(57)【要約】一態様において、ヒト骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）タンパク質に特異的に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを増加させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可溶性ＴＲＥＭ２タンパク質（ｓＴＲＥＭ２）のレベルを減少させる、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）リン酸化を誘導する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する、請求項３または４に記載の単離された抗体。
【請求項６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、神経炎症を増大することなく、ミクログリア機能を増強する、請求項５に記載の単離された抗体。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項３〜６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項８】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下で、ＴＲＥＭ２活性を増加させる、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項１１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下で、Ｓｙｋリン酸化を誘導する、請求項１０に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの活性を選択的に増強する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項３に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強するが、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を増強しない、請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下では誘導するが、非存在下では誘導しない、請求項１５に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項８〜１６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２活性を阻害する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する、請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項１９または２０に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を減少させる、請求項１８に記載の単離された抗体。
【請求項２３】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項２６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を誘導する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項２７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する、請求項２５または２６に記載の単離された抗体。
【請求項２８】
前記抗体またはその抗原結合部分が、神経炎症を増大することなく、ミクログリア機能を増強する、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下で、ＴＲＥＭ２活性を増加させる、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下で、Ｓｙｋリン酸化を誘導する、請求項３１に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの活性を選択的に増強する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項２５に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強するが、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を増強しない、請求項３１に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下では誘導するが、非存在下では誘導しない、請求項３６に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項２９〜３７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２活性を阻害する、請求項２３に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する、請求項３９に記載の単離された抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項３９に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項４０または４１に記載の単離された抗体。
【請求項４３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項３９または４０に記載の単離された抗体。
【請求項４４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を減少させる、請求項３９に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＴＲＥＭ２活性を増強する、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を誘導する、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項４７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、食作用を増強するか、または骨髄細胞、ミクログリア、もしくはマクロファージの遊走、分化、機能、もしくは生存を増強する、請求項４５または４６に記載の単離された抗体。
【請求項４８】
前記抗体またはその抗原結合部分が、神経炎症を増大することなく、ミクログリア機能を増強する、請求項４７に記載の単離された抗体。
【請求項４９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、またはＲＳ９．Ｆ１０によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項４５〜４８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項５０】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローンＲＳ９．Ｆ６によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項４９に記載の単離された抗体。
【請求項５１】
前記抗体または抗原結合部分が、アミノ酸残基１４０〜１４８を含むか、またはそれらからなるＴＲＥＭ２フラグメントに結合する、請求項５０に記載の単離された抗体。
【請求項５２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、アミノ酸残基１４０〜１４４を含むヒトＴＲＥＭ２上のエピトープに結合する、請求項５０に記載の単離された抗体。
【請求項５３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のうちの１つ以上と直接接触する、請求項５２に記載の単離された抗体。
【請求項５４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のそれぞれと直接接触する、請求項５３に記載の単離された抗体。
【請求項５５】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下で、ＴＲＥＭ２活性を増加させる、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項５６】
前記抗体が、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項５７】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強する、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項５８】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下で、Ｓｙｋリン酸化を誘導する、請求項５７に記載の単離された抗体。
【請求項５９】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドの活性を選択的に増強する、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項６０】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項６１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強するが、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を増強しない、請求項４５に記載の単離された抗体。
【請求項６２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下では誘導するが、非存在下では誘導しない、請求項６１に記載の単離された抗体。
【請求項６３】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項５５〜６２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項６４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、またはＲＳ９．Ｆ１０によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項５７に記載の単離された抗体。
【請求項６５】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＴＲＥＭ２活性を阻害する、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６６】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６７】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６８】
前記抗体が、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項６９】
前記ＴＲＥＭ２リガンドが、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される、請求項６７または６８に記載の単離された抗体。
【請求項７０】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、またはＲＳ９．Ｅ２によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項６７に記載の単離された抗体。
【請求項７１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、Ｓｙｋリン酸化を減少させる、請求項６５に記載の単離された抗体。
【請求項７２】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、またはＲＳ１２．３Ｃ１０によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと、少なくとも５０％のオーバーラップを有する、請求項７２に記載の単離された抗体。
【請求項７４】
前記抗体または抗原結合部分が、抗体クローンＲＳ９．Ｆ６によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する、請求項７２に記載の単離された抗体。
【請求項７５】
前記抗体または抗原結合部分が、アミノ酸残基１４０〜１４４を含むヒトＴＲＥＭ２上のエピトープに結合する、請求項７４に記載の単離された抗体。
【請求項７６】
前記抗体または抗原結合部分が、Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のうちの１つ以上と直接接触する、請求項７５に記載の単離された抗体。
【請求項７７】
前記抗体または抗原結合部分が、Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のそれぞれと直接接触する、請求項７６に記載の単離された抗体。
【請求項７８】
前記抗体または抗原結合部分が、アミノ酸残基１４０〜１４８を含むか、またはそれらからなるＴＲＥＭ２フラグメントに結合する、請求項７４に記載の単離された抗体。
【請求項７９】
前記抗体またはその抗原結合部分が、
抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有する１つ以上のＣＤＲ、または
抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０のＣＤＲを基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する１つ以上のＣＤＲ
を含む、請求項１〜７８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項８０】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、
抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の相補性決定領域（ＣＤＲ）に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有する１つ以上のＣＤＲ、または
抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０のＣＤＲを基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する１つ以上のＣＤＲ
を含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８１】
前記抗体またはその抗原結合部分が、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、またはＲＳ１２．３Ｃ１０の重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｈ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｈ２）、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｈ３）、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｌ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｌ３）と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれを含む、請求項７９または８０に記載の単離された抗体。
【請求項８２】
前記抗体またはその抗原結合部分が、
抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の重鎖可変領域に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び／または
２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の軽鎖可変領域に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜８１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項８３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ｉ）抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の重鎖可変領域に対して、少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、（ｉｉ）前記抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３とを含む、重鎖可変領域、及び／または
（ｉ）抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、もしくはＲＳ１２．３Ｃ１０の軽鎖可変領域に対して、少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、（ｉｉ）前記抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と同一であるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３とを含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項８２に記載の単離された抗体。
【請求項８４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１〜８３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項８５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項８４に記載の単離された抗体。
【請求項８６】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｅ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｇ）配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｊ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｋ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｌ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｍ）配列番号３０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号３１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｎ）配列番号３１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項８５に記載の単離された抗体。
【請求項８７】
配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、及び３１４のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む、請求項８５に記載の単離された抗体。
【請求項８８】
配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、及び３１８のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項８５に記載の単離された抗体。
【請求項８９】
（ａ）配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号１５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号１７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号２０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号２１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号２２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号２３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｍ）配列番号３０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｎ）配列番号３１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項８５に記載の単離された抗体。
【請求項９０】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、以下を含む、前記抗体またはその抗原結合部分：
（ａ）軽鎖可変領域；ならびに
（ｂ）重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｈ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｈ２）、及び重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｈ３）を含む、重鎖可変領域であって、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｈ１は、式ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（Ｉ）
（式中、Ｘ２はＹまたはＦであり、Ｘ３はＴ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ４はＦ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ５はＴ、Ｓ、またはＫであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ７はＤまたは不在であり、Ｘ８はＨ、Ｙ、またはＴであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、Ｔ、またはＹであり、Ｘ１０はＭ、Ｉ、またはＷであり、Ｘ１１はＨ、Ｑ、またはＮである）
を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｈ２は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（Ｖ）
（式中、Ｘ１はＤ、Ｖ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ２はＩ、Ｓ、またはＶであり、Ｘ３はＬ、Ｓ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ４はＰ、Ｔ、または不在であり、Ｘ５はＳ、Ｙ、Ｎ、Ｔ、Ａ、Ｇ、またはＦであり、Ｘ６はＩ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ７はＧまたはＤであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ９はＲ、Ｔ、またはＡであり、Ｘ１０はＩ、Ｇ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１２はＧ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＶ、Ｑ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１４はＫまたはＳであり、Ｘ１５はＦ、ＹまたはＬであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、Ｑ、または不在であり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、Ｄ、Ｓ、または不在である）
を含み、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｈ３は、配列番号１０、配列番号４７、配列番号５３、配列番号５９、配列番号７０、配列番号７６、配列番号８３、配列番号８７、配列番号３１９、及び配列番号３１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、または式ＡＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３ＤＹ（ＶＩＩＩ）
（式中、Ｘ３はＧまたはＮであり、Ｘ４はＤまたはＧであり、Ｘ５はＤまたはＩであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＹまたはＴであり、Ｘ８はＲまたはＡであり、Ｘ９はＲまたはＧであり、Ｘ１０はＧまたはＹであり、Ｘ１３はＬまたはＭである）
を含む、前記重鎖可変領域。
【請求項９１】
式Ｉの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ２はＹであり、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ５はＴまたはＳであり、Ｘ８はＨまたはＹであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、またはＴである、と更に定義される、請求項９０に記載の単離された抗体。
【請求項９２】
ＣＤＲ−Ｈ１において、Ｘ７が不在である、請求項９０または９１に記載の単離された抗体。
【請求項９３】
ＣＤＲ−Ｈ１において、Ｘ１０がＷであり、Ｘ１１がＮである、請求項９０〜９２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項９４】
式Ｉの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ３はＴまたはＮであり、Ｘ７は不在であり、Ｘ１０はＭまたはＩであり、Ｘ１１はＨまたはＱである、と更に定義される、請求項９０に記載の単離された抗体。
【請求項９５】
ＣＤＲ−Ｈ２が、式ＧＹＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（ＩＶ）
（式中、Ｘ４はＦまたはＬであり、Ｘ５はＴまたはＳであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ８はＨまたはＹであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、またはＴであり、Ｘ１０はＭまたはＩであり、Ｘ１１はＨまたはＱである）
を有する、請求項９１または９２に記載の単離された抗体。
【請求項９６】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ４が、Ｆである、請求項９０〜９５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項９７】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ５が、Ｔである、請求項９０〜９６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項９８】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ４及びＸ５が、それぞれＦ及びＴである、請求項９６または９７に記載の単離された抗体。
【請求項９９】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ６が、ＤまたはＳである、請求項９０〜９８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１００】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ６が、Ｄである、請求項９９に記載の単離された抗体。
【請求項１０１】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ６が、Ｓである、請求項９９に記載の単離された抗体。
【請求項１０２】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ８が、Ｙである、請求項９０〜１０１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０３】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ１０が、Ｍである、請求項９０〜１０２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０４】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ１１が、Ｈである、請求項９０〜１０３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０５】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ１０及びＸ１１が、それぞれＭ及びＨである、請求項１０３または１０４に記載の単離された抗体。
【請求項１０６】
ＣＤＲ−Ｈ１のＸ１０及びＸ１１が、それぞれＩ及びＱである、請求項９０〜１０２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０７】
式Ｖの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ１はＶ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ３はＳ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、Ｇ、またはＦであり、Ｘ６はＳ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ９はＴまたはＡであり、Ｘ１２はＮ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＱ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、Ｄ、またはＳである、と更に定義される、請求項９０〜１０６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１０８】
式Ｖの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ４はＰまたはＴであり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、またはＧであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ１０はＧ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１４はＫであり、Ｘ１５はＦまたはＹであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、またはＤである、と更に定義される、請求項１０７に記載の単離された抗体。
【請求項１０９】
前記抗体が、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｌ１）、軽鎖ＣＤＲ−２（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｌ３）を含む、軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）ＣＤＲ−Ｌ１は、式Ｘ１ＳＳＸ４ＳＬＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＬＸ１７（ＩＸ）
（式中、Ｘ１はＲまたはＫであり、Ｘ４はＱまたはＫであり、Ｘ７はＶまたはＬであり、Ｘ８はＨ、Ｄ、またはＹであり、Ｘ９はＩ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ１０はＳまたは不在であり、Ｘ１１はＤまたはＮであり、Ｘ１２はＧまたはＱであり、Ｘ１３はＮ、Ｉ、またはＫであり、Ｘ１４はＴまたはＳであり、Ｘ１５はＹまたはＦであり、Ｘ１７はＱ、Ｈ、Ｙ、Ｎ、またはＡである）
を含むか、またはＣＤＲ−Ｌ１は、式Ｘ１ＡＳＸ４Ｘ５ＩＸ７Ｘ８Ｘ９ＬＸ１１（Ｘ）
（式中、Ｘ１はＲ、Ｋ、またはＳであり、Ｘ４はＥまたはＱであり、Ｘ５はＮ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ７はＹまたはＳであり、Ｘ８はＳまたはＮであり、Ｘ９はＮ、Ｒ、またはＹであり、Ｘ１１はＡまたはＮである）
を含み、
（ｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ２は、式Ｘ１Ｘ２ＳＸ４Ｘ５Ｘ６Ｓ（ＸＩ）
（式中、Ｘ１はＫ、Ｑ、Ｙ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ２はＶ、Ｍ、またはＴであり、Ｘ４はＮ、Ｋ、またはＹであり、Ｘ５はＲまたはＬであり、Ｘ６はＦ、Ａ、Ｈ、またはＤである）
を含むか、またはＣＤＲ−Ｌ２は、配列番号４３、配列番号５５、または配列番号６６のアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ−Ｌ３は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｔ（ＸＩＩ）
（式中、Ｘ１はＳ、Ｗ、またはＱであり、Ｘ２はＱまたはＨであり、Ｘ３はＳ、Ｔ、Ｇ、Ｙ、またはＦであり、Ｘ４はＴ、Ｆ、Ｗ、またはＳであり、Ｘ５はＨ、Ｓ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６はＶ、Ａ、Ｆ、Ｙ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７はＰ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ８はＹ、Ｆ、Ｐ、またはＷである）
を含むか、またはＣＤＲ−Ｌ３は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、
請求項９０〜１０８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１０】
式ＩＸのＸ４が、Ｑである、請求項１０９に記載の単離された抗体。
【請求項１１１】
式ＩＸのＸ８が、Ｈである、請求項１０９または１１０に記載の単離された抗体。
【請求項１１２】
式ＩＸのＸ９が、ＩまたはＳである、請求項１０９〜１１１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１３】
式ＩＸのＸ１０が、不在である、請求項１０９〜１１２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１４】
式ＩＸのＸ１１が、Ｎである、請求項１０９〜１１３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１５】
式ＩＸのＸ１２が、Ｇである、請求項１０９〜１１４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１６】
式ＩＸのＸ１３が、ＮまたはＫである、請求項１０９〜１１５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１７】
式ＩＸのＸ１４が、Ｔである、請求項１０９〜１１６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１８】
式ＩＸのＸ１５が、Ｙである、請求項１０９〜１１１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１１９】
式ＸＩのＸ２が、Ｖである、請求項１０９〜１１８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２０】
式ＸＩのＸ４が、Ｎである、請求項１０９〜１１９のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２１】
式ＸＩのＸ５が、Ｒである、請求項１０９〜１２０のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２２】
式ＸＩのＸ５が、Ｌである、請求項１０９〜１２１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２３】
式ＸＩＩの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ１はＱであり、Ｘ３はＹまたはＦであり、Ｘ４はＦ、Ｗ、またはＳであり、Ｘ５はＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６はＹ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７はＰであり、Ｘ８はＰ、Ｙ、またはＷである、と更に定義される、請求項１０９〜１２２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２４】
式ＸＩＩのＸ２が、Ｑである、請求項１０９〜１２３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２５】
式ＸＩＩのＸ４が、Ｔである、請求項１０９〜１２４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２６】
式ＸＩＩのＸ５が、Ｈである、請求項１０９〜１２５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２７】
式ＸＩＩの前記アミノ酸が、次のように：Ｘ１はＳまたはＷであり、Ｘ２はＱであり、Ｘ３はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ４はＴであり、Ｘ５はＨであり、Ｘ６はＶ、Ａ、またはＦであり、Ｘ７はＰ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ８はＹ、Ｆ、またはＰである、と更に定義される、請求項１０９〜１２２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１２８】
式ＸＩＩのＸ６が、ＶまたはＦである、請求項１２７に記載の単離された抗体。
【請求項１２９】
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３１９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３１９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、前記抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３０】
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３１９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１２９に記載の単離された抗体。
【請求項１３１】
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｅ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｇ）配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｊ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｋ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｌ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｍ）配列番号３０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号３１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｎ）配列番号３１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む、請求項１３０に記載の単離された抗体。
【請求項１３２】
配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、及び３１４のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む、請求項１３０または１３１に記載の単離された抗体。
【請求項１３３】
配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、及び３１８のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１３０または１３１に記載の単離された抗体。
【請求項１３４】
（ａ）配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号１５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号１７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号２０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号２１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号２２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号２３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｍ）配列番号３０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｎ）配列番号３１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域
を含む、請求項１２９〜１３１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１３５】
前記抗体が、第１のＦｃポリペプチドと、任意で第２のＦｃポリペプチドとを含む、請求項１〜１３４のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１３６】
前記抗体が、前記第１のＦｃポリペプチド及び前記第２のＦｃポリペプチドを含む、請求項１３５に記載の単離された抗体。
【請求項１３７】
前記第１のＦｃポリペプチドが、修飾されたＦｃポリペプチドであり、及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、修飾されたＦｃポリペプチドである、請求項１３５または１３６に記載の単離された抗体。
【請求項１３８】
前記抗体が、
（ａ）前記ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する第１の可変領域を含む第１の抗原結合部分であって、（ｉ）第１のＦｃポリペプチドを含む第１の重鎖及び（ｉｉ）第１の軽鎖を含む、前記第１の抗原結合部分と、
（ｂ）前記ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する第２の可変領域を含む第２の抗原結合部分であって、（ｉ）第１のＦｃポリペプチドを含む第２の重鎖及び（ｉｉ）第２の軽鎖を含む、前記第２の抗原結合部分とを含み、
前記第１のＦｃポリペプチド及び前記第２のＦｃポリペプチドは、Ｆｃ二量体を形成する、
請求項１〜１３７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１３９】
前記第１のＦｃポリペプチドが、修飾されたＦｃポリペプチドであり、及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、修飾されたＦｃポリペプチドである、請求項１３８に記載の単離された抗体。
【請求項１４０】
前記第１の可変領域及び前記第２の可変領域が、前記ヒトＴＲＥＭ２タンパク質中の同じエピトープを認識する、請求項１３８または１３９に記載の単離された抗体。
【請求項１４１】
前記第１の可変領域及び前記第２の可変領域が、前記ヒトＴＲＥＭ２タンパク質中の異なるエピトープを認識する、請求項１３８または１３９に記載の単離された抗体。
【請求項１４２】
前記第１のＦｃポリペプチド及び前記第２のＦｃポリペプチドが、ヘテロ二量体化を促進する修飾をそれぞれ含有する、請求項１３７〜１４１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１４３】
ＥＵナンバリングに従って、前記Ｆｃポリペプチドの一方がＴ３６６Ｗ置換を有し、前記Ｆｃポリペプチドのもう一方がＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有する、請求項１４２に記載の単離された抗体。
【請求項１４４】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ネイティブＦｃＲｎ結合部位を含む、請求項１３７〜１４３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１４５】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＦｃＲｎ結合を変化させる修飾を含む、請求項１３７〜１４３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１４６】
前記第１のＦｃポリペプチド及び前記第２のＦｃポリペプチドが、エフェクター機能を持たない、請求項１３７〜１４５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１４７】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、エフェクター機能を低下させる修飾を含む、請求項１３７〜１４５のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１４８】
エフェクター機能を低下させる前記修飾が、ＥＵナンバリングに従って、位置２３４にＡｌａ及び位置２３５にＡｌａの置換を含む、請求項１４７に記載の単離された抗体。
【請求項１４９】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ネイティブＦｃ配列を基準にして、血清中半減期を延長するアミノ酸変化を含む、請求項１３７〜１４８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１５０】
前記アミノ酸変化が、ＥＵナンバリングに従って、位置２５２にＴｙｒ、位置２５４にＴｈｒ、及び位置２５６にＧｌｕの置換を含む、請求項１４９に記載の単離された抗体。
【請求項１５１】
前記アミノ酸変化が、ＥＵナンバリングに従って、位置４２８にＬｅｕ及び位置４３４にＳｅｒの置換を含む、請求項１４９に記載の単離された抗体。
【請求項１５２】
前記アミノ酸変化が、ＥＵナンバリングに従って、位置４３４にＳｅｒまたはＡｌａの置換を含む、請求項１４９に記載の単離された抗体。
【請求項１５３】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、トランスフェリン受容体に特異的に結合する、請求項１３７〜１５２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１５４】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも２つの置換を含む、請求項１５３に記載の単離された抗体。
【請求項１５５】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、少なくとも３、４、５、６、７、８、または９つの位置に置換を含む、請求項１５４に記載の単離された抗体。
【請求項１５６】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って、３８０、３９１、３９２、及び４１５を含む位置に１、２、３、または４つの置換を更に含む、請求項１５４または１５５に記載の単離された抗体。
【請求項１５７】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って、４１４、４２４、及び４２６を含む位置に１つ、２つ、または３つの置換を更に含む、請求項１５４〜１５６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１５８】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、位置３８８にＴｒｐを含む、請求項１５４〜１５７のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１５９】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、位置４２１に芳香族アミノ酸を含む、請求項１５４〜１５８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１６０】
位置４２１の前記芳香族アミノ酸が、ＴｒｐまたはＰｈｅである、請求項１５９に記載の単離された抗体。
【請求項１６１】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、次から選択される少なくとも１つの位置：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである、を含む、請求項１５４〜１６０のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１６２】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、次から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１の位置：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである、を含む、請求項１６１に記載の単離された抗体。
【請求項１６３】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、次の１１の位置：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである、を含む、請求項１６２に記載の単離された抗体。
【請求項１６４】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のいずれか１つのアミノ酸１１１〜２１７に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有するＣＨ３ドメインを有する、請求項１６２または１６３に記載の単離された抗体。
【請求項１６５】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１６２または１６３に記載の単離された抗体。
【請求項１６６】
配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のうちのいずれか１つのＥＵインデックス位置３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、４１３、４１４、４１５、４１６、４２１、４２４及び４２６に対応する位置の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６の残基が、欠失も置換もされない、請求項１６４または１６５に記載の単離された抗体。
【請求項１６７】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、前記トランスフェリン受容体のアピカルドメインに結合する、請求項１５３〜１６６のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１６８】
前記抗体またはその抗原結合部分の前記トランスフェリン受容体への前記結合が、前記トランスフェリン受容体へのトランスフェリンの結合を実質的に阻害しない、請求項１６７に記載の単離された抗体。
【請求項１６９】
前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、対応する野生型Ｆｃポリペプチドと比較して、少なくとも７５％、または少なくとも８０％、９０％、９２％、もしくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１３５〜１６８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７０】
前記対応する野生型Ｆｃポリペプチドが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチドである、請求項１６９に記載の単離された抗体。
【請求項１７１】
前記抗体またはその抗原結合部分の脳への取り込みが、前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドにトランスフェリン受容体結合をもたらす修飾がない抗体またはその抗原結合部分の取り込みよりも少なくとも１０倍大きい、請求項１５３〜１２１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７２】
前記Ｆｃポリペプチドの一方が、血液脳関門受容体に結合するように修飾されておらず、前記Ｆｃポリペプチドのもう一方が、トランスフェリン受容体に特異的に結合するように修飾されている、請求項１３５〜１７１のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、マウスＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す、請求項１〜１７２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７４】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜１７３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７５】
前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１〜１７３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７６】
前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜１７３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７７】
前記抗体が、完全ヒト抗体である、請求項１〜１７３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７８】
前記抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価のｓｃＦｖである、請求項１〜１７３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１７９】
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１〜１７８のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１８０】
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項１７９に記載の単離された抗体。
【請求項１８１】
前記二重特異性抗体が、２つの異なるＴＲＥＭ２エピトープを認識する、請求項１８０に記載の単離された抗体。
【請求項１８２】
前記二重特異性抗体が、細胞の表面におけるＴＲＥＭ２クラスタリングを誘導することが可能である、請求項１８０または１８１に記載の単離された抗体。
【請求項１８３】
前記二重特異性抗体が、前記二重特異性抗体の単一アームと同じ配列を含む二価単一特異性抗体よりも少なくとも２倍低いＥＣ５０を有する、請求項１８０〜１８２のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１８４】
前記二重特異性抗体の２つのアームのそれぞれが、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンから選択され、前記２つのアームは異なるエピトープビンである、請求項１８０〜１８３のいずれか１項に記載の単離された抗体。
【請求項１８５】
請求項１〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１８６】
前記ヒトＴＲＥＭ２タンパク質への結合について、請求項１〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体と競合する、抗体。
【請求項１８７】
請求項１〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項１８５に記載の医薬組成物と、
その使用のための説明書と
を含む、キット。
【請求項１８８】
神経変性疾患を治療する方法であって、神経変性疾患を有する対象に、請求項１〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体または請求項１８５に記載の医薬組成物を投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１８９】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソニズム認知症複合（ＡＬＳ−ＰＤＣ）、皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性イギリス型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、グリア細胞球状封入体タウオパチー、グアドループ認知症パーキンソニズム、グアドループＰＳＰ、ハレフォルデン−スパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球−橋−黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病である、請求項１８９に記載の方法。
【請求項１９１】
神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法であって、前記対象に、請求項１〜２２または７２〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体を投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１９２】
神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる方法であって、前記対象に、請求項２３〜４４または７２〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体を投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１９３】
神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を増強する方法であって、前記対象に、請求項４５〜６４または７２〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体を投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１９４】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強する抗体である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ＴＲＥＭ２活性を選択的に増強する抗体である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９６】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２活性を増強する抗体である、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９７】
神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を阻害する方法であって、前記対象に、請求項６５〜１８４のいずれか１項に記載の単離された抗体を投与する段階を含む、前記方法。
【請求項１９８】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体である、請求項１９３〜１９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９９】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗体である、請求項１９３〜１９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２００】
神経変性疾患を有する対象を抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定する方法であって、
前記対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定する段階と、
前記対象からの前記サンプル中のｓＴＲＥＭ２の前記レベルを対照値と比較する段階であって、前記対象からの前記サンプル中のｓＴＲＥＭ２の前記レベルが前記対照値を基準として増加している場合、前記対象を治療の候補であると特定する、前記比較する段階と、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を前記対象に投与する段階と
