(57)【要約】  本発明は、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するか、または細菌バイオフィルムの形成を防止するための組成物および方法を提供する。慢性副鼻腔炎を処置および防止するための方法および組成物も、本発明において提供される。このような組成物および方法は、本明細書に記載される少なくとも１つのリン脂質化合物と組み合わせて１つ以上の抗生物質化合物を利用する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するか、または細菌によるバイオフィルムの形成を防止する方法であって、前記細菌を治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質と接触させ、それにより、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するか、または前記細菌によるバイオフィルムの形成を防止することを含み、前記少なくとも１つのリン脂質が、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合計で少なくとも約８個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む、方法。
【請求項２】
前記細菌が、哺乳動物対象の副鼻腔通路に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗生物質および前記リン脂質化合物が、乾燥粉末または液体製剤として存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記親水性頭部が、前記リン酸基に結合されているコリン基をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子を有する１つの脂肪酸鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記１つ以上の脂肪酸鎖が、不飽和炭化水素を含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記リン脂質および前記抗生物質が、医薬組成物中に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記リン脂質および前記抗生物質を、同時に組織と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記リン脂質が、ホスホグリセリドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ホスホグリセリドが、１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記リン脂質が、リゾリン脂質である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記リゾリン脂質が、ドデシルホスホコリンまたはテトラデシルホスホコリンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの抗生物質が、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物対象における慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を処置または防止する方法であって、ＣＲＳに罹患しているかまたはＣＲＳを発症するリスクのある対象に、治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を投与し、それにより、前記対象におけるＣＲＳを処置または防止することを含み、前記リン脂質が、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合計で少なくとも約８個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む、方法。
【請求項１６】
前記親水性頭部が、前記リン酸基に結合されているコリン基をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子の１つの脂肪酸鎖を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記リン脂質が、ドデシルホスホコリンまたはテトラデシルホスホコリンである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記リン脂質が、１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記１つ以上の脂肪酸鎖が、不飽和炭化水素を含まない、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記リン脂質および前記抗生物質が、前記対象に同時に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記リン脂質および前記抗生物質が、前記対象に逐次的に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
前記リン脂質および前記抗生物質を含む医薬組成物が、前記対象の前記鼻腔を通して投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記医薬組成物が、乾燥組成物、エアロゾル化組成物、または液体組成物である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記医薬組成物が、吸入器、シリンジデバイス、エアロゾルデバイス、またはネブライザーにより前記対象に投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬組成物が、ステロイドまたは抗真菌化合物と組み合わせて前記対象に投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
副鼻腔症状の改善、鼻腔液もしくは後鼻漏の体積の減少、前記副鼻腔におけるバイオフィルムの一部もしくは完全除去、または前記副鼻腔における炎症の出現の減少について前記対象を検査することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を含む、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を処置または防止するための治療用キットまたは医薬組成物であって、前記リン脂質が、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合計で少なくとも８個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む、治療用キットまたは医薬組成物。
【請求項３０】
前記少なくとも１つのリン脂質化合物が、ドデシルホスホコリン、テトラデシルホスホコリン、または１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）であり、前記少なくとも１つの抗生物質が、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含む、請求項２９に記載のキットまたは組成物。
【請求項３１】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子の１つの脂肪酸鎖を含む、請求項２９に記載のキットまたは組成物。
【請求項３２】
前記リン脂質の前記疎水性尾部が、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む、請求項２９に記載のキットまたは組成物。
【請求項３３】
前記１つ以上の脂肪酸鎖が、不飽和炭化水素を含まない、請求項２９に記載のキットまたは組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月２１日に出願された米国仮出願第６２／５６１，３１３号に対する優先権を主張する。本仮出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、予め形成されたバイオフィルムを破壊するか、または細菌によるバイオフィルムの形成を防止するための組成物および方法、ならびに慢性副鼻腔炎を処置および防止するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
バイオフィルムは、細菌群集によって生成される保護フィルムであり、これは細菌が治療に耐性を有することを可能とし、解決が難しく、時には生命を脅かす慢性感染症を引き起こし得る。バイオフィルム感染症の臨床的治療は、該バイオフィルム感染症が治療困難であり、バイオフィルムマトリックス中での細菌の保護および収容に起因し得るような通常の抗生物質に対する感受性の低下を示すため、特に解決が難しいことがよくある。バイオフィルムは、多くのヒト疾患および状態に関与していることが知られている。
【０００４】
そのような疾患の１つは、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）である。ＣＲＳは、米国だけで約４，０００万人が罹患している疾患である。この疾患は、鼻腔および副鼻腔粘膜の長期的な炎症を伴う。この疾患はまた、肉体的苦痛を引き起こすことに加えて、患者の精神的に健康な状態および日常機能に影響を与える。細菌バイオフィルムが慢性副鼻腔炎の発症の重要な要因であることを支持する強力な証拠がある。この疾患の蔓延にもかかわらず、現在、ＣＲＳを管理および治療するための満足のいく治療法はない。この状態を軽減するために、毎年数十億ドルが医療費に費やされている。
【０００５】
予め形成されたバイオフィルムを破壊するか、または細菌によるバイオフィルムの形成を防止するための有効な組成物および方法について、明らかに、当技術分野において満たされていないニーズがある。さらに、慢性鼻副鼻腔炎を治療および防止するための有効な組成物および方法について、当技術分野において満たされていないニーズがある。本発明は、予め形成されたバイオフィルムを破壊するか、もしくは細菌によるバイオフィルムの形成を防止するため、ならびに／またはＣＲＳを防止するために有用な新規な方法および組成物を提供することによって、これらおよび他の満たされていない医療ニーズに対処する。
【発明の概要】
【０００６】
一態様では、本発明は、予め形成されたバイオフィルムを破壊するか、または細菌によるバイオフィルムの形成を防止するための方法を提供する。本発明のこれらの方法は、典型的には、バイオフィルムおよび／または細菌を治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質と接触させることを伴う。本開示のいくつかの方法では、リン脂質化合物は、典型的には、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合計で少なくとも約８個、９個、または１０個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む。いくつかの方法は、哺乳動物対象の副鼻腔経路に存在するバイオフィルムおよび／または細菌を対象とする。いくつかの方法では、抗生物質およびリン脂質化合物は、乾燥粉末または液体製剤の形態で細菌と接触させる。
【０００７】
本発明のいくつかの方法では、使用されるリン脂質の親水性頭部は、リン酸基に結合されたコリン基をさらに含む。いくつかの実施形態では、リン脂質の疎水性尾部は、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子および５０個未満または２０個未満の炭素原子を有する１つの脂肪酸鎖を含む。他のいくつかの方法では、リン脂質の疎水性尾部は、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子および２５個未満または１５個未満の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、使用されるリン脂質の１つ以上の脂肪酸鎖は、不飽和炭化水素を含まない。様々な実施形態では、リン脂質および抗生物質は、医薬組成物を含む組成物中に存在する。いくつかの方法では、リン脂質および抗生物質を同時に細菌と接触させる。他のいくつかの方法では、リン脂質および抗生物質を細菌と逐次的に接触させる。
【０００８】
本発明のいくつかの方法は、ホスホグリセリドであるリン脂質を使用する。例えば、使用されるリン脂質は、ホスホグリセリド１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）であり得る。他のいくつかの方法では、使用されるリン脂質は、リゾリン脂質またはリゾリン脂質誘導体である。例えば、該方法は、リゾリン脂質誘導体であるドデシルホスホコリンまたはテトラデシルホスホコリンを使用することができる。いくつかの実施形態では、使用される抗生物質は、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含むことができる。
【０００９】
関連する態様では、本発明は、哺乳動物対象における慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を処置または防止するための方法を提供する。これらの方法は、ＣＲＳに罹患しているか、またはＣＲＳを発症するリスクがある対象に、治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を投与することを含む。本開示のいくつかの方法では、投与されるリン脂質は、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合わせて少なくとも約８個、９個、または１０個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む。いくつかの方法では、リン脂質の親水性頭部は、リン酸基に結合したコリン基をさらに含むことができる。
【００１０】
いくつかの実施形態では、使用されるリン脂質の疎水性尾部は、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子および５０個未満または２０個未満の炭素原子の１つだけの脂肪酸鎖を含む。いくつかの他の実施形態では、使用されるリン脂質の疎水性尾部は、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子および２５個未満または１５個未満の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む。いくつかの方法では、使用されるリン脂質の１つ以上の脂肪酸鎖は、不飽和炭化水素を含まない。
【００１１】
いくつかの実施形態では、リン脂質および抗生物質は、対象に同時に投与される。いくつかの他の実施形態では、リン脂質および抗生物質は、対象に逐次的に投与される。いくつかの方法では、リン脂質および抗生物質を含む医薬組成物は、対象の鼻腔を通して投与される。様々な実施形態では、投与される医薬組成物は、乾燥組成物、エアロゾル化組成物、または液体組成物である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、医薬組成物は、吸入器、シリンジデバイス、エアロゾルデバイス、またはネブライザーにより対象に投与される。いくつかの方法では、医薬組成物は、ステロイドまたは抗真菌化合物と組み合わせて対象に投与される。本発明のいくつかの方法は、副鼻腔症状の改善、鼻腔液もしくは後鼻漏の体積の減少、副鼻腔におけるバイオフィルムの一部もしくは完全除去、または副鼻腔における炎症の出現の減少について対象を検査することをさらに含むことができる。
【００１２】
本開示のいくつかの方法は、ホスホグリセリドであるリン脂質を使用する。例えば、使用されるリン脂質は、ホスホグリセリドＤＨＰＣであり得る。他のいくつかの方法では、使用されるリン脂質は、リゾリン脂質またはリゾリン脂質誘導体である。例えば、該方法は、リゾリン脂質誘導体であるドデシルホスホコリンまたはテトラデシルホスホコリンを使用することができる。いくつかの実施形態では、使用される抗生物質は、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含むことができる。
【００１３】
別の態様では、本発明は、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を処置または防止するための治療用キットまたは組み合わせ、ならびに関連する医薬組成物を提供する。そのような治療用キットおよび組成物は、典型的には、少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を含む。本開示のいくつかの方法では、キットおよび関連組成物中のリン脂質化合物は、（ａ）リン酸基を含む親水性頭部、および（ｂ）合計で少なくとも約８個、９個、または１０個の炭素原子を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含む疎水性尾部を含む。いくつかの実施形態では、使用されるリン脂質の疎水性尾部は、少なくとも９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子および５０個未満または２５個未満の炭素原子の１つの脂肪酸鎖を含む。いくつかの他の実施形態では、使用されるリン脂質の疎水性尾部は、それぞれが少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子および２５個未満または１５個未満の炭素原子を有する２つの脂肪酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ホスホグリセリドである。例えば、リン脂質は、ホスホグリセリドＤＨＰＣであり得る。他のいくつかの方法では、リゾリン脂質またはリゾリン脂質誘導体が使用される。例えば、リゾリン脂質誘導体は、ドデシルホスホコリンまたはテトラデシルホスホコリンであり得る。いくつかの実施形態では、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含むことができる。
