ｖｅｎｔａｎａ  ＢｅｎｃｈＭａｒｋ  Ｕｌｔｒａプラットフォーム（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）を使用するＶｅｎｔａｎａ  ＯｐｔｉＶｉｅｗ（登録商標）ＤＡＢ  ＩＨＣ検出キットの形での検証アッセイである。また、アベルマブと関連して使用される７３−１０抗ＰＤ−Ｌ１抗体（Ｄａｋｏ）を使用してもよく、同様に、５Ｈ１、７Ｇ１１、０１５、９Ａ１１、ＣＤ２７４、ＭＡＢ１５６１、およびＳＡＢ２９００３６５と呼ばれる抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用してもよい。
【０２２１】
ＩＨＣにおいてＥ１Ｌ３Ｎ（登録商標）抗体を使用すること（実施例ＸＶ）に加えて、治療前ＰＤ−Ｌ１発現を測定するための他の好ましいアッセイおよび抗体は、アテゾリズマブに関連して使用されるもの、特に、ＳＰ１４２と呼ばれるＶｅｎｔａｎａ抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用する、Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６に記載されている、自動Ｖｅｎｔａｎａ  ＢｅｎｃｈＭａｒｋ  Ｕｌｔｒａプラットフォームを使用するＶｅｎｔａｎａ  ＯｐｔｉＶｉｅｗ（登録商標）ＤＡＢ  ＩＨＣアッセイの形での検証アッセイである（例えば、特許出願ＵＳ２０１６／０００９８０５）。遺伝子操作された細胞株において、Ｅ１Ｌ３Ｎ抗体を使用したＰＤ−Ｌ１発現レベルは、発色性ＩＨＣおよび定量的免疫蛍光を用いるＳＰ１４２抗体を使用したものと極めて一致している（Ｇａｕｌｅら、２０１７）。これは、実施例ＸＶの本研究とＦｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒらの研究（２０１６年）との間の技術的な関連性（および予測結果の驚くべき違い）が強調している。
【０２２２】
「ＳＰ１４２」ＰＤ−Ｌ１アッセイでは、試料は、好ましくは、関連する間質を伴う少なくとも約５０個の腫瘍細胞を有するべきであり、ＰＤ−Ｌ１は、これらの細胞において膜状および顆粒状の細胞質染色として発現される。ＳＰ１４２アッセイは段階的アプローチを使用して行われる。腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１陽性生存腫瘍細胞および関連する腫瘍内のおよび隣接する腫瘍周囲の間質によって覆われる面積の割合を決定することによってスコアリングされる。所望であれば、免疫細胞は、任意の強度のＰＤ−Ｌ１陽性免疫細胞によって占められている腫瘍領域の割合を決定することによってスコアリングしてもよい。このアッセイは、アテゾリズマブ療法のために進行性尿路上皮癌および進行性ＮＳＣＬＣを有する患者を選択するための補完的診断ツールとしてＦＤＡによって承認されている。
【０２２３】
陰性のＰＤ−Ｌ１発現とバビツキシマブ治療における改善された生存との相関関係も驚くに値し、またも他の免疫療法についての最先端技術とは対照的である。具体的には、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１に対する抗体などのチェックポイント阻害剤による治療を受けた癌患者の生存の増加は、典型的には、より高いレベルの治療前ＰＤ−Ｌ１と相関する。とりわけ、本バイオマーカー分析が基づいている、抗ＰＤ−Ｌ１抗体であるアテゾリズマブによるＮＳＣＬＣの治療に関するＦｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６の研究では、全生存の増加は腫瘍細胞（および腫瘍浸潤免疫細胞）上でのＰＤ−Ｌ１発現の増加と関連しており、このことは、バビツキシマブについての今回の発見とは逆の動向である。バビツキシマブに対する免疫バイオマーカーとしての陰性ＰＤ−Ｌ１の特定は、現在チェックポイント阻害剤から恩恵を受けることがあったとしても少なく、そのため新たな治療を最も必要としている患者である、「免疫風邪」腫瘍を有する患者を治療するためのバビツキシマブの使用も支持する。
【０２２４】
Ｅ．バイオマーカーとしてのβ２ＧＰＩ
本発明者らは、治療前のレベルのβ２ＧＰＩを、バイオマーカーとして、またはバイオマーカーのパネルの一部として使用して、ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブおよび関連抗体）を使用する療法の治療結果を予測することができるかどうかを、それを否定する広範なデータ（例えば、実施例Ｉ、Ｅ）があるにも関わらず調査することにした。本開示に加えて、そのような技術は、２０１６年９月２７日に出願された仮出願第６２／４００，５８９号、２０１６年１０月１１日に出願された第６２／４０６，７２７号、および２０１６年１０月１３日に出願された第６２／４０７，９８３号（各々参照により本明細書に具体的に組み込まれる）に記載されている。
【０２２５】
β２ＧＰＩは、遊離のものとリポタンパク質に関連するものとの両方が見出される、豊富な血漿（血清）糖タンパク質である。マウス、ラット、イヌ、ウシ、チンパンジー、およびヒトを含む、様々な哺乳動物種由来のβ２ＧＰＩのＤＮＡおよびアミノ酸配列が既知である（Ｓｔｅｉｎｋａｓｓｅｒｅｒら、１９９１）。例示的な参考までに、ヒトβ２ＧＰＩアミノ酸配列は、受入番号１Ｃ１ＺＡとして提供されている。β２ＧＰＩはグリコシル化されており、５０ｋＤａのタンパク質として通例的に報告されている（実施例Ｉ；ＭｃＮｅｉｌら、１９９０の図４；Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎら、１９９８の図１；Ｌｕｓｔｅｒら、２００６の図１Ｄも参照されたい）。β２ＧＰＩは数十年間研究されているものの、β２ＧＰＩの正確な生理学的役割は未知のままである（Ｐｒａｋａｓａｍ＆Ｔｈｉａｇａｒａｊａｎ、２０１２）。実際に、β２ＧＰＩを欠損したノックアウトマウスの見かけ上健康な生活は、その役割が重要ではないことを示している（Ｓｈｅｎｇら、２０１１）。
【０２２６】
驚くべきことに、治療前のβ２ＧＰＩ、特に機能性β２ＧＰＩの血中濃度が、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用する治療法に対する奏効を予測するためのバイオマーカーとして有効であることが決定された。実際に、ＰＳと、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との両方に結合するβ２ＧＰＩを意味する「機能性」β２ＧＰＩのレベルは、バビツキシマブに対する応答のためのバイオマーカーとして単独で有用である。
【０２２７】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体に対する応答のバイオマーカーとして治療前のβ２ＧＰＩレベルを単独で使用する本発明の実施形態において、それらのβ２ＧＰＩレベルは共に数値的に定義され、本明細書に定義される「機能性」β２ＧＰＩを検出できるアッセイにおいて測定される。しかしながら、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体に対する応答の２つ以上または複数のバイオマーカーのうちの１つとして治療前のβ２ＧＰＩレベルを使用する本発明の実施形態において、β２ＧＰＩレベルはそれほど厳密に数値的に定義される必要はなく、機能性β２ＧＰＩのアッセイにおいて単独で測定される必要はない。
【０２２８】
したがって、バビツキシマブを含む療法のための二重または多重マーカーシグネチャーの一部としてのβ２ＧＰＩレベルは、「高β２ＧＰＩ」対「低β２ＧＰＩ」であり得、ＶｅｒｉＳｔｒａｔ（登録商標）良好（ＶＳ良好）およびＶＳ不良、ならびに「熱」または「冷」腫瘍などの説明と同様である。この文脈において、「高β２ＧＰＩ」であるβ２ＧＰＩのレベルは、約１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、または２６０μｇ／ｍＬ以上、好ましくは約２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩ（全β２ＧＰＩ、または好ましくは機能性β２ＧＰＩのいずれか）の治療前レベルである。したがって、「高β２ＧＰＩ」は、約１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、または３２０μｇ／ｍＬに等しいβ２ＧＰＩ（全β２ＧＰＩ、または好ましくは機能性β２ＧＰＩのいずれか）の治療前レベルを含む。
【０２２９】
本発明はまた、機能性β２ＧＰＩを検出することができるアッセイにおいて測定される、ある特定の数値的に定義された量および範囲の機能性β２ＧＰＩに関するバイオマーカーも提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、２００μｇ／ｍＬ以上（実施例ＸＩＩＩ、図３、実施例ＸＩＶ、実施例ＸＶＩＩ）、すなわち、約２００μｇ／ｍＬの機能性β２ＧＰＩの治療前レベルに基づく患者の選択および治療に関する。これは、約２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、または３２０μｇ／ｍＬに等しい機能性β２ＧＰＩの治療前レベルを含む。
【０２３０】
現在、本発明のある特定の好ましい実施形態は、２００〜２４０μｇ／ｍＬ（実施例ＸＩＩＩ；図４）の範囲内、すなわち、約２００〜２４０μｇの機能性β２ＧＰＩの治療前レベルに基づく、特にＮＳＣＬＣの治療に対する患者の選択および治療に関する。これは、２００〜２１０、２００〜２２０、２００〜２３０、２１０〜２２０、２１０〜２３０、２１０〜２４０、２２０〜２３０、２２０〜２４０、および２３０〜２４０μｇ／ｍＬの範囲内の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルも含む。
【０２３１】
さらなる実施形態では、本発明は、低い数として約１８０、１９０、２００、２１０、または２２０μｇ／ｍＬのうちのいずれか１つから、高い数として約２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、または３２０μｇ／ｍＬのうちのいずれか１つまでの範囲内の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルに基づく患者の選択および治療に関する。これらの範囲には以下、
約１８０〜２３０、１８０〜２４０、１８０〜２５０、１８０〜２６０、１８０〜２７０、１８０〜２８０、１８０〜２９０、１８０〜３００、１８０〜３１０、および１８０〜３２０、
約１９０〜２３０、１９０〜２４０、１９０〜２５０、１９０〜２６０、１９０〜２７０、１９０〜２８０、１９０〜２９０、１９０〜３００、１９０〜３１０、および１９０〜３２０、
約２００〜２３０、２００〜２４０、２００〜２５０、２００〜２６０、２００〜２７０、２００〜２８０、２００〜２９０、２００〜３００、２００〜３１０、および２００〜３２０、
約２１０〜２３０、２１０〜２４０、２１０〜２５０、２１０〜２６０、２１０〜２７０、２１０〜２８０、２１０〜２９０、２１０〜３００、２１０〜３１０、および２１０〜３２０、ならびに
約２２０〜２３０、２２０〜２４０、２２０〜２５０、２２０〜２６０、２２０〜２７０、２２０〜２８０、２２０〜２９０、２２０〜３２０、２２０〜３１０、および２２０〜３２０の全てが含まれ、その中でも約２００〜２８０μｇ／ｍＬの範囲が好ましい。
【０２３２】
上記の数または範囲のうちの１つ以上のどれが選択されようと、治療前レベルのβ２ＧＰＩ、好ましくは機能性β２ＧＰＩのバイオマーカーとしての、またはバイオマーカーのパネルの一部としての使用は、ＰＳがマーカーである広範囲の疾患（特に癌およびウイルス感染症であるが、細胞内寄生体の感染症でもある）を有する患者の選択、ならびにバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を、単独で、または好ましくは任意の併用療法でのいずれかで使用するそれらの治療に適用される。
【０２３３】
Ｆ．β２ＧＰＩのアッセイ
β２ＧＰＩの治療前レベルは、ＰＳ標的化抗体（例えば、バビツキシマブおよび関連抗体）のバイオマーカーであるため、β２ＧＰＩのアッセイに関して以下の指針が提供される。本発明はまた、機能性β２ＧＰＩを定量化するための特定の好ましいアッセイも提供する（節Ｇ）。
【０２３４】
Ｆ１．β２ＧＰＩ試料
血清タンパク質として、β２ＧＰＩは、下記のように末梢血（血漿、血清）試料中での検出に理想的である。しかしながら、ＰＳが関与する様々な病態生理学的条件下で、β２ＧＰＩはインビボで内皮細胞に局在化することが研究により示唆されている（Ａｇｏｓｔｉｎｉｓら、２０１１）。したがって、あらゆる種類の生体試料（節Ｄ１）がβ２ＧＰＩ検出に使用され得る可能性がある。
【０２３５】
それにも関わらず、末梢血、血漿、および血清試料が、全β２ＧＰＩであるか機能性β２ＧＰＩであるかに関わらず、β２ＧＰＩの検出および定量化に特に好ましい（節Ｇ）。全血が使用されてもよい（赤血球、白血球、血小板、タンパク質、および血漿）。好ましくは、赤血球および白血球の沈殿後に残る液体である血漿が使用される。血漿は、フィブリノーゲンおよび他の凝固因子を含有するため、放置すると凝固する傾向がある。凝固しにくい血漿が入手可能であり、これが好ましく、また無血小板血漿が使用されてもよい。最も好ましくは、血清が、β２ＧＰＩの検出および定量に使用される。血清は凝固因子を有せず、主にフィブリノーゲンを有しない血漿であるため、血清は放置しても凝固しない。動物およびヒトの血清が診断目的で通例的に使用されており、調製技術は広く知られている。β２ＧＰＩ試験用の血清試料を調製するための例示的な方法を本明細書に示す（実施例ＸＩ、Ａ）。
【０２３６】
本発明の利点は、試験を、生体試料、好ましくは血液、血漿、または血清に対して直接実行することができることである。感度のために、β２ＧＰＩは、いかなる事前の富化または濃縮もせずに（しかし、これは排除されない）容易に検出することができる。試験試料、好ましくは血清試料は、新鮮なものでも、事前に凍結され、その後解凍されたものでもよい。実施例ＸＩ、実施例ＸＩＩ、実施例ＸＩＩＩ、および実施例ＸＩＶは、β２ＧＰＩが−７０°Ｃでの長期保存に対して安定であることを示す。低音貯蔵管もしくはバイアルおよび／または全体的なタンパク質分解を制限するためのプロテアーゼ阻害剤の使用などの、凍結、保存、および／または解凍の業界標準の技術を使用するのが好ましい。
【０２３７】
Ｆ２．β２ＧＰＩアッセイの範囲
それが「機能性」β２ＧＰＩであるかどうかに関係なく、β２ＧＰＩを測定するためのアッセイ（すなわち、「全」β２ＧＰＩのためのアッセイ）の幅は、治療前β２ＧＰＩレベルがバビツキシマブの２つ以上のバイオマーカーのうちの唯一のものとして使用される本発明の実施形態との使用に適用可能である。β２ＧＰＩのレベルがバビツキシマブのバイオマーカーとして単独で使用される場合、節Ｇに記載されるように、「機能性」β２ＧＰＩアッセイが使用されるべきである。
【０２３８】
全β２ＧＰＩレベルは、当該技術分野において既知である多くのインビトロ結合アッセイおよびキットのうちの任意の１つ以上を使用して検出および好ましくは定量化することができる。好適な結合アッセイとしては、例えば、免疫ブロット、ウエスタンブロット、ドットブロット、ＲＩＡ、免疫組織化学、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、免疫沈降、親和性クロマトグラフィーなどが挙げられる。典型的には固相結合アッセイが好ましいが、β２ＧＰＩを検出するための様々な他の方法が文献に記載されており、それらのいずれを使用してもよい。例えば、β２ＧＰＩレベルは、放射状免疫拡散によって正確に決定することができる。実際に、放射状免疫拡散は、１９６０年代後半からより現代までβ２ＧＰＩの定量化に使用されてきた（例えば、Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎら、１９９８）。ウエスタンブロット、免疫電気泳動、およびオクタロニー二重免疫拡散（Ｔａｋｅｕｃｈｉら、２０００）と同様に、等電点電気泳動（ＩＥＦ）およびそれに続く免疫ブロットもまた、β２ＧＰＩの定量化に使用することができる（Ｋａｍｂｏｈら、１９８８）。
【０２３９】
Ｆ３．固相β２ＧＰＩ結合アッセイ
β２ＧＰＩの多数の高感度固相結合アッセイが当該技術分野において既知であり、全β２ＧＰＩは、好ましくはそのようなアッセイのうちの１つ以上を使用して検出および定量される。そのようなアッセイの好ましい一例は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）としてのものである。修飾捕捉ＥＬＩＳＡ（例えば、Ｍｅｈｄｉら、１９９９）および競合ＥＬＩＳＡ（例えば、Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎら、１９９８）を含む、全β２ＧＰＩに特異的な様々なＥＬＩＳＡが文献に報告されている。診断用ラベルに添付されているものを含む、市販の抗β２ＧＰＩ抗体と同様に、全β２ＧＰＩをアッセイするための多数の市販のキットが利用可能である。任意のそのようなキットまたは抗体を使用して、全β２ＧＰＩを検出および定量することができる。例えば、ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌの抗β２ＧＰＩ抗体が、本明細書において比較アッセイで使用される（実施例ＸＩＩ、Ａ１０、Ｂ２）。
【０２４０】
一般論として、全β２ＧＰＩのためのＥＬＩＳＡは、１つ以上の抗β２ＧＰＩ抗体を使用する。抗体技術は非常に進歩しているが、市販のキットおよび市販の抗β２ＧＰＩ抗体はしばしばポリクローナル抗β２ＧＰＩ抗体を使用し、それらはそのような実施形態における使用に完全に好適である。全β２ＧＰＩのための例示的なアッセイにおいて、抗β２ＧＰＩ抗体は９６ウェルプラスチックプレートなどの固体表面に吸着され、β２ＧＰＩ（この場合「抗原」）を含有することが疑われる生体試料と共にインキュベートされる。結合したβ２ＧＰＩ（抗原）は、検出可能な物質、すなわち、検出および定量化可能である色または蛍光などの検出可能なシグナルを生成する物質で直接的または間接的に標識された二次結合剤を使用して検出される。好ましくは、二次結合剤は、検出可能な物質で標識されている抗β２ＧＰＩ抗体である。
【０２４１】
全β２ＧＰＩのためのそのようなＥＬＩＳＡは、実施例ＸＩＩ、Ａ１０、Ｂ２に例証され、固体支持体および検出可能な物質などの多くの一般的な構成要素およびステップも、本発明の機能性β２ＧＰＩアッセイに関して以下でより完全に記載される（Ｇ節）。したがって、特定の試薬またはステップが機能性β２ＧＰＩアッセイにおける使用にのみ適用されることが明らかでない限り、全β２ＧＰＩを検出するためのアッセイにおけるそれらの適用が本明細書において企図される。
【０２４２】
Ｇ．機能性β２ＧＰＩのための好ましいＥＬＩＳＡ
臨床試験結果をバイオマーカーについて分析して、より良い転帰を予測するための様々な市販のアッセイおよび研究ツールが利用可能であるが、いずれもバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体に特有に適用可能であることは知られていなかった。低レベルおよび／または変動するレベルの血清β２ＧＰＩがバビツキシマブの治療転帰に有意な影響を及ぼさない（実施例Ｉ、Ｅ；図５）ことを示す、広範な前臨床モデリングおよび顕著な先行臨床経験にも関わらず、第ＩＩＩ相試験（実施例Ｘ）の患者におけるβ２ＧＰＩ濃度の分析が模索された。
【０２４３】
しかしながら、全β２ＧＰＩとは対照的に、ＰＳに結合し得るβ２ＧＰＩを特異的に検出するための信頼できる定量的なβ２ＧＰＩアッセイは、入手することができなかった。そのようなアッセイは、特にβ２ＧＰＩの一部分（「全」β２ＧＰＩ）がニック入りβ２ＧＰＩとして存在し、それがＰＳに結合できず、したがって疾患部位で抗体結合を媒介できないことが周知であるため、バイオマーカーに適用される際、最も正確な測定に必要とされる。さらに、ＰＳにだけでなく、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体にも結合し得るβ２ＧＰＩを特異的に検出するためのいかなるアッセイも著しく欠如していた。これは、例えば、他の有意義な変化（特に、ドメインＩＩにおける、またはそれに影響を与える突然変異および／またはニックもしくは切断）を有するβ２ＧＰＩが検出されていた可能性を除外するための忠実度が最も高いバイオマーカー測定にとって特に重要であるが、これは、いかなるそのようなβ２ＧＰＩ変化も、治療活性に必要とされる抗体：β２ＧＰＩ：ＰＳ複合体の形成を減少または無効化するためである。
【０２４４】
したがって、第ＩＩＩ相試験（実施例Ｘ）の患者を含む、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療した（または治療される予定の）患者においてβ２ＧＰＩ濃度の最適な分析を実行するには、まず新たなアッセイを発明する必要があった。本出願は、血漿および血清などのヒト血液試料中の機能性（活性）β２ＧＰＩの量を検出および定量化する目的に特有に適合した、そのような有利なアッセイを開示し、このアッセイは、ＰＳと、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との両方に結合し得るβ２ＧＰＩのレベルを決定することができる。
【０２４５】
機能性β２ＧＰＩのためのそのようなアッセイを使用することによって、本発明は、バビツキシマブおよび関連ＰＳ標的化抗体での治療に対する応答についての単一のバイオマーカーとして使用するための治療前β２ＧＰＩの定義されたレベルを提供する。特に、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩ（実施例ＸＩＩＩ；図３；実施例ＸＩＶ；実施例ＸＶＩＩ）および２００〜２４０μｇ／ｍＬの範囲内の機能性β２ＧＰＩ（実施例ＸＩＩＩ；図４）。本発明によって提供される機能性β２ＧＰＩのための好ましいＥＬＩＳＡは、実施例ＸＩＩの詳細な教示によって例証され、また以下により十分に記載される。
【０２４６】
Ｇ１．アッセイ方法
一般論として、機能性β２ＧＰＩのためのＥＬＩＳＡなどの固相アッセイは、ＰＳと、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との両方を使用し、それらのうちの少なくとも一方は、固体支持体に作動可能に関連付けられており、かつ／またはそれらのうちの少なくとも一方は、検出可能な物質で直接的もしくは間接的に標識されている。全ての結合形式を使用することができる。例えば、ＰＳ標的化抗体を、固体支持体、および検出可能な物質で標識したＰＳに吸着させ得る。検出可能な物質で標識したＰＳなどの多くの脂質が当該技術分野で既知であり、それらのいずれを使用してもよい。しかしながら、簡略化のために、ここで好まれる実施形態は、ＰＳが９６ウェルプラスチックプレートなどの固体表面に吸着されているものである。これは、バビツキシマブまたは１Ｎ１１などのＰＳ標的化抗体が、好ましくは抗体に結合した直接標識である検出可能な物質で標識され得ることを意味する。
【０２４７】
アッセイステップを実施する際には、ＰＳをコーティングした固体支持体、例えばＥＬＩＳＡウェルを、β２ＧＰＩ（「抗原」）を含有することが疑われる生体試料と共にインキュベートする。「インキュベーション」は、特異的結合を可能にするのに有効な条件下および時間で行われる。ＰＳに結合することができるβ２ＧＰＩのみが、ＰＳをコーティングした固体支持体に特異的に結合する、すなわち、慣行的な洗浄によって除去されない。
【０２４８】
結合したβ２ＧＰＩ（抗原）は、少なくともＰＳ標的化抗体の形態、好ましくはバビツキシマブまたは１Ｎ１１の形態の少なくとも１つの二次結合剤を使用して検出され、これは、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。非標識ＰＳ標的化抗体は、ＰＳ標的化抗体に結合し、かつ検出可能な物質で直接標識されている三次結合剤、好ましくは別の抗体との関連で使用され得る。しかしながら、再び簡略化のために、ここで好まれる実施形態は、ＰＳ標的化抗体自体が検出可能な物質に直接結合しているものである。検出可能な物質は、色または蛍光などの検出および定量化することができる検出可能なシグナルを生成する物質である。典型的には、シグナルから測定される結合材料の量は、標準曲線などの「基準シグナル」のレベルと比較される。
【０２４９】
好ましい実施形態では、機能性β２ＧＰＩは、このようにして以下を含むアッセイで測定される。
（ａ）ＥＬＩＳＡプレートをＰＳでコーティングして、ＰＳをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製すること、
（ｂ）生体流体試料、好ましくは、血液、血漿、または血清試料を、ＰＳでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートへの生体流体試料中のβ２ＧＰＩの結合を可能にするのに有効な条件下で、ＰＳをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに加えて、ＰＳおよびβ２ＧＰＩをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを調製すること、
（ｃ）ＰＳ標的化抗体、好ましくはバビツキシマブまたは１Ｎ１１を、ＰＳおよびβ２ＧＰＩをコーティングしたＥＬＩＳＡへのＰＳ標的化抗体の結合を可能にするのに有効な条件下で、ＰＳおよびβ２ＧＰＩをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに加えること、ならびに
（ｄ）ＰＳおよびβ２ＧＰＩをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートへのＰＳ標的化抗体の結合を検出することにより、試料中の機能性β２ＧＰＩを測定すること。
【０２５０】
好ましくは、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、検出可能なシグナルを生成する検出可能な物質に結合し、ここで、ＰＳおよびβ２ＧＰＩをコーティングしたＥＬＩＳＡプレートへのＰＳ標的化抗体の結合は、該検出可能なシグナルの検出および測定によって検出および測定される。例示的な検出可能な物質は、酵素の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）であり、ＨＲＰは、基質３，３’５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を切断して、４５０ｎｍで検出および測定される色付きシグナルを生成する。
【０２５１】
これらのアッセイの全ての形式において、最終的に検出される唯一のβ２ＧＰＩは、ＰＳおよびＰＳ標的化抗体の両方に結合することができるβ２ＧＰＩ、すなわち、慣行的な洗浄によって全体的には除去されないβ２ＧＰＩである。したがって、これらのアッセイは、臨床治療に最も意義のある形態の治療前β２ＧＰＩ、すなわち、投与された抗体、好ましくはバビツキシマブ、および好ましくは腫瘍の微小環境内の疾患部位に曝露されたＰＳと結合複合体を形成するように「機能する」β２ＧＰＩの検出に特有に好適である。したがって、これらのアッセイの使用は、バビツキシマブ療法における治療転帰の改善のための患者の選択に有利である。
【０２５２】
本発明によって提供される機能性β２ＧＰＩアッセイはまた、単純で再現性があり、高感度で費用効果が高く、かつ低侵襲技術によって得られる生体試料、特に、血液（血清および血漿）試料と共に使用するのに理想的である。アッセイの迅速な性質は、バイオマーカー試験を素早く実行し、治療決定を適時に行い、実施することができるという重要な利点を提供する。
【０２５３】
Ｇ２．固体支持体
本発明の固相結合アッセイは、典型的には、結合構築物を（コーティングまたは結合のための少なくとも１つの表面を有する）固体支持体または基質と操作可能に会合させることを必要とする。本明細書で使用される場合、「結合構築物」は、バイオマーカーの検出に有用な構成成分に結合する構築物を含む。β２ＧＰＩバイオマーカーに関連して、結合構築物は、抗β２ＧＰＩ抗体、ＰＳ、およびバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を含む。
【０２５４】
そのような固体支持体または基質としては、例えば、プレート、ビーズ、および繊維が挙げられる。本発明の好ましい実施形態において、固体支持体または基質は、標準的な９６ウェルプレートなどのマルチウェルプレートである。固体支持体または基質は、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ラテックス、ガラス、ポリスチレン、ポリビニル、ニトロセルロース、シリコン、シリカ、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）などの任意の好適な材料から製造することができる。結合構築物は、支持体または基質の少なくとも１つの表面を結合構築物と効率的に接触させることによって、固体支持体または基質と操作可能に会合されている。好ましくは、結合構築物は、固体支持体または基質の少なくとも１つの表面に固定化される。結合構築物はまた、コーティングされたスライドガラス上に印刷され、バイオマーカーアレイまたはマイクロアレイにおいて使用されてもよい。非接触印刷および接触印刷の両方を使用して、そのようなマイクロアレイを調製することができ、接触印刷が好ましい。
【０２５５】
Ｇ３．検出可能な物質
好適な検出可能な物質としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β−ガラクトシダーゼ、およびウレアーゼなどの酵素が挙げられる。西洋ワサビペルオキシダーゼ検出系は、例えば、発色基質テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）と共に使用することができ、これは、過酸化水素の存在下、４５０ｎｍで検出可能な可溶性生成物をもたらす。他の好都合な酵素結合系としては、例えば、アルカリホスファターゼ検出系が挙げられ、これを発色基質ｐ−ニトロフェニルリン酸と共に使用して、４０５ｎｍで容易に検出可能な可溶性生成物を得ることができる。同様に、β−ガラクトシダーゼ検出系を発色基質Ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＯＮＰＧ）と共に使用して、４１０ｎｍで検出可能な可溶性生成物を得ることができ、またはウレアーゼ検出系をウレア−ブロモクレゾールパープルなどの基質と共に使用することができる。
【０２５６】
検出可能な物質のさらなる例としては、化学発光標識および蛍光検出用の標識が挙げられる。有用な蛍光色素としては、ＤＡＰＩ、フルオレセイン、Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３２５Ｓ、Ｒ−フィコシアニン、Ｂ−フィコエリトリン、Ｒ−フィコエリトリン、ローダミン、テキサスレッド、およびリサミンが挙げられる。フルオレセインもしくはローダミン標識抗体もしくはアネキシン、および／またはフルオレセインもしくはローダミン標識二次抗体が使用されてもよい。同位体もまた検出方法において有用であり得、その部分およびアッセイは当該技術分野において周知である。
【０２５７】
検出可能な物質は検出可能なシグナルを生成し、その後、これは検出および好ましくは定量化される。検出可能なシグナルは、例えば、発色基質から色を検出するための分光光度計、放射線を検出するための放射線計数器（１２５Ｉ検出用ガンマ計数器など）、または特定の波長の光の存在下で蛍光を検出するための蛍光光度計を使用して分析することができる。酵素結合アッセイを使用する場合、検出可能なシグナルの定量分析は、分光光度計を使用して実行することができる。
【０２５８】
Ｇ４．キット
本発明はまた、診断的、予後的、および予測的治療キットを含む一連のバイオマーカーに基づくキットを提供する。バイオマーカーキットは、典型的には、本明細書に教示されるバイオマーカーの検出に有用な結合構築物のうちの１つ以上を含むだろう。β２ＧＰＩバイオマーカーに関連するキットは一般に、抗β２ＧＰＩ抗体、ＰＳ、およびＰＳ標的化抗体（バビツキシマブなど）などの少なくとも第１のβ２ＧＰＩ結合構築物を含むだろう。
【０２５９】
他のキットは、バイオマーカー検出のための結合構築物と、選択された患者の治療に使用するための少なくとも第１の治療剤、例えば、バビツキシマブもしくは１Ｎ１１などのＰＳ標的化抗体、またはその免疫複合体との両方を含む。そのようなキットは、ＰＳ標的化抗体との併用治療に使用するための少なくとも第２または第３の異なる治療剤をさらに含み得る。例えば、１つ以上の化学療法剤、放射線療法剤、抗血管新生剤、免疫療法剤、および／または抗ウイルス剤である。
【０２６０】
一般に、キットは、少なくとも第１の好適な容器（または容器手段）内に述べられる構成成分を含有するだろう。容器は一般に、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、瓶、シリンジ、または他の容器もしくは容器手段を含み、その中に所望の薬剤を入れ、好ましくは好適にアリコートする。キットはまた、典型的には、個々のバイアル瓶などを送達のために厳重に閉じ込めて収容するための手段、例えば、所望のバイアル瓶および他の装置を入れて保持する射出または吹込成形プラスチック容器を含む。
【０２６１】
キットの構成成分は、水性媒体または凍結乾燥形態のいずれかに含有され得る。試薬または構成成分が乾燥粉末として提供されるとき、粉末は、好適な溶媒の添加によって再構成され得る。溶媒はまた、キット内の別の容器内に提供されてもよい。任意の治療構成成分は、好ましくは薬学的に許容される製剤中にあるか、またはそのまま再構成する準備ができている。キットはまた、動物または患者に治療剤を投与するための手段、例えば、１つ以上の針もしくはシリンジ、または点眼器、ピペット、または動物に製剤を注入するか、もしくは身体の患部に適用することができる他の同様の装置を含有し得る。
【０２６２】
キットは、好ましくは所望の各構成成分または薬剤、特にバイオマーカー検出および診断用構成成分のための異なる容器を有するだろう。しかしながら、併用療法での使用のために、キットは、モル当量の組み合わせで、または他の構成成分を超える１つの構成成分と共に、事前混合された２つ以上の治療薬を含有する１つの容器を含み得る。キットは、完全に共役した形態の事前標識された抗体、またはキットの使用者によって共役される別々の標識部分を、好ましくは結合についての説明書と共に含み得る。免疫検出のために、ＰＳなどの１つ以上の構成成分が、既にマイクロタイタープレートのウェルなどの固体支持体に結合されていてもよい。
【０２６３】
キットはまた、好ましくは、例えば、併用療法における使用を含む、定量化、前臨床的、臨床的、および／または獣医学的実施形態における使用のための書面上または電子的な説明書も含むことになる。バイオマーカーに基づくため、キットは、好ましくは、検出アッセイのための標準曲線を準備するために使用され得るように、標識の有無に関わらず、好適にアリコートされた生物学的組成物などの制御剤をさらに含むことになる。
【０２６４】
Ｇ５．チップおよびナノアッセイ形式
全β２ＧＰＩおよび／または機能性β２ＧＰＩを含む固相およびＥＬＩＳＡ型バイオマーカーアッセイは、必要に応じて自動化またはロボットで実行することができ、複数の試料からのシグナルを同時に検出することができる。本発明の文脈ではないが、一般にバイオマーカーを検出および定量化するために、そのような様々なアッセイ形式が使用されてきた。例えば、「チップ」と呼ばれるナノプラズモンセンサーおよびマイクロ流体デバイスが記載され、癌患者の循環バイオマーカーのオンチップ単離、定量化、および特徴付けに使用されている。したがって、本発明の特異性を依然として維持しながら、本アッセイは、そのようなマイクロ流体、チップ、ナノ技術、および他の合理化かつ自動化されたアッセイを使用して達成することができる。
【０２６５】
予測方法およびバイオマーカー誘導治療法に加えて、本発明はまた、コンピュータに基づくハードウェアおよび試験も提供する。本発明のそのようなコンピュータに基づく実施形態は、全β２ＧＰＩおよび／または機能性β２ＧＰＩのものを含む１つ以上の実験室バイオマーカー試験を読み取るように構成されたインターフェース、ならびにそのようなバイオマーカー試験からのデータを分析し、好ましくは分析されたデータを確立されたデータセット（試験データセットおよび対照データセットを含む）と比較するコンピュータを含む。本発明のコンピュータで実装される実施形態は、好ましくは、メモリストレージ、出力機能、および出力に基づいて治療法を誘導するように構成された命令を含む。
【０２６６】
Ｈ．免疫療法（ＩＯ）の組み合わせ
効果的な免疫療法に対する課題は、自然または適応免疫活性化を阻害する複数の経路を克服することである。ＰＤ−１免疫チェックポイントは、主要な免疫抑制経路として特定されており、化学療法よりも毒性が少ない癌免疫療法のための有望な標的として浮上している。それは、活性化した腫瘍特異的Ｔ細胞を消耗させ、それらの殺腫瘍活性を弱めるように機能する。ＰＤ−１は、ナイーブＴ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＤＣ、および単球には不在であるが、それらの活性化対応物には高度に発現される。特に、腫瘍および関連骨髄細胞は、ＰＤ−１経路を利用して、ＰＤ−Ｌ１発現の上方制御を通して自然および適応免疫耐性を生成する。機序研究は、これらの免疫チェックポイントの遮断が、新規または既存の抗腫瘍免疫応答が存在するときに最も有効であることを示している。残念なことに、腫瘍微小環境を支配するＰＳおよび他の免疫抑制因子の曝露のために、既存の腫瘍特異的免疫活性は癌患者において限定的である。
【０２６７】
複数の癌型において、ＰＤ−１シグナル伝達を遮断する薬剤による持続的な抗腫瘍免疫応答が観察されているが、あるサブセットの患者のみが応答しており、結果的に満たされない重要な医学的必要性が残っている。特に、腫瘍微小環境内で低レベルのＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１（免疫抑制およびＴ細胞活性化の欠如のバイオマーカー）を発現する患者は、チェックポイント遮断療法に対する応答性が低いようである。これに関連して、本出願は、バビツキシマブ治療により、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１および他のチェックポイント療法から利益を得ることができる患者の割合が増加し得ることを示す。
【０２６８】
実際に、バビツキシマブおよび免疫療法による治療を受けたヒト患者が、有意義な延命効果を有することを初めて示す臨床データが本明細書に提示される。特に、実施例ＸＶＩの結果により、バビツキシマブ（およびドセタキセル）、続いて後続免疫療法（「ＳＡＣＴ−ＩＯ」）で治療した患者が、プラセボ（ドセタキセル単独）、続いて免疫療法で治療した患者と比較して、統計的に有意でより良好な全生存期間を有することが実証される。後続ＩＯを受けるバビツキシマブ患者のｍＯＳはまだ得られていないため、生存期間の延長は統計的に有意であり（ｐ＝０．００６）、さらにより見覚ましかった（実施例ＸＶＩ；図６；表１１）。したがって、バビツキシマブは実際に、ヒト患者において免疫療法剤の活性を増強する。
【０２６９】
