(57)【要約】  院内感染の予防及び／又は治療のための技術。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ポリマー及びポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の抗原性多糖類を含む骨格ポリマー；並びに（ｉｉ）ポリマー又は抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化した１つ以上のポリペプチド抗原を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
１つ以上の抗原性多糖類が、リンカーを含むか又は含まずにポリマーにコンジュゲートされている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
１つ以上の抗原性多糖類が、グラム陰性細菌及び／又はグラム陽性細菌に由来する、請求項１〜２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
抗原性多糖類が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原性多糖類に由来する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイによって測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上が、所定のレベルと比較して増加する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイにより測定される、オプソニン化能又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上が、対照組成物と比較して増加する、請求項５に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイにより測定される、オプソニン化能又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上が、所定のレベルに対して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍増加する、請求項５又は６に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
所定のレベルが免疫前レベルである、請求項５〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
１つ以上の抗原性多糖類のエピトープ価が、天然多糖類の少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍高い、請求項５〜７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
１つ以上のポリペプチド抗原が、１つ以上の抗原性多糖類の担体タンパク質である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
ＥＬＩＳＡにより測定される、対象への投与時に、免疫原性組成物が、抗原性多糖類を含み、かつ骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象の１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
ＥＬＩＳＡにより測定される、対象への投与時に、免疫原性組成物が、ポリペプチド抗原を含み、かつ骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象の１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
１つ以上の病原体が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から選択される、請求項１１又は１２に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
対象への投与時に、免疫原性組成物が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対する免疫応答を誘発する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
１つ以上のポリペプチド抗原が、細菌性ポリペプチド、真菌性ポリペプチド、及び／又はウイルス性ポリペプチドを含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
１つ以上のポリペプチド抗原が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリペプチドに由来するポリペプチドを含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
ポリマーが多糖類、ポリペプチド、又は合成デンドリマーである、請求項１、２、及び４〜１６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
ポリマーのサイズが約５０ｋＤａ〜約２０００ｋＤａである、請求項１、２、及び４〜１７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
ポリマーが、グラム陰性又はグラム陽性細菌に由来する莢膜多糖類である、請求項１、２、及び４〜１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
莢膜多糖類が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）莢膜多糖類、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌体外多糖類、及び／又はエシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）莢膜多糖類である、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
ポリマーがクレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類である、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
ポリマーが線状ポリ−Ｌ−リジン、又はＬ−リジンのデンドリマーである、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
ポリマーが合成単糖類又はオリゴ糖のデンドリマーである、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
１つ以上のポリペプチド抗原が、（ｉ）ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類に関連する第１の親和性分子；並びに（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成により、ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
相補的親和性分子対が、ビオチン／ビオチン結合タンパク質、抗体／抗原、酵素／基質、受容体／リガンド、金属／金属結合タンパク質、炭水化物／炭水化物結合タンパク質、脂質／脂質結合タンパク質、及びＨｉｓタグ／Ｈｉｓタグ結合分子からなる群から選択される、請求項２４に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
第１の親和性分子がビオチン又はその誘導体である、請求項２５に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
相補的親和性分子が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインである、請求項２５又は２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
ビオチン結合タンパク質が、リザビジン、アビジン、ストレプトアビジン、ブラダビジン、タマビジン、レンチアビジン、ゼバビジン、ニュートラアビジン、ＣａｐｔＡｖｉｄｉｎ（商標）、又はそれらの組み合わせである、請求項２７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
第１の親和性分子が、ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
第１の親和性分子が、骨格ポリマーのポリマーに架橋又は共有結合している、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
第１の親和性分子が、１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
第１の親和性分子が、骨格ポリマーのポリマー及び１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している、請求項２９に記載の免疫原性組成物。
【請求項３３】
ポリマーがポリ−Ｌ−リジンである、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３４】
１つ以上の抗原性多糖類が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上の多糖類を含む、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３５】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ又はそれらの組み合わせを含む、請求項３４に記載の免疫原性組成物。
【請求項３６】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１、Ｏ１２型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項３４に記載の免疫原性組成物。
【請求項３７】
抗原性多糖類のうちの少なくとも１つが、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌体外多糖類ＰｓＬである、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３８】
ＰｓＬが、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び／又は配列番号５の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体に結合する少なくとも１つのエピトープを含む、請求項３７に記載の免疫原性組成物。
【請求項３９】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号１（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｉ型線毛タンパク質）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４０】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号２（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列及び／又は配列番号３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はそれらの免疫原性断片を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４１】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ、又はそれらの免疫原性断片である、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４２】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号６（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ１）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号９（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ２）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はそれらの免疫原性断片を含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４４】
（ａ）
（ｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類を含むポリマー；及び
（ｉｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）又はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の多糖類を含む１つ以上の抗原性多糖類
を含む骨格ポリマー；並びに
（ｂ）
（ｉ）ポリマーに関連付けられた第１の親和性分子；及び
（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子
を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成によりポリマーと非共有結合的に複合体化された１つ以上のポリペプチド抗原
を含む、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４５】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ又はそれらの組み合わせを含む、請求項４４に記載の免疫原性組成物。
【請求項４６】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項４４又は請求項４５に記載の免疫原性組成物。
【請求項４７】
第１の親和性分子がビオチン又はその誘導体であり、相補的親和性分子がビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインである、請求項４４〜４６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４８】
ビオチン結合タンパク質が、リザビジン又はそのビオチン結合ドメインである、請求項４７に記載の免疫原性組成物。
【請求項４９】
１つ以上のポリペプチド抗原が、ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ、それらの抗原性断片、又はそれらの組み合わせから選択される、請求項４４〜４８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５０】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項４４〜４９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】
融合タンパク質が、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４４〜５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項４４〜５１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５３】
融合タンパク質が、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項４４〜５２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５４】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；並びに
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項５５】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；並びに
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項５６】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；並びに
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項５７】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；並びに
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項５８】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第９の免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１０の免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１１の免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１２の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項５９】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第９の免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１０の免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１１の免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１２の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項６０】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質が、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄｏｍａｉｎ２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項５４〜５９のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６１】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質が、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項５５、５７、５９又は６０のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６２】
各免疫原性組成物のＯＰＳが約１：１のｗ／ｗ比で存在する、請求項５４〜６１のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６３】
各免疫原性組成物の骨格ポリマーが約１：１のｗ／ｗ比で存在する、請求項５４〜６１のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６４】
各免疫原性組成物の組み合わされたＯＰＳ及びＣＰＳが約１：１のｗ／ｗ比で存在する、請求項５４〜６１のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６５】
各免疫原性組成物のＯＰＳが約１μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６６】
各免疫原性組成物の骨格ポリマーが約１μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６７】
各免疫原性組成物の組み合わされたＯＰＳ及びＣＰＳが約１μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６８】
各免疫原性組成物のＯＰＳが約５μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項６９】
各免疫原性組成物の骨格ポリマーが約５μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項７０】
各免疫原性組成物の組み合わされたＯＰＳ及びＣＰＳが約５μｇで存在する、請求項５４〜６４のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項７１】
骨格ポリマーがＢＰ−１骨格である、請求項５４〜７０のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項７２】
骨格ポリマーがＢＰ−１．２骨格である、請求項５４〜７０のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項７３】
対象への投与時に、免疫原性組成物が、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７４】
免疫応答が抗体又はＢ細胞応答である、請求項７３に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７５】
免疫応答が、Ｔｈ１、Ｔｈ２、もしくはＴｈ１７応答を含むＣＤ４＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である、請求項７４に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７６】
免疫応答が、
抗体又はＢ細胞の応答；及び
Ｔ細胞応答
である、請求項７５に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７７】
グラム陰性細菌がクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項７０〜７６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７８】
１つ以上のポリペプチド抗原が１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）タンパク質又は変異体を含み、相補的親和性分子がビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインを含む、請求項２４〜７７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項７９】
ポリペプチド抗原のうちの少なくとも１つが、配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片を含む、請求項２４〜７８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８０】
ポリペプチド抗原のうちの少なくとも１つが、配列番号６（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ１フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片を含む、請求項２４〜７９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８１】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号９（ＦｌａＡ２フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８２】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８３】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８４】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８５】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８６】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＩＩ型分泌系（ＴＴＳＳ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８７】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８８】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項８９】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項９０】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜８９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項９１】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項２４〜９０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項９２】
対象への投与時に、組成物が、ＭｒｋＡを発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）上の天然ＭｒｋＡを認識する抗体を誘発する、請求項８３〜９１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項９３】
請求項１〜９２の免疫原性組成物又はワクチン組成物のうちの１つ以上及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項９４】
１つ以上のアジュバントをさらに含む、請求項９３に記載の医薬組成物。
【請求項９５】
アジュバントが、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸化水酸化アルミニウム、ＴＬＲ２サポニン（ＱＳ２１）又はポリンなどのＴＬＲアゴニスト、及び例えばモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）などのＴＬＲ４アゴニスト、並びにフラジェリンなどのＴＬＲ５などの群から選択される、請求項９４に記載の医薬組成物。
【請求項９６】
組成物が注射用に製剤化される、請求項９３〜９５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９７】
対象への投与時に、医薬組成物がＴｈ１及び／又はＴｈ１７細胞応答を誘発する、請求項９３〜９６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９８】
対象への投与時に、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対するオプソニン／殺菌応答を誘発する、請求項９３〜９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９９】
対象への投与時に、医薬組成物が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上による粘膜表面の伝播及び／又は定着の速度を低下させる、請求項９３〜９８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１００】
対象への投与時に、医薬組成物が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上によるＧＩ管の伝播及び／又は定着の速度を低下させる、請求項９３〜９９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０１】
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項１〜９２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０２】
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項９３〜１００のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０３】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項１〜９２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０４】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項９３〜１００のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０５】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項１〜９２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０６】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法であって、請求項９３〜１００のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、上記方法。
【請求項１０７】
請求項１〜９２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む、抗体組成物。
【請求項１０８】
抗体組成物が、モノクローナル抗体及び抗イディオタイプ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む、請求項１０７に記載の抗体組成物。
【請求項１０９】
抗体組成物が、単離されたガンマグロブリン画分を含む、請求項１０７又は請求項１０８に記載の抗体組成物。
【請求項１１０】
タンパク質及び／又は核酸を含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、
１つ以上の細胞成分を酸化試薬と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５である、ステップ；
Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及び
ＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する、ステップ
を含む、上記方法。
【請求項１１１】
酸化試薬が亜硝酸ナトリウムであり、酸が酢酸であり、ＯＰＳの還元末端が遊離アルデヒドを含有する２，５−アンヒドロマンノース残基である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
タンパク質及び／又は核酸を含む、グラム陰性細菌の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、
１つ以上の細胞成分を酸性試薬と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５である、ステップ、
混合物を約８０℃〜約１００℃に加熱するステップ；
Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及び
ＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端にケトンを含有する、ステップ
を含む、上記方法。
【請求項１１３】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
Ｏ抗原多糖類を、アルデヒド基を含有する部分酸化多糖類及び一級アミンを含有するビオチンと混合することにより、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、混合物を得ること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項１１４】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いで多糖類を酸化剤で処理することにより得られるビオチン化及び酸化された多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合すること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１．２ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項１１５】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いで多糖類をＣＤＡＰで処理することにより得られるビオチン化及びＣＤＡＰ活性化多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、ＢＰ−１．３ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項１１６】
Ｏ抗原多糖類の一級基が、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯＰＳのＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有する短いスペーサー分子の化学結合によりＯ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。請求項１１３〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
多糖類の酸化のための酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウムであり、ジアミンを含有する短いスペーサーがアジピン酸ジヒドラジドであり、還元的アミノ化還元剤がシアノ水素化ホウ素ナトリウムである、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１８】
少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
還元的アミノ化により、各末端に一級アミンを含有する短いスペーサーをＯ抗原多糖類に結合して、Ｏ抗原多糖類−スペーサー分子を得ること、又はＬ−アラニンα−アミノ基を含有する非誘導体化ＯＰＳを使用して、一級アミンを含有するＯ抗原多糖類を部分酸化多糖類と混合して混合物を得ることのいずれかによって得られるそのコアに一級アミンを含有するＯ抗原多糖類を化学的に結合すること；
混合物を還元的にアミノ化してＯＰＳ骨格を形成すること；並びに
ＣＤＡＰ及び一級アミンを含有するビオチンでＯＰＳ骨格を誘導体化し、
それにより、骨格ポリマーを形成すること
を含み、多糖類及び化学的に結合したＯ抗原多糖類が、ビオチン化される、上記方法。
【請求項１１９】
少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及び少なくとも１つの非ビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
１つ以上のコアＫＤＯ及び／又はヘプトース部分を含むＯ抗原多糖類をＣＤＡＰ及び一級アミンを含有するビオチンでビオチン化して、ビオチン化ＯＰＳ混合物を得ること；
ビオチン化ＯＰＳ混合物を過ヨウ素酸ナトリウムで部分的に酸化して、コアＫＤＯ及び／もしくはヘプトース部分にアルデヒドを導入すること；
ビオチン化混合物をアジピン酸ジヒドラジドで還元的にアミノ化すること；
ビオチン化及びアミノ化ＯＰＳを部分酸化多糖類と混合して混合物を形成すること；並びに
混合物を還元的にアミノ化すること；
それにより、骨格ポリマーを形成すること
を含み、多糖類がビオチン化されず、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化される、上記方法。
【請求項１２０】
少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及びＰＬＬポリマーを含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
末端アルデヒド又はアルファＫＤＯを含有するＯ抗原多糖類を、ＰＬＬポリマーのε−ＮＨ２基で還元的にアミノ化して、ＯＰＳ  ＰＬＬポリマーを産生すること；
ＣＤＡＰでＯＰＳを誘導体化して、誘導体混合物を形成すること；
誘導体混合物を一級アミンを含有するビオチンと反応させること；並びに
混合物をアシル化試薬で処理するか又は処理せずに、ＰＬＬポリマーの未反応ε−ＮＨ２基をキャップすること；
それにより、骨格ポリマーを作製すること
を含み、キャップされたＮ−アセチル化ＰＬＬ骨格又はキャップされていないＰＬＬが、ビオチン化されず、化学的に結合したＯ抗原多糖類が、ビオチン化される、上記方法。
【請求項１２１】
アシル化剤が無水酢酸又は塩化アセチルである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
還元剤がシアノ水素化ホウ素ナトリウムである、請求項１２０又は請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
その還元末端にアジド基、及びアルキン基を含有する少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
触媒の存在下で、その還元末端にアジド基を含有するＯ抗原多糖類を、アルキンを含有するビオチン化多糖類と化学的にクリック結合すること、
それにより、ＯＰＳ骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類がビオチン化されるが化学的にクリック結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項１２４】
その還元末端にアルデヒド又はケトン基、並びに触媒の存在下で、アルキン基を含有するビオチン化多糖類を一端にアジド及び他端に遊離アミノ基を含有する低ＭＷ化合物とクリック結合することにより得られる一級アミノ基を含有する少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
Ｏ抗原多糖類を一級アミノ基を含有するビオチン化多糖類と混合し、混合物を還元剤で還元的にアミノ化することにより、アルデヒド又はケトン基を含有するＯ抗原多糖類を化学的に結合すること、
それにより骨格ポリマーを形成すること
を含み、多糖類がビオチン化されるが化学的に結合されたＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項１２５】
その還元末端にアジド基、及びアルキンを含有する少なくとも１つの非ビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
触媒の存在下で、その還元末端にアジド基を含有するビオチン化Ｏ抗原多糖類を、アルキンを含有する非ビオチン化多糖類と化学的にクリック結合すること、
それにより、骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類が非ビオチン化され、化学的にクリック結合したＯ抗原多糖類がビオチン化される、上記方法。
【請求項１２６】
アルキン−アジド付加環化を介してＯ抗原多糖類と多糖類とをクリック結合するための触媒が硫酸銅である、請求項１２３〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２７】
多糖類を誘導体化するアルキン基が、１−アミノ−３−ブチン、１−アミノ−４−ペンチン、ＤＢＣＯ−アミン、及びアルキン−ＰＥＧ４−アミンからなる群より選択される、請求項１２３〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２８】
多糖類を誘導体化するためのアジド基が、アジド−ＰＥＧ３−アミン、アジド−プロピルアミン、及びアジド−ブチルアミンからなる群より選択される、請求項１２３〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２９】
請求項１１３〜１２８のいずれか一項に記載の方法により作製された骨格ポリマー。
【請求項１３０】
ビオチン結合ドメイン及び配列番号１６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項１３１】
ビオチン結合ドメイン及び配列番号１〜３又は６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項１３２】
請求項１２８に記載の少なくとも１つの骨格ポリマーを、請求項１２９〜１３０のいずれか一項に記載の融合タンパク質のうちの少なくとも１つと複合体化させることを含む、変異体ＭＡＰＳを作製する方法。
【請求項１３３】
変異体ＭＡＰＳがＢＰ−１  ＭＡＰＳ、ＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ、ＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳ、ＢＰ−２ｂ  ＭＡＰＳ、又はＢＰ−３  ＭＡＰＳである、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
請求項１〜９２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の免疫原性及び／又は効力を評価する方法であって、一連のＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含むインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイのうちの１つ以上を使用して、免疫原性組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答が評価される、上記方法。
【請求項１３５】
請求項９３〜１００のいずれか一項に記載の医薬組成物の免疫原性及び／又は効力を評価する方法であって、一連のＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含むインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイのうちの１つ以上を使用して、免疫原性組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答が評価される、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年６月２３日に出願された米国特許仮出願第６２／５２４，３１５号及び２０１８年２月２２日に出願された米国仮出願第６２／６３３，８０７号の優先権及び利益を主張し、それらの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
院内感染は、病院取得感染とも呼ばれ、今日の患者が直面している大きな問題である。米国で１８３の病院で実施された調査（Ｍａｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、２０１４）では、１１，２８２人の患者のうち４５２人が１つ以上の医療関連感染を有していたことが実証された（４．０％；９５％信頼区間３．７〜４．４）。５０４のそのような感染のうち、最も一般的なタイプは肺炎（２１．８％）、手術部位感染（２１．８％）、及び胃腸感染（１７．１％）であった。ディフィシル菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、最も一般的に報告されている病原体であった（医療関連感染の１２．１％を引き起こす）。伝統的に医療関連感染を予防するためのプログラムの焦点であったデバイス関連感染（すなわち、中心カテーテル関連血流感染、カテーテル関連尿路感染、及び人工呼吸器関連肺炎）は、そのような感染の２５．６％の割合を占めた。著者らは、２０１１年に米国（ＵＳ）の救急病院に７２１，８００人の医療関連感染症（ＨＡＩ）を患う患者が６４８，０００人いると推定した。
【０００３】
多剤耐性（ＭＤＲ）細菌の劇的な増加により、院内感染の治療が困難になっている。臨床医は、より有毒で効果の低い抗生物質に頼らなければならなかった。それでも、疾病対策予防センター（ＣＤＣ）は、ＭＤＲ細菌に起因する感染で年間約２３，０００人が死亡すると推定している。
【０００４】
したがって、そのような感染の予防及び／又は治療のための効果的な技術が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、院内感染の予防及び／又は治療のための好適な技術の欠如に対処する。とりわけ、本開示は、免疫及びコロニー形成の防止を達成するのに十分な免疫原性をワクチンに提供する際の課題に対処する。
【０００６】
とりわけ、本開示は、それを必要とする患者集団における院内感染の予防及び／又は治療のための組成物及び方法を提供する。
【０００７】
とりわけ、本発明は、例えば、（ｉ）ポリマー及びポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の抗原性多糖類を含む骨格ポリマー；並びに（ｉｉ）ポリマー又は抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化した１つ以上のポリペプチド抗原を含む免疫原性組成物を提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、リンカーを有するポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の抗原性多糖類を含んでもよい。いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、リンカーなしでポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の抗原性多糖類を含んでもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、グラム陰性細菌及び／又はグラム陽性細菌に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原性多糖類に由来する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイによって測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上は、所定のレベルに対して増加する。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイによって測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上は、対照組成物に対して増加する。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又はワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイにより測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上は、所定のレベルに対して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍増加する。いくつかの実施形態では、所定のレベルは免疫前レベルである。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類のエピトープ価は、天然多糖類のエピトープ価よりも少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍高い。
【００１１】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、１つ以上の抗原性多糖類の担体タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、免疫原性組成物は、抗原性多糖類を含み、骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象の１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、免疫原性組成物は、ポリペプチド抗原を含み、骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象の１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。いくつかの実施形態では、１つ以上の病原体は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から選択される。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、免疫原性組成物は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対する免疫応答を誘発する。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原は、細菌ポリペプチド、真菌ポリペプチド、及び／もしくはウイルスポリペプチド、又はそれらの組み合わせであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／もしくは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）からのポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリペプチドに由来するポリペプチドであるか、又はそれを含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ポリマーは、多糖類、ポリペプチド、又は合成デンドリマーであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーのサイズは約５０ｋＤａ〜約２０００ｋＤａである。いくつかの実施形態では、ポリマーは、グラム陰性又はグラム陽性細菌に由来する莢膜多糖類であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖類は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）莢膜多糖類、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌体外多糖類、及び／又はエシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）莢膜多糖類であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは、線状ポリ−Ｌ−リジン、又はＬ−リジンのデンドリマーであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは、合成単糖類又はオリゴ糖のデンドリマーであるか、又はそれを含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、（ｉ）ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類に関連する第１の親和性分子；並びに（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成により、ポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される。いくつかの実施形態では、相補的親和性分子対は、ビオチン／ビオチン結合タンパク質、抗体／抗原、酵素／基質、受容体／リガンド、金属／金属結合タンパク質、炭水化物／炭水化物結合タンパク質、脂質／脂質結合タンパク質、及びＨｉｓタグ／Ｈｉｓタグ結合分子からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１の親和性分子はビオチン又はその誘導体である。いくつかの実施形態では、相補的親和性分子は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は、リザビジン、アビジン、ストレプトアビジン、ブラダビジン、タマビジン、レンチアビジン、ゼバビジン、ニュートラアビジン、ＣａｐｔＡｖｉｄｉｎ（商標）、又はそれらの組み合わせである。
【００１５】
いくつかの実施形態では、第１の親和性分子は、ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している。いくつかの実施形態では、第１の親和性分子は、骨格ポリマーのポリマーに架橋又は共有結合している。いくつかの実施形態では、第１の親和性分子は、１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している。いくつかの実施形態では、第１の親和性分子は、骨格ポリマーのポリマー及び１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している。いくつかの実施形態では、ポリマーはポリ−Ｌ−リジンであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上の多糖類であるか、又はそれらを含む。
【００１６】
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型、又はそれらの組み合わせの肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１、Ｏ１２型、又はそれらの組み合わせの緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類の少なくとも１つは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌体外多糖類ＰｓＬであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ＰｓＬは、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列及び／又は配列番号５の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体に結合する少なくとも１つのエピトープであるか、又はそれらを含む。
【００１７】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号１（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｉ型線毛タンパク質）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号２（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列及び／又は配列番号３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はそれらの免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ、又はそれらの免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号６（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ１）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号９（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ２）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はそれらの免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片であるか、又はそれを含む。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、（ａ）（ｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類を含むポリマー；及び（ｉｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）又はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の多糖類を含む１つ以上の抗原性多糖類を含む骨格ポリマー；並びに（ｂ）（ｉ）ポリマーに関連付けられた第１の親和性分子；及び（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成によりポリマーと非共有結合的に複合体化された１つ以上のポリペプチド抗原であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型、又はそれらの組み合わせの肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型、又はそれらの組み合わせの緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、第１の親和性分子はビオチン又はその誘導体であり、相補的親和性分子はビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は、リザビジン又はそのビオチン結合ドメインであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ、それらの抗原性断片、又はそれらの組み合わせであるか、又はそれらを含む。
【００１９】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか、又はそれを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか、又はそれを含む。
【００２１】
とりわけ、本発明はワクチン組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上の免疫原性組成物を含み得る。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、薬学的に許容される担体を含み得る。
【００２２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。
【００２３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。
【００２４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質��含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。
【００２５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質��含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリ��ーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリ��ーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物のうちの１つ以上を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであるか、又はそれを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物のＯＰＳは、約１：１のｗ／ｗ比で存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の骨格ポリマーは、約１：１のｗ／ｗ比で存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の組み合わされたＯＰＳ及びＣＰＳは、約１：１のｗ／ｗ比で存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物のＯＰＳは約１μｇで存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の骨格ポリマーは約１μｇで存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の組み合わせられたＯＰＳ及びＣＰＳは、約１μｇで存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物のＯＰＳは約５μｇで存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の骨格ポリマーは約５μｇで存在する。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物の組み合わせられたＯＰＳ及びＣＰＳは、約５μｇで存在する。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーはＢＰ−１骨格であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーはＢＰ−１．２骨格であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーはＢＰ−２ａ骨格であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーはＢＰ−２ｂ骨格であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーはＢＰ−３骨格であるか、又はそれを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）タンパク質又は変異体であるか、又はそれらを含み、相補的親和性分子は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原の少なくとも１つは、配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド抗原の少なくとも１つは、配列番号６（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ１フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号９（ＦｌａＡ２フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＩＩ型分泌系（ＴＴＳＳ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの相補的親和性分子対は、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質であるか、又はそれを含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、対象への投与時に、免疫原性組成物は、ＭｒｋＡを発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）上の天然ＭｒｋＡを認識する抗体を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、ワクチン組成物は、ＭｒｋＡを発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）上の天然ＭｒｋＡを認識する抗体を誘発する。
【００４２】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の１つ以上の免疫原性組成物又はワクチン組成物を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は薬学的に許容される担体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は１つ以上のアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸化水酸化アルミニウム、ＴＬＲ２サポニン（ＱＳ２１）又はポリンなどのＴＬＲアゴニスト、及び例えばモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）などのＴＬＲ４アゴニスト、並びにフラジェリンなどのＴＬＲ５などの群から選択される。
【００４３】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、及び／又は皮下投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は注射用に製剤化される。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、医薬組成物はＴｈ１及び／又はＴｈ１７細胞応答を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、医薬組成物は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対するオプソニン／殺菌応答を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、医薬組成物は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上による粘膜表面の伝播及び／又は定着の速度を低下させる。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、医薬組成物は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上によるＧＩ管の伝播及び／又は定着の速度を低下させる。
【００４４】
いくつかの実施形態は、本発明の免疫原性組成物の有効量を対象に投与することを含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明のワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態は、本発明の免疫原性組成物の有効量を対象に投与することを含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明のワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【００４６】
いくつかの実施形態は、本発明の免疫原性組成物の有効量を対象に投与することを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明のワクチン組成物の有効量を対象に投与することを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本発明の医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【００４７】
いくつかの実施形態では、対象への投与時に、免疫原性組成物は、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、ワクチン組成物は、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、医薬組成物は、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、グラム陰性菌は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、免疫応答は抗体又はＢ細胞応答である。いくつかの実施形態では、免疫応答は、Ｔｈ１、Ｔｈ２、もしくはＴｈ１７応答を含むＣＤ４＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である。いくつかの実施形態では、免疫応答は抗体又はＢ細胞応答；及びＴ細胞応答である。
【００４８】
いくつかの実施形態は、本発明の免疫原性組成物で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む抗体組成物を提供する。いくつかの実施形態は、本発明のワクチン組成物で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む抗体組成物を提供する。いくつかの実施形態は、本発明の医薬組成物で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む抗体組成物を提供する。いくつかの実施形態では、抗体組成物は、モノクローナル抗体及び抗イディオタイプ抗体からなる群より選択される少なくとも１つの抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体組成物は、単離されたガンマグロブリン画分を含む。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞成分がタンパク質及び／又は核酸を含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、１つ以上の細胞成分を酸化試薬と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５である、ステップ；Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及びＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する、ステップを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、酸化試薬は亜硝酸ナトリウムであり、酸は酢酸であり、ＯＰＳの還元末端は遊離アルデヒドを含有する２，５−アンヒドロマンノース残基である。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞成分がタンパク質及び／又は核酸を含む、グラム陰性細菌の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、１つ以上の細胞成分を酸性試薬と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５である、ステップ、混合物を約８０℃〜約１００℃に加熱するステップ；Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及びＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端にケトンを含有する、ステップを含む、方法を提供する。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｏ抗原多糖類が一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、Ｏ抗原多糖類を、アルデヒド基を含有する部分酸化多糖類及び一級アミンを含有するビオチンと混合することにより、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、混合物を得ること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製されたＢＰ−１ポリマー骨格を提供する。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｏ抗原多糖類が一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いで多糖類を酸化剤で処理することにより得られるビオチン化及び酸化された多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合すること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１．２ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類の主要な基は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯＰＳのＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有する短いスペーサー分子を化学的に結合することによって、Ｏ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。いくつかの実施形態では、多糖類の酸化のための酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムであり、ジアミンを含有する短いスペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであり、還元的アミノ化還元剤はシアノ水素化ホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製されたＢＰ−１．２ポリマー骨格を提供する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｏ抗原多糖類が一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いでビオチン化多糖類をＣＤＡＰで活性化することにより得られるビオチン化及びＣＤＡＰ活性化多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、ＢＰ−１．３ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類の主要な基は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯＰＳのＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有する短いスペーサー分子を化学的に結合することによって、Ｏ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。いくつかの実施形態では、ジアミンを含有する短いスペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであり、還元的アミノ化還元剤はシアノ水素化ホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態は、本明細書に開示された方法により作製されたＢＰ−１．３ポリマー骨格を提供する。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、還元的アミノ化により、各末端に一級アミンを含有する短いスペーサーをＯ抗原多糖類に結合して、Ｏ抗原多糖類−スペーサー分子を得ること、又はＬ−アラニンα−アミノ基を含有する非誘導体化ＯＰＳを使用して、一級アミンを含有するＯ抗原多糖類を部分酸化多糖類と混合して混合物を得ることのいずれかによって得られるそのコアに一級アミンを含有するＯ抗原多糖類を化学的に結合すること；混合物を還元的にアミノ化してＯＰＳ骨格を形成すること；並びにＣＤＡＰ及び一級アミンを含有するビオチンでＯＰＳ骨格を誘導体化することにより骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類及び化学的に結合したＯ抗原多糖類が、ビオチン化される、方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００５５】
