(57)【要約】  （ａ）体外受精を行う場合には複数の卵母細胞、または（ｂ）多排卵胚移植を行う場合には複数の胚のその後の採取を可能にする、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ科および他の雌動物において同期的生育（超刺激）および複数の卵胞の排卵（過剰排卵）を誘発および制御するための簡易化された単回注射方法のための方法および製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウシ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物において過剰排卵を誘発する方法であって、
制御放出薬剤を含む５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスをウシ属の動物に投与する工程
を含み、
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスを前記ウシ属の動物に投与する前記工程は単回投与により行い、かつ
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは前記ウシ属の動物において成熟した卵胞コホートの主席卵胞除去、過剰排卵および同期排卵を誘発することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは少なくとも１種のポリマーを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは有機ポリマーを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ウシ属の動物における前記過剰排卵は、前記ウシ属の動物において少なくとも２つの原始卵胞を刺激して同時に成熟させることを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の０〜２回分の用量を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記制御放出薬剤はＬＨにより前記ウシ属の動物において前記主席卵胞の退行を引き起こす、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記主席卵胞の退行が前記制御放出薬剤の投与直後に開始する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＦＳＨは投与後４８〜１４４時間の間に処方された速度で提供される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記制御放出薬剤は、投与後１４５〜１８２時間の間にＬＨの計算されたサージ（バースト）を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＬＨサージは前記ウシ属の動物において卵胞を引き起こして排卵させる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは注射により投与する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＦＳＨの用量は７５ＩＵである、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＬＨの用量は５０ｍｇである、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量のみを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記制御放出薬剤は性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の単回用量のみを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
ウシ属の動物において過剰排卵を誘発するための薬物製剤であって、
ウシ属の動物への５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスと、
制御放出薬剤と
を含み、
前記薬物製剤はウシ属の動物に投与された場合に前記ウシ属の動物の過剰排卵を誘発することを特徴とする製剤。
【請求項１８】
前記製剤は懸濁液であるか懸濁液のための徐放粉末である、請求項１７に記載の製剤。
【請求項１９】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスはポリ（乳酸）（ＰＬＡ）またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む、請求項１７または１８に記載の製剤。
【請求項２０】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは緩衝液に懸濁されている、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２１】
前記制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の０〜２回分の用量を含む、請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２２】
前記タンパク質マイクロスフェアマトリックスは緩衝液に懸濁されている、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２３】
前記ＦＳＨの用量は７５ＩＵであり、かつ前記ＬＨの用量は５０ｍｇである、請求項２１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量のみを含む、請求項１７に記載の製剤。
【請求項２５】
前記制御放出薬剤は性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の単回用量のみを含む、請求項１７に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１７年６月３０日に出願された「ウシ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物において複数の卵胞の同期的生育および排卵（過剰排卵）を誘発および制御するための簡易化された単回注射方法」という発明の名称の米国仮特許出願第６２／５２７，０８４号および２０１８年３月５日に出願された「ウシ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物において複数の卵胞を誘発および制御するための単回注射方法および製剤」という発明の名称の米国実用特許出願第１５／９１２，１０１号の優先日の利益を主張する。これらの出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は畜産および、一般に胚移植（ＥＴ）技術と呼ばれる繁殖管理プロセスに関する。より具体的には、本発明は、（ａ）一般に体外受精と呼ばれるプロセスにおいて工程を行う場合の複数の卵母細胞、または（ｂ）一般に多排卵胚移植（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｍｂｒｙｏ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）と呼ばれるプロセスにおいて工程を行う場合の複数の胚のその後の採取を可能にする、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物において複数の卵胞の同期的生育（超刺激（ｓｕｐｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ））および排卵（過剰排卵）を誘発および制御するための簡易化された単回注射方法および製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
