(57)【要約】  本開示は、ＣＴＣＬの処置のためのＫＩＲ３ＤＬ２標的薬剤の使用に関する。本開示は、特に第１選択ＣＴＣＬにおいて、ＣＴＣＬの処置のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を使用する有利な処置レジメンを提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液浸潤を有する個体および血液浸潤のない患者の両方で有効な、組織症状を伴うＴ細胞悪性腫瘍の処置方法であって、前記方法が、Ｔ細胞悪性腫瘍を有する個体に、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤を、少なくとも１投与サイクルにわたって投与するステップを含み、ここで、前記薬剤は、前記薬剤の２回の連続した投与の間に、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００の血中濃度を維持する量で、少なくとも２回投与される方法。
【請求項２】
前記処置が、高い血液腫瘍負荷を有する個体および低い血液腫瘍負荷を有する個体の両方で有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記処置が、第１選択処置として使用される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記個体が、骨髄移植または造血幹細胞移植を受けていない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記薬剤が、静脈内投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤が、少なくとも４、６、８または１０回投与され、任意選択で、連続した投与の間に、１週間〜１ヵ月ずつ間隔をあける、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記薬剤は、前記血中濃度が、少なくとも１０週間、任意選択で少なくとも３ヶ月、任意選択で少なくとも６ヶ月にわたって維持されるような量および頻度で投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
組織症状を伴う前記Ｔ細胞悪性腫瘍が、ＣＴＣＬである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＣＴＣＬが、緩徐進行性ＣＴＣＬまたはステージＩＩもしくはＩＩＩのＣＴＣＬである、請求項８に記載の薬剤または方法。
【請求項１０】
前記処置または方法が、循環中１，０００／μＬ未満のセザリー細胞を有する個体のＴ細胞増殖性疾患の処置または予防に使用される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記処置または方法が、循環中に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞が実質的にない個体のＴ細胞増殖性疾患の処置または予防に使用される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記処置または方法が、高い血液腫瘍負荷、任意選択でＢ２末梢血液浸潤を有する個体のＴ細胞増殖性疾患の前記処置または予防に使用される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記同じ投与レジメンが、ステージ２または３の菌状息肉症を有する個体のＴ細胞増殖性疾患の前記処置または予防に使用される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合し、ヒトＣＤ１６ポリペプチドに結合するヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む抗体である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、ヒトγ１定常領域に融合した重鎖可変領域（ＶＨ）と、ヒトκ定常領域に融合した軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む完全長抗体である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記薬剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合し、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による結合に利用可能な細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの増加を引き起こすことができる抗体である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記薬剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合し、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ由来のＦｃ領域を含み、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解についての５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、配列番号２５もしくは２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、およびヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃ領域を含む抗体のＥＣ５０の１−ｌｏｇ未満もしくはそれ以内、ならびに／または（ｂ）１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌである、ＥＣ５０を特徴とする抗体である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体が、循環中、少なくとも０．４μｇ／ｍｌ、任意選択で少なくとも１０μｇ／ｍｌの濃度を維持する量で投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記薬剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体であり、毎月１〜４回、０．７５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で特定の量で、任意選択で０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ体重からなる群から選択される量で投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記処置の前に、毎月１〜２回投与の頻度、任意選択で毎月１回投与の頻度で、０．７５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、任意選択で０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ体重からなる群から選択される量で、複数回の連続した静脈内投与により、抗体を投与する導入期間（またはサイクル）が置かれる、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記薬剤が、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ体重からなる群から選択される量で投与される、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体であり、前記処置レジメンが、以下：
前記量の前記抗体が、毎週１回投与の頻度で、複数回の連続した静脈内投与により投与される、導入期間（またはサイクル）、および
前記量の前記抗体が、毎月１または２回投与の頻度で、複数回の連続した静脈内投与により投与される、処置期間
を含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
投与毎に投与される抗体の量が、６ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
投与毎に投与される抗体の量が、１０ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記個体が、皮膚にＫＩＲ３ＤＬ２を発現する病原性細胞を呈示する、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記疾患が、セザリー症候群、菌状息肉症またはＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
個体における前記処置または予防が、以下：
ａ）２回の連続した薬剤投与の間に、所望のＮＫ溶解能力のためのヒトの血中濃度、任意選択でＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００を維持する、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する薬剤の濃度を決定するステップ、および
ｂ）２回の連続した薬剤投与の間に、所望のＮＫ溶解能力のための血中濃度を維持する任意の量および頻度で、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記薬剤を前記個体に投与するステップ
を含む、ＣＴＣＬの処置方法。
【請求項２７】
所望のＮＫ溶解能力のためのヒトの血中濃度を維持する、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する薬剤の濃度を決定するステップが、５１Ｃｒ放出アッセイで測定される通り、得られた最大腫瘍細胞のパーセンテージにより、健常なドナー由来のＮＫ細胞およびＨＵＴ７８腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞傷害性アッセイにおいて薬剤をアッセイすることを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記薬剤による処置の前に、血中のＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞を検出するステップの非存在を特徴とする、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記疾患が、ＣＤ４Ｔ細胞癌である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患が、ＣＴＣＬである、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する前記薬剤が、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対する結合について、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９と競合する、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞中のＫＩＲ３ＤＬ２の細胞内取込みを実質的に増大または誘導しない、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が、任意選択で膜結合ＫＩＲ３ＤＬ２の安定化によって、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の表面でＫＩＲ３ＤＬ２発現の増大を引き起こすことができる、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が、ＫＩＲ３ＤＬ２とその天然リガンドとの相互作用を妨害し、任意選択で、前記リガンドは、ＨＬＡタンパク質、任意選択でＨＬＡ−Ｂ２７タンパク質である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合するが、ヒトＫＩＲ３ＤＬ１には結合しない、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０またはＤ１ドメインに結合する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、配列番号１の野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドと比較して、残基Ｐ１７９および／または残基Ｓ１８１に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が低下している、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の薬剤または方法。
【請求項３８】
前記抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、配列番号１の野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドと比較して、残基Ｉ６０および／または残基Ｇ６２に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が低下している、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体が、Ｋａｂａｔナンバリングに従い、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のいずれかのＶＬおよびＶＨ  ＣＤＲ１、２および３を含む、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬剤が、以下：（ａ）配列番号２（ＨＣＤＲ１）、配列番号３（ＨＣＤＲ２）および配列番号４（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号５（ＬＣＤＲ１）、６（ＬＣＤＲ２）および７（ＬＣＤＲ３）をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）、または（ｂ）配列番号１８（ＨＣＤＲ１）、配列番号１９（ＨＣＤＲ２）および配列番号２０（ＨＣＤＲ３）の配列をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、２および３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、ならびに配列番号２１（ＬＣＤＲ１）、２２（ＬＣＤＲ２）もしくは２３（ＬＣＤＲ３）をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、２および３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記薬剤が、以下：
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体；ならびに
（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
からなる群から選択される抗体である、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１０月２１日に提出された米国仮特許出願第６２／４１０，８８０号明細書の利益を主張し、これらの開示は、あらゆる図面を含めて、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表に対する参照
本出願は、電子形式の配列表と共に提出される。配列表は、サイズが５３ＫＢである、２０１７年１０月１８日に作られた「ＫＩＲ−７＿ＳＴ２５」というタイトルのファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、ＣＴＣＬの処置のためのＫＩＲ３ＤＬ２標的剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
様々なＴ細胞腫瘍およびＢ細胞腫瘍は、一次的または二次的のいずれかで皮膚に浸潤し得る。皮膚に存在する原発性皮膚リンパ腫は、診断時に真皮外疾患のエビデンスを一切伴わない。原発性皮膚リンパ腫は、組織学的に類似する全身リンパ腫とは完全に異なる臨床挙動および予後を有することが多く、二次的に皮膚に浸潤し得ることから、異なるタイプの処置が必要となる。皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）は、皮膚への新生Ｔリンパ球の局在化を特徴とするリンパ増殖性疾患の１群である。集合的に、ＣＴＣＬは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の１タイプとして分類される。ＣＴＣＬの処置選択は、典型的に、皮膚浸潤の程度、皮膚病変のタイプ、ならびに癌が、リンパ節またはその他の内臓まで広がっているか否かに応じて異なる。菌状息肉症の場合、処置は、皮膚または全身を標的とし得る。セザリー症候群は、一般に、血液浸潤を特徴とし、通常、皮膚局所療法単独では処置されない。処置は、最善の長期利益を達成するために、単独で、または組み合わせて処方され得る。ＣＴＣＬの皮膚局所療法は、斑および限定的なプラーク疾患の場合に有用であり、そうしたものとして、中でも、コルチコステロイド、レチノイド、またはイミキモドなどの局所処置、局所化学療法、局所放射線療法、メトトレキサート、循環光療法、紫外線（光線療法）が挙げられる。
【０００５】
近年では、悪性細胞の表面に発現されるタンパク質をターゲティングするいくつかの抗体治療剤が、ＣＴＣＬの治療法として有望である。
【０００６】
アレムツズマブは、大部分のＴおよびＢ細胞により発現される抗原であるＣＤ５２に対して特異的なヒト化ＩｇＧ１κモノクローナル抗体であり、これは、ＣＴＣＬおよびＰＴＣＬの治療に使用されており、通常の投与プロトコルは、３０ｍｇを３回／週である。しかし、いくつかの後ろ向き研究（ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ）および前向き研究（ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ）は、セザリー症候群において優れた効果を示しているものの、アレムツズマブでの処置は、ＮＫおよびＴ細胞の広範な排除を引き起こすため、血球減少および免疫排除を招く。さらには、非特許文献１は、それにもかかわらず、アレムツズマブ処置は、皮膚中のＴ細胞を完全には排除しないと報告した。アレムツズマブは、血液中の全てのＴ細胞を排除したが、皮膚常在Ｔエフェクターメモリー細胞の別種の集団は、療法後も皮膚中に残った。アレムツズマブによるＴ細胞排除は、血液中に一般に存在するが正常皮膚中には稀な細胞型である好中球の存在を必要とするが、これは、セントラルメモリーＴ細胞が血液と皮膚の間を再循環するので、排除されたのに対し、皮膚常在エフェクターメモリーＴ細胞は、固着性で、再循環しないために、残ったことを示唆している。
【０００７】
さらに近年では、モガムリズマブ（ＫＷ−０７６１）が、再発性／難治性ＣＴＣＬおよびＰＴＣＬの治療剤として出現している。モガムリズマブは、ＣＣＲ４を排除するヒト化抗ＣＣＲ４モノクローナル抗体であり、ＣＣＲ４＋ＡＴＬＬ、ＰＴＣＬまたはＣＴＣＬの処置のために日本で使用が承認されている。しかし、モガムリズマブもまた、正常なＣＣＲ４発現細胞を排除することから、正常調節Ｔ（ＴＲｅｇ）細胞の排除を引き起こす。正常ＴＲｅｇ細胞の排除は、移植片対宿主病の危険性により、後のもしくは併用される造血幹細胞移植、または特に安全性のために正しく機能する免疫系を必要とする他の治療剤を予め排除するという結果をもたらす。
【０００８】
ＣＴＣＬの治療に有望な別の免疫療法薬は、ＣＤ３０抗原をターゲティングし、ＣＤ３０発現細胞を排除する抗体薬物コンジュゲートのブレンツキシマブベドチンである。Ａｄｃｅｔｒｉｓ（商標）（ブレンツキシマブベドチン（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ  ｖｅｄｏｔｉｎ））は、プロテアーゼ切断性リンカーにより、微小管阻害薬のモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に結合した抗ＣＤ３０モノクローナル抗体（クローンｃＡＣ１０）である。一旦ＣＤ３０に結合すると、ブレンツキシマブベドチンは取り込まれ、リンカーに対するリソソーム酵素の作用によりＭＭＡＥが放出されて、細胞死を引き起こす。ブレンツキシマブベドチンは、管理可能な毒性で、高い効力を示しているが、この処置は、正常なＣＤ３０発現免疫細胞、特に活性化Ｂ細胞およびＴ細胞もターゲティングし得る。一部の著者は、腫瘍環境内に放出されたＭＭＡＥが、調節Ｔ（ＴＲｅｇ）細胞の排除による作用機構に寄与する可能性も示唆している。
【０００９】
最後に、ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＣＴＣＬの標的として提案されている（たとえば、非特許文献２；および特許文献１を参照）。ＫＩＲ３ＤＬ２／ＣＤ１５８ｋは、正常な循環ＮＫおよびＣＤ８＋Ｔリンパ球上に発現される細胞表面受容体である。ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＣＴＣＬ細胞株およびＳＳ患者から新しく単離されたＣＤ４＋ＰＢＬの表面上、ならびにＣＴＣＬ患者の循環悪性腫瘍細胞中にも見出されている（非特許文献３）。非特許文献４は、フローサイトメトリーにより分析されるＣＤ１５８ｋ＋血液リンパ球のパーセンテージと、セザリー症候群患者の大きな１群の細胞形態学により決定される異型循環細胞（セザリー細胞）のパーセンテージとの間の強度の正相関を報告し、循環ＣＤ４＋ＣＤ１５８ｋ＋リンパ球が、悪性クローン細胞集団と一致することを報告している。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２は、循環腫瘍負荷の評価、ならびにセザリー症候群患者の経過観察のマーカとして提案されている。特許文献２は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、特に、循環ＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍細胞または腫瘍細胞株に対するＡＤＣＣの媒介に効率的な抗体を報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第０２／５０１２２号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２０１４／０４４６８６号パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｃｌａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２  Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓ．Ｍｅｄ．４（１１７）：１１７ｒａ７（ＤＯＩ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．３００３００８）
【非特許文献２】Ｏｒｔｏｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ  １０７（１０）：４０３０−４０３８
【非特許文献３】Ｎｉｋｏｌｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ．４３（４）：７４１−７４６
【非特許文献４】Ｐｏｓｚｅｐｃｚｙｎｓｋａ−Ｇｕｉｇｎｅ  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．（２００４）１２２（３）：８２０−３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ＣＴＣＬのための様々な処置が利用可能であるが、それらの多くまたは大部分がその使用を制限する副作用を有し、そうしたものとして、腫瘍細胞の表面に発現されるタンパク質をターゲティングする抗体がある。特に、アレムツズマブおよびモガムリズマブによりそれぞれターゲティングされるＣＤ５２およびＣＣ４は、正常細胞にも発現され、正常Ｔ細胞およびＮＫ細胞の排除に関連する副作用を招き、さらには、他の利用可能な抗ＣＴＣＬ処置の後の使用または併用の範囲を制限する。したがって、ＣＴＣＬ処置の改善が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本開示は、Ｔ細胞増殖性疾患の血管外、特に皮膚部位での免疫応答を誘導するのに有効な量で、免疫調節剤としての排除用抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の使用を提供する。この処置は、とりわけ、正常なＫＩＲ３ＤＬ２発現ＮＫ細胞およびＴ細胞の排除を引き起こすことなく、悪性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を排除することができる。これらの薬剤は、特に、循環中の検出可能な悪性細胞の存在とは関係なく、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の処置に使用することができる。これらの薬剤は、循環中に検出可能な悪性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞がまだない顕在型または進行型疾患を有する患者に有利に使用することができる。これらの薬剤は、循環中に有意な悪性細胞が少ないか、またはないことを特徴とする緩徐進行性もしくは早期Ｔ細胞リンパ腫（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する患者の処置に有利に使用することができる。一実施形態では、Ｔ細胞リンパ腫（たとえば、ＣＴＣＬ）の第１選択処置として薬剤を有利に使用することができる。任意選択で、対象は、化学療法薬でまだ処置されていない。任意選択で、対象は、免疫療法薬（たとえば、モガムリズマブ、アレムツズマブおよび／またはブレンツキシマブベドチン）でまだ処置されていない。任意選択で、対象は、骨髄移植または造血幹細胞移植でまだ処置されていない。任意選択で、対象は、進行性疾患を有する。一実施形態では、骨髄移植または造血幹細胞移植前の患者を処置するために、薬剤を有利に使用することができる。
【００１４】
ＡＤＣＣ誘導性抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を有するヒト患者の再発性／難治性ＣＴＣＬの臨床試験において、本発明者らは、驚くことに、極めて少量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（皮膚中のほんのわずかな数の悪性細胞、また特定の用量レベルでは、血液中の悪性細胞（もし存在すれば）のほんの一部に到達するのに十分な量）を受けた患者の皮膚病変に強力な抗腫瘍効果を観察した。
【００１５】
さらに、循環中に検出可能な悪性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞がない患者において、皮膚疾患（皮膚の紅皮症、プラークまたは斑点）に強力な抗腫瘍効果が観察された。
【００１６】
加えて、臨床試験からの分析は、循環中のＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞に対するほんの部分的／最小ＮＫ溶解活性をもたらすように投与される用量で、しかも、皮膚腫瘍（たとえば、高い腫瘍負荷を有する患者の腫瘍など）中の細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２受容体の有意な占有を達成する量よりはるかに低い量の排除用抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤で処置すると、患者は、正常皮膚構造の回復、および疾患の皮膚部位でのＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の大幅な減少など、皮膚疾患の著しい改善を経験したことを明らかにした。
【００１７】
これらの結果は、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤が、十分に長期（たとえば、１０週間以上）にわたって循環中に活性をもたらすように投与されると、組織の疾患部分における作用が予想される低用量の治療剤にもかかわらず、組織（たとえば、皮膚）中の疾患を処置する上で有効となり得ることを示唆している。さらに、この処置は、有利なことに、他の処置で観察されるものとは異なり、循環中の正常なＫＩＲ３ＤＬ２発現ＮＫ細胞および／またはＴ細胞の排除を回避することができる。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、限定されないが、早期および／または緩徐進行性疾患を有する個体をはじめとするＣＴＣＬの第１選択処置に特に有利に使用することができる。一実施形態では、疾患の早期および後期ステージの両方で、造血幹細胞または骨髄移植と組み合わせて（たとえば、その前に）ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する。一実施形態では、ＣＴＣＬの第１選択処置のために、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する。一実施形態では、造血幹細胞または骨髄移植に不適格である（たとえば、高い血液および／または皮膚腫瘍負荷により）対象のＣＴＣＬを処置するために、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する。一実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、正常ＮＫ細胞および／またはＴ細胞の排除なしに、血液および／または皮膚腫瘍負荷の低減を達成し、対象を造血幹細胞または骨髄移植に対して適格にする。
【００１８】
本発明者らの研究では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の用量設定を決定するための新たなパラダイムを使用した。進行型疾患に関連する高い腫瘍負荷を有する個体の場合に特に高い血中濃度を要すると考えられる皮膚の固形腫瘍中の悪性細胞に対する十分なＫＩＲ３ＤＬ２占有を維持するのではなく、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、より低いが、たとえば少なくとも６０％、８０％、９０％もしくは１００％のＮＫ溶解能力（％）をもたらす血液（たとえば、血清）中濃度を維持するのに十分な量および頻度の投与で、顕著な抗腫瘍応答を達成すると同時に、全ての患者に対して単一の投与レジメンを可能にした。これらの処置レジメンは、長期の処置期間および／またはいくつかの処置サイクルにわたって使用することができ、任意選択で、より高い投与頻度（もしくは高用量）を使用する誘導または負荷期間が先行する。特定の実施形態では、低い血液および／または皮膚疾患負荷を有する個体ならびに高い血液および／または皮膚疾患負荷を有する個体の両方で、単一の処置レジメン（たとえば、同じ投与量および頻度）を有利に使用することができる。
【００１９】
一実施形態では、正常ＮＫ細胞および／またはＴ細胞排除を引き起こさない共通処置レジメン（たとえば、同じ投与量および頻度）を、初期腫瘍負荷および／または病期とは関係なく個体に有利に使用することができ、この場合、共通処置レジメンの前に、より高い投与頻度で個体（たとえば、高腫瘍負荷を有する個体）に抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を投与する導入レジメンまたは負荷期間が実施される（任意選択で、共通処置レジメンおよび導入レジメンにおける抗体の投与当たりの用量は同じである。
【００２０】
一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体は、循環悪性および非悪性ＣＤ４（＋）Ｔ細胞集団からクローンとして増殖するのではなく、疾患の皮膚症状に起因し得る。したがって、ＫＩＲ３ＤＬ２は、緩徐進行性もしくは早期ＣＴＣＬを含め、患者に血液浸潤がない（循環中に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞がない）場合、実際には、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤による治療ターゲティングを行うことができるほどに、皮膚Ｔ細胞悪性腫瘍中に十分に発現されている可能性がある。上記に加えてまたは代わり、皮膚病変からの腫瘍細胞が循環に侵入（または再侵入）する可能性もあり、これによって、循環中の少数の腫瘍細胞の溶解は、皮膚におけるより広範な抗腫瘍応答に寄与するのを助ける。
【００２１】
一態様では、ＣＴＣＬの処置に使用するための、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤が提供される。一実施形態では、ＣＴＣＬは、疾患の組織症状、たとえば、掻痒症、紅皮症および／または皮膚腫瘍を有する。一実施形態では、第１選択処置として薬剤を使用する。一実施形態では、Ｔ細胞悪性腫瘍（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する個体に、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤を投与するステップを含む方法が提供される。一態様では、後の骨髄移植または造血幹細胞移植に備え、Ｔ細胞悪性腫瘍（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する個体の前処置に使用するための、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤が提供される。一態様では、疾患の組織症状を伴うＴ細胞悪性腫瘍（たとえば、掻痒症、紅皮症および／または皮膚腫瘍を伴うＣＴＣＬ）を有するが、循環中の検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞がない個体の処置に使用するための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤が提供される。一態様では、緩徐進行性または早期ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用するための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤が提供される。
【００２２】
一態様では、疾患の皮膚症状、たとえば、掻痒症、紅皮症および／または皮膚腫瘍を伴うＣＴＣＬを有する患者において、循環中のＮＫ溶解能力が著しい抗腫瘍効果を誘導するのに十分となり得るわずかなＥＣ１０程度を達成するのに有効な量で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を投与することができる。循環中のＮＫ溶解能力としてわずかなＥＣ１０程度を維持した用量は、血液腫瘍負荷を低減し、循環中のＮＫ溶解能力としてわずかなＥＣ６０程度を維持した用量は、正常皮膚構造を回復し、疾患の皮膚部位のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を減少させる。したがって、一実施形態では、ＣＴＣＬの皮膚症状を有するが、循環中に検出可能な悪性細胞がないか、または低レベルである個体の処置に使用するための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤が提供され、ここで、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、循環中のＮＫ溶解能力が著しい抗腫瘍効果を誘導するのに十分となり得る程度のＥＣ１０を維持するのに有効な量で投与される。別の実施形態では、ＣＴＣＬの皮膚症状および循環中の検出可能な（たとえば、より高レベルの）悪性細胞を有する個体の処置に使用するための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤が提供され、ここで、処置は、ＮＫ溶解能力としてわずかなＥＣ１０程度を維持するのに有効な量での抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の複数回投与を含む。
【００２３】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤によるＫＩＲ３ＤＬ２のターゲティングは、したがって、いくつかの治療状況において有利であり、さらには、循環および／または皮膚中の悪性細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２発現の前試験を必要としない。さらに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用は、様々な範囲の腫瘍負荷を有する集団内の全患者について皮膚疾患（たとえば、紅皮症、皮膚病変）の腫瘍細胞上の十分な受容体占有を維持する用量を必要とせず、しかも、循環中の少数のＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍細胞（たとえば検出限界未満）、たとえば、皮膚病変から循環中に侵入する腫瘍細胞の排除を通して、および／または皮膚病変における抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の誘導を通して、より広範な抗腫瘍応答に寄与する正常免疫細胞（たとえば、ＮＫ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、γ−δＴ細胞）の能力から利益を受けることができる。
【００２４】
一態様では、こうした抗腫瘍応答を誘導することができる抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の投与のための治療用レジメンが提供される。
【００２５】
一態様では、本明細書に開示される治療用レジメンは、循環中に検出可能な悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞）を有するＴ細胞リンパ腫（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する個体、ならびに循環中にそうした検出可能な悪性細胞がないＴ細胞リンパ腫を有する個体の処置に合うように改変されるという利点を有する。特に、こうした患者を処置するために、単一の投与量および／または投与レジメンを使用することができ、循環中の悪性細胞のレベル（またはその欠如）に応じて異なる処置を施す必要が回避される。有利なことに、任意選択で、ある期間にわたって繰り返しおよび／または継続的に、高腫瘍負荷を有する患者を処置して、皮膚症状に対するより広範な応答を生み出すために、治療用レジメンを使用することができる。
【００２６】