いくつかの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及び少なくとも１つの非ビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、１つ以上のコアＫＤＯ及び／又はヘプトース部分を含むＯ抗原多糖類をＣＤＡＰ及び一級アミンを含有するビオチンでビオチン化して、ビオチン化ＯＰＳ混合物を得ること；ビオチン化ＯＰＳ混合物を過ヨウ素酸ナトリウムで部分的に酸化して、コアＫＤＯ及び／もしくはヘプトース部分にアルデヒドを導入すること；ビオチン化混合物をアジピン酸ジヒドラジドで還元的にアミノ化すること；ビオチン化及びアミノ化ＯＰＳを部分酸化多糖類と混合して混合物を形成すること；並びに混合物を還元的にアミノ化すること；それにより、骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類がビオチン化されず、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化される、方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００５６】
いくつかの実施形態では、本発明は、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及びＰＬＬポリマーを含む骨格ポリマーを作製する方法であって、末端アルデヒド又はアルファＫＤＯを含有するＯ抗原多糖類を、ＰＬＬポリマーのε−ＮＨ２基で還元的にアミノ化して、ＯＰＳ  ＰＬＬポリマーを産生すること；ＣＤＡＰでＯＰＳを誘導体化して、誘導体混合物を形成すること；誘導体混合物を、一級アミンを含有するビオチンと反応させること；並びに混合物をアシル化試薬で処理するか又は処理せずに、ＰＬＬポリマーの未反応ε−ＮＨ２基をキャップすること；それにより、骨格ポリマーを作製することを含み、キャップされたＮ−アセチル化ＰＬＬ骨格又はキャップされていないＰＬＬが、ビオチン化されず、化学的に結合されたＯ抗原多糖類が、ビオチン化される、方法を提供する。いくつかの実施形態では、アシル化剤は、無水酢酸又は塩化アセチルである。いくつかの実施形態では、還元剤はシアノ水素化ホウ素ナトリウムである。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｏ抗原多糖類がその還元末端にアジド基、及びアルキン基を含有する少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、触媒の存在下で、その還元末端にアジド基を含有するＯ抗原多糖類を、アルキンを含有するビオチン化多糖類と化学的にクリック結合することによりＯＰＳ骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類がビオチン化されるが化学的にクリック結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明は、Ｏ抗原多糖類がその還元末端にアルデヒド又はケトン基、並びに触媒の存在下で、アルキン基を含有するビオチン化多糖類を一端にアジド及び他端に遊離アミノ基を含有する低ＭＷ化合物とクリック結合することにより得られる一級アミノ基を含有する少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、Ｏ抗原多糖類を、一級アミノ基を含有するビオチン化多糖類と混合し、混合物を還元剤で還元的にアミノ化することにより、アルデヒド又はケトン基を含有するＯ抗原多糖類を化学的に結合して、それにより骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類がビオチン化されるが化学的に結合されたＯ抗原多糖類がビオチン化されない、方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００５９】
いくつかの実施形態では、本発明は、その還元末端にアジド基、及びアルキンを含有する少なくとも１つの非ビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、触媒の存在下で、その還元末端にアジド基を含有するビオチン化Ｏ抗原多糖類を、アルキンを含有する非ビオチン化多糖類と化学的にクリック結合することにより骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類が非ビオチン化され、化学的にクリック結合したＯ抗原多糖類がビオチン化される、方法を提供する。いくつかの実施形態では、アルキン−アジド付加環化を介したＯ抗原多糖類と多糖類とのクリック結合のための触媒は硫酸銅である。いくつかの実施形態では、多糖類を誘導体化するアルキン基は、１−アミノ−３−ブチン、１−アミノ−４−ペンチン、ＤＢＣＯ−アミン、及びアルキン−ＰＥＧ４−アミンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、多糖類を誘導体化するアジド基は、アジド−ＰＥＧ３−アミン、アジド−プロピルアミン、及びアジド−ブチルアミンからなる群から選択される。いくつかの実施形態は、本明細書に開示される方法により作製される骨格ポリマーを提供する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ビオチン結合ドメイン及び配列番号１６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列であるか、又はそれを含むポリペプチドであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ビオチン結合ドメイン及び配列番号１〜３又は６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列であるか、又はそれを含むポリペプチドであるか、又はそれらを含む。
【００６１】
いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳを作製する方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの骨格ポリマーを本明細書に記載の少なくとも１つの融合タンパク質と複合体化することを含む。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳは、ＢＰ−１  ＭＡＰＳ、ＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ、ＢＰ−１．３  ＭＡＰＳ、ＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳ、ＢＰ−２ｂ  ＭＡＰＳ、又はＢＰ−３  ＭＡＰＳである。
【００６２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物の免疫原性を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、免疫原性組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物の効力を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、免疫原性組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、免疫原性組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、免疫原性組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は免疫原性組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、免疫原性組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のワクチン組成物の免疫原性を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、ワクチン組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又はワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のワクチン組成物の効力を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、ワクチン組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、ワクチン組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、ワクチン組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又はワクチン組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、ワクチン組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物の免疫原性を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、医薬組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物の効力を評価する方法は、ＥＬＩＳＡによる抗体レベル、ＦＣ、ＯＰＫによる機能的抗体レベル、凝集、運動性、細胞毒性、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞、及びサイトカインレベルのような他の機能試験などのＢ細胞及びＴ細胞応答を含む１つ以上のインビトロバイオアッセイ、並びに院内疾患（肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ、及び手術部位感染）の動物モデルのインビボアッセイを使用して、医薬組成物の標的である院内病原体による抗原投与後の細菌クリアランス、受動的及び能動的保護などの免疫応答を評価、測定、及び／又は比較することを含む。いくつかの実施形態では、免疫応答は対照組成物と比較される。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチドを含み、医薬組成物中に存在する骨格ポリマーを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、対照組成物は、医薬組成物中に存在する抗原性ポリペプチド及び／又は医薬組成物中に存在する抗原性多糖類を含み、医薬組成物中に存在するポリマーを含まなくてもよい。
【００６８】
一般的な略語のリスト
ＡＤＨ：アジピン酸ジヒドラジド；ＡＭＲ：抗菌薬耐性；ＡＵ：任意単位；ＢＢ：骨格；ＢＰ：骨格ポリマー；ＣＤＡＰ：１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボラート；ＣＤＣ：疾病管理予防センター；ＣＤＭ：化学的に定義された培地；ＣＦ：嚢胞性線維症；ＣＰ：共通部分；ＣＰＳ：莢膜多糖類；ＣＦＵ：コロニー形成単位；ＣＯＰＳ：コアＯ多糖類；ＣＴ：コレラ毒素；ＤＮＡ：デオキシリボ核酸；ＤＴＴ：ジチオトレイトール；ＥＣ：大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）；ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド；ＥＬＩＳＡ：酵素免疫測定法；ＥＬＩＳｐｏｔ：酵素結合免疫スポット；ＥＴＥＣ：腸管毒性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；ＦＣ：フローサイトメトリー；ＦＴ；フロースルー；ＧＩ：消化管；ＧＮＢ：グラム陰性細菌；ＧＮＲ：グラム陰性桿菌；Ｈ−ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴；ＨＡ：血球凝集；ＨＫ：熱殺菌；ＨＬ−６０細胞：ヒト前骨髄球性白血病細胞；ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；ＩＡＴＳ：国際抗原タイピングスキーム；ＩＣＵ：集中治療室；ＩＥＣ：イオン交換クロマトグラフィー；ＩＦＮ：インターフェロン；ＩＬ：インターロイキン；ＩＭ：筋肉内；ＩＮ：鼻腔内；ＩＰ：腹腔内；ＩＶ：静脈内；ＩＶＩＧ：静脈内免疫グロブリン；Ｉｇ：免疫グロブリン；ＫＤＯ：ケト酸基；ＫＰ：肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）；ＫＯ：クレブシエラオキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）；ＬＡＬ：リムルス変形細胞溶解物：ＬＰＳ：リポ多糖類；ｍＡｂ：モノクローナル抗体；ＭＡＬＬＳ：マルチアングルレーザー光散乱；ＭＡＰＳ：複数抗原提示システム；ＭＤＲ：多剤耐性；ＭＨＣ：主要組織適合性複合体；ＭＷ：分子量；ＮＡＰＬＬ：Ｎ−アセチルポリ−Ｌ−リジン；ＮａＢＨ３ＣＮ：シアノ水素化ホウ素ナトリウム；ＮａＩＯ４：メタ過ヨウ素酸ナトリウム；ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；ＮＨＳ：正常ヒト血清；ＮＭＲ：核磁気共鳴；ＯＤ：光学密度；ＯＭＰ：外膜タンパク質；ＯＰＡ：オプソニン食作用アッセイ；ＯＰＫ：オプソニン食作用性殺傷；ＯＰＳ：Ｏ多糖類；ＰＡ：緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）；ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応；ＰＢＳ：リン酸緩衝液；ＰＥＧ：ポリエチレングリコール；ＰＭＮ：多形核白血球；ＰＬＬ：ポリ−Ｌ−リジン；ＰＯ：経口；ＰＰＧ：ポリプロピレングリコール；ＰＲＯ−ＣＮ：担体タンパク質対照；ＰＴ：百日咳毒素；ＲＣＢ：リサーチセルバンク；ＲＩ：屈折率；ＲＩＡ：ラジオイムノアッセイ；ＲＮＡ：リボ核酸；ＲＰＭ：１分あたりの回転数；ＳＢＡ：血清殺菌アッセイ；ＳＣ：皮下；ＳＤＳ：ドデシル硫酸ナトリウム；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ：ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動：ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィー；ＴＦＦ：接線流濾過；ＴＬＲ：ｔｏｌｌ様受容体；ＴＮＦ：腫瘍壊死因子；ＴＴＳＳ：３型分泌系；ＵＦ：限外濾過；ＵＳ：米国；ＷＦＩ：注射用水。
【００６９】
本明細書に記載される本教示は、添付の図面と一緒に読まれると、様々な例示的な実施形態の以下の説明からより完全に理解されるであろう。以下に説明する図面は、例示のみを目的とするものであり、本教示の範囲を決して限定することを意図するものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１Ａ】緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＰＡ）からのリポ多糖類の内部コア（上部）及び外部コア（下部）の化学構造を示し、「開裂」と標識された矢印は、「ケト酸基」（ＫＤＯ）とリピドＡ分子との間の酢酸によって媒介される開裂部位を指す図である。
【図１Ｂ】異なるＰＡコアの国際的に受け入れられているタイピング標準（ＩＡＴＳ）型のいくつかの繰り返しＯ多糖類（ＯＰＳ）単位の化学構造を示す図である。
【図１Ｃ】肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）リポ多糖類（ＬＰＳ）のコア多糖類の一部の構造を示す図であり、ＬＰＳを亜硝酸ナトリウム及び酢酸（亜硝酸）で処理した場合のグルコサミンとコアのガラクツロン酸残基との間の脱アミノ開裂部位を含む、ＯＰＳの共通部分（ＣＰ）の還元末端のＣ−１にアルデヒド基を有する２，５アンヒドロマンノースが形成される。
【図１Ｄ】ＯＰＳのＣＰの還元末端に２，５アンヒドロマンノースを有する、いくつかの肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（ＫＰ）ＯＰＳの繰り返し単位の化学構造を示す図である。
【図１Ｅ】肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｋ１９  ＣＰＳ（Ｂｒｉｓｓｅ  ｅｔ  ａｌ．、２０１３）と同一のＫ．オキシトカ（Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ）（ＫＯ）莢膜多糖類（ＣＰＳ）Ｋ１９の繰り返し単位の化学構造を示す図であり、このため、２つが本明細書ではＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳと互換的に呼ばれる。
【図１Ｆ】精製ＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳの９５０ＭＨｚでのＨ核磁気共鳴（Ｈ−ＮＭＲ）スペクトルを示す図である。
【００７１】
【図２Ａ】アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で標識され、ＣＰＳ（ＢＰ−１）で選択的にビオチン化された酸化ＣＰＳに還元的アミノ化によって結合されたＫＰ／ＰＡ  ＯＰＳの産生のための例示的な化学プロセスの概略図である。
【図２Ｂ】ＫＰ／ＰＡ  ＣＰＳ／ＯＰＳ  ＢＰ−１．２の産生のための例示的な化学プロセスの概略図であり、ビオチン残基が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ−ＮＨＳ）反応を介して骨格ポリマーのＣＰＳのカルボキシラート基に結合され、ＡＤＨ標識ＯＰＳが、過ヨウ素酸塩酸化及びビオチン化ＣＰＳによる還元的アミノ化により、ビオチン化ＣＰＳ骨格ポリマーに結合される。
【図２Ｃ】ＫＰ／ＰＡ  ＣＰＳ／ＯＰＳ  ＢＰ−１．３の産生のための例示的な化学プロセスの概略図であり、ビオチン残基が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ−ＮＨＳ）反応を介して骨格ポリマーのＣＰＳのカルボキシラート基に結合され、その後、ＡＤＨ標識ＯＰＳが、ビオチン化及びＣＤＡＰ活性化ＣＰＳ骨格ポリマーに結合される。
【００７２】
【図３】酸化ＣＰＳに結合されたＡＤＨ標識ＯＰＳを産生し、続いてＣＰＳ及びＯＰＳ（ＢＰ−２ａ）上にビオチン残基を付加するための例示的な化学プロセスの概略図である。
【００７３】
【図４】ビオチン残基がＯＰＳ（ＢＰ−２ｂ）に選択的に結合されている酸化ＣＰＳに結合されたＯＰＳの産生のための化学プロセスの例示的な概略図である。
【００７４】
【図５Ａ】ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）ポリマーを有するＯＰＳ骨格ポリマーの産生のための例示的な化学プロセスの概略図であり、ビオチン残基がＯＰＳに選択的に導入され、ＰＬＬの未反応ε遊離アミノ基がキャップされ、ビオチン化ＯＰＳ  Ｎ−アセチル化ＰＬＬ（ＮＡＰＬＬ）骨格ポリマー（ＢＰ−３）が生成される。
【図５Ｂ】例示的な骨格ポリマーを作製するための３つのスキームを示す図である。スキーム１及びスキーム２は、クリックケミストリーを使用してＣＰＳ／ＯＰＳ骨格１（ＢＰ−１）の産生のための化学プロセスの概略図の２つの方法を示し；スキーム３は、ＣＰＳ／ＯＰＳ骨格２ｂ（ＢＰ−２ｂ）の産生のためのクリックケミストリーを使用した化学プロセスの概略図を示す。
【００７５】
【図６Ａ】例示的なサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ−４０００カラム及びアジ化ナトリウム（０．０２％）を含有するＰＢＳ  ｐＨ７．４で１ｍＬ／分の流速、ＫＰ  Ｋ１９酸化ＣＰＳ、ＯＰＳ−ＡＤＨ誘導体化ＫＰＯ１（トレース１）、ＫＰＯ５（トレース５）、ＰＡＯ６（トレース６）、ＰＡＯ１０（トレース１０）の溶出プロファイルを示す図である。
【図６Ｂ】ＳＥＣ  ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＢｉｏＡｌｌｉａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ−４０００カラム、及びアジ化ナトリウム（０．０２％）を含有するＰＢＳ  ｐＨ７．４で１ｍＬ／分の流速、（左）：ＯＰＳＡＤＨ、酸化ＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳＯＸ（図にＫ１９ＯＸとして示される）；及びＫ１９  ＣＰＳＯＸ：ＯＰＳＡＤＨ骨格ポリマー、並びに（右）：Ｋ１９  ＣＰＳＯＸ：１００ｋＤａの公称分子量カットオフ（ＮＭＷＣＯ）膜を使用したＳＥＣ又は限外濾過（ＵＦ）を使用することによって分子サイジング後のＯＰＳＡＤＨ骨格ポリマーの溶出プロファイルを示す図である。
【図６Ｃ】熱殺菌（ＨＫ）−緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）免疫（第４の免疫後）からのウサギ超免疫血清を使用した、ＰＡ  ＣＯＰＳ又はＰＡ  ＣＯＰＳ：Ｋ１９  ＢＰ−１構築物を用いた酵素に結合した免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）による抗原性分析を示す図である。腸管毒性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＥＴＥＣ）ＣＯＰＳは、ＥＬＩＳＡの陰性対照として使用さる。ＰＡ  ＣＯＰＳ  Ｋ１９  ＢＰ−１と緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）特異的ＯＰＳ抗血清との強い反応性は、骨格ポリマー中のＯＰＳエピトープが保存されていることを示す。
【００７６】
【図７Ａ】リザビジン融合タンパク質及びＯＰＳ  ＢＰ−１又はＢＰ−１．２とのＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体の例示的な概略図である。
【図７Ｂ】リザビジン融合タンパク質及びＯＰＳ  ＢＰ−２ａとのＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳ複合体の例示的な概略図である。
【図７Ｃ】リザビジン融合タンパク質及びＯＰＳ  ＢＰ−２ｂとのＢＰ−２ｂ  ＭＡＰＳ複合体の例示的な概略図である。
【図７Ｄ】リザビジン融合タンパク質及びＯＰＳ  ＢＰ−３とのＢＰ−３  ＭＡＰＳ複合体の概略図である。
【図７Ｅ】リザビジン融合タンパク質及び天然ＯＰＳを有するＭＡＰＳ複合体の概略図である。
【００７７】
【図８Ａ】ＫＰからのＯＰＳ及びＰＡからのＯＰＳの下流精製プロセスの例示的なフロー図である。
【図８Ｂ】例示的なＳＥＣ−ＨＰＬＣ（ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ−４０００カラムを備えたＷａｔｅｒｓ  ＢｉｏＡｌｌｉａｎｃｅをアジ化ナトリウム（０．０２％）を含有するＰＢＳ  ｐＨ７．４で１ｍＬ／分の流速で使用した、左から右への屈折率（ＲＩ）トレースの精製ＫＰ  ＯＰＳ及びＫ１９  ＣＰＳオーバーレイのプロファイル：Ｋ１９  ＣＰＳ、Ｏ１、Ｏ３、Ｏ２、及びＯ５を示す図である。
【図８Ｃ】例示的なＳＥＣ−ＨＰＬＣ（ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ−４０００カラムを備えたＷａｔｅｒｓ  ＢｉｏＡｌｌｉａｎｃｅを、アジ化ナトリウム（０．０２％）を含有するＰＢＳ  ｐＨ７．４で１ｍＬ／分の流速で使用した、左から右へのＲＩトレースの精製ＰＡ  ＯＰＳオーバーレイのプロファイル：Ｏ２、Ｏ６、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ１、Ｏ１０、及びＯ１１を示す図である。
【００７８】
【図９Ａ】ＫＯ  ＣＰＳ  Ｋ１９の下流精製プロセスの例示的なフロー図である。
【図９Ｂ】菌体外多糖類ＰｓＬ過剰産生シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）試薬株の遺伝子の構築物を示す図である。
【図９Ｃ】ＰＡ菌体外多糖類ＰｓＬの下流精製プロセスのフロー図である。
【００７９】
【図１０】上部パネルは、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質とＫ１９：ＫＰＯ２−ＡＤＨ  ＢＰ−２ａとのＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳ複合体のＳｕｐｅｒｄｅｘ−２００カラムでの例示的なＳＥＣ溶出プロファイルを示す図である。下部パネルは、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及びＳＥＣカラムから溶出する画分の総タンパク質染色によるスクリーニングを示す図であり、サンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥの前に１０ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含むドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）サンプル緩衝液で加熱せずに処理して、ＭＡＰＳ複合体を無傷のままにした。
【００８０】
【図１１Ａ】図１１Ａ〜図１１Ｃは、異なる融合タンパク質を使用して調製された例示的なＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析及び総タンパク質染色の例を示す。図１１Ａは、ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン４及び５）、ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン６及び７）、並びにＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン８及び９）と別々に形成されたリザビジン融合タンパク質（ＰＲＯ−ＣＮ）間の変異体ＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体の例示的なＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。
【図１１Ｂ】ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン４及び５）、ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン６及び７）、並びにＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン８及び９）と別々に形成されたリザビジン−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶタンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ）間のＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体の例示的なＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。
【図１１Ｃ】ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン４及び５）、ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ（レーン６及び７）、並びにＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ  ＢＰ−１（レーン８及び９）によるリザビジン−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡタンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）間のＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体の例示的なＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す図である。図１１Ａ〜１１Ｃでは、リザビジン融合タンパク質単独を対照として使用した（レーン１及び２）。各サンプルは、熱を加えて（煮沸による）（レーン１、４、６、及び８）、また熱なしで（レーン２、５、７、及び９）処理した。ＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体は熱なしでは破壊されず、ＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体のタンパク質はゲルの最上部に保持された。煮沸により、ＢＰ−１変異体ＭＡＰＳ複合体が破壊され、タンパク質が放出され、タンパク質二量体も分離された。タンパク質分子量マーカーも含まれており（レーン３）、標準の分子量はゲルの左側にｋＤａで示される。
【００８１】
【図１２Ａ】シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（ＰｃｒＶ；ＦｌａＢ；ＦｌａＡ２；ＦｌａＡ１；ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ；ＦｌａＢ−Ｄ２；ＦｌａＡ２−Ｄ２）もしくはクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）（ＭｒｋＡ）又は両方のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ；  ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ）に由来するハイブリッドタンパク質に由来する産生されたリザビジン−抗原融合タンパク質の概略図である。
【図１２Ｂ】単独又は肺炎球菌多糖類（ＰｎＰＳ）６Ｂとの変異体ＭＡＰＳ複合体としての天然シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリン及びＲｈａｖｉ融合タンパク質のｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）５生物活性を示す図であり、このアッセイでは、ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ：Ｌｕｃ細胞がフラジェリンに応答したが、媒体単独では応答しなかった。これらの結果は、リザビジンフラジェリン構築物（ＦｌａＢ、ＦｌａＡ１、ＦｌａＡ２）が単独で、又はＰｎＰＳ  ６ＢとのＭＡＰＳ複合体でＴＬＲ５活性を促進し、したがって適切に折り畳まれたことを示す。
【００８２】
【図１３Ａ】様々なリザビジン−抗原融合タンパク質と肺炎球菌莢膜多糖類（ＰｎＣＰＳ）で産生されたＭＡＰＳ複合体の能力を比較する図であり、ＥＬＩＳＡで測定したウサギの抗ＣＰＳ  １９Ａ抗体（図１３Ａ）又は抗ＣＰＳ−６Ｂ抗体（図１３Ｂ）応答を誘発する。血清サンプルは、免疫前（Ｐ０）、第１の免疫（Ｐ１）の２週間後、第２の免疫（Ｐ２）の２週間後から評価した。測定されたＩｇＧ応答には、１２，５００ＡＵ／ｍｌが割り当てられた標準曲線から任意単位（ＡＵ）が割り当てられた。幾何平均は、９５％信頼区間のエラーバーを含む水平の黒い線として示される。図１３Ａ上部パネル：ＰＲＯ−ＣＮ；リザビジン単独（Ｒｈａｖｉ）；リザビジン−ＦｌａＢ−Ｄ２（ＦｌａＢＤ２）；リザビジン−ＦｌａＡ２−Ｄ２（ＦｌａＡ２Ｄ２）；リザビジン−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ）；リザビジン−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）；リザビジン−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ（ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ）を用いたＰｎＣＰＳ  １９Ａに対する免疫グロブリン（ＩｇＧ）応答。図１３Ａ下部パネル：ＰＲＯ−ＣＮ；リザビジン−ＰｃｒＶ（ＰｃｒＶ）；リザビジン−ＦｌａＢ（ＦｌａＢ）；リザビジン−ＦｌａＡ１（ＦｌａＡ１）；リザビジン−ＦｌａＡ２（ＦｌａＡ２）；リザビジン−ＭｒｋＡ（ＭｒｋＡ）。
【図１３Ｂ】図１３Ｂ上部パネル：ＰＲＯ−ＣＮ；リザビジン単独（Ｒｈａｖｉ）；リザビジン−ＦｌａＢ−Ｄ２（ＦｌａＢＤ２）；リザビジン−ＦｌａＡ２−Ｄ２（ＦｌａＡ２Ｄ２）；リザビジン−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ）；リザビジン−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）；リザビジン−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ（ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ）を用いたＰｎＣＰＳ  ６Ｂに対するＩｇＧ応答。図１３Ｂ下部パネル：ＰＲＯ−ＣＮ；リザビジン−ＰｃｒＶ（ＰｃｒＶ）；リザビジン−ＦｌａＢ（ＦｌａＢ）；リザビジン−ＦｌａＡ１（ＦｌａＡ１）；リザビジン−ＦｌａＡ２（ＦｌａＡ２）；リザビジン−ＭｒｋＡ（ＭｒｋＡ）。
【００８３】
【図１４】リザビジン−抗原融合タンパク質（フロイントアジュバント中の１００μｇのタンパク質）で免疫したウサギの免疫応答を示す図である。免疫前（Ｐ０）及び第２の免疫（Ｐ２）２週間後の血清サンプルの免疫抗原に対するウサギＩｇＧをＥＬＩＳＡで測定した。測定されたＩｇＧ応答には、１２，５００ＡＵ／ｍｌとして割り当てられた標準曲線からＡＵが割り当てられた。幾何平均は、水平の黒い線で示される。タンパク質Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２（ＦｌａＢ−Ｄ２）；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２−Ｄ２（ＦｌａＡ２−Ｄ２）；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ）；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ（ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ）；及びＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ（ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ）についてＡＵで力価が示される。
【００８４】
【図１５】リザビジン融合タンパク質ＰＲＯ−ＣＮ又はリザビジン（Ｒｈｚ）とのＭＡＰＳ複合体におけるＰＡ  Ｏ６及びＯ１０天然ＯＰＳの二価製剤のウサギにおける免疫原性を比較する図である。抗Ｏ６又はＯ１０  ＯＰＳ  ＩｇＧの力価は、注射前（Ｐ０）、１回の注射（Ｐ１）後、又は２回の注射（Ｐ２）後にＥＬＩＳＡ単位で示される。
【００８５】
【図１６】リザビジン融合タンパク質ＰＲＯ−ＣＮ及びリン酸アルミニウムとのすべての変異体ＭＡＰＳ複合体における２価ＫＰ  Ｏ１及びＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１；一価のＫＰ  Ｏ１  ＢＰ−２ａ；並びにＫＰ  Ｏ１  ＢＰ−２ｂの製剤のウサギにおける免疫原性を比較する図である。抗ＫＰ  Ｏ１又はＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ  ＩｇＧの力価は、注射前（Ｐ０）、１回の注射（Ｐ１）後、又は２回の注射（Ｐ２）後にＥＬＩＳＡ単位で示される。
【００８６】
【図１７】特に指定がない限り、リザビジン融合タンパク質ＰＲＯ−ＣＮとリン酸アルミニウムとのＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体における、ＰＲＯ−ＣＮと複合体化した２価ＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１；ＰＲＯ−ＣＮ（ミョウバンなし）と複合体化したＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１；ＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０−ＢＰ−１（タンパク質なし、例えばＰＲＯ−ＣＮなし）；ＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１（ＭＡＰＳなし；例えば、ビオチン化なしだが、成分骨格ポリマー及びＰＲＯ−ＣＮを含む）；並びに一価ＰＡ−Ｏ６  ＯＰＳ  ＢＰ−１の製剤のウサギにおける免疫原性を比較する図である。抗ＰＡ  Ｏ６及び抗ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＩｇＧの力価は、注射前（Ｐ０）、１回の注射（Ｐ１）後、又は２回の注射（Ｐ２）後にＥＬＩＳＡ単位で示される。
【００８７】
【図１８Ａ】第２の免疫前後のＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ（左）；第２の免疫前後のＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ／リザビジンＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ（右）パネルに対するオプソニン食作用性殺傷（ＯＰＫ）とウサギ抗血清（ウサギＡＦＶ６５１及びＡＦＶ６６７から）のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株１２−０５８１（Ｏ１：Ｋ６２）のヒト前骨髄球性白血病細胞（ＨＬ−６０）細胞とを比較する図である。同じウサギからの免疫前血清と比較して、免疫血清のＢＰ−２ａ血清については殺傷の増加が観察された。
【図１８Ｂ】ＯＰＫとシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡ  ＩＡＴＳＯ６のＨＬ−６０細胞とウサギ抗血清を、二価ＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０−ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ及び一価ＰＡ  ＩＡＴＳＯ６−ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳと比較する図ある。試験された個々のウサギ血清は、ＰＡ  ＩＡＴＳＯ６のＯＰＫを産生し、ウサギ血清ＡＦＶ６４３は、強いＯＰＳ抗体力価を示唆するプロゾーン効果を産生した。
【図１８Ｃ】２価ＰＡ  Ｏ６、ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ−ＭＡＰＳワクチンで生成された４つの個々のウサギ免疫血清（Ｐ２）が、ＨＬ−６０細胞でＰＡ  Ｏ１０細菌の堅牢なＯＰＫを誘導したことを示す図である。
【００８８】
【図１９Ａ】クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｂ５０５５株全体（Ｏ１：Ｋ２）へのフローサイトメトリー（ＦＣ）の結合を、ＫＰＯ１のＰＲＯ−ＣＮ変異体ＭＡＰＳ、Ｏ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１（左）、及びＫＰＯ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ（右）に対する個々のウサギ血清と比較する図である。細菌全体でのこれらのＦＣ結合の結果は、精製ＫＰＯ１  ＯＰＳに対するＥＬＩＳＡ力価と同様の傾向、すなわち低力価、低ＦＣ結合を有する。少数の二重陽性事象は、抗体の弱い結合又はクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｂ５０５５株表面への限定的なＯＰＳ曝露を示した。
【図１９Ｂ】（上部パネル）（Ｂ５０５５）及び（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｃａｒｏｌｉ株（ｓｔｒａｉｎ  Ｃａｒｏｌｉ）、Ｏ１：Ｋ２）との弱い結合、並びにカプセル化されていないクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）（ＣＶＤ  ３００１）Ｏ１株への強い結合を比較した、ＫＰＯ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａとのＰＲＯ−ＣＮ  ＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳ複合体に対する個々のウサギ血清（ＡＦＶ６６７）のＦＣ散布図である。（下部パネル）は、２価ＫＰ  Ｏ１、Ｏ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳを接種したウサギからの血清の同じ３つのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｏ１株に対するＦＣ全結合事象を示す図である。これらの結合データは、ＣＰＳの量が成長条件によって影響を受ける可能性のあるＯＰＳ曝露に影響したことを示唆する。
【００８９】
【図２０】シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細菌株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）全体に対するＦＣの結合を、（左）２価ＰＡＯ６−ＰＡＯ１０天然ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮのウサギ血清（第２の免疫後の３匹のウサギのプール血清）；（中央）２価ＰＡＯ６−ＰＡＯ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳのウサギ血清（第２の免疫後の３匹のウサギのプール血清）；（右）一価ＰＡＯ６−ＩＡＴＳＯ６−ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳのウサギ血清（第２の免疫後の３匹のウサギのプール血清）と比較する図であり、ＯＰＳ  ＭＡＰＳの天然形式と比較して、ＰＡＯ６  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＭＡＰＳではより強いＦＣ結合が観察される。
【００９０】
【図２１Ａ】ＰＡＯ１株Ｏ５：発現ＦｌａＢへのウサギ抗ＦｌａＢ結合のＦＣ結合データを示す図であり、右パネルは、出血前（Ｐ０）血清（左パネル）と比較した場合のリザビジンＦｌａＢ−Ｄ２（ＴＬＲ５結合領域を欠く）でワクチン接種されたウサギの第３の出血後（Ｐ３出血；プール血清１０匹のウサギ）の標識ＰＡＯ１集団の高い割合（％）の散布図を実証する。
【図２１Ｂ】上部パネルは、リザビジンＦｌａＢ−Ｄ２に対する個々のウサギＰ３出血血清のＦＣを示し；中央パネルは、リザビジンＦｌａＢ−ＰｃｒＶに対する個々のウサギＰ３出血血清のＦＣを示し；下部パネルは、リザビジンＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡに対する個々のウサギＰ３出血血清のＦＣを示す図である。
【００９１】
【図２２】陽性対照と比較したプールウサギ抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｈｉｓ抗血清、ＰＡＯ１  ＦｌａＢに対して生じた抗ＰＡ−ＦｌａＢ抗体、及びポリクローナルヒト静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）抗体、並びに陰性対照（抗体なし）を含む標的株シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＯ１（Ｏ５：発現ＦｌａＢ）のＨＬ−６０細胞でのＯＰＫを示す図である。
【００９２】
【図２３】異なる希釈の抗ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡウサギ血清によるＡ５４９（肺癌）細胞へのＫＰ  Ｏ５  ６９９７（南アフリカ原産）の付着のブロックを示す図である。ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ（第３の免疫後、Ｐ３）血清は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）６９９７株のＡ５４９細胞への結合を阻害したが、免疫前血清は阻害しなかった。これは、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ  ＦＰのＭｒｋＡタンパク質成分が適切に折り畳まれ、機能的抗体を誘発したことを示す。
【００９３】
【図２４Ａ】シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）による細胞毒性中毒からのＡ５４９細胞の抗ＰｃｒＶ抗体保護を示す図である。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ融合タンパク質をワクチン接種したウサギ（３のプール）からの１０％血清の存在下で、Ａ５４９単層をシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）に４時間感染させた。抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（Ｐ３、第３の免疫後）血清は、丸みを帯びた剥離細胞が少ないことからわかるように、免疫前血清と比較してシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ中毒から細胞を保護した。
【図２４Ｂ】Ａ５４９単層細胞を、様々な希釈液のＮＣＢ００６  Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（プール３）からの血清の存在下でシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫに４時間感染させた図である。細胞をＰＢＳで洗浄し、ニュートラルレッドと１時間インキュベートした。細胞を溶解し、各ウェルの色素吸光度を記録した。抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（Ｐ３）血清は、１〜４０の希釈液の免疫前血清と比較して、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ細胞毒性中毒から細胞を保護した。
【００９４】
【図２５】Ａ５４９細胞及び抗ＦｌａＢ−ＰｃｒＶウサギ血清（第３の免疫後；Ｐ３）を様々なシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株とともに使用した細胞毒性アッセイを示す図であり：非常に毒性の高いＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ１（黒菱形）、細胞毒性からの血清保護はなし；細胞毒性ＰＡ  Ｍ２  Ｏ５（黒丸）、血清保護なし；細胞毒性ＰＡ  １７００２  Ｏ１０（黒四角）、明確な血清保護がある；非細胞毒性のＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ６（黒三角）、毒性は検出されなかった。
【００９５】
【図２６】火傷し、その後熱傷に投与された２８コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＦｌａＢ発現シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株Ｍ−２（Ｏ５）に感染したマウスのカプラン・マイヤー生存プロットを示す図である。このモデルでは、ＣＤ−１マウスに免疫前ウサギ血清又は抗ＦｌａＢウサギ血清を受動的に移し、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）又はＰＢＳ中のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株Ｍ−２で偽感染させた。抗ＦｌａＢ抗血清を投与されたマウスは、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）Ｍ−２株による創傷抗原投与から１０日以上保護された（５／５又は１００％生存）が、偽感染マウス以外の他の群からのマウスはすべて創傷抗原投与で死亡した。
【００９６】
【図２７】ＫＰ感染のマウスモデルにおけるクリアランス及び臓器細菌量を示す図である。マウス（ＣＤ１；３群）に、ＫＰＯ１  ＢＰ−２ａ  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対する腹腔内（ＩＰ）ウサギ血清を受動投与し、その後、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株ＫＰ  Ｂ５０５５  Ｏ１：Ｋ２（９×１０４ＣＦＵ）を静脈内（ＩＶ）に抗原投与した。脾臓ＫＰ生菌カウントを抗原投与の１４時間後に測定した。免疫前血清（Ｐ０）を受けたマウスの脾臓と比較して、免疫血清（Ｐ２）を受けたマウスの脾臓では、ＫＰ生菌カウントが明らかに減少している。これらのデータは、変異体ＭＡＰＳワクチンの骨格ポリマーによって生成されたＯＰＳ  Ｏ１抗体がマウス組織から生物を取り除くことができ、したがって機能的なインビボ保護活性を有していたことを示す。
【００９７】
【図２８】莢膜発現を減らすためにサリチラートで増殖させたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｂ５０５５株（Ｏ１：Ｋ２）での感染の前に、ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ血清を投与されたマウスの受動的保護のカプラン・マイヤー生存率を示す図である。ＣＤ１マウス（５／群）にＩＰで０．１ｍＬのウサギ免疫（Ｐ２）又は免疫前（Ｐ０）血清のプールを２×１０４ＣＦＵクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株Ｂ５０５５（Ｏ１：Ｋ２）でＩＰ細菌抗原投与する前に与えた。Ｐ０又はＰ２  ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ血清を受けたマウスのカプラン・マイヤー生存プロットを示す。Ｐ２血清は、ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ抗血清を受けたマウスの割合が高いモデルで保護され、Ｐ０血清を投与したマウスに対して長期間にわたって生存した。
【００９８】
【図２９】４価ＫＰワクチン（ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ、治療群４）と比較した１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ、治療群５）で免疫したウサギからのプール血清のＫＰ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す図である。
【００９９】
【図３０】８価ＰＡワクチン（ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ、治療群４）と比較した１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ、治療群５）で免疫したウサギからのプール血清のＰＡ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す図である。
【０１００】
【図３１】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した１μｇのＰＳ、治療群６）と比較した１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与する５μｇのＰＳ）で免疫したウサギからのプール血清のＰＡ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す図である。
【０１０１】
【図３２】５μｇ用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ）での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１中の各ＰＳに対する個々のＩｇＧの力価を示す図である。
【０１０２】
【図３３】１μｇ用量（例えば、ワクチン中の１２μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した１μｇのＰＳ）での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１中の各ＰＳに対する個々のＩｇＧの力価を示す図である。
【０１０３】
【図３４】５μｇ用量での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の個々の抗ＯＰＳ  ＩｇＧの誘導の増加を示す図である。
【０１０４】
【図３５】ＢＰ用量あたり５μｇのＰＳ及びＢＰ用量あたり１μｇのＰＳでの１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の個々の抗ＯＰＳ  ＩｇＧの誘導の増加の比較を示す図である。
【０１０５】
【図３６】ワクチン（治療群２）中のＢＰの各タイプが寄与した１２μｇ、１μｇのＰＳの用量で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２と比較したワクチン用量（治療群１）のＢＰの各タイプが寄与した６０μｇ、５μｇのＰＳの用量で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２で免疫したウサギからのプール血清のＰＡ及びＫＰ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す図である。
【０１０６】
【図３７】５μｇ用量での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２中の各ＰＳに対する個々のＩｇＧ力価を示す図である。
【０１０７】
【図３８】５μｇ用量での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２の個々の抗ＯＰＳ  ＩｇＧの誘導の増加を示す図である。
【０１０８】
【図３９】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２、８価ＰＡワクチン、及び４価ＫＰワクチンの投与により誘導されたＦｌａＢＤ２に対するウサギＩｇＧのＥＬＩＳＡ分析を示す図である。
【０１０９】
【図４０】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２、８価ＰＡワクチン、及び４価ＫＰワクチンの投与により誘導されたＭｒｋＡに対するウサギＩｇＧのＥＬＩＳＡ分析を示す図である。
【０１１０】
【図４１】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の投与により誘導されたＰｃｒＶに対するウサギＩｇＧのＥＬＩＳＡ分析を示す図である。
【０１１１】
【図４２】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２、８価ＰＡワクチン、及び４価ＫＰワクチンの投与によって誘導された個々の抗担体タンパク質ＩｇＧの誘導の増加を示す図である。
【０１１２】
【図４３】３つのウサギ免疫原性研究：ＮＣＢ００７、ＮＣＢ００８、及びＮＣＢ０１２での様々なワクチン製剤の投与により誘導されるＦｌａＢ応答の誘導の増加を示す図である。
【０１１３】
【図４４】３つのウサギ免疫原性研究：ＮＣＢ００７、ＮＣＢ００８、及びＮＣＢ０１２での様々なワクチン製剤の投与により誘導されるＭｒｋＡ応答の誘導の増加を示す図である。
【０１１４】
【図４５】３つのウサギ免疫原性研究：ＮＣＢ００７、ＮＣＢ００８、及びＮＣＢ０１２での様々なワクチン製剤の投与により誘導されるＰｃｒＶ応答の誘導の増加を示す図である。
【０１１５】
【図４６】ＦｌａＢドメイン２のみを含有する担体タンパク質によって示されるＴＬＲ５アゴニスト生物活性の欠如を示す図である。
【０１１６】
【図４７】ＫＰ  Ｏ２  Ｋ−株７３８０を用いたヒト好中球ＯＰＫアッセイの結果を示す図である。
【０１１７】
【図４８Ａ】ゲンタマイシンの存在下でのＪ７７４マクロファージ細胞株を用いたＯＰＫ取り込みアッセイの結果を示す図である。
【図４８Ｂ】ゲンタマイシンの非存在下でのＪ７７４マクロファージ細胞株を用いたＯＰＫ取り込みアッセイの結果を示す図である。
【０１１８】
【図４９】１２価ワクチン−１で免疫したウサギからのプール血清でオプソニン化したＰＡ及びＫＰのゲンタマイシン保護アッセイの結果を示す図である。免疫血清（Ｐ２）は、マクロファージ様Ｊ７７４細胞による細菌の取り込みを仲介するが、免疫前血清（Ｐ０）は仲介しない。
【０１１９】
【図５０】ＧＦＰ標識ＰＡを使用したマクロファージ様Ｊ７７４細胞による細菌の取り込みの顕微鏡分析を示す図である。ＰＡは免疫血清への曝露後に熱心に取り込まれる。
【０１２０】
【図５１】５μｇ用量の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（６０μｇの総ＰＳ）を受けたウサギからのプール血清が食細胞による細菌の取り込みを促進することを示す図である。
【０１２１】
【図５２】ＫＰ  Ｏ２  ７３８０株を用いたＨＬ６０  ＯＰＫアッセイでの細胞の生存率（％）を示す図である。
【０１２２】
【図５３】ＰｃｒＶに対する抗体が細胞毒性から細胞を保護することを実証するアッセイの結果を示す図である。１２価免疫血清（プール１０、ワクチン１高用量）と混合したＰＡ株（ＦｌａＢなし）は、同じウサギからの免疫前血清と比較して細胞毒性の低下を示す。
【０１２３】
【図５４】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン−１を５μｇ用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ）で免疫したウサギからのプール血清で治療した細胞が、免疫前血清による治療と比較して、ＦｌａＢに対する抗体によるＰＡ  Ｏ５  ＦｌａＢ株の運動性の低下を示す図である。
【０１２４】
【図５５】ＰＡ  ＯＰＳを含有せず、ＦｌａＢ発現ＰＡの凝集が増加した４価ＫＰワクチン（５μｇ用量、治療群４）で免疫したウサギからのプール血清を示す図であり、これは、ＦｌａＢ含有担体タンパク質に対して生成された抗体が機能的であることを実証する。
【０１２５】
【図５６】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギのプール血清、８価ＰＡワクチンで免疫したウサギのプール血清（ＭｒｋＡは８価ＰＡワクチンの唯一のＫＰ抗原）、４価ＫＰワクチンで免疫したウサギのプール血清が、Ａ５４９細胞へのＫＰ  Ｏ５株６９９７の付着をブロックすることを示す図である。データは、担体タンパク質ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡによって誘導されたＭｒｋＡ抗体が原因であることを示唆している。
【０１２６】
【図５７】抗原投与の１時間後及び４時間後にＫＰ  Ｏ１株Ｂ５０５５で抗原投与した３匹のマウスの血液クリアランスアッセイの結果を示す図である。
【０１２７】
【図５８】ＫＰ  Ｏ１  Ｂ５０５５株による抗原投与後のマウスの肝臓及び脾臓の臓器細菌量を示す図である。
【０１２８】
【図５９】抗原投与の１時間後及び４時間後にＫＰ  Ｏ５株６９９７で抗原投与した３匹のマウスの血液クリアランスアッセイの結果を示す図である。
【０１２９】
【図６０】ＫＰ  Ｏ５（６９９７株）での抗原投与後のマウスの脾臓における臓器細菌量を示す図である。
【０１３０】
【図６１】マウスの脾臓の臓器細菌量の受動的保護分析を示す図であり、これは１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからの血清で治療したマウスの循環からのＫＰ  Ｏ２（ＫＰＮ−１２株）のクリアランスを実証する。
【０１３１】
【図６２】クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｏ２  Ｋ２に対するＮＣＢ０１２免疫前血清及び免疫血清を用いたＣＤ−１マウス受動的保護実験の様々な例示的な最適化プロトコル及び結果を示す図である。
【０１３２】
【図６３】ＫＰ  Ｏ１  ＭＡＰＳワクチンで免疫し、続いてＫＰ  Ｏ１：Ｋ２  Ｂ５０５５株で細菌抗原投与したマウスからの刺激された脾臓細胞におけるＩＬ−１７ａ誘導を示す図である。
【０１３３】
【図６４】２用量のＰＡ  Ｏ６  ＭＡＰＳワクチンとそれに続く細菌抗原投与で免疫したラットにおけるＰＡ  Ｏ６によるＧＩ管定着研究の治療プロトコル及び結果を示す図である。
【０１３４】
【図６５】ＫＰ  ＯＰＳ  Ｇａｌ−Ｉ、Ｇａｌ−ＩＩ、及びＧａｌ−ＩＩＩエピトープの構造の概略図を示す図である。
【０１３５】
【図６６】４価ＫＰ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳワクチンで免疫された動物からの抗血清におけるフローサイトメトリーによるエピトープを発現するＫＰ  Ｄ−Ｇａｌ−ＩＩＩ及びＫＰ  Ｄ−Ｇａｌ−Ｉへの結合を示す図である。
【０１３６】
【図６７】１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫されたウサギからのプール血清中の抗体が、菌血症分離株からの３つのＳＴ２５８株のうち２つに結合し、ＭｒｋＡの変異対立遺伝子を有するワクチンに含まれない血清型の４つの株のうち３つにも結合したことを実証するフローサイトメトリー分析の結果を示す図である。
【０１３７】
【図６８】ＢＰ−１（群１）及びＢＰ−１．２（群２）ＫＰ／ＰＡ  ４価ＭＡＰＳワクチンによる免疫後の個々の抗ＯＰＳ  ＩｇＧ力価を示す図である。
【０１３８】
【図６９】ＢＰ−１  ＭＡＰＳ（群１）とＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ（群２）プール血清との比較から観察された担体タンパク質ＩｇＧ応答を示す図である。
【０１３９】
【図７０】それぞれＢＰ−１及びＢＰ−１．２（ＫＰ／ＰＡ  ４価）の担体タンパク質ＦｌａＢＤ２に対する個々の血清の抗体応答を示す図である。
【０１４０】
【図７１】それぞれＢＰ−１及びＢＰ−１．２（ＫＰ／ＰＡ  ４価）の担体タンパク質ＭｒｋＡに対する個々の血清の抗体応答を示す図である。
【０１４１】
定義
本出願では、文脈からそうでないことが明確でない限り、（ｉ）「ａ」という用語は「少なくとも１つ」を意味すると理解され得；（ｉｉ）「又は」という用語は「及び／又は」を意味すると理解され得；（ｉｉｉ）「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」という用語は、それ自体で、又は１つ以上の追加の構成要素もしくはステップとともに提示されるかどうかにかかわらず、箇条書きの構成要素もしくはステップを包含すると理解され得；（ｉｖ）「約」及び「およそ」という用語は、当業者によって理解されるように標準的な変更を可能にするものと理解され得；（ｖ）範囲が提供される場合、端点が含まれる。
【０１４２】
約：「約」という用語は、本明細書で値に関して使用される場合、文脈において参照値に類似する値を指す。一般に、文脈に精通している当業者は、その文脈の「約」に包含される関連する分散の程度を理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、「約」という用語は、参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はそれ以下以内の値の範囲が包含され得る。
【０１４３】
投与：本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、典型的には、組成物である、又はそれに含まれる薬剤の送達を達成するための対象又はシステムへの組成物の投与を指す。当業者は、適切な状況において、例えばヒトなどの対象への投与に利用し得る種々の経路を知っているであろう。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、眼、経口、非経口、局所などであり得る。いくつかの特定の実施形態では、投与は、気管支（例えば、気管支点滴による）、頬側、真皮（例えば、真皮の局所、皮内、皮膚間、経皮などのうちの１つ以上であり得る、又はそれらを含む）、腸内、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、くも膜下腔内、静脈内、脳室内、特定の臓器内（例えば、肝内）、粘膜、鼻、口、直腸、皮下、舌下、局所、気管（例えば、気管内注射による）、膣、硝子体などであり得る。いくつかの実施形態では、投与は単回用量のみを伴い得る。いくつかの実施形態では、投与は、固定された数の用量の適用を伴い得る。いくつかの実施形態では、投与は、間欠的（例えば、時間的に分離された複数の用量）である投薬及び／又は周期的（例えば、共通の期間により分離された個々の用量）投薬を伴い得る。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間の連続投薬（例えば、灌流）を伴い得る。
【０１４４】
薬剤：一般に、本明細書で使用される場合、「薬剤」という用語は、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、又はそれらの組み合わせ、又はそれらの複合体を含む任意の化学クラスの化合物又は実体を指すために使用され得る。当業者にとって文脈から明らかなように、適切な状況では、この用語は、細胞もしくは生物、又はその画分、抽出物、もしくは成分であるか、又はそれらを含む実体を指すために利用され得る。代替的又は追加的に、文脈が明らかになるように、この用語は、自然界で見られる、及び／又は自然界から得られるという点で、天然産物を指すために使用され得る。場合によっては、やはり文脈から明らかなように、この用語は、人間の手の活動を通じて設計、改変、及び／もしくは産生され、かつ／又は自然界で見られないという点で、人工の１つ以上の実体を指すために使用される場合がある。いくつかの実施形態では、薬剤は、単離された形態又は純粋な形態で利用され得；いくつかの実施形態では、薬剤は粗形態で利用され得る。いくつかの実施形態では、潜在的な薬剤は、例えば、それらの中の活性薬剤を特定又は特徴付けるためにスクリーニングされ得るコレクション又はライブラリとして提供され得る。場合によっては、「薬剤」という用語は、ポリマーであるか、又はそれを含む化合物もしくは実体を指し得；場合によっては、この用語は、１つ以上のポリマー部分を含む化合物又は実体を指し得る。いくつかの実施形態では、「薬剤」という用語は、ポリマーではなく、かつ／又は実質的にいかなるポリマー及び／又は１つ以上の特定のポリマー部分も含まない化合物又は実体を指し得る。いくつかの実施形態では、この用語は、ポリマー部分を欠くか又は実質的に含まない化合物又は実体を指し得る。
【０１４５】
アミノ酸：その最も広い意味で、本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、例えば１つ以上のペプチド結合の形成を通じてポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は非天然アミノ酸であり；いくつかの実施形態では、アミノ酸はＤ−アミノ酸であり；いくつかの実施形態では、アミノ酸はＬ−アミノ酸である。「標準アミノ酸」とは、天然に存在するペプチドに一般的に見られる２０種類の標準Ｌ−アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」とは、合成的に調製されたものでも天然源から得られたものであっても、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド中のカルボキシ及び／又はアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、上記の一般構造と比較して構造的修飾を含有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ペグ化、グリコシル化、リン酸化、並びに／又は置換（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／もしくはヒドロキシル基）によって修飾され得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、例えば、他の点では同一の非修飾アミノ酸を含有するポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの循環半減期を変更し得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、他の点では同一の非修飾アミノ酸を含有するポリペプチドと比較して、修飾アミノ酸を含有するポリペプチドの関連する活性を有意に変更させない。文脈から明らかなように、いくつかの実施形態では、「アミノ酸」という用語は、遊離アミノ酸を指すために使用され得；いくつかの実施形態では、ポリペプチドのアミノ酸残基を指すために使用され得る。
【０１４６】
抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、特定の標的抗原への特異的結合を付与するのに十分な標準的な免疫グロブリン配列要素を含むポリペプチドを指す。当技術分野で既知のように、自然界で産生される無傷の抗体は、一般的に「Ｙ字型」構造と呼ばれるものに互いに関連する２つの同一の重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０ｋＤａ）及び２つの同一の軽鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤａ）で構成されるおよそ１５０ｋＤａの四量体剤である。各重鎖は、アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ構造の先端に位置）とそれに続く３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙのステムの基部に位置）との少なくとも４つのドメイン（それぞれ約１１０アミノ酸長）で構成される。「スイッチ」として既知の短い領域は、重鎖の可変領域と定常領域とを接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを抗体の残りの部分に接続する。このヒンジ領域の２つのジスルフィド結合は、２つの重鎖ポリペプチドを無傷の抗体で互いに接続する。各軽鎖は、別の「スイッチ」によって互いに分離されたアミノ末端可変（ＶＬ）ドメインとそれに続くカルボキシ末端定常（ＣＬ）ドメインとの２つのドメインで構成される。無傷の抗体四量体は、重鎖と軽鎖とが単一のジスルフィド結合によって互いに結合する２つの重鎖−軽鎖二量体で構成され；他の２つのジスルフィド結合が重鎖ヒンジ領域を相互に接続するため、二量体が相互に接続され、四量体が形成される。天然に産生された抗体も、典型的にはＣＨ２ドメインでグリコシル化される。天然抗体の各ドメインは、圧縮された逆平行ベータバレルで互いに詰められた２つのベータシート（例えば、３、４、又は５本鎖シート）から形成される「免疫グロブリンフォールド」によって特徴付けられる構造を有する。各可変ドメインは、「補体決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）として既知の３つの超可変ループと、４つのやや不変の「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）とを含有する。天然の抗体が折り畳まれると、ＦＲ領域はドメインの構造フレームワークを提供するベータシートを形成し、重鎖及び軽鎖の両方からのＣＤＲループ領域は、それらがＹ構造の先端に位置する単一の超可変抗原結合部位を創出するように三次元空間に集められる。天然に存在する抗体のＦｃ領域は、補体系の要素に結合し、例えば細胞毒性を媒介するエフェクター細胞を含むエフェクター細胞上の受容体にも結合する。当技術分野で既知のように、Ｆｃ受容体に対するＦｃ領域の親和性及び／又は他の結合属性は、グリコシル化又は他の修飾により調節することができる。いくつかの実施形態では、本発明に従って産生及び／又は利用される抗体には、そのようなグリコシル化が修飾又は改変されたＦｃドメインを含むグリコシル化Ｆｃドメインが含まれる。本発明の目的のために、特定の実施形態では、天然の抗体に見られる十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチド又はポリペプチドの複合体は、そのようなポリペプチドが天然に産生されるかどうかにかかわらず、「抗体」と呼ぶことができ、かつ／もしくは「抗体」として使用することができ（例えば、抗原に反応する生物によって生成される）、又は組換え工学、化学合成、又は他の人工システムもしくは方法論によって産生することができる。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナルであり；いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナルである。いくつかの実施形態では、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、又はヒトの抗体に特徴的な定常領域配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体配列要素は、当技術分野で既知のように、ヒト化、霊長類化、キメラなどである。さらに、本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、適切な実施形態では（特に明記又は文脈から明らかでない限り）、代替提示で抗体の構造的及び機能的特徴を利用するための当技術分野で既知又は開発された構築物又は形式のいずれかを指すことができる。例えば、実施形態では、本発明に従って利用される抗体は、完全なＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、又はＩｇＭ抗体；二重又は多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）；Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、及び単離されたＣＤＲ、又はそれらのセットなどの抗体フラグメント；単鎖Ｆｖ；ポリペプチド−Ｆｃ融合；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲ又はその断片などのサメ単一ドメイン抗体）；カメロイド抗体；マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；小型モジュラー免疫医薬品（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）；単鎖又はタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質又はＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）；Ｔｒａｎｓ−ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；マイクロタンパク質；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗体は、天然に産生された場合に有するであろう共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）を欠く場合がある。いくつかの実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカンの付着、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など］、又は他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］を含有し得る。