【００１４】
いくつかの実施形態では、使用されるリン脂質の１つ以上の脂肪酸鎖は、不飽和炭化水素を含まない。いくつかの実施形態では、使用されるリン脂質化合物は、ドデシルホスホコリン、テトラデシルホスホコリン、または１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）であり、使用される抗生物質は、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの一方または両方を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質および／または抗生物質は、液体製剤の乾燥粉末の形態である。
【００１５】
本発明のこれらおよび他の目的および特徴は、本発明の以下の説明を考慮してより完全に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するか、または細菌バイオフィルムの形成を防止することにおいて、抗生物質と組み合わせた場合にポジティブな活性を示したいくつかのリン脂質である、１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）、ドデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１２）、テトラデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１４）の構造を示す。
【図２】リン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２の存在下での、ゲンタマイシンに対する予め形成されたＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１７２０）バイオフィルムの感受性を示す。
【図３】リン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２の存在下での、ゲンタマイシンに対するＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１７２０）バイオフィルム形成の感受性を示す。
【図４Ａ】リン脂質の非存在下（図４Ａ）または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図４Ｂ】リン脂質の非存在下（図４Ａ）または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図４Ｃ】リン脂質の非存在下（図４Ａ）または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図４Ｄ】リン脂質の非存在下（図４Ａ）または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図５Ａ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図５Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図５Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図５Ｃ）である。
【図５Ｂ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図５Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図５Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図５Ｃ）である。
【図５Ｃ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後における予め形成されたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図５Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図５Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図５Ｃ）である。
【図６Ａ】リン脂質の非存在下（図６Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図６Ｂおよび６Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図６Ｂ】リン脂質の非存在下（図６Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図６Ｂおよび６Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図６Ｃ】リン脂質の非存在下（図６Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図６Ｂおよび６Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の６時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図７Ａ】リン脂質の非存在下（図７Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図７Ｂおよび７Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図７Ｂ】リン脂質の非存在下（図７Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図７Ｂおよび７Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図７Ｃ】リン脂質の非存在下（図７Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図７Ｂおよび７Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図８Ａ】リン脂質の非存在下（図８Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図８Ｂおよび８Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図８Ｂ】リン脂質の非存在下（図８Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図８Ｂおよび８Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図８Ｃ】リン脂質の非存在下（図８Ａ）または１０２４もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下（それぞれ図８Ｂおよび８Ｃ）のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６である。
【図９Ａ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図９Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図９Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図９Ｃ）である。
【図９Ｂ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図９Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図９Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図９Ｃ）である。
【図９Ｃ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシン処置の２４時間後におけるＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図９Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図９Ｂ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図９Ｃ）である。
【図１０Ａ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後における予め形成されたバイオフィルムでのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１０Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図１０Ｂ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図１０Ｃ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図１０Ｄ）である。
【図１０Ｂ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後における予め形成されたバイオフィルムでのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１０Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図１０Ｂ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図１０Ｃ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図１０Ｄ）である。
【図１０Ｃ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後における予め形成されたバイオフィルムでのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１０Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図１０Ｂ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図１０Ｃ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図１０Ｄ）である。
【図１０Ｄ】リン脂質の非存在下または５１２、１０２４、もしくは２０４８μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後における予め形成されたバイオフィルムでのＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１０Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２（図１０Ｂ）、ＭＡＰＣＨＯ−１４（図１０Ｃ）、およびＭＡＰＣＨＯ−１６（図１０Ｄ）である。
【図１１Ａ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１１Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１１Ｂ）である。
【図１１Ｂ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１１Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１１Ｂ）である。
【図１２Ａ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１２Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１２Ｂ）である。
【図１２Ｂ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１２Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１２Ｂ）である。
【図１３Ａ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＭＲＳＡの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１３Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１３Ｂ）である。
【図１３Ｂ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＭＲＳＡの細菌増殖（細菌密度）の阻害を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１３Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１３Ｂ）である。
【図１４Ａ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＭＲＳＡバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１４Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１４Ｂ）である。
【図１４Ｂ】リン脂質の非存在下または２５６、５１２、もしくは１０２４μｇ／ｍｌの濃度のリン脂質の存在下のいずれかでのゲンタマイシンによる処置の６時間後におけるＭＲＳＡバイオフィルム形成の防止を示す。調べたリン脂質は、ＭＡＰＣＨＯ−１０（図１４Ａ）およびＭＡＰＣＨＯ−１２（図１４Ｂ）である。
【図１５】リン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２の存在下または非存在下での、ゲンタマイシン処置またはトブラマイシン処置のいずれかに対するＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＴＣ  ８３２５）バイオフィルム形成の感受性を示す。
【図１６】リン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２またはＭＡＰＣＨＯ−１４のいずれかの存在下での、ゲンタマイシン処置に対するＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＴＣ８３２５）バイオフィルム形成の感受性を示す。
【図１７】リン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２またはＭＡＰＣＨＯ−１４のいずれかの存在下での、トブラマイシン処置に対するＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＴＣ８３２５）バイオフィルム形成の感受性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
一実施形態では、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するか、または細菌バイオフィルムの形成を防止するための組成物および方法が提供される。一実施形態では、バイオフィルムは、対象の鼻腔および／または副鼻腔経路に存在する。本開示のこれらの方法は、典型的には、バイオフィルムおよび／または細菌を治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質と接触させることを伴う。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を処置または防止するための組成物および方法に関する。これらの方法は、ＣＲＳに罹患しているか、またはＣＲＳを発症するリスクがある対象に、治療有効量の少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を投与することを含む。
【００１９】
典型的には、そのような方法で使用するための組成物は、本明細書に記載される少なくとも１つの抗生物質化合物および少なくとも１つのリン脂質化合物を含む。本発明者らは、抗生物質およびリン脂質の組み合わせが、ＣＲＳの発症における重要な要因を示す予め形成された細菌バイオフィルムの破壊または細菌バイオフィルムの分解において相乗効果をもたらすことを観察した。具体的には、リン脂質と様々な細菌（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって生成されたバイオフィルムとの相互作用により、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンなどの抗生物質が細菌に細胞毒性を引き起こすことが見出された。予め形成された細菌バイオフィルムを破壊／分解することに加えて、リン脂質および抗生物質の組み合わせも細菌バイオフィルムの形成を防止することも見出された。
【００２０】
本明細書に例示される本発明者の研究によれば、本発明は、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊し、細菌バイオフィルムを防止し、哺乳動物対象におけるＣＲＳを処置および防止するための方法ならびに治療用組成物を含む組成物を提供する。抗生物質およびリン脂質に加えて、細菌バイオフィルムの処置、ＣＲＳの症状の緩和、ならびに／または対象の鼻腔および副鼻腔組織への損傷の軽減に有用な他の化合物または薬剤も、本発明の組成物に含めることができる。
