(57)【要約】ワクチン、例えば、インフルエンザワクチン、例えば、ペプチドベースのワクチン、核酸ベースのワクチン、組換えウイルスベースのワクチン、抗体ベースのワクチン、およびウイルスベースのワクチンに関連する組成物を、本明細書中で提供する。ワクチン、例えばインフルエンザワクチンに関連する方法、例えば、ワクチンのエピトープの同定方法、ワクチンの生産、形成および投与方法も、本明細書中で提供する。【選択図】図４
2020515283.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに、配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むポリペプチド。
【請求項２】
配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに、配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むポリペプチド。
【請求項３】
以下を含むポリペプチド
ａ．  配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｂ．  配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４４、４５、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列：または
ｃ．  配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｄ．  配列番号１７、２０、２９、３１、３３、３４、４４、４５、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８７、８８、８９、９０、または９１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｅ．  配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｆ．  配列番号３、５１または５２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｇ．  配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または
ｈ．  配列番号２、８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４３、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の異なる配列、これに関し、第１の配列および第２の異なる配列を含む連続する配列は、ＰＢ１、ＰＡ、またはＮＰには見いだされない。
【請求項４】
第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列を含むポリペプチドであって、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列のそれぞれが、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４からなる群より選択される異なる配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含み、該ポリペプチドが天然に存在しない、前記ポリペプチド。
【請求項５】
第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列の少なくとも１つが、配列番号１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７２〜７８、８２、８３、８５〜９１、９３、および９４からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含む、請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４、および第５の配列の少なくとも１つが、配列番号２、３、４３、５１、および５２からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含む、請求項４または５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列の少なくとも１つが、配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、および９２からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含む、請求項４〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
さらに、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
さらに、配列番号１１６、１１７、または１１８のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
各配列が、最大１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸の長さを有する、請求項１〜９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１１】
第１の配列および第２の配列が直接連結している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
第１の配列および第２の配列がリンカーによって連結されている、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
リンカーが、複数のグリシン、アラニン、アルギニン、バリン、またはリジンを含む、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
リンカーが配列ＲＶＫＲ（配列番号１１０）を含む、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
さらに、配列ＧＡＬＮＮＲＦＱＩＫＧＶＥＬＫＳＫ（配列番号１０３）を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１６】
配列番号１０３がポリペプチドのアミノ末端部分に連結している、請求項１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、および９４を含む、請求項１〜１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】
ポリペプチドが単離ポリペプチドである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項２１】
ポリヌクレオチドが単離されている、請求項１９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項２０または２１に記載のポリヌクレオチドを含む組成物。
【請求項２３】
請求項２０または２１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２４】
ベクターが非ヒト霊長類ベクターである、請求項２３に記載のベクター。
【請求項２５】
ベクターがアデノウイルスベクターである、請求項２３または２４に記載のベクター。
【請求項２６】
ベクターがチンパンジーアデノウイルスベクターである、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項２７】
チンパンジーアデノウイルスベクターが、Ｃ６８（ＡｄＣ６８）（配列番号１０４）、Ｃ７（ＡｄＣ７）、Ｃ６（ＡｄＣ６）（配列番号１０５）、Ｐａｎ７、またはＰａｎ９の配列の少なくとも５０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を含む、請求項２６に記載のベクター。
【請求項２８】
ベクターが単離されている、請求黄２３〜２７のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項２９】
請求項２３〜２８のいずれか一項に記載のベクターを含む組成物。
【請求項３０】
請求項２０〜２１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むウイルス。
【請求項３１】
請求項２３〜２８のいずれか一項に記載のベクターを含むウイルス。
【請求項３２】
ウイルスが単離されている、請求項３０または３１に記載のウイルス。
【請求項３３】
ウイルスがアデノウイルスである、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載のウイルス。
【請求項３４】
請求項３０〜３３のいずれか一項に記載のウイルスを含む組成物。
【請求項３５】
少なくとも５つの異なるペプチドを含む組成物であって、少なくとも５つの異なるペプチドのそれぞれが、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含む配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、前記組成物。
【請求項３６】
各ペプチドが、最大１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸の長さを有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
さらに、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むペプチドを含む、請求項３５または３６に記載の組成物。
【請求項３８】
さらに、配列番号１１６、１１７、または１１８のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むペプチドを含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
さらに、医薬的に許容しうる賦形剤を含む、請求項１９、２２、２９、３４、または３５〜３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
組成物が、皮下、鼻腔内、または筋肉内投与のために製剤化される、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項１９、２２、２９、３４または３５〜４０のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与することを含む方法。
【請求項４２】
投与が皮下投与である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
投与が鼻腔内投与である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
投与が筋肉内投与である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
さらに、組成物を対象に２回目に投与することを含む、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
免疫応答が投与後に誘導される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
免疫応答が全身性免疫応答である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
対象がヒトである、請求項４１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
対象がウイルスに感染している、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ウイルスがインフルエンザウイルスである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
インフルエンザウイルスが、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、またはＣ型インフルエンザウイルスである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
インフルエンザウイルスがＡ型インフルエンザウイルスである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
組成物が、投与されたときに、対象においてＡ型インフルエンザ株の１以上のサブタイプに対して交差防御を誘発する、請求項５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
[0001]本出願は２０１６年１２月２８日に出願された米国仮出願第６２／４３９８６５号、および２０１７年８月２５日に出願された米国仮出願第６２／５５０１６７号の利益を主張するものであり、これらの米国仮出願を、全体として本明細書中に参考として援用する。
配列表
[0002]本出願はＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、その全体を本明細書中に参考として援用する。２０１７年１２月２７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、４６６９０−７０８＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズが１５２０３０バイトである。
【背景技術】
【０００２】
[0003]ワクチンは、特定の疾患に対する能動的適応免疫を提供することによって、ヒトの健康を大いに促進する。改善されたワクチン、例えばインフルエンザワクチンが必要とされている。改善されたワクチンは、より高い安全性、増大した免疫原性、より広範囲の病原体への適用、またはそれらの任意の組み合わせを示すことができる。
【発明の概要】
【０００３】
[0004]本開示の一観点は、配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに、配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むポリペプチドを提供する。
【０００４】
[0005]本開示の別の観点は、配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに、配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むポリペプチドを提供する。
【０００５】
[0006]本開示の別の観点は、以下を含むポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｂ）配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４４、４５、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列：または（ｃ）配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｄ）配列番号１７、２０、２９、３１、３３、３４、４４、４５、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８７、８８、８９、９０、または９１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｅ）配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｆ）配列番号３、５１または５２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｇ）配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｈ）配列番号２、８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４３、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の異なる配列、これに関し、第１の配列および第２の異なる配列を含む連続する配列は、ＰＢ１、ＰＡ、またはＮＰには見いだされない。
【０００６】
[0007]本開示の他の観点は、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列を含むポリペプチドであって、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列のそれぞれが、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４からなる群より選択される異なる配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含み、該ポリペプチドが天然に存在しない、前記ポリペプチドを提供する。
【０００７】
[0008]いくつかの場合において、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列の少なくとも１つは、配列番号１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７２〜７８、８２、８３、８５〜９１、９３、および９４からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含むことができる。場合によっては、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４、および第５の配列の少なくとも１つは、配列番号２、３、４３、５１、および５２からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含むことができる。場合によっては、第１の配列、第２の配列、第３の配列、第４の配列、および第５の配列の少なくとも１つは、配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、および９２からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含むことができる。
【０００８】
[0009]本明細書で提供されるポリペプチドはさらに、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むことができる。本明細書中で提供されるポリペプチドはさらに、配列番号１１６、１１７、または１１８のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むことができる。場合によっては、各配列は、最大１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸の長さを有することができる。いくつかの場合において、第１の配列および第２の配列は、直接連結していることができる。いくつかの場合において、第１の配列および第２の配列は、リンカーによって連結されていることができる。場合によっては、リンカーは、複数のグリシン、アラニン、アルギニン、バリン、またはリジンを含むことができる。リンカーは、配列ＲＶＫＲ（配列番号１１０）を含むことができる。本明細書で提供されるポリペプチドはさらに、配列ＧＡＬＮＮＲＦＱＩＫＧＶＥＬＫＳＫ（配列番号１０３）を含むことができる。配列番号１０３は、ポリペプチドのアミノ末端部分に連結することができる。本明細書で提供されるポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、および９４を含むことができる。
【０００９】
[0010]本明細書中に提供されるポリペプチドは、単離ポリペプチドであることができる。
[0011]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるポリペプチドを含む組成物を提供する。
【００１０】
[0012]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。本明細書中に提供されるポリヌクレオチドは、単離することができる。
【００１１】
[0013]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるポリヌクレオチドを含む組成物を提供する。
[0014]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。本明細書中に提供されるベクターは、非ヒト霊長類ベクターであることができる。本明細書中に提供されるベクターは、アデノウイルスベクターであることができる。本明細書中に提供されるベクターは、チンパンジーアデノウイルスベクターであることができる。いくつかの場合において、チンパンジーアデノウイルスベクターは、Ｃ６８（ＡｄＣ６８）（配列番号１０４）、Ｃ７（ＡｄＣ７）、Ｃ６（ＡｄＣ６）（配列番号１０５）、Ｐａｎ７、またはＰａｎ９の配列の少なくとも５０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を含むことができる。
【００１２】
[0015]本明細書中に提供されるベクターは、単離することができる。
[0016]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるベクターを含む組成物を提供する。
【００１３】
[0017]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるポリヌクレオチドを含むウイルスを提供する。
[0018]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるベクターを含むウイルスを提供する。
【００１４】
[0019]本明細書中に提供されるウイルスは、単離することができる。ウイルスは、アデノウイルスであることができる。
[0020]本開示の他の観点は、本明細書中に提供されるウイルスを含む組成物を提供する。
【００１５】
[0021]本開示の他の観点は、少なくとも５つの異なるペプチドを含む組成物であって、少なくとも５つの異なるペプチドのそれぞれが、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４からなる群より選択される配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を含む配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる、前記組成物を提供する。組成物のいくつかの場合において、各ペプチドは、最大１０、１２、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸の長さを有することができる。本明細書中に提供される組成物はさらに、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むペプチドを含むことができる。本明細書中に提供される組成物はさらに、配列番号１１６、１１７、または１１８のアミノ酸配列の少なくとも１０％に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含むペプチドを含むことができる。本明細書で提供される組成物はさらに、医薬的に許容しうる賦形剤を含むことができる。本明細書中に提供される組成物は、皮下、鼻腔内、または筋肉内投与のために製剤化することができる。
【００１６】
[0022]本開示の他の観点は、本明細書中に提供される組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの場合において、投与は皮下投与であることができる。いくつかの場合において、投与は鼻腔内投与であることができる。いくつかの場合において、投与は筋肉内投与であることができる。本明細書中に提供される方法はさらに、組成物を対象に２回目に投与することを含むことができる。いくつかの場合において、免疫応答は、投与後に誘導される可能性がある。免疫応答は、全身性免疫応答であることができる。いくつかの場合において、対象はヒトであることができる。いくつかの場合において、対象はウイルスに感染していることができる。ウイルスは、インフルエンザウイルスであることができる。インフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、またはＣ型インフルエンザウイルスであることができる。いくつかの場合において、インフルエンザウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルスであることができる。いくつかの場合において、組成物は、投与されたときに、対象においてＡ型インフルエンザ株の１以上のサブタイプに対して交差防御を誘発することができる。
参考としての援用
[0023]本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許、または特許出願が参考として援用されるように具体的かつ個々に示されている場合と同じ程度まで、本明細書中に参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
[0024]本発明の新規特徴を、付随の特許請求の範囲で詳細に説明する。本発明の特徴および利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な態様を示す以下の詳細な説明、および添付の図面を参照することによって得られる：
【図１】[0025]  図１は、ワクチンエピトープを発見するための方法を例示する。
【図２】[0026]  図２は、ワクチン接種マウスのインフルエンザチャレンジ投与(influenza challenge)の結果を例示する。
【図３Ａ】[0027]  図３Ａは、ワクチン接種マウスの初期体重のパーセントを例示する。
【図３Ｂ】[0028]  図３Ｂは、非ワクチン接種マウスの初期体重のパーセントを例示する。
【図３Ｃ】[0029]  図３Ｃは、群１（ＡｄＣｒｅ注射）マウスの初期体重のパーセントを例示する。
【図３Ｄ】[0030]  図３Ｄは、群２のワクチン接種マウスの初期体重のパーセントを例示する。
【図４】[0031]  図４は、図３Ａおよび３Ｂ中のワクチン接種マウスおよび非ワクチン接種マウスの生存率を例示する。
【図５】[0032]  図５は、本明細書中に提供されるアデノウイルスベースのワクチンを産生する方法を例示する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
[0033]ワクチン、例えばインフルエンザワクチンを形成するための方法および組成物を、本明細書中に提供する。該方法は、例えば、１以上のインフルエンザエピトープ、例えば１以上のＡ型インフルエンザエピトープ、例えば１以上のＡ型インフルエンザペプチドエピトープをコードする配列を使用して、組換えウイルスワクチン、例えば組換えアデノウイルスワクチンを作製することを含むことができる。１以上のエピトープは、“不変”配列、例えば、変異に対する忍容性が低い配列を含むことができる。１以上のエピトープは、実験的に確認されたヒトＣＤ８ Ｔ細胞Ａ型インフルエンザウイルスエピトープを含むことができる。組換えアデノウイルスは、少なくとも１、５、８、１０、２５、５０、１００、または１０００のペプチドエピトープを発現することができる。いくつかの場合において、発現されたエピトープは、例えば、共有結合を介して、例えば、単一のポリペプチドにおいて連結されている。いくつかの場合において、発現されたエピトープは連結されておらず、例えば、各エピトープは、別個のプロモーター、別個の核酸、または別個のウイルスから発現されることができる。いくつかの場合において、１以上のエピトープは、Ｉｍｍｕｎｅ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ）に記載されている。１以上のエピトープを含む単一のポリペプチドは、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザ由来の全長ウイルスタンパク（または全長ウイルスタンパク質の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％、またはそのようなタンパク質に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、もしくは１００％の配列同一性を有する配列）の１つ、２つ、またはそれより多くのコピーに連結していることができる。
【００１９】
[0034]定義
[0035]本明細書中で使用される専門用語は、特定の場合を説明するためのものに過ぎず、限定することを意図するものではない。本明細書で使用されるように、単数形“１つの(a)”、“１つの(an)”および“その”は、文脈が明確にそわないことを示していない限り、複数形も包含することができる。さらに、用語“含有する(contains)”、“含有している(containing)”、“包含している(including)”、“包含する(includes)”、“有している(having)”、“有する(has)”、“伴う(with)”、またはそれらの変形が詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかで使用されている範囲において、そのような用語は、“含んでいる(comprising)”という用語と同様に包括的であることができる。
【００２０】
[0036]用語“約”または“およそ”は、当業者によって決定されるような特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味することができ、これは、値がどのように測定または決定されるか、例えば、測定システムの限界に部分的に依存することができる。例えば、“約”は、所与の値における実施につき、１または１を超える標準偏差内を意味することができる。特定の値が出願および特許請求の範囲に記載されている場合、特記しない限り、“約”という用語は、“約”という用語によって修飾された値の±１０％など、特定の値に対する許容可能な誤差範囲を意味することができる。
【００２１】
[0037]用語“ポリペプチド”およびその文法的等価物は、本明細書中で使用される場合、ペプチド（アミド）結合によって連結されたアミノ酸モノマーの連続的および非分枝状の鎖をさすことができ、該結合は、１つのアミノ酸のカルボキシル基が他のアミノ酸のアミノ基と反応するときに形成される共有化学結合であることができる。特記しない限り、用語“ポリペプチド”および“ペプチド”は、本明細書中で使用される場合、互換可能である。もっとも短いポリペプチドは、単一のペプチド結合によって結び付けられた２つのアミノ酸のみを有するジペプチドであることができる。本開示の目的に関し、これらの用語は、長さの上限に関して限定するものとして解釈されるべきではない。この用語はまた、天然アミノ酸の類似体、ならびに側鎖、キラリティー、または特性において修飾されているアミノ酸を包含することができる。
【００２２】
[0038]用語“核酸”、“ポリヌクレオチド”、“ポリ核酸”、および“オリゴヌクレオチド”およびそれらの文法的等価物は互換的に使用することができ、線状または環状コンフォメーションにあり、一本鎖または二本鎖形態のいずれかにある、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドポリマーをさすことができる。本開示の目的に関し、これらの用語は、長さの上限に関して限定するものとして解釈されるべきではない。この用語はまた、天然ヌクレオチドの類似体、ならびに塩基、糖および／またはリン酸部分（例えば、ホスホロチオエート骨格）において修飾されているヌクレオチドを包含することができる。用語の修飾はまた、脱メチル化、ＣｐＧメチル化の付加、細菌メチル化の除去、および／または哺乳類メチル化の付加を包含することができる。一般に、特定のヌクレオチドの類似体は同じ塩基対合特異性を有することができる、すなわち、Ａの類似体はＴと塩基対合することができる。
【００２３】
[0039]本明細書で使用される用語“抗原”およびその文法的等価物は、１以上の受容体によって結合されることができる１以上のエピトープを含有する分子をさすことができる。例えば、抗原は、宿主の免疫系を刺激して、抗原が示された場合の細胞抗原特異的免疫応答、または体液性抗体応答をもたらすことができる。抗原はまた、単独で、または他の分子と組み合わせて存在する場合、細胞性および／または体液性応答を誘発する能力を有することができる。例えば、Ａ型インフルエンザウイルスタンパク質は、ＴＣＲによって認識することができる。
【００２４】
[0040]本明細書で使用される用語“エピトープ”およびその文法的等価物は、抗体、Ｂ細胞、Ｔ細胞または人工細胞によって認識することができる抗原の一部をさすことができる。例えば、エピトープは、ＴＣＲによって認識されるＡ型インフルエンザウイルスエピトープであることができる。抗原内の複数のエピトープを認識することもできる。エピトープはまた、変異していることができる。
【００２５】
[0041]用語“変異”およびその文法的等価物は、本明細書で使用される場合、当技術分野で一般に理解されているようなオープンリーディングフレームを除去する変異を含む、欠失、異種核酸の挿入、逆位または置換をさすことができる。
【００２６】
[0042]用語“遺伝子”およびその文法的等価物は、本明細書中で使用される場合、個々のポリペプチド、タンパク質またはＲＮＡ（“コード配列”または“コード領域”ともよばれる）をコードする核酸のセグメントであって、コード配列の上流または下流に位置することができる関連する調節領域、例えば、プロモーター、オペレーター、ターミネーターなどと一緒であってもよいセグメントをさすことができる。
【００２７】
[0043]用語“天然に存在する”およびその文法的等価物は、本明細書においてウイルスに関して使用される場合、ウイルスを天然に見いだすことができる、すなわち、天然の供給源から単離することができ、そしてこれが意図的に改変されていないことを示すことができる。
【００２８】
[0044]本明細書で言及される用語“阻害する”、“低減する”、または“防止する”、またはこれらの用語の任意の変形は、所望の結果を達成するための任意の測定可能な減少または完全な阻害を包含することができる。
【００２９】
[0045]本明細書で使用される“プロモーター”およびその文法的等価物は、転写の開始および速度を制御する核酸配列の領域である制御配列であることができる。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などの調節タンパク質および調節分子が結合することができる遺伝的要素を含有することができる。用語“作動可能なように位置決めされた”、“作動可能なように連結された”、“制御下にある”および“転写制御下にある”は、プロモーターが、その配列の転写開始および／または発現を制御するように、核酸配列に対して正しい機能的位置および／または配向にあることを意味することができる。いくつかの場合において、プロモーターは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列をさすことができる“エンハンサー”と共に使用してもよく、または使用しなくてもよい。
【００３０】
[0046]用語“対象”およびその文法的等価物は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、またはマウスを包含するがこれらに限定されない動物をさすことができる。用語“対象”および“患者”は、例えば、ヒト対象などの哺乳類対象に関して本明細書中で互換可能に使用することができる。
【００３１】
[0047]ワクチンに使用するためのエピトープの同定方法
[0048]本開示の一観点は、ワクチンに使用するためのエピトープの同定方法を提供する。該方法は、病原体、例えばウイルス、例えばＲＮＡウイルス、例えばインフルエンザウイルス、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザウイルスのエピトープ配列の同定に使用することができる。いくつかの場合において、本明細書中に提供される方法は、ワクチンに使用のための、病原体、例えばウイルス、例えばＲＮＡウイルス、例えばインフルエンザウイルス、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザウイルスのエピトープ配列の同定に関連して使用される。エピトープ配列は、ＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１、またはＮＥＰ／ＮＳ２のうちの１以上に由来することができ、またはこれらのうちの１以上に相同性を有することができる。
【００３２】
[0049]不変性または不変ペプチド領域は、例えば、２０１５年４月６日に出願された国際ＰＣＴ出願公開ＷＯ／２０１５／１５７１８９に記載されているように決定することができる。該国際ＰＣＴ出願公開を全体として本明細書中で参考として援用する。不変性は、病原体の適応度との関連でアミノ酸残基の機能的重要性を説明することができる。不変性は、病原体の適応度の程度であることができる。アミノ酸残基レベルにおいて、不変性は、変異に対するアミノ酸残基の忍容性、および、病原体の増殖能力、すなわち病原体の適応度に対するこの変異の有害性に、関連付けることができる。不変性は、病原体の生存におけるアミノ酸残基の役割と相関することができる。例えば、病原体の増殖に有害な影響を及ぼす病原体における変異は、破壊的変異とみなすことができ、病原体集団内での増殖が起こらないであろう。有害な変異と相関する関連するアミノ酸位置は、その変異が忍容されないので、不変であると特徴付けることができる。
【００３３】
[0050]該方法は、核酸ライブラリーの生成を含むことができる。いくつかの場合において、核酸ライブラリーは、特定の病原体株において生じることができるすべての考えうる変異のシミュレーションを、例えば、変異体Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのプールを生成することによって、可能にすることができる。いくつかの場合において、該方法はさらに、病原体、例えばＡ型インフルエンザウイルスのプールの産生を支持するために、ライブラリーを細胞に導入することを含むことができる。場合によっては、該方法はさらに、細胞を病原体のプールで数回（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれ以上）感染させ、結果として生じる病原体のプール、例えば、Ａ型インフルエンザウイルスを得、そして第２のシークエンシングライブラリーを生成することを含むことができる。該方法はさらに、第２のシークエンシングライブラリーの核酸配列を得ることを含むことができる。いくつかの場合において、該方法はさらに、配列を比較して（例えば、ライブラリー由来の配列を、第２のライブラリー由来の配列、または最後の回の感染に由来するライブラリーと比較して）、不変配列領域、例えば不変ペプチド領域を得ることを、含むことができる。不変配列領域は、ストレッチ(stretch)におけるすべての考えうる変異の中で、＜０．０５、＜０．０８、＜０．１、＜０．２、＜０．３、または＜０．４の平均不変比（最終集団における変異体の頻度／初期集団における頻度）を有することができる。該方法はさらに、不変配列領域を評価することを含むことができる。いくつかの場合において、該方法はさらに、不変配列領域のＨＬＡ親和性結合分析、ワクチン開発および患者の処置のためのいくつかの追加的な免疫原性分析、またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。用語“免疫原性”は、本明細書中で使用される場合、免疫応答を誘導する特定の物質、例えば、抗原またはエピトープの能力をさすことができる。いくつかの場合において、ワクチンに使用するためのエピトープ配列についての第１のスクリーニングは、免疫原性ペプチド配列を同定した後、配列不変性についてエピトープ配列を評価することを含む。