畜産の中の繁殖管理プロセスのうちの１つは一般に胚移植（ＥＴ）技術と呼ばれ、これは体外受精（ＩＶＦ）および多排卵胚移植（ＭＯＥＴ）の２つの下位区分からなる。どちらの下位区分も複数の胚という同じ結果をもたらし、これは代理宿主の子宮の中に直接移植されるか後で移植するために凍結される。
【０００４】
ＩＶＦは、卵巣超刺激のために外因性卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）を使用して複数の卵胞を同期的に生育および成熟させる。自然排卵の前に、超音波誘導経腟採卵（ＯＰＵ）により卵母細胞を手作業で採取し、次いで研究室で卵母細胞を体外成熟（ＩＶＭ）させ、ペトリ皿の中で受精（ＩＶＦ）させて胚を生産し、これを移植または凍結前に７〜８日間培養（ＩＶＣ）する。
【０００５】
ＭＯＥＴは、卵巣過剰排卵のために外因性ＦＳＨを使用して複数の卵胞を同期的に生育、成熟および排卵させる。排卵させた卵母細胞を体内で受精させ、次いで移植または凍結のために７日後に胚として子宮から回収する。ＩＶＦおよびＭＯＥＴはどちらも、胚移植技術の極めて重要な必須ホルモン成分として外因性ＦＳＨの生理学およびその必要性を特徴とする。ＩＶＦおよびＭＯＥＴは典型的に、通常は発情周期ごとに１個の卵母細胞のみを排卵し（単一排卵性（ｍｏｎｏｖｕｌａｔｏｒｙ））、妊娠周期ごとに１頭の子のみが誕生する生物種の中の遺伝的価値の高い雌に対して使用される。その同じ雌をＭＯＥＴプログラムに投入した場合、この雌は胚ドナーと呼ばれ、１年に５０〜１００個の生存可能な胚を産生し、１２ヶ月ごとに代理の胚レシピエントを介して３５〜７０頭の子を誕生させる可能性を有する（例えばウシ）。
【０００６】
ＭＯＥＴは過去４０年間にわたって商業的に実施されているが、ＩＶＦで生産された胚の商業的受け入れはおよそ１０年前に開始した。
【０００７】
ＩＶＦおよびＭＯＥＴのための既存の方法およびシステムとしては、欧州特許第００２１２３４Ｂ１号、欧州特許第０２９８９９０Ｂ１号、米国特許第３４９９４４５号、米国特許第３８３５１０８号、米国特許第３８６０７０１号、米国特許第４００５０６３号、米国特許第４００８２０９号、米国特許第４１５９９８０号、米国特許第４６７０４１９号、米国特許第４７６２７１７号、米国特許第４７８０４５１号、米国特許第４９７５２８０号、米国特許第５１６２３０６号、米国特許第５５１２３０３号、米国特許第５５８９４５７号、米国特許第５６３３０１４号、米国特許第５６５０１７３号、米国特許第５７４７０５８号、米国特許第５９４１８４４号、米国特許第６０２８０５７号、米国特許第６５７３２５４号、米国特許第７１５１０８３号、米国特許第７２０５２８１号、米国特許第７４４６０９０号、米国特許第７７４０８８４号、米国特許第７７４１２６８号、米国特許第８５３０４１９号、米国特許第８９０５９１３号、米国特許第８９２７４９６号、米国特許第８９３７０４４号、米国特許第９０１８１６５号、米国特許第９３５１８１８号、米国特許第９３５２０１１号、米国特許出願公開第２００５０１３０８９４号、米国特許出願公開第２００６０２６４３７２号、米国特許出願公開第２００７０１７３４５０号、米国特許出願公開第２００７０１９７４３５号、米国特許出願公開第２００９００３６３８４号、米国特許出願公開第２０１２００４６５１９号、米国特許出願公開第２０１３００４１２１０号、米国特許出願公開第２０１３００８５３２１号、中国特許第１０１１２９３３３Ａ号、中国特許第１０４８００８３４Ａ号、米国特許第４５９９２２７号、米国特許第７５６３７６３号、米国特許第７６２９１１３号、米国特許第８５１８８８１号、米国特許出願公開第２００８０３１２１５１号、米国特許出願公開第２０１４０３３５１９３号、米国特許出願公開第２０１５０３３５７１３号、米国特許出願公開第２０１６０２５０３３３号、国際特許第１９９５１６４５９Ａ１号が挙げられる。
【０００８】
ＩＶＦ卵母細胞ドナーは典型的に、２〜３日にわたってＦＳＨの４〜６回の注射を必要とし、ＭＯＥＴドナーは４日間にわたって投与される８回のＦＳＨ注射を必要とする。
【０００９】
ドナーの所有者の遺伝的および金銭的目的を満足させるために、多排卵胚移植（ＭＯＥＴ）および／またはＩＶＦと組み合わせられる経腟採卵（ＯＰＵ）をウシの家畜および他の動物のための繁殖管理プログラムに組み込むための起動力は、望ましい繁殖、育児および／または生産形質を示したか、ゲノム試験によりそれらの子において望ましい繁殖、育児および／または生産形質を所有および発現する可能性が高い雌の繁殖率を高めることである。ＭＯＥＴは過剰排卵の非存在下では不可能であり、世界中のＯＰＵに供された動物、特に家畜種のウシドナーのおよそ半分がＯＰＵ、ＩＶＦおよび培養に適した健康な成熟した卵母細胞を含む卵胞を産生するための超刺激プロトコルを取り入れている。
【００１０】
ＭＯＥＴのための公知の過剰排卵プロトコルは５〜７週間ごとに繰り返すことができ、生物種において補助生殖技術を使用しない場合と比較して一度に平均して７倍の生存可能な（移植可能な）胚の増加、および回収可能かつ生存可能な胚における１１倍またはそれ以上の寿命の増加を生じる。過剰排卵プロトコルの非存在下では、単一の生存可能な胚は非刺激ドナーからその時間のおよそ６０％で回収することができ、かつそれはその採取を経験豊富な技術者によって行われることを必要とする。同様の条件下で、公知の過剰排卵方法により、過剰排卵ごとに平均７個の移植可能または凍結可能な胚が得られるが、数のばらつきは大きい。様々な理由により、過剰排卵の試みの１５％から生存可能な胚は回収されない。少ない割合の過剰排卵させたドナーは、過剰排卵ごとに２０個超、および非常に稀であるが５０個超の移植可能／凍結可能な胚を産生する。ＩＶＦドナーのための公知の超刺激プロトコルは、２〜３週間ごとに繰り返すことができる採卵セッションごとに平均して３倍の生存可能（移植可能）な胚の増加をもたらす。
【００１１】