一実施形態では、有利な処置は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に相当する血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量および頻度を個体に投与するステップを含む。任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量および頻度は、皮膚中の（または皮膚病変もしくは腫瘍、たとえば進行型疾患ステージ、高腫瘍負荷または紅皮症内の）受容体飽和についてＥＣ９０、またはＥＣ１００を維持するものより低い。
【００２７】
本明細書に記載するいずれかの実施形態の一態様では、有利な処置は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量および頻度で複数回の投与を含む。任意選択で、少なくとも１０週間、１２週間、３ヶ月、４ヶ月または６ヶ月の期間にわたって療法を投与する。任意選択で、投与は、約１週間〜約２ヶ月ずつ間隔を置いて行う。任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、少なくとも４、６、８、１０または２０回投与する。任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量および頻度は、皮膚中の（または皮膚病変もしくは腫瘍、たとえば、進行型疾患ステージ、高腫瘍負荷または紅皮症内の）受容体飽和についてＥＣ９０、またはＥＣ１００をもたらすものより低い。
【００２８】
一実施形態では、有利な処置は、２回の連続した投与の間に、少なくとも１０％、任意選択で少なくとも６０％、任意選択で少なくとも８０％、任意選択で少なくとも９０％、または任意選択で少なくとも１００％）のＮＫ％溶媒能力をもたらす血液（たとえば、血清）中濃度を維持する量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤を個体に投与するステップを含む。
【００２９】
一実施形態では、有利な処置は、２回の連続した投与の間に、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である血液（たとえば、血清）中濃度を維持する量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤を個体に投与するステップを含む。一実施形態では、処置は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である少なくとも血液（たとえば、血清）中濃度のトラフ濃度を維持する。
【００３０】
任意選択で、少なくとも１０週間、１２週間、３ヶ月、４ヶ月または６ヶ月の期間にわたって処置を投与する。
【００３１】
任意選択で、投与は、約１週間〜約２ヶ月ずつ間隔を置いて行う。
【００３２】
任意選択で、処置は、少なくとも４、６、８、１０または２０回の連続した抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の投与を含む。
【００３３】
一実施形態では、個体は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置前に、造血幹細胞移植または骨髄移植に適格である（適格を維持するか、もしくは適格にされる）。
【００３４】
一実施形態では、個体は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置前に、造血幹細胞移植または骨髄移植に不適格であり、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置後に造血幹細胞移植または骨髄移植に対して適格にされる。
【００３５】
任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置は、造血幹細胞移植または骨髄移植の前に行う。任意選択で、処置は、造血幹細胞移植または骨髄移植と組み合わせる。任意の実施形態では、処置方法は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置後に、造血幹細胞移植または骨髄移植を個体に行うステップをさらに含む。
【００３６】
一実施形態では、組織症状を伴うＴ細胞悪性腫瘍の処置に使用するための、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤が提供され、ここで、処置は、血液浸潤を有する個体および血液浸潤のない個体のいずれにおいても有効である。
【００３７】
一実施形態では、Ｔ細胞悪性腫瘍（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する個体に、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合して、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を引き起こすことができる薬剤を少なくとも１投与サイクルにわたり投与するステップを含む方法が提供され、上記サイクルにおいて、２回の連続した薬剤投与の間に、少なくとも１０％、任意選択で少なくとも６０％、８０％、もしくは９０％、または任意選択で１００％の％溶媒能力を循環中に維持する量で薬剤を少なくとも２回投与する。たとえば、薬剤は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００の血液（たとえば、血清）中濃度を維持する量で投与する。一実施形態では、薬剤は、静脈内投与する。一実施形態では、少なくとも４、６、８または１０回薬剤を投与し、任意選択で、連続した投与の間に１週間〜１ヶ月ずつ間隔をあける。一実施形態では、循環中に前記％溶解能力（またはＥＣ値）をもたらす循環中濃度が、少なくとも１０週間、任意選択で少なくとも３ヶ月、任意選択で少なくとも６ヶ月維持されるように、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する薬剤を投与する。一実施形態では、本方法は、組織症状を伴うＴ細胞悪性腫瘍を処置する方法であり、これは、血液浸潤を有する個体および血液浸潤のない個体のいずれにおいても有効である。一実施形態では、本方法は、Ｔ細胞悪性腫瘍（たとえば、ＣＴＣＬ）を有する個体を後の骨髄移植または造血幹細胞移植のために前処理する方法である。
【００３８】
任意選択で、いずれかの実施形態において、処置レジメンの前に、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤をより高い量および／もしくは頻度で投与する導入または負荷期間を実施する。任意選択で、いずれかの実施形態において、処置レジメンの前に、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を同じ量で、しかしより高い頻度で投与する（たとえば、複数回の連続した投与で）導入または負荷期間を実施する。
【００３９】
任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量は、組織（たとえば、血管外組織、疾患組織、皮膚、進行型疾患ステージ、高腫瘍負荷もしくは紅皮症を含む皮膚病変または腫瘍内）中の受容体飽和についてＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００をもたらす量より少ない。
【００４０】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（たとえば、腫瘍細胞）のエフェクター細胞媒介性溶解を媒介する薬剤である。任意選択で、薬剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、またはそうしたポリペプチドを発現する免疫エフェクター細胞（たとえば、キメラ抗原受容体免疫エフェクター細胞）、抗体または他の化合物と結合する、抗原結合ポリペプチド、任意選択で、抗体またはその断片（たとえば、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインを含むタンパク質）である。任意選択で、抗体は、排除用ポリペプチド（抗体）である。任意選択で、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に対してＡＤＣＣおよび／もしくはＡＤＣＰを指向させる単一特異性または多重特異性（たとえば、二重特異性）抗体である。
【００４１】
本明細書のいずれかの実施形態の一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、ＡＤＣＣを媒介することができるヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含み、少なくとも０．１μｇ／ｍｌ（または任意選択で少なくとも０．４、１、２、１０μｇ／ｍＬ）、任意選択で６０μｇ／ｍＬ未満もしくは１００μｇ／ｍＬ未満、任意選択で２〜３０μｇ／ｍＬ、任意選択で２〜６０μｇ／ｍＬの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の血液（血清）濃度を達成する（および／または指定期間にわたって、もしくは２つの連続した投与の間に維持する）のに有効な量で少なくとも２回個体に投与される。一実施形態では、抗体は、毎週１回、２週間毎に１回、毎月（もしくは４週間毎に）１回、任意選択で毎月１回〜２ヶ月毎に１回、静脈内投与する。
【００４２】
これらの態様は、本明細書において提供される本発明の説明において、より詳細に説明され、さらなる態様、特徴、および利点は、本明細書において提供される本発明の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１Ａ】受容体取込み／循環を阻害する４℃でのインキュベーションは、少なくとも同等レベルの細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２をもたらすことが予想されたが、抗体２Ｂ１２（ヒトＩｇＧ１）での染色は、４℃よりも３７℃の方が高かったことを示す。さらに、インキュベーション時間が長くなるほど、高い蛍光中央値が観察され、２４時間のインキュベーション後に最大のＫＩＲ３ＤＬ２発現が観察された。
【図１Ｂ】ＫＩＲ３ＤＬ２レベルの抗体２Ｂ１２（濃い線／正方形）およびアイソタイプ対照（薄い線／丸）の効果を示す。遊離受容体および２Ｂ１２結合ＫＩＲ３ＤＬ２受容体読み出しが相関し、類似のＥＣ５０を有することがわかる。一番右のパネルは、２Ｂ１２との２０時間のインキュベーションが、ＡＰＣに結合した非競合抗ＫＩＲ３ＤＬ２（ｍＡｂ２）により検出される通り、細胞表面で総ＫＩＲ３ＤＬ２受容体レベルを増加することを示している。
【図１Ｃ】３７℃で抗体２Ｂ１２とのインキュベーションは、用量依存的様式で、ＫＩＲ３ＤＬ２の表面発現を増加する（非競合抗ＫＩＲ３ＤＬ２（ｍＡｂ２）により、または２Ｂ１２自体＋二次Ａｂにより検出される通り）ことを示す。この増加は、既に３７℃で１時間後に観察され、２４時間後にその最大値に達すると思われる。染色は、２４時間後で最適である（総染色および検出されたＡｂ結合受容体に関して）。
【図２】ＩＰＨ４１０２のＰＫシミュレーションモデル、すなわち、並列一次経路および飽和性消失経路を含む２コンパートメントモデルを示す。
【図３】最大５０週間にわたる患者のＮＫ細胞のベースライン（１週目の１日目）からの％変化によって示されるように、ＩＰＨ４１０２が、ＮＫ細胞の排除を引き起こさなかったことを証明する。
【図４】最大５０週間にわたる患者のＮＫ細胞の数（１μｌ当たりのＮＫ細胞）によって示されるように、ＩＰＨ４１０２が、ＮＫ細胞の排除を引き起こさなかったことを証明する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本明細書において使用されるように、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味してもよい。請求項において使用される場合、語「含む」と共に使用される場合、語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、１つまたは２つ以上を意味してもよい。本明細書において使用されるように、「他の」は、少なくとも第２のまたはそれを超えるものを意味してもよい。
【００４５】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択で、「〜から本質的になる」または「〜からなる」と交換することができる。
【００４６】
いつでも、「処置」は、疾患および抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（たとえば抗体）に関して言及され、（ａ）疾患の処置を可能にする用量（治療有効量）で、たとえば上記におよび下記に指定される用量（量）で、そのような処置を必要とする温血動物、とりわけヒトに、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（たとえば薬学的に許容され得るキャリヤ材料中の）を投与するステップを含む（少なくとも１つの処置のための）、疾患の処置の方法；（ｂ）疾患の処置のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤もしくは前記処置における（とりわけヒトにおける）使用のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用；（ｃ）疾患の処置のための医薬調製物の製造のための抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用、疾患の処置のための医薬調製物の製造に抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を使用する方法であって、薬学的に許容され得るキャリヤと抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を混合するステップを含む方法、もしくは疾患の処置に適切な、有効用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を含む医薬調製物；または（ｄ）本出願が提出される国において特許を受けるのに許容される主題に従うａ）、ｂ）、およびｃ）の任意の組合せを意味する。
【００４７】
本明細書において使用される用語「生検」は、診断を確立するためなどの検査の目的のための組織の摘出として定義される。生検のタイプの例は、シリンジに付けられた針を通してなど、吸引の適用によるもの；組織の断片の機器を用いる摘出によるもの；適切な機器による摘出によるもの；病変全体などの外科的切除によるもの；および同種のものを含む。
【００４８】
本明細書において使用される用語「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を指す。重鎖中の定常ドメインのタイプに依存して、抗体は、５つの主なクラスのうちの１つに割り当てられる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。これらのいくつかは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、および同種のものなどのサブクラスまたはアイソタイプにさらに分けられる。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。それぞれの四量体は、同一の２対のポリペプチド鎖から構成され、それぞれの対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。それぞれの鎖のＮ−末端は、抗原認識を主として担う約１００〜１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を定める。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。異なるクラスの免疫グロブリンに相当する重鎖定常ドメインは、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」、および「ミュー」とそれぞれ称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は、よく知られている。ＩｇＧは、それらが生理学的状況において最も一般的な抗体であるため、また、それらが研究所の環境において最も容易に作製されるため、本明細書において用いられる例示的なクラスの抗体となる。一実施形態では、抗体が、モノクローナル抗体である。ヒト化、キメラ、ヒト、またはそうでなければヒトに適した抗体が提供される。「抗体」はまた、本明細書において記載される抗体の任意の断片または誘導体も含む。「断片」は、インタクトな抗体の一部、一般に、抗原結合部位または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；連続したアミノ酸残基の非分断配列（本明細書では、「一本鎖抗体断片」もしくは「一本鎖ポリペプチド」と呼ぶ）から構成される一次構造を有するポリペプチドである任意の抗体断片、たとえば、限定されないが、（１）一本鎖Ｆｖ分子（２）関連する重鎖部分がなく、１つの軽鎖可変ドメインだけを含む一本鎖ポリペプチド、または軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むその断片、および（３）関連する軽鎖部分がなく、１つの重鎖可変ドメインだけを含む一本鎖ポリペプチド、または重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含むその断片など；ならびに抗体断片から形成される多重特異性（たとえば、二重特異性）抗体が挙げられる。中でも、ナノボディ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体または「ｄＡｂ」が含まれる。
【００４９】
用語「〜に特異的に結合する」は、抗体が、タンパク質の組換え形態、その中のエピトープ、または単離標的細胞の表面に存在する天然のタンパク質を使用して評価されるように、競合結合アッセイにおいて、結合パートナー、たとえばＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができることを意味する。競合結合アッセイおよび特異的な結合を決定するための他の方法は、下記にさらに記載され、当技術分野においてよく知られている。
【００５０】
抗体が、特定のモノクローナル抗体「と競合する」と言われる場合、抗体が、組換えＫＩＲ３ＤＬ２分子または表面に発現されるＫＩＲ３ＤＬ２分子のいずれかを使用する結合アッセイにおいてモノクローナル抗体と競合することを意味する。たとえば、試験抗体が、結合アッセイにおいてＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドまたはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への１９Ｈ１２、１２Ｂ１１、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の結合を低下させる場合、抗体は、１９Ｈ１２、１２Ｂ１１、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９とそれぞれ「競合する」と言われる。
【００５１】
本明細書において使用される用語「親和性」は、エピトープへの抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］×［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］として定義される解離定数Ｋｄによって与えられ、［Ａｂ−Ａｇ］は抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は非結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は非結合抗原のモル濃度である。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄによって定義される。ｍＡｂの親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８）、Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）、およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）において見ることができ、これらの参考文献は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を決定するための当技術分野においてよく知られている１つの標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニングの使用である（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析デバイスによる分析によってなど）。
【００５２】
用語「エピトープ」は抗原決定基を指し、抗体が結合する抗原上のエリアまたは領域である。タンパク質エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基および特異的な抗原結合抗体またはペプチドによって有効に遮断されるアミノ酸残基、すなわち、抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含んでいてもよい。それは、たとえば抗体または受容体と連結することができる複雑な抗原分子上の最も単純な形態または最も小さな構造エリアである。エピトープは、線状または立体構造／構造的なものとすることができる。用語「線状エピトープ」は、アミノ酸の線状配列（一次構造）上で連続しているアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。用語「立体構造または構造的エピトープ」は、全てが連続しているわけではなく、したがって、分子のフォールディング（二次、三次、および／または四次構造）によって互いに接近するようになる、アミノ酸の線状配列の隔てられた部分に相当するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造エピトープは、３次元構造に依存する。用語「立体構造」は、そのため、多くの場合、「構造的」と区別なく使用される。
【００５３】
用語「細胞内取込み」、または「取込み」は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドおよび／またはそれに結合する抗体について述べるとき、細胞の細胞外表面から細胞の細胞内表面へと１分子を輸送するプロセスを伴う分子の生化学的細胞事象を指す。分子の細胞内取込みを担うこれらのプロセスは、よく知られており、中でも、細胞外分子（たとえば、ホルモン、抗体、および小有機分子など）の取込み；膜結合分子（たとえば、細胞表面受容体など）；ならびに細胞外分子に結合した膜結合分子の複合体（たとえば、膜貫通受容体に結合したリガンドまたは膜結合分子に結合した抗体など）の取込みを含み得る。したがって、「細胞内取込みを誘導および／または増大すること」は、細胞内取込みが開始されるならびに／または細胞内取込みの速度および／もしくは範囲が増大する事象を含む。
【００５４】
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に関する用語「排除すること」、「排除する」、または「排除」は、サンプルまたは対象において存在するＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の数にマイナスの影響を与えるように、死滅させる、除く、溶解する、またはそのような死滅、除去、もしくは溶解を誘発することができるプロセス、方法、または組成物を意味する。細胞の排除は、たとえば、ＡＤＣＣを介して起こり得る。
【００５５】
用語「剤」は、化学化合物、化学化合物の混合物、生体高分子、細胞、または生体物質から作製された抽出物を表すために本明細書において使用される。用語「治療剤」は、生物学的活性を有する剤を指す。
【００５６】
「ヒト化」または「ヒト」抗体は、１つ以上のヒト免疫グロブリンの定常および可変フレームワーク領域が結合領域、たとえば動物免疫グロブリンのＣＤＲと融合された抗体を指す。そのような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するように設計される。そのような抗体は、抗原投与に応じて特異的なヒト抗体を産生するように「操作された」トランスジェニックマウスまたは他の動物から得ることができる（たとえばＧｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９を参照されたい。これらの全教示は参照により本明細書に組み込まれる）。完全ヒト抗体はまた、全て当技術分野において知られている遺伝的または染色体トランスフェクション方法およびファージディスプレー技術によって構築することもできる（たとえばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３を参照されたい）。ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞によって生成されてもよい（たとえば、参照によりそれらの全体が組み込まれる米国特許第５，５６７，６１０号明細書および米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）。
【００５７】
「キメラ抗体」は、（ａ）定常領域またはその一部分が、抗原結合部位（可変領域）が異なるもしくは改変されたクラス、エフェクター機能、および／または種の定常領域またはキメラ抗体に新しい特性を与える完全に異なる分子、たとえば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬剤などに連結されるように改変された、交換された、または取り替えられた；または（ｂ）可変領域もしくはその一部分が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域と改変された、取り替えられた、もしくは交換された抗体分子である。
【００５８】
用語「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」、および「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖のＣ−末端断片、たとえばヒトγ（ガンマ）重鎖のアミノ酸（ａａ）約２３０〜約ａａ４５０または他のタイプの抗体重鎖（たとえばヒト抗体についてはα、δ、ε、およびμ）中のその対応する配列またはその天然に存在するアロタイプを指す。別段の定めがない限り、免疫グロブリンについて共通して認められるＫａｂａｔアミノ酸ナンバリングは、本開示の全体にわたって使用される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照されたい）。
【００５９】
用語「ＮＫ％溶解能力」は、健常なドナー由来のＮＫ細胞が、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて腫瘍細胞（たとえば、ＨＵＴ７８細胞）を溶解する能力を指し、これは、５１Ｃｒ放出アッセイにおいて、得られた最大腫瘍細胞溶解のパーセンテージ（＝腫瘍細胞溶解／飽和時の最大腫瘍細胞溶解×１００）により測定される。エフェクターおよび標的細胞としてＰＢＭＣおよびＨＵＴ７８細胞を使用する好適なアッセイの例を本明細書の実施例に記載する。ＮＫ溶解能力に関して「ＥＣ１０」（または「ＥＣ６０」、「ＥＣ８０」、「ＥＣ９０」、もしくは「ＥＣ１００」）は、そのようなＮＫ溶解能力に関してその最大応答または効果の１０％（または「ＥＣ６０」、「ＥＣ８０」、「ＥＣ９０」、もしくは「ＥＣ１００」の場合には、それぞれ６０％、８０％、９０％もしくは１００％）を生み出す抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の効果濃度を指す。
【００６０】
用語「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、当技術分野においてよく理解される用語であり、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介する非特異的細胞傷害性細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好中球、および好酸球を含む。
【００６１】
用語「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」は、その天然の状態で見られるように通常それに付随する構成成分が実質的にまたは本質的にない材料を指す。純度および均一性は、ポリアクリルアミドゲル等電点電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して典型的に決定される。調製物中に存在する主な種であるタンパク質は、実質的に精製される。
【００６２】
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において区別なく使用される。用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的ミメティックであるアミノ酸ポリマーならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。
【００６３】
用語「組換え」は、たとえば細胞または核酸、タンパク質、もしくはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質、もしくはベクターが異種核酸もしくはタンパク質の導入または天然の核酸もしくはタンパク質の改変によって修飾されたことまたは細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、たとえば、組換え細胞は、細胞の天然の（非組換え）形態内で見られない遺伝子を発現するまたはそうでなければ異常に発現される、不十分に発現される、もしくは全く発現されない天然の遺伝子を発現する。
【００６４】
用語「修飾」は、アミノ酸の配列に関して述べるとき（たとえば、「アミノ酸修飾」）、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。「修飾」または「アミノ酸修飾」とは、ポリペプチド配列中のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を意味する。本明細書において「アミノ酸置換」または「置換」とは、タンパク質配列中の所与の位置のアミノ酸を別のアミノ酸で置換することを意味する。たとえば、置換Ｐ１４Ｓは、１４位のプロリンがセリンで置換された、親ポリペプチドの変異体を指す。ポリペプチドの「変異体」は、参照ポリペプチド、典型的にはネイティブまたは「親」ポリペプチドと実質的に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。ポリペプチド変異体は、ネイティブアミノ酸配列内の特定の位置に１つもしくは複数のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有してもよい。
【００６５】
本明細書における文脈の範囲内で、ポリペプチドまたはエピトープ「に結合する」抗体という用語は、特異性および／または親和性により前記決定基に結合する抗体を示す。
【００６６】
用語「同一性」または「同一な」は、２つ以上のポリペプチドの配列の間の関係において使用される場合、一連の２つ以上のアミノ酸残基の間のマッチの数によって決定されるように、ポリペプチドの間の配列関連性の程度を指す。「同一性」は、特定の数学モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち「アルゴリズム」）によって処理される、ギャップアライメント（もしあれば）を有する２つ以上の配列のより小さな配列の間の同一マッチのパーセントを測定する。関連するポリペプチドの同一性は、知られている方法によって容易に計算することができる。そのような方法は、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）において記載されるものを含むが、これらに限定されない。
【００６７】
同一性を決定するための方法は、試験された配列の間の最大のマッチをもたらすように設計される。同一性を決定する方法は、公的に入手可能なコンピュータープログラムにおいて記載される。２つの配列の間の同一性を決定するためのコンピュータープログラム方法は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を含むＧＣＧプログラムパッケージ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））を含む。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源から公的に入手可能である（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、前掲）。よく知られているＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムもまた、同一性を決定するために使用されてもよい。
【００６８】
疾患の処置
本明細書に開示する抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤および投与レジメンは、任意選択で第１選択処置として、ＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｔ細胞リンパ腫、特にＣＴＣＬ、任意選択でセザリー症候群（ＳＳ）、任意選択で菌状息肉症（ＭＦ）、任意選択で形質転換型ＭＦ、任意選択で進行期の疾患（たとえば、ステージＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＶＡ１、ＩＶＡ２もしくはＩＶＢ）、任意選択で末梢血液浸潤を伴う疾患、任意選択で末梢血液中に検出可能なレベルもしくは高レベルのＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞を伴う疾患、任意選択で緩徐進行性もしくは早期疾患、任意選択でステージＩＡ、ＩＢもしくは、ＩＩＡ疾患、任意選択で末梢血液浸潤を伴わない疾患、任意選択で末梢血液中に検出可能なレベルのＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞がないか、もしくはそれが低レベルである疾患を治療するために、有利に使用することができる。別の態様では、ＣＴＣＬを有する個体のリンパ腫を予防する方法が提供される。別の態様では、ＣＴＣＬを有する個体において、疾患の進行の危険性を抑制する、イニシエーションを経た細胞集団内のリンパ腫の危険性を軽減する方法が提供される。別の態様では、造血幹細胞または骨髄移植のために対象を前処置する、またはそれらに対して対象を適格にする方法が提供される。
【００６９】
皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（下のイメージを参照）は、皮膚への新生Ｔ細胞の局在化を特徴とするリンパ増殖性疾患の１群である。集合的に、ＣＴＣＬは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の１タイプとして分類される。ＣＴＣＬの世界保健機関−欧州癌研究・治療機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ−Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ）（ＷＨＯ−ＥＯＲＴＣ）分類は、Ｗｉｌｌｅｍｚｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０５：３７６８−３７８５に記載されている。ＷＨＯ−ＥＯＲＴＣは、ＣＴＣＬを、緩徐進行性臨床挙動を有するものと、侵攻型サブタイプを有するものとに区分する。第３のカテゴリーは、Ｔ細胞リンパ腫ではない前駆血液腫瘍（ＣＤ４＋／ＣＤ５６＋血液−皮膚腫瘍、芽球性ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞リンパ腫またはＢ細胞由来の原発性皮膚腫瘍）のカテゴリーである。緩徐進行性臨床挙動を有するＣＴＣＬは、菌状息肉症（ＭＦ）およびその変異型、原発性皮膚ＣＤ３０＋リンパ増殖性疾患（たとえば、原発性皮膚未分化大細胞型リンパ腫、リンパ腫様丘疹症）、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫（暫定）および原発性皮膚ＣＤ４＋小／中サイズ多形細胞型リンパ腫（暫定）を含む。侵攻型臨床挙動を有するＣＴＣＬは、セザリー症候群（ＳＳ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型、原発性皮膚末梢性Ｔ細胞リンパ腫、非特定、原発性皮膚侵攻型表皮向性ＣＤ８＋Ｔ細胞リンパ腫（暫定）および皮膚γ／δ陽性Ｔ細胞リンパ腫（暫定）を含む。
【００７０】
最も一般的なＣＴＣＬは、ＭＦおよびＳＳである。それらの特徴は、たとえば、Ｗｉｌｌｅｍｚｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０５：３７６８−３７８５に概説されており、その開示内容は、参照により本明細書に組み込む。ＭＦのほとんどの症例において、その臨床的特徴、病歴、および組織形態学および細胞形態学的所見によって診断に到る。ＣＴＣＬを炎症性皮膚疾患から識別するための別の診断基準は、分子アッセイ（たとえば、サザンブロット、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ））による皮膚生検材料中の優勢なＴ細胞クローンを明らかにすることである。また、遺伝子試験も考慮され得る。古典的菌状息肉症は、次の３つのステージに区分される：（１）斑（萎縮性もしくは非萎縮性）：非特異性皮膚炎、体幹下部および臀部の斑；わずかな掻痒症／掻痒症なし；（２）プラーク：強度の痒みを伴うプラーク、リンパ節腫脹ならびに（３）腫瘍：潰瘍への傾向。セザリー症候群は、紅皮症および白血病により定義される。徴候および症状は、浮腫状皮垂、リンパ節腫脹、手掌および／または足底角皮症、脱毛症、爪ジストロフィー、外反ならびに肝脾腫大を含む。セザリー症候群の診断の場合、基準は、典型的に、分子または細胞遺伝学的方法によって示される末梢血液中の絶対セザリー細胞計数、免疫表現型異常、Ｔ細胞抗原および／またはＴ細胞クローンの喪失を含む。
【００７１】
