(57)【要約】本開示は、同種共免疫調節ポリペプチド（「同種ＭＯＤ」）に対して低減された結合親和性を呈するように選択され得る免疫調節ポリペプチド（「ＭＯＤ」）と、エピトープペプチド等の、エピトープとしての役目を果たすことができる分子を共有結合性で結合させるための箇所とを含む、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（「Ｔ細胞ＭＭＰ」）を提供する。ひとたびエピトープ分子が結合すると、結果として生じるＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、エピトープ選択的／特異的様態で、ＩＬ−２、またはＩＬ−２Ｒに対して低減された結合親和性を呈するＩＬ−２バリアント等の免疫調節ペプチドをＴ細胞に送達することによって、Ｔ細胞の活性を調節するために、したがって、個体における免疫応答を調節するために有用である。【選択図】図６
2020534352.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（Ｔ細胞ＭＭＰ）であって、
ａ）
ｉ）Ｎ末端及びＣ末端を有する第１の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
を含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択で免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場、
を含む、第２のポリペプチドと、
ｃ）前記第１のポリペプチドに結合したもしくはその内部にある第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位、及び／または前記第２のポリペプチドに結合したもしくはその内部にある第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位と、
ｄ）１つまたは複数の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、を含み、前記１つまたは複数のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、
Ａ）前記第１のポリペプチドの前記Ｃ末端に、
Ｂ）前記第２のポリペプチドの前記Ｎ末端に、
Ｃ）前記第２のポリペプチドの前記Ｃ末端に、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドの前記Ｃ末端及び前記第２のポリペプチドの前記Ｎ末端にあり、
前記１つまたは複数のＭＯＤの各々が、独立して選択される野生型またはバリアントＭＯＤである、前記Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（Ｔ細胞ＭＭＰ）。
【請求項２】
前記第１及び第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩポリペプチドであり、前記第１のＭＨＣポリペプチドが、
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、Ｎ末端及びＣ末端を有するベータ−２−ミクログロブリン（「β２Ｍ」）ポリペプチド、
そのＮ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、
そのＣ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、または
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、
を含む、請求項１に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項３】
前記第２のポリペプチドが、
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩ重鎖（「ＭＨＣ−Ｈ」）ポリペプチドを含む）、
そのＮ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、
そのＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、または
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、
を含む、請求項２に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項４】
前記第２のポリペプチドが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場をさらに含む、請求項３に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項５】
前記Ｔ細胞ＭＭＰが、独立して選択される１つまたは複数の野生型及び／またはバリアントＭＯＤポリペプチドを含む、請求項３に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項６】
前記Ｔ細胞ＭＭＰが、独立して選択される１つまたは複数の野生型及び／またはバリアントＭＯＤポリペプチドを含み、前記１つまたは複数のバリアントＭＯＤポリペプチドのうちの少なくとも１つが、同種ＭＯＤ（その同種ＭＯＤ）に対して、対応する野生型ＭＯＤの前記同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈し、バイオレイヤー干渉法（「ＢＬＩ」）によって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ここで、前記対照は、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する結合親和性対、ｉｉ）前記野生型ＭＯＤのバリアントを含む本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの前記同種ＭＯＤに対する結合親和性の比が、少なくとも１．５：１であるか、または１．５：１〜１０６：１の範囲内にある、請求項３に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項７】
前記野生型ＭＯＤポリペプチドが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＩＣＡＭ、及びＰＤ−Ｌ２からなる群から独立して選択され、前記バリアントＭＯＤポリペプチドが、それらのバリアントである、請求項６に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項８】
前記第１及び第２の化学コンジュゲーション部位が、
ａ）酵素的修飾配列として作用するペプチド配列（例えば、スルファターゼモチーフ）、
ｂ）非天然アミノ酸及び／またはセレノシステイン、
ｃ）操作されたアミノ酸の化学コンジュゲーション部位、
ｄ）炭水化物もしくはオリゴ糖部分、及び／または
ｅ）ＩｇＧヌクレオチド結合部位、
から独立して選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項９】
前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、酵素的修飾配列を含む、請求項８に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項１０】
前記１つまたは複数の第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、スルファターゼモチーフである、請求項９に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項１１】
前記スルファターゼモチーフが、配列Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３、Ｘ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２（Ｐ／Ａ）Ｘ３Ｚ３、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、またはＣＸ２ＰＸ３Ｒを含み、ここで、
Ｚ１が、システインまたはセリンであり、
Ｚ２が、プロリン残基またはアラニン残基のいずれかであり、
Ｚ３が、塩基性アミノ酸であり、
Ｘ１が、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性非荷電アミノ酸であり、但し、前記スルファターゼモチーフが前記ポリペプチドの前記Ｎ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３が独立して、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸である、
請求項１０に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項１２】
前記第１または前記第２の化学コンジュゲーション部位としてｆＧｌｙアミノ酸残基を含む、請求項１１に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
【請求項１３】
請求項８に記載のＴ細胞ＭＭＰを含み、かつエピトープをさらに含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートであって、前記エピトープが、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位で、または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位で、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドに直接、またはスペーサーもしくはリンカーを介して間接的にコンジュゲートされている、前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
【請求項１４】
前記エピトープが、スペーサーまたはリンカーを介して前記第１のポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｏｔｉｄｅ）、または前記第２のポリペプチドにコンジュゲートされている（ｃｏｎｍｊｕｇａｔｅｄ）、請求項１３に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
【請求項１５】
前記エピトープが、がんエピトープ、ウイルスエピトープ、または自己エピトープである、請求項１３に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
【請求項１６】
前記エピトープが、ＨＰＶ  ＣＭＶまたはＨＢＶエピトープから選択されるウイルスエピトープである、請求項１５に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
【請求項１７】
ａ）請求項１５に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、
ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、
を含む、組成物。
【請求項１８】
有効量の前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを、それを必要とする個体に投与するための医薬の製造に向けた、請求項１５に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの使用。
【請求項１９】
インビトロでのまたは個体へのインビボでの、エピトープ選択的またはエピトープ選択的／特異的様態での免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）の標的Ｔ細胞への送達方法において使用するための医薬の製造に向けた、請求項１５に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの使用であって、
前記医薬を前記Ｔ細胞にインビトロで接触させること、または
前記医薬を前記個体に投与すること、を含み、
前記標的Ｔ細胞が、前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記エピトープに特異的である、前記使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５５５，５５９号、２０１７年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／６０９，０８２号、及び２０１８年１月９日に出願された米国仮特許出願第６２／６１５，４０２号の利益を主張するものである。
【０００２】
本願は、ＥＦＳ−ｗｅｂを介して電子的に提出された配列表を含み、これはハードコピー及びコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の両方としての役目を果たすものであり、２０１８年９月３日に作成され、１９６，１８０バイトのサイズであり、参照によりその全体が本明細書に援用される「１２３６４０−８００１ＷＯ００＿ｓｅｑｌｉｓｔ．ｔｘｔ」と題されるファイルからなる。
【０００３】
序論
適応免疫応答には、Ｔ細胞の表面上に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の、主要組織適合複合体（ＭＨＣ、ヒトにおいてはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも称される）によって抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に非共有結合性で提示される低分子ペプチド抗原との結合（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）が関与する。この結合は、免疫系の標的化機構を表し、Ｔ細胞調節（活性化または阻害）及びエフェクター機能に必須の分子間相互作用である。エピトープ特異的な細胞の標的化に続いて、標的化Ｔ細胞は、ＡＰＣ上に見出される共刺激タンパク質の、Ｔ細胞上の相対する共刺激タンパク質との結合を通して活性化される。両方のシグナル、すなわち、エピトープ／ＴＣＲ結合、及びＡＰＣ共刺激タンパク質のＴ細胞共刺激タンパク質との結合が、Ｔ細胞の特異性及び活性化または阻害を駆動するために必要とされる。ＴＣＲは、所与のエピトープに特異的であるが、共刺激タンパク質は、エピトープ特異的ではなく、代わりに、全般的に、全てのＴ細胞上または大きなＴ細胞サブセット上で発現される。
【発明の概要】
【０００４】
本開示は、一実施形態では、ＭＨＣ受容体の一部分及び少なくとも１つの免疫調節ポリペプチド（本明細書で「ＭＯＤポリペプチド」または単に「ＭＯＤ」とも称される）を含む、Ｔ細胞調節多量体ポリペプチド（１つの「Ｔ細胞ＭＭＰ」または複数の「Ｔ細胞ＭＭＰ」）を提供する。Ｔ細胞ＭＭＰに存在するＭＯＤのうちのいずれか１つまたは複数は、野生型であっても、または、その細胞（例えば、Ｔ細胞表面）結合パートナー／受容体（全般的に「同種ＭＯＤ（Ｃｏ−ＭＯＤ）」と称される）に対して低減された結合親和性を呈するバリアントであってもよい。Ｔ細胞ＭＭＰは、標的エピトープを含む分子（例えば、ペプチドまたは炭水化物等の非ペプチド）がＴ細胞受容体をもつ細胞への提示のために共有結合され得る、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を含む。エピトープの連結用の化学コンジュゲーション部位を含むＴ細胞ＭＭＰは、提示されるエピトープに特異的なＴ細胞の活性を調節し得るＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを迅速に調製するために、したがって、これらのＴ細胞が関与する個体における免疫応答を調節するために有用である。Ｔ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲートは、具体的な標的エピトープと共送達するための、化学療法剤等の生理活性物質（ペイロード）のコンジュゲーションのための部位を追加的に含んでもよい。したがって、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、免疫調節ペプチド（例えば、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＦａｓＬ、ＴＧＦβ、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＩＣＡＭ、ＪＡＧ１、もしくはそれらの断片、またはそれらの改変された（変異した）バリアント）及び／またはペイロード（例えば、化学療法薬）をエピトープ特異的様態で細胞に送達するための手段と見なされ得る。
【０００５】
本明細書に記載される実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰは、会合したエピトープペプチドの不在下であっても、細胞内輸送中及び／または多量体ポリペプチドを発現する細胞による分泌後にＴ細胞ＭＭＰの安定化を補助する、修飾を含んでもよい。本明細書に記載される実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰは、ＭＨＣ−Ｉ  α１ヘリックスのカルボキシル末端とＭＨＣ−Ｉ  α２−１ヘリックスのアミノ末端とを連結する修飾を含んでもよい。かかる修飾には、これらのヘリックスの示された領域を連結するジスルフィド結合による連結（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ  ｌｉｎｋａｇｅｓ）の形成をもたらす、システイン残基の挿入が含まれる。例えば、ＭＨＣ−Ｉのアミノ酸８４（Ｙ８４Ｃ置換）及び１３９（Ａ１３９Ｃ置換）、またはヘリックスを形成する配列に対して同等の位置でのシステイン残基の挿入により、Ｔ細胞ＭＭＰを安定化する一助となるジスルフィド結合による連結が形成され得る。例えば、Ｚ．Ｈｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １２７：２８８５−２８９７を参照されたい。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】化学カップリング（「ＣＣ」により表される）によってβ−２ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチド配列に結合させたエピトープをもつ本開示のＴ細胞ＭＭＰのある実施形態による、エピトープ非特異的Ｔ細胞と対比したエピトープ特異的Ｔ細胞の優先的な活性化を図示する。
【０００７】
【図２Ａ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｂ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｃ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｄ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｅ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｆ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【図２Ｇ】免疫グロブリンＦｃポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号１〜１２）を提供する。
【０００８】
【図３Ａ】ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を提供する。図３Ａのエントリ：３Ａ．１は、ＨＬＡ−Ａアルファ鎖（ＨＬＡ−Ａ＊０１：０１：０１：０１）（ＮＣＢＩ受託ＮＰ＿００１２２９６８７．１）（配列番号１３４）であり、エントリ３Ａ．２は、ＨＬＡ−Ａ＊１１０１（配列番号１３５）からのものであり、エントリ３Ａ．３は、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２（配列番号１３６）からのものであり、エントリ３Ａ．４は、ＨＬＡ−Ａ＊３３０３（配列番号１３７）からのものである。
【図３Ｂ】ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を提供する。
【図３Ｃ】ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を提供する。シグナル配列であるアミノ酸１〜２４は、太字にされ、下線を引かれている。
【０００９】
【図３Ｄ】それらのリーダー配列を含まずかつ膜貫通ドメイン領域を含まない、１１個の成熟ＭＨＣクラスＩ重鎖ペプチド配列のアライメントを示す。アライメントされた配列には、ヒト（ｈｕｍａ）ＨＬＡ−Ａ、配列番号１４０（配列番号１３４もまた参照されたい）；ＨＬＡ−Ｂ、配列番号１４１（配列番号１３８を参照されたい）；ＨＬＡ−Ｃ、配列番号１４２（配列番号１３９を参照されたい）；ＨＬＡ−Ａ＊０２０１、配列番号１４３；マウスＨ２Ｋタンパク質配列、配列番号１４４；ＨＬＡ−Ａの３つのバリアント（バリアント２、バリアント２Ｃ、及びバリアント２ＣＰ、配列番号１４５〜１４７）；３つのヒト（ｈｕｍａ）ＨＬＡ−Ａバリアント（ＨＬＡ−Ａ＊１１０１（ＨＬＡ−Ａ１１）、配列番号１４８；ＨＬＡ−Ａ＊２４０２（ＨＬＡ−Ａ２４）、配列番号１４９；及びＨＬＡ−Ａ＊３３０３（ＨＬＡ−Ａ３３）、配列番号１５０が含まれる。ＨＬＡ−Ａ＊０２０１は、ＨＬＡ−Ａのバリアントである。ＨＬＡ−Ａ（バリアント２）として記されるのは、ＨＬＡ−ＡのＹ８４Ａ及びＡ２３６Ｃバリアントである。ＨＬＡ−Ａ（バリアント２Ｃ）として記される７番目のＨＬＡ−Ａ配列は、８４位、１３９位、及び２３６位がＣ残基で置換されたＨＬＡ−Ａを示し、８番目の配列は、先行する配列のＣ末端に１つの追加的なプロリンが追加されている。９番目から１１番目の配列は、それぞれＨＬＡ−Ａ１１（ＨＬＡ−Ａ＊１１０１）、ＨＬＡ−Ａ２４（ＨＬＡ−Ａ＊２４０２）、及びＨＬＡ−Ａ３３（ＨＬＡ−Ａ＊３３０３）からのものであり、これらはある特定のアジア人集団においてよく見られる。アライメントにおいて、結合されたエピトープペプチドの不在下でＭＨＣ−β２Ｍ複合体を安定化するためのジスルフィド結合の形成のためにその位置のアミノ酸の代わりにシステイン残基が挿入され得る、複数の箇所（成熟タンパク質の８４及び１３９）が示される。また、アライメントにおいて、（成熟ポリペプチドの）２３６位も示され、これは、（例えば、成熟ポリペプチドのａａ１２で）β２Ｍと鎖内ジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基で置き換えられ得る。これらの箇所の各々の上には矢印が現れ、当該残基は、太字にされている。残基８４、１３９、及び２３６の両側に位置するボックスは、ａａクラスタ１、ａａクラスタ２、ａａクラスタ３、ａａクラスタ４、ａａクラスタ５、及びａａクラスタ６と表される（図においてそれぞれａａｃ１からａａｃ６として示される）、５つの残基からなるこれらの６つの組のそれぞれの側にある５つのアミノ酸からなる群を示し、これらは、（ｉ）任意の天然型アミノ酸または（ｉｉ）プロリンもしくはグリシンを除く任意の天然型アミノ酸から独立して選択される１〜５つのアミノ酸で置き換えられ得る。
【００１０】
【図４】Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ（ＮＰ＿００４０３９．１、配列番号１５１）、Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ（ＮＰ＿００１００９０６６．１、配列番号１５２）、Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ（ＮＰ＿００１０４０６０２．１、配列番号１５３）、Ｂｏｓ  Ｔａｕｒｕｓ（ＮＰ＿７７６３１８．１、配列番号１５４）、及びＭｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（ＮＰ＿０３３８６５．２、配列番号１５５）由来のβ２Ｍ前駆体（すなわち、リーダー配列を含む）の複数のアミノ酸配列のアライメントを提供する。下線を引かれたアミノ酸１〜２０は、シグナルペプチド（リーダー配列と称されることがある）である。
【００１１】
【図５】Ａ〜Ｄとして記される４つのＴ細胞ＭＭＰの実施形態を提供する。各実例において、Ｔ細胞ＭＭＰは、Ｎ末端及びＣ末端を有し、第１の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド（ＭＨＣ−１）を含む、第１のポリペプチドと、Ｎ末端及びＣ末端ならびに第２のＭＨＣポリペプチド（ＭＨＣ−２）を有し、任意選択で免疫グロブリン（Ｆｃ）ポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場を含む、第２のポリペプチドとを含む。示される実施形態では、第１及び第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結されて示されるが、Ｔ細胞ＭＭＰは、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間にジスルフィド結合による連結または任意の他の共有結合性の連結を必要とするものではない。Ｔ細胞ＭＭＰはまた、破線（−−−）により示される、独立して選択されるリンカー配列を含んでもよい。Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの両方は、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を含む。第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位（ＣＣ−１）及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位（ＣＣ−２）に対するいくつかの可能性のある箇所が、矢印により示される。独立して選択される１つまたは複数のＭＯＤのための箇所（例えば、それぞれのＭＯＤの間に任意選択的なアミノ酸リンカーを有して順に接続された１つ、２つ、３つ、またはそれよりも多くのＭＯＤを含む配列）は、点描のボックス内の「ＭＯＤ」により示される。ＭＯＤは、本開示の他の箇所でＭＯＤ＊により表される、バリアントＭＯＤを含有してもよい。Ａにおいて、ＭＯＤ（複数可）は、第１のポリペプチドのＣ末端に位置し、Ｂにおいて、ＭＯＤ（複数可）は、第２のポリペプチドのＮ末端に位置し、Ｃにおいて、ＭＯＤ（複数可）は、第２のポリペプチドのＣ末端に位置し、Ｄにおいて、複数のＭＯＤ（これらは同じであっても、または異なってもよい）は、第１のポリペプチドのＣ末端及び第２のポリペプチドのＮ末端に位置する。
【００１２】
【図６】Ａ〜Ｈとして記される、図５における実施形態と相似するＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートの８つの実施形態を提供する。図５にあるように、第１のポリペプチドは、Ｎ末端及びＣ末端を有し、このうち第１のＭＨＣポリペプチドは、β−２−ミクログロブリンポリペプチド（ＭＨＣクラスＩ重鎖（ＭＨＣ−Ｈ）と相互作用し、Ｔ細胞受容体にエピトープを提示することが可能なβ２Ｍ）を含むものとして与えられる。第２のポリペプチドは、Ｎ末端及びＣ末端、ＭＨＣ−Ｈポリペプチドを有し、任意選択で、免疫グロブリン（Ｆｃ）ポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場を含む。Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを繋ぐ任意選択的なジスルフィド結合は、Ａ〜Ｄにおいて、β２Ｍペプチド配列とＭＨＣ−Ｈペプチド配列とを接続するように示され、破線（−−−）により示される、独立して選択される任意選択的なリンカー配列は、必須ではない。Ｅ〜Ｈにおいては、Ａ〜Ｄにある複合体が繰り返されるが、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを繋ぐジスルフィド結合は、ＭＨＣ−Ｈペプチド配列を、エピトープとβ２Ｍペプチド配列との間に介在するリンカー配列に繋ぐように示される（例えば、ＭＨＣ−Ｈ鎖配列の８４位のＣｙｓ残基から（図３を参照されたい）、介在するリンカーへの結合）。Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの両方はまた、エピトープのコンジュゲーションのために採用される部位に加えて、１つまたは複数の化学コンジュゲーション部位を含んでもよい。かかるＣＣ−１及びＣＣ−２に対する可能性のある箇所が、矢印により示される。１つまたは複数の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤまたはバリアントＭＯＤのいずれか）は、図５に記載される通りである。
【００１３】
【図７】Ｔ細胞ＭＭＰから形成される２つの二量体の例を提供する。「Ａ」と標示される二量体は、図６において「Ａ」と標示されるＴ細胞ＭＭＰの２つを二量体化した結果である。「Ｂ」と標示される二量体は、図６において「Ｂ」と標示されるＴ細胞ＭＭＰの２つを二量体化した結果である。示されるような実施形態は、それぞれのポリペプチドの間に１つまたは複数のジスルフィド結合を含み、これらの各々は任意選択的なものである。加えて、Ｆｃ領域または結合した任意選択的なリンカーにおけるＣＣ−２部位のサブセットのみが示される。
【００１４】
【図８】米国特許第９，３１０，３７４号から適合された、アルデヒド含有ポリペプチドと反応するヒドラジニルインドールの略図を示す。
【００１５】
【図９】パートＡでは、ＦＧＥ酵素の作用を通した化学コンジュゲーション部位（ｆＧｌｙ残基）を生じさせるための箇所としてスルファターゼモチーフを有する第１のポリペプチドを有する、Ｔ細胞ＭＭＰのマップを示す。Ｂにおいて、図９は、ヒトＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ末端に結合した縦一列に並んだＩＬ−２  ＭＯＤ、続いてヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドを有する、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドを示す。
【００１６】
【図１０Ａ】Ｎ末端からＣ末端へと、下線及び太字で示されるヒトＩＬ−２シグナル配列を有する、一連のＨＬＡ  Ａ＊１１０１重鎖構築物を示す。
【図１０Ｂ】Ｎ末端からＣ末端へと、下線及び太字で示されるヒトＩＬ−２シグナル配列を有する、一連のＨＬＡ  Ａ＊１１０１重鎖構築物を示す。
【図１０Ｃ】Ｎ末端からＣ末端へと、下線及び太字で示されるヒトＩＬ−２シグナル配列を有する、一連のＨＬＡ  Ａ＊１１０１重鎖構築物を示す。
【図１０Ｄ】Ｎ末端からＣ末端へと、下線及び太字で示されるヒトＩＬ−２シグナル配列を有する、一連のＨＬＡ  Ａ＊１１０１重鎖構築物を示す。シグナル（リーダー）配列には、ＭＯＤ（ヒトＩＬ−２として示される）または「任意選択的なペプチドリンカー−免疫調節ポリペプチド−任意選択的なペプチドリンカー」が続く。ＭＯＤが指定されない場合、それは任意の所望のＭＯＤであってもよい。配列の残りの部分は、３つのシステイン置換（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ、Ａ２３６Ｃ）を有するＨＬＡ  Ａ＊１１０１  Ｈ鎖配列、リンカー、及び２つのアミノ酸置換（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）を有するｈＩｇＧ１  Ｆｃである。アスタリスクは、配列の終止を示す。
【００１７】
【図１１Ａ】ヒトβ２Ｍポリペプチド配列を含む一連の構築物を示す。
【図１１Ｂ】ヒトβ２Ｍポリペプチド配列を含む一連の構築物を示す。
【図１１Ｃ】ヒトβ２Ｍポリペプチド配列を含む一連の構築物を示す。
【図１１Ｄ】ヒトβ２Ｍポリペプチド配列を含む一連の構築物を示す。
【図１１Ｅ】ヒトβ２Ｍポリペプチド配列を含む一連の構築物を示す。構築物は、Ｎ末端からＣ末端へと、リーダー配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（太字にされ、下線を引かれている）、実施例１及び２に記載されるような任意選択的なリンカー及びスルファターゼ部位及び独立して選択される別のリンカー（（リンカー）０−４Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（リンカー）０−４）、ならびにＲ１２Ｃアミノ酸修飾を有するヒトβ２Ｍ配列
【化１】
2020534352.tif 000003
を含む。哺乳類細胞における、図１０にあるペプチド等のＭＨＣクラスＩ重鎖含有ポリペプチドとの共発現により、Ｔ細胞ＭＭＰを産出した後、スルファターゼ配列は、ホルミルグリシン残基を含有するように酵素的に修飾される。次いで、Ｔ細胞ＭＭＰのホルミルグリシンを、例えばそれらのカルボキシル末端でヒドラジニル基（例えば、ヒドラジニルインドール基）をもつように修飾された、ＨＢＶペプチド（例えば、図１１Ａ〜１１Ｅに示されるような）と反応させることによって、Ｔ細胞ＭＭＰコンジュゲートが調製され得る。
【００１８】
定義
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチドを指す。故に、この用語には、１本鎖、２本鎖、または多重鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、あるいはプリン塩基及びピリミジン塩基または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然の、または誘導体化されたヌクレオチド塩基を含むポリマーが含まれるが、これらに限定されない。
【００１９】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書で互換的に使用され、コード化及び非コード化アミノ酸、化学的もしくは生化学的に修飾されたまたは誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾ペプチド骨格を有するポリペプチドが含まれ得る、任意の長さのポリマー形態のアミノ酸を指す。
【００２０】
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対してある特定の「配列同一性」パーセントを有し、これはつまり、アライメントされたとき、当該２つの配列を比較した際に塩基またはアミノ酸のパーセンテージが同じであり、かつ同じ相対的位置にあるということである。配列同一性は、いくつかの異なる方式で決定することができる。配列同一性を決定するには、種々の好都合な方法、ならびに、ワールド・ワイド・ウェブを介してｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、及びｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含めたサイトにて利用可能な、コンピュータプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ−ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ等）を用いて、配列をアライメントすることができる。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０を参照されたい。別途定めのない限り、配列アライメントは、ＢＬＡＳＴを用いて作成される。
【００２１】
「アミノ酸（単数）」及び「アミノ酸（複数）」という用語は、それぞれ「ａａ」及び「ａａｓ」と略称される。天然型アミノ酸（単数）または天然型アミノ酸（複数）とは、別途定めのない限り、Ｌ（Ｌｅｕ、ロイシン）、Ａ（Ａｌａ、アラニン）、Ｇ（Ｇｌｙ、グリシン）、Ｓ（Ｓｅｒ、セリン）、Ｖ（Ｖａｌ、バリン）、Ｆ（Ｐｈｅ、フェニルアラニン）、Ｙ（Ｔｙｒ、チロシン）、Ｈ（Ｈｉｓ、ヒスチジン）、Ｒ（Ａｒｇ、アルギニン）、Ｎ（Ａｓｎ、アスパラギン）、Ｅ（Ｇｌｕ、グルタミン酸）、Ｄ（Ａｓｐ、アスパラギン）、Ｃ（Ｃｙｓ、システイン）、Ｑ（Ｇｌｎ、グルタミン）、Ｉ（Ｉｌｅ、イソロイシン）、Ｍ（Ｍｅｔ、メチオニン）、Ｐ（Ｐｒｏ、プロリン）、Ｔ（Ｔｈｒ、トレオニン）、Ｋ（Ｌｙｓ、リジン）、及びＷ（Ｔｒｐ、トリプトファン）（全てＬ体のものである）を意味する。セレノシステイン及びヒドロキシプロリンは両方とも、それらが包含されることが意図されるあらゆる事例において具体的に言及される、天然型アミノ酸である。
【００２２】
非天然アミノ酸は、上記に列挙した天然型アミノ酸、セレノシステイン、及びヒドロキシプロリン以外の任意のアミノ酸である。
【００２３】
本明細書で使用される「化学コンジュゲーション」とは、共有結合の形成を意味する。本明細書で使用される「化学コンジュゲーション部位」とは、ポリペプチドへの共有結合の形成において必要とされるかまたはそれを補助する任意の前後関係にある要素（例えば、周囲のアミノ酸配列）を含む、共有結合が形成され得るポリペプチド内の箇所を意味する。したがって、群内のあるアミノ酸において酵素的修飾、及び最終的に共有結合の形成を導くアミノ酸の群を含む部位もまた、化学コンジュゲーション部位と称され得る。一部の事例では、前後関係から明確となろうが、化学コンジュゲーション部位という用語は、共有結合の形成または化学修飾がすでに起こった箇所を指して使用されてもよい。
【００２４】
「保存的アミノ酸置換」という用語は、タンパク質における、類似した側鎖を有するアミノ酸残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンからなり、脂肪族−ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びトレオニンからなり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンからなり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンからなり、酸性側鎖を有するアミノ酸の群は、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンからなる。例となる保存的アミノ酸置換の群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン−グリシン、及びアスパラギン−グルタミンである。
【００２５】
本明細書で使用される「免疫シナプス（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｙｎａｐｓｅ）」または「免疫シナプス（ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｎａｐｓｅ）」という用語は全般的に、適応免疫応答において相互作用している２つの免疫細胞間の天然の境界面、例えば、ＡＰＣ、または標的Ｔ細胞と、エフェクター細胞、例えば、リンパ球、エフェクターＴ細胞、天然キラー細胞等との間の境界面を指す。ＡＰＣとＴ細胞との間の免疫シナプスは全般的に、例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５−９６に記載されるように、Ｔ細胞抗原受容体と１つまたは複数のＭＨＣ分子との相互作用によって開始される。同文献の開示は参照により本明細書に援用される。
【００２６】
「Ｔ細胞」には、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔレグ）、及びＮＫ−Ｔ細胞を含めた、ＣＤ３を発現する全ての種類の免疫細胞が含まれる。
【００２７】
別途定めのない限り、本明細書で使用されるとき、「第１の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」または「第１のＭＨＣポリペプチド」という用語、ならびに「第２のＭＨＣポリペプチド」、「ＭＨＣ重鎖」、及び「ＭＨＣ−Ｈ」という用語は、ＭＨＣクラスＩ受容体の要素を指す。
【００２８】
「ＭＯＤ」（共免疫調節ポリペプチドまたは共刺激ポリペプチドとも呼ばれる）は、この用語が本明細書で使用されるとき、Ｔ細胞上の「同種ＭＯＤ」（同種共免疫調節ポリペプチドまたは同種共刺激ポリペプチドとも呼ばれる）に特異的に結合して、それによって、例えばペプチドが負荷されたＭＨＣポリペプチドとのＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって提供される一次シグナルに加えて、増殖、活性化、分化等を含むが、これらに限定されないＴ細胞の応答を媒介するシグナルを提供する、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞等）上のポリペプチド、またはＡＰＣ上のポリペプチドの一部分を含む。ＭＯＤには、ＣＤ７、Ｂ７−１（ＣＤ８０）、Ｂ７−２（ＣＤ８６）、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ−Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体、及びＢ７−Ｈ３に特異的に結合するリガンドが含まれるが、これらに限定されない。ＭＯＤはまた、とりわけ、限定されないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ−１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）、ＣＤ２、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７−Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等の、Ｔ細胞上に存在する同種ＭＯＤに特異的に結合する抗体（またはＦａｂ等のその抗原結合部分）も包含する。
【００２９】
Ｔ細胞ＭＭＰの「免疫調節ドメイン」（「ＭＯＤ」）は、ＭＯＤとして作用するＴ細胞ＭＭＰのポリペプチドである。
【００３０】
本明細書で使用される「異種」とは、それぞれ天然の核酸またはタンパク質に見出されないヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。
【００３１】
本明細書で使用される「組換え」とは、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系に見出される内在性核酸から区別可能な構造的コード配列または非コード配列を有する構築物をもたらす、クローニング、制限、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、及び／またはライゲーションステップの種々の組み合わせの産物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、ｃＤＮＡ断片から、または一連の合成オリゴヌクレオチドから組み立てて、細胞内または無細胞転写・翻訳系に含まれる組換え転写単位から発現させることが可能である合成核酸を提供することができる。
【００３２】
「組換え発現ベクター」及び「ＤＮＡ構築物」という用語は、ベクター及び少なくとも１つのインサートを含むＤＮＡ分子を指すように本明細書で互換的に使用される。組換え発現ベクターは、通常は、インサート（複数可）を発現させる及び／または伝播させる目的で、または他の組換えヌクレオチド配列の構築目的で生成される。インサート（複数可）は、プロモーター配列に作動可能に連結される場合もあれば、されない場合もあり、またＤＮＡ制御配列に作動可能に連結される場合もあれば、されない場合もある。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、「親和性」という用語は、２つの作用物質（例えば、抗体及び抗原）の可逆的結合に関する平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）として表される。親和性は、無関係のアミノ酸配列に対する抗体の親和性よりも少なくとも１倍高い、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも３０倍高い、少なくとも４０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも６０倍高い、少なくとも７０倍高い、少なくとも８０倍高い、少なくとも９０倍高い、少なくとも１００倍高い、もしくは少なくとも１，０００倍高い、またはそれよりも高い可能性がある。標的タンパク質に対する抗体の親和性は、例えば、約１００ナノモル濃度（ｎＭ）〜約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１ピコモル濃度（ｐＭ）、もしくは約１００ｎＭ〜約１フェムトモル濃度（ｆＭ）、またはそれよりも高い可能性がある。本明細書で使用されるとき、「結合活性」という用語は、２つ以上の作用物質の複合体の、希釈後の解離に対する抵抗性を指す。「免疫反応性」及び「優先的に結合する」という用語は、抗体及び／または抗原結合断片に関して本明細書で互換的に使用される。
【００３４】
本明細書で使用される「結合」（例えば、１つもしくは複数のＭＯＤを含むＴ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲート等の分子の、１つまたは複数のポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体及びＴ細胞上の同種共免疫調節ポリペプチド（同種ＭＯＤ）への結合を参照しての）は、分子間の非共有結合性の相互作用（複数可）を指す。非共有結合性の結合は、例えば、塩橋及び水架橋等の相互作用を含めた、静電気、疎水性、イオン性、及び／または水素結合相互作用に起因する、２つの分子間の直接の会合を指す。非共有結合性の結合による相互作用は全般的に、１０−６Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、または１０−１２Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を特徴とする。「親和性」は、非共有結合性の結合の強度を指し、増加した結合親和性がより低いＫＤに相関する。「特異的結合」は全般的に、例えば、リガンド分子とその結合部位または「受容体」との間の、少なくとも約１０−７Ｍまたはそれよりも高い親和性（例えば、５×１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、もしくは１０−１２Ｍ未満、及びそれよりも高い親和性、または１０−７〜１０−９もしくは１０−９〜１０−１２の範囲内）での結合を指す。「非特異的結合」は全般的に、リガンドの、その指定される結合部位または「受容体」以外の何らかへの、典型的には約１０−７Ｍ未満の親和性での結合（例えば、約１０−６Ｍ未満、約１０−５Ｍ未満、約１０−４Ｍ未満の親和性での結合）を指す。しかしながら、一部の文脈、例えば、ＴＣＲとペプチド／ＭＨＣ複合体との間の結合においては、「特異的結合」は、１μＭ〜１００μＭ、または１００μＭ〜１ｍＭの範囲内にあり得る。本明細書で使用される「共有結合」とは、２つの異なる分子間の１つまたは複数の共有結合性の化学結合の形成を意味する。
【００３５】
「処置」、「処置すること」等の用語は、所望の薬理作用及び／または生理作用を得ることを全般的に意味するように本明細書で使用される。この作用は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）という点で予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）であってもよく、及び／または疾患及び／または疾患に起因し得る有害作用に対する部分的もしくは完全な治癒の点で治療的であってもよい。本明細書で使用される「処置」とは、哺乳動物における疾患または症状のあらゆる処置を網羅するものであり、これには、（ａ）疾患もしくは症状にかかる素因があり得るが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患もしくは症状が起こることを予防すること、（ｂ）疾患もしくは症状を阻害すること、すなわち、その発症を停止させること、及び／または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退縮を引き起こすこと、が含まれる。治療剤は、疾患または損傷の前、その最中、及び／またはその後に投与されてもよい。処置が患者の望ましくない臨床症状を安定化するかまたは低減する、継続中の疾患の処置が、特に目的となる。かかる処置は、罹患した組織における完全な機能喪失の前に行われることが望ましい。対象となる療法は、疾患の症候性の段階中、及び一部の実例では疾患の症候性の段階後に投与されることが望ましいであろう。
【００３６】
「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、診断、処置、または療法が所望される任意の哺乳類対象を指す。哺乳動物には、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、齧歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、有蹄類（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギ等）等が含まれる。
【００３７】
本発明がさらに説明される前に、本発明が説明される特定の実施形態に限定されず、したがって、当然のことながら、異なり得ることを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態を説明することを目的とするにすぎず、限定することを意図していないことも理解されたい。
【００３８】
値の範囲が提供される場合、この範囲が、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り、その範囲の上限と下限との間の各介在値を下限の小数点第１位まで含み、その定められる範囲内の任意の他の定められる値または介在値が本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は独立して、当該より小さい範囲に含まれてもよく、これらもまた、定められる範囲内の任意の具体的に除外される境界値に制約されつつ、本発明に包含される。ある範囲が上限及び下限を含む場合、これらの境界値のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた、本発明に含まれる。
【００３９】
別途規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に一般に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の実践または試験において、本明細書に記載の方法及び材料と同様または同等の任意の方法及び材料もまた使用することができるが、好ましい方法及び材料がここでは記載される。本明細書で言及される全ての刊行物は、それらの刊行物が引用される関連となる方法及び／または材料を開示し、説明するために、参照により本明細書に援用される。
【００４０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上そうでないとする明確な指示がない限り、複数形の指示対象を含むことに留意しなければならない。故に、例えば、「多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド（単数）」への言及は、複数のかかるポリペプチドを含み、「（ｔｈｅ）免疫調節ポリペプチド」または「（ｔｈｅ）ＭＯＤ」への言及は、１つまたは複数の免疫調節ポリペプチド及び当業者に既知のその均等物への言及を含み、その他も同様である。特許請求の範囲がいずれの任意選択的な要素をも除外するように起草され得ることにさらに留意されたい。したがって、この陳述は、請求項の要素の列挙に関連しての「単に」、「のみ」等といった排他的用語の使用、または「否定的」限定の使用のための先行基礎（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ  ｂａｓｉｓ）としての役目を果たすことを意図する。
【００４１】
明確さのために別個の実施形態の関連において記載される、本発明のある特定の特長がまた、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。それとは逆に、簡潔さのために単一の実施形態の関連において記載される、本発明の種々の特長がまた、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供されてもよい。本発明に関する実施形態の全ての組み合わせが、あたかもありとあらゆる組み合わせが個々にかつ明示的に開示されているかのように本発明によって具体的に包含され、本明細書に開示される。加えて、種々の実施形態及びその要素の全ての部分的組み合わせもまた、あたかもありとあらゆるかかる部分的組み合わせが個々にかつ明示的に本明細書に開示されているかのように本発明によって具体的に包含され、本明細書に開示される。
【００４２】
本明細書で考察される刊行物は、本願の出願日前に単にそれらが開示されるために提供される。本明細書には、先願発明に基づいて本発明がかかる刊行物に先行する権利がないことが認められると解釈されるものは何もない。さらに、提供される刊行物の日付は、実際の刊行物の日付とは異なる場合があり、実際の刊行物の日付は独立して確認する必要があり得る。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
Ｉ．エピトープ結合のための化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞調節多量体ポリペプチド（Ｔ細胞ＭＭＰ）
本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であるＴ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲート、ならびにそれらの調製方法及び個体における免疫応答を調節する際のそれらの使用方法を提供する。Ｔ細胞ＭＭＰは、独立して選択される１つまたは複数の野生型ＭＯＤポリペプチド及び／またはそれらの同種ＭＯＤに対して低減された結合親和性を呈するバリアントＭＯＤポリペプチド、ならびにエピトープ及びペイロードをカップリングするための化学コンジュゲーション部位を含んでもよい。２つの種類のポリペプチド（第１のポリペプチド及び第２のポリペプチド）を含み、これらのポリペプチドのうちの少なくとも１つが、化学療法剤等のペイロード及び／またはＴＣＲに結合し得る材料（例えば、エピトープペプチド及びヌルペプチド（ｎｕｌｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ））の結合（例えば、共有結合性の結合）のための化学コンジュゲーション部位を含む、ヘテロ二量体であるＴ細胞ＭＭＰが本開示に含まれる。また、エピトープ及び／またはペイロード（例えば、化学療法薬）に化学的にコンジュゲートされたＴ細胞ＭＭＰも本開示に含まれる。Ｔ細胞ＭＭＰに存在するＭＯＤ（複数可）の種類に応じて、ＴＣＲに特異的なエピトープがＴ細胞ＭＭＰ上に存在する場合、Ｔ細胞は、例えば、クローン増大を含めた活性化を受けることによって応答し得る（例えば、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、及び／またはＣＤ８０等の活性化型ＭＯＤがＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる場合）。代替として、Ｔ細胞は、ＣＤ８６及び／またはＰＤ−Ｌ１等のＭＯＤがＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる場合、Ｔ細胞活性を下方制御する（例えば、自己免疫反応を遮断する）阻害を受けてもよい。ＭＯＤはいずれのエピトープにも特異的ではないため、Ｔ細胞の活性化または阻害は、Ｔ細胞ＭＭＰのＴ細胞への結合がＭＨＣ−エピトープ−ＴＣＲ間相互作用から強力に影響を受けるように、またはさらにはそれに支配されるように、同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤをＴ細胞ＭＭＰに組み込むことによって、エピトープ特異的相互作用の方へ傾けることができる。
【００４４】
本明細書に記載される実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、代用ＡＰＣとして機能し、適応免疫応答を模倣する。Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート複合体において提示される共有結合されたエピトープにより、Ｔ細胞の表面上に存在するＴＣＲに結合することによって、それを行う。この結合は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに、エピトープ特異的細胞の標的化を達成する能力を提供する。本明細書に記載される実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートはまた、Ｔ細胞上の相対する共刺激タンパク質（同種ＭＯＤ）に結合する少なくとも１つのＭＯＤも保有する。次いで、両方のシグナル、すなわち、ＴＣＲへのエピトープ／ＭＨＣ結合及び同種ＭＯＤへのＭＯＤ結合が、所望のＴ細胞特異性と、阻害または活性化／増殖のいずれかとの両方を駆動する。
【００４５】
化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰは、治療用途、診断用途、及び研究用途での材料を調製するために異なるエピトープ及び／またはペイロードが挿入され得る、プラットフォームとしての用途がある。化学コンジュゲーション部位を含むかかるＴ細胞ＭＭＰは、エピトープ含有材料（例えば、ペプチド）をＴ細胞ＭＭＰに迅速に挿入し、該エピトープに特異的なＴＣＲをもつＴ細胞の活性化または阻害に関して試験することを可能にするため、診断薬及び治療薬の迅速な調製を可能にする。
【００４６】
ある実施形態では、かかるＴ細胞ＭＭＰの化学コンジュゲーション部位を利用して、化学療法剤または酵素等のペイロードをＴ細胞ＭＭＰに結合させてもよい。付加されたエピトープの不在下で、結果として生じる複合体は、特に、Ｔ細胞ＭＭＰがＦｃ足場の組み込みに起因して多量体（例えば、二量体または高次構造）を形成する場合、抗体と同様の様式で用いて、ペイロードを送達させてもよい。エピトープの欠如に起因して、Ｔ細胞ＭＭＰ−ペイロードコンジュゲートのＭＯＤは、異なる細胞に対するそれらの結合特異性及び当該複合体の結合活性によって、ペイロードを受け取ることになる細胞を規定することになる。
【００４７】
ある実施形態では、Ｔ細胞増殖を刺激するバリアントＭＯＤ及びエピトープがＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる場合、Ｔ細胞を少なくとも１つの濃度のＴ細胞ＭＭＰに接触させることにより、該エピトープに特異的なＴＣＲを有するＴ細胞の活性化において（Ｔ細胞増殖またはＺＡＰ−７０活性（例えば、Ｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ２．５（２０１０）：ａ００２２７９を参照されたい）によって測定したとき）、該エピトープに特異的なＴＣＲを有しない同じ濃度のＴ細胞ＭＭＰに接触させたＴ細胞と比較して、少なくとも２倍（例えば、少なくとも２、３、４、５、１０、２０、３０、５０、７５、または１００倍）の差異が誘導される。
【００４８】
ある実施形態では、Ｔ細胞活性化を阻害するバリアントＭＯＤ及びエピトープがＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる場合、Ｔ細胞を少なくとも１つの濃度のＴ細胞ＭＭＰに接触させることにより、（Ｔ細胞増殖によって測定したとき）Ｔ細胞の活性化がエピトープ特異的様態で阻止される。
【００４９】
エピトープが組み込まれたＴ細胞ＭＭＰの特異性は、結合への該エピトープ及びＭＯＤの相対的寄与度に左右されよう。ＭＯＤが結合相互作用を支配する場合、該エピトープに特異的なＴ細胞へのＴ細胞ＭＭＰの特異性は、該エピトープがＭＯＤよりも全体的結合エネルギーに多く寄与することによって結合相互作用を支配する場合のＴ細胞ＭＭＰ複合体と比べて、低減されよう。該エピトープに特異的なＴＣＲに対するエピトープの寄与度が高ければ高いほど、Ｔ細胞ＭＭＰの特異性はそのＴ細胞型に対して高くなろう。エピトープがそのＴＣＲに対して強力な親和性を有する場合、それらの同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤの使用が、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのエピトープ選択的相互作用に有利となり、また、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートにコンジュゲートされ得る任意のペイロードの選択的送達を容易にしよう。
【００５０】
エピトープを組み込むため及びエピトープ特異的であるＴ細胞ＭＭＰを調製するための構造として有用であることに加えて、エピトープを欠いているか、またはヌルペプチドを含有するかのいずれかとして説明されるＴ細胞ＭＭＰは、Ｔ細胞ＭＭＰに存在するＭＯＤ及び／またはバリアントＭＯＤに対する受容体をもつ標的細胞にペイロードを送達するために採用されてもよい。
【００５１】
ある実施形態では、エピトープを欠いた（またはヌルペプチドを含有する）、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖に対して阻害性のＭＯＤをもつＴ細胞ＭＭＰが、Ｔ細胞ＭＭＰに存在するＭＯＤまたはバリアントＭＯＤに対する１つまたは複数の受容体を含有するＴ細胞の模擬物質（ｓｉｍｕｌａｔｏｒｓ）として使用されてもよい。かかる刺激性Ｔ細胞ＭＭＰを用いて、それが結合するＴ細胞にペイロード（例えば、化学的にコンジュゲートされた化学療法薬）を同時に送達してもよい。
【００５２】
ある実施形態では、エピトープを欠いた（またはヌルペプチドを含有する）、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖に対して阻害性のＭＯＤをもつＴ細胞ＭＭＰが、免疫反応を抑制する（例えば、移植片対宿主または宿主対移植片拒絶反応を予防する）ために、免疫抑制薬として、単独で、またはシクロスポリン等の他の免疫抑制薬と組み合わせて使用されてもよい。かかる阻害性Ｔ細胞ＭＭＰを用いて、それが結合するＴ細胞にペイロード（例えば、化学的にコンジュゲートされた化学療法薬）を同時に送達してもよい。
【００５３】
本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するために、したがって、個体における免疫応答を調節するために有用である、Ｔ細胞ＭＭＰを提供する。Ｔ細胞ＭＭＰは、同種ＭＯＤに対して低減された結合親和性を呈するＭＯＤを含む。
【００５４】
Ｉ．Ａ．Ｔ細胞ＭＭＰ
本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰフレームワークは、第１のポリペプチド鎖または第２のポリペプチド鎖のいずれかの上に少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を含む。
【００５５】
ある実施形態では、本開示は、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、ｃ）第１及び第２のポリペプチドのうちの少なくとも一方が化学コンジュゲーション部位を含むことと、ｄ）少なくとも１つのＭＯＤと、を含むヘテロ二量体を含み、該第１及び／または第２のポリペプチドが少なくとも１つのＭＯＤ（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれよりも多く）を含む、Ｔ細胞ＭＭＰを提供する。任意選択で、第１または第２のポリペプチドは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む。独立して選択される、ＭＯＤのうちの１つまたは複数は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈するバリアントＭＯＤであってもよい。本開示はまた、エピトープ（例えば、エピトープをもつペプチド）が化学コンジュゲーション部位に（直接または間接的に）共有結合されて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成する、Ｔ細胞ＭＭＰも提供する。かかる実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在するエピトープ（例えば、エピトープペプチド）は、少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または少なくとも１ｎＭ）の親和性で、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合し得る。Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートは、該Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で、第１のＴ細胞に結合し得、ここで、第１のＴ細胞は、その表面上に同種ＭＯＤ、及び少なくとも１００μＭの親和性で該エピトープに結合するＴＣＲを発現し、第２のＴ細胞は、その表面上に同種ＭＯＤを発現するが、その表面上に、少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または少なくとも１ｎＭ）の親和性で該エピトープに結合するＴＣＲは発現しない。
【００５６】
ある実施形態では、本開示は、ヘテロ二量体のＴ細胞ＭＭＰ（これは、ヘテロ二量体のより高いレベルでの多量体、二量体、三量体等を形成し得る）であって、
ａ）ｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）任意選択的な免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド足場または非Ｉｇポリペプチド足場を含む、第２のポリペプチドと、
ｃ）第１のポリペプチドに結合したもしくはその内部にある第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位、及び／または第２のポリペプチドに結合したもしくはその内部にある第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位と、
ｄ）１つまたは複数の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、を含み、該１つまたは複数のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、
Ａ）第１のポリペプチドのＣ末端に（例えば、図５または６におけるＡを参照されたい）、
Ｂ）第２のポリペプチドのＮ末端に（例えば、図５または６におけるＢを参照されたい）、
Ｃ）第２のポリペプチドのＣ末端に（例えば、図５または６におけるＣを参照されたい）、または
Ｄ）第１のポリペプチドのＣ末端及び第２のポリペプチドのＮ末端にあり（例えば、図５または６におけるＤを参照されたい）、
該１つまたは複数のＭＯＤの各々が、独立して選択される野生型またはバリアントＭＯＤである、該ヘテロ二量体のＴ細胞ＭＭＰを提供する。
【００５７】
かかるＴ細胞ＭＭＰフレームワークは、エピトープ（例えば、ポリペプチドエピトープ）を、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドのうちの少なくとも一方に結合された第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの１つへの連結を通して共有結合性で結合させて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成させ得る、プラットフォームとして作用する。これは、Ｔ細胞ＭＭＰの関連においてＴ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に提示するための、異なるエピトープのフレームワークへの容易な導入を可能にする。ペイロード（例えば、化学療法薬）を同様に、第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの１つ（例えば、エピトープの結合に採用されない部位）への共有結合性の結合によって、Ｔ細胞ＭＭＰに結合させることができる。
【００５８】
多量体化が可能な免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場が採用される場合、Ｔ細胞ＭＭＰは、多量体化し得る。該複合体は、二量体（例えば、図７を参照されたい）、三量体、四量体、または五量体の形態であってもよい。Ｔ細胞ＭＭＰの多量体を含む組成物はまた、単量体を含んでもよく、したがって、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、またはそれらのいずれかの組み合わせ（例えば、単量体及び二量体の混合物）を含んでもよい。
【００５９】
ある実施形態では、ＭＯＤは、任意選択でエピトープを含むＴ細胞ＭＭＰにおいて提示される、独立して選択される野生型ＭＯＤまたはバリアントＭＯＤである。ある実施形態では、ＭＯＤは、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性化／増殖を刺激することが可能な１つまたは複数のＭＯＤまたはバリアントＭＯＤ（例えば、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、及び／またはＣＤ８０）である。別の実施形態では、ＭＯＤは、Ｔ細胞の活性化／増殖を阻害することが可能な１つまたは複数のＭＯＤまたはバリアントＭＯＤ（例えば、ＦＡＳ−Ｌ及び／またはＰＤ−Ｌ１）である。好適なエピトープをもつＴ細胞ＭＭＰと併用されるとき、かかる活性化型ＭＯＤまたは阻害性ＭＯＤは、特にＭＯＤがバリアントＭＯＤであり、ＭＨＣ−エピトープ−ＴＣＲ間相互作用がＴ細胞ＭＭＰとＴ細胞との相互作用を支配するのに十分に強力である場合、エピトープ特異的Ｔ細胞作用の能力がある。
【００６０】
Ｉ．Ａ．１Ｔ細胞ＭＭＰにおける第１及び第２の化学コンジュゲーション部位の箇所
エピトープ（例えば、エピトープ含有ペプチド）及び／またはペイロードを組み込む化学コンジュゲーション反応に供される前に、本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰは、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を含む。Ｔ細胞ＭＭＰが１つよりも多くの化学コンジュゲーション部位を含む場合、第１のポリペプチド上にコンジュゲーション部位（第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位）が２つ以上、第２のポリペプチド上にコンジュゲーション部位（第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位）が２つ以上、または第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位が少なくとも１つ及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位が少なくとも１つ、存在してもよい。１つよりも多くの化学コンジュゲーション部位がＴ細胞ＭＭＰ分子に存在する各事例において、これらの部位は独立して選択され、コンジュゲーションのために同じまたは異なる化学反応、アミノ酸配列、または化学基を採用してもよい。第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位（ＣＣ−１として示される）及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位（ＣＣ−１として示される）に対する箇所のいくつかの例が、図５〜７に示される。
【００６１】
複数の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドは、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない第１のＭＨＣポリペプチド、そのＮ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチド、そのＣ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチド、またはそのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチドを含む。第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つは、ａ）第１のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、このとき、第１のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか、もしくはその配列内にあり、ここで、第１のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを含む、ｃ）第１のＭＨＣポリペプチドのＮ末端上のリンカーの配列に結合しているか、もしくはその配列内にある、及び／またはｄ）第１のＭＨＣポリペプチドのＣ末端上のリンカーの配列に結合しているか、もしくはその配列内にある。Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドの追加的な化学コンジュゲーション部位が、第１のＭＨＣポリペプチドまたはそれに結合した任意のリンカー内を含めた、第１のポリペプチド上の任意の箇所に（それに結合して、またはその内部に）存在してもよい（例えば、化学コンジュゲーション用の部位としての役目を果たす１つよりも多くの酵素修飾配列）。かかる実施形態では、第１のＭＨＣポリペプチドは、下記に記載されるようなβ２Ｍポリペプチド配列を含んでもよい。
【００６２】
複数の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドは、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない第２のＭＨＣポリペプチド、そのＮ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、そのＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、またはそのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチドを含む。第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つは、ａ）第２のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、このとき、第２のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか、もしくはその配列内にあり、ここで、第２のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを含む、ｃ）第２のＭＨＣポリペプチドのＮ末端上のリンカーの配列に結合しているか、もしくはその配列内にある、及び／またはｄ）第２のＭＨＣポリペプチドのＣ末端上のリンカーの配列に結合しているか、もしくはその配列内にある。加えて、第２のポリペプチドが、免疫グロブリン（Ｆｃ）ポリペプチドａａ配列または非Ｉｇポリペプチド足場を、それに結合した追加的なリンカーと共に含有する場合、第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位は、第２のＭＨＣポリペプチド、免疫グロブリンポリペプチド、ポリペプチド足場、または結合したリンカーに結合しているか、またはその内部にあってもよい。Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドの追加的な化学コンジュゲーション部位が、第２のＭＨＣポリペプチドまたはそれに結合した任意のリンカー内を含めた、第２のポリペプチド上の任意の箇所に（それに結合して、またはその内部に）存在してもよい（例えば、化学コンジュゲーション用の部位としての役目を果たす１つよりも多くの酵素修飾配列）。かかる実施形態では、第２のＭＨＣポリペプチドは、下記に記載されるようなＭＨＣ重鎖（ＭＨＣ−Ｈ）ポリペプチド配列を含んでもよい。
【００６３】
ある実施形態では、第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩポリペプチドであるように選択されてもよく、このうち第１のＭＨＣポリペプチドがβ２Ｍポリペプチド配列を含み、第２のポリペプチドがＭＨＣ重鎖配列を含み、第１または第２のポリペプチド上に少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位が存在する。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰにおける１つまたは複数の第１の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つは、β２Ｍポリペプチド、またはそのＮ末端もしくはＣ末端に結合したリンカーのいずれかに結合しているか（Ｎ末端またはＣ末端での結合を含む）、またはそれらのいずれかの内部にあってもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰにおける第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つは、ＭＨＣ−Ｈポリペプチド、ＭＨＣ−ＨポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に結合したリンカーに結合しているか（Ｎ末端またはＣ末端での結合を含む）、もしくはその内部にあってもよく、または、存在する場合、免疫グロブリン（Ｆｃ）ポリペプチド（または非Ｉｇポリペプチド足場）もしくはそれに結合したリンカーに結合しているか、もしくはその内部にあってもよい。かかるＭＨＣクラスＩポリペプチド構築物の別の実施形態では、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの両方が、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を含む。
【００６４】
Ｔ細胞ＭＭＰがβ２Ｍポリペプチド配列を含む場合、この配列は、図４に記載されるアミノ酸配列のうちの１つに対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有し得る。β２Ｍポリペプチドは、図４に記載されるアミノ酸配列の一部分に対して同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、８０、１００、または１１０個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列を含んでもよい。化学コンジュゲーション配列は、β２Ｍポリペプチドに結合し得るか（例えば、Ｎ末端及び／またはＣ末端またはそれに結合したリンカーで）、またはβ２Ｍポリペプチド内にあり得る。
【００６５】
Ｔ細胞ＭＭＰがＭＨＣ−Ｈポリペプチドを含む場合、それは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ重鎖であってもよい。ある実施形態では、ＭＨＣ−Ｈポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｄのうちの１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含んでもよい。ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｄに記載されるアミノ酸配列の一部分に対して同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、または３３０個の連続アミノ酸を有するアミノ酸配列を含んでもよい。化学コンジュゲーション配列は、ＭＨＣ−Ｈポリペプチドに結合し得るか（例えば、Ｎ末端及び／またはＣ末端またはそれに結合したリンカーで）、またはその内部にあり得る。
【００６６】
Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドは、多量体化するための構造及びその能力をＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）に提供し、加えて、化学コンジュゲーションのための可能性のある箇所を提供する、分子足場の一部として作用し得るＩｇ  Ｆｃポリペプチド配列を含んでもよい。一部の実施形態では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである。かかる実施形態では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜２Ｄのうちの１つに図示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８、もしくは９９％、またはさらには１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図２にあるアミノ酸配列の一部分に対して同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、または２２０個の連続アミノ酸を有する配列を含んでもよい。ある実施形態では、第２のポリペプチドがＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドを含む場合、このポリペプチドはまた、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含んでもよい。かかる一実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドは、単独で、または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位と組み合わせてのいずれかで、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含む。化学コンジュゲーション部位は、Ｎ末端及び／またはＣ末端にまたはそれに結合したリンカーに位置し／そこで結合し得るか、あるいはＩｇ  Ｆｃポリペプチド内にあり得る。
【００６７】
Ｉ．Ａ．２Ｔ細胞ＭＭＰの化学コンジュゲーション部位
Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位は、Ｔ細胞ＭＭＰポリペプチドの一方または両方のいずれかへの共有結合性の連結の形成を可能にする試薬及び／または酵素等の触媒での処理時に修飾され得る、任意の好適な部位であってもよい。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドのいずれかに導入された化学コンジュゲーション部位が１つのみ存在する。別の実施形態では、各々第１及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位は、それぞれのポリペプチド上に１種類のみのコンジュゲーション部位（異なるコンジュゲーション部位）が存在することにより、異なる分子がこれらのポリペプチドの各々に選択的にコンジュゲートされることを可能にするように選択される。他の実施形態では、例えば、エピトープ分子及び１つまたは複数のペイロード分子の両方がＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる対象となる場合、第１及び／または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーションの１つよりも多くのコピーがＴ細胞ＭＭＰに導入されてもよい。例えば、Ｔ細胞ＭＭＰは、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位（例えば、エピトープをコンジュゲートするため）を１つ、及びペイロード分子を送達するための第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位を複数、有してもよい。
【００６８】
複数の実施形態では、第１及び第２の化学コンジュゲーション部位は、
ａ）酵素修飾配列として作用する、第１または第２のポリペプチドに結合したまたはその内部にあるペプチド配列（例えば、スルファターゼ、ソルターゼ、及び／またはトランスグルタミナーゼ配列）、
ｂ）第１または第２のポリペプチドに結合したまたはその内部にある非天然アミノ酸及び／またはセレノシステイン、
ｃ）操作されたアミノ酸の化学コンジュゲーション部位、
ｄ）第１または第２のポリペプチドに結合した炭水化物またはオリゴ糖部分、及び
ｅ）第１または第２のポリペプチドに結合したまたはその内部にあるＩｇＧヌクレオチド結合部位、
から独立して選択されてもよい。
【００６９】
Ｉ．Ａ．２．１スルファターゼモチーフ
化学コンジュゲーション部位を提供する手段として酵素的修飾が選定されるような実施形態では、１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、スルファターゼモチーフを含んでもよい。スルファターゼモチーフは、通常は５または６アミノ酸の長さであり、例えば、米国特許第９，５４０，４３８号及び米国特許公開第２０１７／０１６６６３９  Ａｌ号に記載され、同特許は参照により援用される。該モチーフの挿入は、アルデヒドタグ付きまたはアルデヒドタグを有すると称されることがある、タンパク質またはポリペプチドの形成をもたらす。該モチーフは、ホルミルグリシン生成酵素（複数可）（「ＦＧＥ（単数）」または「ＦＧＥ（複数）」）によって作用を引き起こされて、該モチーフにおけるシステインまたはセリンをホルミルグリシン残基（「ｆＧｌｙ」、ただし「ＦＧｌｙ」と表されることもある）に変換し得、このホルミルグリシン残基は、選択的（例えば、部位特異的）化学コンジュゲーション反応に利用され得るアルデヒド含有アミノ酸である。したがって、本明細書で使用されるとき、「アルデヒドタグ」または「アルデヒドタグ付き」ポリペプチドは、未変換のスルファターゼモチーフを含むアミノ酸配列、ならびに、該モチーフのシステイン残基またはセリン残基がＦＧＥの作用によってｆＧｌｙに変換されたスルファターゼモチーフを含むアミノ酸配列を指す。加えて、アミノ酸配列の関連においてスルファターゼモチーフが提供される場合、それは未変換のモチーフを含有するアミノ酸配列（例えば、ポリペプチド）ならびにそのｆＧｌｙ含有相対物の両方の開示を提供するものとして理解される。ひとたび（例えば、Ｔ細胞ＭＭＰの）ポリペプチドに組み込まれると、ｆＧｌｙ残基は、チオセミカルバジド基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、及びヒドラジノ基を含むが、これらに限定されない様々な反応性基を含む分子（例えば、エピトープペプチド）と反応させられて、ｆＧｌｙ残基を介した当該ペプチドと当該分子との間の共有結合を有するコンジュゲート（例えば、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲート）を形成し得る。
【００７０】
複数の実施形態では、スルファターゼモチーフは、少なくとも５または６ａａ残基であるが、例えば、５〜１６（例えば、６〜１６、５〜１４、６〜１４、５〜１２、６〜１２、５〜１０、６〜１０、５〜８、または６〜８）ａａの長さであることができる。スルファターゼモチーフは、１６、１４、１２、１０、または８アミノ酸残基未満の長さに限定され得る。
【００７１】
ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、式（Ｉ）に示される配列を含有し、
Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３（Ｉ）（配列番号４５）、式中、
Ｚ１は、システインまたはセリンであり、
Ｚ２は、プロリン残基またはアラニン残基のいずれか（これはまた「Ｐ／Ａ」により表され得る）であり、
Ｚ３は、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、またはヒスチジン、通常はリジン）、または脂肪族アミノ酸（アラニン、グリシン、ロイシン、バリン、イソロイシン、またはプロリン、通常はＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩ）であり、
Ｘ１は、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より通常はＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり、但し、スルファターゼモチーフが標的ポリペプチドのＮ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３は独立して、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧである。
【００７２】
したがって、一実施形態では、ＦＧｌｙ含有ポリペプチドは、式Ｉを有するスルファターゼモチーフを用いて調製されてもよく、式中、
Ｚ１は、システインまたはセリンであり、
Ｚ２は、プロリン残基またはアラニン残基であり、
Ｚ３は、脂肪族アミノ酸または塩基性アミノ酸であり、
Ｘ１は、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であるが、但し、スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３は、各々独立して、任意のアミノ酸であり、該配列は、溶媒が接近可能なＩｇ定常領域のループ領域内にあるか、またはそれに隣接し、かつ該配列は、Ｉｇ重鎖のＣ末端にはない。
【００７３】
アルデヒドタグが標的ポリペプチドのＮ末端以外の箇所に存在する場合、スルファターゼモチーフのＸ１は、標的ポリペプチドが組み込まれる配列のアミノ酸によって提供されてもよい。したがって、一部の実施形態では、該モチーフが標的ポリペプチドのＮ末端以外の箇所に存在する場合、スルファターゼモチーフは、下記式のものであってもよく、
（Ｃ／Ｓ）Ｘ２（Ｐ／Ａ）Ｘ３Ｚ３、式（ＩＩ）（配列番号４６）、式中、Ｘ１は不在であり、Ｘ２、Ｘ３、及びＺ３は、上記で定義した通りである。
【００７４】
スルファターゼモチーフを含有するペプチドが、真核生物ＦＧＥによる、例えば、真核細胞、または真核生物ＦＧＥを用いた無細胞系におけるｆＧｌｙ含有ペプチドの発現及び変換による、ｆＧｌｙ含有ペプチドへの変換用に調製されようとする場合、真核生物ＦＧＥによる変換に応じやすいスルファターゼモチーフが有利に採用され得る。一般に、真核生物ＦＧＥによる変換に応じやすいスルファターゼモチーフは、上記の式（Ｉ）（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、配列番号４７）、及びＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、配列番号４８（上記の式（ＩＩ）により包含される）における、それぞれＺ１及びＺ２にシステイン及びプロリンを含有する。これらのモチーフをもつペプチドは、「ＳＵＭＦｌ型」ＦＧＥによって修飾することができる。
【００７５】
ある実施形態では、ＦＧＥが真核生物ＦＧＥである場合、スルファターゼモチーフは、下記からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでもよい。
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＲまたはＣＸ２ＰＸ３Ｒ（配列番号４７及び４８、ここで、Ｚ３は、Ｒであり、Ｘ１は、存在するかまたは不在である）、
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＫまたはＣＸ２ＰＸ３Ｋ（配列番号４７及び４８、ここで、Ｚ３は、Ｋであり、Ｘ１は、存在するかまたは不在である）、
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＨまたはＣＸ２ＰＸ３Ｈ（配列番号４７及び４８、ここで、Ｚ３は、Ｈであり、Ｘ１は、存在するかまたは不在である）、
Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＬまたはＣＸ２ＰＸ３Ｌ（配列番号４７及び４８、ここで、Ｚ３は、Ｌであり、Ｘ１は、存在するかまたは不在である）、（ここで、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、上記で定義した通りである）。
【００７６】
ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、配列Ｘ１Ｃ（Ｘ２）Ｐ（Ｘ３）Ｚ３（配列番号４７を参照されたい）を含み、ここで、
Ｘ１は、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であるが、但し、スルファターゼモチーフがポリペプチドのＮ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３は、独立して選択されるセリン残基、トレオニン残基、アラニン残基、またはグリシン残基である。
【００７７】
原核生物ＦＧＥによる変換に応じやすい、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）のスルファターゼモチーフは、多くの場合、Ｚ１にシステインまたはセリン及びＺ２にプロリンを含有し、これらは、それぞれ「ＳＵＭＰ  Ｉ型」ＦＧＥまたは「ＡｔｓＢ型」ＦＧＥのいずれかによって修飾されてもよい。原核生物ＦＧＥによる変換を受けやすい、式（Ｉ）または（ＩＩ）の他のスルファターゼモチーフは、Ｚ１にシステインまたはセリン、及びＺ２にプロリンまたはアラニン（これらの各々は独立して選択される）を含有し、該配列の残りのアミノ酸が式（Ｉ）及び（ＩＩ）に関して記載される通りであり、これらは、例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（システイン型酵素）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（セリン型酵素）由来のＦＧＥ、またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＦＧＥによる修飾を受けやすい。
【００７８】
スルファターゼモチーフは、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）の第１または第２のポリペプチド上の任意の所望の箇所に組み込まれてもよい。スルファターゼモチーフを用いて、エピトープ（例えば、エピトープ提示ペプチド）を組み込むだけでなく、ペイロード（例えば、薬物及び診断分子とのコンジュゲートの形成において）もまた組み込んでもよい。ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、第１及び第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣ−Ｈ及びβ２Ｍポリペプチド）、足場またはＩｇ  Ｆｃ、ならびにこれらの要素に隣接するリンカーを含めた、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）の第１または第２のポリペプチドにおける任意の要素の末端またはその付近で付加されてもよい。複数の実施形態では、スルファターゼモチーフは、β２Ｍ、ＭＨＣクラスＩ重鎖、及び／またはＦｃ  Ｉｇポリペプチドに組み込まれてもよい。ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、第１のＭＨＣポリペプチド（例えば、β２Ｍポリペプチド）のアミノ末端またはそれに結合したリンカーの付近またはその箇所で、第１のポリペプチドに組み込まれてもよい。ある実施形態では、第１のポリペプチドがβ２Ｍポリペプチド配列を含む場合、スルファターゼモチーフＸ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２ＰＸ３Ｚ３（配列番号４５、ここで、Ｚ１はＣまたはＳであり、Ｚ２はＰである）をβ２Ｍ配列のＮ末端またはその付近で組み込んで、例えば、直接またはリンカーを通してのいずれかでのエピトープの化学コンジュゲーションを可能にしてもよい。例として、図４に示されるようなβ２−ミクログロブリンの成熟配列は、２０アミノ酸のリーダー配列から始まり、成熟ポリペプチドは、最初の配列ＩＱ（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．（配列番号１５１〜１５５のａａ残基２１〜３１）から始まり、β２Ｍポリペプチドの残りの部分にわたって継続する。したがって、β２ＭのＮ末端領域におけるアミノ酸に連結された（リンカーの有無にかかわらず）スルファターゼモチーフは、例えば、下記のように示され得るか、
【表１】
2020534352.tif 000004
またはヒトβ２Ｍリーダー配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１５１のａａｓ１〜２０）及び任意選択的なリンカー（例えば、リンカーペプチド）と共に下記に示されるようなものであり得、
（配列番号１５１のａａ１〜２０）−リンカー−（配列番号４５または４７）−（β２Ｍ配列）
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、もしくは
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ここで、存在する場合、リンカーは、独立して選択されるアミノ酸配列（例えば、ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）（配列番号７６）等の、ポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリン、及びポリ−Ｇｌｙ等の１〜５０ａａ）を含んでもよい。示されるリンカーは、存在しても、または不在であってもよく、２つのリンカーが示される場合、それら同じであっても、または異なってもよい。
【００７９】
ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、図４に示される配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟β２Ｍポリペプチドのうちのいずれかの配列）に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を含むβ２Ｍポリペプチドを有する第１または第２のポリペプチドにおいて、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）に組み込まれるか、またはそれに結合している（例えば、ペプチドリンカーを介して）。この実施形態の目的において、β２Ｍポリペプチドの配列同一性は、付加されたスルファターゼモチーフ及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく、図４にあるβ２Ｍポリペプチドの対応する部分と比べて決定される。
【００８０】
ある実施形態では、スルファターゼモチーフが、図４に示される配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟β２Ｍポリペプチドのうちのいずれかの配列）と比較して１〜１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化を含むβ２Ｍポリペプチド配列を有する第１または第２のポリペプチドを有する、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）に組み込まれるか、またはそれに結合しており（例えば、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端及びＣ末端の両方における独立して選択される１つまたは複数のペプチドリンカーを介して）、ここでのアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化は、付加されたＡ２−５またはＧ２−５モチーフ及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく評定される。この実施形態の目的において、β２Ｍポリペプチドにおけるアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化は、スルファターゼモチーフのアミノ酸及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく、図４にあるβ２Ｍポリペプチドの対応する部分と比べて決定される。かかる一実施形態では、スルファターゼモチーフ（例えば、上述の式Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３、（Ｃ／Ｓ）Ｘ２（Ｐ／Ａ）Ｘ３Ｚ３、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｒ、またはＸ１ＣＸ２ＰＸ３Ｌのもの）は、図４に示される配列等の成熟β２Ｍ配列の、アミノ末端の１５個のアミノ酸のうちのいずれかを置き換えてもよいし、及び／またはそれらの間に挿入されてもよい。
【００８１】
別の実施形態では、式（Ｉ）配列番号４５または（ＩＩ）配列番号４６のスルファターゼモチーフは、第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位としてＩｇ  Ｆｃ領域に組み込まれるか、またはそれに結合していてもよい（例えば、ペプチドリンカーを介して）。ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、スルファターゼモチーフ配列の付加前に図２に示される配列の対応する部分と比べて少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列に組み込まれる。かかる一実施形態では、スルファターゼモチーフは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【００８２】
別の実施形態では、配列番号４５（式（Ｉ））または配列番号４６（式ＩＩ）のスルファターゼモチーフは、化学コンジュゲーション部位としてＭＨＣ−Ｈポリペプチド配列に組み込まれてもよい。ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、スルファターゼモチーフ配列の付加前に図３に示される配列の対応する部分と比べて少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する、ＭＨＣ−Ｈ配列に組み込まれる。かかる一実施形態では、スルファターゼモチーフは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【００８３】
別の実施形態では、配列番号４５（式（Ｉ））または配列番号４６（式ＩＩ）のスルファターゼモチーフの１つまたは複数のコピーは、第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位としてＩｇＦｃ領域に組み込まれてもよい。かかる一実施形態では、それらは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【００８４】
上記に示されたように、アルデヒドタグのスルファターゼモチーフは、少なくとも５または６アミノ酸残基であるが、例えば、５〜１６アミノ酸の長さであることができる。該モチーフは、アルデヒドタグがスルファターゼモチーフ及び「補助的モチーフ」の両方を含むように、Ｎ末端及びＣ末端の一方または両方で追加的な残基を含有し得る。ある実施形態では、スルファターゼモチーフは、Ｃ末端の補助的モチーフ（すなわち、該モチーフのＺ３位に続く）を含み、またＡＡＬＬＴＧＲ（配列番号４９）、ＳＱＬＬＴＧＲ（配列番号５０）、ＡＡＦＭＴＧＲ（配列番号５１）、ＡＡＦＬＴＧＲ（配列番号５２）、及びＧＳＬＦＴＧＲ（配列番号５３）からなる群から選択されるアミノ酸配列の連続残基のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つ全てを含んでもよい。多数の他の補助的モチーフ（ｍｏｉｆｓ）が記載されている。補助的モチーフのアミノ酸残基は、アルデヒドタグのスルファターゼモチーフのＦＧＥ媒介性変換に必要とされるものではなく、故に、任意選択的なものにすぎず、本明細書に記載されるアルデヒドタグから具体的に除外されてもよい。
【００８５】
米国特許第９，５４０，４３８号は、スルファターゼモチーフの、Ｆｃ領域ポリペプチドを含めた種々の免疫グロブリン配列への組み込みについて考察しており、スルファターゼモチーフならびにＦｃポリペプチド及び他のポリペプチドの修飾についてのその教示に関して参照により本明細書に援用される。この特許はまた、ＦＧＥ酵素、及びｆＧｌｙ残基を形成させる際のそれらの使用、ならびにエピトープ及びペイロード等の分子のｆＧｌｙ残基へのカップリングに関連する化学反応についてのその手引きに関しても、参照により援用される。
【００８６】
スルファターゼモチーフの組み込みは、該モチーフをコードする核酸配列を、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドをコードする核酸における所望の箇所で組み込むことによって、遂行されてもよい。下記で考察されるように、該核酸配列は、転写制御配列（複数可）（プロモーター）の制御下に配置され、その発現を導く制御要素が提供されてもよい。発現タンパク質は、発現及び部分精製または完全精製の後に、１つまたは複数のＦＧＥで処理されてもよい。代替として、スルファターゼモチーフを認識するＦＧＥを発現する細胞における核酸の発現が、該モチーフのシステインまたはセリンのｆＧｌｙ（これはオキソアラニン（ｏｘｏａｌａｎｉｎｅ）と呼ばれることがある）への変換をもたらす。２つ以上の異なるスルファターゼモチーフが存在する場合（例えば、第１及び第２のスルファターゼモチーフ）、細胞発現の最中に各モチーフの変換を実施するか、または細胞発現及び部分精製もしくは完全精製の後に各モチーフの変換を実施することもまた可能である。２つ以上のＦＧＥ酵素を用いて、これらＦＧＥの各々によって異なるモチーフが選択的に及び複数のモチーフが優先的に変換されるようにしながら、細胞発現の最中に少なくとも１つのスルファターゼモチーフを、及び部分精製もしくは完全精製の後に少なくとも１つのスルファターゼモチーフを順次に変換するか、または発現後にスルファターゼモチーフをｆＧｌｙ残基に別個に変換することもまた可能である。下記で考察されるように、異なるスルファターゼモチーフを別個に変換して、それらを順次の様式でエピトープ及び／またはペイロードに化学的にカップリングする能力は、スルファターゼカップリングを用いて、異なるモチーフの箇所で異なるエピトープまたはペイロードを組み込むことを可能にする。
【００８７】
未変換のスルファターゼモチーフを有する、または細胞がｆＧｌｙ含有ポリペプチド配列を変換するための好適なＦＧＥを発現する、ポリペプチドの生産用の宿主細胞には、原核生物及び真核生物のものが含まれる。非限定的な例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ株、Ｂａｃｉｌｌｕｓ菌種（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ等）、酵母または真菌（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ菌種等）が挙げられる。昆虫及び脊椎動物等の高等生物、特に哺乳動物に由来する宿主細胞を含めた、他の宿主細胞の例としては、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞等（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８及びＣＲＬ９０９６）、ＣＨＯ  ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ−Ｋｌ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ−６１）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｎｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬｌＯ）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８８】
様々なＦＧＥが、スルファターゼモチーフにおけるシステインまたはセリンの、ｆＧｌｙへの変換（酸化）のために採用されてもよい。本明細書で使用されるとき、ホルミルグリシン生成酵素、またはＦＧＥという用語は、スルファターゼモチーフのシステインまたはセリンの、ｆＧｌｙへの変換を触媒するｆＧｌｙ生成酵素を指す。米国特許第９，５４０，４３８号で考察されるように、同文献は、多くの場合、該モチーフのシステインをｆＧｌｙに変換する酵素に関してホルミルグリシン生成酵素という用語を使用する一方で、スルファターゼモチーフにおけるセリンをｆＧｌｙに変換する酵素は、Ａｔｓ−Ｂ様と称される。
【００８９】
ＦＧＥは、好気性及び嫌気性の２つの区分に分類され得る。真核酵素（例えば、ヒト酵素）を含む、好気性酵素は、システイン残基をｆＧｌｙに変換し、ここで、システインは全般的に、式Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３（配列番号４７）のスルファターゼモチーフの関連にある。真核生物ＦＧＥは、「ＳＵＭＦｌ型」のものであり、ヒトにおいてはＳＵＭＦ１遺伝子によってコードされる嫌気性酵素は、ほとんどの場合は原核生物源（例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＡｔｓＢ型のものであり、好気性形態とは異なる機構を用いてそれらのスルファターゼモチーフにおけるシステインまたはセリンをｆＧｌｙに変換可能であるように思われる。
【００９０】
セリンまたはシステインのｆＧｌｙへの変換を触媒する能力は、酵素及びスルファターゼモチーフに左右される。ＦＧＥがセリン及びシステインを変換する能力における差異の故に、異なるスルファターゼモチーフが異なる化学コンジュゲーション部位として使用され得ることが可能である。例えば、Ｔ細胞ＭＭＰに、真核生物好気性ＳＵＭＦ１型ＦＧＥによる変換に応じやすいシステイン含有部位及びＡｔｓＢ型ＦＧＥによる変換に応じやすいセリン含有部位の両方をコードする配列を組み込むことが可能であり得る。ＳｕｍＦ１型ＦＧＥを発現する真核細胞における発現後、システインモチーフは、ｆＧｌｙ残基をもつようになり、このｆＧｌｙがエピトープまたはペイロードとの１回目の化学コンジュゲーションに供されてもよい。１回目の化学コンジュゲーションに続いて、Ｔ細胞ＭＭＰコンジュゲートは、無細胞系においてＡｔｓＢ型セリン型酵素で処理され、次いで、セリン含有モチーフから生産されたｆＧｌｙは、１回目の化学コンジュゲーションにおいて使用された分子と同じまたはそれとは異なる分子との化学コンジュゲーションに供することができる。
【００９１】
上述に照らして、本開示は、上記で考察されたように第１または第２のポリペプチド鎖の配列に組み込まれた１つまたは複数のｆＧｌｙ残基を含む、Ｔ細胞ＭＭＰを提供する。ｆＧｌｙ残基は、例えば、配列Ｘ１（ｆＧｌｙ）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３の関連にあってもよく、ここで、ｆＧｌｙは、ホルミルグリシン残基であり、Ｚ２、Ｚ３、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、上記の式（Ｉ）に定義される通りである。
【００９２】
化学コンジュゲーション後、Ｔ細胞ＭＭＰは、配列Ｘ１（ｆＧｌｙ’）Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３の関連にある、第１または第２のポリペプチド鎖の配列に組み込まれた１つまたは複数のｆＧｌｙ’残基を含み、ここで、ｆＧｌｙ’残基は、化学反応を経た、今では共有結合性で結合した部分（例えば、エピトープまたはペイロード）を有する、ホルミルグリシンである。
【００９３】
ｆＧｌｙを含有する化学コンジュゲーション部位でのカップリング対象となる分子のチオセミカルバジド、アミノオキシ、ヒドラジド、またはヒドラジノ誘導体の使用を含むが、これらに限定されない、いくつかの化学反応及び市販の試薬を利用して、分子（例えば、エピトープまたはペイロード）をｆＧｌｙ残基にコンジュゲートすることができる。例えば、チオセミカルバジド、アミノオキシ、ヒドラジド、ヒドラジノ、またはヒドラジニル官能基（例えば、ペプチドのアミノ酸に直接、またはＰＥＧ等のリンカーを介して結合した）をもつエピトープ（例えば、エピトープペプチド）及び／またはペイロードを、Ｔ細胞ＭＭＰのｆＧｌｙを含有する第１または第２のポリペプチドと反応させて、共有結合性で連結したエピトープを形成させることができる。同様に、例えば、ビオチンヒドラジドを連結剤として用いて、薬物及び治療薬等のペイロードを導入することができる。
【００９４】
ある実施形態では、ペプチド（例えば、エピトープ含有ペプチド）は、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドに組み込まれたｆＧｌｙ残基と反応する求核試薬含有部分（例えば、アミノオキシ部分またはヒドラジド部分）を組み込むように修飾される。この反応は、Ｔ細胞ＭＭＰ及びペプチド（例えば、エピトープまたはペイロード）が共有結合性で連結された（例えば、ヒドラゾンまたはオキシム連結によって）コンジュゲートの形成をもたらす（例えば、米国特許第９，２３８，８７８号及び同第７，３５１，７９７号、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ．ｆｒ／ｆｔ／Ｊ／ＪＶ２２９０．ｐｄｆ（２０１７年９月２日にアクセス）にて入手可能なＩｎｔｅｒｃｈｅｍ，Ａｍｉｎｏｏｘｙ  ＆  Ａｌｄｅｈｙｄｅ  ＰＥＯ／ＰＥＧ  ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｆｅａｔｕｒｉｎｇ  Ｏｘｉｍｅ  Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ（日付なし）を参照されたい）。
【００９５】
ある実施形態では、チオセミカルバジド基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、またはヒドラジノ基をもつエピトープ（例えば、ペプチドエピトープ）及び／またはペイロードが、Ｔ細胞ＭＭＰのｆＧｌｙを含有する第１及び／または第２のポリペプチドと反応させられる。この反応は、Ｔ細胞ＭＭＰと、エピトープ及び／またはペイロードとの間での共有結合の形成をもたらす。米国特許第９，５４０，４３８号及び米国特許公開第２０１７／０１６６６３９  Ａｌ号で考察されるように、結果として生じるコンジュゲートは、下記の形態の構造（修飾アミノ酸残基）を含有してもよく、
【化２】
2020534352.tif 000005
ここで、
Ｊ１は、共有結合された部分であり、
各Ｌ１は、アルキレン、置換アルキレン、アルケニレン、置換アルケニレン、アルキニレン、置換アルキニレン、アリーレン、置換アリーレン、シクロアルキレン、置換シクロアルキレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、ヘテロシクレン、置換ヘテロシクレン、アシル、アミド、アシルオキシ、ウレタニレン（ｕｒｅｔｈａｎｙｌｅｎｅ）、チオエステル、スルホニル、スルホンアミド、スルホニルエステル、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、及び置換アミンから独立して選択される二価部分であり、
ｎは、ゼロから４０（例えば、１〜５、５〜１０、１０〜２０、２０〜３０、または３０〜４０）から選択される数である。
【００９６】
ある実施形態では、エピトープ及び／またはペイロードは、ｆＧｌｙアミノ酸残基をもつＴ細胞ＭＭＰへのそれらの共有結合性の結合を可能にする、環状置換基（例えば、インドール）をもつヒドラジニル基を含めた、共有結合されたヒドラジニル基を含むように修飾されてもよい。一実施形態では、ヒドラジニル（ｈｙｄｒａｚｉｎａｌ）化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物であり、
【化３】
2020534352.tif 000006
式中、式（Ｆｏｍｕｌａ）（ＩＩＩ）の目的において、
Ｒ’’’は、ｆＧｌｙ含有ポリペプチドにコンジュゲートされる対象となる、目的とするペイロードまたはエピトープであり得、
Ｒ’及びＲ’’は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルを含むが、これらに限定されない、任意の所望の置換基であり得、
Ｑ１０、Ｑ２０、Ｑ３０、及びＱ４０は、ＣＲ１１、ＮＲ１２、Ｎ、Ｏ、またはＳであり得、
Ｑ１０、Ｑ２０、Ｑ３０、及びＱ４０のうちの１つは、任意選択的であり、Ｒ１１及びＲ１２は、任意の所望の置換基（例えば、アルキル）であり得る。米国特許公開第２０１５／０３５２２２５号を参照されたい。
【００９７】
他の実施形態では、修飾エピトープ及びペイロード（例えば、薬物及び／または診断剤）のヒドラジニル基は、式（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）によって与えられる構造を有する。米国特許第９，３１０，３７４号を参照されたく、同特許は、ペプチド及びポリペプチドを伴うコンジュゲートを含めた生物学的コンジュゲートの形成におけるヒドラジニル化合物の調製及び使用についてのその教示に関して参照により援用される。
【表２】
2020534352.tif 000007
式中、この節で列挙される式（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）の目的において、
Ｑ２及びＱ３のうちの一方は、−（ＣＨ２）ｎＮＲ３ＮＨＲ２であり、他方は、Ｙ４であり、
ｎは、０または１であり、
Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は、各々独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択され、
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、及びＹ４は、各々独立して、水素、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノアシル、アルキルアミド、置換アルキルアミド、スルホニル、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｌは、任意選択的なリンカーであり、
Ｗ１は、エピトープ（例えば、エピトープポリペプチド）、薬物、診断剤、または他のペイロードから選択される。
【００９８】
これらの構造に該当するヒドラジニルインドールの、アルデヒド官能化ペプチドとの例となる反応は、図８に概略的に示される。
【００９９】
ある実施形態では、Ｑ２は、−（ＣＨ２）ｎＮＲ３ＮＨＲ２であり、Ｑ３は、Ｙ４である。ある実施形態では、Ｑ３は、−（ＣＨ２）ｎＮＲ３ＮＨＲ２であり、Ｑ２は、Ｙ４である。ある実施形態では、ｎは、１である。ある実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、アルキル及び置換アルキルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は各々、メチルである。ある実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４は各々、Ｃである。ある実施形態では、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、及びＹ４は各々、Ｈである。
【０１００】
ある実施形態では、Ｌは存在し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、カルボキシル、カルボキシルエステル、アシルアミノ、アルキルアミド、置換アルキルアミド、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ヘテロシクリル、及び置換ヘテロシクリルから選択される基を含む。一部の実施形態では、Ｌは存在し、ポリマーを含む。一部の実施形態では、該ポリマーは、ポリエチレングリコールである。
【０１０１】
式（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）の目的において、
１．「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する、一価飽和脂肪族ヒドロカルビル基を指す。この用語には、例として、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、及びネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）等の直鎖状及び分岐状ヒドロカルビル基が含まれる。
２．「置換アルキル」という用語は、アルキル鎖における１個または複数の炭素原子が、−Ｏ−、−Ｎ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ここで、ｎは、０〜２である）、または−ＮＲ−（ここで、Ｒは、水素またはアルキルである）等のヘテロ原子で任意選択で置き換えられており、かつアルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び−ＮＲａＲｂ（ここで、Ｒａ及びＲｂは、同じであっても、または異なってもよく、水素、任意選択で置換されるアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及び複素環式基（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）から選定される）からなる群から選択される１〜５つの置換基を有する、本明細書で定義されるようなアルキル基を指す。
３．「アルキレン」は、直鎖または分岐状のいずれかであり、任意選択で、−Ｏ−、−ＮＲ１０−、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−等から選択される１つまたは複数の基が介在する、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、二価脂肪族ヒドロカルビル基を指す。この用語には、例として、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソ−プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）−）、（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ−）、（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）等が含まれる。
４．Ｒ１０は、Ｈまたはアルキル（例えば、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）である。
５．「置換アルキレン」は、１〜３個の水素が下記の「置換（される）」の定義において炭素に関して記載されるような置換基で置き換えられた、アルキレン基を指す。
６．「アルカン」という用語は、本明細書で定義されるようなアルキル基及びアルキレン基を指す。
７．「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」、及び「アルキルアミノアルキニル」という用語は、Ｒ’ＮＨＲ’’−という基を指し、ここで、Ｒ’は、本明細書で定義されるようなアルキル基であり、Ｒ’’は、本明細書で定義されるようなアルキレン基、アルケニレン基、またはアルキニレン基である。
８．「アルカリール（ａｌｋａｒｙｌ）」または「アラルキル」という用語は、−アルキレン−アリール及び−置換アルキレン−アリールという基を指し、ここで、アルキレン、置換アルキレン、及びアリールは、本明細書で定義される。
９．「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキルという基を指し、ここで、アルキルは、本明細書で定義される通りである。アルコキシには、例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ等が含まれる。「アルコキシ」という用語はまた、アルケニル−Ｏ−、シクロアルキル−Ｏ−、シクロアルケニル−Ｏ−、及びアルキニル−Ｏ−という基も指し、ここで、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びアルキニルは、本明細書で定義される通りである。
１０．「置換アルコキシ」という用語は、置換アルキル−Ｏ−、置換アルケニル−Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｏ−、置換シクロアルケニル−Ｏ−、及び置換アルキニル−Ｏ−という基を指し、ここで、置換アルキル、置換アルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、及び置換アルキニルは、本明細書で定義される通りである。
１１．「アルコキシアミノ」という用語は、−ＮＨ−アルコキシという基を指し、ここで、アルコキシは、本明細書で定義される。
１２．「ハロアルコキシ」という用語は、アルキル基上の１個または複数の水素原子がハロ基で置換された、アルキル−Ｏ−という基を指し、例として、トリフルオロメトキシ等といった基が含まれる。
１３．「ハロアルキル」という用語は、アルキル基上の１個または複数の水素原子がハロ基で置換された、上述のような置換アルキル基を指す。かかる基の例としては、限定されないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロエチル等といったフルオロアルキル基が挙げられる。
１４．「アルキルアルコキシ」という用語は、−アルキレン−Ｏ−アルキル、アルキレン−Ｏ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｏ−アルキル、及び置換アルキレン−Ｏ−置換アルキルという基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルキレン、及び置換アルキレンは、本明細書で定義される通りである。
１５．「アルキルチオアルコキシ」という用語は、−アルキレン−Ｓ−アルキル、アルキレン−Ｓ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｓ−アルキル、及び置換アルキレン−Ｓ−置換アルキルという基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルキレン、及び置換アルキレンは、本明細書で定義される通りである。
１６．「アルケニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜４個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ、好ましくは１〜２つの不飽和二重結合の部位を有する、直鎖または分岐状ヒドロカルビル基を指す。この用語には、例として、ビ−ビニル、アリル、及びブタ−３−エン−１−イルが含まれる。シス及びトランス異性体またはこれらの異性体の混合物が、この用語に含まれる。
１７．「置換アルケニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、本明細書で定義されるようなアルケニル基を指す。
１８．「アルキニル」は、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ、好ましくは１〜２つの不飽和三重結合の部位を有する、直鎖または分岐状一価ヒドロカルビル基を指す。かかるアルキニル基の例としては、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
１９．「置換アルキニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、本明細書で定義されるようなアルキニル基を指す。
２０．「アルキニルオキシ」は、−Ｏ−アルキニルという基を指し、ここで、アルキニルは、本明細書で定義される通りである。アルキニルオキシには、例として、エチニルオキシ、プロピニルオキシ等が含まれる。
２１．「アシル」は、Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、及び置換ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。例えば、アシルには、「アセチル」基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−が含まれる。
２２．「アシルアミノ」は、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキル、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）複素環式基、及び−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換複素環式基という基を指し、ここで、Ｒ２０は、水素またはアルキルであり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
２３．「アミノカルボニル」または「アミノアシル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２という基を指し、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基からなる群から選択され、またＲ２１及びＲ２２は、任意選択で、それに結合した窒素と一緒に繋がって、複素環基または置換複素環基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
２４．「アミノカルボニルアミノ」は、−ＮＲ２１Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２３という基を指し、ここで、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３は、水素、アルキル、アリール、もしくはシクロアルキルから独立して選択されるか、または２つのＲ基が繋がって、ヘテロシクリル基を形成する。
２５．「アルコキシカルボニルアミノ」という用語は、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲという基を指し、ここで、各Ｒは独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであり、ここで、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは、本明細書で定義される通りである。
２６．「アシルオキシ」という用語は、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは、本明細書で定義される通りである。
２７．「アミノスルホニル」は、−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ２２という基を指し、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基からなる群から選択され、またＲ２１及びＲ２２は、任意選択で、それに結合した窒素と一緒に繋がって、複素環基または置換複素環基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
２８．「スルホニルアミノ」は、−ＮＲ２１ＳＯ２Ｒ２２という基を指し、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基からなる群から選択され、またＲ２１及びＲ２２は、任意選択で、それに結合した原子と一緒に繋がって、複素環基または置換複素環基を形成し、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
２９．「アリール」または「Ａｒ」は、単環（例えば、フェニル基に存在する）または複数の縮合環を有する環系（かかる芳香環系の例としては、ナフチル、アントリル、及びインダニルが挙げられる）を有する、６〜１８個の炭素原子の一価芳香族炭素環基を指し、この縮合環は、芳香族である場合もあれば、芳香族でない場合もあるが、但し、結合点が芳香環の原子を介するものであることを条件とする。この用語には、例として、フェニル及びナフチルが含まれる。アリール置換基に関する定義によって別途制約されない限り、かかるアリール基は、任意選択で、置換されて、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、「置換アリール」基を形成し得る。
３０．「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリールという基を指し、ここで、アリールは、本明細書で定義される通りであり、これには、例として、同じく本明細書で定義されるような任意選択で置換されるアリール基を含む、フェノキシ、ナフトキシ等が含まれる。
３１．「アミノ」は、−ＮＨ２という基を指す。
３２．「置換アミノ」という用語は、−ＮＲＲという基を指し、ここで、各Ｒは独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択されるが、但し、少なくとも１つのＲが水素ではないことを条件とする。
３３．「アジド」という用語は、−Ｎ３という基を指す。
３４．「カルボキシル」、「カルボキシ」、または「カルボキシレート」は、−ＣＯ２Ｈまたはその塩を指す。
３５．「カルボキシルエステル」もしくは「カルボキシエステル」、または「カルボキシアルキル」もしくは「カルボキシルアルキル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環式基、及び−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換複素環式基という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
３６．「（カルボキシルエステル）オキシ」または「カーボネート」は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−複素環式基、及び−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換複素環式基という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
３７．「シアノ」または「ニトリル」は、−ＣＮという基を指す。
３８．「シクロアルキル」は、単環式環、または縮合系、架橋系、及びらせん（ｓｐｉｒａｌｉｎｇ）系を含めた多環式環を有する、３〜１０個の炭素原子の環状アルキル基を指す。好適なシクロアルキル基の例としては、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等が挙げられる。かかるシクロアルキル基には、例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル等といった単環構造、またはアダマンタニル等といった多環構造が含まれる。
３９．「置換シクロアルキル」という用語は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、シクロアルキル基を指す。
４０．「シクロアルケニル」は、単環または多環を有し、かつ少なくとも１つの二重結合、好ましくは１〜２つの二重結合を有する、３〜１０個の炭素原子の非芳香族環状アルキル基を指す。
４１．「置換シクロアルケニル」という用語は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及び−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、シクロアルケニル基を指す。
４２．「シクロアルキニル」は、単環または多環を有し、かつ少なくとも１つの三重結合を有する、５〜１０個の炭素原子の非芳香族シクロアルキル基を指す。
４３．「シクロアルコキシ」は、−Ｏ−シクロアルキルを指す。
４４．「シクロアルケニルオキシ」は、−Ｏ−シクロアルケニルを指す。
４５．「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードを指す。
４６．「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨという基を指す。
４７．「ヘテロアリール」は、環内の１〜１０個の炭素原子等の１〜１５個の炭素原子と、酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子との芳香族基を指す。かかるヘテロアリール基は、単環（ピリジニル、イミダゾリル、またはフリル等）または環系における複数の縮合環（例えば、インドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンズイミダゾリル、またはベンゾチエニル等の基にあるような）を有することができ、ここで、環系内の少なくとも１つの環は、芳香族であるが、但し、結合点が芳香環の原子を介するものであることを条件とする。ある特定の実施形態では、ヘテロアリール基の窒素及び／または硫黄環原子（複数可）は、任意選択で酸化されて、Ｎ−オキシド（Ｎ−＞Ｏ）部分、スルフィニル部分、またはスルホニル部分を提供する。この用語には、例として、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、及びフラニルが含まれる。ヘテロアリール置換基に関する定義によって別途制約されない限り、かかるヘテロアリール基は、任意選択で置換されて、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及び−ＳＯ２−ヘテロアリール、ならびにトリハロメチルから選択される１〜５つの置換基、または１〜３つの置換基を有する、「置換ヘテロアリール」基を形成することができる。
４８．「ヘテロアラルキル」という用語は、−アルキレン−ヘテロアリールという基を指し、ここで、アルキレン、及びヘテロアリールは、本明細書で定義される。この用語には、例として、ピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチル等が含まれる。
４９．「ヘテロアリールオキシ」は、−Ｏ−ヘテロアリールを指す。
５０．「複素環」、「複素環式基」、「ヘテロシクロアルキル」、及び「ヘテロシクリル」は、単環、または縮合系、架橋系、及びスピロ環系を含めた複数の縮合環を有し、かつ１〜１０個のヘテロ原子を含む３〜２０個の環原子を有する、飽和または不飽和基を指す。これらの環原子は、窒素、硫黄、または酸素からなる群から選択され、ここで、縮合環系において、環のうちの１つまたは複数は、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであることができるが、但し、結合点が非芳香族環を介するものであることを条件とする。ある特定の実施形態では、複素環基の窒素及び／または硫黄原子（複数可）は、任意選択で酸化されて、Ｎ−オキシド部分、−Ｓ（Ｏ）−部分、または−ＳＯ２−部分を提供する。
５１．複素環及びヘテロアリールの例としては、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも称される）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
５２．複素環置換基に関する定義によって別途制約されない限り、かかる複素環基は、任意選択で、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び縮合複素環から選択される１〜５つ、または１〜３つの置換基で置換され得る。
５３．「ヘテロシクリルオキシ」は、−Ｏ−ヘテロシクリルという基を指す。
５４．「ヘテロシクリルチオ」という用語は、複素環式基−Ｓ−という基を指す。
５５．「ヘテロシクレン」という用語は、本明細書で定義されるような複素環から形成されるジラジカル基を指す。
５６．「ヒドロキシアミノ」という用語は、−ＮＨＯＨという基を指す。
５７．「ニトロ」は、−ＮＯ２という基を指す。
５８．「オキソ」は、（＝Ｏ）という原子を指す。
５９．「スルホニル」は、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−置換アルキル、ＳＯ２−アルケニル、ＳＯ２−置換アルケニル、ＳＯ２−シクロアルキル、ＳＯ２−置換シクロアルキル、ＳＯ２−シクロアルケニル、ＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−置換アリール、ＳＯ２−ヘテロアリール、ＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＳＯ２−複素環式基、及びＳＯ２−置換複素環式基という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。スルホニルには、例として、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−、及び４−メチルフェニル−ＳＯ２−が含まれる。
６０．「スルホニルオキシ」は、−ＯＳＯ２−アルキル、ＯＳＯ２−置換アルキル、ＯＳＯ２−アルケニル、ＯＳＯ２−置換アルケニル、ＯＳＯ２−シクロアルキル、ＯＳＯ２−置換シクロアルキル、ＯＳＯ２−シクロアルケニル、ＯＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＯＳＯ２−アリール、ＯＳＯ２−置換アリール、ＯＳＯ２−ヘテロアリール、ＯＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＯＳＯ２−複素環式基、及びＯＳＯ２置換複素環式基という基を指し、ここで、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、複素環式基、及び置換複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
６１．「アミノカルボニルオキシ」という用語は、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲという基を指し、ここで、各Ｒは独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環式基であり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及び複素環式基は、本明細書で定義される通りである。
６２．「チオール」は、−ＳＨという基を指す。
６３．「チオキソ」、または「チオケト」という用語は、（＝Ｓ）という原子を指す。
６４．「アルキルチオ」または「チオアルコキシ」という用語は、−Ｓ−アルキルという基を指し、ここで、アルキルは、本明細書で定義される通りである。ある特定の実施形態では、硫黄は、−Ｓ（Ｏ）−に酸化されてもよい。スルホキシドは、１つまたは複数の立体異性体として存在してもよい。
６５．「置換チオアルコキシ」という用語は、−Ｓ−置換アルキルという基を指す。
６６．「チオアリールオキシ」という用語は、アリール−Ｓ−という基を指し、ここで、アリール基は、同じく本明細書で定義される任意選択で置換されるアリール基を含めて、本明細書で定義される通りである。
６７．「チオヘテロアリールオキシ」という用語は、ヘテロアリール−Ｓ−という基を指し、ここで、ヘテロアリール基は、同じく本明細書で定義されるような任意選択で置換されるアリール基を含めて、本明細書で定義される通りである。
６８．「チオヘテロシクロオキシ」という用語は、ヘテロシクリル−Ｓ−という基を指し、ここで、ヘテロシクリル基は、同じく本明細書で定義されるような任意選択で置換されるヘテロシクリル基を含めて、本明細書で定義される通りである。
６９．本明細書における開示に加えて、「置換（される）」という用語は、指定される基またはラジカルを修飾するように使用されるとき、指定される基またはラジカルの１個または複数の水素原子が各々、互いから独立して、下記で定義されるような同じまたは異なる置換基で置き換えられることもまた意味し得る。
７０．本明細書で個々の用語に対して開示される基に加えて、指定される基またはラジカルにおける飽和炭素原子上の１個または複数の水素（単一の炭素上の任意の２個の水素は、＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２、または＝Ｓで置き換えられ得る）を置換するための置換基は、別途指定されない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０は、任意選択で置換されるアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、各Ｒ７０は独立して、水素もしくはＲ６０であり、各Ｒ８０は独立して、Ｒ７０であるか、または、代替として、２つのＲ８０が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、５員、６員、もしくは７員ヘテロシクロアルキルを形成し、これは任意選択で、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される（このうちＮは、−ＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキル置換を有してもよい）同じまたは異なる追加的なヘテロ原子のうちの１〜４個を含んでもよく、各Ｍ＋は、正味単一の正電荷を有する対イオンである。各Ｍ＋は独立して、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋等のアルカリイオン、＋Ｎ（Ｒ６０）４等のアンモニウムイオン、または［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５、もしくは［Ｂａ２＋］０．５等のアルカリ土類イオン（「０．５」とは、かかる二価アルカリ土類イオンに対する対イオンのうちの一方が本発明の化合物のイオン化形態であり得、他方が塩化物等の典型的な対イオンであり得るか、または本明細書に開示される２つのイオン化化合物が、かかる二価アルカリ土類イオンに対する対イオンとしての役目を果たし得るか、または本発明の二重イオン化（ｄｏｕｂｌｙ  ｉｏｎｉｚｅｄ）化合物が、かかる二価アルカリ土類イオンに対する対イオンとしての役目を果たし得ることを意味する）であってもよい。具体的な例として、−ＮＲ８０Ｒ８０は、−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペラジニル、４Ｎ−メチル−ピペラジン−１−イル、及びＮ−モルホリニルを含むことを意図する。
７１．本明細書における開示に加えて、「置換」アルケン基、アルキン基、アリール基、及びヘテロアリール基における不飽和炭素原子上の水素に対する置換基は、別途指定されない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３−２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２−Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２−Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０、及びＭ＋は、先に定義した通りであるが、但し、置換アルケンまたはアルキンの場合、置換基が−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、または−Ｓ−Ｍ＋ではないことを条件とする。
７２．本明細書で個々の用語に対して開示される基に加えて、「置換」ヘテロアルキル基及びシクロヘテロアルキル基における窒素原子上の水素に対する置換基は、別途指定されない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、及び−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０、Ｒ７０、Ｒ８０、及びＭ＋は、先に定義した通りである。
【０１０２】
ある実施形態では、ｆＧｌｙ含有ポリペプチドにコンジュゲートされる対象となるエピトープ（例えば、ペプチドエピトープ）及び／またはペイロードは、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）の形態を有する。一部の実施形態では、エピトープは、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）の化合物において共有結合される。かかる一実施形態では、該エピトープは、エピトープ（例えば、ウイルスまたはがんエピトープ）のａａ配列を含むペプチドである。ある実施形態では、ペプチドエピトープは、約４ａａ〜約２０ａａ（例えば、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ）長の長さを有する。
【０１０３】
本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−ペイロードコンジュゲートの調製方法であって、
ａ）セリンまたはシステインを含むスルファターゼモチーフ（例えば、上記で考察されたＸ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３（配列番号４７）、ＣＸ１ＰＸ２Ｚ３（配列番号４８）等の、式（Ｉ）または（ＩＩ）のスルファターゼモチーフ）をコードする配列を、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドをコードする核酸に組み込むことと、
ｂ）スルファターゼモチーフを含有する第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドを、
ｉ）ＦＧＥを発現して、スルファターゼモチーフのセリンもしくはシステインをｆＧｌｙに変換する細胞において発現させ、ｆＧｌｙを含有する第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドを別個にもしくはＴ細胞ＭＭＰとして部分的にもしくは完全に精製すること、あるいは
ｉｉ）スルファターゼモチーフのセリンもしくはシステインをｆＧｌｙに変換するＦＧＥを発現しない細胞において発現させ、ｆＧｌｙ残基を含有するＴ細胞ＭＭＰを精製するか、もしくは部分的に精製し、精製したもしくは部分的に精製したＴ細胞ＭＭＰを、スルファターゼモチーフのセリンもしくはシステインをｆＧｌｙ残基に変換するＦＧＥに接触させることと、
ｃ）ｆＧｌｙを含有する第１及び／または第２のポリペプチドを別個に、またはＴ細胞−ＭＭＰの一部として、ｆＧｌｙのアルデヒドとエピトープ及び／またはペイロードとの間で共有結合を形成する基で官能化されたエピトープ及び／またはペイロードに接触させることと、を含み、
それによってＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／またはＴ細胞ＭＭＰペイロードコンジュゲートを形成させる、該方法を提供する。
かかる方法において、エピトープ（エピトープ含有分子）及び／またはペイロードは、アルデヒド基と選択的に反応する任意の好適な官能基によって官能化されてもよい。かかる基は、例えば、チオセミカルバジド、アミノオキシ、ヒドラジド、及びヒドラジノからなる群から選択されてもよい。複数の実施形態では、エピトープ及びまたはペイロードは、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（Ｖａ）、（ＶＩ）、または（ＶＩａ）のヒドラジニル化合物の一部である。かかる一実施形態では、スルファターゼモチーフは、β２Ｍ  ａａ配列を含むＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドに、β２Ｍ配列内、またはそれに結合したリンカー内のいずれかで（例えば、Ｎ末端の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００ａａ以内で）組み込まれる。ある実施形態では、スルファターゼモチーフが、図４に示されるβ２Ｍ配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）の配列同一性を有するβ２Ｍ  ａａ配列を含む、第１または第２のポリペプチドに組み込まれる（例えば、ここでの同一性は、スルファターゼモチーフ配列を含めることなく、またはその付加前に算出される）。例えば、スルファターゼモチーフは、シグナル配列と成熟ペプチドの配列との間、または成熟ペプチドのＮ末端に配置されてもよく、該モチーフは、ペプチドリンカーによってβ２Ｍ配列（複数可）から隔離されてもよい。
【０１０４】
Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／またはＴ細胞ＭＭＰペイロードコンジュゲートの調製方法に関する他の実施形態では、配列番号４５（式（Ｉ））または配列番号４６のスルファターゼモチーフが、第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位として第２のポリペプチドのＩｇＦｃ領域に組み込まれてもよい。ある実施形態では、スルファターゼモチーフが、スルファターゼモチーフ配列の付加前に図２に示される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む配列に組み込まれる。
【０１０５】
Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／またはＴ細胞ＭＭＰペイロードコンジュゲートの調製方法の別の実施形態では、配列番号４５（式（Ｉ））または配列番号４６のスルファターゼモチーフが、化学コンジュゲーション部位としてＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドに組み込まれてもよい。
【０１０６】
Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／またはＴ細胞ＭＭＰペイロードコンジュゲートの調製方法のある実施形態では、スルファターゼモチーフが、図３に示される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列に組み込まれる（例えば、ここでの配列同一性は、スルファターゼモチーフ配列を含めることなく、またはその付加前に算出される）。かかる一実施形態では、スルファターゼモチーフは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【０１０７】
Ｉ．Ａ．２．２  ソルターゼＡ酵素部位
エピトープ（例えば、エピトープの配列を含むペプチド）及びペイロードは、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端で、これらの箇所でソルターゼＡコンジュゲーション用の部位を組み込むことによって、結合させてもよい。
【０１０８】
ソルターゼＡは、Ｃ末端ペンタペプチド配列ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａ（配列番号５４、このうちＸ５は任意の単一アミノ酸であり、Ｇ／Ａはグリシンまたはアラニンである）を認識し、この配列内のトレオニンとコンジュゲーションパートナーのＮ末端におけるグリシンまたはアラニンとの間でアミド結合を作り出す。有利なことに、これらの認識配列は、いずれかのコンジュゲーションパートナーに組み込まれて、第１または第２のポリペプチドのアミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかが化学コンジュゲーション部位としての役目を果たすことを可能にし得る。さらに、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａ配列は、いずれの非天然アミノ酸も必要とせず、多様な細胞型における多種多様な条件下でＴ細胞ＭＭＰに対する発現が実行されることを可能にする。ソルターゼＡによる酵素的ライゲーションの可能性のある不利点は、それが、グルタミン側鎖の、リジン等のアルキル一級アミンへのカップリングをもまた触媒し得る、細菌トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）を採用するという点である。細菌ｍＴＧは、天然ＩｇＧ１においてグルタミン残基を修飾することができないように思われるが、採用されるときポリペプチド配列の二次修飾をもたらす場合がある。
【０１０９】
エピトープまたはペイロードをＴ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドのカルボキシ末端に結合させる場合、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａが、所望のペプチド（複数可）のカルボキシ末端部分に導入操作される。露出したグリシンまたはアラニンの連なり（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ由来のソルターゼＡを用いる場合は（Ｇ）３−５（配列番号５５及び５６）、またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来のソルターゼＡを用い場合は（Ａ）３−５（配列番号５７及び５８））が、エピトープを含むペプチド（またはそれに結合したリンカー）、ペプチドペイロード（またはそれに結合したリンカー）、または非ペプチドエピトープもしくはペイロードに共有結合性で結合したペプチドのＮ末端に導入操作される。
【０１１０】
エピトープまたはペイロードをＴ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドのアミノ末端に結合させる場合、露出したグリシン（例えば、（Ｇ）２、３、４、または５）またはアラニン（例えば、（Ａ）２、３、４、または５）の連なりが、所望のポリペプチド（複数可）のＮ末端に現れるように操作され、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａが、エピトープを含むペプチド（またはそれに結合したリンカー）、ペプチドペイロード（またはそれに結合したリンカー）、または非ペプチドエピトープもしくはペイロードに共有結合性で結合したペプチドのカルボキシ末端部分に導入操作される。
【０１１１】
ソルターゼＡをアミノ操作及びカルボキシ操作ペプチドと組み合わせることにより、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａ配列においてＴｈｒ残基とＧｌｙ／Ａｌａ残基との間の切断がもたらされて、カルボキシ標識ペプチドとのチオエステル中間体が形成される。Ｎ末端で修飾されたポリペプチドによる求核攻撃により、カルボキシ修飾ポリペプチド−ＬＰ（Ｘ５）Ｔ＊Ｇ／Ａ−アミノ修飾ポリペプチドという形態の、共有結合性でカップリングされた複合体の形成がもたらされ、ここで、「＊」は、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａモチーフのトレオニンと、Ｎ末端修飾ペプチドのグリシンまたはアラニンとの間で形成される結合を表す。上述に照らして、本開示は、
第１及び／または第２のポリペプチドのカルボキシ末端における少なくとも１つのＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａアミノ酸配列（例えば、そのＮ末端においてオリゴグリシンまたはオリゴアラニンで修飾されたエピトープペプチドとのカップリング用）、
第１及び／または第２のポリペプチドのアミノ末端における少なくとも１つのオリゴグリシン（例えば、（Ｇ）２、３、４、または５）（例えば、そのＮ末端においてＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａアミノ酸配列で修飾されたエピトープポリペプチドとのカップリング用）、
第１及び／または第２のポリペプチドのアミノ末端における少なくとも１つのオリゴアラニン（例えば、（Ａ）２、３、４、または５）（例えば、そのＮ末端においてＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａアミノ酸配列で修飾されたエピトープポリペプチドとのカップリング用）、
第１及び／または第２のポリペプチドにおける少なくとも１つのＬＰ（Ｘ５）ＴＡ（例えば、ＬＰＥＴＡ、配列番号５４（ここで、Ｘ５はＥであり、終わりの位置はＡである））アミノ酸配列（例えば、そのＮ末端においてオリゴグリシンまたはオリゴアラニンで修飾されたエピトープペプチドとのカップリング用）、及び／または
第１及び／または第２のポリペプチドにおける少なくとも１つのＬＰ（Ｘ５）ＴＧ（例えば、ＬＰＥＴＧ、配列番号５４（ここで、Ｘ５はＥであり、終わりの位置はＧである））アミノ酸配列（例えば、そのＮ末端においてオリゴグリシンまたはオリゴアラニンで修飾されたエピトープペプチドとのカップリング用）、
を有するＴ細胞ＭＭＰを含有する組成物、及びその使用を企図する。
【０１１２】
ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａの代わりに、ＬＰＥＴＧＧ（配列番号５９）ペプチドがＳ．ａｕｒｅｕｓソルターゼＡカップリングに使用されてもよく、またはＬＰＥＴＡＡ（配列番号６０）ペプチドがＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓソルターゼＡカップリングに使用されてもよい。コンジュゲーション反応は依然として、トレオニンとアミノ末端オリゴグリシンまたはオリゴアラニンペプチドとの間で起こって、カルボキシ修飾ポリペプチド−ＬＰ（Ｘ５）Ｔ＊Ｇ／Ａ−アミノ修飾ポリペプチドを産出し、ここで、「＊」は、トレオニンと、Ｎ末端修飾ペプチドのグリシンまたはアラニンとの間で形成される結合を表す。
【０１１３】
一実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドがβ２Ｍポリペプチドを含む場合、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端で、または第１のポリペプチドに結合したポリペプチドリンカー（例えば、リンカーは、第１のポリペプチドと共翻訳され、第１のポリペプチドのＮ末端にある）のＮ末端で、オリゴグリシン（例えば、（Ｇ）２、３、４、または５）またはオリゴアラニン（例えば、（Ａ）２、３、４、または５）を含有する。オリゴグリシンまたはオリゴアラニンをソルターゼＡによる化学コンジュゲーション部位として用いて、そのカルボキシ末端領域にＬＰ（Ｘ５）ＴＧ／Ａをもつポリペプチドを含むエピトープにそれをコンジュゲートすることによって、エピトープ分子をＴ細胞ＭＭＰに導入してもよい。例として、図４に示されるようなβ２Ｍの配列は、２０アミノ酸のリーダー配列から始まり、成熟ポリペプチドは、最初の配列ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳから始まり、当該ポリペプチドの残りの部分にわたって継続する。配列番号５４、５９、及び６９のソルターゼモチーフは、例えば、下記のように、
Ａ２−５もしくはＧ２−５−リンカー−ＩＱ（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
Ａ２−５もしくはＧ２−５−リンカー−Ｑ（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、または
Ａ２−５もしくはＧ２−５−リンカー−（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
（Ａ２−５またはＧ２−５については配列番号５５〜５８、ならびにβ２Ｍ配列については配列番号１５１〜１５５及び図４を参照されたい）、
あるいはヒトリーダー配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１５１及び図４を参照されたい）と共に下記に示されるように、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（Ａ２−５またはＧ２−５）−リンカー−ＩＱ（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（Ａ２−５またはＧ２−５）−リンカー−Ｑ（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
または
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（Ａ２−５またはＧ２−５）−リンカー−（Ｒ／Ｋ）ＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
その中に導入されてもよく、ここで、存在する場合、リンカーは、独立して選択されるアミノ酸配列（例えば、ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）（配列番号７６）等の、ポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリン、及びポリ−Ｇｌｙ等の１〜５０個のアミノ酸）、または化学基（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール等）を含んでもよい。リンカーは、存在しても、または不在であってもよく、２つのリンカーが示される場合、それら同じであっても、または異なってもよい。
【０１１４】
そのＮ末端にオリゴグリシンをもつポリペプチドが、細胞に基づく系における発現によって調製され、その発現細胞によってリーダー配列及び／またはリンカーのいずれの部分も除去されないか、または完全には除去されない場合、トロンビン切断部位（Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ、配列番号６１）が、グリシンに先行するように挿入されてもよい。トロンビンはＡｒｇ残基とＧｌｙ残基との間を切断するので、これにより、ポリペプチドにおいて他のトロンビン部位が何ら存在しないことを条件として、切断後にグリシンが、オリゴグリシンで標識され、コンジュゲートされるようにタンパク質分子上に露出することが確実となる。
【０１１５】