ウシ属の動物を過剰排卵させるための２つの公知の方法は、２種類の異なる性腺刺激ホルモン、具体的にはＦＳＨまたはＰＭＳＧのうちの１つを使用することに基づいている。性腺刺激ホルモンは、ほとんどの脊椎動物で分泌される糖タンパク質ポリペプチドホルモンであり、哺乳類のホルモン卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、胎盤性／絨毛性性腺刺激ホルモン（ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ））およびウマ絨毛性性腺刺激ホルモン（ｅＣＧ）（妊馬血清性性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）ともいう）が挙げられる。これらのホルモンは複雑な内分泌系制御、正常な成長、性的発達および生殖機能にとって重要である。ＬＨおよびＦＳＨホルモンは脳下垂体前葉によって分泌されるが、ｈＣＧおよびｅＣＧ（ＰＭＳＧ）はそれぞれ、妊娠中のヒトおよび雌馬の胎盤によって分泌される。獣医使用のＰＭＳＧ（米国ＦＤＡによって認可されていない）は雌豚および実験室動物における発情同期化に用いられる。獣医使用のＦＳＨは米国ＦＤＡによって認可されており、肉牛および未経産乳牛および乳牛における超刺激および過剰排卵の誘発に用いられる。
【００１２】
過剰排卵を誘発する公知の第１の方法は、１８００〜３０００ＩＵの妊馬血清性性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）、次いでＬＨまたはＧｎＲＨおよびプロスタグランジンＦ２αの筋肉内注射を適応外で投与することであった。第２のプロスタグランジン注射は多く場合に第１の注射後１２〜２４時間の間に投与し、これにより典型的に胚生産が向上した。残念なことに、ＰＭＳＧは過剰排卵反応を生じるその予測不可能性、および当該ホルモンが刺激した際の生存可能な胚収率の極限範囲が原因で、一般的な「ゴールドスタンダード」の過剰排卵剤には決してならなかった。ＰＭＳＧに関するこれらの問題は、ＬＨサージをもたらす低い能力、および排卵後の卵胞の望ましくない持続的動員を引き起こすＰＭＳＧの非常に長い半減期（４０時間超）に関連していると考えられている。ＦＳＨの全身の生理学的半減期は乳牛では５時間である。
【００１３】
その予測可能な胚収率により過去４０年間にゴールドスタンダードプロトコルとなっている過剰排卵の第２の公知の方法は、半日間隔で卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の８回の注射を投与することである。ＦＳＨ治療の前およびその間中ずっと、高い持続的な全身性プロゲステロン（Ｐ４）を維持するＰ４含浸装置を膣内に配置する。Ｌｕｔａｌｙｓｅ（ジノプロスト）またはＥｓｔｒｕｍａｔｅ（Ｄ−クロプロステノール）を第６、第７または第８のＦＳＨ注射と共に治療の開始後７２〜９６時間の間に注射する。一般的な減少用量（すなわち１日２回の注射）のＦＳＨレジメンは、１５ｉｕを２回、１１ｉｕを２回、７ｉｕを２回および４ｉｕを２回であり、第６、第７または第８のＦＳＨ注射と共に注射されるＥｓｔｒｕｍａｔｅまたはＬｕｔａｌｙｓｅを４日にわたって１２時間間隔で投与する。第８のＦＳＨ注射に加えて、ＧｎＲＨ（性腺刺激ホルモン放出ホルモン）の注射は通常ＦＳＨの開始の２日前に投与し、これは内因性ＬＨの放出を刺激し、これにより主席卵胞の破裂（除去）を引き起こし、それによりの新たな卵胞発育波が開始するのを促進するように機能する。第２のＧｎＲＨ注射は、最終のＦＳＨ注射後２日目にＭＯＥＴプログラムにおいて定期的に投与して、内因性ＬＨの放出を刺激してドナーの排卵期間を制御および予測する。この第２のＧｎＲＨ注射は、それがドナーのＬＨサージの開始を操作、刺激および制御して、結果的に所望の期間にわたって同期的排卵を生じさせ、それにより高い受精率を得るという希望および所望により投与される。内因性ＧｎＲＨは視床下部で生じて下垂体まで全身を移動し、この際、放出ホルモンとしてそれが下垂体まで全身を移動して下垂体からのＬＨの重要なパルス放出（ＬＨサージ）を刺激し、次いでこれが卵巣まで全身を移動して、ある期間にわたって同期的かつ完全な排卵を誘発することが期待される。残念なことに、ＭＯＥＴ手順の間に外因性ＧｎＲＨを追加することで、全ての成熟した卵胞の同期的または完全な排卵が常に生じるわけでなく、そのどちらもが高い受精率および高い胚収率を達成するために必要とされる。生理学的に、ＬＨは同期的かつ完全な排卵の誘発に直接関与するホルモンであり、ＧｎＲＨはそうではない。歴史的にだけでなく現在でも、一般的なＧｎＲＨ−ＦＳＨ−ＧｎＲＨ  ＭＯＥＴプロトコルは、８〜９日間にわたって少なくとも１０回の異なる回数で動物に注射することを必要とする。
【００１４】
米国にはＦＤＡに認可された獣医使用のＬＨは存在しない。そのような理由で米国における現在の一般的な過剰排卵プロトコルは、ＦＳＨ注射の開始前にＧｎＲＨを注射してＬＨの内因性放出を刺激して主席卵胞の除去を引き起こす。ＧｎＲＨを再度８〜９日後（ＦＳＨが卵胞の発育および成熟を刺激した後）に注射して、先に１２段落に記載した一連のイベントを開始させて排卵を生じさせる。外因性ＧｎＲＨの投与は排卵という最終目標を明示的に達成せず、生理学的にＧｎＲＨは、排卵に直接関与するホルモンであるＬＨを投与する場合とは対照的に、排卵を引き起こすことに直接関与しない。
【００１５】
但し不利なことに、今日のゴールドスタンダード過剰排卵プロトコルはむしろ、ドナーの過剰排卵または超刺激期間全体を通して特定の時間間隔での繰り返し投与を必要とする０．３〜５．０時間の非常に短い生物学的半減期を有する全ての公知の誘発剤が原因で、全体的に非効率的である。このプロトコルは８〜９日間にわたって１２時間間隔で、処方された日数での刺激および／または放出／誘発剤によるドナー動物への繰り返し投与要求（ＭＯＥＴでは１０回、ＯＰＵでは４〜６回の注射）が原因で非効率的である。当該プロトコルは、獣医またはウシ／動物所有者が遵守することが難しい可能性がある。現在のプロトコルは、（ａ）通常はＭＯＥＴまたはＯＰＵ技術者から離れた位置で８〜９日間にわたって複数の詳細および職員に厳重に注意を払うことを必要とするという理由から１００％の遵守を達成するのが難しく、（ｂ）ＭＯＥＴまたはＩＶＦドナーを特定し、集合させ、拘束し、身体的に制限し、かつ最後に注射するために規定の時間および日数で少なくとも１０回の機会に専用の農場または病院内職員を必要とし、時間および大きな労働力を要し（従ってコストがかかり）、（ｃ）現在のプロトコルはドナーおよび職員をストレスおよび潜在的な身体的傷害に曝し、かつ（ｄ）集合／取り扱いおよび注射順序に関連するドナーのストレスの上昇はドナーの過剰排卵反応、受精率および乳生成に悪影響を与えることが分かった。全体的な義務づけられた順序（最初のＧｎＲＨ注射後に１日２回のＦＳＨ注射を行い、最後のＧｎＲＨ注射で終了する）はドナー動物にストレスが多く、かつ職員およびドナーに多く場合に１５００ポンド以上の体重を有する動物を集合させ、拘束し、制限し、かつ注射するための各一連の要求により肉体的傷害に曝す危険を高める。
【００１６】
そこで、超刺激および過剰排卵プロトコルのための先行技術における欠点を解決する方法および製剤を提供することが望まれている。
【発明の概要】