ＣＴＣＬステージは、ＴＮＭ分類に従って、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶ、ならびに場合に応じて、末梢血液浸潤を含む。菌状息肉症またはセザリー症候群（ＭＦ／ＳＳ）細胞を含む末梢血液浸潤は、さらに進行した皮膚ステージ、リンパ節および内臓浸潤ならびに短い生存期間と相関する。ＭＦおよびＳＳは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ（ＩＳＣＬ）および欧州癌研究・治療機構（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ）（ＥＯＲＴＣ）により提案されている公式のステージ決定システムを有する。Ｏｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｌｏｏｄ．１１０（６）：１７１３−１７２２；およびＡｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（３１）：４７３０−４７３９（その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ＳＳおよびＭＦ、ステージＩＶ（ＩＶＡ１、ＩＶＡ２およびＩＶＢ）は、Ｂ２末梢血液浸潤（高い血液−腫瘍負荷；≧１，０００／μＬの陽性クローン含有セザリー細胞）を含み得る。ＳＳおよびＭＦステージは、Ｉ（ＩＡおよびＩＢ）、ＩＩ（ＩＩＡおよびＩＩＢ）、ＩＩＩ（ＩＩＩ、ＩＩＩＡおよびＩＩＩＢ）ならびにＩＶ（ＩＶＡ１、ＩＶＡ２およびＩＶＢ）を含む。
【００７２】
循環中の悪性ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞のエフェクター細胞媒介性溶解を実現するために設計される処置は、ほんの少数の循環細胞（たとえば、疾患の細胞外症状における悪性細胞全体と比較して）の溶解を介する、循環中の限定数のエフェクター細胞の活性化を介する、ならびに／または皮膚病変中の限定数の悪性細胞に向けた抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、悪性細胞の排除を招く抗腫瘍応答の生成および皮膚病変の全般的疾患改善の誘導を介するものであってよい。応答は、ＮＫ溶解能力としてＥＣ１０をもたらすのに有効な特定の量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を循環中に維持するように設計された様々な処置レジメンを用いて、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体の反復投与により達成された。投与レジメンは、血液浸潤が低いか全くない患者の皮膚病変を改善し、反復投与レジメンは、血液浸潤が高い患者の皮膚病変も改善した。
【００７３】
ＣＴＣＬの診断時に、対象を抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤で処置することができる。正常ＮＫおよびＴ細胞を維持しながら、悪性細胞を排除するために、腫瘍負荷とは関係なく、処置を用いることができる。したがって、この処置は、後のＢＭＴまたはＨＳＣＴと適合性である。一実施形態では、本開示は、ＣＴＣＬを有する対象を治療するための第１選択処置としての抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の使用を提供する。本明細書に使用する用語「第１選択処置」は、ＣＴＣＬの処置のために投与される第１タイプの全身薬物療法を指す。これは、診断後に最初に提供される単剤、併用または維持療法であってよい。
【００７４】
一態様では、個体のＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、血液サンプルからの悪性細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２発現の事前検査のステップなしで、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００７５】
一態様では、個体のＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、皮膚生検からの悪性細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２発現の事前検査のステップなしで、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００７６】
一態様では、循環中に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）がない個体のＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。一態様では、循環中に低レベルの検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）を有する個体のＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００７７】
一態様では、Ｂ２ステージ未満の末梢血液浸潤を有する個体のＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。任意選択で、個体は、１，０００／μＬ未満のセザリー細胞腫瘍負荷を有するか、および／または陽性クローンがない。
【００７８】
一態様では、緩徐進行性ＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。
【００７９】
一態様では、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）ＣＴＣＬを有する個体においてＣＴＣＬのステージおよび／または疾患予後を評価するステップ；および（ｂ）個体が、ステージＩＩまたはＩＩＩの疾患、任意選択でＩＩＢ、ＩＩＩＡもしくはＩＩＩＢを有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８０】
一態様では、ステージＩ  ＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。一態様では、ステージＩＩ  ＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。一態様では、ステージＩＩＩ  ＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。
【００８１】
一態様では、Ｂ２ステージ未満の末梢血液浸潤を有する個体のＣＴＣＬを処置する方法であって、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む方法が提供される。任意選択で、個体は、血液腫瘍負荷がないか、または血液腫瘍負荷が低く、任意選択で、個体は、Ｂ０（有意な血液浸潤の非存在、たとえば、≦５％の末梢血液リンパ球が異型（セザリー）細胞である）またはＢ１（低い血液腫瘍負荷、たとえば、＞５％の末梢血液リンパ球が異型（セザリー）細胞であり、Ｂ２の基準を満たさない）末梢血液浸潤を有する。
【００８２】
前述のいずれかの一態様において、ＣＴＣＬを有する個体は、皮膚病変、任意選択で有意もしくは進行型皮膚疾患、任意選択でＴ２（皮膚表面の≧１０％を覆う斑、丘疹、もしくはプラーク、任意選択でさらにＴ２ａ（斑のみ）またはＴ２ｂ（プラーク±斑）、Ｔ３（少なくとも１つの腫瘍（≧１ｃｍ直径）または身体表面積の≧８０％を覆うＴ４ステージ皮膚浸潤紅皮症）を有する。一実施形態では、個体は、多重および／または高い皮膚腫瘍負荷を有する。一実施形態では、個体は、直径１ｃｍ超の１つまたは複数の皮膚腫瘍を有する。
【００８３】
前述のいずれかの一態様において、ＣＴＣＬを有する個体は、皮膚表面の≧１０％を覆う斑、丘疹、またはプラークを有する。前述のいずれかの一態様において、ＣＴＣＬを有する個体は、少なくとも１つの≧１ｃｍ直径の腫瘍を有する。前述のいずれかの一態様において、ＣＴＣＬを有する個体は、身体表面積の≧８０％を覆う紅皮症を有する。
【００８４】
実施形態において、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）ＣＴＣＬを有する個体におけるＣＴＣＬのステージおよび／または疾患予後を評価するステップ；ならびに（ｂ）個体が、ステージＩＶ疾患、任意選択でＩＶＡ１もしくはＩＶＡ２疾患、任意選択でＩＶＢ疾患を有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８５】
本開示の処置方法が、処置前にＣＴＣＬを特性決定するステップを含んでも、含まなくてもよいことは理解されよう。実施形態において、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）個体が、ＣＴＣＬの皮膚症状（たとえば、紅皮症、皮膚病変もしくは腫瘍）、任意選択で病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を特徴とする皮膚症状を含むＣＴＣＬを有するか否かを決定するステップ；ならびに（ｂ）個体が、ＣＴＣＬの皮膚症状、任意選択で病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を特徴とする皮膚症状を有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。任意選択で、個体が、ＣＴＣＬの皮膚症状を含むＣＴＣＬを有するか否かを決定するステップは、皮膚病変の程度を明らかにするステップ；任意選択で、個体が、プラークおよび／または潰瘍性腫瘍を有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。任意選択で、個体が、ＣＴＣＬの皮膚症状を含むＣＴＣＬを有するか否かを決定するステップは、皮膚疾患のステージ、たとえば、Ｔ２、Ｔ３、もしくはＴ４疾患を明らかにするステップを含む。任意選択で、個体が、ＣＴＣＬの進行した皮膚症状、たとえばＴ２、Ｔ３、またはＴ４疾患を有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８６】
実施形態において、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）ＣＴＣＬを有する個体におけるＣＴＣＬのステージおよび／または疾患予後を評価するステップ；ならびに（ｂ）個体が、緩徐進行性ＣＴＣＬを有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８７】
本開示の処置方法が、処置前にＫＩＲ３ＤＬ２発現について腫瘍細胞を特性決定するステップを含んでも、含まなくてもよいことは理解されよう。実施形態において、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）個体におけるＣＴＣＬの皮膚症状が、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（たとえば、紅皮症および／もしくは皮膚病変中のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞）を含むか否かを決定するステップ；ならびに（ｂ）個体が、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を含むＣＴＣＬの皮膚症状を有する場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８８】
本開示の処置方法が、処置前にＫＩＲ３ＤＬ２発現について腫瘍細胞を特性決定するステップを含んでも、含まなくてもよいことは理解されよう。実施形態において、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）個体から血液サンプルもしくは生検（たとえば、皮膚生検）を取得して、サンプルが、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（ＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞）を含むか否かを決定するステップ；および（ｂ）サンプルが、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を含む場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。別の実施形態では、ＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）個体から血液サンプルを取得して、サンプルが、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（ＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞）を含むか否かを決定するステップ；および（ｂ）サンプルが、検出可能な病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞を含まない場合、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含む。
【００８９】
任意選択で、本方法は、さらに、疾患細胞が、その表面に異常リンパ球の他のマーカも発現しないか否かを決定するステップ、たとえば、細胞が、ＣＤ４、ＣＤ３０、ＣＤ３、ＣＤ８細胞であるか否かを決定するステップも含む。
【００９０】
いくつかの態様では、ＣＴＣＬの処置の後、寛解状態にあるか、またはそうでなければ第１の（１つもしくは複数の）抗ＣＴＣＬ療法（すなわち、非ＫＩＲ３ＤＬ２による）に良好に応答しており、任意選択で低い血液腫瘍負荷を有する個体に抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を投与することができる。
【００９１】
いくつかの態様では、疾患予後が不良であり、且つ／または再発し、第１の（１つもしくは複数の）治療剤に対して抵抗性であるか、または不応答性である個体に抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を投与することができる。
【００９２】
本明細書には、血液腫瘍負荷が低いか、もしくは血液腫瘍負荷がない（および／または検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞がない）ＣＴＣＬの両方、あるいは血液浸潤を伴う、または高い血液腫瘍負荷を伴う（および／または検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞を有する）ＣＴＣＬの処置に使用することができる処置レジメンが提供される。しかし、これらのレジメンが、一方または他方のサブグループに個別に使用してもよいことは理解されよう。
【００９３】
一実施形態において、任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、低用量で、任意選択で、高い血液および皮膚腫瘍負荷を有する者を含む全ての患者において、皮膚疾患（たとえば、紅皮症、皮膚病変もしくは腫瘍）の腫瘍細胞上の十分な受容体占有を維持する量を下回るように設計された量で投与され；こうした用量は、循環中の少数のＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍細胞（たとえば、検出限界未満）、たとえば、皮膚腫瘍から循環に侵入する腫瘍細胞の排除を介して、より広範な抗腫瘍応答をもたらし、および／または皮膚腫瘍における抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の誘導を介して、より広範な抗腫瘍応答をもたらす有利な特性を有し得る。一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の用量は反復され、特に、処置は、１回目、２回目、および任意選択でそれ以上の抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤の投与を含む。任意選択で、投与スケジュール（たとえば、２回の連続した投与の間隔）および用量は、ＮＫ溶解能力について少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に対応する血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤のトラフレベルを維持するように選択される。
【００９４】
一部の実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、任意選択で、おおむねまたは少なくともおおむねＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に相当する血液（たとえば、血清）中濃度を取得および／または維持するような用量および頻度で投与する。
【００９５】
任意選択で、本明細書に記載のいずれかの実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量および頻度は、毎週投与した場合、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇ体重ずつ提供されるものに相当する血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす量より低い。任意選択で、本明細書に記載のいずれかの実施形態では、投与される抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の量または用量は、２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇもしくは１５ｍｇ／ｋｇ体重より低くなるように指定することができる。
【００９６】
本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、ＣＴＣＬの進行を抑制もしくは予防する、その寛解を維持する、もしくはＣＴＣＬの再発を予防する、またはＣＴＣＬのリンパ腫の再発を予防する方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、関連期間にわたって生存の可能性を高める方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、個体のクオリティオブライフを改善する方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、個体における循環リンパ腫細胞（たとえば、セザリー細胞）の数を減少させる方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、個体における血液腫瘍負荷を低減する方法である。
【００９７】
本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、早期ＣＴＣＬから、より進行したステージのＣＴＣＬへの進行を予防する方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、早期ステージＩ、ＩＩもしくはＩＩＩＣＴＣＬから、ステージＩＶ  ＣＴＣＬへの進行を予防する方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、血液腫瘍がないか、もしくは血液腫瘍負荷が低いＣＴＣＬから、血液腫瘍負荷または高い血液腫瘍負荷を有するＣＴＣＬへの進行を予防する方法である。本明細書に記載のいずれかの態様の別の実施形態において、処置方法は、Ｂ０またはＢ１血液腫瘍負荷を有するＣＴＣＬから、Ｂ２血液腫瘍負荷を有するＣＴＣＬへの進行を予防する方法である。
【００９８】
対象への抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤（たとえば、抗体もしくはその断片）の送達（単離されたタンパク質性結合剤としての直接投与、その表面に抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合タンパク質を発現するＣＡＲエフェクター細胞などの細胞としての投与、または内部の核酸、たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体コード核酸配列を含むポックスウイルス遺伝子導入用ベクターなどからのタンパク質性結合剤の発現のいずれかにより）ならびに本明細書に記載の他の方法の実施を使用して、本明細書に開示するＣＴＣＬのいずれか好適な態様を軽減、処置、予防、あるいはそうでなければ、改善することができる。処置は、非経口、たとえば静脈内投与することができ、特に、皮膚病変の異常リンパ球の増殖の抑制および／または改善、正常皮膚構造の回復および病原性Ｔ細胞の大幅な低減に有用となり得る。
【００９９】
本明細書に記載の特定の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、少なくとも１投与サイクルにわたって個体に投与し、このサイクルにおいて、薬剤は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に相当する血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす量で少なくとも２回投与される。任意選択で、２回の連続した薬剤投与の間に、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に相当する血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす濃度を達成、および／または維持するのに有効な量で薬剤を投与する。任意選択で、投与サイクルは、少なくとも１回目および２回目（ならびに任意選択で３回目、４回目、５回目、６回目、７回目および／または８回目もしくはそれ以上）の薬剤投与を含む。任意選択で、薬剤を静脈内投与する。任意選択で、処置は、少なくとも１０週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月または６ヶ月の期間を有する。
【０１００】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす（たとえば、達成する、および／または維持する）量で、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与する。
【０１０１】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ＮＫ溶解能力としてＥＣ１０〜ＥＣ７０、ＥＣ１０〜ＥＣ８０、ＥＣ１０〜ＥＣ９０、またはＥＣ６０〜ＥＣ１００に相当する血液（たとえば、血清）中濃度を少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも１ヶ月もしくは少なくとも２ヶ月にわたり維持する量で、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与する。
【０１０２】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、２回の連続した薬剤投与の間に、皮膚（たとえば、皮膚病変もしくは腫瘍）中のＣＴＣＬ細胞上に実質的に十分なＫＩＲ３ＤＬ２占有を維持する量を下回る量で、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与する。本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、２回の連続した薬剤投与の間に、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ５０、ＥＣ７０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００に相当する皮膚（たとえば、皮膚病変もしくは腫瘍）中の濃度を維持する量を下回る量で、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与する。本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解に関する５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１〜５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌの、ＥＣ５０を特徴とする抗体を、１５、２０もしくは３０ｍｇ／ｋｇ体重を下回る量で（たとえば、毎週投与）個体に投与する。
【０１０３】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解に関する５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１〜５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌの、ＥＣ５０を特徴とする抗体を含み、これを少なくとも０．１μｇ／ｍｌ（または、任意選択で少なくとも０．４、１．２もしくは１０μｇ／ｍｌ）の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の血液（血清）中濃度を達成する（および／または指定期間にわたって、もしくは２回の連続した投与の間に維持する）のに有効な量で個体に投与する。一実施形態では、毎週１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、毎月１回、任意選択で毎月１回〜２ヶ月毎に１回、抗体を静脈内投与する。一実施形態では、少なくとも７ｎｇ／ｍｌ（たとえば、１０％溶解能力）、任意選択で少なくとも７０ｎｇ／ｍｌ（たとえば、６０％溶解能力）、任意選択で少なくとも０．４μｇ／ｍｌ（たとえば、８０％溶解能力）、任意選択で少なくとも２μｇ／ｍｌ（たとえば、９０％溶解能力）、任意選択で少なくとも１０μｇ／ｍｌ（たとえば、１００％溶解能力）、または任意選択で少なくとも２０μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌもしくは８０μｇ／ｍｌの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の血液（血清）中濃度を、２回の連続した投与の間に）維持するのに有効な量で抗体を個体に投与する。
【０１０４】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を含み、０．１〜０．５μｇ／ｍｌ、任意選択で０．４〜２μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜７μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜１０μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜５０μｇ／ｍｌ、任意選択で１０〜２０μｇ／ｍｌ、任意選択で２０〜５０μｇ／ｍｌ、または任意選択で５０〜１００μｇ／ｍｌの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の最小（トラフ）血液（血清）濃度を、指定期間にわたって、もしくは２回の連続した投与の間に）維持するのに有効な量で個体に投与する。一実施形態では、毎月１回、任意選択で毎月１回〜２ヶ月毎に１回、抗体を静脈内投与する。
【０１０５】
特定の血液濃度を達成するのに必要な抗体の量は、特定の抗体の特性に基づいて決定することができる。本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解に関する５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、本明細書に開示する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体のそれと同等のＥＣ５０を特徴とする抗体を含み、（たとえば、本明細書に開示の抗体（たとえば、２Ｂ１２抗体）のそれのＥＣ５０の１−ｌｏｇもしくは０．５−ｌｏｇ未満もしくはそれ以内であるＥＣ５０、任意選択で１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１〜５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を有する。本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、０．１〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．２〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．４〜１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．７５〜１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．０１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．２ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．７５ｍｇ／ｋｇ、または任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で個体に静脈内投与する。一実施形態では、０．１〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．２〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．４〜１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．７５〜１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．０１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．２ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約０．７５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、または任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、毎月１回、任意選択で毎月１回〜２ヶ月毎に１回、抗体を静脈内投与する。
【０１０６】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、０．７５〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で０．７５〜１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇ、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で個体に静脈内投与する。一実施形態では、１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜８ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約４ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１０ｍｇ／ｋｇ体重未満、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、毎週１回（任意選択で２週間毎に１回）、または毎週１回〜毎月１回（もしくは４週間毎に１回）、抗体を静脈内投与する。
【０１０７】
本明細書に記載のいずれかの実施形態の一態様において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇまたは任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で個体に静脈内投与する。一実施形態では、１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１０ｍｇ／ｋｇ体重未満、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、毎月１回〜２ヶ月毎に１回、抗体を静脈内投与する。
【０１０８】
いずれかの実施形態において、ｍｇ／ｋｇは、たとえば６５ｋｇまたは７５ｋｇの体重を用いて、用量のいずれかの固定用量当量として表すことができ、たとえば、１０ｍｇ／ｋｇの固定用量当量は、７５０ｍｇとして規定することができる。
【０１０９】
一実施形態では、個体（たとえば、本明細書に記載のＣＴＣＬを有する個体）のＣＴＣＬを処置する方法が提供され、この方法は、少なくとも１投与サイクルにわたってＫＩＲ３ＤＬ２結合剤を個体に投与するステップを含み、このサイクルにおいて、薬剤は、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす量で少なくとも２回投与される。任意選択で、２回の連続した薬剤投与の間に、ＮＫ溶解能力として少なくともＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００である血液（たとえば、血清）中濃度をもたらす濃度を達成、および／または維持するのに有効な量で薬剤を投与する。任意選択で、投与サイクルは、少なくとも１回目および２回目（ならびに任意選択で３回目、４回目、５回目、６回目、７回目および／または８回目もしくはそれ以上）の薬剤投与を含む。任意選択で、薬剤は静脈内投与する。
【０１１０】
任意選択で、処置レジメンは、導入サイクルを含み得る。たとえば、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解についての５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、本明細書に開示する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体のそれと同等であるＥＣ５０を特徴とする（たとえば、本明細書に開示の２Ｂ１２抗体のそれのＥＣ５０の１−ｌｏｇもしくは０．５−ｌｏｇ未満もしくはそれ以内であるＥＣ５０を有する抗体、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解についての５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１〜５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を特徴とする抗体のためのレジメンは、以下：
（ａ）複数回の抗体投与を含む導入処置サイクルであって、少なくとも５０、８０、９０、１００、２００もしくは３００μｇ／ｍｌ、任意選択で５０〜２００μｇ／ｍｌ、任意選択で５０〜１００μｇ／ｍｌの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の最小（トラフ）血液（血清）濃度を、指定期間にわたって、もしくは２回の連続した投与の間に）維持するのに有効な量で抗体を個体に静脈内投与する導入サイクル、続いて
（ｂ）複数回の抗体投与を含む処置サイクルであって、１００μｇ／ｍｌ未満、任意選択で５０μｇ／ｍｌ未満、任意選択で少なくとも０．１〜０．５μｇ／ｍｌ、任意選択で０．４〜２μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜７μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜１０μｇ／ｍｌ、任意選択で２〜５０μｇ／ｍｌ、任意選択で１０〜２０μｇ／ｍｌ、任意選択で２０〜５０μｇ／ｍｌの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の最小（トラフ）血液（血清）濃度を、指定期間にわたって、もしくは２回の連続した投与の間に）維持するのに有効な量で抗体を個体に静脈内投与する処置サイクル
を含み得る。一実施形態では、処置サイクル（ｂ）で投与される量は、処置サイクル（ａ）で投与される量と同じであるが、投与の頻度はそれより低い。
【０１１１】
ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の別の例示的な処置レジメンにおいて、処置は、以下：
（ａ）複数回（たとえば、少なくとも２、４、８、もしくは１０回）の抗体投与を含む導入処置サイクルであって、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇ、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、毎月約２、３もしくは４回、任意選択で毎週１回の頻度で、抗体を個体に静脈内投与する導入サイクル、続いて
（ｂ）複数回（たとえば、少なくとも２、４、８、もしくは１０回）の抗体投与を含む処置サイクル（たとえば、維持サイクル）であって、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で１．５〜３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で３〜６ｍｇ／ｋｇ、任意選択で６〜１０ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約１．５ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約３ｍｇ／ｋｇ、任意選択で約６ｍｇ／ｋｇ、または任意選択で約１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、１〜３ヶ月毎に約１回、任意選択で毎月約１回の頻度で、抗体を個体に静脈内投与する処置サイクル
を含む。一実施形態では、処置サイクル（ｂ）で投与される用量（たとえば、１、１．５、３、６もしくは１０ｍｇ／ｋｇ）は、処置サイクル（ａ）で投与される用量と同じである。
【０１１２】
一実施形態では、正常ＮＫおよび／またはＴ細胞排除を引き起こさない共通処置レジメン（たとえば、投与の同じ用量および同じ頻度）は、初期腫瘍負荷および／または病期と関係なく、個体に有利に使用することができ、この場合、共通処置レジメンの前に、より高い投与頻度で個体（たとえば、高腫瘍負荷を有する個体）に抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を投与する誘導レジメンまたは負荷期間が実施される（任意選択で、共通処置レジメンおよび誘導レジメンにおける抗体の投与毎の用量は同じである。
【０１１３】
一実施形態では、癌（たとえば、固形腫瘍）を有する個体を治療する方法が提供され、この方法は、ヒトＩｇＧアイソタイプの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を少なくとも１投与サイクルで個体に投与するステップを含み、ここで、この方法は、以下：
ａ．０．７５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量、毎月２〜４回投与（たとえば、毎週１回投与）の頻度で、複数回の連続した静脈内投与により、抗体を投与する導入期間（またはサイクル）、ならびに
ｂ．０．７５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量、毎月もしくは２ヶ月毎に１回投与（たとえば、毎週１回投与）の頻度で、複数回の連続した静脈内投与により、抗体を投与する維持期間（またはサイクル）