ある実施形態では、Ａ２−５またはＧ２−５モチーフが、図４に示される配列（例えば、図４に示される全配列、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟ポリペプチドの配列のいずれか）に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を含むポリペプチドに組み込まれ、ここでの配列同一性は、付加されたＡ２−５またはＧ２−５モチーフ及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく評定される。
【０１１６】
ある実施形態では、Ａ２−５またはＧ２−５モチーフが、図４に示される配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟ポリペプチド配列のうちのいずれか）と比較して１〜１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化を有するβ２Ｍ配列を含むポリペプチドに組み込まれ、ここでのアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化は、付加されたＡ２−５またはＧ２−５モチーフ及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく評定される。かかる一実施形態では、Ａ２−５またはＧ２−５モチーフは、図４に示される配列等の成熟β２Ｍ配列の、アミノ末端の１５個（例えば、１〜５、５〜１０、または１０〜１５個）のアミノ酸のうちのいずれかを置き換えてもよいし、及び／またはそれらの間に挿入されてもよい。
【０１１７】
Ｉ．Ａ．２．３  トランスグルタミナーゼ酵素部位
トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）は、グルタミン残基の側鎖上のアミド基と、一級アミンドナー（例えば、ポリペプチドにおけるリジン残基の側鎖上で見出されるもの等の、一級アルキルアミン）との間での共有結合の形成を触媒する。トランスグルタミナーゼは、エピトープ及びペイロードをＴ細胞ＭＭＰに直接、または遊離一級アミンを含むリンカーを介して間接的のいずれかでコンジュゲートするために採用されてもよい。したがって、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドに存在するグルタミン残基は、それらがＳｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｅｎｓｅトランスグルタミナーゼ等の酵素によって接近可能である場合、化学コンジュゲーション部位と見なされ得る。その酵素（ＥＣ  ２．３．２．１３）は、リジンのε−アミノ基へのグルタミンのγ−アシル転移を触媒する、安定なカルシウム非依存性酵素である。しかしながら、配列に現れるグルタミン残基は、酵素的修飾用に常に接近可能であるわけではない。限定された接近性は、修飾が起こり得る箇所の数を限定するため、有利であり得る。例えば、細菌ｍＴＧは全般的に、天然ＩｇＧ１においてグルタミン残基を修飾することができないが、Ｓｃｈｉｂｌｉと共同研究者（Ｊｅｇｅｒ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ（Ｉｎｔ  Ｅｎｇｌ）．２０１０；４９：９９９５７及びＤｅｎｎｌｅｒ  Ｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．２０１４；２５（３）：５６９−７８）は、ＩｇＧ１をＮ２９７において脱グリコシル化することによりグルタミン残基Ｑ２９５が接近可能となり、抗体薬物コンジュゲートを作り出すための酵素的ライゲーションが可能となることを見出した。さらに、Ｎ２９７からＱ２９７へのＩｇＧ１変異体を生産することにより、トランスグルタミナーゼによる酵素標識用の２つの部位を導入する。
【０１１８】
Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドが、化学コンジュゲーション部位として採用され得るグルタミンを含有しない（例えば、それがトランスグルタミナーゼにとって接近可能でないか、または所望の箇所に配置されていない）場合、トランスグルタミナーゼの基質として作用し得るグルタミン残基、または接近可能なグルタミンを含む配列（「グルタミンタグ」または「Ｑタグ」と称されることがある）が、ポリペプチドに組み込まれてもよい。付加されたグルタミンまたはＱタグは、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位として作用し得る。米国特許公開２０１７／００４３０３３  Ａ１は、グルタミン残基及びＱタグの組み込み、ならびにポリペプチドを修飾するためのトランスグルタミナーゼの使用について記載しており、これらの教示に関して本明細書に援用される。
【０１１９】
グルタミン残基及びＱタグの組み込みは、ペプチドを合成することにより化学的に、または当該ポリペプチドをコードする核酸を修飾して、細胞もしくは無細胞系において修飾核酸を発現させることによって、遂行され得る。
【０１２０】
ある実施形態では、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位がグルタミンまたはＱタグである場合、このグルタミンまたはＱタグは、上述の第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位に関して示される箇所のうちのいずれかにあってよい。
【０１２１】
ある実施形態では、付加されたグルタミン残基またはＱタグは、第１のＭＨＣポリペプチド、または、存在する場合、第１のＭＨＣポリペプチドに結合したリンカーの配列に結合しているか（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）、またはその配列内にある。第１のポリペプチドの追加的な化学コンジュゲーション部位が、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド上の任意の箇所に（それに結合して、またはその内部に）存在してもよい。かかる一実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のＭＨＣポリペプチドは、β２Ｍポリペプチドであり、付加されたグルタミンまたはＱタグが、図４に提供される成熟β２Ｍポリペプチド配列（これは２０塩基対のシグナル配列を除外する）（または図４にある成熟β２Ｍポリペプチドに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９、またはさらには１００％の配列同一性を有するペプチド）のＮ末端から２０、１５、または１０アミノ酸以内に組み込まれている。別の実施形態では、グルタミンまたはＱタグは、図４に提供される成熟β２Ｍポリペプチドのうちの１つのＮ末端に結合したポリペプチドリンカーに存在する。
【０１２２】
ある実施形態では、付加されたグルタミン残基またはＱタグは、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、Ｎ末端またはＣ末端で）、またはその配列内にあり、例えば、第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣ−Ｈペプチド）、または、存在する場合、第２のＭＨＣポリペプチドに直接もしくは間接的に結合したＦｃ足場ペプチドもしくはリンカーの末端またはその内部にある。第２のポリペプチドの追加的な化学コンジュゲーション部位が、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチド上の任意の箇所に（それに結合して、またはその内部に）存在してもよい。一実施形態では、第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣ−Ｈポリペプチドであり、第２のポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを含み、付加されたグルタミンまたはＱタグが、ＭＨＣ−ＨまたはＦｃポリペプチド配列内に組み込まれている。別の実施形態では、グルタミンまたはＱタグは、ＭＨＣ−ＨポリペプチドとＦｃポリペプチドとの間のポリペプチドリンカー内、またはＦｃポリペプチドのカルボキシル末端に結合したリンカー内に存在する。
【０１２３】
複数の実施形態では、グルタミン含有タグは、ＬＱＧ、ＬＬＱＧＧ（配列番号６２）、ＬＬＱＧ（配列番号６３）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号６４）、及びＬＬＱＬＱＧ（配列番号６５）（多数の他の例が利用可能である）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
一級アミン基を含有する、または一級アミン基を含有するように修飾されたペイロード及びエピトープを、トランスグルタミナーゼ触媒反応においてアミンドナーとして用いて、グルタミン残基（例えば、Ｑタグにおけるグルタミン残基）と、エピトープまたはペイロードとの間で共有結合を形成させてもよい。
【０１２５】
エピトープまたはペイロードが、それがアミンドナーとして作用することを可能にするのに好適な一級アミンを含まない場合、エピトープまたはペイロードは、アミン基を組み込むように化学的に修飾（例えば、リジン、アミノカプロン酸、カダベリン等への連結によって一級アミンを組み込むように修飾）されてもよい。エピトープまたはペイロードがペプチドを含み、アミンドナーとして作用するための一級アミンを必要とする場合、トランスグルタミナーゼと共に一級アミンが作用し得るリジン、または他のアミン含有化合物が、当該ペプチドに組み込まれてもよい。一級アミン基を提供し得、かつアルファアミノ酸鎖に組み込まれるか、またはその末端にあり得る他のアミン含有化合物には、ホモリジン、２，７−ジアミノヘプタン酸、及びアミノヘプタン酸が含まれるが、これらに限定されない。代替として、エピトープまたはペイロードは、好適なアミン基を含むペプチドまたは非ペプチドリンカーに結合していてもよい。好適な非ペプチドリンカーの例としては、アルキルリンカー及びＰＥＧ（ポリエチレングリコール）リンカーが挙げられる。
【０１２６】
トランスグルタミナーゼは、様々な源から得ることができ、これには、哺乳類肝臓（例えば、モルモット肝臓）；真菌（例えば、Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｏｎａｓｃｕｓ、またはＲｈｉｚｏｐｕｓトランスグルタミナーゼ）；粘菌（例えば、Ｐｈｙｓａｒｕｍ  ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌｕｍトランスグルタミナーゼ）；及び／または細菌（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｇｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｌａｄａｋａｎｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｍｏｂａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｒｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｄａｋａｎｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃａｎｉｆｅｒｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｎｅｔｒｏｐｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｆｒａｄｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｓｅｏｖｅｒｔｉｖｉｌｌａｔｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｉｎｎａｍａｏｎｅｏｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｏｃａｒｎｅｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｖｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｌｙｄｉｃｕｓ、Ｓ．ｍｏｂａｒｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｉｏｙａｎｓｉｓ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ菌種、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａ  ｃｔｅｒｉｕｍ  ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａ  ｍｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ菌種、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）由来の酵素が含まれる。一部の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、酵素の立体構造変化を誘導して、酵素活性を可能にするのにカルシウムを必要としない、カルシウム非依存性トランスグルタミナーゼである。
【０１２７】
他の第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位に関して上記で考察されたように、グルタミンまたはＱタグは、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチド上の任意の所望の箇所に組み込まれてもよい。ある実施形態では、グルタミンまたはＱタグは、第１及び第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣ−Ｈ及びβ２Ｍポリペプチド）、足場またはＩｇ  Ｆｃ、ならびにこれらの要素に隣接するリンカーを含めた、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドにおける任意の要素の末端またはその付近で付加されてもよい。
【０１２８】
一実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドがβ２Ｍポリペプチド配列を含む場合、第１のポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端に、または第１のポリペプチドに結合したポリペプチドリンカー（例えば、リンカーは、第１のポリペプチドのＮ末端に結合している）のＮ末端に、グルタミンまたはＱタグを含有する。グルタミンまたはＱタグを化学コンジュゲーション部位として用いて、トランスグルタミナーゼによりアミドドナーとして使用され得る、一級アミンをもつエピトープ、または一級アミンを含むリンカーに結合されたエピトープにそれをコンジュゲートすることによって、エピトープ分子をＴ細胞ＭＭＰに導入してもよい。例として、図４に示されるようなβ２Ｍの配列は、２０アミノ酸のリーダー配列から始まり、成熟ポリペプチドは、最初の配列ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳから始まり、当該ポリペプチドの残りの部分にわたって継続する。上記に示されたその他のＱタグを代表し、かつその他のＱタグによって置換可能である、アミノ酸配列ＬＬＱＧ（配列番号６３）を有するＱタグが、下記に示されるように、
Ｑタグ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＬＬＱＧ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＬＬＱＧ−リンカー−ＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．．．．、もしくは
ＬＬＱＧ−リンカー−ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
（β２Ｍ配列については配列番号１５１〜１５５を参照されたい）
またはヒトリーダー配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１５１及び図４を参照されたい）と共に下記に示されるように、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｑタグ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ＬＬＱＧ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ＬＬＱＧ−リンカー−ＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、もしくは
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ＬＬＱＧ−リンカー−ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．．
β２ＭのＮ末端で組み込まれ得、ここで、存在する場合、リンカーは、独立して選択されるアミノ酸配列（例えば、ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）（配列番号７６）等の、ポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリン、及びポリ−Ｇｌｙ等の１〜５０個のアミノ酸）、または化学基（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール等）を含んでもよい。リンカーは、存在しても、または不在であってもよく、２つのリンカーが示される場合、それら同じであっても、または異なってもよい。
【０１２９】
ある実施形態では、Ｑタグモチーフが、図４に示される配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟β２Ｍポリペプチドのうちのいずれかの配列）に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するβ２Ｍ配列を含むポリペプチドに組み込まれ、ここでの同一性は、付加されたＱタグモチーフ及び存在する任意のリンカー配列を考慮することなく評定される。
【０１３０】
ある実施形態では、Ｑタグモチーフは、図４に示される配列（図４に示される全配列、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟ポリペプチドの配列のいずれか）と比較して１〜１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化を有する配列に組み込まれる。変化は、Ｑタグモチーフ及び存在する任意のリンカー配列のアミノ酸を考慮することなく評定される。かかる一実施形態では、Ｑタグモチーフは、図４に示される配列等の成熟β２Ｍ配列の、アミノ末端の１５個（例えば、１〜５、５〜１０、または１０〜１５個）のアミノ酸のうちのいずれかを置き換えてもよく、及び／またはそれらの間に挿入されてもよい。
【０１３１】
代替として、Ｔ細胞ＭＭＰに現れるＭＨＣ−Ｈ鎖配列に現れるグルタミン残基のうちのいずれか１つ、２つ、または３つの周りの配列が、Ｑタグのそれと一致するように修飾され、エピトープまたはペイロードの付加用の化学コンジュゲーション部位として使用されてもよい。
【０１３２】
別の実施形態では、グルタミンまたはＱタグは、第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位としてＩｇＦｃ領域に組み込まれてもよい。かかる一実施形態では、それらは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、または一級アミンをもつペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【０１３３】
Ｉ．Ａ．２．４  化学コンジュゲーション部位としてのセレノシステイン及び非天然アミノ酸
Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドにおいて部位特異的化学コンジュゲーション部位を提供するための１つの戦略は、当該ポリペプチドに存在する他のアミノ酸とは明確に異なる反応性を有するアミノ酸の挿入を採用する。かかるアミノ酸には、非天然アミノ酸であるアセチルフェニルアラニン（ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐＡｃＰｈｅ）、パラアジド（ｐａｒａｚｉｄｏ）フェニルアラニン、及びプロピニル−チロシン、ならびに天然型アミノ酸であるセレノシステイン（Ｓｅｃ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３４】
米国特許公開第２０１４００５１８３６  Ａ１号においてＴｈａｎｏｓらは、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌ−ドパ、フッ化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、及びｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニンを含む、いくつかの他の非天然アミノ酸について考察している。他の非天然アミノ酸は、アミノ、カルボキシ、アセチル、ヒドラジノ、ヒドラジド、セミカルバジド、スルファニル、アジド、及びアルキニルを含めた反応性基を含む。例えば、米国特許公開第２０１４００４６０３０  Ａ１号を参照されたい。
【０１３５】
実験室でのポリペプチドの直接合成に加えて、転写−翻訳系を利用して非天然アミノ酸をタンパク質及びポリペプチドに組み込むための、終止コドンを利用する２つの方法が開発されてきた。第１の方法は、オパール終止コドンであるＵＧＡをセレノシステイン（Ｓｅｃ）挿入配列と対合することによってＳｅｃを組み込む。第２の方法は、全般的にアンバー、オーカー、またはオパール終止コドンの使用により非天然アミノ酸をポリペプチドに組み込む。固有のコドン、まれなコドン、非天然コドン、５塩基コドン、及び４塩基コドン等の、他の種類のコドンの使用、ならびにナンセンス及びフレームシフト抑制の使用もまた報告されてきた。例えば、米国特許公開第２０１４００４６０３０  Ａ１号及びＲｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １０３（２３）８６５０−８６５５（２００６）を参照されたい。例として、非天然アミノ酸アセチルフェニルアラニンが、インビボまたは無細胞転写−翻訳系においてｔＲＮＡ／アミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ対を用いて、アンバーコドンで組み込まれてもよい。
【０１３６】
セレノシステイン及び非天然アミノ酸の両方の組み込みは、必要な終止コドン（複数可）をＴ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドの核酸コード配列に所望の箇所（複数可）で導入操作することを必要とし、その後、当該コード配列を用いて、インビボまたは無細胞転写−翻訳系においてＴ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチド鎖を発現させる。
【０１３７】
インビボ系は全般的に、生体直交型の化学コンジュゲーション部位として作用する非天然アミノ酸をポリペプチド及びタンパク質に組み込むために操作された細胞株に依存する。例えば、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ」と題される、国際公開出願第２００２／０８５９２３号を参照されたい。インビボでの非天然アミノ酸の組み込みは、宿主細胞における全ての内在性ｔＲＮＡ及びシンテターゼに直交型である、ｔＲＮＡとアミノアシルｔＲＮＡシンテターゼ（ａａＲＳ）との対に依存する。選定の非天然アミノ酸は、細胞培養または発酵中に培地に補充されるため、細胞透過性及び安定性が重要な考慮事項となる。
【０１３８】
荷電ｔＲＮＡが提供された種々の無細胞合成系もまた利用して、非天然アミノ酸を組み込んでもよい。かかる系には、米国公開特許出願第２０１６０１１５４８７Ａ１号、Ｇｕｂｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＲＮＡ．２０１０  Ａｕｇ；１６（８）：１６６０−１６７２、Ｋｉｍ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．６６：１８０−８（１９９９）、Ｋｉｍ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１６：３８５−９０（２０００）、Ｋｉｍ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：３０９−１６（２００１）、Ｓｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６７：１６９−８２（２００４）、Ｋｉｍ，Ｄ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８５：１２２−２９（２００４）、Ｊｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｃ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８６：１９−２６（２００４）、Ｙｉｎ，Ｇ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８６：１８８−９５（２００４）、Ｊｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｃ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：４６５−７２（２００４）、Ｖｏｌｏｓｈｉｎ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｒ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９１：５１６−２１（２００５）に記載されるものが含まれる。
【０１３９】
ひとたびＴ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドに組み込まれると、組み込まれたセレノシステインまたは非天然アミノ酸と反応性の基をもつエピトープ及び／またはペイロードが、好適な条件下でＴ細胞ＭＭＰに接触させられて、共有結合を形成する。例として、ｐＡｃＰｈｅのケト基は、オキシムカップリングを介して、アルコキシ−アミンに対して反応性であり、アルコキシアミン含有エピトープ及び／またはペイロードに直接、またはアルコキシアミン含有リンカーを介してエピトープ及びペイロードに間接的にコンジュゲートされ得る。セレノシステインは、例えば、一級ヨウ化アルキル（例えば、リンカーとして使用され得るヨードアセトアミド）、マレイミド、及びメチルスルホンフェニルオキサジアゾール基と反応する。したがって、これらの基をもつ、またはこれらの基をもつリンカーに結合されたエピトープ及び／またはペイロードが、セレノシステインをもつポリペプチド鎖に共有結合され得る。
【０１４０】
他の第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位及び第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位に関して上記で考察されたように、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチド上の任意の所望の箇所に組み込まれてもよい。ある実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、第１及び第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣ−Ｈ及びβ２Ｍポリペプチド）、足場またはＩｇ  Ｆｃ、ならびにこれらの要素に隣接するリンカーを含めた、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドにおける任意の要素の末端またはその付近で付加されてもよい。複数の実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、β２Ｍ、ＭＨＣクラスＩ重鎖、及び／またはＦｃ  Ｉｇポリペプチドに組み込まれてもよい。ある実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、第１のＭＨＣポリペプチド（例えば、β２Ｍポリペプチド）のアミノ末端またはそれに結合したリンカーの付近またはその箇所で、第１のポリペプチドに組み込まれてもよい。例えば、第１のポリペプチドがβ２Ｍ配列を含む場合、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸をβ２Ｍ配列のＮ末端またはその付近で組み込んで、例えば、直接またはリンカーを通してのいずれかでのエピトープの化学コンジュゲーションを可能にしてもよい。例として、図４に示されるようなβ２Ｍの配列は、２０アミノ酸のリーダー配列から始まり、成熟ポリペプチドは、最初の配列ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳから始まり、当該ポリペプチドの残りの部分にわたって継続する。セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸（「ψ」により表される）は、例えば、下記のように、
ψＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、ψ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ψ−リンカー−ＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、もしくはψ−リンカー−ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
またはヒトリーダー配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（β２Ｍ配列については配列番号１５１〜１５５及び図４を参照されたい）と共に下記に示されるように、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ψＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ψ−リンカー−ＩＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ψ−リンカー−ＱＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、もしくは
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−ψ−リンカー−ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．、
その中に導入されてもよく、ここで、存在する場合、リンカーは、独立して選択されるアミノ酸配列（例えば、ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）（配列番号７６）等の、ポリグリシン、ポリアラニン、ポリセリン、及びポリ−Ｇｌｙ等の１〜５０個のアミノ酸）、または化学基（例えば、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール等）を含んでもよい。リンカーは、存在しても、または不在であってもよく、２つのリンカーが示される場合、それら同じであっても、または異なってもよい。
【０１４１】
ある実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、図４に示されるβ２Ｍ配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟β２Ｍポリペプチドのうちのいずれかの配列）に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するβ２Ｍ配列を含むポリペプチドに組み込まれ、ここでの配列同一性は、付加されたセレノシステイン及び／または非天然アミノ酸ならびに存在する任意のリンカー配列を考慮することなく評定される。
【０１４２】
ある実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、図４に示されるβ２Ｍ配列（例えば、図４に示される完全長配列のうちのいずれか、またはアミノ酸２１で開始し、それらのＣ末端で終わる成熟β２Ｍポリペプチドのうちのいずれかの配列）と比較して１〜１５個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個）のアミノ酸の欠失、挿入、及び／または変化を有するβ２Ｍ配列を含むポリペプチドに組み込まれる。変化は、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸ならびに存在する任意のリンカー配列のアミノ酸を考慮することなく評定される。かかる一実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、図４に示される配列等の成熟β２Ｍ配列の、アミノ末端の１５個のアミノ酸のうちのいずれかを置き換えてもよく、及び／またはそれらの間に挿入されてもよい。
【０１４３】
他の実施形態では、セレノシステイン及び／または非天然アミノ酸は、化学コンジュゲーション部位として、ＭＨＣ−Ｈ鎖またはＩｇＦｃポリペプチド配列（それに結合したリンカーを含む）を含むポリペプチドに組み込まれてもよい。かかる一実施形態では、それらは、例えば、Ｔ細胞ＭＭＰにコンジュゲートされるエピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の部位として利用されてもよい。
【０１４４】
Ｉ．Ａ．２．５操作されたアミノ酸の化学コンジュゲーション部位
天然型アミノ酸の側鎖に、またはポリペプチドの末端に存在する様々な官能基（例えば、−ＳＨ、−ＮＨ３、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ等）のうちのいずれも、化学コンジュゲーション部位として使用され得る。これには、それぞれＮ−ヒドロキシスクシンイミド官能基及びマレイミド官能基を含む試薬によって容易に修飾可能である、リジン及びシステインの側鎖が含まれる。かかるアミノ酸残基を利用することの主な不利点は、生成物の可変性及び不均一性の可能性である。例えば、ＩｇＧは、８０個を超えるリジンを有し、このうち２０個超が、溶媒が接近可能な部位にある。例えば、ＭｃＣｏｍｂ  ａｎｄ  Ｏｗｅｎ，ＡＡＰＳ  Ｊ．１１７（２）：３３９−３５１を参照されたい。システインは、それよりは広範に分布していない傾向にある。それらは、ジスルフィド結合に関与する傾向にあり、接近不可能で、化学コンジュゲーション部位を配置することが望ましい場所に位置していない場合がある。したがって、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドの選択的修飾のために、所望の箇所で非天然型アミノ酸を組み込むように第１及び／または第２のポリペプチドを操作することが可能である。操作は、ポリペプチドの直接化学合成の形態をとってもよく（例えば、適切にブロッキングしたアミノ酸のカップリングによって）、及び／またはポリペプチドをコードする核酸の配列を修飾し、それを細胞もしくは無細胞系において発現させることによるものでもよい。したがって、本明細書は、転写／翻訳、ならびに第１及び／または第２のポリペプチドの翻訳された部分のＣ末端またはＮ末端に、化学コンジュゲーション部位（例えば、エピトープまたはペプチドのための）として使用する対象となる非天然または天然（セレノシステインを含む）アミノ酸をもつ操作されたポリペプチドを繋ぐことによる、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドの全てまたは一部の調製を含み、かつそれらを実現する。操作されたペプチドは、上記でエピトープペプチドに関して記載されるようなソルターゼの使用を含めた、任意の好適な方法によって繋がれてもよく、リンカーペプチド配列を含んでもよい。ある実施形態では、操作されたペプチドは、ソルターゼコンジュゲーションに役立ち得る、及び／またはリンカー配列の一部としての役割を果たし得る、２、３、４、または５つのアラニンまたはグリシンからなる配列を含んでもよい。
【０１４５】
一実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドは、図４に示されるようなβ２Ｍ配列、図２に示されるようなＩｇＦｃ配列、または図３に示されるようなＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドに導入操作された、化学コンジュゲーション部位として使用する対象となる少なくとも１つの天然型アミノ酸を含有する。ある実施形態では、化学コンジュゲーション部位として使用する対象となる少なくとも１つの天然型アミノ酸は、図４に示されるようなβ２Ｍ配列、図２に示されるようなＩｇＦｃ配列、または図３に示されるようなＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドに導入操作される。ある実施形態では、化学コンジュゲーション部位として使用する対象となる少なくとも１つの天然型アミノ酸は、図４に示されるような成熟β２Ｍ配列、図２に示されるようなＩｇＦｃ配列、または図３に示されるようなＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの少なくともアミノ末端の１０、２０、３０、４０、５０、６０、または７０個のアミノ酸との、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９３％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するβ２Ｍアミノ酸配列を含む、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドに導入操作される。別の実施形態では、化学コンジュゲーション部位として使用する対象となる少なくとも１つの天然型アミノ酸は、図４に示されるようなβ２Ｍ配列、図２に示されるようなＩｇＦｃ配列、または図３に示されるようなＭＨＣクラスＩ重鎖配列に対して１００％のアミノ酸配列同一性を有する、少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００アミノ酸の連続配列を含むポリペプチドに導入操作される。天然型アミノ酸がポリペプチドに導入操作される、上記で言及した実施形態のうちのいずれかにおいて、アミノ酸は、アルギニン、リジン、システイン、セリン、トレオニン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、及びアスパラギンからなる群から選択されてもよい。別のかかる実施形態では、アミノ酸は、リジン、システイン、セリン、トレオニン、及びグルタミンからなる群から選択される。別のかかる実施形態では、アミノ酸は、リジン、グルタミン、及びシステインからなる群から選択される。ある実施形態では、アミノ酸は、システインである。ある実施形態では、アミノ酸は、リジンであり、別の実施形態では、アミノ酸は、グルタミンである。
【０１４６】
当業者に既知の任意の方法を用いて、ペイロードまたはエピトープを、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドに導入操作されたアミノ酸にカップリングしてもよい。例として、マレイミドを利用して、スルフヒドリルにカップリングしてもよく、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを利用して、アミン基にカップリングしてもよく、酸無水物または塩化物を用いて、アルコールまたはアミンにカップリングしてもよく、脱水剤を用いて、アルコールまたはアミンをカルボン酸基カップリングしてもよい。したがって、かかる化学反応を用いることで、エピトープまたはペイロードが、第１及び／または第２のポリペプチド上の箇所に直接、またはリンカー（例えば、ホモ二官能性またはヘテロ二官能性クロスリンカー）を通して間接的にカップリングされ得る。例として、マレイミドアミノ酸を含むエピトープペプチド（またはペプチド含有ペイロード）は、天然型であるまたはＴ細胞ＭＭＰに導入操作された化学コンジュゲーション部位（例えば、システイン残基）のスルフヒドリルにコンジュゲートすることができる。ディールス・アルダー／レトロディールス・アルダー保護スキームを用いることで、固相ペプチド合成技法を用いてマレイミドアミノ酸をペプチド（例えば、エピトープペプチド）に直接組み込むことが可能である。例えば、Ｋｏｅｈｌｅｒ，Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ（２０１２），“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｉｃｋａｂｌｅ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，”Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｇｒａｄｕａｔｅ  Ｔｈｅｓｅｓ  ＆  Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｓ，３１、ｈｔｔｐｓ：／／ｓｃｈｏｌａｒ．ｃｏｌｏｒａｄｏ．ｅｄｕ／  ｃｈｂｅ＿ｇｒａｄｅｔｄｓ／３１を参照されたい。したがって、一実施形態では、エピトープペプチドは、Ｔ細胞ＭＭＰの結合ポケットに存在するシステインにカップリングされるマレイミドアミノ酸を含む。マレイミドはまた、マレイミドをペプチドに結合させるクロスリンカー（例えば、マレイミドを、例えばペプチドリジン上のアミン基に結合させることができる、ヘテロ二官能性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド−マレイミドクロスリンカー）を用いて、エピトープペプチドに付加されてもよい。ある実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１つまたは２つ）のマレイミドアミノ酸を有するエピトープペプチドが、５位、７位、５９位、８４位、１１６位、１３９位、１６７位、１６８位、１７０位、及び／または１７１位から選択される任意の１つまたは複数（例えば、１つまたは２つ）のアミノ酸位置でシステイン残基（例えば、Ｙ７Ｃ、Ｙ５９Ｃ、Ｙ８４Ｃ、Ｙ１１６Ｃ、Ａ１３９Ｃ、Ｗ１６７Ｃ、Ｌ１６８Ｃ、Ｒ１７０Ｃ、及びＹ１７１Ｃ置換）を有するＭＨＣ重鎖にコンジュゲートされ、ここでの番号付けは、図３Ｄにある通りである。ある実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１つまたは２つ）のマレイミドアミノ酸を有するエピトープペプチドが、７位、８４位、及び／または１１６位から選択される任意の１つまたは複数（例えば、１つまたは２つ）のアミノ酸位置でシステイン残基（例えば、Ｙ７Ｃ、Ｙ８４Ｃ、及びＹ１１６Ｃ置換）を有するＭＨＣ重鎖にコンジュゲートされ、ここでの番号付けは、図３Ｄにある通りである。ある実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１つまたは２つ）のマレイミドアミノ酸を有するエピトープペプチドが、８４位及び／または１１６位から選択される任意の１つまたは複数（例えば、１つまたは２つ）のアミノ酸位置でシステイン残基（例えば、Ｙ８４Ｃ及び／またはＹ１１６Ｃ置換）を有するＭＨＣ重鎖にコンジュゲートされ、ここでの番号付けは、図３Ｄにある通りである。
【０１４７】
Ｔ細胞ＭＭＰに化学コンジュゲートを作り出すために、一対のスルフヒドリル基が同時に採用されてもよい。かかる実施形態では、ジスルフィド結合を有する、または互いに近接する箇所に導入操作された２つのシステイン（またはセレノシステイン）を有するＴ細胞ＭＭＰが、ビス−チオールリンカーの使用を通した化学コンジュゲーション部位として利用されてもよい。Ｇｏｄｗｉｎと共同研究者によって記載される、ビス−チオールリンカーは、その場所で架橋基を形成することによってジスルフィド結合の還元に関連する不安定性を回避すると同時に、別の分子（これはエピトープまたはペイロードであり得る）の組み込みを可能にする。例えば、Ｂｒｉｄｇｉｎｇ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅｓ  ｆｏｒ  ｓｔａｂｌｅ  ａｎｄ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓと題される、Ｂａｄｅｓｃｕ  Ｇ，ｅｔ  ａｌ．，（２０１４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．，２５（６）：１１２４−３６を参照されたく、これは親水性リンカー（例えば、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）リンカー）を組み込む、ビス−スルホン試薬の使用について記載している。
【０１４８】
Ｔ細胞ＭＭＰがジスルフィド結合を含む場合、ビス−チオールリンカーを用いて、全般的に化学量論量またはほぼ化学量論量のジチオール還元剤（例えば、ジチオスレイトール）によりこの結合を還元し、リンカーが両方のシステイン残基と反応することを可能にすることによって、エピトープまたはペイロードを組み込んでもよい。複数のジスルフィド結合が存在する場合、化学量論量またはほぼ化学量論量の還元剤の使用が、１つの部位での選択的修飾を可能にし得る。例えば、Ｂｒｏｃｃｈｉｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．（２００８）６０：３−１２を参照されたい。Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドが一対のシステイン及び／またはセレノシステイン（例えば、１つのセレノシステインと１つのシステイン）を含まない場合、それらをポリペプチドに導入操作して（システインまたはセレノシステインの一方または両方を導入することによって）、ビス−チオールリンカーと相互作用し得る一対の残基を提供してもよい。システイン及び／またはセレノシステインは、ビス−チオールリンカーがそれらを架橋できるような位置に置かれるべきである（例えば、２つのシステインがジスルフィド結合を形成可能な箇所で）。システイン及びセレノシステインの任意の組み合わせが採用され得る（すなわち、２つのシステイン、２つのセレノシステイン、または１つのセレノシステインと１つのシステイン）。システイン及び／またはセレノシステインが両方とも、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチド上に存在してもよい。代替として、システイン及び／またはセレノシステインは、第１のポリペプチド上に存在してもよく、ビス−チオールリンカー反応におけるそれらの相対物が、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチド上に存在してもよい。
【０１４９】
ある実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインが、一対のシステイン及び／またはセレノシステインの付加前に図４に示される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するβ２Ｍ配列を含む、Ｔ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドに、またはこれらの配列のうちの１つに結合したペプチドリンカーに組み込まれる。かかる一実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の、ビス−チオールリンカーのカップリング部位として利用されてもよい。一実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインは、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドのアミノ末端から１０、２０、３０、４０、または５０アミノ酸以内に位置する。
【０１５０】
別の実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインが、第２のポリペプチドに組み込まれたＩｇＦｃ配列に組み込まれて、化学コンジュゲーション部位を提供する。ある実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインが、一対のシステインまたはセレノシステインの付加前に図２に示される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するＩｇＦｃ配列を含むポリペプチドに、またはこれらの配列のうちの１つに結合したペプチドリンカーに組み込まれる。かかる一実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の、ビス−チオールリンカーのカップリング部位として利用されてもよい。
【０１５１】
別の実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインが、化学コンジュゲーション部位として、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列を含むポリペプチドに組み込まれる。ある実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインが、一対のシステインまたはセレノシステインの付加前に図３に示される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を含むポリペプチドに、またはこれらの配列のうちの１つに結合したペプチドリンカーに組み込まれる。かかる一実施形態では、一対のシステイン及び／またはセレノシステインは、例えば、エピトープ及び／またはペイロードの、直接、またはペプチドもしくは化学リンカーを通して間接的のいずれかでのコンジュゲーション用の、ビス−チオールリンカーのカップリング部位として利用されてもよい。
【０１５２】
Ｔ細胞ＭＭＰに化学コンジュゲートを作り出すために、一対のスルフヒドリル基が同時に採用されてもよい。かかる実施形態では、ジスルフィド結合を有する、または互いに近接する箇所に導入操作された２つのシステイン（またはセレノシステイン）を有するＴ細胞ＭＭＰが、ビス−チオールリンカーの使用を通した化学コンジュゲーション部位として利用されてもよい。
【０１５３】
Ｉ．Ａ．２．６  他の化学コンジュゲーション部位
炭水化物の化学コンジュゲーション部位
細胞発現によって調製される多くのタンパク質は、付加された炭水化物（例えば、哺乳類細胞において発現される抗体に付加される種類のオリゴ糖）を含有する。したがって、Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチドが細胞発現によって調製される場合、炭水化物が存在し、グリコール−コンジュゲーション反応において部位選択的化学コンジュゲーション部位として利用可能であってもよい。ＭｃＣｏｍｂｓ  ａｎｄ  Ｏｗｅｎ，ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ，（２０１５）１７（２）：３３９−３５１、及びその中で引用される参考文献は、抗体への分子のグリコール−コンジュゲーションのための炭水化物残基の使用について記載している。
【０１５４】
炭水化物残基の付加及び修飾は、炭水化物を改変する化学物質（例えば、アルデヒド基を導入する、過ヨウ素酸塩）の使用を通して、または化学コンジュゲーション部位として使用するための化学反応性の炭水化物もしくは炭水化物類似体を組み込むことができる酵素（例えば、フコシルトランスフェラーゼ）の作用によって、エクスビボで実施されてもよい。
【０１５５】
ある実施形態では、既知のグリコシル化部位を有するＩｇＦｃ足場の組み込みを用いて、部位特異的化学コンジュゲーション部位を導入してもよい。
【０１５６】
本開示は、化学コンジュゲーション（グリコール−コンジュゲーション）部位として炭水化物を有するＴ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲートを含み、かつそれらを実現する。本開示はまた、エピトープとの、ならびに薬物及び診断剤等の他の分子とのコンジュゲートを形成する際のかかる分子の使用、ならびに医療処置方法及び医療診断方法におけるこれらの分子の使用も含み、かつそれらを実現する。
【０１５７】
ヌクレオチド結合部位
ヌクレオチド結合部位は、結合部位に共有結合性で連結し得る紫外線反応性部分の使用を通して、部位特異的官能化を提示する。Ｂｉｌｇｉｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ．２０１４；２５（７）：１１９８−２０２は、ヌクレオチド結合部位でＩｇＧに共有結合性で連結され得るインドール−３−酪酸（ＩＢＡ）部分の使用について報告した。ヌクレオチド結合部位を形成するのに必要とされる配列の組み込みによって、反応性ヌクレオチドをもつ好適に修飾されたエピトープ及び／または他の分子（例えば、薬物または診断剤）とのＴ細胞ＭＭＰの化学コンジュゲートが、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを調製するために採用されてもよい。
【０１５８】
本開示は、化学コンジュゲーション部位としてヌクレオチド結合部位を有するＴ細胞ＭＭＰを含み、かつそれを実現する。本開示はまた、エピトープとの、ならびに薬物及び診断剤等の他の分子とのコンジュゲートを形成する際のかかる分子の使用、ならびに処置方法及び診断方法におけるこれらの分子の使用も含み、かつそれらを実現する。
【０１５９】
Ｉ．Ａ．２．７  Ｔ細胞ＭＭＰ、エピトープ、及びＭＯＤの結合及び特性
本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを提供する。一実施形態では、本開示は、ａ）第１のポリペプチドと、ｂ）第２のポリペプチドとを含む、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートを提供し、該多量体ポリペプチドの第１及び第２のポリペプチドは、エピトープ、第１のＭＨＣポリペプチド、第２のＭＨＣポリペプチド、及び任意選択で免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む。別の実施形態では、本開示はまた、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）エピトープ、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）任意選択でＩｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドとを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートも提供する。上記に列挙した構成要素に加えて、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第１及び第２のポリペプチドのうちの少なくとも一方は、１つまたは複数（例えば、少なくとも１つ）のＭＯＤを含む。１つまたは複数のＭＯＤは、Ａ）第１のポリペプチドのＣ末端、Ｂ）第２のポリペプチドのＮ末端、Ｃ）第２のポリペプチドのＣ末端、及び／またはＤ）第１のポリペプチドのＣ末端及び第２のポリペプチドのＮ末端に位置する。ある実施形態では、１つまたは複数のＭＯＤのうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、または少なくとも３つ）は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈するバリアントＭＯＤである。
【０１６０】
ある実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープは、少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または少なくとも１ｎＭ）の親和性で、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合する。ある実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、該Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い親和性で、第１のＴ細胞に結合し、ここで、第１のＴ細胞は、その表面上に同種ＭＯＤ、及び少なくとも１００μＭの親和性で該エピトープに結合するＴＣＲを発現し、第２のＴ細胞は、その表面上に同種ＭＯＤを発現するが、その表面上に、少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または少なくとも１ｎＭ）の親和性で該エピトープに結合するＴＣＲは発現しない。
【０１６１】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープは、約１０−４Ｍ〜約５×１０−４Ｍ、約５×１０−４Ｍ〜約１０−５Ｍ、約１０−５Ｍ〜約５×１０−５Ｍ、約５×１０−５Ｍ〜約１０−６Ｍ、約１０−６Ｍ〜約５×１０−６Ｍ、約５×１０−６Ｍ〜約１０−７Ｍ、約１０−７Ｍ〜約１０−８Ｍ、または約１０−８Ｍ〜約１０−９Ｍの親和性で、Ｔ細胞上のＴＣＲに結合する。別の表現をすれば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープは、約０．１μＭ〜約０．５μＭ、約０．５μＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭの親和性で、Ｔ細胞上のＴＣＲに結合する。
【０１６２】
ある実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するバリアントＭＯＤは、対応する野生型ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い親和性で、その同種ＭＯＤに結合する。
【０１６３】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するバリアントＭＯＤは、同種ＭＯＤに対して、１ｎＭ〜１００ｎＭ、または１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するバリアントＭＯＤは、同種ＭＯＤに対して、約１ｎＭ〜約５ｎＭ、約５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤは、同種ＭＯＤに対して、約１ｎＭ〜約５ｎＭ、約５ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜約５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜約１００ｎＭである結合親和性を有する。
【０１６４】
ＭＯＤのその同種ＭＯＤに対して低減された親和性と、エピトープのＴＣＲに対する親和性との組み合わせは、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの向上された選択性を実現しながらも、依然としてＭＯＤの活性を可能にする。例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、を発現する第２のＴ細胞への結合と比較して、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現する第１のＴ細胞に選択的に結合する。例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、それが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２００％（２倍）、少なくとも２５０％（２．５倍）、少なくとも５００％（５倍）、少なくとも１，０００％（１０倍）、少なくとも１，５００％（１５倍）、少なくとも２，０００％（２０倍）、少なくとも２，５００％（２５倍）、少なくとも５，０００％（５０倍）、少なくとも１０，０００％（１００倍）、または１００倍超高い親和性で、第１のＴ細胞に結合する。
【０１６５】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されたとき、エピトープ特異的Ｔ細胞の応答及びエピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の両方を誘導する。本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されたとき、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現する第１のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ特異的Ｔ細胞の応答を誘導する。Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートはまた、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤを発現する第２のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答も誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞の応答対エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の比は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、または少なくとも１００：１である。エピトープ特異的Ｔ細胞の応答対エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の範囲は、約２：１〜約５：１、約５：１〜約１０：１、約１０：１〜約１５：１、約１５：１〜約２０：１、約２０：１〜約２５：１、約２５：１〜約５０：１、約５０：１〜約１００：１、または１００：１超である。Ｔ細胞の「活性を調節すること」には、ｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を活性化させること、ｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導すること、ｉｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞毒素（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュライシン）の産生及び放出を誘導すること、ならびにｉｖ）自己反応性Ｔ細胞の活性を阻害すること等のうちの１つまたは複数が含まれ得る。
【０１６６】
ＭＯＤのその同種ＭＯＤに対して低減された親和性と、エピトープのＴＣＲに対する親和性との組み合わせは、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの向上された選択性を実現する。故に、例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、それがｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、を発現する第２のＴ細胞に結合する結合活性と比較して、より高い結合活性をもって、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現する第１のＴ細胞に結合する。
【０１６７】
Ｉ．Ａ．２．８  結合親和性の決定
ＭＯＤとその同種ＭＯＤとの間の結合親和性は、精製したＭＯＤ及び精製した同種ＭＯＤを用いて、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定することができる。Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートとその同種ＭＯＤとの間の結合親和性は、精製したＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び同種ＭＯＤを用いて、ＢＬＩによって決定することができる。ＢＬＩ法は当業者に周知である。例えば、Ｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．，２０（４）：４９８−５０７、及びＳｈａｈ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照されたい。本開示に記載される、同種ＭＯＤとＭＯＤとの間、または同種ＭＯＤとＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）との間の特異的結合親和性及び相対的結合親和性は、以下の手順を用いて決定することができる。
【０１６８】
ＢＬＩアッセイは、Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６（Ｐａｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ）機器、または同様の機器を用いて、以下のように実行することができる。例えば、同種ＭＯＤのＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）（例えば、バリアントＭＯＤを有する本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲート、または野生型ＭＯＤを含む対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート）に対する結合親和性を決定するために、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）を不溶性支持体（「バイオセンサ」）上に固定化する。固定化したＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）は、「標的」である。固定化は、捕捉抗体を不溶性支持体上に固定化し、そこで捕捉抗体がＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）を固定化することによって成し遂げられ得る。例えば、Ｔ細胞ＭＭＰがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、固定化は、抗Ｆｃ（例えば、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ）抗体を不溶性支持体上に固定化し、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートを固定化した抗Ｆｃ抗体に接触させ、抗Ｆｃ抗体がそれに結合して、それを固定化することによって、成し遂げられ得る。同種ＭＯＤをいくつかの異なる濃度で、固定化したＴ細胞ＭＭＰ（またはその固定化したエピトープコンジュゲート）に適用し、機器の応答を記録する。アッセイを、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ６．８）、５％ポリ（エチレングリコール）６０００、５０ｍＭ  ＫＣｌ、０．１％ウシ血清アルブミン、及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ  ２０非イオン性界面活性剤を含む液体培地中で実施する。同種ＭＯＤの固定化したＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）への結合を３０℃で実施する。結合親和性に関する陽性対照として、抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体を使用することができる。例えば、抗ＨＬＡクラスＩモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｗ６／３２（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ番号ＨＢ−９５、Ｐａｒｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９７９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３：３４２）（これは７ｎＭのＫＤを有する）を使用することができる。抗ＭＨＣクラスＩモノクローナル抗体の段階希釈を用いて標準曲線を生成することができる。同種ＭＯＤ、または抗ＭＨＣクラスＩ  ｍＡｂは、「分析物」である。ＢＬＩは、ｉ）固定化したポリペプチド（「標的」）から、及びｉｉ）内部参照層から、の２つの表面から反射された白色光の干渉パターンを分析する。バイオセンサチップに結合させた分子（「分析物」、例えば、同種ＭＯＤ、抗ＨＬＡ抗体）の数の変化が、干渉パターンにシフトを引き起こし、この干渉パターンのシフトをリアルタイムで測定することができる。標的／分析物間相互作用の親和性を記述する２つの運動項は、会合定数（ｋａ）及び解離定数（ｋｄ）である。これらの２つの項の比（ｋｄ／ｋａ）が親和性定数ＫＤをもたらす。このアッセイはまた、精製した野生型ＭＯＤまたはそのバリアントＭＯＤをバイオセンサ上に固定化して実施することもでき、その間、同種ＭＯＤをいくつかの異なる濃度で適用して、ＭＯＤとその同種ＭＯＤとの間の結合パラメータを決定する。
【０１６９】
故に、同種ＭＯＤ（例えば、ＩＬ−２Ｒ）の、野生型ＭＯＤ（例えば、ＩＬ−２）及びバリアントＭＯＤ（例えば、本明細書に開示されるようなＩＬ−２バリアント）の両方との、または野生型もしくはバリアントＭＯＤを含有するＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）との結合親和性を決定することにより、野生型分子及びバリアント分子の相対的結合親和性を決定することが可能となる。つまり、バリアントＭＯＤのその受容体（その同種ＭＯＤ）に対する結合親和性が、野生型ＭＯＤの同じ同種ＭＯＤに対する結合親和性と比較して低減されるかどうか、及び、そうであれば、野生型の同種ＭＯＤの結合親和性からの低減パーセンテージを決定することができる。
【０１７０】
ＢＬＩアッセイは、マルチウェルプレートで実行される。アッセイを実行するには、プレートのレイアウトを定め、アッセイステップを定め、バイオセンサをＯｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアに割り当てる。バイオセンサアセンブリを含水させる。含水させたバイオセンサアセンブリ及びアッセイプレートをＯｃｔｅｔ機器で１０分間平衡化する。ひとたびデータを取得すると、取得したデータをＯｃｔｅｔ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアにロードする。データをＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇウィンドウで、参照減算、ｙ軸合わせ、段階間補正、及びＳａｖｉｔｚｋｙ−Ｇｏｌａｙフィルタリングのための方法を指定することにより処理する。データをＡｎａｌｙｓｉｓウィンドウで、分析するためのステップ（会合及び解離）を指定し、曲線当てはめモデル（１：１）、当てはめ法（グローバル）、及び目的とするウィンドウ（秒単位）を選択することにより分析する。当てはめの質（ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｆｉｔ）を評価する。各データトレース（分析物濃度）についてのＫＤ値は、３倍範囲内にある場合、平均化することができる。ＫＤエラー値は、親和性定数値の１桁以内にあるべきである。Ｒ２値は、０．９５を上回るべきである。例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００８），Ｊ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３７７：２０９を参照されたい。
【０１７１】
本明細書で別途定めのない限り、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの同種ＭＯＤに対する親和性、または対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ここで、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する親和性は、上述のようにＢＬＩを用いて決定される。同様に、ＭＯＤ及びその同種ＭＯＤポリペプチドの親和性は、上述のようにＢＬＩを用いて決定することができる。
【０１７２】
一部の実例では、ＢＬＩ（上述の通り）によって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ここで、対照は、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する結合親和性対、ｉｉ）野生型ＭＯＤのバリアントを含む本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの同種ＭＯＤに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。一部の実例では、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ここで、対照は、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する結合親和性対、ｉｉ）野生型ＭＯＤのバリアントを含む本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの同種ＭＯＤに対する結合親和性の比は、１．５：１〜１０６：１、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０２：１、１０２：１〜１０３：１、１０３：１〜１０４：１、１０４：１〜１０５：１、または１０５：１〜１０６：１の範囲内にある。
【０１７３】
例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＩＬ−２ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＩＬ−２ポリペプチド（野生型ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＩＬ−２受容体（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＩＬ−２受容体（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。一部の実例では、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＩＬ−２ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＩＬ−２ポリペプチド（野生型ＩＬ−２ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＩＬ−２受容体（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＩＬ−２受容体に対する結合親和性の比は、１．５：１〜１０６：１、例えば、１．５：１〜１０：１、１０：１〜５０：１、５０：１〜１０２：１、１０２：１〜１０３：１、１０３：１〜１０４：１、１０４：１〜１０５：１、または１０５：１〜１０６：１の範囲内にある。
【０１７４】
別の例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチド（野生型ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＰＤ−１ポリペプチド（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＰＤ−１ポリペプチドに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。
【０１７５】
別の例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＣＤ８０ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＣＤ８０ポリペプチド（野生型ＣＤ８０ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＴＬＡ４ポリペプチド（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＴＬＡ４ポリペプチドに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。
【０１７６】
別の例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＣＤ８０ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＣＤ８０ポリペプチド（野生型ＣＤ８０ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＤ２８ポリペプチド（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＤ２８ポリペプチドに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。
【０１７７】
別の例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型４−１ＢＢＬポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアント４−１ＢＢＬポリペプチド（野生型４−１ＢＢＬポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの４−１ＢＢポリペプチド（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの４−１ＢＢポリペプチドに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。
【０１７８】
別の例として、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが野生型ＣＤ８６ポリペプチドを含み、かつ本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートがＭＯＤとしてバリアントＣＤ８６ポリペプチド（野生型ＣＤ８６ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１〜１０個のアミノ酸置換を含む）を含む場合、ＢＬＩによって測定したときの、ｉ）対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＤ２８ポリペプチド（すなわち、同種ＭＯＤ）に対する結合親和性対、ｉｉ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＣＤ２８ポリペプチドに対する結合親和性の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である。
【０１７９】
本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの標的Ｔ細胞に対する結合親和性は、以下の様態で測定することができる。Ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを、その表面上に、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）該エピトープに結合するＴＣＲ、を発現する標的Ｔ細胞に接触させて（ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、エピトープタグまたは蛍光標識を含む）、それによりＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが標的Ｔ細胞に結合するようにすること、Ｂ）Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートが未標識である場合、標的Ｔ細胞が結合したＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを、エピトープタグに結合する蛍光標識した結合剤（例えば、蛍光標識した抗体）に接触させて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート／標的Ｔ細胞／結合剤複合体を生成すること、Ｃ）フローサイトメトリーを用いて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート／標的Ｔ細胞／結合剤複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定すること。エピトープタグは、例えば、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニンタグ、ｃ−ｍｙｃタグ、ポリ（ヒスチジン）タグ等であり得る。様々な濃度のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ライブラリメンバー）にわたって測定されたＭＦＩが、親和性の尺度を提供する。様々な濃度のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ライブラリメンバー）にわたって測定されたＭＦＩが、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの半数効果濃度（ＥＣ５０）を提供する。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの標的Ｔ細胞に対するＥＣ５０は、ｎＭ範囲にあり、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの対照Ｔ細胞（ここで、対照Ｔ細胞は、その表面上に、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープには結合しないＴ細胞受容体を発現する）に対するＥＣ５０は、μＭ範囲にある。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの対照Ｔ細胞に対するＥＣ５０対、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの標的Ｔ細胞に対するＥＣ５０の比は、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも（ａｔ  ｌｅａｓｅ）１０５：１、または少なくとも１０６：１である。本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの対照Ｔ細胞に対するＥＣ５０対、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの標的Ｔ細胞に対するＥＣ５０の比は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの選択性の式である。