【００２１】
定義
以下の用語は、別段の指示がない限り、次の意味を有する。
【００２２】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明示しない限り、複数の指示対象を含む。
【００２３】
バイオフィルムまたは細菌バイオフィルムとは、多くの異なる表面で増殖することができる１種以上の微生物の集合を指す。細菌は、バイオフィルムおよび浮遊性（ｐｌａｎｋｔｏｎｉｃ）という２つの異なる形態で存在する。バイオフィルムは、推定で９９％の細菌が存在する状態である。バイオフィルムを構成する細菌は、それらの浮遊性対応物と比較して、増殖動態および遺伝子発現に関していくつかの重要な違いを示す。バイオフィルムでは、細胞が互いに付着し、しばしば表面にも付着する。これらの付着細胞は、細胞外高分子物質（ＥＰＳ）で構成される粘液性の細胞外マトリックス内に埋め込まれる。ＥＰＳの成分は、バイオフィルム内の細胞によって生成され、典型的には、細胞外ＤＮＡ、タンパク質、および多糖類の高分子凝集体である。バイオフィルムは、生体表面または非生体表面上に形成され得、自然、産業、および病院環境に広く存在することができる。バイオフィルムを形成する微生物には、細菌、真菌、および原生生物が含まれる。バイオフィルムが慢性副鼻腔炎を含む慢性感染症の病態生理に重要であるという証拠が増えている。
【００２４】
本明細書で使用する場合、コリンという用語は、化学式（ＣＨ３）３Ｎ＋（ＣＨ２）２ＯＨＸ−有する第四級アンモニウム塩のクラスを指し、式中、Ｘ−は、塩化物、水酸化物、または酒石酸塩などの対イオンである。
【００２５】
一般に「慢性副鼻腔炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）」としても知られる慢性副鼻腔炎（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｒｈｉｎｏｓｉｎｕｓｉｔｉｓ）（ＣＲＳ）は、鼻腔および副鼻腔粘膜の長期的な炎症を伴う慢性疾患である。ＣＲＳという用語は、何週間も続く、鼻腔および副鼻腔のすべての炎症性疾患を包含する。蔓延しているにもかかわらず、ＣＲＳの病因についてはほとんど知られていない。処置は症候性であり、症状の緩和に焦点が置かれている。ほとんどのＣＲＳ患者は、アトピーおよび免疫グロブリンＥレベルの上昇に関係なく、鼻組織（粘膜）の好酸球浸潤を有する。
【００２６】
真菌は至る所に存在し、健康な人およびＣＲＳ患者の両方の鼻粘液中にいるが、真菌は特定の状況では細菌感染を悪化させ得る。鼻粘液中の真菌は無害であるが、なおおＣＲＳ患者では、これらの同じ真菌が炎症反応を刺激し、これにより好酸球が血管を離れ、鼻および鼻腔組織に入り、最終的には鼻気道粘液に入ることとなる。鼻粘液では、これらの好酸球が真菌を攻撃し、好酸球中の顆粒から主要塩基性タンパク質（ＭＢＰ）と称される毒性物質が放出されることによって真菌を破壊する。この毒性ＭＢＰの脱顆粒および放出は、真菌を破壊するだけでなく、鼻および鼻腔粘膜内層組織を損傷させる不随する損傷も引き起こす。粘膜内層に対する損傷により、鼻および鼻腔粘膜が細菌による侵入および可能性のある感染を受けやすくなる。この組織の炎症および損傷が持続的で長期にわたる場合、その状態はＣＲＳと称される。
【００２７】
根本的な病因に関係なく、ＣＲＳ患者はバイオフィルムの形成とともに粘液線毛クリアランスの障害を示す。バイオフィルムは、炎症状態の結果として副鼻腔の表面上に形成される微細な層である。このフィルムは、細胞壁の断片、細胞および血漿タンパク質、ペプチド、炭水化物、および脂質などの可溶性分解産物を含む炎症の分解産物によって生成される。これらの作用物質の混合物は空気を含む副鼻腔中で乾燥するので、フィルムを形成する。バイオフィルムは細菌および真菌を閉じ込め、これがコロニーに成長する。バイオフィルム膜に囲まれているために、細菌および真菌のコロニーは、殺菌剤および真菌治療剤に対して抵抗性であることができる。
【００２８】
ＣＲＳの診断は、前鼻鏡検査または内視鏡検査による症状基準に主に基づいており、診断に関して疑問がある場合は、コンピュータ断層撮影画像法を使用して、罹患した副鼻腔粘膜の存在を確認する。ＣＲＳの処置は、医療的（鼻腔内コルチコステロイド、生理食塩水洗浄）または外科的であるかどうかにかかわらず、副鼻腔経路での炎症および閉塞を低減することを目的としている。抗生物質は、急性細菌感染の疑いがある場合の処置に一般的に使用される。ＣＲＳの真菌および好酸球の病因の背後にある理論により、抗真菌化合物である鼻腔内アンホテリシンＢの使用に至っている。
【００２９】
形容詞として使用される場合、「ヒト」とは、ヒトの生理学と互換性があることを意味し、「ヒト」という用語に関連付けられる名詞は、ホモサピエンスに厳密に由来する必要はない。例えば、「ヒト」と記載されるポリペプチドまたは他の物質は、ヒトにおいて免疫反応を実質的に引き起こさない。
【００３０】
マイクロエマルジョンは、油、水、界面活性剤の透明で、熱力学的に安定した、等方性液体混合物であり、しばしば共界面活性剤と組み合わされる。水相は、塩および／または他の成分を含み得、「油」は、実際には、異なる炭化水素およびオレフィンの複雑な混合物であり得る。通常のエマルジョンとは対照的に、マイクロエマルジョンは、成分を単に混合したときに形成され、通常のエマルジョンの形成において一般的に使用される高剪断条件を必要としない。マイクロエマルジョンの３つの基本的なタイプは、直接（水に分散した油、ｏ／ｗ）、逆（油に分散した水、ｗ／ｏ）、および双連続である。
【００３１】
「薬学的に許容される」とは、ヒトに投与された場合にアレルギー反応または同様の有害な反応を引き起こさない分子実体および組成物を指す用語である。
【００３２】
「患者」および「対象」という用語は、互換的に使用され、ヒト患者および非ヒト霊長類などの哺乳動物、ならびにウサギ、ラット、およびマウスなどの実験動物、ならびに他の動物を指す。動物には、すべての脊椎動物、例えば、哺乳動物およびイヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、ブタ、ウサギ、ニワトリなどの非哺乳動物が含まれる。特定の実施形態では、本発明の治療方法を実施する対象はヒトである。処置を必要とする対象には、ＣＲＳに既に罹患している患者および障害を発症しやすい患者、ならびにバイオフィルム形成に関連する細菌感染に罹患している患者およびそのような細菌感染を発症しやすい患者が含まれる。
【００３３】
「処置する」または「処置」という用語は、（ｉ）疾患または障害（例えば、ＣＲＳ）の発生を防止すること（例えば、予防）、（ｉｉ）その発症を阻害または阻止すること、および（ｉｉｉ）状態に関連する症状を緩和することを含む。したがって、「処置」には、本発明の医薬組成物、および／または本明細書に記載の疾患の症状、合併症、もしくは生化学的兆候の発症を防止もしくは遅延させるための他の治療用組成物もしくは薬剤の投与、症状を緩和または改善すること、あるいは疾患、状態、または障害の進行を阻止または阻害することが含まれる。「処置」は、軽減、寛解、または症状の低減、または病態が患者に対してより許容可能となることなどの客観的または主観的パラメータを含む、本明細書に記載の疾患、状態、または障害の処置または改善または防止における成功の任意の兆候をさらに指す。疾患の処置または改善のための詳細な手順は、医師による検査の結果を含む客観的または主観的パラメータに基づくことができる。
【００３４】
「精製された」とは、材料が作られた環境から該材料が取り出されたことを意味する。材料は、部分的または実質的に精製されてもよく、完全に（１００％）純粋である必要はない。例えば、本明細書に記載のリン脂質化合物は、該リン脂質化合物が合成された後に、未反応の化学物質、副産物、および他の成分の一部またはすべてを除去することによって精製してもよい。
【００３５】
不飽和炭化水素は、隣接する炭素原子間に二重または三重共有結合を有する炭化水素である。少なくとも１つの炭素間二重結合を有するものはアルケンと称され、少なくとも１つの炭素間三重結合を有するものはアルキンと称される。不飽和化合物（例えば、脂肪酸鎖）は、アルケンまたはアルキンに見られるものなどの不飽和炭化水素を含む化合物を指す。不飽和化合物は、炭素原子鎖のみからなる必要はない。それらは、直鎖、分枝鎖、または環配置を形成することができる。
【００３６】
リン脂質
本発明の組成物および方法は、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊し、および／または細菌バイオフィルムの形成を防止することを目的とする。したがって、組成物および方法、特に治療用組成物は、バイオフィルム形成に関連するＣＲＳおよび細菌感染症の処置に有用である。処置は、本明細書に記載される少なくとも１つのリン脂質化合物と組み合わせた少なくとも１つの抗生物質の使用を含む。リン脂質は、非極性の疎水性尾部、グリセロールまたはスフィンゴシン部分（骨格）、および極性の頭部で構成される一群の両親媒性脂質である。本発明の実施において使用することができるリン脂質には、ホスホグリセリドおよびそのリゾリン脂質誘導体の両方が含まれる。したがって、これらのリン脂質化合物は、式ＩａまたはＩｂに該当する任意の有機化合物を広く含むことができる：
【化１】
2020534333.tif 000003
式中、Ｒ１は、脂肪酸残基、アルキル残基、またはＨであり、Ｒ２は、脂肪酸残基、アルキル残基、またはＨであり、Ｒ３は、Ｈまたはコリン（ＨＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋（ＣＨ３）３ＯＨ−）、エタノールアミン（ＨＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、イノシトール、もしくはセリンなどの窒素含有化合物であり、Ｒ４は、負電荷、Ｈ、またはアルカリ金属陽イオン（例えばＬｉ＋、Ｎａ＋、またはＫ＋）などの陽イオンである。Ｒ１およびＲ２は、同時にＨではない。Ｒ３がＨである場合、化合物はジアルキルグリセロールリン酸（ｄｉａｌｋｙｌｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）（ホスファチジン酸としても知られる）であり、Ｒ３が窒素含有化合物である場合、化合物は、例えば、レシチン、セファリン、ホスファチジルセリン、またはプラズマローゲンなどのホスファチドである。Ｒ１部位は、リン脂質の１位（立体特異性［ｓｎ］の命名方式毎に）と称され、Ｒ２部位は、リン脂質の２位（ｓｎ２位）と称され、Ｒ３サイトは、リン脂質の３位（ｓｎ３位）と称される。本発明に好適なリン脂質の特定の例には、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルイノシトール、ならびに対応するリゾリン脂質およびリゾリン脂質誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
本発明に好適なリン脂質には、スフィンゴ脂質およびホスファチジン酸も含まれ得る。スフィンゴ脂質（グリコシルセラミド）は、ホスホグリセリドと同じホスファチジル系の頭部基構造を有する。しかし、一般的なリン脂質分子とは対照的に、スフィンゴ脂質は、疎水性成分として単一の脂肪酸および長鎖アルコール、ならびにフィンゴシン骨格（グリセロールではない）を含む。
【００３８】
上記のように、リン脂質の疎水性尾部は、１つまたは２つのいずれかの直鎖状脂肪酸鎖を有する。本発明のいくつかの実施形態では、使用されるリン脂質の疎水性尾部は、合計で少なくとも約８個、９個、１０個、またはそれ以上の炭素原子を含むべきである。したがって、いくつかの実施形態では、２つの脂肪酸鎖を有するリン脂質が使用される場合、各鎖は、好ましくは、少なくとも５個、６個、７個、８個、またはそれ以上の炭素原子を含むべきである。いくつかの他の実施形態では、１つの脂肪酸鎖を有するリン脂質が使用される場合、脂肪酸鎖は、好ましくは、少なくとも約９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子を含むべきである。実施形態（上記の特定の範囲を含む）では、リン脂質の脂肪酸鎖は、５０個未満の炭素原子、例えば、４５個未満、４０個未満、３５個未満、３０個未満、２５個未満、２０個未満、１９個未満、１８個未満、１７個未満、１６個未満、１５個未満、１４個未満、１３個未満、１２個未満、１１個未満、または１０個未満の炭素原子を含む。一実施形態では、リン脂質の脂肪酸鎖は、１０〜２０個の炭素原子、１０〜１６個の炭素原子、４〜１０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜５０個の炭素原子、例えば、１０個の炭素原子〜１６個の炭素原子、１０炭素原子〜２０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜２５個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３５個の炭素原子、１０個の炭素原子〜４０個の炭素原子、または１０個の炭素原子〜４５個の炭素原子を含む。一般に、リン脂質中の非極性脂肪酸疎水性尾部は、飽和または不飽和のいずれかであり得る。本発明のいくつかの実施形態では、脂肪酸疎水性尾部は、いかなる不飽和炭化水素を含まない。様々な実施形態では、脂肪酸鎖は、アルキル側鎖、アリール側鎖、または本質的に（ｉｎ  ｎａｔｕｒｅ）疎水性である任意の他の化学組成物の鎖であり得る。本発明に好適なリン脂質中のリン酸頭部基は、様々な親水性基で修飾し得る。上記のように、いくつかの実施形態では、リン酸頭部基は窒素含有塩基に結合している。これらの実施形態のいくつかでは、極性頭部でのリン酸基はコリン基に結合している。いくつかの他の実施形態では、リン酸基は、別の有機基、例えばセリン、エタノールアミン、またはイノシトールで修飾することができる。
【００３９】
本発明のいくつかの方法では、使用されるリン脂質は、リン脂質の最も一般的なクラスであるホスホグリセリド（グリセロリン脂質）である。ホスホグリセリドは、式ＣＨ２ＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＯＨの炭素３個のアルコールであるグリセロールに基づいている。２つの脂肪酸鎖がグリセロール骨格に対してエステル化されている。グリセロールの３番目のヒドロキシル基がリン酸と反応して、ホスファチジン酸エステルを形成する。本発明の実施では、使用されるホスホグリセリドの２つの疎水性脂肪酸鎖は、好ましくは、少なくとも約５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、またはそれ以上の合計数の炭素原子を含むべきである。例えば、２つの脂肪酸側鎖のそれぞれは、少なくとも約５個、６個、７個、８個、９個、またはそれ以上の炭素原子を有することができる。いくつかの実施形態では、２つの脂肪酸側鎖のそれぞれは、少なくとも１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、またはそれ以上の炭素原子を有し得る。前述の実施形態のいずれかでは、２つの脂肪酸鎖のそれぞれは、２０個未満の炭素原子を含む。本発明の方法に好適な例示的なホスホグリセリドは、本明細書の実施例に詳述されるように、炭素７個の２つの脂肪酸側鎖を有する１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ）である。
【００４０】
本発明の他のいくつかの方法では、使用されるリン脂質はリゾリン脂質である。リゾリン脂質とは、単一の炭素鎖および極性頭部基を特徴とするリン脂質の誘導体を指す。一実施形態では、使用されるリゾリン脂質の単一の疎水性脂肪酸鎖は、好ましくは、少なくとも約８個、９個、または１０個の炭素原子を有するべきである。一実施形態では、リゾリン脂質の脂肪酸鎖は、５０個未満の炭素原子、例えば、４５個未満、４０個未満、３５個未満、３０個未満、２５個未満、２０個未満、１９個未満、１８個未満、１７個未満、１６個未満、１５個未満、１４個未満、１３個未満、１２個未満、１１個未満、または１０個未満の炭素原子を含む。一実施形態では、リゾリン脂質誘導体の脂肪酸鎖は、６個の炭素原子〜５０個の炭素原子、例えば、６個の炭素原子〜１６個の炭素原子、７個の炭素原子〜２０個の炭素原子、７個の炭素原子〜１２個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３５個の炭素原子、１０個の炭素原子〜４０個の炭素原子、または１０個の炭素原子〜４５個の炭素原子を含む。
【００４１】
本発明のいくつかの他の方法では、使用されるリン脂質はリゾリン脂質誘導体である。様々な実施形態では、本発明の方法で使用されるリゾリン脂質誘導体は、少なくとも１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、またはさらにそれ以上の炭素原子を含む脂肪酸鎖を有する。一実施形態では、リゾリン脂質誘導体の脂肪酸鎖は、５０個未満の炭素原子、例えば、４５個未満、４０個未満、３５個未満、３０個未満、２５個未満、２０個未満、１９個未満、１８個未満、１７個未満、１６個未満、１５個未満、１４個未満、１３個未満、１２個未満、または１１個未満の炭素原子を含む。一実施形態では、リゾリン脂質誘導体の脂肪酸鎖は、１０個の炭素原子〜５０個の炭素原子、例えば、１０個の炭素原子〜１６個の炭素原子、１０個の炭素原子〜２０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜２５個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３０個の炭素原子、１０個の炭素原子〜３５個の炭素原子、１０個の炭素原子〜４０個の炭素原子、または１０個の炭素原子〜４５個の炭素原子を含む。本発明の方法のために本明細書で例示されている特定のリゾリン脂質誘導体には、例えば、炭素１２個の脂肪酸を有するドデシルホスホコリン、１４個の脂肪酸鎖を有するテトラデシルホスホコリン、および炭素１６個の脂肪酸を有するヘキサデシルホスホコリンが含まれる。