他のＰＳ受容体の中でもバビツキシマブは、そのＰＳ標的化活性のために、ＴＩＭおよびＴＡＭの活性を遮断し、また他の箇所で述べられているように、外部細胞膜上の露出ホスファチジルセリンは癌およびアポトーシスの顕著な特徴である。腫瘍微小環境において富化され活性化されるＴＩＭおよびＴＡＭは、免疫抑制に寄与し、癌性細胞に対する適切な免疫応答を妨げる。ＩＦＮγレベルが低い患者によって例示されるように、抗腫瘍免疫応答が枯渇したまたは機能不良である患者は、ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１の阻害剤などの免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）に対する抗体療法に反応する可能性が低い。低いＩＦＮγレベルとバビツキシマブに対する応答との間の相関関係は、今日まで高いＩＦＮγレベルが免疫チェックポイント阻害剤応答と相関していたので驚きであった。実施例ＸＶＩに記載の臨床試験では、後続のチェックポイント阻害剤療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）の前にある期間にわたってバビツキシマブによる治療を受けた患者は、はるかに良好な応答を有した（図６、７、および８）。これらのデータは、バビツキシマブが抗ＰＤ−１療法および抗ＰＤ−Ｌ１療法に対する患者の感受性を高めたことを強く示唆し、これは、バビツキシマブが、枯渇した抗腫瘍免疫応答の効力を、完全にではないが、免疫細胞がチェックポイント遮断によって最適に増強され得るところまで回復したことに起因し得る。したがって、実施例ＸＶＩの表１２の抗ＰＤ−１治療剤および抗ＰＤ−Ｌ１治療剤とのバビツキシマブの併用療法により、同じ患者に投与したときにチェックポイント阻害剤に対する感受性を回復し、応答を高めるという驚くべき利益が得られた。よって、表Ｆに挙げた阻害剤を、同じ患者にバビツキシマブと一緒に投与した場合、これらの薬物単独よりも良好な患者転帰がもたらされるであろう。バビツキシマブは、腫瘍の微小環境を改変し、チェックポイント阻害剤に対する抗腫瘍免疫応答を改善するのに有効な真の免疫調節因子である。
【０２７０】
したがって、実施例ＸＶＩのデータによって例証されるように、本発明の重要な実施形態は、免疫療法剤または免疫腫瘍（ＩＯ）剤と組み合わせたバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体による癌患者の治療である。併用療法のための例示的な免疫療法剤を表Ｄに列挙する。ＩＯ剤のある特定の好ましい例は、臨床治療、またはヒト臨床試験、好ましくは後期臨床試験において承認されているもの、例えば、表Ｅに記載のものである。表Ｅの詳細によって例証されるように、使用のための用量および治療の兆候は当業者に周知である。
【０２７１】
実施例ＸＶＩのデータによって直接支持されるように、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との併用療法に特に好ましいＩＯ剤は、本明細書において「免疫チェックポイント抗体」とも呼ばれる「チェックポイント阻害剤」である。好適な「免疫チェックポイント抗体」としては、ＣＤ２８、ＯＸ４０、および／またはＧＩＴＲなどの活性化免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合するアゴニスト（活性化）抗体、ならびにＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、および／またはＬＡＧ−３などの抑制性免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合する拮抗（遮断）抗体が挙げられる。そのような遮断抗体は慣例的に「免疫チェックポイント阻害剤」と呼ばれ、これもまた本明細書で使用される。いくつかのそのような抗体はまた、臨床治療または後期臨床試験において承認されているものとして表Ｅに記載されている。
【０２７２】
免疫チェックポイント抗体（免疫チェックポイント阻害剤）の現在最も好ましい例は、「ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体」である。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合するいくつかのそのような遮断抗体、ならびにそれらの選択、調製、および使用のための機能アッセイを含む方法は、表Ｆに記載されるように、当業者には周知である。これらには、イピリムマブおよびトレメリムマブなどのＣＴＬＡ−４に対する遮断抗体；ニボルマブ、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、およびペムブロリズマブなどのＰＤ−１に対する遮断抗体；デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ、ＬＹ−３３０００５４、ＣＸ−１８８、およびアテゾリズマブなどのＰＤ−Ｌ１に対する遮断抗体；ならびに「ＩＯダブレット」として知られる、そのような抗体のうちのいずれか１つ以上の組み合わせが含まれる。
【０２７３】
上記の遮断抗体のうち、トレメリムマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブが好ましく、アテゾリズマブが特に好ましい。トレメリムマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブについての主な米国特許は、それぞれ、米国特許第６，６８２，７３６号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許第８，２１７，１４９号である。アテゾリズマブと組み合わせたバビツキシマブの使用は、実施例ＸＩＸに詳細に示されている。同じ研究の一部ではないが、１つ以上の他の治療選択肢において、アテゾリズマブは、別の免疫チェックポイント抗体、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１に結合する別の遮断抗体、または任意のチェックポイント阻害剤に結合する二重特異性遮断抗体によって代置されてもよい。異なる遮断抗体を選択する際に、当業者は、例えば、表Ｅ、任意選択で表Ｆにおいて参照されるように、文献から好適な用量および投与スケジュールを知ることになる。
【０２７４】
表Ｆに加えて、抗ＣＴＬＡ−４抗体の他の好適な例は、米国特許第６，２０７，１５６号に記載されているものであり、この特許は特に、寄託されたハイブリドーマに由来する定義された抗体から選択されるＣＤＲ（ＣＤＲ３、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ１）を含む抗ＣＴＬＡ−４抗体に関する。
【０２７５】
表Ｆに加えて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の他の好適な例は、特に化学療法の併用を含む、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体によるＰＤ−Ｌ１過剰発現癌の治療に関する米国特許第８，１６８，１７９号に記載されているもの、特にキメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体を含む、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体による腫瘍の治療に関する米国特許第９，４０２，８９９号に記載されているもの、ならびに、特に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および化学療法による癌の治療に関する米国特許第９，４３９，９６２号に記載されているものである。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体組成物および方法は、Ｏｎｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよび共同研究者らによって開発中のものを含む。
【０２７６】
ＰＤ−Ｌ１に対するさらなる好適な抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号、同第９，５８０，５０５号、および同第９，５８０，５０７号のもの、それらのキット（米国特許第９，５８０，５０７号）、ならびにそれらの抗体をコードする核酸（米国特許第８，３８３，７９６号）である。そのような抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合し、結合について基準抗体と競合するか、ＶＨおよびＶＬ遺伝子によって定義されるか、あるいは定義された配列の重鎖および軽鎖ＣＤＲ３（米国特許第７，９４３，７４３号）もしくは重鎖ＣＤＲ３（米国特許第８，３８３，７９６号）またはそれらの保存的修飾によって定義されるか、あるいは基準抗体に対して９０％または９５％の配列同一性を有する。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体はまた、定義された定量的（結合親和性を含む）特性および定性的特性を有するもの、免疫複合体、ならびに二重特異性抗体を含む。免疫応答を増強する上で、そのような抗体、ならびに定義された定量的（結合親和性を含む）特性および定性的特性を有するもの（単鎖形式の抗体および単離されたＣＤＲの抗体にある抗体を含む）を使用する方法がさらに含まれる（米国特許第９，１０２，７２５号）。米国特許第９，１０２，７２５号にあるように、免疫応答の増強を使用して、癌、または感染症、例えば、ウイルス、細菌、真菌、もしくは寄生虫による病原性感染症を治療してもよい。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体組成物および方法は、ＢＭＳ９３６５５９の製品を含む。
【０２７７】
ＰＤ−Ｌ１に対するさらなる好適な抗体は、米国特許出願第２０１６／０００９８０５号にあるものであり、この特許は、定義されたＣＤＲ配列の抗体および競合抗体を含む、ＰＤ−Ｌ１上の特定のエピトープに対する抗体；核酸、ベクター、宿主細胞、免疫複合体；検出、診断、予後、およびバイオマーカー方法；ならびに治療方法に関する。
【０２７８】
チェックポイント調節因子の組み合わせ
本発明は、例えば、ＰＳ標的化抗体分子、例えば本明細書に記載のものと組み合わせて使用するための、免疫チェックポイント調節因子（例えば、免疫チェックポイント抑制分子および免疫チェックポイント刺激分子）に結合することができる抗体分子を特徴とする。そのような抗体分子は、例えば、ＰＳ標的化抗体分子、例えば本明細書に記載のものと一緒に、組み合わせて投与することができる。例示的な免疫チェックポイント抗体分子には、活性化免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合する、アゴニスト（活性化）抗体分子、および免疫チェックポイント調節因子（例えば、抑制性または刺激性受容体または分子）に結合するアンタゴニスト（遮断）抗体分子が挙げられる。免疫チェックポイント調節因子の例には、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦ−βが挙げられるが、これらに限定されない。免疫チェックポイント抗体分子の例としては、アベルマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、ピジリズマブ、ＸｍＡｂ２０７１７、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、ＣＸ−１８８、およびＬＹ３３０００５４が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２７９】
実施形態では、免疫チェックポイント抗体分子はＰＤ−１に結合することができる（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子）。実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、副刺激性分子の調節因子、例えばアゴニストと組み合わせて投与される。一実施形態では、副刺激性分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、またはＣＤ１６０のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合断片、または可溶性融合物）から選択される。別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、副刺激性分子、例えば、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、およびＧＩＴＲの副刺激性ドメインを含む陽性シグナルと関連するアゴニストと組み合わせて使用される。
【０２８０】
例示的なＧＩＴＲアゴニストとしては、例えば、ＧＩＴＲ融合タンパク質および抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、二価の抗ＧＩＴＲ抗体）、例えば、米国特許第６，１１１，０９０号、欧州特許第０９０５０５（Ｂ１）号、米国特許第８，５８６，０２３号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００３１１８号および同第２０１１／０９０７５４号に記載のＧＩＴＲ融合タンパク質、または米国特許第７，０２５，９６２号、欧州特許第１９４７１８３（Ｂ１）号、米国特許第７，８１２，１３５号、米国特許第８，３８８，９６７号、米国特許第８，５９１，８８６号、欧州特許第ＥＰ１８６６３３９号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０２８６８３号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３９９５４号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／００７１９０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／１３３８２２号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／０５５８０８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／４０１９６号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／０３７２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／２０７５８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００６／０８３２８９号、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／１１５４５１号、米国特許第７，６１８，６３２号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ２０１１／０５１７２６号に記載の抗ＧＩＴＲ抗体が挙げられる。
【０２８１】
一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、免疫チェックポイント分子の抑制性分子の阻害剤と組み合わせて投与される。「免疫チェックポイント」という用語がＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の細胞表面上の一群の分子を意味することは、当業者には理解されるであろう。これらの分子は、抗腫瘍免疫応答を下方調節または阻害するための「ブレーキ」として効果的に役立ち得る。免疫チェックポイント分子には、免疫細胞を直接阻害する、プログラム死１（ＰＤ−１）、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｂ７Ｈ１、Ｂ７Ｈ４、ＯＸ−４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＬＡＧ−３、およびＴＩＭ−３が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法において有用な免疫チェックポイント阻害剤として作用することができる免疫療法剤としては、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、および／またはＴＧＦ−ベータの阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。抑制性分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質のレベルでの阻害によって行われ得る。実施形態では、抑制性核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）を使用して、抑制性分子の発現を阻害することができる。他の実施形態では、抑制性シグナルの阻害剤は、ポリペプチド、例えば、抑制性分子に結合する可溶性リガンド、または抗体もしくはその抗原結合断片である。
【０２８２】
一実施態様では、阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、もしくはＣＴＬＡ４に結合する可溶性リガンド（例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇまたはＴＩＭ−３−Ｉｇ）、または抗体もしくは抗体断片である。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えば、イピリムマブと組み合わせて、例えば、癌（例えば、黒色腫、例えば、転移性黒色腫；肺癌、例えば、非小細胞肺癌；または前立腺癌、から選択される癌）を治療するために、投与することができる。抗ＣＴＬＡ４抗体の例としては、トレメリムマブ（以前はチシリムマブとして知られていたＰｆｉｚｅｒから入手可能なＩｇＧ２モノクローナル抗体、ＣＰ−６７５，２０６）、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０としても知られるＣＴＬＡ−４抗体、ＣＡＳ番号４７７２０２−００−９）が挙げられる。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、治療後、例えば、黒色腫の治療後に、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブ）と共に、ＢＲＡＦ阻害剤（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフェニブ）を伴ってまたは伴わずに投与される。使用することができる例示的な用量には、約１〜１０ｍｇ／ｋｇ、例えば３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１抗体分子の用量、および約３ｍｇ／ｋｇの抗ＣＴＬＡ−４抗体、例えばイピリムマブの用量が挙げられる。
【０２８３】
Ｉ．疾患の治療および予防
本発明は、動物およびヒトを選択し、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体での治療を最適化するためのバイオマーカー方法、組成物、およびキットを提供するため、動物、対象、および患者（ヒト患者を含む）に関する以下の指針が、バイオマーカー検出および選択された集団の治療に適用される。
【０２８４】
Ｉ１．動物、対象、および患者
本発明は、ヒト対象および患者に最も直接的に適用可能であるため、ヒトの選択および治療が最も好ましい実施形態である。それにも関わらず、種を超えたバイオマーカーの共通性および保存は、本発明がヒト以外の動物にも適用可能であることを意味する。動物の中では、哺乳動物が好ましく、最も好ましくは、家庭用ペット、競走馬、および人間が消費するための食物を直接的（例えば、肉）または間接的（例えば、牛乳）に生産する動物などの価値ある貴重な動物であるが、実験動物もまた含まれる。したがって、本発明は、臨床的、獣医学的、および研究的用途を含む。したがって、ヒトに加えて、本発明は、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、イノシシ、ヒツジ、ヤギ、バッファロー、バイソン、ラマ、シカ、ヘラジカ、および他の大型動物、ならびに子牛および子羊を含むそれらの幼若動物に適用され、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、霊長類（サルなど）、および他の実験動物に適用される。
【０２８５】
Ｉ２．抗体用量
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の「治療有効」量または用量は、そのような治療を必要とする動物、好ましくはヒト患者に投与したとき（併用療法の一部分として投与したときを含む）に有益な治療効果を発揮する量または用量である。例えば、治療的に有効な抗癌投与量は、癌を有する動物、好ましくはヒト患者に投与したとき（併用癌療法の一部分として投与したときを含む）に有益な抗癌効果を発揮する量または用量である。治療的に有効な抗ウイルス用量は、ウイルス感染症または疾患を有する動物、好ましくはヒト患者に投与したとき（併用ウイルス療法の一部分として投与したときを含む）に有益な抗ウイルス効果を発揮する量または用量である。
【０２８６】
「有益な抗癌効果」は、腫瘍脈管構造血栓症および／または破壊、腫瘍壊死、腫瘍退縮、および腫瘍寛解（治癒までを含む）を含む、任意の一貫して検出可能な抗腫瘍および抗癌効果を含む。有益な抗癌効果の臨床的尺度としては、例えば、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、およびＣＲ＋ＰＲを含む全奏効率（ＯＲＲ）の改善；腫瘍進行までの時間（ＴＴＰ）；奏効期間（ＤＯＲまたはＤＲ）；ならびに該当する場合、個々の患者、患者集団、および亜集団における無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、および全生存期間（ＯＳ）（全生存期間の中央値（ｍＯＳ）を含む）の改善または拡大が挙げられる。
【０２８７】
「有益な抗ウイルス効果」は、ウイルス感染、複製、成熟、繁殖、および放出、ならびに／またはさらなる細胞（宿主細胞）もしくは組織の進行中の感染またはそれらへの拡散の阻害を含む、任意の一貫して検出可能な抗ウイルス効果を含む。有益な抗ウイルス効果の臨床的尺度としては、例えば、早期のウイルス学的応答、ウイルス量の低減およびウイルスのクリアランス、ならびにウイルス感染症によって引き起こされる症状の改善が挙げられる。
【０２８８】
有益な治療効果、特に抗癌効果は、特に中期または長期的には治療的ではない可能性があるが、それは治療の有用性を無効化するものではないことが理解される。これに関して、しかしまた一般に、「有益な」治療効果、抗癌効果、および抗ウイルス効果はまた、比較的および／または適度の治療効果も含むが、いずれか１つ以上の安全性の尺度における改善を伴う。「有益な」治療効果についての別の考慮事項は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体が、疾患または腫瘍をさらに治療処置しやすくし得るために、その後の治療が全体的に改善された効果をもたらし得るという事実である。
【０２８９】
バビツキシマブまたは１Ｎ１１などのＰＳ標的化抗体の治療有効用量は、動物モデルからのデータを含む広範囲のデータを試用して現在容易に決定可能であるが、特に、本明細書に詳述され、文献に公開されるものなどの臨床研究に基づく。一般に、静脈内（ＩＶ）投与され、ｍｇ／ｋｇで引用されるバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の有効用量範囲は、約０．１から約１３〜１５、好ましくは約０．１から約６〜１０、好ましくは、約０．３〜約６、より好ましくは、約０．５〜約６、より好ましくは、約１〜約６、より好ましくは、約０．５〜約３、または約３〜約６、より好ましくは、約１〜約３である。静脈内投与され、ｍｇ／ｋｇで引用されるバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の例示的な有効用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、および約１５、好ましくは約０．１、０．３、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、および約６、より好ましくは約２または３、ならびに最も好ましくは約３ｍｇ／ｋｇである。本開示の方法および投与量に関して、体重への言及、または「一律用量」を含む場合も含まない場合もある用量という用語の一使用は、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）に関係なく患者に投与される用量を意味する。したがって、一律用量は、ｍｇ／ｋｇ用量としてではなく、むしろ薬剤の絶対量（例えば、バビツキシマブ抗体、および／またはチェックポイント阻害剤抗体などの免疫腫瘍（ＩＯ）剤）として提供され得る。例えば、６０ｋｇの人と１００ｋｇの人とが同じ用量の抗体（例えば、約１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、２１０ｍｇ、２２０ｍｇ、２３０ｍｇ、２４０ｍｇ、２５０ｍｇ、２６０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２９０ｍｇ、３００ｍｇ、３１０ｍｇ、３２０ｍｇ、３３０ｍｇ、３４０ｍｇ、３５０ｍｇ、３６０ｍｇ、またはそれ以上）を摂取し得る。
【０２９０】
臨床治療のために、特に全ての腫瘍学的適応症のために静脈内（ＩＶ）投与される３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブのここで好まれる用量は、広範な安全性データと共に、広範な前臨床および臨床データ、ならびに特にヒトにおける薬物動態プロファイル（実施例ＩＩ）に基づいて推奨される。とはいえ、０．３ｍｇ／ｋｇでの臨床的抗ウイルス活性を含む一連の用量が有効であることが示されている（実施例ＩＩ）。加えて、バビツキシマブは、ラットおよびサルに１０ｍｇ／ｋｇ超、最大１００ｍｇ／ｋｇまでの用量で安全に投与されている。サルにおける１００ｍｇ／ｋｇ用量レベルでは、バビツキシマブは、体循環中のβ２ＧＰＩを一過的に減少させたため、そのような超高用量は推奨されない。
【０２９１】
したがって、幅広いデータから、３ｍｇ／ｋｇの用量が、好ましくはあるが本発明を限定しないことは明らかである。したがって、本明細書に提示されるパラメータおよび詳細な指針を考慮して、活性または最適用量範囲および用量におけるさらなる変形が本発明に包含されることが理解される。したがって、特定の薬剤との併用ではより低い用量がより適切であり得ること、および特に通常致命的な疾患を治療する場合には高用量が依然として許容され得ることが理解される。
【０２９２】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を投与する上で、（無菌性、発熱性、純度、および一般的安全性のＦＤＡ標準に従って）薬学的に許容される組成物が動物または患者に全身投与される。静脈内注射が一般に好ましく、数時間にわたる連続注入が最も好ましい。
【０２９３】
用量自体を変えることに加えて、投与レジメンもまた、当業者に周知のように、治療戦略を最適化するように適合させることができる。治療されている対象の病態に応じて、投薬量および治療レジメンにおけるいくらかの変動が必要となり得る。担当医師（複数可）は、本開示を考慮して、個々の対象にとって適切な治療を決定することができるだろう。そのような最適化および調整は、当該技術分野において慣例的に実行されており、決して過度の量の実験を反映していない。
【０２９４】
Ｉ３．β２ＧＰＩでの補足治療
単独で、または多重バイオマーカー選択の一部分としてのいずれかで、治療前β２ＧＰＩレベルをＰＳ標的化抗体（バビツキシマブなど）に対する応答のバイオマーカーとして使用する上で、全β２ＧＰＩまたは機能性β２ＧＰＩが測定されるかどうかに関わらず、本方法は治療のために患者のサブセットのみを選択する。
【０２９５】
したがって、本出願の別の実施形態は、β２ＧＰＩをバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体と共にそれらの患者に同時投与することによって、いずれの選択されなかった患者も治療適格に回復させることである。このようにして、集団全体がＰＳ標的化抗体で治療可能になる。例えば、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルに基づいて治療のための患者を選択する際に、β２ＧＰＩレベルを少なくとも約２００μｇ／ｍＬに回復させるのに十分な機能性β２ＧＰＩと組み合わせてバビツキシマブを同時投与することによって、１５０μｇ／ｍＬの機能性β２ＧＰＩの治療前レベルを有する患者を治療可能な群に戻すことができる。試料は、バイオマーカー分析に使用されるいずれの治療前レベルのβ２ＧＰＩにも適用される。
【０２９６】
Ｊ．ＰＳがマーカーである疾患の治療
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、ＰＳを特異的に標的化するため、治療の第１の（および最も重要な）適応症は、癌（Ｌ節）、特に固形腫瘍およびそれらの転移であるが、白血病などの液性腫瘍、および好ましくはホジキンリンパ腫もまた適応症である。
【０２９７】
正常で健康な細胞では、ＰＳは細胞膜の内側に維持されており、結合に利用することはできない。疾患細胞のみが細胞膜の外側に曝露されたＰＳを有し、これらは特に腫瘍微小環境内にある細胞であるが、瀕死の細胞、異常細胞、不適切に活性化された細胞、感染した細胞、および病原性生物自体でもある。癌において、腫瘍微小環境内でのＰＳ曝露は「免疫抑制」であり、これは身体が癌と適切に戦うことができないことを意味する。ＰＳを遮断することによって、バビツキシマブはＰＳ媒介免疫抑制を無効化し、身体が腫瘍を攻撃するのを助ける。
【０２９８】
腫瘍微小環境内にある細胞、特に腫瘍内（およびウイルスに感染した細胞およびウイルス内）の血管を覆う細胞において、ＰＳは比較的安定したマーカーであり、これはそれが治療の理想的な標的であることを意味する。多くの細胞死が存在する疾患において、ＰＳはまた細胞の外側にも曝露され、これは、バビツキシマブが、増加した細胞死または不適切な細胞死が生じる様々な疾患（そのような病態は、例えば、癌および心臓発作を含む）の診断において、ならびに特に「撮像」（すなわち、インビボ診断）のためにも使用され得ることを意味する（撮像については下記を参照されたい）。
【０２９９】
宿主細胞にＰＳを外在化させる主な病原体は、ウイルスである（Ｋ節）。実際に、エンベロープウイルスの侵入および感染の増強剤としてのＰＳおよびＰＳ受容体の役割は現在十分に立証されており、広範囲のウイルスに適用される。さらに、ＰＳとウイルスとの関係は、エンベロープウイルスに限定されず、非エンベロープウイルスにも及ぶ。特に、ウイルスに感染した細胞から放出される「ＰＳ脂質小胞」が、エンテロウイルスの効率的な一括感染を可能にすることが既知である。
【０３００】
癌およびウイルス感染症に加えて、広範囲の疾患および病原性感染症は、ＰＳを健康な細胞内のその内部位置から弾き出して、細胞の外側に曝露させ、これは、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体がそれらの細胞および病原体に局所化し、有益な効果を発揮し得ることを意味する。まとめると、これらは「ＰＳがマーカーである疾患および障害」である。
【０３０１】
癌、ウイルス性および病原性感染症以外で、ＰＳがマーカーである顕著な疾患および障害としては、（凝固しやすい）血栓形成促進性血管を有する疾患および障害、ならびに異常な血管新生に関与するものを含む、異常な脈管構造（血管）に関与する疾患を含む。血管新生は、既存の血管から新たな血管が形成されるプロセスであり、新たな血管の発達は、ＰＳを必要とする内皮細胞芽の形成から始まる（Ｗｅｉｈｕａら、２００５）。異常な血管新生は、多くの疾患、特に癌に関与している。それらの異常な脈管構造を考慮して、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）などの（悪性とは対照的に）良性腫瘍、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、肉芽腫（化膿性肉芽腫およびサルコイドーシス（サルコイド）を含む）、髄膜腫、アンジオーマ、血管腫、ならびに全身型血管腫である血管腫症を治療することができる。
【０３０２】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療することができる異常な脈管構造に直接関連する病態としては、血管形成術後の再狭窄、静脈閉塞、動脈閉塞、および閉塞性頸動脈または閉塞性疾患を含む血管再狭窄（血管の狭小化）；ベーチェット病（眼疾患でもある）、結節性多発動脈炎（結節性汎動脈炎またはＰＡＮ）、およびウェゲナー肉芽腫症（ＷＧ）またはサルコイドーシス（多発性血管炎を伴う肉芽腫症、ＧＰＡ）を含む血管炎（炎症によって血管が破壊される障害）；動静脈奇形（ＡＶＭ）および動静脈瘻；鼻出血（鼻血）；血管癒着；ならびに過粘稠度症候群が挙げられる。
【０３０３】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、異常な脈管構造とのそれらの関連のために、関節リウマチおよび変形性関節症などの関節疾患、滑膜炎、血友病性関節、およびパジェット病；乾癬、皮膚炎、強皮症（全身性硬化症またはＣＲＥＳＴ症候群）、弾性線維性仮性黄色腫（ＰＸＥ、Ｇｒｏｎｂｌａｄ−Ｓｔｒａｎｄｂｅｒｇ症候群として知られる）、酒さ、スティーブンス−ジョンソン症候群またはスティーブンス−ジョンソン病（ＰＸＥ、酒さ、およびスティーブンス−ジョンソン症候群はまた眼疾患でもある）類天疱瘡、肥厚性瘢痕、およびケロイドなどの皮膚疾患；オスラー−ウェーバー（またはオスラー−ウェーバー−ランデュ）症候群またはオスラー−ウェーバー（またはオスラー−ウェーバー−ランデュ）病（遺伝性出血性末梢血管拡張症、ＨＨＴとしても知られる）を含む臨床的に重要な疾患を治療することができる。
【０３０４】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療される異常な脈管構造に関与する疾患の特に重要な例は、眼の血管新生疾患である。これらの疾患は、網膜、脈絡膜、および／または角膜などの眼の構造への新たな血管の浸潤を特徴とする。それらは失明の最も一般的な原因であり、約２０の眼疾患に関与している。最も一般的な眼の血管新生疾患は、（増殖性）糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）を含む黄斑変性症、未熟児網膜症（ＲＯＰまたはテリー症候群、以前は後水晶体線維増殖症ＲＬＦとして知られていた）、血管新生緑内障、角膜移植血管新生、および角膜移植後拒絶反応である。脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）は、進行性ＡＭＤを有する患者における重度の視力喪失の症例の９０％を占め、直接ＰＳ結合抗体および間接ＰＳ結合抗体の両方を含むＰＳ標的化抗体で効果的に治療されている（Ｌｉら、２０１５）。
【０３０５】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療することができる網膜／脈絡膜血管新生に関連する他の疾患には、梅毒性眼感染症、マイコバクテリア性眼感染、および／または網膜炎もしくは脈絡膜炎を引き起こす他の眼感染症；硝子体炎および周辺部ぶどう膜炎を含むぶどう膜炎（虹彩毛様体炎）；エールス病、推定眼ヒストプラスマ症候群（ＰＯＨＳ）、ベスト病（卵黄様黄斑変性症）、シュタルガルト病、眼の外傷、およびレーザー後合併症が含まれる。
【０３０６】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療することができる角膜血管新生に特に関連するさらなる疾患としては、アトピー性角膜炎、上輪部角結膜炎、乾燥翼状片角膜炎、および辺縁性表皮剥離どの、角膜炎（角膜のみが炎症する）および結膜炎（結膜のみが炎症する）を含むあらゆる形態の角結膜炎；フィレクテヌローシス（ｐｈｙｌｅｃｔｅｎｕｌｏｓｉｓ）；モーレン潰瘍；化学熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、ヘルペス感染症、ならびに眼の外傷およびコンタクトレンズの過剰装着が挙げられる。
【０３０７】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体で治療することができる他の眼疾患としては、強膜炎、ルベオーシス（虹彩の血管新生）、隅角血管新生（ＮＶＡ）、および糖尿病に関連するかどうかに関わらず、線維血管または線維組織の異常増殖によって引き起こされる疾患（全ての形態の増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）を含む）が挙げられる。
【０３０８】
内皮細胞芽の形成にはＰＳが必要であるため、新たな血管の発達にもまたＰＳが必要である（Ｗｅｉｈｕａら、２００５）。このプロセスはまた、特定の正常な生理学的事象、特に創傷治癒および再生にも関与し、排卵および受精後の胞胚の着床において重要である。したがって、バビツキシマブを使用するこのプロセスの予防は、無月経を誘発する（生殖年齢の女性における月経期間の不在）、排卵を遮断する、かつ／または胞胚による着床を防止する、すなわち避妊薬として使用することができる。創傷治癒において、過剰な修復または線維増殖は、外科手順の有害な副作用である可能性があり、癒着は、手術の頻繁な合併症であり、これは小腸閉塞などの問題をもたらし得る。これらもまた、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体によって治療することができる。
【０３０９】
慢性炎症もまた、異常かつ病理学的な脈管構造に関与する。特に、潰瘍性大腸炎およびクローン病などの慢性炎症性疾患の状態は、炎症組織への新たな血管の内部成長と共に組織学的変化を示す。したがって、それらの疾患もまた、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体によって治療することができる。
【０３１０】
宿主細胞がＰＳを曝露する、ならびに／またはＰＳ陽性細胞外微小胞およびエキソソームが立証されている、いくつかの他の疾患および障害が既知である。例えば、鎌状赤血球症（鎌状赤血球貧血とも呼ばれる）および鎌状赤血球クリーゼでは、赤血球の３０〜４０％が時期尚早に老化し、ＰＳ陽性（「鎌状赤血球」）であるのに対して、健康な人々ではこれは約１％に過ぎない。ＰＳ陽性鎌状赤血球は循環したままであり、内皮に付着し、それらの曝露されたＰＳは凝血塊増殖の原因となる凝固カスケードの開始のためのプラットフォームとして作用する（Ｋｅｎｎｅｄｙら、２０１５）。
【０３１１】
ＰＳはまたアテローム動脈硬化症においても発現され、ＰＳ陽性細胞外微小胞はアテローム硬化性プラークから放出される（Ｍａｌｌａｔら、１９９９）。ＰＳ陽性である血管内腔内に形成されたプラークもまた、血管新生刺激活性を有することが示されている。ヒト冠状動脈アテローム性硬化症の進行における、および閉塞性冠状動脈疾患における再開通プロセスにおける、ＶＥＧＦなどの血管新生マーカーの病態生理学的有意性についての特別な証拠が存在する。したがって、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、アテローム性動脈硬化症および閉塞性冠状動脈疾患のための効果的な治療を提供する。
【０３１２】
１型および２型糖尿病患者はいずれも、アネキシンＶ陽性であることによって示されるように、ＰＳ陽性の細胞外微小胞を有する（Ｓａｂａｔｉｅｒら、２００２）。アルツハイマー病において、脳のエキソソームは、ＰＳと、この疾患の病原体であるアミロイドβ−ペプチド（Ａβ）とを含有する（Ｙｕｙａｍａら、２０１２）。ＰＳおよびＰＳ陽性細胞外微小胞もまた敗血症（敗血症性ショック）に関与しており、それらは敗血症誘導微小血管機能不全および免疫抑制のマーカーおよびメディエーターである（Ｓｏｕｚａら、２０１５）。
【０３１３】