【０１８０】
一部の実例では、先行段落に記載されるように測定したときに、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ライブラリメンバー）の、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーに存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴＣＲ、を含む対照Ｔ細胞に対する結合と比較して、標的Ｔ細胞に対して選択的結合を呈する。
【０１８１】
二量体化された多量体Ｔ細胞調節ポリペプチド
本開示のＴ細胞ＭＭＰは、それらに化学的にコンジュゲートされたエピトープを有するものを含めて、二量体化され得、すなわち、本開示は、本開示の多量体Ｔ細胞ＭＭＰの二量体を含む、多量体ポリペプチドを提供する。故に、本開示は、Ａ）第１のヘテロ二量体であって、ａ）ｉ）ペプチドエピトープ、及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチド、ならびにｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む、第２のポリペプチド、を含み、該第１のヘテロ二量体が１つまたは複数のＭＯＤを含む、該第１のヘテロ二量体と、Ｂ）第２のヘテロ二量体であって、ａ）ｉ）ペプチドエピトープ、及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチド、ならびにｂ）第２のＭＨＣポリペプチドを含む、第２のポリペプチド、を含み、該第２のヘテロ二量体が１つまたは複数のＭＯＤを含む、該第２のヘテロ二量体と、を含み、該第１のヘテロ二量体及び第２のヘテロ二量体が、互いに共有結合性で連結している、多量体Ｔ細胞ＭＭＰを提供する。一部の実例では、該２つの多量体Ｔ細胞ＭＭＰは、アミノ酸配列が互いに同一である。一部の実例では、第１のヘテロ二量体及び第２のヘテロ二量体は、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域及び第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域を介して、互いに共有結合性で連結している。一部の実例では、第１のヘテロ二量体及び第２のヘテロ二量体は、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端アミノ酸及び第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域を介して、互いに共有結合性で連結しており、例えば、一部の実例では、第１のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端アミノ酸及び第２のヘテロ二量体の第２のポリペプチドのＣ末端領域は、直接またはリンカーを介してのいずれかで互いに連結されている。リンカーは、ペプチドリンカーであり得る。該ペプチドリンカーは、１ａａ〜２００ａａ（例えば、１ａａ〜５ａａ、５ａａ〜１０ａａ、１０ａａ〜２５ａａ、２５ａａ〜５０ａａ、５０ａａ〜１００ａａ、１００ａａ〜１５０ａａ、または１５０ａａ〜２００ａａ）の長さを有し得る。一部の実例では、第１のヘテロ二量体のペプチドエピトープ及び第２のヘテロ二量体のペプチドエピトープは、同じアミノ酸配列を含む。一部の実例では、第１及び第２のヘテロ二量体の第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ  β２Ｍであり、第１及び第２のヘテロ二量体の第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖である。一部の実例では、第１のヘテロ二量体のＭＯＤ及び第２のヘテロ二量体のＭＯＤは、同じアミノ酸配列を含む。一部の実例では、第１のヘテロ二量体のＭＯＤ及び第２のヘテロ二量体のＭＯＤは、対応する野生型親ＭＯＤと比較して１〜１０個のアミノ酸置換を含むバリアントＭＯＤであり、ここで、１〜１０個のアミノ酸置換は、バリアントＭＯＤの同種ＭＯＤへの低減された親和性での結合をもたらす。一部の実例では、第１のヘテロ二量体のＭＯＤ及び第２のヘテロ二量体のＭＯＤは、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１（ＣＤ３３９）、ＴＧＦβ、ＩＣＡＭ、及びそれらのバリアントＭＯＤ（例えば、対応する野生型親ＭＯＤと比較して１〜１０個のアミノ酸置換を有するバリアントＭＯＤ）からなる群から選択される。好適なＭＨＣポリペプチド、ＭＯＤ、及びペプチドエピトープの例が下記に記載される。
【０１８２】
二量体に加えて、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートは、三量体、四量体、または五量体を含めたより高次の複合体を形成し得る。Ｔ細胞ＭＭＰの多量体を含む組成物はまた、単量体等のより低次の複合体を含んでもよく、したがって、単量体、二量体、三量体、四量体、五量体、またはそれらのいずれかの組み合わせ（例えば、単量体及び二量体の混合物）を含んでもよい。
【０１８３】
Ｉ．Ｂ．Ｔ細胞ＭＭＰのＭＨＣポリペプチド
上述のように、Ｔ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、ＭＨＣポリペプチドを含む。本開示の目的において、「主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」という用語は、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも称される）ポリペプチド、齧歯類（例えば、マウス、ラット等）ＭＨＣポリペプチド、及び他の哺乳類種（例えば、ウサギ類、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、有蹄類（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ等）のＭＨＣポリペプチド等を含めた、種々の種のＭＨＣクラスＩポリペプチドを含むことを意図する。「ＭＨＣポリペプチド」という用語は、ＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、β−２ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖及び／またはそれらの部分）を含むことを意図する。
【０１８４】
上述のように、本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第１及び第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩポリペプチドである（例えば、一部の実例では、第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ  β２Ｍ（β２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）（「ＭＨＣ−Ｈ」）である）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）におけるβ２Ｍ配列及びＭＨＣ−Ｈ鎖配列の両方がヒト起源のものである。別途明示的定めのない限り、本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰは、ＭＨＣクラスＩ分子の膜アンカードメイン（膜貫通領域）、またはその分子のうち、結果として生じるＴ細胞ＭＭＰもしくはそのペプチドを、それが発現される細胞（例えば、哺乳類細胞等の真核細胞）に係留するのに十分な一部を含むことを意図しない。
【０１８５】
一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣポリペプチドは、ＨＬＡクラスＩポリペプチド、例えば、β２Ｍポリペプチド、またはＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドである。Ｔ細胞ＭＭＰまたはそれらのエピトープコンジュゲートに含めることができるＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドには、ＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｅ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ−Ｆ重鎖ポリペプチド、及びＨＬＡ−Ｇ重鎖ポリペプチド、あるいは、図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、及び／または３Ｄに図示されるヒトＨＬＡ重鎖ポリペプチドのうちのいずれかのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それらは、１〜３０、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む、ポリペプチドが含まれる。
例として、多量体ポリペプチドのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに図示されるヒトＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドのうちのいずれかのアミノ酸配列のアミノ酸２５〜３６５に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み得る。
【０１８６】
Ｉ．Ｂ．１  ＭＨＣクラスＩ重鎖
ＨＬＡ−Ａ（ＨＬＡ−Ａ＊０１：０１：０１：０１）
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊０１：０１：０１：０１のアミノ酸配列（図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ（配列番号１４０））、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａと標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される置換を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。Ｙ８４Ａ置換は、ＭＨＣ結合ポケットの一端を開き、リンカー（存在する場合）がポケットの端部から「入り込む（ｔｈｒｅａｄ）」ことができるようにし、より多様な大きさのエピトープ（例えば、エピトープ配列をもつより長いペプチド）がポケットに収まり、Ｔ細胞ＭＭＰによって提示されることを許容する。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１８７】
ＨＬＡ−Ａ＊０２０１
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｄに提供されるＨＬＡ−Ａ＊０２０１のアミノ酸配列（配列番号１４３）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊０２０１重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ＊０２０１と標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊０２０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊０２０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊０２０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１８８】
ＨＬＡ−Ａ＊１１０１
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｄに提供されるＨＬＡ−Ａ＊１１０１のアミノ酸配列（配列番号１４８）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊１１０１重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ＊１１０１と標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊１１０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊１１０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊１１０１重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１８９】
ＨＬＡ−Ａ＊２４０２
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｄに提供されるＨＬＡ−Ａ＊２４０２のアミノ酸配列（配列番号１４９）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊２４０２重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ＊２４０２と標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊２４０２重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊２４０２重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊２４０２重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１９０】
ＨＬＡ−Ａ＊３３０３
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｄに提供されるＨＬＡ−Ａ＊３３０３のアミノ酸配列（配列番号１５０）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊３３０３重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ＊３３０３と標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊３３０３重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊３３０３重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ａ＊３３０３重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１９１】
ＨＬＡ−Ｂ
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ｂのアミノ酸配列（配列番号１４１）（図３ＤにあるＨＬＡ−Ｂ）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ｂと標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｂ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１９２】
ＨＬＡ−Ｃ
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ｃのアミノ酸配列（配列番号１４２）（図３ＤにあるＨＬＡ−Ｃ）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるＨＬＡ−Ｃと標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−Ｃ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１９３】
マウスＨ２Ｋ
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、マウスＨ２Ｋのアミノ酸配列（配列番号１４４）（図３ＤにあるマウスＨ２Ｋ）、またはその配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列（例えば、それは、１〜２５、１〜５、５〜１０、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、または２５〜３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を含んでもよい）を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのマウスＨ２Ｋ重鎖ポリペプチドが、図３ＤにあるマウスＨ２Ｋと標示される配列に対して１００％未満の同一性を有する場合、それは、８４位、１３９位、及び／または２３６位のうちの１つまたは複数において、下記から選択される変異を含んでもよい。８４位におけるチロシンからアラニン（Ｙ８４Ａ）、８４位におけるチロシンからシステイン（Ｙ８４Ｃ）、１３９位におけるアラニンからシステイン（Ａ１３９Ｃ）、及び２３６位におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのマウスＨ２Ｋ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ変異及びＡ２３６Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのマウスＨ２Ｋ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異及びＡ１３９Ｃ変異を含む。ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのマウスＨ２Ｋ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ変異、Ａ１３９Ｃ変異、及びＡ２３６Ｃ変異を含む。
【０１９４】
１１６位及び１６７位における置換
任意のＭＨＣクラスＩ重鎖配列（ＨＬＡ−Ａ（ＨＬＡ−Ａ＊０１：０１：０１：０１）、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１、ＨＬＡ−Ａ＊１１０１、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２、ＨＬＡ−Ａ＊３３０３、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、及びマウスＨ２Ｋに関して上記で開示したものを含む）は、１１６位におけるシステイン置換（Ｙ１１６Ｃ、マレイミドペプチドとの反応によって等でエピトープペプチドを係留するためのチオールを提供する）及び／または１６７位におけるアラニン置換（Ｗ１６７Ａ）もしくはシステイン置換（Ｗ１６７Ｃ）のうちの一方をさらに含んでもよい。ＭＨＣ−Ｈ結合ポケットの一端を開く置換（例えば、８４位におけるまたはその同等物、例えばＹ８４Ａ）と同様に、１６７位におけるアラニンもしくはグリシンの置換またはその同等物（例えば、Ｗ１６７Ａ置換）は、ＭＨＣ結合ポケットの他端を開いて、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートによって提示され得るより多様な（例えば、より長い長さの）エピトープペプチドを許容する溝を作り出す。８４位及び１６７位における置換またはそれらの同等物（例えば、Ｗ１６７ＡまたはＷ１６７Ｇと組み合わせたＹ８４Ａ）を組み合わせて使用して、ＭＨＣ−Ｈ鎖の結合ポケットを修飾してもよい。１６７位におけるシステインの配置（例えば、Ｗ１６７Ｃ変異）またはその同等物は、エピトープペプチドを係留するためのチオール残基を提供する）。１１６位及び１６７位におけるシステイン置換を別個に使用して、エピトープ（例えば、エピトープペプチド）を係留するか、または組み合わせて使用して、２箇所（例えば、エピトープ含有ペプチドの端部）でエピトープを係留してもよい。１１６位及び／または１６７位における変異は、上述の８４位、１３９位、及び／または２３６位における任意の１つまたは複数の変異と組み合わされてもよい。
【０１９５】
置換の組み合わせ
アミノ酸８４及び１３９が両方ともシステインである場合、それらは、エピトープペプチドが負荷されていない場合であってもＭＨＣクラス１タンパク質を安定化し、真核細胞による翻訳及び外分泌を許容し得る、鎖内ジスルフィド結合を形成し得る。８４位がＣ残基である場合、それはまた、β２Ｍポリペプチド（例えば、エピトープ−ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ（配列番号１３３）成熟β２Ｍポリペプチド、配列番号１５１〜１５５を参照されたい）のＮ末端に結合したリンカーと鎖内ジスルフィド結合を形成することができる。アミノ酸２３６がシステインである場合、それは、その位置でＲ１２Ｃ置換を含むバリアントβ２Ｍポリペプチドのアミノ酸１２におけるシステインと鎖内ジスルフィド結合を形成することができる。Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートに組み込まれ得る、ＭＨＣクラス１重鎖配列の修飾のいくつかの可能性のある組み合わせが、以下の表に示される。表に提供される残基８４、１３９、及び２３６における置換の任意の組み合わせは、表に提供される１１６位及び１６７位における置換の任意の組み合わせと組み合わされてもよい。
Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートに組み込まれ得る、ＭＨＣクラス１重鎖配列の修飾のいくつかの組み合わせ
【表３】
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2020534352.tif 000009
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＊＊配列同一性範囲は、図３Ｄに列挙される配列の対応する部分と比べての、Ｔ細胞ＭＭＰに組み込まれたＭＨＣ−Ｈポリペプチド配列の配列同一性における許容範囲である。
【０１９６】
Ｉ．Ｂ．２  ＭＨＣクラスＩ  β２−ミクログロビン（Ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｉｎｓ）及びＭＨＣ−Ｈポリペプチドとの組み合わせ
多量体ポリペプチドのβ２Ｍポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、マウスβ２Ｍポリペプチド等であり得る。一部の事例では、β２Ｍポリペプチドは、図４に図示されるβ２Ｍアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の事例では、β２Ｍポリペプチドは、図４に図示されるβ２Ｍアミノ酸配列のアミノ酸２１〜１１９に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。
【０１９７】
一部の実例では、ＭＨＣポリペプチドは、参照ＭＨＣポリペプチド（ここで、参照ＭＨＣポリペプチドは、野生型ＭＨＣポリペプチドであり得る）と比べて単一アミノ酸置換を含み、ここで、単一アミノ酸置換は、あるアミノ酸をシステイン（Ｃｙｓ）残基で置換する。かかるシステイン残基は、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートの第１のポリペプチドのＭＨＣポリペプチドに存在する場合、第２のポリペプチド鎖に存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成し得る。
【０１９８】
一部の実例では、多量体ポリペプチドの第１のポリペプチドにおける第１のＭＨＣポリペプチド、及び／または多量体ポリペプチドの第２のポリペプチドにおける第２のＭＨＣポリペプチドは、あるアミノ酸をシステインで置換するアミノ酸置換を含み、ここで、第１のＭＨＣポリペプチドにおける置換システインが、第２のＭＨＣポリペプチドにおけるシステインとジスルフィド結合を形成するか、第１のＭＨＣポリペプチドにおけるシステインが、第２のＭＨＣポリペプチドにおける置換システインとジスルフィド結合を形成するか、または第１のＭＨＣポリペプチドにおける置換システインが、第２のＭＨＣポリペプチドにおける置換システインとジスルフィド結合を形成する。
【０１９９】
例えば、一部の実例では、ＨＬＡ  β２Ｍ及びＨＬＡクラスＩ重鎖における以下の残基対のうちの１つが、システインで置換される（ここで、残基番号は、成熟ポリペプチドの残基番号である）：１）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６；２）β２Ｍ残基１２、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３７；３）β２Ｍ残基８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４；４）β２Ｍ残基１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３５；５）β２Ｍ残基２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３６；６）β２Ｍ残基２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３２；７）β２Ｍ残基９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１９２；８）β２Ｍ残基９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２３４；９）β２Ｍ残基３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２０；１０）β２Ｍ残基３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６；１１）β２Ｍ残基５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基３５；１２）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基９６；１３）β２Ｍ残基６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基１２２；１４）β２Ｍ残基６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基２７；１５）β２Ｍ残基Ａｒｇ３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｙ１２０；１６）β２Ｍ残基Ｈｉｓ３１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６；１７）β２Ｍ残基Ａｓｐ５３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ３５；１８）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ９６；１９）β２Ｍ残基Ｔｒｐ６０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｓｐ１２２；２０）β２Ｍ残基Ｔｙｒ６３、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｔｙｒ２７；２１）β２Ｍ残基Ｌｙｓ６、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２；２２）β２Ｍ残基Ｇｌｎ８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４；２３）β２Ｍ残基Ｔｙｒ１０、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｐｒｏ２３５；２４）β２Ｍ残基Ｓｅｒ１１、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｎ２４２；２５）β２Ｍ残基Ａｓｎ２４、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｌａ２３６；２６）β２Ｍ残基Ｓｅｒ２８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｇｌｕ２３２；２７）β２Ｍ残基Ａｓｐ９８、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ｈｉｓ１９２；及び２８）β２Ｍ残基Ｍｅｔ９９、ＨＬＡクラスＩ重鎖残基Ａｒｇ２３４。ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖のアミノ酸の番号付けは、シグナルペプチドを含めずに、成熟ＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ重鎖を参照している。例えば、シグナルペプチドを含む、図３Ａに図示されるアミノ酸配列において、Ｇｌｙ１２０は、Ｇｌｙ１４４であり、Ｇｌｎ９６は、Ｇｌｎ１２０であり、その他も同様である。一部の実例では、β２Ｍポリペプチドは、Ｒ１２Ｃ置換を含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖は、Ａ２３６Ｃ置換を含む。そのような実例では、ジスルフィド結合は、β２ＭポリペプチドのＣｙｓ−１２とＨＬＡクラスＩ重鎖のＣｙｓ−２３６との間で形成する。例えば、一部の実例では、成熟ＨＬＡ−Ａアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ａに図示されるアミノ酸配列の残基２６０）が、Ｃｙｓで置換される。一部の実例では、成熟ＨＬＡ−Ｂアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ｂに図示されるアミノ酸配列の残基２６０）が、Ｃｙｓで置換される。一部の実例では、成熟ＨＬＡ−Ｃアミノ酸配列の残基２３６（すなわち、図３Ｃに図示されるアミノ酸配列の残基２６０）が、Ｃｙｓで置換される。一部の実例では、図４に図示されるアミノ酸配列の残基３２（成熟β２ＭのＡｒｇ−１２に対応する）が、Ｃｙｓで置換される。
【０２００】
別個に、または、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチド（上記で考察された）との間で鎖内ジスルフィド結合を形成するために使用され得る、β２Ｍ及びＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドにおけるシステイン残基の対に加えて、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡ−重鎖は、α１ヘリックスのカルボキシル末端部分の中へ置換されたシステインと、α２−１ヘリックスのアミノ末端部分におけるシステインとの間で鎖内ジスルフィド結合を形成するようにシステインで置換されてもよい。かかるジスルフィド結合は、結合されたエピトープペプチド（またはヌルペプチド）の不在下で、Ｔ細胞ＭＭＰを安定化し、真核細胞によるその細胞プロセス及び外分泌を許容する。一実施形態では、α１ヘリックスのカルボキシル末端部分は、ＭＨＣクラスＩ重鎖のおよそアミノ酸７９位からおよそアミノ酸８９位までであり、α２−１ヘリックスのアミノ末端部分は、およそアミノ酸１３４位からアミノ酸１４４位までである（これらのアミノ酸位置は、それらのリーダー配列を含めずに重鎖の配列に基づいて決定される（例えば、図３Ｄを参照されたい）。かかる一実施形態では、ジスルフィド結合は、ＭＨＣクラスＩ重鎖の８３位、８４位、または８５位に位置するシステインと、１３８位、１３９位、または１４０位のうちのいずれかに位置するシステインとの間にある。例えば、ジスルフィド結合は、アミノ酸８３でＭＨＣクラスＩ重鎖に組み込まれたシステインと、１３８位、１３９位、または１４０位のうちのいずれかに位置するアミノ酸におけるシステインとから形成されてもよい。代替として、ジスルフィド結合は、８４位で挿入されたシステインと、１３８位、１３９位、もしくは１４０位のうちのいずれかで挿入されたシステインとの間、または８５位で挿入されたシステインと、１３８位、１３９位、もしくは１４０位のうちのいずれか１つにおけるシステインとの間で形成されてもよい。ある実施形態では、ＭＨＣクラス１重鎖の鎖内ジスルフィド結合は、８４位及び１３９位で重鎖配列の中へ置換されたそれぞれのシステインの間にある（例えば、重鎖配列は、図３Ｄに記載される重鎖配列のうちの１つであり得る）。上述のように、８４及び１３９におけるシステイン間のジスルフィド結合を含めた、ＭＨＣクラスＩの鎖内ジスルフィド結合のうちのいずれも、ＭＨＣクラス１重鎖２３６位と、例えば図４に示されるような成熟β２Ｍポリペプチド配列（そのリーダーを欠いた）の１２位との間の結合を含む、鎖内ジスルフィド結合と組み合わされてもよい。
【０２０１】
別の実施形態では、鎖内ジスルフィド結合は、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＭＨＣ−Ｈ配列において、図３Ｄに与えられる配列のアミノ酸７９位〜８９位の領域の中へ置換されたシステインと、アミノ酸１３４位〜１４４位の領域の中へ置換されたシステインとの間で形成されてもよい。かかる実施形態では、ＭＨＣクラスＩ重鎖配列は、α１ヘリックスのカルボキシル末端部分と、α２−１ヘリックスのアミノ末端部分との間でジスルフィド結合を形成するシステインの前または後に、１〜５個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を有し得る。任意の挿入されるアミノ酸は、天然型アミノ酸またはプロリン及びアラニンを除く天然型アミノ酸から選択され得る。
【０２０２】
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのβ２Ｍポリペプチドは、ＮＰ＿００４０３９．１、ＮＰ＿００１００９０６６．１、ＮＰ＿００１０４０６０２．１、ＮＰ＿７７６３１８．ｌ、またはＮＰ＿０３３８６５．２（配列番号１５１〜１５５）のうちのいずれか１つの成熟β２Ｍポリペプチド配列（ａａｓ２１〜１１９）を含む。
【０２０３】
一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｄに記載されるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ配列のうちのいずれか１つを含む。これらの重鎖配列のうちのいずれかは、８４位及び１３９位にシステイン置換をさらに含んでもよく、これらが鎖内ジスルフィド結合を形成してもよい。
【０２０４】
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのβ２Ｍポリペプチドは、図４にある配列のうちのいずれか１つの成熟β２Ｍポリペプチド配列（ａａｓ２１〜１１９）を含み、これは、Ｒ１２Ｃ置換をさらに含む。
【０２０５】
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートは、Ｒ１２Ｃ置換を有する成熟β２Ｍポリペプチド配列（例えば、図４にある配列のうちのいずれか１つのａａｓ２１〜１１９）を含む、第１のポリペプチドと、２３６位にシステインをもつ、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ重鎖配列のうちのいずれか１つを含む、第２のポリペプチドとを含む。かかる実施形態では、鎖内ジスルフィド結合は、１２位及び２３６位におけるそれぞれのシステインの間で形成し得る。加えて、これらの重鎖配列のうちのいずれかは、８４位及び１３９位にシステイン置換をさらに含んでもよく、これらが鎖内ジスルフィド結合を形成してもよい。
【０２０６】
一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１（図３Ｄ）のアミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、Ａ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１（図３Ｄ）のアミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ａ及びＡ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ−Ａ＊０２０１（図３Ｄ）のアミノ酸配列を含む。
【０２０７】
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートは、Ｒ１２Ｃ置換を有するＮＰ＿００４０３９．１（図４を参照されたい）のアミノ酸残基２１〜１１９を含む、第１のポリペプチドと、図３ＤにあるＨＬＡ−Ａ０２０１（ＨＬＡ−Ａ２）配列を含む、第２のポリペプチドとを含む。かかる一実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２０１配列は、Ａ２３６Ｃ置換を有する。別のかかる実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２０１配列は、Ｙ８４Ｃ及びＡ１３９Ｃ置換を有する。別のかかる実施形態では、ＨＬＡ−Ａ０２０１配列は、Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ、及びＡ２３６Ｃ置換を有する。示されるように、Ｙ８４Ｃ及びＡ１３９Ｃ置換を有するＭＨＣ−Ｈ配列は、安定化する鎖内ジスルフィド結合を形成し得、２３６位のシステインは、成熟β２Ｍポリペプチドの１２位のシステインに結合し得る。
【０２０８】
ある実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートは、Ｒ１２Ｃ置換を有するＮＰ＿００４０３９．１（図４を参照されたい）のアミノ酸残基２１〜１１９を含む、第１のポリペプチドと、第２のポリペプチドとを含み、ＨＬＡクラスＩ重鎖ポリペプチドは、下記のアミノ酸配列、
ＧＳＨＳＭＲＹＦＦＴＳＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＡＳＱＲＭＥＰＲＡＰＷＩＥＱＥＧＰＥＹＷＤＧＥＴＲＫＶＫＡＨＳＱＴＨＲＶＤＬ（ａａクラスタ１）｛Ｃ｝（ａａクラスタ２）ＡＧＳＨＴＶＱＲＭＹＧＣＤＶＧＳＤＷＲＦＬＲＧＹＨＱＹＡＹＤＧＫＤＹＩＡＬＫＥＤＬＲＳＷ（ａａクラスタ３）｛Ｃ｝（ａａクラスタ４）ＨＫＷＥＡＡＨＶＡＥＱＬＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＮＧＫＥＴＬＱＲＴＤＡＰＫＴＨＭＴＨＨＡＶＳＤＨＥＡＴＬＲＣＷＡＬＳＦＹＰＡＥＩＴＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＴＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＱＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬＴＬＲＷＥＰ（配列番号１５６）、を含むか、または、
第１のポリペプチドは、下記の配列、
ＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹ  ＳＣＨＰＡＥＮＧＫＳ  ＮＦＬＮＣＹＶＳＧＦ  ＨＰＳＤＩＥＶＤＬＬＫＮＧＥＲＩＥＫＶＥ  ＨＳＤＬＳＦＳＫＤＷ  ＳＦＹＬＬＹＹＴＥＦ  ＴＰＴＥＫＤＥＹＡＣ  ＲＶＮＨＶＴＬＳＱＰ  ＫＩＶＫＷＤＲＤＭ（配列番号１５７）、を含み、第２のポリペプチドは、下記のアミノ酸酸（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ａｃｉｄ）配列、
ＧＳＨＳＭＲＹＦＦＴＳＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＶＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＡＡＳＱＲＭＥＰＲＡＰＷＩＥＱＥＧＰＥＹＷＤＧＥＴＲＫＶＫＡＨＳＱＴＨＲＶＤＬ（ａａクラスタ１）｛Ｃ｝（ａａクラスタ２）ＡＧＳＨＴＶＱＲＭＹＧＣＤＶＧＳＤＷＲＦＬＲＧＹＨＱＹＡＹＤＧＫＤＹＩＡＬＫＥＤＬＲＳＷ（ａａクラスタ３）｛Ｃ｝（ａａクラスタ４））ＨＫＷＥＡＡＨＶＡＥＱＬＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＲＲＹＬＥＮＧＫＥＴＬＱＲＴＤＡＰＫＴＨＭＴＨＨＡＶＳＤＨＥＡＴＬＲＣＷＡＬＳＦＹＰＡＥＩＴＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＴＥＬ（ａａクラスタ５）（Ｃ）（ａａクラスタ６）ＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＱＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＫＰＬＴＬＲＷＥＰ（配列番号１５８）、を含み、
ここで、｛Ｃ｝として示されるシステイン残基は、α１ヘリックスとα２−１ヘリックスとの間でジスルフィド結合を形成し、（Ｃ）残基は、β２Ｍポリペプチドシステインと、１２位においてジスルフィド結合を形成する。
【０２０９】
ａａクラスタ１、ａａクラスタ２、ａａクラスタ３、ａａクラスタ４、ａａクラスタ５、及びａａクラスタ６の各出現例は独立して、１〜５つのアミノ酸残基であるように選択され、これらのアミノ酸残基は、各々独立して、ｉ）任意の天然型（タンパク新生）アミノ酸、またはｉｉ）プロリンもしくはグリシンを除く任意の天然型アミノ酸から選択される。
【０２１０】
ある実施形態では、
ａａクラスタ１は、アミノ酸配列ＧＴＬＲＧであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＬがＩ、Ｖ、Ａ、またはＦによって置き換えられた）ものであり得、
ａａクラスタ２は、アミノ酸配列ＹＮＱＳＥであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＮがＱによって置き換えられ、ＱがＮによって置き換えられ、及び／またはＥがＤによって置き換えられた）ものであり得、
ａａクラスタ３は、アミノ酸配列ＴＡＡＤＭであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＴがＳによって置き換えられ、ＡがＧによって置き換えられ、ＤがＥによって置き換えられ、及び／またはＭがＬ、Ｖ、もしくはＩによって置き換えられた）ものであり得、
ａａクラスタ４は、アミノ酸配列ＡＱＴＴＫであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＡがＧによって置き換えられ、ＱがＮによって置き換えられ、またはＴがＳによって置き換えられ、及びまたはＫがＲもしくはＱによって置き換えられた）ものであり得、
ａａクラスタ５は、アミノ酸配列ＶＥＴＲＰであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＶがＩもしくはＬによって置き換えられ、ＥがＤによって置き換えられ、ＴがＳによって置き換えられ、及び／またはＲがＫによって置き換えられた）ものであり得、及び／または
ａａクラスタ６は、アミノ酸配列ＧＤＧＴＦであるか、またはその配列のうち１つもしくは２つのアミノ酸が欠失しているか、もしくは他の天然型アミノ酸で置換された（例えば、ＤがＥによって置き換えられ、ＴがＳによって置き換えられ、またはＦがＬ、Ｗ、もしくはＹによって置き換えられた）ものであり得る。
【０２１１】
一部の実例では、β２Ｍポリペプチドは、下記のアミノ酸配列、
ＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹＳＣＨＰＡＥＮＧＫＳＮＦＬＮＣＹＶＳＧＦＨＰＳＤＩＥＶＤＬＬＫＮＧＥＲＩＥＫＶＥＨＳＤＬＳＦＳＫＤＷＳＦＹＬＬＹＹＴＥＦＴＰＴＥＫＤＥＹＡＣＲＶＮＨＶＴＬＳＱＰＫＩＶＫＷＤＲＤＭ（配列番号１５７）、を含む。
【０２１２】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ｉ）第１のポリペプチド鎖におけるペプチドエピトープ及びβ２Ｍポリペプチドを接続するリンカー（例えば、エピトープがリンカー及びβ２Ｍ配列のＮ末端側に配置されて）に存在するＣｙｓ残基と、ｉｉ）第２のポリペプチド鎖におけるＭＨＣクラスＩ重鎖に存在するＣｙｓ残基とを通して、互いにジスルフィド結合で連結されている。一部の実例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖に存在するＣｙｓ残基は、Ｙ８４Ｃ置換として導入されたＣｙｓである。一部の実例では、第１のポリペプチド鎖におけるペプチドエピトープ及びβ２Ｍポリペプチドを接続するリンカーは、ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎであり、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９（配列番号１３３）である（例えば、エピトープ−ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ−成熟β２Ｍポリペプチド）。例えば、一部の実例では、リンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７８）を含む。別の例として、リンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９）を含む。かかるジスルフィド結合で連結された第１及び第２のポリペプチドの例が、図６Ｅ〜６Ｈに概略的に図示される。
【０２１３】
Ｉ．Ｃ．足場ポリペプチド
Ｔ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、Ｆｃポリペプチドを含み得るか、または別の好適な足場ポリペプチドを含み得る。
【０２１４】
好適な足場ポリペプチドには、抗体ベースの足場ポリペプチド及び非抗体ベースの足場が含まれる。非抗体ベースの足場には、例えば、アルブミン、ＸＴＥＮ（延長組換え（ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ））ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５を参照されたい；例えば、（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ、配列番号１５９）（ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）のペンタペプチド繰り返し単位を含むポリペプチド）、アルブミン結合ポリペプチド、絹様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｒ  Ｓｏｃ  Ｌｏｎｄ  Ｂ  Ｂｉｏｌ  Ｓｃｉ．３５７：１６５を参照されたい）、絹エラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ、例えば、Ｍｅｇｅｅｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．５４：１０７５を参照されたい）等が含まれる。好適なＸＴＥＮポリペプチドには、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２、及びＵＳ２００９／００９２５８２に開示されるものが含まれる（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６もまた参照されたい）。好適なアルブミンポリペプチドには、例えば、ヒト血清アルブミンが含まれる。
【０２１５】
好適な足場ポリペプチドは、一部の実例では、半減期を延長するポリペプチドであろう。故に、一部の実例では、好適な足場ポリペプチドは、足場ポリペプチドを欠いた対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（例えば、血清半減期）を増加させる。例えば、一部の実例では、足場ポリペプチドは、足場ポリペプチドを欠いた対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超増加させる。例として、一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを欠いた対照多量体ポリペプチドと比較して、多量体ポリペプチドのインビボ半減期（血清半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超増加させる。
【０２１６】
Ｉ．Ｄ．Ｆｃポリペプチド
一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはその対応するＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート）の第１及び／または第２のポリペプチド鎖は、ポリペプチド内にある、またはそれに結合した（例えば、末端で、またはリンカーによって結合した）１つまたは複数の化学コンジュゲーション部位を含むように修飾され得る、Ｆｃポリペプチドを含む。Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのＦｃポリペプチドは、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭに由来し得、これは、ヒトポリペプチド配列、ヒト化ポリペプチド配列、合成重鎖定常領域またはコンセンサス重鎖定常領域のＦｃ領域ポリペプチドを含有してもよい。複数の実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ、ヒトＩｇＡ  Ｆｃ、ヒトＩｇＤ  Ｆｃ、ヒトＩｇＥ  Ｆｃ、ヒトＩｇＭ  Ｆｃ等に由来し得る。別途定めのない限り、Ｔ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲートで使用されるＦｃポリペプチドは、膜貫通アンカードメイン、または膜貫通アンカードメインうち、Ｔ細胞ＭＭＰもしくはそのエピトープコンジュゲートを細胞膜に係留するのに十分な一部分を含まない。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜２Ｇに図示されるＦｃ領域のアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｆｃ領域は、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｆｃ領域は、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み、かつＮ７７の置換を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、Ｎ７７Ａ置換を含む。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９〜３２５に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ａに図示されるヒトＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９〜２４６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｂに図示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｂに図示されるヒトＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２７６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｃに図示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｃに図示されるヒトＩｇＡ  Ｆｃポリペプチドに対するアミノ酸１〜２３４に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、アミノ酸配列を含む。
【０２１７】
一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、アスパラギン以外のアミノ酸によるＮ２９７の置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｃ（Ｎ２９７Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸によるＬ２３４の置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸によるＬ２３５の置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。
【０２１８】
一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｅに図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｆに図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｇ（Ｌ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、プロリン以外のアミノ酸によるＰ３３１の置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含み、一部の実例では、この置換は、Ｐ３３１Ｓ置換である。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸によるＬ２３４及びＬ２３５における置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、ロイシン以外のアミノ酸によるＬ２３４及びＬ２３５における置換、ならびにプロリン以外のアミノ酸によるＰ３３１の置換を除いて、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｂ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ１  Ｆｃ）に図示されるアミノ酸配列を含む。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含むＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドである。
【０２１９】
Ｉ．Ｅ．リンカー
Ｔ細胞ＭＭＰ（及びそれらのＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート）は、例えば、下記のうちのいずれか１つまたは複数の間に介在する独立して選択される１つまたは複数のリンカーペプチドを含み得る。ｉ）ＭＨＣポリペプチドとＩｇ  Ｆｃポリペプチドとの間（かかるリンカーは、本明細書で「Ｌ１リンカー」と称される）、ｉｉ）ＭＨＣポリペプチドとＭＯＤとの間（かかるリンカーは、本明細書で「Ｌ２リンカー」と称される、ｉｉｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間（かかるリンカーは、本明細書で「Ｌ３リンカー」と称される）（例えば、第１のバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドと第２のバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドとの間、または第２のバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドと第３のバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドとの間）、ｉｖ）コンジュゲーション部位またはペプチド抗原（コンジュゲートされた「エピトープ」ペプチド）とＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、β２Ｍ）との間、ｖ）ＭＨＣクラスＩポリペプチドと二量体化ポリペプチド（例えば、二量体化する対の第１または第２のメンバー）との間、及びｖｉ）二量体化ポリペプチド（例えば、二量体化する対の第１または第２のメンバー）とＩｇＦｃポリペプチドとの間。
【０２２０】
好適なリンカー（「スペーサー」とも称される）は、容易に選択することができ、１ａａ〜２５ａａ、３ａａ〜２０ａａ、２ａａ〜１５ａａ、３ａａ〜１２ａａ、４ａａ〜１０ａａ、５ａａ〜９ａａ、６ａａ〜８ａａ、または７ａａ〜８ａａ等のいくつかの好適な長さのうちのいずれかのものであり得る。複数の実施形態では、好適なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ａａの長さであり得る。一部の実例では、リンカーは、２５ａａ〜５０ａａの長さ、例えば、２５〜３０、３０〜３５、３５〜４０、４０〜４５、または４５〜５０ａａの長さを有する。
【０２２１】
例となるリンカーには、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号６６）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号６７）を含み、ここで、ｎは、少なくとも１（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の整数である）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及び当該技術分野で既知の他の柔軟なリンカーが含まれる。グリシンポリマー及びグリシン−セリンポリマーが両方とも使用され得る。Ｇｌｙ及びＳｅｒの両方は、比較的構造をとらず（ｕｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ）、したがって、構成要素間の天然テザーとしての役目を果たすことができる。グリシンポリマーは、アラニンよりもさらに顕著にファイ−プサイ空間に接近し、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２（１９９２）を参照されたい）。例となるリンカーはまた、ＧＧＳＧ（配列番号６８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号６９）、ＧＳＧＳＧ（配列番号７０）、ＧＳＧＧＧ（配列番号７１）、ＧＧＧＳＧ（配列番号７２）、ＧＳＳＳＧ（配列番号７３）等を含むが、これらに限定されないアミノ酸配列をも含み得る。例となるリンカーは、例えば、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）ｎ（配列番号７４）を含み得、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。一実施形態では、リンカーは、アミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）を含む。
【０２２２】
一部の実例では、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号７６）を含み、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートの第１のポリペプチドに存在するリンカーポリペプチドは、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのエピトープまたは第２のポリペプチドに存在するシステイン残基とジスルフィド結合を形成し得る、システイン残基を含む。一部の実例では、例えば、リンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、または９である）（配列番号１３３）、
【化４】
2020534352.tif 000012
を含む。
【０２２３】
上述のポリペプチドリンカーを含めたリンカーは、Ｔ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）の第１または第２のポリペプチドにカップリングされたペイロードの間に存在してもよい。上記に列挙したポリペプチドリンカーに加えて、ペイロードまたはエピトープ（例えば、ペプチド）を第１及び／または第２のポリペプチドに結合させるために使用されるリンカーは、非ペプチドであり得る。かかる非ペプチドリンカーには、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むポリマーが含まれる。下記に列挙されるリンカー等の、二官能性架橋剤によるカップリングからもたらされるリンカーを含めた他のリンカーもまた利用されてもよい。
【０２２４】
Ｉ．Ｆ．エピトープ
本明細書に記載される化学コンジュゲーション部位及び化学反応は、ペプチド（エピトープ提示ペプチド）及び非ペプチドエピトープの両方の、Ｔ細胞ＭＭＰへの組み込みを可能にする。ポリペプチドエピトープに加えて、エピトープには、例えば糖ペプチドが含まれ得る。
【０２２５】
ある実施形態では、多量体ポリペプチドに存在するエピトープは、約４ａａ〜約２５ａａの長さを有し得、例えば、該エピトープは、４ａａ〜１０ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、または２０ａａ〜２５ａａの長さを有し得る。例えば、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープは、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７、ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、２０ａａ、２１ａａ、２２ａａ、２３ａａ、２４ａａ、または２５ａａの長さを有し得る。一部の実例では、多量体ポリペプチドに存在するエピトープは、５ａａ〜１０ａａ、例えば、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、または１０ａａの長さを有する。
【０２２６】
ある実施形態では、多量体ポリペプチドに存在するエピトープは、Ｔ細胞によって特異的に結合され、すなわち、該エピトープは、エピトープ特異的Ｔ細胞によって特異的に結合される。エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合するが、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープに結合し、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには、仮に結合したとしても、１０−６Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、または１０−４Ｍ未満の親和性で結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、それが特異性をもつエピトープに、少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも１０−８Ｍ、少なくとも１０−９Ｍ、または少なくとも１０−１０Ｍの親和性で結合することができる。
【０２２７】
好適なペプチド／ポリペプチドエピトープには、がん関連抗原に存在するエピトープが含まれるが、これらに限定されない。がん関連抗原は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：５３２３を参照されたい。がん関連抗原には、α−葉酸受容体、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４４ｖ７／８、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ−２）、上皮糖タンパク質４０（ＥＧＰ−４０）、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、胎児型アセチルコリン受容体、ガングリオシド抗原ＧＤ２、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＩＬ−１３Ｒ−ａ２、カッパ軽鎖、ＬｅＹ、Ｌ１細胞接着分子、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＭＡＧＥ−Ａ１、メソテリン、ＭＵＣ１、ＮＫＧ２Ｄリガンド、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ−７２）、血管内皮成長因子受容体−２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）（例えば、Ｖｉｇｎｅｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：１５、及びＶｉｇｎｅｒｏｎ（２０１５）ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ．Ｉｎｔ’ｌ  Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ９４８５０１を参照されたい）、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩポリペプチド（例えば、Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：２９６５、及びＭｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）ＰＬｏＳＯｎｅ  ９：ｅ９４２８１を参照されたい）が含まれるが、これらに限定されない。一部の実例では、該エピトープは、ヒトパピローマウイルスＥ７抗原エピトープである（例えば、Ｒａｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３６：６６を参照されたい）。
【０２２８】
一部の実例では、好適なペプチドエピトープは、ＭＵＣ１ポリペプチド、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６ポリペプチド、ＬＭＰ２ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチド、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｖＩＩＩポリペプチド、ＨＥＲ−２／ｎｅｕポリペプチド、黒色腫抗原ファミリーＡ、３（ＭＡＧＥ  Ａ３）ポリペプチド、ｐ５３ポリペプチド、変異体ｐ５３ポリペプチド、ＮＹ−ＥＳＯ−１ポリペプチド、葉酸ヒドロラーゼ（前立腺特異的膜抗原、ＰＳＭＡ）ポリペプチド、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ポリペプチド、Ｔ細胞に認識される黒色腫抗原（メランＡ／ＭＡＲＴ１）ポリペプチド、Ｒａｓポリペプチド、ｇｐ１００ポリペプチド、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）ポリペプチド、ｂｃｒ−ａｂｌポリペプチド、チロシナーゼポリペプチド、サバイビンポリペプチド、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）ポリペプチド、ｈＴＥＲＴポリペプチド、肉腫転座切断点ポリペプチド、滑膜肉腫Ｘ（ＳＳＸ）切断点ポリペプチド、ＥｐｈＡ２ポリペプチド、酸性ホスファターゼ、前立腺（ＰＡＰ）ポリペプチド、黒色腫アポトーシス阻害因子（ＭＬ−ＩＡＰ）ポリペプチド、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）ポリペプチド、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）ポリペプチド、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合）ポリペプチド、ＮＡ１７ポリペプチド、ペアードボックス３（ＰＡＸ３）ポリペプチド、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）ポリペプチド、アンドロゲン受容体ポリペプチド、サイクリンＢ１ポリペプチド、Ｎ−ｍｙｃがん原遺伝子（ＭＹＣＮ）ポリペプチド、Ｒａｓホモログ遺伝子ファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）ポリペプチド、チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ−２）ポリペプチド、メソテリンポリペプチド、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）ポリペプチド、黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ  Ａ１）ポリペプチド、チトクロムＰ４５０  １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）ポリペプチド、胎盤特異的タンパク質１（ＰＬＡＣ１）ポリペプチド、ＢＯＲＩＳポリペプチド（別名、ＣＣＣＴＣ結合因子またはＣＴＣＦ）、ＥＴＶ６−ＡＭＬポリペプチド、乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１ポリペプチド（アンキリン反復ドメイン含有タンパク質３０Ａとも称される）、Ｇタンパク質シグナル伝達調節因子（ＲＧＳ５）ポリペプチド、Ｔ細胞に認識される扁平上皮細胞癌抗原（ＳＡＲＴ３）ポリペプチド、炭酸脱水酵素ＩＸポリペプチド、ペアードボックス５（ＰＡＸ５）ポリペプチド、ＯＹ−ＴＥＳ１（精巣抗原；別名、アクロシン結合タンパク質）ポリペプチド、精子タンパク質１７ポリペプチド、リンパ球細胞特異的タンパク質−チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）ポリペプチド、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ−ＭＡＡ）、Ａキナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ−４）、滑膜肉腫Ｘ切断点２（ＳＳＸ２）ポリペプチド、Ｘ抗原ファミリーメンバー１（ＸＡＧＥ１）ポリペプチド、Ｂ７ホモログ３（Ｂ７Ｈ３；別名、ＣＤ２７６）ポリペプチド、レグマインポリペプチド（ＬＧＭＮ１；別名、アスパラギニルエンドペプチダーゼ）、Ｉｇ及びＥＧＦ相同性ドメインを有するチロシンキナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  Ｉｇ  ａｎｄ  ＥＧＦ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ  ｄｏｍａｉｎｓ）２（Ｔｉｅ−２、別名、アンジオポエチン１受容体）ポリペプチド、Ｐ抗原ファミリーメンバー４（ＰＡＧＥ４）ポリペプチド、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦ２）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−１ポリペプチド、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）ポリペプチド、血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦβ）ポリペプチド、ＭＡＤ−ＣＴ−２ポリペプチド、Ｆｏｓ関連抗原１（ＦＯＳＬ）ポリペプチド、またはウィルムス腫瘍１（ＷＴ−１）ポリペプチドの、約４ａａ〜約２０ａａ（例えば、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ）長のペプチド断片である。
【０２２９】
がん関連抗原のアミノ酸配列は、当該技術分野で既知である。例えば、ＭＵＣ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ５６７３４）、ＬＭＰ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ４７０２４）、ＨＰＶ  Ｅ６（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＤ３３２５２）、ＨＰＶ  Ｅ７（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＨＧ９９４８０）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１３３３８７０）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＩ６７１４７）、ＭＡＧＥ−Ａ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１１７４４）、ｐ５３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＢＡＣ１６７９９）、ＮＹ−ＥＳＯ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ０５９０８）、ＰＳＭＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ２５６７２）、ＣＥＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＡ５１９６７）、メラン／ＭＡＲＴ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５５０２）、Ｒａｓ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１２３９１４）、ｇｐ１００（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ６０６３４）、ｂｃｒ−ａｂｌ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＢ６０３８８）、チロシナーゼ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＢ６０３１９）、サバイビン（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ５１６６０）、ＰＳＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＤ５４６１７）、ｈＴＥＲＴ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＢＡＣ１１０１０）、ＳＳＸ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２６５６２０）、Ｅｐｈ２Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４４２２）、ＰＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１６３４４）、ＭＬ−ＩＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ１４４７５）、ＡＦＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１２５）、ＥｐＣＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２３４５）、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合）（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＣＡ８１３８５）、ＰＡＸ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＩ０１３０１）、ＡＬＫ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４２９５）、アンドロゲン受容体（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００００３５）、サイクリンＢ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＯ９９２７３）、ＭＹＣＮ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２８０１５７）、ＲｈｏＣ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ５２８０８）、ＴＲＰ−２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＣ６０６２７）、メソテリン（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ０９２７２）、ＰＳＣＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＨ６５１８３）、ＭＡＧＥ  Ａ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４９７９）、ＣＹＰ１Ｂ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＭ５０５１２）、ＰＬＡＣ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＧ２２５９６）、ＢＯＲＩＳ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１２５５９６９）、ＥＴＶ６（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１９７８）、ＮＹ−ＢＲ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿４４３７２３）、ＳＡＲＴ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０５５５２１）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＥＡＷ５８３５９）、ＰＡＸ５（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０５７９５３）、ＯＹ−ＴＥＳ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿１１５８７８）、精子タンパク質１７（ＧｅｎＢａｎｋ  ＡＡＫ２０８７８）、ＬＣＫ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１０３６２３６）、ＨＭＷ−ＭＡＡ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１８８８）、ＡＫＡＰ−４（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００３８７７）、ＳＳＸ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＡＡ６０１１１）、ＸＡＧＥ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１０９１０７３、ＸＰ＿００１１２５８３４、ＸＰ＿００１１２５８５６、及びＸＰ＿００１１２５８７２）、Ｂ７Ｈ３（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ��００１０１９９０７、ＸＰ＿９４７３６８、ＸＰ＿９５０９５８、ＸＰ＿９５０９６０、ＸＰ＿９５０９６２、ＸＰ＿９５０９６３、ＸＰ＿９５０９６５、及びＸＰ＿９５０９６７）、ＬＧＭＮ１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１００８５３０）、ＴＩＥ−２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０００４５０）、ＰＡＧＥ４（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１３０５８０６）、ＶＥＧＦＲ２（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２２４４）、ＭＡＤ−ＣＴ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５８９３  ＮＰ＿０５６２１５）、ＦＡＰ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００４４５１）、ＰＤＧＦβ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００２６００）、ＭＡＤ−ＣＴ−２  ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００１１３８５７４）、ＦＯＳＬ（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿００５４２９）、及びＷＴ−１（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＰ＿０００３６９）を参照されたい。これらのポリペプチドはまた、Ｃｈｅｅｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：５３２３、及びその中で引用される参照文献、Ｗａｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１６：１６５３、Ｍａｔｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ５：２４９、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  ３８３：１６８でも考察される。
【０２３０】
一部の実例では、該エピトープは、ウイルス、マイコプラズマ属（例えば、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、または細菌病原体等の感染症の病原体のエピトープである。一部の実例では、エピトープがウイルスエピトープである場合、該エピトープは、コアタンパク質、初期タンパク質、後期タンパク質、ＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼ、または外殻タンパク質に由来する。例えば、一部の実例では、ウイルスエピトープは、パピローマウイルス（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ））または肝炎ウイルス（例えば、肝炎Ａウイルスまたは肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ））由来のペプチドエピトープである。別の実施形態では、該エピトープは、サイトメガロウイルス（「ＣＭＶ」）に由来する。
【０２３１】
ある実施形態では、該エピトープがＨＰＶウイルスである場合、それはヒトパピローマ初期タンパク質に由来する。かかる一実施形態では、該エピトープは、ＨＰＶ  Ｅ６ポリペプチド、ＨＰＶ  Ｅ７ポリペプチド、ＨＰＶ  １６初期タンパク質７（ＨＰＶ１６Ｅ７）のアミノ酸８２〜９０（ＨＰＶ１６Ｅ７／８２〜９０、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶ、配列番号８０）に由来する。ある実施形態では、該エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７のアミノ酸８６〜９３（ＴＬＧＩＶＣＰＩ、配列番号８１）である。ある実施形態では、該エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７のアミノ酸１１〜２０（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ、配列番号８２）である。ある実施形態では、該エピトープは、ＨＰＶ１６Ｅ７のアミノ酸１１〜１９（ＹＭＬＤＬＱＰＥＴ、配列番号８３）である。追加の好適なＨＰＶエピトープについては、例えば、Ｒｅｓｓｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５９３４）を参照されたい。