を含む。一実施形態では、維持期間内の１回目の投与は、負荷期間の最後の投与から１ヶ月以内に実施する。一実施形態では、（ａ）の導入サイクル中の各投与および（ｂ）の維持期間中の各投与での用量は、同じである（たとえば、導入サイクルおよび維持期間中の両方で０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇを使用する）。
【０１１４】
導入サイクルまたは期間を含む処置のいずれかの一実施形態では、導入期間は、４、５、６、７、８回またはそれ以上の投与を含む。一実施形態では、続く（たとえば、維持）期間は、少なくとも２、３、４、５、６、７または８回の投与を含む。一実施形態では、負荷期間および維持期間のいずれにおいても同じ用量で抗体を投与する。一実施形態では、導入期間および維持期間の各々が、０．７５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、導入期間および維持期間の各々が、１．５ｍｇ／ｋｇ体重の用量で抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、導入期間および維持期間の各々が、３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、導入期間および維持期間の各々が、６ｍｇ／ｋｇ体重の用量で抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、導入期間および維持期間の各々が、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１１５】
任意選択で、本開示の処置は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する正常免疫細胞（たとえば、ＮＫ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、γδＴ細胞）の排除を引き起こさない。任意選択で、薬剤の量は、循環中のＫＩＲ３ＤＬ２発現腫瘍細胞（たとえば、そうした細胞が、たとえば血液腫瘍負荷が低い／ない個体において、ほとんどないか、または検出限界未満である場合）の排除を介して、たとえば、皮膚病変から循環中に侵入する腫瘍細胞の排除を介して、より広範な抗腫瘍応答をもたらすのに有効な量である。任意選択で、薬剤の量は、皮膚病変における抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の誘導を介して、より広範な抗腫瘍応答をもたらすのに有効な量である。
【０１１６】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、ＳＳを有する個体およびＭＦを有する個体に使用する。
【０１１７】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、緩徐進行性疾患を有する個体および侵攻型疾患を有する個体に使用する。
【０１１８】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、循環中に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）がない個体、および循環中に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）を有する個体に使用する。
【０１１９】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、循環中に少数の検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）を有する個体、および循環中に多数の検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２発現悪性細胞（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー細胞）を有する個体に使用する。
【０１２０】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、血液腫瘍負荷が低いか、もしくはない個体、および血液腫瘍負荷（または高い血液腫瘍負荷）を有する個体に使用する。一実施形態では、血液腫瘍負荷がないか、または低腫瘍負荷は、Ｂ０（有意な血液浸潤の非存在、たとえば、≦５％の末梢血液リンパ球が異型（セザリー）細胞）またはＢ１（低い血液腫瘍負荷、たとえば、＞５％の末梢血液リンパ球が異型（セザリー）細胞）である。一実施形態では、血液腫瘍負荷を有するか、または高い血液腫瘍負荷を有するものは、Ｂ２（高い血液腫瘍負荷：≧１，０００／μＬの陽性クローン含有セザリー細胞）である。
【０１２１】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、ＣＴＣＬを有する個体の処置に使用し、その場合、処置レジメン（たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤の同じ投与用量および頻度）を、早期ＣＴＣＬ（たとえば、ステージＩ、ＩＩおよび／またはＩＩＩ）を有する個体、ならびに後期ＣＴＣＬ（たとえば、ステージＩＶ）を有する個体に使用する。
【０１２２】
一態様では、本明細書に記載の処置レジメンのいずれかを、皮膚病変、任意選択で有意もしくは進行型皮膚疾患、任意選択でＴ２（皮膚表面の≧１０％を覆う斑、丘疹、もしくはプラーク、任意選択でさらにＴ２ａ（斑のみ）またはＴ２ｂ（プラーク±斑）、Ｔ３（少なくとも１つの腫瘍（≧１ｃｍ直径）または身体表面積の≧８０％を覆うＴ４ステージ皮膚浸潤紅皮症）を伴うＣＴＣＬを有する個体の処置に使用する。一実施形態では、個体は、複数の且つ／または高い皮膚腫瘍負荷を有する。一実施形態では、個体は、直径１ｃｍ超の１つまたは複数の皮膚腫瘍を有する。
【０１２３】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、薬剤が投与される特定の処置目的のために通常使用される処置および薬剤などの１もしくは複数種の他の処置または治療剤を用いた処置と組み合わせて使用してもよい。追加処置または薬剤は、処置しようとする特定の疾患もしくは状態の単剤療法における処置または薬剤のために典型的に使用される量および処置レジメンで通常投与される。処置方法では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物および第２の治療剤または処置を順次投与することができる。ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物は、第２の治療剤または処置の投与前に投与することができる。たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物は、第２の治療剤または処置の投与の約０〜３０日前に投与することができる。一部の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物は、第２の治療剤または処置の投与の約３０分〜約２週間、約３０分〜約１週間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜１日、または約１〜５日前に投与する。一実施形態では、処置は、骨髄移植または造血幹細胞移植である。一部の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合化合物は、治療剤の投与と同時に投与する。
【０１２４】
一実施形態では、対象は、骨髄移植または造血幹細胞移植による処置の前に、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置を受ける。たとえば、移植は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置の終了後１、２または３ヶ月以内に投与することができる。
【０１２５】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤による処置は、以下：コルチコステロイド、ナイトロジェンマスタード、カルムスチン、局所タクロリムス（Ｐｒｏｔｏｐｉｃ（登録商標））、イミキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標）；３Ｍ  Ｉｎｃ．）、局所レチノイド、およびレキシノイド（ベキサロテン；Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）；Ｌｉｇａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ））、モガムリズマブ、アレムツズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ならびに紫外線療法（Ｐｓｏｒａｌｅｎ＋ＵＶＡ（ＰＵＶＡ）、ナローバンドＵＶＢ、およびＵＶＢ）、光線力学療法（ＰＤＴ）および全身照射、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、たとえばボリノスタット（スベロイルアニリドヒドロキサム酸、Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））およびＲｏｍｉｄｅｐｓｉｎ（デプシペプチド、ＦＫ−２２８、Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））、ヒストンデアセチラーゼアイソタイプ１、２、４および６を選択的に阻害する環状ペプチド、化学療法または併用療法、ゲムシタビン、抗葉酸剤類似体、たとえばＰｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ（Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））、ＩＭｉＤｓ（免疫抑制薬）、ＣＣ−５０１３（レナリドミド；Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））、ＣＣ−４０４７（Ａｃｔｉｍｉｄ）、およびＥＮＭＤ−０９９５、プロテオソーム阻害剤およびボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））からなる群から選択されるＣＴＣＬの追加治療剤または追加処置を用いた処置の前に行う。抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、前述の処置の１つもしくは複数を（またはいずれも）受けたことがない個体に有利に使用することができる。
【０１２６】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤組成物は、任意選択で別の治療剤を含まない。一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤組成物は、単剤療法として、たとえば、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤が投与される特定の処置目的の、特にＣＴＣＬの処置のための別の治療剤の併用投与なしで、使用してもよい。
【０１２７】
ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する薬剤（用語：抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤、抗ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤などと置き換え可能に使用される）は、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するのに好適なあらゆる薬剤であってよく、本開示に従う官能性を有する。
【０１２８】
ＫＩＲ３ＤＬ２（ＣＤ１５８ｋ）は、開示が参照により本明細書に組み込まれるＰｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：５０５−５１８において記載される約１４０ｋＤの３つのＩｇドメイン分子のジスルフィド結合ホモ二量体である。いくつかの対立遺伝子変異体がＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドについて報告されており、これらのそれぞれは、用語ＫＩＲ３ＤＬ２によって包含される。成熟ヒトＫＩＲ３ＤＬ２（ａｌｌｅｌｅ  ＊００２）のアミノ酸配列は、下記に配列番号１において示され、２１アミノ酸残基リーダー配列が省かれたＧｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＢ５２５２０に対応する。
【化１】
2020500161.tif 000003
【０１２９】
また、配列番号１に示されるＫＩＲ３ＤＬ２の対立遺伝子変異体であるあらゆる核酸またはタンパク質、たとえば、少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上のアミノ酸同一性を有するＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質も包含される。
【０１３０】
密接に関連するＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ１）は、Ｃｏｌｏｎｎａ  ａｎｄ  Ｓａｍａｒｉｄｉｓ（１９９５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８（５２０９），４０５−４０８において記載される約７０ｋＤの単量体分子である。ＫＩＲ３ＤＬ１（ＣＤ１５８ｅ２）ポリペプチド（ａｌｌｅｌｅ  ＊００１０１）をコードするｃＤＮＡは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号Ｌ４１２６９において示され、コードされるアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＡ６９８７０において示される。一実施形態では、本明細書において言及されるＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドが、ａｌｌｅｌｅ  ＊００１０１である。
【０１３１】
ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、任意の好適な供給源から容易に得ることができ、たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、様々な免疫グロブリンまたは非免疫グロブリンスカホールド、たとえば、ブドウ球菌プロテインＡのＺドメインに基づく抗体、改変クニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）ドメイン、ヒトフィブロネクチンＩＩＩの第１０細胞外ドメインに基づくモノボディもしくはアドネクチン、リポカリン由来のアンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ（設計されたアンキリン反復ドメイン、多量体化ＬＤＬＲ−Ａモジュール、アビマー（ａｖｉｍｅｒ）またはシステインリッチノッティンペプチドから製造することができる。たとえば、Ｇｅｂａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｓｋｅｒｒａ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３：２４５−２５５（その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。特定の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２結合剤は、抗体（または抗体断片）を含む。
【０１３２】
ＣＴＣＬの治療に使用するためのＫＩＲ３ＤＬ２結合剤（たとえば、抗体、抗体断片）は、たとえば、単離されたタンパク質の形態であってもよいし、または細胞（たとえば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞もしくはＮＫＴ細胞などのＣＡＲエフェクター細胞）の表面に存在するか、または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体コード核酸配列を含むポックスウイルス遺伝子移入ベクターなどの内部の核酸によりコードされてもよい。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞を構築することができる。ＣＡＲの例は、Ｔ細胞抗原受容体複合体ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインに融合した細胞外単鎖抗体（ｓｃＦｖ）を含み、しかも、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞もしくはＮＫ細胞などのエフェクター細胞中で発現されると、モノクローナル抗体の特異性に基づいて抗原認識（すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２認識）を再指向させる能力を有するように操作される。一態様では、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＫＩＲ３ＤＬ２特異的細胞外ドメイン（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合するモノクローナル抗体、たとえば、本明細書に開示する抗体の１つの可変重鎖および軽鎖領域に由来するドメイン）を含むＫＩＲ３ＤＬ２特異的キメラ免疫受容体を、細胞表面膜上に発現し、担持する遺伝子改変免疫細胞が提供される。さらに、ＫＩＲ３ＤＬ２特異的キメラ免疫受容体、受容体をコードするＤＮＡ構築物、ならびに発現のために正しい配向で構築物を含有するプラスミド発現ベクターも提供される。
【０１３３】
一実施形態において、ＫＩＲ３ＤＬ２結合抗体は、ＡＤＣＣ、さらに任意選択でＡＤＣＰをＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞へと指向させる抗体である。
【０１３４】
一実施形態において、本明細書に記載するいずれかの実施形態で使用される抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合し、任意選択で、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ１ポリペプチドには実質的に結合せず、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して１００ｎｇ／ｍｌ未満の（それより良い）、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌの結合親和性（ＫＤ）を特徴とする。
【０１３５】
抗体は、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解に関する５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、１００ｎｇ／ｍｌ未満、任意選択で１〜１００ｎｇ／ｍｌ、任意選択で１〜５０ｎｇ／ｍｌ、任意選択で２５〜７５ｎｇ／ｍｌ、任意選択で約５０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０を特徴とする。抗体は、任意選択で、健常なボランティア由来のＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍溶解に関する５１Ｃｒ−放出アッセイにおいて、本明細書に開示する抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体のそれと同等のＥＣ５０を特徴とする（たとえば、配列番号３１のＶＨおよび配列番号２５もしくは２６のＶＬを有し、野生型もしくは修飾ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含み、しかもＡＤＣＣを媒介する本明細書に開示の２Ｂ１２抗体のそれのＥＣ５０の１−ｌｏｇもしくは０．５−ｌｏｇ未満もしくはそれ以内であるＥＣ５０を有する）。
【０１３６】
例示的な抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、たとえば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置を用いた分析など）により決定されて、ＫＩＲ３ＤＬ２に関して、１×１０−９Ｍ未満の平均解離定数（ＫＤ）を特徴とし得る。任意選択で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２の場合、約１×１０−８Ｍ〜約１×１０−１０Ｍ、または約１×１０−９Ｍ〜約１×１０−１１ＭのＫＤを有する。
【０１３７】
一態様では、ＫＩＲ３ＤＬ２に特異的に結合する抗体は、以下の特性の１つもしくは複数（組合せが矛盾しない限り、それらのあらゆる組合せを含む）を特徴とすることができる：
（ａ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について、１０−８Ｍ未満、好ましくは１０−９Ｍ未満、または好ましくは１０−１０Ｍ未満のＫｄを有する；
（ｂ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８または残基１９３〜２９２に対応するセグメント中の少なくとも１つの残基に結合する；
（ｃ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および／または２０Ｅ９と競合する；
（ｄ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合について（たとえば、ポリペプチド相互作用アッセイで）、ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンド（たとえば、ＨＬＡポリペプチド、任意選択でＨＬＡ−Ｂ２７）と競合する；
（ｅ）ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞内へのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの取込みを実質的に増大もしくは誘導せず、且つ／またはＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞内に取り込まれない；
（ｆ）ＫＩＲ３ＤＬ２の天然リガンド（たとえば、ＨＬＡポリペプチド；ＨＬＡ−Ｂ２７）により誘導されるＫＩＲ３ＤＬ２シグナル伝達を阻害する、または阻害しない；
（ｇ）ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＳ１、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＬ１および／またはＫＩＲ２ＤＳ４ポリペプチドに実質的に結合しない；
（ｈ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのアミノ酸残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／またはＲ２４６のいずれかを１つもしくは複数を含むエピトープに結合する；ならびに
（ｉ）ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｈ３２、Ｇ３３、Ｉ６０、Ｇ６２、Ｒ７８、Ｌ８２、Ｗ２２６、Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つもしくは複数に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１３８】
本明細書に記載する実施形態のいずれかにおいて、抗体は、上の（ａ）〜（ｉ）のいずれか１つまたは複数の特徴を特徴とし得る。本明細書に記載する実施形態のいずれかにおいて、抗体は、さらに（ｄ）または（ｆ）の特徴、任意選択でさらには上の（ｅ）の特徴と組み合わせて、特徴（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｇ）の特徴を特徴とし得る。任意選択で、抗体は、さらに特徴（ｈ）および／または（ｉ）を特徴とする。
【０１３９】
一実施形態では、抗体は、ヒトに好適である。一実施形態では、抗体は、キメラであり、たとえば、非ヒトまたはマウス由来の可変領域、およびヒトまたは非マウス由来の定常領域を含む。一実施形態では、抗体は、ヒトもしくはヒト化抗体である。
【０１４０】
一実施形態では、抗体は、Ｆｃドメインを含むか、またはＦｃγＲ（たとえば、ＦｃγＲＩＩＩＡ）により結合されるアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプの抗体である。
【０１４１】
ヒトＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体の例として、抗体１９Ｈ１２、１２Ｂ１１、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９が挙げられる。これらの抗体およびさらに別の抗体は、いずれも２０１３年９月１７日に出願されたＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書およびＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書に記載されており、これらの抗体の開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。これらの抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２に選択的に結合するが、ＫＩＲ３ＤＬ１（またはＫＩＲ３ＤＳ１）には結合しない。抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９は、たとえば、病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞に向けたＡＤＣＣの誘導により、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的の排除のために、たとえば個体に投与される治療剤として、使用することができるが、抗体１２Ｂ１１および１９Ｈ１２は、検出アッセイにおけるＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞の検出に特に効率的であり、１２Ｂ１１は、凍結組織切片を用いた免疫組織化学アッセイに有利であり、また１９Ｈ１２は、フローサイトメトリー検出に有利であることから、細胞の表面上のＫＩＲ３ＤＬ２発現の検出（たとえば、インビトロアッセイ）に使用する上で、抗体１２Ｂ１１および１９Ｈ１２が有利であろう。
【０１４２】
抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の重鎖および軽鎖可変領域のアミノ酸配列を表Ｃに列挙する。具体的な実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、モノクローナル抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のいずれかとほぼ同じエピトープもしくは決定基と結合し；任意選択で、抗体は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の抗原結合領域を含む。本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９は、そのアミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列を特徴とし得る。一実施形態では、モノクローナル抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＦａｂもしくはＦ（ａｂ’）２部分を含み得る。モノクローナル抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の重鎖可変領域を含む。一実施形態によれば、モノクローナル抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含む。モノクローナル抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の可変軽鎖可変領域、または１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の軽鎖可変領域の１つ、２つもしくは３つのＣＤＲをさらに含み得る。任意選択で、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲのいずれか１つもしくは複数は、１、２、３、４もしくは５以上のアミノ酸修飾（たとえば、置換、挿入または欠失）を含み得る。任意選択で、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９の抗原結合領域の一部もしくは全部を含む軽鎖および／または重鎖可変領域のいずれかをヒトＩｇＧタイプの免疫グロブリン定常領域、任意選択でヒト定常領域、任意選択でヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３アイソタイプに融合させる。
【０１４３】
別の態様では、抗体は、以下を含む：表Ａに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＨＣＤＲ１領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、異なるアミノ酸で置換されていてもよい；表Ａに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＨＣＤＲ２領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、異なるアミノ酸で置換されていてもよい）；表Ａに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＨＣＤＲ３領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、異なるアミノ酸で置換されていてもよい）；表Ｂに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＬＣＤＲ１領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、異なるアミノ酸で置換されていてもよい；表Ｂに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＬＣＤＲ２領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、異なるアミノ酸で置換されていてもよい）；表Ｂに記載するアミノ酸配列、またはそれらの少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の連続したアミノ酸の配列を含む１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９のＬＣＤＲ３領域（任意選択で、これらのアミノ酸の１つもしくは複数は、欠失していても、または異なるアミノ酸で置換されていてもよい）。ＨＣＤＲ１、２、３およびＬＣＤＲ１、２、３配列は、全て（または各々独立に）を、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（各ＣＤＲについて表Ａおよび／またはＢに示される通り）のもの、Ｃｈｏｔｉａナンバリングシステム（各ＣＤＲについて表Ａに示される通り）のもの、ＩＭＧＴナンバリングシステム（各ＣＤＲについて表Ａに示される通り）のもの、またはいずれか他の好適なナンバリングシステムのものとして、任意選択で指定することができる。
【０１４４】
【表１】
2020500161.tif 000004
【０１４５】
【表２】
2020500161.tif 000005
【０１４６】
【表３】
2020500161.tif 000006
【０１４７】
【表４】
2020500161.tif 000007
【０１４８】
【表５】
2020500161.tif 000008
【０１４９】
抗体１０Ｇ５のヒト化ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列の例を表Ｄ中、配列番号１３〜１７および８〜１２においてそれぞれ示す。一態様では、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離されたヒト化抗体が提供され、抗体は、以下：配列番号２において示されるアミノ酸配列ＳＹＴＭＨを含むＨＣＤＲ１領域、またはその少なくとも３もしくは４アミノ酸の配列；配列番号３において示されるアミノ酸配列ＹＩＮＰＳＳＧＹＴＥＮＮＲＫＦを含むＨＣＤＲ２領域、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の連続したアミノ酸の配列；配列番号４において示されるアミノ酸配列ＬＧＫＧＬＬＰＰＦＤＹを含むＨＣＤＲ３領域、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の連続したアミノ酸の配列；配列番号５において示されるアミノ酸配列ＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡを含むＬＣＤＲ１領域、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の連続したアミノ酸の配列；配列番号６において示されるアミノ酸配列ＡＡＴＮＬＡＤを含むＬＣＤＲ２領域、またはその少なくとも３、４もしくは５の連続したアミノ酸の配列；配列番号７において示されるアミノ酸配列ＱＨＦＷＧＴＰＹＴを含むＬＣＤＲ３領域、またはその少なくとも４、５、６、７、もしくは８の連続したアミノ酸の配列を含む。
【０１５０】
一態様では、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するヒト化１０Ｇ５抗体は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含む。
【０１５１】
一実施形態では、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１由来の重鎖フレームワークを含み、任意選択で、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒に、ＩＧＨＶ１−４６＊０３を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＶＫ１由来の軽鎖フレームワーク、任意選択でＩＧＫＶ１−ＮＬ１＊０１を含む。
【０１５２】
任意選択で、ヒトフレームワークは、１つまたは複数の突然変異、たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する保持能力を示す復帰突然変異を含む。したがって、本発明の実施形態は、Ａｂｎｕｍナンバリングを用いて、下記の残基：
１０Ｇ５  ＶＨ：５、１１、１２、１３、２０、３８、４０、４８、６６、６７、６９、７１、７２ａ、７５
のいずれか１つもしくは複数（または任意の組合せ）に復帰突然変異を有する復帰突然変異１０Ｇ５重鎖変異体を含む。
【０１５３】
Ａｂｎｕｍアミノ酸ナンバリング命名法については、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５：３８３２−３８３９に記載されており、その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。Ａｂｎｕｍシステムを用いた配列ナンバリングは、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍで自動的に作成することもできる。しかし、当業者は、別のナンバリングシステムを用いて、Ａｂｎｕｍナンバリングに対応する識別位置を見出すことができ、たとえば、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを用いることができることは理解されよう（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）。
【０１５４】
本発明のさらに別の実施形態は、したがって、下記の残基：
１０Ｇ５  ＶＬ：１７、１８、４０、４５、４８、７０、７６、１００
のいずれか１つもしくは複数（または任意の組合せ）に復帰突然変異を有する復帰突然変異１０Ｇ５軽鎖変異体を含む。
【０１５５】
ヒト化抗体は、たとえば、ヒト化抗体の親和性、安定性、または他の特性を増強するために、ヒトフレームワーク配列に１つもしくは複数の追加突然変異（たとえば復帰突然変異）をさらに含んでもよい。
【０１５６】
一態様では、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するヒト化１０Ｇ５抗体は、以下：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）グルタミン（Ｑ）残基が、ＶＨドメインの３９位およびＶＬドメインの３８位に存在するヒトフレームワーク配列
を含む。任意選択で、ヒトフレームワーク配列は、１つまたは複数の復帰突然変異を含む。
【０１５７】
３９位のグルタミン（Ｑ）残基は、ヒトＶＨフレームワーク配列内に天然に存在するものであってもよいし、または配列のアミノ酸置換もしくは他の修飾により導入してもよい。
【０１５８】
別の態様では、ヒト化抗体は、配列番号１３〜１７の１０Ｇ５のＶＨドメインに対して少なくとも約８０％の配列同一性（たとえば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、またはそれ以上の同一性）を有するＶＨドメインを含み得る。別の特定の態様では、ヒト化抗体は、以下：（ａ）ヒトＶＨドメインに組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメインであって、ＶＨドメインが、配列番号１３〜１７のヒト化１０Ｇ５  ＶＨと少なくとも約８０％（たとえば少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一であるＶＨドメイン、および（ｂ）ヒトＶＬドメインに組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメインであって、ＶＬドメインが、配列番号８〜１２のヒト化１０Ｇ５  ＶＬと少なくとも約８０％（たとえば少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一であるＶＬドメインを含み得る。
【０１５９】