を含み、
前記単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる、前記方法。
【請求項２０１】
抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定された神経変性疾患を有する対象を治療する方法であって、
前記対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として増加していることが特定されており、
前記方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を前記対象に投与する段階、を含み、
前記単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる、前記方法。
【請求項２０２】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、請求項１〜２２または７２〜１８４のいずれか１項に記載の抗体である、請求項２００または２０１に記載の方法。
【請求項２０３】
神経変性疾患を有する対象を抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定する方法であって、
前記対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定する段階と、
前記対象からの前記サンプル中のｓＴＲＥＭ２の前記レベルを対照値と比較する段階であって、前記対象からの前記サンプル中のｓＴＲＥＭ２の前記レベルが前記対照値を基準として減少している場合、前記対象を治療の候補であると特定する、前記比較する段階と、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を前記対象に投与する段階と
を含み、
前記単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる、前記方法。
【請求項２０４】
抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定された神経変性疾患を有する対象を治療する方法であって、
前記対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として減少していることが特定されており、
前記方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を前記対象に投与する段階、を含み、
前記単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる、前記方法。
【請求項２０５】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、請求項２３〜４４または７２〜１８４のいずれか１項に記載の抗体である、請求項２０３または２０４に記載の方法。
【請求項２０６】
神経変性疾患を有する対象に対する抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の有効性をモニタリングする方法であって、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与前に採取された前記対象からの第１のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定する段階と、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分により前記対象を治療する段階と、
前記抗ＴＲＥＭ２抗体の投与後に採取された前記対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定する段階と
を含み、
前記対象からの前記第１のサンプルと比較した、前記対象からの前記第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの変化は、前記対象が前記抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す、前記方法。
【請求項２０７】
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、請求項１〜１８４のいずれか１項に記載の抗体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項２０８】
前記対象からの前記第１のサンプルと比較した、前記対象からの前記第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの減少は、前記対象が前記抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２０９】
前記対象からの前記第１のサンプルと比較した、前記対象からの前記第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの増加は、前記対象が前記抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す、請求項２０６に記載の方法。
【請求項２１０】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソニズム認知症複合（ＡＬＳ−ＰＤＣ）、皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性イギリス型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、グリア細胞球状封入体タウオパチー、グアドループ認知症パーキンソニズム、グアドループＰＳＰ、ハレフォルデン−スパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球−橋−黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される、請求項１９１〜２０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１１】
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項２１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／５５８，８０３号、２０１７年１１月８日に出願された同第６２／５８３，３７９号、及び２０１８年１月２４日に出願された同第６２／６２１，３８０号の優先権を主張するものであり、そのそれぞれの内容全体は、参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
背景
骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、ミクログリア上に発現する膜貫通型受容体であり、食作用、細胞生存、及び炎症促進性サイトカインの産生を制御する機能を有すると考えられている。アルツハイマー病、那須・ハコラ病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、及び前頭側頭型認知症を含む、神経変性疾患では、ＴＲＥＭ２の変異が同定されている。更に、ＴＲＥＭ２に変異があるアルツハイマー病または前頭側頭型認知症の患者の脳脊髄液中においては、可溶性ＴＲＥＭ２（ｓＴＲＥＭ２）のレベル変化が報告されている。
【０００３】
ＴＲＥＭ２の活性またはｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する治療薬が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
簡単な概要
一態様において、ヒト骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する（例えば、減少させるまたは増加させる）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを調節し（例えば、減少させるまたは増加させる）、更に、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）リン酸化を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、食作用を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、または疾患関連ミクログリアの遊走を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、または疾患関連ミクログリアの分化を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、または疾患関連ミクログリアの生存を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、選択的に増強するまたは選択的に阻害する）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する（例えば、増強するまたは阻害する）が、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を調節しない（例えば、増強しないまたは阻害しない）。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２リガンドは、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシ���セラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される。
【０００５】
別の態様において、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合し、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する、単離された抗体またはその抗原結合部分。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、ＲＳ９．Ｆ６によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、アミノ酸残基１４０〜１４４を含むヒトＴＲＥＭ２上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のうちの１つ以上と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ｔｒｐ１４２と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のそれぞれと直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、アミノ酸残基１４０〜１４８を含むか、またはそれらからなるＴＲＥＭ２フラグメントに結合する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を有する抗体またはその抗原結合部分はまた、本明細書に記載される抗体クローン（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローン）によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープも認識する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、ＲＳ９．Ｆ６によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、アミノ酸残基１４０〜１４４を含むヒトＴＲＥＭ２上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のうちの１つ以上と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ｔｒｐ１４２と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のそれぞれと直接接触する。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、アミノ酸残基１４０〜１４８を含むか、またはそれらからなるＴＲＥＭ２フラグメントに結合する。
【０００７】
別の態様において、本明細書に記載される抗体の１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域の配列を有する、抗体またはその抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態において、抗体または抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲに対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲを基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する１つ以上のＣＤＲ（例えば、全てのＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｈ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｈ２）、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｈ３）、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｌ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｌ３）と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３のそれぞれを含む。
【０００８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含むアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と同一であるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、
（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含むアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域と、
（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と同一であるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域と、を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を有する抗体またはその抗原結合部分はまた、本明細書に記載される抗体（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローン）の１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全て）のＣＤＲを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、及び３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、７５、７９、８２、８６、３０８、及び３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、及び３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、及び３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、及び３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、及び３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全て）のＣＤＲを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｅ）配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｇ）配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｊ）配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｋ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｌ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｍ）配列番号３０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号３１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列、または
（ｎ）配列番号３１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、
（ｉ）配列番号６に対して、少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、（ｉｉ）それぞれ配列番号８、９、及び１０のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３とを含む、重鎖可変領域、及び／または
（ｉ）配列番号７に対して、少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列と、（ｉｉ）それぞれ配列番号１１、１２、及び１３のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３とを含む、軽鎖可変領域
を含む。
【００１６】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、及び３１４のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、及び３１８のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、及び３１４のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、及び３１８のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｂ）配列番号１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｃ）配列番号１５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｄ）配列番号１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｅ）配列番号１７に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｆ）配列番号１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｇ）配列番号１９に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｈ）配列番号２０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｉ）配列番号２１に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号２２に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｋ）配列番号２３に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｌ）配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｍ）配列番号３０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１０に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域、または
（ｎ）配列番号３１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域、及び配列番号３１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域
を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかでは、抗体は、第１のＦｃポリペプチドと、任意で第２のＦｃポリペプチドとを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドであり、及び／または第２のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドである。
【００１９】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかでは、抗体は、
（ａ）ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する第１の可変領域を含む第１の抗原結合部分であって、（ｉ）第１のＦｃポリペプチドを含む第１の重鎖及び（ｉｉ）第１の軽鎖を含む、第１の抗原結合部分と、
（ｂ）ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する第２の可変領域を含む第２の抗原結合部分であって、（ｉ）第１のＦｃポリペプチドを含む第２の重鎖及び（ｉｉ）第２の軽鎖を含む、第２の抗原結合部分とを含み、
第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは、Ｆｃ二量体を形成する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドであり、及び／または第２のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドである。
【００２１】
いくつかの実施形態において、第１の可変領域及び第２の可変領域は、ＴＲＥＭ２タンパク質中の同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、第１の可変領域及び第２の可変領域は、ＴＲＥＭ２タンパク質中の異なるエピトープを認識する。
【００２２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは、ヘテロ二量体化を促進する修飾をそれぞれ含有する。いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングに従って、Ｆｃポリペプチドの一方はＴ３６６Ｗ置換を有し、Ｆｃポリペプチドのもう一方はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を有する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ネイティブＦｃＲｎ結合部位を含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合を変化させる修飾を含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を持たない。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、エフェクター機能を低下させる修飾を含む。いくつかの実施形態において、エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、位置２３４にＡｌａ及び位置２３５にＡｌａの置換を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ネイティブＦｃ配列を基準にして、血清中半減期を延長するアミノ酸変化を含む。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化は、ＥＵナンバリングに従って、位置２５２にＴｙｒ、位置２５４にＴｈｒ、及び位置２５６にＧｌｕの置換を含む。あるいは、他の実施形態において、アミノ酸変化は、ＥＵナンバリングに従って、位置４２８にＬｅｕ及び位置４３４にＳｅｒの置換を含む。あるいは、更なる実施形態において、アミノ酸変化は、ＥＵナンバリングに従って、位置４３４にＳｅｒまたはＡｌａの置換を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１からなる群から選択される位置に少なくとも２つの置換を含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、少なくとも３、４、５、６、７、８、または９つの位置に置換を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、３８０、３９１、３９２、及び４１５を含む位置に１、２、３、または４つの置換を更に含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、４１４、４２４、及び４２６を含む位置に１つ、２つ、または３つの置換を更に含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、位置３８８にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、位置４２１に芳香族アミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、位置４２１の芳香族アミノ酸は、ＴｒｐまたはＰｈｅである。
【００２９】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、次から選択される少なくとも１つの位置を含む：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである。
【００３０】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、次から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１の位置を含む：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである。
【００３１】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、次の１１の位置を含む：位置３８０はＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕであり、位置３８４はＴｙｒまたはＰｈｅであり、位置３８６はＴｈｒであり、位置３８７はＧｌｕであり、位置３８８はＴｒｐであり、位置３８９はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎであり、位置３９０はＳｅｒまたはＡｓｎであり、位置４１３はＴｈｒまたはＳｅｒであり、位置４１５はＧｌｕまたはＳｅｒであり、位置４１６はＧｌｕであり、位置４２１はＰｈｅである。
【００３２】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のいずれか１つのアミノ酸１１１〜２１７に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有するＣＨ３ドメインを有する。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、及び３３７〜４６０のうちのいずれか１つのＥＵインデックス位置３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、４１３、４１４、４１５、４１６、４２１、４２４及び４２６に対応する位置の少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６の残基は、欠失も置換もされない。
【００３３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれかでは、抗体は、配列番号２１９〜２９８及び３５１〜４６０からなる群から選択されるＦｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２１９、２２０、２２１、２２２、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、３５１、３５２、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３９２、３９３、３９４、３９９、４００、４０１、４０６、４０７、４０８、４１３、４１４、４１５、４２０、４２１、４２２、４２７、４２８、４２９、４３４、４３５、４３６、４４１、４４２、４４３、４４８、４４９、４５０、４５５、４５６、及び４５７からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２２３、２２４、２２５、２２６、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、３５３、３５４、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９５、３９６、３９７、４０２、４０３、４０４、４０９、４１０、４１１、４１６、４１７、４１８、４２３、４２４、４２５、４３０、４３１、４３２、４３７、４３８、４３９、４４４、４４５、４４６、４５１、４５２、４５３、４５８、４５９、及び４６０からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２１９、２２０、２２１、２２２、３５１、３５２、４０６、４０７、及び４０８からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２２３、２２４、２２５、２２６、３５３、３５４、４０９、４１０、及び４１１からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、３９２、３９３、及び３９４からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、３９５、３９６、及び３９７からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、４３４、４３５、及び４３６からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、４３７、４３８、及び４３９からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、４４８、４４９、及び４５０からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、４５１、４５２、及び４５３からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、４５５、４５６、及び４５７からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、４５８、４５９、及び４６０からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、４１３、４１４、及び４１５からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、４１６、４１７、及び４１８からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、４２０、４２１、及び４２２からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、４２３、４２４、及び４２５からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３５５、３５６、３５７、３５８、３６０、３９９、４００、及び４０１からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、４０２、４０３、及び４０４からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、４４１、４４２、及び４４３からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、４４４、４４５、及び４４６からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、４２７、４２８、及び４２９からなる群から選択される第１のＦｃポリペプチドと、配列番号３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４３０、４３１、及び４３２からなる群から選択される第２のＦｃポリペプチドと、を含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体のアピカルドメインに結合する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体のトランスフェリン受容体への結合は、トランスフェリン受容体へのトランスフェリンの結合を実質的に阻害しない。
【００３５】
いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、対応する野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチドである野生型Ｆｃポリペプチド）と比較して、少なくとも７５％、または少なくとも８０％、９０％、９２％、もしくは９５％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００３６】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分の脳への取り込みは、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドにトランスフェリン受容体結合をもたらす修飾がない抗体またはその抗原結合部分の取り込みよりも大きい。いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分の脳への取り込みは、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドにトランスフェリン受容体結合をもたらす修飾がない抗体またはその抗原結合部分の取り込みと比較して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００倍大きい。
【００３７】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方は、血液脳関門受容体に結合するように修飾されず、Ｆｃポリペプチドのもう一方は、トランスフェリン受容体に特異的に結合するように修飾される。
【００３８】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、マウスＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、または二価のｓｃＦｖである。
【００３９】
別の態様において、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗原結合フラグメントが提供される。いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆｃポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、例えば、ヘテロ二量体化の促進、エフェクター機能の低下、血清中半減期の延長、及び／またはトランスフェリン受容体への結合のために、本明細書に記載される修飾のうちの１つ以上を含有する。非限定的な例として、抗原結合フラグメントは、Ｆｃポリペプチドを更に含むＦａｂフラグメント、例えば、Ｆａｂ−Ｆｃ融合体を含み得る。他の実施形態において、抗原結合フラグメントは、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドを更に含む。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドであり、及び／または第２のＦｃポリペプチドは、修飾されたＦｃポリペプチドである。いくつかの実施形態において、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、例えば、ヘテロ二量体化の促進、エフェクター機能の低下、血清中半減期の延長、及び／またはトランスフェリン受容体への結合のために、本明細書に記載される修飾のうちの１つ以上を含有する。非限定的な例として、抗原結合フラグメントは、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドを更に含むＦ（ａｂ’）２フラグメント、例えば、Ｆ（ａｂ’）２−Ｆｃ融合体を含み得る。
【００４０】
いくつかの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、２つの異なるＴＲＥＭ２エピトープを認識する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、細胞の表面におけるＴＲＥＭ２クラスタリングを誘導することが可能である。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、二重特異性抗体の単一アームと同じ配列を含む二価単一特異性抗体よりも少なくとも２倍（例えば、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍）低いＥＣ５０を有する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体の２つのアームのそれぞれは、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンから選択され、ここで、２つのアームは異なるエピトープビンである。
【００４１】
別の態様において、医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を有し、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じもしくは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識し、及び／または本明細書に記載される抗体クローンの１つ以上のＣＤＲ、重鎖、及び／または軽鎖配列を含む、抗体またはその抗原結合部分を含む。
【００４２】
別の態様において、単離されたポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態において、単離されたポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む。別の態様において、当該単離されたポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞が提供される。
【００４３】
更に別の態様において、ヒトＴＲＥＭ２への特異的結合について、本明細書に記載される抗体クローン（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローン）と競合する抗体が提供される。
【００４４】
更に別の態様において、本明細書に記載される治療的及び予後的使用のためのキットが提供される。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載されるヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を含み、治療的または予後的使用のための説明書を更に含む。
【００４５】
別の態様において、神経変性疾患を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、神経変性疾患を有する対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソニズム認知症複合（ＡＬＳ−ＰＤＣ）、皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性イギリス型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、グリア細胞球状封入体タウオパチー、グアドループ認知症パーキンソニズム、グアドループＰＳＰ、ハレフォルデン−スパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球−橋−黒質変性症、パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。
【００４６】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【００４７】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。
【００４８】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を増強する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下で、ＴＲＥＭ２活性を増強する抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下では増強するが、非存在下では増強しない抗体である。
【００４９】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下で、ＴＲＥＭ２活性を阻害する抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２活性を、ＴＲＥＭ２リガンドの存在下では阻害するが、非存在下では阻害しない抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下でＴＲＥＭ２活性を阻害し、ＴＲＥＭ２のリガンド活性化を阻害する抗体である。
【００５０】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象のプラーク蓄積を減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、アルツハイマー病である。
【００５１】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象を抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定する方法が提供される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、方法は、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを対照値と比較することであって、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として増加している場合、当該対象を治療の候補であると特定する、比較することと、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される任意の抗体）を当該対象に投与することと、
を含む。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体である。
【００５３】
いくつかの実施形態において、方法は、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを対照値と比較することであって、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として減少している場合、当該対象を治療の候補であると特定する、比較することと、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される任意の抗体）を当該対象に投与することと、を含む。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗体である。
【００５４】
別の態様において、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定された神経変性疾患を有する対象を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される任意の抗体）を当該対象に投与することを含み、当該対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として増加していることが特定されている。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体である。
【００５５】
いくつかの実施形態において、方法は、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される任意の抗体）を当該対象に投与することを含み、当該対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として減少していることが特定されている。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗体である。
【００５６】
更に別の態様において、神経変性疾患を有する対象に対する抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の有効性をモニタリングする方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与（例えば、対象への第１の投与）前に採取された対象からの第１のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される任意の抗体）により対象を治療することと、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与後に採取された対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、を含み、
対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの変化は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【００５７】
いくつかの実施形態において、対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの減少は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。いくつかの実施形態において、対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの増加は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞上の表面ＴＲＥＭ２に結合する。（Ａ）抗ＴＲＥＭ２抗体を、ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞（非標識）及びマウスＴＲＥＭ２  ＨＥＫ発現細胞（ＮｕｃＢｌｕｅで標識）への結合についてスクリーニングした。抗体結合をＡＰＣ結合二次抗マウス多重吸着抗体により検出した。ＲＳ９．Ｆ６は、マウスとヒトの両方のＴＲＥＭ２細胞への結合を示す。５７Ｄ７．Ａ１は、ヒトＴＲＥＭ２細胞に特異的に結合する。（Ｂ）非特異的結合を除外するために、親ＨＥＫ−ＧＦＰ細胞をネガティブコントロールとして使用した。（Ｃ）ｈＴＲＥＭ２−ＨＥＫ細胞における抗ＴＲＥＭ２抗体表面結合の用量反応。抗ＴＲＥＭ２抗体を、ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞への結合について滴定した。抗体結合をＡＰＣ結合二次抗マウス多重吸着抗体により検出した。ＲＳ９．Ｆ６及びＲＳ９．Ｆ１０は、ヒトＴＲＥＭ２細胞に対して、２ｎＭ未満のＥＣ５０結合を示す。（Ｄ）ｍＴＲＥＭ２−２９３Ｆ細胞における抗ＴＲＥＭ２抗体表面結合の用量反応。マウスＴＲＥＭ２ＨＥＫ細胞を、（Ｃ）と同様に結合について滴定した。ＲＳ９．Ｆ６及びＲＳ９．Ｆ１０は、マウスＴＲＥＭ２  ＨＥＫ細胞に対して、８ｎＭ未満のＥＣ５０結合を示す。
【図２】初代ヒトマクロファージへの抗ＴＲＥＭ２抗体結合。抗ＴＲＥＭ２抗体を、初代ヒト単球由来マクロファージへの結合について、ＦＡＣＳによってスクリーニングした。抗体結合をＡＰＣ結合二次抗マウス多重吸着抗体により検出した。グレーの線＝二次抗体のみ。黒の線＝ＴＲＥＭ２抗体。
【図３】抗ＴＲＥＭ２抗体によるＰ−Ｓｙｋ活性化。（Ａ）ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞に抗ＴＲＥＭ２抗体を３０ｎＭで加えると、ｐＳｙｋが誘導される。ｐＳｙｋは、緩衝液コントロールに対する倍数として算出される。（Ｂ〜Ｃ）抗ＴＲＥＭ２抗体のＰ−Ｓｙｋ活性化用量反応を決定した。ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞で抗ＴＲＥＭ２抗体を用量滴定し、緩衝液コントロールに対する倍数からｐＳｙｋ誘導を算出した。ＥＣ５０値は、各抗体のｎＭでの有効性及びｐＳｙｋの誘導倍数を示す。
【図４】抗ＴＲＥＭ２抗体による可溶性ＴＲＥＭ２の調節。ヒトＴＲＥＭ２発現細胞を指定濃度の溶液中の抗体で一晩（１８時間）処理した。ＳＤＳ中で変性後、可溶性ＴＲＥＭ２濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ｓＴＲＥＭ２の絶対定量を標準曲線に基づいて決定した。データのフィッティングを、４パラメーターロジスティック方程式を用いて行った。
【図５】抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトマクロファージの生存を誘導する。末梢血から単離されたヒト単球を、滴定した濃度のプレートコーティング抗ＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプコントロールの存在下で、５ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦ（Ａ）またはｎｏＭ−ＣＳＦ（Ｂ）とともにインキュベートした。６日目に、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ生存率アッセイによって決定した。抗ＴＲＥＭ２抗体は、制限されたＭ−ＣＳＦまたはＭ−ＣＳＦなしで培養したヒトマクロファージの生存を増加させた。
【図６】抗ＴＲＥＭ２抗体は、シグナル伝達経路を誘導した。（Ａ〜Ｄ）ヒトマクロファージを３０ｎＭの抗体またはコントロールで１５分間刺激した。Ａｌｐｈａ−ＬＩＳＡによって、細胞ライセートのｐ−Ｙ５２５／５２６−ＳＹＫ（Ａ）、ｐ−Ｔ２０２／Ｙ２０４−ＥＲＫ１／２（Ｂ）、ｐ−Ｓ９−ＧＳＫ３−β（Ｃ）、及びｐ−Ｓ４７３−ＡＫＴ（Ｄ）を測定した。抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋリン酸化、ＥＲＫリン酸化、ＧＳＫ３−βリン酸化、及びＡＫＴリン酸化を誘導した。
【図７】抗ＴＲＥＭ２抗体エピトープビン。抗ＴＲＥＭ２抗体エピトープを競合ビニングによって特徴付けし、多数のエピトープビンを示す。ビオチン化検出抗体を使用して交差競合を評価し、ＥＬＩＳＡ形式でストレプトアビジン結合試薬により結合を測定した。接続する線の距離は、ビンの類似性を示す。円の線は、方法を検証するポジティブコントロールとして機能する自己競合を示す。
【図８】新規脂質リガンドによるＴＲＥＭ２  ｐ−Ｓｙｋ誘導。（Ａ〜Ｂ）ヒトＴＲＥＭ２（黒色の棒）及びＤＡＰ１２（グレーの棒）（Ａ）を安定的に過剰発現するＨＥＫ２９３細胞、または変異体ＴＲＥＭ２  Ｒ４７Ｈ（黒色の棒）及びＤＡＰ１２（グレーの棒）（Ｂ）を安定的に過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、３０％の指定の脂質及び７０％のホスファチジルコリン（ＰＣ）を含有するリポソーム０．５ｍｇ／ｍＬで刺激した。ただし、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）は、１０％ＫＬＡ及び９０％ＰＣを含有する。ｐＳｙｋをＡｌｐｈａＬＩＳＡによって測定し、データを緩衝液コントロール（ＨＢＳＳ）に対する倍数変化として示す。各棒は、１〜２回の独立した実験からの平均±標準偏差を表す。（Ｃ）３０％の指定の脂質及び７０％のホスファチジルコリン（ＰＣ）を含有するリポソーム０．５ｍｇ／ｍＬでヒトマクロファージを刺激した。ただし、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）は、１０％ＫＬＡ及び９０％ＰＣを含有する。ｐＳｙｋをＡｌｐｈａＬＩＳＡによって測定し、データを緩衝液コントロールに対する倍数変化としてグラフ化する。データポイントは、３人の独立したヒトドナーからの２〜３回の技術的反復実験の平均値を表す。各棒は、平均±標準偏差を表す。＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。１００％ＰＣリポソームに対するダネットの事後検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡ比較。脂質の略語の凡例については、表９を参照されたい。
【図９】ｐ−Ｓｙｋを活性化または遮断する、抗ＴＲＥＭ２抗体の脂質リガンドとの相互作用の特性評価。（Ａ）ＴＲＥＭ２脂質リガンドの存在下におけるｐＳｙｋの抗体誘導。抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＣ２０（０．０４６ｍｇ／ｍＬ）、ＥＣ５０（０．２１２ｍｇ／ｍＬ）、またはＥＣ８０（０．９６７ｍｇ／ｍＬ）濃度の、３０％ホスファチジルセリン（ＰＳ）／７０％ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含有するリポソームとともに、またはなしで、ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞に３０ｎＭで投与した。緩衝液単独コントロールに対する倍数からｐＳｙｋ活性化を算出した。２１Ｄ６．Ｇ２及び３Ｄ３．Ａ１は、脂質ＴＲＥＭ２活性化物質と相加的であるＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。（Ｂ）ＴＲＥＭ２脂質リガンドの存在下におけるｐＳｙｋの抗体誘導。抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＥＣ２０（０．０４６ｍｇ／ｍＬ）、ＥＣ５０（０．２１２ｍｇ／ｍＬ）、またはＥＣ８０（０．９６７ｍｇ／ｍＬ）濃度の、３０％ホスファチジルセリン（ＰＳ）／７０％ホスファチジルコリン（ＰＣ）を含有するリポソームとともに、またはなしで、ヒトマクロファージに１０ｎＭで投与した。リポソーム単独によるシグナルを各値で差し引き、抗体が脂質リガンド誘導ｐＳｙｋ活性化に対する相乗効果、中立的効果、または阻害効果を有するかどうかを決定した。（Ｃ）抗ＴＲＥＭ２抗体（３０ｎＭ）または緩衝液をヒトマクロファージとともに３７℃で３０分間インキュベートし、抗体を除去し、次いで、リポソームまたは緩衝液を３７℃で５分間加えた。ＡｌｐｈａＬＩＳＡによる溶解細胞のｐＳｙｋ検出を使用して、リポソームリガンドと相乗作用する抗体、またはリポソームリガンドを遮断する抗体を決定した。（Ｄ）細胞を抗体とともにプレインキュベートして、その結果、どの程度リポソーム媒介性ｐＳｙｋシグナル伝達が遮断または増強されるのかを定量することによって、阻害または相乗効果のパーセンテージを決定した。１００％阻害は、リポソームによって媒介されるｐＳｙｋの増加を完全に遮断するものと定義した。（Ｅ）ＴＲＥＭ２脂質リガンドの存在下におけるｐＳｙｋの抗体阻害。２１Ｄ４は、コントロールと比較して、リポソームによるＴＲＥＭ２活性化を大幅に減少させた。（Ｆ〜Ｇ）漸増抗体濃度での抗体２１Ｄ４（Ｆ）及び２１Ｄ１１（Ｇ）による抗体阻害。
【図１０】ＴＲＥＭ２及びｈＴｆＲ結合のＡＴＶ−抗ＴＲＥＭ２  Ｂｉａｃｏｒｅ分析。（Ａ）ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７＿ＬＡＬＡＰＧのＴＲＥＭ２結合。（Ｂ）ＲＳ９．Ｆ６のＴＲＥＭ２結合。（Ｃ）ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７＿ＬＡＬＡＰＧのヒトＴｆＲ結合。
【図１１】ＴＲＥＭ２由来ペプチドに関する、ＴＲＥＭ２単独の経時的水素重水素交換と、ＴＲＥＭ２とＦ６  Ｆａｂの混合物の経時的水素重水素交換を比較した示差的なヒートマップ。（Ａ）配列番号４６５のＴＲＥＭ２タンパク質の長さにわたる示差的なヒートマップ。ＴＲＥＭ２タンパク質の残基は、ヒートマップの上部に表示される。ＴＲＥＭ２由来ペプチドに含まれなかった残基１〜３７は、示されていない。（Ｂ〜Ｄ）（Ａ）に示す示差的なヒートマップの一部を示すヒートマップ。（Ｂ）ＴＲＥＭ２タンパク質の残基１〜６８を示す示差的なヒートマップ。（Ｃ）ＴＲＥＭ２タンパク質の残基６９〜１４４を示す示差的なヒートマップ。（Ｄ）ＴＲＥＭ２タンパク質の残基１４５〜１９３を示す示差的なヒートマップ。
【図１２】Ｆ６  Ｆａｂ−ＴＲＥＭ２ペプチド共複合体構造。（Ａ）Ｆａｂ：ペプチド複合体のカートゥーン表示。Ｆａｂ軽鎖（ＶＬ、左）、Ｆａｂ重鎖（ＶＨ、右）、及びＴＲＥＭ２ペプチド（中央）を示す。（Ｂ）結合部位での相互作用。ＴＲＥＭ２ペプチド（中央）、軽鎖（左）、及び重鎖（右）を示す。Ｆａｂ残基の連続ナンバリング。
【図１３】Ｆ６−ＴＲＥＭ２複合体の界面残基。（Ａ）Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングによる、Ｆ６  Ｆａｂの軽鎖可変ドメイン（配列番号１１２の残基１〜１１２）及び重鎖可変ドメイン（配列番号２４）のアミノ酸配列。Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲには下線が引かれている。ＴＲＥＭ２ペプチドと直接接触する残基を赤で示す。（Ｂ）ＴＲＥＭ２ペプチドとＦａｂとの間の直接接触。ペプチド残基を丸で囲み、Ｆａｂ残基を四角で囲んでいる。Ｆａｂ残基の連続ナンバリング。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
詳細な説明
Ｉ．序文
骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２（ＴＲＥＭ２）は、ミクログリア、樹状細胞、マクロファージ、及び破骨細胞の細胞表面上に発現する膜貫通型受容体である。特定の理論に拘束されるものではないが、ＴＲＥＭ２は、リガンドが結合すると、膜貫通アダプタータンパク質であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）とシグナル伝達複合体を形成し、それがプロテインキナーゼＳＲＣによってチロシンリン酸化されると考えられている。活性化されたＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体は、Ｓｙｋキナーゼなどのキナーゼを動員及びリン酸化することによって、細胞内シグナル伝達を調節すると考えられている。ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達は、ミクログリア及びマクロファージなどの細胞の食作用、細胞成長及び生存、炎症促進性サイトカインの分泌、ならびに遊走などの活性を調節する。
【００６０】
ＴＲＥＭ２は、制御された膜内タンパク質分解を受け、このとき、膜結合型の全長ＴＲＥＭ２は、メタロプロテアーゼＡＤＡＭ１０によって切断され、細胞から放出されるｓＴＲＥＭ２部分と、γセクレターゼによって更に分解される膜保持型Ｃ末端フラグメントとに分かれる。アルツハイマー病または前頭側頭型認知症を有し、ＴＲＥＭ２に変異がある患者では、ｓＴＲＥＭ２のレベル変化が報告されている。更に、ＴＲＥＭ２の変異は、食作用の低減及びミクログリア機能の低下などの機能変化に関連している。
【００６１】
以下の実施例の項で詳述されるように、ヒトＴＲＥＭ２に特異的に結合し、Ｓｙｋキナーゼのリン酸化などのＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体の１つ以上の下流機能を調節する抗体を作製した。したがって、一態様において、本開示は、抗ＴＲＥＭ２抗体及びその抗原結合部分を提供する。
【００６２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強する。したがって、別の態様において、例えば、神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を増強する方法が提供される。
【００６３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害する。したがって、別の態様において、例えば、神経変性疾患を有する対象のＴＲＥＭ２活性を阻害する方法が提供される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２の遊離（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）を減少させる。したがって、更に別の態様において、例えば、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法が提供される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２の遊離を増加させる。したがって、更に別の態様において、例えば、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる方法が提供される。
【００６６】
ＩＩ．定義
本明細書で使用されるとき、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別途明示される場合を除き、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、任意で、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを含む。
【００６７】