【０１４７】
抗原：本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、（ｉ）免疫応答を誘発する薬剤、及び／又は（ｉｉ）Ｔ細胞受容体（例えば、ＭＨＣ分子によって提示される場合）もしくは抗体に結合する薬剤を指す。いくつかの実施形態では、抗原は体液性応答を誘発し（例えば、抗原特異的抗体の産生を含む）；いくつかの実施形態では、細胞性応答を誘発する（例えば、その受容体が抗原と特異的に相互作用するＴ細胞が関与する）。いくつかの実施形態では、抗原は体液性応答及び細胞性応答を誘発する。いくつかの実施形態では、抗原は抗体に結合し、生物において特定の生理学的応答を誘発する場合もしない場合もある。一般に、抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ポリマー（いくつかの実施形態では、生物学的ポリマー以外（例えば、核酸又はアミノ酸ポリマー以外））などの任意の化学物質などであり得るか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、抗原はポリペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、抗原は多糖類であるか、又はそれを含む。当業者は、一般に、抗原が、単離された形態又は純粋な形態で提供され得るか、あるいは（例えば、細胞抽出物などの抽出物中の、又は抗原含有源の他の比較的粗い調製物中の他の材料と一緒に）粗形態で提供され得ることを認識するであろう。いくつかの実施形態では、本発明に従って利用される抗原は、粗形態で提供される。いくつかの実施形態では、抗原は組換え抗原である。
【０１４８】
関連付け：２つの実体は、１つの存在、レベル、及び／又は形態が他の実体と相関している場合、その用語が本明細書で使用されているように、互いに「関連付け」られる。いくつかの実施形態では、２つ以上の実体は、直接的又は間接的に相互作用する場合、互いに物理的に「関連付け」られ、その結果、それらは互いに物理的に近接及び／又は近接したままになる。いくつかの実施形態では、互いに物理的に関連付けられた２つ以上の実体が互いに共有結合しており；いくつかの実施形態では、互いに物理的に関連付けられている２つ以上の実体は、互いに共有結合されていないが、例えば親和性相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、及びそれらの組み合わせによって非共有結合している。
【０１４９】
骨格ポリマー：本明細書で使用される場合、「骨格ポリマー」という用語は、１つ以上の多糖類（例えば、抗原性多糖類）がコンジュゲートしているか、コンジュゲートできるポリマーを指す。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ポリマー及びポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の多糖類（例えば、抗原性多糖類）である。
【０１５０】
結合：本明細書で使用される場合、「結合」という用語は、典型的には、２つ以上の実体の間又はそれらの間の非共有結合的会合を指すことが理解されるであろう。「直接」結合には、実体又は部分間の物理的な接触を伴い；間接結合には、１つ以上の中間実体との物理的な接触による物理的な相互作用を伴う。典型的には、相互作用する実体もしくは部分が単独で、又はより複雑なシステムの状況で研究される場合を含む（例えば、共有結合又はその他の方法で、担体実体及び／又は生物学的システムもしくは細胞内に関連付けられている）２つ以上の実体間の結合は、種々の状況のいずれかで評価できる。
【０１５１】
担体タンパク質：本明細書で使用される場合、「担体タンパク質」という用語は、結合又は複合ハプテンに対する免疫応答を誘発又は改善するタンパク質又はペプチドを指す。いくつかの実施形態では、担体タンパク質によって誘発又は改善される免疫応答は、ハプテンに対する応答である。いくつかの実施形態では、担体タンパク質自体に対する有意な応答は起こらず；いくつかの実施形態では、担体タンパク質に対する応答が検出され得る。いくつかの実施形態では、担体タンパク質は、１つ以上の他の分子と複合体化される。
【０１５２】
クリックケミストリー：本明細書で使用される場合、「クリックケミストリー」という用語は、例えば、２００１年にＫ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓによって記述されたように、迅速で高収率の反応を指す。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、クロマトグラフィーなしで除去できる副産物を創出する。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、クロマトグラフィーなしで除去できる副産物のみを創出する。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は立体特異的である。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、１つ以上の容易に除去可能な溶媒を使用して実施され得る。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、１つ以上の良性溶媒を使用して実施され得る。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、銅触媒アジド−アルキン付加環化反応を利用して、１つ以上の分子実体を接続する。いくつかの実施形態では、１つ以上の分子実体は、分子サイズによって制限されない。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は生体直交性であり得；例えば、反応物もその生成物の官能基も官能化生体分子と相互作用せず、かつ／又は反応は、室温、及び好ましくは水中などの穏やかな非毒性条件下で容易に進行する。いくつかの実施形態では、クリックケミストリー反応は、銅触媒ヒュイスゲン付加環化、アジド−アルキン［３＋２］双極付加環化、シュタウディンガー連結、又はアジドホスフィン連結であり得る。いくつかの実施形態では、クリックケミストリーを使用して、２つの生体ポリマー（例えば、２つの核酸、又は核酸及びタンパク質もしくはペプチド、又は２つの糖重合体など）を一緒に結合し得る。
【０１５３】
定着（コロニー形成）（例えば、粘膜又はＧＩ管）：本明細書で使用される場合、「定着」という用語は、微生物が解剖学的部位、例えば粘膜、損傷部位、器官などにニッチを確立する能力を指す。
【０１５４】
併用療法：本明細書で使用される場合、「併用療法」という用語は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療薬）に同時に曝露されるそれらの状況を指す。いくつかの実施形態では、２つ以上のレジメンが同時に投与され得；いくつかの実施形態では、そのようなレジメンは連続して投与され得（例えば、第１のレジメンのすべての「用量」は、第２のレジメンの任意の用量の投与の前に投与される）；いくつかの実施形態では、そのような薬剤は重複した投薬レジメンで投与される。いくつかの実施形態では、併用療法の「投与」は、組み合わせで他の薬剤又はモダリティを受ける対象への１つ以上の薬剤又はモダリティの投与を伴い得る。明確にするために、併用療法では、個々の薬剤を単一組成物で（又は必然的に同時に）一緒に投与する必要はないが、いくつかの実施形態では、２つ以上の薬剤もしくはそれらの活性部分を組み合わせ組成物で、又は組み合わせ化合物であっても（例えば、単一の化学複合体又は共有体の一部として）一緒に投与され得る。
【０１５５】
組成物：当業者は、本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、１つ以上の特定の成分を含む別個の物理的実体を指すために使用され得ることを理解するであろう。一般に、別段の指定がない限り、組成物は、例えば、気体、ゲル、液体、固体などの任意の形態であり得る。
【０１５６】
誘導体：本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、参照物質の構造的類似体を指す。すなわち、「誘導体」は、参照物質と有意な構造的類似性を示す物質であり、例えば、コア又はコンセンサス構造を共有しているが、特定の個別の点でも異なる。いくつかの実施形態では、誘導体は、化学的操作により参照物質から生成できる物質である。いくつかの実施形態では、誘導体は、参照物質を生成するものと実質的に類似する（例えば、複数のステップを共有する）合成プロセスの実行を通じて生成できる物質である。
【０１５７】
ドメイン：本明細書で使用される場合、「ドメイン」という用語は、実体のセクション又は部分を指す。いくつかの実施形態では、「ドメイン」は、ドメインがその親実体の残りから物理的に分離されたときに、特定の構造及び／又は機能的特徴を実質的又は完全に保持するように実体の特定の構造的及び／又は機能的特徴に関連付けられる。代替的又は追加的に、ドメインは、その（親）実体から分離され、異なる（受信者）実体と結合されたときに、受信者実体に１つ以上の構造的及び／又は親実体でそれを特徴付けた機能的特徴を実質的に保持及び／又は付与する実体の部分であり得るか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ドメインは、分子のセクション又は部分（例えば、小分子、炭水化物、脂質、核酸、もしくはポリペプチド）である。いくつかの実施形態では、ドメインはポリペプチドのセクションであり；いくつかのそのような実施形態では、ドメインは特定の構造要素（例えば、特定のアミノ酸配列もしくは配列モチーフ、αヘリックス文字、βシート文字、コイルドコイル文字、ランダムコイル文字など）、及び／又は特定の機能的特徴（例えば、結合活性、酵素活性、フォールディング活性、シグナル伝達活性など）によって特徴付けられる。
【０１５８】
剤形又は単位剤形：当業者は、「剤形」という用語が、対象への投与のための活性剤（例えば、治療剤又は診断剤）の物理的に別個の単位を指すために使用され得ることを理解するであろう。典型的には、そのような各ユニットは、所定量の活性剤を含有する。いくつかの実施形態では、そのような量は、関連する集団に投与された場合に所望の又は有益な結果と相関することが決定された投薬レジメン（すなわち、治療的投薬レジメン）に従った投与に適した単位投薬量（又はその全画分）である。当業者は、特定の対象に投与される治療用組成物又は薬剤の総量が１人以上の主治医によって決定され、複数の剤形の投与を伴い得ることを理解する。
【０１５９】
投薬レジメン：当業者は、「投薬レジメン」という用語が、典型的には期間で分離された対象に個別に投与される一連の単位用量（典型的には複数）を指すために使用され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、所与の治療薬は、推奨される投薬レジメンを有しており、これは１用量以上を伴い得る。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、それぞれが他の用量から時間的に分離された複数の用量を含む。いくつかの実施形態では、個々の用量は、同じ長さの期間だけ互いに分離されており；いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、複数の用量及び個々の用量を分離する少なくとも２つの異なる期間を含む。いくつかの実施形態では、投薬レジメン内のすべての用量は同じ単位用量量である。いくつかの実施形態では、投薬レジメン内の異なる用量は異なる量である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第１の用量数での第１の投与と、それに続く第１の用量とは異なる第２の用量での追加の１以上の投与とを含む。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、第１の用量での第１の投与と、それに続く第１の用量と同じ第２の用量での追加の１以上の投与とを含む。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、関連する集団にわたって投与された場合の所望の又は有益な結果と相関する（すなわち、治療的投薬レジメンである）。
【０１６０】
エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン（例えば、抗体又は受容体）結合成分により特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学原子又は化学基で構成される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子又は化学基は、抗原が関連する三次元立体構造をとるときに表面に露出される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子又は化学基は、抗原がそのような立体構造をとるとき、空間で互いに物理的に近い。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのそのような化学原子は、抗原が代替の立体構造をとる（例えば、線形化される）ときに互いに物理的に分離される基である。
【０１６１】
菌体外多糖類：本明細書で使用される場合、「菌体外多糖類」という用語は、糖残基で構成され、微生物によってその環境に分泌される高分子量の天然ポリマーを指す。菌体外多糖類は、細胞外多糖類（ＥＰＳ）と互換的に呼ばれ得る。ＥＰＳは、バイオフィルムの機能的及び構造的完全性を確立し、バイオフィルムの物理化学的特性を決定する基本的な成分とみなされる。ＥＰＳは、バイオフィルムの全有機物の５０〜９０％を構成する。
【０１６２】
断片：本明細書に記載の材料又は実体の「断片」は、全体の別個の部分を含む構造を有するが、全体に見られる１つ以上の部分を欠いている。いくつかの実施形態では、断片はそのような別個の部分からなる。いくつかの実施形態では、断片は、全体に見られる１つ以上の機能的特徴を共有する全体の別個の部分を含む。いくつかの実施形態では、断片はそのような別個の部分からなる。いくつかの実施形態では、断片は、全体に見られる特徴的な構造要素又は部分からなるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリマー断片は、ポリマー全体に見られる場合、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００以上のモノマー単位（例えば、残基）を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリマー断片は、ポリマー全体に見られる少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上のモノマー単位（残基など）を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、材料又は実体全体は、全体の「親」と呼ばれ得る。
【０１６３】
相同性：本明細書で使用される場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば核酸分子間（例えばＤＮＡ分子及び／もしくはＲＮＡ分子）並びに／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一である場合、互いに「相同」であるとみなされる。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％類似である場合、互いに「相同」であるとみなされる。
【０１６４】
同一性：本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば核酸分子間（例えばＤＮＡ分子及び／もしくはＲＮＡ分子）並びに／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一である場合、互いに「実質的に同一」であるとみなされる。例えば、２つの核酸又はポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的で２つの配列を整列させることによって実行できまる（例えば、最適な整列のために第１及び第２の配列の一方又は両方にギャップを導入でき、比較のために、同一ではない配列は無視できる）。特定の実施形態では、比較のために整列された配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は実質的に１００％である。次いで、対応する位置でのヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸）で占められている場合、そのとき、分子はその位置で同一である。２つのシーケンス間の同一性パーセントは、ギャップの数及び各ギャップの長さを考慮して、配列で共有される同一の位置の数の関数であり、２つの配列の最適な整列のために導入する必要がある。数学的アルゴリズムを使用して、２つの配列間の配列の比較及び同一性パーセントの決定を達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＭｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ、１９８９、４：１１−１７）のアルゴリズムを使用して決定できる。いくつかの例示的な実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムで行われた核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用する。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して決定できる。
【０１６５】
「改善する」、「増加する」、「阻害する」、又は「低減する」：本明細書で使用される場合、「改善する」、「増加する」、「阻害する」、「低減する」という用語、又はそれらの文法的同等物は、ベースライン又は他の参照測定に対する値を示す。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、特定の薬剤又は治療の存在（例えば、前及び／もしくは後）がない、又は適切な比較可能な参照薬剤の存在下で他の比較可能な条件下での特定のシステム（例えば、単一の個体）での測定であり得るか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、関連する薬剤又は治療の存在下で、特定の方法で応答することが既知である又は予想される比較可能なシステムでの測定値であるか、又はそれを含む。
【０１６６】
単離：本明細書で使用される場合、（１）（自然及び／又は実験環境にかかわらず）初期に産生されたときに関連付けられた成分のうちの少なくとも一部から分離され、かつ／又は（２）人の手によって設計、産生、調製、及び／もしくは製造された物質及び／又は実体を指す。単離された物質及び／又は実体は、それらが初期に関連付けられた他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％から分離することができ、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離され得る。いくつかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％以上の純度である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分が実質的にない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態では、当業者によって理解されるように、物質は、例えば１つ以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）などの他の特定の成分と組み合わせた後でも、「単離された」又は「純粋」でさえあるとみなされ得；そのような実施形態では、物質の単離パーセント又は純度は、そのような担体又は賦形剤を含まずに計算される。一例を挙げると、いくつかの実施形態では、自然界で生じるポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生体ポリマーは、ａ）その起源又は派生源により、自然界でその天然の状態でそれに付随する成分の一部又はすべてと関連していない；ｂ）自然界でそれを産生する種と同じ種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まない；ｃ）自然界でそれを産生する種ではない細胞又は他の発現系の成分によって発現されるか、又はそれと関連する、場合に「単離された」とみなされる。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、化学的に合成されたポリペプチド、又は自然界でそれを産生する細胞系とは異なる細胞系で合成されたポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドとみなされる。代替的に又は追加的に、いくつかの実施形態では、１つ以上の精製技術に供されたポリペプチドは、ａ）それが自然に関連し；かつ／又はｂ）初期に産生されたときに関連付けられた他の成分から分離された程度まで「単離された」ポリペプチドとみなされ得る。
【０１６７】
リンカー：本明細書で使用される場合、異なる要素を互いに接続するマルチ要素薬剤のその部分を指すために使用される。例えば、当業者は、その構造が２つ以上の機能的又は組織的ドメインを含むポリペプチドが、それらを互いに結合するそのようなドメイン間にアミノ酸のストレッチをしばしば含むことを認識する。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは、一般形態Ｓ１−Ｌ−Ｓ２の全体構造を有し、Ｓ１及びＳ２は同じでも異なっていてもよく、リンカーによって互いに関連する２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、ポリプチドリンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、又はそれ以上の長さのアミノ酸である。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛性の三次元構造をとらない傾向があることを特徴とし、むしろポリペプチドに柔軟性を提供する。当技術分野で既知のポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を改変する場合に適切に使用できる種々の異なるリンカー要素（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｐｏｌｊａｋ，１９９４）。
【０１６８】
医薬組成物：本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、活性剤が１つ以上の薬学的に許容される担体とともに製剤化される組成物を指す。いくつかの実施形態では、活性剤は、関連する集団に投与されたときに所定の治療効果を達成する統計的に有意な確率を示す治療レジメンでの投与に適した単位用量で存在する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、以下に適合するものを含む固体又は液体形態での投与のために特別に製剤化され得る：経口投与、例えば、水薬（水性もしくは非水性溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば、頬、舌下、及び全身吸収用に標的化されたもの、舌への適用のためのボーラス、粉末、顆粒、ペースト；例えば、滅菌溶液もしくは懸濁液、又は徐放性製剤としての、例えば、皮下、筋肉内、静脈内、又は硬膜外注射による非経口投与；例えば、皮膚、肺、又は口腔に適用されるクリーム、軟膏、又は制御放出パッチもしくはスプレーとしての局所適用；例えば、ペッサリー、クリーム、又は泡としての膣内もしくは直腸内；舌下；眼球；経皮的に；又は鼻、肺、及び他の粘膜表面。
【０１６９】
薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、本明細書に開示される組成物を製剤化するために使用される担体、希釈剤、又は賦形剤に適用される「薬学的に許容される」という用語は、担体、希釈剤、又は賦形剤が組成物の他の構成成分と適合しなければならず、その受取人に有害ではないことを意味する。
【０１７０】
多糖類：本明細書で使用される場合、「多糖類」という用語は、グリコシド結合によって一緒に結合され、加水分解すると構成単糖又はオリゴ糖を与える単糖単位の長鎖から構成される高分子炭水化物分子を指す。多糖類の構造は、線状から高度に分岐したものまで及ぶ。例には、デンプン及びグリコーゲンなどの貯蔵多糖類、セルロース及びキチンなどの構造多糖類、並びに微生物多糖類、並びにＯＰＳ、ＣＰＳ、ＣＯＰＳ、及びＬＰＳを含む微生物に見られる抗原性多糖類が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７１】
予防する又は予防：本明細書で使用される場合、疾患、障害、及び／又は状態の発生に関連して使用される場合、予防する又は予防は、疾患、障害、及び／もしくは状態を発症するリスクを低減すること、かつ／又は疾患、障害、もしくは状態の１つ以上の特徴もしくはは症状の発症を遅らせることを指す。疾患、障害、又は状態の発症が所定の期間遅れた場合、予防は完了したとみなされ得る。
【０１７２】
タンパク質：本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに結合された少なくとも２つのアミノ酸の列）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分を含んでもよく（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどでもよい）、かつ／又は他の方法で処理又は修飾されてもよい。当業者は、「タンパク質」が細胞により産生される完全なポリペプチド鎖（シグナル配列を有するか又は有しない）であり得るか、又はその特徴的な部分であり得ることを認識するであろう。当業者は、タンパク質が、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって結合されるか、又は他の手段によって関連付けられる、複数のポリペプチド鎖を時々含むことができることを理解するであろう。ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、又はそれらの両方を含有してもよく、当技術分野で既知の種々のアミノ酸修飾又は類似体のいずれかを含有してもよい。有用な修飾には、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが含まれる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すために使用される。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、及び／又はその特徴的な部分である。
【０１７３】
ポリペプチド：本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、一般に、少なくとも３つのアミノ酸のポリマーの当技術分野で認識されている意味を有する。当業者は、「ポリペプチド」という用語が、本明細書に列挙された完全な配列を有するポリペプチドだけでなく、そのような完全なポリペプチドの機能的断片（すなわち、少なくとも１つの活性を保持する断片）を表すポリペプチドを包含するように十分に一般的であることを意図していることを理解するであろう。さらに、当業者は、タンパク質配列が一般に、活性を破壊することなくいくらかの置換を許容することを理解する。したがって、活性を保持し、同じクラスの別のポリペプチドと少なくとも約３０〜４０％の全体配列同一性、多くの場合、約５０％、６０％、７０％、又は８０％超を共有し、さらに通常は、少なくとも１つのはるかに高い同一性の領域、多くの場合、１つ以上の高度に保存された領域で９０％超、又は９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％を含み、通常は、少なくとも３〜４個、多くの場合最大２０個のアミノ酸を包含する任意のポリペプチドは、本明細書で使用される「ポリペプチド」という関連用語内に包含される。ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、又はそれらの両方を含有してもよく、当技術分野で既知の種々のアミノ酸修飾又は類似体のいずれかを含有してもよい。有用な修飾には、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが含まれる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。
【０１７４】
予防：本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、特定の疾患、障害、もしくは状態のうちの１つ以上の症状の発症の遅延、並びに／又は頻度及び／もしくは重症度の低下を指す。いくつかの実施形態では、予防は、集団ベースで評価され、その結果、疾患、障害、又は状態のうちの１つ以上の症状の発生、頻度、及び／又は強度の統計的に有意な減少が、疾患、障害、又は状態の影響を受けやすい集団で観察される場合、薬剤は、特定の疾患、障害、又は状態を「予防」するとみなされる。疾患、障害、又は状態の発症が所定の期間遅れた場合、予防は完了したとみなされ得る。
【０１７５】
タンパク質：本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに結合された少なくとも２つのアミノ酸の列）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分を含んでもよく（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどでもよい）、かつ／又は他の方法で処理又は修飾されてもよい。当業者は、「タンパク質」が細胞により産生される完全なポリペプチド鎖（シグナル配列を有するか又は有しない）であり得るか、又はその特徴的な部分であり得ることを認識するであろう。当業者は、タンパク質が、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって結合されるか、又は他の手段によって関連付けられる、複数のポリペプチド鎖を時々含むことができることを理解するであろう。ポリペプチドは、ｌ−アミノ酸、ｄ−アミノ酸、又はそれらの両方を含有してもよく、当技術分野で既知の種々のアミノ酸修飾又は類似体のいずれかを含有してもよい。有用な修飾には、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが含まれる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、又は１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すために使用される。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、及び／又はその特徴的な部分である。
【０１７６】
組換え：本明細書で使用される場合、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現されるポリペプチド；組換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリーから単離されたポリペプチド；トランスジェニックであるか、そうでなければ遺伝子を発現するように操作された動物（例えば、マウス、ウサギ、ヒツジ、魚など）から単離されたポリペプチド、又はポリペプチドの発現をコード及び／もしくは指示する遺伝子成分又は１つ以上のその成分、部分、要素、もしくはドメイン；及び／又は互いに選択された核酸配列要素のスプライシングもしくはライゲーション、選択された配列要素の化学合成、及び／又はポリペプチドの発現をコード化及び／又は指示する核酸の生成を伴う任意の他の手段によって調製、発現、創出、もしくは単離されたポリペプチド、又はその１つ以上の成分、部分、要素、もしくはドメインなどの組換え手段によって設計、改変、調製、発現、創出、製造、及び／又は単離されるポリペプチドを指すものとする。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列要素のうちの１つ以上が自然界で見られる。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列要素のうちの１つ以上がインシリコで設計される。いくつかの実施形態では、１つ以上のそのような選択された配列要素は、例えば目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなどの）の生殖系列などの天然又は合成源からの既知の配列要素の突然変異誘発（例えば、インビボ又はインビトロ）から生じる。
【０１７７】
参照：本明細書で使用される場合、比較が実行される標準又は対照を説明する。例えば、いくつかの実施形態では、目的の薬剤、動物、個体、集団、サンプル、配列、又は値は、参照もしくは対照の薬剤、動物、個体、集団、サンプル、配列、又は値と比較される。いくつかの実施形態では、参照又は対照は、目的の試験又は決定と実質的に同時に試験及び／又は決定される。いくつかの実施形態では、参照もしくは対照は、有形の媒体で任意に具体化される履歴参照又は対照である。典型的には、当業者に理解されるように、参照又は対照は、評価中のものと同等な条件又は状況の下で決定又は特徴付けられる。当業者は、特定の可能な参照又は対照への依存及び／又は比較を正当化するのに十分な類似性が存在する場合を認識するであろう。
【０１７８】
応答：本明細書で使用される場合、治療に対する応答は、治療の結果として生じる、又は治療と相関する対象の状態の有益な変化を指し得る。そのような変化には、状態の安定化（例えば、治療がなければ起こるであろう悪化の防止）、状態の症状の改善、及び／又は状態の治癒の見通しの改善などが含まれ得る。対象の応答又は腫瘍の応答を指してもよい。腫瘍又は対象の応答は、臨床的基準及び客観的基準を含む多種多様な基準に従って測定され得る。応答を評価する技術には、臨床検査、ポジトロン放射断層撮影、胸部Ｘ線ＣＴスキャン、ＭＲＩ、超音波、内視鏡検査、腹腔鏡検査、対象、細胞診、及び／又は組織学から得られたサンプル中の腫瘍マーカーの存在又はレベルが含まれるが、これらに限定されない。これらの技術の多くは、腫瘍のサイズを決定するか、そうでなければ総腫瘍量の決定を試みる。治療に対する応答を評価するための方法及びガイドラインは、Ｔｈｅｒａｓｓｅ  ｅｔ．ａｌ．（２０００）「Ｎｅｗ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、欧州がん研究治療機構、米国国立がん研究所、米国国立がん研究所で考察される。腫瘍及び／又は患者の群を比較する場合、比較される群が応答率を決定するための同じ又は同等の基準に基づいて評価されるならば、正確な応答基準を任意の適切な方法で選択できる。当業者は、適切な基準を選択することができる。
【０１７９】
リスク：文脈から理解されるように、疾患、障害、及び／又は状態の「リスク」は、特定の個体が疾患、障害、及び／又は状態を発症する可能性を指す。いくつかの実施形態では、リスクはパーセンテージとして表される。いくつかの実施形態では、リスクは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、最大１００％である。いくつかの実施形態では、リスクは、参照サンプル又は参照サンプルの群に関連するリスクに対するリスクとして表される。いくつかの実施形態では、参照サンプル又は参照サンプルの群は、疾患、障害、状態、及び／又は事象の既知のリスクを有する。いくつかの実施形態では、参照サンプル又は参照サンプルの群は、特定の個体に匹敵する個体からのものである。いくつかの実施形態では、相対リスクは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上である。
【０１８０】
血清型：本明細書で使用される場合、血液型亜型とも呼ばれる「血清型」という用語は、細菌もしくはウイルスの種内又は異なる個体の免疫細胞間の明確な変異を指す。これらの微生物、ウイルス、又は細胞は、それらの細胞表面抗原に基づいて一緒に分類され、亜種レベルまでの生物の疫学的分類を可能にする。共通の抗原を有する血清型の群は、血清型又は時には血清複合体と呼ばれ得る。
【０１８１】
短いオリゴ糖：本開示の目的のために、オリゴ糖は、任意の直鎖に４つ未満の残基、又は確実に３つ未満の残基を有する場合、典型的に「短い」とみなされる。
【０１８２】
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、生物、典型的には哺乳動物（例えば、いくつかの実施形態では、出生前のヒトの形態を含むヒト）を指す。いくつかの実施形態では、対象は関連する疾患、障害、又は状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態の影響を受けやすい。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態のうちの１つ以上の症状又は特徴を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態の症状又は特徴をまったく示さない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、又は状態に対する感受性又はリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する者である。いくつかの実施形態では、対象は患者である。いくつかの実施形態では、対象は、診断及び／もしくは療法であり、かつ／又はそれらが施されている個体である。
【０１８３】
影響を受けやすい：疾患、障害、又は状態に「影響を受けやすい」個体は、疾患、障害、又は状態を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、疾患、障害、又は状態の影響を受けやすい個体は、疾患、障害、又は状態のいかなる症状も示さない。いくつかの実施形態では、疾患、障害、又は状態の影響を受けやすい個体は、疾患、障害、及び／又は状態と診断されていない。いくつかの実施形態では、疾患、障害、又は状態の影響を受けやすい個体は、疾患、障害、又は状態の発症に関連する状態に曝露された個体である。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態を発症するリスクは、集団ベースのリスク（例えば、疾患、障害、又は状態に罹患している個体の家族）である。
【０１８４】
症状が軽減される：本発明によれば、特定の疾患、障害、又は状態のうちの１つ以上の症状の程度（例えば、強度、重症度など）及び／又は頻度が低下すると、「症状が軽減される」。明確にするために、特定の症状の発症の遅れは、その症状の頻度を減らす１つの形態とみなされる。
【０１８５】
治療有効量：本明細書で使用される場合、それが投与される所望の効果を生じる量を意味する。いくつかの実施形態では、この用語は、疾患、障害、及び／又は状態を治療するために、治療的投薬レジメンに従って疾患、障害、及び／又は状態に罹患している又は影響を受けやすい集団に投与される場合に十分な量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状の発生率及び／又は重症度を低減し、かつ／又は発症を遅らせる量である。当業者は、「治療有効量」という用語が実際に特定の個体で成功した治療が達成されることを必要としないことを理解するであろう。むしろ、治療有効量は、そのような治療を必要とする患者に投与された場合に、かなりの数の対象において特定の望ましい薬理学的応答を提供する量であり得る。いくつかの実施形態では、治療有効量への言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害、もしくは状態の影響を受ける組織）又は体液（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）で測定された量への言及であり得る。当業者は、いくつかの実施形態では、特定の薬剤又は療法の治療有効量を単回投与で製剤化及び／又は投与し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、治療的に有効な薬剤は、例えば投薬レジメンの一部として、複数の用量で製剤化及び／又は投与され得る。いくつかの実施形態では、治療有効量は、免疫応答を誘発するのに好適な免疫原性組成物又はワクチンの量を指し得る。例えば、「治療有効量」は、任意の対象の感染及び／又は疾患（例えば、細菌感染、肺炎球菌感染など）を治療、減弱、又は予防する量であり得る無毒だが十分な量を指す。
【０１８６】
治療：本明細書で使用される場合、「治療」（「治療する」又は「治療すること」も）という用語は、部分的又は完全に軽減、改良、回復、阻害、発症の遅延、重症度の軽減、及び／又は特定の疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の症状、特徴、及び／又は原因の発生率を減らす療法の投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／もしくは状態の兆候を示さない対象、並びに／又は疾患、障害、及び／もしくは状態の初期兆候のみを示す対象に対するものであり得る。代替的又は追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態のうちの１つ以上の確立された兆候を示す対象に対するものであり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象に対するものであり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症リスクの増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが既知の対象に対するものであり得る。
【０１８７】
変異体：分子、例えば核酸、タンパク質、又は小分子の文脈で本明細書で使用される場合、「変異体」という用語は、例えば、参照実体と比較して、１つ以上の化学部分の存在もしくは不存在、又はそのレベルで、参照分子と有意な構造的同一性を示すが、参照分子とは構造的に異なる分子を指す。いくつかの実施形態では、変異体はまた、その参照分子と機能的に異なる。一般に、特定の分子が参照分子の「変異体」であると適切にみなされるかどうかは、その参照分子との構造的同一性の程度に基づく。当業者によって理解されるように、任意の生物学的又は化学的参照分子は、特定の特徴的な構造要素を有する。定義により、変異体は、１つ以上のそのような特徴的な構造要素を共有するが、参照分子と少なくとも１つの側面が異なる別個の分子である。ほんの数例を挙げると、ポリペプチドは、線形もしくは三次元空間で相互に指定された位置を有し、かつ／又は特定の構造モチーフ及び／もしくは生物学的機能に寄与する複数のアミノ酸からなる特徴的な配列要素を有してもよく；核酸は、線形又は三次元空間において相互に指定された位置を有する複数のヌクレオチド残基から構成される特徴的な配列要素を有してもよい。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、アミノ酸又はヌクレオチド配列の１つ以上の違い、及び／又は（例えば、ポリペプチドもしくは核酸骨格に結合する）ポリペプチドもしくは核酸の共有成分である化学部分（例えば、炭水化物、脂質、リン酸基）の１つ以上の違いの結果として参照ポリペプチド又は核酸と異なり得る。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９９％である参照ポリペプチド又は核酸との全体的な配列同一性を示す。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照ポリペプチド又は核酸と少なくとも１つの特徴的な配列要素を共有しない。いくつかの実施形態では、参照ポリペプチド又は核酸は、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照ポリペプチド又は核酸の生物学的活性のうちの１つ以上を共有する。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照ポリペプチド又は核酸の生物学的活性のうちの１つ以上を欠いている。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照ポリペプチド又は核酸と比較して、１つ以上の生物学的活性のレベルの低下を示す。いくつかの実施形態では、目的のポリペプチド又は核酸は、それが参照のアミノ酸又はヌクレオチド配列と同一であるが、特定の位置に少数の配列変更を有する場合、参照ポリペプチド又は核酸の「変異体」であるとみなされる。典型的には、参照と比較して、約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、又は約２％未満の変異体内の残基が置換、挿入、又は削除される。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照と比較して、約１０、約９、約８、約７、約６、約５、約４、約３、約２、又は約１個の置換残基を含む。しばしば、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照に対して、非常に少数（例えば、約５、約４、約３、約２、又は約１つ未満）の置換、挿入、又は削除された機能的残基（すなわち、特定の生物学的活性に参加する残基）を含む。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照と比較して、約５、約４、約３、約２、又は約１つ以下の追加又は削除を含み、いくつかの実施形態では、追加又は削除を含まない。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は核酸は、参照と比較して、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１０、約９、約８、約７、約６未満、一般的に約５、約４、約３、又は約２つ未満の追加又は削除を含む。いくつかの実施形態では、参照ポリペプチド又は核酸は、自然界で見られるものである。いくつかの実施形態では、参照ポリペプチド又は核酸は、ヒトポリペプチド又は核酸である。
【０１８８】
ワクチン接種：本明細書で使用される場合、「ワクチン接種」という用語は、例えば疾患の原因となる薬剤に対する免疫応答を引き起こすことを意図した組成物の投与を指す。本発明の目的のために、ワクチン接種は、疾患の原因となる薬剤への曝露の前、最中、及び／又は後に、特定の実施形態では、薬剤への曝露の前、最中、及び／又は直後に投与することができる。いくつかの実施形態では、ワクチン接種は、ワクチン接種組成物の適切な時間間隔での複数回投与を含む。
【発明を実施するための形態】
【０１８９】
本開示は、一般に、複合タンパク質及び多糖類、例えば複合タンパク質及び多糖類のワクチンを含む組成物、システム、及び方法に関する。そのような複合体は、例えば、院内感染のリスクがある患者において免疫保護応答を誘発及び／又は増加させるために使用することができる。
【０１９０】
院内感染は、入院後少なくとも約４８時間で病院又は他の医療施設で獲得する感染である。病院環境及び非病院環境の両方を強調するために、院内感染は、代わりに医療関連感染（ＨＡＩ又はＨＣＡＩ）と呼ばれることもある。いくつかの実施形態では、院内感染は、病院、養護施設、リハビリテーション施設、外来診療所、又は他の臨床設定で獲得され得る。いくつかの実施形態では、院内感染は、様々な手段によって臨床環境の影響を受けやすい患者に広がる。いくつかの実施形態では、医療スタッフが、汚染された機器、ベッドリネン、又は空気滴に加えて、院内感染を広める可能性がある。いくつかの実施形態では、院内感染は、外部環境、別の感染患者、感染している可能性のあるスタッフに起因する可能性があり、場合によっては、院内感染の原因を決定できない。場合によっては、院内感染を引き起こす微生物は、患者自身の皮膚微生物叢に起因し、手術又は保護皮膚バリアを損なう他の処置後に日和見的になる。患者は自分の皮膚から感染にかかる場合があるが、そのような感染は医療環境で発症するため、依然として院内感染とみなされる。
【０１９１】
抗菌薬耐性
抗菌薬耐性（ＡＭＲ）の問題に立ち向かう際のワクチンの役割についての評価が高まっている。ワクチンは、抗菌薬の使用の必要性を減らすことにより耐性の有病率を減らし、症例の総数を減らすことでその影響を減らすことができる。特定の臨床症候群の原因となり得る病原体の数を減らすことにより、ワクチンは経験的療法のためのより狭いスペクトルの抗生物質の使用を許可できる。これらの効果は、集団免疫によって増幅され、集団内の予防接種を受けていない人に保護を拡大し得る。耐性についての選択の多くは、正常な細菌叢の第三者に対する選択によるものであるため、ワクチン接種は、ワクチンに含まれていない病原体であっても耐性に対する圧力を減らすことができる。一部のワクチンは、標的種内の薬剤耐性系統に不均衡な影響を及ぼしており、これは、ワクチン設計でより意図的に活用できる利点である（Ｌｉｐｓｉｔｃｈ  ａｎｄ  Ｓｉｂｅｒ，２０１６）。これらの各メカニズムによるＡＭＲとの闘いにおけるワクチンの利点は、ワクチン接種を受けた個体が自分自身に感染したり定着したりせず、したがって病原体を他に伝播しない場合に生じる間接的な保護又は集団免疫によって増幅される可能性がある（Ｆｉｎｅ，１９９３）。この方法で、感染、耐性感染、及び抗菌薬の使用は、予防接種を受けた個体だけでなく、その接触者でも減らすことができる。最後に、無症状で鼻咽頭、皮膚、腸、又は他の部位にコロニーを形成する生物に対するワクチンの場合、ワクチン接種により微生物集団の密度を減らすと、耐性要素の遺伝的交換の機会が減るという理論的可能性がある（Ｌｅｖｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９；Ｌｅｖｉｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｎｅｊｏ，２００９）。
【０１９２】
特に興味深いワクチンは、複数の抗生物質に頻繁に耐性があるＨＡＩの最も重要な原因を標的とするワクチンである（ＣＤＣ，２０１３；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＨＡＩの最も一般的な原因には、複数の耐性グラム陰性細菌が含まれ；最近の出版物は、最終手段の薬剤であるポリミキシンＢ及びコリスチンに対して耐性になった世界中の分離株を報告している（Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５：Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。グラム陽性生物では、一次及び二次薬剤に対する耐性も問題である。カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）種は、免疫不全患者における粘膜感染及び播種性感染の重要な原因であり、抗菌薬療法の結果である（ＣＤＣ，２０１３）。グラム陰性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、及びアシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）種も、複数の抗生物質に対してますます耐性になりつつある（ＭｃＧａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６；Ｃｏｌｌｉｇｎｏｎ，２００９；Ａｇｏｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＷＨＯ  ｒｅｐｏｒｔ，２０１４）。この知識のギャップに対処するため、ＣＤＣは、２００９年に、ＨＡＩ及び抗菌薬の使用に関する多州有病率調査を開発及び実施するための３段階の取り組みを開始した。他の国では、そのような感染の問題の範囲及び規模を説明するために、有病率調査が使用されている。ＣＤＣの取り組みは、救急病院のＨＡＩの有病率を推定し、表１に示すように感染部位及び病原体に従ってこれらの感染の分布を決定し、これらの感染症の国家負担の更新された推定値を生成した２０１１年に大規模な調査で頂点に達した（Ｍａｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０１９３】
調査は米国で１８３の病院で実施された（Ｍａｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。１１，２８２人の患者のうち、４５２人は１つ以上のＨＡＩを有していた（４．０％；９５％信頼区間、３．７〜４．４）。５０４のそのような感染のうち、最も一般的なタイプは肺炎（２１．８％）、手術部位感染（２１．８％）、及び胃腸（ＧＩ）感染（１７．１％）であった。ディフィシル菌（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、最も一般的に報告された病原体であった（医療関連感染の１２．１％を引き起こす）。従来、ＨＡＩを予防するプログラムの焦点であったデバイス関連感染（すなわち、中心カテーテル関連血流感染、カテーテル関連尿路感染、人工呼吸器関連肺炎）は、そのような感染の２５．６％を占めていた。著者らは、２０１１年に米国の救急病院に７２１，８００ＨＡＩの患者が６４８，０００人いると推定した。肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、又はそれらの組み合わせを病院環境でのワクチン接種により標的とすることは、肺炎、手術部位、尿路感染症などの最も一般的なＨＡＩ感染の発生率に大きな影響を与えるだけでなく、表１に示す抗生物質耐性の有病率を下げる。
【表１】
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【０１９４】
免疫原性複合体
本開示は、骨格ポリマー、多糖類、及びポリペプチドを含む免疫原性複合体を包含する。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は複数の抗原提示システム（ＭＡＰＳ）である。特定のＭＡＰＳシステムは、ＷＯ２０１２／１５５００７に以前に記載されている。一般に、本明細書に記載の免疫原性複合体は、（ｉ）ポリマー及びポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の多糖類（例えば、抗原性多糖類）を含む骨格ポリマー；並びに（ｉｉ）ポリマー及び／又は抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化された１つ以上のポリペプチド（例えば、抗原性ポリペプチド及び／又は担体ペプチド）を含む新しい変異体ＭＡＰＳ型複合体を表す。いくつかの例示的な骨格ポリマーは、図７Ａ〜７Ｄに示される免疫原性複合体に示される。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳ複合体はＢＰ−１  ＭＡＰＳである。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳ複合体はＢＰ−１．２  ＭＡＰＳである。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳ複合体はＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳである。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳ複合体はＢＰ−２ｂ  ＭＡＰＳである。いくつかの実施形態では、変異体ＭＡＰＳ複合体はＢＰ−３  ＭＡＰＳである。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、（ｉ）ポリマー及び／又は抗原性多糖類に関連する第１の親和性分子；並びに（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子を含む少なくとも１つの親和性分子／相補的親和性分子対の形成により、骨格ポリマー及び／又はポリマーにコンジュゲートされた抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される。いくつかの実施形態では、１つ以上の多糖類は、ポリマーに化学的に結合している。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、グラム陰性細菌及び／又はグラム陽性細菌に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の微生物抗原性多糖類は、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗原性多糖類に由来する。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、本明細書に記載の相補的親和性分子に共有結合（例えば、融合）されている。
【０１９８】
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約０．０１〜約１０ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約０．０１〜約０．１ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約０．０１〜約１ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約０．１〜約１ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約０．１〜約１０ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、約１〜約１０ｗ／ｗの比で骨格ポリマーにコンジュゲートされる。
【０１９９】
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、１つ以上の病原体に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５の血清型又は病原体の株に由来する。
【０２００】
いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、骨格ポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の親和性分子を含む。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類は、抗原性多糖類にコンジュゲートされた１つ以上の親和性分子を含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマー及び抗原性多糖類は、１つ以上の親和性分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは１つ以上の親和性分子にコンジュゲートされ、抗原性多糖類は親和性分子にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは親和性分子にコンジュゲートされておらず、抗原性多糖類は１つ以上の親和性分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、親和性分子はビオチン又はビオチン誘導体を含む。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、骨格ポリマーにコンジュゲートされた複数の親和性分子を含む。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類は、抗原性多糖類にコンジュゲートされた複数の親和性分子を含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマー及び抗原性多糖類は、複数の親和性分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは複数の親和性分子にコンジュゲートされ、抗原性多糖類は親和性分子にコンジュゲートされない。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは親和性分子にコンジュゲートされておらず、抗原性多糖類は複数の親和性分子にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、親和性分子はビオチン又はビオチン誘導体を含む。
【０２０２】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体に含まれ得る多糖類及び／又はポリペプチドは、組換え又は合成により産生される。いくつかの実施形態では、免疫原性複合体に含めることができる多糖類及び／又はポリペプチドは、天然源から単離及び／又は由来する。例示的な多糖類及び／又はポリペプチドは以下に記載される。
【０２０３】
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染の大部分は入院に関連している。日和見病原体として、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）は、主に、入院し、真性糖尿病又は慢性肺閉塞などの重篤な基礎疾患に罹患している免疫不全の個体を攻撃する。院内クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染は、主に、医学的に最も重要な属の種である肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって引き起こされる。クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）がＵＳ及びヨーロッパでのすべての院内細菌感染の８％を引き起こすと推定される（Ｐｏｄｓｃｈｕｎ  ａｎｄ  Ｕｌｌｍａｎｎ，１９９８）。主にアジアで見られ、ヨーロッパ及び西半球ではあまり見られない超毒性のＫ１莢膜化株を除き、頻度に大きな地理的変動は認められていない。米国では、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）はすべての院内細菌感染の３〜７％を占めており、病院で最も重要な８つの感染性病原体に分類されており（Ｈｏｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８；Ｓｃｈａｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）、英国（Ｂｅｒｇｏｇｎｅ−Ｂｅｒｅｚｉｎ，１９９５）及びドイツ（Ｕｌｌｍａｎｎ，１９８６）から収集されたデータは、ＣＤＣによって報告されたデータと非常に類似している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類及び／又はポリペプチドを含む。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＬＰＳ由来及び／又はＣＰＳ多糖類を含む。いくつかの実施形態では、ＬＰＳ由来の多糖類はＯＰＳである。いくつかの実施形態では、ＬＰＳ由来の多糖類はＣＯＰＳである。莢膜は、ほぼすべてのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株によって産生され；それらは、宿主環境と接触する表面構造の最外層を表しており、免疫原性が高く無毒であることが証明されている（Ｃｒｙｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５）。肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（ＫＰ）ＣＰＳワクチンの欠点は、莢膜（Ｋ）抗原が非常に多いことである（８０以上の異なる抗原）。しかしながら、菌血症性クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）分離株の莢膜型の発生率の研究では、２５の血清型だけですべての菌血症株の７０％を構成することが観察された（Ｃｒｙｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６ａ）。本発明者らの血清疫学的所見に基づいて、２４価ＫＰ  ＣＰＳワクチンが製剤化され、その後安全で免疫原性があることが証明された（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。しかしながら、単純な多糖類は、それ自体では十分に免疫原性がなく、長く効果的な記憶応答を開始及び維持できず、多くの場合、タンパク質が効果的であるようにコンジュゲートする必要がある。２４の複合糖質を１つのワクチンに組み合わせるには、各成分によって誘発される免疫原性のバランスを取る必要があるため、２４価ＫＰ多糖類コンジュゲートワクチンの開発は複雑で困難である。
【０２０５】
それらの内毒素特性のために、ＬＰＳは敗血症の病理学において重要であるとみなされる。最近まで、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＬＰＳ  Ｏ抗原は、一般にＣＰＳによってマスクされているとみなされていたため、細菌表面には露出していなかった。しかしながら、いくつかの研究により、特定の莢膜血清型を発現する株でのＯ抗原の表面露出及び抗体へのアクセス性が実証された（Ｔｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８）。Ｋ抗原とは対照的に、８つのＯタイプのみが既知であり、Ｏ１は臨床分離株で最も一般的に見られるＯタイプである。４つのＫＰ分離株（Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５）が臨床分離株の大半を占めている（Ｈａｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｏ１抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）の投与は、致死的な内毒素血症のマウスモデルで保護的であることが報告されている（Ｍａｎｄｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。
【０２０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）３型線毛タンパク質又はポリペプチドを含む。他の線毛と異なり、タンニンで処理された３型線毛は赤血球を凝集する。その名前であるマンノース耐性のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）様血球凝集素（ＭＲ／Ｋ−ＨＡ）は、この線毛型がクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）によってのみ合成されることを意味するが、後の研究では、３型線毛が多くの腸属に発生することが実証された（Ｃｌｅｇｇ  ａｎｄ  Ｇｅｒｌａｃｈ，１９８７）。さらに、血清学的研究はかなりの抗原多様性を示したため、３型線毛は腸内細菌のすべての属で同一ではない（Ｏｌｄ  ａｎｄ  Ａｄｅｇｂｏｌａ，１９８５）。植物の根に生息するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の付着細胞小器官として元々説明されていたこれらの線毛は、後に様々なヒト細胞に結合できることがわかった。３型線毛を発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の株は、内皮細胞、気道の上皮、及び尿路上皮細胞に付着する（Ｈｏｒｎｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２；Ｔａｒｋｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｗｕｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，１９９０）。腎臓では、これらの線毛は、管状の基底膜、ボウマン嚢、及び腎血管への細菌の付着を媒介する（Ｔａｒｋｋａｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。ＭｒｋＡは、ＩＩＩ型線毛複合体の主要なタンパク質であり、宿主細胞の付着及びバイオフィルム形成に関与しており（Ｍｕｒｐｈｙ  ａｎｄ  Ｃｌｅｇｇ，２０１２）、これは、細菌病原体が感染を確立するために使用する戦略である（Ｂｕｒｍｏｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。付着膜ではなくＭｒｋＡ（ＭｒｋＤ）がバイオフィルム形成を促進することが以前に示された（Ｌａｎｇｓｔｒａａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。ＭｒｋＡ抗原は、異なるＫＰ分離株間で高度な配列保存性を示し、細胞外標的として一般にアクセス可能である（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。２つの最も優勢な病原性分離株である肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びクレブシエラオキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）からのＭｒｋＡは、９５％の相同性を示す。さらに、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）ファミリーの代表的なメンバー間のＭｒｋＡ相同性は、９０％を超えるため、これらの配列データは、ＭｒｋＡベースの抗肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及びパングラム陰性菌戦略を開発する潜在的な機会を示唆している。
【０２０７】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）多糖類
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）多糖類を含む。ＣＰＳ（例えば、Ｋ抗原）に加えて、ＯＰＳは肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のもう１つの重要な毒性因子である。肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳには少なくとも９つのサブタイプがあり、それぞれ異なる多糖類化学構造を有する。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ多糖類は、本明細書に記載の免疫複合体に含まれる。本明細書で使用される場合、各血清型の指定は、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）及びクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）に関する参照及び調査のための世界保健機関（ＷＨＯ）協力センターに従って指定される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、Ｏ１（及びｄ−Ｇａｌ−ＩＩＩ変異体）、Ｏ２（及びｄ−Ｇａｌ−ＩＩＩ変異体）、Ｏ２ａｃ、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ７、Ｏ８、及びＯ１２から選択される１つ以上の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型である、又はそれらに由来する１つ以上のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５のうちの１つ以上、又はそれらの組み合わせから、又はそれらに由来するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５のそれぞれから、又はそれらに由来するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類を含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、ＯＰＳである、又はそれに由来する１つ以上のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、及びそれらの変異体又は組み合わせであるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５の血清型のうちの１つ以上、又はそれらの組み合わせから選択される、又はそれらに由来するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＯＰＳを含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５のそれぞれから、又はそれらに由来するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＯＰＳを含む。