抗体２Ｂ１２のヒト化ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列の例を表Ｄ中、配列番号２４〜２８および３０〜３３においてそれぞれ示す。一態様では、ヒト化抗体は、以下：配列番号１８において示されるアミノ酸配列ＴＡＧＭＱを含むＨＣＤＲ１領域、またはその少なくとも３もしくは４の連続したアミノ酸の配列；配列番号１９において示されるアミノ酸配列ＷＩＮＳＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫを含むＨＣＤＲ２領域、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の連続したアミノ酸の配列；配列番号２０において示されるアミノ酸配列ＧＧＤＥＧＶＭＤＹを含むＨＣＤＲ３領域、またはその少なくとも５、６、７、もしくは８の連続したアミノ酸の配列；配列番号２１において示されるアミノ酸配列ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡを含むＬＣＤＲ１領域、またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の連続したアミノ酸の配列；配列番号２２において示されるアミノ酸配列ＷＴＳＴＲＨＴを含むＬＣＤＲ２領域、またはその少なくとも３、４もしくは５の連続したアミノ酸の配列；および／または配列番号２３において示されるアミノ酸配列ＱＱＨＹＳＴＰＷＴを含むＬＣＤＲ３領域、またはその少なくとも４、５、６、７、もしくは８の連続したアミノ酸の配列を含む。
【０１６０】
本明細書におけるいずれかの実施形態では、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２、および３のいずれかが、その少なくとも４、５、６、７、８、９、もしくは１０の連続したアミノ酸の配列によっておよび／または対応する配列番号において列挙される特定のＣＤＲまたはＣＤＲのセットと少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有するとして特徴付けられてもよい。
【０１６１】
一態様では、ヒト化２Ｂ１２抗体は、以下：
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）ヒトフレームワーク配列
を含む。
【０１６２】
一実施形態では、ヒト化抗体は、ＪＨ６と一緒にヒトサブグループＶＨ１および／またはＶＨ７由来の重鎖フレームワークを含み、任意選択で、抗体は、ＩＧＨＪ６＊０１と一緒に、ＩＧＨＶ７−４−１＊０２および／またはＩＧＨＶ１−ｃ＊０１を含む。一実施形態では、ヒト化抗体は、ヒトサブグループＶＫ１および／またはＶＫ４由来の軽鎖フレームワーク、任意選択でＪＨ４と一緒に、ＩＧＫＶ４−１＊０１および／またはＩＧＫＶ１−３９＊０１、任意選択でＩＧＫＪ４＊０１を含む。
【０１６３】
任意選択で、ヒトフレームワークは、１つまたは複数の突然変異、たとえば、復帰突然変異を含む。任意選択で、下のアミノ酸配列（配列番号２９）の２Ｂ１２重鎖変異体は、Ａｂｎｕｍナンバリングを用いて、下記の残基：
２Ｂ１２  ＶＨ：２、３８、３９、４０、４３、４８、６８、７２ｃ、９１、１０８
のいずれか１つもしくは複数（または任意の組合せ）に復帰突然変異を有し得る。
【化２】
2020500161.tif 000009
【０１６４】
本発明のさらに別の実施形態は、したがって、下記の残基：
２Ｂ１２  ＶＬ：３、８、９、２１、４３、７１、７８、１０４
のいずれか１つもしくは複数（または任意の組合せ）に復帰突然変異を有する復帰突然変異２Ｂ１２軽鎖変異体を含む。
【０１６５】
ヒト化抗体は、たとえば、ヒト化抗体の親和性、安定性、または他の特性を増強するために、ヒトフレームワーク配列に１つもしくは複数の追加突然変異（たとえば復帰突然変異）をさらに含んでもよい。
【０１６６】
一態様では、ヒト化２Ｂ１２抗体は、以下：
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；
（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３；
（ｄ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
（ｆ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３；および
（ｇ）グルタミン（Ｑ）残基が、ＶＨドメインの３９位およびＶＬドメインの３８位に存在するヒトフレームワーク配列
を含む。任意選択で、ヒトフレームワーク配列は、１つまたは複数の復帰突然変異をさらに含む。
【０１６７】
別の態様において、ヒト化抗体は、配列番号３０〜３３の２Ｂ１２またはヒト化２Ｂ１２のＶＨドメインに対して少なくとも８０％の配列同一性（たとえば、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、またはそれ以上の同一性）を有するＶＨドメインを含む。別の特定の態様では、ヒト化抗体は、以下：（ａ）ヒトＶＨドメインに組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＨドメインであって、ＶＨドメインが、配列番号３０〜３３のヒト化２Ｂ１２  ＶＨと少なくとも約８０％（たとえば少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一であるＶＨドメイン、および（ｂ）ヒトＶＨドメインに組み込まれた非ヒトＣＤＲ残基を含むＶＬドメインであって、ＶＬドメインが、配列番号２４〜２８のヒト化２Ｂ１２  ＶＬと少なくとも約８０％（たとえば少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％）同一であるＶＬドメインを含む。
【０１６８】
３９位のグルタミン（Ｑ）残基は、ヒトＶＨフレームワーク配列内に天然に存在するものであってもよいし、または、配列のアミノ酸置換もしくは他の修飾によって導入してもよい。
【０１６９】
１０Ｇ５または２Ｂ１２抗体は、ネイティブまたは改変ヒトＩｇＧ定常ドメインをさらに含んでもよい。任意選択で、定常ドメインは、ＩｇＧ１ドメインであり、任意選択で、Ｆｃ受容体結合を増大するための修飾をさらに含む。
【０１７０】
【表６】
2020500161.tif 000010
【０１７１】
【表７】
2020500161.tif 000011
【０１７２】
一実施形態では、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７３】
一実施形態では、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７４】
一実施形態では、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７５】
一実施形態では、ヒト化２Ｂ１２モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７６】
一実施形態では、ヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７７】
一実施形態では、ヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７８】
一実施形態では、ヒト化１０Ｇ５モノクローナル抗体は、以下：（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【０１７９】
一態様では、本明細書に記載の処置方法に従って使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜１９２、残基１〜９８、または９９〜１９２に対応するセグメント（またはそのサブ配列）と少なくとも部分的に重複するか、またはセグメント中の少なくとも１つの残基を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド上のエピトープに結合する。一実施形態では、エピトープの重要な残基は全て、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜１９２、残基１〜９８、または残基９９〜１９２に対応するセグメント中にある。一実施形態では、抗体は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜１９２、１〜９８または９９〜１９２に対応するセグメント中の１、２、３、４、５、６、７もしくはそれ以上の残基を含むエピトープに結合する。好ましくは、抗体が結合する残基は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの表面上に存在する。
【０１８０】
一態様では、本明細書に記載の処置方法に従って使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、Ｒ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｉ６０およびＧ６２（配列番号１に関して）からなる群から選択される１、２、３、４、５もしくはそれ以上の残基を含むエピトープに結合し、且つ／またはＲ１３、Ｐ１４、Ｓ１５、Ｈ２３、Ａ２５、Ｑ２７、Ｉ６０およびＧ６２（配列番号１に関して）からなる群から選択される残基に突然変異を含むＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの低い結合を有する。
【０１８１】
本明細書に記載の突然変異に用いられる略記法は、以下の通りである：配列番号１に示される残基のナンバリングを用いて、野生型残基：ポリペプチド中の位置：突然変異残基。
【０１８２】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。たとえば、抗体は、突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＱ２７Ｒを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、これに加えて、残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２の１つもしくは複数を含み（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２に突然変異（配列番号１に関して、たとえば、Ｉ６０Ｎ、Ｇ６２Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、これに加えてまたは代わって、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３の１つもしくは複数を含み（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＰ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、残基Ｒ３２および／もしくはＧ３３を含まず（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｒ３２および／もしくはＧ３３に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＲ３２Ｈおよび／もしくはＧ３３Ｒ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有さない。任意選択で、エピトープは、残基Ｆ５０および／もしくはＲ５３を含まず（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｆ５０および／もしくはＲ５３に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＦ５０Ａ、Ｒ５３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有さない。抗体は、残基Ｑ５６および／もしくはＥ５７、ならびに／または残基Ｆ９および／もしくはＳ１１に、結合する場合（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２−ＨＬＡ  Ｂ２７およびＨＬＡ  Ａ３相互作用を遮断する抗体）も、または結合しない場合（たとえば、非内在化抗体）もあり；したがって、一実施形態では、任意選択で、エピトープは、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７（配列番号１に関して）を含まず、且つ／または抗体は、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＦ９ＳおよびＳ１１Ａ、Ｑ５６ＳおよびＥ５７Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有さず；別の実施形態では、任意選択で、エピトープは、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７（配列番号１に関して）を含み、且つ／または抗体は、残基Ｆ９、Ｓ１１、Ｑ５６および／もしくはＥ５７に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＦ９ＳおよびＳ１１Ａ、Ｑ５６ＳおよびＥ５７Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、残基Ｈ２９および／もしくはＦ３４を含まず（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｈ２９および／もしくはＦ３４に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＨ２９Ｓ、Ｆ３４Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対��て低い結合を有さない。任意選択で、エピトープは、残基Ｆ９および／もしくはＳ１１の１つ以上を含まず（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｆ９および／もしくはＳ１１に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＦ９Ｓ、Ｓ１１Ａ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有さない。
【０１８３】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｉ６０および／もしくはＧ６２に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。たとえば、抗体は、突然変異Ｉ６０Ｎおよび／またはＧ６２Ｓを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有し得る。任意選択で、エピトープは、これに加えてまたは代わって、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３の１つもしくは複数を含み（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＰ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７に結合せず、且つ／または残基Ｒ１３、Ａ２５および／もしくはＱ２７に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（たとえば、突然変異Ｒ１３Ｗ、Ａ２５Ｔおよび／もしくはＱ２７Ｒに突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド）に対して低い結合を有さない。
【０１８４】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＰ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１８５】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、（１）残基Ｉ６０および／またはＧ６２に突然変異（配列番号１に関して、たとえば、Ｉ６０Ｎ、Ｇ６２Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、ならびに（２）残基Ｐ１４、Ｓ１５および／もしくはＨ２３に突然変異（配列番号１に関して、たとえば、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、Ｈ２３Ｓ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を示す。
【０１８６】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの（ａ）残基Ｒ１３、Ａ２５および／またはＧ２７の１、２もしくは３つ、ならびに（ｂ）残基Ｉ６０および／またはＧ６２の一方もしくは両方を含むエピトープに結合する。一態様では、抗体は、（ａ）残基Ｒ１３、Ａ２５および／またはＧ２７の１、２もしくは３つに突然変異、ならびに（ｂ）残基Ｉ６０および／またはＧ６２の一方もしくは両方に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１８７】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｒ７８および／もしくはＬ８２を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｒ７８および／もしくはＬ８２に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。たとえば、抗体は、突然変異Ｒ７８ＨおよびＬ８２Ｐを有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有し得る。任意選択で、エピトープは、これに加えて、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／もしくはＡ８７の１つもしくは複数を含むか、または除外し（配列番号１に関して）、且つ／あるいは抗体は、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／もしくはＡ８７に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有するか、または低い結合を有さない。一実施形態では、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基１〜９８に対応するセグメント中の１、２、３、４、５、６、７もしくはそれ以上の残基を含むエピトープに結合し（配列番号１に関して）、任意選択でさらに、エピトープは、残基Ｋ７、Ｙ３０、Ｒ３１、Ｒ７８、Ｐ７９、Ｈ８０、Ｓ８１、Ｌ８２、Ｔ８３、Ｇ８４、Ｗ８５、Ｓ８６および／もしくはＡ８７の１つもしくは複数（たとえば、１、２、３、４、５個）を含む。
【０１８８】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｗ２２６を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｗ２２６に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、これに加えて、残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６の１つもしくは複数を含み（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＩ２３１Ｍ、Ｒ２４６Ｐ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。任意選択で、エピトープは、これに加えて、残基Ｅ２３９を含み（配列番号１に関して）、且つ／または抗体は、残基Ｅ２３９に突然変異（配列番号１に関して、たとえばＥ２３９Ｇ）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１８９】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、配列番号１のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６を含むエピトープに結合し、且つ／または残基Ｉ２３１および／もしくはＲ２４６に突然変異（配列番号１に関して）を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１９０】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの残基Ｗ２２６と、残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の１つもしくは複数を含むエピトープに結合する。
【０１９１】
一態様では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤は、残基Ｗ２２６に突然変異、ならびに残基Ｉ２３１および／またはＲ２４６の一方もしくは両方に突然変異を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに対して低い結合を有する。
【０１９２】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と、ＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体でトランスフェクトした細胞との結合を測定した後、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（配列番号１）に結合する能力を比較する（開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１４／０４４６８６号パンフレットを参照されたい）。本明細書において使用される抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体および突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの間の結合の低下は、結合親和性の低下（たとえば、特定の突然変異体を発現する細胞のＦＡＣＳ試験などの知られている方法によってもしくは突然変異体ポリペプチドへの結合についてのＢｉａｃｏｒｅ試験によって測定されるように）および／または抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の全体の結合能力の低下（たとえば抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体濃度対ポリペプチド濃度のプロットにおけるＢｍａｘの減少によって証明される）があることを意味する。結合の著しい減少は、突然変異した残基が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体への結合に直接関与するまたは抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合した場合に結合タンパク質の非常に近くにあることを示す。抗体エピトープは、このように、そのような残基を含んでいてもよく、そのような残基に空間的に隣接しているさらなる残基を含んでいてもよい。
【０１９３】
いくつかの実施形態では、結合の著しい減少は、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体および突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの間の結合親和性および／または能力が、４０％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、または９５％超、抗体および野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（たとえば配列番号１において示されるポリペプチド）の間の結合と比較して低下していることを意味する。ある実施形態では、結合が、検出可能な限界未満まで低下する。いくつかの実施形態では、結合の著しい減少は、突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の結合が、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体および野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（たとえば配列番号１において示される細胞外ドメイン）の間で観察される結合の５０％未満（たとえば４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、または１０％未満）である場合に証明される。そのような結合測定値は、当技術分野において知られている様々な結合アッセイを使用して生成することができる。１つのそのようなアッセイの特定の例は、実施例の部において記載される。
【０１９４】
一部の実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（たとえば、配列番号１）の残基が置換されている突然変異ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、たとえば、実施例１に記載されているような突然変異体に対して有意に低い結合を呈示する。本明細書で使用される略記法において、フォーマットは以下の通りである：配列番号１に示される残基のナンバリングを用いて、野生型残基：ポリペプチド中の位置：突然変異残基。
【０１９５】
任意選択で、抗体は、配列番号１の残基Ｎ９９、Ｈ１００、Ｅ１３０、Ｈ１３１、Ｆ１３２、Ｖ１７８、Ｐ１７９、Ｈ１８０、Ｓ１８１、Ｐ１８２、Ｙ１８３、および／または残基Ｑ１８４に置換を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が低下している。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が、配列番号１の配列を有する野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するが、任意の１つ以上（たとえば１、２、３、または４つ）の以下の突然変異を有する突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの結合が減少している：Ｐ１７９Ｔおよび／またはＳ１８１Ｔ（配列番号１に関して）。一実施形態では、突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２への結合が、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２への結合と比較して、有意に低下している。
【０１９７】
いくつかの実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、野生型ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド（たとえば配列番号１）中の残基１〜９８、残基９９〜２９２、または残基９９〜１９２に対応するセグメント（またはそのサブ配列）中の残基が異なるアミノ酸により置換された突然変異体ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドへの有意により低い結合を示す。
【０１９８】
一態様では、抗体は、モノクローナル抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と競合することができ、ＫＩＲ３ＤＬ２分子上で、モノクローナル抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と実質的に同じもしくはほぼ同じ、または同じエピトープまたは「エピトープ部位」を認識し、それと結合するか、またはそれに対して免疫特異性を有する。他の実施形態では、モノクローナル抗体は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９から構成されるか、またはその誘導体もしくは断片である。
【０１９９】
抗体は、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と同じエピトープに結合し得るが、好適な抗体は、抗体がＫＩＲ３ＤＬ２に結合し、所望の機能性を有する限り、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドのいずれかの部分を認識して、それに対して増加し得ることは理解されよう。たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２の任意の断片、たとえば、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２、またはＫＩＲ３ＤＬ２断片の任意の組合せを免疫原として用いて、抗体を増加させることができ、抗体は、本明細書に記載のようにＫＩＲ３ＤＬ２発現ＮＫ細胞上で同様にふるまうことができる限り、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド内のあらゆる位置でエピトープを認識することができる。一実施形態では、認識されたエピトープは、細胞表面上に存在する、すなわち、それらは、細胞の外側に存在する抗体に接近可能である。任意選択で、エピトープは、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９によって特異的に認識されるエピトープである。さらに、たとえば、異なる個体の間で最大の効果および標的域を有するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合するために、ＫＩＲ３ＤＬ２内の個別のエピトープを認識する抗体を組み合わせて使用することもできる。
【０２００】
抗体は、当技術分野において知られている様々な技術によって産生されてもよい。典型的に、それらは、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、任意選択でヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む免疫原による、非ヒト動物、任意選択でマウスの免疫化によって産生される。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの完全長配列を含んでいてもよいまたはその断片もしくは誘導体、典型的に免疫原性断片、すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを発現する細胞の表面上に曝露したエピトープを含むポリペプチドの一部分、任意選択で、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９抗体によって認識されるエピトープを含んでいてもよい。そのような断片は、典型的に、成熟ポリペプチド配列の少なくとも約７つの連続するアミノ酸またはその少なくとも約１０の連続するアミノ酸を含有する。断片は、典型的に、受容体の細胞外ドメインに本質的に由来する。一実施形態では、免疫原が、典型的に細胞の表面の脂質膜中の野生型ヒトＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含む。一実施形態では、免疫原が、任意選択で処置されたまたは溶解された、インタクトな細胞、特にインタクトなヒト細胞を含む。他の実施形態では、ポリペプチドが、組換えＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドである。
【０２０１】
抗原により非ヒト哺乳動物を免疫化するステップは、マウスにおける抗体の産生を刺激するために、当技術分野においてよく知られている任意の方法で実行されてもよい（たとえば全開示が参照により本明細書に組み込まれるＥ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８）を参照されたい）。例示的なモノクローナル抗体の場合、次のステップは、免疫化非ヒト哺乳動物から脾細胞を単離した後、これらの脾細胞を不死化細胞と融合させて、抗体産生ハイブリドーマを形成するものである。一旦単離して、単一細胞懸濁液中に存在させたら、リンパ球を不死化細胞株と融合させることができる。
【０２０２】
抗体はまた、たとえば全開示が参照により本明細書に組み込まれるＷａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４１（１９８９）ｐ．５４４において開示されるように、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択によって産生されてもよい。
【０２０３】
ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する１つ以上の抗体の同定は、抗体競合を評価することができる様々な免疫学的スクリーニングアッセイのいずれかを使用して容易に決定することができる。多くのそのようなアッセイは、ルーチン的に実行され、当技術分野においてよく知られている（たとえば、参照により本明細書に詳細に組み込まれる、１９９７年８月２６日に発行された米国特許第５，６６０，８２７号明細書を参照されたい）。本明細書において記載される抗体が結合するエピトープを実際に決定することは、本明細書において記載されるモノクローナル抗体と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する抗体を同定するために決して必要とされないということが理解されるであろう。
【０２０４】
たとえば、調べようとする試験抗体が、異なる由来動物から得られるか、または異なるＩｇアイソタイプのものである場合、単純な競合アッセイを使用することができ、その場合、対照（たとえば、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）と試験抗体を混合（または血清吸着処理）してから、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを含有するサンプルに適用する。このような競合試験での使用には、ウエスタンブロッティングおよびＢＩＡＣＯＲＥ分析の使用に基づくプロトコルが好適である。
【０２０５】
特定の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原サンプルに適用する前の所定時間にわたって、対照抗体（たとえば、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）を様々な量の試験抗体（たとえば、約１：１０もしくは約１：１００）と予め混合する。他の実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原サンプルに対する曝露中に、対照および様々な量の試験抗体を単純に混合することができる。遊離抗体から結合抗体を（たとえば、非結合抗体を排除するための分離もしくは洗浄技法を用いて）、また試験抗体から１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９を（たとえば、種特異的もしくはアイソタイプ特異的二次抗体または１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９を検出可能な標識で特異的に標識することにより）識別することができる限り、試験抗体が、抗原に対する１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９の結合を低減するかどうかを決定することができる。完全に無関係の抗体の非存在下での（標識）対照抗体の結合は、対照の高い値として役立ち得る。対照の低い値は、標識（１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）抗体を、全く同じタイプの非標識抗体（１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）とインキュベートすることによって得ることができ、その際、競合が起こって、標識抗体の結合が低減することになる。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下で標識抗体反応性の有意な低下は、実質的に同じエピトープを認識し得る試験抗体を示す。試験抗体は、たとえば、約１：１０〜約１：１００の範囲の１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９：試験抗体の任意の比で、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対する１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９の結合を、少なくとも約５０％、たとえば少なくとも約６０％、またはより好ましくは少なくとも約８０％もしくは９０％（たとえば、約６５〜１００％）低減し得る。たとえば、そのような試験抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対する１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９の結合を、少なくとも約９０％（たとえば、約９５％）低減し得る。
【０２０６】
競合も、たとえば、フローサイトメトリー試験により評価することができる。こうした試験では、所与のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを担持する細胞をまず、たとえば１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と、次に、蛍光色素またはビオチンで標識した試験抗体とインキュベートすることができる。飽和量の１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９とのプレインキュベーション時に得られた結合が、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９とのプレインキュベーションなしの抗体によって得られた結合（蛍光を用いて測定される）の約８０％、約５０％、約４０％以下（たとえば、約３０％、２０％もしくは１０％）であれば、抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と競合すると言える。あるいは、飽和量の試験抗体とプレインキュベートした細胞上の標識１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９抗体と達成された結合（蛍光色素またはビオチンによる）が、試験抗体とのプレインキュベーションなしで得られた結合の約８０％、約５０％、約４０％以下（たとえば、約３０％、２０％もしくは１０％）であれば、抗体は、１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９と競合すると言える。
【０２０７】