【００１７】
本発明の目的は、ウシ属の動物のための先行技術の過剰排卵および超刺激プロトコルにおける欠点を解決する方法およびシステムを提供することにある。さらに、本発明の目的は、ヤギ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物のための先行技術の過剰排卵および超刺激プロトコルにおける欠点を解決する方法およびシステムを提供することにある。
【００１８】
本発明の目的は、（ａ）体外受精により行う場合には複数の卵母細胞、または（ｂ）多排卵胚移植により行う場合には複数の胚のその後の採取を可能にする、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ラクダ科および他の雌動物において同期的生育（超刺激）および複数の卵胞の排卵（過剰排卵）を誘発および制御するための簡易化された単回注射方法のための方法および製剤を提供することにある。
【００１９】
本発明の目的は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ科および他の雌動物において複数の卵胞の同期的生育（超刺激）および排卵（過剰排卵）を誘発および制御するための薬物製剤を単回投与で投与することを含む、持続制御放出方法および製剤を提供することにある。
【００２０】
本発明の目的は、操作された制御放出薬剤によってカプセル化された動物由来の二重ホルモンタンパク質マイクロスフェアマトリックスを含む薬物製剤を提供することにある。
【００２１】
本発明の目的は、ＬＨにより主席卵胞除去を誘発し、かつＦＳＨにより複数の卵胞の同期的刺激および生育を誘発する薬物製剤を提供することにある。
【００２２】
本発明の目的は、操作された制御放出技術薬剤によりＦＳＨ刺激の大きさおよび持続期間を制御する薬物製剤を提供することにある。
【００２３】
本発明の目的は、操作された制御放出技術ＬＨサージにより既に成熟している卵胞のタイミングを制御し、かつその同期的排卵を誘発する薬物製剤を提供することにある。
【００２４】
本発明の目的は、動物に制御放出薬剤を含むタンパク質マイクロスフェアマトリックスを投与するためのシステムおよび方法を提供することにあり、ここではタンパク質マイクロスフェアマトリックスをウシ属の動物に投与する工程は単回投与により行い、かつタンパク質マイクロスフェアマトリックスはＩＶＦのために使用される場合には超刺激を誘発し、ＭＯＥＴのために当該動物で使用される場合には付随する過剰排卵と共に超刺激を誘発する。
【００２５】
本発明の目的は、単回注射としての２種類のホルモンにより、具体的にはＬＨによる主席卵胞の除去、その後のＦＳＨによる超刺激（または過剰排卵）、その後の操作されたＬＨサージを達成して、規定のタイムスケジュールごとに排卵を生じさせる製剤を提供することにある。
【００２６】
本発明の目的は、（１）注射直後の主席卵胞除去（ＤＦＲ）、および（２）８〜９時間後に、ＬＨの第２の操作された用量を次第に増加する「バースト」で数時間にわたって放出させ、結果的に同期的排卵を生じさせ、かつ直接引き起こすという、２つの発明の効果を有するような処方で操作された制御放出ＬＨを提供することにある。
【００２７】
本発明の目的は、上記利点の全ておよび上記目的および利点の全ての組み合わせを含む方法およびシステムを提供することにある。
【００２８】
本発明のこれらおよび他の目的は、動物に制御放出薬剤を含む５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスを投与する工程を含む、ウシ属の動物において過剰排卵を誘発する方法によって達成され、ここではタンパク質マイクロスフェアマトリックスを当該動物に投与する工程は単回投与により行い、かつタンパク質マイクロスフェアマトリックスは当該動物において過剰排卵を誘発する。
【００２９】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは医薬品有効成分（ＡＰＩ）を含む。
【００３０】
特定の実施形態では、ＡＰＩはＦＳＨおよび／またはＬＨである。
【００３１】
特定の実施形態では、ＦＳＨは非組換えＦＳＨである。
【００３２】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは少なくとも１種のポリマーを含む。
【００３３】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスはポリ乳酸（ＰＬＡ）またはポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含む。
【００３４】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは有機ポリマーを含む。
【００３５】
特定の実施形態では、少なくとも１種のポリマーとしては、ポリ（ｄｌ−ラクチド）、ラクチド−グリコリド共重合体、ショ糖酢酸イソ酪酸（ＳＡＩＢ、すなわちＳＡＢＥＲプラットフォーム）、およびラクチド−カプロラクトン共重合体が挙げられる。
【００３６】
特定の実施形態では、当該マトリックスは乳化剤を含む。特定の実施形態では、乳化剤はショ糖酢酸イソ酪酸（ＳＡＩＢ）である。
【００３７】
特定の実施形態では、当該マトリックスは、小ゲージ針を通して投与するのを可能にする溶媒を含む。
【００３８】
特定の実施形態では、当該マトリックスは注射または、ＡＰＴの制御放出のために筋肉内注射時に形成されるｉｎ−ｓｉｔｕゲルにより投与される。
【００３９】
特定の実施形態では、ウシ属の動物における過剰排卵は、ウシ属の動物において少なくとも２つの原始卵胞を刺激して同時に成熟させることを含む。
【００４０】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、処方された用量の卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および／または黄体形成ホルモン（ＬＨ）を含む。
【００４１】
特定の実施形態では、ＡＰＩは二重ホルモン治療薬である。
【００４２】
特定の実施形態では、本制御放出ＬＨ薬剤は当該動物における主席卵胞の即時退行を引き起こす。本発明の目的は、主席卵胞の退行が本制御放出薬剤の投与直後に開始することである。
【００４３】
特定の実施形態では、ＦＳＨは投与後４８〜１４４時間の間は測定および制御された速度で提供される。
【００４４】
特定の実施形態では、ＦＳＨは投与後４８〜１６８時間の間は測定および制御された速度で提供される。
【００４５】
特定の実施形態では、ＦＳＨは投与後４０〜１６８時間の間は測定および制御された速度で提供される。
【００４６】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、投与後１４５〜１８２時間の間にＬＨの計算されたパルス放出を含む。
【００４７】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、投与後１６８〜１８２時間の間にＬＨの計算されたパルス放出を含む。