【０２１０】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、ＣＰＳであるか、又はそれに由来する１つ以上のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、ＣＰＳは、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｋ１、Ｋ２、Ｋ１０、Ｋ１６、及びＫ１９であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＰＳはクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｋ１９であるか、又はそれに由来する。
【０２１１】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｉ型線毛タンパク質又はその免疫原性断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、Ｇｅｒｌａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙに公開された配列番号１のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、配列番号１の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２１２】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｉ型線毛タンパク質配列番号１
【数１】
2020525540.tif 000003
【０２１３】
いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ又はその免疫原性断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、配列番号２のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、配列番号２の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２１４】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が保存されたＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ配列番号２
【数２】
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【０２１５】
いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ又は免疫原性断片、例えば、ＭｒｋＡ単量体タンパク質との安定化相互作用を提供する繰り返し配列を有する断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、配列番号３のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ポリペプチドは、配列番号３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２１６】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が安定化されたＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ配列番号３
【数３】
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【０２１７】
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）は、特に好中球減少症及び人工呼吸器による患者の免疫不全において、ＨＡＩ感染の主な原因であり、嚢胞性線維症患者の主要な死因である。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染は、熱傷、目（例えば、角膜）の損傷、外傷などにも関係している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類及び／又はポリペプチドを含む。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）Ｏ抗原を含む。Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈは、２０個のＯ抗原血清型のうち１６個を含有する精製抽出物をＰＥＶ−１ワクチンに組み合わせて、この抗原に基づくワクチンを開発する初期の取り組みのほとんどを提供した。１９７６年〜１９８４年に合計５つの第１−２相臨床試験の結果が発表された（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９７６，１９７８，１９７９，１９８０；Ｌａｎｇｆｏｒｄ  ａｎｄ  Ｈｉｌｌｅｒ，１９８４）。ワクチンの安全性データは、忍容性が良好であることを示す。セロコンバージョンは、正常なボランティア及び熱傷又は嚢胞性線維症（ＣＦ）患者のワクチン接種群で比較的一貫しているように見えた。ワクチン接種は、熱傷での定着に対して、ほとんど又は効果なしから有意な効果まで、様々な効果があった。血液培養は、１つの研究でワクチン接種によりほぼ１０倍の減少を示した。熱傷患者の各研究では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）による死亡数は必ずしも明確ではなかったものの、７０〜１００％の様々な死亡の減少があった。ＣＦ研究（Ｌａｎｇｆｏｒｄ  ａｎｄ  Ｈｉｌｌｅｒ，１９８４）では、ワクチン接種による緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の定着には臨床的利益も差も見られず、抗体ＥＬＩＳＡの力価と臨床的又は細菌学的な読み取り値との間に相関関係はなかった。スイス血清研究所、ベルナバイオテック、及びクルーセルは、８価のＯ抗原−エキソトキシンＡコンジュゲートワクチン（Ａｅｒｕｇｅｎ）を開発し、３つの公開された第１−２相臨床試験を実施した（Ｓｃｈａａｄ，ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｌａｎｇ、ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｃｒｙｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。彼らの筋肉内（ＩＭ）投与ワクチンは忍容性が良好であり、すべての血清型へのセロコンバージョンはすべての研究で有意であると考えられた。ワクチン接種の結果、大半の研究でコロニー形成が著しく減少し、ワクチン又はプラセボ群でＰＡ関連の死亡は報告されなかった。ＣＦ患者におけるＣｒｕｃｅｌｌ  ４７６患者の第３相試験では、ワクチンは望ましいエンドポイントを満たしておらず、以前の試験で観察された結果を繰り返さなかった。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）鞭毛又はその抗原性部分を含む。初期の調査の有効性研究（Ｈｏｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２；Ｈｏｌｄｅｒ  ａｎｄ  Ｎａｇｌｉｃｈ，１９８６；Ｍｏｎｔｉｅ、ｅｔ  ａｌ．，１９８７）は、ａ型又はｂ型の鞭毛がネズミ熱傷モデルにおける死亡から型特異的な保護を提供できるが、そのｂ型鞭毛はそうするのがいくらか熟練しているように見えた。前臨床研究では、ＩＭＭＵＮＯ  ＡＧ（Ｃｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）は、ａ０、ａ０ａ１ａ２、ａ０ａ２、ａ０ａ３、ａ０ａ３ａ４、及びｂ型鞭毛からなる個々のワクチンを使用して、ｂ抗原がより良い免疫原であると決定し、ａ型製剤よりも免疫不全マウスモデルでの高い保護率を提供した。同じ論文の第１相研究では、これらの免疫原のすべてが、力価が高く、持続性の高い血清抗体を誘発し、追跡第２相研究の単一のｂ型免疫原を誘発したことが示され（Ｄｏｒｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ，１９９５）、これは、気管支肺胞洗浄におけるＩｇＧ、ＩｇＡ、及びｓＩｇＡのセロコンバージョンも示した。ＣＦ患者（３相）にａ型（ａ０ａ１ａ２）＋ｂ型鞭毛ワクチンを組み合わせて投与すると、高力価の血清ＩｇＧが持続した。しかしながら、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）肺感染に対して保護効果はいくらかあったが、ワクチンに関連しない血清型の存在が結果の解釈を曇らせた（Ｄｏｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｏｒｎｅｒ，１９９７；Ｄｏｒｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００７）。その後のレビューで、Ｄｏｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｐｉｅｒ（２００８）は、二価の鞭毛ワクチンは最適ではない場合があり、ｂ型鞭毛及びすべてのａ型サブタイプを含む単一のワクチンにはデータが存在しないようであることを示唆した。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリン又はその抗原性断片を含む。鞭毛のサブユニットであるフラジェリンに関する研究は、調査段階を超えて進展していない。研究には、精製されたフラジェリン（Ｃａｍｐｏｄｏｎｉｃｏ，ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｆａｅｚｉ、ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、フラジェリンを含むＤＮＡワクチン（Ｓａｈａ、ｅｔ  ａｌ．，２００７）、及びフラジェリン／ポリマンヌロン酸コンジュゲートが含まれた（Ｃａｍｐｏｄｏｎｉｃｏ，ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。これらはすべて免疫原性があり保護的であるが、鞭毛製剤によって達成されるレベルには達していないようである。受動的免疫はまた、抗ｂ型血清（Ｂａｒｎｅａ，ｅｔ  ａｌ．，２００６）、ｍＡｂ抗ａ型（Ｂａｒｎｅａ，ｅｔ  ａｌ．，２００９）、及び抗ａ型血清（Ｆａｅｚｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１１）で研究されている。すべての製剤は、マウス熱傷モデルでの死亡の減少を示した。
【０２２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶ（ＩＩＩ型分泌）又はその抗原性断片を含む。疾患の重症度に関連する重要な毒性因子は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＩＩ型分泌系（Ｔ３ＳＳ）であり、これは細菌毒素を宿主細胞の細胞質に直接注射する。Ｔ３ＳＳインジェクチソーム複合体の先端に位置するＰｃｒＶタンパク質は、Ｔ３ＳＳ機能に必要であり、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を標的とする免疫予防戦略の動物モデルで十分に検証された標的である。能動的免疫及び受動的免疫（Ｓａｗａ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｈｏｌｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｓｈｉｍｅ，ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｆｒａｎｋ，ｅｔ  ａｌ．，２００２）が、様々な動物モデルで保護を示したＰｃｒＶの以前の基礎に基づき、ＫａｌｏＢｉｏｓは、「ヒューマニア（Ｈｕｍａｎｅｅｒｅｄ）、高親和性、ＰＥＧ化Ｆａｂ’」（ＫＢ−００１）を受動的療法として開発し、これは前臨床（Ｂａｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００９）及び臨床試験（Ｆｒａｎｃｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｍｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）を調査している。マウス及び「ヒューマニア」ｍＡｂ及びそのＦａｂ’断片の両方が動物研究で有効であることが証明されたが、ＫＢ−００１を用いた臨床試験では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の定着数、症状、又は肺活量測定での有意差は示されず、嚢胞性線維症患者の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症を治療するための新しい改良版、ＫＢ−００１Ａは、第２相ヒト臨床試験（ＣｌｉｎＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ，２０１４）でその主要エンドポイントを満たさなかった。本開示までの活性ワクチンとしてのその使用に関して、ＰｃｒＶタンパク質抗原に関してはほとんど研究が行われていない。
【０２２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌体外多糖類を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫複合体は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｓＬを含む。この菌体外多糖類は、哺乳動物細胞への緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の付着、並びに非ムコイド及びムコイド緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）分離株によって産生されるバイオフィルムの形成及び維持に重要である。ＰｓＬ多糖類は、生体膜細胞を一緒に保持するように機能するため、付着におけるＰｓＬの重要な役割を果たす（Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。機能的スクリーニングにより、１つのＰｓＬエピトープに対するｍＡｂがＯＰＫ及び細胞付着アッセイで優れた活性を示し、複数の動物モデルで顕著な保護を付与することが明らかになった。
【０２２３】
多糖類ＰｓＬは、非ムコイド及びムコイドの臨床分離株の両方で一般的である抗体にアクセス可能な血清型に依存しない表面機能である（ＤｉＧｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。動物では、ＰｓＬ抗体はエフェクター細胞の存在下でＯＰＫを媒介し、上皮細胞への緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の結合を阻害する。ＰｓＬ−推定の特異的ｍＡｂ  Ｃａｍ−００３は、受動的に保護され、用量依存的にマウスの臓器の細菌量を軽減した（ＤｉＧｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。また、Ｃａｍ−００３  ｍａｂは、マウス肺炎モデルにおける複数の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）血清型に対して保護的であった。同様の結果は、引っかき傷のある角膜モデル又は熱傷したマウスモデルでも得られ、どちらの場合も、Ｃａｍ−００３は感染の減少に効果的であった。ＭＥＤＩ  ３９０２は、血清型に依存しないＴＴＳＳ毒性因子ＰｃｒＶ及び持続性因子ＰｓＬ菌体外多糖類を標的とする二重特異性抗体である（ＤｉＧｉａｎｄｏｍｅｎｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）により引き起こされる肺炎（人工呼吸器関連肺炎）の予防に関するＭＥＤＩ  ３９０２の第１相安全性試験が完了した（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ＮＣＴ０２２５５７６０）。本開示までの活性ワクチンとしてのその使用に関しては、ＰｓＬ菌体外多糖類抗原でほとんど研究が行われていない。
【０２２４】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）多糖類
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）多糖類を含む。ＩＡＴＳ法によるＯ抗原の血清型は、およそ２０種類が知られている。分子のＯ抗原多糖類は、ワクチン開発の潜在的な非毒性標的を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＯＰＳ、ＬＰＳ、及び／又は菌体外多糖類を含む。いくつかの実施形態では、ＬＰＳ由来の多糖類はＯＰＳである。いくつかの実施形態では、ＬＰＳ由来の多糖類はＣＯＰＳである。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ９、Ｏ１０、Ｏ１１、Ｏ１２、Ｏ１３、Ｏ１４、Ｏ１５、Ｏ１６、Ｏ１７、Ｏ１８、Ｏ１９、及びＯ２０（ＩＡＴＳ）から選択される１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）血清型である、又はそれらに由来する１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、及びＯ１１から選択される１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）血清型、又はそれらの組み合わせである、又はそれらに由来する１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、及びＯ１１から選択される緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）血清型のそれぞれである、又はそれらに由来するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。
【０２２６】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、ＯＰＳであるか、又はそれに由来する１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ９、Ｏ１０、Ｏ１１、Ｏ１２、Ｏ１３、Ｏ１４、Ｏ１５、Ｏ１６、Ｏ１７、Ｏ１８、Ｏ１９、及びＯ２０型のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、又はそれらの組み合わせであるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、又はＯ１１型のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、又はそれらの組み合わせであるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、又はＯ１１型のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）のそれぞれであるか、又はそれらに由来する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、莢膜又は莢膜様菌体外多糖類であるか、又はそれらに由来する１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、莢膜又は莢膜様多糖類は、アルギン酸シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、Ｐｓｌ、又はＰｅｌであるか、又はそれらに由来する。
【０２２８】
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、菌体外多糖類であるか、又はそれに由来する１つ以上のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）多糖類を含む。いくつかの実施形態では、菌体外多糖類は、ＰｓＬであるか、又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、ＰｓＬは、配列番号４及び／又は配列番号５を含むモノクローナル抗体に結合する少なくとも１つのエピトープを含む。いくつかの実施形態では、ＰｓＬの少なくとも１つのエピトープに結合するモノクローナル抗体は、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのＰｓＬ結合断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ＰｓＬの少なくとも１つのエピトープに結合するモノクローナル抗体は、配列番号５の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのＰｓＬ結合断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ＰｓＬの少なくとも１つのエピトープに結合するモノクローナル抗体は、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのＰｓＬ結合断片、及び配列番号５の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのＰｓＬ結合断片であるか、又はそれらを含む。
【０２２９】
Ｃａｍ−００３  ｍＡｂ配列番号４に結合するＰｓＬの配列
【数４】
2020525540.tif 000006
【０２３０】
Ｃａｍ−００３  ｍＡｂ配列番号５に結合するＰｓＬの配列
【数５】
2020525540.tif 000007
【０２３１】
緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ１又はその免疫原性断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号６のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号６の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２３２】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ１配列番号６
【数６】
2020525540.tif 000008
【０２３３】
いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ又はその免疫原性断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号７のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号７の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２３４】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ配列番号７
【数７】
2020525540.tif 000009
【０２３５】
いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、ＴＬＲ５結合モチーフ又はその免疫原性断片を欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメインであるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号１０のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号１０の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２３６】
ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢフラジェリンＤ２ドメイン配列番号１０
【数８】
2020525540.tif 000010
【０２３７】
いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）３型分泌系（ＴＴＳＳ）毒性因子ＰｃｒＶ又はその免疫原性断片であるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号８のポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ポリペプチドは、配列番号８の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はその免疫原性断片であるか、又はそれらを含む。
【０２３８】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）３型分泌系（ＴＴＳＳ）毒性因子ＰｃｒＶ配列番号８
【数９】
2020525540.tif 000011
【０２３９】
大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）敗血症に関連する死亡率は、最適な抗菌療法及び支持療法を行っても２０％〜４０％である（Ｇｒａｎｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｋｒｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０；Ｒａｙｎｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｃｏｘ、１９８８；Ｂｒｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３；Ｃｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３）。これら及び他のグラム陰性細菌に対する抗体による補助治療を含む新しい予防及び治療アプローチが明らかに必要である。Ｏ抗原特異的抗体は、相同細菌株による感染から保護するが、研究者は、グラム陰性細菌の血清型の多様性を考慮して、そのような抗体による免疫療法は限られた価値があるとみなした（Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ，１９９０）。しかしながら、腸管外侵襲性大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に関連する細菌血清型の疫学的調査により、限られた数のＯ血清型群が菌血症症例の６０％近くを占めることが明らかになっている（Ｇｒａｎｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｃｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４；ＭｃＣａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９７８）。したがって、そのような感染の予防及び／又は治療のための効果的な技術が、依然として必要とされている。
【０２４０】
多糖類の精製方法
いくつかの実施形態では、本開示は、細菌のうちの１つ以上の細胞成分から本明細書に記載の１つ以上の多糖類を精製する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、細菌のうちの１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製することを伴う。いくつかの実施形態では、方法は、細菌のうちの１つ以上の細胞成分からＣＰＳを精製することを伴う。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、細菌はグラム陰性である。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）。
【０２４２】
いくつかの実施形態では、細胞成分はタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、細胞タンパク質は核酸を含む。いくつかの実施形態では、細胞成分は脂質を含む。いくつかの実施形態では、細胞成分は多糖類を含む。いくつかの実施形態では、細胞成分は溶解物の一部である。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、細菌のうちの１つ以上の細胞成分から多糖類を精製する方法は、細胞成分を酸化試薬及び酸と接触させて混合物を得ることを含む。いくつかの実施形態では、酸化剤は亜硝酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、酸は酢酸である。いくつかの実施形態では、混合物のｐＨは約３〜約５である。いくつかの実施形態では、この方法は、混合物中の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を分離することを含む。いくつかの実施形態では、分離されたＯＰＳは、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する。いくつかの実施形態では、分離されたＯＰＳは、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する２，５−アンヒドロマンノース残基を含有する。いくつかの実施形態では、この方法は、ＯＰＳを回収することを含み、回収されたＯＰＳは、１つ以上の他の細胞成分を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、回収されたＯＰＳは、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する。いくつかの実施形態では、回収されたＯＰＳは、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する２，５−アンヒドロマンノース残基を含有する。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、グラム陰性細菌のうちの１つ以上の細胞成分から多糖類を精製する方法は、細胞成分を酸性試薬と接触させて混合物を得ることを含む。いくつかの実施形態では、混合物のｐＨは約３〜約５である。いくつかの実施形態では、この方法は、混合物を約８０℃〜約１３５℃に加熱することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、混合物中の１つ以上の細胞成分からコアとＯ抗原多糖類（ＣＯＰＳ）とを分離することを含む。いくつかの実施形態では、分離されたＣＯＰＳは、その還元末端にＫＤＯを含有する。いくつかの実施形態では、分離されたＣＯＰＳは、その還元末端でＫＤＯ内にケトンを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ＣＯＰＳを回収することを含み、回収されたＣＯＰＳは、１つ以上の他の細胞成分を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、回収されたＣＯＰＳは、その還元末端にケトンを含有する。
【０２４５】
親和性分子対
本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、本開示の免疫複合体は、１つ以上のポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化された１つ以上のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類との親和性相互作用を介して複合体化される。いくつかの実施形態では、本開示の免疫複合体は、１つ以上の親和性分子／相補的親和性分子対を使用して１つ以上のポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される１つ以上のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、（ｉ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされ、かつ／又は１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされた本明細書に記載の第１の親和性分子、及び（ｉｉ）本明細書に記載の相補的親和性分子及びポリペプチドであるか、又はそれを含む融合タンパク質を含む。第１の親和性分子と相補的親和性分子とが会合すると、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、親和性分子／相補的親和性分子対は、ビオチン／ビオチン結合タンパク質、抗体／抗原、酵素／基質、受容体／リガンド、金属／金属結合タンパク質、炭水化物／炭水化物結合タンパク質、脂質／脂質結合タンパク質、及びＨｉｓタグ／Ｈｉｓタグ結合分子のうちの１つ以上から選択される。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、第１の親和性分子はビオチン（又はその誘導体もしくは断片）であり、相補的親和性分子はビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は、リザビジン、アビジン、ストレプトアビジン、ブラダビジン、タマビジン、レンチアビジン、ゼバビジン、ニュートラアビジン、ＣａｐｔＡｖｉｄｉｎ（商標）、又はそれらのビオチン結合断片、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質はリザビジン又はそのビオチン結合断片である。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は、配列番号１３のポリペプチド又はそのビオチン結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は、配列番号１４のポリペプチド又はそのビオチン結合断片を含む。
【０２４８】
融合タンパク質
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫複合体は、本明細書に記載の相補的親和性分子であるか又はそれを含む融合タンパク質、及び本明細書に記載の１つ以上のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、そのような融合タンパク質は、担体特性及び／又は抗原特性を有する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ビオチン結合タンパク質、又はそのビオチン結合ドメイン、及びポリペプチドであるか、又はそれらを含む。
【０２４９】
いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は配列番号１３のポリペプチド又はそのビオチン結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのビオチン結合断片であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ビオチン結合タンパク質は配列番号１４のポリペプチド又はそのビオチン結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するポリペプチド又はそのビオチン結合断片であるか、又はそれらを含む。
【０２５０】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）並びに肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に由来する１つ以上のポリペプチドを含む。
【０２５１】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、１つ以上のリンカー及び／又はヒスチジンタグを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１５のアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳＳＳ）を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１５の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号６（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ１フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号９（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ２フラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＩＩ型分泌系（ＴＴＳＳ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２６の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。
【０２５５】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、並びに配列番号２（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。
【０２５６】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣサブタイプＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、並びに配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）安定化ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は配列番号２４のポリペプチドを含む。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に記載の相補的親和性分子（例えば、本明細書に記載のビオチン結合タンパク質）及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、並びに配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）安定化ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む。
【０２５８】
骨格ポリマー
本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、本開示の免疫複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類、ポリペプチド、又は合成デンドリマーであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーはポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは、線状ＰＬＬ、もしくはＬ−リジンのデンドリマーであるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは、グラム陰性又はグラム陽性細菌に由来するＣＰＳである。いくつかの実施形態では、ＣＰＳは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＣＰＳ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌体外多糖類、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＣＰＳである。いくつかの実施形態では、ポリマーはＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳである。いくつかの実施形態では、ポリマーは合成単糖類又はオリゴ糖のデンドリマーである。いくつかの実施形態では、ポリマーのサイズは約５０ＫＤａ〜約２０００ＫＤａである。いくつかの実施形態では、ポリマーは抗原特性を有する。いくつかの実施形態では、ポリマーは抗原性ではない。いくつかの実施形態では、ポリマーは、１つ以上の抗原性多糖類であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類は、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、又はそれらの組み合わせであり得る。
【０２５９】
骨格ポリマー１（ＢＰ−１）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ポリマーにコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類である。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類は、Ｏ抗原多糖類、コアＯ抗原、又はコア多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ビオチン化された少なくとも１つのポリマー（例えば、多糖類）及びビオチン化されていない少なくとも１つの抗原性多糖類（例えば、少なくとも１つのＯ抗原多糖類）を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのビオチン化ポリマー（例えば、ビオチン化多糖類）及び少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、一級アミン基を含有する非ビオチン化Ｏ抗原多糖類（天然又はリンカーを含む）とアルデヒド基を含有する部分酸化多糖類及び一級アミンを含有するビオチンとを組み合わせて、混合物を得ることと；混合物を還元剤で還元的にアミノ化して、Ｏ抗原多糖類（すなわち、抗原性多糖類）を多糖類（すなわち、ポリマー）と化学的に結合することにより、非ビオチン化抗原性多糖類（すなわち、非ビオチン化Ｏ抗原多糖類）に化学的に結合したビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを形成することとによって産生される。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は、スペーサーを介して部分酸化ポリマー（例えば、多糖類）と化学的に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは短いスペーサーである。いくつかの実施形態では、短いスペーサーは、スペーサーの各末端に一級アミンを含有する。いくつかの実施形態では、スペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであってもよい。いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）はビオチン化されており、化学的に結合されたＯ抗原多糖類はビオチン化されていない。
【０２６２】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は一級アミノ基を含む。いくつかの実施形態では、一級アミノ基は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯ−多糖類のＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有するスペーサー分子を化学的に結合することにより、Ｏ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。いくつかの実施形態では、一級アミノ基を含むＯ抗原多糖類は、一級アミノ基を含むＯ抗原多糖類を、アルデヒド基及び一級アミンを含有するビオチンを含有する部分酸化ポリマー（例えば多糖類）と混合して、混合物を得ること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化することにより、骨格ポリマーを形成することであって、ポリマー（例えば、多糖類）がビオチン化されるが、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、形成することによって化学的に結合される。
【０２６３】
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）は、酸化剤で部分的に酸化される。いくつかの実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素ナトリウムを含む。
【０２６４】
骨格ポリマー１．２（ＢＰ−１．２）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ポリマーにコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類である。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類は、Ｏ抗原多糖類、コアＯ抗原、又はコア多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ビオチン化された少なくとも１つのポリマー（例えば、多糖類）及びビオチン化されていない少なくとも１つの抗原性多糖類（例えば、少なくとも１つのＯ抗原多糖類）を含む。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのビオチン化ポリマー（例えば、ビオチン化多糖類）及び少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、一級アミン基を含有する非ビオチン化Ｏ抗原多糖類（天然に又はリンカーを含む）を、１つ以上のアルデヒド基を含有する部分酸化多糖類、並びにカルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）と反応し、多糖類のウロン酸残基のカルボキシラートを使用して直交部位に導入された１つ以上のビオチン残基と組み合わすこと、並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化して、Ｏ抗原多糖類（すなわち、抗原性多糖類）を多糖類（すなわち、ポリマー）と化学的に結合することにより、非ビオチン化抗原性多糖類（すなわち、非ビオチン化Ｏ抗原多糖類）に化学的に結合したビオチン化多糖類を含む骨格ポリマーを形成することによって産生される。いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は、スペーサーを介して部分酸化ポリマー（例えば、多糖類）と化学的に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは短いスペーサーである。いくつかの実施形態では、短いスペーサーは、スペーサーの各末端に一級アミンを含有する。いくつかの実施形態では、スペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであってもよい。いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）はビオチン化されており、化学的に結合されたＯ抗原多糖類はビオチン化されない。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は一級アミノ基を含む。いくつかの実施形態では、一級アミノ基は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯ−多糖類のＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有するスペーサー分子を化学的に結合することにより、Ｏ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。いくつかの実施形態では、一級アミノ基を含むＯ抗原多糖類は、一級アミノ基を含むＯ抗原多糖類を、アルデヒド基及び一級アミンを含有するビオチンを含有する部分酸化ポリマー（例えば多糖類）と混合して、混合物を得ること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化することにより、骨格ポリマーを形成することであって、ポリマー（例えば、多糖類）がビオチン化されるが、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、形成することによって化学的に結合される。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）は、酸化剤で部分的に酸化される。いくつかの実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素ナトリウムを含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、アルデヒド又はケトンを含むＯＰＳは、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ３ＣＮ）での還元的アミノ化により、各末端に一級アミン（例えば、アジピン酸ジヒドラジドＡＤＨ）を含有する短いスペーサーを使用してその還元末端でアミノ化され、ヒドラジド誘導化ＯＰＳを産生する。いくつかの実施形態では、ＫＰ１９  ＣＰＳ骨格は、多糖類のウロン酸残基のカルボキシラートをカルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、及び一級アミンを含有するビオチン誘導体（例えば、アミン−ＰＥＧ３−ビオチンなど）と反応させることにより、直交部位に導入された１つ以上のビオチン残基でビオチン化される。いくつかの実施形態では、次いで、ビオチン化ＫＰ  １９  ＣＰＳポリマーを過ヨウ素酸塩で部分的に酸化して１つ以上のアルデヒド基を生成し、ヒドラジド誘導体化ＯＰＳと混合し、混合物をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ３ＣＮ）などの還元剤で還元的にアミノ化して、ポリマー骨格のウロン残基に１つ以上のビオチン部分を含み、Ｏ抗原多糖類にビオチンを含まない骨格ポリマーＢＰ−１．２を形成する。
【０２６９】
骨格ポリマー１．３（ＢＰ−１．３）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ポリマーにコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類である。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類は、Ｏ抗原多糖類、コアＯ抗原、又はコア多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ビオチン化された少なくとも１つのポリマー（例えば、多糖類）及びビオチン化されていない少なくとも１つの抗原性多糖類（例えば、少なくとも１つのＯ抗原多糖類）を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのビオチン化ポリマー（例えば、ビオチン化多糖類）及び少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、一級アミン基を含有する非ビオチン化Ｏ抗原多糖類（天然に又はリンカーを含む）を、ＣＤＡＰ活性化多糖類、及びカルボジイミド（ＥＤＣ）とＮヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）との反応により直交部位に導入された１つ以上のビオチン残基と組み合わせること、並びに多糖類のウロン酸残基のカルボキシラートを使用することにより、非ビオチン化抗原性多糖類（すなわち、非ビオチン化Ｏ抗原多糖類）に化学的に結合したビオチン化多糖を含む骨格ポリマーを形成することによって産生される。いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は、スペーサーを介してＣＤＡＰ活性化ポリマー（例えば、多糖類）と化学的に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは短いスペーサーである。いくつかの実施形態では、短いスペーサーは、スペーサーの各末端に一級アミンを含有する。いくつかの実施形態では、スペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであってもよい。いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）は、ビオチン化されており、化学的に結合されたＯ抗原多糖類はビオチン化されない。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、アルデヒド又はケトンを含むＯＰＳは、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ３ＣＮ）での還元的アミノ化により、各末端に一級アミン（例えば、アジピン酸ジヒドラジドＡＤＨ）を含有する短いスペーサーを使用してその還元末端でアミノ化され、ヒドラジド誘導化ＯＰＳを産生する。いくつかの実施形態では、ＫＰ１９  ＣＰＳ骨格は、多糖類のウロン酸残基のカルボキシラートをカルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、及び一級アミンを含有するビオチン誘導体（例えば、アミン−ＰＥＧ３−ビオチンなど）と反応させることにより、直交部位に導入された１つ以上のビオチン残基でビオチン化される。いくつかの実施形態では、次いで、ビオチン化ＫＰ  １９  ＣＰＳポリマーをＣＤＡＰで活性化し、ヒドラジド誘導体化ＯＰＳと混合して、ポリマー骨格のウロン残基に１つ以上のビオチン部分を含み、Ｏ抗原多糖類上にビオチンを含まない骨格ポリマーＢＰ−１．３を形成する。
【０２７２】
骨格ポリマー２ａ（ＢＰ−２ａ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ポリマーにコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含み、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類である。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類はＯ抗原多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ビオチン化された少なくとも１つのポリマー（例えば、多糖類）及びビオチン化された少なくとも１つのＯ抗原多糖類を含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのビオチン化ポリマー（例えば、ビオチン化多糖類）及び少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、Ｏ抗原多糖類を、アルデヒド基を含有する部分酸化ポリマー（例えば、多糖類）と組み合わせて、混合物を得ること；混合物を還元剤で還元的にアミノ化して、Ｏ抗原多糖類をポリマー（例えば、多糖類）と化学的に結合することにより、Ｏ抗原多糖類及びポリマー（例えば、多糖類）を含む骨格ポリマーを形成すること；並びにＣＤＡＰ又は別のシアニル化試薬（例えばＣＮＢｒ）及び一級アミンを含有するビオチンで骨格ポリマーを誘導体化することにより、ビオチン化Ｏ抗原及びポリマー多糖類に化学的に結合したビオチン化ポリマー（例えば、ビオチン化多糖類）を含む骨格ポリマーを形成することによって産生される。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は、スペーサーを介して部分酸化多糖類骨格と化学的に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは短いスペーサーである。いくつかの実施形態では、短いスペーサーは、スペーサーの各末端に一級アミンを含有する。いくつかの実施形態では、スペーサーはアジピン酸ジヒドラジドであってもよい。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は一級アミノ基を含む。いくつかの実施形態では、一級アミノ基は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の外部コアＯ抗原多糖類のＬ−アラニンα−アミノ基、又は還元剤による還元的アミノ化により、各末端に一級基を含有する短いスペーサー分子の化学結合によりＯ抗原多糖類の還元末端に導入されたアミノ基である。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、ポリマー（例えば、多糖類）は、酸化剤で部分的に酸化される。いくつかの実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素ナトリウムを含む。
【０２７７】
骨格ポリマー２ｂ（ＢＰ−２ｂ）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、抗原性多糖類にコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーは多糖類である。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類はＯ抗原多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、ビオチン化されていない少なくとも１つのポリマー（例えば、多糖類）及び少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの非ビオチン化ポリマー（例えば、非ビオチン化多糖類）及び少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、Ｏ多糖類繰り返し並びに１つ以上のコアアルファＫＤＯ及び／又はヘプトース部分を含むＯ抗原多糖類を、ＣＤＡＰ及び一級アミンを含有するビオチンでビオチン化して、ビオチン化Ｏ抗原多糖類混合物を得ること；ビオチン化ＯＰＳ混合物を過ヨウ素酸ナトリウムで部分的に酸化して、コアＫＤＯ及び／もしくはヘプトース部分並びに／又はＯＰＳ残基にアルデヒドを導入すること；ビオチン化多糖類をアジピン酸ジヒドラジドで還元的にアミノ化すること；ビオチン化及びアミノ化ＯＰＳを部分酸化ポリマー（例えば多糖類）と混合して、混合物を形成すること；並びに混合物を還元的にアミノ化すること；それにより、ビオチン化されていないポリマー（例えば、多糖類）及びビオチン化された化学的に結合されたＯ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを形成することによって産生される。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、Ｏ抗原多糖類は、酸化剤で部分的に酸化される。いくつかの実施形態では、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素ナトリウムを含む。
【０２８０】
骨格ポリマー３（ＢＰ−３）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上の抗原性多糖類にコンジュゲートされたポリマーを含む骨格ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、抗原性多糖類にコンジュゲート（例えば、架橋又は共有結合）された本明細書に記載の第１の親和性分子（例えば、ビオチン）を含む。いくつかの実施形態では、ポリマーはポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）ポリマーである。いくつかの実施形態では、抗原性多糖類はＯ抗原多糖類である。いくつかの実施形態では、骨格ポリマーは、少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類及びＰＬＬポリマーを含む。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの非ビオチン化ポリマー（例えば、非ビオチン化ＰＬＬポリマー）及び少なくとも１つのビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーは、末端アルデヒド又はＫＤＯを含有するＯ抗原多糖類を、ＰＬＬポリマーのε−ＮＨ２基で還元的にアミノ化して、ＯＰＳ  ＰＬＬポリマーを産生すること；混合物をアシル化試薬で処理するか又は処理せずに、ＰＬＬポリマーの未反応ε−ＮＨ２基をキャップすること；ＣＤＡＰでＯＰＳを誘導体化して、誘導体混合物を形成すること；並びに誘導体混合物を一級アミンを含有するビオチンと反応させること；それにより、キャップされたＮ−アセチル化ＰＬＬポリマー又はキャップされていないＰＬＬが、ビオチン化されず、化学的に結合されたＯ抗原多糖類が、ビオチン化される骨格ポリマーを作製することによって産生される。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、アシル化剤は、無水酢酸又は塩化アセチルである。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、「クリックケミストリー」を使用して、そのカルボキシラート基にアルキン官能基を備えたポリマー（例えば、多糖類）又は酸化された多糖類アルデヒドを、その末端にアジド基で誘導体化されたＯ抗原多糖類に結合する。２つの多糖類のクリック結合は、水性媒体中の触媒で実行される。Ｏ抗原多糖類の多糖類へのクリック結合は、ＯＰＳに結合したアジド基、及び多糖類に結合したアルキン基又はその逆による逆の方法で使用できる。この化学反応を使用して、骨格ポリマー−１を生成する多糖類又は骨格ポリマー−２ｂを生成するＯ抗原多糖類のいずれかを選択的にビオチン化できる。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、アルキンアジド付加環化の触媒は硫酸銅である。いくつかの実施形態では、多糖類を誘導体化するアルキン基は、１−アミノ−３−ブチン、１−アミノ−４−ペンチン、ＤＢＣＯ−アミン、及びアルキン−ＰＥＧ４−アミンからなる群から選択される。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、その還元末端でＯ抗原多糖類を誘導体化するアジド基は、アミノ−ＰＥＧ−アジド、アジド−ＰＥＧ３−アミン、アジド−プロピルアミン、及びアジド−ブチルアミンからなる群から選択される。
【０２８６】
免疫原性複合体の使用
いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類を含む本明細書に記載の免疫原性複合体は、ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイにより測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上が所定のレベルに対して、増加することを特徴とする。いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡ及び／又は機能的抗体アッセイにより測定される、オプソニン化能、又は１つ以上の抗原性多糖類の免疫原性のうちの１つ以上は、所定のレベルに対して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍増加する。いくつかの実施形態では、所定のレベルは免疫前レベルである。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗原性多糖類のエピトープ価は、天然多糖類のエピトープ価よりも少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、又は５倍高い。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、１つ以上の抗原性多糖類の担体タンパク質である。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、抗原多糖類単独を含み骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで対象における１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、骨格ポリマーを含み抗原多糖類単独を含まない組成物よりも高いレベルで対象における１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。
【０２８８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、対象への投与時に、抗原性多糖類単独を含み骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象における１つ以上の病原体に対する免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、対象への投与時に、骨格ポリマーを含み抗原性多糖類単独を含まない組成物よりも高いレベルで対象における１つ以上の病原体に対する免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、免疫応答は抗体又はＢ細胞応答である。いくつかの実施形態では、免疫応答は、Ｔｈ１、Ｔｈ２、もしくはＴｈ１７応答を含むＣＤ４＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である。いくつかの実施形態では、免疫応答は抗体又はＢ細胞応答及びＴ細胞応答である。
【０２８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、ポリペプチド抗原単独を含み骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで対象における１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。いくつかの実施形態では、１つ以上の病原体は、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、対象への投与時に、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対する免疫応答を誘発する。
【０２９０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、対象への投与時に、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、グラム陰性細菌は、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、及びそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、対象への投与時に、ＭｒｋＡを発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）上の天然ＭｒｋＡを認識する抗体を誘発する。
【０２９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、１つ以上のポリペプチド抗原を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、細菌性ポリペプチド、真菌性ポリペプチド、及び／又はウイルス性ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチド抗原は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリペプチドに由来するポリペプチドである。
【０２９２】
いくつかの実施形態では、抗原性多糖類のうちの少なくとも１つは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌体外多糖類ＰｓＬである。いくつかの実施形態では、ＰｓＬは、配列番号４の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有する配列及び／又は配列番号５（Ｃａｍ−００３）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有する配列を含むモノクローナル抗体に結合する少なくとも１つのエピトープを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号１（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｉ型線毛タンパク質）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号２（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はモノマー安定化ＭｒｋＡ配列番号３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＡ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ、又はその免疫原性断片である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリペプチド抗原は、配列番号６（サブタイプＡ１）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、配列番号９（サブタイプＡ２）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を含む。
【０２９３】
免疫原性複合体の製造
本開示は、本明細書に記載の免疫原性複合体を製造するための方法を含む。いくつかの実施形態では、免疫原性複合体の製造方法は、少なくとも１つのビオチン化骨格ポリマーを少なくとも１つのビオチン結合融合タンパク質と複合体化することを含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１６〜２６のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０２９４】
病気、障害、及び状態
いくつかの実施形態では、ＥＬＩＳＡによって測定される、対象への投与時に、本明細書に開示される免疫原性複合体（例えば、本明細書に記載の免疫原性複合体を含む組成物）は、抗原性多糖類を含み、骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象における１つ以上の病原体に対する抗体産生を誘導する。いくつかの実施形態では、１つ以上の病原体は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から選択される。
【０２９５】
いくつかの実施形態では、対象への投与時に、本明細書に開示される免疫原性複合体（例えば、本明細書に記載の免疫原性複合体を含む組成物）は、対象における１つ以上の病原体に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、本明細書に開示される免疫原性複合体は、抗原性多糖類を含み骨格ポリマーを含まない組成物よりも高いレベルで、対象における１つ以上の病原体に対する免疫応答を誘発する。いくつかの実施形態では、１つ以上の病原体は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から選択される。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、対象への投与時に、本明細書に開示される免疫原性複合体（例えば、本明細書に記載の免疫原性複合体を含む組成物）は、感染症を治療又は予防するために使用される。いくつかの実施形態では、感染症は、熱傷感染症、ＧＩ感染症、手術部位感染症、尿路感染症、角膜感染症、皮膚及び／又は軟部組織感染症、糖尿病性創傷感染症、デバイス関連感染症（例えば、カテーテル、外科用インプラント、プロテーゼ）である。いくつかの実施形態では、対象への投与時に、本明細書に開示される免疫原性組成物は、肺炎、敗血症、及び／又は定着を治療又は予防するために使用される。
【０２９７】
免疫原性組成物及び製剤
本明細書はまた、本明細書に記載の１つ以上の免疫原性複合体を含む組成物も提供する。例えば、免疫原性組成物、例えばワクチン組成物は、本明細書に記載の１つ以上の免疫原性複合体を含むことができる。いくつかの実施形態では、そのような組成物は、本明細書に記載の１つの種類の免疫原性複合体を複数含むことができる。追加的又は代替的に、そのような組成物は、本明細書に記載の複数の種類の免疫原性複合体を複数含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、医薬組成物に製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物はワクチンであり得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は多価（ｐｏｌｙｖａｌｅｎｔ）又は多価（ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ）ワクチンである。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物の価数は、ワクチン組成物に存在する免疫原性複合体の種類の数を指す。本明細書に記載のワクチンの価数は、医薬組成物、免疫原性複合体、もしくはワクチン中に存在する総抗原、又は医薬組成物、免疫原性複合体、免疫原性組成物、もしくはワクチン組成物の投与が免疫保護応答を誘発し得る病原体株の数に関して制限されない。非限定的な例では、１２価ワクチン組成物は、１２を超える抗原性成分（例えば、ペプチド及び／又は多糖類成分）を含み得、１２を超える病原体又は病原性株に対する免疫保護応答を誘発し得る。