身体自身のリン脂質に対して抗体が産生される自己免疫性障害である、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥまたはループス）は、流産および血小板減少症（低血小板数）などの凝固障害に関連付けられている。したがって、これらの患者における抗リン脂質抗体は、血栓症を引き起こす病原性抗体である。しかしながら、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、いかなるそのような副作用も呈することなくＰＳを標的化する。したがって、バビツキシマブはまた、抗リン脂質抗体症候群、関連疾患、およびその合併症も治療することができる。特に、バビツキシマブは、ＡＰＳ患者において病原性抗体と拮抗または競合する可能性があり、したがって病原性抗体を体内のそれらのリン脂質−タンパク質標的から退ける。
【０３１４】
病原性感染症に関して、例えば、リーシュマニア症を引き起こす寄生原虫であるＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓ（Ｚａｎｄｂｅｒｇｅｎら、２００６；Ｗａｎｄｅｒｌｅｙら、２００９；Ｗａｎｄｅｒｌｅｙら、２０１３）、マラリアを引き起こすＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（Ｅｄａ＆Ｓｈｅｒｍａｎ、２００２；Ｐａｔｔａｎａｐａｎｙａｓａｔら、２０１０）、およびトリパノソーマ症を引き起こす寄生原虫であるＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ（ＤａＭａｔｔａら、２００７）などの細胞内寄生体は全て、ＰＳ曝露をもたらす。同様に、トキソプラズマ症を引き起こすＴｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ（Ｓｅａｂｒａら、２００４）と同様に、住血吸虫症を引き起こす寄生扁形動物であるＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａもまたＰＳを曝露する（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｌｅｉｊら、２００２）。
【０３１５】
ＰＳ曝露はまた、それぞれペストおよび野兎病を引き起こすＹｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓおよびＦｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓなどの細胞内細菌性病原体による感染後の細胞外表面上でも示されている（Ｌｏｎｓｄａｌｅら、２０１１）。リステリア症を引き起こすＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓもまた、感染した宿主細胞からの細胞外表面のＰＳを有する膜由来小胞の放出を促進する（Ｃｚｕｃｚｍａｎら、２０１４）。同様に、髄膜炎を引き起こす病原体であるＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに感染した内皮細胞は、細胞表面へのＰＳ転位を呈する（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ−Ｕｎｋｍｅｉｒら、２００７）。マクロファージにおいて細胞内複製し、結核（ＴＢ）を引き起こすＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓへの感染は、結核病変の好中球におけるＰＳ外在化と関連付けられている（Ｆｒａｎｃｉｓら、２０１４）。同様に、レジオネラ症を引き起こす通性的な細胞内寄生体であるＬｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａは、ヒト単球においてＰＳ外在化を誘導する（Ｈａｇｅｌｅら、１９９８）。
【０３１６】
したがって、上記に詳述した通性的な細胞内寄生体に共通するＰＳ外在化は、それぞれブルセラ症、ならびに腸チフス、パラチフス、および食中毒などの疾病などを引き起こす、ＢｒｕｃｅｌｌａおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａなどの他のそのような病原体について生じる可能性がある。これはまた、性感染性クラミジア感染症を引き起こすＣｈｌａｍｙｄｉａ菌種などの偏性的な細胞内寄生体による感染症についても立証されており、ＰＳ外在化は病態形成にとって重要であり、感染した上皮細胞、内皮細胞、顆粒球細胞、および単球細胞上で示されている（Ｇｏｔｈ＆Ｓｔｅｐｈｅｎｓ、２００１）。トラコーマを引き起こすＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓもまた治療することができる（上記も参照されたい）。
【０３１７】
実際に、宿主細胞上のＰＳ外在化は、現在、様々な細菌および病原体への感染に応答する一般に認識されている現象である（Ｗａｎｄｌｅｒら、２０１０）。これは、胃上皮細胞に侵入し（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ＆Ｋｒｏｇｆｅｌｔ、２００３）、胃潰瘍を引き起こすＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉをさらに含む。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉが胃上皮細胞と直接接触を持つと、それは宿主の原形質膜の外小葉へのＰＳ外面化を誘導する（Ｍｕｒａｔａ−Ｋａｍｉｙａら、２０１０）。ＰＳはまた、梅毒を引き起こすＴｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍにも存在する。南アメリカで見られる細菌性感染症であるバルトネラ症は、バビツキシマブで治療することができるが、これは、特にバルトネラ症が血管内皮細胞の増殖を特徴とする慢性期をもたらし、癌治療において明らかに示されるバビツキシマブの作用機序のうちの１つが血管内皮細胞を破壊することであるためである。
【０３１８】
インビボ診断に関して、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用して、前述の疾患、障害、および感染症のいずれかを撮像すること、最も好ましくは血管新生化腫瘍を撮像することができる（Ｊｅｎｎｅｗｅｉｎら、２００８；Ｍａｒｃｏｎｅｓｃｕ＆Ｔｈｏｒｐｅ、２００８；Ｓａｈａら、２０１０；Ｓｔａｆｆｏｒｄ＆Ｔｈｏｒｐｅ、２０１１；Ｇｏｎｇら、２０１３；Ｓｔａｆｆｏｒｄら、２０１３；米国特許第７，７９０，８６０号）。バビツキシマブはまた、深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、心房細動、人工心臓血管材料の問題、脳卒中（脳血管障害（ＣＶＡ）または脳血管発作（ＣＶＩ））などの、特に心臓内また心臓付近の血管血栓症の撮像にも使用することができる。バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体はまた、例えば、膿瘍、再狭窄、関節炎などの病態にある、ならびに動脈血栓症、冠動脈血栓、静脈血栓症、および脳血栓症などの止血障害にある、活性化血小板の撮像にも使用することができる。
【０３１９】
したがって、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、ＰＳが立証されたマーカーである上記全ての疾患および障害を治療および／または診断するのに好適である。
【０３２０】
Ｋ．ウイルス感染症の治療
宿主細胞にＰＳを外在化させる主な病原体は、ウイルスである。ＰＳの存在は、表Ｂ１および表Ｂ２に示されるように、広範囲のウイルスファミリーに由来するウイルスおよびウイルスに感染した細胞の表面上で示されている。加えて、ウイルスおよびウイルスに感染した細胞上でのそのようなＰＳ曝露は単に偶発的なものではなく、ウイルス感染症において重要な役割を有することを示すデータを、表Ｂ３およびＢ４に提示する（米国特許第７，９０６，１１５号、およびＷＯ２０１５／１３１１５３（Ａ１）も参照されたい）。これは、インビトロおよびインビボの両方で、多様なウイルスファミリーに由来する感染症を阻害するためのＰＳ標的化抗体の使用によって示されている。
【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【０３２１】
ＰＳとウイルス感染症との間の関係もまた、今では文献で詳しく立証されている（例えば、米国特許第７，９０６，１１５号；Ｓｏａｒｅｓら、２００８；Ｍｅｒｃｅｒ  ａｎｄ  Ｈｅｌｅｎｉｕｓ、２００８；Ｍｏｏｄｙら、２０１０；Ｍｏｒｉｚｏｎｏら、２０１１；Ｍｅｅｒｔｅｎｓら、２０１２；Ｂｅｓｔ、２０１３；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａら、２０１３；Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙら、２０１３；Ｍｏｌｌｅｒ−Ｔａｎｋ＆Ｍａｕｒｙ、２０１４；Ｂｉｒｇｅら、２０１６）。これは、エンベロープウイルスの侵入および感染の増強剤としてのＰＳおよびＰＳ受容体の役割を含む（例えば、Ｍｏｌｌｅｒ−Ｔａｎｋ＆Ｍａｕｒｙ、２０１４の表１を参照されたい）。ＰＳと、ウイルス感染症と、エキソソームなどの細胞外微小胞との関係もまた近年ますます明らかになってきており（Ｍｅｃｋｅｓ＆Ｒａａｂ−Ｔｒａｕｂ、２０１１；Ｓｉｍｓら、２０１４）、また広範囲のウイルスに適用されている（例えば、Ｗａｌｋｅｒら、２００９；Ｍｅｃｋｅｓら、２０１０；Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ−Ｕｓｅｒｏｓら、２０１０；Ｍｅｃｋｅｓ＆Ｒａａｂ−Ｔｒａｕｂ、２０１１）。
【０３２２】
さらに、ＰＳとウイルスとの関係は、エンベロープウイルスに限定されず、非エンベロープウイルスにも及ぶ（Ｃｌａｙｓｏｎら、１９８９；Ｃｈｅｎら、２０１５）。特に、「ＰＳ脂質小胞」を示し、ＰＳ小胞がエンテロウイルスの効率的な一括伝染を可能にすることを示すデータを添付している、Ｃｈｅｎら、２０１５によるＣｅｌｌ論文の表紙の図を参照されたい。特定の機序によって拘束されるものではないが、以下の理論的根拠は、ＰＳがエンベロープウイルスおよび非エンベロープウイルスの両方による感染症に関与していることを説明する。
【０３２３】
全てのウイルスは、宿主細胞からの成熟ビリオンの時間を計った排出を調整して、新たな宿主細胞の感染の成功を確実にする。エンベロープウイルスは、宿主細胞原形質膜を利用して、子孫ビリオンの次の宿主細胞への効率的な侵入を媒介するウイルスタンパク質を埋め込む。ＰＳは、ウイルス放出前にウイルスに感染した細胞の外側に見られ、エンベロープウイルスは、宿主細胞からの排出時にＰＳをウイルスエンベロープに組み込む。
【０３２４】
エンベロープをそれらの成熟ビリオンに組み込まないウイルスは、他の機序によって宿主細胞を離れる。非エンベロープウイルスが細胞から新たなビリオンを放出するために使用するいくつかの戦略には、細胞溶解が含まれ、これは感染した細胞（Ｔ細胞またはマクロファージ）に対する宿主免疫応答によって直接的に、または宿主細胞タンパク質合成または細胞構造に対する直接的なウイルスの活性のために引き起こされ得る。細胞構造を変化させて細胞溶解を誘導するウイルスの一例は、アデノウイルスである。アデノウイルスは、感染中後半に、フィラメントネットワークおよびタンパク質合成を破壊することによって細胞の構造的統合性を変化させるいくつかのタンパク質を発現する。いくつかの非エンベロープウイルスは、いかなる細胞変性効果もなく、非破壊的機序を介してそれらの子孫ウイルスを放出することができる。ポリオウイルスは急速に（約８時間）細胞溶解を誘導するが、それはまた、新たな宿主細胞を感染させることができるＰＳ脂質小胞内の細胞からも放出される。ＰＳ小胞内のポリオウイルス粒子は、ＨｅＬａ細胞および初代マクロファージを感染させる上でＰＳ小胞から除去されるウイルス粒子よりも効率的であり、アネキシンＶによる小胞の遮断は、用量に依存した様式で感染した細胞からの小胞を阻害し、これは、ＰＳ脂質がポリオウイルス感染症の補助因子であることを示唆している。ポリオウイルスに加えて、コクサッキーウイルスＢ３およびライノウイルス粒子もまたＰＳ脂質小胞内に放出され（Ｃｈｅｎら、２０１５）、これは、細胞を溶解することなく成熟粒子を選択的に放出するためにエンテロウイルスによって利用される共通の機序を示している。
【０３２５】
ＳＶ４０に関して、ＳＶ４０もまた上記の種類のＰＳ−脂質小胞内の細胞から放出される可能性がある。例えば、細胞変性効果の誘導前にＳＶ４０粒子の細胞からの放出が見られ得ることが報告されている（Ｃｌａｙｓｏｎら、１９８９）。また、ＳＶ４０ビリオンは、感染の４８時間後に平滑な細胞質小胞内で観察され、ＳＶ４０粒子の放出は、脂質膜にわたるカチオン輸送を遮断することによって細胞内タンパク質輸送を遮断するナトリウムイオン透過孔である、モネンシンによって阻害された。ＳＶ４０が属するウイルスのファミリーであるポリオーマウイルスの他の例には、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、およびメルケル細胞癌ウイルス（ＭＣＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２６】
また、多くのウイルスは、効率的に複製するための環境を作り出すために宿主細胞の活性化を誘導する必要がある。ウイルス活性化剤または非ウイルス活性化剤のいずれかによる細胞活性化は、ＰＳ転位を活性化する細胞内カルシウム（Ｃａ２＋）の上昇をもたらす。したがって、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の可能性のある作用機序としては、細胞活性化に必要とされるタンパク質またはウイルス放出を媒介するそれらの能力との干渉、ＰＳ媒介免疫抑制の逆転、および免疫クリアランス機序による感染した細胞またはウイルスのクリアランスが挙げられる。
【０３２７】
インビボウイルスモデルは、ＰＳ標的化抗体で治療したウイルスに感染した動物の生存期間の増加を実証する。バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体がそのような抗ウイルス特性を発揮することが示されている、可能性のある機序には、１）ウイルス粒子への結合、２）感染した細胞への結合、３）ウイルス複製の阻害、および４）ＰＳに結合する免疫抑制細胞受容体を遮断することによる免疫応答の増強が含まれる。ＨＩＶ−１モデルにおけるデータは、ウイルスに感染したマクロファージによって産生されたビリオンが、マクロファージのＨＩＶ−１感染の補助因子としての役割を果たす、上昇したレベルのＰＳを有することを実証する。ＰＳ標的化抗体でＨＩＶ−１上のＰＳを遮断することは、細胞間相互作用を予防し、ウイルス標的細胞融合を遮断し得る。結果はまた、バビツキシマブがピチンデウイルス粒子に結合し、ピチンデウイルスに感染したモルモットの治療が抗ピチンデ抗体および細胞応答の両方の発生を増強することも示している。
【０３２８】
全体として、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用する、エンベロープウイルスおよび非エンベロープウイルスを含む全てのウイルス感染症の治療は、米国特許第７，６１１，７０４号および米国特許第７，９０６，１１５号に教示されており、これらは両方とも、そのような治療に関して本開示を補足するために参照により具体的に組み込まれる。特に、これら特許の表Ｈ、表Ｊ、および表Ｇは、具体的に組み込まれ、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との併用療法において使用され得る一般的な抗ウイルス薬（表Ｇ）と共に、動物およびヒトにおけるウイルス感染症および関連疾患の治療（表Ｈ、表Ｊ）を例証している。
【０３２９】
Ｌ．癌の治療
本出願の広範な節は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体分子を、例えば、免疫チェックポイント分子と組み合わせて使用して、腫瘍および癌を治療することに関する。聴神経腫、聴神経腫瘍、神経線維腫、トラコーマ、化膿性肉芽腫、およびＢＰＨなどの良性腫瘍の治療が含まれる。悪性腫瘍の治療が好ましい。本明細書で使用される場合、「腫瘍（複数可）および癌（複数可）」は、別途明確に述べられない限り、概して、悪性のものを示すことが意図される。
【０３３０】
白血病およびリンパ腫などの血液由来腫瘍、ならびに骨髄の様々な急性または慢性新生物疾患の治療が包含される。好ましくは、治療される腫瘍は、血管新生が活性である腫瘍および血栓形成促進性血管を有する腫瘍を含む、固形腫瘍または血管新生化腫瘍である。「固形」および「血管新生化」腫瘍は、血管構成成分を有する、すなわち、腫瘍細胞への酸素および栄養素の提供に腫瘍血管を必要とする腫瘍である。
【０３３１】
原発性または転移性であるかに関わらず、乳癌、卵巣癌、胸部癌、肺癌、肝臓癌（肝細胞癌、ＨＣＣ）、結腸癌、結腸直腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌（神経膠腫および神経膠芽腫）、子宮頸癌、子宮癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、耳下腺癌、食道癌、胃食道癌、喉頭癌、甲状腺癌、胃腸癌、胃癌、腎臓癌（腎細胞癌、ＲＣＣ）、胆道癌、膀胱癌、精巣癌、ならびに黒色腫、メルケル細胞癌、および血液悪性腫瘍だけでなく、細胞腫（扁平上皮癌および非扁平上皮癌、小細胞癌および非小細胞癌）、腺癌、および神経芽腫も含む他の癌によって例証される、全ての癌が含まれる。ある特定の実施形態において、本発明は、特に、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、あるいは乳癌、膵臓癌、肝臓癌、腎臓癌、直腸癌、もしくは卵巣癌、または黒色腫に適用される。特に、本発明は、非扁平上皮ＮＳＣＬＣなどのＮＳＣＬＣに適用される。
【０３３２】
公開されている文献に加えて、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用する全ての癌の治療がいくつかの米国特許に教示されている。例えば、米国特許第６，４０６，６９３号、同第７，４２２，７３８号、同第８，４８６，３９１号、同第７，２４７，３０３号、および同第７，５７２，４４８号であり、これらの全ては、そのような治療に関して本開示を補足するために参照により具体的に組み込まれる。治療的に有効な抗癌量に関する上記の考察も参照されたい（節Ｉ２）。バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の作用機序は、全ての固形腫瘍において実質的にまたは完全に同じであるため、本発明は、腫瘍細胞自体の特定の表現型または遺伝子型に関わらず、全ての固形腫瘍の治療に広く適用可能であることが理解される。
【０３３３】
Ｍ．併用療法
本出願の多くの節、公開された文献、およびいくつかの米国特許もまた、併用療法においてバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用して癌を治療することに関する（例えば、米国特許第７，４２２，７３８号、米国特許第８，４８６，３９１号、米国特許第７，５７２，４４８号）。
【０３３４】
したがって、治療方法は、動物または患者が呈する特定の疾患または障害、特に癌およびウイルス感染症ならびにウイルス疾患の治療において一般に用いられる任意の他の方法と併用することができる。所与の治療アプローチ自体が患者の病態に有害であることが既知ではなく、ＰＳ標的化抗体療法に有意に反作用しない限り、それと本発明との併用が企図される。非悪性疾患のための併用療法もまた企図される。
【０３３５】
癌治療に関して、本発明は、外科手術、化学療法、放射線療法、サイトカイン療法、抗血管新生などのような古典的なアプローチ、および免疫腫瘍（ＩＯ）剤などのより新しいアプローチと併用して使用することができる。したがって、本発明は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体が手術もしくは放射線治療と同時に、その前に、もしくはその後に使用されるか、または従来の化学療法剤もしくは放射線療法剤、サイトカイン、抗血管新生剤、アポトーシス誘導剤、標的化療法、ＩＯ剤などと共に、その前に、もしくはその後に患者に投与される、併用療法を提供する。
【０３３６】
手術に関して、任意の外科介入が本発明との併用で実施され得る。放射線療法に関連して、γ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、およびさらには電子放出などの、腫瘍細胞内で局所的にＤＮＡ損傷を誘導するための任意の機序が企図される。腫瘍細胞への放射性同位体の指向的送達もまた企図され、これは標的化抗体または他の標的化手段との関連で使用され得る。
【０３３７】
癌治療における物質の併用の一般的な使用法は、周知である。１つ以上の薬剤を、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体と併用して使用する場合、併用した結果が、各治療を別々に実行したときに観察される効果の相加である必要はない。少なくとも相加効果が一般には望ましいが、単一療法のうちの１つを超える任意の治療効果または利益の増加（例えば、副作用の低減）は価値があるだろう。また、併用治療が相乗効果を呈する特別な必要はないが、これは可能かつ有利である。
【０３３８】
本明細書で使用される場合、本発明の「一次治療剤」または「第１の抗癌剤」は、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体である。本明細書で使用される場合、「二次治療剤」または「少なくとも第２の抗癌剤」は、第２の異なる治療剤、免疫腫瘍（ＩＯ）剤を含む抗癌剤、または抗ウイルス剤、すなわち、一次治療剤「以外」の治療剤、免疫腫瘍（ＩＯ）剤を含む抗癌剤、または抗ウイルス剤である。本発明の併用療法では、いずれの二次治療剤を使用してもよい。また、二次治療剤、「第２の抗癌剤」、または「第２の抗ウイルス剤」は、本開示の指針および当業者の知識に従って、相加効果、相加効果を超える効果、および可能性として相乗効果を達成する目的で選択してもよい。
【０３３９】
併用療法、抗腫瘍療法、または抗ウイルス療法を実施するためには、動物または患者に、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を、動物または患者内でそれらの併用治療作用、抗癌作用、または抗ウイルス作用をもたらすのに有効な様式で、別のもの、すなわち、第２の異なる治療剤、抗癌剤、または抗ウイルス剤と併用して投与するだけでよい。したがって、薬剤は、疾患部位（例えば、腫瘍、腫瘍環境、もしくは腫瘍微小環境）内でのそれらの組み合わせでの存在をもたらすのに、かつ／または動物もしくは患者内でそれらの併用治療作用を発揮するのに、好ましくは動物もしくは患者の免疫系に対するそれらの併用治療作用を発揮するのに有効な量および有効な期間で提供される。この目的を達成するために、一次治療剤および第２の異なる治療剤は、単一の組成物で、または異なる投与経路を使用して２つの異なる組成物として、実質的に同時に投与され得る。
【０３４０】
あるいは、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、例えば、数分から数週間の範囲の間隔で、第２の異なる治療剤、抗癌剤、または抗ウイルス剤に先行しても、後続してもよい。一次治療剤および第２の異なる治療剤が動物または患者に別々に適用される特定の実施形態において、各薬剤が依然として有利な併用効果を発揮することができるように、各送達時の間に不作動期間が存在しないことを確実にする。バビツキシマブによる今日までの臨床経験を含む標準的習慣から、１週間または２週間は、バビツキシマブの投与と第２の異なる治療剤の投与との間の不作動期間ではない。実際に、約１週間の間隔が好ましくてもよい。バビツキシマブの送達と免疫腫瘍（ＩＯ）剤などの第２の異なる治療剤の送達との間の３、４、５、または６週間の送達間隔も、有利な効果を発揮し得、併用療法において使用されてもよい。
【０３４１】
別々に時間を計った併用療法のための二次治療剤が、本明細書で考察され、当該技術分野において既知であるものを含む特定の基準に基づいて選択され得る。しかしながら、前後の投与のために１つ以上の第２の異なる治療剤を選択することが好ましくても、これは必要に応じて、実質的な同時投与におけるそれらの使用を排除しない。
【０３４２】
癌に関して、一次治療剤の「前に」投与するために選択され、増加した効果および可能性としては相乗効果を達成するように設計される第２の異なる抗癌剤は、腫瘍微小環境内でＰＳの発現を誘導する薬剤を含む。例えば、局在化したカルシウム産生を刺激する、ＰＳを原形質膜の外表面に移動させる膜輸送体を活性化させる、腫瘍内皮を損傷させる、アポトーシス前変化を引き起こす、かつ／または腫瘍内皮または腫瘍細胞内のアポトーシスを誘導する薬剤は一般に、ＰＳ発現の増加をもたらすだろう。そのような薬剤の例は、ドセタキセルおよびパクリタキセルである。その後、ＰＳは、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体を使用して標的化され得、それにより全体的な治療効果を増幅し、また宿主エフェクター（補体、ＡＤＣＣ、抗体媒介食作用、ＣＤＣ）を介した攻撃を増加させる。
【０３４３】
腫瘍血管内には存在するが、正常な静止血管内には存在しないような、血管新生、リモデリング、または活性化内皮細胞に対する選択性を有する薬物もまた、腫瘍微小環境内でのＰＳの曝露を選択的に引き起こすために使用することができる。そのような薬剤の例は、コンブレタスタチンおよびドセタキセルである。これもまた、抗体結合の増加および宿主エフェクター機構の開始の増強をもたらすだろう。
【０３４４】
一次治療剤に「後続して」投与するために選択され、増加した効果および可能性としては相乗効果を達成するように設計される、第２の異なる抗癌剤は、一次治療剤の効果から利益を得る薬剤を含む。バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、腫瘍壊死を引き起こす。したがって、後続投与に有効な第２の異なる抗癌剤としては、転移を阻害する抗血管新生剤、壊死腫瘍細胞を標的化する薬剤（インビボで悪性細胞から利用可能になる細胞内抗原に特異的な抗体など）（米国特許第５，０１９，３６８号、同第４，８６１，５８１号、および同第５，８８２，６２６号）、末梢で生存し得るあらゆる腫瘍細胞を攻撃する化学療法剤および抗腫瘍細胞免疫複合体が挙げられる。
【０３４５】
状態によっては、治療期間を大幅に延長することが望ましい場合があり、数日間（２、３、４、５、６、もしくは７）、数週間（１、２、３、４、５、６、７、もしくは８）、または数ヶ月間（１、２、３、４、５、６、７、もしくは８）がそれぞれの投与間に経過する。これは、ある治療が腫瘍を実質的に破壊することを意図し、抗血管新生剤の投与などの別の治療が微小転移もしくは腫瘍の再成長の予防を意図する状況において有利である。しかしながら、効果的な創傷治癒を可能にするために、抗血管新生剤は手術後の慎重な時期に投与されるべきである。その後、抗血管新生剤は、患者の生涯にわたって投与され得る。
【０３４６】
一次治療剤または第２の異なる治療剤のいずれかの複数回投与を利用することも想定される。一次治療剤および第２の異なる治療剤は、１日おきもしくは１週間おきに互換的に投与されてもよく、または一連の１つの薬剤による治療が与えられ、その後に一連の他の治療が与えられてもよい。いずれにしても、併用療法を使用して治療効果を達成するためには、投与時間に関わらず、治療効果を発揮するのに有効な併用量で両方の薬剤を送達することが必要である。
【０３４７】
Ｍ１．化学療法
実質的に同時に投与されようと、連続的に投与されようと、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体は、１つ以上の化学療法剤または化学療法薬と併用して投与することができる。化学療法薬は、増殖中の腫瘍細胞を死滅させ、治療全体によって生じる壊死領域を増強することができる。したがって、薬物は、本発明の一次治療剤の作用を増強することができる。
【０３４８】
ほとんどの癌化学療法薬は、分裂中の酸素化細胞に対して選択的である。それらは併用療法において利点を有するが、これは化学療法薬が一次治療剤とは異なる標的に作用し、より完全な抗腫瘍効果をもたらすためである。例えば、化学療法薬は、腫瘍末梢において急速に分裂する酸素化腫瘍細胞に対して選択的に活性である。腫瘍末梢における高酸素化血管新生血管に選択的である抗血管新生薬もまた、併用に有効だろう。
【０３４９】
腫瘍血管内で血栓の形成を誘導することによって、本発明の一次治療剤はまた、腫瘍内に薬物を保持または捕捉することにより化学療法薬の作用を増強することができる。したがって、化学療法剤は腫瘍内に保持される一方で、残りの薬物は身体から除去される。したがって、腫瘍細胞はより長期間にわたってより高濃度の薬物に曝露される。腫瘍内への薬物のこの閉じ込めは薬物の用量の低減を可能にし、治療をより安全かつより効果的にする。
【０３５０】
本発明において併用するためのさらなる薬物は、一次治療剤の作用によって薬物に対して「感作」された細胞に作用するものであるため、その抗腫瘍効果を達成するのに必要とされる第２の薬物の用量は低減される。例えば、これは、第２の薬物の作用の腫瘍構成成分が腫瘍血管に発揮され、本発明の抗体または薬剤が細胞を薬物に対して感作する場合に生じ得る。これは、本発明の一次治療剤が、直接的にまたはサイトカイン放出の刺激を通して、腫瘍細胞を第２の薬物に対して感作する場合にも同様である。
【０３５１】
併用療法に好適な他の第２の抗癌剤は、例えば、免疫系の免疫抑制構成成分の活性を選択的に阻害することによって、宿主エフェクター細胞の活性を増強するものである。そのような薬剤は、それらの機序の一部分としてエフェクター細胞による攻撃を刺激する本発明の一次治療剤をより積極的に機能させることができる。そのような薬剤の例はドセタキセルである。
【０３５２】
他の好ましい抗癌剤としては、例えば、ＴＧＦβＲ１キナーゼ阻害剤ＩＩ  ＬＹ３２００８８２、レンバチニブ（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、およびＶＥＧＦＲ３キナーゼに対して活性）、およびメレスチニブ（ＭＥＴの小分子阻害剤、ならびにＭＳＴ１Ｒ、ＦＬＴ３、ＡＸＬ、ＭＥＲＴＫ、ＴＥＫ、ＲＯＳ１、ＮＴＲＫ１／２／３、およびＤＤＲ１／２などのいくつかの他の受容体チロシンキナーゼ）が挙げられる。
【０３５３】
一次治療剤の正確な作用機序（複数可）についての理解は、本発明の治療の実施に必要ではないが、そのような機序に関するデータおよび道理にかなった推論を使用して、本発明において併用するための特定の第２の抗癌剤を選択することができる。転じて、選択された併用療法の有効性は、元のデータおよび提案された作用機序を支持し、また併用療法を実施するための第２の抗癌剤の好ましいカテゴリーをもたらす。
【０３５４】
アポトーシスを誘導する薬物は併用療法における使用に好ましい。例えば、ドセタキセルは、微小管への結合および細胞有糸分裂の破壊によってアポトーシスを誘導し、したがってＰＳ曝露を誘導する（Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓら、２００２）。腫瘍血管を覆う内皮細胞および腫瘍細胞の、無症状濃度のドセタキセルによる治療は、細胞表面でのＰＳ発現を誘導することが既知である。
【０３５５】
バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体の抗腫瘍効果には、ＡＤＣＣ、ＣＤＣなどの免疫エフェクター機能のＦｃドメイン媒介により増大、サイトカイン産生の刺激、およびそのような機序の組み合わせが含まれる。これはまたドセタキセルにも関連するが、それは、他の研究が、乳癌患者のドセタキセルによる治療が血清ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、およびＧＭ−ＣＳＦサイトカインレベルの増加をもたらし、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびリンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ）細胞の活性を増強することによって、これらの患者における抗腫瘍免疫応答を増大することを示しているためである。
【０３５６】
したがって、ドセタキセルは、投与された抗体のＰＳ発現および結合の両方を誘導し、また抗腫瘍効果を媒介する免疫エフェクターの活性も増強する。前述の考察に基づくと、抗体とドセタキセルとの組み合わせが好ましい実施形態である。
【０３５７】
したがって、ドセタキセルおよびアポトーシスを誘導する他の化学療法剤は、本発明の併用療法に使用するための好ましい薬剤である。ドセタキセルなどのアポトーシスを誘導する化学療法薬との組み合わせは、腫瘍脈管構造内皮細胞および腫瘍細胞区画を相乗的に攻撃し、治療効力の有意な増強だけでなく、毒性の低下ももたらす。これらの組み合わせは、乳癌治療における、特にドセタキセルを使用するメトロノーム化学療法と本発明の抗体とを組み合わせた使用が企図される。
【０３５８】
併用療法のための例示的な化学療法剤を表Ｃに列挙する。列挙された各薬剤は例示的であり、限定的ではない。治療される病態に応じて、投薬量の変動が生じ得る。治療する医師は、個々の対象にとって適切な用量を決定することができるだろう。ある特定の好ましい実施形態において、ドセタキセルは、６０ｍｇ／ｍ２の出発用量で投与されるドセタキセル、または７５ｍｇ／ｍ２の量で患者に投与されるドセタキセルとして使用される。
【表８−１】
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【表８−２】
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【表８−３】
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【表８−４】
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【表８−５】
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【表８−６】
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【表８−７】
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【表８−８】
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【表８−９】
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【表８−１０】
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【０３５９】
Ｎ．免疫療法（ＩＯ）の組み合わせ
本発明の実施形態は、免疫療法剤または免疫腫瘍（ＩＯ）剤と組み合わせたバビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体による癌患者の治療を含む。併用療法のための例示的な免疫療法剤を表Ｄに列挙する。ＩＯ剤のある特定の好ましい例は、臨床治療、またはヒト臨床試験、好ましくは後期臨床試験において承認されているもの、例えば、表Ｅに記載のものである。表Ｅの詳細によって例証されるように、使用のための用量および治療の兆候は当業者に周知である。
【０３６０】
実施例ＸＶＩのデータによって直接支持されるように、バビツキシマブなどのＰＳ標的化抗体との併用療法に特に好ましいＩＯ剤は、本明細書において「免疫チェックポイント抗体」とも呼ばれる「チェックポイント阻害剤」である。好適な「免疫チェックポイント抗体」としては、ＣＤ２８、ＯＸ４０、および／またはＧＩＴＲなどの活性化免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合するアゴニスト（活性化）抗体、ならびにＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、および／またはＬＡＧ−３などの抑制性免疫チェックポイント、受容体、または分子に結合する拮抗（遮断）抗体が挙げられる。そのような遮断抗体は慣例的に「免疫チェックポイント阻害剤」と呼ばれ、これもまた本明細書で使用される。いくつかのそのような抗体はまた、臨床治療または後期臨床試験において承認されているものとして表Ｅに記載されている。
【０３６１】
免疫チェックポイント抗体（免疫チェックポイント阻害剤）の現在最も好ましい例は、「ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体」である。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１に結合するいくつかのそのような遮断抗体、ならびにそれらの選択、調製、および使用のための機能アッセイを含む方法は、表Ｆに記載されるように、当業者には周知である。これらには、イピリムマブおよびトレメリムマブなどのＣＴＬＡ−４に対する遮断抗体；ニボルマブ、セミプリマブ（ＲＥＧＮ２８１０）、ＣＢＴ−５０１、ＣＸ−０７２、およびペムブロリズマブなどのＰＤ−１に対する遮断抗体；デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ、ＬＹ−３３０００５４、ＣＸ−１８８、およびアテゾリズマブなどのＰＤ−Ｌ１に対する遮断抗体；ならびに「ＩＯダブレット」として知られる、そのような抗体のうちのいずれか１つ以上の組み合わせが含まれる。
【０３６２】
上記の遮断抗体のうち、トレメリムマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブが好ましく、アテゾリズマブが特に好ましい。トレメリムマブ、ニボルマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブについての主な米国特許は、それぞれ、米国特許第６，６８２，７３６号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，７７９，１０８号、および米国特許第８，２１７，１４９号である。アテゾリズマブと組み合わせたバビツキシマブの使用は、実施例ＸＩＸに詳細に示されている。同じ研究の一部ではないが、１つ以上の他の治療選択肢において、アテゾリズマブは、別の免疫チェックポイント抗体、例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１に結合する別の遮断抗体、または任意のチェックポイント阻害剤に結合する二重特異性遮断抗体によって代置されてもよい。異なる遮断抗体を選択する際に、当業者は、例えば、表Ｅ、任意選択で表Ｆにおいて参照されるように、文献から好適な用量および投与スケジュールを知ることになる。
【０３６３】
表Ｆに加えて、抗ＣＴＬＡ−４抗体の他の好適な例は、米国特許第６，２０７，１５６号に記載されているものであり、この特許は特に、寄託されたハイブリドーマに由来する定義された抗体から選択されるＣＤＲ（ＣＤＲ３、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ１）を含む抗ＣＴＬＡ−４抗体に関する。
【０３６４】
表Ｆに加えて、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の他の好適な例は、特に化学療法の併用を含む、ヒト抗ＰＤ−Ｌ１抗体によるＰＤ−Ｌ１過剰発現癌の治療に関する米国特許第８，１６８，１７９号に記載されているもの、特にキメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体を含む、ＰＤ−Ｌ１に対する抗体による腫瘍の治療に関する米国特許第９，４０２，８９９号に記載されているもの、ならびに、特に、抗ＰＤ−Ｌ１抗体および化学療法による癌の治療に関する米国特許第９，４３９，９６２号に記載されているものである。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体組成物および方法は、Ｏｎｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよび共同研究者らによって開発中のものを含む。