【００４８】
特定の実施形態では、ＬＨサージはウシ属の動物において卵胞を排卵させる。
【００４９】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量のみを含む。
【００５０】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、各ＬＨ用量が日数を空けて血流の中に放出するＬＨの２回分の制御放出用量を含む。
【００５１】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の単回用量のみを含む。
【００５２】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨは内因性ＬＨサージを間接的に刺激して結果的に同期的排卵を生じさせる。
【００５３】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨは最終的にＤＦＲを間接的に引き起こす。
【００５４】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨはＦＳＨと共にカプセル化されて含有されている。
【００５５】
本発明の他の目的は、ウシ属の動物において過剰排卵を誘発するための薬物製剤を提供することによって達成され、当該製剤は動物への５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスと、制御放出薬剤とを含み、当該製剤はウシ属の動物に投与された場合に当該動物の過剰排卵を誘発する。
【００５６】
特定の実施形態では、本方法は、雌のウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダおよびヒト以外の他の従来の単一排卵性の動物種において過剰排卵を誘発する。
【００５７】
特定の実施形態では、本製剤は懸濁液であるか懸濁液のための徐放粉末である。
【００５８】
特定の実施形態では、操作されたタンパク質マイクロスフェアマトリックスは少なくとも１種のポリマーを含む。
【００５９】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは、ポリ乳酸（ＰＬＡ）またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む。
【００６０】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは緩衝液に懸濁されている。
【００６１】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、処方された用量の卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および／または黄体形成ホルモン（ＬＨ）を含む。
【００６２】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量のみを含む。
【００６３】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、各ＬＨ用量が日数を空けて血流の中に放出するＬＨの２回分の制御放出用量を含む。
【００６４】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の単回用量のみを含む。
【００６５】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨは内因性ＬＨサージを間接的に刺激して結果的に同期的排卵を生じさせる。
【００６６】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨは最終的にＤＦＲを間接的に引き起こす。
【００６７】
特定の実施形態では、ＧｎＲＨはＦＳＨと共にカプセル化されて含有されている。
【００６８】
本発明の他の目的は、複数回の制御されたＬＨサージからなるＬＨホルモンの単回制御放出用量を提供することによって達成される。特定の実施形態では、ＬＨホルモンの制御放出用量は、０〜１８時間の間（０時間は当該薬物を注射する時である）の当該プロセスのフロントエンドにおいて主席卵胞を溶解し、かつ６時間後に第２の制御放出ＬＨサージは所望のタイムスケジュールごとに排卵を誘発／指示する。この第２の制御放出「ＬＨサージ」は１４４〜１８０時間の間の３〜８回の次第に強力になるＬＨ放出を特徴とする。
【００６９】
特定の実施形態では、本製剤はＦＳＨを産生し、かつＦＳＨ抽出プロセスはＬＨの「副産物」も産生する。
【００７０】
特定の実施形態では、単回注射ＦＳＨ製剤は、単回注射ＦＳＨ製品の成分としてＬＨの代わりに制御放出ＧｎＲＨを含む。
【００７１】
特定の実施形態では、本製剤は２回のＧｎＲＨ注射を単回のＬＨ注射で置き換える。
【００７２】
本発明の他の目的は、処方された体積のＬＨおよびＦＳＨを含む二重ホルモン製剤をウシ属の動物に投与することを含む多排卵胚移植（ＭＯＥＴ）のための方法を提供することによって達成され、ここでは二重ホルモン製剤中のＬＨはウシ属の動物の血流に直接利用可能であり、ＦＳＨは操作された制御放出によりウシ属の動物の血流に利用可能である。
【００７３】
特定の実施形態では、上記製剤は注射によって投与される。
【００７４】
特定の実施形態では、二重ホルモン製剤は主席卵胞除去のためのものである。
【００７５】
特定の実施形態では、ＦＳＨは二重ホルモン製剤の投与後４日間にわたって放出される。
【００７６】
特定の実施形態では、ＦＳＨの制御放出は卵胞を生育および成熟させる。
【００７７】
特定の実施形態では、ＦＳＨの制御放出後に制御放出ＬＨサージが起こり、排卵が生じる。
【００７８】
本発明の他の目的は、処方された体積のＬＨおよびＦＳＨを含む二重ホルモン製剤をウシ属の動物に投与することを含むＩＶＦのための方法を提供することによって達成され、ここではＬＨはウシ属の動物の血流に直接利用可能であり、ＦＳＨは操作された制御放出製剤によりウシ属の動物の血流に利用可能である。
【００７９】
特定の実施形態では、上記製剤は注射によって投与される。
【００８０】
特定の実施形態では、二重ホルモン製剤は主席卵胞除去のためのものである。
【００８１】
特定の実施形態では、ＦＳＨは二重ホルモン製剤の投与後４日間にわたって放出される。
【００８２】
特定の実施形態では、ＦＳＨの制御放出は卵胞を生育および成熟させる。
【００８３】
特定の実施形態では、ＦＳＨの制御放出はウシ属の動物において超刺激を引き起こすが、ＬＨサージを引き起こさない。
【００８４】
本発明の他の目的は、ウシ属の動物への生分解性制御放出（ＣＲ）ポリマー系を提供することによって達成される。
【００８５】
特定の実施形態では、本システムは制御放出（ＣＲ）微小粒子の筋肉内（ＩＭ）注射を含む。
【００８６】
特定の実施形態では、ＣＲ微小粒子は、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）の操作された厚さの中にカプセル化されたＡＰＩ（ＦＳＨ／ＬＨ）の分子である。