【０２９９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１〜５０種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１〜２５種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１〜１５種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１〜１０種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１〜５種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチンは多価ワクチンである。
【０３００】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は１種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、２種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、４種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、６種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、８種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１０種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１２種類の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、各免疫原性組成物からのワクチン組成物中のＯＰＳの重量が異なる、例えば約１：１ではないｗ／ｗ比で存在するような量の２種類以上の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、各免疫原性組成物からのワクチン組成物中のＯＰＳの重量がほぼ同じである、例えば約１：１のｗ／ｗ比で存在するような量の２種類以上の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約１μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約２μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約３μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約４μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約５μｇである。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、各免疫原性組成物からのワクチン組成物中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量が異なる、例えば約１：１ではないｗ／ｗ比で存在するような量の２種類以上の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、各免疫原性組成物からのワクチン組成物中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量が異なる、例えば約１：１ではないｗ／ｗ比で存在するような量の２種類以上の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は各免疫原性組成物からのワクチン組成物中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量が異なる、例えば約１：１ではないｗ／ｗ比で存在するような量の２種類以上の免疫原性複合体を含む。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量は、約１μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量は、約２μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳの重量は約３μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量は、約４μｇである。いくつかの実施形態では、各免疫原性組成物からのワクチン中のＯＰＳ及びＣＰＳの合計重量は、約５μｇである。
【０３０２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、以下から選択される２種類以上の免疫原性組成物を含む。
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物。
【０３０３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、以下から選択される２種類以上の免疫原性組成物を含む。
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ａ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｃ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｉ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｊ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｋ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｌ’）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は以下を含む。
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物。
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物。
【０３０５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は以下を含む。
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む免疫原性組成物。
【０３０６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、以下から選択される２種類以上の免疫原性組成物を含む。
（ａ）ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ａ’）ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｂ）ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｂ’）ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｃ）ＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｃ’）ＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｄ）ＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｄ’）ＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｅ）ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｅ’）ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｆ）ＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合物を含む免疫原性組成物；
（ｆ’）ＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｇ）ＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ及びａＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｇ’）ＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｈ）ＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｈ’）ＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｉ）ＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｉ’）ＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｊ）ＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｊ’）ＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｋ）ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｋ’）ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；
（ｌ）ＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物；並びに
（ｌ’）ＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物。
【０３０７】
いくつかの実施形態では、１種類以上の免疫原性組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３０８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳとＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質との組み合わせを含む免疫原性組成物；及び
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳとＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質との組み合わせを含む免疫原性組成物から選択される免疫原性組成物
を含む。
【０３０９】
いくつかの実施形態では、１種類以上の免疫原性組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）
（ｉ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上及びそれらの任意の組み合わせ；並びに
（ｉｉ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む免疫原性組成物；並びに／又は
（ｂ）
（ｉ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上及びそれらの任意の組み合わせ；並びに
（ｉｉ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む免疫原性組成物を含む。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、１種類以上の免疫原性組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３１２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質の組み合わせを含む免疫原性組成物；並びに
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質の組み合わせを含む免疫原性組成物
から選択される免疫原性組成物を含む。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、ワクチンは１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、ポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ポリマーは莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３１４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３１５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及び１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ポリマーは莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３１６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３１７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及び１つ以上のポリペプチドは１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３１８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及び１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３２０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３２１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３２２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３２４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３２６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３２９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３３０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３３１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３３２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３３３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３３４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３３５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｄ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、１つ以上のポリマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＰＳは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３３８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３３９】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及び１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３４０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３４１】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及び１つ以上のポリペプチドは、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３４２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチド
を含む。
【０３４３】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリペプチドは、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーは、第１の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーは、第２の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは異なる細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは同じ血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは、異なる血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３４４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３４７】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３４９】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーは、第１の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーは、第２の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは異なる細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは同じ血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは、異なる血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３５３】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーは、第１の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーは、第２の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは異なる細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは同じ血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは、異なる血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３５４】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３５５】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３５６】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＯＰＳ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされた、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；及び
（ｄ）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーは、第１の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーは、第２の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは異なる細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは同じ血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは、異なる血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、以下から選択される２種類以上の免疫原性組成物を含む。
（ａ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ａ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｂ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｂ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｃ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｃ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｄ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｄ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｅ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｅ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｆ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合体に共有結合したＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｆ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｇ）ａＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｇ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｈ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｈ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｉ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｉ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｊ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｊ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｋ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｋ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；
（ｌ）ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物；及び
（ｌ’）ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質に共有結合したＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳを含む免疫原性組成物。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、以下から選択される２種類以上の免疫原性組成物を含む。
（ａ）ポリマー、ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ａ’）ポリマー、ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｂ）ポリマー、ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｂ’）ポリマー、ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｃ）ポリマー、ＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｃ’）ポリマー、ＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｄ）ポリマー、ＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｄ’）ポリマー、ＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｅ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｅ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｆ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｆ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｇ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｇ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｈ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｈ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｉ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｉ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｊ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｊ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｋ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｋ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；
（ｌ）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；並びに
（ｌ’）ポリマー、ＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又はＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリマーは莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）ポリマー、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳの組み合わせ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；並びに
（ｂ）ポリマー、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳの組み合わせ、及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、融合タンパク質が、ポリマー及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物
から選択される免疫原性組成物を含む。
【０３６４】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのポリマーは莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、ポリマーはＰＬＬを含む。
【０３６５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上の第１のポリマー、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳの組み合わせ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質が、１つ以上の第１のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合しており、かつＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質が、１つ以上の第１のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物；並びに
（ｂ）１つ以上の第２のポリマー、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳの組み合わせ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質及びＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む免疫原性組成物であって、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質が、１つ以上の第２のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合しており、かつＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質が、１つ以上の第２のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、免疫原性組成物
から選択される免疫原性組成物を含む。
【０３６６】
いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされ、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は１つ以上の第１のポリマーにコンジュゲートされ、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質は、１つ以上の第１のポリマー及び１つ以上の第２のポリマーにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは同じである。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーと１つ以上の第２のポリマーとは異なる。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーは、第１の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーは、第２の病原体からの莢膜多糖類を含む。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは異なる細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは同じ血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、第１の病原体と第２の病原体とは、異なる血清型の同じ細菌である。いくつかの実施形態では、１つ以上の第１のポリマーはＰＬＬを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の第２のポリマーはＰＬＬを含む。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ペプチド
を含む。
【０３６８】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー；
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ポリペプチド
を含む。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３７１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｄ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ポリペプチド
を含む。
【０３７２】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３７３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３７６】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３７８】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３８１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３８２】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３８３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３８６】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３８７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む。
【０３８８】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３８９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｅ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ポリペプチド
を含む。
【０３９２】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３９３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｂ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ポリペプチド
を含む。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）配列番号１〜３、６〜１２、又は１６〜２６のうちの１つ以上の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ポリペプチド
を含む。
【０３９６】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｂ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０３９９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｂ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０４００】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４０１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質
を含む。
【０４０２】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマー、
（ｂ）Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４０４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４０５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｂ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４０６】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４０７】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４０８】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４０９】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマー及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳの少なくとも一部に共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４１０】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４１１】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４１２】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、
（ａ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｂ）１つ以上のポリマーに共有結合している、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳのうちの１つ以上；
（ｃ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質；並びに
（ｄ）１つ以上のポリマーの少なくとも一部及び／又は少なくとも１種類のＯＰＳに共有結合している、ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質
を含む。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４１５】
いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は以下を含む：
（ａ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第７の免疫原性組成物；
（ｈ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含む第８の免疫原性組成物；
（ｉ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第９の免疫原性組成物；
（ｊ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第１０の免疫原性組成物；
（ｋ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第１１の免疫原性組成物；
（ｌ）ポリマー、ポリマーにコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びポリマーに共有結合したＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含む第１２の免疫原性組成物。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、ポリマーのうちの少なくとも１つは莢膜多糖を含む。いくつかの実施形態では、莢膜多糖は、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖である。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリマーは、ＰＬＬを含む。
【０４１７】
特定のワクチンに最適な成分の量は、対象の適切な免疫応答の観察を伴う標準的な研究によって確認できる。初期のワクチン接種に続いて、対象は適切な間隔で１回又は数回のブースター免疫を受けることができる。
【０４１８】
本明細書に記載の免疫原性複合体、及び／又はその製剤は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために単位剤形で製剤化され得る。任意の特定の患者又は生体に対する特定の治療的有効な用量レベルは、感染の重症度又はリスクの程度；用いられた特定のワクチン又はワクチン組成物の活性；用いられた特定のワクチン又はワクチン組成物の他の特性；年齢、体重、一般的な健康状態、対象の性別、対象の食事、対象の薬物動態、投与時間（例えば、食事、睡眠、他のワクチン用量を含む他の薬の摂取などのような対象の他の活動に関して）、投与経路、用いられた特定のワクチン又はワクチン組成物の排泄率；用いられたワクチン組成物と組み合わせて又は同時に使用されるワクチン；並びに医学の分野で周知の同様の要因を含む種々の要因に依存し得る。
【０４１９】
本開示に従って使用するための免疫原性複合体は、既知の技術に従って組成物（例えば、医薬組成物）に製剤化され得る。ワクチン製剤は、一般に、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ（Ｐｏｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｎｅｗｍａｎ，１９９５）に記載されている。例えば、免疫原性の量のワクチン製品は、１つ以上の有機もしくは無機、液体又は固体の薬学的に好適な担体材料と一緒に製剤化することができる。肺炎球菌多糖類及びコンジュゲートワクチンの調製は、例えば、２００６年３月３１日に出願されたＵＳＳＮ１１／３９５，５９３に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０４２０】
一般に、薬学的に許容される担体には、薬学的投与に適合する溶媒、分散媒などが含まれる。例えば、薬学的に許容される担体として機能できる材料には、ラクトース、グルコース、デキストロース、及びスクロースなどの糖；コーンスターチ及びポテトスターチなどのデンプン；セルロース並びにその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及びセルロースアセタート；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバター及び座薬ワックスなどの賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油などの油；グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなどのポリオール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール、及びリン酸緩衝液、並びにラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの他の非毒性適合潤滑剤、並びに防腐剤が含まれるが、これらに限定されず、抗酸化剤も配合者の判断に従って組成物中に存在することができる（Ｍａｒｔｉｎ，１９７５）。
【０４２１】
ワクチンは、例えば、従来の混合、造粒、溶解、凍結乾燥、又は同様のプロセスを含む任意の利用可能な手段により、本明細書に開示される免疫原性複合体のうちの１つ以上を担体及び／又は他の任意の成分と組み合わせることにより製剤化され得る。
【０４２２】
提供された方法で有用なワクチン組成物は、使用される直前まで凍結乾燥されてもよく、その時点で希釈剤を用いて即座に再構成される。いくつかの実施形態では、ワクチン成分又は組成物は、１つ以上の他の成分（例えば、アジュバント）の存在下で凍結乾燥され、生理食塩水で即座に再構成される。あるいは、個々の成分又は成分のセットを別々に凍結乾燥及び／又は保存し（例えば、ワクチン接種キットで）、成分を再構成し、使用前に混合するか、又は対象に別々に投与し得る。
【０４２３】
凍結乾燥は、より安定した組成物を産生できる（例えば、多糖類抗原の分解を防止又は低減することにより）。ワクチン又はワクチン成分の凍結乾燥は、当技術分野で周知である。典型的には、液体ワクチン又はワクチン成分は、しばしば固化防止剤（例えば、スクロース又はラクトースなどの糖など）の存在下で凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、固化防止剤は、例えば、１０〜２００ｍｇ／ｍｌの初期濃度で存在する。凍結乾燥は、典型的には、一連のステップ、例えば、−６９℃で開始し、３時間かけて徐々に−２４℃に調整し、その後この温度を１８時間保持してから、１時間かけて徐々に−１６℃に調整し、この温度を６時間保持してから、３時間かけて徐々に＋３４℃に調整し、最終的にこの温度を９時間保持するサイクルで行われる。
【０４２４】
本発明に従って使用するためのワクチン又はワクチン成分は、リポソーム、渦巻状物、ポリラクチド、ポリグリコリド、及びポリラクチドコグリコリドなどの生分解性ポリマー、又は免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）に組み込まれ得る。
【０４２５】
特定の状況では、例えば１つ以上のワクチン成分の吸収を遅くすることにより、ワクチンの効果を延長するか、又は本発明に従って使用することが望ましい場合がある。そのような吸収の遅延は、例えば、水溶性が低い結晶性又はアモルファス材料の液体懸濁液の使用により達成され得る。次いで、生成物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、溶解速度はサイズ及び形態に依存し得る。代替的又は追加的に、１つ以上のワクチン成分を油性ビヒクルに溶解又は懸濁することにより、遅延吸収を達成し得る。注射用デポー剤形も吸収を遅らせるために用いることができる。そのようなデポー剤形は、１つ以上のワクチン成分のマイクロカプセルマトリックスを生分解性ポリマーネットワークで形成することにより調製することができる。ポリマーとワクチン成分との比率、及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、放出速度を制御することができる。
【０４２６】
本発明に従って用いることができる生分解性ポリマーの例には、例えば、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。１つの特定の例示的なポリマーは、ポリラクチド−ポリグリコリドである。
【０４２７】
デポー注射可能製剤はまた、体組織と適合性のあるリポソーム又はマイクロエマルジョンに製品を閉じ込めることによって調製され得る。
【０４２８】
ポリマー送達システムは、例えば経口製剤を含む非デポー製剤でも用いることができる。例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを経口製剤で使用することができる。多糖類抗原又はコンジュゲートは、有用な製剤（例えば、経口）の調製を促進するために、例えば粒子、微粒子、押出物、固体分散体、混合物、又は他の組み合わせを調製するために、そのようなポリマーとともに製剤化され得る。
【０４２９】
本発明に従って使用するためのワクチンは免疫原性組成物を含み、１つ以上の追加の活性剤（すなわち、不活性成分ではなく生物学的効果を発揮する薬剤）をさらに含んでもよい。そのような追加の薬剤は、１つ以上の他のワクチン成分と一緒に製剤化され得、又は別々に維持し、投与の時点又はその近くで組み合わされ得ることが理解されよう。いくつかの実施形態では、そのような追加の成分は、関連する効果が達成されるための適切な時間枠内で、他のワクチン成分の一部又はすべてとは別々に投与され得る。
【０４３０】
例えば、ワクチン製剤では、１つ以上のアジュバントを含めるのが一般的である。アジュバントは、一般に、抗原に対する免疫応答を増強する薬剤である。いくつかの実施形態では、Ｔｈ１型免疫応答を増強するアジュバントが利用される。
いくつかの実施形態では、Ｔｈ１７型免疫応答を増強するアジュバントが利用される。
【０４３１】
アジュバント
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合体は、アジュバントと組み合わせて製剤化及び／又は投与される。いくつかの実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、ＴＬＲアゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト（例えば、サポニン（例えば、ＱＳ２１など）、ポリンなど）、ＴＬＲ３アゴニスト（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｐｏｌｙＩ：ｐｏｌｙＣ、ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ、Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）など）、ＴＬＲ４アゴニスト（例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ  Ａ））、ＴＬＲ５アゴニスト（例えば、フラジェリン）；ＴＬＲ７、８、又は９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ−オリゴヌクレオチドなど）の群から選択される。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、本発明に従って使用するのに好適なアジュバントには、以下が含まれるが、これらに限定されない：
（１）水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムなどのアルミニウム塩（ミョウバン）など；
（２）水中油型エマルジョン製剤（ムラミルペプチド（以下に定義）などの他の特定の免疫刺激剤を含むか又は含まない）又は細菌細胞壁成分、例えば、
（ａ）５％スクアレン、Ｍｏｄｅｌ  １１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを使用して、サブミクロン粒子に配合された０．５％Ｔｗｅｅｎ  ８０、及び０．５％Ｓｐａｎ  ８５（任意に様々な量のＭＴＰ−ＰＥ（必須ではないが、以下を参照）を含有する）を含有するＭＦ５９（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／１４８３７）、
（ｂ）より大きな粒子サイズのエマルジョンを生成するためにサブミクロンエマルジョンにマイクロ流体化するか、又はボルテックスされる１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ  ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、及びｔｈｒ−ＭＤＰ（下記参照）を含有するＳＡＦ、並びに
（ｃ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０、及び米国特許第４，９１２，０９４号（Ｃｏｒｉｘａ）に記載されている３−Ｏ−脱アシル化モノリン脂質Ａ（ＭＰＬ（商標））、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、及び細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群からの１つ以上の細菌細胞壁成分を含有するＲｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；
（３）Ｑｕｉｌ  Ａ又はＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）ＱＳ−２１（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，ＭＡ）などのサポニンアジュバント（米国特許第５，０５７，５４０号）を使用してもよく、又はＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などの粒子から生成される粒子；
（４）Ｃｏｒｉｘａから入手可能であり、米国特許第６，１１３，９１８号に記載されている、細菌性リポ多糖類、アミノリピドグルコサミンリン酸化合物（ＡＧＰ）などの合成リピドＡ類似体、又はその誘導体もしくは類似体；そのようなＡＧＰの１つは、５２９（以前はＲＣ５２９として既知）としても既知であり、水性形態として、又は安定なエマルジョン、ＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチドなどの合成ポリヌクレオチド（米国特許第６，２０７，６４６号）として配合される、２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］エチル２−デオキシ−４−Ｏ−ホスホノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイル］−２−［（Ｒ）−３−テトラデカノイルオキシテトラデカノイルアミノ］−ｂ−Ｄ−グルコピラノシドである；ＴＬＲ３アゴニスト（合成ｄｓＲＮＡ、ｐｏｌｙＩ：ｐｏｌｙＣ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎから入手可能なＨｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標））；
（５）インターロイキンなどのサイトカイン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８など）、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、共刺激分子Ｂ７−１及びＢ７−２など；
（６）野生型又は変異体のいずれかのコレラ毒素（ＣＴ）などの細菌ＡＤＰリボシル化毒素の解毒変異体であって、例えば、アミノ酸位置２９のグルタミン酸が別のアミノ酸、好ましくは、公開された国際特許出願番号ＷＯ００／１８４３４（ＷＯ０２／０９８３６８及びＷＯ０２／０９８３６９も参照）によるヒスチジンで置換されているか、あるいは百日咳毒素（ＰＴ）、又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）熱不安定毒素（ＬＴ）、特にＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、及びＬＴ（Ｒ１９２Ｇ／Ｌ２１１Ａ）又はｄｍＬＴと示されるＬＴの新規変異体は、ワクチン抗原（Ａｎｄｒｅａｓｅｎ、２００９；Ｎｏｒｔｏｎ、２０１１；Ｎｏｒｔｏｎ、２０１２；Ｌｅａｃｈ、２０１２；Ｔｏｐｒａｎｉ、２０１７）、ＣＴ−Ｓ１０９、ＰＴ−Ｋ９／Ｇ１２９（例えば、ＷＯ９３／１３３０２及びＷＯ９２／１９２６５を参照）に対するＴｈ１７応答を誘発できるもの；並びに
（７）組成物の有効性を増強するための免疫刺激剤として作用する他の物質、例えば、デルタイヌリン（Ａｄｖａｘ（登録商標））、Ｍａｔｒｉｘ  Ｍ。
【０４３３】
ムラミルペプチドには、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）などが含まれるが、これらに限定されない。
【０４３４】
本発明に従って使用するためのワクチンは、他の抗菌療法を含むか、又は同時に投与され得る。例えば、そのようなワクチンは、病原体を殺す又は成長を遅らせる１つ以上の薬剤を含むか、それとともに投与され得る。そのような薬剤には、例えば、ペニシリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、及びクラリスロマイシン、セフォタキシム、セフトリアキソン、レボフラキシン、ガチフロキサシンが含まれる。
【０４３５】
代替的又は追加的に、本発明に従って使用するためのワクチンは、１つ以上の他のワクチン又は療法を含むか、又はそれらとともに投与され得る。例えば、１つ以上の肺炎球菌以外の抗原は、ワクチンに含まれるか、又はそれとともに投与され得る。
【０４３６】
投与
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体は、疾患のリスクがある対象、例えば、入院患者に投与される。個体は、病気のいかなる症状と診断されることなく、病気を発症するリスクがあるとみなすことができることが理解されよう。例えば、感染にさらされるリスクが比較的高い状況にある、又はそのように意図されていることがわかっている場合、その個体は病気を発症するリスクがあるとみなされる（例えば、入院患者、長期介護施設に住んでいる高齢者など）。
【０４３７】
例えば、経口、経鼻、経腸、非経口、筋肉内もしくは静脈内、皮下、皮内、直腸内、膣内、局所的、眼内、肺内、又は接触適用などの任意の有効な投与経路を利用し得る。いくつかの実施形態では、ワクチン組成物は、注射されてもよく（例えば、筋肉内、腹腔内、皮内、及び／もしくは皮下経路を介して）；又は粘膜を介して（例えば、口腔／消化管、呼吸器、及び／もしくは泌尿生殖器路へと）送達され得る。ワクチンの鼻腔内投与は、肺炎又は中耳炎の治療など、一部の状況で特に有用であり得る（肺炎球菌の鼻咽頭保菌をより効果的に防止できるため、感染をその初期段階で減衰する）。本発明のいくつかの実施形態では、異なる経路により異なる用量のワクチンを投与することが望ましい場合があり；いくつかの実施形態では、異なる経路を介して１用量の異なる成分を投与することが望ましい場合がある。
【０４３８】
本発明のいくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、ワクチン）は皮内投与される。皮内注射の従来の技術である「マントー手順」は、皮膚を洗浄し、次いで片手で伸ばすステップを含み、細いゲージの針（２６〜３１ゲージ）のベベルを上向きにして、針を１０〜１５°の角度で挿入させる。針のベベルが挿入されると、針のバレルを下げてさらに前進させながら、皮膚の下でそれを持ち上げるためにわずかな圧力をかける。次いで、液体を非常にゆっくりと注射することにより、皮膚表面に小疱又は隆起が形成され、その後、針がゆっくり引き抜かれる。
【０４３９】
液体薬剤を皮膚内に又は皮膚を通して投与するように特に設計された装置、例えば、ＷＯ９９／３４８５０及びＥＰ１０９２４４４に記載された装置、また例えば、ＷＯ０１／１３９７７；米国特許第５，４８０，３８１号、米国特許第５，５９９，３０２号、米国特許第５，３３４，１４４号、米国特許第５，９９３，４１２号、米国特許第５，６４９，９１２号、米国特許第５，５６９，１８９号、米国特許第５，７０４，９１１号、米国特許第５，３８３，８５１号、米国特許米国特許第５，８９３，３９７号、米国特許第５，４６６，２２０号、米国特許第５，３３９，１６３号、米国特許第５，３１２，３３５号、米国特許第５，５０３，６２７号、米国特許第５，０６４，４１３号、米国特許第５，５２０，６３９号、米国特許第４，５９６，５５６号、米国特許第４，７９０，８２４、米国特許第４，９４１，８８０号、米国特許第４，９４０，４６０号、ＷＯ９７／３７７０５、及びＷＯ９７／１３５３７に記載されたジェット注射装置が記載されている。ワクチン製剤の皮内投与の他の方法には、従来の注射器及び針、又は固形ワクチンの弾道送達用に設計された装置（ＷＯ９９／２７９６１）、又は経皮パッチ（ＷＯ９７／４８４４０；ＷＯ９８／２８０３７）が含まれ得；又は皮膚の表面に適用される（経皮もしくは経皮送達ＷＯ９８／２０７３４；ＷＯ９８／２８０３７）。
【０４４０】
上記のように、医薬組成物（例えば、ワクチン）は、単回投与又は複数回投与として投与され得る。関連するすべての成分が時間枠内で対象に投与される限り、投与は単一の「用量」であり；すべての成分が単一組成物に存在する必要はないことが理解されよう。例えば、２４時間未満の期間内の２つの異なる免疫原性組成物の投与は、単回投与とみなされる。一例を挙げると、異なる抗原成分を有する免疫原性組成物は、別々の組成物で投与してもよいが、単回投与の一部として投与してもよい。上記のように、そのような別々の組成物は、異なる経路又は同じ経路を介して投与されてもよい。代替的又は追加的に、ワクチンが免疫原性組成物と追加の種類の活性剤との組み合わせを含む実施形態では、免疫原性組成物は１つの経路を介して投与されてもよく、第２の活性剤は同じ経路又は異なる経路で投与されてもよい。
【０４４１】
医薬組成物（例えば、ワクチン）は、所望の結果を達成するのに必要な量及び時間で投与される。本発明の特定の実施形態では、ワクチン組成物は、治療有効量の少なくとも免疫原性組成物を含む。治療有効量を達成するのに必要な正確な量は、免疫原性組成物に応じて、かつ対象ごとに、対象の生物種、年齢、及び全身状態、疾患の段階、特定の医薬混合物、その投与モードなどに応じて、変わり得る。
【０４４２】
各医薬組成物（例えば、ワクチン）用量における多糖類抗原又はコンジュゲートの量は、本明細書に記載のように投与された場合に、ワクチンが重大な有害な副作用なしに適切な免疫保護応答を誘導できるように選択される。本明細書で使用される場合、「免疫保護」又は「保護免疫」応答は、ワクチンが向けられる特定の病原体（例えば、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染）による増殖感染から免疫対象を保護するのに十分な免疫応答である。そのような量は、どの特定の免疫原性組成物又は組成物が用いられるか、及びそれがどのように存在するかに応じて変わり得る。
【０４４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性複合体を含む医薬組成物は、対象への投与時にＴｈ１及び／又はＴｈ１７細胞応答を誘発する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性複合体を含む医薬組成物は、対象への投与時に肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対するオプソニン／殺菌反応を誘発する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性複合体を含む医薬組成物は、対象への投与時に肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上による粘膜表面の伝播及び／又はコロニー形成の速度を低下させる。
【０４４４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性複合体を含む医薬組成物は、伝播時に肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上によるＧＩ管の伝播及び／又はコロニー形成率を低下させる。
【０４４５】
いくつかの実施形態は、本明細書に記載の有効量の免疫原性複合体を対象に投与することを含む、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、本明細書に記載の有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【０４４６】
いくつかの実施形態は、本明細書に記載の有効量の免疫原性複合体を対象に投与することを含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【０４４７】
いくつかの実施形態は、本明細書に記載の有効量の免疫原性複合体を対象に投与することを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。いくつかの実施形態は、有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫する方法を提供する。
【０４４８】
投薬量
本開示によれば、医薬組成物（例えば、ワクチン）投与は、単回用量のみの送達を伴ってもよく、あるいは、適切な間隔をあけた１回又は数回の追加の免疫用量が続く初期投与を伴ってもよい。免疫スケジュールは、対象の１つ以上の特定の年齢で、１つ以上の特定の投与経路によって、１つ以上の特定の用量の１つ以上の特定の肺炎球菌ワクチンを投与するためのプログラムである。
【０４４９】
本開示は、少なくとも１用量のワクチンを若年者に投与することを伴う免疫方法を提供する。いくつかの実施形態では、若年者は１８歳以下である。いくつかの実施形態では、若年者は以前に１用量以上のコンジュゲートされた肺炎球菌多糖類ワクチンの投与を受けており、他の実施形態では、若年者は肺炎球菌ワクチンに対してナイーブである。いくつかの実施形態では、若年者は以前にクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に感染しているか、又は感染にさらされている。
【０４５０】
本開示は、少なくとも１用量のワクチンを成人対象に投与することを伴う免疫方法を提供する。いくつかの実施形態では、成人対象は約５０歳以上である。いくつかの実施形態では、成人対象は約６５歳以上である。いくつかの実施形態では、成人対象は以前に１用量以上のコンジュゲート化肺炎球菌多糖類ワクチンの投与を受けており；他の実施形態では、成人対象は、肺炎球菌ワクチンに対してナイーブである。いくつかの実施形態では、成人対象は以前にクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び／又は大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に感染しているか、又は感染に曝露されている。
【０４５１】
本開示の免疫スケジュールは、対象の集団及び／又は亜集団における、少なくとも１つの感染、疾患、もしくは障害、及び／又は感染、疾患、もしくは障害のうちの少なくとも１つの代理マーカーの発生率、有病率、頻度、及び／又は重症度からなる群から選択される少なくとも１つの測定値を低下させるのに十分な対象の免疫応答（例えば、免疫防御応答）を誘発又は誘導するために提供される。補足的な免疫スケジュールは、補足する標準的なスケジュールに対してこの効果を有するものである。補足的なスケジュールは、標準スケジュールで見られる、本明細書で開示される免疫原性組成物の追加投与及び／もしくは超免疫原性用量、又は標準スケジュールの一部ではないワクチンの投与を必要とし得る。本発明の完全な免疫スケジュールは、標準スケジュール及び補足的なスケジュールの両方を含んでもよい。例示的なサンプルワクチン接種スケジュールは、例示目的のために提供される。本明細書で論じられる免疫原性応答を評価する方法の詳細な説明により、過度の実験を行うことなくサンプルの免疫スケジュールの変更を開発することが可能になる。
【０４５２】
本開示の一実施形態では、肺炎球菌ワクチンの第１の投与は、通常、対象が約５０歳超、約５５歳超、約６０歳超、約６５歳超、又は約７０歳超の場合に行われる。
【０４５３】
本開示のいくつかの実施形態では、ワクチンの単回投与が用いられる。本発明の目的は、特に１つ以上の利用されるワクチン多糖類及び／もしくはコンジュゲート、又はそれらの組み合わせが強力である場合、単回投与で目的を果たすことができ、そのような状況では、持続的な免疫保護反応を誘発するには、単回用量スケジュールで十分である。
【０４５４】
特定の実施形態では、より高い免疫保護効果及び適用範囲のために、２用量以上のワクチンを投与することが望ましい。したがって、いくつかの実施形態では、用量数は少なくとも２倍、少なくとも３倍以上の用量である。設定された最大用量数はないが、望ましい効果を達成するために必要以上に頻繁に免疫しないことは良い臨床習慣である。
【０４５５】
理論に拘束されるものではないが、本開示に従って投与されるワクチンの最初の用量は、「プライミング」用量とみなされ得る。特定の実施形態では、２以上の用量が免疫スケジュールに含まれる。そのようなシナリオでは、後続の用量は、「ブースティング」用量とみなされ得る。
【０４５６】
プライミング用量は、ナイーブな対象（以前に多糖類ワクチンを受けたことがない対象）に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本発明による初期のワクチン用量の投与の少なくとも５年以上前に多糖類ワクチンを以前に受けた対象にプライミング用量を投与してもよい。他の実施形態では、本発明によるプライミングワクチンの投与の少なくとも２０年以上前にコンジュゲートワクチンを以前に受けた対象にプライミング用量を投与してもよい。
【０４５７】
免疫スケジュールが２回以上の個別の用量を必要とする場合、用量の間隔が考慮される。２回の連続用量の間隔は、免疫スケジュール全体で同じでも、対象の年齢に応じて変化してもよい。本発明の免疫スケジュールでは、第１のワクチン用量が投与されると、後続用量の投与前に第１の間隔がある。第１の間隔は、一般に、少なくとも約２週間、１ヶ月、６週間、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、又はそれ以上である。２以上の後続用量が投与される場合、そのような後続用量の間に第２（又はそれ以上）の間隔を設けてもよい。いくつかの実施形態では、後続用量間のすべての間隔は、同じ長さであり；他の実施形態では、第２の間隔の長さは、変わってもよい。いくつかの実施形態では、後続用量間の間隔は、少なくとも約１２ヶ月、少なくとも約１５ヶ月、少なくとも約１８ヶ月、少なくとも約２１ヶ月、又は少なくとも約２年であり得る。特定の実施形態では、用量間の間隔は、最大３年、最大約４年、又は最大約５年もしくは１０年以上であり得る。特定の実施形態では、後続用量間の間隔は、対象が加齢するにつれて減少し得る。
【０４５８】
当業者であれば、第１の投与のタイミング、最短間隔、最長間隔、及び投与の総数の様々な条件の種々の可能な組み合わせ及びサブコンビネーション（絶対的な用語で、又は指定された期間内）が存在し、これらの組み合わせ及びサブコンビネーションはすべて、ここでは明示的に列挙されていないが、発明者の意図の範囲内にあるとみなされるべきである。
【０４５９】
免疫原性応答の決定のためのアッセイ
いくつかの実施形態では、免疫原性複合体（及び／もしくは免疫原性複合体を含む組成物）の免疫原性並びに／又は効力を評価する方法は、免疫原性組成物に対する免疫応答を評価することを含む。いくつかの実施形態では、評価は、一連のインビトロアッセイのうちの１つ以上を実行することにより行われる。いくつかの実施形態では、評価される免疫応答はＢ細胞又はＴ細胞応答である。
【０４６０】
いくつかの実施形態では、インビトロアッセイは、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、Ｔｈ１／Ｔｈ１７細胞応答、ＯＰＫ、血清殺菌殺傷（ＳＢＡ）、凝集、運動性、細胞毒性、付着、凝集により測定されるサイトカインレベル測定及び機能的抗体レベルのうちの１つ以上から選択される。
【０４６１】
いくつかの実施形態では、評価は、一連のインビボアッセイのうちの１つ以上を実行することにより行われる。いくつかの実施形態では、インビボアッセイは、院内疾患の動物モデルを利用する。いくつかの実施形態では、動物モデルは、肺炎、敗血症、熱傷、ＧＩ感染、又は手術部位感染のうちの１つ以上のモデルである。いくつかの実施形態では、インビボアッセイは、１つ以上の標的病原体による抗原投与後の受動的保護、又は１つ以上の標的病原体による抗原投与後の能動的保護による、細菌クリアランス、定着、又は死亡のうちの１つ以上を測定する。いくつかの実施形態では、標的病原体は院内病原体である。
【０４６２】
一般的に言えば、体液性応答、細胞性応答、及び／又は両者間の相互作用を評価することが望ましい場合がある。体液性応答が評価されている場合、特定の病原体血清型に対する抗体力価及び／又は型（例えば、総ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＭ、ＩｇＡなど）は、例えばワクチンの初期又は追加用量の投与前及び／又は投与後に決定され得る（及び／又は抗原刺激の非存在下での抗体レベルと比較）。細胞性応答は、担体タンパク質に対する遅延型過敏性応答などの応答を監視することで評価され得る。細胞性応答は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）単球の目的の抗原による刺激に対する応答を評価することにより直接測定することもできる。前駆体及び記憶Ｂ細胞集団は、特定の病原体ＣＰＳ及び／又はＯＰＳに対する酵素結合免疫スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイで評価され得る。
【０４６３】
対象の血清中の抗体のレベル及び／又は活性を検出するために、種々のアッセイのいずれかが用いられ得る。好適なアッセイには、例えば、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、及びマルチプレックスアッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ、Ｂｉｏｐｌｅｘ）などのリガンド結合アッセイ；オプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）などの機能アッセイ；並びにインビボ保護アッセイ（乳児ラット保護及び成体マウス肺並びにげっ歯類のＧＩ定着及び死亡モデル）が含まれる。
【０４６４】
ＲＩＡ法は、懸濁液中の放射能標識されたタイプ特異的多糖類と血清のインキュベーションにより型特異的抗体を検出する（例えば、Ｓｃｈｉｆｆｉｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０）。次いで、抗原抗体複合体を硫酸アンモニウムで沈殿させ、カウント毎分（ｃｐｍ）について放射性標識ペレットをアッセイした。
【０４６５】