【００３４】
[0051]ＨＬＡ親和性結合分析は、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＤｅｎｍａｒｋのＣｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＣＢＳ）からのＮｅｔＭＨＣｐａｎ４．０、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ＨｅａｌｔｈからのＨＬＡペプチド結合予測サーバー、Ｉｍｍｕｎｅ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＥＤＢ）からのＭＨＣ−１結合予測サーバーなどの分析プログラムを用いて実施することができる。
【００３５】
[0052]いくつかの場合において、本明細書中に提供される方法によって同定される不変配列候補を、さらに分析することができる。例えば、不変配列候補を、インフルエンザウイルスエピトープの実験的に試験した免疫原性データ、例えばＩｎｆｌｕｅｎｚａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｌｕｄｂ．ｏｒｇ）のようなさまざまなデータベースにおけるものと比較することができる。比較により、免疫原性が実験的に証明されている（例えば、ｈｔｔｐｓ://ｆｌｕｄｂ.ｏｒｇに寄託されているもの）不変配列候補を同定し、さらなる解析またはワクチン開発のいずれかに付すことができる。例えば、このような不変配列候補、またはその多様体は、本明細書中に記載するような導入遺伝子から発現する可能性がある、本明細書中に記載するようなポリペプチドの構成エピトープ配列の１つになるように選択することができ、該導入遺伝子は、ウイルスベースのワクチン、例えばアデノウイルスベースのワクチンを産生するためのベクター、例えばウイルスベクターの一部であることができる。
【００３６】
[0053]追加的分析
[0054]ワクチン開発のため、およびインフルエンザなどの状態を処置または予防するために患者へワクチンを投与するための候補の不変配列またはペプチドを選択するために、追加的な分析を実施することができる。これらの追加的な分析またはスクリーニングは、免疫学的アッセイに基づく免疫応答の分析を包含することができる。いくつかの場合において、試験動物は最初に免疫化され（プライム）、プライムの数週間後に第２の免疫化（ブースト）を行っても行わなくてもよく、そして血液または組織試料を、例えば、最後の免疫化の２〜４週間後に収集する。これらの試験は、抗原または抗原のプールが防御免疫をもたらすか否かの決定に加え、防御免疫に相関する免疫パラメーター、例えば、特異抗体（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭ）の誘導および特異的Ｔリンパ球応答の誘導の測定を、可能にすることができる。
【００３７】
[0055]脾臓細胞、肺細胞、縦隔リンパ節由来の細胞、または末梢血単核細胞を、免疫化された試験動物から単離し、抗原特異的Ｔ細胞の存在およびサイトカイン合成の誘導について測定することができる。ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、または細胞質サイトカイン染色は、単独で、またはフローサイトメトリーと組み合わせて、単一細胞レベルについての前記情報を提供することができる。
【００３８】
[0056]免疫化の有効性を同定するために使用することができる免疫学的試験としては、抗体測定、中和アッセイ、および抗原または病原体に特異的な抗原提示細胞またはリンパ球の活性化レベルまたは頻度の分析が挙げられる。このような試験に使用することができる試験動物としては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、サル、またはヒトが挙げられる。
【００３９】
[0057]サルは、例えばサルとヒトのＭＨＣ分子は類似しているため、有用な試験動物であることができる。ウイルス中和アッセイは、病原体に特異的に結合するだけでなく、病原体（例えばウイルス）の機能を中和する抗体の検出に有用であることができる。これらは、免疫化された動物の血清中の抗体の検出、および組織培養細胞中の病原体（例えばウイルス）増殖を阻害するこれらの抗体の能力についての分析に基づくことができる。このようなアッセイは、当業者に公知である。ウイルス中和アッセイを用いて、防御免疫も提供する抗原をスクリーニングすることができる。
【００４０】
[0058]ポリペプチド
[0059]本開示の一観点は、１以上のインフルエンザウイルスエピトープ配列、例えばＡ型インフルエンザウイルスエピトープ配列を含むか、これからなるか、または本質的にこれからなるポリペプチドを提供する。
【００４１】
[0060]本明細書中で使用される場合、特定の配列または式に従った配列を“含む”ペプチドまたはポリペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端、またはその両方に追加的なアミノ酸残基、アミノ酸異性体、および／またはアミノ酸類似体を包含することができるペプチドまたはポリペプチドであることができる。追加的残基は、ペプチドまたはポリペプチドの活性または機能を変化させてもさせなくてもよく、例えば、特定の配列または式のみからなるペプチドの活性と比較して、ペプチドの活性を上昇または低下させる。本明細書中で使用される場合、特定の配列または式“から本質的になる”ペプチドは、その活性または機能を追加的残基が実質的に変化させない限り、例えば、特定の配列または式のみからなるペプチドの活性と比較してペプチドの活性を上昇または低下させない限り、ペプチドがＮ末端、Ｃ末端、またはその両方に追加的なアミノ酸残基、アミノ酸異性体、および／またはアミノ酸類似体を包含することができることを意味することができる。本明細書中で使用される場合、特定の配列または式“からなる”ペプチドは、ペプチドがそのＮ末端およびＣ末端の両方において、追加的なアミノ酸残基、アミノ酸異性体、および／またはアミノ酸類似体を包含しないことを意味することができる。
【００４２】
[0061]ポリペプチドは、本開示により提供される代表的方法によって同定されるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。例えば、ポリペプチドは、配列番号１〜９４からなる群より選択される１以上のエピトープ配列、または表１、表２、または表３から選択される１以上のエピトープ配列を含むか、それらからなるか、または本質的にそれらからなることができる。以下の表１、２、および３に、エピトープ配列、および該エピトープ配列が由来するウイルスタンパク、またはそのバリエーションを列挙する。本明細書中に記載されるポリペプチドのそれぞれは、化学的に合成することができ、またはｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏで発現させることができる。ポリペプチドは核酸によってコードされていることができ、そして核酸は、ベクター、例えばウイルスベクター、例えばアデノウイルスベクター内にあることができる。ベクター、例えばアデノウイルスベクターは、組換えウイルス、例えば組換えアデノウイルスを生成するために使用することができる。本明細書中のポリペプチドはいずれも、全長ウイルスタンパクとは異なっていることができる。本明細書中に提供されるポリペプチドは、天然に存在しないものであることができる。“天然に存在しないポリペプチド”という用語は、本明細書中で使用される場合、その一次配列が天然に存在しない、例えば、天然の単一分子中に見出すことができないポリペプチドをさすことができる。
【００４３】
【表１】
2020515283.tif 000003
【００４４】
【表２】
2020515283.tif 000004
【００４５】
【表３】
2020515283.tif 000005
【００４６】
【表４】
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【００４７】
【表５】
2020515283.tif 000007
【００４８】
【表６】
2020515283.tif 000008
【００４９】
【表７】
2020515283.tif 000009
【００５０】
[0062]本明細書中に記載されるポリペプチドは、１以上のエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。場合によっては、本明細書中に記載されるポリペプチドは、１より多くのエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、そのうちのいくつかのエピトープ配列は同じであるが、残りのエピトープ配列は異なるか、またはすべてのエピトープ配列が同じであるか、またはすべてのエピトープ配列が異なっている。いくつかの場合において、１以上のエピトープ配列は、ポリペプチドにおいて、例えば、約、少なくとも、または最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、もしくは２０回繰り返される。場合によっては、ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。ポリペプチドは１つのエピトープ配列のみを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、その１つのエピトープ配列は、ポリペプチド中に、約、少なくとも、または最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、または２０回存在することができる。
【００５１】
[0063]いくつかの場合において、ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４からなる群から選択される配列の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、または少なくとも２５の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、または少なくとも２５の連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含む。
【００５２】
[0064]いくつかの場合において、ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表１、表２、表３、またはそれらの任意の組み合わせから選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表１、表２、表３、またはそれらの任意の組み合わせから選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含む。該ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表１、表２、表３、またはそれらの任意の組み合わせから選択される配列の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、または少なくとも２５の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。ポリペプチドは、１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該１以上の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表１、表２、表３、またはそれらの任意の組み合わせから選択される配列の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、または少なくとも２５の連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含む。
【００５３】
[0065]ポリペプチドは、少なくとも２つの異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該少なくとも２つの異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。該ポリペプチドは、少なくとも３つの異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該少なくとも３つの異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。該ポリペプチドは、少なくとも４つの異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該少なくとも４つの異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。該ポリペプチドは、少なくとも５つの異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該少なくとも５つの異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。該ポリペプチドは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、または少なくとも５１の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該異なるエピトープ配列のそれぞれは、配列番号１〜９４、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％の配列同一性を含む。
【００５４】
[0066]非限定的な一例は、少なくとも５１の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなるポリペプチドに関し、該５１の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表３から選択される異なる配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも７０％の配列同一性を含む。場合によっては、ポリペプチドは、少なくとも５１の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、該５１の異なるエピトープ配列のそれぞれは、表３から選択される異なる配列の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、または少なくとも２５の連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を含む。いくつかの場合において、ポリペプチドは、表３からの各配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。
【００５５】
[0067]いくつかの場合において、ポリペプチドは、少なくとも８つのアミノ酸を含む。ポリペプチドは、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１４０、少なくとも１６０、少なくとも１８０、少なくとも２００、少なくとも２５０、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも１５００、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも４０００、少なくとも５０００、またはそれより多くのアミノ酸を含むことができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは、最大２０、最大３０、最大４０、最大５０、最大６０、最大７０、最大８０、最大９０、最大１００、最大１５０、最大２００、最大２５０、最大３００、最大５００、最大８００、最大１０００、最大１５００、最大２０００、最大２５００、最大３０００、最大４０００、または最大５０００のアミノ酸を含むか、またはそれからなる。ポリペプチドは、約８〜約５０００のアミノ酸、約８〜約４０００のアミノ酸、約８〜約３０００のアミノ酸、約８〜約２０００のアミノ酸、約８〜約１０００のアミノ酸、約８〜約５００のアミノ酸、約１００〜約５０００のアミノ酸、約１００〜約２５００のアミノ酸、約１００〜約１０００のアミノ酸、約１５００〜約３０００のアミノ酸、約１０００〜約３０００のアミノ酸、または約１０００〜約２５００のアミノ酸を含むか、それからなるか、本質的にそれからなることができる。ポリペプチドは、例えば、合成された場合、または例えば細胞において最初に発現された場合、５０００、４０００、３０００、２９００、２８００、２７００、２６００、２５００、２４００、２３００、２２００、２１００、２０００、１９００、１８００、１７００、１６００、１５００、１４００、１３００、１２００、１１００、１０００、７５０、５００、２５０、または１００未満のアミノ酸からなることができる。
【００５６】
[0068]ウイルスタンパク、例えばインフルエンザウイルスタンパク、例えばＡ型インフルエンザウイルスタンパク質の少なくとも一部から誘導することができるか、その変形物であるか、またはそのフラグメントであるかことができる１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる人工ポリペプチドを、本明細書中に提供する。いくつかの態様において、Ａ型インフルエンザウイルスタンパク質は、ＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍｌ、Ｍ２、ＮＳ１またはＮＥＰ／ＮＳ２であることができる。ＰＢ２はＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ複合体の一部であることができ、これは、宿主ｍＲＮＡ前駆体分子からの“キャップ−スナッチング(cap-snatching)”を促進して転写を開始させることができ、複製を誘導することができる。特定の状況において、ＰＢ１は、転写および複製の開始のためにｖＲＮＡおよびｃＲＮＡの末端に結合することができ、これは、ＲＮＡ鎖伸長中にヌクレオチドの逐次付加を触媒することができる、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであることができる。ＰＡはウイルスの転写および複製に使用することができ、エンドヌクレアーゼ活性を有することができる。いくつかの場合において、ＰＡはポリメラーゼ活性と相関しない。ＨＡは付着のために細胞表面上のシアル酸に結合することができ、低ｐＨで立体構造変化を経て、エンドソーム膜と相互作用することができる融合ペプチドを暴露し、ウイルスＲＮＰが細胞質中に放出されることを可能にする孔を形成することができる。ＮＰはウイルスＲＮＡをコートして、ウイルスリボ核タンパク質（ｖＲＮＰ）複合体を形成することができ、これは、ｖＲＮＰの核への輸送に重要であることができる。ＮＡは、ウイルスを細胞膜に固定することができるＨＡ−シアル酸結合の開裂によるウイルスの最終放出に、必要とされる可能性がある。ＮＡはまた、ウイルス粒子の凝集を妨げることができる。Ｍ１は、ビリオンの中間コアを形成してＮＰ  ｗ／ｖＲＮＰを拘束することができ、細胞膜からのウイルスの出芽を促進することができる。Ｍ２はイオンチャネル活性を有することができ、酸性化エンドソームからのプロトンをウイルス粒子に誘導して、残りのウイルス成分からのｖＲＮＰのｐＨ依存性解離をもたらすことができる。ＮＳ１は細胞性抗ウイルス１型インターフェロン応答を阻害することができ、ｄｓＲＮＡへの結合に依存することができる。ＮＥＰ／ＮＳ２は、細胞外搬出機構の補強によるｖＲＮＰの核外搬出に必要である可能性がある。Ａ型インフルエンザウイルスタンパク質は、ＮＰ、ＰＢ１、またはＰＡであることができる。
【００５７】
[0069]本明細書中に提供されるポリペプチドの非限定的な一例は、ＰＢ１タンパク質に由来する配列またはＰＢ１タンパク質の多様体、例えば、限定されるものではないが、配列番号１〜７、４３、５１、５２、および６３〜６６からなる群より選択される配列、または配列番号２、３、４３、５１、および５２からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの場合において、ポリペプチドはさらに、配列番号８〜４２、４４〜５０、５３〜６２、６７〜８０、および８２〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含む。ポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは全長ＰＢ１配列を含まない。
【００５８】
[0070]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、ＰＡタンパク質に由来する配列またはＰＡタンパク質の多様体、例えば、限定されるものではないが、配列番号８〜１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される配列、または配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。場合によっては、ポリペプチドはさらに、配列番号１〜７、１３〜３９、４２〜５７、６０、６３〜８０、８２、８３、８５〜９１、および９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むことができる。ポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは全長ＰＡ配列を含まない。
【００５９】
[0071]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、ＮＰタンパク質に由来する配列またはＮＰタンパク質の多様体、例えば、限定されるものではないが、配列番号１３〜３４、３７、３９、４２、４４〜５０、５３〜５７、６０、６７〜８０、８２、８３、８５〜９１、９３、および９４からなる群から選択される配列、または配列番号１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３〜７８、８２、８３、８５〜９１、９３、および９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。場合によっては、ポリペプチドはさらに、配列番号１〜１２、３５、３６、３８、４３、５１、５２、５８、５９、６１〜６６、８４、および９２からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むことができる。ポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは全長ＮＰ配列を含まない。
【００６０】
[0072]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、ＮＡタンパク質に由来する配列またはＮＡタンパク質の多様体、例えば、限定されるものではないが、配列番号３５および３８から選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。場合によっては、ポリペプチドはさらに、配列番号１〜３４、３６、３７、３９〜８０、および８２〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むことができる。ポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。場合によっては、ポリペプチドは全長ＮＡ配列を含まない。
【００６１】
[0073]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、Ｍ１タンパク質に由来する配列またはＭ１タンパク質の多様体、例えば、限定されるものではないが、配列番号３６の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなる。場合によっては、ポリペプチドはさらに、配列番号１〜３５、３７〜８０、および８２〜９４からなる群より選択される配列の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または１００％の配列同一性を有する１以上の異なるエピトープ配列を含む。ポリペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０〜２２、２４、２６、２９〜３４、４０、４１、４３〜４５、４９、５１〜５３、５８〜６２、７０、７３〜７８、および８２〜９４を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。場合によっては、ポリペプチドは全長Ｍ１配列を含まない。
【００６２】
[0074]本明細書中に提供されるポリペプチドの非限定的な一例は、配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。
【００６３】
[0075]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５２、５８、５９、６１、６２、８４、および９２からなる群より選択される第１の配列；ならびに配列番号１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４４、４５、４９、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、および９４からなる群より選択される第２の配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。
【００６４】
[0076]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、以下を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる：（ａ）配列番号８、１１、１２、４０、４１、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、６０、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｂ）配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４４、４５、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｃ）配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、４０、４１、４３、５１、５２、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｄ）配列番号１７、２０、２９、３１、３３、３４、４４、４５、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８７、８８、８９、９０、または９１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｅ）配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｆ）配列番号３、５１、または５２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｇ）配列番号２、８、１１、１２、４０、４１、４３、５８、５９、６１、６２、８４、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２１、２２、２４、２６、３０、３２、４９、５３、６０、７０、８５、８６、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の配列；または（ｈ）配列番号２、８、１１、１２、２１、２２、２４、２６、３０、３２、４０、４１、４３、４９、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、８４、８５、８６、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第１の配列、および配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む第２の異なる配列、これに関し、第１の配列および第２の異なる配列を含む連続する配列は、ＰＢ１、ＰＡ、またはＮＰには見いだされない。
【００６５】
[0077]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、以下の群のうち少なくとも２つから選択される配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる：（ａ）配列番号８、４０、４１、または８４の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｂ）配列番号１１、５８または５９の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｃ）配列番号１２、６１、６２、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｄ）配列番号２または４３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｅ）配列番号３、５１、または５２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｆ）配列番号３２、９３、９４、または７０の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｇ）配列番号２１、２２、または８５の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｈ）配列番号２４、４９、または８６の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｉ）配列番号２６、５３、３０、または６０の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｊ）配列番号１７、８２、または８３の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｋ）配列番号２０、４４、または４５の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｌ）配列番号２９、８７、８８、８９、９０、または９１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｍ）配列番号３１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；および（ｎ）配列番号３３、３４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列；これに関し、少なくとも１つの配列は（ａ）〜（ｄ）群から選択され、少なくとも１つの配列は（ｆ）〜（ｎ）群から選択される。
【００６６】
[0078]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、以下を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる：（ｏ）配列番号８、４０、４１、または８４のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３または４つの配列、あるいは配列番号８、４０、４１、または８４のいずれかに対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３または４つの配列；（ｐ）配列番号１１、５８、または５９のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列、あるいは配列番号１１、５８、または５９のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７の連続するアミノ酸に対して少なくとも５２％、少なくとも５８％、少なくとも６４％、少なくとも７０％、および少なくとも７６％、少なくとも８２％、少なくとも８８％、少なくとも９４％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列；（ｑ）配列番号１２、６１、６２、または９２の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列、あるいは配列番号１２、６１、６２、または９２のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７の連続するアミノ酸に対して少なくとも５２％、少なくとも５８％、少なくとも６４％、少なくとも７０％、および少なくとも７６％、少なくとも８２％、少なくとも８８％、少なくとも９４％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列；（ｒ）配列番号２または４３のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１または２つの配列、あるいは配列番号２または４３のいずれかの少なくとも９または１０の連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１または２つの配列；（ｓ）配列番号３、５１、または５２のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列、あるいは配列番号３、５１、または５２のいずれかの少なくとも９または１０の連続するアミノ酸に対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列；（ｔ）配列番号３２、９３、９４、または７０のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列、あるいは配列番号３２、９３、９４、または７０のいずれかの９または１０の連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列；（ｕ）配列番号２１、２２、または８５のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列、あるいは配列番号２１、２２、または８５のいずれかの９つの連続するアミノ酸に対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列；（ｖ）配列番号２４、４９、または８６のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性、あるいは配列番号２４、４９、または８６のいずれかの９つの連続するアミノ酸に対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２または３つの配列；（ｗ）配列番号２６、５３、３０、または６０のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列、あるいは配列番号２６、５３、３０、もしくは６０のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、もしくは１６の連続するアミノ酸、または配列番号３０もしくは６０のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、もしくは１７の連続するアミノ酸に対して、少なくとも５０％、少なくとも５６％、少なくとも６２％、少なくとも６８％、少なくとも７５％、少なくとも８１％、少なくとも８７％、少なくとも９３％、または少なくとも１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、または４つの配列；（ｘ）配列番号１７、８２、または８３のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列、あるいは配列番号１７、８２、または８３のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、または１４の連続するアミノ酸に対して少なくとも５０％、少なくとも５７％、少なくとも６０％、少なくとも７１％、少なくとも７８％、少なくとも８５％、少なくとも９２％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列；（ｙ）配列番号２０、４４、または４５のいずれかの少なくとも８つの連続アミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列、あるいは配列番号２０、４４、または４５のいずれかの９つの連続するアミノ酸に対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、または３つの配列；（ｚ）配列番号２９、８７、８８、８９、９０、または９１のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、４、５、または６つの配列、あるいは配列番号２９、８７、８８、８９、９０、または９１のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８の連続するアミノ酸に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６１％、少なくとも６６％、少なくとも７２％、少なくとも８３％、少なくとも８８％、少なくとも９４％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、４、５、または６つの配列；（ａａ）配列番号３１の少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性を含む配列、あるいは配列番号３１の９つの連続するアミノ酸に対して少なくとも５５％、少なくとも６６％、少なくとも７７％、少なくとも８８％、または１００％の配列同一性を含む配列；（ｂｂ）配列番号３３、３４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のいずれかの少なくとも８つの連続するアミノ酸に対して少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８つの配列、あるいは配列番号３３、３４、７３、７４、７５、７６、７７、または７８のいずれかの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５の連続するアミノ酸に対して少なくとも５２％、少なくとも５６％、少なくとも６０％、少なくとも６４％、少なくとも６８％、少なくとも７２％、少なくとも７６％、少なくとも８０％、少なくとも８４％、少なくとも８８％、少なくとも９２％、少なくとも９６％、または１００％の配列同一性をそれぞれ含む、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、または８つの配列；あるいは（ｏ）〜（ｂｂ）の任意の組み合わせ。