【００４２】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、一般式ＩＩを有し
【化２】
2020534333.tif 000004
（式中、Ｒ５は、飽和Ｃ９〜Ｃ１７アルキル鎖、不飽和Ｃ９〜Ｃ１７アルキル鎖、または
【化３】
2020534333.tif 000005
であり、Ｒ６は、ＯＨまたは
【化４】
2020534333.tif 000006
であり、
ＸおよびＹは、それぞれ独立して−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｒ７は、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ１４アルキル鎖であり、
Ｒ８は、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖である）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグである。別の関連する態様では、リン脂質化合物は、一般式ＩＩを有し（式中、Ｒ５は、飽和または不飽和Ｃ９〜Ｃ１７アルキル鎖である）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグである。
【００４３】
一態様では、Ｒ５は、飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、またはＣ１７飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、またはＣ１７不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、またはＣ１５飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、またはＣ１５不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１２またはＣ１４飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１２またはＣ１４不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１２飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１４飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１２飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１２不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１４飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、Ｃ１４不飽和アルキル鎖である。
【００４４】
一態様では、Ｒ５は、１〜３つの二重結合および／または三重結合の混合物を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１〜３つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つまたは２つの二重結合または三重結合の混合物を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つまたは２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つまたは２つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つの二重結合または三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。
【００４５】
一態様では、Ｒ５は、１つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、２つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、１つの二重結合および１つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、３つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。アルキル鎖が２つの二重結合および１つの三重結合を含む場合を含む態様では。一態様では、Ｒ５は、１つの二重結合および２つの三重結合を含む不飽和アルキル鎖である。
【００４６】
一態様では、Ｒ５は、それぞれがシス配置またはトランス配置を有する１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれがシス配置、トランス配置、またはシス配置およびトランス配置の混合物を有する１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれがシス配置を有する１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれがトランス配置を有する１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれがシス配置およびトランス配置の混合物を有する１〜３つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、シス配置を有する１つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、トランス配置を有する１つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、シス配置およびトランス配置の混合物を有する１つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれがシス配置を有する２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれの二重結合がトランス配置を有する２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれの二重結合がシス配置およびトランス配置の混合物を有する２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖であり、１つの二重結合がシス配置を有し、他の二重結合がトランス配置を有する。
【００４７】
一態様では、Ｒ５は、それぞれの二重結合がシス配置を有する２つ以上の二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれの二重結合がトランス配置を有する２つ以上の二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、Ｒ５は、それぞれの二重結合がシス配置およびトランス配置の混合物を有する２つ以上の二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。
【００４８】
Ｒ５が飽和または不飽和Ｃ９〜Ｃ１７アルキル鎖、特に、飽和Ｃ９〜Ｃ１７アルキル鎖である場合、得られるリン脂質化合物は、モノアルキルホスファチジルコリンの一種であるリゾホスファチジルコリンの構造類似体を表す。そのような構造では、疎水性アルキル鎖尾部は、エーテル結合を介してリン酸部分に結合され、これにより疎水性アルキル鎖尾部が加水分解開裂に対して耐性となる。比較すると、対応するリゾホスファチジルまたはグリセロホスファチジルコリン化合物は、疎水性アルキル鎖尾部がエステル結合を介してリン酸部分に結合されている場合、より加水分解されやすい。
【００４９】
代表的なリゾホスファチジルコリン構造ＩＩａ〜ＩＩｄを以下に示す。
【００５０】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩａによって表されるＮ−デシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１０）である。
【化５】
2020534333.tif 000007
【００５１】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩｂによって表されるＮ−ドデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１２）である。
【化６】
2020534333.tif 000008
【００５２】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩｃによって表されるＮ−テトラデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１４）である。
【化７】
2020534333.tif 000009
【００５３】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩｄによって表されるＮ−テトラデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１６）である。
【化８】
2020534333.tif 000010
【００５４】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−ドデシルホスホコリン、Ｎ−テトラデシルホスホコリン、およびＮ−ヘキサデシルホスホコリンからなる群から選択される。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−ドデシルホスホコリンまたはＮ−テトラデシルホスホコリンのいずれかである。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−ドデシルホスホコリンまたはＮ−ヘキサデシルホスホコリンのいずれかである。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−テトラデシルホスホコリンまたはＮ−ヘキサデシルホスホコリンのいずれかである。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−ドデシルホスホコリンである。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−テトラデシルホスホコリンである。一態様では、本開示のリン脂質化合物は、Ｎ−ヘキサデシルホスホコリンである。
【００５５】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は一般式ＩＩを有し、式中、Ｒ５は、
【化９】
2020534333.tif 000011
であり、Ｒ６は、ＯＨであり、Ｘは、−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ７は、飽和また不飽和Ｃ５〜Ｃ１４アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＩＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化１０】
2020534333.tif 000012
【００５６】
さらなる態様では、Ｘは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ７は、飽和または不飽和Ｃ５〜Ｃ１４アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＩＩａのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化１１】
2020534333.tif 000013
【００５７】
別のさらなる態様では、Ｘは、−ＣＨ２−であり、Ｒ７は、飽和または不飽和Ｃ５〜Ｃ１４アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＩＩｂのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化１２】
2020534333.tif 000014
【００５８】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、もしくはＣ１４飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、もしくはＣ１３飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ９もしくはＣ１１飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ９飽和または不飽和アルキル鎖である。
【００５９】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、１〜３つの二重または三重結合の混合物を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、１つまたは２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、それぞれの二重結合がシス配置、トランス配置、またはシス配置およびトランス配置の混合物を有する１つ以上の二重結合を含む不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、１つ以上の二重結合を含む不飽和アルキル鎖であり、二重結合のうちの少なくとも１つはシス配置を有する。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、１つまたは２つの二重結合を含む不飽和アルキル鎖であり、それぞれの二重結合はシス配置を有する。
【００６０】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、またはＣ１４飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、またはＣ１３飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ９またはＣ１１飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ、またはＩＩＩｂを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ９飽和アルキル鎖である。
【００６１】
式ＩＩＩを有するリン脂質化合物は、リゾホスファチジルコリンである。式ＩＩＩａを有するリン脂質化合物は、Ｒ７へのエステル結合を有するリゾホスファチジルコリンである。式ＩＩＩｂを有するリン脂質化合物は、Ｒ７へのエーテル結合を有するリゾホスファチジルコリンである。上記のように、エーテル結合は加水分解開裂に耐性がある。
【００６２】
式ＩＩＩａを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＩＩｃ〜ＩＩＩｆによって表される。
【００６３】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｃによって表される０８：０リゾＰＣ（１−オクタノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化１３】
2020534333.tif 000015
【００６４】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｄで表される１０：０リゾＰＣ（１−デカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化１４】
2020534333.tif 000016
【００６５】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｅで表される１２：０リゾＰＣ（１−ドデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化１５】
2020534333.tif 000017
【００６６】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｆによって表される１３：０リゾＰＣ（１−トリデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化１６】
2020534333.tif 000018
【００６７】
一態様では、一般式ＩＩＩａの化合物は、０８：０リゾＰＣ、１０：０リゾＰＣ、および１２：０リゾＰＣである。一態様では、一般式ＩＩＩａの化合物は、１０：０リゾＰＣおよび１２：０リゾＰＣである。一態様では、一般式ＩＩＩａの化合物は、１０：０リゾＰＣである。
【００６８】
式ＩＩＩｂを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＩＩｇ〜ＩＩＩｊによって表される。
【００６９】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｇで表されるエーテル０８：０リゾＰＣ（１−オクタノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化１７】
2020534333.tif 000019