ＥＬＩＳＡ検出法では、ワクチン接種対象の血清からの血清型特異的な抗体は、固体支持体に吸着された血清型特異的多糖類とのインキュベーションによって定量化される（例えば、Ｋｏｓｋｅｌａ  ａｎｄ  Ｌｅｉｎｏｎｅｎ（１９８１）；Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｒａｓｃｈ，２００１）。結合した抗体は、酵素コンジュゲート二次検出抗体を使用して検出される。ＥＬＩＳＡは、アイソタイプ又はサブクラス特異的な二次抗体を使用することにより、免疫応答のアイソタイピング及びサブクラス化（すなわち、ＩｇＭ対ＩｇＧ又はＩｇＧ１対ＩｇＧ２）を可能にし、血清型特異的抗体の親和性を評価するために適合させることができる（Ａｎｔｔｉｌａ，ｅｔ  ａｌ，１９９８；Ｒｏｍｅｒｏ−Ｓｔｅｉｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２００５）。マルチプレックスアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ，Ｂｉｏｐｌｅｘ）により、複数の血清型に対する抗体を同時に検出できる。血清型特異的なＣＰＳ及び／又はＯＰＳは、スペクトル的に異なるミクロスフェアにコンジュゲートされ、それらは一緒に混合され、希釈された血清とともにインキュベートされる。結合した抗体は、フィコエリトリンコンジュゲートされた二次抗体で検出され、１つのレーザーを使用してビーズタイプ（血清型）を識別し、第２のレーザーを使用して結合した二次抗体を定量する特殊なフローサイトメーターで定量される（Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ，２００２；Ｌａｌ，ｅｔ  ａｌ．２００５）。
【０４６６】
血清中の機能的抗体を評価するためのアプローチは、細菌をオプソニン化できる抗体のみを定量化するＯＰＡであり、これは細菌の摂取及び死滅をもたらす。標準アッセイでは、ヒト食細胞性エフェクター細胞、補体の供給源、細菌、及び希釈血清を利用する。アッセイの読み取り値は、補体及びヒト細胞単独とインキュベートした細菌と比較して、≧５０％の死滅がある血清エンドポイント力価である（Ｒｏｍｅｒｏ−Ｓｔｅｉｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ，１９９７）。この死滅ＯＰＡは、異なる抗生物質耐性マーカーをもつ病原体の標的株を利用することにより多重化することもできる（Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ，２００３）。１：８以上のエンドポイント力価は、これらの死滅タイプＯＰＡの肯定的な結果とみなされる。別のタイプのマルチプレックスオプソニンアッセイは、希釈血清及び補体供給源の存在下で、標的病原体からの抗原性ＣＰＳ及び／又はＯＰＳとコンジュゲートされた蛍光染色カプセル化病原体又は蛍光ミクロスフェアの食細胞性エフェクター細胞による取り込みをＦＣによって評価する非殺傷アッセイである（Ｍａｒｔｉｎｅｚ，ｅｔ  ａｌ，１９９９）。血清抗体及び補体のオプソニン活性は、摂取した病原体に対する食作用性ヒトエフェクター細胞の酸化応答を測定することでも評価できる（Ｍｕｎｒｏ，ｅｔ  ａｌ．１９８５；Ｏｊｏ−Ａｍａｉｚｅ，ｅｔ  ａｌ．１９９５）。
【０４６７】
特定のインビボモデルシステムを使用して、本発明のワクチンにより誘発された血清抗体によりもたらされる保護を評価することができる。そのような受動的保護システムでは、マウス又はラットに病原体及び希釈した血清を抗原投与し、菌血症、臓器もしくは組織の定着、又は死亡に対する保護を提供する血清のエンドポイント力価を決定する（Ｓｔａｃｋ，ｅｔ  ａｌ．１９９８；Ｓａｅｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．２０００）。
抗体組成物
いくつかの実施形態は、本発明の免疫原性複合体で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む抗体組成物を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、ｍＡｂ及び抗イディオタイプ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体組成物は単離されたガンマグロブリン画分を含む。
【０４６８】
キット
本開示は、例えば、免疫応答に対する抗原又は抗原の組み合わせの効果を評価するための調査目的のために、研究者が、彼らの好ましい抗原との免疫原性複合体を調整するのに有用な、本明細書に開示される免疫原性複合体を産生するためのキットも提供する。そのようなキットは、容易に入手可能な材料及び試薬から調製することができる。例えば、そのようなキットは、以下の材料のいずれか１つ以上を含むことができる：複数の第１の親和性分子で架橋された骨格ポリマーを含む容器；及び第１の親和性分子と会合する相補的親和性分子を含む容器であって、相補的親和性分子が抗原と会合する、容器。
【０４６９】
別の実施形態では、キットは、ポリマー、例えば多糖類を含む容器、複数の第１の親和性分子を含む容器、及び第１の親和性分子を骨格ポリマーに架橋するための架橋試薬を含む容器を含むことができる。
【０４７０】
いくつかの実施形態では、キットは、抗原に相補的親和性分子を付着させる手段をさらに含み、その手段は、架橋試薬又は何らかの中間融合タンパク質によるものであり得る。いくつかの実施形態では、キットは、ポリマーに添加することができる少なくとも１つの共刺激因子を含むことができる。いくつかの実施形態では、キットは、架橋剤、例えば、ＣＤＡＰ（１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボラート）、ＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドヒドロクロライド）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム；臭化シアン；補助因子をポリマーに結合するための重炭酸アンモニウム／ヨード酢酸を含むが、これらに限定されない。
【０４７１】
キットの使用目的、特定の標的抗原、及び使用者のニーズに応じて、本明細書に記載の方法で使用するための種々のキット及び成分を調製することができる。
【０４７２】
例
本明細書に記載される本発明がより完全に理解され得るために、以下の例を記載する。代表的な例は、情報、例示、及びガイダンスを含有し、それらは、その様々な実施形態及びその均等物において本発明の実施に適合させることができる。これらの例は例示のみを目的とするものであり、いかなる方法でも本発明を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。
【０４７３】
例１：細菌株
試薬株を動物製品を含まない培地で３回継代し、あらゆる可能性がある動物製品の汚染物質を除去した。株の特性を、継代前、継代中、及び継代後と比較した。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の場合：グラム染色、コロニー形態、ＡＰＩ、オキシダーゼ試験、マッコンキー寒天での成長、ＩＡＴＳ血清型別、成長速度論。クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の場合：グラム染色、コロニー形態、ＡＰＩ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による分子セロタイピング、ＰＣＲ及びシーケンシング（必要に応じて）による変異の確認、Ｋタイピング（ＰＣＲによる）、成長速度論。
【表２】
2020525540.tif 000012
【０４７４】
ｇｕａＢＡ及びｗｚａｂｃ遺伝子は、ラムダレッド組換えを使用して削除された。簡単に言えば、ｇｕａＢＡ及びｗｚａｂｃ遺伝子の上流及び下流のＤＮＡをカナマイシン耐性カセットに融合し、線形ＤＮＡを、ラムダリコンビナーゼ遺伝子を発現できるヘルパープラスミドも含有する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株に形質転換した。誘導すると、これらの遺伝子は相同組換えを促進し、ｇｕａＢＡ及びｗｚａｂｃ遺伝子をカナマイシン耐性カセットに置き換えることができた。その後、カナマイシン耐性カセットを、カセットに隣接するＦＲＴ部位間の組換えを促進するフリッパーゼ酵素を使用して除去した。変異体はカナマイシン感受性であることが確認され、欠失はＰＣＲ及び欠失の配列決定により確認された。
【表３】
2020525540.tif 000013
【０４７５】
菌体外多糖類ＰｓＬを過剰生産するＰＡ株の創出
ニュージャージー州ピスカタウェイのＧｅｎｓｃｒｉｐｔからの１８８６ｂｐ合成ＤＮＡを使用して、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｓＬ誘導性株ＰＡＯ１Δｐｓｌ／ｐＢＡＤ−ｐｓｌを再構築するための例示的な遺伝的アプローチを図９Ｂに示す。
【０４７６】
相同組換えにより、ａｒａＣ−ｐＢＡＤプロモーターを緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１  ｐｓｌＡ遺伝子の上流に挿入した。本質的に、ｐｓｌＡの上流のＤＮＡは緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１から増幅され、ゲンタマイシン耐性カセットの上流に融合された。ａｒａＣ−ｐＢＡＤプロモーター及びｐｓｌＡ遺伝子を含有する合成ＤＮＡからなる構築物は、ゲンタマイシン耐性カセットの下流に融合された。この構築物全体をｐＥＸ１００Ｔシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）突然変異誘発プラスミドに挿入した。突然変異誘発は以前に記載されたように実行した（Ｓｃｈｗｅｉｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。ゲンタマイシン耐性遺伝子はその後除去され、ａｒａＣ−ｐＢＡＤプロモーターの挿入はＰＣＲ及び配列決定によって確認された。
【０４７７】
例２：Ｏ及びＫ多糖類抗原の産生
クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）及び緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）株の成長
すべての試薬クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）及びＰＡ株は、動物製品を含まない培地で３回継代し、あらゆる可能性がある動物製品の汚染物質を除去した。リサーチセルバンク（ＲＣＢ）をＨｙ−Ｓｏｙブロスの振とうフラスコで増殖させ、１５％グリセロール最終濃度の無菌分注バイアルに移した。細菌は、リン酸一カリウム、リン酸アンモニウム、クエン酸一水和物、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）（消泡剤）、炭素源として３％のグリセロール、微量ビタミン及び元素、並びに必要に応じて選択したアミノ酸を含有する化学的に定義された培地（ＣＤＭ）の８Ｌ  ＢｉｏＦｌｏ  ４１５発酵槽で増殖させた。２００ＲＰＭの最小撹拌速度で設定されたカスケードモードで溶存酸素を３０％に維持し、水酸化アンモニウムでｐＨを７に修正した。発酵中、必要に応じて培地をバッチモードで、５０％グリセロール、ＭｇＳＯ４、微量ビタミン、並びに微量ビタミン及び微量元素で補充した。細菌は、多糖類を得るために培養物が採取された時点で、１２〜１８時間、定常期まで増殖させた。
【０４７８】
ＫＰ  Ｏ多糖類及びＰＡコア−Ｏ多糖類の精製
ＫＰ及びＰＡ  ＯＰＳの下流精製プロセスのフロー図を図８Ａに示す。手短に言えば、発酵の終わりに、発酵培養全体を、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細胞培養については１００℃で４時間１％酢酸で、又は肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞については４℃で１２時間酢酸中の亜硝酸ナトリウムで処理した。遠心分離及び深層濾過（０．４５μｍ）による清澄化の後、加水分解及び放出されたＯＰＳを含有する透明な溶液に、１Ｍ  ＮａＣｌ及びＴｒｉｓ緩衝液に対するダイアフィルトレーションを備えた１０ｋＤａ又は３０ｋＤａ  ＮＭＷＣＯ膜を備えた接線流濾過（ＴＦＦ）ＵＦ−ＤＦに供した。次いで、保持液を、Ｔｒｉｓ緩衝液中のイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）用の強アニオン交換膜に通した。負に帯電したＰＡ  ＯＰＳは膜に捕捉され（図８Ａ）、次いで塩化ナトリウムで溶出した。中性ＫＰ及び中性又は弱酸性ＰＡ  ＯＰＳは、ＩＥＣ膜のフロースルー（ＦＴ）で得られた。ＩＥＣフロースルー又は溶出液は、次いで、残留タンパク質を除去するために硫酸アンモニウム沈殿に供した。次いで、硫酸アンモニウム上清のＫＰ  ＯＰＳを３００ｋＤａ  ＮＭＷＣＯ膜で開始する２つの連続したＴＦＦ濾過に供し、次いで、ＦＴを濃縮し、５又は１０ｋＤａのＮＭＷＣＯ膜でダイアフィルトレーションした。この後のＴＦＦ  ＦＴの保持液には、精製ＫＰ中性ＯＰＳが含有した（図８Ａ）。硫酸アンモニウム（ＮＨ４ＳＯ４）上清中の精製された中性及び酸性ＰＡ  ＯＰＳは、それらが保持液で回収された５〜１０ｋＤａのＴＦＦ（図８Ａ）に供した。ＳＥＣマルチアングルレーザー光散乱（ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ）で測定した最終ＯＰＳ製品の平均ＭＷは、Ｏタイプに応じて１０〜３０ｋＤａの範囲に及び、エンドトキシン、タンパク質、及び核酸の含有量は低かった。
【０４７９】
クレブシエラオキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｘｙｔｏｃａ）Ｋ１９莢膜多糖類（ＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳ）の精製
ＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳの下流精製プロセスのフロー図を図９Ａに示す。手短に言えば、ホルムアルデヒドの不活性化、並びに遠心分離及び表面濾過（０．４５μｍ）の中断による清澄化の後、ＣＰＳを含有する透明な溶液を濃縮し、ＴＦＦを使用して３０ｋＤａのＮＭＷＣＯ膜でダイアフィルトレーションした。３０ｋＤａの保持液はＣＴＡＢによって沈殿した。沈殿物を塩化カルシウムで再溶解し、２０％エタノールで沈殿させて、核酸及びタンパク質混入物を除去した。遠心分離後、収集した上清を８０％エタノールで沈殿させた。沈殿物を含有するＣＰＳは、Ｔｒｉｓ緩衝液に再溶解され、弱アニオン交換樹脂上に捕捉された。樹脂から溶出したＫ１９  ＣＰＳを９０％エタノール中の０．１Ｍ  ＮａＯＨでさらに処理（解毒）して、その凝集及びエンドトキシン（リムルスアメボサイトライサート（ＬＡＬ）活性で測定）に寄与するあらゆる残留末端脂質を除去した（図９Ａ）。最終的なＫ１９多糖類製品は、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳを使用して測定した場合、２２０ｋＤａの平均ＭＷを有し、エンドトキシン、タンパク質、及び核酸の含有量が低かった。
【０４８０】
ＰＡ菌体外多糖類ＰｓＬの精製
ｅｘｏＰＳ  ＰｓＬの例示的な精製プロセスのフロー図を図９Ｃに示す。手短に言えば、ＰＡ細菌培養物を１０，０００×ｇ、ＲＴで４０分間遠心分離することにより清澄化し、上清を０．５〜０．３ｕｍの深さのフィルターで濾過した。１０ダイアボリュームの注射用水（ＷＦＩ）を含む１００ｋＤａ  ＭＷＣＯ  ＰＥＳ膜を使用したＴＦＦで濾過した上清をダイアフィルトレーションし、透過液を、１０〜２０×ＵＦで２ｋＤａ  Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜を使用して収集及び濃縮し、１０ダイアボリュームの５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５でダイアフィルトレーションした。次いで、濃縮溶出液をＧＥ  Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗの強アニオン交換樹脂（ＩＥＸ）クロマトグラフィーに通し、１以上のカラム容量の溶出液で洗浄して、フロースルーを収集した。溶出液を濃縮し、２ｋＤａハイドロサート膜を使用してＷＦＩでダイアフィルトレーションし、次いで、ＲＴで１８時間８０％エタノールで沈殿させた。４０００×ｇで３０分間遠心分離した後、ペレットをＷＦＩに溶解し、０．２μｍフィルターで滅菌濾過し、凍結乾燥した。最終精製多糖類材料は、Ｄｉｏｎｅｘ  ＩＣＳ−４０００キャピラリー機器及びＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡ１０カラムを使用したＨＰＡＥＣ／ＰＡＤ（パルス電気化学検出を備えた高性能アニオン交換クロマトグラフィー）、及び市販の単糖類標準によって、単糖類組成、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイでの残留タンパク質、Ｑ−ｂｉｔ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｑｕａｎｔ−ＩＴキットでの残留核酸、ＬＡＬアッセイによるエンドトキシン、及びアントロンアッセイによる総炭水化物について分析した。最終材料は、その構造を確認するための高分解能Ｈ−ＮＭＲ及び分子量推定のためのＳＥＣ−ＨＰＬＣによっても分析した。
【０４８１】
Ｏ及びＫ抗原の特性解析のための分析方法
上記のプロセスから得られたＯＰＳ及びＣＰＳの純度及び同一性は、以下のように決定した。残留タンパク質濃度は、ブラッドフォード及び／又はＢＣＡアッセイによって決定し；核酸濃度は、ピコグリーンアッセイ又は２６０ｎｍでの吸光度を使用して決定し；エンドトキシンレベルは、ＬＡＬアッセイを使用して測定し；多糖類の糖組成は、酸加水分解に続く上記のＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ（Ｄｉｏｎｅｘ）による個々の単糖類の分離によって決定した。多糖類の物理的完全性は、Ｂｒｕｋｅｒ分光計を使用して５００、８００、又は９５０ＭＨｚで高分解能１Ｈ−ＮＭＲによって決定し、スペクトルを記録し、得られたスペクトルを文献に掲載されているスペクトルと比較した。精製された天然及び化学的に誘導体化された多糖類のインプロセス及び最終産物としての多糖類の同一性及びエピトープの完全性は、特定のＯＰＳ及びＣＰＳモノクローナル抗体並びに熱殺菌型特異的細菌に対して生じたポリクローナルウサギ抗血清を使用するＥＬＩＳＡによって確認された。多糖類上のＯ−アセチル基の存在は、ヘストリン比色アッセイ及び１Ｈ−ＮＭＲによって決定した。多糖類のサイズは、適切なサイジングカラムを使用して、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ（図８Ｂ及び８Ｃ）並びにＳＥＣ−ＭＡＬＬＳによって決定した。多糖類濃度は、アントロンアッセイによって決定した。
【０４８２】
例３：ＯＰＳ及びＣＰＳのビオチン化の一般的な方法
ヒドロキシル基を含有する多糖類（ＰＳ）のビオチン化は、ＣＤＡＰを活性化試薬として使用して行った。多糖類をＬＰＳを含まない水（細胞培養グレード；ＨｙＣｌｏｎｅ）に溶解し、最終濃度を１〜５ｍｇ／ｍＬにした。時間０で、ボルテックス中に１ｍｇのＰＳあたり１ｍｇのＣＤＡＰの最終比率になる量のＣＤＡＰ（アセトニトリル中１００ｍｇ／ｍＬの濃度で新たに作製）を添加した。３０秒で、ｐＨを８に上げる量の０．２Ｍのトリエチルアミン（ＴＥＡ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加した（中性ＰＳの場合、ＴＥＡの量はＣＤＡＰの量に等しく、酸性ＰＳの場合、ＴＥＡの量は２倍である）。２．５分で、１ｍｇのビオチンと１ｍｇのＰＳとの最終比率になる量のビオチン誘導体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ａｍｉｎｅ−ＰＥＧ３−Ｂｉｏｔｉｎ、水中２０ｍｇ／ｍＬ）を加え、室温で１〜４時間インキュベートした。より希釈されたサンプル（＜１ｍｇ／ｍＬ）では、一晩のインキュベーションを使用した。２５ｍＭグリシンを添加することによって反応を終了させ、ＰＢＳに対する広範な透析により過剰なビオチンを除去した。
【０４８３】
骨格ポリマーＢＰ−１．２の場合、ポリマーＫ１９  ＣＰＳのビオチン化は、１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミドヒドロクロライド（ＥＤＣ，Ｐｉｅｒｃｅ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）でウロン酸残基のカルボキシラート基を活性化することにより進行し、効率を改善するか、又は乾燥安定な（アミン反応性）中間体を創出した。ＥＤＣは、ＮＨＳをカルボキシルに結合し、生理学的ｐＨでの一級アミンへの効率的なコンジュゲーションを可能にしつつ、Ｏ−アシルイソ尿素中間体よりもかなり安定したＮＨＳエステルを形成する。次いで、ビオチンアミン誘導体（Ｐｉｅｒｃｅ  ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ａｍｉｎｅ−ＰＥＧ３−Ｂｉｏｔｉｎ）は、Ｋ１９  ＣＰＳのＮＨＳエステル中間体のビオチン化に使用される。
【０４８４】
総糖濃度は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＯＰＳ／ＣＰＳのアントロンアッセイ又はＰＡ  ＯＰＳのレゾルシノールアッセイのいずれかによって決定した。
【０４８５】
例４：組換えリザビジン及びリザビジン融合タンパク質抗原の構築
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）及び緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来のリザビジン融合タンパク質の発現構築物の設計及び工学
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリン（ＦｌｉＣ）Ａ（ＦｌａＡ）及びＢ（ＦｌａＢ）の場合、結晶内のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌｉＣのパッキングに基づく鞭毛フィラメントのインシリコ構築は、ドメイン２（Ｄ２）が溶液に曝露され、免疫原性に重要な役割を果たすことができることを示唆している（Ｓｏｎｇ，２０１４）。さらに、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌｉＣはＴＬＲ５によるその認識を介して先天性免疫応答を活性化し、反応原性を引き起こす可能性があるため、本発明者らは、ＴＬＲ５結合ドメイン及びドメイン２のみを削除した隣接領域を有するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリンを生成及び評価した。ＴＬＲ５ドメインを欠くＦｌａＡ２−ドメイン２及びＦｌａＢ−ドメイン２の結果配列は、リザビジン単独又はリザビジン及びクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＭｒｋＡもしくはＰｃｒＶとの融合として発現された。生成及び発現されたシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（ＦｌａＢ；ＦｌａＡ１；ＦｌａＡ２；ＰｃｒＶ；ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ；ＦｌａＢ−Ｄ２；ＦｌａＡ２−Ｄ２；ＦｌａＢ−Ｄ２−ＰｃｒＶ）に由来するリザビジン−抗原融合タンパク質変異体並びにクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の両方（ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ；ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ）に由来するハイブリッドリザビジン融合タンパク質の概略図を図１２Ａに示す。
【０４８６】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の場合、フラジェリンは鞭毛の主要成分である可能性が高い担体タンパク質及び防御抗原として選択され、フラジェリンに対する抗体は播種性感染に必要な運動性を阻害し、動物感染モデルで防御として実証されていることが既知である。フラジェリンの場合、血清型Ａ２は高度に保存されているが、Ａ１からわずかに異なり、血清型Ｂのドメイン２で大きく異なる。これらの変異の活性を評価するために、血清型Ａ１（ＦｌａＡ１）、Ａ２（ＦｌａＡ２）、及びＢ（ＦｌａＢ）フラジェリンをクローン化して、全長タンパク質として発現された。このドメインが集合した鞭毛の外側を飾り、中和抗体に対する標的である可能性があるため、フラジェリンＡ２及びＢのみからのドメイン２もクローニング及び発現された。これにより、ＴＬＲ５結合ドメインの適応免疫応答への寄与を個別に評価できた。選択した配列を合成し、プラスミドにクローニングして、アミノ末端リザビジン融合及び初期親和性精製用の６つのヒスチジンタグによって大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で直接発現させた（図１２Ａ）。
【０４８７】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）については、ＰｃｒＶはＩＩＩ型分泌装置の先端タンパク質をコードするため、選択された。ＰｃｒＶに特異的な抗体は侵襲性感染から保護できるため、保護抗原としても既知である。この配列は、１８種類の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）株の２９４アミノ酸からのアミノ酸変化を伴う４つの位置のみで高度に保存される。配列を合成し、プラスミドにクローン化して、アミノ末端リザビジン融合及び初期親和性精製用の６つのヒスチジンタグを用いて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で直接発現させた（図１２Ａ）。
【０４８８】
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）については、３型線毛の主要な線毛サブユニットと、線毛の免疫学的に支配的な部分とをコードするＭｒｋＡを選択した。３型線毛はバイオフィルム形成を媒介するために必要であり、ＭｒｋＡはバイオフィルム形成及び付着に主要な役割を果たしており、これは、この抗原がワクチン製剤の保護を提供できることを示唆している。ＭｒｋＡは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の９つの異なる遺伝子型で高度に保存されており、１８０個のアミノ酸にわたるアミノ酸変化を１つの位置のみに提供することが見出された。１つの追加の遺伝子型は、１８０個のアミノ酸にわたる変化を伴う９つの位置でわずかに高い変化を提供した（表４）。他の３型線毛サブユニットについては、ドナー鎖相補法と呼ばれる発現中に単量体を安定化させる戦略が開発された（Ｗａｌｃｚａｋ，２０１４）。この戦略は、構造内の次のサブユニットから通常提供されるベータ鎖の方向に折り畳み、結合できるように、アミノ末端配列を取得し、カルボキシル末端でそれを繰り返す。本発明者らは、リザビジン融合の細胞質発現に焦点を当てることを計画したため、まず分泌シグナル配列を除去することにより、この戦略を肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）３型線毛サブユニットＭｒｋＡに拡張しようとした。推定分泌シグナルは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＦｉｍＡアミノ酸１〜２４のアラインメントに基づいてＣｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｌａｎｇｍｕｉｒでモデル化される。次いで、本発明者らは、６グリシンリンカーをカルボキシル末端に加え、続いてＭｒｋＡのＮ末端から最初の２０アミノ酸の繰り返し（シグナル配列なし）を提供して、ドナー鎖の相補性を提供した。配列を合成し、プラスミドにクローン化して、アミノ末端リザビジン融合及び初期親和性精製用の６つのヒスチジンタグを用いて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で直接発現させた（図１２Ａ）。
【表４】
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高度に保存された肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡタンパク質の場合、表４のＡＥＯ２７４９２配列（太字）を合成遺伝子を生成するためのソース配列として使用した。
【０４８９】
これらの研究で使用される組換えリザビジン（ｒＲｈａｖｉ）は、予測シグナル配列（アミノ酸１〜４４）が組み込まれていないため、ゲノムからコードされたタンパク質のアミノ酸４５〜１７９に及んだ。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるｒＲｈａｖｉの発現レベルを最適化するために、リザビジンポリペプチドをコードする遺伝子配列（４５〜１７９；配列番号１４）は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）優先発現コドンを使用して再設計して、合成した。コドン最適化遺伝子をｐＥＴ２１ｂベクターにクローニングして、タンパク質発現を誘導した。リザビジンの正しい折り畳み及びジスルフィド結合の形成を促進するために、細胞質でのジスルフィド結合の形成を促進する発現のために大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株、Ｔ７  ｓｈｕｆｆｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓ（ＮＥＢ）を選択した。
【０４９０】
リザビジン−抗原融合タンパク質を構築するために、７つのアミノ酸（ＧＧＧＧＳＳＳ；配列番号１５）からなる柔軟なリンカー領域をコードするＤＮＡ配列を合成ｒＲｈａｖｉ遺伝子の３’末端に直接挿入して、ｒＲｈａｖｉから分離し、後続の融合タンパク質の適切な折り畳みを促進した。候補抗原（全長又は所望の断片）をコードする遺伝子を合成し、リンカー領域のすぐ先のｒＲｈａｖｉ発現ベクターに挿入した。精製を促進するために、６つのヒスチジンタグを構築物の末端に加えた。
【０４９１】
ｒＲｈａｖｉ融合タンパク質の発現を指示するＤＮＡを含有するプラスミドを、製造元のプロトコルに従ってＴ７  ｓｈｕｆｆｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に形質転換した。単一コロニーから培養を開始し、アンピシリン（Ａｍｐ＋）を含有する３０ｍｌのルリアベルターニ（ＬＢ）培地に接種して、３０℃で一晩培養した。２日目に、５ｍｌの出発培養物を１リットルのＬＢ培地／Ａｍｐ＋で、ＯＤ６００が約１．２〜１．６に達するまで３０℃で増殖させた。培養物を１６℃に冷却した後、ＩＰＴＧを最終濃度０．１ｍＭまで加えた。誘導された培養物を１６℃で振とうしながら１６〜２０時間インキュベートした。５０００×ｇで２０分間の遠心分離により細菌を収集し、ペレットを−２０℃で凍結した。
【０４９２】
例示的な融合タンパク質
本発明の例示的なリザビジン融合タンパク質を以下の配列表に記載する。参照しやすいように、融合タンパク質の１文字のアミノ酸配列を以下に提供する。
【０４９３】
Ｒｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ配列番号１６
【数１０】
2020525540.tif 000015
【０４９４】
Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡ−ドナー鎖相補−Ｈｉｓ配列番号１７
【数１１】
2020525540.tif 000016
【０４９５】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ１−Ｈｉｓ配列番号１８
【数１２】
2020525540.tif 000017
【０４９６】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２−Ｈｉｓ配列番号１９
【数１３】
2020525540.tif 000018
【０４９７】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｈｉｓ配列番号２０
【数１４】
2020525540.tif 000019
【０４９８】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−Ｈｉｓ配列番号２１
【数１５】
2020525540.tif 000020
【０４９９】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２−ドメイン２−Ｈｉｓ配列番号２２
【数１６】
2020525540.tif 000021
【０５００】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ配列番号２３
【数１７】
2020525540.tif 000022
【０５０１】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ−ドナー鎖相補−Ｈｉｓ配列番号２４
【数１８】
2020525540.tif 000023
【０５０２】
Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡ−ドナー鎖相補−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ配列番号２５
【数１９】
2020525540.tif 000024
【０５０３】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ配列番号２６
【数２０】
2020525540.tif 000025
【０５０４】
融合タンパク質の精製
精製を開始するために、細菌ペレットを細胞ペレット１ｇあたり４ｍｌの冷却２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）に再懸濁した。細菌を超音波処理で破壊し、続いてＤＮａｓｅ  Ｉを２５μｇ／ｍｌの最終濃度まで加えた。５０００×ｇで２０分間の遠心分離により、不溶性の破片を除去した。透明なライサートを等量の２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、５００ｍＭ  ＮａＣｌで希釈して、最終緩衝液濃度を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１×Ｈａｌｔプロテアーゼ阻害剤にした。タンパク質は、ニッケル親和性樹脂に結合し、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、２０ｍＭイミダゾールで洗浄し、結合タンパク質を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５００ｍＭ  ＮａＣｌ、５００ｍＭイミダゾールで溶出することにより精製した。標的タンパク質の二量体について予想される溶出でのピーク画分をプールし、濃縮した。これらのカラムから溶出されたタンパク質は、ゲル濾過及び／又はＳＥＣによってさらに精製した。次いで、これらのタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ウェスタンブロッティング、及びＳＥＣで分析した。すべての融合タンパク質は、予測ＭＷでＳＤＳ−ＰＡＧＥで移動した。ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、各サンプルのタンパク質濃度を測定した。精製タンパク質を分注し、液体窒素で瞬間凍結し、将来の使用のために−８０℃で保存した。
【０５０５】
本発明の例示的なリザビジン融合タンパク質及び変異体の物理的属性の概要を表５に示す。本発明のすべてのリザビジン融合タンパク質を発現し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により実証されるように二量体タンパク質であると決定した（表５）。
【表５】
2020525540.tif 000026
【０５０６】
フラジェリン融合タンパク質におけるＴＬＲ５活性の評価
融合タンパク質が適切に折り畳まれているかどうかを評価するために、ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ：Ｌｕｃ細胞を、図１２Ｂに示すように各試験タンパク質又は複合体の滴定で４時間インキュベートすることにより刺激した。ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ：Ｌｕｃ細胞は、ＬＰＳ又は非鞭毛サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ではなく、フラジェリンに応答することが以前に報告されていた（Ｓｉｍｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｕｅｌ，２００７）。細胞を溶解した後、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅでルシフェラーゼ活性を決定した。このアッセイはＮＦ−ｋＢの活性化を測定する（Ｓｉｍｏｎ  ａｎｄ  Ｓａｍｕｅｌ，２００７）。
【０５０７】
ＨＥＫ２９３−ＮＦｋＢ：Ｌｕｃ細胞及び天然シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリン及びＲｈａｖｉ融合タンパク質を単独又はＰｎＰＳ  ６ＢとのＭＡＰＳ複合体として使用するアッセイにおけるＴＬＲ５生物活性を図１２Ｂに示す。これらの結果は、リザビジンフラジェリン構築物ＦｌａＢ、ＦｌａＡ１、ＦｌａＡ２がそれら自体で、又はＰｎＰＳ  ６ＢとのＭＡＰＳ複合体としてＴＬＲ５活性を促進し、したがって適切に折り畳まれたことを明確に示す。
【０５０８】
例示的な融合タンパク質の免疫原性
融合タンパク質変異体に対する高力価の血清を生成して、タンパク質特異的抗体のインビトロ活性を評価した。ＥＬＩＳＡ  ＩｇＧは、以下の融合タンパク質（ＦＰ）のそれぞれについて、対応する免疫原に対する力価がある：Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２−Ｄ２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ、及びＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡを図１４に示す。すべてのＦＰは非常に免疫原性が高く、ＦＰ特異的ＩｇＧ抗体の高力価を引き出す。
【０５０９】
ＦｌａＢ及びＦｌａＡ１は、リザビジン融合タンパク質を含有するＦｌａＢに対して生じたウサギ血清との交差反応性を表６に要約する。
【表６】
2020525540.tif 000027
【０５１０】
抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶウサギ血清は両方ともＦｌａＢ特異的抗体の力価が高いが、抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ血清はＦｌａＢ特異的抗体の力価が低い。抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ血清は、有意な交差反応性ＦｌａＡ１特異的抗体を有し、したがって、融合タンパク質のＦｌａＢ成分が適切に折り畳まれていること、及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２又はＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡのいずれでも発現しない共通の保存されたＤ０及びＤ１ドメイン（Ｓｏｎｇ  ａｎｄ  Ｙｏｏｎ，２０１４）で、交差反応性ＦｌａＡ１エピトープがおそらくフラジェリンドメイン２の外側に存在することを示唆している。したがって、ＦｌａＡ１との有意な交差反応性のため、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶは、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染に対する広範なフラジェリン免疫を提供し得る優れた候補融合タンパク質である。
【０５１１】
例５：免疫原性複合体の調製
天然ＯＰＳ骨格ポリマーの調製
天然ＯＰＳ
肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（ＫＰ  ＯＰＳ）血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５並びに緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）コアＯＰＳ（ＰＡ  ＯＰＳ）血清型Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１のＯ多糖類（ＯＰＳ）は、ＰＡ  ＯＰＳの場合は１パーセント酢酸において１００℃で煮沸させ、又はＫＰ  ＯＰＳの場合は酢酸及び亜硝酸ナトリウム（ＮａＮＯ２）で処理した後、ＣＤＭで増殖した生物の発酵バイオマスから分離した。ＰＡ  ＬＰＳの場合、酢酸処理によりＬＰＳの内部コアとリピドＡとのＫＤＯ結合が開裂され（図１Ａ）、ＣＯＰＳの還元末端でＫＤＯ部分が生成された。ＫＰ  ＬＰＳの場合、亜硝酸脱アミノ化により、ＬＰＳの内部コアグルコサミン残基と残りの内部コアリピドＡ部分との結合が開裂され、炭素１にアルデヒドを含む還元２，５−アンヒドロマンノース残基が生成された（図１Ｃ）。ＰＡ  ＯＰＳ（Ｋｎｉｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）及びＫＰ  ＯＰＳ（Ｖｉｎｏｇｒａｄｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）の構造をそれぞれ図１Ｂ及び１Ｄに示す。ＰＡ及びＫＰ  ＯＰＳの下流精製プロセスを図８Ａに示す。これらの精製プロセスにより、残留タンパク質、核酸、及びエンドトキシンのレベルが低い、大量（精製された材料の５０〜１００ｍｇ／Ｌ超）の高純度ＯＰＳが生成された。ＯＰＳの化学的及び免疫化学的同一性は、ＴＦＡ解重合並びにＤｉｏｎｅｘ  ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ、ＮＭＲスペクトルデータ（化学シフト及び結合定数）と公開された文献とを比較する高分解能１Ｈ−ＮＭＲによって、並びにＫＰ  ＯＰＳ及びＰＡ  ＯＰＳ型特異的モノクローナル抗体又は熱殺菌した全菌で生じた抗血清とのＥＬＩＳＡ免疫反応性によって、確認された（図６Ｃ）。ＳＥＣ及びＳＥＣ−ＭＡＬＬＳで測定したＯＰＳの平均ＭＷは、タイプに応じておよそ１０ｋＤａ〜３０ｋＤａの範囲であったが、ＰＡ  ＯＰＳは、典型的にはＫＰ  ＯＰＳよりも大きかった。精製ＫＰ  ＯＰＳ及びＰＡ  ＯＰＳのＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ（Ｄｉｏｎｅｘ）単糖組成分析の概要を表７に示す。
【表７】
2020525540.tif 000028
【０５１２】
骨格ポリマーＯＰＳ
図１Ｅは、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｋ１９  ＣＰＳと同一のＫ．オキシトカ（Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ）（ＫＯ）莢膜多糖類（ＣＰＳ）Ｋ１９の繰り返し単位の化学構造を示す。図１Ｆは、精製ＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳの９５０ＭＨｚでのＨ−ＮＭＲスペクトルを示す。平均ＭＷ  １０〜３０ｋＤａの天然ＫＰ  ＯＰＳ及びＰＡ  ＯＰＳは、より大きなＫ１９  ＣＰＳ（ａｖＭＷ  ２１８ｋＤａ）に共有結合して、その実効ＭＷサイズ及びエピトープ価数の両方を増加させた。骨格ポリマーＯＰＳは、その後又は拡大プロセス中に、Ｋ１９  ＣＰＳ骨格ポリマーで選択的にビオチン化され、ＢＰ−１、ＢＰ−１．２、もしくはＢＰ−１．３（図２Ａ〜２Ｃ）を産生するか、又はＯＰＳ及びＣＰＳの両方でランダムにビオチン化され、ＢＰ−２ａ（図３）を産生するか、又はＯＰＳで選択的にビオチン化され、ＢＰ−２ｂ（図４）を産生した。
【０５１３】
骨格ポリマーは、サイズ排除カラムでＫ１９  ＣＰＳ又はＯＰＳ単独よりも顕著に早く溶出し、これは、それらが成分単独から大幅にサイズが大きくなり、骨格ポリマーへの組み込みを示す出発材料の量に対して、遊離ＯＰＳレベルの低下を実証したことを示唆している。
【０５１４】
Ｋ１９  ＣＰＳなどのＣＰＳを骨格ポリマーとして使用するこの拡大プロセスは、あらゆるＣＰＳ／ＯＰＳ又は低ＭＷの細菌性多糖類に適用できる普遍的なプロセスであり、明確で一貫した製品をもたらすことができ、ＯＰＳ／ＣＰＳエピトープの変更を最小限からまったく生じさせない。図６Ｃに示すように、これは、ＨＫ−ＰＡ免疫からのウサギ過免疫血清を使用して、天然ＰＡ  ＯＰＳ  Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ６、Ｏ１０、及びＯ１１並びに対応するＰＡ  ＯＰＳ：Ｋ１９  ＢＰ−１構築物を用いたＥＬＩＳＡによる以下の抗原性分析を明らかに実証した（図６Ｃ）。これらの実験では、天然ＰＡ  ＯＰＳと対応する骨格ポリマーＯＰＳとの間で抗原性の違いは観察されず、ＯＰＳエピトープが拡大プロセス中に保持されたことを示す。
【０５１５】
骨格ポリマー（ＢＰ）のビオチン化
ＢＰ−１
ＯＰＳは、ＮａＢＨ３ＣＮを用いた還元的アミノ化により、各末端に一級アミンを含有する短いスペーサー（例えば、ＡＤＨ）をその還元末端に最初に装備した。ＫＰ  ＯＰＳの反応性アルデヒドは、ＬＰＳ全体を亜硝酸ナトリウムで処理することにより抽出手順中に生成された末端の２，５−アンヒドロマンノース（２，５−ａｎＭａｎ）残基に位置し（図８Ａ）、ＰＡ  ＯＰＳの反応性ケトンは図８Ａに示すように、ＬＰＳを酢酸で処理することにより生成されたＰＡ  ＯＰＳの内部コアの還元末端ＫＤＯ残基に位置していた。その後、ＡＤＨ誘導体化ＯＰＳを、部分過ヨウ素酸塩酸化ＫＰ１９  ＣＰＳ骨格（図６Ａ及び６Ｂに示すこれらの誘導体の例示的ＳＥＣ−ＨＰＬＣトレース）及び一級アミン（アミン−ＰＥＧ３−ビオチンなど）を含有するビオチンと混合し、混合物を還元的にアミノ化し、本発明者らが、骨格ポリマー１（ＢＰ−１）と称した多糖類骨格で独自にビオチン化されたＯＰＳ骨格ポリマーを形成した（図２Ａ）。
【０５１６】
ＢＰ−１．２
あるいは、ＫＰ１９  ＣＰＳ骨格反応性カルボキシラート基は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及び一級アミンを含有するビオチン（アミンＰＥＧビオチン）を最初にビオチン化して、次いで過ヨウ素酸塩酸化、ＡＤＨ誘導体化ＯＰＳと混合し、混合物を還元的にアミノ化して、本発明者らが、ＢＰ−１．２と称した多糖類骨格で独自にビオチン化されたＯＰＳ骨格ポリマーを形成した（図２Ｂ）。あるいは、ＰＡ  ＯＰＳのＡＤＨステップは、それらがアウターコアのガラクトサミン残基の炭素−２に遊離α−アミノ基を有するアミノ酸アラニン置換基を含有するため、削除できる（図１Ａ）。したがって、これらの利用可能なアミノ基は、アミン含有ビオチンとともに過ヨウ素酸塩酸化Ｋ１９  ＣＰＳポリマーへの還元的アミノ化による直接カップリングに容易に使用でき、ビオチン化ＢＰ−１（図２Ａ）又はＢＰ−１．２（図２Ｂ）を形成する。
【０５１７】
あるいは、その還元末端にアルデヒド又はケトンを含有するＯＰＳを、還元剤の存在下でアジドアミノ化合物で誘導体化して、その末端にアジド基を有するＯＰＳを産生する。次いで、多糖類骨格に、多糖類カルボキシラート基及びＥＤＣを介してアルキン基が装備される。骨格多糖類は、ＣＤＡＰ及びビオチンヒドラジド化合物でさらにビオチン化され、ビオチン化及びアルキニル化含有多糖類を生成する。次いで、誘導体化されたアジド−ＯＰＳ及びビオチン化アルキン−ＣＰＳを銅触媒でクリック結合して、（ＯＰＳ）ｎ−ＣＰＳ  ＢＰ−１を形成し、ここで骨格ポリマーはビオチン化され、ＯＰＳはビオチン化されない（図５Ｂ；スキーム１）。このクリック結合化学を使用して、ＯＰＳ  ＢＰ−１はまた、最初にカルボキシラート基及びＥＤＣを使用してアルキン基をＣＰＳに導入し、続いてアミノ−ＰＥＧ−アジド及び硫酸銅触媒を使用してアミノ化、ＣＤＡＰ及びビオチンヒドラジドによるＣＰＳのビオチン化によって得ることができ；一級アミノ基を含有するビオチン化ＣＰＳを天然ＯＰＳ（その末端還元端にアルデヒド又はケトン基を含有する）と混合し、還元剤で還元的にアミノ化してＯＰＳ／ＣＰＳ  ＢＰ−１を産生する（図５Ｂ；スキーム２）。ＢＰ−２ｂは、第１にその末端にアジド基で誘導体化されたＯＰＳにビオチン残基を選択的に導入し、次いでＣＤＡＰケミストリー及びビオチンヒドラジドを使用してビオチン化すること；図５Ｂ；スキーム３）に示すように、アルキニル化ＣＰＳで誘導体化されたビオチン化ＯＰＳアジドを第２のクリック結合することによるこのクリックケミストリーによって、得ることができる。
【０５１８】
ＢＰ−２ａ
あるいは、ＡＤＨ誘導体化ＯＰＳ又は非誘導体化ＯＰＳを部分過ヨウ素酸塩酸化ＫＰ株１９  ＣＰＳ骨格と混合し、還元的アミノ化してＯＰＳ骨格ポリマーを形成し；骨格ポリマーは、ＣＤＡＰ及びビオチンＰＥＧアミンでさらに誘導体化され、骨格多糖類及び本発明者らがＢＰ−２ａ（ＢＰ−２ａ）と称するＯＰＳの両方でビオチンによりランダムにビオチン化された骨格ポリマーを得る（図３）。
【０５１９】
ＢＰ−２ｂ
あるいは、ＯＰＳは最初にＣＤＡＰ及びアミンＰＥＧビオチンでビオチン化され；得られたビオチン化ＯＰＳは、過ヨウ素酸塩で部分的に酸化され、アルデヒドをその内部コアＫＤＯ又はヘプトース部分に導入し、ＡＤＨで還元的にアミノ化され；次いで、ビオチン化及びアミノ化されたＯＰＳを部分過ヨウ素酸塩酸化ＫＰ１９  ＣＰＳ骨格と混合し、還元的にアミノ化して、そのＯＰＳで選択的にビオチン化されたＯＰＳ骨格ポリマーを形成し；本発明者らは、それをＢＰ−２ｂと称した（図４及び図５Ｂ、スキーム３）。
【０５２０】
ＢＰ−３
あるいは、ＡＤＨ誘導体化ＯＰＳは、最初にＰＬＬ骨格のε−ＮＨ２基で還元的にアミノ化され、ＯＰＳ−ＰＬＬ骨格ポリマーを産生する。得られたＯＰＳ−ＰＬＬを無水酢酸などのアシル化試薬で処理して、ＰＬＬ骨格の未反応アミノ（ε−ＮＨ２）基をキャップし、ＯＰＳ−ポリ−Ｎ−アセチル−リジン（ＯＰＳ−ＰＮＡｃＬＬ）骨格ポリマーを形成する。このＯＰＳ−ＰＮＡｃＬＬ骨格ポリマーは、最初にＣＤＡＰで、次いでアミンＰＥＧビオチンで処理することにより、そのＯＰＳでビオチン化される。そのＯＰＳで選択的にビオチン化されたこの骨格ポリマーは、ＢＰ−３と称される（図５Ａ）。
【０５２１】
未反応のＯＰＳ、ビオチン、ＣＰＳ、及び残留コンジュゲーション化学物質は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００を用いたＦＰＬＣ−ＳＥＣ又は５０−３００ｋＤａ  ＴＦＦ  ＵＦ−ＤＦによって除去した。
【０５２２】
例示的な免疫原性複合体の生成及び精製
ＭＡＰＳ複合体又は変異体ＭＡＰＳ複合体は、選択された比率（典型的には３：１、タンパク質：ＰＳ  ｗ：ｗ）で２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌのビオチン化多糖類に、０．０１％のチメロサールを添加して微生物の増殖を阻害しながらｒＲｈａｖｉ抗原融合タンパク質候補を加えることによって生成した。サンプルを２５℃で終夜回転させながら一晩インキュベートした後、１０，０００×ｇで５分間遠心分離して不溶性材料を除去した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。可溶性材料を収集し、２ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ  ＮａＣｌのＳｕｐｅｒｄｅｘ  ７５カラム（天然ＯＰＳ  ＰＳ  ＭＡＰＳ）又はＳｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＣＰＳ  ＭＡＰＳ及び骨格ポリマーＰＳ変異体ＭＡＰＳ）のサイズ排除クロマトグラフィーでＭＡＰＳ複合体又は変異体ＭＡＰＳ複合体を精製した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。加熱せずに還元したサンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いてタンパク質含有量についてピーク画分を分析し、総タンパク質染色で視覚化した。ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳ複合体を含有する画分は、タンパク質二量体のサイズでの予想される移動ではなく、ゲル内の高分子量複合体の染色タンパク質保持によるゲルの観察から同定した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＭＡＰＳ複合体を含有する画分をプールし、ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳのタンパク質／多糖類比を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット及び多糖類用のアントロンアッセイを使用して決定した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳ複合体の完全性は、総タンパク質染色で視覚化された加熱なしの還元サンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥで評価した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳ複合体の遊離タンパク質含有量は、標準量の対照タンパク質二量体と比較して、加熱なしのＳＤＳ−ＰＡＧＥ  ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳ複合体のタンパク質二量体含有量のデンシトメトリーにより定量した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳ複合体に組み込まれたタンパク質の分子量を、総タンパク質染色及び分子量タンパク質標準で視覚化された還元煮沸サンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。
【０５２３】
ＫＰ／ＰＡ  ＯＰＳは、骨格ポリマーとしてＫ１９  ＣＰＳを使用して、様々なＯＰＳ骨格ポリマーの形態（１、２ａ、２ｂ）として産生され、ＫＰ及びＰＡゲノムに由来する以下の組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）リザビジン融合タンパク質と変異体ＭＡＰＳに複合体化した：Ｒｈａｖｉ−ＰｃｒＶ；Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡ；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ１；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ２−ドメイン２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ；Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡ−ＰｃｒＶ；それぞれが配列番号１６〜２６であり、対照タンパク質としてＰＲＯ−ＣＮを使用するＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ。
【０５２４】
本発明のリザビジン融合タンパク質で生成され、ビオチン化肺炎球菌ＰＳタイプ６Ｂ、７Ｆ、及び１９Ａ多糖類と複合体化されたいくつかのＭＡＰＳロットの例示的な属性を表８に示す。変異体ＭＡＰＳ複合体の例示的な精製を図１０及び１１に示す。変異体ＭＡＰＳ複合体はＳＥＣによって未反応タンパク質から精製され、ゲルからの溶出画分はＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析され、典型的な分析を図１０に示すが、ここで、遊離タンパク質はゲルの後期画分で溶出することを示し、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３でＭＡＰＳ複合体について最初に指摘された変異体ＭＡＰＳから分離することができる。図１１Ａ〜１１Ｃは、精製Ｋ１９−ＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体、Ｋ１９−ＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体、及びＰＲＯ−ＣＮ（図１１Ａ）；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（図１１Ｂ）；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ（図１１Ｃ）とのＫ１９−ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＭＡＰＳ複合体のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。精製された変異体ＭＡＰＳサンプルのそれぞれは、煮沸し、加熱なしで別々に処理した。変異体ＭＡＰＳ複合体は、加熱なしでは破壊されず、変異体ＭＡＰＳ複合体のタンパク質はゲルの最上部に保持した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。煮沸により、変異体ＭＡＰＳ複合体が破壊され、タンパク質が放出され、リザビジン分子間相互作用によって形成されたタンパク質二量体も解離した（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。次いで、変異体ＭＡＰＳのタンパク質含有量をＢＣＡアッセイで決定し、多糖類含有量をアントロンアッセイで決定した。タンパク質対多糖類の比は、重量対重量比及びモル比として計算した。
【０５２５】
すべての最終精製ＭＡＰＳ及び変異体ＭＡＰＳは、０．２２μｍフィルターを用いた滅菌濾過に適していた（表８及びデータは示していない）。
【表８】
2020525540.tif 000029
【０５２６】
例６：免疫研究
動物の免疫
ウサギの免疫の前に、ＭＡＰＳもしくは変異体ＭＡＰＳ複合体又はＰＳ単独を、注射のおよそ４８時間前にアジュバントとともに配合した。ＭＡＰＳ又は変異体ＭＡＰＳは、４℃で一晩、転倒混合による４０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．２５ｍｇ／ｍｌリン酸アルミニウムゲルとの単一又は多価混合物として、各血清型ＰＳの最終濃度１０μｇ／ｍｌでアジュバントに吸着した。この配合された混合物は、５μｇ用量のＰＳに対して０．５ｍｌの体積で免疫に直接使用した。より低いＰＳ用量については、４０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌで適切に希釈した。２回のＩＭ免疫（０．５ｍｌ）を２週間又は４週間間隔で生後４ヶ月のニュージーランドホワイトウサギに投与した（Ｃｏｃａｌｉｃｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、１群あたりｎ＝８〜１０）。２週間の用量間隔で、第１及び第２の免疫の２週間後に血液サンプルを得た。サンプルは、４週間の用量間隔で、第１の免疫の２週間後及び４週間後、第２の免疫の２週間後に採取した。
【０５２７】
担体融合タンパク質候補に対する高力価抗体を得るために、フロイントの完全アジュバントを第１の免疫に使用し、フロイントの不完全免疫を第２及び第３の免疫にそれぞれ使用した。各担体タンパク質（０．１ｍｇ）をフロイントアジュバントと別々に混合し、最終体積１ｍｌで、４つの異なる部位に０．２ｍｌを皮下注射し、免疫ごとにウサギあたり０．２ｍｌをＩＭで注射した。免疫は、生後４ヶ月のニュージーランドホワイトウサギ（Ｃｏｃａｌｉｃｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、（１群あたりｎ＝３）に０、１４、２１日目に投与され、第２及び第３の免疫の２週間後に血液サンプルを採取した。
【０５２８】
抗体測定
莢膜多糖類（ＣＰＳ）もしくはＯＰＳ又は異なるタンパク質抗原に対するウサギ抗体のアッセイは、（１μｇＣＰＳもしくはＯＰＳ又はＨＳＡ／ｍｌ  ＰＢＳにコンジュゲートされたＰＳ）又はタンパク質抗原（１μｇタンパク質／ｍｌ  ＰＢＳ）でコーティングされたＩｍｍｕｌｏｎ  ２  ＨＢ又はＧｒｅｎｅｉｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ培地結合９６マイクロウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗａｌｔｈａｍ  Ｍａｓｓ）で行った。ＰＢＳ中の１％ＢＳＡでプレートをブロックした。ＰＢＳ−Ｔで希釈した抗体を加え、室温で２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、ウサギ免疫グロブリンＧ（Ｓｉｇｍａ製）に対する二次ＨＲＰコンジュゲートされた抗体を加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＳｕｒｅＢｌｕｅ  ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で発育させた。
【０５２９】
異なるタンパク質抗原に特異的な血清サンプル中のウサギＩｇＧの力価は、ＥＬＩＳＡ及び任意単位が割り当てられたポリクローナル血清からの標準曲線で決定した。タンパク質抗原を室温でＩｍｍｕｌｏｎ  ２  ＨＢ  ９６マイクロウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で０．５〜１μｇのタンパク質／ｍｌ  ＰＢＳでウェルあたり１００μｌで一晩コーティングした。タンパク質溶液を除去し、プレートを室温で１時間ＰＢＳ＋１．０％ＢＳＡでブロッキングし、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＤｕｌｂｅｃｏのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄した。ウサギ血清をＰＢＳ−Ｔで希釈し、プレートに加え、室温で２時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄し、ＰＢＳ−Ｔで１〜２０，０００に希釈したＨＲＰ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）にコンジュゲートした二次ロバ抗ウサギＩｇＧをウェルあたり１００μｌ加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＳｕｒｅＢｌｕｅ  ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で発育させた。等量の１Ｎ  ＨＣｌで反応を停止し、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）において４５０ｎｍで吸光度を読み取った。１２，５００ＡＵ／ｍｌのＡＵ値をすべてのプレートに含まれるポリクローナル血清標準に割り当て、４パラメーター曲線近似からの方程式を使用して、４５０ｎｍでの吸光度に基づいて各希釈血清サンプルのＡＵを割り当て、希釈係数を修正した。ポリクローナル血清（ＰＲＯ−ＣＮ、リザビジン、及び６ヒスチジンタグに特有のＡＦＶ１６０）標準曲線の許容基準は、重複間の０．９９以上及び１０％ＣＶ未満の４パラメーター曲線適合のＲ２であった。内部対照血清（ＰＲＯ−ＣＮ、リザビジン、及び６ヒスチジンタグに固有のＡＦＶ１５１）もすべてのプレートに含まれており、割り当てられた値のＣＶは、データを受け入れるためにプレート間で２０％以下である必要があった。
【０５３０】
担体機能の評価
ＭＡＰＳ複合体で多糖類に対する免疫応答の増加を生成するリザビジン融合タンパク質の担体機能能力を評価し、リザビジン単独及び複合多糖類に対する堅牢な免疫応答を以前に生成した対照担体タンパク質（ＰＲＯ−ＣＮ）と比較した。生成された様々な融合タンパク質は、既知の免疫原性の多糖類（肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）６Ｂ、７Ｆ、及び１９Ａ）と複合体化し（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）、堅牢な機能の担体タンパク質対照（ＰＲＯ−ＣＮ）と比較した。すべての融合タンパク質は、ビオチン化ＰＳと複合体化し、精製及びその後のウサギ免疫及び担体機能の評価に使用可能な高分子量複合体を形成することができた。
【０５３１】
ウサギは、様々なリザビジン融合タンパク質で生成された肺炎球菌多糖類（ＰｎＰＳ）６Ｂ及び１９Ａで生成されたＭＡＰＳ複合体で免疫した。血清は、第１の免疫（Ｐ１）及び第２の免疫（Ｐ２）の２週間後に収集した。各サンプルのＰｎＰＳ  １９Ａ及び６Ｂに対するウサギＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡにより測定し、１２，５００ＡＵ／ｍｌのＡＵを割り当てられたポリクローナル血清での標準曲線から決定されたＡＵとして報告した。図１３Ａ及び１３Ｂに示すように、リザビジン融合タンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ）としてのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）フラジェリンＢ（ＦｌａＢ）及びリザビジン融合タンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ）としてシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶに融合したシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌａＢは、以前に同定された担体タンパク質、ＰＲＯ−ＣＮと同様に、肺炎球菌多糖類（ＰｎＰＳ）６Ｂ及び１９Ａに対するＩｇＧ力価を生成することができた。リザビジン融合タンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＡ１及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＡ２）としてのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌａＡ１及びＦｌａＡ２及びリザビジン融合タンパク質（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）としてクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＭｒｋＡに融合したシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌａＢドメイン２は、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ及びＰＲＯ−ＣＮ力価と同様又は２倍以内の力価を実証する。クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＭｒｋＡ及びシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶは、挑戦的な１９Ａ  ＰＳに対するＩｇＧの力価が非常に低いか又は検出不可能であり、０．０４４μｇの用量で６Ｂ及び７Ｆの力価が低いことを実証した。ＭｒｋＡの貧弱な担体機能を克服するために、ＭｒｋＡに対する抗体を生成すると同時に、強力な担体ＦｌａＢ−ドメイン２タンパク質と融合させて担体機能を保持した（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）。
【０５３２】
表９は、本発明の例示的なリザビジン融合タンパク質の担体属性を要約する。各融合タンパク質の担体機能は、担体タンパク質ＰＲＯ−ＣＮで実証されたもののパーセントとして表され、ＰＲＯ−ＣＮと比較した場合、６Ｂに対する免疫応答が４％、１９Ａに対する免疫応答が５％しかなかったリザビジンタンパク質単独と比較される。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ、二重病原体特異的タンパク質（リザビジンと融合した２つのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）由来抗原ＦｌａＢ及びＰｃｒＶを含むキメラタンパク質）は、ＰＲＯ−ＣＮ（１００％）に対して、６Ｂ（６２％）及び１９Ａ（１０２％）型に対する堅牢なＰｎＰＳ特異的ウサギ免疫応答を高めるという点で強力な担体として登場した。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢは、ＰＲＯ−ＣＮに対して、６Ｂ（６６％）及び１９Ａ（４９％）の両方に堅牢な応答を示す強力な担体機能も実証した。Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡは、それぞれＰＲＯ−ＣＮに対して、６Ｂ（２７％）及び１９Ａ（２％）の担体タンパク質機能が低かった。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２は、６Ｂ（６６％）の堅牢な担体機能及び１９Ａ（２０％）の低い担体機能を有した。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）（ＦｌａＢＤ２）及びクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）（ＭｒｋＡ）抗原の両方を含有するキメラＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡは、６Ｂ（３４％）及び１９Ａ（４５％）の両方に担体機能を提供し、それは、担体タンパク質であるＰＲＯ−ＣＮよりもおよそ２倍低く、リザビジン単独よりも増加している。ＰＲＯ−ＣＮの３０％超の両方のＰｎＰＳに対する免疫応答が発生し、病原体特異的タンパク質の数が多くなったため、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ変異体の両方を、本発明のＯＰＳ骨格ポリマーと変異体ＭＡＰＳを複合体化するために担体タンパク質候補として選択した。実証された担体機能に加えて、高度に保存されたシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶ、及びある程度のＦｌａＢ（すなわち、ＦｌａＢを発現する約４５パーセントのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株）及びこれらのＦＰに対して生成された保存されたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＭｒｋＡに特異的な担体タンパク質ＩｇＧは、これら２つの病原体による病気の原因に対する重要な追加の広範な保護範囲をもたらす。
【表９】
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【０５３３】
免疫原性の評価
リザビジン融合タンパク質ＰＲＯ−ＣＮ又はリザビジンとＭＡＰＳ複合体としての天然ＰＡ  Ｏ６及びＯ１０  ＯＰＳの様々な製剤のウサギにおける免疫原性の比較研究を図１５に示す。ＯＰＳ特異的ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ力価は、ＥＬＩＳＡ単位で報告される。Ｐ０の１００倍を超えるＯＰＳ特異的ＩｇＧ抗体の力価は、２回の免疫（Ｐ２）後にこれらの製剤のいずれでも生成できなかった。これは、天然ＰＡ  ＯＰＳの分子サイズ（１０〜３０ｋＤａ）が小さすぎる、エピトープの価数が低すぎる、又は分子構造が担体タンパク質ＰＲＯ−ＣＮとのＭＡＰＳ複合体としても応答を誘導するのに適切ではなかったことを示唆している。
【０５３４】
変異体ＭＡＰＳに複合体化されたＫＰ−Ｏ１  ＯＰＳの様々な骨格ポリマー変異体を比較する免疫原性研究をウサギで行った。クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）莢膜多糖類（ＣＰＳ）Ｋ１９に結合されたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳのＢＰ−１、ＢＰ−２ａ、及びＢＰ−２ｂ変異体の免疫原性を評価した。Ｋ１９に結合されたＫＰ  Ｏ５のＢＰ−１変異体も評価した。変異体ＭＡＰＳ複合体の４つの混合物のそれらの免疫原性を比較した；２価ＫＰ−Ｏ１及びＯ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１（その概略図を図２Ａに示す）；ＫＰ−Ｏ１  ＢＰ−２ａ（図３）；並びにＫＰ−Ｏ１  ＢＰ−２ｂ（図４）。これらの多糖類はすべて、変異体ＭＡＰＳで担体タンパク質ＰＲＯ−ＣＮと複合体化し、注射前にミョウバンとともに配合した。抗ＫＰ−Ｏ１  ＯＰＳ  ＩｇＧ力価は、免疫前（Ｐ０）、１回の免疫（Ｐ１）又は２回の免疫（Ｐ２）後の血清についてＥＬＩＳＡ単位で示し、図１６に示す。ＢＰ−２ａ  ＯＰＳ（１２，０００  ＥＩＡ単位）は、Ｐ０の１００倍を超えるＯ１  ＯＰＳ特異的ＩｇＧ力価を示した。Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１及びＯ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１は、Ｐ０の１０倍を超える力価を示した。
【０５３５】
同様に、ウサギの免疫原性試験では、ＰＡ−Ｏ６と−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１との様々な製剤を比較した：ミョウバンを有する２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ；アジュバントなし（ミョウバンなし）の２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ；２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１多糖類のみ（ミョウバン、タンパク質なし）；ＰＲＯ−ＣＮと複合体化されていない（非ビオチン化；ミョウバン；変異体ＭＡＰＳ形成なし）２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１混合物；ミョウバン（ＯＰＳの追加のＰＡ  Ｏ６株源）を有する一価ＰＡ−ＩＡＴＳ  Ｏ６  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ。抗ＰＡ−Ｏ６及びＰＡ−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＩｇＧ力価は、免疫前（Ｐ０）、１回の免疫（Ｐ１）後又は２回の免疫（Ｐ２）後血清のＥＬＩＳＡ単位で示され、図１７に示す。ＯＰＳ骨格ポリマーがミョウバンとの変異体ＭＡＰＳ複合体に存在する場合にのみ、Ｐ０の１００倍を超えるＰＡ−Ｏ６及びＰＡ−Ｏ１０  ＯＰＳ特異的ＩｇＧ力価（ＥＬＩＳＡ単位で５，０００〜１１，０００の範囲）を達成できた。