【０３６５】
ＰＤ−Ｌ１に対するさらなる好適な抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号、同第９，５８０，５０５号、および同第９，５８０，５０７号のもの、それらのキット（米国特許第９，５８０，５０７号）、ならびにそれらの抗体をコードする核酸（米国特許第８，３８３，７９６号）である。そのような抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合し、結合について基準抗体と競合するか、ＶＨおよびＶＬ遺伝子によって定義されるか、あるいは定義された配列の重鎖および軽鎖ＣＤＲ３（米国特許第７，９４３，７４３号）もしくは重鎖ＣＤＲ３（米国特許第８，３８３，７９６号）またはそれらの保存的修飾によって定義されるか、あるいは基準抗体に対して９０％または９５％の配列同一性を有する。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体はまた、定義された定量的（結合親和性を含む）特性および定性的特性を有するもの、免疫複合体、ならびに二重特異性抗体を含む。免疫応答を増強する上で、そのような抗体、ならびに定義された定量的（結合親和性を含む）特性および定性的特性を有するもの（単鎖形式の抗体および単離されたＣＤＲの抗体にある抗体を含む）を使用する方法がさらに含まれる（米国特許第９，１０２，７２５号）。米国特許第９，１０２，７２５号にあるように、免疫応答の増強を使用して、癌、または感染症、例えば、ウイルス、細菌、真菌、もしくは寄生虫による病原性感染症を治療してもよい。これらの抗ＰＤ−Ｌ１抗体組成物および方法は、ＢＭＳ９３６５５９の製品を含む。
【０３６６】
ＰＤ−Ｌ１に対するさらなる好適な抗体は、米国特許出願第２０１６／０００９８０５号にあるものであり、この特許は、定義されたＣＤＲ配列の抗体および競合抗体を含む、ＰＤ−Ｌ１上の特定のエピトープに対する抗体；核酸、ベクター、宿主細胞、免疫複合体；検出、診断、予後、およびバイオマーカー方法；ならびに治療方法に関する。
【表９−１】
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【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１１】
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【表１１−２】
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【表１１−３】
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【表１２−４】
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***
【０３６７】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実演するために含まれる。以下の実施例に開示されている技術は、本発明の実施において十分に機能することが発明者によって発見された技術を表しており、したがってその実施のための好ましい様式を構成すると見なされ得ることが、当業者によって理解されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示を踏まえて、開示される特定の実施形態に多くの変更を行っても、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく依然として同様または類似の結果を得ることができることを理解するべきである。
【０３６８】
実施例Ｉ
バビツキシマブの生成および特性評価
本実施例は、３Ｇ４と呼ばれるマウスＰＳ標的化抗体の生成および初期の特徴付け、ならびに現在バビツキシマブと呼ばれるマウス−ヒトキメラ抗体（ｃｈ３Ｇ４）を含む３Ｇ４抗体のキメラバージョンの生成を要約する。
【０３６９】
Ａ．３Ｇ４抗体の生成
３Ｇ４抗体は、Ｒａｎら、２００５に報告されているように、マウスを自己由来のＰＳ陽性内皮細胞で免疫することによって産生させた。３Ｇ４抗体を、血清の存在下および不在下で標準的なＥＬＩＳＡにおいてＰＳへの結合について試験し、最初に「血清非依存性」、すなわち、血清の不在下でＰＳに結合する抗体として特徴付けた。３Ｇ４抗体は、ＰＳ、ＣＬ、ＰＩ（ホスファチジルイノシトール）、ＰＡ（ホスファチジン酸）、およびＰＧ（ホスファチジルグリセロール）に結合することを決定した。腫瘍内で差次的に発現されるＰＳを標的化するためのモデルと一致して、３Ｇ４抗体は、中性リン脂質、ＰＣ、およびＳＭとは反応しなかった。
【０３７０】
標準的なタンパク質Ａ手順を使用して、３Ｇ４抗体を、培養した雑種の上清から見た目が均質になるまで精製した。初期の前臨床実験は、同系および異種の腫瘍モデルにおける３Ｇ４抗体の抗腫瘍効果のいくつかを示し、これもまたＲａｎら、２００５に報告されている（例えば、Ｒａｎら、２００５の図４を参照されたい）。３Ｇ４抗体は、毒性の証拠なしに、腫瘍血管損傷、局在性血栓症、腫瘍壊死、および腫瘍成長の遅延を引き起こした。
【０３７１】
合わせて６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む３Ｇ４抗体の重鎖および軽鎖可変領域の全配列を決定し、続いて現在バビツキシマブと呼ばれているマウス−ヒトキメラ抗体（ｃｈ３Ｇ４）を含む３Ｇ４抗体のキメラバージョンを生成をした。３Ｇ４抗体の重鎖可変領域（Ｖｈ）の核酸配列およびアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３５および配列番号３６によって表される。重鎖可変領域の配列は、Ｋａｂａｔによって予測可能な位置にＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、およびＶＨ  ＣＤＲ３を包含する（Ｋａｂａｔら、１９９１）。
【０３７２】
配列番号３５および配列番号３６は、図１Ａに示されるように、マウスリーダー配列の一部および定常鎖配列を含む。リーダー配列は、配列番号３６のアミノ酸１〜１９によって表され、成熟タンパク質は、図１Ａの矢印によって示されるように開始する。十分な可変領域およびＣＤＲ配列情報は、成熟タンパク質の配列によって、ＶＳＳを終結させる配列部分まで含まれ、その後アミノ酸は抗原結合に必須ではない。このため、核酸配列内のＢｓｔＥＩＩ部位を好都合な部位として使用して、例えば、ヒト定常領域への移植に使用するための機能性マウス可変領域を調製することができる（図１Ａ）。
【０３７３】
実際に、３Ｇ４−２ＢＶＨ配列は、Ｌｏｎｚａ  ｐＥＥベクターを使用してＢｓｔＥＩＩ部位のヒトγ１定常領域に移植されている。結果として生じる生成物はマウスリーダー配列を含有し、そのＶＨは図１Ａに示される様式でヒトＣＨ１配列に接合され、ここで、ＡＳＴＬＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧ（配列番号３９）はヒトＣＨ１配列の第１の部分を表す。
【０３７４】
３Ｇ４抗体の軽鎖可変領域（Ｖκ）の核酸配列およびアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３７および配列番号３８によって表される。軽鎖可変領域配列は、Ｋａｂａｔによって予測可能な位置にＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３を包含する（Ｋａｂａｔら、１９９１）。
【０３７５】
配列番号３７および配列番号３８も、図１Ｂに示されるように、マウスリーダー配列の一部および定常鎖配列を含む。リーダー配列は配列番号３８のアミノ酸１〜２２であり、成熟タンパク質は図１Ｂの矢印で示されるように開始する。十分な可変領域およびＣＤＲ配列情報は、成熟タンパク質の配列によって、ＴＶＦを終結させる配列部分まで含まれ、その後アミノ酸は抗原結合に必須ではない。このため、核酸配列内のＢｂｓＩ部位を好都合な部位として使用して、例えば、ヒト定常領域への移植に使用するための機能性マウス可変領域を調製することができる（図１Ｂ）。
【０３７６】
実際に、３Ｇ４−２ＢＶＬ配列は、Ｌｏｎｚａ  ｐＥＥベクターを使用してＢｂｓＩ部位のヒトκ定常領域に移植されている。結果として生じる生成物はマウスリーダー配列を含有し、そのＶＬは図１Ｂに示される様式でヒトＣＬ１配列に接合され、ここで、ＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳ（配列番号４０）はヒトκ定常領域配列の第１の部分を表す。
【０３７７】
Ｂ．マウスキメラ抗体２ａＧ４の生成
直下に記載のように、マウス３Ｇ４抗体のヒトキメラ（ｃｈ３Ｇ４）は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ（ｈＩｇＧ１）である。ｃｈ３Ｇ４のマウスＩｇＧホモログは、ＩｇＧ２ａアイソタイプ（ｍＩｇＧ２ａ）に対応する。この構築物を作製し、試験したところ、元のマウスＩｇＧ３抗体と本質的に同じように挙動することが示された。
【０３７８】
簡潔には、３Ｇ４軽鎖コード配列を、３Ｇ４雑種細胞の細胞株から単離した全ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲによって増幅した。ＲＴ−ＰＣＲプライマーは、Ｌｏｎｚａ発現ベクターであるｐＥＥ１２．４ベクターへのクローニングのために、増幅断片が増幅産物の両端にＸｍａＩおよびＥｃｏＲＩ制限酵素部位を含有するように設計した。３Ｇ４重鎖可変領域を、３Ｇ４雑種細胞の細胞株から単離した全ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲによって増幅した。プライマーは、Ｌｏｎｚａ発現ベクターであるｐＥＥ６．４ベクターへのクローニングのために、増幅断片が増幅産物の両端にＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｍａＩ制限酵素部位を含有するように設計した。
【０３７９】
マウスＩｇＧ２ａ定常領域を、Ｄｒ．Ｓｈｏｚｏ  Ｉｚｕｉによって提供されたプラスミドベクターからＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲプライマーは、ｐＥＥ６．４＋３Ｇ４ＶＨベクターへのクローニングのために、増幅産物の両端にＢｓｔＩＩおよびＥｃｏＲＩ制限酵素部位を有するように設計した。ＢｓｔＥＩＩ部位は、上流の３Ｇ４のＶＨ可変領域配列とインフレームになるように設計した。重鎖および軽鎖構築物を、両方のベクターをＳａｌＩおよびＮｏｔＩで切断することによって単一の二重遺伝子ベクター（１２．４  ３Ｇ４  ＩｇＧ２ａ）に組み合わせた。重鎖および軽鎖コード領域を、配列決定によって検証した。
【０３８０】
１２．４  ３Ｇ４  ＩｇＧ２ａベクターを、電気穿孔によってＮＳ０細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション後、ＮＳ０細胞を希釈し、グルタミンを欠如する培地中で９６ウェルプレートにプレーティングした。（陽性選択のためのグルタミンシンターゼ遺伝子を含有する）構築物でトランスフェクトした細胞のみが、グルタミンの不在下で成長することができる。最初に３Ｇ４抗体の試験に使用したものと同じ標準的なＥＬＩＳＡを使用して、トランスフェクタントを特定し、抗体分泌についてスクリーニングし、最高量の抗体を分泌するトランスフェクタントを大型培養において成長させて、精製抗体を生成した。
【０３８１】
結果として生じる２ａＧ４抗体を見た目が均質になるまで精製し、３Ｇ４抗体と本質的に同じ親和性および結合プロファイルを有することが示された。
【０３８２】
Ｃ．ヒトキメラ抗体ｃｈ３Ｇ４（バビツキシマブ）の生成
マウス可変領域およびヒト定常領域を含有するキメラ構築物を生成し（ｃｈ３Ｇ４）、元のマウス抗体と本質的に同じ特徴を有することが示された。
【０３８３】
マウス３Ｇ４抗体を、ヒト−マウスキメラ抗体に変換した。マウスＶＨをクローニングし、Ｌｏｎｚａ  ２ＢＶＨベクターのＢｓｔＥＩＩ部位のヒトγ１定常領域上に移植した。マウスＶＫをクローニングし、Ｌｏｎｚａ  ２ＢＶＬベクターのＢｂｓＩ部位のヒトＫ定常領域上に移植した。配列を検証した。全構築物をＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣）内で発現させ、抗体を精製した。これは、現在バビツキシマブと呼ばれる抗体である。
【０３８４】
最初に３Ｇ４抗体の試験に使用したものと同じ標準的なＥＬＩＳＡを使用して、結果として生じるｃｈ３Ｇ４は、少なくともマウス３Ｇ４と同程度にリン脂質コーティングＥＬＩＳＡプレートに結合した。キメラ３Ｇ４の、リン脂質ＰＳ、ＰＡ、ＣＬ、ＰＩ、およびＰＧへのインビトロ結合プロファイルは、３Ｇ４と同じであることが示された。無関係な特異性の対照抗体では結合は観察されなかったため、結合は抗原特異的であった。インビボでは、ｃｈ３Ｇ４は腫瘍血管内皮に局在化すること、ならびに広範囲の研究において抗腫瘍効果および抗ウイルス効果を発揮することもまた示された。
【０３８５】
Ｄ．３Ｇ４抗体およびバビツキシマブは、β２ＧＰＩに依存した様式でＰＳを標的化する
キメラ３Ｇ４構築物を無血清条件下でＣＨＯ細胞内に発現させ、精製抗体を血清の不在下でＥＬＩＳＡにおいてＰＳへの結合について試験した場合、ＰＳへの結合は失われた。元の雑種細胞由来の３Ｇ４抗体と、ＣＨＯ細胞内で発現されたキメラ抗体とのＰＳ結合プロファイルにおける見かけ上の矛盾を解決するためのデータを生成した。そうすることで、３Ｇ４抗体とＰＳとの間の相互作用が血漿タンパク質β２−糖タンパク質Ｉ（β２ＧＰＩ）に依存することを実証した。
【０３８６】
このデータは、３Ｇ４（およびバビツキシマブ）抗体とＰＳとの間の相互作用が、血漿タンパク質β２ＧＰＩに依存することを実証している。３Ｇ４は、一般にβ２ＧＰＩドメインＩを認識する、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）を有する患者から単離された病原性抗体とは関連しないドメインＩＩでβ２ＧＰＩに結合することが示された。このデータは、ＰＳ陽性細胞への結合を含むＰＳ結合の増強に二価３Ｇ４／β２ＧＰＩ複合体が必要とされ、これは３Ｇ４Ｆａｂ’断片がこの活性を有しないためであることを示した。細胞結合アッセイにおいて、曝露されたＰＳを有するＡＢＡＥ細胞に結合するには、ｃｈ３Ｇ４抗体およびｈβ２ＧＰＩが同時に存在しなければならないことが示され、これは、ｃｈ３Ｇ４抗体がＰＳに対するβ２ＧＰＩの親和性を増強することを示唆する（Ｌｕｓｔｅｒら、２００６）。
【０３８７】
要約すると、３Ｇ４抗体はドメインＩＩでβ２ＧＰＩに結合し、β２ＧＰＩドメインＶの脂質結合領域が、細胞上に曝露されたＰＳへの３Ｇ４（およびｃｈ３Ｇ４）ならびにβ２ＧＰＩの共結合に必要とされることが示された。加えて、抗体二価性が、曝露されたＰＳへの３Ｇ４（およびｃｈ３Ｇ４）ならびにβ２ＧＰＩのそのような共結合に必要とされることが実証された。したがって、抗体およびβ２ＧＰＩは、活性化内皮細胞、腫瘍血管内皮細胞および腫瘍細胞、ならびにウイルス感染細胞で生じるものなどの、膜の外面上に曝露されたＰＳに共結合する。
【０３８８】
Ｅ．バビツキシマブとβ２ＧＰＩとの間の相互作用の前臨床モデリング
バビツキシマブファミリーの抗体β２ＧＰＩおよびＰＳ間の相互作用に関する前臨床データは、ヒト集団における典型的な量を著しく下回る比較的低レベルのβ２ＧＰＩが、ＰＳへのバビツキシマブの効果的な結合に十分であることを示した。
【０３８９】
マウスにおける初期の研究では、抗体に対するβ２ＧＰＩのモル比０．１２〜０．２５が抗腫瘍活性に有効であることが計算され、よって高レベルのβ２ＧＰＩは抗腫瘍活性に必要ではないことが示された。
【０３９０】
細胞上のＰＳへの３Ｇ４−β２ＧＰＩ複合体の結合に必要とされるβ２ＧＰＩレベルを分析すると、最初の研究における最大の相対的結合は、β２ＧＰＩ対抗体の比がわずか０．５である８０ｎＭの抗体濃度で起こった。０．１２５、０．５、および２の間のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比で、最適な抗体結合が生じると結論付けた。したがって、この第１のインビトロ研究は、低レベルのβ２ＧＰＩが、曝露されたＰＳを有する細胞へのバビツキシマブの結合を効果的に支持することも示した。
【０３９１】
以後の研究において、ＰＳへの２ａＧ４抗体の結合を、様々な濃度のヒトβ２ＧＰＩの存在下でＥＬＩＳＡにおいて試験した。この研究は、ＰＳへの２ａＧ４抗体の結合が、約１のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比でプラトーになり始めたことを示した。より正確には、０．９３のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比が、ＰＳでコーティングされたプレートへの抗体結合を支持するのに効果的であることが示された。
【０３９２】
卵白アルブミン中、様々な濃度のヒトβ２ＧＰＩの存在下で、ＥＬＩＳＡにおいてバビツキシマブのＰＳへの結合を試験する一連の関連研究を実行した。バビツキシマブ滴定およびβ２ＧＰＩ滴定の両方を実行した。これらの研究もまた、０．５μｇ／ｍｌまでの濃度を含む低レベルのβ２ＧＰＩが、ＰＳでコーティングされたプレートに結合する上での様々な抗体濃度を支持するのに有効であることを示した。
【０３９３】
別の一連の研究を実行して、様々な希釈度のヒト血清中でのＰＳに対するバビツキシマブの結合および機能を試験した。これらには、ＥＬＩＳＡにおけるＰＳへの結合、ＰＳ陽性細胞を使用するＦＡＣＳ分析、およびＮＦＡＴ代替ＡＤＣＣバイオアッセイの形式の機能アッセイが含まれた（Ｌａｒｓｏｎら、２０１３）。
【０３９４】
ＥＬＩＳＡアッセイからの例示的な結果は、ＰＳへのバビツキシマブの結合が、β２ＧＰＩ対抗体のモル比が２．８６である１％ヒト血清中のβ２ＧＰＩの濃度で既に飽和状態にあることを示した。０．５％のヒト血清でさえ、ＰＳへのバビツキシマブの結合はプラトーに接近しており、これは１．４３のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比に対応する。ＮＦＡＴ代替ＡＤＣＣバイオアッセイの結果はまた、この一般的な範囲内のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比が、バビツキシマブ機能を支持するのに効果的であることも示した。例えば、この研究は、バビツキシマブ活性の最適比を特定するようには設計されていないが、１．９の（ウシ）β２ＧＰＩ対抗体のモル比は、ＮＦＡＴアッセイにおいてバビツキシマブ活性を効果的に支持することが示された。
【０３９５】
要約すると、０．１２〜２．８６ほど低いβ２ＧＰＩ対抗体のモル比が、ＰＳおよびＰＳ陽性細胞への抗体結合を支持し、機能アッセイにおける活性を促進し、マウスの腫瘍の効果的な治療を可能にすることが示された。上記の全てのデータを考慮し、予防的アプローチを採ると、バビツキシマブの結合および機能を最大化するためには、β２ＧＰＩ対抗体のモル比は約２．８６であるべきだが、それは約３より高い必要はないことが推定された。
【０３９６】
実施例ＩＩ
臨床研究におけるバビツキシマブの薬物動態
この実施例は、ＰＳがマーカーである疾患、特に癌およびウイルス感染症を有するヒト対象に投与したときのバビツキシマブの薬物動態に関する。臨床経験は、上記のように、前臨床モデリングと一致することが示されている。
【０３９７】
Ａ．初期第Ｉ相研究
第Ｉ相多施設非盲検用量漸増研究を実行して、難治性進行性固形腫瘍を有する２６人の患者に静脈内投与（バビツキシマブ単独療法）した場合のバビツキシマブの安全性、耐容性、および薬物動態（ＰＫ）を評価した。２つの投薬スケジュールで、４つの連続的な用量漸増コホート（毎週０．１、０．３、１、または３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ）に患者を登録した。０．１ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇのコホートでは、患者は０、２８、３５、および４２日目にバビツキシマブを受け、１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇのコホートでは、０、７、１４、および２１日目に患者にバビツキシマブを投与した。
【０３９８】
前臨床モデル（実施例Ｉ、Ｅ）および他の患者集団における経験に基づいて、１週間に３ｍｇ／ｋｇの上限用量を選択した。実施例Ｉ、およびＲａｎら、２００５の研究に続く広範な動物モデル研究において、１週間に３回の０．５ｍｇ／ｋｇの抗体用量で最大有効性が達成され、治療の過程を通じて、４８時間の半減期および２μｇ／ｍＬの模擬平均血液濃度で５．５μｇ／ｍＬのＣｍａｘがもたらされた。そのような用量を超えると、ＰＳ陽性細胞へのバビツキシマブの結合がインビトロで飽和する濃度の観察に基づいて、バビツキシマブによるＰＳ結合は飽和することが推定された（実施例Ｉ、Ｅ）。
【０３９９】
研究前、０、１、２、４、７、１０、１４日目、および２１〜７０日目までの７日ごとに、０．１および０．３ｍｇ／ｋｇの用量コホートの患者から試料を収集した。研究前、０、１、２、４、７、１４、２１、２２、２３、２５日目、および２８〜５６日目までの７日ごとに、１および３ｍｇ／ｋｇの用量コホートの患者から、試料を収集した。バビツキシマブ血中レベルを、有効なＥＬＩＳＡによって決定した。
【０４００】
表１は、最大濃度（Ｃｍａｘ）、クリアランス（ＣＬ）、半減期（ｔ１／２）、およびゼロから無限までの血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）を含む、この第Ｉ相試験における単回投与（０日目）および複数回投与（２１日目）後のバビツキシマブの平均（変動係数、ＣＶ）ＰＫパラメータの要約を提示する。
【表１３】
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【０４０１】
表１に示されるように、単回投与後、バビツキシマブの平均半減期は３７．２〜４３．９時間の範囲であることが決定された。０日目に、最大血清濃度（Ｔｍａｘ）に到達したときの投与後の時間の中央値で、平均最大血清濃度（Ｃｍａｘ）は、２．１１〜５６．４μｇ／ｍＬ（用量依存）の範囲であった（値は２．０４〜３．７３時間の範囲）。３ｍｇ／ｋｇで投与したバビツキシマブでは、最大血清濃度は５６．４μｇ／ｍＬであった。研究全体では、バビツキシマブ半減期は３７〜４７時間の範囲であった。この研究では、最大許容用量には到達しなかった。
【０４０２】
バビツキシマブは、直線的な単回用量（０日目）および複数回用量（２１または４２日目）のＰＫ特徴を呈した。バビツキシマブは、複数回用量投与後に明らかな蓄積または時間依存的なＰＫの差は呈さなかった。要約すると、この研究は、バビツキシマブが１週間に最大３ｍｇ／ｋｇまでの範囲の用量で良好に許容され、薬物動態が毎週の投薬レジメンを支持することを示した。特に、１ｍｇ／ｋｇの用量では、バビツキシマブ濃度は６日間、前臨床モデルに基づいて予測される治療閾値である２μｇ／ｍＬを超えたままであり、３ｍｇ／ｋｇの用量では、バビツキシマブ濃度は７日間、この２μｇ／ｍＬを超えたままであることが決定された。したがって、１週間に３ｍｇ／ｋｇの用量を腫瘍学における将来の使用のために選択した。
【０４０３】
Ｂ．さらなる薬物動態学的研究
上記の第Ｉ相試験に加えて、ここでは、単回投与、１週間１回または１週間に２回の注入（６０〜９０分間）として投与されるバビツキシマブのＰＫを、癌またはウイルス感染症を有する患者におけるいくつかの他の臨床研究にわたって、１２０人超の患者で評価した。バビツキシマブは、０．１〜６ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で直線的な単回用量および複数回用量のＰＫ特徴を呈することが確認され、バビツキシマブの明らかな蓄積または時間依存的なＰＫの差の証拠はなかった。中央値Ｔｍａｘは、注入終了後の最初の２〜３時間以内に生じることが示された。血清バビツキシマブ濃度は、見かけ上、単一指数関数的または双指数関数的な一次様式で低下する。観察された場合、より急速な分布相は本質的に６時間以内に完了し、最終排出半減期は約１〜２日（２１．９〜４６．８時間）である。
【０４０４】
１．ウイルス感染症におけるＰＫ
バビツキシマブのＰＫ特徴は、ＨＩＶの有無に関わらず、ＨＣＶに慢性的に感染した患者において試験されたように、癌および慢性ウイルス感染症を有する患者において一般に類似している。
【０４０５】
第Ｉ相非盲検単一施設用量漸増研究は、ＨＣＶに慢性的に感染した患者におけるバビツキシマブの単回静脈内注入を評価した（実施例ＩＩＩ、Ａ）。表２に示されるように、観察されたバビツキシマブ濃度は、ＰＫモデリングデータの予測値と非常に一貫していることが見出された。
【表１４】
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【０４０６】
慢性ＨＣＶ患者における対応する第Ｉｂ相多施設非盲検非無作為化漸増反復用量研究において、ＰＫデータの分析は、全ての用量レベルにおいて、０日目に直線的な単回用量ＰＫ特徴を、および１０日目に直線的な複数回用量特徴を示し、２週間の投薬後、バビツキシマブの蓄積または時間依存的なＰＫの差の証拠はなかった。
【０４０７】
慢性ＨＣＶおよびＨＩＶに同時感染した患者における第Ｉｂ相研究（実施例ＩＩＩ、Ｃ）において、バビツキシマブは、０．３〜６ｍｇ／ｋｇの範囲の用量での１週間に１回の投与後、０日目に直線的な単回用量ＰＫ特徴を、および４９日目に直線的な複数回用量ＰＫ特徴を呈した。バビツキシマブは、８週間にわたる１週間に１回の複数回投与後、時間依存的なＰＫの差または蓄積は呈さなかった。
【０４０８】
２．併用療法におけるＰＫ
重要なことに、バビツキシマブおよび他の薬物（特に化学療法剤）を併用して投与した場合、いずれの薬物にも臨床的に関連する薬物動態学的相互作用は見られなかった。これには、バビツキシマブおよびドセタキセルを併用して投与した場合も含まれる。
【０４０９】
これに関して、第Ｉｂ相多施設非盲検非無作為化研究はまず、難治性進行性固形腫瘍を有する患者において、ゲムシタビン、パクリタキセル＋カルボプラチン、またはドセタキセルと併用した場合の３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブの１週間に１回の静脈内投与の安全性、耐容性、およびＰＫを評価した。単回用量（０日目）または複数回用量のバビツキシマブ投与（２１日目）後に、３つの治療群間のいかなる測定可能なパラメータにも有意差は存在しないことが決定された。ＣｍａｘおよびＡＵＣの評価は、８週間にわたって１週間に１回の複数回用量投与後に、バビツキシマブの蓄積がないことを示した。
【０４１０】
治療歴を有する局所進行性または転移性の非扁平上皮ＮＳＣＬＣ患者においてバビツキシマブ＋ドセタキセルを評価する、第ＩＩ相無作為化二重盲検プラセボ対照研究（実施例ＩＸ）において、全研究集団のサブセット（１群当たり６人の患者）はまた、バビツキシマブとドセタキセルとの間の薬物間相互作用を調査するためのＰＫ下位研究にも参加した。周期１および２の指定された時点で、これらの患者に対して追加の採血を実行した。ドセタキセルありのバビツキシマブについて、臨床的に関連する薬物動態学的な薬物間相互作用は観察されなかった。加えて、ドセタキセルは、バビツキシマブの投与の有無に関わらず、類似した薬物動態学的特徴を呈した。したがって、これらの患者において、ドセタキセルありのバビツキシマブについて、臨床的に関連する薬物動態学的な薬物間相互作用は観察されなかった。
【０４１１】
実施例ＩＩＩ
バビツキシマブを使用する、患者におけるウイルス感染症の治療
この例では、リバビリンとの併用でのバビツキシマブを含む、ビツキシマブを使用する、患者におけるウイルス感染症の治療における臨床経験のいくつかを例証するためのデータが提示されている。選択された臨床用量では、バビツキシマブの投与が、ヒト対象のβ２ＧＰＩレベルを認識できるほどには低減させないことを示すためのデータもまた提示されている。
【０４１２】
Ａ．ＨＣＶ患者における第Ｉ相研究
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に慢性的に感染した患者における、第Ｉ相非盲検用量漸増研究および第Ｉｂ相非盲検漸増反復用量研究で、まずバビツキシマブを評価した。これらの研究は、バビツキシマブの安全性、耐容性、ＰＫプロファイル、ウイルス動態、最大許容用量（ＭＴＤ）、および最大有効量（ＭＥＤ）に関するものであった。０．１、０．３、１、３、および６ｍｇ／ｋｇの用量を第Ｉ相（３０人の患者、６人の患者の連続コホート）において投与し、０．３、１、３、および６ｍｇ／ｋｇの用量を第Ｉｂ相（２４人の患者、６人の患者の４つのコホート）において投与した。
【０４１３】
ＨＣＶ患者における第Ｉ相および第Ｉｂ相の研究では、全ての用量レベルのバビツキシマブが良好に許容された。第Ｉ相では、抗ウイルス活性を示唆するウイルス量の一過的な低減が、全ての用量レベルで観察された。第Ｉｂ相では、０．３、１、および６ｍｇ／ｋｇの用量のバビツキシマブによる治療後にウイルス量がわずかに減少し、これらの減少はしばしば一過的なものであったが、各コホートの少なくとも１人の患者において、ウイルス量の持続的な減少があった。特に、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブの用量では、ＨＣＶの一貫した減少が研究治療および経過観察を通して実証された。
【０４１４】
Ｂ．バビツキシマブはβ２ＧＰＩを枯渇させない
上記の第Ｉｂ相研究はまた、患者におけるβ２ＧＰＩのレベルを測定して、バビツキシマブの投与がこれらのヒト対象におけるβ２ＧＰＩレベルを変化させたかどうかを決定した。１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けている患者において、β２ＧＰＩレベルは実質的に変化がなかった。３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けている患者において、β２ＧＰＩの血清レベルの一過的な低減（２０〜２５％）が観察された。しかしながら、そのような低減は、用量前レベルから統計的に有意には変化していなかった。実際に、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ用量では、β２ＧＰＩレベルは正常範囲内に留まり、２４時間以内に治療前レベルに戻った。対照的に、６ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けている患者において、β２ＧＰＩは有意に低減した（ｐ＜０．０２）。６ｍｇ／ｋｇの用量では、β２ＧＰＩレベルは治療前レベルと比較して、ほぼ正常範囲の下限まで４０％低下した。それにも関わらず、６ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブで治療したヒト対象においてさえ、β２ＧＰＩは３日以内にベースラインレベルに回復した。
【０４１５】
したがって、これらのデータは、ヒトにおける使用のための３ｍｇ／ｋｇ用量のバビツキシマブの選択を確認した。この用量は、バビツキシマブおよびβ２ＧＰＩが、血漿β２ＧＰＩレベルを枯渇させることなく、バビツキシマブ−β２ＧＰＩ複合体が形成され、疾患部位の細胞上に曝露されたＰＳに結合するのを可能にするのに有効な濃度で共に存在する、最大用量であることが決定された。しかしながら、このデータはまた、バビツキシマブ治療中のいかなるβ２ＧＰＩの低減も一過的なものに過ぎないこと、およびβ２ＧＰＩレベルが３日以内に回復することも示している。
【０４１６】
Ｃ．ＨＣＶ−ＨＩＶ患者における第Ｉ相研究
別個の第Ｉｂ相多施設非盲検無作為化用量漸増反復用量研究を実行して、慢性ＨＣＶ（ＨＣＶ遺伝子型１の大部分）およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に同時感染した患者においてバビツキシマブを評価した。主な目的は、安全性、耐容性、ＰＫプロファイル、ウイルス動態、ＭＴＤ、および／またはＭＥＤを決定することであった。この研究は、約１６週間にわたって１６回の訪問予定を伴った。バビツキシマブを、以下の用量、０．３ｍｇ／ｋｇ（６人の患者）、１ｍｇ／ｋｇ（６人の患者）、３ｍｇ／ｋｇ（９人の患者）、および６ｍｇ／ｋｇ（６人の患者）で患者の連続コホートに投与した。患者は、８週間にわたって毎週静脈内にバビツキシマブを受けた。コホート内の全ての患者が、重篤有害事象（ＳＡＥ）として分類される血栓の事象なく最初の４週間の投薬を完了した後に、用量漸増を進めた。
【０４１７】
ベースラインＨＣＶウイルス量の中央値は６．７６ｌｏｇ１０であり、ＨＩＶのベースライン中央値は３．９９ｌｏｇ１０であった。研究中の特定の時点で、ＨＣＶおよびＨＩＶの血漿ウイルス量を測定した。全ての用量レベルにおいてバビツキシマブで治療した場合、各治療群の何人かの患者は、一過的な抗ウイルス活性を呈した（ベースラインから０．５ｌｏｇ１０以上のＨＣＶおよび／またはＨＩＶウイルス量の最大低減）。
【０４１８】
Ｄ．ＨＣＶ患者における第ＩＩ相研究
第ＩＩ相多施設無作為化活性対照研究を実行して、慢性ＨＣＶ（遺伝子型１）感染症の初期治療のための、リバビリンとの併用でのバビツキシマブを評価した。主要評価項目は、研究１２週目に早期ウイルス学的応答（ＥＶＲ）を示した患者の割合であり、ＥＶＲは、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの２−ｌｏｇ１０国際単位（ＩＵ）以上の低減と定義された。安全性は、副次的評価項目に含まれた。
【０４１９】
患者は、最長２８日間のスクリーニング／ウォッシュアウト期間、その後（１：１：１の比の）ランダム化を受けて、全て１日２回の経口リバビリン１０００ｍｇ（体重７５ｋｇ未満）または１２００ｍｇ（体重７５ｋｇ以上）と共に、１週間に０．３または３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ注入または１２週間のペグ化インターフェロンアルファ−２ａ（ペグ化インターフェロン、ＰＥＧ−ＩＦＮα−２ａとも称される）の皮下注射を受けた。１２週間後にＥＶＲを示した患者は、最大４８週間経過までペグ化インターフェロン＋リバビリンでの研究外治療を受けた。
【０４２０】
平均年齢３９．１歳の合計６６人の患者（男性３８人、女性２８人）をこの研究に登録した。２２人の患者は各々、０．３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ、およびペグ化インターフェロンを受けた。受けた０．３および３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ用量の中央値は各々１２回の用量であり、平均治療期間はそれぞれ７８および７５日間であった。
【０４２１】
この研究では、バビツキシマブ＋リバビリンで治療した一部の患者で、１２週間にわたって徐々にウイルス低減が見られた。興味深いことに、より高い用量の３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブとは対照的に、より低い用量のバビツキシマブ（０．３ｍｇ／ｋｇ）で治療した患者において、２倍の人数の患者でＥＶＲが見られた（１８％対９％）。いずれの用量でも、ペグ化インターフェロンを受けた患者ではＥＶＲ率はバビツキシマブを受けた患者よりも高かったが、バビツキシマブはより好ましい安全性プロファイルを示し、いずれのバビツキシマブ含有群と比較しても、ペグ化インターフェロン群のほぼ２倍の患者がＡＥを報告した。
【０４２２】
実施例ＩＶ
バビツキシマブおよびパクリタキセルによる乳癌患者の治療
臨床癌治療に目を向けると、本実施例は、タキサン、パクリタキセルと併用してバビツキシマブを使用する、ＨＥＲ２陰性転移性乳癌を有する患者の治療からのデータを提供する。
【０４２３】
単一施設研究者主導研究では、１４人のＨＥＲ２陰性転移性乳癌を有する患者が、４週間周期で１、８、および１５日目に投与されるパクリタキセル（８０ｍｇ／ｍ２）との併用で１週間に１回３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けた。骨痛、疲労、頭痛、および好中球減少が、最も一般的な有害事象（ＡＥ）であった。対処可能な注入関連反応が、バビツキシマブに関連する最も一般的なＡＥであった。バビツキシマブは、血栓形成性の増加の証拠は示さなかった。治療は８５％の全奏効率（ＯＲＲ）をもたらし、２人の患者が完全奏効を示し、無増悪生存期間（ＰＦＳ）中央値は７．３ヶ月（９５％のＣＩ：２．８、１０．８）であった。
【０４２４】
要約すると、この研究は、パクリタキセルと併用したバビツキシマブが、転移性乳癌を有する患者の治療に良好に許容され、臨床奏効率（ＲＲ）およびＰＦＳに関して有望な結果が観察されることを示した。
【０４２５】
実施例Ｖ
バビツキシマブおよびパクリタキセル−カルボプラチンによる乳癌患者の治療
この例は、ホルモンまたはＨＥＲ２の状態に制限されない、局所進行性または転移性乳癌を有する患者における、バビツキシマブ＋パクリタキセルおよびカルボプラチンの安全性および有効性を評価する、第ＩＩ相非盲検単一群研究の結果を報告する。
【０４２６】
この第ＩＩ相研究は、Ｓｉｍｏｎの２段階設計を利用した。１５人の患者を段階Ａに登録し、試験を段階Ｂにおいてさらに３１人の患者に拡大し、合計４６人の患者とした。主な目的は、完全奏効（ＣＲ）＋部分奏効（ＰＲ）、つまりＣＲ＋ＰＲとして定義される全奏効率（ＯＲＲ）を決定することであった。副次的目的には、腫瘍進行までの時間、奏効期間（ＤＯＲまたはＤＲ）、全生存期間（ＯＳ）、および安全性が含まれた。
【０４２７】
最大６周期まで、２８日間周期の１、８、および、１５日目にカルボプラチン（ＡＵＣ＝２の用量）およびパクリタキセル１００ｍｇ／ｍ２と併用して、疾患進行まで１週間に１回バビツキシマブ（３ｍｇ／ｋｇ）を与えた。４６人の患者のうち１６人（３４．８％）が、治療未経験者であった。
【０４２８】
最も一般的なグレード４の治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）は、好中球減少（１２人の患者、２６．１％）であり、これはこの研究で使用される化学療法で治療した患者において予想される発生率である。最も一般的なグレード３のＴＥＡＥは、白血球減少（１１人の患者、２３．９％）、好中球減少（９人の患者、１９．６％）、および貧血（５人の患者、１０．９％）であった。これらもまた、この研究で使用される化学療法で治療した患者において予想される発生率である。
【０４２９】
固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）に従う客観的奏効は、４６人中３４人の患者（７３．９％）において生じ、４６人中５人の患者（１０．９％）はＣＲが有し、２９人の患者（６３．０％）がＰＲを有した。平均奏効期間（ＤＯＲ）は３．７ヶ月（９５％の信頼区間［ＣＩ］：３．１、５．８）であり、ＰＦＳ中央値は６．９ヶ月（９５％のＣＩ：５．６、７．７）であった。研究終了時に、ＯＳ中央値は２３．２ヶ月であることが決定された（９５のＣＩ：「決定せず」まで５５３日）。これらの結果は、特に併用療法において、現在進行中のバビツキシマブの開発にとって非常に有望である。
【０４３０】
実施例ＶＩ
バビツキシマブおよびドセタキセルによる乳癌患者の治療
本実施例は、今度は局所進行性または転移性乳癌を有する患者におけるドセタキセルとの併用での、バビツキシマブの安全性および有効性を評価する、別の第ＩＩ相非盲検単一群研究の結果を報告する。
【０４３１】
この試験はまた、Ｓｉｍｏｎの２段階設計を利用する第ＩＩ相多施設試験でもあった。１５人の患者を段階Ａに登録し、試験を段階Ｂにおいてさらに３１人の患者に拡大し、合計４６人の患者とした。主な目的は、ＯＲＲ（ＣＲ＋ＰＲ）を決定することであった。副次的目的には、腫瘍進行までの時間、ＤＯＲ、ＯＳ、および安全性が含まれた。
【０４３２】