【０２３２】
一部の実例では、該エピトープは、肝炎Ｂウイルス（ＨＢＶ）エピトープである。いくつかのＨＢＶエピトープが当該技術分野で既知である。例えば、Ｄｅｓｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １３：１６１、Ｌｕｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｏｐｅｎ  Ｒｅｓ．１：９、及びＫｅｆａｌａｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ６２：４７を参照されたい。本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ、ＨＢＶ遺伝子型Ｃ、またはＨＢＶ遺伝子型Ｄを含めた種々のＨＢＶ遺伝子型のうちのいずれかに由来するＨＢＶペプチドであり得る。本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、種々のＨＢＶ遺伝子亜型のうちのいずれかに由来するＨＢＶペプチドであり得る。本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍで、少なくとも１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍで、または少なくとも１０−１０Ｍの親和性で、ＭＨＣ複合体に結合し得、ＭＨＣ複合体と複合体化されたときにＴＣＲによって結合される。
【０２３３】
本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、約４ａａ〜約２５ａａの長さを有し得、例えば、該エピトープは、４ａａ〜１０ａａ、９ａａ〜１５ａａ、１０ａａ〜１５ａａ、１５ａａ〜２０ａａ、または２０ａａ〜２５ａａの長さを有し得る。例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、２０ａａ、２１ａａ、２２ａａ、２３ａａ、２４ａａ、または２５ａａの長さを有し得る。
【０２３４】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、ＭＨＣクラスＩ拘束ＨＢＶペプチド（例えば、それは、特定のＨＬＡクラスＩ対立遺伝子に拘束される）である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、例えば、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１（ＨＬＡ−Ａ＊１１０１）、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２、またはＨＬＡ−Ａ３３０３（例えば、図３を参照されたい）に拘束される。別の例として、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、ＨＬＡ−Ｂに拘束される。別の例として、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、ＨＬＡ−Ｃに拘束される。
【０２３５】
本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドの中には、ＨＢＶエンベロープペプチド、ＨＢＶプレコア／コアペプチド、ポリメラーゼペプチド、及びＨＢＶ  Ｘ−タンパク質ペプチドがある。いくつかのＨＢＶエピトープが当該技術分野で既知である。例えば、Ｄｅｓｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １３：１６１、Ｌｕｍｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１６）Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｏｐｅｎ  Ｒｅｓ．１：９、及びＫｅｆａｌａｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ６２：４７を参照されたい。本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートへの組み込みに好適なＨＢＶペプチドは、少なくとも１０−７Ｍ、少なくとも１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍで、少なくとも１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍで、または少なくとも１０−１０Ｍの親和性で、ＭＨＣクラスＩ複合体に結合し得、ＭＨＣ複合体と複合体化されたときにＴＣＲによって結合される。本明細書に提供されるＨＢＶエピトープの表は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに組み込まれるエピトープペプチドの全てまたは一部を形成し得るペプチド配列を含有する、ＨＢＶエピトープの非限定的な実施形態を挙げる。
ＨＢＶエピトープの表
【表４】
2020534352.tif 000013
2020534352.tif 000014
2020534352.tif 000015
【０２３６】
Ｉ．Ｇ．免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）
好適なＭＯＤポリペプチドが、同種ＭＯＤに対して低減された親和性を呈するドメインとして、Ｔ細胞ＭＭＰに組み込まれてもよい。ＭＯＤポリペプチドは、野生型免疫調節ドメインから１ａａ〜１０ａａの差異を有し得る。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、アミノ酸配列において、対応する野生型ＭＯＤから、例えば、１ａａ、２ａａ、３ａａ、４ａａ、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａ（例えば、１ａａ〜５ａａ、５ａａ〜１０ａａ、または１０ａａ〜２０ａａ）だけ異なってもよい。例として、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）ＭＯＤと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個（例えば、１〜５、２〜５、３〜５、５〜１０、または１０〜２０個）のアミノ酸置換を有し、及び／またはそれを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、対応する参照（例えば、野生型）ＭＯＤと比較して、単一アミノ酸置換を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤは、対応する野生型参照（例えば、野生型ＭＯＤ）と比べて、１〜２個のａａ置換、１〜３個のａａ置換、１〜４個のａａ置換、１〜５個のａａ置換、１〜６個のａａ置換、１〜７個のａａ置換、１〜８個のａａ置換、１〜９個のａａ置換、１〜１０個のａａ置換、１〜１１個のａａ置換、１〜１２個のａａ置換、１〜１３個のａａ置換、１〜１４個のａａ置換、１〜１５個のａａ置換、１〜１６個のａａ置換、１〜１７個のａａ置換、１〜１８個のａａ置換、１〜１９個のａａ置換、または１〜２０個のａａ置換を含む。
【０２３７】
上記で考察されたように、本開示のＴ細胞ＭＭＰ（及び／またはそれらのエピトープコンジュゲート）への、ドメイン（ＭＯＤポリペプチド）としての組み込みに好適なバリアントＭＯＤは、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈するものを含む。好適なバリアントＭＯＤは、例えば、走査型変異誘発（例えば、アラニン、セリン、またはグリシン走査型変異誘発）等の変異誘発によって識別することができる。
【０２３８】
例となるＭＯＤと同種ＭＯＤとの対には、以下の表に列挙されるエントリ（ａ）〜（ｒ）が含まれるが、これらに限定されない。
例となるＭＯＤと同種ＭＯＤとの対
【表５】
2020534352.tif 000016
【０２３９】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤは、同種ＭＯＤに対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ（またはそのエピトープコンジュゲート）に存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、同種ＭＯＤに対して、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約１μＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約１μＭ〜約２５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約２５μＭ〜約１００μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する（例えば、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートは、同種ＭＯＤに対して結合親和性を有するバリアントＭＯＤを含む）。
【０２４０】
Ｉ．Ｇ．１  野生型及びバリアントＰＤ−Ｌ１  ＭＯＤ
１つの非限定的な例として、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドである。野生型ＰＤ−Ｌ１は、ＰＤ１に結合する。
【０２４１】
野生型ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を含み得る。ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭ  ＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴ  ＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶ  ＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣ  ＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬ  ＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥ  ＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧ  ＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳ  ＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤ  ＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱ  ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ  ＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧ  ＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶ  ＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲ  ＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥ  ＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹ  ＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳ  ＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴ  ＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬ  ＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮ  ＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴ  ＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨ  ＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩ  ＬＮＶＳＩＫＩＣＬＴ  ＬＳＰＳＴ（配列番号１３）。
【０２４２】
野生型ヒトＰＤ−Ｌ１外部ドメインは、以下のアミノ酸配列を含み得る。ＦＴ  ＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶ  ＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣ  ＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬ  ＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥ  ＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧ  ＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳ  ＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤ  ＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱ  ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ  ＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧ  ＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶ  ＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲ  ＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥ  ＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹ  ＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳ  ＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴ  ＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬ  ＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮ  ＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴ  ＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨ  ＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩ  ＬＮＶＳＩＫＩ（配列番号１４）。
【０２４３】
野生型ＰＤ−１ポリペプチド（ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００５００９．２、ａａｓ２１〜２８８）は、以下のアミノ酸配列を含み得る。ＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲ  ＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡ  ＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡ  ＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳ  ＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭ  ＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡ  ＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧ  ＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬ  ＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶ  ＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴ  ＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰ  ＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡ  ＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥ  ＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰ  ＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ  ＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳ  ＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶ  ＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩ  ＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫ  ＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳ  ＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷ  ＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰ  ＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴ  ＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳ  ＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧ  ＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥ  ＤＧＨＣＳＷＰＬ（配列番号１５）。
【０２４４】
一部の実例では、ＭＯＤポリペプチドとして採用され得る、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、その同種ＭＯＤ  ＰＤ−１（例えば、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に対して、配列番号１３または配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性と比較して低減された結合親和性を呈する。例えば、ある実施形態では、本開示のバリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１３または配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＰＤ−１（例えば、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＰＤ−１ポリペプチド）に結合する。
【０２４５】
ある実施形態では、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対して、１ｎＭ〜１μＭである結合親和性を有する。一部の実例では、本開示のバリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ−１に対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。別の例として、一部の実例では、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ１（例えば、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＰＤ１ポリペプチド）に対して、約１００ｎＭ〜約１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。
【０２４６】
一部の実例では、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１または配列番号２に記載されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１３または配列番号１４に記載されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＰＤ−Ｌ１ポリペプチドは、配列番号１３または配列番号１４に記載されるＰＤ−Ｌ１アミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０２４７】
好適なＰＤ−Ｌ１バリアントには、以下のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０２４８】
【化５】
2020534352.tif 000017
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘは、Ａｒｇである。
【０２４９】
好適なＰＤ−Ｌ１バリアントには、以下のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０２５０】
【化６】
2020534352.tif 000018
2020534352.tif 000019
（ここで、Ｘは、Ｉｌｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｓｐである。
【０２５１】
好適なＰＤ−Ｌ１バリアントには、以下のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０２５２】
【化７】
2020534352.tif 000020
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｒｇである。
【０２５３】
Ｉ．Ｇ．２  野生型及びバリアントＣＤ８０  ＭＯＤ
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、バリアントＣＤ８０ポリペプチドである。野生型ＣＤ８０は、ＣＤ２８に結合する。
【０２５４】
ヒトＣＤ８０の外部ドメインの野生型アミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【０２５５】
ＶＩＨＶＴＫ  ＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣ  ＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡ  ＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫ  ＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤ  ＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲ  ＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳ  ＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤ  ＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫ  ＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨ  ＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡ  ＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦ  ＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩ  ＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥ  ＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥ  ＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳ  ＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶ  ＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴ  ＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹ  ＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮ  ＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰ  ＤＮ（配列番号１６）。
【０２５６】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下の通りであり得る。ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ  ＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫ  ＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶ  ＡＹＤＮＡＶＮＬＳＣ  ＫＹＳＹＮＬＦＳＲＥ  ＦＲＡＳＬＨＫＧＬＤ  ＳＡＶＥＶＣＶＶＹＧ  ＮＹＳＱＱＬＱＶＹＳ  ＫＴＧＦＮＣＤＧＫＬ  ＧＮＥＳＶＴＦＹＬＱ  ＮＬＹＶＮＱＴＤＩＹ  ＦＣＫＩＥＶＭＹＰＰ  ＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧ  ＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬ  ＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳ  ＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧ  ＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶ  ＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲ  ＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤ  ＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧ  ＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡ  ＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号１７）。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰがバリアントＣＤ８０ポリペプチドを含む場合、同種ＭＯＤは、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチドである。
【０２５７】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下の通りであり得る。ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ  ＦＰＳＩＱＶＴＧＮＫ  ＩＬＶＫＱＳＰＭＬＶ  ＡＹＤＮＡＶＮＬＳＷ  ＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰ  ＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶ  ＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳ  ＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦ  ＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬ  ＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲ  ＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱ  ＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡ  ＹＲＳ（配列番号１７）。
【０２５８】
野生型ＣＤ２８アミノ酸配列は、以下の通りであり得る。ＭＬＲＬＬＬＡＬＮＬ  ＦＰＳＩＱＶＴＧＫＨ  ＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰ  ＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶ  ＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬ  ＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ  ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳ  ＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰ  ＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹ  ＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲ  Ｓ（配列番号１９）。
【０２５９】
一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ２８に対して、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ８０ポリペプチドのＣＤ２８に対する結合親和性と比較して低減された結合親和性を呈する。例えば、一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ８０ポリペプチドのＣＤ２８（例えば、配列番号１７、１８、または１９のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＣＤ２８に結合する。
【０２６０】
一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ２８に対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。別の例として、一部の実例では、本開示のバリアントＣＤ８０ポリペプチドは、ＣＤ２８（例えば、配列番号１７、配列番号１８、または配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対して、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。
【０２６１】
一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号１６に記載されるＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号１６に記載されるＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８０ポリペプチドは、配列番号１６に記載されるＣＤ８０アミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０２６２】
いくつかの好適なＣＤ８０バリアントには、以下のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％（２０個未満の置換）、少なくとも９５％（１０個未満の置換）、少なくとも９７％（６個未満の置換）、少なくとも９８％（４個未満の置換）、少なくとも９９％（２個未満の置換）、または少なくとも９９．５％（１個の置換）のアミノ酸配列同一性の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０２６３】
【化８】
2020534352.tif 000021
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６４】
【化９】
2020534352.tif 000022
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６５】
【化１０】
2020534352.tif 000023
（ここで、Ｘは、Ｉｌｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６６】
【化１１】
2020534352.tif 000024
2020534352.tif 000025
（ここで、Ｘは、Ｌｙｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６７】
【化１２】
2020534352.tif 000026
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６８】
【化１３】
2020534352.tif 000027
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２６９】
【化１４】
2020534352.tif 000028
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７０】
【化１５】
2020534352.tif 000029
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７１】
【化１６】
2020534352.tif 000030
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７２】
【化１７】
2020534352.tif 000031
（ここで、Ｘは、Ｍｅｔ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７３】
【化１８】
2020534352.tif 000032
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７４】
【化１９】
2020534352.tif 000033
（ここで、Ｘは、Ｉｌｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７５】
【化２０】
2020534352.tif 000034
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７６】
【化２１】
2020534352.tif 000035
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７７】
【化２２】
2020534352.tif 000036
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７８】
【化２３】
2020534352.tif 000037
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２７９】
【化２４】
2020534352.tif 000038
（ここで、Ｘは、Ｐｒｏ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２８０】
Ｉ．Ｇ．３  野生型及びバリアントＣＤ８６  ＭＯＤ
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、バリアントＣＤ８６ポリペプチドである。野生型ＣＤ８６は、ＣＤ２８に結合する。
【０２８１】
野生型ヒトＣＤ８６の全外部ドメインのアミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【化２５】
2020534352.tif 000039
【０２８２】
野生型ヒトＣＤ８６のＩｇＶドメインのアミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【化２６】
2020534352.tif 000040
【０２８３】
一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、ＣＤ２８に対して、配列番号２０または配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ８６ポリペプチドのＣＤ２８に対する結合親和性と比較して低減された結合親和性を呈する。例えば、一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２０または配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ８６ポリペプチドのＣＤ２８（例えば、配列番号１７、１８、または１９のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＣＤ２８に結合する。
【０２８４】
一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、ＣＤ２８に対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。別の例として、一部の実例では、本開示のバリアントＣＤ８６ポリペプチドは、ＣＤ２８（例えば、配列番号１７、１８、または１９のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ２８ポリペプチド）に対して、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、〜約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。
【０２８５】
一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２０に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２０に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２０に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０２８６】
一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２１に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２１に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＣＤ８６ポリペプチドは、配列番号２１に記載されるＣＤ８６アミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０２８７】
好適なＣＤ８６バリアントには、以下のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０２８８】
【化２７】
2020534352.tif 000041
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２８９】
【化２８】
2020534352.tif 000042
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９０】
【化２９】
2020534352.tif 000043
（ここで、Ｘは、Ｔｒｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９１】
【化３０】
2020534352.tif 000044
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９２】
【化３１】
2020534352.tif 000045
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９３】
【化３２】
2020534352.tif 000046
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９４】
【化３３】
2020534352.tif 000047
（ここで、Ｘは、Ｔｒｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９５】
【化３４】
2020534352.tif 000048
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９６】
【化３５】
2020534352.tif 000049
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９７】
【化３６】
2020534352.tif 000050
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９８】
【化３７】
2020534352.tif 000051
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０２９９】
【化３８】
2020534352.tif 000052
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３００】
【化３９】
2020534352.tif 000053
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０１】
【化４０】
2020534352.tif 000054
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０２】
【化４１】
2020534352.tif 000055
2020534352.tif 000056
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０３】
【化４２】
2020534352.tif 000057
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０４】
【化４３】
2020534352.tif 000058
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０５】
【化４４】
2020534352.tif 000059
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３０６】
【化４５】
2020534352.tif 000060
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、第２のＸ２は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１及びＸ２は両方とも、Ａｌａである。
【０３０７】
【化４６】
2020534352.tif 000061
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１及びＸ２は両方とも、Ａｌａである。
【０３０８】
【化４７】
2020534352.tif 000062
2020534352.tif 000063
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、かつＸ２は、Ａｌａである。
【０３０９】
【化４８】
2020534352.tif 000064
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１及びＸ２は両方とも、Ａｌａである。
【０３１０】
【化４９】
2020534352.tif 000065
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０３１１】
【化５０】
2020534352.tif 000066
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０３１２】
Ｉ．Ｇ．４  野生型及びバリアント４−１ＢＢＬ  ＭＯＤ
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドである。野生型４−１ＢＢＬは、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）に結合する。
【０３１３】
野生型４−１ＢＢＬアミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【化５１】
2020534352.tif 000067
2020534352.tif 000068
【０３１４】
一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、ヒト４−１ＢＢＬの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）相同性ドメイン（ＴＨＤ）のバリアントである。
【０３１５】
ヒト４−１ＢＢＬのＴＨＤの野生型アミノ酸配列は、例えば、以下のような配列番号２３〜２５のうちの１つであり得る。
【０３１６】
ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ  ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ  ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ  ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ  ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ  ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ  ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ  ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ  ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ  ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ  ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ  ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ  ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ  ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ  ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ  ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ  ＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳ  ＰＲＳＥ（配列番号２３）、
【０３１７】
Ｄ  ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ  ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ  ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ  ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ  ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ  ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ  ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ  ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ  ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ  ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ  ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ  ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ  ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ  ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ  ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ  ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ  ＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳ  ＰＲＳＥ（配列番号２４）、または
【０３１８】
Ｄ  ＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ  ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ  ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ  ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ  ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ  ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ  ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ  ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ  ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ  ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ  ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ  ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ  ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ  ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ  ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ  ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ  ＴＰＥＩＰＡ（配列番号２５）。
【０３１９】
野生型４−１ＢＢアミノ酸配列は、以下の通りであり得る。ＭＧＮＳＣＹＮＩＶＡ  ＴＬＬＬＶＬＮＦＥＲ  ＴＲＳＬＱＤＰＣＳＮ  ＣＰＡＧＴＦＣＤＮＮ  ＲＮＱＩＣＳＰＣＰＰ  ＮＳＦＳＳＡＧＧＱＲ  ＴＣＤＩＣＲＱＣＫＧ  ＶＦＲＴＲＫＥＣＳＳ  ＴＳＮＡＥＣＤＣＴＰ  ＧＦＨＣＬＧＡＧＣＳ  ＭＣＥＱＤＣＫＱＧＱ  ＥＬＴＫＫＧＣＫＤＣ  ＣＦＧＴＦＮＤＱＫＲ  ＧＩＣＲＰＷＴＮＣＳ  ＬＤＧＫＳＶＬＶＮＧ  ＴＫＥＲＤＶＶＣＧＰ  ＳＰＡＤＬＳＰＧＡＳ  ＳＶＴＰＰＡＰＡＲＥ  ＰＧＨＳＰＱＩＩＳＦ  ＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬ  ＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦ  ＳＶＶＫＲＧＲＫＫＬ  ＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲ  ＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧ  ＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥ  ＧＧＣＥＬ（配列番号２６）。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰがバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドを含む場合、同種ＭＯＤは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチドである。
【０３２０】
一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、４−１ＢＢに対して、配列番号２２〜２５のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を含む４−１ＢＢＬポリペプチドの結合親和性と比較して低減された結合親和性を呈する。例えば、一部の実例では、本開示のバリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、同じ条件下でアッセイされたとき、配列番号２２〜２５のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を含む４−１ＢＢＬポリペプチドの４−１ＢＢポリペプチド（例えば、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチド）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、４−１ＢＢに結合する。
【０３２１】
一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、４−１ＢＢに対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。別の例として、一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、４−１ＢＢ（例えば、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む４−１ＢＢポリペプチド）に対して、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、〜約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。
【０３２２】
一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、配列番号２２〜２５のうちの１つに記載される４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、配列番号２２〜２５のうちの１つに記載される４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアント４−１ＢＢＬポリペプチドは、配列番号２２〜２５のうちの１つに記載される４−１ＢＢＬアミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０３２３】
好適な４−１ＢＢＬバリアントには、以下のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０３２４】
【化５２】
2020534352.tif 000069
2020534352.tif 000070
（ここで、Ｘは、Ｌｙｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３２５】
【化５３】
2020534352.tif 000071
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３２６】
【化５４】
2020534352.tif 000072
（ここで、Ｘは、Ｍｅｔ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３２７】
【化５５】
2020534352.tif 000073
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３２８】
【化５６】
2020534352.tif 000074
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３２９】
【化５７】
2020534352.tif 000075
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３０】
【化５８】
2020534352.tif 000076
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３１】
【化５９】
2020534352.tif 000077
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３２】
【化６０】
2020534352.tif 000078
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３３】
【化６１】
2020534352.tif 000079
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３４】
【化６２】
2020534352.tif 000080
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３５】
【化６３】
2020534352.tif 000081
2020534352.tif 000082
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３６】
【化６４】
2020534352.tif 000083
（ここで、Ｘは、Ｉｌｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３７】
【化６５】
2020534352.tif 000084
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３８】
【化６６】
2020534352.tif 000085
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３３９】
【化６７】
2020534352.tif 000086
（ここで、Ｘは、Ｐｒｏ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４０】
【化６８】
2020534352.tif 000087
2020534352.tif 000088
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４１】
【化６９】
2020534352.tif 000089
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４２】
【化７０】
2020534352.tif 000090
（ここで、Ｘは、Ｔｒｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４３】
【化７１】
2020534352.tif 000091
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４４】
【化７２】
2020534352.tif 000092
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４５】
【化７３】
2020534352.tif 000093
2020534352.tif 000094
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４６】
【化７４】
2020534352.tif 000095
（ここで、Ｘは、Ｐｒｏ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４７】
【化７５】
2020534352.tif 000096
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４８】
【化７６】
2020534352.tif 000097
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３４９】
【化７７】
2020534352.tif 000098
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５０】
【化７８】
2020534352.tif 000099
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５１】
【化７９】
2020534352.tif 000100
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５２】
【化８０】
2020534352.tif 000101
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５３】
【化８１】
2020534352.tif 000102
（ここで、Ｘは、Ｔｈｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５４】
【化８２】
2020534352.tif 000103
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５５】
【化８３】
2020534352.tif 000104
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５６】
【化８４】
2020534352.tif 000105
2020534352.tif 000106
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５７】
【化８５】
2020534352.tif 000107
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５８】
【化８６】
2020534352.tif 000108
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３５９】
【化８７】
2020534352.tif 000109
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６０】
【化８８】
2020534352.tif 000110
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６１】
【化８９】
2020534352.tif 000111
2020534352.tif 000112
（ここで、Ｘは、Ｔｈｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６２】
【化９０】
2020534352.tif 000113
（ここで、Ｘは、Ｌｙｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６３】
【化９１】
2020534352.tif 000114
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６４】
【化９２】
2020534352.tif 000115
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６５】
【化９３】
2020534352.tif 000116
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６６】
【化９４】
2020534352.tif 000117
2020534352.tif 000118
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６７】
【化９５】
2020534352.tif 000119
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６８】
【化９６】
2020534352.tif 000120
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３６９】
【化９７】
2020534352.tif 000121
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７０】
【化９８】
2020534352.tif 000122
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７１】
【化９９】
2020534352.tif 000123
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７２】
【化１００】
2020534352.tif 000124
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７３】
【化１０１】
2020534352.tif 000125
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７４】
【化１０２】
2020534352.tif 000126
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７５】
【化１０３】
2020534352.tif 000127
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７６】
【化１０４】
2020534352.tif 000128
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７７】
【化１０５】
2020534352.tif 000129
2020534352.tif 000130
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７８】
【化１０６】
2020534352.tif 000131
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３７９】
【化１０７】
2020534352.tif 000132
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８０】
【化１０８】
2020534352.tif 000133
（ここで、Ｘは、Ｐｒｏ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８１】
【化１０９】
2020534352.tif 000134
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８２】
【化１１０】
2020534352.tif 000135
2020534352.tif 000136
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８３】
【化１１１】
2020534352.tif 000137
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８４】
【化１１２】
2020534352.tif 000138
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８５】
【化１１３】
2020534352.tif 000139
（ここで、Ｘは、Ａｓｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８６】
【化１１４】
2020534352.tif 000140
（ここで、Ｘは、Ｓｅｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８７】
【化１１５】
2020534352.tif 000141
2020534352.tif 000142
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８８】
【化１１６】
2020534352.tif 000143
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３８９】
【化１１７】
2020534352.tif 000144
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９０】
【化１１８】
2020534352.tif 000145
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９１】
【化１１９】
2020534352.tif 000146
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９２】
【化１２０】
2020534352.tif 000147
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９３】
【化１２１】
2020534352.tif 000148
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９４】
【化１２２】
2020534352.tif 000149
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９５】
【化１２３】
2020534352.tif 000150
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９６】
【化１２４】
2020534352.tif 000151
（ここで、Ｘは、Ｔｈｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９７】
【化１２５】
2020534352.tif 000152
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９８】
【化１２６】
2020534352.tif 000153
2020534352.tif 000154
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０３９９】
【化１２７】
2020534352.tif 000155
（ここで、Ｘは、Ａｒｇ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４００】
【化１２８】
2020534352.tif 000156
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０１】
【化１２９】
2020534352.tif 000157
（ここで、Ｘは、Ｔｒｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０２】
【化１３０】
2020534352.tif 000158
（ここで、Ｘは、Ｌｅｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０３】
【化１３１】
2020534352.tif 000159
2020534352.tif 000160
（ここで、Ｘは、Ｔｈｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０４】
【化１３２】
2020534352.tif 000161
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０５】
【化１３３】
2020534352.tif 000162
（ここで、Ｘは、Ｇｌｙ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０６】
【化１３４】
2020534352.tif 000163
（ここで、Ｘは、Ｔｈｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０７】
【化１３５】
2020534352.tif 000164
（ここで、Ｘは、Ｖａｌ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４０８】
Ｉ．Ｇ．５  ＩＬ−２バリアント
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰに存在するバリアントＭＯＤポリペプチドは、バリアントＩＬ−２ポリペプチドである。野生型ＩＬ−２は、ＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、すなわち、ＩＬ−２Ｒα、ＩＬ−２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγを含むヘテロ三量体ポリペプチドに結合する。
【０４０９】
野生型ＩＬ−２アミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【化１３６】
2020534352.tif 000165
【０４１０】
野生型ＩＬ２は、細胞の表面上のＩＬ２受容体（ＩＬ２Ｒ）に結合する。ＩＬ２受容体は、一部の実例では、アルファ鎖（ＩＬ−２Ｒα；ＣＤ２５とも称される）、ベータ鎖（ＩＬ−２Ｒβ；ＣＤ１２２とも称される）、及びガンマ鎖（ＩＬ−２Ｒγ；ＣＤ１３２とも称される）を含むヘテロ三量体ポリペプチドである。ヒトＩＬ−２Ｒα、ＩＬ２Ｒβ、及びＩＬ−２Ｒγのアミノ酸配列は、以下の通りであり得る。
【０４１１】
ヒトＩＬ−２Ｒα：ＥＬＣＤＤＤＰＰＥ  ＩＰＨＡＴＦＫＡＭＡ  ＹＫＥＧＴＭＬＮＣＥ  ＣＫＲＧＦＲＲＩＫＳ  ＧＳＬＹＭＬＣＴＧＮ  ＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣ  ＱＣＴＳＳＡＴＲＮＴ  ＴＫＱＶＴＰＱＰＥＥ  ＱＫＥＲＫＴＴＥＭＱ  ＳＰＭＱＰＶＤＱＡＳ  ＬＰＧＨＣＲＥＰＰＰ  ＷＥＮＥＡＴＥＲＩＹ  ＨＦＶＶＧＱＭＶＹＹ  ＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨ  ＲＧＰＡＥＳＶＣＫＭ  ＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰ  ＱＬＩＣＴＧＥＭＥＴ  ＳＱＦＰＧＥＥＫＰＱ  ＡＳＰＥＧＲＰＥＳＥ  ＴＳＣＬＶＴＴＴＤＦ  ＱＩＱＴＥＭＡＡＴＭ  ＥＴＳＩＦＴＴＥＹＱ  ＶＡＶＡＧＣＶＦＬＬ  ＩＳＶＬＬＬＳＧＬＴ  ＷＱＲＲＱＲＫＳＲＲ  ＴＩ（配列番号２８）。
【０４１２】
ヒトＩＬ−２Ｒβ：ＶＮＧ  ＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳ  ＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱ  ＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱ  ＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷ  ＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳ  ＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬ  ＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴ  ＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣ  ＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡ  ＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬ  ＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶ  ＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩ  ＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹ  ＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲ  ＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥ  ＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱ  ＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰ  ＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶ  ＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷ  ＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲ  ＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴ  ＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧ  ＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬ  ＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴ  ＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣ  ＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳ  ＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶ  ＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳ  ＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰ  ＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲ  ＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱ  ＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳ  ＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴ  ＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰ  ＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶ  ＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥ  ＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰ  ＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰ  ＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴ  ＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦ  ＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰ  ＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡ  ＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱ  ＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱ  ＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰ  ＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥ  ＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶ  ＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳ  ＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧ  ＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰ  ＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱ  ＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬ  Ｖ（配列番号２９）。
【０４１３】