本明細書で使用されるとき、「約」及び「およそ」という用語は、ある数値または範囲で指定された数を修飾するために使用される場合、当該数値だけでなく、当業者に既知である当該値からの合理的な差、例えば、±２０％、±１０％、または±５％も、列挙された値の意図される意味の範囲内であることを指す。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、「ＴＲＥＭ２タンパク質」という用語は、遺伝子Ｔｒｅｍ２にコードされる、骨髄細胞上に発現するトリガー受容体２タンパク質を指す。本明細書で使用されるとき、「ＴＲＥＭ２タンパク質」は、限定するものではないが、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）、及び他の哺乳類などのあらゆる脊椎動物のネイティブ（すなわち、野生型）ＴＲＥＭ２タンパク質を指す。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２タンパク質は、ＵｎｉｐｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２（配列番号９６）で識別される配列を有するヒトＴＲＥＭ２タンパク質である。
【００６９】
本明細書で使用されるとき、「抗ＴＲＥＭ２抗体」という用語は、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体を指す。
【００７０】
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、その可変領域を介して抗原に特異的に結合し、免疫グロブリンの折り畳みを有するタンパク質を指す。この用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、一本鎖抗体、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体を包含する。「抗体」という用語は、本明細書で使用されるとき、結合特異性を保持する抗体フラグメントも含み、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖを含むが、これらに限定されない。抗体は、κまたはλのいずれかに分類される軽鎖を含有し得る。抗体は、γ、μ、α、δ、またはεに分類される重鎖を含有し得、これらはそれぞれ免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを定義する。
【００７１】
例示的な免疫グロブリン（抗体）の構造単位は、四量体からなる。各四量体は、２つの同一ペアであるポリペプチド鎖で構成され、それぞれのペアは、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）と、１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を定義する。「可変軽鎖」（ＶＬ）及び「可変重鎖」（ＶＨ）という用語は、それぞれこれらの軽鎖及び重鎖を指す。
【００７２】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖細胞系列可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または連結（Ｊ）遺伝子に由来し（定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子断片には由来しない）、抗原に対する結合特異性を抗体に付与する、抗体重鎖または軽鎖中のドメインを指す。典型的に、抗体可変領域は、４つの保存された「フレームワーク」領域を含み、これらは、３つの超可変「相補性決定領域」の間にある。
【００７３】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、軽鎖及び重鎖可変領域によって確立される４つのフレームワーク領域を分断する各鎖中の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗原エピトープへの抗体の結合に主に関与する。各鎖のＣＤＲは、典型的に、Ｎ末端から順に番号が付けられたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれ、また、典型的に、個々のＣＤＲが位置する鎖によって識別される。したがって、ＶＨ  ＣＤＲ３またはＣＤＲ−Ｈ３は、それが存在する抗体の重鎖可変領域中に位置し、一方、ＶＬ  ＣＤＲ１またはＣＤＲ−Ｌ１は、それが存在する抗体の軽鎖可変領域に由来するＣＤＲ１である。
【００７４】
異なる軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域は、構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を合わせたものであり、ＣＤＲを三次元空間に配置させ整列させる機能を持つ。フレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列を含め、公共ＤＮＡデータベースまたは公開リファレンスから取得することができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列の生殖細胞系列可変遺伝子配列データベース「ＶＢＡＳＥ２」で確認することができる。
【００７５】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野においてよく知られている様々な定義を使用して決定することができ、それらには、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）がある。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔ定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５（１９９６）を参照されたい。いくつかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔの各ＣＤＲ定義の組み合わせによって定義される。
【００７６】
「抗原結合部分」及び「抗原結合フラグメント」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、その可変領域を介して、抗原（例えば、ＴＲＥＭ２タンパク質）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗原結合フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント）、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結されている２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）、ＶＬ（軽鎖可変領域）、及びＶＨ（重鎖可変領域）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
「エピトープ」という用語は、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の部分または領域を指し、数個のアミノ酸もしくは数個のアミノ酸、例えば、５または６個以上、例えば、２０個以上のアミノ酸の一部分、またはそれらのアミノ酸の一部分を含み得る。例えば、標的がタンパク質である場合、エピトープは、連続したアミノ酸からなることもあれば（例えば、線状エピトープ）、タンパク質フォールディングによって近接した状態になるタンパク質の異なる部分のアミノ酸からなることもある（例えば、不連続または高次構造エピトープ）。いくつかの実施形態において、エピトープは、１つのアミノ酸（例えば、セリンまたはトレオニン残基）がリン酸化されている。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、「エピトープを認識する」という文言は、抗ＴＲＥＭ２抗体に関して使用されるとき、当該抗体のＣＤＲが、抗原（すなわち、ＴＲＥＭ２タンパク質）と当該エピトープもしくは当該エピトープを含有する抗原の一部分で相互作用するか、または特異的に結合することを意味する。
【００７９】
本明細書で使用されるとき、「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上の異なる抗原結合部分を含む抗体を指し、各抗原結合部分は、異なる抗原を認識する異なる可変領域、またはその可変領域を介して２つ以上の異なる抗原に結合する抗体のフラグメントもしくは一部分を含む。本明細書で使用されるとき、「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる抗原結合部分を含む抗体を指し、各抗原結合部分は、異なる抗原を認識する異なる可変領域、またはその可変領域を介して２つの異なる抗原に結合する抗体のフラグメントもしくは一部分を含む。
【００８０】
「モノクローナル抗体」は、単一の細胞クローンまたは単一の細胞株によって産生され、その一次アミノ酸配列が同一である抗体分子からなるまたはそれらから本質的になる、抗体を指す。
【００８１】
「ポリクローナル抗体」は、不均一な抗体集団から得られた抗体を指し、当該集団の種々の抗体は、異なる抗原エピトープに結合する。
【００８２】
「キメラ抗体」は、その抗原結合部位（すなわち、可変領域、ＣＤＲ、またはその一部分）が、異なるまたは改変されたクラス、エフェクター機能及び／または種の定常領域に連結するように、定常領域またはその一部分を変更、置換または交換するか、あるいは、可変領域またはその一部分を、異なるまたは改変された抗原特異性を有する可変領域（例えば、異なる種に由来するＣＤＲ及びフレームワーク領域）に変更、置換または交換した、抗体分子を指す。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、１つの供給源または種（例えば、マウス）に由来する可変領域と、第２の供給源または種（例えば、ヒト）に由来する定常領域とを含む、モノクローナル抗体である。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野において記載されている。
【００８３】
「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ以外の非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限で含有する非ヒト供給源（例えば、マウス）由来のキメラ抗体である。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の抗原結合可変ドメイン（複数可）を含み、そのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に該当し、そのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に該当する。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのある特定のフレームワーク領域残基は、例えば、特異性、親和性、及び／または血清中半減期を改善するために、非ヒト種由来の対応する残基に置き換えることができる。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的に、ヒト免疫グロブリン配列の少なくとも一部分を含み得る。抗体のヒト化の方法は、当該技術分野において知られている。
【００８４】
「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、ヒト重鎖及び軽鎖配列を有する抗体であり、典型的に、ヒト生殖細胞系列遺伝子に由来する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト細胞によって、ヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス）によって、またはファージディスプレイプラットフォームによって産生される。
【００８５】
「特異的に結合する」という用語は、サンプル中のエピトープまたは標的に対して、別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、高い親和性、高いアビディティ、及び／または長い時間、当該エピトープまたは標的に結合する、分子（例えば、抗体（またはその抗原結合部分）または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分））を指す。いくつかの実施形態において、エピトープまたは標的に特異的に結合する抗体（またはその抗原結合部分）または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分）は、他のエピトープまたは非標的化合物よりも、少なくとも５倍高い親和性、例えば、少なくとも６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍以上高い親和性で、当該エピトープまたは標的に結合する、抗体（またはその抗原結合部分）または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分）である。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２タンパク質（例えば、ヒトＴＲＥＭ２）に特異的に結合する抗体は、非ＴＲＥＭ２タンパク質への結合よりも少なくとも５倍高い親和性（例えば、少なくとも１０倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、１０，０００倍以上の親和性）でＴＲＥＭ２タンパク質に結合する。特定のエピトープまたは標的に関する、「特異的結合」、「特異的に結合する」、または「特異的である」という用語は、本明細書で使用されるとき、例えば、その分子が結合するエピトープまたは標的に対する平衡解離定数ＫＤによって表すことができ、例えば、１０−４Ｍ以下、例えば、１０−５Ｍ、１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍである。当業者であれば、ある種に由来するＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、そのＴＲＥＭ２タンパク質のオルソログにも特異的に結合し得ることを認識するであろう。
【００８６】
「結合親和性」という用語は、本明細書中、２つの分子間、例えば、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間、または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分）と標的との間の非共有結合性相互作用の強さを指すために使用される。したがって、例えば、この用語は、別途明示されるか、文脈から明らかな場合を除き、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間、または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分）と標的との間の１：１相互作用を指し得る。結合親和性は、解離速度定数（ｋｄ、時間−１）を会合速度定数（ｋａ、時間−１Ｍ−１）で割ったものを指す、平衡解離定数（ＫＤ）を測定することによって定量され得る。ＫＤは、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）などの結合平衡除外アッセイ；及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォーム使用）を使用して、複合体形成及び解離のカイネティクスを測定することによって決定することができる。本明細書で使用されるとき、「結合親和性」は、正式な結合親和性、例えば、抗体（またはその抗原結合部分）と抗原との間、または修飾されたＦｃポリペプチド（またはその標的結合部分）と標的との間の１：１相互作用を反映する結合親和性だけではなく、ＫＤが計算され、多価結合を反映し得る見かけの親和性も含み得る。
【００８７】
「トランスフェリン受容体」または「ＴｆＲ」は、本明細書で使用されるとき、トランスフェリン受容体タンパク質１を指す。ヒトトランスフェリン受容体１ポリペプチド配列は、配列番号９７に記載される。他の種に由来するトランスフェリン受容体タンパク質１配列も知られている（例えば、チンパンジー：アクセッション番号ＸＰ＿００３３１０２３８．１、アカゲザル：ＮＰ＿００１２４４２３２．１、イヌ：ＮＰ＿００１００３１１１．１、ウシ：ＮＰ＿００１１９３５０６．１、マウス：ＮＰ＿０３５７６８．１、ラット：ＮＰ＿０７３２０３．１、及びニワトリ：ＮＰ＿９９０５８７．１）。「トランスフェリン受容体」という用語は、トランスフェリン受容体タンパク質１染色体遺伝子座にある遺伝子によってコードされる例示的な参照配列、例えば、ヒト配列のアレルバリアントも包含する。全長トランスフェリン受容体タンパク質は、短いＮ末端細胞内領域、膜貫通領域、及び大きな細胞外ドメインを含む。細胞外ドメインは、３つのドメイン：プロテアーゼ様ドメイン、ヘリカルドメイン、及びアピカルドメインを特徴とする。
【００８８】
本明細書で使用されるとき、「Ｆｃポリペプチド」という用語は、構造ドメインとして、Ｉｇの折り畳みを特徴とする、天然免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、少なくともＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを含む定常領域配列を含有し、ヒンジ領域の少なくとも一部を含有し得るが、可変領域は含有しない。
【００８９】
「修飾されたＦｃポリペプチド」は、野生型免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列と比較して少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失または挿入を有するが、Ｉｇの全体的な折り畳みまたはネイティブＦｃポリペプチドの構造を保持する、Ｆｃポリペプチドを指す。
【００９０】
本明細書で使用されるとき、「ＦｃＲｎ」という用語は、胎児性Ｆｃ受容体を指す。ＦｃポリペプチドのＦｃＲｎへの結合は、Ｆｃポリペプチドのクリアランスを低下させ、血清中半減期を延長する。ヒトＦｃＲｎタンパク質は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質に類似した約５０ｋＤａのサイズのタンパク質と、約１５ｋＤａのサイズのβ２−ミクログロブリンとからなる、ヘテロ二量体である。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、「ＦｃＲｎ結合部位」は、ＦｃＲｎに結合するＦｃポリペプチドの領域を指す。ヒトＩｇＧにおいて、ＦｃＲｎ結合部位は、ＥＵインデックスを使用してナンバリングしたとき、Ｌ２５１、Ｍ２５２、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｒ２５５、Ｔ２５６、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、Ｈ４３５、及びＹ４３６を含む。これらの位置は、配列番号９８の位置２１〜２６、１９８、及び２０３〜２０６に該当する。
【００９２】
本明細書で使用されるとき、「ネイティブＦｃＲｎ結合部位」は、ＦｃＲｎに結合し、かつＦｃＲｎに結合する天然Ｆｃポリペプチドの領域と同じアミノ酸配列を有する、Ｆｃポリペプチドの領域を指す。
【００９３】
本明細書で使用されるとき、「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン定常領域ドメインポリペプチドを指す。本出願上、ＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置３４１前後〜位置４４７前後のアミノ酸セグメントを指し、ＣＨ２ドメインポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置２３１前後〜位置３４０前後のアミノ酸セグメントを指し、ヒンジ領域配列を含まない。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインポリペプチドは、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ナンバリングスキームによってもナンバリングすることができ、この場合、ＩＭＧＴ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃチャートのナンバリング（ＩＭＧＴウェブサイト）に従うと、ＣＨ２ドメインのナンバリングは１〜１１０であり、ＣＨ３ドメインのナンバリングは１〜１０７である。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。Ｆｃ領域は、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置２３１前後〜位置４４７前後のアミノ酸セグメントを指すが、本明細書で使用されるとき、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部を含み得る。例示的なヒンジ領域配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号９９）である。
【００９４】
「野生型」、「ネイティブ」、及び「天然」という用語は、ＣＨ３またはＣＨ２ドメインに関して使用されるとき、自然に発生する配列を有するドメインを指す。
【００９５】
本明細書で使用されるとき、「変異体」という用語は、変異体ポリペプチドまたは変異体ポリヌクレオチドに関して使用されるとき、「バリアント」と区別なく使用される。所与の野生型ＣＨ３またはＣＨ２ドメイン参照配列に対するバリアントは、天然アレルバリアントを含み得る。「非天然」のＣＨ３またはＣＨ２ドメインは、天然の細胞には存在しないものであり、遺伝子改変によって、例えば、遺伝子工学技術または変異導入技術を使用して作製された、ネイティブＣＨ３ドメインまたはＣＨ２ドメインポリヌクレオチドまたはポリペプチドのバリアントまたは変異体ドメインを指す。「バリアント」には、野生型を基準にして少なくとも１つのアミノ酸変異を含む、あらゆるドメインが含まれる。変異は、置換、挿入、及び欠失を含み得る。
【００９６】
「交差反応」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗体が惹起された抗原以外の抗原に結合する抗体の能力を指す。いくつかの実施形態において、交差反応性は、抗体が惹起された抗原とは別の種に由来する抗原に結合する抗体の能力を指す。非限定的な例として、ヒトＴＲＥＭ２ペプチドに対して惹起される本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体は、異なる種（例えば、サルまたはマウス）に由来するＴＲＥＭ２ペプチドまたはタンパク質との交差反応性を示し得る。
【００９７】
「単離された」という用語は、核酸またはタンパク質（例えば、抗体）に関して使用されるとき、当該核酸またはタンパク質が、天然の状態下で付随している他の細胞構成成分を本質的に含まないことを示す。純度及び均一性は、典型的に、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）などの分析化学技術を使用して決定される。いくつかの実施形態において、単離された核酸またはタンパク質（例えば、抗体）は、少なくとも８５％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、または少なくとも９９％純粋である。
【００９８】
「アミノ酸」という用語は、天然及び合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然アミノ酸は、遺伝コードによってコードされているアミノ酸だけでなく、その後修飾されたアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、及びＯ−ホスホセリンもある。「アミノ酸類似体」は、天然アミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、α炭素が水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合しているものを有する化合物を指し、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。「アミノ酸模倣体」は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する、化合物を指す。アミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される、一般的に知られている三文字表記または一文字表記のいずれかで示され得る。
【００９９】
「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、アミノ酸残基の一本鎖の重合体を指すために本明細書中で区別なく使用される。この用語は、天然アミノ酸重合体及び非天然アミノ酸重合体だけでなく、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工的な化学模倣体であるアミノ酸重合体にも適用される。アミノ酸重合体は、Ｌ−アミノ酸のみ、Ｄ−アミノ酸のみ、またはＬアミノ酸とＤアミノ酸の混合物を含み得る。
【０１００】
本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、ポリペプチドまたは一本鎖ポリペプチドの二量体（すなわち、２つ）もしくは多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。一本鎖ポリペプチドのタンパク質は、共有結合、例えば、ジスルフィド結合によって、または非共有結合性相互作用によって、結合され得る。
【０１０１】
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、区別なく、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによって鎖に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾されたヌクレオチド、例えば、メチル化されたヌクレオチド及びそれらの類似体を含み得る。本明細書で企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。
【０１０２】
「保存的置換」及び「保存的変異」という用語は、類似の特徴を有するものとして分類することができる別のアミノ酸を用いたアミノ酸の置換となる変更を指す。この様式で定義される保存的アミノ酸群の分類の例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含む「荷電性／極性群」；Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）を含む「芳香族群」；ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（スレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含む「脂肪族群」を挙げることができる。各群で、サブグループを特定することもできる。例えば、荷電性または極性アミノ酸の群は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓを含む「正に荷電したサブグループ」；Ｇｌｕ及びＡｓｐを含む「負に荷電したサブグループ」；ならびにＡｓｎ及びＧｌｎを含む「極性サブグループ」を含む、サブグループに細分することができる。別の例として、芳香族または環状群は、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ及びＴｒｐを含む「窒素環サブグループ」；ならびにＰｈｅ及びＴｙｒを含む「フェニルサブグループ」を含む、サブグループに細分することができる。別の更なる例として、脂肪族群は、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、及びＡｌａを含む「脂肪族非極性サブグループ」；ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＣｙｓを含む「脂肪族弱極性サブグループ」のサブグループに細分することができる。保存的変異の分類の例としては、上記サブグループ内のアミノ酸のアミノ酸置換が挙げられ、例えば、限定するものではないが、正電荷が維持され得るようなＬｙｓのＡｒｇでの置換またはその逆；負電荷が維持され得るようなＧｌｕのＡｓｐでの置換またはその逆；遊離−ＯＨが維持され得るようなＳｅｒのＴｈｒでの置換またはその逆；及び遊離−ＮＨ２が維持され得るようなＧｌｎのＡｓｎでの置換またはその逆が挙げられる。いくつかの実施形態において、疎水性アミノ酸は、例えば、活性部位で、疎水性を維持するように、天然疎水性アミノ酸の代わりに使用される。
【０１０３】
「同一」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上のポリペプチド配列の文脈において、配列比較アルゴリズムを使用して、または手動アラインメント及び目視確認により判定して、比較ウインドウまたは指定領域にわたって最大の一致を得るように比較及び整列させたとき、２つ以上の配列またはサブ配列が、同じであるか、特定領域にわたって同一であるアミノ酸残基を特定の割合、例えば、少なくとも６０％の同一性、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％以上で有することを指す。
【０１０４】
ポリペプチドの配列比較については、典型的に、ある１つのアミノ酸配列が参照配列の役割を果たし、候補配列と比較される。アラインメントは、当業者に利用可能な種々の方法、例えば、視覚的アラインメントを使用して、または最大アラインメントを達成する既知のアルゴリズムを使用した公共利用可能なソフトウェアを使用して、実施することができる。そのようなプログラムには、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が含まれる。アラインメントに利用される最大アラインメントを達成するためのパラメーターは、当業者によって決定され得る。本出願のためのポリペプチド配列の配列比較については、２つのタンパク質配列をデフォルトパラメーターで整列させるＢＬＡＳＴＰアルゴリズム標準タンパク質ＢＬＡＳＴが使用される。
【０１０５】
ポリペプチド配列中の所与のアミノ酸残基を同定する文脈で使用される場合、「〜に対応する」、「〜を参照して決定される」、または「〜を参照してナンバリングされる」という用語は、所与のアミノ酸配列が参照配列に対して最大限アライメントされ比較されたときの、特定の参照配列の残基の位置を指す。したがって、例えば、修飾されたＦｃポリペプチド中のアミノ酸残基は、当該残基を配列番号９８に対して最適にアラインメントしたとき、配列番号９８のアミノ酸と一致する場合、配列番号９８のアミノ酸に「対応する」。参照配列に対してアラインメントされるポリペプチドは、参照配列と同じ長さである必要はない。
【０１０６】
「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、限定するものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、ウシ、ブタ、ウマ、及び他の哺乳類種を含む、哺乳類を指す。一実施形態において、対象、個体、または患者は、ヒトである。
【０１０７】
「治療すること」、「治療」などの用語は、本明細書中、一般に、所望の薬理作用及び／または生理作用を得ることを意味するために使用される。「治療すること」または「治療」は、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病または本明細書に記載される別の神経変性疾患）の治療または改善の奏功を示す任意の兆候を指し得、緩和、寛解、患者生存の改善、生存時間もしくは生存率の増大、症状の軽減、または疾患に対する患者の忍容性を高めること、変性速度もしくは衰退速度を遅くすること、または患者の身体的もしくは精神的健康を改善することなどの任意の客観的または主観的パラメーターを含む。症状の治療または改善は、客観的または主観的パラメーターに基づくことができる。治療の効果は、治療を受けていない個体もしくは個体のプール、または治療前の同患者もしくは治療中の異なる時間における同患者と比較され得る。
【０１０８】
「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ヒトまたは動物における使用に生物学的または薬理学的に適合性のある非活性の薬剤成分、限定するものではないが、緩衝液、担体、または防腐剤などを指す。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、剤（例えば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」または「治療上有効な量」は、対象における疾患の症状の重症度を治療、軽減、緩和、または減少させる剤の量である。剤（例えば、本明細書に記載される抗体）の「治療量」は、患者の生存を改善し、生存時間もしくは生存率を増大し、症状を軽減し、損傷、疾患もしくは状態（例えば、神経変性疾患）に対する忍容性を高め、変性速度もしくは衰退速度を遅くし、または患者の身体的もしくは精神的健康を改善し得る。
【０１１０】
「投与する」という用語は、剤、化合物、または組成物を所望の生物学的作用部位に送達する方法を指す。これらの方法には、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、本明細書に記載される抗体は、静脈内投与される。
【０１１１】
「選択的に増強する」という用語は、ＴＲＥＭ２リガンドによって誘導される活性を増強するＴＲＥＭ２抗体の文脈で使用されるとき、当該抗体が、適切な参照、例えば、参照ＴＲＥＭ２リガンド（例えば、本明細書に記載されるいずれかのもの）の増強と比較して、またはＴＲＥＭ２リガンド（例えば、本明細書に記載されるいずれかのものまたは全ての群の平均増増強と比較して、ＴＲＥＭ２リガンドの活性を大幅に（例えば、少なくとも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、４倍、５倍、８倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、または５０倍）増強することを意味する。
【０１１２】
「対照」または「対照値」という用語は、参照値またはベースライン値を指す。適切な対照は、当業者によって決定され得る。いくつかの場合において、対照値は、同じ対象または実験内のベースラインを基準として決定することができ、例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の前に行われたｓＴＲＥＭ２の測定値を、同じ対象における治療の後のｓＴＲＥＭ２レベルの測定値の対照値にすることができる。他の場合において、対照値は、対照対象者（例えば、健常対照者または疾患対照者）または対照対象者（例えば、健常対照者または疾患対照者）の集団（例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００人以上の対照対象者の集団）の平均値を基準として決定することができ、例えば、ベースラインまたは治療後のいずれかにおける対象のｓＴＲＥＭ２のレベルの測定値を健常対照値と比較することができる。
【０１１３】
ＩＩＩ．抗ＴＲＥＭ２抗体
一態様において、ＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体及びその抗原結合部分が提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、他のＴＲＥＭ様受容体（例えば、ＴＲＥＭ１）よりもＴＲＥＭ２に対して選択的である。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２に特異的に結合する抗体は、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を有する抗体であり、例えば、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）と相互作用するキナーゼの動員もしくはリン酸化を調節し、食作用を調節し、細胞遊走を調節し、及び／または細胞分化を調節する抗体；ｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する抗体；ＴＲＥＭ２のリガンド活性化を調節する抗体；本明細書に記載される抗体クローン（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、またはＲＳ１２．３Ｃ１０）によって認識されるエピトープと同じもしくは実質的に同じエピトープを認識する抗体；及び／または本明細書に記載される抗体クローン（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、またはＲＳ１２．３Ｃ１０）の１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を有する抗体である。
【０１１５】
ｓＴＲＥＭ２の遊離を調節する抗ＴＲＥＭ２抗体
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、サンプル中のｓＴＲＥＭ２タンパク質のレベル、例えば、細胞表面から細胞外サンプル中に放出されるｓＴＲＥＭ２のレベルを変更する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理されたサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量が、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理されたサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量が、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理のサンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞の上清、または抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量である。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理されたサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量が、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、処理されたサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量が、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理のサンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞の上清、または抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のｓＴＲＥＭ２の量である。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２の遊離は、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含むサンプルを使用して測定される。いくつかの実施形態において、サンプルは、脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態において、サンプルは、細胞培養物の上清（例えば、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージなどの初代細胞もしくは細胞株、またはＴＲＥＭ２を発現するように、例えば、以下の実施例の項に記載されているように操作された初代細胞または細胞株の上清）を含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、サンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルは、イムノアッセイを使用して測定される。イムノアッセイは、当該技術分野において知られており、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、例えば、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）、免疫細胞化学、キャピラリー電気泳動イムノアッセイ（ＣＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光イムノアッセイ（ＣＬ）、及び電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２レベルは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２レベルは、以下の実施例の項に記載されているＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２活性も調節する。いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗ＴＲＥＭ２抗体は、以下に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２活性も調節する。
【０１２１】
ＴＲＥＭ２活性を調節する抗ＴＲＥＭ２抗体
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する。例えば、いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼの動員またはリン酸化を調節する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、食作用、細胞成長、細胞生存、細胞分化、サイトカイン分泌、または細胞遊走などの１つ以上の下流活性を調節する。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強させ、限定するものではないが、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化の誘導、食作用（例えば、細胞デブリ、アミロイドβ粒子などの食作用）の増強、細胞遊走（例えば、ミクログリアまたはマクロファージの遊走）の増強、細胞機能（例えば、骨髄細胞、疾患関連ミクログリアを含むミクログリア、及びマクロファージに関するもの）の増強、及び／または細胞生存もしくは細胞分化（例えば、骨髄細胞、疾患関連ミクログリアを含むミクログリア、及びマクロファージに関するもの）の増強を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性（例えば、上記のもの）を増強する。リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強する抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書中、「ポジティブアロステリックモジュレーター」（「ＰＡＭ」）と呼ばれる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強するが、リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を増強しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの活性を選択的に増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害し、限定するものではないが、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化の減少もしくは阻害、食作用（例えば、細胞デブリ、アミロイドβ粒子などの食作用）の減少もしくは阻害、細胞遊走（例えば、ミクログリアまたはマクロファージの遊走）の減少もしくは阻害、及び／または細胞生存もしくは細胞分化（例えば、骨髄細胞、疾患関連ミクログリアを含むミクログリア、及びマクロファージに関するもの）の減少もしくは阻害を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する。リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書中、「ネガティブアロステリックモジュレーター」（「ＮＡＭ」）と呼ばれる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害するが、リガンドの非存在下ではＴＲＥＭ２活性を阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下でＴＲＥＭ２活性を阻害し、リガンドによって誘導される１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドによるＴＲＥＭ２の活性化を阻止する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンド結合部位でＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドのＴＲＥＭ２への結合を遮断する。
【０１２５】
キナーゼリン酸化
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル、または抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値（例えば、リガンドの存在下であるが、抗体の非存在下でのレベル）と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍以上増加した場合、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を誘導する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル  またはＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を、リガンドの存在下では誘導するが、リガンドの非存在下では誘導しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では誘導するが、リガンドの非存在下では誘導しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドでは処理していないサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて増加していない）場合、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では誘導するが、リガンドの非存在下では誘導しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えて、または１倍を超えて増加していない）場合、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では誘導するが、リガンドの非存在下では誘導しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル  またはＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１２８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル、または抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、リガンドの存在下で、Ｓｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル  またはＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１３０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドでは処理していないサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて減少していない）場合、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えて、または１倍を超えて減少していない）場合、Ｓｙｋのリン酸化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプルまたはＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）のリン酸化をリガンドの非存在下で阻害し、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの非存在下でＳｙｋのリン酸化を阻害し、リガンドによって誘導されるＳｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下で、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体及びＴＲＥＭ２リガンドで処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、リガンドの非存在下でＳｙｋのリン酸化を阻害し、リガンドによって誘導されるＳｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンドの非存在下で、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体及びＴＲＥＭ２リガンドで処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、リガンドの非存在下でＳｙｋのリン酸化を阻害し、リガンドによって誘導されるＳｙｋのリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないＴＲＥＭ２発現細胞を含むサンプル  またはＴＲＥＭ２リガンドもしくは抗ＴＲＥＭ２抗体で治療していない対象からのサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１３２】
サンプル中のリン酸化（例えば、Ｓｙｋリン酸化）の検出及び／または定量には、いくつかの実施形態において、イムノアッセイが使用される。いくつかの実施形態において、イムノアッセイは、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）、免疫細胞化学、キャピラリー電気泳動イムノアッセイ（ＣＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光イムノアッセイ（ＣＬ）、または電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）である。いくつかの実施形態において、リン酸化は、化学増幅型ルミネッセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｉｎｃ．）を利用するイムノアッセイを使用して、検出及び／または定量される。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、リン酸化は、１つ以上の細胞、例えば、１つ以上のＴＲＥＭ２発現細胞（例えば、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージなどの初代細胞もしくは細胞株、またはＴＲＥＭ２を発現するように、例えば、以下の実施例の項に記載されているように操作された初代細胞または細胞株）を含むサンプルを使用して測定される。いくつかの実施形態において、サンプルは、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態において、サンプルは、組織（例えば、肺、脳、腎臓、脾臓、神経組織、または骨格筋）または当該組織に由来する細胞を含む。いくつかの実施形態において、サンプルは、内因性の体液、組織、または細胞（例えば、ヒトまたは非ヒト対象に由来するもの）を含む。
【０１３４】
食作用
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、死細胞デブリ、組織デブリ、アミロイドβ粒子、または異物の食作用を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、リガンドの存在下で、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、リガンドの存在下で、食作用を増強する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、食作用を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて増加していない）場合、食作用を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えてまたは１倍を超えて増加していない）場合、食作用を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、食作用を減少させる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、食作用を低減する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、食作用を低減する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、食作用を減少させる。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、リガンドの存在下で、作用を低減する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、リガンドの存在下で、食作用を低減する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、食作用を、リガンドの存在下では低減するが、リガンドの非存在下では低減しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて減少していない）場合、食作用を、リガンドの存在下では低減するが、リガンドの非存在下では低減しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の食作用のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えてまたは１倍を超えて減少していない）場合、食作用を、リガンドの存在下では低減するが、リガンドの非存在下では低減しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプルまたは適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の食作用のレベルである。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、食作用は、標識基質による食作用アッセイを使用して測定される。食作用アッセイは、当該技術分野において知られている。いくつかの実施形態において、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージまたはミクログリアなどの細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、食作用アッセイは、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、細胞遊走は、以下の実施例の項に記載されているヒトマクロファージ食作用アッセイを使用して測定される。
【０１４１】
細胞の遊走、生存、機能、及び分化
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、及び疾患関連ミクログリアを含むミクログリアに関するもの）を増強する。疾患関連ミクログリア及び疾患関連ミクログリアを検出する方法は、Ｋｅｒｅｎ−Ｓｈａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１７，１６９：１２７６−１２９０に記載されている。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞遊走を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞生存を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨髄細胞の遊走、生存、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージの遊走、生存、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの遊走、生存、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの活性化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、疾患関連ミクログリアの遊走、生存、及び／または分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ネイティブＴＲＥＭ２リガンドの結合を遮断することなく、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルである。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加した場合、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加した場合、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を増強する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドまたは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルである。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の活性のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて増加していない）場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上増加し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の活性のレベルが、対照値と比較して、実質的に増加していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えてまたは１倍を超えて増加していない）場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では増強するが、リガンドの非存在下では増強しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドまたは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルである。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、及び疾患関連ミクログリアを含むミクログリアに関するもの）を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞遊走を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞生存を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の細胞種（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、またはミクログリア）の細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、骨髄細胞の遊走、生存、及び／または分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、マクロファージの遊走、生存、及び／または分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの遊走、生存、及び／または分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ミクログリアの活性化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、疾患関連ミクログリアの遊走、生存、及び／または分化を阻害する。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中のＳｙｋリン酸化のレベルである。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少した場合、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少した場合、リガンドの存在下で、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を阻害する。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドまたは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）または適切な非ＴＲＥＭ２結合抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルである。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の活性のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１０％を超えてまたは５％を超えて減少していない）場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２リガンド及び抗ＴＲＥＭ２抗体で処理したサンプル中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上減少し、かつ抗ＴＲＥＭ２抗体で処理し、ＴＲＥＭ２リガンドで処理していないサンプル中の活性のレベルが、対照値と比較して、実質的に減少していない（例えば、対照値と比較して、１．５倍を超えてまたは１倍を超えて減少していない）場合、細胞遊走、細胞生存、または細胞分化を、リガンドの存在下では阻害するが、リガンドの非存在下では阻害しない。いくつかの実施形態において、対照値は、未処理サンプル（例えば、ＴＲＥＭ２リガンドまたは抗ＴＲＥＭ２抗体で処理していないサンプル）中の活性（例えば、遊走、生存、または分化）のレベルである。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、細胞遊走は、走化性アッセイを使用して測定される。走化性アッセイは、当該技術分野において知られている。いくつかの実施形態において、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージなどの細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、細胞遊走アッセイ（例えば、走化性アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、細胞遊走は、以下の実施例の項に記載されているヒトマクロファージ走化性アッセイを使用して測定される。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、細胞生存は、細胞生存率アッセイを使用して測定される。細胞生存率アッセイは、当該技術分野において知られている。いくつかの実施形態において、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージなどの細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、細胞生存アッセイ（例えば、細胞生存率アッセイ）は、ＴＲＥＭ２を発現するように操作された細胞を含むサンプルで実施される。いくつかの実施形態において、細胞生存は、以下の実施例の項に記載されているヒトマクロファージ生存率アッセイを使用して測定される。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、細胞分化は、ＴＲＥＭ２を内因性発現する細胞が分化する能力を評価することによって測定される。例えば、いくつかの実施形態において、細胞分化は、例えば、以下の実施例の項に記載されているように、マクロファージが単球から分化する能力を評価することによって測定される。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ミクログリアの活性化は、ｉｎ  ｖｉｖｏで測定される。いくつかの実施形態において、ミクログリア活性化は、ＴＳＰＯ−ＰＥＴイメージングを使用して測定される。ＴＳＰＯ−ＰＥＴイメージング法は、当該技術分野において知られている。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、神経炎症を増大させることなく、ミクログリア機能を増強する。神経炎症のレベルは、限定するものではないが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１ｒａ、ＴＧＦβ、ＩＬ−１５、またはＩＦＮ−γなどのサイトカイン（例えば、炎症性サイトカイン）のレベルを測定することによって決定され得る。いくつかの実施形態において、サイトカインレベルは、イムノアッセイ、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、酵素多重免疫測定法（ＥＭＩＡ）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）、免疫組織化学染色（ＩＨＣ）、免疫細胞化学、キャピラリー電気泳動イムノアッセイ（ＣＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫蛍光法、化学発光イムノアッセイ（ＣＬ）、または電気化学発光イムノアッセイ（ＥＣＬ）を使用して測定される。