【００７０】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｈによって表されるエーテル１０：０リゾＰＣ（１−デカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である：
【化１８】
2020534333.tif 000020
【００７１】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｉによって表されるエーテル１２：０リゾＰＣ（１−ドデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である：
【化１９】
2020534333.tif 000021
【００７２】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＩＩｊによって表されるエーテル１３：０リゾＰＣ（１−トリデカノイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である：
【化２０】
2020534333.tif 000022
【００７３】
一態様では、一般式ＩＩＩｂの化合物は、エーテル０８：０リゾＰＣ、エーテル１０：０リゾＰＣ、およびエーテル１２：０リゾＰＣである。一態様では、一般式ＩＩＩｂの化合物は、エーテル１０：０リゾＰＣおよびエーテル１２：０リゾＰＣである。一態様では、一般式ＩＩＩｂの化合物は、エーテル１０：０リゾＰＣである。
【００７４】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、一般式ＩＩを有し（式中、Ｒ５は、
【化２１】
2020534333.tif 000023
であり、Ｒ６は、
【化２２】
2020534333.tif 000024
であり、ＸおよびＹは、それぞれ独立して、−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ７は、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アシル鎖であり、Ｒ８は、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖である）、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグであり、これにより、一般式ＩＶの化合物が得られる。
【化２３】
2020534333.tif 000025
【００７５】
さらなる態様では、ＸおよびＹは、それぞれ−Ｃ（＝Ｏ）であり−、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、飽和もしくは不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＶａのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化２４】
2020534333.tif 000026
【００７６】
別のさらなる態様では、ＸおよびＹは、それぞれ−ＣＨ２−であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＶｂのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化２５】
2020534333.tif 000027
【００７７】
別のさらなる態様では、Ｘは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｙは、−ＣＨ２−であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＶｃのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化２６】
2020534333.tif 000028
【００７８】
別のさらなる態様では、Ｘは、−ＣＨ２−であり、Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して、飽和または不飽和Ｃ３〜Ｃ９アルキル鎖であり、これにより、一般式ＩＶｄのリン脂質化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、およびプロドラッグが得られる。
【化２７】
2020534333.tif 000029
【００７９】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ８は、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、もしくはＣ９飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ８は、Ｃ５、Ｃ６、もしくはＣ７飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ８は、Ｃ６飽和または不飽和アルキル鎖である。
【００８０】
前述の態様のいずれかでは、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ飽和アルキル鎖である。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７またはＲ８の１つのうちの少なくとも１つは、飽和アルキル鎖であり、Ｒ７またはＲ８のうちの１つうちの１つは、任意選択により不飽和アルキル鎖である。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ不飽和アルキル鎖である。
【００８１】
前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が不飽和アルキル鎖である場合、Ｒ７および／またはＲ８は、１から３の間の二重結合および／または三重結合の混合物を含み得る。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が不飽和アルキル鎖である場合、Ｒ７および／またはＲ８は１〜２つの二重結合および／または三重結合の混合物を含み得る。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が不飽和アルキル鎖である場合、Ｒ７および／またはＲ８は１つの二重結合または三重結合を含み得る。
【００８２】
前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が１つ以上の二重結合を含む場合、それぞれの二重結合は、シス配置、トランス配置、またはシス配置およびトランス配置の混合物を有し得る。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が１つ以上の二重結合を含む場合、二重結合のうちの少なくとも１つはシス配置を有する。前述の態様のいずれかでは、Ｒ７および／またはＲ８が１つ以上の二重結合を含む場合、それぞれの二重結合はシス配置を有する。
【００８３】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は同じである。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は、同じ鎖長、同じ（もしくはそうではない）数の二重結合および／または三重結合、ならびに存在し得る同じ配置の任意の二重結合を有する。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は同じ鎖長を有し、それぞれの鎖は飽和である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は同じ鎖長を有し、それぞれの鎖は、それぞれがシス配置を有する１つまたは２つの二重結合を含む。
【００８４】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は、Ｒ７およびＲ８が同じ長さになるように選択され、これにより、同じ長さの２つのアルキル鎖を有する式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、およびＩＶｄのリン脂質化合物が得られる。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は、Ｒ７およびＲ８が異なる長さを有するように選択され、これにより、異なる長さの２つのアルキル鎖を有する式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、およびＩＶｄのリン脂質化合物が得られる。
【００８５】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、もしくはＣ９飽和または不飽和アルキル鎖であり、Ｒ８は、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、もしくはＣ９飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、もしくはＣ８飽和または不飽和アルキル鎖であり、Ｒ８は、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、もしくはＣ８飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ５、Ｃ６、もしくはＣ７飽和または不飽和アルキル鎖であり、Ｒ８は、Ｃ５、Ｃ６、もしくはＣ７飽和または不飽和アルキル鎖である。一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７は、Ｃ６飽和または不飽和アルキル鎖であり、Ｒ８は、Ｃ６飽和または不飽和アルキル鎖である。前述の態様では、好ましくは、Ｒ７またはＲ８のうちの少なくとも１つは飽和アルキル鎖であるか、またはＲ７およびＲ８のそれぞれは飽和アルキル鎖である。
【００８６】
一態様では、リン脂質化合物は、式ＩＶ、ＩＶａ、ＩＶｂ、ＩＶｃ、またはＩＶｄを有し、式中、Ｒ７およびＲ８は、それぞれＣ４飽和アルキル鎖、Ｃ５飽和アルキル鎖、Ｃ６飽和アルキル鎖、Ｃ７飽和アルキル鎖、またはＣ８飽和アルキル鎖である。
【００８７】
式ＩＶを有するリン脂質化合物は、グリセロファチジルコリンである。式ＩＶａを有するリン脂質化合物は、Ｒ７およびＲ８の両方へのエステル結合を有するグリセロファチジルコリンである。式ＩＶｂを有するリン脂質化合物は、Ｒ７およびＲ８の両方へのエーテル結合を有するグリセロファチジルコリンである。式ＩＶｃまたはＩＶｄを有するリン脂質化合物は、Ｒ７およびＲ８基への１つのエステル結合および１つのエーテル結合を有するグリセロファチジルコリンである。上記のように、エーテル結合は加水分解開裂に耐性である。
【００８８】
式ＩＶａを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＶｅ〜ＩＶｇによって表される。
【００８９】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｅで表される０６：０ＰＣ（１，２−ジヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化２８】
2020534333.tif 000030
【００９０】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｆによって表される０７：０ＰＣ（ＤＨＰＣ；１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化２９】
2020534333.tif 000031
【００９１】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｇによって表される０８：０ＰＣ（１，２−ジオクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化３０】
2020534333.tif 000032
【００９２】
式ＩＶｂを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＶｈ〜ＩＶｊによって表される。
【００９３】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｈで表されるエーテル０６：０ＰＣ（１，２−ヘキサノイル−ジ−Ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化３１】
2020534333.tif 000033
【００９４】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｉで表されるエーテル０７：０ＰＣ（１，２−ヘプタノイル−ジ−Ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化３２】
2020534333.tif 000034
【００９５】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｊで表されるエーテル０８：０ＰＣ（１，２−オクタノイル−ジ−Ｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）である。
【化３３】
2020534333.tif 000035
【００９６】
式ＩＶｃを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＶｋ〜ＩＶｍによって表される。
【００９７】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｋによって表される１−ヘキサノイル−２−Ｏ−ヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３４】
2020534333.tif 000036
【００９８】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｌによって表される１−ヘプタノイル−２−Ｏ−ヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３５】
2020534333.tif 000037
【００９９】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｍによって表される１−オクタノイル−２−Ｏ−オクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３６】
2020534333.tif 000038
【０１００】
式ＩＶｄを有する代表的なリン脂質化合物は、以下の構造ＩＶｎ〜ＩＶｐによって表される。
【０１０１】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｎによって表される１−Ｏ−ヘキサノイル−２−ヘキサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３７】
2020534333.tif 000039
【０１０２】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｏによって表される１−Ｏ−ヘプタノイル−２−ヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３８】
2020534333.tif 000040
【０１０３】
一態様では、本開示のリン脂質化合物は、以下の式ＩＶｐによって表される１−Ｏ−オクタノイル−２−オクタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。
【化３９】
2020534333.tif 000041
【０１０４】
本発明の組成物および方法で使用することができる様々なリン脂質は、天然資源から容易に得るか、標準的な有機化学プロトコルを介して合成するか、または商業的供給業者から購入することができる。例えば、本発明に好適な多くのリン脂質は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｉｎｃ．（アラバマ州アラバスター）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ミズーリ州セントルイス）、Ｌｉｐｏｉｄ  ＧｍｂＨ（ルートヴィヒスハーフェン、ドイツ）、Ｃｏｒｄｅｎ  Ｐｈａｒｍａ，ＬＬＣ（スイス）、およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐ．（カリフォルニア州アーバイン）などの多くの商業的供給業者から入手することができる。多くの天然に存在するリン脂質はまた、例えば、大豆、菜（カノーラ）種、小麦胚芽、ヒマワリ、および亜麻の種子のような植物源、ならびに卵黄、牛乳、またはオキアミのような動物材料から単離することができる。それらには、例えば、ホスファチジルコリン、リゾホスホコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびホスファチジルイノシトールが含まれる。本発明に好適ないくつかのリン脂質はまた、天然に存在するリン脂質または他の既知の化合物から合成され得る。一般に、合成リン脂質は、有機化学合成ステップおよび／または酵素合成ステップを使用して生成することができる。例には、Ｄ−マンニトールから合成されたジアルキルホスファチジルコリン、グリセロホスホコリンから合成された混合脂肪酸鎖リン脂質が含まれる。
【０１０５】
抗生物質