ヒトＩＬ−２Ｒγ：ＬＮＴＴＩＬＴＰ  ＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦ  ＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬ  ＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶ  ＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭ  ＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰ  ＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷ  ＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱ  ＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥ  ＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫ  ＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶ  ＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲ  ＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮ  ＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬ  ＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬ  ＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮ  ＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲ  ＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱ  ＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬ  ＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴ  ＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬ  ＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷ  ＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴ  ＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬ  ＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭ  ＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹ  ＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩ  ＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶ  ＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷ  ＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳ  ＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣ  ＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧ  ＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰ  ＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰ  ＰＣＹＴＬＫＰＥＴ（配列番号３０）。
【０４１４】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰがバリアントＩＬ−２ポリペプチドを含む場合、同種ＭＯＤは、配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、ＩＬ−２Ｒである。
【０４１５】
一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対して、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドの結合親和性と比較して低減された結合親和性を呈する。例えば、一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、同じ条件下でアッセイされたとき、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＩＬ−２ポリペプチドのＩＬ−２Ｒ（例えば、配列番号２８〜３０に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対する結合親和性よりも少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％超低い結合親和性で、ＩＬ−２Ｒに結合する。
【０４１６】
一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒに対して、１００ｎＭ〜１００μＭである結合親和性を有する。別の例として、一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、ＩＬ−２Ｒ（例えば、配列番号２８〜３０に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ−２Ｒ）に対して、約１００ｎＭ〜１５０ｎＭ、約１５０ｎＭ〜約２００ｎＭ、約２００ｎＭ〜約２５０ｎＭ、約２５０ｎＭ〜約３００ｎＭ、約３００ｎＭ〜約３５０ｎＭ、約３５０ｎＭ〜約４００ｎＭ、約４００ｎＭ〜約５００ｎＭ、約５００ｎＭ〜約６００ｎＭ、約６００ｎＭ〜約７００ｎＭ、約７００ｎＭ〜約８００ｎＭ、約８００ｎＭ〜約９００ｎＭ、約９００ｎＭ〜約１μＭ、〜約１μＭ〜約５μＭ、約５μＭ〜約１０μＭ、約１０μＭ〜約１５μＭ、約１５μＭ〜約２０  μＭ、約２０μＭ〜約２５μＭ、約２５μＭ〜約５０μＭ、約５０μＭ〜約７５μＭ、または約７５μＭ〜約１００μＭである結合親和性を有する。
【０４１７】
一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、配列番号２７に記載されるＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、単一アミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、配列番号２７に記載されるＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、２〜１０個のアミノ酸置換を有する。一部の実例では、バリアントＩＬ−２ポリペプチドは、配列番号２７に記載されるＩＬ−２アミノ酸配列と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を有する。
【０４１８】
好適なＩＬ−２バリアントＭＯＤポリペプチドには、以下のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリペプチドが含まれる。
【０４１９】
【化１３７】
2020534352.tif 000166
（ここで、Ｘは、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２０】
【化１３８】
2020534352.tif 000167
（ここで、Ｘは、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２１】
【化１３９】
2020534352.tif 000168
（ここで、Ｘは、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２２】
【化１４０】
2020534352.tif 000169
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２３】
【化１４１】
2020534352.tif 000170
（ここで、Ｘは、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、またはＶａｌである。
【０４２４】
【化１４２】
2020534352.tif 000171
（ここで、Ｘは、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２５】
【化１４３】
2020534352.tif 000172
（ここで、Ｘは、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘは、Ａｌａである。
【０４２６】
【化１４４】
2020534352.tif 000173
（ここで、Ｘ１は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、かつＸ２は、Ａｌａである。
【０４２７】
【化１４５】
2020534352.tif 000174
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、かつＸ２は、Ａｌａである。
【０４２８】
【化１４６】
2020534352.tif 000175
（ここで、Ｘ１は、Ｇｌｕ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０４２９】
【化１４７】
2020534352.tif 000176
（ここで、Ｘ１は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０４３０】
【化１４８】
2020534352.tif 000177
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０４３１】
【化１４９】
2020534352.tif 000178
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０４３２】
【化１５０】
2020534352.tif 000179
（ここで、Ｘ１は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４は、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ４は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、Ｘ３は、Ａｌａであり、かつＸ４は、Ａｌａである。
【０４３３】
【化１５１】
2020534352.tif 000180
2020534352.tif 000181
（ここで、Ｘ１は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ４は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、Ｘ３は、Ａｌａであり、かつＸ４は、Ａｌａである。
【０４３４】
【化１５２】
2020534352.tif 000182
（ここで、Ｘ１は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ａｓｐ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ４は、Ｔｙｒ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ５は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ４は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ５は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、Ｘ３は、Ａｌａであり、Ｘ４は、Ａｌａであり、かつＸ５は、Ａｌａである。
【０４３５】
【化１５３】
2020534352.tif 000183
（ここで、Ｘ１は、Ｈｉｓ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ２は、Ｐｈｅ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ３は、Ｇｌｎ以外の任意のアミノ酸である）。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ２は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ３は、Ａｌａである。一部の実例では、Ｘ１は、Ａｌａであり、Ｘ２は、Ａｌａであり、かつＸ３は、Ａｌａである。
【０４３６】
本明細書に提供される野生型またはバリアントＩＬ−２配列のうちのいずれかにおいて、１２５位のシステインは、アラニンで置換されてもよい（Ｃ１２５Ａ置換（ｓｕｂｓｉｔｉｔｕｔｉｏｎ））。この置換によって提供されるあらゆる安定性に加えて、例えば、エピトープ含有（ｃｏｎｔａｉｎｇ）ペプチドまたはペイロードがＴ細胞ＭＭＰの第１または第２のポリペプチドにおける他の箇所にあるシステイン残基にコンジュゲートされる予定の場所で、それを採用して、それによってＩＬ−２  ＭＯＤ配列のＣ１２５による競合を回避してもよい。
【０４３７】
Ｉ．Ｈ．追加的なポリペプチド
Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートのポリペプチド鎖は、上述のポリペプチドに加えて１つまたは複数のポリペプチドを含み得る。好適な追加のポリペプチドには、エピトープタグ及び親和性ドメインが含まれる。１つまたは複数の追加的なポリペプチド（複数可）は、細胞または無細胞系によって翻訳されるポリペプチドの一部として、多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＮ末端で、多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖のＣ末端で、または多量体ポリペプチドのポリペプチド鎖内で内部に、組み込むことができる。
【０４３８】
Ｉ．Ｉ．エピトープタグ
好適なエピトープタグには、ヘマグルチニン（ＨＡ、例えば、ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号３１））、ＦＬＡＧ（例えば、ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号３２））、ｃ−ｍｙｃ（例えば、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号３３））等が含まれるが、これらに限定されない。
【０４３９】
Ｉ．Ｊ．親和性ドメイン
親和性ドメインは、識別または精製に有用な、例えば、固体支持体上に固定化された結合パートナー等の結合パートナーと相互作用し得る、ペプチド配列を含む。発現タンパク質に融合させた場合の、ヒスチジン等の複数の連続する単一アミノ酸をコードするＤＮＡ配列が、ニッケルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）等の樹脂カラムへの高親和性の結合による組換えタンパク質の一段階精製に使用されてもよい。例となる親和性ドメインには、Ｈｉｓ５（ＨＨＨＨＨ）（配列番号３４）、ＨｉｓＸ６（ＨＨＨＨＨＨ）（配列番号３５）、Ｃ−ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）（配列番号３３）、Ｆｌａｇ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）（配列番号３２）、ＳｔｒｅｐＴａｇ（ＷＳＨＰＱＦＥＫ）（配列番号３６）、ヘマグルチニン（例えば、ＨＡタグ（ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ）（配列番号３１））、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、セルロース結合ドメイン、ＲＹＩＲＳ（配列番号３７）、Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ（配列番号３８）、キチン結合ドメイン、Ｓ−ペプチド、Ｔ７ペプチド、ＳＨ２ドメイン、Ｃ末端ＲＮＡタグ、ＷＥＡＡＡＲＥＡＣＣＲＥＣＣＡＲＡ（配列番号３９）、金属結合ドメイン、例えば、亜鉛結合ドメインまたはカルシウム結合ドメイン、例えば、カルシウム結合タンパク質、例えば、カルモジュリン、トロポニンＣ、カルシニューリンＢ、ミオシン軽鎖、リカバリン、Ｓ−モジュリン、ビジニン、ＶＩＬＩＰ、ニューロカルシン、ヒポカルシン、フリクエニン、カルトラクチン、カルパイン大サブユニット、Ｓ１００タンパク質、パルブアルブミン、カルビンディンＤ９Ｋ、カルビンディンＤ２８Ｋ、及びカルレチニン由来のもの、インテイン、ビオチン、ストレプトアビジン、ＭｙｏＤ、Ｉｄ、ロイシンジッパー配列、ならびにマルトース結合タンパク質が含まれる。
【０４４０】
Ｉ．Ｋ．ペイロード
多種多様なペイロードがＴ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに会合させられてもよく、このＴ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、第１または第２の化学コンジュゲーション部位でＴ細胞ＭＭＰに（共有結合性で）コンジュゲートされたエピトープに加えて、１つよりも多くの種類のペイロードを組み込み得る。加えて、Ｔ細胞ＭＭＰ分子またはそれらのエピトープコンジュゲートが多量体化する場合、異なるペイロードで標識された単量体を多量体に組み込むことが可能であり得る。したがって、治療剤、化学療法剤、診断剤、標識等からなる群から選択される１つまたは複数のペイロードを導入することが可能である。一部のペイロードは１つよりも多くの区分に該当し得ることが明らかとなろう（例えば、放射標識は、診断薬として、また治療薬として、具体的な組織または細胞型に選択的に照射するのに有用であり得る）。
【０４４１】
上述のように、Ｔ細胞ＭＭＰポリペプチド（例えば、足場またはＦｃポリペプチド）は、ペイロード及び／またはエピトープを、Ｔ細胞ＭＭＰの第１もしくは第２のポリペプチドに結合させた、またはＴ細胞ＭＭＰの第１もしくは第２のポリペプチドにある（例えば、操作されたシステインまたはリジン等の化学コンジュゲーション部位で）化学コンジュゲーション部位にコンジュゲートするための架橋試薬で修飾され得る。かかる架橋剤には、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、またはスクシンイミジル−ヨードアセテートが含まれる。過剰のかかる架橋剤を用いてペイロードを導入することにより、複数のペイロード分子がＴ細胞ＭＭＰに組み込まれる結果をもたらすことができる。ペイロードをＴ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲートに導入するためのいくつかの二官能性リンカーには、切断可能リンカー及び切断不可能リンカーが含まれる。一部の実例では、ペイロードリンカーは、プロテアーゼで切断可能なリンカーである。好適なペイロードリンカーには、例えば、ペプチド（例えば、２〜１０アミノ酸の長さ、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸の長さ）、アルキル鎖、ポリ（エチレングリコール）、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、光不安定基、ペプチダーゼ不安定基、及びエステラーゼ不安定基が含まれる。好適なリンカーの非限定的な例は、Ｎ−スクシンイミジル−［（Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−テトラエチレングリコール］エステル（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−マレイミド）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、グルタル酸ジスクシンイミジル（ＤＧＳ）、アジプイミド酸ジメチル（ＤＭＡ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ−スクシンイミジル４（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）��ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、ＰＥＧ４−ＳＰＤＰ（ＰＥＧ化、長鎖ＳＰＤＰクロスリンカー）、ＢＳ（ＰＥＧ）５（ＰＥＧ化ビス（スルホスクシンイミジル）スベラート）、ＢＳ（ＰＥＧ）９（ＰＥＧ化ビス（スルホスクシンイミジル）スベラート）、マレイミド−ＰＥＧ６−スクシンイミジルエステル、マレイミド−ＰＥＧ８−スクシンイミジルエステル、マレイミド−ＰＥＧ１２−スクシンイミジルエステル、ＰＥＧ４−ＳＰＤＰ（ＰＥＧ化、長鎖ＳＰＤＰクロスリンカー）、ＰＥＧ１２−ＳＰＤＰ（ＰＥＧ化、長鎖ＳＰＤＰクロスリンカー）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、３−マレイミドプロパン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、及びＮ−スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）である。
【０４４２】
反応の化学量論組成の制御は、分子における全ての他の基に直交型の化学反応を伴う操作された部位が利用されない、何らかの選択的修飾をもたらし得る。上記で考察されたビス−チオリンカー等の、はるかにより高い選択性を示す試薬が、単一のリジンまたはシステイン残基と反応する試薬よりも、箇所及び化学量論組成のより精密な制御を可能にする傾向にある。
【０４４３】
本開示のＴ細胞ＭＭＰがＦｃポリペプチドを含む場合、Ｆｃポリペプチドは、直接またはリンカーを通して間接的に結合させた、１つまたは複数の共有結合性で結合したペイロード分子を含み得る。例として、本開示のＴ細胞ＭＭＰがＦｃポリペプチドを含む場合、Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖は、式（Ａ）−（Ｌ）−（Ｃ）のものであり得、式中、（Ａ）は、Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖であり、存在する場合、（Ｌ）は、リンカーであり、（Ｃ）は、ペイロード（例えば、細胞傷害性薬剤）である。存在する場合、（Ｌ）は、（Ａ）を（Ｃ）に連結する。一部の実例では、Ｆｃポリペプチドを含むポリペプチド鎖は、１つよりも多くのペイロード分子（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、または５つよりも多くの細胞傷害性薬剤分子）を含み得る。
【０４４４】
ある実施形態では、ペイロードは、生物活性剤もしくは生物活性薬、診断剤または標識、ヌクレオチドまたはヌクレオシド類似体、核酸または合成核酸（例えば、アンチセンス核酸、低分子干渉ＲＮＡ、２本鎖（ｄｓ）ＤＮＡ、１本鎖（ｓｓ）ＤＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ）、毒素、リポソーム（例えば、５−フルオロデオキシウリジン等の化学療法薬を組み込む）、ナノ粒子（例えば、核酸または他の分子を担持する金または他の金属、核酸または他の分子を担持する脂質、粒子）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０４４５】
ある実施形態では、ペイロードは、治療剤（例えば、薬物またはプロドラッグ）、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、抗ウイルス薬、細胞周期同調剤、細胞表面受容体（複数可）に対するリガンド、免疫調節剤（例えば、シクロスポリン等の免疫抑制薬）、アポトーシス促進剤、血管新生阻害剤、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、タンパク質またはポリペプチド、抗体またはその抗原結合断片、酵素、酵素前駆体、ホルモン、及びそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される、生物活性剤または生物活性薬から選択される。
【０４４６】
ある実施形態では、ペイロードは、光検出可能な標識（例えば、色素、蛍光標識、燐光標識、発光標識）、造影剤（例えば、ヨウ素またはバリウム含有物質）、放射標識、画像化剤、常磁性標識／画像化剤（磁気共鳴画像法におけるガドリニウム含有標識）、超音波標識、及びそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される、治療薬、診断剤または標識から独立して選択される、生物活性剤または生物活性薬から選択される。
Ｉ．Ｌ．治療剤及び化学療法剤
【０４４７】
Ｔ細胞ＭＭＰのポリペプチド鎖は、化学コンジュゲーション部位で第１または第２のポリペプチド鎖に連結された（例えば、共有結合性で結合した）小分子薬物を含むが、これらに限定されないペイロードを含み得る。ペイロードと、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートの第１または第２のポリペプチド鎖との間の連結は、直接連結であっても、または間接的連結であってもよい。直接連結は、アミノ酸側鎖への直接の連結を伴い得る。間接的連結は、リンカーを介した連結であり得る。薬物（例えば、がん化学療法剤等のペイロード）は、チオエーテル結合、アミド結合、カルバメート結合、ジスルフィド結合、またはエーテル結合を介して、本開示のＴ細胞ＭＭＰのポリペプチド鎖（例えば、Ｆｃポリペプチド）に連結され得る。
【０４４８】
好適な治療剤には、例えば、ラパマイシン、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）等のレチノイド、ビタミンＤ３、ビタミンＤ３類似体等が含まれる。上述のように、一部の実例では、薬物は、細胞傷害性薬剤である。細胞傷害性薬剤は、当該技術分野で既知である。好適な細胞傷害性薬剤は、細胞死をもたらすか、もしくは細胞死を誘導するか、または何らかの様態で細胞の生存能力を減少させる、任意の化合物であり得、これには、例えば、マイタンシノイド及びマイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５及びＣＣ−１０６５類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、カリケアマイシン等のエンジイン、ドラスタチン及びアウリスタチンを含めたドラスタチン類似体、トメイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ならびにモルホリノドキソルビシンが含まれる。
【０４４９】
例えば、一部の実例では、細胞傷害性薬剤は、真核細胞における微小管形成を阻害する化合物である。かかる薬剤には、例えば、マイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トメイマイシン、及びレプトマイシン、または前述のもののうちのいずれか１つのプロドラッグが含まれる。マイタンシノイド化合物には、例えば、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）、Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３）、及びＮ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ４）が含まれる。ベンゾジアゼピンには、例えば、インドリノベンゾジアゼピン及びオキサゾリジノベンゾジアゼピンが含まれる。
【０４５０】
細胞傷害性薬剤には、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ  ａｎｔｈｒａｃｉｎ  ｄｉｏｎｅ）、マイタンシンまたはその類似体もしくは誘導体、アウリスタチンまたはその機能性ペプチド類似体もしくは誘導体、ドラスタチン１０もしくは１５またはその類似体、イリノテカンまたはその類似体、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、カリケアマイシンまたはその類似体もしくは誘導体、代謝拮抗剤、６メルカプトプリン、６チオグアニン、シタラビン、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎ）、５フルオロウラシル、デカルバジン、ヒドロキシ尿素、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビン、アルキル化剤、白金誘導体、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＳＡ、ラケルマイシン（ＣＣ−１０６５）またはその類似体もしくは誘導体、抗生物質、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン（ＰＤＢ）、ジフテリア毒素、リシン毒素、コレラ毒素、志賀様毒素、ＬＴ毒素、Ｃ３毒素、志賀毒素、百日咳毒素、破傷風毒素、大豆Ｂｏｗｍａｎ−Ｂｉｒｋプロテアーゼ阻害剤、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、アロリン（ａｌｏｒｉｎ）、サポリン、モデシン、ゲラニン（ｇｅｌａｎｉｎ）、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）毒素、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、ＤＮａｓｅ  Ｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ腸毒素Ａ、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ジフテリン（ｄｉｐｈｔｈｅｒｉｎ）毒素、及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ内毒素が含まれる。
【０４５１】
Ｉ．Ｍ．診断剤及び標識
Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び／または第２のポリペプチド鎖は、光検出可能な標識（例えば、色素、蛍光標識、燐光標識、発光標識）、造影剤（例えば、ヨウ素またはバリウム含有物質）、放射標識、画像化剤、スピン標識、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）型標識、常磁性標識／画像化剤（例えば、磁気共鳴画像法におけるガドリニウム含有標識）、超音波標識、及びそれらの組み合わせの、１つまたは複数のペイロード分子を含み得る。
【０４５２】
一部の実施形態では、コンジュゲート部分は、放射性同位体であるかまたはそれを含む、標識を含む。放射性同位体または他の標識の例としては、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１ｌｎ、１３１Ｉｎ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、及び１５３Ｐｂが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５３】
ＩＩ．Ｔ細胞ＭＭＰポリペプチドの生成方法
本開示は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較してより低い親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含むＴ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを含めた、Ｔ細胞ＭＭＰ及びＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法を提供し、該方法は、
Ａ）Ｔ細胞ＭＭＰの第１及び第２のポリペプチドをコードする核酸を細胞または無細胞系に導入することによって、Ｔ細胞ＭＭＰを生成することであって、各メンバーが、
ａ）ｉ）第１のＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、β２Ｍポリペプチド）を含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド）、及びｉｉ）任意選択でＩｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のポリペプチドが、第１の化学コンジュゲーション部位を含み、及び／または第２のポリペプチドが、第２の化学コンジュゲーション部位を含み、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドのうちの少なくとも一方が、独立して選択される１つまたは複数のＭＯＤ（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれよりも多くの野生型及び／またはバリアントＭＯＤ）を含む、該生成することと、
Ｂ）第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを接触させて（同じ細胞または無細胞系において共発現される場合、該ポリペプチドは、翻訳されると同時に接触し得る）、Ｔ細胞ＭＭＰを形成させることと、を含み、
Ｔ細胞ＭＭＰが１つまたは複数の新生の（例えば、活性化されていない）化学コンジュゲーション部位を含む場合、該新生の化学コンジュゲーション部位は、任意選択で、第１及び／または第２の化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰを生産するように活性化され得る（例えば、Ｔ細胞ＭＭＰを発現する細胞がホルミルグリシン生成酵素を発現しない場合、スルファターゼモチーフをホルミルグリシン生成酵素と反応させること）。
該方法はこの時点で停止され、Ｔ細胞ＭＭＰが精製によって得られてもよい。代替として、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートが所望される場合、該方法は、以下のステップで継続されてもよい。
Ｃ）第１及び／または第２の化学コンジュゲーション部位とのコンジュゲーションに好適なエピトープ（例えば、エピトープペプチド）（例えば、スルファターゼモチーフのホルミルグリシンとの反応用のヒドラジニルまたはヒドラジニルインドール修飾ペプチド）を用意し、該エピトープをＴ細胞ＭＭＰに（例えば、好適な反応条件下で）接触させて、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートを生産すること。
【０４５４】
Ｔ細胞ＭＭＰがペイロード（例えば、小分子薬物、放射標識等）を含有することが望ましい場合、上述のようなエピトープコンジュゲートの代わりにペイロードがＴ細胞ＭＭＰと反応させられてもよい。Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートがペイロードを含有することが望ましい場合、ペイロードは、エピトープがその化学反応部位（複数可）に接触させられて、それと反応させられる前、またはその後のいずれかで、化学コンジュゲーション部位（複数可）と反応させられてもよい。異なるコンジュゲーション部位（例えば、第１及び第２の化学コンジュゲーション部位）に対するエピトープ及びペイロードの選択性は、コンジュゲーション反応における直交型の化学反応の使用及び／または化学量論組成の制御により制御されてもよい。複数の実施形態では、リンカー（例えば、ポリペプチドまたは他の二官能性化学リンカー）を用いて、エピトープ及び／またはペイロードをそれらのコンジュゲーション部位に結合させてもよい。
【０４５５】
本開示は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較してより低い親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含む、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートの獲得方法を提供し、該方法は、
Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートのライブラリを生成することであって、各メンバーが、ａ）ｉ）エピトープ、及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド（例えば、β２Ｍポリペプチド）を含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド）、及びｉｉ）任意選択でＩｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドと、を含み、各メンバーが、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１及び第２のポリペプチド上の両方に、異なるバリアントＭＯＤを含む、該生成することと、
Ｂ）ライブラリの各メンバーの、同種ＭＯＤに対する親和性を決定することと、
Ｃ）同種ＭＯＤに対して低減された親和性を呈するライブラリメンバーを選択することと、を含む。
一部の実例では、親和性は、精製したＴ細胞ＭＭＰライブラリメンバー及び同種ＭＯＤを用いて、ＢＬＩによって決定される。ＢＬＩ法は当業者に周知である。ＢＬＩアッセイは上述される。例えば、Ｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８−５０７、及びＳｈａｈ  ａｎｄ  Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照されたい。
【０４５６】
本開示は、Ｔ細胞に対して選択的結合を呈するＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法を提供し、該方法は、
Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリを生成することであって、各メンバーが、
ａ）ｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）任意選択で免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドと、を含み、
各メンバーが、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１及び第２のポリペプチド上の両方に、異なるバリアントＭＯＤを含み、該バリアントＭＯＤが、アミノ酸配列において、野生型親ＭＯＤから１ａａ〜１０ａａだけ異なり、
Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーが、エピトープタグまたは蛍光標識をさらに含み）、
第１または第２のポリペプチドのうちの１つが、直接、またはリンカーを通して間接的のいずれかで、化学コンジュゲーション部位を通して第１及び／または第２のポリペプチドに共有結合されたエピトープを含む、該生成することと、
Ｂ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、その表面上に、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）該エピトープに結合するＴＣＲ、を発現する標的Ｔ細胞に接触させることと、
Ｃ）Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートがエピトープタグを含む場合、標的Ｔ細胞に結合したＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、エピトープタグに結合する蛍光標識した結合剤に接触させ（これは、蛍光標識したＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートを用いる場合は不必要である）、ライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体を生成することと、
Ｄ）フローサイトメトリーを用いて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することであって、様々な濃度のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーにわたって測定されたＭＦＩが、親和性及び見かけの結合活性の尺度を提供する、該測定することと、
Ｅ）ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰライブラリメンバーに存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴＣＲ、を含む対照Ｔ細胞への、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合するＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを選択することと、を含む。
一部の実例では、標的Ｔ細胞に選択的に結合するとして識別されるＴ細胞ＭＭＰライブラリメンバーが、ライブラリから単離される。一部の実例では、野生型親ＭＯＤと同種ＭＯＤとの対は、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＦａｓＬとＦａｓ、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、ＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、及びＣＤ８６とＣＴＬＡ４から選択される。
【０４５７】
本開示は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法を提供し、該方法は、複数のメンバーを含むＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリから、同種ＭＯＤに対して低減された親和性を呈するメンバーを選択することを含み、該複数のメンバーの各々は、ａ）ｉ）化学コンジュゲーション部位に共有結合されたエピトープ、及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）任意選択でＩｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドと、を含み、該ライブラリのメンバーは、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１及び第２のポリペプチドの両方に存在する複数のバリアントＭＯＤを含む。一部の実例では、該選択ステップは、ＢＬＩを用いて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーと同種ＭＯＤとの間の結合の親和性を決定することを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、上述の通りである。
【０４５８】
一部の実例では、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法は、ａ）選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、その表面上に、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）該エピトープに結合するＴＣＲ、を発現する標的Ｔ細胞に接触させて（ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーは、エピトープタグを含む）、それによりＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーが標的Ｔ細胞に結合するようにすることと、ｂ）標的Ｔ細胞に結合した選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、エピトープタグに結合する蛍光標識した結合剤に接触させて、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体を生成することと、ｃ）フローサイトメトリーを用いて、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体のＭＦＩを測定することであって、様々な濃度の選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーにわたって測定されたＭＦＩが、親和性及び見かけの結合活性の尺度を提供する、該測定することと、をさらに含む。ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーに存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴＣＲ、を含む対照Ｔ細胞への、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合する選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーが、標的Ｔ細胞に選択的に結合するとして識別される。一部の実例では、結合剤は、エピトープタグに特異的な抗体である。一部の実例では、バリアントＭＯＤは、対応する野生型親ＭＯＤと比較して、１〜２０個のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸置換）を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、２つのバリアントＭＯＤを含む。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、同じアミノ酸配列を含む。一部の実例では、第１のポリペプチドは、該２つのバリアントＭＯＤのうちの一方を含み、第２のポリペプチドは、該２つのバリアントＭＯＤのうちの第２のバリアントＭＯＤを含む。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの同じポリペプチド鎖上にある。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第１のポリペプチド上にある。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第２のポリペプチド上にある。
【０４５９】
一部の実例では、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法は、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーをライブラリから単離することをさらに含む。一部の実例では、該方法は、選択されたライブラリメンバーを調製するために使用される、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を用意することをさらに含む。一部の実例では、該核酸は、組換え発現ベクターに存在する。一部の実例では、該ヌクレオチド配列は、真核細胞において機能性である転写制御要素に作動可能に連結されている。一部の実例では、該方法は、該核酸を真核宿主細胞に導入することと、細胞を液体培地中で培養して、細胞において少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有するコードされたＴ細胞ＭＭＰを合成することと、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有する合成されたＴ細胞ＭＭＰを細胞から、または液体培養基から単離することと、それを少なくとも１つのエピトープにコンジュゲートして、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成させることと、をさらに含む。一部の実例では、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有する選択されたＴ細胞ＭＭＰは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。一部の実例では、該方法は、薬物をＩｇ  Ｆｃポリペプチドにコンジュゲートすることをさらに含む。一部の実例では、薬物は、マイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トメイマイシン、及びレプトマイシン、または前述のもののうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害性薬剤である。一部の実例では、薬物は、レチノイドである。一部の実例では、野生型親ＭＯＤと同種ＭＯＤは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＦａｓＬとＦａｓ、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＦａｓＬとＦａｓ、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、及びＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、及びＣＤ８６とＣＴＬＡ４から選択される。
【０４６０】
本開示は、同種ＭＯＤに対して、対応する野生型親ＭＯＤの同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの獲得方法を提供し、該方法は、Ａ）複数のメンバーを含むＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリを用意することであって、該複数のメンバーが、ａ）ｉ）化学コンジュゲーション部位で共有結合されたエピトープ、及びｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｉ）任意選択でＩｇ  Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場を含む、第２のポリペプチドと、を含み、該ライブラリのメンバーが、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１及び第２のポリペプチドの両方に存在する複数のバリアントＭＯＤを含む、該用意することと、Ｂ）該ライブラリから、同種ＭＯＤに対して低減された親和性を呈するメンバーを選択することと、を含む。一部の実例では、該選択ステップは、ＢＬＩを用いて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーと同種ＭＯＤとの間の結合の親和性を決定することを含む。一部の実例では、該選択ステップは、ＢＬＩを用いて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーと同種ＭＯＤとの間の結合の親和性を決定することを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、上述の通りである。
【０４６１】
一部の実例では、該方法は、ａ）選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、その表面上に、ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）該エピトープに結合するＴ細胞受容体、を発現する標的Ｔ細胞に接触させて（ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーは、エピトープタグを含む）、それによりＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーが標的Ｔ細胞に結合するようにすることと、ｂ）標的Ｔ細胞に結合した選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーを、エピトープタグに結合する蛍光標識した結合剤に接触させて、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体を生成することと、ｃ）フローサイトメトリーを用いて、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバー／標的Ｔ細胞／結合剤複合体のＭＦＩを測定することであって、様々な濃度の選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーにわたって測定されたＭＦＩが、親和性及び見かけの結合活性の尺度を提供する、該測定することと、をさらに含む。ｉ）野生型親ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーに存在するエピトープ以外のエピトープに結合するＴ細胞受容体、を含む対照Ｔ細胞への、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーの結合と比較して、標的Ｔ細胞に選択的に結合する選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーが、標的Ｔ細胞に選択的に結合するとして識別される。一部の実例では、結合剤は、エピトープタグに特異的な抗体である。一部の実例では、バリアントＭＯＤは、対応する野生型親ＭＯＤと比較して、１〜２０個のアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアミノ酸置換）を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、２つのバリアントＭＯＤを含む。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、同じアミノ酸配列を含む。一部の実例では、第１のポリペプチドは、該２つのバリアントＭＯＤのうちの一方を含み、第２のポリペプチドは、該２つのバリアントＭＯＤのうちの第２のバリアントＭＯＤを含む。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの同じポリペプチド鎖上にある。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第１のポリペプチド上にある。一部の実例では、該２つのバリアントＭＯＤは、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第２のポリペプチド上にある。
【０４６２】
一部の実例では、該方法は、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのライブラリメンバーをライブラリから単離することをさらに含む。一部の実例では、該方法は、選択されたライブラリメンバーを調製するために使用される、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を用意することをさらに含む。一部の実例では、該核酸は、組換え発現ベクターに存在する。一部の実例では、該ヌクレオチド配列は、真核細胞において機能性である転写制御要素に作動可能に連結されている。一部の実例では、該方法は、該核酸を真核宿主細胞に導入することと、細胞を液体培地中で培養して、細胞において少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有するコードされたＴ細胞ＭＭＰを合成することと、少なくとも１つの化学コンジュゲーション部位を有する合成された選択されたＴ細胞ＭＭＰを細胞から、または液体培養基から単離することと、それを少なくとも１つのエピトープにコンジュゲートして、選択されたＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成させることと、をさらに含む。一部の実例では、選択されたＴ細胞ＭＭＰライブラリメンバーは、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。一部の実例では、該方法は、薬物をＩｇ  Ｆｃポリペプチドにコンジュゲートすることをさらに含む。一部の実例では、薬物は、マイタンシノイド、ベンゾジアゼピン、タキソイド、ＣＣ−１０６５、デュオカルマイシン、デュオカルマイシン類似体、カリケアマイシン、ドラスタチン、ドラスタチン類似体、アウリスタチン、トメイマイシン、及びレプトマイシン、または前述のもののうちのいずれか１つのプロドラッグから選択される細胞傷害性薬剤である。一部の実例では、薬物は、レチノイドである。一部の実例では、野生型親ＭＯＤと同種ＭＯＤは、ＩＬ−２とＩＬ−２受容体、４−１ＢＢＬと４−１ＢＢ、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、ＦａｓＬとＦａｓ、ＴＧＦβとＴＧＦβ受容体、ＣＤ７０とＣＤ２７、ＣＤ８０とＣＤ２８、ＣＤ８６とＣＤ２８、ＯＸ４０ＬとＯＸ４０、ＦａｓＬとＦａｓ、ＩＣＯＳ−ＬとＩＣＯＳ、ＩＣＡＭとＬＦＡ−１、及びＪＡＧ１とＮｏｔｃｈ、ＪＡＧ１とＣＤ４６、ＣＤ８０とＣＴＬＡ４、及びＣＤ８６とＣＴＬＡ４から選択される。
【０４６３】
ＩＩＩ．核酸
本開示は、本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰのポリペプチドに導入操作される化学コンジュゲーション部位を含む本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。
【０４６４】
本開示は、本明細書に記載されるＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の核酸においてコードされる。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰの全てのポリペプチド鎖が、単一核酸においてコードされる。一部の実例では、第１の核酸が、本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸が、本開示のＴ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実例では、単一核酸が、本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び本開示のＴ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０４６５】
ＩＩＩ．Ａ．多量体ポリペプチドの個々のポリペプチド鎖をコードする別個の核酸
本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。上述のように、一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の核酸においてコードされる。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの別個のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素、例えば、真核細胞において機能性であるプロモーター等のプロモーターに作動可能に連結され、このプロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。
【０４６６】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、該第１の核酸は、本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該第１のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第１のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）ＭＯＤ（例えば、上述のような親和性低減バリアントＭＯＤポリペプチド）を含み、該第２の核酸は、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｂ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。好適なエピトープ、ＭＨＣポリペプチド、ＭＯＤ、及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドは上述される。第１及び第２のポリペプチドのうちの少なくとも一方は、化学コンジュゲーション部位（または化学コンジュゲーション部位に変換され得る新生の部位）を含む。一部の実例では、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結されている。一部の実例では、転写制御要素は、真核細胞において機能性であるプロモーターである。一部の実例では、該核酸は、別個の発現ベクターに存在する。
【０４６７】
本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、該第１の核酸は、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該第１のポリペプチドが第１のＭＨＣポリペプチドを含み、該第２の核酸は、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、該第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、ａ）ＭＯＤ（例えば、上述のような親和性低減バリアントＭＯＤポリペプチド）、ｂ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｃ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む。好適なＭＨＣポリペプチド、ＭＯＤ、及びＩｇ  Ｆｃポリペプチドは上述される。第１及び第２のポリペプチドのうちの少なくとも一方は、化学コンジュゲーション部位を含む。一部の実例では、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結されている。一部の実例では、転写制御要素は、真核細胞において機能性であるプロモーターである。一部の実例では、該核酸は、別個の発現ベクターに存在する。
【０４６８】
ＩＩＩ．Ｂ．Ｔ細胞ＭＭＰに存在する２つ以上のポリペプチドをコードする核酸
本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰの少なくとも第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰが第１、第２、及び第３のポリペプチドを含む場合、核酸は、第１、第２、及び第３のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に介在する、タンパク質分解によって切断可能なリンカーを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に介在する、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と、第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に介在する、リボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性ヒドロラーゼ要素、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。タンパク質分解によって切断可能なリンカーがＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするそれぞれのヌクレオチド配列の間に提供される、核酸の例が下記に記載される。これらの実施形態のうちのいずれにおいても、タンパク質分解によって切断可能なリンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルが使用され得る。
【０４６９】
本明細書で提供される一部の実例では、第１の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ等）は、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ等）は、Ｔ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実例では、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、及び第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列は各々、転写制御要素、例えば、真核細胞において機能性であるプロモーター等のプロモーターに作動可能に連結され、このプロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。
【０４７０】
本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、該組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、下記の要素、ａ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｂ）ＭＯＤ（例えば、上述のような親和性低減バリアント）、ｃ）タンパク質分解によって切断可能なリンカー、ｄ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｅ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド、を含み、該要素のうちの少なくとも１つが、細胞プロセス中に除去されない化学コンジュゲーション部位を含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、該組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、下記の要素、ａ）第１のリーダーペプチド、ｂ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｃ）ＭＯＤ（例えば、上述のような親和性低減バリアント）、ｄ）タンパク質分解によって切断可能なリンカー、ｅ）第２のリーダーペプチド、ｆ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｇ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、を含み、該要素のうちの少なくとも１つが、細胞プロセス中に除去されない化学コンジュゲーション部位を含む。本開示は、組換えポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供し、該組換えポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端の順に、下記の要素、ａ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｂ）タンパク質分解によって切断可能なリンカー、ｃ）ＭＯＤ（例えば、上述のような親和性低減バリアント）、ｄ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｅ）Ｉｇ  Ｆｃポリペプチド、を含み、該要素のうちの少なくとも１つが、細胞プロセス中に除去されない化学コンジュゲーション部位を含む。一部の実例では、第１のリーダーペプチド及び第２のリーダーペプチドは、β２Ｍリーダーペプチドである。一部の実例では、ヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結されている。一部の実例では、転写制御要素は、真核細胞において機能性であるプロモーターである。
【０４７１】
好適なＭＨＣポリペプチドは上述される。一部の実例では、第１のＭＨＣポリペプチドは、β２−ミクログロブリンポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである。一部の実例では、β２−ミクログロブリンポリペプチドは、図４に図示されるβ２Ｍアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％（例えば、少なくとも（ａｔ  ｌｅａｓｅ）約９０％、９５％、９８％、９９％、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、またはＨＬＡ−Ｌ重鎖である。一部の実例では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａ〜３Ｄのうちのいずれか１つに図示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。かかる実施形態では、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、膜貫通アンカードメインを含まない場合がある（例えば、該重鎖ポリペプチドは、図３Ｄにある配列を含む）。
【０４７２】
好適なＦｃポリペプチドは上述される。一部の実例では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである。一部の実例では、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドは、図２Ａ〜２Ｇに図示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【０４７３】
好適な免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）は上述される。
【０４７４】
タンパク質分解によって切断可能な任意の他のリンカーに加えて、一部の実例では、タンパク質分解によって切断可能なリンカーは、ａ）ＬＥＶＬＦＱＧＰ（配列番号４０）、ｂ）ＥＮＬＹＴＱＳ（配列番号４１）、ｃ）ＤＤＤＤＫ（配列番号４２）、ｄ）ＬＶＰＲ（配列番号４３）、及びｅ）ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号４４）からなる群（ｒｏｕｐ）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０４７５】
一部の実例では、第１のＭＨＣポリペプチドに結合した第１のＣｙｓ残基を含むリンカーが提供され、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２の（操作された）Ｃｙｓ残基を提供するようなアミノ酸置換を含み、それにより、第１及び第２のＣｙｓ残基が、該リンカーと第２のＭＨＣポリペプチドとの間でジスルフィド結合による連結を提供する。一部の実例では、第１のＭＨＣポリペプチドは、第１の操作されたＣｙｓ残基を提供するようなアミノ酸置換を含み、第２のＭＨＣポリペプチドは、第２の操作されたＣｙｓ残基を提供するようなアミノ酸置換を含み、それにより、第１のＣｙｓ残基及び第２のＣｙｓ残基が、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドとの間でジスルフィド結合による連結を提供する。上記で考察されたように、ジスルフィド架橋が提供される場合、チオール反応性薬剤またはビス−チオールリンカーのいずれかを用いて、ペイロードまたはエピトープを組み込むことが可能である。
【０４７６】
ＩＩＩ．Ｃ．組換え発現ベクター
本開示は、本開示の核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。一部の実例では、組換え発現ベクターは、非ウイルスベクターである。一部の実施形態では、組換え発現ベクターは、ウイルス構築物、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス構築物（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照されたい）、組換えアデノウイルス構築物、組換えレンチウイルス構築物、組換えレトロウイルス構築物、非組み込みウイルスベクター等である。
【０４７７】
好適な発現ベクターには、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３５：２５４３  ２５４９，１９９４、Ｂｏｒｒａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ６：５１５  ５２４，１９９９、Ｌｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ  ９２：７７００  ７７０４，１９９５、Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ５：１０８８  １０９７，１９９９、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４、及びＷＯ９５／００６５５を参照されたい）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９：８１  ８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：６９１６  ６９２１，１９９７、Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３８：２８５７  ２８６３，１９９７、Ｊｏｍａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ４：６８３  ６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０：６４１  ６４８，１９９９、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  ５：５９１  ５９４，１９９６、ＷＯ  ９３／０９２３９におけるＳｒｉｖａｓｔａｖａ、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２−３８２８、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４−１６５、及びＦｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３−１０６１７を参照されたい）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９４：１０３１９  ２３，１９９７、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７３：７８１２  ７８１６，１９９９を参照されたい）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、及び乳腺腫瘍ウイルス等のレトロウイルスに由来するベクターに基づく、ウイルスベクター）等が含まれるが、これらに限定されない。
【０４７８】
多数の好適な発現ベクターが当業者に既知であり、多くが市販されている。以下のベクターは、真核宿主細胞に対する例として提供される。ｐＸＴ１、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、及びｐＳＶＬＳＶ４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。しかしながら、宿主細胞と適合性である限り、任意の他のベクターが使用され得る。
【０４７９】
利用される宿主／ベクター系に応じて、構成的プロモーター及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー要素、転写ターミネーター等を含めた、いくつかの好適な転写制御要素及び翻訳制御要素のうちのいずれも、発現ベクターにおいて使用され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０４８０】
一部の実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、制御要素、例えば、プロモーター等の転写制御要素に作動可能に連結されている。転写制御要素は、真核細胞、例えば、哺乳類細胞、または原核細胞（例えば、細菌または古細菌細胞）のいずれかにおいて機能性であり得る。一部の実施形態では、ＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、原核細胞及び真核細胞の両方においてＤＮＡ標的化ＲＮＡ及び／または部位特異的修飾ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を可能にする複数の制御要素に作動可能に連結されている。
【０４８１】
好適な真核生物プロモーター（真核細胞において機能的なプロモーター）の非限定的な例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、初期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来の長い末端反復配列（ＬＴＲ）、ならびにマウスメタロチオネイン−Ｉ由来のものが挙げられる。適切なベクター及びプロモーターの選択は、当該技術分野における通常の技術の水準内に十分にある。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位及び転写ターミネーターを含有してもよい。発現ベクターはまた、発現を増幅するための適切な配列を含んでもよい。
【０４８２】
Ｉｖ．宿主細胞
本開示は、遺伝子修飾された宿主細胞を提供し、該宿主細胞は、本開示の核酸により遺伝子修飾されている。
【０４８３】
好適な宿主細胞には、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞等の真核細胞が含まれる。一部の実例では、宿主細胞は、哺乳類細胞株の細胞である。好適な哺乳類細胞株には、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、齧歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株等が含まれる。好適な哺乳類細胞株には、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ−２（商標））、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−９６１８（商標）、ＣＣＬ−６１（商標）、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１５７３（商標））、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１６５８）、Ｈｕｈ−７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１０（商標））、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１７２１（商標））、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞等が含まれるが、これらに限定されない。
【０４８４】
一部の実例では、宿主細胞は、内在性ＭＨＣ  β２Ｍを合成しないように、及び／または内在性ＭＨＣクラスＩ重鎖（ＭＨＣ−Ｈ）を合成しないように遺伝子修飾された、哺乳類細胞である。前述のものに加えて、ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）活性を発現する宿主細胞が、スルファターゼモチーフを含むＴ細胞ＭＭＰとの使用に関して上記で考察され、かかる細胞は有利には、内在性ＭＨＣ  β２Ｍ及びＭＨＣ−Ｈタンパク質の、両方ではなくとも少なくとも一方を発現しないように修飾され得る。
【０４８５】
Ｖ．組成物
本開示は、１つまたは複数のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを含む、薬学的組成物を含めた組成物を提供する。本開示は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む、薬学的組成物を含めた組成物を提供する。
【０４８６】
Ｖ．Ａ．Ｔ細胞ＭＭＰを含む組成物
本開示の組成物は、本開示のＴ細胞ＭＭＰに加えて、下記のうちの１つまたは複数を含み得る。塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４等；緩衝剤、例えば、トリス緩衝液、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−トリス［ヒドロキシメチル］メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）等；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ−２０等といった非イオン性界面活性剤；プロテアーゼ阻害剤；グリセロール等。
【０４８７】
該組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含んでもよく、様々なそのような賦形剤が当該技術分野で既知であり、本明細書で詳細に考察される必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、様々な刊行物に十分に記載されており、これには例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ  Ｅｄ．（１９９５）、または最新版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃが含まれる。
【０４８８】
薬学的組成物は、本開示のＴ細胞ＭＭＰと、薬学的に許容される賦形剤とを含み得る。一部の実例では、対象となる薬学的組成物は、対象への投与に好適であり、例えば、滅菌されていよう。例えば、一部の実施形態では、対象となる薬学的組成物は、ヒト対象への投与に好適であり、例えば、該組成物は、滅菌されており、かつ検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まない。
【０４８９】
該タンパク質組成物は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、スクロース、マグネシウム、カーボネート等といった他の構成要素を含んでもよい。該組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤等といった、生理条件に近似させるために必要とされるような薬学的に許容される補助的物質、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、塩酸塩、硫酸塩、溶媒和物（例えば、混合イオン性塩、水、有機物）、水和物（例えば、水）等を含有してもよい。
【０４９０】
例えば、組成物は、水性液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル剤、懸濁剤、スプレー剤等を含み（例えば、その形態であり）得る。該組成物は、下記に記載される種々の投与経路に従って製剤化されてもよい。
【０４９１】