【０１５４】
ＴＲＥＭ２リガンド
いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２リガンドは、本明細書に記載される脂質リガンド、例えば、以下の実施例４に記載される脂質リガンドである。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２リガンドは、１−パルミトイル−２−（５’−オキソ−バレロイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＶＰＣ）、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、７−ケトコレステロール（７−ＫＣ）、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２４ＯＨＣ）、２５（Ｓ）ヒドロキシコレステロール（２５ＯＨＣ）、２７−ヒドロキシコレステロール（２７ＯＨＣ）、アシルカルニチン（ＡＣ）、アルキルアシルグリセロホスホコリン（ＰＡＦ）、α−ガラクトシルセラミド（ＫＲＮ７０００）、ビス（モノアシルグリセロ）リン酸（ＢＭＰ）、カルジオリピン（ＣＬ）、セラミド、セラミド−１−リン酸（Ｃ１Ｐ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、リン酸コレステロール（ＣＰ）、ジアシルグリセロール３４：１（ＤＧ３４：１）、ジアシルグリセロール３８：４（ＤＧ３８：４）、ジアシルグリセロールピロリン酸（ＤＧＰＰ）、ジヒドロセラミド（ＤｈＣｅｒ）、ジヒドロスフィンゴミエリン（ＤｈＳＭ）、エーテルホスファチジルコリン（ＰＣｅ）、遊離コレステロール（ＦＣ）、ガラクトシルセラミド（ＧａｌＣｅｒ）、ガラクトシルスフィンゴシン（ＧａｌＳｏ）、ガングリオシドＧＭ１、ガングリオシドＧＭ３、グルコシルスフィンゴシン（ＧｌｃＳｏ）、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）、Ｋｄｏ２−リピドＡ（ＫＬＡ）、ラクトシルセラミド（ＬａｃＣｅｒ）、リゾアルキルアシルグリセロホスホコリン（ＬＰＡＦ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、リゾホスファチジルグリセロール（ＬＰＧ）、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、リゾホスファチジルセリン（ＬＰＳ）、Ｎ−アシル−ホスファチジルエタノールアミン（ＮＡＰＥ）、Ｎ−アシル−セリン（ＮＳｅｒ）、酸化ホスファチジルコリン（ｏｘＰＣ）、パルミチン酸−９−ヒドロキシ−ステアリン酸（ＰＡＨＳＡ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルエタノール（ＰＥｔＯＨ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（Ｓａ１Ｐ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、スフィンゴシン、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓｏ１Ｐ）、及びスルファチドからなる群から選択される。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の脂質リガンド（例えば、本明細書に記載される脂質リガンド）と相互作用して、ＴＲＥＭ２活性を調節する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上の脂質リガンドと相互作用して、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（限定するものではないが、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂなど）を伴うＴＲＥＭ２シグナル伝達経路を調節する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、脂質リガンドと相互作用して、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂを活性化する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、シグナル伝達経路（例えば、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂ）の活性化に対して、脂質リガンドとの相加効果を示す。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｐ−Ｓｙｋの活性化に対して、脂質リガンドとの相加効果を示す。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、シグナル伝達経路（例えば、Ｓｙｋ、ＺＡＰ７０、ＰＩ３Ｋ、Ｅｒｋ、ＡＫＴ、またはＧＳＫ３ｂ）の脂質リガンド活性化に対して、遮断効果を示す。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｐ−Ｓｙｋの脂質リガンド活性化に対して、遮断効果を示す。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２シグナル伝達経路の構成要素（例えば、ｐ−Ｓｙｋ）の活性化に対して、脂質リガンドとの相加効果を示し、抗体クローンＲＳ９．Ｆ６、２２Ｂ８．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、２１Ｄ６．Ｇ２、５９Ｃ６．Ｆ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、６０Ａ４．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、５４Ｃ２．Ａ１、４４Ｅ２．Ｈ１、２２Ｇ９．Ｄ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、または７Ｂ１０．Ａ２によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２シグナル伝達経路の構成要素（例えば、ｐ−Ｓｙｋ）の活性化に対して、脂質リガンドとの遮断効果を示し、抗体クローンＲＳ９．Ｆ１０、１３Ｂ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、３０Ａ８．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、２４Ｂ４．Ａ１、３９Ｈ１０．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、１４Ｈ１１．Ｂ１、４０Ｈ３．Ａ４、３０Ｆ２．Ａ１、５１Ｄ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、４４Ｅ３．Ｂ１、２６Ｄ５．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、ＲＳ９．Ｅ２、または２Ｇ４．Ｂ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。
【０１５７】
抗ＴＲＥＭ２抗体の結合特徴
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、細胞（例えば、ＴＲＥＭ２を内因性発現するヒトマクロファージなどの初代細胞もしくは細胞株、またはＴＲＥＭ２を発現するように、例えば、以下の実施例の項に記載されているように操作された初代細胞もしくは細胞株）上に発現されるＴＲＥＭ２に結合する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、精製されたもしくは組み換えＴＲＥＭ２タンパク質またはＴＲＥＭ２もしくはその部分を含むキメラタンパク質（例えば、ＴＲＥＭ２を含むＦｃ融合タンパク質またはＴＲＥＭ２のエクトドメインを含むＦｃ融合タンパク質）に結合する。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、別の種の１つ以上の他のＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、マウスＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、カニクイザル（「サル」）ＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、ラットＴＲＥＭ２タンパク質との交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体は、マウスＴＲＥＭ２、サルＴＲＥＭ２、及びラットＴＲＥＭ２のうちの１つ、２つ、または３つ全てとの交差反応性を示す。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ヒトＴＲＥＭ２、サルＴＲＥＭ２、及びマウスＴＲＥＭ２との交差反応性を示す。
【０１５９】
結合親和性、結合カイネティクス、及び交差反応性を分析するための方法は、当該技術分野において知られている。これらの方法には、固相結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイ）、免疫沈降法、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））、結合平衡除外アッセイ（例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））、フローサイトメトリー、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））、及びウェスタンブロット分析が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、ＥＬＩＳＡを使用して、結合親和性及び／または交差反応性を決定する。ＥＬＩＳＡアッセイを実施するための方法は、当該技術分野において知られており、以下の実施例の項にも記載されている。いくつかの実施形態において、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を決定する。いくつかの実施形態において、結合平衡除外アッセイを使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を決定する。いくつかの実施形態において、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法を使用して、結合親和性、結合カイネティクス、及び／または交差反応性を決定する。
【０１６０】
抗ＴＲＥＭ２抗体によって認識されるエピトープ
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。本明細書で使用されるとき、「実質的に同じ」という用語は、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープに関して使用されるとき、抗ＴＲＥＭ２抗体が、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープに対して、同一であるか、その範囲内にあるか、もしくはほぼ同一であるエピトープ（例えば、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または当該エピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換、例えば、保存的置換を有するエピトープ）、または実質的なオーバーラップ（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のオーバーラップ）を有するエピトープを認識することを意味する。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０．ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと実質的にオーバーラップする（例えば、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のオーバーラップを有する）ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させ、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させ、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させ、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させ、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させ、抗体クローン４２Ｅ８．Ｈ１によって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させ、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させ、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させ、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させ、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させ、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１によって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強し（例えば、キナーゼリン酸化を誘導し、食作用を増強し、及び／または細胞遊走、分化、もしくは生存を増強し）、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、またはＲＳ９．Ｆ１０によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強し、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強し、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強し、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を増強し、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害し（例えば、キナーゼリン酸化を阻害し、食作用を阻害し、及び／または細胞遊走、分化、もしくは生存を阻害し）、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１または２１Ｄ１１によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害し、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１または２１Ｄ１１によって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害し、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１または２１Ｄ１１によって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害し、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１または２１Ｄ１１によって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、ＴＲＥＭ２活性を阻害し、抗体クローン２１Ｄ４．Ｄ１または２１Ｄ１１によって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強し（例えば、キナーゼリン酸化を誘導し、食作用を増強し、及び／または細胞遊走、分化、もしくは生存を増強し）、抗体クローン３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、またはＲＳ９．Ｆ１０によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強し、３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強し、３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強し、３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を増強し、３Ｄ３．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ６．Ｇ２、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ．２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｆ６、及びＲＳ９．Ｆ１０からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を阻害し（例えば、キナーゼリン酸化を誘導し、食作用を増強し、及び／または細胞遊走、分化、もしくは生存を増強し）、抗体クローン２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、またはＲＳ９．Ｅ２によって認識されるエピトープと同じまたは実質的に同じエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を阻害し、２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、及びＲＳ９．Ｅ２からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープと同一であるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を阻害し、２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、及びＲＳ９．Ｅ２からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープの範囲内にあるヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を阻害し、２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、及びＲＳ９．Ｅ２からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープに対して、少なくとも９０％の同一性を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、リガンドによって誘導されるＴＲＥＭ２活性を阻害し、２Ｇ４．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１．Ｂ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４４Ｅ３．Ｂ１、５１Ｄ４．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、及びＲＳ９．Ｅ２からなる群から選択される抗体クローンによって認識されるエピトープを基準として、１つ、２つ、または３つのアミノ酸置換（例えば、保存的置換）を有するヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基２４〜４３、４４〜５８、６４〜７８、８９〜１０３、９４〜１０８、１２４〜１５３、１４０〜１４４、または１５９〜１７４を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基２４〜４３を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、エピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基４４〜５８を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基６４〜７８を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基８９〜１０３を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基９４〜１０８を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基１２４〜１５３を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基１４０〜１４８を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基１４０〜１４４を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基１４０〜１４４を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号９６の残基１５９〜１７４を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、配列番号９６の残基１４０〜１４８を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する（例えば、配列番号９６の残基１４０〜１４４を含むか、それらの範囲内であるか、またはそれらからなる、ヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識する）抗ＴＲＥＭ２抗体は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のうちの１つ以上と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、残基Ｔｒｐ１４２と直接接触する。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、残基Ａｓｐ１４０、Ｌｅｕ１４１、Ｔｒｐ１４２、Ｐｈｅ１４３、及びＰｒｏ１４４のそれぞれと直接接触する。
【０１７５】
抗ＴＲＥＭ２抗体配列
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載される抗体１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、本明細書に記載される抗体の１つ以上のＣＤＲ、重鎖可変領域、及び／または軽鎖可変領域配列を含み、本明細書に記載される１つ以上の機能特徴（例えば、ｓＴＲＥＭ２のレベルの変更及び／または１つ以上のＴＲＥＭ２活性の調節）を更に含む。
【０１７６】
ＣＤＲ配列
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲに対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むか、または２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲを基準として、最大２つのアミノ酸置換（すなわち、０、１、または２つのアミノ酸置換）を有する１つ以上のＣＤＲを含む。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｈ１）、重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｈ２）、重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｈ３）、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｌ１）、軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｌ３）と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てを含む。
【０１７８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２４Ｇ７、２６Ｄ２、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、もしくは３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、もしくは３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、もしくは３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、もしくは３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、もしくは３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、もしくは３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、もしくは３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、もしくは３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、もしくは３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、もしくは３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２配列、及び
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、もしくは３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、８９、もしくは３１３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を基準として、最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）〜（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てを含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）の重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）の重鎖ＣＤＲ２、及び（ｃ）の重鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）の軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）の軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）の軽鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列を基準として、１つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態において、最大２つのアミノ酸置換を有するＣＤＲは、参照配列を基準として、２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態において、最大２つのアミノ酸置換は、保存的置換である。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）配列番号８、３６、３９、４５、５１、５７、６２、６８、７４、８１、８５、３０７、または３１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、
（ｂ）配列番号９、３７、４０、４６、５２、５８、６３、６９、７５、７９、８２、８６、３０８、または３１６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、
（ｃ）配列番号１０、４１、４７、５３、５９、６４、７０、７６、８３、８７、３０９、または３１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号１１、４２、４８、５４、６０、６５、７１、７７、８８、または３１１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、
（ｅ）配列番号１２、３８、４３、４９、５５、６６、７２、３１２、または３１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、ならびに
（ｆ）配列番号１３、４４、５０、５６、６１、６７、７３、７８、８０、８４、または８９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）〜（ｆ）のうちの２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てを含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ａ）の重鎖ＣＤＲ１、（ｂ）の重鎖ＣＤＲ２、及び（ｃ）の重鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｄ）の軽鎖ＣＤＲ１、（ｅ）の軽鎖ＣＤＲ２、及び（ｆ）の軽鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１８３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、１つ以上のコンセンサス配列のバリアントである１つ以上の配列を含む。非限定的な例として、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）生殖細胞系列に由来する抗体の重鎖または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントすることによって特定することができる。いくつかの実施形態において、コンセンサス配列は、同じ（または類似の）長さの配列を含有する抗体及び／または少なくとも１つの非常に類似するＣＤＲ（例えば、非常に類似するＣＤＲ３）を有する抗体から生成され得る。いくつかの実施形態において、これらの抗体中のそのような配列をアラインメント及び比較して、保存的アミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列中の変化がタンパク質機能を変化させ得るもの）及び／または配列にバリエーションが生じる領域（すなわち、配列のバリエーションがタンパク質機能に大きな影響を与える可能性が低いもの）が特定され得る。あるいは、コンセンサス配列は、同じまたは類似の（例えば、オーバーラップする）エピトープに結合する抗体の重鎖または軽鎖配列（例えば、ＣＤＲ）をアラインメントして、保存的アミノ酸またはモチーフ（すなわち、配列中の変化がタンパク質機能を変化させ得るもの）及び配列のアラインメントにバリエーションが生じる領域（すなわち、配列のバリエーションがタンパク質機能に大きな影響を与える可能性が低いもの）を決定することによって特定することができる。いくつかの実施形態において、１つ以上のコンセンサス配列は、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ１１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｅ２．Ａ３、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５４Ｃ２．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、ＲＳ９．Ｆ６、またはＲＳ９．Ｆ１０）と同じまたは類似のエピトープを認識する抗体について決定され得る。例示的なコンセンサス配列は、配列番号３２０〜３３２を含む。配列番号３２０〜３３２のコンセンサス配列において、大文字は、アラインメントされた配列（例えば、アラインメントされたＣＤＲ配列）のなかで完全に保存されているアミノ酸残基を表し、一方、「Ｘ」は、アラインメントされた配列のなかで絶対的に保存されていないアミノ酸残基を表す。「Ｘ」で示される位置に挿入されるアミノ酸を選択する場合、いくつかの実施形態おいて、アミノ酸は、アラインメントされた配列中の対応する位置にあるアミノ酸から選択されることが理解されよう。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、抗体は、式ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（Ｉ）（配列番号３２０）（式中、Ｘ２はＹまたはＦであり、Ｘ３はＴ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ４はＦ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ５はＴ、Ｓ、またはＫであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ７はＤまたは不在であり、Ｘ８はＨ、Ｙ、またはＴであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、Ｔ、またはＹであり、Ｘ１０はＭ、Ｉ、またはＷであり、Ｘ１１はＨ、Ｑ、またはＮである）を含む、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｈ１）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列は、配列
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を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、式Ｉのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ２はＹであり、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ５はＴまたはＳであり、Ｘ８はＨまたはＹであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、またはＴである。いくつかの実施形態において、Ｘ７は、不在である。いくつかの実施形態において、Ｘ１０はＷであり、Ｘ１１はＮである。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、式Ｉのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ３はＴまたはＮであり、Ｘ７は不在であり、Ｘ１０はＭまたはＩ、Ｘ１１はＨまたはＱである。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、抗体は、ＧＹＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（ＩＩ）（配列番号３２１）（式中、Ｘ３はＴまたはＳであり、Ｘ４はＦ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ５はＴまたはＳであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ７はＤまたは不在であり、Ｘ８はＨまたはＹであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、Ｔ、またはＡであり、Ｘ１０はＭ、Ｉ、またはＷであり、Ｘ１１はＨ、Ｑ、またはＮである）を含むＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列を含む。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、抗体は、式ＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（ＩＩＩ）（配列番号３２２）（式中、Ｘ２はＹまたはＦであり、Ｘ３はＴまたはＮであり、Ｘ４はＦ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ５はＴ、Ｓ、またはＫであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ８はＨ、Ｙ、またはＴであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、Ｔ、Ｙ、またはＡであり、Ｘ１０はＭまたはＩであり、Ｘ１１はＨまたはＱである）を含むＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列を含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、抗体は、式ＧＹＴＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１（ＩＶ）（配列番号３２３）（式中、Ｘ４はＦまたはＬであり、Ｘ５はＴまたはＳであり、Ｘ６はＤ、Ｓ、またはＥであり、Ｘ８はＨ、Ｙであり、Ｘ９はＡ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｗ、Ｔであり、Ｘ１０はＭまたはＩであり、Ｘ１１はＨまたはＱである）を含むＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列を含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ４は、Ｆである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ５は、Ｔである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ４及びＸ５はそれぞれＦ及びＴである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ６は、ＤまたはＳである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ８は、Ｙである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ１０は、Ｍである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ１１は、Ｈである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ１０及びＸ１１はそれぞれＭ及びＨである。いくつかの実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのうちのいずれか１つのＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列において、Ｘ１０及びＸ１１はそれぞれＩ及びＱである。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｖ）（配列番号３２４）（式中、Ｘ１はＤ、Ｖ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ２はＩ、Ｓ、またはＶであり、Ｘ３はＬ、Ｓ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ４はＰ、Ｔ、または不在であり、Ｘ５はＳ、Ｙ、Ｎ、Ｔ、Ａ、Ｇ、またはＦであり、Ｘ６はＩ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ７はＧまたはＤであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ９はＲ、Ｔ、またはＡであり、Ｘ１０はＩ、Ｇ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１２はＧ、Ｎ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＶ、Ｑ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１４はＫまたはＳであり、Ｘ１５はＦ、ＹまたはＬであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、Ｑ、または不在であり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、Ｄ、Ｓ、または不在である）を含む重鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｈ２）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000003
を含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、式Ｖのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ１はＶ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ３はＳ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、Ｇ、またはＦであり、Ｘ６はＳ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ９はＴまたはＡであり、Ｘ１２はＮ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＱ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、Ｄ、またはＳである。いくつかの実施形態において、式Ｖのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ４はＰまたはＴであり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、またはＧであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ１０はＧ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１４はＫであり、Ｘ１５はＦまたはＹであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、またはＤである。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７（ＶＩ）（配列番号３２５）（式中、Ｘ１はＶ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ２はＩ、Ｓ、またはＶであり、Ｘ３はＳ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ４はＰ、Ｔ、または不在であり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、Ｇ、またはＦであり、Ｘ６はＳ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ７はＧまたはＤであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、Ｎ、Ｒ、またはＳであり、Ｘ９はＴ、またはＡであり、Ｘ１０はＩ、Ｇ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＱ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１４はＫまたはＳであり、Ｘ１５はＦ、ＹまたはＬであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、Ｄ、またはＳである）を含むＣＤＲ−Ｈ２コンセンサス配列を含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＸ１２Ｘ１３ＫＸ１５Ｘ１６Ｘ１７（ＶＩＩ）（配列番号３２６）（式中、Ｘ１はＶ、Ｙ、Ｒ、Ｇ、またはＴであり、Ｘ２はＩ、Ｓ、またはＶであり、Ｘ３はＳ、Ｎ、Ｄ、Ｉ、またはＹであり、Ｘ４はＰまたはＴであり、Ｘ５はＹ、Ｎ、Ｔ、Ａ、またはＧであり、Ｘ６はＳ、Ｎ、Ｔ、またはＤであり、Ｘ７はＧまたはＤであり、Ｘ８はＧ、Ｄ、またはＮであり、Ｘ９はＴ、またはＡであり、Ｘ１０はＧ、Ｓ、Ｋ、Ｔ、Ｎ、またはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ｄ、またはＴであり、Ｘ１３はＱ、Ｅ、またはＰであり、Ｘ１５はＦまたはＹであり、Ｘ１６はＫ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ１７はＧ、Ｔ、またはＤである）を含むＣＤＲ−Ｈ２コンセンサス配列を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、抗体は、式ＡＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＡＸ１３ＤＹ（ＶＩＩＩ）（配列番号３２７）（式中、Ｘ３はＧまたはＮであり、Ｘ４はＤまたはＧであり、Ｘ５はＤまたはＩであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＹまたはＴであり、Ｘ８はＲまたはＡであり、Ｘ９はＲまたはＧであり、Ｘ１０はＧまたはＹであり、Ｘ１３はＬまたはＭである）を含む重鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｈ３）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｈ３コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000004
を含む。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１ＳＳＸ４ＳＬＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５ＬＸ１７（ＩＸ）（配列番号３２８）（式中、Ｘ１はＲまたはＫであり、Ｘ４はＱまたはＫであり、Ｘ７はＶまたはＬであり、Ｘ８はＨ、Ｄ、またはＹであり、Ｘ９はＩ、Ｎ、またはＳであり、Ｘ１０はＳまたは不在であり、Ｘ１１はＤまたはＮであり、Ｘ１２はＧまたはＱであり、Ｘ１３はＮ、Ｉ、またはＫであり、Ｘ１４はＴまたはＳであり、Ｘ１５はＹまたはＦであり、Ｘ１７はＱ、Ｈ、Ｙ、Ｎ、またはＡである）を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ−Ｌ１）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ１コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000005
を含む。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ４は、Ｑである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ８は、Ｈである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ９は、ＩまたはＳである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１０は、不在である。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１１は、Ｎである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１２は、Ｇである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１３は、ＮまたはＫである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１４は、Ｔである。いくつかの実施形態において、式ＩＸのＸ１５は、Ｙである。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１ＡＳＸ４Ｘ５ＩＸ７Ｘ８Ｘ９ＬＸ１１（Ｘ）（配列番号３２９）（式中、Ｘ１はＲ、Ｋ、またはＳであり、Ｘ４はＥまたはＱであり、Ｘ５はＮ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ７はＹまたはＳであり、Ｘ８はＳまたはＮであり、Ｘ９はＮ、Ｒ、またはＹであり、Ｘ１１はＡまたはＮである）を含むＣＤＲ−Ｌ１コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ１コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000006
を含む。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１Ｘ２ＳＸ４Ｘ５Ｘ６Ｓ（ＸＩ）（配列番号３３０）（式中、Ｘ１はＫ、Ｑ、Ｙ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ２はＶ、Ｍ、またはＴであり、Ｘ４はＮ、Ｋ、またはＹであり、Ｘ５はＲまたはＬであり、Ｘ６はＦ、Ａ、Ｈ、またはＤである）を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＣＤＲ−Ｌ２）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ２コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000007
を含む。
【０２００】
いくつかの実施形態において、式ＸＩのＸ２は、Ｖである。いくつかの実施形態において、式ＸＩのＸ４は、Ｎである。いくつかの実施形態において、式ＸＩのＸ５は、Ｒである。いくつかの実施形態において、式ＸＩのＸ５は、Ｌである。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、抗体は、式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｔ（ＸＩＩ）（配列番号３３１）（式中、Ｘ１はＳ、Ｗ、またはＱであり、Ｘ２はＱまたはＨであり、Ｘ３はＳ、Ｔ、Ｇ、Ｙ、またはＦであり、Ｘ４はＴ、Ｆ、Ｗ、またはＳであり、Ｘ５はＨ、Ｓ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６はＶ、Ａ、Ｆ、Ｙ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７はＰ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ８はＹ、Ｆ、Ｐ、またはＷである）を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＣＤＲ−Ｌ３）コンセンサス配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ−Ｌ２コンセンサス配列は、配列
2020534277.tif 000008
を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、式ＸＩＩのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ１はＱであり、Ｘ３はＹまたはＦであり、Ｘ４はＦ、Ｗ、またはＳであり、Ｘ５はＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６はＹ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７はＰであり、Ｘ８はＰ、Ｙ、またはＷである。いくつかの実施形態において、式ＸＩＩのＸ２は、Ｑである。いくつかの実施形態において、式ＸＩＩのＸ４は、Ｔである。いくつかの実施形態において、Ｘ５は、Ｈである。いくつかの実施形態において、式ＸＩＩのアミノ酸は、次のように更に定義される：Ｘ１はＳまたはＷであり、Ｘ２はＱであり、Ｘ３はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ４はＴであり、Ｘ５はＨであり、Ｘ６はＶ、Ａ、またはＦであり、Ｘ７はＰ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ８はＹ、Ｆ、またはＰである。いくつかの実施形態において、式ＸＩＩのＸ６は、ＶまたはＦである。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、抗体は、式ＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＰＸ８Ｔ（ＸＩＩＩ）（配列番号３３２）（式中、Ｘ２はＱまたはＨであり、Ｘ３はＹまたはＦであり、Ｘ４はＦ、Ｗ、またはＳであり、Ｘ５はＳ、Ｇ、またはＮであり、Ｘ６はＹ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ８はＰ、Ｙ、またはＷである）を含むＣＤＲ−Ｌ３コンセンサス配列を含む。
【０２０４】
可変領域配列
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、または３１４のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号６、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３０６、または３１４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、または３１８のうちのいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２は、配列番号７、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３１０、または３１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２０９】
ＣＤＲ及び可変領域配列
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含むアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、（ｉ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と同一であるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、
（ａ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの重鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と同一であるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３を含むアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域と、
（ｂ）２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの軽鎖可変領域に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、かつ（ｉｉ）抗体クローンのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と同一であるＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含むアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域と、
を含む。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローン）と競合する抗体である。
【０２１３】
ＲＳ９．Ｆ６及びＲＳ．Ｆ１０
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２または配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８または配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９または配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２または配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。
【０２１４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２１５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３６、３７、１０、１１、３８、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６または配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６または配列番号２４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７または配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７または配列番号３５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８、９、及び１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号１１、１２、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８、９、及び１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号１１、１２、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３６、３７、及び１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号１１、３８、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３６、３７、及び１０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号１１、３８、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号８、９、１０、１１、１２、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体、配列番号３６、３７、１０、１１、３８、及び１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２２７】