【００８７】
特定の実施形態では、ＰＬＧＡ層が様々な操作された時間で生分解するにつれて、ＡＰＩ（ＦＳＨ、またはＦＳＨ／ＬＨ、またはＦＳＨ／ＧｎＲＨ）は血流の中に放出される。
【００８８】
特定の実施形態では、次いでＣＲ微小粒子を「液体ポリマーマトリックス溶液」の中に入れる。
【００８９】
特定の実施形態では、カプセル化ＣＲ微小粒子溶液が注射されて水性体液に接触すると、それは固体（ｉｎ−ｓｉｔｕゲル、「デポー剤」）を形成する。
【００９０】
特定の実施形態では、ポリマーのｉｎ−ｓｉｔｕゲルマトリックスデポー剤が生分解してＡＰＩがデポー剤から放出されるにつれて、個々のＡＰＩカプセル化粒子の血流内への放出が時間をかけて生じる。
【００９１】
特定の実施形態では、非カプセル化ＡＰＩ分子を液体ポリマーマトリックスの中に「溶解」し、かつポリマーのｉｎ−ｓｉｔｕゲルが分解するにつれて時間をかけて循環に入れることができる。
【００９２】
特定の実施形態では、操作された微小粒子によりＡＰＩを所望の時間で放出させることができる。
【００９３】
本発明の他の目的ならびにその特定の特徴および利点は、以下の図面および添付の詳細な説明を検討することからより明らかになるであろう。当然のことながら、詳細な説明および具体例は本発明の好ましい実施形態を示しているが、単に例示のためのものであって、本発明の範囲を限定することは意図していない。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
以下の記載では、説明のために数多くの詳細が記載されている。但し、当業者であれば本発明はこれらの具体的な詳細を使用せずに実施できることが分かるであろう。
【００９５】
本出願は、「タンパク質マイクロスフェアおよびその使用方法」という発明の名称の米国特許第５，６７９，３７７号の内容を参照によって組み込む。
【００９６】
特定の実施形態では、ウシ属の動物において過剰排卵を誘発する方法は、制御放出薬剤を含む５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスをウシ属の動物に投与する工程を含み、ここではタンパク質マイクロスフェアマトリックスをウシ属の動物に投与する工程は単回投与により行い、かつタンパク質マイクロスフェアマトリックスは、およそ１８２時間にわたってウシ属の動物において、ＬＨによる主席卵胞除去（ＤＦＲ）、ＦＳＨによる過剰排卵およびＬＨサージによる処方された時間で開始する同期的排卵の開始の連続的結果を誘発することが企図されている。
【００９７】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは少なくとも１種のポリマーを含むことが企図されている。
【００９８】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）またはポリ（乳酸）（ＰＬＡ）を含むことが企図されている。
【００９９】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは有機ポリマーを含むことが企図されている。
【０１００】
特定の実施形態では、ウシ属の動物における過剰排卵は、ウシ属の動物において少なくとも２つの原始卵胞を刺激して同時に成熟させることを含むことが企図されている。
【０１０１】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の０〜２回分の用量を含むことが企図されている。
【０１０２】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量および性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）の０〜２回分の用量を含むことが企図されている。
【０１０３】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤はＬＨによりウシ属の動物において主席卵胞の即時退行を引き起こすことが企図されている。
【０１０４】
特定の実施形態では、主席卵胞の退行が本制御放出薬剤の投与直後に開始することが企図されている。
【０１０５】
特定の実施形態では、ＦＳＨは投与後およそ４８〜１４４時間の間に一定の処方された濃度で提供されることが企図されている。
【０１０６】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、投与後０〜１２時間および再度１４５〜１８２時間の間にＬＨの計算されたサージ（バースト）を含むことが企図されている。
【０１０７】
特定の実施形態では、ＬＨサージはウシ属の動物において卵胞を排卵させることが企図されている。
【０１０８】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは好ましい筋肉内（ＩＭ）注射により投与することが企図されている。
【０１０９】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは皮下（ＳＱ）方法により投与することが企図されている。
【０１１０】
特定の実施形態では、ウシ属の動物において過剰排卵を誘発するための薬物製剤はウシ属の動物への５０〜７０ミクロンの範囲の直径を有するタンパク質マイクロスフェアマトリックスと、制御放出薬剤とを含み、ここでは本薬物製剤はウシ属の動物に投与された場合にウシ属の動物の過剰排卵を誘発することが企図されている。
【０１１１】
特定の実施形態では、本製剤は懸濁液であるか懸濁液のための徐放粉末であることが企図されている。
【０１１２】
特定の実施形態では、本製剤はｉｎ−ｓｉｔｕゲルであることが企図されている。
【０１１３】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは少なくとも１種のポリマーを含むことが企図されている。
【０１１４】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスはポリ（乳酸）（ＰＬＡ）またはポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含むことが企図されている。
【０１１５】
特定の実施形態では、タンパク質マイクロスフェアマトリックスは緩衝液に懸濁されていることが企図されている。
【０１１６】
特定の実施形態では、本制御放出薬剤は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の単回用量および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の０〜２回分の用量を含むことが企図されている。
【０１１７】
特定の実施形態では、本薬剤は操作された徐放複合体である。
【０１１８】
特定の実施形態では、本薬剤は１８ｇａ×１’’または１．５’’の針により１０〜１５ｍｌのＩＭ単回注射として投与される懸濁液のための徐放粉末である。
【０１１９】
特定の実施形態では、ＰＬＡまたはＰＬＧＡは放出速度制御ポリマーである。