【００６７】
[0079]本明細書中に提供されるポリペプチドの他の非限定的な例は、以下を含むか、それからなるか、本質的にそれからなることができる：（ｃｃ）配列番号８、４０、４１、および８４からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｄｄ）配列番号１１、５８、および５９からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｅｅ）配列番号１２、６１、６２、および９２からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｆｆ）配列番号２および４３からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｇｇ）配列番号３、５１、および５２からなる群からの少なくとも３つの配列；（ｈｈ）配列番号３２、９３、９４、および７０からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｉｉ）配列番号２１、２２、および８５からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｊｊ）配列番号２４、４９、および８６からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｋｋ）配列番号２６、５３、３０、および６０からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｌｌ）配列番号１７、８２、および８３からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｍｍ）配列番号２０、４４、および４５からなる群からの少なくとも２つの配列；（ｎｎ）配列番号２９、８７、８８、８９、９０、および９１からなる群からの少なくとも２つの配列；または（ｏｏ）配列番号３３、３４、７３、７４、７５、７６、７７、および７８からなる群からの少なくとも２つの配列。
【００６８】
[0080]いくつかの場合において、本明細書中に提供されるポリペプチドはさらに、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）のウイルスタンパク、例えば、１以上のインフルエンザウイルスタンパク、例えば、１以上のＡ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザウイルスタンパク、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザからのＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１またはＮＥＰ／ＮＳ２の全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）を含むことができる。いくつかの場合において、本明細書中に提供するワクチンは、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）のウイルスタンパク、例えば、１以上のインフルエンザウイルスタンパク、例えば、１以上のＡ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザウイルスタンパク、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザに由来するＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１またはＮＥ／ＮＳ２の全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）を含むポリペプチドを含み、例えば、または、ポリペプチドは、別個の核酸またはワクチン中のウイルス、例えばアデノウイルスから発現される。本明細書中に提供されるポリペプチドは、ウイルスタンパク質の全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）の配列の１、２、３、４、または５またはそれより多くのコピーを含むことができる。全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）は、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、ポリペプチドの内部、または、例えば、多重コピーが存在する場合、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に存在することができる。例えば、ポリペプチドは、表１、表２、または表３に由来する少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、または５１の配列（例えば、各配列は、表１、表２、または表３の１つに由来する）、これに関し、各配列は、リンカーによって分離されているか、または分離されていない；ならびに、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）のウイルスタンパク、例えば、１以上のインフルエンザウイルスタンパク、例えば、１以上のＡ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザウイルスタンパク、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザに由来するＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１、またはＮＥＰ／ＮＳ２の全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）の１、２、または３つのコピーを、含むことができる。
【００６９】
[0081]いくつかの場合において、本明細書中に提供されるポリペプチドはさらに、インフルエンザ、例えば、Ａ型インフルエンザ、またはＢ型インフルエンザ、Ｃ型インフルエンザのＮＰタンパク質の全長アミノ酸配列（または全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）を含むことができる。いくつかの場合において、ＮＰタンパク質配列（またはＮＰの全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）は、Ｂ型インフルエンザの任意の適切な株に由来することができる。例えば、配列は、インフルエンザシーズンの流行株または流行が予想される株に基づき選択することができる。ＮＰ配列を選択するＢ型インフルエンザ株は、無作為に選択することができる。例えば、ポリペプチドは、Ｂ／ビクトリア系統に属するＢ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８様またはＢ／山形系統に属するＢ／Ｐｈｕｋｅｔ／３０７３／２０１３様もしくはＢ／Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ／４９／２０１５のような特定のＢ型インフルエンザ株に由来するＮＰタンパク質配列のアミノ酸配列（またはＮＰの全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）を含むことができる。Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質の全長アミノ酸配列の誘導体（またはフラグメント）は、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質の全長アミノ酸配列（またはＮＰの全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）に対して少なくとも６０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、少なくとも９９％の同一性、少なくとも９９．５％の同一性、少なくとも９９．８％の同一性、少なくとも９９．９％の同一性、少なくとも９９．９９％の同一性を含むことができる。Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質の全長アミノ酸配列の誘導体（またはフラグメント）は、Ｂ型インフルエンザのＮＰタンパク質の全長アミノ酸配列とは異なる最大１００のアミノ酸、最大８０のアミノ酸、最大６０のアミノ酸、最大５０のアミノ酸、最大４０のアミノ酸、最大３０のアミノ酸、最大２０のアミノ酸、最大１５のアミノ酸、最大１０のアミノ酸、最大９のアミノ酸、最大８のアミノ酸、最大７のアミノ酸、最大６のアミノ酸、最大５のアミノ酸、最大４のアミノ酸、最大３のアミノ酸、最大２のアミノ酸、または１アミノ酸のみを含むか、それからなることができる。ポリペプチドは、各配列間のリンカーの有無にかかわらず、表１の配列のすべてと、全長タンパク質（またはタンパク質の全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）、例えば、Ｂ型インフルエンザ株に由来するＮＰタンパク質の１または２つのコピーとを含むことができる。ポリペプチドは、各配列間のリンカーの有無にかかわらず、表２の配列のすべてと、全長タンパク質（またはタンパク質の全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）、例えば、Ｂ型インフルエンザ株に由来するＮＰタンパク質の１または２つのコピーとを含むことができる。ポリペプチドは、各配列間のリンカーの有無にかかわらず、表３の配列のすべてと、全長タンパク質（またはタンパク質の全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％）、例えば、Ｂ型インフルエンザ株に由来するＮＰタンパク質の１または２つのコピーとを含むことができる。
【００７０】
[0082]いくつかの場合において、ポリペプチドは、Ｂ／ビクトリア系統に属するウイルス由来のＮＰタンパク質のアミノ酸配列（全長またはフラグメント）を含むことができる。例えば、ポリペプチドは、Ｂ型インフルエンザ／Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８に由来するＮＰタンパク質（受託番号：ＡＧＫ６３０６４．１、配列番号１１６）の全長、または、例えば、１〜５６０、３８〜５５７、５０〜５００、１００〜５００、２００〜４００、１〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、または５００〜５６０のアミノ酸を含むフラグメントに対して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは、Ｂ／山形系統に属するウイルス由来のＮＰタンパク質のアミノ酸配列（全長またはフラグメント）を含むことができる。例えば、ポリペプチドは、Ｂ型インフルエンザ／山形／１６／１９８８に由来するＮＰタンパク質（受託番号：ＡＢＬ７７２６０．１、配列番号：１１７）またはＢ型インフルエンザ／Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ／４９／２０１５に由来するＮＰタンパク質（受託番号：ＡＯＺ８２２７８．１、配列番号：１１８）の全長、または、例えば、１〜５６０、２〜５６０、５０〜５００、１００〜５００、２００〜４００、１〜１００、２〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、または５００〜５６０のアミノ酸を含むフラグメントに対して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの場合において、ポリペプチドは、Ｂ／ビクトリア系統に属するウイルス由来のＮＰタンパク質のアミノ酸配列（全長またはフラグメント）またはその誘導体、およびＢ／山形系統に属するウイルス由来のＮＰタンパク質のアミノ酸配列（全長またはフラグメント）またはその誘導体の両方を含むことができる。
【００７１】
[0083]本明細書中で提供されるポリペプチドは、順番に配置された１以上のエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。いくつかの場合において、エピトープ配列は、免疫原性の増進、発現の増加、ポリペプチド安定性の促進、ポリペプチド溶解性の上昇、ポリペプチド鎖のｉｎ  ｖｉｖｏ開裂の促進、またはワクチン性能に影響を及ぼし得る任意の他の因子、またはそれらの任意の組み合わせを考慮して、特定の順序で配置される。当業者が達成することができるように１以上の特定のパラメーターをアップレギュレートまたはダウンレギュレートするかのいずれかで、ポリペプチド中のエピトープ配列の順序を操作して、ワクチンの特定の観点を微調整することも可能である。
【００７２】
[0084]いくつかの態様において、ポリペプチドは、直接的に例えば“背中合わせに”一緒に連結されている１より多くのエピトープ配列を含む。あるいは、ポリペプチドは、少なくとも２つの隣接するエピトープ配列がリンカー配列で連結されている１より多くのエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。ポリペプチドは、全体にわたって単一タイプのリンカー配列を含むことができる。ポリペプチドは、１より多くの異なるタイプのリンカー配列を含むことができる。リンカー配列の選択は、ペプチド配列の選択、いくつかの異なるパラメーター、例えば、限定されるものではないが、発現レベル、フォールディングおよび安定性、溶解性、細胞および細胞内標的化、免疫原性、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期に対する特定の要件に応じて変動する可能性がある。
【００７３】
[0085]リンカーは、単一のポリペプチド中の複数のドメインを分離するための短いアミノ酸配列であることができる。いくつかの場合において、リンカー配列は、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれより多くのアミノ酸を含むことができる。リンカー配列は、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、または少なくとも５０のアミノ酸を含むことができる。リンカー配列は、最大４、最大５、最大６、最大７、最大８、最大９、最大１０、最大１１、最大１２、最大１５、最大２０、最大３０、最大４０、最大５０、または最大１００のアミノ酸を含むことができる。
【００７４】
[0086]リンカー配列は、天然のマルチドメインタンパク質中に存在し、その中のドメインを連結する配列を含むことができる。リンカー配列は、人工的に作製されたリンカーを含むことができる。リンカーはまた、天然のリンカータンパク質と人工的に作製された配列の両方の接合産物であることができる。いくつかの場合において、特異的リンカー配列は、ポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ開裂性のために選択することができる。例えば、特定のエピトープ配列間で開裂させて、抗原提示細胞に提示されるポリペプチドの分離された２以上の部分を別々にすることが望ましい可能性がある。リンカーは、複数のグリシン、アラニン、またはそれらの任意の組合せを含むことができる。リンカーは、複数のアルギニン、バリン、リジン、またはそれらの任意の組合せを含むことができる。このような典型的な状況下では、ＬＥＡＧＣＫＮＦＦＰＲＳＦＴＳＣＧＳＬＥ（配列番号９５）、ＣＲＲＲＲＲＲＥＡＥＡＣ(配列番号９６）などのリンカー配列を選ぶことができる。場合によっては、軟質リンカー配列、例えば、限定されるものではないが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ｎ＝１〜１０）（配列番号１０７）、（Ｇｌｙ）８（配列番号９７）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号９８）、（ＧＧＧＧＳ）４（配列番号９９）のようなＧｌｙおよびＳｅｒ残基のストレッチ（“ＧＳ”リンカー）を使用することが望ましい可能性がある。いくつかの場合では、剛性リンカー配列、例えば、限定されるものではないが、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号１０８）、任意のアミノ酸を示すＸを用いることができる（ＸＰ）ｎ（ｎ＝１〜２０）（配列番号１０９）のようなプロリッチ(Pro-rich)配列を使用することが望ましい可能性がある。いくつかの場合では、リンカー配列ＲＶＫＲ(配列番号１１０）を選ぶことができる。リンカー配列ＲＶＫＲ(配列番号１１０）は、いくつかの状況において免疫刺激性であることができる。ポリペプチドは、表１、表２、または表３に由来する各配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、これに関し、各配列はリンカーによって分離されている。ポリペプチドは、表１、表２、または表３に由来する各配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、これに関し、各配列はリンカーによって分離されていない。ポリペプチドは、表１、表２、または表３に由来する各配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができ、これに関し、配列のいくつかはリンカーによって分離されており、配列のいくつかはリンカーによって分離されていない。
【００７５】
[0087]本開示の特定の観点において、本明細書中に提供されるポリペプチドはさらに、上記エピトープ配列の１以上に接続されているＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞エピトープを含む。“接続”は、例えば、直接的もしくは間接的な共有結合、または直接的もしくは間接的な非共有結合であることができる。ＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞エピトープは、ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ (配列番号１００）であることができる。いくつかの場合において、ＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞エピトープは、ＡＫＦＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（ＨＬＡ  ＤＲ結合エピトープ、ＰＡＤＲＥ）（配列番号１０１）、またはＰＡＤＲＥ配列の非天然アミノ酸誘導体、ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡＺＣ（配列番号１０２）であり、これに関し、ＸはＬ−シクロヘキシルアラニンであり、Ｚはアミノカプロン酸である。いくつかの場合において、ＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞エピトープは、ＧＡＬＮＮＲＦＱＩＫＧＶＥＬＫＳＫ（配列番号１０３）であることができる。いくつかの態様において、本明細書中に提供されるポリペプチド、例えば、配列番号１〜９４から選択される配列または表１、表２もしくは表３から選択される配列を含むポリペプチドのＣ末端は、リジンに付着しており、該リジンはＣＤ４+ Ｔ細胞エピトープのＮ末端に付着している。ＣＤ４＋（ヘルパー）Ｔ細胞エピトープのＣ末端がリジンに付着していてもよく、該リジンが、配列番号１〜９４から選択される配列または表１、表２、もしくは表３から選択される配列を含むペプチドのＮ末端に付着していてもよい。
【００７６】
[0088]ポリペプチドは、全長ウイルスタンパク、例えば、全長ＰＢ１、ＰＢ１−Ｆ２、ＰＢ２、ＰＡ、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、Ｍ１、Ｍ２、ＮＳ１、またはＮＥＰ／ＮＳ２タンパク質に連結していることができ、または、該ポリペプチドは、例えば、Ａ型インフルエンザ、Ｂ型インフルエンザ、またはＣ型インフルエンザに由来するこれらのタンパク質のいずれかの全長配列の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは９５％に対して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列同一性を有するタンパク質に、例えば本明細書中に記載するリンカーを介して連結していることができ、または接続はリンカーなしであることができる。
【００７７】
[0089]本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上の天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。アミノ酸残基は、アミノ基およびカルボキシル基の両方を含有する分子であることができる。記載するペプチドに使用するのに適したアミノ酸としては、限定なしで、天然に存在するアミノ酸のＤ−およびＬ−異性体（アミノ酸異性体）の両方、ならびに有機合成または他の代謝経路によって調製される天然に存在しないアミノ酸が挙げられる。アミノ酸は、α−アミノ酸、β−アミノ酸、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはアミノ酸類似体であることができる。α−アミノ酸は、α−炭素とよばれる炭素に結合しているアミノ基およびカルボキシル基の両方を含有する分子であることができる。β−アミノ酸は、アミノ基およびカルボキシル基の両方をβ配置で含む分子であることができる。天然に存在するアミノ酸は、天然で合成されるペプチドに一般に見いだされる２０のアミノ酸のいずれか１つであることができ、１文字の略語Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、ＹおよびＶによって知られる。
【００７８】
[0090]本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上の疎水性、親水性、極性、または荷電アミノ酸を含むことができる。疎水性アミノ酸は、小さな疎水性アミノ酸および大きな疎水性アミノ酸を包含することができる。小さな疎水性アミノ酸は、グリシン、アラニン、プロリン、ならびにそれらの類似体および異性体であることができる。大きな疎水性アミノ酸は、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、ならびにそれらの類似体および異性体であることができる。極性アミノ酸は、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、チロシン、ならびにそれらの類似体および異性体であることができる。荷電アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、またはそれらの類似体であることができる。
【００７９】
[0091]本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上のアミノ酸類似体を含むことができる。アミノ酸類似体は、構造的にアミノ酸に類似し、ペプチド模倣大環状分子の形成においてアミノ酸を置換することができる分子であることができる。アミノ酸類似体としては、β−アミノ酸およびアミノ酸であって、アミノまたはカルボキシル基が同様の反応性基によって置換されている（例えば、第二級もしくは第三級アミンでの第一級アミンの置換、またはエステルでのカルボキシル群の置換）ものが挙げられる。
【００８０】
[0092]本明細書中に提供されるポリペプチドは、１以上の非天然アミノ酸を含むことができる。非天然アミノ酸は、天然で合成されるペプチドに一般に見いだされる２０のアミノ酸のうちの１つではなく、１文字の略語Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、ＹおよびＶによって知られるアミノ酸であることができる。
【００８１】
[0093]アミノ酸類似体は、β−アミノ酸類似体を含むことができる。アミノ酸類似体としては、アラニン、バリン、グリシン、ロイシン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、プロリン、セリン、トレオニン、および／またはトリプトファンの類似体を挙げることができる。
【００８２】
[0094]アミノ酸類似体は、ラセミ体であることができる。いくつかの態様では、アミノ酸類似体のＤ異性体を用いる。いくつかの場合では、アミノ酸類似体のＬ異性体を用いる。いくつかの態様において、アミノ酸類似体は、ＲまたはＳ配置にあるキラル中心を含む。場合によっては、β−アミノ酸類似体のアミノ基（１以上）は、保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ基）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、トシルなどで置換されている。場合によっては、β−アミノ酸類似体のカルボン酸官能基は、例えば、そのエステル誘導体として保護されている。いくつかの場合では、アミノ酸類似体の塩が使用される。
【００８３】
[0095]本明細書中に提供されるポリペプチドは、非必須アミノ酸を含むことができる。非必須アミノ酸残基は、その本質的な生物学的または生化学的活性（例えば、受容体の結合または活性化）を消失または実質的に改変させることなく、ペプチドの野生型配列から改変させることができる残基であることができる。本明細書中に提供されるペプチドは、必須アミノ酸を含むことができる。必須アミノ酸残基は、ペプチドの野生型配列から改変された場合、ペプチドの本質的な生物学的または生化学的活性の消失または実質Ａ的消失をもたらす残基であることができる。
【００８４】
[0096]本明細書中に提供されるポリペプチドは、保存的アミノ酸置換を含むことができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものであることができる。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、Ｋ、Ｒ、Ｈ）、酸性側鎖（例えば、Ｄ、Ｅ）、非荷電極性側鎖（例えば、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｃ）、非極性側鎖（例えば、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、Ｗ）、ベータ分枝状側鎖（例えば、Ｔ、Ｖ、Ｉ）、および芳香族側鎖（例えば、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｈ）を有するアミノ酸を挙げることができる。したがって、例えば、ペプチド中の予測される非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーに由来する他のアミノ酸残基で置換されていることができる。許容しうる置換の他の例は、等配電子的考慮（例えば、メチオニンをノルロイシンで）または他の特性（例えば、フェニルアラニンを２−チエニルアラニンで、またはトリプトファンを６−Ｃ１−トリプトファンで）に基づく置換であることができる。
【００８５】
[0097]ワクチン組成物
[0098]本明細書中に提供される個々のエピトープ配列、本明細書中に提供されるように個々のエピトープ配列が連結されているポリペプチド、本明細書中に提供される個々のエピトープ配列またはポリペプチドを発現する核酸、本明細書中に提供される個々のエピトープ配列またはポリペプチドを発現する核酸を含むベクター、またはそのような核酸もしくはベクターを含むウイルスは、ワクチンとして製剤化することができる。本明細書中に提供されるワクチンは、抗体の産生を刺激し、１以上の疾患、例えばインフルエンザに対する免疫を提供するために使用される、任意の物質であることができる。ワクチンは、生きた病原体、生きた弱毒化病原体、または、例えば、化学薬品、熱、または放射線によって不活性化されている不活性化病原体から調製することができる。ワクチンは病原体のサブユニットまたは部分を含有することができ、これらのサブユニットは、所望によりコンジュゲートしていることができる。ワクチンはまた、ペプチドに基づくワクチン、核酸に基づくワクチン、ウイルスベクターに基づくワクチン、抗体に基づくワクチン、または抗原提示細胞に基づくワクチンとして調製することができる。
【００８６】
[0099]ワクチンは、例えば病原体に対して保護することができる。病原体は、細菌、真菌、ウイルス、原生動物などを含む任意の感染性生物であることができる。ワクチンはまた、腫瘍または癌ワクチンを包含することができる。本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、対象の体、例えば人体に投与されると、全身性免疫応答を誘発することができる。本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、対象の体、例えば人体に投与されると、全身性免疫応答に加えて、例えば気道において粘膜免疫応答を誘発することができる。
【００８７】
[0100]ワクチンは、伝統的なワクチンまたは万能ワクチンであることができる。伝統的なワクチンは、特定の病原体を標的とすることができるワクチンであることができる。麻疹ワクチンは伝統的なワクチンの一例である。それは、５０年間にわたって保存されたままである麻疹ウイルスの赤血球凝集素（Ｈ）タンパク質上に存在するエピトープを標的とすることができる。
【００８８】
[00101]季節性ワクチンは、他のタイプの伝統的なワクチンであることができる。例えば、インフルエンザワクチンは、毎年修正されることができ、所定の年に存在するインフルエンザウイルスの集団に適合される。いくつかの場合において、インフルエンザワクチンは３価ワクチンとして生成され、これはＡ型インフルエンザウイルスの２つのサブタイプ、Ｈ１Ｎ１およびＨ３Ｎ２、ならびにＢ型インフルエンザウイルスの１つの株を包含することができる。場合によっては、インフルエンザワクチンは、Ａ型インフルエンザウイルスの２つのサブタイプおよびＢ型インフルエンザウイルスの２つの株を包含することができる。Ａ型およびＢ型インフルエンザウイルスの特定の株はサーベイランスに基づく予想に基づいて選ぶことができ、サーベイランスに基づく予想は、毎年循環株の病原性を予測することができ、国によって異なる可能性がある。
【００８９】
[00102]万能ワクチンは、病原体の複数の株に対し、および／または同じファミリー内の複数の病原体に対し、広範な保護を提供するワクチンであることができる。代表的な万能ワクチンとしては、Ｉｎｏｖｉｏ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓからのＳｙｎＣｏｎ（登録商標）インフルエンザワクチン、ＢｉｏｎｄＶａｘからのＭ−００１、およびＩｍｍｕｎｅ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＳｙｓｔｅｍｓからのＦＰ−０１が挙げられる。これらの万能ワクチンは、インフルエンザウイルスタンパク内に存在する保存された領域またはエピトープを標的とすることができる。保存された領域またはエピトープは、少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９９％の配列相同性または配列同一性を示すことができる。
【００９０】
[00103]ワクチン組成物は、１以上の活性剤、例えば、１以上のペプチド、核酸、タンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメント）、ＡＰＣ、または本明細書中に記載されるウイルスの、医薬的に用いることができる調製物への加工を容易にする賦形剤および助剤を包含する、１以上の生理学的に許容しうるキャリヤーを使用して製剤化することができる。適切な製剤は、選択される投与経路に依存することができる。
【００９１】
[00104]いくつかの場合において、ワクチン組成物は、ペプチドベースのワクチン、核酸ベースのワクチン、抗体ベースのワクチン、細胞ベースのワクチン、またはウイルスベースのワクチンとして製剤化される。例えば、ワクチン組成物は、カチオン性脂質製剤中の裸のｃＤＮＡ；リポペプチド（例えば、Ｖｉｔｉｅｌｌｏ，Ａ．ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：３４１，１９９５参照）；例えば、ポリ（ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（“ＰＬＧ”）微小球状体中に封入されている裸のｃＤＮＡまたはペプチド（例えば、Ｅｌｄｒｉｄｇｅ，ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：２８７−２９４，１９９１：Ａｌｏｎｓｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：２９９−３０６，１９９４；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １３：６７５−６８１，１９９５）；免疫刺激性複合体（ＩＳＣＯＭＳ）に含有されるペプチド組成物（例えば、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：８７３−８７５，１９９０；Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１３：２３５−２４３，１９９８）；または、複数の抗原ペプチド系（ＭＡＰ）（例えば、Ｔａｒｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：５４０９−５４１３，１９８８；Ｔａｒｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １９６：１７−３２，１９９６参照）を包含することができる。場合によっては、ワクチンは、ペプチドベースのワクチン、または核酸がペプチドをコードする核酸ベースのワクチンとして製剤化される。場合によっては、ワクチンは、抗体ベースのワクチンとして製剤化される。場合によっては、ワクチンは、細胞ベースのワクチンとして製剤化される。
【００９２】
[00105]ワクチン組成物は、１以上の活性剤、例えば、１以上のペプチド、核酸、タンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメント）、ＡＰＣ、または本明細書中に記載されるウイルスの、医薬的に用いることができる調製物への加工を容易にする賦形剤および助剤を包含する、１以上の生理学的に許容しうるキャリヤーを使用して製剤化することができる。適切な製剤は、選択される投与経路に依存することができる。
【００９３】
[00106]ペプチドベースのワクチン
[00107]本明細書中に記載される１以上のエピトープ配列または１以上のポリペプチドを含むペプチドベースのワクチンを、本明細書中で提供する。例えば、ポリペプチドは、配列番号１〜９４からなる群より選択される１以上のエピトープ配列、または表１、表２、もしくは表３から選択される１以上のエピトープ配列を含むか、それからなるか、または本質的にそれからなることができる。ペプチドベースのワクチンは、１つのポリペプチドを含むことができる。ペプチドベースのワクチンは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５１、またはそれより多くの異なるペプチド配列を含むことができ、例えば、各ペプチドは、配列番号２、３、８、１１、１２、１７、２０、２１、２２、２４、２６、２９、３０、３１、３２、３３、３４、４０、４１、４３、４４、４５、４９、５１、５２、５３、５８、５９、６０、６１、６２、７０、７３、７４、７５、７６、７７、７８、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、または９４の少なくとも８、９、１０、１４、１６、１７、１８、または２５のアミノ酸に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の配列同一性を有することができる。ペプチドベースのワクチンは、インフルエンザ感染の処置または防止に用いることができる。
【００９４】
[00108]いくつかの態様において、組成物は、本明細書に記載されるような精製ペプチドまたはポリペプチドであってもなくてもよい、１以上のペプチドまたはポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。本明細書中で使用される場合、本明細書中に記載されるような１以上のペプチドまたはポリペプチドを“含む”組成物は、該組成物が、本明細書中に記載されていない１以上のタンパク質を含む他の化合物を含有することができることを意味することができる。本明細書で使用される場合、１以上のペプチドまたはポリペプチド“から本質的になる”組成物は、組成物に含有される１以上のペプチドまたはポリペプチドの活性または機能を追加的化合物が実質的に変化させない限り、組成物が、本明細書中に記載されるペプチドまたはポリペプチドに加えて他の化合物を含むことができることを意味することができる。本明細書中で使用される場合、本明細書中に記載されるような１以上のペプチドまたはポリペプチド“からなる”組成物は、該組成物が、本明細書中に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチドに加えて、他のタンパク質を含有しないことを意味することができる。本明細書中に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチドからなる組成物は、タンパク質以外の成分、例えば、医薬的に許容しうるキャリヤー、界面活性剤、防腐剤などを含むことができる。いくつかの態様において、本明細書に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチドからなる組成物は微量の混在物を含有することができ、該混在物は、ペプチドまたはポリペプチド混在物、例えば、例えば本明細書中に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチドの合成、これに続く加工、貯蔵条件、および／またはタンパク質分解から生じる可能性がある本明細書中に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチドのより小さなフラグメントを包含することができる。
【００９５】