２１Ｄ１１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３９、４０、４１、４２、４３、及び４４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３９、４０、及び４１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４２、４３、及び４４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３９、４０、及び４１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号２５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４２、４３、及び４４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号３９、４０、４１、４２、４３、及び４４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２３５】
２１Ｄ４．Ｄ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２３８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号４５、４６、及び４７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４８、４９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１５に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号４５、４６、及び４７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号２６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４８、４９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号４５、４６、４７、４８、４９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２４３】
２６Ｄ２
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５１、５２、５３、５４、５５、及び５６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２４６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２４７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号５１、５２、及び５３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２７に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号５４、５５、及び５６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号５１、５２、及び５３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号２７に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号５４、５５、及び５６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号５１、５２、５３、５４、５５、及び５６のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２５１】
２６Ｅ２．Ａ３及び２４Ｂ４．Ａ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号５７、５８、５９、６０、３８、及び６１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６０、３８、及び６１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１７に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号２８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６０、３８、及び６１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２５８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号５７、５８、５９、６０、３８、及び６１のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２５９】
３Ｄ３．Ａ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号６７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、及び６７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２６２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２９に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号６２、６３、及び６４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２９に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６５、６６、及び６７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号６２、６３、及び６４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号２９に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６５、６６、及び６７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号６２、６３、６４、６５、６６、及び６７のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２６７】
４０Ｈ３．Ａ４
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、及び７３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号６８、６９、及び７０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７１、７２、及び７３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号１９に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号６８、６９、及び７０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７１、７２、及び７３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号６８、６９、７０、７１、７２、及び７３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２７５】
４２Ｅ８．Ｈ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７４、７５、７６、７７、３８、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７４、７５、及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７７、３８、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７４、７５、及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３１に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７７、３８、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号７４、７５、７６、７７、３８、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２８３】
４９Ｈ１１．Ｂ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号７４、７９、７６、７７、３８、及び８０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３２に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３２のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７４、７９、及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３２に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７７、３８、及び８０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２８９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２１に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号７４、７９、及び７６のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３２に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号７７、３８、及び８０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号７４、７９、７６、７７、３８、及び８０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２９１】
５４Ｃ２．Ａ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８１、８２、８３、６０、３８、及び８４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３３に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３３に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８１、８２、及び８３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３３に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６０、３８、及び８４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２２に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８１、８２、及び８３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３３に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号６０、３８、及び８４のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号８１、８２、８３、６０、３８、及び８４のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０２９９】
５７Ｄ７．Ａ１
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号８５、８６、８７、８８、３８、及び８９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３００】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８５、８６、及び８７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３０４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号８８、３８、及び８９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３０５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号２３に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号８５、８６、及び８７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号８８、３８、及び８９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号８５、８６、８７、８８、３８、及び８９のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０３０７】
７Ｂ１０．Ａ２
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、及び３１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１０のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１０に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１０のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０３１１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３０７、３０８、及び３０９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号３１１、３１２、及び３１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３１３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３０６に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３０７、３０８、及び３０９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３１０に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号３１１、３１２、及び３１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３１４】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、及び３１３のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号３０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０３１５】
５１Ｄ４
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号３１７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１５、３１６、３１７、４８、３１９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含む。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含む。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１８に対して、少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％，９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４のアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を更に含む。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１５、３１６、及び３１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４８、３１９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、配列番号３１４に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域を含み、配列番号３１５、３１６、及び３１７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、重鎖ＣＤＲ１〜３を含み、配列番号３１８に対して、少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域を含み、配列番号４８、３１９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む、軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む。
【０３２２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、結合について、本明細書に記載される抗体（例えば、配列番号３１５、３１６、３１７、４８、３１９、及び５０のアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１〜３及び軽鎖ＣＤＲ１〜３を含む、抗体、または配列番号３１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を更に含む、抗体）と競合する抗体である。
【０３２３】
抗体の作製
いくつかの実施形態において、抗体は、１または複数の動物（例えば、マウス、ウサギ、またはラット）を、抗体応答を誘導するための抗原または抗原の混合物で免疫することによって、作製される。いくつかの実施形態において、抗原または抗原の混合物は、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント）と一緒に投与される。初回の免疫付与後、抗体産生を改善するために、１回以上の後続する１つまたは複数の抗原または抗原の追加免疫注射が投与されてもよい。免疫付与に続いて、抗原特異的Ｂ細胞を、例えば、脾臓及び／またはリンパ組織から採取する。モノクローナル抗体を作製するために、Ｂ細胞をミエローマ細胞と融合させ、その後、抗原特異性についてスクリーニングする。抗体を調製する方法は、以下の実施例の項にも記載されている。
【０３２４】
目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞からクローニングすることができ、例えば、モノクローナル抗体をコードする遺伝子は、ハイブリドーマからクローニングし、組み換えモノクローナル抗体の産生のために使用することができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリーは、ハイブリドーマまたは血漿細胞から作製することもできる。あるいは、ファージまたは酵母ディスプレイ技術を使用して、選択した抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂフラグメントを特定することができる。抗体はまた、二重特異性、すなわち、２つの異なる抗原を認識することが可能なように作製することができる。抗体はまた、ヘテロコンジュゲート、例えば、２つの共有結合した抗体、または免疫毒素であり得る。
【０３２５】
抗体は、原核生物及び真核生物の発現系を含む、任意の数の発現系を使用して産生され得る。いくつかの実施形態において、発現系は、ハイブリドーマなどの哺乳類細胞発現、またはＣＨＯ細胞発現系である。そのような系の多くは、市販の業者から広く入手可能である。抗体がＶＨ及びＶＬ領域の両方を含む実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、単一ベクターを使用して、例えば、ジシストロニック発現単位で、または異なるプロモーターの制御下で発現され得る。他の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載されるＶＨまたはＶＬ領域は、任意でＮ末端にメチオニンを含み得る。
【０３２６】
いくつかの実施形態において、抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野において知られている。例えば、マウスなどの１つの種に由来する抗原結合領域（重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）がヒトなどの別の種のエフェクター領域（定常ドメイン）に融合したキメラ抗体を作製することができる。別の例として、抗体のエフェクター領域を、異なる免疫グロブリンクラスまたはサブクラスのエフェクター領域で置換した「クラススイッチ」キメラ抗体を作製することができる。
【０３２７】
いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。一般に、非ヒト抗体は、その免疫原性を低減するためにヒト化される。ヒト化抗体は、典型的に、非ヒトである（例えば、マウス可変領域配列に由来する）１つ以上の可変領域（例えば、ＣＤＲ）またはその部分と、場合により、非ヒトであるいくつかのフレームワーク領域またはその部分とを含み、ヒト抗体配列に由来する１つ以上の定常領域を更に含む。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野において知られている。トランスジェニックマウス、または他の哺乳類などの他の生物を使用して、ヒト化抗体またはヒト抗体を発現させることができる。抗体をヒト化する他の方法としては、例えば、可変ドメインリサーフェーシング、ＣＤＲグラフティング、特異性決定残基（ＳＤＲ）グラフティング、ガイド選択、及びフレームワークシャフリングが挙げられる。
【０３２８】
ヒト化に代わるものとして、完全ヒト抗体を生成することができる。非限定的な例として、免疫化した際に、内因性免疫グロブリンの産生がない状態でヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することができる。例えば、内因性抗体産生は、キメラ及び生殖系列変異体マウスで抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子をホモ接合欠失させることにより、完全に阻害できることが記載されている。そのような生殖系列変異マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移入すると、抗原刺激に際してヒト抗体が産生される。別の例として、ヒト抗体は、初代ヒトＢ細胞を使用してヒトモノクローナル抗体を産生する細胞株を作製することなどによる、ハイブリドーマに基づく方法によって産生することができる。
【０３２９】
ヒト抗体は、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイ技術を使用して産生することもできる。ファージディスプレイにおいて、可変重鎖及び可変軽鎖遺伝子のレパートリーは、ファージディスプレイベクターで増幅及び発現される。いくつかの実施形態において、抗体ライブラリーは、ヒト供給源から増幅された天然レパートリーである。いくつかの実施形態において、抗体ライブラリーは、重鎖及び軽鎖配列をクローニングし、組み換えて、異なる抗原特異性を有する抗体の大きなプールを作製することによって作られた合成ライブラリーである。ファージは、典型的に、抗体フラグメント（例えば、ＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖフラグメント）を提示し、次いで、これを、目的の抗原への結合についてスクリーニングする。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＶＨ、またはＶＨＨなど）が生成される。抗体フラグメントを作製するための技術は、様々なものが開発されている。従来、これらのフラグメントは、インタクト抗体のタンパク質分解消化によって得られていた。しかしながら、これらのフラグメントは、現在、組み換え宿主細胞を使用して、直接作製することができる。例えば、抗体フラグメントは、抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞から直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる別のアプローチでは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組み換え宿主細胞の培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントを作製するための他の技術は、当業者には明白であろう。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、抗体または抗体フラグメントは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期を延長するために、別の分子、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ化）または血清アルブミンに結合される。
【０３３２】
多重特異性抗体
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体（またはその抗原結合部分）を含む多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体が提供される。抗体多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有する抗体である。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、ＴＲＥＭ２に対する結合特異性を有し、少なくとも１つの他の抗原に対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、２つの異なるＴＲＥＭ２エピトープに結合する。いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）は、細胞表面におけるＴＲＥＭ２クラスタリングを誘導することが可能である。共焦点ＦＲＥＴ顕微鏡法を使用して受容体クラスタリングを測定するための例示的な方法は、Ｗａｌｌｒａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２００３，８５：５５９−５７１に記載されている。
【０３３３】
多重特異性抗体を作製するための方法としては、重鎖と軽鎖の２つのペアの宿主細胞における組み換え共発現、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」エンジニアリング、分子内三量体化、及び別の抗体のＮ末端またはＣ末端への抗体フラグメントの融合、例えば、タンデム可変ドメインが含まれるが、これらに限定されない。
【０３３４】
核酸、ベクター、及び宿主細胞
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体は、組み換え法を使用して調製される。したがって、いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体のいずれか（例えば、本明細書に記載されるＣＤＲ、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のうちのいずれか１つ以上）をコードする核酸配列を含む単離された核酸、そのような核酸を含むベクター、及び核酸が導入され、核酸をコードする抗体の複製及び／または抗体の発現のために使用される宿主細胞を提供する。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分（例えば、「抗ＴＲＥＭ２抗体配列」と題する上記セクションに記載されているもの）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、２Ｇ４．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、７Ｂ１０．Ａ２、８Ａ１１．Ｂ１、１３Ｂ１１．Ａ１、１４Ｄ５．Ｆ１、１４Ｈ１１．Ａ１、１９Ｆ１０．Ｆ３、２１Ｄ４．Ｄ１、２１Ｄ６．Ｇ２、２１Ｄ１１、２２Ｂ８．Ｂ１、２２Ｇ９．Ｄ１、２４Ｂ４．Ａ１、２６Ｄ２．Ｄ１、２６Ｄ５．Ａ１、２６Ｄ１１．Ｂ１、２６Ｅ２．Ａ３、３０Ａ８．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、３８Ｅ９．Ｅ５、３９Ｈ１０．Ａ１、４０Ｈ３．Ａ４、４２Ｅ８．Ｈ１、４３Ｅ９．Ｈ１、４４Ｅ２．Ｈ１、４４Ｅ３．Ｂ１、４９Ｈ１１．Ｂ１、５１Ｄ４、５２Ｈ９．Ｄ１、５３Ｈ１１．Ｄ３、５４Ｃ２．Ａ１、５５Ｂ９．Ａ１、５７Ｄ７．Ａ１、５９Ｃ６．Ｆ１、６０Ａ４．Ｂ１、ＲＳ９．Ｅ２、ＲＳ９．Ｆ６、ＲＳ９．Ｆ１０、ＲＳ１１．１Ｆ５、ＲＳ１１．１Ｇ６、ＲＳ１１．１Ａ１０、ＲＳ１１．１Ｄ１１、ＲＳ１１．４Ａ５、ＲＳ１１．４Ｈ６、ＲＳ１１．４Ｄ７、ＲＳ１１．４Ｄ９、ＲＳ１１．４Ｆ１１、ＲＳ１２．１Ｃ６、ＲＳ１２．１Ｃ１０、ＲＳ１２．２Ｄ１、ＲＳ１２．２Ｄ４、ＲＳ１２．２Ｅ１、ＲＳ１２．２Ｆ２、ＲＳ１２．２Ｇ１、ＲＳ１２．２Ｈ１、及びＲＳ１２．３Ｃ１０からなる群から選択される抗体クローンの配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、及び／またはフレームワーク領域配列）と同一である１つ以上のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ、重鎖、軽鎖、及び／またはフレームワーク領域）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、異種核酸、例えば、異種プロモーターに作動可能に連結される。
【０３３６】
本開示の抗体、またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含有する好適なベクターには、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。選択されるクローニングベクターは、使用予定の宿主細胞に応じて変わり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製能を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼの標的を１つ有し得、及び／またはベクターを含有するクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を保持し得る。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ  ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８などのシャトルベクターが挙げられる。これらのクローニングベクター及び多くの他のクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【０３３７】
発現ベクターは、一般に、本開示の核酸を含有する複製可能なポリヌクレオチドコンストラクトである。発現ベクターは、エピソームまたは染色体ＤＮＡの構成部分のいずれかとして、宿主細胞内で複製することができる。好適な発現ベクターとしては、プラスミド、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスのベクター、及び任意の他のベクターが含まれるが、これらに限定されない。
【０３３８】
本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたはベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、原核生物または真核細胞が含まれる。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、原核生物細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、真核生物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞である。
【０３３９】
別の態様において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載される宿主細胞（例えば、本明細書に記載されるポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を抗体の発現に好適な条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、その後、宿主細胞（または宿主細胞の培養培地）から回収される。
【０３４０】
ＩＶ．血液脳関門（ＢＢＢ）受容体結合のためのＦＣポリペプチド修飾
いくつかの態様において、本明細書で提供されるのは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して輸送可能な抗ＴＲＥＭ２抗体である。そのようなタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮細胞だけでなく、他の種類の細胞及び組織にも発現する。いくつかの実施形態において、ＢＢＢ受容体は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）である。
【０３４１】
ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドに導入されるものを含む、様々なＦｃ修飾に関して指定されるアミノ酸残基は、本明細書において、ＥＵインデックスナンバリングを使用してナンバリングされる。任意のＦｃポリペプチド、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチドは、本明細書に記載される１つ以上の位置に、修飾、例えば、アミノ酸置換を有し得る。
【０３４２】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、第１のＦｃポリペプチドと、任意で第２のＦｃポリペプチドとを含み、そのそれぞれは、独立して修飾され得る。いくつかの実施形態において、第１及び／または第２のＦｃポリペプチドになされる修飾（例えば、ＴｆＲ結合を促進するもの）により、抗体（またはその抗原結合部分）の脳の取り込みが、修飾されていない取り込みと比較して、少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、２０倍以上増加する。
【０３４３】
修飾された（例えば、ヘテロ二量体化及び／またはＢＢＢ受容体結合を向上させた）Ｆｃポリペプチドは、ネイティブＦｃ領域配列またはその断片、例えば、少なくとも５０アミノ酸長もしくは少なくとも１００アミノ酸長以上のフラグメントに対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、ネイティブＦｃアミノ酸配列は、配列番号９８のＦｃ領域配列である。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号９８のアミノ酸１〜１１０に対して、もしくは配列番号９８のアミノ酸１１１〜２１７に対して、またはその断片、例えば、少なくとも５０アミノ酸長もしくは少なくとも１００アミノ酸長以上のフラグメントに対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ヘテロ二量体化及び／またはＢＢＢ受容体結合を向上させた）Ｆｃポリペプチドは、ネイティブＦｃ領域アミノ酸配列に対応する少なくとも５０アミノ酸、もしくは少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、もしくは９５以上、または少なくとも１００アミノ酸以上を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号９８などのネイティブＦｃ領域のアミノ酸配列に対応する少なくとも２５の連続するアミノ酸または少なくとも３０、３５、４０、もしくは４５の連続するアミノ酸、または５０の連続するアミノ酸、または少なくとも６０、６５、７０、７５、８０  ８５、９０、もしくは９５以上の連続するアミノ酸、または１００以上の連続するアミノ酸を含む。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、ＢＢＢ受容体結合活性に関して修飾されるドメインは、ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインなどのヒトＩｇ  ＣＨ３ドメインである。ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであってよい。ＩｇＧ１抗体との関係においては、ＣＨ３ドメインは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置３４１前後〜位置４４７前後のアミノ酸のセグメントを指す。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、ＢＢＢ受容体結合活性に関して修飾されるドメインは、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインなどのヒトＩｇ  ＣＨ２ドメインである。ＣＨ２ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであってよい。ＩｇＧ１抗体との関係においては、ＣＨ２ドメインは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置２３１前後〜位置３４０前後のアミノ酸のセグメントを指す。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８、及び２９９を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０の置換を含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、及び２９０を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、７、８、または９つの置換を含む。
【０３４９】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、２９６、及び３００を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０の置換を含む。
【０３５０】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、７、８、または９つの置換を含む。
【０３５１】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、または７つの置換を含む。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態において、ＥＵナンバリングスキームに従って、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１を含むアミノ酸位置に、少なくとも４、５、６、７、８、または９つの置換を含む。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、２つのＦｃポリペプチドを含み、Ｆｃポリペプチドの一方は、ＢＢＢ受容体（例えば、ＴｆＲ）に結合するように修飾されず、Ｆｃポリペプチドのもう一方は、ＢＢＢ受容体（例えば、ＴｆＲ）に特異的に結合するように修飾される。
【０３５４】
ＦｃＲｎ結合部位
ある特定の態様において、修飾された（例えば、ＢＢＢ受容体結合）Ｆｃポリペプチド、またはＢＢＢ受容体に特異的に結合しないＦｃポリペプチドは、ＦｃＲｎ結合部位も含み得る。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、Ｆｃポリペプチドまたはその断片内にある。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、ネイティブＦｃＲｎ結合部位を含む。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、ネイティブＦｃＲｎ結合部位のアミノ酸配列を基準として、アミノ酸変化を含まない。いくつかの実施形態において、ネイティブＦｃＲｎ結合部位は、ＩｇＧ結合部位、例えば、ヒトＩｇＧ結合部位である。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、ＦｃＲｎ結合を変更する修飾を含む。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、１つ以上のＦｃポリペプチド（例えば、第１のＦｃポリペプチド、第２のＦｃポリペプチド、または第１及び第２のＦｃポリペプチド）は、ＦｃＲｎ結合に影響する（例えば、増加させる）修飾を含有する。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、変異された、例えば、置換された１つ以上のアミノ酸残基を有し、ここで、変異（複数可）は、血清中半減期を延長させるか、または血清中半減期を実質的に低下させない（すなわち、同じ条件下でアッセイしたとき、血清中半減期の低下が、変異位置に野生型残基を有する同等の修飾Ｆｃポリペプチドと比較して２５％以下である）ものである。いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位は、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２５１〜２５６、４２８、及び４３３〜４３６に、置換された１つ以上のアミノ酸残基を有する。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、ＦｃＲｎ結合部位の残基またはその前後の残基の１つ以上は、修飾されたポリペプチドの血清中半減期を延長させるために、ネイティブヒトＩｇＧ配列を基準として、変異される。いくつかの実施形態において、変異、例えば、置換は、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２４４〜２５７、２７９〜２８４、３０７〜３１７、３８３〜３９０、及び４２８〜４３５のうちの１つ以上に導入される。いくつかの実施形態において、１つ以上の変異は、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３８５、３８６、３８７、３８９、４２８、４３３、４３４、または４３６に導入される。いくつかの実施形態において、変異は、位置２５２、２５４、及び２５６のうちの１つ、２つ、または３つに導入される。いくつかの実施形態において、変異は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、変異Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅを更に含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置Ｔ３０７、Ｅ３８０、及びＮ４３４のうちの１つ、２つ、または３つ全てに変異を含む。いくつかの実施形態において、変異は、Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ａである。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、変異Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０Ａ、及びＮ４３４Ａを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置Ｔ２５０及びＭ４２８に変異を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、変異Ｔ２５０Ｑ及び／またはＭ４２８Ｌを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置Ｍ４２８及びＮ４３４に変異を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａの変異を含む。
【０３５８】
トランスフェリン受容体結合Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施形態において、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合し、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過して輸送可能な修飾Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ３ドメイン中に置換を含む。いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ２ドメイン中に置換を含む。
【０３５９】
ＣＨ３ドメイン中に変異を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ３ドメイン中に置換を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ  ＣＨ３ドメインなどのヒトＩｇ  ＣＨ３ドメインを含み、当該ドメインがＴｆＲ結合活性について修飾される。ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであってよい。ＩｇＧ抗体との関係においては、ＣＨ３ドメインは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置３４１前後〜位置４４７前後のアミノ酸のセグメントを指す。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲのアピカルドメインに結合し、トランスフェリンのＴｆＲへの結合を遮断または別様に阻害することなく、ＴｆＲに結合し得る。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、実質的に阻害されない。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合阻害は、約５０％未満（例えば、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）である。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合阻害は、約２０％未満（例えば、約１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満）である。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、または９つの置換を含む。これらの位置に導入され得る例示的な置換は、表１１及び１２に示される。いくつかの実施形態において、位置３８８及び／または４２１のアミノ酸は、芳香族アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒである。いくつかの実施形態において、位置３８８のアミノ酸は、Ｔｒｐである。いくつかの実施形態において、位置４２１の芳香族アミノ酸は、ＴｒｐまたはＰｈｅである。
【０３６２】
いくつかの実施形態において、次のように、少なくとも１つの位置が置換される：位置３８４にＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、もしくはＶａｌ；位置３８６にＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ；位置３８７にＶａｌ、Ｐｒｏ、もしくは酸性アミノ酸；位置３８８に芳香族アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ；位置３８９にＶａｌ、Ｓｅｒ、もしくはＡｌａ；位置４１３に酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、もしくはＰｒｏ；位置４１６にＴｈｒもしくは酸性アミノ酸；または位置４２１にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｈｅ。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。したがって、例えば、位置３８４、３８６、及び／または位置４１３には、Ｉｌｅが存在し得る。いくつかの実施形態において、位置３８７、４１３、及び４１６の１つ、２つ、またはそれぞれの位置の酸性アミノ酸は、Ｇｌｕである。他の実施形態において、位置３８７、４１３、及び４１６の１つ、２つ、またはそれぞれの酸性アミノ酸は、Ａｓｐである。いくつかの実施形態において、位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１６、及び４２１の２、３、４、５、６、７、または８つ全ては、本段落に指定されるアミノ酸置換を有する。
【０３６３】
いくつかの実施形態において、前述の２つの段落に記載されるように修飾されるＦｃポリペプチドは、位置３９０にネイティブＡｓｎを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３９０にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｓｐを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、３８０、３９１、３９２、及び４１５を含む位置に、１、２、３、または４つの置換を更に含む。いくつかの実施形態において、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎは、位置３８０に存在し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅは、位置３９１に存在し得る。いくつかの実施形態において、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓは、位置３９２に存在し得る。いくつかの実施形態において、Ｇｌｕは、位置４１５に存在し得る。
【０３６４】
ある特定の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１の位置を含む：位置３８０にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、位置３８４にＴｙｒまたはＰｈｅ、位置３８６にＴｈｒ、位置３８７にＧｌｕ、位置３８８にＴｒｐ、位置３８９にＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎ、位置３９０にＳｅｒまたはＡｓｎ、位置４１３にＴｈｒまたはＳｅｒ、位置４１５にＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６にＧｌｕ、及び／または位置４２１にＰｈｅ。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の１１の位置を全て含む：位置３８０にＴｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、位置３８４にＴｙｒまたはＰｈｅ、位置３８６にＴｈｒ、位置３８７にＧｌｕ、位置３８８にＴｒｐ、位置３８９にＳｅｒ、Ａｌａ、Ｖａｌ、またはＡｓｎ、位置３９０にＳｅｒまたはＡｓｎ、位置４１３にＴｈｒまたはＳｅｒ、位置４１５にＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６にＧｌｕ、及び／または位置４２１にＰｈｅ。
【０３６５】
ある特定の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８４にＬｅｕもしくはＭｅｔ、位置３８６にＬｅｕ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、位置３８７にＶａｌ、位置３８８にＴｒｐ、位置３８９にＶａｌもしくはＡｌａ、位置４１３にＰｒｏ、位置４１６にＴｈｒ、及び／または位置４２１にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３９１にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅを更に含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８０にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または位置３９２にＧｌｎ、Ｐｈｅ、もしくはＨｉｓを更に含む。いくつかの実施形態において、Ｔｒｐは位置３８０に位置し、及び／またはＧｌｎは位置３９２に位置する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８０にＴｒｐを有さない。
【０３６６】
他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８４にＴｙｒ、位置３８６にＴｈｒ、位置３８７にＧｌｕもしくはＶａｌ、位置３８８にＴｒｐ、位置３８９にＳｅｒ、位置４１３にＳｅｒもしくはＴｈｒ、位置４１６にＧｌｕ、及び／または位置４２１にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３９０にネイティブＡｓｎを含む。ある特定の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８０にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または位置４１５にＧｌｕを更に含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置３８０にＴｒｐ及び／または位置４１５にＧｌｕを更に含む。
【０３６７】
追加の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、４１４、４２４、及び４２６を含む位置に、１つ、２つ、または３つの置換を更に含む。いくつかの実施形態において、位置４１４はＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、もしくはＰｒｏであり、位置４２４はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、もしくはＬｙｓであり、及び／または位置４２６はＳｅｒ、Ｔｒｐ、もしくはＧｌｙである。
【０３６８】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の置換のうちの１つ以上を含む：ＥＵナンバリングスキームに従って、位置３８０にＴｒｐ、位置３８６にＴｈｒ、位置３８８にＴｒｐ、位置３８９にＶａｌ、位置４１３にＴｈｒもしくはＳｅｒ、位置４１５にＧｌｕ、及び／または位置４２１にＰｈｅ。
【０３６９】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つのアミノ酸１１１〜２１７に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つに対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つのＥＵインデックス位置３８４〜３９０及び／または４１３〜４２１にアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つのＥＵインデックス位置３８０〜３９０及び／または４１３〜４２１にアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つのＥＵインデックス位置３８０〜３９２及び／または４１３〜４２６にアミノ酸を含む。
【０３７０】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１８５、２１９〜２９８、または３３７〜４６０（例えば、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０）のうちのいずれか１つに対して、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し、ＥＵインデックスに従ってナンバリングされた次の位置のうちの少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６の位置を更に含む：位置３８０にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕ、位置３８４にＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、またはＶａｌ、位置３８６にＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、またはＰｒｏ、位置３８７にＶａｌ、Ｐｒｏ、または酸性アミノ酸、位置３８８に芳香族アミノ酸、例えば、Ｔｒｐ、位置３８９にＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＡｌａ、位置３９０にＳｅｒまたはＡｓｎ、位置３９１にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅ、位置３９２にＧｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓ、位置４１３に酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、またはＰｒｏ、位置４１４にＬｙｓ、Ａｒｇ、ＧｌｙまたはＰｒｏ、位置４１５にＧｌｕまたはＳｅｒ、位置４１６にＴｈｒまたは酸性アミノ酸、位置４２１にＴｒｐ、Ｔｙｒ、ＨｉｓまたはＰｈｅ、位置４２４にＳｅｒ、Ｔｈｒ、ＧｌｕまたはＬｙｓ、及び位置４２６にＳｅｒ、Ｔｒｐ、またはＧｌｙ。