本開示のＴ細胞ＭＭＰが、注射剤（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、及び／または静脈内）として組織内に直接投与される場合、製剤は、即時使用可能な（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）剤形、非水性形態（例えば、再構成可能な貯蔵安定性粉末）、または薬学的に許容される担体及び賦形剤から構成される液体等の水性形態として提供され得る。該タンパク質含有製剤はまた、投与後に対象となるタンパク質の血清半減期を向上させるように提供され得る。例えば、該タンパク質は、リポソーム製剤中で、コロイドとして調製されて、または血清半減期を延長するための他の従来技法により、提供され得る。例えば、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．１９８０  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号、及び同第４，８３７，０２８号に記載されるような、様々な方法が、リポソームを調製するために利用可能である。調製物はまた、制御放出または緩徐放出形態で提供されてもよい。
【０４９２】
非経口投与に好適な製剤の他の例としては、等張滅菌注射液、酸化防止剤、静菌剤、及び製剤を意図されるレシピエントの血液と等張性にする溶質、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤が挙げられる。例えば、対象となる薬学的組成物は、容器、例えば、シリンジ等の滅菌容器中に存在し得る。製剤は、アンプル及びバイアル等の単位用量または複数用量の密封容器中で提示され得、注射のために、使用直前に滅菌液体賦形剤、例えば、水の添加のみを必要とする、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））状態で貯蔵され得る。即座の注射液及び懸濁液が、滅菌散剤、顆粒剤、及び錠剤から調製され得る。
【０４９３】
製剤中のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの濃度は、広く異なり得（例えば、重量に基づき、約０．１％未満、通常は約２％または少なくとも約２％から最大２０％〜５０％以上まで）、通常は、主として流体の体積、粘度、ならびに選択される特定の投与様式及び患者の必要性に従った患者に基づく要因に基づいて、選択されよう。
【０４９４】
本開示は、本開示の組成物、例えば、液体組成物を含む容器を提供する。容器は、例えば、シリンジ、アンプル等であり得る。一部の実例では、容器は滅菌されている。一部の実例では、容器及び組成物の両方が滅菌されている。
【０４９５】
本開示は、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートを含む、薬学的組成物を含めた組成物を提供する。組成物は、ａ）Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、ｂ）Ｔ細胞ＭＭＰ及びそれらのエピトープコンジュゲートに関して上述したような賦形剤と、を含み得る。一部の実例では、賦形剤は、薬学的に許容される賦形剤である。
【０４９６】
一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、液体組成物中に存在する。故に、本開示は、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを含む組成物（例えば、薬学的組成物を含めた、液体組成物）を提供する。一部の実例では、本開示の組成物は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、ｂ）食塩水（例えば、０．９％または約０．９％ＮａＣｌ）と、を含む。一部の実例では、該組成物は、滅菌されている。一部の実例では、該組成物は、ヒト対象への投与に好適であり、例えば、該組成物は、滅菌されており、かつ検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まない。故に、本開示は、ａ）Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、ｂ）食塩水（例えば、０．９％または約０．９％ＮａＣｌ）と、を含む組成物を提供し、該組成物は、滅菌されており、かつ検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まない。
【０４９７】
ＶＩ．核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む、組成物、例えば、薬学的組成物を提供する。多種多様な薬学的に許容される賦形剤が当該技術分野で既知であり、本明細書で詳細に考察される必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、様々な刊行物に十分に記載されており、これには例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、及びＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ  ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃが含まれる。
【０４９８】
本開示の組成物は、ａ）Ｔ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つもしくは複数の核酸または１つもしくは複数の組換え発現ベクターと、ｂ）緩衝液、界面活性剤、酸化防止剤、親水性ポリマー、デキストリン、キレート剤、懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、静菌剤、湿潤剤、及び防腐剤のうちの１つまたは複数と、を含むことができる。好適な緩衝液には、（例えば）Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ−トリス（ヒドロキシメチル）メタン（ビス−トリス）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’３−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳまたはＨＥＰＰＳ）、グリシルグリシン、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタン−スルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、重炭酸ナトリウム、３−（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）−メチル−アミノ）−２−ヒドロキシ−プロパンスルホン酸）ＴＡＰＳＯ、（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−グリシン（トリシン）、トリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン（トリス）等）が含まれるが、これらに限定されない。好適な塩には、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４等が含まれる。
【０４９９】
本開示の薬学的製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを約０．００１％〜約９０％（ｗ／ｗ）の量で含むことができる。下記の製剤の説明において、「対象となる核酸または組換え発現ベクター」とは、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含むことが理解されよう。例えば、一部の実施形態では、対象となる製剤は、本開示の核酸または組換え発現ベクターを含む。
【０５００】
対象となる核酸または組換え発現ベクターは、他の化合物または化合物の混合物と混和、カプセル封入、コンジュゲートされ得るか、または別様に会合され得、かかる化合物は、例えば、リポソームまたは受容体標的分子を含むことができる。対象となる核酸または組換え発現ベクターは、製剤中で、取り込み、分布、及び／または吸収を補助する１つまたは複数の構成要素と組み合わせることができる。
【０５０１】
対象となる核酸または組換え発現ベクター組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐剤、及び浣腸剤等の、多くの可能な剤形のうちのいずれかへと製剤化され得る。対象となる核酸または組換え発現ベクター組成物はまた、水性、非水性、または混合媒体中の懸濁剤としても製剤化され得る。水性懸濁剤は、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、及び／またはデキストランを含めた、懸濁剤の粘度を増加させる物質をさらに含有してもよい。懸濁剤はまた、安定剤を含有してもよい。
【０５０２】
対象となる核酸または組換え発現ベクターを含む製剤は、リポソーム製剤であり得る。本明細書で使用されるとき、「リポソーム」という用語は、１つまたは複数の球状の二重層に配列された両親媒性脂質から構成される小胞を意味する。リポソームは、親油性材料と、送達対象の組成物を含有する水性の内部とから形成される膜を有する、単層膜または多層膜小胞である。カチオン性リポソームは、負電荷をもつＤＮＡ分子と相互作用して安定な複合体を形成し得る、正電荷をもつリポソームである。ｐＨ感受性であるまたは負電荷をもつリポソームは、ＤＮＡと複合体を形成するのではなく、ＤＮＡを封入すると考えられる。カチオン性リポソーム及び非カチオン性リポソームの両方が、対象となる核酸または組換え発現ベクターを送達するために使用され得る。
【０５０３】
リポソームにはまた、「立体的に安定化された」リポソームも含まれ、この用語は、本明細書で使用されるとき、１つまたは複数の特殊化された脂質を含むリポソームを指し、この特殊化された脂質は、リポソームに組み込まれるとき、かかる特殊化された脂質を欠いたリポソームと比べて向上した循環寿命をもたらす。立体的に安定化されたリポソームの例としては、リポソームの小胞を形成する脂質部分の一部が１つまたは複数の糖脂質を含むか、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分等の１つもしくは複数の親水性ポリマーで誘導体化されている、リポソームがある。リポソーム及びそれらの使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載され、同特許は参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０５０４】
本開示の製剤及び組成物はまた、界面活性剤を含んでもよい。医薬品、製剤、及びエマルション中の界面活性剤の使用は、当該技術分野で周知である。界面活性剤及びそれらの使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載される。
【０５０５】
一実施形態では、核酸の効率的な送達をもたらすために、種々の透過促進剤が含められる。細胞膜を通した非親油性薬物の拡散を補助することに加えて、透過促進剤はまた、親油性薬物の透過性も向上させる。透過促進剤は、５つの大区分、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート剤、及び非キレート性非界面活性剤のうちの１つに属するものとして分類され得る。透過促進剤及びそれらの使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載され、同特許は参照によりその全体が本明細書に援用される。
【０５０６】
経口投与用の組成物及び製剤には、散剤もしくは顆粒剤、微粒子、ナノ粒子、水中もしくは非水性媒体中の懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、小袋、錠剤、または小さな錠剤（ｍｉｎｉｔａｂｌｅｔｓ）が含まれる。増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、または結合剤が望ましい場合がある。好適な経口製剤には、対象となるアンチセンス核酸が１つまたは複数の透過促進剤、界面活性剤、及びキレート剤と併せて投与されるものが含まれる。好適な界面活性剤には、脂肪酸及び／またはそのエステルもしくは塩、胆汁酸及び／またはその塩が含まれるが、これらに限定されない。好適な胆汁酸／塩及び脂肪酸ならびにそれらの使用は、米国特許第６，２８７，８６０号にさらに記載される。また、透過促進剤の組み合わせ、例えば、胆汁酸／塩と組み合わせた脂肪酸／塩も好適である。例となる好適な組み合わせは、ラウリン酸、カプリン酸、及びＵＤＣＡのナトリウム塩である。さらなる透過促進剤には、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、及びポリオキシエチレン−２０−セチルエーテルが含まれるが、これらに限定されない。好適な透過促進剤にはまた、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、トリエタノールアミン（ｔｒｉｅｔｈａｎｏｉａｍｉｎｅ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−ピロリドン及びその誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコール、ならびにＡＺＯＮＥ（商標）も含まれる。
【０５０７】
ＶＩＩ  Ｔ細胞活性の調節方法
Ｔ細胞ＭＭＰ上のＭＯＤ、ならびに一部の事例では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが担持している場合があるペイロード。エピトープを欠いたＴ細胞ＭＭＰを用いて、ペイロードを、ＭＯＤによって定義されるＴ細胞のクラスに、及び／またはＴ細胞のこれらのクラスを刺激するかもしく阻害する手段として、送達してもよい。他の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰがエピトープにコンジュゲートされた場合（すなわち、それはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートである）、このコンジュゲートをＴ細胞に接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の調節がもたらされる。一部の実例では、接触は、インビボで（例えば、ヒト、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、または霊長類等の哺乳動物において）起こる。一部の実例では、接触は、インビトロで起こる。一部の実例では、接触は、エクスビボで起こる。
【０５０８】
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節方法を提供し、該方法は、Ｔ細胞を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることを含み、ここで、Ｔ細胞を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性が選択的に調節される。一部の実例では、接触は、インビトロで起こる。一部の実例では、接触は、インビボで起こる。一部の実例では、接触は、エクスビボで起こる。
【０５０９】
一部の実例では、例えば、標的Ｔ細胞がＣＤ８＋  Ｔ細胞である場合、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、ＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、β２−ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖）を含む。
【０５１０】
本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、活性化型ポリペプチドであるＭＯＤを含む場合、Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞が活性化される。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、がん細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、がん細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性が増加する。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、がん細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数が増加する。
【０５１１】
一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性が増加する。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数が増加する。
【０５１２】
本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、阻害型ポリペプチドであるＭＯＤを含む場合、Ｔ細胞を該多量体に接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞が阻害される。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、自己抗原に存在するエピトープに特異的である自己反応性Ｔ細胞であり、この接触により、自己反応性Ｔ細胞の数が低減される。
【０５１３】
ＶＩＩＩ  共刺激ポリペプチド（ＭＯＤ）の選択的送達方法
本開示は、ＭＯＤまたは天然型ＭＯＤの親和性低減バリアント（本明細書に開示されるバリアント等）の、例えば、所与のエピトープに特異的なＴＣＲが標的化されるような様態での、選択されたＴ細胞または選択されたＴ細胞集団への送達方法を提供する。本開示は、ＭＯＤまたは本明細書に開示される天然型ＭＯＤの親和性低減バリアントの、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的なＴＣＲをもつ標的Ｔ細胞への選択的な送達方法を提供する。該方法は、Ｔ細胞の集団を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることを含む。Ｔ細胞の集団は、ｉ）標的Ｔ細胞と、ｉｉ）該エピトープに特異的でない非標的Ｔ細胞（例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞が結合するエピトープ以外のエピトープ（複数可）に特異的であるＴ細胞）と、を含む混合集団であり得る。エピトープ特異的Ｔ細胞は、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在するエピトープ提示ペプチドに特異的であり、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートによって提供されるペプチドＨＬＡ複合体またはペプチドＭＨＣ複合体に結合する。したがって、Ｔ細胞の集団をＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに接触させることにより、共刺激ポリペプチド（例えば、野生型ＭＯＤまたは本明細書に記載されるような野生型ＭＯＤの親和性低減バリアント）が、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的であるＴ細胞（複数可）に選択的に送達される。
【０５１４】
故に、本開示は、ＭＯＤ（ＩＬ−２等）、もしくは本明細書に開示される天然型ＭＯＤの親和性低減バリアント（ＩＬ−２バリアント等）、または両方の組み合わせの、標的Ｔ細胞への選択的な送達方法を提供し、該方法は、Ｔ細胞の混合集団を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることを含む。Ｔ細胞の混合集団は、標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含む。標的Ｔ細胞は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート内に存在するエピトープに特異的である。Ｔ細胞の混合集団を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート内に存在するＭＯＤ（複数可）が標的Ｔ細胞に送達される。
【０５１５】
例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートは、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的である標的Ｔ細胞（複数可）と、ｉｉ）非標的Ｔ細胞（複数可）、例えば、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープではない第２のエピトープ（複数可）に特異的であるＴ細胞（複数可）と、を含むＴ細胞の集団に接触させられる。該集団の接触により、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤ（複数可）（例えば、天然型ＭＯＤ（例えば、天然型ＩＬ−２）または天然型ＭＯＤの親和性低減バリアント（例えば、本明細書に開示されるＩＬ−２バリアント））の、標的Ｔ細胞への選択的送達がもたらされる。故に、例えば、非標的Ｔ細胞の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または４％、３％、２％、もしくは１％未満が、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに結合し、結果として、共刺激ポリペプチド（例えば、ＩＬ−２またはＩＬ−２バリアント）は、非標的Ｔ細胞には送達されない。別の例として、該集団の接触により、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在する共刺激ポリペプチド（複数可）（例えば、天然型共刺激ポリペプチド（例えば、天然型４−１ＢＢＬ）または天然型共刺激ポリペプチドの親和性低減バリアント（例えば、本明細書に開示される４−１ＢＢＬバリアント））の、標的Ｔ細胞への選択的送達がもたらされる。故に、例えば、非標的Ｔ細胞の５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または４％、３％、２％、もしくは１％未満が、Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに結合し、結果として、共刺激ポリペプチド（例えば、４−１ＢＢＬまたは４−１ＢＢＬバリアント）は、非標的Ｔ細胞には送達されない。
【０５１６】
一部の実例では、Ｔ細胞の集団は、インビトロにある。一部の実例では、Ｔ細胞の集団は、インビトロにあり、標的Ｔ細胞集団の、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに対する生物学的応答（例えば、Ｔ細胞の活性化及び／または増大及び／または表現型分化）が、インビトロ培養物の関連において誘発される。例えば、Ｔ細胞の混合集団を個体から得ることができ、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートにインビトロで接触させることができる。かかる接触は、Ｔ細胞の集団の、規定の用量（複数可）及び／または曝露スケジュール（複数可）への単回または複数回の曝露を含み得る。一部の実例では、該接触は、Ｔ細胞の集団内での標的Ｔ細胞の選択的結合／活性化及び／または増大をもたらし、活性化した及び／または増大した標的Ｔ細胞の集団の生成をもたらす。例として、Ｔ細胞の混合集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であり得る。例えば、患者由来のＰＢＭＣを標準的な採血及びＰＢＭＣ濃縮技法から得、その後、標準的なリンパ球培養条件下で０．１〜１０００ｎＭの本開示の多量体ポリペプチドに曝露することができる。規定の用量及びスケジュールでの混合Ｔ細胞集団の曝露の前、その最中、及びその後の時点で、インビトロ培養物中の標的Ｔ細胞の存在量を、特異的ペプチド−ＭＨＣ多量体及び／または表現型マーカー及び／または機能活性（例えば、サイトカインＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）によって監視することができる。一部の実例では、インビトロで抗原特異的細胞の最適な存在量及び／または表現型が達成されると、活性化した及び／または増大した標的Ｔ細胞の集団の全てまたは一部分が、個体（Ｔ細胞の混合集団が得られた個体）に投与される。
【０５１７】
一部の実例では、Ｔ細胞の集団は、インビトロにある。例えば、Ｔ細胞の混合集団を個体から得、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートにインビトロで接触させる。インビトロ細胞培養の関連における、Ｔ細胞の、規定の用量（複数可）及び／または曝露スケジュール（複数可）への単回または複数回の曝露を含み得る、かかる接触を用いて、Ｔ細胞の混合集団が、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートによって提示されるエピトープに特異的であるＴ細胞を含むかどうかを決定することができる。Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのエピトープに特異的であるＴ細胞の存在は、Ｔ細胞の混合集団を含む試料をアッセイすることによって決定することができ、そのようなＴ細胞の集団は、該エピトープに特異的でないＴ細胞（非標的Ｔ細胞）を含み、また該エピトープに特異的であるＴ細胞（標的Ｔ細胞）を含んでもよい。既知のアッセイを用いて、標的Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を検出し、それによって、特定のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、当該個体に存在するＴ細胞に結合するエピトープを保有するかどうか、故に、該Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、その個体にとって治療組成物として有用な可能性を有するかどうかを決定することが可能な、エクスビボアッセイを提供することができる。標的Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を検出するのに好適な既知のアッセイには、例えば、フローサイトメトリーによるＴ細胞の表現型及び／または抗原特異性及び／または増殖の特性評価が含まれる。エピトープ特異的Ｔ細胞の存在を検出するためのかかるアッセイ、例えば、コンパニオン診断は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが標的Ｔ細胞に選択的に結合する／それを活性化させる及び／または増大させるかどうかを決定するための、追加的なアッセイ（例えば、エフェクターサイトカインＥＬＩＳｐｏｔアッセイ）及び／または適切な対照（例えば、抗原特異的及び抗原非特異的多量体ペプチド−ＨＬＡを染色する試薬）をさらに含み得る。故に、例えば、本開示は、個体から得られたＴ細胞の混合集団における、目的とするエピトープに結合する標的Ｔ細胞の存在の検出方法を提供し、該方法は、ａ）インビトロＴ細胞の混合集団を本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることと（ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、目的とするエピトープを含む）、ｂ）該接触に応答したＴ細胞の活性化及び／または増殖を検出することと（ここで、活性化した及び／または増殖したＴ細胞は、標的Ｔ細胞の存在を示す）、を含む。代替として、及び／または加えて、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを用いて、所望のＴ細胞集団の活性化及び／または増大（増殖）が得られる場合、活性化した／増大したＴ細胞を含むＴ細胞の集団の全てまたは一部分が、治療薬として当該個体に戻して投与され得る。
【０５１８】
一部の事例では、Ｔ細胞の集団は、個体内のインビボにある。かかる事例では、ＭＯＤ（例えば、ＩＬ−２もしくは親和性低減ＩＬ−２、４−１ＢＢＬもしくは親和性低減４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１もしくは親和性低減ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０もしくは親和性低減ＣＤ８０、またはＣＤ８６もしくは親和性低減ＣＤ８６）の、エピトープ特異的Ｔ細胞への、本開示の選択的送達方法は、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを個体に投与することを含む。
【０５１９】
ＭＯＤ（例えば、ＩＬ−２もしくは親和性低減ＩＬ−２、４−１ＢＢＬもしくは親和性低減４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１もしくは親和性低減ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８０もしくは親和性低減ＣＤ８０、またはＣＤ８６もしくは親和性低減ＣＤ８６）が選択的に送達されようとしているエピトープ特異的Ｔ細胞は、本明細書で「標的Ｔ細胞」とも称される。一部の実例では、標的Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔレグ）である。一部の実例では、Ｔレグは、自己反応性Ｔ細胞の活性を阻害または抑制する。
【０５２０】
一部の実例では、標的Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。例えば、標的Ｔ細胞は、がんエピトープ（例えば、がん細胞によって提示されるエピトープ）に特異的な細胞傷害性Ｔ細胞であり得る。
【０５２１】
ＸＩ．処置方法
本開示は、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節方法（例えば、個体を処置する）を提供し、該方法は、エピトープへのコンジュゲーション後に個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節するのに有効である、ある量の本開示のＴ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、またはＴ細胞ＭＭＰをコードする１つもしくは複数の核酸を個体に投与することを含む。また、ヒトまたは動物の身体の処置方法において使用するための、本開示のＴ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートも提供される。一部の実例では、本開示の処置方法は、それを必要とする個体に、本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つまたは複数の組換え発現ベクターを投与することを含む。一部の実例では、本開示の処置方法は、それを必要とする個体に、本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つまたは複数のｍＲＮＡ分子を投与することを含む。一部の実例では、本開示の処置方法は、それを必要とする個体に、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含む。処置され得る病態には、感染症、がん、及び自己免疫障害が含まれ、これらのうちのいくつかの例が下記に記載される。
【０５２２】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されたとき、エピトープ特異的Ｔ細胞の応答及びエピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の両方を誘導する。換言すれば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、それを必要とする個体に投与されたとき、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰに存在するエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現する第１のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ特異的Ｔ細胞の応答を誘導し、かつ、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰに存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、を発現する第２のＴ細胞の活性を調節することによって、エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答を誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞の応答対エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の比は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、または少なくとも１００：１である。エピトープ特異的Ｔ細胞の応答対エピトープ非特異的Ｔ細胞の応答の比は、約２：１〜約５：１、約５：１〜約１０：１、約１０：１〜約１５：１、約１５：１〜約２０：１、約２０：１〜約２５：１、約２５：１〜約５０：１、約５０：１〜約１００：１、または１００：１超である。Ｔ細胞の「活性を調節すること」には、ｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を活性化すること、ｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導すること、ｉｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞毒素（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュライシン）の産生及び放出を誘導すること、ｉｖ）自己反応性Ｔ細胞の活性を阻害すること等のうちの１つまたは複数が含まれ得る。
【０５２３】
複数の実施形態では、例えば、患者が全般的に免疫抑制状態にある場合、独立して選択されるＭＯＤ（例えば、野生型）またはそれらの同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤをもつ１つまたは複数のＴ細胞ＭＭＰが、患者の全体的な免疫状態／応答性（例えば、ワクチン抗原または感染症に反応する患者の能力によって測定したときの）を刺激するために患者に投与されてもよい。他の実施形態では、例えば、患者が全般的に免疫抑制状態にある場合、独立して選択されるＭＯＤ（例えば、野生型）またはそれらの同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤをもつ、１つまたは複数のＴ細胞ＭＭＰが、患者の免疫応答を刺激するために、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと組み合わせて患者に投与されてもよい。
【０５２４】
複数の実施形態では、独立して選択されるＭＯＤ（例えば、野生型）またはそれらの同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤをもつ１つまたは複数のＴ細胞ＭＭＰが、病原体に対する免疫の発達を刺激する／向上させるために、病原体に対するワクチン（例えば、タンパク質または核酸ワクチン）と併せて患者に投与されてもよい。別の実施形態では、病原体に対するエピトープをもつ１つまたは複数のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、病原体に対する免疫の発達を刺激するために、病原体に対するワクチン（例えば、タンパク質または核酸ワクチン）と併せて患者に投与される。かかる実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、独立して選択されるＭＯＤ（例えば、野生型）、またはそれらの同種ＭＯＤに対して低減された親和性を有するバリアントＭＯＤを含んでもよい。Ｔ細胞ＭＭＰがワクチン（例えば、タンパク質または核酸）と併せて投与される場合、それはワクチンと組み合わせて、またはワクチン投与と同時にもしくはそれとは異なる時間に投与される別個の製剤中で、共投与されてもよい。
【０５２５】
ＭＯＤのその同種ＭＯＤに対して低減された親和性と、エピトープのＴＣＲに対する親和性との組み合わせは、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの向上された選択性を実現する。故に、例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、それがｉ）Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在するエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰエピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、を発現する第２のＴ細胞に結合する結合活性と比較して、より高い結合活性をもって、ｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在するＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現する第１のＴ細胞に結合する。
【０５２６】
本開示は、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節方法を提供し、該方法は、個体に、有効量の本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含み、ここで、Ｔ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートは、個体においてエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性の選択的調節により、個体において疾患または障害を処置することができる。故に、本開示は、処置を必要とする個体に、有効量のＴ細胞ＭＭＰまたはそのエピトープコンジュゲートを投与することを含む、処置方法を提供する。
【０５２７】
一部の実例では、ＭＯＤは、活性化型ポリペプチドであり、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、エピトープ特異的Ｔ細胞を活性化させる。一部の実例では、該エピトープは、がん関連エピトープであり、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、がん関連エピトープに特異的なＴ細胞の活性を増加させる。
【０５２８】
本開示は、個体におけるがんの処置方法を提供し、該方法は、個体に、有効量の本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート投与することを含み、ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、がんエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、かつＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、刺激性ＭＯＤを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるがん細胞の数を低減する量である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるがん細胞の数を、Ｔ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートによる投与の不在下での個体におけるがん細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または検出不能なレベルまで低減する量である。別の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における少なくとも１つの固形腫瘍の体積を、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの第１回目の用量の投与時点でのその腫瘍の体積と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または検出不能なレベルまで低減する量である。
【０５２９】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるがん細胞の数、または少なくとも１つの腫瘍の体積のいずれかを検出不能なレベルまで低減する量である。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における腫瘍量を、Ｔ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与の不在下での個体における総腫瘍量と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または検出不能なレベルまで低減する量である。別の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における少なくとも１つの腫瘍の腫瘍体積を低減する量である。例えば、一部の実例では、本開示の多量体ポリペプチドの「有効量」とは、それを必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１回または複数回の用量で投与されたときに、腫瘍体積を、Ｔ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰもしくはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与の不在下での個体における腫瘍体積と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または検出不能なレベル（体積）まで低減する量である。かかる実施形態では、腫瘍量は、腫瘍の密度及び体積に基づいて算出され得る。
【０５３０】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体の生存時間を増加させる量である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体の生存時間を、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートによる投与の不在下での個体の予想される生存時間と比較して、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、３ヶ月〜６ヶ月、６ヶ月〜１年、１年〜２年、２年〜５年、５年〜１０年、または１０年超増加させる量である。
【０５３１】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体の集団内の個体に１回または複数回の用量で投与されたときにその集団の平均生存時間を増加させる量である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体の集団内の個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを受けているその個体の集団の生存時間を、Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを受けていない個体の生存時間と比較して、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、３ヶ月〜６ヶ月、６ヶ月〜１年、１年〜２年、２年〜５年、５年〜１０年、または１０年超増加させる量であり、ここで、集団は、年齢、性別、体重、及び疾患状態（疾患及び進行度合い）を一致させた集団である。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、ウイルス感染細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性が増加する。一部の事例では、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ウイルス感染細胞上に存在するエピトープに特異的であるＴ細胞であり、このエピトープ特異的Ｔ細胞をＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の数が増加する。したがって、本開示は、個体におけるウイルス感染症の処置方法を提供し、該方法は、個体に、有効量の本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含み、ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、ウイルスエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、かつＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、刺激性ＭＯＤを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるウイルス感染細胞の数を低減する量である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるウイルス感染細胞の数を、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートによる投与の不在下での個体におけるウイルス感染細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する量である。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるウイルス感染細胞の数を検出不能なレベルまで低減する量である。
【０５３２】
本開示はまた、個体における感染症の処置方法も提供し、該方法は、個体に、有効量のＴ細胞ＭＭＰ及び／または本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含み、ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、病原体関連エピトープであるＴ細胞エピトープを含み、かつＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、刺激性ＭＯＤを含む。一部の実例では、Ｔ細胞ＭＭＰの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における病原体の数を低減する量である。例えば、一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における病原体の数を、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートによる投与の不在下での個体における病原体の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する量である。一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における病原体の数を検出不能なレベルまで低減する量である。病原体には、ウイルス、細菌、原虫等が含まれる。
【０５３３】
一部の実例では、ＭＯＤは、阻害性ポリペプチドであり、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を阻害する。一部の実例では、該エピトープは、自己エピトープであり、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、自己エピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に阻害する。
【０５３４】
本開示は、個体における自己免疫障害の処置方法を提供し、該方法は、個体に、有効量の、自己エピトープを含むＴ細胞ＭＭＰ（またはＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つまたは複数の核酸）及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含み、ここで、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、阻害性ＭＯＤを含む。そのような実例では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、自己反応性Ｔ細胞の数を、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与前、またはＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの投与の不在下での個体における自己反応性Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低減する量である。一部の実例では、かかるＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体におけるＴｈ２サイトカインの産生を低減する（例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％）量である。一部の実例では、かかるＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの「有効量」とは、それを必要とする個体に１回または複数回の用量で投与されたときに、個体における自己免疫疾患に関連する１つまたは複数の症状を寛解させる量である。
【０５３５】
上述のように、一部の実例では、対象となる処置方法を実施するにあたって、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、ポリペプチドそれ自体としてそれを必要とする個体に投与される。他の事例では、対象となる処置方法を実施するにあたって、本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つまたは複数の核酸が、それを必要とする個体に投与される。故に、他の事例では、本開示の１つまたは複数の核酸、例えば、本開示の１つまたは複数の組換え発現ベクターが、それを必要とする個体に投与される。
【０５３６】
Ｘ．製剤
好適な製剤は上述され、ここで、好適な製剤は、薬学的に許容される賦形剤を含む。一部の実例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の実例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含み、一部の事例では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸と、ｂ）本開示のＴ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸と、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の実例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターと、ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。一部の実例では、好適な製剤は、ａ）本開示のＴ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の組換え発現ベクターと、ｂ）本開示のＴ細胞ＭＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の組換え発現ベクターと、ｃ）薬学的に許容される賦形剤と、を含む。
【０５３７】
好適な薬学的に許容される賦形剤は上述される。
【０５３８】
Ｘ．Ａ．投薬量
好適な投薬量は、種々の臨床要因に基づいて、主治医、または他の資格を有する医療関係者が決定することができる。医療分野において周知であるが、任意の一患者に対する投薬量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与対象となる特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与時間、投与経路、全般的な健康状態、及び同時に投与されようとしている他の薬物を含めた、多くの要因に左右される。本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、用量当たり１ｎｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の間、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜５ｍｇ／ｋｇ体重の間の量で投与されてもよいが、とりわけ前述の要因を考慮して、この例となる範囲を下回るかまたは上回る用量が想定される。レジメンが持続注入である場合、それはまた、体重１キログラム当たり、１分間につき１μｇ〜１０ｍｇの範囲にあり得る。本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重〜約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重〜約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与され得る。
【０５３９】
一部の実例では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの好適な用量は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｇ、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜１０ｇ、体重１ｋｇ当たり１μｇ〜１ｇ、体重１ｋｇ当たり１０μｇ〜１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１ｍｇである。当業者は、投与された薬剤の体液または体組織中での測定された滞留時間及び濃度に基づいて、投薬の反復速度を容易に推定することができる。処置の成功に続いて、疾患状態の再発を予防するために患者に維持療法を受けさせることが望ましい場合があり、ここで、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｇ、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜１０ｇ、体重１ｋｇ当たり１μｇ〜１ｇ、体重１ｋｇ当たり１０μｇ〜１００ｍｇ、体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１０ｍｇ、または体重１ｋｇ当たり１００μｇ〜１ｍｇの範囲の維持用量で投与される。
【０５４０】
当業者であれば、用量レベルが、具体的なＴ細胞ＭＭＰ、対象の症状の重症度及び副作用の起こりやすさの関数として異なり得ることを容易に理解しよう。所与の化合物についての好ましい投薬量は、様々な手段により当業者が容易に決定可能である。
【０５４１】
一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの複数回用量が投与される。本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な要因のうちのいずれか、例えば、症状の重症度等に応じて異なり得る。例えば、一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、１ヶ月に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に３回、隔週（ｑｏｗ）、１週間に１回（ｑｗ）、１週間に２回（ｂｉｗ）、１週間に３回（ｔｉｗ）、１週間に４回、１週間に５回、１週間に６回、隔日（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。
【０５４２】
本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの投与の継続期間、例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターが投与される期間は、様々な要因のうちのいずれか、例えば、患者の応答等に応じて異なり得る。例えば、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、約１日〜約１週間、約２週間〜約４週間、約１ヶ月〜約２ヶ月、約２ヶ月〜約４ヶ月、約４ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約８ヶ月、約８ヶ月〜約１年、約１年〜約２年、もしくは約２年〜約４年の範囲の、またはそれよりも長い期間にわたって投与され得る。
【０５４３】
Ｘ．Ｂ．投与経路
活性薬剤（本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクター）は、インビボ法及びエクスビボ法、ならびに全身投与経路及び局所投与経路を含めた、薬物送達に好適な任意の利用可能な方法及び経路を用いて、個体に投与される。
【０５４４】
従来のかつ薬学的に許容される投与経路には、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、リンパ内、気管内、脳内、皮下、皮内、局所、静脈内、動脈内、直腸、鼻腔、経口、ならびに他の経腸及び非経口経路の投与が含まれる。投与経路は、所望であれば組み合わされるか、あるいは、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート及び／または所望の効果に応じて調整されてもよい。本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、または本開示の核酸もしくは組換え発現ベクターは、単回用量または複数回用量で投与され得る。
【０５４５】
一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、静脈内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、筋肉内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、リンパ内に投与される。一部の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、局所投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、腫瘍周囲に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、脳内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、皮下に投与される。
【０５４６】
一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、静脈内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、筋肉内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、局所投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、腫瘍内に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、腫瘍周囲に投与される。一部の実施形態では、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、脳内に投与される。一部の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、皮下に投与される。一部の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、リンパ内に投与される。一部の実施形態では、Ｔ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートは、リンパ内に投与される。
【０５４７】
本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターは、全身経路または局所経路を含めた、従来の薬物の送達に好適な任意の利用可能な従来方法及び経路を用いて、宿主に投与され得る。一般に、本開示の方法において用いるために企図される投与経路には、経腸、非経口、及び吸入経路が含まれるが、必ずしもこれらに限定されない。
【０５４８】
吸入投与以外の非経口投与経路には、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、嚢内、脊椎内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、腫瘍内、リンパ内、腫瘍周囲、及び静脈内経路が含まれるが、必ずしもこれらに限定されず、すなわち、消化管を通した投与経路以外の任意の投与経路である。非経口投与は、本開示のＴ細胞ＭＭＰ及び／またはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、本開示の核酸、または本開示の組換え発現ベクターの全身または局所送達をもたらすために実行され得る。全身送達が所望される場合、投与は典型的には、薬学的調製物の侵襲性投与または全身に吸収される局所もしくは粘膜投与を伴う。
【０５４９】
Ｘ．Ｃ．処置に好適な対象
本開示の方法による処置に好適な対象には、がんを有すると診断された個体、がんに対して処置されたが、処置に応答しなかった個体、及びがんに対して処置され、最初は処置に応答したが、その後不応性となった個体を含めた、がんを有する個体が含まれる。本開示の方法による処置に好適な対象には、感染症を有すると診断された個体、及び感染症に対して処置されたが、処置に応答しなかった個体を含めた、感染症（例えば、細菌、ウイルス、原虫等といった病原体による感染症）を有する個体が含まれる。本開示の方法による処置に好適な対象には、細菌感染症を有すると診断された個体、及び細菌感染症に対して処置されたが、処置に応答しなかった個体を含めた、細菌感染症を有する個体が含まれる。本開示の方法による処置に好適な対象には、ウイルス感染症を有すると診断された個体、及びウイルス感染症に対して処置されたが、処置に応答しなかった個体を含めた、ウイルス感染症を有する個体が含まれる。本開示の方法による処置に好適な対象には、自己免疫疾患を有すると診断された個体、及び自己免疫疾患に対して処置されたが、処置に応答しなかった個体を含めた、自己免疫疾患を有する個体が含まれる。
【０５５０】
ある特定の事例では、例えば、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドがＨＢＶエピトープを含む場合、処置に好適な個体は、ＨＢＶに感染した個体である。一部の実例では、個体は、急性ＨＢＶ感染症を有する。一部の実例では、個体は、急性ＨＢＶ感染症を有し、肝臓癌は有しない。一部の実例では、個体は、ＨＢＶの非活動性キャリアである。一部の実例では、個体は、ＨＢＶの非活動性キャリアであり、肝臓癌は有しない。一部の実例では、個体は、慢性活動性ＨＢＶを有する。一部の実例では、個体は、慢性活動性ＨＢＶを有し、肝臓癌は有しない。一部の実例では、個体は、ＨＢＶ感染症に起因する肝臓癌を有する。
【０５５１】
ある特定の事例では、例えば、本開示のＴ細胞調節多量体ポリペプチドがＨＢＶエピトープを含む場合、処置に好適な個体は、ＨＢＶに感染した個体であり、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、急性ＨＢＶ感染症を有する。一部の実例では、個体は、急性ＨＢＶ感染症を有し、肝臓癌は有せず、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、ＨＢＶの非活動性キャリアであり、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、ＨＢＶの非活動性キャリアであり、肝臓癌は有せず、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、慢性活動性ＨＢＶを有し、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、慢性活動性ＨＢＶを有し、肝臓癌は有せず、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。一部の実例では、個体は、ＨＢＶ感染症に起因する肝臓癌を有し、ここで、個体はアジア人であり、例えば、個体は、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、またはＨＬＡ−Ａ３３対立遺伝子を有する。
【０５５２】
ＸＩ．ある特定の実施形態
本発明は、その具体的な実施形態を参照して説明されたが、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく種々の変更がなされてもよく、均等物が代わりに用いられてもよいことが当業者には理解されるべきである。加えて、特定の状況、材料、組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｔｔｅｒ）、プロセス、及び／またはプロセスのステップ（単数または複数）を本発明の目的、趣旨、及び範囲に適合させるために、多くの改変がなされてもよい。全てのかかる修飾が、本明細書に添付される特許請求の範囲内にあることを意図する。
１．Ｔ細胞ＭＭＰ（Ｔ細胞ＭＭＰ）であって、
ａ）
ｉ）Ｎ末端及びＣ末端を有する第１の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド、
を含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、
ｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及び
ｉｉ）任意選択で免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場、
を含む、第２のポリペプチドと、
ｃ）前記第１のポリペプチドに結合した（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）もしくはその内部にある第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位、及び／または前記第２のポリペプチドに結合した（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）もしくはその内部にある第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位と、
ｄ）１つまたは複数の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、を含み、前記１つまたは複数のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、
Ａ）前記第１のポリペプチドの前記Ｃ末端に、
Ｂ）前記第２のポリペプチドの前記Ｎ末端に、
Ｃ）前記第２のポリペプチドの前記Ｃ末端に、または
Ｄ）前記第１のポリペプチドの前記Ｃ末端及び前記第２のポリペプチドの前記Ｎ末端にあり、
前記１つまたは複数のＭＯＤの各々が、独立して選択される野生型またはバリアントＭＯＤである、前記Ｔ細胞ＭＭＰ（Ｔ細胞ＭＭＰ）。
２．前記第１のポリペプチドが、
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない第１のＭＨＣポリペプチド、
そのＮ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチド、
そのＣ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチド、または
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつ第１のＭＨＣポリペプチド、
を含む、実施形態１に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３．前記第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、
ａ）前記第１のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記第１のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、
ｂ）前記第１のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記第１のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを含む、
ｃ）前記第１のＭＨＣポリペプチドの前記Ｎ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、及び／または
ｄ）前記第１のＭＨＣポリペプチドの前記Ｃ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
実施形態１〜２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４．前記第１及び第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩポリペプチドであり、前記第１のＭＨＣポリペプチドが、
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、Ｎ末端及びＣ末端を有するベータ−２−ミクログロブリン（「β２Ｍ」）ポリペプチド、
そのＮ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、
そのＣ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、または
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつβ２Ｍポリペプチド、
を含む、実施形態１〜３のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５．前記第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、
ａ）そのＮ末端またはＣ末端上にリンカーを有しない前記β２Ｍポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
ｂ）前記β２Ｍポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記β２Ｍポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを含む、
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドの前記Ｎ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、及び／または
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドの前記Ｃ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
実施形態４に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６．前記第２のポリペプチドが、
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない第２のＭＨＣポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩ重鎖（「ＭＨＣ−Ｈ」）ポリペプチドを含む）、
そのＮ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、
そのＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、または
そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、
を含む、実施形態１〜５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
７．前記第２のポリペプチドが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場をさらに含む、実施形態６に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
８．前記第２のポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端の順に、
そのＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、続いて免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドもしくは非Ｉｇポリペプチド足場、または
そのＮ末端及び／またはＣ末端上にリンカーをもつ第２のＭＨＣポリペプチド、続いて免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドもしくは非Ｉｇポリペプチド足場、
を含む、実施形態７に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
９．前記第２のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、
ａ）前記第２のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、
ｂ）前記第２のＭＨＣポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及び／またはＣ末端上にリンカーを含む、
ｃ）前記第２のＭＨＣポリペプチドの前記Ｎ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
ｄ）前記第２のＭＨＣポリペプチドの前記Ｃ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、及び／または
ｅ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドもしくは非Ｉｇポリペプチド足場の配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、このとき、前記第２のＭＨＣポリペプチドに免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドもしくは非Ｉｇポリペプチド足場が続く、
実施形態１〜８のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１０．前記第２のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを有しない、Ｎ末端及びＣ末端を有するＭＨＣクラスＩ重鎖（「ＭＨＣ−Ｈ」）ポリペプチド、そのＮ末端上にリンカーをもつＭＨＣ−Ｈポリペプチド、そのＣ末端上にリンカーをもつＭＨＣ−Ｈポリペプチド、またはそのＮ末端及びＣ末端上にリンカーをもつＭＨＣ−Ｈポリペプチドを含む、実施形態１〜９のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１１．前記第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、
ａ）そのＮ末端またはＣ末端上にリンカーを有しない前記β２Ｍポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
ｂ）前記β２Ｍポリペプチドの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にあり、前記β２Ｍポリペプチドが、そのＮ末端及びＣ末端上にリンカーを含む、
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドの前記Ｎ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、及び／または
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドの前記Ｃ末端上の前記リンカーの配列に結合しているか（例えば、前記Ｎ末端またはＣ末端で）、もしくはその配列内にある、
実施形態４〜１０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１２．前記第１のポリペプチドの１つもしくは複数の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、そのシグナル配列を欠いた成熟β２Ｍポリペプチド配列（例えば、図４に示されるβ２Ｍポリペプチド配列）の、アミノ末端の１５個のアミノ酸のうちのいずれかを置き換える、及び／またはそれらの間に挿入される、実施形態４〜１０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１３．前記第２のポリペプチドが、Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドを含む、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１４．前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ３  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＧ４  Ｆｃポリペプチド、ＩｇＡ  Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＭ  Ｆｃポリペプチドである、実施形態１３に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１５．前記Ｉｇ  Ｆｃポリペプチドが、図２Ａ〜２Ｄのうちの１つに図示されるアミノ酸配列、または図２Ａ〜２Ｄのうちの１つにある配列のうち前記ＩｇＦｃポリペプチドに対応する一部分（少なくとも約５０、７５、１００、１２５、または１５０アミノ酸の長さ）に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１６．前記ＩｇＦｃポリペプチドが、ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドである、実施形態１５に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１７．前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、実施形態１６に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１８．前記ＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を含む、実施形態１７に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
１９．Ｔ細胞ＭＭＰが、独立して選択される１つまたは複数の野生型及び／またはバリアントＭＯＤポリペプチドを含み、前記１つまたは複数のバリアントＭＯＤポリペプチドのうちの少なくとも１つが、同種ＭＯＤ（その同種ＭＯＤ）に対して、対応する野生型ＭＯＤの前記同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する（例えば、ＢＬＩ（上述の通り）によって測定したときの、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（ここで、前記対照は、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する結合親和性対、ｉｉ）前記野生型ＭＯＤのバリアントを含む本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの前記同種ＭＯＤに対する結合親和性の比が、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である）、実施形態１〜１８のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２０．前記バリアントＭＯＤポリペプチドが、対応する野生型免疫調節ポリペプチドと比べて１〜１０個のアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失を含むか、または前記対応する野生型ＭＯＤのアミノ酸配列、もしくは野生型ＭＯＤの前記配列の一部分（例えば、前記野生型ＭＯＤの少なくとも約５０、７５、１００、１２５、または１５０個の連続アミノ酸の長さ）に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１９に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２１．前記野生型免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＪＡＧ１、ＴＧＦβ、ＩＣＡＭ、及びＰＤ−Ｌ２からなる群から独立して選択される、実施形態１〜２０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２２．前記第１のＭＨＣポリペプチドが、β２ミクログロブリンβ２Ｍポリペプチドであり、前記第２のＭＨＣポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、実施形態１〜２１のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２３．前記β２Ｍポリペプチドが、図４に記載されるアミノ酸配列のうちの１つ、または図４にある成熟配列β２Ｍポリペプチドの一部分（例えば、少なくとも約６０、７０、８０、または９０アミノ酸の長さ）に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む、実施形態４〜２２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２４．前記β２Ｍポリペプチドが、図４に記載されるアミノ酸配列のうちの１つの少なくとも一部分との同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９９個の連続アミノ酸の配列（例えば、図４に記載されるそのシグナル配列を欠いた成熟β２Ｍポリペプチドの配列に対して同一性を有する、２０〜９９、２０〜４０、３０〜５０、４０〜６０、４０〜９０、５０〜７０、６０〜８０、６０〜９９、７０〜９０、または７９〜９９個の連続アミノ酸を有する配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態４〜２３のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２５．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ重鎖（例えば、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａ２４、及びＨＬＡ−Ａ３３を含めた、図３からのＨＬＡ−Ａ  ＨＬＡ−Ｂ、またはＨＬＡ−Ｃ）である、実施形態１０〜２４のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２６．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列が、図３Ａ〜３Ｄのうちの１つに記載されるアミノ酸配列、または図３Ａ〜３Ｄのうちの１つにある配列のうち前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドに対応する一部分に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有するアミノ酸配列（例えば、図３Ａ〜３Ｄのうちの１つに記載される配列に対して同一性を有する、２０〜１００、２０〜４０、３０〜５０、４０〜６０、４０〜９０、５０〜７０、６０〜８０、６０〜９０、７０〜９０、８０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０個、または２５０個超の連続アミノ酸を有する配列）を含み、任意選択で、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが機能的な膜貫通アンカードメインを含まないという条件下にある、実施形態２５に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２７．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、図３Ａ〜３Ｄのうちの少なくとも１つに記載されるアミノ酸配列の一部分との同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、８０、１００、１５０、２００、または２５０個の連続アミノ酸の配列を含むが、但し、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが機能的な膜貫通ドメインを含まないことを条件とする、実施形態２６に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２８．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列が、α１ヘリックスのカルボキシル末端部分におけるシステインと、α２−１ヘリックスのアミノ末端部分におけるシステインとの間にジスルフィド結合を含み、及び／またはアミノ酸残基２、７、８４、５、５９、１１６、１３９、１６７、１６８、１７０、もしくは１７１のうちのいずれか１つもしくは複数（２つ、３つ、４つ等）においてシステインもしくはシステイン置換を含む、実施形態１０〜２７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