[00109]ペプチドベースのワクチンは、適切な技術、キャリヤー、および賦形剤を使用して製剤化することができる。ペプチドベースのワクチンは、それらの生物学的半減期、安定性、効力、バイオアベイラビリティ、生物活性、またはそれらの組み合わせを改善するように製剤化することができる。
【００９６】
[00110]場合によっては、ワクチンは、同じ配列を含有する本明細書中に記載する複数のポリペプチドのカクテル、または本明細書中に記載する異なるポリペプチドの複数のコピーのカクテルを含むことができる。ポリペプチドは、脂質化、またはキャリヤータンパク質への付着などによって修飾することができる。脂質化は、ポリペプチドへの脂質基の共有結合であることができる。脂質化ポリペプチドは、構造を安定化することができ、ワクチン処置の効力を増強することができる。
【００９７】
[00111]脂質化は、Ｎ−ミリストイル化、パルミトイル化、ＧＰＩアンカー付加、プレニル化、およびいくつかの追加的タイプの修飾など、いくつかの異なるタイプに分類することができる。Ｎ−ミリストイル化は、Ｃ１４飽和酸であるミリスチン酸塩のグリシン残基への共有結合であることができる。パルミトイル化は、システイン残基への長鎖脂肪酸（ＣＩ６）のチオエステル連結であることができる。ＧＰＩアンカー付加は、アミド結合を介したグリコシル−ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結であることができる。プレニル化は、システイン残基へのイソプレノイド脂質（例えば、ファルネシル（Ｃ−１５）、ゲラニルゲラニル（Ｃ−２０））のチオエーテル連結であることができる。追加的タイプの修飾としては、システインの硫黄原子によるＳ−ジアシルグリセロールの付着、セリンまたはトレオニン残基を介したＯ−オクタノイルコンジュゲーション、システイン残基へのＳ−古細菌コンジュゲーション、およびコレステロール付着を挙げることができる。
【００９８】
[00112]脂質化ポリペプチドを生成するための脂肪酸としては、Ｃ２〜Ｃ３０飽和、一不飽和、または多不飽和脂肪アシル基を挙げることができる。代表的な脂肪酸としては、パルミトイル、ミリストイル、ステアロイル、およびデカノイル基を挙げることができる。
【００９９】
[00113]いくつかの態様では、外因性アジュバントの非存在下で免疫原性を誘導または増強するために、アジュバント特性を有する脂質部分を目的のペプチドに付着させる。脂質化ペプチドまたはリポペプチドは、自己アジュバントリポペプチドと称することができる。
【０１００】
[00114]上記および本明細書中の他の箇所に記載される脂肪酸はいずれも、目的のペプチドの免疫原性を誘導または増強することができる。免疫原性を誘導または増強することができる脂肪酸は、パルミトイル、ミリストイル、ステアロイル、ラウロイル、オクタノイル、およびデカノイル基を包含することができる。いくつかの場合において、免疫原性を誘導または増強することができる脂肪酸は、パルミトイル基を包含することができる。パルミトイル基の非限定的な例としては、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、またはＰａｍ３ＯＨが挙げられる。
【０１０１】
[00115]Ｐａｍ２Ｃｙｓは、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システインまたはＳ−［２，３ビス（パルミトイルオキシ）プロピル］システインとしても知られ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓから単離されたマクロファージ活性化リポペプチドであるＭＡＬＰ−２の脂質部分に相当する。
【０１０２】
[00116] Ｐａｍ３Ｃｙｓは、Ｐａｍ３ＯＨまたはＮ−パルミトイル−Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）プロピル］システインとしても知られ、グラム陰性菌の内膜および外膜におよぶブラウンリポタンパク質のＮ末端部分の合成型である。
【０１０３】
[00117]使用が意図される他の脂肪酸基としては、Ｓｅｔ２Ｃｙｓ（Ｓ−（２，３−ビス（ステアロイルオキシ）プロピルとしても知られる）システインまたはジステアロイル−５−グリセリル−システイン）、Ｌａｕ２Ｃｙｓ（Ｓ−［２，３−ビス（ラウロイルオキシ）プロピル］システインまたはジラウロイル−Ｓ−グリセリル−システインとしても知られる）；およびＯｃｔ２Ｃｙｓ（Ｓ−［２，３−ビス（オクタノイルオキシ）プロピル］システインまたはジオクタノイル−Ｓ−グリセリル−システインとしても知られる）が挙げられる。
【０１０４】
[00118]追加的な適した脂肪酸基としては、合成トリアシル化およびジアシル化リポペプチド、ＦＳＬ−Ｉ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｍ  Ｉ由来の合成リポタンパク質）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（トリパルミトイル(tripaltnitoyl)−Ｓ−グリセリルシステイン）およびＳ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２ＲＳ）−プロピル］−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−システインが挙げられ、これに関し、“Ｐａｍ３”は、“トリパルミトイル−Ｓ−グリセリル”である。Ｐａｍ３Ｃｙｓの誘導体も使用に適しており、これに関し、誘導体としては、Ｓ−［２，３−ビス（パルミトイルオキシ）−（２−Ｒ，Ｓ）−プロピル］−Ｎ−パルミトイル−（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４−ヒドロキシトリヒドロクロリド（配列番号１１１として開示している“（Ｒ）−Ｃｙｓ−（Ｓ）−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４”；Ｐａｍ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｌａ（配列番号１１２）；ＰａＭ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１１３）；Ｐａｍ３Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｙ；ＰａｍｓＣｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ；Ｐａｍ３Ｃｙｓ−Ｓｅｒ；ＰａＭ３ＣｙＳ−ＯＭｅ；Ｐａｍ３Ｃｙｓ−ＯＨ；ＰａｍＣＡＧ、パルミトイル−Ｃｙｓ（（ＲＳ）−２，３−ジ（パルミトイルオキシ）−プロピル）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−ＯＨ；などが挙げられる。他の非限定的な例としては、Ｐａｍ２ＣＳＫ４（配列番号１１４）（ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン−セリン−（リジン）４；またはＰａｍ２Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−（Ｌｙｓ）４（配列番号１１４））が挙げられる。
【０１０５】
[00119]裸のペプチドまたは脂質化ペプチドなどのペプチドは、リポソームに組み込まれていてもよい。例えば、脂質化ペプチドの脂質部分は、リポソームの脂質二重層に自発的に組み込まれていることができる。したがって、リポペプチドはリポソームの“表面”に存在することができる。脂質化ペプチドは、リポソーム内に封入されたペプチドであることができる。
【０１０６】
[00120]製剤への組み込みに適した代表的なリポソームとしては、限定されるものではないが、多重ラメラ(multilamellar)小胞（ＭＬＶ）、オリゴラメラ小胞（ＯＬＶ）、単ラメラ小胞（ＵＶ）、小型単ラメラ小胞（ＳＵＶ）、中型単ラメラ小胞（ＭＵＶ）、大型単ラメラ小胞（ＬＵＶ）、巨大単ラメラ小胞（ＧＵＶ）、多小胞性小胞(multivesicular vesicle)（ＭＶＶ）、逆相蒸発法（ＲＥＶ）によって作製される単一小胞またはオリゴラメラ小胞、逆相蒸発法によって作製される多重ラメラ小胞（ＭＬＶ−ＲＥＶ）、安定な多ラメラ(plurilamellar)小胞（ＳＰＬＶ）、凍結融解ＭＬＶ（ＦＡＴＭＬＶ）、押出法によって調製される小胞（ＶＥＴ）、フレンチプレスによって調製される小胞（ＦＰＶ）、融合によって調製される小胞（ＦＵＶ）、脱水−再水和小胞（ＤＲＶ）、およびバブルソーム(bubblesome)（ＢＳＶ）が挙げられる。
【０１０７】
[00121]調製方法に応じて、リポソームは、単ラメラまたは多重ラメラ状であることができ、直径が約０．０２μｍ〜約１０μｍ超の範囲のさまざまなサイズであることができる。場合によっては、リポソームは、小型単ラメラ小胞（２５〜５０ｎｍ）、大型単ラメラ小胞（１００〜２００ｎｍ）、巨大単ラメラ小胞（１〜２μｍ）、および多重ラメラ小胞（ＭＬＶ；１μｍ〜２μｍ）であることができる。送達されるペプチドは、リポソーム中に封入されるか、または表面上に吸着されることができる。リポソームのサイズおよび表面特性は、望ましい結果に合わせて最適化することができる。例えば、単ラメラおよび多重ラメラリポソームは、血管内投与の数時間から数日後までの持続放出を提供する。延長された薬物放出は、ＤｅｐｏＦｏａｍ（登録商標）技術としても知られる多小胞リポソームによって達成することができる。ＵＬＶおよびＭＬＶとは異なり、多小胞リポソームは、上昇した安定性レベルおよび薬物放出のより長い持続時間を付与する脂質層の網状構造によって包囲されている、非同心性の複数の水性小室から構成される。さらに、リポソームは、望ましい結果を達成するため修飾することができる。例えば、リポソームは、細網内皮系による認識および取り込みを妨害し、増加した循環時間を提供するために、ＰＥＧ化され得るか、または他の表面修飾を有することができる。
【０１０８】
[00122]リポソームは多くのタイプの細胞を吸着した後、取り込まれた薬剤（例えば、本明細書中に記載されているポリペプチド）を放出することができる。いくつかの場合において、リポソームは標的細胞と融合し、それによって、続いてリポソームの内容物は標的細胞中に流入する。リポソームは、食作用を示す細胞によってエンドサイトーシスされることができる。エンドサイトーシスに続いて、リポソーム脂質のリソソーム内分解および封入薬剤の放出が起こる可能性がある。
【０１０９】
[00123]本明細書中に提供されるリポソームは、キャリヤー脂質を含むこともできる。いくつかの態様において、キャリヤー脂質はリン脂質である。リポソームを形成することができるキャリヤー脂質としては、限定されるものではないが、ジパルミトイルホスファチジルコリン(dipalmitoylphosphatidylcholme)（ＤＰＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ；レシチン）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）が挙げられる。他の適したリン脂質としては、さらに、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール(dipalmitoylphosphatidyglycerol)（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール(distearoylphosphatidyglycerol)（ＤＳＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；ジミリストイルホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（ＤＰＰＳ）、ジミリストイルホスファチジルセリン（ＤＭＰＳ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(dipalmitoylphosphatidyethanolamine)（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）など、またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様において、リポソームはさらに、リポソーム形成を調節するステロール（例えば、コレステロール）を含む。キャリヤー脂質は、任意の公知の非リン酸極性脂質であることができる。
【０１１０】
[00124]本明細書中に記載されるポリペプチドは、ワクチンとしての送達のためにキャリヤータンパク質に付着していることができる。キャリヤータンパク質は、免疫原性キャリヤー要素であることができ、任意の組換え技術によって付着させることができる。代表的なキャリヤータンパク質としては、Ｍａｒｉｃｕｌｔｕｒｅ  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ｍｃＫＬＨ）、ＰＥＧ化ｍｃＫＬＨ、Ｂｌｕｅ  Ｃａｒｒｉｅｒ＊  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カチオン化ＢＳＡ、オボアルブミン、および破傷風トキソイド（ＴＴ）などの細菌タンパク質が挙げられる。
【０１１１】
[00125]本明細書中に記載されるポリペプチドは、多抗原ペプチド（ＭＡＰ）として調製することもできる。ポリペプチドは、小さな非免疫原性コアにＮ末端またはＣ末端で付着することができる。このコア上に蓄積されたポリペプチドは、高度に局在化されたペプチド密度を提供することができる。コアは、二官能性単位から構成される樹枝状コア残基またはマトリックスであることができる。ＭＡＰの構築に適したコア分子としては、アンモニア、エチレンジアミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、およびリジンを挙げることができる。例えば、リジンコア分子は、そのアミノ基のそれぞれを通じ、ペプチド結合を介して、２つの追加的なリジンに付着していることができる。この第２世代分子は４つの遊離アミノ基を有し、そのそれぞれは、追加的なリジンに共有結合して、８つの遊離アミノ基を有する第３世代分子を形成することができる。ポリペプチドは、そのＣ末端を介してこれらの遊離基のそれぞれに付着して、八価の多抗原ペプチド（“ＭＡＰ８”構造ともよばれる）を形成することができる。４つの遊離アミノ基を有する第２世代分子を用いて、四価または四量体ＭＡＰ、例えば、コアに共有結合している４つのペプチドを有するＭＡＰ（“ＭＡＰ４”構造とも呼ばれる）を形成することができる。第１のリジン残基のカルボキシル基は、遊離のままであっても、アミド化されていても、またはβ−アラニンもしくは他の遮断化合物にカップリングしていてもよい。本明細書中で用いる場合、ＭＡＰ系構造の“線状部分または分子”は、コアマトリックスに連結された抗原ペプチドをさすことができる。したがって、抗原エピトープのクラスターはＭＡＰの表面を形成することができ、小さなマトリックスがそのコアを形成する。樹枝状コア、およびＭＡＰ全体は、古典的なＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ合成手順を用いて固体樹脂上で合成することができる。
【０１１２】
[00126]ＭＡＰ調製に使用されるポリペプチドは、同一であることができ、または複数の異なる配列および長さを含むことができる。ポリペプチドは、細菌、ウイルス、または真菌から誘導することができる。ペプチドは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、またはＨＩＶなどのウイルスから誘導することができる。
【０１１３】
[00127]場合によっては、本明細書中に記載するようなポリペプチドを環化に付して、タンパク質分解に耐性を示す環状ペプチドをもたらすことができる。環化は、当分野で公知の方法を用いて、ジスルフィド結合、ランチオニン、ジカルバ、ヒドラジン、またはラクタム架橋を介して、ペプチド配列の側鎖または末端の間で実施することができる。
【０１１４】
[00128]いくつかの態様において、本明細書中に記載するポリペプチドは、ビタミンＢ１２、脂質、またはエチレンオキシド化合物、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、およびポリオキシエチレン（ＰＯＥ）、メトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ(ｍＰＥＧ)などの分子にコンジュゲートしている。エチレンオキシド化合物はさらに、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカーボネート、および脂肪族アルデヒドなどのアミン結合末端官能基、またはマレイミド、ピリジルジスルフィド、およびビニルスルホネートなどのチオール結合基で、官能化することができる。アミノ基（ａ−アミノおよびε−リジンアミノ）およびシステイン残基はコンジュゲーションによく適しているので、本明細書中に提供されるペプチドはさらに、エチレンオキシド分子または当分野で公知のキャリヤー化合物へのコンジュゲーションのための１以上のアミノ酸残基を包含することができる。コンジュゲートペプチドの薬物動態学的および薬力学的特性はさらに、特定のリンカーの使用によって修正することができる。例えば、プロピルリンカーおよびアミルリンカーを使用すると、緩いコンフォメーションを有するコンジュゲートを提供することができるが、フェニルリンカーを使用すると、より密なコンフォメーションを提供し、ならびにＣ末端に隣接するドメインを保護することができる。いくつかの場合、密なコンフォメーションは、緩いコンフォメーションと比較して、生物活性の維持、血漿半減期の延長、タンパク質分解感受性の低下、および免疫原性において、より効率的であることができる。
【０１１５】
[00129]いくつかの態様において、本明細書中に記載されるポリペプチドは、当分野で公知の方法、例えば、Ｉｎ  ｓｉｔｕ化学反応または部位特異的突然変異誘発法を使用して、高グリコシル化することができる。高グリコシル化は、Ｎ連結またはＯ連結タンパク質グリコシル化のいずれかを生じることができる。所与のペプチドのクリアランス率は、特定の糖の選択によって最適化することができる。例えば、ポリシアル酸（ＰＳＡ）はさまざまなサイズで入手可能であり、そのクリアランスは、ポリマーのタイプおよび分子サイズに依存する。したがって、例えば、高分子量を有するＰＳＡは低分子量ペプチドの送達に好適であることができ、低分子量を有するＰＳＡは高分子量を有するペプチドの送達に好適であることができる。糖のタイプは、ペプチドを特定の組織または細胞に標的化するために使用することができる。例えば、マンノースとコンジュゲートしたポリペプチドは、マンノース特異的レクチン、例えば、マンノース受容体およびマンノース結合タンパク質によって認識されることができ、肝臓に取り込まれる。いくつかの態様では、ポリペプチドを高グリコシル化して、異なる環境条件下でのそれらの物理的および化学的安定性を改善する、例えば、応力条件下での不活性化を阻害し、産生および貯蔵条件に起因する凝集を低減することができる。
【０１１６】
[00130]いくつかの態様では、感受性タンパク質の保護、放出の延長、投与頻度の減少、患者のコンプライアンスの改善、および血漿レベルの制御をもたらすために、薬物送達システム、例えば、マイクロ粒子、ナノ粒子（１０〜１０００ｎｍの範囲のサイズを有する粒子）、ナノエマルション、リポソームなどを用いることができる。生分解性および／または生体適合性ポリマーであることができるさまざまな天然または合成マイクロ粒子およびナノ粒子を使用することができる。マイクロ粒子およびナノ粒子は、脂質、ポリマー、および／または金属から製作することができる。ポリマーマイクロ粒子およびナノ粒子は、デンプン、アルギン酸塩、コラーゲン、キトサン、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）などの天然または合成ポリマーから製作することができる。いくつかの態様において、ナノ粒子は、固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）、カーボンナノチューブ、ナノスフェア、ナノカプルなどである。いくつかの態様において、ポリマーは親水性である。いくつかの態様において、ポリマーはチオール化ポリマーである。
【０１１７】
[00131]マイクロ粒子およびナノ粒子からの薬物放出の速度および程度はポリマーの組成および製作方法に依存する可能性があるので、望ましい薬物放出プロフィールを付与するために、所与の組成および製作方法、例えば、噴霧乾燥、凍結乾燥、マイクロ押出、および二重エマルションを選択することができる。マイクロ粒子またはナノ粒子の中またはその上に組み込まれたペプチドは、製剤開発中に水性有機界面で変性する傾向があり得るので、凝集および変性を防止するために、さまざまな安定化賦形剤および組成物を使用することができる。例えば、ＰＥＧおよび糖、例えば、ＰＥＧ（分子量５０００）およびａ−キモトリプシンを含むマルトースを組成物に添加して、凝集および変性を低減することができる。さらに、化学的に修飾されたペプチド、例えば、本明細書中に記載するような共役ペプチドおよび高グリコシル化ペプチドを、採用することができる。
【０１１８】
[00132]タンパク質安定性は、選択された製作方法によって達成することもできる。例えば、水性有機界面での分解を防止するために、ＰｒｏＬｅａｓｅ（登録商標）技術とよばれる非水性方法論を使用することができる。固体状態のペプチドは、水中油中固体（ｓ／ｏ／ｗ）法を用いて封入することができ、例えば、噴霧乾燥または噴霧凍結乾燥ペプチドまたはペプチド担持固体ナノ粒子を、ｓ／ｏ／ｗ法を用いてマイクロスフェア中に封入することができる。
【０１１９】
[00133]疎水性イオン対形成（ＨＩＰ）複合体形成を用いて、タンパク質安定性を向上させ、マイクロ粒子およびナノ粒子中への封入効率を高めることができる。疎水性イオン対形成（ＨＩＰ）複合体形成では、ペプチドのイオン化可能な官能基を、逆帯電した官能基を含有するイオン対形成剤（例えば、界面活性剤またはポリマー）と複合体形成させて、親水性タンパク質分子が疎水性複合体形態で存在するＨＩＰ複合体の形成をもたらす。
【０１２０】
[00134]本明細書中に記載されるポリペプチドは、化学的に合成するか、または細胞系もしくは無細胞系において組換え技術によって発現させることができる。ポリペプチドは、液相合成、固相合成、またはマイクロ波支援(microwave assisted)ペプチド合成などによって合成することができる。本明細書中に記載されるポリペプチドは、アシル化、アルキル化、アミド化、アルギニル化、ポリグルタミル化、ポリグリシル化、ブチリル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、マロニル化、ヒドロキシル化、ヨード化、ヌクレオチド付加（例えば、ＡＤＰ−リボシル化）、酸化、リン酸化、アデニル化、プロピオニル化、Ｓ−グルタチオニル化、Ｓ−ニトロシル化、スクシニル化、硫酸化、糖化、パルミトイル化、ミリストイル化、イソプレニル化またはプレニル化（例えば、ファルネシル化またはゲラニルゲラニル化）、グリピエーション(glypiation)、リポイル化、フラビン部分（例えば、ＦＭＮまたはＦＡＤ）の付着、ヘムＣの付着、ホスホパンテテイニル化、レチニリデンシッフ塩基形成、ジフタミド形成、エタノールアミンホスホグリセロール付着、ヒプシン形成、ビオチン化、ペグ化、ＩＳＧ化、ＳＵＭＯ化、ユビキチン化、Ｎｅｄｄ化(Neddylation)、Ｐｕｐ化(Pupylation)、シトルリン化、脱アミド化、エリミニル化(eliminylation)、カルバミル化、またはこれらの組み合わせなどによって、修飾することができる。
【０１２１】
[00135]ポリペプチドの生成後、ポリペプチドを１回以上の精製段階に付して、不純物を除去することができる。精製段階は、親和性ベース、サイズ排除ベース、イオン交換ベースなどの分離方法を利用するクロマトグラフ段階であることができる。いくつかの場合において、ペプチドは最大３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、または１００％純粋であるか、または不純物が存在しない。いくつかの場合において、ペプチドは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、または１００％純粋であるか、または不純物が存在しない。いくつかの場合において、ペプチド組成物中のペプチドの量は、重量に基づき全組成物の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、または１００％である。本明細書中で使用される場合、ポリペプチドの“精製された”ペプチドは、該ペプチドに天然に付随しているある量の高分子成分が、ペプチドから除去されていることを意味することができる。本明細書中で使用される場合、本発明の１以上の精製ペプチドを含む、本質的にそれからなるか、またはそれからなる組成物は、該組成物が、１以上のペプチドもしくはポリペプチドに天然に付随しているある量の高分子成分、および／または該ペプチドもしくはポリペプチドの合成に用いられる試薬を、含有しないことを意味することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載される組成物は、本明細書中に記載される１以上のペプチドまたはポリペプチド、例えば、固体または結晶化形態の１以上のペプチドまたはポリペプチドのみからなる。
【０１２２】
[00136]いくつかの態様において、本明細書中に記載のペプチドまたはポリペプチドまたは核酸分子は、単離することができる。本明細書中で使用される場合、“単離された”化合物（例えば、ペプチド、ポリペプチド、核酸分子）は、その天然環境から単離された化合物をさすことができる。例えば、単離されたペプチドまたはポリペプチドは、全長ポリペプチドに対応し、Ｎ末端、Ｃ末端、またはその両方に隣接する、その天然アミノ酸を有さないものであることができる。他の例として、単離ペプチドは、ペプチドに天然に付随していない基質に固定化されたものであることができる。さらなる例として、単離されたペプチドまたはポリペプチドは、ペプチドに天然に付随していない他の分子、例えば、ＰＥＧ化合物に連結しているものであることができる。同様に、“単離された”核酸分子は、全長核酸分子に対応し、その５’末端、３’末端、または両方に隣接する、その天然の核酸塩基を有さないものであることができる。他の例として、単離核酸分子は、核酸分子に天然に付随していない基質または化合物、例えば、蛍光タグのような標識に結合したものであることができる。さらなる例として、核酸分子に関して、単離されるという用語は、それが、天然に存在する核酸および細胞から分離されることを意味することができる。
【０１２３】
[00137]ペプチドベースのワクチンは、約、少なくとも、または最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５１、５５、６０、６５、７０または７５の異なるペプチド配列を含むことができる。異なるペプチド配列は、本明細書中に記載される任意のポリペプチドを包含することができる。
【０１２４】
[00138]核酸ベースのワクチン
[00139]本明細書中に記載される約、少なくとも、または最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５１、５５、６０、６５、７０または７５のポリペプチドをコードする核酸ベースのワクチンを、本明細書中で提供する。核酸ベースのワクチンは、インフルエンザ感染の処置または予防に用いることができる。
【０１２５】
[00140]核酸ベースのワクチンは、適切な技術、キャリヤー、および賦形剤を使用して製剤化することができる。核酸は、ゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡの両方のＤＮＡ、ＲＮＡ、またはハイブリッドであることができ、これに関し、核酸は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドの組み合わせ、ならびに、ウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、イソシトシンおよびイソグアニンを含む塩基の組み合わせを含有することができる。核酸は、化学合成法によって、または組換え法によって得ることができる。ワクチンは、ＤＮＡベースのワクチン、ＲＮＡベースのワクチン、ハイブリッドＤＮＡ／ＲＮＡベースのワクチン、またはハイブリッド核酸／ペプチドベースのワクチンであることができる。ペプチドは、配列番号１〜９４または表１、表２もしくは表３から選択される配列からなる群より選択されるペプチドに対して、少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性または同一性を有する配列を有するポリペプチドであることができる。ペプチドは、配列番号１〜９４または表１、表２もしくは表３から選択される配列からなる群より選択されるペプチドに対して、最大４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性または同一性を有する配列を有するポリペプチドであることができる。
【０１２６】
[00141]核酸分子は、一緒に共有結合している少なくとも２つのヌクレオチドをさすことができる。本明細書中に記載される核酸はホスホジエステル結合を含有することができるが、いくつかの場合において、以下（例えば、プライマーおよびプローブ、例えば標識プローブの構築において）に概説するように、例えば、ホスホルアミド、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、Ｏ−メチルホスホロアミダイト連結、およびペプチド核酸（本明細書中で“ＰＮＡ”ともよぶ）骨格および連結を含む、交互骨格(alternate backbone)を有することができる核酸類似体が包含される。他の類似の核酸としては、ロックド核酸(locked nucleic acid)（本明細書中では“ＬＮＡ”ともよぶ）；陽性骨格；非イオン性骨格および非リボース骨格を含む、二環式構造を有するものが挙げられる。１以上の炭素環式糖を含有する核酸も、核酸の定義内に包含される（例えば、Ｊｅｎｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．１９９５）ｐｐ  １６９  １７６参照）。いくつかの核酸類似体は、例えば、Ｒａｗｌｓ，Ｃ＆Ｅ  Ｎｅｗｓ  １９９７年６月２日、３５頁に記載されている。“ロックド核酸”も、核酸類似体の定義内に包含される。ＬＮＡは、リボース環が２’−Ｏ原子を４’−Ｃ原子と接続するメチレン架橋によって“ロック”されている核酸類似体のクラスである。これらの参考文献のすべてを、本明細書中で参考として明確に援用する。リボース−リン酸塩骨格のこれらの修飾は、生理学的環境におけるそのような分子の安定性および半減期を増大させるために行うことができる。例えば、ＰＮＡ：ＤＮＡおよびＬＮＡ−ＤＮＡハイブリッドは、より高い安定性を示すことができ、したがって、いくつかの態様において使用することができる。標的核酸は、特定されるように、一本鎖または二本鎖であることができ、または二本鎖または一本鎖配列の両方の部分を含有することができる。用途に応じて、核酸はＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、およびｃＤＮＡを含む）、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡおよびｒＲＮＡを含む）またはハイブリッドであることができ、これに関し、核酸は、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドの任意の組合せ、ならびに、ウラシル、アデニン、チミン、シトシン、グアニン、イノシン、キサタニン、ヒポキサタニン、イソシトシン、イソグアニンなどを含む塩基の任意の組合せを含有する。
【０１２７】
[00142]本明細書中に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、本明細書中で提供する。いくつかの場合、該ベクターを用いて、インフルエンザ感染を治療または予防することができる。いくつかの場合、該ベクターを用いて、本明細書中に記載されるポリペプチドの１以上を産生することができる。
【０１２８】
[00143]本明細書中に提供されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ヒト、マウス、ブタ、またはイヌなどの標的対象について最適化されたコドンであることができる。例えば、本明細書中に提供されるポリヌクレオチドは、前臨床動物実験のためのマウスについて最適化されたコドンであることができる。いくつかの場合において、対象物質は、農業のためのインフルエンザの予防、例えば、豚インフルエンザまたは鳥インフルエンザの予防において用途を見いだすことができる。このタイプの最適化は、同じタンパク質をコードしている間に、意図した宿主生物または宿主細胞のコドン優先傾向を模倣するために、異物由来の（例えば、組換え型）ＤＮＡの変異を必要とすることができる。
【０１２９】
[00144]ベクターは、環状プラスミドまたは線状核酸であることができる。環状プラスミドまたは線状核酸は、適切な対象細胞において特定のヌクレオチド配列の発現を指令することができる。ベクターは、終結シグナルに作動可能に連結することができる、ペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターを有することができる。ベクターは、ヌクレオチド配列の適切な翻訳に必要な配列を含有することもできる。目的のヌクレオチド配列を含むベクターはキメラであることができ、これは、その成分の少なくとも１つが、その他の成分の少なくとも１つに関して異種であることを意味する。発現カセットにおけるヌクレオチド配列の発現は、宿主細胞がいくつかの特定の外部刺激に暴露された場合にのみ転写を開始することができる、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下にあることができる。
【０１３０】
[00145]ベクターはプラスミドであってもよい。プラスミドは、ペプチドをコードする核酸で細胞をトランスフェクトするのに有用であることができ、形質転換された宿主細胞は、ペプチドの発現が起こる条件下で培養および維持することができる。
【０１３１】
[00146]プラスミドは、本明細書中に開示されるさまざまなポリペプチドの１以上をコードする核酸配列を含むことができる。単一のプラスミドは、単一のポリペプチドのコード配列、または１より多くのポリペプチドのコード配列を含有することができる。場合によっては、プラスミドはさらに、サイトカインのような免疫刺激分子などのアジュバントをコードするコード配列を含むことができる。
【０１３２】
[00147]プラスミドはさらに、コード配列の上流にあることができる開始コドン、および、コード配列の下流にあることができる終止コドンを含むことができる。開始コドンおよび終止コドンは、コード配列とインフレームであることができる。プラスミドはまた、コード配列に作動可能に連結されたプロモーター、およびコード配列の上流のエンハンサーを含むことができる。エンハンサーは、ヒトアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチン、または、ＣＭＶ、ＦＭＤＶ、ＲＳＶ、もしくはＥＢＶ由来のものなどのウイルスエンハンサーであることができる。
【０１３３】
[00148]プラスミドはまた、プラスミドを染色体外に維持し、細胞中でプラスミドの複数のコピーを産生するために、哺乳動物の複製起点を含むことができる。プラスミドは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からのｐＶＡＸＩ、ｐＣＥＰ４、またはｐＲＥＰ４であることができる。
【０１３４】
[00149]プラスミドはまた、プラスミドが投与される細胞における遺伝子発現によく適していることができる調節配列を含むことができる。コード配列は、宿主細胞におけるコード配列のより効率的な転写を可能にすることができるコドンを含むことができる。
【０１３５】
[00150]プラスミドは、ｐＳＥ４２０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＭＡＸＢＡＣＴＭ完全バキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ｐｃＤＮＡ  ＩまたはｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）であることができる。
【０１３６】
[00151]ベクターは、細胞ゲノムへの組み込みによって標的細胞を形質転換することができるか、または染色体外に存在することができる（例えば、複製起点を有する自律複製プラスミド）、環状プラスミドであることができる。代表的なベクターとしては、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、またはｐｒｏｖａｘ、または、抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞がその配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターが挙げられる。
【０１３７】
[00152]核酸ベースのワクチンはまた、線状核酸ワクチン、または線状発現カセット（“ＬＥＣ”）であることができ、これは、エレクトロポレーションを介して対象に効率的に送達することができ、本明細書中に開示される１以上のペプチドを発現することができる。ＬＥＣは、リン酸骨格を欠く任意の線状ＤＮＡであることができる。ＤＮＡは、本明細書中に開示される１以上のペプチドをコードすることができる。ＬＥＣは、プロモーター、イントロン、終止コドン、および／またはポリアデニル化シグナルを含有することができる。ペプチドの発現は、プロモーターによって制御することができる。ＬＥＣが抗生物質抵抗性遺伝子および／またはリン酸骨格を含有しないことも可能である。ＬＥＣは、ポリペプチド発現に関連しない他の核酸配列を含有することができない。
【０１３８】
[00153]ＬＥＣは、線状化されることができる任意のプラスミドから誘導することができる。プラスミドはペプチドを発現することができる。代表的なプラスミドとしては、ｐＮＰ（Ｐｕｅｒｔｏ  Ｒｉｃｏ／３４）、ｐＭ２（Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／９９）、ＷＬＶ００９、ｐＶＡＸ、ｐｃＤＮＡ３．０、ｐｒｏｖａｘ、または、抗原をコードするＤＮＡを発現し、細胞がその配列を免疫系によって認識される抗原に翻訳することを可能にすることができる任意の他の発現ベクターが挙げられる。
【０１３９】