【０３７１】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１００〜１３６または３３７〜３５０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０３７２】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、以下のセクションＩＶに記載される変異などの追加の変異を含み、これらには、限定するものではないが、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、及び／または血清中安定性を高める変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、またはＮ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））が含まれる。例示として、配列番号２２７〜２９８及び３５１〜４６０は、これらの追加の変異のうちの１つ以上を含む、ＣＨ３ドメイン（例えば、クローンＣＨ３Ｃ．３５．２０．１、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．２、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．３、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．４、ＣＨ３Ｃ．３５．２１．１７．２、ＣＨ３Ｃ．３５．２３、ＣＨ３Ｃ．３５．２１、ＣＨ３Ｃ．３５．２０．１．１、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．２．１、及びＣＨ３Ｃ．３５．２３．１．１）中に変異を有する修飾Ｆｃポリペプチドの非限定的な例を提供する。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）を含み、配列番号２２７、２３９、２５１、２６３、２７５、２８７、３５５、３６７、及び３７９のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２２７、２３９、２５１、２６３、２７５、２８７、３５５、３６７、及び３７９のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））を含み、配列番号２２８、２２９、２４０、２４１、２５２、２５３、２６４、２６５、２７６、２７７、２８８、２８９、３５１、３５６、３５７、３６８、３６９、３８０、及び３８１のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２２８、２２９、２４０、２４１、２５２、２５３、２６４、２６５、２７６、２７７、２８８、２８９、３５１、３５６、３５７、３６８、３６９、３８０、及び３８１のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、血清中安定性を高める変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、またはＮ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを含み、配列番号２３０、２４２、２５４、２６６、２７８、２９０、３５８、３７０、３８２、３９２、３９９、４０６、４１３、４２０、４２７、４３４、４４１、４４８、及び４５５のいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３０、２４２、２５４、２６６、２７８、２９０、３５８、３７０、３８２、３９２、３９９、４０６、４１３、４２０、４２７、４３４、４４１、４４８、及び４５５のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））と、血清中安定性を高める変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、またはＮ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを含み、配列番号２３１、２３２、２４３、２４４、２５５、２５６、２６７、２６８、２７９、２８０、２９１、２９２、３５２、３５９、３６０、３７１、３７２、３８３、３８４、３９３、３９４、４００、４０１、４０７、４０８、４１４、４１５、４２１、４２２、４２８、４２９、４３５、４３６、４４２、４４３、４４９、４５０、４５６、及び４５７のいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３１、２３２、２４３、２４４、２５５、２５６、２６７、２６８、２７９、２８０、２９１、２９２、３５２、３５９、３６０、３７１、３７２、３８３、３８４、３９３、３９４、４００、４０１、４０７、４０８、４１４、４１５、４２１、４２２、４２８、４２９、４３５、４３６、４４２、４４３、４４９、４５０、４５６、及び４５７のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を含み、配列番号２３３、２４５、２５７、２６９、２８１、２９３、３６１、３７３、及び３８５のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３３、２４５、２５７、２６９、２８１、２９３、３６１、３７３、及び３８５のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７８】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））とを含み、配列番号２３４、２３５、２４６、２４７、２５８、２５９、２７０、２７１、２８２、２８３、２９４、２９５、３５３、３６２、３６３、３７４、３７５、３８６、及び３８７のいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３４、２３５、２４６、２４７、２５８、２５９、２７０、２７１、２８２、２８３、２９４、２９５、３５３、３６２、３６３、３７４、３７５、３８６、及び３８７のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３７９】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、血清中安定性を高める変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、またはＮ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを含み、配列番号２３６、２４８、２６０、２７２、２８４、２９６、３６４、３７６、３８８、３９５、４０２、４０９、４１６、４２３、４３０、４３７、４４４、４５１、及び４５８のいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３６、２４８、２６０、２７２、２８４、２９６、３６４、３７６、３８８、３９５、４０２、４０９、４１６、４２３、４３０、４３７、４４４、４５１、及び４５８のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））と、血清中安定性を高める変異（例えば、ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、またはＮ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを含み、配列番号２３７、２３８、２４９、２５０、２６１、２６２、２７３、２７４、２８５、２８６、２９７、２９８、３５４、３６５、３６６、３７７、３７８、３８９、３９０、３９６、３９７、４０３、４０４、４１０、４１１、４１７、４１８、４２４、４２５、４３１、４３２、４３８、４３９、４４５、４４６、４５２、４５３、４５９、及び４６０のいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２３７、２３８、２４９、２５０、２６１、２６２、２７３、２７４、２８５、２８６、２９７、２９８、３５４、３６５、３６６、３７７、３７８、３８９、３９０、３９６、３９７、４０３、４０４、４１０、４１１、４１７、４１８、４２４、４２５、４３１、４３２、４３８、４３９、４４５、４４６、４５２、４５３、４５９、及び４６０のうちのいずれか１つの配列を含む。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０に、少なくとも２、３、４、５、６、７、または８つの置換を含む。例示的な修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１８６〜１９０に提供される。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置４３７にＧｌｙ、位置４３８にＰｈｅ及び／または位置４４０にＡｓｐを含む。いくつかの実施形態において、Ｇｌｕは、位置４４０に存在する。ある特定の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の位置に、少なくとも１つの置換を含む：位置３４５にＰｈｅもしくはＩｌｅ、位置３４６にＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、もしくはＬｙｓ、位置３４７にＴｙｒ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、もしくはＡｓｐ、位置３４９にＴｈｒもしくはＡｌａ、位置４３７にＧｌｙ、位置４３８にＰｈｅ、位置４３９にＨｉｓ  Ｔｙｒ、Ｓｅｒ、もしくはＰｈｅ、または位置４４０にＡｓｐ。いくつかの実施形態において、位置３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０の２、３、４、５、６、７、または８つ全ては、本段落に指定される置換を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１８６〜１９０のうちのいずれか１つのアミノ酸１１１〜２１７に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１８６〜１９０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１８６〜１９０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１８６〜１９０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０３８３】
ＣＨ２ドメイン中に変異を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＣＨ２ドメイン中に置換を含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ  ＣＨ２ドメインなどのヒトＩｇ  ＣＨ２ドメインを含み、当該ドメインがＴｆＲ結合活性について修飾される。ＣＨ２ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであってよい。ＩｇＧ抗体との関係においては、ＣＨ２ドメインは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置２３１前後〜位置３４０前後のアミノ酸のセグメントを指す。
【０３８４】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲのアピカルドメインに結合し、トランスフェリンのＴｆＲへの結合を遮断または別様に阻害することなく、ＴｆＲに結合し得る。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、実質的に阻害されない。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合阻害は、約５０％未満（例えば、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）である。いくつかの実施形態において、トランスフェリンのＴｆＲへの結合阻害は、約２０％未満（例えば、約１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％未満）である。
【０３８５】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、及び２９０に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、または９つの置換を含む。例示的な修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９１〜１９５に提供される。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２８７にＧｌｕ及び／または位置２８８にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の位置に、少なくとも１つの置換を含む：位置２７４にＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、もしくはＴｒｐａｔ、位置２７６にＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、もしくはＴｙｒａｔ、位置２８３にＡｓｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ａｓｎ、もしくはＰｈｅａｔ、位置２８５にＡｒｇ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、もしくはＧｌｙａｔ、位置２８６にＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、もしくはＶａｌａｔ、位置２８７にＧｌｕａｔ、位置２８８にＴｒｐもしくはＴｙｒａｔ、位置２８９にＧｌｎ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、もしくはＡｓｐａｔ、または位置２９０にＬｅｕ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｔｙｒ、もしくはＶａｌ。いくつかの実施形態において、位置２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、及び２９０の２、３、４、５、６、７、８、または９つ全ては、本段落に指定される置換を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。
【０３８６】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２７４にＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｎ、もしくはＴｙｒ、位置２７６にＩｌｅ、Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、もしくはＴｙｒ、位置２８３にＡｓｐ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、もしくはＡｓｎ、位置２８５にＡｒｇ、Ｓｅｒ、もしくはＡｌａ、位置２８６にＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、もしくはＶａｌ、位置２８７にＧｌｕ、位置２８８にＴｒｐ、位置２８９にＧｌｎ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、もしくはＶａｌ、及び／または位置２９０にＬｅｕ、Ｔｒｐ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、もしくはＴｙｒを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２８５にＡｒｇ、位置２８６にＴｙｒもしくはＴｒｐ、位置２８７にＧｌｕ、位置２８８にＴｒｐ、及び／または位置２９０にＡｒｇもしくはＴｒｐを含む。
【０３８７】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９１〜１９５のうちのいずれか１つのアミノ酸１〜１１０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９１〜１９５に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９１〜１９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９１〜１９５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０３８８】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８、及び２９９に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の置換を含む。例示的な修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９６〜２００に提供される。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２７０にＰｒｏ、位置２９５にＧｌｕ、及び／または位置２９７にＴｙｒを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の位置に、少なくとも１つの置換を含む：位置２６６にＰｒｏ、Ｐｈｅ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、もしくはＡｓｐ、位置２６７にＧｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、もしくはＴｙｒ、位置２６８にＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、もしくはＬｅｕ、位置２６９にＰｒｏ、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、もしくはＡｓｐ、位置２７０にＰｒｏ、Ｖａｌ、もしくはＰｈｅ、位置２７１にＴｒｐ、Ｇｌｎ、Ｔｈｒ、もしくはＧｌｕ、位置２９５にＧｌｕ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、もしくはＴｒｐ、位置２９７にＴｙｒ、Ｈｉｓ、Ｖａｌ、もしくはＡｓｐ、位置２９８にＴｈｒ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、もしくはＶａｌ、または位置２９９．Ｔｙｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、もしくはＰｒｏ。いくつかの実施形態において、位置２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８、及び２９９の２、３、４、５、６、７、８、９、または１０全ては、本段落に指定される置換を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２６６にＰｒｏ、Ｐｈｅ、もしくはＡｌａ、位置２６７にＧｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、もしくはＩｌｅ、位置２６８にＴｈｒ、Ｓｅｒ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、もしくはＴｒｐ、位置２６９にＰｒｏ、Ｖａｌ、もしくはＡｌａ、位置２７０にＰｒｏ、位置２７１にＴｒｐもしくはＧｌｎ、位置２９５にＧｌｕ、位置２９７にＴｙｒ、位置２９８にＴｈｒ、Ｈｉｓ、もしくはＧｌｎ、及び／または位置２９９にＴｙｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、もしくはＳｅｒを含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２６６にＭｅｔ、位置２６７にＬｅｕもしくはＧｌｕ、位置２６８にＴｒｐ、位置２６９にＰｒｏ、位置２７０にＶａｌ、位置２７１にＴｈｒ、位置２９５にＶａｌもしくはＴｈｒ、位置１９７にＨｉｓ、位置１９８にＨｉｓ、Ａｒｇ、もしくはＡｓｎ、及び／または位置２９９にＰｒｏを含む。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２６６にＡｓｐ、位置２６７にＡｓｐ、位置２６８にＬｅｕ、位置２６９にＴｈｒ、位置２７０にＰｈｅ、位置２７１にＧｌｎ、位置２９５にＶａｌもしくはＬｅｕ、位置２９７にＶａｌ、位置２９８にＴｈｒ、及び／または位置２９９にＰｒｏを含む。
【０３９２】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９６〜２００のうちのいずれか１つのアミノ酸１〜１１０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９６〜２００に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９６〜２００のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号１９６〜２００のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、及び３００に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の置換を含む。例示的な修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０１〜２０５に提供される。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の位置に、少なくとも１つの置換を含む：位置２６８にＶａｌもしくはＡｓｐ、位置２６９にＰｒｏ、Ｍｅｔ、もしくはＡｓｐ、位置２７０にＰｒｏもしくはＴｒｐ、位置２７１にＡｒｇ、Ｔｒｐ、Ｇｌｕ、もしくはＴｈｒ、位置２７２にＭｅｔ、Ｔｙｒ、もしくはＴｒｐ、位置２９２にＬｅｕもしくはＴｒｐ、位置２９３にＴｈｒ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｙｓ、位置２９４にＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｌａ、もしくはＬｅｕ、位置２９６にＨｉｓ、Ｌｅｕ、もしくはＰｒｏ、または位置３００にＶａｌもしくはＴｒｐ。いくつかの実施形態において、位置２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、及び３００の２、３、４、５、６、７、８、９、または１０全ては、本段落に指定される置換を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２６８にＶａｌ、位置２６９にＰｒｏ、位置２７０にＰｒｏ、位置２７１にＡｒｇもしくはＴｒｐ、位置２７２にＭｅｔ、位置２９２にＬｅｕ、位置２９３にＴｈｒ、位置２９４にＳｅｒ、位置２９６にＨｉｓ、及び／または位置３００にＶａｌを含む。
【０３９５】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２６８にＡｓｐ、位置２６９にＭｅｔもしくはＡｓｐ、位置２７０にＴｒｐ、位置２７１にＧｌｕもしくはＴｈｒ、位置２７２にＴｙｒもしくはＴｒｐ、位置２９２にＴｒｐ、位置２９３にＶａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＬｙｓ、位置２９４にＬｙｓ、Ａｌａ、もしくはＬｅｕ、位置２９６にＬｅｕもしくはＰｒｏ、及び／または位置３００にＴｒｐを含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０１〜２０５のうちのいずれか１つのアミノ酸１〜１１０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０１〜２０５に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０１〜２０５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０１〜２０５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の置換を有する。例示的な修飾されたポリペプチドは、位置３３０にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次の位置に、少なくとも１つの置換を含む：位置２７２にＴｒｐ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、もしくはＡｌａ、位置２７４にＴｒｐもしくはＧｌｙ、位置２７６にＴｙｒ、Ａｒｇ、もしくはＧｌｕ、位置３２２にＳｅｒ、Ａｒｇ、もしくはＧｌｎ、位置３２４にＶａｌ、Ｓｅｒ、もしくはＰｈｅ、位置３２６にＩｌｅ、Ｓｅｒ、もしくはＴｒｐ、位置３２９にＴｒｐ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、もしくはＡｓｐ、位置３３０にＴｒｐ、または位置３３１にＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、もしくはＶａｌ。いくつかの実施形態において、位置２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１の２、３、４、５、６、７、８、または９つ全ては、本段落に指定される置換を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、保存的置換、例えば、当該セットの位置のうちの１つ以上の特定のアミノ酸に、同じ荷電群、疎水性群、側鎖環状構造群（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ群、及び／または極性もしくは非極性群のアミノ酸を含み得る。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、次から選択される２、３、４、５、６、７、８、または９つの位置を含む：位置２７２はＴｒｐ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、またはＡｌａであり、位置２７４はＴｒｐまたはＧｌｙであり、位置２７６はＴｙｒ、Ａｒｇ、またはＧｌｕであり、位置３２２はＳｅｒ、Ａｒｇ、またはＧｌｎであり、位置３２４はＶａｌ、Ｓｅｒ、またはＰｈｅであり、位置３２６はＩｌｅ、Ｓｅｒ、またはＴｒｐであり、位置３２９はＴｒｐ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、またはＡｓｐであり、位置３３０はＴｒｐであり、位置３３１はＳｅｒ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、またはＶａｌである。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、位置２７２にＶａｌもしくはＩｌｅ、位置２７４にＧｌｙ、位置２７６にＡｒｇ、位置３２２にＡｒｇ、位置３２４にＳｅｒ、位置３２６にＳｅｒ、位置３２９にＴｈｒ、Ｓｅｒ、もしくはＡｒｇ、位置３３０にＴｒｐ、及び／または位置３３１にＬｙｓもしくはＡｒｇを含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０６〜２１０のうちのいずれか１つのアミノ酸１〜１１０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０６〜２１０に対して、少なくとも７０％の同一性、少なくとも７５％の同一性、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０６〜２１０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む。他の実施形態において、修飾されたＦｃポリペプチドは、配列番号２０６〜２１０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸が置換される。
【０４００】
追加のＦｃポリペプチド変異
いくつかの態様において、本明細書に開示される抗ＴＲＥＭ２抗体は、第１のＦｃポリペプチドと、任意で第２のＦｃポリペプチドとを含み、そのそれぞれは、独立して選択される修飾を含み得るか、または野生型Ｆｃポリペプチド、例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、血液脳関門（ＢＢＢ）受容体、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合を付与する１つ以上の修飾を含有する。Ｆｃポリペプチドの一方または両方に導入され得る他の変異の非限定的な例としては、例えば、血清中安定性を高める変異、エフェクター機能を調節する変異、グリコシル化に影響を与える変異、ヒトにおける免疫原性を低下させる変異、及び／またはＦｃポリペプチドのノブホールによるヘテロ二量体化をもたらす変異が挙げられる。
【０４０１】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ヘテロ二量体の形成を促進し、ホモ二量体の形成を妨げる、ノブホール変異を含む。一般に、修飾は、ヘテロ二量体の形成が促進され、ホモ二量体の形成が妨げられるように、突起が空隙内に配置され得る形で、第１のポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）を導入し、第２のポリペプチドの界面に対応する空隙（「ホール」）を導入する。突起は、第１のポリペプチドの界面にある小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突起と同一サイズまたは類似のサイズの代償的な空洞は、大きいアミノ酸側鎖を、より小さい側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面上に作製される。いくつかの実施形態において、そのような追加の変異は、Ｆｃポリペプチド中、ポリペプチドのＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲへの結合に悪影響を及ぼさない位置にある。
【０４０２】
二量化のためのノブホールアプローチの例示的な一実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方の位置３６６（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）は、ネイティブトレオニンの代わりにトリプトファンを含む。二量体のＦｃポリペプチドのもう一方は、位置４０７（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）にネイティブチロシンの代わりにバリンを有する。Ｆｃポリペプチドのもう一方は、位置３６６（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）のネイティブトレオニンがセリンに置換され、位置３６８（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）のネイティブロイシンがアラニンに置換される、置換を更に含み得る。したがって、Ｆｃポリペプチドの一方は、Ｔ３６６Ｗのノブ変異を有し、Ｆｃポリペプチドのもう一方は、典型的にＴ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａホール変異を伴う、Ｙ４０７Ｖの変異を有する。
【０４０３】
いくつかの実施形態において、血清中半減期を高めるための修飾が導入され得る。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方またはもう一方は、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、位置２５２にチロシン、位置２５４にトレオニン、及び位置２５６にグルタミン酸を含み得る。したがって、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの置換を有し得る。あるいは、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、ＥＵナンバリングに従って、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの置換を有し得る。あるいは、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａの置換を有し得る。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞上に発現されるＦｃ受容体に結合すると、エフェクター機能を低下させる修飾、すなわち、ある特定の生物学的機能を誘導する能力を低下させる修飾を含み得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合と補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるが、これらに限定されない。エフェクター機能は、抗体クラスによって異なり得る。例えば、ネイティブヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性を惹起することができ、ネイティブヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫系細胞上に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＰ機能を惹起することができる。
【０４０５】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、ヘテロ二量体化のための他の修飾を含有するように操作されてもよく、例えば、天然の荷電性または疎水性パッチ修飾であるＣＨ３−ＣＨ３界面内の接触残基の静電的操作がある。
【０４０６】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、エフェクター機能を調節する追加の修飾を含み得る。
【０４０７】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、エフェクター機能を低下または排除する修飾を含み得る。エフェクター機能を低下させる例示的なＦｃポリペプチド変異には、ＣＨ２ドメイン中の置換、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２３４及び２３５での置換が含まれるが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、位置２３４及び２３５にアラニン残基を含み得る。したがって、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）の置換を有し得る。いくつかの実施形態において、ＴｆＲへの結合を促進する１つ以上の修飾を含むＦｃポリペプチドは、ＬＡＬＡ置換を更に含む。いくつかの実施形態において、ＴｆＲへの結合を促進する１つ以上の修飾を含まないＦｃポリペプチドは、ＬＡＬＡ置換を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、両方ともＬＡＬＡ置換を含む。
【０４０８】
エフェクター機能を調節する追加のＦｃポリペプチド変異には、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９での１つ以上の置換が含まれるが、これらに限定されない。例示的な置換には、次が含まれる：位置３２９は、プロリンが、グリシンまたはアルギニンまたはＦｃのプロリン３２９とＦｃＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間で形成されるＦｃ／Ｆｃ受容体界面を破壊するのに十分大きいアミノ酸残基で置換される、変異を有し得る。追加の例示的な置換には、ＥＵナンバリングスキームに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、及びＰ３３１Ｓが含まれる。複数の置換が存在してもよく、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従って、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ヒトＩｇＧ１領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ、ならびにヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅがある。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換を有し得、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従って、位置２９８、３３３、及び／または３３４での置換を有し得る。
【０４０９】
追加の変異を含む例示的なＦｃポリペプチド
非限定的な例として、本開示の抗ＴＲＥＭ２抗体に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））、及び／または血清中安定性を高める変異（例えば、（ｉ）ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｎ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））を含む、追加の変異を含み得る。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）を有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ノブ変異を有するように修飾され得る。
【０４１１】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異と、エフェクター機能を調節する変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ノブ変異及びエフェクター機能を調節する変異を有するように修飾され得る。
【０４１２】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、血清中安定性を高める変異（例えば、（ｉ）ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｎ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異と、血清中安定性を高める変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ノブ変異及び血清中安定性を高める変異を有するように修飾され得る。
【０４１３】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｗ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））と、血清中安定性を高める変異（例えば、（ｉ）ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｎ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ノブ変異と、エフェクター機能を調節する変異と、血清中安定性を高める変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ノブ変異、エフェクター機能を調節する変異、及び血清中安定性を高める変異を有するように修飾され得る。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ホール変異を有するように修飾され得る。
【０４１５】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異と、エフェクター機能を調節する変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ホール変異及びエフェクター機能を調節する変異を有するように修飾され得る。
【０４１６】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、血清中安定性を高める変異（例えば、（ｉ）ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｎ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異と、血清中安定性を高める変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ホール変異及び血清中安定性を高める変異を有するように修飾され得る。
【０４１７】
いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）と、エフェクター機能を調節する変異（例えば、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＰ３２９Ｇ（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ））と、血清中安定性を高める変異（例えば、（ｉ）ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたとき、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ、または（ｉｉ）ＥＵナンバリングを参照してナンバリングしたとき、Ｎ４３４Ｓ（Ｍ４２８Ｌの有無にかかわらない））とを有し、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列に対して、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ホール変異と、エフェクター機能を調節する変異と、血清中安定性を高める変異と、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列とを有し得る。いくつかの実施形態において、配列番号９８、１００〜２１０、及び３３７〜３５０のうちのいずれか１つの配列を有するＦｃポリペプチドは、ホール変異、エフェクター機能を調節する変異、及び血清中安定性を高める変異を有するように修飾され得る。
【０４１８】
Ｖ．抗ＴＲＥＭ２抗体の治療的及び予後的使用方法
別の態様において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体の使用方法が提供される。いくつかの実施形態において、上記のセクションＩＩＩに記載されている抗ＴＲＥＭ２抗体が、本明細書に記載される方法の実施に使用される。
【０４１９】
抗ＴＲＥＭ２抗体による治療
いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象の１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、ＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２シグナル伝達複合体と相互作用するキナーゼ（例えば、Ｓｙｋキナーゼ）の動員もしくはリン酸化を調節すること、食作用（例えば、細胞デブリ、アミロイドβ粒子などの食作用）を調節すること、細胞遊走（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアの遊走）を調節すること、及び／または細胞分化（例えば、骨髄細胞、マクロファージ、ミクログリア、及び疾患関連ミクログリアに関するもの）を調節することを含む。いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象の１つ以上のＴＲＥＭ２活性を増強する方法が提供される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象の１つ以上のＴＲＥＭ２活性を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態において、対象の１つ以上のＴＲＥＭ２活性を調節する方法は、当該対象に、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合部分、例えば、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体、または本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を投与することを含む。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する方法が提供される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを調節する方法は、当該対象に、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合部分、例えば、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体、または本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を投与することを含む。
【０４２１】
いくつかの実施形態において、神経変性疾患を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病、原発性年齢関連タウオパチー、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症、グアムの筋萎縮性側索硬化症／パーキンソニズム認知症複合（ＡＬＳ−ＰＤＣ）、皮質基底核変性症、慢性外傷性脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ボクサー認知症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病、ダウン症候群、家族性イギリス型認知症、家族性デンマーク型認知症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、グリア細胞球状封入体タウオパチー、グアドループ認知症パーキンソニズム、グアドループＰＳＰ、ハレフォルデン−スパッツ病、スフェロイドを伴う遺伝性びまん性白質脳症（ＨＤＬＳ）、ハンチントン病、封入体筋炎、多系統萎縮症、筋強直性ジストロフィー、那須・ハコラ病、神経原線維変化優位型認知症、ニーマン・ピック病Ｃ型、淡蒼球−橋−黒質変性症パーキンソン病、ピック病、脳炎後パーキンソニズム、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、亜急性硬化性全脳炎、及び神経原線維型老年認知症からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、那須・ハコラ病である。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、前頭側頭型認知症である。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、パーキンソン病である。いくつかの実施形態において、方法は、当該対象に、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体もしくはその抗原結合部分、例えば、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体、または本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物を投与することを含む。
【０４２２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体（またはその抗原結合部分または医薬組成物）は、ＴＲＥＭ２の変異を特徴とする神経変性疾患の治療に使用される。いくつかの実施形態において、ＴＲＥＭ２の変異を特徴とする神経変性疾患は、アルツハイマー病、例えば、ＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ変異を特徴とするアルツハイマー病である。
【０４２３】
いくつかの実施形態において、治療される対象は、ヒト、例えば、ヒト成人またはヒト小児である。
【０４２４】
いくつかの実施形態において、神経変性疾患を有する対象のプラーク蓄積を減少させる方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、対象に、本明細書に記載される抗体または医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、アルツハイマー病である。いくつかの実施形態において、対象は、神経変性疾患の動物モデル（例えば、５ＸＦＡＤまたはＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデル）である。いくつかの実施形態において、プラーク蓄積は、アミロイドプラークイメージング及び／またはＴａｕイメージングによって、例えば、ポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）スキャニングを使用して、測定される。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与は、プラーク蓄積を、ベースライン値（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体を投与する前の対象のプラーク蓄積のレベル）と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させる。
【０４２５】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、治療上有効な量または用量で対象に投与される。約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの１日用量範囲が使用され得る。しかしながら、投与量は、選択された投与経路、組成物の処方、患者の応答、状態の重症度、対象の体重、及び処方医師の判断を含む、いくつかの因子に従って変動し得る。投与量は、個々の患者の必要に応じて、経時的に増加または減少し得る。ある特定の場合において、患者は、最初に低用量が投与され、次いで、患者にとって忍容性のある有効な投与量まで増加される。有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０４２６】
本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、鼻腔、経粘膜、腸、眼もしくは耳の送達、または当該技術分野において知られている任意の他の方法であり得る。いくつかの実施形態において、抗体は、経口、静脈内、または腹腔内投与される。
【０４２７】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体（及び任意で別の治療薬）は、対象に、長期間にわたって、例えば、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０日間以上投与される。
【０４２８】
抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補となる対象の特定
別の態様において、神経変性疾患を有する対象を抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定する方法が提供される。
【０４２９】
いくつかの実施形態において、方法は、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを対照値と比較することであって、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として増加している場合、当該対象を治療の候補であると特定する、比較することと、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）を当該対象に投与することと、
を含む。
【０４３０】
いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を更に有し、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じもしくは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識し、及び／または本明細書に記載される抗体クローンの１つ以上のＣＤＲ、重鎖、及び／または軽鎖配列を含む。
【０４３１】
いくつかの実施形態において、方法は、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを対照値と比較することであって、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として減少している場合、当該対象を治療の候補であると特定する、比較することと、
治療の候補として特定された対象に関して、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）を当該対象に投与することと、
を含む。
【０４３２】
いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を更に有し、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じもしくは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識し、及び／または本明細書に記載される抗体クローンの１つ以上のＣＤＲ、重鎖、及び／または軽鎖配列を含む。
【０４３３】
別の態様において、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の候補として特定された神経変性疾患を有する対象を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）を対象に投与することを含み、対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として増加していることが特定されている。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを減少させる抗体である。
【０４３４】
いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）を対象に投与することを含み、対象は、ｓＴＲＥＭ２のレベルが対照値を基準として減少していることが特定されている。いくつかの実施形態において、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ｓＴＲＥＭ２のレベルを増加させる抗体である。
【０４３５】
いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２のレベルは、健常対照者または健常対照者の集団（すなわち、神経変性疾患に罹患してない）について決定された対照値と比較される。いくつかの実施形態において、対象は、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％以上異なる場合、治療の候補と特定される。いくつかの実施形態において、対象は、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが、対照値と比較して、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍以上異なる場合、治療の候補と特定される。いくつかの実施形態において、健常対照値は、全員が神経変性疾患を有していないことがわかっている対象または対象の集団（例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００人以上の対象）のｓＴＲＥＭ２のレベルを評価することによって決定される。
【０４３６】
いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２のレベルは、疾患対照者または疾患対照者の集団（例えば、アルツハイマー病に罹患している人もしくは集団、またはＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ変異を特徴とするアルツハイマー病などのＴＲＥＭ２の変異を特徴とする神経変性疾患に罹患している人もしくは集団）について決定された対照値と比較される。いくつかの実施形態において、対象は、対象からのサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルが、疾患対照者または疾患対照者の集団のｓＴＲＥＭ２のレベルと同等である（例えば、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％以内である）場合、治療の候補として特定される。いくつかの実施形態において、疾患対照値は、全員が神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）を有していることがわかっている対象または対象の集団（例えば、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００人以上の対象）のｓＴＲＥＭ２のレベルを評価することによって決定される。
【０４３７】
いくつかの実施形態において、対象の集団は、年齢、性別、人種、または他の基準などの患者の１つ以上の特徴に従って、試験対象とマッチングされる。いくつかの実施形態において、対照値は、試験対象のｓＴＲＥＭ２のレベルを評価するために使用するのと同じ種類の対象の集団からのサンプル（例えば、脳脊髄液を含むサンプル）を使用して確立される。
【０４３８】
いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２レベルは、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含むサンプルを使用して測定される。いくつかの実施形態において、サンプルは、脳脊髄液を含む。
【０４３９】
ＳＴＲＥＭ２レベルは、本明細書に記載される方法、例えば、上記のセクションＩＩＩに記載されている方法に従って、測定することができる。いくつかの実施形態において、ｓＴＲＥＭ２レベルは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
【０４４０】
抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の有効性モニタリング
別の態様において、神経変性疾患を有する対象に対する抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の有効性をモニタリングする方法が提供される。いくつかの実施形態において、治療される対象は、本明細書に記載される神経変性疾患の診断を受けている。いくつかの実施形態において、対象は、アルツハイマー病の診断を受けている。いくつかの実施形態において、対象は、ＴＲＥＭ２のＲ４７Ｈ変異を特徴とするアルツハイマー病などのＴＲＥＭ２の変異を特徴とする神経変性疾患の診断を受けている。
【０４４１】
いくつかの実施形態において、方法は、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与（例えば、対象への第１の投与）前に採取された対象からの第１のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）により対象を治療することと、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与後に採取された対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、を含み、
対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの減少は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【０４４２】
いくつかの実施形態において、対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルにおける少なくとも少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の減少は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【０４４３】
いくつかの実施形態において、方法は、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与（例えば、対象への第１の投与）前に採取された対象からの第１のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、
ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分（例えば、本明細書に記載される抗体）により対象を治療することと、
抗ＴＲＥＭ２抗体の投与後に採取された対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルを測定することと、を含み、
対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２レベルの増加は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【０４４４】
いくつかの実施形態において、対象からの第１のサンプルと比較した、対象からの第２のサンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルにおける少なくとも少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の増加は、対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に応答していることを示す。
【０４４５】
いくつかの実施形態において、測定する工程は、本明細書に記載されるｓＴＲＥＭ２レベルのためのアッセイ、例えば、上記のセクションＩＩＩに記載されているアッセイを使用することを含む。いくつかの実施形態において、サンプル中のｓＴＲＥＭ２のレベルは、イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
【０４４６】
いくつかの実施形態において、サンプルは、本明細書に記載されるサンプル（例えば、上記のセクションＩＩＩに記載されているもの）である。いくつかの実施形態において、サンプルは、体液、例えば、血液、血漿、血清、尿、または脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態において、サンプルは、脳脊髄液を含む。いくつかの実施形態において、第１のサンプル及び第２のサンプルは、同じ種類のサンプルである（例えば、第１のサンプル及び第２のサンプルのそれぞれは、脳脊髄液サンプルである）。
【０４４７】
いくつかの実施形態において、対象は、抗ＴＲＥＭ２抗体（例えば、本明細書に記載される１つ以上のＴＲＥＭ２関連活性を有し、本明細書に記載される抗体クローンによって認識されるエピトープと同じもしくは実質的に同じヒトＴＲＥＭ２のエピトープを認識し、及び／または本明細書に記載される抗体クローンの１つ以上のＣＤＲ、重鎖、及び／または軽鎖配列を含む、抗体またはその抗原結合部分）により、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間以上治療されている。いくつかの実施形態において、対象は、抗ＴＲＥＭ２抗体により、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月以上治療されている。
【０４４８】
いくつかの実施形態において、方法は、第１のサンプルと比較した、第２のサンプルで検出されたｓＴＲＥＭ２レベルの変化レベルに応じて、対象に投与される抗ＴＲＥＭ２抗体の投与量を調整すること（例えば、抗ＴＲＥＭ２抗体の投与量及び／または頻度を増加または減少させること）を更に含み得る。いくつかの実施形態において、方法は、投与される抗ＴＲＥＭ２抗体を調整すること（例えば、異なる抗ＴＲＥＭ２抗体を投与すること）を更に含み得る。いくつかの実施形態において、方法は、抗ＴＲＥＭ２抗体による治療を中止することを更に含み得る。
【０４４９】
ＶＩ．医薬組成物及びキット
更に別の態様において、ヒトＴＲＥＭ２タンパク質に特異的に結合する抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。いくつかの実施形態において、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患、例えば、ＴＲＥＭ２の変異を特徴とする神経変性疾患の治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、医薬組成物及びキットは、１つ以上のＴＲＥＭ２活性、例えば、Ｓｙｋリン酸化の調節（例えば、増強または阻害）に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、医薬組成物及びキットは、ｓＴＲＥＭ２レベルの調節（例えば、減少または増加）に使用するためのものである。いくつかの実施形態において、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患を有する対象が抗ＴＲＥＭ２抗体による治療に適した候補であるかどうかを特定するのに使用するためのものである。いくつかの実施形態において、医薬組成物及びキットは、神経変性疾患を有する対象の抗ＴＲＥＭ２抗体による治療の有効性をモニタリングするのに使用するためのものである。
【０４５０】
医薬組成物