【０５３６】
化学的に定義された培地で実験室で標準化された成長条件を使用して産生されたＫＰ  ＯＰＳのサイズは、１０〜１５ｋＤａの範囲であり、同様の条件下で得られたＰＡ  ＯＰＳ（２０〜３０ｋＤａ）のサイズよりも比較的小さく、これらのサイズの違いは、この比較免疫原性研究でＰＡ  ＯＰＳ  ＢＰ−１がＫＰ  ＯＰＳ  ＢＰ−１よりも免疫原性が高い理由の一部を説明できるかもしれない。一方、ＫＰ  ＯＰＳ  ＢＰ−２ｂ構築物は有意に免疫原性であった（図１６）。ＯＰＳ繰り返し単位の他の構造的な違いも要因である可能性があり、例えば、ＰＡ−Ｏ６及びＯ１０の両方の繰り返し単位は負に帯電し、一方、ＫＰ−Ｏ１  ＯＰＳは中性である。
【０５３７】
例７：機能的抗体アッセイ
オプソニン食作用性死滅アッセイ
ＨＬ−６０を用いたオプソニン食作用性死滅（ＯＰＫ）アッセイ：修正を加えて、前述のようにアッセイを実行した（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。手短に言えば、３×１０５細胞／ｍｌに希釈された対数期培養からの緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及び肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株；仔ウサギ補体（ＢＲＣ）；多形核白血球源としてのＰＭＡ分化ＨＬ−６０細胞（２×１０７細胞／ｍｌ）；いくつかの希釈でのウサギの免疫前／免疫血清を使用して、９６ウェル丸底プレートでアッセイを実行した。３７℃で４５分間インキュベートした後、アリコートをウェルから取り出し、細菌寒天プレートに播種した（５％Ｈｙ−Ｙｅａｓｔ抽出物［Ｋｅｒｒｙ  Ｂｉｏ−Ｓｃｉｅｎｃｅ］、１０％Ａｎｉｍａｌ−Ｆｒｅｅ  Ｓｏｙｔｏｎｅ［Ｔｅｋｎｏｖａ］、５％ＮａＣｌ  ［Ａｍｅｒｉｃａｎｂｉｏ］、及び１．４％寒天［Ａｍｅｒｉｃａｎｂｉｏ］以降、ＨｙＳｏｙ寒天又はＨＳＡと呼ぶ）。ＨＳＡで一晩インキュベートした後、ＣＦＵをカウントした。免疫血清で処理した細菌のＣＦＵが、免疫前血清の同様の希釈液のＣＦＵから減少すると、陽性のＯＰＫ応答が得られる。
【０５３８】
図１８Ａは、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株ＫＰ１２−０５８１（Ｏ１：Ｋ６２）のＯＰＫを、ＨＬ−６０細胞並びに第２の免疫前後のＫＰ−Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ（左）及び第２の免疫前後のＫＰ−Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ／リザビジンＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ（右）に対するウサギ抗血清と比較する。同じウサギからの免疫前血清（Ｐ０）と比較した場合、ＢＰ−２ａ免疫血清（Ｐ２）で有意なＫＰ死滅が観察された。これらの構築物で得られたＯ１−ＯＰＳ特異的ＩｇＧ力価、すなわち相対的力価に関してＢＰ−２ａ＞ＢＰ−１と一致して、ＢＰ−１免疫血清では有意な死滅は観察されなかった。
【０５３９】
ＨＬ−６０細胞を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ６のＯＰＫ、及び二価のＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０−ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ及び一価のＰＡ  ＩＡＴＳＯ６  −ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ抗血清を図１８Ｂに示す。個々の２匹のウサギＰ２血清（ＡＦＶ６２４；ＡＦＶ６２５）からＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０−ＢＰ−１  ＭＡＰＳは、ＰＡ  ＩＡＴＳＯ６の有意なＯＰＫを生成し（左パネル）、ＰＡ  ＩＡＴＳＯ６−ＢＰ−１  ＭＡＰＳに対するウサギ免疫後血清（Ｐ２）は、ＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ６の有意なＯＰＫを産生したが、血清ＡＦＶ６４３（Ｐ２）は、強力なＯＰＳ抗体力価を示唆するプロゾーン効果を産生した。
【０５４０】
２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０  ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ−ＭＡＰＳワクチンで生成された４つの個々のウサギ免疫血清（Ｐ２）は、ＨＬ−６０細胞を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）Ｏ１０細菌の堅牢なＯＰＫを誘導した（図１８Ｃ）。
【０５４１】
プールウサギ抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｈｉｓ抗血清及びＨＬ−６０細胞を含む標的株緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）株ＰＡＯ１（Ｏ５：発現ＦｌａＢ）のＯＰＫを図２２に示す。この実験では、抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｈｉｓ抗血清によって誘発されたＯＰＫ（最大１／１００希釈）がいくらかあった。強力なＯＰＫは、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ワクチン及び抗シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌａＢ血清で生じたヒトＩＶＩＧに登録した。（−）対照血清はＯＰＫを誘発しなかった。
【０５４２】
ヒトＰＭＮを用いたＯＰＫアッセイ
アッセイは、修正を加えて以前に記載されたように実行した（Ｃｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）。手短に言えば、デキストラン沈降及びフィコール・ハイパック密度勾配遠心分離により健康なヒトドナーから新たに単離された多形核白血球（ＰＭＮ）を使用して、９６ウェルプレートでアッセイを実行した。ストックＰＭＮ溶液は、カルシウム／マグネシウムを含むＨＢＳＳで２３×１０６細胞／ｍｌに調整した。６０μｌのＰＭＮストックを、様々な希釈液の１０μｌの熱不活化免疫前又は免疫後血清の存在又は不在下で、１０〜２０μｌの仔ウサギ補体又は新鮮な正常ヒト血清（ＮＨＳ）、１０μｌの細菌（ＭＯＩで約１０６ＣＦＵ〜１：１）とともにマイクロタイターウェルに加える。時間０のサンプルが得られ、希釈され、ＨｙＳｏｙプレートに播種され、９６ウェルプレートが３７℃で２時間振とうしながらインキュベートされる。２時間後、サンプルを再度取得し、希釈し、播種する。３７℃で一晩インキュベートした後、プレートをカウントする。各ウェルの２時間カウントは、０時間カウントで除算され、％死滅は１．０−Ｔ２ｈＣＦＵ／Ｔ０ＣＦＵで計算する。あるいは、本発明者らは、各ウェルのＣＦＵをｌｏｇ  ＣＦＵに変換し、０時間カウントからｌｏｇ  ＣＦＵカウントから２時間サンプルからｌｏｇ  ＣＦＵカウントを減算し、死滅の差を「デルタｌｏｇ  ＣＦＵ」として表す。次いで、本発明者らは、免疫前及び免疫後血清のウェルの死滅を、抗体なしの対照と比較する。
【０５４３】
フローサイトメトリーベースの結合アッセイ
対数期中期の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及び肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株をＰＢＳで濃縮してＯＤ６００を０．８にした。多糖類抗原については、抗体を加える前に細菌を１％ホルムアルデヒドで固定した。タンパク質抗原の場合、細胞表面抗原を保存するために、抗体を加える前に細菌をホルムアルデヒドで固定しなかった。細菌をウサギ免疫前血清／免疫血清の様々な希釈液とともに室温で１時間インキュベートした。細菌を遠心分離してペレット化し、ＰＢＳで洗浄して未結合の抗体を除去し、洗浄した細胞をＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と室温で１時間インキュベートした。細菌をペレット化し、ＰＢＳで洗浄することにより、結合していない二次抗体を除去した。免疫染色された細菌は、生存生物を死滅させるために１％ホルムアルデヒドで固定した。サンプルをＬＳＲ  ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ）に注入し、ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａ（ｖ．６．１．３；ＢＤ）及びＦｌｏｗＪｏ（ｖ．９．２；Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）を使用して分析した。
【０５４４】
Ｋ−１９：Ｏ１−及びＯ５−ＯＰＳ  ＢＰ−１、並びにＢＰ−２ａ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ抗血清を含むクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｂ５０５５株（Ｏ１：Ｋ２）へのＦＣ結合を図１９Ａに示す。２価ＫＰ  Ｏ１、Ｏ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１（＃６５１−６５５）（左）及びＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ（＃６６６−６７０）（右）への個々のウサギ血清を含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）細菌株Ｂ５０５５全体へのＦＣ結合。
【０５４５】
表１０に示すように、細菌全体でのこれらのＦＣ結合結果は、精製ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳに対応するＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ力価とよく相関し、すなわち、低力価は低ＦＣ結合に対応し、少数の二重陽性事象は、ＫＰ  Ｂ５０５５表面での抗体の結合が弱いか、又はＯＰＳ抗体のアクセスが制限されていることを示す。
【表１０】
2020525540.tif 000031
【０５４６】
図１９Ｂは、ＦＣ結合散布図を、ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ複合体で生じたウサギ抗血清（ＡＦＶ６６７）を含む３つのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｏ１株と比較し、上部パネルで観察されるのは、ＫＰ  Ｂ５０５５への弱いＦＣ結合（左）、Ｋ．カロリ（Ｋ．ｃａｒｏｌｉ）への弱い結合（中央）、及びカプセル化されていないＫＰ  ＣＶＤ  ３００１への強い結合（右）である。下部パネル（図１９Ｂ）では、２価ＫＰ  Ｏ１、Ｏ５  ＯＰＳ  ＢＰ−１（ＡＦＶ６５１）ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ及び一価ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳで生じたウサギ血清（ＡＦＶ６６７）をワクチン接種したウサギの血清間で、同じ３つのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）  Ｏ１株に対するＦＣ総結合事象を比較している。注目すべきは、対応するＢＰ−１  ＯＰＳよりもＯ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ構築物と結合するＦＣ抗体が有意に多く、これらのデータはＯ１  ＯＰＳに対するＩｇＧの力価と相関するようである、すなわち、ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２ａは、その同等のＢＰ−１よりも免疫原性が高い。これらの結合データは、ＣＰＳの量が成長条件によって影響を受ける可能性のある抗体ＯＰＳ曝露に影響することも示唆している。
【０５４７】
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細菌株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）全体に結合するＦＣ抗体の比較を図２０に示す：これは２価ＰＡ−Ｏ６、−Ｏ１０天然ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ−ＭＡＰＳに対するウサギ血清（３匹のウサギのプール血清、第２の免疫後）（左）；２価ＰＡ  Ｏ６、Ｏ１０−ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ血清（３匹のウサギのプール血清、第２の免疫後）（中央）；一価ＰＡＯ６−ＩＡＴＳ−ＯＰＳ  ＢＰ−１−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ血清（３匹のウサギのプール血清、第２の免疫後）；を有し、ＰＡＯ６  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳは、ＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ  ＭＡＰＳの天然形態と比較した場合、ＰＡＫ株へのより強いＦＣ抗体の結合が観察され、これは、その免疫原性に重要なＯＰＳの最小サイズがあり、すなわち、天然ＰＡ  ＯＰＳサイズが小さすぎるため、骨格多糖類への化学結合により拡大して、そのエピトープの価数及びそのサイズを増加させる必要があることを示す。
【０５４８】
ＦｌａＢエピトープを含有する様々なリザビジンＦＰ変異体で生じた個々のウサギ抗ＦｌａＢ抗体のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＯ１（ＦｌａＢを発現するＯ５）への結合をＦＣにより調べ、表１１に要約した。閾値を超える結合率（％）及び免疫前血清（Ｐ０）対第３の免疫後（Ｐ３）血清の高い結合率は、融合タンパク質抗原に対する３つの個々のウサギ血清について示されている。これらの結合データは、リザビジンＦｌａＢ−Ｄ２及びＦｌａＢ−ＰｃｒＶ融合タンパク質が強力な抗体結合を誘導し、ＦｌａＢ鞭毛を発現するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＯ１全体を認識できることを実証し、これは、これらの２つのタンパク質が、正しい折り畳みで産生され、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細菌全体の天然の鞭毛Ｂエピトープに特異的にＦｌａＢ抗体を誘導することができたことを示す。抗ＲｈａｖｉＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質血清は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌株ＰＡＯ１全体で鞭毛を有意に（又はせいぜい不十分に）認識せず、これはリザビジン構築物のＦｌａＢ部分が適切に折り畳まれていないか、又はフロイントアジュバントによるタンパク質単独免疫として評価された場合のＭｒｋＡとの融合タンパク質の文脈では十分に免疫原性ではなかったことを示す。
【０５４９】
表１１にリストされている個々のウサギ血清（＃７９２、＃７９８、＃８００）のいくつかのＦＣ散布図も図２１Ｂに示され、（上部パネル）個々のウサギ＃７９２（Ｐ３出血）血清のリザビジンＦｌａＢ−Ｄ２への強いＦＣ結合を示し；（中央パネル）ウサギ血清＃７９８（Ｐ３出血）のリザビジンＦｌａＢ−ＰｃｒＶへの中間ＦＣ結合を示し；（下部）個々のウサギ血清＃８００（Ｐ３出血）のリザビジンＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡへのＦＣの結合不良を示す。図２１Ａでは、リザビジンＦｌａＢ−ドメイン２融合タンパク質（ＴＬ５結合領域を欠いている）で免疫したウサギからのウサギ血清のプール（Ｐ３）は、免疫前（Ｐ０）と比較して標識シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＯ１集団（散布図右パネル）の割合（％）が高いことを示す。
【表１１】
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【０５５０】
これらのＥＬＩＳＡ及びＦＣ結合データは、リザビジンＦｌａＢ−ドメイン２及びリザビジンＦｌａＢ−ＰｃｒＶなどのＦｌａＢを含有するリザビジン融合タンパク質を、適切な折り畳みで産生して、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌全体で天然の鞭毛Ｂを認識できる機能的抗体を誘導できるという概念を裏付ける。
【０５５１】
運動性及び運動阻害アッセイ
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１株（Ｏ５：ＦｌａＢ発現）は、ＨｙＳｏｙブロスで対数期中期まで増殖した。細菌を遠心分離によりペレット化し、ＰＢＳで０．３のＯＤ６００読み取り値に懸濁し、次いでＰＢＳで１００倍希釈した。軟寒天を、フラジェリンに対して上昇させた抗血清の様々な希釈液の存在又は非存在下で２４ウェルプレートに注いだ。抗血清希釈は３連のウェルで実行した。火炎針を細菌懸濁液に浸し、次いで寒天プラグの中心に接種するために使用した。プレートが、細菌が寒天の表面を横切る接種部位から広がるまで、３０℃で１４時間以上インキュベートした。プレートの画像をデジタルカメラで撮影して、細菌コロニーの直径を記録した。抗フラジェリン血清を含む寒天上のコロニーのサイズが免疫前血清に対して著しく減少した場合、陽性の運動阻害試験結果が得られる。
【０５５２】
リザビジンＦｌａＢ構築物：Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２；Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ；及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡでワクチン接種したウサギからの血清のＥＬＩＳＡ及び対応する運動阻害力価を表１２に要約する。この表では、第３目の免疫（Ｐ３）後抗血清のＦｌａＡ１及びＦｌａＢに対するＥＬＩＳＡ力価が示され、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１（Ｏ５：ＦｌａＢ発現）を使用したそれぞれのＰ３抗血清の運動阻害力価も示される。抗ＦｌａＢ抗体のレベル（ＥＬＩＳＡ力価）と対応する運動阻害力価、すなわち、ＰＡＯ１の高レベルの運動阻害を誘導する高力価のＦｌａＢ特異的抗体を有するＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２及びＲｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ抗血清の両方との間に良好な相関関係があり、一方、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質構築物は、フロイントのアジュバントによるタンパク質単独免疫として評価された場合、おそらく構築物中のＦｌａＢタンパク質成分の不適切な折り畳み又はＭｒｋＡとの融合タンパク質の文脈での免疫応答の欠如のいずれかによるＦｌａＢ抗体の低レベルによるものではなかった。
【表１２】
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【０５５３】
細胞毒性アッセイ（シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶタンパク質構築物用）
アッセイは以下のように実行した。手短に言えば、細菌分泌系タンパク質ＰｃｒＶに対して生じたウサギ抗血清を、平底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｓｔａｒ）に播種したＡ５４９細胞に加えた。すべての抗血清及び細菌の希釈は、抗生物質を含まないＲＰＭＩ培地で実行した。ＥｘｏＵを発現できる対数期の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＫ株をおよそ１０のＭＯＩで加え、３７℃／５％ＣＯ２で２時間インキュベートし、その間にＡ５４９細胞は中毒になり、生存できなくなった。各ウェルの生細胞数は、生体色素であるニュートラルレッドの細胞取り込みによって推定される（シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）はアラマーブルーも代謝するため、使用できない）。各ウェルの生細胞の割合は、ニュートラルレッドの吸光度を測定し、これらの値を細菌に曝露されていない細胞と比較することで推定される。このアッセイの陽性試験は、免疫前血清の同等の希釈と比較して、ＰｃｒＶ抗血清が生細胞（すなわちニュートラルレッドを取り込むことができる細胞）の数を増加させた場合に生じる。
【０５５４】
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）細菌による細胞毒性の予防モデル（Ｗａｒｒｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）を使用して、抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ  ＦＴウサギ抗体の効力を試験し、これを図２４Ａに示す。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）による中毒からのＡ５４９（肺癌）細胞の抗ＰｃｒＶ抗体保護は、以下のようにして得られた。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ融合タンパク質をワクチン接種したウサギ（３のプール、第３の免疫後、Ｐ３）の１０％血清の存在下で、Ａ５４９単層にシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫ（Ｏ６：ＦｌａＡ１）を４時間感染させた。抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ血清は、丸い細胞及び剥離した細胞が少ないことからわかるように、免疫前血清と比較して、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫによる中毒から細胞を保護した。以下の実験（図２４Ｂ）では、Ａ５４９単層細胞に、様々な希釈液の血清抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（プール３、Ｐ３）の存在下で、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株ＰＡＫを４時間感染させた。細胞をＰＢＳで洗浄して、ニュートラルレッドと１時間インキュベートした。細胞を溶解し、各ウェルの色素吸光度を記録した。抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ（Ｐ３）血清は、１〜４０に希釈した免疫前血清と比較して、細胞をＰＡＫ中毒から保護した。
【０５５５】
理論に縛られることを望まないが、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ＰｃｒＶに対する応答のポリクローナル性及び融合タンパク質内でのその構成が、融合タンパク質のＰｃｒＶ成分に対する抗体の親和性の増加の理由になり得る。Ａ５４９細胞及び抗ＦｌａＢ−ＰｃｒＶウサギ血清（第３の免疫後、Ｐ３）を使用したこの細胞毒性アッセイで、いくつかのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株を試験した（図２５）：非常に毒性の高いＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ１（黒菱形）、細胞毒性からの血清保護は観察されなかった；細胞毒性ＰＡ  Ｍ−２  Ｏ５株（黒丸）でも血清保護はなかった；非細胞毒性のＰＡ  ＩＡＴＳ  Ｏ６（黒三角）では、毒性は見つからなかった；細胞毒性ＰＡ  １７００２（Ｏ１０）（黒四角）では、明確な血清保護があった；株による血清保護のこれらの変動は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株のＰｃｒＶ標的の発現及びレベルを反映している可能性がある。
【０５５６】
細胞付着アッセイ
Ａ５４９細胞へのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の付着は、いくつかの修正を加えて、記載されているように（Ｃｌｅｍｅｎｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）アッセイした。線毛タンパク質ＭｒｋＡに対して生じたウサギ抗血清をＲＰＭＩ緩衝液（サプリメントなし）で希釈し、９６ウェルプレートに播種したＡ５４９細胞に加えた。等量の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｏ５株６９９７（１０４ＣＦＵ／ｍｌ）を抗血清希釈液と混合した。感染した細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、ウェルを滅菌ＰＢＳで６回洗浄して未結合の細菌を除去した。細胞をＰＢＳ中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で溶解し、溶液のアリコートをＨＳＡに播種した。プレートを一晩インキュベートし、ＣＦＵの数を数えた。免疫前血清の等希釈と比較して、付着性クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の数がＭｒｋＡ抗血清で減少すると、陽性のアッセイが得られる。
【０５５７】
抗Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡウサギ血清によるクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ５  ６９９７（南アフリカ原産）のＡ５４９細胞への付着のブロックを図２３に示す。高力価Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ（第３の免疫後、Ｐ３）特異的血清は、ＫＰ  ６９９７株のＡ５４９細胞への結合を最大１／１０００の希釈まで有意に阻害したが、免疫前血清（Ｐ０）はそうではなかった。これは、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ  ＦＰのＭｒｋＡタンパク質成分が適切に折り畳まれており、ＫＰ細菌の表面にある天然ＭｒｋＡに特異的な機能的ブロッキング抗体を誘発できることを示した。第２の実験は、２つのＭｒｋＡリザビジン融合タンパク質Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ及びＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡによる免疫によって得られた個々の抗ＭｒｋＡウサギ抗血清を使用して行われ、その結果を表１３に要約する。すべてのＭｒｋＡ  ＦＰウサギ血清（１つの＃８０４を除く）は、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｏ５株６９９７のＡ５４９細胞への付着を低減することができ、これは、これら２つのリザビジンＦＰが機能的なＭｒｋＡ特異的抗体を誘発する可能性があることを示す。
【表１３】
2020525540.tif 000034
【０５５８】
ＭｒｋＡ抗体応答アッセイ
ＭｒｋＡ／３型線毛を発現するクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）は、抗ＭｒｋＡ抗体により凝集し、細菌をクラスター化し、溶液から脱落させる。Ｒｈａｖｉ−ＭｒｋＡ−ｈｉｓ、Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ−ｈｉｓ、又はＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡ−ｈｉｓ担体タンパク質を接種したウサギからの免疫前又は免疫血清を評価した。クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）４４２５株（Ｏ５：Ｋ５７）は、９６ウェル丸底マイクロタイタープレートで２５℃で１時間、ＰＢＳで希釈した血清とインキュベートした。プレートを静かに振って、非凝集細菌を懸濁させた。各ウェルからの上清を慎重に取り出し、新鮮なマイクロタイタープレートに移し、６００ｎｍでの光散乱を測定して溶液の濁度を評価した。抗体が誘導された凝集による上清中の細菌数の減少を示す抗体を含まない対照ウェルの吸光度から吸光度が減少した場合、肯定的な結果が得られる。アッセイの結果は、６００ｎｍでの吸光度の差で測定される場合、免疫前血清よりも免疫血清により肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が凝集した最高抗体希釈（最低濃度）として記録する。
【０５５９】
肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株Ｏ５Ｋ５７、株４４２５及びＯ１  Ｋ２２、１７０３８１株の様々なＭｒｋＡリザビジン融合タンパク質構築物に対するウサギ抗血清の凝集の評価：Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ及びＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡを表１４に要約する。第２（Ｐ２）及び第３（Ｐ３）の免疫後の各構築物に特異的な３つの個々のウサギ抗血清の力価は、凝集が検出可能な最高の血清希釈である。この実験では、凝集した塊を沈降させ、残りの（凝集していない）細菌量を光学密度（ＯＤ）６００ｎｍで測定した。２つの構築物Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄ２−ＭｒｋＡ及びＲｈａｖｉ−ＰｃｒＶ−ＭｒｋＡによって誘導されたＭｒｋＡ特異的抗体は、両方のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株で発現したＭｒｋＡを認識し、これは、これら２つの融合タンパク質のＭｒｋＡ成分が適切に折り畳まれ、機能的な抗体応答を生成することを示す。
【表１４】
2020525540.tif 000035
【０５６０】
例８：緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の熱性傷害及び菌血症のマウスモデル
熱性傷害及び菌血症モデルは、修正を加えて記載されているように実行した（Ｎｅｅｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。熱性傷害については、１１週齢のＣＤ−１非近交系マウスの背部を剃毛し、ケタミン及びキシラジンで麻酔した後、１×１．５インチの開口部を有する耐熱性ポリマーカードテンプレートに曝露した。このプラットフォームは、全身の表面積が１２〜１５％の熱性傷害を引き起こすように設計した。エタノール（０．５ｍｌ  １００％）が、窓で囲まれた背中の領域に均等に広がり、点火され、正確に１０秒間燃焼し、次いで吹き消される。熱傷の直後に、マウスに水和のために０．５ｍｌの滅菌生理食塩水を与える。次いで、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を熱傷の下にＳＣ注射する。傷は覆わないままとする。動物は、死亡及び臓器細菌量（すなわち、遠隔播種）について、感染後１４日間、綿密に監視される。
【０５６１】
抗シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＦｌａＢウサギ抗体の効力を評価するために、熱傷敗血症マウスモデルを使用した（Ｃｒｙｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）。このモデルでは、ＣＤ１マウスを上記のように火傷させ、２８ＣＦＵの緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｍ２株（Ｏ５：ＦｌａＢ）（熱傷感染ＬＤ５０＜１×１０２）を熱傷に注射した。ＣＤ−１マウスに、熱傷の抗原投与の前にＰＢＳ、免疫前、又は抗ＦｌａＢ血清をＩＰ注射した。図２６のカプラン・マイヤー生存プロットに示すように、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）株Ｍ−２を発現するＦｌａＢでの創傷の抗原投与から１０日間以上、抗ＦｌａＢによってマウスを保護したが、他の群からのすべてのマウスは創傷の抗原投与で死亡した。
【０５６２】
菌血症モデルでは、７週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）又は緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のＩＶ抗原投与の２４時間前にＩＰ投与することにより、対照ＩｇＧ又はワクチン誘導抗体で治療する。生物に応じて、動物を、血液からのクリアランスを監視するために１〜４時間以上の間隔で採血し、感染後１〜２４時間でマウスを安楽死させ、肝臓及び脾臓を採取する。
【０５６３】
例９：マウス保護アッセイ
クリアランス及び臓器細菌量マウスモデル
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染を予防するＫＰ  ＯＰＳ特異的抗体の能力は、クリアランス及び臓器細菌量マウスモデルで試験した。ＣＤ１マウス（３群）に、ＫＰＯ１  ＢＰ−２ａ  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ血清をＩＰ投与し、次いでクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｂ５０５５  Ｏ１（９×１０４ＣＦＵ）で抗原投与（ＩＶ）した。脾臓ＫＰ生菌カウントを抗原投与の１４時間後に測定した。免疫前血清（Ｐ０）を受けたマウスの脾臓と比較して、免疫血清（Ｐ２）を受けたマウスの脾臓におけるＫＰ生菌カウントの有意な減少が観察された（図２７）。このデータは、ＯＰＳ  ＢＰ−２ａ  ＭＡＰＳワクチンによって誘導されたＯ１  ＯＰＳ特異的抗体が、マウスの脾臓から生物を除去する能力を有するため、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して保護的であることを示す。
【０５６４】
サリチル酸ナトリウムで増殖したＫＰ（Ｏ１：Ｋ２）
肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｂ５０５５株（Ｏ１：Ｋ２）を２．５ｍＭサリチル酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含有するＨｙＳｏｙブロスで一晩増殖させて、ＣＰＳの発現を低下させた（Ｄｏｍｅｎｉｃｏ，１９８９）。２．５ｍＭサリチル酸ナトリウムを含む１２ｍｌのＨｙＳｏｙブロスに５％の一晩培養物を接種し、次いで対数期中期（３７℃、振とう）まで増殖させた。細菌を遠心分離によりペレット化した後、滅菌ＰＢＳに再懸濁して、およそ１×１０８ＣＦＵ／ｍｌの濃度にした。濃縮された細菌は、ＰＢＳで２×１０５ＣＦＵ／ｍｌに希釈した。０．１ｍｌのウサギ血清のＩＰ投与の１時間後、雌マウスＣＤ−１、８〜１２週齢のマウスに０．１ｍｌ中の２×１０４ＣＦＵ  Ｂ５０５５をＩＰで感染させた。マウスの死亡率を７日間監視した。
【０５６５】
実験１では、２×１０４のＫＰ  Ｏ１  Ｂ５０５５生物でＩＰ抗原投与する１時間前に、ＣＤ１マウスに０．１ｍｌのＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１；ＢＰ−２ａ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳウサギ又はＨＫ  ＫＰ  Ｏ１：Ｋ２ウサギ抗血清（１／１０希釈）をＩＰで与えた。実験の結果を表１５に要約する。
【表１５】
2020525540.tif 000036
【０５６６】
実験１では、陽性対照ＨＫ  ＫＰ  Ｏ１細菌及びＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−２  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ抗血清は、ＫＰ  Ｏ１：Ｋ２（Ｂ５０５５）抗原投与に対する完全な保護を提供したが、ＰＢＳ対照及びＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ抗血清はマウスを保護しなかった。
【０５６７】
実験２では、ＣＤ１マウス（５／群）に２×１０４のＫＰ  Ｏ１  Ｂ５０５５細菌によるＩＰでの細菌抗原投与の前に、ＩＰで０．１ｍＬのプールウサギ免疫又は免疫前血清を与えた。マウスは、それぞれ陰性及び陽性対照としてＰＢＳ及びＫＰ  Ｏ１  ＨＫ血清（１／１０希釈）を受けた。すべてのＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ血清は、ＢＰ−２ａを受けたマウス（５匹中４匹）が抗原投与で有意に優れて生存するが、モデルで保護を得ることができた。ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ血清により、５匹中２匹のマウスが生存し、ある程度の保護が得られた。ＰＢＳを受けたマウスは、いずれも抗原投与により生存しなかった。これらの生存結果はよく一致しており、抗ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ特異的ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ力価のレベルと非常によく相関している（すなわち、より高いレベルの抗体でより良いレベルの保護が観察された）。
【０５６８】
マウスモデルでのシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌に対する受動的保護
シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染を予防するＰＡ  ＯＰＳ特異的抗体の能力は、Ｄ−ガラクトサミンとともにＰＡ株１７００２（Ｏ１０）によるＣＤ１マウス抗原投与ＩＰを使用して動物をエンドトキシン（Ｇａｌａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９７９）の致死作用に感作して、それらを感染の影響をより受けやすくする受動的保護生存マウスモデルで試験した。（１×１０６ＣＦＵ）及びＤ−ガラクトサミンで抗原投与する１時間前に、マウスは、ウサギ抗２価ＰＡ  Ｏ６／Ｏ１０  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ（ウサギＡＦＶ６２４又はＡＦＶ６２９、ＩＰ投与）を受けた。結果を表１６に要約する。この保護研究では、ＰＡ  Ｏ６／Ｏ１０  ２ｖ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ免疫血清（ＡＦＶ６２４；Ｐ２）は、免疫前血清（ＡＦＶ６２４  Ｐ０）と比較してＰＡ  Ｏ１０株１７００２に対して４０％超のマウスを保護した。同様に、ＰＡ  Ｏ６／Ｏ１０  ２ｖ  ＢＰ−１  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ免疫血清（ＡＦＶ６２９；Ｐ２）は、免疫前血清（ＡＦＶ６２９  Ｐ０）と比較してＰＡ  Ｏ１０株１７００２に対して４０％超のマウスを保護した。熱殺菌されたＰＡ  Ｏ１０細菌で生じた高力価のウサギ抗血清陽性対照は、ＰＢＳ対照に対して有意な保護を与えた。一部のウサギからの免疫前血清は、ＰＢＳ（ＡＦＶ６２４  Ｐ０）と比較してある程度の保護を提供し得る。ＥＬＩＳＡ（表１６）で測定した場合、保護レベル（生存）とワクチン誘発性ＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ特異的ＩｇＧ抗体のレベルとの間には、ある程度の相関関係があるようである。
【表１６】
2020525540.tif 000037
図２８は、莢膜発現を減らすためにサリチラートで増殖させたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）Ｂ５０５５株（Ｏ１：Ｋ２）での感染の前に、ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳに対するウサギ血清を投与されたマウスの受動的保護のカプラン・マイヤー生存率を示す。ＣＤ１マウス（５／群）にＩＰで０．１ｍＬのウサギ免疫（Ｐ２）又は免疫前（Ｐ０）血清のプールを２×１０４ＣＦＵクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株Ｂ５０５５（Ｏ１：Ｋ２）でＩＰ細菌抗原投与する前に与えた。Ｐ０又はＰ２  ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ血清を受けたマウスのカプラン・マイヤー生存プロットを示す。Ｐ２血清は、ＫＰＯ１  ＢＰ−１  ＯＰＳ−ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳ抗血清を受けたマウスの割合が高いモデルで保護され、Ｐ０血清を投与したマウスに対して長期間にわたって生存した。
【０５６９】
例１０：例示的な多価免疫原性組成物
例示的な４価ＫＰワクチン
４つの異なる免疫原性複合体を別々に調製し、次いで一緒に配合して、例示的な４価ＫＰワクチンを調製した。
【０５７０】
各複合体には、ＫＰ単一細菌血清型から酸化Ｋ１９多糖類へのＯＰＳのコンジュゲーション、それに続くＫ１９多糖類のビオチン化によって調製されたＢＰ−１ポリマーが含まれた。次いで、これらをリザビジン融合担体タンパク質と複合体化した。これらの各複合体の成分の詳細を表１７に示す。
【表１７】
2020525540.tif 000038
【０５７１】
これらの４つの複合体は、以下の表２１で詳述するように、アジュバントとともに配合された。
【０５７２】
例示的な８価ＰＡワクチン
８つの異なる免疫原性複合体を別々に調製し、次いで一緒に配合して、例示的な８価ＰＡワクチンを調製した。
【０５７３】
各複合体には、単一のＰＡ細菌血清型から酸化Ｋ１９多糖類へのＯＰＳのコンジュゲーション、それに続くＫ１９多糖類のビオチン化によって調製されたＢＰ−１ポリマーが含まれた。次いで、これらをリザビジン融合担体タンパク質と複合体化した。これらの各複合体の成分の詳細を表１８に示す。
【表１８】
2020525540.tif 000039
【０５７４】
これらの８つの複合体は、以下の表２１で詳述するように、アジュバントとともに配合された。
【０５７５】
例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１
１２個の異なる免疫原性複合体を別々に調製し、次いで一緒に配合して、例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１を調製した。
【０５７６】
各複合体には、酸化Ｋ１９多糖類へのＯＰＳのコンジュゲーション、それに続くＫ１９多糖類のビオチン化によって調製されたＢＰ−１ポリマーが含まれた。次いで、これらをリザビジン融合担体タンパク質と複合体化した。これらの各複合体の成分の詳細を表１９に示す。
【表１９】
2020525540.tif 000040
【０５７７】
これらの１２個の複合体は、以下の表２１で詳述するように、アジュバントとともに配合された。
【０５７８】
例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２
１２個の異なる免疫原性複合体を別々に調製し、次いで一緒に配合して、例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２を調製した。
【０５７９】
各複合体には、酸化Ｋ１９多糖類へのＯＰＳのコンジュゲーション、それに続くＫ１９多糖類のビオチン化によって調製されたＢＰ−１ポリマーが含まれた。次いで、これらをリザビジン融合担体タンパク質と複合体化した。これらの各複合体の成分の詳細を表２０に示す。
【表２０】
2020525540.tif 000041
【０５８０】
これらの１２個の複合体は、以下の表２１で詳述するように、アジュバントとともに配合された。
【０５８１】
例１１：緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）／肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１２価ワクチンのウサギ免疫研究
動物の免疫
ウサギの免疫前に、例示的な４価ＫＰワクチン、例示的な８価ＰＡワクチン、例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、及び例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２を注射のおよそ４８時間前にアジュバントとともに配合した。複合体は、４℃で一晩転倒混合による４０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、及び１．２５ｍｇ／ｍｌリン酸アルミニウムゲルとの単一又は多価混合物として、各血清型ＢＰ−１の５μｇＰＳ用量については１０μｇ／ｍｌ、１μｇＰＳ用量については２μｇ／ｍｌの最終濃度でアジュバントに吸着した。これらの配合混合物を、用量あたり０．５ｍｌの体積で免疫に直接使用した。例示的な４価ＫＰワクチン、例示的な８価ＰＡワクチン、例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、及び例示的な１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２の組成物の要約を表２１に提供する。
【表２１】
2020525540.tif 000042
【０５８２】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１を治療群５及び６（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶを担体タンパク質として）に投与し、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２を治療群１及び２（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡを担体タンパク質として）に投与した。比較のために、８価ＰＡワクチン又は４価ＫＰワクチンを受けた２つの追加治療群がこの研究に含まれた。治療群３は８価ＰＡワクチンを受け、治療群４は４価ＫＰワクチンを受けた。群１、３、４、及び５は、ワクチンで５μｇの各多糖類（ＰＳ）を受け、治療群２及び６は、ワクチンで各ＰＳ１μｇの低用量を受けた。すべてのワクチンには、アジュバントとして同じ量のリン酸アルミニウムが含有された（６２５μｇ）。
【０５８３】
２回のＩＭ免疫（０．５ｍｌ）を４週間間隔で生後４ヶ月のニュージーランドホワイトウサギに投与した（Ｃｏｃａｌｉｃｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、１群あたりｎ＝１０）。血液サンプルは、第１の免疫の４週間後及び第２の免疫の２週間後に収集した。
【０５８４】
ＯＰＳに対する免疫応答
４価ＫＰワクチンと比較した１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＫＰ  ＯＰＳに対する免疫応答
図２９は、４価ＫＰワクチン（５μｇ用量、治療群４）と比較して、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（５μｇ用量、治療群５）で免疫したウサギからのプール血清のＫＰ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す。
【０５８５】
すべてのＫＰ  ＯＰＳワクチンの血清型（及びＫＰ１９  ＣＰＳ）に対する堅牢なＩｇＧ応答が実証され、４価ＫＰワクチンの各ＫＰ  ＯＰＳ型と、対応する各１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＫＰ  ＯＰＳ  ＩｇＧ力価のそれぞれとの間に力価の有意差はなかった。１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で誘導されるＫＰ  ＯＰＳ応答はわずかに良好になる傾向がある。これらの結果は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に含まれる追加の８  ＰＡ  ＯＰＳと組み合わせた場合、４価ＫＰワクチンの各ＫＰ  ＯＰＳに対する免疫応答にマイナスの干渉がないことも示す（すべてＢＰ−１  ＭＡＰＳとして調製）。
【０５８６】
８価ＰＡワクチンと比較した１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＰＡ  ＯＰＳに対する免疫応答
図３０は、８価ＰＡワクチン（５μｇ用量、治療群３）と比較して、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（５μｇ用量、治療群５）で免疫したウサギからのプール血清のＰＡ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す。
【０５８７】
ＫＰ  ＯＰＳ応答で観察されたように、すべてのＰＡ  ＯＰＳワクチン血清型に対する堅牢なＩｇＧ応答が実証され、８価ＰＡ  ＭＡＰＳワクチンの各ＰＡ  ＯＰＳタイプと、対応する各１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＰＡ  ＯＰＳ  ＩｇＧ力価との間に力価の有意差はなかった。これらの結果は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（すべてＢＰ−１  ＭＡＰＳとして調製）で追加の４  ＫＰ  ＯＰＳと組み合わせた場合、８価ワクチンの各ＰＡ  ＯＰＳに対する免疫応答にマイナスの干渉がないことを示す。また、１回の免疫（Ｐ１）後の各ＰＡ  ＯＰＳに対する堅牢なＩｇＧ応答が実証され、第２の免疫（Ｐ２）後は有意な増加はなかった。
【０５８８】
２つの異なる用量レベルでの１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に対する免疫応答
図３１は、ワクチン（治療群６）中のＢＰの各タイプが寄与した１μｇＰＳで１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１と比較したワクチン用量（治療群５）のＢＰの各タイプが寄与した５μｇＰＳで１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清のＰＡ  ＯＰＳ  ＩｇＧエンドポイントＥＬＩＳＡ力価の結果を示す。
【０５８９】
１回の免疫（Ｐ１）又は２回の免疫（Ｐ２）後に５μｇ用量及び１μｇ用量の治療群を比較した場合、第２の免疫でＩｇＧ応答が改善されたＫＰ  Ｏ３を除き、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１については、ＰＡ及びＫＰ  ＯＰＳに対するＩｇＧ力価の有意差は観察されなかった。
【０５９０】
第１の免疫（Ｐ１）の２８日後及び第２の免疫（Ｐ２）の１４日後の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の個々のＩｇＧ  ＯＰＳ特異的ＥＬＩＳＡ力価を図３２及び図３３に示す。５μｇ用量（図３２）及び１μｇ用量（図３３）での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１について、すべての１２  ＯＰＳワクチン血清型及びＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳに対する堅牢なＩｇＧ応答が実証される。しかしながら、堅牢ではあるが、ＯＰＳ  ＫＰＯ２、及びＫＰＯ３に対するＩｇＧ応答の大きさは、特に第１の免疫後でＫＰＯ１及びＫＰＯ５に対する応答ほど大きくない。最高の応答はＫＯ  Ｋ１９で観察された。
【０５９１】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に対する抗ＯＰＳ  ＩｇＧの個々のｘ倍誘導の比較は、５μｇ用量の治療群で実行した。結果を図３４に示す。２つの外れ値を除いて、すべての動物は、各ＯＰＳ血清型について、ベースライン（Ｐ２／Ｐ０）を超えるＥＬＩＳＡ力価の少なくとも４倍の誘導を示した。平均として、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のすべてのＯＰＳ血清型について２０倍の誘導を超えた。最高の誘導はＫＯ  １９で観察された。
【０５９２】
図３５は、５μｇ及び１μｇ用量の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のベースライン（Ｐ２／Ｐ０）を超える抗ＯＰＳ  ＩｇＧ  ＥＬＩＳＡ力価の個々のｘ倍誘導の比較結果を提供する。興味深いことに、１μｇ用量治療群からのすべての動物は、５μｇ用量治療群についてすでに説明したように、ベースラインより少なくとも４倍の増加を示した。１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に含まれるすべてのＯＰＳ血清型のＩｇＧ力価の平均ｘ倍の増加は、動物に投与された５μｇ及び１μｇのすべてのＯＰＳ血清型のベースラインを２０倍以上超えている。両方の用量レベルでＫＯ  Ｋ１９で最高のｘ倍誘導が観察され、ＫＰ  Ｏ２及びＫＰ  Ｏ３で最低のｘ倍誘導が観察された。
【０５９３】
２つの異なる用量レベルでの１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２に対する免疫応答
図３６は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２で免疫したウサギからのプール血清の第１のワクチン接種（Ｐ１）２８日後及び第２のワクチン接種（Ｐ２）１４日後のＫＰ／ＰＡ  ＯＰＳ応答の比較結果を示す。驚くべきことに、５μｇ用量治療群では、ワクチンは、ＫＰ  Ｏ２及びＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳを除いて、第１の免疫後にすべてのＯＰＳ血清型に対して堅牢なＩｇＧ応答を誘導し、第２の免疫後に力価の有意な増加はなかった。これらのＯＰＳ血清型については、第２の免疫で力価が有意に増加した。ＯＰＳ  ＩｇＧ応答は、低用量で免疫原性応答が少ないＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳを除いて、５μｇ及び１μｇ用量治療群と同等である。
【０５９４】
第１の免疫（Ｐ１）の２８日後及び第２の免疫（Ｐ２）の１４日後の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２の個々のＩｇＧ  ＯＰＳ特異的ＥＬＩＳＡ力価を図３７及び図３８に示す。５μｇ用量（図３７）及び１μｇ用量（図３８）での１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２について、すべての１２  ＯＰＳワクチン血清型及びＫＰ  Ｋ１９  ＣＰＳに対する堅牢なＩｇＧ応答が実証される。各ＯＰＳ血清型の力価は、第２のワクチン接種の１４日後にさらに増加した。しかしながら、ＫＰ  Ｏ３を除き、この増加の大きさは顕著ではなかった。１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で観察されたように、５μｇ用量治療群と１μｇ用量治療群との間の免疫応答の差はわずかであった。ＯＰＳ血清型ＫＯ  Ｋ１９で最高の力価が観察され、ＫＰ  Ｏ２及びＫＰ  Ｏ３で最低の応答が観察された。
【０５９５】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２のＯＰＳ免疫応答結果の概要
プールされたウサギ血清中の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のすべてのＰＡ  ＯＰＳに対する抗ＯＰＳ免疫応答は、８価ＰＡ  ＭＡＰＳワクチンの免疫応答と同等であった。
【０５９６】
プールされたウサギ血清中の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のすべてのＫＰ  ＯＰＳに対する抗ＯＰＳ免疫応答は、４価ＫＰ  ＭＡＰＳワクチンの場合と同様又はわずかに良好であった。
【０５９７】
ベースラインを超えるおよそ２００倍の増加がＰＡ  ＯＰＳ抗体で観察され、ベースラインを超えるおよそ５０倍の増加がＫＰ  ＯＰＳ抗体で観察された。
【０５９８】
プール血清のＢＰ用量治療群あたり５μｇＰＳ及びＢＰ用量治療群あたり１μｇＰＳの抗体は、ＫＰ  Ｏ３を除いて、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２で同様である。
【０５９９】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＢＰ用量治療群あたり５μｇＰＳ及びＢＰ用量治療群あたり１μｇＰＳの個々の血清の分析は、ＫＰ  Ｏ２及びＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳへの応答を除き、単一の免疫後のすべてのＫＰ及びＰＡ  ＯＰＳに対する堅牢な応答、第２の免疫後がほとんど増加せず、第２の免疫によりＩｇＧ抗体力価が有意に増加したことを実証する。
【０６００】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２のＢＰ用量治療群あたり５μｇＰＳ及びＢＰ用量治療群あたり１μｇＰＳの個々の血清の分析は、ＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳへの応答を除き、単一の免疫後のすべてのＫＰ及びＰＡ  ＯＰＳに対する堅牢な応答、第２の免疫後がほとんど増加せず、第２の免疫によりＩｇＧ力価が有意に増加したことも実証する。
【０６０１】
担体タンパク質の性能
担体タンパク質に対する抗体応答
ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶを担体タンパク質として含む１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、並びにＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡを担体タンパク質としてのみ含む１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２によって誘導される担体タンパク質抗体応答を評価した。個々のウサギの担体タンパク質に対する応答は、免疫前（Ｐ０）レベルのＥＬＩＳＡ  ＩｇＧ単位として表され、１回の免疫（Ｐ１）及び２回の免疫（Ｐ２）後に得られる。担体タンパク質に対する個々のウサギＩｇＧのＥＬＩＳＡ分析は、コーティング抗原として対応する個々の組換えタンパク質成分（すなわち、ＦｌａＢＤ２、ＭｒｋＡ、及びＰｃｒＶ）を使用して決定した。各分析では、ワクチン１及び２の担体タンパク質成分に対する応答を、８価ＰＡ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡワクチン及び４価ＫＰ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡワクチンに対する応答と比較した。ワクチン用量及び治療群の詳細を表２１に提供する。
【０６０２】
（ａ）異なる担体タンパク質のＥＬＩＳＡ結果
ＦｌａＢ−Ｄ２のＥＬＩＳＡ  ＩｇＧ力価の結果を図３９に示す。第１の免疫後、ＩｇＧ力価の堅牢な増加が観察され、その後、比較されたすべての群で第２の免疫後、力価の第２の増加が続いた。各ワクチン接種後の抗体のレベルは、すべての群間、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１と１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２と、及び８価ＰＡワクチンと４価ＫＰワクチンとの２つの異なる用量群（ワクチン組成物中に存在する各タイプの複合体が寄与する合計１μｇ又は５μｇのＰＳ、例えば、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及びワクチン２組成物中に存在する合計１２μｇ又は６０μｇのＰＳ）で同様であった（両方ともワクチン中の５μｇの各ＰＳ、例えば、それぞれワクチン中に存在する合計４０μｇ又は２０μｇのＰＳ）。
【０６０３】
ＭｒｋＡのＥＬＩＳＡ  ＩｇＧ力価の結果を図４０に示す。ＦｌａＢＤ２で観察されたように、ＩｇＧ力価の堅牢な増加が第１の免疫後に観察され、各群、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１と１２価のＫＰ／ＰＡワクチン２と、及び８価ＰＡワクチンと４価ＫＰワクチンとの２つの異なる用量群（ワクチン中の各タイプの複合体が寄与する１μｇ又は５μｇのＰＳ）で同様の増加を伴うすべての群で第２の免疫後にさらに上昇した（両方ともワクチン中の各タイプの複合体が寄与する５μｇのＰＳ）。
【０６０４】
図４１は、ワクチン中の１μｇ及び５μｇの各ＰＳで１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫後のＰｃｒＶに対する抗体応答の結果を示す。ＩｇＧ応答は、第１の免疫後に堅牢であり、第２のワクチン接種後に力価がさらに増加した。しかしながら、応答は２用量群の間で同様であった。
【０６０５】
１回の免疫（Ｐ１）及び２回の免疫（Ｐ２）後の免疫前（Ｐ０）レベルに対する力価のＥＬＩＳＡｘ倍変化として表された、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶを担体タンパク質として含む１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡを担体タンパク質として含む１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２、８価ＰＡワクチン（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）、及び４価ＫＰワクチン（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）に誘導される担体タンパク質応答を図４２に示す。
【０６０６】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の３つの担体タンパク質ＦｌａＢＤ２、ＭｒｋＡ、及びＰｃｒＶのそれぞれに対して、第１の免疫後の３０倍以上の変化及び第２の免疫後の５００倍の変化を伴う堅牢な応答が実証された。５μｇ用量群と１μｇ用量群との間で、３つのタンパク質に対する免疫原性に有意差は観察されなかった。
【０６０７】
２つのタンパク質成分のそれぞれに対する堅牢なＩｇＧ応答は、１回の免疫後にすでに観察され、２つの融合タンパク質成分ＦｌａＢＤ２、及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２のＭｒｋＡが３０倍を超えて増加した。追加の有意な増加が第２の免疫後に観察され、１０００倍を超えて増加した。５μｇ用量群と１μｇ用量群との間でＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡのｘ倍の変化に有意差は観察されなかった。
【０６０８】
８価ＰＡワクチン又は４価ＫＰワクチンを受けた群間で、２つの成分ＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡに対する免疫原性に有意差は観察されなかった。しかしながら、これらの応答は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２群及び８価ＰＡワクチン群の応答と比較して、４価ワクチン群でわずかに低かった。
【０６０９】
（ｂ）３つの研究にわたる異なる担体タンパク質に対するＩｇＧ応答のｘ倍変化の比較
ＦｌａＢに対するＩｇＧ応答のｘ倍変化の比較は、３つのウサギの免疫原性の研究：ＮＣＢ００７、ＮＣＢ００８、及びＮＣＢ０１２で調べられた。ＮＣＢ００７では、６価ＰＡ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ（ＰＡ  Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ６、Ｏ１０、及びＯ１１  ＯＰＳを含有する）の５μｇ用量を、同等の６価ＰＡ  ＦｌａＢ−ＰｃｒＶと比較し、ＮＣＢ００８では、４価（Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５）ＫＰ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡの５μｇ用量を４価ＫＰ  ＦｌａＢ−ＰｃｒＶと比較し、ＮＣＢ０１２では、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡを含む１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２の５μｇ用量を、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶと比較した。すべてのワクチンはＢＰ−１足場型であった。ｘ倍の変化としての結果を図４３、図４４、及び図４５に提供する。
【０６１０】
図４３は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２に対する応答が最も増加したＦｌａＢに対するＩｇＧ応答のｘ倍の変化を示す。第１の免疫後には良好な応答がすでに観察され、第２の免疫後にはさらに増加した。ＮＣＢ００８の４価ＫＰ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及び４価ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ複合体に対する応答は、第１の免疫後に良好な応答を示し、ＦｌａＢＤ−２−ＭｒｋＡの第２の免疫後はほとんど増加せず、ＦｌａＢ−ＰｃｒＶの免疫後は基本的には応答しなかった。ＦｌａＢに対する貧弱な応答は、最初の免疫後のＮＣＢ００７の６価ＰＡ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡでも観察されたが、第２のワクチン接種後には有意な増加が誘発された。ＮＣＢ００７でのＦｌａＢ−ＰｃｒＶへの応答は、第１の免疫後に堅牢であり、第２の免疫後に追加の増加はなかった。
【０６１１】
図４４は、ＮＣＢ００８の４価ＫＰ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＮＣＢ００７の６価ＰＡ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡに対する応答と比較した場合の、ＮＣＢ０１２の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のベースラインからの変化が最も高い応答を有するＭｒｋＡに対する応答を示す。第１及び第２のワクチン接種後、ＮＣＢ００８でＭｒｋＡの応答はほとんど観察されなかったが、ＭｒｋＡに対する堅牢な応答が、第１の免疫後に６価ＰＡ  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡで観察され、第２の免疫後にさらに増加した。
【０６１２】
図４５は、ＰｃｒＶに対するＩｇＧ応答のｘ倍の変化を示しており、第１及び第２の免疫後の研究ＮＣＢ０１２で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１が最も増加している。ＮＣＢ００８の４価ＫＰ  ＦｌａＢ−ＰｃｒＶ研究では、ＰｃｒＶへの応答はほとんど観察されなかった。ＮＣＢ００７研究では、第１及び第２の免疫後に、ＰｃｒＶに対する堅牢な応答が観察された。
（ｃ）結果の概要
・１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２について、３つすべての担体タンパク質に対する堅牢なＩｇＧ抗体応答が実証された。
・担体タンパク質に対する応答は、１μｇ及び５μｇの用量群で同様であった。
・１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の場合、３つの担体タンパク質のそれぞれに対して生成されるｘ倍の増加は、およそ５００〜１０００倍であった。
・ナイーブな動物では、第１の用量と第２の用量との間で一貫したブースティングがあった。理論に縛られることを望まないが、ナイーブでない成人では、１用量後、７〜１０日以内にほぼ最大の応答が期待される。
・４価ＫＰワクチンで免疫した動物でＭｒｋＡ及びＰｃｒＶに対する応答が低いという以前の問題は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１又は１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２で免疫した動物では観察されなかった。
【０６１３】
ＦｌａＢ２のみを含有する担体タンパク質のＴＬＲ５アゴニスト生物活性の欠如
図１２Ｂは、ＮＦ−ｋＢ駆動型ルシフェラーゼレポーターを発現するＨＥＫ２９３細胞を使用したＦｌａＡ及びＦｌａＢタンパク質を含有する融合タンパク質及びＭＡＰＳ複合体のＴＬＲ５生物活性を示す。フラジェリンＴＬＲ５の活性化は、レポーター発現のアップレギュレーションを引き起こす。
【０６１４】
図４６に示すように、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶのルシフェラーゼアッセイからのデータで実証されているように、ＦｌａＢドメイン２（ＦｌａＢＤ２）のみを含有するＫＰ／ＰＡ  ＭＡＰＳ担体タンパク質は、ＴＬＲ５アゴニスト生物活性を欠いていることが見出された。ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶは、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の２つの担体タンパク質である。
【０６１５】
ＦｌａＢ対照及び融合タンパク質Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ｈｉｓは、強力なＴＬＲ５アゴニスト生物活性を示したが、ＦｌａＢＤ２、ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ、及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶはすべてＦｌａＢドメイン２（ＦｌａＢＤ２）のみを含有し、このアッセイでは活性を示さなかった。
【０６１６】
ＦＡＣＳによる結合の幅及び非ＯＰＳワクチン株の凝集
ＯＰＳワクチン血清型ではないＫＰ及びＰＡ株は、フローサイトメトリー及び凝集アッセイで試験し、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に対する抗体の適用範囲の幅を研究した。
【０６１７】
表２２は、各ＢＰ−１の５μｇ用量で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清（ＡＦＶ１５０２−１５１１）で得られた非ＯＰＳ  ＫＰ株のＦＡＣＳ結合及び細菌凝集の結果を示す。試験した１４株のうち１２株は、凝集におけるＰ０及びＰ２血清による認識に明らかな違いを示し、１：１００の血清希釈でフローサイトメトリーにより測定した細菌結合の増加を示した。
【表２２】
2020525540.tif 000043
【０６１８】
表２３は、各血清型ＢＰ−１の５μｇ用量で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清（ＡＦＶ１５０２−１５１１）による非ＯＰＳ  ＰＡ株のＦＡＣＳ結合及び細菌凝集の結果を示す。フラジェリンＢについては、７株のうち６株が凝集し、７株のうち７株がフローサイトメトリーにより抗体結合を示した。フラジェリンＡ１の場合、４株のうち３株がフローサイトメトリーにより抗体結合を示した。フラジェリンＡ２の場合、４株の抗体認識の証拠は観察されなかった。
【表２３】
2020525540.tif 000044
【０６１９】
非ＯＰＳワクチン血清型である１４のＫＰ株及び１５のＰＡ株を試験し、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１に対してウサギで生成された抗体の適用範囲の幅を決定した。要約すれば：
・誘発された抗体は、１４の非ＯＰＳ  ＫＰ血清型株のうち１２に結合して凝集する：
・ＭｒｋＡ遺伝子を含有しない血清型は抗体に結合しなかった。
・これらの株への結合は、ＭｒｋＡ指向性抗体による可能性が高い
・誘発された抗体は、１５の非ＯＰＳ  ＰＡワクチン血清型のうち１０を結合する：
・ＦｌａＢの菌株とＦｌａＡ１の一部の菌株で結合が発生した
・結合は、ＦｌａＢ指向抗体及びＦｌａＡ１との交差反応性による可能性が最も高い
・担体タンパク質（ＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡ）に対する抗体は、非ＯＰＳワクチン血清型の適用範囲の幅を拡大する。
【０６２０】
担体タンパク質に対する抗体によって誘発される動物の受動的保護
マウスで受動的保護を誘導する担体タンパク質の可能性は、表２４に詳述されているように、抗Ｏ１血清及び抗ＭｒｋＡ血清を使用したクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｂ５０５５（Ｏ１：Ｋ２）による熱傷感染モデルで評価した。