また、試験抗体を血清吸着処理してから、飽和濃度で、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原が固定化された表面上に適用する、単純な競合アッセイを使用してもよい。単純な競合アッセイでの表面は、たとえば、ＢＩＡＣＯＲＥチップ（または表面プラズモン共鳴分析に好適な他の媒体）である。続いて、対照抗体（たとえば１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）を、ＫＩＲ３ＤＬ２飽和濃度で表面と接触させ、ＫＩＲ３ＤＬ２と対照抗体の表面結合を測定する。この対照抗体の結合を、試験抗体の非存在下でのＫＩＲ３ＤＬ２含有表面に対する対照抗体の結合と比較する。試験アッセイでは、試験抗体の存在下での対照抗体によるＫＩＲ３ＤＬ２含有表面への結合の有意な低減は、試験抗体が競合し、対照抗体と実質的に同じエピトープを認識し得ることを示している。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対する対照（たとえば１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９など）抗体の結合を少なくとも約３０％以上、または約４０％低減するいずれかの試験抗体を選択することができる。たとえば、そうした試験抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対する対照抗体（たとえば１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３もしくは２０Ｅ９）の結合を少なくとも約５０％（たとえば、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、またはそれ以上）低減することになる。対照および試験抗体の順序は逆転できる：すなわち、競合アッセイにおいて、対照抗体を初めに表面に結合させた後、試験抗体を表面と接触させてもよいことは理解されよう。たとえば、二次抗体の場合に認められる結合の低減（抗体が交差反応していると想定して）がより大きな規模になることが予想されるため、ＫＩＲ３ＤＬ２抗原に対してより高い親和性を有する抗体をまず、表面に結合させる。こうしたアッセイの別の例は、Ｓａｕｎａｌ（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８３：３３−４１に記載されており、その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０８】
抗体がエピトープ領域内で結合するかどうかの決定は、当業者に知られている方法で実行することができる。そのようなマッピング／特徴付け方法の１つの例として、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体に対するエピトープ領域は、ＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質において露出したアミン／カルボキシルの化学修飾を使用するエピトープ「フットプリント法」によって決定されてもよい。そのようなフットプリント法技術の１つの特定の例は、ＨＸＭＳ（質量分析法によって検出される水素−重水素交換）の使用であり、受容体およびリガンドタンパク質アミドプロトンの水素／重水素交換、結合、および逆交換が生じ、タンパク質結合に参加する主鎖アミド基は、逆交換から保護され、そのため、重水素化されたままであろう。関連する領域は、消化性タンパク質分解、ファストマイクロボア（ｆａｓｔ  ｍｉｃｒｏｂｏｒｅ）高速液体クロマトグラフィー分離、および／またはエレクトロスプレーイオン化質量分析によって、この時点で同定することができる。たとえばＥｈｒｉｎｇ  Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２−２５９（１９９９）Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。適したエピトープ同定技術の他の例は、核磁気共鳴エピトープマッピング（ＮＭＲ）であり、典型的に、遊離抗原および抗体などの抗原結合ペプチドと複合体を形成した抗原の２次元ＮＭＲスペクトル中のシグナルの位置が比較される。抗原は、典型的に、１５Ｎにより選択的に同位体標識され、抗原に対応するシグナルだけがＮＭＲスペクトルにおいて見られ、抗原結合ペプチドからのシグナルは見られない。抗原結合ペプチドとの相互作用に典型的に関与するアミノ酸に起源を有する抗原シグナルは、遊離抗原のスペクトルと比較して、複合体のスペクトルにおいて位置をシフトさせ、結合に関与するアミノ酸はそのように同定することができる。たとえばＥｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｆｏｕｎｄ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９−６７；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１−６７（１９９８）；およびＳａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６  Ｊｕｎ；９（３）：５１６−２４を参照されたい。
【０２０９】
エピトープマッピング／特徴付けはまた、質量分析法方法を使用して実行することもできる。たとえばＤｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００  Ａｐｒ；３５（４）：４９３−５０３およびＫｉｓｅｌａｒ  ａｎｄ  Ｄｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１９９９  Ｍａｙ  １；７１（９）：１７９２−８０１を参照されたい。プロテアーゼ消化技術もまた、エピトープマッピングおよび同定の状況において有用になり得る。抗原決定基に関連する領域／配列は、プロテアーゼ消化によって、たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２に対して約１：５０の比率でトリプシンを使用することまたはｐＨ７〜８でのｏ／ｎ消化、その後に続く、ペプチド同定のための質量分析法（ＭＳ）分析によって、決定することができる。抗ＫＩＲ３ＤＬ２バインダーによってトリプシン切断から保護されたペプチドは、続いて、トリプシン消化にかけられたサンプルおよび抗体とインキュベートされ、次いで、たとえばトリプシンによる消化にかけられたサンプルの比較によって、同定することができる（それによってバインダーについてのフットプリントを明らかにする）。キモトリプシン、ペプシンなどの他の酵素もまたまたはその代わりに、類似するエピトープ特徴付け方法において使用することができる。さらに、酵素的消化は、潜在的な抗原決定基配列が、表面に曝露されておらず、したがって、おそらく、免疫原性／抗原性の点から関連しない、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの領域内にあるかどうかを分析するための迅速な方法を提供することができる。類似する技術の議論については、たとえばＭａｎｃａ，Ａｎｎ  Ｉｓｔ  Ｓｕｐｅｒ  Ｓａｎｉｔａ．１９９１；２７：１５−９を参照されたい。
【０２１０】
部位特異的突然変異誘発は、結合エピトープの解明に有用な他の技術である。たとえば、「アラニンスキャニング」では、タンパク質セグメント内のそれぞれの残基が、アラニン残基と交換され、結合親和性についての結果が測定される。突然変異が結合親和性の著しい減少に至る場合、それはおそらく結合に関与しているであろう。構造的エピトープに対して特異的なモノクローナル抗体（すなわち非フォールドタンパク質に結合しない抗体）は、アラニン置換が、タンパク質の全体的なフォールドに影響を及さないことを検証するために使用することができる。たとえばＣｌａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５；２６７：３８３−３８６；およびＷｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９６；９３：１−６を参照されたい。
【０２１１】
電子顕微鏡もまた、エピトープ「フットプリント法」に使用することができる。たとえばＷａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９２；３５５：２７５−２７８は、天然ササゲモザイクウイルスのカプシド表面上のＦａｂ断片の物理的フットプリントを決定するために、連係して適用した低温電子顕微鏡、３次元像修復、およびＸ線結晶解析を使用した。
【０２１２】
エピトープ評価のための「標識遊離」アッセイの他の形態は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ）および反射型干渉分光法（ＲｉｆＳ）を含む。たとえばＦａｅｇｅｒｓｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  １９９０；３：２０８−１４；Ｎｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９９３；６４６：１５９−１６８；Ｌｅｉｐｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８；３７：３３０８−３３１１；Ｋｒｏｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  ２００２；１７：９３７−９４４を参照されたい。
【０２１３】
抗体と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する抗体は、本明細書において記載される、１つ以上の例示的な競合アッセイにおいて同定することができることもまた、注目されるべきである。
【０２１４】
一旦、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合することができるおよび／または他の所望される特性を有する抗体が同定されたら、それらはまた、典型的に、無関係なポリペプチドを含む他のポリペプチドに結合するそれらの能力について、本明細書において記載されるものを含む標準的な方法を使用して、評価されるであろう。理想的には、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２、たとえばヒトＫＩＲ３ＤＬ２にのみ実質的な親和性により結合し、無関係なポリペプチドに有意なレベルでは結合しない。しかしながら、ＫＩＲ３ＤＬ２に対する親和性が、それが他の無関係なポリペプチドに対するものよりも実質的に大きい限り（たとえば５×、１０×、５０×、１００×、５００×、１０００×、１０，０００×、またはそれを超える）、抗体は、本発明の方法における使用に適していることが理解されるであろう。
【０２１５】
実施形態のいずれかの一態様では、本発明の方法に従って調製される抗体が、モノクローナル抗体である。他の態様では、抗体を産生するために使用される非ヒト動物が、げっ歯動物、ウシ、ブタ、家禽、ウマ、ウサギ、ヤギ、またはヒツジなどの哺乳動物である。
【０２１６】
代替の実施形態によれば、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド上に存在するエピトープに結合する抗体をコードするＤＮＡが、ハイブリドーマから単離され、適切な宿主の中へのトランスフェクションのための適切な発現ベクター中に置かれる。次いで、宿主は、抗体またはそのモノクローナル抗体のヒト化バージョン抗体の活性断片、抗体の抗原認識部分を含むキメラ抗体、もしくは検出可能な成分を含むバージョンなどのその変異体の組換え産生に使用される。
【０２１７】
モノクローナル抗体、たとえば抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３または２０Ｅ９をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離し、シークエンシングすることができる（たとえば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）。一旦単離されたら、ＤＮＡは発現ベクターの中に置くことができ、これは、次いで、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を達成するために、トランスフェクトされなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞の中にトランスフェクトされる。本明細書において別記されるように、そのようなＤＮＡ配列は、多くの目的のいずれかのために、たとえば抗体をヒト化する、断片もしくは誘導体を産生するために、または抗体の結合特異性を最適化するために、たとえば抗原結合部位中の抗体の配列を修飾するために、修飾することができる。
【０２１８】
抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現は、当技術分野においてよく知られている（たとえばＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２５６（１９９３）；およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０，ｐ．１５１（１９９２）を参照されたい。
【０２１９】
一実施形態では、抗体は、ＡＤＣＣを介した（および任意選択でさらにＡＤＣＰを介した）病原性ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（たとえば、腫瘍細胞）の排除を媒介することができる。一旦、抗原結合化合物が得られたら、それは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞に向けてＡＤＣＣを誘発する、その活性および／もしくは増殖を阻害する、ならびに／またはその除去を引き起こす能力について評価されてもよい。ＡＤＣＣを誘発するまたはＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞の活性の除去もしくは阻害に一般に至る抗原結合化合物の能力の評価は、方法の任意の適したステージで実行することができる。この評価は、治療上の使用のために定められた抗体（または他の化合物）の同定、産生、および／または開発に関与する様々なステップの１つ以上で有用になり得る。たとえば、活性は、候補抗原結合化合物を同定するためのスクリーニング方法との関連においてまたは抗原結合化合物が選択され、ヒトに適したものにする（たとえば、抗体の場合には、キメラまたはヒト化される）、抗原結合化合物を発現する細胞（たとえば組換え抗原結合化合物を発現する宿主細胞）が得られ、機能的抗体（もしくは他の化合物）を産生するその能力について評価される、および／またはある量の抗原結合化合物が産生され、活性について評価することになる（たとえば、産物のバッチもしくはロットを試験する）方法において、評価されてもよい。一般に、抗原結合化合物は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに特異的に結合することが知られているであろう。ステップは、複数（たとえばハイスループットスクリーニング方法を使用する非常に多数または少数）の抗原結合化合物を試験することを伴ってもよい。
【０２２０】
ＡＤＣＣの試験は、当技術分野において知られているものおよび本明細書における実験の実施例において記載されるものを含む、様々なアッセイによって実行することができ、決定することができる。ＡＤＣＣの試験は、典型的に、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が結合したＫＩＲ３ＤＬ２発現標的細胞（たとえばセリアック病細胞または他のＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞）が、補体の関与を伴うことなく、Ｆｃ受容体を有するエフェクター細胞によって認識される細胞媒介性細胞傷害性を評価することを含む。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原を発現しない細胞は、コントロールとして任意選択で使用することができる。ＮＫ細胞傷害性の活性化は、サイトカイン産生（たとえばＩＦＮ−γ産生）または細胞傷害性マーカ（たとえばＣＤ１０７動員）の増加を測定することによって評価される。一実施形態では、抗体が、サイトカイン産生の増加、細胞傷害性マーカの発現、またはコントロール抗体（たとえばＫＩＲ３ＤＬ２に結合しない抗体、マウス定常領域を有するＫＩＲ３ＤＬ２抗体）と比較して、標的細胞の存在下において少なくとも２０％、５０％、８０％、１００％、２００％、もしくは５００％の標的細胞溶解を誘発するであろう。他の実施例では、標的細胞の溶解が、たとえばクロミウム放出アッセイにおいて検出され、たとえば、抗体が、標的細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％の溶解を誘発するであろう。
【０２２１】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、細胞の表面に発現されるＫＩＲ３ＤＬ２の細胞内取込みを実質的に増大または誘導しない。本明細書で使用されるように、「取り込まれない」または「内在化しない」抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、哺乳動物細胞（すなわち、細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２）上のＫＩＲ３ＤＬ２への結合時に、細胞によって実質的に取り込まれない（すなわち、細胞内に侵入しない）ものである。
【０２２２】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、特に悪性細胞上で、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による結合のために利用可能な細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの増加を引き起こすことができる。抗体は、一実施形態において、細胞表面（たとえば、悪性細胞の）上でのＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの発現レベルを高め得る。抗体は、一実施形態において、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体による結合のために利用可能な細胞表面上のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの量または数を増加し得る。抗体は、一実施形態において、細胞表面上に存在するＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの蓄積を安定化、および／または引き起こすことができ、たとえば、抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの受容体循環または取込みを低減し得る。たとえば、病原性ＣＤ４＋Ｔ細胞上で、細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２を増加する抗体は、より多数の抗体をＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（たとえば、標的細胞、悪性細胞）に結合させることができるため、高い効力を有する。一実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の表面上のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する単離されたモノクローナル抗体が提供され、ここで、抗体は、少なくとも１時間、３時間、６時間、１２時間もしくは２４時間にわたって細胞と接触させた（インビボもしくはインビトロで）後、細胞表面に検出可能なＫＩＲ３ＤＬポリペプチドの量または数の増加を引き起こす。この増加は、対照抗体、たとえば、アイソタイプ対照、またはＫＩＲ３ＤＬ２に結合する別の抗体（たとえば、異なる重鎖および／もしくは軽鎖可変領域アミノ酸配列を有する抗体）との比較によるものでよい。
【０２２３】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が、哺乳動物細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２に結合時に内在化するか否か、またはＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドが、細胞内取込み（たとえば、抗体により結合された時点で）を受けるか否かは、様々なアッセイによって決定することができ、こうしたアッセイとして、両方とも２０１３年９月１７日に提出されたＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書およびＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書の実験例に記載されているものがある。たとえば、培地に添加された関連抗体の存在もしくは非存在下の組織培養皿内で細胞をインキュベートし、所望の時点で顕微鏡分析のために処理することができる。細胞内に取り込まれた標識抗体の存在は、放射性標識抗体を使用する場合、顕微鏡法またはオートラジオグラフィーによって直接視覚化することができる。任意選択で、顕微鏡法により、既知ポリペプチドまたは他の細胞成分との同時局在化を評価することができ；たとえば、エンドソーム／リソソームマーカＬＡＭＰ−１（ＣＤ１０７ａ）は、取り込まれた抗体の細胞下局在化に関する情報を提供することができる。
【０２２４】
抗体が、細胞表面のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの数を増加することができるか否かの試験は、試験抗体をＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞（たとえば、Ｔ細胞リンパ腫）と一緒にインキュベートし、インキュベーション期間後に細胞表面のＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドを検出することによって実施することができる。ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドは、好適な親和性試薬、たとえば、１または複数の抗体を用いて実施することができる。例示的なアッセイは、ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書およびＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書に示されている。たとえば、抗体は、対照抗体（たとえば、ＫＩＲ３ＤＬ２に結合しない抗体、異なる抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体）と比較して、試験抗体の存在下でのインキュベーション（たとえば、少なくとも１、３、６、１２、２４もしくは４８時間にわたる）後に細胞表面に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの数の少なくとも２０％、５０％、７５％または１００％の増加を誘導し得る。任意選択で、インキュベーション後の細胞表面に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの数は、試験抗体を用いて検出可能な数である。任意選択で、インキュベーション後の細胞表面に検出可能なＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの数は、ＫＩＲ３ＤＬ２に対する結合について試験抗体と競合しない第２の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体を用いて検出可能な数である。
【０２２５】
一実施形態では、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２とＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡ天然リガンド同士の結合を検出可能に低減（または排除）するその能力について試験することができる。例示的なアッセイは、ＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９３０２号明細書およびＰＣＴ／欧州特許出願公開第２０１３／０６９２９３号明細書に示されている。一実施形態では、ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する抗体が提供され、ここで、前記抗体は、ＫＩＲ３ＤＬ２とＫＩＲ３ＤＬ２の第１ＨＬＡ天然リガンド同士の結合を検出可能に低減（または排除）するが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＫＩＲ３ＤＬ２の第２ＨＬＡ天然リガンド同士の結合は検出可能に低減（または排除）しない。
【０２２６】
一実施形態では、抗体は、任意選択で、ＫＩＲ３ＤＬ２とＫＩＲ３ＤＬ２のＨＬＡクラスＩ−リガンド（たとえば、ＨＬＡ−Ｂ２７）同士の結合を検出可能に低減する。一実施形態では、抗体は、任意選択で、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ｂ２７同士の結合を検出可能に低減するが、ＫＩＲ３ＤＬ２とＨＬＡ−Ａ３同士の結合は検出可能に低減しない。
【０２２７】
ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドに結合する剤が同定された場合、それを試験して、５１Ｃｒ放出アッセイで測定される通り、インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて腫瘍細胞（たとえば、ＨＵＴ７８細胞）を溶解するＮＫ細胞の能力を試験することによって、指定「ＮＫ％溶解能力」を達成する濃度を、得られた最大腫瘍細胞のパーセンテージ（＝腫瘍細胞溶解／飽和時の最大腫瘍細胞溶解×１００）により決定することができる。エフェクター細胞および標的細胞としてＰＢＭＣおよびＨＵＴ７８細胞を使用する好適なアッセイの例を本明細書の実施例に記載する。そうしたＮＫ溶解能力に関してその最大応答または効果のＥＣ１０、ＥＣ６０、ＥＣ８０、ＥＣ９０、またはＥＣ１００を決定するために、抗ＫＩＲ３ＤＬ２剤を試験することができる。典型的に、ＮＫ細胞は、健常なヒトドナーに由来する、たとえばＰＢＭＣ内のＮＫ細胞である。異なるドナーからのサンプル、たとえば、１０、２０またはそれ以上のドナーサンプルを用いて好適な回数の実験を実施することができる。
【０２２８】
ある実施形態では、抗体を産生するハイブリドーマのＤＮＡが、たとえば、相同な非ヒト配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列を置換することによって（たとえばＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ｐｐ．６８５１（１９８４））または非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全てもしくは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することによって、発現ベクターへの挿入の前に修飾することができる。そのように、もとの抗体の結合特異性を有する「キメラ」抗体または「ハイブリッド」抗体が、調製される。典型的に、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインと置換される。
【０２２９】
したがって、他の実施形態によれば、抗体が、ヒト化抗体である。抗体の「ヒト化」形態は、マウス免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、特異的なキメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、または断片である（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、もしくは抗体の他の抗原結合サブ配列など）。大部分について、ヒト化抗体は、もとの抗体の所望の特異性、親和性、および能力を維持しながら、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、もとの抗体（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基と交換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【０２３０】
いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基と交換されてもよい。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においても、移入されるＣＤＲもしくはフレームワーク配列においても見られない残基を含むことができる。これらの修飾は、抗体性能をさらに改良し、最適化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てがもとの抗体のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、実質的に全ての、少なくとも１つの、典型的に２つの可変ドメインを含むであろう。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。さらなる詳細については、全開示が参照により本明細書に組み込まれるＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，ｐｐ．３２３（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２，ｐｐ．５９３（１９９２）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９，ｐｐ．１５３４；および米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。抗体をヒト化する方法は、当技術分野においてよく知られている。
【０２３１】
ヒト化抗体を作製するのに使用されることになるヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖の両方の選択は、抗原性を低下させるのに非常に重要である。いわゆる「最適適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」方法によれば、抗体の可変ドメインの配列は、知られているヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、マウスのものに最も近いヒト配列は、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として許容される（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１，ｐｐ．２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．１９６，１９８７，ｐｐ．９０１）。他の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８９，ｐｐ．４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，ｐ．２６２３（１９９３））。
【０２３２】
ＫＩＲ３ＤＬ２受容体に対する高い親和性および他の好都合な生物学的特性を保持しながら、抗体がヒト化されることはさらに重要である。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の３次元モデルを使用する、親の配列および様々な概念的なヒト化産物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。候補免疫グロブリン配列の有望な３次元構造を示し、表示するコンピュータープログラムは、入手可能である。これらの表示についての検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の有望な役割の分析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このように、標的抗原に対する親和性の増加などの所望の抗体特質が実現されるように、ＦＲ残基は、コンセンサス配列およびインポート配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に直接、最も実質的に、影響を及ぼすことに関与する。
【０２３３】
「ヒト化」モノクローナル抗体を作製する他の方法は、免疫化のために使用されるマウスとしてＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）を使用することである。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、その免疫グロブリン遺伝子が機能的ヒト免疫グロブリン遺伝子と交換されたマウス宿主である。したがって、このマウスによってまたはこのマウスのＢ細胞から作製されたハイブリドーマにおいて産生された抗体は、既にヒト化されている。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，１６２，９６３号明細書において記載される。
【０２３４】
ヒト抗体はまた、免疫化のために、ヒト抗体レパートリーを発現するように操作された他のトランスジェニック動物を使用することによって（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２（１９９３）２５５）またはファージディスプレー方法を使用する抗体レパートリーの選択によってなど、様々な他の技術に従って産生されてもよい。そのような技術は、当業者に知られており、本出願において開示されるモノクローナル抗体から出発して実行することができる。
【０２３５】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体がＡＤＣＣを誘発する能力を考慮して、抗体は、抗体依存性細胞傷害性、肥満細胞脱顆粒、および食作用などのエフェクター機能ならびにリンパ球増殖および抗体分泌の調節などの免疫調節性シグナルに影響を与えることができる、Ｆｃ受容体に結合するそれらの能力を増加させる修飾をなすことができる。典型的な修飾は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（たとえば置換、欠失、挿入）および／またはグリコシル化の改変タイプ、たとえば低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）を含む修飾ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。そのような修飾は、Ｆｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）との相互作用に影響を与えることができる。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は、活性化（すなわち免疫系増強）受容体であるが、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は、阻害（すなわち免疫系抑制）受容体である。修飾は、たとえば、エフェクター（たとえばＮＫ）細胞上のＦｃγＲＩＩＩａに対するＦｃドメインの結合を増加させてもよい。
【０２３６】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、任意選択で修飾されたヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのＦｃドメイン（またはその一部分）を含んでいてもよい。残基２３０〜３４１（Ｋａｂａｔ  ＥＵ）は、Ｆｃ  ＣＨ２領域である。残基３４２〜４４７（Ｋａｂａｔ  ＥＵ）は、Ｆｃ  ＣＨ３領域である。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、１つ以上の部分において１つ以上のアミノ酸修飾（たとえば置換、欠失、挿入）を有する変異Ｆｃ領域を含んでいてもよく、この修飾は、ＦｃγＲ（活性化および阻害性ＦｃγＲを含む）に対する変異Ｆｃ領域の親和性および結合活性を増加させる。いくつかの実施形態では、前記１つ以上のアミノ酸修飾が、ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異Ｆｃ領域の親和性を増加させる。他の実施形態では、変異Ｆｃ領域が、さらに、同等の親抗体（すなわち、Ｆｃ領域における１つ以上のアミノ酸修飾を除いて抗体と同じアミノ酸配列を有する抗体）のＦｃ領域よりも低い親和性でＦｃγＲＩＩＢに特異的に結合する。たとえば、アミノ酸位置３１０および４３５のヒスチジン残基の一方または両方は、たとえばリシン、アラニン、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、セリン、またはトレオニンによって置換されてもよく（たとえばＰＣＴ公開国際公開第２００７／０８０２７７号パンフレットを参照されたい）、そのような置換された定常領域は、活性化ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を減少させることなく、阻害性ＦｃγＲＩＩＢへの結合の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、そのような修飾が、親抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異Ｆｃ領域の親和性を増加させ、また、ＦｃγｙＲＩＩＢに対する変異Ｆｃ領域の親和性も増強させる。他の実施形態では、前記１つ以上のアミノ酸修飾が、親抗体のＦｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異Ｆｃ領域の親和性を増加させるが、ＦｃγＲＩＩＢに対する変異Ｆｃ領域の親和性を改変しない。他の実施形態では、前記１つ以上のアミノ酸修飾が、親抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＡに対する変異Ｆｃ領域の親和性を増強するが、ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性を低下させる。親和性および／または結合活性の増加は、親分子（修飾Ｆｃ領域なし）の結合活性を細胞において検出することができない場合、低レベルのＦｃγＲを発現する細胞において、検出可能なＦｃγＲへの結合またはＦｃγＲ関連性の活性をもたらす。
【０２３７】
ＦｃγＲに対する分子の親和性および結合特性は、ＥＬＩＳＡアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、免疫沈降アッセイを含むが、これらに限定されない、抗体−抗原またはＦｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、それぞれ、抗体への抗原の特異的な結合または  ＦｃγＲへのＦｃ領域の特異的な結合を決定するための、当技術分野において知られているインビトロアッセイ（生化学的または免疫学的ベースのアッセイ）を使用して決定することができる。