本明細書に記載されるリン脂質に加えて、本発明の治療用組成物および関連する方法はまた、細菌バイオフィルムの破壊およびその形成の阻害における１つ以上の抗生物質化合物の使用を含む。本明細書で使用される場合、「抗生物質」という用語は、限定するものではないが真菌または酵母などの微生物によって生成される天然に存在する物質であって、感染症の処置に有用である物質を指す。抗生物質はまた、微生物によって生成された分子形態が所望の特性を達成するためにその後に改変された半合成物質を指す。一般的に使用される一般名または商標名の抗生物質は、通常、ペニシリン、テトラサイクリン、セファロスポリン、キノロン、リンコマイシン、マクロライド、スルホンアミド、糖ペプチド、アミノグリコシド、およびカルバペネムなど、いくつかのタイプの抗生物質のうちのいずれか１つに分類される。一般的抗生物質の具体例には、アモキシシリン、ドキシサイクリン、セファレキシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、メトロニダゾール、アジスロマイシン、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、アモキシシリン／クラブラン酸塩、およびレボフロキサシンが含まれる。関連する商標名の抗生物質の例には、オーグメンチン（Ａｕｇｍｅｎｔｉｎ）、フラジール（Ｆｌａｇｙｌ）（Ｆｌａｇｙｌ  ＥＲ）、アモキシル（Ａｍｏｘｉｌ）、シプロ（Ｃｉｐｒｏ）、ケフレックス（Ｋｅｆｌｅｘ）、バクトリム（Ｂａｃｔｒｉｍ）（Ｂａｃｔｒｉｍ  ＤＳ）、レバキン（Ｌｅｖａｑｕｉｎ）、ジスロマック（Ｚｉｔｈｒｏｍａｘ）、アベロックス（Ａｖｅｌｏｘ）、およびクレオシン（Ｃｌｅｏｃｉｎ）が含まれる。本発明に好適なこれらの抗生物質および他の抗生物質化合物のいずれも、例えば、Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｍｙｌａｎ、Ｈｏｓｐｉｒａ、Ａｓｐｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃａｒｅ、およびＬｕｐｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．などの商業的製薬製造会社から容易に入手することができる。
【０１０６】
一般に、細菌に対して細胞増殖抑制効果または細胞毒性効果を有する任意の抗生物質薬が、本発明の方法および組成物において使用され得る。対象、特に対象の呼吸経路または鼻腔経路における細菌感染を処置または除去するのに有効であるかまたは有益である任意の抗生物質薬を本発明の治療方法で使用することができる。いくつかの実施形態では、使用される抗生物質化合物は、副鼻腔感染症に一般的に関与している細菌について意図している。例えば、副鼻腔感染症を引き起こす最も一般的な細菌には、例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓが含まれる。好ましくは、本発明の方法で使用される抗生物質は、これらの細菌種を効果的に死滅させることができる。
【０１０７】
様々な実施形態では、本発明の方法は、これらおよび他の種類の細菌による感染を処置するために医療分野で日常的に使用されている１つ以上の抗生物質化合物を使用することができる。いくつかの実施形態では、アモキシシリン（アモキシル）またはアモキシシリンクラブラン酸塩（オーグメンチン）を、疑いのある細菌性副鼻腔感染症の処置のための第一選択薬として使用することができる。これらの抗生物質は、通常、副鼻腔感染症を引き起こす細菌のほとんどの種および株に対して効果的である。他のいくつかの実施形態では、異なる抗生物質を、特にペニシリンに対してアレルギーのある対象において最初の選択肢として使用することができる。そのような抗生物質には、例えば、トリメトプリムおよびスルファメトキサゾール（バクトリム（Ｂａｃｔｒｉｍ）、セプトラ（Ｓｅｐｔｒａ））、セファクロル（セクラー（Ｃｅｃｌｏｒ））、ロラカルベフ（ロラビド（Ｌｏｒａｂｉｄ））、ゲンタマイシン（ガラマイシン（Ｇａｒａｍｙｃｉｎ））、トブラマイシン、クラリスロマイシン（ビアキシン（Ｂｉａｘｉｎ））、アジスロマイシン（ジスクロマックス（Ｚｉｔｈｋｒｏｍａｘ））、スルファメトキサゾール（ガンタノール（Ｇａｎｔａｎｏｌ））、およびシプロフロキサシン（シプロ（Ｃｉｐｒｏ））が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の治療用組成物は、ゲンタマイシンを含む。いくつかの実施形態では、本発明の治療用組成物は、トブラマイシンを含む。いくつかの他の実施形態では、本発明の治療用組成物は、２つ以上の抗生物質化合物、例えば、ゲンタマイシンおよびトブラマイシンの両方を含む。いくつかの実施形態では、対象は、処置の過程中に異なる抗生物質で処置され得る。例えば、ゲンタマイシンまたはアモキシシリンを含む治療用組成物での処置の特定の期間（例えば、４日、５日、６日、７日、またはそれ以上）後に対象の状態が改善しない場合、トブラマイシンなどの別の抗生物質化合物を含む異なる組成物を使用し得る。
【０１０８】
一実施形態では、低用量の抗生物質が、本明細書に記載されるリン脂質と一緒に投与される場合には有効用量を確立するのに十分である。一実施形態では、アルキル鎖中に１０個以上の炭素原子を有するホスホコリンとともに投与される場合、１μｇ／ｍｌ未満のゲンタマイシン、例えば、０．９μｇ／ｍｌ未満、０．８μｇ／ｍｌ未満、０．７μｇ／ｍｌ未満、０．６μｇ／ｍｌ未満、０．５μｇ／ｍｌ未満、０．４μｇ／ｍｌ未満、０．３μｇ／ｍｌ未満、０．２μｇ／ｍｌ未満、０．１μｇ／ｍｌ未満、または０．０５μｇ／ｍｌのゲンタマイシンをＳ．ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムの効果的な処置で提供することができる。一実施形態では、アルキル鎖中に１０〜２０個の炭素原子を有するリゾホスホコリン誘導体（ＭＡＰＣＨＯ−１２またはＭＡＰＣＨＯ−１４などであるが、これらに限定されない）とともに投与される場合、０．２μｇ／ｍｌ未満のゲンタマイシン、例えば、０．１μｇ／ｍｌ未満または０．０５μｇ／ｍｌ未満のゲンタマイシンをＳ．Ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムの効果的な処置で提供することができる。一実施形態では、アルキル鎖中に１０〜２０個の炭素原子を有するリゾホスホコリン誘導体（ＭＡＰＣＨＯ−１２またはＭＡＰＣＨＯ−１４などであるが、これらに限定されない）とともに投与される場合、０．２μｇ／ｍｌ未満のトブラマイシン、例えば、０．１μｇ／ｍｌ未満または０．０５μｇ／ｍｌ未満のトブラマイシンをＳ．Ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムの効果的な処置で提供することができる。
【０１０９】
一般に、効果的な抗生物質処置は最低１０〜１４日間継続する必要がある。いくつかの他の実施形態では、対象は、抗生物質を含む組成物で、より長い期間、例えば、１４〜２１日の任意の日数で処置され得る。処置期間の正確な長さは、対象の全身健康状態、状態の重症度、および投与される抗生物質の種類に依存する。
【０１１０】
処置方法
一実施形態では、哺乳動物対象におけるＣＲＳおよび／または関連する状態を処置するための治療方法および関連する組成物が提供される。ＣＲＳはしばしば、他のいくつかの鼻または呼吸器系の疾患または状態、例えば、鼻ポリポーシス、喘息、および好酸球増加症と関連する。症候群として併存し得るこれらの状態はすべて、本発明の方法による処置に好適である。バイオフィルム形成を伴う慢性の細菌または真菌副鼻腔感染は、これらの状態に関与している。これらの状態を患う多くの患者は、バイオフィルムの形成のために全く効果がない抗生物質および／または抗真菌薬の複数の過程を経験している。これらの患者の多くは、鼻腔手術を繰り返し受けており、一般的には、プレドニゾンの長期使用からのステロイドに依存している。したがって、いくつかの関連する実施形態では、本発明は、哺乳動物組織における予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するかまたは細菌バイオフィルムの形成を防止するための治療方法を提供する。これらの実施形態のいくつかでは、バイオフィルムは、細菌、例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染しているかまたは感染しやすい副鼻腔経路に存在する。
【０１１１】
本発明の治療方法は、典型的には、治療有効量の本明細書に記載の少なくとも１つの抗生物質化合物および少なくとも１つのリン脂質を含む治療用組成物を対象に投与すること、または対象の組織を該治療用組成物と接触させることを含む。ＣＲＳを有する対象の炎症を起こした鼻腔および副鼻腔に接触および注入した際、治療用組成物は、疾患の原因である、内在するバイオフィルムを破壊もしくは除去しおよび／またはさらなるバイオフィルムの形成を防止することができる。バイオフィルムに対する治療用組成物の治療活性は、リン脂質および抗生物質の組み合わせによってもたらされる相乗活性による。本明細書に示されるように、抗生物質化合物単独またはリン脂質単独は、予め形成された細菌バイオフィルムの破壊またはバイオフィルム形成の阻害にほとんどまたは全く影響を示さなかった。いくつかの実施形態では、リン脂質および抗生物質は、細菌種に感染しているまたは感染していると疑われる哺乳動物組織と同時に接触させるか、または処置を必要とする対象に同時に投与される。あるいは、抗生物質およびリン脂質は、逐次的に、細菌種に感染しているかまたは感染していると疑われる哺乳動物組織と接触させるか、または処置を必要とする対象に投与することができる。したがって、これらの実施形態のいくつかでは、リン脂質を最初に投与した後に抗生物質を投与することができる。他のいくつかの実施形態では、抗生物質最初に投与した後にリン脂質を投与することができる。リン脂質および抗生物質以外に、治療用組成物は、典型的には、本明細書に記載される薬学的に許容される担体も含む。
【０１１２】
抗生物質およびリン脂質を含む治療用組成物は、ＣＲＳに罹患しているかまたはＣＲＳを発症するリスクがある対象を処置するために単独で使用することができる。付随の鼻ポリープを有するまたは有しないＣＲＳ患者は、本発明の方法による処置に好適である。一実施形態では、付随の鼻ポリープを有するＣＲＳ患者は、本発明の治療方法および組成物を使用して処置される。一実施形態では、付随の鼻ポリープを有さないＣＲＳ患者は、本発明の治療方法および組成物を使用して処置される。鼻ポリープは、鼻および副鼻腔の粘膜から主に生じるポリープ状の腫瘤である。鼻ポリープは、アレルギー性鼻炎を頻繁に伴う粘膜の異常増殖である。鼻ポリープは、自由に移動でき、非圧痛性である。
【０１１３】
一実施形態では、対象は、限定するものではないがペリオスチンなどの、ポリープの存在および／または形成を示すバイオマーカーの存在または非存在に基づいて、本発明の治療方法または組成物による処置が必要であると決定される。一実施形態では、対象は、ペリオスチンの発現パターンに基づいて処置が必要であると決定される（Ｓｈｉｏｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｒｉｓ  Ｎａｓｕｓ  Ｌａｒｎｙｘ，２０１５，４２（２），１２３−７、これはそのような教示について参照により本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、対象は、「びまん型」のペリオスチン発現を示す。一実施形態では、対象は、「表面型」のペリオスチン発現を示す。一実施形態では、対象は、「表面型」のペリオスチン発現を示す。一実施形態では、対象は、鼻腔および／または副鼻腔経路におけるペリオスチンの濃度に基づいて処置が必要であると決定される（Ｍａｘｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ−  Ｈｅａｄ  ａｎｄ  Ｎｅｃｋ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，ＤＯＩ：１０．１１７７／０１９４５９９８１７７３７９６７、これはそのような教示について参照により本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、対象は、５０μｇ／ｍｌより高いペリオスチン濃度を示す（これは鼻ポリープの存在を示す）。一実施形態では、対象は、５０μｇ／ｍｌ未満のペリオスチン濃度を示す（これは鼻ポリープがないことを示す）。
【０１１４】
一実施形態では、記載された方法による治療用組成物の投与は、対象においてａｍｏｓｉｍｉａをもたらさない。
【０１１５】
本発明の治療用組成物はまた、ＣＲＳを処置するかまたはＣＲＳの症状を改善するのに好適な他の化合物または治療と組み合わせて対象に投与することができる。例えば、本発明の治療用組成物はまた、生理食塩水洗浄を受けたＣＲＳ患者を処置するために使用することができ、またはステロイドの投与もしくはＣＲＳのための他の既知の治療と一緒に使用することができる。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、炎症を軽減するためまたは副鼻腔の排液を改善するために鼻腔内コルチコステロイドおよび鬱血除去薬と一緒にＣＲＳ患者に共投与される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、粘液を薄くするのを助ける医薬（粘液溶解薬）とともにＣＲＳ患者に共投与することができる。他のいくつかの実施形態では、患者は、副鼻腔経路の閉塞を減少させるために、生理食塩水洗浄と組み合わせて治療用組成物で処置される。さらにいくつかの他の実施形態では、患者には、真菌感染を制御するために、治療用組成物および抗真菌化合物（例えば、鼻腔内アンホテリシンＢ）が共投与される。これらの様々な併用療法において、本発明の治療用組成物は、既知の治療による処置の前、それと同時に、またはその後に患者に投与することができる。
【０１１６】
慢性副鼻腔炎に罹患している任意の哺乳動物対象は、本発明の組成物および方法で処置することができる。好ましくは、対象はヒト患者である。したがって、成人、１０代の若者、小児、幼児、および早産児はすべて、本発明の組成物および方法で処置することができる。一般に、処置は、ＣＲＳに関連するかまたはＣＲＳによって媒介される患者における１つ以上の症状の改善をもたらす。これらには、例えば、頭痛の重症度、粘液の量、色、および粘度、鬱血、ならびに嗅覚の改善などの副鼻腔症状の軽減；標準化機器によって測定された生活の質の向上；鼻腔液もしくは後鼻漏の体積の減少；内視鏡検査により（顕微鏡検査のための生検を伴う）、または洞様液（ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ  ｆｌｕｉｄ）もしくは洗浄液の化学分析により、またはＣＴ（コンピューター断層撮影）もしくはＭＲＩなどの撮像法により決定される、副鼻腔中のバイオフィルムの一部または完全な除去；ならびに内視鏡検査による副鼻腔における炎症の発生の低減が含まれる。ＣＲＳの診断および処置において医師によって日常的に実施されているこれらの症状をモニタリングするための様々な試験またはアッセイは、本発明の実施において容易に使用することができる。
【０１１７】
本発明の治療方法は、本明細書に記載の少なくとも抗生物質およびリン脂質を含む医薬組成物または製剤を使用する。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、鼻腔を介して患者に投与される。製剤またはその成分は、乾燥粉末、液体、またはエアロゾル組成物として提供することができる。いくつかの実施形態では、本発明の治療用組成物中のリン脂質および／または抗生物質は、例えば吸入器を介して、処置を必要とする対象に乾燥粉末として投与される。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、ＳＰＩＮＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＲＯＴＡＨＡＬＥＲ（登録商標）、またはＨＡＮＤＩＨＡＬＥＲ（登録商標）などの単回投与デバイスである。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、ＴＵＲＢＵＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＥＡＳＹＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＣＬＩＣＫＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＴＷＩＳＴＨＡＬＥＲ（登録商標）、またはＮＯＶＯＬＩＺＥＲ（登録商標）などの複数回投与デバイスである。一実施形態では、乾燥粉末吸入器は、ＡＥＲＯＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＤＩＳＫＨＡＬＥＲ（登録商標）、ＤＩＳＫＵＳ（登録商標）、またはＡＣＣＵＨＡＬＥＲ（登録商標）などの複数回投与デバイスである。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、液体製剤である。いくつかの実施形態では、治療用製剤は、マイクロエマルジョンまたはエアロゾル製剤として対象に投与することができる。例えば、治療用組成物の凍結乾燥調製物を液体媒体に入れ、任意のエアロゾル装置またはネブライザーによってエアロゾルとすることができる。一実施形態では、ネブライザーは、空気圧縮機ネブライザー、超音波ネブライザー、振動型メッシュネブライザーまたはホーン型ネブライザー、およびマイクロプロセッサー制御呼吸作動型ネブライザーからなる群から選択される。
【０１１８】