【０６２１】
結果は、カプセル化されたＫＰ株に感染した動物の死を予防することにおけるＭｒｋＡ（ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ）の保護的役割の傾向があることを示す。抗原投与後６日目に、動物の６０％（３／５）は、まだ生存していた。この実験では、ＯＰＳ  Ｏ１抗体は感染に対して保護しなかった。
【表２４】
2020525540.tif 000045
【０６２２】
ワクチン製剤における２つの担体タンパク質の性能の概要
・１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１及び１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２の担体タンパク質ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶは、ＫＰ／ＰＡ  ＯＰＳの堅牢な担体であることが実証された。
・１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ及びＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ、並びに１２価ＫＰ／ＰＡワクチン２のＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡに強い抗タンパク質応答が見られた。
・１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の担体タンパク質に対する抗体は、非ＯＰＳワクチン血清型の適用範囲の幅を拡大する。
・ＦｌａＢドメイン２（ＦｌａＢＤ２）のみを含有するＦｌａＢの実験設計と一致して、ＦｌａＢＤ２融合担体タンパク質のＴＬＲ５アゴニスト活性の完全な除去が実証された。
・マウスのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染の熱傷モデルにおける最初の抗原投与の結果は、ＭｒｋＡに対する抗体の保護傾向を示す。
【０６２３】
例１２：緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）／肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１２価ワクチン機能アッセイ
オプソニン食作用性殺傷（ＯＰＫ）アッセイ
ヒト好中球ＯＰＫアッセイ
莢膜欠損ＫＰ血清型Ｏ２（ＫＰ  Ｏ２  Ｋ−）７３８０株を使用して、５μｇ用量（ＮＣＢ０１２、表２１）で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で生じたプールウサギ血清（Ｐ２）の機能的応答を評価するために、ヒト好中球オプソニン食作用性殺傷（ＯＰＫ）アッセイを使用した。ＯＰＫアッセイの結果を図４７に示す。
【０６２４】
免疫血清は、２４時間のインキュベーション後、１／１０希釈でＫＰ  Ｏ２細菌を１００％殺傷したが、１／１００希釈では細菌の殺傷活性はなかった。血清の殺傷活動は、ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳもしくはＭｒｋＡ、又は２つのワクチン成分の組み合わせに起因する可能性がある。
【０６２５】
Ｊ７７４マクロファージ細胞株ＯＰＫアッセイ
このＯＰＫアッセイは、抗生物質ゲンタマイシンの存在下又は非存在下でＪ７７４マクロファージ細胞株を使用して機能的活性を評価する。いくつかの抗生物質は真核細胞に浸透できない。したがって、これらの抗生物質はすでに内在化した細菌を傷つけることはできない。そのような抗生物質を使用すると、真核細胞への浸透に成功した細菌とそうでない細菌とを区別することが可能になる。細菌に感染した真核細胞の培養にそのような抗生物質を適用すると、細胞の外側に残っている細菌を殺傷し、侵入した細菌を温存する。このアッセイに最適な抗生物質は、アミノグリコシドゲンタマイシンである。
【０６２６】
ＮＣＢ０１２で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の５μｇ用量を受け、最も高いＯＰＳ力価（１５０２、１５０６、１５０８、１５１１）を示した治療群５のウサギからのプールウサギ血清がＪ７７４マクロファージ細胞ラインＯＰＫアッセイで使用され、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株ＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ２、ＫＰ  Ｏ３、及びＫＰ  Ｏ５の食作用性取り込みに対する血清の効果を評価する。
【０６２７】
実験の２４時間前に、Ｊ７７４マクロファージ細胞を９６ウェルプレートに播種した。様々なＯ型のクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株をブロスの対数期中期まで増殖させ、プールした血清を殺傷アッセイで使用した。およそ１×１０５ＣＦＵ細菌を、プールされた免疫前（Ｐ０）又は免疫（Ｐ２）血清とともに３０分間インキュベートした。オプソニン化された細菌は、室温で１５分間Ｊ７７４細胞とインキュベートされ、この時間は、抗体を介した食作用を可能にするのに十分な時間である。非結合細菌を細胞から除去し、新鮮な緩衝液±５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンをさらに２０分間加えた。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、純水を加えて溶解した。１０ｍｌを各ウェルから二重に播種し、コロニー形成単位（ＣＦＵ）を翌日にカウントした。
【０６２８】
このアッセイの結果を図４８Ａ及び４８Ｂに示す。１／２０、１／１００、及び１／５００希釈の免疫血清又は免疫前血清でオプソニン化されたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）のＪ７７４細胞の食細胞による取り込みは、免疫血清の存在下及びゲンタマイシンの存在下でのＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ２、ＫＰ  Ｏ３、及びＫＰ  Ｏ５の取り込みの増加を実証する（図４８Ａ）。ＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ２、ＫＰ  Ｏ３の１／１００希釈で最高の取り込みが観察された。ＫＰ  Ｏ５の場合、取り込みは１／２０及び１／１００の希釈で同様であった。
【０６２９】
ゲンタマイシンの非存在下では、細菌の取り込みが少ない免疫前と比較した場合、Ｊ７７４細胞によるＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ３及びＫＰ  Ｏ５の有意な取り込みもＰ２血清で観察された。ＫＰ  Ｏ２の場合、ＣＦＵカウントが高すぎてカウントできないため、結果は表示されない（図４８Ｂ）。ＫＰ  Ｏ１及びＫＰ  Ｏ３の場合、より高い希釈で取り込みが減少し、ＫＰ  Ｏ５の場合、１／１００希釈で最大の取り込みが観察され、１／２０希釈でわずかに低い取り込み、１／５００希釈で最も低い取り込みが観察された。
【０６３０】
ＮＣＢ０１２の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１の５μｇ用量を受け、最も高いＯＰＳ力価（１５０２、１５０６、１５０８、１５１１）を示したウサギからのプール血清も、Ｊ７７４マクロファージ細胞株ＯＰＫアッセイで使用され、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）  ＰＡ（Ｏ５：ＦｌａＢ及びＯ６：ＦｌａＡ１）及びクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ５株（６９９７株）の両方の貪食性取り込みに対する血清の効果を評価した。アッセイは、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）株ＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ２、ＫＰ  Ｏ３、及びＫＰ  Ｏ５のＪ７７４  ＯＰＫ試験に関して上記のように実行した。
【０６３１】
このアッセイの結果を図４９、５０、及び５１に示す。図４９に実証するように、免疫血清（Ｐ０）は食細胞によるこれらの各細菌株の取り込みを媒介した。マクロファージ様Ｊ７７４細胞による細菌の取り込みは、図５０に示すように、ＧＦＰ標識ＰＡ（ＰＡ  Ｏ１、ＰＡ  Ｏ５  ＦｌａＢ）を使用した顕微鏡検査によってさらに示される。免疫血清に曝露されたＰＡは、細胞に熱心に取り込まれた。各Ｊ７７４細胞の複数のＰ２処理ＰＡ分離株を図５０の拡大図に示す。図５１は、免疫血清で処理した細胞では、免疫前血清で処理した細胞と比較して、細胞の割合が高く（左パネル）、細胞あたりの細菌数が多い（右パネル）ことが観察されたことを示す。
【０６３２】
ＨＬ−６０  ＯＰＫアッセイ
このタイプのアッセイでは、ＫＰ  Ｏ２株７３８０細菌を最初に血清でオプソニン化し、次いで、分化したＨＬ−６０細胞を混合物に加えた。混合物を４５分間インキュベートした後、生菌をカウントした。ＯＰＫ力価は、陰性対照（細菌＋ＨＬ−６０細胞のみ）に対して５０％未満の細菌が生存する力価として定義された。
【０６３３】
図５２及び表２５は、ＫＰ  Ｏ２  ７３８０株及び５μｇ用量の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清を用いたＨＬ６０  ＯＰＫアッセイの結果を示す。抗ＫＰ  Ｏ２熱殺菌（ＨＫ）ウサギ血清は、免疫前及び免疫後に陽性対照として機能した。血清の１／２００〜１／２０４，８００希釈液を使用してアッセイを実行した。
【０６３４】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからの血清は、ＫＰ  Ｏ２株７３８０に対して有意なＯＰＫ活性を示すが、対応する免疫前血清は細菌の死滅においてはるかに低い効果を示した。殺傷活動は、ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ抗体もしくはＭｒｋＡのいずれか、又は両方に起因する可能性がある。免疫前及び免疫後の血清並びに陽性対照のＯＰＫ力価の詳細を表２５に示す。免疫前血清（１／８００）と免疫後血清（１／１２，８００）との間の殺傷活動に有意差（１５倍超の増加）があった。
【表２５】
2020525540.tif 000046
【０６３５】
ＫＰ  Ｏ５株６９９７株を使用して、同様のアッセイを実行した。細菌をＮＣＢ０１２からの免疫前（Ｐ０）又は免疫血清（Ｐ２）プールと混合し、補体の存在下でＨＬ−６０細胞に加えた（表２６）。免疫血清の力価が１：１，２８０になると、５０パーセントの生存率の低下が観察されたが、免疫前の血清プールは１：４０の血清希釈でわずかな減少を示した。
【表２６】
2020525540.tif 000047
【０６３６】
異なるＯＰＫアッセイの結論
３つの異なるＯＰＫアッセイを使用して、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１を２回投与した後、ウサギに誘導された抗体の有効性を評価した。ヒトＰＭＮ、Ｊ７７４マクロファージ細胞、又は分化したＨＬ６０細胞のいずれかを使用したアッセイで、ＫＰタイプＯ１、Ｏ２、Ｏ３、及びＯ５血清型に対して有意なＯＰＫ活性を実証することができた。ＯＰＫ活性は、ＯＰＳ特異的抗体及び／又は担体タンパク質ＭｒｋＡに対する抗体のいずれかに起因する可能性がある。１２価免疫血清によって促進される食細胞によるＫＰ及びＰＡの取り込みは、ＯＰＳ抗体が原因である可能性がある。
【０６３７】
細胞毒性からの保護
例７に記載されているプロトコルに従って（シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰｃｒＶタンパク質構築物の細胞毒性アッセイ）、ＭＡＰＳ担体タンパク質に対する免疫応答、又は同じ範囲の血清濃度でこれらの同じウサギからの免疫前血清で生成された抗ＰｃｒＶ抗体を含有する、様々な濃度（１０％、５％、２．５％、又はｎｉｌ）の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン−１免疫ウサギからの血清の存在下で、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ＰＡＫ株（Ｏ６  ＦｌａＡ１）を、一晩増殖させ、ヒト肺上皮由来Ａ５４９細胞の単層に感染させるために使用した。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）誘発Ａ５４９細胞毒性は、細胞がアポトーシスになり、組織培養プレートの表面から剥離する際の細胞の丸みを特徴とする。細胞毒性からの抗ＰｃｒＶ抗体媒介保護は、同様の濃度の免疫前血清で処理した細胞と比較して、所与の顕微鏡視野における丸い（アポトーシス）細胞の数の減少によって示される。免疫血清処理と免疫前血清処理との間の丸い（アポトーシス）細胞の最大差は、２．５％の血清濃度で観察された（図５３、左グラフ）。２．５％血清で処理した代表的なＰＡＫ感染Ａ５４９細胞の顕微鏡写真は、免疫血清処理サンプルの屈折率の高い丸い細胞の数の減少としてこの差を実証する（図５３、右パネル）。同様の画像を使用して、各血清濃度で影響を受けた細胞の数を推定した（図５３、左グラフ）。
【０６３８】
ＦｌａＢに対する抗体を介した緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の運動性の低下
【０６３９】
図５４に示すように、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン−１のＰＳあたり５μｇの用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与した５μｇのＰＳ）で免疫したウサギからのプール血清で処理した細胞は、免疫前血清による治療と比較して、ＦｌａＢに対する抗体によるＰＡ  Ｏ５  ＦｌａＢ株の運動性の低下を示す。
【０６４０】
ＦｌａＢ抗体を介した緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の凝集
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰＡＯ１株（Ｏ５  ＦｌａＢ）を一晩増殖させ、ＰＢＳで１０７ＣＦＵ／ｍｌの濃度に懸濁した後、４価ＫＰワクチンをワクチン接種したウサギからの１％血清又は同じウサギからの免疫前血清と１時間室温でインキュベートした。Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ担体タンパク質に対する免疫応答から生成された血清中の抗ＦｌａＢ抗体は、顕微鏡写真で黒い棒（図５５、右パネル）及び標識された凝集体として見られる細菌のクラスターによって実証されるように、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）を発現するＦｌａＢを凝集させることができたが、免疫前血清で処理した細菌では、そのような凝集体は観察されなかった（図５５、左パネル）。ＦｌａＢＤ２は、このワクチン製剤で唯一のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）抗原であり、架橋細菌の観察は、担体タンパク質が細菌フラジェリンで産生された天然エピトープを認識できる機能的抗体の産生を誘導することを示す。１２価ＫＰ／ＰＡ  ＭＡＰＳワクチン−１で免疫したウサギからの血清は、ワクチン中にないＯ型でシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）を発現するＦｌａＢを凝集させることができ（データは示していない）、これは、担体タンパク質を含有するＦｌａＢＤ２が、１２価製剤で機能的な抗ＦｌａＢ抗体を誘発したが、観察された凝集に寄与するシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）Ｏ型間の交差反応性を排除することはできないことを強く示唆する。
【０６４１】
付着阻害アッセイ
このアッセイでは、ＮＣＢ０１２からのプール血清を使用して、異なる例示的なワクチンに対して生成された抗体応答の付着阻害を評価した。３型線毛発現ＫＰ  Ｏ５株６９９７細菌細胞を免疫前及び免疫血清（１０％）と混合し、Ａ５４９上皮細胞株細胞とインキュベートした。細胞の溶解及び付着細菌数の決定の前に、非付着細菌を細胞から洗浄した。付着阻害により、プレート上のＣＦＵが減少する。図５６は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギのプール血清、８価ＰＡワクチンで免疫したウサギのプール血清（ＭｒｋＡは８価ＰＡワクチンの唯一のＫＰ抗原）、４価ＫＰワクチンで免疫したウサギのプール血清が、Ａ５４９細胞へのＫＰ  Ｏ５株６９９７の付着をブロックした。理論に拘束されることを望まないが、８価ＰＡ  ＯＰＳのみのワクチンで免疫したウサギのプール血清も付着を阻害したため、それは、担体タンパク質によって誘導されたＭｒｋＡ抗体が保護を提供することを示唆している。
【０６４２】
例１３：マウス保護アッセイ
ＫＰ／ＰＡワクチンで免疫したウサギから得た抗血清を用いて、マウスで受動的免疫研究を実行した。表２１は、ウサギの免疫に使用されたワクチン製剤に関する情報を提供する。ウサギの免疫前及び免疫後の血清（プール血清として）は、異なるモデルで説明されているように、マウスの受動的免疫に使用した。異なる抗原投与株の詳細も研究ごとに説明されている。
【０６４３】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギの血清を使用した致死性ＰＡ感染に対するマウスの受動的保護研究
マウスの受動的保護研究は、研究ＮＣＢ０１２の１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１（表２１、群５）のＰＳごとに５μｇの用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与する５μｇのＰＳ）で免疫したウサギからのプール血清を使用して実行した。マウスを免疫前血清又は免疫血清（プールウサギ血清）で前処理し、異なるＰＡ株でＩＰに抗原投与した。
【０６４４】
致死的なＰＡ抗原投与用量では、免疫血清はマウスをＰＡ  Ｏ５及びＰＡ  Ｏ６の感染から保護した。ＰＡ  Ｏ１０及びＯ１１抗原投与で保護する傾向があったが、免疫前血清で処理し、１×１０８ＣＦＵ及び３倍低い用量で抗原投与したマウスの生存率の顕著な差は、多くのグラム陰性細菌の用量反応曲線がどれほど急勾配であるかを示している。これは、これらのアッセイの実行においてしばしば課題を提示する。生存率の詳細を表２７に提示する。
【表２７】
2020525540.tif 000048
【０６４５】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからの血清を使用したクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）  ＫＰ  Ｏ３に対するマウスの受動的保護研究
ＮＣＢ０１２のＰＳあたり５μｇの用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中の各タイプのＢＰが寄与する５μｇのＰＳ）（群５）で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫した４つの最も高い抗ＫＰ−Ｏ３レスポンダー（ウサギ１５０２、１５０６、１５０８、及び１５１１、表２８）からの血清をプールし、０．１ｍｌの５０，０００ＣＦＵでＫＰ  Ｏ３株７００６０３をＩＶ抗原投与する２０時間前及び２時間前にＩＰで注射（免疫前又は免疫血清）した。
【表２８】
2020525540.tif 000049
【０６４６】
抗原投与の４時間後にマウスを安楽死させ、血液、肝臓、及び脾臓を採取し、コロニー数を測定した。結果を表２９に提供する。プール免疫血清を与えられたマウスは、同じウサギからの免疫前血清で処理されたマウスと比較して、肝臓及び脾臓の血液クリアランス及び生菌数の減少を示した。これらの結果は、ＮＣＢ００８研究で４価ＫＰ  ＭＡＰＳで免疫したウサギからの同等の力価の血清を使用した細菌クリアランスについても同様であった。
【表２９】
2020525540.tif 000050
【０６４７】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからの血清を使用したクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ１株Ｂ５０５５に対するマウスの受動的保護研究
この研究では、群あたり３匹のマウスに、ＮＣＢ０１２研究（免疫前及び免疫血清）でＰＳあたり５μｇの用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与する５μｇＰＳ）（表２１、群５）で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清を注射し、続いて、５×１０６のＫＰ  Ｏ１株Ｂ５０５５により静脈内（ＩＶ）抗原投与した。抗原投与後１時間及び４時間での血液クリアランスアッセイの結果を幾何平均ＣＦＵ／ｍｌ血液として表３０にリストし、個々のマウスについて図５７に示す。
【０６４８】
抗原投与の４時間後、免疫血清群のマウスからの血液はＣＦＵ／ｍｌを有意に減少させたが、免疫前血清を受けたマウスのＣＦＵ／ｍｌは上昇したままであった。
【表３０】
2020525540.tif 000051
【０６４９】
これらのマウスにおける脾臓及び肝臓の臓器細菌量の結果は、３匹のマウスの幾何平均ＣＦＵ／ｇ組織として表３１に記載されている。図５８は、抗原投与の２０時間後の３匹のマウスの脾臓及び肝臓の臓器細菌量の結果を示す。
【０６５０】
免疫血清を受けた３匹のマウスのうち２匹は、免疫前血清を受けたマウスと比較して、肝臓の幾何平均ＣＦＵカウントの減少を示した。脾臓の結果は、免疫血清で前処理したマウスで同様のパターンを示し、これは、細菌カウントが有意に多かった免疫前血清を受けたマウスと比較して、抗原投与後２０時間で有意な減少を示している。
【表３１】
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【０６５１】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからの血清を使用したクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ５株６９９７に対するマウスの受動的保護研究
この研究では、群あたり３匹のマウスに、ＮＣＢ０１２研究（表２１、群５の免疫前及び免疫血清）のＰＳあたりの５μｇの用量（例えば、ワクチン中の６０μｇの総ＰＳ；ワクチン中のＢＰの各タイプが寄与する５μｇＰＳ）で１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清を注射し、続いて５×１０６のＫＰ  Ｏ５株６９９７によりＩＶ抗原投与した。抗原投与後１時間及び４時間での血液クリアランスアッセイの結果を平均ＣＦＵ／ｍｌ血液として表３２にリストし、個々のマウスについて図５９に示す。
【０６５２】
抗原投与後４時間で、免疫血清群の３匹中２匹のマウスの血液が細菌を除去し、３匹目のマウスでＣＦＵ負荷が有意に減少したが、免疫前血清を受けたマウスのＣＦＵは、抗原投与後４時間で（３匹のマウス中２匹）上昇したままであった。
【表３２】
2020525540.tif 000053
【０６５３】
これらのマウスの脾臓の臓器細菌量の結果は、３匹のマウスの幾何平均ＣＦＵ／ｇ組織として表３３にリストされており、図６０は、抗原投与後２０時間の３匹のマウスの脾臓の臓器細菌量の結果を示す。
【０６５４】
脾臓については、免疫血清を受けたマウスが、免疫前血清を受けたそれらのマウスよりも抗原投与後２０時間で細菌カウントがはるかに少ないことが観察された。
【表３３】
2020525540.tif 000054
【０６５５】
１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ２（ＫＰＮ  １２株）に対するマウスの受動的保護研究
この研究では、ＣＤ−１マウス（３／群）に０．２ｍｌの免疫前又は免疫血清プール（プールあたり１０匹のウサギ、研究ＮＣＢ０１２）を２×１０５ＣＦＵ  ＫＰ  Ｏ２株ＫＰＮ−１２のＩＶ投与の２４時間及び２時間前に与えた。感染の７２時間後に脾臓を採取し、組織１グラムあたりの細菌量を決定した。免疫血清を受けたマウスは、免疫前血清で処理されたマウスと比較して生菌数の減少を示した（７，９７８対１１４，６８７平均ＣＦＵ；図６１）。プール免疫血清は、循環からのＫＰ  Ｏ２（ＫＰＮ−１２株）のクリアランスを促進した。
【０６５６】
クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ＫＰ  Ｏ２を用いた致死的抗原投与モデルで受動的保護プロトコルを開発及び最適化するために、ＮＣＢ０１２免疫前及び免疫血清を用いたいくつかの実験を行った。他の生物、他のワクチンもしくは免疫原性組成物、及び／又は他の病原体／株の受動的保護プロトコルを開発及び最適化するために、同様の実験を行ってもよい。細菌の抗原投与用量、接種材料の送達（例えば、注射前の細菌のオプソニン化）、並びに受動的保護のための血清の数、タイミング、及び強度（例えば、５μｇ又は１μｇの多糖類用量で生成された血清）などの変数を調べた。試験された例示的なパラメーター及び結果を図６２に示す。
【０６５７】
Ｔｈ１７応答及びＣＤ−１マウスのコロニー形成−抗原投与により
この実験は、ＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡを含む３用量のＫＰ  Ｏ１  ＭＡＰＳワクチンをマウスに投与する能力を決定するために設計され、各用量は前回の用量の１４日後に投与され、最後の免疫の２週間後の細菌抗原投与後の細菌定着を減少させた。ＣＤ−１マウスの２つの群は、細菌抗原投与を受けることになっていた；一方の群はＫＰＯ１／ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ  ＭＡＰＳワクチンで免疫し、他方の群は緩衝液（ＰＢＳ）単独で免疫した。
【０６５８】
群あたり５匹のマウスに３〜５×１０３ＣＦＵ  ＫＰ  Ｂ５０５５（Ｏ１：Ｋ２）を気管内（ＩＴ）で抗原投与した。細菌抗原投与の４８時間後、肺を採取して秤量し、ホモジナートを細菌カウントのために播種し、次いで遠心分離した。上清をＩＬ−１７ａレベルについて評価した。同時に、脾臓を上記のようにＰＢＳ、ＦｌａＢＤ２、及びＭｒｋＡと共培養し、３日後に上清をＩＬ−１７ａレベルについて評価した。
【０６５９】
図６３は、細菌抗原投与後の刺激された脾臓細胞のＩＬ−１７ａ誘導を示す。ＦｌａＢＤ２刺激脾臓細胞に有意な誘導が観察された（ｐ＝０．０２）。
【０６６０】
緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によるＧＩ管定着に対する免疫の効果
以下の実験プロトコルは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）による胃腸（ＧＩ）定着に対する一価ＰＡ  Ｏ６  ＭＡＰＳワクチンによる免疫の効果を調べるために設計された。
【０６６１】
８匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、一価ＭＡＰＳワクチン、ＭＡ６−９３−ＰＡＯ６（肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｋ１９：緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｏ６／Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ−ｈｉｓ  ＢＰ−１）で２週間間隔で０．５ｍｌ  ＳＣにより２回免疫した。７匹のラットを緩衝液単独で免疫した。第２の免疫の１４日後、ラットをセフトリアキソン（５０ｍｇ／ｋｇ  ＩＭ）で治療し、９日間抗生物質を１日１回の用量で継続して受けさせた。ラットには、ＰＡなどの日和見細菌に対するＧＩ管での定着抵抗性を克服するために抗生物質を与え、臨床状況を模倣した。抗生物質単独を４日間投与した後、ラットに強制経口投与により１０８ＣＦＵの緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（ＰＡ、ＩＡＴＳ  Ｏ６）を合計５日間投与した。ＰＡを１日５回の用量及びセフトリアキソンを１日９回の用量後、ラットを安楽死させ、盲腸を摘出し、秤量してから培養した。抗生物質及び細菌を投与する前に抗体レベルについて血液を得て、ＰＡの第１の用量の前日及び２日後にＰＡ培養用の便サンプルを得た。詳細は、図６４の上半分でも確認することができる。
【０６６２】
２用量のＰＡ  Ｏ６  ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ  ＭＡＰＳワクチンを用いたラットでのコロニー形成研究の結果を図６４の下部に示す。ＰＡ  Ｏ６ワクチンを受けたラットは、ＰＢＳを受けたラットよりも高いＥＬＩＳＡ  ＩｇＧ力価を有した（図の左下）。また、ワクチン接種ラットは、中央値が＞１０４ＣＦＵ／ｇを有した対照ラットと比較して、中央値が１０３ＣＦＵ／ｇ未満の細菌を示した（図の右下）。この研究結果は、一価のＰＡ  Ｏ６  ＭＡＰＳワクチンによる２回の免疫後、ＰＡ  Ｏ６の盲腸コロニー形成の減少を示す。
【０６６３】
例１４：Ｇａｌ−ＩＩＩエピトープを発現するカルバペネム耐性ＫＰ（ＣＲＫＰ）株に対する抗ＯＰＳ抗体
他のクラスの細菌性カルバペネマーゼ（例えば、ｏｘａ−４８又はメタロ−ベータ−ラクタマーゼ）とは対照的に、ＫＰＣ（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）カルバペネマーゼ）の広がりは少なくとも部分的にクローン現象であると思われる。配列タイプ（ＳＴ）２５８と称される特定の系統は、いくつかの地理的地域で風土病であるＫＰＣ産生クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染症の大部分の原因であることが示されている。現在、米国北東部の州では、すべての院内肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の３０％超がＣＲＫＰによって引き起こされており、これらの約７０％はＫＰＣ産生ＳＴ２５８クローンに属する。同様に、このクローン（単一遺伝子座ＳＴ変異体を含む）は、イスラエル、ポーランド、イタリア、ギリシャ、南米、及び中国を含む世界の他の地域で流行している。最近、ＳＴ２５８の分子進化の調査により、異なる莢膜多糖類の発現に関連する２つのクレードが特定された（Ｃｈｅｎ  ２０１４ａ、Ｃｈｅｎ  ２０１４ｂ、ＤｅＬｅｏ  ２０１４）。肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＳＴ２５８は、治療選択肢が限られた世界的に普及し、薬剤耐性が非常に高い院内クローンである。
【０６６４】
ＫＰ  Ｏ１及びＫＰ  Ｏ２抗原は、ガラクトースのホモポリマー、すなわちガラクタンで構築されている。ｄ−ガラクタン−Ｉ（ｇａｌ−Ｉ）と称されるＫＰ  Ｏ２抗原は、ガラクトース二糖類の繰り返し単位で構成されている。ＫＰ  Ｏ１の場合、ｇａｌ−Ｉは、血清型特異性を決定するｄ−ガラクタン−ＩＩ（ｇａｌ−ＩＩ）と称される抗原的に異なるガラクトース二糖の繰り返しによってキャップされる。まれな血清型ＫＰ  Ｏ２ａｃは類似の構造を有し、すなわち、ｇａｌ−Ｉサブユニットの繰り返しは、この場合は非ガラクタン繰り返し単位のポリマーでキャップされる。したがって、ＫＰ  Ｏ１、ＫＰ  Ｏ２、及びＫＰ  Ｏ２ａｃ株はすべてｇａｌ−Ｉ抗原を共有するが、ＫＰ  Ｏ２ではこれが唯一のＯ抗原決定基であり、ＫＰ  Ｏ１及びＫＰ  Ｏ２ａｃの場合、ｇａｌ−Ｉは外側の繰り返し単位によってシールドされる。さらに、ｇａｌ−Ｉ二糖繰り返し単位は、ＫＰ  Ｏ２血清型内にサブタイプを生成するＯ−アセチル又はガラクトシル基の化学量論的及び非化学量論的付加によって修飾できる（図６５）。ＳＴ２５８分離株の大部分は変性ｄ−ガラクタン−Ｉリポ多糖類Ｏ抗原を発現し、Ｇａｌ−Ｉが修飾されたガラクトシル基は以降ｄ−ガラクタン−ＩＩＩと称される（Ｓｚｉｊａｒｔｏ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。
【０６６５】
ＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳは、Ｄ−Ｇａｌ−Ｉ又はＤ−Ｇａｌ−ＩＩＩの短い「プライマー」ストレッチと、それに続くＤ−Ｇａｌ−ＩＩの長いストレッチで構成される。ＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳは、Ｄ−Ｇａｌ−Ｉ又はＤ−Ｇａｌ−ＩＩＩのみで構成される（図６５）。Ｇａｌ−ＩＩエピトープは、ＫＰ  Ｏ１血清型にのみ特異的である。
【０６６６】
ＭＡＰＳワクチンのＫＰ  Ｏ１抗原のソースであるＢ５０５５  ＯＰＳは、Ｄ−Ｇａｌ−ＩＩＩの短いストレッチとそれに続く長いＤ−Ｇａｌ−ＩＩポリマーを有する。ＫＰ  ７３８０（ＫＰ  Ｏ２ワクチン抗原のソース）はＤ−Ｇａｌ−Ｉのみを有する。
【０６６７】
調査のために、ＫＰ／ＰＡ  ＭＡＰＳワクチンがＧａｌ−ＩＩＩエピトープに対する抗体を生成する可能性があり、したがってＫＰＣＲ  ＳＴ  ２５８クローン株による感染を予防する可能性があるかどうかを調査した。５μｇ用量の４価ＫＰ  ＰＲＯ−ＣＮ  ＭＡＰＳワクチンで免疫したウサギからのプール血清（Ｐ２）をフローサイトメトリーアッセイで使用して、ＫＰ  Ｄ−Ｇａｌ−ＩＩＩ及びＫＰ  Ｄ−Ｇａｌ−Ｉ発現エピトープに対する結合能力を実証した。この場合、関連する応答は、ＯＰＳが認識したＤ−Ｇａｌ−Ｉ  Ｏ２及びＤ−Ｇａｌ−ＩＩＩ  Ｏ２  ＯＰＳ、Ｄ−Ｇａｌ−ＩＩ  Ｏ１  ＯＰＳのみである。結果は、Ｄ−Ｇａｌ  ＩＩＩ及びＤ−Ｇａｌ  Ｉ  ＯＰＳのＫＰ  Ｏ１及びＫＰ  Ｏ２の両方について、対応する免疫前血清（Ｐ０）よりも結合が増加することを実証した（図６６）。したがって、３つのＫＰ  Ｄ−Ｇａｌタイプすべてに対して抗体が生成された可能性がある。
【０６６８】
表３４及び図６７に提供されるフローサイトメトリー分析は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１で免疫したウサギからのプール血清中の抗体が、菌血症分離株の３つのＳＴ２５８株のうち２つに結合したことを示す。１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１抗血清は、マイナー配列変異体を含むＭｒｋＡ対立遺伝子を有する株を含む、ワクチンに含まれない血清型の４つの株のうち３つに結合した（図６７）。理論に縛られることを望まないが、これらのデータは、１２価ＫＰ／ＰＡワクチン１のＯＰＳ成分の血清型だけでなく、大部分のＫＰ株が、ＭｒｋＡ融合タンパク質成分を介してワクチンによって生じる抗体によって認識されることを示唆している。
【表３４】
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【０６６９】
４価ＫＰ  ＭＡＰＳワクチンのＫＰ  Ｄ−Ｇａｌ−Ｉ及びＤ−Ｇａｌ−ＩＩＩ発現エピトープへの結合能力の結果は、１２価ＫＰ／ＰＡワクチンが、Ｇａｌ−ＩＩＩエピトープに対する抗体を生成し、ＫＰＣＲ  ＳＴ  ２５８クローン株による感染を予防する可能性があることを示す。
【０６７０】
例１５：ＢＰ−１．２の調製
ＢＰ−１は、ＢＰのＣＰＳの側面にのみビオチン残基を配置することで恩恵を受け、これは、製品の特性評価及びＯＰＳエピトープの乱れを最小限に抑える点で有利であり得る。そのような骨格を作製するためのこのプロセスの変種が開発され、これは、アルデヒドではなく多糖類のウロン酸残基のカルボキシラートを使用して、ビオチン残基を直交部位でＣＰＳに結合することに依存する。カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の使用を伴うこの反応は、高度に制御可能であり、ＣＰＳ及び結果として生じるＢＰの一貫したレベルのビオチン化を可能にする。そのような方法で調製されたＢＰはＢＰ−１．２と呼ばれる。ＢＰ−１．２を調製するための例示的なプロセスの概略図を図２Ｂに示す。
【０６７１】
このプロセスのいくつかの利点には、ビオチン誘導体化のレベルをより良く制御し、すべてのＢＰが同じビオチン化ＣＰＳバッチから派生するため、製品の一貫性が向上した一貫したビオチン化プロセスを提供すること、大きなバッチで保存できる安定したビオチン化中間体を提供すること、及び同じ結合部位の競合が少なくなるＣＰＳでより多くのアルデヒド基が利用可能であるため、ＢＰでより高いＯＰＳ／ＣＰＳ比を達成する可能性が含まれる。
【０６７２】
例１６：ＢＰ−１及びＢＰ−１．２免疫原性複合体の免疫研究
４価ワクチンは、ＢＰ−１  ＭＡＰＳ又はＢＰ−１．２  ＭＡＰＳとして調製され、表３５に従って配合された。これらの組成物は、上記のプロトコル、例えば、例６及び１１を使用してウサギに投与された。
【表３５】
2020525540.tif 000056
【０６７３】
ＢＰ−１及びＢＰ−１．２群の両方で、ＫＰ及びＰＡ  ＯＰＳの両方に対する堅牢なＩｇＧ抗体応答が観察された。群１及び群２の個々のＯＰＳ及びＣＰＳ  Ｋ１９  ＩｇＧの力価を図６８に示す。ＰＡ  Ｏ６及びＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳの両方に対する抗ＯＰＳ免疫応答は、ＢＰ−１及びＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物で同等であった。同様に、ＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物を用いたＫＰ  Ｏ３の力価は有意に優れていたが、ＫＰ  Ｏ３及びＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳでも同等の応答が観察された（幾何平均力価でおよそ５〜６倍）。Ｋ１９  ＣＰＳに対するＩｇＧ力価は、ＢＰ−１及びＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物の両方で同等であった。ＦｌａＢ−Ｄ２及びＭｒｋＡ担体タンパク質の両方に対する堅牢なＩｇＧ抗体応答も、ＢＰ−１及び１．２群の両方であった。両方の担体タンパク質に対する抗体応答（プール血清）は、ＢＰ−１及びＢＰ−１．２群の両方で同等であった（図６９）。結果の要約を表３６に示す。
【表３６】
2020525540.tif 000057
【０６７４】
群１及び群２の個々のＯＰＳ及びＣＰＳ  Ｋ１９  ＩｇＧの力価を図６８に示す。ＰＡ  Ｏ６及びＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳの両方に対する抗ＯＰＳ免疫応答は、ＢＰ−１及びＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物で同等であった。同様に、ＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物を用いたＫＰ  Ｏ３の力価は有意に優れていたが、ＫＰ  Ｏ３及びＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳでも同等の応答が観察された（幾何平均力価でおよそ５〜６倍）。Ｋ１９  ＣＰＳに対するＩｇＧ力価は、ＢＰ−１及びＢＰ−１．２  ＭＡＰＳ構築物の両方で同等であった。
ＮＣＢ０１３研究では、ウサギでＢＰ−１（足場−１）とＢＰ−１．２（足場−１．２）２価ＫＰ／ＰＡワクチンとの比較を実行した（ワクチン製剤の説明については表３５も参照）。図７０及び図７１は、それぞれＢＰ−１及びＢＰ−１．２（ＫＰ／ＰＡ４価）に対する２つの担体タンパク質ＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡに対する個々の抗体応答を実証する。両方の足場の両方の担体タンパク質の最初の免疫後に、抗体力価の有意な増加が観察された。抗体力価は、第２の免疫後にさらに増加した。ＢＰ−１及びＢＰ−１．２の両方の群でＦｌａＢＤ２及びＭｒｋＡの両方に対する堅牢な抗体応答が観察され、両方のタンパク質に対する抗体応答はＢＰ−１及びＢＰ−１．２の群で同等であった。
【表３７−１】
2020525540.tif 000058
【表３７−２】
2020525540.tif 000059
【表３７−３】
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【表３７−４】
2020525540.tif 000061
【表３７−５】
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【表３７−６】
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参考文献
2020525540.tif 000064
2020525540.tif 000065
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【０６７５】
等価物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの同等物を認識するか、又は日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲に記載されているものである。
【配列表フリーテキスト】
【０６７６】
配列表４  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表５  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１３  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１４  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１５  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ペプチド
配列表１６  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１７  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１８  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表１９  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２０  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２１  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２２  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２３  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２４  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２５  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表２６  ＜２２３＞人工配列の記載：合成ポリペプチド
配列表３６  ＜２２３＞人工配列の記載：合成６×Ｈｉｓタグ
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
2020525540.tif 000104
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
2020525540.tif 000113
【図１６】
2020525540.tif 000114
【図１７】
2020525540.tif 000115
【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２５】
2020525540.tif 000128
【図２６】
2020525540.tif 000129
【図２７】
2020525540.tif 000130
【図２８】
2020525540.tif 000131
【図２９】
2020525540.tif 000132
【図３０】
2020525540.tif 000133
【図３１】
2020525540.tif 000134
【図３２】
2020525540.tif 000135
【図３３】
2020525540.tif 000136
【図３４】
2020525540.tif 000137
【図３５】
2020525540.tif 000138
【図３６】
2020525540.tif 000139
【図３７】
2020525540.tif 000140
【図３８】
2020525540.tif 000141
【図３９】
2020525540.tif 000142
【図４０】
2020525540.tif 000143
【図４１】
2020525540.tif 000144
【図４２】
2020525540.tif 000145
【図４３】
2020525540.tif 000146
【図４４】
2020525540.tif 000147
【図４５】
2020525540.tif 000148
【図４６】
2020525540.tif 000149
【図４７】
2020525540.tif 000150
【図４８−１】
2020525540.tif 000151
【図４８−２】
2020525540.tif 000152
【図４９】
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【図５０】
2020525540.tif 000154
【図５１】
2020525540.tif 000155
【図５２】
2020525540.tif 000156
【図５３】
2020525540.tif 000157
【図５４】
2020525540.tif 000158
【図５５】
2020525540.tif 000159
【図５６】
2020525540.tif 000160
【図５７】
2020525540.tif 000161
【図５８】
2020525540.tif 000162
【図５９】
2020525540.tif 000163
【図６０】
2020525540.tif 000164
【図６１】
2020525540.tif 000165
【図６２】
2020525540.tif 000166
【図６３】
2020525540.tif 000167
【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
2020525540.tif 000170
【図６７】
2020525540.tif 000171
【図６８】
2020525540.tif 000172
【図６９】
2020525540.tif 000173
【図７０】
2020525540.tif 000174
【図７１】
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【配列表】
2020525540000001.app
【手続補正書】
【提出日】令和2年3月5日(2020.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ポリマー及びポリマーにコンジュゲートされた１つ以上の抗原性多糖類を含む骨格ポリマー；並びに（ｉｉ）ポリマー又は抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化した１つ以上のポリペプチド抗原を含む、免疫原性組成物。
【請求項２】
ポリマーが、グラム陰性又はグラム陽性細菌に由来する莢膜多糖類である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
莢膜多糖類が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）莢膜多糖類、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）菌体外多糖類、及び／又はエシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）莢膜多糖類である、請求項２に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
ポリマーがクレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類である、請求項３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ポリマーが線状ポリ−Ｌ−リジン、又はＬ−リジンのデンドリマーである、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
１つ以上のポリペプチド抗原が、（ｉ）ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類に関連する第１の親和性分子；並びに（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成により、ポリマー又は１つ以上の抗原性多糖類と非共有結合的に複合体化される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
相補的親和性分子対が、ビオチン／ビオチン結合タンパク質、抗体／抗原、酵素／基質、受容体／リガンド、金属／金属結合タンパク質、炭水化物／炭水化物結合タンパク質、脂質／脂質結合タンパク質、及びＨｉｓタグ／Ｈｉｓタグ結合分子からなる群から選択される、請求項６に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
第１の親和性分子が、ポリマー及び／又は１つ以上の抗原性多糖類に架橋又は共有結合している、請求項６又は７に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
１つ以上の抗原性多糖類が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上の多糖類を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ又はそれらの組み合わせを含む、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１、Ｏ１２型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項９に記載の免疫原性組成物。 
【請求項１２】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号２（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）保存ＩＩＩ型線毛タンパク質ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列及び／又は配列番号３の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はそれらの免疫原性断片を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＡ、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＢ、又はそれらの免疫原性断片である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つのポリペプチド抗原が、配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
（ａ）
（ｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類を含むポリマー；及び
（ｉｉ）クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）又はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の多糖類を含む１つ以上の抗原性多糖類
を含む骨格ポリマー；並びに
（ｂ）
（ｉ）ポリマーに関連付けられた第１の親和性分子；及び
（ｉｉ）１つ以上のポリペプチド抗原に関連する相補的親和性分子
を含む少なくとも１つの相補的親和性分子対の形成によりポリマーと非共有結合的に複合体化された１つ以上のポリペプチド抗原
を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ５型の肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＰＳ又はそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
１つ以上の抗原性多糖類が、Ｏ１、Ｏ２、Ｏ３、Ｏ４、Ｏ５、Ｏ６、Ｏ１０、Ｏ１１型の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＯＰＳ、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１５又は請求項１６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
第１の親和性分子がビオチン又はその誘導体であり、相補的親和性分子がビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインである、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
ビオチン結合タンパク質が、リザビジン又はそのビオチン結合ドメインである、請求項１８に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
１つ以上のポリペプチド抗原が、ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン（ＦｌａＢＤ２）、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ、それらの抗原性断片、又はそれらの組み合わせから選択される、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
融合タンパク質が、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン（ＦｌａＢＤ２））の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
融合タンパク質が、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；並びに
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項２６】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；並びに
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項２７】
（ａ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１の免疫原性組成物；
（ｂ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第２の免疫原性組成物；
（ｃ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第３の免疫原性組成物；
（ｄ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＫＰ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第４の免疫原性組成物；
（ｅ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第５の免疫原性組成物；
（ｆ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ２  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第６の免疫原性組成物；
（ｇ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ３  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第７の免疫原性組成物；
（ｈ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ４  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第８の免疫原性組成物；
（ｉ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ５  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第９の免疫原性組成物；
（ｊ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ６  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１０の免疫原性組成物；
（ｋ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１０  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１１の免疫原性組成物；並びに
（ｌ）ビオチン化クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類、クレブシエラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）Ｋ１９莢膜多糖類にコンジュゲートされたＰＡ  Ｏ１１  ＯＰＳ、及びビオチン化骨格ポリマーに非共有結合的に複合体化したＲｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質を含むポリマーを含む骨格ポリマーを含む第１２の免疫原性組成物
を含む、ワクチン組成物。
【請求項２８】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＭｒｋＡ融合タンパク質が、配列番号２４（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−Ｄｏｍａｉｎ２−ＭｒｋＡ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項２９】
Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢＤ２−ＰｃｒＶ融合タンパク質が、配列番号２６（Ｒｈａｖｉ−ＦｌａＢ−ドメイン２−ＰｃｒＶ−Ｈｉｓ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
【請求項３０】
対象への投与時に、免疫原性組成物が、グラム陰性及び／又はグラム陽性細菌に対する免疫応答を誘発する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３１】
免疫応答が抗体又はＢ細胞応答である、請求項３０に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３２】
免疫応答が、Ｔｈ１、Ｔｈ２、もしくはＴｈ１７応答を含むＣＤ４＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答、又はＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である、請求項３０に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３３】
免疫応答が、
抗体又はＢ細胞の応答；及び
Ｔ細胞応答
である、請求項３０に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３４】
グラム陰性細菌がクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、及びそれらの組み合わせから選択される、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３５】
１つ以上のポリペプチド抗原が１つ以上の緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）タンパク質又は変異体を含み、相補的親和性分子がビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメインを含む、請求項６〜３４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３６】
ポリペプチド抗原のうちの少なくとも１つが、配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片を含む、請求項６〜３５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３７】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１１（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ１フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、又は配列番号１２（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＡ２フラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３８】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠くＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜３７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項３９】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、及び配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＩＩＩ型分泌系（ＴＴＳＳ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜３８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４０】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＢ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜３９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４１】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）（ＦｌａＢＤ２）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４２】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号７（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）サブタイプＢフラジェリン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜４１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの相補的親和性分子対が、（ｉ）ビオチン結合タンパク質又はそのビオチン結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）サブタイプＢフラジェリンＤ２ドメイン（ＦｌａＢＤ２））の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び（ｉｉｉ）配列番号２又は配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片を含む融合タンパク質を含む、請求項６〜４２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４４】
対象への投与時に、組成物が、ＭｒｋＡを発現する肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）上の天然ＭｒｋＡを認識する抗体を誘発する、請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物。
【請求項４５】
請求項１〜４４の免疫原性組成物又はワクチン組成物のうちの１つ以上及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４６】
１つ以上のアジュバントをさらに含む、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
アジュバントが、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、リン酸化水酸化アルミニウム、ＴＬＲ２サポニン（ＱＳ２１）又はポリンなどのＴＬＲアゴニスト、及び例えばモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）などのＴＬＲ４アゴニスト、並びにフラジェリンなどのＴＬＲ５などの群から選択される、請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
組成物が注射用に製剤化される、請求項４５〜４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
対象への投与時に、医薬組成物がＴｈ１及び／又はＴｈ１７細胞応答を誘発する、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
対象への投与時に、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上に対するオプソニン／殺菌応答を誘発する、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
対象への投与時に、医薬組成物が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上による粘膜表面の伝播及び／又は定着の速度を低下させる、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
対象への投与時に、医薬組成物が、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、及び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のうちの１つ以上によるＧＩ管の伝播及び／又は定着の速度を低下させる、請求項４５〜５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
（ｉ）請求項１〜４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量、或いは（ｉｉ）請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）感染に対して対象を免疫するための医薬。
【請求項５４】
請求項１〜４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量、或いは（ｉｉ）請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を含む、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対して対象を免疫するための医薬。
【請求項５５】
請求項１〜４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物の有効量、或いは（ｉｉ）請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）感染に対して対象を免疫するための医薬。
【請求項５６】
請求項１〜４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン組成物で免疫された哺乳動物で生じた抗体を含む、抗体組成物。
【請求項５７】
タンパク質及び／又は核酸を含む、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、
１つ以上の細胞成分を酸化試薬及び酸と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５であり、酸化試薬が亜硝酸ナトリウムであり、酸が酢酸である、ステップ；
Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及び
ＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端に遊離アルデヒドを含有する２，５−アンヒドロマンノース残基を含有する、ステップ
を含む、上記方法。
【請求項５８】
タンパク質及び／又は核酸を含む、グラム陰性細菌の１つ以上の細胞成分からＯ抗原多糖類を精製する方法であって、
１つ以上の細胞成分を酸性試薬と接触させて、混合物を得るステップであって、混合物のｐＨが約３〜５である、ステップ、
混合物を約８０℃〜約１００℃に加熱するステップ；
Ｏ抗原多糖類を細胞成分から分離するステップ；及び
ＯＰＳを回収するステップであって、ＯＰＳが他の細胞成分を実質的に含まず、その還元末端にケトンを含有する、ステップ
を含む、上記方法。
【請求項５９】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
Ｏ抗原多糖類を、アルデヒド基を含有する部分酸化多糖類及び一級アミンを含有するビオチンと混合することにより、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、混合物を得ること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項６０】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いで多糖類を酸化剤で処理することにより得られるビオチン化及び酸化された多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合すること；並びに混合物を還元剤で還元的にアミノ化してＢＰ−１．２ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項６１】
一級アミノ基及び少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）並びにビオチンヒドラジドで多糖類のカルボキシラート基を最初に処理して、次いで多糖類をＣＤＡＰで処理することにより得られるビオチン化及びＣＤＡＰ活性化多糖類とＯ抗原多糖類とを混合することによって、Ｏ抗原多糖類一級アミノ基を化学的に結合して、ＢＰ−１．３ポリマー骨格を産生することを含み、多糖類が、ビオチン化され、化学的に結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項６２】
その還元末端にアジド基、及びアルキン基を含有する少なくとも１つのビオチン化多糖類を含む、少なくとも１つの非ビオチン化Ｏ抗原多糖類を含む骨格ポリマーを作製する方法であって、
触媒の存在下で、その還元末端にアジド基を含有するＯ抗原多糖類を、アルキンを含有するビオチン化多糖類と化学的にクリック結合すること、
それにより、ＯＰＳ骨格ポリマーを形成することを含み、多糖類がビオチン化されるが化学的にクリック結合したＯ抗原多糖類がビオチン化されない、上記方法。
【請求項６３】
ビオチン結合ドメイン及び配列番号１６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項６４】
ビオチン結合ドメイン及び配列番号１〜３又は６〜２６のいずれか１つの配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、融合タンパク質。
【請求項６５】
請求項５９〜６２のいずれか一項の方法によって製造される少なくとも１つの骨格ポリマーを、請求項６３又は６４の融合タンパク質のうちの少なくとも１つと複合体化させることを含む、変異体ＭＡＰＳを作製する方法。
【請求項６６】
（ｉ）ビオチン結合タンパク質、
（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌａＢフラジェリンＤ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び
（ｉｉｉ）配列番号３（肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＭｒｋＡ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片
を含む融合タンパク質。
【請求項６７】
（ｉ）ビオチン結合タンパク質、
（ｉｉ）配列番号１０（ＴＬＲ５結合モチーフを欠く緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＦｌｉＣフラジェリンサブタイプＢ  Ｄ２ドメイン）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片、及び
（ｉｉｉ）配列番号８（緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＰｃｒＶ）の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその免疫原性断片
を含む融合タンパク質。
【国際調査報告】
2020525540.tif 000176
2020525540.tif 000177
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