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体を含む医薬組成物が提供される。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されている抗体（または抗原結合部分）である。
【０４５１】
いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、１つ以上の薬学的に許容される担体及び／または賦形剤を更に含む。薬学的に許容される担体は、生理学的に適合性があり、活性剤の活性に干渉し、別様に阻害しない任意の溶媒、分散媒、またはコーティング剤を含む。薬学的に許容される様々な賦形剤が当該技術分野においてよく知られている。
【０４５２】
いくつかの実施形態において、担体は、静脈内、筋肉内、経口、腹腔内、髄腔内、経皮、局所、または皮下投与に好適なものである。薬学的に許容される担体は、例えば、組成物を安定させるように、または活性剤（複数可）の吸収を増加もしくは減少させるように作用する、１つ以上の生理学的に許容される化合物（複数可）を含有し得る。生理学的に許容される化合物には、例えば、グルコース、スクロース、もしくはデキストランなどの炭水化物、アスコルビン酸もしくはグルタチオンなどの抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、活性剤のクリアランスもしくは加水分解を低減させる組成物または賦形剤または他の安定剤及び／または緩衝液が含まれる。他の薬学的に許容される担体及びその製剤化は、当該技術分野においてよく知られている。
【０４５３】
本明細書に記載される医薬組成物は、当業者に知られている方法で、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣、乳化、カプセル化、封入または凍結乾燥の各プロセスによって、製造することができる。以下の方法及び賦形剤は、単なる例示であり、決して限定的なものではない。
【０４５４】
経口投与の場合、抗ＴＲＥＭ２抗体は、当該技術分野においてよく知られている薬学的に許容される担体と組み合わせることによって、製剤化することができる。そのような担体により、化合物を、治療される患者によって経口摂取される、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、エマルジョン、脂溶性及び親水性懸濁液、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能になる。経口使用のための薬学的調製物は、化合物を固形賦形剤とともに混合し、任意で、得られた混合物を粉砕し、所望により、好適な助剤を添加した後、顆粒混合物を加工して、錠剤または糖衣丸コアを得ることができる。好適な賦形剤には、例えば、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖、セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが含まれる。所望される場合には、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムを添加してもよい。
【０４５５】
抗ＴＲＥＭ２抗体は、注射による、例えば、ボーラス注射または連続注入による、非経口投与用に製剤化され得る。注射剤の場合、１つまたは複数の化合物は、所望により、可溶化剤、等張化剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤及び防腐剤などの従来の添加剤とともに、水性溶媒中、または植物性油もしくは他の類似の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸エステルもしくはプロピレングリコールなどの非水性溶媒中で、化合物を溶解、懸濁または乳化することによって、調製物に製剤化することができる。いくつかの実施形態において、化合物は、水性溶液、例えば、ハンクス溶液、リンゲル液、または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性のある緩衝液中で製剤化することができる。注射用製剤は、保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多回投与容器の単位剤形で提供することができる。組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液などの形態を取ることができ、懸濁、安定化及び／または分散剤などの製剤化用剤を含有し得る。
【０４５６】
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、徐放性製剤、制御放出製剤、延長放出製剤、持効性製剤または遅延放出製剤、例えば、活性剤を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリクスでの送達用に調製される。様々な種類の徐放性材料が確立されており、当業者によく知られている。現在の延長放出製剤は、フィルムコーティング錠剤、多粒子またはペレット系、親水性材料または親油性材料を使用するマトリクス技術、及び細孔形成賦形剤を含むワックス系錠剤を含む。徐放性送達系は、その設計に応じて、数時間または数日にわたって、例えば、４、６、８、１０、１２、１６、２０、２４時間以上にわたって、化合物を放出することができる。通常、徐放性製剤は、天然または合成ポリマー、例えば、高分子ビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）；カルボキシビニル親水性ポリマー；疎水性及び／または親水性ヒドロコロイド、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース；ならびにカルボキシポリメチレンを使用して調製することができる。
【０４５７】
典型的に、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するための医薬組成物は、無菌である。滅菌は、当該技術分野において知られている方法、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、滅菌濾過、または放射線照射に従って実施することができる。
【０４５８】
本開示の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される具体的な用途に応じて変化し得る。適切な用量または投与経路の決定は、十分に当業者の技術範囲内である。好適な用量は、上記のセクションＶにも記載されている。
【０４５９】
キット
いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体を含むキットが提供される。いくつかの実施形態において、抗ＴＲＥＭ２抗体は、上記のセクションＩＩＩに記載されている抗体（または抗原結合部分）である。
【０４６０】
いくつかの実施形態において、キットは、１つ以上の追加の治療薬を更に含む。例えば、いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体を含み、神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病の治療に使用される１つ以上の追加の治療薬を更に含む。いくつかの実施形態において、治療薬は、神経変性疾患の認知症状または行動症状の治療に使用される剤（例えば、抗うつ薬、ドパミンアゴニスト、または抗精神病薬）である。いくつかの実施形態において、治療薬は、神経保護剤（例えば、カルビドパ／レボドパ、抗コリン薬、ドパミン作動薬、モノアミン酸化酵素Ｂ（ＭＡＯ−Ｂ）阻害薬、カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（ＣＯＭＴ）阻害薬、グルタミン酸作動薬、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害薬、カンナビノイド、カスパーゼ阻害薬、メラトニン、抗炎症薬、ホルモン（例えば、エストロゲンまたはプロゲステロン）、またはビタミン）である。
【０４６１】
いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ｓＴＲＥＭ２レベルを測定するための１つ以上の試薬を更に含む。いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ抗体を含み、ＴＲＥＭ２活性を測定する（例えば、Ｓｙｋリン酸化を測定する）ための１つ以上の試薬を更に含む。
【０４６２】
いくつかの実施形態において、キットは、本明細書に記載される方法を実施するための指示（すなわち、プロトコル）を含む説明資料（例えば、上記のセクションＶに記載されている治療的または予後的方法のためのキットを使用するための説明書）を更に含む。説明資料は、典型的に、書面または印刷された資料を含むが、それらに限定されない。そのような説明を記憶し、それをエンドユーザーに伝えることが可能な媒体が本開示によって企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ−ＲＯＭ）などが含まれるが、これらに限定されない。そのような媒体は、当該説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含み得る。
【実施例】
【０４６３】
ＶＩＩ．実施例
本発明は、特定の実施例により、より詳細に記載される。以下の実施例は、例示のみを目的に提供するものであり、いかなる形でも本発明を限定する意図はない。
【０４６４】
実施例１．抗ＴＲＥＭ２抗体の作製及び特性評価の方法
マウスＦｃ融合ヒトＴＲＥＭ２  ＥＣＤの組み換え発現及び精製
ヒトＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  ＩＤ−Ｑ９ＮＺＣ２）のエクトドメイン（残基１９〜１７２）を、Ｎ末端領域に位置するマウスＩｇＧ  κ鎖Ｖ−ＩＩＩ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  ＩＤ−Ｐ０１６６１）アミノ酸１〜２０の分泌シグナル、及びＴＲＥＭ２  ＥＣＤとＦｃとの間にＧＧＧＧＳを有するＣ末端領域のマウスＦｃタグとともに、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。
【０４６５】
精製したプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｋｉｔを製造元の説明書に従って使用して、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。トランスフェクションの直後に、Ｎ結合型グリカンの成熟を阻害し、グリコシル化の不均一性を低減するために、高度マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシン（Ｓｉｇｍａ）を１μｇ／ｍＬの濃度で培養液に加えた。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ  ＨＴ  Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）で、１２５ｒｐｍ及び３７℃、６％ＣＯ２の加湿雰囲気下でインキュベートした。トランスフェクションから１６時間後、細胞にＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒ  １及び２を加え、トランスフェクションから９６時間後、培地上清を回収した。清澄化した上清にＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害薬（Ｒｏｃｈｅ）を加え、−８０℃で保存した。
【０４６６】
ｒｈＴＲＥＭ２−ｍＦｃを単離するために、清澄化した培地上清をＨｉＴｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａアフィニティーカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）にロードし、２００ｍＭアルギニン及び１３７ｍＭコハク酸緩衝液（ｐＨ５．０）で洗浄した。融合タンパク質を１００ｍＭ  ＱＢクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）及び５０ｍＭ  ＮａＣｌで溶出した。溶出直後に、１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）をタンパク質溶液に加えて、ｐＨを中性にした。タンパク質凝集物は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  １０／３００  ＧＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって分離した。ＳＥＣの移動相緩衝液は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ及び５０ｍＭアルギニンとし、これはタンパク質保存緩衝液でもあった。クロマトグラフィーの全工程は、ＡＫＴＡ  ｐｕｒｅまたはＡＫＴＡ  Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で実施した。
【０４６７】
Ｈｉｓタグ付きＴＲＥＭ２  ＥＣＤの組み換え発現及び精製
ＴＲＥＭ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｑ９ＮＺＣ２）のエクトドメイン（残基１９〜１７２）を、Ｎ末端領域に位置するマウスＩｇ  κ鎖Ｖ−ＩＩＩ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ  ＩＤ−Ｐ０１６６１）アミノ酸１〜２０の分泌シグナル、及びＣ末端領域に位置する６Ｘ−Ｈｉｓタグとともに、ｐＲＫベクターにサブクローニングした。シーケンシングによってインサートを確認し、マキシプレッププラスミド精製を実施した。
【０４６８】
精製したプラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｋｉｔを製造元の説明書に従って使用して、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞を、オービタルシェーカー（Ｉｎｆｏｒｓ  ＨＴ  Ｍｕｌｔｉｔｒｏｎ）で、１２５ｒｐｍ及び３７℃、６％ＣＯ２の加湿雰囲気下でインキュベートした。トランスフェクションから１６時間後、細胞にＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２９３  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｒ  １及び２を加え、トランスフェクションから９６時間後、培地上清を回収した。
【０４６９】
回収した培地に１Ｍイミダゾール（ｐＨ８．０）を加えて最終濃度１０ｍＭにし、孔径０．４マイクロメートルのＮａｌｇｅｎｅ（商標）Ｒａｐｉｄ−Ｆｌｏｗ（商標）使い捨てフィルターユニット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して濾過した。ＨｉｓＰｕｒ（商標）Ｎｉ−ＮＴＡ  Ｒｅｓｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）をＭＱ水で洗浄し、ロード緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び１０ｍＭイミダゾール）で平衡化した。自然落下法を使用してアフィニティー精製を実施した。回収した培地を樹脂にロードし、非特異的に結合したタンパク質を、５０ｍＭ及び１００ｍＭイミダゾールを加えたロード緩衝液で洗浄した。結合したＨｉｓタグ付きＴＲＥＭ２エコドメインを２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び２００ｍＭイミダゾールで溶出した。溶出したタンパク質をＡｍｉｃｏｎ  １０ｋＤａコンセントレーターを使用して濃縮し、濃縮したタンパク質をＡＫＴＡ  Ａｖａｎｔシステム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したゲル濾過クロマトグラフィーによって更に精製した。１ｘＰＢＳで平衡化したＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００  １６／６００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）カラムにタンパク質をロードし、１ｘＰＢＳをランニング緩衝液として使用して、溶出及び分画した。溶出分画を変性条件下及び未変性条件下でのポリアクリルアミド（ＰＡＧＥ）ゲル電気泳動によって分析した。分析的サイズ排除クロマトグラフィー及びインタクトタンパク質の質量測定により、溶出分画の更なる特性評価を行った。ＰＡＧＥ及び分析的特性評価の結果を使用して、高度にグリコシル化されたタンパク質分画をプールし、それらを等分して−８０℃で保存した。
【０４７０】
マウスの免疫付与
野生型Ｂａｌｂ／ｃ及びＫＯ  Ｃ５７Ｂｌ６マウスを、ＴＲＥＭ２Ｆｃタンパク質と、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２（「Ｔｒｅｍ２Ｄａｐ１２」）を発現するＢＷＺ細胞の交互注入により免疫した。免疫付与は、Ｓｉｇｍａアジュバントを含む５〜１０μｇの抗原を用いて、２週に１回、足蹠を介して４〜６週間実施した。血清力価を細胞ベースＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。１０４を超える力価を有する動物を最終追加免疫のために選択した。マウスにアジュバントなしの最終追加免疫を足蹠を介して行い、追加免疫から３日後に屠殺した。膝窩及び鼠経のリンパ節を採取し、セルストレーナに通して単一細胞懸濁液を作製し、次いで、そのリンパ球を、以下に記載されるハイブリドーマ作製に使用した。
【０４７１】
ハイブリドーマライブラリーの作製
リンパ節から採取したＢ細胞を処理し、計数した。それをＰ３Ｘ６３Ａｇ８細胞と１：１で混合し、ＢＴＸ  Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ  Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ装置を使用して融合させた。融合したハイブリドーマを６０〜９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルのＨＡＴ（ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン）選択培地とともに播種した。１週間後、プレートにＨＴ（ヒポキサンチンチミジン）を与えた。２週間後、５０μＬ／ウェルの上清を回収し、以下に記載される細胞ＥＬＩＳＡによって抗原特異的結合についてスクリーニングした。
【０４７２】
ヒトＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２安定発現ＨＥＫ細胞株の作製
野生型ヒトＴＲＥＭ２とＤＡＰ１２、バリアントＴＲＥＭ２  Ｒ４７ＨとＤａｐ１２、及びＤＡＰ１２のみを発現するベクターをそれぞれＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。安定発現クローンを選択し、細胞表面のＴＲＥＭ２発現をフローサイトメーターによって評価した。ＴＲＥＭ２表面発現分析には、ＡＰＣ結合ラット抗ヒト／マウスＴＲＥＭ２モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  ＭＡＢ１７２９１）を使用した。クローン＃６が最も高い野生型ＴＲＥＭ２発現レベルを示し、これを選択して、ＨＥＫ２９３−Ｈ６と名付けた。バリアントＴＲＥＭ２  Ｒ４７Ｈの表面発現が最も高いクローンは、ＨＥＫ２９３−Ｒ４と名付けた。ＤＡＰ１２を安定的に発現するクローンをウェスタンブロットによって分析し、選択したクローンをＨＥＫ２９３−ＤＡＰ１２＃１と名付けた。
【０４７３】
タンパク質ＥＬＩＳＡによる結合に関する抗体スクリーニング
ハイブリドーマ上清を３８４ウェルフォーマットのタンパク質ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。４つの異なるタンパク質を４象限でコーティングした：ＴＲＥＭ２−Ｈｉｓ、ＡＤＡＭ１０ペプチド１１５〜１４３アミノ酸、１３４〜１５４アミノ酸及び１４９〜１７０アミノ酸を３８４ウェルプレートにＰＢＳ中１μｇ／ｍｌでコーティングした。
【０４７４】
２５μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清をプレートに加えた。プレートを室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴ緩衝液で３回洗浄した。二次検出抗体ヤギ抗マウスＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を培地で１：７０００に希釈し、２５μＬ／ウェルでプレートに加え、室温で１時間インキュベートした。１時間後、プレートをＰＢＳＴ緩衝液で３回洗浄した。プレートを２５μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で発色させ、２５μＬ／ウェルの１Ｎ硫酸でクエンチした。シグナルをＢｉｏＴｅｋ（登録商標）プレートリーダー上でＡ４５０で定量した。ＴＲＥＭ２及び／またはペプチドのバックグラウンドの３倍のＯＤを持つウェルを陽性とみなし、二次スクリーニングに進めた。
【０４７５】
抗ＴＲＥＭ２抗体に関する抗体結合データを以下の表１に示す。
【０４７６】
（表１）ＴＲＥＭ２抗体の結合データ
2020534277.tif 000009
Ｎ．Ｄ．＝決定されず
Ｎ．Ｂ．＝検出された結合なし
【０４７７】
Ｂｉａｃｏｒｅ
抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手）をＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手）の表面上にアミン結合により、約６，０００〜８，０００レスポンスユニット（ＲＵ）に達するまで固定化した。その表面を、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）とＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合物（いずれもＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手）を７分間注入することによって活性化した。抗マウスＦｃ抗体を酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）で２５μｇ／ｍＬに希釈し、５μＬ／分の流量で１０分間注入した後、エタノールアミン（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅから入手）を７分間注入した。
【０４７８】
精製した抗ＴＲＥＭ２ハイブリドーマ（２０μｇ／ｍＬ）を１０００〜１５００ＲＵに達するまで捕捉した。いずれかのシングルサイクルカイネティクス法を使用して、ある範囲で段階希釈したＴＲＥＭ２−Ｈｉｓタンパク質（例えば、３．４ｎＭ〜３００ｎＭ）を３０μＬ／分の流量で注入した。センサーグラムのフィッティングを１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルの使用により行い、ｋｏｎ及びｋｏｆｆを見積もった。
【０４７９】
細胞ＥＬＩＳＡによるＴｒｅｍ２Ｄａｐ１２結合に関する抗体スクリーニング
Ｔｒｅｍ２Ｄａｐ１２発現ＨＥＫ２９３を９６ウェル細胞培養Ｎｕｎｃプレートの培地中に播種することによって一次スクリーニングを実施した。５０，０００細胞／ウェルをアッセイ培地中に播種し、３７℃でインキュベートした。２日目に、プレートから培地を除去し、５０μＬ／ウェルのハイブリドーマ上清をプレートに加え、４℃で１時間インキュベーションした。インキュベーション後、Ｂｉｏｔｅｋプレートウォッシャーを使用して、ＨＢＳＳ緩衝液でプレートを６回洗浄した。二次検出抗体ヤギ抗マウスＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を培地で１：２０００に希釈し、５０μＬ／ウェルでプレートに加え、４℃で１時間インキュベートした。１時間後、プレートをＨＢＳＳ緩衝液で６回洗浄した。プレートを５０μＬ／ウェルのＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で発色させ、５０μＬ／ウェルの１Ｎ硫酸でクエンチした。シグナルをＢｉｏＴｅｋ（登録商標）プレートリーダー上でＡ４５０で定量した。ＴＲＥＭ２のバックグラウンドの３倍のＯＤを持つウェルを陽性とみなし、二次スクリーニングに進めた。
【０４８０】
一次スクリーニングの陽性物質を二次スクリーニングに進め、ｓＴＲＥＭ２、ｐＳｙｋ及びＦＡＣＳ結合などの機能アッセイでスクリーニングを行った。
【０４８１】
混合細胞株でのＦＡＣＳ結合
ヒトＴＲＥＭ２（Ｈ６）を過剰発現するＨＥＫ２９３及びＧＦＰ（Ｂ５）を過剰発現するＨＥＫ２９３を０．０５％トリプシンによって回収し、表面ＴＲＥＭ２の回復のために３７℃で２時間インキュベートした。マウスＴＲＥＭ２を過剰発現する２９３Ｆを回収し、ＮｕｃＢｌｕｅ  Ｌｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎ  ＲｅａｄｙＰｒｏｂｅｓ試薬で１０分間標識した（培地１ｍＬあたり２滴の試薬を添加）。標識後、細胞を１ｘＰＢＳで２回洗浄した。Ｈｕｍａｎ  Ｔｒｕｓｔａｉｎ  ＦｃＸ溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃４２２３０２）を含むＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ）中、ＮｕｃＢｌｕｅ標識２９３Ｆ細胞を１細胞株当たり１０６／ｍＬの密度でＨ６及びＢ５と混合した。混合した細胞株を丸底９６ウェルに１ウェル当たり３００，０００細胞で播種し、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離にかけ、試験抗ＴＲＥＭ２抗体を加え、次いで、氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離にかけ、ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。次いで、細胞を二次抗体（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７  ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃγフラグメント特異的（１：２００、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、ｃａｔ＃１１５−６０６−０７１）とともに氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、９０μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、次いで、フローサイトメトリー（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）によって分析した。各サンプルにつき２０，０００イベントを取得した。
【０４８２】
ヒトまたはマウスＴＲＥＭ２発現細胞に結合する抗ＴＲＥＭ２抗体の抗体表面結合データを図１Ａ〜Ｄ及び以下の表２に示す。表２のデータは、結合に対する倍数（ＦＯＢ）で示す。
【０４８３】
（表２）ヒトまたはマウスＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞に対する抗体表面結合
2020534277.tif 000010
Ｎ．Ｄ．＝決定されず
【０４８４】
初代マクロファージでのＦＡＣＳ結合
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃１５０６８）に従ってヒト単球を単離した。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解液中に再懸濁して赤血球を溶解した。２０ｍＬの洗浄緩衝液を加えてＡＣＫ溶解を停止し、次いで、遠心分離にかけ、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ）でもう一度洗浄した。２５０ｍＬフラスコで、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ）中、ヒトＭ−ＣＳＦ  ５０ｎｇ／ｍＬの存在下でヒト単球をマクロファージに分化させた。３日目に新しいヒトＭ−ＣＳＦをスパイクし、５日目にヒトマクロファージを回収した。ヒトマクロファージを、Ｈｕｍａｎ  Ｔｒｕｓｔａｉｎ  ＦｃＸ溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｃａｔ＃４２２３０２）及び１％ヒト血清を含むＦＡＣＳ緩衝液中、１０６／ｍＬの密度で再懸濁し、丸底９６ウェルに１ウェル当たり１００，０００細胞で播種し、次いで、室温で２０分間インキュベートした。細胞を遠心分離にかけ、上清を捨て、次いで、試験抗ＴＲＥＭ２抗体（１００ｎＭ）を９６ウェルプレートに加え、氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を遠心分離にかけ、ＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄した。次いで、細胞を二次抗体（ＡＰＣヤギ抗マウスＩｇ、多重吸着、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、＃５５０８２６、１：５００）とともに氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、９０μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、次いで、フローサイトメトリー（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）によって分析した。各サンプルにつき２０，０００イベントを取得した。
【０４８５】
抗ＴＲＥＭ２抗体の初代ヒトマクロファージへの結合を図２に示す。
【０４８６】
ＴＲＥＭ２タンパク質／ペプチドＥＬＩＳＡ
ＴＲＥＭ２−Ｈｉｓタグ付きタンパク質またはストレプトアビジンを３８４ウェル高結合プレートに吸着させた。３％ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）を加えてウェルをブロッキングした。ＴＢＳＴで洗浄した後、ＴＲＥＭ２アミノ酸１１５〜１４３、１３４〜１５４、または１４９〜１７０に対応するビオチン化ペプチドをストレプトアビジン含有ウェルに加えた。プレートを洗浄した後、ハイブリドーマ上清またはコントロール抗体を加えた。一次検出抗体を室温で１時間インキュベートし、続いて、ＴＢＳＴで５回洗浄してから、抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ結合二次抗体を加えた。ＴＢＳＴで５回洗浄した後、検出試薬（Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ  ＴＭＢ  Ｕｌｔｒａ、Ｔｈｅｒｍｏ）を加え、７分間インキュベートしてから、停止試薬（２Ｎ硫酸）を加えた。Ｂｉｏｔｅｋプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍでの吸光度を測定した。工程は全て、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラー及びＢｉｏｔｅｋ  ４０５プレートウォッシャーを使用して実施した。
【０４８７】
ＴＲＥＭ２  ｐＳＹＫ  ＡｌｐｈａＬｉｓａ
ＴＲＥＭ２に依存するｐＳｙｋシグナル伝達の活性化を、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社から市販されているＡｌｐｈａＬｉｓａアッセイを使用して測定した。このアッセイでは、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２（ＴＲＥＭ２シグナル伝達のアダプタータンパク質）を過剰発現するように操作したＨＥＫ２９３細胞株である、Ｈ６と呼ばれる細胞株を使用した。細胞をＴ−１５０フラスコ中で２〜３日間成長させた後、１Ｘｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ＦＢＳ、１ＸＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ溶液、及び２００μｇ／ｍＬのゼオマイシンを含有するＤＭＥＭ中でアッセイを行った。細胞は、アッセイの前に、トリプシン処理、遠心分離、及び新しい抗生物質不含培地への再懸濁によって回収し、次いで、５０ｍＬコニカルチューブ中、３７℃の組織培養インキュベーター内で２〜６時間保存し、その後、遠心分離にかけ、ＨＢＳＳ中に再懸濁して、ｐＳｙｋアッセイに使用した。
【０４８８】
ｐＳｙｋアッセイでスクリーニング／試験する抗ＴＲＥＭ２抗体含有サンプルに、９６ウェルプレート中、激しく振盪しながら室温で１時間インキュベーションすることにより、磁気プロテインＧコーティングＤｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）をコーティングした。コーティング後、Ｈ６細胞の懸濁液を、ビーズコーティングした抗体に加えた（３，０００，０００細胞／ｍＬの懸濁液から１００μＬ／ウェル、１ウェル当たり３００，０００細胞）。抗体コーティングビーズ及びＨ６細胞を含む９６ウェルプレートを、３７℃の組織培養インキュベーターで５分間、短くインキュベートした。その後、プレートを取り出し、遠心分離にかけた。上清をピペッティングによって除去し、ライセートを２５μＬ／ウェルの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製、１ｍＭ  ＰＭＳＦを添加）を加え、ピペッティングにより混合して調製した。ライセートを氷上で３０分間インキュベートした後、アッセイを行った。
【０４８９】
ライセートの調製及びインキュベーション後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ｐＳｙｋ  Ａｌｐｈａ  Ｌｉｓａキットの標準プロトコルを使用して、ライセートのｐＳｙｋについてアッセイを行った。簡潔に述べれば、１０μＬのライセート／ウェルを白色不透明の３８４ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に移した。次に、５μＬのＡｃｃｅｐｔｏｒ  Ｍｉｘ（アクセプタービーズの作業溶液を含む）を各ウェルに加え、続いて、ホイルシールでプレートをシールし、室温で１時間インキュベーションした。この後、５μＬのＤｏｎｏｒ  Ｍｉｘ（ドナービーズの作業溶液を含む）を減光条件下で各ウェルに加えた。プレートを再度シールし、室温で１時間インキュベートした。最後に、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーでＡｌｐｈａ  Ｌｉｓａの設定を使用して、プレートを読み取った。抗ＴＲＥＭ２抗体によるｐＳｙｋ誘導を図３Ａ及び以下の表３に示し、バックグラウンドに対する倍数（ＦＯＢ）として示す。図３Ｂ及び表４は、ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞における、選択した抗体クローンのＥＣ５０値を示す。
【０４９０】
（表３）ＴＲＥＭ２抗体によるｐＳｙｋ誘導
2020534277.tif 000011
【０４９１】
（表４）ヒトＴＲＥＭ２発現ＨＥＫ細胞におけるＴＲＥＭ２抗体のＥＣ５０
2020534277.tif 000012
【０４９２】
追加データを図３Ｃに示す。これは、非アゴニスト２１Ｄ１１及び２１Ｄ４がｐ−Ｓｙｋを誘導しないことを裏付けている。これらのデータは次のように作成した。実験の２日前に、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を安定して過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンコーティングプレートに４０，０００細胞／ウェルで播種した。次いで、脂質小胞を利用するＰＡＭ実験では、脂質小胞（以下のプロトコル参照）を、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用して、ＰＢＳ中、リポソーム濃度０、リポソームＥＣ２０、ＥＣ５０、またはＥＣ８０（下記参照）で、９６ウェルプレート上で抗体（一定濃度）と混合した。アゴニスト実験のみ（リポソームなし）では、リポソームを使用せずに、抗体をＰＢＳで希釈した。Ｂｉｏｔｅｋ  ４０５／４０６プレートウォッシャーを用いて細胞をＨＢＳＳで３回洗浄し、次いで、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用して５０μＬのリポソーム／抗体混合物を各ウェルに加えた。次いで、リポソーム／抗体を含む細胞プレートを３７℃のインキュベーターに５分間移した。プレートをフリッキングすることによってリポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して４０μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＳＴ）を加えた。ライセートを４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、上記のａｌｐｈａ−ＬＩＳＡアッセイに直ちに進めた。
【０４９３】
可溶性ＴＲＥＭ２（ＴＲＥＭ２遊離）アッセイ
抗体処理の４〜１６時間前に、ポリ−Ｄ−リジンをプレコーティングした９６ウェルプレートに、ヒトＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞を播種した。抗体上清またはコントロール抗体を新しい完全培地に希釈し、細胞にトリプリケートで加えた。細胞を抗体含有培地とともに１８時間インキュベートした後、ＴＲＥＭ２  ＥＬＩＳＡによるアッセイのために細胞上清を除去した。サンプル及び標準物は、アッセイプレート中のブロッキング緩衝液（３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ）に１：１０に希釈した。簡潔に述べれば、ＭＳＤスモールスポットストレプトアビジンプレートに、ビオチン化抗ｈＴＲＥＭ２ポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を４℃で一晩または室温で１時間コーティングした。次いで、ブロッキング緩衝液３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴにより、プレートを４℃で一晩または室温で１時間ブロッキングした。プレートをＢｉｏｔｅｋプレートウォッシャー（全ての洗浄に使用）でＴＢＳＴにより３回洗浄した後、希釈剤（ブロッキング緩衝液）及び細胞培養の変性上清を加えた。３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中に希釈したＴＲＥＭ２−Ｈｉｓタンパク質を絶対定量の標準として使用した。室温で１時間インキュベーションした後、プレートをＴＢＳＴで洗浄した。３％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中に希釈した一次検出抗体のスルホタグ付きヤギ抗ヒトＴＲＥＭ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加え、室温で１時間インキュベートした。ＴＢＳＴで洗浄した後、ＭＳＤプレートを２ｘＭＳＤリード緩衝液Ｔを用いて発光させ、続いて、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒプレートリーダーを使用して検出した。Ｐｒｉｓｍ７．０ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して標準曲線をフィッティングすることにより、ＭＳＤ値をｓＴＲＥＭ２の絶対定量に変換した。ＴＲＥＭ２遊離の調節は、培地中で非特異的ＴＲＥＭ２抗体とともに培養した細胞に対する比として示した。ＴＲＥＭ２遊離アッセイの結果を図４に示す。図４に示されるように、４２Ｅ８は、ＴＲＥＭ２遊離を遮断する抗体クラスを定義し、一方、２１Ｄ４は、ＴＲＥＭ２遊離を増強する抗体クラスを定義する。
【０４９４】
ポジティブアロステリックモジュレーター（ＰＡＭ）及びシングルポイントｐＳｙｋのスクリーニング
実験の２日前に、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を安定して過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンコーティングプレートに４０，０００細胞／ウェルで播種した。次いで、脂質小胞（以下のプロトコル参照）を、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用して、０、ＥＣ２０、ＥＣ５０、またはＥＣ８０の濃度（下記参照）で、９６ウェルプレート上で抗体と混合した。Ｂｉｏｔｅｋ  ４０５／４０６プレートウォッシャーを用いて細胞をＨＢＳＳで３回洗浄し、次いで、Ｈａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用して５０μＬのリポソーム／抗体混合物を各ウェルに加えた。次いで、リポソーム／抗体を含む細胞プレートを３７℃のインキュベーターに５分間移した。プレートをフリッキングすることによってリポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して４０μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＣＳＴ）を加えた。ライセートを４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、上記のａｌｐｈａ−ＬＩＳＡアッセイに直ちに進めた。
【０４９５】
リポソーム形成ならびにＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２過剰発現細胞におけるリポソーム媒介性ｐＳｙｋ活性のＥＣ２０、ＥＣ５０、及びＥＣ８０を決定するための滴定
リポソームは、実験の同日に次のように調製した。ガラスバイアル中で７ｍｇのＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）及び３ｍｇのＰＯＰＳ（１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン）をクロロホルムと混合し、Ｎ２ガス流下で１〜２時間、または完全に乾燥するまで乾燥させる。脂質混合物を１ｍＬのＨＢＳＳ（１０ｍｇ／ｍＬの最終脂質濃度）中に再懸濁し、２〜３分間ボルテックス処理した。その後、脂質懸濁液を、１枚の１００ｎｍ孔径膜を備えたＡｖａｎｔｉ小型押し出し器を使用して２９回押し出して、１０ｍｇ／ｍＬの小型単層小胞を得た。
【０４９６】
１０点希釈曲線でリポソームを６ｍｇ／ｍＬ（分子量のモルパーセント加重平均を使用して算出、７９３ｇ／モルに等しい）から０．００１５７ｍｇ／ｍＬまで滴定することによって、リポソームＥＣ２０、ＥＣ５０、及びＥＣ８０を個別に決定した。リポソームをＨＢＳＳで希釈し、上記のプロトコルのようにＨａｍｉｌｔｏｎ  Ｎｉｍｂｕｓリキッドハンドラーを使用して、５０μＬのリポソーム溶液をウェルごとにＴＲＥＭ２／ＤＡＰ１２過剰発現細胞に加えた。細胞を５分間インキュベートし、次いで、４０μＬのＣＳＴ溶解緩衝液中で溶解し、４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、ａｌｐｈａ−ＬＩＳＡアッセイに進めた。１０μＬのライセートからのｐＳｙｋ応答を上記のように測定し、Ｐｒｉｓｍで非線形回帰（４パラメーター用量反応）フィットを使用して曲線フィットを行った。決定されたＥＣ２０は０．０４６ｍｇ／ｍＬ、ＥＣ５０は０．２１２ｍｇ／ｍＬ、ＥＣ８０は０．９６７ｍｇ／ｍＬであった。
【０４９７】
ヒトマクロファージ走化性アッセイ
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒト単球濃縮カクテルプロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔ＃１５０６８）に従ってヒト単球を単離する。単離した単球を洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で洗浄し、１０ｍＬのＡＣＫ溶解液中に再懸濁して赤血球を溶解する。２０ｍＬの洗浄緩衝液を加えてＡＣＫ溶解を停止し、次いで、サンプルを遠心分離にかけ、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ）でもう一度洗浄する。細胞を培地に１００万／ｍＬの密度で再懸濁し、１２５ｍＬフラスコ（２５００万／フラスコ）中、ヒトＭＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ、Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃ＰＨＣ９５０１）の存在下でマクロファージを分化させる。３日目に新しいヒトＭ−ＣＳＦをスパイクする。５日目にヒトマクロファージを回収し、遊走アッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ、フェノールレッド不含＋０．１％ＢＳＡ）で洗浄する。洗浄後、細胞を１，０００，０００細胞／ｍＬの密度でアッセイ緩衝液中に再懸濁し、細胞培養インキュベーター内で１．３３μＭカルセインＡＭ蛍光色素（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ｃａｔ．＃３５４２１７）を用いて４５分間標識する。インキュベーション後、細胞をアッセイ緩衝液で１回洗浄し、アッセイ緩衝液中に１，０００，０００／ｍＬの密度で再懸濁する。ヒトマクロファージ走化性アッセイは、Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＦｌｕｏｒｏＢｌｏｋ  ２４−Ｍｕｌｔｉｗｅｌｌインサートシステム（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ｃａｔ＃３５１１５８）を使用して実施する。標識した細胞懸濁液をインサート（１００μｌ／ウェル）に加え、脇に置く。別の２４ウェルプレートに、６５０μＬの化学誘引物質Ｃ５ａ（１ｎｇ／ｍＬ）を加える。細胞を含むマルチウェルインサートを、化学誘引物質を含むプレートへ静かに沈め、すぐに４８５／５３０ｎｍ（Ｅｘ／Ｅｍ）波長で下部蛍光プレートリーダー（ＢｉｏＴｅｃｋ、ＳＹＮＥＲＧＹマイクロプレートリーダー）に置いた。インサートの下部表面に移動した細胞から放出される蛍光を様々な時点で測定する。
【０４９８】
食作用アッセイ
ヒト及びマウスの初代ミクログリア、マクロファージまたはマクロファージ／ミクログリア細胞株（それぞれＴＨＰ−１及びＥＣＯ２０など）の食作用活性を調べるには、ｐＨｒｏｄｏ（商標）Ｒｅｄで標識したミエリン調製物を使用する食作用アッセイを使用することができる。簡潔に述べれば、貪食細胞を９６ウェルプレートに播種する。細胞を抗体で前処理し（または陰性対照については未処理のまま、または対照試薬で処理）、適量の標識基質を細胞に加え、細胞を３７℃で２〜６時間インキュベートする。食作用活性をＯｐｅｒａ  Ｐｈｅｎｉｘ  Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって測定する。
【０４９９】
細胞生存アッセイ
これまでの研究は、ＴＲＥＭ２がマクロファージの分化及び生存に重要な役割を果たすことを示している（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，２００９，２１２：６８１−６９７）。野生型及びＴＲＥＭ２ノックアウトマウスのミクログリア細胞を使用した最近の研究は、ノックアウトマウスのミクログリアに細胞生存障害があることを示した（Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２０１７，３７：１７７２−１７８４）。ＴＲＥＭ２は、ミクログリアのエネルギー恒常性を支援することができる（Ｕｌｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，２０１７，１７０：６４９−６６３）。ＴＲＥＭ２ノックアウトマウスを使用した研究は、ＴＲＥＭ２が骨髄細胞の生存に必要であることを示唆している。ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体によるＴＲＥＭ２活性の増強が、限定されたＭ−ＣＳＦ条件下でのマクロファージ／ミクログリア生存に十分であるかどうかを理解するために、本明細書に記載される抗体を使用して、ヒトマクロファージの分化及び生存研究を実施した。末梢血から単離されたヒト単球を、滴定した濃度のプレートコーティングＴＲＥＭ２抗体またはアイソタイプコントロールの存在下で、５ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦとともにインキュベートした。６日目に、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ生存率アッセイによって決定した。図５Ａ〜Ｂに示されるように、抗ＴＲＥＭ２アゴニスト抗体ＲＳ９．Ｆ６、５４Ｃ２．Ａ１、２４Ｂ４．Ａ１、及び１９Ｆ１０．Ｆ３などの抗ＴＲＥＭ２抗体は、制限されたＭ−ＣＳＦまたはＭ−ＣＳＦなしで培養したヒトマクロファージの生存を増加させた。
【０５００】
ウェスタン及びＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイを使用して、ｐＳ９−ＧＳＫ３β、ｐＴ３７４−ＡＫＴ及びｐ−Ｅｒｋの細胞生存経路におけるシグナル伝達構成要素の活性化を調べることができる。これらのアッセイのために、ヒト血液細胞から単球を単離し、１０％ハイクローンＦＢＳ、抗生物質及び５０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地が入った９６ウェル細胞培養プレートに１ウェル当たり１００，０００細胞で播種し、ヒト単球からマクロファージを分化させる。分化の６日目に、細胞をＭ−ＣＳＦなしで４〜６時間処理する。抗ＴＲＥＭ２抗体及び適切なＩｇＧアイソタイプコントロールをそれぞれ適切な濃度で細胞に加え、３７℃で５分間インキュベートする。培地を迅速に除去し、プレートを氷上に置き、２００μＬの氷冷ＴＢＳで洗浄し、溶液を完全に除去する。４℃で１時間振盪しながら、細胞を４０〜５０μＬのＣｅｌｌ  Ｌｙｓａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒで溶解する。ライセートは、−８０℃で保存することができる。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社のＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎキットならびにｐＳ９−ＧＳＫ３β、ｐＴ３７４−ＡＫＴ及びｐ−Ｅｒｋを製造元の説明書に従って使用して、リン酸化を測定することができる。
【０５０１】
いくつかのシグナル伝達経路ＳＹＫ、ＥＲＫ１／２、ＡＫＴ及びＧＳＫ３−βの活性化について、抗ＴＲＥＭ２抗体を特徴付けた。末梢単球から分化したヒトマクロファージを１００，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。３つの条件（培地中０％、０．５％、及び１０％ＦＢＳ）でアッセイを３時間試験した。抗体ＲＳ９．Ｆ６、２４Ｂ４．Ａ１、８Ａ１１．Ｂ１、３Ｄ３．Ａ１、５４Ｃ２．Ａ１、アイソタイプコントロールのＩｇＧ２ａｋ、Ｒ＆Ｄ社のラット抗ＴＲＥＭ２、アイソタイプコントロールのラットＩｇＧ２ｂ、または処理なし（ＮＴ）で細胞を１５分間刺激した。Ａｌｐｈａ−ＬＩＳＡキット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、細胞ライセートのｐ−Ｙ５２５／５２６−ＳＹＫ、ｐ−Ｔ２０２／Ｙ２０４−ＥＲＫ１／２、ｐ−Ｓ９−ＧＳＫ３−β、及びｐ−Ｓ４７３−ＡＫＴを測定した。図６Ａ、６Ｂ、及び６Ｄに示されるように、ＲＳ９．Ｆ６、２４Ｂ４．Ａ１、３Ｄ３．Ａ１、５４Ｃ２．Ａ１及びラット抗ＴＲＥＭ２抗体は、ロバストなｐ−ＳＹＫ及びｐＥＲＫ１／２シグナルを誘導した。抗体は、ｐ−ＧＳＫシグナルを中程度に刺激した（図６Ｃ）。
【０５０２】
本明細書に記載される抗ＴＲＥＭ２抗体に関する細胞結合の特徴、ｐＳｙｋの活性化、ｓＴＲＥＭ２レベルの変化、及びｐＳｙｋを活性化する脂質リガンドとの相互作用の概要を以下の表５に示す。
【０５０３】
（表５）ＴＲＥＭ２抗体の概要
2020534277.tif 000013
2020534277.tif 000014
Ｎ．Ｄ．＝決定されず
＊細胞結合の列において、空白は、細胞結合なしを示す。
＊＊ｐＳｙｋの列において、空白は、バックグラウンドの５倍のカットオフで効果がないことを示す。
＊＊＊ｓＴＲＥＭ２の列では、以下の凡例を使用する：ＮＣ＝変化なし、−−＝ｓＴＲＥＭ２の減少、＋＋＝ｓＴＲＥＭ２の増加
【０５０４】
実施例２．ハイブリドーマ配列決定
Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、各抗体を産生するおよそ５×１０６個のハイブリドーマ細胞からトータルＲＮＡを抽出した。最初のｃＤＮＡ鎖を、ＳＭＡＲＴ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を供給元のプロトコルに従って使用して合成した。重鎖及び軽鎖の可変領域ｃＤＮＡを、マウスγ鎖及びκ鎖のＣ領域にそれぞれアニーリングする３’プライマー（以下に列挙する配列）とＳＭＡＲＴ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔで提供される５’ユニバーサルプライマーとを使用したポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。
【０５０５】
ＶＨのＰＣＲの場合、３’プライマーは、以下のとおりであった：
2020534277.tif 000015
【０５０６】
ＶＬのＰＣＲの場合、３’プライマーは、以下のとおりであった：
2020534277.tif 000016
【０５０７】
ＰＣＲ産物をアガロースゲル電気泳動によって分離した。ＶＨ及びＶＬ遺伝子に対応するＤＮＡフラグメントをＱＩＡ  ｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）によって精製し、ＴＯＰＯ  ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、ｐＣＲＩＩ−ＴＯＰＯベクターにサブクローニングした。成功した各クローンの配列をＳａｎｇｅｒシーケンシングによって決定した。各サンプルについて、少なくとも８つのクローンの配列を決定した。
【０５０８】
配列が決定した抗体の重鎖配列、軽鎖配列、及びＣＤＲ配列を以下の表１５に示す。
【０５０９】
実施例３．抗ＴＲＥＭ２抗体のエピトープビニング及びエピトープマッピング
エピトープビニング
限界量（０．２５ｎｇ／ｍＬ）のＴＲＥＭ２−Ｆｃタンパク質を、高結合ポリスチレン９６ウェルプレート（例えば、Ｃｏｒｎｉｎｇ  ３６９０）にコーティングした。その後、プレートを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０及び３％ウシ血清アルブミンを含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（１０ｍＭ、Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）（３％ＢＳＡ−ＴＢＳＴ）を満たすことによってブロッキングした。その後の抗体希釈は全て３％ＢＳＡ−ＴＢＳＴであった。ウェルをＴＢＳＴで５回洗浄した。ウェルを、試験抗体（１０μｇ／ｍｌ）及びビオチン化プローブ抗体（０．２５〜１ｎｇ／ｍＬ）とともに同時に室温で１時間インキュベートした。洗浄（５ｘＴＢＳＴ）後、ウェルを、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体とともに室温で１時間インキュベートした。洗浄（５ｘＴＢＳＴ）し、残った緩衝液を除去した後、ＴＭＢ基質を加えてプレートを約１〜２分間発色させ、２Ｎ硫酸を加えて停止した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍでの吸光度を決定した。結合の競合は、競合抗体の非存在下と比較した、競合抗体の存在下におけるプローブ抗体結合の減少率として決定した。エピトープビンは、いくつかの異なる抗体プローブのそれぞれの競合結合を算出することによって決定した。図７に、抗体を、類似エピトープごとにクラスター化して示す。クラスタリングは、Ｃｙｔｏｓｃａｐｅバージョン３．５．１を使用して算出した。
【０５１０】
ヒトＴＲＥＭ２−ＨＥＫ細胞株でのＦＡＣＳビニング
ヒトＴＲＥＭ２（Ｈ６）を過剰発現するＨＥＫ２９３を０．０５％トリプシンによって回収し、表面ＴＲＥＭ２の回復のために３７℃のインキュベーターで２時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を１ｘＰＢＳで洗浄し、ヒトＴｒｕｓｔａｉｎ  ＦｃＸ溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、Ｃａｔ＃４２２３０２）を含むＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ）を１０６／ｍＬの密度で加えた。細胞を丸底９６ウェルに１ウェルあたり１００，０００細胞で播種し、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、抗ＴＲＥＭ２抗体（１００ｎＭ）を細胞に加え、細胞を氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション後、ラット抗ｈ／ｍＴＲＥＭ２−ＡＰＣ抗体（１：１００、Ｒ＆Ｄ、Ｃａｔ＃ＦＡＢ１７２９１Ａ）を細胞に加え、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で３回洗浄し、１０μＬ  ＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、次いで、フローサイトメトリー（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）によって分析した。各サンプルにつき２０，０００イベントを取得した。Ｒ＆Ｄ抗体と競合する能力を、アイソタイプまたは緩衝液コントロールウェルと比較したＭＦＩ分析により決定した。ＦＡＣＳビニングの結果を以下の表６に示す。
【０５１１】
抗ＴＲＥＭ２抗体のＯｃｔｅｔビニング
自社内で作製したビオチン化ヒトＴｒｅｍ２−Ｈｉｓタンパク質を使用したＯｃｔｅｔ  Ｒｅｄにより、Ｒ＆Ｄ抗体との競合を実施した。ビオチン化ヒトＴＲＥＭ２−Ｈｉｓタンパク質をストレプトアビジンチップ上に捕捉し、次いで、チップを１００ｎＭのＲ＆Ｄ抗体または緩衝液のいずれかで３分間インキュベートし、続いて、１００ｎＭの試験ハイブリドーマで３分間インキュベーションした。Ｒ＆Ｄ抗体のプレ結合がある場合とない場合のハイブリドーマ結合曲線の差を分析して、エピトープを決定した。Ｏｃｔｅｔビニングの結果を以下の表６に示す。
【０５１２】
（表６）ＦＡＣＳ及びＯｃｔｅｔによるエピトープビニング
2020534277.tif 000017
Ｎ．Ｄ．＝決定されず
【０５１３】
ペプチドマイクロアレイを使用したエピトープマッピング
ヒトＴＲＥＭ２（配列番号９６；ＵｎｉｐｒｏｔＫＢアクセッション番号Ｑ９ＮＺＣ２）の細胞外ドメインを、５アミノ酸のオフセット（１０アミノ酸の重複）で、１５アミノ酸ペプチドに分割した。ペプチドを合成し、スポットサイズ０．５ｍｍでシリカスライドにトリプリケートで共有結合させた（ＪＰＴ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。抗体を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む３％ウシ血清アルブミンのＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（１０ｍＭ、Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）（３％ＢＳＡ−ＴＢＳＴ）で、３０μｇ／ｍＬに希釈した。Ｐｅｐｓｔａｒユーザーマニュアル（ＪＰＴ）に記載されているとおりに、スライド上に付けたペプチドに希釈抗体を室温で２時間結合させた。十分洗浄した後（５×５分  ＴＢＳＴ）、スライドを、二次抗体（ロバ抗マウスＩｇＧ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ  ６４７コンジュゲート、３％ＢＳＡ−ＴＢＳＴ中５μｇ／ｍＬ）とともに室温で１時間インキュベートした。十分洗浄した後（５×５分  ＴＢＳＴ、５×５分  超純水）、スライドを窒素下で乾燥し、Ｏｐｅｒａ  Ｐｈｅｎｉｘで６４７ｎｍのチャネルで撮像した。ＩｍａｇｅＪを使用し、ランドマークとして機能するコントロールマウスＩｇＧを用いて、画像をペプチドアレイ定義ファイル（ｇａｌｖｉｅｗｅｒ、ＪＰＴ）に対して位置合わせした。エピトープマッピングの結果を以下の表７に示す。
【０５１４】
（表７）抗ＴＲＥＭ２抗体のエピトープマッピング
2020534277.tif 000018
Ｎ．Ｄ．＝決定されず
【０５１５】
実施例４．新規ＴＲＥＭ２−ｐＳｙｋ活性化脂質のスクリーニング
脂質は、ＴＲＥＭ２の生理学的リガンドである。ＴＲＥＭ２の潜在的な内因性脂質リガンド、例えば、特定の細胞もしくは組織の種類または特定の疾患状態における内因性脂質リガンドを理解することで、抗体と脂質の生物学的相互作用の分析及びｉｎ  ｖｉｖｏ機能の予測が可能になる。野生型ＴＲＥＭ２とＤＡＰ１２、変異体ＴＲＥＭ２とＤＡＰ１２、またはＤＡＰ１２のみを発現するＨＥＫ細胞、及びＴＲＥＭ２を内因性発現するマクロファージ細胞でｐ−Ｓｙｋを誘導する脂質リガンドを特定するために、スクリーニングを実施した。また、選択した抗ＴＲＥＭ２抗体は、ｐ−Ｓｙｋを活性化する脂質リガンドと抗体の相互作用を特徴付ける試験も行った。
【０５１６】
リポソーム調製
脂質をＡｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）またはＥｃｈｅｌｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，ＵＴ）から購入した。スクリーニングした脂質のそれぞれをクロロホルム中に再懸濁し、３０モル％の組成で７０モル％のホスファチジルコリン（ＰＣ；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ）に加えた。Ｋｄｏ２−リピドＡを１０モル％の組成で９０モル％のＰＣとともに加えた。脂質混合物を窒素ガス下で乾燥し、４ｍｇ／ｍＬの濃度でＨＢＳＳ中に再懸濁した。混合物を再懸濁するまでボルテックス処理するか、または軽く超音波処理し、次いで、１〜５分間、超音波浴で処理した。リポソームは、１〜２週間で使用した。独立した３つのリポソームバッチを実験に使用した。