【０１２０】
特定の実施形態では、本製剤は、所望の異なるＦＳＨおよびＬＨ放出プロファイルを達成するために単回用量で２種類の異なるホルモンを使用する獣医使用のための単回注射薬である。
【０１２１】
特定の実施形態では、本制御放出方法は、（ａ）ＬＨ用量により主席卵胞の即時退行を引き起こし、（ｂ）注射後４８時間で開始して４８〜１４４時間の間に標的臓器へのＦＳＨの送達を行い、（ｃ）その後に注射後１４５〜１８２時間の間にＬＨの計算されたサージ（バースト）を生じさせる。
【０１２２】
特定の実施形態では、本製剤は主席卵胞除去（ＤＦＲ）を引き起こし、それにより新たな卵胞波を出現させることができる。特定の実施形態では、過剰排卵は新たな原始卵胞波を引き起こして同時に成熟させる。特定の実施形態では、所望のＬＨサージは卵胞を決定された／所望の時間で所望の短い間隔にわたって排卵させる。
【０１２３】
特定の実施形態では、本製剤は生分解性である。
【０１２４】
特定の実施形態では、本製剤はカプセル化微小粒子またはマイクロスフェアまたはｉｎ−ｓｉｔｕゲルを含む。
【０１２５】
特定の実施形態では、生分解性ポリマーは、指定された期間の間中ずっと規定の濃度および体積のＦＳＨ／ＬＨの非経口送達を与える。
【０１２６】
特定の実施形態では、本製剤は制御放出（ＣＲ）微小粒子の筋肉内（ＩＭ）もしくは皮下（ＳＱ）注射である。この選択肢は、様々な厚さおよび／または溶解速度を有するポリマーの中にカプセル化された処方された量のＦＳＨおよびＬＨを含み、それにより、処方された量の医薬品有効成分（ＡＰＩ）が所定の設計された時間で血流の中に放出される状態になるのを可能にする。
【０１２７】
特定の実施形態では、本製剤は、生分解性ポリマーＣＲ沈殿技術を特徴とするｉｎ−ｓｉｔｕゲル（すなわちデポー剤）を形成するＩＭ注射である。生分解性の注射可能なｉｎ−ｓｉｔｕゲルを形成する薬物送達は、生体適合性担体に溶解された生分解性ポリマーからなる。液体ポリマー系がそのバイアルから吸引され、かつ標準的な針および注射器を用いて体に注射される場合、それは水性体液と接触すると固まって固体の埋め込み物を形成する。
【０１２８】
特定の実施形態では、本製剤は単回注射としての２種類のホルモンにより、具体的には、ＬＨによる主席卵胞の除去、その後のＦＳＨによる超刺激（または過剰排卵）、その後の操作されたＬＨサージを達成し、それにより規定のタイムスケジュールごとに排卵を生じさせる。
【０１２９】
特定の実施形態では、本製剤は単回注射としての２種類のホルモンにより、具体的には、間接的に制御放出ＧｎＲＨによる主席卵胞の除去、その後のＦＳＨによる超刺激（または過剰排卵）、過剰排卵のためである場合は規定のタイムスケジュールごとに間接的に排卵を生じさせるその後の制御放出ＧｎＲＨを達成する。
【０１３０】
特定の実施形態では、ＡＰＩ（すなわち、ＣＲ微小粒子の中に製剤化されていないＦＳＨ／ＬＨ薬物製剤）がポリマー溶液の中に組み込まれており、それは固まるにつれてポリマーマトリックス内に封入された状態になる。このポリマーが生分解するにつれて薬物放出が時間をかけて生じ、それによりＦＳＨ／ＬＨ薬物製剤は雌動物の血流の中に放出される。
【０１３１】
実施例１：ＭＯＥＴ研究提案
時間０＝およそ１８２時間にわたって当該化合物の制御放出をもたらすＦＳＨ＋ＬＨを含有する制御放出（ＣＲ）ホルモン化合物の単回筋肉内（ＩＭ）注射を投与するとき。
【表１】
2020525547.tif 000002
【０１３２】
実施例１に記載されている本研究提案では、ＰＬＡもしくはＰＬＧＡ（または両方）のポリマーを利用して複数の試験製剤を調製する。解析方法を実行してマイクロスフェアマトリックス中のタンパク質を特性評価する。本製剤をインビトロで放出させ、かつ４日間の期間にわたって放出速度を確認するために解析する。注射後１４５〜１８２時間の間のＬＨ放出のために第２の製剤を作製するための選択肢も提供される。
【０１３３】
特定の実施形態では、両方のマイクロスフェア製剤を組み合わせて単回用量にして、異なるＦＳＨおよびＬＨ放出プロファイルを達成してもよい。
【０１３４】
本製剤開発段階のスコープは、表２に記載されているターゲットプロダクトプロファイルに従ってポリマー組成および水：ポリマー比において異なるポリ活性ポリマーの８種類のマイクロスフェア製剤を用いる１ラウンドからなる。本製剤のラウンドは５０〜１００のスケールである。
【０１３５】
本プロセスを操作して５０〜７０ミクロンの直径範囲のマイクロスフェアを作製する。このサイズ範囲は１８ｇａの針を通した送達に適している。
【表２】
2020525547.tif 000003
【０１３６】
当該マイクロスフェアの調製後に、粉砕方法を適用してカプセル化ＡＰＩのいくつかを即座に放出させる。マイクロスフェア処理活性がタンパク質分解を引き起こした場合、これは放出されたタンパク質のＨＰＬＣおよびＳＯＳ−ＰＨＡＧＥ分析によって評価する。
【０１３７】
当該マイクロスフェアを形態、粒径分布およびＡＰＩ含有量についてさらに解析する。
【０１３８】
意図されている放出持続期間および最大１０個の時点（例えば、１時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、９６時間）を有するバースト要求を考慮して、インビトロ放出研究を行う。活性についてＨＰＬＣおよびＳＯＳ−ＰＨＡＧＥによってインビトロで試料を解析する。
【０１３９】
選ばれたプロトタイプ製剤のうちの１つに対して注射能力研究を行う。マイクロスフェアを緩衝液に再懸濁させ、連続的に次第に小さくなる針ゲージの中に引き込む。本研究はマイクロスフェア濃度、注射体積および針ゲージ間の最適なバランスを確立する。
【０１４０】
以上、本発明の方法を実施するためのいくつかの実施形態について記載してきたが、その利点および目的は容易に理解することができる。上に記載したものは本発明の範囲から逸脱することなく当業者によって変形させてもよく、かつ変形させることができる。
【０１４１】
従って、本発明は上に記載されている実施形態に限定されず、それらは単なる一例として提供されており、限定のためのものではない。
【０１４２】
参考文献
【０１４３】
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【０１５３】
Ｌａｎｄｒｙら．２０１６．ＦＳＨ刺激およびコースティング治療後に得られた卵母細胞のインビトロ発生能に対する乳牛の年齢の影響（Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｏｗ  ａｇｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ｏｏｃｙｔｅｓ  ｏｂｔａｉｎｅｄ  ａｆｔｅｒ  ＦＳＨ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏａｓｔｉｎｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ）．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ  ８６：１２４０−１２４６