【０２３８】
また、ＦｃγＲＩＩＩａまたはＦｃＲｎ結合に影響を与える（増強する）具体的な突然変異（ＩｇＧ１  Ｆｃドメイン中）も以下に示す。
【０２３９】
【表８】
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【０２４０】
いくつかの実施形態では、変異Ｆｃ領域を含む分子が、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインにおいて少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つまたはそれを超えるアミノ酸修飾を有する）。他の実施形態では、変異Ｆｃ領域を含む分子が、アミノ酸２３１〜３４１に及ぶとして定義される、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおいて少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つまたはそれを超えるアミノ酸修飾を有する）。いくつかの実施形態では、分子が、少なくとも２つのアミノ酸修飾を含み（たとえば、２、３、４、５、６、７、８、９つまたはそれを超えるアミノ酸修飾を有する）、少なくとも１つのそのような修飾がＣＨ３領域中にあり、少なくとも１つのそのような修飾がＣＨ２領域中にある。アミノ酸修飾は、たとえばヒンジ領域中でなされてもよい。特定の実施形態では、本発明は、アミノ酸２１６〜２３０に及ぶとして定義される、Ｆｃ領域のＣＨ１ドメイン中にアミノ酸修飾を包含する。
【０２４１】
Ｆｃ修飾の任意の組合せ、たとえば、米国特許第７，６３２，４９７号明細書；米国特許第７，５２１，５４２号明細書；米国特許第７，４２５，６１９号明細書；米国特許第７，４１６，７２７号明細書；米国特許第７，３７１，８２６号明細書；米国特許第７，３５５，００８号明細書；米国特許第７，３３５，７４２号明細書；米国特許第７，３３２，５８１号明細書；米国特許第７，１８３，３８７号明細書；米国特許第７，１２２，６３７号明細書；米国特許第６，８２１，５０５号明細書、および米国特許第６，７３７，０５６号明細書；国際公開第２０１１／１０９４００号パンフレット；国際公開第２００８／１０５８８６号パンフレット；国際公開第２００８／００２９３３号パンフレット；国際公開第２００７／０２１８４１号パンフレット；国際公開第２００７／１０６７０７号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０５／１１５４５２号パンフレット；国際公開第０５／１１０４７４号パンフレット；国際公開第０４／１０３２２６９号パンフレット；国際公開第００／４２０７２号パンフレット；国際公開第０６／０８８４９４号パンフレット；国際公開第０７／０２４２４９号パンフレット；国際公開第０５／０４７３２７号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレット、および国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；ならびにＰｒｅｓｔａ，Ｌ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０（４）：４８７−４９０；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６；２７７（３０）：２６７３３−２６７４０、およびＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１−６６０４）において開示される様々な修飾の任意の組合せを作製することができる。
【０２４２】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、変異Ｆｃ領域を含んでいてもよく、変異Ｆｃ領域が、野生型Ｆｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（たとえば１、２、３、４、５、６、７、８、９つまたはそれを超えるアミノ酸修飾を有する）、分子が、野生型Ｆｃ領域を含む分子と比較して、エフェクター機能が増強されており、任意選択で、変異Ｆｃ領域が、２２１、２３９、２４３、２４７、２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１６、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７０、３７３、３７６、３７８、３９２、３９６、３９９、４０２、４０４、４１６、４１９、４２１、４３０の、４３４、４３５、４３７、４３８、および／または４３９の任意の１つ以上の位置に置換を含む。
【０２４３】
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体は、変異Ｆｃ領域を含んでいてもよく、変異Ｆｃ領域が、野生型Ｆｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み（たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９つまたはそれを超えるアミノ酸修飾を有する）、分子が、野生型Ｆｃ領域を含む分子と比較して、エフェクター機能が増強されており、任意選択で、変異Ｆｃ領域が、３２９、２９８、３３０、３３２、３３３、および／または３３４の任意の１つ以上の位置に置換（たとえばＳ２３９Ｄ、Ｓ２９８Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、および／またはＫ３３４Ａ置換）を含む。
【０２４４】
一実施形態では、変異または野生型Ｆｃ領域を有する抗体が、抗体のＦｃ受容体結合能力を増加させるグリコシル化パターンの改変を有していてもよい。そのような炭水化物修飾は、たとえば、グリコシル化機構の改変を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって、達成することができる。グリコシル化機構の改変を有する細胞は、当技術分野において記載されており、組換え抗体を発現する宿主細胞として使用し、それによってグリコシル化の改変を有する抗体を産生することができる。たとえば、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１、および欧州特許第１，１７６，１９５号明細書；国際公開第０６／１３３１４８号パンフレット；国際公開第０３／０３５８３５号パンフレット；国際公開第９９／５４３４２号パンフレットを参照されたい。
【０２４５】
一般に、グリコシル化の改変を有するそのような抗体は、「グリコ最適化され」、抗体は、非修飾抗体または天然に存在する定常領域を有する抗体と比較された場合に、ＡＤＣＣおよびエフェクター細胞受容体結合活性の増強を含むが、これらに限定されないある望ましい特性をもたらす、特定のＮ−グリカン構造を有し、マウス骨髄腫ＮＳＯおよびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｃｈｕ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００１，１２：１８０−７）、本明細書において実施例の部で産生されるＨＥＫ２９３Ｔ発現抗体、または組換え治療用抗体を産生するために一般に使用される他の哺乳動物宿主細胞系によって産生される。
【０２４６】
哺乳動物宿主細胞において産生されたモノクローナル抗体は、それぞれの重鎖のＡｓｎ２９７にＮ結合型グリコシル化部位を含有する。抗体上のグリカンは、典型的に、複雑な二分岐構造であり、バイセクティングＮ−アセチルグルコサミン（バイセクティングＧｌｃＮＡｃ）が非常に低くまたはなく、高レベルのコアフコシル化を有する。グリカン末端は、非常に低い末端シアル酸を含有しまたは全く含有せず、様々な量のガラクトースを含有する。抗体機能に対するグリコシル化の効果の検討については、Ｗｒｉｇｈｔ＆Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｔｒｅｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６−３１（１９９７）を参照されたい。かなりの研究は、抗体グリカン構造の糖組成に対する変化がＦｃエフェクター機能を改変することができることを示す。抗体活性に寄与する重要な炭水化物構造は、アルファ−１，６連結を介して、Ｆｃ領域Ｎ結合型オリゴ糖の最も内側のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌａｃＮＡｃ）残基に付加されたフコース残基であると考えられる（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【０２４７】
ＦｃγＲ結合は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３タイプのＦｃ領域における保存Ａｓｎ２９７に共有結合されたオリゴ糖の存在を必要とする。非フコシル化オリゴ糖構造は、最近、インビトロＡＤＣＣ活性の劇的な増加に関連付けられた。「Ａｓｎ２９７」は、Ｆｃ領域における約位置２９７に位置するアミノ酸アスパラギンを意味し、抗体の軽微な配列変異に基づいて、Ａｓｎ２９７はまた、数アミノ酸（通常＋３アミノ酸以下）上流または下流に位置することができる。
【０２４８】
歴史的に、ＣＨＯ細胞において産生される抗体は、約２〜６％の非フコシル化された集団を含有する。アルファ６−フコシルトランスフェラーゼの基質であるＧＤＰフコースまたはＧＤＰ糖中間体の欠乏に至る欠損ＧＤＰ−マンノース４，６−デヒドラターゼを有するＹＢ２／０（ラット骨髄腫）およびＬｅｃｌ３細胞株（ＣＨＯ系のレクチン突然変異体）は、７８〜９８％の非フコシル化種を有する抗体を産生することが報告された。他の実施例では、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）またはノックアウト技術が、ＦＵＴ８  ｍＲＮＡ転写物レベルを減少させるまたは遺伝子発現を完全にノックアウトするために細胞を操作するために用いることができ、そのような抗体は、７０％までの非フコシル化グリカンを含有することが報告された。
【０２４９】
ＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体は、Ａｓｎ２９７で糖鎖によりグリコシル化されてもよい。一実施形態では、抗体が、ＦｃｙＲＩＩＩａへの抗体結合および／またはＡＤＣＣを改善する、Ｆｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸改変を含む定常領域を含むであろう。
【０２５０】
一態様では、抗体が、それらの定常領域において低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）される。そのような抗体は、アミノ酸改変を含んでいてもよいまたは含んでいなくてもよいが、そのような低フコシル化をもたらすための条件下で産生されてもよいまたは処置されてもよい。一態様では、抗体組成物が、本明細書において記載されるキメラ、ヒト、またはヒト化抗体を含み、組成物中の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７５、８５、９０、９５％、または実質的に全ての抗体種が、フコースを欠くコア炭水化物構造（たとえば複雑な、ハイブリッド、および高マンノース構造）を含む定常領域を有する。一実施形態では、フコースを有するコア炭水化物構造を含む抗体がない抗体組成物が提供される。コア炭水化物は、好ましくは、Ａｓｎ２９７の糖鎖であろう。
【０２５１】
一実施形態では、抗体組成物、たとえばＫＩＲ３ＤＬ２に結合する抗体を含む組成物が、Ａｓｎ２９７で糖鎖によりグリコシル化され、抗体が、部分的にフコシル化される。部分的にフコシル化された抗体は、Ａｓｎ２９７の糖鎖内にフコースを欠く、組成物中の抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の割合が、２０％〜９０％、２０％〜８０％、２０％〜５０％、５５％、６０％、７０％、もしくは７５％、３５％〜５０％、５５％、６０％、７０％、もしくは７５％、または４５％〜５０％、５５％、６０％、７０％、もしくは７５％であることによって特徴付けられる。任意選択で、抗体が、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３タイプである。
【０２５２】
糖鎖は、ヒト細胞由来の抗体のまたはげっ歯動物細胞、マウス細胞（たとえばＣＨＯ細胞）、もしくは鳥類の細胞において組換えで発現された抗体のＡｓｎ２９７に付加されたＮ結合型グリカンの特質を含む、任意の特質（たとえば、複雑な、ハイブリッド、および高マンノース構造の存在および割合）をさらに示すことができる。
【０２５３】
一実施形態では、抗体は、細胞株がそれらのコア炭水化物においてフコースを欠くタンパク質を産生するように、フコシルトランスフェラーゼ酵素を欠く細胞において発現される。たとえば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞株において発現された抗体が、それらのコア炭水化物上にフコースを欠くように、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８（アルファ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ））を欠く。これらの細胞株は、２つの交換ベクターを使用するＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的破壊によって作られた（開示が参照により本明細書に組み込まれるＹａｍａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許出願公開第２００４０１１０７０４号明細書；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２を参照されたい）。他の例は、ＦＵＴ８遺伝子を機能的に破壊するための、アンチセンス抑制、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）干渉、ヘアピンＲＮＡ（ｈｐＲＮＡ）干渉、またはイントロン含有ヘアピンＲＮＡ（ｉｈｐＲＮＡ）干渉の使用を含む。一実施形態では、抗体が、フコシルトランスフェラーゼをコードする、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株において、そのような細胞株において発現された抗体が、アルファ１，６結合関連性の酵素を低下させるまたは除くことによって、低フコシル化を示すように発現される。
【０２５４】
一実施形態では、抗体は、操作された細胞株において発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらすバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造の増加を示すように、グリコプロテム（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｍ）修飾グリコシルトランスフェラーゼ（たとえばベータ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニル−トランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＨＩ））を発現するように操作された細胞株において発現される（開示が参照により本明細書に組み込まれるＵｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．による国際公開第９９／５４３４２号パンフレット；およびＵｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０２５５】
他の実施形態では、抗体が、発現され、フコシル残基が、フコシダーゼ酵素を使用して切断される。たとえば、フコシダーゼアルファ−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−５５２３）。他の実施例では、抗体を産生する細胞株を、グリコシル化阻害剤により処置することができる；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎ．９９：６５２−６６５（２００８）は、アルファ−マンノシダーゼＩ阻害剤、キフネンシンによるＣＨＯ細胞の処置を記載し、非フコシル化オリゴマンノース型Ｎ−グルカンを有する抗体の産生をもたらした。
【０２５６】
一実施形態では、抗体が、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコシルを追加するための酵素活性が天然に低いまたは酵素活性を有していない細胞株、たとえばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６６２）において発現される。細胞株の他の例は、Ａｓｎ（２９７）連結炭水化物にフコシルを付加する能力が低下し、また、その宿主細胞において発現された抗体の低フコシル化をももたらす変異ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｄ３細胞を含む（開示が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第０３／０３５８３５号パンフレット（Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ）；およびＳｈｉｅｌｄｓ，ＲＸ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０）。他の実施形態では、抗体が、低フコース含有量を有する抗体を天然にもたらす鳥類の細胞、たとえばＥＢｘ（登録商標）細胞（Ｖｉｖａｌｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）において発現される（たとえば国際公開第２００８／１４２１２４号パンフレット）。低フコシル化グリカンはまた、植物起源の細胞株においても産生することができる（たとえば、開示が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第０７／０８４９２６Ａ２号パンフレット（Ｂｉｏｌｅｘ  Ｉｎｃ．）および国際公開第０８／００６５５４号パンフレット（Ｇｒｅｅｎｏｖａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧＭＢＨ））。
【０２５７】
抗体製剤
これらの組成物において使用されてもよい薬学的に許容され得るキャリヤは、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和野菜脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩などの塩または電解質、コロイドケイ酸、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂を含むが、これらに限定されない。この方法は、前記患者と前記組成物を接触させるステップを含む。そのような方法は、予防処置および治療目的の両方にとって有用となるであろう。
【０２５８】
患者への投与に使用するために、患者への投与のために組成物を製剤化する。組成物は、非経口的に、特に静脈内注射または注入法により投与してよい。
【０２５９】
組成物の滅菌注射用形態は、水性または油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、適した分散または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、当技術分野において知られている技術に従って製剤されてもよい。滅菌注射用調製物はまた、無毒性の非経口的に許容され得る希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、たとえば１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。用いられてもよい許容され得るビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンガー溶液、および生理食塩液がある。そのうえ、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁化媒体として従来から用いられている。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む、任意の、刺激がない不揮発性油が用いられてもよい。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、とりわけそれらのポリオキシエチル化バージョンのオリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容され得る油のように、注射液の調製において有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤または乳剤および懸濁液を含む薬学的に許容され得る投薬形態の製剤において一般に使用される類似する分散剤を含有してもよい。Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎｓ、および他の乳化剤などの他の一般に使用される界面活性剤または一般に薬学的に許容され得る固体、液体、もしくは他の投薬形態の製造において使用される生物学的利用率エンハンサーもまた、製剤の目的のために使用されてもよい。
【０２６０】
いくつかのモノクローナル抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）（トラスツズマブ）、またはＸｏｌａｉｒ（商標）（オマリズマブ）など、臨床状況において効率的であることが示され、類似する投与レジメン（すなわち製剤および／または用量および／または投与プロトコル）は、抗体と共に使用されてもよい。たとえば、医薬組成物中に存在する抗体は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）使い捨てバイアル中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給することができる。
【０２６１】
さらなる態様および利点を以下の実験のセクションで開示するが、これらは、例示的とみなすべきであり、本出願の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【０２６２】
実施例１−ＫＩＲ３ＤＬ２選択的抗体の生成
免疫化およびスクリーニング
ＫＩＲ３ＤＬ２に結合するが、密接に関連するＫＩＲ３ＤＬ１に結合しない抗体は、米国特許出願公開第２０１５−０２３２５５６−Ａ１号明細書に記載される、組換えＫＩＲ３ＤＬ２−Ｆｃ融合タンパク質によりマウスを免疫化することによって生成した。成長中のハイブリドーマの上清（ＳＮ）は、セザリー症候群細胞株（ＨＵＴ７８、ＣＯＵ−Ｌ）およびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０−ｅＧＦＰに対してフローサイトメトリーによって試験した。最初のスクリーニングから選択した、可能性として興味深いハイブリドーマは、９６ウェルプレート中で限界希釈技術によってクローニングした。第２のスクリーニングは、ＨＵＴ７８、ＣＯＵ−Ｌ、ＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ１ドメイン０−ｅＧＦＰ、およびＨＥＫ−２９３Ｔ／ＫＩＲ３ＤＬ２ドメイン０−ｅＧＦＰに対してフローサイトメトリーによってサブクローンの上清を試験することによる、関心のあるハイブリドーマの選択を伴った。陽性のサブクローンは、腹水を産生するようにマウスに注射し、関心のある抗体は、ヒトＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞への結合に基づく様々なアッセイフォーマットが後続するｒｅｃ  ＫＩＲ３ＤＬ２チップを使用するＢｉａｃｏｒｅアッセイにおいて試験する前に精製した。
【０２６３】
抗体の重（ＶＨ）および軽（ＶＬ）鎖の可変ドメインの配列は、それぞれの抗体のｃＤＮＡからＰＣＲによって増幅した。増幅した配列は、アガロースゲル上に流し、次いで、Ｑｉａｇｅｎ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎキットを使用して精製した。次いで、ＶＨおよびＶＬ配列は、メーカーの指示に従ってＩｎＦｕｓｉｏｎシステム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して、Ｌｏｎｚａ発現ベクター（Ｄｏｕｂｌｅ−Ｇｅｎｅ  Ｖｅｃｔｏｒｓ）の中にサブクローニングした。シークエンシングの後に、ＶＨおよびＶＬ配列を含有するベクターは、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰｕｒｅＹｉｅｌｄ（商標）Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  Ｓｙｓｔｅｍを使用して、Ｍａｘｉｐｒｅｐとして調製した。次いで、ベクターは、メーカー指示に従って、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００を使用するＨＥＫ−２９３Ｔ細胞トランスフェクションに使用した。生成された抗体は、とりわけ、１０Ｇ５、２Ｂ１２、１９Ｈ１２および１２Ｂ１１を含んだ。
【０２６４】
エピトープマッピング
抗体は、一連のＫＩＲ３ＤＬ２突然変異体への結合についてさらに試験した。抗体１９Ｈ１２および１２Ｂ１１は、非突然変異野生型ＫＩＲ３ＤＬ２（ＷＴａＫＩＲ３ＤＬ２）への結合についていかなる損失も示さなかったが、Ｐ１７９ＴおよびＳ１８１Ｔ置換を有する突然変異体１１ならびにＶ１７８ＡおよびＨ１８０Ｓ置換を有する突然変異体１１Ａ１への結合を損なった。そのため、これらの抗体１９Ｈ１２、１８Ｂ１０、および１２Ｂ１１の主要なエピトープは、残基Ｐ１７９、Ｓ１８１、Ｖ１７８、および／またはＨ１８０を含む。突然変異体１１における位置１７９および１８１のこれらの残基は、ＫＩＲ３ＤＬ１中に存在する残基に相当する（ＫＩＲ３ＤＬ１はＴ１７９およびＴ１８１を有する）。残基Ｐ１７９およびＳ１８１は、特に、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ１ドメイン内にかつＨＬＡ結合領域（すなわちＨＬＡ結合ポケット）のＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質上の反対の面にある。抗体１５Ｃ１１、１９Ｈ１２、１８Ｂ１０、および１２Ｂ１１のそれぞれは、置換Ｅ１３０Ｓ、Ｈ１３１Ｓ、およびＲ１４５Ｓを有する突然変異体Ｍ１１Ａ４への結合を低下させた（１５Ｃ１１および１９Ｈ１２については結合の完全な損失）。突然変異体１１における位置１７９および１８１のこれらの残基は、ＫＩＲ３ＤＬ１中に存在する残基に相当する（ＫＩＲ３ＤＬ１はＴ１７９およびＴ１８１を有する）。残基Ｐ１７９およびＳ１８１は、特に、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ１ドメイン内にかつＨＬＡ結合領域（すなわちＨＬＡ結合ポケット）のＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質上の反対の面にある。これらの突然変異残基に隣接する表面に曝露した残基もまた、たとえば、Ｐ１７９／Ｓ１８１エピトープの領域においてＫＩＲ３ＤＬ２の表面に位置するが、抗体の結合の損失をもたらさなかったＫＩＲ３ＤＬ２突然変異の領域（たとえば突然変異体５（残基Ｐ６６）および突然変異体８（残基Ｖ１２７））の外側に位置する残基Ｎ９９、Ｈ１００、Ｅ１３０、Ｈ１３１、Ｆ１３２、Ｖ１７８、Ｈ１８０、Ｐ１８２、Ｙ１８３、およびＱ１８４（配列番号１に関して）を含めて、抗体のエピトープに寄与し得る。抗体２Ｂ１２は、Ｉ６０ＮおよびＧ６２Ｓ置換を有する突然変異体への結合を損失し、Ｐ１４Ｓ、Ｓ１５Ａ、およびＨ２３Ｓ置換を有する突然変異体への結合が減少したが、あらゆる他の突然変異体への結合を失わなかった。そのため、これらの抗体の主要なエピトープは、残基Ｉ６０および／またはＧ６２を含む（また、エピトープは、任意選択で、Ｐ１４、Ｓ１５、およびＨ２３の１つ以上をさらに含む）。残基６０および６２は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメイン内にある。残基１４、１５、２３、６０、および６１は、ＫＩＲ３ＤＬ２のＤ０ドメイン内にある。
【０２６５】
抗体は、利用可能な細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２受容体の数を増加する
第１部：
ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の２Ｂ１２標識に対する染色条件の影響
この試験は、４℃または３７℃、ならびに２時間、４時間または２４時間のインキュベーション時間で、総細胞に対してゲーティングした、ＫＩＲ３ＤＬ２発現細胞の２Ｂ１２標識に対する染色条件の影響を評価することを目標とした。手短には、ウェル当たり１００，０００個のＨＵＴ７８細胞を、０．０００５μｇ／ｍｌから出発して３０μｇ／ｍｌまでの２Ｂ１２抗体の用量範囲（完全培地中の階段希釈１／３）と一緒にインキュベートした。使用するプロトコルは次の通りであった：４℃および３７℃でのインキュベーション２時間；４時間および一晩；ＰＦＡ固定を含む、または含まないＲＰＭＩ１０％中での染色；ＳＢ（１５０μｌ／ｗ）で２回の洗浄；４℃で３０分間の抗ヒトＦｃ  ＰＥの添加；ＳＢ（１００μｌ／ｗ）で２回の洗浄；ならびにＦＡＣＳ  ＣＡＮＴＯ  ＩＩを用いた検出。
【０２６６】
結果を図１Ａに示す。受容体取込み／循環を阻害する４℃でのインキュベーションは、少なくとも同等レベルの利用可能な細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２をもたらすことが予想されたが、抗体２Ｂ１２（ヒトＩｇＧ１）での染色は、４℃よりも３７℃の方が高かった。さらに、インキュベーション時間が長くなるほど、高い蛍光中央値が観察され、２４時間のインキュベーション後に最大のＫＩＲ３ＤＬ２発現が観察された。
【０２６７】
第２部：
一晩のインキュベーション後のＨＵＴ７８腫瘍細胞上での総、遊離および２Ｂ１２結合ＫＩＲ３ＤＬ２検出
この試験は、結合２Ｂ１２（ヒトＩｇＧ１）、遊離（非抗体結合）細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチド、および総細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２ポリペプチドの量を観測することによって、細胞表面ＫＩＲ３ＤＬ２レベルに対する抗体２Ｂ１２との２０時間インキュベーションの影響を評価することを目標とした。手短には、８．８８μｇ／ｍｌから出発する（漸減する）２Ｂ１２抗体の用量範囲、１／３階段希釈、１１の濃度を用いて、ＨＵＴ７８（１００，０００細胞／ウェル）を３７℃で２０時間インキュベートした。次の２つの染色条件を実施するために、用量範囲を２回反復して作製した：
−総ＫＩＲ３ＤＬ２＋結合ＫＩＲ３ＤＬ２（ＧａＨ  ＩｇＧ  Ｆｃ−ＰＥ＋ｍＡｂ２−ＡＰＣ（非競合抗ＫＩＲ３ＬＤ２  ｍＡｂ）（１０μｇ／ｍｌ）
−遊離ＫＩＲ３ＤＬ２：２Ｂ１２−ＰＥ（１０μｇ／ｍｌ）
【０２６８】
染色バッファー中４℃で染色を１時間実施した後、ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ  ＨＴＳで分析した。結果を図１Ｂに示す。濃い線／正方形は抗体２Ｂ１２を表し、薄い線／丸は、アイソタイプ対照を表す。１０μｇ／ｍｌの２Ｂ１２−ＰＥと細胞をインキュベートして、非競合抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体と共に遊離受容体を検出すると、遊離ＫＩＲ３ＤＬ２受容体を検出できることがわかる。ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＰＥ二次Ａｂと一緒に細胞をインキュベートすることにより、２Ｂ１２結合ＫＩＲ３ＤＬ２受容体を検出できることがわかる。両方の読み出しは相関しており、類似のＥＣ５０を有する。一番右のパネルは、２Ｂ１２との２０時間のインキュベーションによって、非競合抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体ｍＡｂ２−ＡＰＣにより検出される通り、細胞表面のＫＩＲ３ＤＬ２受容体レベルが増加することを示している。抗体２Ｂ１２は、結合時の構造変化、細胞表面での受容体安定化／蓄積および／または取込み／再循環阻害を引き起こしている可能性がある。
【０２６９】
第３部：
１、２４または４８時間後のＨＵＴ７８腫瘍細胞上の総、遊離および２Ｂ１２結合ＫＩＲ３ＤＬ２検出
この試験は、抗体２Ｂ１２との異なるインキュベーション期間後の総、遊離および２Ｂ１２結合ＫＩＲ３ＤＬ２の量を観測することによって、ＫＩＲ３ＤＬ２受容体発現の動力学を評価することを目的とした。手短には、ＨＵＴ７８細胞（５０，０００細胞／ウェル）を、２Ｂ１２（ヒトＩｇＧ１）、１０μｇ／ｍｌから出発する（漸減する）用量範囲、１／３階段希釈、１１の濃度と一緒に、またはアイソタイプ対照（ＩＣ）、１０μｇ／ｍｌから出発する（漸減する）用量範囲、１／３階段希釈、１１の濃度と一緒に完全培地中３７℃で１時間、２４時間もしくは４８時間にわたってインキュベートした。次の３つの染色条件を実施するために、用量範囲を３回反復して実現した：
−結合ＫＩＲ３ＤＬ２（４℃で３０分）：ＧａＨ  ＩｇＧ  Ｆｃ−ＰＥ、
−遊離ＫＩＲ３ＤＬ２＋総ＫＩＲ３ＤＬ２（４℃で１時間）：２Ｂ１２−ＰＥ（１０μｇ／ｍｌ）＋ｍＡｂ２−ＡＰＣ（非競合抗ＫＩＲ３ＤＬ２）（１０μｇ／ｍｌ）、
−総ＫＩＲ３ＤＬ２（４℃で１時間＋３０分）：２Ｂ１２（１０μｇ／ｍｌ）＋ＧａＨ  ＩｇＧ  Ｆｃ−ＰＥ。
【０２７０】
染色バッファー中４℃で染色を実施し、ＨＴＦＣ  Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔで分析を実施した。
【０２７１】
結果を図１Ｃに示す。これらの培養条件（９６ウェルプレート、Ｔ０で５０，０００  ＨＵＴ７８／ウェル）で、細胞表面でのＫＩＲ３ＤＬ２検出は、いずれのＡｂも存在しない場合、減少する（ｍＡｂ２−ＡＰＣ、２Ｂ１２−ＰＥまたは２Ｂ１２＋ＧａＨ−ＰＥ、Ｙ軸の点により検出される通り）
【０２７２】
３７℃で２Ｂ１２とのインキュベーションは、用量依存的様式で、ＫＩＲ３ＤＬ２の表面発現を増加する（非競合ｍＡｂ２により、または２Ｂ１２自体＋二次Ａｂにより検出される通り）。アイソタイプ対照は、ＫＩＲ３ＤＬ２に何らの変化も起こさなかった。この増加は、３７℃で１時間後に既に観察され、２４時間後にその最大値に達すると思われる。染色は、２４時間後で最適である（総染色および検出されたＡｂ結合受容体に関して）。
【０２７３】
抗体は、セザリー症候群細胞株に内在化しない
抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、１３Ｈ１、４Ｂ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９、ならびに抗体ＡＺ１５８（比較対照としての抗ドメイン０ｍＡｂ）およびＰＣＴ出願国際公開第２０１４／０４４６８６号パンフレットおよび同第２０１４／０４４６８１号パンフレットに開示されている他の抗Ｄ１抗体の内在化を、ＨＵＴ７８  ＳＳ細胞株を用いて蛍光顕微鏡法により評価した。
【０２７４】
材料および方法
１０μｇ／ｍｌの異なる抗体と一緒に、４℃で１時間Ｈｕｔ−７８細胞をインキュベートした。このインキュベーション後、細胞を固定する（ｔ＝０時間）か、または３７℃で２時間インキュベートした。次に、２時間インキュベートした細胞を固定し、染色した。Ａｌｅｘａ５９４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ａ１１０３２）に結合したヤギ抗マウス抗体を用いて抗体を染色した。ウサギ抗ＬＡＭＰ−１抗体（Ａｂｃａｍ，ａｂ２４１７０）を用いて、ＬＡＭＰ−１コンパートメントを染色し、ＦＩＴＣ（Ａｂｃａｍ，ａｂ６７１７）に結合したヤギ抗ウサギポリクローナル抗体により明らかにした。Ａｐｔｏｍｅ装置（Ｚｅｉｓｓ）を用いて画像を取得し、Ａｘｉｏｖｉｓｉｏｎソフトウェアを用いて解析した。
【０２７５】
結果：
抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ｍＡｂは、赤色に見えたのに対し、ＬＡＭＰ−１コンパートメントは、緑色に見えた。抗体の添加時点で、赤色のＫＩＲ３ＤＬ２染色は、細胞表面に見えたのに対し、緑色のＬＡＭＰ−１は、細胞内に緑色が見えた。しかし、抗体の添加から２時間後、抗体ＡＺ１５８、１３Ｈ１および４Ｂ５、ならびに抗Ｄ１抗体のそれぞれは、細胞表面の赤色染色の減少と共に、赤色染色の緑色染色との共局在化を引き起こし、これは、ＡＺ１５８、１３Ｈ１および４Ｂ５、ならびに抗Ｄ１抗体が急速に取り込まれたことを示している。しかしながら、抗体１０Ｆ６、２Ｂ１２、１８Ｃ６、９Ｅ１０、１０Ｇ５、５Ｈ１、１Ｅ２、１Ｃ３および２０Ｅ９は取り込まれず、抗体の添加から２時間後、赤色染色は、細胞表面全体に残った。
【０２７６】
抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介してＫＩＲ３ＤＬ２発現標的を死滅させることができる
ＡＤＣＣメカニズムを通しての細胞溶解は、放射活性に基づく５１Ｃｒ放出実験においてモニターした（予め負荷した標的細胞から放出される放射活性のレベルはそれらの死に比例する）。１００万の標的細胞に３７℃で１時間５１Ｃｒを負荷し、３回洗浄した。３，０００の細胞をウェル（Ｕ字底９６ウェルプレート）毎に接種し、試験ｍＡｂを１０または２０μｇ／ｍｌ最終濃度で追加する（あるいは用量−応答関係が研究される場合、増加濃度）。エフェクター細胞は、定められたエフェクター：標的比（一般に１０：１）で追加し、混合物を４時間、３７℃でインキュベートした。上清は、Ｌｕｍａｐｌａｔｅ装置で分析する。
【０２７７】
実施例１で選択された抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ｍＡｂは、ＫＩＲ３ＤＬ２トランスフェクトＢ２２１標的細胞を死滅させるために同じ最終濃度（１０μｇ／ｍｌ）で試験した。ｍＡｂは、ＫＩＲ３ＤＬ２発現Ｂ２２１標的に対するＡＤＣＣを媒介するのに効果的であった。
【０２７８】
実施例２−ＫＩＲ３ＤＬ２発現ヒト腫瘍のマウス異種移植片モデルにおける活性