[00154]核酸ベースのワクチンは、非経口的送達方法によって対象に送達することができる。非経口送達は、静脈内、経皮、経口、胆管内、実質内、肝内動脈、門脈内静脈、腫瘍内、または経静脈送達を包含することができる。場合によっては、非経口送達は、核酸ベースのワクチンの送達のために針（例えば、皮下注射針）を利用することができる。核酸ベースのワクチンは、水溶液、例えば、生理食塩水中で製剤化することができる。送達はさらに、エレクトロポレーションによって補助することができる。場合によっては、非経口送達は、送達方法として遺伝子銃を利用することができる。核酸ベースのワクチンは、ＤＮＡでコーティングされたマイクロ粒子、例えば、ＤＮＡでコーティングされた金またはタングステンビーズとして、製剤化することができる。遺伝子銃送達方法は、標的細胞への核酸を加速するために弾道送達方法を使用することができる。場合によっては、非経口送達は、送達方法として空気注入を利用することができる。核酸ベースのワクチンは、水溶液として製剤化することができる。
【０１４０】
[00155]核酸ベースのワクチンはまた、局所送達方法によって対象に送達することができる。局所性の核酸ベースのワクチンは、粘膜表面、例えば、鼻粘膜および肺粘膜、眼投与、または膣粘膜上に送達される裸のＤＮＡのエアロゾル点滴として製剤化することができる。
【０１４１】
[00156]核酸ベースのワクチンはさらに、脂質媒介送達方法によって対象に送達することができる。場合によっては、脂質媒介送達方法は、サイトフェクチン媒介送達方法であることができる。サイトフェクチンは、細胞膜を横切って核酸分子に結合し、これを輸送することができるカチオン性脂質であることができる。核酸は、サイトフェクチンベースのリポソームによって組み込むことができる。場合によっては、脂質媒介送達方法は、中性脂質媒介送達方法であることができる。
【０１４２】
[00157]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、または１０００の異なる核酸を含むことができる。
[00158]組換えウイルスベースのワクチン
[00159]組換えウイルスベースのワクチンを、本明細書中で提供する。
【０１４３】
[00160]上記ベクターは、ウイルスベクター、例えば、組換えウイルスベクターであることができる。いくつかの場合において、上記のような核酸ベースのワクチンは、組換えウイルスの形態にあることができる。組換えウイルスは、典型的にはウイルスベクターおよびインフルエンザウイルス以外のウイルス起源に由来するキャプシドタンパク質によって封入されている、本明細書中に記載される組換えウイルスベクターを含むことができる。
【０１４４】
[00161]ウイルスベクターは、さまざまなウイルス、例えば、限定されるものではないが、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アルファウイルス、バキュロウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、ポックスウイルスに基づくことができる。パラインフルエンザウイルス５（ＰＩＶ５）および小胞性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）。いくつかの場合において、ベクターは、本明細書中に記載するポリペプチドの１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）をコードするポリヌクレオチド、およびインフルエンザウイルス以外のウイルス由来のウイルスタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む、組換えウイルスベクターであることができる。ワクチンは、１以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０）の異なるウイルスベクターを含むことができ、各ベクターは、異なる配列を有するポリペプチドを発現する。
【０１４５】
[00162]アデノウイルスベースのワクチンは、広範囲の宿主に感染することができる。いくつかの場合において、アデノウイルスワクチンは、ウイルス遺伝子が宿主ゲノムに組み込まれる可能性なしで、高レベルの導入遺伝子発現を誘導することができる。細胞培養において高力価で増殖するそれらの能力に起因して、本明細書中に記載されるアデノウイルスワクチンは、安全かつ安価に製造することができる。いくつかの場合において、本明細書中に提供されるワクチンに使用されるアデノウイルスベクターは、Ｔｏｌｌ様受容体依存性経路およびＴｏｌｌ様受容体非依存性経路を介して先天性免疫応答を本質的に刺激することができる。いくつかの場合において、アデノウイルスワクチンはまた、樹状細胞（ＤＣ）に感染することができ、それによって、例えば、共刺激分子のアップレギュレーション、感染したＤＣによるサイトカインおよびケモカイン産生の増加、またはその両方を介して、免疫細胞へのより有効な抗原提示をもたらす。
【０１４６】
[00163]本明細書中に記載されるアデノウイルスベクターは、２つの異なる形態：複製欠損型または複製可能型で生成することができる。複製欠損型アデノウイルスベクターは、複製に必須であることができるＥ１遺伝子の欠失によってもたらされることができる。場合によっては、外来遺伝子挿入のためのより多くの空間を作り出すために、複製欠損型アデノウイルスベクターは、Ｅ３遺伝子を欠くようにすることもできる。所望の導入遺伝子、例えば、本明細書中に記載される１以上のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを有する発現カセットを、挿入することができる。複製可能型アデノウイルスベクターは、Ｅ３遺伝子の欠失を用いて提供することができる。場合によっては、複製可能型Ａｄベクターは天然のウイルス感染を模倣することができ、それによって、先天性および適応免疫のさまざまな要素の固有の刺激に起因して、強力なアジュバント効果を発揮することができる。
【０１４７】
[00164]本開示のいくつかの態様において、ベクターはアデノウイルスベクターであることができる。いくつかの場合において、ベクターは非ヒトアデノウイルスベクターである。いくつかの場合において、ベクターは、非ヒト霊長類アデノウイルスベクターであることができる。いくつかの場合において、ベクターはチンパンジーアデノウイルスベクターであることができる。
【０１４８】
[00165]特定の態様において、チンパンジーアデノウイルスベクターは、１以上のポリペプチド、例えば、Ｃ６８（ＡｄＣ６８）（配列番号１０４）、例えば、米国特許第６０８３７１６号、Ｃ７（ＡｄＣ７）に開示されているもの、例えば、Ｔａｔｓｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅ−ｏｒｉｇｉｎ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｃａｒｒｉｅｒｓ，”  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １３：  ４２１−４２９（２００６）に開示されているもの、Ｈａｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａ  Ｐａｒｔｉａｌ  Ｅ３  Ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ−Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ａｌｌｏｗｓ  ｆｏｒ  Ｓｔａｂｌｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  Ｔｏｘｉｃ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ”，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＤＯＩ：１０．１０８９／ｈｇｔｂ．２０１６．０４４（２０１６）に開示されているＣ６（ＡｄＣ６）（配列番号１０５）、どちらもＲｏｙ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｓｃｕｅ  ｏｆ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｔｏ  ｅｘｐａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｅｒｏｔｙｐｅ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ，”Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４１（ａ）：１４−２１（２００７）に開示されているＰａｎ７およびＰａｎ９の発現に用いることができる。
【０１４９】
[00166]あるいは、ベクターはＡＡＶに基づいていることができる。組換えＡＡＶは、さまざまな宿主、組織、ならびに増殖性および非増殖性細胞タイプに感染する広範な親和性を有することができる。本開示に関連して使用することができるＡＡＶとしては、限定されるものではないが、ＡＡＶ血清型２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ７、ＡＡＶ１、およびＡＡＶ６を挙げることができる。
【０１５０】
[00167]ベクターはまた、バキュロウイルスに基づいていることができる。本明細書中に提供されるワクチン、例えばインフルエンザワクチンのためのベクターとして使用することができるバキュロウイルスとしては、限定されるものではないが、アルファバキュロウイルス、ベータバキュロウイルス、ガンマバキュロウイルス、およびデルタバキュロウイルスを挙げることができる。
【０１５１】
[00168]あるいは、ベクターはポックスウイルスに基づいていることができる。ポックスウイルスは、二本鎖ＤＮＡウイルスであることができる。ポックスウイルスゲノムは非常に大きい可能性があり、哺乳類ポックスウイルスは約１３０ｋｂのゲノムを持つことができ、鳥類ポックスウイルスゲノムは約３００ｋｂでさらに大きい。このような大きなゲノムサイズは、感染力または他の必須のウイルス機能を損なうことなく、１０ｋｂを超える外来ＤＮＡの挿入を可能にすることができる。ポックスウイルスはそれ自体の転写機構、ウイルスＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、および転写後修飾酵素を有することができ、これにより、自己充分な細胞質複製が可能になる。結果として、挿入された導入遺伝子産物は、高レベルで発現させることができ、強力な細胞性免疫応答を生じる。
【０１５２】
[00169]組換えワクシニアウイルスは、本明細書中に記載されるように、ポリペプチドを発現するように作製されることができる。本開示に関連して使用することができる非複製ポックスウイルスベクターとしては、限定されるものではないが、改変ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）、ＮＹＶＡＣ、およびＡＬＶＡＣ株が挙げられる。ＭＶＡは、ニワトリ胚線維芽細胞における反復継代に起因するその元のゲノムの約１５％の損失によって複製欠損にされた。ワクシニアのコペンハーゲン株に由来するＮＹＶＡＣ株は、元のウイルスゲノムから１８の異なるオープンリーディングフレームを欠失させることによって複製欠損性にした。ＡＬＶＡＣは、ヒト細胞において複製しないカナリポックスウイルスベクターであり、さらなる弱毒化が、ニワトリ胚線維芽細胞における２００を超える継代を介して誘導されている。
【０１５３】
[00170]あるいは、ベクターはアルファウイルスに基づいていることができる。アルファウイルスは、感染細胞の細胞質において複製することができる一本鎖プラスセンスＲＮＡウイルスであることができる。本開示に関連して使用することができるアルファウイルスにとしては、限定されるものではないが、ベネズエラ馬脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、シンドビスウイルス（ＳＩＮ）、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、およびＶＥＥ−ＳＩＮキメラが挙げられる。
【０１５４】
[00171]アルファウイルスベクターは、構造タンパク質をコードする遺伝子を欠失させて設計することができる。このようなアルファウイルスベクターは、“レプリコン”として知られる。アルファウイルスベクターは、流入領域リンパ節(draining lymph node)において樹状細胞のような抗原提示細胞を潜在的に標的化することができ、これは、抗原特異的免疫応答の効率的な生成をもたらすことができる。また、アルファウイルスベクターは、いくつかの細胞においてアポトーシスを誘導することによって、ワクチン抗原のクロスプライミングに適した環境を作り出すことができる。ワクチン免疫はまた、アルファウイルスベクター自体によってさらに増強することができる。
【０１５５】
[00172]ＶＥＥはヒトにおいて病原性であることができるが、ＳＩＮはそうではない。ＶＥＥ／ＳＩＮキメラは、ヒトがワクチン接種対象である場合の安全性の懸念を回避するために使用することができる。ＶＥＥ／ＳＩＮキメラにおいて、ＶＥＥはレプリコン成分として機能することができ、ＳＩＮは構造およびパッケージング成分として機能することができる。
【０１５６】
[00173]本明細書中に記載されるようなワクチンを産生するためのベクターとして使用することができる他のＲＮＡウイルスとしては、限定されるものではないが、ＮＤＶ、ＰＩＶ５、およびＶＳＶを挙げることができる。
【０１５７】
[00174]本明細書中に記載されるようなアデノウイルスベクターまたはアデノウイルスベースのワクチンは、例えば、図５に示される手順に従って、本明細書中に提供される方法によって生産することができる。
【０１５８】
[00175]アデノウイルスベースのワクチンの生産方法は、プラスミドＤＮＡの調製および精製を含むことができる。本明細書中のプラスミドＤＮＡは、本明細書中に記載されるような１以上のエピトープ配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組換えアデノウイルスベクターＤＮＡであることができる。上記のように、組換えアデノウイルスベクターは、Ｅ領域遺伝子、例えば、Ｅ１、Ｅ３、Ｅ５、またはそれらの組み合わせを欠いている可能性がある。内因性ウイルス遺伝子の欠失は、目的の遺伝子、例えば、本明細書中に記載されるポリペプチドを発現するポリヌクレオチドの挿入のためのゲノム空間を提供することができる。一例として、Ｅ１欠失組換えアデノウイルスベクターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ連結法または相同組換え法のいずれかによって構築することができる。
【０１５９】
[00176]ｉｎ  ｖｉｔｒｏ連結法は、全アデノウイルスＤＮＡゲノム、ならびに右逆方向末端反復（ＩＴＲ）を有するＡｄの左末端、パッケージングシグナルおよびＥ１Ａエンハンサー配列を含有するプラスミドを使用することができる。目的の遺伝子、例えば、本明細書中に記載するようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、プラスミドのウイルス配列の下流に挿入することができた後、ウイルス配列および目的の遺伝子を含有するフラグメントを切除し、制限部位に連結し、ウイルスＥ１領域の一部を置換し、それによって組換えアデノウイルスＤＮＡベクターを生産することができる。
【０１６０】
[00177]あるいは、組換えアデノウイルスベクターは、相同組換え法を使用することによって作製することもできる。ｉｎ  ｖｉｖｏで組換える重複フラグメントを有する２以上のプラスミドを使用することができる。代表的な第１のプラスミドは、ＤＮＡパッケージング領域およびＥ１領域の欠失を有するアデノウイルスゲノム全体を含有することができる。代表的な第２のプラスミド（シャトルベクター）は、右ＩＴＲ、パッケージングシグナル、第１のプラスミドと重複する配列を含有することができる。目的の遺伝子、例えば、本明細書中に記載するポリペプチドを発現するポリヌクレオチドを、第２のプラスミドに導入することができた後、２つのプラスミドを組換え細胞中に同時トランスフェクトすることができる。細胞において、相同組換えは、第１のプラスミドと第２のプラスミドとの間で行い、それによって、組換えアデノウイルスベクターを生産することができる。相同組換えのための細胞の非限定的な例としては、酵母、細菌、および哺乳動物細胞株、例えば、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｈｅｌａ細胞を挙げることができる。いくつかの場合において、組換えアデノウイルスベクターは、組換え細胞から精製することができる。あるいは、組換えプロセスをｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。
【０１６１】
[00178]アデノウイルスベースのワクチンの生産方法はさらに、宿主細胞を精製ＤＮＡプラスミドでトランスフェクションすることを含むことができる。いくつかの態様において、ＤＮＡプラスミド、例えば、組換えアデノウイルスベクターは、トランスフェクションの前に線状化される。いくつかの場合において、トランスフェクションは、アデノウイルスプラーク(adenoviral plaque)を生成することができる。
【０１６２】
[00179]いくつかの場合において、組換えアデノウイルスベクターは、アデノウイルスの複製を媒介することができるＥ１遺伝子を欠く。したがって、場合によっては、組換えアデノウイルスが複製するためにＥ１遺伝子を補充することが必要である。場合によっては、アデノウイルス感染を用いて生成されていて、ゲノム中にＥ１遺伝子を有する２９３細胞株を用いることができる。Ｅ１遺伝子産物を産生するように操作されている他の細胞株も、この目的のために使用することができる。いくつかの場合において、他のウイルスゲノム要素または１以上のヘルパーウイルスを含有するＤＮＡフラグメントも、組換えアデノウイルスの産生のために使用することができる。例えば、ヘルパーウイルスは、ウイルスパッケージングのためのパッケージングシグナルを提供することができるが、組換えウイルスベクターはパッケージングシグナルを欠く可能性がある。あるいは、パッケージングシグナルを含有するＤＮＡフラグメントは、組換えアデノウイルスの生産のために宿主細胞に同時トランスフェクトすることができる。組換えアデノウイルスベクターの生産のためのゲノム材料に寄与する、本明細書中で使用される１以上のプラスミドベクターまたはヘルパーウイルスは、レポーター遺伝子、選択マーカー、またはウイルス産生に有用であり得る任意の他の遺伝子を含むことができる。
【０１６３】
[00180]細胞トランスフェクションは、当業者が利用可能な任意のトランスフェクションアプローチを用いて行うことができる。トランスフェクションアプローチとしては、限定されるものではないが、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リン酸カルシウム沈殿、カチオン性ポリマー、デンドリマー、リポソーム、マイクロプロジェクタイル衝撃(midroprojectile bombardment)、ｆｕｇｅｎｅ、直接音波負荷、細胞圧搾、光学トランスフェクション、プロトプラスト融合、インペールフェクション(impalefection)、マグネトフェクション(magnetofection)、ヌクレオフェクション、またはこれらの任意の組み合わせを挙げることができる。
【０１６４】
[00181]アデノウイルスベースのワクチンの生産方法はさらに、ウイルスの単離および増幅を含むことができる。ウイルスの単離は、アデノウイルスプラークの単離を含むことができ、これに続いてプラークのスクリーニングを行うことができる。いくつかの場合において、スクリーニングは、ウイルス核酸の配列決定によって行うことができる。いくつかの場合において、プラークは、完全な、改変されていない導入遺伝子配列についてスクリーニングすることができる。正確なプラークはさらに、連続的により多数の細胞を感染させることによって増幅させることができる。方法はさらに、感染細胞の単離、および所望により溶解を含むことができ、続いてウイルス粒子を精製することができる。精製は、さまざまなアプローチ、例えば、限定されるものではないが、超遠心分離および透析を介して実施することができる。方法はさらに、例えばプラークアッセイによって、感染力価を決定することを含むことができる。方法はさらに、例えば紫外線吸光度測定によって、ウイルス粒子濃度を決定することを含むことができる。
【０１６５】
[00182]組換えウイルスベースのワクチンは、非経口送達法によって対象に送達されることができる。非経口送達は、静脈内、経皮、経口、胆管内、実質内、肝内動脈、門脈内、腫瘍内、または経静脈送達を包含することができる。場合によっては、非経口送達は、組換えウイルスベースのワクチンの送達のために針（例えば、皮下注射針）を利用することができる。組換えウイルスベースのワクチンは、水溶液、例えば生理食塩水中で製剤化することができる。場合によっては、非経口送達は、送達方法として空気注入を利用することができる。核酸ベースのワクチンは、水溶液として製剤化することができる。
【０１６６】
[00183]組換えウイルスベースのワクチンは、局所送達法によって対象に送達することもできる。ワクチンは、感染領域、例えば鼻腔に直接施用することができる。
[00184]抗体ベースのワクチン
[00185]本明細書中に記載されるペプチドまたはポリペプチド配列に結合する実体(entity)を含むことができる抗体ベースのワクチンを、本明細書中で提供する。抗体ベースのワクチンは、インフルエンザ感染に対して使用することができる。実体は抗体であることができる。
【０１６７】
[00186]抗体ベースのワクチンは、適した任意の技術、キャリヤー、および賦形剤を使用して製剤化することができる。抗体は、天然抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体であってもよく、または抗体フラグメントであってもよい。抗体は、本明細書中に記載されるエピトープ配列の１以上を認識することができる。抗体は、配列番号１〜９４から選択される１以上の配列、または表１、表２、もしくは表３から選択される配列を、認識することができる。抗体は、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列または表１、表２、もしくは表３から選択される配列に対して、最大４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性または同一性を有する配列を認識することができる。抗体は、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列または表１、表２、もしくは表３から選択される配列に対して、少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列相同性または同一性を有する配列を認識することができる。抗体は、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の配列長の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、またはそれを超える配列長を認識することができる。抗体は、配列番号１〜９４からなる群より選択される配列または表１、表２、もしくは表３から選択される配列の配列長の最大３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％の配列長を認識することができる。いくつかの態様において、抗体は、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルスなどのインフルエンザウイルスの複数の株からのエピトープを認識する。
【０１６８】
[00187]抗体は、完全に組み立てられた抗体、抗原に結合することができる抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体など）、および前述のものを含む組換えペプチドを包含することができる。
【０１６９】
[00188]抗体は、モノクローナル抗体であることができる。モノクローナル抗体の調製は当分野で公知であり、公知の技術に従って、抗原に対して感作された宿主由来の脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させることによって、または脾臓細胞を適切な形質転換ベクターで形質転換して細胞を不死化することによって、達成することができる。細胞を選択培地中で培養し、クローニングし、スクリーニングして、指定された抗原に結合するモノクローナル抗体を選択することができる。モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の調製に関して、多数の参考文献を見いだすことができる。
【０１７０】
[00189]天然抗体（天然免疫グロブリン）は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５００００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であることができる。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されることができるが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって多様であることができる。各重鎖および軽鎖はまた、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有することができる。各重鎖は一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は一端に可変ドメイン（ＶＬ）を、他端に定常ドメインを有することができ、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列させることができ、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列させることができる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの間の界面を形成することができる。
【０１７１】
[00190]可変領域は、抗原結合特異性を付与することができる。いくつかの場合において、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均一に分布していない。可変性は、ともに軽鎖および重鎖の可変ドメインにある相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域とよばれる３つのセグメントに集中していることができる。可変ドメインのより高度に保存されている部分は、フレームワーク（ＦＲ）領域に位置することができる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、βプリーツシート構造を接続し、場合によってはその一部を形成するループを形成する３つのＣＤＲによって接続されていて、おもにβプリーツシート配置を採用している、４つのＦＲ領域を含むことができる。各鎖中のＣＤＲはＦＲ領域によって近接して一緒に保持されることができ、他の鎖由来のＣＤＲと一緒に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。いくつかの場合において、定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与することができないが、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与、補体依存性細胞毒性の開始、および肥満細胞脱顆粒など、さまざまなエフェクター機能を示すことができる。
【０１７２】
[00191]超可変領域は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基をさすことができる。超可変領域は、相補的に決定する領域またはＣＤＲからのアミノ酸残基および／または“超可変ループ”からのアミノ酸残基を含むことができる。フレームワークまたはＦＲ残基は、本明細書中で考慮されるように、超可変領域残基以外の可変ドメイン残基であることができる。
【０１７３】
[00192]抗体フラグメントは、無傷抗体の部分、例えば、無傷抗体の抗原結合領域または可変領域を含むことができる。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；ダイアボディ；ミニボディ(minibody)；線状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、それぞれが単一の抗原結合部位を有しＦａｂフラグメントとよばれる２つの同一の抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を名前が反映している残りのＦｃフラグメントとをもたらすことができる。ペプシン処理によって、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができる、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントが生じる。
【０１７４】
[00193]Ｆｖは、完全な抗原認識および結合部位を含有する最小抗体フラグメントであることができる。この領域は、緊密で非共有結合的な関連にある１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなることができる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定することができるのは、この配置である。集合的に、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与することができる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有することができる。
【０１７５】
[00194]Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨＩ）を含有することができる。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域由来の１以上のシステインを含む重鎖ＣＨＩドメインのカルボキシ末端に数個の残基を付加することによって、Ｆａｂ’フラグメントとは異なることができる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書中で、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’に使用することができる。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド架橋を還元することによって生産することができる。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【０１７６】
[00195]任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）とよばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【０１７７】
[00196]重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンの５つの主要なクラスには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが包含され、これらのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューとよばれる。さまざまなクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元配置が周知である。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有することができる。例えば、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、ＡＤＣＣ(抗体依存性細胞媒介性細胞毒性）活性を有する。
【０１７８】
[00197]モノクローナル抗体は、任意の適切な種、例えば、ネズミ、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、またはヒトモノクローナル抗体から得ることができる。
[00198]組成物、例えばワクチンは、約、または少なくとも、または最大で５、１０、２５、５０または１００の異なる抗体を含むことができる。
【０１７９】
[00199]抗原提示細胞（ＡＰＣ）ベースのワクチン
[00200]本明細書中に記載されるポリペプチドを提示するＡＰＣベースのワクチンを、本明細書中に提供する。ＡＰＣベースのワクチンは、インフルエンザ感染に対して使用することができる。ＡＰＣベースのワクチンは、適切に、当分野で理解されているように、任意の公知の技術、キャリヤー、および賦形剤を使用して製剤化することができる。ＡＰＣは、単球、単球由来細胞、マクロファージ、および樹状細胞を包含することができる。場合によっては、ＡＰＣベースのワクチンは、樹状細胞ベースのワクチンであることができる。
【０１８０】
[00201]樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチンは、当分野で公知の任意の方法によって調製することができる。いくつかの場合において、樹状細胞ベースのワクチンは、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ法によって調製することができる。ｅｘ  ｖｉｖｏ法は、患者に投与する前にＤＣを活性化または負荷するために、本明細書中に記載するポリペプチドでｅｘ  ｖｉｖｏでパルス化された自己ＤＣの使用を含むことができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ法は、本明細書中に記載するペプチドと結び付いた抗体を用いて、特異的ＤＣ受容体を標的化することを含むことができる。ＤＣベースのワクチンはさらに、ＴＬＲ３、ＴＬＲ−７−８、およびＣＤ４０アゴニストなどのＤＣアクチベーターを含むことができる。ＤＣベースのワクチンはさらに、アジュバント、および医薬的に許容しうるキャリヤーを含むことができる。
【０１８１】
[00202]ウイルスベースのワクチン
[00203]ウイルスベースのワクチンは、生ウイルスまたは不活化ウイルスに基づき作製することができる。ウイルスは、本明細書中に記載される配列のいずれかを含む１以上のタンパク質を発現するように操作することができる。生ウイルスに基づくワクチンは、弱毒化ウイルス、または低温に適応可能なウイルスを使用することができる。不活化ウイルスに基づくワクチンは、全ビリオン(whole virion)、スプリットビリオン(split virion)、または精製表面抗原（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス由来のＨＡおよび／またはＮ）を含むことができる。ウイルスを不活性化するための化学的手段は、有効量の以下の薬剤の１以上での処置を包含することができる：デタージェント(detergent)、ホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン、メチレンブルー、ソラレン、カルボキシフラーレン（Ｃ６０）、二成分エチルアミン、アセチルエチレンイミン、またはそれらの組み合わせる。ウイルス不活性化の非化学的方法、例えば、紫外線、熱不活性化、またはガンマ線照射は、当技術分野で知られている。
【０１８２】
[00204]スプリットビリオンは、さまざまな方法によってウイルス含有流体から収集することができる。例えば、精製プロセスは、ビリオンを破壊するためのデタージェントを包含する直鎖状スクロース勾配溶液を用いるゾーン遠心分離を包含することができる。抗原は、所望による希釈の後、ダイアフィルトレーションによって精製することができる。
【０１８３】
[00205]スプリットビリオンは、精製ビリオンを、“Ｔｗｅｅｎ−エーテル”分割プロセスなど、デタージェント（例えば、エチルエーテル、ポリソルベート８０、デオキシコール酸塩、リン酸トリ−Ｎ−ブチル、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｎ１０１、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ  ＮＰ９など）で処理してサブビリオン調製物を生産することにより、得ることができる。インフルエンザウイルスを分割する方法は、当分野で周知である。ウイルスの分割は、分割剤の破壊濃度で感染性であろうと非感染性であろうと、ウイルス全体を破壊または断片化することによって行うことができる。破壊は、ウイルスタンパク質の完全または部分的な可溶化をもたらすことができ、ウイルスの完全性を変化させる。分割剤は非イオン性またはイオン性（例えば、カチオン性）界面活性剤、例えば、アルキルグリコシド、アルキルチオグリコシド、アシル糖、スルホベタイン、ベタイン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、Ν，Ν−ジアルキル−グルカミド、Ｈｅｃａｍｅｇ、アルキルフェノキシ−ポリエトキシエタノール、第四級アンモニウム化合物、サルコシル、ＣＴＡＢ（セチルトリメチルアンモニウムブロミド）、リン酸トリ−Ｎ−ブチル、Ｃｅｔａｖｌｏｎ、ミリスチルトリメチルアンモニウム塩、リポフェクチン、リポフェクタミン、およびＤＯＴ−ＭＡ、オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはＴｒｉｔｏｎ  Ｎ１０１などのＴｒｉｔｏｎ界面活性剤）、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ界面活性剤）、ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンエステルなどであることができる。代表的的な分割手順の１つでは、デオキシコール酸ナトリウムとホルムアルデヒドの連続効果を使用することができ、分割は最初のビリオン精製中に（例えば、スクロース密度勾配溶液中で）行うことができる。したがって、分割プロセスは、ビリオン含有材料の清澄化（非ビリオン材料を除去するため）、収集されたビリオンの濃縮（例えば、ＣａＨＰ０４吸着などの吸着方法を使用する）、非ビリオン材料からの全ビリオンの分離、密度勾配遠心分離段階において分割剤を使用するビリオンの分割（例えば、デオキシコール酸ナトリウムなどの分割剤を含有するスクロース勾配を使用する）、次いで望ましくない材料を除去するための濾過（例えば、限外濾過）を包含することができる。スプリットビリオンは、リン酸ナトリウム緩衝生理食塩水中に有用に再懸濁することができる。ＢＥＧＲＩＶＡＣＴＭ、ＦＬＵＡＲＩＸＴＭ、ＦＬＵＺＯＮＥＴＭ、およびＦＬＵＳＨＩＥＬＤＴＭ製品は、分割ワクチンである。
【０１８４】
[00206]精製表面抗原ワクチンは、インフルエンザ表面抗原、ヘマグルチニン、および典型的にはノイラミニダーゼも含むことができる。精製された形態でこれらのタンパク質を調製するためのプロセスは、当分野で周知である。ＦＬＵＶＩＲＩＮＴＭ、ＡＧＲＩＰＰＡＬＴＭ、およびＩＮＦＬＵＶＡＣＴＭ製品が例である。