【０５１７】
過剰発現ＨＥＫ２９３細胞株の培養
ＴＲＥＭ２とＤＡＰ１２、変異体ＴＲＥＭ２−Ｒ４７ＨとＤＡＰ１２、またはＤＡＰ１２のみを過剰発現するＨＥＫ２９３細胞株を、９６ウェルのＰＤＬコーティングプレートに１ウェルあたり４０，０００細胞の密度で播種し、９０〜１００％コンフルエントになるまで３６〜４８時間培養した。
【０５１８】
ヒトマクロファージの分化培養
１０ｍＬのヒト血液をＢｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃから得た。単球ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．；Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ；＃１５０６８）を製造元のプロトコルに従って使用して、単球を抽出した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｒｅｍｉｕｍ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ；＃１７−５４４２−０２）を用いて、密度勾配を実施した。単離された単球を約１〜１３０万細胞／ｍＬで再懸濁し、組織培養処理済みＴ１７５フラスコ中、５０ｎｇ／ｍＬのヒトＭ−ＣＳＦ（Ｇｉｂｃｏ、＃ＰＨＣ９５０１）を含む、ＲＰＭＩ、１０％Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、及びペニシリン／ストレプトマイシンで、５〜６日間培養した。Ｍ−ＣＳＦを２〜３日ごとに補充した。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、新しい培地を１５ｍＬ加え、細胞をこすり取って回収した。１０〜２５ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを含む組織培養処理済み９６ウェルプレートで、細胞を１ウェルあたり１００，０００細胞の密度で一晩培養した。
【０５１９】
過剰発現ＨＥＫ２９３細胞株及びヒトマクロファージのリポソーム刺激アッセイ
細胞培地を除去し、細胞を２００ｕｌのＨＢＳＳで１回洗浄した。リポソームを０．０３１２５ｍｇ／ｍＬ〜２ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度でＨＢＳＳで希釈し、次いで、１プレートあたり２〜３の技術的反復で５０μｌをウェルに加えた。各プレートは、ＨＢＳＳネガティブコントロールウェル、１００％ＰＣリポソームコントロール、５μｇ／ｍＬのアゴニスト抗ＴＲＥＭ２ポジティブコントロール（Ａｂｎｏｖａ；Ｔａｉｗａｎ；＃ＭＡＢ２０５６）、及び５μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ３アイソタイプコントロール（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ；＃ＭＡＢ００７）を含有した。刺激物を細胞とともに３７℃、５％ＣＯ２で５分間インキュベートし、リポソームを除去し、プレートを−８０℃で凍結した。
【０５２０】
過剰発現ＨＥＫ２９３細胞株及びヒトマクロファージのリン酸化Ｓｙｋアッセイ
細胞を、１ｍＭ  ＰＭＳＦを含むＣｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ；＃９８０３）５０ｕｌ／ウェル中、氷上で３０分〜１時間溶解した。ＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ＳｕｒｅＦｉｒｅ  Ｕｌｔｒａｐ−Ｓｙｋ  Ｔｙｒ５２５／５２６アッセイキット（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＡＬＳＵ−ＰＳＹＫ−Ａ１０Ｋ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ライセート中のｐＳｙｋレベルを測定した。１０μｌのライセートを３８４ウェルのＯｐｔｉＰｌａｔｅｓ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ；＃６００７２９０）に加え、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してＡｌｐｈａＬＩＳＡ蛍光を測定した。
【０５２１】
リポソームスクリーニング分析
ＰＳｙｋ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡ蛍光をｌｏｇ２スケールに変換した。リポソーム及びコントロールの蛍光値は、同じプレート上のＨＢＳＳ刺激ウェルの平均蛍光値からそれぞれ差し引いた（ｌｏｇ２（リポソーム）−ｌｏｇ２（ＨＢＳＳ平均）＝ｌｏｇ２（シグナル））。結果を標準スケールに変換して、倍数変化を求めた（２ｌｏｇ２（シグナル）＝倍数変化）。技術的反復実験の倍数変化値を平均して、列挙したバックグラウンドに対する倍数変化（ｐＳｙｋ  ＦＯＢ）を得た。グラフは、独立した実験または個々のヒトドナーの値を表す。過剰発現ＨＥＫ２９３細胞株のスクリーニングの結果を以下の表９及び図８Ａ〜８Ｂに示す。初代ヒトマクロファージのスクリーニングの結果を以下の表１０及び図８Ｃに示す。単独発現のＤＡＰ１２よりもＴＲＥＭ２に対して特異性を示すＨＥＫ２９３の結果を使用して、どの脂質種がヒトマクロファージ上のＴＲＥＭ２リガンドとして機能する可能性が高いかを推定することができる。ＰＡＨＳＡ、ＫＬＡ、ＣＬ、Ｃ１Ｐ、ＢＭＰ、ＰＩ、ＰＳ、ＬＰＥ、及びＧａｌＣｅｒは、ｐＳｙｋレベルがＤＡＰ１２コントロール細胞を超えて上昇しているので、ＴＲＥＭ２を介したシグナル伝達を行う可能性が高く、一方、ＰＡ、Ｓｏ１Ｐ、及びＧｌｃＳｏは、ＴＲＥＭ２を介したシグナル伝達をしない可能性がある。図９Ａは、ｐ−Ｓｙｋを活性化する、選択した抗ＴＲＥＭ２抗体の脂質リガンドとの相互作用の特性評価を示す。図９Ａに示されるように、２１Ｄ６．Ｇ２及び３Ｄ３．Ａ１は、脂質ＴＲＥＭ２活性化物質との相加として機能する、ＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。２１Ｄ４．Ｄ１は、単独でｐＳｙｋシグナル伝達を誘導するが、ＴＲＥＭ２の脂質リガンド活性化を遮断する、ＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。
【０５２２】
ヒトマクロファージのＴＲＥＭ２  ＰＡＭ／ｐＳｙｋアッセイ
ヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、マクロファージ培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＨｙクローンＦＢＳ＋Ｇｌｕｔａｍａｘ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋非必須アミノ酸＋ピルビン酸ナトリウム）中でヒトｍＣＳＦとともに単球を５日間培養し、ドナー血液からヒトマクロファージを分化させた。５日目に、ヒトマクロファージをフラスコからこすり取り、マクロファージ培地（ｍＣＳＦ不含）を含む９６ウェルのポリＤ−リジンコーティングプレートに１００，０００細胞／ウェルで再度播種した。細胞を２４時間インキュベートして付着させ、次いで、培地を除去した。
【０５２３】
ＨＢＳＳ中に希釈した７０％ＤＯＰＣ及び３０％ＰＯＰＳからなる脂質小胞（上記の小胞作製手順に従って作製）と予め混合した抗体を細胞に即座に加え、３７℃で５分間インキュベートした。リポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して３５μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＳＴ）を加えた。次いで、ライセートを４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、上記のｐＳｙｋ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイに直ちに進めた。リポソーム単独によるシグナルを各値で差し引き、抗体が脂質リガンド誘導ｐＳｙｋ活性化に対する相乗効果、中立的効果、または阻害効果を有するかどうかを決定した。アッセイの結果を図９Ｂ及び以下の表８に示す。５２Ｈ９．Ｄ１及び７Ｂ１０．Ａ２は、脂質ＴＲＥＭ２活性化物質と相乗的に作用するＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。ＲＳ９．Ｆ６及び３Ｄ３．Ａ１は、ＴＲＥＭ２の脂質リガンド活性化に対して少なくとも相加効果を有するＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。２１Ｄ４．Ｄ１は、ＴＲＥＭ２の脂質リガンド活性化に対して阻害効果を有するＴＲＥＭ２抗体の種類を定義する。
【０５２４】
（表８）ＴＲＥＭ２脂質リガンドの存在下におけるｐＳｙｋの誘導
2020534277.tif 000019
【０５２５】
ＴＲＥＭ２  ｐＳｙｋアンタゴニストアッセイ
ヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、マクロファージ培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＨｙクローンＦＢＳ＋Ｇｌｕｔａｍａｘ＋Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋非必須アミノ酸＋ピルビン酸ナトリウム）中でヒトｍＣＳＦとともに単球を５日間培養し、ドナー血液からヒトマクロファージを分化させた。５日目に、ヒトマクロファージをフラスコからこすり取り、マクロファージ培地（ｍＣＳＦ不含）を含む９６ウェルのポリＤ−リジンコーティングプレートに１００，０００細胞／ウェルで再度播種した。細胞を２４時間インキュベートして付着させ、次いで、培地を除去した。
【０５２６】
ＲＰＭＩのみで希釈した抗体を細胞に即座に加え、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、抗体を除去した。ＨＢＳＳ中の７０％ＤＯＰＣ及び３０％ＰＯＰＳからなる脂質小胞（上記の小胞作製手順に従って作製）を細胞に加え、３７℃で数分インキュベートした。リポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して３５μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＳＴ）を加えた。次いで、ライセートを４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、上記のｐＳｙｋ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイに直ちに進めた。リポソーム単独によるシグナルを各値で差し引き、抗体が脂質リガンド誘導ｐＳｙｋ活性化に対する相乗効果、中立的効果、または阻害効果を有するかどうかを決定した。アッセイの結果を図９Ｃ〜９Ｄに示す。図９Ｃ及び９Ｄに示されるように、５１Ｄ４．Ａ１、３０Ｆ２．Ａ２、２１Ｄ１１．Ｂ１、及び２６Ｄ２．Ｄ１の全てがリポソーム媒介性ｐＳｙｋシグナル伝達を遮断し、５４Ｃ２．Ａ１、２２Ｂ８．Ｂ１、及び２６Ｅ２．Ａ３の全てがリポソーム媒介性ｐＳｙｋシグナル伝達を増強した。
【０５２７】
図９Ｅは、２１Ｄ４及び２１Ｄ１１によるリポソーム媒介性ｐＳｙｋの阻害を示す。これらの実験は、以下のとおりに実施した。実験の２日前に、ＴＲＥＭ２及びＤＡＰ１２を安定して過剰発現するＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンコーティングプレートに４０，０００細胞／ウェルで播種した。ＤＭＥＭのみで希釈した抗体を細胞に即座に加え、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、抗体を除去した。７０％ＤＯＰＣ及び３０％ＰＯＰＳからなる脂質小胞を、そのＥＣ２０、ＥＣ５０、もしくはＥＣ８０、またはＰＢＳ単独で細胞に加え、３７℃で５分間インキュベートした。リポソーム／抗体溶液を除去し、リキッドハンドラーを使用して３５μＬの溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＣＳＴ）を加えた。次いで、ライセートを４℃で３０分間インキュベートし、次いで、−８０℃で凍結するか、上記のｐＳｙｋ  ＡｌｐｈａＬＩＳＡアッセイに直ちに進めた。阻害率（％）を図９Ｃのように算出した。
【０５２８】
図９Ｆ及び９Ｇは、漸増抗体濃度での２１Ｄ４及び２１Ｄ１１による阻害をそれぞれ示す。これらの実験は、図９Ｅに記載されているものと同様に実施した。これらの図は、２１Ｄ４がアンタゴニスト活性を示し、２１Ｄ１１が弱いアンタゴニスト活性を示すことを表している。
【０５２９】
（表９）過剰発現ＨＥＫ細胞株のスクリーニングから特定された新規ＴＲＥＭ２−ｐＳｙｋ活性化脂質
2020534277.tif 000020
2020534277.tif 000021
2020534277.tif 000022
【０５３０】
（表１０）初代ヒトマクロファージのスクリーニングから特定された新規ＴＲＥＭ２−ｐＳｙｋ活性化脂質
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【０５３１】
実施例５．ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチド
本実施例は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）結合、及び血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する輸送を付与する、Ｆｃポリペプチドへの修飾について記載する。別途指示がない限り、本実施例におけるアミノ酸残基の位置は、ヒトＩｇＧ１野生型Ｆｃ領域のＥＵインデックスナンバリングに基づいてナンバリングされる。
【０５３２】
位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１（ＣＨ３Ｃクローン）に修飾を含むＦｃポリペプチドの生成及び特性評価
アミノ酸位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１を含む位置に修飾を導入したＦｃ領域を含有する酵母ライブラリーを後述のように作製した。ＴｆＲに結合する例示的なクローンを表１１及び１２に示す。
【０５３３】
ソーティングを更に２ラウンド行った後、単一クローンの配列を決定し、４つのユニーク配列を特定した。これらの配列は、位置３８８に保存的なＴｒｐを有し、位置４２１は全て芳香族残基（すなわち、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＨｉｓ）であった。他の位置には大きな多様性があった。ライブラリーから選択した４つのクローンを、ＣＨＯ細胞または２９３細胞で、ＦａｂフラグメントへのＦｃ融合体として発現させ、プロテインＡクロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーによって精製し、次いで、ヒトＴｆＲに対する結合を、ホロ−Ｔｆの存在下または非存在下で、ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。クローンは全てヒトＴｆＲに結合し、ホロ−Ｔｆを過剰に添加しても（５μＭ）、結合への影響はなかった。クローンはまた、ヒトＴｆＲを内因的に発現する２９３Ｆ細胞への結合についても試験した。クローンは２９３Ｆ細胞に結合したが、総合的な結合は、高親和性ポジティブコントロールよりも実質的に弱かった。
【０５３４】
次に、クローンＣＨ３Ｃ．３を試験クローンとして使用して、クローンがＴｆＲ発現細胞に内在化できるかどうかを試験した。接着ＨＥＫ２９３細胞を９６ウェルプレートで約８０％コンフルエントまで成長させ、培地を除去し、サンプルを１μＭ濃度で加えた：クローンＣＨ３Ｃ．３、抗ＴｆＲベンチマークポジティブコントロール抗体（Ａｂ２０４）、抗ＢＡＣＥ１ベンチマークネガティブコントロール抗体（Ａｂ１０７）、及びヒトＩｇＧアイソタイプコントロール（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈより入手）。細胞を３７℃及び８％ＣＯ２濃度で３０分間インキュベートし、次いで、洗浄し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００で透過処理し、抗ヒトＩｇＧ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８二次抗体で染色した。更に洗浄した後、細胞をハイコンテント蛍光顕微鏡（すなわち、Ｏｐｅｒａ  Ｐｈｅｎｉｘ（商標）システム）で撮像し、１細胞あたりの斑点数を定量した。クローンＣＨ３Ｃ．３は、１μＭで、ポジティブ抗ＴｆＲコントロールと同様の内在化傾向を示し、一方、ネガティブコントロールは内在化を示さなかった。
【０５３５】
クローンの更なる操作
ヒトＴｆＲに対する最初のヒットの親和性を改善するために、ソフトランダム化法を使用して、更なるライブラリーを作製した。元の４つのヒットのそれぞれに基づいて、ＤＮＡオリゴを作製し、ソフト変異導入を組み込んだ。ＴｆＲに結合する更なるクローンを特定し、選択した。選択したクローンを２つの一般配列グループに分類した。グループ１のクローン（すなわち、クローンＣＨ３Ｃ．１８、ＣＨ３Ｃ．２１、ＣＨ３Ｃ．２５、及びＣＨ３Ｃ．３４）は、位置３８４に半保存的Ｌｅｕ、位置３８６にＬｅｕまたはＨｉｓ、位置３８７及び３８９にそれぞれ保存的及び半保存的Ｖａｌ、ならびに位置４１３、４１６、及び４２１にそれぞれ半保存的Ｐ−Ｔ−Ｗモチーフを有した。グループ２のクローンは、位置３８４に保存的Ｔｙｒ、位置３８６〜３９０にモチーフＴＸＷＳＸ、ならびに位置４１３、４１６、及び４２１にそれぞれ保存的モチーフＳ／Ｔ−Ｅ−Ｆを有した。クローンＣＨ３Ｃ．１８及びＣＨ３Ｃ．３５を、各配列グループの代表メンバーとして更なる研究に使用した。
【０５３６】
エピトープマッピング
操作したＦｃ領域がＴｆＲのアピカルドメインに結合するかどうかを決定するために、ＴｆＲアピカルドメインをファージの表面上に発現させた。アピカルドメインの適切なフォールディング及びディスプレイを行うためには、ループの１つを切断し、配列を循環置換する必要があった。クローンＣＨ３Ｃ．１８及びＣＨ３Ｃ．３５をＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、ファージＥＬＩＳＡプロトコルに従った。簡潔に述べれば、１％ＰＢＳＡで洗浄及びブロッキングした後、ファージディスプレイの希釈液を加え、室温で１時間インキュベートした。その後、プレートを洗浄し、抗Ｍ１３−ＨＲＰを加え、更に洗浄した後、プレートをＴＭＢ基質で発色させ、２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４でクエンチした。本アッセイでは、両方のクローンＣＨ３Ｃ．１８及びＣＨ３Ｃ．３５がアピカルドメインに結合した。
【０５３７】
パラトープマッピング
Ｆｃドメインのどの残基がＴｆＲ結合に最も重要であるかを理解するために、一連の変異体クローンＣＨ３Ｃ．１８及びクローンＣＨ３Ｃ．３５Ｆｃ領域を作製した。各変異体は、ＴｆＲ結合が記録された変異の１つの位置を野生型に戻した。得られたバリアントをＦａｂ−Ｆｃ融合体として組み換え発現し、ヒトまたはカニクイザルＴｆＲへの結合について試験した。クローンＣＨ３Ｃ．３５の場合、位置３８８及び４２１が結合に重要であり、これらのいずれかを野生型に戻すと、ヒトＴｆＲへの結合は完全になくなった。
【０５３８】
成熟クローンの結合特性評価
精製したＦａｂ−Ｆｃ融合体バリアントと、プレート上にコーティングしたヒトまたはカニクイザルＴｆＲとの結合ＥＬＩＳＡを上記のとおり実施した。クローンＣＨ３Ｃ．１８変異体ライブラリーのバリアントである、クローンＣＨ３Ｃ．３．２−１、クローンＣＨ３Ｃ．３．２−５、及びクローンＣＨ３Ｃ．３．２−１９は、ほぼ同等のＥＣ５０値でヒト及びカニクイザルＴｆＲに結合したが、親クローンＣＨ３Ｃ．１８及びＣＨ３Ｃ．３５は、ヒト対カニクイザルＴｆＲに対して、１０倍を超える良好な結合を有した。
【０５３９】
次に、修飾されたＦｃポリペプチドがヒト細胞及びサル細胞で内在化するどうかを試験した。上記プロトコルを使用して、ヒトＨＥＫ２９３細胞及びアカゲザルＬＬＣ−ＭＫ２細胞での内在化を試験した。ヒト及びカニクイザルＴｆＲに同様に結合するバリアントである、クローンＣＨ３Ｃ．３．２−５及びＣＨ３Ｃ．３．２−１９は、クローンＣＨ３Ｃ．３５と比較して、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞における内在化が大幅に改善した。
【０５４０】
クローンの更なる操作
クローンＣＨ３Ｃ．１８及びＣＨ３Ｃ．３５を更に親和性成熟させる更なる操作には、直接的相互作用、第２シェル相互作用、または構造安定化を介して結合を増強する位置に、追加の変異を加えることが含まれた。これは、「ＮＮＫウォーク」または「ＮＮＫパッチ」ライブラリーの作製及び選択により達成した。ＮＮＫウォークライブラリーは、パラトープに近い残基のＮＮＫ変異を１つずつ作製することを伴った。ＦｃγＲＩに結合するＦｃの構造（ＰＤＢ  ＩＤ：４Ｗ４Ｏ）を調べることによって、元の修飾位置に近い４４の残基を調査候補として特定した。具体的には、次の残基をＮＮＫ変異導入の対象にした：Ｋ２４８、Ｒ２５５、Ｑ３４２、Ｒ３４４、Ｅ３４５、Ｑ３４７、Ｔ３５９、Ｋ３６０、Ｎ３６１、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｋ３７０、Ｅ３８０、Ｅ３８２、Ｓ３８３、Ｇ３８５、Ｙ３９１、Ｋ３９２、Ｔ３９３、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｓ４０３、Ｋ４０９、Ｌ４１０、Ｔ４１１、Ｖ４１２、Ｋ４１４、Ｓ４１５、Ｑ４１８、Ｑ４１９、Ｇ４２０、Ｖ４２２、Ｆ４２３、Ｓ４２４、Ｓ４２６、Ｑ４３８、Ｓ４４０、Ｓ４４２、Ｌ４４３、Ｓ４４４、Ｐ４４５８、Ｇ４４６、及びＫ４４７。４４のシングルポイントＮＮＫライブラリーをＫｕｎｋｅｌ変異導入を使用して作製し、生成物をプールし、他の酵母ライブラリーについて記載したとおりに、エレクトロポレーションにより酵母に導入した。
【０５４１】
これらのミニライブラリーの組み合わせ（それぞれ１つの位置に変異を有し、２０のバリアントが生じる）により、より高い親和性結合が得られる任意の位置について、酵母表面ディスプレイの使用により選択された小ライブラリーを作製した。選択は、ＴｆＲアピカルドメインタンパク質を使用して、上記のとおりに実施した。ソーティングを３ラウンド行った後、濃縮酵母ライブラリーから得たクローンの配列を決定し、特定の点変異によりアピカルドメインタンパク質への結合が大幅に改善する、いくつかの「ホットスポット」位置を特定した。クローンＣＨ３Ｃ．３５の場合、これらの変異には、Ｅ３８０（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎへの変異）及びＳ４１５（Ｇｌｕへの変異）が含まれた。クローンＣＨ３Ｃ．３５の単一及び組み合わせ変異体の配列を配列番号１００〜１０４及び１６０〜１６６に記載する。クローンＣＨ３Ｃ．１８の場合、これらの変異には、Ｅ３８０（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、またはＬｅｕへの変異）及びＫ３９２（Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓへの変異）が含まれた。クローンＣＨ３Ｃ．１８単一変異体の配列を配列番号１５４〜１５９に示す。
【０５４２】
クローンＣＨ３Ｃ．３５の親和性を改善する追加の成熟ライブラリー
ＮＮＫウォークライブラリーの変異の組み合わせを、その周辺にいくつかの更なる位置を加えながら特定するために、先の酵母ライブラリーについて記載したとおりに追加のライブラリーを作製した。このライブラリーでは、ＹｘＴＥＷＳＳ（配列番号２９９）及びＴｘｘＥｘｘｘｘＦ（配列番号３００）モチーフを一定に保ち、６つの位置を完全にランダム化した：Ｅ３８０、Ｋ３９２、Ｋ４１４、Ｓ４１５、Ｓ４２４、及びＳ４２６。位置Ｅ３８０及びＳ４１５は、ＮＮＫウォークライブラリーの「ホットスポット」であるため、含めた。位置Ｋ３９２、Ｓ４２４、及びＳ４２６は、結合領域を位置付けし得るコア部分を構成するため、含めた。一方、Ｋ４１４は、位置４１５に隣接するため選択した。
【０５４３】
このライブラリーは、カニクイザルＴｆＲアピカルドメインのみを用いて、前述したようにソーティングした。５ラウンド後に濃縮プールの配列決定をした。特定されたユニーククローンの修飾された領域の配列を配列番号１０５及び１６９〜１８５に記載する。
【０５４４】
主な結合パラトープにおける許容可能な多様性を更に探求するために、次のライブラリーを設計した。元の位置（３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１）及び２つのホットスポット（３８０及び４１５）をＮＮＫコドンで個別にランダム化し、一連の単一位置飽和変異導入ライブラリーを酵母で作製した。加えて、各位置をそれぞれ野生型残基に戻し、これらの個々のクローンを酵母で提示させた。野生型残基に戻した場合でもＴｆＲへの実質的な結合を保持した位置は、位置３８０、３８９、３９０、及び４１５のみであることが確認された（いくらか残るものの大きく減少した結合は、４１３を野生型に戻したときに観察された）。
【０５４５】
ヒトＴｆＲアピカルドメインに対する単一位置のＮＮＫライブラリーのソーティングを３ラウンド行い、上位約５％までの結合体を回収し、次いで、各ライブラリーから少なくとも１６クローンの配列を決定した。結果は、クローンＣＨ３Ｃ．３５の場合、各位置のどのアミノ酸がヒトＴｆＲへの結合を大幅に減少させることなく許容され得るかを示している。概要を以下に示す。
位置３８０：Ｔｒｐ、Ｌｅｕ、またはＧｌｕ、
位置３８４：ＴｙｒまたはＰｈｅ、
位置３８６：Ｔｈｒのみ、
位置３８７：Ｇｌｕのみ、
位置３８８：Ｔｒｐのみ、
位置３８９：Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＶａｌ（野生型Ａｓｎ残基は、ある程度の結合を保持するようだが、ライブラリーソーティング後には現れなかった）、
位置３９０：ＳｅｒまたはＡｓｎ、
位置４１３：ＴｈｒまたはＳｅｒ、
位置４１５：ＧｌｕまたはＳｅｒ、
位置４１６：Ｇｌｕのみ、及び
位置４２１：Ｐｈｅのみ。
【０５４６】
クローンＣＨ３Ｃ．３５への置換を単一変化または組み合わせで行ったときの上記残基は、ＴｆＲアピカルドメインへの結合を保持するパラトープ多様性を表す。これらの位置に変異を有するクローンは、表１２に示されるものを含み、これらのクローンのＣＨ３ドメインの配列を配列番号１００〜１３６及び３４４〜３５０に示す。
【０５４７】
ＴｆＲ結合を付与するように修飾され得る更なるＦｃ位置
Ｆｃ領域の代替部位、例えば、以下の位置に修飾を有する、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合する更なる修飾されたＦｃポリペプチドを作製した：
位置２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、及び２９０（ＣＨ２Ａ２クローン）；
位置２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８、及び２９９（ＣＨ２Ｃクローン）；
位置２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、及び３００（ＣＨ２Ｄクローン）；
位置２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１（ＣＨ２Ｅ３クローン）；または
位置３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０（ＣＨ３Ｂクローン）。
【０５４８】
ＴｆＲに結合する例示的なＣＨ３Ｂクローンは、配列番号１８６〜１９０に記載される。ＴｆＲに結合する例示的なＣＨ２Ａ２クローンは、配列番号１９１〜１９５に記載される。ＴｆＲに結合する例示的なＣＨ２Ｃクローンは、配列番号１９６〜２００に記載される。ＴｆＲに結合する例示的なＣＨ２Ｄクローンは、配列番号２０１〜２０５に記載される。ＴｆＲに結合する例示的なＣＨ２Ｅ３クローンは、配列番号２０６〜２１０に記載される。
【０５４９】
方法
ファージディスプレイライブラリーの作製
野生型ヒトＦｃ配列をコードするＤＮＡ鋳型を合成し、ファージミドベクターに組み込んだ。ファージミドベクターは、ｏｍｐＡまたはｐｅｌＢリーダー配列と、ｃ−Ｍｙｃ及び６ｘＨｉｓエピトープタグに融合したＦｃインサートと、アンバー終止コドンに続くＭ１３コートタンパク質ｐＩＩＩとを含有した。
【０５５０】
修飾が望ましい位置に「ＮＮＫ」の３コドンを含有するプライマーを作製した。Ｎは、任意のＤＮＡ塩基（すなわち、Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＴ）であり、Ｋは、ＧまたはＴのいずれかである。あるいは、「ソフト」ランダム化プライマーを使用し、各ランダム化位置に、７０％の野生型塩基と、１０％の他の３つの各塩基に対応する塩基の組み合わせを使用した。ランダム化領域に対応するＦｃ領域のフラグメントのＰＣＲ増幅を実施することによってライブラリーを作製し、ＳｆｉＩ制限部位を含有するエンドプライマーを使用して組み立て、次いで、ＳｆｉＩで消化し、ファージミドベクターにライゲートした。あるいは、これらのプライマーを使用して、Ｋｕｎｋｅｌ法の変異導入を実施した。ライゲーション産物またはＫｕｎｋｅｌ産物により、エレクトロコンピテント大腸菌細胞ＴＧ１株（Ｌｕｃｉｇｅｎ（登録商標）から入手）を形質転換した。回収し、一晩成長させた後、大腸菌細胞をＭ１３Ｋ０７ヘルパーファージに感染させ、その後、ライブラリーファージを５％ＰＥＧ／ＮａＣｌで沈殿させ、１５％グリセロール／ＰＢＳに再懸濁し、使用まで凍結した。典型的なライブラリーサイズは、約１０９〜約１０１１個の形質転換体の範囲であった。Ｆｃ二量体は、ｐＩＩＩ融合Ｆｃと、ｐＩＩＩに結合していない可溶性Ｆｃとの間（後者は、ｐＩＩＩの前のアンバー終止コドンによって生成される）での対合を介して、ファージ上に提示された。
【０５５１】
酵母ディスプレイライブラリーの作製
野生型ヒトＦｃ配列をコードするＤＮＡ鋳型を合成し、酵母ディスプレイベクターに組み込んだ。ＣＨ２及びＣＨ３ライブラリーの場合、Ｆｃポリペプチドは、Ａｇａ２ｐ細胞壁タンパク質上に提示された。両ベクターは、Ｋｅｘ２切断配列を持つプレプロリーダーペプチド、及びＦｃの末端に融合したｃ−Ｍｙｃエピトープタグを含有した。
【０５５２】
酵母ディスプレイライブラリーは、ベクターに対して相同末端を含有するプライマーを用いてフラグメントの増幅を実施したことを除いて、ファージライブラリーについて記載した方法と同様の方法を使用して組み立てた。新たに調製したエレクトロコンピテント酵母（すなわち、ＥＢＹ１００株）に線状ベクター及び組み立てたライブラリーインサートをエレクトロポレーションで導入した。エレクトロポレーション法は、当業者に知られている。ＳＤ−ＣＡＡ選択培地で回収した後、酵母をコンフルエントまで成長させ、２回分割し、次いで、ＳＧ−ＣＡＡ培地に移すことによって、タンパク質発現を誘導した。典型的なライブラリーサイズは、約１０７〜約１０９個の形質転換体の範囲であった。Ｆｃ二量体は、隣接して提示されたＦｃモノマーが対合することによって形成された。
【０５５３】
ファージ選択の一般的方法
Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｂａｒｂａｓ，２００１）のファージ法を採用した。更なるプロトコルの詳細は、その参考文献から得ることができる。
【０５５４】
プレートソーティング法
抗原をＭａｘｉＳｏｒｐ（登録商標）マイクロタイタープレート（典型的に１〜１０μｇ／ｍＬ）上に４℃で一晩コーティングした。ファージライブラリーを各ウェルに加え、結合のために一晩インキュベートした。マイクロタイターのウェルを０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で十分洗浄し、酸（典型的に５００ｍＭ  ＫＣｌまたは１００ｍＭグリシンを含む５０ｍＭ  ＨＣｌ（ｐＨ２．７））とともにウェルを３０分間インキュベートすることによって、結合したファージを溶出した。溶出ファージを１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）で中和し、ＴＧ１細胞及びＭ１３／ＫＯ７ヘルパーファージを使用して増幅し、５０μｇ／ｍＬのカルベナシリン及び５０ｕｇ／ｍＬのカナマイシンを含有する２ＹＴ培地中、３７℃で一晩成長させた。標的含有ウェルから溶出したファージの力価を、非標的含有ウェルから回収したファージの力価と比較して、濃縮を評価した。その後、結合中のインキュベーション時間を短縮し、洗浄時間及び洗浄回数を増やすことによって、選択ストリンジェンシーを高めた。
【０５５５】
ビーズソーティング法
ＮＨＳ−ＰＥＧ４−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）から入手）を使用して、遊離アミンを介して、抗原をビオチン化した。ビオチン化反応には、３〜５倍モル過剰のＰＢＳ中ビオチン試薬を使用した。Ｔｒｉｓで反応を停止し、次いで、ＰＢＳで十分に透析した。ビオチン化抗原をストレプトアビジンコーティング磁気ビーズ（すなわち、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから入手したＭ２８０−ストレプトアビジンビーズ）に固定化した。ファージディスプレイライブラリーを抗原コーティングビーズとともに室温で１時間インキュベートした。次いで、結合していないファージを除去し、ビーズをＰＢＳＴで洗浄した。結合したファージを、５００ｍＭ  ＫＣｌ（または０．１Ｍグリシン）を含有する５０ｍＭ  ＨＣｌ（ｐＨ２．７）とともに３０分間インキュベートすることによって溶出し、次いで、プレートソーティングについて上記したように中和し、増幅させた。
【０５５６】
パニングを３〜５ラウンド行った後、Ｆｃをファージ上に発現させるか、大腸菌ペリプラズム中に可溶的に発現させることによって、単一クローンをスクリーニングした。そのような発現法は、当業者によく知られている。抗原またはネガティブコントロールをコーティングし、ブロッキングしたＥＬＩＳＡプレートに、個々のファージ上清またはペリプラズム抽出物を曝露し、その後、ペリプラズム抽出物にはＨＲＰ結合ヤギ抗Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈから入手）、またはファージには抗Ｍ１３（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して検出し、次いで、ＴＭＢ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから入手）で発色させた。バックグラウンドの約５倍を超えるＯＤ４５０値を有するウェルをポジティブクローンとみなし、配列決定し、その後、いくつかのクローンを、可溶性Ｆｃフラグメントとして、またはＦａｂフラグメントに融合させて、発現させた。
【０５５７】
酵母選択の一般的方法
ビーズソーティング法（磁気標識細胞分離法（ＭＡＣＳ））
ＭＡＣＳ及びＦＡＣＳ選択は、Ａｃｋｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．，２００９  ２５（３）：７７４に記載されているものと同様に実施した。ストレプトアビジン磁気ビーズ（例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒのＭ−２８０ストレプトアビジンビーズ）をビオチン化抗原で標識し、酵母とともにインキュベートした（典型的に５〜１０ｘのライブラリー多様性）。結合していない酵母を除去し、ビーズを洗浄し、結合した酵母を選択培地で成長させ、その後の選択ラウンドに進めた。
【０５５８】
蛍光標識細胞分取法（ＦＡＣＳ）
酵母を抗ｃ−Ｍｙｃ抗体で標識し、発現及びビオチン化抗原をモニタリングした（濃度はソーティングラウンドに応じて異なる）。いくつかの実験では、相互作用のアビディティを高めるために、抗原をストレプトアビジン−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７と予め混合した。他の実験では、ストレプトアビジン−ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（登録商標）６４７との結合及び洗浄後に、ビオチン化抗原を検出した。ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩＩセルソーターを使用して、結合を有する単一酵母をソーティングした。ソーティングした酵母を選択培地で成長させ、次いで、その後の選択ラウンドに進めた。
【０５５９】
濃縮した酵母集団が達成されたら、酵母をＳＤ−ＣＡＡ寒天プレートに播種し、単一コロニーを成長させ、発現を誘導し、次いで、上記のとおりに標識して、標的への結合性質を決定した。その後、ポジティブ単一クローンの抗原結合配列を決定し、その後、いくつかのクローンを、可溶性Ｆｃフラグメントとして、またはＦａｂフラグメントに融合させて、発現させた。
【０５６０】
スクリーニングの一般的方法
ＥＬＩＳＡによるスクリーニング
パニング産物からクローンを選択し、９６ウェルのディープウェルプレートの個々のウェルで成長させた。クローンは、自己誘導培地（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから入手）を使用したペリプラズム発現を誘導させるか、個々のＦｃバリアントをファージ上にファージディスプレイさせるヘルパーファージに感染させた。ＥＬＩＳＡプレートを抗原で、典型的に０．５ｍｇ／ｍＬで一晩コーティングし、次いで、１％ＢＳＡでブロッキングしてからファージまたはペリプラズム抽出物を加えた。１時間インキュベーションし、結合していないタンパク質を洗い流した後、ＨＲＰ結合二次抗体を加え（すなわち、可溶性Ｆｃまたはファージ提示Ｆｃに対して、それぞれ抗Ｆｃまたは抗Ｍ１３）、３０分間インキュベートした。プレートを再度洗浄し、次いで、ＴＭＢ試薬で発色させ、２Ｎ硫酸でクエンチした。４５０ｎｍでの吸光度をプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ（登録商標））を使用して定量し、適用可能な場合はＰｒｉｓｍソフトウェアを使用して、結合曲線をプロットした。いくつかのアッセイでは、可溶性トランスフェリンまたは他の競合物質を、典型的に極めてモル過剰で、結合工程中に加えた。
【０５６１】
フローサイトメトリーによるスクリーニング
Ｆｃバリアントポリペプチド（ファージ上での発現、ペリプラズム抽出物中の発現、またはＦａｂフラグメントへの融合体としての可溶的発現のいずれか）を９６ウェルＶ底プレートの細胞に加え（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ（ＰＢＳＡ）中１ウェルあたり約１００，０００細胞）、４℃で１時間インキュベートした。その後、プレートを遠心し、培地を除去し、次いで、細胞をＰＢＳＡで１回洗浄した。細胞を二次抗体（典型的にヤギ抗ヒト−ＩｇＧ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒから入手））を含有するＰＢＳＡ中に再懸濁した。３０分後、プレートを遠心し、培地を除去し、細胞をＰＢＳＡで１〜２回洗浄し、次いで、プレートをフローサイトメーター（すなわち、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）ＩＩフローサイトメーター）で読み取った。各条件の蛍光値の中央値をＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して算出し、結合曲線をソフトウェアを用いてプロットした。
【０５６２】
（表１１）ＣＨ３ドメイン修飾
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【０５６３】
（表１２）ＣＨ３ドメインの更なる修飾
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【０５６４】
実施例６．修飾されたＦｃポリペプチドを含む抗ＴＲＥＭ２抗体の作製及び特性評価
ＢＢＢ透過Ｆｃポリペプチドに融合したＴＲＥＭ２  Ｆａｂの作製
ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ．３５．２１．１７
トランスフェリン受容体に結合するように操作し、更に、エフェクター機能を変更するＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇ置換（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）と、ホモ二量体化を防いで「ホール」変異（Ｔ３６６Ｗ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を含むＦｃとのヘテロ二量体化を促進する「ノブ」変異（Ｔ３６６Ｗ）とを含むＦｃを含む発現ベクターに、クローンＲＳ９．Ｆ６のＦｄ（ＶＨ＋ＣＨ１領域）をクローニングすることによって、第１のＲＳ９．Ｆ６重鎖を構築した。第１のＲＳ９．Ｆ６重鎖は、配列番号９１の配列を発現するように設計した。
【０５６５】
「ホール」変異（Ｔ３６６Ｗ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を含み、更に、エフェクター機能を変更するＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇ置換（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）を含むが、トランスフェリン受容体結合変異を含まないＦｃを含む発現ベクターに、クローンＲＳ９．Ｆ６のＦｄ（ＶＨ＋ＣＨ１領域）をクローニングすることによって、第２のＲＳ９．Ｆ６重鎖を構築した。第２のＲＳ９．Ｆ６重鎖は、配列番号９２の配列を発現するように設計した。
【０５６６】
ＲＳ９．Ｆ６の軽鎖は、配列番号３５の配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを使用して構築した。
【０５６７】
前述の配列番号３５、９１、及び９２の配列をコードするポリヌクレオチドを含むベクター（ＲＳ９．Ｆ６の場合）は、１：１：２（第１の重鎖：第２の重鎖：軽鎖）の比率で、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞またはＥｘｐｉ２９３細胞にコトランスフェクトした。発現されたタンパク質（「ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ．３５．２１．１７」と呼ぶ）を、当業者に知られている方法によるプロテインＡクロマトグラフィー、続いて、分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製した。
【０５６８】
３Ｄ３．Ａ１／３Ｃ．３５．２１．１７
トランスフェリン受容体に結合するように操作し、更に、エフェクター機能を変更するＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇ置換（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）と、ホモ二量体化を防いで「ホール」変異（Ｔ３６６Ｗ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を含むＦｃとのヘテロ二量体化を促進する「ノブ」変異（Ｔ３６６Ｗ）とを含むＦｃを含む発現ベクターに、クローン３Ｄ３．Ａ１のＦｄ（ＶＨ＋ＣＨ１領域）をクローニングすることによって、第１の３Ｄ３重鎖を構築する。第１の３Ｄ３．Ａ１重鎖は、配列番号９４の配列を発現するように設計する。「ホール」変異（Ｔ３６６Ｗ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を含み、更に、エフェクター機能を変更するＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｇ置換（ＥＵナンバリングスキームに従ったナンバリング）を含むが、トランスフェリン受容体結合変異を含まないＦｃを含む発現ベクターに、クローン３Ｄ３．Ａ１のＦｄ（ＶＨ＋ＣＨ１領域）をクローニングすることによって、第２の３Ｄ３．Ａ１重鎖を構築する。第２の３Ｄ３．Ａ１重鎖は、配列番号９５の配列を発現するように設計する。
【０５６９】
３Ｄ３．Ａ１の軽鎖は、配列番号２９の配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを使用して構築する。
【０５７０】
前述の配列番号２９、９４、及び９５の配列をコードするポリヌクレオチドを含むベクター（３Ｄ３．Ａ１の場合）は、１：１：２（第１の重鎖：第２の重鎖：軽鎖）の比率で、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞またはＥｘｐｉ２９３細胞にコトランスフェクトした。発現タンパク質（「３Ｄ３／３Ｃ．３５．２１．１７」と呼ぶ）を、当業者に知られている方法によるプロテインＡクロマトグラフィー、続いて、分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって精製した。
【０５７１】
ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７のＴＲＥＭ２及びトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）への結合
ＴＲＥＭ２／ＴｆＲ結合タンパク質ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７のＴＲＥＭ２及びＴｆＲへの結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００機器のＳＰＲの使用により測定した。ＴｆＲ結合を測定するために、抗ヒトＦａｂをＣＭ５チップに固定化し、ＴＲＥＭ２／ＴｆＲ結合タンパク質を捕捉した。全長ヒトＴｆＲまたはヒトＴｆＲアピカルドメインを連続希釈（例えば、１〜１０００ｎＭの濃度）でチップ上に流し（１８０秒の会合時間）、次いで解離させた。１：１結合モデルを使用してフィッティングを実施した。ＴＲＥＭ２結合を測定するために、抗ヒトＦｃ抗体をＣＭ５チップ上に固定化し、ＴＲＥＭ２／ＴｆＲ結合タンパク質を捕捉した。ある範囲の濃度の組み換えＴＲＥＭ２−Ｈｉｓタンパク質をチップ上に流し、会合及び解離させた。得られたセンサーグラムのフィッティングを１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルの使用により行い、ｋｏｎ及びｋｏｆｆを見積もった（図１０）。
【０５７２】
ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７のＢｉａｃｏｒｅ評価
ヒトＴＲＥＭ２及びＴｆＲに対するＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００を使用する表面プラズモン共鳴によって決定した。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５センサーチップに２つのモノクローナルマウス抗Ｆａｂ抗体の混合物を固定化した（ＧＥ  ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのヒトＦａｂ捕捉キット）。各抗原の３倍連続希釈液を３０μＬ／分の流速で注入した。捕捉抗体への抗原の結合を３０〜１８０秒間モニタリングし、次いで、ＨＢＳ−ＥＰ＋ランニング緩衝液（ＧＥ、＃ＢＲ１００６６９）中での解離を３０〜３００秒間モニタリングした。ブランクフローセルからのＲＵを差し引くことで結合応答を補正した。カイネティクス解析には、ｋｏｎ及びｋｏｆｆを同時にフィッティングさせる１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを使用した。ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７の結合カイネティクスを以下の表１３に示した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合は、二重特異性ＴＲＥＭ２／ＴｆＲ結合タンパク質が、ＴＲＥＭ２に対して高い親和性で、ｈＴｆＲに対して期待される親和性で結合できることを示した。
【０５７３】
（表１３）ＲＳ９．Ｆ６／３Ｃ３５．２１．１７及びコントロールの結合カイネティクスの概要
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Ｎ．Ｄ．＝決定されず
【０５７４】
実施例７．ＴＲＥＭ２ペプチド−Ｆ６  Ｆａｂ共複合体のエピトープマッピング及びＸ線結晶学
以下に記載するように、水素重水素交換質量分析を使用して抗体ＲＳ９．Ｆ６のエピトープを決定した。加えて、ＴＲＥＭ２ペプチドに結合したＲＳ９．Ｆ６の結晶構造も明らかにした。
【０５７５】
水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）によるＦ６  Ｆａｂエピトープマッピング
ヒトＴＲＥＭ２に対する抗ＴＲＥＭ２抗体ＲＳ９．Ｆ６（「Ｆ６」）のＦａｂフラグメントの結合に関するエピトープマッピングには、シグナルペプチド及びＨｉｓタグを含まないＴＲＥＭ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）アミノ酸配列を使用した：
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【０５７６】
ペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化及び配列カバー率を決定するためのＴＲＥＭ２  ＥＣＤのＬＣ−ＭＳ
１３０μＬのコントロール緩衝液（３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２００ｍＭ  塩化ナトリウム、３％グリセロール（ｐＨ８．０））中の５．７７μｇのネイティブまたは７．４μｇのＴＲＥＭ２を、１３０μＬの４Ｍグアニジン塩酸塩、０．８５Ｍ  ＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨ２．５）を加えることによって変性させ、この混合物を２０℃で３分間インキュベートした。次いで、自社内で充填したペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラム（２．１×３０ｍｍ）を使用して、混合物をオンラインペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化に供した。得られたペプチドを、Ｑ  Ｅｘａｃｔｉｖｅ（商標）Ｈｙｂｒｉｄ  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ）に結合されたＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣで構成されるＵＰＬＣ−ＭＳシステムを使用して分析した。ペプチドを、５０×１ｍｍ  Ｃ８カラムで、２〜３１％の溶媒Ｂ（０．２％ギ酸／アセトニトリル）の１６．５分のグラジエントを用いて分離した。溶媒Ａは、０．２％ギ酸／水であった。注入バルブ及びペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩカラム及びそれらに関する接続チューブは、それぞれ、ネイティブＴＲＥＭ２の場合１０℃に維持された冷却ボックス内にあった。第２のスイッチングバルブ、Ｃ８カラム及びそれらに関するステンレス鋼製接続チューブは、−６℃に維持された別の冷却循環ボックス内にあった。ペプチド特定は、Ｍａｓｃｏｔを用いたＴＲＥＭ２配列に対するＭＳ／ＭＳデータ検索により行った。プリカーサーイオン及びプロダクトイオンの質量許容誤差は、それぞれ７ｐｐｍ及び０．０２Ｄａであった。
【０５７７】
Ｆａｂの存在がある場合及びない場合のネイティブＴＲＥＭ２のＨＤＸ  ＭＳ
１２μＬのＴＲＥＭ２（５．７７μｇ）または１２μＬのＴＲＥＭ２＆ＴＲＥＭ２  Ｆａｂ混合物（５．７７μｇ：２８．８５μｇ）を、１１８μＬの重水標識緩衝液（３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２００  ｍＭ塩化ナトリウム、３％グリセロール（ｐＤ７．６））とともに２０℃で０秒、１０秒、６０秒、６００秒または３６００秒間インキュベートした。１３０μＬの４Ｍグアニジン塩酸塩、０．８５Ｍ  ＴＣＥＰ緩衝液（最終ｐＨ２．５）を加えることによって、水素／重水素交換を停止した。その後、クエンチしたサンプルを、上記のオンカラムペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩ消化及びＬＣ−ＭＳ分析に供した。マススペクトルをＭＳ専用モードで記録した。
【０５７８】
未加工のＭＳデータを、Ｈ／Ｄ交換ＭＳデータ分析用ソフトウェアであるＨＤＸ  ＷｏｒｋＢｅｎｃｈを使用して処理した（Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０１２，２３（９），１５１２−１５２１）。重水素化ペプチドとそのネイティブ形態（ｔ０）との間の平均質量差を使用して、重水素レベルを算出した。
【０５７９】
結果
ネイティブＴＲＥＭ２に対して、７８．８％の配列カバー率が達成された。ＴＲＥＭ２は、重水中、単独またはＦａｂとの複合体のいずれかでインキュベートした。重水素交換は、２０℃で０秒、１０秒、６０秒、６００秒、または３６００秒間実施した。交換反応を低ｐＨによって停止し、タンパク質をペプシン／プロテアーゼＸＩＩＩで消化した。特定されたペプチドの重水素レベルは、ＬＣ−ＭＳの質量シフトからモニタリングした。全てのペプチドの交換時間にわたる重水素蓄積曲線をプロットした。ＴＲＥＭ２単独の水素／重水素交換とＴＲＥＭ２＆Ｆａｂ混合物の水素／重水素交換を比較した示差的なヒートマップを図１１Ａ〜１１Ｄに示す。図１１Ａ及び１１Ｄに示されるように、ＴＲＥＭ２は、Ｆａｂに結合すると、アミノ酸配列１５７〜１６６（ＤＬＷＦＰＧＥＳＥＳ（配列番号３３４）、配列番号９６のヒトＴＲＥＭ２の残基１４０〜１４９に対応）での重水素取り込みが減少を示すことから、ネイティブＴＲＥＭ２への結合についてＦａｂが標的にするエピトープは、このペプチド領域内にあることが示唆される。
【０５８０】
ＴＲＥＭ２−Ｆ６  Ｆａｂの共結晶化法
ヒトＴＲＥＭ２合成ペプチドの９−ｍｅｒアミノ酸配列
合成９−ｍｅｒペプチドＤＬＷＦＰＧＥＳＥ（配列番号３３５）（ヒトＴＲＥＭ２のアミノ酸残基１４０〜１４８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢエントリーＴＲＥＭ２＿ＨＵＭＡＮに従う）に対応する）を共結晶化に使用した。
【０５８１】
Ｆ６  Ｆａｂ発現
Ｆ６抗ＴＲＥＭ２抗体のＦａｂフラグメントを、２．５×１０６細胞／ｍｌの初期細胞密度でＥｘｐｉ−２９３細胞で発現させた。トランスフェクションから９６時間後に細胞を回収した。
【０５８２】
Ｆ６精製
ＦａｂをプロテインＬ樹脂で精製した。固定化したＦａｂを２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）で洗浄し、０．１Ｍ  グリシン（ｐＨ２．５）で溶出した。タンパク質溶出液を１Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）で直ちに中和した。プロテインＬ樹脂からのタンパク質溶出液を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００サイズ排除クロマトグラフィーによって、移動相に３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、３％グリセロールを用いて、更に精製した。
【０５８３】
結晶化
精製したＦａｂ溶液を２０ｍＭ  Ｍ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、０．２Ｍ  ＮａＣｌ、３％グリセロールで２５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。ＴＲＥＭ２  ９−ｍｅｒペプチドを２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．５）中、５０ｍｇ／ｍｌで再構成した。Ｆａｂ：ペプチド複合体を、最終濃度２３ｍｇ／ｍｌの過剰のペプチドで成分を１：１０のモル比で混合することによって得た。
【０５８４】
結晶化実験を、ナノ結晶化プロトコルに従って、Ｉｎｔｅｌｌｉ  ９６−３ロープロファイルプレートにおけるシッティングドロップ方式で、室温で実施した。セットアップには、２０の市販のスクリーニング及び自社のスクリーニングがそれぞれ９６条件で含まれた。０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中２５％ＰＥＧ  ８０００から、Ｘ線解析に好適な結晶が成長した。２０％グリセロールを加えた母液中に浸漬することによって結晶を凍結保護し、液体窒素で急速凍結した。
【０５８５】
Ｘ線データ収集
Ａｒｇｏｎｎｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＡＮＬ）  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）のＩＭＣＡ−ＣＡＴビームライン１７−ＩＤでＤｅｃｔｒｉｓ  Ｐｉｌａｔｕｓ  ６Ｍ検出器を使用して、Ｘ線回折データを収集した。波長は１．０００Å、露出時間は０．２５°イメージあたり０．２５秒であった。回折像をＸＤＳを用いて処理すると、分解能２．４Å、空間群Ｐ２１、単位格子定数：ａ＝４８．６６Å、ｂ＝６５．３７Å、ｃ＝６９．３６Å、及びβ＝１０７．２９°であった。非対称単位は、１つのＦａｂ：ペプチド複合体を含む。
【０５８６】
Ｆａｂ：ペプチド複合体の構造を、ＰＤＢエントリー５ｉ１６から得た検索モデルを使用し、Ｐｈａｓｅｒを用いた分子置換法によって解析した。構造をＣｏｏｔを用いて手動で再構築し、Ｒｅｆｍａｃ５を使用して精密化した。Ｆａｂモデルは、その全てに乱れがあった、重鎖のＧｌｎ１及びＳｅｒ１３１〜Ｓｅｒ１３５、ならびに各鎖のＣ末端のいくつかの残基を除いて、全ての残基を含んだ。ＴＲＥＭ２ペプチドの残基１４０〜１４６は、電子密度では、はっきり目で確認できるが、残基１４７〜１４８には乱れがあった。Ｘ線データ及び精密の統計値を以下の表１４に示す。
【０５８７】
（表１４）Ｘ線データ及び精密化の統計値
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【０５８８】
構造分析
図１２Ａは、Ｆ６  Ｆａｂが、可変ドメイン間の中央の空隙で、ＴＲＥＭ２ペプチドに結合することを示している。ペプチドは、折り畳まれたループ様コンフォーメーション内にあり、Ｎ末端のＴｒｐ１４２側鎖は、ＣＤＲフレームワーク残基と接触する結合溝に深く埋まっている。図１２Ｂに示されるように、残基ＤＬＷＦＰ（配列番号３３６；ｈＴＲＥＭ２タンパク質の残基１４０〜１４４）がＦａｂと直接接触する。ペプチドの最後の２つの残基ＳＥ（ｈＴＲＥＭ２タンパク質の残基１４７〜１４８）は、構造化されておらず、構造内に電子密度がない。この種の埋没した抗原結合様式は、多くのタンパク質−タンパク質相互作用では知られていない。
【０５８９】
ＣＤＲは、６つ全てが抗原結合に関与している。合計で２４のＦａｂ残基がペプチドと直接接触し（＜４．０Å）、そのうちの７つはフレームワーク領域内にある（図１３Ａ〜１３Ｂ）。これらの結果は、複雑な接触ネットワークがＦ６の高親和性結合を支えており、高親和性を維持するにはＴｒｐ１４２との接触が主要な因子である可能性を示している。
【０５９０】
（表１５）略式的な配列表
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2020534277.tif 000063
【０５９１】
本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的にするものであり、それらを考慮した様々な変形または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。
【図１−１】
2020534277.tif 000064
【図１−２】
2020534277.tif 000065
【図２】
2020534277.tif 000066
【図３Ａ】
2020534277.tif 000067
【図３Ｂ】
2020534277.tif 000068
【図３Ｃ】
2020534277.tif 000069
【図４】
2020534277.tif 000070
【図５】
2020534277.tif 000071
【図６Ａ】
2020534277.tif 000072
【図６Ｂ】
2020534277.tif 000073
【図６Ｃ】
2020534277.tif 000074
【図６Ｄ】
2020534277.tif 000075
【図７】
2020534277.tif 000076
【図８Ａ】
2020534277.tif 000077
【図８Ｂ】
2020534277.tif 000078
【図８Ｃ】
2020534277.tif 000079
【図９Ａ】
2020534277.tif 000080
【図９Ｂ】
2020534277.tif 000081
【図９Ｃ】
2020534277.tif 000082
【図９Ｄ】
2020534277.tif 000083
【図９Ｅ】
2020534277.tif 000084
【図９Ｆ】
2020534277.tif 000085
【図９Ｇ】
2020534277.tif 000086
【図１０】
2020534277.tif 000087
【図１１Ａ】
2020534277.tif 000088
【図１１Ｂ】
2020534277.tif 000089
【図１１Ｃ】
2020534277.tif 000090
【図１１Ｄ】
2020534277.tif 000091
【図１２】
2020534277.tif 000092
【図１３Ａ】
2020534277.tif 000093
【図１３Ｂ】
2020534277.tif 000094
【配列表】
2020534277000001.app
【国際調査報告】
2020534277.tif 000095
2020534277.tif 000096
2020534277.tif 000097
2020534277.tif 000098
2020534277.tif 000099
2020534277.tif 000100