腫瘍細胞株Ｂ２２１およびＲＡＪＩはヒトＫＩＲ３ＤＬ２を発現するように作製した。Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２およびＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２モデルに使用した免疫を損なったマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入したＮＯＤ−ＳＣＩＤとした。以下のモデルにおいて、５００万のヒトＢ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２またはＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２腫瘍細胞（ビヒクルとしての１００μｌ  ＰＢＳ中）は、０日目（Ｄ０）、すなわち処置開始（Ｄ１）の１日前にＩＶ移植した。Ｄ１から、マウスは、ＰＢＳ中で希釈した、様々な用量の抗ＫＩＲ３ＤＬ２  ｍＡｂ（用量はマウス体重に適応させた）、全実験の期間の間、１週間当たりに２回の注射によりＩＶ処置した。
【０２７９】
実験に応じて含められたコントロール群：
−  正常な／腫瘍成長に冒されていないコントロールとしてのＰＢＳ／プラセボ処置マウス；
−  無関係の抗原に対して向けられる、同じ用量のアイソタイプコントロール対応ｍＡｂを注射したマウス。
【０２８０】
マウスは、計量し、モデルによっては２〜５日毎に臨床的症状について観察した。体重変化のパーセントは、腫瘍移植前のＤ０での体重または実験の間に達した最も高い体重と比較して計算した。マウスの死または重要な体重減少は、記録し、生存Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ曲線を書き、マウスのコントロール群と比較した生存における改善を計算するために使用した。
【０２８１】
ＩｇＧ２ｂアイソタイプマウス抗ＫＩＲ３ＤＬ２  １９Ｈ１２抗体（週に二度３００μｇ／マウスで与える）の効能は、ＳＣ  Ｂ２２１−ＫＩＲ３ＤＬ２異種移植片またはＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２異種移植片（群当たりｎ＝６  ＮＯＤ−ＳＣＩＤマウス）に対して別々に試験した。抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体により処置した動物は、アイソタイプコントロール対応ｍＡｂにより処置したマウスと比較して生存の増加を示した。
【０２８２】
実施例３−改善された検出方法はＫＩＲ３ＤＬ２陽性の腫瘍を明らかにする
ＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２モデルおよびＲＡＪＩ−ＫＩＲ３ＤＬ２細胞株由来の腫瘍生検材料を得、染色を、ＡＺ１５８抗体（国際公開第２０１０／０８１８９０号パンフレットを参照されたい）または抗体１２Ｂ１１（実施例１を参照されたい）を使用して、凍結サンプルに対して実行した。ＫＩＲ３ＤＬ２は、ＢｅｎｃｈＭａｒｋ  ＸＴ  Ｖｅｎｔａｎａ  Ｒｏｃｈｅによる免疫染色に適応させた標準的なプロトコルに従ってＤＡＢ色素生成検出によって抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体により染色した。全ての染色コントロールアイソタイプ（ｍＩｇＧ１）およびコントロールについてＤＡＢを実行した。驚いたことに、ＡＺ１５８は陰性であったが、同じ濃度（５μｇ／ｍｌ）の抗体の１２Ｂ１１抗体を使用した場合、腫瘍は陽性であった（図１を参照されたい）。抗体ＡＺ１５８の濃度の上昇（５０μｇ／ｍｌまで）は、腫瘍サンプルを健康な組織と区別するのを可能にしなかった広範囲なバックグラウンド染色を発生させた。
【０２８３】
次に、予めＡＺ１５８により染色した癌患者由来の腫瘍生検材料を抗体１２Ｂ１１を使用して再試験した。ＡＺ１５８でＫＩＲ３ＤＬ２陰性であった生検材料を１２Ｂ１１により染色した（すなわち、ＫＩＲ３ＤＬ２陽性になった）。
【０２８４】
実施例４：ＮＫ溶解能力アッセイ
ＡＤＣＣメカニズムを通しての細胞溶解は、放射活性に基づく５１Ｃｒ放出実験でモニターした（予め負荷した標的細胞ＨＵＴ７８（ＬＧＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  Ｃｏｒｐ．から入手可能なＡＴＣＣ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ＴＩＢ−１６１（商標））から放出される放射活性のレベルはそれらの細胞死に比例する）。手短には、健常なドナーからのヒト末梢血液単核球（ＰＢＭＣ）をＨＵＴ７８標的細胞株（ＫＩＲ３ＤＬ２＋）と一緒に、用量範囲のＩＰＨ４１０２  ｍＡｂ（ヒト化２Ｂ１２  ｍＡｂ）の存在下でインキュベートした。１００のＥ：Ｔ比を用い、４時間クロミウム放出アッセイにおいてＰＢＭＣによるＨＵＴ７８細胞溶解をモニターした。
【０２８５】
エフェクター細胞調製
ヒト血液をＣＰＴチューブ（ｎ＝６〜８チューブ／ドナー、７〜８ｍｌの血液を含有する）に回収した。収集から３０分以内に、低加速および低ブレーキを用い、室温（ＲＴ）にて、ＣＰＴチューブを１５００ｇで３０分間遠心分離した。遠心分離後、分離ゲル上の上清中の単核球を５０ｍｌコニカルチューブに移し（２〜３つのＣＰＴチューブの内容物を１つの５０ｍｌチューブにプールする）、ＲＰＭＩ−１６４０で５０ｍｌまで補充した後、ＲＴにて１０分間６００ｇで遠心分離した。全ての細胞ペレットを１つの５０ｍｌコニカルチューブに移し、５０ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０で洗浄した（ＲＴ、１３０ｇで１０分の遠心分離）。残った赤血球（ＲＢＣ）の溶解をこのステップで、細胞ペレットに１ｍｌの低温ＮＨ４Ｃｌを添加し、ＲＴで５〜１０分間インキュベートすることにより、実施することができた。ＲＢＣ溶解が必要な場合には、５０ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０でチューブを充填することにより追加の洗浄ステップを実施した（ＲＴ、１３０ｇで１０分の遠心分離）。細胞ペレットを２０ｍｌのＣＣＭ中に再懸濁させた後、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒセルカウンターを用い、トリパンブルー色素で死滅細胞を除外することにより、ＰＢＭＣを計数した。
【０２８６】
ＰＢＭＣ濃度は、標的細胞溶解アッセイ（５１Ｃｒ放出、５０μｌ／ｗ＝３×１０５細胞）の場合には、ＣＣＭで６×１０６細胞／ｍｌに、またＮＫ細胞活性化アッセイ（ＣＤ１３７発現、５０μｌ／ｗ＝１．２５×１０５細胞）の場合には、２．５×１０６細胞／ｍｌに調節した。
【０２８７】
標的細胞調製
ＨＵＴ７８標的細胞は、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒセルカウンターを用い、トリパンブルー色素で死滅細胞を除外することによりカウントした。１０６細胞当たり５０μＣｉの５１Ｃｒを丸底１４ｍｌポリプロピレンチューブ内の細胞ペレットに添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、２．１０６細胞を５１Ｃｒで標識した。クロミウム標識後、細胞を１０ｍｌのＣＣＭ（遠心分離５分、５００ｇ、ＲＴ）で細胞を３回洗浄した。Ｋｏｖａｓｌｉｄｅを用い、トリパンブルー色素で死滅細胞を除外することにより、細胞をカウントした。細胞濃度を３×１０４細胞／ｍｌ（１００μｌ／ｗ＝３×１０３細胞）に調節した。
【０２８８】
ｍＡｂ溶液調製
抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体（１．６ｍｌ）、陰性アイソタイプ対照、１．６ｍｌ）およびアレムツズマブ（抗ＣＤ５２、陽性対照、１．２ｍｌ）の４×溶液（最終２００μｌ／ｗ中５０μｌ／ｗ）をＣＣＭ中に調製し、卓上遠心分離機を用い、４℃、最大速度（１６１００ｇ）で１０分間遠心分離した（潜在的凝集体を排除するため）。
【０２８９】
最高試験濃度は、アイソタイプ対照およびアレムツズマブが１０μｇ／ｍｌ（すなわち、４×溶液として４０μｇ／ｍｌ）、抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体が８．８８μｇ／ｍｌ（すなわち、４×溶液として３５．５μｇ／ｍｌ）であった。アイソタイプ対照および抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体について、４００μｌのｍＡｂ溶液を１．２ｍｌのＣＣＭに移すことにより、９６ディープウェルプレート内で１／４階段希釈を実施した。両方のＡｂについて１１の濃度を試験したが、アレムツズマブは、１０μｇ／ｍｌでのみ試験した。
【０２９０】
アッセイ手順
ｍＡｂ溶液（５０μｌ／ｗ）を９６ディープウェルプレートからＵ底プレートに３回反復で移した。エフェクター細胞（ＰＢＭＣ、５０μｌ／ｗ）と、５１Ｃｒを負荷した標的細胞（ＨＵＴ７８、１００μｌ／ｗ）とをウェルに添加した。最終Ｅ／Ｔ比は１００／１である。標的細胞からの自発的および最大クロミウム放出を、培地中の標的細胞および培地＋２％トリトンＸ−１００中の標的細胞をそれぞれ含有する専用のウェル（プレート当たりｎ＝８）内で測定した。プレートを３００ｇで１分遠心分離した後、３７℃で４時間インキュベートした。４時間のインキュベーション後、プレートを３００ｇで３分間遠心分離してから、５０μｌの上清を、シンチレータを含むＬｕｍａｐｌａｔｅに移した。上清を５６℃で乾燥させ、培養上清中に放出されたクロミウムをＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ（商標）マイクロプレートシンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて、定量した。
【０２９１】
標的細胞の特異的溶解は、下記の式：
【数１】
2020500161.tif 000013
を用いて計算した。
【０２９２】
実施例５−抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体の用量設定を決定するための、ＮＫ細胞％溶解能力に基づくモデルの作製
治療用ｍＡｂの薬物動態は、通常、２コンパートメントモデルを用いてモデル化される（Ｄｉｒｋｓ  ａｎｄ  Ｍｅｉｂｏｈｍ，２０１０；Ｌｏｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｍｏｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９７０；Ｒｏｓｋｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。実施例１に従って取得した抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体２Ｂ１２をヒト化し（表Ｄに示すＶＨおよびＶＬアミノ酸配列；また、開示内容が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／１３６０５２号パンフレットも参照されたい）；抗体（ＩＰＨ４１０２と称する）を全長ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体として生成し、これをカニクイザルおよびマウスにおいて評価した。カニクイザルおよびマウス両方の前臨床ＰＫ結果によれば、ＩＰＨ４１０２は、化合物特異的標的媒介作用を除き、ヒトにおいて他の治療用ｍＡｂと類似するＰＫ特性を呈示することが予想される。ＳＳおよびＭＦ患者の場合、ＩＰＨ４１０２は、ＫＩＲ３ＤＬ２＋正常リンパ球に加えて、血液および組織中のＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞に結合するであろう。標的介在性薬物動態（ＴＭＤＤ）は、ヒトにおけるＩＰＨ４１０２のＰＫに影響し得ることが予想される。そのため、ＴＭＤＤを表すためのパラメータをＰＫモデルに含めた。
【０２９３】
最終ＰＫシミュレーションモデルは、図２に例示するように、並列一次経路および飽和性消失経路を備える２コンパートメントモデルであった。ＩＰＨ４１０２について予想されるヒトＰＫを説明するために、このＴＭＤＤモデルを使用することができるが、これは、以下のものを含む：
−コンパートメント間クリアランス（Ｑ）と、セントラルおよび末梢コンパートメントについての分布容積（それぞれＶｃおよびＶｐ）によって特徴付けられる、２コンパートメント分布（血液から末梢への）。
−単一クリアランスパラメータ、ＣＬによって特徴付けられる、セントラルコンパートメントからの一次消失。
−それぞれセントラルおよび末梢コンパートメント内の完全飽和で利用可能なＫＩＲ３ＤＬ２抗原により結合され得るＩＰＨ４１０２の量を表す、セントラルおよび末梢最大標的結合能力（それぞれＴＢｍａｘｃおよびＴＢｍａｘｐ）。
全身の動態は、会合速度定数、Ｋｏｎ、解離速度定数、Ｋｏｆｆ、およびＫＩＲ３ＤＬ２陽性細胞のターンオーバー速度、Ｋｃｅｌｌにより特徴付けられる。実際に、会合速度定数、Ｋｏｎは、Ｋｏｎ＝Ｋｏｆｆ／ＫＤとして決定され、ここで、ＫＤは、ＫＩＲ３ＤＬ２への結合のためのＩＰＨ４１０２の親和性である。
【０２９４】
ＰＫモデルは延長されて、ヒトにおけるＩＰＨ４１０２の予測血清濃度とヒトのＮＫ細胞溶解能力との関連、ならびにＫＩＲ３ＤＬ２飽和予測を含む。
【０２９５】
得られた最大腫瘍細胞溶解のパーセンテージ（＝腫瘍細胞溶解／飽和時の最大腫瘍細胞溶解×１００）により、たとえば５１Ｃｒ放出アッセイで測定したＩＰＨ４１０２濃度（Ｃｏｎｃ）とＮＫ溶解能力の間の関連を説明するために、単一の効力パラメータ、ＥＣ５０と標準Ｅｍａｘタイプの関係を使用した：
％ＮＫ溶解能力＝１００×Ｃｏｎｃ／（Ｃｏｎｃ＋ＥＣ５０）
【０２９６】
治療用ｍＡｂについてのコンパートメント内の最大標的結合（ＴＢｍａｘ）は、以下：ＴＢｍａｘ＝Ｒｅｃ×Ｃｃｅｌｌ×Ｖ×ＡＮ×ＭＷｍＡｂ×１０９
のように計算することができ、
ここで、
Ｒｅｃは、受容体密度＝標的受容体の数／細胞であり、
Ｃｃｅｌｌは、コンパートメント内の標的陽性細胞の濃度（数／ｍＬ）であり、
Ｖは、コンパートメントの容積であり、
ＡＮは、エンティティの数をモルに変換するためのアボガドロ数（Ａｖｏｇａｄｒｏ’ｓ  ｎｕｍｂｅｒ）＝６．０２３×１０２３／ｍｏｌであり、
ＭＷｍＡｂは、ＩＰＨ４１０２の分子量＝１５０，０００ｇ／ｍｏｌであり、
１０９は、ｇからｎｇに変換する。
【０２９７】
ＰＫ／ＰＤモデルの構造を図１に示す。モデルの各コンパートメントのパラメータは、以下にさらに記載する通り、インビトロデータおよび文献の情報に基づいて取得した。
【０２９８】
パラメータ（ＣＬ、Ｖｃ、Ｑ、Ｖｐ）の値は、カニクイザルおよびマウス両方の前臨床ＰＫ結果に基づいて決定され、これらは、ＩＰＨ４１０２が、ヒトにおける他の治療用ｍＡｂと類似するＰＫ特性を呈示することが予想されることを示し、これは、ヒトにおけるＩｇＧの標準２コンパートメントモデルを定義する。
【０２９９】
血液中の正常免疫細胞に対する標的結合能力を決定した。手短には、健常なボランティアにおける非介入、単一施設記述的および前向き非盲検試験からの結果を用いて、ＫＩＲ３ＤＬ２発現リンパ球の総数を決定した。総数４０人のボランティアが登録し、これを２つのコホート、６０歳未満の２０人のボランティアから成るコホート１と、６１歳超の２０人のボランティアから成るコホート２に分けた。各ドナーの血液組成により付与される白血球（ＷＢＣ）の数を用いて、フローサイトメトリーデータを正規化した。新鮮な白血球サンプルを処理してから、１群の蛍光色素結合ｍＡｂ（８色の組合せ）で分析することにより、血液細胞サブセットを定めた。フローサイトメトリーのゲーティング戦略は、ＷＢＣのパーセンテージとして各細胞サブセットを表現することを目標とした。これらのパーセンテージおよび血液組成からのＷＢＣ数を用いることにより、様々な血液細胞サブセットを血液１μｌ当たりの細胞として定めた。ＰＥ標識抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂ（１〜１０チューブの平均値）を用い、リンパ球中のＫＩＲ３ＤＬ２＋免疫細胞集団の絶対数（１〜１０チューブの平均値）および飽和時のＭＥＳＦを使用して、ヒトのリンパ球上のＫＩＲ３ＤＬ２受容体の総数を計算した。
【０３００】
ＫＩＲ３ＤＬ２＋リンパ球の組織：血液比に関する具体的な情報は当初入手できなかった。そのため、組織中の正常免疫細胞に対する標的結合能力は、ＫＩＲ３ＤＬ２を発現する血液リンパ球の数、ならびにＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞が、他のリンパ球の一般的な分布と類似の分布を有するという想定に基づいて推定し、ここで、組織中の細胞の数は、血液中の約５０倍高い。ＫＩＲ３ＤＬ受容体密度は、血液と組織の間で同等であると想定された。
【０３０１】
ＳＳ患者について、血液中の白血病腫瘍細胞に対する標的結合能力を評価した。ＳＳ患者の血液腫瘍細胞に対するＩＰＨ４１０２標的結合を評価するために、ＰＥ標識抗ＫＩＲ３ＤＬ２ｍＡｂを用いて、血液組成計数および全血細胞中のＣＤ３＋ＣＤ４＋ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞の％に基づき、９人のＳＳ患者においてＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞の総数を決定した。原発セザリー腫瘍細胞の細胞表面に発現したＫＩＲ３ＤＬ２分子の数を各患者について決定した。ＫＩＲ３ＤＬ２＋腫瘍細胞（ＣＤ４＋ＣＤ３＋ＫＩＲ３ＤＬ２＋）の絶対数の全測定値の平均を計算した。ＳＳ腫瘍細胞の細胞表面のＫＩＲ３ＤＬ２密度を評価した。
【０３０２】
組織中の腫瘍細胞に対する標的結合能力に関して、皮膚の腫瘍Ｔ細胞の総数に関する具体的な情報がＣＴＣＬ患者について当初入手できなかった。総皮膚常在Ｔ細胞は、２００億細胞であると評価されたため、総腫瘍ＫＩＲ３ＤＬ２＋Ｔ細胞がこのレベルを大きく超えることはないと仮定し、腫瘍細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２密度中央値は、ＳＳ患者の循環腫瘍細胞と同様であると推定された。結果は、組織中の腫瘍細胞について得られたＴＢｍａｘが、ＳＳ患者に観察される循環腫瘍細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２に対するＩＰＨ４１０２の標的結合能力と同じ範囲内に見出されるというものであった。
【０３０３】
標的介在性動態の機構は、ＮＫおよび腫瘍細胞の正常なターンオーバーに限定され、これらは、ＩＰＨ４１０２濃度とは独立していると想定された。
【０３０４】
インビトロ親和性（ＫＤ）および解離速度（Ｋｏｆｆ）。ＫＩＲ３ＤＬ２トランスフェクト細胞株、ＫＩＲ３ＤＬ２発現セザリー症候群（ＳＳ）腫瘍細胞株、および患者血液サンプルから収集したＳＳ原発腫瘍について実施した濃度−応答フローサイトメトリー実験において、ＰＥ標識ＩＰＨ４１０２を用い、ＫＩＲ３ＤＬ２に対するＩＰＨ４１０２インビトロ結合親和性を評価した。ＮＫ細胞にゲーティングした、健常なボランティア由来の全血に関するフローサイトメトリー実験、ならびに組換えヒトＫＩＲ３ＤＬ２タンパク質（Ｂｉａｃｏｒｅでの平均二価結合親和性を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験において、ＫＩＲ３ＤＬ２に対するＩＰＨ４１０２結合の濃度−応答を確認した。
【０３０５】
ＫＩＲ３ＤＬ２＋セザリー細胞株（ＨｕＴ７８もしくはＣＯＵ−Ｌなど）および原発性セザリー腫瘍細胞に対して、ＩＰＨ４１０２を用いたインビトロ濃度−応答結合実験により、ＫＩＲ３ＤＬ２発現レベルとは関係なく、細胞株および原発性セザリー細胞に対するＩＰＨ４１０２結合のＥＣ５０は類似する（ＨｕＴ７８については０．０６μｇ／ｍＬ、ＣＯＵ−Ｌについては０．０８７μｇ／ｍＬ、患者の原発性腫瘍細胞に対しては０．０７μｇ／ｍＬ）ことが判明した。結論として、血液中の腫瘍および免疫細胞に対するＩＰＨ４１０２の結合親和性をＰＫ／ＰＤモデルにおいて７０ｎｇ／ｍｌに設定した。一晩の染色条件では、ＰＥ標識は、ＫＩＲ３ＤＬ２に対するＩＰＨ４１０２親和性に小さな影響しか及ぼさなかった。重要なことには、類似の親和性がＳＰＲに見出された（Ｂｉａｃｏｒｅでの組換えＫＩＲ３ＤＬ２に対するＩＰＨ４１０２平均二価結合親和性、０．１４６ｎＭ、２１．９ｎｇ／ｍｌに相当、下の表に示す。組換えＫＩＲ３ＤＬ２からのＩＰＨ４１０２の解離速度は、ＳＰＲ実験から取得した。ＫＩＲ３ＤＬ２抗原結合活性を、２ステップ実験セットアップを用いて決定した。第１に、ＩＰＨ４１０２サンプルを一定濃度でプロテインＡチップに対して注射した（抗体捕捉ステップ）。第２に、捕捉された抗体に対してＫＩＲ３ＤＬ２−Ｈｉｓ抗原サンプルを一定濃度で注射し（抗原結合ステップ）、解離させた後、ベースライン補正（ブランク差し引き）のための再生バッファーを注射した。バッチ同士の比較のために、結合抗原と捕捉抗原の平均（ｎ＝３）反射率単位（ＲＵ）比を比較指数（０．４）として用いた。
【０３０６】
二価結合についての解離速度の３つの測定値の平均を使用した（１．４×１０−４ｓ−１、０．５０４ｈ−１に相当）。
【０３０７】
【表９】
2020500161.tif 000014
【０３０８】
生理的状況でのＩＰＨ４１０２の生物学的および潜在的毒性活性を評価するために、ＩＰＨ４１０２のインビトロ濃度−応答アッセイを、ＨｕＴ７８細胞および漸増用量のＩＰＨ４１０２ｍＡｂと一緒に、同時インキュベートした１５のヒト正常ドナーＰＢＭＣに対してインビトロで測定した。３つの読み出しを並行して調べた：ＣＤ１３７発現によるＮＫ細胞の活性化（フローサイトメトリー）、ＰＢＭＣによる標的細胞の溶解（古典的５１Ｃｒ放出アッセイ）ならびに５つのサイトカインおよびケモカイン：ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１の分泌。手短には、健常なドナーからのＰＢＭＣを、用量範囲のＩＰＨ４１０２ｍＡｂの存在下で、ＨｕＴ７８標的細胞株（ＫＩＲ３ＤＬ２＋）と一緒にインキュベートした。２０時間のインキュベーション後のＰＢＭＣ中のＮＫ細胞の活性化を、２．５：１のＥ：Ｔ（エフェクター：標的）比を用い、活性化マーカＣＤ１３７を使用してモニターした。２０時間のインキュベーション（ＣＤ１３７アッセイ）中に培養上清中のＰＢＭＣにより産生されたサイトカインをＡｌｐｈａＬＩＳＡ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて定量した。並行して、実施例４に記載するように、１００：１のＥ：Ｔ比を用いて、４時間の５１Ｃｒ放出アッセイでＰＢＭＣによるＨｕＴ７８細胞溶解をモニターした。
【０３０９】
５１Ｃｒ放出アッセイにおける健常なドナーＰＢＭＣによるＨｕＴ７８腫瘍細胞溶解（ＮＫ細胞溶解能力）として、用量設定の決定のためのＩＰＨ４１０２安全性および薬理学的活性に最も関連するパラメータを選択した。５１Ｃｒ放出アッセイにおける中央ＥＣ１０およびＥＣ５０（±ＳＤ）は、それぞれ２（±２．８）ｎｇ／ｍｌおよび４５（±４０）ｎｇ／ｍｌであった。
【０３１０】
したがって、ＩＰＨ４１０２濃度（Ｃｏｎｃ）と、ＮＫ溶解能力の％：
ＮＫ溶解能力の％＝１００×Ｃｏｎｃ／（Ｃｏｎｃ＋ＥＣ５０）
によって測定される腫瘍細胞溶解を媒介するＮＫ細胞の最大能力の％との関連を表すために、単一の効力パラメータ、５１Ｃｒ放出アッセイにおけるＩＰＨ４１０２のＥＣ５０、すなわち＝４５ｎｇ／ｍｌとの標準Ｅｍａｘタイプの関係を使用した。
【０３１１】
最終パラメータを以下の表にまとめる。
【０３１２】
【表１０】
2020500161.tif 000015
【０３１３】
次に、ソフトウェアＰｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．４を用いて、ＰＤ／ＰＫシミュレーションを実施し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．０４を用いて、結果のプロッティングを行った。モデルは、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎにインプリメントし、これを用いて、様々な用量レベルについてヒトへのＩＰＨ４１０２の１時間のｉ．ｖ．注入後、経時的にＰＫをシミュレートした。これに基づいて、ヒト初回投与（ＦＩＨ）試験のための用量を決定した。ＭＡＢＥＬ計算のための選択薬理学的パラメータは、５１Ｃｒ放出アッセイにおける健常なドナーＰＢＭＣによるＨｕｔ７８腫瘍細胞溶解であったが、これは、ＳＳ患者における生物学的ＩＰＨ４１０２媒介応答の保守的評価であった。本発明者らは、ＨｕＴ７８腫瘍溶解のインビトロアッセイ（実施例４を参照）において低いが、認識可能な効果をもたらす用量を決定した。このアッセイにおける１０％応答を低ＭＡＢＥＬ応答として採用した（Ｅ１０＝２ｎｇ／ｍｌ）。したがって、Ｃｍａｘで予め定めた１０％５１Ｃｒ放出をもたらす用量が特に重要であった。ＰＫシミュレーションに基づいて、Ｃｍａｘ、ＣｍａｘでのＮＫ溶解能力の％およびｔ＝３〜６時間で達成された最大ＫＩＲ３ＤＬ２占有を健常なドナー、ＭＦ（循環腫瘍細胞なし）およびＳＳ（循環腫瘍細胞）患者で、様々な用量について予測し、ＦＨＤを０．１μｇ／ｋｇとして決定するのに役立てた。
【０３１４】
複数回用量第１相臨床試験の１回目および４回目用量後のシミュレートＡＵＣ０〜７日、Ｃｍａｘおよび蓄積指数を、ＭＦおよびＳＳ患者について下の表に示す。
【０３１５】
【表１１】
2020500161.tif 000016
【０３１６】
ＭＦおよびＳＳ患者において、０．１μｇ／ｋｇの用量で、ＫＩＲ３ＤＬ２占有は、３％未満を維持するため、ＩＰＨ４１０２シミュレートＮＫ細胞により媒介されるＮＫ溶解能力の％は６％未満を維持するであろう。下の表は、ＭＦおよびＳＳ患者についてそれぞれ、１５００μｇ／ｋｇまでの用量レベルで、ＭＦ患者におけるサイクル１およびサイクル４の毎週反復投与について、ＣｍａｘおよびＣトラフでの循環中のＮＫ溶解能力の％の予測値に関するシミュレーションをまとめる。
【０３１７】
【表１２】
2020500161.tif 000017
【０３１８】
【表１３】
2020500161.tif 000018
【０３１９】
実施例６−再発性／難治性ＣＴＣＬのヒト第Ｉ相臨床試験
ＩＰＨ４１０２（ヒト化ＩｇＧ１抗ＫＩＲ３ＤＬ２抗体２Ｂ１２）は、現在、再発性／難治性ＣＴＣＬ患者への単剤ＩＰＨ４１０２の反復投与を評価する、ヒト初回用量設定第１相試験（ＮＣＴ０２５９３０４５）で検証中である。
【０３２０】
主要な目的は、用量制限毒性および有害事象を特性決定することにより、ＩＰＨ４１０２の用量増加の安全性および耐容性を評価することである。副次的目的は、抗腫瘍臨床活性のＰＫ、免疫原性およびシグナルを含む。探索的バイオマーカは、浸潤組織／コンパートメントにおけるＫＩＲ３ＤＬ２発現および非発現細胞を特性決定すること、ならびにＩＰＨ４１０２処置によるそれらの変化をモニターすることを目標とする。分子残存病変の測定を皮膚、血液および／またはリンパ節において実施する。ＳＳ患者への投与前に、自己腫瘍細胞に対するエクスビボＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣの評価も実施する。
【０３２１】
試験は、２つの連続した部分、すなわち、用量漸増と、これに続くコホート拡大部分を有する。用量漸増部分は、加速漸増を含む３＋３デザインを有し、最大耐量（ＭＴＤ）または推奨される第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定することを目標とする。試験した用量は、以下を含んだ：０．０００１ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ体重。拡大部分では、２つのＣＴＣＬサブタイプ特異的コホートが試験され、各コホートは、ＭＴＤまたはＲＰ２Ｄをさらに探究するために、１０人の追加患者を含むことになる。適格ＣＴＣＬ患者は、以前に少なくとも２つの抗腫瘍全身療法を受けていなければならない。センターで評価された、皮膚または血液中の悪性細胞でのＫＩＲ３ＤＬ２発現が参加のために必要とされる。
【０３２２】
患者は、進行または許容できない毒性が現れるまで、ＩＰＨ４１０２投与を毎週受けた。患者内用量漸増は、５週目の最初の完全な臨床評価を経なければ許可されず、しかも、より高い次の用量レベルが、安全委員会により安全と宣言されることを条件とする。
【０３２３】
処置を受けた（またはまだ受けている）１４人の患者のうち、１１人はＳＳを、２人はＭＦを、１人はＣＤ４＋ＣＴＣＬ、他に特定されない（Ｎｏｔ  Ｏｔｈｅｒｗｉｓｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ）（ＮＯＳ）を有する。臨床評価は、腫瘍負荷の評価、ならびに皮膚、リンパ節、血液、および内臓における奏功の定義のために公開された推奨標準化スコアリングシステムに従い、Ｏｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２９，２５９８−２６０７に記載されている複合的総合応答スコアおよび臨床エンドポイントの共通定義を用いることにより実施した。このシステムでは、総合完全奏功（ＣＲ）は、病変の全ての臨床エビデンスの完全な消失として定義され、全ての浸潤器官、すなわち、全てのＴＮＭＢカテゴリーにおいてＣＲが記録されて初めて達成され得る。これに対し、いずれかのＴＮＭＢカテゴリーにおける何らかの進行性疾患（ＰＤ）は、総合ＰＤとみなす。中間の状況では、部分奏功（ＰＲ）または安定（ＳＤ）の総合スコアは、ＴＮＭＢカテゴリー（Ｏｌｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）に記載、同上に従って達成される。実施される臨床評価は、以下を含んだ：
−投与前、次に、５週目（Ｗ５）、Ｗ１４、Ｗ２６、その後、処置の停止まで４週間毎に実施される全ＴＮＭＢスコアリング（イメージングが必要な場合もある）；
−投与前、５週目、次にＷ２６まで２週間毎、その後４週間毎に皮膚特異的ｍＳＷＡＴ測定を実施し；
−血液浸潤の評価（セザリー細胞計数または免疫表現型決定もしくは細胞形態学により）も、投与前、Ｗ５、次にＷ２６まで２週間毎、その後４週間毎に実施する。
【０３２４】
臨床試験は、依然として継続中である。試験に残った患者の臨床評価を下の表に詳しく記載する：
【０３２５】
【表１４】
2020500161.tif 000019
【０３２６】
上の表は、各患者が試験に登録した用量レベル、患者が受けたＩＰＨ４１０２投与の回数、ＣＴＣＬサブタイプおよび試験登録時のＴＮＭＢステージも示す。３人の患者は、総合ＰＲを経験し、それは、それぞれ２８、７４および７０日間持続し、依然として進行中である。これらの奏功の発生のタイミングならびに発生時に投与された用量レベルも同じ列に記載する。
【０３２７】
特にセザリー症候群患者の場合、血液中の臨床奏功に特別な注意が払われた。下の表に示すように、試験に参加した５人の患者のうち、２人はＰＲを達成し、１人は血液中ＣＲを達成した。
【０３２８】
【表１５】
2020500161.tif 000020
【０３２９】
全体として、グレード１または２関連の有害事象（ＡＥ）のみが報告された。試験に参加した患者で、ＤＬＴまたはグレード３〜５いずれかに関連するＡＥを経験した者はいなかった。ＩＰＨ４１０２に関連する皮膚発疹または感染症は、試験した最大用量まで観察されなかった。
【０３３０】
エクスビボ機能性アッセイ結果から、ＳＳ患者のＮＫ細胞が機能性であり、ＡＤＣＣを介して自己腫瘍細胞を殺傷できることを確認した。
【０３３１】
ＩＰＨ４１０２は、ＮＫ細胞の排除を起こさなかった。図３は、最大５０週間にわたり患者のＮＫ細胞のベースライン（１週目の１日目）からの％変化を示す。図４は、最大５０週間の期間にわたる患者のＮＫ細胞の数（１μｌ当たりのＮＫ細胞）を示す。
【０３３２】
ＩＰＨ４１０２の反復投与前および投与後に採取した皮膚生検から一次ＩＨＣ結果を取得した。何人かの患者におけるＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞の顕著な減少のエビデンスと共に、皮膚病変におけるＩＰＨ４１０２薬理活性のシグナルが、ＳＳおよびＭＦ患者の両方で観察された。代表的な例として、以下が挙げられる：
【０３３３】
患者３は、ＭＦを有し、０．０１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで試験を開始した。彼は、スクリーニング時に２つの生検（Ｂ１およびＢ２）を採取され、それぞれ５４％および２６％のＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞を含んだ。５週目に、Ｂ１（０．５％）にＫＩＲ３ＤＬ２染色の減少が観察されたが、Ｂ２（３２％）には観察されず、Ｗ１４には、両方の病変が、ＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞の減少（それぞれ１％および１６％）を示した。この患者は、１０週目から総合ＰＲであった。
【０３３４】
患者４は、セザリー症候群を有し、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで試験を開始し、スクリーニング時に採取された皮膚生検中には５２％のＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞が含まれた。５週目に、顕著なＫＩＲ３ＤＬ２染色の減少が観察され、わずか４．４％の細胞がＫＩＲ３ＤＬ２＋であった。患者は、試験の１０週目から、総合ＰＲであり、血液中ＣＲであった。
【０３３５】
患者６は、ＳＳを有し、０．０５ｍｇ／ｋｇで試験を開始した。スクリーニング生検は、１７．５％のＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞を示したが、５週目に３％まで減少した。この病変の経過も、スクリーニング時のプラークから、５週目には斑へと改善した。しかし、この患者は、依然として総合ＳＤ（皮膚のＳＤおよび血液中ＳＤと共に）のままである。
【０３３６】
患者７は、ＳＳを有し、０．２ｍｇ／ｋｇで試験を開始した。スクリーニング生検は、７６％のＫＩＲ３ＤＬ２＋細胞を示し、５週目に安定を維持した（６２％）。病変の経過も、プラークから斑へと改善したが、この患者は、総合ＳＤ（皮膚のＳＤおよび血液中ＳＤ）のままである。
【０３３７】
結論として、臨床活性の一次徴候の中間分析は、ＩＰＨ４１０２が、反復用量で進行性ＣＴＣＬ患者に有意な臨床利益を賦与することができ；奏功のあった患者が受けたのは、０．０００１ｍｇ／ｋｇ（血液浸潤に対する奏功）または０．０１ｍｇ／ｋｇ（皮膚疾患の奏功）という低い用量であったことを示している。血液中の臨床奏功（ＳＳ患者）は、非常に高い血液浸潤を有する患者（たとえば、試験登録時に１９，０００超の血液セザリー細胞／μＬの血液を有した患者２にも観察された。興味深いことに、処置の期間中、抗腫瘍効果は、完全ＮＫ溶解活性よりかなり低いレベルで観察された。さらに、０．０１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、ＩＰＨ４１０２は、多くとも非常に少数の皮膚中の悪性細胞しか到達しないことが予想される。
【０３３８】
また、興味深いことには、血液浸潤のない患者（患者３、０．０１ｍｇ／ｋｇ）において、抗腫瘍効果（皮膚中）が観察された。これは、ＩＰＨ４１０２が、有意な血液浸潤のない緩徐進行性または早期ＣＴＣＬを有する個体の処置に有用となることを示唆している。
【０３３９】
さらに、ＩＰＨ４１０２を静脈内で、さらには低量で、しかも、低用量および高用量にかかわらず、ＮＫ細胞（ＫＩＲ３ＤＬ２を発現するＮＫ細胞の有意な部分）の排除なしに投与することにより、皮膚疾患を処置することができれば、血液浸潤がある、もしくはない、且つ／または別の腫瘍負荷を有する患者に単一の投与レジメンを使用することができるため、有利である。ＣＴＣＬ患者の非常に広範な血液および皮膚腫瘍負荷にもかかわらず、ＩＰＨ４１０２は、これらの高負荷患者における腫瘍細胞上のＫＩＲ３ＤＬ２を占有するのに必要となる量を下回る用量で、高い腫瘍負荷の場合であっても使用が有望であり、このことは、悪性細胞（たとえば、皮膚中）上のＫＩＲ３ＤＬ２の飽和を維持するために高い用量処置がこれらの患者に必要ではないこと、さらには、血液または皮膚腫瘍負荷のレベルとは無関係に、単一の非ＮＫ排除処置レジメンを使用できることを示唆している（組織中の十分な受容体占有の達成は、概して、循環中の十分な占有を達成するのに要する少なくとも１０倍の抗体の血液濃度を必要とすると考えられる）。試験からの最終的な結果により、この初老且つ複数の治療歴を有する患者集団（ｎ＝２５）において、ＩＰＨ４１０２の優れた安全性プロフィールおよび有望な活性が確認された。１．５ｍｇ／ｋｇの用量レベル以上（１．５、３、６および１０ｍｇ／ｋｇ）で、どんな注射スケジュールであれ、血液腫瘍負荷とは無関係に全ての患者において、血液腫瘍細胞での飽和が達成された。それぞれ、セザリー症候群を有する２０人の患者における客観的奏効率は、５０％であり；ＯＲＲ４（少なくとも４ヶ月超持続する奏功率）は４０％であり、疾患制御率（ＤＣＲ）は９０％、奏功期間中央値（ＤＯＲ）は、９．９ヶ月、無増悪生存率中央値（ＰＦＳ）は、１０．８ヶ月であった。データは、総合臨床奏功を有する患者だけではなく、安定を有する患者においても掻痒症に実質的な改善を示した。
【０３４０】
本明細書において引用される刊行物、特許出願、および特許を含む全ての参考文献は、それらの全体が参照により、また、あたかもそれぞれの参考文献が、参照により組み込まれることが個々にかつ明確に示され、かつ本明細書においてその全体が示されるのと同じ程度まで（法律によって許可される最大限の程度まで）、本明細書において別記される特定の文献の組み込みが別々に提供されるにもかかわらず、本明細書に組み込まれる。
【０３４１】
本発明を説明する文脈における用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」ならびに類似する指示語の使用は、特に指定のない限りまたは文脈によって明らかに否定されない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されたい。
【０３４２】
特に指定のない限り、本明細書において提供される厳密な値は全て、対応する近似値の代表である（たとえば、特定の因子または測定値に関して提供される全ての厳密な例示的な値は、適切な場合、「約」によって修飾される、対応する近似の測定値も提供すると考えることができる）。
【０３４３】
要素に関して「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」などの用語を使用する本発明の任意の態様または実施形態の本明細書における記載は、特に指定のない限りまたは文脈によって明らかに否定されない限り、その特定の要素「からなる」、「から本質的になる」、または「を実質的に含む」本発明の類似する態様または実施形態について支持を提供することが意図される（たとえば、特定の要素を含むとして本明細書において記載される組成物はまた、特に指定のない限りまたは文脈によって明らかに否定されない限り、その要素からなる組成物を記載することが理解されるべきである）。
【０３４４】
本明細書において提供されるあらゆる実施例または例示的な用語（たとえば「など」）の使用は、単に本発明をより明らかにすることが意図され、特に主張されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる用語も、本発明の実施にとって不可欠なものとして主張されていない要素を示すと解釈されるべきでない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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