【０１８５】
[00207]不活化ウイルスに基づくワクチンは、ビロソーム（核酸を含まないウイルス様リポソーム粒子）を包含することができる。ビロソームは、デタージェントでインフルエンザウイルスを可溶化した後、ヌクレオカプシドを除去し、ウイルス糖タンパク質を含有する膜を再構成することによって調製することができる。また、ビロソームは、ウイルス膜糖タンパク質を過剰量のリン脂質に添加して、その膜にウイルスタンパク質を有するリポソームを生成することによって調製することもできる。
【０１８６】
[00208]医薬組成物および投与
[00209]インフルエンザウイルス感染に対する免疫を提供するために使用することができる医薬組成物を、本明細書中に提供する。本開示の特定の観点において、医薬組成物はワクチンであることができる。
【０１８７】
[00210]組成物は、１以上のポリペプチド、核酸、タンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメント）、ＡＰＣ、または本明細書中に記載されるウイルス、またはそれらの組み合わせ、および医薬的に許容しうる賦形剤を含むことができる。いくつかの態様において、組成物はさらに、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはベクターのためのキャリヤーを含むことができる。組成物はさらに、防腐剤を含むことができる。場合によっては、組成物はさらに、適切な物理的または化学的特性、例えば、限定されるものではないが、塩濃度、重量モル浸透圧濃度、ｐＨ、疎水性／疎水性、および溶解度を維持するための他の試薬を含むことができる。組成物はさらに、増強された送達のための適切な浸透増強剤を含むことができる。組成物はさらに、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはベクターの免疫原性を増強することができる適切なアジュバント（１以上）を含むことができる。
【０１８８】
[00211]製剤
[00212]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、組成物の意図される投与経路に部分的に基づいて製剤化することができる。組成物、例えばワクチンは、１以上の活性剤、例えば、１以上のペプチド、核酸、タンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメント）、ＡＰＣ、本明細書中に記載されるウイルス、またはそれらの組み合わせを含むことができる。１以上の活性薬剤を１以上のアジュバントと組み合わせて含む組成物は、賦形剤、希釈剤、および／または助剤を含む、１以上の生理学的に許容しうるキャリヤーを使用して、従来法で製剤化することができる。これに関し、助剤は、例えば、投与することができる調製物中への１以上の活性薬剤の加工を容易にするものである。本明細書中に記載される１以上の活性薬剤は、本明細書中に記載されるいくつかの投与経路または投与法、例えば、経口、口腔内、局所、直腸内、経皮、経粘膜、皮下、静脈内、および筋肉内施用、ならびに吸入を使用して、対象に送達することができる。
【０１８９】
[00213]本明細書に記載される組成物、例えばワクチンは、懸濁液、シロップ、またはエリキシルなどの液体調製物であることができる。組成物、例えばワクチンはまた、非経口、皮下、皮内、筋肉内、または静脈内投与（例えば、注射可能な投与）のための調製物、例えば、滅菌懸濁液またはエマルションであることができる。いくつかの場合において、水溶液は、そのまま使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥調製物は、投与前に滅菌溶液と組み合わせられる。組成物、例えばワクチンは、溶液または懸濁液として送達することができる。一般に、ゼリー、クリーム、ローション、坐剤および軟膏などの製剤は、ある領域に１以上の活性薬剤へのより長期の暴露を提供することができ、溶液中の製剤、例えばスプレーは、より即時の短期暴露を提供することができる。
【０１９０】
[00214]吸入用製剤（例えば、経鼻投与または経口投与）
[00215]本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンは、対象の鼻腔を介した投与のために製剤化することができる。キャリヤーが固体であり、経鼻投与に適した製剤は、例えば、約１０〜約５００ミクロンの範囲の粒子サイズを有する粗粉末を包含することができ、これは、例えば、鼻の近くに保持された粉末の容器からの鼻腔を介した迅速な吸入によって嗅剤を摂取する方法で、投与することができる。製剤は、鼻スプレー、点鼻薬、またはネブライザーによるエアロゾル投与であることができる。製剤は、ワクチンの水性または油性溶液を包含することができる。
【０１９１】
[00216]本明細書で提供される組成物、例えばワクチンは、エアロゾル製剤として製剤化することができる。エアロゾル製剤は、例えば、エアロゾル溶液、懸濁液または乾燥粉末であることができる。エアロゾルは、呼吸器系または鼻腔を通して投与することができる。例えば、組成物は、適切なキャリヤー、例えば医薬的に許容しうる噴射剤に懸濁化または溶解することができ、鼻スプレーまたは吸入剤を使用して肺に直接投与することができる。例えば、１以上の活性薬剤を含むエアロゾル製剤は、例えば、鼻スプレーまたは吸入剤として投与するために、噴射剤または溶媒と噴射剤との混合物中に溶解、懸濁化または乳化することができる。エアロゾル製剤は、化粧用または皮膚科学的または医薬的に許容しうる噴射剤のような、加圧下の任意の許容しうる噴射剤を含有することができる。
【０１９２】
[00217]経鼻投与のためのエアロゾル製剤は、点滴またはスプレーで鼻腔に投与するように設計された水溶液であることができる。点鼻液は、等張性で、約５．５〜約６．５のｐＨを維持するためにわずかに緩衝化することができるという点で、鼻分泌物と同様であることができる。場合によっては、この範囲外のｐＨ値を使用することができる。抗菌剤または防腐剤が製剤に包含されることもできる。
【０１９３】
[00218]吸入のためのエアロゾル製剤は、経鼻または経口呼吸経路によって投与されたときに、１以上の活性薬剤が対象の呼吸器系に運ばれるように設計することができる。吸入溶液は、例えばネブライザーによって投与することができる。微細粉末薬または液剤を含む吸入剤または吹入剤は、例えば分配を補助するために、噴射剤中の薬剤または薬剤の組み合わせの溶液または懸濁液の医薬エアロゾルとして、呼吸器系に送達することができる。噴射剤は、ハロカーボン、例えば、フッ素化塩素化炭化水素、ヒドロクロロフルオロカーボン、およびヒドロクロロカーボンなどのフルオロカーボン、ならびに炭化水素および炭化水素エーテルを含む液化ガスであることができる。
【０１９４】
[00219]ハロカーボン噴射剤としては、すべての水素がフッ素で置換されているフルオロカーボン噴射剤、すべての水素が塩素および少なくとも１つのフッ素で置換されているクロロフルオロカーボン噴射剤、水素含有フルオロカーボン噴射剤、および水素含有クロロフルオロカーボン噴射剤を挙げることができる。炭化水素噴射剤としては、例えば、プロパン、イソブタン、ｎ−ブタン、ペンタン、イソペンタン、およびネオペンタンを挙げることができる。炭化水素のブレンドも噴射剤として使用することができる。エーテル噴射剤としては、例えば、ジメチルエーテルおよびエーテル類が挙げられる。エアロゾル製剤はまた、１より多くの噴射剤を含むことができる。例えば、エアロゾル製剤は、２以上のフルオロカーボンなど、同じクラスからの１より多くの噴射剤；または、フルオロ炭化水素および炭化水素など異なるクラスからの１より多く、２より多く、３より多くの噴射剤を含むことができる。本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンは、圧縮ガス、例えば、二酸化炭素、亜酸化窒素、または窒素などの不活性ガスと一緒に、分配することもできる。
【０１９５】
[00220]エアロゾル製剤は、他の成分、例えば、エタノール、イソプロパノール、プロピレングリコール、ならびに界面活性剤または他の成分、例えば、油およびデタージェントを包含することもできる。これらの成分は製剤を安定化し、および／または弁成分を円滑にするのに役立つことができる。
【０１９６】
[00221]エアロゾル製剤は加圧下で包装することができ、溶液、懸濁液、エマルション、粉末、および半固体調製物を使用してエアロゾルとして製剤化することができる。例えば、溶液エアロゾル製剤は、（実質的に）純粋な噴射剤中、または噴射剤と溶媒との混合物中などの活性薬剤の溶液を含むことができる。溶媒は、１以上の活性薬剤を溶解するために、および／または噴射剤の蒸発を遅らせるために、使用することができる。溶媒としては、例えば、水、エタノール、およびグリコールを挙げることができる。適切な溶媒の任意の組み合わせを使用することができ、所望により、防腐剤、酸化防止剤、および／または他のエアロゾル成分と組み合わせることができる。
【０１９７】
[00222]エアロゾル製剤は、分散液または懸濁液であることができる。懸濁エアロゾル製剤は、１以上の活性薬剤、例えばペプチドと、分散剤との懸濁液を含むことができる。分散剤としては、例えば、ソルビタントリオレエート、オレイルアルコール、オレイン酸、レシチン、およびトウモロコシ油を挙げることができる。懸濁エアロゾル製剤は、潤滑剤、防腐剤、酸化防止剤、および／または他のエアロゾル成分を包含することもできる。
【０１９８】
[00223]エアロゾル製剤は、同様に、エマルションとして製剤化することができる。エマルションエアロゾル製剤は、例えば、エタノールなどのアルコール、界面活性剤、水、および噴射剤のほか、活性薬剤または活性薬剤の組合せ、例えば１以上のペプチドを包含することができる。使用される界面活性剤は、非イオン性、アニオン性、またはカチオン性であることができる。エマルションエアロゾル製剤の一例は、例えば、エタノール、界面活性剤、水、および噴射剤を含む。エマルションエアロゾル製剤の他の例は、例えば、植物油、モノステアリン酸グリセリル、およびプロパンを含む。
【０１９９】
[00224]非経口投与用製剤
[00225]１以上の活性薬剤を含む組成物、例えばワクチンは、非経口投与用に製剤化することができ、アンプル、予め充填されたシリンジ、小容量注入液、または防腐剤が添加されている複数用量容器において、単位剤形で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルション、例えば、水性ポリエチレングリコール中の溶液などの形態をとることができる。
【０２００】
[00226]注射可能な製剤の場合、ビヒクルは、適切であることが当分野で知られているもの、例えば、水溶液または油懸濁液、または、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油もしくは落花生油を含むエマルション、ならびに、エリキシル、マンニトール、デキストロース、または滅菌水溶液、および同様の医薬ビヒクルから、選択することができる。製剤は、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）のような、生体適合性で生分解性であるポリマー組成物を含むこともできる。これらの材料をミクロまたはナノスフェアにし、薬物を担持させ、さらにコーティングまたは誘導体化して、優れた持続放出性能をもたらすことができる。眼周囲または眼内注射に適したビヒクルとしては、例えば、注射グレードの水中の活性薬剤の懸濁液、リポソーム、および親油性物質に適したビヒクル、および当分野で公知のものが挙げられる。
【０２０１】
[00227]非経口注射は、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、および心臓内投与を包含することができる。皮下投与は、皮下にボーラスとして投与することができる。ヒト対象の皮下注射部位は、上腕の外側領域、腹部、大腿前面、上背部、臀部の上部領域を包含することができる。筋肉内投与は、筋肉への直接注射であることができる。筋肉内注射部位としては、三角筋、背臀筋(dorsogluteal)、大腿直筋、外側広筋および腹臀筋(ventrogluteal muscle)を挙げることができる。静脈内投与は、静脈内への液体製剤の直接送達であることができる。静脈内投与は、末梢静脈（例えば、腕、手、脚、および足部の静脈）または中心静脈（例えば、心臓の上大静脈、下大静脈、および右心房）に施用することができる。腹腔内投与は、腹膜への注射であることができる。心臓内投与は、心筋または心室への直接注射であることができる。
【０２０２】
[00228]場合によっては、組成物、例えばワクチンは、ヒトのような哺乳類対象への静脈内投与のために製剤化することができる。静脈内投与のための組成物、例えばワクチンは、滅菌等張水性緩衝液中の溶液であることができる。いくつかの場合において、組成物、例えばワクチンは、可溶化剤および注射部位の痛みを緩和するためのリドカインなどの局所麻酔薬を包含することができる。構成成分は、別個に供給されるか、または、例えば、活性薬剤の量を示しているアンプルまたはサシェット(sachet)のような密閉容器中の乾燥凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として、単位剤形で一緒に混合することができる。組成物を注入によって投与する場合、滅菌した医薬用の水または生理食塩水を含有する注入ボトルで調剤してもよい。組成物を注射によって投与する場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルは、構成成分を投与前に混合することができるように提供することができる。
【０２０３】
[00229]投与が注射による場合、１以上の活性薬剤を含む組成物、例えばワクチンは、水溶液中、特に、ハンクス溶液、リンガー溶液、または生理食塩水緩衝液のような生理学的に適合性の緩衝液中で製剤化することができる。溶液は、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤化剤を含有することができる。あるいは、１以上の活性薬剤は、使用前に適切なビヒクル、例えば無菌で発熱物質を含まない水と一緒に構成するように、粉末形態にあることができる。他の態様において、組成物、例えば、ワクチンは、活性薬剤によって刺激される免疫応答を増強するために添加されるアジュバントまたは任意の他の物質を含まない。他の態様において、組成物、例えばワクチンは、１以上の活性薬剤に対する免疫応答を阻害する物質を含むことができる。
【０２０４】
[00230]いくつかの態様において、１以上の活性薬剤は、デポー調製物として製剤化することができる。このような長期作用性製剤は、埋め込みまたは経皮送達（例えば、皮下または筋肉内）、筋肉内注射、または経皮パッチの使用によって投与することができる。したがって、例えば、１以上の活性薬剤を、適切なポリマーまたは疎水性材料（例えば、許容しうる油中のエマルションとして）またはイオン交換樹脂と一緒に、または難溶性誘導体として、例えば難溶性塩として、製剤化することができる。
【０２０５】
[00231]局所投与用製剤
[00232]本開示の特定の観点において、本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、局所的に投与するか、または特定の感染部位またはその近くに注射したときに、局部的(local)および部位的(regional)な効果を発揮する１以上の薬剤を含むことができる。例えば、粘性液体、溶液、懸濁液、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ベースの溶液、リポソーム製剤、ゲル、ゼリー、クリーム、ローション、軟膏、坐剤、フォーム、またはエアロゾルスプレーの直接局所施用を局部的投与のために使用して、例えば局部的および／または部位的効果を生じさせることができる。このような製剤のための医薬的に適したビヒクルとしては、例えば、低級脂肪族アルコール、ポリグリコール（例えば、グリセロールまたはポリエチレングリコール）、脂肪酸のエステル、油、脂肪、シリコーンなどが挙げられる。このような調製物は、防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル）および／または酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸およびトコフェロール）を包含することもできる。いくつかの態様において、１以上の活性薬剤を含む局部／局所製剤は、表皮または粘膜のウイルス感染を処置するために使用される。
【０２０６】
[00233]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、皮膚科学的に許容しうるキャリヤーを含有することができる。このようなキャリヤーは、皮膚、爪、粘膜、組織、および／または毛髪と適合し、これらの要件を満たす任意の皮膚科学的キャリヤーを包含することができる。このようなキャリヤーは、当業者なら容易に選択することができる。皮膚軟膏の製剤化では、１以上の薬剤を、油性炭化水素基剤、無水吸収基剤、油中水型吸収基剤、水中油型水除去性基剤および／または水溶性基剤中に製剤化することができる。このようなキャリヤーおよび賦形剤の例としては、保湿剤（例えば、尿素）、グリコール（例えば、プロピレングリコール）、アルコール（例えば、エタノール）、脂肪酸（例えば、オレイン酸）、界面活性剤（例えば、ミリスチン酸イソプロピルおよびラウリル硫酸ナトリウム）、ピロリドン、グリセロールモノラウレート、スルホキシド、テルペン（例えば、メントール）、アミン、アミド、アルカン、アルカノール、水、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、さまざまな糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
【０２０７】
[00234]軟膏およびクリームは、例えば、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加して、水性または油性基剤と一緒に製剤化することができる。ローションは水性または油性基剤と一緒に製剤化することができ、一般に、１以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、または着色剤も含有する。薬剤の送達のための経皮パッチの構築および使用は、当分野で公知である。このようなパッチは、薬剤の連続的、脈動的、またはオンデマンド送達のために構築することができる。
【０２０８】
[00235]組成物および剤形を形成するために使用することができる潤滑剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽鉱油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水素化植物油（例えば、落花生油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、またはそれらの混合物が挙げられる。追加的な潤滑剤としては、例えば、シロイドシリカゲル、合成シリカの凝固エアロゾル、またはそれらの混合物が挙げられる。潤滑剤は、所望により、組成物の約１重量パーセント未満の量で添加することができる。
【０２０９】
[00236]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、局所施用に適した任意の形態、例えば、水性、水性−アルコール性もしくは油性溶液、ローションもしくは血清分散液(serum dispersion)、水性、無水もしくは油性ゲル、水性相中の脂肪相の分散によって得られるエマルション（Ｏ／Ｗもしくは水中油型）もしくはその逆（Ｗ／Ｏもしくは油中水型）、マイクロエマルション、または、代替的にイオン性および／もしくは非イオン性タイプのマイクロカプセル、マイクロ粒子もしくは脂質小胞分散液の形態にあることができる。１以上の活性薬剤以外に、本明細書中で提供される組成物のさまざまな構成要素の量は、当分野で使用されているものであることができる。これらの組成物は、顔、手、身体および／もしくは粘膜用、または皮膚の洗浄用の、保護、処置またはケアクリーム、ミルク、ローション、ゲルまたはフォームを構成することができる。組成物は、石鹸またはクレンジングバーを構成する固体調製物からなることもできる。
【０２１０】
[00237]局部／局所施用のための、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、第四級アンモニウム化合物、有機水銀、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、芳香族アルコール、クロロブタノールなどの１以上の抗菌性防腐剤を包含することができる。
【０２１１】
[00238]経口投与用製剤
[00239]場合によっては、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、経口投与のために製剤化することができる。
【０２１２】
[00240]経口投与の場合、本明細書中に提供される組成物は、１以上の活性薬剤を、当分野で公知の医薬的に許容しうるキャリヤーと組み合わせることによって、容易に製剤化することができる。そのようなキャリヤーにより、活性薬剤を、処置される患者による経口摂取のための、チュアブル錠を含む錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、トローチ剤、ハードキャンディ、液体、ゲル、シロップ、スラリー、粉末、懸濁液、エリキシル、カシェ剤などとして製剤化することが可能になる。このような製剤は、固体希釈剤または充填剤、滅菌水性媒体、およびさまざまな非毒性有機溶媒を含む、医薬的に許容しうるキャリヤーを含むことができる。固体キャリヤーは、希釈剤、香味剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁剤、バインダー、防腐剤、錠剤崩壊剤、または封入用材料として作用することもできる１以上の物質であることができる。粉末において、キャリヤーは、微粉化した活性成分との混合物である微粉化固体であることができる。錠剤において、活性成分は一般に、望ましい結合能力を有するキャリヤーと適切な割合で混合され、望ましい形状およびサイズに圧縮される。粉末および錠剤は、約一（１）％〜約七十（７０）％の１以上の活性薬剤を含有することができる。適切なキャリヤーとしては、限定されるものではないが、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられる。一般に、１以上の活性薬剤は、経口剤形の全組成物の約０．５重量％、約５重量％、約１０重量％、約２０重量％、または約３０重量％〜約５０重量％、約６０重量％、約７０重量％、約８０重量％、または約９０重量％の範囲の濃度レベルにおいて、望ましい用量単位を提供するのに十分な量で包含されることができる。
【０２１３】
[00241]経口使用のための水性懸濁液は、１以上の活性薬剤を、懸濁剤（例えば、メチルセルロース）、湿潤剤（例えば、レシチン、リゾレシチンおよび／または長鎖脂肪族アルコール）、ならびに着色剤、防腐剤、香味剤などのような医薬的に許容しうる賦形剤と一緒に、含有することができる。
【０２１４】
[00242]油または非水性溶媒は、例えば、大きな親油性部分の存在に起因して、１以上の活性薬剤を溶液にするために必要とされることがある。あるいは、エマルション、懸濁液、または他の調製物、例えばリポソーム調製物を、使用することができる。リポソーム調製物に関し、状態の処置用のリポソームを調製するための任意の公知の方法を使用することができる。リガンドをリポソームに付着させて、これらの組成物を特定の作用部位に向けることもできる。
【０２１５】
[00243]経口使用のための医薬調製物は、固体賦形剤として得ることができ、所望により、得られた混合物を粉砕し、必要に応じて適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適切な賦形剤は、とりわけ、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖のような充填剤；香味要素、セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などである。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩のような崩壊剤を添加することができる。これらの薬剤は、持続放出性調製物として製剤化することもできる。
【０２１６】
[00244]糖衣錠コアには、適切なコーティングを施すことができる。この目的のために、所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含有することができる濃縮糖溶液を使用することができる。同定のために、または活性薬剤の異なる組合せを特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加することができる。
【０２１７】
[00245]経口的に使用できる医薬調製物は、ゼラチン製のプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤から作製される軟質密封カプセルを包含する。プッシュフィットカプセルは、活性構成成分を、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどのバインダー、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および所望により安定剤と混合して、含有することができる。軟カプセルにおいて、活性薬剤は、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解または懸濁させることができる。さらに、安定剤を添加することができる。経口投与のための全ての製剤は、投与に適した用量にあることができる。
【０２１８】
[00246]経口投与に適した他の形態としては、エマルション、シロップ、エリキシル、水溶液、水性懸濁液、または使用直前に液体形態の調製物に転化することが意図される固体形態の調製物を含む、液体形態の調製物が挙げられる。エマルションは、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中で調製することができ、または、乳化剤、例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエート、もしくはアラビアゴムを含有することができる。水溶液は、活性成分を水に溶解し、適切な着色剤、香味料、安定剤、および増粘剤を添加することによって調製することができる。水性懸濁液は、微粉化した活性成分を、粘性材料、例えば、天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤を含む水中に分散させることによって、調製することができる。組成物を投与することができる適切な充填剤またはキャリヤーとしては、寒天、アルコール、脂肪、ラクトース、デンプン、セルロース誘導体、多糖類、ポリビニルピロリドン、シリカ、滅菌生理食塩水など、または適切な量で使用されるそれらの混合物が挙げられる。固体形態の調製物としては、溶液、懸濁液、およびエマルションが挙げられ、活性成分に加えて、着色剤、香味料、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有することができる。
【０２１９】
[00247]シロップまたは懸濁液は、活性化合物を、糖、例えばスクロースの濃縮水溶液に添加することによって作製することができ、これには、任意の補足成分を添加することもできる。そのような補足成分は、香味料、糖の結晶化を遅らせるための薬剤、または他の任意の成分の溶解度を増大させるための薬剤、例えば、多価アルコール、例えば、グリセロールまたはソルビトールを、包含することができる。
【０２２０】
[00248]経口投与用の化合物を製剤化する場合、胃腸（ＧＩ）管からの吸収を増強するために、胃内滞留性(gastroretentive)製剤を利用することが望ましい場合がある。胃内に数時間保持される製剤は活性薬剤をゆっくりと放出し、本明細書中で使用することができる持続放出をもたらすことができる。活性薬剤の吸収を最大にするために、膨張性、浮遊性、および生体接着性の技術を利用することができる。
【０２２１】
[00249]眼投与用製剤
[00250]いくつかの場合において、本明細書中で提供される組成物は、眼を通して投与することができ、例えば、点眼剤で送達することができる。点眼剤は、生理食塩水、緩衝液などの滅菌水溶液中に１以上の活性薬剤を溶解することによって、または溶解する粉末組成物を使用前に組み合わせることによって、調製することができる。当分野で公知の他のビヒクル、例えば、限定されるものではないが、平衡塩類溶液、生理食塩水、ポリエチレングリコールなどの水溶性ポリエーテル、ポリビニルアルコールおよびポビドンなどのポリビニル、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体、鉱油および白色ワセリンなどの石油誘導体、ラノリンなどの動物性脂肪、カルボキシポリメチレンゲルなどのアクリル酸のポリマー、落花生油などの植物性脂肪、およびデキストランなどの多糖類、ならびにヒアルロン酸ナトリウムなどのグリコサミノグリカンを選択することができる。望ましい場合、点眼剤に通常使用される添加剤を加えることができる。このような添加剤としては、等張化剤（例えば、塩化ナトリウムなど）、緩衝剤（例えば、ホウ酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなど）、防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノールなど）、増粘剤（例えば、ラクトース、マンニトール、マルトースなどの糖質；例えば、ヒアルロン酸、またはヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウムなどのその塩；例えば、コンドロイチン硫酸などのムコ多糖；例えば、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、架橋ポリアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、または当業者に公知の他の薬剤）が挙げられる。
【０２２２】
[00251]他の製剤
[00252]いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物は、耳用の溶液、懸濁液、軟膏、または挿入物で投与される。いくつかの態様において、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、坐剤として投与するために製剤化される。例えば、トリグリセリド、脂肪酸グリセリド、Ｗｉｔｅｐｓｏｌ  Ｓ５５（Ｄｙｎａｍｉｔｅ  Ｎｏｂｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，ドイツの商標）、またはカカオバターの混合物などの低融点ワックスを最初に溶融させ、活性成分を、例えば撹拌によって均質に分散させることができる。その後、溶融した均質な混合物を、好都合なサイズの型に注ぎ入れ、そのまま冷却し、凝固させることができる。いくつかの態様では、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、膣内投与のために製剤化される。場合によっては、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレーは、１つまたは組成物、例えば本明細書中に記載のワクチンを含有する。
【０２２３】
[00253]構成成分、例えば、キャリヤー、賦形剤
[00254]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上のキャリヤーおよび賦形剤（緩衝剤、炭水化物、マンニトール、タンパク質、ペプチドまたはアミノ酸、例えばグリシン、酸化防止剤、静菌薬、キレート化剤、懸濁剤、増粘剤および／または防腐剤を含むが、これらに限定されない）、水、油、例えば、石油、動物、植物または合成由来のもの、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油など、食塩水、水性デキストロースおよびグリセロール溶液、香味剤、着色剤、脱粘着剤および他の許容しうる添加剤、アジュバント、またはバインダー、生理学的条件に近づけるために必要とされる他の医薬的に許容しうる補助物質、例えば、ｐＨ緩衝剤、張性調整剤、乳化剤、湿潤剤などを包含することができる。賦形剤の例としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、イネ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。他の例において、組成物は実質的に防腐剤を含まない。他の態様において、組成物、例えばワクチンは、少なくとも１つの防腐剤を含有する。医薬剤形に関する一般的な方法論は、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｈ，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  Ｍｄ（１９９９））に見いだすことができる。当業者に公知の任意の適切なキャリヤーを、本明細書中に記載される医薬組成物の投与に採用することができるが、キャリヤーのタイプは投与方法に応じて多様であることができることは、認識されるであろう。適切な製剤および追加的なキャリヤーは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ“Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”（第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  Ｍｄ）に記載されており、その教示を全体として本明細書中で参考として援用する。
【０２２４】
[00255]リポソームおよびミクロスフェア
[00256]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、リポソーム内に封入されていることができる。生分解性ミクロスフェアも、組成物のためのキャリヤーとして採用することができる。
【０２２５】
[00257]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、リポソームまたはミクロスフェア（または微粒子）で投与することができる。患者に投与するためのリポソームおよびミクロスフェアの調製方法は、当業者に公知である。例えば、内容を本明細書で参考として援用する米国特許公報第４７８９７３４号には、生物材料をリポソーム中に封入するための方法が記載されている。材料を水溶液に溶解し、適したリン脂質および脂質を必要に応じて界面活性剤と一緒に添加し、材料を要望に応じて透析または超音波処理することができる。ポリマーまたはタンパク質で形成されたミクロスフェアは当業者に公知であり、胃腸管を通って血流に直接通過するように適応させることができる。あるいは、化合物を組み込み、ミクロスフェア、またはミクロスフェアの複合体を、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたり徐放するように埋め込むことができる。
【０２２６】
[00258]防腐剤／滅菌
[00259]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、単回投与（例えば、免疫化）のための材料を包含することができ、または複数回投与（例えば、免疫化）のための材料（例えば、“複数回用量”キット）を含むことができる。組成物、例えばワクチンは、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールのような１以上の防腐剤を包含することができる。いくつかの態様において、ワクチンは、水銀物質を実質的に含まず（例えば、＜１０μｇ／ｍＬ）、例えばチオメルサルを含まない。いくつかの態様において、コハク酸ａ−トコフェロールは、水銀化合物の代替物として使用される。防腐剤は、使用中の微生物混入を防止するために使用することができる。適切な防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸、Ｏｎａｍｅｒ  Ｍ、または当業者に公知の他の薬剤が挙げられる。眼科用製品では、例えば、そのような防腐剤は０．００４％〜０．０２％のレベルで使用することができる。本出願の組成物において、防腐剤、例えば塩化ベンザルコニウムは、０．００１重量％〜０．０１重量％未満、例えば、０．００１重量％〜０．００８重量％、好ましくは約０．００５重量％のレベルで採用することができる。０．００５％の塩化ベンザルコニウム濃度は、本明細書中に提供される組成物を微生物攻撃から保護するのに十分であることができる。
【０２２７】
[00260]複数回用量の組成物に防腐剤を包含させる代わりに（または、これに加えて）、組成物、例えばワクチンは、材料を除去するための無菌アダプターを有する容器に入れることができる。
【０２２８】
[00261]いくつかの場合において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、無菌であることができる。組成物、例えばワクチンは、非発熱性で、例えば、用量あたり＜１ＥＵ(エンドトキシン単位、標準尺度）を含有することができ、用量あたり＜０．１ＥＵであることもできる。組成物、例えばワクチンは、当分野で公知の適切なビヒクル中で、滅菌溶液または懸濁液として製剤化することができる。組成物、例えばワクチンは、従来の公知の滅菌技術によって滅菌することができ、例えば、組成物は滅菌濾過することができる。
【０２２９】
[00262]塩／重量モル浸透圧濃度
[00263]いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上の塩を含む。張性を制御するために、ナトリウム塩などの生理学的塩を、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンに包含させることができる。他の塩としては、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二ナトリウム、および／または塩化マグネシウムなどを挙げることができる。いくつかの態様において、組成物、例えばワクチンは、１以上の医薬的に許容しうる塩と一緒に製剤化される。１以上の医薬的に許容しうる塩としては、無機イオン、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムイオンなどの塩を挙げることができる。このような塩としては、無機または有機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、フマル酸、コハク酸、乳酸、マンデル酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、またはマレイン酸との塩を挙げることができる。活性薬剤（例えば、ポリペプチド）がカルボキシ基または他の酸性基を含有する場合、それは、無機または有機塩基を有する医薬的に許容しうる付加塩に転化することができる。適切な塩基の例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンなどが挙げられる。