２９．前記α１ヘリックスの前記カルボキシル末端部分が、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖のおよそアミノ酸７９位からおよそアミノ酸８９位までであり、前記α２−１ヘリックスの前記アミノ末端部分が、およそアミノ酸１３４位からアミノ酸１４４位までであり、前記アミノ酸位置が、それらのリーダー配列を含めずに前記重鎖の配列に基づいて決定される（例えば、図３Ｄを参照されたい）、実施形態２８に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３０．前記ジスルフィド結合が、８３位、８４位、または８５位に位置するシステインと、１３８位、１３９位、または１４０位に位置するシステインとの間（例えば、８３位〜１３８位、１３９位、もしくは１４０位、８４位〜１３８位、１３９位、もしくは１４０位、または８５位〜１３８位、１３９位、もしくは１４０位）にある、実施形態２８〜２９のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３１．前記ジスルフィド結合が、８４位に位置するシステインと、１３９位（ｐｏｔｉｏｎ）に位置するシステインとの間にある、実施形態２８〜３０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３２．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖配列が、前記α１ヘリックスの前記カルボキシル末端部分と、前記α２−１ヘリックスの前記アミノ末端部分との間で前記ジスルフィド結合を形成する前記システインの前または後に、１〜５個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を有し得る、実施形態２８に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３３．置換及び／または挿入が存在する場合、前記アミノ酸が、任意の天然型アミノ酸、またはグリシン及びプロリンを除く任意の天然型アミノ酸から選択され得る、実施形態３２に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３４．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの１〜７９位にあるアミノ酸配列が、図３Ｄに記載される少なくとも１つの配列の前記対応する一部分に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有する（例えば、前記配列が、図３Ｄにある配列と比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を有する）、実施形態２５〜３３のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３５．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの８９〜１３４位（これらの位置を含む）のアミノ酸配列が、図３Ｄに記載される少なくとも１つの配列の前記対応する一部分に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有する（例えば、前記配列が、図３Ｄにある配列と比べて１、２、３、４、５、または６個のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を有する）、実施形態２５〜３４のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３６．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの１４４〜２３０位（これらの位置を含む）のアミノ酸配列が、図３Ｄに記載される少なくとも１つの配列の前記対応する一部分に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有する（例えば、前記配列が、図３Ｄにある配列と比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３個のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を有する）、実施形態２５〜３５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３７．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの２４２〜２７４位（これらの位置を含む）のアミノ酸配列が、図３Ｄに記載される少なくとも１つの配列の前記対応する一部分に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％の同一性）を有する（例えば、前記配列が、図３Ｄにある配列と比べて１、２、３、または４個のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を有する）、実施形態２５〜３６のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３８．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、非共有結合性で会合している、実施形態１〜３７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
３９．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、互いに共有結合性で連結している、実施形態１〜３７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４０．前記共有結合性の連結が、ジスルフィド結合を介するものである、実施形態３９に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４１．独立して選択される２つ以上、３つ以上、または４つ以上のＭＯＤを含む、実施形態１〜４０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４２．前記２つ以上（例えば、２つ、３つ、または４つ）の野生型またはバリアントＭＯＤのうちのいずれか２つ以上、３つ以上、または４つ以上の間にペプチドリンカーを含む、実施形態４１に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４３．前記第１のポリペプチドが、前記第１のＭＨＣポリペプチドと、少なくとも１つの野生型またはバリアントＭＯＤとの間にペプチドリンカーを含む、実施形態１〜４２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４４．前記第２のポリペプチドが、前記第２のＭＨＣポリペプチドと、少なくとも１つの野生型またはバリアントＭＯＤとの間にペプチドリンカーを含む、実施形態１〜４２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４５．前記リンカーが、５アミノ酸〜３０アミノ酸（例えば、５〜１０、１０〜２０、または２０〜３０アミノ酸）の長さを有する、実施形態２〜４４のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４６．前記リンカーが、式（ＡＡＡＧＧ）ｎまたは（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎが１〜８（例えば、１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、または１〜４、３〜６、もしくは４〜８から選択される範囲内）である、実施形態４５に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４７．前記第１及び第２の化学コンジュゲーション部位が、
ａ）酵素的修飾配列として作用するペプチド配列（例えば、スルファターゼモチーフ）、
ｂ）非天然アミノ酸及び／またはセレノシステイン、
ｃ）操作されたアミノ酸の化学コンジュゲーション部位、
ｄ）炭水化物もしくはオリゴ糖部分、及び／または
ｅ）ＩｇＧヌクレオチド結合部位、
から独立して選択される、実施形態１〜４６のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。：
４８．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、酵素的修飾配列を含む、実施形態１〜４７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
４９．前記１つまたは複数の第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、スルファターゼモチーフである、実施形態４８に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５０．前記スルファターゼモチーフが、配列Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３、Ｘ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２（Ｐ／Ａ）Ｘ３Ｚ３、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、またはＣＸ２ＰＸ３Ｒを含み、ここで、
Ｚ１が、システインまたはセリンであり、
Ｚ２が、プロリン残基またはアラニン残基のいずれかであり、
Ｚ３が、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、またはヒスチジン、通常はリジン）、または脂肪族アミノ酸（アラニン、グリシン、ロイシン、バリン、イソロイシン、またはプロリン、通常はＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩ）であり、
Ｘ１が、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より通常はＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり、但し、前記スルファターゼモチーフが前記標的ポリペプチドの前記Ｎ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３が独立して、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧである、
実施形態４９に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５１．第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドのアミノ酸配列において１つまたは複数のｆＧｌｙアミノ酸残基を含む、実施形態５０に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５２．前記１つまたは複数の第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、前記第１及び／または第２のポリペプチドの前記Ｃ末端に位置付けられたアミノ酸配列ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧ、ＬＰ（Ｘ５）ＴＡ、ＬＰ（Ｘ５）ＴＧＧ、ＬＰ（Ｘ５）ＴＡＡ、ＬＰＥＴＧＧ、またはＬＰＥＴＡＡを含むソルターゼＡ酵素部位であり、ここで、Ｘ５が、任意のアミノ酸である、実施形態１〜５１のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５３．前記１つまたは複数の第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、前記第１及び／または第２のポリペプチドの前記アミノ末端に少なくとも１つのオリゴグリシン（例えば、（Ｇ）２、３、４、または５）を含む、及び／または前記第１及び／または第２のポリペプチドの前記アミノ末端に少なくとも１つのオリゴアラニン（例えば、（Ａ）２、３、４、または５）を含む、ソルターゼＡ酵素部位である、実施形態１〜５２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５４．前記１つまたは複数の第１または第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、トランスグルタミナーゼ部位である、実施形態１〜５３のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５５．前記１つまたは複数のトランスグルタミナーゼ部位のうちの少なくとも１つが、ＬＱＧ、ＬＬＱＧＧ、ＬＬＱＧ、ＬＳＬＳＱＧ、ＧＧＧＬＬＱＧＧ、ＧＬＬＱＧ、ＬＬＱ、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ、ＧＬＬＱＧＧＧ、ＧＬＬＱＧＧ、ＧＬＬＱ、ＬＬＱＬＬＱＧＡ、ＬＬＱＧＡ、ＬＬＱＹＱＧＡ、ＬＬＱＧＳＧ、ＬＬＱＹＱＧ、ＬＬＱＬＬＱＧ、ＳＬＬＱＧ、ＬＬＱＬＱ、ＬＬＱＬＬＱ、ＬＬＱＧＲ、ＬＬＱＧＰＰ、ＬＬＱＧＰＡ、ＧＧＬＬＱＧＰＰ、ＧＧＬＬＱＧＡ、ＬＬＱＧＰＧＫ、ＬＬＱＧＰＧ、ＬＬＱＧＰ、ＬＬＱＰ、ＬＬＱＰＧＫ、ＬＬＱＡＰＧＫ、ＬＬＱＧＡＰＧ、ＬＬＱＧＡＰ、及びＬＬＱＬＱＧからなる群から選択される、実施形態５４に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５６．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、セレノシステイン、または独立して選択される１つもしくは複数の非天然アミノ酸を含有するアミノ酸配列を含む、実施形態１〜５５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５７．前記１つまたは複数の非天然アミノ酸のうちの少なくとも１つが、パラ−アセチルフェニルアラニン、パラ−アジドフェニルアラニン、及びプロピニル−チロシンからなる群から選択される、実施形態５６に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５８．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、操作されたアミノ酸部位を含む、実施形態１〜５７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
５９．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、１つまたは複数のスルフヒドリル基またはアミン基（例えば、アミノ酸残基２、７、８４、５、５９、１１６、１３９、１６７、１６８、１７０、または１７１のうちのいずれか１つまたは複数（２つ、３つ、４つ等）におけるシステイン置換）を含む、実施形態１〜５７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６０．前記１つまたは複数のスルフヒドリル基またはアミン基のうちの少なくとも１つが、前記第１及びまたは第２のポリペプチドにおけるリジンまたはシステインの存在からもたらされる、実施形態５９に記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６１．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、独立して選択される炭水化物、単糖、二糖、及び／またはオリゴ糖を含む、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６２．前記１つまたは複数の第１及び第２の化学コンジュゲーション部位のうちの少なくとも１つが、１つまたは複数のＩｇＧヌクレオチド抗体結合部位を含む、実施形態１〜６１のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６３．エピトープ（例えば、エピトープポリペプチド）をさらに含み、前記エピトープが、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位で、または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位で、前記第１のポリペプチドまたは前記第２のポリペプチドに直接、またはスペーサーもしくはリンカーを介して間接的にコンジュゲートされて（共有結合性で結合して）、Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成する、実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ。
６４．前記１つまたは複数のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、バリアントＭＯＤである、実施形態６３に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
６５．前記エピトープが、リンカーまたはスペーサーによって前記第１または第２のペプチドの化学コンジュゲーション部位に間接的に共有結合されている、実施形態６３〜６４のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
６６．前記エピトープが、ペプチドまたは非ペプチドポリマーから選択されるリンカーを通してコンジュゲートされている、実施形態６３〜６５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
６７．前記リンカーが、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、ＧＧＳＧ）、（ＧＧＳＧＧ）、（ＧＳＧＳＧ）、（ＧＳＧＧＧ）ｎ、（ＧＧＧＳＧ）ｎ、（ＧＳＳＳＧ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎを含む）、（ＡＡＡＧＧ）ｎ等のグリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及びＧＣＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）ｎ  ＧＣＧＡＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、またはＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ等のシステイン含有リンカーを含むが、これらに限定されない、１０アミノ酸〜３０アミノ酸（例えば、１０〜２０または２０〜３０アミノ酸）の長さを有するペプチドであり、式中、ｎが、少なくとも１（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）の整数である、実施形態６６に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
６８．前記リンカーが、式（ＡＡＡＧＧ）ｎまたは（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎが、１〜８（例えば、１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、または１〜４、３〜６、もしくは４〜８から選択される範囲内）である、６７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート
６９．
（ａ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、前記Ｔ細胞ＭＭＰが第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも２５％高い（１．２５倍高い）親和性で、第１のＴ細胞に結合し、
前記第１のＴ細胞が、その表面上に同種ＭＯＤ、及び少なくとも１０−７Ｍ（例えば、１０−８または１０−９Ｍ）の親和性で前記エピトープに結合するＴＣＲを発現し、
前記第２のＴ細胞が、その表面上に前記同種ＭＯＤを発現するが、その表面上に、少なくとも１０−７Ｍの親和性（例えば、１０−６または１０−５Ｍ等の、１０−７Ｍ未満の親和性）で前記エピトープに結合するＴＣＲは発現しないか、または
（ｂ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが、それが前記第２のＴ細胞に結合する親和性よりも少なくとも１０％（例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％）、または少なくとも２倍（例えば、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または１００倍超）高い親和性で、第１のＴ細胞に結合し、
前記第１のＴ細胞が、ｉ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記エピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、の両方を発現し、
前記第２のＴ細胞が、ｉ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記エピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲ、及びｉｉ）前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記ＭＯＤに結合する同種ＭＯＤ、を発現する、
実施形態６３〜６８のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７０．１つまたは複数のバリアントＭＯＤを含み、前記１つまたは複数のＭＯＤが、バイオレイヤー干渉法によって測定したとき、その同種ＭＯＤに対して、対応する野生型ＭＯＤの前記同種ＭＯＤに対する親和性と比較して低減された親和性を呈する（例えば、ＢＬＩ（上述の通り）によって測定したときの、対照Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート（前記対照は、野生型ＭＯＤを含む）の同種ＭＯＤに対する結合親和性対、ｉｉ）前記野生型ＭＯＤのバリアントを含む本開示のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの前記同種ＭＯＤに対する結合親和性の比が、少なくとも１．５：１、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、少なくとも１００：１、少なくとも５００：１、少なくとも１０２：１、少なくとも５×１０２：１、少なくとも１０３：１、少なくとも５×１０３：１、少なくとも１０４：１、少なくとも１０５：１、または少なくとも１０６：１である）、実施形態６３〜６８のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７１．前記エピトープが、がんエピトープ、ウイルスエピトープ、または自己エピトープである、実施形態６３〜７０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７２．前記エピトープが、ＨＰＶ  ＣＭＶまたはＨＢＶエピトープから選択されるウイルスエピトープである、実施形態６３〜７０のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７３．前記エピトープが、４アミノ酸（ａａ）、５ａａ、６ａａ、７ａａ、８ａａ、９ａａ、１０ａａ、１１ａａ、１２ａａ、１３ａａ、１４ａａ、１５ａａ、１６ａａ、１７ａａ、１８ａａ、１９ａａ、または２０ａａの長さのペプチド断片である、実施形態６３〜７２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７４．前記エピトープが、ソルターゼ部位、スルファターゼ部位、またはトランスグルタミナーゼ部位でコンジュゲートされている、実施形態６３〜７２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７５．前記エピトープが、非天然アミノ酸またはセレノシステインを通してコンジュゲートされている、実施形態６３〜７２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７６．前記エピトープが、操作されたアミノ酸を通してコンジュゲートされている、実施形態６３〜７２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７７．１つまたは複数の第１及び／または第２の化学コンジュゲーション部位に直接、またはスペーサーもしくはリンカーを通して間接的のいずれかで共有結合されている、独立して選択される１つまたは複数のペイロードをさらに含み、前記スペーサーまたはリンカーが、任意選択で切断可能である（例えば、哺乳類細胞のエンドソーム内で）、実施形態６３〜７６のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７８．前記ペイロードが、独立して選択される１つまたは複数の生物活性剤もしくは生物活性薬、診断剤もしくは標識、ヌクレオチドもしくはヌクレオシド類似体、核酸もしくは合成核酸、または毒素、リポソーム（例えば、５−フルオロデオキシウリジン等の等の（ｓｕｃｈ  ａｓ  ｓｕｃｈ  ａｓ）薬物を組み込む）、ナノ粒子、またはそれらの組み合わせである、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
７９．治療剤（例えば、薬物またはプロドラッグ）、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、抗生物質、抗ウイルス薬、細胞周期同調剤、細胞表面受容体（複数可）に対するリガンド、免疫調節剤（例えば、シクロスポリン等の免疫抑制薬）、アポトーシス促進剤、血管新生阻害剤、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、タンパク質もしくはポリペプチド、抗体もしくはその抗原結合断片、酵素、酵素前駆体、ホルモン、またはそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される、１つまたは複数の生物活性剤または生物活性薬から選択されるペイロードを含む、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８０．光検出可能な標識（例えば、色素、蛍光標識、燐光標識、発光標識）及び放射標識、画像化剤、造影剤、常磁性標識、超音波標識、ならびにそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される、１つまたは診断剤または標識から選択されるペイロードを含む、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８１．１本鎖または２本鎖ＤＮＡ、１本鎖または２本鎖ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｃＤＮＡ、球状核酸（ｓｐｈｅｒｉｃａｌ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ）、及びプラスミドからなる群から選択される、１つまたは複数のヌクレオチドもしくはヌクレオシド、ヌクレオシド類似体、核酸、または合成核酸から選択されるペイロードを含む、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８２．ミセル、金属ナノ粒子（例えば、金ナノ粒子）、及び非金属ナノ粒子（これらのうちのいずれかまたは全てが、核酸及びまたはタンパク質にコンジュゲートされ得る）からなる群から独立して選択される、１つまたは複数のリポソーム及び／またはナノ粒子から選択されるペイロードを含む、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８３．前記ペイロードが、独立して選択される１〜２０個（例えば、１〜２、２〜４、５〜１０、または１０〜２０個）のアルファ、ベータ、デルタ、ガンマアミノ酸、もしくはそれらの組み合わせを有するリンカーを介してコンジュゲートされるか、または前記リンカーが、式、ポリ−グリシンポリ−アラニン、ランダム（ｒａｎｄｏｍ）ポリグリシン／アラニンコポリマー、もしくはポリ（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドであり、式中、ｎが、１、２、３、４、５、６、７、または８である、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８４．前記ペイロードが、スペーサーによって化学コンジュゲーション部位に結合しており、前記スペーサーが、単結合もしくは二重結合、ジスルフィド結合、炭素−酸素結合、炭素窒素結合、またはそれらの組み合わせによって繋がれた２個以上の炭素原子を含む、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８５．前記ペイロードが、スペーサーによって化学コンジュゲーション部位に結合しており、前記スペーサーが、ホモ官能性（例えば、ホモ二官能性）クロスリンカーまたはヘテロ官能性（例えば、ヘテロ二官能性）クロスリンカーの作用からもたらされる、実施形態７７に記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８６．前記ペイロードが、リンカーによって結合されており、ヒトＴ細胞エンドソーム内での前記リンカーもしくはスペーサーの切断によって、または過剰のチオール還元剤（例えば、ジチオスレイトール、ＤＴＴ）での還元によって前記Ｔ細胞ＭＭＰから除去され得る、実施形態７７〜８５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
８７．実施形態６３〜８５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを含む組成物。
８８．
ａ）実施形態６３〜８７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートと、
ｂ）薬学的に許容される賦形剤と、
を含む、組成物。
８９．個体における免疫応答の調節方法であって、前記個体に、有効量の実施形態６３〜８７のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを投与することを含む、前記方法。
９０．インビトロでのまたは個体へのインビボでの、エピトープ選択的またはエピトープ選択的／特異的様態での免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）の標的Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞）への送達方法であって、
実施形態６３〜８６のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを前記Ｔ細胞にインビトロで接触させること、または
実施形態６３〜８６のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート、もしくは実施形態８７〜８８のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを含む組成物を、前記個体に投与すること、を含み、
前記標的Ｔ細胞が、前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに存在する前記エピトープに特異的である、前記方法。
９１．前記ＭＯＤが、ＩＬ−２、４−１ＢＢＬ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ−４０Ｌ、ＦａｓＬ、ＩＣＡＭ、またはＰＤ−Ｌ２ポリペプチドから選択される野生型またはバリアントＭＯＤである、実施形態９０に記載の方法。
９２．前記個体がヒトである、実施形態８９〜９１のいずれか１つに記載の方法。
９３．前記調節が、がん細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞の応答を増加させることを含む、実施形態８９〜９２のいずれか１つに記載の方法。
９４．前記調節が、自己抗原に対するＴ細胞の応答を低減することを含む、実施形態８９〜９３のいずれか１つに記載の方法。
９５．前記投与が、直腸、鼻腔、経口、ならびに他の経腸及び／または非経口経路の投与である、実施形態８９〜９４のいずれか１つに記載の方法。
９６．前記投与が、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管内、脳内、皮下、リンパ内、皮内、局所、静脈内、及び／または動脈内である、実施形態８９〜９５のいずれか１つに記載の方法。
９７．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰの前記第１及び前記第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、１つまたは複数の核酸。
９８．前記第１のポリペプチドが、第１のヌクレオチド配列によってコードされ、前記第２のポリペプチドが、第２のヌクレオチド配列によってコードされ、前記第１及び前記第２のヌクレオチド配列が、単一核酸（例えば、プラスミド）に存在する、実施形態９７に記載の１つまたは複数の核酸。
９９．前記第１のヌクレオチド配列及び前記第２のヌクレオチド配列が、転写制御要素に作動可能に連結されている、実施形態９７〜９８のいずれか１つに記載の１つまたは複数の核酸。
１００．前記第１のポリペプチドが、第１の核酸（例えば、第１のプラスミド）に存在する第１のヌクレオチド配列によってコードされ、前記第２のポリペプチドが、第２の核酸（例えば、第２のプラスミド）に存在する第２のヌクレオチド配列によってコードされる、実施形態９７に記載の１つまたは複数の核酸。
１０１．前記第１のヌクレオチド配列が、第１の転写制御要素に作動可能に連結され、前記第２のヌクレオチド配列が、第２の転写制御要素に作動可能に連結されている、実施形態９８または１００のいずれか１つに記載の１つまたは複数の核酸。
１０２．実施形態９７〜１０１のいずれか１つに記載の１つまたは複数の核酸を含む組成物。
１０３．実施形態１〜６２のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰの作製方法であって、前記方法が、
ａ）前記第１のＭＨＣポリペプチドをコードする核酸、前記第２のＭＨＣポリペプチドをコードする核酸、及び独立して選択される１つまたは複数のＭＯＤをコードする核酸（複数可）、ならびに任意選択で、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド、非Ｉｇポリペプチド足場、及び／または独立して選択される１つまたは複数のリンカーのうちのいずれか１つまたは複数をコードする核酸を用意すること、
ｂ）ステップｉ及びｉｉを任意の順に実施することであって、これらのステップが、
ｉ）１つまたは複数の化学コンジュゲーション部位を、前記独立して選択される１つまたは複数のＭＯＤをコードする前記核酸（複数可）以外の前記用意された核酸のうちの１つの中に含める（コード配列の中に導入操作する）ように、前記用意された核酸のうちの少なくとも１つを修飾することと、
ｉｉ）前記用意された核酸を、前記第１のポリペプチドをコードする第１の核酸及び前記第２のポリペプチドをコードする第２の核酸に組み込むことと、
を含む、前記実施すること、
ｃ）前記第１及び第２の核酸によってコードされる前記ポリペプチドを発現させて、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドを得るためのＴ細胞ＭＭＰを得ること、
を含む、前記方法。
１０４．前記１つまたは複数の化学コンジュゲーション部位が、酵素的修飾配列として作用するペプチド配列、非天然アミノ酸及び／またはセレノシステイン、操作されたアミノ酸の化学コンジュゲーション部位、ＩｇＧヌクレオチド結合部位から独立して選択される、実施形態１０３に記載の方法。
１０５．前記用意された核酸のうちの少なくとも１つを修飾することが、野生型の第１のＭＨＣポリペプチド、前記第２のＭＨＣポリペプチド、前記ＭＯＤのペプチド配列、またはいずれの任意選択的な免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド、非Ｉｇポリペプチド足場、もしくはリンカーにおいて、天然型アミノ酸をそれが存在しない箇所で含むポリペプチド配列としてコードするように、ＭＯＤ（複数可）をコードする前記核酸（複数可）以外の用意された核酸のうちの１つまたは複数を修飾することを含む、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．
ａ）反応性基をもつエピトープペプチド、または反応性基をもつ任意選択的なリンカーにコンジュゲートされたエピトープペプチドを用意すること、
ｂ）前記エピトープペプチド、または任意選択的なリンカーにコンジュゲートされたエピトープペプチドを、実施形態１０３〜１０５のいずれか１つに記載のＴ細胞ＭＭＰに、前記反応性基と化学コンジュゲーション部位との間で共有結合が形成される条件下で接触させて、
それによってＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを生産すること、
をさらに含む、実施形態１０３〜１０５のいずれかに記載の方法。
１０７．共有結合が、前記反応性基と、前記第１のＭＨＣポリペプチドまたは前記第１のＭＨＣポリペプチドに結合したリンカーにおける化学コンジュゲーション部位との間で選択的に形成される、実施形態１０６に記載の方法。
１０８．前記第１のＭＨＣポリペプチドが、そのＮ末端に任意選択的なペプチドリンカーが結合したベータ−２−ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドを含む、実施形態１０７に記載の方法。
１０９．前記β２Ｍポリペプチドが、前記第１のポリペプチドの前記Ｎ末端にある、１０８に記載の方法。
１１０．反応性基をもつペイロードをＴ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートに接触させて、前記Ｔ細胞ＭＭＰまたはＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートのペイロードコンジュゲートを形成させることをさらに含む、実施形態１０３〜１０９のいずれか１つに記載の方法。
１１１．前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープを作り出すために前記エピトープが共有結合された前記化学コンジュゲーション部位が、
図２Ａ〜２ＧにあるＦｃポリペプチド配列、
図３Ａ〜３ＤにあるＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列、または
図４にあるβ−２ミクログロブリンポリペプチド配列、
に対して１００％のアミノ酸同一性を有するアミノ酸配列内には位置しない、実施形態６３〜８６のいずれかに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
１１２．前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープを作り出すために前記エピトープが共有結合された前記化学コンジュゲーション部位が、
図２Ａ〜２ＧにあるＦｃポリペプチド配列、
図３Ａ〜３ＤにあるＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列、または
図４にあるβ−２ミクログロブリンポリペプチド配列、
のうちのいずれか１つの任意の部分に対して１００％のアミノ酸同一性を有する１０、２０、３０、４０、または５０アミノ酸長の配列内には位置しない、実施形態６３〜８６のいずれかに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
１１３．前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープを作り出すために前記エピトープが共有結合された前記化学コンジュゲーション部位が、
図２Ａ〜２ＧにあるＦｃポリペプチド、
図３Ａ〜３ＤにあるＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、または
図４にあるβ−２ミクログロブリンポリペプチド配列、
のうちのいずれか１つの任意の部分に対して１００％のアミノ酸同一性を有する５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、または７０アミノ酸長の配列に現れるアミノ酸ではない、実施形態６３〜８６のいずれかに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
１１４．前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを作り出すために前記エピトープが共有結合された前記化学コンジュゲーション部位が、
図２Ａ〜２ＧにあるＦｃポリペプチド配列、
図３Ａ〜３ＤにあるＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列、または
図４にあるβ−２ミクログロブリンポリペプチド配列、
のうちのいずれか１つの任意の部分に対して１００％のアミノ酸同一性を有する１０、２０、３０、４０、５０、６０、または７０アミノ酸長の配列内に位置するリジン、システイン、セリン、トレオニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、またはグルタミンではない、実施形態６３〜８６のいずれかに記載のＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲート。
１１５．
Ｎ末端及びＣ末端を有する成熟β２Ｍポリペプチド配列（そのシグナル配列を欠いた）と、
任意選択的なリンカーと、
前記成熟β２Ｍポリペプチドの前記配列内にある、または任意選択的なリンカーを介して前記成熟β２Ｍポリペプチドに結合した、１つまたは複数の化学コンジュゲーション部位と、
を含む、ポリペプチド。
１１６．前記成熟β２Ｍポリペプチドが、図４に提供される成熟β２Ｍの配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を有し、前記β２Ｍポリペプチドと図４にある対応する配列との間の同一性が、前記付加されたスルファターゼモチーフ及び存在するいずれの任意選択的なリンカー配列をも考慮することなく決定される、実施形態１１５に記載のポリペプチド。
１１７．前記β２Ｍポリペプチド配列が、図４に記載されるアミノ酸配列のうちの１つの少なくとも一部分との同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９９個の連続アミノ酸の配列（例えば、図４に記載されるそのシグナル配列を欠いた成熟β２Ｍの配列に対して同一性を有する、２０〜９９、２０〜４０、３０〜５０、４０〜６０、４０〜９０、５０〜７０、６０〜８０、６０〜９９、７０〜９０、または７９〜９９個の連続アミノ酸を有する配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態１１５〜１１６のいずれかに記載のポリペプチド。
１１８．前記β２Ｍポリペプチド配列が、前記成熟β２Ｍポリペプチド配列のアミノ酸１０位、１１位、１２位、１３位、または１４位のうちの１つ、２つ、またはそれよりも多くにおいてシステインを含む、実施形態１１５〜１１７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１１９．前記β２Ｍポリペプチド配列の最初の１２個のアミノ酸が、ＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹＳＣである、実施形態１１８に記載のポリペプチド。
１２０．前記スルファターゼモチーフが、配列Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３、Ｘ１（Ｃ／Ｓ）Ｘ２（Ｐ／Ａ）Ｘ３Ｚ３、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、またはＣＸ２ＰＸ３Ｒを含み、ここで、
Ｚ１が、システインまたはセリンであり、
Ｚ２が、プロリン残基またはアラニン残基のいずれかであり、
Ｚ３が、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、またはヒスチジン、通常はリジン）、または脂肪族アミノ酸（アラニン、グリシン、ロイシン、バリン、イソロイシン、またはプロリン、通常はＡ、Ｇ、Ｌ、Ｖ、またはＩ）であり、
Ｘ１が、存在するかまたは不在であり、存在する場合、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、硫黄含有アミノ酸、または極性非荷電アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＬ、Ｍ、Ｖ、Ｓ、またはＴ、より通常はＬ、Ｍ、Ｓ、またはＶであり、但し、前記スルファターゼモチーフが前記標的ポリペプチドの前記Ｎ末端にある場合、Ｘ１が存在することを条件とし、
Ｘ２及びＸ３が独立して、任意のアミノ酸であり得るが、通常は脂肪族アミノ酸、極性非荷電アミノ酸、または硫黄含有アミノ酸（すなわち、芳香族アミノ酸または荷電アミノ酸以外）、通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、Ｇ、またはＣ、より通常はＳ、Ｔ、Ａ、Ｖ、またはＧである、
実施形態１１５〜１１９のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１２１．前記スルファターゼモチーフが、直接、またはリンカーを介して間接的に、前記β２Ｍポリペプチドの前記Ｎ末端配列に連結されている、実施形態１１５〜１２０のいずれかに記載のポリペプチド。
１２２．シグナル配列、またはシグナル配列及びリンカーをさらに含み、前記シグナル配列が、前記ポリペプチドのアミノ最末端の要素である、実施形態１１５〜１２１のいずれかに記載のポリペプチド。
１２３．前記任意の１つまたは複数のリンカーが、独立して選択されるポリペプチドを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態１１５〜１２２のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１２４．前記リンカーのうちのいずれか１つまたは複数が、式（ＡＡＡＧＧ）ｎまたは（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドから独立して選択され、式中、ｎが１〜８（例えば、１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、または１〜４、３〜６、もしくは４〜８から選択される範囲内）である、実施形態１２３に記載のポリペプチド。
１２５．前記ポリペプチドが、下記の配列、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡＬＣＴＰＳＲＧＧＧＧＳＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹＳＣＨＰＡＥＮＧＫＳＮＦＬＮＣＹＶＳＧＦＨＰＳＤＩＥＶＤＬＬＫＮＧＥＲＩＥＫＶＥＨＳＤＬＳＦＳＫＤＷＳＦＹＬＬＹＹＴＥＦＴＰＴＥＫＤＥＹＡＣＲＶＮＨＶＴＬＳＱＰＫＩＶＫＷＤＲＤＭ
または下記の配列、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡＧＧＧＧＳＬＣＴＰＳＲＧＧＧＧＳＩＱＲＴＰＫＩＱＶＹＳＣＨＰＡＥＮＧＫＳＮＦＬＮＣＹＶＳＧＦＨＰＳＤＩＥＶＤＬＬＫＮＧＥＲＩＥＫＶＥＨＳＤＬＳＦＳＫＤＷＳＦＹＬＬＹＹＴＥＦＴＰＴＥＫＤＥＹＡＣＲＶＮＨＶＴＬＳＱＰＫＩＶＫＷＤＲＤＭ、
を有する、実施形態１２３に記載のポリペプチド。
１２６．前記スルファターゼモチーフのセリンまたはシステインが、ｆＧｌｙ（ホルミルグリシン）残基に変換された、実施形態１１５〜１２５のいずれかに記載のポリペプチド。
１２７．前記ｆＧｌｙ残基との化学反応（例えば、チオセミカルバジド、アミノオキシ、ヒドラジド、またはヒドラジノ修飾エピトープポリペプチドと、前記ｆＧｌｙのアルデヒドとの反応）を通して前記ポリペプチドに共有結合されたエピトープをさらに含む、実施形態１２６に記載のポリペプチド。
１２８．前記エピトープが、前記ｆＧｌｙ残基の前記アルデヒドとの反応用のヒドラジニルインドール基を含む、実施形態１２７に記載のポリペプチド。
１２９．前記エピトープが、ポリペプチドエピトープである、実施形態１２７または１２８に記載のポリペプチド。
１３０．実施形態１１５〜１２９のいずれか１つに記載のポリペプチドを含む組成物。
１３１．実施形態１２７〜１２９のいずれか１つに記載のポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
１３２．Ｎ末端からＣ末端の順に、
成熟ＭＨＣクラス１重鎖ポリペプチド配列（そのシグナル配列を欠いた）と、
任意選択的なリンカーと、
免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇポリペプチド足場と、
を含む、ポリペプチド。
１３３．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、図３Ｄに提供される配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも９０％、９５％、９８％、もしくは９９％の同一性、またはさらには１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を有し、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドと図３Ｄにある対応する配列との間の同一性が、前記（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド及び存在するいずれの任意選択的なリンカーをも考慮することなく決定される、実施形態１３２に記載のポリペプチド。
１３４．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、図３Ｄに記載されるアミノ酸配列のうちの１つの少なくとも一部分との同一性を有する、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００個の連続アミノ酸の配列（例えば、図３Ｄに記載されるＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドの配列に対して同一性を有する、２０〜１００、２０〜４０、３０〜５０、４０〜６０、４０〜９０、５０〜７０、６０〜８０、６０〜９０、７０〜９０、または８０〜１００個の連続アミノ酸を有する配列）を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態１３２〜１３３のいずれかに記載のポリペプチド。
１３５．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、
ｉ）図３Ｄに記載されるＭＨＣクラスＩ重鎖配列のおよそアミノ酸７９位からおよそアミノ酸８９位までの配列、
ｉｉ）およそアミノ酸１３４位からおよそアミノ酸１４４位までの配列、及び
ｉｉｉ）およそアミノ酸２３１位からおよそアミノ酸２４１位までの配列、
からなる群から選択される１つ、２つ、または３つの配列を含む、実施形態１３４に記載のポリペプチド。
１３６．前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドが、
ｉ）およそアミノ酸７９位からおよそアミノ酸８９位までの前記配列と、
ｉｉ）およそアミノ酸１３４位からおよそアミノ酸１４４位までの前記配列と、
を含み、８３位、８４位、または８５位のうちの１つがシステインで置換されており、前記システインが１３８位、１３９位、または１４０位のうちの１つにおいて置換されたシステインと鎖内ジスルフィド結合を形成する、実施形態１３５に記載のポリペプチド。
１３７．前記ポリペプチドが、図３Ｄに記載されるＭＨＣクラスＩ重鎖配列のおよそアミノ酸２３１位からおよそアミノ酸２４１位までのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド配列を含み、２３５位、２３６位、または２３７位のうちの１つが、システインによって置換されている、実施形態１３５〜１３６のいずれかに記載のポリペプチド。
１３８．前記リンカーのうちのいずれか１つまたは複数が、式（ＡＡＡＧＧ）ｎまたは（ＧＧＧＧＳ）ｎのペプチドから独立して選択され、式中、ｎが、１〜８（例えば、１、２、３、４、５、６、７、もしくは８、または１〜４、３〜６、もしくは４〜８から選択される範囲内）である、実施形態１３２〜１３７のいずれか１つに記載のポリペプチド。
１３９．前記ポリペプチドが、下記の配列、
【化１５４】
2020534352.tif 000184
を有する、実施形態１３７に記載のポリペプチド。
１４０．実施形態１３２〜１３９のいずれか１つに記載のポリペプチドを含む組成物。
１４１．実施形態１３２〜１３９のいずれか１つに記載のポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
１４２．Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの調製方法であって、
ａ）化学コンジュゲーション部位をコードするヌクレオチド配列を、Ｔ細胞ＭＭＰの第１のポリペプチド及び／または第２のポリペプチドをコードする核酸配列に組み込んで、第１のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位及び／または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位を導入することと、
ｂ）前記核酸を、前記Ｔ細胞ＭＭＰを発現させるための細胞に導入し、第１及び／または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰを得、任意選択で前記Ｔ細胞ＭＭＰを（部分的にまたは完全に）精製することと、
ｃ）前記化学コンジュゲーション部位（複数可）が酵素的活性化または化学変換を必要とする場合、前記化学コンジュゲーション部位（複数可）を（例えば、酵素により）活性化または変換することと、
ｄ）第１及び／または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位を有する前記Ｔ細胞ＭＭＰを、前記第１または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位と反応を経ることが可能なエピトープ（または結合したリンカーを有するエピトープ）に、前記第１または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位と前記エピトープ（または前記エピトープに結合した前記リンカー）との間で共有結合の形成を引き起こすのに好適な反応条件下で（例えば、酵素または触媒の存在下で）接触させて、前記Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを生産することと、
を含む、前記方法。
１４３．前記化学コンジュゲーション部位が、スルファターゼモチーフ（例えば、Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３、ＣＸ１ＰＸ２Ｚ３等の、式（Ｉ）または（ＩＩ）のスルファターゼモチーフ）である、実施形態１４２に記載の方法。
１４４．前記細胞が、
ｉ）ＦＧＥを発現して、前記スルファターゼモチーフのセリンもしくはシステインをＦＧｌｙに変換するか、または
ｉｉ）前記スルファターゼモチーフのセリンもしくはシステインをＦＧｌｙに変換するＦＧＥを発現せず、前記方法が、第１及び／または第２のポリペプチドの化学コンジュゲーション部位を有する前記Ｔ細胞ＭＭＰを、前記スルファターゼモチーフの前記セリンまたはシステインをＦＧｌｙに変換するＦＧＥに接触させることと、
ｉｉｉ）前記ＦＧｌｙ含有ポリペプチドを、前記ＦＧｌｙのアルデヒドと前記エピトープとの間で共有結合を形成する基で官能化されたエピトープに接触させることと、をさらに含み、
それによってＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートを形成する、実施形態１４３に記載の方法。
【実施例】
【０５５３】
実施例１．ホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）化学コンジュゲーション部位を有するＴ細胞ＭＭＰの調製
このデータの裏づけのない実施例（ｐｒｏｐｈｅｔｉｃ  ｅｘａｍｐｌｅ）は、ｆＧｌｙ化学コンジュゲーション部位を含有する第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを有するＴ細胞ＭＭＰの調製を可能にする。これらの第１及び第２のポリペプチドは一緒になって、エピトープがコンジュゲートされ得るＴ細胞ＭＭＰを形成する。
【０５５４】
これらのポリペプチドは、ポリアデニル化及び終止コドンと共に第１及び第２のポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子の発現を駆動するための構成的または誘導性プロモーター要素を含む発現カセットにおいて、第１及び第２のポリペプチドのコード配列を組み立てることによって調製する。発現カセットは、好適な細胞株（例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ、Ｖｅｒｏ、ＣＯＳ、酵母等）からの一過性発現のために、別個のベクター（プラスミド、ウイルス等）、または単一のベクターへと組み立てる。代替として、組み立てたカセットを、第１及び第２のポリペプチドの構成的発現または誘導性発現のために、かかる細胞に安定に組み込む。
【０５５５】
下記に記載されるＴ細胞ＭＭＰの第１及び第２のポリペプチドポリペプチドにおいて示されるリンカーは、任意選択的なものである。存在する場合、リンカーは、アミノ酸配列（例えば、ＡＡＡＧＧ（配列番号７５）または（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）（配列番号７６）等の１〜５０個のアミノ酸）である。１つよりも多くのリンカー配列が示される場合、各箇所について選択されるリンカー配列は、リンカーが現れる他の任意の他の部位について選択されるリンカー配列と同じであっても、または異なってもよい。
【０５５６】
１Ａ．第１のポリペプチド
この実施例の第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へと、ａ）リーダー配列、ｂ）ｆＧｌｙ化学カップリング部位を導入するためのスルファターゼモチーフ、ｃ）任意選択的なリンカー、及びｄ）β２Ｍポリペプチドを含む。ＦＧＥの作用に次いで、第１のペプチドは、このモチーフにおけるシステインをホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基に変換させる。したがって、ｍＲＮＡは、下記の全体的配列（リーダー配列の除去及びｆＧｌｙ残基を作り出すＦＧＥ作用の前として示される）を有する第１のポリペプチドをコードする。
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３ＩＱＲＴＰ（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３−リンカー−ＩＱＲＴＰ（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３ＲＴＰ（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＩＱＲＴＰ（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）、
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３Ｚ３−リンカー−ＩＱＲＴＰ（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）、または
ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ−リンカー−Ｘ１ＣＸ２ＰＸ３ＲＴＰ（Ｋ／Ｑ）ＩＱＶＹＳ．．．（例えば、図４による、β２Ｍの残りの部分）。
【０５５７】
上述の第１のペプチド内で、配列ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７）は、シグナル配列としての役目を果たし、ポリペプチドの成熟中の細胞プロセスの間に除去される。スルファターゼモチーフの残基（Ｘ１、Ｚ１、Ｘ２、Ｚ２、Ｘ３、及びＺ３）は、上述の第Ｉ．Ａ節に記載される。かかる第１のポリペプチドのマップが図９、パートＡに示され、図中、スルファターゼモチーフ（ＬＣＴＰＳＲ）は、リンカーがこのモチーフの前及び／または後に配置され得ることを強調するために、Ｇ４Ｓ（ＧＧＧＧＳ）（配列番号７６）リンカー内に示される。このマップはまた、アルギニンをシステインに変化させる（Ｒ１２Ｃ）、β２Ｍポリペプチドの１２位における可能性のあるアミノ酸置換の箇所も示す。マップの下には、リーダー配列を含む第１のポリペプチドについての例となるペプチド配列が現れる。β２Ｍポリペプチドは、斜体と共に太字で示され、スルファターゼ配列（ＬＣＴＰＳＲ）は、太字で示される。
【０５５８】
１Ｂ．第２のポリペプチド
この実施例の第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へと、ａ）リーダー配列、ｂ）ＭＯＤポリペプチド（複数可）、ｃ）任意選択的なリンカー、ｄ）ＭＨＣクラス１重鎖ポリペプチド、ｅ）任意選択的なリンカー、及びｆ）免疫グロブリンＦｃ領域を含む。
【０５５９】
ｍＲＮＡは、次の全体的構造を有する第２のポリペプチドポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）をコードする。シグナル配列−リンカー−ＩＬ２ポリペプチド−リンカー−ＩＬ２ポリペプチド−ＭＨＣクラス１重鎖ポリペプチド−リンカー−免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド（ここで、シグナル配列は、ヒトＩＬ２シグナル配列である）。かかる第２のポリペプチドのマップが図９、パートＢに示され、図中、ポリペプチドは、シグナル配列ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８）、４つのＧ４Ｓ（ＧＧＧＧＳ）リピート（配列番号７６）を有するリンカーによって分離されたヒトＩＬ２  ＭＯＤ（太字で示される）のリピートを含有する。このポリペプチドはまた、ヒト（ｈｕｍａ）ＨＬＡ−Ａポリペプチド（太字かつ斜体で示される）及びヒトＩｇＧ１  Ｆｃポリペプチドも含有する。このマップの下には、Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ、及びＡ２３６Ｃシステイン置換の箇所を含めた、可能性のあるアミノ酸置換の箇所が示される。Ｙ８４Ｃ及びＡ１３９Ｃ置換は、安定化するジスルフィド結合が、ＨＬＡ  α１ヘリックスのカルボキシル末端付近の領域とＨＬＡ  α２−１ヘリックスのアミノ末端周辺の領域との間で形成することを可能にする。Ａ２３６Ｃ置換からもたらされるシステインは、第１のポリペプチドにおけるβ２Ｍポリペプチドの、例えば１２位のシステインと、鎖内ジスルフィド結合を形成することができる。マップの下には、リーダー配列を含む第２のポリペプチドについての例となるペプチド配列が現れる。
【０５６０】
１Ｃ．第１の第２のポリペプチドの発現及び成熟
上記に示されたように、第１及び第２のポリペプチドを、好適な細胞株（例えば、真核細胞株または哺乳類細胞株）における一過性発現または安定な発現によって調製する。細胞におけるプロセシングにより、シグナル配列が除去され、また、ポリペプチド発現用に採用した細胞がまたスルファターゼモチーフのシステインまたはセリンをホルミルグリシン（ｆＧｌｙ）残基に変換可能であるＦＧＥも発現する場合には、ｆＧｌｙ残基が形成する。
【０５６１】
Ｔ細胞ＭＭＰは、細胞によって、第１及び第２のポリペプチドならびに結合された（非共有結合性で会合している）エピトープまたはヌルポリペプチドを含む複合体としてプロセスされ得る。ＨＬＡ重鎖ポリペプチドにおける、α１ヘリックスのカルボキシル末端の領域とα２−１ヘリックスのアミノ末端の領域との間でのジスルフィド結合の導入は、第１及び第２のポリペプチドに会合しているエピトープポリペプチドの不在下での発現を可能にする。加えて、Ｔ細胞ＭＭＰ複合体は膜アンカー領域を含有しないため、この複合体は、発現細胞から可溶型で放出される。
【０５６２】
発現されたＴ細胞ＭＭＰの好適なレベルが達成された後に、発現されたＴ細胞ＭＭＰを含有する細胞培養基を採集する。発現に用いた細胞がＦＧＥ活性を有しなかった場合、Ｔ細胞ＭＭＰを、スルファターゼモチーフにおいてｆＧｌｙ残基を形成可能なＦＧＥで処理する。例えばクロマトグラフ法を用いて、培地からのＴ細胞ＭＭＰの単離及び濃縮を実施して、この複合体の第１のポリペプチドのアミノ末端またはその付近にｆＧｌｙ化学コンジュゲーション部位を有する精製Ｔ細胞ＭＭＰを生産する。結果として生じるＴ細胞ＭＭＰは、図５、パートＢに示される一般構造を有し、図中、第１のポリペプチドにおけるＭＨＣ−１は、β２Ｍポリペプチドであり、第２のポリペプチド「ＭＯＤ」は、一対のＩＬ２ポリペプチドであり、ＭＨＣ−２は、ＨＬＡ−Ａポリペプチドであり、Ｆｃは、ＩＧｇ１重鎖定常領域である。第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間のジスルフィド結合は、β２ＭポリペプチドのＲ１２Ｃ置換及びＨＬＡ−ＡのＡ２３６Ｃ置換から生じるシステインからもたらされる。
【０５６３】
実施例２．Ｔ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートの調製
エピトープポリペプチドを、Ｔ細胞ＭＭＰにおけるｆＧｌｙアルデヒドと反応可能な基をエピトープペプチド上で形成することによって、実施例１で調製されるｆＧｌｙポリペプチドにコンジュゲートする。チオセミカルバジド、アミノオキシ、ヒドラジド、またはヒドラジノアルデヒド反応性基を利用することができるが、この実施例は、インドールに結合させたヒドラジニル基を用いて例示され、ここで、エピトープペプチド（図８におけるＲ）は、インドール環の窒素に直接または間接的に共有結合されている。図８に示されるように、ヒドラジニルインドールの具体的な構造に応じて、エピトープペプチド（Ｒ）をＴ細胞ＭＭＰのｆＧｌｙ含有ポリペプチド（囲まれたポリペプチド）に接触させることにより、Ｔ細胞ＭＭＰ及びエピトープが、三環基の形成を通して共有結合性で連結されるようになり、それによってＴ細胞ＭＭＰ−エピトープコンジュゲートが形成する。このコンジュゲートは、図６にある実施形態Ｂの一般構造を有し、図中、エピトープ及びβ２Ｍポリペプチドを共有結合性で連結している三環基は示されない。
【０５６４】
実施例３．ＨＢＶエピトープにコンジュゲートされたＴ細胞ＭＭＰ
Ｔ細胞ＭＭＰ複合体を生産するために作製され得るＴ細胞ＭＭＰ構築物の非限定的な例としては、図１０Ａ〜１０Ｄ及び図１１Ａ〜１１Ｅに図示されるものが挙げられた。具体的な複合体により例として示されているが、図１０のペプチド及び図１１のペプチドの任意の組み合わせを用いて、エピトープペプチドにコンジュゲートされてＴ細胞ＭＭＰ複合体を形成し得る、Ｔ細胞ＭＭＰを形成させることができる。図（ＩＧ．）１０に示されるペプチドの各々は、ヒトＩＬ−２配列、ＨＬＡ−Ａ重鎖配列、及びＩｇＧ足場を構成するアミノ酸を含有する。ＨＬＡ−Ａ配列は、安定化する鎖内ジスルフィド結合を形成させるための上述のようなアミノ酸８９及び１３９におけるシステイン、ならびに次に説明するβ２Ｍ含有ポリペプチドと鎖内ジスルフィドを形成し得る、アミノ酸２３６におけるシステインの組み込みによって、安定化される。事例の各々において、図１１に示されるポリペプチドは、鎖内ジスルフィド形成用に１２位にシステイン置換を有するβ２Ｍ配列、及び任意選択的なリンカーが両側に位置するスルファターゼモチーフ（配列番号４５）：（リンカー）０−４−Ｘ１Ｚ１Ｘ２Ｚ２Ｘ３Ｚ３−（リンカー）０−４を含有する。スルファターゼモチーフのアミノ酸は、ＬＣＴＰＳＲ等のスルファターゼのアミノ酸配列を含むように、上述のように（例えば、実施例１及び２にあるように）選択してもよい。スルファターゼモチーフのアミノ側及びカルボキシル側上のリンカーは、独立して選択され、存在する場合、ＧＧＧＧＳ（配列番号７６）の１〜４つのリピート等の任意の所望のアミノ酸配列であってもよい。例えば、哺乳類細胞における発現により、ＨＬＡ−Ａ重鎖、ならびにスルファターゼ配列及びβ２Ｍ配列を含むペプチドを含む、Ｔ細胞ＭＭＰ複合体の形成がもたらされる。ＬＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９１）、ＡＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９２）、ＹＶＮＶＮＭＧＬＫ（配列番号９３）、ＦＬＰＳＤＦＦＰＳＶ（配列番号８４）、ＳＴＬＰＥＴＴＶＶ（配列番号９０）から選択されるＨＢＶエピトープペプチド、またはＨＢＶエピトープの表に列挙される他のＨＢＶエピトープ等のエピトープペプチドは、スルファターゼモチーフにおけるホルミルグリシンの形成、続いてそのホルミル基を適切に修飾したペプチド（例えば、そのカルボキシル末端またはその付近にヒドラジニルインドール等のチオセミカルバジド基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、またはヒドラジノ基をもつペプチド）にコンジュゲートすることによって、第１及び第２のペプチドの複合体にコンジュゲートすることができる。
【０５６５】
Ｔ細胞ＭＭＰの１つの非限定的な例では、この複合体は、図１０Ａにおいて１７７５’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ａにおいて１７８３’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ａに図示されるＬＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９１）ペプチド以外である。
【０５６６】
Ｔ細胞ＭＭＰの第２の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｂにおいて１７７７’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ａにおいて１７８３’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ａに図示されるＬＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９１）ペプチド以外である。
【０５６７】
Ｔ細胞ＭＭＰの第３の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｃにおいて１７７９’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ａにおいて１７８３’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ａに図示されるＬＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９１）ペプチド以外である。
【０５６８】
Ｔ細胞ＭＭＰの第４の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｄにおいて１７８１’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ａにおいて１７８３’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ａに図示されるＬＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９１）ペプチド以外である。
【０５６９】
Ｔ細胞ＭＭＰの第５の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ａにおいて１７７５’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｂにおいて１７８４’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｂに図示されるＡＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９２）ペプチド以外である。
【０５７０】
Ｔ細胞ＭＭＰの第６の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｂにおいて１７７７’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｂにおいて１７８４’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｂに図示されるＡＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９２）ペプチド以外である。
【０５７１】
Ｔ細胞ＭＭＰの第７の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｃにおいて１７７９’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｂにおいて１７８４’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｂに図示されるＡＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９２）ペプチド以外である。
【０５７２】
Ｔ細胞ＭＭＰの第８の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｄにおいて１７８１’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｂにおいて１７８４’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｂに図示されるＡＩＭＰＡＲＦＹＰＫ（配列番号９２）ペプチド以外である。
【０５７３】
Ｔ細胞ＭＭＰの第９の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ａにおいて１７７５’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｃにおいて１７８５’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｃに図示されるＹＶＮＶＮＭＧＬＫ（配列番号９３）ペプチド以外である。
【０５７４】
Ｔ細胞ＭＭＰの第１０の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｂにおいて１７７７’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｃにおいて１７８５’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｃに図示されるＹＶＮＶＮＭＧＬＫ（配列番号９３）ペプチド以外である。
【０５７５】
Ｔ細胞ＭＭＰの第１１の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｃにおいて１７７９’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｃにおいて１７８５’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｃに図示されるＹＶＮＶＮＭＧＬＫ（配列番号９３）ペプチド以外である。
【０５７６】
Ｔ細胞ＭＭＰの第１２の非限定的な例では、この複合体は、図１０Ｄにおいて１７８１’と表記されるアミノ酸配列を含有するＭＨＣ重鎖を含み、第２のポリペプチドは、図１１Ｃにおいて１７８５’と表記されるポリペプチドである。そのポリペプチドは、一部の実例では、シグナルペプチド（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））を含まず、β２Ｍ配列を含有するポリペプチドは、一部の実例では、リーダーペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））を含まないであろう。一部の実例では、エピトープペプチドは、図１１Ｃに図示されるＹＶＮＶＮＭＧＬＫ（配列番号９３）ペプチド以外である。
【０５７７】
実施例４．ＣＭＶエピトープにコンジュゲートされたＴ細胞ＭＭＰ
順に、シグナルペプチド（ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１６７））、任意選択的なリンカーが両側に位置するスルファターゼモチーフ（配列番号４５）、及びβ２Ｍ配列（配列番号１５１及び図４を参照されたい）を含む、下記の第１のポリペプチド、
【化１５５】
2020534352.tif 000185
は、シグナル配列（ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１６８））、続いてヒトＩＬ−２  ＭＯＤ、Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ、及びＡ２３６Ｃアミノ酸置換を有するＨＬＡ−Ａ１１（ＨＬＡ  Ａ＊１１０１）配列を含有する、下記の第２のポリペプチド、
【化１５６】
2020534352.tif 000186
、と共に発現させてもよい。
【０５７８】
図１０にあるような他のＭＨＣクラス１重鎖構築物を、上記に示されたＨＬＡ−Ａ含有構築物の代替物として共発現させてもよい。リンカー及びスルファターゼモチーフは、例えば、実施例１及び２に上述した通りである。
【０５７９】
共発現により、ポリペプチドにコンジュゲートされ得るスルファターゼモチーフを有する、Ｔ細胞ＭＭＰ複合体の生産がもたらされる。スルファターゼモチーフが、例えば、ＬＣＴＰＳＲ（アルデヒドへの変換後はＬ（ｆＧｌｙ）ＴＰＳＲ）であり、コンジュゲーション用のエピトープがＣＭＶ（例えば、ＮＬＶＰＭＶＡＴＶ（配列番号１７０））に由来する場合、ＦＧｌｙ残基を含有するように変換し、エピトープペプチドのｃ末端にコンジュゲートした後の第１のポリペプチドは、
【化１５７】
2020534352.tif 000187
として現れ得る。
【０５８０】
シグナルペプチドは、細胞プロセスにより除去されており、システイン１２とＨＬＡ−Ａ＊１１０１含有構築物との間の連結は示されない。
【図１】
2020534352.tif 000188
【図２Ａ】
2020534352.tif 000189
【図２Ｂ】
2020534352.tif 000190
【図２Ｃ】
2020534352.tif 000191
【図２Ｄ】
2020534352.tif 000192
【図２Ｅ】
2020534352.tif 000193
【図２Ｆ】
2020534352.tif 000194
【図２Ｇ】
2020534352.tif 000195
【図３Ａ】
2020534352.tif 000196
【図３Ｂ】
2020534352.tif 000197
【図３Ｃ】
2020534352.tif 000198
【図３Ｄ−０１】
2020534352.tif 000199
【図３Ｄ−０２】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2020534352.tif 000203
【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６−０１】
2020534352.tif 000206
【図６−０２】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【手続補正書】
【提出日】令和2年7月1日(2020.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2020534352000001.app
【国際調査報告】
2020534352.tif 000220