典型的には、処置期間は、ＣＲＳの症状がなくなるかまたは制御されるまで継続する。処置される対象の症状および他の詳細に応じて、治療用製剤は、約１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、またはさらに頻繁に患者に投与することができる。広範囲に及ぶ処置期間を経験して症状が大幅に改善された対象については、より少ない頻度の処置計画を用い得る。さらに、疾患を発症するリスクがあると疑われる対象におけるＣＲＳの発症を防止するための予防目的のために、より少ない頻度の投与がまた適切であり得る。したがって、一部の対象には、本発明の治療用組成物を、１日１回よりも少ない頻度で、例えば、１日毎に、３〜６日毎に、週１回、またはさらに少ない頻度で投与することができる。さらに、治療用製剤は、処置期間中に様々な頻度で対象に投与され得る。例えば、本発明の治療用組成物は、毎日またはより少ない頻度で、すなわち、１日毎に、３日〜６日毎に、週に１回、またはさらに少ない頻度で対象に投与することができる。
【０１１９】
治療用組成物
医薬組成物は、選択された投与経路、例えば、鼻腔経路に適合した様々な形態で、ヒト患者などの哺乳動物対象に投与することができる。本発明の治療用組成物は、有効成分として該組成物中に溶解または分散された本明細書に記載のリン脂質および抗生物質化合物と一緒に生理学的に認容される（ｔｏｌｅｒａｂｌｅ）または許容される担体を含み得る。一実施形態では、治療用組成物は、治療目的で哺乳動物またはヒト患者に投与される場合、免疫原性ではない。製剤および特定の患者に応じて、患者に投与される治療用組成物中のリン脂質および抗生物質化合物のそれぞれの量は、約０．５〜２，５００ｍｇ／用量、１〜１，５００ｍｇ／用量、２〜５００ｍｇ／用量、５〜１００ｍｇ／用量、または１０〜５０ｍｇ／用量であり得る。治療効果を最適化し、副作用を最小限にするための用量の調整は、既知の手順に従って決定することができる。液体またはエアロゾル製剤中に存在するリン脂質および／または抗生物質は、例えば、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度であり得る。使用する特定の化合物に応じて、抗生物質およびリン脂質は、最適な処置効果をもたらす適切な比率で使用することができる。したがって、本発明の様々な実施形態では、抗生物質：リン脂質の重量比は、約１００：１〜約１：１０，０００の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、比率は、約１０：１、５：１、１：１、１：５、１：１０、１：１００またはさらに低い。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、治療用組成物は、噴霧乾燥によって処理されて、１〜５μｍのサイズの所望の空気動力学的中央粒子径（ｍａｓｓ  ｍｅｄｉａｎ  ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有する噴霧乾燥粒子を生成する。次いで、噴霧乾燥粒子は、吸入療法のために、上記のように、エアロゾル化デバイス中に保存され、ユーザーによって使用され得る。示されるように、粉末粒子は乾燥粉末エアロゾルとして送達することができ、または該粒子は水性液滴形態でのエアロゾル化のために水性媒体中に懸濁することができる。あるいは、液体形態の好適な治療製剤、例えば、揮発性生体適合性流体に含まれる製剤溶液または懸濁液は、形成された粒子が活性剤の治療送達のために直ちに吸入されるエアロゾル化プロセスで形成され得る。
【０１２１】
エアロゾル投与の場合、治療用組成物の唯一の要件は、該治療用組成物を組成物成分を含む好適なエアロゾル粒子形態に変換または加工するできることである。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、乾燥塊を形成し、次いでこれを例えば研削（ｇｒｉｎｄｉｎｇ）により粉砕して、１〜５μｍのサイズ範囲の空気動力学的中央粒子径を有する乾燥粉末粒子を含む組成物を形成するために、凍結乾燥により調製される脂質体の水性懸濁液であり得る。次いで、乾燥粉末粒子は、吸入処置または粒子懸濁液としてのエアロゾル化用の好適な溶媒での懸濁液好適な乾燥粒子エアロゾルを生成するために、好適なエアロゾル化デバイスに保存され使用される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、製剤は、マイクロエマルジョンにより調製することができる。これらの実施形態のいくつかでは、鼻腔に投与される製剤の体積は、例えば、約０．５ｍｌ〜約１００ｍｌ、約１ｍｌ〜約５０ｍｌ、約２．５ｍｌ〜約２５ｍｌ、または５ｍｌ〜約１０ｍｌであり得る。いくつかの実施形態では、治療用製剤は、例えば、プラスチック管を通ってリン脂質および抗生物質化合物が洞に注入される該プラスチック管を備えた注射器デバイスによって投与することができる。いくつかの他の実施形態では、治療用製剤は、圧迫した際に鼻腔に流体を噴出させる容器を用いて投与することができる。例えば、米国特許第６，５２０，３８４号を参照のこと。
【０１２３】
いくつかの他の実施形態では、本発明は、脂質体形態の治療用製剤を含む水性液滴エアロゾルを生成するために、ユーザー制御ネブライザーまたはエアロゾル装置を用いて液体治療用製剤を処理加工することを企図する。この実施形態の治療用製剤の成分は、エアロゾル液滴中に懸濁された規則正しい、結晶性の、または非晶質の脂質粒子中に存在することができる。
【０１２４】
上記のように、本発明の製剤は、溶液製剤または粒子製剤として調製することができる。治療剤および治療用製剤の他の任意の成分は、水性溶媒、有機溶媒、または混合溶媒中に懸濁されたリポソーム、結晶性、または非晶質脂質体に組み込むこともできる。本発明のリポソーム様治療用組成物は、一般に、無菌のリポソーム懸濁液である。これらのリポソームは、複数コンパートメントもしくは多層ベシクル、単一コンパートメントベシクル、マクロベシクル（ｍａｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）、または他のコロイド形態であり得る。多層ベシクルは、一般に、最も通常のものである。多層ベシクル（ＭＬＶ）は、好ましくは無菌条件下で、簡単な脂質膜水和技術によって形成することができる。リポソーム様治療用組成物は、当技術分野で周知の様々な技術によって作製し得る。例えば、Ｓｚｏｋａ，  Ｆ．Ｊｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９：４６７−５０８，１９８０；  ａｎｄ  Ｏｌｓｏｎ，Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，５５７：９−２３，１９７９を参照のこと。リポソーム製剤は、水性液滴形態でのエアロゾル化のために脂質分散液として保存されてもよいし、またはリポソーム製剤は、凍結乾燥され、粉末化され、そして乾燥粉末エアロゾルとして投与されてもよい。あるいは、リポソーム分散液は、噴霧エアロゾルとして投与するために、噴霧乾燥されて粉末形態の乾燥脂質粒子を形成してもよい。
【０１２５】
凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ  ｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）は、溶液または懸濁液から乾燥粉末を生成するための１つの標準的な方法である。例えば、Ｆｒｅｉｄｅ，Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２１１（１）：１１７−１２２，１９９３；Ｓａｒｂｏｌｏｕｋｉ，Ｍ．Ｎ．  ａｎｄ  Ｔ．  Ｔｏｌｉａｔ，ＰＤＡＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，５２（１）：２３−２７，１９９８）を参照のこと。凍結乾燥後、乾燥した治療用製剤は、例えば研削または他の従来の手段によって粉砕され、所望のサイズの粒子を形成する。液化ガスの超臨界特性を利用する技術は、治療用タンパク質を含む微粒子および粉末の生成に使用されている（Ｎｉｖｅｎ，Ｒ．Ｗ．，Ｉｎ：ＭＯＤＵＬＡＴＥＤ  ＤＲＵＧ  ＴＨＥＲＡＰＹ  ＷＩＴＨ  ＩＮＨＡＬＡＴＩＯＮ  ＡＥＲＯＳＯＬＳ：ＲＥＶＩＳＩＴＥＤ，  Ａ．Ｊ．Ｈｉｃｋｅｙ，ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。吸入目的に好適な晶癖および特徴を有する粒子は、これらの方法により調製することができる。例示的な超臨界流体処理加工技術には、超臨界流体の急速膨張（ｒａｐｉｄ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄｓ）（ＲＥＳＳ）、粒子を調製するための気体貧溶媒（ｇａｓ−ａｎｔｉｓｏｌｖｅｎｔ）（ＧＡＳ）沈殿の使用、および超臨界流体の溶液増強分散（ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄｓ）（ＳＥＤＳ）が含まれる（米国特許第５，３０１，６４４号、同第５，７０７，６３４号、同第５，７７０，５５９号、同第５，９８１，４７４号、同第５，８３３，８９１号、同第５，８７４，０２９号、および同第６，０６３，１３８号を参照のこと）。
【０１２６】
噴霧乾燥はまた、所望のサイズの乾燥脂質粒子を生成するために有利に使用され得る。（Ｍａｓｔｅｒ，Ｋ．，  ＳＰＲＡＹ  ＤＲＹＩＮＧ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；Ｍａａ，Ｙ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１５（５）：７６８−７７５，１９９８；  Ｍａａ，Ｙ．Ｆ．，Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．，２（３）：２１３−２２３，１９９７を参照のこと）。様々な噴霧乾燥法が特許文献に記載されている。例えば、米国特許第６，１７４，４９６号、同第５，９７６，５７４号、同第５，９８５，２８４号、同第６，００１，３３６号、同第６，０１５，２５６号、同第５，９９３，８０５号、同第６，２２３，４５５号、同第６，２８４，２８２号、および同第６，０５１，２５７号を参照。
【０１２７】
いくつかの関連する実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるように、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するまたはＣＲＳを処置するための、治療用キットまたは治療用組み合わせおよび関連する医薬組成物を提供する。キットおよび組成物は、典型的には、本明細書に記載される少なくとも１つの抗生物質および少なくとも１つのリン脂質化合物を含む。予め形成された細菌バイオフィルムを破壊し、ＣＲＳを処置するための上記の他の成分のいずれも、キットまたは医薬組成物中に提供され得る。本発明の治療用キットはまた、本発明の化合物または治療用製剤を投与するための上記のデバイスのうちの１つ以上、および管、緩衝液などを含み得る。キットの様々な構成要素は、別々の容器中に存在してもよいし、またはそれらの一部もしくはすべては、所望により、単一容器中で試薬混合物に事前に合わせもよい。上記の成分に加えて、本発明のキットは、本発明の方法を実施するための説明書をさらに含み得る。これらの説明書は、様々な形態で対象キットに存在し得、そのうちの１つ以上がキットに存在し得る。これらの説明書が存在し得る１つの形態は、好適な媒体または基体、例えば、情報が印刷される１枚または複数枚の紙、キットのパッケージ、添付文書などに印刷された情報としてである。これらの説明書のさらに別の形態は、情報が記録された、例えばディスケット、コンパクトディスク（ＣＤ）などのコンピュータ読み取り可能媒体である。存在し得るこれらの説明書のさらに別の形態は、情報にアクセスするためにインターネットを介して使用し得るウェブサイトアドレスである。
【実施例】
【０１２８】
以下の実施例は、本発明を例示することを意図しており、限定することを意図していない。
【０１２９】
実施例１  一緒にバイオフィルムを破壊するためのリン脂質および抗生物質
抗生物質と一緒にしたリン脂質が予め形成された細菌バイオフィルムを破壊する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。バイオフィルム形成は、９６ウェルプレート中で３７℃で２４時間インキュベートした後、（１）５％グルコースを補充したトリプチケースソイブロス培地中でＳ．Ａｕｒｅｕｓを培養すること、および（２）陽イオン調整したミューラーヒントンブロス中でＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを培養することによって得られた。次いで培地を除去し、抗生物質の処置溶液、抗生物質＋リン脂質、リン脂質単独、または対照溶液で置き換えた。アッセイで使用されたリン脂質濃度は５１２μｇ／ｍｌであったが、いくつかの研究では１０２５μｇ／ｍｌであった。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で２４時間インキュベートした。次いで培地を除去し、ウェルの底のバイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色して定量化した。
【０１３０】
研究の結果を図２に示した。結果は、ゲンタマイシンと一緒にしたリン脂質ドデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１２）がＳ．ａｕｒｅｕｓの予め形成されたバイオフィルムを破壊する能力を示した。図に示すように、ゲンタマイシン単独は成功しなかった。同様に、リン脂質単独もバイオフィルムを破壊しなかった（データは示していない）。リン脂質／ゲンタマイシンの組み合わせによるバイオフィルムの破壊により、Ｓ．ａｕｒｅｕｓも死滅した。
【０１３１】
実施例２  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルム形成を阻害する
抗生物質と一緒のリン脂質がバイオフィルムの形成を防止する能力のインビトロ試験も行った。新たに増殖させたＳ．ａｕｒｅｕｓおよびＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを定量化し、リン脂質ならびにゲンタマイシンおよびトブラマイシン（抗生物質）、リン脂質単独、抗生物質単独、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。３７℃で２４時間後、液体を除去し、ウェルをクリスタルバイオレットで染色し、次いでウェル中のクリスタルバイオレットの密度を５４０ｎｍの光吸収によって定量化した。
【０１３２】
図３は、試験の結果を示しており、これはＳ．ａｕｒｅｕｓによって生成されたバイオフィルムの形成に対する、リン脂質ドデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１２）およびゲンタマイシンの陽性効果対ゲンタマイシン単独の陰性活性を示した。図に示されるように、ゲンタマイシン単独は、低濃度のゲンタマイシンにおいてＳ．ａｕｒｅｕｓによるバイオフィルムの形成を防止しなかったのに対し、低濃度のゲンタマイシンおよびリン脂質の組み合わせはバイオフィルムの形成を防止した。リン脂質単独も、バイオフィルムの形成を防止しなかった。
【０１３３】
図３に示されるのと同じ結果が、図１に示される２つの他のリン脂質ジヒドロホスホコリン（ＤＰＨＣ）およびテトラデシルホスホコリンでも得られた。疎水性側鎖をほとんどまたは全く有しないリン脂質は、予め形成された細菌バイオフィルムを破壊するかまたはバイオフィルム形成を防止する活性を示さないことも観察された。
【０１３４】
実施例３  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルムを破壊する
抗生物質と一緒のリン脂質が予め形成された細菌バイオフィルムを破壊する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。バイオフィルム形成は、９６ウェルプレート中で３７℃で２４時間インキュベートした後、陽イオン調整したミューラーヒントンブロス中でＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを培養することにより得られた。次いで、培地を除去し、ゲンタマイシン、リン脂質およびゲンタマイシンの処置溶液、または対照溶液で置き換えた。３つまたは４つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（５１２μｇ／ｍｌ、１０２４μｇ／ｍｌ、および２０４８μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で６時間または２４時間インキュベートした。次いで培地を除去し、ウェルの底のバイオフィルムをクリスタルバイオレットで染色して定量化した。
【０１３５】
図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、および４Ｄは、６時間時点での試験の結果を示している。結果は、３つのリン脂質用量（５１２μｇ／ｍｌ、１０２４μｇ／ｍｌ、および２０４８μｇ／ｍｌ）のいずれかのＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、またはＭＡＰＣＨＯ−１６のいずれかと組み合わせてゲンタマイシンで処置した際、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムの破壊が起こることを示した。ゲンタマイシン単独は、バイオフィルムの破壊を誘発しなかった（図４Ａ）。
【０１３６】
図５Ａ、５Ｂ、および５Ｃは、２４時間の時点での試験の結果を示す。結果は、３つのリン脂質用量（５１２μｇ／ｍｌ、１０２４μｇ／ｍｌ、および２０４８μｇ／ｍｌ）のいずれかのＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、またはＭＡＰＣＨＯ−１６のいずれかと組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルムのほぼ完全な根絶が起こることを示した。