【０２３０】
[00264]組成物、例えばワクチンは、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内の重量モル浸透圧濃度を有することができる。
【０２３１】
[00265]緩衝液／ｐＨ
[00266]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上の緩衝液、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液；ホウ酸緩衝液；コハク酸緩衝液；ヒスチジン緩衝液（例えば、水酸化アルミニウムアジュバントを含む）；またはクエン酸緩衝液を含むことができる。緩衝液は、場合によっては５〜２０ｍＭの範囲で包含される。
【０２３２】
[00267]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、約５．０〜約８．５、約６．０〜約８．０、約６．５〜約７．５、または約７．０〜約７．８のｐＨを有する。
[00268]デタージェント／界面活性剤
[00269]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上のデタージェントおよび／または界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般に“Ｔｗｅｅｎ”とよばれる）、例えば、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０；ＤＯＷＦＡＸＴＭの商標名で販売されているエチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー、例えば、線状ＥＯ／ＰＯブロックコポリマー；繰り返しエトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が多様であることができるオクトキシノール、例えば、オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシエトキシエタノール）；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；ホスファチジルコリン（レシチン）などのリン脂質；ＴｅｒｇｉｔｏｌＴＭ  ＮＰシリーズなどのノニルフェノールエトキシレート；ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールから誘導されるポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として知られる）、例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ  ３０）；およびソルビタンエステル（一般に“Ｓｐａｎ”として知られる）、例えば、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ  ８５）およびソルビタンモノラウレート、オクトキシノール（オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（“ＣＴＡＢ”）、または、とりわけスプリットまたは表面抗原ワクチン用にはデオキシコール酸ナトリウムを包含する。１以上のデタージェントおよび／または界面活性剤は、微量でのみ存在することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、それぞれ１ｍｇ／ｍＬ未満のオクトキシノール−１０およびポリソルベート８０を包含することができる。本明細書では非イオン性界面活性剤を使用することができる。界面活性剤は、それらの“ＨＬＢ”（親水性／親油性バランス）によって分類することができる。場合によっては、界面活性剤は、少なくとも１０、少なくとも１５、および／または少なくとも１６のＨＬＢを有する。
【０２３３】
[00270]いくつかの態様において、界面活性剤の混合物、例えばＴｗｅｅｎ ８０／Ｓｐａｎ ８５の混合物を、組成物、例えばワクチンに使用する。ポリオキシエチレンソルビタンエステルとオクトキシノールとの組み合わせも、適切であることができる。ほかの組合せは、ラウレス９＋ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールを含むことができる。界面活性剤の量（重量％）は、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ ８０など）０．０１〜１％、特に約０．１％；オクチル−またはノニルフェノキシポリオキシエタノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他のデタージェントなど）０．００１〜０．１％、特に０．００５〜０．０２％；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９など）０．１〜２０％、好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％であることができる。
【０２３４】
[00271]アジュバント
[00272]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、１以上のアジュバントを含むことができる。アジュバントは、ワクチンを受ける対象に誘発される免疫応答（体液性および／または細胞性）を増強するために使用することができる。場合によっては、アジュバントはＴｈ１型応答を誘発することができる。場合によっては、アジュバントはＴｈ２型応答を誘発することができる。Ｔｈ１型応答は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１０のようなサイトカインの産生によって特徴づけることができるＴｈ２型応答とは対照的に、ＩＦＮ−γのようなサイトカインの産生によって特徴づけることができる。
【０２３５】
[00273]ＭＰＬおよびＭＤＰなどの脂質ベースのアジュバントは、本明細書に開示される組成物、例えばワクチンと一緒に使用することができる。例えば、モノホスホリル脂質Ａ(ＭＰＬ)は、特定のＴリンパ球に対するリポソーム抗原の提示の増加を引き起こすことができるアジュバントである。さらに、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）も、本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンと併せて、適切なアジュバントとして使用することができる。
【０２３６】
[00274]アジュバントは、サイトカインのような刺激性分子も含むことができる。サイトカインの非限定的な例としては、ＣＣＬ２０、ａ−インターフェロン（ＩＦＮａ）、β−インターフェロン（ＩＦＮ−β）、γ−インターフェロン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ＴＮＦａ、ＴＮＦｐ、ＧＭ−ＣＳＦ、表皮成長因子（ＥＧＦ）、皮膚Ｔ細胞誘引ケモカイン（ＣＴＡＣＫ）、上皮胸腺発現ケモカイン（ＴＥＣＫ）、粘膜関連上皮ケモカイン（ＭＥＣ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−２８、ＭＨＣ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１８、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１−、ＩＬ−８、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐ１５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−１８の変異体形態、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、神経成長因子、血管内皮増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｉｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲＳ、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−Ｉ、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ  ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０  ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰＩ、およびＴＡＰ２が挙げられる。
【０２３７】
[00275]追加的なアジュバントとしては、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ａ、ＭＩＰ−１ｐ、ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、Ｌ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、ＣＤ３４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭａｄＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−１、Ｍａｃ−１、ｐｌ５０．９５、ＰＥＣＡＭ、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ２、ＬＦＡ−３、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１８の変異体形態、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、血管増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ＩＬ−７、ＩＬ−２２、神経成長因子、血管内皮増殖因子、Ｆａｓ、ＴＮＦ受容体、Ｆｉｔ、Ａｐｏ−１、ｐ５５、ＷＳＬ−１、ＤＲ３、ＴＲＡＭＰ、Ａｐｏ−３、ＡＩＲ、ＬＡＲＤ、ＮＧＲＦ、ＤＲ４、ＤＲ５、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＡＩＬ−２、ＴＲＩＣＫ２、ＤＲ６、カスパーゼＩＣＥ、Ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、Ｓｐ−１、Ａｐ−１、Ａｐ−２、ｐ３８、ｐ６５Ｒｅｌ、ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ、ＴＲＡＦ６、ＩｋＢ、不活性ＮＩＫ、ＳＡＰ  Ｋ、ＳＡＰ−１、ＪＮＫ、インターフェロン応答遺伝子、ＮＦｋＢ、Ｂａｘ、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬｒｅｃ、ＴＲＡＩＬｒｅｃＤＲＣ５、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫ  ＬＩＧＡＮＤ、Ｏｘ４０、Ｏｘ４０  ＬＩＧＡＮＤ、ＮＫＧ２Ｄ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｂ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｆ、ＴＡＰＩ、ＴＡＰ２、およびそれらの機能的フラグメントを挙げることができる。
【０２３８】
[00276]いくつかの場合において、１以上のアジュバントは、ｔｏｌｌ様受容体のモジュレーターであることができる。ｔｏｌｌ様受容体のモジュレーターの例は、ＴＬＲ−９アゴニストおよびＴＬＲ−２アゴニストを包含し、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（Ｒ８３７）などのｔｏｌｌ様受容体の小分子モジュレーターに限定されない。本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンを使用することができるアジュバントの他の例としては、サポニン、ＣｐＧ  ＯＤＮなどが挙げられる。
【０２３９】
[00277]いくつかの場合において、１以上のアジュバントは、細菌トキソイド、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックポリマー、アルミニウム塩、リポソーム、ＣｐＧポリマー、水中油型エマルション、またはそれらの組み合わせから選択される。
【０２４０】
[00278]場合によっては、１以上のアジュバントは、アルミニウム塩（ミョウバン）またはその誘導体に基づいていることができる。代表的なミョウバンは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムナトリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、硫酸アルミニウムセシウム、またはアルミニウムおよびマグネシウムの水酸化物の混合物を含むことができる。ミョウバンは、結晶質オキシ水酸化アルミニウム（ＡＩＯＯＨ）を含むこともできる。場合によっては、ＡＩＯＯＨアジュバントは、材料中の機能的サブユニットを表す凝集体を形成するナノ長スケールの板状一次粒子を構成することができる。これらの凝集体は、多孔質であることができ、直径約１〜約２０μｍの範囲の不規則な形状を有することができる。抗原と混合すると、凝集体は、吸収された抗原をワクチン全体に分布させるために再凝集することができるより小さなフラグメントに分解することができる。いくつかの態様において、アジュバントは、規則正しい棒状のＡＩＯ（ＯＨ）ナノ粒子を含む。
【０２４１】
[00279]いくつかの態様において、１以上のアジュバントは、水中油型エマルションである。水中油型エマルションは、少なくとも１つの油および少なくとも１つの界面活性剤を包含することができ、この油（１以上）および界面活性剤（１以上）は、生分解性および生体適合性である。エマルション中の油滴は直径が５μｍ未満であることができ、さらにサブミクロン直径を有していてもよく、これらの小さなサイズは、安定なエマルションを提供するためのマイクロフルイダイザーを用いて達成される。２２０ｎｍ未満のサイズを有する液滴は、濾過滅菌に付すことができるので、好ましいことがある。
【０２４２】
[00280]使用される油は、動物（魚など）または植物源由来のものなどを包含することができる。植物油の供給源としては、堅果、種子、および穀物を挙げることができる。堅果油の典型例は、落花生油、大豆油、ココナッツ油、およびもっとも一般的に入手可能なオリーブ油である。例えばホホバ豆から得られるホホバ油を使用してもよい。種子油としては、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油などが挙げられる。穀物群としては、トウモロコシ油、ならびに、コムギ、オートムギ、ライムギ、イネ、テフ、トリチカレ(triticale)など他のシリアル穀物の油を挙げることができる。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールのの炭素数６〜１０の脂肪酸エステルは、種子油中に天然には存在しないが、落花生油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製することができる。哺乳類の乳汁からの脂肪および油は代謝可能であることができ、本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンと一緒に使用することができる。動物源から純粋な油を得るための分離、精製、けん化、および他の手段のための手順は、当分野で公知である。サカナは、容易に回収することができる代謝可能な油を含有することができる。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨ろうなどの鯨油は、本明細書中で使用することができる魚油のいくつかを例示することができる。いくつかの分枝鎖油は、炭素数５のイソプレン単位で生化学的に合成することができ、一般にテルペノイドとよぶことができる。サメ肝油は、スクアレンとして知られる分枝状不飽和テルペノイド、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエンを含有する。スクアレンに対する飽和類似体であるスクアランも使用することができる。スクアレンおよびスクアランを含む魚油は、商業的供給源から容易に入手可能であることができ、または当分野で公知の方法によって得ることができる。
【０２４３】
[00281]他の有用な油としてはトコフェロールが挙げられ、これは、ビタミンＥが高齢対象群における免疫応答に対して正の効果を有することができるので、高齢患者（例えば、６０歳以上）に使用するために、本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンに包含されることができる。さらに、トコフェロールは、エマルションの安定化を助けることができる抗酸化特性を有することができる。さまざまなトコフェロールが存在し（α、β、γ、δ、εまたはξ）；場合によっては、ａが使用される。ａ−トコフェロールの例は、ＤＬ−ａ−トコフェロールである。コハク酸ａ−トコフェロールは、本明細書中で提供される組成物、例えばインフルエンザワクチンと適合性であることができ、水銀化合物の代替物として有用な防腐剤であることができる。いくつかの態様では、油の混合物、例えば、スクアレンおよびａ−トコフェロールを使用することができる。２〜２０％（体積基準）の範囲の油含有量を使用することができる。
【０２４４】
[00282]特定の水中油型エマルションアジュバントとしては、例えば、スクアレン、ポリソルベート８０、およびソルビタントリオレエートのサブミクロンエマルションが挙げられる。体積に基づくエマルションの組成は、約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０および約０．５％のＳｐａｎ  ８５であることができる。重量換算で、これらの比は、４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０および０．４８％のＳｐａｎ  ８５となる。このアジュバントは“ＭＦ５９”として知られている。ＭＦ５９エマルションは、有利には、クエン酸イオン、例えば、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液を包含する。
【０２４５】
[00283]水中油型エマルションは、スクアレン、トコフェロール、およびポリソルベート８０のサブミクロンエマルションであることができる。これらのエマルションは、２〜１０％のスクアレン、２〜１０％のトコフェロール、および０．３〜３％のポリソルベート８０を有することができ、スクアレン：トコフェロールの重量比は、より安定なエマルションを提供することができるので、好ましくは≦１（例えば、０．９０）であることができる。スクアレンおよびポリソルベート８０は、約５：２の体積比で、または約１１ ：５の重量比で存在することができる。このようなエマルションの１つは、Ｔｗｅｅｎ ８０をＰＢＳに溶解して２％溶液を得た後、この溶液９０ｍＬを（５ｇのＤＬ−ａ−トコフェロールと５ｍＬのスクアレン）の混合物と混合し、次いでこの混合物をマイクロ流動化することによって作製することができる。得られたエマルションは、例えば、１００〜２５０ｎｍ、好ましくは約１８０ｎｍの平均直径を有するサブミクロンの油滴を有する。エマルションはまた、３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３ｄ−ＭＰＬ）を包含することができる。このタイプの他の有用なエマルションは、ヒト用量あたり、０．５〜１０ｍｇのスクアレン、０．５〜１１ｍｇのトコフェロール、および０．１〜４ｍｇのポリソルベート８０を含むことができる。
【０２４６】
[00284]水中油型エマルションは、スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎデタージェント（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）のエマルションであることができる。エマルションはまた、３ｄ−ＭＰＬ（以下を参照）を包含することができる。エマルションは、リン酸緩衝液を含有することができる。
【０２４７】
[00285]水中油型エマルションは、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎデタージェント（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）およびトコフェロール（例えば、コハク酸ａ−トコフェロール）を含むエマルションであることができる。エマルションは、約７５：１１：１０の質量比でこれら３つの成分を包含することができ（例えば、７５０μ／ｍＬのポリソルベート８０、１１０ｕ／ｍＬのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および１００μ／ｍＬのコハク酸α−トコフェロール）、これらの濃度は、抗原からのこれらの成分の寄与を包含すべきである。エマルションは、スクアレンを包含することもできる。エマルションはまた、３ｄ−ＭＰＬを包含することができる。水相は、リン酸緩衝液を含有することができる。
【０２４８】
[00286]水中油型エマルションは、スクアラン、ポリソルベート８０、およびポロキサマー４０１（“ＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ  Ｌ１２１”）のエマルションであることができる。エマルションは、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水中で製剤化することができる。このエマルションは、ムラミルジペプチドのための有用な送達ビヒクルであることができ、“ＳＡＦ−１”アジュバント（０．０５〜１％のＴｈｒ−ＭＤＰ、５％のスクアラン、２．５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）中でトレオニル−ＭＤＰと一緒に用いることができる。これは、“ＡＦ”アジュバント（５％のスクアラン、１．２５％のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１および０．２％のポリソルベート８０）中でのように、Ｔｈｒ−ＭＤＰなしで使用することもできる。
【０２４９】
[00287]水中油型エマルションは、スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性非イオン性界面活性剤（例えば、ソルビタンモノオレエートまたは“Ｓｐａｎ ８０”などのソルビタンエステルまたはマンニドエステル）を含むエマルションであることができる。エマルションは熱可逆性であることができ、および／または、油滴の少なくとも９０％（体積基準）は２００ｎｍ未満のサイズを有する。エマルションはまた、アルジトール；細胞保護剤（例えば、糖、例えば、ドデシルマルトシドおよび／またはスクロース）；および／またはアルキルポリグリコシドのうちの１以上を包含することができる。エマルションは、ＴＬＲ４アゴニストを包含することができる。このようなエマルションは凍結乾燥することができる。
【０２５０】
[00288]水中油型エマルションは、スクアレン、ポロキサマー１０５およびＡｂｉｌ−Ｃａｒｅのエマルションであることができる。アジュバント添加ワクチン中のこれらの成分の最終濃度（重量）は、５％のスクアレン、４％のポロキサマー１０５（プルロニックポリオール）および２％のＡｂｉｌ−Ｃａｒｅ  ８５（Ｂｉｓ−ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６  ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ジメチコン；トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル）であることができる。
【０２５１】
[00289]水中油型エマルションは、０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルションであることができる。リン脂質成分としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびカルジオリピンを挙げることができる。サブミクロンの液滴サイズが有利であることができる。
【０２５２】
[00290]水中油型エマルションは、非代謝性油（軽質鉱油など）および少なくとも１つの界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ ８０またはＳｐａｎ ８０など）のサブミクロン水中油型エマルションであることができる。添加剤としては、ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油性コンジュゲート（例えば、グルクロン酸のカルボキシル基を介してデスアシルサポニンに脂肪族アミンを付加することによって生成されるＧＰＩ−ＯｌＯＯ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、および／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンを挙げることができる。
【０２５３】
[00291]いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、親水性または親油性ゲル化剤、親水性または親油性活性薬剤、防腐剤、酸化防止剤、溶媒、芳香剤、充填剤、日焼け止め剤、臭気吸収剤、および染料などのアジュバントを含有する。これらさまざまなアジュバントの量は、考慮される分野で使用されているものであることができ、例えば、組成物の全重量の約０．０１％〜約２０％である。それらの性質に応じて、これらのアジュバントは、脂肪相、水相および／または脂質小胞に導入することができる。
【０２５４】
[00292]１以上のアジュバントと組み合わせて、ペプチド、核酸分子、抗体もしくはそのフラグメントなどの１以上の活性薬剤、ＡＰＣ、および／または本明細書に記載されるウイルスを含む、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、特定のモル比を含むように製剤化することができる。例えば、約９９：１〜約１：９９のモル比で活性薬剤を１以上のアジュバントと組み合わせて、使用することができる。いくつかの態様において、１以上のアジュバントと組み合わせた活性薬剤のモル比の範囲は、約８０：２０〜約２０：８０；約７５：２５〜約２５：７５；約７０：３０〜約３０：７０；約６６：３３〜約３３：６６；約６０：４０〜約４０：６０；約５０：５０；および約９０：１０〜約１０：９０から選択することができる。１以上のアジュバントと組み合わせた活性薬剤のモル比は、約１：９であることができ、場合によっては約１：１であることができる。ペプチドまたはポリペプチド、核酸分子、抗体もしくはそのフラグメント、ＡＰＣ、および／または本明細書に記載されるウイルスなどの活性薬剤は、１以上のアジュバントと組み合わせて、同じ用量単位、例えば、１つのバイアル、坐剤、錠剤、カプセル、およびエアロゾルスプレーで一緒に製剤化することができ；あるいは、各薬剤、形態、および／または化合物は、別個の単位、例えば、２つのバイアル、坐剤、錠剤、２つのカプセル、錠剤およびバイアル、エアロゾルスプレーなどで、製剤化することができる。
【０２５５】
[00293]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、ミョウバン、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、イミキモド（Ｒ８３７）（小さな合成抗ウイルス分子−ＴＬＲ７リガンド）、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、および規則正しい棒状ＡＩＯ（ＯＨ）ナノ粒子（Ｒｏｄ）のリストから選択される１以上のアジュバントを含むことができる。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、ミョウバンを含む。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、Ｒｏｄを含む。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、Ｒｏｄ、ＭＰＬ、およびＲ８３７を含む。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、ＭＰＬおよびＲ８３７を含む。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、ミョウバン、ＭＰＬ、およびＲ８３７を含む。いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、Ｐａｍ２Ｃｙｓを含む。
【０２５６】
[00294]追加的薬剤
[00295]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、追加的活性薬剤と一緒に投与することができる。追加的活性薬剤の選択は、少なくとも部分的に、処置される状態に依存することができる。追加的活性薬剤としては、例えば、病原体感染（例えばウイルス感染）に対する治療効果を有する任意の活性薬剤、例えば、炎症性状態を処置するために使用されるＮＳＡＩＤのような薬物、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、アセトアミノフェン、ケトプロフェン、またはアスピリンなどを挙げることができる。いくつかの態様において、インフルエンザ感染を処置または防止するための製剤は、１以上の従来のインフルエンザ抗ウイルス薬、例えば、ビタミンＤ、アマンタジン、アルビドール、ラニナミビル、リマンタジン、ザナミビル、ペラミビル、およびオセルタミビルを含有することができる。ＨＩＶのようなレトロウイルス感染の処置において、製剤は、１以上の従来の抗ウイルス薬、例えば、プロテアーゼ阻害剤（ロピナビル／リトナビル（Ｋａｌｅｔｒａ（登録商標））、インジナビル（Ｃｒｉｘｉｖａｎ（登録商標））、リトナビル（Ｎｏｒｖｉｒ（登録商標））、ネルフマビル（Ｖｉｒａｃｅｐｔ（登録商標））、サキナビル硬質ゲルカプセル（Ｉｎｖｉｒａｓｅ（登録商標））、アタザナビル（Ｒｅｙａｔａｚ（登録商標））、アンプレナビル（Ａｇｅｎｅｒａｓｅ（登録商標））、ホスアンプレナビル（Ｔｅｌｚｉｒ（登録商標））、チプラナビル（Ａｐｔｉｖｕｓ（登録商標）））、逆転写酵素阻害薬、例えば、非ヌクレオシドおよびヌクレオシド／ヌクレオチド阻害薬（ＡＺＴ（ジドブジン、Ｒｅｔｒｏｖｉｒ (登録商標））、ｄｄｌ(ジダノシン、Ｖｉｄｅｘ（登録商標））、３ＴＣ（ラミブジン、Ｅｐｉｖｉｒ（登録商標））、ｄ４Ｔ（スタブジン、Ｚｅｒｉｔ（登録商標））、アバカビル（Ｚｉａｇｅｎ（登録商標））、ＦＴＣ（エムトリシタビン、Ｅｍｔｒｉｖａ（登録商標））、テノホビル（Ｖｉｒｅａｄ（登録商標））、エファビレンツ（Ｓｕｓｔｉｖａ（登録商標））およびネビラピン（Ｖｉｒａｍｕｎｅ（登録商標））、融合阻害剤Ｔ２０（エンフビルチド、Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標））、インテグラーゼ阻害剤（ＭＫ−０５１８およびＧＳ−９１３７）、および成熟阻害剤（ＰＡ−４５７（Ｂｅｖｉｒｉｍａｔ（登録商標）））を含有することができる。他の
例として、製剤は、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ならびに他のビタミンおよび酸化防止剤などの１以上のサプリメントをさらに含有することができる。
【０２５７】
[00296]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上の抗生物質（例えば、ネオマイシン、カナマイシン、ポリミキシンＢ）を包含することができる。
[00297]いくつかの態様において、組成物、例えばワクチンは、グルテンを含まないことができる。
【０２５８】
[00298]共溶媒
[00299]本明細書中で提供される組成物の成分の溶解度は、組成物中の共溶媒によって高めることができる。このような共溶媒としては、ポリソルベート２０、６０、および８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、Ｆ−８４、およびＰ−１０３、シクロデキストリン、または当業者に公知の他の薬剤が挙げられる。このような共溶媒は、約０．０１重量％〜２重量％のレベルで採用することができる。
【０２５９】
[00300]浸透増強剤
[00301]いくつかの態様において、本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、１以上の浸透増強剤を包含することができる。例えば、組成物は、浸透性バリヤー、例えば皮膚を横切る薬剤または薬剤の組み合わせの浸透を増加させるか、または送達を助ける、適切な固体またはゲル相キャリヤーまたは賦形剤を含むことができる。浸透増強化合物の例としては、例えば、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、２−プロパノールのようなテルペン）、スルホキシド（例えば、ジメチルスルホキシド、デシルメチルスルホキシド、テトラデシルメチルスルホキシド）、ピロリドン（例えば、２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピロリドン）、ラウロカプラム、アセトン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフルフリルアルコール、Ｌ−ａ−アミノ酸、アニオン性、カチオン性、両性または非イオン性界面活性剤（例えば、ミリスチン酸イソプロピルおよびラウリル硫酸ナトリウム）、脂肪酸、脂肪アルコール（例えば、オレイン酸）、アミン、アミド、クロフィブリン酸アミド、ヘキサメチレンラウラミド、タンパク質分解酵素、ａ−ビサボロール、ｄ−リモネン、尿素およびＮ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミドなどが挙げられる。さらなる例としては、保湿剤（例えば、尿素）、グリコール（例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール）、グリセロールモノラウレート、アルカン、アルカノール、ＯＲＧＥＬＡＳＥ、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、さまざまな糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、および／または他のポリマーが挙げられる。いくつかの態様において、組成物は、１以上のそのような浸透増強剤を包含する。
【０２６０】
[00302]持続放出性製剤用添加剤
[00303]いくつかの態様において、１以上の活性薬剤は、局所、眼内、眼周囲、または全身投与のための挿入物(insert)上にあるか、その中にあるか、またはそれに付着している、持続放出性製剤で使用するための生体適合性ポリマーに、放出可能に付着させることができる。生体適合性ポリマーからの制御放出を水溶性ポリマーと一緒に利用して、点滴可能な製剤を形成することができる。ＰＬＧＡミクロスフェアまたはナノスフェアなどの生体適合性ポリマーからの制御放出は、眼内移植または持続放出投与のための注射に適した製剤に利用することができる。任意の適切な生分解性および生体適合性ポリマーを使用することができる。
【０２６１】
[00304]投与経路
[00305]本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンは、さまざまな経路を介して対象、例えばヒトに送達することができる。送達経路としては、経口（口腔内および舌下を含む）、直腸内、経鼻、局所、経皮、経粘膜、肺内、膣内、坐剤、または非経口（筋肉内、動脈内、髄腔内、皮内、腹腔内、皮下および静脈内を含む）投与、あるいは、エアロゾル化、吸入または吹送による投与に適した形態を挙げることができる。組成物、例えばワクチンは、筋肉に投与することができ、あるいは、皮内もしくは皮下注射を介して、または経皮的に、例えばイオン導入によって、投与することができる。組成物、例えばワクチンは、表皮投与によって対象に送達してもよい。
【０２６２】
[00306]治療方法
[00307]本明細書中で提供される組成物、例えばワクチンは、約０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０ｍＬ、またはそれより多くの用量体積で、対象に投与することができる。半用量、例えば約０．２５ｍＬを小児に投与することができる。場合によっては、ワクチンを、より高い用量、例えば約１ｍＬで投与することができる。
【０２６３】
[00308]組成物、例えばワクチンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回、またはそれより多くの用量経過レジメンとして投与することができる。場合によっては、ワクチンを、２、３、または４回の用量経過レジメンとして投与することができる。場合によっては、ワクチンを２回の用量経過レジメンとして投与することができる。
【０２６４】
[00309]２回の用量経過レジメンの第１の用量および第２の用量の投与は、約０日、１日、２日、５日、７日、１４日、２１日、３０日、２ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年、１．５年、２年、３年、４年、５年、１０年、２０年、またはそれを超えて、分離することができる。本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、対象に、１年に１回、１年に２回、１年に３回、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年ごと、またはそれを超える年ごとに投与することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、対象に、２、３、４、５、６、７年ごと、またはそれを超える年ごとに投与することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、４、５、６、７年ごと、またはそれを超える年ごとに投与することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、対象に１回投与することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、ある期間にわたって複数回用量のワクチンとして対象によって摂取されることができ、例えば、第２の用量が第１の用量の４〜５年後に摂取されることができる２回用量ワクチンである。いくつかの場合において、組成物、例えばワクチンは、例えば北半球の領域において、８月〜３月、９月〜２月、１０月〜１月、１１月〜１２月の期間に投与される。いくつかの場合において、組成物、例えばワクチンは、例えば南半球の領域において、３月〜１０月、４月〜９月、５月〜８月、６月〜７月の期間に投与される。