最大６周期まで、４週間の計画周期の１、８、および、１５日目に与えられるドセタキセル（３５ｍｇ／ｍ２）と併用して、進行まで１週間に１回バビツキシマブ（３ｍｇ／ｋｇ）を与えた。全ての患者は、１つの事前化学療法レジメンを受けた。報告された最も一般的なＴＥＡＥのうち、疲労、頭痛、腰痛、および高血圧のみがグレード３以上であった。
【０４３３】
この研究では、４６人の患者のうち２８人（６０．９％）に客観的奏効が生じることが決定され、４６人の患者のうち５人（１０．９％）がＣＲを有し、４６人の患者のうち２３人（５０．０％）がＰＲを有した。ＤＯＲ中央値は６．１ヶ月（９５％のＣＩ：５．７、７．５）であり、ＰＦＳ中央値は７．４ヶ月（９５％のＣＩ：６．１、９．１）であった。最終分析時点で、ＯＳ中央値は約２０．７ヶ月であった（９５％のＣＩ：「決定せず」まで１６．１ヶ月）。これらのデータは、ドセタキセルとの併用療法を含む、バビツキシマブのさらなる開発に対する強力な支持を提供する。
【０４３４】
実施例ＶＩＩ
バビツキシマブおよびソラフェニブによる肝癌患者の治療
この実施例では、ソラフェニブと併用してバビツキシマブを使用する、進行肝細胞癌（ＨＣＣ）を有する患者の治療からのデータを提示する。
【０４３５】
進行肝細胞癌（ＨＣＣ）におけるバビツキシマブおよびソラフェニブの第ＩＩ相単一施設研究を実行した。患者は、放射線学的進行まで、１週間に１回３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを静脈内（ＩＶ）に、および４００ｍｇのソラフェニブを経口で１日に２回（ＰＯ  ＢＩＤ）受けた。副次的評価項目には、全生存期間（ＯＳ）、疾患特異的生存期間、４ヶ月無増悪生存期間、安全性、および奏効率が含まれた。この研究には、３８人の患者を集めた。
【０４３６】
本研究の６人の患者からの関連橋渡しデータでは、複数の前臨床癌モデルにおいて関連ＰＳ標的化抗体について示されたものと類似して、評価した患者の半数が、１周期のバビツキシマブ治療後に抗腫瘍免疫細胞の増加を有することが決定された。加えて、免疫応答の増加はより長期間にわたって研究治療を続けた患者に関連付けられ、これは臨床的に有意義な抗腫瘍免疫応答を示唆した。評価した６人の患者のうち３人は腫瘍微小環境内への活性化抗腫瘍Ｔ細胞（ＣＤ８）の浸潤の増加を有し、これは疾患進行までの期間の延長と相関していた。加えて、これらの応答する患者は、治療開始前により低レベルのＰＤ−１陽性細胞（Ｔ細胞活性化および疾患成績の確立されたマーカーである）を最初に示し、続いてバビツキシマブ治療後に測定可能な上昇を示した。
【０４３７】
臨床的には、グレード４または５の有害事象は記録されなかった。最も一般的な全グレードの事象は、下痢（３２％）、疲労（２６％）、および食欲不振（２４％）であった。ＯＳ中央値（ｍＯＳ）は６．２ヶ月であった。２人の患者が部分奏効を達成し、４ヶ月ＰＦＳは６１％であった。
【０４３８】
これらの結果は、他のチェックポイント免疫療法で見られた自己免疫有害事象の徴候なく、進行ＨＣＣを有する患者においてバビツキシマブおよびソラフェニブが良好に許容されることを実証した。進行までの時間、疾患制御率、および４ヶ月無増悪生存期間の臨床成績は、高い大血管浸潤率を含む彼らの好ましくない疾患生物学のために、非常に不良な予後を有する多数の前治療歴を有するこの患者コホートにおいて特に有望である。
【０４３９】
実施例ＶＩＩＩ
バビツキシマブおよびゲムシタビンによる膵臓癌患者の治療
本実施例では、バビツキシマブと併用してゲムシタビンを使用する、治療歴のないＩＶ期膵臓癌を有する患者の治療のデータを提示する。
【０４４０】
この研究（ＰＰＨＭ１００２）は、治療歴のないＩＶ期膵臓癌を有する患者において、バビツキシマブと併用して、または併用せずに投与したときのゲムシタビンを評価するための第ＩＩ相無作為化非盲検研究である。主な目的は、治療群間での患者のＯＳを比較することであった。副次的目的には、ＰＦＳ、ＯＲＲ、ＤＲ、および安全性を比較することが含まれた。
【０４４１】
登録された患者を１：１の比で無作為化して、ゲムシタビン単独、または１週間に１回の３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブとの併用でのゲムシタビンの研究治療を受けさせた。ゲムシタビン（１０００ｍｇ／ｍ２）を、疾患進行または許容できない毒性があるまで、各２８日周期（４週間）の１、８、および１５日目に与えた。合計７０人の患者をこの研究に登録した。一般に、患者集団は非常に広範な疾患負荷量を有しており、これが両治療群において奏効を低減させている可能性がある。
【０４４２】
バビツキシマブ＋ゲムシタビン治療群の最も一般的なＴＥＡＥは、悪心（４４．１％）、貧血（３５．３％）、ならびに疲労、便秘、および食欲不振（各々患者の３２．４％に発生）であった。ゲムシタビンのみに無作為化した３人（９．１％）の患者は、グレード５（致命的）の事象（突然死［１人］、肝膿瘍［１人］、および心停止［１人］）を有した。ゲムシタビン＋バビツキシマブ群では、グレード５（致命的）の事象は発生しなかった。
【０４４３】
ほとんどの有効性評価項目は治療群間で同等であったが、バビツキシマブおよびゲムシタビン群では、１年時点で数値的に高い奏効率および生存確率が存在した。研究終了時、全生存期間中央値（９５％のＣＩ）は、ゲムシタビン単独治療群で５．２（４．０〜６．３）ヶ月、バビツキシマブ＋ゲムシタビン治療群で５．６（４．７〜７．０）ヶ月であった。バビツキシマブの追加に対するこれらの結果は、非常に広範な疾患負荷量を有するこの患者集団において特に有望である。
【０４４４】
実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験、および機能性β２ＧＰＩレベルが治療結果と相関することを示す実施例ＸＩＩＩの機能性β２ＧＰＩ分析後、本第ＩＩ相試験からの保存試料もまた、機能性β２ＧＰＩについて試験した。実施例ＸＩＶに報告されるように、これらの分析の結果は、機能性β２ＧＰＩのレベルがバビツキシマブ治療の成功のためのバイオマーカーであるという発見を強化する。
【０４４５】
実施例ＩＸ
ＮＳＣＬＣ患者におけるバビツキシマブおよびドセタキセルの第ＩＩ相試験
第Ｉ相および単一群第ＩＩ相実験を基にして、本実施例は、治療歴を有するＩＩＩｂ／ＩＶ期非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者においてバビツキシマブ＋ドセタキセルを試験する、第ＩＩ相試験に関する。
【０４４６】
この研究（ＰＰＨＭ０９０２）は、治療歴を有する局所進行性または転移性の非扁平上皮ＮＳＣＬＣを有する患者においてバビツキシマブ＋ドセタキセルを評価する、第ＩＩ相無作為化二重盲検プラセボ対照試験である。この研究の主な目的は、治療群間のＯＲＲ（ＣＲ＋ＰＲ）を比較することであった。副次的目的には、ＰＦＳ、ＤＲ、ＯＳ、安全性、およびＰＫを比較することが含まれた。
【０４４７】
患者を１：１：１の比で無作為化して、ドセタキセル＋プラセボ、ドセタキセル＋１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ、またはドセタキセル＋３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けさせた。ドセタキセル７５ｍｇ／ｍ２を、最大６周期まで各２１日周期の１日目に与え、プラセボまたは割り当てられた用量のバビツキシマブを１週間に１回投与した。進行または毒性があるまで、患者は、１週間に１回割り当てられた盲検治療（プラセボ、１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ、または３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ）を受け続けた。
【０４４８】
全研究集団のサブセット（１群当たり６人の患者）が、バビツキシマブとドセタキセルとの間の薬物間相互作用を調査するためのＰＫ下位研究に参加した。周期１および２の特定の時点で、これらの患者に対して追加の採血を実行した。
【０４４９】
平均年齢６０．０歳の合計１２１人の患者（男性７６人および女性４５人）をこの研究に登録した。独立データモニタリング委員会（ＩＤＭＣ）では、ＯＲＲの主要評価項目に到達したため、研究治療の非盲検化が推奨されることが決定され、この会議後に研究治療を非盲検化した。加えて、安全性の懸念または問題は、ＩＤＭＣによって特定されなかった。
【０４５０】
研究の非盲検化後、プラセボ群および１ｍｇ／ｋｇ群に関与する、包装および標識業者による標識の誤りが発見された。調査要約を食品医薬品局（ＦＤＡ）に提出し、プラセボまたは１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを投薬した患者のデータをプールして、探索分析および３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ群に対する比較のための複合対照群を形成した。
【０４５１】
全体として、毒性グレードによる治療群間のＡＥの発生率に有意差は観察されなかった。治療群間でＳＡＥに顕著な差は観察されなかった。複合対照群の３人の患者（３．８％）およびドセタキセルありの３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ群の２人の患者（５．０％）は、グレード５（致命的）の事象を有した。致命的事象を有する複合対照患者には、１人の敗血症を有する患者、１人の脳血管発作を有する患者、および１人の肺炎および偽敗血症の両方を経験する患者が含まれた。３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ＋ドセタキセル群では、１人の患者がバビツキシマブとは無関係の致命的な敗血症を有し、１人の患者が同様にバビツキシマブとは無関係の老衰事象を有した。
【０４５２】
有効性評価項目の要約を表３に提示し、この中で分析は治療意図（ＩＴＴ）集団および中央判定データに基づいている。全ての評価項目（ＯＲＲ、ＰＦＳ、およびＯＳ）は、複合対照群（プラセボまたは１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ）と比較して、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブが優位に向かう傾向を実証した。複合群と比較して、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブのＯＲＲは約５０％高かった。ＰＦＳ中央値は、複合群と３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ群との間で類似していたが、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブを受けた患者のＯＳ中央値は約６０％長かった。特に、複合群の患者のｍＯＳがわずか７．３ヶ月であるのに対して、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者は１１．７ヶ月のｍＯＳを有した（ＨＲ＝０．６６）。
【表１５】
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【０４５３】
実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験、および機能性β２ＧＰＩレベルが治療結果と相関することを示した実施例ＸＩＩＩにおける機能性β２ＧＰＩの分析に続いて、本第ＩＩ相試験からの保存試料もまた、機能性β２ＧＰＩについて試験した。実施例ＸＩＶに記載されているこれらの分析の結果は、機能性β２ＧＰＩのレベルがバビツキシマブ治療の成功のためのバイオマーカーであることをさらに確認する。
【０４５４】
実施例Ｘ
ＮＳＣＬＣ患者におけるバビツキシマブおよびドセタキセルの第ＩＩＩ相試験
前の実施例において報告されるように、第Ｉ相および第ＩＩ相研究の全体的な結果は、バビツキシマブの臨床的に有意義な治療効果を実証した。そのような結果、特に上記の二重盲検第ＩＩ相試験に基づいて、第ＩＩＩ相試験を行い、本実施例は第ＩＩＩ相試験および得られたデータを記載する。
【０４５５】
第ＩＩＩ相試験は、治療歴を有するＩＩＩｂ／ＩＶ期非扁平上皮非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者における、バビツキシマブ＋ドセタキセルの無作為化二重盲検プラセボ対照多施設試験であった。この世界的な二重盲検第ＩＩＩ相試験は、２０１２年に開始された。選択基準は、ＥＣＯＧ一般状態が０〜１であり、以前の免疫療法が許容されている、プラチナ−ダブレット化学療法に進んだ（既知のＥＧＦＲまたはＡＬＫ突然変異の場合、適切な標的化療法に進んだはずである）ＩＩＩｂ／ＩＶ期の非扁平上皮ＮＳＣＬＣを有する患者のためのものである（ＥＣＯＧは、Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐによって定義される一般状態スケールである）。この試験には、５９７人のそのような患者を１：１の比で集めて、進行または毒性があるまで、最大６周期の２１日周期のドセタキセル（Ｄ）を毎週３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ（バビツキシマブ＋ドセタキセル、Ｂ＋Ｄ）またはプラセボ（ドセタキセル単独、Ｄ）と併用して受けさせた。主要評価項目は、全生存期間（ＯＳ）であり、副次的評価項目は、客観的奏効率（独立中央判定、ＩＣＲ）、無増悪生存期間（ＩＣＲ）、安全性、ＰＫ、生活の質（ＬＣＳＳ）、および免疫相関を含む探索バイオマーカーである。選択された患者のベースライン特徴を表４に示し、表中の「プラセボ」欄はドセタキセル単独で治療した患者を指し、「バビツキシマブ」欄はバビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者を指す。
【表１６】
2020515637.tif 000161
【０４５６】
Ａ．安全性
標的とするＯＳ事象の７０％に到達したため、ＯＳ中央値（ｍＯＳ）を評価した（下記を参照されたい）。この時点で、安全性プロファイルは群間で一般に類似していることが決定された。よって、バビツキシマブおよびドセタキセルの併用の安全性プロファイルは、プラセボ＋ドセタキセルの併用に類似している。
【０４５７】
Ｂ．有効性
標的とするＯＳ事象の７０％に到達したため、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の２９７人の患者におけるｍＯＳは１０．７ヶ月（９５％の信頼区間［ＣＩ］、８．６〜１１．５）であり、ドセタキセル単独群の３００人の患者におけるｍＯＳは１０．８ヶ月（９５％のＣＩ、９．２〜１２．６）であった（死亡ハザード比（ＨＲ）、１．１０（０．８９、１．３７））。その後の免疫療法は、本研究の患者のうち約１５％が受け、バビツキシマブ＋ドセタキセル群とドセタキセル単独群との間で均等に分布していた（実施例ＸＶＩを参照されたい）。
【０４５８】
無増悪生存期間（ＰＦＳ）もまた、標的とするＯＳ事象の７０％に到達した時点で２群において類似しており、ＰＦＳ中央値はバビツキシマブ＋ドセタキセル群で４．１ヶ月、ドセタキセル単独群で３．９ヶ月であった。この段階での客観的奏効率（ＩＴＴ）および奏効期間（ＤＯＲ）の分析を表５に列挙し、表中、Ｐ値は両側層別コクラン−マンテル−ヘンツェル直接法に基づく。層別因子には、病期（ＩＩＩＢ対ＩＶ）、地理上の地域（北米、欧州、その他の地域）、以前の維持療法および／または標的化療法（あり対なし）が含まれる。
【表１７】
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【０４５９】
最後の患者を無作為化してから１２ヶ月間の経過観察が経過し、かつ標的とするＯＳ事象の約８５％に到達し、ＯＳ中央値は、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の２９７人の患者で１０．５ヶ月（９５％の信頼区間［ＣＩ］、８．４〜１１．９）、およびドセタキセル単独群の３００人の患者で１０．９ヶ月（９５％のＣＩ、９．２〜１２．１）であった（ＨＲ、１．０６；Ｐ＝０．５３３）。この段階でのＰＦＳは、バビツキシマブ＋ドセタキセル群で４．２ヶ月（９５％のＣＩ、３．９〜４．６）、およびドセタキセル単独群で４．１ヶ月（９５％のＣＩ、３．２〜４．８）であった（ＨＲ、１．０２；Ｐ＝０．８７６）。この段階でのＯＲＲは、バビツキシマブ＋ドセタキセル群で１５％であったのに対し、ドセタキセル単独群では１１％であった（オッズ比０．７、Ｐ＝０．１５）。この段階での安全性プロファイルはグループ間で類似していた。グレード３以上の有害事象は、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の患者のうち６８％に、およびドセタキセル単独群の患者の６０％に発生した。
【０４６０】
ＯＳ中央値のこれらの結果は、実施例ＩＸにおいて上述した第ＩＩ相データおよび研究の検出力に使用した仮定ｍＯＳとは予想外に異なり、これらのうち後者は、バビツキシマブ＋ドセタキセルでは９．１ヶ月のｍＯＳであったのに対し、ドセタキセル単独では７．０ヶ月のｍＯＳであった（９．１対７．０ヶ月のｍＯＳを仮定して、８０％の検出力および片側２．５％の有意水準を提供する４７３のＯＳ事象；ＨＲ  ０．７７）。
【０４６１】
後ろ向きＶｅｒｉＳｔｒａｔ（登録商標）プロテオミクス試験は、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の８０％およびドセタキセル単独群の８４％においてＶＳ良好サインを実証した（実施例ＸＩ）。治療歴を有する非扁平上皮ＮＳＣＬＣを有する患者におけるこの第ＩＩＩ相試験は、バビツキシマブ＋ドセタキセル群における優れたＯＳという主な目的は満たさなかったが、この結果は、特にドセタキセル単独群において、全体的に予想よりも高い割合のＶＳ良好サインによって影響された可能性がある。
【０４６２】
実施例ＸＩ
バビツキシマブの第ＩＩＩ相試験の初期バイオマーカー分析
上記の第ＩＩＩ相試験に関連して、バビツキシマブを含む治療レジメンから最大の利益を得る患者について、１つ以上のバイオマーカー、またはバイオマーカーのパターン（バビツキシマブの「シグネチャー」）を特定する目的で、バイオマーカー分析を実行した。本実施例は、プロテオームシグネチャー分析、およびバイオマーカー誘導の進行中のバビツキシマブの臨床開発におけるそれらの適用に関する。
【０４６３】
Ａ．試料収集
第ＩＩＩ相試験を設計し、患者の血液試料の収集のためにインフォームドコンセントを得た。患者の血液検体は、適切な静脈切開技術を使用して得た。止血帯を静脈穿刺部位の７〜１０ｃｍ上に置いたが、予備的な静脈選択のための止血帯の適用は１分を超えないようにした。患者に自らの拳を握らずに閉じさせ、中心から周辺への円運動を使用して、７０％のイソプロピルアルコールパッドで静脈穿刺部位を洗浄し、風乾させた。
【０４６４】
２１ゲージの針を使用して、患者の血液を５．０ｍＬの金蓋血清分離管（ＳＳＴ）に収集した。血液が流れ始めた後できるだけ早く止血帯を取り外し、管を完全に充填させた。収集後直ちに管を５回反転させ、少なくとも３０分間凝固させた。血清を分離するために、収集後３０〜６０分以内に管を１，０００〜１，３００ｇで１５分間遠心分離した。ピペットを使用して、約１．２５ｍＬの血清を３．６ｍＬのクリオバイアル管２本に移し、それらの試料を凍結した。
【０４６５】
凍結したバイアルを検体袋に入れ、しっかりと密封した。ドライアイス輸送箱の底部にドライアイスを層状に重ね、この箱に検体袋を入れた。箱が一杯になるまでドライアイスを添加し、蓋を所定の位置に固定し、試料を−７０℃で保存するために中央実験室に輸送した。
【０４６６】
中央実験室は、試料を解凍することによって部分アリコートのためのバイアルを準備した。ピペットを使用して、血清の少なくとも２５０μｌを２ｍｌの自然蓋クリオバイアル管４本に移し、−７０℃で再凍結した。同じ輸送指示を反復し、部分アリコートした試料を、試験用バイオマーカーのためにドライアイス上で凍結した状態で試験室に輸送した。
【０４６７】
Ｂ．ＶｅｒｉＳｔｒａｔ（登録商標）分析
癌の多次元特徴を理解することは、患者選択および治療計画にとって重要である。ＶｅｒｉＳｔｒａｔ（登録商標）試験は、進行性ＮＳＣＬＣを有する患者のための、血液に基づく市販の予測的および予後的プロテオミクス試験である。予後的であることに加えて、ＶｅｒｉＳｔｒａｔは、単剤治療の選択肢から選択する場合の差次的な治療利益を予測する。ＶｅｒｉＳｔｒａｔは、第ＩＩＩ相試験の患者試料に対して後ろ向きに実行した。別個のプロテオミクスアプローチも、特にバビツキシマブのために探求されている。
【０４６８】
より侵襲性の疾患と相関するＶｅｒｉＳｔｒａｔ（ＶＳ）不良（ＶＳ−Ｐ）、またはより好ましい予後と相関するＶＳ良好（ＶＳ−Ｇ）として患者を分類する質量分析を使用して、第ＩＩＩ相試験の患者の治療前血清試料をタンパク質発現について試験した。カプランマイヤー統計法を使用して、ＯＳをＶｅｒｉＳｔｒａｔサブグループによって分析した。
【０４６９】
ＶｅｒｉＳｔｒａｔ分類は、５９７人の無作為化患者のうち５６９人の患者について入手可能であった。バビツキシマブ＋ドセタキセル群では、８０％がＶＳ良好、２０％がＶＳ不良であった。ドセタキセル単独群では、８４％がＶＳ良好、１６％がＶＳ不良であった。したがって、第ＩＩＩ相試験では、ＶｅｒｉＳｔｒａｔの良好／不良サインは治療群間でほぼ均衡が取れていた。
【０４７０】
全生存期間中央値（ｍＯＳ）は、全ＶＳ良好では１１．５ヶ月（９５％の信頼区間［ＣＩ］、１０．６〜１２．９）であり、全ＶＳ不良では５．７ヶ月（９５％のＣＩ、４．２〜７．２）であった；ｐ＜０．０００１、ハザード比［ＨＲ］ＯＳ（ＶＳ−Ｇ  ｖｓ．ＶＳ−Ｐ）０．４９（９５％のＣＩ  ０．３７〜０．６４）；ｐ＜０．００１。これらのＶｅｒｉＳｔｒａｔ結果は、ＰＲＯＳＥ試験（Ｇｒｅｇｏｒｃら、２０１４）ならびにＰＦＳおよびＯＳの全体的な予後と一致している。
【０４７１】
ＶＳ良好患者のうち、バビツキシマブ＋ドセタキセル群のｍＯＳは１１．２ヶ月（９５％のＣＩ、１０．２〜１２．８）であり、ドセタキセル単独群では１１．８ヶ月（９５％のＣＩ、１０．４〜１３．５）である（ｐ＝０．３８）。ＶＳ不良患者のうち、バビツキシマブ＋ドセタキセル群のｍＯＳは５．８ヶ月（９５％のＣＩ、５．０〜１１．３）であり、ドセタキセル単独群では４．７ヶ月（９５％のＣＩ、３．４〜７．２）である（ｐ＝０．２７）。この群の患者に対する治療選択肢が限定されていることを考慮すると、バビツキシマブがＶＳ不良患者においてＯＳを改善する能力は重要である。
【０４７２】
結論として、第ＩＩＩ相試験のＶｅｒｉＳｔｒａｔ結果は、ＰＦＳおよびＯＳについて全体的な予後であるが、バビツキシマブ治療応答の予測はできない。ドセタキセル群での予想外のＯＳ結果は、ＶｅｒｉＳｔｒａｔ良好患者の比較的高い全体的割合によって影響を受けた可能性がある。特に、この第ＩＩＩ相試験におけるＶｅｒｉＳｔｒａｔ良好患者のパーセンテージ（８０％超）は以前に報告されたもの（約６７％）よりも高く、これは患者が全体的に良好な予後を有したことを示し、したがって、ドセタキセル群の予想よりも良好な性能を部分的に説明する。
【０４７３】
Ｃ．バビツキシマブ免疫バイオマーカー
前述のＶｅｒｉＳｔｒａｔ分析とは別に、バビツキシマブに対する独自の免疫バイオマーカーシグネチャーの開発が進行中である。第一に、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）レベルに基づく生存の分析により、ＩＦＮγがバビツキシマブによる治療の成功のためのバイオマーカーであることが示される。特に、低レベルの（末梢）ＩＦＮγの事前治療を受けた患者は、バビツキシマブ治療に対してより良好な成果を挙げる（実施例ＸＶＩＩ）。ＩＦＮγレベルはまた、腫瘍微小環境において測定することもできる。
【０４７４】
第二に、ＰＤ−Ｌ１発現を予後バイオマーカーとして探求した。患者のサブセットにおけるベースラインＰＤ−Ｌ１発現は、バビツキシマブ治療を受けた患者において、陰性ＰＤ−Ｌ１発現（ＴＣ０）が、陽性ＰＤ−Ｌ１発現（ＴＣ１／２／３）と比較して有意に延長されたＯＳと関連することを示した（実施例ＸＶ）。
【０４７５】
まとめると、これらの観察結果はバビツキシマブと一致しており、ＰＤ−Ｌ１陰性の「免疫風邪」腫瘍においてより高い効果を示している。免疫相関のこれらおよび関連する試験は、将来の臨床試験において患者選択に使用するために設計される。
【０４７６】
実施例ＸＩＩ
機能性β２ＧＰＩのアッセイ
本実施例は、流体試料中の機能性（活性）β２ＧＰＩの検出のために明確に設計されたβ２ＧＰＩアッセイの開発に関する。この試験方法は、機能性β２ＧＰＩ（ＰＳおよびバビツキシマブの両方に結合することができるβ２ＧＰＩを意味する）を検出および定量化するように特有に適合している。したがって、本実施例は、バビツキシマブ治療に関連してさらなる有意義なバイオマーカー分析に必要とされる、以前は利用できなかった手段を提供する。
【０４７７】
Ａ．材料および方法
１．材料および装置
以下の特定の材料および装置をアッセイにおいて使用して、本実施例の節Ｂ１およびＢ２に提示される結果を生成した。材料：９６ウェルの培地結合平底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＢｉｏＯｎｅ、カタログ番号６５５００１）、９６ウェルの非結合丸底プレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３６０５）、ヘキサン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号３２２９３）、ＰＳ抗原（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｐ６６４１）、卵白アルブミン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ５５０３）、発色基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＫＰＬ、カタログ番号５０−７６−００）、２ＭのＨ２ＳＯ４（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号ＳＡ８１８−４）、プレートカバー（Ｆｉｓｈｅｒ  ０１５−０２７−１１）、接着プレート密封機（ＶＷＲ２３２７０１）、試薬リザーバー（ＶｉｓｔａＬａｂカタログ番号３０５４−１０００）。１．５ｍＬの微量遠心管、５０ｍＬの円錐管、および１５ｍＬの円錐管もまた利用した。
【０４７８】
装置：ボルテックス（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）、タイマー（ＶＷＲ６２３４４−６４）、１０〜１０００μＬのピペッター（Ｒａｉｎｉｎ）、１００〜３００μＬの多チャネルピペッター（Ｒａｉｎｉｎ）、４５０および６５０ｎｍのプレートリーダー（ＥＮ１８３５）。秤、撹拌棒、および３７℃のインキュベーターもまた利用した。このアッセイにはＳｏｆｔＭａｘ（登録商標）Ｐｒｏソフトウェアを使用した。
【０４７９】
２．緩衝液および技術
洗浄緩衝液は１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）であり、遮断緩衝液は１×ＰＢＳ中２％の卵白アルブミンである。
【０４８０】
アッセイ全体を通して、大量（例えば、５００μＬ以上）で作業するときは、減法ピペッティングを利用した。全量の希釈剤を最初にピペッティングした。追加の試薬を添加する前に、等量の希釈剤を除去した。危険である可能性のある蒸気は全て、ドラフト内で取り扱った。
【０４８１】
３．バビツキシマブ−ＨＲＰ
バビツキシマブ抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）に共役させて、アッセイに使用するためのバビツキシマブ−ＨＲＰ検出剤を調製した。ＥＺ−Ｌｉｎｋ（登録商標）Ｐｌｕｓ活性化ペルオキシダーゼ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３１４８７）を使用し、その後ｐＨ７．２で活性化ペルオキシダーゼを抗体に共役させるための手順（製造者により提供）を続けて、共役を実行した。簡潔には、１ｍｇのバビツキシマブをＰＢＳ（ｐＨ７．２）中で１ｍｇ／ｍＬまで希釈した。これを１ｍｇの凍結乾燥ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｐｌｕｓ活性化ペルオキシダーゼに添加して、再構成した。再構成直後に、１０μＬの５Ｍのシアノ水素化ホウ素ナトリウム溶液を反応物に添加し、室温で１時間インキュベートした。インキュベーションの完了後、２０μＬの反応停止緩衝液を添加し、室温で１５分間インキュベートした。共役バビツキシマブ−ＨＲＰ（１ｍｇ／ｍＬ）を４℃で最大４週間保存した。
【０４８２】
４．コーティング
ＥＬＩＳＡプレートを以下のようにＰＳ抗原でコーティングした。５μｇ／ｍＬのＰＳ抗原を調製し、送風機がオフの状態のドラフト内で６ｍＬのヘキサン中に希釈した。１２チャネルピペットを使用して、５０μＬのＰＳ溶液を各ウェルに添加した。ドラフトの送風機を再びオンにし、ヘキサンを３０〜４５分間、典型的には３０分間蒸発させた。
【０４８３】
５．遮断
ＰＳコーティングＥＬＩＳＡプレートを以下のように遮断した。１プレート当たり１００ｍＬの遮断緩衝液（１×ＰＢＳ中２％の卵白アルブミン）を調製した。１２チャネルピペットを使用して、２００μＬの遮断緩衝液を各ウェルに添加した。遮断されたＥＬＩＳＡプレートを、３７℃で１２０分間（±１０分間、これによるアッセイ性能の変化はなかった）インキュベートした。
【０４８４】
６．試料調製
アッセイ用の標準物、陽性対照、および試料調製を下記のように実行した。
【０４８５】
陽性対照のためのβ２ＧＰＩ標準物は、０．２Ｍのグリシン、０．１５ＭのＮａＣｌの緩衝液（ｐＨ７．４）中、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（ＨＴＩ、カタログ番号Ｂ２Ｇｌ−０００１−Ｃ、１．０ｍｇ／ｍｌ）から得た。β２ＧＰＩのバイアルを解凍し、標準物および陽性対照調製を以下のように実行した。
１０μｇ／ｍＬのβ２ＧＰＩサブストックＡを１ｍＬ、遮断緩衝液中で調製し、
サブストックＡから１００μＬを減法ピペッティングすることによって、１，０００ｎｇ／ｍＬのβ２ＧＰＩサブストックＢを１ｍＬ、遮断緩衝液中で調製し、
サブストックＢから２５０μＬを減法ピペッティングすることによって、２５０ｎｇ／ｍＬのβ２ＧＰＩ標準を１ｍＬ、遮断緩衝液中で調製し、
減法ピペッティングを使用して、１０００ｎｇ／ｍＬのサブストックから、２００ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、および５ｎｇ／ｍＬの対照試料を調製した。
【０４８６】
未知試料を試験のために以下のように調製した。１：４０００および１：８０００の最終希釈度で未知試料を遮断緩衝液中で調製し、１：１００の希釈度の未知試料を最初に調製し、１：４０の希釈度を１：１００の希釈度から調製して１：４０００の希釈度を達成し、１：８０の希釈度を１：１００の希釈度から調製して１：８０００の希釈度を達成した。
【０４８７】
非結合プレートの調製を以下のように実行した。７５μＬの遮断緩衝液を行Ｂ〜Ｈの列１〜３に添加し、２５０ｎｇ／ｍＬの標準物１５０μＬを列１〜３、行Ａに添加し、多チャネルピペットを使用して、列１〜３の７５μＬを列Ａから列Ｇまで段階希釈し、７５μＬの陽性対照および試料を指定のウェルに添加し、７５μＬの遮断緩衝液を全ての空のウェルに添加した。プレート設定を表６に示す。
【表１８】
2020515637.tif 000163
【０４８８】
７．検出
遮断終了前に、３００ｎｇ／ｍＬのバビツキシマブ−ＨＲＰを６ｍＬ、遮断緩衝液中で調製した。２５０μＬを各ウェルにピペッティングすることによって、アッセイプレートを１×ＰＢＳで洗浄し、これをさらに２回反復した。プレート洗浄機を使用してもよく、その場合、プレートを１×ＰＢＳで１回洗浄する。プレートができるだけ乾燥していることを確実にした。
【０４８９】
５０μＬの３００ｎｇ／ｍＬのバビツキシマブ−ＨＲＰをアッセイプレートの全てのウェルに添加した。非結合プレートの対応する各ウェルから、５０μＬを添加した。インキュベーションを３７℃で９０分間実行した。
【０４９０】
８．発色
ＴＭＢペルオキシダーゼ基質およびＴＭＢペルオキシダーゼ溶液Ｂを、使用の少なくとも１時間前に冷蔵庫から取り出した。２５０μＬを各ウェルにピペッティングすることによって、アッセイプレートを１×ＰＢＳで洗浄し、これをさらに２回反復した。プレート洗浄機を使用してもよく、その場合、プレートを１×ＰＢＳで１回洗浄する。プレートができるだけ乾燥していることを確実にした。
【０４９１】
６ｍＬのＴＭＢペルオキシダーゼ基質を６ｍＬのＴＭＢ溶液Ｂと混合することによって、１２ｍＬのＴＭＢ混合物を調製した。１００μＬのＴＭＢ溶液をアッセイプレートの各ウェルに添加し、５〜６分間発色させた。アッセイプレートの各ウェルに２ＭのＨ２ＳＯ４を１００μＬ添加することによって、発色を停止させた。アッセイプレートを読み取り、反応停止後３０分以内に４５０ｎｍで光学密度（ＯＤ）を決定した。アッセイデータの印刷物を提供するＳｏｆｔＭａｘＰｒｏプレートデータおよび分析テンプレートと併用して、マイクロプレートリーダーを使用した。
【０４９２】
９．ニック入りβ２ＧＰＩの調製
ヒト血漿および組み換えヒトβ２ＧＰＩから精製したβ２ＧＰＩの試料を両方ともプラスミンで処理（酵素加水分解）して、ニック入りβ２ＧＰＩの大部分を含有する試料を調製した。ニック入りβ２ＧＰＩは、初期研究では均質になるまで精製しなかったが、ニック入りβ２ＧＰＩは、ニックのない、すなわち「インタクトな」β２ＧＰＩを超えて存在することが決定された。
【０４９３】
１０．全β２ＧＰＩのためのアッセイ
使用した抗体に関する製造者の仕様に基づいて、全β２ＧＰＩを検出するアッセイを設計した。これは、ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから市販されている抗体を使用するアッセイであり、このアッセイでは、プレートをβ２ＧＰＩに対する捕捉抗体でコーティングし、検出抗体として抗β２ＧＰＩ−ＨＲＰ共役体を使用して、全ての結合β２ＧＰＩを検出する。抗体カタログ番号は、捕捉抗体、ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ番号Ａ２２９９−８１Ａ、親和性精製抗β２ＧＰＩおよび検出抗体、ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ番号Ａ２２９９−８１Ｂ、ペルオキシダーゼ共役抗β２ＧＰＩである。
【０４９４】
捕捉抗体の１：１００の希釈物を、炭酸塩緩衝液（５０ｍＭの重炭酸ナトリウム）中にｐＨ９．６で調製した。１００μＬをＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに添加し、室温でインキュベートした。Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する１×ＰＢＳ緩衝液でプレートを洗浄し、その後１％のＢＳＡを含有する１ウェル当たり２００μＬのアッセイ希釈剤で遮断し、３７℃でインキュベートした。精製β２ＧＰＩを使用して、アッセイ希釈剤中５００ｎｇ／ｍＬから始まる２倍希釈標準曲線を準備した。試料をアッセイ希釈剤中で希釈して、標準曲線の直線領域内の濃度を達成した。遮断インキュベーション後、プレートを洗浄し、続いて１ウェル当たり１００μＬの標準曲線および試料を２連または３連で添加した。標準曲線および試料の添加後、プレートを３７℃でインキュベートした。検出抗体を、アッセイ希釈剤で１：４００に希釈した。試料および標準曲線のインキュベート後、プレートを洗浄し、続いて１ウェル当たり１００μＬの検出抗体を添加した。プレートを３７℃でインキュベートした。二次抗体のインキュベーション後、プレートを洗浄し、その後ＴＭＢで発色させた。４５０ｎｍでプレートをプレートリーダーで読み取り、試料濃度を標準曲線から決定した。
【０４９５】
Ｂ．結果
１．機能性β２ＧＰＩとニック入りβ２ＧＰＩとの区別
ヒト血漿から精製したβ２ＧＰＩ（「ヒト」）または組み換え発現後のβ２ＧＰＩ（「組み換え」）をプラスミンで処理して、ＰＳに結合しない、プラスミン切断された（ニック入り）β２ＧＰＩの大部分を含有するβ２ＧＰＩ試験試料を調製した。本アッセイ（表７Ｂ）において、かつ市販の捕捉抗体および検出抗体を使用して全β２ＧＰＩを検出するように設計したアッセイ（表７Ａ）を使用して、これらの試料を、無プラスミン（インタクトな）β２ＧＰＩ、および各々の５０：５０混合物と共に試験した。結果を以下に示す。
【表１９】
2020515637.tif 000164
【表２０】
2020515637.tif 000165
【０４９６】
市販の抗体を使用するいわゆる「全β２ＧＰＩアッセイ」（表７Ａ）および本発明の「機能性β２ＧＰＩアッセイ」（表７Ｂ）は両方とも、類似した濃度のβ２ＧＰＩ（およそ１４１ｎｇ／ｍＬおよび１３６ｎｇ／ｍＬ）が読み取られることがまず理解され得る。全β２ＧＰＩアッセイを使用しても、プラスミン処理した組み換えβ２ＧＰＩを検出する上で本質的な違いはなく、ヒト血漿からのプラスミン処理したβ２ＧＰＩの量が増加するにつれて、中程度の検出の低減のみが存在した（１４１から１０４ｎｇ／ｍＬ）。対照的に、機能性β２ＧＰＩアッセイを使用すると、組み換えまたは血漿由来のプラスミン処理したβ２ＧＰＩの量の増加は、有意な結合の低減をもたらす（１３６から３３ｎｇ／ｍＬ）。
【０４９７】
したがって、アッセイの設計と一貫して、これらの結果は、本アッセイが、ニック入りβ２ＧＰＩとは対照的に、機能性β２ＧＰＩ（すなわち、ＰＳおよびバビツキシマブの両方に結合するβ２ＧＰＩ）を効果的に検出することができることを示す。これにより、本発明の機能性β２ＧＰＩアッセイは、ＰＳに結合するβ２ＧＰＩと一緒に（ＰＳに結合しない）ニック入りβ２ＧＰＩも検出する市販のアッセイキット（および市販の抗β２ＧＰＩ抗体を使用するアッセイ）から区別される。
【０４９８】
２．機能性β２ＧＰＩの定量化
アッセイは、流体試料中の機能性β２ＧＰＩ（ＰＳおよびバビツキシマブの両方に結合するβ２ＧＰＩである）の量を決定に成功することができる。このアッセイは現在、再現性があるβ２ＧＰＩ標準曲線を準備するために慣例的に実行されている。これに関して、４パラメータロジスティック適合が使用され、これは非線形回帰分析に使用される統計的等式である。４パラメータ適合式は、
【数１】
2020515637.tif 000166
であり、式中、
Ａは、Ｘ軸の低い値に対する漸近線（すなわち、曲線の平坦部分）に対応するＹ値であり、
Ｂは、曲線の中心にある漸近線から、曲線がいかに素早く推移するかを説明する係数であり、一般に勾配係数と呼ばれ、
Ｃは、ＡとＤとの中間点に対応するＸ値であり、一般にＥＣ５０と呼ばれ、
Ｄは、Ｘ軸の高い値に対する漸近線に対応するＹ値である。
【０４９９】
機能性β２ＧＰＩについての標準曲線を生成し、そのような標準曲線から、血漿または血清試料などのヒト血液試料中の機能性β２ＧＰＩの濃度を決定することができる。主に正確さのためではあるが、また試料調製の経済性のためにも、標準曲線はｎｇ／ｍｌ（ナノグラム／ｍｌ）で準備される。正常なヒト集団におけるβ２ＧＰＩの平均レベルは約２００μｇ／ｍｌ（マイクログラム／ｍｌ）であるため（Ｍｅｈｄｉら、１９９９；Ｍｉｙａｋｉｓら、２００４）、標準曲線は試験試料がアッセイでの分析前に希釈されるという期待の下で準備される。希釈した血漿または血清試験試料をアッセイにかけ、その後、希釈係数を調整することによって患者のβ２ＧＰＩ濃度を計算することができる。
【０５００】
このアッセイは現在、上記の第ＩＩＩ相試験の患者における機能性β２ＧＰＩのレベルを決定するために使用されており、その結果を、以下の実施例ＸＩＩＩ、ならびに実施例ＸＩＶおよび実施例ＸＶＩＩに提示する。
【０５０１】
３．代替的な同等のアッセイ構成要素およびステップ
本実施例の節Ａ１〜Ａ８に記載される特定の材料、装置、およびアッセイステップに加えて、機能性β２ＧＰＩを検出および定量化するためのアッセイの概念から逸脱することなく、構成要素および方法ステップにおける変形がなされ、実行され得る。以下の結果は、関連薬剤が節Ａ１〜Ａ８に記載される薬剤に取って代わり得ること、および本質的に同じ結果が達成されることを示す。