【０１５４】
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【０１５７】
Ｎｉｖｅｔら．２０１７．ウシにおける顆粒膜細胞トランスクリプトームに対する黄体形成ホルモンサポートの影響（Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｏｎ  ｇｒａｎｕｌｏｓａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｉｎ  ｃａｔｔｌｅ）．Ａｎｉｍ  Ｓｃｉ  Ｊ．ｄｏｉ：１０．１１１１／ａｓｊ．１２８５６
【０１５８】
Ｐｒｉｃｅ，Ｃ．Ａら．１９９９．ウシにおける内因性ＬＨ分泌に対する過剰排卵の効果および胚生産の結果（Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＬＨ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｔｔｌｅ，ａｎｄ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｆｏｒ  ｅｍｂｒｙｏ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，第５１巻，第１号，３７−４６
【０１５９】
Ｓｃｈａｍｓら．１９７７．妊馬血清性性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）およびウシにおける過剰排卵の適用後の内分泌反応に対するいくつかの研究。乳牛における繁殖の制御（Ｓｏｍｅ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｇｎａｎｔ  ｍａｒｅ  ｓｅｒｕｍ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ（ＰＭＳＧ）  ａｎｄ  ｏｎ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｆｔｅｒ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｔｔｌｅ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｏｗ）．Ｍａｒｔｉｎｕｓ  Ｎｉｊｈｏｆｆ，Ｔｈｅ  Ｈａｇｕｅ，ｐｐ１２２−１４２
【０１６０】
Ｓｏｕｍａｎｏ  Ｋ，Ｐｒｉｃｅ  ＣＡ．１９９７．過剰排卵法を受けているウシにおける卵胞ステロイド産生急性調節タンパク質、低密度リポタンパク質受容体およびチトクロームＰ４５０側鎖切断メッセンジャーリボ核酸（Ｏｖａｒｉａｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｓｔｅｒｏｉｄｏｇｅｎｉｃ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ，  ｌｏｗ−ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，  ａｎｄ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０  ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  ｉｎ  ｃａｔｔｌｅ  ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ  ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ）．Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ；５６：５１６−５２２
【０１６１】
Ｔａｋｅｄｏｍｉ，Ｔ．ら．ポリビニルピロリドンに溶解したＦＳＨの単回皮下注射によるホルスタイン種未経産牛の過剰排卵（Ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｏｌｓｔｅｉｎ  ｈｅｉｆｅｒｓ  ｂｙ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＳＨ  ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎ）．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，第４３巻，第７号，１２５９〜１２６８頁
【０１６２】
Ｔｒｉｂｕｌｏ，Ａｎｄｒｅｓら．Ｆｏｌｌｔｒｏｐｉｎ−Ｖの単回筋肉内注射による肉牛における卵胞発達の超刺激（Ｓｕｐｅｒｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｎ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｉｎ  ｂｅｅｆ  ｃａｔｔｌｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｏｌｌｔｒｏｐｉｎ−Ｖ）．Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１２９巻，第１号，７〜１３頁
【０１６３】
Ｙａｄａｖ，Ｍ．Ｃ．ら．１９８６．卵胞刺激ホルモンまたは妊馬血清性性腺刺激ホルモンを用いた乳牛の過剰排卵中の黄体形成ホルモンおよびプロゲステロンの血漿中濃度（Ｐｌａｓｍａ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄａｉｒｙ  ｃｏｗｓ  ｕｓｉｎｇ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｏｒ  ｐｒｅｇｎａｎｔ  ｍａｒｅ  ｓｅｒｕｍ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ）．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，第２６巻，第４号，５２３−５４０
【０１６４】
Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｍ．ら．ポリビニルピロリドンに溶解したＦＳＨの単回筋肉内注射による乳牛における過剰排卵（Ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｗ  ｗｉｔｈ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＳＨ  ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎ）  Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ，第４１巻，第３号，７４７〜７５５頁
【国際調査報告】
2020525547.tif 000004
2020525547.tif 000005