【０２６５】
[00310]投与量の例は限定的ではなく、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンを投与するための特定の投与レジメンを例示するためにのみ使用される。いくつかの態様において、ヒトで使用するための“治療的有効量”は、動物モデルから決定することができる。例えば、ヒトに対する用量は、動物において治療的に有効であることが見いだされている循環器、肝臓、局所、および／または胃腸の濃度を達成するように製剤化することができる。動物データおよび他のタイプの同様のデータに基づいて、当業者はヒトへの投与に適した組成物、例えばワクチンの治療的有効量を決定することができる。
【０２６６】
[00311]本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、季節性インフルエンザまたは汎発性インフルエンザを処置または防止するために使用することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載の方法および組成物は、インフルエンザウイルスのサブタイプを標的とすることができる。Ａ型インフルエンザウイルスは、ウイルスエンベロープの表面に発現される２つのタンパク質であるヘマグルチニン（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）に基づいてサブタイプ化することができる。Ａ型インフルエンザウイルスは、約１８のＨＡサブタイプ：ＨＩ、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、およびＨ１８；ならびに約１１のＮサブタイプ：Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、Ｎ４、Ｎ５、Ｎ６、Ｎ７、Ｎ８、Ｎ９、Ｎ１０、およびＮ１１を示すことができる。一緒に、ＨＡおよびＮサブタイプは、任意の組み合わせで組み合わせることができる。観察されたＨＡおよびＮサブタイプの組み合わせの非限定的な例としては、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ７、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ５、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ４、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ２、Ｈ１０Ｎ７、ＨＩ１Ｎ６、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、およびＨ１４Ｎ５が挙げられる。いくつかの態様では、本明細書中に記載されるワクチンは、本明細書中に開示されるＨＡおよびＮサブタイプの組合せを有するＡ型インフルエンザウイルスを標的とすることができる。いくつかの場合において、この組み合わせはＨｘＮｙによって表すことができ、これに関し、ｘは任意のＨＩ〜ＨＩ８サブタイプを表し、ｙは任意のＮ１〜Ｎ１１サブタイプを表す。例えば、いくつかの態様において、本明細書中に開示されるワクチンは、本明細書中に記載される任意のＮサブタイプとの組み合わせにあるＨＩであるＨ１Ｎｙとして表されるサブタイプ、またはＨ２Ｎｙとして表されるサブタイプなどを標的とすることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載のワクチンは、ＨＡおよびＮサブタイプの組合せＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ１Ｎ７、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ３Ｎ８、Ｈ４Ｎ８、Ｈ５Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ８、Ｈ５Ｎ９、Ｈ６Ｎ５、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３、Ｈ７Ｎ４、Ｈ７Ｎ７、Ｈ７Ｎ９、Ｈ８Ｎ４、Ｈ９Ｎ２、Ｈ１０Ｎ７、Ｈ１１Ｎ６、Ｈ１２Ｎ５、Ｈ１３Ｎ６、またはＨ１４Ｎ５を有するＡ型インフルエンザウイルスを標的とすることができる。
【０２６７】
[00312]いくつかの態様において、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、Ｂ型インフルエンザウイルスを標的とすることができる。Ｂ型インフルエンザウイルスは、系統および株に分類することができる。Ｂ型インフルエンザウイルスは、Ｂ／山形またはＢ／ビクトリア系統のいずれかに属することができる。代表的なＢ型インフルエンザウイルス株としては、Ｂｒｉｓｂａｎｅ／６０／２００８、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ／２／２０１２、およびＷｉｓｃｏｎｓｉｎ／１／２０１０が挙げられる。
【０２６８】
[00313]いくつかの態様において、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、および／またはＣ型インフルエンザウイルスを標的とすることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、またはそれらの組み合わせの株を標的とすることができる。
【０２６９】
[00314]いくつかの態様では、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンを用いて、Ａ型インフルエンザウイルス感染、Ｂ型インフルエンザウイルス感染、またはＣ型インフルエンザウイルス感染などのインフルエンザ感染を有する患者を処置することができる。場合によっては、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンを、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、またはＣ型インフルエンザウイルスの感染に対するワクチン接種方法として使用することができる。場合によっては、本明細書中に記載の組成物、例えばワクチンは、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、および／またはＣ型インフルエンザウイルスに関連する異なる株に対する交差防御を提供する。
【０２７０】
[00315]本明細書中で使用される“治療的有効量”という用語は、処置される疾患または状態の症状または徴候を軽減、改善、または防止するのに有効な量を意味することができる。例えば、いくつかの態様において、治療的有効量は、ウイルス感染、例えばインフルエンザ感染、例えば、Ａ型インフルエンザ感染の徴候および／または症状を有する対象において有益な効果を有する量であることができる。いくつかの態様において、治療的有効量は、対照と比較して、ウイルス感染、例えばインフルエンザ感染、例えばＡ型インフルエンザ感染の徴候および／または症状を阻害または低減する量であることができる。インフルエンザ感染、例えばＡ型インフルエンザ感染の徴候および症状は当分野で周知であり、発熱、咳、咽頭痛、鼻水、鼻詰まり、頭痛、筋肉痛、悪寒、倦怠（疲労）、悪心、嘔吐、下痢、疼痛（例えば、腹痛）、結膜炎、息切れ、呼吸困難、肺炎、急性呼吸窮迫、ウイルス性肺炎、呼吸不全、神経学的変化（例えば、精神状態の変化、発作）、またはそれらの組合せを包含することができる。いくつかの態様において、治療的有効量は、対照と比較して、対象における徴候および／または症状のいずれかを、約、または少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％減少させるのに十分な量であることができる。
【０２７１】
[00316]治療的有効量は、１以上の活性薬剤に関する場合、医療または医薬分野のさまざまな規制機関または助言機関（例えば、ＦＤＡ、ＡＭＡ）のいずれかによって、または製造業者もしくは供給業者によって推奨または承認されている用量範囲、投与様式、製剤などであることができる。
【０２７２】
[00317]本開示のいくつかの観点において、組成物はペプチドベースの製剤を含むことができる。本明細書中に記載されるポリペプチドを含む組成物は、対象に、約１ｎｍｏｌ／用量〜約１０００μｍｏｌ／用量で投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、対象に、約１ｎｍｏｌ／用量、約５ｎｍｏｌ／用量、約１０ｎｍｏｌ／用量、約２０ｎｍｏｌ／用量、約３０ｎｍｏｌ／用量、約４０ｎｍｏｌ／用量、約５０ｎｍｏｌ／用量、約６０ｎｍｏｌ／用量、約７０ｎｍｏｌ／用量、約８０ｎｍｏｌ／用量、約９０ｎｍｏｌ／用量、約１００ｎｍｏｌ／用量、約２００ｎｍｏｌ／用量、約３００ｎｍｏｌ／用量、約４００ｎｍｏｌ／用量、約５００ｎｍｏｌ／用量、約６００ｎｍｏｌ／用量、約７００ｎｍｏｌ／用量、約８００ｎｍｏｌ／用量、約９００ｎｍｏｌ／用量、約１μｍｏｌ／用量、約１μｍｏｌ／用量、約２μｍｏｌ／用量、約３μｍｏｌ／用量、約４μｍｏｌ／用量、約５μｍｏｌ／用量、約６μｍｏｌ／用量、約７μｍｏｌ／用量、約８μｍｏｌ／用量、約９μｍｏｌ／用量、約１０μｍｏｌ／用量、約２０μｍｏｌ／用量、約５０μｍｏｌ／用量、約１００μｍｏｌ／用量、約２００μｍｏｌ／用量、約３００μｍｏｌ／用量、約４００μｍｏｌ／用量、約５００μｍｏｌ／用量、約７５０μｍｏｌ／用量、約１０００μｍｏｌ／用量、またはこのうち任意の２つの間の任意の用量の用量で、投与することができる。場合によっては、組成物は、約５０ｎｍｏｌ／用量で対象に投与することができる。
【０２７３】
[00318]本開示のいくつかの観点において、組成物は、本明細書中に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むことができる。対象に投与される組成物は、約１ｐｍｏｌ／用量〜約１０００μｍｏｌ／用量の用量でポリヌクレオチドを含むことができる。いくつかの態様において、対象に投与される組成物は、約１ｐｍｏｌ／用量、約５ｐｍｏｌ／用量、約１０ｐｍｏｌ／用量、約２０ｐｍｏｌ／用量、約３０ｐｍｏｌ／用量、約４０ｐｍｏｌ／用量、約５０ｐｍｏｌ／用量、約６０ｐｍｏｌ／用量、約７０ｐｍｏｌ／用量、約８０ｐｍｏｌ／用量、約９０ｐｍｏｌ／用量、約１００ｐｍｏｌ／用量、約２００ｐｍｏｌ／用量、約３００ｐｍｏｌ／用量、約４００ｐｍｏｌ／用量、約５００ｐｍｏｌ／用量、約６００ｐｍｏｌ／用量、約７００ｐｍｏｌ／用量、約８００ｐｍｏｌ／用量、約９００ｐｍｏｌ／用量、１ｎｍｏｌ／用量、約５ｎｍｏｌ／用量、約１０ｎｍｏｌ／用量、約２０ｎｍｏｌ／用量、約３０ｎｍｏｌ／用量、約４０ｎｍｏｌ／用量、約５０ｎｍｏｌ／用量、約６０ｎｍｏｌ／用量、約７０ｎｍｏｌ／用量、約８０ｎｍｏｌ／用量、約９０ｎｍｏｌ／用量、約１００ｎｍｏｌ／用量、約２００ｎｍｏｌ／用量、約３００ｎｍｏｌ／用量、約４００ｎｍｏｌ／用量、約５００ｎｍｏｌ／用量、約６００ｎｍｏｌ／用量、約７００ｎｍｏｌ／用量、約８００ｎｍｏｌ／用量、約９００ｎｍｏｌ／用量、約１μｍｏｌ／用量、約１μｍｏｌ／用量、約２μｍｏｌ／用量、約３μｍｏｌ／用量、約４μｍｏｌ／用量、約５μｍｏｌ／用量、約６μｍｏｌ／用量、約７μｍｏｌ／用量、約８μｍｏｌ／用量、約９μｍｏｌ／用量、約１０μｍｏｌ／用量、約２０μｍｏｌ／用量、約５０μｍｏｌ／用量、約１００μｍｏｌ／用量、約２００μｍｏｌ／用量、約３００μｍｏｌ／用量、約４００μｍｏｌ／用量、約５００μｍｏｌ／用量、約７５０μｍｏｌ／用量、約１０００μｍｏｌ／用量、またはこのうち任意の２つの間の任意の用量の用量で、ポリヌクレオチドを含むことができる。
【０２７４】
[00319]本開示のいくつかの観点において、組成物は、本明細書中に記載されるようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する組換えウイルスを含むことができる。組換えウイルスを含む組成物は、対象に、約１０３〜１０１２のウイルス粒子またはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵで投与することができる。いくつかの態様において、対象に投与される本開示のウイルスワクチンの量は、約１０３〜１０１２のウイルス粒子またはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵであることができる。場合によっては、対象に投与される本開示のウイルスワクチンは、約１０３ＰＦＵ／用量〜約１０４ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量〜約１０５ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量〜約１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量〜約１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量〜約１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量〜約１０１１ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量〜約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量の用量で投与することができる。対象に投与される本開示のウイルスワクチンは、約２×１０３ＰＦＵ／用量、３×１０３ＰＦＵ／用量、４×１０３ＰＦＵ／用量、５×１０３ＰＦＵ／用量、６×１０３ＰＦＵ／用量、７×１０３ＰＦＵ／用量、８×１０３ＰＦＵ／用量、９×１０３ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量、約２×１０４ＰＦＵ／用量、約３×１０４ＰＦＵ／用量、約４×１０４ＰＦＵ／用量、約５×１０４ＰＦＵ／用量、約６×１０４ＰＦＵ／用量、約７×１０４ＰＦＵ／用量、約８×１０４ＰＦＵ／用量、約９×１０４ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量、２×１０５ＰＦＵ／用量、３×１０５ＰＦＵ／用量、４×１０５ＰＦＵ／用量、５×１０５ＰＦＵ／用量、６×１０５ＰＦＵ／用量、７×１０５ＰＦＵ／用量、８×１０５ＰＦＵ／用量、９×１０５ＰＦＵ／用量、約１０６ＰＦＵ／用量、約２×１０６ＰＦＵ／用量、約３×１０６ＰＦＵ／用量、約４×１０６ＰＦＵ／用量、約５×１０６ＰＦＵ／用量、約６×１０６ＰＦＵ／用量、約７×１０６ＰＦＵ／用量、約８×１０６ＰＦＵ／用量、約９×１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量、約２×１０７ＰＦＵ／用量、約３×１０７ＰＦＵ／用量、約４×１０７ＰＦＵ／用量、約５×１０７ＰＦＵ／用量、約６×１０７ＰＦＵ／用量、約７×１０７ＰＦＵ／用量、約８×１０７ＰＦＵ／用量、約９×１０７ＰＦＵ／用量、約１０８ＰＦＵ／用量、約２×１０８ＰＦＵ／用量、約３×１０８ＰＦＵ／用量、約４×１０８ＰＦＵ／用量、約５×１０８ＰＦＵ／用量、約６×１０８ＰＦＵ／用量、約７×１０８ＰＦＵ／用量、約８×１０８ＰＦＵ／用量、約９×１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量、約２×１０９ＰＦＵ／用量、約３×１０９ＰＦＵ／用量、約４×１０９ＰＦＵ／用量、約５×１０９ＰＦＵ／用量、約６×１０９ＰＦＵ／用量、約７×１０９ＰＦＵ／用量、約８×１０９ＰＦＵ／用量、約９×���０９ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量、約２×１０１１ＰＦＵ／用量、約３×１０１１ＰＦＵ／用量、約４×１０１１ＰＦＵ／用量、約５×１０１１ＰＦＵ／用量、約６×１０１１ＰＦＵ／用量、約７×１０１１ＰＦＵ／用量、約８×１０１１ＰＦＵ／用量、約９×１０１１ＰＦＵ／用量、または約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量、またはこのうち任意の２つの間の任意の用量を、構成することができる。
【０２７５】
[00320]場合によっては、対象に投与される本開示のウイルスワクチンは、約１０４ウイルス粒子／用量、約１０４ウイルス粒子／用量〜約１０５ウイルス粒子／用量、約１０５ウイルス粒子／用量〜約１０６ウイルス粒子／用量、約１０７ウイルス粒子／用量〜約１０８ウイルス粒子／用量、約１０９ウイルス粒子／用量〜約１０１０ウイルス粒子／用量、約１０１０ウイルス粒子／用量〜約１０１１ウイルス粒子／用量、約１０１１ウイルス粒子／用量〜約１０１２ウイルス粒子／用量、約１０１２ウイルス粒子／用量〜約１０１３ウイルス粒子／用量、約１０１３ウイルス粒子／用量〜約１０１４ウイルス粒子／用量、または約１０１４ウイルス粒子／用量〜約１０１５ウイルス粒子／用量の用量で投与することができる。いくつかの態様において、対象に投与される本開示のウイルスワクチンは、約１×１０９ウイルス粒子／用量、約１．５×１０９ウイルス粒子／用量、約２×１０９ウイルス粒子／用量、約２．５×１０９ウイルス粒子／用量、約３×１０９ウイルス粒子／用量、約３．５×１０９ウイルス粒子／用量、約４×１０９ウイルス粒子／用量、約４．５×１０９ウイルス粒子／用量、約５×１０９ウイルス粒子／用量、約５．５×１０９ウイルス粒子／用量、約６×１０９ウイルス粒子／用量、約６．５×１０９ウイルス粒子／用量、約７×１０９ウイルス粒子／用量、約７．５×１０９ウイルス粒子／用量、約８×１０９ウイルス粒子／用量、約８．５×１０９ウイルス粒子／用量、約９×１０９ウイルス粒子／用量、約１×１０１０ウイルス粒子／用量、約２×１０１０ウイルス粒子／用量、約３×１０１０ウイルス粒子／用量、約４×１０１０ウイルス粒子／用量、約５×１０１０ウイルス粒子／用量、約６×１０１０ウイルス粒子／用量、約７×１０１０ウイルス粒子／用量、約８×１０１０ウイルス粒子／用量、約９×１０１０ウイルス粒子／用量、またはこのうち任意の２つの間の任意の用量の用量で、投与することができる。いくつかの態様において、対象に投与される本開示のウイルスワクチンは、約７．５×１０９ウイルス粒子／用量の用量で投与することができる。
【０２７６】
[00321]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンは、病原体感染、例えば、Ａ型インフルエンザ感染に関連する症状の発症前、発症中、または発症後に投与することができる。代表的な症状としては、発熱、咳、咽頭痛、鼻水、鼻詰まり、頭痛、筋肉痛、悪寒、倦怠、悪心、嘔吐、下痢、疼痛（例えば、腹痛）、結膜炎、息切れ、呼吸困難、肺炎、急性呼吸窮迫、ウイルス性肺炎、呼吸不全、神経学的変化（例えば、精神状態の変化、発作）、またはそれらの組み合わせを挙げることができる。いくつかの場合において、組成物、例えばワクチンは、病原体感染、例えばインフルエンザ感染、例えば、Ａ型インフルエンザ感染を処置するために、対象に投与することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは、病原体感染、例えばインフルエンザ感染、例えばＡ型インフルエンザ感染の予防的処置のような予防目的のために、対象に投与することができる。組成物、例えばワクチンは、対象からの免疫応答を生じさせる(illicit)ために、対象に投与することができる。組成物、例えばワクチンは、病原体感染の前、病原体感染の間、または病原体感染に対する予防手段として、対象からの免疫応答を生じさせるために、対象に投与することができる。本明細書中に提供される組成物、例えばワクチンの投与後、病原体に関連する症状は、約、少なくとも、または最長１日、５日、１週間、２週間、３週間、または１ヶ月で、約、少なくとも、または最大５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％低減される可能性がある。
【０２７７】
[00322]インフルエンザ感染、例えばＡ型インフルエンザ感染による合併症は、例えば、肺炎、気管支炎、副鼻腔感染、または耳感染であることができる。場合によっては、インフルエンザ感染、例えばＡ型インフルエンザ感染は、慢性的な健康問題を悪化させることがあり、例えば、喘息を有する人は、インフルエンザ感染を有する間に喘息発作を経験することがあり、または慢性うっ血性心不全を有する人は、インフルエンザ感染を有する間に、この状態の悪化を経験することがある。いくつかの態様において、治療的有効量の本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンは、インフルエンザ感染による合併症を有する対象に投与することができる。いくつかの態様において、治療的有効量の本明細書中に記載される組成物、例えばワクチンは、インフルエンザ感染（例えば、Ａ型インフルエンザ感染）および１以上の慢性的健康問題を有する対象に投与することができる。
【０２７８】
[00323]本明細書中に提供される組成物、例えばワクチン、または本明細書中に記載されるキットは、２℃〜８℃で保管することができる。場合によっては、組成物、例えばワクチンは室温で保管してもよい。いくつかの態様において、組成物、例えばワクチンは、凍結保存しなくてもよい。いくつかの態様では、組成物、例えばワクチンを、−２０℃または−８０℃などの温度で保管することができる。いくつかの態様において、組成物、例えばワクチンは、日光から離して保管することができる。
【実施例】
【０２７９】
[00324]実施例
[00325]以下の実施例を、制限のためではなく例示のために提供する。
[00326]実施例１
[00327]ペプチド配列ＴＹＱＲＴＲＡＬＶ（配列番号３７）を、１）ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｆｌｕｄｂ．ｏｒｇにおける実験的に確認されたＢＡＬＢ／Ｃ  Ａ型インフルエンザウイルスＣＤ８  Ｔ細胞エピトープであること、および２）ストレッチにおけるすべての考えうる変異の中で＜０．０８の平均不変比率（最終集団における変異頻度／初期集団における頻度）を有すること（一般に、各残基は、コドン内の単一ヌクレオチドの変化により６〜７の変異を有する可能性がある）に基づいて選択した。ペプチドをＰａｍ２Ｃｙｓ（ＴＬＲ２を活性化し、ペプチドに共有結合しているリポソームアジュバント）およびＨＡからのＣＤ４  Ｔ細胞エピトープ（ＧＡＬＮＮＲＦＱＩＫＧＶＥＬＫＳ（配列番号１１５））にコンジュゲートさせた（エピトープは中心リジンを介して接続し、Ｐａｍ２Ｃｙｓは２つのセリンを介して中心リジンにコンジュゲートさせた）。（ＣＳ  Ｂｉｏ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡはリポペプチドを合成した）製剤を、２０μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（２．５μＭ）あたり、配列ＴＹＱＲＴＲＡＬＶ（配列番号３７）を有する５０ｎｍｏｌのＰａｍ２Ｃｙｓ−ペプチドを用いて作製した。２０μＬの容量の製剤を、１０匹のＢＡＬＢ／Ｃマウス（“群２”）のそれぞれに鼻腔内投与した。２０μｌの容量のＰＢＳを、１０匹の対照ＢＡＬＢ／Ｃマウス（“群１”）のそれぞれに鼻腔内投与した。投与の４週間後、両群のマウスに、１００  ＴＣＩＤ５０  ＰＲ８  Ａ型インフルエンザウイルスをチャレンジ投与した。ワクチン群（群２）のマウスの６０％（１０匹中６匹）は、対照群（群１）の０％（１０匹中０匹）と比較して、Ａ型インフルエンザウイルスの致死的チャレンジ投与から９日後に生存しており、ワクチンによる統計的に有意な保護が示された（図２参照）。
【０２８０】
[00328]実施例２
[00329]この実施例では、４つのインフルエンザウイルスエピトープを含むワクチンでのワクチン接種について記載する。４つのインフルエンザウイルスエピトープ：ＥＬＲＳＲＹＷＡＩＲＴＲＳＧ（ＮＰ）（配列番号１７）、ＦＹＩＱＭＣＴＥＬ（ＮＰ）（配列番号７９）、ＴＹＮＡＥＬＬＶＬＬ（ＨＡ）（配列番号８０）、およびＴＹＱＲＴＲＡＬＶ（ＮＰ）（配列番号３７）を有する組換えアデノウイルスを作製した。組換えアデノウイルスは、タンデムにコードされ、リンカーＲＶＫＲ（配列番号１１０）によって分離された４つのペプチドを有する単一の導入遺伝子を含有していた。導入遺伝子産物の配列は、ＧＡＬＮＮＲＦＱＩＫＧＶＥＬＫＳＫＴＹＱＲＴＲＡＬＶＲＶＫＲＥＬＲＳＲＹＷＡＩＲＴＲＳＧＲＶＫＲＦＹＩＱＭＣＴＥＬＲＶＫＲＴＹＮＡＥＬＬＶＬＬ（配列番号８１）である。組換えアデノウイルスベクターを作製するために、導入遺伝子をマウス細胞で発現させるためにコドン最適化した。組換えアデノウイルスを、群１のマウス（１０匹のＢＡＬＢ／Ｃマウス）の皮下および鼻腔内に同時に、２０μＬ中に２×１０７ｐｆｕ（プラーク形成単位）の用量で投与した（皮下および鼻腔内それぞれに７．５×１０９ウイルス粒子）。２８日後、致死量５〜１０  ＬＤ５０（５０％致死量）（約１００  ＴＣＩＤ５０または組織培養感染量５０）のＨ１Ｎ１インフルエンザをマウスにチャレンジ投与した。この群の１０匹のマウスすべてが生存した。１０匹のマウスのうち９匹は最初に体重を減少させたが、チャレンジ投与後１２日目までに体重の大部分を回復させた。図３Ａおよび図４参照。
【０２８１】
[00330]対照群（群２、非ワクチン接種、生理食塩水の皮下および鼻腔内注射）では、１０匹のＢＡＬＢ／Ｃマウスに致死量５〜１０ ＬＤ５０（５０％致死量）（約１００ ＴＣＩＤ５０または組織培養感染量５０）のＨ１Ｎ１インフルエンザをチャレンジ投与した。１０匹中０匹のマウスが生存し、すべてのマウスがチャレンジ投与後９日目までに死に至った。図３Ｂおよび図４参照。
【０２８２】
[00331]他のセットの実験では、ＡｄＣｒｅ注射マウスを、Ａｄベクターの対照群（図３Ｃの群１）として使用した。ＡｄＣｒｅは組換えアデノウイルスワクチンと同じアデノウイルスベクターを用いて産生されるが、４つのエピトープを発現するヌクレオチド配列の代わりにＣｒｅリコンビナーゼ遺伝子を挿入されたアデノウイルスである。図３Ｃに示すように、対照群の５匹のマウスのうち３匹は死に至り、５匹のうちの他の２匹のマウスは実質的な体重を失った。対照的に、ワクチン接種群（図３Ｄの群２）では、５匹のマウスのうち０匹が＞１０％の体重を失った。ＡｄＣｒｅの５匹のマウスはすべて３以上の症状スコアを有していたが（示していない）、ワクチン群の５匹のマウスはすべて１以下であった。
【０２８３】
[00332]実施例３
[00333]この実施例では、９つのインフルエンザウイルスエピトープを含むワクチンによるワクチン接種について記載する。９つのインフルエンザウイルスエピトープを持つ組換えアデノウイルスを生成する。９つのインフルエンザウイルスエピトープを含むペプチドのワクチンカクテルを使用することもできる。インフルエンザウイルスエピトープは、表１に列挙されるエピトープの任意の組み合わせを含むことができる。
【０２８４】
[00334]ワクチン接種は、ＨＬＡ−Ｂ４４トランスジェニックマウスを用いて行うことができる。プライムブーストレジメンを採用することができる。プライミングは、９つのＰａｍ２Ｃｙｓアジュバント化ペプチドを用いて行うことができる。ブースティングは、９つのインフルエンザウイルスエピトープを持つ組換えアデノウイルスか、または普遍的ヘルパーＴ細胞エピトープで行うことができる。ワクチン接種後、マウスにインフルエンザウイルスのＰＲ８株をチャレンジ投与する。ワクチン接種によって付与される防御を評価するために、マウスの健康、体重、および生存をモニタリングする。
【０２８５】
[00335]実施例４
[00336]この実施例では、インフルエンザウイルスのヘテロサブタイプ防御試験のための実験手順および材料について記載する。
【０２８６】
[00337]死滅曲線
[00338]死滅曲線実験（致死量曲線）を行って、ＬＤ５０（対象動物の５０％が死に至る用量）を決定することができ、その結果、５〜１０  ＬＤ５０のチャレンジ用量を防御実験に使用することができる。
【０２８７】
[00339]１日目：各群３匹のマウス、２５ｕＬを鼻腔内投与
Ｖｉｃｔ １ｄはＨ３Ｎ２であり、３．２×１０７ＴＣＩＤ５０／ｍＬである
１)群Ａ：１０ ＴＣＩＤ５０ Ｖｉｃｔ １ｄ（Ｈ３Ｎ２）（これを第５にする：希釈＃５：５０ｕＬ  希釈＃４＋４５０ｕｌ  ＰＢＳ）
２)群Ｂ：１００ ＴＣＩＤ５０ Ｖｉｃｔ １ｄ（これを第４にする：希釈＃４：５０ｕＬ  希釈＃３＋４５０ｕｌ  ＰＢＳ）
３)群Ｃ：１０００ ＴＣＩＤ５０ Ｖｉｃｔ １ｄ（これを第３にする：希釈＃３：５０ｕＬ  希釈＃２＋４５０ｕｌ  ＰＢＳ）
４)群Ｄ：１００００ ＴＣＩＤ５０ Ｖｉｃｔ １ｄ（これを第２にする：希釈＃２：５０ｕＬ  希釈＃１＋４５０ｕｌ  ＰＢＳ）
５)群Ｅ：１０００００ ＴＣＩＤ５０ Ｖｉｃｔ １ｄ（これを第１にする：希釈＃１：１００ｕＬ  ウイルスストック＋７００ｕｌ  ＰＢＳ）
[00340]ヘテロサブタイプ防御
[00341]１日目：マウスを免疫化する：
１)群１：１０匹のマウスに生理食塩水２０ｕＬをｉ．ｎ．（鼻腔内）投与および生理食塩水２０ｕＬをｓ．ｃ．（皮下）投与
２)群２：２０ｕＬ  ＡｄＢＡＬＢにおける２×１０７ｐｆｕを１０匹のマウスにｉ．ｎ．投与および同じものをｓ．ｃ．投与
２×１０７ｐｆｕ  ＡｄＢＡＬＡＢの場合：３つのバイアルのＡｄＢＡＬＢに、それぞれ１１５ｕＬのＰＢＳを加える。バイアルを一緒に混合し（合計４２０ｕＬ、ちょうど十分になるべきでありる；群６のバイアルからのいくつかを使用することもできる）、上記を投与する。
【０２８８】
３)群３：２０ｕＬ  ＡｄＢＡＬＢ５−ｐｅｐにおける２×１０７ｐｆｕを５匹のマウスにｉ．ｎ．投与および同じものをｓ．ｃ．投与
２×１０７ｐｆｕ  ＡｄＢＡＬＡＢ５−ｐｅｐの場合：１つのバイアルのＡｄＢＡＬＢ５−ｐｅｐに、２３０ｕＬのＰＢＳを加え、上記を投与する。
【０２８９】
４)群４：２０ｕＬにおける７．５×１０９ウイルス粒子を５匹のマウスにｉ．ｎ．投与および同じものをｓ．ｃ．投与
１０×１０９ｐｆｕ  ＡｄＢＡＬＡＢ５−ｐｅｐの場合：１つのバイアルのＡｄＢＡＬＢ５−ｐｅｐに、７２２ｕＬのＰＢＳを加え、上記を投与する。
【０２９０】
５)群５：２０ｕＬ  ＡｄＣｒｅを５匹のマウスにｉ．ｍ．（筋肉内）投与
２０ｕＬ  ＡｄＣｒｅの場合：１つのバイアルのＡｄＣｒｅに、６５３ｕＬのＰＢＳを加え、上記を投与する。
【０２９１】
６)群６：２０ｕＬ  ＡｄＢＡＬＡＢを５匹のマウスにｉ．ｍ．投与
２０ｕＬ  ＡｄＢＡＬＡＢの場合：１つのバイアルのＡｄＢＡＬＡＢに、１１５ｕＬのＰＢＳを加え、上記を投与する。
【０２９２】
[00342]２〜１５日目：体重、生存、および臨床スコアをモニタリングする
[00343]２９日目：マウスにチャレンジ投与する：すべて２０ｕＬで鼻腔内投与
１）群１〜４：５〜１０  ＬＤ５０（死滅曲線に基づき選択）Ｖｉｃｔ  １ｄ
２）群５〜６：１００  ＴＣＩＤ５０  ＰＲ８（ウイルスストックを１／１００００に希釈：ウイルスストック１０ｕＬ＋９９０ｕｌ  ＰＢＳ；この希釈液１０ｕＬ＋ワーキングストック用ＰＢＳ  ９９０ｕＬ）
[00344]３０〜４３日目：体重、生存、および臨床スコアをモニタリングする
[00345]試薬
[00346]合計５５匹の６〜１２週齢のＢＡＬＢ／Ｃ雌マウス。
【０２９３】
[00347]アデノウイルス：ＡｄＢＡＬＢ（エピトープ配列を有さない対照ウイルス）；ＡｄＢＡＬＢ５−ｐｅｐ（５つの異なるインフルエンザエピトープ配列を持つワクチン）；ＡｄＣｒｅ（エピトープ配列を有さないがＣｒｅ導入遺伝子を有する対照ウイルス）。インフルエンザウイルス：ＰＲ８；Ｖｉｃｔ  １ｄ（Ｈ３Ｎ２）。
【０２９４】
[00348]実施例５
[00349]この実施例では、５１の異なるインフルエンザウイルスエピトープを有する組換えアデノウイルスベースのワクチン（ＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐ）について記載する。組換えアデノウイルスは、表３の５１のエピトープ配列すべてを発現する単一の導入遺伝子を用いて操作される。これに関し、該エピトープ配列はタンデムにコードされ、リンカーＲＶＫＲ(配列番号１１０）によって分離されている。５１のエピトープ配列の順序はランダムであることができ、それによって、さまざまな異なる導入遺伝子配列を生成する。導入遺伝子産物の一例の配列、または導入遺伝子産物の一部は、表４に列挙されるとおりである。
【０２９５】
【表８】
2020515283.tif 000010
【０２９６】
導入遺伝子は、Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク、例えば、配列番号１１６、１１７または１１８の１以上（例えば、２、３、４または５）のコピー、またはＢ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク質のフラグメント（例えば、配列番号１１６、１１７または１１８のアミノ酸２〜５６０）に連結しているポリペプチドを発現することができる。場合によっては、ワクチンは、Ｂ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク、例えば、配列番号１１６、１１７もしくは１１８、またはＢ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク質のフラグメントの１以上（例えば、２、３、４、５）のコピーを含むポリペプチドを発現することができる第２の導入遺伝子を有する第２のアデノウイルスを含む。いくつかの場合において、アデノウイルスは、配列番号１０６を含むポリペプチド、およびＢ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク、例えば、配列番号１１６、１１７もしくは１１８、またはＢ型インフルエンザウイルスＮＰタンパク質のフラグメントの１以上（例えば、２、３、４または５）のコピーを含む第２のポリペプチドを、発現することができる導入遺伝子を含むことができる。
【０２９７】
[00350]実施例６
[00351]この実施例では、実施例５に記載したようなアデノウイルスベースのインフルエンザワクチンの産生について記載する。
【０２９８】
[00352]最初に、配列番号１０６を発現する導入遺伝子を含有するシャトルベクター（Ａｄｄ２）を、従来の分子クローニング技術を用いて構築することができる。導入遺伝子は、ＣＭＶプロモーターによって駆動される。導入遺伝子の発現は、２９３Ｔ細胞へのトランスフェクションによってこの時点で確認することができる。トランスフェクトされた２９３Ｔ細胞においてポリペプチド発現を観察することができない場合、ベクター構築物は最適化される。
【０２９９】
[00353]その後、Ｍａｘｉｐｒｅｐ  ｐＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐを線状化し、アデノウイルスプラークの生成のために２９３細胞にトランスフェクトする。複製欠損型Ｃ６８ヘルパーウイルスまたはＣ６ウイルスを、アデノウイルスパッケージングのためにトランスフェクトされた２９３細胞に補充する。ウイルスプラークは、プレーティングの７〜１０日後に形成する。その後、プラークを採取し、後の使用のために凍結し、またはウイルスの増殖に供することができる。ｐＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐウイルスの実験室規模での増殖は、サブコンフルエントな２９３細胞を、Ｔ２５、Ｔ７５、またはさらにはＴ１５０のような異なるサイズの細胞培養フラスコにより連続的に継代することによって行うことができる。
【０３００】
[00354]細胞培養培地および溶解細胞を、ウイルスストックのための遠心分離に付す。力価測定は、日常的なウイルス力価測定手順に従って行う。
[00355]実施例７
[00356]この実施例では、実施例５に記載されるようなアデノウイルスベースのワクチンのヒト対象における臨床試験について記載する。
【０３０１】
[00357]表３の５１の異なるエピトープ配列を含有するアデノウイルスベースのワクチン（ＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐワクチン）を、健康成人において評価するために、制御されていない非盲検第１相試験を実施する。
【０３０２】
[00358]目的：１８〜５５歳の両性の健康成人ボランティアにおいて、ＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐワクチンの安全性、忍容性および免疫原性を評価する。
[00359]用量
[00360]ＡｄＦｌｕ５１ｐｅｐワクチンの開始用量は、三角筋への１回の筋肉内注射により、３×１０５〜１×１０９ＰＦＵの範囲、例えば、３×１０５ＰＦＵ、３×１０６ ＰＦＵ、３×１０７ＰＦＵ、３×１０８ＰＦＵ、および１×１０９ＰＦＵの用量レベルである。
【０３０３】
[00361]各用量レベルについて、６〜１２人の評価可能な健康成人を登録する。
[00362]安全性モニタリング
[00363]注射部位および全身の反応原性(reactogenicity)および薬物使用を、注射後７日間および追跡調査時（１４日目および２８日目）に記録することができる。臨床的および実験室的評価は、各治験来院の間に行うことができる。実験室分析は、全血球計算、ならびにクレアチニン、Ｃ反応性タンパク質、および肝機能の測定を包含することができる。参加者ごとに有害事象をリストアップする。
【０３０４】
[00364]免疫原性
[00365]参加者の血清試料をアッセイすることにより、免疫原性を評価することができる。Ｔ細胞免疫原性をアッセイするためのＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴを、ベースライン（ワクチン接種前）および注射後２８および１８０日目に収集した参加者の血清試料を用いて実施する。
【０３０５】
本発明の好ましい態様を本明細書中で示し、記載してきたが、そのような態様は例示のために提供されたに過ぎないことは、当業者には明らかである。当業者なら、ここで、本発明から逸脱することなく、数々の変動、変更、および置き換えに思い当たるであろう。本明細書に記載される本発明の態様に対するさまざまな代替物を、本発明を実施する際に採用することができることを、理解すべきである。以下の請求項が本発明の範囲を定義し、これによって、これらの請求項およびその等価物の範囲内の方法および構造が対象となることを、目的としている。
【図１】
2020515283.tif 000011
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2020515283.tif 000014
【図３Ｃ】
2020515283.tif 000015
【図３Ｄ】
2020515283.tif 000016
【図４】
2020515283.tif 000017
【図５】
2020515283.tif 000018
【配列表】
2020515283000001.app
【国際調査報告】
2020515283.tif 000019
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