【０５０２】
特定の好ましいＥＬＩＳＡプレートは、脂質吸着に最適化されたものであり、これは上記の節Ａ１のＥＬＩＳＡプレートに取って代わるように使用することができる。脂質吸着に最適化されたＥＬＩＳＡプレートが既知であり、それはより良好な脂質（ＰＳ）結合を提供する表面化学を有する。１つのそのようなＥＬＩＳＡプレートは、新たなアッセイ形式で使用されているＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ＰｏｌｙＳｏｒｐ（登録商標）プレートである。
【０５０３】
上記の節Ａ４のヘキサンに基づくＰＳコーティング方法には、好ましくは、（ヘキサンの使用を回避することによって）ユーザに特定の安全性利益を提供することができるイソプロパノールに基づくＰＳコーティング方法が取って代わってもよい。新たなアッセイ形式において、コーティング緩衝液としてイソプロパノールを使用する際には、イソプロパノール中に希釈した１０μｇ／ｍＬのＰＳ抗原を使用してＥＬＩＳＡプレートをＰＳ抗原でコーティングし、インキュベーション時間は９０分間である。
【０５０４】
有効なβ２ＧＰＩ較正曲線を生成するために、β２ＧＰＩを得る任意の既知の方法を用いることができる。例えば、ＨＴＩ（上記の節Ａ６）などの商業販売会社から購入されるものである。明確で再現性のある較正制御のために、代替的なβ２ＧＰＩ調製物もまた開発され得る。１つのそのような好ましい方法は、ＣＨＯ細胞内でβ２ＧＰＩを発現させ、発現されたβ２ＧＰＩを精製することである。
【０５０５】
ＣＨＯ細胞由来のβ２ＧＰＩの好ましい精製は、混入物を除去し、清澄化された採取物が０．２μｍのフィルタを通過することを可能にする、採取物の清澄化、クロマチン抽出ステップ；清澄化された採取物を緩衝液交換し、体積を増加させずに、その伝導率を低下させるための、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）システムの使用；さらなる混入物を除去するための、アニオン流スルーモードにおけるＣａｐｔｏ  Ａｄｈｅｒｅ（ＧＥ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）ステップ；凝集物および他の混入物を除去し、溶出液を濃縮し、任意の緩衝液交換を促進するための、Ｎｕｖｉａ（商標）Ｓを使用する強カチオンステップ；ならびに任意で、精製β２ＧＰＩを緩衝液交換し、濃縮するための、ＴＦＦシステムの使用を含む。β２ＧＰＩはこのように発現および精製され、新たなアッセイ形式において使用されている。
【０５０６】
上記の節Ａ３に加えて、特定の好ましいバビツキシマブ−ＨＲＰ検出剤は、２つの一般に使用されている非専売の架橋剤であるＳＭＣＣ（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート）またはＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート）のいずれかを使用して架橋された共役体である。他の好ましいバビツキシマブ−ＨＲＰ検出剤は、ＨＲＰの数がバビツキシマブ抗体の数を超える共役体、特に２：１または３：１のＨＲＰ：バビツキシマブ比をもたらし、本質的に遊離（非共役）抗体を有しないものである。そのようなコンジュゲートは、Ｓ−３００サイズ分類カラムによって精製されて、未反応の反応構成成分が除去される。これらの成分および特性の各々を有するバビツキシマブ−ＨＲＰ検出剤は、Ｃｏｌｕｍｂｉａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、４９８５  Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ  Ｂｌｖｄ．，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，２１７０３から得られ、新たなアッセイ形式において６００ｎｇ／ｍＬで使用されている。
【０５０７】
上記の代替的な構成要素およびアッセイステップのうちの１つ以上が好ましいが、全てのそのような代替物の併用でさえも、本実施例（すなわち、節Ａ１〜Ａ８）において最初に記載したアッセイと本質的に同じ結果をもたらす機能性β２ＧＰＩが提供される。そのような比較結果を以下の表８に示し、この表は、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｂｌｏｏｄ  Ｂａｎｋから得た４つの無作為ヒト試料（ドナー）を使用して、２つの異なるアッセイ形式で測定される機能性β２ＧＰＩレベルを提示する。
【表２１】
2020515637.tif 000167
【０５０８】
実施例ＸＩＩＩ
バビツキシマブ第ＩＩＩ相試験におけるβ２ＧＰＩバイオマーカー分析
上記の機能性β２ＧＰＩアッセイを利用して、本実施例は、実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験の患者における治療前の機能性β２ＧＰＩのレベルを報告する。機能性β２ＧＰＩのレベルを治療結果と相関させることによって、本実施例はまた、バビツキシマブおよびドセタキセルで治療したＮＳＣＬＣ患者におけるものなどの、バビツキシマブ治療の成功のためのバイオマーカーとしての機能性β２ＧＰＩにも関する。
【０５０９】
Ａ．患者における機能性β２ＧＰＩレベル
上記の第ＩＩＩ相試験には５９７人の患者を集めた。第ＩＩＩ相試験における患者の血液試料の収集は、実施例ＸＩ、Ａに記載されている。本分析の時点で、機能性β２ＧＰＩが評価可能な５９２の患者試料が存在した。これらの５９２人の患者の血液試料の部分アリコートを、直前の実施例に記載されるアッセイを使用して機能性β２ＧＰＩについて試験した。
【０５１０】
μｇ／ｍｌでの治療前の機能性β２ＧＰＩのレベルおよび統計の要約を表９に示し、表中、「バビツキシマブ」列はバビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者を指し、「プラセボ」列はドセタキセル単独で治療した患者を指す。
【表２２】
2020515637.tif 000168
【０５１１】
機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは、０．５〜４０２μｇ／ｍｌの範囲であった。バビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者において、機能性β２ＧＰＩは、２２〜３６５μｇ／ｍｌの範囲であった。ドセタキセル単独で治療した患者における機能性β２ＧＰＩの分布は、この研究の全範囲を網羅する（０．５〜４０２μｇ／ｍｌ）。
【０５１２】
各治療群（２０２および１９５μｇ／ｍｌ）について、ならびに研究全体（１９８μｇ／ｍｌ）について、治療前の機能性β２ＧＰＩのレベルは文献に報告されている２００μｇ／ｍｌの平均と一貫している（２０ｍｇ／ｄｌはＭｅｈｄｉら、１９９９によって、および２００ｍｇ／ｌはＭｉｙａｋｉｓら、２００４によって）。
【０５１３】
２００μｇ／ｍｌ以上の治療前の機能性β２ＧＰＩレベルを有する患者のパーセンテージは、バビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者では５６％、およびドセタキセル単独で治療した患者では４９％であることが決定された。
【０５１４】
Ｂ．初期β２ＧＰＩバイオマーカー分析
バビツキシマブ＋ドセタキセル療法を受けている患者における応答の予測因子としての機能性β２ＧＰＩを評価するために実行したサブグループ分析は、生存期間の延長に対する傾向を実証した。
【０５１５】
まず単一カットオフ法を使用して、患者のβ２ＧＰＩデータを評価した。このように最適なカットオフを探索する上で、ステップ１は、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の患者について、高β２ＧＰＩ群対低β２ＧＰＩ群の有意なＯＳ分離を探索することであり、ステップ２は、それらの高β２ＧＰＩ患者について、バビツキシマブ＋ドセタキセル群対ドセタキセル単独群（プラセボ）の有意なＯＳ分離を探索することである。
【０５１６】
評価可能な５７８人の患者に単一カットオフ法を適用することによる、可能性のあるバイオマーカーとしての機能性β２ＧＰＩの初期分析は、驚くべきことに、高β２ＧＰＩを有する患者において、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の１６７人の患者ではｍＯＳが１１．９ヶ月（９５％のＣＩ、９．０〜１４．７）であり、ドセタキセル単独群の１４１人の患者では９．４ヶ月（９５％のＣＩ、７．７〜１１．７）（死亡ＨＲ、０．７７；Ｐ＝０．１）であることを示した。これらの初期分析において、「高β２ＧＰＩ」は、２００μｇ／ｍＬ以上（≧２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルと定義される。これらの分析は単一カットオフに基づいているため、「高β２ＧＰＩ」を有しない患者は、２００μｇ／ｍＬ未満（＜２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩを有する。
【０５１７】
その後、単一カットオフ分析を評価可能な５９２人の患者に拡大した。統計的に有意ではないが、これらの分析もまた、患者が２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルを有するときに、バビツキシマブ＋ドセタキセル群において生存期間が延長する驚くべき傾向を実証した。これらの結果は、図３において、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩについて、カプランマイヤー生存曲線によって表される。５９２人の評価可能な患者のうち、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルを有する患者において、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の１６７人の患者間のｍＯＳは１１．９ヶ月（９５％のＣＩ、９．０〜１４．７）であり、ドセタキセル単独群の１４６人の患者間のｍＯＳは１０．１ヶ月（９５％のＣＩ、８．５〜１１．７）であった（死亡ＨＲ、０．８１；Ｐ＝０．１５５、ＣＩ（０．６０、１．０９））。
【０５１８】
Ｃ．詳細なβ２ＧＰＩバイオマーカー分析
上記の初期分析により、５９２人の評価可能な患者におけるデータのさらなる大規模な分析が促された。これらの分析には、２カットオフ法を使用した（ＫｌｅｉｎおよびＭｏｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ、２００３）。２カットオフ法において、ステップ１は、バビツキシマブ（＋ドセタキセル）で治療した患者の「範囲内」対「範囲外」の有意なＯＳ分離を検索することであり、ステップ２は、「範囲内」の患者のバビツキシマブ群対プラセボ群の有意なＯＳ分離を探索することである。
【０５１９】
５９２人の評価可能な患者における２カットオフ法を使用したこれらの詳細なサブグループ分析は、２００〜２４０μｇ／ｍＬの範囲内の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが、ドセタキセル単独で治療した患者と比較した、バビツキシマブ＋ドセタキセルで治療した患者の全生存期間における利益の予測であるという驚くべき発見をもたらした。これらの結果は、２００〜２４０μｇ／ｍＬの機能性β２ＧＰＩ範囲について、カプランマイヤー生存曲線によって表される（図４）。
【０５２０】
図４の結果を要約すると、２００〜２４０μｇ／ｍＬの範囲の機能性β２ＧＰＩ（「２００、２４０」または「２００≦β２ＧＰＩ≦２４０」）を有する患者において、バビツキシマブ＋ドセタキセル群の９４人の患者間のｍＯＳは１３．２ヶ月（９５％のＣＩ、９．０〜１７．９）であり、ドセタキセル単独群の７７人の患者間のｍＯＳは７．７ヶ月（９５％のＣＩ、６．６〜１２．１）であった（死亡ＨＲ、０．６７、ＣＩ（０．４４、１．００）；ログランクｐ値＝０．０４９）。このため、２００〜２４０μｇ／ｍＬの治療前β２ＧＰＩレベルを有するバビツキシマブ群の患者（試験集団の約３０％）は、同じ範囲のβ２ＧＰＩレベルを有する対照群の患者と比較して、統計的に有意な５．５ヶ月のｍＯＳの改善を経験した。
【０５２１】
２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが、バビツキシマブ治療時に生存期間が延長する傾向を示すという示唆は文献には存在せず、２００〜２４０μｇ／ｍＬの機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが、バビツキシマブで治療した患者の全生存期間における利益を予測するという示唆も存在しない。実際に、バビツキシマブの有意な以前の臨床経験には、そのような結果を示唆するものは何もない。さらに、そのような発見は、広範な前臨床モデリングからのデータと非常に矛盾しており、これは、様々なレベルの血清β２ＧＰＩがバビツキシマブの治療結果に有意な影響を及ぼさないことを示した。特に、臨床前の経験は、むしろ約１０〜２０から５０〜６０μｇ／ｍＬ程度などの非常に低いレベルの血清β２ＧＰＩが、バビツキシマブの結合および活性を支持するのに十分であることを示した（実施例Ｉ、Ｅ）。
【０５２２】
特に、異なるアッセイを使用して、実施例Ｉ、Ｅは、０．１２〜０．２５；０．１２５、０．５〜２；０．９３；ならびに１．４３〜２．８６のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比が、ＰＳへのバビツキシマブの結合を支持する上で有効であることを報告する。バビツキシマブが約２．８６のβ２ＧＰＩ対抗体のモル比で有効であることを示す前臨床データを含む、いくつかの異なる結合および機能試験システムを考慮すると、β２ＧＰＩ対抗体のモル比は３を超える必要はない。本第ＩＩＩ相試験において３ｍｇ／ｋｇの用量のバビツキシマブを使用すると、そのような比は６０μｇ／ｍＬ未満のβ２ＧＰＩレベルで達成される（図５）。参考のために、第ＩＩＩ相試験のβ２ＧＰＩの量、抗体の量、および相当するβ２ＧＰＩ−抗体比を表１０に示し、表中、Ｎ＝定義された各増分内の機能性β２ＧＰＩレベルを有する患者数（５９２人の評価可能な患者から）である。
【表２３】
2020515637.tif 000169
【０５２３】
表１０をモデリングに使用したデータ（実施例Ｉ、Ｅ）と比較すると、第ＩＩＩ相試験の大多数の患者は、バビツキシマブがその最大血中濃度である（５６．４μｇ／ｍｌのＣｍａｘ；実施例ＩＩ；Ｇｅｒｂｅｒら、２０１１）場合ですら、バビツキシマブ結合を飽和させるのに十分過ぎるほどである（２．８６以上）、すなわち、６０μｇ／ｍｌまたは１．２μＭ（表１０、図５）から始まる、β２ＧＰＩ対抗体モル比に一致する機能性β２ＧＰＩのレベルを有していたことが理解され得る。実際に、５９２人の評価可能な患者のうち４人（０．６８％）が、６０μｇ／ｍｌ未満の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルを有していた。さらに、機能性β２ＧＰＩのレベルが増加する（これは試験における大多数の患者に当てはまる）場合、β２ＧＰＩ対バビツキシマブのモル比は２または３よりはるかに高く、例えば、２００μｇ／ｍｌで１０を超え、２４０μｇ／ｍｌで１２を超える。以前の前臨床モデリングまたは臨床経験では、そのようなβ２ＧＰＩレベルまたは比がバビツキシマブ療法に有益であることを指摘するものは何もなかった。むしろ、図５に示されるように、前臨床データは、約１０μｇ／ｍＬ以下から始まる低レベルの血清β２ＧＰＩ（５μｇ／ｍＬのβ２ＧＰＩは０．２５７のβ２ＧＰＩ：抗体モル比を有する）、および約６０μｇ／ｍＬでも簡単に、バビツキシマブの結合および活性を支持するのに十分であることを示した（実施例Ｉ、Ｅ）。
【０５２４】
予想外ではあったが、バビツキシマブの成績についての可能性のあるバイオマーカーとしての、機能性β２ＧＰＩの治療前レベルについてのこれらの詳細な分析は、非常に有望である。したがって、患者における機能性β２ＧＰＩの治療前濃度を測定することは、バビツキシマブ療法に対する応答を予測するための、すなわち、バビツキシマブでの治療から利益を得る可能性がより高いか、または最も可能性が高い患者を選択するための戦略を提供する。これは、特にＮＳＣＬＣにおいて、ドセタキセルと共にバビツキシマブを使用した場合に最初に観察された。しかしながら、機能性β２ＧＰＩおよびＰＳを有する複合体中でのバビツキシマブ結合の機序、および全体的なバビツキシマブの免疫活性化機序は、全てのバビツキシマブ療法に共通しているため、したがって、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩの治療前レベル、例えば、２００〜２４０μｇ／ｍＬの範囲の治療前機能性β２ＧＰＩに基づく患者の選択は、これが治療結果を改善するという根拠の十分な期待の下でバビツキシマブを使用する全ての将来の試験および治療法に含めることができる。実際に、これを支持するさらなる証拠が実施例ＸＩＶおよび実施例ＸＶＩＩに提供されている。
【０５２５】
実施例ＸＩＶ
さらなるバビツキシマブ臨床試験におけるβ２ＧＰＩバイオマーカー分析
実施例ＸＩＩＩにおけるバビツキシマブ治療の成功のバイオマーカーとしての機能性β２ＧＰＩの特定に続いて、本実施例は、機能性β２ＧＰＩアッセイの使用を、より初期のバビツキシマブ臨床試験の試料に拡大する。以下の結果は、同じレベルの機能性β２ＧＰＩがバビツキシマブの成功した治療結果とも相関することを示し、したがって、機能性β２ＧＰＩがバビツキシマブのバイオマーカーとして確認される。
【０５２６】
Ａ．実施例ＩＸの第ＩＩ相試験
実施例ＩＸのＮＳＣＬＣ第ＩＩ相試験（ＰＰＨＭ０９０２）の試料を、実施例ＸＩＩの機能性β２ＧＰＩアッセイを使用して試験した。機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが評価可能な１１９人の患者の試料があり、そのうち４０人の患者がバビツキシマブ３ｍｇ／ｋｇ群におり、７９人の患者が複合対照群（プラセボまたは１ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブ）にいた。
【０５２７】
機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは、全患者について０．５〜２６６μｇ／ｍｌの範囲であった。バビツキシマブ３ｍｇ／ｋｇ＋ドセタキセルで治療した患者では、機能性β２ＧＰＩは０．５〜２６６μｇ／ｍｌの範囲であった。複合対照群の患者における機能性β２ＧＰＩの分布は０．５〜２５７．４μｇ／ｍｌであった。各治療群（バビツキシマブ３ｍｇ／ｋｇでは１６９．４μｇ／ｍｌ、および複合対照群では１７１．８μｇ／ｍｌ）について、ならびに研究全体（１７１．０μｇ／ｍｌ）について、機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは文献に報告されている平均と一貫している。
【０５２８】
２００μｇ／ｍＬ以上（≧２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルとして定義される、「高β２ＧＰＩ」のカットオフを使用して、バビツキシマブ３ｍｇ／ｋｇ群では、２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩが全生存期間の増加と共に増加する傾向があるが、他方の群ではそのような傾向はないと決定した。例えば、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブで治療した患者について、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する者は１６．８ヶ月のｍＯＳを有したのに対して、２００μｇ／ｍＬ未満の「低β２ＧＰＩ」ではわずか９．４ヶ月であった。また、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する患者において、３ｍｇ／ｋｇのバビツキシマブで治療した患者の１６．８ヶ月のｍＯＳは、複合対照群の患者のわずか８．７ヶ月のｍＯＳを超えていた。
【０５２９】
Ｂ．実施例ＶＩＩＩの第ＩＩ相試験
実施例ＶＩＩＩの第ＩＩ相膵臓癌試験の試料（ＰＰＨＭ１００２）を、実施例ＸＩＩの機能性β２ＧＰＩアッセイを使用して試験した。機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが評価可能な３１の患者試料があった。機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは、全患者について８２．５〜３４３．２μｇ／ｍｌの範囲であった。これら３１人の患者について、治療前の機能性β２ＧＰＩの平均レベル（２１９．２μｇ／ｍｌ）は文献に報告されている平均と一貫していた。
【０５３０】
全症例数が小さく、かつ疾患が非常に侵襲性はであるが、２００μｇ／ｍＬ以上（≧２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩの「高β２ＧＰＩ」のカットオフを使用して、バビツキシマブについて、２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩが全生存期間の増加と共に増加する傾向があることを決定した。２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有するバビツキシマブで治療した患者は、７．４ヶ月のｍＯＳを有したのに対して、２００μｇ／ｍＬ未満の「低β２ＧＰＩ」では５．３ヶ月であった。
【０５３１】
Ｃ．ＮＳＣＬＣにおけるバビツキシマブおよびパクリタキセル／カルボプラチンの第ＩＩ相試験
バビツキシマブ併用または非併用のパクリタキセル／カルボプラチンの無作為化非盲検第ＩＩ相試験（ＰＰＨＭ１００１）を、治療歴のない局所進行または転移性非扁平上皮ＮＳＣＬＣを有する患者において実行した。この試験の試料を、実施例ＸＩＩの機能性β２ＧＰＩアッセイを使用して試験した。機能性β２ＧＰＩの治療前レベルが評価可能な８４の患者試料があり、そのうち４４人の患者がバビツキシマブ群に、４０人の患者がパクリタキセル／カルボプラチン群にいた。
【０５３２】
機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは、全患者について０．５〜３２６μｇ／ｍｌの範囲であった。バビツキシマブで治療した患者内では、機能性β２ＧＰＩは０．５〜３２６μｇ／ｍｌの範囲であった。パクリタキセル／カルボプラチン群の患者における機能性β２ＧＰＩは、８８．８〜２９２．７μｇ／ｍｌの範囲であった。各治療群（バビツキシマブでは１８７．９μｇ／ｍｌ、パクリタキセル／カルボプラチン群では１８６．４μｇ／ｍｌ）について、および研究全体（１８７．２μｇ／ｍｌ）について、機能性β２ＧＰＩの治療前レベルは、ここでもまた文献に報告されている平均と一貫している。
【０５３３】
２００μｇ／ｍＬ以上（≧２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルであるものと同じ「高β２ＧＰＩ」のカットオフを使用して、２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩは、ここでもまたバビツキシマブ群においては全生存期間の増加と共に増加する傾向があるが、対照（パクリタキセル／カルボプラチン）群ではそのような傾向はないと決定した。例えば、バビツキシマブで治療した患者について、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する者は１７．０ヶ月のｍＯＳを有したのに対して、２００μｇ／ｍＬ未満の「低β２ＧＰＩ」では１４．２ヶ月であった。また、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する患者では、バビツキシマブで治療した患者の１７．０ヶ月のｍＯＳは、対照群の患者のわずか１３．２ヶ月のｍＯＳを超えた。
【０５３４】
結論として、４つの別個の臨床試験からの実施例ＸＩＩＩおよび実施例ＸＩＶのデータは、機能性β２ＧＰＩレベルが治療結果と相関し、したがって機能性β２ＧＰＩレベルをバビツキシマブ治療の成功のバイオマーカーとして確認することを一貫して示している。
【０５３５】
実施例ＸＶ
バビツキシマブの予後バイオマーカーとしてのＰＤ−Ｌ１発現
本実施例は、実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験の患者における治療前ＰＤ−Ｌ１発現の分析に関する。これらの研究は、バビツキシマブを受けた患者において、ＴＣ０として特徴付けられる陰性ＰＤ−Ｌ１発現が、ＴＣ１／２／３として特徴付けられる陽性ＰＤ−Ｌ１発現と比較して有意に延長されたＯＳと関連することを示した。
【０５３６】
Ａ．方法
実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験では、診断時に得られた保存組織が要望されたが必須ではなかった。多重（６重）定量的免疫組織化学（ＩＨＣ）アッセイ（ＯＰＡＬ（登録商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用し、ＤＡＰＩを使用して、Ｆｅｎｇら、２０１５に記載されているように、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）スライドを、抗体を用いてリンパ（または腫瘍）細胞マーカー：ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＦｏｘＰ３＋、ＰＤ−Ｌ１＋、ＣＤ１６３＋、およびＣＫ＋（サイトケラチン、上皮癌マーカー）のパネルについて染色した。使用したＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｅ１Ｌ３Ｎ（登録商標）ＸＰ（登録商標）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（ＣＳＴ），Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ、カタログ＃１３６８４；Ｍａｈｏｎｅｙら、２０１５）と呼ばれるウサギ抗ＰＤ−Ｌ１抗体であった。ベースラインＰＤ−Ｌ１発現を腫瘍細胞（ＴＣ、すなわちＣＫ＋）について遡及的にスコアリングし、確立されているアッセイおよび分類を使用して、ＰＤ−Ｌ１発現腫瘍細胞を、腫瘍細胞の総数におけるそれらのパーセンテージに従って分類すると（Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒら、２０１６）、以下のとおりであった：ＴＣ３≧５０％、ＴＣ２≧５％かつ＜５０％、ＴＣ１≧１％かつ＜５％、およびＴＣ０＜１％。ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣサブグループ集団のＣｏｘ回帰モデルをＯＳとの相関に使用した。
【０５３７】
Ｂ．結果
診断生検が利用可能な患者のサブセット（５９７人の無作為化患者のうち１１０人）では、ＰＤ−Ｌ１発現の有病率はＴＣ３で５．４５％、ＴＣ２／３で１８．２％、ＴＣ１／２／３で３４．５％、ＴＣ０で６５．５％であった。バビツキシマブ＋ドセタキセル群の患者のｍＯＳは、ＰＤ−Ｌ１発現がより高い患者の６．０ヶ月のみ（ＴＣ１／２／３、≧１％；“ＣＫ＋≧１％”）と比較して、ＰＤ−Ｌ１発現が陰性の患者で１１．５ヶ月であり（ＴＣ０、＜１％；“ＣＫ＋＜１％”）、ＨＲが０．３８（９５％のＣＩ、０．１９〜０．７６）、ｐ値＝０．００４であった（図８Ａ）。ドセタキセル単独群の患者のｍＯＳは、陰性ＰＤ−Ｌ１では１１．１ヶ月（ＴＣ０、＜１％；“ＣＫ＋＜１％”）であり、より高いＰＤ−Ｌ１では１０．４ヶ月（ＴＣ１／２／３、≧１％；“ＣＫ＋≧１％”）であり、ＨＲが０．９３（９５％のＣＩ、０．４７〜１．８７）、ｐ値＝０．８４４であった（図８Ｂ）。
【０５３８】
よって、第ＩＩＩ相試験からの患者のサブセットにおけるベースラインＰＤ−Ｌ１発現は、バビツキシマブ＋ドセタキセルを受けた患者において、陰性ＰＤ−Ｌ１発現（ＴＣ０）が、陽性ＰＤ−Ｌ１発現（ＴＣ１／２／３）と比較して有意に延長されたＯＳと関連することを示した。ＰＤ−Ｌ１発現によるドセタキセル単独群の患者ではＯＳの有意差は観察されなかった。図８Ａ（バビツキシマブ患者）における曲線の明確な分離を、図８Ｂ（対照患者）の上重ね曲線と対比されたい。これらの観察結果も、ＰＤ−Ｌ１陰性の「免疫風邪」腫瘍においてより高い効果を実証しているバビツキシマブと一致している。
【０５３９】
実施例ＸＶＩ
後続免疫療法と組み合わせたバビツキシマブの生存利益
実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験の初期の分析は、ドセタキセル単独群と比較して、バビツキシマブ＋ドセタキセル群において優れたＯＳを示さなかったが、バビツキシマブ治療に対する治療的利益の他の可能性のある指標を特定する目的で、進行中の研究を実行した。本実施例は、バビツキシマブおよびドセタキセル、その後に後続免疫療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）で治療した患者は、ドセタキセル単独、その後に免疫療法で治療した患者とは対照的に、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有することを示す。
【０５４０】
バビツキシマブおよびドセタキセル、またはドセタキセル単独のいずれかによる治療の後、患者の約１５％（５９７人中９１人）が、後続免疫腫（ＩＯ）療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）の形態で後続抗癌療法（ＳＡＣＴ）を受けた。これらの９１人の患者は、治療群間で等しく均衡が取れており、４５人の患者がバビツキシマブおよびドセタキセルによる前治療を受け、４６人の患者がドセタキセル単独による前治療を受けた。
【０５４１】
驚くべきことに、後続ＩＯで治療した場合、プラセボとは対照的に、バビツキシマブでの前治療を受ける患者では、ｍＯＳの劇的な増加が存在することが決定された（図６）。特に、後続ＩＯを受ける患者について、バビツキシマブおよびドセタキセル群では依然としてｍＯＳには到達していない（９５％のＣＩ、１５．２〜該当せず）一方で、ドセタキセル単独群では１２．６ヶ月（９５％のＣＩ、１０．４〜１７．８）であった。ＨＲ＝０．４６およびｐ＝０．００６（図６、表１１）。後続ＩＯを受けなかった患者では、ｍＯＳは、バビツキシマブおよびドセタキセル群で９．２ヶ月、ならびにドセタキセル単独群で１０．２ヶ月であった。ＨＲ＝１．１６およびｐ＝０．１７２。
【表２４】
2020515637.tif 000170
【０５４２】
後続ＩＯ群において、「第１の後続ＩＯ」の特定の免疫療法剤もまた特定した。バビツキシマブ（およびドセタキセル）ならびに後続ＩＯで治療した４５人の患者において、免疫療法剤を表１２に示し、それらは全て、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤＬ−１に結合する遮断抗体の形態のチェックポイント阻害剤抗体（免疫チェックポイント阻害剤）である。具体的には、使用した遮断抗体は、ＣＴＬＡ−４に結合する遮断抗体であるトレメリムマブ、ＰＤ−１に結合する遮断抗体であるニボルマブ、およびＰＤ−Ｌ１に結合する遮断抗体であるデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）であった。
【表２５】
2020515637.tif 000171
【０５４３】
４人の患者が２回以上のＩＯ剤を受けたこと、すなわち、彼らの「第１の後続ＩＯ」療法自体が「ＩＯ併用」、すなわち、第１および第２のチェックポイント阻害剤抗体であったことに留意されたい。したがって、「ＩＴＴ」（治療意図）分析では、バビツキシマブで治療した４５人の患者が第１の後続ＩＯを受けたが、表１２では４７の後続ＩＯ剤が存在する。これは、２人の患者が「ＩＯダブレット」を受けたためである。全体として、４人の患者が２回以上の後続ＩＯを受け、これらの各々がＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）およびトレメリムマブのダブレットを受けた。これら４人の対象のうち、２人はバビツキシマブ群であり、２人はプラセボ群であった。
【０５４４】
後続ＩＯを受ける９１人の患者において、ドセタキセル単独（プラセボ）の治療歴のある患者もまた、トレメリムマブ、ニボルマブ、またはデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）を受けた。加えて、プラセボ群の２人の患者がペムブロリズマブ（以前のＭＫ−３４７５）を受け、プラセボ群の１人の患者がＲＥＧＮ２８１０を受け、これらはどちらもＰＤ−１に結合する遮断抗体である。全体として、プラセボ群における第１の後続ＩＯは、トレメリムマブ（３人）、ニボルマブ（３９人）、デュルバルマブ（３人）、ペンブロリズマブ（２人）、およびＲＥＧＮ２８１０（１人）であり、これは４６人の患者において合計４８の薬剤であり、２人の患者がＭＥＤＩ４７３６−トレメリムマブのＩＯダブレットを受けた。
【０５４５】
結論として、本実施例のデータは初めて、バビツキシマブがヒト患者において免疫療法剤の活性を増強することを示している。したがって、これらの結果は、免疫療法剤、特に免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせたバビツキシマブによる癌患者の進行中および将来の治療を強く支持する。
【０５４６】
実施例ＸＶＩＩ
バビツキシマブおよび後続免疫療法のβ２ＧＰＩバイオマーカー分析
実施例ＸＶＩに示されるように、バビツキシマブ（＋ドセタキセル）および後続ＩＯで治療した患者は、ドセタキセル単独および後続ＩＯで治療した患者よりも著しく良好なｍＯＳを有する。本実施例は、バビツキシマブバイオマーカーとしての機能性β２ＧＰＩの使用をさらに確認するものであり、これは、同じレベルの機能性β２ＧＰＩが免疫療法との併用でのバビツキシマブによる治療の成功とも相関することを示す。
【０５４７】
実施例ＸＩＩのアッセイを使用すると、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩレベルは、第ＩＩＩ相試験を含むバビツキシマブ治療の成功と相関することが示される（実施例ＸＩＩＩ）。２００μｇ／ｍＬ以上（≧２００μｇ／ｍＬ）の機能性β２ＧＰＩの治療前レベルであるものと同じ「高β２ＧＰＩ」のカットオフに基づいて、２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩは、バビツキシマブおよび後続ＩＯで治療した患者では全生存期間の増加と相関するが、後続ＩＯを受けた対照患者では相関しないことを再度決定した（図７Ａおよび図７Ｂ）。
【０５４８】
特に、２００μｇ／ｍＬ以上の機能性β２ＧＰＩを有する患者について、バビツキシマブおよび後続ＩＯで治療した患者ではｍＯＳには未だ到達していない一方で、ドセタキセルおよび後続ＩＯで治療した患者ではｍＯＳは１２．３ヶ月（１０．２〜１７．６）であった（図７Ａ、ｐ＝０．００２）。実施例ＸＩＩＩのデータによって予測されるように、後続ＩＯなしの患者では、対照（９．２ヶ月）と比較して、バビツキシマブで治療した患者（１０．５ヶ月）において２００μｇ／ｍＬ以上のβ２ＧＰＩは依然として全生存期間の増加と共に増加する傾向があったが、曲線の分離は、後続ＩＯ患者について観察されたほどは顕著ではない（図７Ａ）。図７Ａと図７Ｂとを比較すると、バビツキシマブ治療とは対照的に、後続ＩＯありの患者（１８．６ヶ月対１２．３ヶ月）および後続ＩＯなしの患者（１１．６ヶ月対９．２ヶ月）の両方について、対照群の患者では、β２ＧＰＩが２００μｇ／ｍＬ未満であるときに生存期間がより長くなる傾向がある。図７Ｂのデータのさらに詳細な分析は、β２ＧＰＩが２００μｇ／ｍＬ未満である群においてバビツキシマブおよび後続ＩＯで治療した患者（ｎ＝１２）が比較的少数であることによって妨げられる。
【０５４９】
したがって、これらの臨床データは、機能性β２ＧＰＩが、免疫療法と組み合わせた、特にトレメリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、デュルバルマブ、およびアテゾリズマブなどの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、バビツキシマブによる治療の成功のバイオマーカーであることを示す。
【０５５０】
実施例ＸＶＩＩＩ
バビツキシマブのバイオマーカーとしての低インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）
本実施例は、実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験の患者からの血液および組織中の治療前ＩＦＮγの測定、およびバビツキシマブの可能性のあるバイオマーカーとしてのＩＦＮγの分析に関する。ＯＳの統計的に有意な分離が、バビツキシマブおよびドセタキセルで治療された患者において低い治療前血清ＩＦＮγを支持するように観察された一方、ＯＳにおける差は、ドセタキセル単独（プラセボ）群において観察されなかった。
【０５５１】
Ａ．方法
実施例Ｘの第ＩＩＩ相試験では、治療前の保存生検は任意であり、主に多重ＩＨＣ用に収集された。可能であれば、腫瘍内ＩＦＮγを含む残りの腫瘍標本における免疫遺伝子発現を、Ｆｌｕｉｄｉｇｍ（登録商標）ベースの遺伝子発現プラットフォーム（Ｓｉｒｏｎａ  ＤＸ，Ｌａｋｅ  Ｏｓｗｅｇｏ，ＯＲ，ＵＳＡ）を使用して分析した。
【０５５２】
血清は、第ＩＩＩ相試験の全ての無作為化ＮＳＣＬＣ患者からのスクリーニング時、ならびに治療中定期的におよび疾患の進行時に単離した。血清試料中のＩＦＮγレベルを、Ｓｉｍｏａ（登録商標）（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ）アッセイ（Ｍｙｒｉａｄ  ＲＢＭ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を使用して評価した。５９７人の無作為化患者のうち５８２人からの治療前血清試料が、ＯＳとの相関に利用可能であった。
【０５５３】
カプランマイヤー統計的手法およびＣｏｘ比例ハザードモデルを利用して、２０１７年２月２８日付けの第ＩＩＩ相試験（実施例Ｘ）から切り出したデータに基づき、周辺（および腫瘍内）ＩＦＮγのＯＳとの相関を評価および対比した。ＩＦＮγ分類によるＯＳも、実施例ＸＶＩに記載されるように、免疫チェックポイント阻害剤を用いた後続抗癌療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）の有無に関わらず相関していた。
【０５５４】
Ｂ．結果
腫瘍内ＩＦＮγ遺伝子発現データが限られているため（ｎ＝３３）、腫瘍性ＩＦＮγについての統計的相関は不可能であった。
【０５５５】
血清ＩＦＮγについては、バビツキシマブおよびドセタキセル群における治療前血清ＩＦＮγの中央値は０．０９３ｐｇ／ｍＬであると決定された。いずれかの群の各患者を、０．０９３ｐｇ／ｍＬのＩＦＮγの中央値をカットオフとして使用して、治療前血清「ＩＦＮγ高」（カットオフ以上）または「ＩＦＮγ低」（カットオフ未満）に分類した。
【０５５６】
ＩＦＮγ低群のバビツキシマブおよびドセタキセルで治療した患者では、統計的に有意なＯＳの増加が観察されたが、ドセタキセル単独で治療した患者では、ＯＳの差は観察されなかった。具体的には、バビツキシマブおよびドセタキセル群において、ｍＯＳは、ＩＦＮγ低で１１．９ヶ月であったのに対し、ＩＦＮγ高では９．２ヶ月であった。ｐ＝０．０４６。対照的に、ドセタキセル単独群について、ｍＯＳは、ＩＦＮγ低で１１．１ヶ月であったのに対し、ＩＦＮγ高では１０．６ヶ月であった。
【０５５７】