【０１３７】
実施例４  リン脂質および抗生物質は一緒に浮遊性細菌の増殖を阻害する
抗生物質と一緒のリン脂質が浮遊性細菌の増殖を阻害する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。新たに増殖させたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレート中に入れた。４つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６）を２つの異なるリン脂質試験濃度（１０２４μｇ／ｍｌおよび２０４８μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で６時間または２４時間インキュベートした。次いで細菌密度を分析し、ＯＤ６００で測定した。
【０１３８】
図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃは、６時間の時点での試験の結果を示す。結果は、１０２４μｇ／ｍｌおよび２０４８μｇ／ｍｌのリン脂質投与量のＭＡＰＣＨＯ−１２またはＭＡＰＣＨＯ−１４と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較して（図６Ａ）、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖の穏やかな阻害が観察されたことを示している（図６Ｂおよび６Ｃ）。
【０１３９】
図７Ａ、７Ｂ、および７Ｃは、２４時間の時点での試験の結果を示す。結果は、１０２４μｇ／ｍｌおよび２０４８μｇ／ｍｌのリン脂質用量のＭＡＰＣＨＯ−１４と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較して（図７Ａ）、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖が有意に阻害されることが観察されることを示している（図７Ｂおよび７Ｃ）。同様に、２０４８μｇ／ｍｌのリン脂質最高用量のＭＡＰＣＨＯ−１２と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較して、有意な阻害が観察される（図７Ｃ）。
【０１４０】
実施例５  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルムの形成を防止する
抗生物質と一緒のリン脂質がバイオフィルムの形成を防止する能力のインビトロ試験を行った。新たに増殖させたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。４つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６）を２つの異なるリン脂質試験濃度（１０２４μｇ／ｍｌおよび２０４８μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、液体を除去し、ウェルをクリスタルバイオレットで染色し、次いでウェル中のクリスタルバイオレットの密度を定量化した。
【０１４１】
図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃは、試験の結果を示す。図８Ａは、ゲンタマイシン単独ではＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成を防止できなかったことを示している。図８Ｂおよび８Ｃは、いずれかの試験されたリン脂質濃度でのゲンタマイシンとＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、またはＭＡＰＣＨＯ−１６のいずれかとの組み合わせが、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａバイオフィルム形成の防止に有効であることを示している。
【０１４２】
実施例６  リン脂質および抗生物質は一緒に細菌の増殖を阻害する
抗生物質と一緒のリン脂質が細菌増殖を防ぐ能力のインビトロ試験を行った。新たに増殖させたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。３つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（５１２μｇ／ｍｌ、１０２４μｇ／ｍｌ、および２０４８μｇ／ｍｌ）で試験した。次いで、３７℃で２４時間後、細菌密度を分析し、ＯＤ６００で測定した。
【０１４３】
図９Ａ、９Ｂ、および９Ｃは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６の試験結果を示す。図９Ｂおよび９Ｃは、ＭＡＰＣＨＯ−１４およびＭＡＰＣＨＯ−１６が、それぞれゲンタマイシンと組み合わせた場合、ゲンタマイシン単独での処置と比較して、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの細菌増殖を阻害するのにより効果的であることを示している。
【０１４４】
実施例７  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルムのさらなる成長を阻害する
抗生物質と一緒にしたリン脂質が予め形成された細菌のバイオフィルムを根絶する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。バイオフィルム形成は、９６ウェルプレート中で３７℃で２４時間インキュベートした後、陽イオン調整したミューラーヒントンブロス中でＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを培養することにより得られた。次いで、培地を除去し、ゲンタマイシン、リン脂質およびゲンタマイシンの処置溶液、または対照溶液で置き換えた。４つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（５１２μｇ／ｍｌ、１０２４μｇ／ｍｌ、および２０４８μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で６時間インキュベートした。次いで細菌密度を分析し、ＯＤ６００で測定した。
【０１４５】
図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１０、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６の試験の結果を示す。図１０Ｂ、１０Ｃ、および１０Ｄは、ＭＡＰＣＨＯ−１２、ＭＡＰＣＨＯ−１４、およびＭＡＰＣＨＯ−１６のいずれもが、ゲンタマイシンとの組み合わせで、ゲンタマイシン単独での処置と比較してＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細菌増殖を阻害するのにより効果的であることが判明したことを示している。
【０１４６】
実施例８  リン脂質および抗生物質は一緒に浮遊性細菌の増殖を阻害する
抗生物質と一緒にしたリン脂質が浮遊性細菌の増殖を阻害する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。新たに増殖させたＳ．ａｅｒｕｓを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。２つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（２５６μｇ／ｍｌ、５１２μｇ／ｍｌ、および１０２４μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で６時間インキュベートした。次いで細菌密度を分析し、ＯＤ６００で測定した。
【０１４７】
図１１Ａおよび１１Ｂは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２の試験の結果を示す。結果は、ＭＡＰＣＨＯ−１０と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較して、Ｓ．ａｅｒｕｓ増殖の穏やかな阻害が観察されるが（図１１Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較してＳ．ａｅｒｕｓ増殖の強い阻害が観察される（図１１Ｂ）。
【０１４８】
実施例９  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルムの形成を防止する
抗生物質と一緒にしたリン脂質がバイオフィルムの形成を防止する能力のインビトロ試験を行った。新たに増殖させたＳ．ａｅｒｕｓを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。２つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（２５６μｇ／ｍｌ、５１２μｇ／ｍｌ、および１０２４μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で６時間後、液体を除去し、ウェルをクリスタルバイオレットで染色し、次いでウェル中のクリスタルバイオレットの密度を定量化した。
【０１４９】
図１２Ａおよび１２Ｂは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２の試験の結果を示す。結果は、ゲンタマイシンと組み合わせて投与された場合、ＭＡＰＣＨＯ−１０またはＭＡＰＣＨＯ−１２のいずれかが、ゲンタマイシン単独での処置と比較して、Ｓ。
【０１５０】
実施例１０  リン脂質および抗生物質は一緒に浮遊性細菌の増殖を阻害する
抗生物質と一緒のリン脂質が浮遊性細菌の増殖を阻害する能力のインビトロ研究を行った。試験は以下のように行った。新たに増殖させたＭＲＳＡを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。２つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（２５６μｇ／ｍｌ、５１２μｇ／ｍｌ、および１０２４μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で２４時間後、培地を除去し、新鮮な培地を加え、９６ウェルプレートを３７℃で６時間インキュベートした。次いで細菌密度を分析し、ＯＤ６００で測定した。
【０１５１】
図１３Ａおよび１３Ｂは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２の試験の結果を示す。結果は、ＭＡＰＣＨＯ−１０と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較して、ＭＲＳＡ増殖の穏やかな阻害が観察されるが（図１３Ａ）、ＭＡＰＣＨＯ−１２と組み合わせてゲンタマイシンで処置した際に、ゲンタマイシン単独での処置と比較した場合、ＭＲＳＡ増殖の強い阻害が観察されることを示している（図１３Ｂ）。
【０１５２】
実施例１１  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルムの形成を防止する
抗生物質と一緒にしたリン脂質がバイオフィルムの形成を防止する能力のインビトロ試験を行った。新たに増殖させたＭＲＳＡを定量化し、ゲンタマイシン単独、リン脂質およびゲンタマイシン、または対照溶液と一緒に９６ウェルプレートに入れた。２つの異なるリン脂質（ＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２）を、３つの異なるリン脂質試験濃度（２５６μｇ／ｍｌ、５１２μｇ／ｍｌ、および１０２４μｇ／ｍｌ）で試験した。３７℃で６時間後、液体を除去し、ウェルをクリスタルバイオレットで染色し、次いでウェル中のクリスタルバイオレットの密度を定量化した。
【０１５３】
図１４Ａおよび１４Ｂは、それぞれＭＡＰＣＨＯ−１０およびＭＡＰＣＨＯ−１２の試験の結果を示す。結果は、ＭＡＰＣＨＯ−１２が、ゲンタマイシンと組み合わせて投与した場合、５１２μｇ／ｍｌおよび１０２４μｇ／ｍｌリン脂質試験濃度では、ゲンタマイシン単独での処置と比較してＭＲＳＡバイオフィルム形成の防止に対してより効果的である傾向があることを示している。
【０１５４】
実施例１２  リン脂質および抗生物質は一緒にバイオフィルム形成を阻害する
抗生物質と一緒のリン脂質がバイオフィルムの形成を防止する能力のインビトロ試験も行った。新たに増殖させたＳ．ａｕｒｅｕｓ（ＮＣＴＣ８３２５）を定量化し、リン脂質ならびにゲンタマイシンおよびトブラマイシン（抗生物質）または抗生物質単独と一緒に９６ウェルプレートに入れた。３７℃で２４時間後、液体を除去し、ウェルをクリスタルバイオレットで染色し、次いでウェル中のクリスタルバイオレットの密度を５４０ｎｍの光吸収によって定量化した。
【０１５５】
図１５は、トブラマイシン単独またはゲンタマイシン単独のいずれかと比較して、トブラマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかと組み合わせた５１２μｇの用量のリン脂質ドデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１２）のポジティブな効果を示した試験結果を示している。図１６および１７は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって生成されるバイオフィルムの形成に対する、それぞれゲンタマイシンまたはトブラマイシンのいずれかと組み合わせた５１２μｇの用量のテトラデシルホスホコリン（ＭＡＰＣＨＯ−１４）の同様のポジティブな効果を示している。
【０１５６】
図１５に示すように、ゲンタマイシン単独またはトブラマイシン単独のいずれかでの処置では、抗生物質が低濃度である場合、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによるバイオフィルムの形成が防止されなかったが、トブラマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかとリン脂質ＭＡＰＣＨＯ−１２との組み合わせでは、低濃度でバイオフィルム形成が防止された。リン脂質単独では、バイオフィルム形成が防止されなかった（データは示していない）。
＊＊＊
【０１５７】
本明細書で参照または言及されているすべての特許および刊行物は、本発明が属する当業者の技術レベルを示しており、そのような参照される特許または刊行物は、その全体が個別に参照により組み込まれているか、またはその全体が本明細書に記載されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。本出願人は、任意のそのような引用された特許または刊行物からの任意かつすべての資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を留保する。
【０１５８】
本明細書に記載される特定の方法および組成物は、実施形態の代表であり、例示であり、本発明の範囲に対する制限するものとして意図されるものではない。他の目的、態様、および実施形態は、本明細書を考慮した際に当業者が思い付くものであり、特許請求の範囲によって定義される本発明の真意内に包含される。本発明の範囲および真意から逸脱することなく、本明細書に開示された本発明に対して様々な置換および修正を行うことができることは当業者に容易に明らかであろう。特に明記しない限り、本明細書において好適により例示的に記載される本発明は、本明細書で本質的なものとして具体的に開示されていない任意の要素または限定なしに実施し得る。特に明記しない限り、本明細書で好適により例示的に記載される方法およびプロセスは、異なる順序のステップで実施し得、本明細書または特許請求の範囲に示すステップの順序に必ずしも限定されない。
【０１５９】
特に明記しない限り、使用されている用語および表現は、限定のための用語ではなく説明のための用語として使用され、そのような用語および表現を使用する場合、示されおよび記載された特徴またはその一部の任意の等価物を除外することを意図しておらず、しかしながら、様々な変更が、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲内で可能であることが認識される。したがって、本発明は実施形態および任意選択による特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示された概念の修正および変形は当業者によって行われ得、そのような修正および変形は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内にあるとみなされる。
【０１６０】
本発明は、本明細書に広く包括的に記載されている。包括的な開示の範囲に入る狭い種および下位概念的分類もそれぞれ、本発明の一部を形成する。これには、除かれたものが本明細書に具体的に記載されているかどうかに関係なく、任意の対象物を属から除外する条件または消極的限定を伴う本発明の包括的な記載が含まれる。
【０１６１】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。さらに、本発明の特徴または態様がマーカッシュ群に関して記載されている場合、当業者は、それにより本発明がマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても記載されていることを認識するであろう。
【図１】
2020534333.tif 000042
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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