後続ＩＯを受けた治療前ＩＦＮγが低い患者（実施例ＸＶＩ）では、ｍＯＳは、バビツキシマブおよびドセタキセル群で達成されず、対応するドセタキセル単独群で１２．１ヶ月であった。ＨＲ＝０．２４およびｐ＜０．００１。後続ＩＯを受けなかったＩＦＮγが低い患者では、ｍＯＳは、バビツキシマブおよびドセタキセル群で１０．５ヶ月であり、対応するドセタキセル単独群で１０．８ヶ月であった。ＨＲ＝１．１７およびｐ＝０．３２８。後続ＩＯを受けた治療前ＩＦＮγが高い患者では、ｍＯＳは、バビツキシマブおよびドセタキセルで１３．９ヶ月であり、対応するドセタキセル単独群で１３．５ヶ月であった。ＨＲ＝１．０およびｐ＝０．９９８。後続ＩＯを受けなかったＩＦＮγが高い患者では、ｍＯＳは、バビツキシマブおよびドセタキセル群で９．０ヶ月であり、対応するドセタキセル単独群で９．２ヶ月であった。ＨＲ＝１．１４およびｐ＝０．３７５。
【０５５８】
まとめると、ＩＦＮγ分類およびＳＡＣＴ−ＩＯ分類の両方による分析により、後続ＩＯを受けた治療前ＩＦＮγが低い患者間で、バビツキシマブおよびドセタキセル群を支持するＯＳの統計的に有意な差が確認された（ＨＲ＝０．２４、ｐ＜０．００１）。後続ＩＯに関わらず、治療前ＩＦＮγが高い患者では、バビツキシマブとプラセボの間にＯＳの差は観察されなかった。
【０５５９】
全体として、これらの臨床データは、バビツキシマブが免疫応答を調節して免疫療法剤の活性を増強するという機序的所見を支持する。実施例ＸＶＩのデータと合わせて、これらの結果は、バビツキシマブをチェックポイント阻害剤などの免疫療法剤と組み合わせて使用する、癌患者のさらなる臨床治療を支持する。
【０５６０】
実施例ＸＩＸ
ＣＢＴ−５０１と組み合わせたバビツキシマブによる癌の治療
実施例ＸＶＩに示すように、バビツキシマブおよびドセタキセル、その後に免疫療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）によって患者を治療することは、最初にプラセボおよびドセタキセル、その後に後続免疫療法で治療した患者とは対照的に、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有する。本実施例は、ヒトにおけるＩＯ剤の活性を増強するためのバビツキシマブの使用に関し、特に、ＣＢＴ−５０１と組み合わせたバビツキシマブによる癌患者の治療に関する。
【０５６１】
本実施例は、米国を含む世界中の約１０施設で実施された、以前に治療された転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者における、バビツキシマブを伴うＣＢＴ−５０１の非盲検第ＩＩ相試験を記載する。これは、集積約１２ヶ月（ｎ＝４２）または集積１８ヶ月（ｎ＝６４）、推定経過観察１２ヶ月で設計する。よって、登録は、全症例数が４２人または６４人の患者である。１期には、４２人の患者を登録する。２期では、さらに２２人の患者を登録し、患者は合計６４人となる。
【０５６２】
治験製品、用量、および投与様式は以下のとおりである：バビツキシマブは、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸塩および注射用水を含む無菌の防腐剤を含まない溶液として供給する。バビツキシマブは、臨床プロトコルに従って、毎週少なくとも体重１ｋｇ当たり３ｍｇの静脈内（ＩＶ）注入として、または一律用量として、投与する。ＣＢＴ−５０１はＩＶ注入として投与する。
【０５６３】
目的は以下のとおりである：主目的：客観的奏効率（ＯＲＲ）によって決定される抗腫瘍活性を評価すること；バビツキシマブとＣＢＴ−５０１との組み合わせの安全性および耐容性を特性評価すること；副次的目的、臨床上の有益な奏効率（ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤが１６週間以上続く）を評価すること；全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、および奏効期間（ＤＯＲ）を評価すること；ベースラインのβ２ＧＰ１レベルおよび／またはＩＦＮγおよび／またはＰＤ−Ｌ１発現によってＯＲＲを評価すること；予備的／相関的目的、アテゾリズマブと組み合わせたバビツキシマブで治療された患者の免疫変化を評定すること；ならびに腫瘍および免疫細胞に対するＰＤ−Ｌ１発現のレベルを臨床転帰と相関させること。
【０５６４】
試験設計は、以前に治療されたＮＳＣＬＣを有する患者におけるＣＢＴ−５０１およびバビツキシマブの非盲検第ＩＩ相試験である。治療相では、ＣＢＴ−５０１と組み合わせてバビツキシマブを受けている患者の客観的奏効率（ＯＲＲ）を評価するために、Ｓｉｍｏｎの２段階ＭｉｎＭａｘ設計を採用する。１期では、最大４２人の患者が、疾患の進行または許容できない毒性を示すまで、ＣＢＴ−５０１と組み合わせて毎週少なくとも３ｍｇ／ｋｇまたは一律用量のバビツキシマブを受ける。７以上の応答が観察され、２２人の追加の患者を補充してステージ２期に登録する。各患者の治療相はＣ１Ｄ１に開始する。患者は、疾患の進行、毒性による中断、同意の撤回、または研究の終了まで試験治療を継続することになる。治験設計の概略は以下のとおりである。
【表２６】
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【０５６５】
治療後追跡相では、全ての治験治療を中止したが疾患の進行を経験したことがないか、または後続の抗癌療法を開始したことのない患者は、疾患の進行または後続の抗癌療法の開始まで研究スケジュールに従って腫瘍評定および相関評定を受け続ける。
【０５６６】
生存追跡相では、治験治療をもはや受けておらず、かつ疾患の進行を経験したか、または後続の抗癌療法を開始した患者が、生存追跡に入る。生存追跡情報は、死亡、追跡不能、同意の撤回、または研究の終了まで、およそ３ヶ月ごとに収集する。
【０５６７】
診断および主な選択基準／除外基準は以下のとおりである。
選択基準
１．あらゆる治験に特別な評価の前に、施設内審査委員会／独立倫理審査委員会が承認したインフォームドコンセントを理解し署名することができる。
２．目標集団
ａ）インフォームドコンセント署名日に１８歳以上である男性または女性。
ｂ）白金系レジメン（ペメトレキセドなどの維持療法が一次レジメンのための構成要素と見なされる）中に事前の進行を有する、組織学的に確認されている転移性非小細胞肺癌。ＥＧＦＲ活性化変異またはＡＬＫ転座が分かっている患者は、適切な標的治療の後に進行している（または適切な標的治療に忍容性がない）はずである。
ｃ）腫瘍組織（または保存組織）またはベースライン研究生検がバイオマーカー評価に利用可能でなければならない。
３．ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準に準拠した断層撮影上で測定可能な疾患。標的腫瘍病変は、進行がそのような病変において実証されている場合、以前に照射された領域にあり得る。
４．Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）の一般状態で０または１。
５．適正な臓器機能を証明する臨床要件：
ａ）血液学：
絶対好中球数［ＡＮＣ］が１，０００細胞／μＬ以上である。
血小板が１００，０００細胞／μＬ以上である。
ヘモグロビンが９ｇ／ｄＬ以上である。
ｂ）腎臓
血清クレアチニンが１．５×ＵＬＮ以下であるか、または血清クレアチニンが１．５×ＵＬＮ超の場合、測定もしくは計算クレアチニンが６０ｍＬ／分超である。クレアチニンクリアランスは、施設／研究所基準を使用して計算してもよい。
ｃ）肝臓
総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ以下であるか、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である患者については直接ビリルビンがＵＬＮ未満である。
ＡＳＴおよびＡＬＴが２．５×ＵＬＮ以下であり、肝転移のある患者ではＡＬＴおよび／またはＡＳＴが５×ＵＬＮ以下であってもよい。
ｄ）凝固［検討中］
ＩＮＲまたはＰＴが抗凝固剤の意図された使用に推奨される範囲を超えない限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除いて、ＩＮＲまたはＰＴが１．５×ＵＬＮ未満である。
ａＰＴＴが抗凝固剤の意図された使用に推奨される範囲を超えない限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除いて、ａＰＴＴが１．５×ＵＬＮ未満である。
６．生殖状態
ａ）女性患者は、１日目から１週間以内の血清ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈｃＧ）検査が陰性でなければならない（妊娠検査は両側卵巣摘出術および／または子宮摘出術を受けた患者または閉経から１年を超えている患者には不要）。
ｂ）生殖能力のある（すなわち、外科的不妊状態でも閉経後でもない）全ての患者は、治験責任医師が決定して、治験治療の最後の投与の間およびその後５ヶ月間、非常に効果的な避妊方法を使用することに同意しなければならない。
【０５６８】
除外基準
１．試験１日目（Ｃ１Ｄ１）の２週間前以内に別の抗癌療法または治験薬による治療を受けている。
２．抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、または抗ＰＤ−Ｌ２療法を以前に受けている［検討中］。
３．過去の療法に関連したグレード１を超える有害事象が持続している。
例外：過去の療法に起因したグレード２の神経障害および脱毛症は認められる。
４．以下を除く過去の悪性腫瘍の病歴：
根治的に治療された非黒色腫皮膚癌を有した。
再発の証拠なしに５年以上前に根治的に治療された固形腫瘍を有した。
治験責任医師の意見では治験治療効果の決定に影響を及ぼさないであろうその他の悪性腫瘍の病歴がある。
５．治験１日目（Ｃ１Ｄ１）の４週間前以内に血液製剤（血小板または赤血球を含む）の輸血またはコロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、または組み換えエリスロポエチンを含む）の投与を受けている。
６．活動性中枢神経系（ＣＮＳ）転移および／または癌性髄膜炎が分かっている。
注：過去に治療を受けた脳転移を有する患者は、安定している（治験治療の最初の投与前の少なくとも４週間（ＭＲＩまたはＣＴスキャンのいずれかの評定で同一の画像診断法を使用して）撮像によって進行の証拠がなく、いずれの神経症状もベースラインに戻っている）、新たな脳転移または拡大する脳転移の証拠がなく、治験治療前の少なくとも７日間はステロイドを使用していない条件で、参加してもよい。この例外には、臨床的安定性に関わらず除外される癌性髄膜炎は含まれない。
７．試験１日目の７日前以内に免疫不全の診断または全身ステロイド療法を受けている。ＨＩＶの病歴が分かっている、活動性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎が分かっている。
８．過去２年以内に全身治療を必要とした（すなわち、疾患修飾剤、コルチコステロイド、または免疫抑制薬の使用による）活動性自己免疫疾患を有した。補充療法（例えば、チロキシン、インスリン、または副腎もしくは下垂体機能不全のための生理的コルチコステロイド補充療法など）は、全身治療の一種とは見なされない。
外用コルチコステロイド、またはコルチコステロイドを含有する点眼薬の使用は、許容される。
吸入ステロイドは除外される。
コルチコステロイドの生理的用量の使用は、治験依頼者との協議の後、承認され得る。
９．全身療法を必要とする活動性感染症を有した。
１０．非感染性肺炎の現在の証拠を有する。
１１．間質性肺疾患の病歴を有する。
１２．治験責任医師の裁量により患者を危険にさらす可能性があるとされるあらゆる他の併存疾患を有する。
１３．アテゾリズマブの最後の投与後９０日およびバビツキシマブの最後の投与後３０日を含む治験の予定期間内に、妊娠中となるか、または授乳中となるか、または妊娠予定であるか、または子の父親となる。
１４．試験１日目から３０日以内に生ウイルスワクチン接種を受ける。生ウイルスを含まない季節性インフルエンザワクチンは許可される。
１５．バビツキシマブ、アテゾリズマブ、またはそれらの添加剤のいずれかに対する過敏症の病歴がある。
１６．二次治癒による創傷治癒を含む深刻な非治癒性創傷を有する。
１７．Ｃ１Ｄ１の４週間前以内に大手術を受ける。
１８．バビツキシマブによる過去の療法を受けたことがある。
【０５６９】
評価基準は以下のとおりである：
安全性：
有害事象（ＡＥ）。
臨床検査：血液学（血小板による全血球算定および鑑別）、生化学（腎臓、肝臓を含む）、甲状腺機能検査、および抗薬物抗体（ＡＤＡ）。
バイタルサイン評価（心拍数、収縮期血圧および拡張期血圧）、ＥＣＯＧ一般状態、および身体検査を含む、その他の安全性評価。
有効性：
ＯＲＲ：最良全奏効が完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）である患者の割合。
ＤＯＲ：奏効期間（ＤＯＲ）：最初のＣＲまたはＰＲ（最初に記録されたほう）から最初に記録された腫瘍進行（ＲＥＣＩＳＴ  １．１による）または何らかの原因による死亡のいずれか早いほうまでの日数。
ＰＦＳ：試験治療の最初の投与から最初に記録された腫瘍進行（ＲＥＣＩＳＴ  １．１による）または何らかの原因による死亡のいずれか早いほうまでの日数。
ＯＳ：治験薬の最初の投与から何らかの原因による死亡までの日数。
【０５７０】
予備的：
ＩＦＮγおよびＰＤ−Ｌ１状態などの免疫相関
β２−ＧＰ１の血清濃度
【０５７１】
統計的考察：
全症例数：
Ｓｉｍｏｎの２段階ＭｉｎＭａｘ設計を用いて、研究が２期を通過するかどうかに応じて、４２人または６４人の患者が登録される。
【０５７２】
データ分析：
有効性：
ＯＲＲは、Ｃｌｏｐｐｅｒ−Ｐｅａｒｓｏｎ直接法を使用して、９５％の信頼区間（ＣＩ）で報告される。ＰＦＳ、ＤＯＲ、およびＯＳを含む、事象までの時間エンドポイントは、Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒの積極限法を使用して要約され、グラフで表示される。
【０５７３】
安全性：
安全性評価は、任意の量の治験治療（バビツキシマブおよび／またはアテゾリズマブ）を受ける全ての患者からのデータを使用して行う。ＡＥ評価は、治療中に発生した事象に焦点を当てる。全体的な安全性プロファイルを、任意のＡＥまたは臨床検査の異常の種類、頻度、重症度、発症のタイミング、期間、および治験治療との関係によって特性評価する。任意の重篤な有害事象（ＳＡＥ）または治験治療の中止につながるＡＥの列挙および説明を行う。免疫原性も評定する。ＡＥ（重篤と見なされるものを含む）、検査結果、および抗薬物抗体（ＡＤＡ）データについての作表が提供する。
【０５７４】
予備的／相関的：
臨床転帰に対するＰＤ−Ｌ１発現の相関を含む免疫効果を評価する。
【０５７５】
実施例ＸＸ
実施例ＸＶＩに示すように、バビツキシマブおよびドセタキセル、その後に免疫療法（ＳＡＣＴ−ＩＯ）によって患者を治療することは、プラセボおよびドセタキセル、その後に後続免疫療法で治療した患者とは対照的に、統計的に有意なより良好なｍＯＳを有する。本実施例は、ヒトにおけるＩＯ剤の活性を増強するためのバビツキシマブの使用に関し、特に、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたバビツキシマブによる癌患者の治療に関する。
【０５７６】
本実施例は、転移性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）または転移性胃食道癌における抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法中に進行した患者における抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の治験責任医師の選択によるバビツキシマブの非盲検第ＩＩ相試験を記載する。本臨床試験は、米国を含む全世界で約１０施設で実施される。本臨床試験の目的は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１単剤療法による過去の結果と比較して、併用療法に由来する臨床的に意義のある改善を確認すること、および併用療法への応答が他のバイオマーカーサブグループよりも統計的に有意であるバイオマーカーサブグループが存在するかどうかを確認することである。
【０５７７】
治験製品、用量、および投与様式は以下のとおりである：バビツキシマブは、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸塩および注射用水を含む無菌の防腐剤を含まない溶液として供給する。バビツキシマブは、臨床プロトコルに従って、毎週またはそれよりも低い頻度で、体重１ｋｇ当たり少なくとも３ｍｇ、かつ１０ｍｇ／ｋｇ以下の静脈内（ＩＶ）注入として、または一律用量として、投与する。抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法は、それらのラベルに従って、または併用用量探求試験を介して確立されたレジメンで投与する。
【０５７８】
本臨床試験は、バイオマーカーの状態に従って患者を層別化することによって実施される。バイオマーカーには、患者のベースライン免疫状態を評定するために、ベースラインβ２ＧＰ１レベルおよび／またはＩＦＮγおよび／またはＰＤ−Ｌ１発現が含まれるが、これらに限定されない。
【０５７９】
実施例ＸＸＩ
本実施例は、ヒトにおけるＩＯ剤の活性を増強するためのバビツキシマブの使用に関し、特に、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせたバビツキシマブによる癌患者の治療に関する。
【０５８０】
本実施例は、ＰＤ−１阻害剤を受けている間に進行した再発／転移性扁平上皮頭頸部癌（ＨＮＳＣＣ）患者におけるペムブロリズマブを伴うバビツキシマブの非盲検第ＩＩ相試験を記載する。本臨床試験は米国で実施される。本臨床試験の目的は、バビツキシマブが、ＰＤ−１阻害剤療法と相乗的に作用して、ＰＤ−１阻害剤を受けている間に進行した再発／転移性扁平上皮頭頸部癌（ＨＮＳＣＣ）患者において有効な抗腫瘍免疫応答を生む可能性があるかどうかを決定することである。
【０５８１】
治験製品、用量、および投与様式は以下のとおりである：バビツキシマブは、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸塩および注射用水を含む無菌の防腐剤を含まない溶液として供給する。バビツキシマブは、臨床プロトコルに従って、毎週またはそれよりも低い頻度で、体重１ｋｇ当たり少なくとも３ｍｇ、かつ１０ｍｇ／ｋｇ以下の静脈内（ＩＶ）注入として、または一律用量として、投与する。ペムブロリズマブはそのラベルに従って投与する。
【０５８２】
予備的相関を使用して、療法に対する応答に関連するバイオマーカーを決定する。ベースライン時、およびサイクル１、２、４の間、および試験終了時に、ＰＤ分析用の血液を採取する。新鮮な生検組織を分析にかけ、可能であれば、療法開始から４〜６週の間に腫瘍コア生検を繰り返す。以下の相関研究を行う：
●β２−ＧＰ１−血液試料を採取して、ＰＳ発現を評価する。
●治療前後のＰＤ−Ｌ１発現−これは腫瘍組織で評定する。
●β２ｍ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＣＳＦ１Ｒ、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＨＬＡ−ＤＲ／ＤＱ／ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＩＤＯ１、およびＴＩＭ３を含む自動免疫組織化学染色。
●ＨＰＶ状態を臨床基準に従って得る。このデータが医療記録で利用可能である場合には、繰り返しの試験は不要である。
●一部の患者に対する体細胞ゲノム分析を検討する。
●研究結果および材料の入手可能性に応じて、免疫関連遺伝子発現プロファイルを評価するための遺伝子発現プロファイリングを含む、保存された材料に対する追加の免疫関連分析を検討する。
【０５８３】
実施例ＸＸＩＩ
本実施例は、ヒトにおけるＩＯ剤の活性を増強するためのバビツキシマブの使用に関し、特に、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせたバビツキシマブによる癌患者の治療に関する。
【０５８４】
本実施例は、進行性肝細胞癌（ＨＣＣ）患者におけるペムブロリズマブを伴うバビツキシマブの非盲検第ＩＩ相試験を記載する。本臨床試験は米国で実施される。本臨床試験の目的は、進行性ＨＣＣ患者におけるペムブロリズマブとバビツキシマブとの組み合わせの全奏効率（ＯＲＲ）を決定することである。
【０５８５】
治験製品、用量、および投与様式は以下のとおりである：バビツキシマブは、ｐＨ５．０の１０ｍＭ酢酸塩および注射用水を含む無菌の防腐剤を含まない溶液として供給する。バビツキシマブは、臨床プロトコルに従って、毎週またはそれよりも低い頻度で、体重１ｋｇ当たり少なくとも３ｍｇ、かつ１０ｍｇ／ｋｇ以下の静脈内（ＩＶ）注入として、または一律用量として、投与する。ペムブロリズマブはそのラベルに従って投与する。
【０５８６】
この研究では、全ての患者がベースライン時（臨床治療用）および治験薬開始後５週〜６週の間（研究のみ）に、ＨＣＣの単一部位の最大２つの画像誘導（ＣＴまたは超音波のいずれか）による針生検を受ける可能性がある。治療前生検は、持続的応答の見込みあるマーカーを評価するために使用する。これには、免疫組織化学による、腫瘍内の腫瘍浸潤リンパ球、単球、およびナチュラルキラー細胞の分析が含まれる。加えて、ＰＤ−Ｌ１発現をベースライン時に分析し、関連する転帰の尺度について分析する。並行して、十分な材料がある場合には、局所腫瘍微小環境を含む腫瘍組織のベースライン特徴を詳述するために、ＲＮＡプロファイリングを用いる。ＲＮＡプロファイリングからの腫瘍の分子的特徴を、ＯＲＲおよび疾患の他の臨床的特徴との関連について分析して、応答のマーカーを探求する。治療後生検は、腫瘍マーカーに対するペムブロリズマブおよびバビツキシマブの効果を決定するために、またＲＮＡプロファイリングのために使用する。臨床転帰は応答のマーカーと相関する。血漿、血清、および全血試料は、治療中、ベースライン時および９〜１２週ごとに採取する。血液試料は、循環腫瘍ＤＮＡまたは腫瘍量の他の特徴を測定するために使用するものであり、疾患応答と相関する。
＊＊＊
【０５８７】
本明細書で開示および主張される組成物および方法の全ては、本開示を踏まえて、必要以上の実験をすることなく作製および実行することができる。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態に関して説明してきたが、本発明の概念、趣旨、および範囲から逸脱することなく、本組成物および方法、ならびに本明細書に記載の方法のステップまたはステップの順序に変更を適用することができることは、当業者には明らかであろう。より具体的には、同じまたは類似の結果を達成しながら、化学的にも生理学的にも関連する特定の薬剤が本明細書に記載の薬剤に取って代わり得ることは明らかであろう。当業者に明らかであるそのような類似の代替および変更は全て、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨、範囲、および概念の範囲内にあると見なされる。
【０５８８】
参考文献
以下の参考文献は、本明細書に示されるものを捕捉する例示的な手順について詳細または他の詳細を提供する範囲で、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
Ａｇｏｓｔｉｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  β２ＧＰＩ  ｕｎｄｅｒ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ”，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１５）：４２３１−４２３８，２０１１．
Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｘｏｓｏｍｅｓ  ｓｅｒｖｅ  ａｓ  ｔｕｍｏｕｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｆｏｒ  ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ｏｗｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ”，Ｊ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌ．Ｖｅｓｉｃｌｅｓ，４：２７５２２，２０１５；ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３４０２／ｊｅｖ．ｖ４．２７５２２．
Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ  ｂｅｔａ−２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｂｙ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  ＥＬＩＳＡ”，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，９２：９１−９７，１９９８．
Ｂｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｓｔｒｏｎｇｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１１８：２６３９−２６４３，２００６．
Ｂｅｓｔ，“Ｖｉｒｕｓｅｓ  ｐｌａｙ  ｄｅａｄ  ｔｏ  ＴＡＭｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ＆Ｍｉｃｒｏｂｅ，１４（２）：１１７−８，２０１３．
Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｅｎｖｅｌｏｐｅｄ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｄｉｓａｂｌｅ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｄｉｒｅｃｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＡＭ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ＆Ｍｉｃｒｏｂｅ，１４（２）：１３６−１４７，２０１３．
Ｂｉｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｉｓ  ａ  ｇｌｏｂａｌ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｉｎ  ｅｆｆｅｒｏｃｙｔｏｓｉｓ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ”，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒ．，２３（６）：９６２−７８，２０１６．
Ｂｒａｈｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｖｅｒｓｕｓ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｑｕａｍｏｕｓ−ｃｅｌｌ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ”，Ｎ．  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３７３（２）：１２３−１３５，２０１５．
Ｃｈａｌａｓａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ  ａｎｄ  Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ２  Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４（７）：１０５１−１０５９，２０１５．
Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  Ｖｅｓｉｃｌｅｓ  Ｅｎａｂｌｅ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｅｎ  Ｂｌｏｃ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓｅｓ”，Ｃｅｌｌ，１６０：６１９−６３０，２０１５．
Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ  ｉｎ  Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．，５１０７−５，ＤＯＩ  １０．１２４５／ｓ１０４３４−０１６−５１０７−５，２０１６．
Ｃｌａｙｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ  ４０  Ｖｉｒｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  ａｎｄ  Ｏｃｃｕｒｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，６３（５）：２２７８−２２８８，１９８９．
Ｃｚｕｃｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ｅｘｐｌｏｉｔｓ  ｅｆｆｅｒｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｃｅｌｌ−ｔｏ−ｃｅｌｌ  ｓｐｒｅａｄ”，Ｎａｔｕｒｅ，５０９：２３０−２３４，２０１４．
ＤａＭａｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ  ｅｘｐｏｓｅｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｓ  ａｎ  ｅｖａｓｉｏｎ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ”，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，２６６：２９−３３，２００７．
Ｄａｖｒａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｌｉｇａｎｄ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＡＭ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ−Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ”，Ｃａｎｃｅｒｓ，８：１０７−１２０，２０１６．
ｄｅ  Ｌａａｔ，Ｄｅｒｋｓｅｎ，Ｕｒｂａｎｕｓ，ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ，“ＩｇＧ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｇｌｙ４０−Ａｒｇ４３  ｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  Ｉ  ｏｆ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ｃａｕｓｅ  ＬＡＣ，ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｓｔｒｏｎｇｌｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ”，Ｂｌｏｏｄ，１０５（４）：１５４０−５，２００５．
ｄｅ  Ｌａａｔ，Ｄｅｒｋｓｅｎ，ｖａｎ  Ｌｕｍｍｅｌ，Ｐｅｎｎｉｎｇｓ，ｄｅ  Ｇｒｏｏｔ，“Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ａｎｔｉ−β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ  ｄｏｍａｉｎ  Ｉ  ｏｆ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ｏｎｌｙ  ａｆｔｅｒ  ａ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｎｇｅ”，Ｂｌｏｏｄ，１０７（５）：１９１６−２４，２００６．
ＤｅＲｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ，ａ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｕｎｅ−ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｆｏｒ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３（８）：９３３−９４４，２０１１．
Ｄｉｇｕｍａｒｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ  Ｐｌｕｓ  Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ａｎｄ  Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ”，Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，８６：２３１−２３６，２０１４．
Ｅｄａ＆Ｓｈｅｒｍａｎ，“Ｃｙｔｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｍａｌａｒｉａ−Ｉｎｆｅｃｔｅｄ  Ｒｅｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｓ  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ”，Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１２：３７３−３８４，２００２．
Ｆｅｈｒｅｎｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ  ｖｅｒｓｕｓ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ（ＰＯＰＬＡＲ）：ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｐｈａｓｅ  ２  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ”，Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３８７（１００３０）：１８３７−１８４６，２０１６．
Ｆｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｔｒａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｆｏｒｍａｌｉｎ−ｆｉｘｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｔｅ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ｊ．ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒ．  Ｃａｎｃｅｒ，３：４７，２０１５．
Ｆｒａｎｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ＥＳＡＴ−６  ｉｓ  ａ  ｌｅｕｋｏｃｉｄｉｎ  ｃａｕｓｉｎｇ  Ｃａ２＋ｉｎｆｌｕｘ，ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｒａｐ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ”，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，５：ｅ１４７４；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｄｄｉｓ．２０１４．３９４，２０１４．
Ｆｒｅｉｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ＣＴＬＡ−４  ａｎｄ  ＰＤ−１  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｍｅｌａｎｏｍａ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，４（６）：５３１−４０，２０１６．
Ｇａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ”，Ｎ．  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３７２（２１）：２０１８−２０２８，２０１５．
Ｇａｕｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  １  ｌｉｇａｎｄ  １”，ＪＡＭＡ  Ｏｎｃｏｌ．，３（２）：２５６−２５９，２０１７．
Ｇｅｒｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ，ａ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１７（２１）：１−９，２０１１．
Ｇｅｒｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  Ｔｒｅａｔｅｄ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｎｏｎｓｑｕａｍｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，１７（３）：１６９−１７６，２０１６．
Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｙ  Ｎｅａｒ−Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒｓ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ”，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ，１２（４）：２４４−２５６，２０１３．
Ｇｏｔｈ＆Ｓｔｅｐｈｅｎｓ，“Ｒａｐｉｄ，Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  Ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  Ｈｏｓｔ  Ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ”，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，６９（２）：１１０９−１１１９，２００１．
Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｕｇｍｅｎｔ  ｔｈｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＰＤ−１  ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｙ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｔｒｉｐｌｅ−ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ”，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１８（１）：５０，ＤＯＩ  １０．１１８６／ｓ１３０５８−０１６−０７０８−２，２０１６ａ．
Ｇｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，“ＬＡＧ３  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｍｕｒｉｎｅ  ｔｒｉｐｌｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ  ｗｈｏｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｓ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｐｏｓｔｅｒ  Ｂ０１９，ＣＲＩ−ＣＩＭＴ−ＥＡＴＩ−ＡＡＣＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２５−２８，２０１６ｂ．
Ｇｒｅｇｏｒｃ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｅｃｏｎｄ−ｌｉｎｅ  ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ  ｏｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（ＰＲＯＳＥ）：ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ−ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ，ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｐｈａｓｅ  ３  ｔｒｉａｌ”，Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１５（７）：７１３−７２１，２０１４．
Ｈａｇｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ  ｋｉｌｌｓ  ｈｕｍａｎ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｒｏｔｏｚｏａｎ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ”，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．，１６９（１）：５１−５８，１９９８．
Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒａｄｉａｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ａｎｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１３（１７）：５２１１−５２１８，２００７．
Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｄａｍａｇｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１５（２２）：６８７１−８０，２００９．
Ｈｏｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｔｏ  Ｉｍｐｒｏｖｅ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎｔｏ  Ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１８：２７５−２８７，２０１１．
Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｒｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｏｒｇａｎｉｚｉｎｇ  ｃｅｎｔｅｒ”，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，１（１３）：１１９１−２００，２００２．
Ｈｕａｎｇ，Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ａｎｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６５（１０）：４４０８−４４１６，２００５．
Ｈｕｎｔ，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｋｒｉｌｉｓ，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｏｒ  ｌｉｐｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｎｔｉｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｆａｃｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２１４１−２１４５，１９９３．
Ｈｕｎｔ  ａｎｄ  Ｋｒｉｌｉｓ，“Ｔｈｅ  ｆｉｆｔｈ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ｃｏｎｔａｉｎｓ  ａ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ（Ｃｙｓ２８１−Ｃｙｓ２８８）ａｎｄ  ａ  ｒｅｇｉｏｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ａｎｔｉｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：６５３−６５９，１９９４．
Ｉｏａｎｎｏｕ，Ｐｅｒｉｃｌｅｏｕｓ，Ｇｉｌｅｓ，Ｌａｔｃｈｍａｎ，Ｉｓｅｎｂｅｒｇ，Ｒａｈｍａｎ，“Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｎ  ｄｏｍａｉｎ  Ｉ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ：ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  Ｒ３９  ｔｏ  Ｒ４３”，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，５６（１）：２８０−９０，２００７．
Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ−Ｕｓｅｒｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，“ＨＩＶ  ａｎｄ  ｍａｔｕｒｅ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ：Ｔｒｏｊａｎ  ｅｘｏｓｏｍｅｓ  ｒｉｄｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｔｒｏｊａｎ  ｈｏｒｓｅ？”，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ，６（３）：ｅ１０００７４０，２０１０．
Ｊｅｎｎｅｗｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ａ  Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ａｒｓｅｎｉｃ−Ｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  Ｂｉｎｄｓ  Ｅｘｐｏｓｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１４（５）：１３７７−１３８５，２００８．
Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，“ＴＩＭ−Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｅｎｖｅｌｏｐｅｄ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｖｉｒｉｏｎ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ”，ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，９（３）：ｅ１００３２３２；２０１３．
Ｊｕｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｌａｐｓｅｓ  ａｆｔｅｒ  Ｓｕｒｇｅｒｙ”，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，１４：３５２−３５９，２０１２．
Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”  ５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１，ｐｐ  ６４７−６６９  ｉｎ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ．
Ｋａｍｂｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＩＶ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ｏｆ  Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈ（β２−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ）”，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．，４２：４５２−４５７，１９８８．
Ｋｅｎｎｅｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｔｔｅｎｕａｔｉｎｇ  ａ  ｓｉｃｋｌｅ  ｃｅｌｌ  ｃｒｉｓｉｓ  ｗｉｔｈ  ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ”，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ，ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｅｈｙ．２０１５．０１．０３７，２０１５．
Ｋｌｅｉｎ＆Ｍｏｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒ，“Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｃｅｎｓｏｒｅｄ  ａｎｄ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｄａｔａ”，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００３（ＩＳＢＮ−１０：０３８７９５３９９Ｘ；ＩＳＢＮ−１３：９７８−０３８７９５３９９１）．
Ｌａｒｓｏｎ，Ｉｙｅｎｇａｒ，Ｋｉｎｊｏ，Ｐａｓｃｕａｌ，Ｋｎａｕｅｒ，Ｃｈａｎｇ，“Ｃｕｓｔｏｍｉｚａｔｉｏｎ，Ｓｃａｌｅ−Ｕｐ  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）Ｂｉｏａｓｓａｙ”，ＩＢＣ’ｓ  ２３ｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓａｙｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｙ  １４−１６，２０１３；Ｐｏｓｔｅｒ  Ｂｏａｒｄ  ＃７．
Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ（ＰＳ）ｉｓ  Ｅｘｐｏｓｅｄ  ｉｎ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ：ＰＳ−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  Ｅｘ  Ｖｉｖｏ”，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．，５６：７１３７−７１４５，２０１５．
Ｌｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｍｕｔａｎｔ  Ｐ５３  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｎ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｔｕｍｏｒｓ”，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．，１２５：４０７−４２０，２０１１．
Ｌｏｎｓｄａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｓ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ  ａｎｄ  Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ”，Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｅｆｅｎｓｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，２０１１  Ｌａｓ  Ｖｅｇａｓ，ＮＶ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｗ１５−０４８．
Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  １  Ｍｅｄｉａｔｅｓ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ３Ｇ４  ａｎｄ  Ａｎｉｏｎｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｏｎ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１（４０）：２９８６３−２９８７１，２００６．
Ｍａｈｏｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，“ＰＤ−Ｌ１  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｉｔｓ  Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｍｏｓｔ  Ｃｌｅａｒｌｙ  Ｄｅｌｉｎｅａｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌｓ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．，３（１２）：１３０８−１３１５，２０１５．
Ｍａｌｌａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｈｅｄ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  Ｐｌａｑｕｅｓ”，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９９：３４８−３５３，１９９９．
Ｍａｒｃｏｎｅｓｃｕ＆Ｔｈｏｒｐｅ，“Ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｔ  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｏｆ  Ｐｈｓｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ａｎｄ  Ａｎｉｏｎｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  Ｃｅｌｌｓ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，１７７８（１０）：２２１７−２２２４，２００８．
ＭｃＮｅｉｌ，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｃｈｅｓｔｅｒｍａｎ，Ｋｒｉｌｉｓ，“Ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｒｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｇａｉｎｓｔ  ａ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｈａｔ  ｉｎｃｌｕｄｅｓ  ａ  ｌｉｐｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ：β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈ）”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７（１１）：４１２０−４１２４，１９９０．
Ｍｅｃｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｖｉｒｕｓ  ｕｔｉｌｉｚｅｓ  ｅｘｏｓｏｍｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０７（４７）：２０３７０−２０３７５，２０１０．
Ｍｅｃｋｅｓ  ａｎｄ  Ｒａａｂ−Ｔｒａｕｂ，”Ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  Ｖｉｒａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，８５（２４）：１２８４４−１２８５４，２０１１．
Ｍｅｈｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈ（β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ）ｇｅｎｅ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｐｌａｓｍａ  ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ”，Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．，１０５：６３７１，１９９９．
Ｍｅｅｒｔｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ＴＩＭ  ａｎｄ  ＴＡＭ  ｆａｍｉｌｉｅｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｄｅｎｇｕｅ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ＆Ｍｉｃｒｏｂｅ，１２（４）：５４４−５５７，２０１２．
Ｍｅｒｃｅｒ  ａｎｄ  Ｈｅｌｅｎｉｕｓ，“Ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｕｓｅｓ  ｍａｃｒｏｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｍｉｍｉｃｒｙ  ｔｏ  ｅｎｔｅｒ  ｈｏｓｔ  ｃｅｌｌｓ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２０：５３１−５３５，２００８．
Ｍｉｙａｋｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  −  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，１１４：３３５−３４６，２００４．
Ｍｏｌｌｅｒ−Ｔａｎｋ＆Ｍａｕｒｙ，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ  ｏｆ  ｅｎｖｅｌｏｐｅｄ  ｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，４６８−４７０（２０１４）５６５−５８０，２０１４．
Ｍｏｏｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ＣＣＲ５−ｔｒｏｐｉｃ  ＨＩＶ−１  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  β−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ”，Ｊ．Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，２０７（４）：７６３−７７６，２０１０．
Ｍｏｒｉｚｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｈｅ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｓｅｒｕｍ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇａｓ６  ｂｒｉｄｇｅｓ  ｖｉｒｉｏｎ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  Ｃ２５４  ｔｏ  ｔｈｅ  ＴＡＭ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  Ａｘｌ  ｔｏ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｖｉｒａｌ  ｅｎｔｒｙ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ，９：２８６−２９８．２０１１．
Ｍｕｒａｔａ−Ｋａｍｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ  Ｅｘｐｌｏｉｔｓ  Ｈｏｓｔ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｆｏｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣａｇＡ  Ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ，７：３９９−４１１，２０１０．
Ｐａｔｔａｎａｐａｎｙａｓａｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｆｅｂｒｉｌｅ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ｍａｌａｒｉａ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐａｒａｓｉｔｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ”，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｐａｒｔ  Ａ，７７Ａ：５１５−５２３，２０１０．
Ｐｅｔｅｒｓｅｎ＆Ｋｒｏｇｆｅｌｔ，“Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ：ａｎ  ｉｎｖａｄｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ？Ａ  ｒｅｖｉｅｗ”，ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，３６：１１７−１２６，２００３．
Ｐｒａｋａｓａｍ  ａｎｄ  Ｔｈｉａｇａｒａｊａｎ，“β２−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  −  Ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  Ｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ”，Ｉｎ  Ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｅｄ．Ａｌｅｎａ  Ｂｕｌｉｋｏｖａ，ＩＳＢＮ：９７８−９５３−５１−０５２６−８，ＩｎＴｅｃｈ，Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｔｅｃｈｏｐｅｎ．ｃｏｍ／ｂｏｏｋｓ／ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ−ｓｙｎｄｒｏｍｅ／ｂｅｔａ２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−ｉ−ｉｎ−ｓｅａｒｃｈ−ｏｆ−ｆｕｎｃｔｉｏｎ，２０１２．
Ｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ａｎｉｏｎｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ”，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１１：１５５１−１５６２，２００５．
Ｒｅｂｅｌａｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ−１  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｓｓａｙ  ｖａｌｉｄａｔｅｄ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｄｉａｇｎｏｓ．Ｐａｔｈｏｌ．，１１（１）：９５，２０１６．
Ｓａｂａｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｙｐｅ  １  Ａｎｄ  Ｔｙｐｅ  ２  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５１：２８４０−２８４５，２００２．
Ｓａｈａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎ  Ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ  Ｌｕｎｇ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｉｍａｇｅ−Ｇｕｉｄｅｄ  Ｍｉｃｒｏｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔｓ”，Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．，１７４：６２−７１，２０１０．
Ｓｃｈｕｂｅｒｔ−Ｕｎｋｍｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐａｔｔｅｒｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ”，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，７５（２）：８９９−９１４，２００７．
Ｓｅａｂｒａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ  ｅｘｐｏｓｅｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ａ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ１  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｒｃｈｅｓｔｒａｔｉｎｇ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｅｖａｓｉｏｎ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，３２４（２）：７４４−７５２，２００４．
Ｓｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｍｐａｉｒｅｄ  Ｔｈｒｏｍｂｉｎ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  β２−Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  Ｎｕｌｌ  Ｍｉｃｅ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（１７）：１３８１７−１３８２１，２０１１．
Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅｕｒａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｅｘｏｓｏｍｅｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｖｉｒａｌ  ｅｎｔｒｙ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，９：４８９３−４８９７，２０１４．
Ｓｏａｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｎｓｉｄｅ−ｏｕｔ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ｖｉｒａｌ  ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４（１２）：１３５７−１３６２，２００８．
Ｓｏｕｚａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ  ＡＫＩ”，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｋｉ．２０１５．２６，２０１５．
Ｓｔａｆｆｏｒｄ＆Ｔｈｏｒｐｅ，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ”，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，１３：２９９−３０８，２０１１．
Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｉｇｈｌｙ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＰＥＴ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｔｕｍｏｒｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ａｎ  Ｉｏｄｉｎｅ−１２４−Ｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｔｈａｔ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ”，ＰＬｏＳ  ＯＮＥ，８（１２）：ｅ８４８６４，２０１３．
Ｓｔｅｉｎｋａｓｓｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｅｄｕｃｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２７７：３８７−３９１，１９９１．
Ｔａｋｅｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ２  ｓｉｂｌｉｎｇｓ  ｗｉｔｈ  β２−ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ”，Ｂｌｏｏｄ，９６：１５９４−１５９５，２０００．
米国特許出願第ＵＳ２０１６／０００９８０５  Ａｌ．号
米国特許第４，８６１，５８１号
米国特許第５，０１９，３６８号
米国特許第５，８８２，６２６号
米国特許第７，２４７，３０３号
米国特許第７，４２２，７３８号
米国特許第７，４５５，８３３号
米国特許第７，５７２，４４８号
米国特許第７，６１１，７０４号
米国特許第７，７９０，８６０号
米国特許第７，９０６，１１５号
米国特許第８，４８６，３９１号
米国特許第８，９５６，６１６号
ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｌｅｉｊ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｈｏｓｔ−Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｌｉｐｉｄ  Ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ：ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｌ  ｌｙｓｏ−ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  ａｎｄ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｉｍｍｕｎｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７（５０）：４８１２２−４８１２９，２００２．
Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ−ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｃａｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ＣＤ４＋ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｅｘｏｓｏｍｅｓ”‘Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８２（３）：１５４８−１５５９，２００９．
Ｗａｎｄｅｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ａｎｄ  ｖｉａｂｌｅ  ｍｅｔａｃｙｃｌｉｃｓ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ”，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，４（５）：ｅ５７３３，２００９．
Ｗａｎｄｅｒｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓ  ａｍａｓｔｉｇｏｔｅｓ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ”，Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３５：１０９−１１９，２０１３．
Ｗａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｇｒｅａｓｙ  Ｆｏｏｔｈｏｌｄ  ｆｏｒ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ”，Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  Ｍｉｃｒｏｂｅ，７：３３８−３３９，２０１０．
Ｗｅｉｈｕａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｉｔｉａｔｅ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ  ｖｉａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６５（２４）：１１５２９−１１５３５，２００５．
Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ｍ１  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｍｙｅｌｏｉｄ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，１（４）：２５６−２６８，２０１３．
Ｙｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ−ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  Ｅｘｏｓｏｍｅ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  Ａｍｙｌｏｉｄ−β  ｂｙ  Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ”，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７（１４）：１０９７７−１０９８９，２０１２．
Ｚａｎｄｂｅｒｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｄｅｐｅｎｄｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｐｒｏｍａｓｔｉｇｏｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｖｉｒｕｌｅｎｔ  ｉｎｏｃｕｌｕｍ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．，１０３（３７）：１３８３７−１３８４２，２００６．
Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｂｉｍｏｄａｌ  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  ｉｎ  Ｍｉｃｅ”，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，１８３：１１４−１２３，２０１４．
Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｅａｒ−Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｅｘｐｏｓｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｉｎ  ａ  Ｍｏｕｓｅ  Ｇｌｉｏｍａ  Ｍｏｄｅｌ”，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，４：３５５−３６４，２０１１．
Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ−Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ  ｂｙ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ”，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０：１−１０，２０１４．
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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